MX2013012592A - Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para reducir las respuestas inmunitarias a proteínas terapéuticas. - Google Patents

Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para reducir las respuestas inmunitarias a proteínas terapéuticas.

Info

Publication number
MX2013012592A
MX2013012592A MX2013012592A MX2013012592A MX2013012592A MX 2013012592 A MX2013012592 A MX 2013012592A MX 2013012592 A MX2013012592 A MX 2013012592A MX 2013012592 A MX2013012592 A MX 2013012592A MX 2013012592 A MX2013012592 A MX 2013012592A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
therapeutic protein
population
protein
factor
synthetic nanocarriers
Prior art date
Application number
MX2013012592A
Other languages
English (en)
Inventor
Christopher Fraser
Roberto A Maldonado
Takashi Kei Kishimoto
Original Assignee
Selecta Biosciences Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Selecta Biosciences Inc filed Critical Selecta Biosciences Inc
Publication of MX2013012592A publication Critical patent/MX2013012592A/es

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/366—Lactones having six-membered rings, e.g. delta-lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A61K38/13—Cyclosporins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/38—Albumins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/001—Preparations to induce tolerance to non-self, e.g. prior to transplantation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/35—Allergens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/35—Allergens
    • A61K39/36—Allergens from pollen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/52—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an inorganic compound, e.g. an inorganic ion that is complexed with the active ingredient
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A61K47/544—Phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/593—Polyesters, e.g. PLGA or polylactide-co-glycolide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6923—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being an inorganic particle, e.g. ceramic particles, silica particles, ferrite or synsorb
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
    • A61K47/6935—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol
    • A61K47/6937—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol the polymer being PLGA, PLA or polyglycolic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5115—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A61K9/5153—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • G01N33/56972—White blood cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/577—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 tolerising response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6093—Synthetic polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG], Polymers or copolymers of (D) glutamate and (D) lysine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y40/00—Manufacture or treatment of nanostructures
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70514—CD4
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70517—CD8
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)

Abstract

Se describen composiciones nanoportadores sintéticos y métodos relacionados que comprenden antígenos presentables por APC de proteínas terapéuticas e inmunosupresores que proporcionan respuestas inmunitarias tolerogénicas específicas para las proteínas terapéuticas.

