RU2687164C2 - Новые иммунотерапевтические молекулы и их применения - Google Patents
Новые иммунотерапевтические молекулы и их применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2687164C2 RU2687164C2 RU2015120543A RU2015120543A RU2687164C2 RU 2687164 C2 RU2687164 C2 RU 2687164C2 RU 2015120543 A RU2015120543 A RU 2015120543A RU 2015120543 A RU2015120543 A RU 2015120543A RU 2687164 C2 RU2687164 C2 RU 2687164C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- ara
- peptides
- peptide
- cells
- Prior art date
Links
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 title description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 263
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 172
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims abstract description 145
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims abstract description 141
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 131
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 93
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 claims abstract description 38
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 claims abstract description 29
- 235000007466 Corylus avellana Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- 241000723382 Corylus Species 0.000 claims abstract description 19
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 15
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 10
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 48
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 45
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims description 43
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 claims description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 35
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 20
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 18
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 18
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 206010011968 Decreased immune responsiveness Diseases 0.000 claims description 6
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 claims description 5
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000020113 brazil nut Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 241001553178 Arachis glabrata Species 0.000 abstract 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 112
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 34
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 27
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 208000008267 Peanut Hypersensitivity Diseases 0.000 description 19
- 230000004044 response Effects 0.000 description 18
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 17
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 17
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 17
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 16
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 16
- 201000010853 peanut allergy Diseases 0.000 description 16
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 15
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 15
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 15
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 15
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 15
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 15
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 13
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 12
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 12
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 230000008859 change Effects 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 229960004784 allergens Drugs 0.000 description 9
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 description 9
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 9
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 8
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 8
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 8
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 7
- 101800001357 Potential peptide Proteins 0.000 description 6
- 102400000745 Potential peptide Human genes 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 6
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 108010062347 HLA-DQ Antigens Proteins 0.000 description 5
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 5
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 5
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 5
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- -1 thiol compounds Chemical class 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 4
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 241001235216 Larix decidua Species 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- PRQROPMIIGLWRP-BZSNNMDCSA-N chemotactic peptide Chemical compound CSCC[C@H](NC=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PRQROPMIIGLWRP-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 3
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 3
- 229940099112 cornstarch Drugs 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 3
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 3
- NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DFVFTMTWCUHJBL-UHFFFAOYSA-N 4-azaniumyl-3-hydroxy-6-methylheptanoate Chemical compound CC(C)CC(N)C(O)CC(O)=O DFVFTMTWCUHJBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 2
- 102100025222 CD63 antigen Human genes 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical compound CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000968532 Dictyocaulus viviparus DVA-1 polyprotein Proteins 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000015789 HLA-DP Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010010378 HLA-DP Antigens Proteins 0.000 description 2
- 101000934368 Homo sapiens CD63 antigen Proteins 0.000 description 2
- 208000001718 Immediate Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N N-bromosuccinimide Chemical compound BrN1C(=O)CCC1=O PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 208000002366 Nut Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100026918 Phospholipase A2 Human genes 0.000 description 2
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 102100037681 Protein FEV Human genes 0.000 description 2
- 101710198166 Protein FEV Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 2
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 2
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 2
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 230000021235 carbamoylation Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- XLJMAIOERFSOGZ-UHFFFAOYSA-M cyanate Chemical compound [O-]C#N XLJMAIOERFSOGZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N cysteic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CS(O)(=O)=O XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N glyoxal Chemical compound O=CC=O LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N iodoacetic acid Chemical compound OC(=O)CI JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 201000010854 nut allergy Diseases 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- OJUGVDODNPJEEC-UHFFFAOYSA-N phenylglyoxal Chemical compound O=CC(=O)C1=CC=CC=C1 OJUGVDODNPJEEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 2
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- KMOUUZVZFBCRAM-OLQVQODUSA-N (3as,7ar)-3a,4,7,7a-tetrahydro-2-benzofuran-1,3-dione Chemical compound C1C=CC[C@@H]2C(=O)OC(=O)[C@@H]21 KMOUUZVZFBCRAM-OLQVQODUSA-N 0.000 description 1
- 101150084750 1 gene Proteins 0.000 description 1
- SNTGWXAZMZPJPH-UHFFFAOYSA-N 1-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxypyrrolidine-2,5-dione Chemical compound O=C1CCC(=O)N1ON1C(=O)CCC1=O SNTGWXAZMZPJPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- KFDPCYZHENQOBV-UHFFFAOYSA-N 2-(bromomethyl)-4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1CBr KFDPCYZHENQOBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TXHAHOVNFDVCCC-UHFFFAOYSA-N 2-(tert-butylazaniumyl)acetate Chemical compound CC(C)(C)NCC(O)=O TXHAHOVNFDVCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FADQCEBBTITJBI-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-methoxyphenyl)methoxymethyl]oxirane Chemical compound COC1=CC=CC=C1COCC1OC1 FADQCEBBTITJBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTOFYLAWDLQMBZ-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-3-thiophen-2-ylpropanoate Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CS1 WTOFYLAWDLQMBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBTSQILOGYXGMD-LURJTMIESA-N 3-nitro-L-tyrosine Chemical class OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C([N+]([O-])=O)=C1 FBTSQILOGYXGMD-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- JAJQQUQHMLWDFB-UHFFFAOYSA-N 4-azaniumyl-3-hydroxy-5-phenylpentanoate Chemical compound OC(=O)CC(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 JAJQQUQHMLWDFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010003402 Arthropod sting Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101001015517 Betula pendula Germin-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 240000009226 Corylus americana Species 0.000 description 1
- 235000001543 Corylus americana Nutrition 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 102100036241 HLA class II histocompatibility antigen, DQ beta 1 chain Human genes 0.000 description 1
- 102100040485 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain Human genes 0.000 description 1
- 108010065026 HLA-DQB1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010039343 HLA-DRB1 Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N L-alpha-phenylglycine zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 238000011050 LAL assay Methods 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 1
- 244000246386 Mentha pulegium Species 0.000 description 1
- 235000016257 Mentha pulegium Nutrition 0.000 description 1
- 235000004357 Mentha x piperita Nutrition 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 150000007930 O-acyl isoureas Chemical class 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 101000750404 Phoneutria keyserlingi CRISP-1 Proteins 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710118538 Protease Proteins 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- 229920001800 Shellac Polymers 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000017274 T cell anergy Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- NYTOUQBROMCLBJ-UHFFFAOYSA-N Tetranitromethane Chemical compound [O-][N+](=O)C([N+]([O-])=O)([N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O NYTOUQBROMCLBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 206010045240 Type I hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710196023 Vicilin Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 229940022663 acetate Drugs 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 229940074608 allergen extract Drugs 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 229940093740 amino acid and derivative Drugs 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002052 anaphylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000010216 atopic IgE responsiveness Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003659 bee venom Substances 0.000 description 1
- 229940050390 benzoate Drugs 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- AWGTVRDHKJQFAX-UHFFFAOYSA-M chloro(phenyl)mercury Chemical compound Cl[Hg]C1=CC=CC=C1 AWGTVRDHKJQFAX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VIMWCINSBRXAQH-UHFFFAOYSA-M chloro-(2-hydroxy-5-nitrophenyl)mercury Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[Hg]Cl VIMWCINSBRXAQH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000007859 condensation product Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K dicalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N diethyl pyrocarbonate Chemical compound CCOC(=O)OC(=O)OCC FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229940015043 glyoxal Drugs 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000591 gum Polymers 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 235000001050 hortel pimenta Nutrition 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002463 imidates Chemical class 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002689 maleic acids Chemical class 0.000 description 1
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 150000002730 mercury Chemical class 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229910052751 metal Chemical class 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- SJFKGZZCMREBQH-UHFFFAOYSA-N methyl ethanimidate Chemical compound COC(C)=N SJFKGZZCMREBQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000006396 nitration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000031787 nutrient reservoir activity Effects 0.000 description 1
- 235000014571 nuts Nutrition 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 229940116317 potato starch Drugs 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 description 1
- 229960001327 pyridoxal phosphate Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000009666 routine test Methods 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N shellac Chemical compound OCCCCCC(O)C(O)CCCCCCCC(O)=O.C1C23[C@H](C(O)=O)CCC2[C@](C)(CO)[C@@H]1C(C(O)=O)=C[C@@H]3O ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N 0.000 description 1
- 239000004208 shellac Substances 0.000 description 1
- 229940113147 shellac Drugs 0.000 description 1
- 235000013874 shellac Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 229940086735 succinate Drugs 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 230000009959 type I hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000009637 wintergreen oil Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/001—Preparations to induce tolerance to non-self, e.g. prior to transplantation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/35—Allergens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммунологии, и может быть использовано в медицине и диагностике состояний у млекопитающего, характеризующихся гиперчувствительностью к арахису или лесным орехам, которые содержат Ara h 1. Получены композиции из пептидов коровой эпитопной области Ara h 1 Т-клеток. Изобретение обеспечивает десенсибилизацию или индукцию иммунологической толерантности к Ara h 1. 10 н. и 14 з.п. ф-лы, 5 ил., 11 табл., 1 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение в целом относится к молекулам, таким как пептиды, полипептиды и белки, которые иммунологически взаимодействуют с Т-лимфоцитами у субъектов, имеющих аллергию на арахис или аллергию на другие лесные орехи, и генетическим последовательностям, кодирующим их. Предпочтительно эти молекулы являются иммуноинтерактивными по отношению к Т-клеткам субъектов, имеющих аллергию на аллерген Ara h 1. Молекулы по данному изобретению являются полезными в разработке диагностических, терапевтических и профилактических средств для состояний, характеризующихся аберрантным, неадекватным или иным нежелательным иммунным ответом на Ara h 1, его производное или гомолог.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Библиографические данные публикаций, указанных автором в данном описании изобретения собраны в алфавитном порядке в конце описания.
Ссылка на любой известный уровень техники в данном описании изобретения не является и не должна рассматриваться как подтверждение или любая другая форма утверждения того, что известный уровень техники соответствует части общего уровня знаний в данной области техники в Австралии.
Аллергия на арахис является опасным для жизни и неизлечимым расстройством, поражающим около 1% популяции (Husain et al. J Am Acad Dermatol. 66(1): 136-43, 2012, Burks, Lancet. 371(9623):1538-46,2008). Оно характеризуется внезапным началом анафилаксии, которая может возникнуть при воздействии малых количеств белков арахиса (Hourihane et al., J Allergy Clin Immunol 100: 596-600, 1997; Pumphrey, Current Opinion in Allergy & Clinical Immunology. 4(4):285-90, 2004). Анафилаксию, индуцируемую орехами, чаще всего связывают со смертностью или угрожающими жизни признаками (Bock et al. J Allergy Clin Immunol. 119(4): 1016-8, 2007; Burks 2008, см. выше). Белки арахиса часто скрыты в, на первый взгляд, безопасных источниках питания, так, что в течение 5 лет случайный контакт наблюдается у до 50% больных (Sicherer et al., Paediatrics 102: е6, 1998). Неудивительно, что аллергию на орехи связывают со значительной психологической заболеваемостью как у больных, так и у лиц, осуществляющих уход за ними, близких к тем, кто пострадал от хронических дегенеративных заболеваний, таких как ревматоидный артрит (Primeau et al., Clin Exp Allergy 30: 1135-43, 2000; Kemp et al. Med. J. Aust. 188(9):503-4, 2008). Лечение, в то же время, является необходимым для того, чтобы аллергия на орехи не являлась причиной смертности, также необходимо снять хроническую психологическую нагрузку, которую несут субъекты, страдающие аллергией на арахис.
На сегодняшний день усилия, направленные на иммунотерапию при аллергии на арахис, увенчались крайне ограниченным успехом. Nelson et al. показали, что толерантность к арахису может быть индуцирована с применением протокола интенсивной иммунотерапии, но такая толерантность теряется в процессе гибкого дозирования приблизетельно у половины субъектов и, кроме того, такие инъекции связывают с частыми эпизодами анафилаксии у большинства субъектов, как во время фазы развития, так и во время фазы стабилизации (Nelson et al., J Allergy Clin Immunol 99: 744-51, 1997). Oppenheimer et al. в рамках своего исследования продемонстрировали сходные результаты, снова указывая на то, что активная терапия связана с высоким уровнем общей анафилактической реакции. Сбор данных в этом исследовании был прекращен после того, как введение экстракта арахиса субъекту с рандомизированным плацебо привело к их смерти, подчеркивая опасность этого состояния (Oppenheimer et al., J Allergy Clin Immunol 90: 256-62, 1992). Недавние исследования оральной иммунотерапии непросеянной арахисовой мукой дали обнадеживающий результат, что десенсибилизация возможна, но наблюдаемые побочные реакции указывают на основные проблемы безопасности (Hofmann et al. J. Allergy Clin. Immunol. 124, 286, 2009; Jones et al J. Allergy Clin. Immunol. 24, 292, 2009; Clark et al. Allergy 64, 1218,2009; Varshney et al. J Allergy Clin Immunol. 127(3):654-60, 2011; Varshney et al. J Allergy Clin Immunol. 124(6):1351-2, 2009; Anagnostou et al. Clin Exp Allergy. 41(9):1273-81, 2011; Allen & O'Hehir. Clin Exp Allergy. 41(9):1172-4, 2011; Yuetal Int Arch Allergy Immunol. 159(2): 179-182, 2012; Thyagarajan et al. J Allergy Clin Immunol. 126(l):31-2, 2010; Blumchen et al. J Allergy Clin Immunol. 126(1):83-91, 2010). Даже за исключением детей, склонных к тяжелым симптомам или астме, об анафилактическом эпизоде сообщалось в двух исследованиях, в одном случае во время начальной пищевой провокации (Clark et al. Allergy 64,1218, 2009), а в другом случае во время лечения ребенка, который ранее не испытывал анафилаксии (Hofmann et al. J. Allergy Clin. Immunol. 124, 286, 2009).
Разработка новых стратегий преодоления осложнений, связанных с аллерговакцинацией, зависит от точного понимания иммунологической основы для успешной иммунотерапии, а также ее побочных эффектов. Давно установлено, что заболеваемость в связи с аллерговакцинацией обусловлена перекрестным связыванием IgE и что это действие не требуется для того, чтобы такая терапия была эффективной (Litwin et al., Int Arch Allergy Appl Immunol 87: 361-61, 998). Известно также, что одним из важнейших эффектов иммунотерапии в достижении толерантности является ее способность изменять преобладающий фенотип конкретной Т-клетки от TH2 до регуляторного фенотипа. Эти регуляторные Т-клетки действуют посредством образования противовоспалительных цитокинов IL-10 и/или TGFβ.(Akdis & Akdis, J Allergy Clin Immunol. 123:735-46, 2009; Akdis & Akdis, Nature Reviews: Drug Discovery. 8:645-60. 2009; Akdis & Akdis, J Allergy Clin Immunol 127:18-27, 2011).
Основное различие гуморального и лимфоцитарного ответов заключается в распознавании антигена: антитела распознают конформационные эпитопы в зависимости от молекулярной третичной структуры, тогда как CD4+ Т-клетки распознают короткие линейные пептиды. Эта разница в распознавании антигена является основой многих новых стратегий иммунотерапии, в том числе с применением пептидов, основанных на Т-клеточных эпитопах, мутантах В-клеточных эпитопов и измененных пептидных лигандах (Rolland et al. Pharmacology & Therapeutics 121:273-284, 2009). Все подобные способы основаны на изменении или отсутствии молекулярной третичной структуры, так что теряются перекрестное связывание IgE и активация эффекторной клетки. Пептидная иммунотерапия представляет собой способ, по отношению к которому существуют данные об эффективности, документируемые как в случае аллергии на кошачью перхоть, так и в случае аллергии на пчелиный яд. Три различных исследования показали, что при отсутствии каких-либо системных побочных эффектов толерантность по отношению к основному аллергену пчелиного яда фосфолипазе А2 (PLA2) может быть достигнута с применением последовательностей, содержащих Т-клеточные эпитопы (Muller et al. J Allergy Clin Immunol. 101: 747-54, 1998; Tarzi et al. Clin Exp Allergy. 36: 465-74, 2006; Fellrath et al. J Allergy Clin Immunol. 111: 854-61, 2003), в то время как несколько исследований показали, что пептиды, основанные на структуре основного аллергена кошек Fel d 1, могут быть применены, чтобы вызвать сниженный клинический ответ (Norman et al.,Am JRespir Crit Care Med 154: 1623-8, 1996; Marcotte et al., J Allergy Clin Immunol 101: 506-13, 1998; Pene et al., J Allergy Clin Immunol 102: 571-8, 1998; Oldfield et al. Lancet 360:47-53, 2002; Alexander et al. Clin Exp Allergy 35: 52-8, 2004; Alexander et al. Allergy 60:1269-74, 2005). Совсем недавно исследование фазы На подтвердило безопасность, переносимость и потенциальную эффективность смеси с Fel d 1, состоящей из семи пептидов (Toleromune Cat©, Cicassia Ltd., Oxford, UK) (Worm et al. J Allergy Clin Immunol. 127: 89-97, 2011), а в настоящее время ведется исследование Phase lib (Moldaver & Larche. Allergy. 66: 784-91, 2011). Решающее значение в развитии подобных стратегий имеет сохранение Т-клеточных эпитопов, чтобы обеспечить возможность индукции фенотипического изменения Т-клеток.
