EA027103B1 - Толерогенные синтетические наноносители, уменьшающие иммунный ответ на терапевтические белки - Google Patents

Толерогенные синтетические наноносители, уменьшающие иммунный ответ на терапевтические белки Download PDF

Info

Publication number
EA027103B1
EA027103B1 EA201391597A EA201391597A EA027103B1 EA 027103 B1 EA027103 B1 EA 027103B1 EA 201391597 A EA201391597 A EA 201391597A EA 201391597 A EA201391597 A EA 201391597A EA 027103 B1 EA027103 B1 EA 027103B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
therapeutic protein
protein
synthetic nanocarriers
cells
composition
Prior art date
Application number
EA201391597A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201391597A1 (ru
Inventor
Кристофер Фрейзер
Такаси Кеи Кисимото
Роберто А. Мальдонадо
Original Assignee
Селекта Байосайенсиз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Селекта Байосайенсиз, Инк. filed Critical Селекта Байосайенсиз, Инк.
Publication of EA201391597A1 publication Critical patent/EA201391597A1/ru
Publication of EA027103B1 publication Critical patent/EA027103B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/366—Lactones having six-membered rings, e.g. delta-lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A61K38/13—Cyclosporins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/38—Albumins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/001—Preparations to induce tolerance to non-self, e.g. prior to transplantation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/35—Allergens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/35—Allergens
    • A61K39/36—Allergens from pollen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/52—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an inorganic compound, e.g. an inorganic ion that is complexed with the active ingredient
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A61K47/544—Phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/593—Polyesters, e.g. PLGA or polylactide-co-glycolide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6923—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being an inorganic particle, e.g. ceramic particles, silica particles, ferrite or synsorb
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
    • A61K47/6935—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol
    • A61K47/6937—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol the polymer being PLGA, PLA or polyglycolic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5115—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A61K9/5153—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • G01N33/56972—White blood cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/577—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 tolerising response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6093—Synthetic polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG], Polymers or copolymers of (D) glutamate and (D) lysine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y40/00—Manufacture or treatment of nanostructures
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70514—CD4
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70517—CD8
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pathology (AREA)

Abstract

В изобретении раскрыты композиции синтетических наноносителей и связанные с ними способы, включающие терапевтические белки-презентируемые АРС антигены и иммунодепрессанты, которые обеспечивают толерогенные иммунные ответы, специфические в отношении терапевтических белков.