Description

NANOPORTADORES SINTÉTICOS TOLEROGÉNICOS PARA REDUCIR LAS RESPUESTAS INMUN1TARIAS A PROTEÍNAS TERAPÉUTICAS SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reivindica el beneficio conforme con lo dispuesto en §119 de 35 U.S.C. de la solicitud provisional de los Estados Unidos 61/480,946, presentada el 29 de abril de 2011 , 61/513,514, presentada el 29 de julio de 2011, 61/531 ,147, presentada el 6 de septiembre de 2011 , 61/531 ,153, presentada el 6 de septiembre de 2011 , 61/531 ,164, presentada el 6 de septiembre de 2011 , 61/531 ,168, presentada el 6 de septiembre de 2011 , 61/531 ,175, presentada el 6 de septiembre de 2011 , 61/531 ,180, presentada el 6 de septiembre de 2011 , 61/531 ,194, presentada el 6 de septiembre de 2011 , 61/531 ,204, presentada el 6 de septiembre de 2011 , 61/531 ,209, presentada el 6 de septiembre de 2011 , 61/531 ,215, presentada el 6 de septiembre de 2011 , el contenido completo de cada una de las cuales se incorpora a la presente por referencia.
CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a composiciones de nanoportadores sintéticos con inmunosupresores y antígenos presentables por células presentadoras de antígeno (APC, por sus siglas en inglés) de proteína terapéutica, y a métodos relacionados. Las composiciones y los métodos permiten una captación eficiente por parte de las APC para modificar la respuesta inmunitaria en favor del desarrollo de una respuesta inmunitaria tolerogénica específica para las proteínas terapéuticas. Por lo tanto, las composiciones y los métodos proporcionados se pueden emplear para generar una respuesta inmunitaria tolerogénica en un sujeto en el que la administración de una proteína terapéutica produce o cabe esperar que produzca respuestas inmunitarias no deseadas.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los tratamientos terapéuticos, tales como terapias de reemplazo enzimático o proteico, suelen producir respuestas inmunitarias al agente terapéutico particular no deseadas. En tales casos, las células del sistema inmunitario reconocen el agente terapéutico como extraño e intentan destruirlo, al igual que ocurre cuando intentan destruir organismos infecciosos tales como bacterias y virus. Tales respuestas inmunitarias no deseadas se pueden reducir empleando fármacos inmunosupresores. Sin embargo, los fármacos inmunosupresores convencionales son de amplio espectro. Además, para mantener la inmunosupresión, la terapia con fármacos inmunosupresores es generalmente una propuesta de por vida. Desafortunadamente, el uso de inmunosupresores de amplio espectro está asociado con el riesgo de padecer efectos secundarios graves, tales como tumores, infecciones, nefrotoxicidad y trastornos metabólicos. Por consiguiente, disponer de nuevas terapias inmunosupresoras sería beneficioso.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En un aspecto, se proporciona una composición que comprende (i) una primera población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a inmunosupresores y (ii) una segunda población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a antígenos presentables por APC de proteína terapéutica. En una realización, la primera población y la segunda población son la misma población. En otra realización, la primera población y la segunda población son poblaciones diferentes.
En otra realización adicional, los inmunosupresores comprenden una estatina, un inhibidor de mTOR, un agente señalizador de TGF-p, un corticosteroide, un inhibidor de la función mitocondrial, un inhibidor de P38, un inhibidor de NF-?ß, un agonista de los receptores de adenosina, un agonista de la prostaglandina E2, un inhibidor de la fosfodiesterasa 4, un inhibidor de HDAC o un inhibidor de proteasomas. En otra realización más, el inhibidor de mTOR es la rapamicina o un análogo de la rapamicina.
En algunas realizaciones, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica se proporcionan acoplando la proteína terapéutica a los nanoportadores sintéticos. En otras realizaciones, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica se proporcionan acoplando un polipéptido o péptido obtenido a partir de la proteína terapéutica o derivado de esta. En otra realización, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica comprenden epítopos de linfocitos B y/o epítopos restringidos por MHC de clase I y/o restringidos por MHC de clase II de una proteína terapéutica. En otra realización, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica comprenden epítopos restringidos por MHC de clase II de una proteína terapéutica. En otra realización, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica no comprenden sustancialmente ningún epítopo de linfocitos B de una proteína terapéutica. En otra realización, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica comprenden epítopos restringidos por MHC de clase II y sustancialmente ningún epítopo de linfocitos B de una proteína terapéutica.
En una realización, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica comprenden una proteína terapéutica para el reemplazo proteico o terapia de suplementación proteica, o un fragmento o derivado de esta. En otra realización, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica comprenden una proteína terapéutica, enzima, cofactor enzimático, hormona, factor sanguíneo o de coagulación sanguínea, citocina, interferón, factor de crecimiento, anticuerpo monoclonal, anticuerpo policlonal o proteína asociada con la enfermedad de Pompe administrable por inyección o infusión, o un fragmento o derivado de cualquiera de los anteriores. En otra realización, la proteína terapéutica administrable por inyección o infusión comprende Tocilizumab, alfa-1 antitripsina, Hematide, albinterferón alfa-2b, Rhucin, tesamorelina, ocrelizumab, belimumab, pegloticasa, taliglucerasa alfa, agalsidasa alfa o velaglucerasa alfa. En otra realización, la enzima comprende una oxidorreductasa, transferasa, hidrolasa, liasa, isomerasa o ligasa. En otra realización, la enzima comprende una enzima para la terapia de reemplazo enzimático para un trastorno por almacenamiento lisosómico. En otra realización, la enzima para la terapia de reemplazo enzimático para un trastorno por almacenamiento lisosómico comprende imiglucerasa, a-galactosidasa A (a-gal A), agalsidasa beta, a-glucosidasa ácida (GAA), alglucosidasa alfa, LUMIZYME, MYOZYME, arilsulfatasa B, laronidasa, ALDURAZYME, idursulfasa, ELAPRASE, arilsulfatasa B o NAGLAZYME. En otra realización, la citocina comprende una linfocina, interleucina, quimiocina, citocina de tipo 1 o citocina de tipo 2. En otra realización, el factor sanguíneo o de coagulación sanguínea comprende Factor I, Factor II, factor tisular, Factor V, Factor VII, Factor VIII , Factor IX, Factor X, Factor Xa, Factor XII, Factor XIII, factor de von Willebrand, precalicreína, cininógeno de alto peso molecular, fibronectina, antitrombina III, cofactor II de la heparina, proteína C, proteína S, proteína Z, inhibidor de proteasa dependiente de la proteína Z (ZPI), plasminógeno, alfa 2-antiplasmina, activador tisular del plasminógeno (tPA), urocinasa, inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 1 (PAI1), inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 2 (PAI2), procoagulante de cáncer o epoetina alfa. En otra realización más, la proteína terapéutica se expresa en, mediante o sobre células de una terapia a base de células.
En una realización, la composición está en una cantidad eficaz para generar una respuesta inmunitaria tolerogénica al antígeno presentable por APC de proteína terapéutica o la proteína terapéutica a partir de la cual se obtienen los antígenos o de la cual se derivan. En otra realización, la composición está en una cantidad eficaz para reducir la generación de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica cuando se administra a un sujeto.
En otra realización, la carga de los inmunosupresores y/o antígenos como promedio entre la primera y/o segunda población de nanoportadores sintéticos está comprendida entre un 0.0001% y un 50%. En otra realización más, la carga de los inmunosupresores y/o antigenos como promedio entre la primera y/o segunda población de nanoportadores sintéticos está comprendida entre un 0.1% y un 10%.
En una realización, los nanoportadores sintéticos de la primera población y/o la segunda población comprenden nanopartículas lipídicas, nanopartículas poliméricas, nanopartículas metálicas, emulsiones a base de surfactantes, dendrímeros, futbolenos, nanohilos, partículas pseudovíricas, o partículas peptídicas o proteicas. En otra realización, los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población comprenden nanopartículas lipídicas. En otra realización adicional, los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población comprenden liposomas. En otra realización más, los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población comprenden nanopartículas metálicas. En otra realización, las nanopartículas metálicas comprenden nanopartículas de oro. En otra realización adicional, los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población comprenden nanopartículas poliméricas. En otra realización, las nanopartículas poliméricas comprenden polímeros que son polímeros Pluronic no terminados en metoxi. En otra realización más, las nanopartículas poliméricas comprenden un poliéster, un poliéster acoplado a un poliéter, poliaminoácido, policarbonato, poliacetal, policetal, polisacárido, polietiloxazolina o polietilenimina. En otra realización, el poliéster comprende un poli(ácido láctico), poli(ácido glicólico), poli(ácido láctico-co-glicólico) o policaprolactona. En otra realización adicional, las nanopartículas poliméricas comprenden un poliéster y un poliéster acoplado a un poliéter. En otra realización, el poliéter comprende polietilenglicol o polipropilenglicol.
En otra realización, la media de una distribución del tamaño de partícula obtenida utilizando dispersión de luz dinámica de los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población es un diámetro superior a 100 nm. En otra realización, el diámetro es superior a 150 nm. En otra realización, el diámetro es superior a 200 nm. En otra realización, el diámetro es superior a 250 nm. En otra realización, el diámetro es superior a 300 nm.
En otra realización, la relación entre las dimensiones de los nanoportadores sintéticos de la primera población y/o la segunda población es superior a 1 :1, 1:1.2, 1:1.5, 1 :2, 1:3, 1 :5, 1:7 o 1 :10.
En otra realización adicional, la composición comprende además un excipiente farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, se proporciona una forma farmacéutica que comprende cualquiera de las composiciones proporcionadas en la presente.
En otro aspecto, se proporciona un método que comprende administrar cualquiera de las composiciones o formas farmacéuticas proporcionadas en la presente a un sujeto al que se le está administrando o al que se le administrará una proteína terapéutica. En una realización, el método comprende además administrar la proteína terapéutica al sujeto. En otra realización, la proteína terapéutica se administra antes, concomitantemente o después de administrar la composición o forma farmacéutica. En otra realización adicional, se administran una o más dosis de mantenimiento de la composición o forma farmacéutica al sujeto.
En otra realización adicional, el método comprende además evaluar la generación de una respuesta inmunitaria no deseada en el sujeto antes y/o después de administrar la composición o forma farmacéutica y/o la proteína terapéutica. En una realización, la respuesta inmunitaria no deseada es la generación de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica. En otra realización, la respuesta inmunitaria no deseada es la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ específica para la proteína terapéutica. En otra realización más, la respuesta inmunitaria no deseada es la proliferación y/o actividad de linfocitos B específica para la proteína terapéutica.
En una realización, la proteína terapéutica comprende una proteína terapéutica para la terapia de reemplazo proteico o suplementación proteica. En otra realización, la proteína terapéutica comprende una proteína terapéutica, enzima, cofactor enzimático, hormona, factor sanguíneo o de coagulación sanguínea, citocina, interferón, factor de crecimiento, anticuerpo monoclonal, anticuerpo policlonal o proteína asociada con la enfermedad de Pompe administrable por inyección o infusión. En otra realización, la proteína terapéutica administrable por inyección o infusión comprende Tocilizumab, alfa-1 antitripsina, Hematide, albinterferón alfa-2b, Rhucin, tesamorelina, ocrelizumab, belimumab, pegloticasa, taliglucerasa alfa, agalsidasa alfa o velaglucerasa alfa. En otra realización, la enzima comprende una oxidorreductasa, transferasa, hidrolasa, Nasa, isomerasa o ligasa. En otra realización, la enzima comprende una enzima para la terapia de reemplazo enzimático para un trastorno por almacenamiento lisosómico. En otra realización, la enzima para la terapia de reemplazo enzimático para un trastorno por almacenamiento lisosómico comprende imiglucerasa, a-galactosidasa A (a-gal A), agalsidasa beta, a-glucosidasa ácida (GAA), alglucosidasa alfa, LUMIZYME, MYOZYME, arilsulfatasa B, laronidasa, ALDURAZYME, idursulfasa, ELAPRASE, arilsulfatasa B o NAGLAZYME. En otra realización, la citocina comprende una linfocina, interleucina, quimiocina, citocina de tipo 1 o citocina de tipo 2. En otra realización, el factor sanguíneo o de coagulación sanguínea comprende Factor I, Factor II, factor tisular, Factor V, Factor VII, Factor VIII , Factor IX, Factor X, Factor Xa, Factor XII, Factor XIII, factor de von Willebrand, precalicreína, cininógeno de alto peso molecular, fibronectina, antitrombina III, cofactor II de la heparina, proteína C, proteína S, proteína Z, inhibidor de proteasa dependiente de la proteína Z (ZPI), plasminógeno, alfa 2-antiplasmina, activador tisular del plasminógeno (tPA), urocinasa, inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 1 (PAI1), inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 2 (PAI2), procoagulante de cáncer o epoetina alfa. En otra realización más, la proteína terapéutica se expresa en, mediante o sobre células de una terapia a base de células.
En una realización, la administración de la primera y/o segunda población de nanoportadores sintéticos y/o la proteína terapéutica se trata de una administración intravenosa, intraperitoneal, transmucosal, oral, subcutánea, pulmonar, intranasal, intradérmica o intramuscular. En otra realización, la administración de la primera y/o segunda población de nanoportadores sintéticos y/o la proteína terapéutica se trata de una administración por inhalación, intravenosa, subcutánea o transmucosal.
En otro aspecto más, se proporciona un método que comprende administrar a un sujeto una composición que comprende (i) una primera población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a inmunosupresores y (ii) una segunda población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a antígenos presentables por APC de proteína terapéutica, donde la composición está en una cantidad eficaz para reducir la generación de una respuesta inmunitaria no deseada contra los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica. En otro aspecto adicional, se proporciona un método que comprende reducir la generación de una respuesta inmunitaria no deseada en un sujeto mediante la administración de una composición que comprende (i) una primera población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a inmunosupresores y (ii) una segunda población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a antígenos presentables por APC de proteína terapéutica. En otro aspecto, se proporciona un método que comprende administrar una composición a un sujeto de acuerdo con un protocolo que se ha demostrado previamente que reduce la generación de una respuesta inmunitaria no deseada a antígenos presentables por APC de proteína terapéutica en uno o más sujetos objeto de estudio; donde la composición comprende (i) una primera población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a inmunosupresores y (ii) una segunda población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica. En una realización, la primera población y la segunda población son la misma población. En otra realización, la primera población y la segunda población son poblaciones diferentes.
En otra realización adicional, el método comprende además proporcionar o identificar el sujeto. En otra realización más, el método comprende además evaluar la generación de la respuesta inmunitaria no deseada en el sujeto antes y/o después de administrar la composición. En una realización, la respuesta inmunitaria no deseada es la generación de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica, y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ específica para la proteína terapéutica, y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos B específica para la proteína terapéutica.
En otra realización, los inmunosupresores comprenden una estatina, un inhibidor de mTOR, un agente señalizador de TGF-ß, un corticosteroide, un inhibidor de la función mitocondrial, un inhibidor de P38, un inhibidor de NF-?ß, un agonista de los receptores de adenosina, un agonista de la prostaglandina E2, un inhibidor de la fosfodiesterasa 4, un inhibidor de HDAC o un inhibidor de proteasomas. En otra realización adicional, el inhibidor de mTOR es la rapamicina o un análogo de la rapamicina.
En algunas realizaciones, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica se proporcionan acoplando la proteína terapéutica a los nanoportadores sintéticos. En otras realizaciones, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica se proporcionan acoplando un polipéptido o péptido obtenido a partir de la proteína terapéutica o derivado de esta. En otra realización, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica comprenden epítopos de linfocitos B y/o epítopos restringidos por MHC de clase I y/o restringidos por MHC de clase II de una proteína terapéutica. En otra realización, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica comprenden epítopos restringidos por MHC de clase II de una proteína terapéutica. En otra realización, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica no comprenden sustancialmente ningún epítopo de linfocitos B de una proteína terapéutica. En otra realización, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica comprenden epítopos restringidos por MHC de clase II y sustancialmente ningún epítopo de linfocitos B de una proteína terapéutica.
En una realización, la proteína terapéutica comprende una proteína terapéutica para la terapia de reemplazo proteico o suplementación proteica. En otra realización, la proteína terapéutica comprende una proteína terapéutica, enzima, cofactor enzimático, hormona, factor sanguíneo o de coagulación sanguínea, citocina, interferón, factor de crecimiento, anticuerpo monoclonal, anticuerpo policlonal o proteína asociada con la enfermedad de Pompe administrable por inyección o infusión. En otra realización, la proteína terapéutica administrable por inyección o infusión comprende Tocilizumab, alfa-1 antitripsina, Hematide, albinterferón alfa-2b, Rhucin, tesamorelina, ocrelizumab, belimumab, pegloticasa, taliglucerasa alfa, agalsidasa alfa o velaglucerasa alfa. En otra realización, la enzima comprende una oxidorreductasa, transferasa, hidrolasa, liasa, isomerasa o ligasa. En otra realización, la enzima comprende una enzima para la terapia de reemplazo enzimático para un trastorno por almacenamiento lisosómico. En otra realización, la enzima para la terapia de reemplazo enzimático para un trastorno por almacenamiento lisosómico comprende imiglucerasa, a-galactosidasa A (a-gal A), agalsidasa beta, a-glucosidasa ácida (GAA), alglucosidasa alfa, LUMIZYME, MYOZY E, arilsulfatasa B, laronidasa, ALDURAZYME, idursulfasa, ELAPRASE, arilsulfatasa B o NAGLAZYME. En otra realización, la citocina comprende una linfocina, interleucina, quimiocina, citocina de tipo 1 o citocina de tipo 2. En otra realización, el factor sanguíneo o de coagulación sanguínea comprende Factor I, Factor II, factor tisular, Factor V, Factor VII, Factor VIII , Factor IX, Factor X, Factor Xa, Factor XII, Factor XIII, factor de von Willebrand, precalicreína, cininógeno de alto peso molecular, fibronectina, antitrombina III, cofactor II de la heparina, proteína C, proteína S, proteína Z, inhibidor de proteasa dependiente de la proteína Z (ZPI), plasminógeno, alfa 2-antiplasmina, activador tisular del plasminógeno (tPA), urocinasa, inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 1 (PAI1), inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 2 (PAI2), procoagulante de cáncer o epoetina alfa. En otra realización más, la proteína terapéutica se expresa en, mediante o sobre células de una terapia a base de células.
En una realización, la composición está en una cantidad eficaz para reducir la generación de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica, y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ específica para la proteína terapéutica, y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos B específica para la proteína terapéutica .
En otra realización, la carga de los inmunosupresores y/o antígenos como promedio entre la primera y/o segunda población de nanoportadores sintéticos está comprendida entre un 0.0001% y un 50%. En otra realización más, la carga de los inmunosupresores y/o antígenos como promedio entre la primera y/o segunda población de nanoportadores sintéticos está comprendida entre un 0.1% y un 10%.
En una realización, los nanoportadores sintéticos de la primera población y/o la segunda población comprenden nanopartículas lipídicas, nanopartículas poliméricas, nanopartículas metálicas, emulsiones a base de surfactantes, dendrímeros, futbolenos, nanohilos, partículas pseudovíricas, o partículas peptídicas o proteicas. En otra realización, los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población comprenden nanopartículas lipídicas. En otra realización adicional, los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población comprenden liposomas. En otra realización más, los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población comprenden nanopartículas metálicas. En otra realización, las nanopartículas metálicas comprenden nanopartículas de oro. En otra realización adicional, los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población comprenden nanopartículas poliméricas. En otra realización, las nanopartículas poliméricas comprenden polímeros que son polímeros Pluronic no terminados en metoxi. En otra realización más, las nanopartículas poliméricas comprenden un poliéster, un poliéster acoplado a un poliéter, poliaminoácido, policarbonato, poliacetal, policetal, polisacárido, polietiloxazolina o polietilenimina. En otra realización, el poliéster comprende un poli(ácido láctico), poli(ácido glicólico), poli(ácido láctico-co-glicólico) o policaprolactona. En otra realización adicional, las nanopartículas poliméricas comprenden un poliéster y un poliéster acoplado a un poliéter. En otra realización más, el poliéter comprende polietilenglicol o polipropilenglicol.
En otra realización, la media de una distribución del tamaño de partícula obtenida utilizando dispersión de luz dinámica de los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población es un diámetro superior a 100 nm. En otra realización, el diámetro es superior a 150 nm. En otra realización, el diámetro es superior a 200 nm. En otra realización, el diámetro es superior a 250 nm. En otra realización, el diámetro es superior a 300 nm.
En otra realización, la relación entre las dimensiones de los nanoportadores sintéticos de la primera población y/o la segunda población es superior a 1 :1 , 1 :1.2, 1 :1.5, 1 :2, 1 :3, 1 :5, 1 :7 o 1 :10.
En otra realización más, la composición comprende además un excipiente farmacéuticamente aceptable.
En otra realización adicional, el método comprende además administrar la proteína terapéutica al sujeto. En una realización, la proteína terapéutica se administra antes, concomitantemente o después de administrar la composición.
En otra realización, se administran una o más dosis de mantenimiento de la composición al sujeto.
En otra realización más, el método comprende además evaluar la generación de una respuesta inmunitaria no deseada en un sujeto antes y/o después de administrar la composición y/o la proteína terapéutica. En otra realización, la respuesta inmunitaria no deseada es la generación de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica, y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ específica para la proteína terapéutica, y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos B específica para la proteína terapéutica.
En una realización, la administración de la primera y/o segunda población de nanoportadores sintéticos y/o la proteína terapéutica se trata de una administración intravenosa, intraperitoneal, transmucosal, oral, subcutánea, pulmonar, intranasal, intradérmica o intramuscular. En otra realización, la administración de la primera y/o segunda población de nanoportadores sintéticos y/o la proteína terapéutica se trata de una administración por inhalación, intravenosa, subcutánea o transmucosal.
En otro aspecto, se proporciona un método que comprende (i) producir una primera población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a inmunosupresores y (ii) producir una segunda población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a antígenos presentables por APC de proteína terapéutica. En una realización, la primera población y la segunda población son la misma población. En otra realización, la primera población y la segunda población son poblaciones diferentes. En otra realización adicional, la primera y la segunda población de nanoportadores sintéticos que se producen son como las definidas tal como se proporcionan en cualquier parte de la presente En una realización, el método comprende además producir una forma farmacéutica de una composición que comprende la primera y la segunda población de nanoportadores sintéticos producidas. En otra realización más, el método comprende además poner a disposición de un sujeto una composición que comprende la primera población y la segunda población de nanoportadores sintéticos o la forma farmacéutica para su administración. En otra realización, el método comprende además evaluar la reducción de una respuesta inmunitaria no deseada con una composición que comprende la primera población y la segunda población de nanoportadores sintéticos. En una realización, la respuesta inmunitaria no deseada es la generación de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica, y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ específica para la proteína terapéutica, y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos B específica para la proteína terapéutica.
En otro aspecto adicional, se proporciona un proceso para producir una composición o forma farmacéutica que comprende (i) una primera población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a inmunosupresores y (ii) una segunda población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a antígenos presentables por APC de proteína terapéutica, comprendiendo el proceso los pasos definidos en cualquiera de los métodos proporcionados en la presente.
En otro aspecto, se proporciona una composición o la forma farmacéutica que se puede obtener mediante cualquiera de los métodos o procesos proporcionados en la presente.
En otro aspecto más, cualquiera de las composiciones o formas farmacéuticas proporcionadas en la presente se puede emplear en terapia o profilaxis.
En otro aspecto más, cualquiera de las composiciones o formas farmacéuticas proporcionadas en la presente se puede utilizar en un método de inducción de una respuesta inmunitaria tolerogénica a antígenos de proteína terapéutica, terapia a base de células, terapia de reemplazo proteico, terapia de suplementación proteica o en cualquiera de los métodos proporcionados en la presente.
En otro aspecto, se proporciona el uso de cualquiera de las composiciones o formas farmacéuticas proporcionadas en la presente para la fabricación de un medicamento que se pueda utilizar en un método de inducción de una respuesta inmunitaria tolerogénica a antígenos de proteína terapéutica, terapia a base de células, terapia de reemplazo proteico, terapia de suplementación proteica o en cualquiera de los métodos proporcionados en la presente.
En otro aspecto más, se proporciona una forma farmacéutica que comprende cualquiera de las composiciones proporcionadas en la presente.
En algunas realizaciones de cualquiera de las composiciones y métodos proporcionados, las composiciones proporcionadas en la presente se administran profilácticamente, en una fase temprana de la respuesta inmunitaria (p. ej., durante una fase de IgM) y/o antes de establecer una respuesta de memoria madura y/o una respuesta de anticuerpos IgG. En las realizaciones de cualquiera de las composiciones y métodos proporcionados en la presente, las composiciones y métodos pueden reducir la frecuencia de linfocitos T efectores que reaccionen con el antígeno y/o su capacidad para producir citocinas proinflamatorias. En otras realizaciones de cualquiera de las composiciones y métodos proporcionados en la presente, las composiciones y métodos incrementan la frecuencia de linfocitos B o T reguladores supresores que reducen la incidencia de respuestas inmunitarias no deseadas a proteínas terapéuticas.
En una realización de cualquiera de las composiciones y métodos proporcionados en la presente, los antígenos que son proteínas que comprenden los epítopos mencionados anteriormente se pueden acoplar a los nanoportadores sintéticos. En otra realización, se pueden acoplar polipéptidos o péptidos que comprenden los epítopos mencionados anteriormente pero con aminoácidos adicionales que flanquean uno o ambos extremos del epítopo o los epítopos a los nanoportadores sintéticos. En otra realización, los propios epítopos están acoplados a los nanoportadores sintéticos.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Fig. 1 muestra los resultados de un análisis por citometría de flujo de Treg.
La Fig. 2 muestra un efecto sobre el número de linfocitos T efectores específicos para el antígeno con nanoportadores sintéticos de la invención que comprenden un inmunosupresor (rapamicina o simvastatina) (después de una única inyección).
La Fig. 3 muestra una reducción en el número de células de los ganglios linfáticos poplíteos con nanoportadores sintéticos de la invención que comprenden un inmunosupresor (rapamicina o simvastatina) (después de múltiples inyecciones).
La Fig. 4 demuestra la reducción de los anticuerpos anti-OVA IgG con nanoportadores sintéticos que comprenden el inmunosupresor rapamicina y antígeno OVA.
La Fig. 5 demuestra la reducción de los anticuerpos anti-OVA IgG con nanoportadores sintéticos que comprenden el inmunosupresor rapamicina y antígeno OVA en los grupos pasivos y de control.
La Fig. 6 muestra una reducción en los niveles de IgG específica para el antígeno con la administración de nanoportadores sintéticos que comprenden el péptido OVA y el inmunosupresor rapamicina.
La Fig. 7 demuestra una reducción en el número de linfocitos B específicos para el antígeno con la administración de nanoportadores sintéticos que comprenden el péptido OVA y el inmunosupresor rapamicina.
La Fig. 8 demuestra una reducción en el número de linfocitos T CD4+ en muestras de lavado de sujetos del modelo del asma en animales tratados con nanoportadores sintéticos que comprenden el péptido OVA y un inmunosupresor.
La Fig. 9 demuestra una reducción en el porcentaje de linfocitos T CD4+ que se dividen como resultado del tratamiento con nanoportadores sintéticos que comprenden el péptido OVA y el inmunosupresor rapamicina en sujetos del modelo del asma en animales.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Antes de describir la presente invención detalladamente, se debe sobreentender que esta invención no está limitada a los materiales o parámetros de proceso particularmente ejemplificados, ya que, por supuesto, estos pueden variar. También se debe sobreentender que la terminología utilizada en la presente tiene como fin únicamente describir realizaciones particulares de la invención y no se pretende que limite el uso de terminología alternativa para describir la presente invención.
Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente citadas en la presente, ya sea previa o posteriormente, se incorporan a la presente por referencia en su totalidad a todos los efectos.
Las formas en singular "un/una" y "el/la", tal como se utilizan en esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas, incluyen los referentes en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Por ejemplo, la referencia a "un polímero" incluye una mezcla de dos o más de tales moléculas o una mezcla de pesos moleculares diferentes de una única especie polimérica, la referencia a "un nanoportador sintético" incluye una mezcla de dos o más de tales nanoportadores sintéticos o una pluralidad de tales nanoportadores sintéticos, la referencia a "una molécula de ADN" incluye una mezcla de dos o más de tales moléculas de ADN o una pluralidad de tales moléculas de ADN, la referencia a "un inmunosupresor" incluye una mezcla de dos o más de tales materiales o una pluralidad de moléculas inmunosupresoras, y similares.
Se debe interpretar que el término "comprenden" o variaciones de este tales como "comprende" o "que comprende", tal como se utilizan en la presente, indican la inclusión de cualquier entidad mencionada (p. ej., un aspecto, elemento, característica, propiedad, limitación o paso del proceso/método) o grupo de entidades (p. ej., aspectos, elementos, características, propiedades, limitaciones o pasos del proceso/método), pero no la exclusión de ninguna otra entidad o grupo de entidades. De este modo, la expresión "que comprende", tal como se utiliza en la presente, es inclusiva y no excluye entidades ni pasos del proceso/método adicionales que no se hayan mencionado.
En las realizaciones de cualquiera de las composiciones y métodos proporcionados en la presente, la expresión "que comprende" se puede reemplazar por "constituido esencialmente por" o "constituido por". La expresión "constituido esencialmente por" se emplea en la presente para requerir la(s) entidad(es) o pasos especificados, así como también aquellos que no afectan materialmente al carácter o la función de la invención reivindicada. La expresión "constituido", tal como se utiliza en la presente, se emplea para indicar la presencia únicamente de la entidad mencionada (p. ej., un aspecto, elemento, característica, propiedad, limitación o paso del proceso/método) o grupo de entidades (p. ej., aspectos, elementos, características, propiedades, limitaciones o pasos del proceso/método).
A. Introducción Tal como se ha mencionado previamente, los inmunosupresores convencionales actuales son de amplio espectro y generalmente producen una reducción sistémica global del sistema inmunitario. Las composiciones y métodos proporcionados en la presente ofrecen efectos inmunitarios más localizados al permitir, por ejemplo, la liberación localizada en células inmunitarias de interés. Por lo tanto, las composiciones y métodos pueden conseguir supresión inmunitaria de una forma más localizada. Se ha descubierto que la administración de inmunosupresores y antígenos que comprenden epítopos restringidos por MHC de clase II puede reducir de forma eficaz la producción de anticuerpos específicos para el antígeno así como también reducir la generación de linfocitos B y linfocitos T CD4+ específicos para el antígeno. Debido a que este tipo de respuestas inmunitarias pueden ser beneficiosas para contrarrestar respuestas inmunitarias no deseadas que se generan durante el tratamiento terapéutico con proteínas terapéuticas, la invención es útil para promover respuestas inmunitarias tolerogénicas en sujetos que han recibido, están recibiendo o recibirán una proteína terapéutica contra la cual se generan respuestas inmunitarias no deseadas o cabe esperar que estas se generen. La presente invención, en algunas realizaciones, previene o suprime respuestas inmunitarias no deseadas que pueden neutralizar el efecto beneficioso de ciertos tratamientos terapéuticos.
Los inventores han descubierto inesperada y sorprendentemente que los problemas y las limitaciones que se han indicado anteriormente se pueden resolver llevando a la práctica la invención que se describe en la presente. En particular, los inventores han descubierto inesperadamente que es posible proporcionar composiciones de nanoportadores sintéticos y métodos relacionados, que induce una respuesta inmunitaria tolerogénica a proteínas terapéuticas. Las composiciones descritas en la presente incluyen composiciones que comprenden (i) una primera población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a inmunosupresores y (ii) una segunda población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a antígenos presentables por APC de proteína terapéutica.
En otro aspecto, se proporcionan formas farmacéuticas de cualquiera de las composiciones de la presente. Tales formas farmacéuticas se pueden administrar a un sujeto, tal como un sujeto que lo necesite (p. ej., que necesite respuestas inmunitarias tolerogénicas específicas para la proteína terapéutica). En una realización, el sujeto es aquel que ha sido, está siendo o será tratado con una proteína terapéutica contra la cual se generan respuestas inmunitarias no deseadas o cabe esperar que estas se generen.
En otro aspecto, se administra cualquiera de las composiciones proporcionadas en la presente a un sujeto. La composición se puede administrar en una cantidad eficaz para reducir la generación de una respuesta inmunitaria no deseada contra una o más proteínas terapéuticas. En una realización, se administra una composición a un sujeto de acuerdo con un protocolo que se ha demostrado previamente que reduce la generación de una respuesta inmunitaria no deseada a proteínas terapéuticas en uno o más sujetos. La respuesta inmunitaria no deseada puede ser la generación de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica, la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ o proliferación y/o actividad de linfocitos B, o combinaciones de estas. Las respuestas inmunitarias no deseadas también pueden ser la generación de otras respuestas inmunitarias posteriores a las mencionadas anteriormente. En las realizaciones, la cantidad eficaz o protocolo genera o se ha demostrado que genera respuestas inmunitarias deseadas. Tales respuestas inmunitarias incluyen la reducción de cualquiera de las anteriores o sus combinaciones. Tales respuestas inmunitarias incluyen cualesquiera respuestas inmunitarias tolerogénicas, tales como las descritas en la presente.
Las composiciones se pueden administrar al sujeto antes, concomitantemente o después de administrar una proteína terapéutica al sujeto. En algunas realizaciones, las composiciones de nanoportadores sintéticos se administran antes de que se establezca una respuesta de memoria madura en el sujeto. Los métodos proporcionados, en algunas realizaciones, pueden comprender además administrar la proteína terapéutica. En las realizaciones, las composiciones proporcionadas también se pueden administrar como una o más dosis de mantenimiento a un sujeto que ha recibido, está recibiendo o recibirá una proteína terapéutica. En tales realizaciones, las composiciones proporcionadas se administran de modo que se reduzca la generación de una respuesta inmunitaria no deseada durante un período determinado. En otras secciones de la presente se proporcionan ejemplos de tales períodos.
En otro aspecto adicional, se proporciona un método para (i) producir una primera población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a inmunosupresores y (ii) producir una segunda población de nanoportadores sintéticos que están acoplados a antigenos presentables por APC de proteína terapéutica. En una realización, el método comprende además producir una forma farmacéutica que comprende la primera y la segunda población de nanoportadores sintéticos.
A continuación, la invención se describirá más detalladamente.
B. Definiciones El término "administrar" o "administración" se refiere a proporcionar un material a un sujeto de una manera que sea farmacológicamente útil.
La expresión "cantidad eficaz" en el contexto de una composición o forma farmacéutica para la administración a un sujeto se refiere a una cantidad de la composición o forma farmacéutica que produce una o más respuestas ¡nmunitarias deseadas en el sujeto, por ejemplo, la generación de una respuesta inmunitaria tolerogénica, (p. ej., una reducción en la proliferación, activación, inducción, atracción de linfocitos T CD4+ específicos para el antígeno o linfocitos B específicos para el antígeno, o una reducción en la producción de anticuerpos específicos para el antígeno). Por lo tanto, en algunas realizaciones, una cantidad eficaz es cualquier cantidad de una composición proporcionada en la presente que produce una o más de estas respuestas inmunitarias deseadas. Esta cantidad puede ser para aplicaciones in vitro o in vivo. Para las aplicaciones in vivo, la cantidad puede ser aquella que un médico considere que pueda ejercer un beneficio clínico para un sujeto que necesite la inducción de inmunotolerancia específica para el antígeno.
Las cantidades eficaces pueden suponer únicamente reducir el nivel de una respuesta inmunitaria no deseada, aunque en algunas realizaciones, suponen prevenir una respuesta inmunitaria no deseada por completo. Las cantidades eficaces también pueden suponer ralentizar la aparición de una respuesta inmunitaria no deseada. Una cantidad que es eficaz también puede ser una cantidad de una composición proporcionada en la presente que produce un objetivo terapéutico deseado o un resultado terapéutico deseado. Las cantidades eficaces, preferentemente, producen una respuesta inmunitaria tolerogénica a un antígeno en un sujeto. El logro de cualquiera de los resultados anteriores se puede monitorizar mediante métodos rutinarios.
En algunas realizaciones de cualquiera de las composiciones y métodos proporcionados, la cantidad eficaz es aquella en la que la respuesta inmunitaria deseada persiste en el sujeto durante al menos 1 semana, al menos 2 semanas, al menos 1 mes, al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 4 meses, al menos 5 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 1 año, al menos 2 años, al menos 5 años o más. En otras realizaciones de cualquiera de las composiciones y métodos proporcionados, la cantidad eficaz es aquella que produce una respuesta inmunitaria deseada medible, por ejemplo, una reducción medible en una respuesta inmunitaria (p. ej., a un antígeno específico) durante al menos 1 semana, al menos 2 semanas, al menos 1 mes, al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 4 meses, al menos 5 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 1 año, al menos 2 años, al menos 5 años o más.
Las cantidades eficaces dependerán, obviamente, del sujeto particular que se esté tratando; la gravedad de la afección, enfermedad o trastorno; los parámetros individuales del paciente, que incluyen la edad, el estado físico, el tamaño y el peso; la duración del tratamiento; la naturaleza de las terapias concurrentes (en caso de que las haya); la vía específica de administración y factores similares comprendidos entre los conocimientos y las competencias del profesional sanitario. Los expertos en la técnica estarán familiarizados con estos factores los cuales se pueden determinar simplemente mediante experimentación rutinaria. Por lo general, se prefiere emplear una dosis máxima, es decir, la dosis segura más elevada de acuerdo con un juicio médico razonable. Sin embargo, los expertos en la técnica sobreentenderán que un paciente puede insistir en tomar una dosis inferior o una dosis tolerable por motivos médicos, motivos psicológicos o virtualmente por cualquier otro motivo.
En general, las dosis de los inmunosupresores y/o antígenos en las composiciones de la invención pueden variar entre aproximadamente 10 Dg/kg y aproximadamente 100 000 Dg/kg. En algunas realizaciones, las dosis pueden variar entre aproximadamente 0.1 mg/kg y aproximadamente 100 mg/kg. En otras realizaciones más, las dosis pueden variar entre aproximadamente 0.1 mg/kg y aproximadamente 25 mg/kg, entre aproximadamente 25 mg/kg y aproximadamente 50 mg/kg, entre aproximadamente 50 mg/kg y aproximadamente 75 mg/kg o entre aproximadamente 75 mg/kg y aproximadamente 100 mg/kg. Como alternativa, la dosis se puede administrar en función del número de nanoportadores sintéticos que proporcionen la cantidad deseada de inmunosupresores y/o antígenos. Por ejemplo, las dosis útiles incluyen más de 106, 107, 108, 109 o 1010 nanoportadores sintéticos por dosis. Otros ejemplos de dosis útiles incluyen entre aproximadamente 1x106 y aproximadamente 1x1010, entre aproximadamente 1x107 y aproximadamente 1x109 o entre aproximadamente 1 x108 y aproximadamente 1 x109 nanoportadores sintéticos por dosis.
El término "antígeno" se refiere a un antígeno de linfocitos B o un antígeno de linfocitos T. La expresión "tipo(s) de antígenos" se refiere a moléculas que comparten las mismas características antigénicas o sustancialmente las mismas. En algunas realizaciones, los antígenos pueden ser proteínas, polipéptidos, péptidos, lipoproteínas, glucolípidos, polinucleótidos, polisacáridos o están contenidos o se expresan en células. En algunas realizaciones, tales como cuando los antígenos no están bien definidos o caracterizados, los antígenos pueden estar contenidos dentro de un preparado celular o tisular, residuos celulares, exosomas celulares, medios acondicionados, etc. Un antígeno se puede combinar con los nanoportadores sintéticos en la misma forma a la que está expuesto un sujeto la cual provoca una respuesta inmunitaria no deseada pero también puede ser un fragmento o derivado de esta. Sin embargo, cuando se trate de un fragmento o derivado, una respuesta inmunítaria deseada a la forma a la que se expone dicho sujeto es el resultado preferible con las composiciones y métodos proporcionados.
La expresión "específica para el antígeno" se refiere a cualquier respuesta inmunitaria debida a la presencia del antígeno o porción de este, o que genera moléculas que reconocen o se unen específicamente al antígeno. Por ejemplo, si la respuesta inmunitaria es la producción de anticuerpos específicos para el antígeno, se producen anticuerpos que se unen específicamente al antígeno. Como otro ejemplo, si la respuesta inmunitaria es la proliferación y/o actividad específica para el antígeno de linfocitos T CD4+ o linfocitos B, la proliferación y/o actividad se debe al reconocimiento del antígeno o porción de este, solo o en un complejo con moléculas MHC, linfocitos B, etc.
La expresión "evaluar una respuesta inmunitaria" se refiere a cualquier medición o determinación del nivel, la presencia o ausencia, reducción, incremento, etc. de una respuesta inmunitaria in vitro o in vivo. Tales mediciones o determinaciones se pueden llevar a cabo en una o más muestras obtenidas de un sujeto. Dicha evaluación se puede llevar a cabo mediante cualquiera de los métodos proporcionados en la presente o conocidos en la técnica.
Un sujeto "que corre el riesgo de" es aquel que un profesional sanitario considera que es posible que desarrolle una enfermedad, afección a trastorno como los proporcionados en la presente o es aquel que un profesional sanitario considera que es posible que experimente una respuesta inmunita a no deseada como las proporcionadas en la presente.
El término "promedio", tal como se utiliza la presente, se refiere a la media aritmética a menos que se indique lo contrario.
La expresión "antígeno de linfocitos B" se refiere a cualquier antígeno que es reconocido por un linfocito B y desencadena una respuesta inmunitaria en este (p. ej., un antígeno que es reconocido específicamente por un linfocito B o un receptor de este). En algunas realizaciones, un antígeno que es un antígeno de linfocitos T también es un antígeno de linfocitos B. En otras realizaciones, el antígeno de linfocitos T no es además un antígeno de linfocitos B. Los antígenos de linfocitos B incluyen, sin carácter limitante, proteínas, péptidos, etc. En algunas realizaciones, el antígeno de linfocitos B comprenden un antígeno no proteico (es decir, no se trata de un antígeno proteico ni peptídico).
El término "concomitantemente" se refiere a administrar dos o más sustancias a un sujeto de un modo que está correlacionado en el tiempo, preferentemente lo suficientemente correlacionado en el tiempo para proporcionar una modulación de la respuesta inmunitaria. En las realizaciones, la administración concomitante puede tener lugar mediante la administración de dos o más sustancias en la misma forma farmacéutica. En otras realizaciones, la administración concomitante puede englobar la administración de dos o más sustancias en diferentes formas farmacéuticas, pero dentro de un periodo especificado de tiempo, preferentemente en 1 mes, más preferentemente en 1 semana, aún más preferentemente en 1 día e incluso más preferentemente en 1 hora.
El término "acoplar", "acoplado" o "se acopla" (y similares) se refiere a asociar químicamente una entidad (por ejemplo, un resto) con otra. En algunas realizaciones, el acoplamiento es covalente, lo cual significa que el acoplamiento tiene lugar en el contexto de la presencia de un enlace covalente entre las dos entidades. En las realizaciones no covalentes, el acoplamiento no covalente está mediado por interacciones no covalentes que incluyen, sin carácter limitante, interacciones de cargas, interacciones de afinidad, coordinación de metales, adsorción física, interacciones de receptor-sustrato, interacciones hidrófobas, interacciones aromáticas, interacciones de puente de hidrógeno, interacciones de van der Waals, interacciones magnéticas, interacciones electrostáticas, interacciones dipolo-dipolo y/o combinaciones de estas. En algunas realizaciones, la encapsulación es una forma de acoplamiento.
El término "derivado" quiere decir preparado a partir de un material o información relacionada con un material pero que no se "obtiene" del material. Tales materiales pueden ser formas procesadas o modificadas sustancialmente de materiales extraídos directamente de un material biológico. Tales materiales también incluyen materiales producidos a partir de información relacionada con un material biológico.
La expresión "forma farmacéutica" se refiere a un material farmacológica y/o inmunológicamente activo en un medio, portador, vehículo o dispositivo adecuado para su administración a un sujeto.
El término "encapsular" se refiere a encerrar al menos una porción de una sustancia dentro de un nanoportador sintético. En algunas realizaciones, una sustancia se encierra completamente dentro de un nanoportador sintético. En otras realizaciones, la mayor parte o la totalidad de una sustancia que está encapsulada no está expuesta al entorno local externo al nanoportador sintético. En otras realizaciones, no más de un 50%, 40%, 30%, 20%, 10% o 5% (peso/peso) está expuesto al entorno local. La encapsulación es distinta de la absorción, que sitúa la mayor parte o la totalidad de una sustancia sobre una superficie de un nanoportador sintético y deja la sustancia expuesta al entorno local externo al nanoportador sintético.
El término "epítopo", también conocido como determinante antigénico, es la parte de un antígeno que es reconocida por el sistema inmunitario, específicamente por, por ejemplo, anticuerpos, linfocitos B o linfocitos T. La expresión "epítopos restringidos por MHC de clase I", tal como se utiliza en la presente, se refiere a epítopos que son presentados a las células inmunitarias por moléculas MHC de clase I en células nucleadas. La expresión "epítopos restringidos por MHC de clase II" se refiere a epítopos que son presentados a las células inmunitarias por moléculas MHC de clase II que se encuentran en células presentadoras de antígeno (APC), por ejemplo, en células inmunitarias presentadoras de antígeno profesionales, tales como macrófagos, linfocitos B y células dendríticas, o en células no hematopoyéticas, tales como hepatocitos. La expresión "epítopos de linfocitos B" se refiere a estructuras moleculares que son reconocidas por anticuerpos o linfocitos B. En algunas realizaciones, el propio epítopo es un antígeno.
Los expertos en la técnica estarán familiarizados con múltiples epítopos y los epítopos ilustrativos adecuados de acuerdo con algunos aspectos de esta invención incluyen, sin carácter limitante, los enumerados en la base de datos de epítopos inmunitarios (www.immuneepitope.org, Vita R, Zarebski L, Greenbaum JA, Emami H, Hoof I, Salimi N, Damle R, Sette A, Peters B. The immune epitope datábase 2.0. Nucleic Acids Res. enero de 2010;38(edición de la base de datos):D854-62; el contenido de la cual se incorpora en su totalidad a la presente por referencia así como también todas las entradas de la base de datos de la versión 2.4 de IEDB, agosto de 2011 , y en particular todos los epítopos descritos en ellas). Los epítopos también se pueden identificar con algoritmos de acceso público, por ejemplo, los algoritmos descritos en Wang P, Sidney J, Kim Y, Sette A, Lund O, Nielsen M, Peters B. 2010. Peptide binding predictions for HLA DR, DP and DQ molecules. BMC Bioinformatics 2010, 11 :568; Wang P, Sidney J, Dow C, Mothé B, Sette A, Peters B. 2008. A systematic assessment of MHC class II peptide binding predictions and evaluation of a consensus approach. PLoS Comput Biol. 4(4):e1000048; Nielsen M, Lund O. 2009. NN-align. An artificial neural network-based alignment algorithm for MHC class II peptide binding prediction. BMC Bioinformatics. 10:296; Nielsen M, Lundegaard C, Lund O. 2007. Prediction of MHC class II binding affinity using SMM-align, a novel stabilization matrix alignment method. BMC Bioinformatics. 8:238; Bui HH, Sidney J, Peters B, Sathiamurthy M, Sinichi A, Purton KA, Mothé BR, Chisari FV, Watkins DI, Sette A. 2005. Immunogenetics. 57:304-314; Sturniolo T, Bono E, Ding J, Raddrizzani L, Tuereci O, Sahin U, Braxenthaler M, Gallazzi F, Protti MP, Sinigaglia F, Hammer J. 1999. Generation of tissue-specific and promiscuous HLA ligand databases using DNA microarrays and virtual HLA class II matrices. Nat Biotechnol. 17(6): 555-561 ; Nielsen M, Lundegaard C, Worning P, Lauemoller SL, Lamberth K, Buus S, Brunak S, Lund O. 2003. Reliable prediction of T-cell epitopes using neural networks with novel sequence representations. Protein Sci 12:1007-1017; Bui HH, Sidney J, Peters B, Sathiamurthy M, Sinichi A, Purton KA, Mothe BR, Chisari FV, Watkins DI, Sette A. 2005. Automated generation and evaluation of specific MHC binding predictive tools: ARB matrix applications. Immunogenetics 57:304-314; Peters B, Sette A. 2005. Generating quantitative models describing the sequence specificity of biological processes with the stabilized matrix method. BMC Bioinformatics 6:132; Chou PY, Fasman GD. 1978. Prediction of the secondary structure of proteins from their amino acid sequence. Adv Enzymol Relat Areas Mol Biol 47:45-148; Emini EA, Hughes JV, Perlow DS, Boger J. 1985. Induction of hepatitis A virus-neutralizing antibody by a virus-specific synthetic peptide. J Virol 55:836-839; Karplus PA, Schulz GE. 1985. Prediction of chain flexibility in proteins. Naturwissenschaften 72:212-213; Kolaskar AS, Tongaonkar PC. 1990. A semi-empirical method for prediction of antigenic determinante on protein antigens. FEBS Lett276: 172-174; Parker JM, Guo D, Hodges RS. 1986. New hydrophilicity scale derived from high-performance liquid chromatography peptide retention data: correlation of predicted surface residues with antigenicity and X-ray-derived accessible sites. Biochemistry 25:5425-5432; Larsen JE, Lund O, Nielsen M. 2006. Improved method for predicting linear B-cell epitopes. Immunome Res 2:2; Ponomarenko JV, Bourne PE. 2007. Antibody-protein interactions: benchmark dataseis and prediction tools evaluation. BMC Struct Biol 7:64; Haste Andersen P, Nielsen M, Lund O. 2006. Prediction of residues in discontinuous B-cell epitopes using protein 3D structures. Protein Sci 15:2558-2567; Ponomarenko JV, Bui H, Li W, Fusseder N, Bourne PE, Sette A, Peters B. 2008. ElliPro: a new structure-based tool for the prediction of antibody epitopes. BMC Bioinformatics 9:514; Nielsen M, Lundegaard C, Blicher T, Peters B, Sette A, Justesen S, Buus S, and Lund O. 2008. PLoS Comput Biol.4(7)e1000107. Quantitative predictions of peptide binding to any HLA-DR molecule of known sequence: NetMHCIIpan; el contenido de cada uno de los cuales se incorpora en su totalidad a la presente por referencia para la descripción de métodos y algoritmos para la identificación de epítopos.
El término "generar" se refiere a provocar una acción, tal como una respuesta inmunitaria (p. ej., una respuesta inmunitaria tolerogénica), ya sea directamente uno mismo o indirectamente, tal como, sin carácter limitante, un tercero no relacionado que ejerce una acción debido a la confianza en la información o acciones de otro.
El término "identificar" se refiere a una acción o un conjunto de acciones que permite a un médico reconocer a un sujeto como aquel que se puede beneficiar de las composiciones y métodos proporcionados en la presente. Preferentemente, el sujeto identificado es aquel que necesita una respuesta inmunitaria tolerogénica como las proporcionadas en la presente. La acción o conjunto de acciones puede tratarse de directamente uno mismo o indirectamente, tal como, sin carácter limitante, un tercero no relacionado que ejerce una acción debido a la confianza en la información o acciones de otro.
El término "inmunosupresor" se refiere a un compuesto que hace que una APC ejerza un efecto inmunosupresor (p. ej., tolerogénico). Un efecto inmunosupresor generalmente se refiere a la producción o expresión de citocinas u otros factores por parte de la APC que reduce, inhibe o previene una respuesta inmunitaria no deseada o que promueve una respuesta inmunitaria deseada. Cuando la APC produce un efecto inmunosupresor sobre células inmunitarias que reconocen un antígeno presentado por la APC, el efecto inmunosupresor se califica como específico para el antígeno presentado. Tal efecto también se denomina en la presente efecto tolerogénico. Sin que ello suponga ceñirse a ninguna teoría particular, se cree que el efecto inmunosupresor o tolerogénico es un resultado de la administración del inmunosupresor a la APC, preferentemente en presencia de un antígeno (p. ej., un antígeno administrado o uno que ya está presente in vivo). Por consiguiente, el inmunosupresor incluye compuestos que proporcionan una respuesta inmunitaria tolerogénica a un antígeno que puede ser proporcionado o no en la misma composición o en una composición diferente. En una realización, el inmunosupresor es aquel que hace que una APC fomente un fenotipo regulador en una o más células efectoras inmunitarias. Por ejemplo, el fenotipo regulador se puede caracterizar por la inhibición de la producción, inducción, estimulación o atracción de linfocitos B o linfocitos T CD4+ específicos para el antígeno, la inhibición de la producción de anticuerpos específicos para el antígeno, la producción, inducción, estimulación o atracción de linfocitos T reguladores (p. ej., linfocitos Treg CD4+CD25highFoxP3+), etc. Esto puede ser el resultado de la conversión de linfocitos B o linfocitos T CD4+ en un fenotipo regulador. Esto también puede ser el resultado de la inducción de FoxP3 en otras células inmunitarias, tales como linfocitos T CD8+, macrófagos y linfocitos ¡NKT. En una realización, el inmunosupresor es aquel que afecta a la respuesta de la APC después de que esta procese un antígeno. En otra realización, el inmunosupresor no es aquel que interfiere en el procesamiento del antígeno. En otra realización, el inmunosupresor no es una molécula de señalización apoptótica. En otra realización, el inmunosupresor no es un fosfolípido.
Los inmunosupresores incluyen, sin carácter limitante, estatinas; inhibidores de mTOR, tales como la rapamicina o un análogo de la rapamicina; agentes señalizadores de TGF-ß; agonistas de los receptores de TGF-ß; inhibidores de la histona-deacetilasa, tales como Tricostatina A; corticosteroides; inhibidores de la función mitocondrial, tales como rotenona; inhibidores de P38; inhibidores de NF-?ß, tales como 6Bio, Dexametasona, TCPA-1, IKK VII; agonistas de los receptores de adenosina; agonistas de la prostaglandina E2 (PGE2), tales como Misoprostol; inhibidores de la fosfodiesterasa, tales como un inhibidor de la fosfodiesterasa 4 (PDE4), tales como Rolipram; inhibidores de proteasomas; inhibidores de cinasas; agonistas de receptores acoplados a proteínas G; antagonistas de receptores acoplados a proteínas G; glucocorticoides; retinoides; inhibidores de citocinas; inhibidores de los receptores de citocinas; activadores de los receptores de citocinas; antagonistas de los receptores activados por el proliferador de peroxisomas; agonistas de los receptores activados por el proliferador de peroxisomas; inhibidores de la histona-deacetilasa; inhibidores de calcineurina; inhibidores de fosfatasas; inhibidores de PI3KB, tales como TGX-221 ; inhibidores de la autofagia, tales como 3-Metiladenina; inhibidores de los receptores de aril-hidrocarburos; inhibidor del proteasoma I (PSI); y ATP oxidados, tales como los bloqueadores de los receptores P2X. Los inmunosupresores también incluyen IDO, vitamina D3, ciclosporinas, tales como la ciclosporina A, inhibidores de los receptores de aril-hidrocarburos, resveratrol, azatiopurina (Aza), 6-mercaptopurina (6-MP), 6-tioguanina (6-TG), FK506, sanglifehrina A, salmeterol, micofenolato mofetilo (MMF), aspirina y otro inhibidores de COX, ácido niflúmico, estriol y triptolida. En las realizaciones, el inmunosupresor puede comprender cualquiera de los agentes proporcionados en la presente.
El inmunosupresor puede ser un compuesto que proporcione directamente el efecto inmunosupresor (p. ej., tolerogénico) sobre las APC o puede ser un compuesto que proporcione el efecto inmunosupresor (p. ej., tolerogénico) indirectamente (es decir, después de haber sido procesado de alguna forma tras la administración). Por lo tanto los inmunosupresores incluyen las formas de profármaco de cualquiera de los compuestos proporcionados en la presente.
Los inmunosupresores también incluyen los ácidos nucleicos que codifican los péptidos, polipéptidos o proteínas proporcionados en la presente que proporcionan una respuesta inmunitaria inmunosupresora (p. ej., tolerogénica). Por lo tanto, en algunas realizaciones, el inmunosupresor es un ácido ribonucleico que codifica un péptido, polipéptido o proteína que produce una respuesta inmunitaria inmunosupresora (p. ej., tolerogénica) y es el ácido nucleico que está acoplado al nanoportador sintético.
El ácido nucleico puede ser ADN o ARN, tal como ARNm. En las realizaciones, las composiciones de la invención comprenden un complemento, tal como un complemento de longitud completa, o una forma redundante (debido a la redundancia del código genético) de cualquiera de los ácidos nucleicos proporcionados en la presente. En las realizaciones, el ácido nucleico es un vector de expresión que se puede transcribir cuando se transfiere a una línea celular. En las realizaciones, el vector de expresión puede comprender un plásmido, retrovirus o un adenovirus, entre otros. Los ácidos nucleicos se pueden aislar o sintetizar utilizando métodos de biología molecular estándar, por ejemplo, utilizando una reacción en cadena de la polimerasa para producir un fragmento de ácido nucleico, que a continuación se purifica y clona en un vector de expresión. Se pueden consultar otras técnicas útiles para llevar a la práctica esta invención en Current Protocols in Molecular Biology 2007 de John Wiley and Sons, Inc.; Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Tercera Edición) Joseph Sambrook, Instituto del Cáncer Peter MacCallum, Melbourne, Australia; David Russell, Centro Médico Southwestern de la Universidad de Texas, Dallas, Cold Spring Harbor.
En las realizaciones, los inmunosupresores proporcionados en la presente están acoplados a nanoportadores sintéticos. En las realizaciones preferentes, el inmunosupresor es un elemento que se suma al material que constituye la estructura del nanoportador sintético. Por ejemplo, en una realización, donde el nanoportador sintético está constituido por uno o más polímeros, el inmunosupresor es un compuesto que se suma y está acoplado al polímero o polímeros. Como otro ejemplo, en una realización, donde el nanoportador sintético está constituido por uno o más lípidos, el inmunosupresor de nuevo se suma y está acoplado al lípido o lípidos. En las realizaciones, tales como donde el material del nanoportador sintético también produce un efecto inmunosupresor (p. ej., tolerogénico), el inmunosupresor es un elemento presente que se suma al material del nanoportador sintético que produce un efecto inmunosupresor (p. ej., tolerogénico).
Otros inmunosupresores ilustrativos incluyen, sin carácter limitante, fármacos de bajo peso molecular, productos naturales, anticuerpos (p. ej., anticuerpos contra CD20, CD3, CD4), fármacos biológicos, fármacos a base de carbohidratos, nanopartículas, liposomas, ARNi, ácidos nucleicos antisentido, aptámeros, metotrexato, AINE; fingolimod; natalizumab; alemtuzumab; anti-CD3; tacrolimus (FK506), etc. Los expertos en la técnica estarán familiarizados con otros inmunosupresores y la invención no está limitada a este respecto.
El término "carga" del inmunosupresor o antígeno presentable por APC de proteína terapéutica es la cantidad del inmunosupresor o antígeno presentable por APC de proteína terapéutica acoplado a un nanoportador sintético en función del peso total de los materiales en un nanoportador sintético completo (peso/peso). En general, la carga se calcula como un promedio entre una población de nanoportadores sintéticos. En una realización, la carga del inmunosupresor como promedio entre la primera población de nanoportadores sintéticos está comprendida entre un 0.0001% y un 50%. En otra realización, la carga del antígeno presentable por APC de proteína terapéutica como promedio entre la primera y/o segunda población de nanoportadores sintéticos está comprendida entre un 0.0001% y un 50%. En otra realización adicional, la carga del inmunosupresor y/o antígeno presentable por APC de proteína terapéutica está comprendida entre un 0.01% y un 20%. En otra realización, la carga del inmunosupresor y/o antígeno presentable por APC de proteína terapéutica está comprendida entre un 0.1% y un 10%. En otra realización más, la carga del inmunosupresor y/o antígeno presentable por APC de proteína terapéutica está comprendida entre un 1% y un 10%. En otra realización adicional, la carga del inmunosupresor y/o el antígeno presentable por APC de proteína terapéutica es de al menos un 0.1%, al menos un 0.2%, al menos un 0.3%, al menos un 0.4%, al menos un 0.5%, al menos un 0.6%, al menos un 0.7%, al menos un 0.8%, al menos un 0.9%, al menos un 1%, al menos un 2%, al menos un 3%, al menos un 4%, al menos un 5%, al menos un 6%, al menos un 7%, al menos un 8%, al menos un 9%, al menos un 10%, al menos un 11%, al menos un 12%, al menos un 13%, al menos un 14%, al menos un 15%, al menos un 16%, al menos un 17%, al menos un 18%, al menos un 19% o al menos un 20% como promedio entre la población de nanoportadores sintéticos. En otra realización adicional, la carga del inmunosupresor y/o el antígeno presentable por APC de proteína terapéutica es de un 0.1%, un 0.2%, un 0.3%, un 0.4%, un 0.5%, un 0.6%, un 0.7%, un 0.8%, un 0.9%, un 1%, un 2%, un 3%, un 4%, un 5%, un 6%, un 7%, un 8%, un 9%, un 10%, un 11%, un 12%, un 13%, un 14%, un 15%, un 16%, un 17%, un 18%, un 19% o un 20% como promedio entre la población de nanoportadores sintéticos. En algunas realizaciones de las realizaciones anteriores, la carga del inmunosupresor y/o el antígeno presentable por APC de proteína terapéutica no es superior a un 25% como promedio entre una población de nanoportadores sintéticos. En las realizaciones, la carga se calcula como se describe en los Ejemplos.
En las realizaciones de cualquiera de las composiciones y métodos proporcionados, la carga se calcula como se indica a continuación: se recogen aproximadamente 3 mg de nanoportadores sintéticos y se centrifugaron para separar el sobrenadante del pellet de nanoportadores sintéticos. Se añade acetonitrilo al pellet, y la muestra se sónica y centrifuga para eliminar cualquier material insoluble. El sobrenadante y el pellet se inyectan en un RP-HPLC y se lee la absorbancia a 278 nm. Los g que se encuentran en el pellet se utilizan para calcular el % atrapado (carga) y los g en el sobrenadante y el pellet se utilizan para calcular los pg totales recuperados.
La expresión "dosis de mantenimiento" se refiere a una dosis que se administra a un sujeto, después de que una dosis inicial haya provocado una respuesta inmunosupresora (p. ej., tolerogénica) en un sujeto, para mantener una respuesta inmunosupresora deseada (p. ej., tolerogénica). Una dosis de mantenimiento puede ser, por ejemplo, aquella que mantiene el efecto tolerogénico conseguido después de la dosis inicial, previene una respuesta inmunitaria no deseada en el sujeto o previene que el sujeto se convierta en un sujeto que corra el riesgo de experimentar una respuesta inmunitaria no deseada, incluido un nivel no deseado de una respuesta inmunitaria. En algunas realizaciones, la dosis de mantenimiento es aquella que es suficiente para mantener un nivel adecuado de una respuesta inmunitaria deseada.
La expresión "dimensión máxima de un nanoportador sintético" se refiere a la mayor dimensión de un nanoportador medida a lo largo de cualquier eje del nanoportador sintético. La expresión "dimensión mínima de un nanoportador sintético" se refiere a la dimensión más pequeña de un nanoportador sintético medida a lo largo de cualquier eje del nanoportador sintético. Por ejemplo, para un nanoportador sintético esferoidal, la dimensión máxima y la mínima del nanoportador sintético serían sustancialmente idénticas y serían del tamaño de su diámetro. De manera similar, para un nanoportador sintético cuboidal, la dimensión mínima del nanoportador sintético sería la más pequeña de su altura, ancho o largo, mientras que la dimensión máxima del nanoportador sintético sería la mayor de su altura, ancho o largo. En una realización, la dimensión mínima de al menos un 75%, preferentemente al menos un 80%, más preferentemente al menos un 90%, de los nanoportadores sintéticos en una muestra, basándose en el número total de nanoportadores sintéticos en la muestra, es mayor o igual a 100 nm. En una realización, la dimensión máxima de al menos un 75%, preferentemente al menos un 80%, más preferentemente al menos un 90%, de los nanoportadores sintéticos en una muestra, basándose en el número total de nanoportadores sintéticos en la muestra, es inferior o igual a 5 µ??. Preferentemente, la dimensión mínima de al menos un 75%, preferentemente al menos un 80%, más preferentemente al menos un 90%, de los nanoportadores sintéticos en una muestra, basándose en el número total de nanoportadores sintéticos en la muestra, es superior a 110 nm, más preferentemente superior a 120 nm, más preferentemente superior a 130 nm y aún más preferentemente superior a 150 nm. Las relaciones entre dimensiones para las dimensiones máxima y mínima de los nanoportadores sintéticos de la invención pueden variar dependiendo de la realización. Por ejemplo, las relaciones entre dimensiones para las dimensiones máxima frente a mínima de los nanoportadores sintéticos pueden variar desde 1 :1 hasta 1 000 000:1 , preferentemente desde 1 :1 hasta 100 000:1 , más preferentemente desde 1 :1 hasta 10 000:1 , más preferentemente desde 1 :1 hasta 1000:1 , aún más preferentemente desde 1 :1 hasta 100:1 , e incluso más preferentemente desde 1 :1 hasta 10:1. Preferentemente, la dimensión máxima de al menos un 75%, preferentemente al menos un 80%, más preferentemente al menos un 90%, de los nanoportadores sintéticos en una muestra, basándose en el número total de nanoportadores sintéticos en la muestra, es menor o igual a 3 µ??, más preferentemente menor o igual a 2 µ?t?, más preferentemente menor o igual a 1 µ?t?, más preferentemente menor o igual a 800 nm, más preferentemente menor o igual a 600 nm, y aún más preferentemente menor o igual a 500 nm. En las realizaciones preferidas, la dimensión mínima de al menos un 75%, preferentemente al menos un 80%, más preferentemente al menos un 90%, de los nanoportadores sintéticos en una muestra, basándose en el número total de nanoportadores sintéticos en la muestra, es mayor o igual a 100 nm, más preferentemente mayor o igual a 120 nm, más preferentemente mayor o igual a 130 nm, más preferentemente mayor o igual a 140 nm, y aún más preferentemente mayor o igual a 150 nm. La medición de las dimensiones de los nanoportadores sintéticos (p. ej., diámetro) se obtiene suspendiendo los nanoportadores sintéticos en un medio líquido (generalmente acuoso) y utilizando dispersión de luz dinámica (DLS) (p. ej., utilizando un instrumento Brookhaven ZetaPALS). Por ejemplo, una suspensión de nanoportadores sintéticos se puede diluir a partir de un tampón acuoso en agua purificada para conseguir una concentración final de la suspensión de nanoportadores sintéticos comprendida entre aproximadamente 0.01 y 0.1 mg/mL. La suspensión diluida se puede preparar directamente dentro de una cubeta adecuada para el análisis por DLS o se puede transferir a dicha cubeta. A continuación, la cubeta se puede colocar en el DLS, dejar que se equilibre hasta la temperatura controlada y después escanear durante un tiempo suficiente para adquirir una distribución estable y reproducible basándose en los parámetros adecuados para la viscosidad del medio y los índices de refracción de la muestra. A continuación se registra el diámetro eficaz o la media de la distribución. El término "dimensión", "tamaño" o "diámetro" de los nanoportadores sintéticos se refiere a la media de una distribución del tamaño de partícula obtenida utilizando dispersión de luz dinámica.
El término "MHC" se refiere al complejo principal de histocompatibilidad, una familia de genes o región genómica grande que se encuentra en la mayoría de los vertebrados la cual codifica moléculas MHC que exhiben fragmentos o epítopos de proteínas procesadas en la superficie celular. La presentación de MHC:péptido en las superficies celulares permite la vigilancia por parte de las células inmunitarias, normalmente un linfocito T. Existen dos clases generales de moléculas MHC: Clase I y Clase II. Generalmente, las moléculas MHC de clase I se encuentran en células nucleadas y presentan péptidos a los linfocitos T citotóxicos. Las moléculas MHC de clase II se encuentran en ciertas células inmunitarias, principalmente macrófagos, linfocitos B y células dendríticas, conocidas de forma colectiva como APC profesionales. Los genes más conocidos en la región MHC son el subconjunto que codifica proteínas presentadoras de antígeno en la superficie celular. En los seres humanos, estos genes se denominan genes de antígenos leucocitarios humanos (HLA, por sus siglas en inglés).
La expresión "polímero no terminado en metoxi" se refiere a un polímero que posee al menos un extremo terminal que termina en un resto que no sea metoxi. En algunas realizaciones, el polímero posee al menos dos extremos terminales que terminan en un resto que no sea metoxi. En otras realizaciones, el polímero no tiene ningún extremo terminal que termine en metoxi. La expresión "polímero Pluronic no terminado en metoxi" se refiere a un polímero que no sea un polímero Pluronic lineal con metoxi en ambos extremos terminales. Las nanopartículas poliméricas proporcionadas en la presente pueden comprender polímeros no terminados en metoxi o polímeros Pluronic no terminados en metoxi.
El término "obtenido" se refiere a la extracción directa a partir de un material y a su uso con sustancialmente ninguna modificación y/o procesamiento.
La expresión "excipiente farmacéuticamente aceptable" se refiere a un material farmacológicamente inactivo empleado junto con los nanoportadores sintéticos mencionados para formular las composiciones de la invención. Los excipientes farmacéuticamente aceptables comprenden una variedad de materiales conocidos en la técnica, incluidos, sin carácter limitante, sacáridos (tales como glucosa, lactosa y similares), conservantes tales como agentes antimicrobianos, adyuvantes para la reconstitución, colorantes, solución salina (tal como solución salina tamponada con fosfato) y tampones.
El término "protocolo" se refiere a cualquier régimen posológico de una o más sustancias para un sujeto. Un régimen posológico puede incluir la cantidad, la frecuencia y/o el modo de administración. En algunas realizaciones, este tipo de protocolo se puede utilizar para administrar una o más composiciones de la invención a uno o más sujetos objeto de estudio. Las respuestas inmunitarias en estos sujetos objeto de estudio se pueden evaluar posteriormente para determinar si el protocolo ha sido o no eficaz a la hora de reducir una respuesta inmunitaria no deseada o generar una respuesta inmunitaria deseada (p. ej., fomentar un efecto tolerogénico). También se puede evaluar cualquier otro efecto terapéutico y/o profiláctico en vez de o además de las respuestas inmunitarias mencionadas anteriormente. Se puede determinar si un protocolo ejerce o no un efecto deseado utilizando cualquiera de los métodos proporcionados en la presente o conocidos en la técnica. Por ejemplo, se puede obtener una población de células de un sujeto al cual se le ha administrado una composición proporcionada en la presente de acuerdo con un protocolo específico con el fin de determinar si se ha producido o no la reducción, generación, activación, etc. de células inmunitarias específicas, citocinas, anticuerpos, etc. Los métodos útiles para detectar la presencia y/o el número de células inmunitarias incluyen, sin carácter limitante, métodos de citometría de flujo (p. ej., FACS) y métodos inmunohistoquímicos. Se pueden adquirir de proveedores comerciales anticuerpos y otros agentes ligantes para la tinción específica de marcadores de células ¡nmunitarias. Los kits de este tipo normalmente incluyen reactivos colorantes para múltiples antígenos que permiten la detección, separación y/o cuantificación basadas en FACS de una población de células deseada a partir de una población heterogénea de células.
La expresión "proporcionar a un sujeto" se refiere a cualquier acción o conjunto de acciones que hacen que un médico entre en contacto con un sujeto y le administre una composición proporcionada en la presente o para llevar a cabo seguidamente un método proporcionado en la presente. Preferentemente, el sujeto es aquel que necesita una respuesta inmunitaria tolerogénica como las proporcionadas en la presente. La acción o conjunto de acciones puede tratarse de directamente uno mismo o indirectamente, tal como, sin carácter limitante, un tercero no relacionado que ejerce una acción debido a la confianza en la información o acciones de otro.
El término "sujeto" se refiere a animales, incluidos los mamíferos de sangre caliente tales como seres humanos y primates; aves; animales domésticos, mascotas o animales de granja tales como gatos, perros, ovejas, cabras, reses, caballos y cerdos; animales de laboratorio tales como ratones, ratas y conejillos de Indias; peces; reptiles; animales de zoológico y animales salvajes; y similares.
La expresión "sustancialmente ningún epítopo de linfocitos B" se refiere a la ausencia de epítopos de linfocitos B en una cantidad (por sí sola, dentro del contexto del antígeno, junto con un portador o junto con una composición de la invención) que estimule la activación sustancial de una respuesta por parte de los linfocitos B. En las realizaciones, una composición sin sustancialmente ningún epítopo de linfocitos B no contiene una cantidad medible de epítopos de linfocitos B de un antígeno. En otras realizaciones, este tipo de composición puede comprender una cantidad medible de epítopos de linfocitos B de un antígeno pero dicha cantidad no es eficaz para generar una respuesta por parte de los linfocitos B medible (por sí sola, dentro del contexto del antígeno, junto con un portador o junto con una composición de la invención), tal como la producción de anticuerpos específicos para el antígeno o la proliferación y/actividad de linfocitos B específicos para el antígeno, o no es eficaz para generar una respuesta inmunitaria significativa por parte de los linfocitos B medible (por sí sola, dentro del contexto del antígeno, junto con un portador o junto con una composición de la invención). En algunas realizaciones, una respuesta inmunitaria por parte de los linfocitos B medible es aquella que produce o cabe esperar que produzca un resultado clínico adverso en un sujeto. En otras realizaciones, una respuesta inmunitaria por parte de los linfocitos B medible significativa es aquella que es superior al nivel del mismo tipo de respuesta inmunitaria (p. ej., la producción de anticuerpos específicos para el antígeno o la proliferación y/o actividad de linfocitos B específicos para el antígeno) producida por un antígeno de control (p. ej., aquel que se sabe que no comprende epítopos de linfocitos B del antígeno o que estimula respuestas inmunitarias por parte de los linfocitos B). En algunas realizaciones, una respuesta inmunitaria significativa por parte de los linfocitos B medible, tal como una medición de las titulaciones de anticuerpos (p. ej., por ELISA) es dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, quince, veinte o más veces superior que el mismo tipo de respuesta producida por un control (p. ej., antígeno de control). En otras realizaciones, una composición sin sustancialmente ningún epítopo de linfocitos B es aquella que produce pocas o ninguna titulación de anticuerpos específicos para el antígeno (por sí sola, dentro del contexto del antígeno, junto con un portador o junto con una composición de la invención). Tales composiciones incluyen aquellas que producen una titulación de anticuerpos (como un valor de CE5o) inferior a 500, 400, 300, 200, 100, 50, 40, 30, 20 o 10. En otras realizaciones, una respuesta inmunitaria de linfocitos B medible significativa, es una medición del número o la proliferación de linfocitos B que es un 10%, 25%, 50%, 100%, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, quince, veinte o más veces superior que el mismo tipo de respuesta producida por un control. Los expertos en la técnica estarán familiarizados con otros métodos para medir las respuestas por parte de los linfocitos B.
En las realizaciones, para garantizar que una composición no comprenda sustancialmente ningún epítopo de linfocitos B, se seleccionan antígenos de modo que no comprendan epítopos de linfocitos B para el acoplamiento con los nanoportadores sintéticos proporcionados en la presente. En otras realizaciones, para garantizar que una composición no comprenda sustancialmente ningún epítopo de linfocitos B de un antígeno, se producen los nanoportadores sintéticos acoplados al antígeno y se analizan para determinar sus respuestas inmunitarias por parte de los linfocitos B (p. ej., la producción de anticuerpos específicos para el antígeno, la proliferación y/o actividad de linfocitos B). A continuación se pueden seleccionar las composiciones que exhiben las propiedades deseadas.
La expresión "nanoportador(es) sintético(s)" se refiere a un objeto específico que no se encuentra en la naturaleza y que posee al menos una dimensión que tiene un tamaño menor o igual a 5 mieras. Las nanopartículas de albúmina generalmente se incluyen como nanoportadores sintéticos, sin embargo, en ciertas realizaciones los nanoportadores sintéticos no comprenden nanopartículas de albúmina. En las realizaciones, los nanoportadores sintéticos de la invención no comprenden quitosano. En otras realizaciones, los nanoportadores sintéticos de la invención no son nanopartículas a base de lípidos. En otras realizaciones, los nanoportadores sintéticos de la invención no comprenden un fosfolípido.
Un nanoportador sintético puede ser, sin carácter limitante, una o una pluralidad de nanopartículas a base de lípidos (también denominadas en la presente nanopartículas lipídicas, es decir, nanopartículas en las que la mayor parte del material que constituye su estructura son lípidos), nanopartículas poliméricas, nanopartículas metálicas, emulsiones a base de surfactante, dendrímeros, futbolenos, nanohilos, partículas pseudovíricas (es decir, partículas que están constituidas principalmente por proteínas estructurales víricas pero que no son infecciosas o tienen una infectividad baja), partículas a base de péptidos o proteínas (también denominadas en la presente partículas proteicas, es decir, partículas en las que la mayor parte del material que constituye su estructura son péptidos o proteínas) (tales como nanopartículas de albúmina) y/o nanopartículas que se elaboran utilizando una combinación de nanomateriales tales como nanopartículas poliméricas-lipídicas. Los nanoportadores sintéticos pueden tener una variedad de formas diferentes, incluidas, sin carácter limitante, esferoidal, cuboidal, piramidal, oblonga, cilindrica, toroidal y similares. Los nanoportadores sintéticos de acuerdo con la invención comprenden una o más superficies. Los nanoportadores sintéticos ilustrativos que pueden adaptarse para emplearlos en la práctica de la presente invención comprenden: (1) las nanopartículas biodegradables descritas en la Patente de EE. UU. 5.543,158 concedida a Gref et al., (2) las nanopartículas poliméricas de la Solicitud de Patente de EE. UU. Publicada 20060002852 concedida a Saltzman et al., (3) las nanopartículas construidas litográficamente de la Solicitud de Patente de EE. UU. Publicada 20090028910 concedida a DeSimone er al., (4) la descripción de WO 2009/051837 concedida a von Andrian et al., (5) las nanopartículas descritas en la Solicitud de Patente de EE. UU. Publicada 2008/0145441 concedida a Penades et al., (6) las nanopartículas proteicas descritas en la Solicitud de Patente de EE. UU. Publicada 20090226525 concedida a de los Rios et al., (7) las partículas pseudoví ricas descritas en la Solicitud de Patente de EE. UU. Publicada 20060222652 concedida a Sebbel et al., (8) las partículas pseudovíricas acopladas a ácido nucleico descritas en la Solicitud de Patente de EE. UU. Publicada 20060251677 concedida a Bachmann eí al., (9) las partículas pseudovíricas descritas en WO2010047839A1 o WO2009106999A2, (10) las nanopartículas nanoprecipitadas descritas en P. Paolicelli et al., "Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles" Nanomedicine. 5(6):843-853 (2010), o (11) células apoptóticas, cuerpos apoptóticos o los miméticos sintéticos o semisintéticos descritos en la Publicación de EE. UU. 2002/0086049. En las realizaciones, los nanoportadores sintéticos pueden poseer una relación entre dimensiones superior a 1 :1 , 1 :1.2, 1 :1.5, 1 :2, 1 :3, 1 :5, 1 :7 o superior a 1 :10.
Los nanoportadores sintéticos de acuerdo con la invención que tienen una dimensión mínima menor o igual a aproximadamente 100 nm, preferentemente menor o igual a 100 nm, no comprenden una superficie con grupos hidroxilo que activen el complemento o, como alternativa, comprenden una superficie constituida esencialmente por restos que no son grupos hidroxilo que activan el complemento. En una realización preferida, los nanoportadores sintéticos de acuerdo con la invención que tienen una dimensión mínima menor o igual a aproximadamente 100 nm, preferentemente menor o igual a 100 nm, no comprenden una superficie que active sustancialmente el complemento o, como alternativa, comprenden una superficie constituida esencialmente por restos que no activan sustancialmente el complemento. En una realización más preferida, los nanoportadores sintéticos de acuerdo con la invención que tienen una dimensión mínima menor o igual a aproximadamente 100 nm, preferentemente menor o igual a 100 nm, no comprenden una superficie que active el complemento o, como alternativa, comprenden una superficie constituida esencialmente por restos que no activan el complemento. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos excluyen partículas pseudovíricas. En las realizaciones, los nanoportadores sintéticos pueden poseer una relación entre dimensiones superior a 1 :1 , 1 :1.2, 1 :1.5, 1 :2, 1:3, 1:5, 1 :7 o superior a 1:10.
