UA122666C2 - Ізольоване антитiло або його антигензв'язувальний фрагмент, що специфічно зв'язується з людським білком програмованої смерті-1 (pd-1) - Google Patents

Ізольоване антитiло або його антигензв'язувальний фрагмент, що специфічно зв'язується з людським білком програмованої смерті-1 (pd-1) Download PDF

Info

Publication number
UA122666C2
UA122666C2 UAA201608946A UAA201608946A UA122666C2 UA 122666 C2 UA122666 C2 UA 122666C2 UA A201608946 A UAA201608946 A UA A201608946A UA A201608946 A UAA201608946 A UA A201608946A UA 122666 C2 UA122666 C2 UA 122666C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
antigen
antibodies
binding
binding fragment
Prior art date
Application number
UAA201608946A
Other languages
English (en)
Inventor
Ніколас Дж. Пападопулос
Николас Дж. ПАПАДОПУЛОС
Ендрю Дж. Мерфі
Эндрю Дж. Мэрфи
Ґевін Терстон
Гэвин ТЕРСТОН
Елла Іоффе
Эла Иофе
Елена Бурова
Original Assignee
Ридженерон Фармасьютикалз, Інк.
Ридженерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=52462456&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA122666(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ридженерон Фармасьютикалз, Інк., Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Ридженерон Фармасьютикалз, Інк.
Publication of UA122666C2 publication Critical patent/UA122666C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/10—X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

Винахід належить до ізольованого антитіла або його антигензв’язувального фрагмента, що специфічно зв’язується з людським білком програмованої смерті-1 (PD-1), ізольованої полінуклеотидної молекули, що кодує таке антитіло, вектору, клітини, що експресує даний вектор, способу одержання антитіла. Винахід також належить до фармацевтичної композиції, що містить ізольоване антиітло, застосування ізольованого антитіла або його антигензв’язувального фрагмента або фармацевтичної композиції для інгібування T-регуляторних (Treg) клітин у суб'єкта, застосування ізольованого антитіла для посилення активації T-клітин у суб'єкта, застосування антитіла для посилення імунної відповіді та застосування антитіла для інгібування росту пухлини або пухлинних клітин у суб’єкта.

Description

вектор, способу одержання антитіла.
Винахід також належить до фармацевтичної композиції, що містить ізольоване антиїтло, застосування ізольованого антитіла або його антигензв'язувального фрагмента або фармацевтичної композиції для інгібування Т- регуляторних (Тгед) клітин у суб'єкта, застосування ізольованого антитіла для посилення активації Т-клітин у суб'єкта, застосування антитіла для посилення імунної відповіді та застосування антитіла для інгібування росту пухлини або пухлинних клітин у суб'єкта.
ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ, ДО ЯКОЇ НАЛЕЖИТЬ ВИНАХІД
ЇОО1| Даний винахід стосується людських антитіл і антигензв'язувальних фрагментів людських антитіл, що специфічно зв'язуються з імуномодулюючим рецептором програмованої смерті-1 (РО-1), і терапевтичних і діагностичних способів застосування цих антитіл.
СТАН СПОРІДНЕНОЇ ГАЛУЗІ ТЕХНІКИ
І002| Програмована смерть-ї (РО-1) (також має назву СО279) являє собою білковий рецептор з 288 амінокислот, експресований на активованих Т-клітинах і В-клітинах, природних клітинах-кілерах і моноцитах. РО-1 є членом сімейства СО28/СТІ А-4 (антигенів цитотоксичних
Т-лімфоцитів З/ЛСО5 (індукованих костимуляторів) Т-клітинних співінгібуючих рецепторів (Спеп еї аі. 2013, Маї. Вем. Іттипої. 13:227-242). Первинною функцією РО-1 є ослаблення імунної відповіді (КіЇїеу, 2009, Іттипої. Кем. 229:114-125). РО-1 має два ліганди, РО-ліганд-1 (РО-І1) і
РО-І2. РО--1 (20274, В7НІ) інтенсивно експресується як у лімфоїдних, так і нелімфоїдних тканинах, таких як СО4 і СОВ8 Т-клітини, клітини ліній макрофагів, периферичні тканини, а також у пухлинних клітинах, клітинах, інфікованих вірусами, і клітинах аутоїмунних тканин. РО-І 2 (СбОр273, В7-ОС) має більш обмежену експресію, ніж РО-І1, будучи експресованим в активованих дендритних клітинах і макрофагах (Оопд еї а). 1999, Маїште Меа.). РО-Ї1 експресується при більшості злоякісних новоутворень людини, що включають меланому, гліому, недрібноклітинний рак легень, плоскоклітинний рак області голови і шиї, лейкемію, рак підшлункової залози, нирковоклітинну карциному і гепатоклітинну карциному, і може індукуватися майже при всіх типах злоякісних новоутворень (20и апа Спеп, 2008, Маї. Кем.
Ітітипої. 8:467-77). Зв'язування РО-1 з його лігандами в результаті приводить до зниженої проліферації Т-клітин і секреції цитокінів, порушуючи гуморальні і клітинні імунні відповіді при захворюваннях, таких як злоякісне новоутворення, вірусна інфекція й аутоїмунне захворювання.
Блокаду зв'язування РО-1 з оборотною імуносупресією досліджували при імунотерапії аутоїмунних, вірусних і пухлинних захворювань (Кібраз, 2012, МЕМ, 366:2517-2519; М/аїапабре єї а!. 2012, Сііп. Оєм. Іттипої. Моїште 2012, Апісіє ІС: 269756; Мапа еї аї. 2013, 9. Міга! Нер. 20:27- 39).
ІООЗІ Т-клітинні костимулюючі і співінгібуючі молекули (узагальнено названі косигнальними молекулами) відіграють вирішальну роль у регуляції активації Т-клітин, внутрішньогруповій
Зо диференціації, ефекторній функції і виживаності (Спеп еї аї. 2013, Майиге Кем. Іттипої. 13:227- 242). Після розпізнавання когнатних пептид-МНО комплексів на антигенпрезентуючих клітинах
Т-клітинними рецепторами, косигнальні рецептори співлокалізуються 3 Т-клітинними рецепторами в імунному синапсі, де вони синергетично взаємодіють із сигнальним шляхом
ТС, щоб ініціювати або інгібувати активацію і функцію Т-клітин (Рііе5 еї аїЇ. 2011, Маїе 4. Віо).
Меса. 84:409-421). Остаточна імунна відповідь регулюється балансом між костимулюючими і співінгібуючими сигналами ("їмунними контрольними точками") (РагаоїІЇ, 2012, Маїиге, 12:252- 264). РО-1 функціонує як одна така "імунна контрольна точка" при опосередкуванні толерантності периферичних Т-клітин і при запобіганні аутоіїмунності. РО-1 зв'язується з РО-Ї 1 або РО-Ї2 і інгібує активацію Т-клітин. Здатність РО-1 інгібувати активацію Т-клітин використовується хронічними вірусними інфекціями і пухлинами, щоб ухилитися від імунної відповіді. При хронічних вірусних інфекціях, РО-1 інтенсивно експресується у вірус-специфічних
Т-клітинах, і ці Т-клітини стають "виснаженими" з втратою ефекторних функцій і проліферативної здатності (Ргеептап, 2008, РМА5, 10510275-10276). РО-/1 експресується в різноманітних пухлинах, і дослідження на тваринних моделях показали, що РО-І1 у пухлинах інгібує активацію Т-клітин і лізис пухлинних клітин і може приводити до збільшеної смерті пухлиноспецифічних Т-клітин. Система РО-1:РО-І 1 також відіграє важливу роль в індукуванні Т- регуляторного (Тгед) розвитку клітин і в підтриманні Тгед-функції (Егапсі5со еї аї. 2010, Іттипої.
Вем. 236:219-242).
І004| Оскільки РО-1 відіграє важливу роль при аутоіїмунності, імунітеті проти пухлин і імунітеті проти інфекцій, він являє собою ідеальну мішень для імунотерапії. Блокування РО-1 антагоністами, що включають моноклональні антитіла, досліджували при терапіях злоякісних новоутворень і хронічних вірусних інфекцій (Зпегідап, 2012, Маїиге ВіоїесНпо!. 30:729-730).
І005| Моноклональні антитіла до РО-1 відомі в даній галузі і були описані, наприклад, у патентних публікаціях США МоМо 8008449, 8168757, 20110008369, 20130017199, 20130022595 і в УМО 2006121168, УУО 20091154335, УМО 2012145493, МО 2013014668, МО 2009101611, ЕР 2262837 і ЕР 2504028.
КОРОТКИЙ ЗМІСТ СУТІ ВИНАХОДУ
ІОО6) Даний винахід надає антитіла і їх антигензв'язувальні фрагменти, що зв'язуються з РО- 1. Антитіла даного винаходу є застосовними, серед іншого, для цілеспрямованої дії на Т- 60 клітини, експресуючі РО-1, і для модуляції активності РО-1. У деяких варіантах здійснення,
антитіла винаходу є застосовними для інгібування або нейтралізації активності РО-1 і/або для стимуляції активації Т-клітин, наприклад, при обставинах, де опосередковане Т-клітинами знищення є сприятливим або бажаним. В альтернативних варіантах здійснення, антитіла збільшують зв'язування і/або активність РО-1 і можуть застосовуватися для інгібування активації Т-клітин. Антитіла проти РО-1 винаходу або їх антигензв'язувальні частини можуть бути включені як частина мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули, наприклад, щоб модулювати імунну відповідь і/або націлювати антитіла на специфічний тип клітин, такий як пухлинна клітина, клітина аутоіїмунної тканини або клітина, інфікована вірусом. Антитіла є застосовними при лікуванні захворювання або розладу, такого як злоякісне новоутворення, вірусна інфекція й аутоїмунне захворювання.
І007| Антитіла винаходу можуть бути непроцесованими (наприклад, антитіло За або Ідс4) або можуть містити тільки антигензв'язувальну частину (наприклад, фрагмент Раб, К(аб)» або 5СЕМм) і можуть бути модифіковані, щоб впливати на функціональність, наприклад усувати залишкові ефекторні функції (Кеаау еї аї., 2000, 9. Іттипої. 164:1925-1933). У деяких варіантах здійснення, антитіла можуть бути біспецифічними.
ЇО08| У першому аспекті, даний винахід надає ізольовані рекомбінантні моноклональні антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, що специфічно зв'язуються з РО-1. У деяких варіантах здійснення, антитіла є повністю людськими. Ілюстративні антитіла проти РО-1 даного винаходу перераховані в Таблицях 1-3 цього опису. У Таблиці 1 наведені ідентифікатори амінокислотних послідовностей варіабельних областей важкого ланцюга (НСМК5), варіабельних областей легкого ланцюга (І СУК»), областей, що визначають комплементарність, важкого ланцюга (НСОКІ, НСОК2 і НСОКЗ) і областей, що визначають комплементарність, легкого ланцюга (СОМ1, 1 СОК2 і СОМ) ілюстративних антитіл проти РО-1. У Таблиці 2 наведені ідентифікатори послідовностей нуклеїнових кислот НСУК, ГСК, НСОКІ, НСОК2
НеОКзЗ, І СОКІ1, СО і 1 СОКЗ ілюстративних антитіл проти РО-1. У Таблиці 3 наведені ідентифікатори амінокислотних послідовностей послідовностей важкого ланцюга і легкого ланцюга ілюстративних антитіл проти РО-1.
І009| Даний винахід надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять НСМЕ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-яких амінокислотних послідовностей
Зо НСУК, перерахованих у Таблиці 1, або по суті аналогічну їй послідовність, яка має з нею щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ІО10) Даний винахід також надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять
СМАК, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-яких амінокислотних послідовностей І СУК, перерахованих у Таблиці 1, або по суті аналогічну їй послідовність, яка має з нею щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ІО11)| Даний винахід також надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять пару амінокислотних послідовностей НСМК і ГСМК (НСМАКЛСМ), що містить будь-яку з амінокислотних послідовностей НСМЕК, перерахованих у Таблиці 1, у парі будь-якої з амінокислотних послідовностей ГСМК, перерахованих у Таблиці 1. Відповідно до деяких варіантів здійснення, даний винахід надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять пару амінокислотних послідовностей НСМК/ЛСМЕ, що міститься в будь-якому з ілюстративних антитіл проти РО-1, перерахованих у Таблиці 1. У деяких варіантах здійснення, пару амінокислотних послідовностей НСУМК/Л СУК вибирають із групи, що складається з ЗЕО ІЮ
МО: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/202, 218/202, 226/202, 234/202, 242/202, 250/202, 258/202, 266/202, 274/202, 282/202, 290/202, 298/186, 3306/1836 і 314/186. У деяких варіантах здійснення, пару амінокислотних послідовностей НСМКЛСМК вибирають з однієї з 5ЕО ІЮО МО: 130/138 (наприклад, Н2М7795М), 162/170 (наприклад, Н2М7798М), 234/202 (наприклад, НіхНОО48Р) або 314/186 (наприклад, НаХНОООВР).
ІО12)| Даний винахід також надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять
СОКІ важкого ланцюга (НСОКТ), що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-яких амінокислотних послідовностей НСОКІ, перерахованих у Таблиці 1, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ІО13) Даний винахід також надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять
СОК2 важкого ланцюга (НСОК2), що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-яких амінокислотних послідовностей НСОКІ, перерахованих у Таблиці 1, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності. 014) Даний винахід також надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять
СОКЗ важкого ланцюга (НСОМКЗ), що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-яких амінокислотних послідовностей НСОКЗ, перерахованих у Таблиці 1, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ІО15) Даний винахід також надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять
СОКІ легкого ланцюга (СОМ), що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-яких амінокислотних послідовностей ЇСОКІ1, перерахованих у Таблиці 1, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ІО16) Даний винахід також надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять
СОК2 легкого ланцюга (І СОК2), що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-яких амінокислотних послідовностей ЇСОК2, перерахованих у Таблиці 1, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ІО17| Даний винахід також надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять
СОКЗ легкого ланцюга (І СОКЗ), що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-яких амінокислотних послідовностей ЇСОКЗ, перерахованих у Таблиці 1, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ІО18) Даний винахід також надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять пару амінокислотних послідовностей НСОКЗ і І! СОКЗ (НСОКЗ/Л СОКЗ), що містить будь-яку з амінокислотних послідовностей, перерахованих у Таблиці 1, у парі будь-якої з амінокислотних послідовностей І! СОКЗ, перерахованих у Таблиці 1. Відповідно до деяких варіантів здійснення, даний винахід надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять пару амінокислотних послідовностей НСОКЗЛСОМЗ, що міститься в будь-якому з ілюстративних антитіл проти РО-1, перерахованих у Таблиці 1. У деяких варіантах здійснення, пару
Зо амінокислотних послідовностей НСОКЗ/Л СОКЗ вибирають із групи, що складається з 5ЕО ІЮ
МО: 136/144 (наприклад, Н2М7795М), 168/176 (наприклад, Н2М7798М), 240/208 (наприклад,
Нахнзоо48Р) і 320/192 (наприклад, НаХхНОООВР).
ІО19| Даний винахід надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-яких амінокислотних послідовностей НС, перерахованих у Таблиці 3, або по суті аналогічну їй послідовність, що має з нею щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності. 020) Даний винахід також надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-яких амінокислотних послідовностей І С, перерахованих у Таблиці 3, або по суті аналогічну їй послідовність, що має з нею щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ІО21| Даний винахід також надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять пару амінокислотних послідовностей НС і С (НС/ С), що містить будь-яку з амінокислотних послідовностей НС, перерахованих у Таблиці 3, у парі будь-якої з амінокислотних послідовностей ІС, перерахованих у Таблиці 3. Відповідно до деяких варіантів здійснення, даний винахід надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять пару амінокислотних послідовностей НС// С, що міститься в будь-якому з ілюстративних антитіл проти РО-1, перерахованих у Таблиці 3. У деяких варіантах здійснення, пару амінокислотних
БО послідовностей НС/Л/С вибирають із групи, що складається з 5БЕО ІЮ МО: 330/331, 332/333, 334/335 і 336/337. (022) Даний винахід також надає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять набір із шести СОК (тобто НСОМК1-НСОН2-НОСОВЗ-І СОВІ1-І СОВ2-І СО), що міститься в будь- якому з ілюстративних антитіл проти РО-1, перерахованих у Таблиці 1. У деяких варіантах здійснення, набір амінокислотних послідовностей НСОК1-НСОВН2-НОСОВЗ-І СОВІ1-І СОВ2-
ІЇСОВЗ вибирають із групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 132-134-136-140-142-144 (наприклад,
Нагм7795М); 164-166-168-172-174-176 (наприклад, Н2М7798М); 236-238-240-204-206-208 (наприклад, НАхХНЗО48Р) і 316-318-320-188-190-192 (наприклад, НіХНОООВР).
ЇО23| У пов'язаному варіанті здійснення, даний винахід надає антитіла або їх 60 антигензв'язувальні фрагменти, які містять набір із шести СОЕК (тобто НСОМК1-НСОВН2-НСОВЗ-
ІЇСОВ1-ІСОВН2-ІСОМКЗ3), що міститься в парі амінокислотних послідовностей НСМК/Л СМ, визначуваній будь-яким з ілюстративних антитіл проти РО-1, перерахованих у Таблиці 1.
Наприклад, даний винахід включає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять набір амінокислотних послідовностей НСОК1-НСОВН2-НСОВЗ-ІСОВ1-іСОН2-ІСОКЗ, що міститься в парі амінокислотних послідовностей НСУКЛ СУК, вибраній з групи, яка складається з ЗЕО ІЮО МО: 130/138 (наприклад, Н2М7795М); 162/170 (наприклад, Н2М7798М); 234/202 (наприклад, НахНОО48Р) і 314/186 (наприклад, НА4ХНОООВР). Методи і технології для ідентифікації СОМ в амінокислотних послідовностях НСМК і СУК є добре відомими в даній галузі і можуть застосовуватися для ідентифікації СОК у позначених амінокислотних послідовностях НСМК і/або СУК, розкритих у даному описі. Ілюстративні домовленості, які можуть застосовуватися для ідентифікації границь СОК, включають, наприклад, визначення
Кебат, визначення Чотія і визначення АБМ. У цілому, визначення Кебат основане на варіабельності послідовності, визначення Чотія основане на розташуванні структурних петльових областей і визначення АБМ є компромісом між підходами Кебат і Чотія. Див., наприклад, Кабаї, "Зедпепсез ої Ргоївїіп5 ої Іттипоїодісаї! Іпіегезі", Маїйопаї! Іпзійшев ої Неанцй,
Веїпезаа, Ма. (1991); А!-І агікапі еї аї., У. Мої. Вісі. 273:927-948 (1997); і Мапіп еї а!., Ргос. Май.
Асад. сі. ОБА, 86:9268-9272 (1989). Громадські бази даних також є доступними для ідентифікації послідовностей СОК в антитілі.
І024| Даний винахід включає антитіла проти РО-1, що мають модифіковану схему глікозилування. У деяких варіантах здійснення, може застосовуватися модифікація для видалення небажаних ділянок глікозилування або для одержання антитіла без залишку фукози, присутнього в олігосахаридному ланцюзі, наприклад, для збільшення функції антитілозалежної клітинної цитотоксичності (АЮСС) (див. Зпієїй еї а. (2002), УВС, 277:26733). В інших застосуваннях, може бути проведена модифікація галактгозилювання, щоб модифікувати комплементзалежну цитотоксичність (СОС).
ІО25) Даний винахід також надає антитіла і їх антигензв'язувальні фрагменти, які конкурують за специфічне зв'язування з РО-1, причому антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент містить СОК з НСММК і СОК з І СУК, де кожна з НСМК і Ї СУК має амінокислотну послідовність, вибрану з послідовностей НСМК і І СМК, перерахованих у Таблиці 1.
Зо 026) Даний винахід також надає ізольовані антитіла і їх антигензв'язувальні фрагменти, які блокують зв'язування РО-1 з РО-11 або РО-1І2. У деяких варіантах здійснення, антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, що блокує зв'язування РО-1 з РО-11, може зв'язуватися з таким же епітопом на РО-1, як РО-Ї71, або може зв'язуватися з епітопом на РО-1, що відрізняється від РО-Ї 1.
І027| В альтернативних варіантах здійснення, даний винахід надає антитіла і їх антигензв'язувальні фрагменти, які стимулюють зв'язування РО-1 з РО-І11. У деяких варіантах здійснення, даний винахід надає ізольовані антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які зв'язуються з РО-1, де антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти підсилюють зв'язування
РО-1 з РО-11. У деяких варіантах здійснення, ізольовані антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти містять СОМ з НСУЕК, де НСУМК має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 2, 981 250; і СОК з ІСМК, де /СМК має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІО МО: 10, 106 і 202. У деяких варіантах здійснення, ізольовані антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти містять пару амінокислотних послідовностей НСМК/Л СУК, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 2/10 (наприклад, НІМ7789М), 98/106 (наприклад, Н2М7791М) і 250/202 (наприклад, НАНУОбВР). 028) Даний винахід також надає антитіла і їх антигензв'язувальні фрагменти, які специфічно зв'язуються з РО-1 від людини або іншого виду. У деяких варіантах здійснення, антитіла можуть зв'язуватися з РО-1 людини і/або з РО-1 мавпи.
ІО29| Даний винахід також надає антитіла і їх антигензв'язувальні фрагменти, які перехресно конкурують за зв'язування РО-1 з еталонним антитілом або його антигензв'язувальним фрагментом, що містить СОК з НСМК ії СОК з ІСМК, де кожна з НСМК і СУК має амінокислотну послідовність, вибрану з послідовностей НСМРК і І СУК, перерахованих у Таблиці 1.
ЇО3ЗО| В одному варіанті здійснення, винахід надає ізольоване антитіло або антигензв'язувальний фрагмент, що має одну або декілька з наступних характеристик: (а) блокує зв'язування РО-1 з РО-І 1 або РО-1 2; (Б) специфічно зв'язується з РО-1 людини і/або РО- 1 мавпи; (с) блокує РО-1-індуковану Т-клітинну понижувальну регуляцію й захищає передачу сигналів Т-клітин; (4) пригнічує ріст пухлини і збільшує виживаність у суб'єктів з раком товстої й ободової кишки; (є) інгібує проліферацію Т-клітин в аналітичному тесті зі змішаною реакцією лімфоцитів (МІК); і () збільшує секрецію 1-2 і/або інтерферону гамма в аналітичному тесті
МІ В.
ІО31)| У деяких варіантах здійснення, антитіло або антигензв'язувальний фрагмент можуть специфічно зв'язуватися з РО-1 агоністичним чином, тобто вони можуть підсилювати або стимулювати зв'язування з РО-1 і/або його активність; в інших варіантах здійснення, антитіло може специфічно зв'язуватися з РО-1 антагоністичним чином, тобто воно може блокувати РО-1 від зв'язування з його лігандом.
ІЇО32)| У деяких варіантах здійснення, антитіла або антигензв'язувальні фрагменти даного винаходу є біспецифічними і включають першу специфічність зв'язування з РО-1 і другу специфічність зв'язування для другого цільового епітопа. Другий цільовий епітоп може бути ще одним епітопом на РО-1 або на різних білках. У деяких варіантах здійснення, цільовий епітоп може знаходитися на різних клітинах, що включають різні Т-клітини, В-клітини, пухлинні клітини, клітини аутоїмунної тканини або клітини, інфіковані вірусом.
ІО33| В другому аспекті, даний винахід надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі антитіла проти РО-1 або їх частини. Наприклад, даний винахід надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі будь-яку з амінокислотних послідовностей НСУЕК, перерахованих у Таблиці 1; у деяких варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-яких послідовностей нуклеїнової кислоти НСУК, перерахованих у
Таблиці 2, або по суті аналогічну їй послідовність, що має з нею, щонайменше 90 9б5, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ЇО34| Даний винахід також надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі будь-яку з амінокислотних послідовностей І СМЕК, перерахованих у Таблиці 1; у деяких варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-яких послідовностей нуклеїнової кислоти СУК, перерахованих у Таблиці 2, або по суті аналогічну їй послідовність, що має з нею щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ЇО35| Даний винахід також надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі будь-яку з амінокислотних послідовностей НСОКІ, перерахованих у Таблиці 1; у деяких варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з
Зо будь-якої послідовності нуклеїнових кислот НСОКІ, перерахованих у Таблиці 2, або по суті аналогічну їй послідовність, що має з нею щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ЇО36| Даний винахід також надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі будь-яку з амінокислотних послідовностей НСОМК2, перерахованих у Таблиці 1; у деяких варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої послідовності нуклеїнових кислот НСОК2, перерахованих у Таблиці 2, або по суті аналогічної їй послідовності, що має з нею щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ЇО37| Даний винахід також надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі будь-яку з амінокислотних послідовностей НСОМКЗ, перерахованих у Таблиці 1; у деяких варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої послідовності нуклеїнових кислот НСОКЗ, перерахованих у Таблиці 2, або по суті аналогічної їй послідовності, що має з нею щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ІО38| Даний винахід також надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі будь-яку з амінокислотних послідовностей ГСОКІ, перерахованих у Таблиці 1; у деяких варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої послідовності нуклеїнових кислот | СОК1, перерахованих у Таблиці 2, або по суті аналогічної їй послідовності, що має з нею щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ЇО39| Даний винахід також надає молекули нуклеїнової кислоти, кодучі будь-яку з амінокислотних послідовностей ГСОК2, перерахованих у Таблиці 1; у деяких варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої послідовності нуклеїнових кислот ЇСОК2, перерахованих у Таблиці 2, або по суті аналогічної їй послідовності, що має з нею щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
ЇО40| Даний винахід також надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі будь-яку з амінокислотних послідовностей ГСОКЗ, перерахованих у Таблиці 1; у деяких варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з 60 будь-якої послідовності нуклеїнових кислот | СОКЗ, перерахованих у Таблиці 2, або по суті аналогічної їй послідовності, що має з нею щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
І041| Даний винахід також надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі НСМК, де НСУК містить набір із трьох СОК (тобто НСОК1І-НСОВ2-НСОМКЗ), де набір амінокислотних послідовностей НСОМК1-НСОН2-НСОМКЗ є таким, як визначено будь-яким з ілюстративних антитіл проти РО-1, перерахованих у Таблиці 1.