Способность связываться непосредственно с молекулами МНС класса II позволяет пептидам презентироваться "непрофессиональной" или незрелой АПК без провоспалительных и костимулирующих сигналов, которые способствуют индукции толерантности, анергии и/или подавляющей активности в отвечающих Т-клетках (Moldaver & Larche, Allergy 66: 784-91, 2011). Это также позволяет пептидам презентироваться чаще, чем пептиды, полученные из целой молекулы (Santambrogio et al. Proc Natl Acad Sci USA, 1999, 96:15056-61), и поскольку они также более безопасны, чем весь аллерген, пептиды могут презентироваться при более высоких концентрациях, при этом реполяризующая Т-клетка отвечает более эффективно.
Важно отметить, что нацеливание Т-клеток, специфичных по отношению к доминирующим эпитопам основных аллергенов, может изменить ответы на экстракты цельных аллергенов (связанное подавление). Многие исследования, сообщающие об успешной пептидной иммунотерапии на мышиных моделях аллергии, показали, что введение пептидов доминантных Т-клеточных эпитопов основных аллергенов индуцирует толерантность не только к этим пептидам, но и к очищенному аллергену и экстрактам цельных аллергенов (Yang et al. Clin Exp Allergy 40(4):668-78, 2010; Yoshitomi etal. JPeptSci. 13(8):499-503, 2007; Marazuela et al. Mol Immunol. 45(2):438-45, 2008; Rupa et al. Allergy. 67(l):74-82, 2012; Hoyne et al. J Exp Med. 178(5): 1783-8,1993; Hall etal. Vaccine. 21(5-6):549-61,2003).
Таким образом, существует необходимость как в идентификации основных аллергенов арахиса, так и в определении Т-клеточных эпитопов этих аллергенов. Идентификация, характеризация и анализ этих эпитопов являются критичными для разработки специфической диагностической и иммунотерапевтической методологии. В связи с этим, хоть молекула аллергена арахиса Ara h 1 и была ранее предметом анализа, идентификация коровых эпитопных областей Т-клеток, которые имеют важное значение для разработки эффективной вакцины, не была осуществлена. Более того, предыдущие исследования были ограничены тем, что они были основаны на применении тетрамеров HLA-DR, таким образом, что препятствуют выявлению эпитопов, презентируемых другими типами HLA. Поскольку эффективность вакцины в популяции требует, чтобы эпитопы, которые являются предметом обсуждения, могли презентироваться целым рядом различных типов HLA, существует потребность не только в идентификации Т-клеточных эпитопов внутри молекулы Ara h 1, но и, кроме того, в идентификации эпитопов, которые являются и доминирующими, и могут эффективно презентироваться разнообразными типами HLA, которые являются репрезентативными для популяции.
В работе, предшествующей данному изобретению, были идентифицированы доминантные, HLA-вырожденные коровые эпитопные области Ara h 1. Эта группа коровых эпитопных областей является уникальной с точки зрения ее особенно высокого уровня эффективности. В отличие от ранее изученных 20-мерных пептидов Ara h 1, которые были идентифицированы на основании только их способности демонстрировать некоторый уровень реактивности Т-клеток, последовательности по данному изобретению представляют собой выбранный набор коровых Т-клеточных эпитопных областей, которые являются и иммунодоминантными, по сравнению с другими пептидными фрагментами Ara h 1, и HLA-вырожденными в том, что они соединяются с двумя или более типами HLA. Более того, эти эпитопные коровые области презентируются молекулами HLA-DQ. Молекулы HLA-DQ являются более консервативными в смешанных популяциях, чем молекулы HLA-DR. Соответственно, пептиды, презентируемые на HLA-DQ, обеспечивают условия более широкого охвата популяции. Идентификация этой конкретной группы коровых эпитопных областей способствовала, впервые, разработке эффективных способов лечения состояний, характеризующихся аберрантными, неадекватными или иными нежелательными иммунными ответами Ara h 1 или его производного или гомолога, другой аллергией на лесные орехи или аллергией на композицию, такую как пищевые продукты, содержащие аллерген Ara h 1. Идентификация этих эпитопов также способствует развитию соответствующей диагностической технологии
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В данном описании изобретения и в формуле изобретения, которые следуют далее, если контекст не требует иного, слово "содержать" и его вариации, такие как "содержит" и "содержащий", как следует понимать, означают включение указанного целого числа или этапа или группы целых чисел или этапов, но не исключение любого другого целого числа или этапа или группы целых чисел или этапов.
Как применяют в данном документе, термин "полученный из" должен быть принят для того, чтобы указать, что конкретное целое число или группа целых чисел происходит из указанных видов, но не обязательно были получены непосредственно из указанного источника. Дополнительно, как применяют в данном документе, слова в единственном числе означают также и множественное число, если из контекста очевидно не следует иное.
Если не указано иначе, все технические и научные термины, применяемые в данном документе, имеют такое же значение, которое обычно понимает специалист с обычной квалификацией в данной области техники, к которой это изобретение принадлежит.
Спецификация субъекта содержит информацию об аминокислотной последовательности, полученной с применением программы Patentln Version 3.5, представленной в данном документе после библиографии. Каждую аминокислотную последовательность определяют в перечне последовательностей с помощью цифрового индикатора <210>, который идет после идентификатора последовательности (например, <210>1, <210>2 и т.д.). Длина, тип последовательности (белок и т.д.) и источник организма для каждой последовательности указывает информацию, представленную в числовых полях-индикаторах <211>, <212> и <213>, соответственно. Аминокислотные последовательности, указанные в описании, определяют с помощью индикатора SEQ ID NO: после идентификатора последовательности (например, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и т.д.). Идентификатор последовательности, указанный в спецификации, коррелирует с информацией, представленной в числовом поле-индикаторе <400> в перечне последовательностей, за которым следует идентификатор последовательности (например, <400>1, <400>2 и т.д.). То есть последовательность SEQ ID NO: 1, как подробно описано в спецификации, коррелирует с последовательностью, указанной в <400>1 в перечне последовательностей.
Один аспект данного изобретения относится к композиции, содержащей одну или более коровых эпитопных областей Т-клеток Ara h 1, выбранных из группы, состоящей из:
или их функциональных производных или гомологов.
В родственном аспекте данное изобретение относится к композиции, содержащей один или более пептидов, каждый из пептидов которой имеет до 60 последовательно расположенных аминокислот в длину и пептиды которой содержат одну или более коровых эпитопных областей Т-клетки Ara h 1, выбранных из списка, состоящего из:
или их функциональных производных или гомологов.
В одном варианте реализации предыдущих аспектов изобретения указанные пептиды или эпитопы способны модифицировать функции Т-клеток, при условии, что присутствуют в Т-клетках, выделенных у субъектов, имеющих состояние, характеризующееся аберрантным, нежелательным или иным неадекватным иммунным ответом на Ara h 1, но пептиды которых не могут связываться с Ara h 1 - специфическим IgE.
В дополнительном родственном аспекте предлагают композицию, содержащую один или более пептидов, каждый из пептидов которой имеет до 60 последовательно расположенных аминокислот в длину и пептиды которой содержат одну или более коровых эпитопных областей Т-клетки Ara h 1, выбранных из списка, состоящего из:
или функциональные производные или гомологи, пептиды которой способны снижать гиперчувствительность Ara h 1 или гиперчувствительность к композиции, содержащей Ara h 1 при введении субъекту, имеющему состояние, характеризующееся указанной гиперчувствительностью.
В дополнительном родственном аспекте предлагают композицию, содержащую один или более пептидов, каждый из пептидов которой имеет до 60 последовательно расположенных аминокислот в длину и пептиды которой содержат эпитоп NEGVIVKVSK (SEQ ID NO: 3) вместе с одной или несколькими коровыми эпитопными областями Т-клетки Ara h 1, выбранными из списка, состоящего из:
или их функциональных производных или гомологов.
В дополнительном родственном аспекте предлагают композицию, содержащую один или более пептидов, каждый из пептидов которой имеет до 60 последовательно расположенных аминокислот в длину и пептиды которой содержат эпитоп EGALML (SEQ ID NO: 6) вместе с одной или несколькими коровыми эпитопными областями Т-клетки Ara h 1, выбранными из списка, состоящего из:
или их функциональных производных или гомологов.
В тех случаях, когда композиция выполнена таким образом, что коровые эпитопные области изобретения включены как часть более крупного пептида, следует понимать, что любой данный пептид может быть сконструирован для того, чтобы включать одну или более коровых эпитопных областей. С этой целью, в одном варианте реализации по данному изобретению, один или более пептидов целевой композиции выбирают из списка:
В дополнительном аспекте этого варианта реализации изобретения указанная композиция содержит пептид, определенный как SEQ ID NO: 15, 16 или 17, вместе с одним или несколькими пептидами, определенными как SEQ ID NO: 12-14 или 18-33.
В дополнительном аспекте этого варианта реализации изобретения указанная композиция содержит пептид, определенный как SEQ ID NO: 23, вместе с одним или несколькими пептидами, определенными как SEQ ID NO: 12-22 или 24-33.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
Фигура 1: Частотный профиль респондера донора в случае 20-мерных пептидов Ara h 1
Частоты респондера донора в случае распознавания ТКЛ 20-мерных пептидов Ara h 1 (n=18 субъектов с аллергией на арахис).
Фигура 2: Картирование коровых Т-клеточных эпитопов в пределах 20-мерных пептидов 50 и 51 Ara h 1
Пролиферация ТКЛ, специфическая к 20-мерам, по отношению к усеченным наборам пептидов. Типичная ТКЛ показана для пептидов 50 (А) и 51 (В) (имеется в виду имп./мин повторяющихся лунок +SD). В верхних частях указывают эпитоп в перекрывании между 20-мерами (n=2; 3 ТКЛ). В нижних частях указывают эпитопы, уникальные для каждого 20-мера; А) n=3; 6 ТКЛ. В) n=4; 7 ТКЛ. Последовательности эпитопа, распознанные представленной ТКЛ, выделены жирным шрифтом, а 'соединенные эпитопы', распознанные всеми конкретными ТКЛ, подчеркнуты.
Фигура 3: Активация базофила в ответ на пептиды потенциального Ara h 1
Коробчатая диаграмма демонстрирует процент активированных (CD63h1) базофилов (IgEh1) в ответ на Ara h 1 или потенциальные пептиды в случае семи субъектов с аллергией на арахис. Отрицательный контроль был без антигена (без стимуляции), а положительные контроли представляли собой анти-IgE, fMLP и ЭСА. Усы показывают значения от минимального до максимального.
Фигура 4: Типичный анализ на основе CFSE для определения пролиферации CD4+ Т-клеток в РВМС
Распространение CF SE-меченого РВМС от субъекта 26 с аллергией на арахис за следующие 7 дней стимуляции с выбранными 20-мерными пептидами Ara h 1. Отдельно взятая среда (без антигена) или экстракт сырого арахиса (ЭСА) обеспечивают отрицательный и положительный контроли, соответственно. По меньшей мере, анализируют 10000 живых CD4+ Т-клеток на образец. На вставках указан процент CD4+CFSElo (пролиферирующих) Т-клеток от общего количества CD4+ Т-клеток с индексами стимуляции (ИС) в скобках.
Фигура 5: Типичная специфичность рестрикции HLA класса II распознавания Т-клеточного эпитопа
Пролиферацию специфической ТКЛ в выбранных эпитопах в присутствии HLA-DR (кружки), -DQ (квадраты) или -DP (треугольники) мАт (Ai и Bi) или изотипических контрольных антител (10 мкг/мл) (АН и Bii), (имеется в виду имп./мин повторяющихся лунок +SD). Графики демонстрируют выборочные данные для HLA-DR-ограниченного эпитопа (442-458) (А) и HLA-DQ-ограниченного эпитопа (507-524) (В).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение основано, в частности, на идентификации HLA-вырожденных коровых эпитопных областей доминантных Т-клеток Ara h 1. Идентификация этих иммунодоминантных коровых эпитопных областей позволяет улучшить диагностическую методологию и разработать значительно более эффективные терапевтические и профилактические композиции и подходы к лечению, чем доступные на сегодняшний день, для условий, таких как, но не ограничиваясь этим, аллергия на арахис.
Соответственно, один аспект данного изобретения относится к композиции, содержащей одну или более коровых эпитопных областей Т-клеток Ara h 1, выбранных из группы, состоящей из:
или их функциональных производных или гомологов.
В родственном аспекте данное изобретение относится к композиции, содержащей один или более пептидов, каждый из пептидов которой имеет до 60 последовательно расположенных аминокислот в длину и пептиды которой содержат одну или более коровых эпитопных областей Т-клетки Ara h 1, выбранных из списка, состоящего из:
или их функциональных производных или гомологов.
В отдельном варианте реализации предыдущих аспектов изобретения указанные пептиды или коровые эпитопные области способны модифицировать функции Т-клеток, при условии, что присутствуют в Т-клетках, выделенных у субъектов, имеющих состояние, характеризующееся аберрантным, нежелательным или иным неадекватным иммунным ответом на Ara h 1, или аллерген присутствует в композиции, такой как пищевые продукты, включающие Ara h 1, но пептиды которых не могут связываться с Ara h 1-специфическим IgE.
Без ограничения данного изобретения каким-либо образом, арахис содержит большое количество белков, которым соответствует множество различных полос, различимых на SDS-PAGE, в зависимости от используемой методологии. После жидкостной хроматографии высокого давления видимыми являются до 53 полос (de Jong et al., Clin Exp Allergy 28: 743-51, 1998). Только два из этих белков могут быть классифицированы в качестве основных аллергенов с применением стандартных критериев, при условии, что реактивность IgE наблюдается у более чем 50% от популяции с аллергией на арахис; эти белки называются Ara h 1 и Ara h 2 (Burks et al., Allergy 53: 725-30, 1998). Хотя ряд исследований и показал, что Ara h 2 является более мощным из этих двух аллергенов (Blanc et al. Clin Exp Allergy. 2009; 39(8): 1277-85; Koppelman et al. Clin Exp Allergy. 2004; 34(4):583-90; Palmer et al. Clin Immunol. 2005; 115(3):302-12), Ara h 1 также играет важную роль в патогенезе аллергии на арахис, причем многочисленные исследования сообщают о сильных корреляциях между тяжестью симптомов и реактивностью IgE в отношении как Ara h 1, так и Ara h 2 (Glaumann et al. Allergy. 2012; 67(2):242-7; Chiang et al. Pediatr Allergy Immunol. 2009; 21(2 Pt 2):e429-38; Asarnoj et al. Allergy. 2010, 65(9): 1189-95; Moverare et al. Int Arch Allergy Immunol 2011; 156(3):282-90; Lin et al. J Microbiol Immunol Infect. 2012; Peeters et al. Clin Exp Allergy. 2007; 37(1):108-15). Ara h 1 является наиболее распространенным основным аллергеном в арахисе, составляя 12-16% от общего количества белка арахиса (Koppelman et al. Allergy. 2001; 56(2): 132-7).
Тем не менее, не ограничивая каким-либо образом данное изобретение, аллерген Ara h 1 представляет собой гликопротеин запасных белков семян семейства 7S или вицилин. Концентрация Ara h 1 в арахисах возрастает с увеличением размера ядра (4-16 мг экстрагированного Ara h 1/ г арахиса), поэтому экспрессия белка связана со зрелостью арахиса (Pomes et al. 2006, Clin. Exp. Allergy 36(6):824-30). Ara h 1 представляет собой гомотример, удерживаемый вместе посредством гидрофобных областей на дистальных концах мономеров, где расположено большинство эпитопов, связывающих IgE. Каждый мономер 64,5 кДа имеет мотив cupin, который состоит из двух коровых β-цилиндров, каждый из которых связан с петельным доменом из α-спиралей.