La expresión "antígeno de linfocitos T" se refiere a un antígeno de linfocitos T CD4+ o antígeno de linfocitos T CD8+. La expresión "antígeno de linfocitos T CD4+" se refiere a cualquier antígeno que es reconocido por un linfocito T CD4+ y desencadena una respuesta inmunitaria en este, p. ej., un antígeno que es reconocido específicamente por un receptor de linfocitos T en un linfocito T CD4+ por medio de la presentación del antígeno o una porción de este que se une a una molécula del complejo de histocompatibilidad principal (MHC) de Clase II. La expresión "antígeno de linfocitos T CD8+" se refiere a cualquier antígeno que es reconocido por un linfocito T CD8+ y desencadena una respuesta inmunitaria en este, p. ej., un antígeno que es reconocido específicamente por un receptor de linfocitos T en un linfocito T CD8+ por medio de la presentación del antígeno o una porción de este que se une a una molécula del complejo de histocompatibilidad principal (MHC) de clase I. En algunas realizaciones, un antígeno que es un antígeno de linfocitos T también es un antígeno de linfocitos B. En otras realizaciones, el antígeno de linfocitos T no es además un antígeno de linfocitos B. Los antígenos de linfocitos T son generalmente proteínas o péptidos.
La expresión "proteína terapéutica" se refiere a cualquier proteína o terapia a base de proteínas que se puede administrar a un sujeto y ejerce un efecto terapéutico. Tales terapias incluyen las terapias de reemplazo proteico y suplemento proteico. Tales terapias también incluyen la administración de una proteína exógena o externa, terapias con anticuerpos y terapias celulares o a base de células. Las proteínas terapéuticas incluyen enzimas, cofactores enzimáticos, hormonas, factores de coagulación sanguínea, citocinas, factores de crecimiento, anticuerpos monoclonales y anticuerpos policlonales. En otras secciones de la presente se proporcionan ejemplos de otras proteínas terapéuticas. Las proteínas terapéuticas se pueden producir en, sobre o mediante células y se pueden obtener a partir de tales células o se pueden administrar en forma de tales células. En las realizaciones, la proteína terapéutica se produce en, sobre o mediante células de mamíferos, células de insectos, células de levaduras, células de bacterias, células de plantas, células de animales transgénicos, células de plantas transgénicas, etc. La proteína terapéutica se puede producir recombinantemente en tales células. La proteína terapéutica se puede producir en, sobre o mediante una célula transformada víricamente. La proteína terapéutica también se puede producir en, sobre o mediante células autólogas que han sido transfectadas, transducidas o manipuladas de otro modo para expresarla. Como alternativa, la proteína terapéutica se puede administrar como un ácido nucleico o mediante la introducción de un ácido nucleico en un virus, VLP (siglas en inglés de partícula pseudovírica), liposoma, etc. Como alternativa, la proteína terapéutica se puede obtener a partir de tales formas y se puede administrar como la propia proteína terapéutica. Por lo tanto, los sujetos incluyen cualquier sujeto que ha recibido, esté recibiendo o recibirá cualquiera de los elementos anteriores. Tales sujetos incluyen sujetos que han recibido, estén recibiendo o recibirán terapia génica, células autólogas que han sido transfectadas, transducidas o manipuladas de otro modo para expresar una proteína terapéutica, polipéptido o péptido; o células que expresan una proteína terapéutica, polipéptido o péptido.
La expresión "antígeno presentable por APC de proteína terapéutica" se refiere a un antígeno que está asociado con una proteína terapéutica (es decir, la proteína terapéutica o un fragmento de esta puede generar una respuesta inmunitaria contra la proteína terapéutica (p. ej., la producción de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica)). En general, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica pueden ser presentados para su reconocimiento por parte del sistema inmunitario (p. ej., células del sistema inmunitario, tal como presentados por células presentadoras de antígeno que incluyen, sin carácter limitante, células dendríticas, linfocitos B o macrofagos). El antígeno presentable por APC de proteína terapéutica puede ser presentado para su reconocimiento por parte de, por ejemplo, linfocitos T. Tales antígenos pueden ser reconocidos por un linfocito T y desencadenan una respuesta inmunitaria en este mediante la presentación de un epítopo del antígeno unido a una molécula del complejo mayor de histocompatibildad (MHC) de clase I o clase II. Los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica incluyen generalmente proteínas, polipéptidos, péptidos, lipoproteínas o están contenidos o expresados en, sobre o por células. Los antígenos de proteína terapéutica, en algunas realizaciones, están acoplados con nanoportadores sintéticos y comprenden epítopos restringidos por MHC de clase I y/o epítopos restringidos por MHC de clase II y/o epítopos de linfocitos B. En otras realizaciones, los antígenos no comprenden epítopos de linfocitos B, tal como en los casos en que la inclusión de los epítopos de linfocitos B podría exacerbar una respuesta inmunitaria no deseada. En otras realizaciones, los antígenos comprenden epítopos restringidos por MHC de clase II y no comprenden sustancialmente ningún epítopo de linfocitos B. Preferentemente, con las composiciones proporcionadas en la presente se producen una o más respuestas inmunitarias tolerogénicas específicas para la proteína terapéutica.
La expresión "respuesta inmunitaria tolerogénica" se refiere a cualquier respuesta inmunitaria que puede conducir a la supresión inmunitaria específica para un antígeno o una célula, tejido, órgano, etc. que exprese dicho antígeno. Tales respuestas inmunitarias incluyen cualquier reducción, retraso o inhibición de una respuesta inmunitaria no deseada específica para el antígeno o célula, tejido, órgano, etc. que exprese dicho antígeno. Tales respuestas inmunitarias también incluyen cualquier estimulación, producción, inducción, promoción o atracción de una respuesta inmunitaria deseada específica para el antígeno o célula, tejido, órgano, etc. que exprese dicho antígeno. Por lo tanto, las respuestas inmunitarias tolerogénicas incluyen la ausencia o la reducción de una respuesta inmunitaria no deseada a un antígeno que puede ser mediada por células sensibles al antígeno así como también la presencia o promoción de células supresoras. Las respuestas inmunitarias tolerogénicas proporcionadas en la presente incluyen la inmunotolerancia. La expresión "generar una respuesta inmunitaria tolerogénica" se refiere a la generación de cualquiera de las respuestas inmunitarias anteriores específicas para un antígeno o célula, tejido, órgano, etc. que exprese dicho antígeno. La respuesta inmunitaria tolerogénica puede ser el resultado de la presentación restringida por MHC de clase I y/o la presentación restringida por MHC de clase II y/o la presentación de linfocitos B y/o la presentación por parte de CD1d, etc.
Las respuestas inmunitarias tolerogénicas incluyen cualquier reducción, retraso o inhibición de la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+, linfocitos T CD8+ o linfocitos B. Las respuestas inmunitarias tolerogénicas también incluyen una reducción de la producción de anticuerpos específicos para el antígeno. Las respuestas inmunitarias tolerogénicas también pueden incluir cualquier respuesta que produzca la estimulación, inducción, producción o atracción de células reguladoras tales como linfocitos Treg CD4+, linfocitos Treg CD8+, linfocitos Breg, etc. En algunas realizaciones, la respuesta inmunitaria tolerogénica es aquella que provoca la conversión en un fenotipo regulador caracterizado por la producción, inducción, estimulación o atracción de células reguladoras.
Las respuestas inmunitarias tolerogénicas también incluyen cualquier respuesta que provoque la estimulación, producción o atracción de linfocitos Treg CD4+ y/o linfocitos Treg CD8+. Los linfocitos Treg CD4+ pueden expresar el factor de transcripción FoxP3 e inhibir respuestas inflamatorias y enfermedades inflamatorias autoinmunitarias (Human regulatory T cells in autoimmune diseases. Cvetanovich GL, Hafler DA. Curr Opin Immunol. Diciembre de 2010;22(6):753-60. Regulatory T cells and autoimmunity. Vila J, Isaacs JD, Anderson AE. Curr Opin Hematol. Julio de 2009;16(4):274-9). Tales células también suprimen la ayuda de los linfocitos T a los linfocitos B e inducen tolerancia tanto a antígenos exógenos como endógenos (Therapeutic approaches to allergy and autoimmunity based on FoxP3+ regulatory T-cell activation and expansión. Miyara M, Wing K, Sakaguchi S. J Allergy Clin Immunol. Abril de 2009;123(4):749-55). Los linfocitos Treg CD4+ reconocen el antígeno cuando este es presentado por proteínas de clase II en las APC. Los linfocitos Treg CD8+, que reconocen el antígeno presentado por la clase I (y Qa-1), también pueden suprimir la ayuda de los linfocitos T a los linfocitos B y provocan la activación de la supresión específica para el antígeno induciendo tolerancia tanto a antígenos exógenos como endógenos. Se ha demostrado que la disrupción de la interacción de Qa-1 con los linfocitos Treg CD8+ altera las respuestas inmunitarias y provoca el desarrollo de la formación de autoanticuerpos y un lupus eritematoso sistémico letal autoinmunitario (Kim et al., Nature. 16 de septiembre de 2010, 467 (7313): 328-32). También se ha demostrado que los linfocitos Treg CD8+ inhiben modelos de enfermedades inflamatorias autoinmunitarias que incluyen la artritis reumatoide y la colitis (CD4+CD25+ regulatory T cells ¡n autoimmune arthritis. Oh S, Rankin AL, Catón AJ. Immunol Rev. Enero de 2010;233(1):97-111. Regulatory T cells in inflammatory bowel disease. Boden EK, Snapper SB. Curr Opin Gastroenterol. Noviembre de 2008;24(6):733-41. En algunas realizaciones, las composiciones proporcionadas pueden producir de forma eficaz ambos tipos de respuestas (CD4+ Treg y CD8+ Treg). En otras realizaciones, se puede inducir FoxP3 en otras células inmunitarias, tales como macrófagos, linfocitos iNKT, etc. y las composiciones proporcionadas en la presente también pueden provocar una o más de estas respuestas.
Las respuestas inmunitarias tolerogénicas también incluyen, sin carácter limitante, la inducción de citocinas reguladoras, tales como citocinas Treg; la inducción de citocinas inhibitorias; la inducción de citocinas inflamatorias (p. ej., IL-4, IL-1b, IL-5, TNF-ß, IL-6, GM-CSF, IFN-?, IL-2, IL-9, IL-12, IL-17, IL-18, IL-21 , IL-22, IL-23, M-CSF, proteína C reactiva, proteína de fase aguda, quimiocinas (p. ej., MCP-1 , RANTES, ???-1a, ???-1ß, MIG, ITAC o IP-10), la producción de citocinas antiinflamatorias (p. ej., IL-4, IL-13, IL-10, etc.), quimiocinas (p. ej., CCL-2, CXCL8), proteasas (p. ej., MMP-3, MMP-9), leucotrienos (p. ej., CysLT-1 , CysLT-2), prostaglandinas (p. ej., PGE2) o histaminas; la inhibición de la polarización para obtener una respuesta inmunitaria de Th17, Th1 o Th2; la inhibición de citocinas específicas para las células efectoras: Th17 (p. ej., IL-17, IL-25), Th1 (IFN-?), Th2 (p. ej., IL-4, IL-13); la inhibición de factores de transcripción específicos para Th1 , Th2 o TH17; la inhibición de la proliferación de linfocitos T efectores; la inducción de la apoptosis de linfocitos T efectores; la inducción de genes específicos para células dendríticas tolerogénicas, la inducción de la expresión de FoxP3, la inhibición de la inducción de IgE o respuestas inmunitarias mediadas por IgE; la inhibición de respuestas de anticuerpos (p. ej., producción de anticuerpos específicos para el antígeno); la inhibición de la respuesta de linfocitos T cooperadores; la producción de TGF-ß y/o IL-10; la inhibición de la función efectora de autoanticuerpos (p. ej., la inhibición de la reducción del número de células, lesión celular o tisular o activación del complemento); etc.
Cualquiera de las respuestas anteriores se puede medir in vivo en uno o más modelos en animales o se puede medir in vitro. Un experto en la técnica estará familiarizado con tales mediciones in vitro o in vivo. Las respuestas inmunitarias no deseadas o respuestas inmunitarias tolerogénicas se puede monitorizar utilizando, por ejemplo, métodos para determinar el número y/o la función de las células inmunitarias, análisis de tetrámeros, ELISPOT, análisis basado en citometría de flujo de la expresión de citocinas, secreción de citocinas, obtención del perfil de expresión de citocinas, obtención del perfil de expresión génica, obtención del perfil de expresión proteica, análisis de marcadores de la superficie celular, detección basada en PCR del uso de genes receptores de células inmunitarias (remítase a T. Clay et al., "Assays for Monitoring Cellular Immune Response to Active Immunotherapy of Cáncer" Clinical Cáncer Research 7:1127-1135 (2001)), etc. Las respuestas inmunitarias no deseadas o respuestas inmunitarias tolerogénicas también se pueden monitorizar utilizando, por ejemplo, métodos para determinar los niveles proteicos en plasma o suero, ensayos de la función y/o proliferación de las células inmunitarias, etc. En algunas realizaciones, las respuestas inmunitarias tolerogénicas se pueden monitorizar evaluando la inducción de FoxP3. Además, en los Ejemplos se describen métodos específicos más detalladamente.
Preferentemente, las respuestas inmunitarias tolerogénicas provocan la inhibición del desarrollo, el avance o la patología de las enfermedades, trastornos o afecciones descritos en la presente. El que las composiciones de la invención puedan provocar o no la inhibición del desarrollo, el avance o la patología de las enfermedades, trastornos o afecciones descritos en la presente se puede medir con modelos en animales de tales enfermedades, trastornos o afecciones. En algunas realizaciones, la reducción de una respuesta inmunitaria no deseada o la generación de una respuesta inmunitaria tolerogénica se puede evaluar determinando variables de evaluación clínica, la eficacia clínica, síntomas clínicos, biomarcadores de la enfermedad y/o puntajes clínicos. Las respuestas inmunitarias no deseadas o respuestas inmunitarias tolerogénicas también se pueden evaluar con pruebas de diagnóstico para determinar la presencia o ausencia de una enfermedad, trastorno o afección como los proporcionados en la presente. Las respuestas inmunitarias no deseadas también se pueden evaluar mediante métodos de medición de los niveles y/o la función de proteínas terapéuticas en un sujeto.
En algunas realizaciones, la monitorización o evaluación de la generación de una respuesta inmunitaria no deseada o una respuesta inmunitaria tolerogénica en un sujeto puede ser antes de la administración de una composición de nanoportadores sintéticos proporcionada en la presente y/o antes de la administración de una proteína terapéutica. En otras realizaciones, la evaluación de la generación de una respuesta inmunitaria no deseada o una respuesta inmunitaria tolerogénica puede ser después de la administración de una composición de nanoportadores sintéticos proporcionada en la presente y/o después de la administración de una proteína terapéutica. En algunas realizaciones, la evaluación se lleva a cabo después de la administración de la composición de nanoportadores sintéticos, pero antes de la administración de la proteína terapéutica. En otras realizaciones, la evaluación se lleva a cabo después de la administración de la proteína terapéutica, pero antes de la administración de la composición. En otra realizaciones más, la evaluación se lleva a cabo antes de la administración de tanto los nanoportadores sintéticos como de la proteína terapéutica, mientras que en otras realizaciones adicionales, la evaluación se lleva a cabo después de tanto la administración de los nanoportadores sintéticos como de la proteína terapéutica. En otras realizaciones, la evaluación se lleva a cabo tanto antes como después de la administración de los nanoportadores sintéticos y/o la proteína terapéutica. En otras realizaciones más, la evaluación se lleva a cabo más de una vez en el sujeto para determinar si se mantiene un estado inmunitario deseable en el sujeto, tal como un sujeto al que se le ha administrado, se le está administrando o se le administrará una proteína terapéutica.
Una respuesta de anticuerpos se puede evaluar determinando una o más titulaciones de anticuerpos. La expresión "titulación de anticuerpos" se refiere a un nivel medible de producción de anticuerpos. Los métodos para medir las titulaciones de anticuerpos son muy conocidos en la técnica e incluyen el enzimoinmunoensayo (ELISA). En las realizaciones, la respuesta de anticuerpos se puede cuantificar, por ejemplo, como el número de anticuerpos, la concentración de anticuerpos o la titulación. Los valores pueden ser absolutos o pueden ser relativos. Los ensayos para cuantificar una respuesta de anticuerpos incluyen los ensayos de captura de anticuerpos, enzimoinmunoensayos (ELISA), ensayos de inhibición de la absorción en fase líquida (ILPAA), ensayos de inmunoelectroforesis en cohete (RIE) y ensayos de inmunoelectroforesis en línea (LIE). Cuando una respuesta de anticuerpos se compara con otra respuesta de anticuerpos, es preferible utilizar el mismo tipo de valor cuantitativo (p. ej., titulación) y método de medición (p. ej., ELISA) para realizar la comparación.
Un método ELISA para medir una titulación de anticuerpos, por ejemplo, un ELISA de tipo sándwich típico, puede consistir en los siguientes pasos: (i) preparar un material de revestimiento de placas de ELISA de modo tal que la diana del anticuerpo de interés se acople a un sustrato polimérico u otro material adecuado (ii) preparar el material de revestimiento en una solución acuosa (tal como PBS) e introducir la solución del material de revestimiento en los pocilios de una placa de múltiples pocilios para que el revestimiento se deposite sobre la placa de múltiples pocilios durante la noche (iii) lavar minuciosamente la placa de múltiples pocilios con tampón de lavado (tal como Tween-20 al 0.05% en PBS) para eliminar el material de revestimiento en exceso (iv) bloquear la placa para la unión no específica aplicando una solución diluyente (tal como suero fetal bovino al 10% en PBS), (v) retirar la solución de bloqueo/diluyente de la placa lavando con tampón de lavado (vi) diluir la muestra o las muestras séricas que contienen anticuerpos y los estándares adecuados (controles positivos) con diluyente según se requiera para obtener una concentración que sature de forma adecuada la respuesta de ELISA (vii) diluir en serie las muestras de plasma en la placa de múltiples pocilios de modo que se abarque un rango de concentraciones adecuado para generar una curva de respuesta de ELISA (viii) incubar la placa para que se produzca la unión del anticuerpo-diana (ix) lavar la placa con tampón de lavado para eliminar los anticuerpos que no se hayan unido al antígeno (x) añadir una concentración adecuada de un anticuerpo de detección secundario en el mismo diluyente tal como un anticuerpo de detección acoplado a biotina capaz de unirse al anticuerpo primario (xi) incubar la placa con el anticuerpo de detección aplicado y a continuación lavar con tampón de lavado (xii) añadir una enzima tal como estreptavidina-HRP (peroxidasa de rábano picante) que se unirá a la biotina que se encuentra en los anticuerpos biotinilados e incubar (xiii) lavar añadir sustrato(s) (tal la placa de múltiples pocilios (xiv) como solución de TMB) a la placa (xv) aplicar una solución de parada (tal como ácido sulfúrico 2 N) cuando haya finalizado el desarrollo de color (xvi) realizar una lectura de la densidad óptica de los pocilios de la placa a una longitud de onda específica para el sustrato (450 nm con sustracción de las lecturas a 570 nm) (xvi) aplicar un ajuste de curvas multiparamétrico adecuado a los datos y definir la concentración efectiva media(es) (CE5o) como la concentración en la curva en la que consigue la mitad del valor de la DO máxima para los estándares de la placa.
La expresión "respuesta inmunitaria no deseada" se refiere a cualquier respuesta inmunitaria no deseada que es el resultado de la exposición a un antígeno, fomenta o agrava una enfermedad, trastorno o afección proporcionada en la presente (o uno de sus síntomas), o es sintomática de una enfermedad, trastorno o afección proporcionada en la presente. Tales respuestas inmunitarias generalmente ejercen un impacto negativo sobre la salud de un sujeto o son sintomáticas de un impacto negativo sobre la salud de un sujeto. Las respuestas inmunitarias no deseadas incluyen la producción de anticuerpos específicos para el antígeno, la proliferación y/o actividad de linfocitos B específicos para el antígeno, o la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ específicos para el antígeno.
C. Composiciones de la Invención En la presente se proporcionan composiciones de nanoportadores sintéticos tolerogénicas que comprenden inmunosupresores y antígenos presentables por APC de proteína terapéutica y métodos relacionados. Tales composiciones y métodos son útiles para reducir la generación de respuestas inmunitarias no deseadas y fomentar la generación de respuestas inmunitarias tolerogénicas que son especificas para las proteínas terapéuticas. Las composiciones se pueden administrar a sujetos en los que se desea obtener una respuesta inmunitaria tolerogénica a proteínas terapéuticas. Tales sujetos incluyen aquellos a los que se les ha administrado, se les está administrando o se les administrará una proteína terapéutica. En las realizaciones, se administran los nanoportadores sintéticos proporcionados en la presente a un sujeto y posteriormente se administran una o más proteínas terapéuticas. En otras realizaciones, se administra una proteína terapéutica a un sujeto y posteriormente se administran los nanoportadores sintéticos proporcionados. En otras realizaciones más, los nanoportadores sintéticos y la proteína o las proteínas terapéuticas se administran concomitantemente.
Tal como se ha mencionado anteriormente, los nanoportadores sintéticos están diseñados para comprender inmunosupresores y, en algunas realizaciones, un antígeno contra el cual se desea obtener un efecto tolerogénico. En las realizaciones, los antígenos comprenden epítopos restringidos por MHC de clase II que cuando se presentan junto con inmunosupresores pueden producir efectos tolerogénicos, tales como la reducción en la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ específicos para el antígeno. Los efectos tolerogénicos resultantes también incluyen una reducción en la proliferación y/o actividad de linfocitos B específicos para el antígeno, y/o una reducción en la producción de anticuerpos específicos para el antígeno. Se pueden utilizar una amplia variedad de nanoportadores sintéticos de acuerdo con la invención. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos son esferas o esferoides. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos son planos o en forma de placa. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos son cubos o cúbicos. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos son óvalos o elipses. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos son cilindros, conos o pirámides.
En algunas realizaciones, es deseable utilizar una población de nanoportadores sintéticos que sea relativamente uniforme en cuanto al tamaño, la forma y/o la composición, de modo que cada nanoportador sintético tenga propiedades similares. Por ejemplo, al menos un 80%, al menos un 90% o al menos un 95% de los nanoportadores sintéticos, basándose en el número total de nanoportadores sintéticos, puede tener una dimensión mínima o dimensión máxima comprendida dentro de un 5%, 10% o 20% del diámetro medio o la dimensión media de los nanoportadores sintéticos. En algunas realizaciones, una población de nanoportadores sintéticos puede ser heterogénea con respecto al tamaño, la forma y/o la composición.
Los nanoportadores sintéticos pueden ser sólidos o estar huecos y pueden comprender una o más capas. En algunas realizaciones, cada capa tiene una composición única y propiedades únicas con respecto a la(s) otra(s) capa(s). Para proporcionar solamente un ejemplo, los nanoportadores sintéticos pueden tener una estructura de núcleo/cubierta, donde el núcleo es una capa (p. ej., un núcleo polimérico) y la cubierta es una segunda capa (p. ej., una monocapa o bicapa lipídica). Los nanoportadores sintéticos pueden comprender una pluralidad de capas diferentes.
En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos pueden comprender opcionalmente uno o más lípidos. En algunas realizaciones, un nanoportador sintético puede comprender un liposoma. En algunas realizaciones, un nanoportador sintético puede comprender una bicapa lipídica. En algunas realizaciones, un nanoportador sintético puede comprender una monocapa lipídica. En algunas realizaciones, un nanoportador sintético puede comprender una micela. En algunas realizaciones, un nanoportador sintético puede comprender un núcleo que comprenda una matriz polimérica rodeada de una capa lipídica (p. ej., bicapa lipídica, monocapa lipídica, etc.). En algunas realizaciones, un nanoportador sintético puede comprender un núcleo no polimérico (p. ej., partícula metálica, punto cuántico, partícula de cerámica, partícula ósea, partícula vírica, proteínas, ácidos nucleicos, carbohidratos, etc.) rodeado de una capa lipídica (p. ej., bicapa lipídica, monocapa lipídica, etc.).
En otras realizaciones, los nanoportadores sintéticos pueden comprender partículas metálicas, puntos cuánticos, partículas cerámicas, etc. En algunas realizaciones, un nanoportador sintético no polimérico es un agregado de componentes no poliméricos, tal como un agregado de átomos metálicos (p. ej., átomos de oro).
En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos pueden comprender opcionalmente una o más entidades anfifílicas. En algunas realizaciones, una entidad anfifílica puede propiciar la producción de nanoportadores sintéticos con mayor estabilidad, uniformidad mejorada o mayor viscosidad. En algunas realizaciones, las entidades anfifílicas pueden asociarse con la superficie interior de una membrana lipídica (p. ej., bicapa lipídica, monocapa lipídica, etc.). Muchas entidades anfifílicas conocidas en la técnica son adecuadas para ser utilizadas en la preparación de nanoportadores sintéticos de acuerdo con la presente invención. Dichas entidades anfifílicas incluyen, sin carácter limitante, fosfoglicéridos; fosfatidilcolinas; dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC); dioleilfosfatidiletanolamina (DOPE); dioleiloxipropiltrietilamonio (DOTMA); dioleoilfosfatidilcolina; colesterol; éster de colesterol; diacilglicerol; succinato de diacilglicerol; difosfatidilglicerol (DPPG); hexanodecanol; alcoholes grasos tales como polietilenglicol (PEG); éter polioxietilen-9-laurílico; un ácido graso tensioactivo, tal como ácido palmítico o ácido oleico; ácidos grasos; monoglicéridos de ácidos grasos; diglicéridos de ácidos grasos; amidas de ácidos grasos; glicocolato de trioleato de sorbitán (Span®85); monolaurato de sorbitán (Span®20); polisorbato 20 (Tween®20); polisorbato 60 (Tween®60); polisorbato 65 (Tween®65); polisorbato 80 (Tween®80); polisorbato 85 (Tween®85); monoestearato de polioxietileno; surfactina; un poloxómero; un éster de ácido graso de sorbitán tal como trioleato de sorbitán; lecitina; lisolecitina; fosfatidilserina; fosfatidilinositol; esfingomielina; fosfatidiletanolamina (cefalina); cardiolipina; ácido fosfatídico; cerebrósidos; fosfato de dicetilo; dipalmitoilfosfatidilglicerol; estearilamina; dodecilamina; hexadecilamina; palmitato de acetilo; ricinoleato de glicerol; estearato de hexadecilo; miristato de isopropilo; tiloxapol; polietilenglicol 5000-fosfatidiletanolamina; monoestearato de polietilenglicol 400; fosfolípidos; detergentes sintéticos y/o naturales que tienen buenas propiedades tensioactivas; desoxicolatos; ciclodextnnas; sales caotrópicas; agentes de apareamiento iónico y combinaciones de estos. Un componente de la entidad anfifílica puede ser una mezcla de entidades anfifílicas diferentes. Los expertos en la técnica reconocerán que se trata de una lista ilustrativa, pero no exhaustiva, de sustancias con actividad tensioactiva. Puede utilizarse cualquier entidad anfifílica en la producción de nanoportadores sintéticos que se han de utilizar de acuerdo con la presente invención.
En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos pueden comprender opcionalmente uno o más carbohidratos. Los carbohidratos pueden ser naturales o sintéticos. Un carbohidrato puede ser un carbohidrato natural derivatizado. En ciertas realizaciones, un carbohidrato comprende un monosacárido o disacárido, incluidos, sin carácter limitante, glucosa, fructosa, galactosa, ribosa, lactosa, sacarosa, maltosa, trehalosa, celbiosa, mañosa, xilosa, arabinosa, ácido glucurónico, ácido galacturónico, ácido manurónico, glucosamina, galatosamina y ácido neurámico. En ciertas realizaciones, un carbohidrato es un polisacárido, incluidos, sin carácter limitante, pululano, celulosa, celulosa microcristalina, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), hidroxicelulosa (HC), metilcelulosa (MC), dextrano, ciclodextrano, glicógeno, hidroxietilalmidón, carragenina, glicón, amilosa, quitosano, N,0-carboxilmetilquitosano, algina y ácido algínico, almidón, quitina, inulina, konjac, glucomanán, pustulán, heparina, ácido hialurónico, curdlano y xantano. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos de la invención no comprenden (o excluyen específicamente) carbohidratos tales como un polisacárido. En ciertas realizaciones, el carbohidrato puede comprender un derivado de un carbohidrato tal como un alcohol de un azúcar, incluidos, sin carácter limitante, manitol, sorbitol, xilitol, eritritol, maltitol y lactitol.
En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos pueden comprender uno o más polímeros. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos comprenden uno o más polímeros que se tratan de un polímero Pluronic no terminado en metoxi. En algunas realizaciones, al menos un 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% o 99% (peso/peso) de los polímeros que constituyen los nanoportadores sintéticos son polímeros Pluronic no terminados en metoxi. En algunas realizaciones, todos los polímeros que constituyen los nanoportadores sintéticos son polímeros Pluronic no terminados en metoxi. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos comprenden uno o más polímeros que se tratan de un polímero no terminado en metoxi. En algunas realizaciones, al menos un 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% o 99% (peso/peso) de los polímeros que constituyen los nanoportadores sintéticos son polímeros no terminados en metoxi. En algunas realizaciones, todos los polímeros que constituyen los nanoportadores sintéticos son polímeros no terminados en metoxi. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos comprenden uno o más polímeros que no comprenden un polímero Pluronic. En algunas realizaciones, al menos un 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% o 99% (peso/peso) de los polímeros que constituyen los nanoportadores sintéticos no comprenden un polímero Pluronic. En algunas realizaciones, todos los polímeros que constituyen los nanoportadores sintéticos no comprenden un polímero Pluronic. En algunas realizaciones, dicho polímero puede estar rodeado por una capa de recubrimiento (p. ej., liposoma, monocapa lipídica, micela, etc.). En algunas realizaciones, varios elementos de los nanoportadores sintéticos pueden acoplarse al polímero.
Los inmunosupresores y/o antígenos se pueden acoplar a los nanoportadores sintéticos mediante cualquiera de diversos métodos. En general, el acoplamiento puede ser el resultado de la unión entre los inmunosupresores y/o antígenos y los nanoportadores sintéticos. Esta unión puede hacer que los inmunosupresores y/o antígenos estén adheridos a la superficie de los nanoportadores sintéticos y/o contenidos dentro de (encapsulados por) los nanoportadores sintéticos. Sin embargo, en algunas realizaciones, los inmunosupresores y/o antígenos están encapsulados por los nanoportadores sintéticos como resultado de la estructura de los nanoportadores sintéticos en lugar de por la unión a los nanoportadores sintéticos. En las realizaciones preferidas, el nanoportador sintético comprende un polímero como los descritos en la presente, y los inmunosupresores y/o antígenos están acoplados al polímero.
Cuando el acoplamiento es el resultado de la unión entre los inmunosupresores y/o antígenos y los nanoportadores sintéticos, el acoplamiento puede tener lugar a través de un resto de acoplamiento. Un resto de acoplamiento puede ser cualquier resto a través del cual un inmunosupresor y/o antígeno se una a un nanoportador sintético. Tales restos incluyen enlaces covalentes, tales como un enlace de tipo amida o un enlace de tipo éster, así como también moléculas independientes que unen (covalentemente o no covalentemente) el inmunosupresor y/o antígeno al nanoportador sintético. Tales moléculas incluyen conectores o polímeros o una de sus unidades. Por ejemplo, el resto de acoplamiento puede comprender un polímero cargado al cual se une un inmunosupresor y/o antígeno electrostáticamente. Como otro ejemplo, el resto de acoplamiento puede comprender un polímero o una de sus unidades al cual está unido covalentemente.
En las realizaciones preferidas, los nanoportadores sintéticos comprenden un polímero como los proporcionados en la presente. Estos nanoportadores sintéticos pueden ser completamente poliméricos o pueden ser una mezcla de polímeros y otros materiales.
En algunas realizaciones, los polímeros de un nanoportador sintético se asocian para formar una matriz polimérica. En algunas de estas realizaciones, un componente, tal como un inmunosupresor o antígeno, puede estar asociado covalentemente con uno o más polímeros de la matriz polimérica. En algunas realizaciones, la asociación covalente está mediada por un conector. En algunas realizaciones, un componente puede estar asociado no covalentemente con uno o más polímeros de la matriz polimérica. Por ejemplo, en algunas realizaciones, un componente puede estar encapsulado dentro de una matriz polimérica, ser rodeados por esta y/o dispersarse en ella. Como alternativa o además, un componente puede estar asociado con uno o más polímeros de una matriz polimérica mediante interacciones hidrofóbicas, interacciones de carga, fuerzas de van der Waals, etc. Convencionalmente se conoce una amplia variedad de polímeros y métodos para formar matrices poliméricas a partir de estos.
Los polímeros pueden ser polímeros naturales o no naturales (sintéticos). Los polímeros pueden ser homopolímeros o copolímeros que comprenden dos o más monómeros. En cuanto a la secuencia, los copolímeros pueden ser aleatorios, en bloque o comprender una combinación de secuencias aleatorias y en bloque. Normalmente, los polímeros de acuerdo con la presente invención son polímeros orgánicos.
En algunas realizaciones, el polímero comprende un poliéster, policarbonato, poliamida o poliéter, o una de sus unidades. En otras realizaciones, el polímero comprende poli(etilenglicol) (PEG), polipropilenglicol, poli(ácido láctico), poli(ácido glicólico), poli(ácido láctico-co-glicólico) o una policaprolactona, o una de sus unidades. En algunas realizaciones, se prefiere que el polímero sea biodegradable. Por lo tanto, en estas realizaciones, se prefiere que si el polímero comprende un poliéter, tal como poli(etilenglicol) o polipropilenglicol o una de sus unidades, el polímero comprenda un copolímero en bloque de un poliéter y un polímero biodegradable, de modo que el polímero sea biodegradable. En otras realizaciones, el polímero no comprende únicamente un poliéter o una de sus unidades, tal como poli(etilenglicol) o polipropilenglicol o una de sus unidades.
Otros ejemplos de polímeros adecuados para utilizar en la presente invención incluyen, sin carácter limitante, polietilenos, policarbonatos (p. ej., poli(1 ,3-dioxan-2-ona)), polianhídridos (p. ej., anhídrido polisebácico), polipropilfumeratos, poliamidas (p. ej., policaprolactama), poliacetales, poliéteres, poliésteres (p. ej., poliláctido, poliglicólido, poliláctido-co-glicólido, policaprolactona, ácido polihidroxi (p. ej., poli( -hidroxialcanoato)), poli(ortoésteres), policianoacrilatos, alcoholes polivinílicos, poliuretanos, polifosfacenos, poliacrilatos, polimetacrilatos, poliureas, poliestirenos y poliaminas, polilisina, copolímeros de polilisina-PEG, y poli(etilenimina), copolímeros de poli(etilenimina)-PEG.
En algunas realizaciones, los polímeros de acuerdo con la presente invención incluyen los polímeros que han sido aprobados para su uso en humanos por la Administración de Alimentos y Fármacos de los Estados Unidos (FDA) en virtud de la sección 177.2600 del título 21 del Código de Reglamentos Federales e incluyen, sin carácter limitante, poliésteres (p. ej., ácido poliláctico, poli(ácido láctico-co-glicólico), policaprolactona, polivalerolactona, poli(1,3-dioxan-2-ona)); polianhídridos (p. ej., poli(anhídrido sebácico)); poliéteres (p. ej., polietilenglicol); poliuretanos; polimetacrilatos; poliacrilatos; y policianoacrilatos.
En algunas realizaciones, los polímeros pueden ser hidrófilos. Por ejemplo, los polímeros pueden comprender grupos aniónicos (p. ej., grupo fosfato, grupo sulfato, grupo carboxilato); grupos catiónicos (p. ej., grupo de amina cuaternaria); o grupos polares (p. ej., grupo hidroxilo, grupo tiol, grupo amina). En algunas realizaciones, un nanoportador sintético que comprende una matriz polimérica hidrófila genera un entorno hidrófilo dentro del nanoportador sintético. En algunas realizaciones, los polímeros pueden ser hidrófobos. En algunas realizaciones, un nanoportador sintético que comprende una matriz polimérica hidrófoba genera un entorno hidrófobo dentro del nanoportador sintético. La selección de la hidrofilicidad o hidrofobicidad del polímero puede afectar a la naturaleza de los materiales que se incorporan (p. ej., se acoplan) dentro del nanoportador sintético.
En algunas realizaciones, los polímeros pueden modificarse con uno o más restos y/o grupos funcionales. Se pueden emplear varios restos o grupos funcionales de acuerdo con la presente invención. En algunas realizaciones, los polímeros se pueden modificar con polietilenglicol (PEG), con un carbohidrato y/o con poliacetales acíclicos derivados de polisacáridos (Papisov, 2001 , Serie de Congresos de la ACS, 786:301). Ciertas realizaciones se pueden preparar empleando los conocimientos generales que se describen en la Patente de EE. UU. N.° 5543158 concedida a Gref et al. o la publicación WO WO2009/05 837 de Von Andrian et al.
En algunas realizaciones, los polímeros se pueden modificar con un grupo de tipo ácido graso o lípido. En algunas realizaciones, un grupo de tipo ácido graso puede ser uno o más de los siguientes: ácido butírico, caproico, caprílico, cáprico, láurico, mirístico, palmítico, esteárico, araquídico, behénico o lignocérico. En algunas realizaciones, un grupo de tipo ácido graso puede ser uno o más de los siguientes: ácido palmitoleico, oleico, vaccénico, linoleico, alfa-linoleico, gamma-linoleico, araquídónico, gadoleico, araquidónico, eicosapentaenoico, docosahexaenoico o erúcico.
En algunas realizaciones, los polímeros pueden ser poliésteres, incluidos los copolímeros que comprenden unidades de ácido láctico y ácido glicólico, tales como poli(ácido láctico-co-ácido glicólico) y poli(láctido-co-glicólido), denominados colectivamente en la presente "PLGA"; y homopolímeros que comprenden unidades de ácido glicólico, denominados en la presente "PGA", y unidades de ácido láctico, tales como ácido poli-L-láctico, ácido poli-D-láctico, ácido poli-D,L-láctico, poli-L-láctido, poli-D-láctido y poli-D,L-láctido, denominados colectivamente en la presente "PLA". En algunas realizaciones, los poliésteres ilustrativos incluyen, por ejemplo, polihidroxiácidos; copolímeros de PEG y copolímeros de láctido y glicólido (p. ej., copolímeros de PLA-PEG, copolímeros de PGA-PEG, copolímeros de PLGA-PEG y derivados de estos. En algunas realizaciones, los poliésteres incluyen, por ejemplo, poli(caprolactona), copolímeros de poli(caprolactona)-PEG, poli(L-láct¡do-co-L-l¡sina), pol¡(éster de serina), pol¡(éster de 4-hidroxi-L-prolina), poli[ácido a-(4-aminobut¡l)-L-glicólico] y derivados de estos.
En algunas realizaciones, un polímero puede ser PLGA. PLGA es un copolímero biocompatible y biodegradable de ácido láctico y ácido glicólico, y varias formas de PLGA se caracterizan por la proporción de ácido láctico:ácido glicólico. El ácido láctico puede ser ácido L-láctico, ácido D-láctico o ácido D, L-láctico. La tasa de degradación del PLGA puede ajustarse alterando la proporción de ácido láctico:ácido glicólico. En algunas realizaciones, el PLGA que se ha de utilizar de acuerdo con la presente invención se caracteriza por una proporción de ácido láctico:ácido glicólico de aproximadamente 85:15, aproximadamente 75:25, aproximadamente 60:40, aproximadamente 50:50, aproximadamente 40:60, aproximadamente 25:75 o aproximadamente 15:85.
En algunas realizaciones, los polímeros pueden ser uno o más polímeros acrílicos. En ciertas realizaciones, los polímeros acrílicos incluyen, por ejemplo, copolímeros de ácido acrílico y ácido metacrílico, copolímeros de metacrilato de metilo, metacrilatos de etoxietilo, metacrilato de cianoetilo, copolímero de metacrilato de aminoalquilo, poli(ácido acrílico), poli(ácido metacrílico), copolímero de alquilamida de ácido metacrílico, poli(metacrilato de metilo), poli(anhídrido de ácido metacrílico), metacrilato de metilo, polimetacrilato, copolímero de poli(metacrilato de metilo), poliacrilamida, copolímero de metacrilato de aminoalquilo, copolímeros de metacrilato de glicidilo, policianoacrilatos y combinaciones que comprenden uno o más de los polímeros precedentes. El polímero acrílico puede comprender copolímeros totalmente polimerizados de ésteres de ácido acrílico y metacrílico con un bajo contenido de grupos amonio cuaternario.
En algunas realizaciones, los polímeros pueden ser polímeros catiónicos. En general, los polímeros catiónicos son capaces de condensar y/o proteger hebras de ácidos nucleicos con carga negativa (p. ej., ADN o sus derivados). Los polímeros que contienen amina, tales como los dendrimeros de poli(lisina) (Zauner et al., 1998, Adv. Drug Del. Rev., 30:97; y Kabanov et al., 1995, Bioconjugate Chem., 6:7), poli(etilenimina) (PEI; Boussif et al., 1995, Proc. Nati. Acad. ScL, USA, 1995, 92:7297) y poli(amidoamina) (Kukowska-Latallo et al., 1996, Proc. Nati. Acad. Sci., USA, 93:4897; Tang et al., 1996, Bioconjugate Chem., 7:703; y Haensler et al., 1993, Bioconjugate Chem., 4:372) están cargados positivamente a pH fisiológico, forman pares iónicos con ácidos nucleicos y median la transfección en varias líneas celulares. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos de la invención pueden no comprender (o pueden excluir) polímeros catiónicos.
En algunas realizaciones, los polímeros pueden ser poliésteres degradables que contienen cadenas laterales catiónicas (Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; Barrera et al., 1993, J. Am. Chem. Soc, 115:11010; Kwon et al., 1989, Macromolecules, 22:3250; Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc, 121 :5633; y Zhou et al., 1990, Macromolecules, 23:3399). Los ejemplos de estos poliésteres incluyen poli(L-láctido-co-L-lisina) (Barrera et al., 1993, J. Am. Chem. Soc, 115:11010), poli(éster de serina) (Zhou et al., 1990, Macromolecules, 23:3399), poli(éster de 4-hidroxi-L-prolina) (Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; y Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc, 121 :5633) y poli(éster de 4-hidroxi-L-prolina) (Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; y Lim etal., 1999, J. Am. Chem. Soc, 121:5633).
Las propiedades de estos y otros polímeros y los métodos para prepararlos son muy conocidos en la técnica (remítase, por ejemplo, a las Patentes de EE. UU. 6,123,727, 5,804,178, 5,770,417, 5,736,372, 5,716,404, 6,095,148, 5,837,752, 5,902,599, 5,696,175, 5,514,378, 5,512,600, 5;399,665, 5,019,379, 5,010,167, 4,806,621 , 4,638,045 y 4;946,929; Wang et al., 2001 , J. Am. Chem. Soc, 123:9480; Lim et al., 2001, J. Am. Chem. Soc, 123:2460; Langer, 2000, Acc. Chem. Res., 33:94; Langer, 1999, J. Control. Reléase, 62:7; y Uhrich et al., 1999, Chem. Rev., 99:3181). De forma más general, se describen varios métodos para sintetizar ciertos polímeros adecuados en Concise Encyclopedia of Polymer Science and Polymeríc Amines and Ammonium Salts, Ed. de Goethals, Pergamon Press, 1980; Principies of Polymerízation de Odian, John Wiley & Sons, Cuarta Edición, 2004; Contemporary Polymer Chemistry de Allcock et al., Prentice-Hall, 1981 ; Deming et al., 1997, Nature, 390:386; y en las Patentes de EE. UU. 6,506,577, 6,632,922, 6,686,446 y 6,818,732.
En algunas realizaciones, los polímeros pueden ser polímeros lineales o ramificados. En algunas realizaciones, los polímeros pueden ser dendrímeros. En algunas realizaciones, los polímeros pueden estar sustancialmente reticulados entre sí. En algunas realizaciones, los polímeros pueden estar sustancialmente exentos de reticulación. En algunas realizaciones, los polímeros pueden utilizarse de acuerdo con la presente invención sin someterse a una etapa de reticulación. Se debe sobreentender además que los nanoportadores sintéticos de la invención pueden comprender copolímeros en bloque, copolímeros de injerto, combinaciones, mezclas y/o aductos de cualquiera de los polímeros anteriores y otros polímeros. Los expertos en la técnica reconocerán que los polímeros enumerados en la presente representan una lista ilustrativa, pero no exhaustiva, de los polímeros que pueden ser de utilidad de acuerdo con la presente invención.
En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos no comprenden ningún componente polimérico. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos pueden comprender partículas metálicas, puntos cuánticos, partículas cerámicas, etc. En algunas realizaciones, un nanoportador sintético no polimérico es un agregado de componentes no poliméricos, tal como un agregado de átomos metálicos (p. ej., átomos de oro).
Las composiciones de acuerdo con la invención comprenden nanoportadores sintéticos combinados con excipientes farmacéuticamente aceptables, tales como conservantes, tampones, solución salina o solución salina tamponada con fosfato. Las composiciones se pueden preparar utilizando técnicas farmacéuticas convencionales de elaboración y formulación para obtener formas farmacéuticas útiles. En una realización, los nanoportadores sintéticos de la invención están suspendidos en solución salina estéril para su inyección junto con un conservante.
En las realizaciones, cuando se preparan nanoportadores sintéticos como portadores, los métodos para acoplar componentes a los nanoportadores sintéticos pueden resultar útiles. Si el componente es una molécula de bajo peso molecular, puede resultar beneficioso unir el componente a un polímero antes de acoplar los nanoportadores sintéticos. En las realizaciones, también puede resultar beneficioso preparar los nanoportadores sintéticos con grupos superficiales que se emplean para acoplar el componente al nanoportador sintético mediante el uso de estos grupos superficiales en lugar de unir el componente a un polímero y después emplear este conjugado polimérico en la construcción de los nanoportadores sintéticos.
En ciertas realizaciones, el acoplamiento puede ser un conector covalente. En las realizaciones, los péptidos de acuerdo con la invención se pueden acoplar covalentemente a la superficie externa a través de un conector de tipo 1,2,3-triazol formado mediante la reacción de cicloadición 1,3-dipolar de grupos azido sobre la superficie del nanoportador con un antígeno o inmunosupresor que contiene un grupo alquino o mediante la reacción de cicloadición 1 ,3-dipolar de alquinos sobre la superficie del nanoportador con antígenos o inmunosupresores que contienen un grupo azido. Estas reacciones de cicloadición se llevan a cabo preferentemente en presencia de un catalizador de Cu(l) junto con un ligando de Cu(l) adecuado y un agente reductor para reducir el compuesto de Cu(ll) al compuesto de Cu(l) catalíticamente activo. Esta cicloadición de azida-alquino catalizada por Cu(l) (CuAAC) también se puede denominar reacción "click".
Además, el acoplamiento covalente puede comprender un conector covalente que comprende un conector de tipo amida, un conector de tipo disulfuro, un conector de tipo tioéter, un conector de tipo hidrazona, un conector de tipo hidrazida, un conector de tipo imina u oxima, un conector de tipo urea o tiourea, un conector de tipo amidina, un conector de tipo amina y un conector de tipo sulfonamida.
Un conector de tipo amida se forma mediante un enlace de tipo amida entre una amina en un componente, tal como un antígeno o inmunosupresor, y el grupo ácido carboxílico de un segundo componente, tal como el nanoportador. El enlace de tipo amida en el conector se puede obtener empleando cualquiera de las reacciones convencionales para formar enlaces de tipo amida con aminoácidos protegidos de forma adecuada y un ácido carboxílico activado tal como un éster activado con N-hidroxisuccinimida.
Un conector de tipo disulfuro se obtiene mediante la formación de un enlace de tipo disulfuro (S-S) entre dos átomos de azufre con la forma, por ejemplo, de R1-S-S-R2. Un enlace de tipo disulfuro se puede formar mediante el intercambio de un tiol de un componente que contiene un grupo tiol/mercaptano(-SH) con otro grupo tiol activado en un polímero o nanoportador, o un nanoportador que contiene grupos tiol/mercaptano con un componente que contiene un grupo tiol activado.
Un conector de tipo triazol, concretamente un 1 ,2,3-triazol de la forma , donde R1 y R2 pueden ser cualesquiera entidades químicas, se obtiene mediante la reacción de cicloadición 1 ,3-dipolar de una azida unida a un primer componente, tal como el nanoportador, con un alquino terminal unido a un segundo componente, tal como el inmunosupresor o antígeno. La reacción de cicloadición 1 ,3-dipolar se lleva a cabo con o sin un catalizador, preferentemente con un catalizador de Cu(l), que une los dos componentes a través de una función de tipo 1 ,2,3-triazol. Este tipo de química se describe detalladamente en Sharpless et al., Angew. Chem. Int. Ed. 41(14), 2596, (2002) y Meldal er a/., Chem. Rev., 2008, 108(8), 2952-3015 y a menudo se denomina reacción "click" o CuAAC.
En las realizaciones, se prepara un polímero que contiene un grupo azida o alquino terminal respecto a la cadena polimérica. A continuación, este polímero se utiliza para preparar un nanoportador sintético de manera tal que una pluralidad de los grupos alquino o azida se posicionen sobre la superficie de dicho nanoportador. Como alternativa, el nanoportador sintético se puede preparar mediante otra ruta y posteriormente se puede funcionalizar con grupos alquino o azida. El componente se prepara en presencia de un grupo alquino (si el polímero contiene una azida) o un grupo azida (si el polímero contiene un alquino). A continuación, se permite que el componente reaccione con el nanoportador mediante la reacción de cicloadición 1 ,3-dipolar con o sin un catalizador, de este modo el componente se acopla covalentemente a la partícula a través de un conector de tipo 1 ,2,3-triazol 1 ,4-disustituido.
Un conector de tipo tioéter se obtiene mediante la formación de un enlace de tipo azufre-carbono (tioéter) con la forma, por ejemplo, de R1-S-R2. El tioéter se puede obtener mediante la alquilación de un grupo tiol/mercaptano (-SH) en un componente con un agrupo alquilante, tal como un haluro o un epóxido, en un segundo componente. Los conectores de tipo tioéter también se pueden formar mediante la adición de Michael de un grupo tiol/mercaptano en un componente a un grupo alqueno deficiente en electrones en un segundo componente que contiene un grupo maleimida o un grupo viniisulfona como aceptor de Michael. De otro modo, los conectores de tipo tioéter se pueden preparar mediante la reacción radicalaria tiol-eno de un grupo tiol/mercaptano en un componente con un grupo alqueno en un segundo componente.
Un conector de tipo hidrazona se obtiene mediante la reacción de un grupo hidrazida en un componente con un grupo aldehído/cetona en el segundo componente.
Un conector de tipo hidrazida se forma mediante la reacción de un grupo hidrazina en un componente con un grupo ácido carboxílico en el segundo componente. Esta reacción se lleva a cabo generalmente utilizando una química similar a la de la formación del enlace de tipo amida, donde el ácido carboxílico se activa con un reactivo activante.
Un conector de tipo imina u oxima se forma mediante la reacción de un grupo amina o /V-alcoxiamina (o aminooxi) en un componente con un grupo aldehido o cetona en el segundo componente.
Un conector de tipo urea o tiourea se prepara mediante la reacción de un grupo amina en un componente con un grupo isocianato o tioisocianato en el segundo componente.
Un conector de tipo amidina se prepara mediante la reacción de un grupo amina en un componente con un grupo imidoéster en el segundo componente.
Un conector de tipo amina se obtiene mediante la reacción de alquilación de un grupo amina en un componente con un grupo alquilante, tal como un grupo haluro, epóxido o éster sulfonato, en el segundo componente. Como alternativa, un conector de tipo amina también se puede obtener mediante la aminación reductiva de un grupo amina en un componente con un grupo aldehido o cetona en el segundo componente empleando un reactivo reductor adecuado, tal como cianoborohidruro de sodio o triacetoxiborohidruro de sodio.
Un conector de tipo sulfonamida se obtiene mediante la reacción de un grupo amina en un componente con un grupo haluro de sulfonilo (tal como cloruro de sulfonilo) en el segundo componente.
Un conector de tipo sulfona se obtiene mediante la adición de Michael de un nucleófilo a una sulfona vinílica. La sulfona vinílica o el nucleófilo pueden estar sobre la superficie del nanoportador o unidos a un componente.
El componente también se puede conjugar con el nanoportador mediante métodos de conjugación no covalente. Por ejemplo, se puede conjugar un inmunosupresor o antígeno con carga negativa a un nanoportador con carga positiva mediante adsorción electrostática. También se puede conjugar un componente que contenga un ligando de metales a un nanoportador que contenga un complejo metálico mediante un complejo metal-ligando.
En las realizaciones, el componente se puede unir un polímero, por ejemplo, ácido poliláctico-bloque-polietilenglicol, antes de acoplar el nanoportador sintético, o se puede formar el nanoportador sintético con grupos reactivos o activables sobre su superficie. En el último caso, el componente se puede preparar con un grupo que sea compatible con la química de enlace presentada por la superficie del nanoportador sintético. En otras realizaciones, un componente peptídico se puede unir a VLP o liposomas empleando un conector adecuado. Un conector es un compuesto o reactivo capaz de acoplar dos moléculas entre sí. En una realización, el conector puede ser un reactivo homobifuncional o heterobifuncional como los descritos en Hermanson 2008. Por ejemplo, un nanoportador sintético de liposomas o VLP que contenga un grupo carboxílico sobre la superficie se puede tratar con un conector homobifuncional, dihidrazida adípica (ADH, pos sus siglas en inglés), en presencia de EDC para formar el nanoportador sintético correspondiente con el conector ADH. El nanoportador (NC, por sus siglas en inglés) sintético unido al conector ADH resultante se conjuga a continuación con un componente peptídico que contiene un grupo ácido a través del otro extremo del conector ADH en NC para producir el correspondiente conjugado peptídico de liposoma o VLP.
Para consultar descripciones detalladas de métodos de conjugación disponibles, remítase a Hermanson G T "Bioconjugate Techniques", 2.a edición, publicado por Academic Press, Inc., 2008. Además de la unión covalente, el componente se puede acoplar mediante adsorción a un nanoportador sintético preformado o se puede acoplar mediante encapsulación durante la formación del nanoportador sintético.
Cualquiera de los inmunosupresores proporcionados en la presente se puede acoplar al nanoportador sintético. Los inmunosupresores incluyen, sin carácter limitante, estatinas; inhibidores de mTOR, tales como la rapamicina o un análogo de la rapamicina; agentes señalizadores de TGF-ß; agonistas de los receptores de TGF-ß; inhibidores de la histona-deacetilasa (HDAC); corticosteroides; inhibidores de la función mitocondrial, tales como rotenona; inhibidores de P38; inhibidores de NF-?ß; agonistas de los receptores de adenosina; agonistas de la prostaglandina E2; inhibidores de la fosfodiesterasa, tales como un inhibidor de la fosfodiesterasa 4; inhibidores de proteasomas; inhibidores de cinasas; agonistas de receptores acoplados a proteínas G; antagonistas de receptores acoplados a proteínas G; glucocorticoides; retinoides; inhibidores de citocinas; inhibidores de los receptores de citocinas; activadores de los receptores de citocinas; antagonistas de los receptores activados por el proliferador de peroxisomas; agonistas de los receptores activados por el proliferador de peroxisomas; inhibidores de la histona-deacetilasa; inhibidores de calcineurina; inhibidores de fosfatasas y ATP oxidados. Los inmunosupresores también incluyen IDO, vitamina D3, ciclosporina A, inhibidores de los receptores de aril-hidrocarburos, resveratrol, azatiopurina, 6-mercaptopurina, aspirina, ácido niflúmico, estriol, tripolide, interleucinas (p. ej., IL-1 , IL-10), ciclosporina A, citocinas que tienen como diana ARNip o receptores de citocinas y similares.
Los ejemplos de estatinas incluyen atorvastatina (LIPITOR®, TORVAST®), cerivastatina, fluvastatina (LESCOL®, LESCOL® XL), lovastatina (MEVACOR®, ALTOCOR®, ALTOPREV®), mevastatina (COMPACTIN®), pitavastatina (LIVALO®, PIAVA®), rosuvastatina (PRAVACHOL®, SELEKTINE®, LIPOSTAT®), rosuvastatina (CRESTOR®) y simvastatina (ZOCOR®, LIPEX®).
Los ejemplos de inhibidores de mTOR incluyen rapamicina y análogos de esta (p. ej., CCL-779, RAD001 , AP23573, C20-metalilrapamicina (C20-Marap), C16-(S)-butilsulfonamidorapamicina (C16-BSrap), C16-(S)-3-metilindolerapamicina (C16-iRap) (Bayle et al., Chemistry & Biology 2006, 13:99-107)), AZD8055, BEZ235 (NVP-BEZ235), ácido crisofánico (crisofanol), deforolimus (MK-8669), everolimus (RAD0001), KU-0063794, PI-103, PP242, temsirolimus y WYE-354 (comercializado por Selleck, Houston, TX, EE. UU.).
Los ejemplos de agentes señalizadores de TGF-ß incluyen los ligados de TGF-ß (p. ej., activina A, GDF1 , GDF1 1 , proteínas morfogenéticas óseas, nodal, TGF-ps) y sus receptores (p. ej., ACVR1 B, ACVR1 C, ACVR2A, ACVR2B, BMPR2, BMPR1A, BMPR1 B, TGFpRI, TGFpRIl), R-SMADS/co-SMADS (p. ej., SMAD1 , SMAD2, SMAD3, SMAD4, SMAD5, SMAD8), e inhibidores de ligandos (p. ej., folistatina, nogina, cordina, DAN, lefty, LTBP1 , THBS1 , Decorina).
Los ejemplos de inhibidores de la función mitocondrial incluyen atractilosido (sal dipotásica), ácido bongkrekico (sal triamónica), carbonilcianuro-m-clorofenilhidrazona, carboxiatractilosido (p. ej., de Atractylis gummifera), CGP-37157, (-)-Deguelin (p. ej., de Mundulea sericea), F16, péptido del dominio de unión a VDAC de la hexocinasa II, oligomicina, rotenona, Ru360, SFK1 y valinomicina (p. ej., de Streptomyces fulvissimus) (EMD4Biosciences, EE. UU.).
Los ejemplos de inhibidores de P38 incluyen SB-203580 (4-(4-fluorofenil)-2-(4-metilsulfinilfenil)-5-(4-piridil)1 H-imidazol), SB-239063 {trans- -(4-hidroxiciclohexil)-4-(fluorofenil)-5-(2-metoxipirimidin-4-il)imidazol), SB-220025 (5-(2-amino-4-pirimidinil)-4-(4-fluorofenil)-1 -(4-piperidinil)imidazol)) y ARRY-797.
Los ejemplos de inhibidores de NF (p. ej., ??-?ß) incluyen IFRD1 , 2-(1 ,8-naftirid¡n-2-il)fenol, ácido 5-aminosalicílico, BAY 1 1-7082, BAY 11-7085, CAPE (éster fenetílico del ácido cafeico), maleato de dietilo, inhibidor IV de IKK-2, IMD 0354, lactacistina, MG-132 [Z-Leu-Leu-Leu-CHO], inhibidor III de la activación de NFKB, inhibidor II de la activación de NF-??, JSH-23, partenolido, óxido de fenilarsina (PAO), PPM-18, sal amónica del ácido pirrolidinditiocarbámico, QNZ, RO 106-9920, rocaglamida, rocaglamida AL, rocaglamida C, rocaglamida I, rocaglamida J, rocaglaol, (R)- G-132, salicilato sódico, triptolide (PG490), wedelolactona.
Los ejemplos de agonistas de los receptores de adenosina incluyen CGS-21680 y ATL-146e.
Los ejemplos de agonistas de la prostaglandina E2 incluyen E-Prostanoide 2 y E-Prostanoide 4.
Los ejemplos de inhibidores de la fosfodiesterasa (inhibidores selectivos y no selectivos) incluyen cafeína, aminofilina, IBMX (3-isobutil-1-metilxantina), paraxantina, pentoxifilina, teobromina, teofilina, xantinas metiladas, vinpocetina, EHNA (erithro-9-(2-hidroxi-3-nonil)adenina), anagrelida, enoximona (PERFAN™), milrinona, levosimendán, mesembrina, ibudilast, piclamilast, luteolina, drotaverina, roflumilast (DAXAS™, DALIRESP™), sildenafilo (REVATION®, VIAGRA®), tadalafilo (ADCIRCA®, CIALIS®), vardenafilo (LEVITRA®, STAXYN®), udenafilo, avanafilo, icariin, 4-metilpiperazina y pirazolopirimidin-7-ona.
Los ejemplos de inhibidores de proteasomas incluyen bortezomib, disulfiram, epigalocatequin-3-galato y salinosporamida A.
Los ejemplos de inhibidores de cinasas incluyen bevacizumab, BIBW 2992, cetuximab (ERBITUX®), imatinib (GLEEVEC®), trastuzumab (HERCEPTIN®), gefitinib (IRESSA®), ranibizumab (LUCENTIS®), pegaptanib, sorafenib, dasatinib, sunitinib, erlotinib, nilotinib, lapatinib, panitumumab, vandetanib, E7080, pazopanib, mubritinib.
Los ejemplos de glucocorticoides incluyen hidrocortisona (cortisol), acetato de cortisona, prednisona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, betametasona, triamcinolona, beclometasona, acetato de fludrocortisona, acetato de desoxicorticosterona (DOCA) y aldosterona.
Los ejemplos de retinoides incluyen retinol, retinal, tretinoína (ácido retinoico, RETIN-A®), isotretinoína (Accutane®, Amnesteem®, Claravis®, Sotret®), alitretinoína (PANRETIN®), etretinato (TEGISON™) y su metabolito acitretina (SORIATANE®), tazaroteno (Tazorac®, Avage®, Zorac®), bexaroteno (TARGRETIN®) y adapaleno (DIFFERIN®).
Los ejemplos de inhibidores de citocinas incluyen IL1 ra, antagonista del receptor de IL1 , IGFBP, TNF-BF, uromodulina, alfa-2-macroglobulina, ciclosporina A, pentamidina y pentoxifilina (Pentopak®, Pentoxil®, Trental®).
Los ejemplos de antagonistas de los receptores activados por el proliferador de peroxisomas incluyen GW9662, antagonista III de PPARy, G335, T0070907 (EMD4Biosciences, EE. UU.).
Los ejemplos de agonistas de los receptores activados por el proliferador de peroxisomas incluyen pioglitazona, ciglitazona, clofibrato, GW1929, GW7647, L-165,041 , LY 171883, el activador de PPARy, Fmoc-Leu, troglitazona y WY-14643 (EMD4Biosciences, EE. UU.)- Los ejemplos de inhibidores de la histona-deacetilasa incluyen ácidos hidroxámicos (o hidroxamatos) tales como tricostatina A, tetrapéptidos cíclicos (tales como trapoxina B) y depsipéptidos, benzamidas, cetonas electrófilas, compuestos de ácidos alfáticos tales como fenilbutirato y ácido valproico, ácidos hidroxámicos tales como vorinostat (SAHA), belinostat (PXD101), LAQ824 y panobinostat (LBH589), benzamidas tales como entinostat (MS-275), CI994 y mocetinostat (MGCD0103), nicotinamida, derivados de NAD, dihidrocoumarina, naftopiranona y 2-hidroxinafaldehídos.
Los ejemplos de inhibidores de calcineurina incluyen ciclosporina, pimecrolimus, voclosporina y tacrolimus.
Los ejemplos de inhibidores de fosfatasas incluyen clorhidrato de BN82002, CP-91149, caliculina A, ácido cantarídico, cantaridina, cipermetrina, etil-3,4-defostatina, sal sódica de fostriecina, AZ51 , metil-3,4-defostatina, NSC 95397, norcantaridina, sal amónica del ácido okadaico de Prorocentrum concavum, ácido okadaico, sal potásica del ácido okadaico, sal sódica del ácido okadaico, óxido de fenilarsina, diversos cócteles de inhibidores de fosfatasas, proteína fosfatasa 1C, inhibidor de la proteína fosfatasa 2A, proteína fosfatasa 2A1 , proteína fosfatasa 2A2, ortovanadato de sodio.
En algunas realizaciones, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica descritos en la presente también están acoplados a nanoportadores sintéticos. En algunas realizaciones, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica están acoplados a los mismos o diferentes nanoportadores sintéticos a los que están acoplados los inmunosupresores. En otras realizaciones, los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica no están acoplados a ningún nanoportador sintético. Los antígenos presentables por APC de proteína terapéutica incluyen cualquiera de las proteínas terapéuticas, o fragmentos o derivados de estas, que se proporcionan en la presente.
Las proteínas terapéuticas incluyen, sin carácter limitante, proteínas terapéuticas, enzimas, cofactores enzimáticos, hormonas, factores de coagulación sanguínea, citocinas e interferones, factores de crecimiento, anticuerpos monoclonales y anticuerpos policlonales (p. ej., que se administran a un sujeto como terapia de reemplazo), y proteínas asociadas con la enfermedad de Pompe (p. ej., alglucosidasa alfa, rhGAA (p.ej., Myozime y Lumizyme (Genzyme)) administrables por infusión. Las proteínas terapéuticas también incluyen proteínas que participan en la cascada de coagulación sanguínea. Las proteínas terapéuticas incluyen, sin carácter limitante, el Factor VIII, Factor VII, Factor IX, Factor V, Factor de von Willebrand, Factor de von Heldebrant, activador tisular del plasminógeno, insulina, hormona del crecimiento, eritropoyetina alfa, VEGF, trombopoyetina, lisozima, antitrombina y similares. Las proteínas terapéuticas también incluyen adipocinas, tales como la leptina y adiponectina. Otros ejemplos de proteínas terapéuticas son como las que se describen más adelante y en otras secciones de la presente. También se incluyen los fragmentos o derivados de cualquiera de las proteínas terapéuticas proporcionadas como antígeno.
Los ejemplos de proteínas terapéuticas empleadas en la terapia de reemplazo enzimático de sujetos que padecen un trastorno por almacenamiento lisosómico incluyen, sin carácter limitante, imiglucerasa para el tratamiento de la enfermedad de Gaucher (p. ej., CEREZYME™), a-galactosidasa A (a-gal A) para el tratamiento de la enfermedad de Fabry (p. ej., agalsidasa beta, FABRYZYME™), a-glucosidasa ácida (GAA) para el tratamiento de la enfermedad de Pompe (p. ej., alglucosidasa alfa, LUMIZYME™, MYOZYME™), arilsulfatasa B para el tratamiento de mucopolisacaridosis (p. ej., laronidasa, ALDURAZYME™, idursulfasa, ELAPRASE™, arilsulfatasa B, NAGLAZYME™).
Los ejemplos de enzimas incluyen oxidorreductasas, transferasas, hidrolasas, Nasas, isomerasas y ligasas.
Los ejemplos de hormonas incluyen melatonina (/V-acetil-5-metoxitriptamina), Serotonina, tiroxina (o tetraiodotironina) (una hormona tiroidea), triiodotironina (una hormona tiroidea), epinefrina (o adrenalina), norepinefrina (o noradrenalina), dopamina (o hormona inhibidora de prolactina), hormona antimülleriana (u hormona o factor inhibidor mülleriano), adiponectina, hormona adrenocorticotropa (o corticotropina), angiotensinógeno y angiotensina, hormona antidiurética (o vasopresina, arginina vasopresina), péptido atrial-natriurético (o atriopeptina), calcitonina, colecistocinina, hormona liberadora de corticotropina, eritropoyetina, hormona estimuladora de los folículos, gastrina, grelina, glucagón, péptido similar al glucagón (GLP-1), GIP, hormona liberadora de gonadotropina, hormona liberadora de la hormona del crecimiento, gonadotropina coriónica humana, lactógeno placentario humano, hormona del crecimiento, inhibina, insulina, factor de crecimiento insulinoide (o somatomedina), leptina, hormona luteinizante, hormona estimuladora de melanocitos, orexina, oxitocina, hormona paratiroidea, prolactina, relaxina, secretina, somatostatina, trombopoyetina, hormona estimuladora de la tiroides (o tirotropina), hormona liberadora de tirotropina, cortisol, aldosterona, testosterona, dehidroepiandrosterona, androstenediona, dihidrotestosterona, estradiol, estrona, estriol, progesterona, calcitriol (1 ,25-dihidroxivitamina D3), calcidiol (25-hidroxivitamina D3), prostaglandinas, leucotrienos, prostaciclina, tromboxano, hormona liberadora de prolactina, lipotropina, péptido natriurético cerebral, neuropéptido Y, histamina, endotelina, polipéptido pancreático, renina y encefalina.
Los ejemplos de factores sanguíneos y de coagulación sanguínea incluyen el Factor I (fibrinógeno), Factor II (protrombina), factor tisular, Factor V (proacelerina, factor lábil), Factor VII (factor estable, proconvertina), Factor VIII (globulina antihemofílica), Factor IX (factor de Christmas o componente tromboplastínico del plasma), Factor X (factor de Stuart-Prower), Factor Xa, Factor XI, Factor XII (factor de Hageman), Factor XIII (factor estabilizante de fibrina), factor de von Willebrand, precalicreína (factor de Fletcher), cininógeno de alto peso molecular (HMWK) (factor de Fitzgerald), fibronectina, fibrina, trombina, antitrombina III, cofactor II de la heparina, proteína C, proteína S, proteína Z, inhibidor de proteasa dependiente de la proteína Z (ZPI), plasminógeno, alfa 2-antiplasmina, activador tisular del plasminógeno (tPA), urocinasa, inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 1 (PAI1), inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 2 (PAI2), procoagulante de cáncer y epoetina alfa (Epogen, Procrit).
Los ejemplos de citocinas incluyen linfocinas, interleucinas y quimiocinas, citocinas de tipo 1 tales como IFN-?, TGF-ß, y citocinas de tipo 2, tales como IL-4, IL-10 e IL-13.
Los ejemplos de factores de crecimiento incluyen adrenomedulina (AM), angiopoyetina (Ang), factor de motilidad autocrino, proteínas morfogenéticas óseas (BMP), factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF), factor de crecimiento epidérmico (EGF), eritropoyetina (EPO), factor de crecimiento fibroblástico (FGF), factor neurotrófico derivado de la línea celular glial (GDNF), factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF), factor estimulador de colonias de macrófagos y granulocitos (GM-CSF), factor de crecimiento y diferenciación 9 (GDF9), factor de crecimiento hepatocitario (HGF), factor de crecimiento derivado de hepatoma (HDGF), factor de crecimiento insulinoide (IGF), factor estimulador de la migración, miostatina (GDF-8), factor de crecimiento nervioso (NGF) y otras neurotrofinas, factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), trombopoyetina (TPO), factor de crecimiento transformador alfa (TGF-a), factor de crecimiento transformador beta (TGF-ß), factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), vía de señalización Wnt, factor de crecimiento placentario (PIGF), [(somatotrofina fetal bovina)] (FBS), IL-1 , IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6 e IL-7.
Los ejemplos de anticuerpos monoclonales incluyen Abagovomab, Abciximab, Adalimumab, Adecatumumab, Afelimomab, Afutuzumab, Alacizumab pegol, ALD, Alemtuzumab, Altumomab pentetato, Anatumomab mafenatox, Anrukinzumab, globulina antitimocítica, Apolizumab, Arcitumomab, Aselizumab, Atlizumab (tocilizumab), Atorolimumab, Bapineuzumab, Basiliximab, Bavituximab, Bectumomab, Belimumab, Benralizumab, Bertilimumab, Besilesomab, Bevacizumab, Biciromab, Bivatuzumab mertansina, Blinatumomab, Brentuximab vedotina, Briakinumab, Canakinumab, Cantuzumab mertansina, Capromab pendétido, Catumaxomab, Cedelizumab, Certolizumab pegol, Cetuximab, Citatuzumab bogatox, Cixutumumab, Clenoliximab, Clivatuzumab tetraxetán, Conatumumab, Dacetuzumab, Daclizumab, Daratumumab, Denosumab, Detumomab, Dorlimomab aritox, Dorlixizumab, Ecromeximab, Eculizumab, Edobacomab, Edrecolomab, Efalizumab, Efungumab, Elotuzumab, Elsilimomab, Enlimomab pegol, Epitumomab cituxetán, Epratuzumab, Erlizumab, Ertumaxomab, Etaracizumab, Exbivirumab, Fanolesomab, Faralimomab, Farletuzumab, Felvizumab, Fezakinumab, Figitumumab, Fontolizumab , Foravirumab, Fresolimumab, Galiximab, Gantenerumab, Gavilimomab, Gemtuzumab ozogamicina, GC1008, Girentuximab, Glembatumumab vedotina, Golimumab, Gomiliximab, Ibalizumab, Ibritumomab tiuxetán, Igovomab, Imciromab, Infliximab, Intetumumab, Inolimomab, Inotuzumab ozogamicina, Ipilimumab, Iratumumab, Keliximab, Labetuzumab, Lebrikizumab, Lemalesomab, Lerdelimumab, Lexatumumab, Libivirumab, Lintuzumab, Lorvotuzumab mertansina, Lucatumumab, Lumiliximab, Mapatumumab, Maslimomab, Matuzumab, Mepolizumab, Metelimumab, Milatuzumab, Minretumomab, Mitumomab, Morolimumab, Motavizumab, Muromonab-CD3, Nacolomab tafenatox, Naptumomab estafenatox, Natalizumab, Nebacumab, Necitumumab, Nerelimomab, Nimotuzumab, Nofetumomab merpentán, Ocrelizumab, Odulimomab, Ofatumumab, Olaratumab, Omalizumab, Oportuzumab boronato, Oregovomab, Otelixizumab, Pagibaximab, Palivizumab, Panitumumab, Panobacumab, Pascolizumab, Pemtumomab, Pertuzumab, Pexelizumab, Pintumomab, Priliximab, Pritumumab, Rafivirumab, Ramucirumab, Ranibizumab, Raxibacumab, Regavirumab Reslizumab, Rilotumumab, Rituximab, Robatumumab, Rontalizumab, Rovelizumab, Ruplizumab, Satumomab pendétido, Sevirumab, Sibrotuzumab, Sifalimumab, Siltuximab, Siplizumab, Solanezumab, Sonepcizumab, Sontuzumab, Stamulumab, Sulesomab, Tacatuzumab tetraxetán, Tadocizumab, Talizumab, Tanezumab, Taplitumomab paptox, Tefibazumab, Telimomab aritox, Tenatumomab, Teneliximab, Teplizumab, Ticilimumab (tremelimumab), Tigatuzumab, Tocilizumab (atlizumab), Toralizumab, Tositumomab, Trastuzumab, Tremelimumab, Tucotuzumab celmoleucina, Tuvirumab, Urtoxazumab, Ustekinumab, Vapaliximab, Vedolizumab, Veltuzumab, Vepalimomab, Visilizumab, Volociximab, Votumumab, Zalutumumab, Zanolimumab, Ziralimumab y Zolimomab aritox.
Los ejemplos de terapia de infusión o proteínas terapéuticas inyectables incluyen, por ejemplo, Tocilizumab (Roche/Actemra®), alfa-1 antitripsina (Kamada/AAT), Hematide® (Affymax y Takeda, péptido sintético), albinterferón alfa-2b (Novartis/Zalbin™), Rhucin® (Pharming Group, terapia de reemplazo con el inhibidor C1), tesamorelina (Theratechnologies/Egrifta, factor liberador de la hormona de crecimiento sintética), ocrelizumab (Genentech, Roche y Biogen), belimumab (GlaxoSmithKIine/Benlysta®), pegloticasa (Savient Pharmaceuticals/Krystexxa™), taliglucerasa alfa (Protalix/Uplyso), agalsidasa alfa (Shire/Replagal®), velaglucerasa alfa (Shire).
Otras proteínas terapéuticas útiles de acuerdo con los aspectos de esta invención serán evidentes para los expertos en la técnica y la invención no está limitada en este sentido.
En algunas realizaciones, se puede aislar un componente tal como un antígeno o inmunosupresor. El término "aislado" se refiere a la separación del elemento de su entorno nativo y su presencia en cantidades suficientes para permitir su identificación o uso. Esto significa, por ejemplo, que el elemento se puede (i) producir selectivamente por clonación de expresión o (ii) purificar, por ejemplo, por cromatografía o electroforesis. Los elementos aislados pueden ser, aunque no necesariamente, sustancialmente puros. Dado que un elemento aislado se puede mezclar con un excipiente farmacéuticamente aceptable en un preparado farmacéutico, puede que el elemento constituya únicamente un pequeño porcentaje en peso del preparado. No obstante, el elemento está aislado porque se ha separado de las sustancias con las cuales puede estar asociado en sistemas vivos, es decir, se ha separado de otras proteínas o lípidos. Cualquiera de los elementos proporcionados en la presente se puede aislar e incluir en las composiciones en forma aislada.
D. Métodos para preparar y emplear las composiciones de la invención v métodos relacionados Los nanoportadores sintéticos se pueden preparar empleando una amplia variedad de métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los nanoportadores sintéticos se pueden formar mediante métodos tales como nanoprecipitación, flujo focalizado utilizando canales fluídicos, deshidratación por aspersión, evaporación de disolvente de emulsión simple o doble, extracción de disolvente, separación de fases, molienda, procedimientos de microemulsión, microfabricación, nanofabricación, capas sacrificiales, coacervación simple y compleja, y otros métodos con los que estarán familiarizados los expertos en la técnica. Como alternativa o además, se han descrito síntesis en disolventes acuosos y orgánicos para nanomateriales semiconductores monodispersos, conductores, magnéticos, orgánicos y de otros tipos (Pellegrino et al., 2005, Small, 1 :48; Murray et al., 2000, Ann. Rev. Mat. Sci., 30:545; y Trindade et al., 2001 , Chem. Mal, 13:3843). En la bibliografía se han descrito métodos adicionales (remítase, p. ej., a Doubrow, Ed., "Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy", CRC Press, Boca Ratón, 1992; Mathiowitz et al., 1987, J. Control. Reléase, 5:13; Mathiowitz et al., 1987, Reactive Polymers, 6:275; y Mathiowitz et al., 1988, J. Appl. Polymer Sci., 35:755; Patentes de EE. UU. 5578325 y 6007845); P. Paolicelli et al., "Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Partióles" Nanomedicine. 5(6):843-853 (2010)).
Se pueden encapsular diferentes materiales en nanoportadores sintéticos, según sea deseable, utilizando diversos métodos, que incluyen, sin carácter limitante, C. Astete et al., "Synthesis and characterization of PLGA nanoparticles" J. Biomater. Sci. Polymer Edn, Vol. 17, N.° 3, págs. 247-289 (2006); K. Avgoustakis "Pegylated Poly(Lactide) and Poly(Lactide-Co-Glycolide) Nanoparticles: Preparation, Properties and Possible Applications ¡n Drug Delivery" Current Drug Delivery 1 :321-333 (2004); C. Reís et al., "Nanoencapsulation I. Methods for preparation of drug-loaded polymeric nanoparticles" Nanomedicine 2:8- 21 (2006); P. Paolicelli ef al., "Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles" Nanomedicine. 5(6):843-853 (2010). Pueden utilizarse otros métodos adecuados para encapsular materiales en nanoportadores sintéticos, que incluyen, sin carácter limitante, los métodos descritos en la Patente de EE. UU. 6.632.671 concedida a Unger el 14 de octubre de 2003.
En ciertas realizaciones, los nanoportadores sintéticos se preparan mediante un proceso de nanoprecipitación o deshidratación por aspersión. Las condiciones utilizadas en la preparación de los nanoportadores sintéticos se pueden modificar para proporcionar partículas que tengan un tamaño o una propiedad deseada (p. ej., hidrofobicidad, hidrofilicidad, morfología externa, "adhesividad", forma, etc.). El método de preparación de los nanoportadores sintéticos y las condiciones (p. ej., disolvente, temperatura, concentración, tasa de flujo de aire, etc.) utilizadas pueden depender de los materiales que se deseen acoplar a los nanoportadores sintéticos y/o la composición de la matriz polimérica.
Si las partículas preparadas por cualquiera de los métodos anteriores presentan un rango de tamaños fuera del rango deseado, se le puede dar a las partículas un tamaño adecuado, por ejemplo, utilizando un tamiz.
Los elementos (es decir, componentes) de los nanoportadores sintéticos de la invención (tales como restos por los cuales está compuesta una superficie inmunoactiva, restos de direccionamiento, matrices poliméricas, antígenos, inmunosupresores y similares) pueden acoplarse al nanoportador sintético global, p. ej., a través de uno o más enlaces covalentes, o pueden acoplarse a través de uno o más conectores. Otros métodos de funcionalización de nanoportadores sintéticos pueden adaptarse a partir de la Solicitud de Patente de EE. UU. Publicada 2006/0002852 concedida a Saltzman et al., la Solicitud de Patente de EE. UU. Publicada 2009/0028910 concedida a DeSimone et al. o la Solicitud de Patente Internacional Publicada WO/2008/127532 A1 concedida a Murthy et al.
Como alternativa o además, los nanoportadores sintéticos se pueden acoplar a los componentes directa o indirectamente a través de interacciones no covalentes. En las realizaciones no covalentes, el acoplamiento no covalente está mediado por interacciones no covalentes que incluyen, sin carácter limitante, interacciones de cargas, interacciones de afinidad, coordinación de metales, adsorción física, interacciones de receptor-sustrato, interacciones hidrófobas, interacciones aromáticas, interacciones de puente de hidrógeno, interacciones de van der Waals, interacciones magnéticas, interacciones electrostáticas, interacciones dipolo-dipolo y/o combinaciones de estas. Dichos acoplamientos pueden disponerse para que estén sobre una superficie externa o una superficie interna de un nanoportador sintético de la invención. En las realizaciones, la encapsulación y/o absorción es una forma de acoplamiento. En las realizaciones, los nanoportadores sintéticos de la invención se pueden combinar con un antígeno mezclándolos en el mismo vehículo o sistema de suministro.
Las poblaciones de nanoportadores sintéticos se pueden combinar para obtener formas farmacéuticas de acuerdo con la presente invención empleando métodos de mezcla farmacéuticos tradicionales. Estos incluyen la mezcla líquido-líquido en la cual dos o más suspensiones, donde cada una de ellas contiene uno o más subconjuntos de nanoportadores, se combinan directamente o se juntan por medio de uno o más recipientes que contienen diluyente. Dado que los nanoportadores sintéticos también se pueden producir o almacenar en forma de polvo, se podría realizar una mezcla polvo-polvo en seco al igual que una resuspensión de dos o más polvos en un medio común. Dependiendo de las propiedades de los nanoportadores y sus potenciales de interacción, se pueden conferir ventajas a una u otra ruta de mezcla.
Las composiciones típicas de la invención que comprenden nanoportadores sintéticos pueden comprender tampones orgánicos o inorgánicos (p. ej., sales sódicas o potásicas de fosfato, carbonato, acetato o citrato) y agentes para ajusfar el pH (p. ej., ácido clorhídrico, hidróxido de sodio o potasio, sales de citrato o acetato, aminoácidos y sus sales), antioxidantes (p. ej., ácido ascórbico, alfa-tocoferol), tensioactivos (p. ej., polisorbato 20, polisorbato 80, polioxietileno 9-10 nonilfenol, desoxicolato de sodio), estabilizantes de soluciones y/o crio/lioestabilizantes (p. ej., sacarosa, lactosa, manitol, trehalosa), agentes para el ajuste osmótico (p. ej., sales o azúcares), agentes antibacterianos (p. ej., ácido benzoico, fenol, gentamicina), agentes antiespumantes (p. ej., polidimetilsilozona), conservantes (p. ej., timerosal, 2-fenoxietanol, EDTA), estabilizantes poliméricos y agentes para ajusfar la viscosidad (p. ej., polivinilpirrolidona, poloxámero 488, carboximetilcelulosa) y codisolventes (p. ej., glicerol, polietilenglicol, etanol).
Las composiciones de acuerdo con la invención comprenden nanoportadores sintéticos de la invención combinados con excipientes farmacéuticamente aceptables. Las composiciones se pueden preparar utilizando técnicas farmacéuticas convencionales de elaboración y formulación para obtener formas farmacéuticas útiles. Las técnicas adecuadas para ser empleadas en la práctica de la presente invención se pueden consultar en el Handbook of Industrial Mixing: Science and Practice, editado por Edward L. Paul, Víctor A. Atiemo-Obeng y Suzanne M. Kresta, 2004 John Wiley & Sons, Inc.; y Pharmaceutics: The Science of Dosage Form Design, 2.a ed. editado por M. E. Auten, 2001 , Churchill Livingstone. En una realización, los nanoportadores sintéticos de la invención están suspendidos en solución salina estéril para inyección junto con un conservante.
Se debe sobreentender que las composiciones de la invención se pueden obtener de cualquier manera adecuada y la invención no está limitada de ningún modo a las composiciones que se pueden producir utilizando los métodos descritos en la presente. La selección de un método adecuado puede requerir prestar atención a las propiedades de los restos particulares que se están asociando.
En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos de la invención se elaboran en condiciones estériles o se esterilizan al final de su elaboración. Esto puede garantizar que las composiciones resultantes sean estériles y no infecciosas, de este modo se mejora la seguridad en comparación con las composiciones no estériles. Esto proporciona una medida de seguridad valiosa, especialmente cuando los sujetos que reciben los nanoportadores sintéticos presentan defectos inmunitarios, padecen una infección y/o son propensos a padecer una infección. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos de la invención se pueden liofilizar y almacenar en suspensión o como polvo liofilizado, dependiendo de la estrategia de formulación, durante periodos prolongados sin perder actividad.
Las composiciones de la invención se pueden administrar por varias vías, incluidas, sin carácter limitante, la vía subcutánea, intranasal, oral, intravenosa, ¡ntraperitoneal, intramuscular, transmucosal, transmucosal, sublingual, rectal, oftálmica, pulmonar, intradérmica, transdérmica, transcutánea o intradérmica, o mediante una combinación de estas vías. Las vías de administración también incluyen la administración por inhalación o aerosol pulmonar. Los expertos en la técnica estarán familiarizados con las técnicas para preparar sistemas de suministro en aerosol (remítase, por ejemplo, a Sciarra y Cutie, "Aerosols," en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18.a edición, 1990, págs. 1694-1712; incorporado por referencia).
Las proteínas terapéuticas proporcionadas como una terapia a base de células de la invención se pueden administrar por administración parenteral, intraarterial, intranasal o intravenosa, o por inyección en los ganglios linfáticos o la cámara anterior del ojo o por administración local a un órgano o tejido de interés. La administración puede ser por inyección subcutánea, intratecal, ¡ntraventricular, intramuscular, intraperitoneal, intracoronaria, intrapancreática, intrahepática o bronquial.
Las composiciones de la invención se pueden administrar en cantidades eficaces, tales como las cantidades eficaces descritas en otras secciones de la presente. Las dosis de las formas farmacéuticas contienen cantidades variables de poblaciones de nanoportadores sintéticos y/o cantidades variables de inmunosupresores y/o antígenos, de acuerdo con la invención. La cantidad de nanoportadores sintéticos y/o inmunosupresores y/o antígenos presente en las formas farmacéuticas de la invención puede variar de acuerdo con la naturaleza de los antígenos y/o inmunosupresores, el beneficio terapéutico que se desea conseguir y otros parámetros de este tipo. En algunas realizaciones, se pueden realizar estudios posológicos para establecer la cantidad terapéutica óptima de la población de nanoportadores sintéticos y la cantidad de inmunosupresores y/o antígenos que han de estar presentes en la forma farmacéutica. En algunas realizaciones, los nanoportadores sintéticos y/o los inmunosupresores y/o los antígenos están presentes en la forma farmacéutica en una cantidad eficaz para generar una respuesta inmunitaria tolerogénica a los antígenos al administrarlos a un sujeto. Se podrían determinar las cantidades de los inmunosupresores y/o antígenos eficaces para generar una respuesta inmunitaria tolerogénica utilizando técnicas y estudios posológicos convencionales en sujetos. Las formas farmacéuticas de la invención se pueden administrar con varias frecuencias. En una realización preferida, al menos una administración de la forma farmacéutica es suficiente para generar una respuesta farmacológicamente relevante. En las realizaciones más preferidas, se emplean al menos dos administraciones, al menos tres administraciones o al menos cuatro administraciones de la forma farmacéutica para garantizar una respuesta farmacológicamente relevante.
La administración profiláctica de las composiciones de la invención se puede iniciar antes de la aparición de una enfermedad, trastorno o afección, o la administración terapéutica se puede iniciar después de que se haya establecido un trastorno, enfermedad o afección.
En algunas realizaciones, la administración de nanoportadores sintéticos tienen lugar, p. ej., antes de la administración de una proteína terapéutica. En las realizaciones ilustrativas, los nanoportadores sintéticos se administran una o más veces, incluidos, sin carácter limitante 30, 25, 20, 15, 14, 13, 12, 11 , 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 o 0 días antes de la administración de una proteína terapéutica. Además o como alternativa, los nanoportadores sintéticos se pueden administrar a un sujeto después de administrar una proteína terapéutica. En las realizaciones ilustrativas, los nanoportadores sintéticos se administran una o más veces, incluidos, sin carácter limitante 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, etc. días después de la administración de una proteína terapéutica.