І042| Даний винахід також надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі СУК, де СУК містить набір із трьох СОК (тобто ІСОК1-ІСОВ82-ІСОМКЗ), де набір амінокислотних послідовностей СОМ1-І СОВ2-І СОКЗ є таким, як визначено будь-яким з ілюстративних антитіл проти РО-1, перерахованих у Таблиці 1.
І043| Даний винахід також надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі як НСУК, так і
ІЇСМК, де НСМК містить амінокислотну послідовність 3 будь-яких амінокислотних послідовностей НСМК, перерахованих у Таблиці 1, і де ІГСМК містить амінокислотну послідовність з будь-яких амінокислотних послідовностей І СУК, перерахованих у Таблиці 1. У деяких варіантах здійснення, молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої послідовності нуклеїнових кислот НСМУК, перерахованих у
Таблиці 2, або по суті аналогічної їй послідовності що має з нею щонайменше 90 9б5, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності, і полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої послідовності нуклеїнових кислот І СМЕ, перерахованих у Таблиці 2, або по суті аналогічної їй послідовності, що має з нею щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності.
У деяких варіантах здійснення відповідно до цього аспекту винаходу, молекула нуклеїнової кислоти кодує НСМК і СУМ, де як НСУЕ, так і ГСМК одержують з одного і того ж антитіла проти
РО-1, наведеного в Таблиці 1.
І044| Даний винахід надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі будь-яку з амінокислотних послідовностей важкого ланцюга, перерахованих у Таблиці 3. Даний винахід також надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі будь-яку з амінокислотних послідовностей легкого ланцюга, перерахованих у Таблиці 3.
І045) Даний винахід також надає молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі як важкий ланцюг
Зо (НС), так і легкий ланцюг (ІС), де НС містить амінокислотну послідовність з будь-якої з амінокислотних послідовностей НС, перерахованих у Таблиці 3, і де І! С містить амінокислотну послідовність з будь-якої з амінокислотних послідовностей І С, перерахованих у Таблиці 3. 046) У спорідненому аспекті, даний винахід надає рекомбінантні вектори експресії, здатні до експресії поліпептиду, що містить варіабельну область важкого або легкого ланцюга антитіла проти РО-1. Наприклад, даний винахід включає рекомбінантні вектори експресії, що містять будь-яку з молекул нуклеїнової кислоти, зазначених вище, тобто молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі будь-яку з послідовностей НСМЕК, СМР і/або СОК, наведених у Таблиці 1. Даний винахід також надає рекомбінантні вектори експресії, здатні до експресії поліпептиду, що містить важкий або легкий ланцюг антитіла проти РО-1. Наприклад, даний винахід включає рекомбінантні вектори експресії, що містять будь-яку з молекул нуклеїнової кислоти, зазначених вище, тобто молекули нуклеїнової кислоти, кодуючі будь-яку з послідовностей важкого або ланцюга легкого ланцюга, наведених у Таблиці 3. Також в обсяг даного винаходу включені клітини-хазяїни, у які такі вектори були введені, а також способи продукування антитіл або їх частин за допомогою культивування клітин-хазяїнів при умовах, які забезпечують вироблення антитіл або фрагментів антитіл, і витягання антитіл і фрагментів антитіл, продукованих таким чином.
І047| У третьому аспекті, даний винахід надає мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули і їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять першу антигензв'язувальну специфічність, що специфічно зв'язується з РО-1, і другу антигензв'язувальну специфічність, що специфічно зв'язується з антигеном, вибраним із групи, яка складається з пухлинного клітинно- специфічного антигену, тканиноспецифічного антигену аутоїмунної тканини, специфічного антигену інфікованої клітини, Т-клітинного співінгібітору, Т-клітинного рецептора, Ес-рецептора,
РО-І1 ї РО-1. У деяких варіантах здійснення, перша антигензв'язувальна специфічність може містити три СОК, похідні з НСМЕК з амінокислотною послідовністю, вибраною з послідовностей
НСМК у Таблиці 1, і три СОК, похідні з ЇСМЕ. з амінокислотною послідовністю, вибраною з послідовностей ЇСМК у Таблиці 1. В одному варіанті здійснення, перша антигензв'язувальна специфічність може містити позаклітинний домен РО-1Ї1. Друга антигензв'язувальна специфічність може цілеспрямовано діяти на антиген у тій же самій клітині, що і для РО-1, або в іншій клітині такого ж типу тканини або іншого типу тканини. Наприклад, мультиспецифічні бо антигензв'язувальні молекули можуть зв'язуватися з Т-клітиною, де перша антигензв'язувальна (с;
специфічність може специфічно зв'язуватися з РО-1, а друга антигензв'язувальна специфічність може зв'язуватися з Т-клітинним рецептором на Т-клітині. Альтернативно, у ще одному іншому варіанті здійснення, перша антигензв'язувальна специфічність може специфічно зв'язуватися з
РО-1 на Т-клітині, а друга антигензв'язувальна специфічність може бути націлена на антиген/рецептор на В-клітині або макрофагу, або антигенпрезентуючій клітині. У деяких варіантах здійснення, друга антигензв'язувальна специфічність може бути спрямована на антиген, асоційований з аутоїмунною тканиною. В одному варіанті здійснення, перша антигензв'язувальна специфічність може містити позаклітинний домен РО-1І1, а друга антигензв'язувальна специфічність може зв'язуватися з ще одним іншим епітопом на РО-1. У деяких варіантах здійснення, перша антигензв'язувальна специфічність зв'язується з РО-1 з більш низькою афінністю, наприклад з Ко, більшою ніж 10-7 М, більшою ніж 10-55 М, більшою ніж 105 М або більшою ніж 10-27 М.
І048| У четвертому аспекті, винахід надає фармацевтичну композицію, яка містить рекомбінантне людське антитіло або його фрагмент, що специфічно зв'язується з РО-1, і фармацевтично прийнятний носій. У спорідненому аспекті, винахід представляє композицію, яка являє собою комбінацію антитіла проти РО-1 і другого терапевтичного засобу. В одному варіанті здійснення, другий терапевтичний засіб являє собою будь-який засіб, який переважно комбінується з антитілом проти РО-1. Ілюстративні засоби, які можуть переважно комбінуватися з антитілом проти РО-1, включають, без обмеження, інші засоби, що зв'язують і/або модулюють сигнальний шлях РО-1 (що включають інші антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти і т. д.) іМабо засоби, що не зв'язуються безпосередньо з РО-1, але, проте, модулюють активацію імунних клітин. Додаткові комбінаційні терапії і спільні лікарські форми, які включають антитіла проти РО-1 даного винаходу, розкриті ще в інших розділах цього опису. 049) У п'ятому аспекті, винахід надає способи модуляції імунної відповіді у суб'єкта, які включають введення терапевтично ефективної кількості антитіла проти РО-1 винаходу або його антигензв'язувального фрагмента суб'єкту, що потребує цього. У деяких варіантах здійснення, винахід надає способи посилення імунної відповіді у суб'єкта, які включають введення суб'єкту ефективної кількості антитіла винаходу або його фрагмента, що зв'язується з РО-1 і блокує зв'язування РО-1 з РО-11. В одному варіанті здійснення, винахід надає спосіб стимуляції або
Зо посилення стимуляції Т-клітин у суб'єкта. В одному варіанті здійснення, винахід надає способи інгібування Т-регуляторних (Тгед) клітин у суб'єкта, які включають введення терапевтично ефективної кількості блокуючого антитіла винаходу або його антигензв'язувального фрагмента суб'єкту, що потребує цього. У деяких варіантах здійснення, суб'єкт, що потребує цього, може страждати на захворювання або розлад, такі як злоякісне новоутворення або вірусна інфекція.
В альтернативних варіантах здійснення, винахід надає способи інгібування або пригнічення активації Т-клітин у суб'єкта, які включають введення терапевтично ефективної кількості активуючого антитіла винаходу або його фрагмента суб'єкту, що потребує цього. В одному варіанті здійснення, суб'єкт може страждати на аутоїмунне захворювання або розлад.
ІЇО50)| У шостому аспекті, винахід надає терапевтичні способи для лікування захворювання або розладу, такого як злоякісне новоутворення, аутоїмунне захворювання або вірусна інфекція, у суб'єкта, з використанням антитіла проти РО-1 або антигензв'язувальної частини антитіла винаходу, де терапевтичні способи включають введення терапевтично ефективної кількості фармацевтичної композиції, яка містить антитіло або фрагмент антитіла винаходу, суб'єкту, що потребує цього. Розлад, який піддається лікуванню, являє собою будь-яке захворювання або стан, що поліпшується, полегшується, інгібується або попереджається за допомогою стимуляції або інгібування активності або сигнального шляху РО-1. У деяких варіантах здійснення, антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент винаходу вводять у комбінації з другим терапевтичним засобом суб'єкту, що потребує цього. Другий терапевтичний засіб може бути вибраний з групи, що складається з антитіла до ще одного іншого Т-клітинного співінгібітору, антитіла до антигену пухлинних клітин, антитіла до Т-клітинного рецептора, антитіла до Ес-рецептора, антитіла до епітопа на клітині, інфікованої вірусом, антитіла до антигену аутоїмунної тканини, антитіла до РО-Ї71, цитотоксичного засобу, засобу проти злоякісного новоутворення, противірусного лікарського засобу, протизапального лікарського засобу (наприклад, кортикостероїдів), хіміотерапевтичного засобу, променевої терапії, імуносупресанту і будь-яких інших лікарських засобів або терапій, відомих у даній галузі. У деяких варіантах здійснення, другий терапевтичний засіб може являти собою засіб, який допомагає протидіяти або знижувати будь-які можливі побічні ефекти, асоційовані з антитілом винаходу або його антигензв'язувальним фрагментом, якщо такі побічні ефекти будуть мати місце.
ЇО51| У деяких варіантах здійснення, даний винахід надає способи пригнічення росту пухлини. У деяких варіантах здійснення, даний винахід надає способи збільшення виживаності пацієнтів зі злоякісним новоутворенням. Приклади злоякісного новоутворення включають, але не обмежуються перерахованим, первинне і/або рецидивуюче злоякісне новоутворення, включаючи рак мозку (наприклад, мультиформну гліобластому), рак легень (наприклад, недрібноклітинний рак легень), плоскоклітинний рак області голови і шиї, нирковоклітинну карциному, меланому, множинну мієлому, рак простати і рак товстої кишки. Способи включають введення фармацевтичної композиції, яка містить терапевтично ефективну кількість антитіла проти РО-1 даного винаходу в комбінації з другим терапевтичним засобом, вибраним із групи, що складається з антагоніста фактора росту судинного ендотелію (МЕСЕ) (наприклад, афліберцепт, бевацизумаб), інгібітору ангіпоетину-2 (Апд2) (наприклад, антитіла проти Апод2г, такого як несвакумаб), інгібітору гена активації лімфоцитів З (ГАС-3), інгібітору антигену цитотоксичних Т-лімфоцитів 4 (СТІ А-4) (наприклад, іпілімумаб), хіміотерапевтичного засобу і променевої терапії. Додаткові приклади додаткових терапій/терапевтичних засобів, які можуть застосовуватися в комбінації з антитілом проти РО-1 винаходу для застосування при лікуванні злоякісного новоутворення, описані де-небудь ще в даному описі.
ІЇО52| Антитіло або його фрагмент може вводитися підшкірно, внутрішньовенно, внутрішньошкірно, внутрішньоочеревинно, перорально, внутрішньом'язово або інтракраніально.
Антитіло або його фрагмент може вводитися при дозі, що дорівнює від приблизно 0,1 мг/кг маси тіла до приблизно 100 мг/кг маси тіла суб'єкта.
ЇО53| Даний винахід також включає застосування антитіла проти РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента винаходу у виробництві лікарського засобу для лікування захворювання або розладу, які мали б позитивний ефект від блокади або збільшення зв'язування з РО-1 і/або передачі сигналів.
ІО54| Інші варіанти здійснення стануть очевидними з огляду подальшого докладного опису.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
ЇО551| Фіг. 1 являє собою схематичне зображення біотесту на РО-1 на основі люциферази, описаного в Прикладі 8 даного документа. Панель А: неактивні клітини Юркат; Панель В: клітини Юркат активуються Т-клітинним рецептором (ТОК), що утворює кластер за допомогою
Зо біспецифічного антитіла СОЗ3ЗхСО20; Панель С: активація РО-1 ослабляє відповідь у активованих клітин Юркат; Панель О: блокування РО-1 рятує відповідь у активованих клітин
Юркат.
ІО56) Фіг. 2 ілюструє ріст пухлини і результати по виживаності для мишей з імплантованими пухлинними клітинами СоЇоп-26 на День 0 і мишей, що пройшли лікування зазначеними комбінаціями молекул за допомогою ін'єкції в Дні 3, 6, 10, 13 ї 19 ("модель пухлини на ранній стадії"). Графік відображає об'єм пухлини (у мм3) для різних експериментальних груп при різних часових оцінках після імплантації. Верхні стрілки уздовж Х-осі вказують на часовий режим лікувальних ін'єкцій. "підсбега" являє собою ізотипічний контроль ЇдС2; "Ес" є людським Ес- контролем; "МЕСЕ-пастка" являє собою афліберцепт; "проти РО-1" являє собою антитіло проти мишачого РО-1 клону ЕРМІ-14; "проти РО-І 1" являє собою моноклональне антитіло проти РО-
Ї1, описане в іншому розділі даного опису.
ІО57| Фіг. З ілюструє ріст пухлини і результати по виживаності для мишей з імплантованими пухлинними клітинами СоЇоп-26 на День 0 і мишей, що пройшли лікування зазначеними комбінаціями молекул за допомогою ін'єкції в Дні 3, 6, 10, 13 і 19 ("модель пухлини на ранній стадії". Графік відображає об'єм пухлини (у мм") індивідуальних мишей у кожній експериментальній групі в День 28 після імплантації. "тідб2га" являє собою ізотипічний контроль ІдДа2; "Ес" є людським Ес-контролем; "УЕСЕ-пастка" являє собою афліберцепт; "проти
РО-1" являє собою антитіло проти мишачого РО-1 клону ЕРМІ-14; "проти РО-І 1" являє собою моноклональне антитіло проти РО-І1, описане в іншому розділі даного опису.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС
ІЇО58| Перед тим, як способи даного винаходу будуть описані, варто розуміти, що даний винахід не обмежений конкретними способами й описаними експериментальними умовами, оскільки такі способи й умови можуть варіювати. Також варто розуміти, що термінологія, використовувана в даному описі, застосовується тільки з метою опису конкретних варіантів здійснення і не мається на увазі як обмежувальна, оскільки обсяг даного винаходу буде обмежений тільки прикладеною формулою винаходу.
ІЇО59| Якщо не визначено іншим способом, усі технічні і наукові терміни, використовувані в даному описі, мають таке значення, яке звичайно є зрозумілим для рядового фахівця в даній галузі, до якої належить цей винахід. Незважаючи на те, що будь-які способи і матеріали, бо аналогічні або еквівалентні тим способам і матеріалам, що описані в даному документі і можуть застосовуватися при практичній реалізації або тестуванні даного винаходу, зараз описані переважні способи і матеріали. Усі публікації, зазначені в даному описі, повністю включені в нього за допомогою посилання.
ІО6ОЇ Термін "РО-1" стосується білка програмованої смерті-1, Т-клітинного співінгібітору, також відомого як СО279. Амінокислотна послідовність непроцесованого РО-1 надана в
СепВапк під обліковим номером МР 005009,2 і також називається в даному описі ЗЕО ІЮ МО: 327. Термін "РО-1" також включає білкові варіанти РО-1, що мають амінокислотну послідовність з ЗЕО ІО МО: 321, 322, 323 або 324. Термін "РО-1" включає рекомбінантний РО-1 або його фрагмент. Термін також охоплює РО-1 або його фрагмент, сумісний, наприклад, з гістидиновою міткою, мишачим або людським Ес або сигнальною послідовністю, такою як КОК1. Наприклад, термін включає послідовності, демонстровані ЗЕО ІЮ МО: 323 або 324, що містять мишачий Ес (тідс2а) або людський Ес (піІдСс1) по С-кінцю, сумісний з амінокислотними залишками 25-170 непроцесованого РО-1 з С935-зміною. Білкові варіанти, як демонструє 5ЕО ІЮ МО: 321, містять гістидинову мітку по С-кінцю, сумісну з амінокислотними залишками 25-170 непроцесованого
РО-1. Якщо не зазначено, що він належить до нелюдського виду, термін "РО-1" означає РО-1 людини.
ЇО61| РО-1 є членом сімейства СО28/СТІ А-4А/ЛСО5 Т-клітинних співінгібіторів. РО-1 являє собою білок з 288 амінокислот з позаклітинним М-кінцевим доменом, що є Ідм-подібним, трансмембранним доменом, і внутрішньоклітинним доменом, що містить імунорецепторний інгібіторний (ІТІМ) мотив на основі тирозину і імунорецепторний перемикаючий (ІТ5М) мотив на основі тирозину (Спайораанвуау еї аї. 2009, Іттипої. Кем.). РО-1 рецептор має два ліганди, РО- ліганд-1 (РО-І 1) і РО-1 2. (0621 Термін "РО-І 1" стосується ліганду рецептора РО-1, також відомого як СО274 і В7НІ1.
Амінокислотна послідовність непроцесованого РО-І 1 надана в СепВапкК під обліковим номером
МР 0548621 і також називається в даному описі як БЕО ІЮ МО: 328. Термін також охоплює РО-
Ї1 або його фрагмент, сумісний, наприклад, з гістидиновою міткою, мишачим або людським Ес або сигнальною послідовністю, такою як КОК1. Наприклад, термін включає послідовності, ілюстровані ЗЕО ІЮО МО: 325 або 326, що містять мишачий Ес (тідс2а) або людський Ес (ПІДЕ) по С-кінцю, сумісний з амінокислотними залишками 19-239 непроцесованого РО-І1. РО-Ї 1
Ко) являє собою білок з 290 кислот з позаклітинним ІдМ-подібним доменом, трансмембранним доменом і у високому ступені консервативним внутрішньоклітинним доменом із приблизно 30 амінокислот. РО-Ї1 конститутивно експресується в багатьох клітинах, таких як антигенпрезентуючі клітини (наприклад, дендритні клітини, макрофаги і В-клітини) і в гемопоетичних і негемопоетичних клітинах (наприклад, клітинах судинного ендотелію, острівцях
Лангерганса і ділянках з імунним привілеєм). РО-І1 також експресуються в найрізноманітніших пухлинах, клітинах, інфікованих вірусом, і аутоїмунній тканині і є компонентом імуносупресорного середовища (Кібаз, 2012, МЕ9ОУМ, 366:2517-2519). 063) Як використовують у даному описі, термін "Т-клітинний співінгібітор" стосується ліганду і/або рецептора, що модулює імунну відповідь через активацію або супресію Т-клітин. Термін "Т- клітинний співінгібітор", також відомий як Т-клітинна співсигнальна молекула, включає, але не обмежений наведеним, білок гена 3 активації лімфоцитів (ГАС-3, також відомий як СО223), цитотоксичний антиген-4 Т-лімфоцитів (СТІ А-4) і ослаблювач В- і Т-лімфоцитів (ВТ А), СО-28, 284, 1108, Т-клітинний імуноглобулін і муцин З (ТІМ3), Т-клітинний імунорецептор з імуноглобуліном і ІТІМ (ТІСЇТ; також відомий як М51ІС9), асоційований з лейкоцитами імуноглобуліноподібний рецептор 1 (ГАЇК1; також відомий як СОЗ305), індукований Т-клітинний костимулятор (ІСО5; також відомий як СО278), М-домен Ід супресора активації Т-клітин (МІ5ТА) і
СОр160.
ЇО64| Як використовують у даному описі, термін "Рсо-рецептор" стосується білка поверхневого рецептора, виявлюваного на імунних клітинах, що включають В-лімфоцити, природні клітини-кілери, макрофаги, базофіли, нейтрофіли і тучні клітини, який має специфічність зв'язування з Ес-областю антитіла. Термін "Рс-рецептор" включає, але не обмежений наведеним, Есу-рецептор (наприклад, ЕсукІ (СОб64), ЕсуКПА (2032), ЕсуКІІВ (С032),
ЕсувкША (СО16а) і ЕсуУАКТІВ (СО165)), Еса-рецептор (наприклад, ЕсаКІ або СО89) і Есє-рецептор
Інаприклад, ЕсеКІ ї Есе! (СО23)|.
ІО65| Термін "антитіло", як використовують у даному описі, призначений для позначення імуноглобулінових молекул, складених з чотирьох поліпептидних ланцюгів, двох важких (Н) ланцюгів і двох легких (І) ланцюгів, взаємозв'язаних дисульфідними зв'язками (тобто "повних молекул антитіл"), а також їх мультимерів (наприклад, ІМ) або їх антигензв'язувальних фрагментів. Кожен важкий ланцюг складений з варіабельної області важкого ланцюга ("НСМК" 60 або "Мн") і константної області важкого ланцюга (що складається з доменів Сні, Сн2 і Сн3З).
Кожен легкий ланцюг складений з варіабельної області легкого ланцюга (ІСМА" або "Мі") і константної області легкого ланцюга (Сі). Області Мн і Мі можуть бути додатково підрозділені на області гіперваріабельності, названі областями, що визначають комплементарність (СОР), які перемежовуються з областями, що є більш консервативні, названими каркасні області (ЕК).
Кожна Мн і Мі складається з трьох СОК і чотирьох ЕК, розташованих від амінокінця до карбоксикінця в наступному порядку: ЕК!, СОКІ, ЕК2, СОК2, ЕКЗ, СОМКЗ, ЕК4. У деяких варіантах здійснення винаходу, ЕК антитіла (або антигензв'язувального фрагмента) можуть бути ідентичними людським ембріональним послідовностям або можуть бути природним чином або штучно модифіковані. Амінокислотна консенсусна послідовність може бути визначена на основі порівняльного аналізу двох або більше СОК.
ІО66| Заміна одного або декількох залишків СОМ або пропуск однієї або декількох СОК також є можливими. У науковій літературі були описані антитіла, у яких одна або дві СОР можуть обходитися без зв'язування. Радіап еї аЇ. (1995, ЕАБЕВ .). 9:133-139) аналізували контактні області між антитілами і їх антигенами, на основі опублікованих кристалічних структур, і зробили висновок, що тільки приблизно від однієї п'ятої до однієї третьої залишків СОК у дійсності контактують з антигеном. Радіап також знайшов багато антитіл, у яких одна або дві
СОК не мали амінокислот у контакті з антигеном (див. також, Ма|дов5 еї аїІ. 2002, 9. Мої. Віої. 320:415-428).
І067| Залишки СОК, що не контактують з антигеном, можуть бути ідентифіковані на основі попередніх досліджень (наприклад, залишки НбО-Нб5 у СОКНАО часто не потрібні), з областей
СОК по Кебат, що лежать поза СОМ по Чотія, за допомогою молекулярного моделювання і/або емпірично. Якщо СОК або її залишок (залишки) пропущений), вона звичайно заміняється на амінокислоту, що займає відповідне положення в ще одній послідовності людського антитіла або консенсусі таких послідовностей. Положення для заміни усередині СОК і амінокислоти для заміни також можуть бути вибрані емпірично. Емпіричні заміни можуть бути консервативними або неконсервативними замінами.