Description

Данное изобретение относится к синтетическим композициям наноносителя с терапевтическими белками-презентируемыми (АРС) антигенами и иммунодепрессантам и родственным способам. Композиции и способы позволяют для эффективного обратного захвата антиген-презентирующими клетками повышать иммунный ответ в сторону развития толерогенного иммунного ответа, специфического к терапевтическим белкам. Композиции и способы, предоставленные в данном документе, можно, таким образом, использовать для вызова толерогенного иммунного ответа у субъекта, у которого лечение терапевтическим белком приводит или предположительно приведет к нежелательным иммунным ответам.
Предпосылки изобретения
Различные виды терапевтического лечения, такие как белковая или заместительная ферментная терапия, часто приводят к нежелательным иммунным ответам на отдельные терапевтические средства. В таких случаях клетки иммунной системы распознают терапевтическое средство как чужеродное и пытаются разрушить его, так же, как пытаются разрушить инфицирующие организмы, например бактерии и вирусы. Такие нежелательные иммунные ответы можно уменьшить, применяя иммунодепрессантные препараты. Конвенционные иммуннодепрессантные препараты, однако, имеют широкий спектр действия. Кроме того, для поддержания иммунодепрессии терапия иммунодепрессантными препаратами обычно является пожизненной. К сожалению, использование иммунодепрессантов широкого спектра действия связано с риском возникновения серьезных побочных эффектов, таких как опухоли, инфекции, нефротоксичность и нарушения метаболизма. Соответственно полезным было бы появление новых видов терапии иммунодепрессантами.
Краткое описание изобретения
В одном аспекте предоставлена композиция, содержащая: (ί) первое множество синтетических наноносителей, связанных с иммунодепрессантами, и (ίί) второе множество синтетических наноносителей, связанных антигенами, презентируемыми терапевтическим белком АРС. В одном варианте осуществления первое и второе множество являются одним и тем же множеством. В другом варианте осуществления первое и второе множество являются различными множествами.
В другом варианте осуществления иммунодепрессанты содержат статин, ингибитор тТОК, ΤΟΡ-β сигнальный агент, кортикостероид, ингибитор митохондриальной функции, ингибитор р38, ΝΡ-κβ ингибитор, агонист рецептора аденозина, агонист простагландина Е2, ингибитор фосфодиэстеразы-4, ингибитор деацетилазы гистонов или ингибитор протеасомы. В другом варианте осуществления ингибитор тТОК является рапамицином или аналогом рапамицина.
В некоторых вариантах осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, предоставляются путем связывания терапевтического белка с синтетическими наноносителями. В других вариантах осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, предоставляются путем связывания полипептида или пептида, полученного или деривированного из терапевтического белка. В последующем варианте осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, содержат МНС класса Ι-рестриктированные и/или МНС класса 11-рестриктированные эпитопы терапевтического белка и/или эпитопы В-клеток. В другом варианте осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, содержат МНС класса ΙΙ-рестриктированные эпитопы терапевтического белка. В другом варианте осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, практически не содержат эпитопов терапевтического белка В-клеток. В другом варианте осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, содержат МНС ΙΙ классрестриктированные эпитопы и практически не содержат эпитопов терапевтического белка В-клеток.
В одном варианте антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, содержат терапевтический протеин для замещения белка или белковой заместительной терапии или их фрагмент или производное. В другом варианте осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, содержат белок для инфузий или инъекций, фермент, кофактор фермента, гормон, кровь или фактор свертываемости крови, цитокин, интерферон, фактор роста, моноклональное антитело, поликлональное антитело или белок, связанный с болезнью Помпе, или фрагмент, или производное любого из вышеупомянутых веществ. В другом варианте осуществления терапевтический белок для инфузий или инъекций включает тоцилизумаб, альфа-1 антитрипсин, хематид, альбинтерферон альфа-2Ъ, руцин, тезаморелин, окрелизумаб, белимумаб, пеглотиказу, талиглюцеразу альфа, агальцидазу альфа или велаглюцеразу альфа. В другом варианте осуществления фермент содержит оксидоредуктазу, трансферазу, гидролазу, лиа- 1 027103 зу, изомеразу или лигазу. В другом варианте осуществления фермент содержит фермент для ферментной заместительной терапии лизосомной болезни накопления. В другом варианте осуществления фермент для ферментной заместительной терапии лизосомной болезни накопления содержит имиглюцеразу, агалактозидазу А (а-да1 А), агалсидазу бета, кислую а-глюкозидазу (ОАА), алглюкозидазу альфа, умизим, миозим, арилсульфатазу В, ларонидазу, алдуразим, идурсульфазу, элапразу или наглазим. В другом варианте осуществления цитокин содержит лимфокин, интерлейкин, хемокин, цитокин типа 1 или цитокин типа 2. В другом варианте осуществления кровь и факторы свертывания крови содержат фактор I, фактор II, тканевой фактор, фактор V, фактор VII, Р фактор VIII, фактор IX, фактор X, фактор Ха, фактор XII, фактор XIII, фактор фон Виллебранда, прекалликреин, высокомолекулярный кининоген, фибронектин, антитромбин Ш,кофактро гепарина II, белок С, белок 8, белок Ζ, белок Ζ-зависимый протеазный ингибитор (ΖΠ), плазминоген, альфа-2-антиплазмин, тканевой активатор плазминогена (1РА), урокиназу, ингибитор-1 активатора плазминогена (РАН), ингибитор-2 активатора плазминогена(РАН), раковый прокоагулянт или эпоэтин альфа. В другом варианте осуществления терапевтический белок экспрессируется в или на клетках клеточной терапии или их посредством.
В одном варианте осуществления композиция присутствует в эффективном количестве для вызова толерогенного иммунного ответа на терапевтические белки-презентируемые АРС антигены, из которых получены или деривированы антигены. В другом варианте осуществления композиция находится в эффективном количестве для уменьшения образования антител, специфических к терапевтическому белку, который применяют для лечения субъекта.
В другом варианте осуществления нагрузка иммунодепрессантов и/или антигенов в среднем на первое и второе множество синтетических наноносителей находится в диапазоне между 0,0001 и 50%. В другом варианте осуществления нагрузка иммунодепрессантов и/или антигенов в среднем на первое и второе множество синтетических наноносителей находится в диапазоне между 0,1 и 10%.
В одном варианте осуществления синтетические наноносители первого и/или второго множества содержат липидные наночастицы, полимерные эмульсии, металлические наночастицы, эмульсии на основе сурфактантов, дендримеры, бакиболлы, нанонити, вирусоподобные частицы или пептиды или частицы пептидов. В другом варианте осуществления синтетические наноносители первого и/или второго множества содержат липидные наночастицы. В другом варианте осуществления синтетические наноносители первого и/или второго множества содержат липосомы. В другом варианте осуществления синтетические наноносители первого и/или второго множества содержат металлические наночастицы. В последующем варианте осуществления металлические наночастицы содержат наночастицы золота. В последующем варианте осуществления синтетические наноносители первого и/или второго множества содержат полимерные наночастицы. В другом варианте осуществления полимерные наночастицы содержат полимеры без концевой метоксигруппы, блок-сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена. В последующем варианте осуществления полимерные наночастицы содержат полиэстер, полиэстер, связанный с полиэфиром, полиаминокислоту, поликарбонат, полиацетат, поликеталь, полисахарид, полиэтилоксазолин или полиэтиленимин. В другом варианте осуществления полиэфир содержит поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), сополимер молочной и гликолевой кислот или поликапролактон. В другом варианте осуществления полимерные наночастицы содержат полиэстер и полиэстер, связанный с полиэфиром. В другом варианте осуществления полиэфир содержат полиэтиленгликоль или полипропиленгликоль. В другом варианте осуществления среднее значение для распределения размеров частиц, полученного с помощью динамического рассеяния света, составляет более 100 нм. В другом варианте осуществления диаметр больше 150 нм. В другом варианте осуществления диаметр больше 200 нм. В другом варианте осуществления диаметр больше 250 нм. В другом варианте осуществления диаметр больше 300 нм.
В последующем варианте осуществления соотношение синтетических наноносителей первого и/или второго множества больше чем 1:1, 1:1,2, 1:1,5, 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 или 1:10.
В другом варианте осуществления композиция содержит фармацевтически приемлемый наполнитель.
В другом аспекте предоставлена лекарственная форма, содержащая любые из упомянутых композиций.
В другом аспекте предоставлен способ, включающий лечение субъекта, которому вводили, вводят или будут вводить терапевтический белок, любыми упомянутыми композициями или лекарственными формами. В одном варианте осуществления способ помимо того содержит лечение субъекта терапевтическим белком. В другом варианте осуществления терапевтический белок применяют до, во время или после введения композиции или лекарственной формы. В другом варианте осуществления для субъекта применяют одну или больше поддерживающую дозу композиции или лекарственной формы.
В другом варианте осуществления способ, кроме того, включает оценку образования нежелательного иммунного ответа у субъекта до и/или после введения композиции или лекарственной формы и/или терапевтического белка. В одном варианте осуществления нежелательным иммунным ответом является создание антигенов, специфических к терапевтическому белку. В другом варианте осуществления нежелательный иммунный ответ является пролиферацией и/или активностью СЭ4+Т-клеток. специфической
- 2 027103 к терапевтическому белку. В другом варианте осуществления нежелательный иммунный ответ является пролиферацией и/или активностью В-клеток, специфической к терапевтическому белку.
В одном варианте осуществления терапевтический белок содержит терапевтический белок, предназначенный для белковой заместительной или белковой дополняющей терапии. В другом варианте осуществления терапевтический белок содержит терапевтический белок для инфузий или инъекций, фермент, кофактор фермента, гормон, кровь или фактор свертываемости крови, цитокин, интерферон, фактор роста, моноклональное антитело, поликлональное антитело или белок, связанный с болезнью Помпе, или фрагмент, или производное любого из вышеупомянутых веществ. В другом варианте осуществления терапевтический белок для инфузий или инъекций содержит тоцилизумаб, альфа-1 антитрипсин, хематид, альбинтерферон альфа-2Ъ, руцин, тезаморелин, окрелизумаб, белимумаб, пеглотиказу, талиглюцеразу альфа, агальцидазу альфа или велаглюцеразу альфа. В другом варианте осуществления фермент содержит оксидоредуктазу, трансферазу, гидролазу, лиазу, изомеразу или лигазу. В другом варианте осуществления фермент содержит фермент для ферментной заместительной терапии лизосомной болезни накопления. В другом варианте осуществления фермент для ферментной заместительной терапии лизосомной болезни накопления содержит имиглюцеразу, а-галактозидазу А (а-да1 А), агалсидазу бета, кислую а-глюкозидазу (ОАА), алглюкозидазу альфа, умизим, миозим, арилсульфатазу В, ларонидазу, альдуразим, идурсульфазу, элапразу или наглазим. В другом варианте осуществления цитокин содержит лимфокин, интерлейкин, хемокин, цитокин типа 1 или цитокин типа 2. В другом варианте осуществления кровь и факторы свертывания крови содержат фактор I, фактор II, тканевой фактор, фактор V, фактор VII, Р фактор VIII, фактор IX, фактор X, фактор Ха, фактор XII, фактор XIII, фактор фон Виллебранда, прекалликреин, высокомолекулярный кининоген, фибронектин, антитромбин III, кофактор гепарина II, белок С, белок Б, белок Ζ, белок Ζ-зависимый протеазный ингибитор (ΖΡ(), плазминоген, альфа-2антиплазмин, тканевой активатор плазминогена (1РА), урокиназу, ингибитор-1 активатора плазминогена (РАЛ), ингибитор-2 активатора плазминогена (РА^), раковый прокоагулянт или эпоэтин альфа. В еще одном варианте осуществления терапевтический белок экспрессируется в клетках клеточной терапии, посредством их или на их поверхности.
В одном варианте осуществления введение первого и/или второго множества синтетических наноносителей и/или терапевтического белка осуществляется внутривенно, интраперитонеально, трансмукозально, орально, подкожным, пульмонально, интраназально, внутрикожно или внутримышечно. В другом варианте осуществления введение первого и/или второго множества синтетических наноносителей и/или терапевтического белка осуществляется путем ингаляции или внутривенно, подкожно или трансмукозально.
В еще одном аспекте предоставлен способ, включающий введение пациенту композиции, содержащей: (ί) первое множество синтетических наноносителей, связанных с иммунодепрессантами, и (и) второе множество синтетических наноносителей, связанных с антигенами, презентируемыми терапевтическим белком АРС, причем композиция вводится в эффективном количестве для уменьшения образования нежелательного иммунного ответа на терапевтические белки-презентируемые АРС антигены. В еще одном аспекте предоставлен способ, включающий уменьшение вызова нежелательного иммунного ответа у субъекта при введении композици, содержащей: (ί) первое множество синтетических наноносителей, связанных с иммунодепрессантами, и (и) второе множество синтетических наноносителей, связанных с терапевтическими белками-презентируемыми АРС антигенами. В еще одном аспекте предоставлен способ лечения субъекта композицией по указанному протоколу с целью уменьшить вызов нежелательного иммунного ответа на терапевтические белки-презентируемые АРС антигены у одного или нескольких исследуемых субъектов; причем композиции содержат: (ί) первое множество синтетических наноносителей, связанных с иммунодепрессантами, и (ίί) второе множество синтетических наноносителей, связанных с терапевтическими белками-презентируемыми АРС антигенами. В одном варианте осуществления первое множество и второе множество являются одним и тем же множеством. В другом варианте осуществления первое множество и второе множество являются различными множествами.
В другом варианте осуществления способ, кроме того, включает обеспечение и идентификацию субъекта. В другом варианте осуществления способ, кроме того, содержит оценку нежелательного иммунного ответа у субъекта до и/или после введения композиции. В одном варианте осуществления нежелательный иммунный ответ является вызовом специфических антител к терапевтическому белку и/или пролиферацией и/или активностью СЭ4+Т-клеток. специфической к терапевтическому белку, и/или пролиферацией и/или активностью В-клеток, специфической к терапевтическому белку.
В другом варианте осуществления иммунодепрессанты включают статин, ингибитор тТОК, ТОРсигнальный агент-β, кортикостероид, ингибитор митохондриальной функции, ингибитор р38, ΝΡ-κβ ингибитор, агонист аденозинового рецептора, агонист простагландина Е2, ингибитор фосфодиэстеразы-4, ингибитор деацетилазы гистонов или ингибитор протеасомы. В другом варианте осуществления ингибитором тТОК является рапамицин или аналог рапамицина.
В некоторых вариантах осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, предоставляются связыванием терапевтического белка с синтетическими наноносителями. В других вариантах осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, предоставляют свя- 3 027103 занным с полипептидом или пептидом, полученным или деривированным из терапевтического белка. В последующем варианте осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, содержат МНС класса Нрестриктированные и МНС класса П-рестриктированные эпитопы терапевтического белка и/или эпитопы В-клеток. В другом варианте осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, содержат МНС класса П-рестриктированные эпитопы терапевтического белка. В другом варианте осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, практически не содержат эпитопов терапевтического белка В-клеток. В другом варианте осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, содержат МНС класса П-рестриктированные эпитопы терапевтического белка и практически не содержат эпитопов В-клеток.
В одном варианте осуществления терапевтический белок содержит терапевтический белок для белковой заместительной или белковой дополняющей терапии. В другом варианте осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, содержат терапевтический белок для инфузий или инъекций, фермент, кофактор фермента, гормон, кровь или фактор свертываемости крови, цитокин, интерферон, фактор роста, моноклональное антитело, поликлональное антитело или белок, связанный с болезнью Помпе. В другом варианте осуществления терапевтический белок для инфузий или инъекций содержит тоцилизумаб, альфа-1 антитрипсин, хематид, альбинтерферон альфа-2Ь, руцин, тезаморелин, окрелизумаб, белимумаб, пеглотиказу, талиглюцеразу альфа, агальцидазу альфа или велаглюцеразу альфа. В другом варианте осуществления фермент содержит оксидоредуктазу, трансферазу, гидролазу, лиазу, изомеразу или лигазу. В другом варианте осуществления фермент содержит фермент для ферментной заместительной терапии лизосомной болезни накопления. В другом варианте осуществления фермент для ферментной заместительной терапии лизосомной болезни накопления содержит имиглюцеразу, агалактозидазу А (а-да1 А), агалсидазу бета, кислую а-глюкозидазу (САА), алглюкозидазу альфа, умизим, миозим, арилсульфатазу В, ларонидазу, альдуразим, идурсульфазу, элапразу или наглазим. В другом варианте осуществления цитокин содержит лимфокин, интерлейкин, хемокин, цитокин типа 1 или цитокин типа 2. В другом варианте осуществления кровь и факторы свертывания крови содержат фактор I, фактор II, тканевой фактор, фактор V, фактор VII, Р фактор VIII, фактор IX, фактор X, фактор Ха, фактор XII, фактор XIII, фактор фон Виллебранда, прекалликреин, высокомолекулярный кининоген, фибронектин, антитромбин III, кофактор гепарина II, белок С, белок 8, белок Ζ, белок Ζ-зависимый протеазный ингибитор (ΖΡ^, плазминоген, альфа-2-антиплазмин, тканевой активатор плазминогена (1РА), урокиназу, ингибитор-1 активатора плазминогена (РАН), ингибитор-2 активатора плазминогена (РА12), раковый прокоагулянт или эпоэтин альфа. В еще одном варианте осуществления терапевтический белок экспрессируется в клетках клеточной терапии, на их поверхности или посредством их.
В одном варианте осуществления композиция присутствует в эффективном количестве для уменьшения вызова антител, специфических к терапевтическому белку, и/или пролиферации, и/или активности СЭ4+Т-клеток, специфической к терапевтическому белку, и/или пролиферации, и/или активности Вклеток, специфической к терапевтическому белку.
В другом варианте осуществления средняя нагрузка иммунодепрессантов и/или антигенов на первое и/или второе множество синтетических наноносителей находится в диапазоне от 0,0001 до 50%. В другом варианте осуществления средняя нагрузка иммунодепрессантов и/или антигенов на первое и/или второе множество синтетических наноносителей находится в диапазоне от 0,1 до 10%.
В одном варианте осуществления синтетические наноносители первого и/или второго множества содержат липидные наночастицы, полимерные наночастицы, металлические наночастицы, эмульсии на основе сурфактантов, дендримеры, бакиболлы, нанонити, вирусоподобные частицы или пептидные или белоковые частицы. В другом варианте осуществления синтетические наноносители первого и/или торого множества содержат липидные наночастицы. В другом варианте осуществления синтетические наноносители первого и/или торого множества содержат липосомы. В другом варианте осуществления синтетические наноносители первого и/или торого множества содержат металлические наночастицы. В последующем варианте осуществления металлические наночастицы содержат наночастицы золота. В последующем варианте осуществления синтетические наноносители первого и/или торого множества содержат полимерные наночастицы. В другом варианте осуществления полимерные наночастицы содержат полимеры без концевой метоксигруппы, блок-сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена. В еще одном варианте осуществления полимерные наночастицы содержат полиэстер, полиэстер, связанный с полиэфиром, полиаминокислотой, поликарбонатом, полиацетатом, поликеталем, полисахаридом, полиэтилоксазолином или полиэтиленимином. В другом варианте осуществления полиэстер содержит поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), сополимер молочной и гликолевой кислот или поликапролактон. В другом варианте осуществления полимерные наночастицы содержит полиэстер и полиэстер, связанный с полиэстером. В другом варианте осуществления полиэфир содержит полиэтиленгликоль или полипропиленгликоль.
В другом варианте осуществления в дисперсный состав частиц, измеренный путем динамического рассеяния светом наночастиц первого и/или второго множества, входят частицы диаметром больше 100 нм. В другом варианте осуществления диаметр больше 150 нм. В другом варианте осуществления диаметр больше 200 нм. В другом варианте осуществления диаметр больше 250 нм. В другом варианте осу- 4 027103 ществления диаметр больше 300 нм.
В последующем варианте осуществления соотношение синтетических наноносителей первого и/или второго множества больше чем 1:1, 1:1,2, 1:1,5, 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 или 1:10.
В последующем варианте осуществления композиция помимо того содержит фармацевтически приемлемый наполнитель.
В последующем варианте осуществления способ помимо того включает лечение субъекта терапевтическим белком. В одном варианте осуществления терапевтический белок применяют до, во время или после лечения композицией.
В другом варианте осуществления пациенту вводят одну или больше поддерживающих доз.
В другом варианте осуществления способ помимо того содержит оценку нежелательного иммунного ответа у субъекта до и/или после введения композиции и/или терапевтического белка. В другом варианте осуществления нежелательный иммунный ответ является вызовом антител, специфических к терапевтическому белку, и/или пролиферацией и/или активностью СЭ4+Т-клеток. специфической к терапевтическому белку, и/или пролиферацией и/или активностью В-клеток, специфической к терапевтическому белку.
В одном варианте осуществления введение первого и/или второго множества синтетических наноносителей и/или терапевтического белка осуществляется внутривенно, интраперитонеально, трансмукозально, орально, подкожным, пульмонально, интраназально, внутрикожно или внутримышечно. В другом варианте осуществления введение первого и/или второго множества синтетических наноносителей и/или терапевтического белка осуществляется путем ингаляции или внутривенно, подкожно или трансмукозально.
В другом аспекте предоставляется способ, включающий: (ί) производство первой популяции синтетических наноносителей, связанных с иммунодепрессантами, и (тт) производство второй популяции синтетических наноносителей, связанных с терапевтическими белками-презентируемыми АРС антигенами. В одном варианте осуществления первое множество и второе множества одинаковы. В другом варианте осуществления первое множество и второе множества различны. В другом варианте осуществления производимые первое и второе множества синтетических наноносителей такие, как описано где-либо в настоящем документе.
В одном варианте осуществления способ помимо того содержит производство лекарственной формы или композиции, содержащей первое и вторе множества производимых синтетических наноносителей. В другом варианте осуществления способ помимо того содержит создание композиции, содержащей первое множество и второе множество синтетических наноносителей, или лекарственной формы, доступной для введения субъекту. В последующем варианте осуществления способ помимо того содержит оценку уменьшения нежелательного иммунного ответа при помощи композиции, содержащей первое множество и второе множество синтетических наноносителей. В одном варианте осуществления нежелательный иммунный ответ является вызовом антител, специфических к терапевтическому белку, и/или пролиферацией и/или активностью СЭ4+Т-клеток, специфической к терапевтическому белку, и/или пролиферацией В-клеток и/или их активностью, специфической к терапевтическому белку.
В еще одном аспекте предоставлен процесс производства композиции или лекарственной формы, содержащей: (ί) первое множество синтетических наноносителей, связанных с иммунодепрессантами, и (ίί) второе множество синтетических наноносителей, связанных с антигенами, презентируемыми терапевтическим белком АРС, причем процесс включает этапы, как описано в любом из упомянутых в настоящем документе способов.
В другом аспекте предоставлена композиция или лекарственная форма, полученная при помощи любого из описаных в настоящем документе способа или процесса.
В другом аспекте любые из композиций или лекарственных форм, предоставленных в настоящем документе, могут быть использованы для терапии или профилактики.
В другом аспекте любые из представленных в настоящем документе композиций или лекарственных форм могут быть использованы как способ индуцирования толерогенного иммунного ответа на антигены терапевтического белка, клеточную терапию, белковую заместительную терапию, белковую дополнительную терапию или любой из способов, представленных в настоящем документе.
В другом вспекте предоставлено применение любых из указанных в данном документе композиций или лекарственных форм для производства лекарственного препарата, применяемого для индуцирования толерогенного иммунного ответа на антигены терапевтического белка, клеточную терапию, белковую заместительную терапию, белковую дополнительную терапию или любой из способов, представленных в настоящем документе.
В другом вспекте предоставлена лекарственная форма, содержащая любую из композиций, представленных в настоящем документе.
При некоторых способах исполнения любых из представленных в настоящем документе композиций или способов, представленные композиции вводят в целях профилактики на ранних стадиях иммунного ответа (например, на стадии иммуноглобулина М) и/или до формирования устойчивой анамнестической реакции и/или ответ иммуноглобулина О. При исполнении любых из представленных в настоя- 5 027103 щем документе композиций или способов представленные композиции и способы могут уменьшать частоту реагирования эффекторв Т-клеток на антиген и/или их способность продуцировать провоспалительные цитокины. При других способах исполнения любых из представленных в настоящем документе композиций или способов представленные композиции и способы увеличивают количество депрессивных регуляторных Т- или В-клеток, уменьшающих частоту возникновения нежелательных иммунных ответов на терапевтический белок.
При исполнении любых из представленных в настоящем документе композиций или вариантов осуществления антигены белковой природы включают вышеупомянутые эпитопы и могут быть связаны с синтетическими наноносителями. В другом варианте осуществления полипептиды или пептиды, которые включают не только один или несколько вышеупомянутых эпитопов, но и дополнительные аминокислоты, которые находятся с одной или обеих сторон эпитопа(ов), могут связываться с синтетическими наноносителями. В другом варианте осуществлени эпитопы сами связаны с синтетическими наноносителями.
Краткое описание фигур
Фиг. 1 Т-регуляторных клеток.
Фиг. 2 показано влияние изобретения, содержащего иммунодепрессант (рапамицин или симвастатин), на количество антиген-специфических эффекторов Т-клеток с синтетическими наноносителями (после однократной инъекции).
Фиг. 3 показано увеличение количества клеток в подколенных лимфатических узлах при применении синтетических наноносителей изобретения, содержащих иммунодепрессант (рапамицин или симвастатин) (после неоднократных инъекций).
Фиг. 4 1дС содержат иммунодепрессант рапамицин и антиген овальбумин.
Фиг. 5 содержат иммунодепрессант рапамицин и антиген овальбумин.
Фиг. 6 показано уменьшение уровня антиген-специфических иммуноглобулинов С при введении синтетических наноносителей, содержащих пептид овальбумина и иммунодепрессант рапамицин.
Фиг. 7 показано уменьшение количества антиген-специфических В-клеток при введении синтетических наноносителей, содержащих пептид овальбумина и иммунодепрессант рапамицин.
Фиг. 8 показано уменьшение количества СИ4+Т-клеток в лаважных пробах животных моделей с астмой, которую лечили синтетическими наноносителями, содержащими пептид овальбумина и иммунодепрессант.
Фиг. 9 показано уменьшение у животных моделей с астмой доли делящихся С.П4+ Т-клеток в результате введения синтетических наноносителей, содержащих пептид овальбумина и иммунодепрессант рапамицин.
Подробное описание изобретения
Прежде чем давать подробное описание настоящего изобретения следует понимать, что данное изобретение не ограничено исключительно представленными материалами или показателями процесса, так как они, безусловно, могут варьироваться. Также следует понимать, что терминология используется в настоящем документе в целях описания лишь отдельных вариантов осуществления, и использование альтернативной терминологии для описания настоящего изобретения не ограничено.
Все публикации, патенты и заявки на патенты, цитированные в настоящем документе, а также ранее или позже, включены в настоящее описание во всей полноте посредством ссылки для всех целей.
При упоминании в этой спецификации и прилагаемых пунктах формулы изобретения единственные формы предполагают множественные определяемые объекты, если только контекст явно не предполагает иное. Например, упоминание полимер содержит смесь двух или более одинаковых молекул или смесь молекул с разными молекулярными массами одного вида полимера, упоминание синтетический наноноситель относится к смеси двух или более таких синтетических наноносителей или совокупности таких синтетических наноносителей, упоминание молекула ДНК содержит смесь двух или более таких молекул ДНК или совокупность таких молекул ДНК, упоминание иммунодепрессант содержит смесь двух или более таких веществ или совокупность молекул иммунодепрессантов и тому подобное.
Применяемое в настоящем документе выражение содержат или его вариации, такие как содержит или содержащий, следует читать, как указывающие на включение любого упомянутого целого (например, признака, элемента, характеристики, свойства, этап способа/процесса или ограничение) или группы целых чисел (например, признаков, элемента, характеристик, свойств, этапов способа/процесса или ограничений), но не исключение любого другого целого или группы целых чисел. Таким образом, применяемое в настоящем документе выражение содержащий является включающим и не исключает дополнительные, неупомянутые целые или этапы способа/процесса.
В вариантах осуществления любых из приведенных в данном документе композиций и способов содержащий можно заменить на по сути состоящий из или состоящий из. Фразу по сути состоящий из в данном документе применяют как предписывающую указанное(ые) целое(ые) или этапы, а также в существенной степени не влияющие на характер или функцию заявленного изобретения. Применяемое в настоящем документе выражение состоящий применяют для указания наличия только упомянутого целого (например, признака, элемента, характеристики, свойства, этапа способа/процесса или ог- 6 027103 раничения) или группы целых (например, признаков, элемента, характеристик, свойств, этапов способа/процесса или ограничений).
A. Введение.
Как указано выше, современные конвенционные иммунодепрессанты имеют широкий спектр действия и обычно приводят к общей системной деактивации иммунной системы. Композиции и способы, представленные в настоящем документе, вызывают более направленные иммунные эффекты, например, делая возможной адресную доставку к иммунным клеткам-мишеням. Таким образом, композиции и способы помогают достичь иммунодепрессии более направленным способом. Обнаружено, что доставка иммунодепрессантов и антигенов, включающих МНС класса П-рестриктированные эпитопы, может значительно уменьшить выработку антиген-специфических антител, а также уменьшить образование антиген-специфических СЭ4+Т-клеток и В-клеток. Поскольку подобные иммунные ответы могут быть желательными при противодействии нежелательным иммунным ответам, которые генерируются при терапии терапевтическими белкам, и изобретение является полезным при стимуляции толерогенных иммунных ответов у тех субъектов, которые получали, получают или будут получать терапевтический белок, против которого уже возник или ожидается нежелательный иммунный ответ. Настоящее изобретение при некоторых вариантах осуществления предотвращает или подавляет нежелательные иммунные ответы, которые могут нейтрализовать положительный эффект определенных видов терапевтического введения.
Изобретатели неожиданно обнаружили, что проблемы и ограничения, упомянутые выше, можно разрешить, применяя изобретение, описанное в настоящем документе. В частности, изобретатели неожиданно обнаружили, что можно предложить синтетические наноносители и родственные методы для толерогенного иммунного ответа на терапевтические белки. Описанные в настоящем документе композиции включают композиции, содержащие: (ί) первое множество синтетических наноносителей, связанных с иммунодепрессантами, и (ίί) второе множество синтетических наноносителей, связанных с антигенами, презентируемыми терапевтическим белком АРС.
В другом аспекте представлены лекарственные формы любой из композиций. Такие лекарственные формы могут быть использованы для введения субъекту в случае необходимости (например, при потребности в толерогенных иммунных ответах, специфических к терапевтическому белку). В одном способе субъектом является лицо, которое получало, получает или будет получать терапевтический белок, против которого генерируются или ожидаются нежелательные иммунные ответы.
С другой стороны, любую из предоставленных в настоящем документе композиций вводят пациенту. Композицию могут вводить в эффективном количестве для уменьшения вызова нежелательного иммунного ответа против одного или нескольких терапевтических белков. В одном способе композицию вводят пациенту согласно протоколу, описанному выше, чтобы уменьшить нежелательный иммунный ответ на терапевтические белки у одного или нескольких субъектов. Нежелательный иммунный ответ может представлять собой генерирование антител, специфических к терапевтическому белку, пролиферацию и/или активность СЭ4+Т-клеток. или пролиферацию и/или активность В-клеток или их комбинации. Нежелательные иммунные ответы также могут являться вызовом других иммунных ответов исходя из вышесказанного. В вариантах осуществления эффективные количества или протокол вызывают или, как было показано, вызвали желательные иммунные ответы. Такие иммунные ответы включают уменьшение любых эффектов или их комбинаций, упомянутых выше. Такие иммунные ответы включают любые толерогенные иммунные ответы, например, такие, как описано в настоящем документе.
Композиции могут вводить пациенту до, во время или после введения ему терапевтического белка. В некоторых вариантах осуществления композиции синтетических наноносителей водят пациенту до формирования устойчивой анамнестической реакции. В некоторых вариантах осуществления предоставленные способы могут также включать введение терапевтического белка. В некоторых вариантах осуществления предоставленные композиции могут быть введены пациенту, который получал, получает или будет получать терапевтический белок, в количестве одной или нескольких поддерживающих доз. В таких вариантах осуществления предоставленные композиции вводят так, что нежелательный иммунный ответ уменьшается на протяжении определенного периода времени. Примеры подобных периодов времени приведены в настоящем документе.
В еще одном аспекте предоставлен способ получения (ί) первого множества синтетических наноносителей, связанных с иммунодепрессантами, и (ίί) второго множества синтетических наноносителей, связанных с антигенами, презентируемыми терапевтическим белком АРС. В одном варианте осуществления способ помимо того включает создание лекарственной формы, содержащей первое или второе множества синтетических наноносителей.
Настоящее изобретение более детально будет описано ниже.
B. Определения.
Введение или лечение подразумевает предоставление вещества пациенту фармацевтически полезным способом.
Эффективное количество в контекстве композиции или лекарственной формы или введения субъекту подразумевает такое количество композиции или лекарственной формы, которое вызывает один или несколько желательных иммунных ответов у субъекта, например вызов толерогенного иммунного ответа
- 7 027103 (например, уменьшение пролиферации, активации, индукции, рекрутинга антиген-специфических СЭ4+Т-клеток или антиген-специфических В-клеток или уменьшение выработки антигенспецифических антител). Таким образом, в некоторых вариантах осущетсвления эффективное количество является любым количеством предоставленной в данном документе композиции, которое вызывает один или несколько таких желательных иммунных ответов. Это количество можно применять ίη νίίτο или ίη νίνο. При введении ίη νίνο количество может быть таким, что врач-клиницист может убедиться в его клиническом преимуществе для субъекта, который нуждается в антиген-специфической толеризации.
Эффективные количества могут включать только снижение уровня нежелательного иммунного ответа, хотя при некоторых способах они включают также и предотвращение нежелательного иммунного ответа. Эффективные количества могут также включать задержку возникновения нежелательного иммунного ответа. Количество, являющееся эффективным, также может являться таким количеством предоставленной в настоящем документе композиции, которое вызывает желательный терапевтический ожидаемый результат или желательный терапевтический результат. Эффективные количества преимущественно вызывают у субъекта в результате толерогенный иммунный ответ к антигену. Достижение любого из вышеупомянутых эффектов может быть отслежено с помощью распространенных методов.
В некоторых варинтах осуществления в любых из предоставленных композиций и способов эффективное количество является таким, при котором желательный иммунный ответ сохраняется у субъекта в течение по меньшей мере 1 недели, по меньшей мере 2 недель, по меньшей мере 1 месяца, по меньшей мере 2 месяцев, по меньшей мере 3 месяцев, по меньшей мере 4 месяцев, по меньшей мере 5 месяцев, по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 9 месяцев, по меньшей мере 1 года, по меньшей мере 2 лет, по меньшей мере 5 лет или дольше. В других вариантах осуществления любой из предоставленных композиций и способов эффективное количество таково, что вызывает измеряемый желательный иммунный ответ, например измеряемое уменьшение имммунного ответа (например, к специфическому антигену), по меньшей мере на 1 неделю, по меньшей мере на 2 недели, по меньшей мере на 1 месяц, по меньшей мере на 2 месяца, по меньшей мере на 3 месяца, по меньшей мере на 4 месяца, по меньшей мере на 5 месяцев, по меньшей мере на 6 месяцев, по меньшей мере на 9 месяцев, по меньшей мере на 1 год, по меньшей мере на 2 года, по меньшей мере на 5 лет или больше.
Эффективные количества будут зависеть, конечно, от особенностей субъекта, получающего лечение; от серьезности состояния, болезни или нарушения; от индивидуальных показателей субъекта, таких как возраст, физическое состояние, рост и вес; от продолжительности введения, от природы одновременной терапии (если ее применяют); от специфического способа введения и подобных факторов, зависящих от знаний и опыта лечащего врача. Эти факторы широко известны в данной области и могут рассматриваться как обычный эксперимент. В целом предпочтительно, чтобы применялась максимальная доза, т. е. наивысшая безопасная доза, в соответствии с результатами тщательной медицинской оценки. Специалисты в данной области должны понимать однако, что пациент может настаивать на применении более низкой или приемлемой дозы по медицинским причинам или практически по любой другой причине.
В целом, дозы иммунодепрессантов и/или антигенов в композиции изобретения могут находиться в диапазоне от около 10 μ/кг до около 100 г<44ц. В некоторых вариантах осуществления дозы могут находиться в диапазоне от около 0,1 до около 100 мг/кг. В очередных вариантах осуществления дозы могут находиться в диапазоне от около 0,1 до около 25 мг/кг, от около 25 до около 50 мг/кг, от около 50 до около 75 мг/кг или от около 75 до около 100 мг/кг. Альтернативно, дозу можно вводить посредством ряда синтетических наноносителей, которые обеспечивают желательное количество иммунодепрессантов и/или антигенов. Например, полезные дозы включают количества больше чем 106, 107, 108, 109 или 1010 синтетических наноносителей на одну дозу. Другие примеры полезных доз включают значения в диапазоне от около 1х 106 до около 1х1010, от около 1х107 до около 1х109 или от около 1х108 до около 1х109 синтетических наноносителей на одну дозу.
Антиген означает антиген В-клетки или антиген Т-клетки. Тип(ы) антигенов подразумевает молекулы, имеющие одинаковые или практически одинаковые антигенные характеристики. В некоторых вариантах осуществления антигенами могут быть белки, полипептиды, пептиды, липопротеины и гликолипиды, полинуклеотиды, полисахариды, и они могут содержаться или экспрессироваться в клетках. В некоторых вариантах осуществления, например, когда антигены с трудом поддаются определению или характеристике, антигены могут находиться внутри клетки или препарата ткани, фрагментах клеток, экзосомах клеток, кондиционированных средах и так далее. Антиген может комбинироваться с синтетическими наноносителями в той же форме, которую вводят пациенту и которая вызывает нежелательный иммунный ответ, но может также быть ее частью или производным. В случае фрагмента или производного, однако, желаемый иммунный ответ на форму представленную таким субъектом является предпочтительным результатом с предусмотренными композициями и способами.
Термин антиген-специфический относится к любому иммунному ответу, который вызывает присутствие антигена или его части или который генерирует молекулы, специфически распознающие и связывающие антиген. Например, когда иммунный ответ является продуцированием антигенспецифических антител, образуются антитела, которые специфически связывают антиген. Другим при- 8 027103 мером является имммунный ответ, при котором происходит пролиферация антиген-специфических Вклеток или СЭ4+ Т-клеток и/или их активность, причем пролиферация и/или активность вызвана распознаванием антигена или его части, одного или в комплексе с молекулами МНС, В-клетками и т. д.
Оценка иммунного ответа означает любое измерение или определение уровня, присутствия или отсутствия, уменьшения, увеличения и т. д. иммунного ответа ίη νίίτο или ίη νίνο. Подобные измерения или определения могут быть произведены на одном или нескольких образцах, полученных от субъекта. Подобные измерения могут быть произведены любым из предоставленных в настоящем документе методов или другими, известными в данной области.
Субъектом с повышенным риском является такой пациент, в отношении которого лечащий врач уверен, что есть вероятность заболевания, нарушения или состояния, как описано в настоящем документе, или есть вероятность возникновения нежелательного иммунного ответа, как описано в настоящем документе.
В среднем в контексте настоящего документа относится к среднему арифметическому, если не указано другое.
Антиген В-клетки относится к любому антигену, который распознается В-клеткой и запускает в ней иммунный ответ (например, антиген, который специфически распознается В-клеткой или ее рецептором). В некоторых вариантах осуществления антиген Т-клетки также является антигеном В-клетки. В других вариантах осуществления антиген Т-клетки не является антигеном В-клетки. Антигены В-клеток включают белки, пептиды и т. д., но не ограничены ими. В некоторых вариантах осуществления антиген В-клеток содержит небелковый антиген (т. е. небелковый и непептидный антиген).
Одновременно означает введение пациенту двух или больше веществ способом, который совпадает во времени предпочтительно в достаточном объеме, чтобы обеспечить модуляцию иммунного ответа. В вариантах осуществления одновременное введение может происходить путем введения двух или более веществ в одной и той же лекарственной форме. В других вариантах осуществления одновременное введение может включать введение двух или больше веществ в различных лекарственных формах в пределах определенного периода времени, предпочтительно в течение 1 месяца, предпочтительней в течение 1 недели, еще более предпочтительно в 1 день или еще лучше в течение 1 часа.
Связь, или связанные, или связи (и тому подобное) означает химически ассоциированные друг с другом в одну частицу (например, в функциональную группу). В некоторых вариантах осуществления связь является ковалентной, то есть связывание происходит в присутствии ковалентной связи между частицами. При нековалентных вариантах нековалентное связывание происходит посредством нековалентных взаимодействий, включающих взаимодействия зарядов, но не ограниченное ими, химическое сродство, металлокоординационные взаимодействия, физическую адсорбцию, взаимодействия типа хозяингость, гидрофобные взаимодействия, ТТ стэкинг-взаимодействие, водородные связи, взаимодействия ван дер Ваальса, магнитные взаимодействия, электростатические взаимодействия, взаимодействия между диполями и/или комбинации вышеуказанного. В вариантах осуществления инкапсуляция является формой связывания.
Деривированный означает приготовленный из вещества или с использованием данных о веществе, но не полученный из вещества. Подобные вещества могут являться в значительной степени модифицироваными или преобразованными формами веществ, полученных непосредственно из биологического материала. Такие вещества также могут включать вещества, полученные с использованием данных, связанных с биологическим материалом.
Лекарственная форма означает фармакологически и/или иммунологически активное вещество в посреднике, носителе, наполнителе или приспособлении, удобном для введения вещества пациенту.
Инкапсулировать означает заключать по меньшей мере часть вещества в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления осуществления вещество полностью в синтетическом наноносителе. В других способах осуществления большая часть или все вещество, которое инкапсулировано, не подвергается воздействию локального окружения, внешнего по отношению к синтетическому наноносителю. В других способах не более 50, 40, 30, 20, 10 или 5% (вес./вес.) выделяется в местную среду. Инкапсуляция отличается от абсорбции, при которой все вещество или его большая часть находится на поверхности синтетического наноносителя и остается снаружи синтетического наноносителя во внешней среде.
Эпитоп, также известный как антигенная детерминанта, является частью антигена, которая распознается иммунной системой специфически, например, антителами, В-клетками или Т-клетками. В контексте настоящего документа МНС класса Ι-рестриктированные эпитопы являются эпитопами, которые презентируются иммунным клеткам молекулами МНС I класса, находящимися на клетках с ядрами. МНС класса ΙΙ-рестриктированные эпитопы являются эпитопами, которые презентируются иммунным клеткам молекулами МНС II класса, находящимися на антиген-презентирующих клетках (АРС), например на профессиональных антиген-презентирующих иммунных клетках, таких как макрофаги, В-клетки и дендритные клетки, или на негематопоэтических клетках, таких как гепатоциты. Эпитопы В-клеток являются молекулярными структурами, которые распознаются антителами или В-клетками. В некоторых вариантах осуществления сам эпитоп является антигеном.
- 9 027103
В данной области известны многие эпитопы и некоторые примеры эпитопов, соответствующих данному изобретению, содержат эпитопы, внесенные в списки базы данных иммунных эпитопов, но не ограничены ими (ххлхлу.пптипеерПоре.огу, Уйа К., 2агеЬзк1 Ь., ОтеепЪаит 1.Л., Етат1 Η., Ηοοί I., 8аНт1 Ν., Эат1е К., 8еГГе А., РеГегз В. ТЬе 1ттипе ерйоре йаГаЬазе 2.0. Хис1е1с Ас1йз Кез. 2010 1ап;38(ОаГаЬазе 13зие):П854-62; полный перечень которых, а также все статьи базы данных ΙΕΌΒ уегзюп 2.4, АидизГ 2011, и в особенности все эпитопы, упомянутые в настоящем документе, включены сюда посредством данной ссылки). Эпиопы также могут быть идентифицированы при помощи общедоступных методов, например описанных у ^апё Е 8Мпеу 1, Кип Υ, Зейе А, Ьипй
О, №е1зеп М, Ре1егз В. 2010. рерОйе ЫпШпд ргесНсОопз £ог ΗΡΑ ϋΚ, ϋΡ апй ϋζ) то1еси1ез.
ВМС ВютГогтайсз 2010, 11:568; \Уапд Р, 31йпеу 1, ϋοχν С, МоШё В, Зейе А, Ре1егз В.
2008. А зуз1етайс аззеззтеп! о£МНС с1азз II рерОйе Ыпйтд ргссПсОопз апй суа,иаОоп о£ а сопзепзиз арргоасй. РРоЗ Сотри! Βΐοΐ. 4(4):е1000048; №е1зеп М, Рипй О. 2009. ΝΝ-айдп.
Ап агййс1а1 пеига1 пс1\уогк-Ьазсй айдптепГ а1§опШгп Гог МНС с1азз II рерОйе Ыпйтд ргсШсОоп. ВМС ВютГогтаОсз. 10:296; №е1зеп М, Рипйедаагй С, Ьипй О. 2007. РгсШсОоп о!
МНС с1азз II Ыпйтд аГПпйу изтд ЗММ-айдп, а ηονοί зШЬШгайоп таОгх аНдптеп! теШой.
ВМС ВютГогтайсз. 8:238; Вт НН, ЗШпеу .£ Ре!егз В, ЗаООатигШу М, ЗпйсЫ А, РигГоп КА, МоШё ВК, СЫзап РУ, \УаГктз ϋΐ, Зейе А. 2005. Гттиподепейсз. 57:304-314; 81игто1о Τ, Βοηο Ε, ϋίηβ .1. Каййпггат к. Тиегес1 О, ЗаЫп ЕГ, ВгахепШа1ег М, С1а11а//1 Ρ, ΡτοΙΙί МР,
ЗтгдадНа Р, Наттег 1. 1999. Оепегайоп о£ йззие-зресШс апй ргогшзсиоиз НРА Идапй йа1аЬазез изтд ϋΝΑ пйсгоаггауз апй у1г!иа1 НРА с1азз II табдсез. Ыа1 ВюГесйпок 17(6):555561; №е1зеп М, Рипйедаагй С, ХУогтпд Р, РаиетоИег 8Р, РатЪегЙг К, Вииз 8, Вгипак 8,
Рипй О. 2003. КейаЫе ргеШсйоп о£Т-се11 ерйорез изтд пеига1 перуогкз νζϊΐΐτ ηονεί зес|испсе гергезеп!айопз. ΡτοΙείη δει 12:1007-1017; Вш НН, ЗЫпеу I, Ре1егз В, ЗаЙнатигШу Μ, ЗнОсЮ А, РигГоп КА, МоШе ВК., СЫзап РУ, ХУаООпз ϋΐ, Зейе А. 2005. Аи!ота!ей депегаОоп апй еуа1иа0оп о! зрсШПс МНС Ыпйтд ргссПсОус 1оо1з: АКБ тайгх аррйсайопз. ОптиподепеОсз 57:304-314; Ре1егз В, Зейе А. 2005. Оепегайпд с|иап0ййАс тойе1з йезсАЫпд Ше зсс|испсе зресШсйу оГЫо1одюа1 ргосеззез ννΐύι Ше зГаЫЮей таках теШой. ВМС ВютГоппайсз
6:132; СЬои ΡΥ, Разтап СЮ. 1978. РгеШсйоп о£ Ше зесопйагу з1гис1иге о£рго!етз кот Шегг атто асМ зедиепсе. Айу Еп/уто1 Ке1а1 Агеаз Μοί Βΐοΐ 47:45-148; Εηιΐηΐ ЕА, НидЬез IV,
Рег1о\у ϋδ, Водег I. 1985.Ыйисйоп оГЪераййз А уггиз-пеиЦайгтд апйЬойу Ьу а уЫиззресйгс зупШейс рерййе. I У1го1 55:836-839; Кагр1из РА, ЗсЬиЫ ОЕ. 1985. РгеШсйоп о! скат ПехШПйу ίη рго!етз. АаШгАззепзсНаПеп 72:212-213; Ко1азкаг АЗ, Топдаопкаг РС. 1990. А зет1-етртса1 теШой 1ог ргеШсйоп о! апОдетс йе1егттап1з оп рго!ет апйдепз. РЕВ 8 Рей276:172-174; Рагкег ΙΜ, Оио ϋ, Нойдез КЗ. 1986. Νενν ЪуйгорЫНсйу зса1е йегАей кот ЫдН-регГогтапсе Псрпй сЫотаЮдгарЬу рерййе ге!епйоп йа!а: согге1айоп о! ргей1с!ей з иг Гасс гезЫиез ννΐύι апйдетску апй Х-гау-йегАей ассеззИЯе зйез. ВюсЬепйзйу 25:5425-5432;
Рагзеп ΙΕ, Рипй О, №е1зеп М. 2006. Ьпргоуей теШой Гог ргеШсйпд Нпеаг В-се11 ерйорез.
Ьптипоте Кез 2:2; Ропотагепко IV, Воигпе РЕ. 2007. АпйЬойу-рго1ет т1егасйопз:
ЬепсЬтагк Йа1азе1з апй ргеШсйоп 1оо1з еуаЫайоп. ВМС 81гис1 Βΐοΐ 7:64; Наз1е Апйегзеп Р, №е1зеп М, Рипй О. 2006. РгеШсйоп оГгезЫиез ίη Шзсопйпиоиз В-се11 ерЬорез изтд рго!ет 3ϋ з1гис1игез. Рго1ет 8с1 15:2558-2567; Ропотагепко IV, Вш Η, Ρΐ Ά, Риззейег Ν, Воигпе РЕ, ЗеИе А, Ре1егз В. 2008. ЕШРго: а ηενν зйисШге-Ъазей 1оо1 Гог Ше ргеШсйоп оГ апйЬойу ерйорез. ВМС ВютГогтайсз 9:514; №е1зеп М, Рипйедаагй С, ВйсЬег Т, Ре1егз В, Зейе А,
ЫзГезеп 8, Вииз 8, апй Рипй О. 2008. РРоЗ СотриГ Вю1.4(7)е1000107.
Количественные предсказания связывания пептидов с любой молекулой НРАЮК известной последовательности: №ГМНС11рап; полное содержание каждого из которых включено сюда посредством дан- 10 027103 ной ссылки для описания способов или алгоритмов идентификации эпитопов.
Вызов означает стимуляцию действия, такого как иммунный ответ (т. е. толерогенный иммунный ответ), либо непосредственную, либо опосредованную, такую как при помощи третьей стороны, которая принимает действия с опорой на слова или поступки другого.
Идентификация является любым действием или комплексом действий, которые позволяют врачуклиницисту определить, что пациент получит пользу от способов и композиций, предоставленных в настоящем документе. Предпочтительно идентифицированным субъектом является тот, кто нуждается в толерогенных иммунных ответах, предоставленных в данном документе. Действие или комплекс действий могут являться напрямую или косвенно, такими как, но не ограниченными, независимой третьей стороной, которая принимает действия с опорой на слова или поступки другого.
Иммунодепрессант означает соединение, которое вызывает у АРС проявление иммунодепрессивного (т. е. толерогенного) эффекта. Иммунодепрессивный эффект обычно относится к продуцированию или проявлению цитокинеза или других факторов АРС, которые уменьшают, ингибируют или предотвращают нежелательный иммунный ответ или которые вызывают желательный иммунный ответ. Когда АРС оказывают иммунодепрессивный эффект на иммунные клетки, распознающие антиген, презентированный АРС, об иммуннодепрессивном эффекте говорят, что он специфический к презентированному антигену. Подобный эффект упоминается в настоящем документе как толерогенный эффект. Не привязываясь к какой-либо определенной теории считают, что иммуннодепрессивный или толерогенный эффект является результатом доставки иммунодепрессанта к АРС, предпочтительно в присутствии антигена (т. е. вносимого антигена или такого, который уже присутствует ίη νίνο). Соответственно иммунодепрессант содержит соединения, которые обеспечивают толерогенный иммунный ответ на антиген, который может быть предоставлен или не предоставлен в одной и той же или иной композиции. В одном способе иммунодепрессант заставляет АРС запускать регуляторный фенотип у одной или нескольких иммунных эффекторных клеток. Например, регуляторный фенотип может характеризоваться ингибированием продуцирования, вызова, стимуляции или рекрутинга антиген-специфических СО4+Т-клеток или В-клеток, ингибированием образования антиген-специфических антител, образования, вызова, стимуляции или рекрутинга регуляторных Т- клеток (например, ί'.Ό4+ί'.Ό251ιί§1ιΡο\Ρ3+ регуляторных Т-клеток), и т. д. Это может быть результатом конверсии СО4+Т-клеток или В-клеток в регуляторный фенотип. Это также может быть результатом вызова Ρο\Ρ3 в другие иммунные клетки, такие как СЭ8+Т-клетки. макрофаги и ίΝΚΤ-клетки (нативные киллеры). В одном варианте осуществления иммунодепрессант является таким, который действует на ответ АРС после того, как он обработал антиген. В другом варианте осуществления иммунодепрессант не влияет на обработку антигена. В последующем варианте осуществления иммунодепрессант не является сигнальной молекулой апоптоза. В другом способе иммунодепрессант не является фосфолипидом.
Иммунодепрессанты содержат, но не ограничиваются статинами; ингибиторами шТОК, такими как рапамицин или аналог рапамицина; сигнальными агентами ΤΟΡ-β; агонивкортикостероидами ТСР-В; ингибиторами митохондриальной функции, например ротеноном; ингибиторами р38, ΝΡ-κ-В ингибитокв ингибиторами, например 6Вю, дексаметазоном, ТСРА-1, ΙΚΚ VII; агонистами рецептора аденозина, агонистами простагландина Е2 (ΡΟΕ2), например мизопростолом; ингибиторами фосфодиэстеразы, например ингибитором фосфодиэстеразы-4 (ΡΌΕ4), таким как ролипрам; ингибиторами протеасомы; ингибиторами киназы; агонистами рецепторов, связанных с Ο-белком; антагонистами рецепторов, связанных с Ο-белком; глюкокортикоидами; ретиноидами; ингибиторами цитокинов; ингибиторами рецепторов цитокинов; активаторами рецепторов цитокинов; антагонистами рецепторов, активируемых пероксисомой; агонистами рецепторов, активируемых пролиферацией пероксисомы; ингибиторами деацетилазы гистонов; ингибиторами кальциневрина; ингибиторами фосфатазы; ингибиторами ΡΙ3ΚΒ, такими как ΤΟΧ221; ингибиторами автофагии, такими как 3-метиладенин; ингибиторами рецепторов арилгидрокарбона; ингибитором протеасомы I (Ρ8Ι) и окисленными АТФ, такими так блокаторы рецептора Р2Х. Иммунодепрессанты также включают ИДО (изодецилоктилсульфалат), витамин Ό3, циклоспорины, такие как циклоспорин А, ингибиторы рецептора арилгидрокарбона, ресвератрол, азатиопурин (Л/а), 6меркаптопурин (6-МР), 6-тиогуанин (6-ΤΟ), ΡΚ506, санглиферин А, сальмерерол, микофенолят мофетил (ΜΜΡ), аспирин и другие ингибиторы ЦОГ (циклооксигеназы), нифлумовую кислоту, эстриол и триптолид. При различных способах иммунодепрессант может содержать любой из названных агентов.
Иммунодепрессант может быть соединением, которое оказывает иммунодепрессивный (т. е. толерогенный) эффект на АРС прямо или соединением, которое оказывает иммунодепрессивный (т. е. толерогенный) эффект опосредованно (т. е. будучи каким-либо образом обработанным после введения). Иммунодепрессанты, таким образом, включают неактивные формы лекарства любого из соединений, предоставленных в настоящем документе.
Иммунодепрессанты также включают нуклеиновые кислоты, которые кодируют пептиды, полипептиды или белки, предоставленные в настоящем документе, вызывающие иммунодепрессивный (т. е. толерогенный) иммунный ответ. В вариантах осуществления, таким образом, иммунодепрессант является нуклеиновой кислотой, кодирующей пептид, полипептид или белок, который вызывает иммунодепрес- 11 027103 сивный (т. е. толерогенный) иммунный ответ, и эта нуклеиновая кислота связана с синтетическим наноносителем.
Нуклеиновая кислота может являться ДНК или РНК, такой как мРНК. В вариантах осуществления композиции по настоящему изобретению содержат комплемент, например первичный комплемент, или вырожденный вариант (из-за вырождения генетического кода) любой из названных нуклеиновых кислот. В вариантах осуществления нуклеиновая кислота является экспрессирующим вектором, который может быть транскрибирован при перенесении в линию клеток. В вариантах осуществления экспрессирующий вектор может включать, кроме прочего, плазмиду, ретровирус или аденовирус. Нуклеиновые кислоты могут быть изолированы или синтезированы стандартными методами молекулярной биологии, методом ПНР (полимеразной цепной реакции) для получения фрагмента нуклеиновой кислоты, который затем очищают и клонируют в экспрессирующий вектор. Дополнительные методы, полезные в применении данного изобретения, можно найти в Сиггеи! Рго1осо1к ίη Мо1еси1аг Вю1оду 2007 Ьу 1оЬп \УПеу аиф §опк, 1пс.; Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬогаЮгу Мапиа1 (ТЫгФ ЕФйюп) 1окерЬ ЗатЬгоок, Ре!ег МасСа11ит Сапсег 1пк1Пи1е, Ме1Ьоите, Аик1гаИа; Ό;·ινίύ Кикке11, Итуегкйу оГ Техак 5>ои1Ь\уек1егп МеЫса1 СеШег, Иа11ак, Со1Ф 8ргтд НагЬог.
При различных способах иммунодепрессанты, предоставленные в настоящем документе, связаны с синтетическими наноносителями. Предпочтительно иммунодепрессант также является составляющей, которая дополняет вещество, составляющее структуру синтетического наноносителя. Например, в одном варианте осуществления, где синтетический наноноситель состоит из одного или нескольких полимеров, иммунодепрессант является соединением, которое дополняет один или несколько полимеров и связывается ими. В качестве другого примера в одном варианте осуществления, где синтетический наноноситель состоит из одного или нескольких липидов, иммунодепрессант также является соединением, которое дополняет один или несколько полимеров и связывается ими. В вариантах осуществления, например, когда вещество синтетического наноносителя также вызывает иммунодепрессивный (т. е. толерогенный) эффект, иммунодепрессант является составляющей, дополняющей вещество синтетического наноносителя, что приводит к иммунодепрессивному (т. е. толерогенному) эффекту.
Другие примеры иммунодепрессантов включают синтетические препараты, природные вещества, антитела (т. е. антитела против СЭ20, СИ3, СИ4), биологические препараты, углеводные препараты, наночастицы, липосомы, РИНА, антисмысловые нуклеиновые кислоты, аптамеры, метотрексат, нестероидные противовоспалительные препараты; финголимод; натализумаб; алемтузумаб; анти-СЭ3; такролимус (РК506) и т. п., но не ограничиваются ими, помимо того иммунодепрессанты, известные в данной области, и в этом отношении данное изобретение не ограничено.
Нагрузка иммунодепрессанта или антигена АРС, презентирующего терапевтический белок, является количеством иммунодепрессанта или антигена, презентируемого терапевтическим белком АРС, связанным с синтетическим наноносителем, основанным на общей массе веществ на всем синтетическом наноносителе (вес./вес.). Как правило, нагрузка рассчитывается в среднем на популяцию синтетического наноносителя. В одном варианте осуществления средняя нагрузка иммунодепрессанта на первое множество синтетических наноносителей находится в диапазоне от 0,0001 до 50%. В другом варианте осуществления средняя нагрузка антигена, презентируемого терапевтическим белком АРС, на первое и/или второе множество синтетических наноносителей находится в диапазоне от 0,0001 до 50%. В другом варианте осуществления нагрузка иммунодепрессанта и/или антигена, презентируемого терапевтическим белком АРС, находится в диапазоне от 0,01 до 20%. В последующем варианте осуществления нагрузка иммунодепрессанта и/или антигена, презентируемого терапевтическим белком АРС, находится в диапазоне от 0,1 до 10%. В последующем варианте осуществления нагрузка на иммунодепрессант и/или антигена, презентируемого терапевтическим белком АРС, находится в диапазоне от 1 до 10%. В другом варианте осуществления средняя нагрузка иммунодепрессанта и/или антигена, презентируемого терапевтическим белком АРС, составляет по меньшей мере 0,1%, по меньшей мере 0,2%, по меньшей мере 0,3%, по меньшей мере 0,4%, по меньшей мере 0,5%, по меньшей мере 0,6%, по меньшей мере 0,7%, по меньшей мере 0,8%, по меньшей мере 0,9%, по меньшей мере 1%, по меньшей мере 2%, по меньшей мере 3%, по меньшей мере 4%, по меньшей мере 5%, по меньшей мере 6%, по меньшей мере 7%, по меньшей мере 8%, по меньшей мере 9%, по меньшей мере 10%, по меньшей мере 11%, по меньшей мере 12%, по меньшей мере 13%, по меньшей мере 14%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 16%, по меньшей мере 17%, по меньшей мере 18%, по меньшей мере 19% или по меньшей мере 20% на популяцию синтетических наноносителей. В последующем варианте осуществления средняя нагрузка иммунодепрессанта и/или антигена, презентируемого терапевтическим белком АРС, составляет 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20% на популяцию синтетических наноносителей. При некоторых вышеуказанных вариантах осуществления средняя нагрузка иммунодепрессанта и/или антигена, презентируемого терапевтическим белком АРС, составляет не более 25% на популяцию синтетических наноносителей. В разных вариантах осуществления нагрузку рассчитывали так, как описано в примерах.
При исполнении любых из предоставленных композиций и способов нагрузку рассчитывают следующим способом: Приблизительно 3 мг синтетических наноносителей центрифугируют, чтобы отде- 12 027103 лить надосадочную жидкость от осадка синтетического наноносителя. В осадок добавляют ацетонитрил, обрабатывают образец ультразвуком и центрифугируют, чтобы отделить любую нерастворимую фракцию. Надосадочную жидкость и осадок исследуют методом обращенно-фазной хроматографии, при этом показатель оптической плотности составляет 278 нм. Микрограмм (мкг), обнаруженный в осадке, используют для подсчета процента захвата (нагрузки), мкг надосадочной жидкости и осадке используют, чтобы подсчитать общий уловленный мкг.
Поддерживающая доза относится к дозе, вводимой пациенту после того, как начальная доза вызвала иммунодепрессивный (т. е., толерогенный) ответ у субъекта, в целях поддержания желательного иммунодепрессивного (т. е., толерогенного) ответа. Поддерживающая доза, например, может быть такой, которая поддерживает толерогенный эффект, полученный после начальной дозы, предотвращает нежелательный иммунный ответ у субъекта или предотвращает отнесение субъекта к группе риска возникновения нежелательного иммунного ответа, включая нежелательный уровень иммунного ответа. В некоторых вариантах осуществления поддерживающая доза является достаточной для поддержания соответственного желательного иммунного ответа.
Максимальный размер синтетического наноносителя означает наибольший размер наноносителя, измеряемый вдоль любой оси синтетическиого наноносителя. Минимальный размер синтетического наноносителя означает наименьший размер синтетического наноносителя, измеряемый вдоль любой оси синтетического наноносителя. Например, для сферического синтетического наноносителя максимальный и минимальный размеры синтетического наноносителя будут практически одинаковыми и будут равны его диаметру. Соответственно для кубического синтетического наноносителя минимальный размер синтетического наноносителя будет наименьшим из значений его высоты, ширины или длины, а максимальный размер синтетического наноносителя будет наибольшим из значений его высоты, ширины или длины. В варианте осуществления минимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительней по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце относительно общего количества синтетических наноносителей в образце равен или больше 100 нм. В варианте осуществления максимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце относительно общего количества синтетических наноносителей в образце равен или меньше 5 цм. Предпочтительно минимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце относительно общего количества синтетических наноносителей в образце больше 110 нм, более предпочтительно больше 120 нм, более предпочтительно больше 130 нм и еще более предпочтительно больше 150 нм. Соотношение максимального и минимального размеров изобретенных синтетических наноносителей могут отличаться в зависимости от варианта осуществления изобретения. Например, соотношения максимального и минимального размеров синтетических наноносителей могут находиться в диапазоне от 1:1 до 1000000:1, предпочтительно от 1:1 до 100000:1, более предпочтительно от 1:1 до 10000:1, более предпочтительно от 1:1 до 1000:1, еще более предпочтительно от 1:1 до 100:1 и наиболее предпочтительно от 1:1 до 10:1. Предпочтительно максимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце по отношению к общему количеству синтетических наноносителей в образце равен или меньше 3 цМ, более предпочтительно равен или меньше 2 цМ, более предпочтительно равен или меньше 1 цМ, более предпочтительно равен или меньше 800 нм, еще более предпочтительно равен или меньше 600 нм и наиболее предпочтительно равен или меньше 500 нм. В предпочтительных вариантах осуществления минимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце по отношению к общему количеству синтетических наноносителей в образце равен или больше 100 нм, более предпочтительно равен или больше 120 нм, более предпочтительно равен или больше 130 нм, более предпочтительно равен или больше 140 нм и наиболее предпочтительно равен или больше 150 нм. Измерение размеров синтетического наноносителя (например, диаметра) производят путем суспендирования синтетических наноносителей в жидкой (обычно водной) среде с использованием динамического рассеяния света (ЭБЗ) (например, используя аппарат ВтоокЪауеи 2е1аРЛЬ§). Например, суспензию синтетических наноносителей можно разбавить из водного буфера в очищенную воду до достижения конечной концентрации суспензии синтетических наноносителей приблизительно от 0,01 до 0,1 мг/мл. Разбавленную суспензию можно получить непосредственно внутри или перенести в подходящую кювету для ΌΕδ-анализа. Кювету затем помещают в ОЬ§, приводят к контролируемой температуре, а затем проверяют на наличие достаточного времени для приобретения стабильного и воспроизводимого распределения на основе соответствующих входов для вязкости среды и индексы преломления образца. Затем регистрируют эффективный диаметр или среднее распределения. Величина, или размер, или диаметр синтетических наноносителей относится к среднему значению дисперсного состава частиц, полученному при динамическом рассеянии света.
МНС относится к главному комплексу гистосовместимости, большой области генома или семейству генов, обнаруженных у большинства позвоночных, кодирующим молекулы МНС, которые прояв- 13 027103 ляют фрагменты или эпитопы процессируемых белоков на поверхности клетки. Презентация МНС: пептид на поверхности клетки позволяет исследование иммунным клеткам, обычно Т-клеткам. Существуют два общих класса молекул МНС: класс I и класс II. Обычно молекулы МНС класса I находятся на поверхности клеток, содержащих ядра, и презентируют пептиды цитотоксическим Т-клеткам. Молекулы МНС класса II находятся на поверхности определенных иммунных клеток, преимущественно макрофагов, В-клеток и дендритных клеток, совокупность которых известна под названием профессиональные АРС. Наиболее известными генами области МНС являются гены подгруппы, кодирующие антигенпрезентирующие белки на поверхности клеток. У человека эти гены называют антигенами лейкоцита человека (НЬА).
Не содержащий концевую метоксигруппу полимер относится к полимеру, по меньшей мере один конец молекулы которого оканчивается группой, отличной от метоксильной группы. В некоторых вариантах осуществления у полимера есть по меньшей мере два конца молекулы, которые оканчиваются группой, отличной от метоксильной группы. В других вариантах осуществления ни один конец молекулы полимера не оканчивается метоксильной группой. Неметокситерминированный плюроновый полимер относится к любому полимеру, кроме линейного плюроного полимера, оба конца молекулы которого оканчиваются метоксильной группой. Полимерные наночастицы, как представлено в настоящем документе, включают не содержащие концевую метоксигруппу полимеры или не содержащие концевую метоксигруппу плюроновые полимеры.
Полученный означает взятый непосредственно из вещества и применяемый практически без модификации и/или обработки.
Фармацевтически приемлемый наполнитель означает фармакологически неактивный материал, применяемый вместе с указанными синтетическими наноносителями для составления композиций по настоящему изобретению. Фармацевтически приемлемые наполнители включают ряд материалов, известных в настоящем уровне техники, в том числе без ограничения сахариды (такие как глюкоза, лактоза и т. п.), консерванты, такие как противомикробные средства, восстанавливающие средства, окрашивающие средства, солевой раствор (такой как фосфатно-солевой буфер) и буферы.
Протокол относится к любому режиму дозирования одного или нескольких веществ, вводимых пациенту. Режим дозирования может включать количество, частоту и/или способ введения. В некоторых вариантах осуществления такой протокол может быть применен при введении одной или нескольких композиций по настоящему изобретению одному или нескольким испытуемым. Иммунные ответы у этих испытуемых могут в дальнейшем быть измерены, чтобы определить, был ли протокол эффективным для уменьшения нежелательного иммунного ответа или вызова желательного иммунного ответа (т. е. стимуляции толерогенного эффекта). Любой другой терапевтический и/или профилактический эффект также может быть измерен вместо упомянутых иммунных ответов или в дополнение к ним. Дал протокол желательный эффект или нет можно определить любыми способами, предоставленными в настоящем документе, или другими, известными в данной области. Например, можно получить популяцию клеток от субъекта, которого лечат предложенной в настоящем документе композицией в соответствии со специфическим протоколом, чтобы определить, произошли ли вызов, активация, уменьшение количества и т. п. специфических иммунных клеток, цитокинов, антител и т. п. Методы, пригодные для определения присутствия и/или количества иммунных клеток, включают проточные цитометрические методы (например, РАС8) и иммуногистохимические методы, но не ограничены ими. Антитела и другие связывающие агенты для специфического окрашивания иммунных клеточных маркеров применяются в промышленных масштабах. Подобные комплекты, как правило, содержат окрашивающие реагенты для множественных антигенов, которые позволяют провести РАС8-анализ, сепарацию и/или количественную оценку желательной популяции клеток из их гетерогенной популяции.
Обеспечение субъекта является любым действием или комплексом действий, которые позволяют врачу войти в контакт с субъектом и вводить ему композицию, предоставленную выше в настоящем документе, или применять способ, описанный выше в настоящем документе. Предпочтительно субъектом является лицо, которое нуждается в толерогенных иммунных ответах, предоставленных в настоящем документе. Действие или комплекс действий могут являться напрямую или косвенно, такими как, но не ограниченными, независимой третьей стороной, которая принимает действия с опорой на слова или поступки другого.
Субъект относится к животным, в том числе теплокровным животным, например человеку и приматам; птицам; домашним или сельскохозяйственным животным, например кошкам, собакам, овцам, козам, крупному рогатому скоту, лошадям и свиньям; лабораторным животным, например мышам, крысам и морским свинкам; рыбам; рептилиям; диким и живущим в зоопарках животным и т .п.
Практически не содержит эпитопов В-клеток означает отсутствие эпитопов В-клеток в количестве (самих клеток, в контексте антигена, связанных с носителем или в составе изобретенной композиции), достаточном для существенной активации ответа В-клеток. В вариантах осуществления композиция, практически не содержащая эпитопов В-клеток, не содержит заметного количества антигена эпитопов Вклеток. В других вариантах осуществления такая композиция может содержать заметное количество антигена эпитопов В-клеток, однако это количество неэффективно для заметного иммунного ответа В- 14 027103 клеток (самих клеток, в контексте антигена, связанных с носителем или в составе изобретенной композиции), такого как образование антиген-специфических антител или пролиферации антигенспецифических В-клеток и/или их активности, или неэффективно для вызова заметного измеримого иммунного ответа В-клеток (самих клеток, в контексте антигена, связанных с носителем или в составе изобретенной композиции). В некоторых вариантах осуществления заметный измеримый имммунный ответ В-клеток является таким, который вызывает или, вероятно, вызовет побочный эффект у субъекта. В других вариантах осуществления заметный измеримый иммунный ответ В-клеток имеет более высокий уровень такого же типа иммунного ответа (т. е. образование антиген-специфических антител или пролиферация антиген-специфических В-клеток и/или их активность), возникающего под контролем антигена (т. е. такого, который не содержит антигены эпитопов В-клеток или не стимулирует иммунные ответы Вклеток). В некоторых вариант осуществления заметный измеримый имунный ответ В-клеток, например измерение титра антитела (например, с помощью ЕЫ8А), является 2-кратным, 3-кратным, 4-кратным, 5кратным, 6-кратным, 7-кратным, 8-кратным, 9-кратным, 10-кратным, 15-кратным, 20-кратным или более многократным, чем аналогичный ответ, продуцированный в контроле (например, при контрольном антигене). В других вариантах осуществления композиция, практически не содержащая эпитопов В-клеток, вызывает появление небольшого титра антиген-специфических антител или не вызывает его появление вообще (самих клеток в контексте антигена, связанных с носителем, или в составе изобретенной композиции). Такие композиции включают композиции, вызывающие титр антитела (как значение ЕС50) меньше 500, 400, 300, 200, 100, 50, 40, 30, 20 или 10. В других вариантах осуществления заметный измеримый иммунный ответ В-клеток экспрессируется при таком уровне количества или пролиферации Вклеток, который составляет 10, 25, 50, 100% или 2-кратен, 3-кратен, 4-кратен, 5-кратен, 6-кратен, 7кратен, 8-кратен, 9-кратен, 10-кратен, 15-кратен, 20-кратен или более многократен по сравнению с аналогичным ответом в контроле. Другие способы измерения ответов В-клеток известны специалистам в данной области.
В вариантах осуществления, чтобы убедиться в том, что композиция практически не содержит эпитопов В-клеток, антигены выбирают таким образом, что они не содержат эпитопов В-клеток, связанных с синтетическими наноносителями, представленными в настоящем документе. В других вариантах осуществления, чтобы убедиться в том, что композиция практически не содержит антигенов эпитопов Вклеток, синтетические наноносители, связанные с антигеном, производят и тестируют на иммунные ответы В-клеток (например, продукцию антиген-специфических антител, пролиферацию и/или активность В-клеток). Композиции, обладающие желательными свойствами, в дальнейшем могут отбирать.
Синтетический(ие) наноноситель(и) относится к отвлеченному объекту, не существующему в природе, который обладает по меньшей мере одним измерением, размер которого меньше или равен 5 мкм. Наночастицы альбумина, как правило, добавляют в качестве синтетического наноносителя, однако при некоторых способах синтетические наноносители не включают наночастицы альбумина. В вариантах осуществления изобретательские синтетические наноносители не включают хитозан. В других вариантах осуществления изобретательские синтетические наноносители не включают липидные наночастицы. В других вариантах осуществления изобретательские синтетические наноносители не включают фосфолипид.
А синтетический наноноситель может являться одной основанной на липидах наночастицей (также упоминаемой в настоящем документе как липидная наночастица, т. е. большая часть составляющего ее вещества является липидом)или их совокупностью, полимерными наночастами, металлическими наночастицами, эмульсиями на основе сурфактантов, дендримерами, бакиболлами, нанонитями, вирусоподобными частицами (т. е. частицами, основой строения которых являются вирусные белки, но которые не являются инфекционными или имеют низкую инфекционность), пептидными или основанными на белках частицами (также упоминаемыми в настоящем документе как белковые частицы, т. е. частицы, большая часть составляющего вещества которых является пептидами или белками) (такие как наночастицы альбумина) и/или наночастицами, разработанными из совокупности наноматериалов, например липидно-полимерные частицы, но не ограничивается ими. Синтетические наноносители могут иметь различные формы, в том числе сферическую, кубическую, пирамидальную, вытянутую, цилиндрическую, тороидальную и другие, но не ограничены ими. Синтетические наноносители в соответствии с изобретением имеют одну или несколько поверхностей. Например, синтетические наноносители, которые могут быть адаптированы для применения в практике настоящего изобретения, включают: (1) биоразлагаемые наночастицы, как раскрыто в патенте США 5543158, Сте£ е! а1., (2) полимерные наночастицы, как раскрыто в опубликованной заявке на патент США 20060002852, 8а1итап е! а1., (3) наночастицы, конструируемые литографским способом, как раскрыто в опубликованной заявке на патент США 20090028910, Не81топе е! а1., (4) раскрытие сущности изобретения \УО 2009051837, νοη АпДпап е! а1., (5) наночастицы, как раскрыто в опубликованной заявке на патент США 20080145441, РепаДек е! а1., (6) белковые наночастицы, как раскрыто в опубликованной заявке на патент США 20090226525, Де 1ок Κίοδ е! а1., (7) вирусоподобные частицы, как раскрыто в опубликованной заявке на патент США 20060222652, 8еЬЬе1 е! а1., (8) связанные с нуклеиновой кислотой вирусоподобные частицы, как раскрыто в опубликованной заявке на патент США 20060251677, ВасЬтапп е! а1., (9) вирусоподобные частицы, как описано в
- 15 027103
АО 2010047839А1 или АО 2009106999А2, (10) нанопреципитированные наночастицы, как раскрыто в Р. РаоНсеШ с1 а1., 8игГасе-тобШеб РЬОА-Ьакеб Ыапорагйс1е8 Юа1 сап ΕΓΓίοίοηΙΙν А55оаа1с апб Эсйусг νίπίδНке РагНс1е8 Шпотебюте. 5(6):843-853 (2010), или (11) апоптические клетки, апоптозные тельца или синтетические или полусинтетические имитаторы, как раскрыто в опубликованной заявке на патент США 20020086049. При различных способах синтетические наноносители могут находиться в соотношении больше чем 1:1, 1:1,2, 1:1,5, 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 или больше чем 1:10.
Синтетические наноносители в соответствии с изобретением, имеющие минимальный размер, равный или меньший около 100 нм, предпочтительно равный или меньший 100 нм, не содержат поверхности с гидроксильными группами, активирующими комплемент, или альтернативно, содержат поверхность, которая состоит в основном из групп, активирующих комплемент, но не являющихся гидроксильными группами. При предпочтительном способе исполнения синтетические наноносители в соответствии с изобретением, минимальный размер которых равен или меньше около 100 нм, предпочтительно равен или меньше 100 нм, не содержат поверхность, которая в значительной степени активирует комплемент, или альтернативно, содержат поверхность, которая состоит преимущественно из групп, которые не активируют комплемент в значительной степени. Более желательно, чтобы синтетические наноносители в соответствии с изобретением, имеющие минимальный размер, равный или меньший около 100 нм, предпочтительно равный или меньший 100 нм, не содержали поверхность, активирующую комплемент, или альтернативно, содержали поверхность, состоящую преимущественно из групп, которые не активируют комплемент. В вариантах осуществления синтетические наноносители не включают вирусоподобные частицы. При различных способах синтетические наноносители могут находиться в соотношении, большем чем 1:1, 1:1,2, 1:1,5, 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 или 1:10.