En algunas realizaciones, se administra una dosis de mantenimiento (p. ej., de una composición de nanoportadores sintéticos proporcionada en la presente) a un sujeto después de que una administración inicial haya provocado una respuesta tolerogénica en el sujeto, por ejemplo, para mantener el efecto tolerogénico conseguido después de la dosis inicial, para prevenir una reacción inmunitaria no deseada en el sujeto o para prevenir que el sujeto se convierta en un sujeto que corra el riesgo de experimentar una respuesta inmunitaria no deseada o un nivel no deseado de una respuesta inmunitaria. En algunas realizaciones, la dosis de mantenimiento es la misma dosis que la dosis inicial recibida por el sujeto. En algunas realizaciones, la dosis de mantenimiento es una dosis menor que la dosis inicial. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la dosis de mantenimiento es aproximadamente 3/4, aproximadamente 2/3, aproximadamente 1/2, aproximadamente 1/3, aproximadamente 1/4, aproximadamente 1/8, aproximadamente 1/10, aproximadamente 1/20, aproximadamente 1/25, aproximadamente 1/50, aproximadamente 1/100, aproximadamente 1/1000, aproximadamente 1/10 000, aproximadamente 1/100 000 o aproximadamente 1/1 000 000 (peso/peso) de la dosis inicial.
Las composiciones y métodos descritos en la presente se pueden utilizar para inducir o fomentar una respuesta inmunitaria tolerogénica y/o para suprimir, modular, dirigir o redirigir una respuesta inmunitaria no deseada a efectos de supresión inmunitaria. Las composiciones y métodos descritos en la presente se pueden utilizar para generar una respuesta inmunitaria tolerogénica en un sujeto al que se le ha administrado, se le está administrando o se le administrará una proteína terapéutica.
EJEMPLOS EJEMPLO 1 Respuesta inmunitaria de los nanoportadores sintéticos con rapamicina acoplada con y sin péptido (323-339) de ovoalbúmina Materiales El péptido 323-339 de ovoalbúmina, un péptido de 17 aminoácidos que se sabe que es un epítopo de linfocitos T y B de la proteína ovoalbúmina, se adquirió en Bachem Americas Inc. (3132 Kashiwa Street, Torrance CA 90505; # de pieza 4065609). La rapamicina se adquirió en TSZ CHEM (185 Wilson Street, Framingham, MA 01702; # de catálogo del producto R1017). El PLGA con una proporción de láctido:glicólido de 3:1 y una viscosidad inherente de 0.75 dl_/g se adquirió en SurModics Pharmaceuticals (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211 ; código de producto 7525 DLG 7A). El alcohol polivinílico (85-89% hidrolizado) se adquirió en EMD Chemicals (número de producto 1.41350.1001).
Solución 1 : Péptido 323-339 de ovoalbúmina con una concentración de 20 mg/mL en una solución acuosa de ácido clorhídrico diluido. La solución se preparó disolviendo el péptido de ovoalbúmina en una solución 0.13 M de ácido clorhídrico a temperatura ambiente.
Solución 2: Rapamicina con una concentración de 50 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo la rapamicina en cloruro de metileno puro.
Solución 3: PLGA con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLGA en cloruro de metileno puro.
Solución 4: Alcohol polivinílico con una concentración de 50 mg/mL en tampón de fosfato 100 mM, pH 8.
Método para preparar nanoportadores sintéticos que contienen rapamicina v ovoalbúmina (323-339) En primer lugar, se preparó una emulsión primaria de agua en aceite (W1/01). La W1/01 se preparó combinando la solución 1 (0.2 mL), la solución 2 (0.2 mL) y la solución 3 (1.0 mL) en un tubo de presión pequeño y sonicando con una amplitud del 50% durante 40 segundos con un sonicador Branson Digital Sonifier 250. A continuación, se preparó una emulsión secundaria (W1/01/W2) combinando la solución 4 (3.0 ml_) con la emulsión primaria W1/01 , agitando en un vórtex durante 10 s y sonicando con una amplitud del 30% durante 60 segundos utilizando el sonicador Branson Digital Sonifier 250.
La emulsión W1/01/W2 se añadió a un vaso de precipitados que contenía solución tampón de fosfato 70 mM, pH 8 (30 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas para permitir que el cloruro de metileno se evaporara y se formaran los nanoportadores sintéticos. Una porción de los nanoportadores sintéticos se lavó transfiriendo la suspensión de nanoportadores sintéticos a un tubo de centrifugación, centrifugando a 21 000xg y 4 °C durante una hora, retirando el sobrenadante y volviendo a suspender el pellet en solución salina tamponada con fosfato. El procedimiento de lavado se repitió y el pellet se volvió a suspender en solución salina tamponada con fosfato para obtener una dispersión de nanoportadores sintéticos final de aproximadamente 10 mg/mL.
Las cantidades de péptido y rapamicina en los nanoportadores sintéticos se determinaron mediante análisis por HPLC. La masa seca total de nanoportadores sintéticos por mL de suspensión se determinó mediante un método gravimétrico.
Método para nanoportadores sintéticos que contienen rapamicina En primer lugar, se preparó una emulsión primaria de agua en aceite (W1/01). La W1/01 se preparó combinando una solución 0.13 M de ácido clorhídrico (0.2 ml_), la solución 2 (0.2 ml_) y la solución 3 (1.0 ml_) en un tubo de presión pequeño y sonicando con una amplitud del 50% durante 40 segundos con un sonicador Branson Digital Sonifier 250. A continuación, se preparó una emulsión secundaria (W1/01/W2) combinando la solución 4 (3.0 ml_) con la emulsión primaria W1/01 , agitando en un vórtex durante 10 s y sonicando con una amplitud del 30% durante 60 segundos utilizando el sonicador Branson Digital Sonifier 250.
La emulsión W1/01/W2 se añadió a un vaso de precipitados que contenía solución tampón de fosfato 70 mM, pH 8 (30 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas para permitir que el cloruro de metileno se evaporara y se formaran los nanoportadores sintéticos. Una porción de los nanoportadores sintéticos se lavó transfiriendo la suspensión de nanoportadores sintéticos a un tubo de centrifugación, centrifugando a 21 000xg y 4 °C durante una hora, retirando el sobrenadante y volviendo a suspender el pellet en solución salina tamponada con fosfato. El procedimiento de lavado se repitió y el pellet se volvió a suspender en solución salina tamponada con fosfato para obtener una dispersión de nanoportadores sintéticos final de aproximadamente 10 mg/mL.
La cantidad de rapamicina en el nanoportador sintético se determinó mediante análisis por HPLC. La masa seca total de nanoportadores sintéticos por mL de suspensión se determinó mediante un método gravimétrico.
Método para medir la carga de rapamicina Se recogieron aproximadamente 3 mg de nanoportadores sintéticos y se centrifugaron para separar el sobrenadante del pellet de nanoportadores sintéticos. Se añadió acetonitrilo al pellet, y la muestra se sónico y centrifugó para eliminar cualquier material insoluble. El sobrenadante y el pellet se inyectaron en un RP-HPLC y se leyó la absorbancia a 278 nm. Los pg encontrados en el pellet se utilizaron para calcular el % atrapado (carga), y los pg en el sobrenadante y el pellet se utilizaron para calcular los pg totales recuperados.
Método para medir la carga de ovoalbúmina (323-339) Se recogieron aproximadamente 3 mg de nanoportadores sintéticos y se centrifugaron para separar el sobrenadante del pellet de nanoportadores sintéticos. Se añadió trifluoroetanol al pellet y la muestra se sónico para disolver el polímero, se añadió ácido trifluoroacético al 0.2%, y la muestra se sonicó y después se centrifugó para eliminar cualquier material insoluble. El sobrenadante y el pellet se inyectaron en un RP-HPLC y se leyó la absorbancia a 215 nm. Los pg encontrados en el pellet se utilizaron para calcular el % atrapado (carga), y los pg en el sobrenadante y el pellet se utilizaron para calcular los pg totales recuperados.
Actividad de las células dendríticas toleroqénicas (tDC) específicas para el antígeno sobre el desarrollo de linfocitos Treg El ensayo incluyó el uso de ratones OTIl que tienen un receptor de linfocitos T transgénico específico para una ovoalbúmina (323-339) inmunodominante. Con el fin de crear tDC específicas para el antígeno, se aislaron esplenocitos CD11c+ y se añadió el péptido (323-339) de ovoalbúmina in vitro con una concentración de g/mL o nada de antígeno. A continuación, se añadió la rapamicina soluble o encapsulada en nanoportadores a las DC durante 2 horas, las cuales se lavaron posteriormente de forma exhaustiva para eliminar la rapamicina libre del cultivo. Se aislaron células CD4+CD25- respondedoras purificadas de ratones OTIl y se añadieron a tDC en una proporción de 10:1 de T respecto a DC. A continuación, la mezcla de tDC y linfocitos T de OTIl se cultivó durante 4-5 días, y la frecuencia de linfocitos Treg (CD4+CD25highFoxP3+) se analizó mediante citometría de flujo como se muestra en la Fig. 1. Se seleccionaron regiones en función de los controles isotípicos.
EJEMPLO 2 Nanopartículas de sílice mesoporosa con ibuprofeno acoplado (teórico) Se crean núcleos de nanopartículas de S1O2 mesoporosa mediante un proceso sol-gel. Se disuelve bromuro de hexadeciltrimetilamonio (CTAB) (0.5 g) en agua desionizada (500 mL) y a continuación se añade una solución acuosa 2 M de NaOH (3.5 mL) a la solución de CTAB. La solución se agita durante 30 min y a continuación se añade tetraetoxisilano (TEOS) (2.5 mL) a la solución. El gel resultante se agita durante 3 h a una temperatura de 80 °C. El precipitado blanco que se forma se captura por filtración, seguida de lavado con agua desionizada y secado a temperatura ambiente. El surfactante restante se extrae a continuación de las partículas por suspensión en una solución etanólica de HCI durante la noche. Las partículas se lavan con etanol, se centrifugan y se vuelven a dispersar con ultrasonicación. Este procedimiento de lavado es repite dos veces más.
Las nanopartículas de Si02 se funcionalizan posteriormente con grupos amino utilizando (3-aminopropil)trietoxisilano (APTMS). Para hacer esto, las partículas se suspenden en etanol (30 mL) y se añade APTMS (50 pL) a la suspensión. La suspensión se deja reposar a temperatura ambiente durante 2 h y después se hierve durante 4 h, manteniendo el volumen constante mediante adiciones periódicas de etanol. Los reactivos remanentes se eliminan con cinco ciclos de lavado mediante centrifugación y redispesión en etanol puro.
En una reacción independiente, se crean semillas de oro con un diámetro de 1-4 nm. Toda el agua empleada en esta reacción se desioniza primero y después se destila en vidrio. Se introduce agua (45.5 mL) en un matraz de fondo redondo de 100 mL. Mientras se agita, se añade NaOH acuoso 0.2 M (1.5 mL), seguido de una solución acuosa al 1% de cloruro de tetrakis(hidroximetil)fosfonio (THPC) (1.0 mL). Dos minutos después de añadir la solución de THPC, se añade una solución acuosa de 10 mg/mL de ácido cloroáurico (2 mL), la cual se ha dejado reposar al menos 15 min. Las semillas de oro se purifican mediante diálisis frente a agua.
Para formar los nanoportadores de núcleo/cubierta, las nanopartículas de S1O2 funcionalizadas con grupos amino formadas anteriormente se mezclan primero con las semillas de oro durante 2 h a temperatura ambiente. Las partículas de S1O2 decoradas con oro se recogen mediante centrifugación y se mezclan con una solución acuosa de ácido cloroáurico y bicarbonato de potasio para formar la cubierta de oro. A continuación, las partículas se lavan mediante centrifugación y se vuelven a dispersar en agua. El ibuprofeno se carga suspendiendo las partículas en una solución de ibuprofeno sódico (1 mg/L) durante 72 h. Después, el ibuprofeno libre se lava de las partículas mediante centrifugación y se vuelven a dispersar en agua.
EJEMPLO 3 Liposomas que contienen ciclosporina A (teórico) Los liposomas se forman utilizando hidratación de película fina. Se disuelven 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPPC) (32 µ????), colesterol (32 µ????) y ciclosporina A (6.4 pmol) en cloroformo puro (3 mL). Esta solución lipídica se introduce en un matraz de fondo redondo de 50 mL, y el disolvente se evapora en un evaporador rotatorio a una temperatura de 60 °C. A continuación, el matraz de purga con nitrógeno gaseoso para eliminar el disolvente remanente. Se añaden solución salina tamponada con fosfato (2 mL) y cinco microesferas de vidrio al matraz, y la película lipídica formada se hidrata agitando a 60 °C durante 1 h para formar una suspensión. La suspensión se transfiere a un tubo de presión pequeño y se sónica a 60 °C durante cuatro ciclos de pulsos de 30 s con una separación de 30 s entre cada pulso. A continuación, la suspensión se deja reposar a temperatura ambiente durante 2 h para permitir que se complete la hidratación. Los liposomas se lavan mediante centrifugación y se vuelven a suspender en solución tamponada con fosfato recién preparada.
EJEMPLO 4 Nanoportador polimérico que contiene un conjugado de polímero rapamicina (teórico) Preparación del conjugado de PLGA-rapamicina: El polímero PLGA con un grupo terminal ácido (7525 DLG1A, índice de acidez: 0.46 mmol/g, Lakeshore Biomaterials; 5 g, 2.3 mmol, 1.0 eq) se disuelve en 30 mL de diclorometano (DCM). Se añade N,N-diciclohexilcarbodimida (1.2 eq, 2.8 mmol, 0.57 g) seguida de rapamicina (1.0 eq, 2.3 mmol, 2.1 g) y 4-dimetilaminopiridina (D AP) (2.0 eq, 4.6 mmol, 0.56 g). La mezcla se agita a TA durante 2 días. A continuación, la mezcla se filtra para eliminar la diciclohexilurea insoluble. El filtrado se concentra hasta un volumen de aproximadamente 10 mL y se añade a 100 mL de alcohol isopropílico (IPA) para que precipite el conjugado de PLGA-rapamicina. La capa de IPA se eliminó y el polímero se lavó posteriormente con 50 mL de IPA y 50 mL de éter f-butil metílico (MTBE). A continuación, el polímero se secó al vacío a 35 °C durante 2 días para obtener PLGA-rapamicina como un sólido blanco (aprox. 6.5 g).
Preparación de un nanoportador que contiene un conjugado de PLGA-rapamicina y péptido (323-339) de ovoalbúmina: El nanoportador que contiene PLGA-rapamicina se prepara de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1 como se indica a continuación: Se preparan las soluciones para formar el nanoportador como se indica a continuación: Solución 1 : Péptido 323-339 de ovoalbúmina con una concentración de 20 mg/mL en una solución acuosa de ácido clorhídrico diluido. La solución se prepara disolviendo el péptido de ovoalbúmina en una solución 0.13 M de ácido clorhídrico a temperatura ambiente. Solución 2: PLGA-rapamicina con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se prepara disolviendo el PLGA-rapamicina en cloruro de metileno puro. Solución 3: PLA-PEG con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se prepara disolviendo el PLA-PEG en cloruro de metileno puro. Solución 4: Alcohol polivinílico con una concentración de 50 mg/mL en tampón de fosfato 100 mM, pH 8.
En primer lugar, se prepara una emulsión primaria de agua en aceite (W1/01). La W1/01 se prepara combinando la solución 1 (0.2 mL), la solución 2 (0.75 mL) y la solución 3 (0.25 mL) en un tubo de presión pequeño y sonicando con una amplitud del 50% durante 40 segundos con un sonicador Branson Digital Sonifier 250. A continuación, se prepara una emulsión secundaria (W1/01/W2) combinando la solución 4 (3.0 mL) con la emulsión primaria W1/01 , agitando en un vórtex durante 10 s y sonicando con una amplitud del 30% durante 60 segundos utilizando el sonicador Branson Digital Sonifier 250. La emulsión W1/01/W2 se añade a un vaso de precipitados que contiene solución tampón de fosfato 70 mM, pH 8 (30 mL) y se agita a temperatura ambiente durante 2 horas para permitir que el cloruro de metileno se evapore y se formen los nanoportadores. Una porción de los nanoportadores se lava transfiriendo la suspensión de nanoportadores a un tubo de centrifugación, centrifugando a 75 600*g y 4 °C durante 35 min, retirando el sobrenadante y volviendo a suspender el pellet en solución salina tamponada con fosfato. El procedimiento de lavado se repite y el pellet se vuelve a suspender en solución salina tamponada con fosfato para obtener una dispersión de nanoportadores final de aproximadamente 10 mg/mL.
EJEMPLO 5 Preparación de nanoportadores de oro (AuNC) que contienen rapamicina (teórico) Preparación de HS-PEG-rapamicina: Una solución de disulfuro de PEG-ácido (1.0 eq), rapamicina (2.0-2.5 eq), DCC (2.5 eq) y DMAP (3.0 eq) en D F anhidro se agita a TA durante la noche. La diciclohexilurea insoluble se elimina por filtración, y el filtrado se añade a alcohol isopropílico (IPA) para que precipite el PEG-disulfuro-di-éster de rapamicina y se lava con IPA y se seca. A continuación, el polímero se trata con clorhidrato de tris(2-carboxietil)fosfina en DMF para reducir el disulfuro de PEG a tiol-PEG-éster de rapamicina (HS-PEG-rapamicina). El polímero resultante se recupera mediante precipitación en IPA y se seca como se ha descrito previamente y se analiza por HRMN y GPC.
Formación de nanoportadores de oro (AuNC): Se calienta una solución ac. de 500 ml_ de HAuCI4 1 mM hasta reflujo durante 10 min con agitación vigorosa en un matraz de fondo redondo de 1 L equipado con un condensador. A continuación se añade rápidamente una solución de 50 ml_ de citrato de trisodio 40 mM a la solución agitada. La solución de color vino tinto intenso resultante se mantiene a reflujo durante 25-30 min, se deja de calentar y la solución se enfría hasta temperatura ambiente. A continuación, la solución se filtra a través de un filtro de membrana de 0.8 µ?t? para proporcionar la solución de AuNC. Los AuNC se caracterizan empleando espectroscopia visible y microscopía electrónica de transmisión. Los AuNC tienen un diámetro de aproximadamente 20 nm, están bloqueados con citrato y presentan una absorción máxima a 520 nm.
Conjugado de AuNC con HS-PEG-rapamicina: Una solución de 150 pL de HS-PEG-rapamicina (10 µ? en tampón de carbonato 10 mM, pH 9.0) se añade a 1 mL de nanoportadores de oro bloqueados con citrato con un diámetro de 20 nm (1.16 nM) para producir una relación molar de tiol frente a oro de 2500:1. La mezcla se agita a temperatura ambiente en atmósfera de argón durante 1 hora para permitir que se complete el intercambio de tiol con citrato en los nanoportadores de oro. A continuación, los AuNC con PEG-rapamicina sobre la superficie se purifican por centrifugación a 12 000 g durante 30 minutos. El sobrenadante se decanta y el pellet que contiene AuNC-S-PEG-rapamicina se lava en forma de pellet con 1x tampón PBS. A continuación, los nanoportadores de oro-PEG-rapamicina purificados se vuelven a suspender en un tampón adecuado para su análisis y bioensayos posteriores.
EJEMPLO 6 Nanoportadores de núcleo-cubierta de sílice mesoporosa-oro que contienen ovoalbúmina (teórico) Se crean núcleos de nanopartículas de S1O2 mesoporosa mediante un proceso sol-gel. Se disuelve bromuro de hexadeciltrimetilamonio (CTAB) (0.5 g) en agua desionizada (500 mL) y a continuación se añade una solución acuosa 2 M de NaOH (3.5 mL) a la solución de CTAB. La solución se agita durante 30 min y a continuación se añade tetraetoxisilano (TEOS) (2.5 mL) a la solución. El gel resultante se agita durante 3 h a una temperatura de 80 °C. El precipitado blanco que se forma se captura por filtración, seguida de lavado con agua desionizada y secado a temperatura ambiente. El surfactante restante se extrae a continuación de las partículas por suspensión en una solución etanólica de HCI durante la noche. Las partículas se lavan con etanol, se centrifugan y se vuelven a dispersar con ultrasonicación. Este procedimiento de lavado es repite dos veces más.
Las nanopartículas de S¡Ü2 se funcionalizan posteriormente con grupos amino utilizando (3-aminopropil)trietoxisilano (APTMS). Para hacer esto, las partículas se suspenden en etanol (30 mL) y se añade APTMS (50 pL) a la suspensión. La suspensión se deja reposar a temperatura ambiente durante 2 h y después se hierve durante 4 h, manteniendo el volumen constante mediante adiciones periódicas de etanol. Los reactivos remanentes se eliminan con cinco ciclos de lavado mediante centrifugación y redispesión en etanol puro.
En una reacción independiente, se crean semillas de oro con un diámetro de 1-4 nm. Toda el agua empleada en esta reacción se desioniza primero y después se destila en vidrio. Se introduce agua (45.5 mL) en un matraz de fondo redondo de 100 mL. Mientras se agita, se añade NaOH acuoso 0.2 M (1.5 mL), seguido de una solución acuosa al 1% de cloruro de tetrakis(hidroximetil)fosfonio (THPC) (1.0 mL). Dos minutos después de añadir la solución de THPC, se añade una solución acuosa de 10 mg/mL de ácido cloroáurico (2 mL), la cual se ha dejado reposar al menos 15 min. Las semillas de oro se purifican mediante diálisis frente a agua.
Para formar los nanoportadores de núcleo/cubierta, las nanopartículas de S1O2 funcionalizadas con grupos amino formadas anteriormente se mezclan primero con las semillas de oro durante 2 h a temperatura ambiente. Las partículas de S1O2 decoradas con oro se recogen mediante centrifugación y se mezclan con una solución acuosa de ácido cloroáurico y bicarbonato de potasio para formar la cubierta de oro. A continuación, las partículas se lavan mediante centrifugación y se vuelven a dispersar en agua. Se carga ovoalbúmina tiolada (preparada tratando ovoalbúmina con clorhidrato de 2-iminotiolano) suspendiendo las partículas en una solución de ovoalbúmina tiolada (1 mg/L) durante 72 h. Las partículas se lavan en forma de pellet con 1x PBS (pH 7.4) para eliminar la proteína libre. A continuación, los nanoportadores de núcleo-cubierta de sílice-oro resultantes que contienen ovoalbúmina se vuelven a suspenden en 1x PBS para su análisis y ensayos posteriores.
EJEMPLO 7 Liposomas que contienen rapamicina y ovoalbúmina (teórico) Los liposomas se forman mediante hidratación de película fina. Se disuelven 1 ,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPPC) (32 µ?t???), colesterol (32 µ?t???) y rapamicina (6.4 mol) en cloroformo puro (3 mL). Esta solución lipídica se añade a un tubo de vidrio de 10 mL, y el disolvente se elimina con una corriente de nitrógeno gaseoso y se deseca durante 6 h al vacío. Se obtienen vesículas multilamelares mediante la hidratación de la película con 2.0 mL de tampón MOPS 25 mM, pH 8.5, que contiene una cantidad en exceso de ovoalbúmina. El tubo se agita en un vórtex hasta que la película lipídica se separa de la superficie del tubo. Para dividir las vesículas multilamelares en monolamelares, se aplican diez ciclos de congelación (nitrógeno líquido) y descongelación (baño de agua a 30 °C). A continuación, la muestra se diluye hasta 1 mL en tampón MOPS 25 mM, pH 8.5. El tamaño del liposoma resultante se homogeneiza por extrusión haciendo pasar la muestra 10 veces a través de filtros de policarbonato con poros de 200 nm. Los liposomas resultantes se utilizan posteriormente para su análisis y bioensayos posteriores.
EJEMPLO 8 Nanoportadores poliméricos compuestos por poliaminoácido modificado con ovoalbúmina conjugada en su superficie (teórico) Paso-1. Preparación de poli(ácido ?-glutámico) (?-PGA) modificado con éster etílico de L-fenilalanina (L-PAE): Se disuelven 4.7 unidades en mmol de ?-PGA (Mn= 300 kD) en solución acuosa 0.3 N de NaHC03 (50 mL). Se añaden L-PAE (4.7 mmol) y EDC.HCI (4.7 mmol) a la solución y se agita durante 30 min a 4 °C. La solución se mantiene posteriormente a temperatura ambiente con agitación durante 24 h. Los productos químicos de bajo peso molecular se eliminan por diálisis utilizando una membrana de diálisis con un PMNL (peso molecular nominal límite) de 50 kD. El D-PGA-injerto-L-PAE resultante se obtiene por liofilización.
Paso-2. Preparación de nanopartículas a partir del polímero ?-PGA-injerto-L-PAE: Se preparan nanopartículas compuestas de ß-PGA-injerto-L-PAE mediante un método de precipitación y diálisis. Se disolvió ?-PGA-injerto-L-PAE (20 mg) en 2 mL de DMSO y a continuación se añadieron 2 mL de agua para formar una solución translúcida. Posteriormente, la solución se dializó frente a agua destilada utilizando un tubo de membrana de celulosa (PMNL= 50 000) para formar las nanopartículas y para eliminar los disolventes orgánicos durante 72 h a temperatura ambiente. El agua destilada se reemplazó en intervalos de 12 h. La solución de nanopartículas resultante (10 mg/mL en agua) se utilizó posteriormente para su conjugación con el antígeno.
Paso-3. Conjugación de ovoalbúmina con nanopartículas de ?-PGA: Los grupos ácido carboxílico superficiales de las nanopartículas de ?-PGA (10 mg/mL) se activan primero con EDC y NHS (10 mg/mL de cada uno en tampón de fosfato, pH 5.8) durante 2 horas a temperatura ambiente. Tras lavar en forma de pellet para eliminar el exceso de EDC/NHS, las nanopartículas activadas se mezclan con 1 mL de ovoalbúmina (10 mg/mL) en solución salina tamponada con fosfato (PBS, pH 7.4) y la mezcla se incuba a 4-8 °C durante 24 h. Las nanopartículas de ?-PGA conjugadas con ovoalbúmina resultantes se lavan dos veces con PBS y se vuelven a suspender con una concentración de 5 mg/mL en PBS para su análisis y bioensayos posteriores.
EJEMPLO 9 Nanopartículas de v-PGA con eritropovetina (EPO) encapsulada (teórico) Para preparar las nanopartículas de ?-PGA con EPO encapsulada, se disuelven 0.25-4 mg de EPO en 1 mL de PBS (pH 7.4) y se añade 1 mL del ?-PGA-injerto-L-PAE (10 mg/mL en DMSO) a la solución de EPO. La solución resultante se centrifuga a 14 000 x g durante 15 min y se vuelve a lavar repetidamente con PBS. Las nanopartículas de ?-PGA con EPO encapsulada resultantes se vuelven a suspender posteriormente en PBS (5 mg/mL) para su análisis y bioensayo posteriores.
EJEMPLO 10 Preparación de nanoportadores de oro (AuNC) que contienen ovoalbúmina (teórico Paso-1. Formación de nanoportadores de oro (AuNC): Se calienta una solución ac. de 500 mL de HAuCU 1 mM hasta reflujo durante 10 min con agitación vigorosa en un matraz de fondo redondo de 1 L equipado con un condensador. A continuación se añade rápidamente una solución de 50 mL de citrato de trisodio 40 mM a la solución agitada. La solución de color vino tinto intenso resultante se mantiene a reflujo durante 25-30 min, se deja de calentar y la solución se enfría hasta temperatura ambiente. A continuación, la solución se filtra a través de un filtro de membrana de 0.8 µ?t? para proporcionar la solución de AuNC. Los AuNC se caracterizan empleando espectroscopia visible y microscopía electrónica de transmisión. Los AuNC tienen un diámetro de aproximadamente 20 nm, están bloqueados con citrato y presentan una absorción máxima a 520 nm.
Paso-2. Conjugación de ovoalbúmina con AuNC: Una solución de 150 [ÍL de ovoalbúmina tiolada (10 µ? en tampón de carbonato 10 mM, pH 9.0) se añade a 1 mL de nanoportadores de oro bloqueados con citrato con un diámetro de 20 nm (1.16 nM) para producir una relación molar de tiol frente a oro de 2500:1. La mezcla se agita a temperatura ambiente en atmósfera de argón durante 1 hora para permitir que se complete el intercambio de tiol con citrato en los nanoportadores de oro. A continuación, los AuNC con ovoalbúmina sobre la superficie se purifican por centrifugación a 12 000 g durante 30 minutos. El sobrenadante se decanta y el pellet que contiene AuNC-ovoalbúmina se lava en forma de pellet con 1x tampón PBS. A continuación, los nanoportadores de oro-ovoalbúmina se vuelven a suspender en un tampón adecuado para su análisis y bioensayos posteriores.
EJEMPLO 11 Evaluación de la respuesta inmunitaria tolerogénica a epoyetina alfa in vivo (teórico) Se inmunizan ratones Balb/c con epoyetina alfa en adyuvante de Freund incompleto para inducir la proliferación de linfocitos T CD4+, cuyo nivel se evalúa. Subsecuentemente, se administra una composición de la invención que comprende epítopos restringidos por MHC de clase II de epoyetina alfa y un inmunosupresor por vía subcutánea de un modo dependiente de la dosis. A continuación, los mismos ratones se exponen de nuevo a la epoyetina alfa y se vuelve a evaluar el nivel de proliferación de linfocitos T CD4+. Los cambios en la población de linfocitos T CD4+ se monitorizan posteriormente con una reducción en la proliferación de linfocitos T CD4+ tras la subsecuente estimulación con epoyetina alfa lo cual indica que se ha producido una respuesta inmunitaría tolerogénica.
EJEMPLO 12 Evaluación de las respuestas inmunitarias toleroqénicas con nanoportadores sintéticos que comprenden inmunosupresores v antíqenos presentables por APC in vivo Materiales y métodos para producir nanoportadores sintéticos Nanoportador 1 La rapamicina se adquirió en TSZ CHEM (185 Wilson Street, Framingham, MA 01702; # de catálogo del producto R1017). El PLGA con una proporción de láctido:glicólido de 3:1 y una viscosidad inherente de 0.75 dL/g se adquirió en SurModics Pharmaceuticals (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211 ; código de producto 7525 DLG 7A). Se sintetizó un copolímero en bloque de PLA-PEG con un bloque de PEG de aproximadamente 5000 Da y un bloque de PLA de aproximadamente 20 000 Da. El alcohol polivinílico (85-89% hidrolizado) se adquirió en EMD Chemicals (número de producto 1.41350.1001).
Las soluciones se prepararon como se indica a continuación: Solución 1 : Rapamicina con una concentración de 50 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo la rapamicina en cloruro de metileno puro.
Solución 2: PLGA con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLGA en cloruro de metileno puro.
Solución 3: PLA-PEG con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLA-PEG en cloruro de metileno puro.
Solución 4: Alcohol polivinílico con una concentración de 50 mg/mL en tampón de fosfato 100 mM, pH 8.
Se utilizó una emulsión de aceite en agua (O W) para preparar los nanoportadores. La emulsión O/W se preparó combinando la solución 1 (0.2 mL), la solución 2 (0.75 mL), la solución 3 (0.25 mL) y la solución 4 (3 mL) en un tubo de presión pequeño y sonicando con una amplitud del 30% durante 60 segundos con un sonicador Branson Digital Sonifier 250. La emulsión O/W se añadió a un vaso de precipitados que contenía solución tampón de fosfato 70 mM, pH 8 (30 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas para permitir que el cloruro de metileno se evaporara y se formaran los nanoportadores. Una porción de los nanoportadores se lavó transfiriendo la suspensión de nanoportadores a un tubo de centrifugación, centrifugando a 21 000xg y 4 °C durante 45 min, retirando el sobrenadante y volviendo a suspender el pellet en solución salina tamponada con fosfato. El procedimiento de lavado se repitió y el pellet se volvió a suspender en solución salina tamponada con fosfato para obtener una dispersión de nanoportadores final de aproximadamente 10 mg/mL.
El tamaño de los nanoportadores se determinó mediante dispersión de luz dinámica. La cantidad de rapamicina en el nanoportador se determinó mediante análisis por HPLC. La masa seca total del nanoportador por mL de suspensión se determinó mediante un método gravimétrico.
Nanoportador 2 El péptido 323-339 de ovoalbúmina, un péptido de 17 aminoácidos que se sabe que es un epítopo de linfocitos T y B de la proteína ovoalbúmina, se adquirió en Bachem Americas Inc. (3132 Kashiwa Street, Torrance CA 90505; # de pieza 4065609). El PLGA con una proporción de láctido:glicólido de 3:1 y una viscosidad inherente de 0.75 dL/g se adquirió en SurModics Pharmaceuticals (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211 ; código de producto 7525 DLG 7A). Se sintetizó un copolímero en bloque de PLA-PEG con un bloque de PEG de aproximadamente 5000 Da y un bloque de PLA de aproximadamente 20 000 Da. El alcohol polivinílico (85-89% hidrolizado) se adquirió en EMD Chemicals (número de producto 1.41350.1001).
Las soluciones se prepararon como se indica a continuación: Solución 1 : Péptido 323-339 de ovoalbúmina con una concentración de 20 mg/mL en una solución acuosa de ácido clorhídrico diluido. La solución se preparó disolviendo el péptido de ovoalbúmina en una solución 0.13 M de ácido clorhídrico a temperatura ambiente.
Solución 2: PLGA con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLGA en cloruro de metileno puro.
Solución 3: PLA-PEG con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLA-PEG en cloruro de metileno puro.
Solución 4: Alcohol polivinílico con una concentración de 50 mg/mL en tampón de fosfato 100 mlvl, pH 8.
En primer lugar, se preparó una emulsión primaria de agua en aceite (W1/01). La W1/01 se preparó combinando la solución 1 (0.2 mL), la solución 2 (0.75 mL) y la solución 3 (0.25 mL) en un tubo de presión pequeño y sonicando con una amplitud del 50% durante 40 segundos con un sonicador Branson Digital Sonifier 250. A continuación, se preparó una emulsión secundaria (W1/01/W2) combinando la solución 4 (3.0 mL) con la emulsión primaria W1/01 , agitando en un vórtex durante 10 s y sonicando con una amplitud del 30% durante 60 segundos utilizando el sonicador Branson Digital Sonifier 250.
La emulsión W1/01/W2 se añadió a un vaso de precipitados que contenía solución tampón de fosfato 70 mM, pH 8 (30 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas para permitir que el cloruro de metileno se evaporara y se formaran los nanoportadores. Una porción de los nanoportadores se lavaron transfiriendo la suspensión de nanoportadores a un tubo de centrifugación, centrifugando a 75 600*g y 4 °C durante 35 min, retirando el sobrenadante y volviendo a suspender el pellet en solución salina tamponada con fosfato. El procedimiento de lavado se repitió y el pellet se volvió a suspender en solución salina tamponada con fosfato para obtener una dispersión de nanoportadores final de aproximadamente 10 mg/mL.
El tamaño de los nanoportadores se determinó mediante dispersión de luz dinámica. La cantidad de péptido en el nanoportador se determinó mediante análisis por HPLC. La masa seca total del nanoportador por mL de suspensión se determinó mediante un método gravimétrico.
Nanoportador 3 La simvastatina se adquirió en LKT Laboratories, Inc. (2233 University Avenue West, St. Paul, MN 55114; # de catálogo del producto S3449). El PLGA con una proporción de láctido:glicólido de 3:1 y una viscosidad inherente de 0.75 dl_/g se adquirió en SurModics Pharmaceuticals (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211 ; código de producto 7525 DLG 7A). Se sintetizó un copolímero en bloque de PLA-PEG con un bloque de PEG de aproximadamente 5000 Da y un bloque de PLA de aproximadamente 20 000 Da. El alcohol polivinílico (85-89% hidrolizado) se adquirió en EMD Chemicals (número de producto 1.41350.1001).
Las soluciones se prepararon como se indica a continuación: Solución 1 : Simvastatina con una concentración de 50 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo la simvastatina en cloruro de metileno puro.
Solución 2: PLGA con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLGA en cloruro de metileno puro.
Solución 3: PLA-PEG con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLA-PEG en cloruro de metileno puro.
Solución 4: Alcohol polivinílico con una concentración de 50 mg/mL en tampón de fosfato 100 mM, pH 8.
Se utilizó una emulsión de aceite en agua (O/W) para preparar los nanoportadores. La emulsión O/W se preparó combinando la solución 1 (0.15 mL), la solución 2 (0.75 mL), la solución 3 (0.25 mL) y la solución 4 (3 mL) en un tubo de presión pequeño y sonicando con una amplitud del 30% durante 60 segundos con un sonicador Branson Digital Sonifier 250. La emulsión O/W se añadió a un vaso de precipitados que contenía solución tampón de fosfato 70 mM, pH 8 (30 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas para permitir que el cloruro de metileno se evaporara y se formaran los nanoportadores. Una porción de los nanoportadores se lavó transfiriendo la suspensión de nanoportadores a un tubo de centrifugación, centrifugando a 75 600*g y 4 °C durante 35 min, retirando el sobrenadante y volviendo a suspender el pellet en solución salina tamponada con fosfato. El procedimiento de lavado se repitió y el pellet se volvió a suspender en solución salina tamponada con fosfato para obtener una dispersión de nanoportadores final de aproximadamente 10 mg/mL.
El tamaño de los nanoportadores se determinó mediante dispersión de luz dinámica. La cantidad de simvastatina en el nanoportador se determinó mediante análisis por HPLC. La masa seca total del nanoportador por mL de suspensión se determinó mediante un método gravimétrico.
Nanoportador 4 El péptido 323-339 de ovoalbúmina, un péptido de 17 aminoácidos que se sabe que es un epítopo de linfocitos T y B de la proteína ovoalbúmina, se adquirió en Bachem Americas Inc. (3132 Kashiwa Street, Torrance CA 90505; # de pieza 4065609). La rapamicina se adquirió en TSZ CHEM (185 Wilson Street, Framingham, MA 01702; # de catálogo del producto R1017). El PLGA con una proporción de láctido:glicólido de 3:1 y una viscosidad inherente de 0.75 dL/g se adquirió en SurModics Pharmaceuticals (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211 ; código de producto 7525 DLG 7A). Se sintetizó un copolímero en bloque de PLA-PEG con un bloque de PEG de aproximadamente 5000 Da y un bloque de PLA de aproximadamente 20 000 Da. El alcohol polivinílico (85-89% hidrolizado) se adquirió en EMD Chemicals (número de producto 1.41350.1001).
Las soluciones se prepararon como se indica a continuación: Solución 1 : Péptido 323-339 de ovoalbúmina con una concentración de 20 mg/mL en una solución acuosa de ácido clorhídrico diluido. La solución se preparó disolviendo el péptido de ovoalbúmina en una solución 0.13 M de ácido clorhídrico a temperatura ambiente.
Solución 2: Rapamicina con una concentración de 50 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo la rapamicina en cloruro de metileno puro.
Solución 3: PLGA con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLGA en cloruro de metileno puro.
Solución 4: PLA-PEG con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLA-PEG en cloruro de metileno puro.
Solución 5: Alcohol polivinílico con una concentración de 50 mg/mL en tampóñ de fosfato 100 mM, pH 8.
En primer lugar, se preparó una emulsión primaria de agua en aceite (W1/01). La W1/01 se preparó combinando la solución 1 (0.2 mL), la solución 2 (0.2 mL), la solución 3 (0.75 mL) y la solución 4 (0.25 mL) en un tubo de presión pequeño y sonicando con una amplitud del 50% durante 40 segundos con un sonicador Branson Digital Sonifier 250. A continuación, se preparó una emulsión secundaria (W1/01/W2) combinando la solución 5 (3.0 ml_) con la emulsión primaria W1/01 , agitando en un vórtex durante 10 s y sonicando con una amplitud del 30% durante 60 segundos utilizando el sonicador Branson Digital Sonifier 250.
La emulsión W1/01/W2 se añadió a un vaso de precipitados que contenía solución tampón de fosfato 70 mM, pH 8 (30 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas para permitir que el cloruro de metileno se evaporara y se formaran los nanoportadores. Una porción de los nanoportadores se lavaron transfiriendo la suspensión de nanoportadores a un tubo de centrifugación, centrifugando a 21 000*g y 4 °C durante 45 min, retirando el sobrenadante y volviendo a suspender el pellet en solución salina tamponada con fosfato. El procedimiento de lavado se repitió y el pellet se volvió a suspender en solución salina tamponada con fosfato para obtener una dispersión de nanoportadores final de aproximadamente 10 mg/mL.
El tamaño de los nanoportadores se determinó mediante dispersión de luz dinámica. Las cantidades de péptido y rapamicina en el nanoportador se determinaron mediante análisis por HPLC. La masa seca total del nanoportador por mL de suspensión se determinó mediante un método gravimétrico.
Nanoportador 5 El péptido 323-339 de ovoalbúmina, un péptido de 17 aminoácidos que se sabe que es un epítopo de linfocitos T y B de la proteína ovoalbúmina, se adquirió en Bachem Americas Inc. (3132 Kashiwa Street, Torrance CA 90505; # de pieza 4065609). La simvastatina se adquirió en LKT Laboratories, Inc. (2233 University Avenue West, St. Paul, MN 55114; # de catálogo del producto S3449). El PLGA con una proporción de láctido:glicólido de 3:1 y una viscosidad inherente de 0.75 dL/g se adquirió en SurModics Pharmaceuticals (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211 ; código de producto 7525 DLG 7A). Se sintetizó un copolímero en bloque de PLA-PEG con un bloque de PEG de aproximadamente 5000 Da y un bloque de PLA de aproximadamente 20 000 Da. El alcohol polivinílico (85-89% hidrolizado) se adquirió en EMD Chemicals (número de producto 1.41350.1001).
Las soluciones se prepararon como se indica a continuación: Solución 1 : Péptido 323-339 de ovoalbúmina con una concentración de 20 mg/mL en una solución acuosa de ácido clorhídrico diluido. La solución se preparó disolviendo el péptido de ovoalbúmina en una solución 0. 3 M de ácido clorhídrico a temperatura ambiente.
Solución 2: Simvastatina con una concentración de 50 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo la simvastatina en cloruro de metileno puro.
Solución 3: PLGA con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLGA en cloruro de metileno puro.
Solución 4: PLA-PEG con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLA-PEG en cloruro de metileno puro.
Solución 5: Alcohol polivinílico con una concentración de 50 mg/mL en tampón de fosfato 100 mM, pH 8.
En primer lugar, se preparó una emulsión primaria de agua en aceite (W1/01). La W1/01 se preparó combinando la solución 1 (0.2 mL), la solución 2 (0.15 mL), la solución 3 (0.75 mL) y la solución 4 (0.25 mL) en un tubo de presión pequeño y sonicando con una amplitud del 50% durante 40 segundos con un sonicador Branson Digital Sonifier 250. A continuación, se preparó una emulsión secundaria (W1/01/W2) combinando la solución 5 (3.0 mL) con la emulsión primaria W1/01 , agitando en un vórtex durante 10 s y sonicando con una amplitud del 30% durante 60 segundos utilizando el sonicador Branson Digital Sonifier 250.
La emulsión W1/01/W2 se añadió a un vaso de precipitados que contenía solución tampón de fosfato 70 mM, pH 8 (30 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas para permitir que el cloruro de metileno se evaporara y se formaran los nanoportadores. Una porción de los nanoportadores se lavaron transfiriendo la suspensión de nanoportadores a un tubo de centrifugación, centrifugando a 75 600*g y 4 °C durante 35 min, retirando el sobrenadante y volviendo a suspender el pellet en solución salina tamponada con fosfato. El procedimiento de lavado se repitió y el pellet se volvió a suspender en solución salina tamponada con fosfato para obtener una dispersión de nanoportadores final de aproximadamente 0 mg/mL.
El tamaño de los nanoportadores se determinó mediante dispersión de luz dinámica. Las cantidades de péptido y simvastatina en el nanoportador se determinaron mediante análisis por HPLC. La masa seca total del nanoportador por mL de suspensión se determinó mediante un método gravimétrico.
Administración 1 in vivo Se extirparon bazos de ratones B6.Cg-Tg(TcraTcrb)425Cbn/J (OTII) y C57BL/6 (B6), se disociaron mecánicamente y se filtraron por separado a través de un tamiz de 70 µ? para obtener una suspensión de células de un único tipo. Las células CD4+CD25- purificadas se extrajeron posteriormente en un proceso de dos pasos. Utilizando un separador celular magnético AutoMACS de Miltenyi Biotec, se marcaron primero las células de los bazos con un kit II de aislamiento de linfocitos T CD4+ y se eliminaron las células CD25+ de la fracción no marcada con un kit de depleción de CD25. Las células de B6 purificadas se tiñeron con colorante intracelular, éster succinimidílico de carboxifluoresceína (CFSE), antes de mezclarlas en concentraciones iguales con las células de OTII purificadas. A continuación, se inyectaron por vía intravenosa (i.v.) en ratones receptores B6.SJL-Pfprca/BoyAi (CD45.1).
Al día siguiente, los ratones receptores CD45.1 se trataron con partículas de vacuna sintética tolerogénicas dirigidas (t2SVP). Se cargaron con combinaciones de péptido (323-339) de ovoalbúmina (OVA ^3-339), rapamicina (Rapa) y/o simvastatina (Simva), y se administraron por vía subcutánea (s.c).
La inyección constituye un tratamiento tolerogénico, después del cual se realizaron 4 inyecciones más, en intervalos de 2 semanas entre cada una. Una vez se completó el régimen de tratamiento, los animales CD45.1 receptores se sacrificaron y se extirparon sus bazos y ganglios linfáticos poplíteos, se disociaron mecánicamente y se filtraron por separado a través de un tamiz de 70 µ? para obtener una suspensión de células de un único tipo. Se eliminaron los eritrocitos (RBC, por sus siglas en inglés) de las células de los bazos incubando con tampón de lisis de RBC (Stem Cell Technologies) y se realizaron recuentos celulares tanto en los bazos como en los ganglios linfáticos.
Las células de los bazos o los ganglios linfáticos se cultivaron en CM (siglas en inglés de medio completo) suplementado con 10 U/mL de IL-2, se volvieron a estimular con OPII con una densidad de 0.3x106 células/pocilio en placas de fondo redondo (RB, por sus siglas en inglés) de 96 pocilios y se incubaron a 37 °C, 5% de CO2. Las células se dividieron el Día 2 y se recogieron el Día 5. Se recogió el sobrenadante y se congeló, mientras que las células se tiñeron para el análisis fenotípico por citometría de flujo. Las células se analizaron en un citómetro de flujo FacsCanto de Becton Dickinson.
Administración 2 in vivo Se extirparon bazos de ratones B6.Cg-Tg(TcraTcrb)425Cbn/J (OTII) y C57BL/6 (B6), se disociaron mecánicamente y se filtraron por separado a través de un tamiz de 70 µ? para obtener una suspensión de células de un único tipo. Las células CD4+CD25- purificadas se extrajeron posteriormente en un proceso de dos pasos utilizando un separador celular magnético AutoMACS de Miltenyi Biotec. Las células de los bazos se marcaron utilizando un kit II de aislamiento de linfocitos T CD4+ de Miltenyi. Se eliminaron las células CD25+ de la fracción de linfocitos T CD4+ no marcada con un kit de depleción de CD25. Las células CD4 purificadas de ratones B6 se tiñeron con colorante intracelular, éster succinimidílico de carboxifluoresceína (CFSE), antes de mezclarlas en concentraciones iguales con las células de OTII purificadas. A continuación, se inyectaron por vía intravenosa (i.v.) en ratones receptores B6.SJL-Pfprca/BoyAi (CD45.1).
Al día siguiente, los ratones receptores CD45.1 se trataron con partículas de vacuna sintética tolerogénicas dirigidas. Estas comprendían combinaciones de péptido (323-339) de ovoalbúmina (OVA 323'339), rapamicina (Rapa) y simvastatina (Simva), y se administraron por vía subcutánea (s.c.) o intravenosa (i.v.).
Una vez se completó el régimen de tratamiento, los animales CD45.1 receptores se sacrificaron y se extirparon sus bazos y ganglios linfáticos poplíteos, se disociaron mecánicamente y se filtraron por separado a través de un tamiz de 70 µ? para obtener una suspensión de células de un único tipo. Se eliminaron los eritrocitos (RBC, por sus siglas en inglés) de las células de los bazos mediante la incorporación de tampón de lisis de RBC (Stem Cell Technologies) y se realizaron recuentos celulares tanto en los bazos como en los ganglios linfáticos.
Las células de los bazos o los ganglios linfáticos se cultivaron en CM suplementado con 10 U/mL de IL-2, se volvieron a estimular con OPII 1 µ? con una densidad de 0.3x106 células/pocilio en placas de fondo redondo (RB) de 96 pocilios y se incubaron a 37°C, 5% de C02. Las células se dividieron el Día 2 y se recogieron el Día 5. Se recogió el sobrenadante y se congeló, mientras que las células se tiñeron para el análisis fenotípico por citometría de flujo. Las células se analizaron en un citómetro de flujo FacsCanto de Becton Dickinson.
Resultados Los resultados se muestran en las Figs. 2 y 3 (Inmunomodulador 1: rapamicina; Inmunomodulador 2: simvastatina). Las figuras muestran los efectos in vivo y demuestran que la expansión específica para el antígeno de las células inmunitarias efectoras se reduce con nanoportadores sintéticos que comprenden antígeno e inmunosupresores en comparación con solamente antígeno o nanoportadores sintéticos que comprenden antígeno con y sin una molécula inmunoestimuladora.
EJEMPLO 13 Respuestas inmunitarias tolerogénicas con nanoportadores sintéticos Materiales y métodos Nanoportador 1 La proteína ovoalbúmina se adquirió en Worthington Biochemical Corporation (730 Vassar Avenue, Lakewood, NJ 08701 ; código de producto 3048). El PLGA con una proporción de láctido:glicólido de 3:1 y una viscosidad inherente de 0.75 dUg se adquirió en SurModics Pharmaceuticals (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211 ; código de producto 7525 DLG 7A). El alcohol polivinílico (85-89% hidrolizado) se adquirió en EMD Chemicals (número de producto 1.41350.1001). Se sintetizó un copolímero en bloque de PLA-PEG con un bloque de PEG de aproximadamente 5000 Da y un bloque de PLA de aproximadamente 20 000 Da. El colato sódico hidratado se adquirió en Sigma-Aldrich Corp. (3050 Spruce Street, St. Louis, MO 63103; código de producto C6445).
Las soluciones se prepararon como se indica a continuación: Solución 1 : Ovoalbúmina con una concentración de 50 mg/mL en solución salina tamponada con fosfato. La solución se preparó disolviendo la ovoalbúmina en solución salina tamponada con fosfato a temperatura ambiente. Solución 2: PLGA con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLGA en cloruro de metileno puro. Solución 3: PLA-PEG con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLA-PEG en cloruro de metileno puro. Solución 4: Alcohol polivinílico en una concentración de 50 mg/mL y colato sódico hidratado en una concentración de 10 mg/mL en tampón de fosfato 100 mM, pH 8.
En primer lugar, se preparó una emulsión primaria de agua en aceite (W1/01). La W1/01 se preparó combinando la solución 1 (0.2 mL), la solución 2 (0.75 mL) y la solución 3 (0.25 mL) en un tubo de presión pequeño y sonicando con una amplitud del 50% durante 40 segundos con un sonicador Branson Digital Sonifier 250. A continuación, se preparó una emulsión secundaria (W1/01 W2) combinando la solución 4 (3.0 mL) con la emulsión primaria W1/01 , agitando en un vórtex durante 10 s y sonicando con una amplitud del 30% durante 60 segundos utilizando el sonicador Branson Digital Sonifier 250. La emulsión W1/01/W2 se añadió a un vaso de precipitados que contenía solución tampón de fosfato 70 mM, pH 8 (30 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas para permitir que el cloruro de metileno se evaporara y se formaran los nanoportadores. Una porción de los nanoportadores se lavaron transfiriendo la suspensión de nanoportadores a un tubo de centrifugación, centrifugando a 75 600*g y 4 °C durante 35 min, retirando el sobrenadante y volviendo a suspender el pellet en solución salina tamponada con fosfato. El procedimiento de lavado se repitió y el pellet se volvió a suspender en solución salina tamponada con fosfato para obtener una dispersión de nanoportadores final de aproximadamente 10 mg/mL.
El tamaño de los nanoportadores se determinó mediante dispersión de luz dinámica. La cantidad de proteína en el nanoportador se determinó mediante un ensayo fluorimétrico con o-ftalaldehído. La masa seca total del nanoportador por mL de suspensión se determinó mediante un método gravimétrico.
Nanoportador 2 La proteína ovoalbúmina se adquirió en Worthington Biochemical Corporation (730 Vassar Avenue, Lakewood, NJ 08701 ; código de producto 3048). La rapamicina se adquirió en TSZ CHE (185 Wilson Street, Framingham, MA 01702; # de catálogo del producto R1017). El PLGA con una proporción de láctido:glicólido de 3:1 y una viscosidad inherente de 0.75 dL/g se adquirió en SurModics Pharmaceuticals (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211 ; código de producto 7525 DLG 7A). Se sintetizó un copolímero en bloque de PLA-PEG con un bloque de PEG de aproximadamente 5000 Da y un bloque de PLA de aproximadamente 20 000 Da. El alcohol polivinílico (85-89% hidrolizado) se adquirió en EMD Chemicals (número de producto 1.41350.1001). El colato sódico hidratado se adquirió en Sigma-Aldrich Corp. (3050 Spruce Street, St. Louis, MO 63103; código de producto C6445).
Las soluciones se prepararon como se indica a continuación: Solución 1 : Ovoalbúmina con una concentración de 50 mg/mL en solución salina tamponada con fosfato. La solución se preparó disolviendo la ovoalbúmina en solución salina tamponada con fosfato a temperatura ambiente. Solución 2: Rapamicina con una concentración de 50 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo la rapamicina en cloruro de metileno puro. Solución 3: PLGA con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLGA en cloruro de metileno puro. Solución 4: PLA-PEG con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLA-PEG en cloruro de metileno puro. Solución 5: Alcohol polivinílico en una concentración de 50 mg/mL y colato sódico hidratado en una concentración de 10 mg/mL en tampón de fosfato 100 mM, pH 8.
En primer lugar, se preparó una emulsión primaria de agua en aceite (W1/01). La W1/01 se preparó combinando la solución 1 (0.2 mL), la solución 2 (0.2 mL), la solución 3 (0.75 mL) y la solución 4 (0.25 mL) en un tubo de presión pequeño y sonicando con una amplitud del 50% durante 40 segundos con un sonicador Branson Digital Sonifier 250. A continuación, se preparó una emulsión secundaria (W1/01/W2) combinando la solución 5 (3.0 mL) con la emulsión primaria W1/01 , agitando en un vértex durante 10 s y sonicando con una amplitud del 30% durante 60 segundos utilizando el sonicador Branson Digital Sonifier 250. La emulsión W1/01/W2 se añadió a un vaso de precipitados que contenía solución tampón de fosfato 70 mM, pH 8 (30 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas para permitir que el cloruro de metileno se evaporara y se formaran los nanoportadores. Una porción de los nanoportadores se lavaron transfiriendo la suspensión de nanoportadores a un tubo de centrifugación, centrifugando a 75 600*g y 4 °C durante 35 min, retirando el sobrenadante y volviendo a suspender el pellet en solución salina tamponada con fosfato. El procedimiento de lavado se repitió y el pellet se volvió a suspender en solución salina tamponada con fosfato para obtener una dispersión de nanoportadores final de aproximadamente 10 mg/mL.
El tamaño de los nanoportadores se determinó mediante dispersión de luz dinámica. La cantidad de rapamicina en el nanoportador se determinó mediante análisis por HPLC. La cantidad de proteína en el nanoportador se determinó mediante un ensayo fluorimétrico con o-ftalaldehído. La masa seca total del nanoportador por mL de suspensión se determinó mediante un método gravimétrico.
Inmunización El objetivo de este experimento era evaluar los efectos de un inmunosupresor (t2SVP) encapsulado sobre las respuestas de anticuerpos actuales midiendo las inmunoglobulinas específicas para el antígeno. Un grupo de animales se mantuvo sin inmunizar como control. Dos grupos de animales se inmunizaron utilizando una "administración pasiva" de ovoalbúmina o inmunización activa con OVA y CpG en tres inyecciones (dO, d14 y d28) seguida de una evaluación de las titulaciones de anticuerpos y una o dos semanas de reposo. Otros dos grupos recibieron las mismas inmunizaciones pero recibieron vacunas cada dos semanas al mismo tiempo que recibían el tratamiento. Cada uno de estos grupos se dividió en tres subgrupos para evaluar la capacidad de tratamientos diferentes para modificar las titulaciones de Ig inducidas. Un subgrupo de control no recibió tratamiento tolerogénico. Se aplicaron otros dos tratamientos a los otros subgrupos que incluían NP portadores de la proteína OVA sola o combinada con inmunosupresor.
Para la inmunización, los animales recibieron 20 L/pata de OVA+CpG (12.5 ig de OVA + 10 g de CpG), ambas patas traseras s.c. o 25 g de OVA i.v. en 100 µ?_. El tratamiento tolerogénico incluía la administración de 200 µ?_ de t2SVP i.v. utilizando 10 g de OVA. Se proporcionaron nanopartículas con una concentración de 500 pg/mL respecto al contenido de OVA. El t2SVP se diluyó de tal forma que se inyectaran las mimas cantidades de OVA en todos los grupos.
Medición de IqG Se midió el nivel de anticuerpos IgG. Se utilizó el bloqueador caseína en PBS (Thermo Fisher, # de catálogo 37528) como diluyente. Se utilizó Tween-20 al 0.05% en PBS como tampón de lavado, preparado añadiendo 10 mL de Tween-20 ((Sigma, # de catálogo P9416-100 ml_) a 2 L de un patrón de 10x PBS (PBS: OmniPur® 10X PBS concentrado líquido, 4 L, EMD Chemicals, # de catálogo 6505) y 18 L de agua desionizada.
Se utilizó la proteína OVA en una concentración patrón de 5 mg/mL como material de recubrimiento. Se utilizó una dilución 1 :1000 hasta 5 pg/mL como concentración de trabajo. Cada pocilio de las placas de ensayo se cubrió con 100 µ?_ de OVA diluida por pocilio, las placas se sellaron con una película sellante (VWR, # de catálogo 60941-120) y se incubaron durante a la noche a 4 °C. Se utilizaron placas Costar9017 de 96 pocilios de fondo plano como placas de ensayo, Costar9017.
Se utilizaron una placa de 96 pocilios o tubos de polipropileno de baja adhesividad como placas preparatorias, en los cuales se prepararon las muestras antes de transferirlas a la placa de ensayo. Las placas preparatorias no contenían nada de antígeno y, por lo tanto, los anticuerpos séricos no se adhirieron a la placa durante la preparación de las muestras. Las placas preparatorias se utilizaron para la preparación de las muestras con el fin de minimizar la adhesión que podría tener lugar durante la preparación de las muestras o al pipetearlas si se utilizase una placa recubierta de antígeno para preparar las muestras. Antes de preparar las muestras en la placa preparatoria, los pocilios se cubrieron con diluyente para bloquear cualquier unión no específica y la placa se selló e incubó a 4 °C durante la noche.
Las placas de ensayo se lavaron tres veces con tampón de lavado y el tampón de lavado se retiró completamente de los pocilios por aspiración después del último lavado. Después de lavar, se añadieron 300 pL de diluyente a cada pocilio de la placa o placas de ensayo para bloquear la unión no específica y las placas se incubaron al menos 2 horas a temperatura ambiente. Las placas de suero se prepararon en la placa preparatoria con diluciones iniciales adecuadas. Las diluciones iniciales también se prepararon en ocasiones en tubos de 1.5 mL utilizando diluyente. Las diluciones iniciales adecuadas se determinaron en función de datos previos, cuando se disponía de ellos. Cuando no se disponía de datos previos, la dilución inicial más baja fue 1 :40. Una vez diluida, 200 µ? de la dilución inicial de la muestra sérica se transfirió al pocilio adecuado de la placa preparatoria.
A continuación se describe una distribución ilustrativa de la placa preparatoria: Las columnas 2 y 11 contenían un estándar del isotipo lgG2b monoclonal anti-ovoalbúmina (AbCam, ab17291), diluido hasta 1 g/mL (dilución 1 :4000). Las columnas 3-10 contenían muestras séricas (en diluciones adecuadas). Las columnas 1 y 12 no se utilizaron para muestras ni estándares para evitar cualquier error en las mediciones debido al efecto de borde. En su lugar, las columnas 1 y 12 contenían 200 L de diluyente. Se utilizó suero de ratón normal con una dilución 1 :40 como control negativo. Se utilizó anti-lgG2a de ratón con una dilución 1 :500 a partir de un patrón de 0.5 mg/mL (BD Bioscience) como control isotípico.
Una vez preparadas todas las muestras en la placa preparatoria, la placa se selló y se conservó a 4 °C hasta que se completó el bloqueo de las placas de ensayo. Las placas de ensayo se lavaron tres veces con tampón de lavado y el tampón se retiró completamente de los pocilios por aspiración después del último lavado. Después de lavar, se añadieron 100 µ?_ de diluyente a todos los pocilios en las filas B-H de las placas de ensayo. Se utilizó una pipeta de 12 canales para transferir muestras desde la placa preparatoria hasta la placa de ensayo. Las muestras se mezclaron antes de transferirlas pipeteando 150 µ?_ de suero diluido hacia arriba y abajo 3 veces. Después de mezclar, se transfirieron 150 µ?_ de cada muestra desde la placa preparatoria y se añadieron a la fila A de la placa de ensayo respectiva.
Una vez transferidas las diluciones iniciales de cada muestra desde la placa preparatoria hasta la fila A de la placa de ensayo, se pipetearon diluciones en serie sobre la placa de ensayo tal como se indica: Se extrajeron 50 µ?_ de cada muestra sérica de la fila A utilizando una pipeta de 12 canales y se mezclaron con los 100 µ?_ de diluyente añadidos previamente a cada pocilio de la fila B. Este paso se repitió a lo largo de toda la placa. Después de pipetear la dilución de la fila final, se extrajeron 50 µ?_ de fluido de los pocilios en la fila final y se desecharon, de este modo se obtuvo un volumen final de 100 pL en cada pocilio de la placa de ensayo. Una vez preparadas las diluciones de las muestras en las placas de ensayo, las placas se incubaron a temperatura ambiente durante al menos 2 horas.
Después de incubar, las placas se lavaron tres veces con tampón de lavado. El anticuerpo de detección (anticuerpo anti-lgG de ratón producido en cabra, conjugado con HRP, AbCam ab98717) se diluyó con un factor de 1 :1500 (0.33 Mg/mL) en diluyente y se añadieron 100 iL del anticuerpo diluido a cada pocilio. Las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente y después se lavaron tres veces con tampón de lavado, incluyendo cada paso de lavado un tiempo de remojo de al menos 30 segundos.
Después de lavar, se añadió sustrato de detección a los pocilios. Se combinaron partes iguales del sustrato A y sustrato B (BD Biosciences TMB Substrate Reagent Set, # de catálogo 555214) justo antes de su adición a las placas de ensayo, y se añadieron 100 µ?_ de la solución de sustratos mezclados a cada pocilio y se incubó durante 10 minutos en la oscuridad. La reacción se detuvo añadiendo 50 µ?_ de solución de parada (H2S04 2 N) a cada pocilio después de un periodo de 10 minutos. Se evaluó la densidad óptica (DO) de los pocilios justo después de añadir la solución de parada en un lector de placas a 450 nm con sustracción a 570 nm. El análisis de datos se realizó utilizando el software SoftMax Pro v5.4 de Molecular Devices. En algunos casos, se preparó una gráfica con un ajuste de curva logístico de cuatro parámetros con la dilución en el eje de las x (escala logarítmica) y el valor de DO en el eje de las y (escala lineal), y se determinó la mitad del valor máximo (CE50) para cada muestra. La plantilla de las placas en la parte superior de la disposición se ajustó para reflejar la dilución de cada muestra (1 por columna).
Resultados La Fig. 4 muestra una reducción en la producción de anticuerpos específicos para el antígeno con los nanoportadores que comprenden antígeno peptídico e inmunosupresor en comparación con los nanoportadores que comprenden únicamente el péptido. El Panel 3 muestra que el uso de un estimulador inmunitario potente, CpG, contrarrestaba los efectos tolerogénicos de los nanoportadores sintéticos que comprendían rapamicina en algunos casos.
EJEMPLO 14 Respuestas inmunitarias toíeroqénicas con nanoportadores sintéticos Materiales y métodos Los nanoportadores se prepararon como en el ejemplo anterior (Ejemplo 13).
Inmunización El objetivo de este experimento era evaluar los efectos de un inmunosupresor (t2SVP) encapsulado sobre las respuestas de anticuerpos emergentes midiendo las inmunoglobulinas específicas para el antígeno en animales que reciben el tratamiento con NP y el inmunógeno a la vez. Un grupo de animales se mantuvo sin inmunizar como control (pero recibieron tratamiento). Un segundo grupo de animales se inmunizó utilizando "administración pasiva" de ovoalbúmina y un tercer grupo se inmunizó con OVA y CpG en la región subescapular. Se administró a cada uno de estos grupos una inyección bisemanal de nanopartículas (NP) y se monitorizaron los niveles de Ig anti-OVA el día previo a la vacuna. Para la inmunización, los animales recibieron 100 µ?_ de OVA+CpG s.c. (subescapular) o 25 pg de OVA i.v. en 100 µ?_. El tratamiento tolerogénico comprendía la administración de 100 µ?_ de t2SVP i.v. Se proporcionaron nanoportadores con una concentración de 5 mg/mL. El t2SVP se diluyó de tal forma que se inyectaran las mismas cantidades de OVA en todos los grupos. Las inyecciones se realizaron los días dO, d14, d28, d42 y d56.
Medición de IqG Se midió el nivel de anticuerpos IgG. Se utilizó el bloqueador caseína en PBS (Thermo Fisher, # de catálogo 37528) como diluyente. Se utilizó Tween-20 al 0.05% en PBS como tampón de lavado, preparado añadiendo 10 mL de Tween-20 ((Sigma, # de catálogo P9416-100 mL) a 2 L de un patrón de 10x PBS (PBS: OmniPur® 10X PBS concentrado líquido, 4 L, EMD Chemicals, # de catálogo 6505) y 18 L de agua desionizada.
Se utilizó la proteína OVA en una concentración patrón de 5 mg/mL como material de recubrimiento. Se utilizó una dilución 1 :1000 hasta 5 µg/mL como concentración de trabajo. Cada pocilio de las placas de ensayo se cubrió con 100 pL de OVA diluida por pocilio, las placas se sellaron con una película sellante (VWR, # de catálogo 60941-120) y se incubaron durante a la noche a 4 °C. Se utilizaron placas Costar9017 de 96 pocilios de fondo plano como placas de ensayo, Costar9017.
Se utilizaron una placa de 96 pocilios o tubos de polipropileno de baja adhesividad como placas preparatorias, en los cuales se prepararon las muestras antes de transferirlas a la placa de ensayo. Las placas preparatorias no contenían nada de antígeno y, por lo tanto, los anticuerpos séricos no se adhirieron a la placa durante la preparación de las muestras. Las placas preparatorias se utilizaron para la preparación de las muestras con el fin de minimizar la adhesión que podría tener lugar durante la preparación de las muestras o al pipetearlas si se utilizase una placa recubierta de antígeno para preparar las muestras. Antes de preparar las muestras en la placa preparatoria, los pocilios se cubrieron con diluyente para bloquear cualquier unión no específica y la placa se selló e incubó a 4 °C durante la noche.
Las placas de ensayo se lavaron tres veces con tampón de lavado y el tampón de lavado se retiró completamente de los pocilios por aspiración después del último lavado. Después de lavar, se añadieron 300 pL de diluyente a cada pocilio de la placa o placas de ensayo para bloquear la unión no específica y las placas se incubaron al menos 2 horas a temperatura ambiente. Las muestras séricas se prepararon en la placa preparatoria con diluciones iniciales adecuadas. Las diluciones iniciales también se prepararon en ocasiones en tubos de 1.5 mL utilizando diluyente. Las diluciones iniciales adecuadas se determinaron en función de datos previos, cuando se disponía de ellos. Cuando no se disponía de datos previos, la dilución inicial más baja fue 1 :40. Una vez diluida, 200 pL de la dilución inicial de la muestra sérica se transfirió al pocilio adecuado de la placa preparatoria.
A continuación se describe una distribución ilustrativa de la placa preparatoria: Las columnas 2 y 11 contenían un estándar del isotipo lgG2b monoclonal anti-ovoalbúmina (AbCam, ab17291), diluido hasta 1 pg/mL (dilución 1:4000). Las columnas 3-10 contenían muestras séricas (en diluciones adecuadas). Las columnas 1 y 12 no se utilizaron para muestras ni estándares para evitar cualquier error en las mediciones debido al efecto de borde. En su lugar, las columnas 1 y 12 contenían 200 pL de diluyente. Se utilizó suero de ratón normal con una dilución 1 :40 como control negativo. Se utilizó anti-lgG2a de ratón con una dilución 1 :500 a partir de un patrón de 0.5 mg/mL (BD Bioscience) como control isotípico.
Una vez preparadas todas las muestras en la placa preparatoria, la placa se selló y se conservó a 4 °C hasta que se completó el bloqueo de las placas de ensayo. Las placas de ensayo se lavaron tres veces con tampón de lavado y el tampón de lavado se aspiró completamente después del último lavado. Después de lavar, se añadieron 100 pL de diluyente a todos los pocilios en las filas B-H de las placas de ensayo. Se utilizó una pipeta de 12 canales para transferir muestras desde la placa preparatoria hasta la placa de ensayo. Las muestras se mezclaron antes de transferirlas pipeteando 150 pL de suero diluido hacia arriba y abajo 3 veces. Después de mezclar, se transfirieron 150 pL de cada muestra desde la placa preparatoria y se añadieron a la fila A de la placa de ensayo respectiva.
Una vez transferidas las diluciones iniciales de cada muestra desde la placa preparatoria hasta la fila A de la placa de ensayo, se pipetearon diluciones en serie sobre la placa de ensayo tal como se indica: Se extrajeron 50 µ?_ de cada muestra sérica de la fila A utilizando una pipeta de 12 canales y se mezclaron con los 100 µ?_ de diluyente añadidos previamente a cada pocilio de la fila B. Este paso se repitió a lo largo de toda la placa. Después de pipetear la dilución de la fila final, se extrajeron 50 µ?_ de fluido de los pocilios en la fila final y se desecharon, de este modo se obtuvo un volumen final de 100 µ?_ en cada pocilio de la placa de ensayo. Una vez preparadas las diluciones de las muestras en las placas de ensayo, las placas se incubaron a temperatura ambiente durante al menos 2 horas.
Después de incubar, las placas se lavaron tres veces con tampón de lavado. El anticuerpo de detección (anticuerpo anti-lgG de ratón producido en cabra, conjugado con HRP, AbCam ab98717) se diluyó con un factor de 1 :1500 (0.33 pg/mL) en diluyente y se añadieron 100 µ?_ del anticuerpo diluido a cada pocilio. Las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente y después se lavaron tres veces con tampón de lavado, incluyendo cada paso de lavado un tiempo de remojo de al menos 30 segundos.
Después de lavar, se añadió sustrato de detección a los pocilios. Se combinaron partes iguales del sustrato A y sustrato B (BD Biosciences TMB Substrate Reagent Set, # de catálogo 555214) justo antes de su adición a las placas de ensayo, y se añadieron 100 µ?_ de la solución de sustratos mezclados a cada pocilio y se incubó durante 10 minutos en la oscuridad. La reacción se detuvo añadiendo 50 µ? de solución de parada (H2S04 2 N) a cada pocilio después de un periodo de 10 minutos. Se evaluó la densidad óptica (DO) de los pocilios justo después de añadir la solución de parada en un lector de placas a 450 nm con sustracción a 570 nm. El análisis de datos se realizó utilizando el software SoftMax Pro v5.4 de Molecular Devices. En algunos casos, se preparó una gráfica con un ajuste de curva logístico de cuatro parámetros con la dilución en el eje de las x (escala logarítmica) y el valor de DO en el eje de las y (escala lineal), y se determinó la mitad del valor máximo (CE50) para cada muestra. La plantilla de las placas en la parte superior de la disposición se ajustó para reflejar la dilución de cada muestra (1 por columna).
Resultados La Fig. 5 muestra una reducción en la producción de anticuerpos específicos para el antígeno con los nanoportadores que comprenden antígeno e inmunosupresor en comparación con los nanoportadores que comprenden únicamente el antígeno. De nuevo, los datos también muestran que el uso de un estimulador inmunitario potente, CpG, contrarrestaba los efectos tolerogénicos de los nanoportadores sintéticos que comprendían rapamicina en algunos casos.
EJEMPLO 15 Evaluación de los efectos de nanoportadores con antíqenos e inmunosupresores sobre respuestas i nm unitarias Materiales y métodos Nanoportador 1 El péptido 323-339 de ovoalbúmina, un péptido de 17 aminoácidos que se sabe que es un epítopo de linfocitos T y B de la proteína ovoalbúmina, se adquirió en Bachem Americas Inc. (3132 Kashiwa Street, Torrance CA 90505; # de pieza 4065609). El PLGA con una proporción de láctido:glicólido de 3:1 y una viscosidad inherente de 0.75 dL/g se adquirió en SurModics Pharmaceuticals (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211 ; código de producto 7525 DLG 7A). Se sintetizó un copolímero en bloque de PLA-PEG con un bloque de PEG de aproximadamente 5000 Da y un bloque de PLA de aproximadamente 20 000 Da. El alcohol polivinílico (85-89% hidrolizado) se adquirió en EMD Chemicals (número de producto 1.41350.1001).
Las soluciones se prepararon como se indica a continuación: Solución 1 : Péptido 323-339 de ovoalbúmina con una concentración de 20 mg/mL en una solución acuosa de ácido clorhídrico diluido. La solución se preparó disolviendo el péptido de ovoalbúmina en una solución 0.13 M de ácido clorhídrico a temperatura ambiente. Solución 2: PLGA con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLGA en cloruro de metileno puro. Solución 3: PLA-PEG con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLA-PEG en cloruro de metileno puro. Solución 4: Alcohol polivinílico con una concentración de 50 mg/mL en tampón de fosfato 100 mM, pH 8.
En primer lugar, se preparó una emulsión primaria de agua en aceite (W1/01). La W1/01 se preparó combinando la solución 1 (0.2 mL), la solución 2 (0.75 mL) y la solución 3 (0.25 mL) en un tubo de presión pequeño y sonicando con una amplitud del 50% durante 40 segundos con un sonicador Branson Digital Sonifier 250. A continuación, se preparó una emulsión secundaria (W1/01/W2) combinando la solución 4 (3.0 mL) con la emulsión primaria W1/01 , agitando en un vórtex durante 10 s y sonicando con una amplitud del 30% durante 60 segundos utilizando el sonicador Branson Digital Sonifier 250. La emulsión W1/01/W2 se añadió a un vaso de precipitados que contenía solución tampón de fosfato 70 mM, pH 8 (30 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas para permitir que el cloruro de metileno se evaporara y se formaran los nanoportadores. Una porción de los nanoportadores se lavaron transfiriendo la suspensión de nanoportadores a un tubo de centrifugación, centrifugando a 75 600*g y 4 °C durante 35 min, retirando el sobrenadante y volviendo a suspender el pellet en solución salina tamponada con fosfato. El procedimiento de lavado se repitió y el pellet se volvió a suspender en solución salina tamponada con fosfato para obtener una dispersión de nanoportadores final de aproximadamente 10 mg/mL El tamaño de los nanoportadores se determinó mediante dispersión de luz dinámica. La cantidad de péptido en el nanoportador se determinó mediante análisis por HPLC. La masa seca total del nanoportador por mL de suspensión se determinó mediante un método gravimétrico.
Nanoportador 2 El péptido 323-339 de ovoalbúmina, un péptido de 17 aminoácidos que se sabe que es un epítopo de linfocitos T y B de la proteína ovoalbúmina, se adquirió en Bachem Americas Inc. (3132 Kashiwa Street, Torrance CA 90505; # de pieza 4065609). La rapamicina se adquirió en TSZ CHEM (185 Wilson Street, Framingham, MA 01702; # de catálogo del producto R1017). El PLGA con una proporción de láctido:glicólido de 3:1 y una viscosidad inherente de 0.75 dL/g se adquirió en SurModics Pharmaceuticals (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211; código de producto 7525 DLG 7A). Se sintetizó un copolímero en bloque de PLA-PEG con un bloque de PEG de aproximadamente 5000 Da y un bloque de PLA de aproximadamente 20 000 Da. El alcohol polivinílico (85-89% hidrolizado) se adquirió en EMD Chemicals^número de producto 1.41350.1001).
Las soluciones se prepararon como se indica a continuación: Solución 1 : Péptido 323-339 de ovoalbúmina con una concentración de 20 mg/mL en una solución acuosa de ácido clorhídrico diluido. La solución se preparó disolviendo el péptido de ovoalbúmina en una solución 0.13 M de ácido clorhídrico a temperatura ambiente. Solución 2: Rapamicina con una concentración de 50 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo la rapamicina en cloruro de metileno puro. Solución 3: PLGA con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLGA en cloruro de metileno puro. Solución 4: PLA-PEG con una concentración de 100 mg/mL en cloruro de metileno. La solución se preparó disolviendo el PLA-PEG en cloruro de metileno puro. Solución 5: Alcohol polivinílico con una concentración de 50 mg/mL en tampón de fosfato 100 mM, pH 8.
En primer lugar, se preparó una emulsión primaria de agua en aceite (W1/01). La W1/01 se preparó combinando la solución 1 (0.2 mL), la solución 2 (0.2 mL), la solución 3 (0.75 mL) y la solución 4 (0.25 mL) en un tubo de presión pequeño y sonicando con una amplitud del 50% durante 40 segundos con un sonicador Branson Digital Sonifier 250. A continuación, se preparó una emulsión secundaria (W1/01 W2) combinando la solución 5 (3.0 mL) con la emulsión primaria W1/01 , agitando en un vórtex durante 10 s y sonicando con una amplitud del 30% durante 60 segundos utilizando el sonicador Branson Digital Sonifier 250. La emulsión W1/01/W2 se añadió a un vaso de precipitados que contenía solución tampón de fosfato 70 mM, pH 8 (30 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas para permitir que el cloruro de metileno se evaporara y se formaran los nanoportadores. Una porción de los nanoportadores se lavaron transfiriendo la suspensión de nanoportadores a un tubo de centrifugación, centrifugando a 21 OOfJxg y 4 °C durante 45 min, retirando el sobrenadante y volviendo a suspender el pellet en solución salina tamponada con fosfato. El procedimiento de lavado se repitió y el pellet se volvió a suspender en solución salina tamponada con fosfato para obtener una dispersión de nanoportadores final de aproximadamente 10 mg/mL.
El tamaño de los nanoportadores se determinó mediante dispersión de luz dinámica. Las cantidades de péptido y rapamicina en el nanoportador se determinaron mediante análisis por HPLC. La masa seca total del nanoportador por mL de suspensión se determinó mediante un método gravimétrico.
Inmunización Los animales recibieron inmunización cada dos semanas al mismo tiempo que recibieron el tratamiento. Cada uno de estos grupos se dividió en subgrupos para evaluar la capacidad de tratamientos diferentes para modificar las titulaciones de Ig inducidas. Un subgrupo de control no recibió tratamiento tolerogénico. Dos subgrupos recibieron nanoportadores que portaban el péptido OVA323-339 solo o combinado con rapamicina.
La inmunización se administró por las siguientes vías (los valores son por animal): 20 pL/pata de OVA+CpG (12.5 pg de OVA + 10 pg de CpG), ambas patas traseras s.c. Los tratamientos tolerogénicos se administraron por la siguiente vía (los valores son por animal): Se proporcionaron 200 pL de nanoportadores en una concentración de 100 pg/mL respecto al contenido de OVA323-339.
Medición de IgG Se midió el nivel de anticuerpos IgG. Se utilizó el bloqueador caseína en PBS (Thermo Fisher, # de catálogo 37528) como diluyente. Se utilizó Tween-20 al 0.05% en PBS como tampón de lavado, preparado añadiendo 10 mL de Tween-20 ((Sigma, # de catálogo P9416-100 mL) a 2 L de un patrón de 10x PBS (PBS: OmniPur® 10X PBS concentrado líquido, 4 L, EMD Chemicals, # de catálogo 6505) y 18 L de agua desionizada.
Se utilizó la proteína OVA en una concentración patrón de 5 mg/mL como material de recubrimiento. Se utilizó una dilución 1 :1000 hasta 5 pg/mL como concentración de trabajo. Cada pocilio de las placas de ensayo se cubrió con 100 pL de OVA diluida por pocilio, las placas se sellaron con una película sellante (VWR, # de catálogo 60941-120) y se incubaron durante a la noche a 4 °C. Se utilizaron placas Costar9017 de 96 pocilios de fondo plano como placas de ensayo, Costar9017.
Se utilizaron una placa de 96 pocilios o tubos de polipropileno de baja adhesividad como placas preparatorias, en los cuales se prepararon las muestras antes de transferirlas a la placa de ensayo. Las placas preparatorias no contenían nada de antígeno y, por lo tanto, los anticuerpos séricos no se adhirieron a la placa durante la preparación de las muestras. Las placas preparatorias se utilizaron para la preparación de las muestras con el fin de minimizar la adhesión que podría tener lugar durante la preparación de las muestras o al pipetearlas si se utilizase una placa recubierta de antígeno para preparar las muestras. Antes de preparar las muestras en la placa preparatoria, los pocilios se cubrieron con diluyente para bloquear cualquier unión no específica y la placa se selló e incubó a 4 °C durante la noche.
Las placas de ensayo se lavaron tres veces con tampón de lavado y el tampón de lavado se retiró completamente de los pocilios por aspiración después del último lavado. Después de lavar, se añadieron 300 pL de diluyente a cada pocilio de la placa o placas de ensayo para bloquear la unión no específica y las placas se incubaron al menos 2 horas a temperatura ambiente. Las muestras séricas se prepararon en la placa preparatoria con diluciones iniciales adecuadas. Las diluciones iniciales también se prepararon en ocasiones en tubos de 1.5 mL utilizando diluyente. Las diluciones iniciales adecuadas se determinaron en función de datos previos, cuando se disponía de ellos. Cuando no se disponía de datos previos, la dilución inicial más baja fue 1:40. Una vez diluida, 200 pL de la dilución inicial de la muestra sérica se transfirió al pocilio adecuado de la placa preparatoria.
A continuación se describe una distribución ilustrativa de la placa preparatoria: Las columnas 2 y 1 contenían un estándar del isotipo lgG2b monoclonal anti-ovoalbúmina (AbCam, ab17291), diluido hasta 1 pg/mL (dilución 1:4000). Las columnas 3-10 contenían muestras séricas (en diluciones adecuadas). Las columnas 1 y 12 no se utilizaron para muestras ni estándares para evitar cualquier error en las mediciones debido al efecto de borde. En su lugar, las columnas 1 y 12 contenían 200 pL de diluyente. Se utilizó suero de ratón normal con una dilución 1 :40 como control negativo. Se utilizó anti-lgG2a de ratón con una dilución 1:500 a partir de un patrón de 0.5 mg/mL (BD Bioscience) como control isotípico.
Una vez preparadas todas las muestras en la placa preparatoria, la placa se selló y se conservó a 4 °C hasta que se completó el bloqueo de las placas de ensayo. Las placas de ensayo se lavaron tres veces con tampón de lavado y el tampón de lavado se aspiró completamente después del último lavado. Después de lavar, se añadieron 100 pL de diluyente a todos los pocilios en las filas B-H de las placas de ensayo. Se utilizó una pipeta de 12 canales para transferir muestras desde la placa preparatoria hasta la placa de ensayo. Las muestras se mezclaron antes de transferirlas pipeteando 150 pL de suero diluido hacia arriba y abajo 3 veces. Después de mezclar, se transfirieron 150 pL de cada muestra desde la placa preparatoria y se añadieron a la fila A de la placa de ensayo respectiva.
Una vez transferidas las diluciones iniciales de cada muestra desde la placa preparatoria hasta la fila A de la placa de ensayo, se pipetearon diluciones en serie sobre la placa de ensayo tal como se indica: Se extrajeron 50 pL de cada muestra sérica de la fila A utilizando una pipeta de 12 canales y se mezclaron con los 100 µ?_ de diluyente añadidos previamente a cada pocilio de la fila B. Este paso se repitió a lo largo de toda la placa. Después de pipetear la dilución de la fila final, se extrajeron 50 µ?_ de fluido de los pocilios en la fila final y se desecharon, de este modo se obtuvo un volumen final de 100 µ?_ en cada pocilio de la placa de ensayo. Una vez preparadas las diluciones de las muestras en las placas de ensayo, las placas se incubaron a temperatura ambiente durante al menos 2 horas.
Después de incubar, las placas se lavaron tres veces con tampón de lavado. El anticuerpo de detección (anticuerpo anti-lgG de ratón producido en cabra, conjugado con HRP, AbCam ab987 7) se diluyó con un factor de 1 :1500 (0.33 µg/mL) en diluyente y se añadieron 100 µ? del anticuerpo diluido a cada pocilio. Las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente y después se lavaron tres veces con tampón de lavado, incluyendo cada paso de lavado un tiempo de remojo de al menos 30 segundos.
Después de lavar, se añadió sustrato de detección a los pocilios. Se combinaron partes iguales del sustrato A y sustrato B (BD Biosciences TMB Substrate Reagent Set, # de catálogo 555214) justo antes de su adición a las placas de ensayo, y se añadieron 100 µ?_ de la solución de sustratos mezclados a cada pocilio y se incubó durante 10 minutos en la oscuridad. La reacción se detuvo añadiendo 50 pL de solución de parada (H2S04 2 N) a cada pocilio después de un periodo de 10 minutos. Se evaluó la densidad óptica (DO) de los pocilios justo después de añadir la solución de parada en un lector de placas a 450 nm con sustracción a 570 nm. El análisis de datos se realizó utilizando el software SoftMax Pro v5.4 de Molecular Devices. En algunos casos, se preparó una gráfica con un ajuste de curva logístico de cuatro parámetros con la dilución en el eje de las x (escala logarítmica) y el valor de DO en el eje de las y (escala lineal), y se determinó la mitad del valor máximo (CE50) para cada muestra. La plantilla de las placas en la parte superior de la disposición se ajustó para reflejar la dilución de cada muestra (1 por columna).
Determinación del % de linfocitos B OVA+ que se dividen Se evalúo la división de linfocitos B ovoalbúmina+ mediante citometría de flujo. Se tiñeron esplenocitos de animales experimentales con colorante Cell Tracker Orange (CTO), una sonda fluorescente sensible a tiol adecuada para el mareaje celular a largo plazo, y se cultivaron en medio completo a 37 °C, 5% de CO2 con péptido o proteína ovoalbúmina durante 3 días. El día 3, las células se lavaron, se bloquearon con anticuerpo anti-CD16/32 y después se tiñeron con anticuerpos conjugados específicos para B220 y CD19. También se incubó la proteína ovoalbúmina conjugada con Alexa 647 con las células para marcar BCR específicos para la ovoalbúmina. Aquellos esplenocitos que eran CD19+ B220+ OVA-Alexa647+ se evaluaron para determinar la proliferación comparando la tinción de CTO diferencial. Aquellos con CTO bajo se consideraron linfocitos B Ovoalbúmina+ proliferantes y se compararon con los linfocitos B Ovoalbúmina+ con CTO alto para cuantificar los porcentajes.
Resultados La Fig. 6 muestra una reducción en los niveles de IgG específica para el antígeno con la administración de nanoportadores sintéticos que comprenden el péptido OVA y el inmunosupresor rapamicina. La Fig. 7 también demuestra una reducción, pero en el número de linfocitos B específicos para el antígeno, con los nanoportadores sintéticos. Estos resultados demuestran la reducción en respuestas inmunitarias no deseadas con nanoportadores sintéticos acoplados a péptido OVA (que comprende un epítopo restringido por MHC de clase II) e inmunosupresor. Estos resultados son relevantes en cualquier contexto en el que la reducción de linfocitos B específicos para el antígeno pueda proporcionar un beneficio.
EJEMPL0 16 Evaluación de los efectos de nanoportadores con antígenos e inmunosupresores Nanoportadores Los nanoportadores se prepararon de acuerdo con métodos proporcionados anteriormente (Ejemplo 15).
Inmunización Los nanoportadores se descongelaron y equilibraron. Las diluciones iniciales consistían en una solución patrón 10x y se diluyeron aún más hasta una concentración de 100 pg/mL en OVA323-339 o una solución 1x. Esta solución 1x se utilizó para inyecciones en 200 µ? por inyección i.v. Los animales se inmunizaron con proteína OVA (OVA) y se trataron con péptido OVA323-339 para evaluar la capacidad de los nanoportadores para controlar las respuestas inmunitarias en ausencia de antígenos de linfocitos B. Las vías de inmunización fueron las siguientes: 10 g de OVA + 4 mg de Alum i.p. en 400 iL para cada ratón Balb/C hembra que no ha sido sometido a ningún tratamiento inmunológico previo. Cada uno de los grupos experimentales estaba constituido por cinco animales. Las células de los bazos se volvieron a estimular con antígeno utilizando CFSE o CTO para determinar la cantidad de proliferación específica para el Ag.
Niveles de tipos específicos de células inmunitarias Se analizaron archivos de FCS utilizando el software FlowJo. Las células 7AAD positivas (un colorante nuclear que marca células muertas) se excluyeron y se cuantificaron las morfologías celulares dependientes de la expresión de CD4, CD8, Gr-1 , F4/80, B220, TCRb y CD1 1 b.
Estrategia de selección para subconjuntos de linfocitos T ? 7AAD- F4/80- GR-1- TCRb+ CD4+/- CD8+/- Estrategia de selección para subconjuntos de linfocitos B ? 7AAD- B220+ TCRb- Estrategia de selección para eosinófilos -> 7AAD- F4/80- Gr-1 + TCRb- CD11b+ Gr-1 + Determinación del % de linfocitos T CD4+ que se dividen La frecuencia de linfocitos T CD4+ sensibles a la ovoalbúmina se calculó por medio de la citometría de flujo. Se tiñeron esplenocitos de animales experimentales con CFSE, una sonda fluorescente sensible a tiol adecuada para el mareaje celular a largo plazo, y se cultivaron en medio completo a 37 °C, 5% de CO2 con proteína ovoalbúmina durante 3 días. El día 3, las células se lavaron, se bloquearon con anticuerpo anti-CD16/32 y después se tiñeron con anticuerpos conjugados específicos para TCR de CD4 y CD8a. Los esplenocitos que eran TCR+CD4 o TCR+CD8a+ se evaluaron para determinar la proliferación comparando la tinción de CFSE diferencial.
Resultados Las Figs. 8 y 9 demuestran la efectividad de los nanoportadores en un modelo en animales. Específicamente, la Fig. 8 demuestra una reducción en el número de linfocitos T CD4+ en muestras de lavado de sujetos que son animales tratados con nanoportadores sintéticos que comprenden OVA323-339 (un epítopo restringido por MHC de clase II) y un inmunosupresor. La Fig. 9 demuestra una reducción en el porcentaje de linfocitos T CD4+ que se dividen como resultado del mismo tratamiento.