ІО68) Повністю людські моноклональні антитіла проти РО-1, розкриті в даному описі, можуть містити одну або декілька амінокислотних замін, вставок і/або делецій у каркасній області і/або варіабельних доменах СОК областей важкого і легкого ланцюгів в порівнянні з відповідними
Зо ембріональними послідовностями. Такі мутації можуть бути легко встановлені за допомогою порівняння амінокислотних послідовностей, розкритих у даному описі, з ембріональними послідовностями, доступними з, наприклад, загальнодоступних баз даних послідовностей антитіл. Даний винахід включає антитіла і їх антигензв'язувальні фрагменти, які є похідними від будь-якої з амінокислотних послідовностей, розкритих у даному описі, де одна або декілька амінокислот усередині однієї або декількох каркасних і/або СОК-областей піддаються мутації до відповідного залишку (залишків) ембріональної послідовності, з якої антитіло було одержано, або до відповідного залишку (залишків) ще однієї людської ембріональної послідовності, або до заміни консервативної амінокислоти із відповідного ембріонального залишку (залишків) (такі зміни послідовності іменуються в даному описі як "ембріональні мутації"). Рядовий фахівець у даній галузі, починаючи з послідовностей варіабельних областей важкого і легкого ланцюгів, розкритих у даному описі, зможе легко одержати численні антитіла й антигензв'язувальні фрагменти, які містять одну або декілька індивідуальних ембріональних мутацій або їх комбінації. У деяких варіантах здійснення, усі з каркасних і/або СОБ-залишків у доменах Мн і/або
Мі піддаються зворотній мутації до залишків, що виявляються у вихідній ембріональній послідовності, з якої антитіло було одержане. В інших варіантах здійснення, тільки деякі залишки мутують зворотно до вихідної ембріональної послідовності, наприклад тільки залишки, що мутували, виявлені в межах перших 8 амінокислот з ЕК1 або в межах останніх 8 амінокислот
ЕК4, або тільки залишки, що мутували, виявлені в межах СОКІ, СОК2 або СОКЗ. В інших варіантах здійснення, один або декілька з каркасних і/або СОР -залишків мутують у відповідні залишки відмінної ембріональної послідовності (тобто ембріональної послідовності, що відрізняється від ембріональної послідовності, з якої антитіло було спочатку одержане). Крім того, антитіла даного винаходу можуть містити будь-яку комбінацію з двох або декількох ембріональних мутацій у межах каркасної і/або СОК -області, наприклад, де деякі індивідуальні залишки мутують у відповідний залишок конкретної ембріональної послідовності, у той час як деякі інші залишки, що відрізняються від вихідної ембріональної послідовності, підтримуються або мутують у відповідний залишок іншої ембріональної послідовності. Відразу після одержання, антитіла й антигензв'язувальні фрагменти, які містять одну або декілька ембріональних мутацій, можуть бути легко протестовані на одну або декілька бажаних властивостей, таких як поліпшена специфічність зв'язування, збільшена афінність зв'язування, 60 поліпшені або посилені антагоністичні або агоністичні біологічні властивості (у деяких випадках),
знижена імуногенність і т. д. Антитіла й антигензв'язувальні фрагменти, одержані таким загальним способом, охоплюються даним винаходом.
ІО69)| Даний винахід також включає повністю людські моноклональні антитіла проти РО-1, які містять варіанти будь-яких з амінокислотних послідовностей НСМК, І СУ і/або СОК, розкритих тут, що мають одну або декілька консервативних замін. Наприклад, даний винахід включає антитіла проти РО-1, що мають амінокислотні послідовності НСМК, І СМК і/або СОМ з, наприклад, 10 або менше, 8 або менше, б або менше, 4 або менше і т. д. консервативних амінокислотних замін відносно будь-яких з амінокислотних послідовностей НСМК, І СМК і/або
СОК, розкритих тут.
ІО70| Термін "людське антитіло", як використовують у даному описі, має на увазі включення антитіл, які мають варіабельні і константні області, одержані з людських ембріональних послідовностей імуноглобулінів. Людські тАбБ винаходу можуть включати амінокислотні залишки, некодовані людськими ембріональними послідовностями імуноглобулінів (наприклад, мутації, що вводяться за допомогою випадкового або сайт-специфічного мутагенезу іп міго або за допомогою соматичної мутації іп мімо), наприклад, у СОК і, конкретно, у СОКЗ. Однак, термін "людське антитіло", як використовують у даному описі, не призначений для включення тАБб, у яких послідовності СОМ, одержані з ембріональної лінії ще одного виду ссавця (наприклад, миші), були щеплені на людські послідовності ЕК. Термін включає антитіла, рекомбінантно одержані в ссавці, що не є людиною, або в клітинах ссавця, що не є людиною. Термін не призначений для включення антитіл, ізольованих з людського суб'єкта або генерованих у ньому.
ІО71| Термін "рекомбінантне", як використовують у даному описі, стосується антитіл або їх антигензв'язувальних фрагментів винаходу, створених, експресованих, ізольованих або одержаних за допомогою технологій або способів, відомих в даній галузі, таких як технологія рекомбінантних ДНК, що включає, наприклад, сплайсинг ДНК і трансгенну експресію. Термін стосується антитіл, експресованих у ссавця, що не є людиною (що включає трансгенних нелюдських ссавців, наприклад трансгенних мишей), або клітинній (наприклад, у клітинах СНО) системі експресії, або ізольованих з комбінаторної бібліотеки рекомбінантних людських антитіл.
І0721| Термін "мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули", як використовують у даному описі, стосується біспецифічних, триспецифічних або мультиспецифічних антигензв'язувальних
Зо молекул і їх антигензв'язувальних фрагментів. Мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули можуть бути специфічними для різних епітопів одного цільового поліпептиду або можуть містити антигензв'язувальні домени, специфічні для епітопів більше ніж одного цільового поліпептиду.
Мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула може являти собою одиночний мультифункціональний поліпептид або вона може бути мультимерним комплексом із двох або більше поліпептидів, які ковалентно або нековалентно асоційовані один з одним. Термін "мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули" включає антитіла даного винаходу, які можуть бути зв'язані або спільно експресуватися з ще однією функціональною молекулою, наприклад ще одним пептидом або білком. Наприклад, антитіло або його фрагмент можуть бути функціонально зв'язані (наприклад, за допомогою хімічного сполучення, генетичної гібридизації, нековалентної асоціації або інакше) з одним або декількома іншими молекулярними об'єктами, такими як білок або його фрагмент, для одержання біспецифічної або мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули з другою специфічністю зв'язування. Відповідно до даного винаходу, термін "мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули" також включає біспецифічні, триспецифічні або мультиспецифічні антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти. У деяких варіантах здійснення, антитіло даного винаходу є функціонально зв'язаним із ще одним антитілом або його антигензв'язувальним фрагментом для одержання біспецифічного антитіла з другою специфічністю зв'язування. Біспецифічні і мультиспецифічні антитіла даного винаходу описані в інших розділах цього опису.
І073| Терміни "специфічно зв'язується" або "специфічно зв'язується з", або т. п. означають, що антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент утворює комплекс з антигеном, який є відносно стабільним при фізіологічних умовах. Специфічне зв'язування може характеризуватися рівноважною константою дисоціації, що дорівнює щонайменше приблизно 1х108 М або менше (наприклад, більш низька Ко означає більш щільне зв'язування). Методи визначення того, чи зв'язуються специфічно дві молекули, добре відомі в даній галузі і включають, наприклад, рівноважний діаліз, поверхневий плазмонний резонанс і т. п. Як описано тут, антитіла ідентифікували за допомогою поверхневого плазмонного резонансу, наприклад
ВІАСОКЕ М, що зв'язується специфічно з РО-1. Більше того, мультиспецифічні антитіла, що зв'язуються з одним доменом у РО-1 і одним або декількома додатковими антигенами, або біспецифічна молекула, що зв'язується з двома різними областями РО-1, проте, вважаються бо антитілами, які "специфічно зв'язуються", як використовують у даному описі.
І074| Термін "висока афінність" антитіла стосується тА, які мають афінність зв'язування з
РО-1, що виражається як Ко, що дорівнює щонайменше 107 М, переважно 109 М, більш переважно 107 М, навіть більш переважно 1072 М, навіть більш переважно 10- М, як виміряно за допомогою поверхневого плазмонного резонансу, наприклад ВІАСОКЕ"М або ЕГІ5ЗА з афінністю в розчині. 075) Терміни "швидкість уповільнення", "Кон" або "Ка" означають, що антитіло дисоціює з РО- 1 з константою швидкості, що дорівнює 1х103 с" або менше, переважно 1х107 с" або менше, як визначають поверхневим плазмонним резонансом, наприклад ВІАСОКЕ "М,
І0О76| Терміни "антигензв'язувальна частина" антитіла, "антигензв'язувальний фрагмент" антитіла і т. п., як використовують у даному описі, включають будь-який природний, ферментативно одержуваний, синтетичний або генетично сконструйований поліпептид або глікопротеїн, що специфічно зв'язується з антигеном з утворенням комплексу. Терміни "антигензв'язувальний фрагмент" антитіла або "фрагмент антитіла"? як використовують у даному описі, стосується одного або декількох фрагментів антитіла, які зберігають здатність зв'язуватися з РО-1. 077) У конкретних варіантах здійснення, антитіло або фрагмент антитіла винаходу можуть бути кон'юговані із фрагментом, таким як ліганд або терапевтичний фрагмент ("імунокон'югат"), такий як антибіотик, друге антитіло проти РО-1 або антитіло до ще одного антигену, такого як пухлиноспецифічний антиген, антиген аутоімунної тканини, антиген клітини, інфікованої вірусом,
Ес-рецептор, Т-клітинний рецептор або Т-клітинний співінгібітор, або імунотоксин, або будь-який терапевтичний фрагмент, застосовуваний для лікування захворювання або стану, що включає злоякісне новоутворення, аутоїмунне захворювання або хронічну вірусну інфекцію. 078) "Ізольоване антитіло", як використовують у даному описі, призначене для позначення антитіла, яке не містить по суті інших антитіл (АБ), що мають різні антигенні специфічності (наприклад, ізольоване антитіло, що специфічно зв'язується з РО-1, або його фрагмент по суті не містить АБ, які специфічно зв'язують антигени, відмінні від РО-1).
ІО79| "Блокуюче антитіло" або "нейтралізуюче антитіло", як використовують у даному описі (або "антитіло, що нейтралізує активність РО-1", або "антагоністичне антитіло"), призначене для позначення антитіла, зв'язування якого з РО-1 приводить до інгібування щонайменше однієї
Ко) біологічної активності РО-1. Наприклад, антитіло винаходу може запобігати або блокувати зв'язування РО-1 з РО-І 1.
ІО80| "Активуюче антитіло" або "посилююче антитіло", як використовують у даному описі (або "агоністичне антитіло"), призначене для позначення антитіла, зв'язування якого з РО-1 приводить до збільшення або стимуляції щонайменше однієї біологічної активності РО-1.
Наприклад, антитіло винаходу може збільшувати зв'язування РО-1 з РО-1 1.
ІО81| Термін "поверхневий плазмонний резонанс", як використовують у даному описі, стосується оптичного явища, яке робить можливим дослідження біомолекулярних взаємодій у режимі реального часу за допомогою виявлення змін концентрацій білка в матриці біосенсора, наприклад, використовуючи систему ВІАСОКЕ "м (Рпагтасіа Віозепзог АВ, Оррзаїа, Змуедеп і
Різсаїамау, М.У.).
ІЇО82| Термін "Ко", як використовують у даному описі, призначений для позначення рівноважної константи дисоціації конкретної взаємодії антитіло-антиген.
ІО83| Термін "епітоп" стосується антигенної детермінанти, що взаємодіє з конкретною ділянкою зв'язування антигену у варіабельній області молекули антитіла, відомою як паратоп.
Одиночний антиген може мати більше ніж один епітоп. Таким чином, різні антитіла можуть зв'язуватися з різними областями на антигені і можуть мати різні біологічні ефекти. Термін "епітоп" також стосується ділянки на антигені, на яку реагують В- і/або Т-клітини. Він також стосується області антигену, що зв'язується антитілом. Епітопи можуть бути визначені як структурні або функціональні. Функціональні епітопи звичайно являють собою підвид структурних епітопів і мають такі залишки, що безпосередньо сприяють афінності взаємодії.
Епітопи можуть також бути конформаційними, тобто складатися з нелінійних амінокислот. У деяких варіантах здійснення, епітопи можуть включати детермінанти, що є хімічно активними поверхневими угрупованнями молекул, таких як амінокислоти, цукрові бічні ланцюги, фосфорильні групи або сульфонільні групи, і, у деяких варіантах здійснення, можуть мати специфічні тривимірні структурні характеристики і/або специфічні характеристики заряду.
І084| Термін "суттєва ідентичність" або "по суті ідентичні", коли відносять до нуклеїнової кислоти або її фрагмента, указує на те, що при оптимальному вирівнюванні з відповідними нуклеотидними вставками або делеціями з ще однією нуклесновою кислотою (або її комплементарним ланцюгом) існує нуклеотидна ідентичність послідовності на щонайменше 60 приблизно 90 95 і більш переважно щонайменше приблизно 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95 нуклеотидних основ, виміряна за допомогою будь-якого добре відомого алгоритму ідентичності послідовності, такого як РАБТА, ВІАБТ або САР, як обговорюється нижче. Молекула нуклеїнової кислоти, яка має суттєву ідентичність з еталонною молекулою нуклеїнової кислоти, може, у деяких випадках, кодувати поліпептид, що має таку ж або по суті аналогічну амінокислотну послідовність, як поліпептид, кодований еталонною молекулою нуклеїнової кислоти.
ІЇО85| Застосовно до поліпептидів, термін "суттєва подібність" або "по суті аналогічна" означає, що дві пептидних послідовності, при оптимальному вирівнюванні, такому як за допомогою програм САР або ВЕ5ТРЇТ з використанням геп-мас за замовчуванням, розділяють щонайменше 90 95 ідентичності послідовності, навіть більш переважно щонайменше 95 95, 98 960 або 99 95 ідентичності послідовності. Переважно, положення залишків, що не є ідентичними, відрізняються консервативними замінами амінокислот. "Консервативна заміна амінокислоти" є заміною, при якій амінокислотний залишок заміняється ще одним амінокислотним залишком, що має бічний ланцюг (К-групу) з аналогічними хімічними властивостями (наприклад, зарядом або гідрофобністю). У цілому, консервативна амінокислотна заміна не буде суттєво змінювати функціональні властивості білка. У випадках, де дві або декілька амінокислотних послідовностей відрізняються одна від одної консервативними замінами, відсоток або ступінь подібності може регулюватися з підвищенням для корекції консервативної природи заміни.
Засоби проведення таких регулювань добре відомі фахівцям в даній галузі. Див., наприклад,
Реагзоп (1994), Меїйпоа5 Мої. Віої. 24:307-331, що включена в даний опис за допомогою посилання. Приклади груп амінокислот, які мають бічні ланцюги з подібними хімічними властивостями, включають 1) аліфатичні бічні ланцюги: гліцин, аланін, валін, лейцин і ізолейцин; 2) аліфатичні-гідроксильні бічні ланцюги: серин і треонін; 3) амідовмісні бічні ланцюги: аспарагін і глутамін; 4) ароматичні бічні ланцюги: фенілаланін, тирозин і триптофан; 5) основні бічні ланцюги: лізин, аргінін і гістидин; б) кислі бічні ланцюги: аспартат і глутамат; і 7) сірковмісні бічні ланцюги: цистеїн і метіонін. Переважними консервативними амінокислотними замінюючими групами є: валін-лейцин-ізолейцин, фенілаланін-тирозин, лізин-аргінін, аланін- валін, глутамат-аспартат і аспарагін-глутамін. Альтернативно, консервативна заміна являє собою будь-яку зміну, що має позитивне значення в матриці лог-подібності РАМ250, розкритій в
Соппеї еї аї. (1992), Зсіепсе, 256:1443 45, включеній тут за допомогою посилання. "Помірно консервативна" заміна являє собою будь-яку зміну, що має ненегативне значення в матриці лог- подібності РАМ250.
ІО86| Подібність послідовностей для поліпептидів звичайно вимірюють, використовуючи програмне забезпечення аналізу послідовностей. Програмне забезпечення аналізу білка суміщає подібні послідовності з використанням вимірювань подібності, що належить до різних замін, делецій і інших модифікацій, які включають консервативні амінокислотні заміни.
Наприклад, програмне забезпечення СО містить програми, такі як САР і ВЕ5ТРІТ, що можуть застосовуватися з параметрами за замовчуванням для визначення гомології послідовностей або ідентичності послідовностей між близькоспорідненими поліпептидами, такими як гомологічні поліпептиди від організмів різних видів або між білком дикого типу і його мутеїном.
Див., наприклад, СО Мегзіоп 6,1. Поліпептидні послідовності також можуть порівнюватися з використанням ЕРА5ТА з параметрами за замовчуванням або рекомендованими параметрами; програма в СО Мегзіоп 6.1. РЕА5ТА (наприклад, ЕАЗТА2 і РГА5ЗТАЗ) надає вирівнювання і відсоток ідентичності послідовностей областей найкращого перекривання між запитуваною і пошуковою послідовностями (Реагзоп (2000), вище). Ще одним переважним алгоритмом при порівнянні послідовності винаходу з базою даних, що містить велике число послідовностей від різних організмів, є комп'ютерна програма ВІА5БТ, особливо ВІАЗТР або ТВІА5ТМ, з використанням параметрів за замовчуванням. Див., наприклад, Ай5сПиї еї аї. (1990), 9. Мої. Віої. 215:403-410; ії (1997), Мисієїс Асід5 Ке5. 25:3389-3402, кожна з яких включена в даний опис за допомогою посилання.
І087| Фраза "терапевтично ефективна кількість" означає кількість, яка надає бажаний ефект, для якого її вводять. Точна кількість буде залежати від мети лікування і буде установлюватися фахівцем в даній галузі з використанням відомих методів (див., наприклад, ГІоуй (1999), Ані,
Зсієпсе апа Тесппоіоду ої Рнаптасецшііса! Сотроипаїпа).
І088| Як використовують у даному описі, термін "суб'єкт" стосується тварини, переважно ссавця, що потребує зниження, запобігання і/або лікування захворювання або розладу, такого як хронічна вірусна інфекція, злоякісне новоутворення або аутоїмунне захворювання.
ІО89| Як використовують у даному описі, "протипухлинний засіб" означає будь-який засіб, застосовний для лікування злоякісного новоутворення, який включає, але не обмежений 60 перерахованим, цитотоксини і засоби, такі як антиметаболіти, алкілувальні засоби,
антрацикліни, антибіотики, антимітотичні засоби, прокарбазин, гідроксисечовину, аспарагіназу, кортикостероїди, мітотан (О,Р'(0ОЮ)), біологічні засоби (наприклад, антитіла й інтерферони) і радіоактивні речовини. Як використовують у даному описі, "цитотоксин або цитотоксичний засіб" також стосується хіміотерапевтичного засобу й означає будь-який засіб, що надає на клітини шкідливий вплив. Приклади включають ТахоїФ (паклітаксел), темозоломід, цитохалазин
В, граміцидин 0, бромід етидію, еметин, цисплатин, мітоміцин, етопозид, теніпозид, вінкристин, вінбластин, колхіцин, доксорубіцин, даунорубіцин, дигідроксіантрациндіон, мітоксантрон, мітраміцин, актиноміцин 0, 1-дегідротестостерон, глюкокортикоїди, прокаїн, тетракаїн, лідокаїн, пропранолол і пуроміцин і їх аналоги або гомологи.
І0909| Як використовують у даному описі, термін "противірусний засіб" стосується будь-якого лікарського засобу або терапії, що застосовується для лікування, запобігання або зменшення вірусної інфекції у суб'єкта-хазяїна. Термін "противірусний засіб" включає, але не обмежений наведеним, зидовудин, ламівудин, абакавір, рибавірин, лопінавір, ефавіренц, кобіцистат, тенофовір, рилпівірин, анальгетики і кортикостероїди. У контексті даного винаходу, вірусні інфекції включають довгострокові або хронічні інфекції що викликаються вірусами, які включають, але не обмежені наведеним, вірус імунодефіциту людини (ВІЛ), вірус гепатиту В (НВМ), вірус гепатиту С (НСМ), вірус папіломи людини (НРУ), вірус лімфоцитарного хоріоменінгіту (ССММУ) і вірус імунодефіциту мавпи (51ІМ). (091) Антитіла й антигензв'язувальні фрагменти даного винаходу специфічно зв'язуються з
РО-1 і модулюють взаємодію РО-1 з РО-І1. Антитіла проти РО-1 можуть зв'язуватися з РО-1 з високою афінністю або з низькою афінністю. У деяких варіантах здійснення, антитіла даного винаходу можуть бути блокуючими антитілами, де антитіла можуть зв'язуватися з РО-1 і блокувати взаємодію РО-1 з РО-11. У деяких варіантах здійснення, блокуючі антитіла винаходу можуть блокувати зв'язування РО-1 з РО-І 1 і/або стимулювати або підсилювати активацію Т- клітин. У деяких варіантах здійснення, блокуючі антитіла можуть застосовуватися для стимуляції або посилення імунної відповіді і/або для лікування суб'єкта, що страждає на злоякісне новоутворення або хронічну вірусну інфекцію. Антитіла при введенні суб'єкту, що потребує цього, можуть знижувати хронічну інфекцію, що викликається вірусом, таким як НІМ,
ІЇСММ або НВУ, у суб'єкта. Вони можуть застосовуватися для інгібування росту пухлинних
Зо клітин у суб'єкта. Вони можуть застосовуватися окремо або як допоміжна терапія з іншими терапевтичними фрагментами або модальностями, відомими в даній галузі, для лікування злоякісного новоутворення або вірусної інфекції.
І092| В інших варіантах здійснення, антитіла даного винаходу можуть являти собою активуючі антитіла, де антитіла можуть зв'язуватися з РО-1 і підсилювати взаємодію РО-1 і РО- 1. У деяких варіантах здійснення, активуючі антитіла можуть підсилювати зв'язування РО-1 з
РО-І1 і/або інгібувати або пригнічувати активацію Т-клітин. Активуючі антитіла даного винаходу можуть бути застосовними для інгібування імунної відповіді у суб'єкта і/або для лікування аутоїмунного захворювання.
ЇО93| У деяких варіантах здійснення, антитіла проти РО-1 можуть являти собою мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули, де вони містять першу специфічність зв'язування з РО-1 і другу специфічність зв'язування з антигеном, вибраним із групи, що складається з ще одного Т-клітинного співінгібітору, антигену аутоімунної тканини, Т-клітинного рецептора, Ес-рецептора, Т-клітинного рецептора, РО-1 1 і іншого епітопа з РО-1. (094) У деяких варіантах здійснення, антитіла винаходу одержують з мишей, імунізованих первинним імуногеном, таким як непроцесований РО-1 |див. СепВапК, обліковий номер
МР 005009,2 (ЗЕО ІЮ МО: 327)), або рекомбінантною формою РО-1, або модифікованими фрагментами РО-1 людини (5ЕО ІО МО: 321, 323 або 324), або модифікованими фрагментами
РО-1 мавпи (ЗЕО ІЮО МО: 322), з наступною імунізацією вторинним імуногеном або імуногенно активним фрагментом РО-1.
І095| Імуноген може являти собою біологічно активний і/або імуногенний фрагмент РО-1 або
ДНК, кодуючу його активний фрагмент. Фрагмент може бути одержаний з М-кінцевого або С- кінцевого домену РО-1. У деяких варіантах здійснення винаходу, імуноген є фрагментом РО-1, що знаходиться в інтервалі амінокислотних залишків 25-170 з ЗЕО ІО МО: 327 зі зміною С935.
І096| Пептиди можуть бути модифіковані для включення або приєднання заміни деяких залишків для мічення або для цілей кон'югації з молекулами-носіями, такими як КІН.
Наприклад, цистеїн може бути приєднаний або по М-термінальному, або по С-термінальному кінцю пептиду або лінкерна послідовність може бути додана для одержання пептиду для кон'югації, наприклад, з КІН для імунізації.
І097| Непроцесована амінокислотна послідовність непроцесованого РО-1 людини показана (510) як БЕО ІЮО МО: 327.
098) У деяких варіантах здійснення, антитіла, які специфічно зв'язуються з РО-1, можуть бути одержані з використанням фрагментів зазначених вище областей або пептидів, що знаходяться поза позначеними областями на приблизно 5-20 амінокислотних залишків від кожного з, або обох, М- або С- термінальних кінців областей, описаних тут. У деяких варіантах здійснення, будь-яка комбінація зазначених вище областей або їх фрагментів може застосовуватися при одержанні РО-1-специфічних антитіл. У деяких варіантах здійснення, будь- які одна або декілька з зазначених вище областей РО-1 або їх фрагментів можуть застосовуватися для одержання моноспецифічних, біспецифічних або мультиспецифічних антитіл.
І0О99| Деякі антитіла проти РО-1 даного винаходу здатні зв'язуватися з РО-1 і нейтралізувати його активність, як визначають за допомогою тестів іп мійго або іп мімо. Здатність антитіл винаходу зв'язуватися з РО-1 і нейтралізувати його активність може бути виміряна з використанням будь-яких стандартних методів, відомих фахівцям в даній галузі, що включають тести на зв'язування або тести на активність, як описано тут.
ІО100| Необмежувальні ілюстративні тести іп міго для вимірювання активності зв'язування ілюструються в Прикладах у даному описі. У Прикладі З, афінності зв'язування і кінетичні константи людських антитіл проти РО-1 для РО-1 людини і РО-1 мавпи визначали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу і вимірювання проводили на приладі Віасоге 4000 або
Т200. У Прикладах 4 і 5, тести на блокування застосовували для визначення здатності антитіл проти РО-1 блокувати РО-ІЇ1-зв'язувальну здатність РО-1 іп міго. У Прикладі б, тести на блокування застосовували для визначення перехресної конкуренції між антитілами проти РО-1.