Антиген Т-клетки означает антиген 004+Т-клетки или антиген 008+Т-клетки. Антиген СЭ4+Тклетки означает любой антиген, который распознается 004+Т-клетками и запускает их иммунный ответ, т. е. антиген, который специфически распознается рецептором Т-клетки на поверхности СЭ4+Тклетки путем презентации антигена или его части молекулой главного комплекса гистосовместимости класса II (МНС). Антиген СН8+Т-клетки означает любой антиген, который распознается СЭ8+Тклетками и запускает их иммунный ответ, т. е. антиген, который специфически распознается рецептором Т-клетки на поверхности 008+Т-клетки путем презентации антигена или его части молекулой главного комплекса гистосовместимости класса I (МНС). В некоторых вариантах осуществления антиген Т-клетки одновременно является антигеном В-клетки. В других вариантах осуществления антиген Т-клетки не является одновременно антигеном В-клетки. Антигены Т-клетки обычно являются белкам и или пептидами.
Терапевтический белок относится к любому белку или белковой заместительной терапии, применяемой к субъекту и имеющей терапевтический эффект. Такие виды терапии включают белковую заместительную и белковую дополнительную терапию. Такие виды терапии также включают введение экзогенного или чужеродного белка, применение различных видов терапии антителами и клеточной терапии. Терапевтические белки включают ферменты, кофакторы ферментов, гормоны, факторы свертываемости крови, цитокин, факторы роста, моноклональные антитела и поликлональные антитела. Примеры других терапевтических белков приведены в тексте настоящего документа. Терапевтические белки могут быть образованы в клетках, на их поверхности или их посредством и получены из таких клеток и введены в форме таких клеток. В вариантах осуществления терапевтический белок образуется в клетках млекопитающих, насекомых, дрожжей, бактерий, растений, трансгенных животных клеток, трансгенных растительных клеток, на их поверхности или их посредством, и т. д. Терапевтический белок может рекомбинантно образовываться в подобных клетках. Терапевтический белок может образовываться в трансформированной вирусом клетке, на ее поверхности или посредством ее. Терапевтический белок также может образовываться в аутологических клетках, трансфицированных, трансдуцированных или измененных иным способом, на их поверхности или посредством. Альтернативно, терапевтический белок может быть введен в виде нуклеиновой кислоты или путем внесения нуклеиновой кислоты в вирус, вирусоподобную частицу, липосому и т. д. Альтернативно, терапевтический белок можно получить из таких форм и ввести как собственно терапевтический белок. Субъекты, таким образом, включают любой субъект, который получал, получает или будет получать что-либо из вышеупомянутого. Такой субъект содержит субъекты, которые получали, получают или будут получать генную терапию, аутологические клетки, трансфицированные, трансдуцированные или измененные иным способом, чтобы экспрессировать терапевтический белок, полипептид или пептид; или клетки, экспрессирующие терапевтический белок, полипептид или пептид.
Антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС означает антиген, связанный с терапевтическим белком (т. е. терапевтическим белком или его фрагментом, который может генерировать имунный ответ на терапевтический белок (т. е. образование антител, специфических к терапевтическому белку)). Как правило, антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, могут быть представлены для распознания иммунной системой (т. е. клетками иммунной системы, такими как антигенпрезентирующими клетками, включая дендритные клетки, В-клетки или макрофаги, но не ограничиваясь ими), антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, могут быть презентированы или распо- 16 027103 знаны, например, Т-клетками. Такие антигены могут быть распознаны Т-клетками и запустить их имунный ответ путем презентации эпитопа антигена молекулы МНС класса I или II. Антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, как правило, включают белки, полипептиды, пептиды, липобелокы и содержатся или экспрессируются в клетках, на них или их посредством. Антигены терапевтических белков при некоторых способах связаны с синтетическими наноносителями и включают МНС класса Iрестриктированные и/или МНС класса П-рестриктированные эпитопы и/или эпитопы В-клеток. В других вариантах осуществления антигены не включают эпитопы В-клеток, как, например, когда присоединение эпитопов В-клеток обостряет нежелательный иммунный ответ. В других вариантах осуществления антигены включают МНС класса П-рестриктированные эпитопы и преимущественно не содержат эпитопов В-клеток. Предпочтительно, чтобы один или несколько толерогенных иммунных ответов, специфических к терапевтическому белку, были вызваны представленной в настоящем документе композицией.
Толерогенный иммунный ответ означает любой иммунный ответ, ведущий к иммунодепрессии, специфической к антигену или клетке, ткани, органу и другому, экспрессирующему этот антиген. Такие иммунные ответы включают уменьшение, задержку или ингибирование нежелательного иммунного ответа, специфического к антигену или клетке, ткани, органу и другому, экспрессирующему этот антиген. Такие иммунные ответы также включают любую стимуляцию, продукцию, индукцию, стимулирование или рекрутинг желательного имунного ответа, специфического к антигену или клетке, ткани, органу и другому, экспрессирующему этот антиген. Толерогенные иммунные ответы, таким образом, включают отсутствие или уменьшение нежелательного иммунного ответа на антиген, которые могут происходить посредством участия антиген-реактивных клеток, а также в присутствии или стимуляции депрессивных клеток. Толерогенные иммунные ответы, как показано в настоящем документе, включают иммунологическую толерантность. Генерировать толерогенный иммунный ответ относится к вызову любого из вышеупомянутых иммунных ответов, специфических к антигену или клетке, ткани, органу и подобному, экспрессирующему такой антиген.
Толерогенный имунный ответ может являться результатом презентирования главному комплексу гистосовместимости класса I и/или главному комплексу гистосовместимости класса II и/или презентирования В-клеткам и/или презентирования СЭМ и т. д.
Толерогенные иммунные ответы включают любое уменьшение, задержку или ингибирование пролиферации и/или активности СЭ4+Т-клеток, СЭ8+Т-клеток или В-клеток. Толерогенные иммунные ответы также включают уменьшение продукции антиген-специфических антител. Толерогенные иммунные ответы также могут включать любой ответ, ведущий к стимуляции, индукции, продукции или рекрутингу регуляторных клеток, например СЭ4+Т-регуляторных клеток, СЭ8+Т-регуляторных клеток, Врегуляторных клеток и т. д. В некоторых вариантах осуществления толерогенный иммунный ответ приводит к обращению в регуляторный фенотип, зарактеризуемый продукцией, индукцией, стимуляцией или рекрутингом регуляторных клеток.
Толерогенные иммунные ответы также включают любой ответ, ведущий к стимуляции, продукции или рекрутингу СЭ4+Т-регуляторных клеток или СЭ8+Т-регуляторных клеток. СЭ4+Т-регуляторные клетки могут экспрессировать фактор транскрипции РохРЗ и ингибировать воспалительные ответы или аутоиммунные воспалительные заболевания (Нитап геди1а!огу Т се115 ίη аи1о1штиие Шзсазсз. Суе1аиоуюЬ СЬ, НаЛег ΌΑ. Сигг Θρίη Iттиηо1. 2010 Эес; 22(6):753-60. Кеди1а!огу Т се115 аиД аи1о1штит1у. УПа I., Паасз Ι.Ό., АпДсг5оп Α.Ε. Сигг Θρίη Неша1о1. 2009 1и1;16(4):274-9). Такие клетки также подавляют помощь Т-клеток В-клеткам и индуцируют толерантность как к собственным, так и к чужеродным антигенам (ТЬегареиПс арргоасЬе5 1о а11ег§у аиД аиЮнтпинПу Ьа5еД ои РохР3+ геди1а!огу Т-се11 асОуаОоп аиД ехраи5юи. М1уага Μ., ^ίη§ К., 8акадисЫ δ. I. А11ег§у С1ш Iштиηо1. 2009 Арг;123(4):749-55). СЭ4+Трегуляторные клетки распознают антиген, когда он презентируется белкам и класса II на АРС. СЭ8+Трегуляторные клетки, распознающие антиген, презентируемый классом I (и Оа-1). могут также подавлять помощь Т-клеток В-клеткам и приводить к активации антиген-специфической депрессии, вызывающей толерантность как к собственным, так и к чужеродным антигенам. Нарушение взаимодействия между Оа-1 и СЭ8+Т-регуляторными клетками, как было показано, разрегулирует иммунные ответы и приводит к развитию воспаления, обусловленного аутоантителом, и аутоиммунной летальной системной красной волчанки (К1т е! а1., ЫаШге. 2010 8ер 16, 467 (7313): 328-32). СЭ8+Т-регуляторные клетки также, как было показано, ингибируют модели аутоиммунных воспалительных заболеваний, включая ревматоидный артрит и колит (СЭ4+СЭ25+ геди1а!огу Т се115 ίη аиЮппишне апЬгЙ15. ОЕ 8., Каикш А.Ь., Са!ои А.Е Iштиио1 Кеу. 2010 1аи;233(1):97-111. Кеди1а!огу Т се115 ίη шПаттайгу Ьо\\е1 Д15еа5е. ВоДеи ЕК, 8иаррег 8В. Сигг Орт Са51гоеи1его1. 2008 Ыоу;24(6):733-41). В некоторых вариантах осуществления предоставленные композиции могут эффективно вызывать оба типа ответов (СЭ4+Т-регуляторные клетки и СЭ8+ Т-регуляторные клетки). В других вариантах осуществления РохР3 может быть индуцирован в других иммунных клетках, таких как микрофаги, ίΝΚΓ и др., и предоставленные композиции также могут вызывать один или несколько подобных ответов.
Толерогенные иммунные ответы также включают индукцию регуляторных кининов, например, Трегуляторных цитокинов; индукцию ингибиторных цитокинов; ингибирование воспалительных цитокинов (например, Ш-4, ТЬ-1Ь, Ш-5, ЮТ-о, Ш-6, СМ-С8Р, ΨΝ-γ, Ш-2, Ш-9, Щ-12, Ш-17, ТЬ-18, Ш-21, Ш-22,
- 17 027103
1Ь-23, М-С8Р, реактивного белка С, белка острой фазы, хемокинов (например, МСР-1, ΚΛΝΤΕ8, ΜΙΡ-1α, ΜΙΡ-1β , МЮ, 1ТАС или ΙΡ-10), продукцию антивоспалительных цитокинов (например, 1Ь-4, 1Ь-13, 1Ь-10 и др.), хемокинов (например, ССЬ-2, СХСЬ8), протеаз (например, ММР-3, ММР-9), лейкотриенов (например, СукЬТ-1, СукЬТ-2), простагландинов (наприемр, ΡΟΕ2) или гистаминов; ингибирование поляризации иммунный ответа на ТН17. ТЫ или ТЬ2; ингибирование эффекторных клеткоспецифических цитокинов: ТЫ7 (например, 1Ь-17, 1Ь-25), ТЫ (ΙΡΝ-γ), ТЬ2 (например, 1Ь-4, 1Ь-13); ингибирование ТЫ-, ТЬ2или ТН17-специфических факторов транскрипции; ингибирование пролиферации эффекторных Тклеток; индукцию апоптоза эффекторных Т-клеток; индукцию генов, специфических для толерогенных дендритных клеток, индукцию экспрессии ΡοχΡ3, ингибирование индукции Ι§Ε или ΙβΕ-опосредованных иммунных ответов, ингибирование гуморальных иммунных ответов (например, образование антигенспецифических антител); ингибирование клеточного ответа при участии Т-хелперов; образование ТСР-β и/или ΙΗ-10; ингибирование эффекторной функции аутоантител (например, ингибирование элиминации клеток, повреждения клетки или ткани или активации комплемента) и т. д.
Любой из вышеперечисленных эффектов может быть измерен ίη νίνο на одной или нескольких животных моделях или может быть измерен ίη νίίτο. Специалисту в данной области известны подобные измерения ίη νίνο или ίη νίίτο. Нежелательные иммунные ответы или толерогенные иммунные ответы могут быть отслежены, например, при помощи методов измерения количества и/или функций иммунных клеток, тетрамерного анализа, ΕΕ^ΡΟΈ проточного цитометрического анализа экспрессии цитокина, секреции цитокина, анализа сывороточного спектра цитокина, анализа спектра экспрессии гена, анализа спектра белка, анализа маркеров поверхности клетки, ПЦР-определение использования гена рецепторами иммунной клетки (см. Т. С1ау с1 а1., Аккаук ίοτ Μοηίίοτίη§ Се11и1аг Iттиηе Ροκροηκο ίο АсИус IттиηοШегару οί Саисег С.’1пйса1 Саисег РекеагсН 7:1127-1135 (2001)) и т .д. Нежелательные иммунные ответы или толерогенные иммунные ответы могут также быть отслежены, например, при помощи методов измерения уровней белка в плазме или сыворотке, пролиферации иммунных клеток и/или функционального анализа и т. д. В некоторых вариантах осуществления толерогенные иммунные ответы могут быть отслежены при помощи оценки индукции ΡοχΡ3. Кроме того, в примерах более детально описаны специфические методы.
Предпочтительно, чтобы толерогенные иммунные ответы приводили к ингибированию развития, прогрессирования или патологии болезней, расстройств или состояний, описанных в настоящем документе. Приводят ли или нет изобретательские композиции к ингибированию развития, прогрессирования или патологии болезней, расстройств или состояний, описанных в настоящем документе, можно определить, используя животные модели болезней, расстройств или состояний. В некоторых вариантах осуществления уменьшение нежелательного иммунного ответа или вызова толерогенного иммунного ответа могут быть измерены путем определения конечных клинических результатов, клинической эффективности, клинических признаков, биомаркеров заболевания и/или клинических показателей. Нежелательные иммунные ответы или толерогенные иммунные ответы могут также быть измерены при помощи диагностических тестов, выявляющих присутствие или отсутствие заболевания, нарушения или состояния, как описано выше. Нежелательные иммунные ответы могут помимо того быть измерены методами измерения уровней терапевтических белоков и/или их функций у субъекта.
В некоторых вариантах осуществления мониторинг или измерение вызова нежелательного иммунного ответа или толерогенного имунного ответа у субъекта может быть проведено до введения композиции синтетических наноносителей, предоставленных в настоящем документе, и/или до введения терапевтического белка. В других способах измерение вызова нежелательного иммунного ответа или толерогенного имунного ответа может быть произведено после введения композиции синтетических наноносителей, предоставленных в настоящем документе, и/или после введения терапевтического белка. В некоторых вариантах осуществления измерение производят после введения композиции синтетических наноносителей, но до введения терапевтического белка. В других вариантах осуществления производят после введения терапевтического белка, но до введения композиции. В других вариантах осуществления измерение производят до введения и синтетических наноносителей, и терапевтического белка, в то время как в некоторых вариантах исполнения изобретения измерение производят после введения и синтетических наноносителей, и терапевтического белка. В других вариантах осуществления измерение производят как до введения синтетических наноносителей и/или терапевтического белка, так и после него. В других способах измерение производят больше одного раза, чтобы определить, что у субъекта поддерживается желательный иммунный статус, причем субъект получал, получает или будет получать терапевтический белок.
Ответ антител может быть измерен путем определения титров одного или нескольких антител. Титр антитела означает измеримый уровень продукции антител. Методы определения титров антител известны в этой области и включают ферментсвязанный иммуносорбентный метод исследования (ΕΜ8Α). В вариантах осуществления ответ антитела может быть измерен количественно, например в виде количества антител, концентрации антител или титра. Показатели могут быть абсолютными или относительными. Методы количественного анализа ответа антитела включают методы захвата антител,
- 18 027103 методы ЕЫЗА, методы ингибирования абсорбции жидкой фазы (ГЬРАА), методы ракетного иммуноэлектрофореза (ЫЕ) и методы линейного иммуноэлектрофореза (ЫЕ). Когда ответ антитела сравнивают с ответом другого антитела по такому же количественному показателю (например, титру), предпочтительно использовать метод измерения (например, ЕЫЗА) для сравнения.
Метод ЕЫЗА для определения титра антитела, например типичного бутербродного ЕЫЗА, может состоять из таких этапов: (ί) приготовление покровного материала для ЕЫЗА-планшета, такого, что исследуемое антитело связывается с полимером субстрата или другим подходящим материалом, (ίί) приготовление покровного материала в водном растворе (например, РВЗ) и добавление покровного материала в лунки многолуночного планшета для экспозиции покровного материала в лунках в течение ночи, (ίίί) тщательная отмывка многолуночного планшета отмывочным буфером (например, 0,05% Тгееп-20 в РВЗ) для удаления покровного материала, (ίν) блокирование планшета для неспецифического связывания при помощи разведенного раствора (например, 10% зародышевой бычьей сыворотки в РВЗ), (ν) отмывка блокатора/разведенного раствора с планшета отмывочным буфером, (νί) разведение образца(ов) сыворотки, содержащих антитела и соответствующие стандарты (положительные контроли) растворителем, как требуется для получения концентрации, достаточной для получения ответа ЕЫЗА, (νίί) серийное разведение образцов плазмы в многолуночном планшете, чтобы охватить серию концентраций, подходящих для генерации кривой ответа ЕЫЗА, (νίίί) инкубирование планшета, чтобы обеспечить связывание антитела с мишенью, (ίχ) отмывка планшета отмывочным буфером, чтобы удалить антитела, не связанные с антигеном, (х) добавление соответствующей концентрации вторичного идентифицирующего антитела в том же растворителе, например биотине, связанном с идетнифицирующим антителом, которое способно связывать первичное антитело, (χί) инкубирование планшета с внесенным идентифицирующим антителом с последующей отмывкой отмывочным буфером, (χίί) добавление фермента, например стрептавидина-НКР (пероксидаза хрена), который связывает биотинсвязанные антитела, и инкубирование, (χίίί) отмывка многолуночного планшета, (χίν) добавление субстрата(ов) (например, раствор ТМВ) в планшет, (χν) применение стоп-раствора (например, 2 н серной кислоты) по завершении проявления цвета, (χνί) определение оптической плотностие лунок планшета и специфической длины волн субстрата (450 нм с субстракцией чтения при 570 нм), (χνί) построение соответствующей данным многопараметральной кривой и определение половины максимальной эффективной концентрации (ЕС50) как концентрации на кривой, при которой достигается половина максимального значения ΘΌ.
Нежелательный иммунный ответ относится к любому нежелательному иммунному ответу, который вызван экспозицией антигену, вызвает или усугубляет заболевание, нарушение или состояние, как описано в настоящем документе, или их симптом, или является признаком заболевания, нарушения или состояния, как описано в настоящем документе. Такие иммунные ответы, как правило, отрицательно влияют на здоровье субъекта или являются симптоматикой негативного влияния на здоровье субъекта. Нежелательные иммунные ответы включают продукцию антиген-специфических антител, пролиферацию иили активность антиген-специфических В-клеток или пролиферацию и/или активность антигенспецифических СЭ4+Т-клеток.
С. Композиции изобретения.
Настоящим предлагаются композиции толерогенного синтетического наноносителя, содержащие иммунодепрессанты и терапевтические белки-презентируемые АРС антигены, и родственные способы. Такие композиции и способы нужны для уменьшения вызова нежелательных иммунных ответов и стимуляции вызова толерогенных иммунных ответов, специфических к терапевтическим белкам. Композиции можно вводить субъектам, для которых желательно получение толерогенного иммунного ответа на терапевтические белки. Такими субъектами являются те, кто получал, получают или будут получать терапевтический белок. В вариантах осуществления субъекту вводят синтетические наноносители, предоставленные в настоящем документе, а затем вводят один или несколько терапевтических белков. В других вариантах осуществления субъекту сначала вводят терапевтический белок, а затем предоставленные синтетические наноносители. В других вариантах осуществления синтетические наноносители и один или несколько терапевтических белков вводят одновременно.
Как указано выше, синтетические наноносители разработаны так, чтобы включить иммунодепрессанты и при некоторых способах антиген, против которого желательно возникновение толерогенного эффекта. В вариантах осуществления антигены включают МНС класса П-рестриктированные эпитопы, которые при презентации в комплексе с иммунодепрессантом могут вызывать толерогенные эффекты, такие как уменьшение пролиферации и/или активности антиген-специфических СЭ4+Т-клеток. Вызванные толерогенные эффекты также включают уменьшение пролиферации и/или активности антигенспецифических В-клеток и/или уменьшение продукции антиген-специфического антитела. В соответствии с изобретением может применяться большое разнообразие синтетических наноносителей. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители являятся сферами или сфероидами. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители плоские или листообразные. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители являются кубами или кубоидами. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители овальные или эллиптические. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители имеют форму цилиндров, конусов или пирамид.
- 19 027103
В некоторых вариантах осуществления желательно применять множество синтетических наноносителей, относительно однородных по размеру, форме и/или составу, так что каждый синтетический наноноситель имеет аналогичные свойства. Например, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% синтетических наноносителей от их общего числа могут иметь минимальный размер или максимальный размер, находящийся в пределах 5, 10 или 20% среднего диаметра или среднего размера синтетических наноносителей. В некоторых вариантах осуществления множество синтетических наноносителей может быть гетерогенной по размеру, форме и/или составу.
Синтетические наноносители могут быть твердыми, полыми и состоять из одного или нескольких слоев. В некоторых вариантах осуществления каждый слой имеет особенный состав и особенные свойства относительно другого слоя (слоев). В качестве примера синтетические наноносители могут иметь сердцевинно-оболочное строение, при котором сердцевина является одним слоем (например, полимерной жилой), а оболочка является вторым слоем (например, билипидным слоем или одинарным слоем). Синтетические наноносители могут включать совокупность разных слоев.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут дополнительно включать один или несколько липидов. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать липосому. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать билипидный слой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать липидный монослой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать мицеллу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать сердцевину, содержащую полимерную матрицу, окруженную липидным слоем (например, билипидным слоем, липидным монослоем и т. д.). В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать неполимерную сердцевину (например, частицу металла, квантовую точку, керамическую частицу, костную частицу, вирусную частицу, белки, нуклеиновые кислоты, углеводы и т. д.), окруженную липидным слоем (например, билипидным слоем, липидным монослоем и т. д.).
В других вариантах осуществления синтетические наноносители могут содержать частицы металла, квантовые точки, керамические частицы и т. д. В некоторых вариантах осуществления неполимерный синтетический наноноситель является агрегатом неполимерных компонентов, например агрегатом атомов металла (например, атомов золота).
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут дополнительно содержать один или несколько амфифильных компонентов. В некоторых вариантах осуществления амфифильная составляющая может придавать синтетическим наноносителям повышенную стабильность, улучшенную однородность или повышенную вязкость. В некоторых вариантах осуществления амфифильные составляющие могут быть связаны с внутренней поверхностью липидной мембраны (например, билипидным слоем, липидным монослоем и т. д.). Многие амфифильные составляющие, известные в данной области, пригодны для применения в создании синтетических наноносителей в соответствии с настоящим изобретением. Такие амфифильные составляющие включают фосфоглицериды; фосфатидилхолины; дипальмитоил фосфатидилхолин (ЭРРС); диолеил фосфатидилэтаноламин (ПОРЕ); диолеилоксипропилтриэтиламмоний (ЭОТМА); диолеилфосфатидилхолин; холестерол; эфир холестерола; диацилглицерол; диацилглицеролсукцинат; дифосфатидилглицерол (ЭРРО); гександеканол; спирты жирного ряда, такие как полиэтиленгликоль (РЕО); полиоксиэтилен-9-лаурилэфир; поверхностно-активные жирные кислоты, такие как пальмитиновая кислота или олеиновая кислота; жирные кислоты; моноглицериды жирных кислот; диглицериды жирных кислот; амиды жирных кислот; сорбитан триолеат (8раи®85) гликохолат; сорбитан монолаурат (§раи®20); полисорбат 20 (Туееп®20); полисорбат 60 (Туееп®60); полисорбат 65 (Туееп®65); полисорбат 80 (Туееп®80); полисорбат 85 (Туееп®85); полиоксилэтилен моностеарат; сурфактин; полоксомер; сорбитановый эстер жирной кислоты, например сорбитан триолеат; лецитин; лизолецитин; фосфатидилсерин; фосфатидилинозитол; сфингомиелин; фосфатидилэтаноламин (цефалин); кардиолипин; фосфатидную кислоту; цереброзиды; дицетилфосфат; дипальмитоилфосфатидилглицерол; стеариламин; додециламин; гексадециламин; ацетилпальмитат; глицеролрицинолеат; гексадецилстерат; изопропилмиристат; тилоксапол; поли(этиленгликоль) 5000фосфатидилэтаноламин; поли(этиленгликоль) 400-моностеарат; фосфолипиды; ситнетические и/или природные детергенты с высокими сурфактантными свойствами; деоксихолаты; циклодекстрины; хаотропные соли; агенты для образования пар ионов и комбинации вышеперечисленного, но не ограничены ими. Амфифильная составляющая может состоять из смеси различных амфифильных составляющих. Специалисты в данной области поймут, что это примерный, а не исчерпывающий список веществ, проявляющих поверхностную активность. Любая амфифильная составляющая может быть использована в производстве синтетических наноносителей для применения в соответствии с настоящим изобретением.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут дополнительно содержать один или несколько углеводов. Углеводы могут быть природными или синтетическими. Углевод может быть деривированным природным углеводом. В некоторых вариантах осуществления углевод содержит моносахарид или дисахарид, например глюкозу, фруктозу, галактозу, рибозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, трегалозу, целлобиозу, маннозу, ксилозу, арабинозу, глуроновую кислоту, галактуроновую
- 20 027103 кислоту, маннуроновую кислоту, глюкозамин и нейраминовую кислоту, но не ограничен ими. В некоторых вариантах осуществления углевод является полисахаридом, включая пуллунан, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу (НРМС),гидроксицеллюлозу (НС), метилцеллюлозу (МС), декстран, циклодекстран, гликоген, гидроксиэитилкрахмал, каррагенан, гликон, амилозу, хитозан, Ν,Ο-карбоксиметилхитозан, альгин и альгиновую кислоту, крахмал, хитин, инулин, конджак, глюкоманнан, пустулан, гепарин, гиалуроновую кислоту, курдлан и ксантан, но не ограничен ими. В различных вариантах осуществления изобретательские синтетические наноносители не включают (или специфически исключают) углеводы, такие как полисахариды. В некоторых вариантах осуществления углевод может содержать производное углевода, например сахароспирт, включая маннитол, сорбитол, ксилитол, эритриол, мальтитол и лактиол, но не ограничиваясь ими.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут содержать один или несколько полимеров. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители включают один или несколько полимеров, которые являются несетокситерминированными плюроновыми полимерами. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97 или 99% (вес./вес.) полимеров, составляющих синтетические наноносители, являются не содержащими концевую метоксигруппу плюроновыми полимерами. В некоторых вариантах осуществления все полимеры, составляющие синтетические наноносители, являются не содержащими концевую метоксигруппу плюроновыми полимерами. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители включают один или несколько не содержащих концевую метоксигруппу плюроновых полимеров. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97 или 99% (вес./вес.) полимеров, составляющих синтетические наноносители, являются не содержащими концевую метоксигруппу полимерами. В некоторых вариантах осуществления все полимеры, составляющие синтетические наноносители, являются не содержащими концевую метоксигруппу полимерами. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители содержат один или несколько полимеров, которые не включают плюроновый полимер. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97 или 99% (вес./вес.) полимеров, составляющих синтетические наноносители, не включают плюроновый полимер. В некоторых вариантах осуществления все полимеры, составляющие синтетические наноносители, не включают плюроновый полимер. В некоторых вариантах осуществления такой полимер может быть окружен слоем покрытия (например, липосомой, липидным монослоем, мицеллой и т. д.). В некоторых вариантах осуществления различные элементы синтетических наноносителей могут быть связаны с полимером.
Иммунодепрессанты и/или антигены могут быть связаны с синтетическими наноносителями рядом способов. Как правило, соединение может являться результатом образования связи между иммунодепрессантами и/илиантигенами и синтетическими наноносителями. Образование связи может привести к присоединению иммунодепрессантов и/илиантигенов к поверхности синтетических наноносителей и/или их заключению в синтетические наноносители (инкапсуляции). В некоторых вариантах осуществления, однако, иммунодепрессанты и/или антигены инкапсулируются синтетическими наноносителями скорее благодаря структуре синтетических наноносителей, чем путем присоединения к синтетическим наноносителям. В более предпочтительных вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит полимер, как предоставлено в настоящем документе, и иммунодепрессанты и/или антигены, связанные с полимером.
Когда присоединение происходит в результате возникновения связи между иммунодепрессантами и/или антигенами и синтетическими наноносителями, присоединение может происходить за счет соединительной доли. Соединительная доля может являться группой, посредством которой иммунодепрессант и/или антиген соединяется с синтетическим наноносителем. Такие доли включают ковалентные связи, например амидную связь сложноэфирную связь, а также отдельные молекулы, которые связывают (ковалентно или нековалентно) иммунодепрессант и/или антиген с синтетическим наноносителем. Такие молекулы включают линкеры или полимеры или их элементарное звено. Например, соединительная доля может содержать заряженный полимер, с которым иммунодепрессант и/или антиген связываются электростатически. В качестве другого примера соединительная доля может содержать полимер или его мономер, к которым происходит ковалентное присоединение.
В более предпочтительных вариантах осуществления синтетические наноносители включают полимер, как предоставлено в настоящем документе. Эти синтетические наноносители могут полностью состоять из полимера или могут состоять из смеси полимеров и других веществ.
В некоторых вариантах осуществления полимеры синтетического наноносителя соединяются, образуя полимерную матрицу. В некоторых вариантах осуществления составляющая, например иммунодепрессант или антиген, может ковалентно присоединяться к одному или нескольким полимерам полимерной матрицы. В некоторых вариантах осуществления ковалентная связь образуется посредством линкера. В некоторых вариантах осуществления составляющая может нековалентно присоединяться к одному или нескольким полимерам полимерной матрицы. Например, в некоторых вариантах осуществления составляющая может быть инкапсулирована или окружена полимерной матрицей или диспергирована в ней.
- 21 027103
Альтернативно или дополнительно составляющая может быть связана с одним или несколькими полимерами полимерной матрицы гидрофобными взаимодействиями, взаимодействиями зарядов, силами ван дер Ваальса и т. д. Известно большое количество конвенционных полимеров и способов образования из них полимерных матриц.
Полимеры могут быть природными или искусственными (синтетическими). Полимеры могут являться гомополимерами или сополимерами, содержащими два или более мономеров. В смысле последовательности сополимеры могут быть случайными, блок-сополимерами или содержать комбинацию случайных или блочных последовательностей. Как правило, полимеры в соответствии с настоящим изобретением являются органическими полимерами.
В некоторых вариантах осуществления полимер содержит полиэфир, поликарбонат, полиамид, или полиэстер, или их мономер. В других вариантах осуществления полимер содержит поли(этиленгликоль) (РЕО), полипропиленгликоль, поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), сополимер молочной и гликолевой кислот, или поликапролактон, или их мономер. В некоторых вариантах осуществления предпочтительно, чтобы полимер был биоразлагаемым. Таким образом, в этих вариантах осуществления предпочтительно, чтобы полимер включал полиэфир, такой как поли(этиленгликоль), или полипропиленгликоль, или их его мономер, блок-сополимер полиэфира и биоразлагаемый полимер, так чтобы полимер был биоразлагаемым. В других вариантах осуществления полимер не содержит исключительно полиэфир или его мономер, такой как поли(этиленгликоль) или полипропиленгликоль или его мономер.
Другими примерами полимеров, пригодных для применения в настоящем изобретении, являются полиэтилены, поликарбонаты (например, поли(1,3-диоксан-2он)), полиангидриды (например, поли(себациновый ангидрид)), полипропилфумераты, полиамиды (например, поликапролактам), полиацеталы, полиэфиры, полиэстеры (например, полилактид, полигликолид, полилактид-со-гликолид, поликапролактон, полигидроксикислота (например поли(в -гидроксиалканоат))), поли(ортоэстеры), полицианоакрилаты, поливиниловые спирты, полиуретаны, полифосфазены, полиакрилаты, полиметакрилаты, полимочевины, полистиролы и полиамины, полилизин, сополимеры полилизин-РЕО и сополимеры поли(этиленимина) и поли(этиленимин)-РЕО, но не ограничиваясь ими.
В некоторых вариантах осуществления полимеры в соответствии с настоящим изобретением включают полимеры, разрешенные к применению для человека И.8. Ροοά апй Игид ΛώηίηίδΙπιΙίοη (РИЛ) в 21 С.Р.К § 177.2600, включая полиэстеры (например, полимолочную кислоту, сополимер молочной и гликолевой кислот, поликапролактон, поливалеролактон, поли(1,3-диоксан-2он)); полиангидриды (например, поли(себациновый ангидрид)); полиэфиры (например, полиэтиленгликоль); полиуретаны; полиметакрилаты; полиакрилаты и полицианоакрилаты, но не ограничиваясь ими.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть гидрофильными. Например, полимеры могут содержать анионные группы (например, фосфатную группу, сульфатную группу, карбоксилатную группу); катионные группы (например, четвертичную аминогруппу) или полярные группы (например, гидроксильную группу, тиоловую группу, аминогруппу). В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель, содержащий гидрофильную полимерную матрицу, создает гидрофильную среду в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть гидрофобными. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель, содержащий гидрофобную полимерную матрицу, создает гидрофобную среду в синтетическом наноносителе. Выбор гидрофобного или гидрофильного полимера может оказывать влияние на природу связываемых синтетическим наноносителем (например, присоединяемых) веществ.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы одной или несколькими соединительными долями и/или функциональными группами. В соответствии с настоящим изобретением могут применяться различные соединительные доли или функциональные группы. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы полиэтиленгликолем (РЕО), углеводом и/или ацикличными полиацеталами, полученными из полисахаридов (Ραρίδον. 2001, ЛС8 δутρο8^ит 8спс5. 786:301). Определенные варианты осуществляют, применяя общие указания в патенте США № 5543158, Оге£ с1 а1., или в публикации международной заявки \УО 2009051837, νοη Лпйпап с1 а1.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы липидом или группой жирной кислоты. В некоторых вариантах осуществления группой жирной кислоты может быть одна или несколько из масляной, капроновой, каприловой, лауриновой, миристиновой, пальмитиновой, стеариновой, арахиновой, бегеновой или лигноцериновой кислот. В некоторых вариантах осуществления группой жирной кислоты может быть одна или несколько из пальмитолеиновой, олеиновой, вакценовой линолевой, альфа-линолевой, гамма-линолевой, арахидоновой, эйкозапентаеновой, докозагексаеновой или эруковой кислот.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут являться полиэстерами, включая сополимеры, содержащие мономеры молочной и гликолевой кислот, такие как сополимер молочной и гликолевой кислот и поли(лактид-со-гликолид), совокупность которых упоминается в настоящем документе как РЬОЛ; и гомополимерами, содержащими мономеры гликолевой кислоты, которые упоминаются в настоящем документе как РОА, и мономеры молочной кислоты, такие как поли-Ь-молочная кислота, поли-И-молочная кислота, поли-И,Е-молочная кислота, поли-Ь-лактид, поли-И-лактид и поли-ЭР-лактид,
- 22 027103 совокупность которых упоминается в настоящем документе как РЬА. В некоторых вариантах осуществления примерами полиэстеров являются, например, полигидроксикислоты; РЕС сополимеры и сополимеры лактида и гликолида (например, РЬЛ-РЕС сополимеры, РСА-РЕС сополимеры, РЬСА-РЕС сополимеры и их производные. В некоторых вариантах осуществления полиэстеры включают, например, поли(капролактон), поли(капролактон)-РЕС сополимеры, поли(Ь-лактид-со-Ь-лизин), полиэстер серина, поли(4-гидрокси-Ь-пролин эстер), поли[а-(4-аминобутил)-Ь-гликолевую кислоту] и их производные.
В некоторых вариантах осуществления полимер может являться РЬСА. РЬСА является биологически совместимым и биоразлагаемым сополимером молочной и гликолевой кислот, и различные формы РЬСА зарактеризуются соотношением молочная кислота:гликолевая кислота. Молочная кислота может являться Ь-молочной кислотой, Ό-молочной кислотой или Ό,Ό-молочной кислотой. Степень деградации РЬСА можно менять, изменяя соотношение молочная кислота:гликолевая кислота. В некоторых вариантах осуществления РЬСА, используемые в соответствии с настоящим изобретением, характеризуются отношением молочная кислота:гликолевая кислота, приблизительно 85:15, приблизительно 75:25, приблизительно 60:40, приблизительно 50:50, приблизительно 40:60, приблизительно 25:75 или приблизительно 15:85.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут являться одним или несколькими акриловыми полимерами. В некоторых вариантах осуществления акриловые полимеры включают, например, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, этоксиэтилметакрилат, цианоэтилметакрилат, сополимеры аминоалкилметакрилата, поли(акриловой кислоты), поли(метакриловой кислоты), сополимер метакриловой кислоты и алкиламида, поли(метилметакрилата), поли(ангидрида метакриловой кислоты), метилметакрилата, полиметакрилата, сополимер поли(метилметакрилата), полиакриламид, сополимер аминоалкилметакрилата, сополимер глицидилметакрилата, полицианоакрилата и комбинациями, содержащими один или несколько из вышеупомянутых полимеров. Акриловый полимер может содержать полностью полимеризированные сополимеры эстеров акриловой и метакриловой кислот с низким числом четвертичных аммониевых групп.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть катионными. Как правило, катионные полимеры способны конденсировать и/или защищать негативно заряженные нити нуклеиновых кислот (например, ДНК или ее производных). Аминосодержащие полимеры, такие как дендримеры поли(лизина) (2аипег е1 а1., 1998, Λύν. Огид Όβΐ. Κβν., 30:97; и Καϋαηον е1 а1., 1995, ВюсопщдаЮ СЬет., 6:7), поли(этиленимина) (РЕ1; Вои881£ е1 а1., 1995, Ргос. Ыаб. Асаб. δει., и8А. 1995, 92:7297) и поли(амидоамина) (Кико№8ка-Ьа1а11о е1 а1., 1996, Ргос. Ыаб. Асаб. δει., ^А, 93:4897; Тапд е1 а1., 1996, Βίοсоп)ида1е СЬет., 7:703; апб Наеп81ег е1 а1., 1993, В1осоп]ида1е СЬет., 4:372) являются положительно заряженными при физиологических знчениях рН, образуют с нуклеиновыми кислотами ионные пары и проводят трансфекцию во многих линиях клеток. В различных вариантах осуществления изобретательские синтетические наноносители могут не содержать (или могут исключать) катионные полимеры.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут являться способными к разложению полиэстерами, несущими катионные боковые цепи (Ри1пат е1 а1., 1999, Масгото1еси1е8, 32:3658; Ваггега е1 а1., 1993, I. Ат. СЬет. δο^ 115:11010; Κ\νοη е1 а1., 1989, Масгото1еси1е8, 22:3250; Ыт е1 а1., 1999, I. Ат. СЬет. δομ 121:5633; апб 2Ьои е1 а1., 1990, Масгото1еси1е8, 23:3399). Примерами таких полиэстеров являются поли(Ь-лактид-со-Ь-лизин) (Ваггега е1 а1., 1993, I. Ат. СЬет. δο^ 115:11010), полиэстер серина (2Ьои е1 а1., 1990, Масгото1еси1е8, 23:3399), поли(4-гидрокси-Ь-пролин эстер) (РШпат е1 а1., 1999, Масгото1еси1е8, 32:3658; апб Ыт е1 а1., 1999, I. Ат. СЬет. δο^ 121:5633) и поли(4-гидрокси-Ь-пролин эстер) (РиЫат е1 а1., 1999, Масгото1еси1е8, 32:3658; апб Ыт е1 а1., 1999, I. Ат. СЬет. δομ 121:5633).
Свойства этих и других полимеров и способы их получения хорошо известны в данной области (см, например, патенты США 6123727; 5804178; 5770417; 5736372; 5716404; 6095148; 5837752; 5902599; 5696175; 5514378; 5512600; 5399665; 5019379; 5010167; 4806621; 4638045 и 4946929; \\апд е1 а1., 2001, I. Ат. СЬет. δο^ 123:9480; Ыт е1 а1., 2001, I. Ат. СЬет. δο^ 123:2460; Ьапдег, 2000, Асс. СЬет. Ке8., 33:94; Ьапдег, 1999, I. Сойго1. Ке1еа8е, 62:7; и ИЬпсЬ е1 а1., 1999, СЬет. Рее., 99:3181). В более общем виде разнообразие методов синтеза отдельных подходящих полимеров описано в Сопс18е Епсус1ореб1а о£ Ро1утег δ^ιτ^ апб Ро1утепс Атте8 апб Аттотит δаЬ8, Еб. Ьу Сое1Ьа18, Регдатоп Рге88, 1980; РгшсЬ р1е8 о£ Ро1утеп/аЬоп Ьу Об1ап, ЫЬп \УПеу & δοπ8, РоийЬ ЕбШоп, 2004; СоШетрогагу Ро1утег СЬеш181гу Ьу А11соск е1 а1., РгепЬсе-На11, 1981; Оеттд е1 а1., 1997, ЫаШге, 390:386; и в патентах США 6506577, 6632922,6686446 и 6818732.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть линейными или разветвленными. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут являться дендримерами. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть практически сшитыми друг с другом поперечными мостиками. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть практически не связанными друг с другом поперечными мостиками. В некоторых вариантах осуществления полимеры могжно применять в соответствии с настоящим изобретением, не подвергая их сшиванию поперечными мостиками. Помимо того, следует понимать, что изобретательские синтетические наноносители могут содержать блоксополимеры, графт-сополимеры, комбинации, смеси и/или продукты присоединения упомянутых или других полимеров. Специалисты в данной области поймут, что приведенный в настоящем документе
- 23 027103 список полимеров, которые можно применять в соответствии с настоящим изобретением, является примерным, но не исчерпывающим.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители не включают полимерный компонент. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут содержать металлические частицы, квантовые точки, керамические частицы и т. д. В некоторых вариантах осуществления неполимерный синтетический наноноситель является агрегатом неполимерных компонентов, например агрегатом атомов металла (например, атомов золота).
Композиции в соответствии с изобретением включают синтетические наноносители в комбинации с фармацевтически примлемлемыми наполнителями, такими как консерванты, буферы, раствор солей или раствор фосфатного буфера. Композиции можно производить, используя конвенционные фармацевтические составляющие и технологии для получения полезных лекарственных форм. В различных вариантах осуществления изобретательские синтетические наноносители суспендированы в стерильном растворе солей для инъекцирования вместе с консервантом.
В различных вариантах осуществления при приготовлении синтетических наноносителей в роли носителей могут быть полезны методы присоединения компонентов к синтетическим наноносителям. Если компонент является малой молекулой, предпочтительно связывать компонент с полимером до присоединения синтетических наноносителей. В различных вариантах осуществления также более желательно применять синтетические наноносители с поверхностными группами, которые служат для присоединения компонента к синтетическому наноносителю, а не для присоединения компонента к полимеру в конструкции синтетических наноносителей.
В некоторых вариантах осуществления связующим звеном может являться ковалентный линкер. В различных вариантах осуществления пептиды в соответствии с изобретением могут ковалентно присоединяться к внешней поверхности посредством линкера 1,2,3-триазол при помощи 1,3-диполярного циклоприсоединения азидогрупп на поверхности наноносителя к антигену или иммунодепрессанту, содержащему алкиновую группу, или при помощи 1,3-диполярного циклоприсоединения алкинов на поверхности наноносителя к антигенам или иммунодепрессантам, несущим азидогруппу. Такие реакции циклоприсоединения предпочтительней проводить в присутствии катализатора Си(1) с Си(1)-лигандом и восстановителем, который восстанавливает соединение Си(11) до каталитически активного соединения Си(1). Такое Си(1)-катализированное азидоалкиновое циклоприсоединение (СиЛЛС) также упоминается как клик-реакция.
Кроме того, ковалентное присоединение может содержать ковалентный линкер, который содержит амидный линкер, дисульфидный линкер, тиоэфирный линкер, гидразоновый линкер, иминовый или оксимовый линкер, мочевинный или тиомочевинный линкер, имидиновый линкер, аминовый линкер и сульфонамидный линкер.
Амидный линкер образован при помощи амидной связи между амином одного компонента, такого как антиген или иммунодепрессант, с карбоксильной группой другого компонента, такого как наноноситель. Амидная связь в линкере может образовываться при помощи любой из конвенционных реакций образования амидной связи с соответственно защищенными аминокислотами и активированной карбоксильной кислотой с Ν-гидроксисукцинимид-активированным эстером.
Дисульфидный линкер образуется через образование дисульфидной (δ-δ) связи между двумя атомами серы в форме, например, Κ1-δ-δ-Κ2. Дисульфидная связь может образовываться при обмене тиола между компонентом, содержащим тиоловую/меркаптановую группу(^Н), с другой активированной тиоловой группой на полимере или наноносителе, содержащем тиоловые/меркаптановые группы, с компонентом, содержащим активированную тиоловую группу.
Триазоловый линкер, особенно 1,2,3-триазол формы х , где КТ и К2 могут быть любыми химическими составляющими, образуется во время 1,3-диполярного присоединения азида, присоединенного к одному компоненту, например наноносителя, с терминальным алкином, присоединенным к другому компоненту, например иммунодепрессанту или антигену. 1,3-Диполярное циклоприсоединение происходит в присутствии или без присутствия катализатора, предпочтительно Си(1), который связывает два компонента через 1,2,3-триазол. Химизм этого процесса детально описан в δΙκίΓρΚίΝ е! а1., Аидете. Сйет. Ιηΐ. ЕД 41(14), 2596, (2002) аиб Ме1ба1, е! а1, Сйет. Кеу., 2008, 108(8), 2952-3015 и обычно упоминается как клик-реакция или СиААС.
В вариантах осуществления получают полимер, содержащий азидную или алкиновую группу, концевую относительно полимерной цепи. Этот полимер далее применяют для получения синтетического наноносителя таким образом, что большинство алкиновых и азидных групп расположены на поверхности этого наноносителя. Альтернативно, синтетический наноноситель получают другим путем и последовательно функционализируют его алкиновыми или азидными группами. Компонент получают в присутствии алкина (если полимер содержит азид) или азида (если полимер содержит алкиновую группу). Затем компонент реагирует с наноносителем через 1,3-диполярное циклоприсоединение с катализатором
- 24 027103 или без него, что ковалентно связывает компонент к частице при помощи 1,4-распределенного 1,2,3триазолового линкера.
Тиоэфирный линкер образуется путем образования сульфур-карбоновой (тиоэфирной) связи, например в форме К1-8-К2. Тиоэфир может быть образован посредством алкилирования тиол/меркаптановой группы (-8Н) одного компонента алкилирующей группы, например галидом или эпоксидом, второго компонента. Тиоэфирные линкеры могут также быть образованы посредством присоединения по Михаэлю тиол/маркаптановой группы одного компонента к электронодефицитной алкеновой группе второго компонента, содержащего малеимидную или винил-сульфоновую группу в роли акцептора Михаэля. По-другому тиоэфирные линкеры можно получить при помощи радикальной тиоленовой реакции между тиол/меркаптановой группой одного компонента и алкеновой группой второго компонента.
Гидразоновый линкер получают посредством реакции между гидразидной группой одного компонента и альдегидной/кетоновой группой второго компонента.
Гидразидный линкер образуется при помощи реакции между гидразидной группой одного компонента и карбоксильной группой второго компонента. Такие реакции, как правило, осуществляют, используя тот же химизм, что и при получении амидной связи, при которой карбоновая кислота активируется активирующим реагентом.
Иминный или оксимный линкер образуется посредством реакции между аминной или Νалкоксиаминной (или аминоокси) группой одного компонента с альдегидной или кетоновой группой второго компонента.
Мочевинный или тиомочевинный линкер образуется посредством реакции между аминогруппой одного компонента и изоцианатной или тиоцианатной группой второго компонента.
Амидиновый линкер образуется посредством реакции между аминогруппой одного компонента и амидоэфирной группой второго компонента.
Аминный линкер получают при помощи реакции алкилирования аминогруппы одного компонента алкилирующей группой, например галидной, эпоксидной или сульфонатэфирной группой, второго компонента. Альтернативно аминный линкер также можно получить путем восстановительного аминирования аминогруппы одного компонента альдегидной или кетоновой группой второго компонента в присутствии приемлемого восстановителя, например цианоборгидрида натрия или триацетоксиборогидрида натрия.
Сульфонамидный линкер образуется посредством реакции между аминогруппой и сульфонилгалдной (например, сульфонилхлоридной) группой второго компонента.
Сульфоновый линкер получают посредством присоединения по Михаэлю нуклеофила к винил сульфону. На поверхности наноносителя или присоединенным к компоненту может быть как винил сульфон, так и нуклеофил.
Компонент также может быть сопряжен с наноносителем посредством нековалентных способов сопряжения. Например, негативно заряженный антиген или иммунодепрессант может быть сопряжен с позитивно заряженным наноносителем посредством электростатической адсорбции. Компонент, содержащий металлический лиганд, также может быть сопряжен с наноносителем, содержащим металлический комплекс, посредством комплекса металл-лиганд.
В различных вариантах осуществления может быть присоединен к полимеру, полимолочной кислоте-полиэтиленгликолю до того, как произойдет агрегация синтетического наноносителя, или до образвания синтетического наноносителя с реактивными или активируемыми группами на поверхности. В последнем случае компонент можно получить, используя группу, совместимую с химизмом присоединения, характерным для поверхности. В других вариантах осуществления пептидный компонент может присоединяться к УЬР или липосомам посредством приемлемого линкера. Линкер представляет собой соединение или реагент, который способен соединить две молекулы вместе. В варианте осуществления линкер может представлять собой гомобифункциональный или гетеробифункциональный реагент, описываемый в Негтапкоп, 2008. Например, УЬР или липосомный синтетический наноноситель, содержащий карбоксильную группу на поверхности, можно обрабатывать гомобифункциональным линкером, дигидразидом адипиновой кислоты (АЭН) в присутствии БИС для образования соответствующего синтетического наноносителя с АЭН-линкером. Полученный при помощи АЭН-линкера синтетический наноноситель в дальнейшем сопрягают с пептидным компонентом, содержащим кислотную группу, посредством другого конца АЭН-линкера на Ν^ чтобы вызвать сопряжение с соответствующими УЬР или пептидом липосомы.
Подробное описание доступных методов сопряжения содержится в Негтапкоп О.Т. Вюсоп)ида1е Тесйшсщек, 2пй Εάίίίοη РнЪПкйей Ъу Асайепйс Ргекк, Шс., 2008. Помимо ковалентного присоединения компонент может быть связан при помощи адсорбции с заранее сформированным синтетическим наноносителем или может быть связан путем инкапсуляции во время формирования синтетического наноносителя.
Любой иммунодепрессант, как предоставлено в настоящем документе, может быть связан с синтетическим наноносителем. Иммунодепрессанты включают статины; ингибиторы тТОК, такие как рапа- 25 027103 мицин или аналог рапамицина; ΤΟΡ-β сигнальные агенты; агонисты рецептора ΤΟΡ-β; ингибиторы деацетилазы гистонов (НЭАС); кортикостероиды; ингибиторы митохондриальной функции, такие как ротенон; ингибиторы Р38; агонисты ΝΡ-κβ; агонисты рецепторов аденозтина; агонисты простагландина Е2; ингибиторы фосфодиэстеразы, такие как ингибитор фосфодиэстеразы 4; ингибиторы протеасомы; ингибиторы киназы; агонисты рецепторов, связанных с Ο-белком; антагонисты рецепторов, связанных с Οбелком; глюкокортикоиды; ретиноиды; ингибиторы цитокинов; ингибиторы рецепторов цитокинов; активаторы рецепторов цитокинов; антагонисты рецепторов, активируемых пролиферацией пероксисомы; агонисты рецепторов, активируемых пролиферацией пероксисомы; ингибиторы деацетилазы гистонов; ингибиторы кальциневрина; ингибиторы фосфатазы и оксидированных АТФ, но не ограничены ими. Иммунодепрессанты также включают ГОО, витамин Ό3, циклоспорин А, ингибиторы рецептора арилгидрокарбона, ресвератрол, азатиопурин, 6-меркаптопурин, аспирин, нифлюмовую кислоту, эстриол, триполид, интерлейкины (например, 1Ь-1, 1Ь-10), циклоспорин А, цитокины различных малых интерферирующих РНК или рецепторы цитокинов и подобное.
Примерами статинов могут служить аторвастатин (ЫР1ТОК®, ТОКУАЗТ®), церивастатин, флувастатин (ЬЕЗСОЬ®, ЬЕЗСОЬ® ХЬ), ловастатин (МЕУАСОК®, АЬТОСОК®, АЬТОРКЕУ®), мевастатин (СОМРАСТШ®), питавастатин (ЫУАЬО®, Р1АУА®), розувастатин (РКАУАСНОЬ®, δΗΙ.ΗΚΊΊΝΗ®. ЫРОЗТАТ®), розувастатин (СКЕЗТОК®) и симвастатин (2ОСОК®, Ь1РЕХ®).
Примерами ингибиторов тТОК могут служить рапамицин, его аналоги (например, ССЬ-779, КАБ001, АР23573, С20-металлилрапамицин (С20-Магар), С16-(З)-бутилсульфонамилорапамицин (С16ВЗгар), С16-(З)-3-метилиндолрапамицин (С16чКар) (Вау1е е1 а1. СНет151гу & Вю1оду 2006, 13:99-107)), А2Э8055. ВЕ2235 ^УР-ВЕ2235), хризофановая кислота (хризофанол), дефоролимус (МК-8669), эверолимус (КАБ0001), КИ-0063794, Р1-103, РР242, темзиролимус и \УУЕ-354 (ауаПаЪ1е Ггот Зе11еск, НоизЮп, ТХ, ИЗА).
Примерами сигнальных агентов ТОЕ-β лиганды ТОЕ- β (например, активин А, ΟΌΡ1, ΟΌΡ11, морфогенные белки кости, узлы ΤΟЕ-β) и их рецепторы (например, АСУК1В, АСУК1С, АСУК2А, АСУК2В, ВМРК2, ВМРК1А, ВМРК1В, ΤΟЕβ КГ, ΤΟЕβ КП), К-ЗМАБЗ/со-ЗМАБЗ (например, 8МАБ1, ЗМАЭ2, ЗМАЭ3, ЗМАО4, ЗМАО5, ЗМАЭ8) и ингибиторы лигандов (например, фоллистатин, ноггин, хордин, ΌΆΝ, 1ейу, ЬТВР1, ТНВЗ1, декорин).
Примерами ингибиторов митохондриальной функции могут служить атрактилозид (дикалиевая соль), бонгкрековая кислота (триаммонийная соль), карбонилцианид т-хлорфенилгидразол, карбоксиатрактилозид (например, полученный из А1гас1у1|5 диттЛега), СОР-37157, (-)-дегуелин (например, полученный из МииЛи1еа 5епсеа), Ρ16, доменный пептид связывания II УЭАС гексокиназы, олигомицин, ротенон, Ки360, 3ΡΚ1 и валиномицин (например, полученный из ЗПер1отусе5 Ги1у1551ти5) (ЕМП4Вю5с1еисе5, ИЗА).
Примерами ингибиторов Р38 могут служить ЗВ-203580 (4-(4-фторфенил)-2-(4метилсульфинилфенил)-5-(4-пиридил)1Н-имидазол), ЗВ-239063 (транс-1-(4-гидроксициклофенил)-4(фторфенил)-5-(2-метокси-пиримилин-4-ил) имидазол), ЗВ-220025 (5-(2-амино-4-пиримидинил)-4-(4фторфенил)-1-(4-пиперидинил)имидазол)) и АККУ-797.
Примерами ингибиторов ΝΡ (например, ΝΚ-κβ) могут служить ΙΡΚΌ1, 2-(1,8-нафтиридин-2-ил)фенол, 5-аминосалициловая кислота, ВАУ 11-7082, ВАУ 11-7085, САРЕ (фенетилэстер кофейной кислоты), диэтилмалеат, ингибитор ГУ ΙΚΚ-2, ИМО 0354, лактацистин, МО-132 [Ζ-Ееи-Ееи-Ееи-СНО], ингибитор ΙΙΙ активации ΝΡκΕ, ингибитор ΙΙ активации ΝΡκΕ, 1ЗН-23, партенолид, оксид фениларсина (РАО), РРМ-18, аммонийная соль пирролидиндитиокарбаминовой кислоты, ΟΝΖ, КО 106-9920, ракагламид, рокагламид АЬ, рокагламид С, рокагламид Ι, рокагламид ί, рокаглаол, (К)-МО-132, салицилат натрия, триптолид (РО490), веделолактон.
Примерами агонистов рецептора аденозина могут служить СОЗ-21680 и АТЬ-146е.
Примерами агонистов простагландина Е2 могут служить Е-простаноид 2 и Е-простаноид 4.
Примерами ингибиторов фосфодиэстеразы (неселективных и селективных ингибиторов) могут служить кофеин, аминофиллин, ГОМХ (3-изобутил-1-метилксантин), параксантин, пентоксифиллин, теобромин, теофиллин, метилированные скантины, винпоцетин, ЕНNΆ (эритро-9-(2-гидрокси-3нонил)аденин), анагрелид, эноксимон (РЕЙГАН™), милринон, левосимендон, мезембрин, ибудиласт, пикламиласт, лютеолин, дротаверин, рофлумиласт (ИАХАЗ™, ИАиКЕЗР™), силденафил (КЕУΆΤIОN®, УМОРА®), тадалафил (АБаКСА® СМЫЗ®), варденафил (ЕЕУП'РА®, ЗТАХУХ®), уденафил, аванафил, икариин, 4-метилпиперазин и пиразолопиримидин-7-1.
Примерами ингибиторов протеасомы могут служить бортезомиб, дисульфирам, эпигаллокатехин-3галлат и салиноспорамид А.
Примерами ингибиторов киназы могут служить бевацизумаб, ΕΙΕΧν 2992, цетуксимаб (ЕКШТИХ®), иматиниб (ОЬЕЕУЕС®), трастузумаб (НЕКСЕРТГО®), гефитиниб ДКЕЗЗА®), ранибизумаб (ЬиСЕИЛЗ®), пегаптиниб, сорафениб, дасатиниб, сунитиниб, эрлотиниб, нилотиниб, лапатиниб, панитумумаб, вандетаниб, Е7080, пазопаниб, мубритиниб.
Примерами глюкокортикоидов могут служить гидрокортизон (кортизол), кортизон ацетат, предни- 26 027103 зон, преднизолон, метилпреднизолон, дексаметазон, бетаметазон, триамцинолон, беклометазон, флудрокортизон ацетат (ЭОСЛ) и альдостерон.
Примерами ретиноидов могут служить ретинол, ретиналь, третиноин (ретиноевая кислота, ΚΕΤΙΝΑ®), изотретиноин Α^υΤΑΝΕ®, ΑΜΝΕδΤΕΕΜ®, ίΥΑΚΑνΙδ®, δΟΤΚΕΤ®), алитретиноин (ΡΑΝΚΕΤΙΝ®), этретинат (ΤΕΟΙδΟΝ™) и его метаболит ацитреин (δΟΚΙΑΤΑΝΕ®), тазаротен (ΤΑΖΟΚΑΟ®, ΑνΑΟΕ®, ΖΟΡΑ^®), бексаротен (ΤΑΚΟΚΕΤΙΝ®) и адапален (ΌΙΡΡΕΚΙΝ®).
Примерами ингибиторов цитокина могут служить антагонист или рецептор Ш 1га, Ш1, ΙΟΡΒΡ, ΤΝΡ-ΒΡ, уромодулин, альфа-2-макроглобулин, циклоспорин А, пентамидин и пентоксифиллин (ΡΕΝΤΟΡΑΚ®, ΡΕΝΤΟΧΙΕ®, ΤΚΕΝΤΑΣ®).
Примерами рецепторов или антагонистов, активируемых пролиферацией пероксисомы, могут служить О\У9662, антагонист ΙΙΙ ΡΡΑΚγ, Ο335, Т0070907 (ΕΜ04Βίθ5θίοηοο5, США).
Примерами рецепторов или агонистов, активируемых пролиферацией пероксисомы, могут служить пиоглитазон, циглитазон, клофибрат, О\У1929, О\У7647, Ь-165,041, ЬУ 171883, активатор ΡΡΑΚγ, РтосЬеи, троглитазон и ЮУ-14643 (ΕΜΌ4Βίοδθ€Μ€δ, США).
Примерами ингибиторов деацетилазы гистонов могут служить гидроксамовые кислоты (или гидроксаматы), такие как трихостатин А, циклические тетрапептиды (такие как трапоксин В) и депсипептиды, бензамиды, электрофильные кетоны, соединения алифатических кислот, такие как фенилбутират и вальпроевая кислота, гидроксамовые кислоты, такие как вориностат (δΑΗΑ), белиностат (ΡΧΌ101), Ε-ΑΟ824 и панобиностат (ЬВН589), бензамиды, такие как энтиностат (Μδ-275), 0994 и моцетиностат (ΜΟС^0103), накотинамид, производные НАД, дигидрокумарин, нафтопиранон и 2гидроксинафальдегиды.
Примерами ингибиторов кальциневрина могут служить циклоспорин, пимекролимус, воклоспорин и такролимус.
Примерами ингибиторов фосфатазы могут служить ΒΝ82002 гидрохлорид, СР-91149, каликулин А, кантаридиновая кислота, кантаридин, циперметрин, этил-3,4-дефостатин, натриевая соль фостриецина, ΜΑΖ51, метил-3,4-дефостатин, Νδϋ 95397, норкантаридин, аммониевая соль акадаиковой кислоты, полученная из ргогосейгит сοηсаνит, окадаиковая кислота, калиевая соль акадаиковой кислоты, натриевая соль окадаиковой кислоты, фениларсиноксид, разнообразные смеси ингибиторов фосфатазы, белок фосфатаза 1С, ингибитор белка фосфатазы 2А, белок фосфатаза 2А1, пртеин фосфатаза 2А2, натрий ортованадат.
В некоторых вариантах осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, как описано в настоящем документе, также связаны с синтетическими наноносителями. В некоторых вариантах осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, связаны с одними и теми же или с различными синтетическими наноносителями, с которыми связаны иммунодепрессанты. В других враиантах осуществления антигены, презентируемые терапевтическим белком АРС, не связаны с синтетическими наноносителями. Антиген, презентируемый терапевтическим белком АРС, содержит какой-либо из терапевтических белков или их фрагментов или производных, предоставленных в данном документе.
Терапевтические белки включают инфузируемые терапевтические белки, ферменты, кофакторы ферментов, гормоны, факторы свертывания крови, цитокины и интерфероны, факторы роста, моноклональные антитела и поликлональные антитела (например, вводимые субъекту для заместительной терапии) и белки, связанные с болезнью Помпе (например, альглюкозидаза альфа, γΙιΟΑΑ (например, миозим и люмизим (Оеп/уте)), но не ограничены ими. Терапевтические белки также включают белки, вовлеченные в каскад свертывания крови. Терапевтические белки включают фактор νΙΙΙ, фактор νΙΙ, фактор ΙΧ, фактор V, фактор фон Виллебранда, фактор фон Хельдебранта, тканевой активатор плазминогена, инсулин, гормон роста, эрттроэпоэтин альфа, νΕΟΡ, тромбоэпоэтин, лизозим, антитромбин и подобные. Терапевтические белки также включают адипокины, такие как лептин и адипонектин. Другие примеры терапевтических белков описаны ниже и в тексте настоящего документа. Также включены фрагменты или производные любого из терапевтических белков, предоставленного как антиген.
Примерами терапевтических белков, применяемых в ферментной заместительной терапии у субъектов, стардающих от лизосомальной болезни накопления, могут служить имиглюцераза для введения синдрома Гоше (например, церезим™), а-галактозидаза А (а-да1 А) для введения болезни Фабри (например, альгазидаза бета, фабризим™), кислая а-глюкозидаза (ΟΑΑ) для введения болезни Помпе (например, альглюкозидаза альфа, люмизим™, миозим™), арилсульфатаза В для введения мукополисахаридозов (например, ларонидаза, альдуразим™ идурсульфаза, элапраза™, арилсульфатаза В, наглазим™), но не ограничены ими.
Примерами ферментов могут служить оксидоредуктазы, трансферазы, гидролазы, лиазы, изомеразы и лигазы.
Примерами гормонов могут служить мелатонин ^-ацетил-5-метокситриптамин), серотонин, тироксин (или тертаиодтиронин) (тиреоидный гормон), трийодтиронин (тиреоидный гормон), эпинефрин (или адреналин), норэпинефрин (или норадреналин), дофамин (или гормон-ингибитор пролактина), антимюл- 27 027103 леров гормон (или фактор или гормон-ингибитор мюллерова гормона), адипонектин, адренокортикотропный гормон (или кортикотропин), ангиотензиноген и ангиотензин, антидиуретический гормон (иливазопрессин, вазопрессин аргинин), предсердный натрийуретический пептид (или атриопептин), кальцитонин, холецистокинин, кортикотропин-высвобождающий гормон, эритроэпоэтин, фолликулостимулирующий гормон, гастрин, грелин, глюкагон, глюкагоноподобный пептид (ОЬР-1), ОГР, гонадотропинвысвобождающий гормон, гормон, высвобождающий гормон роста, хорионический гонадотропин человека, плацентарный лактоген человека, гормон роста, ингибин, инсулин, инсулиноподобный фактор роста (или соматомедин), лептин, лютеинизирующий гормон, меланоцитстимулирующий гормон, орексин, окситоцин, паратиреоидный гормон, пролактин, релаксин, секретин, соматостатин, тромбоэпоэтин, тиреостимулирующий гормон (или тиреотропин), тиреотропин-высвобождающий гормон, кортизол, альдостерон, тестостерон, дегидроэпиандростерон, андростенедион, дигидротестостерон, эстрадиол, эстрон, эстриол, прогестерон, кальцитриол (1,25-дигидроксивитамин Ό3), кальцидиол (25-гидроксивитамин Ό3), простагландины, лейкотриены, простациклин, тромбоксан, пролактин-высвобождающий гормон, липотропин, нейропептид Υ, гистамин, эндотелин, панкреатический полипептид, натрийуретический пептид головного мозга, ренин и энкефалин.
Примерами крови и свертываемости крови могут служить фактор I (фибриноген), фактор II (протромбин), тканевой фактор, фактор V (проакселерин, лабильный фактор), фактор VII (стабильный фактор, проконвертин), фактор VIII (антигемофилический глобулин), фактор IX (тромбопластин плазмы), фактор X (фактор Стюарта-Прауэра), фактор Ха, фактор XI, фактор XII (фактор Хагемана), фактор XIII (фибрин-стабилизирующий фактор), фактор фон Виллебранда, прекалликреин (фактор Флетчера), высокомолекулярный кининоген (ΗΜνΚ) (фактор Фитцджеральда), фибронектин, фибрин, тромбин, антитромбин III, кофактор гепарина II, белок С, белок 8, белок Ζ, белок Ζ-зависимый протеазный ингибитор ^РЦ, плазминоген, альфа 2-антиплазмин, тканевой активатор плазминогена (!РА), урокиназа, ингибитор-1 активатора плазминогена (РАН), ингибитор-2 активатора плазминогена (РАН), раковый прокоагулянт и эритроэпоэтин альфа (эпоген, прокрит).
Примерами цитокинов могут служить лимфокины, интерлейкины и хемокины, цитокины типа 1, такие как ΣΡΝ-γ, ТОР-β , и цитокины типа 2, такие как №-4, (И-10 и (Н-13.
Примерами факторов роста могут служить адреномедуллин (АМ), ангиоэпоэтин (Апд), фактор аутокринной моторики, морфогенетические белки кости (ВМР), нейротрофический фактор головного мозга (ΒΌΝΡ), эпидермальный фактор роста (ЕОР), эритроэпоэтин (ЕРО), фибробластный фактор роста (РОР), глиальный нейротрофический фактор (ΟΌΝΡ), фактор стимулирования образования колоний гранулоцитов (О-С8Р), фактор, стимулирующий образование колоний гранулоцитов (ОМ-С8Р), фактор дифференциации и роста д-9 (ΟΌΡ9), фактор роста гепатоцитов (НОР), фактор роста производных гепацитов (НООР), инсулиноподобный фактор роста (ЮР), фактор стимуляции миграции, миостатин (ΟΌΡ-8), фактор роста нервной ткани (ΝΟΕ) и другие нейротрофины, фактор роста тромбоцитов (РЭОР), тромбоэпоэтин (ТРО), трансформирующий фактор роста альфа (ТОР-α), трансформирующий фактор роста бета(ТОР-в ), фактор некроза опухолей альфа (ΤΝΤ-α), фактор роста эндотелия сосудов (УЕОР), сигнальный путь Щп1, плацентарный фактор роста (Р1ОР), [(зародышевый бычий соматотропин)] (РВ8), Ю1, Ю-2, Ю-3, Ю-4, Ю-5, Ю-6 и Ю-7.
Примерами моноклональных антител могут служить абавогомаб, абциксимаб, адалимумаб, адекатумумаб, афелимомаб, афутузумаб, алациземаб пегол, АЬН, алемтузумаб, альтумомаб пентетат, анатумомаб мафенатокс, анрукинзумаб, антитимоцитглобин, аполизумаб, арцитумомаб, фселизумаб, атлизумаб (тоцилизумаб), атролимумаб, бапинейзумаб, базиликзимаб, бавитукзимаб, бектумомаб, белимумаб, бернализумаб, бертилимумаб, бесилесомаб, бавацизумаб, бициромаб, биватузумаб мертансин, блинатумомаб, брентуксимаб ведотин, бриакинумаб, канакинумаб, кантузумаб мертансин, капромаб пентетид, катумаксомаб, седелизумаб, сетролизумаб пегол, сетуксимаб, цитатузумаб богатокс, сиксутумаб, кленоликсимаб, кливатузумаб тетраксэтан, конатумумаб, дацетузумаб, даклизумаб, даратумумаб, деносумаб, детумомаб, дорлимумаб арбитокс, дорликсизумаб, экромексимаб, экулизумаб, эдобакомаб, эдреколомаб, эфализумаб, эфунгумаб, элотузумаб, элсилимомаб, энлимомаб пегол, эпитумомаб ситуксетан, эпратузумаб, эрлизумаб, эртумаксомаб, этарасизумаб, эксбивирумаб, фанолесомаб, фаралимомаб, фарлетузумаб, фельвизумаб, фезакинумаб, фигитумаб, фонтолизумаб, форавирумаб, фресолимумаб, галиксимаб, гантенерумаб, гавилимомаб, гентузумаб озогамицин, ОС1008, гирентуксимаб, глумбатумумаб ведотин, голимумаб, гомиликсимаб, ибализумаб, ибритумомаб тиуксетан, иговомаб, имсиромаб, инфликсимаб, интетумумаб, инолимомаб, инотузумаб озогамицин, ипилимумаб, иратумумаб, келиксимаб, лабетузумаб, лебрикизумаб, лемалесомаб, лерделимумаб, лексатумумаб, либивирумаб, линтузумаб, лорвотузумаб мертансин, лукатумумаб, лумиликсимаб, мапатумумаб, маслимомаб, матузумаб, меполизумаб, метелимумаб, милатузумаб, минретумомаб, митумомаб, милоримумаб, мотавизумаб, муромонаб-СО3, наколомаб тафенатокс, наптумомаб эстафенатокс, натализумаб, небакумаб, неситумумаб, нерелимомаб, нимотузумаб, нофетумомаб мерпентан, осрелизумаб, одулимомаб, офатумумаб, оларатумаб, омализумаб, орортузумаб монатокс, ореговомаб, отелексизумаб, пагибаксимаб, павилизумаб, панитумумаб, панобакумаб, пасколизумаб, пентумомаб, пертузумаб, пекселизумаб, пинтумомаб, приликсимаб, притумумаб, рафивирумаб,
- 28 027103 рамусирумаб, ранибизумаб, раксибакумаб, регавирумаб, реслизумаб, рилотумумаб, ритуксимаб, робатумумаб, ронтализумаб, ровелизумаб, руплизумаб, сатумомаб пендетиде, севирумаб, сибротузумаб, сифалимумаб, силтуксимаб, сиплизумаб, соланезумаб, сонепсизумаб, сонтузумаб, стамулумаб, сулесомаб, такатузумаб тетраксэтан, тадосизумаб, тализумаб, танезумаб, таплитумомаб паптокс, тефибазумаб, телимомаб аритокс, тенатумомаб, тенеликсемаб, теплизумаб, тисилимумаб (атлизумаб), торализумаб, тоситумомаб, трастузумаб, тремелимумаб, тукотузумумаб целмолейкин, тувирумаб, уртоксазумаб, устекинумаб, вапаликсимаб, ведолизумаб, велтузумаб, вепалимомаб, висилизумаб, волосиксимаб, вотумумаб, залутумумаб, занолимумаб, зиралимумаб и золимомаб аритокс.
Примерами инъекцируемых терапевтических белков или терапевтических белков, предназначенных для инфузионной терапии, являются, например, Тоцилизумаб (РосЬе/Ас!етга®), альфа-1 антитрипсин (КатаБа/ААТ), Хематид® (АГГутах апБ ТакеБа, синтетический пептид), альбинтерферон альфа-2Ъ (ΝογαΠίδ/ΖαΙΦη™), Руцин® (РЬагттд Огоир, заместительная терапия ингибитора С1), тезаморелин (ТЬега!есЬпо1од1е8/Едг1Йа, синтетический фактор высвобождения гормона роста), окрелизумаб (Оепеп!есЬ, Роске и Вюдеп), белимумаб (О1ахо8тпШ<Ппе/Веп1уз1а®), пеглоксиказа (8ау1еп! РЬагтасеийсак/КгуМехха™), талиглюцераза альфа (Рго!айх/ир1у8о), агальсидза (8Ыге/Рер1ада1®), велаглюцераза альфа (8Ьтге).
Дополнительные терапевтические белки, полезные в соответствии с аспектами данного изобретения, будут очевидны для специалистов в данной области, и изобретение не ограничено в этом отношении.
В некоторых вариантах осуществления компонент, такой как антиген или иммунодепрессант, может быть изолирован. Изолированный относится к элементу, отделенному от своей естественной среды и присутствующему в эффективном количестве для его идентификации или применения. Это означает, например, что элемент может быть (ί) селективно продуцирован при экспрессии клонирования или (ίί) очищен при помощи хроматографии или электрофореза. Изолированные элементы могут быть практически чистыми, но не обязательно. Поскольку изолированный элемент может быть примешан к фармацевтически приемлемому наполнителю в фармацевтическом препарате, элемент может составлять только небольшую долю препарата. Несмотря на это, элемент изолирован в том, что было отделено от веществ, с которыми он может быть ассоциирован в живых системах, например изолирован от других липидов или белков. Любые предоставленные в настоящем документе элементы могут быть изолированы и включены в композиции, из которых были изолированы.
Ό. Способы получения и применения композиций по настоящему изобретению и родственные способы.
Синтетические наноносители могут быть изготовлены при помощи разнообразных способов, известных в этой области. Например, синтетические наноносители могут быть изготовлены при помощи методов нанопреципитации, медленной фокусировки с использованием жидкостных каналов, распылительной сушки, испарения растворителя одинарной и двойной эмульсии, экстракции растворителями, фазовой сепарации, дробления, микроэмульсионных технологий, микрообработки, нанообработки, временных слоев, простой и комплексной коацервации и других методов, известных в данной области техники. Альтернативно или дополнительно описаны способы синтеза монодисперсного полупроводника с водным или органическим растворителем, проводники, магнетики, органические и другие наноматериалы (Рейедгшо е! а1., 2005, 8та11, 1:48; Миггау е! а1., 2000, Апп. Реу. Мак 8ск, 30:545; и ТппБаБе е! а1., 2001, СЬет. Ма!., 13:3843). Дополнительные способы описаны в литературе (см., например, ОоиЪгслу, ЕБ., М1сгосар8и1е8 апБ №порагйс1е8 ш МеБюше апБ РЬагтасу, СРС Ргезз, Воса Ра!оп, 1992; Ма11но\уН/ е! а1., 1987, ί. Сойгок Ре1еазе, 5:13; Ма11ио\\п/ е! а1., 1987, Реасйуе Ро1утег8, 6:275; апБ Ма11но\\т1/ е! а1., 1988, ί. Арр1. Ро1утег 8ск, 35:755; И8 Ра!еп!з 5578325 апБ 6007845; Р. РаоЬсеШ е! а1., 8шГасе-тоБ1йеБ РЬОА-ЪазеБ №порагкс1е5 !Ьа! сап ЕГйтепЙу А88ос1а!е апБ ЭеПуег Упиз-Ьке РагЬскз ШпотеБюте. 5(6):843-853 (2010)).
Различные вещества могут быть инкапсулированы в синтетические наноносители, желательно при использовании методов, описанных в С. Аз!е!е е! а1., 8уп!Ье818 апБ скагайеп/айоп оГ РЬОА папорагЬскз ί. Вюта!ег. 8ск Ро1утег ЕБп, Уо1. 17, №. 3, рр. 247-289 (2006); К. АудоиМакЕ Реду1а!еБ Ро1у(ЬасББе) апБ Ро1у(ЬасЬБе-Со-О1усоИБе) №порагйс1е8: Ргерагайоп, Ргорегйез апБ Ро^МЫе Аррксайопз ш Эгид ЭеПуегу Сиггеп! Эгид Оекуегу 1:321-333 (2004); С. РеЕ е! а1., Шпоепсарзйакоп I. Ме!коБз Гог ргерагайоп оГ Бгид-1оаБеБ ро1утепс папорагйскз ШпотеБюте 2:8-21 (2006); Р. РаоНсеШ е! а1., 8шГасе-тоБШеБ РЬОА-ЪазеБ №порагйс1е8 !ка! сап ЕГйтепЙу Аззоаай апБ ЭеПуег Упиз-Ике РагЬскз ШпотеБюте. 5(6):843-853 (2010). Другие методы, пригодные для инкапсулирования материалов в синтетические наноносители, могут применяться без ограничения методами, раскрытыми в патенте США 6632671, Ипдег Ос!оЪег 14, 2003.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители получают в процессе нанопреципитации или распылительной сушки. Условия получения синтетических наноносителей могут изменяться в целях получения частиц желаемого размера или свойств (например, гидрофобность, гидрофильность, внешняя морфология, липкость, форма и т. д.). Способ получения синтетических наноносителей
- 29 027103 и условия получения (например, растворитель, температура, концентрация, скорость потока воздуха и т. д.) могут зависеть от материалов, связуемых с синтетическими наноносителями, и/или состава полимерной матрицы.
Если размер частиц, полученных любым из перечисленных способов, превышает желаемый размер, частицы могут быть калиброваны, например, при помощи фильтра.
Элементы (т. е. компоненты) изобретательских синтетических наноносителей (такие как группы, из которых состоит поверхность иммунофункции, группы-мишени, полимерные матрицы, антигены, иммунодепрессанты и т. п.) могут быть связаны со всем синтетическим наноносителем, например, одной или несколькими ковалентными связями или могут быть связаны одним или несколькими линкерами. Дополнительные методы функционализирования синтетических наноносителей могут быть адаптированы из опубликованной заявки на петент США 20060002852, 8аЬ/тап е! а1., опубликованной заявки на петент США 20090028910, Эе8|топе е! а1., или опубликованной международной заявки АО 2008127532 А1, ΜιιγιΙιυ е! а1.
Альтернативно или дополнительно синтетические наноносители могут быть связаны с компонентами непосредственно или опосредованно через нековалентные взаимодействия. При нековалентном присоединении нековалентное связывание осуществляется посредством нековалентных взаимодействий, которые включают взаимодействия зарядов, взаимодействие между антигеном и антителом, координацию металла, физическую абсорбцию, взаимодействия по типу хозяин-гость, гидрофобные взаимодействия, стэкинг-взаимодействие ТТ, водородные связи, взаимодействия ванн дер Ваальса, магнитные взаимодействия, электростатические взаимодействия, взаимодействия между диполями и/или их комбинации. Такие пары могут располагаться в определенном порядке на внешней поверхности или на внутренней поверхности синтетического наноносителя по настоящему изобретению. В вариантах осуществления инкапсуляция и/или абсорбция является формой связывания. В вариантах осуществления изобретательские синтетические наноносители могут комбинироваться с антигеном при смешивании в одной основе или системе доставки.
Популяции синтетических наноносителей могут комбинироваться в целях получения фармацевтических лекарственных форм в соответствии с настоящим изобретением путем использования традиционных фармацевтических методов. Они включают смешивание жидкостей, при котором одна или несколько суспензий, каждая из которых содержит одно или несколько подмножеств наноносителей, непосредственно смешивают или объединяют в одной или нескольких емкостях, содержащих растворитель. Поскольку синтетические наноносители также могут производиться или храниться в порошкообразной форме, может применяться способ смешивания сухих порошков, как и ресуспензия двух или нескольких порошкообразных веществ в общей среде. В зависимости от свойств наноносителей и их потенциалов взаимодействия, преимущество может отдаваться одному или другому пути смешивания.
Типичные изобретательские композиции, содержащие синтетические наноносители, могут содержать неорганические или органические буферы (например, натриевые или калиевые соли фосфата, ацетата, карбоната или цитрата) и агенты, регулирующие рН (например, гидрохлоридная кислота, натрий или калий гидроксид, соли цитрата или ацетата, аминокислоты и их соли), антиоксидатны (например, аскорбиновую кислоту, альфа-токоферол), сурфактанты (например, полисорбат 20, полисорбат 80, полиоксэтилен9-10 нонилфенол, натрий дезоксихолат), стабилизаторы раствора и/или крио/лио стабилизаторы, (например, сахароза, лактоза, маннитол, трегалоза), агенты регуляции осмотичности (например, соли или сахара), антибактериальные агенты (например, бензойная кислота, фенол, гентамицин), противовспенивающие агенты (например, полидиметилсилозон), консерванты (например, тимерозал, 2феноксиэтанол, БЭТА), стабилизаторы полиполимера и агенты регуляции вязкости (например, поливинилпирролидон, полоксамер 488, карбоксиметилцеллюлоза) и сорастворители (например, глицерол, полиэтиленгликоль, этанол).
Композиции в соответствии с изобретением включают изобретательские синтетические наноносители в комбинации с фармацевтически приемлемыми наполнителями. Композиции можно получать, используя конвенционные фармацевтические составляющие и технологии для получения полезных лекарственных форм. Технологии, приемлемые в практике настоящего изобретения, можно найти в НапбЬоок оГ 1пбиЧпа1 М1Х1пд: 8с1епсе апб РгасЬсе, ЕбЬеб Ьу Еб\\агб Ь. Раи1, νίΟΌΓ А. АЬето-ОЬепд, апб 8и/аппе М. КгеЧа, 2004 1оНп АПеу & 8оп§, 1пс. и РЬагтасеиЬск: ТЬе 8аепсе оГ Эокаде Рогт Оечдп, 2пб Еб. М. Е. АШеп, 2001, СЬигсЬЫ ЫутдЧопе. В варианте осуществления изобретательские синтетические наноносители суспендируют в стерильном растворе соли для инъекций вместе с консервантом.
Следует понимать, что композиции изобретения можно получать любым удобным способом, и изобретение никоим образом не ограничено композициями, которые получают описанными способами. Выбор соответствующего способа может потребовать внимания к свойствам конкретных связуемых групп.
В некоторых вариантах осуществления изобретательские синтетические наноносители производят в стерильных условиях и заключительно стерилизуют. Это дает уверенность в том, что конечные композиции стерильны и неинфекционны и, таким образом, являются более безопасными по сравнению с нестерильными композициями. Это создает меру безопасности, поддающуюся измерению, особенно когда субъекты, получающие синтетические наноносители, имеют дефекты иммунитета, страдают от инфек- 30 027103 ции и/или являются чувствительными к инфекции. В некоторых вариантах осуществления изобретательские синтетические наноносители могут быть лиофилизированы и хранятся в виде суспензии или лиофилизированного порошка в зависимости от стратегии формулировки по отношению к длительному хранению без потери активности.
Композиции изобретения можно вводить разнообразными способами, в том числе подкожно, интраназально, орально, внутривенно, интраперитонеально, внутримышечно, трансмукозально, сублингвально, ректально, через глаз, пульмонарно, внутрикожно, трансдермально, транскожно или используя комбинацию этих путей. Пути введения также включают введение путем ингаляции или пульмонарного аэрозоля. Способы приготовления аэрозоля широко известны специалистам в данной области (см., например, Заагга апф СиФе, Аегоко1к, ш КепипдЮп'к РЬагтасеиФса1 Заепсек, Ι81Η еФШоп, 1990, рр. 16941712; включенную посредством ссылки).
Терапевтические белки, предоставленные в качестве клеточной терапии изобретения, можно вводить парентерально, внутриартериально, интраназально или внутривенно, или путем инъекций в лимфатические узлы или переднюю камеру глаза, или путем местного введения в интересующий орган или ткань. Введение может осуществляться путем инъекции подкожно, интратекально, интравентрикулярно, внутримышечно, интраперитонеально, интракоронально, интрапанкреально, внутрипеченочно или бронхиально.
Композиции изобретения можно вводить в эффективных количествах, как, например, в эффективных количествах, описанных в тексте настоящего документа. Дозировки лекарственных форм содержат различные количества популяций синтетических наноносителей и/или различные количества иммунодепрессантов и/или антигенов в соответствии с изобретением. Количество синтетических наноносителей и/или иммунодепрессантов и/или антигенов, присуствующих в изобретательских лекарственных формах, может варьировать в зависимости от природы антигенов и/или иммунодепрессантов, ожидаемой терапевтической пользы и других подобных параметров. В вариантах осуществления можно проводить определение оптимальной дозы, чтобы установить оптимальное терапевтическое количество популяции синтетических наноносителей и количество иммунодепрессантов и/или антигенов, присутствующих в лекарственной форме. В вариантах осуществления синтетические наноносители, и/или иммунодепрессанты, и/или антигены присутствуют в лекарственной форме в эффективном количестве для вызова толерогенного иммунного ответа на антигены при введении субъекту. Определить количества иммунодепрессантов и/или антигенов, эффективные для вызова толерогенного иммунного ответа можно, применяя для субъектов конвенционные методы исследования оптимального терапевтического количества. Изобретательские лекарственные формы можно вводить с различной частотой. В предпочтительном варианте осуществления по меньшей мере одного введения лекарственной формы достаточно для выработки фармакологически значимого ответа. В более предпочтительном варианте осуществления по меньшей мере двух введений, по меньшей мере трех введений или по меньшей мере четырех введений лекарственной формы достаточно для выработки фармацевтически значимого ответа.
Профилактическое введение изобретательской композиции может быть назначено до начала болезни, расстройства или состояния, а терапевтическое введение может быть назначено после установления болезни, расстройства или состояния.