Claims (115)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES
1.- Una composición que comprende: (i) una primera población de nanoportadores sintéticos acoplados a inmunosupresores y (ii) una segunda población de nanoportadores sintéticos que se acoplan a antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica.
2. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la primera población y la segunda población son la misma.
3. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizada además porque los inmunosupresores comprenden una estatina, un inhibidor de mTOR, un agente señalizador de TGF-ß, un corticosteroide, un inhibidor de la función mitocondrial, un inhibidor de P38, un inhibidor de NF-?ß, un agonista de los receptores de adenosina, un agonista de la prostaglandina E2, un inhibidor de la fosfodiesterasa 4, un inhibidor de HDAC o un inhibidor de proteasomas.
4. - La composición de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada además porque el inhibidor de mTOR es rapamicina.
5. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada además porque los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica comprenden epítopos restringidos por MHC de clase I y/o restringidos por MHC de clase II de una proteína terapéutica.
6. - La composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica comprenden epítopos restringidos por MHC de clase II de una proteína terapéutica.
7. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada además porque los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica comprenden epítopos de linfocitos B de una proteína terapéutica.
8. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada además porque los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica no comprenden sustancialmente epítopos de linfocitos B de una proteína terapéutica.
9.- La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada además porque los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica comprenden una proteína terapéutica para terapia de reemplazo proteico o suplementación proteica, o un fragmento de esta.
10.- La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada además porque los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica comprenden una prote'rna terapéutica, enzima, cofactor enzimático, hormona, factor sanguíneo o de coagulación sanguínea, citocina, interferón, factor de crecimiento, anticuerpo monoclonal, anticuerpo policlonal o proteína asociada con la enfermedad de Pompe administrable por inyección o infusión, o un fragmento de estos.
11. - La composición de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque la proteína terapéutica administrable por inyección o infusión comprende Tocilizumab, alfa-1 antitripsina, Hematide, albinterferón alfa-2b, Rhucin, tesamorelina, ocrelizumab, belimumab, pegloticasa, taliglucerasa alfa, agalsidasa alfa o velaglucerasa alfa.
12. - La composición de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque la enzima comprende una oxidorreductasa, transferasa, hidrolasa, liasa, isomerasa o ligasa.
13. - La composición de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque la enzima comprende una enzima para la terapia de reemplazo enzimático para un trastorno por almacenamiento lisosómico.
14. - La composición de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada además porque la enzima para la terapia de reemplazo enzimático para un trastorno por almacenamiento lisosómico comprende imiglucerasa, a-galactosidasa A (a-gal A), agalsidasa beta, a-glucosidasa ácida (GAA), alglucosidasa alfa, LUMIZYME, MYOZYME, arilsulfatasa B, laronidasa, ALDURAZYME, idursulfasa, ELAPRASE, arilsulfatasa B o NAGLAZYME.
15. - La composición de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque la citocina comprende una linfocina, interleucina, quimiocina, citocina de tipo 1 o citocina de tipo 2.
16. - La composición de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque el factor sanguíneo o de coagulación sanguínea comprende Factor I, Factor II, factor tisular, Factor V, Factor VII, Factor VIII , Factor IX, Factor X, Factor Xa, Factor XII, Factor XIII, factor de von Willebrand, precalicreína, cininógeno de alto peso molecular, fibronectina, antitrombina III, cofactor II de la heparina, proteína C, proteína S, proteína Z, inhibidor de proteasa dependiente de la proteína Z (ZPI), plasminógeno, alfa 2-antiplasmina, activador tisular del plasminógeno (tPA), urocinasa, inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 1 (PAI1), inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 2 (PAI2), procoagulante de cáncer o epoetina alfa.
17. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizada además porque la composición está en una cantidad eficaz para generar una respuesta inmunitaria tolerogénica al antígeno presentable por APC de la proteína terapéutica.
18. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizada además porque la composición está en una cantidad eficaz para reducir la generación de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica, y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos B cuando es administrabie a un paciente.
19. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, caracterizada además porque la carga del inmunosupresor y/o antígeno presentable por APC de la proteína terapéutica como promedio entre la primera y/o segunda población de nanoportadores sintéticos está comprendida entre un 0.0001% y un 50%.
20. - La composición de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada además porque la carga del inmunosupresor y/o antígeno presentable por APC de la proteína terapéutica como promedio entre la primera y/o segunda población de nanoportadores sintéticos está comprendida entre un 0.1% y un 10%.
21. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20, caracterizada además porque los nanoportadores sintéticos de la primera población y/o segunda población de nanoportadores sintéticos comprenden nanopartículas lipídicas, nanopartículas poliméricas, nanopartículas metálicas, emulsiones a base de surfactantes, dendrímeros, futbolenos, nanohilos, partículas pseudovíricas, o partículas peptídicas o proteicas.
22.- La composición de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizada además porque los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población comprenden nanopartículas lipídicas.
23. - La composición de conformidad con la reivindicación 22, caracterizada además porque los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población comprenden liposomas.
24. - La composición de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizada además porque los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población comprenden nanopartículas metálicas.
25. - La composición de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada además porque las nanopartículas metálicas comprenden nanopartículas de oro.
26.- La composición de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizada además porque los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población comprenden nanopartículas poliméricas.
27. - La composición de conformidad con la reivindicación 26, caracterizada además porque la nanopartícula polímérica comprende polímero que es un polímero Plurónico no terminado en metoxi.
28. - La composición de conformidad con la reivindicación 26 o 27, caracterizada además porque las nanopartículas poliméricas comprenden un poliéster, un poliéster acoplado a un poliéter, poliaminoácido, policarbonato, poliacetal, policetal, polisacárido, polietiloxazolina o polietilenimina.
29. - La composición de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque el poliéster comprende un poli(ácido láctico), poli(ácido glicólico), poli(ácido láctico-co-glicólico) o policaprolactona.
30. - La composición de conformidad con la reivindicación 28 o 29, caracterizada además porque las nanopartículas poliméricas comprenden un poliéster y un poliéster acoplado a un poliéter.
31. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 28 a 30, caracterizada además porque el poliéter comprende polietilenglicol o polipropilenglicol.
32. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 31, caracterizada además porque la media de una distribución del tamaño de partícula obtenida utilizando dispersión de luz dinámica de los nanoportadores sintéticos de la primera y/o segunda población es un diámetro superior a 100 nm.
33. - La composición de conformidad con la reivindicación 32, caracterizada además porque el diámetro es superior a 150 nm.
34. - La composición de conformidad con la reivindicación 33, caracterizada además porque el diámetro es superior a 200 nm.
35. - La composición de conformidad con la reivindicación 34, caracterizada además porque el diámetro es superior a 250 nm.
36. - La composición de conformidad con la reivindicación 35, caracterizada además porque el diámetro es superior a 300 nm.
37.- La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 36, caracterizada además porque la relación entre las dimensiones de los nanoportadores sintéticos de la primera población y/o segunda población es superior a 1 :1 , 1:1.2, 1:1.5, 1 :2, 1:3, 1 :5, 1 :7 o 1 :10.
38. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 37, caracterizada además porque la composición comprende adicionalmente un excipiente farmacéuticamente aceptable.
39. - Una forma farmacéutica que comprende la composición que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38.
40. - El uso de la composición que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38 o la forma farmacéutica que se reclama en la reivindicación 39 en la elaboración de un medicamento para inducir una respuesta inmune tolerogénica a antígenos de la proteína terapéutica en un paciente, en donde la proteína terapéutica está siendo administrable o será administrable al paciente.
41. - El uso como se reclama en la reivindicación 40, en donde el medicamento está adaptado adicionalmente para ser administrable con la proteína terapéutica al paciente.
42.- El uso como se reclama en la reivindicación 40 o 41 , en donde la proteína terapéutica está adaptada para ser administrable antes, concomitantemente o después de la administración del medicamento.
43. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 40 a 42, en donde una o más dosis de mantenimiento del medicamento está adaptada para ser administrable al paciente.
44. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 40 a 43, en donde se evalúa adicionalmente la generación de una respuesta inmune no deseada en el paciente antes y/o después de la administración del medicamento y/o la proteína terapéutica.
45. - El uso como se reclama en la reivindicación 44, en donde la respuesta inmune no deseada es la generación de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos B.
46. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 40 a 45, en donde la proteína terapéutica comprende una proteína terapéutica para la terapia por reemplazo proteico o suplementación proteica.
47. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 40 a 45, en donde la proteína terapéutica comprende una proteína terapéutica, enzima, cofactor enzimático, hormona, factor sanguíneo o de coagulación sanguínea, citocina, interferón, factor de crecimiento, anticuerpo monoclonal, anticuerpo policlonal o proteína asociada con la enfermedad de Pompe administrable por inyección o infusión.
48. - El uso como se reclama en la reivindicación 47, en donde la proteína terapéutica administrable por inyección o infusión comprende Tocilizumab, alfa-1 antitripsina, Hematide, albinterferón alfa-2b, Rhucin, tesamorelina, ocrelizumab, belimumab, pegloticasa, taliglucerasa alfa, agalsidasa alfa o velaglucerasa alfa.
49. - El uso como se reclama en la reivindicación 47, en donde la enzima comprende una oxidoreductasa, transferasa, hidrolasa, liasa, isomerasa o ligasa.
50. - El uso como se reclama en la reivindicación 47, en donde la enzima comprende una enzima para la terapia de reemplazo enzimático para un trastorno por almacenamiento lisosómico.
51. - El uso como se reclama en la reivindicación 50, en donde la enzima para la terapia de reemplazo enzimático para un trastorno por almacenamiento lisosómico comprende imiglucerasa, a-galactosidasa A (a-gal A), agalsidasa beta, a-glucosidasa ácida (GAA), alglucosidasa alfa, LUMIZYME, MYOZYME, arilsulfatasa B, laronidasa, ALDURAZYME, idursulfasa, ELAPRASE, arilsulfatasa B o NAGLAZYME.
52. - El uso como se reclama en la reivindicación 47, en donde la citocina comprende una linfocina, interleucina, quimiocina, citocina de tipo 1 o citocina de tipo 2.
53. - El uso como se reclama en la reivindicación 47, en donde el factor sanguíneo o de coagulación sanguínea comprende Factor I, Factor II, factor tisular, Factor V, Factor VII, Factor VIII , Factor IX, Factor X, Factor Xa, Factor XII, Factor XIII, factor de von Willebrand, precalicreína, cininógeno de alto peso molecular, fibronectina, antitrombina III, cofactor II de la heparina, proteína C, proteína S, proteína Z, inhibidor de proteasa dependiente de la proteína Z (ZPI), plasminogeno, alfa 2-antiplasmina, activador tisular del plasminogeno (tPA), urocinasa, inhibidor del activador del plasminogeno de tipo 1 (PAI1), inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 2 (PAI2), procoagulante de cáncer o epoetina alfa.
54. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 40 a 53, en donde la administración de la primera y/o segunda población de nanoportadores sintéticos y/o la proteína terapéutica está adaptada para ser administrable por administración intravenosa, intraperitoneal, transmucosal, oral, subcutánea, pulmonar, intranasal, intradérmica o intramuscular.
55. - El uso como se reclama en la reivindicación 54, en donde la administración de la primera y/o segunda población de nanoportadores sintéticos y/o la proteína terapéutica está adaptada para ser administrable por administración por inhalación, intravenosa, subcutánea o transmucosal.
56. - El uso de una composición que comprende: (i) una primera población de nanoportadores sintéticos que se acoplan a inmunosupresores, y (ii) una segunda población de nanoportadores sintéticos que se acoplan a antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica, en la elaboración de un medicamento para reducir la generación de una respuesta inmunitaria no deseada contra los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica.
57.- El uso de una composición que comprende: (i) una primera población de nanoportadores sintéticos que se acoplan a inmunosupresores; y (ii) una segunda población de nanoportadores sintéticos que se acoplan a los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica, en la elaboración de un medicamento para reducir la generación de una respuesta inmune no deseada a los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica en un paciente, en donde el medicamento está adaptado para ser administrable al paciente de acuerdo con un protocolo que se demostró previamente que reduce la generación de una repuesta inmune no deseada a los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica en uno o más pacientes bajo prueba.
58. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 o 57, en donde la primera población y la segunda población son la misma.
59. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 58, en donde se proporciona o identifica adicionalmente el paciente.
60. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 59, en donde se evalúa adicionalmente la generación de la respuesta inmune no deseada en el paciente antes y/o después de la administración del medicamento.
61. - El uso como se reclama en la reivindicación 60, en donde la respuesta inmune no deseada es la generación de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos B.
62. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 61 , en donde los inmunosupresores comprenden una estatina, un inhibidor de mTOR, un un agente señalizador de TGF-ß, un corticosteroide, un inhibidor de la función mitocondrial, un inhibidor de P38, un inhibidor de NF-?ß, un agonista de los receptores de adenosina, un agonista de la prostaglandina E2, un inhibidor de la fosfodiesterasa 4, un inhibidor de HDAC o un inhibidor de proteasomas.
63. - El uso como se reclama en la reivindicación 62, en donde el inhibidor de mTOR es rapamicina.
64. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 63, en donde los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica comprenden epítopos restringidos por MHC de clase I y/o restringidos por MHC de clase II de una proteína terapéutica.
65. - El uso como se reclama en la reivindicación 64, en donde los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica comprenden epítopos restringidos por MHC de clase II de una proteína terapéutica.
66.- El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 65, en donde los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica comprenden epítopos de linfocitos B de una proteína terapéutica.
67.- El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 66, en donde la proteína terapéutica comprende una proteína terapéutica para la terapia por reemplazo proteico o suplementación proteica.
68. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 67, en donde la proteína terapéutica comprende una proteína terapéutica, enzima, cofactor enzimático, hormona, factor sanguíneo o de coagulación sanguínea, citocina, interferón, factor de crecimiento, anticuerpo monoclonal, anticuerpo policlonal o proteína asociada con la enfermedad de Pompe administrable por inyección o infusión.
69. - El uso como se reclama en la reivindicación 68, en donde la proteína terapéutica administrable por inyección o infusión comprende Tocilizumab, alfa-1 antitripsina, Hematide, albinterferón alfa-2b, Rhucin, tesamorelina, ocrelizumab, belimumab, pegloticasa, taliglucerasa alfa, agalsidasa alfa o velaglucerasa alfa.
70. - El uso como se reclama en la reivindicación 68, en donde la enzima comprende una oxidoreductasa, transferasa, hidrolasa, liasa, isomerasa o ligasa.
71.- El uso como se reclama en la reivindicación 68, en donde la enzima comprende una enzima para la terapia de reemplazo enzimático para un trastorno por almacenamiento lisosómico.
72.- El uso como se reclama en la reivindicación 71 , en donde la enzima para la terapia de reemplazo enzimático para un trastorno por almacenamiento lisosómico comprende imiglucerasa, a-galactosidasa A (a-gal A), agalsidasa beta, a-glucosidasa ácida (GAA), alglucosidasa alfa, LUMIZYME, MYOZYME, arilsulfatasa B, laronidasa, ALDURAZYME, idursulfasa, ELAPRASE, arilsulfatasa B o NAGLAZYME.
73. - El uso como se reclama en la reivindicación 68, en donde la citocina comprende una linfocina, interleucina, quimiocina, citocina de tipo 1 o citocina de tipo 2.
74. - El uso como se reclama en la reivindicación 68, en donde el factor sanguíneo o de coagulación sanguínea comprende Factor I, Factor II, factor tisular, Factor V, Factor VII, Factor VIII , Factor IX, Factor X, Factor Xa, Factor XII, Factor XIII, factor de von Willebrand, precalicreína, cininógeno de alto peso molecular, fibronectina, antitrombina III, cofactor II de la heparina, proteína C, proteína S, proteína Z, inhibidor de proteasa dependiente de la proteína Z (ZPI), plasminógeno, alfa 2-antiplasmina, activador tisular del plasminógeno (tPA), urocinasa, inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 1 (PAI1), inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 2 (PAI2), procoagulante de cáncer o epoetina alfa.
75. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 74, en donde el medicamento es para reducir la generación de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica, y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos B.
76. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 75, en donde la carga del inmunosupresor y/o antígeno presentable por APC de la proteína terapéutica como promedio entre la primera población y/o segunda población de nanoportadores sintéticos está comprendida entre un 0.0001% y un 50%.
77. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 75, en donde la carga del inmunosupresor y/o antígeno presentable por APC de la proteína terapéutica como promedio entre la primera población y/o segunda población de nanoportadores sintéticos está comprendida entre un 0.1% y un 10%.
78. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 77, en donde los nanoportadores sintéticos de la primera población y/o segunda población de nanoportadores sintéticos comprenden nanopartículas lipídicas, nanopartículas poliméricas, nanopartículas metálicas, emulsiones a base de surfactantes, dendrímeros, futbolenos, nanohilos, partículas pseudovíricas, o partículas peptídicas o proteicas.
79. - El uso como se reclama en la reivindicación 78, en donde los nanoportadores de la primera y/o la segunda población comprenden nanoparttículas lipídicas.
80.- El uso como se reclama en la reivindicación 79, en donde los nanoportadores de la primera y/o la segunda población comprenden liposomas.
81. - El uso como se reclama en la reivindicación 78, en donde los nanoportadores de la primera y/o la segunda población comprenden nanopartículas metálicas.
82. - El uso como se reclama en la reivindicación 81 , en donde las nanopartículas metálicas comprenden nanopartículas de oro.
83. - El uso como se reclama en la reivindicación 78, en donde los nanoportadores de la primera y/o la segunda población comprenden nanopartículas poliméricas.
84. - El uso como se reclama en la reivindicación 83, en donde nanopartícula polimérica comprende un polímero que es un polímero plurónico no terminado en metoxi.
85. - El uso como se reclama en la reivindicación 83 u 84, en donde las nanopartículas poliméricas comprenden un poliéster, un poliéster acoplado a un poliéter, poliaminoácido, policarbonato, poliacetal, policetal, polisacárido, polietiloxazolina o polietlenimina.
86. - El uso como se reclama en la reivindicación 85, en donde el poliéster comprende un ácido poli(láctico), ácido poli(glicólico), ácido poli(láctico-co-glicólico) o policaprolactona.
87. - El uso como se reclama en la reivindicación 85 u 86, en donde las nanopartículas poliméricas comprenden un poliéster y un poliéster acoplado a un poliéter.
88. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 85 a 87, en donde el poliéter comprende polietilenglicol o polipropilenglicol.
89.- El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 88, en donde la media de una distribución de tamaños de partícula que se obtiene usando difusión luminosa dinámica de los nanoportadores de la primera y/o la segunda población es un diámetro superior a 100 nm.
90.- El uso como se reclama en la reivindicación 89, en donde el diámetro es superior a 150 nm.
91.- El uso como se reclama en la reivindicación 90, en donde el diámetro es superior a 200 nm.
92. - El uso como se reclama en la reivindicación 91, en donde el diámetro es superior a 250 nm.
93. - El uso como se reclama en la reivindicación 92, en donde el diámetro es superior a 300 nm.
94. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 93, en donde la relación entre las dimensiones de los nanoportadores sintéticos de la primera población y/o segunda población es superior a 1 :1 , 1:1.2, 1:1.5, 1 :2, 1:3, 1 :5, 1:7 o 1 :10.
95.- El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 94, en donde el medicamento comprende adicionalmente un excipiente farmacéuticamente aceptable.
96. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 95, en donde el medicamento está adaptado para ser administrable con la proteína terapéutica al paciente.
97. - El uso como se reclama en la reivindicación 96, en donde la proteína terapéutica está adaptada para ser administrable antes, concomitantemente o después de la administración del medicamento.
98. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 97, en donde una o más dosis de mantenimiento del medicamento está adaptada para ser administrable al paciente.
99. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 98, en donde se evalúa adicionalmente la generación de una respuesta inmune no deseada en el paciente antes y/o después de la administración del medicamento y/o la proteína terapéutica.
100. - El uso como se reclama en la reivindicación 99, en donde la respuesta inmune no deseada es la generación de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos B.
101. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 56 a 100, en donde el medicamento está adaptado para ser administrable por administración intravenosa, intraperitoneal, transmucosal, oral, subcutánea, pulmonar, intranasal, intradérmica o intramuscular.
102. - El uso como se reclama en la reivindicación 101 , en donde el medicamento está adaptado para ser administrable por inhalación o administración intravenosa, subcutánea o transmucosal.
103. - Un método que comprende: (i) producir una primera población de nanoportadores sintéticos que se acoplan a inmunosupresores y (ii) producir una segunda población de nanoportadores sintéticos que se acoplan a antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica.
104.- El método de conformidad con la reivindicación 103, caracterizado además porque la primera población y la segunda población son la misma.
105 - El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 103 o 104, caracterizado además porque la primera y la segunda población de nanoportadores sintéticos que se producen son como las que se definen en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38.
106. - El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 103 a 105, caracterizado además porque comprende adicionalmente producir una forma farmacéutica de una composición que comprende la primera y la segunda población de nanoportadores sintéticos producidas.
107. - El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 103 a 106, caracterizado además porque comprende adicionalmente elaborar una composición que comprende la primera población y la segunda población de nanoportadores sintéticos o la forma farmacéutica disponible para un paciente para su administración.
108. - El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 103 a 107, caracterizado además porque comprende adicionalmente evaluar la reducción de una respuesta inmunitaria no deseada con una composición que comprende la primera población y la segunda población de nanoportadores sintéticos.
109. - El método de conformidad con la reivindicación 108, caracterizado además porque la respuesta inmune no deseada es la generación de anticuerpos específicos para la proteína terapéutica y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos T CD4+ y/o la proliferación y/o actividad de linfocitos B.
110. - Un procedimiento para producir una composición o forma farmacéutica que comprende: (i) una primera población de nanoportadores sintéticos que se acoplan a inmunosupresores, y (ii) una segunda población de nanoportadores sintéticos que se acoplan a antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica, el procedimiento comprendiendo los pasos que se definen en el método que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 103 a 109.
111. - Una composición o forma terapéutica que se puede obtener mediante el método o procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 103 a 110.
112. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38 y 111 o la forma farmacéutica de conformidad con la reivindicación 39 para su uso en terapia o profilaxis.
113. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38 y 111 o la forma farmacéutica de conformidad con la reivindicación 39 para su uso en la inducción de una respuesta inmune tolerogénica a antígenos de la proteína terapéutica, terapia a base de células, terapia por reemplazo proteico, terapia por suplementación proteica o la reducción de la generación de una respuesta inmune no deseada contra los antígenos presentables por APC de la proteína terapéutica como los que se definen en cualquiera de las reivindicaciones 56-102.
114 - El uso de la composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38 y 1 1 1 o la forma farmacéutica de conformidad con la reivindicación 39 en la elaboración de un medicamento para terapia a base de células, terapia por reemplazo proteico o terapia por suplementación proteica.
115.- Una forma terapéutica que comprende la composición que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 111 a 113.
MX2013012592A 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para reducir las respuestas inmunitarias a proteínas terapéuticas. MX2013012592A (es)