Приклад 7 описує зв'язування антитіл із клітинами, надекспресуючими РО-1. У Прикладі 8, люциферазний тест застосовували для визначення здатності антитіл проти РО-1 антагонізувати сигнальний шлях РО-1/РО-11 у Т-клітинах.
ІО101) У деяких варіантах здійснення, антитіла даного винаходу здатні підсилювати або стимулювати активацію Т-клітин іп міїго і у суб'єкта зі злоякісним новоутворенням або у суб'єкта, інфікованого вірусом, таким як І! СМУ. У деяких варіантах здійснення, антитіла даного винаходу застосовують у комбінації з другим терапевтичним засобом, таким як антитіло до другого Т- клітинного співінгібітору, для посилення імунної відповіді і інгібування росту пухлини у суб'єкта. (0102) Антитіла, специфічні до РО-1, можуть не містити додаткових міток або фрагментів або вони можуть містити М-кінцеві або С-кінцеві мітки або фрагменти. В одному варіанті здійснення, міткою або фрагментом є біотин. У тесті на зв'язування, положення мітки (якщо вона є) може визначати орієнтацію пептиду відносно поверхні, над якою пептид зв'язаний.
Наприклад, якщо поверхня покрита авідином, пептид, що містить М-кінцевий біотин, буде орієнтований таким чином, що С-кінцева частина пептиду буде віддалена від поверхні. В одному варіанті здійснення, мітка може являти собою радіонуклід, флуоресцентний барвник або
МРТ-виявлювану мітку. У деяких варіантах здійснення, такі мічені антитіла можуть застосовуватися в діагностичних аналітичних тестах, що включають тести з візуалізацією.
Антигензв'язувальні фрагменти антитіл 0103) Якщо конкретно не зазначено інакше, термін "антитіло", як використовують у даному описі, варто розуміти як охоплюючий молекули антитіла, що містять два важких ланцюги імуноглобуліну і два легких ланцюги імуноглобуліну (тобто "молекули повного антитіла"), а також їх антигензв'язувальні фрагменти. Терміни "антигензв'язувальна частина" антитіла, "антигензв'язувальний Фрагмент" антитіла і т. п., як використовують у даному описі, включають будь-який природний, одержуваний ферментативно, синтетичний або генетично сконструйований поліпептид або глікопротеїн, що специфічно зв'язується з антигеном з утворенням комплексу. Термін "антигензв'язувальний фрагмент" антитіла або "фрагмент антитіла", як використовують у даному описі, стосується одного або декількох фрагментів антитіла, які зберігають здатність специфічно зв'язуватися з РО-1. Фрагмент антитіла може включати Рар-фрагмент, Е(ар')2-фрагмент, Ем-фрагмент, ЗАБ-фрагмент, фрагмент, що містить
СОК, або ізольовану СОК. У деяких варіантах здійснення, термін "антигензв'язувальний фрагмент" стосується поліпептидного фрагмента мультиспецифічної антигензв'язувальної молекули. У таких варіантах здійснення, термін "антигензв'язувальний фрагмент" включає, наприклад, позаклітинний домен РО-І 1, що специфічно зв'язується з РО-1. Антигензв'язувальні фрагменти антитіл можуть бути одержані, наприклад, з молекул повного антитіла, з використанням будь-яких придатних стандартних методів, таких як протеолітичне розщеплення або методи рекомбінантної генетичної інженерії, що включають маніпуляції й експресію ДНК, кодуючої варіабельні і (необов'язково) константні домени антитіла. Така ДНК є відомою і/або легкодоступною з, наприклад, комерційних джерел, бібліотек ДНК (що включають, наприклад, 60 бібліотеки фаг-антитіло) або може бути синтезована. ДНК може бути секвенована й оброблена хімічно або за допомогою використання методів молекулярної біології, наприклад, для розташування одного або декількох варіабельних і/або константних доменів у придатній конфігурації або для введення кодонів, створення цистеїнових залишків, модифікації, додавання або делеції амінокислот і т. д.
І0104| Необмежувальні приклади антигензв'язувальних фрагментів включають: (ї) Раб- фрагменти; (ії) Е(ар')2-фрагменти; (ії) Ба-фрагменти; (ім) Ем-фрагменти; (м) одноланцюжкові Ем (5сЕм) молекули; (мі) даАБб-фрагменти; і (мії) мінімальні одиниці розпізнавання, що складаються з амінокислотних залишків, які імітують гіперваріабельну область антитіла (наприклад, ізольовану область, що визначає комплементарність (СОК), таку як СОКЗ-пептид), або обмежений пептид
ЕНЗ-СОВЗ-ЕР4. Інші сконструйовані молекули, такі як доменспецифічні антитіла, однодоменні антитіла, антитіла з виключеним доменом, химерні антитіла, СОК-щеплені антитіла, діатіла, триатіла, тетратіла, міні-тіла, нанотіла (наприклад, моновалентні нанотіла, бівалентні нанотіла і т. д.), малі модулярні імунофармацевтичні засоби (ЗМІР) і варіабельні ІОМАК-домени акули, також охоплюються виразом "антигензв'язувальний фрагмент", як його використовують у даному описі. 0105) Антигензв'язувальний фрагмент антитіла буде звичайно містити щонайменше один варіабельний домен. Варіабельний домен може мати будь-який розмір або амінокислотний склад і буде звичайно включати щонайменше одну СОК, що є суміжною або знаходиться в рамці з однією або декількома каркасними послідовностями. В антигензв'язувальних фрагментах, що мають Мн-домен, асоційований з Мі-доменом, Мн- і Мі-домени можуть знаходитися один відносно одного в будь-якому придатному розташуванні. Наприклад, варіабельна область може бути димерною і містити димери Мн-Мн, Мн-Мі або Мі-Ммі.
Альтернативно, антигензв'язувальний фрагмент антитіла може містити мономерний Мн- або М- домен.
ІЇО106| У деяких варіантах здійснення, антигензв'язувальний фрагмент антитіла може містити щонайменше один варіабельний домен, ковалентно зв'язаний щонайменше з одним константним доменом. Необмежувальні ілюстративні конфігурації варіабельних і константних доменів, які можуть бути виявлені в антигензв'язувальному фрагменті антитіла даного винаходу, включають: (ї) Мн-Сні; (ії) Мн-Сне; (іїї) Мн-СнЗ; (ім) Мн-Сн1-Снг; (м) Мн-Сн1і-Сн2г-СнЗ; (мі)
Мн-Сн2-СнЗ; (мії) Мн-Сі; (мії) Мі-Сні; (їх) Мі-Сне; (х) Мі-Сн3з; (хі) Мі-Сні1-Снае; (хії) Мі-Сн1-Сн2-Снз; (хії) Мі-Сн2-СнЗ; і (хім) Мі-Сі. У будь-якій конфігурації варіабельних і константних доменів, що включає будь-яку з ілюстративних конфігурацій, наведених вище, варіабельні і константні домени або можуть бути безпосередньо зв'язані один з одним, або можуть бути зв'язані за допомогою повної або часткової шарнірної або лінкерної області. Шарнірна область може складатися з щонайменше 2 (наприклад, 5, 10, 15, 20, 40, 60 або більше) амінокислот, що приводить до гнучкого або напівгнучкого зв'язування між сусідніми варіабельними і/або константними доменами в єдиній поліпептидній молекулі. Крім того, антигензв'язувальний фрагмент антитіла даного винаходу може містити гомодимер або гетеродимер (або інший мультимер) з будь-якими конфігураціями варіабельного і константного домену, наведеними вище, у нековалентній асоціації один з одним і/або з одним або декількома мономерними Ун- або Мі-доменами (наприклад, за допомогою дисульфідного зв'язку (зв'язків)).
І0107| Що стосується молекул повного антитіла, антигензв'язувальні фрагменти можуть бути моноспецифічними або мультиспецифічними (наприклад, біспецифічними). Мультиспецифічний антигензв'язувальний фрагмент антитіла буде звичайно містити щонайменше два різних варіабельних домени, де кожен варіабельний домен здатний до специфічного зв'язування з окремим антигеном або з різними епітопами на одному і тому ж антигені. Будь-який формат мультиспецифічного антитіла, що включає ілюстративні формати біспецифічного антитіла, розкриті тут, може бути адаптований для застосування в контексті антигензв'язувального фрагмента антитіла даного винаходу, з використанням рутинних методів, доступних у даній галузі.
Одержання людських антитіл
ІО108) Способи генерації людських антитіл у трансгенних мишах є відомими в даній галузі.
Будь-які такі відомі способи можуть застосовуватися в контексті даного винаходу для одержання людських антитіл, які специфічно зв'язуються з РО-1.
І0109| Імуноген, що містить будь-який з наступних, може застосовуватися для генерації антитіл до РО-1. У деяких варіантах здійснення, антитіла винаходу одержують з мишей, імунізованих з використанням непроцесованого нативного РО-1 (див. сепВапкК, обліковий номер
МР 005009.2) (5ЕБО ІЮ МО: 327) або з використанням рекомбінантного пептиду РО-1.
Альтернативно, РО-1 або його фрагмент може бути одержаний з використанням стандартних 60 біохімічних методів і модифікований (ЗЕО ІЮ МО: 321-324) і застосовуватися як імуноген.
ЇО110| У деяких варіантах здійснення, імуноген може являти собою пептид 3 М- термінального або С-термінального кінця РО-1. В одному варіанті здійснення, імуноген являє собою позаклітинний домен або ІдМ-подібний домен РО-1. У деяких варіантах здійснення винаходу, імуноген являє собою фрагмент РО-1, що знаходиться в приблизному інтервалі амінокислотних залишків 25-170 з БЕО ІЮО МО: 327 зі зміною С935.
ІО111) У деяких варіантах здійснення, імуноген може являти собою рекомбінантний пептид
РО-1, експресований у Е. соїї або в будь-яких інших еукаріотних клітинах або клітинах ссавців, таких як клітини яєчника китайського хом'яка (СНО).
ІО112) У деяких варіантах здійснення, антитіла, що специфічно зв'язуються з РО-1, можуть бути одержані з використанням фрагментів відмічених вище областей або пептидів, що знаходяться за межами позначених областей на відстані приблизно 5-20 амінокислотних залишків від кожного з, або обох, М- або С-термінальних кінців областей, описаних тут. У деяких варіантах здійснення, будь-яка комбінація з відмічених вище областей або їх фрагментів може застосовуватися при одержанні РО-1-специфічних антитіл.
ІЇО113| Застосовуючи технологію МЕГОСІММОМЕФ (див., наприклад, И5 6,596,541,
Кедепегоп РПагтасецшіісаіє, МЕГОСІММИОМЕФ) або будь-який інший відомий метод генерації моноклональних антитіл, спочатку виділяють химерні антитіла до РО-1 з високою афінністю, які мають людську варіабельну область і мишачу константну область. Технологія МЕЇГОСІММОМЕФ включає генерацію трансгенної миші, яка має геном, що містить варіабельні області людських важкого і легкого ланцюгів, функціонально зв'язані з ендогенними локусами мишачої константної області таким чином, що миша продукує антитіло, яке містить людську варіабельну область і мишачу константну область, у відповідь на антигенну стимуляцію. ДНК, кодуючу варіабельні області важкого і легкого ланцюгів антитіла, виділяють і функціонально зв'язують з
ДНК, кодуючою константні області людських важкого і легкого ланцюгів. ДНК потім експресують у клітині, здатній до експресії повністю людського антитіла.
Біоеквіваленти (0114) Антитіла проти РО-1 і фрагменти антитіл даного винаходу охоплюють білки, що мають амінокислотні послідовності, які змінюються в порівнянні з послідовностями описаних антитіл, але які зберігають здатність зв'язуватися з РО-1. Такі варіанти антитіл і фрагменти антитіл містять одне або декілька доповнень, делецій або замін амінокислот при порівнянні з батьківською послідовністю, але виявляють біологічну активність, яка є по суті еквівалентною активності описаних антитіл. Аналогічно, послідовності ДНК, кодуючі антитіла даного винаходу, охоплюють послідовності, які містять одне або декілька доповнень, делецій або замін нуклеотидів при порівнянні з розкритою послідовністю, але які кодують антитіло або фрагмент антитіла, що по суті є біоеквівалентними антитілу або фрагменту антитіла винаходу.
ІО115) Два антигензв'язувальні білки або антитіла вважаються біоеквівалентними, якщо, наприклад, вони є фармацевтичними еквівалентами або фармацевтичними альтернативами, швидкість і ступінь усмоктування яких не показують значної відмінності при введенні при однаковій молярній дозі в подібних експериментальних умовах, або однократної дози, або множинних доз. Деякі антитіла будуть вважатися еквівалентами або фармацевтичними альтернативами, якщо вони є еквівалентними по ступеню їх усмоктування, але не по їх швидкості усмоктування, і ще можуть вважатися біоеквівалентними, оскільки такі відмінності по швидкості усмоктування є навмисними і відображуються при міченні, не є суттєвими для досягнення ефективних концентрацій лікарського засобу в організмі при, наприклад, хронічному застосуванні і вважаються незначними в медичному відношенні для конкретного досліджуваного лікарського продукту.
ІО116) В одному варіанті здійснення, два антигензв'язувальних білки є біоеквівалентними, якщо не існує клінічно значимих відмінностей по їх безпеці, чистоті або активності.
ІО117)| В одному варіанті здійснення, два антигензв'язувальних білки є біоеквівалентними, якщо пацієнт може переключатися один або більше разів між еталонним продуктом і біологічним продуктом без очікуваного збільшення ризику несприятливих ефектів, що включають клінічно значиму зміну імуногенності або знижену ефективність, у порівнянні з триваючою терапією без такого переключення.
ІО118) В одному варіанті здійснення, два антигензв'язувальних білки є біоеквівалентними, якщо вони обидва діють за допомогою загального механізму або механізмів дії для стану або станів застосування, тією мірою, у якій такі механізми є відомими.
ІО119| Біоеквівалентність може бути продемонстрована методами іп мімо і/або іп мійго.
Вимірювання біоеквівалентності включають, наприклад, (а) тест іп мімо у людей або інших ссавців, у яких концентрацію антитіла або його метаболітів вимірюють у крові, плазмі, сироватці 60 або іншій біологічній рідині як функцію від часу; (Б) тест іп міго, що корелювався і був обгрунтовано прогнозуючим дані по біодоступності у людини іп мімо; (с) тест іп мімо у людей або інших ссавців, у яких відповідний гострий фармакологічний ефект антитіла (або його мішені) вимірюють як функцію від часу; і (4) добре контрольоване клінічне випробування, що встановлює безпеку, ефективність дії або біодоступність або біоеквівалентність антитіла. 01201 Біоеквівалентні варіанти антитіл винаходу можуть бути побудовані за допомогою, наприклад, проведення різних замін залишків або послідовностей або делеції термінальних або внутрішніх залишків або послідовностей, непотрібних для біологічної активності. Наприклад, залишки цистеїну, які не є суттєвими для біологічної активності, можуть бути піддані делеції або замінені на інші амінокислоти, щоб запобігти утворенню непотрібних або некоректних внутрішньомолекулярних дисульфідних містків при ренатурації. В інших контекстах, біоеквівалентні антитіла можуть включати варіанти антитіл, які містять амінокислотні зміни, що модифікують характеристики глікозилування антитіл, наприклад мутації, що виключають або видаляють глікозилування.
Антитіла проти РО-1, які містять Ес-варіанти 0121) Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, надані антитіла проти
РО-1, які містять Ес-домен, що містить одну або більше мутацій, які підсилюють або ослабляють зв'язування антитіла з рецептором ЕсКп, наприклад при кислому рН у порівнянні з нейтральним рН. Наприклад, даний винахід включає антитіла проти РО-1, які містять мутацію в Снг- або Сн3з- області Рс-домену, де мутація (мутації) збільшує афінність Ес-домену до ЕБсКп у кислому оточенні (наприклад, у ендосомі, де рН знаходиться в інтервалі від приблизно 5,5 до приблизно 6,0). Такі мутації можуть приводити до збільшення періоду напівжиття антитіла в сироватці, при введенні тварині. Необмежувальні приклади таких модифікацій Ес включають, наприклад, модифікацію в положенні 250 (наприклад, Е або 0); 250 і 428 (наприклад, Ї або Р); 252 (наприклад, І /У/ЕЛМ або Т), 254 (наприклад, 5 або Т) і 256 (наприклад, Б/К/О/Е/Ю або Т) або модифікацію в положенні 428 і/або 433 (наприклад, Н/Л//К/5/Р/О або К) і/або 434 (наприклад, А,
М, Н, Е або м ІМ4А34А, М4АЗ4УУ, М434Н, М434Е або М434У|); або модифікацію в положенні 250 іабо 428; або модифікацію в положенні 307 або 308 (наприклад, ЗО8Е, МЗО8Е) і 434. В одному варіанті здійснення, модифікація включає модифікацію 4281Ї (наприклад, М428І) ії 4345 (наприклад, М4345); 4281, 2591 (наприклад, М259І) і модифікацію ЗО8Е (наприклад, МЗОВ8БЕ);
Зо модифікацію 433К (наприклад, Н4АЗЗК) і 434 (наприклад, 434У); модифікацію 252, 254 і 256 (наприклад, 252У, 2541 і 256Е); модифікацію 2500) і 428ІЇ (наприклад, 2500 і М4281) і модифікацію 307 і/або 308 (наприклад, З0О8Е або 308Р). У ще одному іншому варіанті здійснення, модифікація включає модифікацію 265А (наприклад, 0265А) і/або 297А (наприклад,
М297А).
І0122| Наприклад, даний винахід включає антитіла проти РО-1, які містять Ес-домен, що містить одну або декілька пар або груп мутацій, вибраних із групи, що складається з: 2500 і 2481. (наприклад, 12500 і М2481); 252У, 2541 і 256Е (наприклад, М252У, 52541 і Т256Е); 4281 і 4345 (наприклад, М4281 і М4345); 2571 ї 3111 (наприклад, Р2571І ії О3111); 2571 ї 434Н (наприклад,
Р257І ї М434Н); 376М і 434Н (наприклад, Ю376М і М434Н); 307А, З80А і 434А (наприклад, Т307А,
ЕЗ8ОА і М434А); і 433К і 434Е (наприклад, Н4АЗЗК і М434РЕ). В одному варіанті здійснення, даний винахід включає антитіла проти РО-1, які містять Ес-домен, що містить мутацію 5108Р. у шарнірній області Ідса4 для ініціації стабілізації димеру. Усі можливі комбінації наведених вище мутацій Ес-домену і інші мутації у варіабельних доменах антитіла, розкритого тут, маються на увазі включеними в обсяг даного винаходу.
ІО123| Даний винахід також включає антитіла проти РО-1, які містять химерну константну (Сн) область важкого ланцюга, де химерна Сн-область містить сегменти, що є похідними Сн- областей з більше ніж одного ізотипу імуноглобуліну. Наприклад, антитіла винаходу можуть містити химерну Сн-область, що містить частину Сн2-домену або весь Сн2-домен, похідний від молекули людського ІдСс1, людського ІД(22 або людського ІдДС24, у сполученні з частиною Снз-
БО домену або всім СнЗ-доменом, похідним від молекули людського ЇДС1, людського Їдс22 або людського Іда4. Відповідно до деяких варіантів здійснення, антитіла винаходу містять химерну
Сн-область, що має химерну шарнірну область. Наприклад, химерний шарнір може містити амінокислотну послідовність "верхнього шарніра" (амінокислотні залишки з положень 216-227 відповідно до нумерації ЕО), похідну від шарнірної області людського ІДС, людського Ідс2 або людського Ідс24, у сполученні з послідовністю "нижнього шарніра" (амінокислотні залишки з положень 228-236 відповідно до нумерації ЕУ), що є похідною від шарнірної області людського
Іда1, людського ІЇдД22 або людського Ідс4. Відповідно до деяких варіантів здійснення, химерна шарнірна область містить амінокислотні залишки, похідні від верхнього шарніра людського Ідс1 або людського ІдСс4, і амінокислотні залишки, похідні від нижнього шарніра людського Ідсаг. 60 Антитіло, що містить химерну Сн-область, описану в даному документі, може, у деяких варіантах здійснення, виявляти ефекторні функції модифікованого Ес без надання негативного впливу на терапевтичні або фармакокінетичні властивості антитіла (див., наприклад, О55М. 14/170,166, подану 31 січня 2014 р., розкриття якої повністю включене в даний опис за допомогою посилання).
Біологічні характеристики антитіл (0124) У цілому, антитіла даного винаходу функціонують за допомогою зв'язування з РО-1.
Даний винахід включає антитіла проти РО-1 і їх антигензв'язувальні фрагменти, що зв'язують розчинні мономерні або димерні молекули РО-1 з високою афінністю. Наприклад, даний винахід включає антитіла й антигензв'язувальні фрагменти антитіл, що зв'язують мономерний РО-1 (наприклад, при 25 "С або при 37 "С) з Ко, меншою ніж приблизно 50 нМ, виміряною за допомогою поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, з використанням формату тесту, визначеного в Прикладі З даного опису. У деяких варіантах здійснення, антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти зв'язують мономерний РО-1 з Ко, меншою ніж приблизно 40 нМ, меншою ніж приблизно 30 нМ, меншою ніж приблизно 20 нМ, меншою ніж приблизно 10 нМ, меншою ніж приблизно 5 нМ, меншою ніж приблизно 2 нМ або меншою ніж приблизно 1 нМ, виміряною за допомогою поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, з використанням формату тесту, визначеного в Прикладі З даного опису, або по суті аналогічного тесту.
ІО0125| Даний винахід також включає антитіла і їх антигензв'язувальні фрагменти, що зв'язують димерний РО-1 (наприклад, при 25 "С або при 37 "С) з Ко, меншою ніж приблизно 400
ПМ, виміряною за допомогою поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, з використанням формату тесту, визначеного в Прикладі З даного опису. У деяких варіантах здійснення, антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти зв'язують димерний РО-1 з Ко, меншою ніж приблизно 300 пМ, меншою ніж приблизно 250 пМ, меншою ніж приблизно 200 пМ, меншою ніж приблизно 100 пМ або меншою ніж приблизно 50 пМ, виміряною за допомогою поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, з використанням формату тесту, визначеного в Прикладі З даного опису, або по суті аналогічного тесту.
ІО126| Даний винахід також включає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які зв'язують РО-1 мавпи (Масаса їазсісціагіє) (наприклад, при 25 "С або при 37 "С) з Ко, меншою ніж приблизно 35 нМ, виміряною за допомогою поверхневого плазмонного резонансу,
Зо наприклад, з використанням формату тесту, визначеного в Прикладі З даного опису. У деяких варіантах здійснення, антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти зв'язують РО-1 мавпи з Ко, меншою ніж приблизно 30 нМ, меншою ніж приблизно 20 нМ, меншою ніж приблизно 15 нМ, меншою ніж приблизно 10 нМ, або меншою ніж приблизно 5 нМ, виміряною за допомогою поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, з використанням формату тесту, визначеного в Прикладі З даного опису, або по суті аналогічного тесту.
ІО0127| Даний винахід також включає антитіла і їх антигензв'язувальні фрагменти, що зв'язують РО-1 з періодом половинної дисоціації (12), більшим ніж приблизно 1,1 хвилина, виміряним за допомогою поверхневого плазмонного резонансу при 25 "С або 37 "С, наприклад, з використанням формату тесту, визначеного в Прикладі З даного опису, або по суті аналогічного тесту. У деяких варіантах здійснення, антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти даного винаходу зв'язують РО-1 з 7, більшим ніж приблизно 5 хвилин, більшим ніж приблизно 10 хвилин, більшим ніж приблизно 30 хвилин, більшим ніж приблизно 50 хвилин, більшим ніж приблизно 60 хвилин, більшим ніж приблизно 70 хвилин, більшим ніж приблизно 80 хвилин, більшим ніж приблизно 90 хвилин, більшим ніж приблизно 100 хвилин, більшим ніж приблизно 200 хвилин, більшим ніж приблизно 300 хвилин, більшим ніж приблизно 400 хвилин, більшим ніж приблизно 500 хвилин, більшим ніж приблизно 600 хвилин, більшим ніж приблизно 700 хвилин, більшим ніж приблизно 800 хвилин, більшим ніж приблизно 900 хвилин, більшим ніж приблизно 1000 хвилин або більшим ніж приблизно 1200 хвилин, виміряним за допомогою поверхневого плазмонного резонансу при 25 "С або 37 "С, наприклад, з використанням формату тесту, визначеного в Прикладі З даного опису (наприклад, формат тАБр-захоплення або захоплення антигену), або по суті аналогічного тесту.
ІО128| Даний винахід також включає антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які блокують зв'язування РО-1 з РО-Ї1 з ІСво, меншою ніж приблизно 3 нМ, визначеною з використанням тесту на основі імуноаналізу ЕГІ5А, наприклад, як показано в Прикладі 4, або по суті аналогічного тесту. Даний винахід також включає антитіла і їх антигензв'язувальні фрагменти, які зв'язуються з РО-1 і підсилюють зв'язування РО-1 з РО-І1 1.