Ссылку на "Ara h 1" следует понимать как ссылку на все формы этой молекулы, в том числе ссылку на любые изоформы, которые могут возникнуть в связи с альтернативным сплайсингом мРНК Ara h 1, функциональные мутанты или полиморфные формы Ara h 1. Следует также иметь в виду, что это дополнительно распространяется на любой белок, кодируемый геном Ara h 1, любой полипептид субъединицы, например, форм-предшественников, которые могут быть получены, существующие либо в виде мономера, мультимера, либо слитого белка. Она также включает ссылку на аналоги или эквиваленты Ara h 1, которые могут наблюдаться при условии, что продукт, который, естественно, включает Ara h 1, является получаемым синтетически с целью получения продукта, например, в виде пищевой добавки. Настоящее изобретение, таким образом, предлагает эпитопы и способы их применения в диагностике и лечении любого состояния, характеризующегося повышенной чувствительностью к Ara h 1 или Ara h 1 - подобной молекуле, такого как аллергия на арахис, аллергия на лесные орехи или аллергия на антиген, присутствующий в такой композиции, как пищевые продукты, в состав которых также входит Ara h 1. Предпочтительно, указанный Ara h 1 содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11.
Ссылку на "Т-клетки" следует понимать как ссылку на любую клетку, содержащую Т-клеточный рецептор. В связи с этим Т-клеточный рецептор может содержать любую одну или более из α, β, γ и δ цепей. Настоящее изобретение не предназначено быть ограниченным каким-либо конкретным функциональным подклассом Т-клеток, хотя, в предпочтительном варианте реализации изобретения целевая Т-клетка представляет собой Т-хелперную клетку и, еще более предпочтительно, клетку типа Th2 и/или клетку Treg. В связи с этим, ссылку на "изменение функции Т-клеток" следует понимать как ссылку на изменение какой-либо одной или нескольких функций, которые способна выполнять Т-клетка. Например, целевой функцией может быть пролиферация, дифференцирование или другая форма клеточной функциональной активности, такая как образование цитокинов. В одном варианте реализации изобретения целевая функциональная активность представляет собой пролиферацию.
С точки зрения "модификации функции" Т-клеток, выделенных у субъектов, имеющих состояние, характеризующееся аберрантным, нежелательным или неадекватным иммунным ответом на Ara h 1 или на композицию, которая содержит Ara h 1, следует понимать, что это не обязательно ссылка на изменение функции всех Т-клеток в данном биологическом образце, а, скорее всего, на самом деле, существует для отражения модификации функционирования лишь некоторых из Т-клеток в образце. Например, только часть клеток Т-хелперов в данном образце Т-клеток может функционально реагировать на контакт с целевым пептидом. Такой частичный ответ следует понимать как попадающий в пределы объема по данному изобретению. Следует также понимать, что Т-клетки, которые получены от субъекта, могут быть свежесобранными Т-клетками или они могут претерпевать некоторую форму in vitro или in vivo манипуляции перед тестированием. Например, Т-клеточные линии могут быть получены из образца клеток, и именно эти Т-клеточные линии, которые затем образуют субъект, полученный из Т-клеточной популяции, испытываемую в соответствии с данным изобретением. В тех случаях, когда целевой функциональной активностью является пролиферация Т-клеток, анализ пролиферации Т-клеток проводят, предпочтительно, таким образом, как описано в данном документе. Еще более предпочтительно, целевая модификация функции Т-клеток представляет собой индукцию пролиферации. В этом отношении, ссылка на " реактивную в отношении Ara h 1" Т-клетку следует понимать как ссылку на Т-клетку, которая функционально отвечает презентирование HLA Т-клеточного эпитопа Ara h 1. Аналогичным образом, ссылку на "Ara h 1 - специфический" IgE следует понимать как ссылку на IgE, направленный на В-клеточные эпитопы Ara h 1. Ссылка на "аберрантный, нежелательный или иной нецелесообразный" иммунный ответ должна быть понята как ссылка на любую форму физиологической активности, которая включает активацию и/или функционирование одной или нескольких иммунных клеток, где такая активность является неприемлемой, в которой она имеет неподходящий тип или проистекает в неуместной степени. Он может быть аберрантным, при этом, согласно известным иммунологических принципам, он либо не происходит, когда должен, либо, в ином случае, может произойти, когда не должен. В другом примере, иммунный ответ может быть неуместным в том, что он является физиологически нормальным ответом, но который не является необходимым и/или нежелательным, как это происходит по отношению к ответам гиперчувствительности типа I на безвредные аллергены. В контексте по данному изобретению, этот иммунный ответ может быть направлен на Ara h 1 или он может быть направлен на другой аллерген, который присутствует в композиции вместе с Ara h 1. Не ограничивая данное изобретение какой-либо теорией или механизмом действия, было установлено, что даже там, где реакция гиперчувствительности направлена на аллерген, отличный от Ara h 1, аллерген, который присутствует в композиции, которая, тем не менее, включает Ara h 1, лечение с помощью способа по данному изобретению, направленного на Ara h 1, тем не менее вызывает положительную модуляцию Th2 и такую функциональность Treg, что гиперчувствительность, которая существует по отношению к несвязанному аллергену, тем не менее уменьшается. Предпочтительно, указанный иммунный ответ представляет собой гиперчувствительность к арахису.
Под "гиперчувствительностью к арахису" имеют в виду индукцию клинических симптомов IgE-опосредованной гиперчувствительности к арахису. Тем не менее, следует понимать, что, хотя клинические симптомы могут быть очевидны, не все такие индивидуумы будут обязательно демонстрировать определяемые уровни специфических к арахису IgE сыворотки крови, которые измеряют с помощью Kallestad Allercoat EAST System (Sanofi-Pasteur Diagnostics, США), хотя такие индивидуумы, тем не менее, как следует понимать, могут попадать в рамки определения тех, которые демонстрируют "гиперчувствительность к арахису". В альтернативном варианте, тестирование может продолжить применение систем Pharmacia или UniCap. Ссылку на "гиперчувствительность к Ara h 1" следует понимать как имеющую соответствующее значение в контексте реактивности в отношении белка Ara h 1.
В дополнительном родственном аспекте предлагают композицию, содержащую один или более пептидов, каждый из пептидов которой имеет до 60 последовательно расположенных аминокислот в длину и пептиды которой содержат одну или более коровых эпитопных областей Т-клетки Ara h 1, выбранных из списка, состоящего из:
или функциональные производные или гомологи, пептиды которой способны снижать гиперчувствительность Ara h 1 или гиперчувствительность к композиции, содержащей Ara h 1 при введении субъекту, имеющему состояние, характеризующееся указанной гиперчувствительностью.
Снижение гиперчувствительности к Ara h 1 (и гиперчувствительность к аллергену в целом) обсуждается более подробно ниже. Вкратце, однако, это может принять форму либо частичного, либо полного снижения чувствительности, либо вызывает толерантность индивидуума либо конкретно к Ara h 1, либо к арахису, либо другим белкам в целом.
Ссылка на "пептид" включает ссылку на пептид, полипептид или белок или их части. Пептид может быть гликозилированным или негликозилированным и/или может содержать ряд других молекул, слитых, сшитых, связанных или иным образом ассоциированных с белком, таким как аминокислоты, липиды, углеводы или другие пептиды, полипептиды или белки. Ссылка далее на "пептид" включает пептид, содержащий последовательность аминокислот, а также пептид, связанный с другими молекулами, такими как аминокислоты, липиды, углеводы или другие пептиды, полипептиды или белки.
"Производные" включают фрагменты, сегменты, части и варианты из натуральных, синтетических или рекомбинантных источников, в том числе слитых белков. Части или фрагменты включают, например, активные области целевого пептида. Производные могут быть получены с помощью вставки, делеции или замены аминокислот. Аминокислотные инсерционные производные включают аминокислоты и/или карбоксильные концевые слияния, а также вставки внутри одной или нескольких аминокислот. Инсерционные варианты аминокислотных последовательностей представляют собой те, в которых один или более аминокислотных остатков вводят в заранее определенном сайте в белок, хотя также возможны случайные вставки с помощью подходящего скрининга полученного продукта. Делеционные варианты характеризуются удалением одной или нескольких аминокислот из последовательности.
Варианты с замещенными аминокислотами представляют собой такие, в которых по меньшей мере один остаток в последовательности был удален, а другой остаток вставлен на его место. Пример вариантов с замещенными аминокислотами представляют собой консервативные аминокислотные замены. Консервативные аминокислотные замены обычно включают замены в пределах следующих групп: глицин и аланин; валин, изолейцин и лейцин; аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота; аспарагин и глутамин; серии и треонин; лизин и аргинин; и фенил аланин и тирозин. Присоединения к аминокислотным последовательностям включают слияния с другими пептидами, полипептидами или белками.
Химические и функциональные эквиваленты целевого пептида следует понимать как молекулы, обладающие какой-либо одной или несколькими функциональными активностями этих молекул, и могут быть получены из любого источника, например, быть химически синтезированными или определенными с помощью способов скрининга, таких как скрининг натуральных продуктов.
Гомологи включают пептиды, полученные из других, отличных от арахиса сортов, таких как пептиды, полученные из других лесных орехов. Аналоги, предусмотренные в данном документе, включают, но не ограничиваясь этим, модификацию в боковых цепях, включение не встречающихся в природе аминокислот и/или их производных во время синтеза пептида, полипептида или белка и применение сшивающих средств и других способов, которые накладывают конформационные ограничения на белокподобные молекулы или их аналоги. Мутанты включают молекулы, которые демонстрируют измененную функциональную активность (например, пептиды Ara h 1, которые экспрессируют один или более Т-клеточных эпитопов, но не имеют реактивности В-клеток).
Примеры модификаций боковой цепи, рассматриваемые в данном изобретении, включают модификацию аминогрупп, такие как с помощью восстановительного алкилирования по реакции с альдегидом с последующим восстановлением с помощью NaBH4; амидинирования с метилацетимидатом; ацилирования уксусным ангидридом; карбамоилирования аминогрупп цианатом; тринитрибензилирования аминогрупп 2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислоты (TNBS); ацилирования аминогрупп янтарным ангидридом и тетрагидрофталевым ангидридом; и пиридоксилирования лизина пиридоксаль-5-фосфатом с последующим восстановлением с помощью NaBH4.
Группа гуанидина остатков аргинина может быть модифицирована с образованием гетероциклических продуктов конденсации с помощью таких реагентов, как 2,3-бутандион, фенилглиоксаль и глиоксаль.
Карбоксильная группа может быть модифицирована с помощью активации via образования О-ацилизомочевины с последующей дериватизацией, например, в соответствующий амид.
Сульфгидрильные группы могут быть модифицированы такими способами, как карбоксиметилирование иодуксусной кислотой или иодацетамидом; окисление пермуравьиной кислотой до цистеиновой кислоты; образование смешанных дисульфидов с другими тиоловыми соединениями; реакция с малеимидом, малеиновым ангидридом или другим замещенным имидом малеиновой кислоты; формирование ртутных производных с применением 4-хлоромеркурибензоата, 4-хлоромеркурифенилсульфоновой кислоты, хлорида фенилртути, 2-хлоромеркури-4-нитрофенола и других ртутьсодержащих соединений; карбамоилирование цианатом при щелочном рН.
Остатки триптофана могут быть модифицированы, например, окислением N-бромсукцинимидом или алкилированием индольного кольца с помощью 2-гидрокси-5-нитробензилбромида или сульфенильных галогенидов. Остатки тирозина, с другой стороны, могут быть изменены с помощью нитрования тетранитрометаном с образованием производного 3-нитротирозина.
Модификация имидазольного кольца остатка гистидина может быть выполнена с помощью алкилирования производными иодуксусной кислоты или N-карбоэтоксилирования с диэтилпирокарбонатом.
Примеры включения не встречающихся в природе аминокислот и производных в процессе синтеза белка включают, но не ограничиваясь этим, применение норлейцина, 4-аминомасляной кислоты, 4-амино-3-гидрокси-5-фенилпентановой кислоты, 6-аминокапроновой кислоты, трет-бутилглицина, норвалина, фенилглицина, орнитина, саркозина, 4-амино-3-гидрокси-6-метилгептановой кислоты, 2-тиенилаланина и/или D-изомеров аминокислот.Список не встречающихся в природе аминокислот, предусмотренных в данном документе, приведены в Таблице 1.
Сшивающие средства могут быть применены, например, для стабилизации 3D-конформаций с применением гомо-бифункциональных сшивающих средств, таких как бифункциональные имидоэфиры, имеющие разделительные группы (СН2)n с от n=1 до n=6, глутаральдегид, N-гидроксисукцинимидные сложные эфиры и гетеро-бифункциональные реагенты, которые обычно содержат амино-реактивный фрагмент, такой как N-гидроксисукцинимид и другой реакционноспособный фрагмент, специфический к другой группе.
Возможно изменить структуру пептида согласно изобретению для различных целей, таких как для увеличения растворимости, повышения терапевтической или профилактической эффективности, повышения стабильности и увеличения устойчивости к протеолитической деградации. Может быть получен модифицированный пептид, в котором была изменена последовательность аминокислоты, например, с помощью аминокислотной замены, делеции или присоединения, для того, чтобы изменить иммуногенность и/или снизить аллергенность. Аналогичным образом, для получения того же результата, к пептидам по изобретению могут быть добавлены компоненты.
Например, пептид может быть модифицирован таким образом, чтобы приобрести способность индуцировать Т-клеточную анергию. В этом случае, критические остатки для связывания рецепторов Т-клеток могут быть определены с применением известных технологий (например, замены каждого остатка и определения наличия или отсутствия реактивности Т-клеток). В одном примере, эти остатки, которые, как показано, важны для взаимодействия с Т-клеточным рецептором, могут быть изменены с помощью замены незаменимой аминокислоты на другой, предпочтительно, подобный остаток аминокислоты (консервативное замещение), присутствие которого, как показано, изменяет реакционную способность Т-клеток или функционирование Т-клеток. Кроме того, эти аминокислотные остатки, которые не являются незаменимыми при взаимодействии Т-клеточного рецептора, могут быть изменены с помощью замены на другую аминокислоту, чье включение затем может изменить реакционную способность Т-клеток или функционирование Т-клеток, но не, например, устранить связывание с соответствующими белками МНС. В еще одном примере, могут быть созданы мутантные пептиды, которые демонстрируют нормальное связывание Т-клеток, но нейтрализует связывание IgE.
Иллюстративные консервативные замены подробно описаны в Таблице 2 ниже и включают:
Подобные модификации будут приводить к получению молекул, входящих в пределы объема "мутантов" целевого пептида, как определено в данном документе. "Мутанты" следует понимать, как ссылку на пептиды, которые имеют одну или более структурных особенностей или функциональные активности, которые отличаются от тех, которые демонстрируются эквивалентом немутировавшего пептида.
Пептиды по изобретению могут быть также модифицированы для того, чтобы включать один или более полиморфизмов, происходящих из природных аллельных вариаций и D-аминокислот, ненатуральных аминокислот или аналогов аминокислот, которые могут быть замещены в пептидах с получением модифицированных пептидов, попадающих в пределы объема изобретение. Пептиды с помощью известных технологий также могут быть модифицированы конъюгацией с полиэтиленгликолем (ПЭГ). Репортерные группы также могут быть добавлены для облегчения очистки и потенциально увеличивают растворимость пептидов согласно изобретению. Для введения модификаций, которые могут быть полезными в широком диапазоне целей, также могут быть применены другие известные типы модификаций, в том числе вставки сайтов расщепления специфическими эндопротеазами, присоединение функциональных групп или замена гидрофобных остатков с менее гидрофобными остатками, а также сайт-направленного мутагенеза ДНК, кодирующей пептиды по изобретению. Различные модификации пептидов согласно изобретению, которые были упомянуты выше, упоминают только в виде примера и предназначены только для того, чтобы свидетельствовать о широком диапазоне модификаций, которые могут быть произведены.
Как подробно описано выше, данное изобретение относится к пептидам, которые сохраняют все или некоторые из их способности взаимодействовать с Т-клетками, но проявляют частично или полностью ингибированную, нейтрализованную или иным образом отрицательно регулированную реактивность антител. Осуществление отрицательной регуляции реактивности антител может быть достигнуто любым подходящим способом, способы которых хорошо известны специалистам в данной области техники. Например, в том случае, когда В-клеточный эпитоп определяют с помощью его линейной аминокислотной последовательности, можно добавлять, удалять или заменить один или более аминокислотных остатков, для того, чтобы выполнить мутантную линейную последовательность, отличающуюся от последовательности, встречающейся в природе. В тех случаях, когда эпитоп может быть определен дополнительно, или в альтернативном варианте с помощью конформационного эпитопа, можно обратиться к нарушению этой конформации, нарушая 2ю или, при условии, что существуют гомодимеры или гетеродимеры, 3ю структуру пептида. Это может быть достигнуто, например, с помощью нарушением формирование связей, таких как дисульфидные связи, которые, как известно, стабилизируют 2ю и/или 3ю структуры. С точки зрения Т-клеточных эпитопов, определенных выше, эти эпитопные область не содержат эпитопы В-клеток.