Applications Claiming Priority (13)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161480946P 2011-04-29 2011-04-29
US201161513514P 2011-07-29 2011-07-29
US201161531180P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531153P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531215P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531204P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531164P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531168P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531209P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531147P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531175P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531194P 2011-09-06 2011-09-06
PCT/US2012/035366 WO2012149255A2 (en) 2011-04-29 2012-04-27 Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce immune responses to therapeutic proteins

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MX2013012592A true MX2013012592A (es) 2014-08-27

Family

ID=47068065

Family Applications (13)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2013012595A MX2013012595A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para la terapia contra alergias.
MX2013012598A MX2013012598A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para eliminar linfocitos t efectores específicos para un antígeno.
MX2013012597A MX2013012597A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para inducir linfocitos b reguladores.
MX2013012596A MX2013012596A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para generar linfocitos t reguladores cd8+.
MX2013012591A MX2013012591A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos.
MX2013012599A MX2013012599A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Liberación controlada de inmunosupresores a partir de nanoportadores sintéticos.
MX2013012594A MX2013012594A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para reducir las respuestas de linfocitos t citotóxicos.
MX2013012592A MX2013012592A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para reducir las respuestas inmunitarias a proteínas terapéuticas.
MX2013012593A MX2013012593A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para reducir las respuestas de anticuerpos.
MX2019013515A MX2019013515A (es) 2011-04-29 2013-10-28 Nanoportadores sinteticos tolerogenicos para reducir las respuestas de anticuerpos.
MX2019013118A MX2019013118A (es) 2011-04-29 2013-10-28 Nanoportadores sinteticos tolerogenicos para reducir las respuestas inmunitarias a proteinas terapeuticas.
MX2020004906A MX2020004906A (es) 2011-04-29 2013-10-28 Nanoportadores sinteticos tolerogenicos.
MX2019011890A MX2019011890A (es) 2011-04-29 2013-10-28 Liberacion controlada de inmunosupresores a partir de nanoportadores sinteticos.

Family Applications Before (7)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2013012595A MX2013012595A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para la terapia contra alergias.
MX2013012598A MX2013012598A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para eliminar linfocitos t efectores específicos para un antígeno.
MX2013012597A MX2013012597A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para inducir linfocitos b reguladores.
MX2013012596A MX2013012596A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para generar linfocitos t reguladores cd8+.
MX2013012591A MX2013012591A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos.
MX2013012599A MX2013012599A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Liberación controlada de inmunosupresores a partir de nanoportadores sintéticos.
MX2013012594A MX2013012594A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para reducir las respuestas de linfocitos t citotóxicos.

Family Applications After (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2013012593A MX2013012593A (es) 2011-04-29 2012-04-27 Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para reducir las respuestas de anticuerpos.
MX2019013515A MX2019013515A (es) 2011-04-29 2013-10-28 Nanoportadores sinteticos tolerogenicos para reducir las respuestas de anticuerpos.
MX2019013118A MX2019013118A (es) 2011-04-29 2013-10-28 Nanoportadores sinteticos tolerogenicos para reducir las respuestas inmunitarias a proteinas terapeuticas.
MX2020004906A MX2020004906A (es) 2011-04-29 2013-10-28 Nanoportadores sinteticos tolerogenicos.
MX2019011890A MX2019011890A (es) 2011-04-29 2013-10-28 Liberacion controlada de inmunosupresores a partir de nanoportadores sinteticos.

Country Status (15)

Country Link
US (33) US9289477B2 (es)
EP (15) EP3760201A1 (es)
JP (31) JP6602536B2 (es)
KR (24) KR20140034202A (es)
CN (32) CN107261123A (es)
AU (34) AU2012249553A1 (es)
BR (5) BR112013027508A2 (es)
CA (11) CA2834599A1 (es)
DK (1) DK2701739T3 (es)
EA (16) EA201790043A1 (es)
ES (1) ES2806268T3 (es)
HU (1) HUE050142T2 (es)
IL (15) IL305229A (es)
MX (13) MX2013012595A (es)
WO (12) WO2012149247A2 (es)