І0129| У деяких варіантах здійснення, антитіла даного винаходу можуть зв'язуватися з позаклітинним доменом РО-1 або з фрагментом домену. У деяких варіантах здійснення, антитіла даного винаходу можуть зв'язуватися з більше ніж одним доменом (крос-реактивні 60 антитіла). У деяких варіантах здійснення, антитіла даного винаходу можуть зв'язуватися з епітопом, розташованим у позаклітинному домені, що містить амінокислотні залишки 21-171 РО- 1 (5ЕО ІО МО: 327). В одному варіанті здійснення, антитіла можуть зв'язуватися з епітопом, який містить одну або декілька амінокислот, вибраних із групи, що складається з амінокислотних залишків 1-146 з БЕО ІЮ МО: 321-324.
ІО130)| У деяких варіантах здійснення, антитіла даного винаходу можуть функціонувати за допомогою блокування або інгібування РО-Ї 1-зв'язувальної активності, асоційованої з РО-1, за допомогою зв'язування з будь-якою іншою областю або фрагментом непроцесованого білка, амінокислотна послідовність якого показана в ЗЕО ІЮО МО: 327. У деяких варіантах здійснення, антитіла можуть ослабляти або модулювати взаємодію між РО-1 і РО-І 1.
ІО131| У деяких варіантах здійснення, антитіла даного винаходу можуть являти собою біспецифічні антитіла. Біспецифічні антитіла винаходу можуть зв'язувати один епітоп в одному домені і також можуть зв'язувати другий епітоп в іншому домені РО-1. У деяких варіантах здійснення, біспецифічні антитіла винаходу можуть зв'язувати два різних епітопи в одному і тому ж домені. В одному варіанті здійснення, мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула включає першу специфічність зв'язування, де перша специфічність зв'язування включає позаклітинний домен або його фрагмент РО-ІЇ 1; і другу специфічність зв'язування з ще одним епітопом з РО-1.
І0132| В одному варіанті здійснення, винахід надає ізольоване повністю людське моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, що зв'язується з РО-1, де антитіло або його фрагмент виявляє одну або декілька з наступних характеристик: (ї) містить
НСМКЕ, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 218, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 306 і 314, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 9565, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; (ії) містить ГСМЕК, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ
МО: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186 ії 202, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; (ії) містить домен НСОКЗ, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІО МО: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136,
Зо 152, 168, 184, 200, 216, 224, 232, 240, 248, 256, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312 і 320, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 до або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; і домен ЇСОКЗ, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5БЕО ІЮ МО: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192 їі 208, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; (ім) містить домен НСОКТ, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з
ЗЕО І МО: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 220, 228, 236, 244, 252, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308 і 316, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; домен НСОК2, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 222, 230, 238, 246, 254, 262, 270, 278, 286, 294, 302, 310 і 318, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 956 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; домен СОМ, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188 і 204, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 956, щонайменше 95 95, щонайменше 98 90 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; і домен ЇСОК2, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5БЕО ІЮ МО: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190 ї 206, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; (м) являє собою мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, яка містить першу специфічність зв'язування з РО-1 і другу специфічність зв'язування з антигеном, вибраним із групи, що складається з РО-1, пухлиноспецифічного антигену, специфічного антигену аутоімунної тканини, антигену клітини, інфікованої вірусом, іншого Т-клітинного співінгібітору, Т-клітинного рецептора і Ес-рецептора; (мі) зв'язується з РО-1 людини з Ко, що дорівнює приблизно 28 пМ - 1,5 мкМ; (мії) зв'язується з РО-1 мавпи з Ко, що дорівнює приблизно З нМ - 7,5 мкМ; (мії) блокує або підсилює зв'язування РО-1 з РО-І11 з ІСво «приблизно 3,3 нМ; (їх) блокує РО-1-індуковану Т- клітинну понижувальну регуляцію і/або рятує сигнальний шлях Т-клітин у тесті з Т- клітинами/"АРС люциферазним репортером; (х) стимулює проліферацію й активність Т-клітин у бо тесті зі змішаною реакцією лімфоцитів (МІК); (хі) індукує вироблення ІЇ/-2 і/або ІРМУу в аналітичному тесті МІК; і (хії) пригнічує ріст пухлини і збільшує виживаність у суб'єктів зі злоякісним новоутворенням.
ІО133| В одному варіанті здійснення, винахід надає ізольоване повністю людське моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, що блокує зв'язування РО-1 з РО-І11, де антитіло або його фрагмент виявляє одну або декілька з наступних характеристик: () містить НСУЕК, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО
ІО МО: 130, 162, 234 і 314, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 9565, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; (ії) містить ГСМЕК, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ
МО: 138, 170, 186 і 202, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; (її) містить домен НСОКЗ, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з
ЗЕО ІЮО МО: 136, 168, 240 і 320, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 до, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; і домен ЇСОКЗ, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ
МО: 144, 176, 192 їі 208, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 956 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; (їм) містить домен НСОКТ, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з
ЗЕО ІО МО: 132, 164, 236 і 316, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 до, щонайменше 95 95, щонайменше 98 956 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; домен НСОК2, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ
МО: 134, 166, 238 ї 318, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; домен СОМ, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ
МО: 140, 172, 188 ї 204, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; і домен ЇСОК2, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ
МО: 142, 174, 190 ї 206, або по суті аналогічну їй послідовність, що має щонайменше 90 95, щонайменше 95 9565, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності; (м)
Зо являє собою мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу, яка включає першу специфічність зв'язування з РО-1 і другу специфічність зв'язування з антигеном, вибраним із групи, що складається з іншого епітопа РО-1, пухлиноспецифічного антигену, специфічного антигену аутоїмунної тканини, антигену клітини, інфікованої вірусом, іншого Т-клітинного співінгібітору, Т-клітинного рецептора і Ес-рецептора; (мі) зв'язується з РО-1 людини з Ко «1079
М; (мії) зв'язується з РО-1 мавпи з Ко «109 М; (мії) блокує зв'язування РО-1 з РО-І 1 з ІСво «1070
М; (їх) блокує РО-1-індуковану Т-клітинну понижувальну регуляції і/або рятує сигнальний шлях
Т-клітин у тесті Т-клітини/"АРС люциферазний репортер; (х) стимулює проліферацію й активність
Т-клітин у тесті зі змішаною реакцією лімфоцитів (МІ К); (хі) індукує вироблення ІІ -2 і/або ІЄМУ в аналітичному тесті МІК; і (хії) пригнічує ріст пухлини і збільшує виживаність у суб'єктів зі злоякісним новоутворенням.
ІЇО134| Антитіла даного винаходу можуть мати одну або декілька з зазначених вище біологічних характеристик або будь-які їх комбінації. Інші біологічні характеристики антитіл даного винаходу будуть очевидними для рядового фахівця в даній галузі з огляду даного розкриття, що включає наведені в ньому робочі Приклади.
Видова селективність і видова крос-реактивність (0135) Відповідно до деяких варіантів здійснення винаходу, антитіла проти РО-1 зв'язуються з РО-1 людини, але не зв'язуються з РО-1 від іншого виду. Альтернативно, антитіла проти РО-1 винаходу, у деяких варіантах здійснення, зв'язуються з РО-1 людини і з РО-1 від одного або декількох видів, що не є людиною. Наприклад, антитіла проти РО-1 винаходу можуть зв'язуватися з РО-1 людини і можуть зв'язуватися або не зв'язуватися, у деяких випадках, з РО- 1 від одного або декількох з миші, щура, морської свинки, хом'яка, піщанки, свині, кішки, собаки, кролика, кози, вівці, корови, коня, верблюда, макаки, мавпи, резусу або шимпанзе. У деяких варіантах здійснення, антитіла проти РО-1 винаходу можуть зв'язуватися з РО-1 людини і РО-1 мавпи з однаковими афінностями або з різними афінностями, але не зв'язуватися з щурячим і мишачим РО-1.
Картування епітопів і споріднені технології
ІО136) Даний винахід включає антитіла проти РО-1, які взаємодіють з однією або декількома амінокислотами, виявленими усередині одного або декількох доменів молекули РО-1, що включають, наприклад, позаклітинний (Ід9М-подібний) домен, трансмембранний домен і бо внутрішньоклітинний домен, який містить інгібуючий мотив імунорецептора (ІТІМ) і перемикаючий на основі тирозину мотив імунорецептора (ІТ5М). Епітоп, з яким антитіла зв'язуються, може складатися з одиничної граничної послідовності з З або більше (наприклад, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 або більше) амінокислот, розташованих усередині будь-якого з зазначених вище доменів молекули РО-1 (наприклад, лінійного епітопа в домені). Альтернативно, епітоп може складатися з множини неграничних амінокислот (або амінокислотних послідовностей), розташованих усередині кожного або обох із зазначених вище доменів молекули РО-1 (наприклад, конформаційного епітопа).
І0137| Різні методи, відомі рядовому фахівцю в даній галузі, можуть застосовуватися для визначення того, "чи взаємодіє антитіло з однією або декількома амінокислотами" усередині поліпептиду або білка. Ілюстративні методи включають, наприклад, рутинні тести перехресного блокування, такі, як описані в Апіїрбодіе5, Нагіом/ і Гапе (Соїд Зргіпд Нагрог Рге55, Соїай 5ргіпд
Нагрог, МУ). Інші методи включають аналіз мутацій при скануванні аланіну, блотинг-аналіз пептидів (КеїпеКе (2004), Меїйпоа5 Мої. ВіоІ. 248:443-63), кристалографічні дослідження аналізу розщеплення пептидів і аналіз методом ЯМР. На доповнення, можуть використовуватися методи, такі як вирізання епітопів, екстракція епітопів і хімічна модифікація антигенів (Тотег (2000), Ргої. 5сі. 9:487-496). Ще один метод, який може застосовуватися для ідентифікації амінокислот усередині поліпептиду, з яким антитіло взаємодіє, є обмін водень/дейтерій, виявлюваний мас-спектрометрією. Загалом, метод обміну водень/дейтерій включає мічення дейтерієм білка, що представляє інтерес, з наступним зв'язуванням антитіла з міченим дейтерієм білком. Далі, комплекс білок/антитіло переносять у воду й обмінювані протони усередині амінокислот, що захищені комплексом з антитілом, піддаються зворотному обміну дейтерію на водень при більш повільній швидкості, ніж обмінювані протони, усередині амінокислот, що не є частиною поверхні поділу фаз. У результаті, амінокислоти, що утворюють частину поверхні поділу фаз білок/(антитіло, можуть утримувати дейтерій і, отже, виявляють відносно більш високу масу в порівнянні з амінокислотами, не включеними в поверхню поділу фаз. Після дисоціації антитіл, цільовий білок піддають розщепленню протеазою і проводять мас-спектрометричний аналіз, таким чином, відображаючи мічені дейтерієм залишки, що відповідають конкретним амінокислотам, з якими антитіло взаємодіє. Див., наприклад, Епгіпд (1999), Апа|уїіса! Віоспетівігу, 267:252-259; Епдеп апа тій (2001), АпаІ. Снет. 73:256А-265А.
Зо 0138) Термін "епітоп" стосується ділянки на антигені, на яку реагують В- і/або Т-клітини. В- клітинні епітопи можуть бути утворені як з граничних амінокислот, так і з неграничних амінокислот, що знаходяться поруч, за допомогою третинного складання білка. Епітопи, утворені з граничних амінокислот, звичайно зберігаються при впливі денатуруючих розчинників, у той час як епітопи, утворені за допомогою третинного складання, звичайно губляться при обробці денатуруючими розчинниками. Епітоп звичайно включає щонайменше З і більш звичайно щонайменше 5 або 8-10 амінокислот в унікальній просторовій конформації.
І0139| Профілювання за допомогою модифікації (МАР), також відоме як профілювання антитіла на основі структури антигену (АБАР), являє собою метод, який категоризує велике число моноклональних антитіл (птАбБ), спрямованих проти одного і того ж антигену відповідно до аналогій профілю зв'язування кожного антитіла з хімічно або ферментативно модифікованими поверхнями антигенів (див. ОЗ 2004/0101920, спеціально повністю включену в даний опис за допомогою посилання). Кожна категорія може відображати унікальний епітоп, який або чітко відрізняється від епітопа, представленого іншою однією категорією, або частково перекривається з ним. Ця технологія забезпечує швидку фільтрацію генетично ідентичних антитіл, таким чином, що характеризація може бути сфокусована на генетично відмінних антитілах. При застосуванні в скринінгу гібридом, МАР може сприяти ідентифікації рідких клонів гібридоми, які продукують тАб, що мають бажані характеристики. МАР може застосовуватися для сортування антитіл винаходу в групи антитіл, що зв'язують різні епітопи.
ІО140| У деяких варіантах здійснення, антитіла проти РО-1 або їх антигензв'язувальні фрагменти зв'язуються з епітопом усередині будь-яких однієї або декількох з областей, представлених у РО-1, або в природній формі, як представлено в 5ЕБЕО ІЮ МО: 327, або одержаних рекомбінантно, як представлено в ЗЕО ІЮ МО: 321-324, або з його фрагментом. У деяких варіантах здійснення, антитіла винаходу зв'язуються з позаклітинною областю, що містить одну або декілька амінокислот, вибраних із групи, яка складається з амінокислотних залишків 21-171 з РО-1. У деяких варіантах здійснення, антитіла винаходу зв'язуються з позаклітинною областю, що містить одну або декілька амінокислот, вибраних із групи, яка складається з амінокислотних залишків 1-146 РО-1 мавпи, як представлено 5ЕО ІО МО: 322.
ІЇО141| У деяких варіантах здійснення, антитіла винаходу, як показано в Таблиці 1, взаємодіють з щонайменше однією амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, яка 60 складається з амінокислотних залишків в інтервалі від приблизно положення 21 до приблизно положення 136 з 5ЕО ІО МО: 327 або амінокислотних залишків в інтервалі від приблизно положення 136 до приблизно положення 171 з ЗЕО ІЮ МО: 327. Ці області частково представлені в ЗЕО ІЮО МО: 321-324.
І0142| Даний винахід включає антитіла проти РО-1, що зв'язуються з одним і тим же епітопом або частиною епітопа, як будь-яке з конкретних ілюстративних антитіл, описаних у даному документі в Таблиці 1, або антитіло, що має послідовності СОК будь-якого з ілюстративних антитіл, описаних у Таблиці 1. Аналогічно, даний винахід також включає антитіла проти РО-1, що конкурують за зв'язування з РО-1 або фрагментом РО-1, з будь-яким з конкретних ілюстративних антитіл, описаних тут у Таблиці 1, або антитілом, що має послідовності СОК будь-якого з ілюстративних антитіл, описаних у Таблиці 1. Наприклад, даний винахід включає антитіла проти РО-1, що перехресно конкурують за зв'язування з РО-1 з одним або декількома антитілами, визначеними в Прикладі 6 даного опису (наприклад, Нгам7788М,
Нахнво92Р, На4хХНВО99Р, НІМ7799М, Нгам778о0М, НІМ7800М, Нагам7794М, Нгам7798М,
Нахн9о145Р2, НІ4АНЗУО57Р2, НахнНУ1Т20Р2, НахНУ1Т28Р2, НаНЗОТ9Р, НаХхнНО1Т19Р2, НахнНоО135Р2,
НахноозарР, Нгам7790М, НахНЗОЗ5Р, НаХхНЗОЗ7Р, НА4хНЗО5Р ї Нгам7795М).
ЇО143| Можна легко визначити, чи зв'язується антитіло з одним і тим же епітопом або конкурує за зв'язування з ним з еталонним антитілом проти РО-1, за допомогою використання рутинних методів, відомих у даній галузі. Наприклад, щоб визначити, чи зв'язується тестоване антитіло з одним і тим же епітопом, як еталонне антитіло проти РО-1 винаходу, забезпечують зв'язування еталонного антитіла з білююм або пептидом РО-1 в умовах насичення. Далі, оцінюють здатність тестованого антитіла зв'язуватися з молекулою РО-1. Якщо тестоване антитіло здатне зв'язуватися з РО-1 після насичувального зв'язування з еталонним антитілом проти РО-1, можна зробити висновок, що тестоване антитіло зв'язується з іншим епітопом, ніж еталонне антитіло проти РО-1. З іншого боку, якщо тестоване антитіло не здатне зв'язуватися з білююм РО-1 після насичувального зв'язування з еталонним антитілом проти РО-1, тоді тестоване антитіло може зв'язуватися з таким же епітопом, як епітоп, зв'язаний з еталонним антитілом проти РО-1 винаходу. (0144) Щоб визначити, чи конкурує антитіло за зв'язування з еталонним антитілом проти РО- 1, описану вище методологію зв'язування здійснюють у двох орієнтаціях. У першій орієнтації,
Зо забезпечують зв'язування еталонного антитіла з білком РО-1 в умовах насичення з наступною оцінкою зв'язування тестованого антитіла з молекулою РО-1. В другій орієнтації, забезпечують зв'язування тестованого антитіла з молекулою РО-1 в умовах насичення з наступною оцінкою зв'язування еталонного антитіла з молекулою РО-1. Якщо в обох орієнтаціях, тільки перше (насичувальне) антитіло здатне до зв'язування з молекулою РО-1, тоді роблять висновок, що тестоване антитіло й еталонне антитіло конкурують за зв'язування з РО-1. Як буде зрозуміло рядовому фахівцю в даній галузі, антитіло, конкуруюче за зв'язування з еталонним антитілом, не обов'язково може зв'язуватися з ідентичним епітопом, як еталонне антитіло, але може стерично блокувати зв'язування еталонного антитіла за допомогою зв'язування епітопа, що перекривається, або сусіднього епітопа. 01451 Два антитіла зв'язуються з одним і тим же епітопом або епітопом, що перекривається, якщо кожне конкурентно інгібує (блокує) зв'язування іншого з антигеном. Таким чином, 1-, 5-, 10- ,20- або 100-кратний надлишок одного антитіла інгібує зв'язування іншого на щонайменше 50 до, але переважно 75 95, 90 95 або навіть 99 95, виміряне в тесті на конкурентне зв'язування (див., наприклад, Уипопапз еї аї., Сапсег Кез. 1990, 50:1495-1502). Альтернативно, два антитіла мають один і той же епітоп, якщо по суті всі амінокислотні мутації в антигені, які зменшують або виключають зв'язування одного антитіла, зменшують або виключають зв'язування іншого. Два антитіла мають епітопи, що перекриваються, якщо деякі амінокислотні мутації, які зменшують або виключають зв'язування одного антитіла, зменшують або виключають зв'язування іншого.
І0146| Додаткове рутинне експериментування (наприклад, пептидна мутація й аналізи зв'язування) може потім проводитися для підтвердження того, чи спостерігається нестача зв'язування тестованого антитіла фактично внаслідок зв'язування з тим же епітопом, що і для еталонного антитіла, або чи є стеричне блокування (або ще одне явище) відповідальним за нестачу спостережуваного зв'язування. Експерименти цього типу можуть проводитися з використанням ЕГІЗА, РІА, поверхневого плазмонного резонансу, проточної цитометрії або будь-якого іншого кількісного або якісного тесту на зв'язування антитіла, доступного в даній галузі.
Імунокон'югати
ЇО147| Винахід охоплює людське моноклональне антитіло проти РО-1, кон'юговане з терапевтичним фрагментом ("імунокон'югатом"), таким як цитотоксин, або хіміотерапевтичним бо засобом для лікування злоякісного новоутворення. Як використовують у даному описі, термін
"імунокон'югат" стосується антитіла, яке є хімічно або біологічно зв'язаним з цитотоксином, радіоактивною речовиною, цитокіном, інтерфероном, цільовим або репортерним фрагментом, ферментом, токсином, пептидом або білком або терапевтичним засобом. Антитіло може бути зв'язане з цитотоксином, радіоактивною речовиною, цитокіном, інтерфероном, цільовим або репортерним фрагментом, ферментом, токсином, пептидом або терапевтичним засобом по будь-якому розташуванню уздовж молекули, оскільки воно здатне зв'язуватися зі своєю мішенню. Приклади імунокон'югатів включають кон'югати антитіла з лікарським засобом і гібридними білками антитіло-токсин. В одному варіанті здійснення, засіб може являти собою друге відмінне антитіло до РО-1. У деяких варіантах здійснення, антитіло може бути кон'юговане з засобом, специфічним для пухлинної клітини або клітини, інфікованої вірусом. Тип терапевтичного фрагмента, що може бути кон'югований з антитілом проти РО-1, буде вибраний з урахуванням стану, що підлягає лікуванню, і бажаного терапевтичного ефекту, якого необхідно досягти. Приклади придатних засобів для утворення імунокон'югатів відомі в даній галузі; див., наприклад, УМО 05/103081.
Мультиспецифічні антитіла
І0148| Антитіла даного винаходу можуть бути моноспецифічними, біспецифічними або мультиспецифічними. Мультиспецифічні антитіла можуть бути специфічними для різних епітопів одного цільового поліпептиду або можуть містити антигензв'язувальні домени, специфічні для більше ніж одного цільового поліпептиду. Див., наприклад, Тий еї аї., 1991, у.
Іттипої. 147:60-69; Киїег веї а!., 2004, Ттепаз Віоїесппої. 22:238-244.
І0149| В одному аспекті, даний винахід включає мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули або їх антигензв'язувальні фрагменти, де одна специфічність імуноглобуліну є специфічною для позаклітинного домену РО-1 або його фрагмента, а інша специфічність імуноглобуліну є специфічною для зв'язування з зовнішнім позаклітинним доменом РО-1 або другої терапевтичної мішені або є кон'югованою з терапевтичним фрагментом. У деяких варіантах здійснення, перша антигензв'язувальна специфічність може містити РО-І1 або РО-І2 або їх фрагмент. У деяких варіантах здійснення винаходу, одна специфічність імуноглобуліну є специфічною для епітопа, що містить амінокислотні залишки 21-171 з РО-1 (ЗЕО ІО МО: 327), або його фрагмента, а інша специфічність імуноглобуліну є специфічною для другого цільового
Зо антигену. Другий цільовий антиген може знаходитися на тій же клітині, що і РО-1, або на іншій клітині. В одному варіанті здійснення, друга цільова клітина є імунною клітиною, що відрізняється від Т-клітини, такою як В-клітина, антигенпрезентуюча клітина, моноцит, макрофаг або дендритна клітина. У деяких варіантах здійснення, другий цільовий антиген може бути присутній на пухлинній клітині або клітині аутоїмунної тканини або на клітині, інфікованій вірусом. 0150) У ще одному іншому аспекті, винахід надає мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять першу антигензв'язувальну специфічність, що зв'язується з РО-1, і другу антигензв'язувальну специфічність, що зв'язується з Т-клітинним рецептором, В-клітинним рецептором або Ес-рецептором. У спорідненому аспекті, винахід надає мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять першу антигензв'язувальну специфічність, що зв'язується з РО-1, і другу антигензв'язувальну специфічність, що зв'язується з іншим Т-клітинним співінгібітором, таким як
Гда-3, СТІ А-4, ВТ А, СО-28, 284, І 108, ТІСІТ, ТІМЗ, ГАІВТ, ІСОБ і СО160. 0151) У ще одному іншому аспекті, винахід надає мультиспецифічні антигензв'язувальні молекули або їх антигензв'язувальні фрагменти, які містять першу антигензв'язувальну специфічність, що зв'язується з РО-1, і другу антигензв'язувальну специфічність, що зв'язується з антигеном, специфічним для аутоїмунної тканини. У деяких варіантах здійснення, антитіла можуть бути активуючими або агоністичними антитілами.
ІО152| Будь-яка з мультиспецифічних антигензв'язувальних молекул винаходу, або її варіанти, може бути побудована з використанням стандартних методів молекулярної біології (наприклад, технології рекомбінантної ДНК і експресії білка), як відомо рядовому фахівцю в даній галузі.
ІО153) У деяких варіантах здійснення, РО-1-специфічні антитіла генерують у біспецифічному форматі ("біспецифічні"), у якому варіабельні області, що зв'язуються з відмінними доменами
РО-1, зв'язуються разом для надання подвійної доменної специфічності в межах єдиної зв'язувальної молекули. Відповідно сконструйовані біспецифічні молекули можуть підсилювати загальну інгібуючу РО-1 ефективність дії за допомогою збільшення як специфічності, так і зв'язувальної авідності. Варіабельні області зі специфічністю для індивідуальних доменів (наприклад, сегментів М-кінцевого домену), або які можуть зв'язуватися з різними областями бо усередині одного домену, є спареними на структурному каркасі, що дозволяє кожній області одночасно зв'язуватися з роздільними епітопами або з різними областями усередині одного домену. В одному прикладі біспецифічної молекули, варіабельні області важкого ланцюга (Мн) зі зв'язуючого зі специфічністю для одного домену рекомбінують з варіабельними областями легкого ланцюга (Мі) з ряду зв'язуючих зі специфічністю для другого домену, щоб ідентифікувати некогнатні партнери Мі, які можу бути спарені з вихідним Мн без порушення вихідної специфічності для цього Мн. Таким чином, одиничний сегмент Мі (наприклад, Мі1) може комбінуватися з двома різними доменами Мн (наприклад, Уні і Мн2) для генерації біспецифічної молекули, складеної з двох зв'язувальних "плечей" (Мні-Мі1 і Мн2г-Мі1). Застосування одиничного сегмента Мі знижує складність системи і, таким чином, спрощує операції і збільшує ефективність у процесах клонування, експресії й очищення, застосовуваних для генерації біспецифічної молекули (див., наприклад, О55М13/022759 і 052010/0331527). (0154) Альтернативно, антитіла, що зв'язуються з декількома доменами і другою мішенню, такі як, але не обмежені наведеним, наприклад, друге інше антитіло проти РО-1, можуть бути одержані в біспецифічному форматі з використанням методів, описаних у даному документі, або інших методів, відомих кваліфікованим фахівцям в даній галузі. Варіабельні області антитіла, що зв'язуються з відмінними областями, можуть бути зв'язані разом з варіабельними областями, що зв'язуються з потрібними ділянками, наприклад на позаклітинному домені РО-1, для надання подвійної антигенної специфічності в межах єдиної зв'язувальної молекули.