В некоторых вариантах осуществления введение синтетических наноносителей предпринимают, например, до введения терапевтического белка. В некоторых примерах осуществления изобретения синтетические наноносители вводят один или несколько раз, включая 30, 25, 20, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 или 0 дней до введения терапевтического белка без ограничения. Дополнительно или альтернативно синтетические наноносители можно вводить субъекту одновременно с введением терапевтического белка. В некоторых примерах осуществления изобретения синтетические наноносители вводят один или несколько раз, включая 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30 и т.д. дни, следующие за введением терапевтического белка без ограничения.
В некоторых вариантах осуществления поддерживающую дозу (например, композиции синтетического наноносителя, как предоставлено в настоящем документе) вводят пациету после того, как первоначальное введение привело к толерогенному ответу у субъекта, например, чтобы поддержать толерогенный эффект, полученный после начальной дозы, чтобы предотвратить нежелательную иммунную реакцию у субъекта, или чтобы предотвратить возникновение у субъекта риска нежелательного иммунного ответа или нежелательного уровня иммунного ответа. В некоторых вариантах осуществления поддерживающая доза является начальной дозой, полученной субъектом. В некоторых вариантах осуществления поддерживающая доза меньше начальной дозы. Например, в некоторых вариантах осуществления поддерживающая доза составляет приблизительно 3/4, приблизительно 2/3, приблизительно 1/2, приблизительно 1/3, приблизительно 1/4, приблизительно 1/8, приблизительно 1/10, приблизительно 1/20, приблизительно 1/25, приблизительно 1/50, приблизительно 1/100, приблизительно 1/1000, приблизительно 1/10,000, приблизительно 1/100000 или приблизительно 1/1000000 (вес./вес.) начальной дозы.
Композиции и способы, предоставленные в настоящем документе, могут применяться для вызова или увеличения толерогенного иммунного ответа и/или для депрессии, модулирования, направления или перенаправления нежелательного иммунного ответа в целях достижения иммунодепрессии. Композиции
- 31 027103 и способы, предоставленные в настоящем документе, могут применяться для вызова толерогенного иммунного ответа у субъекта, который получал, получает или будет получать терапевтический белок.
Примеры
Пример 1. Имунный ответ на синтетические наноносители со связанным рапамицином с пептидом овальбумина или без него (323-339).
Материалы.
Пептид овальбумина 323-339, пептид, состоящий из 17 аминокислот, известный как эпитоп белка овальбумина Т и В-клеток, куплен у ВасЬст Атспсак Шс. (3132 КакЫуа Бйсск Тоггапсе СА 90505; Рай # 4065609). Рапамицин был куплен у Т§Ζ СНЕМ (185 ХУПкоп Бйсск РгаттдЬат, МА 01702; РгоДис! Са1а1одис # К1017). РЬОА с соотношением лактид:гликолид 3:1 и удельной вязкостью 0,75 дл/г был куплен у §итМоФс8 РЬаттассийса18 (756 Тот Майш Опус, ВиттдЬат, АЬ 35211; РгоДис! СоДс 7525 ОЬО 7А). Поливиниловый спирт (85-89% гидролизный) был куплен у ЕМО СЬстюак (номер продукта 1.41350.1001).
Раствор 1. Пептид овальбумина 323-339 при 20 мг/мл, растворенный в водном растворе гидрохлоридной кислоты. Раствор был получен путем растворения пептида овальбумина в 0,13 М растворе гидрохлоридной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 2. Рапамицин при 50 мг/мл в метилен хлориде. Раствор был получен путем растворения рапамицина в чистом метилен хлориде.
Раствор 3. РЬОА при 100 мг/мл в метилен хлориде. Раствор был получен путем растворения РЬОА в чистом метилен хлориде.
Раствор 4. Поливиниловый спирт при 50 мг/мл 100 мМ рН 8 фосфатном буфере.
Способ получения минтетического наноносителя, содержащего рапамицин и овальбумин (323-339).
Сначала приготовили основную водно-масляную эмульсию. ^М1/О1 была получена путем смешивания раствора 1 (0,2 мл), раствора 2 (0,2 мл) и раствора 3 (1,0 мл) в маленькой напорной трубке и обработки ультразвуком с амплитудой 50% на 40 с при использовании Вгапкоп Όί§ί1π1 БошПсг 250. Затем приготовили вторичную эмульсию (^М1/О1/^М2), смешивая раствор 4 (3,0 мл) с первичной эмульсией \У1/О1, перемешивая на вортексе в течение 10 с и обрабатывая ультразвуком с амплитудой 30% в течение 60 с при использовании Вгапкоп ОщЩИ §ошйст 250.
Эмульсию \У1/О1/\У2 добавляли в мерный стакан, содержащий 70 мМ рН8 растворафосфатного буфера (30 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, чтобы метилен хлорид испарился, и сформировались синтетические наноносители. Часть синтетических наноносителей отмывали, поместив суспензию синтетического наноносителя в пробирку для центрифуги и центрифугируя ее при 21000х§ и 4°С в течение одного часа, удаляя надосадочную жидкость и ресуспендируя осадок в фосфатном буферном растворе солей. Процедуру отмывки повторяли, а осадок ресуспендировали в фосфатном буферном растворе солей, чтобы получить окончательную дисперсию синтетического наноносителя приблизительно 10 мг/мл.
Количества пептида и рапамицина в синтетических наноносителях определяли методом НРЬСанализа. Общую массу сухого синтетического наноносителя на мл суспензии определяли гравиметрическим методом.
Способ получения синтетического наноносителя, содержащего рапамицин.
Сначала приготовили основную водно-масляную эмульсиию. ^М1/О1 была получена путем смешивания 0,13М раствора гидрохлоридной кислоты (0,2 мл), раствора 2 (0,2 мл) и раствора 3 (1,0 мл) в маленькой напорной трубке и обработки ультразвуком с амплитудой 50% на 40 с при использовании Вгапкоп О1§йа1 §ошйст 250. Затем приготовили вторичную эмульсию (^1/О1Ж2), смешивая раствор 4 (3,0 мл) с первичной эмульсией \У1/О1, перемешивая на вортексе в течение 10 с и обрабатывая ультразвуком с амплитудой 30% в течение 60 с при использовании Вгапкоп О1§йа1 Зошйст 250.
Эмульсию \У1/О1/\У2 добавляли в мерный стакан, содержащий 70 мМ рН 8 раствор фосфатного буфера (30 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, чтобы метилен хлорид испарился, и сформировались синтетические наноносители. Часть синтетических наноносителей отмывали, поместив суспензию синтетического наноносителя в пробирку для центрифуги и центрифугируя ее при 21000х§ и 4°С в течение одного часа, удаляя надосадочную жидкость и ресуспендируя осадок в фосфатном буферном растворе солей. Процедуру отмывки повторяли, а осадок ресуспендировали в фосфатном буферном растворе солей, чтобы получить окончательную дисперсию синтетического наноносителя приблизительно 10 мг/мл.
Количество рапамицина в синтетическом наноносителе было определено при помощи НРЬСанализа. Общую массу сухого синтетического наноносителя на мл суспензии определяли гравиметрическим методом.
Способ измерения нагрузки рапамицина.
Отобрали приблизительно 3 мг синтетическх наноносителей и центрифугировали их, чтобы отделить надосадочную жидкость от осадка синтетических наноносителей. В осадок добавили ацетонитрил и обработали образец ультразвуком, чтобы удалить все нерастворимое вещество. Надосадочную жадкость
- 32 027103 и осадок инжектировали в КР-НРЬС, и уровень абсорбции составил 278 нм. μ§ осадка использовали для подсчета % захвата (нагрузки), μ§ надосадочной жидкости использовали для подсчета общего количества мкг.
Способ измерения нагрузки овальбумина (323-339).
Отобрали приблизительно 3 мг синтетическх наноносителей и центрифугировали их, чтобы отделить надосадочную жидкость от осадка синтетических наноносителей. В осадок добавляли трифторэтанол и обрабатывали образец ультразвуком, чтобы растворить полимер, добавляли 0,2% трифторацетатную кислоту и центрифугировали оборазец, чтобы удалить все нерастворимое вещество. Надосадочную жадкость и осадок инжектировали в КР-НРЬС, и уровень абсорбции составил 215 нм. μ§ осадка использовали для подсчета % захвата (нагрузки), мкг надосадочной жидкости использовали для подсчета общего количества мкг.
Толерогенное влияние антиген-специфических дендритных клеток (Тбс) на развитие Трегуляторных клеток.
Исследование включало использование мышей линии ОРИ, у которых есть рецептор тансгенных Тклеток, специфичный к иммунодоминантному овальбумину (323-339). В целях получения антигенспецифических ЮС изолировали СФ11с+ спленоциты и вносили пептид овальбумина (323-339) ίη νίίτο в количестве 1 μг/мл или не вносили антиген. Затем растворимый или инкапсулированный в наноноситель рапамицин добавляли к ЭС5 на 2 ч, а затем интенсивно отмывали их, чтобы удалить из культуры свободный рапамицин. Очищенный респондер - СП4+СЭ25-клетки изолировали от мышей ОТП и вводили в ФС в соотношении Т к ОС 10:1. Смесь ФС и ОТП Т-клеток затем культивировали в течение 4-5 дней, а затем анализировали встречаемость Т-регуляторных клеток (СФ4+СФ251ид11Ро.\Р3+) методом проточной цитометрии, как показано на фиг. 1. Области были выбраны на основе изотопического контроля.
Пример 2. Наночастицы мезпористого диоксида кремния со связанным ибупрофеном (пример возможного использования).
Сердцевины наночастиц мезопористого ЗЮ2 получают при помощи золь-гель процесса. Гексадецилтриметил-аммоний бромид (СТАВ) (0,5 г) растворяют в деионизированной воду (500 мл), а затем добавляют 2М водный раствор ΝαΟΗ (3,5 мл) к раствору СТАВ. Раствор перемешивают в течение 30 мин, а затем в раствор добавляют тетраэтоксилан (ТЕОЗ) (2,5 мл). Полученный гель перемешивают в течение 3 ч при температуре 80°С. Образованный белый преципитат отделяют фильтрованием, а затем отмывают деионизированной водой и высушивают при комнатной температуре. Оставшийся сурфактант затем экстрагивуют из частиц, суспендируя их в этаноловом растворе НС1 в течение ночи. Частицы отмывают этанолом, центрифугируют и редисперсируют под действием ультразвука. Такую процедуру отмывки повторяют еще два раза.
Наночастицы ЗЮ2 затем подвергают функционализации аминогруппами с применением (3аминопропил)-триэтоксисилана (АРТМЗ). Для этого частицы суспендируют в этаноле (30 мл) и добавляют в суспензию АРТМЗ (50 мкл). Суспензию оставляют при комнатной температуре на два часа, а затем кипятят в течение 4 ч, поддерживая постоянный объем, периодически добавляя этанол. Оставшиеся реагенты удаляют, проводя пять циклов отмывки центрифугированием и редисперсией в чистом этаноле.
В отдельной реакции образуются зерна золота диаметром 1-4 нм. Воду, используемую в реакциях, сначала деионизируют, а затем дистиллируют из стекла. Воду (45,5 мл) наливают в 100 мл круглодонную колбу. Перемешивая, добавляют 0,2М водный №ЮН (1,5 мл), затем 1%-ный водный раствор татракис (гидроксиметил)фосфонит хлорида (ТНРС) (1,0 мл). Через две минуты после введения раствора ТНРС добавляют 10 мг/мл водного раствора золотохлористо-водородной кислоты (2 мл), выдержанного по меньшей мере 15 мин. Зерна золота очищают водным диализом.
Для получения сердцевинно-оболочных наноносителей аминофункционализированные наночастицы ЗЮ2, полученные ранее, смешивают с зернами золота в течение 2 ч при комнатной температуре. Частицы ЗЮ2, связанные с золотом, отбирают центрифугированием и смешивают с водным раствором золотохлористо-водородной кислоты и бикарбонатом калия для получения оболочки из золота. Затем частицы отмывают центрифугированием и редисперсией в воде. Ибупрофен присоединяют, суспендируя частицы в растворе ибупрофена натрия (1 мг/л) в течение 72 ч. Затем свободный ибупрофен отмывают от частиц центрифугированием и редисперсией в воде.
Пример 3. Липосомы, содержащие циклоспорин А (пример возможного использования).
Липосомы получают путем гидратации тонкой пленки. 1,2-дипальмитоил-8п-глицеро-3-фосфохолин (ФРРС) (32 мкмоль), холестерин (32 мкмоль) и циклоспорин А (6,4 мкмоль) растворяют в чистом хлороформе (3 мл). Полученный липидный раствор наливают в 50 мл круглодонную колбу и испаряют растворитель на вращающемся испарителе при температуре 60°С. Затем обрабатывают газообразным азотом, чтобы удалить остатки растворителя. Солевой раствор фосфатного буфера (2 мл) и пять полосок стекла добавляют в колбу и гидратируют липидную пленку, встряхивая колбу при 60°С в течение 1 ч дообразования суспензии. Суспензию переносят в в маленькую напорную трубку и обрабатывают ультразвуком при 60°С в течение четырех циклов из 30 с импульсов с 30 с паузой между импульсами. Затем суспензию оставляют, не тревожа, при комнатной температуре на 2 ч для полной гидратации. Липосомы отмывают
- 33 027103 центрифугированием с последующим повторным суспендированием в свежем фосфатно-солевом буферном растворе.
Пример 4. Полимерный наноноситель, содержащий конъюгат полимера и рапамицина (пример возможного использования).
Получение ΡΕΟΑ-рапамицин конъюгата:
ΡΕΟΑ полимер с кислой концевой группой (7525 ΌΕΟ1Ά, кислотное число 0,46 ммоль/г, Еакек1юге Вюта1епа1к; 5 г, 2,3 ммоль, 1,0 экв.) растворяют в 30 мл дихлорметана (ОСМ). Ν,ΝДициклогексилкарбомид (1,2 экв., 2,8 ммоль, 0,57 г) добавляют к рапамицину (1,0 экв., 2,3 ммоль, 2,1 г) и 4-диметиламинопиридину (ΌΜΑΡ) (2,0 экв., 4,6 ммоль, 0,56 г). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 дней. Затем смесь фильтруют, чтобы отделить нерастворимую дициклогексилмочевину. Фильтрат концентрируют до объема приблизительно 10 мл и добавляют к 100 мл изопропилового спирта (ΙΡΑ), чтобы преципитировать ΡΕΟΑ-рапамицин конъюгат. Слой ΙΡΑ удаляют, а полимер затем отмывают 50 мл ΙΡΑ и 50 мл метил-Т-бутилового эфира (МТВЕ). Полимер затем высушивают в вакууме при 35С в течение 2 дней, чтобы получить белый твердый ΡΕΟΑ-рапамицин (приблизительно 6,5 г).
Получение наноносителя, содержащего ΡΕΟΑ-рапамицин конъюгат и пептид овальбумина (323339).
Наноноситель, содержащий ΡΕΟΑ-рапамицин, получают способом, описанном в примере 1.
Растворы для получения наноносителей готовят следующим образом.
Раствор 1. Пептид овальбумина 323-339 при 20 мг/мл в растворителе водном растворе гидрохлоридной кислоты. Раствор получают, растворяя пептид овальбумина в 0,13М растворе гидрохлоридной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 2. ΡΕΟΑ-рапамицин при 100 мг/мл в метилен хлориде. Раствор получают, растворяя ΡΕΟΑрапамицин в чистом метиленхлориде.
Раствор 3. ΡΕΑ-ΡΕΟ при 100 мг/мл в метилен хлориде. Раствор получают, растворяя ΡΕΑ-ΡΕΟ в чистом метиленхлориде.
Раствор 4. Поливиниловый спирт при 50 мг/мл в 100 мМ рН 8 фосфатном буфере.
Сначала приготовили основную водно-масляную эмульсиию. ^1/01 была получена путем смешивания раствора 1 (0,2 мл), раствора 2 (0,75 мл) и раствора 3 (0,25 мл) в маленькой напорной трубке и обработки ультразвуком с амплитудой 50% на 40 с при использовании Β^аηκοη ОщИа1 8οηίίίθΓ 250. Затем приготовили вторичную эмульсию (^1/01/^2), смешивая раствор 4 (3,0 мл) с первичной эмульсией ^1/01, перемешивая на вортексе в течение 10 с и обрабатывая ультразвуком с амплитудой 30% в течение 60 с при использовании Вшитои ОщИа1 8οηίίίθΓ 250. Эмульсию \У1/01/\У2 добавляли в мерный стакан, содержащий 70 мМ рН 8 раствора фосфатного буфера (30 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, чтобы метилен хлорид испарился, и сформировались синтетические наноносители. Часть синтетических наноносителей отмывали, поместив суспензию синтетического наноносителя в пробирку для центрифуги и центрифугируя ее при 75600/д и 4°С в течение 35 мин, удаляя надосадочную жидкость и ресуспендируя осадок в фосфатно-солевом буферном растворе. Процедуру отмывки повторяли, а осадок ресуспендировали в фосфатно-солевом буферном растворе, чтобы получить окончательную дисперсию синтетического наноносителя приблизительно 10 мг/мл.
Пример 5. Получениие наноносителей с золотом (ΑиNС), содержащих рапамицин (пример возможного использования).
Получение Н8-ΡΕΟ-рапамицина:
Раствор ΡΕΟ кислого дисульфида (1,0 экв.), рапамицин (2,0-2,5 экв.), ЭСС (2,5 экв.) и ΌΜΑΡ (3,0 экв.) в сухом ΌΜΡ перемешивают при комнатной температуре на протяжении ночи. Нерастворимую дициклогексилмочевину удаляют фильтрованием, а фильтрат добавляют к изопропиловому спирту (ΙΡΑ), чтобы преципитировать ΡΕΟ-дисульфид-ди-рапамицин эстер, отмывают ΙΡΑ и высушивают. Полимер затем обрабатывают трис(2-карбоксиэтил)фосфин гидрохлоридом в ΌΜΡ, чтобы восстановить ΡΕΟ дисульфид до тиол ΡΕΟ рапамицин эстера (Н8-ΡΕΟ-рапамицин). Полученный полимер отделяют путем преципитации из ΙΡΑ и высушивают, как описано выше, а затем анализируют Н ΗΜΡ и ΟΡΟ
Получение золотых NС (ΑπΝΟ).
Водный раствор 500 мл 1мМ ΗΑιιΟ4 нагревают до возврата флегмы в течение 10 мин с энергичным перемешиванием в круглодонной колбе объемом 1 л, оборудованной конденсатором. Раствор из 50 мл 40 мМ тринатрий цитрата затем быстро добавляют в перемешиваемый раствор. Полученный густовинный раствор выдерживают до возврата флегмы в течение 25-30 мин, отключают подогрев и охлаждают раствор до комнатной температуры. Затем раствор фильтруют через 0,8 мкм мембранный фильтр и получают раствор ΑπΝΟ ΑиNС характеризуют при помощи спектроскопии в видимой области и трансмиссионной электронной микроскопии. Эти ΑиNС имеют диаметр, приблизительно равный 20 нм, и окружены цитратом с пиком поглощения 520 нм.
Конъюгация ΑиNС с Η8-ΡΕΟ-рапамицином.
Раствор из 150 мкл Η8-ΡΕΟ-рапамицина (10 мкМ в 10 мМ, рН 9,0, карбонатном буфере) добавляют к 1 мл окруженных цитратом золотым наноносителям (1,16 нм) диаметром 20 нм, чтобы получить мо- 34 027103 лярное отношение тиола к золоту 2500:1. Смесь перемешивают при комнатной температуре в присутствии аргона в течение 1 ч для полного замещения цитрата тиолом на наноносителях, содержащих золото. ΛιιΝί'.' с РЕС-рапамицином на поверхности затем очищают центрифугированием при 12000 д в течение 30 мин. Надосадочнуюжидкость декантируют, а осадок, содержащий АиNС-δ-РЕС-рапамицин, затем отмывают 1χΡΒδ буфером. Очищенные наноносители, содержащие золото и РЕС-рапамицин, затем ресуспендируют в подходящем буфере для анализа и биопроб.
Пример 6. Сердцевинно-оболочные наноносители с золотистым мезопористым диоксидом кремния, содержащие овальбумин (пример возможного использования).
Сердцевины наночастиц мезопористого δίθ2 получают при помощи золь-гельного процесса. Г ексадецилтриметил-аммоний бромид (СТАВ) (0,5 г) растворяют в деионизированной воде (500 мл), а затем 2М водный раствор Ν;·ιϋΗ (3,5 мл) добавляют к раствору СТАВ. Раствор перемешивают в течение 30 мин, а затем к раствору добавляют тертаэтоксисилан (ΤΕΟδ) (2,5 мл). Полученный гель перемешивают в течение 3 ч при температуре 80°С. Образующийся белый преципитат отделяют фильтрованием, затем отмывают деионизированной водой и высушивают при комнатной температуре. Оставшийся сурфактант затем отделяют от частиц суспендированием в этаноловом растворе НС1 в течение ночи. Частицы отмывают этанолом, центрифугируют и редисперсируют под действием ультразвука. Такую процедуру отмывки повторяют еще два раза.
Наночастицы δίΟ2 затем подвергают функционализации аминогруппами, применяя (3аминопропил)-триэтоксисилан (ΛΡΤΜδ). Чтобы достичь этого, частицы суспендируют в этаноле (30 мл) и добавляют к суспензии ΛΡΤΜδ (50 мкл). Суспензию оставляют при комнатной температуре на 2 ч, а затем кипятят в течение 4 ч, поддерживая постоянный объем, периодически добавляя этанол. Оставшиеся реагенты удаляют с помощью пяти циклов отмывки центрифугированием и редисперсии в чистом этаноле.
В отельной реакции образуются зерна золота диаметром 1-4 нм. Всю воду, используемую в реакциях, сначала деионизируют, а затем дистиллируют. Воду (45,5 мл) наливают в 100 мл круглодонную колбу. Перемешивая, добавляют 0,2М водный №ГОН (1,5 мл), затем 1%-ный водный раствор татракис (гидроксиметил)фосфонит хлорида (ТНРС) (1,0 мл). Через две минуты после введения раствора ТНРС добавляютт 10 мг/мл водного раствора золотохлористо-водородной кислоты (2 мл), выдержанного по меньшей мере 15 мин. Зерна золота очищают водным диализом.
Для получения сердцевинно-оболочных наноносителей аминофункционализированные наночастицы δίΟ2, полученные ранее, смешивают с зернами золота в течение 2 ч при комнатной температуре. Частицы δίΟ2, связанные с золотом, отбирают центрифугированием и смешивают с водным раствором золотохлористо-водородной кислоты и бикарбонатом калия для получения оболочки из золота. Затем частицы отмывают центрифугированием и редисперсией в воде. Тиолированный овальбумин (полученный при обработке овальбумина 2-иминотиолан гидрохлоридом) отделяют, суспендируя частицы в растворе тиолированного овальбумина (1 мг/л) в течение 72 ч. Частицы затем отмывают из осадка 1χΡΒδ (рН 7,4), чтобы удалить чистый белок. Полученные кремний-золотые сердцевинно-оболочные наноносители, содержащие овальбумин, затем ресуспендируют в 1χΡΒδ для анализа и биопроб.
Пример 7. Липосомы, содержащие рапамицин и овальбумин (пример возможного использования).
Липосомы получают путем гидратации тонкой пленки. 1,2-дипальмитоил-8и-глицеро-3-фосфохолин (ΌΡΡΕ) (32 мкмоль), холестерин (32 мкмоль) и рапамицин (6,4 мкмоль) растворяют в чистом хлороформе (3 мл). Этот липидный раствор добавляли в 10-мл стеклянную пробирку и растворитель удаляли в потоке газообразного азота и обезвоживали в течение 6 ч в вакууме. Многослойные везикулы получают путем гидратации пленки 2,0 мл 25 мМ ΜΟΡδ буфера рН 8,5, содержащего избыток овальбумина. Пробирку вращают на вортексе, пока липидная пленка не отслоится с поверхности пробирки. Чтобы превратить многослойные везикулы в однослойные, проделывают десять циклов замораживания (жидким азотом) и размораживания (30°С водная баня). Затем образец растворяют в 1 мл 25 мМ ΜΟΡδ буфера рН 8,5. Размер полученной липосомы гомогенизируют, применяя десятикратное экструдирование образца через поликарбонатные фильтры с диаметром пор 200 нм. Полученные липосомы затем используют для анализа и биопроб.
Пример 8. Полимерные наноносители, состоящие из модифицированной полиаминокислоты с поверхностно конъюгированным овальбумином (пример возможного использования).
Этап 1. Получение поли(у-глутаминовой кислоты) (у^СА), модифицированной этиловым сложным эфиром Ь-фенилаланина (Е^АЕ).
4,7 единицы ммоль уФСА (Ми=300 кДа) растворяют в 0,3н водном растворе NаНСΟз (50 мл). ЬΡΛΕ (4,7 ммоль) и ЕБС-НС1 (4,7 ммоль) добавляют в раствор и перемешивают в течение 30 мин при 4°С. Затем раствор выдерживают при комнатной температуре, перемешивая, в течение 24 ч. Низкомолекулярные вещества удаляют диализной мембраной с Μ\νί'Ό 50 кДа. Полученный у-ΡСА-графт-^-РАЕ получают замораживанием-высушиванием.
Этап 2. Получение наночастиц из у-ΡСА-графт-^-РАЕ полимера.
Наночастицы, состоящие из у-ΡСА-графт-^-РАЕ, получают методами преципитации и диализа. у- 35 027103
РОА-графт-Ь-РАЕ (20 мг) растворили в 2 мл ΌΜδΟ, а затем добавили 2 мл воды для получения полупозрачного раствора. Раствор затем диализировали с дистиллированной водой через трубку с целлюлозной мембраной (50000 М\УСО) для получения наночастиц и удаления органических растворителей в течение 72 ч при комнатной температуре. Дистиллированную воду меняли каждые 12 ч. Полученный раствор наночастиц (10 мг/мл в воде) затем используют для конъюгации антигена.
Этап 3. Конъюгация овальбумина с γ-РОА наночастицами.
Поверхностные группы карбоксильной кислоты γ-РОА наночастиц (10 мг/мл) сначала активируются ЕИС и ΝΗδ (10 мг/мл каждого в фосфатном буфере, рН 5,8) в течение 2 ч при температуре окружающего воздуха. После отмывки осадка для удаления лишних ЕОС/ΝΗδ активированные наночастицы смешивают с 1 мл овальбумина (10 мг/мл) в солевом растворе фосфатного буфера (РВ§, рН 7,4), и смесь выдерживают при 4-8°С в течение 24 ч. Полученный γ-РОА наночастицы, конъюгированные с овальбумином, дважды отмывают РВ§ и ресуспендируют в 5 мг/мл РВ§ для анализа и биопроб.
Пример 9. Эритроэпоэтин (ЕРО)-инкапсулирующие γ-РОА наночастицы (пример возможного использования).
Чтобы получить ЕРО-инкапсулирующие γ-РОА наночастицы, 0,25-4 мг ЕРО растворяют в 1 мл РВ§ (рН 7,4) и 1 мл γ-РОА-графт-Ь-РАЕ (10 мг/мл в ΌΜδΟ) добавляют к раствору ЕРО. Полученный раствор центрифугируют при 14000хд в течение 15 мин и повторно промывают РВ§. Полученные ЕРОинкапсулирующие γ-РОА наночастицы затем ресуспендируют в РВ§ (5 мг/мл) для анализа и биопроб.
Пример 10. Получение золотых наноносителей (А^С), содержащих овальбумин (пример возможного использования).
Этап 1. Получение золотых СN (АиNС).
Водный раствор 500 мл 1мМ НАиС14 нагревают до возврата флегмы в течение 10 мин с энергичным перемешиванием в круглодонной колбе объемом 1 л, оборудованной конденсатором. Раствор 50 мл 40 мМ тринатрий цитрата затем быстро добавляют в перемешиваемый раствор. Полученный густовинный раствор выдерживают до возврата флегмы в течение 25-30 мин, отключают подогрев и охлаждают раствор до комнатной температуры. Затем раствор фильтруют через 0,8 мкм мембранный фильтр и получают раствор АиNС. АиNС характеризуют при помощи спектроскопии в видимой области и трансмиссионной электронной микроскопии. Эти АиNС имеют диаметр, приблизительно равный 20 нм, и окружены цитратом с пиком поглощения 520 нм.
Этап 2. Конъюгация овальбумина с АиNС.
Раствор 150 мкл тиолированного овальбумина (10 мкМ в 10 мМ рН 9,0 карбонатном буфере) добавляют к 1 мл золотых наноносителей диаметром 20 нм, окруженных цитратом (1,16 нм) для получения молярного соотношения тиола к золоту 2500:1. Смесь перемешивают при комнатной температуре в присутствии аргона в течение 1 ч для полного замещения цитрата тиолом на наноносиелях, содержащих золото. АиNС с овальбумином на поверхности затем очищают центрифугированием при 12000 д в течение 30 мин. Надосадочную жидкость декантируют, а осадок, содержащий АиNС-овальбумин, затем отмывают 1хРВ§ буфером. Очищенные золотые наноносители, содержащие овальбумин, затем ресуспендируют в подходящем буфере для анализа и биопроб.
Пример 11. Измерение толерогенного иммунного ответа на эритроэпоэтин альфа ίη νίνο (пример возможного использования).
Мыши линии Ва1Ь/с иммунизированы эритроэпоэтином альфа в неполном адъюванте Фрейнда для вызова пролиферации СО4+Т-клеток, уровень которых изучали. Композицию изобретения, содержащую МНС класса ΙΙ-рестриктированные эпитопы эритроэпоэтина альфа и иммунодепрессант, последовательно и дозозивисимо вводили подкожно. Эти же мыши затем снова получали эритроэпоэтин альфа, и у них снова измеряли уровень пролиферации СИ4+Т-клеток. Затем отслеживались изменения популяции СО4+Т-клеток, при этом обнаружили, что уменьшение пролиферации СИ4+Т-клеток при последовательном введении эритроэпоэтина альфа является толерогенным иммунным ответом.
Пример 12. Измерение толерогенных иммунных ответов на синтетические наноносители, содержащие иммунодепрессант и презентирующий антиген АРС ίη νίνο.
Материалы и способы получения синтетического наноносителя.
Наноноситель 1.
Рапамицин был куплен у ΤδΖ СНЕМ (185 ΧνίΕοη 51гее1, РгаттдНат, МА 01702; Ргойис! Саίа1οдие # К1017). РЬОА с соотношением лактид:гликолид 3:1 и удельной вязкостью 0,75 дл/г был куплен у §игΜοάκδ РНагтасеиРсаЕ (756 Τοιη Майш Όπ\ό, ВиттдНат, АЬ 35211; Ргойис! Сойе 7525 ИЬО 7А). Был синтезирован РЬА-РЕО блок со-полимер с РЕО-блоком приблизительно 5000 Да и РЬА-блоком приблизительно 20000 Да. Поливиниловый спирт (85-89% гидролизный) был куплен у ЕМИ СЬетюаЕ (продукт номер 1.41350.1001).
Растворы готовили следующим образом.
Раствор 1. Рапамицин при 50 мг/мл в метилен хлориде. Раствор был получен путем растворения рапамицина в чистом метилен хлориде.
Раствор 2. РЬОА при 100 мг/мл в метилен хлориде. Раствор был получен путем растворения РЬОА
- 36 027103 в чистом метилен хлориде.
Раствор 3. РЬА-РЕО при 100 мг/мл в метилен хлориде. Раствор был получен путем растворения РЬА-РЕО в чистом метилен хлориде.
Раствор 4. Поливиниловый спирт при 50 мг/мл в 100 мМ рН 8 фосфатного буфера.
Для получения наноносителей использовали эмульсию масло-в-воде. Эмульсия масло-в-воде была получена путем смешивания раствора 1 (0,2 мл), раствора 2 (0,75 мл), раствора 3 (0,25 мл) и раствора 4 (3 мл) в маленькой напорной трубке и обработки ультразвуком с амплитудой 30% в течение 60 с с использованием Вгапкоп П1§Иа1 8ошйег 250. Эмульсию масло-в-воде добавили в мерный стакан, содержащий 70 мМ рН 8 фосфатного буферного раствора (30 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, чтобы метилен хлорид испарился, и образовались наноносители. Часть синтетических наноносителей отмывали, поместив суспензию синтетического наноносителя в пробирку для центрифуги и центрифугируя ее при 21000хд и 4°С в течение 45 мин, удаляя надосадочную жидкость и ресуспендируя осадок в фосфатно-солевом буфере. Процедуру отмывки повторили, и осадок ресуспендировали в фосфатносолевом буфере для окончательной дисперсии наноносителей около 10 мг/мл.
Размер наноносителя определяли методом динамического рассеяния света. Количество рапамицина в синтетическом наноносителе было определено при помощи НРЬС-анализа. Общую массу сухого синтетического наноносителя на мл суспензии определяли гравиметрическим методом.
ГО наноносителя Эффективный диаметр (нм) Содержание рапамицина (% вес/вес)
Наноноситель 1 215 9,5
Наноноситель 2.
Пептид овальбумина 323-339, пептид, состоящий из 17 аминокислот, известный как эпитоп белка овальбумина Т и В-клеток, куплен у ВасНет Атепсак Щс. (3132 КакЫ^а 81гее1, Тоггапсе СА 90505; Раг! # 4065609). РЬОА с соотношением лактид:гликолид 3:1 и удельной вязкостью 0,75 дл/г куплен у 8игМобюк РНагтасеийса1к (756 Тот Магйп Эпуе, ВпттдНат, АЬ 35211; Ргобис! Собе 7525 ЭЙО 7А). РЙА-РЕО блок-сополимер с РЕО-блоком приблизительно 5000 Да и РйА-блоком приблизительно 20000 Да был синтезирован. Поливиниловый спирт (85-89% гидролизный) куплен у ЕМГ) СНет1са1к (Ргобис! ШтЪег 1.41350.1001).
Растворы были приготовлены следующим образом.
Раствор 1. Пептид овальбумина 323-339 при 20 мг/мл в растворителе водном растворе гидрохлоридной кислоты. Раствор был получен путем растворения пептид овальбумина в 0,13М растворе гидрохлоридной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 2. РЙОА при 100 мг/мл в метиленхлориде. Раствор был получен путем растворения РЙОА в чистом метиленхлориде.
Раствор 3. РЙА-РЕО при 100 мг/млв метилен хлориде. Раствор был получен путем растворения РЙА-РЕО в чистом метилен хлориде.
Раствор 4. Поливиниловый спирт при 50 мг/мл в 100 мМ рН 8 фосфатном буфере.
Сначала приготовили основную водно-масляную эмульсиию. ^1/О1 была получена путем смешивания раствора 1 (0,2 мл), раствора 2 (0,75 мл) и раствора 3 (0,25 мл) в маленькой напорной трубке и обработке ультразвуком с амплитудой 50% на 40 с с использованием Вгапкоп П1§Иа1 8ошйег 250. Затем приготовили вторичную эмульсию (Ш/О1Ж2), смешивая раствор 4 (3,0 мл) с начальной ^1/О1 эмульсией, перемешивая на вортексе в течение 10 с и обрабатывая ультразвуком с амплитудой 30% в течение 60 с с использованием Вгапкоп П1§Иа1 8ошйег 250.
Эмульсию ^1/О1Ж2 налили в мерный стакан, содержащий 70 мМ рН 8 раствора фосфатного буфера (30 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, чтобы метиленхлорид испарился, и образовались наноносители. Часть синтетических наноносителей отмывали, поместив суспензию синтетического наноносителя в пробирку для центрифуги и центрифугируя ее при 75600хд и 4°С в течение 35 мин, удаляя надосадочную жидкость и ресуспендируя осадок в фосфатно-солевом буфере. Процедуру отмывки повторили, и осадок ресуспендировали в фосфатно-солевом буфере для окончательной дисперсии наноносителей около 10 мг/мл.
Размер наноносителя определяли методом динамического рассеяния света. Количество пептида в наноносителе было определено при помощи НРйС-анализа. Общую массу сухого синтетического наноносителя на мл суспензии определяли гравиметрическим методом.
ГО наноносителя Эффективный диаметр (нм) Содержание пептида (% вес/вес)
Наноноситель 2 234 2,1
- 37 027103
Наноноситель 3.
Симвастатин был куплен у 1.КТ ЬаЬога1ог1е5, Тис. (2233 ишуег5йу Ауеиие \\'е51, 8ί. Раи1, ΜΝ 55114; РгоДис! Са!а1одие # 83449). РЬСА с соотношением лактид:гликолид 3:1 и удельной вязкостью 0,75 дл/г был куплен у 8игМоД1с5 РЬагтасеийсаЕ (756 Тот МагЛи 1)п\'е, ВнттдЬат, АЬ 35211; РгоДис! СоДе 7525 ЭЬС 7А). РЬА-РЕС блок сополимер с РЕС-блоком приблизительно 5000 Да и РЬА-блоком приблизительно 20000 Да был синтезирован. Поливиниловый спирт (85-89% гидролизированный) был куплен у ЕМЭ СЬет1са15 (продукт номер 1.41350.1001).
Растворы были приготовлены следующим образом.
Раствор 1. Симвастатин при 50 мг/мл в метиленхлориде. Раствор был получен путем растворения симвастатина в чистом метиленхлориде.
Раствор 2. РЬСА при 100 мг/мл в метиленхлориде. Раствор был получен путем растворения РЬСА в чистом метиленхлориде.
Раствор 3. РЬА-РЕС при 100 мг/мл в метилен хлориде. Раствор был получен путем растворения РЬА-РЕС в чистом метиленхлориде.
Раствор 4. Поливиниловый спирт при 50 мг/мл в 100 мМ рН 8 фосфатном буфере.
Для получения наноносителей использовали эмульсию масло-в-воде. Эмульсия масло-в-воде была получена путем смешивания раствора 1 (0,15 мл), раствора 2 (0,75 мл), раствора 3 (0,25 мл) и раствора 4 (3 мл) в маленькой напорной трубке и обработки ультразвуком амплитуде 30% на 60 с с использованием Вгаи5ои Οίΰίΐη1 8ошйег 250. Эмульсию масло-в-воде налили в мерный стакан, содержащий 70 мМ рН 8 раствора фосфатного буфера (30 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, чтобы метиленхлорид испарился, и образовались наноносители. Часть синтетических наноносителей отмывали, поместив суспензию синтетического наноносителя в пробирку для центрифуги и центрифугируя ее при 75600хд и 4°С в течение 35 мин, удаляя надосадочную жидкость и ресуспендируя осадок в фосфатносолевом буфере. Процедуру отмывки повторили, и осадок ресуспендировали в фосфатно-солевом буфере для окончательной дисперсии наноносителей около 10 мг/мл.
Размер наноносителя определяли методом динамического рассеяния света. Количество симвастатина в наноносителе было определено при помощи НРЬС-анализа. Общую массу сухого синтетического наноносителя на мл суспензии определяли гравиметрическим методом.
ГО наноносителя Эффективный диаметр (нм) Количество симвастатина (% вес/вес)
Наноноситель 3 196 8,0
Наноноситель 4.
Пептид овальбумина 323-339, пептид, состоящий из 17 аминокислот, известный как эпитоп белка овальбумина Т- и В-клеток, куплен у ВасЕет Атепса5 Пк. (3132 Ка5Йта 81гее1, Тоггаисе СА 90505; Раг! # 4065609). Рапамицин был куплен у Т82 СНЕМ (185 \\'П5ои 81гее1, Ргаттдйат, МА 01702; РгоДис! Са!а1одие # К1017). РЬСА с соотношением лактид:гликолид 3:1 и удельной вязкостью 0,75 дл/г куплен у 8игМоД1с5 РйагтасеийсаЕ (756 Тот Магйи Эг1уе, В1гтт§йат, АЬ 35211; РгоДис! СоДе 7525 ОРС 7А). РЬА-РЕС блок со-полимер с РЕС-блоком приблизительно 5000 Да и РЬА-блоком приблизительно 20000 Да был синтезирован. Поливиниловый спирт (85-89% гидролизный) был куплен у ЕМЭ СЬет1са15 (номер продукта 1.41350.1001).
Растворы были приготовлены следующим образом:
Раствор 1. Пептид овальбумина 323-339 при 20 мг/мл в растворителе водном растворе гидрохлоридной кислоты. Раствор был получен путем растворения пептида овальбумина в 0,13М растворе гидрохлоридной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 2. Рапамицин при 50 мг/мл в метиленхлориде. Раствор был получен путем растворения рапамицина в чистом метиленхлориде.
Раствор 3. РЬСА при 100 мг/мл в метиленхлориде. Раствор был получен путем растворения РЬСА в чистом метиленхлориде.
Раствор 4. РЬА-РЕС при 100 мг/мл в метиленхлориде. Раствор был получен путем растворения РЬА-РЕС в чистом метиленхлориде.
Раствор 5. Поливиниловый спирт при 50 мг/мл в 100 мМ рН 8 фосфатном буфере.
Сначала приготовили основную водно-масляную эмульсиию. ^1/01 была получена путем смешивания раствора 1 (0,2 мл), раствора 2 (0,2 мл), раствора 3 (0,75 мл) и раствора 4 (0,25 мл) в маленькой напорной трубке и обработки ультразвуком с амплитудой 50% на 40 с с использованием Вгаи5ои Οίρίΐη1 8отйег 250. Затем приготовили вторичную эмульсию (^1/01/^2), смешивая раствор 5 (3,0 мл) с основной \Υ1 /01 эмульсией, перемешивая на вортексе в течение 10 с и обрабатывая ультразвуком с амплитудой 30% в течение 60 с с использованием Вгаи5ои Ι)ίΰίΐ;ι1 8отйег 250.
Эмульсию ^1/01/^2 налили в мерный стакан, содержащий 70 мМ рН 8 раствора фосфатного буфера (30 мл), и перемешали при комнатной температуре в течение 2 ч, чтобы метиленхлорид испарился,
- 38 027103 и образовались наноносители. Часть синтетических наноносителей отмывали, поместив суспензию синтетического наноносителя в пробирку для центрифуги и центрифугируя ее при 21000хд и 4°С в течение 45 мин, удаляя надосадочную жидкость и ресуспендируя осадок в фосфатно-солевом буфере. Процедуру отмывки повторили, и осадок ресуспендировали в фосфатно-солевом буфере для окончательной дисперсии наноносителей около 10 мг/мл.
Размер наноносителя определяли методом динамического рассеяния света. Количество пептида и рапамицина в наноносителе определяли НРБС-анализом. Общую массу сухого синтетического наноносителя на мл суспензии определяли гравиметрическим методом.
ГО наноносителя Эффективный диаметр (нм) Содержание рапамицина (% вес/вес) Содержание пептида (% вес/вес)
4 227 9,0 2,5
Наноноситель 5.
Пептид овальбумина 323-339, пептид, состоящий из 17 аминокислот, известный как эпитоп белка овальбумина Т- и В-клеток, куплен у Васйет Атенсак 1пс. (3132 1<ак1н\\а 81гее1, Тоггапсе СА 90505; Раг! # 4065609). Симвастатин был куплен у БКТ БаЬога1ог1ек, 1пс. (2233 итуегкйу Ауепие ШекС 81. Раи1, МИ 55114; Ргойис! Са1а1одие # 83449). РБОА с соотношением лактид:гликолид 3:1 и удельной вязкостью 0,75 дл/г куплен у ЗигМоШск Рйагтасеийса1к (756 Тот Магйп Бг1ус, Вйттдйат, АЬ 35211; Ргойис! Собе 7525 БЬО 7А). РБА-РЕО блок со-полимер с РЕО-блоком приблизительно 5000 Да и РБА-блоком приблизительно 20000 Да был синтезирован. Поливиниловый спирт (85-89% гидролизный) был куплен у ЕМБ С1ет1са1к (продукт номер 1.41350.1001).
Растворы были приготовлены следующим образом.
Раствор 1. Пептид овальбумина 323-339 при 20 мг/мл в растворителе водном растворе гидрохлоридной кислоты. Раствор был получен путем растворения пептид овальбумина в 0,13М растворе гидрохлоридной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 2. Симвастатин при 50 мг/млв метиленхлориде. Раствор был получен путем растворения симвастатин в чистом метиленхлориде.
Раствор 3. РБОА при 100 мг/млв метиленхлориде. Раствор был получен путем растворения РБОА в чистом метиленхлориде.
Раствор 4. РБА-РЕО при 100 мг/мл в метиленхлориде. Раствор был получен путем растворения РБА-РЕО в чистом метиленхлориде.
Раствор 5. Поливиниловый спирт при 50 мг/мл в 100 мМ рН 8 фосфатном буфере.
Сначала приготовили основную водно-масляную эмульсиию. ^1/01 была получена путем смешивания раствор 1 (0,2 мл), раствор 2 (0,15 мл), раствор 3 (0,75 мл), и раствор 4 (0,25 мл) в маленькой напорной трубке и обработки ультразвуком с амплитудой 50% на 40 с с использованием Вгапкоп Б1§йа1 8ошйег 250. Затем приготовили вторичную эмульсию (^1/01/^2), смешивая раствор 5 (3,0 мл) с основной эмульсией ^1/01, перемешивая на вортексе в течение 10 с и обрабатывая ультразвуком с амплитудой 30% в течение 60 с с использованием Вгапкоп Б1§йа1 8ошйег 250.
Эмульсию Ш1/01/Ш2 налили в мерный стакан, содержащий 70 мМ рН 8 раствора фосфатного буфера (30 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, чтобы метиленхлорид испарился, и образовались наноносители. Часть синтетических наноносителей отмывали, поместив суспензию синтетического наноносителя в пробирку для центрифуги и центрифугируя ее при 75600хд и 4°С в течение 35 мин, удаляя надосадочную жидкость и ресуспендируя осадок в фосфатно-солевом буфере. Процедуру отмывки повторили, и осадок ресуспендировали в фосфатно-солевом буфере для окончательной дисперсии наноносителей около 10 мг/мл.
Размер наноносителя определяли методом динамического рассеяния света. Количества пептида и симвастатина в наноносителе определяли НРБС-анализом. Общую массу сухого синтетического наноносителя на мл суспензии определяли гравиметрическим методом.
ГО наноносителя Эффективный диаметр (нм) Количество симвастатина (% вес/вес) Содержание пептида (% вес/вес)
Наноноситель 5 226 2,7 1,9
1п У1уо введение 1.
Селезенки, полученные от мышей линий В6.С§-Т§(ТсгаТсгЬ)425СЬп/1 (0Т11) и С57ВБ/6 (В6), механически измельчали и отдельно пропускали через 70 мкМ сито, чтобы получить суспензию из одиночных клеток. Затем путем двухэтапного процесса получали очищенные СБ4+СБ25-клетки. При помощи магнитного сортировщика клеток Мй1епу1 Вю1ес Аи1оМАС8 клетки селезенки сначала пометили набором для изоляции СБ4+Т-клеток II, а непомеченную фракцию отделили от СБ25+ клеток при помощи набора для элиминации СБ25. Очищенные В6 клетки окрашивали внутриклеточным красителем, эфиром
- 39 027103 карбоксифлуоресцин сукцинимидила (ί'.'ΡδΕ), а после смешивали в равных концентрациях с очищенными ΟΡΙΙ клетками. Затем их вводили внутривенно (ΐ.ν.) реципиентным мышам Β6.δ^^-Ρΐр^са/ΒοуΑ^ (СБ45.1).
На следующий день реципиентные мыши СЭ45.1 получили таргетные толерогенные синтетические 2 323 339 частицы вакцины (ΐ δνΡ). Они имели нагрузку пептида овальбумина (323-339) (ΟνΑ - ), рапамицина (Нара) и/или симвастатина (Ытеа) и вводились подкожно (к.с).
Толерогенное лечение заключалось в инъекции и сопровождалось еще 4 инъекциями с промежутком 2 недели между ними. После того как курс лечения был окончен, реципиентных животных СЭ45.1 умертвляли, брали их селезенки и подколенные лимфатические узлы, механически измельчали и отдельно пропускали через 70 мкМ сито, чтобы получить суспензию из одиночных клеток. Клетки селезенки отделяли от красных кровяных клеток (ΚΒС) путем выдерживания в ΚΒС-лизирующем буфере (Ь1ет Се11 ΤесЬηο1οд^еδ) и проводили подсчет как клеток селезенки, так и клеток лимфатических узлов.
Клетки селезенки или лимфатических узлов культивировали в СМ (полная среда), дополненной 10Е/мл ΙΕ-2, повторно стимулировали ΟΡΙΙ при 0,3 х106 клеток/лунка в 96-луночных круглодонных (ΚΒ) планшетах и инкубировали при 37°С, 5% ί'.’Ο2. Клетки распределили на день 2 и собрали на день 5. Надосадочные жидкости собирали и замораживали, при этом клетки были окрашены для проведения фенотипического анализа проточной цитометрией. Клетки анализировали на проточном цитометре ВесШп Э|скίηδοη РасЮапЮ.
Ιη νίνο введение 2.
Селезенки, полученные от мышей линий Β6.Сд-Τ§(Τс^аΤс^Ь)425СЬη/^ (ΟΡΙΙ) и С57ВЬ/6 (В6), механически измельчали и отдельно пропускали через 70 мкМ сито, чтобы получить суспензию из одиночных клеток. ГииЛей СЭ4+СЭ25- клетки затем очищали путем двухэтапного процесса, используя магнитный сортировщик клеток Μίΐίο^ί Вю1ес ΑиΐοΜΑСδ. Клетки селезенки метили набором для изоляции СЭ4+Т-клеток ΙΙ ΜΠ^ικί'δ. Непомеченную фракцию СЭ4+Т-клеток отделили от СЭ25' клеток при помощи набора для элиминации СЭ25. Очищенные СЭ4 клетки от мышей В6 затем окрашивали внутриклеточным красителем, сложным карбоксифлуоресцеиновым эфиром сукцинимидила (ί'.'ΡδΕ), а после смешивали при равных концентрациях с очищенными клетками ΟΤΙΙ. Затем их вводили внутривенно (ΐ.ν.) реципиентным мышам Β6.δ^^-Ρίр^са/ΒοуΑ^(С^45.1).
На следующий день реципиентные мыши СЭ45.1 получили таргетные толерогенные синтетические
323-339 частицы вакцины. Они имели нагрузку пептида овальбумина (323-339) (ΟνΑ - ), рапамицина (Пара) и/или симвастатина (δ^тνа) и вводились подкожно (8.с.) или внутривенно (ΐ.ν.).
После того как курс лечения был окончен, реципиентных животных СЭ45.1 умертвляли, брали их селезенки и подколенные лимфатические узлы, механически измельчали и отдельно пропускали через 70 мкМ сито, чтобы получить суспензию из одиночных клеток. Клетки селезенки отделяли от красных кровяных клеток (ИВС'з) путем смешивания с ВВС-лизирующим буфером (Ь1ет Се11 ΤесЬηο1οд^еδ) и проводили подсчет как клеток селезенки, так и клеток лимфатических узлов.
Клетки селезенки или лимфатических узлов культивировали в СМ, дополненной 10Е/мл ΙΕ-2, повторно стимулировали 1 мкМ ΟΡΙΙ при 0,3x10 клеток/лунка в 96-луночных круглодонных (ЕВ) планшетах и инкубировали при 37°С, 5% ί.’Ο2. Клетки распределили на день 2 и собрали на день 5. Надосадочные жидкости собирали и замораживали, при этом клетки были окрашены для проведения фенотипического анализа проточной цитометрией. Клетки анализировали на проточном цитометре Βесΐοη Όκίίηδοη Ρас8Саηΐο.
Результаты.
Результаты показаны на фиг. 2 и 3 (иммуномодулятор 1: рапамицин; иммуномодулятор 2: симвастатин). Фигура показывает эффекты ίη νίνο и демонстрирует, что антиген-специфическая экспансия эффекторных иммунных клеток уменьшается синтетическими наноносителями, содержащими антиген и иммунодепрессанты, по сравнению только с антигеном или с синтетическими наноносителями, содержащими только антиген без иммуностимулирующей молекулы.
Пример 13. Толерогенные иммунные ответы с синтетическими наноносителями.
Материалы и способы.
Наноноситель 1.
Белок овальбумин куплен у νοηΐιίηβίοη ВюсЬетка1 Сο^рο^аΐ^οη (730 Vа88а^ Ανеηие, Επί^γοού, ΝΙ 08701; ΡίούικΙ Сюйе 3048). ΡΕΟΑ с соотношением лактид:гликолид 3:1 и удельной вязкостью 0,75 дл/г куплен у δϋΓΜούΐοδ ΡЬа^тасеиΐ^са1δ (756 Τοη ΜτΓΐίη Опте, ВитшдНат, ΑΕ 35211; Ρτού^ΐ Сюйе 7525 ОБО 7Α). Поливиниловый спирт (85-89% гидролизный) был куплен у ΕΜΌ СНеипсаЕ (продукт номер 1.41350.1001). Был синтезирован ΡΕΑ-ΡΕΟ блок со-полимер с ΡΕΟ-блоком приблизительно 5000 Да и ΡΕΑ-блоком приблизительно 20000 Да. Натрия холат гидрат был куплен у δ^дта-Α1й^^сЬ ϋοιρ. (3050 δρπ^ δύ^ΐ, δΐ. Εοώδ, ΜΟ 63103; ΡίούικΙ Сойе С6445).
Растворы были приготовлены следующим образом:
Раствор 1. Овальбумин при 50 мг/мл в фосфатно-солевом буферном растворе. Раствор готовили, растворяя овальбумин в фосфатно-солевом буферном растворе при комнатной температуре.
- 40 027103
Раствор 2. РБОА при 100 мг/мл в метиленхлориде. Раствор готовили, растворяя РБОА в чистом метиленхлориде.
Раствор 3. РБА-РЕО при 100 мг/мл в метиленхлориде. Раствор готовили, растворяя РБА-РЕО в чистом метиленхлориде.
Раствор 4. Поливиниловый спирт при 50 мг/мл и натрия холат гидрат при 10 мг/мл в 100 мМ рН 8 фосфатном буфере.
Сначала приготовили основную водно-масляную эмульсиию. Ш1/О1 была получена путем смешивания раствора 1 (0,2 мл), раствора 2 (0,75 мл) и раствора 3 (0,25 мл) в маленькой напорной трубке и обработки ультразвуком с амплитудой 50% на 40 с с использованием Вгапзоп П1§йа1 8ошйег 250. Затем приготовили вторичную эмульсию (ν1/01/ν2), смешивая раствор 4 (3,0 мл) с основной эмульсией Ш1/О1, перемешивая на вортексе в течение 10 с и обрабатывая ультразвуком с амплитудой 30% в течение 60 с с использованием Вгапзоп П1§йа1 8ошйег 250. Эмульсию ν1/01/ν2 налили в мерный стакан, содержащий 70 мМ рН 8 раствора фосфатного буфера (30 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, чтобы метиленхлорид испарился, и образовались наноносители. Часть синтетических наноносителей отмывали, поместив суспензию синтетического наноносителя в пробирку для центрифуги, и центрифугируя ее при 75600хд и 4°С в течение 35 мин, удаляя надосадочную жидкость и ресуспендируя осадок в фосфатно-солевом буфере. Процедуру отмывки повторили, и осадок ресуспендировали в фосфатно-солевом буфере для окончательной дисперсии наноносителей около 10 мг/мл.
Размер наноносителя определяли методом динамического рассеяния света. Количества пептида и симвастатина в наноносителе определяли НРБС-анализом. Общую массу сухого синтетического наноносителя на мл суспензии определяли гравиметрическим методом.
Наноноситель ГО Эффективный диаметр (нм) Содержание белка (% вес/вес)
1 191 10,1
Наноноситель 2.
Белок овальбумина куплен у ШойЬт§1оп ВюсЬет1са1 Согрогайоп (730 Vазза^ Аνеηие, Баке^ооД, Ν.Ι 08701; РгоДис! СоДе 3048). Рапамицин был куплен у Τ8Ζ СНЕМ (185 ШДзоп 8йее1, РгаттдЬат, МА 01702; РгоДис! Са1а1одие # К1017). РБОА с соотношением лактид:гликолид 3:1 и удельной вязкостью 0,75 дл/г куплен у 8игМоД1сз РЬагтасеийса1з (756 Тот Магйп Опус- ВйттдЬат, АБ 35211; РгоДис! СоДе 7525 ЭБО 7А). РБА-РЕО блок со-полимер с РЕО-блоком приблизительно 5000 Да и РБА-блоком приблизительно 20000 Да был синтезирован. Поливиниловый спирт (85-89% гидролизный) был куплен у ЕМЭ СЬет1са1з (продукт номер 1.41350.1001). Натрия холат гидрат был куплен у 81дта-А1ДпсЬ Согр. (3050 8ргисе 81гее1, 8!. Бошз, МО 63103; РгоДис! СоДе С6445).
Растворы были приготовлены следующим образом:
Раствор 1. Овальбумин при 50 мг/мл в фосфатно-солевом буферном растворе. Раствор готовили, растворяя овальбумин в фосфатно-солевом буферном растворе при комнатной температуре.
Раствор 2. Рапамицин при 50 мг/мл в метиленхлориде. Раствор готовили, растворяя рапамицин в чистом метиленхлориде.
Раствор 3. РБОА при 100 мг/мл в метиленхлориде. Раствор готовили, растворяя РБОА в чистом метиленхлориде.
Раствор 4. РБА-РЕО при 100 мг/мл в метиленхлориде. Раствор готовили, растворяя РБА-РЕО в чистом метиленхлориде.
Раствор 5. Поливиниловый спирт при 50 мг/мл и натрия холат гидрат при 10 мг/мл в 100 мМ рН 8 фосфатном буфере.
Сначала приготовили основную водно-масляную эмульсиию. Ш1/О1 была получена путем смешивания раствора 1 (0,2 мл), раствора 2 (0,2 мл) и раствора 3 (0,75 мл) и раствора 4 (0,25 мл) в маленькой напорной трубке и обработки ультразвуком с амплитудой 50% на 40 с с использованием Вгапзоп П1дйа1 8ошйег 250. Затем приготовили вторичную эмульсию (Ш1/О1^2), смешивая раствор 5 (3,0 мл) с основной эмульсией Ш1/О1, перемешивая на вортексе в течение 10 с и обрабатывая ультразвуком с амплитудой 30% в течение 60 с с использованием Вгапзоп П1§11а1 8ошйег 250. Эмульсию Ш1/О1/Ш2 налили в мерный стакан, содержащий 70 мМ рН 8 раствора фосфатного буфера (30 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, чтобы метиленхлорид испарился, и образовались наноносители. Часть синтетических наноносителей отмывали, поместив суспензию синтетического наноносителя в пробирку для центрифуги и центрифугируя ее при 75600хд и 4°С в течение 35 мин, удаляя надосадочную жидкость и ресуспендируя осадок в фосфатно-солевом буфере. Процедуру отмывки повторили, и осадок ресуспендировали в фосфатно-солевом буфере для окончательной дисперсии наноносителей около 10 мг/мл.
Размер наноносителя определяли методом динамического рассеяния света. Количество рапамицина на наноносителе определяли НРБС-анализом. Количество белка на наноносителе определяли офталальдегидным флуорометрическим анализом. Общую массу сухого синтетического наноносителя на мл суспензии определяли гравиметрическим методом.
- 41 027103
Наноноситель ГО Эффективный диаметр (нм) Содержание рапамицина (% вес/вес) Содержание белка (% вес/вес)
2 172 7,4 7,6
Иммунизация.
Целью эксперимента было измерение эффектов инкапсулированного (12ЗУР) иммунодепрессанта на происходящие ответы антител путем измерения количества антиген-специфических иммуноглобулинов. Одну группу животных оставили неиммунизироваными для контроля. Две группы животных иммунизировали, применяя пассивное введение овальбумина или активную иммунизацию ΟVА и СрС 3 инъекциями (60, 614 и 628) с последующим измерением титров антител с промежутком в одну или две недели. Другие две группы получали такую же иммунизацию, но одновременно с лечением каждые 2 недели получали бустер-дозу. Каждую из этих групп разделили на три подгруппы, чтобы проверить способность каждого вида лечения модифицировать титры образуемых антител. Контрольная подгруппа не получала толерогенного лечения. Два других вида лечения применяли в других подгруппах, включая применение ОТ, несущих только белок ΟVА или в комбинации с иммунодепрессантом.
В целях иммунизации животные получали 20 мкл/конечность ΟVА+СрС (12,5 мкг ΟVА+10 мкг СрС) в обе задние конечности подкожно или 25 мкг ΟVА внутривенно 100 мкл. Толерогенное лечение включало введение 200 мкл ί2ЗVΡ внутривенно с применением 10 мкг ΟVА. Наночастицы предоставлялись в содержимом 500 мкг/мл ΟVА. ГЗУР растворяли таким образом, что всем группам инъецировали одинаковые количества ΟVА.
Измерение количества ^С.
Измеряли уровни антител ^С. В1оскег Сазеш в РВЗ (Тйегшо Р18йег, Са1а1од #37528) использовали в качестве растворителя. 0,05% Т\уееп-20 в РВЗ использовали в качестве промывочного буфера, приготовив его путем смешивания 10 мл Т\уееп-20 ((Зщша, Са1а1од #Р9416-100мл) с 2 л 10х РВЗ реакционной смеси (РВЗ: ОшшРиг® 10х РВЗ Ыцшб Сопсеп1га1е, 4Б, ЕМБ Сйеш1са18, Са1а1од #6505) и 18 л деионизированной воды.
Белок ΟVА в реакционной концентрации 5 мг/мл использовали в качестве материала покрытия. Раствор 1:1000 до 5 мкг/мл использовали в качестве рабочей концентрации. Каждую лунку планшетов покрывали 100 мкл растворенным ΟVА на лунку, планшеты укупоривали пленкой (УШК са!а1о§ #60941120) и выдерживали в течение ночи при 4°С. В качестве планшетов для исследования использовали Со81аг901796-луночные плоскодонные планшеты, Соз1аг9017.
96-луночные планшеты или тубы из слабосвязанного пропилена использовали в качестве установочных пластин, в которых образцы готовили к помещению на аналитический планшет. Аналитические планшеты не содержали никаких антигенов, и, следовательно, сывороточные антитела не связывались с планшетом во время постановки образцов. Установочные планшеты использовали для подготовки образцов, чтобы минимизировать связывание, возможное при приготовлении или дозировании образцов, если для приготовления образцов использовать планшет с антигенами на поверхности. Перед подготовкой образцов на установочном планшете лунки покрывали растворителем, чтобы предотвратить любое неспецифическое связывание, планшет запечатывали и инкубировали при 4°С на протяжении ночи.
Аналитические планшеты затем трижды промывали промывочным буфером, полностью испаряя промывочный буфер из лунок после последней промывки. После отмывки добавляли 300 мкг растворителя в каждую лунку аналитического планшета (планшетов), чтобы предотвратить неспецифическое связывание, и планшеты инкубировали в течение по меньшей мере 2 ч при комнатной температуре. Образцы сыворотки готовили на установочном планшете, используя соответствующие стартовые растворы. Стартовые растворы также иногда получали в пробирках объемом 1,5 мл, используя растворитель. Соответствующие стартовые растворы определяли, где это было возможно, на основании предшествующих данных. Когда предшествующие данные были неизвестны, самый слабый стартовый раствор был 1:40. После разбавления 200 мкл стартового раствора образца сыворотки переносили в соответствующую лунку устновочного планшета.
Образец расположения на установочном планшете следующим образом: колонки 2 и 11 содержали стандарт изотипа антиовальбуминового моноклонального ^С2Ь (АЬСат, аЬ17291), растворенный в 1 мкг/мл (1:4000 растворение). Колонки 3-10 содержали образцы сыворотки (в соответствующих растворах). Колонки 1 и 12 не использовали для образцов или стандартов, чтобы избежать субъективных ошибок измерения, вызванных граничным эффектом. Вместо этого колонки 1 и 12 содержали 200 мкл растворителя. Нормальную мышиную сыворотку, растворенную 1:40, использовали в качестве негативного контроля. Антимышиный ^С2а растворяли 1:500 из 0,5 мг/мл реакционной смеси (ВБ Вюзшепсе) использовали в качестве изотопического контроля.
Когда все образцы были приготовлены на установочном планшете, планшет закупоривали и выдерживали при 4°С до полного связывания на аналитическом планшете. Аналитические планшеты трижды отмывали промывочным буфером, полностью испаряя промывочный буфер из лунок после последней
- 42 027103 промывки. После отмывки 100 мкл растворителя добавляли во все лунки В-Н аналитических планшетов. Для переноса образцов с установочного планшета на аналитический планшет использовали 12канальную пипетку. Перед переносом образцы смешивали, переливая пипеткой 150 мкл разбавленной сыворотки туда и назад 3 раза. После смешивания 150 мкл каждого образца переносили с установочного планшета и добавляли в ряд А соответствующего аналитического планшета.
После того как стартовые растворы каждого образца перенесли с установочного планшета в ряд А аналитического планшета, растворы сыворотки добавляли пипеткой на аналитический планшет следующим образом: 50 мкл каждого образца сыворотки удаляли из ряда А 12-канальной пипеткой и смешивали со 100 мкл растворителя, предварительно добавленного в каждую лунку ряда В. Эту процедуру повторяли до заполнения всего планшета. После раскапывания раствора из последнего ряда 50 мкл жидкости удаляли из лунок последнего ряда и отбрасывали, получая конечный объем 100 мкл в каждой лунке аналитического планшета. После приготовления образцов растворов на аналитических планшетах планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч.
После инкубации планшеты трижды отмывали промывочным буфером. Идентифицирующее антитело (козье антитело против 1дО мыши, конъюгированное с НИР, АЬСат аЬ98717) развели 1:1500 (0,33 мкг/мл) в растворителе и 100 мкл разведенного антитела добавляли в каждую лунку. Планшеты инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем трижды промывали отмывочным буфером, включая в каждую промывку время выдержки 30 с.
После отмывки идентифицирующий субстрат добавляли в лунки. Равные части субстрата А и субстрата В (ВИ ВюЮепсек ТМВ 8нЬ51га1е Кеадеп! 8е1, са!а1од #555214) смешивали непосредственно перед помещением на аналитические планшеты, 100 мкл раствора смешанного субстрата добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 10 мин в темноте. Реакцию останавливали, добавляя 50 мкл стопраствора (2 н Н28О4) в каждую лунку по прошествии 10 мин. Оптическую плотность (ОИ) лунок измеряли непосредственно после добавления стоп-раствора на спектрофотометр для прочтения планшетов при 450 нм с субтракцией 570 нм. Данные анализировали при помощи программного обеспечения 8оГ!Мах Мо1еси1аг Иеу1се Рго ν5.4. В некоторых случаях строили график логистической кривой с четырьмя параметрами, на оси х (логарифмическая шкала) отложен раствор, на оси у (линейная шкала) отложено значение ОИ, и для каждого образца определяли половину максимального значения (ЕС50). Шаблон планшета в верхней части макета был скорректирован с учетом разведения каждого образца (по 1 на колонку).
Результаты.
Фиг. 4 показывает увеличение выработки антиген-специфическиого антитела с наноносителями, содержащими пептид антиген и иммунодепрессант, по сравнению с наноносителями, содержащими только пептид. График 3 показывает, что применение мощного иммуностимулярота, СрО, в некоторых случаях противодействовало толерогенным эффектам синтетических наноносителей, содержащих рапамицин.
Пример 14. Толерогенные иммунные ответы с синтетическими наноносителями Материалы и способы.
Наноносители получали так, как описано в предыдущем примере (пример 13).
Иммунизация.
Целью эксперимента было определить эффекты инкапсулированного (!28νΓ) иммунодепрессанта на появление ответов антител, измеряя количество антиген-специфических иммуноглобулинов у животных, получающих иммуногенное и ИР-лечение одновременно. Одна группа животных осталась неиммунизированой для контроля (но получала лечение). Две группы животных иммунизировали, применяя пассивное введение овальбумина или активную иммунизацию ОVА и СрО 3 инъекциями под лопатку. Каждая из этих групп получала инъекции наночастиц (ИР) с периодичностью в две недели, и в день, предшествующий бустер-инъекции, измерялись уровни 1д против ОVА. В целях иммунизации животные получали 100 мкл ОVА+СрО подкожно (под лопатку) или 25 мкг ОVА внутривенно в 100 мкл. Толерогенное лечение представляло собой введение 100 мкл !28УР внутривенно. Наноносители предоставлялись в 5мг/мл. !28νΤ растворяли таким образом, что все группы получали одинаковое количество ОVА. Инъекции произвоили в б0, б14, б28, б42, б56.
Измерение количества 1дО.
Измеряли уровни антитела 1дО. В1оскег Сакеш в РВ8 (ТЬегто р18Ьег, Са!а1од #37528) использовали в качестве растворителя. 0,05% Т\уееп-20 в РВ8 использовали в качестве отмывочного буфера, приготовив его путем смешивания 10 мл оГ Т\уееп-20 ((81дта, Са!а1од #Р9416-100мл) с 2 л 10хРВ8 реакционной смеси (РВ8: ОттРиг® 10хРВ8, жидкий концентрат, 4 л, ЕМИ СЬетюаИ, Са!а1од #6505) с 18 л деионизированной воды.
Белок ОVА при концентрации реакционной смеси 5 мг/мл использовали в качестве материала покрытия. Использовали разведение 1:1000 до 5 мкг/мл в качестве рабочей концентрации. Каждую лунку планшетов покрывали 100 мкл растворенным ОVА на лунку, планшеты укупоривали пленкой (νΑΚ са!а1од #60941-120) и выдерживали в течение ночи при 4°С. В качестве планшетов для исследования ис- 43 027103 пользовали Со81аг9017 96-луночные плоскодонные планшеты, Со81аг9017.
96-луночные планшеты или тубы из слабосвязанного пропилена использовали в качестве установочных планшетов, в которых образцы готовили к помещению на аналитический планшет. Аналитические планшеты не содержали никаких антигенов, и, следовательно, сывороточные антитела не связывались с планшетом во время постановки образцов. Установочные планшеты использовали для подготовки образцов, чтобы минимизировать связывание, возможное при приготовлении или дозировании образцов, если для приготовления образцов использовать планшет с антигенами на поверхности. Перед подготовкой образцов на установочном планшете лунки покрывали растворителем, чтобы предотвратить любое неспецифическое связывание, планшет запечатывали и инкубировали при 4°С на протяжении ночи.
Аналитические планшеты затем трижды промывали промывочным буфером, полностью испаряя промывочный буфер из лунок после последней отмывки. После отмывки добавляли 300 мкл растворителя в каждую лунку аналитического планшета (планшетов), чтобы предотвратить неспецифическое связывание, и планшеты инкубировали в течение по меньшей мере 2 ч при комнатной температуре. Образцы сыворотки готовили на установочном планшете, используя соответствующие стартовые растворы. Стартовые растворы также иногда получали в пробирках объемом 1.5 мл, используя растворитель. Соответствующие стартовые растворы определяли, где это было возможно, на основании предшествующих данных. Когда предшествующие данные были неизвестны, самый слабый стартовый раствор был 1:40. После разбавления 200 мкл стартового раствора образца сыворотки переносили в соответствующую лунку установочного планшета.
Типичное расположение на установочном планшете следующее: колонки 2 и 11 содержали стандарт изотипа антиовальбуминового моноклонального 1дС2Ь (АЬСат, аЬ17291), растворенный в 1 мкг/мл (1:4000 растворение). Колонки 3-10 содержали образцы сыворотки (в соответствующих растворах). Колонки 1 и 12 не использовали для образцов или стандартов, чтобы избежать субъективных ошибок измерения, вызванных граничным эфектом. Вместо этого колонки 1 и 12 содержали 200 мкл растворителя. Нормальную мышиную сыворотку, растворенную 1:40, использовали в качестве негативного контроля. Антитло против мышиного 1дС2а растворяли 1:500 из 0,5 мг/мл реакционной смеси (ВО Вю8с1епсе) использовали в качестве изотипного контроля.
Когда все образцы были приготовлены на установочном планшете, планшет закупоривали и выдерживали при 4°С до полного связывания на аналитическом планшете. Аналитические планшеты трижды отмывали промывочным буфером, полностью испаряя промывочный буфер из лунок после последней отмывки. После отмывки 100 мкл растворителя добавляли во все лунки в рядах В-Н аналитических планшетов. Для переноса образцов с установочного планшета на аналитический планшет использовали 12-канальную пипетку. Перед переносом образцы смешивали, переливая пипеткой 150 мкл разбавленной сыворотки туда и назад 3 раза. После смешивания 150 мкл каждого образца переносили с установочного планшета и добавляли в ряд А соответствующего аналитического планшета.
После того как стартовые растворы каждого образца перенесли с установочного планшета в ряд А аналитического планшета, растворы сыворотки добавляли пипеткой на аналитический планшет следующим образом: 50 мкл каждого образца сыворотки удаляли из ряда А 12-канальной пипеткой и смешивали с 100 мкл растворителя, предварительно добавленного в каждую лунку ряда В. Эту процедуру повторяли до заполнения всего планшета. После раскапывания раствора из последнего ряда 50 мкл жидкости удаляли из лунок последнего ряда и отбрасывали, получая конечный объем 100 мкл в каждой лунке аналитического планшета. После приготовления образцов растворов на аналитических планшетах планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч.
После инкубации планшеты трижды отмывали промывочным буфером. Идентифицирующее антитело (козье антитело против 1дС мыши, конъюгированное с НКР, АЬСат аЬ98717) развели 1:1500 (0,33 мкг/мл) в растворителе и 100 мкл разведенного антитела добавляли в каждую лунку. Планшеты инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем трижды промывали отмывочным буфером, включая в каждую отмывку время выдержки по меньшей мере 30 с.
После отмывки идентифицирующий субстрат добавляли в лунки. Равные части субстрата А и субстрата В (ВО Вю8с1епсе8 ТМВ διι08ΐΗΐΝ Кеадеп! δеΐ, са1а1од #555214) соединяли непосредственно перед помещением в аналитические планшеты, добавляли в каждую лунку 100 мкл раствора смешанного субстрата и инкубировали в течение 10 мин в темноте. Реакцию останавливали, добавляя 50 мкл стопраствора (2 н Η2δΟ4) в каждую лунку по прошествии 10 мин. Оптическую плотность (ΟΌ) лунок измеряли непосредственно после добавления стоп-раствора на спектрофотометр для прочтения планшетов при 450 нм с субтракцией 570 нм. Данные анализировали при помощи программного обеспечения Мо1еси1аг Эехасе δοйМаx Рго ν5.4. В некоторых случаях строили график логистической кривой с четырьмя параметрами, на оси х (логарифмическая шкала) отложен раствор, на оси у (линейная шкала) отложено значение ΟΌ, и для каждого образца определяли половину максимального значения (ЕС50). Шаблон планшета в верхней части макета был скорректирован с учетом разведения каждого образца (по 1 на колонку).
Результаты.
Фиг. 5 показывает уменьшение образования антиген-специфического антитела при введении нано- 44 027103 носителей, содержащих антиген и иммунодепрессант, по сравнению с наноносителями, содержащими только антиген. Данные снова показывают, что применение мощного иммуностимулятора, СрС, в некоторых случаях противодействовало толерогенным эффектам синтетических наноносителей, содержащих рапамицин.
Пример 15. Определение эффектов наноносителей с антигенами и иммунодепрессантами.
Материалы и способы.
Наноноситель 1.
Пептид овальбумина 323-339, пептид, состоящий из 17 аминокислот, известный как эпитоп белка овальбумина Т и В-клеток, куплен у Васйет Αте^^саκ Ыс. (3132 КакЫ^а 8йее1, ΤοΓΓβ^ο СΑ 90505; Гай # 4065609). ΡΕΟΑ с соотношением лактид:гликолид 3:1 и удельной вязкостью 0,75 дл/г куплен у 8и^Μοά^сκ Пагтасеийсак (756 'Шт ΜΕίΓΐιη Оггуе, Вйттдфат, ΑΕ 35211; ΡΐΌίΙιιοΙ С/ке 7525 ΌΕΟ 7Α). ΡΕΑ-ΡΕΟблок со-полимер с ΡΕΟ-блоком приблизительно 5000 Да и ΡΕΑ-блоком приблизительно 20000 Да был синтезирован. Поливиниловый спирт (85-89% гидролизный) был куплен у ΕΜΌ Сйетшак (продукт номер 1.41350.1001).
Растворы были приготовлены следующим образом.
Раствор 1. Пептид овальбумин 23-339 при 20 мг/мл в растворителе водном растворе гидрохлоридной кислоты. Раствор готовили, растворяя пептид овальбумин в 0,13М растворе гидрохлоридной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 2. ΡΕΟΑ при 100 мг/мл в метиленхлориде. Раствор готовили, растворяя ΡΕΟΑ в чистом метиленхлориде.
Раствор 3. ΡΕΑ-ΡΕΟ при 100 мг/мл в метиленхлориде. Раствор готовили, растворяя ΡΕΑ-ΡΕΟ в чистом метиленхлориде.
Раствор 4. Поливиниловый спирт при 50 мг/мл в 100 мМ рН 8 фосфатном буфере.
Сначала приготовили основную водно-масляную эмульсиию. Ш1/01 была получена путем смешивания раствора 1 (0,2 мл), раствора 2 (0,75 мл) и раствора 3 (0,25 мл) в маленькой напорной трубке и обработки ультразвуком с амплитудой 50% на 40 с с использованием Βιο^οη ОшПа! 8οηιίΐ0Γ 250. Затем приготовили вторичную эмульсию (Ш1/01/^2), смешивая раствор 4 (3,0 мл) с основной эмульсией Ш1/01, перемешивая на вортексе в течение 10 с и обрабатывая ультразвуком с амплитудой 30% в течение 60 с с использованием Βιο^οη О1§г1а1 8οηιίΐ0Γ 250. Эмульсию Ш1/01/^2 налили в мерный стакан, содержащий 70 мМ рН 8 раствора фосфатного буфера (30 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, чтобы метиленхлорид испарился, и образовались наноносители. Часть синтетических наноносителей отмывали, поместив суспензию синтетического наноносителя в пробирку для центрифуги и центрифугируя ее при 75600/д и 4°С в течение 35 мин, удаляя надосадочную жидкость и ресуспендируя осадок в фосфатно-солевом буфере. Процедуру отмывки повторили, и осадок ресуспендировали в фосфатно-солевом буфере для окончательной дисперсии наноносителей около 10 мг/мл.
Размер наноносителя определяли методом динамического рассеяния света. Количество рапамицина на наноносителе определяли Н?ЕС-анализом. Количество белка на наноносителе определяли офталальдегидным флуорометрическим анализом.
Наноноситель Ш Эффективный диаметр (нм) Содержание пептида (% вес/вес)
1 234 2,1
Наноноситель 2.
Пептид овальбумина 323-339, пептид, состоящий из 17 аминокислот, известный как эпитоп белка овальбумина Т и В-клеток, куплен у Васйет Αте^^саκ Ыс. (3132 КакЫ^а 81гее1, Τοιταηοο СΑ 90505; ?аг1 # 4065609). Рапамицин был куплен у Τ8Ζ ΠΗΕΜ (185 ^Εοη 81гее1, Ргаттдйат, ΜΑ 01702; ΡτοάπΟ Са1акдие # Ρ1017). ΡΕΟΑ с соотношением лактид:гликолид 3:1 и удельной вязкостью 0,75 дл/г куплен у 8и^Μοά^сκ Пагтасеийсак (756 Τοιη ΜΕίΓΐιη Опус Вйтшдфат, ΑΕ 35211; ΡτοάπΟ С/ке 7525 ΌΕΟ 7Α). ΡΕΑ-ΡΕΟ блок со-полимер с ΡΕΟ-блоком приблизительно 5000 Да и ΡΕΑ-блоком приблизительно 20000 Да был синтезирован. Поливиниловый спирт (85-89% гидролизный) был куплен у ΕΜΌ Сйетюак (продукт номер 1.41350.1001).
Растворы были приготовлены следующим образом.
Раствор 1. Пептид овальбумин 323-339 при 20 мг/мл в растворителе водном растворе гидрохлоридной кислоты. Раствор готовили, растворяя пептид овальбумин в 0,13М растворе хлористо-водородной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 2. Рапамицин при 50 мг/мл в метиленхлориде. Раствор готовили, растворяя рапамицин в чистом метиленхлориде.
Раствор 3. ΡΕΟΑ при 100 мг/мл в метиленхлориде. Раствор готовили, растворяя ΡΕΟΑ в чистом метиленхлориде.
Раствор 4. ΡΕΑ-ΡΕΟ при 100 мг/мл в метиленхлориде. Раствор готовили, растворяя ΡΕΑ-ΡΕΟ в чистом метиленхлориде.
- 45 027103
Раствор 5. Поливиниловый спирт при 50 мг/мл в 100 мМ рН 8 фосфатном буфере.
Сначала приготовили основную водно-масляную эмульсиию. ^1/О1 была получена путем смешивания раствора 1 (0,2 мл), раствора 2 (0,2 мл) и раствора 3 (0,75 мл) и раствора 4 (0,25 мл) в маленькой напорной трубке и обработки ультразвуком с амплитудой 50% на 40 с с использованием Вгапзоп Ι)ίμί4ι1 Зошйсг 250. Затем приготовили вторичную эмульсию (^1/О1/^2), смешивая раствор 5 (3,0 мл) с основной эмульсией ^1/О1, перемешивая на вортексе в течение 10 с и обрабатывая ультразвуком с амплитудой 30% в течение 60 с с использованием Вгапзоп Б1д11а1 Зошйсг 250. Эмульсию ^1/О1Ж2 налили в мерный стакан, содержащий 70 мМ рН 8 раствора фосфатного буфера (30 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, чтобы метиленхлорид испарился, и образовались наноносители. Часть синтетических наноносителей отмывали, поместив суспензию синтетического наноносителя в пробирку для центрифуги и центрифугируя ее при 21000х§ и 4°С в течение 45 мин, удаляя надосадочную жидкость и ресуспендируя осадок в фосфатно-солевом буфере. Процедуру отмывки повторили, и осадок ресуспендировали в фосфатно-солевом буфере для окончательной дисперсии наноносителей около 10 мг/мл.
Размер наноносителя определяли методом динамического рассеяния света. Количество рапамицина на наноносителе определяли НРЬС-анализом. Количество белка на наноносителе определяли офталальдегидным флуорометрическим анализом.
Наноноситель ГО Эффективный диаметр (нм) Содержание рапамицина (% вес/вес) Содержание пептида (% вес/вес)
2 227 9,0 2,5
Иммунизация.
Животные получали иммунизацию каждые 2 недели одновременно с лечением. Каждую из этих групп разделили на две подгруппы, чтобы проверить способность каждого вида лечения модифицировать титры образуемых Σ§. Конторольная подгруппа не получала толерогенное лечение. Две подгруппы получали наноноситель, несущий только пептид ΟVА323-339 или его комбинацию с рапамицином.
Иммунизацию осуществляли следующими путями (значения на одно животное): 20 мкл/конечность ОУА+СрО (12,5 мкг ΟVА+10 мкг СрО) в обе задние конечности подкожно. Различные виды толерогенного лечения осуществлялись следующими путями (значения на одно животное): 200 мкл наноносителей предоставлялось в 100 мкг/мл ΟVА323-339 содержимого.
Измерение количества ^О.
Измеряли уровни антитела ^О. В1осксг Сазсш в РВЗ (ТЬсгто Р1бЬсг, Са1а1од #37528) использовали в качестве растворителя. 0,05% Туссп-20 в РВЗ использовали в качестве отмывочного буфера, приготовив его путем смешивания 10 мл Туссп-20 ((З1дта, Са1а1од #Р9416-100тй) с 2 л 10хРВЗ реакционной смеси (РВЗ: ОтшРиг® 10хРВЗ, жидкий концентрат, 4 л, ЕМГ) СЬст1са1Б, Са1а1од #6505) с 18 л деионизированной воды.
Белок ΟVА при концентрации реакционной смеси 5 мг/мл использовали в качестве материала покрытия. Использовали 1:1000 до 5 мкг/мл в качестве рабочей концентрации. Каждую лунку аналитических планшетов покрывали 100 мкл разведенного ΟVА на лунку, планшеты герметизировали при помощи герметизирующей пленки (У^К каталог # 60941-120) и инкубировали в течение ночи при 4°С. Соз1аг9017 96-луночные плоскодонные планшеты были использованы в качестве аналитических планшетов, Соз1аг9017.
96-луночные планшеты или тубы из слабосвязанного пропилена использовали в качестве установочных планшетов, в которых образцы готовили к помещению на аналитический планшет. Аналитические планшеты не содержали никаких антигенов, и, следовательно, сывороточные антитела не связывались с планшетом во время постановки образцов. Установочные планшеты использовали для подготовки образцов, чтобы минимизировать связывание, возможное при приготовлении или дозировании образцов, если для приготовления образцов использовать планшет с антигенами на поверхности. Перед подготовкой образцов на установочные планшете лунки покрывали растворителем, чтобы предотвратить любое неспецифическое связывание, планшет запечатывали и инкубировали при 4°С на протяжении ночи.
Аналитические планшеты затем трижды промывали промывочным буфером, полностью испаряя промывочный буфер из лунок после последней промывки. После отмывки добавляли 300 мкл растворителя в каждую лунку аналитического планшета (планшетов), чтобы предотвратить неспецифическое связывание, и планшеты инкубировали в течение по меньшей мере 2 ч при комнатной температуре. Образцы сыворотки готовили на установочном планшете, используя соответствующие стартовые растворы. Стартовые растворы также иногда получали в пробирках объемом 1,5 мл, используя растворитель. Соответствующие стартовые растворы определяли, где это было возможно, на основании предшествующих данных. Когда предшествующие данные были неизвестны, самый слабый стартовый раствор был 1:40. После разбавления 200 мкл стартового раствора образца сыворотки переносили в соответствующую лунку установочного планшета.
Образец расположения на установочном планшете следующий: Колонки 2 и 11 содержали стандарт
- 46 027103 изотипа оноклонального !дС2Ъ против овальбумина (АЪСат, аЪ17291), растворенный в 1 мкг/мл (1:4000 растворение). Колонки 3-10 содержали образцы сыворотки (в соответствующих растворах). Колонки 1 и 12 не использовали для образцов или стандартов, чтобы избежать субъективных ошибок измерения, вызванных граничным эффектом. Вместо этого колонки 1 и 12 содержали 200 мкл растворителя. Сыворотку нормальной мыши, растворенную 1:40, использовали в качестве негативного контроля. Антитело против мышиного !дС2а растворяли 1:500 из 0,5 мг/мл реакционной смеси (ВО Вюкаепсе) использовали в качестве изотопического контроля.
Когда все образцы были приготовлены на установочном планшете, планшет закупоривали и выдерживали при 4°С до полного связывания на аналитическом планшете. Аналитические планшеты трижды отмывали промывочным буфером, полностью испаряя промывочный буфер из лунок после последней промывки. После отмывки 100 мкл растворителя добавляли во все лунки В-Н аналитических планшетов. Для переноса образцов с установочного планшета на аналитический планшет использовали 12канальную пипетку. Перед переносом образцы смешивали, переливая пипеткой 150 мкл разбавленной сыворотки туда и обратно 3 раза. После смешивания 150 мкл каждого образца переносили с установочного планшета и добавляли в ряд А соответствующего аналитического планшета.
После того как стартовые растворы каждого образца перенесли с установочного планшета в ряд А аналитического планшета, растворы сыворотки добавляли пипеткой на аналитический планшет следующим образом: 50 мкл каждого образца сыворотки удаляли из ряда А 12-канальной пипеткой и смешивали со 100 мкл растворителя, предварительно добавленного в каждую лунку ряда В. Эту процедуру повторяли до заполнения всего планшета. После раскапывания раствора из последнего ряда 50 мкл жидкости удаляли из лунок последнего ряда и отбрасывали, получая конечный объем 100 мкл в каждой лунке аналитического планшета. После приготовления образцов растворов на аналитических планшетах разопланшеты инкубировали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч.
После инкубации планшеты трижды отмывали промывочным буфером. Идентифицирующее антитело (козье антитело против мыши, конъюгированное с НИР, АЪСат аЪ98717) развели 1:1500 (0,33 мкг/мл) в растворителе и 100 мкл разведенного антитела добавляли в каждую лунку. Планшеты инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем трижды промывали отмывочным буфером, включая в каждую отмывку время выдержки по меньшей мере 30 с.
После отмывки идентифицирующий субстрат добавляли в лунки. Равные части субстрата А и субстрата В (ВО Вюкаеисек ТМВ 8иЪк1га1е Иеадеп! 8е!, са!а1од #555214) соединяли непосредственно перед помещением в аналитические планшеты, и добавляли 100 мкл смешанного раствора субстрата в каждую лунку и инкубировали в течение 10 мин в темноте. Реакцию останавливали, добавляя 50 мкл стопраствора (2 н Н28О4) в каждую лунку после промежутка времени в 10 мин. Оптическую плотность (ОО) лунок измеряли непосредственно после добавления стоп-раствора на спектрофотометр для прочтения планшетов при 450 нм с субтракцией 570 нм. Данные анализировали при помощи программного обеспечения Мо1еси1аг Эеуюе 8ойМах Рго ν5.4. В некоторых случаях строили график логистической кривой с четырьмя параметрами, на оси х (логарифмическая шкала) отложен раствор, на оси у (линейная шкала) отложено значение ОО, и для каждого образца определяли половину максимального значения (ЕС50). Шаблон планшета в верхней части макета был скорректирован с учетом разведения каждого образца (по 1 на колонку).
Определение % ОУА+ делящихся В-клеток.
Овальбумин+деление В-клеток определяли методом проточной цитометрии. Спленоциты, полученные от экспериментальных животных, окрашивали Се11 Тгаскег Огапде (СТО), тиол-реактивным флуоресцентным датчиком, пригодным для долгосрочного мечения клеток, и культивировали в полной среде при 37С, 5% СО2 с белком или пептидом овальбумина в течение 3 дней. На 3 день клетки отмыли, блокировали антителом анти-С.'О16/32 и затем окрасили с конъюгированными антителами, специфическими к В220 и СЭ19. А1еха 647 конъюгированный белок овальбумина также инкубировали с клетками, чтобы пометить альбумин-специфические ВСИ. Для спленоцитов СЭ19+В220+ОУЛ-А1еха647+ определили пролиферацию, сравнивая дифференциальное окрашивание СТО. Слабоокрашенные СТО отметили как пролиферирующие овальбумин+В-клетки и сравнили их с сильноокрашенными СТО овальбумин+Вклетками, чтобы сравнить их соотношения.
Результаты.
Фиг. 6 показывает уменьшение уровней антиген-специфических !§О при введении синтетических наноносителей, содержащих пептид овальбумин и иммунодепрессант рапамицин. Фиг. 7 также показывает уменьшение на этот раз количества антиген-специфических В-клеток при введении синтетических наноносителей. Эти результаты показывают уменьшение нежелательных иммунных ответов при введении синтетических наноносителей, связанных с пептидом овальбумина (содержащий МНС класса IIрестриктированный эпитоп) и иммунодепрессантом. Эти результаты релевантны в любом контексте, где уменьшение количества антиген-специфических В-клеток может являться преимуществом.
Пример 16. Определение эффектов наноносителей с антигенами и иммунодепрессантами.
Наноносители.
Наноносители получали способами, описанными выше (пример 15).
- 47 027103
Иммунизация.
Наноносители размораживали и выдерживали на воздухе. Начальные растворы представляли собой 10χ раствор реакционной смеси и затем были разбавлены до концентрации 100 мкг/мл в ΟVА323-339 или 1 χ раствор. Этот 1 χ раствор использовали для инъекций 200 мкл на одно внутривенное введение. Животных иммунизировали белком ΟVА ЩУА) и лечили пептидом ΟVА323-339, чтобы определить способность наноносителей контролировать иммунные ответы в отсутствие антигенов В-клеток. Иммунизацию производили следующим образом: 10 мкг ΟVА+4 мг А1ит интраперитонеально в 400 мкл каждой иммунологически интактной самке мыши Ва1Ь/С. Экспериментальные группы состояли из 5 животных каждая. Клетки селезенки рестимулировали антигеном, используя СΡδΕ или СТО, чтобы определить количество Ад-специфической пролиферации.
Уровни специфических типов иммунных клеток.
ΡСδ файлы анализировали с помощью программного обеспечения Ρ1ονίο. 7ААБ положительные клетки (ядерный краситель, окрашивающий мертвые клетки) положительные клетки исключали и подсчитывали морфологические типы клеток, зависящие от экспрессии СБ4. СБ8. Сг-1, Р4/80, В220, ТСКЬ и СБ11Ь.
Стратегия гейтирования для подкласса Т-клеток^7ААП-Р4/80- СК-1-ТСКЬ+СБ4+/-СБ8+/-.
Стратегия гейтирования для подкласса В-клеток^7ААП-В220+ТСКЬ.
Стратегия гейтирования для эозинофилов^7ААП-Р4/80-Сг-1+ТСКЬ-СП11Ь+Сг-1+.
Определение % делящихся СБ4+Т-клеток.
Встречаемость овальбумин-реактивных СБ4+Т-клеток определяли проточной цитометрией. Спленоциты, полученные от экспериментальных животных, окрашивали СΡδΕ, тиол-реактивным флуоресцентным красителем, пригодным для долгосрочного окрашивания клеток, и культивировали в полной среде при 37С, 5% СΟ2 с белком овальбумина в течение 3 дней. На 3 день клетки отмыли, блокировали анти-СБ16/32 антителом и затем окрашивали вместе с конъюгированными антителами, специфическими к ТСК СБ4 и СБ8а. Пролиферацию спленоцитов ТСК+СБ4 или ТСК+СБ8а+ определяли, сравнивая дифференциальное окрашивание СΡδΕ.
Результаты.
Фиг. 8 и 9 показывают эффективность наноносителей на животных моделях. В частности, фиг. 8 показывает уменьшение количества СБ4+Т-клеток в лаважных пробах, взятых у животных объектов, которых лечили синтетическими наноносителями, содержащими ΟVА323-339 (МНС класса IIрестриктированный эпитоп) и иммунодепрессант. Фиг. 9 показывает уменьшение доли делящихся СБ4+Т-клеток вследствие аналогичного лечения.