Эпитопы, определенные с помощью SEQ ID NO: 1-10, представляют собой коровые эпитопные области Т-клетки Ara h 1, которые были определены также с целью продемонстрировать вырождение HLA, в частности, презентирование с помощью HLA-DQ, что крайне важно с точки зрения создания эффективного режима лечения. Следует понимать, что композиция по данному изобретению может включать одну из перечисленных коровых эпитопных областей или может содержать две или более из указанных коровых эпитопных областей.
В одном варианте реализации изобретения указанная композиция содержит любые две эпитопные области, три эпитопные области, четыре эпитопные области, пять эпитопных областей, шесть эпитопных областей, семь эпитопных областей, восемь эпитопных областей, девять эпитопных областей или десять эпитопных областей.
В одном варианте реализации изобретения предлагают композицию, содержащую один или более пептидов, каждый из пептидов которой имеет до 60 последовательно расположенных аминокислот в длину и пептиды которой содержат эпитоп NEGVIVKVSK (SEQ ID NO: 3) вместе с одной или несколькими коровыми эпитопными областями Т-клетки Ara h 1, выбранными из списка, состоящего из:
или их функциональных производных или гомологов.
В еще одном варианте реализации изобретения предлагают композицию, содержащую один или более пептидов, каждый из пептидов которой имеет до 60 последовательно расположенных аминокислот в длину и пептиды которой содержат эпитоп EGALML (SEQ ID NO: 6) вместе с одной или несколькими коровыми эпитопными областями Т-клетки Ara h 1, выбранными из списка, состоящего из:
или их функциональных производных или гомологов.
В соответствии с этими аспектами, в других вариантах реализации изобретения указанная композиция содержит по меньшей мере три пептида, по меньшей мере четыре пептида, по меньшей мере пять пептидов, по меньшей мере шесть пептидов, по меньшей мере семь пептидов, по меньшей мере восемь пептидов, по меньшей мере девять пептидов или десять пептидов.
Как подробно описано выше, композиция по данному изобретению содержит HLA-вырожденные коровые эпитопные области Т-клеток Ara h 1. Указанные коровые эпитопные области могут быть введены в виде отдельных пептидов или они могут образовывать часть более крупной структуры, такой как более длинный пептид или не-пептидная структура. Как будет оценено специалистами в данной области техники, эпитопная область иногда может быть слишком мала, сама по себе, чтобы индуцировать иммунный ответ.Гаптены являются примером этого типа эпитопа. Коровые эпитопные области по данному изобретению, следовательно, могут быть составлены вместе с любой белковой или небелковой молекулой-носителем, так, чтобы достигать необходимого уровня иммуногенности.
В одном варианте реализации изобретения целевые коровые эпитопные области образуют часть более крупного пептида до 30 последовательно расположенных аминокислот в длину. Целевой пептид может иметь 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16,17,18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 аминокислот в длину. Предпочтительно, целевой пептид имеет 12-25 аминокислот в длину, 15-25 аминокислот в длину, 15-20 аминокислот в длину или 10-20 аминокислот в длину.
В тех случаях, когда композиция выполнена таким образом, что коровые эпитопные области изобретения содержатся в составе более крупного пептида, следует понимать, что любой данный пептид может быть сконструирован для того, чтобы включать одну или более коровых эпитопных областей. С этой целью, в одном варианте реализации по данному изобретению, один или более пептидов целевой композиции выбирают из списка:
В дополнительном аспекте этого варианта реализации изобретения указанная композиция содержит пептид, определенный как SEQ ID NO: 15, 16 или 17, вместе с одним или несколькими пептидами, определенными как SEQ ID NO: 12-14 или 18-33.
В дополнительном аспекте этого варианта реализации изобретения указанная композиция содержит пептид, определенный как SEQ ID NO: 23, вместе с одним или несколькими пептидами, определенными как SEQ ID NO: 12-22 или 24-33.
В еще одном аспекте, один или более пептидов целевой композиции выбирают из списка:
В дополнительном аспекте этого варианта реализации изобретения указанная композиция содержит пептид, определенный как SEQ ID NO: 15 или 16, вместе с одним или несколькими пептидами, определенными как SEQ ID NO: 12-14, 18-26 или 28-32.
В дополнительном аспекте этого варианта реализации изобретения указанная композиция содержит пептид, определенный как SEQ ID NO: 23, вместе с одним или несколькими пептидами, определенными как SEQ ID NO: 12-16, 18-22, 24-26 или 28-32.
В еще одном отличном варианте реализации изобретения, один или более пептидов целевой композиции выбирают из списка:
В дополнительном аспекте этого вариант реализации изобретения указанная композиция содержит пептид, определенный как SEQ ID NO: 15, вместе с одним или несколькими пептидами, определенными как SEQ ID NO: 14, 21, 23, 24, 29 или 30.
В еще одном дополнительном аспекте этого варианта реализации изобретения указанная композиция содержит пептид, определенный как SEQ ID NO: 23, вместе с одним или несколькими пептидами, определенными как SEQ ID NO: 14, 15, 21, 24, 29 или 30.
В еще одном варианте реализации изобретения указанная композиция содержит пептиды, определенные как SEQ ID NO: 14,15, 21, 23, 24, 29 и 30.
Еще в одном варианте реализации изобретения указанная композиция содержит пептиды, определенные как SEQ ID NO: 14, 16, 21, 23, 24, 29 и 30.
В еще одном отличном варианте реализации изобретения указанная композиция содержит пептиды, определенные как SEQ ID NO: 14, 15, 22, 23, 24, 29 и 30.
Еще в одном отличном варианте реализации изобретения указанная композиция содержит пептиды, определенные как SEQ ID NO: 14, 15, 21, 23,24, 29 и 32.
В контексте данного изобретения, следует понимать, что там, где делается ссылка на применение пептида, определенного как SEQ ID NO: 14, этот пептид может быть замещен:
В тех случаях, когда делается ссылка на применение пептида, определенного как SEQ ID NO: 15, этот пептид может быть замещен пептидом, определенным как SEQ ID NO: 16 или 17.
В тех случаях, когда ссылка на применение пептида, определенного как SEQ ID NO: 21, этот пептид может быть замещен пептидом, определенным как:
В тех случаях, когда ссылка на применение пептида, определенного как SEQ ID NO: 29, этот пептид может быть замещен пептидом, определенным как:
В тех случаях, когда ссылка на применение пептида, определенного как SEQ ID NO: 30, этот пептид может быть замещен пептидом, определенным как:
В еще одном дополнительном аспекте этих вариантов реализации изобретения указанная композиция содержит 3, 4, 5 или 6 перечисленных пептидов.
В еще одном варианте реализации указанная композиция содержит все 7 пептидов.
Пептиды по данному изобретению могут быть получены с помощью рекомбинантных или синтетических химических средств. В соответствии с предпочтительным аспектом данного изобретения, предлагают рекомбинантный пептид или его мутант, который предпочтительно является иммунологически реактивным к Т-клеткам индивидуумов с гиперчувствительностью к арахису, что выражается с помощью экспрессии в клетке-хозяине, трансформированной вектором, кодирующим пептидную последовательность по данному изобретению. Пептид может быть слит с другим пептидом, полипептидом или белком. Кроме того, пептид может быть получен с помощью технологий химического синтеза, таким образом, как с помощью процедуры твердофазного синтеза по Меррифилду. Кроме того, хотя синтетические пептиды последовательности, приведенные выше, представляют собой предпочтительный вариант реализации изобретения, данное изобретение также относится к биологически чистым препаратам встречающихся в природе пептидов или их фрагментов. Под "биологически чистый" подразумевают препарат, содержащий по меньшей мере около 60%, предпочтительно, по меньшей мере около 70%, или, более предпочтительно, по меньшей мере около 80% и, еще более предпочтительно, по меньшей мере около 90% или более, как определено по массе, активности или другими подходящими способами,
Поэтому данное изобретение следует понимать как охватывающее пептиды, которые содержат по меньшей мере одну коровую эпитопную область Т-клетки Ara h 1, как определено выше, в сочетании с другими аминокислотами (которая может быть или может не быть встречающейся в природе) или другими химическими соединениями. В предпочтительном аспекте изобретения подобные пептиды могут содержать один или более эпитопов Ara h 1, эпитопы которых представляют собой коровые эпитопные области Т-клеток. Пептиды с одним или несколькими эпитопами Ara h 1 являются желательными для повышенной терапевтической эффективности.
В другом аспекте, данное изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеотидов, кодирующую или комплементарную последовательности, кодирующей эпитопы и пептиды, как определено выше, или его производное, гомолог или аналог.
Следует понимать, что ссылка на "пептиды" включает ссылку на пептиды, содержащие один или более Т-клеточных эпитопов. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая целевой пептид, предпочтительно представляет собой последовательность дезоксирибонуклеиновой кислоты, такой как кДНК, или геномную последовательность. Геномная последовательность может содержать экзоны и интроны. Геномная последовательность может также содержать промоторную область или другие регуляторные области.
Молекула нуклеиновой кислоты может быть лигирована с вектором экспрессии, способным к экспрессии в прокариотической клетке (например, Е. coli) или эукариотической клетке (например, дрожжевых клетках, клетках грибов, клетках насекомых, клетках млекопитающих или клетках растений). Молекула нуклеиновой кислоты может быть лигирована или слита или иным образом связана с молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей другой элемент, такой как, например, сигнальный пептид. Она может также содержать дополнительную информацию в виде нуклеотидной последовательности, которая слита, связана или иным образом связана с ним либо на 3', либо на 5' концевых участках, или и на 3', и на 5'-концевых участках. Молекула нуклеиновой кислоты может также быть частью вектора, такого как вектор экспрессии. Последний вариант реализации изобретения обеспечивает получение рекомбинантных форм целевого пептида, и эти формы входят в объем данного изобретения.
Такие нуклеиновые кислоты могут быть применены для рекомбинантного получения Т-клеточных эпитопов Ara h 1 или содержащих их белков путем вставки в соответствующий вектор и трансфекции в подходящую клеточную линию. Такие векторы экспрессии и линии клетки-хозяина также составляют аспект изобретения.
При получении пептидов с помощью рекомбинантных технологий клетки-хозяева трансформируются нуклеиновой кислотой, имеющей последовательность, кодирующую пептид согласно изобретению, или функциональный эквивалент последовательности этой нуклеиновой кислоты культивируют в среде, подходящей для конкретных клеток. Пептиды могут быть очищены от клеточной культуральной среды, клеток-хозяев или их обоих с применением технологий, хорошо известных в данной области техники, таких как ионообменная хроматография, гель-фильтрационная хроматография, ультрафильтрация, электрофорез или иммуноочистка с антителами, специфичными к пептиду.
Нуклеиновые кислоты, кодирующие Ara h 1, или пептиды, содержащие коровые эпитопные области Т-клеток Ara h 1, могут быть экспрессированы в бактериальные клетки, такие как Е. coli, клетки насекомых, дрожжи или клетки млекопитающих, такие как клетки яичника китайского хомячка (СНО). Подходящие векторы экспрессии, промоторы, энхансеры и другие элементы, контролирующие экспрессию, упоминаются в Sambruck et al (1989). Другие подходящие векторы экспрессии, промоторы, энхансеры и другие элементы экспрессии хорошо известны специалистам в данной области техники. Примеры подходящих векторов экспрессии в дрожжах включают Yep Sec 1 (Balderi et al., 1987, Embo J., 6:229-234); pMFa (Kurjanand Herskowitz., 1982, Cell, 30:933-943); JRY88 (Schultz etal, 1987, Gene., 54: 113-123) и pYES2 (Invitrogen Corporation, Сан Диего, Калифорния). Эти векторы находятся в свободном доступе, в виде бакуловируса и систем экспрессии млекопитающих. Например, система бакуловируса является коммерчески доступной (ParMingen, Сан Диего, Калифорния) для экспрессии в клетки насекомых, а вектор PMSG является коммерчески доступным (Pharmacia, Пискатауэй, Нью-Джерси) для экспрессии в клетках млекопитающих.
Для экспрессии в Е. coli подходящие векторы экспрессии включают, в частности, pTrc (Amann et al., 1998, Gene., 69:301-315) pGex (Amrad Corporation, Мельбурн, Австралия); pMal (N.E. Biolabs, Беверли, Массачусетс); pRit5 (Pharmacia, Пискатауэй, Нью-Джерси); pEt-1 Id (Novagen, Мэддисон, Висконсин) (Jameel et al., 1990, J. Virol, 64:3963-3966) и pSem (Knapp et al., 1990, Bio Techniques., 5:280-281). Применение pTRC и pEt-1 Id, например, приведет к экспрессии неслитого белка. Применение pMal, pRit5, pSem и pGex приведет к экспрессии аллергена, слитого с мальтозо-связывающим белком Е (pMal), белком A (pRit5), усеченного галактозидазой (PSEM) или глутатион-8-трансферазой (pGex). При условии, что Т-клеточный эпитоп Ara h 1 или пептид, содержащий его, экспрессируется в виде слитого белка, особенно предпочтительным является введение сайта ферментативного расщепления в месте слитого перехода между белком-носителем и соответствующих пептидом. Пептид по изобретению может быть извлечен из слитого белка с помощью ферментативного расщепления по ферментативному сайту и биохимической очистки с применением традиционных технологий очистки белков и пептидов. Различные векторы также имеют различные промоторные области, которые делают возможной конститутивную или индуцированную экспрессию или температурную индукцию. Кроме того, может быть целесообразно экспрессировать рекомбинантные пептиды в различных хозяевах Е. coli, которые имеют измененную способность к разложению рекомбинантно экспрессированных белков. В альтернативном варианте, может быть предпочтительным изменить последовательность нуклеиновой кислоты для применения кодонов, предпочтительно используемых Е. coli, где такое изменение нуклеиновой кислоты не влияет на аминокислотную последовательность экспрессированных белков.
Клетки-хозяева могут быть трансформированы для того, чтобы экспрессировать нуклеиновые кислоты по изобретению с применением традиционных способов, таких как соосаждение фосфатом кальция или хлоридом кальция, DEAE-декстран-опосредованной трансфекции или электропорации. Подходящие способы трансформации клеток-хозяев могут быть найдены в Sambruck et al. (1989) и других лабораторных руководствах. Последовательность нуклеиновой кислоты по изобретению может также быть химически синтезирована с применением стандартных технологий.
В дополнение к рекомбинантному получению пептидов согласно изобретению, нуклеиновые кислоты могут быть применены в качестве зондов для экспериментальных задач или очистки.
Идентификация и синтез Т-клеточных эпитопов Ara h 1, как описано в данном документе, на данный момент способствует развитию ряда диагностических и профилактических/терапевтических протоколов лечения для применения по отношению к иммунологическим состояниям, связанным с арахисом. Также облегченной является разработка реагентов для применения в этом отношении.
Соответственно, данное изобретение следует понимать как то, которое распространяется на применение пептидов или функциональных производных, гомологов или их аналогов в терапевтическом и/или профилактическом лечении пациентов. Подобные способы лечения включают, но не ограничиваясь этим:
(i) Введение целевых пептидов или их мутантов пациенту с целью снижения чувствительности или индуцирования иммунологической толерантности к Ara h 1 или Ara h 1-подобных молекул. Это может быть достигнуто, например, с помощью индуцирования анергии Th2, направленной на Ara h 1, или апоптоза. Такой результат может быть достигнут с помощью любой из ряда технологий, включая применение пептидов, которые поддерживают реактивность Т-клеточного эпитопа, но которые либо естественным путем, либо в результате мутации не могут подвергаться связыванию с IgE. В альтернативном варианте, можно использовать протоколы десенсибилизация/лечения, которые основаны на введении конкретных концентраций данного пептида в соответствии с конкретным режимом для того, чтобы вызвать толерантность. Такая методология может устранить гиперчувствительность Ara h 1 или это может уменьшить тяжесть гиперчувствительности Ara h 1 или чувствительность к аллергену, присутствующему в композиции, содержащей Ara h 1, такую как аллергия к арахису. Ссылку в данном документе на лечении чувствительности Ara h 1 следует понимать как охватывающую в своем объеме лечение состояний, характеризующихся чувствительностью к композициям, которые содержат Ara h 1, такие как арахис, в целом, даже если чувствительность направлена на аллерген, отличный от Ara h 1.
Предпочтительно, такой режим лечения не способен модифицировать ответ Т-клеток или ответ и В, и Т-клеток соответствующих индивидуумов. Как применяют в данном документе, модификация аллергической реакции индивидуума, страдающего от гиперчувствительности к арахису, может быть определена как индуцирующую либо толерантность, либо ослабление симптомов по отношению к молекулам Ara h 1, как определено с помощью стандартных клинических процедур (Varney et al. 1991 British Medical Journal 502:265-269). Ослабление симптомов включает любое снижение аллергической реакции у индивидуума на Ara h 1 после того, как был завершен режим лечения. Это ослабление может быть субъективным или клинически установленным, например, с помощью стандартных кожных проб, известных в данной области техники.