Відповідно сконструйовані біспецифічні молекули такої природи виконують подвійну функцію.
Варіабельні області зі специфічністю для позаклітинного домену комбінують з варіабельною областю зі специфічністю для зовнішнього позаклітинного домену і спарюють на структурному каркасі, що забезпечує зв'язування кожної варіабельної області з роздільними антигенами.
ІО155| Формат ілюстративного біспецифічного антитіла, яке може застосовуватися в контексті даного винаходу, включає застосування Сн3-домену першого імуноглобуліну (Ід) ії СнЗ- домену другого Ід, де СнЗ-домени першого і другого Ід відрізняються один від одного щонайменше однією амінокислотою і де щонайменше одна амінокислотна відмінність знижує зв'язування біспецифічного антитіла з Білком А у порівнянні з біспецифічним антитілом, у якому відсутня амінокислотна відмінність. В одному варіанті здійснення, СнЗ-домен першого Ід зв'язується з Білком А, а СнЗ-домен другого Ід містить мутацію, яка знижує або відміняє
Зо зв'язування з Білком А, таку як модифікація (по нумерації ІМОТ екзонів; Ні4З5К по нумерації
ЕШ). Другий Сн3 може додатково містити модифікацію (по ІМТ; У436Е по ЕШ). Додаткові модифікації, які можуть бути виявлені усередині другого Сн3, включають: ЮС16Е, 118М, М445,
Кб2М, М57М ї У82І (по ІМТ; ОЗ56Е, І358М, М3845, КЗО2М, М397М їі М422І по Є) у випадку антитіла ІДС; М445, КБ2М ії М82І (ІМСТ; М3845, КЗО2М ії М4221І по Е))) у випадку антитіла да; і
О15В, М445, КБ2М, М57М, ВбОК, Е79О0 і У821І (по ІМСТ; 03558, М3845, КЗ92М, М397М, ВОК,
Е419О ї М422І по ЕЄ)) у випадку антитіла Ідс4. Варіації форматів біспецифічних антитіл, описаних вище, розглядаються як включені в межі обсягу даного винаходу.
ІО156) Інші ілюстративні біспецифічні формати, які можуть застосовуватися в контексті даного винаходу, включають, без обмеження, наприклад, біспецифічні формати на основі 5сЕм або діатіло, гібриди ІдДо-5сЕм, домен з подвійною варіабельністю (0М0)-Ід, квадрому, формат виступи-в-западини, загальний легкий ланцюг (наприклад, загальний легкий ланцюг з форматом виступи-в-западини і т. д.), Сто55Мар, Сго55Рар, (ЗЕЕБ)тіло, лейцинову блискавку, дуотіло, ас Ласіг, подвійної дії Раб (САБ)-Іда, і Маб- біспецифічні формати (див., наприклад, Кіеїп еї аї. 2012, тАрв 4:6, 1-11, і посилання, цитовані в ній, для огляду наведених вище форматів).
Біспецифічні антитіла також можуть бути побудовані з використанням кон'югації пептид/нуклеїнова кислота, наприклад, де неприродні амінокислоти з ортогональною хімічною реактивністю застосовують для генерації сайт-специфічних кон'югатів антитіло-олігонуклеотид, які потім піддаються самозбиранню в мультимерні комплекси з заданими складом, валентністю і геометрією (див., наприклад, Каапе еї а1., У. Ат. Спет. 5ос. (Ерибр: Оес. 4, 20121).
Терапевтичне введення і лікарські форми
І0157| Винахід надає терапевтичні композиції, які містять антитіла проти РО-1 даного винаходу або їх антигензв'язувальні фрагменти. Терапевтичні композиції відповідно до винаходу будуть вводитися разом із придатними носіями, ексципієнтами й іншими засобами, які вводять у лікарські форми для забезпечення поліпшеного перенесення, доставки, переносимості і т. п. Множину відповідних лікарських форм можна знайти в довіднику, відомому всім хімікам-фармацевтам: Кептіпдіоп'є РПагтасеціїса! Зсіепсе5, Маск Рибіїзпіпд Сотрапу,
Еазюп, РА. Ці лікарські форми включають, наприклад, порошки, пасти, мазі, желе, воски, масла, ліпіди, везикули, що містять ліпіди (катіонні або аніонні) (такі як ЛІПОФЕКТИН"М), кон'югати ДНК, безводні поглинаючі пасти, емульсії типу масло-в-воді і вода-в-маслі, емульсії карбоваксу бо (поліетиленгліколів з різною молекулярною масою), напівтверді гелі і напівтверді суміші, що містять карбовакс. Див. також Роучеї! еї а. "Сотрепаїчт ої ехсіріепів5 Тог рагепієга! Тогтиїайопв",
РОА (1998), 9. Ріпапт. 5сі ТесНпої. 52:238-311. 0158) Доза антитіла може варіювати залежно від віку і розміру суб'єкта, якому будуть її вводити, цільового захворювання, стану, шляху введення і т. п. Коли антитіло даного винаходу застосовують для лікування захворювання або розладу у дорослого пацієнта або для запобігання такому захворюванню, переважним є вводити антитіло даного винаходу звичайно при однократній дозі, що дорівнює приблизно від 0,1 до приблизно 60 мг/кг маси тіла, більш переважно від приблизно 5 до приблизно 60 мг/кг, від приблизно 10 до приблизно 50 мг/кг або від приблизно 20 до приблизно 50 мг/кг маси тіла. Залежно від тяжкості стану, частоту і тривалість лікування можна регулювати. У деяких варіантах здійснення, антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент винаходу може вводитися у вигляді початкової дози, що дорівнює щонайменше від приблизно 0,1 до приблизно 800 мг, від приблизно 1 до приблизно 500 мг, від приблизно 5 до приблизно 300 мг або від приблизно 10 до приблизно 200 мг, до приблизно 100 мг або до приблизно 50 мг. У деяких варіантах здійснення, початкова доза може супроводжуватися введенням другої або множини наступних доз антитіла або його антигензв'язувального фрагмента в кількості, яка може бути приблизно такою ж або меншою, ніж кількість початкової дози, де наступні дози розділені у часі на щонайменше від 1 дня до З днів; щонайменше один тиждень, щонайменше 2 тижні; щонайменше З тижні; щонайменше 4 тижні; щонайменше 5 тижнів; щонайменше б тижнів; щонайменше 7 тижнів; щонайменше 8 тижнів; щонайменше 9 тижнів; щонайменше 10 тижнів; щонайменше 12 тижнів або щонайменше 14 тижнів.
ІЇ0159| Різні системи доставки є відомими і можуть застосовуватися для введення фармацевтичної композиції винаходу, наприклад інкапсулювання в ліпосоми, мікрочастинки, мікрокапсули, рекомбінантні клітини, здатні до експресії мутантних вірусів, опосередкований рецептором ендоцитоз (див., наприклад, Уи еї аї. (1987), 9. ВіоЇ. Снет. 262:4429-4432). Методи введення включають, але не обмежуються перерахованим, внутрішньошкірний, черезшкірний, внутрішньом'язовий, внутрішньоочеревинний, внутрішньовенний, підшкірний, інтраназальний, епідуральний і пероральний шляхи. Композиція може вводитися за допомогою будь-якого зручного шляху, наприклад за допомогою інфузії або болюсної ін'єкції за допомогою
Зо усмоктування через епітеліальні або слизово-шкірні вистілки (наприклад, слизову оболонку порожнини рота, слизові оболонки прямої кишки і кишечнику і т. д.) і може вводитися разом з іншими біологічно активними засобами. Введення може бути системним або місцевим.
Фармацевтична композиція також може доставлятися у везикулі, зокрема ліпосомі (див., наприклад, І апдег (1990), зсіепсе, 249:1527-1533).
ІО160| Застосування наночастинок для доставки антитіла даного винаходу також передбачене в даному описі. Кон'юговані з антитілом наночастинки можуть використовуватися як для терапевтичних, так і для діагностичних застосувань. Кон'юговані з антитілом наночастинки і способи одержання і застосування описані докладно в АїІтчеро М. еї аї. 2009 ("Апіїбоду-сопідаїейд папорапісіе5 Тог Біотедісаї арріісайопв" іп У. Мапотаї. Моїте 2009, Апісіе
ІО 439389, 24 раде5, аоі: 10,1155/2009/439389), включеній в даний опис за допомогою посилання. Наночастинки можуть бути розроблені і кон'юговані з антитілами, що містяться у фармацевтичних композиціях, щоб цілеспрямовано діяти на пухлинні клітини або клітини аутоїмунних тканин, або клітини, інфіковані вірусом. Наночастинки для доставки лікарського засобу також були описані, наприклад, у 5 8257740 або 05 8246995, кожна з яких повністю включена в даний опис.
ІО161) У деяких ситуаціях, фармацевтична композиція може бути доставлена в системі з контрольованим вивільненням. В одному варіанті здійснення, може застосовуватися насос. У ще одному іншому варіанті здійснення, можуть застосовуватися полімерні матеріали. У ще одному іншому варіанті здійснення, система з контрольованим вивільненням може поміщуватися поблизу мішені для композиції, таким чином, вимагаючи тільки фракції системної дози.
І0162)| Ін'єкційні препарати можуть включати дозовані форми для внутрішньовенних, підшкірних, внутрішньошкірних, внутрішньочерепних, внутрішньоочеревинних і внутрішньом'язових ін'єкцій, краплинних інфузій і т. д. Ці ін'єкційні препарати можуть бути одержані загальновідомими методами. Наприклад, ін'єкційні препарати можуть бути одержані, наприклад, за допомогою розчинення, суспендування або емульгування антитіл або їх солей, описаних вище, у стерильному водному середовищі або масляному середовищі, традиційно застосовуваних для ін'єкцій Як водне середовище для ін'єкцій можуть бути використані, наприклад, фізіологічний розчин, ізотонічний розчин, що містить глюкозу й інші допоміжні 60 засоби і т. д., які можуть застосовуватися в комбінації з відповідним солюбілізатором, таким як спирт (наприклад, етанол), поліспирт (наприклад, пропіленгліколь, поліетиленгліколь), неїоногенна поверхнево-активна речовина (Інаприклад, полісорбат 80, нСО-50 (поліоксіетиленовий (50 моль) аддукт гідрованої касторової олії)) і т. д. Як масляне середовище використовують, наприклад, кунжутну олію, соєву олію і т. д., які можуть застосовуватися в комбінації із солюбілізатором, таким як бензилбензоат, бензиловий спирт і т. д. Ін'єкцією, приготовленою таким чином, переважно заповнюють відповідну ампулу.
І0163| Фармацевтична композиція даного винаходу може бути доставлена підшкірно або внутрішньовенно з використанням стандартної голки і шприца. На доповнення, стосовно підшкірної доставки, шприц-ручка для доставки, мабуть, має застосування при доставці фармацевтичної композиції даного винаходу. Така шприц-ручка для доставки може бути багаторазовою або одноразовою. У багаторазовій шприц-ручці для доставки звичайно використовують змінний картридж, що містить фармацевтичну композицію. Як тільки уся фармацевтична композиція в картриджі вводиться і картридж спорожнюється, порожній картридж може легко бути утилізований і замінений на новий картридж, що містить фармацевтичну композицію. Шприц-ручка для доставки може потім повторно використовуватися. В одноразовій шприц-ручці для доставки змінний картридж відсутній.
Замість цього, одноразову шприц-ручку для доставки одержують попередньо заповненою фармацевтичною композицією, що міститься в резервуарі в пристрої. Як тільки резервуар звільняється від фармацевтичної композиції, цілий пристрій утилізують. (0164) Численні пристрої для доставки у вигляді ручки й автоінжектора доставки знаходять застосування при підшкірній доставці фармацевтичної композиції даного винаходу. Приклади включають, але, безсумнівно, не обмежуються перерахованими, АЛОТОРЕМ М (Омеп Митіога,
Іпс., Ууосазіоск, ШК), ручку ОІЗЕТКОМІС "м (Різеїгопіс Медіса! Зузієт5, Вигопао!, Зу/йгепапа), ручку НОМАГОС МІХ 75/257м, ручку НОМАГОС ТМ, ручку НОМАСІМ 70/307м (Еїї Шу апа Со.,
Іпаіапароїїх, ІМ), МОМОРЕМ'"М |, ПП ої ШІ (Момо МогдієкК, Сореппадеп, Юептаїк), МОМОРЕМ
УМО тМм (Момо МогадізК, Сореппадеп, Оептаїгк), ручку ВО м (Весіоп бісКіпзоп, Егапкіїп Гакев,
МУ), ОРТІРЕМ М, ОРТІРЕМ РКО М, ОРТІРЕМ 5ТАКІГЕТ М ї ОРТІСГІК мМ (Запой-Амепіїв, Егапкіш,
Септапу), причому наведено тільки декілька прикладів. Приклади одноразових шприц-ручок для доставки, що мають застосування при підшкірній доставці фармацевтичної композиції даного винаходу, включають, але, безсумнівно, не обмежуються перерахованими, ручку
ЗОГО5ТАК"М (Запоїі-Амепіїз), РГЕХРЕМ М (Момо Могаї5К) ії КУЛКРЕМ "М (Еїї Гу), автоіїінжектор
ЗОКЕСТГІСК М (Атдеп, Тпоизапа Оакз, СА), РЕМІ ЕТ "мМ (НазеїІтеїег, ЗішНдагі, Сегтапу), ЕРІРЕМ (Оеєу, СР.) ї ручку НОМІКА "м (АББрой Гарзх, Арроїї РагкК, І), причому наведено тільки декілька прикладів.
І0165| Переважно, фармацевтичні композиції для перорального або парентерального застосування, описані вище, одержують у вигляді дозованих форм в однократній дозі, придатній для забезпечення дози активних інгредієнтів. Такі дозовані форми в стандартній дозі включають, наприклад, таблетки, пігулки, капсули, ін'єкції (ампули), супозиторії і т. д. Кількість антитіла, що міститься в дозованій формі, звичайно складає від приблизно 5 до приблизно 500 мг на дозовану форму в однократній дозі; особливо у формі ін'єкції, переважно, щоб антитіло містилося в кількості від приблизно 5 до приблизно 100 мг і від приблизно 10 до приблизно 250 мг для інших дозованих форм.
Терапевтичні застосування антитіл 0166) Антитіла винаходу є застосовними, серед іншого, для лікування, запобігання і/або зменшення тяжкості будь-якого захворювання або розладу, асоційованого з або опосередкованого експресією, сигнальним шляхом або активністю РО-1 або виліковуваного за допомогою блокування взаємодії між РО-1 і лігандом РО-1 (наприклад, РО-І1 або РО-І2) або іншого інгібування активності і/або сигнального шляху РО-1. Наприклад, даний винахід надає способи лікування злоякісного новоутворення (інгібування росту пухлини), хронічних вірусних інфекцій і/або аутоїмунного захворювання за допомогою введення антитіла проти РО-1 (або фармацевтичної композиції, що містить антитіло проти РО-1), описаного у даному документі, пацієнту, що потребує такого лікування. Антитіла даного винаходу є застосовними для лікування, запобігання і/або зменшення тяжкості захворювання, розладу або стану, такого як злоякісне новоутворення, аутоїмунне захворювання або вірусна інфекція, і/або для зменшення щонайменше одного симптому, асоційованого з таким захворюванням, розладом або станом. У контексті способів лікування, описаних у даному документі, антитіло проти РО-1 може вводитися у вигляді монотерапії (тобто тільки як терапевтичний засіб) або в комбінації з одним або декількома додатковими терапевтичними засобами (приклади яких описані в різних розділах даного опису).
І0167| У деяких варіантах здійснення винаходу, антитіла, описані в даному документі, є застосовними для лікування суб'єктів, що страждають на первинне або рецидивуюче злоякісне новоутворення, яке включає, але не обмежене наведеними, нирковоклітинну карциному, рак ободової і прямої кишки, недрібноклітинний рак легень, рак мозку (наприклад, мультиформну гліобластому), плоскоклітинний рак області голови і шиї, рак шлунка, рак простати, рак яєчника, рак нирки, рак молочної залози, множинну мієлому і меланому. 0168) Антитіла можуть застосовуватися для лікування симптомів на ранній стадії або пізній стадії злоякісного новоутворення. В одному варіанті здійснення, антитіло винаходу або його фрагмент може застосовуватися для лікування метастазуючого злоякісного новоутворення.
Антитіла є застосовними при зниженні, інгібуванні або зменшенні росту пухлини як для солідних пухлин, так і для гематологічних злоякісних новоутворень. У деяких варіантах здійснення, лікування антитілом винаходу або його антигензв'язувальним фрагментом приводить до більше ніж 50 95 регресії, більше ніж 60 95 регресії, більше ніж 70 95 регресії, більше ніж 80 95 регресії або більше ніж 90 95 регресії пухлини у суб'єкта. У деяких варіантах здійснення, антитіла можуть застосовуватися для запобігання рецидиву пухлини. У деяких варіантах здійснення, антитіла є застосовними для збільшення загальної виживаності у суб'єкта зі злоякісним новоутворенням. У деяких варіантах здійснення, антитіла є застосовними при зниженні токсичності внаслідок хіміотерапії або променевої терапії, у той же час підтримуючи довгострокову виживаність у пацієнта, що страждає на злоякісне новоутворення.
І0169)| У деяких варіантах здійснення, антитіла винаходу є застосовними для лікування суб'єктів, що страждають на хронічну вірусну інфекцію. У деяких варіантах здійснення, антитіла винаходу є застосовними при зниженні концентрацій вірусів у хазяїна і/або порятунку виснажених Т-клітин. У деяких варіантах здійснення, антитіло винаходу або його фрагмент може застосовуватися для лікування хронічної вірусної інфекції, що викликається вірусом лімфоцитарного хоріоменінгіту (І СМУМ). У деяких варіантах здійснення, антитіло винаходу або його антигензв'язувальний фрагмент може вводитися в терапевтичній дозі пацієнту, інфікованому вірусом імунодефіциту людини (ВІЛ) або вірусом папіломи людини (НРУ), або вірусом гепатиту В/С (НВМ/НСМ). У близькому варіанті здійснення, антитіло винаходу або його антигензв'язувальний фрагмент може застосовуватися для лікування інфекції, що викликається
Зо вірусом імунодефіциту мавпи (51ІМ), у мавпи-суб'єкта, такої як макака. 0170) У деяких варіантах здійснення, блокуюче антитіло даного винаходу може вводитися в терапевтично ефективній кількості суб'єкту, що страждає на злоякісне новоутворення або вірусну інфекцію. 0171) У деяких варіантах здійснення, антитіла винаходу є застосовними для лікування аутоїмунного захворювання, що включає, але не обмежене наведеними, осередкову алопецію, аутоїмунний гепатит, целіакію, хворобу Грейвса, синдром Гійєна-Барре, тиреоїдит Хашимото, гемолітичну анемію, запальне захворювання кишечнику, запальні міопатії, розсіяний склероз, первинний біліарний цироз, псоріаз, ревматоїдний артрит, склеродерму, синдром Шегрена, системний червоний вовчак, вітиліго, аутоїмунний панкреатит, аутоїмунну кропивницю, аутоїмунну тромбоцитопенічну пурпуру, хворобу Крона, діабет типу І, еозинофільний фасціїт, еозинофільний ентерогастрит, синдром Гудпасчера, важку міастенію, псоріатичний артрит, ревматичну пропасницю, виразковий коліт, васкуліт і гранулематоз Вегенера. У деяких варіантах здійснення, активуюче антитіло винаходу може застосовуватися для лікування суб'єкта, що страждає на аутоїмунне захворювання.
ІО172| Одне або декілька антитіл даного винаходу можуть вводитися для ослаблення, запобігання або зниження тяжкості одного або більше симптомів або станів захворювання або розладу. 0173) У даному описі також передбачене профілактичне застосування одного або декількох антитіл даного винаходу для пацієнтів, що мають ризик розвитку захворювання або розладу, такого як злоякісне новоутворення, аутоімунне захворювання і хронічна вірусна інфекція.
І0174| У додатковому варіанті здійснення винаходу дані антитіла застосовують для одержання препарату фармацевтичної композиції для лікування пацієнтів, що страждають на злоякісне новоутворення, аутоїмунне захворювання або вірусну інфекцію. У ще одному іншому варіанті здійснення винаходу, дані антитіла застосовують як допоміжну терапію разом з будь- яким іншим засобом або будь-якою іншою терапією, відомою кваліфікованим фахівцям в даній галузі, застосовною для лікування злоякісного новоутворення, аутоїмунного захворювання або вірусної інфекції.
Комбіновані терапії і лікарські форми
Ї0175| Комбіновані терапії можуть включати антитіло проти РО-1 винаходу і будь-який додатковий терапевтичний засіб, які можуть переважно комбінуватися з антитілом винаходу або з біологічно активним фрагментом антитіла винаходу.
ІЇО176| Антитіла даного винаходу можуть комбінуватися синергетично з одним або декількома протипухлинними засобами або терапією, застосовуваною для лікування злоякісного новоутворення, яке включає, наприклад, нирковоклітинну карциному, рак ободової і прямої кишки, мультиформну гліобластому, плоскоклітинний рак області голови і шиї, недрібноклітинний рак легень, рак товстої кишки, рак яєчника, аденокарциному, рак простати, гліому і меланому. У даному винаході передбачене застосування антитіл проти РО-1 винаходу в комбінації з імуностимулюючими і/або імунопідтримуючими терапіями, щоб інгібувати ріст пухлини і/або збільшити виживаність пацієнтів зі злоякісним новоутворенням. Імуностимулюючі терапії включають прямі імуностимулюючі терапії для посилення активності імунних клітин за допомогою або "розгальмовування" пригнічених імунних клітин, або "натиску", щоб активувати імунну відповідь. Приклади включають цілеспрямовану дію на інші контрольні рецептори, вакцинацію й ад'юванти. Імунопідтримуючі модальності можуть збільшити антигенність пухлини за допомогою ініціації смерті імуногенних клітин, запалення або мати інші опосередковані ефекти, що ініціюють протипухлинну імунну відповідь. Приклади включають опромінювання, хіміотерапію, антиагіогенні засоби і хірургічне втручання. 0177) У різних варіантах здійснення, одне або декілька антитіл даного винаходу можуть застосовуватися в комбінації з антитілом до РО-І1, другим антитілом до РО-1 (наприклад, ніволумабом), інгібітором ГГ АС-3, інгібітором СТІ А-4 (наприклад, іпілімумабом), інгібітором ТІМ3, інгібітором ВТГА, інгібітором ТІСІТ, інгібітором СО47, антагоністом ще одного Т-клітинного інгібітору або ліганду (наприклад, антитілом до СО-28, 284, І 108, ІГАІК1, ІСО5, СО160 або
МІЗТА), інгібітором індоламін-2,3-діоксигенази (І0О), антагоністом фактора росту судинного ендотелію (МЕС) І|наприклад, "МЕСЕ-пасткою", такою як афліберцепт, або іншим МЕСЕ- інгібуючим гібридним білком, наведеним у 05 7,087,411, або антитілом проти МЕСЕ або антигензв'язувальним фрагментом (наприклад, бевацизумабом або ранібізумабом) або низькомолекулярним інгібітором кінази рецептора МЕСЕ (наприклад, сунітинібом, сорафенібом або пазопанібом)|, Апд2-інгібітором (наприклад, несвакумабом), інгібітором трансформуючого
Зо фактора росту бета (ТОЕВД), інгібітором рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК) (наприклад, ерлотинібом, цетуксимабом), агоністом костимулюючого рецептора (наприклад, агоністом глюкокортикоїд-індукованого ТМЕК-спорідненого білка), антитілом до пухлиноспецифічного антигену (наприклад, САУ, СА125, асоційованого з меланомою антигену З (МАСЕЗ), карциноембріональним антигеном (СЕА), віментином, пухлина-М2-РК, простат- специфічним антигеном (РЗА), муцином-1ї, МАВТ-1 і СА19-9), вакциною (наприклад, бацилою
Кальметта-Герена, протираковою вакциною), ад'ювантом для збільшення презентації антигену (наприклад, гранулоцитарним-макрофагальним колонієстимулюючим фактором), біспецифічним антитілом (наприклад, біспецифічним антитіллом СОЗ3ЗхХСО20, біспецифічним антитілом РАЕМАХСОЗ), цитотоксином, хіміотерапевтичним засобом (наприклад, дакарбазином, темозоломідом, циклофосфамідом, доцетакселом, доксорубіцином, даунорубіцином, цисплатином, карбоплатином, гемцитабіном, метотрексатом, мітоксантроном, оксаліплатином, паклітакселом і вінкристином), циклофосфамідом, променевою терапією, інгібітором ІС/-68 (наприклад, сарилумабом), інгібітором І/-4К (наприклад, дупілумабом), інгібітором 1-10, цитокіном, таким як 1-2, 1-7, І/-21 ї ІС-15, кон'югатом антитіло-лікарський засіб (АОС) (наприклад, анти-«СО19-0М4 АС і анти-056-0ОМ4 АБС), протизапальним лікарським засобом (наприклад, кортикостероїдами і нестероїдними протизапальними лікарськими засобами), харчовою добавкою, такою як антиоксиданти, або будь-яким паліативним засобом для лікування злоякісного новоутворення. У деяких варіантах здійснення, антитіла проти РО-1 даного винаходу можуть застосовуватися в комбінації з протираковими вакцинами, що включають вакцини проти дендритних клітин, онколітичні віруси, вакцини пухлинних клітин і т. д., для посилення протипухлинної відповіді. Приклади протиракових вакцин, які можуть застосовуватися в комбінації з антитілами проти РО-1 даного винаходу, включають вакцину
МАСЕЗ проти меланоми і раку сечового міхура, вакцину МОС1 проти раку молочної залози,
ЕСЕКУЗ (наприклад, Риндопепімут) проти раку мозку (включаючи мультиформну гліобластому) або | МАС-СЕА (проти СЕАжраю). 0178) У деяких варіантах здійснення, антитіла проти РО-1 винаходу можуть вводитися в комбінації з променевою терапією в способах для генерації довгострокових протипухлинних відповідей і/або збільшення виживаності пацієнтів зі злоякісним новоутворенням. У деяких варіантах здійснення, антитіла проти РО-1 винаходу можуть вводитися до введення, одночасно бо з введенням або після введення променевої терапії пацієнту зі злоякісним новоутворенням.