Claims (18)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Композиция, содержащая:
    (ί) первое множество синтетических наноносителей, связанных с иммунодепрессантами, и (ίί) второе множество синтетических наноносителей, связанных с терапевтическими белкамипрезентируемыми АРС антигенами, необязательно при этом первое множество и второе множество являются одинаковыми, причем нагрузка иммуносупрессора в среднем во всей первой совокупности синтетических наноносителей составляет по меньшей мере 2%, но не более 25% (вес./вес.), причем нагрузка терапевтических белков-презентируемых АРС антигенов в среднем во всей второй совокупности синтетических наноносителей составляет от 1 до 10% (вес./вес.), и/или композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый эксципиент.
  2. 2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что иммунодепрессанты включает статин, ингибитор тΤΟК, например ингибитор тΤΟК является рапамицином, ТСР-β сигнальный агент, кортикостероид, ингибитор митохондриальной функции, ингибитор Р38, ΝΡ-κβ ингибитор, агонист аденозинового рецептора, агонист простагландина Е2, ингибитор фосфодиэстеразы 4, ингибитор НБАС или ингибитор протеасомы.
  3. 3. Композиция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что терапевтические белки-презентируемые АРС антигены (а) охватывают МНС класса Ι-рестриктированные и/или МНС класса ΙΙ-рестриктированные эпитопы терапевтического белка и/или (Ь) охватывают МНС класса ΙΙ-рестриктированные эпитопы терапевтического белка; (с) охватывают В-клеточные эпитопы терапевтического белка; (б) практически не содержат В-клеточные эпитопы терапевтического белка; (е) охватывают терапевтический белок для белковой заместительной или белковой дополняющей терапии или его фрагмент; (Г) охватывают вводимый инфузией или инъекцией терапевтический белок (например, тоцилизумаб, альфа-1 антитрипсин, гематид, альбинтерферон альфа-2Ь, руцин, тезаморелин, окрелизумаб, белимумаб, пеглотиказу, талиглюцеразу альфа, агалсидазу альфа или велаглюцеразу альфа), фермент (например, оксидоредуктазу, трансферазу, гидролазу, лиазу, изомеразу или лигазу, фермент для ферментной заместительной терапии (например, лизосомной болезни накопления, необязательно при этом фермент охватывает имиглюцеразу, αгалактозидазу А (а-да1 А), агалсидазу бета, кислую α-глюкозидазу (САА), алглюкозидазу альфа, луми- 48 027103 зим, миозим, арилсульфатазу В, ларонидазу, алдуразим, идурсульфазу, элапразу, арилсульфатазу В или наглазим)), кофактор фермента, гормон, кровь или фактор свертываемости крови (например, фактор Ι, фактор II, тканевой фактор, фактор V, фактор VII, фактор VIII, фактор IX, фактор X, фактор Ха, фактор XII, фактор XIII, фактор фон Виллебранда, прекалликреин, высокомолекулярный кининоген, фибронектин, антитромбин III, кофактор гепарина II, белок С, белок 8, белок Ζ, белок Ζ-зависимый протеазный ингибитор ^РЦ, плазминоген, альфа-2-антиплазмин, тканевой активатор плазминогена (ТРА), урокиназу, ингибитор-1 активатора плазминогена (РАН), ингибитор-2 активатора плазминогена (РА12), раковый прокоагулянт или эпоэтин альфа), цитокин, интерферон, фактор роста, моноклональное антитело, поликлональное антитело или белок, связанный с болезнью Помпе, или его фрагмент.
  4. 4. Композиция по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что композиция находится в количестве, эффективном для (а) вызова толерогенного иммунного ответа на терапевтический белок-презентируемый АРС антиген и/или (Ь) для уменьшения выработки специфических к терапевтическому белку антител, и/или пролиферации и/или активности СЭ4+ Т-клеток, и/или пролиферации и/или активности В-клеток при введении пациенту.
  5. 5. Композиция по любому из пп.1-4, где содержание иммунодепрессанта и/или терапевтического белка-презентируемого АРС антигена в среднем в первом и/или втором множестве синтетических наноносителей составляет (а) от 0,0001 до 50% или (Ь) от 0,1 до 10%.
  6. 6. Композиция по любому из пп.1-5, отличающаяся тем, что синтетические наноносители первого множества и/или второго множества (а) охватывают липидные наночастицы, полимерные наночастицы, металлические наночастицы, эмульсии на основе поверхностно-активных веществ, дендримеры, бакиболлы, нанонити, вирусоподобные частицы или пептидные или белковые частицы; (Ь) охватывают липидные наночастицы; (с) охватывают липосомы; (й) охватывают металлические наночастицы, например наночастицы золота; или (е) охватывают полимерные наночастицы.
  7. 7. Композиция по п.6, отличающаяся тем, что полимерные наночастицы охватывают (а) полимер, который представляет собой не содержащий концевую метоксигруппу блок-сополимер полиоксиэтилена и полиоксипропилена; и/или (Ь) сложный полиэфир (например, включающий поли (молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), сополимер молочной и гликолевой кислот), сложный полиэфир, связанный с простым полиэфиром, полиаминокислоту, поликарбонат, полиацеталь, поликеталь, полисахарид, полиэтилоксазолин или полиэтиленимин; и/или (с) полимерные наночастицы содержат сложный полиэфир и сложный полиэфир, связанный с простым полиэфиром, необязательно при этом простой полиэфир охватывает полиэтиленгликоль или полипропиленгликоль.
  8. 8. Композиция по любому из пп.1-7, отличающаяся тем, что у синтетических наноносителей первого и/или второго множества среднее значение из распределения размеров частиц, полученного с помощью динамического рассеяния света, представляет собой диаметр, составляющий (а) более 100 нм; (Ь) более 150 нм; (с) более 200 нм; (й) более 250 нм или (е) более 300 нм.
  9. 9. Композиция по любому из пп.1-8, отличающаяся тем, что соотношение синтетических наноносителей первого множества и/или второго множества составляет более 1:1, 1:1,2, 1:1,5, 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 или 1:10.
  10. 10. Лекарственная форма, содержащая композицию по любому из пп.1-9.
  11. 11. Применение композиции по любому из пп.1-9 в терапии или профилактике, например. в способе, включающем введение композиции или лекарственной формы пациенту, которому вводят или будут вводить терапевтический белок, необязательно при этом (а) способ дополнительно включает введение терапевтического белка пациенту; и/или (Ь) терапевтический белок вводят до, одновременно или после введения композиции или лекарственной формы; и/или (с) пациенту вводят одну или несколько поддерживающих доз композиции или лекарственной формы; и/или (й) способ дополнительно включает оценку вызова нежелательного иммунного ответа у пациента до и/или после введения композиции, или лекарственной формы, и/или терапевтического белка, например, нежелательный иммунный ответ заключается в выработке антител, специфических к терапевтическому белку, и/или пролиферации и/или активности СЭ4+ Т-клеток, и/или пролиферации и/или активности В-клеток; и/или (е) терапевтический белок включает терапевтический белок, предназначенный для белковой заместительной или белковой дополняющей терапии; и/или (ί) терапевтический белок охватывает вводимый инфузией или инъекцией терапевтический белок, как определено в п.3; и/или (д) ведение первого и/или второго множества синтетических наноносителей и/или терапевтического белка осуществляют путем внутривенного, интраперитонеального, трансмукозального, перорального, подкожного, пульмонального, интраназального, внутрикожного или внутримышечного введения, например, где введение первого и/или второго множества синтетических наноносителей и/или терапевтического белка осуществляют путем ингаляции или внутривенного, подкожного или трансмукозального введения.
  12. 12. Применение лекарственной формы по п.10 в терапии или профилактике, например, в способе, включающем введение композиции или лекарственной формы пациенту, которому вводят или будут вводить терапевтический белок, необязательно при этом (а) способ дополнительно включает введение терапевтического белка пациенту; и/или (Ь) терапевтический белок вводят до, одновременно или после введения композиции или лекарственной формы; и/или (с) пациенту вводят одну или несколько поддер- 49 027103 живающих доз композиции или лекарственной формы; и/или (ά) способ дополнительно включает оценку вызова нежелательного иммунного ответа у пациента до и/или после введения композиции, или лекарственной формы, и/или терапевтического белка, например, нежелательный иммунный ответ заключается в выработке антител, специфических к терапевтическому белку, и/или пролиферации и/или активности СЭ4+ Т-клеток, и/или пролиферации и/или активности В-клеток; и/или (е) терапевтический белок включает терапевтический белок, предназначенный для белковой заместительной или белковой дополняющей терапии; и/или (ί) терапевтический белок охватывает вводимый инфузией или инъекцией терапевтический белок, как определено в п.3; и/или (д) ведение первого и/или второго множества синтетических наноносителей и/или терапевтического белка осуществляют путем внутривенного, интраперитонеального, трансмукозального, перорального, подкожного, пульмонального, интраназального, внутрикожного или внутримышечного введения, например, где введение первого и/или второго множества синтетических наноносителей и/или терапевтического белка осуществляют путем ингаляции или внутривенного, подкожного или трансмукозального введения.
  13. 13. Применение композиции, содержащей:
    (ί) первое множество синтетических наноносителей, связанных с иммунодепрессантами, и (ίί) второе множество синтетических наноносителей, связанных с терапевтическим белкомпрезентируемым АРС антигеном, в способе, включающем:
    (a) введение пациенту указанной композиции в эффективном количестве для уменьшения вызова нежелательного иммунного ответа на терапевтические белки-презентируемые АРС антигены; или (b) уменьшение вызова нежелательного иммунного ответа у пациента путем введения композиции;
    или (c) введение пациенту композиции по ранее разработанному протоколу, применение которого способствует снижению нежелательного иммунного ответа на терапевтические белки-презентируемые АРС антигены у одного или нескольких пациентов;
    необязательно при этом (ί) первое множество и второе множество являются одинаковыми; и/или (ίί) способ дополнительно включает предоставление или выявление пациента; и/или (ίίί) способ дополнительно включает оценку вызова нежелательного иммунного ответа у пациента до и/или после введения композиции, например, где нежелательный иммунный ответ заключается в выработке антител, специфических к терапевтическому белку, и/или пролиферации и/или активности СЭ4+ Т-клеток, и/или пролиферации и/или активности В-клеток; и/или (ίν) иммунодепрессанты охватывают статин, ингибитор тТОК, например ингибитор тТОК является рапамицином, ΤΟЕ-β сигнальный агент, кортикостероид, ингибитор митохондриальной функции, ингибитор Р38, ΝΡ-κβ ингибитор, агонист аденозинового рецептора, агонист простагландина Е2, ингибитор фосфодиэстеразы 4, ингибитор НЭАС или ингибитор протеасомы; и/или (ν) терапевтические белки-презентируемые АРС антигены охватывают МНС класса Ιрестриктированные и/или МНС класса ΙΙ-рестриктированные эпитопы терапевтического белка, например, где терапевтические белки-презентируемые АРС антигены охватывают МНС класса ΙΙрестриктированные эпитопы терапевтического белка; и/или (νί) терапевтические белки-презентируемые АРС антигены охватывают В-клеточные эпитопы терапевтического белка; и/или (νίί) терапевтический белок охватывает терапевтический белок для белковой заместительной или белковой дополняющей терапии; и/или (νίίί) терапевтический белок охватывает вводимый инфузией или инъекцией терапевтический белок, фермент, кофактор фермента, гормон, кровь или фактор свертываемости крови, цитокин, интерферон, фактор роста, моноклональное антитело, поликлональное антитело или белок, связанный с болезнью Помпе, например, вводимый инфузией или инъекцией терапевтический белок по п.3; и/или (ίχ) композиция представлена в эффективном количестве для уменьшения выработки антител, специфических к терапевтическому белку, и/или пролиферации и/или активности СЭ4+ Т-клеток, и/или пролиферации и/или активности В-клеток; и/или (х) содержание иммунодепрессанта и/или терапевтического белка-презентирующего АРС антигена в среднем в первом множестве и/или втором множестве синтетических наноносителей составляет от 0,0001 до 50% или от 0,1 до 10%; и/или (χί) синтетические наноносители первого множества и/или второго множества охватывают липидные наночастицы, полимерные наночастицы, металлические наночастицы, эмульсии на основе поверхностно-активных веществ, дендримеры, бакиболлы, нанонити, вирусоподобные частицы или пептидные или белковые частицы, например, определенные в п.6 или 7; и/или (χίί) у синтетических наноносителей первого и/или второго множества среднее значение из распределения размеров частиц, полученного с помощью динамического рассеяния света, является таким, как определено в п.8; и/или (χίίί) соотношение синтетических наноносителей первого множества и/или второго множества составляет более 1:1, 1:1,2, 1:1,5, 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 или 1:10; и/или (χίν) композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый наполнитель; и/или (χν) способ дополнительно включает введение терапевтического белка пациенту, необязательно при этом терапевтический белок вводят до, одновременно или после введения композиции; и/или (χνί) пациенту вводят одну или несколько поддерживающих доз композиции; и/или (χνίί) способ дополнительно включает оценку вызова нежелательного иммунного ответа у пациента до и/или после введения композиции,
    - 50 027103 или лекарственной формы, и/или терапевтического белка, например, где нежелательный иммунный ответ заключается в выработке антител, специфических к терапевтическому белку, и/или пролиферации и/или активности СО4- Т-клеток, и/или пролиферации и/или активности В-клеток; и/или (χνΐΐΐ) введение осуществляют путем внутривенного, интраперитонеального, трансмукозального, перорального, подкожного, пульмонального, интраназального, внутрикожного или внутримышечного введения, например путем ингаляции или внутривенного, подкожного или трансмукозального введения.
  14. 14. Способ, включающий:
    (ΐ) получение первого множества синтетических наноносителей, связанных с иммунодепрессантами, и (ΐΐ) получение второго множества синтетических наноносителей, связанных с терапевтическими белками-презентируемыми АРС антигенами, необязательно при этом (а) первое множество и второе множество являются одинаковыми; и/или (Ь) получаемые первое множество и второе множество синтетических наноносителей определены в любом из пп.1-9; и/или (с) способ дополнительно включает получение лекарственной формы композиции, содержащей первое множество и второе множество синтетических наноносителей; и/или (Д) способ дополнительно включает получение композиции, содержащей первое множество и второе множество синтетических наноносителей, или лекарственной формы, доступной пациенту для введения; и/или (е) способ дополнительно включает оценку уменьшения нежелательного иммунного ответа при применении композиции, содержащей первое множество и второе множество синтетических наноносителей, например нежелательный иммунный ответ заключается в выработке антител, специфических к терапевтическому белку, и/или пролиферации и/или активности СО4- Т-клеток, и/или пролиферации и/или активности В-клеток; и/или (ί) способ предназначен для получения композиции или лекарственной формы, содержащей первое множество синтетических наноносителей, которые связаны с иммунодепрессантами, и второе множество синтетических наноносителей, связанных с терапевтическими белками-презентируемыми АРС антигенами.
  15. 15. Композиция, которая может быть получена посредством способа по п.14.
  16. 16. Лекарственная форма, которая может быть получена посредством способа по п.14, например, представляющая собой лекарственную форму, содержащую композицию, которая может быть получена способом по п.14.
  17. 17. Применение композиции по любому из пп.1-9 или 15 в терапии или профилактике, необязательно в способе индукции толерогенного иммунного ответа на антигены-терапевтические белки, в клеточной терапии, в белковой заместительной терапии, белковой дополняющей терапии или в способе по п.14.
  18. 18. Применение лекарственной формы по п.10 или 16 в терапии или профилактике, необязательно в способе индукции толерогенного иммунного ответа на антигены-терапевтические белки, в клеточной терапии, в белковой заместительной терапии, белковой дополняющей терапии или в способе по п.14.
EA201391597A 2011-04-29 2012-04-27 Толерогенные синтетические наноносители, уменьшающие иммунный ответ на терапевтические белки EA027103B1 (ru)