Families Citing this family (495)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6993506B2 (en) 2000-12-05 2006-01-31 Jgr Acquisition, Inc. Method and device utilizing polymorphic data in e-commerce
US9060770B2 (en) 2003-05-20 2015-06-23 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-driven surgical instrument with E-beam driver
US20070084897A1 (en) 2003-05-20 2007-04-19 Shelton Frederick E Iv Articulating surgical stapling instrument incorporating a two-piece e-beam firing mechanism
US11896225B2 (en) 2004-07-28 2024-02-13 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a pan
US8215531B2 (en) 2004-07-28 2012-07-10 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling instrument having a medical substance dispenser
US9237891B2 (en) 2005-08-31 2016-01-19 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled surgical stapling devices that produce formed staples having different lengths
US7934630B2 (en) 2005-08-31 2011-05-03 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Staple cartridges for forming staples having differing formed staple heights
US11246590B2 (en) 2005-08-31 2022-02-15 Cilag Gmbh International Staple cartridge including staple drivers having different unfired heights
US11484312B2 (en) 2005-08-31 2022-11-01 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a staple driver arrangement
US7669746B2 (en) 2005-08-31 2010-03-02 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Staple cartridges for forming staples having differing formed staple heights
US10159482B2 (en) 2005-08-31 2018-12-25 Ethicon Llc Fastener cartridge assembly comprising a fixed anvil and different staple heights
US20070106317A1 (en) 2005-11-09 2007-05-10 Shelton Frederick E Iv Hydraulically and electrically actuated articulation joints for surgical instruments
SI2347775T1 (sl) 2005-12-13 2020-10-30 President And Fellows Of Harvard College Ogrodja za celično transplantacijo
US20110024477A1 (en) 2009-02-06 2011-02-03 Hall Steven G Driven Surgical Stapler Improvements
US20120292367A1 (en) 2006-01-31 2012-11-22 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled end effector
US8186555B2 (en) 2006-01-31 2012-05-29 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Motor-driven surgical cutting and fastening instrument with mechanical closure system
US11278279B2 (en) 2006-01-31 2022-03-22 Cilag Gmbh International Surgical instrument assembly
US11793518B2 (en) 2006-01-31 2023-10-24 Cilag Gmbh International Powered surgical instruments with firing system lockout arrangements
US8708213B2 (en) 2006-01-31 2014-04-29 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical instrument having a feedback system
US7845537B2 (en) 2006-01-31 2010-12-07 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical instrument having recording capabilities
US7753904B2 (en) 2006-01-31 2010-07-13 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Endoscopic surgical instrument with a handle that can articulate with respect to the shaft
US20110290856A1 (en) 2006-01-31 2011-12-01 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled surgical instrument with force-feedback capabilities
US11224427B2 (en) 2006-01-31 2022-01-18 Cilag Gmbh International Surgical stapling system including a console and retraction assembly
US8820603B2 (en) 2006-01-31 2014-09-02 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Accessing data stored in a memory of a surgical instrument
US8992422B2 (en) 2006-03-23 2015-03-31 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled endoscopic accessory channel
US8322455B2 (en) 2006-06-27 2012-12-04 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Manually driven surgical cutting and fastening instrument
US10568652B2 (en) 2006-09-29 2020-02-25 Ethicon Llc Surgical staples having attached drivers of different heights and stapling instruments for deploying the same
US11980366B2 (en) 2006-10-03 2024-05-14 Cilag Gmbh International Surgical instrument
US8652120B2 (en) 2007-01-10 2014-02-18 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical instrument with wireless communication between control unit and sensor transponders
US8684253B2 (en) 2007-01-10 2014-04-01 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical instrument with wireless communication between a control unit of a robotic system and remote sensor
US11291441B2 (en) 2007-01-10 2022-04-05 Cilag Gmbh International Surgical instrument with wireless communication between control unit and remote sensor
US7434717B2 (en) 2007-01-11 2008-10-14 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Apparatus for closing a curved anvil of a surgical stapling device
US11039836B2 (en) 2007-01-11 2021-06-22 Cilag Gmbh International Staple cartridge for use with a surgical stapling instrument
US7673782B2 (en) 2007-03-15 2010-03-09 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling instrument having a releasable buttress material
US11672531B2 (en) 2007-06-04 2023-06-13 Cilag Gmbh International Rotary drive systems for surgical instruments
US8931682B2 (en) 2007-06-04 2015-01-13 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled shaft based rotary drive systems for surgical instruments
US7753245B2 (en) 2007-06-22 2010-07-13 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling instruments
US11849941B2 (en) 2007-06-29 2023-12-26 Cilag Gmbh International Staple cartridge having staple cavities extending at a transverse angle relative to a longitudinal cartridge axis
CA2715460C (en) 2008-02-13 2020-02-18 President And Fellows Of Harvard College Continuous cell programming devices
JP5410110B2 (ja) 2008-02-14 2014-02-05 エシコン・エンド−サージェリィ・インコーポレイテッド Ｒｆ電極を有する外科用切断・固定器具
US9179912B2 (en) 2008-02-14 2015-11-10 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled motorized surgical cutting and fastening instrument
US8636736B2 (en) 2008-02-14 2014-01-28 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Motorized surgical cutting and fastening instrument
US11986183B2 (en) 2008-02-14 2024-05-21 Cilag Gmbh International Surgical cutting and fastening instrument comprising a plurality of sensors to measure an electrical parameter
US7819298B2 (en) 2008-02-14 2010-10-26 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling apparatus with control features operable with one hand
US8573465B2 (en) 2008-02-14 2013-11-05 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled surgical end effector system with rotary actuated closure systems
US7866527B2 (en) 2008-02-14 2011-01-11 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling apparatus with interlockable firing system
US9770245B2 (en) 2008-02-15 2017-09-26 Ethicon Llc Layer arrangements for surgical staple cartridges
US11648005B2 (en) 2008-09-23 2023-05-16 Cilag Gmbh International Robotically-controlled motorized surgical instrument with an end effector
US9005230B2 (en) 2008-09-23 2015-04-14 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Motorized surgical instrument
US8210411B2 (en) 2008-09-23 2012-07-03 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Motor-driven surgical cutting instrument
US9386983B2 (en) 2008-09-23 2016-07-12 Ethicon Endo-Surgery, Llc Robotically-controlled motorized surgical instrument
US8608045B2 (en) 2008-10-10 2013-12-17 Ethicon Endo-Sugery, Inc. Powered surgical cutting and stapling apparatus with manually retractable firing system
US8517239B2 (en) 2009-02-05 2013-08-27 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling instrument comprising a magnetic element driver
RU2525225C2 (ru) 2009-02-06 2014-08-10 Этикон Эндо-Серджери, Инк. Усовершенствование приводного хирургического сшивающего инструмента
KR20120022984A (ko) * 2009-04-21 2012-03-12 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. Ｔｈ１ 편향 반응을 제공하는 면역나노치료법
CN102481376B (zh) 2009-05-27 2016-12-21 西莱克塔生物科技公司 免疫调节剂-聚合物化合物
CN107617110A (zh) * 2009-08-26 2018-01-23 西莱克塔生物科技公司 诱导t细胞辅助的组合物
US8851354B2 (en) 2009-12-24 2014-10-07 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical cutting instrument that analyzes tissue thickness
AU2011258156B2 (en) 2010-05-26 2016-11-24 Selecta Biosciences, Inc. Multivalent synthetic nanocarrier vaccines
WO2012021249A2 (en) 2010-07-12 2012-02-16 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of histidyl-trna synthetases
US8783543B2 (en) 2010-07-30 2014-07-22 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Tissue acquisition arrangements and methods for surgical stapling devices
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9839420B2 (en) 2010-09-30 2017-12-12 Ethicon Llc Tissue thickness compensator comprising at least one medicament
US11812965B2 (en) 2010-09-30 2023-11-14 Cilag Gmbh International Layer of material for a surgical end effector
US10405854B2 (en) 2010-09-30 2019-09-10 Ethicon Llc Surgical stapling cartridge with layer retention features
US9386988B2 (en) 2010-09-30 2016-07-12 Ethicon End-Surgery, LLC Retainer assembly including a tissue thickness compensator
US11298125B2 (en) 2010-09-30 2022-04-12 Cilag Gmbh International Tissue stapler having a thickness compensator
US10945731B2 (en) 2010-09-30 2021-03-16 Ethicon Llc Tissue thickness compensator comprising controlled release and expansion
US9629814B2 (en) 2010-09-30 2017-04-25 Ethicon Endo-Surgery, Llc Tissue thickness compensator configured to redistribute compressive forces
US8978954B2 (en) 2010-09-30 2015-03-17 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Staple cartridge comprising an adjustable distal portion
US11849952B2 (en) 2010-09-30 2023-12-26 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising staples positioned within a compressible portion thereof
US8695866B2 (en) 2010-10-01 2014-04-15 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical instrument having a power control circuit
DE19177059T1 (de) 2010-10-01 2021-10-07 Modernatx, Inc. N1-methyl-pseudouracile enthältendes ribonucleinsäuren sowie ihre verwendungen
ES2773858T3 (es) 2010-10-06 2020-07-15 Harvard College Hidrogeles formadores de poros inyectables para terapias celulares basadas en materiales
EP2640190A4 (en) 2010-11-05 2016-05-11 Selecta Biosciences Inc MODIFIED NICOTINIC COMPOUNDS AND ASSOCIATED METHODS
MX358598B (es) 2010-11-12 2018-08-27 Cour Pharmaceuticals Dev Company Partículas inmuno-moduladoras modificadas.
DE12722942T1 (de) 2011-03-31 2021-09-30 Modernatx, Inc. Freisetzung und formulierung von manipulierten nukleinsäuren
EP2702077A2 (en) 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
RU2606493C2 (ru) 2011-04-29 2017-01-10 Этикон Эндо-Серджери, Инк. Кассета со скобками, содержащая скобки, расположенные внутри ее сжимаемой части
US9289477B2 (en) 2011-04-29 2016-03-22 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce cytotoxic T lymphocyte responses
US11207064B2 (en) 2011-05-27 2021-12-28 Cilag Gmbh International Automated end effector component reloading system for use with a robotic system
US9072535B2 (en) 2011-05-27 2015-07-07 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling instruments with rotatable staple deployment arrangements
WO2013019658A2 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers comprising polymers comprising multiple immunomodulatory agents
EP2750662A4 (en) 2011-08-31 2015-06-24 Univ Georgia NANOPARTICLES TARGETING APOPTOSIS
US20140212398A1 (en) 2011-09-08 2014-07-31 Yeda Research And Development Co. Ltd. Anti third party central memory t cells, methods of producing same and use of same in transplantation and disease treatment
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
JP6113737B2 (ja) 2011-10-03 2017-04-12 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 修飾型のヌクレオシド、ヌクレオチドおよび核酸、ならびにそれらの使用方法
EP2591801A1 (en) * 2011-11-14 2013-05-15 Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf Nanoparticle compositions for generation of regulatory T cells and treatment of autoimmune diseases and other chronic inflammatory conditions
MX2014007233A (es) 2011-12-16 2015-02-04 Moderna Therapeutics Inc Composiciones de nucleosidos, nucleotidos y acidos nucleicos modificados.
WO2013119853A1 (en) 2012-02-07 2013-08-15 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Epitopes from allergen proteins and methods and uses for immune response modulation
WO2013123432A2 (en) 2012-02-16 2013-08-22 Atyr Pharma, Inc. Histidyl-trna synthetases for treating autoimmune and inflammatory diseases
ES2669561T3 (es) 2012-02-17 2018-05-28 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Nanopartículas para el transporte mitocondrial de agentes
MX2014011484A (es) * 2012-03-23 2015-09-23 Esteve Labor Dr Metodo para seguir las respuestas de celulas t especificas al vih.
MX358135B (es) 2012-03-28 2018-08-06 Ethicon Endo Surgery Inc Compensador de grosor de tejido que comprende una pluralidad de capas.
BR112014024098B1 (pt) 2012-03-28 2021-05-25 Ethicon Endo-Surgery, Inc. cartucho de grampos
JP6224070B2 (ja) 2012-03-28 2017-11-01 エシコン・エンド−サージェリィ・インコーポレイテッドＥｔｈｉｃｏｎ Ｅｎｄｏ−Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｉｎｃ． 組織厚さコンペンセータを含む保持具アセンブリ
EP2834259A4 (en) 2012-04-02 2016-08-24 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES
CA2868391A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Stephane Bancel Polynucleotides comprising n1-methyl-pseudouridine and methods for preparing the same
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
ES2773895T3 (es) 2012-04-16 2020-07-15 Harvard College Composiciones de sílice mesoporosa para modular las respuestas inmunitarias
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
WO2013163176A1 (en) 2012-04-23 2013-10-31 Allertein Therapeutics, Llc Nanoparticles for treatment of allergy
US9101358B2 (en) 2012-06-15 2015-08-11 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Articulatable surgical instrument comprising a firing drive
CA2876495C (en) 2012-06-21 2023-10-17 Northwestern University Peptide conjugated particles
US20140001231A1 (en) 2012-06-28 2014-01-02 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Firing system lockout arrangements for surgical instruments
BR112014032776B1 (pt) 2012-06-28 2021-09-08 Ethicon Endo-Surgery, Inc Sistema de instrumento cirúrgico e kit cirúrgico para uso com um sistema de instrumento cirúrgico
CN104487005B (zh) 2012-06-28 2017-09-08 伊西康内外科公司 空夹仓闭锁件
US20140001234A1 (en) 2012-06-28 2014-01-02 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Coupling arrangements for attaching surgical end effectors to drive systems therefor
US11202631B2 (en) 2012-06-28 2021-12-21 Cilag Gmbh International Stapling assembly comprising a firing lockout
US9289256B2 (en) 2012-06-28 2016-03-22 Ethicon Endo-Surgery, Llc Surgical end effectors having angled tissue-contacting surfaces
US9649111B2 (en) 2012-06-28 2017-05-16 Ethicon Endo-Surgery, Llc Replaceable clip cartridge for a clip applier
US9700310B2 (en) 2013-08-23 2017-07-11 Ethicon Llc Firing member retraction devices for powered surgical instruments
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
RU2687164C2 (ru) 2012-10-30 2019-05-07 Аравакс Пти Лтд Новые иммунотерапевтические молекулы и их применения
WO2014069655A1 (ja) * 2012-11-05 2014-05-08 株式会社レグイミューン 免疫寛容誘導剤
CA2892529C (en) 2012-11-26 2023-04-25 Moderna Therapeutics, Inc. Terminally modified rna
BR112015021082B1 (pt) 2013-03-01 2022-05-10 Ethicon Endo-Surgery, Inc Instrumento cirúrgico
MX368026B (es) 2013-03-01 2019-09-12 Ethicon Endo Surgery Inc Instrumento quirúrgico articulable con vías conductoras para la comunicación de la señal.
CA2905010A1 (en) 2013-03-12 2014-09-18 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
KR20210057832A (ko) 2013-03-13 2021-05-21 코어 파마슈티칼스 디벨롭먼트 컴퍼니 인크. 염증 치료용 면역-변형된 입자
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
US9629629B2 (en) 2013-03-14 2017-04-25 Ethicon Endo-Surgey, LLC Control systems for surgical instruments
US9351726B2 (en) 2013-03-14 2016-05-31 Ethicon Endo-Surgery, Llc Articulation control system for articulatable surgical instruments
US9499614B2 (en) 2013-03-14 2016-11-22 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosaccharides
US10258698B2 (en) 2013-03-14 2019-04-16 Modernatx, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
CA2907046C (en) 2013-03-15 2021-04-20 Atyr Pharma, Inc. Histidyl-trna synthetase-fc conjugates
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US9588115B2 (en) 2013-03-28 2017-03-07 Protagen Ag Method for the diagnosis of neuromyelitis optica
CN105188741A (zh) 2013-04-03 2015-12-23 阿勒丁医疗公司 新型纳米颗粒组合物
US9801626B2 (en) 2013-04-16 2017-10-31 Ethicon Llc Modular motor driven surgical instruments with alignment features for aligning rotary drive shafts with surgical end effector shafts
BR112015026109B1 (pt) 2013-04-16 2022-02-22 Ethicon Endo-Surgery, Inc Instrumento cirúrgico
WO2014179771A1 (en) * 2013-05-03 2014-11-06 Selecta Biosciences, Inc. Dosing combinations for reducing undesired humoral immune responses
EA201592106A3 (ru) * 2013-05-03 2016-08-31 Селекта Байосайенсиз, Инк. Локальное сопутствующее введение толерогенных синтетических наноносителей для снижения гиперчувствительности типа i и гиперчувствительности типа iv
EA201592273A1 (ru) * 2013-06-04 2016-09-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Повторное введение неиммуносупрессивных антигенспецифических иммунотерапевтических средств
EP2813242A1 (en) * 2013-06-13 2014-12-17 PLS-Design GmbH Low molecular weight immune-modulators as adjuvants for specific immunotherapy
FI3033102T4 (fi) 2013-08-13 2024-03-01 Univ Northwestern Peptidikonjugoituja hiukkasia
JP6416260B2 (ja) 2013-08-23 2018-10-31 エシコン エルエルシー 動力付き外科用器具のための発射部材後退装置
EP3041934A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
EP3041938A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
US20160228521A1 (en) * 2013-09-16 2016-08-11 Allertein Therapeutics, Llc Managing immune responses in transplantation
BR112016006813A2 (pt) 2013-09-25 2017-09-19 Aravax Pty Ltd Composição imunoterapêutica nova e seus usos
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
CA2926218A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
WO2015051293A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Abbvie, Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
CA2930973A1 (en) 2013-11-22 2015-05-28 Pal SAERTROM C/ebp alpha short activating rna compositions and methods of use
KR101483378B1 (ko) * 2013-12-24 2015-01-15 이영환 금 나노 입자를 함유하는 물을 이용한 금 나노 입자를 포함하는 달걀 제조방법
TR201807778T4 (tr) * 2014-01-17 2018-06-21 Fundacio Inst Catala De Nanociencia I Nanotecnologia Lipozom bazlı immünoterapi.
US9962161B2 (en) 2014-02-12 2018-05-08 Ethicon Llc Deliverable surgical instrument
EP2918262B1 (en) * 2014-03-10 2023-08-09 PLS-Design GmbH Induction of antigen-specific tolerance by peripheral phagocytosis
WO2015138992A1 (en) 2014-03-14 2015-09-17 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Mitochondrial delivery of 3-bromopyruvate
US10004497B2 (en) 2014-03-26 2018-06-26 Ethicon Llc Interface systems for use with surgical instruments
US9690362B2 (en) 2014-03-26 2017-06-27 Ethicon Llc Surgical instrument control circuit having a safety processor
BR112016021943B1 (pt) 2014-03-26 2022-06-14 Ethicon Endo-Surgery, Llc Instrumento cirúrgico para uso por um operador em um procedimento cirúrgico
US20150297222A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Fastener cartridges including extensions having different configurations
CN106456176B (zh) 2014-04-16 2019-06-28 伊西康内外科有限责任公司 包括具有不同构型的延伸部的紧固件仓
US9844369B2 (en) 2014-04-16 2017-12-19 Ethicon Llc Surgical end effectors with firing element monitoring arrangements
BR112016023807B1 (pt) 2014-04-16 2022-07-12 Ethicon Endo-Surgery, Llc Conjunto de cartucho de prendedores para uso com um instrumento cirúrgico
CN106456158B (zh) 2014-04-16 2019-02-05 伊西康内外科有限责任公司 包括非一致紧固件的紧固件仓
US10682400B2 (en) 2014-04-30 2020-06-16 President And Fellows Of Harvard College Combination vaccine devices and methods of killing cancer cells
CN104028745A (zh) * 2014-06-11 2014-09-10 浙江大学 一种利用丝素蛋白调控金纳米颗粒自组装的方法
US20150359865A1 (en) * 2014-06-17 2015-12-17 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers for t-cell-mediated autoimmune disease
WO2016014846A1 (en) 2014-07-23 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of intrabodies
BR112017004361B1 (pt) 2014-09-05 2023-04-11 Ethicon Llc Sistema eletrônico para um instrumento cirúrgico
US11311294B2 (en) 2014-09-05 2022-04-26 Cilag Gmbh International Powered medical device including measurement of closure state of jaws
US20160066913A1 (en) 2014-09-05 2016-03-10 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Local display of tissue parameter stabilization
WO2016037163A1 (en) 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene therapy anti-viral transfer vector immune responses
CN107073066B (zh) * 2014-09-11 2021-09-17 加利福尼亚大学董事会 mTORC1抑制剂
US10105142B2 (en) 2014-09-18 2018-10-23 Ethicon Llc Surgical stapler with plurality of cutting elements
MX2017003960A (es) 2014-09-26 2017-12-04 Ethicon Llc Refuerzos de grapas quirúrgicas y materiales auxiliares.
JP2017528511A (ja) 2014-09-26 2017-09-28 セキラス ユーケー リミテッド 免疫低下された被験体のワクチン接種
US11523821B2 (en) 2014-09-26 2022-12-13 Cilag Gmbh International Method for creating a flexible staple line
US9924944B2 (en) 2014-10-16 2018-03-27 Ethicon Llc Staple cartridge comprising an adjunct material
JP2017533238A (ja) 2014-10-28 2017-11-09 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル 抗原特異的寛容のための組成物及び方法
US10517594B2 (en) 2014-10-29 2019-12-31 Ethicon Llc Cartridge assemblies for surgical staplers
US11141153B2 (en) 2014-10-29 2021-10-12 Cilag Gmbh International Staple cartridges comprising driver arrangements
PL3215133T3 (pl) * 2014-11-05 2021-06-14 Selecta Biosciences, Inc. Sposoby i kompozycje związane z zastosowaniem związków powierzchniowo czynnych o niskiej hlb do wytwarzania syntetycznych nanonośników zawierających rapalog
US9844376B2 (en) 2014-11-06 2017-12-19 Ethicon Llc Staple cartridge comprising a releasable adjunct material
US10736636B2 (en) 2014-12-10 2020-08-11 Ethicon Llc Articulatable surgical instrument system
RU2703684C2 (ru) 2014-12-18 2019-10-21 ЭТИКОН ЭНДО-СЕРДЖЕРИ, ЭлЭлСи Хирургический инструмент с упором, который выполнен с возможностью избирательного перемещения относительно кассеты со скобами вокруг дискретной неподвижной оси
US10004501B2 (en) 2014-12-18 2018-06-26 Ethicon Llc Surgical instruments with improved closure arrangements
US9987000B2 (en) 2014-12-18 2018-06-05 Ethicon Llc Surgical instrument assembly comprising a flexible articulation system
US9844374B2 (en) 2014-12-18 2017-12-19 Ethicon Llc Surgical instrument systems comprising an articulatable end effector and means for adjusting the firing stroke of a firing member
US9844375B2 (en) 2014-12-18 2017-12-19 Ethicon Llc Drive arrangements for articulatable surgical instruments
US10085748B2 (en) 2014-12-18 2018-10-02 Ethicon Llc Locking arrangements for detachable shaft assemblies with articulatable surgical end effectors
US11786457B2 (en) 2015-01-30 2023-10-17 President And Fellows Of Harvard College Peritumoral and intratumoral materials for cancer therapy
US11154301B2 (en) 2015-02-27 2021-10-26 Cilag Gmbh International Modular stapling assembly
US10245033B2 (en) 2015-03-06 2019-04-02 Ethicon Llc Surgical instrument comprising a lockable battery housing
US10441279B2 (en) 2015-03-06 2019-10-15 Ethicon Llc Multiple level thresholds to modify operation of powered surgical instruments
JP2020121162A (ja) 2015-03-06 2020-08-13 エシコン エルエルシーＥｔｈｉｃｏｎ ＬＬＣ 測定の安定性要素、クリープ要素、及び粘弾性要素を決定するためのセンサデータの時間依存性評価
US10052044B2 (en) 2015-03-06 2018-08-21 Ethicon Llc Time dependent evaluation of sensor data to determine stability, creep, and viscoelastic elements of measures
US9993248B2 (en) 2015-03-06 2018-06-12 Ethicon Endo-Surgery, Llc Smart sensors with local signal processing
US10390825B2 (en) 2015-03-31 2019-08-27 Ethicon Llc Surgical instrument with progressive rotary drive systems
JP7094533B2 (ja) 2015-04-10 2022-07-04 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 免疫細胞捕捉デバイスおよびその製造および使用方法
CN104758261A (zh) * 2015-04-30 2015-07-08 中国医学科学院生物医学工程研究所 淫羊藿苷plga纳米粒子及制备方法及用途
WO2016196691A2 (en) 2015-06-01 2016-12-08 California Institute Of Technology Compositions and methods for screening t cells with antigens for specific populations
EP3310342A4 (en) * 2015-06-16 2019-03-06 The Trustees of the University of Pennsylvania INORGANIC PARTICLES WITH QUICK-LOAD PROLONGED RELEASE IN DRUG SUBSTANCE
WO2017011685A1 (en) * 2015-07-15 2017-01-19 Celator Pharmaceuticals, Inc. Improved nanoparticle delivery systems
US10933124B2 (en) 2015-07-16 2021-03-02 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of transplantation and disease treatment
US11260027B2 (en) 2015-07-29 2022-03-01 Musc Foundation For Research Development Donor organ pre-treatment formulation
US10835249B2 (en) 2015-08-17 2020-11-17 Ethicon Llc Implantable layers for a surgical instrument
EP3347053B1 (en) 2015-09-13 2022-05-25 The Research Foundation For State University Of New York Functional, segregated, charged telodendrimers and nanocarriers and methods of making and using same
RS63030B1 (sr) 2015-09-17 2022-04-29 Modernatx Inc Jedinjenja i kompozicije za intracelularno isporučivanje terapeutskih sredstava
US10105139B2 (en) 2015-09-23 2018-10-23 Ethicon Llc Surgical stapler having downstream current-based motor control
US10238386B2 (en) 2015-09-23 2019-03-26 Ethicon Llc Surgical stapler having motor control based on an electrical parameter related to a motor current
KR102514116B1 (ko) 2015-09-24 2023-03-23 삼성전자주식회사 반도체 나노결정 입자 및 이를 포함하는 소자
US10299878B2 (en) 2015-09-25 2019-05-28 Ethicon Llc Implantable adjunct systems for determining adjunct skew
US10561420B2 (en) * 2015-09-30 2020-02-18 Ethicon Llc Tubular absorbable constructs
US10285699B2 (en) 2015-09-30 2019-05-14 Ethicon Llc Compressible adjunct
US11890015B2 (en) 2015-09-30 2024-02-06 Cilag Gmbh International Compressible adjunct with crossing spacer fibers
US10980539B2 (en) 2015-09-30 2021-04-20 Ethicon Llc Implantable adjunct comprising bonded layers
WO2017096262A1 (en) * 2015-12-04 2017-06-08 Jomoco, Corp. Compositions and methods to mitigate or prevent an immune response to an immunogenic therapeutic molecule in non-human primates
MD3386484T2 (ro) 2015-12-10 2022-11-30 Modernatx Inc Compoziții și metode de livrare a unor agenți terapeutici
US11433136B2 (en) 2015-12-18 2022-09-06 The General Hospital Corporation Polyacetal polymers, conjugates, particles and uses thereof
JP7114465B2 (ja) 2015-12-22 2022-08-08 モデルナティエックス インコーポレイテッド 薬剤の細胞内送達のための化合物および組成物
EP3394093B1 (en) 2015-12-23 2022-01-26 Modernatx, Inc. Methods of using ox40 ligand encoding polynucleotides
US10292704B2 (en) 2015-12-30 2019-05-21 Ethicon Llc Mechanisms for compensating for battery pack failure in powered surgical instruments
US10265068B2 (en) 2015-12-30 2019-04-23 Ethicon Llc Surgical instruments with separable motors and motor control circuits
US10368865B2 (en) 2015-12-30 2019-08-06 Ethicon Llc Mechanisms for compensating for drivetrain failure in powered surgical instruments
MA43587A (fr) 2016-01-10 2018-11-14 Modernatx Inc Arnm thérapeutiques codant pour des anticorps anti-ctla-4
CN115487351A (zh) 2016-02-06 2022-12-20 哈佛学院校长同事会 重塑造血巢以重建免疫
US11213293B2 (en) 2016-02-09 2022-01-04 Cilag Gmbh International Articulatable surgical instruments with single articulation link arrangements
BR112018016098B1 (pt) 2016-02-09 2023-02-23 Ethicon Llc Instrumento cirúrgico
US11224426B2 (en) 2016-02-12 2022-01-18 Cilag Gmbh International Mechanisms for compensating for drivetrain failure in powered surgical instruments
US10448948B2 (en) 2016-02-12 2019-10-22 Ethicon Llc Mechanisms for compensating for drivetrain failure in powered surgical instruments
US20170258927A1 (en) * 2016-03-11 2017-09-14 Selecta Biosciences, Inc. Formulations and doses of pegylated uricase
US11607239B2 (en) 2016-04-15 2023-03-21 Cilag Gmbh International Systems and methods for controlling a surgical stapling and cutting instrument
US10335145B2 (en) 2016-04-15 2019-07-02 Ethicon Llc Modular surgical instrument with configurable operating mode
US10828028B2 (en) 2016-04-15 2020-11-10 Ethicon Llc Surgical instrument with multiple program responses during a firing motion
US10426467B2 (en) 2016-04-15 2019-10-01 Ethicon Llc Surgical instrument with detection sensors
US11179150B2 (en) 2016-04-15 2021-11-23 Cilag Gmbh International Systems and methods for controlling a surgical stapling and cutting instrument
US10357247B2 (en) 2016-04-15 2019-07-23 Ethicon Llc Surgical instrument with multiple program responses during a firing motion
US10456137B2 (en) 2016-04-15 2019-10-29 Ethicon Llc Staple formation detection mechanisms
US10492783B2 (en) 2016-04-15 2019-12-03 Ethicon, Llc Surgical instrument with improved stop/start control during a firing motion
US20170296173A1 (en) 2016-04-18 2017-10-19 Ethicon Endo-Surgery, Llc Method for operating a surgical instrument
US11317917B2 (en) 2016-04-18 2022-05-03 Cilag Gmbh International Surgical stapling system comprising a lockable firing assembly
US10426469B2 (en) 2016-04-18 2019-10-01 Ethicon Llc Surgical instrument comprising a primary firing lockout and a secondary firing lockout
EP3251662A1 (en) * 2016-06-07 2017-12-06 Tolerogenics S.à.r.l. Matrix-embedded tolerance-promotion adjuvants for subcutaneous immunotherapy
NL2017204B1 (en) 2016-06-08 2017-12-18 Kei International Ltd Solid substrate comprising antigens immobilised thereto, biosensor comprising said solid substrate and method for detecting the presence of mycobacterial material in a sample
AU2017283480A1 (en) 2016-06-13 2019-01-24 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
JP2018012694A (ja) * 2016-07-12 2018-01-25 日本化薬株式会社 ラパマイシン類結合ブロック共重合体
JP2019522486A (ja) 2016-07-13 2019-08-15 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 抗原提示細胞模倣足場およびそれを作製および使用するための方法
US20180092983A1 (en) * 2016-10-05 2018-04-05 Tian Xin Wang Methods and reagents to treat autoimmune diseases and allergy
US20190008900A1 (en) * 2017-07-07 2019-01-10 Tian Xin Wang Methods and reagents to treat autoimmune diseases and allergy
US20210363220A1 (en) * 2016-10-05 2021-11-25 Tianxin Wang Methods and reagents to treat autoimmune diseases and allergy
US10398732B2 (en) 2016-10-13 2019-09-03 Marshall University Research Corporation Compositions and methods for treating striated muscle injury, treating striated muscle atrophy and/or for promoting striated muscle growth
US11583504B2 (en) 2016-11-08 2023-02-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
WO2018104540A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Curevac Ag Rnas for wound healing
EP3808380A1 (en) 2016-12-08 2021-04-21 CureVac AG Rna for treatment or prophylaxis of a liver disease
US10537325B2 (en) 2016-12-21 2020-01-21 Ethicon Llc Staple forming pocket arrangement to accommodate different types of staples
JP7010956B2 (ja) 2016-12-21 2022-01-26 エシコン エルエルシー 組織をステープル留めする方法
US11419606B2 (en) 2016-12-21 2022-08-23 Cilag Gmbh International Shaft assembly comprising a clutch configured to adapt the output of a rotary firing member to two different systems
JP6983893B2 (ja) 2016-12-21 2021-12-17 エシコン エルエルシーEthicon LLC 外科用エンドエフェクタ及び交換式ツールアセンブリのためのロックアウト構成
US20180168625A1 (en) 2016-12-21 2018-06-21 Ethicon Endo-Surgery, Llc Surgical stapling instruments with smart staple cartridges
US20180168575A1 (en) 2016-12-21 2018-06-21 Ethicon Endo-Surgery, Llc Surgical stapling systems
US20180168633A1 (en) 2016-12-21 2018-06-21 Ethicon Endo-Surgery, Llc Surgical stapling instruments and staple-forming anvils
US20180168615A1 (en) 2016-12-21 2018-06-21 Ethicon Endo-Surgery, Llc Method of deforming staples from two different types of staple cartridges with the same surgical stapling instrument
US10779823B2 (en) 2016-12-21 2020-09-22 Ethicon Llc Firing member pin angle
US10973516B2 (en) 2016-12-21 2021-04-13 Ethicon Llc Surgical end effectors and adaptable firing members therefor
CN110087565A (zh) 2016-12-21 2019-08-02 爱惜康有限责任公司 外科缝合系统
US10980536B2 (en) 2016-12-21 2021-04-20 Ethicon Llc No-cartridge and spent cartridge lockout arrangements for surgical staplers
US10588631B2 (en) 2016-12-21 2020-03-17 Ethicon Llc Surgical instruments with positive jaw opening features
US10675025B2 (en) 2016-12-21 2020-06-09 Ethicon Llc Shaft assembly comprising separately actuatable and retractable systems
US11134942B2 (en) 2016-12-21 2021-10-05 Cilag Gmbh International Surgical stapling instruments and staple-forming anvils
US10682138B2 (en) 2016-12-21 2020-06-16 Ethicon Llc Bilaterally asymmetric staple forming pocket pairs
US11542316B2 (en) * 2017-01-04 2023-01-03 Worg Pharmaceuticals (Zhejiang) Co., Ltd. S-Arrestin peptides and therapeutic uses thereof
AU2018205496A1 (en) * 2017-01-07 2019-07-25 Selecta Biosciences, Inc. Patterned dosing of immunosuppressants coupled to synthetic nanocarriers
US11555178B2 (en) 2017-01-18 2023-01-17 Yeda Research And Development Co. Ltd. Genetically modified veto cells and use of same in immunotherapy
US10751368B2 (en) 2017-01-18 2020-08-25 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of transplantation and disease treatment
BR112019018748A2 (pt) 2017-03-11 2020-04-07 Selecta Biosciences Inc métodos e composições relacionados ao tratamento combinado com anti-inflamatórios e nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor
JP7332478B2 (ja) 2017-03-15 2023-08-23 モデルナティエックス インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子製剤
ES2911186T3 (es) 2017-03-15 2022-05-18 Modernatx Inc Formas cristalinas de aminolípidos
SG11201907916TA (en) 2017-03-15 2019-09-27 Modernatx Inc Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
WO2018187590A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Modernatx, Inc. Reduction or elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
CA3060514A1 (en) 2017-04-20 2018-10-25 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods for treating lung inflammation
WO2018232357A1 (en) 2017-06-15 2018-12-20 Modernatx, Inc. Rna formulations
US11382638B2 (en) 2017-06-20 2022-07-12 Cilag Gmbh International Closed loop feedback control of motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument based on measured time over a specified displacement distance
US10980537B2 (en) 2017-06-20 2021-04-20 Ethicon Llc Closed loop feedback control of motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument based on measured time over a specified number of shaft rotations
US10779820B2 (en) 2017-06-20 2020-09-22 Ethicon Llc Systems and methods for controlling motor speed according to user input for a surgical instrument
US11071554B2 (en) 2017-06-20 2021-07-27 Cilag Gmbh International Closed loop feedback control of motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument based on magnitude of velocity error measurements
US10307170B2 (en) 2017-06-20 2019-06-04 Ethicon Llc Method for closed loop control of motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument
US11653914B2 (en) 2017-06-20 2023-05-23 Cilag Gmbh International Systems and methods for controlling motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument according to articulation angle of end effector
US11517325B2 (en) 2017-06-20 2022-12-06 Cilag Gmbh International Closed loop feedback control of motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument based on measured displacement distance traveled over a specified time interval
US10888321B2 (en) 2017-06-20 2021-01-12 Ethicon Llc Systems and methods for controlling velocity of a displacement member of a surgical stapling and cutting instrument
US10881399B2 (en) 2017-06-20 2021-01-05 Ethicon Llc Techniques for adaptive control of motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument
US11090046B2 (en) 2017-06-20 2021-08-17 Cilag Gmbh International Systems and methods for controlling displacement member motion of a surgical stapling and cutting instrument
US11266405B2 (en) 2017-06-27 2022-03-08 Cilag Gmbh International Surgical anvil manufacturing methods
US11090049B2 (en) 2017-06-27 2021-08-17 Cilag Gmbh International Staple forming pocket arrangements
US10993716B2 (en) 2017-06-27 2021-05-04 Ethicon Llc Surgical anvil arrangements
US11324503B2 (en) 2017-06-27 2022-05-10 Cilag Gmbh International Surgical firing member arrangements
US11564686B2 (en) 2017-06-28 2023-01-31 Cilag Gmbh International Surgical shaft assemblies with flexible interfaces
US11484310B2 (en) 2017-06-28 2022-11-01 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a shaft including a closure tube profile
US10588633B2 (en) 2017-06-28 2020-03-17 Ethicon Llc Surgical instruments with open and closable jaws and axially movable firing member that is initially parked in close proximity to the jaws prior to firing
USD906355S1 (en) 2017-06-28 2020-12-29 Ethicon Llc Display screen or portion thereof with a graphical user interface for a surgical instrument
EP4070740A1 (en) 2017-06-28 2022-10-12 Cilag GmbH International Surgical instrument comprising selectively actuatable rotatable couplers
US10903685B2 (en) 2017-06-28 2021-01-26 Ethicon Llc Surgical shaft assemblies with slip ring assemblies forming capacitive channels
US10765427B2 (en) 2017-06-28 2020-09-08 Ethicon Llc Method for articulating a surgical instrument
US11259805B2 (en) 2017-06-28 2022-03-01 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising firing member supports
US11246592B2 (en) 2017-06-28 2022-02-15 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an articulation system lockable to a frame
US10932772B2 (en) 2017-06-29 2021-03-02 Ethicon Llc Methods for closed loop velocity control for robotic surgical instrument
US11304695B2 (en) 2017-08-03 2022-04-19 Cilag Gmbh International Surgical system shaft interconnection
US11944300B2 (en) 2017-08-03 2024-04-02 Cilag Gmbh International Method for operating a surgical system bailout
US11974742B2 (en) 2017-08-03 2024-05-07 Cilag Gmbh International Surgical system comprising an articulation bailout
US11471155B2 (en) 2017-08-03 2022-10-18 Cilag Gmbh International Surgical system bailout
EP3675817A1 (en) 2017-08-31 2020-07-08 Modernatx, Inc. Methods of making lipid nanoparticles
EP3678701A4 (en) 2017-09-05 2021-12-01 Torque Therapeutics, Inc. THERAPEUTIC PROTEIN COMPOSITIONS AND METHOD FOR MANUFACTURING AND USING THEREOF
EP4183882A1 (en) 2017-09-08 2023-05-24 MiNA Therapeutics Limited Stabilized hnf4a sarna compositions and methods of use
US20200208152A1 (en) 2017-09-08 2020-07-02 Mina Therapeutics Limited Stabilized sarna compositions and methods of use
USD907648S1 (en) 2017-09-29 2021-01-12 Ethicon Llc Display screen or portion thereof with animated graphical user interface
US11399829B2 (en) 2017-09-29 2022-08-02 Cilag Gmbh International Systems and methods of initiating a power shutdown mode for a surgical instrument
USD907647S1 (en) 2017-09-29 2021-01-12 Ethicon Llc Display screen or portion thereof with animated graphical user interface
US20220025015A1 (en) * 2017-10-03 2022-01-27 Tianxin Wang Methods, compositions and therapeutical vaccine for autoimmune diseases and allergy treatment
CA3077084A1 (en) * 2017-10-05 2019-04-11 Epivax, Inc. Regulatory t cell epitopes
US11134944B2 (en) 2017-10-30 2021-10-05 Cilag Gmbh International Surgical stapler knife motion controls
US11090075B2 (en) 2017-10-30 2021-08-17 Cilag Gmbh International Articulation features for surgical end effector
US10842490B2 (en) 2017-10-31 2020-11-24 Ethicon Llc Cartridge body design with force reduction based on firing completion
US10869666B2 (en) 2017-12-15 2020-12-22 Ethicon Llc Adapters with control systems for controlling multiple motors of an electromechanical surgical instrument
US11033267B2 (en) 2017-12-15 2021-06-15 Ethicon Llc Systems and methods of controlling a clamping member firing rate of a surgical instrument
US10966718B2 (en) 2017-12-15 2021-04-06 Ethicon Llc Dynamic clamping assemblies with improved wear characteristics for use in connection with electromechanical surgical instruments
US10779826B2 (en) 2017-12-15 2020-09-22 Ethicon Llc Methods of operating surgical end effectors
US10828033B2 (en) 2017-12-15 2020-11-10 Ethicon Llc Handheld electromechanical surgical instruments with improved motor control arrangements for positioning components of an adapter coupled thereto
US10779825B2 (en) 2017-12-15 2020-09-22 Ethicon Llc Adapters with end effector position sensing and control arrangements for use in connection with electromechanical surgical instruments
US11197670B2 (en) 2017-12-15 2021-12-14 Cilag Gmbh International Surgical end effectors with pivotal jaws configured to touch at their respective distal ends when fully closed
US11071543B2 (en) 2017-12-15 2021-07-27 Cilag Gmbh International Surgical end effectors with clamping assemblies configured to increase jaw aperture ranges
USD910847S1 (en) 2017-12-19 2021-02-16 Ethicon Llc Surgical instrument assembly
US11020112B2 (en) 2017-12-19 2021-06-01 Ethicon Llc Surgical tools configured for interchangeable use with different controller interfaces
US10835330B2 (en) 2017-12-19 2020-11-17 Ethicon Llc Method for determining the position of a rotatable jaw of a surgical instrument attachment assembly
US11076853B2 (en) 2017-12-21 2021-08-03 Cilag Gmbh International Systems and methods of displaying a knife position during transection for a surgical instrument
US11129680B2 (en) 2017-12-21 2021-09-28 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a projector
US20190192151A1 (en) 2017-12-21 2019-06-27 Ethicon Llc Surgical instrument having a display comprising image layers
US11311290B2 (en) 2017-12-21 2022-04-26 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an end effector dampener
CN112384204B (zh) * 2018-02-26 2023-03-14 安托瑞斯公司 致耐受性脂质体及其使用方法
US11566246B2 (en) 2018-04-12 2023-01-31 Mina Therapeutics Limited SIRT1-saRNA compositions and methods of use
CN108841774B (zh) * 2018-05-02 2021-11-26 南开大学 一种双响应型纳米仿生界面的制备及其在细胞捕获与应需无损释放中的应用
CN108753716A (zh) * 2018-06-14 2018-11-06 杭州启澜生物医学技术有限公司 一种体外扩增人外周血cd3+t细胞的方法
EP3833762A4 (en) 2018-08-09 2022-09-28 Verseau Therapeutics, Inc. OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS FOR TARGETING CCR2 AND CSF1R AND THEIR USES
CN110836966A (zh) * 2018-08-15 2020-02-25 王镕 用于抗原特异性t细胞含量检测的检测纳米颗粒、检测方法及试剂盒等
US11039834B2 (en) 2018-08-20 2021-06-22 Cilag Gmbh International Surgical stapler anvils with staple directing protrusions and tissue stability features
US11045192B2 (en) 2018-08-20 2021-06-29 Cilag Gmbh International Fabricating techniques for surgical stapler anvils
USD914878S1 (en) 2018-08-20 2021-03-30 Ethicon Llc Surgical instrument anvil
US11207065B2 (en) 2018-08-20 2021-12-28 Cilag Gmbh International Method for fabricating surgical stapler anvils
US11253256B2 (en) 2018-08-20 2022-02-22 Cilag Gmbh International Articulatable motor powered surgical instruments with dedicated articulation motor arrangements
US11083458B2 (en) 2018-08-20 2021-08-10 Cilag Gmbh International Powered surgical instruments with clutching arrangements to convert linear drive motions to rotary drive motions
US10856870B2 (en) 2018-08-20 2020-12-08 Ethicon Llc Switching arrangements for motor powered articulatable surgical instruments
US11324501B2 (en) 2018-08-20 2022-05-10 Cilag Gmbh International Surgical stapling devices with improved closure members
US11291440B2 (en) 2018-08-20 2022-04-05 Cilag Gmbh International Method for operating a powered articulatable surgical instrument
US10912559B2 (en) 2018-08-20 2021-02-09 Ethicon Llc Reinforced deformable anvil tip for surgical stapler anvil
CN109439626B (zh) * 2018-11-09 2022-10-14 复旦大学附属中山医院 一种有助于体外获得Th22细胞的组合物及其用途
CN111388679A (zh) * 2019-01-03 2020-07-10 北京大学 蛋白质-螺旋聚氨基酸偶联物、其制备方法及用途
CN111574590B (zh) * 2019-02-18 2022-04-22 常州市第一人民医院 一种具有抗肿瘤功能的多肽及其应用
US11172929B2 (en) 2019-03-25 2021-11-16 Cilag Gmbh International Articulation drive arrangements for surgical systems
US11147553B2 (en) 2019-03-25 2021-10-19 Cilag Gmbh International Firing drive arrangements for surgical systems
US11696761B2 (en) 2019-03-25 2023-07-11 Cilag Gmbh International Firing drive arrangements for surgical systems
US11147551B2 (en) 2019-03-25 2021-10-19 Cilag Gmbh International Firing drive arrangements for surgical systems
EP3953473A1 (en) 2019-04-12 2022-02-16 MiNA Therapeutics Limited Sirt1-sarna compositions and methods of use
US11426251B2 (en) 2019-04-30 2022-08-30 Cilag Gmbh International Articulation directional lights on a surgical instrument
US11432816B2 (en) 2019-04-30 2022-09-06 Cilag Gmbh International Articulation pin for a surgical instrument
US11253254B2 (en) 2019-04-30 2022-02-22 Cilag Gmbh International Shaft rotation actuator on a surgical instrument
US11471157B2 (en) 2019-04-30 2022-10-18 Cilag Gmbh International Articulation control mapping for a surgical instrument
US11648009B2 (en) 2019-04-30 2023-05-16 Cilag Gmbh International Rotatable jaw tip for a surgical instrument
US11903581B2 (en) 2019-04-30 2024-02-20 Cilag Gmbh International Methods for stapling tissue using a surgical instrument
US11452528B2 (en) 2019-04-30 2022-09-27 Cilag Gmbh International Articulation actuators for a surgical instrument
AU2020277486A1 (en) * 2019-05-23 2022-01-27 Uti Limited Partnership Nanoparticles comprising non-classical MHC and uses thereof
US11638587B2 (en) 2019-06-28 2023-05-02 Cilag Gmbh International RFID identification systems for surgical instruments
US11478241B2 (en) 2019-06-28 2022-10-25 Cilag Gmbh International Staple cartridge including projections
US11298127B2 (en) 2019-06-28 2022-04-12 Cilag GmbH Interational Surgical stapling system having a lockout mechanism for an incompatible cartridge
US11291451B2 (en) 2019-06-28 2022-04-05 Cilag Gmbh International Surgical instrument with battery compatibility verification functionality
US11051807B2 (en) 2019-06-28 2021-07-06 Cilag Gmbh International Packaging assembly including a particulate trap
US11627959B2 (en) 2019-06-28 2023-04-18 Cilag Gmbh International Surgical instruments including manual and powered system lockouts
US11219455B2 (en) 2019-06-28 2022-01-11 Cilag Gmbh International Surgical instrument including a lockout key
US11376098B2 (en) 2019-06-28 2022-07-05 Cilag Gmbh International Surgical instrument system comprising an RFID system
US11298132B2 (en) 2019-06-28 2022-04-12 Cilag GmbH Inlernational Staple cartridge including a honeycomb extension
US11464601B2 (en) 2019-06-28 2022-10-11 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an RFID system for tracking a movable component
US11553971B2 (en) 2019-06-28 2023-01-17 Cilag Gmbh International Surgical RFID assemblies for display and communication
US11399837B2 (en) 2019-06-28 2022-08-02 Cilag Gmbh International Mechanisms for motor control adjustments of a motorized surgical instrument
US11259803B2 (en) 2019-06-28 2022-03-01 Cilag Gmbh International Surgical stapling system having an information encryption protocol
US11660163B2 (en) 2019-06-28 2023-05-30 Cilag Gmbh International Surgical system with RFID tags for updating motor assembly parameters
US11523822B2 (en) 2019-06-28 2022-12-13 Cilag Gmbh International Battery pack including a circuit interrupter
US11497492B2 (en) 2019-06-28 2022-11-15 Cilag Gmbh International Surgical instrument including an articulation lock
US11224497B2 (en) 2019-06-28 2022-01-18 Cilag Gmbh International Surgical systems with multiple RFID tags
US11426167B2 (en) 2019-06-28 2022-08-30 Cilag Gmbh International Mechanisms for proper anvil attachment surgical stapling head assembly
US11246678B2 (en) 2019-06-28 2022-02-15 Cilag Gmbh International Surgical stapling system having a frangible RFID tag
US11771419B2 (en) 2019-06-28 2023-10-03 Cilag Gmbh International Packaging for a replaceable component of a surgical stapling system
US11684434B2 (en) 2019-06-28 2023-06-27 Cilag Gmbh International Surgical RFID assemblies for instrument operational setting control
US11350938B2 (en) 2019-06-28 2022-06-07 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an aligned rfid sensor
WO2021041991A1 (en) * 2019-08-29 2021-03-04 Diomics Corporation Hydrophilic biopolymer medicament delivery mechanism
WO2021055833A1 (en) 2019-09-19 2021-03-25 Modernatx, Inc. Branched tail lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
EP4048807A1 (en) 2019-09-23 2022-08-31 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating apolipoprotein b (apob) gene expression
CA3147643A1 (en) 2019-09-23 2021-04-01 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating hepatocyte nuclear factor 4-alpha (hnf4.alpha.) gene expression
JP2022553345A (ja) * 2019-10-21 2022-12-22 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド 肝疾患および肝障害を処置するための方法および組成物
US20210206879A1 (en) * 2019-12-06 2021-07-08 Yale University Enhanced targeting platform
US11234698B2 (en) 2019-12-19 2022-02-01 Cilag Gmbh International Stapling system comprising a clamp lockout and a firing lockout
US11607219B2 (en) 2019-12-19 2023-03-21 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a detachable tissue cutting knife
US11701111B2 (en) 2019-12-19 2023-07-18 Cilag Gmbh International Method for operating a surgical stapling instrument
US11559304B2 (en) 2019-12-19 2023-01-24 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a rapid closure mechanism
US11576672B2 (en) 2019-12-19 2023-02-14 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a closure system including a closure member and an opening member driven by a drive screw
US11446029B2 (en) 2019-12-19 2022-09-20 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising projections extending from a curved deck surface
US11464512B2 (en) 2019-12-19 2022-10-11 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a curved deck surface
US11529139B2 (en) 2019-12-19 2022-12-20 Cilag Gmbh International Motor driven surgical instrument
US11911032B2 (en) 2019-12-19 2024-02-27 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a seating cam
US11529137B2 (en) 2019-12-19 2022-12-20 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising driver retention members
US11291447B2 (en) 2019-12-19 2022-04-05 Cilag Gmbh International Stapling instrument comprising independent jaw closing and staple firing systems
US11844520B2 (en) 2019-12-19 2023-12-19 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising driver retention members
US11931033B2 (en) 2019-12-19 2024-03-19 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a latch lockout
US11304696B2 (en) 2019-12-19 2022-04-19 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a powered articulation system
US11504122B2 (en) 2019-12-19 2022-11-22 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a nested firing member
WO2021174013A1 (en) * 2020-02-26 2021-09-02 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions using synthetic nanocarriers comprising immunosuppressant
CA3173528A1 (en) 2020-03-11 2021-09-16 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating forkhead box p3 (foxp3) gene expression
IL297274A (en) * 2020-04-14 2022-12-01 Selecta Biosciences Inc Methods and compositions for inducing autophagy
USD975278S1 (en) 2020-06-02 2023-01-10 Cilag Gmbh International Staple cartridge
USD975851S1 (en) 2020-06-02 2023-01-17 Cilag Gmbh International Staple cartridge
USD967421S1 (en) 2020-06-02 2022-10-18 Cilag Gmbh International Staple cartridge
USD975850S1 (en) 2020-06-02 2023-01-17 Cilag Gmbh International Staple cartridge
USD976401S1 (en) 2020-06-02 2023-01-24 Cilag Gmbh International Staple cartridge
USD974560S1 (en) 2020-06-02 2023-01-03 Cilag Gmbh International Staple cartridge
USD966512S1 (en) 2020-06-02 2022-10-11 Cilag Gmbh International Staple cartridge
US20220031346A1 (en) 2020-07-28 2022-02-03 Cilag Gmbh International Articulatable surgical instruments with articulation joints comprising flexible exoskeleton arrangements
US11779330B2 (en) 2020-10-29 2023-10-10 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a jaw alignment system
USD1013170S1 (en) 2020-10-29 2024-01-30 Cilag Gmbh International Surgical instrument assembly
US11717289B2 (en) 2020-10-29 2023-08-08 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an indicator which indicates that an articulation drive is actuatable
US11617577B2 (en) 2020-10-29 2023-04-04 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a sensor configured to sense whether an articulation drive of the surgical instrument is actuatable
US11931025B2 (en) 2020-10-29 2024-03-19 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a releasable closure drive lock
US11517390B2 (en) 2020-10-29 2022-12-06 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a limited travel switch
US11452526B2 (en) 2020-10-29 2022-09-27 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a staged voltage regulation start-up system
USD980425S1 (en) 2020-10-29 2023-03-07 Cilag Gmbh International Surgical instrument assembly
US11896217B2 (en) 2020-10-29 2024-02-13 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an articulation lock
US11844518B2 (en) 2020-10-29 2023-12-19 Cilag Gmbh International Method for operating a surgical instrument
US11534259B2 (en) 2020-10-29 2022-12-27 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an articulation indicator
CN112480244A (zh) * 2020-11-24 2021-03-12 华科同济干细胞基因工程有限公司 一种抗过敏性纳米抗体组合物、抗体测定方法及喷雾剂
US11737751B2 (en) 2020-12-02 2023-08-29 Cilag Gmbh International Devices and methods of managing energy dissipated within sterile barriers of surgical instrument housings
US11944296B2 (en) 2020-12-02 2024-04-02 Cilag Gmbh International Powered surgical instruments with external connectors
US11678882B2 (en) 2020-12-02 2023-06-20 Cilag Gmbh International Surgical instruments with interactive features to remedy incidental sled movements
US11849943B2 (en) 2020-12-02 2023-12-26 Cilag Gmbh International Surgical instrument with cartridge release mechanisms
US11890010B2 (en) 2020-12-02 2024-02-06 Cllag GmbH International Dual-sided reinforced reload for surgical instruments
US11627960B2 (en) 2020-12-02 2023-04-18 Cilag Gmbh International Powered surgical instruments with smart reload with separately attachable exteriorly mounted wiring connections
US11653915B2 (en) 2020-12-02 2023-05-23 Cilag Gmbh International Surgical instruments with sled location detection and adjustment features
US11653920B2 (en) 2020-12-02 2023-05-23 Cilag Gmbh International Powered surgical instruments with communication interfaces through sterile barrier
US11744581B2 (en) 2020-12-02 2023-09-05 Cilag Gmbh International Powered surgical instruments with multi-phase tissue treatment
GB2603454A (en) 2020-12-09 2022-08-10 Ucl Business Ltd Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
CN112807425A (zh) * 2021-01-14 2021-05-18 南方医科大学深圳医院 一种tTIM融合蛋白疫苗、制备方法及应用
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
US11793514B2 (en) 2021-02-26 2023-10-24 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising sensor array which may be embedded in cartridge body
US11723657B2 (en) 2021-02-26 2023-08-15 Cilag Gmbh International Adjustable communication based on available bandwidth and power capacity
US11701113B2 (en) 2021-02-26 2023-07-18 Cilag Gmbh International Stapling instrument comprising a separate power antenna and a data transfer antenna
US11749877B2 (en) 2021-02-26 2023-09-05 Cilag Gmbh International Stapling instrument comprising a signal antenna
US11730473B2 (en) 2021-02-26 2023-08-22 Cilag Gmbh International Monitoring of manufacturing life-cycle
US11744583B2 (en) 2021-02-26 2023-09-05 Cilag Gmbh International Distal communication array to tune frequency of RF systems
US11925349B2 (en) 2021-02-26 2024-03-12 Cilag Gmbh International Adjustment to transfer parameters to improve available power
US11950779B2 (en) 2021-02-26 2024-04-09 Cilag Gmbh International Method of powering and communicating with a staple cartridge
US11980362B2 (en) 2021-02-26 2024-05-14 Cilag Gmbh International Surgical instrument system comprising a power transfer coil
US11751869B2 (en) 2021-02-26 2023-09-12 Cilag Gmbh International Monitoring of multiple sensors over time to detect moving characteristics of tissue
US11812964B2 (en) 2021-02-26 2023-11-14 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a power management circuit
US11950777B2 (en) 2021-02-26 2024-04-09 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising an information access control system
US11696757B2 (en) 2021-02-26 2023-07-11 Cilag Gmbh International Monitoring of internal systems to detect and track cartridge motion status
US11717291B2 (en) 2021-03-22 2023-08-08 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising staples configured to apply different tissue compression
US11737749B2 (en) 2021-03-22 2023-08-29 Cilag Gmbh International Surgical stapling instrument comprising a retraction system
US11806011B2 (en) 2021-03-22 2023-11-07 Cilag Gmbh International Stapling instrument comprising tissue compression systems
US11759202B2 (en) 2021-03-22 2023-09-19 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising an implantable layer
US11826042B2 (en) 2021-03-22 2023-11-28 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a firing drive including a selectable leverage mechanism
US11826012B2 (en) 2021-03-22 2023-11-28 Cilag Gmbh International Stapling instrument comprising a pulsed motor-driven firing rack
US11723658B2 (en) 2021-03-22 2023-08-15 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a firing lockout
US11896219B2 (en) 2021-03-24 2024-02-13 Cilag Gmbh International Mating features between drivers and underside of a cartridge deck
US11896218B2 (en) 2021-03-24 2024-02-13 Cilag Gmbh International Method of using a powered stapling device
US11903582B2 (en) 2021-03-24 2024-02-20 Cilag Gmbh International Leveraging surfaces for cartridge installation
US11786243B2 (en) 2021-03-24 2023-10-17 Cilag Gmbh International Firing members having flexible portions for adapting to a load during a surgical firing stroke
US11832816B2 (en) 2021-03-24 2023-12-05 Cilag Gmbh International Surgical stapling assembly comprising nonplanar staples and planar staples
US11849945B2 (en) 2021-03-24 2023-12-26 Cilag Gmbh International Rotary-driven surgical stapling assembly comprising eccentrically driven firing member
US11744603B2 (en) 2021-03-24 2023-09-05 Cilag Gmbh International Multi-axis pivot joints for surgical instruments and methods for manufacturing same
US11849944B2 (en) 2021-03-24 2023-12-26 Cilag Gmbh International Drivers for fastener cartridge assemblies having rotary drive screws
US11793516B2 (en) 2021-03-24 2023-10-24 Cilag Gmbh International Surgical staple cartridge comprising longitudinal support beam
US11857183B2 (en) 2021-03-24 2024-01-02 Cilag Gmbh International Stapling assembly components having metal substrates and plastic bodies
US11786239B2 (en) 2021-03-24 2023-10-17 Cilag Gmbh International Surgical instrument articulation joint arrangements comprising multiple moving linkage features
US11944336B2 (en) 2021-03-24 2024-04-02 Cilag Gmbh International Joint arrangements for multi-planar alignment and support of operational drive shafts in articulatable surgical instruments
EP4314292A1 (en) 2021-03-26 2024-02-07 MiNA Therapeutics Limited Tmem173 sarna compositions and methods of use
JP2024515626A (ja) 2021-04-16 2024-04-10 アスクレピオス バイオファーマシューティカル， インコーポレイテッド 血液脳関門を横断し低減された液性応答を惹起する合理的ポリプロイドａａｖビリオン
US11918217B2 (en) 2021-05-28 2024-03-05 Cilag Gmbh International Stapling instrument comprising a staple cartridge insertion stop
CN113425702B (zh) * 2021-06-25 2022-08-26 中国药科大学 应用微流控技术制备纳米颗粒、制备方法及装置和用途
EP4367242A2 (en) 2021-07-07 2024-05-15 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating secreted frizzled receptor protein 1 (sfrp1) gene expression
CA3171750A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Tim SONNTAG Mrnas for treatment or prophylaxis of liver diseases
US11877745B2 (en) 2021-10-18 2024-01-23 Cilag Gmbh International Surgical stapling assembly having longitudinally-repeating staple leg clusters
US11980363B2 (en) 2021-10-18 2024-05-14 Cilag Gmbh International Row-to-row staple array variations
US11957337B2 (en) 2021-10-18 2024-04-16 Cilag Gmbh International Surgical stapling assembly with offset ramped drive surfaces
US11937816B2 (en) 2021-10-28 2024-03-26 Cilag Gmbh International Electrical lead arrangements for surgical instruments
WO2023099884A1 (en) 2021-12-01 2023-06-08 Mina Therapeutics Limited Pax6 sarna compositions and methods of use
GB202117758D0 (en) 2021-12-09 2022-01-26 Ucl Business Ltd Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
WO2023144193A1 (en) 2022-01-25 2023-08-03 CureVac SE Mrnas for treatment of hereditary tyrosinemia type i
WO2023161350A1 (en) 2022-02-24 2023-08-31 Io Biotech Aps Nucleotide delivery of cancer therapy
WO2023170435A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Mina Therapeutics Limited Il10 sarna compositions and methods of use
CN115475255A (zh) * 2022-06-14 2022-12-16 澳门科技大学 一种酶响应型二氧化硅释纳米制剂、制备方法及应用