Наприклад, променева терапія може вводитися в одній або декількох дозах у пухлинні ушкодження з наступним введенням однієї або декількох доз антитіла проти РО-1 винаходу. У деяких варіантах здійснення, променева терапія може вводитися місцево в пухлинне ушкодження для збільшення місцевої імуногенності пухлини пацієнта (ад'ювантне опромінювання) і/або для знищення пухлинних клітин (аблятивне опромінювання) з наступним системним введенням антитіл проти РО-1 винаходу. Наприклад, внутрішньочерепне опромінення може вводитися пацієнту з раком мозку (наприклад, мультиформною гліобластомою) у комбінації із системним введенням антитіла проти РО-1 винаходу. У деяких варіантах здійснення, антитіла проти РО-1 винаходу можуть вводитися в комбінації з променевою терапією і хіміотерапевтичним засобом (наприклад, темозоломідом) або антагоністом МЕСЕ (наприклад, афліберцептом). (0179) У деяких варіантах здійснення, антитіла проти РО-1 винаходу можуть вводитися в комбінації з одним або декількома противірусними лікарськими засобами для лікування хронічних вірусних інфекцій, що викликаються ГСМУМ, ВІЛ, НРУ, НВМ або НСМ. Приклади противірусних лікарських засобів включають, але не обмежуються перерахованим, зидовудин, ламівудин, абакавір, рибавірин, лопінавір, ефавіренц, кобіцистат, тенофовір, рилпівірин і кортикостероїди. У деяких варіантах здійснення, антитіла проти РО-1 винаходу можуть вводитися в комбінації з інгібітором ГАЗ, інгібітором СТІ А-4 або будь-яким антагоністом ще одного іншого Т-клітинного співінгібітору для лікування хронічної вірусної інфекції. 01801 У деяких варіантах здійснення, антитіла проти РО-1 винаходу можуть комбінуватися з антитілом до Ес-рецептора на імунних клітинах для лікування аутоїмунного захворювання. В одному варіанті здійснення, антитіло винаходу або його фрагмент вводять у комбінації з антитілом або антигензв'язувальним білком, націленим на антиген, специфічний до аутоімунної тканини. У деяких варіантах здійснення, антитіло винаходу або його антигензв'язувальний фрагмент вводять у комбінації з антитілом або антигензв'язувальним білком, що цілеспрямовано діє на Т-клітинний рецептор або В-клітинний рецептор, які включають, але не обмежені наведеними, Еса (наприклад, СО89), Есу (наприклад, СО64, 2032, СО1ба ії СО16Б),
С019 і т. д. Антитіла винаходу або їх фрагменти можуть застосовуватися в комбінації з будь- яким лікарським засобом або терапією, відомими в даній галузі (наприклад, кортикостероїдами
Зо й іншими імуносупресорами) для лікування аутоїмунного захворювання або розладу, що включає, але не обмежений перерахованими, осередкову алопецію, аутоїмунний гепатит, целіакію, хворобу Грейвса, синдром Гійєна-Барре, тиреоїдит Хашимото, гемолітичну анемію, запальне захворювання кишечнику, запальні міопатії, розсіяний склероз, первинний біліарний цироз, псоріаз, ревматоїдний артрит, склеродерму, синдром Шегрена, системний червоний вовчак, вітиліго, аутоїмунний панкреатит, аутоїмунну кропивницю, аутоїмунну тромбоцитопенічну пурпуру, хворобу Крона, діабет типу І!/, еозинофільний фасціїт, еозинофільний ентерогастрит, синдром Гудпасчера, важку міастенію, псоріатичний артрит, ревматичну пропасницю, виразковий коліт, васкуліт і гранулематоз Вегенера.
ІО181| Додаткові терапевтично активні засоби/компоненти можуть вводитися перед введенням, одночасно з введенням або після введення антитіла проти РО-1 даного винаходу.
Для цілей даного розкриття, такі режими введення розглядають як введення антитіла проти РО- 1 "у комбінації з" другим терапевтично активним компонентом.
І0182| Додаткові терапевтично активні компоненти можуть вводитися суб'єкту перед введенням антитіла проти РО-1 даного винаходу. Наприклад, перший компонент може вважатися таким, що вводиться "перед" другим компонентом, якщо перший компонент вводять за 1 тиждень до, 72 години до, 60 годин до, 48 годин до, 36 годин до, 24 години до, 12 годин до, б годин до, 5 годин до, 4 години до, З години до, 2 години до, 1 годину до, ЗО хвилин до, 15 хвилин до, 10 хвилин до, 5 хвилин до або менше ніж за 1 хвилину до введення другого компонента. В інших варіантах здійснення, додаткові терапевтично активні компоненти можуть вводитися суб'єкту після введення антитіла проти РО-1 даного винаходу. Наприклад, перший компонент може вважатися таким, що вводиться "після" другого компонента, якщо перший компонент вводять через 1 хвилину після, 5 хвилин після, 10 хвилин після, 15 хвилин після, 30 хвилин після, 1 годину після, 2 години після, З години після, 4 години після, 5 годин після, 6 годин після, 12 годин після, 24 години після, 36 годин після, 48 годин після, 60 годин після, 72 години після введення другого компонента. У ще інших варіантах здійснення, додаткові терапевтично активні компоненти можуть вводитися суб'єкту супутньо з введенням антитіла проти РО-1 даного винаходу. "Супутнє" введення, для цілей даного винаходу, включає, наприклад, введення антитіла проти РО-1 і додаткового терапевтично активного компонента суб'єкту в разовій дозованій формі (наприклад, спільно складеній) або в роздільних дозованих бо формах, що вводяться суб'єкту в межах приблизно 30 хвилин або менше одна від одної. Якщо
Зо введення проводять у роздільних дозованих формах, кожна дозована форма може вводитися через один і той же шлях (наприклад, як антитіло проти РО-1, так і додатковий терапевтично активний компонент можуть вводитися внутрішньовенно, підшкірно і т. д.); альтернативно, кожна дозована форма може вводитися різними шляхами (наприклад, антитіло проти РО-1 може вводитися внутрішньовенно, а додатковий терапевтично активний компонент може вводитися підшкірно). При будь-якій події, будь-яке введення компонентів у разовій дозованій формі, у роздільних дозованих формах за допомогою одного і того ж шляху або в роздільних дозованих формах за допомогою різних шляхів вважають "супутнім введенням" для цілей даного розкриття. Для цілей даного розкриття, введення антитіла проти РО-1 "перед введенням", "супутньо із введенням" або "після введення" (як ці терміни визначені в даному описі вище) додаткового терапевтично активного компонента розглядають як введення антитіла проти РО-1 "у комбінації з" додатковим терапевтично активним компонентом.
ІО183)| Даний винахід включає фармацевтичні композиції, у яких антитіло проти РО-1 даного винаходу складають лікарську форму з одним або декількома додатковими терапевтично активними компонентами, як описано в будь-якому розділі даного опису, використовуючи різноманітні комбінації дозувань. (0184) В ілюстративних варіантах здійснення, у яких антитіло проти РО-1 винаходу вводять у комбінації з антагоністом МЕСЕ (наприклад, МЕСЕ-пасткою, такою як афліберцепт), включаючи введення спільних лікарських форм, що містять антитіло проти РО-1 і антагоніст МЕСБЕ, індивідуальні компоненти можуть вводитися суб'єкту і/або спільно бути складені в лікарську форму з використанням різноманітних комбінацій дозувань. Наприклад, антитіло проти РО-1 може вводитися суб'єкту і/або міститися в спільній лікарській формі в кількості, вибраній із групи, що складається з 0,01 мг, 0,02 мг, 0,03 мг, 0,04 мг, 0,05 мг, 0,1 мг, 0,2 мг, 0,3 мг, 0,4 мг, 0,5 мг, 0,6 мг, 0,7 мг, 0,8 мг, 0,9 мг, 1,0 мг, 1,5 мг, 2,0 мг, 2,5 мг, 3,0 мг, 3,5 мг, 4,0 мг, 4,5 мг, 5,0 мг, 6,0 мг, 7,0 мг, 8,0 мг, 9,0 мг і 10,0 мг; і антагоніст МЕСЕ (наприклад, МЕСЕ-пастка, така як афліберцепт) може вводитися суб'єкту і/або міститися в спільній лікарській формі в кількості, вибраній із групи, що складається з 0,1 мг, 0,2 мг, 0,3 мг, 0,4 мг, 0,5 мг, 0,6 мг, 0,7 мг, 0,8 мг, 0,9 мг, 1,0 мг, 1,1 мг, 1,2 мг, 1,3 мг, 1,4 мг, 1,5 мг, 1,6 мг, 1,7 мг, 1,8 мг, 1,9 мг, 2,0 мг, 2,1 мг, 2,2 мг, 2,3 мг, 2,4 мг, 2,5 мг, 2,6 мг, 2,7 мг, 2,8 мг, 2,9 мг ї 3,0 мг. Комбінації/спільні лікарські форми можуть вводитися суб'єкту відповідно до будь-якого з режимів введення, розкритих де-небудь ще в даному описі, включаючи, наприклад, двічі на тиждень, однократно щотижня, однократно кожного 2 тижня, однократно кожного З тижня, однократно кожен місяць, однократно кожні 2 місяці, однократно кожні З місяці, однократно кожні 4 місяці, однократно кожні 5 місяців, однократно кожні 6 місяців і т. д.
Режими введення (0185) Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, множинні дози антитіла проти РО-1 (або фармацевтична композиція, що містить комбінацію антитіла проти РО-1 і будь- якого з додаткових терапевтично активних засобів, зазначених у даному описі) можуть вводитися суб'єкту протягом заданого періоду часу. Способи відповідно до цього аспекту винаходу включають послідовне введення суб'єкту множини доз антитіла проти РО-1 винаходу.
Як використовують у даному описі, "послідовне введення" означає, що кожну дозу антитіла проти РО-1 вводять суб'єкту в різних часових точках, наприклад у різні дні, розділені попередньо визначеним інтервалом (наприклад, годинами, днями, тижнями або місяцями).
Даний винахід включає способи, які включають послідовне введення пацієнту однократної початкової дози антитіла проти РО-1, з наступними однією або декількома вторинними дозами антитіла проти РО-1 і, необов'язково, з наступними однією або декількома третинними дозами антитіла проти РО-1. Антитіло проти РО-1 може вводитися при дозі між 0,1 мг/кг і 100 мг/кг.
І0186| Терміни "початкова доза" "вторинні дози" і "третинні дози" стосуються часової послідовності введення антитіла проти РО-1 винаходу. Таким чином, "початкова доза" є дозою, яку вводять на початку режиму лікування (також названою "вихідна доза"); "вторинні дози" являють собою дози, які вводять після початкової дози; і "третинні дози" являють собою дози, які вводять після вторинних доз. Усі початкові, вторинні і третинні дози можуть містити однакову кількість антитіла проти РО-1, але звичайно можуть відрізнятися одна від одної відносно частоти введення. У деяких варіантах здійснення, однак, кількості антитіла проти РО-1, що містяться в початкових, вторинних і/або третинних дозах, варіюють одна відносно одної (наприклад, регулюються з підвищенням або зниженням, за необхідності) у ході лікування. У деяких варіантах здійснення, дві або декілька доз (наприклад, 2, 3, 4 або 5) вводять на початку режиму лікування як "навантажувальні дози", супроводжувані наступними дозами, які вводять на менш частій основі (наприклад, "підтримуючі дози").
ІО187| У деяких ілюстративних варіантах здійснення даного винаходу, кожну вторинну і/або третинну дозу вводять протягом від 1 до 26 (наприклад, 1,15,2,2725,3,35,4,45,5,575,6,67, 7,7»,8,82,9, 97, 10,10, 11, 115, 12, 127, 13, 1355, 14, 145, 15, 1555, 16, 165, 17, 175, 18, 18725, 19, 1955, 20, 205, 21,21, 22,22, 23,23, 24, 245, 25, 257, 26, 2675 або більше) тижнів після безпосередньо попередньої дози. Фраза "безпосередньо попередня доза", як використовують у даному описі, означає, в послідовності множини введень, дозу антитіла проти
РО-1, яку вводять пацієнту перед введенням наступної дози в послідовності без яких-небудь проміжних доз.
ІО188) Способи відповідно до цього аспекту винаходу можуть включати введення пацієнту будь-якого числа вторинних і/або третинних доз антитіла проти РО-1. Наприклад, у деяких варіантах здійснення, пацієнту вводять тільки однократну вторинну дозу. В інших варіантах здійснення, пацієнту вводять дві або більше (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 або більше) вторинних доз. Аналогічно, у деяких варіантах здійснення, пацієнту вводять тільки єдину третинну дозу. В інших варіантах здійснення, пацієнту вводять дві або більше (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 або більше) третинних доз.
І0189) У варіантах здійснення, які включають множину вторинних доз, кожну вторинну дозу можуть вводити з такою же частотою, як для інших вторинних доз. Наприклад, кожна вторинна доза може вводитися пацієнту через 1-2 тижні або 1-2 місяці після безпосередньо попередньої дози. Аналогічно, у варіантах здійснення, які включають множину третинних доз, кожна третинна доза може вводитися з тією же частотою, як і інші третинні дози. Наприклад, кожна третинна доза може вводитися пацієнту через 2-12 тижнів після безпосередньо попередньої дози. У деяких варіантах здійснення винаходу, частота, з якою вторинні і/або третинні дози вводять пацієнту, може варіювати протягом проходження режиму лікування. Частота введення може також регулюватися в ході лікування терапевтом залежно від потреб індивідуального пацієнта після клінічного обстеження. 0190) Даний винахід включає введення режимів, при яких від 2 до 6 навантажувальних доз вводять пацієнту при першій частоті (наприклад, однократно на тиждень, однократно кожні два тижні, однократно кожні три тижні, однократно на місяць, однократно кожні два місяці і т. д.), З наступним введенням двох або більше підтримуючих доз пацієнту на менш частій основі.
Наприклад, відповідно до цього аспекту винаходу, якщо навантажувальні дози вводять при частоті, що дорівнює, наприклад, один раз на місяць (наприклад, дві, три, чотири або більше навантажувальних доз, що вводяться один раз на місяць), тоді підтримуючі дози можуть вводитися пацієнту однократно кожні п'ять тижнів, однократно кожні шість тижнів, однократно кожні сім тижнів, однократно кожних вісім тижнів, однократно кожних десять тижнів, однократно кожних дванадцять тижнів і т. д.).
Діагностичні застосування антитіл 0191) Антитіла проти РО-1 даного винаходу можуть застосовуватися для виявлення і/або вимірювання РО-1 у зразку, наприклад, для цілей діагностики. Декілька варіантів здійснення передбачають застосування одного або декількох антитіл даного винаходу в аналітичних тестах для виявлення захворювання або розладу, такого як злоякісне новоутворення, аутоімунне захворювання або хронічна вірусна інфекція. Ілюстративні діагностичні аналітичні тести для РО- 1 можуть включати в себе, наприклад, контактування зразка, одержаного від пацієнта, з антитілом проти РО-1 винаходу, де антитіло проти РО-1 є міченим виявлюваною міткою або репортерною молекулою або застосовується як іммобілізований ліганд для селективного виділення РО-1 зі зразків пацієнта. Альтернативно, немічене антитіло проти РО-1 може застосовуватися в діагностичних додатках у комбінації з вторинним антитілом, яке саме є виявлювано міченим. Виявлювана мітка або репортерна молекула може являти собою радіоактивний ізотоп, такий як ЗН, 7560, 32Р, 555 або 7129І; флуоресцентний або хемілюмінесцентний фрагмент, такий як ізоціанат флуоресцеїну або родамін; або фермент, такий як лужна фосфатаза, ВД-галактозидаза, пероксидаза хрону або люцифераза. Специфічні ілюстративні аналітичні тести, які можуть застосовуватися для виявлення або вимірювання РО- 1 у зразку, включають фермент-зв'язаний імуносорбентний аналіз (ЕГІЗА), радіоіїмунологічний аналіз (РІА) і сортування клітин з активованою флуоресценцією (ЕАС5).
ІО192| Зразки, які можуть застосовуватися в діагностичних аналітичних тестах на РО-1 відповідно до даного винаходу, включають будь-який зразок тканини або рідкого середовища, одержуваний від пацієнта, що містить виявлювані кількості або білка РО-1, або його фрагментів при нормальних або патологічних станах. Звичайно, рівні РО-1 у конкретному зразку, одержаному від здорового пацієнта (наприклад, пацієнта, не ураженого злоякісним новоутворенням або аутоїмунним захворюванням), будуть вимірюватися, щоб спочатку бо установити вихідний або стандартний рівень РО-1. Цей вихідний рівень РО-1 може потім порівнюватися з рівнями РО-1, вимірюваними в зразках, одержаних від індивідуумів з підозрою на стан, що належить до злоякісного новоутворення, або симптомами, асоційованими з таким станом. 0193) Антитіла, специфічні до РО-1, можуть не містити додаткових міток або фрагментів або вони можуть містити М-кінцеву або С-кінцеву мітку або фрагмент. В одному варіанті здійснення, мітка або фрагмент являє собою біотин. В аналітичному тесті на зв'язування, розташування мітки (при її наявності) може визначати орієнтацію пептиду відносно поверхні, з якою пептид зв'язаний. Наприклад, якщо поверхня покрита авідином, пептид, що містить М- кінцевий біотин, буде орієнтований таким чином, що С-кінцева частина пептиду буде віддалена від поверхні.
І0194| Аспекти винаходу стосуються застосування розкритих антитіл як маркерів для прогнозування злоякісного новоутворення або аутоїмунного розладу у пацієнтів. Антитіла даного винаходу можуть застосовуватися в діагностичних аналітичних тестах для оцінки прогнозування злоякісного новоутворення у пацієнта і для прогнозування виживаності.
ПРИКЛАДИ
0195) Наступні приклади пропонуються, щоб, таким чином, надати рядовим фахівцям в даній галузі повне розкриття й опис того, як здійснити і застосувати способи і композиції винаходу, і не призначені для обмеження обсягу того, що автори вважають їх винаходом. Були зроблені спроби забезпечити точність відносно застосовуваних числових значень (наприклад, кількостей, температури і т. д.), але варто брати до уваги деякі експериментальні помилки і відхилення. Якщо не зазначено інакше, частини являють собою масові частини, молекулярна маса являє собою середню молекулярну масу, температура наводиться в градусах по шкалі
Цельсія, кімнатна температура дорівнює приблизно 25 "С і тиск є атмосферним або близьким до атмосферного.
Приклад 1. Генерація людських антитіл до РО-1
І0196| Людські антитіла до РО-1 генерували, використовуючи фрагмент РО-1, що знаходиться в приблизному інтервалі амінокислот 25-170 з послідовності зепВапк з обліковим номером МР 005009,2 (ЗЕО ІЮО МО: 327) зі зміною С935. Імуноген вводили безпосередньо, з ад'ювантом, щоб стимулювати імунну відповідь, мишам МЕГОСІММИОМЕФ, що містять ДНК,
Зо кодуючу важкий ланцюг і каппа-область варіабельної області легкого ланцюга людського імуноглобуліну. Імунну відповідь антитіл реєстрували за допомогою РО-1-специфічного імунологічного аналізу. Коли досягали бажаної імунної відповіді, спленоцити збирали і гібридизували з клітинами мишачої мієломи, щоб зберегти їх життєздатність і утворити клітинні лінії гібридоми. Клітинні лінії гібридоми піддавали скринінгу і відбирали, щоб ідентифікувати клітинні лінії, які продукують РО-1-специфічні антитіла. З використанням даного методу і імуногена, описаного вище, були одержані декілька химерних антитіл проти РО-1 (тобто антитіл, які мають людські варіабельні домени і мишачі константні домени); ілюстративні антитіла, генеровані таким чином, були позначені як НІМ7789М, НІМ7799М, НІМ7800М, Н2М7780М, нагм77в88мМм, Н2гмМ7790М, Н2М7791М, Н2мМ7794М, Н2М7795М, Н2гМ7796 ії НаМ7798М.
І0197| Антитіла проти РО-1 також ізолювали безпосередньо з антигенпозитивних В-клітин без гібридизації з клітинами мієломи, як описано в 0.5. 2007/0280945А1, повністю спеціально включеній в даний опис за допомогою посилання. З використанням цього методу одержали декілька повністю людських антитіл проти РО-1 (тобто антитіл, які мають людські варіабельні домени і людські константні домени); ілюстративні антитіла, генеровані таким чином, були позначені наступним чином: НІНУЗОТ9Р, НіхНУОЗаР2, НаіхНООЗ5Р2, НаХхНЗОЗ7Р2, НаХНОО45Р2,
Нахноб48Р2, Н4НЗО57Р2, НАНЗООбВР2, НахНУ1Т19Р2, НахНОУ1Т20Р2, НахНУТ28Р2, Нахно135Р2,
Нахно145Р2, Н4хНВ8992Р, НаХхнНВ8999Р і НахНУООВР. 0198) Біологічні властивості ілюстративних антитіл, генерованих відповідно до методів даного Прикладу, описані докладно в Прикладах, наведених нижче.
Приклад 2. Амінокислотні і нуклеотидні послідовності важкого ланцюга і варіабельної області легкого ланцюга 0199) У Таблиці 1 наведені ідентифікатори амінокислотних послідовностей важкого ланцюга і варіабельних областей легкого ланцюга і СОК вибраних антитіл проти РО-1 винаходу.
Ідентифікатори відповідних послідовностей нуклеїнових кислот наведені в Таблиці 2.
Таблиця 1
Ідентифікатори амінокислотних послідовностей ниІнн;ИИсИннНшшиоі сни нім7789Мм | 2 | 4 | 6 | 8 | ло | 12 | 14 | 16 нам7780м | 50 | 52 | 5 | 56 | 58 | 60 | 62 | 64 нагм7788м | 66 | 68 | 70 | 72 | 74 | 76 | 78 | 80 нагм7790м | 82. | 84 | 86 | 88 | 90 | 92 | 94 | 96 нагм779їм | 98 | 700 / 102 | 704 | лоб | 108 | 110 | 112
Таблиця 2
Ідентифікатори послідовностей нуклеїнових кислот 11111111 5БОЮМо 777111 нім7789Мм | 1 | з | 5 1 7 1 9 | п | 13 | 5 нам7788м | 65 | 67 | 69 | 7 | 73 | 75 | 77 | 79 нагм7790м | 81 | 83 | 85 | 87 | 89 | 91 | 93 | 55 нагм7791м 1 97 | 99 | 101 | 103 | 705 | 707 | 709 | 11
Продовження Таблиці 2
ІЇ0200| Антитіла типовим чином іменуються в даному описі згідно з наступною номенклатурою: приставка Ес (наприклад, "НахХН", "НІМ", "Н2М" і т. д.), з наступним числовим ідентифікатором (наприклад, "7789", "7799" ії т. д., як показано в Таблиці 1), з наступним суфіксом "Р", "Р2", "М" або "В". Таким чином, відповідно до даної номенклатури, антитіло може іменуватися в даному описі як, наприклад, "НІН7789М", "НІМ7799М", "Н2гМ7780М" і т. д.