Applications Claiming Priority (13)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161480946P 2011-04-29 2011-04-29
US201161513514P 2011-07-29 2011-07-29
US201161531180P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531153P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531215P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531204P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531164P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531168P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531209P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531147P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531175P 2011-09-06 2011-09-06
US201161531194P 2011-09-06 2011-09-06
PCT/US2012/035366 WO2012149255A2 (en) 2011-04-29 2012-04-27 Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce immune responses to therapeutic proteins

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201391597A1 EA201391597A1 (ru) 2014-09-30
EA027103B1 true EA027103B1 (ru) 2017-06-30

Family

ID=47068065

Family Applications (16)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790043A EA201790043A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вырабатывающие иммунную толерантность, для вырабатывания cd8+ регуляторных т-клеток
EA201790109A EA201790109A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Толерогенные синтетические наноносители, уменьшающие иммунный ответ на терапевтические белки
EA201790044A EA201790044A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Толерогенные синтетические наноносители для индукции регуляторных в-клеток
EA201790045A EA201790045A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вырабатывающие имунную толерантность, для антиген-специфического удаления т-эффекторных клеток
EA201692374A EA201692374A3 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вызывающие иммунную толерантность, для снижения ответной реакции антител
EA201790030A EA201790030A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вызывающие иммунную толерантность, для снижения ответной реакции цитотоксических т-лимфоцитов
EA201391611A EA201391611A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Вызывающие иммунную толерантность синтетические наноносители для терапевтического лечения аллергии
EA201391610A EA027380B1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вырабатывающие иммунную толерантность, для вырабатывания cd8регуляторных т-клеток
EA201391597A EA027103B1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Толерогенные синтетические наноносители, уменьшающие иммунный ответ на терапевтические белки
EA201791679A EA201791679A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Толерогенные синтетические наноносители
EA201391601A EA027410B1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вызывающие иммунную толерантность, для снижения ответной реакции цитотоксических t-лимфоцитов
EA201391608A EA027259B1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вырабатывающие иммунную толерантность, для антиген-специфического удаления т-эффекторных клеток
EA201391600A EA026880B1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вызывающие иммунную толерантность, для снижения ответной реакции антител
EA201391609A EA027379B1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Толерогенные синтетические наноносители для индукции регуляторных b-клеток
EA201391599A EA028807B1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Композиции, содержащие толерогенные синтетические наноносители, и их применение
EA201391602A EA201391602A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Контролируемое высвобождение иммунодепрессантов из синтетических наноносителей

Family Applications Before (8)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790043A EA201790043A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вырабатывающие иммунную толерантность, для вырабатывания cd8+ регуляторных т-клеток
EA201790109A EA201790109A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Толерогенные синтетические наноносители, уменьшающие иммунный ответ на терапевтические белки
EA201790044A EA201790044A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Толерогенные синтетические наноносители для индукции регуляторных в-клеток
EA201790045A EA201790045A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вырабатывающие имунную толерантность, для антиген-специфического удаления т-эффекторных клеток
EA201692374A EA201692374A3 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вызывающие иммунную толерантность, для снижения ответной реакции антител
EA201790030A EA201790030A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вызывающие иммунную толерантность, для снижения ответной реакции цитотоксических т-лимфоцитов
EA201391611A EA201391611A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Вызывающие иммунную толерантность синтетические наноносители для терапевтического лечения аллергии
EA201391610A EA027380B1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вырабатывающие иммунную толерантность, для вырабатывания cd8регуляторных т-клеток

Family Applications After (7)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201791679A EA201791679A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Толерогенные синтетические наноносители
EA201391601A EA027410B1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вызывающие иммунную толерантность, для снижения ответной реакции цитотоксических t-лимфоцитов
EA201391608A EA027259B1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вырабатывающие иммунную толерантность, для антиген-специфического удаления т-эффекторных клеток
EA201391600A EA026880B1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Наноносители, вызывающие иммунную толерантность, для снижения ответной реакции антител
EA201391609A EA027379B1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Толерогенные синтетические наноносители для индукции регуляторных b-клеток
EA201391599A EA028807B1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Композиции, содержащие толерогенные синтетические наноносители, и их применение
EA201391602A EA201391602A1 (ru) 2011-04-29 2012-04-27 Контролируемое высвобождение иммунодепрессантов из синтетических наноносителей

Country Status (15)

Country Link
US (33) US9289477B2 (ru)
EP (15) EP3760201A1 (ru)
JP (31) JP6602536B2 (ru)
KR (24) KR20140034202A (ru)
CN (32) CN107261123A (ru)
AU (34) AU2012249553A1 (ru)
BR (5) BR112013027508A2 (ru)
CA (11) CA2834599A1 (ru)
DK (1) DK2701739T3 (ru)
EA (16) EA201790043A1 (ru)
ES (1) ES2806268T3 (ru)
HU (1) HUE050142T2 (ru)
IL (15) IL305229A (ru)
MX (13) MX2013012595A (ru)
WO (12) WO2012149247A2 (ru)