Family Cites Families (310)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1995A (en) 1841-03-03 Latch of door and other locks
US934897A (en) 1907-08-08 1909-09-21 Frank Dutcher Fusee-cap.
US927297A (en) 1908-02-24 1909-07-06 Charles Tuckfield Engine.
US4946929A (en) 1983-03-22 1990-08-07 Massachusetts Institute Of Technology Bioerodible articles useful as implants and prostheses having predictable degradation rates
US6309669B1 (en) 1984-03-16 2001-10-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Therapeutic treatment and prevention of infections with a bioactive materials encapsulated within a biodegradable-biocompatible polymeric matrix
US4638045A (en) 1985-02-19 1987-01-20 Massachusetts Institute Of Technology Non-peptide polyamino acid bioerodible polymers
US4806621A (en) 1986-01-21 1989-02-21 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible, bioerodible, hydrophobic, implantable polyimino carbonate article
US5736372A (en) 1986-11-20 1998-04-07 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable synthetic polymeric fibrous matrix containing chondrocyte for in vivo production of a cartilaginous structure
CA1340581C (en) 1986-11-20 1999-06-08 Joseph P. Vacanti Chimeric neomorphogenesis of organs by controlled cellular implantation using artificial matrices
US5759830A (en) 1986-11-20 1998-06-02 Massachusetts Institute Of Technology Three-dimensional fibrous scaffold containing attached cells for producing vascularized tissue in vivo
ATE81467T1 (de) 1987-02-24 1992-10-15 Xoma Corp Immunosuppression bei der auf immunotoxin basierten behandlung von menschen.
US5912017A (en) 1987-05-01 1999-06-15 Massachusetts Institute Of Technology Multiwall polymeric microspheres
US5019379A (en) 1987-07-31 1991-05-28 Massachusetts Institute Of Technology Unsaturated polyanhydrides
JP2670680B2 (ja) 1988-02-24 1997-10-29 株式会社ビーエムジー 生理活性物質含有ポリ乳酸系微小球およびその製造法
US5010167A (en) 1989-03-31 1991-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Poly(amide-and imide-co-anhydride) for biological application
US5268455A (en) * 1989-05-25 1993-12-07 Genentech, Inc. Process for making biologically active polypeptides based on transforming growth factor-βsequences
US5399665A (en) 1992-11-05 1995-03-21 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymers for cell transplantation
US5679347A (en) 1992-12-10 1997-10-21 Brigham And Women's Hospital Methods of isolating CD1-presented antigens, vaccines comprising CD1-presented antigens, and cell lines for use in said methods
US5928647A (en) 1993-01-11 1999-07-27 Dana-Farber Cancer Institute Inducing cytotoxic T lymphocyte responses
US5512600A (en) 1993-01-15 1996-04-30 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of bonded fiber structures for cell implantation
US5514378A (en) 1993-02-01 1996-05-07 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible polymer membranes and methods of preparation of three dimensional membrane structures
WO1995003035A1 (en) 1993-07-23 1995-02-02 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes with enhanced stability for oral delivery
US5565215A (en) 1993-07-23 1996-10-15 Massachusettes Institute Of Technology Biodegradable injectable particles for imaging
US5543158A (en) 1993-07-23 1996-08-06 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable injectable nanoparticles
US5468729A (en) 1993-10-26 1995-11-21 Alpha 1 Biomedicals Method for treatment of autoimmune hepatitis
JP2930421B2 (ja) 1994-02-28 1999-08-03 メディノヴァ メディカル コンサルティング ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 薬剤組成物、その製造方法及びその使用方法
WO1995031480A1 (en) 1994-05-18 1995-11-23 S.P.I. Synthetic Peptides Incorporated Heterodimer polypeptide immunogen carrier composition and method
US6007845A (en) 1994-07-22 1999-12-28 Massachusetts Institute Of Technology Nanoparticles and microparticles of non-linear hydrophilic-hydrophobic multiblock copolymers
EP0804076A4 (en) 1994-10-19 1998-10-21 Genetic Therapy Inc GENTHERAPY THROUGH SIMULTANEOUS AND REPEATED ADMINISTRATION OF ADENOVIRUS AND IMMUNE SUPPRESSIVES
US5716404A (en) 1994-12-16 1998-02-10 Massachusetts Institute Of Technology Breast tissue engineering
DE69630514D1 (de) 1995-01-05 2003-12-04 Univ Michigan Oberflächen-modifizierte nanopartikel und verfahren für ihre herstellung und verwendung
US6251957B1 (en) 1995-02-24 2001-06-26 Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of reducing an immune response to a recombinant virus
US6123727A (en) 1995-05-01 2000-09-26 Massachusetts Institute Of Technology Tissue engineered tendons and ligaments
JP3462313B2 (ja) 1995-08-24 2003-11-05 キッコーマン株式会社 変異型ウリカーゼ、変異型ウリカーゼ遺伝子、新規な組み換え体ｄｎａ及び変異型ウリカーゼの製造法
EP0850051A2 (en) 1995-08-31 1998-07-01 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition for sustained release of an agent
US6095148A (en) 1995-11-03 2000-08-01 Children's Medical Center Corporation Neuronal stimulation using electrically conducting polymers
US5902599A (en) 1996-02-20 1999-05-11 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymer networks for use in orthopedic and dental applications
WO1998002441A2 (en) 1996-07-12 1998-01-22 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Non immunosuppressive antifungal rapalogs
EP0889954A1 (en) 1996-09-03 1999-01-13 Health Research, Inc. Treatment of antigen presenting cells to modulate antigen presenting cell function
US6368598B1 (en) 1996-09-16 2002-04-09 Jcrt Radiation Oncology Support Services, Inc. Drug complex for treatment of metastatic prostate cancer
US6060082A (en) 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
US5837752A (en) 1997-07-17 1998-11-17 Massachusetts Institute Of Technology Semi-interpenetrating polymer networks
DE69840600D1 (de) 1997-09-16 2009-04-09 Univ Oregon Health & Science Rekombinante mhc-moleküle welche nützlich sind für die manipulation von antigen-spezifischen t-zellen
EP1024829B1 (en) 1997-10-30 2008-12-17 Laboratorios LETI, S.L. Tolerogenic fragments of natural allergens
US6018817A (en) 1997-12-03 2000-01-25 International Business Machines Corporation Error correcting code retrofit method and apparatus for multiple memory configurations
US6254890B1 (en) 1997-12-12 2001-07-03 Massachusetts Institute Of Technology Sub-100nm biodegradable polymer spheres capable of transporting and releasing nucleic acids
US6197229B1 (en) 1997-12-12 2001-03-06 Massachusetts Institute Of Technology Method for high supercoiled DNA content microspheres
JP2001526900A (ja) 1997-12-23 2001-12-25 イントロヘーネ ベスローテン フェンノートシャップ 標的細胞の染色体ｄｎａへの外来遺伝子情報の組み込みに有用な、アデノ随伴ウイルスおよびアデノウイルスのキメラ組換えウイルス
WO1999034826A1 (en) 1998-01-09 1999-07-15 Circassia Limited Methods and compositions for desensitisation
FR2775435B1 (fr) 1998-02-27 2000-05-26 Bioalliance Pharma Nanoparticules comprenant au moins un polymere et au moins un compose apte a complexer un ou plusieurs principes actifs
US6506577B1 (en) 1998-03-19 2003-01-14 The Regents Of The University Of California Synthesis and crosslinking of catechol containing copolypeptides
US6632922B1 (en) 1998-03-19 2003-10-14 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
US6686446B2 (en) 1998-03-19 2004-02-03 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
SE9801288D0 (sv) 1998-04-14 1998-04-14 Astra Ab Vaccine delivery system and metod of production
US6436392B1 (en) 1998-05-20 2002-08-20 University Of Iowa Research Foundation Adeno-associated virus vectors
DE19827164A1 (de) 1998-06-18 1999-12-23 Merck Patent Gmbh Katalytisch Titan(IV)-oxid vermittelte geminale symmetrische Dialkylierung von Carbonsäureamiden
US6306640B1 (en) 1998-10-05 2001-10-23 Genzyme Corporation Melanoma antigenic peptides
DE69918146T2 (de) 1998-10-05 2005-07-07 Pharmexa A/S Verfahren zur therapeutischen impfung
US6759237B1 (en) 1998-11-05 2004-07-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus serotype 1 nucleic acid sequences, vectors and host cells containing same
WO2000032626A1 (en) 1998-11-25 2000-06-08 Regents Of The University Of Minnesota Methods of using epitope peptides of human pathogens
US6153217A (en) 1999-01-22 2000-11-28 Biodelivery Sciences, Inc. Nanocochleate formulations, process of preparation and method of delivery of pharmaceutical agents
US6558951B1 (en) 1999-02-11 2003-05-06 3M Innovative Properties Company Maturation of dendritic cells with immune response modifying compounds
US7238368B2 (en) 1999-04-23 2007-07-03 Alza Corporation Releasable linkage and compositions containing same
US7390780B2 (en) 1999-04-23 2008-06-24 Alza Corporation Gene delivery mediated by liposome-DNA complex with cleavable peg surface modification
EP1880736A1 (en) 1999-04-23 2008-01-23 Alza Corporation Releasable linkage and composition containing same
US6800296B1 (en) 1999-05-19 2004-10-05 Massachusetts Institute Of Technology Modification of surfaces using biological recognition events
DE19951970A1 (de) * 1999-10-28 2001-05-03 Bionetworks Gmbh Arzneimittel für die Toleranzinduktion
CN1406140A (zh) 2000-02-28 2003-03-26 吉倪塞思公司 纳米胶囊包封系统与方法
US20010055593A1 (en) 2000-03-14 2001-12-27 Joseph Sypek Use of rapamycin and agents that inhibit B7 activity in immunomodulation
WO2001085208A2 (en) 2000-05-05 2001-11-15 Cytos Biotechnology Ag Molecular antigen arrays and vaccines
AU2001265187A1 (en) 2000-05-30 2001-12-11 Baylor College Of Medicine Chimeric viral vectors for gene therapy
EP1290205B1 (en) 2000-06-01 2006-03-01 University Of North Carolina At Chapel Hill Duplexed parvovirus vectors
US20040204379A1 (en) 2000-06-19 2004-10-14 Cheng Seng H. Combination enzyme replacement, gene therapy and small molecule therapy for lysosomal storage diseases
US20020095135A1 (en) 2000-06-19 2002-07-18 David Meeker Combination enzyme replacement, gene therapy and small molecule therapy for lysosomal storage diseases
US20020014242A1 (en) 2000-07-31 2002-02-07 Abraham Scaria Use of rapamycin to inhibit immune response and induce tolerance to gene therapy vector and encoded transgene products
CA2319928A1 (en) 2000-09-18 2002-03-18 Vasogen Ireland Limited Apoptosis-mimicking synthetic entities and use thereof in medical treatments
GB0025414D0 (en) 2000-10-16 2000-11-29 Consejo Superior Investigacion Nanoparticles
US7097837B2 (en) 2001-02-19 2006-08-29 Pharmexa A/S Synthetic vaccine agents
AU2002338571A1 (en) 2001-04-11 2002-11-11 Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for suppressing immune responses
US6913915B2 (en) 2001-08-02 2005-07-05 Phoenix Pharmacologics, Inc. PEG-modified uricase
US6818732B2 (en) 2001-08-30 2004-11-16 The Regents Of The University Of California Transition metal initiators for controlled poly (beta-peptide) synthesis from beta-lactam monomers
CN1294268C (zh) 2001-09-03 2007-01-10 上海三维生物技术有限公司 可在肿瘤细胞内特异性复制并扩散的重组腺病毒载体
PT1436321E (pt) * 2001-10-19 2006-10-31 Isotechnika Inc Sintese de analogos de ciclosporina
ES2602352T3 (es) 2001-12-17 2017-02-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Secuencias de serotipo 8 de virus adenoasociado (VAA), vectores que las contienen y usos de las mismas
GB0207440D0 (en) 2002-03-28 2002-05-08 Ppl Therapeutics Scotland Ltd Tolerogenic antigen-presenting cells
US20040038303A1 (en) 2002-04-08 2004-02-26 Unger Gretchen M. Biologic modulations with nanoparticles
US7485314B2 (en) 2002-05-06 2009-02-03 Los Angeles Biomedical Research Institute At Harbor-Ucla Medical Center Induction of antigen specific immunologic tolerance
AU2003228768B2 (en) 2002-05-22 2009-02-05 The Cleveland Clinic Foundation Induction and maintenance of tolerance to composite tissue allografts
ATE469135T1 (de) 2002-05-30 2010-06-15 Scripps Research Inst Kupferkatalysierte ligierung von aziden und acetylenen
AU2003237416A1 (en) 2002-06-04 2003-12-19 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Novel tolerogenic dendritic cells and therapeutic uses therefor
JP2005532067A (ja) * 2002-07-03 2005-10-27 コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド 刺激性免疫応答用の核酸組成物
US20060121029A1 (en) * 2002-08-30 2006-06-08 Hiroshi Shiku Method and composition for regulating the activity of regulatory t cells
US9809654B2 (en) 2002-09-27 2017-11-07 Vaccinex, Inc. Targeted CD1d molecules
DK1565183T3 (da) 2002-11-29 2008-12-01 Maria Grazia Roncarolo Rapamycin og IL-10 til behandling af autoimmune sygdomme
WO2004071493A1 (en) 2003-02-17 2004-08-26 Peter Burkhard Peptidic nanoparticles as drug delivery and antigen display systems
US7510872B2 (en) 2003-02-26 2009-03-31 Nationwide Children's Hospital Recombinant adeno-associated virus production
JP4914209B2 (ja) * 2003-03-14 2012-04-11 ワイス ヒトｉｌ−２１受容体に対する抗体および該抗体の使用
AU2004224762B2 (en) 2003-03-26 2009-12-24 Kuros Us Llc Packaging of immunostimulatory oligonucleotides into virus-like particles: method of preparation and use
US7731967B2 (en) 2003-04-30 2010-06-08 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Compositions for inducing immune responses
US7186699B2 (en) 2003-06-03 2007-03-06 Cell Genesys, Inc. Method for treating cancer by vector-mediated delivery of one or more anti-angiogenic or pro-apoptotic genes
US7727969B2 (en) 2003-06-06 2010-06-01 Massachusetts Institute Of Technology Controlled release nanoparticle having bound oligonucleotide for targeted delivery
EP1486567A1 (en) 2003-06-11 2004-12-15 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Improved adeno-associated virus (AAV) vector for gene therapy
US20060251711A1 (en) 2003-08-28 2006-11-09 Vgsk Technologies, Inc. Sterically stabilized carrier for aerosol therapeutics, compositions and methods for treating diseases of the respiratory tract of a mammal
US7943179B2 (en) 2003-09-23 2011-05-17 Massachusetts Institute Of Technology pH triggerable polymeric particles
DE10347710B4 (de) 2003-10-14 2006-03-30 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Rekombinante Impfstoffe und deren Verwendung
US20080160089A1 (en) 2003-10-14 2008-07-03 Medivas, Llc Vaccine delivery compositions and methods of use
CA2548179A1 (en) 2003-12-02 2005-07-21 Cytimmune Sciences, Inc. Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies
WO2005055949A2 (en) 2003-12-09 2005-06-23 The Children's Hospital Of Philadelphia Sustained release preparations composed of biocompatible complex microparticles
MXPA06006738A (es) 2003-12-19 2006-08-31 Univ North Carolina Metodos para fabricar micro- y nano-estructuras aisladas utilizando litografia suave o de impresion.
BRPI0509755A (pt) * 2004-04-08 2007-10-16 Applied Research Systems composição compreendendo um inibidor de jnk e ciclosporina
CA2566506A1 (en) 2004-06-01 2005-12-15 Innogenetics N.V. Peptides for inducing a ctl and/or htl response to hepatitis c virus
US7713550B2 (en) 2004-06-15 2010-05-11 Andrx Corporation Controlled release sodium valproate formulation
US7534448B2 (en) 2004-07-01 2009-05-19 Yale University Methods of treatment with drug loaded polymeric materials
WO2006014579A2 (en) 2004-07-08 2006-02-09 The Regents Of California Enhancing class i antigen presentation with synthetic sequences
FR2874384B1 (fr) 2004-08-17 2010-07-30 Genethon Vecteur viral adeno-associe pour realiser du saut d'exons dans un gene codant une proteine a domaines dispensables
GB0421296D0 (en) 2004-09-24 2004-10-27 Angiogene Pharm Ltd Bioreductively-activated prodrugs
WO2006041890A2 (en) 2004-10-05 2006-04-20 Tanox, Inc. Treatment and prevention of hypersensitivity and/or anaphylaxis with anti-ige antibodies in patients receiving replacement therapy
WO2007001448A2 (en) 2004-11-04 2007-01-04 Massachusetts Institute Of Technology Coated controlled release polymer particles as efficient oral delivery vehicles for biopharmaceuticals
JP2008524239A (ja) 2004-12-15 2008-07-10 エラン ファーマ インターナショナル リミティド ナノ粒子のタクロリムス製剤
US20090028948A1 (en) 2004-12-31 2009-01-29 Iceutica Pty Ltd Nanoparticle composition and methods of synthesis thereof
GB0504206D0 (en) 2005-03-01 2005-04-06 Glaxo Group Ltd Combination therapy
EP1858511A1 (en) 2005-03-08 2007-11-28 LifeCycle Pharma A/S Pharmaceutical compositions comprising sirolimus and/or an analogue thereof
EP1868576A2 (en) 2005-03-17 2007-12-26 Elan Pharma International Limited Injectable compositions of nanoparticulate immunosuppressive compounds
US7884109B2 (en) 2005-04-05 2011-02-08 Wyeth Llc Purine and imidazopyridine derivatives for immunosuppression
US8173167B2 (en) * 2005-04-12 2012-05-08 Wisconsin Alumni Research Foundation Micelle composition of polymer and passenger drug
US20080305161A1 (en) 2005-04-13 2008-12-11 Pfizer Inc Injectable depot formulations and methods for providing sustained release of nanoparticle compositions
WO2006122223A2 (en) 2005-05-10 2006-11-16 Emory University Strategies for delivery of active agents using micelles and particles
TW200711649A (en) 2005-06-17 2007-04-01 Combinatorx Inc Combination therapy for the treatment of immunoinflammatory disorders
MX2007016039A (es) * 2005-06-17 2008-10-27 Univ North Carolina Metodos, sistemas y materiales de fabricacion de nanoparticulas.
WO2007003054A1 (en) 2005-07-06 2007-01-11 Shoichet Molly S Method of biomolecule immobilization on polymers using click-type chemistry
JPWO2007024026A1 (ja) 2005-08-25 2009-03-05 明石　満 Ｔ細胞認識エピトープペプチドを固定化又は内包化した生分解性ナノ粒子
CN1979166A (zh) 2005-11-30 2007-06-13 北京有色金属研究总院 一种制备免疫检测用纳米胶体金的工艺方法及其反应装置
CA2631760A1 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Robert A. Brodsky Use of high-dose oxazaphosphorine drugs for treating immune disorders
US20070128289A1 (en) 2005-12-07 2007-06-07 Zhao Jonathon Z Nano-and/or micro-particulate formulations for local injection-based treatment of vascular diseases
MX2008007287A (es) 2005-12-08 2008-10-27 Univ Louisville Res Found Metodos y composiciones para expandir celulas reguladoras t.
AU2006325225B2 (en) 2005-12-14 2013-07-04 Cytos Biotechnology Ag Immunostimulatory nucleic acid packaged particles for the treatment of hypersensitivity
US9267937B2 (en) 2005-12-15 2016-02-23 Massachusetts Institute Of Technology System for screening particles
US20100028450A1 (en) 2006-01-25 2010-02-04 The Board Of Trustees Of The University Of Illinoi S Tolerogenic biodegradable artificial antigen presenting system
DK1984007T3 (en) 2006-02-13 2015-12-07 Oncolytics Biotech Inc Application of Low-dose local immunosuppression for amplification of viral oncolytic therapy
US8021689B2 (en) * 2006-02-21 2011-09-20 Ecole Polytechnique Federale de Lausanne (“EPFL”) Nanoparticles for immunotherapy
AU2007221154A1 (en) 2006-02-24 2007-09-07 Novartis Ag Microparticles containing biodegradable polymer and cationic polysaccharide for use in immunogenic compositions
US8568487B2 (en) 2006-02-27 2013-10-29 Biomet Manufacturing, Llc Patient-specific hip joint devices
TW200806789A (en) 2006-03-27 2008-02-01 Globeimmune Inc RAS mutation and compositions and methods related thereto
CA2648099C (en) 2006-03-31 2012-05-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc System for targeted delivery of therapeutic agents
US20070254897A1 (en) 2006-04-28 2007-11-01 Resolvyx Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment of cardiovascular disease
CN101573141B (zh) 2006-05-15 2016-05-04 麻省理工学院 用于功能性颗粒的聚合物
WO2007137117A2 (en) 2006-05-17 2007-11-29 Massachusetts Institute Of Technology Aptamer-directed drug delivery
MX2008015529A (es) 2006-06-12 2009-01-13 Cytos Biotechnology Ag Procesos para empacar oligonucleotidos en particulas similares a virus de bacteriofagos de arn.
WO2007150030A2 (en) 2006-06-23 2007-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Microfluidic synthesis of organic nanoparticles
EP1880729A1 (en) 2006-07-20 2008-01-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of soluble CD160 to suppress immunity
WO2008019142A2 (en) 2006-08-04 2008-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Oligonucleotide systems for targeted intracellular delivery
US20080171059A1 (en) 2006-08-07 2008-07-17 Shanshan Wu Howland Methods and compositions for increased priming of t-cells through cross-presentation of exogenous antigens
CN101500937A (zh) 2006-08-11 2009-08-05 万能药生物有限公司 用于递送活性成分的粒子及其制备方法和组合物
SI2051987T1 (sl) 2006-08-18 2015-02-27 Argos Therapeutics, Inc. Uporaba cd83 v kombinacijskih terapijah
US20120269774A1 (en) 2006-09-21 2012-10-25 Medistem Laboratories, Inc Allogeneic stem cell transplants in non-conditioned recipients
MX2009003680A (es) 2006-10-05 2009-07-17 Univ Johns Hopkins Formulaciones orales, parenterales y topicas dispersables en agua para farmacos deficientemente solubles en agua con el uso de nanoparticulas polimericas inteligentes.
CN101646418B (zh) * 2006-10-12 2013-07-17 昆士兰大学 调节免疫应答的组合物和方法
EP3590503A1 (en) * 2006-10-12 2020-01-08 The University of Queensland Compositions and methods for modulating immune responses
US20100112077A1 (en) 2006-11-06 2010-05-06 Abraxis Bioscience, Llc Nanoparticles of paclitaxel and albumin in combination with bevacizumab against cancer
WO2008147456A2 (en) 2006-11-20 2008-12-04 Massachusetts Institute Of Technology Drug delivery systems using fc fragments
WO2008064357A2 (en) 2006-11-22 2008-05-29 University Of Florida Research Foundation, Inc. Nanoparticles for protection of cells from oxidative stress
WO2008069942A2 (en) 2006-12-05 2008-06-12 Biogen Idec Ma Inc. Novel methods of enhancing delivery of a gene therapy vector using steroids
WO2008071774A1 (en) 2006-12-14 2008-06-19 Cytos Biotechnology Ag Purification process for coat protein of rna bacteriophages
ES2533566T3 (es) 2006-12-29 2015-04-13 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Diana diagnóstica y terapéutica para enfermedades autoinmunitarias y sus usos
CA2678618C (en) 2007-02-21 2019-03-12 Vaccinex, Inc. Modulation of nkt cell activity with antigen-loaded cd1d molecules
KR20080078204A (ko) 2007-02-22 2008-08-27 크레아젠 주식회사 면역억제능이 증가된 간엽줄기세포-매개 자가유래수지상세포
PT2481409T (pt) 2007-03-07 2018-10-18 Abraxis Bioscience Llc Nanopartícula que compreende rapamicina e albumina como agente anticancerígeno
CN101678090B (zh) 2007-03-07 2012-04-11 乌第有限合伙公司 用于预防和治疗自身免疫病的组合物和方法
CN101730526A (zh) 2007-03-07 2010-06-09 阿布拉科斯生物科学有限公司 作为抗癌剂的包含雷帕霉素和白蛋白的纳米颗粒
EP2144600A4 (en) 2007-04-04 2011-03-16 Massachusetts Inst Technology POLY (AMINIC ACID) TARGET MOLECULES
CA2683415C (en) * 2007-04-04 2020-12-08 Sigmoid Pharma Limited An oral pharmaceutical composition
WO2008124634A1 (en) 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Polymer-encapsulated reverse micelles
WO2008124165A2 (en) 2007-04-09 2008-10-16 Chimeros, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
EP2146747A1 (en) 2007-04-12 2010-01-27 Emory University Novel strategies for delivery of active agents using micelles and particles
EP1982729A1 (en) 2007-04-20 2008-10-22 Cytos Biotechnology AG Vaccination Regimen for B-Cell Vaccines
WO2008150868A1 (en) 2007-05-29 2008-12-11 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Methods for inducing therapeutic t cells for immune diseases
US20080311140A1 (en) 2007-05-29 2008-12-18 Baylor College Of Medicine Antigen specific immunosuppression by dendritic cell therapy
EP2757109B1 (en) 2007-05-31 2019-07-10 Academisch Ziekenhuis Leiden h.o.d.n. LUMC Hpv epitopes targeted by t cells infiltrating cervical malignancies for use in vaccines
EA200901621A1 (ru) 2007-06-05 2010-06-30 Новартис Аг Индукция толерогенного фенотипа у зрелых дендритных клеток
US20090004259A1 (en) 2007-06-14 2009-01-01 Consejo Nacional De Investigaciones Cientificas Y Tecnicas (Conicet) Methods of preparing a therapeutic formulation comprising galectin-induced tolerogenic dendritic cells
EA018708B1 (ru) 2007-07-09 2013-10-30 Астразенека Аб ПРОИЗВОДНЫЕ МОРФОЛИНОПИРИМИДИНА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ, СВЯЗАННЫХ С mTOR КИНАЗОЙ И/ИЛИ PI3K
GB0714963D0 (en) 2007-08-01 2007-09-12 Novartis Ag Compositions comprising antigens
SI2083856T1 (sl) 2007-08-15 2011-02-28 Circassia Ltd Peptidi za desenzibilizacijo proti alergijam
WO2009038685A1 (en) 2007-09-18 2009-03-26 The Scripps Research Institute Ligands for copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition reactions
JP2011520769A (ja) 2007-09-21 2011-07-21 サイトイミューン サイエンシズ インコーポレイテッド ナノ治療コロイド金属組成物および方法
EP2620157A3 (en) 2007-10-12 2013-10-16 Massachusetts Institute of Technology Vaccine nanotechnology
WO2009062502A1 (en) 2007-11-13 2009-05-22 Dandrit Biotech A/S Method for generating tolerogenic dendritic cells employing decreased temperature
US20090142318A1 (en) 2007-11-30 2009-06-04 Therakos, Inc. METHOD TO EXPAND nTREG CELLS USING p70 S6 KINASE ANTAGONIST
US8404658B2 (en) 2007-12-31 2013-03-26 Nanocor Therapeutics, Inc. RNA interference for the treatment of heart failure
JP5474831B2 (ja) 2008-02-08 2014-04-16 テルモ株式会社 生理活性物質管腔内制御送達用薬剤送達装置およびその作成方法
WO2009106999A2 (en) 2008-02-28 2009-09-03 Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung Des Öffentlichen Rechts Hollow nanoparticles and uses thereof
EP2262480B1 (en) 2008-03-04 2018-02-14 Liquidia Technologies, Inc. Immunomodulator particles
US9669057B2 (en) * 2008-04-25 2017-06-06 Duke University Regulatory B cells and their uses
EP2300102B1 (en) 2008-05-15 2014-01-08 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory sequences containing CpG for use in the treatment of allergic rhinitis
WO2009145238A1 (ja) * 2008-05-27 2009-12-03 国立大学法人名古屋大学 免疫調節剤及びその利用
US20090297621A1 (en) 2008-06-03 2009-12-03 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Microparticles For The Treatment Of Disease
US8613951B2 (en) * 2008-06-16 2013-12-24 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles with mTor inhibitors and methods of making and using same
JP2012501965A (ja) 2008-06-16 2012-01-26 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 薬剤を装填したポリマーナノ粒子及びその製造方法と使用方法
JP2011530562A (ja) 2008-08-11 2011-12-22 グラクソスミスクライン エルエルシー アレルギー性、炎症性及び感染性疾患治療用のプリン誘導体
UA103195C2 (uk) 2008-08-11 2013-09-25 Глаксосмитклайн Ллк Похідні пурину для застосування у лікуванні алергій, запальних та інфекційних захворювань
WO2010018130A1 (en) 2008-08-11 2010-02-18 Smithkline Beecham Corporation Purine derivatives for use in the treatment of allergic, inflammatory and infectious diseases
WO2010018132A1 (en) 2008-08-11 2010-02-18 Smithkline Beecham Corporation Compounds
US20120034157A1 (en) * 2010-08-03 2012-02-09 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Artificial cells
WO2010018384A1 (en) 2008-08-15 2010-02-18 Circassia Limited T-cell antigen peptide from allergen for stimulation of il-10 production
US8323696B2 (en) 2008-08-29 2012-12-04 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Nanoparticles for immunotherapy
EP2341953B1 (en) 2008-09-04 2018-11-21 The General Hospital Corporation Hydrogels for vocal cord and soft tissue augmentation and repair
CN101676291B (zh) 2008-09-18 2012-05-09 上海海和药物研究开发有限公司 一类雷帕霉素碳酸酯类似物、其药物组合物及其制备方法和用途
US8889124B2 (en) 2008-09-25 2014-11-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Tolerogenic populations of dendritic cells
US10369204B2 (en) 2008-10-02 2019-08-06 Dako Denmark A/S Molecular vaccines for infectious disease
US8343498B2 (en) * 2008-10-12 2013-01-01 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
US8277812B2 (en) 2008-10-12 2012-10-02 Massachusetts Institute Of Technology Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen
US8591905B2 (en) * 2008-10-12 2013-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nicotine immunonanotherapeutics
US8343497B2 (en) * 2008-10-12 2013-01-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics
JP5552630B2 (ja) 2008-10-24 2014-07-16 学校法人 聖マリアンナ医科大学 Ｈｔｌｖ−ｉ関連脊髄症を治療または予防するための医薬、およびｈｔｌｖ−ｉ関連脊髄症の患者に対する抗体療法の効果を試験する方法
US20120015899A1 (en) 2008-10-25 2012-01-19 Plant Bioscience, Limited Modified plant virus particles and uses therefor
WO2010056143A1 (en) 2008-11-13 2010-05-20 Instituto De Medicina Molecular The use of adjuvant to facilitate the induction of immune tolerance
JP2012512175A (ja) 2008-12-15 2012-05-31 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 治療薬を徐放するための長時間循環性ナノ粒子
US20100160089A1 (en) * 2008-12-19 2010-06-24 Tzu-Wei Lin Appapatus and method for providing golfing information
CN102325546A (zh) 2009-01-20 2012-01-18 西北大学 用于诱导抗原-特异性耐受的组合物和方法
EP2620447B1 (en) 2009-02-04 2015-09-09 Universität Leipzig Vector(s) containing an inducible gene encoding a CDK4/CDK6 inhibitor useful for treating neurodegenerative disorders
JP5746053B2 (ja) * 2009-02-05 2015-07-08 サーカッシア リミテッド ワクチン用ペプチド
KR20100099849A (ko) 2009-03-04 2010-09-15 동국대학교 산학협력단 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2의 억제제를 함유한 아토피 피부염 치료용 조성물
US8679837B2 (en) 2009-04-02 2014-03-25 University Of Florida Research Foundation, Inc. Inducible system for highly efficient production of recombinant Adeno-associated virus (rAAV) vectors
GB0906159D0 (en) * 2009-04-09 2009-05-20 Summit Corp Plc Drug combination for the treatment of proteostatic diseases
KR20120022984A (ko) 2009-04-21 2012-03-12 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. Ｔｈ１ 편향 반응을 제공하는 면역나노치료법
US20100273220A1 (en) 2009-04-22 2010-10-28 Massachusetts Institute Of Technology Innate immune suppression enables repeated delivery of long rna molecules
EA024697B1 (ru) 2009-04-27 2016-10-31 Иммурон Лимитед Применение композиции, содержащей обогащенный анти-lps-антителами иммуноглобулиновый препарат, для лечения заболеваний печени
CN102481376B (zh) 2009-05-27 2016-12-21 西莱克塔生物科技公司 免疫调节剂-聚合物化合物
PL398781A1 (pl) 2009-06-25 2012-11-19 Savient Pharmaceuticals, Inc. Sposoby i zestawy do prognozowania ryzyka wystapienia reakcji na wlew oraz zaniku odpowiedzi której posrednicza przeciwciala poprzez monitorowanie kwasu moczowego w surowicy podczas terapii z zastosowaniem pegylowanej urykazy
EP3058953A1 (en) 2009-07-07 2016-08-24 The Research Foundation Of State University Of New York Lipidic compositions for induction of immune tolerance
CN107617110A (zh) 2009-08-26 2018-01-23 西莱克塔生物科技公司 诱导t细胞辅助的组合物
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
EP2305277A1 (en) 2009-09-18 2011-04-06 Forskarpatent I Syd AB Use of tolerogenic dendritic cells in treatment and prevention of atherosclerosis
CN101703781A (zh) 2009-10-28 2010-05-12 陕西北美基因股份有限公司 一种免疫抑制剂的磁性载药方法
KR101267813B1 (ko) 2009-12-30 2013-06-04 주식회사 삼양바이오팜 향상된 수용해도를 갖는 라파마이신 함유 고분자나노입자 주사제형 조성물 및 그 제조방법, 및 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물
US20110171248A1 (en) 2010-01-08 2011-07-14 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic virus-like particles conjugated to human papillomavirus capsid peptides for use as vaccines
WO2011097511A1 (en) 2010-02-05 2011-08-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services REGULATORY B CELLS (tBREGS) AND THEIR USE
US20130195919A1 (en) 2010-03-05 2013-08-01 President And Fellows Of Harvard College Induced dendritic cell compositions and uses thereof
US20110262491A1 (en) 2010-04-12 2011-10-27 Selecta Biosciences, Inc. Emulsions and methods of making nanocarriers
US20110272836A1 (en) 2010-04-12 2011-11-10 Selecta Biosciences, Inc. Eccentric vessels
US8927514B2 (en) 2010-04-30 2015-01-06 City Of Hope Recombinant adeno-associated vectors for targeted treatment
JP5904645B2 (ja) 2010-05-07 2016-04-13 ゾーマ （ユーエス） リミテッド ライアビリティ カンパニー ＩＬ−１β関連病態の治療のための方法
AU2011258156B2 (en) 2010-05-26 2016-11-24 Selecta Biosciences, Inc. Multivalent synthetic nanocarrier vaccines
RU2577278C2 (ru) 2010-06-07 2016-03-10 АБРАКСИС БАЙОСАЙЕНС, ЭлЭлСи Способы комбинированной терапии для лечения пролиферативных заболеваний
EP2600878A4 (en) 2010-08-04 2014-06-11 Univ Duke REGULATORY B-CELLS AND ITS USES
JP6017422B2 (ja) 2010-08-10 2016-11-02 エコール・ポリテクニーク・フェデラル・ドゥ・ローザンヌ（ウペエフエル）Ｅｃｏｌｅ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｑｕｅ Ｆｅｄｅｒａｌｅ ｄｅ Ｌａｕｓａｎｎｅ （ＥＰＦＬ） 赤血球結合療法
AU2011291522A1 (en) 2010-08-20 2013-01-24 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarrier vaccines comprising peptides obtained or derived from human influenza A virus M2E
KR20130098308A (ko) 2010-08-23 2013-09-04 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 항원에 대한 면역 반응을 유도하기 위한 표적화 다중 에피토프 투여형
US9636309B2 (en) 2010-09-09 2017-05-02 Micell Technologies, Inc. Macrolide dosage forms
JP2013540162A (ja) 2010-10-22 2013-10-31 ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファンデーション インコーポレーティッド 抗原特異的な寛容を誘導する微粒子およびその使用
EP2640190A4 (en) 2010-11-05 2016-05-11 Selecta Biosciences Inc MODIFIED NICOTINIC COMPOUNDS AND ASSOCIATED METHODS
WO2012092552A1 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers with reactive groups that release biologically active agents
BR112013020273A2 (pt) 2011-02-08 2016-10-18 Charlotte Mecklenburg Hospital oligonucleotídeos antissenso
US10392632B2 (en) 2011-02-14 2019-08-27 The Children's Hospital Of Philadelphia AAV8 vector with enhanced functional activity and methods of use thereof
US8654487B2 (en) 2011-03-11 2014-02-18 Siemens Industry, Inc. Methods, systems, and apparatus and for detecting parallel electrical arc faults
AU2012236937B2 (en) 2011-03-25 2017-06-08 Selecta Biosciences, Inc. Osmotic mediated release synthetic nanocarriers
US20140155469A1 (en) 2011-04-19 2014-06-05 The Research Foundation Of State University Of New York Adeno-associated-virus rep sequences, vectors and viruses
EP3699286A1 (en) 2011-04-20 2020-08-26 The Trustees of the University of Pennsylvania Regimens and compositions for aav-mediated passive immunization of airborne pathogens
US9289477B2 (en) 2011-04-29 2016-03-22 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce cytotoxic T lymphocyte responses
MX2013013445A (es) 2011-05-16 2014-07-28 Genzyme Corp Induccion de tolerancia inmunologica utilizando metotrexato.
WO2013019658A2 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers comprising polymers comprising multiple immunomodulatory agents
WO2013036293A1 (en) 2011-09-06 2013-03-14 Selecta Biosciences, Inc. Dendritic cell subsets for generating induced tolerogenic dendritic cells and related compositions and methods
AU2012304313A1 (en) 2011-09-08 2014-03-06 University Of Florida Research Foundation, Inc. Materials and methods for modulating immune responses
US8865487B2 (en) 2011-09-20 2014-10-21 General Electric Company Large area hermetic encapsulation of an optoelectronic device using vacuum lamination
WO2013058812A1 (en) 2011-10-19 2013-04-25 President And Fellows Of Harvard College Targeted delivery to pancreatic islet endothelial cells
EP2591801A1 (en) 2011-11-14 2013-05-15 Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf Nanoparticle compositions for generation of regulatory T cells and treatment of autoimmune diseases and other chronic inflammatory conditions
AU2012340567B2 (en) 2011-11-22 2017-11-23 The Children's Hospital Of Philadelphia Virus vectors for highly efficient transgene delivery
CN104520428B (zh) 2012-02-17 2018-09-21 费城儿童医院 将基因转移到细胞、器官和组织的aav载体组合物和方法
CN104487579B (zh) 2012-04-18 2022-01-18 费城儿童医院 使用aav衣壳变异体的高度有效的基因转移的组合物和方法
ES2932952T3 (es) 2012-04-24 2023-01-30 Ohio State Innovation Foundation Composiciones y métodos para tratar y prevenir el síndrome reproductivo y respiratorio porcino
CN102871966B (zh) 2012-10-19 2013-11-20 东南大学 用于改善雷帕霉素生物利用度的纳米载药颗粒及其制备方法
BR112015023793A2 (pt) 2013-03-15 2017-07-18 Us Dept Veterans Affairs composições e métodos de terapias para indução de tolerância imune a substituição do fator vii em indivíduos com hemofilia a
CA2909085C (en) 2013-04-08 2023-08-29 University Of Iowa Research Foundation Chimeric adeno-associated virus/ bocavirus parvovirus vector
EA201592106A3 (ru) 2013-05-03 2016-08-31 Селекта Байосайенсиз, Инк. Локальное сопутствующее введение толерогенных синтетических наноносителей для снижения гиперчувствительности типа i и гиперчувствительности типа iv
WO2014179771A1 (en) 2013-05-03 2014-11-06 Selecta Biosciences, Inc. Dosing combinations for reducing undesired humoral immune responses
EA201592273A1 (ru) 2013-06-04 2016-09-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Повторное введение неиммуносупрессивных антигенспецифических иммунотерапевтических средств
CA2926215A1 (en) 2013-10-06 2015-04-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Modified pseudomonas exotoxin a
US9276815B2 (en) 2013-12-27 2016-03-01 Dell Products L.P. N-node virtual link trunking (VLT) systems management plane
EP2916319A1 (en) 2014-03-07 2015-09-09 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Concept for encoding of information
BR122023023004A2 (pt) 2014-03-09 2023-12-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Vetores virais recombinantes, vírus adeno-associado recombinante, composição farmacêutica, bem como uso dos mesmos
GB201407322D0 (en) 2014-04-25 2014-06-11 Ospedale San Raffaele Gene therapy
US20150359865A1 (en) 2014-06-17 2015-12-17 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers for t-cell-mediated autoimmune disease
US20160220501A1 (en) 2015-02-03 2016-08-04 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce immune responses to therapeutic proteins
EP3160453A1 (en) 2014-06-25 2017-05-03 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for treatment with synthetic nanocarriers and immune checkpoint inhibitors
WO2016037163A1 (en) 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene therapy anti-viral transfer vector immune responses
RU2017115772A (ru) 2014-10-06 2018-11-13 Артроджен Б. В. Комбинация для генотерапии
PL3215133T3 (pl) 2014-11-05 2021-06-14 Selecta Biosciences, Inc. Sposoby i kompozycje związane z zastosowaniem związków powierzchniowo czynnych o niskiej hlb do wytwarzania syntetycznych nanonośników zawierających rapalog
WO2017139212A1 (en) 2016-02-08 2017-08-17 Cyta Therapeutics, Inc. Particle delivery of rapamycin to the liver
WO2017138983A1 (en) 2016-02-10 2017-08-17 Pfizer Inc. Therapeutic nanoparticles having egfr ligands and methods of making and using same
US20170258927A1 (en) 2016-03-11 2017-09-14 Selecta Biosciences, Inc. Formulations and doses of pegylated uricase
WO2018039465A1 (en) 2016-08-25 2018-03-01 Selecta Biosciences, Inc. Polyester polymer matrices for the delivery of allergens
JP2019533718A (ja) 2016-09-27 2019-11-21 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッドＳｅｌｅｃｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ． がんの処置における使用のための組換え免疫毒素
US11583504B2 (en) 2016-11-08 2023-02-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
EP3565605A1 (en) 2017-01-03 2019-11-13 ethris GmbH Ornithine transcarbamylase coding polyribonucleotides and formulations thereof
AU2018205496A1 (en) 2017-01-07 2019-07-25 Selecta Biosciences, Inc. Patterned dosing of immunosuppressants coupled to synthetic nanocarriers
BR112019018748A2 (pt) 2017-03-11 2020-04-07 Selecta Biosciences Inc métodos e composições relacionados ao tratamento combinado com anti-inflamatórios e nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor
AU2018347583A1 (en) 2017-10-13 2020-05-21 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating anti-viral transfer vector IgM responses
KR20200130704A (ko) 2018-02-26 2020-11-19 이슘 리서치 디벨롭먼트 컴퍼니 오브 더 히브루 유니버시티 오브 예루살렘 엘티디. 약물 전달 시스템
US11517628B2 (en) 2018-05-09 2022-12-06 Yale University Particles for spatiotemporal release of agents
MX2021000637A (es) 2018-07-16 2021-06-23 Selecta Biosciences Inc Métodos y composiciones de vectores y constructos ornitina transcarbamilasa (otc).
EP3823676A1 (en) 2018-07-16 2021-05-26 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions of mma constructs and vectors
AU2020265215A1 (en) 2019-04-28 2021-11-18 Selecta Biosciences, Inc. Methods for treatment of subjects with preexisting immunity to viral transfer vectors
WO2020243261A1 (en) 2019-05-28 2020-12-03 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuated anti-viral transfer vector immune response
WO2020247625A1 (en) 2019-06-04 2020-12-10 Selecta Biosciences, Inc. Formulations and doses of pegylated uricase
JP2022553345A (ja) 2019-10-21 2022-12-22 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド 肝疾患および肝障害を処置するための方法および組成物
MX2022005506A (es) 2019-11-08 2022-08-10 Selecta Biosciences Inc Formulaciones y dosis de uricasa pegilada.
WO2021174013A1 (en) 2020-02-26 2021-09-02 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions using synthetic nanocarriers comprising immunosuppressant
EP4117631A1 (en) 2020-03-11 2023-01-18 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions related to synthetic nanocarriers
JP2023548601A (ja) 2020-11-04 2023-11-17 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド 免疫グロブリンプロテアーゼに対する免疫応答を低減するための組成物
BR112023020597A2 (pt) 2021-04-09 2023-12-12 Selecta Biosciences Inc Nanocarreadores sintéticos que compreendem um imunossupressante em combinação com agonistas do receptor de il-2 de alta afinidade para aumentar a tolerância imune

Also Published As

Publication number Publication date
KR20140027361A (ko) 2014-03-06
JP2022003032A (ja) 2022-01-11
US20160030555A1 (en) 2016-02-04
AU2017225163B2 (en) 2019-10-17
KR102112002B1 (ko) 2020-05-18
KR102344744B1 (ko) 2021-12-30
US20120276156A1 (en) 2012-11-01
CN113018452A (zh) 2021-06-25
AU2022202396A1 (en) 2022-05-05
AU2019232935B2 (en) 2022-04-21
CN103501812A (zh) 2014-01-08
AU2019232928B2 (en) 2022-04-21
EP2701739A4 (en) 2015-03-04
KR20230104990A (ko) 2023-07-11
CN103501787A (zh) 2014-01-08
AU2019232928A1 (en) 2019-10-10
IL228937A0 (en) 2013-12-31
KR102457513B1 (ko) 2022-10-24
US8652487B2 (en) 2014-02-18
AU2020200446B2 (en) 2022-05-19
EP3760201A1 (en) 2021-01-06
EP2704693A1 (en) 2014-03-12
AU2020200254A1 (en) 2020-02-06
JP7242519B2 (ja) 2023-03-20
JP7389544B2 (ja) 2023-11-30
US20150320856A1 (en) 2015-11-12
JP6673893B2 (ja) 2020-03-25
MX2019011890A (es) 2019-11-21
AU2012249537A1 (en) 2013-10-24
CN107670030A (zh) 2018-02-09
EA201790109A1 (ru) 2017-09-29
CN107837402A (zh) 2018-03-27
WO2012149255A2 (en) 2012-11-01
AU2017203588A1 (en) 2017-06-22
AU2012249567B2 (en) 2017-07-27
BR112013027517A2 (pt) 2017-02-07
US20200101154A1 (en) 2020-04-02
KR20230079465A (ko) 2023-06-07
EP2701739A1 (en) 2014-03-05
CN107320734A (zh) 2017-11-07
EA201391599A1 (ru) 2014-09-30
AU2012249540B2 (en) 2017-07-13
AU2017245402A1 (en) 2017-11-02
US20230310593A1 (en) 2023-10-05
AU2012249544A1 (en) 2013-10-24
IL297146A (en) 2022-12-01
WO2012149393A9 (en) 2013-01-24
WO2012149405A3 (en) 2013-03-21
US20120276158A1 (en) 2012-11-01
CA2834532A1 (en) 2012-11-01
AU2022204381A1 (en) 2022-07-14
JP2014514333A (ja) 2014-06-19
EP3848030A1 (en) 2021-07-14
AU2022204395A1 (en) 2022-07-14
CA2834571A1 (en) 2012-11-01
EA201790044A1 (ru) 2017-09-29
EA201790030A1 (ru) 2017-09-29
CA2834519A1 (en) 2012-11-01
AU2012249401A1 (en) 2013-10-24
CN107252487A (zh) 2017-10-17
US20150328333A1 (en) 2015-11-19
WO2012149268A8 (en) 2012-12-13
US9295718B2 (en) 2016-03-29
AU2022204820A1 (en) 2022-07-28
ES2806268T3 (es) 2021-02-17
US20190076522A1 (en) 2019-03-14
EP2701738A4 (en) 2015-03-04
IL283253A (en) 2021-07-29
BR112013027541B1 (pt) 2023-10-03
IL228932B (en) 2022-11-01
KR20230006042A (ko) 2023-01-10
WO2012149265A3 (en) 2012-12-27
AU2012249550B2 (en) 2017-07-13
EP2701705A4 (en) 2015-01-28
KR20140034202A (ko) 2014-03-19
IL228935A0 (en) 2013-12-31
MX2013012594A (es) 2014-08-21
IL283728B2 (en) 2024-01-01
CN107261123A (zh) 2017-10-20
WO2012149393A3 (en) 2013-03-14
JP2014514334A (ja) 2014-06-19
EA201391608A1 (ru) 2014-09-30
CN103501820B (zh) 2016-07-06
IL228932B2 (en) 2023-03-01
AU2017203655A1 (en) 2017-06-15
EA201391597A1 (ru) 2014-09-30
KR102283951B1 (ko) 2021-08-02
WO2012149255A3 (en) 2013-01-03
IL228936A0 (en) 2013-12-31
AU2019232938A1 (en) 2019-10-10
US11717569B2 (en) 2023-08-08
EP3679933A1 (en) 2020-07-15
JP2021183616A (ja) 2021-12-02
KR20200057789A (ko) 2020-05-26
EP3682878A1 (en) 2020-07-22
EP2701737A1 (en) 2014-03-05
JP2019065033A (ja) 2019-04-25
US20230321224A1 (en) 2023-10-12
EA027103B1 (ru) 2017-06-30
CN107670054A (zh) 2018-02-09
US20230321225A1 (en) 2023-10-12
MX2019013515A (es) 2020-01-20
US10004802B2 (en) 2018-06-26
CN107126552A (zh) 2017-09-05
BR112013027500A2 (pt) 2017-01-10
JP2023002542A (ja) 2023-01-10
JP6401609B2 (ja) 2018-10-10
AU2012249567A1 (en) 2013-10-31
MX2013012593A (es) 2014-08-21
US20160030554A1 (en) 2016-02-04
KR20190123796A (ko) 2019-11-01
IL305229A (en) 2023-10-01
US20150335762A1 (en) 2015-11-26
CN117298266A (zh) 2023-12-29
AU2022204439A1 (en) 2022-07-14
CA2834514C (en) 2023-04-25
JP2020073496A (ja) 2020-05-14
KR20220026601A (ko) 2022-03-04
CN105999295A (zh) 2016-10-12
CN114306638A (zh) 2022-04-12
EP3871691A1 (en) 2021-09-01
JP2014514332A (ja) 2014-06-19
KR20220147697A (ko) 2022-11-03
AU2017203588B2 (en) 2019-10-24
JP2020050658A (ja) 2020-04-02
AU2012249493A1 (en) 2013-10-24
EP2701706A2 (en) 2014-03-05
KR20200115655A (ko) 2020-10-07
US10420835B2 (en) 2019-09-24
EP2704714A4 (en) 2015-01-07
JP6737725B2 (ja) 2020-08-12
CN103491957A (zh) 2014-01-01
CN103533935A (zh) 2014-01-22
EA027380B1 (ru) 2017-07-31
MX2013012591A (es) 2014-08-21
KR20140027360A (ko) 2014-03-06
CA2834514A1 (en) 2012-11-01
JP2014513102A (ja) 2014-05-29
EP2704715A2 (en) 2014-03-12
JP6491879B2 (ja) 2019-03-27
AU2017225163A1 (en) 2017-10-05
AU2017245402B2 (en) 2019-10-17
AU2019232931B2 (en) 2022-04-14
KR20220002713A (ko) 2022-01-06
JP6422775B2 (ja) 2018-11-14
JP6422774B2 (ja) 2018-11-14
AU2022211839A1 (en) 2022-08-25
WO2012149252A3 (en) 2013-03-14
KR20140033065A (ko) 2014-03-17
CN107029213A (zh) 2017-08-11
IL283252A (en) 2021-07-29
IL283730A (en) 2021-07-29
WO2012149301A2 (en) 2012-11-01
US20150320728A1 (en) 2015-11-12
WO2012149454A2 (en) 2012-11-01
JP2014517828A (ja) 2014-07-24
CN117018224A (zh) 2023-11-10
EP2701737A4 (en) 2015-01-21
KR20140051171A (ko) 2014-04-30
JP6529531B2 (ja) 2019-06-12
WO2012149265A2 (en) 2012-11-01
US10441651B2 (en) 2019-10-15
US20160279234A1 (en) 2016-09-29
WO2012149247A3 (en) 2013-01-03
CA3192054A1 (en) 2012-11-01
CN117065050A (zh) 2023-11-17
EP2701705A2 (en) 2014-03-05
JP2017222668A (ja) 2017-12-21
EA201692374A3 (ru) 2017-08-31
US20160256401A1 (en) 2016-09-08
EA201790043A1 (ru) 2017-09-29
CA2834599A1 (en) 2012-11-01
AU2012249419A1 (en) 2013-10-24
AU2012249493B2 (en) 2017-06-15
JP2017114904A (ja) 2017-06-29
WO2012149454A3 (en) 2013-01-17
EP2704750A4 (en) 2015-01-07
CN103501820A (zh) 2014-01-08
AU2019232934A1 (en) 2019-10-10
MX2020004906A (es) 2020-08-06
EA201790045A1 (ru) 2017-09-29
US11235057B2 (en) 2022-02-01
US20120276109A1 (en) 2012-11-01
CN117205331A (zh) 2023-12-12
AU2017204814B2 (en) 2019-10-24
HUE050142T2 (hu) 2020-11-30
JP2019167350A (ja) 2019-10-03
JP2017193568A (ja) 2017-10-26
US20120276159A1 (en) 2012-11-01
AU2017245278A1 (en) 2017-11-02
EA201391611A1 (ru) 2014-09-30
JP2024022587A (ja) 2024-02-16
WO2012149259A1 (en) 2012-11-01
JP2018111687A (ja) 2018-07-19
CA2834527A1 (en) 2012-11-01
CN103501813A (zh) 2014-01-08
AU2017203656A1 (en) 2017-06-15
CN103517707A (zh) 2014-01-15
WO2012149268A1 (en) 2012-11-01
EP2701737B8 (en) 2024-05-01
US20120276134A1 (en) 2012-11-01
EP2704750A2 (en) 2014-03-12
MX2013012597A (es) 2014-08-27
JP2014513093A (ja) 2014-05-29
EA027259B1 (ru) 2017-07-31
KR20230106708A9 (ko) 2024-03-25
IL285736A (en) 2021-09-30
CN107252481A (zh) 2017-10-17
JP2017122112A (ja) 2017-07-13
CN104623666A (zh) 2015-05-20
EP2704715A4 (en) 2015-03-04
KR20140033066A (ko) 2014-03-17
AU2017204814A1 (en) 2017-07-27
US20120301510A1 (en) 2012-11-29
JP2017122111A (ja) 2017-07-13
JP2017122110A (ja) 2017-07-13
BR112013027514A2 (pt) 2017-02-14
MX2013012596A (es) 2014-08-21
US9289477B2 (en) 2016-03-22
JP2020002140A (ja) 2020-01-09
KR20140029468A (ko) 2014-03-10
IL228939A0 (en) 2013-12-31
EP2701738A2 (en) 2014-03-05
EP2704750B1 (en) 2023-11-01
EA201391609A1 (ru) 2014-09-30
US20120276157A1 (en) 2012-11-01
JP7303627B2 (ja) 2023-07-05
JP2021183612A (ja) 2021-12-02
US20160243253A1 (en) 2016-08-25
EA027410B1 (ru) 2017-07-31
US11779641B2 (en) 2023-10-10
CN107970440A (zh) 2018-05-01
EA027379B1 (ru) 2017-07-31
AU2012249540A1 (en) 2013-10-24
EA026880B1 (ru) 2017-05-31
EP2704715B1 (en) 2020-04-01
AU2020200446A1 (en) 2020-02-13
US20120301498A1 (en) 2012-11-29
EA028807B1 (ru) 2018-01-31
JP2014514331A (ja) 2014-06-19
AU2017204317A1 (en) 2017-07-13
IL228932A0 (en) 2013-12-31
KR20210097810A (ko) 2021-08-09
WO2012149301A3 (en) 2013-01-31
KR102536881B1 (ko) 2023-05-26
WO2012149247A2 (en) 2012-11-01
JP6422773B2 (ja) 2018-11-14
EP3682877A1 (en) 2020-07-22
AU2012249553A1 (en) 2013-10-24
AU2017244514A1 (en) 2017-11-02
BR112013027514B1 (pt) 2021-09-28
US20140199340A1 (en) 2014-07-17
US9265815B2 (en) 2016-02-23
JP6602536B2 (ja) 2019-11-06
CN103501786A (zh) 2014-01-08
US9289476B2 (en) 2016-03-22
JP2019065035A (ja) 2019-04-25
JP2014513092A (ja) 2014-05-29
US20120276155A1 (en) 2012-11-01
DK2701739T3 (da) 2020-07-13
IL284303A (en) 2021-07-29
EA201391600A1 (ru) 2014-09-30
EA201391602A1 (ru) 2014-04-30
EA201391610A1 (ru) 2014-09-30
KR20200055145A (ko) 2020-05-20
US20120294888A1 (en) 2012-11-22
US20150320870A1 (en) 2015-11-12
JP6490964B2 (ja) 2019-03-27
CN103517716A (zh) 2014-01-15
JP2018008929A (ja) 2018-01-18
AU2022204392A1 (en) 2022-07-14
EA201391601A1 (ru) 2014-09-30
MX2019013118A (es) 2019-12-16
JP2019001810A (ja) 2019-01-10
IL283728A (en) 2021-07-29
AU2019232934B2 (en) 2022-04-14
JP7018689B2 (ja) 2022-02-14
CA3182519A1 (en) 2012-11-01
IL283728B1 (en) 2023-09-01
AU2012249550A1 (en) 2013-10-24
US20160022650A1 (en) 2016-01-28
WO2012149252A2 (en) 2012-11-01
KR20230106708A (ko) 2023-07-13
EP2701737B1 (en) 2024-03-27
BR112013027508A2 (pt) 2017-03-14
JP7389549B2 (ja) 2023-11-30
EP2701706A4 (en) 2015-01-28
US20200101155A1 (en) 2020-04-02
KR20190112211A (ko) 2019-10-02
KR20210045525A (ko) 2021-04-26
US20120276160A1 (en) 2012-11-01
JP2023085278A (ja) 2023-06-20
EP2701739B1 (en) 2020-04-01
MX2013012599A (es) 2014-08-21
CN107693798A (zh) 2018-02-16
US20150320884A1 (en) 2015-11-12
AU2019232935A1 (en) 2019-10-17
US9993548B2 (en) 2018-06-12
EP2701738B1 (en) 2020-04-15
JP2017122113A (ja) 2017-07-13
KR20140029469A (ko) 2014-03-10
WO2012149405A2 (en) 2012-11-01
WO2012149411A1 (en) 2012-11-01
WO2012149282A2 (en) 2012-11-01
EA201791679A1 (ru) 2018-09-28
AU2020200252A1 (en) 2020-02-06
AU2019232938B2 (en) 2022-04-21
IL228934A0 (en) 2013-12-31
CN107343959A (zh) 2017-11-14
JP2014514335A (ja) 2014-06-19
IL228938A0 (en) 2013-12-31
CA2834534A1 (en) 2012-11-01
BR112013027541A2 (pt) 2017-01-10
US20120276133A1 (en) 2012-11-01
JP6833625B2 (ja) 2021-02-24
KR20140041505A (ko) 2014-04-04
CN107261154A (zh) 2017-10-20
KR20210090745A (ko) 2021-07-20
EA201692374A2 (ru) 2017-06-30
JP6336900B2 (ja) 2018-06-06
AU2019240565A1 (en) 2019-10-17
JP2021183613A (ja) 2021-12-02
CA2834619A1 (en) 2012-11-01
WO2012149282A3 (en) 2013-03-14
US20220354947A1 (en) 2022-11-10
US10039822B2 (en) 2018-08-07
CN107693799A (zh) 2018-02-16
MX2013012598A (es) 2014-08-18
WO2012149393A2 (en) 2012-11-01
CN107261151A (zh) 2017-10-20
MX2013012595A (es) 2014-08-27
US20240156955A1 (en) 2024-05-16
EP2704714A2 (en) 2014-03-12
US9987354B2 (en) 2018-06-05
CA2834533A1 (en) 2012-11-01
AU2019232931A1 (en) 2019-10-10
EP2704693A4 (en) 2015-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2019232934B2 (en) Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce immune responses to therapeutic proteins
US20160220501A1 (en) Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce immune responses to therapeutic proteins
JP7491669B2 (ja) Ｔエフェクター細胞を抗原特異的に欠失させるための寛容原性合成ナノキャリア

Legal Events

Date Code Title Description
FG Grant or registration