Воздействие человека на пептиды по данному изобретению, которые содержат пептиды по меньшей мере одного Т-клеточного эпитопа, может вызывать толерантность или вызывать анергию соответствующих Т-клеточных субпопуляций таким образом, что они становятся невосприимчивыми к Ara h 1, и не участвуют в стимулировании иммунного ответа при подобном воздействии. Предпочтительно, пептиды согласно изобретению сохраняют иммуногенные Т-клеточные эпитопы, но обладают способностью нейтрализовать связывание IgE. Более того, даже если аллерген, который является предметом обсуждения, не является Ara h 1, но направлен на другой аллерген, который присутствует в той же композиции, что и Ara h 1 (например, аллерген другой арахиса), иммунизация с помощью Ara h 1 тем не менее может вызывать супрессирующий эффект свидетеля, который действует таким образом, что уменьшает степень чувствительности к этому аллергену.
Введение пептида по изобретению может модифицировать профиль секреции цитокинов по сравнению с воздействием встречающегося в природе аллергена Ara h 1. Это воздействие может также влиять на Т-клеточные субпопуляции, которые обычно участвуют в аллергической реакциях, для мигрирования с сайта или сайтов нормального контакта с аллергеном к сайту или сайтам терапевтического введения. Такое перераспределение субпопуляций Т-клеток может улучшить или уменьшить способность иммунной системы индивидуума стимулировать обычный иммунный ответ на сайте нормального контакта с аллергеном, что приводит к уменьшению симптомов аллергии.
Модификация ответа В-клеток может быть достигнута, например, посредством модуляции профиля цитокина, производимого Т-клетками, как описано выше. В частности, уменьшение Т-клеток, полученных при получении IL-4 и IL-13, тем самым уменьшает синтез IgE.
(ii) Пептиды по данному изобретению могут быть применены в качестве адсорбента для удаления Т-клетки, направленных на Ara h 1, из биологического образца или у пациента.
Соответственно, в другом аспекте данное изобретение относится к способу лечения и/или профилактики состояния у субъекта, чье состояние характеризуется аберрантным, нежелательным или иным неадекватным иммунным ответом на Ara h 1 или аллерген в композиции, содержащей Ara h 1, причем указанный способ включает введение указанному субъекту эффективного количества композиции, как определено выше, в течение времени и в условиях, достаточных для устранения или уменьшения присутствия или функции у указанного субъекта Т-клеток, направленных на указанный Ara h 1 или другой аллерген.
Предпочтительно, указанное состояние представляет собой гиперчувствительность к арахису или лесным орехам, содержащим Ara h 1 или Ara h 1 -подобные молекулы, таким как фундук, миндаль или бразильские орехи.
В одном варианте реализации изобретения указанный способ снижает чувствительность или индуцирует иммунологическую толерантность к Ara h 1 или другому аллергену указанной композиции.
В другом варианте реализации изобретения указанная десенсибилизация или толерантность достигается с помощью индукции анергии ТЫ или апоптоза.
В еще одном варианте реализации изобретения указанная десенсибилизация или толерантность достигается с помощью индукции Ara h 1 - специфических клеток Treg.
"Эффективное количество" означает количество, необходимое для того, чтобы по меньшей мере частично достичь желаемый иммунный ответ, отложить наступление, ингибировать прогрессирование или остановить вообще начало или прогрессирование конкретного подлежащего лечению состояния. Количество изменяется в зависимости от подлежащего лечению состояния здоровья и физического состояния индивидуума, таксономической группы индивидуума, подвергаемого лечению, степени желаемой защиты, состава композиции, оценки медицинской ситуации и прочих факторов. Ожидается, что количество будет падать в относительно широком диапазоне, что может быть определено с помощью обычных испытаний.
Следует также понимать, что композиция по данному изобретению может содержать исключительно эпитопы Ara h 1 или она может также содержать другие эпитопы или молекулы, полезные для достижения терапевтической эффективности, например, в диапазоне эпитопов Ara h 2.
Субъект лечения или профилактики обычно представляет собой млекопитающее, такое как, но не ограничиваясь этим, человек, примат, сельскохозяйственное животное (например, овца, корова, лошадь, осел, свинья), домашнее животное (например, собака, кошка), животное для лабораторных испытаний (например, мышь, кролик, крыса, морская свинка, хомяк), пойманное дикое животное (например, лисица, олень). Предпочтительно, млекопитающим является человек или примат. Наиболее предпочтительно, млекопитающее является человеком.
Ссылка в данном документе на "лечение" и "профилактику" будет рассматриваться в самом широком контексте. Термин "лечение" не обязательно означает то, что субъекта лечат до полного восстановления. Аналогичным образом, "профилактика" не обязательно означает, что субъект в конечном итоге не будет страдать болезненным состоянием. Соответственно, лечение и профилактика включают облегчение симптомов конкретного заболевания или предотвращение или уменьшение риска развития конкретного состояния иным образом. Термин "профилактика" можно рассматривать как снижение тяжести или наступления конкретного состояния. "Лечение" может также уменьшить тяжесть существующего состояния.
Введение пептида по данному изобретению (в дальнейшем именуемое "средство") в виде фармацевтической композиции, может быть выполнено любым удобным способом. Средство фармацевтической композиции, как предполагается, демонстрирует терапевтическую активность при введении в количестве, которое зависит от конкретного случая. Изменение зависит, например, от человека или животного и выбранного средства. Может применяться широкий диапазон доз. Учитывая пациента, на каждый килограмм веса тела в день можно вводить, например, от около 0,1 мг до около 1 мг средства. Режимы дозировки могут быть отрегулированы для того, чтобы предложить оптимальный терапевтический ответ. Например, несколько разделенных доз можно вводить ежедневно, еженедельно, ежемесячно или через другие подходящие интервалы времени или доза может быть пропорционально уменьшена, как указывают в связи со сложившейся ситуацией.
Средство может быть введено удобным способом, например, пероральным, внутривенным (при условии, что является водорастворимым), внутрибрюшинным, внутримышечным, подкожным, внутрикожным, интраназальным, сублингвальным путем или в виде суппозитория или имплантата (например, при применении медленно высвобождающихся молекул). Средство может быть введено в виде фармацевтически приемлемых нетоксичных солей, таких как кислотно-аддитивные соли или комплексы металлов, например с цинком, железом и т.п. (которые рассматривают как соли для целей данной заявки). Примерами таких кислотно-аддитивных солей могут служить гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, малеат, ацетат, цитрат, бензоат, сукцинат, малат, аскорбат, тартрат и тому подобные. Если активный ингредиент следует вводить в виде таблеток, таблетка может содержать связующее вещество, такое как трагакант, кукурузный крахмал или желатин; дезинтегрирующее средство, такое как альгиновая кислота; и смазку, такую как стеарат магния.
В соответствии с этими способами, средство, определенное в соответствии с данным изобретением, может быть введено совместно с одним или несколькими другими соединениями или молекулами. Под "совместным введением" имеется в виду одновременное введение в одной и той же композиции или двух различных композиций одними и теми же или различными путями или последовательное введение одними и теми же или различными путями. Под "последовательным" введением подразумевают разницу во времени от нескольких секунд, минут, часов или дней между введением двух типов молекул. Эти молекулы могут быть введены в любом порядке.
Другой аспект данного изобретения относится к применению композиции, как определено выше, при изготовлении лекарственного средства для лечения состояния у млекопитающего, чье состояние характеризуется аберрантным, нежелательным или иным образом неадекватным иммунным ответом на Ara h 1.
Предпочтительно, указанное состояние представляет собой гиперчувствительность к арахису или лесным орехам, которые содержат Ara h 1 или Ara h 1 - подобные молекулы, таким как фундук.
В еще одном дополнительном аспекте данное изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую композицию, как определено выше, вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями и/или разбавителями. Указанная композиция упоминается в качестве активных ингредиентов.
Фармацевтические формы, пригодные для инъекционного применения, содержат стерильные водные растворы (при условии, что являются водорастворимыми) или дисперсии и стерильные порошки для приготовления стерильных инъекционных растворов или дисперсий, или могут быть в виде крема или другой формы, подходящей для местного применения. Она должна быть стабильной в условиях производства и хранения и должна быть защищена от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Носитель может быть растворителем или дисперсионной средой, содержащей, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и тому подобные), их подходящие смеси и растительные масла. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, с помощью применения покрытия, такого как лецитин, с помощью поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и с применением суперфактантов. Предотвращение действия микроорганизмов может быть достигнуто с помощью различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеросала и тому подобных. Во многих случаях, будет предпочтительно включать изотонические средства, например сахара или хлорид натрия. Пролонгированное всасывание инъекционных композиций может быть осуществлено с применением в композициях средств, задерживающих абсорбцию, например, моностеарата алюминия и желатина.
Стерильные инъекционные растворы получают введением активных соединений в необходимом количестве в соответствующий растворитель с различными другими ингредиентами, перечисленными выше, по мере необходимости, с помощью последующей стерилизации фильтрованием. Как правило, дисперсии получают включением различных стерилизованных активных ингредиентов в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и требуемые другие ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъекционных растворов предпочтительными способами приготовления являются вакуумная сушка и технология сублимационной сушки, которые дают порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный желательный ингредиент из их предварительно стерилизованного фильтрацией раствора.
При условии, что активные ингредиенты соответствующим образом защищены, они могут быть введены перорально, например, с инертным разбавителем или с усваиваемым съедобным носителем, или они могут быть заключены в твердую или мягкую желатиновую капсулу, или они могут быть спрессованы в таблетки, или они могут быть включены непосредственно в пищевые продукты диеты. В случае перорального терапевтического введения активное соединение может быть включено с эксципиентами и применено в виде таблеток для приема внутрь, защечных таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и тому подобных. Такие композиции и препараты должны содержать активного соединения по меньшей мере 1% по массе. Процентное содержание композиций и препаратов может, конечно, варьироваться и обычно может быть в пределах от около 5 до около 80% массы единицы. Количество активного соединения в таких терапевтически применимых композициях, таким образом, будет получено в подходящей дозировке. Предпочтительные композиции или препараты в соответствии с данным изобретением получают таким образом, что единичная дозировка пероральной формы содержит от около 0,1 мкг до 2000 мг активного вещества.
Таблетки, пастилки, пилюли, капсулы и тому подобные могут также содержать компоненты, перечисленные ниже: связующее вещество, такое, как камедь, гуммиарабик, кукурузный крахмал или желатин; наполнители, такие как дикальцийфосфат; дезинтегрирующее средство, такое как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, альгиновая кислота и тому подобные; смазывающее вещество, такое как стеарат магния; и подслащивающее средство, такое как сахароза, лактоза или сахарин, могут быть добавлены или ароматизирующее средство, такое как перечная мята, масло грушанки, или вишневый ароматизатор. При условии, что стандартная лекарственная форма представляет собой капсулу, она может содержать, в дополнение к материалам указанного выше типа, жидкий носитель. В качестве покрытий или для модификации физической формы дозированной единицы могут присутствовать другие различные материалы. Например, таблетки, пилюли или капсулы могут быть покрыты шеллаком, сахаром или ими обоими. Сироп или эликсир могут содержать активное соединение, сахарозу в качестве подслащивающего агента, метил и пропилпарабены в качестве консервантов, краситель и ароматизатор, например вишневый или апельсиновый. Конечно, любой материал, применяемый для получения любой стандартной лекарственной формы, должен быть фармацевтически чистым и по существу нетоксичным в применяемых количествах. Кроме того, активное соединение(я) может быть включено в препараты и составы с замедленным высвобождением.
Фармацевтическая композиция может также содержать генетические молекулы, такие как вектор, способный трансфекцировать клетки-мишени, при условии, что вектор несет молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую модулирующее средство. Вектор может быть, например, вирусным вектором.
Способы введения включают, но не ограничиваясь этим, респираторный (например, интраназально или перорально с помощью аэрозоля), внутритрахеально, назофарингеально, внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно, интракраниально, внутрикожно, внутримышечно, интраокулярно, интратекально, интрацеребрально, интраназально, инфузией, перорально, ректально, с помощью установки внутривенной капельницы, имплантата и сублингвально. Предпочтительно, указанный путь введения является подкожным, внутрикожным или интраназальным.
Еще один аспект данного изобретения относится к композициям, как определено выше, при применении в способе по данному изобретению.
В еще одном аспекте, данное изобретение следует понимать как расширение применения эпитопов и пептидов по данному изобретению в диагностических применениях. Указанные диагностические применения включают, но не ограничиваясь этим:
(i) Для измерения реактивности клеток в отношении Ara h 1 субъекта. Это представляет собой применение, например, по отношению к диагностике и/или мониторингу состояний, характеризующихся аберрантным, нежелательным или иным неадекватным иммунным ответом на Ara h 1. Пептиды могут быть добавлены в раствор или связаны с твердым носителем вместе с клетками, полученными из периферической крови или из либо нефракционированных, фракционированных, либо полученных в виде непрерывной клеточной линии тканевых биопсий. Реактивность в отношении целевого пептида может быть измерена с помощью стандартных анализов пролиферации, таких как включение Н3-тимидина, измерение экспрессированных или секретированных молекул, таких как поверхностные маркеры, цитокины, или других стандартных анализов клеточной активности, которые хорошо известны в данной области техники.
(ii) Применение Т-клеточного эпитопа включает пептиды вместе с анализом Т-клеточной пролиферации, который применяет образец Т-клеток, полученных от субъекта, будет способствовать, например, идентификации чувствительного к Т-клеткам популяции.
Способы выявления Ara h 1 могут быть применены, например, для того, чтобы качественно или количественно обнаружить уровни Ara h 1. Тем не менее, эти способы могут быть также применены для скрининга мутаций или полиморфизмов в Ara h 1, которые могут возникнуть в результате мутации, например, потери реактивности Т-клеток в отношении Ara h 1. Эти способы могут быть применены для целей скрининга пептидных молекул, подходящих для применения в терапевтических или профилактических целях лечения индивидуума, страдающего от гиперчувствительности, связанной с Ara h 1.
Соответственно, еще один аспект данного изобретения относится к способу диагностики или мониторинга состояния млекопитающего, состояние которого характеризуется аберрантным, нежелательным или неадекватным ответом на Ara h 1, где указанный способ включает скрининг Т-клеток, реактивных в отношении Ara h 1, с применением пептидов или эпитопов, определенных выше.
Предпочтительно, указанное состояние представляет собой гиперчувствительность к арахису или лесным орехам, содержащим Ara h 1 или Ara h 1 - подобные молекулы, таким как фундук, миндаль или бразильские орехи.
В другом вариант реализации изобретение относится к диагностическим наборам для применения в диагностической методологии, которая была определена выше.
Данное изобретение будет теперь дополнительно описано со ссылкой на следующие неограничивающие Примеры.
ПРИМЕРЫ
СПОСОБЫ
Субъекты
Взрослые испытуемые с аллергией на арахис были набраны из The Alfred Allergy Clinic, Мельбурн, Австралия (Таблица 4). Все субъекты имели клинические симптомы IgE-опосредованную аллергию на арахис и результат САР арахис-специфичного IgE>1 (>0,49 kUA/1; Pharmacia CAP System™, Pharmacia Diagnostics, Уппсала, Швеция). Субъекты, применяемые для поколения Т-клеточной линии (ТКЛ), генотипировали (HLA-DRB 1, -DQB 1 и -DPB 1, экзон 2) с помощью Victorian Transplantation and Immunogenetics Service (Таблица 5). Исследование было утверждено The Alfred and Monash University Ethics Committees и письменное информированное согласие получено от каждого субъекта.
Антигены
Экстракт сырого арахиса (ЭСА) получали из коммерческого несоленого, сухого жареного арахиса, как описано (Prickett et al. 2011 см. выше; de Leon et al. Clin Exp Allergy. 2003; 33(9): 1273-80). Ara h 1 и Ara h 1 обогащали из ЭСА с помощью жидкостной хроматографии, как описано (Prickett et al. 2011 см. выше). Содержание эндотоксина составляло 1,7,4,0 и 78,0 ЕЭ/мг в случае ЭСА, Ara h 1 и Ara h 1, соответственно (Endpoint Chromogenic LAL assay, Lonza, Уолкерсвилль, США). Пептиды Ara h 1 (Mimotopes, Виктория, Австралия и GenScript USA Inc, Нью-Джерси, США; Таблица 6) восстанавливали при 2 мг/мл в 10% диметилсульфоксида/PBS (20-меры и наборы усеченных пептидов) или отдельно PBS (синтезированные на заказ коровые эпитопные пептиды). Подтверждали, что все антигены не были ни митогенными, ни токсичными, как описано (Eusebius et al. Int Arch Allergy Immunol. 2002; 127(3):234-44).