Families Citing this family (495)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6993506B2 (en) 2000-12-05 2006-01-31 Jgr Acquisition, Inc. Method and device utilizing polymorphic data in e-commerce
US9060770B2 (en) 2003-05-20 2015-06-23 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-driven surgical instrument with E-beam driver
US20070084897A1 (en) 2003-05-20 2007-04-19 Shelton Frederick E Iv Articulating surgical stapling instrument incorporating a two-piece e-beam firing mechanism
US11896225B2 (en) 2004-07-28 2024-02-13 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a pan
US8215531B2 (en) 2004-07-28 2012-07-10 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling instrument having a medical substance dispenser
US9237891B2 (en) 2005-08-31 2016-01-19 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled surgical stapling devices that produce formed staples having different lengths
US7934630B2 (en) 2005-08-31 2011-05-03 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Staple cartridges for forming staples having differing formed staple heights
US11246590B2 (en) 2005-08-31 2022-02-15 Cilag Gmbh International Staple cartridge including staple drivers having different unfired heights
US11484312B2 (en) 2005-08-31 2022-11-01 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a staple driver arrangement
US7669746B2 (en) 2005-08-31 2010-03-02 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Staple cartridges for forming staples having differing formed staple heights
US10159482B2 (en) 2005-08-31 2018-12-25 Ethicon Llc Fastener cartridge assembly comprising a fixed anvil and different staple heights
US20070106317A1 (en) 2005-11-09 2007-05-10 Shelton Frederick E Iv Hydraulically and electrically actuated articulation joints for surgical instruments
SI2347775T1 (sl) 2005-12-13 2020-10-30 President And Fellows Of Harvard College Ogrodja za celično transplantacijo
US20110024477A1 (en) 2009-02-06 2011-02-03 Hall Steven G Driven Surgical Stapler Improvements
US20120292367A1 (en) 2006-01-31 2012-11-22 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled end effector
US8186555B2 (en) 2006-01-31 2012-05-29 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Motor-driven surgical cutting and fastening instrument with mechanical closure system
US11278279B2 (en) 2006-01-31 2022-03-22 Cilag Gmbh International Surgical instrument assembly
US11793518B2 (en) 2006-01-31 2023-10-24 Cilag Gmbh International Powered surgical instruments with firing system lockout arrangements
US8708213B2 (en) 2006-01-31 2014-04-29 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical instrument having a feedback system
US7845537B2 (en) 2006-01-31 2010-12-07 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical instrument having recording capabilities
US7753904B2 (en) 2006-01-31 2010-07-13 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Endoscopic surgical instrument with a handle that can articulate with respect to the shaft
US20110290856A1 (en) 2006-01-31 2011-12-01 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled surgical instrument with force-feedback capabilities
US11224427B2 (en) 2006-01-31 2022-01-18 Cilag Gmbh International Surgical stapling system including a console and retraction assembly
US8820603B2 (en) 2006-01-31 2014-09-02 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Accessing data stored in a memory of a surgical instrument
US8992422B2 (en) 2006-03-23 2015-03-31 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled endoscopic accessory channel
US8322455B2 (en) 2006-06-27 2012-12-04 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Manually driven surgical cutting and fastening instrument
US10568652B2 (en) 2006-09-29 2020-02-25 Ethicon Llc Surgical staples having attached drivers of different heights and stapling instruments for deploying the same
US11980366B2 (en) 2006-10-03 2024-05-14 Cilag Gmbh International Surgical instrument
US8652120B2 (en) 2007-01-10 2014-02-18 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical instrument with wireless communication between control unit and sensor transponders
US8684253B2 (en) 2007-01-10 2014-04-01 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical instrument with wireless communication between a control unit of a robotic system and remote sensor
US11291441B2 (en) 2007-01-10 2022-04-05 Cilag Gmbh International Surgical instrument with wireless communication between control unit and remote sensor
US7434717B2 (en) 2007-01-11 2008-10-14 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Apparatus for closing a curved anvil of a surgical stapling device
US11039836B2 (en) 2007-01-11 2021-06-22 Cilag Gmbh International Staple cartridge for use with a surgical stapling instrument
US7673782B2 (en) 2007-03-15 2010-03-09 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling instrument having a releasable buttress material
US11672531B2 (en) 2007-06-04 2023-06-13 Cilag Gmbh International Rotary drive systems for surgical instruments
US8931682B2 (en) 2007-06-04 2015-01-13 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled shaft based rotary drive systems for surgical instruments
US7753245B2 (en) 2007-06-22 2010-07-13 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling instruments
US11849941B2 (en) 2007-06-29 2023-12-26 Cilag Gmbh International Staple cartridge having staple cavities extending at a transverse angle relative to a longitudinal cartridge axis
CA2715460C (en) 2008-02-13 2020-02-18 President And Fellows Of Harvard College Continuous cell programming devices
JP5410110B2 (ja) 2008-02-14 2014-02-05 エシコン・エンド−サージェリィ・インコーポレイテッド Ｒｆ電極を有する外科用切断・固定器具
US9179912B2 (en) 2008-02-14 2015-11-10 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled motorized surgical cutting and fastening instrument
US8636736B2 (en) 2008-02-14 2014-01-28 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Motorized surgical cutting and fastening instrument
US11986183B2 (en) 2008-02-14 2024-05-21 Cilag Gmbh International Surgical cutting and fastening instrument comprising a plurality of sensors to measure an electrical parameter
US7819298B2 (en) 2008-02-14 2010-10-26 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling apparatus with control features operable with one hand
US8573465B2 (en) 2008-02-14 2013-11-05 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Robotically-controlled surgical end effector system with rotary actuated closure systems
US7866527B2 (en) 2008-02-14 2011-01-11 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling apparatus with interlockable firing system
US9770245B2 (en) 2008-02-15 2017-09-26 Ethicon Llc Layer arrangements for surgical staple cartridges
US11648005B2 (en) 2008-09-23 2023-05-16 Cilag Gmbh International Robotically-controlled motorized surgical instrument with an end effector
US9005230B2 (en) 2008-09-23 2015-04-14 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Motorized surgical instrument
US8210411B2 (en) 2008-09-23 2012-07-03 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Motor-driven surgical cutting instrument
US9386983B2 (en) 2008-09-23 2016-07-12 Ethicon Endo-Surgery, Llc Robotically-controlled motorized surgical instrument
US8608045B2 (en) 2008-10-10 2013-12-17 Ethicon Endo-Sugery, Inc. Powered surgical cutting and stapling apparatus with manually retractable firing system
US8517239B2 (en) 2009-02-05 2013-08-27 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling instrument comprising a magnetic element driver
RU2525225C2 (ru) 2009-02-06 2014-08-10 Этикон Эндо-Серджери, Инк. Усовершенствование приводного хирургического сшивающего инструмента
KR20120022984A (ko) * 2009-04-21 2012-03-12 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. Ｔｈ１ 편향 반응을 제공하는 면역나노치료법
CN102481376B (zh) 2009-05-27 2016-12-21 西莱克塔生物科技公司 免疫调节剂-聚合物化合物
CN107617110A (zh) * 2009-08-26 2018-01-23 西莱克塔生物科技公司 诱导t细胞辅助的组合物
US8851354B2 (en) 2009-12-24 2014-10-07 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical cutting instrument that analyzes tissue thickness
AU2011258156B2 (en) 2010-05-26 2016-11-24 Selecta Biosciences, Inc. Multivalent synthetic nanocarrier vaccines
WO2012021249A2 (en) 2010-07-12 2012-02-16 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of histidyl-trna synthetases
US8783543B2 (en) 2010-07-30 2014-07-22 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Tissue acquisition arrangements and methods for surgical stapling devices
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9839420B2 (en) 2010-09-30 2017-12-12 Ethicon Llc Tissue thickness compensator comprising at least one medicament
US11812965B2 (en) 2010-09-30 2023-11-14 Cilag Gmbh International Layer of material for a surgical end effector
US10405854B2 (en) 2010-09-30 2019-09-10 Ethicon Llc Surgical stapling cartridge with layer retention features
US9386988B2 (en) 2010-09-30 2016-07-12 Ethicon End-Surgery, LLC Retainer assembly including a tissue thickness compensator
US11298125B2 (en) 2010-09-30 2022-04-12 Cilag Gmbh International Tissue stapler having a thickness compensator
US10945731B2 (en) 2010-09-30 2021-03-16 Ethicon Llc Tissue thickness compensator comprising controlled release and expansion
US9629814B2 (en) 2010-09-30 2017-04-25 Ethicon Endo-Surgery, Llc Tissue thickness compensator configured to redistribute compressive forces
US8978954B2 (en) 2010-09-30 2015-03-17 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Staple cartridge comprising an adjustable distal portion
US11849952B2 (en) 2010-09-30 2023-12-26 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising staples positioned within a compressible portion thereof
US8695866B2 (en) 2010-10-01 2014-04-15 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical instrument having a power control circuit
DE19177059T1 (de) 2010-10-01 2021-10-07 Modernatx, Inc. N1-methyl-pseudouracile enthältendes ribonucleinsäuren sowie ihre verwendungen
ES2773858T3 (es) 2010-10-06 2020-07-15 Harvard College Hidrogeles formadores de poros inyectables para terapias celulares basadas en materiales
EP2640190A4 (en) 2010-11-05 2016-05-11 Selecta Biosciences Inc MODIFIED NICOTINIC COMPOUNDS AND ASSOCIATED METHODS
MX358598B (es) 2010-11-12 2018-08-27 Cour Pharmaceuticals Dev Company Partículas inmuno-moduladoras modificadas.
DE12722942T1 (de) 2011-03-31 2021-09-30 Modernatx, Inc. Freisetzung und formulierung von manipulierten nukleinsäuren
EP2702077A2 (en) 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
RU2606493C2 (ru) 2011-04-29 2017-01-10 Этикон Эндо-Серджери, Инк. Кассета со скобками, содержащая скобки, расположенные внутри ее сжимаемой части
US9289477B2 (en) 2011-04-29 2016-03-22 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce cytotoxic T lymphocyte responses
US11207064B2 (en) 2011-05-27 2021-12-28 Cilag Gmbh International Automated end effector component reloading system for use with a robotic system
US9072535B2 (en) 2011-05-27 2015-07-07 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Surgical stapling instruments with rotatable staple deployment arrangements
WO2013019658A2 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers comprising polymers comprising multiple immunomodulatory agents
EP2750662A4 (en) 2011-08-31 2015-06-24 Univ Georgia NANOPARTICLES TARGETING APOPTOSIS
US20140212398A1 (en) 2011-09-08 2014-07-31 Yeda Research And Development Co. Ltd. Anti third party central memory t cells, methods of producing same and use of same in transplantation and disease treatment
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
JP6113737B2 (ja) 2011-10-03 2017-04-12 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 修飾型のヌクレオシド、ヌクレオチドおよび核酸、ならびにそれらの使用方法
EP2591801A1 (en) * 2011-11-14 2013-05-15 Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf Nanoparticle compositions for generation of regulatory T cells and treatment of autoimmune diseases and other chronic inflammatory conditions
MX2014007233A (es) 2011-12-16 2015-02-04 Moderna Therapeutics Inc Composiciones de nucleosidos, nucleotidos y acidos nucleicos modificados.
WO2013119853A1 (en) 2012-02-07 2013-08-15 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Epitopes from allergen proteins and methods and uses for immune response modulation
WO2013123432A2 (en) 2012-02-16 2013-08-22 Atyr Pharma, Inc. Histidyl-trna synthetases for treating autoimmune and inflammatory diseases
ES2669561T3 (es) 2012-02-17 2018-05-28 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Nanopartículas para el transporte mitocondrial de agentes
MX2014011484A (es) * 2012-03-23 2015-09-23 Esteve Labor Dr Metodo para seguir las respuestas de celulas t especificas al vih.
MX358135B (es) 2012-03-28 2018-08-06 Ethicon Endo Surgery Inc Compensador de grosor de tejido que comprende una pluralidad de capas.
BR112014024098B1 (pt) 2012-03-28 2021-05-25 Ethicon Endo-Surgery, Inc. cartucho de grampos
JP6224070B2 (ja) 2012-03-28 2017-11-01 エシコン・エンド−サージェリィ・インコーポレイテッドＥｔｈｉｃｏｎ Ｅｎｄｏ−Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｉｎｃ． 組織厚さコンペンセータを含む保持具アセンブリ
EP2834259A4 (en) 2012-04-02 2016-08-24 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES
CA2868391A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Stephane Bancel Polynucleotides comprising n1-methyl-pseudouridine and methods for preparing the same
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
ES2773895T3 (es) 2012-04-16 2020-07-15 Harvard College Composiciones de sílice mesoporosa para modular las respuestas inmunitarias
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
WO2013163176A1 (en) 2012-04-23 2013-10-31 Allertein Therapeutics, Llc Nanoparticles for treatment of allergy
US9101358B2 (en) 2012-06-15 2015-08-11 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Articulatable surgical instrument comprising a firing drive
CA2876495C (en) 2012-06-21 2023-10-17 Northwestern University Peptide conjugated particles
US20140001231A1 (en) 2012-06-28 2014-01-02 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Firing system lockout arrangements for surgical instruments
BR112014032776B1 (pt) 2012-06-28 2021-09-08 Ethicon Endo-Surgery, Inc Sistema de instrumento cirúrgico e kit cirúrgico para uso com um sistema de instrumento cirúrgico
CN104487005B (zh) 2012-06-28 2017-09-08 伊西康内外科公司 空夹仓闭锁件
US20140001234A1 (en) 2012-06-28 2014-01-02 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Coupling arrangements for attaching surgical end effectors to drive systems therefor
US11202631B2 (en) 2012-06-28 2021-12-21 Cilag Gmbh International Stapling assembly comprising a firing lockout
US9289256B2 (en) 2012-06-28 2016-03-22 Ethicon Endo-Surgery, Llc Surgical end effectors having angled tissue-contacting surfaces
US9649111B2 (en) 2012-06-28 2017-05-16 Ethicon Endo-Surgery, Llc Replaceable clip cartridge for a clip applier
US9700310B2 (en) 2013-08-23 2017-07-11 Ethicon Llc Firing member retraction devices for powered surgical instruments
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
RU2687164C2 (ru) 2012-10-30 2019-05-07 Аравакс Пти Лтд Новые иммунотерапевтические молекулы и их применения
WO2014069655A1 (ja) * 2012-11-05 2014-05-08 株式会社レグイミューン 免疫寛容誘導剤
CA2892529C (en) 2012-11-26 2023-04-25 Moderna Therapeutics, Inc. Terminally modified rna
BR112015021082B1 (pt) 2013-03-01 2022-05-10 Ethicon Endo-Surgery, Inc Instrumento cirúrgico
MX368026B (es) 2013-03-01 2019-09-12 Ethicon Endo Surgery Inc Instrumento quirúrgico articulable con vías conductoras para la comunicación de la señal.
CA2905010A1 (en) 2013-03-12 2014-09-18 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
KR20210057832A (ko) 2013-03-13 2021-05-21 코어 파마슈티칼스 디벨롭먼트 컴퍼니 인크. 염증 치료용 면역-변형된 입자
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
US9629629B2 (en) 2013-03-14 2017-04-25 Ethicon Endo-Surgey, LLC Control systems for surgical instruments
US9351726B2 (en) 2013-03-14 2016-05-31 Ethicon Endo-Surgery, Llc Articulation control system for articulatable surgical instruments
US9499614B2 (en) 2013-03-14 2016-11-22 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosaccharides
US10258698B2 (en) 2013-03-14 2019-04-16 Modernatx, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
CA2907046C (en) 2013-03-15 2021-04-20 Atyr Pharma, Inc. Histidyl-trna synthetase-fc conjugates
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US9588115B2 (en) 2013-03-28 2017-03-07 Protagen Ag Method for the diagnosis of neuromyelitis optica
CN105188741A (zh) 2013-04-03 2015-12-23 阿勒丁医疗公司 新型纳米颗粒组合物
US9801626B2 (en) 2013-04-16 2017-10-31 Ethicon Llc Modular motor driven surgical instruments with alignment features for aligning rotary drive shafts with surgical end effector shafts
BR112015026109B1 (pt) 2013-04-16 2022-02-22 Ethicon Endo-Surgery, Inc Instrumento cirúrgico
WO2014179771A1 (en) * 2013-05-03 2014-11-06 Selecta Biosciences, Inc. Dosing combinations for reducing undesired humoral immune responses
EA201592106A3 (ru) * 2013-05-03 2016-08-31 Селекта Байосайенсиз, Инк. Локальное сопутствующее введение толерогенных синтетических наноносителей для снижения гиперчувствительности типа i и гиперчувствительности типа iv
EA201592273A1 (ru) * 2013-06-04 2016-09-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Повторное введение неиммуносупрессивных антигенспецифических иммунотерапевтических средств
EP2813242A1 (en) * 2013-06-13 2014-12-17 PLS-Design GmbH Low molecular weight immune-modulators as adjuvants for specific immunotherapy
FI3033102T4 (fi) 2013-08-13 2024-03-01 Univ Northwestern Peptidikonjugoituja hiukkasia
JP6416260B2 (ja) 2013-08-23 2018-10-31 エシコン エルエルシー 動力付き外科用器具のための発射部材後退装置
EP3041934A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
EP3041938A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
US20160228521A1 (en) * 2013-09-16 2016-08-11 Allertein Therapeutics, Llc Managing immune responses in transplantation
BR112016006813A2 (pt) 2013-09-25 2017-09-19 Aravax Pty Ltd Composição imunoterapêutica nova e seus usos
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
CA2926218A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
WO2015051293A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Abbvie, Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
CA2930973A1 (en) 2013-11-22 2015-05-28 Pal SAERTROM C/ebp alpha short activating rna compositions and methods of use
KR101483378B1 (ko) * 2013-12-24 2015-01-15 이영환 금 나노 입자를 함유하는 물을 이용한 금 나노 입자를 포함하는 달걀 제조방법
TR201807778T4 (tr) * 2014-01-17 2018-06-21 Fundacio Inst Catala De Nanociencia I Nanotecnologia Lipozom bazlı immünoterapi.
US9962161B2 (en) 2014-02-12 2018-05-08 Ethicon Llc Deliverable surgical instrument
EP2918262B1 (en) * 2014-03-10 2023-08-09 PLS-Design GmbH Induction of antigen-specific tolerance by peripheral phagocytosis
WO2015138992A1 (en) 2014-03-14 2015-09-17 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Mitochondrial delivery of 3-bromopyruvate
US10004497B2 (en) 2014-03-26 2018-06-26 Ethicon Llc Interface systems for use with surgical instruments
US9690362B2 (en) 2014-03-26 2017-06-27 Ethicon Llc Surgical instrument control circuit having a safety processor
BR112016021943B1 (pt) 2014-03-26 2022-06-14 Ethicon Endo-Surgery, Llc Instrumento cirúrgico para uso por um operador em um procedimento cirúrgico
US20150297222A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Fastener cartridges including extensions having different configurations
CN106456176B (zh) 2014-04-16 2019-06-28 伊西康内外科有限责任公司 包括具有不同构型的延伸部的紧固件仓
US9844369B2 (en) 2014-04-16 2017-12-19 Ethicon Llc Surgical end effectors with firing element monitoring arrangements
BR112016023807B1 (pt) 2014-04-16 2022-07-12 Ethicon Endo-Surgery, Llc Conjunto de cartucho de prendedores para uso com um instrumento cirúrgico
CN106456158B (zh) 2014-04-16 2019-02-05 伊西康内外科有限责任公司 包括非一致紧固件的紧固件仓
US10682400B2 (en) 2014-04-30 2020-06-16 President And Fellows Of Harvard College Combination vaccine devices and methods of killing cancer cells
CN104028745A (zh) * 2014-06-11 2014-09-10 浙江大学 一种利用丝素蛋白调控金纳米颗粒自组装的方法
US20150359865A1 (en) * 2014-06-17 2015-12-17 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers for t-cell-mediated autoimmune disease
WO2016014846A1 (en) 2014-07-23 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of intrabodies
BR112017004361B1 (pt) 2014-09-05 2023-04-11 Ethicon Llc Sistema eletrônico para um instrumento cirúrgico
US11311294B2 (en) 2014-09-05 2022-04-26 Cilag Gmbh International Powered medical device including measurement of closure state of jaws
US20160066913A1 (en) 2014-09-05 2016-03-10 Ethicon Endo-Surgery, Inc. Local display of tissue parameter stabilization
WO2016037163A1 (en) 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene therapy anti-viral transfer vector immune responses
CN107073066B (zh) * 2014-09-11 2021-09-17 加利福尼亚大学董事会 mTORC1抑制剂
US10105142B2 (en) 2014-09-18 2018-10-23 Ethicon Llc Surgical stapler with plurality of cutting elements
MX2017003960A (es) 2014-09-26 2017-12-04 Ethicon Llc Refuerzos de grapas quirúrgicas y materiales auxiliares.
JP2017528511A (ja) 2014-09-26 2017-09-28 セキラス ユーケー リミテッド 免疫低下された被験体のワクチン接種
US11523821B2 (en) 2014-09-26 2022-12-13 Cilag Gmbh International Method for creating a flexible staple line
US9924944B2 (en) 2014-10-16 2018-03-27 Ethicon Llc Staple cartridge comprising an adjunct material
JP2017533238A (ja) 2014-10-28 2017-11-09 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル 抗原特異的寛容のための組成物及び方法
US10517594B2 (en) 2014-10-29 2019-12-31 Ethicon Llc Cartridge assemblies for surgical staplers
US11141153B2 (en) 2014-10-29 2021-10-12 Cilag Gmbh International Staple cartridges comprising driver arrangements
PL3215133T3 (pl) * 2014-11-05 2021-06-14 Selecta Biosciences, Inc. Sposoby i kompozycje związane z zastosowaniem związków powierzchniowo czynnych o niskiej hlb do wytwarzania syntetycznych nanonośników zawierających rapalog
US9844376B2 (en) 2014-11-06 2017-12-19 Ethicon Llc Staple cartridge comprising a releasable adjunct material
US10736636B2 (en) 2014-12-10 2020-08-11 Ethicon Llc Articulatable surgical instrument system
RU2703684C2 (ru) 2014-12-18 2019-10-21 ЭТИКОН ЭНДО-СЕРДЖЕРИ, ЭлЭлСи Хирургический инструмент с упором, который выполнен с возможностью избирательного перемещения относительно кассеты со скобами вокруг дискретной неподвижной оси
US10004501B2 (en) 2014-12-18 2018-06-26 Ethicon Llc Surgical instruments with improved closure arrangements
US9987000B2 (en) 2014-12-18 2018-06-05 Ethicon Llc Surgical instrument assembly comprising a flexible articulation system
US9844374B2 (en) 2014-12-18 2017-12-19 Ethicon Llc Surgical instrument systems comprising an articulatable end effector and means for adjusting the firing stroke of a firing member
US9844375B2 (en) 2014-12-18 2017-12-19 Ethicon Llc Drive arrangements for articulatable surgical instruments
US10085748B2 (en) 2014-12-18 2018-10-02 Ethicon Llc Locking arrangements for detachable shaft assemblies with articulatable surgical end effectors
US11786457B2 (en) 2015-01-30 2023-10-17 President And Fellows Of Harvard College Peritumoral and intratumoral materials for cancer therapy
US11154301B2 (en) 2015-02-27 2021-10-26 Cilag Gmbh International Modular stapling assembly
US10245033B2 (en) 2015-03-06 2019-04-02 Ethicon Llc Surgical instrument comprising a lockable battery housing
US10441279B2 (en) 2015-03-06 2019-10-15 Ethicon Llc Multiple level thresholds to modify operation of powered surgical instruments
JP2020121162A (ja) 2015-03-06 2020-08-13 エシコン エルエルシーＥｔｈｉｃｏｎ ＬＬＣ 測定の安定性要素、クリープ要素、及び粘弾性要素を決定するためのセンサデータの時間依存性評価
US10052044B2 (en) 2015-03-06 2018-08-21 Ethicon Llc Time dependent evaluation of sensor data to determine stability, creep, and viscoelastic elements of measures
US9993248B2 (en) 2015-03-06 2018-06-12 Ethicon Endo-Surgery, Llc Smart sensors with local signal processing
US10390825B2 (en) 2015-03-31 2019-08-27 Ethicon Llc Surgical instrument with progressive rotary drive systems
JP7094533B2 (ja) 2015-04-10 2022-07-04 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 免疫細胞捕捉デバイスおよびその製造および使用方法
CN104758261A (zh) * 2015-04-30 2015-07-08 中国医学科学院生物医学工程研究所 淫羊藿苷plga纳米粒子及制备方法及用途
WO2016196691A2 (en) 2015-06-01 2016-12-08 California Institute Of Technology Compositions and methods for screening t cells with antigens for specific populations
EP3310342A4 (en) * 2015-06-16 2019-03-06 The Trustees of the University of Pennsylvania INORGANIC PARTICLES WITH QUICK-LOAD PROLONGED RELEASE IN DRUG SUBSTANCE
WO2017011685A1 (en) * 2015-07-15 2017-01-19 Celator Pharmaceuticals, Inc. Improved nanoparticle delivery systems
US10933124B2 (en) 2015-07-16 2021-03-02 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of transplantation and disease treatment
US11260027B2 (en) 2015-07-29 2022-03-01 Musc Foundation For Research Development Donor organ pre-treatment formulation
US10835249B2 (en) 2015-08-17 2020-11-17 Ethicon Llc Implantable layers for a surgical instrument
EP3347053B1 (en) 2015-09-13 2022-05-25 The Research Foundation For State University Of New York Functional, segregated, charged telodendrimers and nanocarriers and methods of making and using same
RS63030B1 (sr) 2015-09-17 2022-04-29 Modernatx Inc Jedinjenja i kompozicije za intracelularno isporučivanje terapeutskih sredstava
US10105139B2 (en) 2015-09-23 2018-10-23 Ethicon Llc Surgical stapler having downstream current-based motor control
US10238386B2 (en) 2015-09-23 2019-03-26 Ethicon Llc Surgical stapler having motor control based on an electrical parameter related to a motor current
KR102514116B1 (ko) 2015-09-24 2023-03-23 삼성전자주식회사 반도체 나노결정 입자 및 이를 포함하는 소자
US10299878B2 (en) 2015-09-25 2019-05-28 Ethicon Llc Implantable adjunct systems for determining adjunct skew
US10561420B2 (en) * 2015-09-30 2020-02-18 Ethicon Llc Tubular absorbable constructs
US10285699B2 (en) 2015-09-30 2019-05-14 Ethicon Llc Compressible adjunct
US11890015B2 (en) 2015-09-30 2024-02-06 Cilag Gmbh International Compressible adjunct with crossing spacer fibers
US10980539B2 (en) 2015-09-30 2021-04-20 Ethicon Llc Implantable adjunct comprising bonded layers
WO2017096262A1 (en) * 2015-12-04 2017-06-08 Jomoco, Corp. Compositions and methods to mitigate or prevent an immune response to an immunogenic therapeutic molecule in non-human primates
MD3386484T2 (ro) 2015-12-10 2022-11-30 Modernatx Inc Compoziții și metode de livrare a unor agenți terapeutici
US11433136B2 (en) 2015-12-18 2022-09-06 The General Hospital Corporation Polyacetal polymers, conjugates, particles and uses thereof
JP7114465B2 (ja) 2015-12-22 2022-08-08 モデルナティエックス インコーポレイテッド 薬剤の細胞内送達のための化合物および組成物
EP3394093B1 (en) 2015-12-23 2022-01-26 Modernatx, Inc. Methods of using ox40 ligand encoding polynucleotides
US10292704B2 (en) 2015-12-30 2019-05-21 Ethicon Llc Mechanisms for compensating for battery pack failure in powered surgical instruments
US10265068B2 (en) 2015-12-30 2019-04-23 Ethicon Llc Surgical instruments with separable motors and motor control circuits
US10368865B2 (en) 2015-12-30 2019-08-06 Ethicon Llc Mechanisms for compensating for drivetrain failure in powered surgical instruments
MA43587A (fr) 2016-01-10 2018-11-14 Modernatx Inc Arnm thérapeutiques codant pour des anticorps anti-ctla-4
CN115487351A (zh) 2016-02-06 2022-12-20 哈佛学院校长同事会 重塑造血巢以重建免疫
US11213293B2 (en) 2016-02-09 2022-01-04 Cilag Gmbh International Articulatable surgical instruments with single articulation link arrangements
BR112018016098B1 (pt) 2016-02-09 2023-02-23 Ethicon Llc Instrumento cirúrgico
US11224426B2 (en) 2016-02-12 2022-01-18 Cilag Gmbh International Mechanisms for compensating for drivetrain failure in powered surgical instruments
US10448948B2 (en) 2016-02-12 2019-10-22 Ethicon Llc Mechanisms for compensating for drivetrain failure in powered surgical instruments
US20170258927A1 (en) * 2016-03-11 2017-09-14 Selecta Biosciences, Inc. Formulations and doses of pegylated uricase
US11607239B2 (en) 2016-04-15 2023-03-21 Cilag Gmbh International Systems and methods for controlling a surgical stapling and cutting instrument
US10335145B2 (en) 2016-04-15 2019-07-02 Ethicon Llc Modular surgical instrument with configurable operating mode
US10828028B2 (en) 2016-04-15 2020-11-10 Ethicon Llc Surgical instrument with multiple program responses during a firing motion
US10426467B2 (en) 2016-04-15 2019-10-01 Ethicon Llc Surgical instrument with detection sensors
US11179150B2 (en) 2016-04-15 2021-11-23 Cilag Gmbh International Systems and methods for controlling a surgical stapling and cutting instrument
US10357247B2 (en) 2016-04-15 2019-07-23 Ethicon Llc Surgical instrument with multiple program responses during a firing motion
US10456137B2 (en) 2016-04-15 2019-10-29 Ethicon Llc Staple formation detection mechanisms
US10492783B2 (en) 2016-04-15 2019-12-03 Ethicon, Llc Surgical instrument with improved stop/start control during a firing motion
US20170296173A1 (en) 2016-04-18 2017-10-19 Ethicon Endo-Surgery, Llc Method for operating a surgical instrument
US11317917B2 (en) 2016-04-18 2022-05-03 Cilag Gmbh International Surgical stapling system comprising a lockable firing assembly
US10426469B2 (en) 2016-04-18 2019-10-01 Ethicon Llc Surgical instrument comprising a primary firing lockout and a secondary firing lockout
EP3251662A1 (en) * 2016-06-07 2017-12-06 Tolerogenics S.à.r.l. Matrix-embedded tolerance-promotion adjuvants for subcutaneous immunotherapy
NL2017204B1 (en) 2016-06-08 2017-12-18 Kei International Ltd Solid substrate comprising antigens immobilised thereto, biosensor comprising said solid substrate and method for detecting the presence of mycobacterial material in a sample
AU2017283480A1 (en) 2016-06-13 2019-01-24 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
JP2018012694A (ja) * 2016-07-12 2018-01-25 日本化薬株式会社 ラパマイシン類結合ブロック共重合体
JP2019522486A (ja) 2016-07-13 2019-08-15 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 抗原提示細胞模倣足場およびそれを作製および使用するための方法
US20180092983A1 (en) * 2016-10-05 2018-04-05 Tian Xin Wang Methods and reagents to treat autoimmune diseases and allergy
US20190008900A1 (en) * 2017-07-07 2019-01-10 Tian Xin Wang Methods and reagents to treat autoimmune diseases and allergy
US20210363220A1 (en) * 2016-10-05 2021-11-25 Tianxin Wang Methods and reagents to treat autoimmune diseases and allergy
US10398732B2 (en) 2016-10-13 2019-09-03 Marshall University Research Corporation Compositions and methods for treating striated muscle injury, treating striated muscle atrophy and/or for promoting striated muscle growth
US11583504B2 (en) 2016-11-08 2023-02-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
WO2018104540A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Curevac Ag Rnas for wound healing
EP3808380A1 (en) 2016-12-08 2021-04-21 CureVac AG Rna for treatment or prophylaxis of a liver disease
US10537325B2 (en) 2016-12-21 2020-01-21 Ethicon Llc Staple forming pocket arrangement to accommodate different types of staples
JP7010956B2 (ja) 2016-12-21 2022-01-26 エシコン エルエルシー 組織をステープル留めする方法
US11419606B2 (en) 2016-12-21 2022-08-23 Cilag Gmbh International Shaft assembly comprising a clutch configured to adapt the output of a rotary firing member to two different systems
JP6983893B2 (ja) 2016-12-21 2021-12-17 エシコン エルエルシーEthicon LLC 外科用エンドエフェクタ及び交換式ツールアセンブリのためのロックアウト構成
US20180168625A1 (en) 2016-12-21 2018-06-21 Ethicon Endo-Surgery, Llc Surgical stapling instruments with smart staple cartridges
US20180168575A1 (en) 2016-12-21 2018-06-21 Ethicon Endo-Surgery, Llc Surgical stapling systems
US20180168633A1 (en) 2016-12-21 2018-06-21 Ethicon Endo-Surgery, Llc Surgical stapling instruments and staple-forming anvils
US20180168615A1 (en) 2016-12-21 2018-06-21 Ethicon Endo-Surgery, Llc Method of deforming staples from two different types of staple cartridges with the same surgical stapling instrument
US10779823B2 (en) 2016-12-21 2020-09-22 Ethicon Llc Firing member pin angle
US10973516B2 (en) 2016-12-21 2021-04-13 Ethicon Llc Surgical end effectors and adaptable firing members therefor
CN110087565A (zh) 2016-12-21 2019-08-02 爱惜康有限责任公司 外科缝合系统
US10980536B2 (en) 2016-12-21 2021-04-20 Ethicon Llc No-cartridge and spent cartridge lockout arrangements for surgical staplers
US10588631B2 (en) 2016-12-21 2020-03-17 Ethicon Llc Surgical instruments with positive jaw opening features
US10675025B2 (en) 2016-12-21 2020-06-09 Ethicon Llc Shaft assembly comprising separately actuatable and retractable systems
US11134942B2 (en) 2016-12-21 2021-10-05 Cilag Gmbh International Surgical stapling instruments and staple-forming anvils
US10682138B2 (en) 2016-12-21 2020-06-16 Ethicon Llc Bilaterally asymmetric staple forming pocket pairs
US11542316B2 (en) * 2017-01-04 2023-01-03 Worg Pharmaceuticals (Zhejiang) Co., Ltd. S-Arrestin peptides and therapeutic uses thereof
AU2018205496A1 (en) * 2017-01-07 2019-07-25 Selecta Biosciences, Inc. Patterned dosing of immunosuppressants coupled to synthetic nanocarriers
US11555178B2 (en) 2017-01-18 2023-01-17 Yeda Research And Development Co. Ltd. Genetically modified veto cells and use of same in immunotherapy
US10751368B2 (en) 2017-01-18 2020-08-25 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of transplantation and disease treatment
BR112019018748A2 (pt) 2017-03-11 2020-04-07 Selecta Biosciences Inc métodos e composições relacionados ao tratamento combinado com anti-inflamatórios e nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor
JP7332478B2 (ja) 2017-03-15 2023-08-23 モデルナティエックス インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子製剤
ES2911186T3 (es) 2017-03-15 2022-05-18 Modernatx Inc Formas cristalinas de aminolípidos
SG11201907916TA (en) 2017-03-15 2019-09-27 Modernatx Inc Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
WO2018187590A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Modernatx, Inc. Reduction or elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
CA3060514A1 (en) 2017-04-20 2018-10-25 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods for treating lung inflammation
WO2018232357A1 (en) 2017-06-15 2018-12-20 Modernatx, Inc. Rna formulations
US11382638B2 (en) 2017-06-20 2022-07-12 Cilag Gmbh International Closed loop feedback control of motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument based on measured time over a specified displacement distance
US10980537B2 (en) 2017-06-20 2021-04-20 Ethicon Llc Closed loop feedback control of motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument based on measured time over a specified number of shaft rotations
US10779820B2 (en) 2017-06-20 2020-09-22 Ethicon Llc Systems and methods for controlling motor speed according to user input for a surgical instrument
US11071554B2 (en) 2017-06-20 2021-07-27 Cilag Gmbh International Closed loop feedback control of motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument based on magnitude of velocity error measurements
US10307170B2 (en) 2017-06-20 2019-06-04 Ethicon Llc Method for closed loop control of motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument
US11653914B2 (en) 2017-06-20 2023-05-23 Cilag Gmbh International Systems and methods for controlling motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument according to articulation angle of end effector
US11517325B2 (en) 2017-06-20 2022-12-06 Cilag Gmbh International Closed loop feedback control of motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument based on measured displacement distance traveled over a specified time interval
US10888321B2 (en) 2017-06-20 2021-01-12 Ethicon Llc Systems and methods for controlling velocity of a displacement member of a surgical stapling and cutting instrument
US10881399B2 (en) 2017-06-20 2021-01-05 Ethicon Llc Techniques for adaptive control of motor velocity of a surgical stapling and cutting instrument
US11090046B2 (en) 2017-06-20 2021-08-17 Cilag Gmbh International Systems and methods for controlling displacement member motion of a surgical stapling and cutting instrument
US11266405B2 (en) 2017-06-27 2022-03-08 Cilag Gmbh International Surgical anvil manufacturing methods
US11090049B2 (en) 2017-06-27 2021-08-17 Cilag Gmbh International Staple forming pocket arrangements
US10993716B2 (en) 2017-06-27 2021-05-04 Ethicon Llc Surgical anvil arrangements
US11324503B2 (en) 2017-06-27 2022-05-10 Cilag Gmbh International Surgical firing member arrangements
US11564686B2 (en) 2017-06-28 2023-01-31 Cilag Gmbh International Surgical shaft assemblies with flexible interfaces
US11484310B2 (en) 2017-06-28 2022-11-01 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a shaft including a closure tube profile
US10588633B2 (en) 2017-06-28 2020-03-17 Ethicon Llc Surgical instruments with open and closable jaws and axially movable firing member that is initially parked in close proximity to the jaws prior to firing
USD906355S1 (en) 2017-06-28 2020-12-29 Ethicon Llc Display screen or portion thereof with a graphical user interface for a surgical instrument
EP4070740A1 (en) 2017-06-28 2022-10-12 Cilag GmbH International Surgical instrument comprising selectively actuatable rotatable couplers
US10903685B2 (en) 2017-06-28 2021-01-26 Ethicon Llc Surgical shaft assemblies with slip ring assemblies forming capacitive channels
US10765427B2 (en) 2017-06-28 2020-09-08 Ethicon Llc Method for articulating a surgical instrument
US11259805B2 (en) 2017-06-28 2022-03-01 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising firing member supports
US11246592B2 (en) 2017-06-28 2022-02-15 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an articulation system lockable to a frame
US10932772B2 (en) 2017-06-29 2021-03-02 Ethicon Llc Methods for closed loop velocity control for robotic surgical instrument
US11304695B2 (en) 2017-08-03 2022-04-19 Cilag Gmbh International Surgical system shaft interconnection
US11944300B2 (en) 2017-08-03 2024-04-02 Cilag Gmbh International Method for operating a surgical system bailout
US11974742B2 (en) 2017-08-03 2024-05-07 Cilag Gmbh International Surgical system comprising an articulation bailout
US11471155B2 (en) 2017-08-03 2022-10-18 Cilag Gmbh International Surgical system bailout
EP3675817A1 (en) 2017-08-31 2020-07-08 Modernatx, Inc. Methods of making lipid nanoparticles
EP3678701A4 (en) 2017-09-05 2021-12-01 Torque Therapeutics, Inc. THERAPEUTIC PROTEIN COMPOSITIONS AND METHOD FOR MANUFACTURING AND USING THEREOF
EP4183882A1 (en) 2017-09-08 2023-05-24 MiNA Therapeutics Limited Stabilized hnf4a sarna compositions and methods of use
US20200208152A1 (en) 2017-09-08 2020-07-02 Mina Therapeutics Limited Stabilized sarna compositions and methods of use
USD907648S1 (en) 2017-09-29 2021-01-12 Ethicon Llc Display screen or portion thereof with animated graphical user interface
US11399829B2 (en) 2017-09-29 2022-08-02 Cilag Gmbh International Systems and methods of initiating a power shutdown mode for a surgical instrument
USD907647S1 (en) 2017-09-29 2021-01-12 Ethicon Llc Display screen or portion thereof with animated graphical user interface
US20220025015A1 (en) * 2017-10-03 2022-01-27 Tianxin Wang Methods, compositions and therapeutical vaccine for autoimmune diseases and allergy treatment
CA3077084A1 (en) * 2017-10-05 2019-04-11 Epivax, Inc. Regulatory t cell epitopes
US11134944B2 (en) 2017-10-30 2021-10-05 Cilag Gmbh International Surgical stapler knife motion controls
US11090075B2 (en) 2017-10-30 2021-08-17 Cilag Gmbh International Articulation features for surgical end effector
US10842490B2 (en) 2017-10-31 2020-11-24 Ethicon Llc Cartridge body design with force reduction based on firing completion
US10869666B2 (en) 2017-12-15 2020-12-22 Ethicon Llc Adapters with control systems for controlling multiple motors of an electromechanical surgical instrument
US11033267B2 (en) 2017-12-15 2021-06-15 Ethicon Llc Systems and methods of controlling a clamping member firing rate of a surgical instrument
US10966718B2 (en) 2017-12-15 2021-04-06 Ethicon Llc Dynamic clamping assemblies with improved wear characteristics for use in connection with electromechanical surgical instruments
US10779826B2 (en) 2017-12-15 2020-09-22 Ethicon Llc Methods of operating surgical end effectors
US10828033B2 (en) 2017-12-15 2020-11-10 Ethicon Llc Handheld electromechanical surgical instruments with improved motor control arrangements for positioning components of an adapter coupled thereto
US10779825B2 (en) 2017-12-15 2020-09-22 Ethicon Llc Adapters with end effector position sensing and control arrangements for use in connection with electromechanical surgical instruments
US11197670B2 (en) 2017-12-15 2021-12-14 Cilag Gmbh International Surgical end effectors with pivotal jaws configured to touch at their respective distal ends when fully closed
US11071543B2 (en) 2017-12-15 2021-07-27 Cilag Gmbh International Surgical end effectors with clamping assemblies configured to increase jaw aperture ranges
USD910847S1 (en) 2017-12-19 2021-02-16 Ethicon Llc Surgical instrument assembly
US11020112B2 (en) 2017-12-19 2021-06-01 Ethicon Llc Surgical tools configured for interchangeable use with different controller interfaces
US10835330B2 (en) 2017-12-19 2020-11-17 Ethicon Llc Method for determining the position of a rotatable jaw of a surgical instrument attachment assembly
US11076853B2 (en) 2017-12-21 2021-08-03 Cilag Gmbh International Systems and methods of displaying a knife position during transection for a surgical instrument
US11129680B2 (en) 2017-12-21 2021-09-28 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a projector
US20190192151A1 (en) 2017-12-21 2019-06-27 Ethicon Llc Surgical instrument having a display comprising image layers
US11311290B2 (en) 2017-12-21 2022-04-26 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an end effector dampener
CN112384204B (zh) * 2018-02-26 2023-03-14 安托瑞斯公司 致耐受性脂质体及其使用方法
US11566246B2 (en) 2018-04-12 2023-01-31 Mina Therapeutics Limited SIRT1-saRNA compositions and methods of use
CN108841774B (zh) * 2018-05-02 2021-11-26 南开大学 一种双响应型纳米仿生界面的制备及其在细胞捕获与应需无损释放中的应用
CN108753716A (zh) * 2018-06-14 2018-11-06 杭州启澜生物医学技术有限公司 一种体外扩增人外周血cd3+t细胞的方法
EP3833762A4 (en) 2018-08-09 2022-09-28 Verseau Therapeutics, Inc. OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS FOR TARGETING CCR2 AND CSF1R AND THEIR USES
CN110836966A (zh) * 2018-08-15 2020-02-25 王镕 用于抗原特异性t细胞含量检测的检测纳米颗粒、检测方法及试剂盒等
US11039834B2 (en) 2018-08-20 2021-06-22 Cilag Gmbh International Surgical stapler anvils with staple directing protrusions and tissue stability features
US11045192B2 (en) 2018-08-20 2021-06-29 Cilag Gmbh International Fabricating techniques for surgical stapler anvils
USD914878S1 (en) 2018-08-20 2021-03-30 Ethicon Llc Surgical instrument anvil
US11207065B2 (en) 2018-08-20 2021-12-28 Cilag Gmbh International Method for fabricating surgical stapler anvils
US11253256B2 (en) 2018-08-20 2022-02-22 Cilag Gmbh International Articulatable motor powered surgical instruments with dedicated articulation motor arrangements
US11083458B2 (en) 2018-08-20 2021-08-10 Cilag Gmbh International Powered surgical instruments with clutching arrangements to convert linear drive motions to rotary drive motions
US10856870B2 (en) 2018-08-20 2020-12-08 Ethicon Llc Switching arrangements for motor powered articulatable surgical instruments
US11324501B2 (en) 2018-08-20 2022-05-10 Cilag Gmbh International Surgical stapling devices with improved closure members
US11291440B2 (en) 2018-08-20 2022-04-05 Cilag Gmbh International Method for operating a powered articulatable surgical instrument
US10912559B2 (en) 2018-08-20 2021-02-09 Ethicon Llc Reinforced deformable anvil tip for surgical stapler anvil
CN109439626B (zh) * 2018-11-09 2022-10-14 复旦大学附属中山医院 一种有助于体外获得Th22细胞的组合物及其用途
CN111388679A (zh) * 2019-01-03 2020-07-10 北京大学 蛋白质-螺旋聚氨基酸偶联物、其制备方法及用途
CN111574590B (zh) * 2019-02-18 2022-04-22 常州市第一人民医院 一种具有抗肿瘤功能的多肽及其应用
US11172929B2 (en) 2019-03-25 2021-11-16 Cilag Gmbh International Articulation drive arrangements for surgical systems
US11147553B2 (en) 2019-03-25 2021-10-19 Cilag Gmbh International Firing drive arrangements for surgical systems
US11696761B2 (en) 2019-03-25 2023-07-11 Cilag Gmbh International Firing drive arrangements for surgical systems
US11147551B2 (en) 2019-03-25 2021-10-19 Cilag Gmbh International Firing drive arrangements for surgical systems
EP3953473A1 (en) 2019-04-12 2022-02-16 MiNA Therapeutics Limited Sirt1-sarna compositions and methods of use
US11426251B2 (en) 2019-04-30 2022-08-30 Cilag Gmbh International Articulation directional lights on a surgical instrument
US11432816B2 (en) 2019-04-30 2022-09-06 Cilag Gmbh International Articulation pin for a surgical instrument
US11253254B2 (en) 2019-04-30 2022-02-22 Cilag Gmbh International Shaft rotation actuator on a surgical instrument
US11471157B2 (en) 2019-04-30 2022-10-18 Cilag Gmbh International Articulation control mapping for a surgical instrument
US11648009B2 (en) 2019-04-30 2023-05-16 Cilag Gmbh International Rotatable jaw tip for a surgical instrument
US11903581B2 (en) 2019-04-30 2024-02-20 Cilag Gmbh International Methods for stapling tissue using a surgical instrument
US11452528B2 (en) 2019-04-30 2022-09-27 Cilag Gmbh International Articulation actuators for a surgical instrument
AU2020277486A1 (en) * 2019-05-23 2022-01-27 Uti Limited Partnership Nanoparticles comprising non-classical MHC and uses thereof
US11638587B2 (en) 2019-06-28 2023-05-02 Cilag Gmbh International RFID identification systems for surgical instruments
US11478241B2 (en) 2019-06-28 2022-10-25 Cilag Gmbh International Staple cartridge including projections
US11298127B2 (en) 2019-06-28 2022-04-12 Cilag GmbH Interational Surgical stapling system having a lockout mechanism for an incompatible cartridge
US11291451B2 (en) 2019-06-28 2022-04-05 Cilag Gmbh International Surgical instrument with battery compatibility verification functionality
US11051807B2 (en) 2019-06-28 2021-07-06 Cilag Gmbh International Packaging assembly including a particulate trap
US11627959B2 (en) 2019-06-28 2023-04-18 Cilag Gmbh International Surgical instruments including manual and powered system lockouts
US11219455B2 (en) 2019-06-28 2022-01-11 Cilag Gmbh International Surgical instrument including a lockout key
US11376098B2 (en) 2019-06-28 2022-07-05 Cilag Gmbh International Surgical instrument system comprising an RFID system
US11298132B2 (en) 2019-06-28 2022-04-12 Cilag GmbH Inlernational Staple cartridge including a honeycomb extension
US11464601B2 (en) 2019-06-28 2022-10-11 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an RFID system for tracking a movable component
US11553971B2 (en) 2019-06-28 2023-01-17 Cilag Gmbh International Surgical RFID assemblies for display and communication
US11399837B2 (en) 2019-06-28 2022-08-02 Cilag Gmbh International Mechanisms for motor control adjustments of a motorized surgical instrument
US11259803B2 (en) 2019-06-28 2022-03-01 Cilag Gmbh International Surgical stapling system having an information encryption protocol
US11660163B2 (en) 2019-06-28 2023-05-30 Cilag Gmbh International Surgical system with RFID tags for updating motor assembly parameters
US11523822B2 (en) 2019-06-28 2022-12-13 Cilag Gmbh International Battery pack including a circuit interrupter
US11497492B2 (en) 2019-06-28 2022-11-15 Cilag Gmbh International Surgical instrument including an articulation lock
US11224497B2 (en) 2019-06-28 2022-01-18 Cilag Gmbh International Surgical systems with multiple RFID tags
US11426167B2 (en) 2019-06-28 2022-08-30 Cilag Gmbh International Mechanisms for proper anvil attachment surgical stapling head assembly
US11246678B2 (en) 2019-06-28 2022-02-15 Cilag Gmbh International Surgical stapling system having a frangible RFID tag
US11771419B2 (en) 2019-06-28 2023-10-03 Cilag Gmbh International Packaging for a replaceable component of a surgical stapling system
US11684434B2 (en) 2019-06-28 2023-06-27 Cilag Gmbh International Surgical RFID assemblies for instrument operational setting control
US11350938B2 (en) 2019-06-28 2022-06-07 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an aligned rfid sensor
WO2021041991A1 (en) * 2019-08-29 2021-03-04 Diomics Corporation Hydrophilic biopolymer medicament delivery mechanism
WO2021055833A1 (en) 2019-09-19 2021-03-25 Modernatx, Inc. Branched tail lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
EP4048807A1 (en) 2019-09-23 2022-08-31 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating apolipoprotein b (apob) gene expression
CA3147643A1 (en) 2019-09-23 2021-04-01 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating hepatocyte nuclear factor 4-alpha (hnf4.alpha.) gene expression
JP2022553345A (ja) * 2019-10-21 2022-12-22 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド 肝疾患および肝障害を処置するための方法および組成物
US20210206879A1 (en) * 2019-12-06 2021-07-08 Yale University Enhanced targeting platform
US11234698B2 (en) 2019-12-19 2022-02-01 Cilag Gmbh International Stapling system comprising a clamp lockout and a firing lockout
US11607219B2 (en) 2019-12-19 2023-03-21 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a detachable tissue cutting knife
US11701111B2 (en) 2019-12-19 2023-07-18 Cilag Gmbh International Method for operating a surgical stapling instrument
US11559304B2 (en) 2019-12-19 2023-01-24 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a rapid closure mechanism
US11576672B2 (en) 2019-12-19 2023-02-14 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a closure system including a closure member and an opening member driven by a drive screw
US11446029B2 (en) 2019-12-19 2022-09-20 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising projections extending from a curved deck surface
US11464512B2 (en) 2019-12-19 2022-10-11 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a curved deck surface
US11529139B2 (en) 2019-12-19 2022-12-20 Cilag Gmbh International Motor driven surgical instrument
US11911032B2 (en) 2019-12-19 2024-02-27 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a seating cam
US11529137B2 (en) 2019-12-19 2022-12-20 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising driver retention members
US11291447B2 (en) 2019-12-19 2022-04-05 Cilag Gmbh International Stapling instrument comprising independent jaw closing and staple firing systems
US11844520B2 (en) 2019-12-19 2023-12-19 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising driver retention members
US11931033B2 (en) 2019-12-19 2024-03-19 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a latch lockout
US11304696B2 (en) 2019-12-19 2022-04-19 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a powered articulation system
US11504122B2 (en) 2019-12-19 2022-11-22 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a nested firing member
WO2021174013A1 (en) * 2020-02-26 2021-09-02 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions using synthetic nanocarriers comprising immunosuppressant
CA3173528A1 (en) 2020-03-11 2021-09-16 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating forkhead box p3 (foxp3) gene expression
IL297274A (en) * 2020-04-14 2022-12-01 Selecta Biosciences Inc Methods and compositions for inducing autophagy
USD975278S1 (en) 2020-06-02 2023-01-10 Cilag Gmbh International Staple cartridge
USD975851S1 (en) 2020-06-02 2023-01-17 Cilag Gmbh International Staple cartridge
USD967421S1 (en) 2020-06-02 2022-10-18 Cilag Gmbh International Staple cartridge
USD975850S1 (en) 2020-06-02 2023-01-17 Cilag Gmbh International Staple cartridge
USD976401S1 (en) 2020-06-02 2023-01-24 Cilag Gmbh International Staple cartridge
USD974560S1 (en) 2020-06-02 2023-01-03 Cilag Gmbh International Staple cartridge
USD966512S1 (en) 2020-06-02 2022-10-11 Cilag Gmbh International Staple cartridge
US20220031346A1 (en) 2020-07-28 2022-02-03 Cilag Gmbh International Articulatable surgical instruments with articulation joints comprising flexible exoskeleton arrangements
US11779330B2 (en) 2020-10-29 2023-10-10 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a jaw alignment system
USD1013170S1 (en) 2020-10-29 2024-01-30 Cilag Gmbh International Surgical instrument assembly
US11717289B2 (en) 2020-10-29 2023-08-08 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an indicator which indicates that an articulation drive is actuatable
US11617577B2 (en) 2020-10-29 2023-04-04 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a sensor configured to sense whether an articulation drive of the surgical instrument is actuatable
US11931025B2 (en) 2020-10-29 2024-03-19 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a releasable closure drive lock
US11517390B2 (en) 2020-10-29 2022-12-06 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a limited travel switch
US11452526B2 (en) 2020-10-29 2022-09-27 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a staged voltage regulation start-up system
USD980425S1 (en) 2020-10-29 2023-03-07 Cilag Gmbh International Surgical instrument assembly
US11896217B2 (en) 2020-10-29 2024-02-13 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an articulation lock
US11844518B2 (en) 2020-10-29 2023-12-19 Cilag Gmbh International Method for operating a surgical instrument
US11534259B2 (en) 2020-10-29 2022-12-27 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising an articulation indicator
CN112480244A (zh) * 2020-11-24 2021-03-12 华科同济干细胞基因工程有限公司 一种抗过敏性纳米抗体组合物、抗体测定方法及喷雾剂
US11737751B2 (en) 2020-12-02 2023-08-29 Cilag Gmbh International Devices and methods of managing energy dissipated within sterile barriers of surgical instrument housings
US11944296B2 (en) 2020-12-02 2024-04-02 Cilag Gmbh International Powered surgical instruments with external connectors
US11678882B2 (en) 2020-12-02 2023-06-20 Cilag Gmbh International Surgical instruments with interactive features to remedy incidental sled movements
US11849943B2 (en) 2020-12-02 2023-12-26 Cilag Gmbh International Surgical instrument with cartridge release mechanisms
US11890010B2 (en) 2020-12-02 2024-02-06 Cllag GmbH International Dual-sided reinforced reload for surgical instruments
US11627960B2 (en) 2020-12-02 2023-04-18 Cilag Gmbh International Powered surgical instruments with smart reload with separately attachable exteriorly mounted wiring connections
US11653915B2 (en) 2020-12-02 2023-05-23 Cilag Gmbh International Surgical instruments with sled location detection and adjustment features
US11653920B2 (en) 2020-12-02 2023-05-23 Cilag Gmbh International Powered surgical instruments with communication interfaces through sterile barrier
US11744581B2 (en) 2020-12-02 2023-09-05 Cilag Gmbh International Powered surgical instruments with multi-phase tissue treatment
GB2603454A (en) 2020-12-09 2022-08-10 Ucl Business Ltd Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
CN112807425A (zh) * 2021-01-14 2021-05-18 南方医科大学深圳医院 一种tTIM融合蛋白疫苗、制备方法及应用
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
US11793514B2 (en) 2021-02-26 2023-10-24 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising sensor array which may be embedded in cartridge body
US11723657B2 (en) 2021-02-26 2023-08-15 Cilag Gmbh International Adjustable communication based on available bandwidth and power capacity
US11701113B2 (en) 2021-02-26 2023-07-18 Cilag Gmbh International Stapling instrument comprising a separate power antenna and a data transfer antenna
US11749877B2 (en) 2021-02-26 2023-09-05 Cilag Gmbh International Stapling instrument comprising a signal antenna
US11730473B2 (en) 2021-02-26 2023-08-22 Cilag Gmbh International Monitoring of manufacturing life-cycle
US11744583B2 (en) 2021-02-26 2023-09-05 Cilag Gmbh International Distal communication array to tune frequency of RF systems
US11925349B2 (en) 2021-02-26 2024-03-12 Cilag Gmbh International Adjustment to transfer parameters to improve available power
US11950779B2 (en) 2021-02-26 2024-04-09 Cilag Gmbh International Method of powering and communicating with a staple cartridge
US11980362B2 (en) 2021-02-26 2024-05-14 Cilag Gmbh International Surgical instrument system comprising a power transfer coil
US11751869B2 (en) 2021-02-26 2023-09-12 Cilag Gmbh International Monitoring of multiple sensors over time to detect moving characteristics of tissue
US11812964B2 (en) 2021-02-26 2023-11-14 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a power management circuit
US11950777B2 (en) 2021-02-26 2024-04-09 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising an information access control system
US11696757B2 (en) 2021-02-26 2023-07-11 Cilag Gmbh International Monitoring of internal systems to detect and track cartridge motion status
US11717291B2 (en) 2021-03-22 2023-08-08 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising staples configured to apply different tissue compression
US11737749B2 (en) 2021-03-22 2023-08-29 Cilag Gmbh International Surgical stapling instrument comprising a retraction system
US11806011B2 (en) 2021-03-22 2023-11-07 Cilag Gmbh International Stapling instrument comprising tissue compression systems
US11759202B2 (en) 2021-03-22 2023-09-19 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising an implantable layer
US11826042B2 (en) 2021-03-22 2023-11-28 Cilag Gmbh International Surgical instrument comprising a firing drive including a selectable leverage mechanism
US11826012B2 (en) 2021-03-22 2023-11-28 Cilag Gmbh International Stapling instrument comprising a pulsed motor-driven firing rack
US11723658B2 (en) 2021-03-22 2023-08-15 Cilag Gmbh International Staple cartridge comprising a firing lockout
US11896219B2 (en) 2021-03-24 2024-02-13 Cilag Gmbh International Mating features between drivers and underside of a cartridge deck
US11896218B2 (en) 2021-03-24 2024-02-13 Cilag Gmbh International Method of using a powered stapling device
US11903582B2 (en) 2021-03-24 2024-02-20 Cilag Gmbh International Leveraging surfaces for cartridge installation
US11786243B2 (en) 2021-03-24 2023-10-17 Cilag Gmbh International Firing members having flexible portions for adapting to a load during a surgical firing stroke
US11832816B2 (en) 2021-03-24 2023-12-05 Cilag Gmbh International Surgical stapling assembly comprising nonplanar staples and planar staples
US11849945B2 (en) 2021-03-24 2023-12-26 Cilag Gmbh International Rotary-driven surgical stapling assembly comprising eccentrically driven firing member
US11744603B2 (en) 2021-03-24 2023-09-05 Cilag Gmbh International Multi-axis pivot joints for surgical instruments and methods for manufacturing same
US11849944B2 (en) 2021-03-24 2023-12-26 Cilag Gmbh International Drivers for fastener cartridge assemblies having rotary drive screws
US11793516B2 (en) 2021-03-24 2023-10-24 Cilag Gmbh International Surgical staple cartridge comprising longitudinal support beam
US11857183B2 (en) 2021-03-24 2024-01-02 Cilag Gmbh International Stapling assembly components having metal substrates and plastic bodies
US11786239B2 (en) 2021-03-24 2023-10-17 Cilag Gmbh International Surgical instrument articulation joint arrangements comprising multiple moving linkage features
US11944336B2 (en) 2021-03-24 2024-04-02 Cilag Gmbh International Joint arrangements for multi-planar alignment and support of operational drive shafts in articulatable surgical instruments
EP4314292A1 (en) 2021-03-26 2024-02-07 MiNA Therapeutics Limited Tmem173 sarna compositions and methods of use
JP2024515626A (ja) 2021-04-16 2024-04-10 アスクレピオス バイオファーマシューティカル， インコーポレイテッド 血液脳関門を横断し低減された液性応答を惹起する合理的ポリプロイドａａｖビリオン
US11918217B2 (en) 2021-05-28 2024-03-05 Cilag Gmbh International Stapling instrument comprising a staple cartridge insertion stop
CN113425702B (zh) * 2021-06-25 2022-08-26 中国药科大学 应用微流控技术制备纳米颗粒、制备方法及装置和用途
EP4367242A2 (en) 2021-07-07 2024-05-15 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating secreted frizzled receptor protein 1 (sfrp1) gene expression
CA3171750A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Tim SONNTAG Mrnas for treatment or prophylaxis of liver diseases
US11877745B2 (en) 2021-10-18 2024-01-23 Cilag Gmbh International Surgical stapling assembly having longitudinally-repeating staple leg clusters
US11980363B2 (en) 2021-10-18 2024-05-14 Cilag Gmbh International Row-to-row staple array variations
US11957337B2 (en) 2021-10-18 2024-04-16 Cilag Gmbh International Surgical stapling assembly with offset ramped drive surfaces
US11937816B2 (en) 2021-10-28 2024-03-26 Cilag Gmbh International Electrical lead arrangements for surgical instruments
WO2023099884A1 (en) 2021-12-01 2023-06-08 Mina Therapeutics Limited Pax6 sarna compositions and methods of use
GB202117758D0 (en) 2021-12-09 2022-01-26 Ucl Business Ltd Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
WO2023144193A1 (en) 2022-01-25 2023-08-03 CureVac SE Mrnas for treatment of hereditary tyrosinemia type i
WO2023161350A1 (en) 2022-02-24 2023-08-31 Io Biotech Aps Nucleotide delivery of cancer therapy
WO2023170435A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Mina Therapeutics Limited Il10 sarna compositions and methods of use
CN115475255A (zh) * 2022-06-14 2022-12-16 澳门科技大学 一种酶响应型二氧化硅释纳米制剂、制备方法及应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100055189A1 (en) * 2008-08-29 2010-03-04 Hubbell Jeffrey A Nanoparticles for immunotherapy
US20100068261A1 (en) * 2003-12-02 2010-03-18 Cytimmune Sciences, Inc. Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies
US20100129439A1 (en) * 2008-10-12 2010-05-27 Frank Alexis Adjuvant Incorporation in Immunonanotherapeutics
US20110020388A1 (en) * 2009-05-27 2011-01-27 Selecta Biosciences, Inc. Targeted synthetic nanocarriers with ph sensitive release of immunomodulatory agents
US20110070153A1 (en) * 2008-08-13 2011-03-24 Searete, Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Artificial cells

Family Cites Families (305)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1995A (en) 1841-03-03 Latch of door and other locks
US934897A (en) 1907-08-08 1909-09-21 Frank Dutcher Fusee-cap.
US927297A (en) 1908-02-24 1909-07-06 Charles Tuckfield Engine.
US4946929A (en) 1983-03-22 1990-08-07 Massachusetts Institute Of Technology Bioerodible articles useful as implants and prostheses having predictable degradation rates
US6309669B1 (en) 1984-03-16 2001-10-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Therapeutic treatment and prevention of infections with a bioactive materials encapsulated within a biodegradable-biocompatible polymeric matrix
US4638045A (en) 1985-02-19 1987-01-20 Massachusetts Institute Of Technology Non-peptide polyamino acid bioerodible polymers
US4806621A (en) 1986-01-21 1989-02-21 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible, bioerodible, hydrophobic, implantable polyimino carbonate article
US5736372A (en) 1986-11-20 1998-04-07 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable synthetic polymeric fibrous matrix containing chondrocyte for in vivo production of a cartilaginous structure
CA1340581C (en) 1986-11-20 1999-06-08 Joseph P. Vacanti Chimeric neomorphogenesis of organs by controlled cellular implantation using artificial matrices
US5759830A (en) 1986-11-20 1998-06-02 Massachusetts Institute Of Technology Three-dimensional fibrous scaffold containing attached cells for producing vascularized tissue in vivo
ATE81467T1 (de) 1987-02-24 1992-10-15 Xoma Corp Immunosuppression bei der auf immunotoxin basierten behandlung von menschen.
US5912017A (en) 1987-05-01 1999-06-15 Massachusetts Institute Of Technology Multiwall polymeric microspheres
US5019379A (en) 1987-07-31 1991-05-28 Massachusetts Institute Of Technology Unsaturated polyanhydrides
JP2670680B2 (ja) 1988-02-24 1997-10-29 株式会社ビーエムジー 生理活性物質含有ポリ乳酸系微小球およびその製造法
US5010167A (en) 1989-03-31 1991-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Poly(amide-and imide-co-anhydride) for biological application
US5268455A (en) * 1989-05-25 1993-12-07 Genentech, Inc. Process for making biologically active polypeptides based on transforming growth factor-βsequences
US5399665A (en) 1992-11-05 1995-03-21 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymers for cell transplantation
US5679347A (en) 1992-12-10 1997-10-21 Brigham And Women's Hospital Methods of isolating CD1-presented antigens, vaccines comprising CD1-presented antigens, and cell lines for use in said methods
US5928647A (en) 1993-01-11 1999-07-27 Dana-Farber Cancer Institute Inducing cytotoxic T lymphocyte responses
US5512600A (en) 1993-01-15 1996-04-30 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of bonded fiber structures for cell implantation
US5514378A (en) 1993-02-01 1996-05-07 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible polymer membranes and methods of preparation of three dimensional membrane structures
WO1995003035A1 (en) 1993-07-23 1995-02-02 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes with enhanced stability for oral delivery
US5565215A (en) 1993-07-23 1996-10-15 Massachusettes Institute Of Technology Biodegradable injectable particles for imaging
US5543158A (en) 1993-07-23 1996-08-06 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable injectable nanoparticles
US5468729A (en) 1993-10-26 1995-11-21 Alpha 1 Biomedicals Method for treatment of autoimmune hepatitis
JP2930421B2 (ja) 1994-02-28 1999-08-03 メディノヴァ メディカル コンサルティング ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 薬剤組成物、その製造方法及びその使用方法
WO1995031480A1 (en) 1994-05-18 1995-11-23 S.P.I. Synthetic Peptides Incorporated Heterodimer polypeptide immunogen carrier composition and method
US6007845A (en) 1994-07-22 1999-12-28 Massachusetts Institute Of Technology Nanoparticles and microparticles of non-linear hydrophilic-hydrophobic multiblock copolymers
EP0804076A4 (en) 1994-10-19 1998-10-21 Genetic Therapy Inc GENTHERAPY THROUGH SIMULTANEOUS AND REPEATED ADMINISTRATION OF ADENOVIRUS AND IMMUNE SUPPRESSIVES
US5716404A (en) 1994-12-16 1998-02-10 Massachusetts Institute Of Technology Breast tissue engineering
DE69630514D1 (de) 1995-01-05 2003-12-04 Univ Michigan Oberflächen-modifizierte nanopartikel und verfahren für ihre herstellung und verwendung
US6251957B1 (en) 1995-02-24 2001-06-26 Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of reducing an immune response to a recombinant virus
US6123727A (en) 1995-05-01 2000-09-26 Massachusetts Institute Of Technology Tissue engineered tendons and ligaments
JP3462313B2 (ja) 1995-08-24 2003-11-05 キッコーマン株式会社 変異型ウリカーゼ、変異型ウリカーゼ遺伝子、新規な組み換え体ｄｎａ及び変異型ウリカーゼの製造法
EP0850051A2 (en) 1995-08-31 1998-07-01 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition for sustained release of an agent
US6095148A (en) 1995-11-03 2000-08-01 Children's Medical Center Corporation Neuronal stimulation using electrically conducting polymers
US5902599A (en) 1996-02-20 1999-05-11 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymer networks for use in orthopedic and dental applications
WO1998002441A2 (en) 1996-07-12 1998-01-22 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Non immunosuppressive antifungal rapalogs
EP0889954A1 (en) 1996-09-03 1999-01-13 Health Research, Inc. Treatment of antigen presenting cells to modulate antigen presenting cell function
US6368598B1 (en) 1996-09-16 2002-04-09 Jcrt Radiation Oncology Support Services, Inc. Drug complex for treatment of metastatic prostate cancer
US6060082A (en) 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
US5837752A (en) 1997-07-17 1998-11-17 Massachusetts Institute Of Technology Semi-interpenetrating polymer networks
DE69840600D1 (de) 1997-09-16 2009-04-09 Univ Oregon Health & Science Rekombinante mhc-moleküle welche nützlich sind für die manipulation von antigen-spezifischen t-zellen
EP1024829B1 (en) 1997-10-30 2008-12-17 Laboratorios LETI, S.L. Tolerogenic fragments of natural allergens
US6018817A (en) 1997-12-03 2000-01-25 International Business Machines Corporation Error correcting code retrofit method and apparatus for multiple memory configurations
US6254890B1 (en) 1997-12-12 2001-07-03 Massachusetts Institute Of Technology Sub-100nm biodegradable polymer spheres capable of transporting and releasing nucleic acids
US6197229B1 (en) 1997-12-12 2001-03-06 Massachusetts Institute Of Technology Method for high supercoiled DNA content microspheres
JP2001526900A (ja) 1997-12-23 2001-12-25 イントロヘーネ ベスローテン フェンノートシャップ 標的細胞の染色体ｄｎａへの外来遺伝子情報の組み込みに有用な、アデノ随伴ウイルスおよびアデノウイルスのキメラ組換えウイルス
WO1999034826A1 (en) 1998-01-09 1999-07-15 Circassia Limited Methods and compositions for desensitisation
FR2775435B1 (fr) 1998-02-27 2000-05-26 Bioalliance Pharma Nanoparticules comprenant au moins un polymere et au moins un compose apte a complexer un ou plusieurs principes actifs
US6506577B1 (en) 1998-03-19 2003-01-14 The Regents Of The University Of California Synthesis and crosslinking of catechol containing copolypeptides
US6632922B1 (en) 1998-03-19 2003-10-14 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
US6686446B2 (en) 1998-03-19 2004-02-03 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
SE9801288D0 (sv) 1998-04-14 1998-04-14 Astra Ab Vaccine delivery system and metod of production
US6436392B1 (en) 1998-05-20 2002-08-20 University Of Iowa Research Foundation Adeno-associated virus vectors
DE19827164A1 (de) 1998-06-18 1999-12-23 Merck Patent Gmbh Katalytisch Titan(IV)-oxid vermittelte geminale symmetrische Dialkylierung von Carbonsäureamiden
US6306640B1 (en) 1998-10-05 2001-10-23 Genzyme Corporation Melanoma antigenic peptides
DE69918146T2 (de) 1998-10-05 2005-07-07 Pharmexa A/S Verfahren zur therapeutischen impfung
US6759237B1 (en) 1998-11-05 2004-07-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus serotype 1 nucleic acid sequences, vectors and host cells containing same
WO2000032626A1 (en) 1998-11-25 2000-06-08 Regents Of The University Of Minnesota Methods of using epitope peptides of human pathogens
US6153217A (en) 1999-01-22 2000-11-28 Biodelivery Sciences, Inc. Nanocochleate formulations, process of preparation and method of delivery of pharmaceutical agents
US6558951B1 (en) 1999-02-11 2003-05-06 3M Innovative Properties Company Maturation of dendritic cells with immune response modifying compounds
US7238368B2 (en) 1999-04-23 2007-07-03 Alza Corporation Releasable linkage and compositions containing same
US7390780B2 (en) 1999-04-23 2008-06-24 Alza Corporation Gene delivery mediated by liposome-DNA complex with cleavable peg surface modification
EP1880736A1 (en) 1999-04-23 2008-01-23 Alza Corporation Releasable linkage and composition containing same
US6800296B1 (en) 1999-05-19 2004-10-05 Massachusetts Institute Of Technology Modification of surfaces using biological recognition events
DE19951970A1 (de) * 1999-10-28 2001-05-03 Bionetworks Gmbh Arzneimittel für die Toleranzinduktion
CN1406140A (zh) 2000-02-28 2003-03-26 吉倪塞思公司 纳米胶囊包封系统与方法
US20010055593A1 (en) 2000-03-14 2001-12-27 Joseph Sypek Use of rapamycin and agents that inhibit B7 activity in immunomodulation
WO2001085208A2 (en) 2000-05-05 2001-11-15 Cytos Biotechnology Ag Molecular antigen arrays and vaccines
AU2001265187A1 (en) 2000-05-30 2001-12-11 Baylor College Of Medicine Chimeric viral vectors for gene therapy
EP1290205B1 (en) 2000-06-01 2006-03-01 University Of North Carolina At Chapel Hill Duplexed parvovirus vectors
US20040204379A1 (en) 2000-06-19 2004-10-14 Cheng Seng H. Combination enzyme replacement, gene therapy and small molecule therapy for lysosomal storage diseases
US20020095135A1 (en) 2000-06-19 2002-07-18 David Meeker Combination enzyme replacement, gene therapy and small molecule therapy for lysosomal storage diseases
US20020014242A1 (en) 2000-07-31 2002-02-07 Abraham Scaria Use of rapamycin to inhibit immune response and induce tolerance to gene therapy vector and encoded transgene products
CA2319928A1 (en) 2000-09-18 2002-03-18 Vasogen Ireland Limited Apoptosis-mimicking synthetic entities and use thereof in medical treatments
GB0025414D0 (en) 2000-10-16 2000-11-29 Consejo Superior Investigacion Nanoparticles
US7097837B2 (en) 2001-02-19 2006-08-29 Pharmexa A/S Synthetic vaccine agents
AU2002338571A1 (en) 2001-04-11 2002-11-11 Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for suppressing immune responses
US6913915B2 (en) 2001-08-02 2005-07-05 Phoenix Pharmacologics, Inc. PEG-modified uricase
US6818732B2 (en) 2001-08-30 2004-11-16 The Regents Of The University Of California Transition metal initiators for controlled poly (beta-peptide) synthesis from beta-lactam monomers
CN1294268C (zh) 2001-09-03 2007-01-10 上海三维生物技术有限公司 可在肿瘤细胞内特异性复制并扩散的重组腺病毒载体
PT1436321E (pt) * 2001-10-19 2006-10-31 Isotechnika Inc Sintese de analogos de ciclosporina
ES2602352T3 (es) 2001-12-17 2017-02-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Secuencias de serotipo 8 de virus adenoasociado (VAA), vectores que las contienen y usos de las mismas
GB0207440D0 (en) 2002-03-28 2002-05-08 Ppl Therapeutics Scotland Ltd Tolerogenic antigen-presenting cells
US20040038303A1 (en) 2002-04-08 2004-02-26 Unger Gretchen M. Biologic modulations with nanoparticles
US7485314B2 (en) 2002-05-06 2009-02-03 Los Angeles Biomedical Research Institute At Harbor-Ucla Medical Center Induction of antigen specific immunologic tolerance
AU2003228768B2 (en) 2002-05-22 2009-02-05 The Cleveland Clinic Foundation Induction and maintenance of tolerance to composite tissue allografts
ATE469135T1 (de) 2002-05-30 2010-06-15 Scripps Research Inst Kupferkatalysierte ligierung von aziden und acetylenen
AU2003237416A1 (en) 2002-06-04 2003-12-19 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Novel tolerogenic dendritic cells and therapeutic uses therefor
JP2005532067A (ja) * 2002-07-03 2005-10-27 コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド 刺激性免疫応答用の核酸組成物
US20060121029A1 (en) * 2002-08-30 2006-06-08 Hiroshi Shiku Method and composition for regulating the activity of regulatory t cells
US9809654B2 (en) 2002-09-27 2017-11-07 Vaccinex, Inc. Targeted CD1d molecules
DK1565183T3 (da) 2002-11-29 2008-12-01 Maria Grazia Roncarolo Rapamycin og IL-10 til behandling af autoimmune sygdomme
WO2004071493A1 (en) 2003-02-17 2004-08-26 Peter Burkhard Peptidic nanoparticles as drug delivery and antigen display systems
US7510872B2 (en) 2003-02-26 2009-03-31 Nationwide Children's Hospital Recombinant adeno-associated virus production
JP4914209B2 (ja) * 2003-03-14 2012-04-11 ワイス ヒトｉｌ−２１受容体に対する抗体および該抗体の使用
AU2004224762B2 (en) 2003-03-26 2009-12-24 Kuros Us Llc Packaging of immunostimulatory oligonucleotides into virus-like particles: method of preparation and use
US7731967B2 (en) 2003-04-30 2010-06-08 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Compositions for inducing immune responses
US7186699B2 (en) 2003-06-03 2007-03-06 Cell Genesys, Inc. Method for treating cancer by vector-mediated delivery of one or more anti-angiogenic or pro-apoptotic genes
US7727969B2 (en) 2003-06-06 2010-06-01 Massachusetts Institute Of Technology Controlled release nanoparticle having bound oligonucleotide for targeted delivery
EP1486567A1 (en) 2003-06-11 2004-12-15 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Improved adeno-associated virus (AAV) vector for gene therapy
US20060251711A1 (en) 2003-08-28 2006-11-09 Vgsk Technologies, Inc. Sterically stabilized carrier for aerosol therapeutics, compositions and methods for treating diseases of the respiratory tract of a mammal
US7943179B2 (en) 2003-09-23 2011-05-17 Massachusetts Institute Of Technology pH triggerable polymeric particles
DE10347710B4 (de) 2003-10-14 2006-03-30 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Rekombinante Impfstoffe und deren Verwendung
US20080160089A1 (en) 2003-10-14 2008-07-03 Medivas, Llc Vaccine delivery compositions and methods of use
WO2005055949A2 (en) 2003-12-09 2005-06-23 The Children's Hospital Of Philadelphia Sustained release preparations composed of biocompatible complex microparticles
MXPA06006738A (es) 2003-12-19 2006-08-31 Univ North Carolina Metodos para fabricar micro- y nano-estructuras aisladas utilizando litografia suave o de impresion.
BRPI0509755A (pt) * 2004-04-08 2007-10-16 Applied Research Systems composição compreendendo um inibidor de jnk e ciclosporina
CA2566506A1 (en) 2004-06-01 2005-12-15 Innogenetics N.V. Peptides for inducing a ctl and/or htl response to hepatitis c virus
US7713550B2 (en) 2004-06-15 2010-05-11 Andrx Corporation Controlled release sodium valproate formulation
US7534448B2 (en) 2004-07-01 2009-05-19 Yale University Methods of treatment with drug loaded polymeric materials
WO2006014579A2 (en) 2004-07-08 2006-02-09 The Regents Of California Enhancing class i antigen presentation with synthetic sequences
FR2874384B1 (fr) 2004-08-17 2010-07-30 Genethon Vecteur viral adeno-associe pour realiser du saut d'exons dans un gene codant une proteine a domaines dispensables
GB0421296D0 (en) 2004-09-24 2004-10-27 Angiogene Pharm Ltd Bioreductively-activated prodrugs
WO2006041890A2 (en) 2004-10-05 2006-04-20 Tanox, Inc. Treatment and prevention of hypersensitivity and/or anaphylaxis with anti-ige antibodies in patients receiving replacement therapy
WO2007001448A2 (en) 2004-11-04 2007-01-04 Massachusetts Institute Of Technology Coated controlled release polymer particles as efficient oral delivery vehicles for biopharmaceuticals
JP2008524239A (ja) 2004-12-15 2008-07-10 エラン ファーマ インターナショナル リミティド ナノ粒子のタクロリムス製剤
US20090028948A1 (en) 2004-12-31 2009-01-29 Iceutica Pty Ltd Nanoparticle composition and methods of synthesis thereof
GB0504206D0 (en) 2005-03-01 2005-04-06 Glaxo Group Ltd Combination therapy
EP1858511A1 (en) 2005-03-08 2007-11-28 LifeCycle Pharma A/S Pharmaceutical compositions comprising sirolimus and/or an analogue thereof
EP1868576A2 (en) 2005-03-17 2007-12-26 Elan Pharma International Limited Injectable compositions of nanoparticulate immunosuppressive compounds
US7884109B2 (en) 2005-04-05 2011-02-08 Wyeth Llc Purine and imidazopyridine derivatives for immunosuppression
US8173167B2 (en) * 2005-04-12 2012-05-08 Wisconsin Alumni Research Foundation Micelle composition of polymer and passenger drug
US20080305161A1 (en) 2005-04-13 2008-12-11 Pfizer Inc Injectable depot formulations and methods for providing sustained release of nanoparticle compositions
WO2006122223A2 (en) 2005-05-10 2006-11-16 Emory University Strategies for delivery of active agents using micelles and particles
TW200711649A (en) 2005-06-17 2007-04-01 Combinatorx Inc Combination therapy for the treatment of immunoinflammatory disorders
MX2007016039A (es) * 2005-06-17 2008-10-27 Univ North Carolina Metodos, sistemas y materiales de fabricacion de nanoparticulas.
WO2007003054A1 (en) 2005-07-06 2007-01-11 Shoichet Molly S Method of biomolecule immobilization on polymers using click-type chemistry
JPWO2007024026A1 (ja) 2005-08-25 2009-03-05 明石　満 Ｔ細胞認識エピトープペプチドを固定化又は内包化した生分解性ナノ粒子
CN1979166A (zh) 2005-11-30 2007-06-13 北京有色金属研究总院 一种制备免疫检测用纳米胶体金的工艺方法及其反应装置
CA2631760A1 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Robert A. Brodsky Use of high-dose oxazaphosphorine drugs for treating immune disorders
US20070128289A1 (en) 2005-12-07 2007-06-07 Zhao Jonathon Z Nano-and/or micro-particulate formulations for local injection-based treatment of vascular diseases
MX2008007287A (es) 2005-12-08 2008-10-27 Univ Louisville Res Found Metodos y composiciones para expandir celulas reguladoras t.
AU2006325225B2 (en) 2005-12-14 2013-07-04 Cytos Biotechnology Ag Immunostimulatory nucleic acid packaged particles for the treatment of hypersensitivity
US9267937B2 (en) 2005-12-15 2016-02-23 Massachusetts Institute Of Technology System for screening particles
US20100028450A1 (en) 2006-01-25 2010-02-04 The Board Of Trustees Of The University Of Illinoi S Tolerogenic biodegradable artificial antigen presenting system
DK1984007T3 (en) 2006-02-13 2015-12-07 Oncolytics Biotech Inc Application of Low-dose local immunosuppression for amplification of viral oncolytic therapy
US8021689B2 (en) * 2006-02-21 2011-09-20 Ecole Polytechnique Federale de Lausanne (“EPFL”) Nanoparticles for immunotherapy
AU2007221154A1 (en) 2006-02-24 2007-09-07 Novartis Ag Microparticles containing biodegradable polymer and cationic polysaccharide for use in immunogenic compositions
US8568487B2 (en) 2006-02-27 2013-10-29 Biomet Manufacturing, Llc Patient-specific hip joint devices
TW200806789A (en) 2006-03-27 2008-02-01 Globeimmune Inc RAS mutation and compositions and methods related thereto
CA2648099C (en) 2006-03-31 2012-05-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc System for targeted delivery of therapeutic agents
US20070254897A1 (en) 2006-04-28 2007-11-01 Resolvyx Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment of cardiovascular disease
CN101573141B (zh) 2006-05-15 2016-05-04 麻省理工学院 用于功能性颗粒的聚合物
WO2007137117A2 (en) 2006-05-17 2007-11-29 Massachusetts Institute Of Technology Aptamer-directed drug delivery
MX2008015529A (es) 2006-06-12 2009-01-13 Cytos Biotechnology Ag Procesos para empacar oligonucleotidos en particulas similares a virus de bacteriofagos de arn.
WO2007150030A2 (en) 2006-06-23 2007-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Microfluidic synthesis of organic nanoparticles
EP1880729A1 (en) 2006-07-20 2008-01-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of soluble CD160 to suppress immunity
WO2008019142A2 (en) 2006-08-04 2008-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Oligonucleotide systems for targeted intracellular delivery
US20080171059A1 (en) 2006-08-07 2008-07-17 Shanshan Wu Howland Methods and compositions for increased priming of t-cells through cross-presentation of exogenous antigens
CN101500937A (zh) 2006-08-11 2009-08-05 万能药生物有限公司 用于递送活性成分的粒子及其制备方法和组合物
SI2051987T1 (sl) 2006-08-18 2015-02-27 Argos Therapeutics, Inc. Uporaba cd83 v kombinacijskih terapijah
US20120269774A1 (en) 2006-09-21 2012-10-25 Medistem Laboratories, Inc Allogeneic stem cell transplants in non-conditioned recipients
MX2009003680A (es) 2006-10-05 2009-07-17 Univ Johns Hopkins Formulaciones orales, parenterales y topicas dispersables en agua para farmacos deficientemente solubles en agua con el uso de nanoparticulas polimericas inteligentes.
CN101646418B (zh) * 2006-10-12 2013-07-17 昆士兰大学 调节免疫应答的组合物和方法
EP3590503A1 (en) * 2006-10-12 2020-01-08 The University of Queensland Compositions and methods for modulating immune responses
US20100112077A1 (en) 2006-11-06 2010-05-06 Abraxis Bioscience, Llc Nanoparticles of paclitaxel and albumin in combination with bevacizumab against cancer
WO2008147456A2 (en) 2006-11-20 2008-12-04 Massachusetts Institute Of Technology Drug delivery systems using fc fragments
WO2008064357A2 (en) 2006-11-22 2008-05-29 University Of Florida Research Foundation, Inc. Nanoparticles for protection of cells from oxidative stress
WO2008069942A2 (en) 2006-12-05 2008-06-12 Biogen Idec Ma Inc. Novel methods of enhancing delivery of a gene therapy vector using steroids
WO2008071774A1 (en) 2006-12-14 2008-06-19 Cytos Biotechnology Ag Purification process for coat protein of rna bacteriophages
ES2533566T3 (es) 2006-12-29 2015-04-13 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Diana diagnóstica y terapéutica para enfermedades autoinmunitarias y sus usos
CA2678618C (en) 2007-02-21 2019-03-12 Vaccinex, Inc. Modulation of nkt cell activity with antigen-loaded cd1d molecules
KR20080078204A (ko) 2007-02-22 2008-08-27 크레아젠 주식회사 면역억제능이 증가된 간엽줄기세포-매개 자가유래수지상세포
PT2481409T (pt) 2007-03-07 2018-10-18 Abraxis Bioscience Llc Nanopartícula que compreende rapamicina e albumina como agente anticancerígeno
CN101678090B (zh) 2007-03-07 2012-04-11 乌第有限合伙公司 用于预防和治疗自身免疫病的组合物和方法
CN101730526A (zh) 2007-03-07 2010-06-09 阿布拉科斯生物科学有限公司 作为抗癌剂的包含雷帕霉素和白蛋白的纳米颗粒
EP2144600A4 (en) 2007-04-04 2011-03-16 Massachusetts Inst Technology POLY (AMINIC ACID) TARGET MOLECULES
CA2683415C (en) * 2007-04-04 2020-12-08 Sigmoid Pharma Limited An oral pharmaceutical composition
WO2008124634A1 (en) 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Polymer-encapsulated reverse micelles
WO2008124165A2 (en) 2007-04-09 2008-10-16 Chimeros, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
EP2146747A1 (en) 2007-04-12 2010-01-27 Emory University Novel strategies for delivery of active agents using micelles and particles
EP1982729A1 (en) 2007-04-20 2008-10-22 Cytos Biotechnology AG Vaccination Regimen for B-Cell Vaccines
WO2008150868A1 (en) 2007-05-29 2008-12-11 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Methods for inducing therapeutic t cells for immune diseases
US20080311140A1 (en) 2007-05-29 2008-12-18 Baylor College Of Medicine Antigen specific immunosuppression by dendritic cell therapy
EP2757109B1 (en) 2007-05-31 2019-07-10 Academisch Ziekenhuis Leiden h.o.d.n. LUMC Hpv epitopes targeted by t cells infiltrating cervical malignancies for use in vaccines
EA200901621A1 (ru) 2007-06-05 2010-06-30 Новартис Аг Индукция толерогенного фенотипа у зрелых дендритных клеток
US20090004259A1 (en) 2007-06-14 2009-01-01 Consejo Nacional De Investigaciones Cientificas Y Tecnicas (Conicet) Methods of preparing a therapeutic formulation comprising galectin-induced tolerogenic dendritic cells
EA018708B1 (ru) 2007-07-09 2013-10-30 Астразенека Аб ПРОИЗВОДНЫЕ МОРФОЛИНОПИРИМИДИНА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ, СВЯЗАННЫХ С mTOR КИНАЗОЙ И/ИЛИ PI3K
GB0714963D0 (en) 2007-08-01 2007-09-12 Novartis Ag Compositions comprising antigens
SI2083856T1 (sl) 2007-08-15 2011-02-28 Circassia Ltd Peptidi za desenzibilizacijo proti alergijam
WO2009038685A1 (en) 2007-09-18 2009-03-26 The Scripps Research Institute Ligands for copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition reactions
JP2011520769A (ja) 2007-09-21 2011-07-21 サイトイミューン サイエンシズ インコーポレイテッド ナノ治療コロイド金属組成物および方法
EP2620157A3 (en) 2007-10-12 2013-10-16 Massachusetts Institute of Technology Vaccine nanotechnology
WO2009062502A1 (en) 2007-11-13 2009-05-22 Dandrit Biotech A/S Method for generating tolerogenic dendritic cells employing decreased temperature
US20090142318A1 (en) 2007-11-30 2009-06-04 Therakos, Inc. METHOD TO EXPAND nTREG CELLS USING p70 S6 KINASE ANTAGONIST
US8404658B2 (en) 2007-12-31 2013-03-26 Nanocor Therapeutics, Inc. RNA interference for the treatment of heart failure
JP5474831B2 (ja) 2008-02-08 2014-04-16 テルモ株式会社 生理活性物質管腔内制御送達用薬剤送達装置およびその作成方法
WO2009106999A2 (en) 2008-02-28 2009-09-03 Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung Des Öffentlichen Rechts Hollow nanoparticles and uses thereof
EP2262480B1 (en) 2008-03-04 2018-02-14 Liquidia Technologies, Inc. Immunomodulator particles
US9669057B2 (en) * 2008-04-25 2017-06-06 Duke University Regulatory B cells and their uses
EP2300102B1 (en) 2008-05-15 2014-01-08 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory sequences containing CpG for use in the treatment of allergic rhinitis
WO2009145238A1 (ja) * 2008-05-27 2009-12-03 国立大学法人名古屋大学 免疫調節剤及びその利用
US20090297621A1 (en) 2008-06-03 2009-12-03 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Microparticles For The Treatment Of Disease
US8613951B2 (en) * 2008-06-16 2013-12-24 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles with mTor inhibitors and methods of making and using same
JP2012501965A (ja) 2008-06-16 2012-01-26 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 薬剤を装填したポリマーナノ粒子及びその製造方法と使用方法
JP2011530562A (ja) 2008-08-11 2011-12-22 グラクソスミスクライン エルエルシー アレルギー性、炎症性及び感染性疾患治療用のプリン誘導体
UA103195C2 (ru) 2008-08-11 2013-09-25 Глаксосмитклайн Ллк Производные пурина для применения в лечении аллергий, воспалительных и инфекционных заболеваний
WO2010018130A1 (en) 2008-08-11 2010-02-18 Smithkline Beecham Corporation Purine derivatives for use in the treatment of allergic, inflammatory and infectious diseases
WO2010018132A1 (en) 2008-08-11 2010-02-18 Smithkline Beecham Corporation Compounds
WO2010018384A1 (en) 2008-08-15 2010-02-18 Circassia Limited T-cell antigen peptide from allergen for stimulation of il-10 production
EP2341953B1 (en) 2008-09-04 2018-11-21 The General Hospital Corporation Hydrogels for vocal cord and soft tissue augmentation and repair
CN101676291B (zh) 2008-09-18 2012-05-09 上海海和药物研究开发有限公司 一类雷帕霉素碳酸酯类似物、其药物组合物及其制备方法和用途
US8889124B2 (en) 2008-09-25 2014-11-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Tolerogenic populations of dendritic cells
US10369204B2 (en) 2008-10-02 2019-08-06 Dako Denmark A/S Molecular vaccines for infectious disease
US8277812B2 (en) 2008-10-12 2012-10-02 Massachusetts Institute Of Technology Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen
US8591905B2 (en) * 2008-10-12 2013-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nicotine immunonanotherapeutics
US8343497B2 (en) * 2008-10-12 2013-01-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics
JP5552630B2 (ja) 2008-10-24 2014-07-16 学校法人 聖マリアンナ医科大学 Ｈｔｌｖ−ｉ関連脊髄症を治療または予防するための医薬、およびｈｔｌｖ−ｉ関連脊髄症の患者に対する抗体療法の効果を試験する方法
US20120015899A1 (en) 2008-10-25 2012-01-19 Plant Bioscience, Limited Modified plant virus particles and uses therefor
WO2010056143A1 (en) 2008-11-13 2010-05-20 Instituto De Medicina Molecular The use of adjuvant to facilitate the induction of immune tolerance
JP2012512175A (ja) 2008-12-15 2012-05-31 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 治療薬を徐放するための長時間循環性ナノ粒子
US20100160089A1 (en) * 2008-12-19 2010-06-24 Tzu-Wei Lin Appapatus and method for providing golfing information
CN102325546A (zh) 2009-01-20 2012-01-18 西北大学 用于诱导抗原-特异性耐受的组合物和方法
EP2620447B1 (en) 2009-02-04 2015-09-09 Universität Leipzig Vector(s) containing an inducible gene encoding a CDK4/CDK6 inhibitor useful for treating neurodegenerative disorders
JP5746053B2 (ja) * 2009-02-05 2015-07-08 サーカッシア リミテッド ワクチン用ペプチド
KR20100099849A (ko) 2009-03-04 2010-09-15 동국대학교 산학협력단 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2의 억제제를 함유한 아토피 피부염 치료용 조성물
US8679837B2 (en) 2009-04-02 2014-03-25 University Of Florida Research Foundation, Inc. Inducible system for highly efficient production of recombinant Adeno-associated virus (rAAV) vectors
GB0906159D0 (en) * 2009-04-09 2009-05-20 Summit Corp Plc Drug combination for the treatment of proteostatic diseases
KR20120022984A (ko) 2009-04-21 2012-03-12 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. Ｔｈ１ 편향 반응을 제공하는 면역나노치료법
US20100273220A1 (en) 2009-04-22 2010-10-28 Massachusetts Institute Of Technology Innate immune suppression enables repeated delivery of long rna molecules
EA024697B1 (ru) 2009-04-27 2016-10-31 Иммурон Лимитед Применение композиции, содержащей обогащенный анти-lps-антителами иммуноглобулиновый препарат, для лечения заболеваний печени
PL398781A1 (pl) 2009-06-25 2012-11-19 Savient Pharmaceuticals, Inc. Sposoby i zestawy do prognozowania ryzyka wystapienia reakcji na wlew oraz zaniku odpowiedzi której posrednicza przeciwciala poprzez monitorowanie kwasu moczowego w surowicy podczas terapii z zastosowaniem pegylowanej urykazy
EP3058953A1 (en) 2009-07-07 2016-08-24 The Research Foundation Of State University Of New York Lipidic compositions for induction of immune tolerance
CN107617110A (zh) 2009-08-26 2018-01-23 西莱克塔生物科技公司 诱导t细胞辅助的组合物
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
EP2305277A1 (en) 2009-09-18 2011-04-06 Forskarpatent I Syd AB Use of tolerogenic dendritic cells in treatment and prevention of atherosclerosis
CN101703781A (zh) 2009-10-28 2010-05-12 陕西北美基因股份有限公司 一种免疫抑制剂的磁性载药方法
KR101267813B1 (ko) 2009-12-30 2013-06-04 주식회사 삼양바이오팜 향상된 수용해도를 갖는 라파마이신 함유 고분자나노입자 주사제형 조성물 및 그 제조방법, 및 방사선 요법과 병용하기 위한 항암 조성물
US20110171248A1 (en) 2010-01-08 2011-07-14 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic virus-like particles conjugated to human papillomavirus capsid peptides for use as vaccines
WO2011097511A1 (en) 2010-02-05 2011-08-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services REGULATORY B CELLS (tBREGS) AND THEIR USE
US20130195919A1 (en) 2010-03-05 2013-08-01 President And Fellows Of Harvard College Induced dendritic cell compositions and uses thereof
US20110262491A1 (en) 2010-04-12 2011-10-27 Selecta Biosciences, Inc. Emulsions and methods of making nanocarriers
US20110272836A1 (en) 2010-04-12 2011-11-10 Selecta Biosciences, Inc. Eccentric vessels
US8927514B2 (en) 2010-04-30 2015-01-06 City Of Hope Recombinant adeno-associated vectors for targeted treatment
JP5904645B2 (ja) 2010-05-07 2016-04-13 ゾーマ （ユーエス） リミテッド ライアビリティ カンパニー ＩＬ−１β関連病態の治療のための方法
AU2011258156B2 (en) 2010-05-26 2016-11-24 Selecta Biosciences, Inc. Multivalent synthetic nanocarrier vaccines
RU2577278C2 (ru) 2010-06-07 2016-03-10 АБРАКСИС БАЙОСАЙЕНС, ЭлЭлСи Способы комбинированной терапии для лечения пролиферативных заболеваний
EP2600878A4 (en) 2010-08-04 2014-06-11 Univ Duke REGULATORY B-CELLS AND ITS USES
JP6017422B2 (ja) 2010-08-10 2016-11-02 エコール・ポリテクニーク・フェデラル・ドゥ・ローザンヌ（ウペエフエル）Ｅｃｏｌｅ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｑｕｅ Ｆｅｄｅｒａｌｅ ｄｅ Ｌａｕｓａｎｎｅ （ＥＰＦＬ） 赤血球結合療法
AU2011291522A1 (en) 2010-08-20 2013-01-24 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarrier vaccines comprising peptides obtained or derived from human influenza A virus M2E
KR20130098308A (ko) 2010-08-23 2013-09-04 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 항원에 대한 면역 반응을 유도하기 위한 표적화 다중 에피토프 투여형
US9636309B2 (en) 2010-09-09 2017-05-02 Micell Technologies, Inc. Macrolide dosage forms
JP2013540162A (ja) 2010-10-22 2013-10-31 ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファンデーション インコーポレーティッド 抗原特異的な寛容を誘導する微粒子およびその使用
EP2640190A4 (en) 2010-11-05 2016-05-11 Selecta Biosciences Inc MODIFIED NICOTINIC COMPOUNDS AND ASSOCIATED METHODS
WO2012092552A1 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers with reactive groups that release biologically active agents
BR112013020273A2 (pt) 2011-02-08 2016-10-18 Charlotte Mecklenburg Hospital oligonucleotídeos antissenso
US10392632B2 (en) 2011-02-14 2019-08-27 The Children's Hospital Of Philadelphia AAV8 vector with enhanced functional activity and methods of use thereof
US8654487B2 (en) 2011-03-11 2014-02-18 Siemens Industry, Inc. Methods, systems, and apparatus and for detecting parallel electrical arc faults
AU2012236937B2 (en) 2011-03-25 2017-06-08 Selecta Biosciences, Inc. Osmotic mediated release synthetic nanocarriers
US20140155469A1 (en) 2011-04-19 2014-06-05 The Research Foundation Of State University Of New York Adeno-associated-virus rep sequences, vectors and viruses
EP3699286A1 (en) 2011-04-20 2020-08-26 The Trustees of the University of Pennsylvania Regimens and compositions for aav-mediated passive immunization of airborne pathogens
US9289477B2 (en) 2011-04-29 2016-03-22 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce cytotoxic T lymphocyte responses
MX2013013445A (es) 2011-05-16 2014-07-28 Genzyme Corp Induccion de tolerancia inmunologica utilizando metotrexato.
WO2013019658A2 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers comprising polymers comprising multiple immunomodulatory agents
WO2013036293A1 (en) 2011-09-06 2013-03-14 Selecta Biosciences, Inc. Dendritic cell subsets for generating induced tolerogenic dendritic cells and related compositions and methods
AU2012304313A1 (en) 2011-09-08 2014-03-06 University Of Florida Research Foundation, Inc. Materials and methods for modulating immune responses
US8865487B2 (en) 2011-09-20 2014-10-21 General Electric Company Large area hermetic encapsulation of an optoelectronic device using vacuum lamination
WO2013058812A1 (en) 2011-10-19 2013-04-25 President And Fellows Of Harvard College Targeted delivery to pancreatic islet endothelial cells
EP2591801A1 (en) 2011-11-14 2013-05-15 Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf Nanoparticle compositions for generation of regulatory T cells and treatment of autoimmune diseases and other chronic inflammatory conditions
AU2012340567B2 (en) 2011-11-22 2017-11-23 The Children's Hospital Of Philadelphia Virus vectors for highly efficient transgene delivery
CN104520428B (zh) 2012-02-17 2018-09-21 费城儿童医院 将基因转移到细胞、器官和组织的aav载体组合物和方法
CN104487579B (zh) 2012-04-18 2022-01-18 费城儿童医院 使用aav衣壳变异体的高度有效的基因转移的组合物和方法
ES2932952T3 (es) 2012-04-24 2023-01-30 Ohio State Innovation Foundation Composiciones y métodos para tratar y prevenir el síndrome reproductivo y respiratorio porcino
CN102871966B (zh) 2012-10-19 2013-11-20 东南大学 用于改善雷帕霉素生物利用度的纳米载药颗粒及其制备方法
BR112015023793A2 (pt) 2013-03-15 2017-07-18 Us Dept Veterans Affairs composições e métodos de terapias para indução de tolerância imune a substituição do fator vii em indivíduos com hemofilia a
CA2909085C (en) 2013-04-08 2023-08-29 University Of Iowa Research Foundation Chimeric adeno-associated virus/ bocavirus parvovirus vector
EA201592106A3 (ru) 2013-05-03 2016-08-31 Селекта Байосайенсиз, Инк. Локальное сопутствующее введение толерогенных синтетических наноносителей для снижения гиперчувствительности типа i и гиперчувствительности типа iv
WO2014179771A1 (en) 2013-05-03 2014-11-06 Selecta Biosciences, Inc. Dosing combinations for reducing undesired humoral immune responses
EA201592273A1 (ru) 2013-06-04 2016-09-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Повторное введение неиммуносупрессивных антигенспецифических иммунотерапевтических средств
CA2926215A1 (en) 2013-10-06 2015-04-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Modified pseudomonas exotoxin a
US9276815B2 (en) 2013-12-27 2016-03-01 Dell Products L.P. N-node virtual link trunking (VLT) systems management plane
EP2916319A1 (en) 2014-03-07 2015-09-09 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Concept for encoding of information
BR122023023004A2 (pt) 2014-03-09 2023-12-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Vetores virais recombinantes, vírus adeno-associado recombinante, composição farmacêutica, bem como uso dos mesmos
GB201407322D0 (en) 2014-04-25 2014-06-11 Ospedale San Raffaele Gene therapy
US20150359865A1 (en) 2014-06-17 2015-12-17 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers for t-cell-mediated autoimmune disease
US20160220501A1 (en) 2015-02-03 2016-08-04 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce immune responses to therapeutic proteins
EP3160453A1 (en) 2014-06-25 2017-05-03 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for treatment with synthetic nanocarriers and immune checkpoint inhibitors
WO2016037163A1 (en) 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene therapy anti-viral transfer vector immune responses
RU2017115772A (ru) 2014-10-06 2018-11-13 Артроджен Б. В. Комбинация для генотерапии
PL3215133T3 (pl) 2014-11-05 2021-06-14 Selecta Biosciences, Inc. Sposoby i kompozycje związane z zastosowaniem związków powierzchniowo czynnych o niskiej hlb do wytwarzania syntetycznych nanonośników zawierających rapalog
WO2017139212A1 (en) 2016-02-08 2017-08-17 Cyta Therapeutics, Inc. Particle delivery of rapamycin to the liver
WO2017138983A1 (en) 2016-02-10 2017-08-17 Pfizer Inc. Therapeutic nanoparticles having egfr ligands and methods of making and using same
US20170258927A1 (en) 2016-03-11 2017-09-14 Selecta Biosciences, Inc. Formulations and doses of pegylated uricase
WO2018039465A1 (en) 2016-08-25 2018-03-01 Selecta Biosciences, Inc. Polyester polymer matrices for the delivery of allergens
JP2019533718A (ja) 2016-09-27 2019-11-21 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッドＳｅｌｅｃｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ． がんの処置における使用のための組換え免疫毒素
US11583504B2 (en) 2016-11-08 2023-02-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
EP3565605A1 (en) 2017-01-03 2019-11-13 ethris GmbH Ornithine transcarbamylase coding polyribonucleotides and formulations thereof
AU2018205496A1 (en) 2017-01-07 2019-07-25 Selecta Biosciences, Inc. Patterned dosing of immunosuppressants coupled to synthetic nanocarriers
BR112019018748A2 (pt) 2017-03-11 2020-04-07 Selecta Biosciences Inc métodos e composições relacionados ao tratamento combinado com anti-inflamatórios e nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor
AU2018347583A1 (en) 2017-10-13 2020-05-21 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating anti-viral transfer vector IgM responses
KR20200130704A (ko) 2018-02-26 2020-11-19 이슘 리서치 디벨롭먼트 컴퍼니 오브 더 히브루 유니버시티 오브 예루살렘 엘티디. 약물 전달 시스템
US11517628B2 (en) 2018-05-09 2022-12-06 Yale University Particles for spatiotemporal release of agents
MX2021000637A (es) 2018-07-16 2021-06-23 Selecta Biosciences Inc Métodos y composiciones de vectores y constructos ornitina transcarbamilasa (otc).
EP3823676A1 (en) 2018-07-16 2021-05-26 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions of mma constructs and vectors
AU2020265215A1 (en) 2019-04-28 2021-11-18 Selecta Biosciences, Inc. Methods for treatment of subjects with preexisting immunity to viral transfer vectors
WO2020243261A1 (en) 2019-05-28 2020-12-03 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuated anti-viral transfer vector immune response
WO2020247625A1 (en) 2019-06-04 2020-12-10 Selecta Biosciences, Inc. Formulations and doses of pegylated uricase
JP2022553345A (ja) 2019-10-21 2022-12-22 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド 肝疾患および肝障害を処置するための方法および組成物
MX2022005506A (es) 2019-11-08 2022-08-10 Selecta Biosciences Inc Formulaciones y dosis de uricasa pegilada.
WO2021174013A1 (en) 2020-02-26 2021-09-02 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions using synthetic nanocarriers comprising immunosuppressant
EP4117631A1 (en) 2020-03-11 2023-01-18 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions related to synthetic nanocarriers
JP2023548601A (ja) 2020-11-04 2023-11-17 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド 免疫グロブリンプロテアーゼに対する免疫応答を低減するための組成物
BR112023020597A2 (pt) 2021-04-09 2023-12-12 Selecta Biosciences Inc Nanocarreadores sintéticos que compreendem um imunossupressante em combinação com agonistas do receptor de il-2 de alta afinidade para aumentar a tolerância imune

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100068261A1 (en) * 2003-12-02 2010-03-18 Cytimmune Sciences, Inc. Methods and compositions for the production of monoclonal antibodies
US20110070153A1 (en) * 2008-08-13 2011-03-24 Searete, Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Artificial cells
US20100055189A1 (en) * 2008-08-29 2010-03-04 Hubbell Jeffrey A Nanoparticles for immunotherapy
US20100129439A1 (en) * 2008-10-12 2010-05-27 Frank Alexis Adjuvant Incorporation in Immunonanotherapeutics
US20110020388A1 (en) * 2009-05-27 2011-01-27 Selecta Biosciences, Inc. Targeted synthetic nanocarriers with ph sensitive release of immunomodulatory agents

Also Published As

Publication number Publication date
KR20140027361A (ko) 2014-03-06
JP2022003032A (ja) 2022-01-11
US20160030555A1 (en) 2016-02-04
AU2017225163B2 (en) 2019-10-17
KR102112002B1 (ko) 2020-05-18
KR102344744B1 (ko) 2021-12-30
US20120276156A1 (en) 2012-11-01
CN113018452A (zh) 2021-06-25
AU2022202396A1 (en) 2022-05-05
AU2019232935B2 (en) 2022-04-21
CN103501812A (zh) 2014-01-08
AU2019232928B2 (en) 2022-04-21
EP2701739A4 (en) 2015-03-04
KR20230104990A (ko) 2023-07-11
CN103501787A (zh) 2014-01-08
AU2019232928A1 (en) 2019-10-10
IL228937A0 (en) 2013-12-31
KR102457513B1 (ko) 2022-10-24
US8652487B2 (en) 2014-02-18
AU2020200446B2 (en) 2022-05-19
EP3760201A1 (en) 2021-01-06
EP2704693A1 (en) 2014-03-12
AU2020200254A1 (en) 2020-02-06
JP7242519B2 (ja) 2023-03-20
JP7389544B2 (ja) 2023-11-30
US20150320856A1 (en) 2015-11-12
JP6673893B2 (ja) 2020-03-25
MX2019011890A (es) 2019-11-21
AU2012249537A1 (en) 2013-10-24
CN107670030A (zh) 2018-02-09
EA201790109A1 (ru) 2017-09-29
CN107837402A (zh) 2018-03-27
WO2012149255A2 (en) 2012-11-01
AU2017203588A1 (en) 2017-06-22
AU2012249567B2 (en) 2017-07-27
BR112013027517A2 (pt) 2017-02-07
US20200101154A1 (en) 2020-04-02
KR20230079465A (ko) 2023-06-07
EP2701739A1 (en) 2014-03-05
CN107320734A (zh) 2017-11-07
EA201391599A1 (ru) 2014-09-30
AU2012249540B2 (en) 2017-07-13
AU2017245402A1 (en) 2017-11-02
US20230310593A1 (en) 2023-10-05
AU2012249544A1 (en) 2013-10-24
IL297146A (en) 2022-12-01
WO2012149393A9 (en) 2013-01-24
WO2012149405A3 (en) 2013-03-21
US20120276158A1 (en) 2012-11-01
CA2834532A1 (en) 2012-11-01
AU2022204381A1 (en) 2022-07-14
JP2014514333A (ja) 2014-06-19
EP3848030A1 (en) 2021-07-14
AU2022204395A1 (en) 2022-07-14
CA2834571A1 (en) 2012-11-01
EA201790044A1 (ru) 2017-09-29
EA201790030A1 (ru) 2017-09-29
CA2834519A1 (en) 2012-11-01
AU2012249401A1 (en) 2013-10-24
CN107252487A (zh) 2017-10-17
US20150328333A1 (en) 2015-11-19
WO2012149268A8 (en) 2012-12-13
US9295718B2 (en) 2016-03-29
AU2022204820A1 (en) 2022-07-28
ES2806268T3 (es) 2021-02-17
US20190076522A1 (en) 2019-03-14
EP2701738A4 (en) 2015-03-04
IL283253A (en) 2021-07-29
BR112013027541B1 (pt) 2023-10-03
IL228932B (en) 2022-11-01
KR20230006042A (ko) 2023-01-10
WO2012149265A3 (en) 2012-12-27
AU2012249550B2 (en) 2017-07-13
EP2701705A4 (en) 2015-01-28
KR20140034202A (ko) 2014-03-19
IL228935A0 (en) 2013-12-31
MX2013012594A (es) 2014-08-21
IL283728B2 (en) 2024-01-01
CN107261123A (zh) 2017-10-20
WO2012149393A3 (en) 2013-03-14
JP2014514334A (ja) 2014-06-19
EA201391608A1 (ru) 2014-09-30
CN103501820B (zh) 2016-07-06
IL228932B2 (en) 2023-03-01
AU2017203655A1 (en) 2017-06-15
EA201391597A1 (ru) 2014-09-30
KR102283951B1 (ko) 2021-08-02
WO2012149255A3 (en) 2013-01-03
IL228936A0 (en) 2013-12-31
AU2019232938A1 (en) 2019-10-10
US11717569B2 (en) 2023-08-08
EP3679933A1 (en) 2020-07-15
JP2021183616A (ja) 2021-12-02
KR20200057789A (ko) 2020-05-26
EP3682878A1 (en) 2020-07-22
EP2701737A1 (en) 2014-03-05
JP2019065033A (ja) 2019-04-25
US20230321224A1 (en) 2023-10-12
CN107670054A (zh) 2018-02-09
US20230321225A1 (en) 2023-10-12
MX2019013515A (es) 2020-01-20
US10004802B2 (en) 2018-06-26
CN107126552A (zh) 2017-09-05
BR112013027500A2 (pt) 2017-01-10
JP2023002542A (ja) 2023-01-10
JP6401609B2 (ja) 2018-10-10
AU2012249567A1 (en) 2013-10-31
MX2013012593A (es) 2014-08-21
US20160030554A1 (en) 2016-02-04
KR20190123796A (ko) 2019-11-01
IL305229A (en) 2023-10-01
US20150335762A1 (en) 2015-11-26
CN117298266A (zh) 2023-12-29
AU2022204439A1 (en) 2022-07-14
CA2834514C (en) 2023-04-25
JP2020073496A (ja) 2020-05-14
KR20220026601A (ko) 2022-03-04
CN105999295A (zh) 2016-10-12
CN114306638A (zh) 2022-04-12
EP3871691A1 (en) 2021-09-01
JP2014514332A (ja) 2014-06-19
KR20220147697A (ko) 2022-11-03
AU2017203588B2 (en) 2019-10-24
JP2020050658A (ja) 2020-04-02
AU2012249493A1 (en) 2013-10-24
EP2701706A2 (en) 2014-03-05
KR20200115655A (ko) 2020-10-07
US10420835B2 (en) 2019-09-24
EP2704714A4 (en) 2015-01-07
JP6737725B2 (ja) 2020-08-12
CN103491957A (zh) 2014-01-01
CN103533935A (zh) 2014-01-22
EA027380B1 (ru) 2017-07-31
MX2013012591A (es) 2014-08-21
KR20140027360A (ko) 2014-03-06
CA2834514A1 (en) 2012-11-01
JP2014513102A (ja) 2014-05-29
EP2704715A2 (en) 2014-03-12
JP6491879B2 (ja) 2019-03-27
AU2017225163A1 (en) 2017-10-05
AU2017245402B2 (en) 2019-10-17
AU2019232931B2 (en) 2022-04-14
KR20220002713A (ko) 2022-01-06
JP6422775B2 (ja) 2018-11-14
JP6422774B2 (ja) 2018-11-14
AU2022211839A1 (en) 2022-08-25
WO2012149252A3 (en) 2013-03-14
KR20140033065A (ko) 2014-03-17
CN107029213A (zh) 2017-08-11
IL283252A (en) 2021-07-29
IL283730A (en) 2021-07-29
WO2012149301A2 (en) 2012-11-01
US20150320728A1 (en) 2015-11-12
WO2012149454A2 (en) 2012-11-01
JP2014517828A (ja) 2014-07-24
CN117018224A (zh) 2023-11-10
EP2701737A4 (en) 2015-01-21
KR20140051171A (ko) 2014-04-30
JP6529531B2 (ja) 2019-06-12
WO2012149265A2 (en) 2012-11-01
US10441651B2 (en) 2019-10-15
US20160279234A1 (en) 2016-09-29
WO2012149247A3 (en) 2013-01-03
CA3192054A1 (en) 2012-11-01
CN117065050A (zh) 2023-11-17
EP2701705A2 (en) 2014-03-05
JP2017222668A (ja) 2017-12-21
EA201692374A3 (ru) 2017-08-31
US20160256401A1 (en) 2016-09-08
EA201790043A1 (ru) 2017-09-29
CA2834599A1 (en) 2012-11-01
AU2012249419A1 (en) 2013-10-24
AU2012249493B2 (en) 2017-06-15
JP2017114904A (ja) 2017-06-29
WO2012149454A3 (en) 2013-01-17
EP2704750A4 (en) 2015-01-07
CN103501820A (zh) 2014-01-08
AU2019232934A1 (en) 2019-10-10
MX2020004906A (es) 2020-08-06
EA201790045A1 (ru) 2017-09-29
US11235057B2 (en) 2022-02-01
US20120276109A1 (en) 2012-11-01
CN117205331A (zh) 2023-12-12
AU2017204814B2 (en) 2019-10-24
HUE050142T2 (hu) 2020-11-30
JP2019167350A (ja) 2019-10-03
JP2017193568A (ja) 2017-10-26
US20120276159A1 (en) 2012-11-01
AU2017245278A1 (en) 2017-11-02
EA201391611A1 (ru) 2014-09-30
JP2024022587A (ja) 2024-02-16
WO2012149259A1 (en) 2012-11-01
JP2018111687A (ja) 2018-07-19
CA2834527A1 (en) 2012-11-01
CN103501813A (zh) 2014-01-08
AU2017203656A1 (en) 2017-06-15
CN103517707A (zh) 2014-01-15
WO2012149268A1 (en) 2012-11-01
EP2701737B8 (en) 2024-05-01
US20120276134A1 (en) 2012-11-01
EP2704750A2 (en) 2014-03-12
MX2013012597A (es) 2014-08-27
JP2014513093A (ja) 2014-05-29
EA027259B1 (ru) 2017-07-31
KR20230106708A9 (ko) 2024-03-25
IL285736A (en) 2021-09-30
CN107252481A (zh) 2017-10-17
JP2017122112A (ja) 2017-07-13
CN104623666A (zh) 2015-05-20
EP2704715A4 (en) 2015-03-04
KR20140033066A (ko) 2014-03-17
AU2017204814A1 (en) 2017-07-27
US20120301510A1 (en) 2012-11-29
JP2017122111A (ja) 2017-07-13
JP2017122110A (ja) 2017-07-13
BR112013027514A2 (pt) 2017-02-14
MX2013012596A (es) 2014-08-21
US9289477B2 (en) 2016-03-22
JP2020002140A (ja) 2020-01-09
KR20140029468A (ko) 2014-03-10
IL228939A0 (en) 2013-12-31
EP2701738A2 (en) 2014-03-05
EP2704750B1 (en) 2023-11-01
EA201391609A1 (ru) 2014-09-30
US20120276157A1 (en) 2012-11-01
JP7303627B2 (ja) 2023-07-05
JP2021183612A (ja) 2021-12-02
US20160243253A1 (en) 2016-08-25
EA027410B1 (ru) 2017-07-31
US11779641B2 (en) 2023-10-10
CN107970440A (zh) 2018-05-01
EA027379B1 (ru) 2017-07-31
AU2012249540A1 (en) 2013-10-24
EA026880B1 (ru) 2017-05-31
EP2704715B1 (en) 2020-04-01
AU2020200446A1 (en) 2020-02-13
US20120301498A1 (en) 2012-11-29
EA028807B1 (ru) 2018-01-31
JP2014514331A (ja) 2014-06-19
AU2017204317A1 (en) 2017-07-13
IL228932A0 (en) 2013-12-31
KR20210097810A (ko) 2021-08-09
WO2012149301A3 (en) 2013-01-31
KR102536881B1 (ko) 2023-05-26
WO2012149247A2 (en) 2012-11-01
JP6422773B2 (ja) 2018-11-14
EP3682877A1 (en) 2020-07-22
AU2012249553A1 (en) 2013-10-24
AU2017244514A1 (en) 2017-11-02
BR112013027514B1 (pt) 2021-09-28
US20140199340A1 (en) 2014-07-17
US9265815B2 (en) 2016-02-23
JP6602536B2 (ja) 2019-11-06
CN103501786A (zh) 2014-01-08
US9289476B2 (en) 2016-03-22
JP2019065035A (ja) 2019-04-25
JP2014513092A (ja) 2014-05-29
US20120276155A1 (en) 2012-11-01
DK2701739T3 (da) 2020-07-13
IL284303A (en) 2021-07-29
EA201391600A1 (ru) 2014-09-30
EA201391602A1 (ru) 2014-04-30
EA201391610A1 (ru) 2014-09-30
KR20200055145A (ko) 2020-05-20
US20120294888A1 (en) 2012-11-22
US20150320870A1 (en) 2015-11-12
JP6490964B2 (ja) 2019-03-27
CN103517716A (zh) 2014-01-15
JP2018008929A (ja) 2018-01-18
AU2022204392A1 (en) 2022-07-14
EA201391601A1 (ru) 2014-09-30
MX2019013118A (es) 2019-12-16
JP2019001810A (ja) 2019-01-10
IL283728A (en) 2021-07-29
AU2019232934B2 (en) 2022-04-14
JP7018689B2 (ja) 2022-02-14
CA3182519A1 (en) 2012-11-01
IL283728B1 (en) 2023-09-01
AU2012249550A1 (en) 2013-10-24
US20160022650A1 (en) 2016-01-28
WO2012149252A2 (en) 2012-11-01
KR20230106708A (ko) 2023-07-13
EP2701737B1 (en) 2024-03-27
BR112013027508A2 (pt) 2017-03-14
JP7389549B2 (ja) 2023-11-30
EP2701706A4 (en) 2015-01-28
US20200101155A1 (en) 2020-04-02
KR20190112211A (ko) 2019-10-02
KR20210045525A (ko) 2021-04-26
US20120276160A1 (en) 2012-11-01
JP2023085278A (ja) 2023-06-20
EP2701739B1 (en) 2020-04-01
MX2013012599A (es) 2014-08-21
CN107693798A (zh) 2018-02-16
US20150320884A1 (en) 2015-11-12
AU2019232935A1 (en) 2019-10-17
US9993548B2 (en) 2018-06-12
EP2701738B1 (en) 2020-04-15
JP2017122113A (ja) 2017-07-13
KR20140029469A (ko) 2014-03-10
WO2012149405A2 (en) 2012-11-01
WO2012149411A1 (en) 2012-11-01
WO2012149282A2 (en) 2012-11-01
EA201791679A1 (ru) 2018-09-28
AU2020200252A1 (en) 2020-02-06
AU2019232938B2 (en) 2022-04-21
IL228934A0 (en) 2013-12-31
CN107343959A (zh) 2017-11-14
JP2014514335A (ja) 2014-06-19
IL228938A0 (en) 2013-12-31
CA2834534A1 (en) 2012-11-01
BR112013027541A2 (pt) 2017-01-10
US20120276133A1 (en) 2012-11-01
JP6833625B2 (ja) 2021-02-24
KR20140041505A (ko) 2014-04-04
CN107261154A (zh) 2017-10-20
KR20210090745A (ko) 2021-07-20
EA201692374A2 (ru) 2017-06-30
JP6336900B2 (ja) 2018-06-06
AU2019240565A1 (en) 2019-10-17
JP2021183613A (ja) 2021-12-02
CA2834619A1 (en) 2012-11-01
WO2012149282A3 (en) 2013-03-14
US20220354947A1 (en) 2022-11-10
US10039822B2 (en) 2018-08-07
CN107693799A (zh) 2018-02-16
MX2013012598A (es) 2014-08-18
WO2012149393A2 (en) 2012-11-01
CN107261151A (zh) 2017-10-20
MX2013012595A (es) 2014-08-27
US20240156955A1 (en) 2024-05-16
EP2704714A2 (en) 2014-03-12
US9987354B2 (en) 2018-06-05
MX2013012592A (es) 2014-08-27
CA2834533A1 (en) 2012-11-01
AU2019232931A1 (en) 2019-10-10
EP2704693A4 (en) 2015-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA027103B1 (ru) Толерогенные синтетические наноносители, уменьшающие иммунный ответ на терапевтические белки
JP2023039981A (ja) Ｃｄ４＋制御性ｔ細胞を増強するための方法および組成物
US20120189700A1 (en) Nanoparticle Based Immunological Stimulation
CN118078979A (zh) 用于降低针对治疗性蛋白的免疫应答的致耐受性合成纳米载体

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM RU