Получение Ara h l-специфических CD4+ Т-клеточных линий (ТКЛ)
Ara h 1-специфическую олигоклональную ТКЛ получали из мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) субъектов с аллергией на арахис, используя методологию на основе 5,6-карбоксифлуоресцеиндиацетатсукцинимидилового эфира (CFSE) (Mannering et al. J Immunol Methods. 2005; 298(1 -2):83-92) как описано (Prickett et al. 2011 см. выше) с ЭСА (100 пг/мл), Ara h 1 (10 пг/мл) или 20-мерными пептидами, охватывающими последовательность Ara h 1 (перекрывание 11 аминокислот (ак) (17 ак перекрывание с последним пептидом); Таблица 6; 10 пг/мл/пептид) в качестве основных антигенов. Все ТКЛ тестировали на специфичность (пролиферацию) по отношению к 20-мерам Ara h 1 индивидуума (10 пг/мл), а также ЭСА (100 пг/мл) и/или Ara h 1 (10 пг/мл). Коровые эпитопные последовательности картировали в пределах выбранных 20-меров, используя пептидные наборы, усеченные с N- или С-конце 20-мера, как описано (Prickett et al. 2011 см. выше).
Анализы Т-клеток
Все культивирование проводили в RPMI-1640, содержащей 2 мМ L-глутамина, 100 МЕ/мл пенициллина-стрептомицина и 5% инактивированной нагреванием человеческой сыворотки АВ (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, США) (cRPMI). Антиген-индуцированную пролиферацию ТКЛ оценивали с помощью анализов поглощения 3Н-тимидина (3H-TDR), как описано (Prickett et al. 2011 см. выше). Индекс стимуляции (ИС; имп./мин антиген-стимулированных Т-клеток/имп./мин нестимулированных Т-клеток)>2,5 считали положительным, а все положительные ответы подтверждали >2 анализами. HLA-ограничение распознавания эпитопа с помощью ТКЛ оценивали с помощью моноклональных антител (мАт) против HLA-DR (L243), HLA-DQ (SVP-L3) или HLA-DP (В7/21), для того, чтобы презентировать эпитоп, как описано (Prickett et al. 2011 см. выше). Чтобы выявить пептид-индуцированную пролиферацию CD4+Т-клеток в пределах всей РВМС, 7-дневные культуры CFSE-меченого РВМС устанавливали, как описано в случае получения ТКЛ (Prickett et al. 2011 см. выше). В образце анализировали по меньшей мере 10000 CD4+ Т-клеток и рассчитывали ИС как процентное отношение CD4+CFSElo (пролиферированных) клеток с антигеном/процентное отношение CD4+CFSElo клеток без антигена (фон). Порог выявления в случае конкретного ответа в этом анализе оценивали с помощью расширения пептид-специфической ТКЛ от пролиферированных CD4+ клетки в диапазоне значений ИС для трех субъектов. Конкретная ТКЛ может быть получена из разделенных Т-клеток с ИС всего лишь 1,1 у всех трех субъектов (данные не приведены), что позволяет обозначить ИС>1,1 как положительный.
Тест активации базофилов
Активацию базофилов оценивали с помощью позитивной регуляции CD63, выявленной с помощью проточной цитометрии, как описано (Drew et al. JImmunol. 2004; 173(9):5872-9). Положительными контролями были антитела против IgE человека кролика (7,5 мкг/мл; DAKO Corporation, Калифорния, США), N-формил-метионин-лейцин-фенилаланин (fMLP) (0,4 мкг/мл; Sigma) и ЭСА. ЭСА, Ara h 1 и пептиды были испытаны в диапазоне 3 концентраций, отличающихся на порядок (5, 0,5 и 0,05 мкг/мл)
РЕЗУЛЬТАТЫ
Выбор 20-мерных пептидов Ara h 1, содержащих доминантные CD4+ Т-клеточные эпитопы, распознаваемые субъектами с аллергией на арахис
Общее количество 145 Ara h 1-специфических Т-клеточных линий (ТКЛ) получали из РВМС 18 отличных по HLA субъектов с аллергией на арахис (Таблица 4 и 5) с помощью выделения и расширения антиген-специфических (пролиферированных) CD4+CFSElo Т-клеток из 7-дневных CFSE-меченных культур РВМС, стимулированных ЭСА, Ara h 1 или пулами 20-мерных пептидов Ara h 1, вместе охватывающих последовательность Ara h 1 (Таблица 6). 20-мерный пептид(ы), который распознали (ИС≥2,5) по каждому субъекту, приведен в Таблице 7, а данные обобщены на Фигуре 1. В случае некоторых субъектов, стимуляция ЭСА или Ara h 1 создает больше ТКЛ, в то время как в случае других это были пептидные пулы. При условии, что ТКЛ получали от данного субъекта, используя различные антигенные препараты (ЭСА, Ara h или пептидные пулы), специфичности 20-меров ТКЛ были сопоставимы. В целом, не было никакого изменения в специфичности 20-мера ТКЛ, получаемого в зависимости от антигенного препарата.
145 ТКЛ совместно распознавали эпитопы на протяжении всей последовательности Ara h 1, только с четырьмя из шестидесяти девяти 20-меров, которые не стимулируют любую ТКЛ. Каждый из четырнадцати 20-меров (23, 24, 26, 38, 40, 44-51 и 57) был распознан четырьмя (22%) или более субъектами, с пептидами 50 и 51, имеющими наибольшее количество респондеров (шесть субъектов; 33%) (Фигура 1). Для того, чтобы выбрать 20-меры, содержащие доминирующие Т-клеточные эпитопы, в дополнение к частотам респондеров был рассмотрен ряд факторов, в том числе величины ответа ТКЛ, количество специфических ТКЛ на субъект, воспроизводимость специфического ответа ТКЛ и способность к нацеливанию на конкретные Т-клетки в РВМС.Исходя из этих параметров, девять из четырнадцати 20-меров (пептиды 23, 24, 40,46,47,49, 50, 51 и 57) были выбраны для последующих анализов. Эти девять 20-меров вместе были распознаны 16 из 18 субъектов (89%) в этой группе, и, как правило, индуцировали сильные и последовательные пролиферативные ответы в конкретной ТКЛ, с большинством ИС более пяти и многими значительно выше (Таблица 7). Кроме того, каждый из этих 20-меров был распознан множеством ТКЛ от многих респондентов, что отражает распространенность Т-клеток, специфичных для этих пептидов среди совокупностей Т-клеток субъектов. Для оценки распознавания в более широкой группе, РВМС от дополнительных 21 субъектов с аллергией на арахис, проверяли с помощью анализа CFSE на пролиферацию CD4+ Т-клеток в РВМС все следующие семь дней стимуляции каждым пептидом (Таблица 1, верхняя часть и Фигура 4). Этот анализ предложил чувствительный и точный скрининг для выявления пептид-специфических CD4+ Т-клеточных ответов в пределах всей РВМС. Все 21 субъекта продемонстрировали пролиферацию Т-клеток РВМС к ЭСА или комбинацию обогащенных Ara h 1 и Ara h 1. 20-меры были вместе распознаны 19 (90 из этих субъектов, с 8-12 (38-60%) респондерами на 20-мер. Анализ четырех субъектов из исходной группы, применяемой для получения ТКЛ, подтвердили, что они также имели Т-клетки, специфические к другим 20-мерам, в дополнение к тем, которые распознаются с помощью их ТКЛ (Таблица 1, нижняя часть). В целом, распознавание Т-клеток выбранной части из девяти 20-меров подтверждали у 35 (90%) из 39 анализируемых субъектов.
Картирование коровых Т-клеточных эпитопов в пределах выбранных 20-мерных пептидов Ara h 1
Пептиды минимальной длины уменьшают риск перекрестного связывания IgE, фиксированного на клетке, на воспалительных клетках во время клинического введения и облегчают терапевтическое получение. Минимальную последовательность (коровую эпитопную), стимулирующую Т-клетки, в пределах каждого выбранного 20-мера определяли с помощью тестирования пролиферации реактивной ТКЛ у различных субъектов по отношению к усеченным множествам пептидов (например, Фигура 2 и Таблица 2). Количество остатков, необходимых для индуцирования максимальной пролиферации Т-клеток, изменяется от 6 до 19 ак между различными ТКЛ и/или субъектами (Таблица 2), в соответствии с предыдущими отчетами для CD4+ Т-клеточных эпитопов (Hemmer et al. Int Immunol. 2000; 12(3):375-83 (Hemmer et al. Int Immunol. 2000; 12(3):375-83; Suri etal. Curr Opin Immunol. 2006; 18(1):70-7). В связи с изменением количества фланкирующих остатков, необходимых для оптимального распознавания эпитопа (Suri et al. 2006 см. выше), ТКЛ рассматривали для того, чтобы распознать тот же эпитоп, если пептиды, содержащие общее ядро последовательность, индуцируют распознавание. Основываясь на этом критерии, определяли десять различных CD4+ Т-клеточных эпитопов ('соединенные эпитопы', Таблица 2), с общими ядрами, изменяющимися от 5 до 12 ак (подчеркнутые последовательности, Таблица 2). Последовательности 'соединенных эпитопов' выбирали для того, чтобы охватить остатки, необходимые для максимальной стимуляции всех конкретных ТКЛ, протестированных на то, чтобы гарантировать максимально широкое возможное распознавание.
По меньшей мере, в каждом из девяти 20-меров был найдена один эпитоп с 20-мерами 50 и 51, каждый из которых содержит два различных, но перекрывающихся Т-клеточных эпитопа: один уникальный для каждого 20-мера ((442- 458) и (452-470)), а другой в пределах последовательности перекрывания ((451-461), Таблица 2 и Фигура 2). Ни один ТКЛ не ответил на оба эпитопа в любом 20-мере, дополнительно подтверждая различие этих эпитопов (данные не приведены). Алгоритмы предсказания HLA-эпитоп (Singh et al. Bioinformatics. 2001; 17(12): 1236-7; Vita et al. Nucleic Acids Res. 2010; 38(Номер в базе данных):0854-62) также подчеркнули один или более сильных мотива, связывающие HLA класса II (HLA-II), в каждой из наших минимально стимулирующих последовательностей. Данные представлены в алгоритме связывания HLA-DR Propred (Singh et al. 2001 см. выше) в Таблице 8. Этот алгоритм не предсказывает эпитопы HLA-DR в пределах пептида 40, но алгоритмы Immune Epitope Database (IEDB) и Analysis Resource (Vita et al. 2010, см. выше) предсказывают, что эпитопы в пределах этого пептида связываются наиболее сильно с молекулами HLA-DP и/или -DQ.
Наконец, чтобы избежать ненужного дублирования последовательности и свести к минимуму число пептидов для терапевтического средства, шесть из соединенных эпитопов (включая три перекрывающиеся пары эпитопов) объединяли в три отдельные пептиды из 20 ак или менее ((206-225), (409-427) и (451- 470); серый фон, Таблица 2). Объединенные пептиды эпитопа, эффективно стимулированные ТКЛ, специфические для каждого эпитопа (данные не приведены) и вместе с остальными четырьмя соединенными эпитопами ((353-371), (436-452), (442-458) и (507-524)) предлагали набор из семи потенциальных пептидов для дополнительной характеристики (смотри звездочки, Таблица II). Скрининг девяти субъектов из наших групп на основе CFSE подтвердил, что каждый из этих пептидов может непосредственно нацеливать выявляемые количества Ara h 1 - специфических Т-клеток среди всех РВМС субъектов с аллергией на арахис (Таблица 9).
Определение специфика рестрикции HLA класса II Т-клеточных эпитопов Ara h 1
Не существует определенной связи между HLA-II и аллергией на арахис (Shreffler et al. Ann Allergy Asthma Immunol 2006; 96(6):865-9), поэтому пептиды, выбранные для терапии, для широкого применения необходимо связать различными молекулами HLA-II. Для определения присутствия каждого эпитопа типа HLA-II, для блокирования индивидуального презентирования эпитопа с Т-клетками применяли анти-HLA-DR, -DP или -DQ-мАт (моноклональные антитела). Для каждого испытанного ТКЛ, распознавание эпитопа в зависимости от дозы (например, Фигура 5) предотвращали одним или несколькими HLA-мАт и тем же самым мАт, блокирующим распознавание ЭСА (данные не приведены), демонстрируя консистенцию для презентирования натуральных, обработанных и синтетических форм эпитопа. На эпитоп протестировали, по меньшей мере, два субъекта и/или ТКЛ (Таблица 3). В соответствии с предсказаниями алгоритмов HLA-II, описанными выше (Singh et al. 2001 см. выше; Vita et al. 2010 см. выше), анти-HLA-DR, блокирующий распознавание всех, кроме одного эпитопа, (353-371), который был заблокирован анти-HLA-DQ у обоих протестированных субъектов. В случае эпитопов (436-452) и (507-524), распознавание было заблокировано анти-HLA-DR в случае некоторых ТКЛ, но анти-HLA-DQ в случае других, подтверждая HLA-связывающий вырождение этих эпитопов.
Для оценки HLA-связывающего вырождения эпитопов, чье распознавание было заблокировано одной HLA-мАт, сравнивали соответствующие HLA-аллели по меньшей мере двух субъектов с ТКЛ, специфичной по отношению к этому эпитопу (Таблица 5 и Таблица 3). Отсутствие общих аллелей HLA-DRB1 или HLA-DQB1 между субъектами, распознающими HLA-DR-или HLA-DQ-ограниченные эпитопы, соответственно, подтвердило, что каждый эпитоп был презентирован на по меньшей мере двух различных HLA-молекулах. HLA-связывающие алгоритмы дополнительно подкрепляют эти данные с каждыми содержащими эпитоп мотивами, которые, как предполагают, связывают несколько HLA-молекул ((Singh et al. 2001 см. выше; Vita et al. 2010 см. выше) (например, Таблица 8).
Тестирование потенциальных пептидов для активации базофилов
Для того, чтобы предложить безопасную альтернативу для целых аллергенов, пептиды не должны связывать и сшивать IgE, фиксированный на клетке. Реактивность базофила на пептиды оценивали в свежей крови семи субъектов с аллергией на арахис, набранных для исследования (Таблица 4) (Фигура 3). Все семь субъектов демонстрировали высокие уровни активации базофилов с ЭСА в диапазоне концентраций. Несмотря на то, что ответы на Ara h 1 изменялись между субъектами с низкой дозой, самая высокая концентрация индуцировала высокую активацию у всех субъектов. Тем не менее, ни один из потенциальных пептидов не индуцирует активацию в любой испытанной концентрации. Один субъект показал очень низкий ответ (8%) на пептид (409-427), но это было ниже порога положительной активации (Boumiza et al. Clin Mol Allergy. 2005; 3:9) и был пренебрежимо малым по сравнению с активацией, вызванной Ara h 1 (80-90%) или ЭСА (74-76%) у этого субъекта.
Специалистам в данной области техники будет понятно, что изобретение, описанное в данном документе, является чувствительным к изменениям и модификациям, кроме тех, которые конкретно описаны. Следует понимать, что изобретение включает все подобные вариации и модификации. Изобретение также включает все этапы, признаки, композиции и соединения, упомянутые или указанные в данном описании изобретения, отдельно или вместе, и любые и все комбинации любых двух или более из указанных этапов или признаков.
Верхняя часть иллюстрирует новую группа доноров с аллергией на арахис; нижняя часть иллюстрирует четыре субъекта из группы доноров с аллергией на арахис, применяемых для получения ТКЛ. ЭСА, экстракт сырого арахиса; +ve, положительный; нт, не тестированный (запасы пептида не доступны на момент тестирования); Серый, индексы стимуляции >1,1<2,5; Черный, индексы стимуляции >2,5
* Фоновая пролиферация без антигена, % CD4+CFSElo Т-клеток от общего количества CD4+ Т-клеток; ^А в случае этих субъектов вместо ЭСА применяли комбинацию обогащенного Ara h 1 и Ara h 1 (10 1/тг/мл каждого).
Серый оттенок указывает перекрывание пары соединенных эпитопов, объединенные в отдельные пептиды для дополнительного анализа.
*Семь потенциальных пептидов, предлагаемых для терапевтического средства
нт = не тестированный (ТКЛ отсутствует); Серый оттенок указывает перекрывание пары соединенных эпитопов, объединенные в отдельные пептиды для дополнительного анализа.
ТКЛ, Т-клеточная линия; 20-мерный CFSE, скрининг реактивности Т-клеток на отдельные 20-меры Ara h 1; Коровый CF SE, скрининг реактивности Т-клеток на потенциальные пептиды Ara h 1; ВАТ, тест активации базофилов; нд, данные не доступны; SPT, кожная инъекционная проба (RAST не доступны для этого субъекта).
Все сокращения HLA соответствуют последним изменениям аллельной номенклатуры (http://hla.alleles.org/announcement.html и http://www.ebi.ac.uldimgt/h 1 a/).
Аллели, за которым следует Iv, представляют собой группы аллелей, которые разделяют общие последовательности в экзоне 2 (http://hla.alleles.org/alleles/p_groups.html).
ТКЛ, Т-клеточная линия. Приведены только положительные индексы стимуляции (ИС >2,5). Для субъектов с множеством ТКЛ, специфическими для данного 20-мера, показан высокий ИС.ИС выше 10 были округлены до ближайшего целого числа. Темно серый, ИС>2,5<5,0; Черный, ИС>5,0.
HLA-DR-связывающие мотивы (серый фон) были предсказаны с помощью алгоритма ProPred (http:www.immuneepitope.org; доступ 30ого января 2012). Предсказанные первичные якорные остатки выделены полужирным шрифтом и подчеркнуты. Пептид 40 (352-371 не показан, так как для этого пептида по этому алгоритму не были предсказаны HLA-DR-связывающие мотивы.
ЭСА, экстракт сырого арахиса; +ve, положительный; Серый, индексы стимуляции >1,1<2,5; Черный, индексы стимуляции >2,5
* Фоновая пролиферация без антигена, % CD4+CFSElo Т-клеток от общего количества CD4+ Т-клеток; ^А в случае этих субъектов вместо ЭСА применяли комбинацию обогащенного Ara h 1 и Ara h 1 (10 1/тг/мл каждого).
ЛИТЕРАТУРА
Akdis and Akdis. J Allergy Clin Immunol 2011; 127(l):18-27; quiz 8-9.
Akdis et al., Allergy 55: 522-530, 2000
Akdis et al., Trends Immunol 22: 175-8, 2001
Alexander et al. Allergy. 2005; 60(10): 1269-74.
Alexander et al. Clin Exp Allergy. 2005; 35(l):52-8.
Allen and O'Hehir. Clin Exp Allergy. 2011; 41(9):1172-4.
Allergen Nomenclature, International Union of Immunological Societies (IUIS) Allergen Nomenclature Sub-committee. Доступна на: http://www.allergen.org/Allergen.aspx. Доступ April 22nd, 2012.
Amann et al., 1998, Gene., 69:301-315
Anagnostou etal. Clin Exp Allergy. 2011; 41(9):1273-81.
Asarnoj et al. Allergy. 2010, 65(9): 1189-95
Asarnoj et al. Allergy. 65(9): 1189-95, 2010.
Avery et al. Pediatr Allergy Immunol 2003; 14(5):378-82.
Balderi et al., 1987, Embo J., 6:229-234)
Bateman et al. Clin Exp Allergy. 2008; 38(11):1760-8.
Blanc et al. Clin Exp Allergy. 2009; 39(8): 1277-85
Bock et al. J Allergy Clin Immunol. 2007; 119(4): 1016-8.
Boumiza et al. Clin Mol Allergy. 2005; 3:9.
Burks AW. Lancet. 2008; 371(9623):1538-46.
Burks etal. EurJBiochem. 1997; 245(2):334-9.
Burks et al., Allergy 53: 725-30, 1998
Busse et al. N Engl J Med. 2002; 347(19):1535-6.
Campbell et al. J Exp Med. 2009; 206(7): 1535-47.
Chiang et al. Pediatr Allergy Immunol. 2009; 21(2 Pt 2):e429-38
de Jong et al., Clin Exp Allergy 28: 743-51, 1998
de Leon etal. Clin Exp Allergy. 2003; 33(9):1273-80.
de Leon et al. Expert Reviews in Molecular Medicine. 2007; 9(1): 1-18.
DeLong et al. J Allergy Clin Immunol. 2011; 127(5):1211-8 e3.
Drew et al. J Immunol. 2004; 173(9):5872-9.
Eusebius etal. Int Arch Allergy Immunol. 2002; 127(3):234-44.
Glaumann et al. Allergy. 2012; 67(2):242-7
Hall et al. Vaccine. 2003; 21(5-6):549-61.
Hemmer et al. Int Immunol. 2000; 12(3):375-83.
Higgins et al. J Allergy Clin Immunol. 1994; 93(5):891-9.
Hofmann et al. J Allergy Clin Immunol. 2009; 124(2):286-91.
Hourihane et al., J Allergy Clin Immunol 100: 596-600, 1997
Hoyne etal. J Exp Med. 1993; 178(5): 1783-8.
Husain and Schwartz. J Am Acad Dermatol. 2012; 66(1): 136-43.
Jameel et al., 1990, J. Virol, 64:3963-3966
Jones et al. J Allergy Clin Immunol 2009; 124(2):292-300.
Kammerer et al. J Allergy Clin Immunol. 1997; 100(1):96-103.
Kay and Larche. Springer Semin Immunopathol. 2004; 25(3-4):391-9.
Kemp and Hu. Med J Aust. 2008; 188(9):503-4.
Knapp et al., 1990, Bio Techniques., 5:280-281
Koppelman et al. Allergy. 2001; 56(2): 132-7
Koppelman et al. Clin Exp Allergy. 2004; 34(4):583-90
Kurjan and Herskowitz., 1982, Cell, 50:933-943
Larche M. Clin Exp Allergy. 2008; 38(11):1709-11.
Lin et al. J Microbiol Immunol Infect. 2012
Lin et al. J Microbiol Immunol Infect. 2012.
Litwin et al., Int Arch Allergy Appl Immunol 87: 361-61, 998
Maguire et al., Clin Immunol 93: 222-31, 1999
Mannering et al. J Immunol Methods. 2005; 298(1-2):83-92.
Marazuela et al. Mol Immunol. 2008; 45(2):438-45.
Marcotte et al., J Allergy Clin Immunol 101: 506-13, 1998
Middleton et al. Новая база данных частоты аллеля: http://www.allelefrequencies.net. Tissue Antigens. 2003; 61(5):403-7.
Moverare et al. Int Arch Allergy Immunol 2011; 156(3):282-90
Muller et al. J Allergy Clin Immunol 1998; 101(6 Pt 1):747-54.
Muller et al., J Allergy Clin Immunol 101: 747-754, 1998
Nelson et al. J Allergy Clin Immunol 1997; 99(6 Pt 1):744-51.
Norman et al.,Am JRespir Crit Care Med 154: 1623-8, 1996
Oldfield et al. Lancet. 2002; 360(9326):47-53.
Oppenheimer et al. J Allergy Clin Immunol 1992; 90(2):256-62.
Palmer and Burks. Curr Opin Allergy Clin Immunol 2006; 6(3):202-6.
Palmer etal. Clin Immunol. 2005; 115(3):302-12
Peeters etal. Clin Exp Allergy. 2007; 37(1):108-15
Pene et al., J Allergy Clin Immunol 102: 571-8, 1998
Pomes et al. 2006, Clin. Exp.Allergy 36(6):824-30
Prickett et al. J Allergy Clin Immunol. 2011; 127(3):608-15 el-5.
Primeau et al., Clin Exp Allergy 30: 1135-43, 2000
Pumphrey R. Current Opinion in Allergy & Clinical Immunology. 2004; 4(4):285-90.
Robinson, Br Med Bull 56: 956-968, 2000
Rolland et al. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2010; В печати.
Rolland et al. Pharmacol Ther. 2009; 121(3):273-84.
Ruiter et al. Int Arch Allergy Immunol. 2007; 143(2): 119-26.
Rupa and Mine. Allergy. 2012; 67(1):74-82.
Sabatos-Peyton et al. Curr Opin Immunol 2010; 22(5):609-15.
Sampson etal,. N Engl J Med 327:380-4, 1992
Sampson et al. J Allergy Clin Immunol. 2006; 117(6): 1440-5.
Schultz et al., 1987, Gene., 54:113-123
Shek et al. J Allergy Clin Immunol. 2010; 126(2):324-31 e7.
Shreffler et al. Ann Allergy Asthma Immunol 2006; 96(6):865-9.
Shreffler et al. J Allergy Clin Immunol. 2004; 113(4):776-82.
Sicher et al., J Allergy Clin Immunol 103: 559-562, 1999
Sicherer et al. J Allergy Clin Immunol. 2010; 125(6):1322-6.
Sicherer et al., Paediatrics 102: e6,1998
Singh etal. Bioinformatics. 2001; 17(12):1236-7.
Suri et al. Curr Opin Immunol. 2006; 18(l):70-7.
Thyagarajan et al. J Allergy Clin Immunol 2010; 126(1):31-2.
van Boxtel et al. JAgric Food Chem. 2008; 56(6):2223-30.
van Neerven et al. J Immunol 1994; 152(8):4203-10.
Varney et al. 1991 British Medical Journal 302:265-269
Varshney et al. J Allergy Clin Immunol 2009; 124(6): 1351-2.
Varshney et al. J Allergy Clin Immunol 2011; 127(3):654-60.
Verhoef etal. Int Immunol. 1993; 5(12):1589-97.
Vita et al. Nucleic Acids Res. 2010; 38 (Номер в базе данных):В854-62.
Yang et al. Clin Exp Allergy. 2010; 40(4):668-78.
Yoshitomi et al.JPept Sci. 2007; 13(8):499-503.
Yun and Katelaris. Intern Med J. 2009; 39(7):475-8.
Claims (82)
1. Композиция, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного пептида, длина которого не превышает 60 аминокислот,
где по меньшей мере один пептид содержит по меньшей мере одну последовательность коровой эпитопной области Ara h 1 Т-клеток, выбранную из группы, включающей:
(i) EGALML (SEQ ID NO:6)
(ii) NEGVIVKVSK (SEQ ID NO:3)
(iii) PHFNSKAMVIV (SEQ ID NO:7),
для лечения или профилактики состояния у млекопитающего, которое характеризуется гиперчувствительностью к аллергену, присутствующему в композиции, содержащей Ara h 1.
2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит один или более пептидов, каждый из этих пептидов в длину составляет до 60 последовательно расположенных аминокислот, и эти пептиды содержат один или более указанных эпитопов Ara h 1 T-клеток.
3. Композиция, содержащая эффективное количество одного или более пептидов, каждый из этих пептидов в длину составляет до 60 последовательно расположенных аминокислот, и эти пептиды содержат коровую эпитопную область EGALML (SEQ ID NO:6) вместе с одним или несколькими эпитопами Ara h 1 Т-клеток, выбранными из списка, состоящего из:
(i) FQNLQNHR (SEQ ID NO:1)
(ii) IVQIEA (SEQ ID NO:2)
(iii) FGKLFEVK (SEQ ID NO:4)
(iv) IVVVN (SEQ ID NO:8)
(v) VVNKGTGNLEL (SEQ ID NO:9)
(vi) IMPAAHP (SEQ ID NO:10),
для лечения или профилактики состояния у млекопитающего, которое характеризуется гиперчувствительностью к аллергену, присутствующему в композиции, содержащей Ara h 1.
4. Композиция, содержащая эффективное количество одного или более пептидов, каждый из которых в длину составляет до 60 последовательно расположенных аминокислот, и эти пептиды содержат коровую эпитопную область NEGVIVKVSK (SEQ ID NO:3) вместе с одним или несколькими эпитопами Ara h 1 Т-клеток, выбранными из списка, состоящего из:
(i) FQNLQNHR (SEQ ID NO:1)
(ii) IVQIEA (SEQ ID NO:2)
(iii) FGKLFEVK (SEQ ID NO:4)
(iv) EVKPDKKNPQLQ (SEQ ID NO:5)
(v) IVVVN (SEQ ID NO:8)
(vi) VVNKGTGNLEL (SEQ ID NO:9)
(vii) IMPAAHP (SEQ ID NO:10),
для лечения или профилактики состояния у млекопитающего, которое характеризуется гиперчувствительностью к аллергену, присутствующему в композиции, содержащей Ara h 1.
5. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит по меньшей мере три пептида, по меньшей мере четыре пептида, по меньшей мере пять пептидов, по меньшей мере шесть пептидов, по меньшей мере семь пептидов, по меньшей мере восемь пептидов, по меньшей мере девять пептидов или десять пептидов.
6. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что длина указанного пептида составляет 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 аминокислот.
7. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что длина указанного пептида равна 10-25 аминокислот, предпочтительно 15-25 аминокислот, предпочтительно 15-20 аминокислот, предпочтительно 10-20 аминокислот.
8. Композиция, содержащая эффективное количество одного или более пептидов, каждый из которых в длину составляет до 60 последовательно расположенных аминокислот, и эти пептиды содержат коровую эпитопную область VEIKEGALMLPHFNSKA (SEQ ID NO:23) вместе с одним или несколькими эпитопами Ara h 1 Т-клеток, выбранными из списка, состоящего из:
(i) FQNLQNHRIV (SEQ ID NO:12)
(ii) RIVQIEAKPNTLV (SEQ ID NO:13)
(iii) FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV (SEQ ID NO:14)
(iv) WSTRSSENNEGVIVKVSKE (SEQ ID NO:15)
(v) STRSSENNEGVIVKVSKE (SEQ ID NO:16)
(vi) ENNEGVIVKVSKE (SEQ ID NO:17)
(vii) NNFGKLFEVKPDKKNPQ (SEQ ID NO:18)
(viii) EVKPDKKNPQLQ (SEQ ID NO:5)
(ix) NNFGKLFEVKPDKKNPQLQ (SEQ ID NO:21)
(x) SNNFGKLFEVKPDKKNPQLQ (SEQ ID NO:22)
(xi) ALMLPHFNSKAMVIVVV (SEQ ID NO:24)
(xii) KAMVIVVVNKG (SEQ ID NO:25)
(xiii) AMVIVVVNKGTGNLELVAV (SEQ ID NO:26)
(xiv) VVNKGTGNLELVAVRK (SEQ ID NO:27)
(xv) AMVIVVVNKGTGNLELV (SEQ ID NO:28)
(xvi) KAMVIVVVNKGTGNLELVAV (SEQ ID NO:29)
(xvii) GDVFIMPAAHPVAINASS (SEQ ID NO:30)
(xviii) VFIMPAAHPVAINASSE (SEQ ID NO:31)
(xix) GDVFIMPAAHPVAINASSE (SEQ ID NO:32)
(xx) VFIMPAAHPVAINASS (SEQ ID NO:33),
для лечения или профилактики состояния у млекопитающего, которое характеризуется гиперчувствительностью к аллергену, присутствующему в композиции, содержащей Ara h 1.
9. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит пептид, определенный как SEQ ID NO:23, вместе с одним или несколькими пептидами, определенными как SEQ ID NO:5, 12-18, 21-22 или 24-33.
10. Композиция, содержащая один или более пептидов, каждый из которых в длину составляет до 60 последовательно расположенных аминокислот, и эти пептиды содержат коровую эпитопную область EGALML (SEQ ID NO:6) вместе с одним или несколькими эпитопами Ara h 1 Т-клеток, выбранными из списка, состоящего из:
(i) FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV (SEQ ID NO:14)
(ii) WSTRSSENNEGVIVKVSKE (SEQ ID NO:15)
(iii) NNFGKLFEVKPDKKNPQLQ (SEQ ID NO:21)
(iv) VEIKEGALMLPHFNSKA (SEQ ID NO:23)
(v) ALMLPHFNSKAMVIVVV (SEQ ID NO:24)
(vi) KAMVIVVVNKGTGNLELVAV (SEQ ID NO:29)
(vii) GDVFIMPAAHPVAINASS (SEQ ID NO:30)
(viii) STRSSENNEGVIVKVSKE (SEQ ID NO:16)
(ix) VFIMPAAHPVAINASS (SEQ ID NO:33)
(x) EVKPDKKNPQLQ (SEQ ID NO:5),
для лечения или профилактики состояния у млекопитающего, которое характеризуется гиперчувствительностью к аллергену, присутствующему в композиции, содержащей Ara h 1.
11. Композиция по п.10, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит пептид, определенный как SEQ ID NO:6, вместе с одним или несколькими пептидами, определенными как SEQ ID NO:5, 14, 16, 23 или 33.
12. Композиция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую кодирующую нуклеиновую кислоту в составе вектора экспрессии, для рекомбинантного получения эпитопов Ara h 1 Т-клеток, содержащая последовательность нуклеотидов, кодирующую по меньшей мере один пептид, длина которого не превышает 60 аминокислот, где по меньшей мере один пептид содержит по меньшей мере одну последовательность коровой эпитопной области Ara h 1 Т-клеток, выбранную из группы, включающей:
(i) EGALML (SEQ ID NO:6)
(ii) NEGVIVKVSK (SEQ ID NO:3) и
(iii) PHFNSKAMVIV (SEQ ID NO:7).
13. Способ лечения или профилактики состояния у млекопитающего, чье состояние характеризуется гиперчувствительностью к арахису или лесным орехам, которые содержат Ara h 1, причем указанный способ включает введение указанному млекопитающему эффективного количества композиции по любому из пп.1-11.
14. Способ по п.13, отличающийся тем, что указанные лесные орехи представляют собой фундук, миндаль или бразильские орехи.
15. Способ по п.13, отличающийся тем, что указанный способ десенсибилизирует или индуцирует иммунологическую толерантность к Ara h 1.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что указанная десенсибилизация или толерантность достигается с помощью индукции анергии Th2 или апоптоза.
17. Применение эффективного количества композиции по любому из пп.1-11 для получения лекарственного средства для лечения или профилактики состояния у млекопитающего, чье состояние характеризуется гиперчувствительностью к арахису или лесным орехам, которые содержат Ara h 1.
18. Применение по п.17, отличающееся тем, что указанные лесные орехи представляют собой фундук, миндаль или бразильские орехи.
19. Применение по п.17, отличающееся тем, что указанный способ десенсибилизирует или индуцирует иммунологическую толерантность к Ara h 1.
20. Применение по п.19, отличающееся тем, что указанная десенсибилизация или толерантность достигается с помощью индукции анергии Th2 или апоптоза.
21. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество композиции по любому из пп.1-11 вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями и/или разбавителями, для лечения или профилактики состояния у млекопитающего, которое характеризуется гиперчувствительностью к аллергену, присутствующему в композиции, содержащей Ara h 1.
22. Способ диагностики или мониторинга состояния млекопитающего, причем это состояние характеризуется гиперчувствительностью к аллергену, присутствующему в композиции, содержащей Ara h 1, где указанный способ включает скрининг Т-клеток, реактивных в отношении Ara h 1, используя по меньшей мере один пептид, длина которого не превышает 60 аминокислот, где по меньшей мере один пептид содержит по меньшей мере одну последовательность коровой эпитопной области Ara h 1 Т-клеток, выбранную из группы, включающей:
(i) EGALML (SEQ ID NO:6)
(ii) NEGVIVKVSK (SEQ ID NO:3) и
(iii) PHFNSKAMVIV (SEQ ID NO:7).
23. Способ по п.22, отличающийся тем, что указанное состояние представляет собой гиперчувствительность к арахису или лесным орехам, которые содержат Ara h 1.
24. Способ по п.23, отличающийся тем, что указанные лесные орехи представляют собой фундук, миндаль или бразильские орехи.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AU2012904780A AU2012904780A0 (en) | 2012-10-30 | Novel immunotherapeutic molecules and uses thereof | |
AU2012904780 | 2012-10-30 | ||
PCT/AU2013/001255 WO2014066939A1 (en) | 2012-10-30 | 2013-10-30 | Novel immunotherapeutic molecules and uses thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2015120543A RU2015120543A (ru) | 2016-12-20 |
RU2687164C2 true RU2687164C2 (ru) | 2019-05-07 |
Family
ID=50626213
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015120543A RU2687164C2 (ru) | 2012-10-30 | 2013-10-30 | Новые иммунотерапевтические молекулы и их применения |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11096994B2 (ru) |
EP (2) | EP3964232A1 (ru) |
JP (3) | JP6608282B2 (ru) |
KR (1) | KR102135732B1 (ru) |
CN (2) | CN110075285A (ru) |
AU (3) | AU2013337596B2 (ru) |
BR (1) | BR112015009883A2 (ru) |
CA (2) | CA3177836A1 (ru) |
DK (1) | DK2914286T3 (ru) |
ES (1) | ES2897421T3 (ru) |
MX (2) | MX2015005636A (ru) |
NZ (1) | NZ707615A (ru) |
PL (1) | PL2914286T3 (ru) |
RU (1) | RU2687164C2 (ru) |
WO (1) | WO2014066939A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201503542B (ru) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2687164C2 (ru) | 2012-10-30 | 2019-05-07 | Аравакс Пти Лтд | Новые иммунотерапевтические молекулы и их применения |
BR112016006813A2 (pt) | 2013-09-25 | 2017-09-19 | Aravax Pty Ltd | Composição imunoterapêutica nova e seus usos |
FR3062797A1 (fr) * | 2017-02-10 | 2018-08-17 | Centre Hospitalier Et Universitaire De Clermont-Ferrand | Gelule a liberation gastro-intestinale destinee a etre utilisee dans une methode permettant de desensibiliser et/ou d'induire une tolerance chez un sujet allergique a l'arachide |
WO2020237181A1 (en) * | 2019-05-23 | 2020-11-26 | Aimmune Therapeutics, Inc. | Methods of treating peanut allergy by oral immunotherapy with low-dose maintenance |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040265342A1 (en) * | 1998-01-09 | 2004-12-30 | Circassia Limited | Methods and compositions for desensitisation |
RU2285042C2 (ru) * | 2000-11-16 | 2006-10-10 | Альк-Абелло А/С | Новые мутантные аллергены |
US20100291145A1 (en) * | 1999-09-14 | 2010-11-18 | Antigen Express, Inc. | Ii-KEY/ANTIGENIC EPITOPE HYBRID PEPTIDE VACCINES |
WO2011106645A1 (en) * | 2010-02-26 | 2011-09-01 | Benaroya Research Institute | Direct analysis of antigen-specific immune response |
Family Cites Families (49)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5558869A (en) | 1992-12-30 | 1996-09-24 | University Of Arkansas | Major peanut allergen ara h II |
JPH11507840A (ja) | 1995-12-29 | 1999-07-13 | ユニバーシティ オブ アーカンソー | ピーナッツアレルゲンおよび方法 |
US20030202980A1 (en) | 1995-12-29 | 2003-10-30 | Caplan Michael J. | Methods and reagents for decreasing clinical reaction to allergy |
US6835824B1 (en) * | 1995-12-29 | 2004-12-28 | University Of Arkansas | Peanut allergens and methods |
CA2318493A1 (en) | 1998-01-16 | 1999-07-22 | The Johns Hopkins University | Oral delivery of nucleic acid vaccines by particulate complexes |
DE69940805D1 (de) | 1998-01-31 | 2009-06-10 | Sinai School Medicine | Verfahren und reagenzien zur verminderung der klinischen reaktion zur allergie |
AU3085299A (en) | 1998-03-12 | 1999-09-27 | Board Of Trustees Of The University Of Arkansas, The | Tertiary structure of peanut allergen ara h 1 |
WO2000052154A2 (en) | 1999-03-02 | 2000-09-08 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Methods and reagents for decreasing clinical reaction to allergy |
AU3865400A (en) | 1999-03-03 | 2000-09-21 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York, The | Animal model of allergies |
WO2000054803A2 (en) | 1999-03-16 | 2000-09-21 | Panacea Pharmaceuticals, Llc | Immunostimulatory nucleic acids and antigens |
US20030235594A1 (en) * | 1999-09-14 | 2003-12-25 | Antigen Express, Inc. | Ii-Key/antigenic epitope hybrid peptide vaccines |
WO2001040264A2 (en) | 1999-12-06 | 2001-06-07 | Panacea Pharmaceuticals, Llc. | Peptide antigens |
US20020147140A1 (en) * | 2000-01-31 | 2002-10-10 | Rosen Craig A. | Nucleic acids, proteins, and antibodies |
KR100919914B1 (ko) | 2000-11-16 | 2009-10-06 | 알크-아벨로 에이/에스 | 신규한 돌연변이체 알레르겐 |
WO2002074250A2 (en) | 2001-03-16 | 2002-09-26 | Panacea Pharmaceuticals | Methods and reagents for decreasing clinical reaction to allergy |
GB0110432D0 (en) | 2001-04-27 | 2001-06-20 | Plant Bioscience Ltd | Lantibiotic production |
WO2002088317A2 (en) | 2001-05-01 | 2002-11-07 | The Regents Of The University Of California | Fusion molecules and methods for treatment of immune diseases |
DE60229979D1 (ru) | 2001-12-05 | 2009-01-02 | Circassia Ltd | |
CA2499123A1 (en) * | 2002-09-17 | 2004-04-15 | Antigen Express, Inc. | Ii-key/antigenic epitope hybrid peptide vaccines |
US7179645B2 (en) | 2002-09-24 | 2007-02-20 | Antigen Express, Inc. | Ii-Key/antigenic epitope hybrid peptide vaccines |
US7923209B2 (en) * | 2003-03-14 | 2011-04-12 | Anergis, S.A. | Allergen peptide fragments and use thereof |
US8057800B2 (en) | 2004-06-10 | 2011-11-15 | Circassia Limited | Immunointeractive molecules and uses thereof |
US7566456B2 (en) | 2005-06-23 | 2009-07-28 | Haiming Chen | Allergen vaccine proteins for the treatment and prevention of allergic diseases |
AU2007240964A1 (en) * | 2006-03-30 | 2007-11-01 | The Regents Of The University Of California | IgE directed DNA vaccination |
FI20075063A0 (fi) | 2007-02-01 | 2007-02-01 | Vactech Oy | Allergisen herkistymisen estäminen |
GB0710529D0 (en) | 2007-06-01 | 2007-07-11 | Circassia Ltd | Vaccine |
SI2083856T1 (sl) | 2007-08-15 | 2011-02-28 | Circassia Ltd | Peptidi za desenzibilizacijo proti alergijam |
GB2455108A (en) | 2007-11-28 | 2009-06-03 | Circassia Ltd | T-Cell dependent method for detecting non-allergic or intrinsic disorders |
EP2140880B1 (en) | 2008-07-04 | 2012-11-14 | HAL Allergy Holding B.V. | Modification of allergens |
EP2153841B2 (en) | 2008-08-15 | 2015-11-11 | Circassia Limited | Vaccine comprising Amb a 1 peptides for use in the treatment of ragweed allergy |
WO2010018384A1 (en) | 2008-08-15 | 2010-02-18 | Circassia Limited | T-cell antigen peptide from allergen for stimulation of il-10 production |
GB0821806D0 (en) | 2008-11-28 | 2009-01-07 | Circassia Ltd | Compositions with reduced dimer formation |
EP2233502A1 (en) | 2009-03-27 | 2010-09-29 | Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin | Sialylated antigen-specific antibodies for treatment or prophylaxis of unwanted inflammatory immune reactions and methods of producing them |
WO2011032097A1 (en) * | 2009-09-14 | 2011-03-17 | Mount Sinai School Of Medicine | Methods for characterizing antibody binding affinity and epitope diversity in food allergy |
US8835361B2 (en) | 2010-06-01 | 2014-09-16 | The Curators Of The University Of Missouri | High-throughput quantitation of crop seed proteins |
US9517257B2 (en) * | 2010-08-10 | 2016-12-13 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) | Erythrocyte-binding therapeutics |
GB201104537D0 (en) * | 2011-03-17 | 2011-05-04 | Cambridge Entpr Ltd | Treatment for peanut allergy |
WO2012129246A2 (en) | 2011-03-20 | 2012-09-27 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Method for predicting severity of allergic reaction |
US9289477B2 (en) | 2011-04-29 | 2016-03-22 | Selecta Biosciences, Inc. | Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce cytotoxic T lymphocyte responses |
JP2013040138A (ja) | 2011-08-17 | 2013-02-28 | Univ Of Tsukuba | 活性化型リコンビナント花粉アレルゲンの作製方法 |
WO2013036293A1 (en) | 2011-09-06 | 2013-03-14 | Selecta Biosciences, Inc. | Dendritic cell subsets for generating induced tolerogenic dendritic cells and related compositions and methods |
CN102533781B (zh) | 2011-12-30 | 2013-09-11 | 华南师范大学 | 花生2s-4b蛋白在诱导细胞凋亡中的应用 |
CN102816232B (zh) | 2011-12-30 | 2014-07-16 | 华南师范大学 | 花生2s-4b蛋白及其生产方法 |
PL2802607T3 (pl) | 2012-01-13 | 2018-03-30 | Julius-Maximilians-Universität Würzburg | Dwuskładnikowa komplementacja funkcjonalna wywoływana przez podwójny antygen |
BR112014031327B1 (pt) | 2012-06-15 | 2022-02-01 | Immunomic Therapeutics, Inc | Moléculas de ácido nucleico para o tratamento de alergias |
RU2687164C2 (ru) | 2012-10-30 | 2019-05-07 | Аравакс Пти Лтд | Новые иммунотерапевтические молекулы и их применения |
WO2014067993A1 (en) | 2012-11-01 | 2014-05-08 | Veterinærinstituttet | New fusion proteins for the treatment of allergic diseases |
CN105163756A (zh) | 2013-03-15 | 2015-12-16 | 赛门蒂斯有限公司 | 免疫调节 |
BR112016006813A2 (pt) | 2013-09-25 | 2017-09-19 | Aravax Pty Ltd | Composição imunoterapêutica nova e seus usos |
-
2013
- 2013-10-30 RU RU2015120543A patent/RU2687164C2/ru active
- 2013-10-30 CA CA3177836A patent/CA3177836A1/en active Pending
- 2013-10-30 BR BR112015009883A patent/BR112015009883A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2013-10-30 WO PCT/AU2013/001255 patent/WO2014066939A1/en active Application Filing
- 2013-10-30 DK DK13851284.3T patent/DK2914286T3/da active
- 2013-10-30 KR KR1020157014381A patent/KR102135732B1/ko active IP Right Grant
- 2013-10-30 AU AU2013337596A patent/AU2013337596B2/en active Active
- 2013-10-30 PL PL13851284T patent/PL2914286T3/pl unknown
- 2013-10-30 EP EP21156418.2A patent/EP3964232A1/en active Pending
- 2013-10-30 MX MX2015005636A patent/MX2015005636A/es unknown
- 2013-10-30 JP JP2015538213A patent/JP6608282B2/ja active Active
- 2013-10-30 ES ES13851284T patent/ES2897421T3/es active Active
- 2013-10-30 CN CN201910062070.2A patent/CN110075285A/zh active Pending
- 2013-10-30 CN CN201380062545.9A patent/CN105120894B/zh active Active
- 2013-10-30 US US14/440,025 patent/US11096994B2/en active Active
- 2013-10-30 EP EP13851284.3A patent/EP2914286B1/en active Active
- 2013-10-30 CA CA2889784A patent/CA2889784C/en active Active
- 2013-10-30 NZ NZ707615A patent/NZ707615A/en unknown
-
2015
- 2015-04-30 MX MX2020012569A patent/MX2020012569A/es unknown
- 2015-05-20 ZA ZA2015/03542A patent/ZA201503542B/en unknown
-
2017
- 2017-11-17 AU AU2017261619A patent/AU2017261619B2/en active Active
-
2018
- 2018-07-25 JP JP2018139143A patent/JP2018184447A/ja active Pending
-
2019
- 2019-10-01 AU AU2019240574A patent/AU2019240574B2/en active Active
-
2021
- 2021-07-13 US US17/374,519 patent/US11980658B2/en active Active
- 2021-08-12 JP JP2021131517A patent/JP2021185162A/ja active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040265342A1 (en) * | 1998-01-09 | 2004-12-30 | Circassia Limited | Methods and compositions for desensitisation |
US20100291145A1 (en) * | 1999-09-14 | 2010-11-18 | Antigen Express, Inc. | Ii-KEY/ANTIGENIC EPITOPE HYBRID PEPTIDE VACCINES |
RU2285042C2 (ru) * | 2000-11-16 | 2006-10-10 | Альк-Абелло А/С | Новые мутантные аллергены |
WO2011106645A1 (en) * | 2010-02-26 | 2011-09-01 | Benaroya Research Institute | Direct analysis of antigen-specific immune response |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
DELONG J.H. et al., Ara h 1-reactive T cells in individuals with peanut allergy,J. Allergy Clin. Immunol., 2011, v.127,n.5,p.1211-1218. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5390742B2 (ja) | アレルゲンペプチド断片を含む組成物 | |
CN105079781B (zh) | 用于治疗乳糜泻的组合物和方法 | |
JP5697447B2 (ja) | アレルゲンに対する脱感作のためのペプチド | |
AU2019240574B2 (en) | Novel immunotherapeutic molecules and uses thereof | |
JP2006520380A5 (ru) | ||
RU2676149C2 (ru) | Пептиды | |
EA020792B1 (ru) | Пептиды трав для вакцины | |
AU2020200883A1 (en) | Novel immunotherapeutic composition and uses thereof | |
JPH09502346A (ja) | 自己免疫疾患に関連するプロトコールにおけるミエリン希突起神経膠細胞糖蛋白質およびそのペプチド部分の使用 | |
KR100455023B1 (ko) | 독보리 꽃가루 알레르겐의 t-세포 에피토프 | |
JP7174492B2 (ja) | S-アレスチンペプチドおよびその治療的使用 | |
US7112333B1 (en) | T cell epitopes of ryegrass pollen allergen |