Приставки НАХН, НІМ, Н2М їі Нгам у позначеннях антитіла, застосовувані в даному описі, указують на конкретний ізотип області Ес антитіла. Наприклад, антитіло "Ні4хХН" має Ес людського Ідс4 з 2 або більше змінами амінокислот, як розкрито в 5 20100331527, антитіло "НІМ" має Ес мишачого ІДС і антитіло "НМ" має Ес мишачого ІдсСе (ізотип а або Б) (усі варіабельні області повністю є людськими, як позначено першою "Н' у позначенні антитіла). Як буде зрозуміло рядовому фахівцю в даній галузі, антитіло, що має конкретний ізотип Ес, може бути перетворене в антитіло з відмінним ізотипом Ес (наприклад, антитіло з Ес мишачого да може бути перетворене в антитіло з людським Ід і т. д.), але при будь-якій події, варіабельні домени (що включають СОК) - які зазначені за допомогою числових ідентифікаторів, показаних у Таблиці 1, - будуть залишатися такими ж і очікується, що властивості зв'язування з анетигеном будуть ідентичними або по суті аналогічними, незалежно від природи домену Ес. 02011 У деяких варіантах здійснення, вибрані антитіла з Ес мишачого ІдС1 були перетворені в антитіла з Ес людського ІдД24. В одному варіанті здійснення, домен Ес Ідс24 містить мутацію серину в пролін у шарнірній області (5108Р) для ініціації стабілізації димеру. У Таблиці З наведені ідентифікатори амінокислотних послідовностей послідовностей важкого ланцюга і легкого ланцюга вибраних антитіл проти РО-1 з Ес людського да.
Таблиця З 11111111 5БОЮМ СС (0202) Кожна послідовність важкого ланцюга в Таблиці З містила варіабельну область (Мн або НСМЕК; що містить НСОКІ1, НСОКЗ2 і НСОКЗ) і константну область (що містить домени Сні,
Снаг і Сн3). Кожна послідовність легкого ланцюга в Таблиці З містила варіабельну область (Мі або І! СМЕ; що містить ЇСОКІ, І СОКа2 і | СОКЗ) і константну область (Сі). 5ЕО ІЮ МО: 330 містила НСМК, що містить амінокислоти 1-117, і константну область, що містить амінокислоти 118-444. 56О ІЮО МО: 331 містила І СУК, що містить амінокислоти 1-107, і константну область, що містить амінокислоти 108-214. 5ЕО ІЮ МО: 332 містила НСМК, що містить амінокислоти 1- 122, і константну область, що містить амінокислоти 123-449. 5ЕО ІЮ МО: 333 містила СУМ, що містить амінокислоти 1-107, і константну область, що містить амінокислоти 108-214. 5ЕО ІЮ МО: 334 містила НОСМЕК, що містить амінокислоти 1-119, і константну область, що містить амінокислоти 120-446. 5ЕБО І МО: 335 містила !СМК, що містить амінокислоти 1-108, і константну область, що містить амінокислоти 109-215. 5БО ІЮ МО: 336 містила НСМК, що містить амінокислоти 1-121, і константну область, що містить амінокислоти 122-448. 5ЕО ІЮ МО: 337 містила ГСМК, що містить амінокислоти 1-108, і константну область, що містить амінокислоти 109-215.
Приклад 3. Зв'язування антитіла з РО-1, визначене за допомогою поверхневого плазмонного резонансу
І0203| Константи швидкості асоціації і дисоціації при зв'язуванні (Ка і Ка, відповідно), рівноважні константи дисоціації і періоди половинної дисоціації (Ко і ї», відповідно) для зв'язування антигену з очищеними антитілами проти РО-1 визначали з використанням аналітичного біосенсорного тесту методом поверхневого плазмонного резонансу в режимі реального часу на приладі Віасоге 4000 або Віасоге Т200. Поверхню датчика Віасоге дериватизували або поліклональними кролячими проти мишачих антитілами (СЕ, ЖВК-1008-38), або моноклональними мишачими проти людських Ес антитілами (ЗЕ, ЖВК-1008-39) для захоплення приблизно 100-900 КО моноклональних антитіл проти РО-1, експресованих разом або з мишачим Ес, або з людським Ес, відповідно. Реагенти на РО-1, тестовані на зв'язування з антитілами проти РО-1, включали рекомбінантний РО-1 людини, експресований з С-кінцневою тус-тус-гексагістидиновою міткою (ПРО-1-ММН; 5ЕО ІО МО: 321), рекомбінантний РО-1 мавп- макак, експресований з С-кінцевою тус-тус-гексагістидиновою міткою (МГРО-1-ММН; 5ЕО І
МО: 322), димер рекомбінантного РО-1 людини, експресований або з С-кінцевою Ес-міткою мишачого ІдСга (ПРО-1-тЕе; БЕО ІО МО: 323) або з С-кінцевим Ес людського ІДС (ПРО-1-пЕс;
ЗЕО ІО МО: 324), і РО-1 мавпи з тес (ЗЕО ІЮО МО: 329). Різні концентрації реагентів на РО-1 в інтервалі від 200 нМ до 3,7 нМ інжектували над поверхнею захоплення моноклонального антитіла проти РО-1 при швидкості потоку, що дорівнює 30 мкл/хв. на Віасоге 4000 або 50 мкл/хв. на Віасоге 7200. Зв'язування реагентів на РО-1 із захопленими моноклональними антитілами реєстрували протягом 3-5 хвилин, у той час як їх дисоціацію з антитіл реєстрували протягом 7-10 хвилин у рухомому буфері НВЗТ (0,01М НЕРЕЗ, рН 7,4, 0,15М Масі, З мМ ЕОТА, 0,05 95 об./06б. поверхнево-активної речовини Р20). Експерименти проводили при 25 "С і 37 "б.
Кінетичні константи швидкості асоціації (Ка) і дисоціації (Ка) визначали за допомогою обробки й апроксимації даних до моделі зв'язування 1:11 з використанням програмного забезпечення
Зо Зстпиррег 2,0с для підбору апроксимуючої кривої. Рівноважні константи дисоціації при зв'язуванні (Ко) і періоди половинної дисоціації (15) потім обчислювали з кінетичних констант швидкості як: Ко (М) - Ка/Ка і 5 (хв.) - Пп2/(бОжКа)|. Параметри кінетики зв'язування для різних моноклональних антитіл проти РО-1, що зв'язуються з різними реагентами на РО-1 при 25С і 37 "С, зведені в Таблиці 4-11.
Таблиця 4
Параметри кінетики зв'язування моноклональних антитіл проти РО-1, що зв'язуються з людським РО-1-ММН при 257С - Ка Ка Ко 5 нгам7796М | 6,73Е403 | 193203 | 286е07 | 60 нім7799м | 504Еч04 | ї23Е02 | 244е07 | 09
Зб
Продовження Таблиці 4 онанео57Ра | 4,60е404 | 134602 | 291207. | 09 снахнетябР2 | 347Е404 | 134303 | З85е08 | 86 нанто»ма | 635Еч404 | 148603 | 233208 | 8 ( «МВ вказує на те, що, при експериментальних умовах, реагент на РО-1 не зв'язувався з захопленим моноклональним антитілом проти РО-1.
Таблиця 5
Параметри кінетики зв'язування моноклональних антитіл проти РО-1, що зв'язуються з людським РО-1-ММН при 37 "С - Ка Ка Ко то
Продовження Таблиці 5 снахнетябР2 00 Ту31ЕЮ5 | т2зЕ02 | 940608 | 09 г Ф «МВ вказує на те, що, при експериментальних умовах, реагент на РО-1 не зв'язувався з захопленим моноклональним антитілом проти РО-1. ІС вказує на те, що, при експериментальних умовах, зв'язування з РО-1 є неостаточним.
Таблиця 6
Параметри кінетики зв'язування моноклональних антитіл проти РО-1, що зв'язуються з димером людського РО-1 (людський РО-1-тЕс або людський РО-1-пЕс) при 2570 - Ка Ка Ко 5 онахнео37Р | Т,БОЕчО5 | ї29е04 | 8баЕлЛО | 89 2 Ф онахнвеяеР | 0 5.55Еч405 | ї20Б04 | 2л7ЕлЛО | 96 Ф
Таблиця 7
Параметри кінетики зв'язування моноклональних антитіл проти РО-1, що зв'язуються з димером людського РО-1 (людський РО-1-тЕс або людський РО-1-пЕс) при 37 "С - Ка Ка Ко 5
Таблиця 8
Параметри кінетики зв'язування моноклональних антитіл проти РО-1, що зв'язуються з МІРО-1-ММН при 257 - Ка Ка Ко 5
Продовження Таблиці 8 нім7799Мм | 578Еч04 | 13002 | 224е07 | 09 онанео57Ра | 346Еч404 | 19102 | 5507 | 06 снахнетіеР2 | 750404 | 6603 | 22208 | 69 нанто»ма | 6,59Е404 | ї148Б03 | 22408 | 8 «МВ вказує на те, що, при експериментальних умовах, реагент на РО-1 не зв'язувався з захопленим моноклональним антитілом проти РО-1.
Таблиця 9
Параметри кінетики зв'язування моноклональних антитіл проти РО-1, що зв'язуються з МІРО-1-ММН при 37 "С - Ка Ка Ко то нгам779їмМ | 3,79Е404 | 9103 | 5ОБЕе08 | 60 2 щ вБФ0 нгам7794М | 6,66Е404 | 20102 | 302Ее07 | 06 (нахнетіеР2 | 240405 | ї23е02 | 5лаБо8 | 09
Продовження Таблиці 9 онахнетзбР2 | 4,62Е405 | 134302 | 289г08. | щ- 09 снахнетябР2 | 0 Л.71Еч.05 | ї143Е02 | 857208 | 08 снахнеоовР | 586Е:05 | 13802 | 23508 | 08 «МВ вказує на те, що, при експериментальних умовах, реагент на РО-1 не зв'язувався з захопленим моноклональним антитілом проти РО-1. ІС вказує на те, що, при експериментальних умовах, зв'язування з РО-1 є неостаточним.
Таблиця 10
Параметри кінетики зв'язування моноклональних антитіл проти РО-1, що зв'язуються з димером РО-1 мавпи (РО-1-тЕс мавпи) при 2570
Кількість 100 нм 4 тАБ (ВИ тес мавпи (КО) " нахнеодоР | 202 | 78 Щ|9,78Е.404| 16804 | 17209 Й 69 нантло»ємМма | 204. | 60 | 160ЕЮ5| 9922-05 | беоїЕЛО | 116
Таблиця 11
Параметри кінетики зв'язування моноклональних антитіл проти РО-1, що зв'язуються з димером РО-1 мавпи (РО-1-тЕс мавпи) при 37 "С
Кількість 100 нм 4 тАБ (НО тес мавпи (КО Я нанеотеР | 89 | 36 | 8лебЕнОї |25ОЕ-04| 309 | 45 нахнеодоР | 161 | 65 | 2А1ЕО5 | 136Е-03| 56ббе09| 8 нанеоваР2 | 90 2 ЮЩ | 6 | ї21Е05 | 1,05Е-02| 863Е08| 1 снахнеттеРа | 98 2 | 40 | 279Е405 |885Е-04| 37/09 | 13 онахнетавР2 | 148 | 60 | 187Е405 |8л6Е-04| 43609 | 14 нахнвеяаР | 206 | 86 | 350Е05 |1,53Е-03| 43809 | 8 нахнеровР | 216. | 98) 2одЕО5 |100Е-0Б5х| 490Б-11 | 155» «Вказує на те, що, при використовуваних експериментальних умовах дисоціації, реагент на
РО-1 не спостерігали і значення Ка вручну фіксували при 1,00Е-05. (0204) Як показано в Таблиці 4, при 25 "С, 28 з 29 антитіл проти РО-1 винаходу зв'язувалися з ПРО-1-ММН зі значеннями Ко в інтервалі від 2,1 нМ до 291 нМ. Одне антитіло, НАНЗОбВР, не демонструвало якого-небудь вимірюваного зв'язування з ПРО-1-ММН при 25 "С. Як показано в
Таблиці 5, при 37 С, 26 з 29 антитіл проти РО-1 винаходу зв'язувалися з ПРО-1-ММН зі значеннями Ко в інтервалі від 3,79 нМ до 1,51 мкМ. Три антитіла винаходу не демонстрували якого-небудь переконливого зв'язування з ПРО-1-ММН при 37 "С. Як показано в Таблиці 6, при 25 "С, усі 29 антитіл проти РО-1 винаходу зв'язувалися з білками димеру ПРО-1 зі значеннями
Ко в інтервалі від 65,5 пМ до 59,4 нМ. Як показано в Таблиці 7, при 37 "С, усі 27 антитіл винаходу проти РО-1 зв'язувалися з білками димеру ПРО-1 зі значеннями Ко в інтервалі від 3,09
ПМ до 551 нМ. Як показано в Таблиці 8, при 25 С, 27 з 29 антитіл винаходу проти РО-1 зв'язувалися з МІРО-1-ММН зі значеннями Ко в інтервалі від 3,09 нМ до 551 НМ. Два антитіла винаходу не демонстрували якого-небудь переконливого зв'язування з МІРО-1-ММН при 25 76.
Як показано в Таблиці 9, при 37 "С, 25 з 29 антитіл винаходу проти РО-1 зв'язувалися з МІРО-1-
ММН зі значеннями Ко в інтервалі від 7,00 нМ до 7,54 мкМ. Чотири антитіла винаходу не демонстрували якого-небудь переконливого зв'язування з МІРО-1-ММН при 37 "С. Як показано в Таблиці 10, при 25 "С, усі 18 тестованих антитіл проти РО-1 винаходу зв'язувалися з димером
МІРО-1 зі значеннями Ко в інтервалі від 137 пМ до 54,2 НМ. Як показано в Таблиці 11, при 37 "С, усі 18 тестованих антитіл винаходу проти РО-1 зв'язувалися з димером МІРО-1 зі значеннями Ко в інтервалі від менше ніж 49 пМ до 86,3 НМ.
Приклад 4. Блокування зв'язування РО-1 з РО-І 1, визначене за допомогою ЕГІЗА 02051) Здатність антитіл проти РО-1 блокувати зв'язування РО-1 людини з його лігандом,
РО-І1-рецептором, вимірювали, використовуючи три конкурентних формати сендвіч-ЕЇ ІЗА.
Димерні людські білки РО-І/1, що складаються з частини позаклітинного домену людського РО- 1, експресованого або з С-кінцевою міткою людського Ес (пПРО-Ї1-пЕс; 5ЕО І: 325), або з С- кінцевою міткою мишачого Ес (пРО-Ї1-тЕс; 5ЕО І0: 326), або димерний людський РО-І2, що складається з позаклітинної області людського РО-Ї2, одержаний з С-кінцевою міткою людського Ес (ПРО-/2-пЕс; НЕО бЗувієтв, 41224-РІ), роздільно вносили при концентрації, що дорівнює 2 мкг/мл, у РВ5 у 96-ямковий планшет для мікротитрування і залишали протягом ночі при 4 "С. Ділянки неспецифічного зв'язування послідовно блокували, використовуючи 0,5 95 (мас./о0б.) розчин ВЗА у РВ5. У першому конкурентному форматі, постійну концентрацію, що дорівнює 1,5 НМ, димерного білка РО-1 людини, що містить позаклітинний домен РО-1 людини, експресований з С-кінцевою міткою мишачого Ес (ПРО-1-тЕс; 5ЕО ІО: 323), додавали до серійних розведень антитіл проти РО-1 або антитіл ізотипічного контролю таким чином, що кінцеві концентрації антитіл знаходилися в інтервалі від 0 до 200 нМ. В другому конкурентному форматі, постійну концентрацію, що дорівнює 200 пМ, димерного біотинільованого білка РО-1 людини, що містить позаклітинний домен РО-1 людини, який експресувався з С-кінцевою міткою людського Ес (ріої-пРО-1-пЕс; 5ЕО І: 323), аналогічно додавали до серійних розведень антитіл проти РО-1 або антитіл ізотипічного контролю при кінцевих концентраціях антитіл в інтервалі від
О до 50 нМ. У третьому конкурентному форматі, постійну концентрацію, що дорівнює 100 пМ, димерного білка ПРО-1-тЕс аналогічно додавали до серійних розведень антитіл проти РО-1 або ізотипічних контролів при кінцевих концентраціях антитіл в інтервалі від 0 до 100 нМ. Ці комплекси антитіло-білок потім інкубували протягом 1 години при кімнатній температурі (КТ).
Комплекси антитіло-білок з 1,5 нМ константної НРО-1-тЕс переносили в планшети для мікротитрування, покриті ПРО-І 1-пЕс, комплекси антитіло-білок з 200 пМ константної Біої-пРО-1-
ПЕС переносили в планшети, покриті ПРО-І 1-тЕс, і комплекси антитіло-білок з 100 пМ константної ПРО-1-птЕс переносили в планшети для мікротитрування, покриті ПРО-Ї 2-ПЕс. Після інкубації протягом 1 години при КТ, ямки промивали, і зв'язаний із планшетом ПРО-1-тЕс виявляли разом з поліклональним антитілом проти тЕс, кон'югованим з пероксидазою хрону (НАР) (Шаскзоп ІттипоНезеагсі Іпс., 2115-035-164), і зв'язаний із планшетом Біог-пРО-1-пЕс виявляли разом зі стрептавідином, кон'югованим з НКР (Тпепто Зсіепійіс, ЖМ200). Зразки проявляли розчином ТМВ (ВО Віозсіепсе5, Ж51-2606КС і йЖ51-2607КС) для одержання колориметричної реакції і потім проявлення кольору стабілізували додаванням 1М сірчаної кислоти перед виміром поглинання при 450 нм на зчитувальному пристрої для планшетів Місіог
Х5. Аналіз даних проводили, використовуючи сигмовидну модель доза-відповідь у програмному забезпеченні Ргізт"м ((згарпРай). Розраховане значення ІСхо, визначуване як концентрація антитіла, необхідна для зниження на 50 95 зв'язування РО-1 людини з людськими РО-1 1 або РО-
Зо Ї2, застосовували як показник активності блокування потенційної активності. Відсоток максимальної блокади розраховували як міру вимірювання здатності антитіла повністю блокувати зв'язування РО-1 людини з людськими РО-1І1 або РО-І2 на планшеті, як визначають по дозовій кривій. Даний відсоток максимального блокування розраховували за допомогою віднімання з 100 95 відношення зниження сигналу, спостережуваного в присутності найвищої тестованої концентрації для кожного антитіла, відносно відмінності між сигналом, спостережуваним для зразка РО-1 людини, що не містить антитіла проти РО-1 (0 95 блокування), і фонового сигналу від НКР-кон'югованого вторинного антитіла окремо (100 95 блокування).
І0206| Відсоткове максимальне блокування і розраховані значення ІСсо для блокування антитілом, більшого, ніж 35 95 від сигналу зв'язування ПРО-1, показані в Таблицях 12-14.
Антитіла, які показали зниження сигналу зв'язування ПРО-1, що дорівнює 35 96 або менше, визначали як неблокатори. Антитіла, які показали збільшення, що дорівнює 35 95 або більше, сигналу зв'язування РО-1 людини, характеризували як неблокатори/енхансери. Теоретична нижня межа тесту, визначувана як мінімальна концентрація антитіла, теоретично необхідна для заняття 50 95 ділянок зв'язування РО-1 людини в тесті, складає 0,75 нМ для формату з використанням постійного 1,5 нМ пРО-1-тЕс, 100 пМ для формату з використанням постійного 200 пМ біот-пРО-1-пЕс і 50 пМ для формату з використанням постійного 100 ПМ пРО-1-тЕс, указуючи на те, що більш низькі розраховані значення ІС5о можуть не представляти кількісну ділянку зв'язування білок-антитіло. З цієї причини, антитіла з розрахованими значеннями ІСобо, меншими ніж 0,75 нМ, у тесті з постійним ПРО-1-тЕс і покриттям ПРО-І1, меншим ніж 100 пМ, у тесті з постійним біот-ПРО-1-пЕс і покриттям ПРО-І1, меншими ніж 50 пМ, у тесті з постійним
ПРО-1-тЕс і покриттям ПРО-12 наведені в Таблицях 12-14 як «7,5Е-10ОМ, «1,0БЕ-1ОМ ї «5,0БЕ-11М, відповідно.
Таблиця 12
Блокування зв'язування РО-1 людини з людським РО-Ї 1 під дією антитіл проти РО-1 за результатами ЕГІЗА . Блокування зв'язування 1,5 нм Блокування зв'язування 200 нм
Антитіло НРО-1-тЕс з ПРО-І 1-НЕс ІСво (м) антитіла 1,5 НМ пПРО-1-тЕс з пРО-Ї 1- " ПЕС, 90 блокування нанеоеР 77777778 0977777777Ї777771717171717171717171711198111111сСсСсС1 нахнеозаР | 77777777 БИЛЕЛОЇ | 77777777771717171717981111117с121 нахнебдьР | 77777777 28ВЕЛОЇ | 77777777771717171717171798111117сСс21 нахнетаоРа | 77777777 ЛоБ09 | 7777777171717171717171798111111сСс21 нахнетавР | 77777777 бАЕЛОЇ | 7777777777771717171798111117сСс21 нахнеозьР. | 77777777 бло | 77777777771717171717171799111111с1 нахнетяьРа | 77777777 98БЛО | 777777777717171717171171901111111сСс21 у нанеобуРа 7 Ї77777777711евює /1777111111111111119811
Теоретична нижня межа тесту: для блокування ЕГІЗА з постійним ПРО-1-тЕс і покриттям
ПРО-1 складає 7,5Е-1ОМ; (ж) - нижче теоретичної нижньої межі тесту;
МТ- не тестували; МВІ - неблокатор;
МВІ/енхансер - неблокатор/енхансер; ІС - непереконливий.
Таблиця 13
Блокування зв'язування біотинільованого РО-1 людини з людським РО-11 антитілами проти РО-1 за даними ЕГІЗА
Блокування 200 пМ зв'язування | Блокування 50 нМ антитіла зв'язування
ІСво (М блокування нахнеоза. 17771111 бввлія/1777771111111111111961111сСс1СС нахнетгоРа 17777111 39 Ї777777771717171717171717171961111СсС1С нахнетзвРа 17777115 Ї7777777777171717171717171796111СсС1 нахнаттярао//////|7777777111вавлтя | 77777777777717171717179611111СсС21С нім7ЯвеМ 7777/1771 МВІ Її 77777777771717111717191111111111 нгам779ом ////77777/1777111111111тевЛО 7 Ї777777171717171717171717171991111111171 нгам7794М 7777/1771 аз Ї77777717171717171111199111111с1
Нгам/7я5ма 77777111 вбевлія ЇЇ 77777777777171717171717991111с1С
ЕР ЕТИ ЛК Я ПО сте : ПОН ОО ст ПО німувоюмМ 77777711 ббвлія | 77777777717171717171717179911111с1С
Теоретична нижня межа тесту: для блокування за даними ЕГІЗА з постійним біот-пРО-1-тЕс і покриттям ПРО-11 складає 1,0Е-10М; (ж) - нижче теоретичної нижньої межі тесту;
МТ- не тестували; МВІ - неблокатор;
МВІ/енхансер - неблокатор/енхансер; ІС - неостаточний.
Таблиця 14
Блокування зв'язування РО-1 людини з людським
РО-І2 антитілами проти РО-1 за даними ЕГІЗА
Антитіло Блокування 100 пМ зв'язування зв'язування 100 ПМ ПРО ТЕС з ПРО-
ПРО-1-тЕс з ПРО-І 2-НЕс, ІСво (М) | 2-пЕс, 95 блокування нахнебдвР2 | 77777771 лЯвЛО | 77777777777171717171719877777с2С
Теоретична нижня межа тесту: блокування ЕГІЗА з використанням постійного ПРО-1-тЕс і покриття ПРО-1 2 складає 5,0Е-11М;
МВІ - неблокатор.
І0207| Як зазначено в Таблиці 12, у першому форматі тесту, 23 з 27 антитіл проти РО-1 блокували 1,5 нМ пРО-1-тЕс від зв'язування з ПРО-І 1-пЕс зі значеннями ІСзо в інтервалі від 190
ПМ до 3,3 нМ, із відсотковим максимальним блокуванням в інтервалі від 67 до 100 95. Одне антитіло, Нгам7796М, було ідентифіковане як неблокатор. Три антитіла проти РО-1 (НЯНООбВР2, НІМ7789М і Нгам7791М) ідентифікували як неблокатори/енхансери.
І0208| Як показано в Таблиці 13, у другому форматі тесту, 23 з 27 антитіл проти РО-1 блокували 200 пМ біот-пРО-1-пЕс від зв'язування з ПРО-Ї 1-"тЕс зі значеннями ІСвхо в інтервалі від 59 пМ до 1,3 НМ, із відсотковим максимальним блокуванням в інтервалі від 60 95 до 101 905.
Одне антитіло, НІМ7789М, було ідентифіковане як неблокатор. Три антитіла проти РО-1 (НЯНЗОО57Р2, НАНЗОбВР2 і Нгам7791 М) ідентифікували як неблокатори/енхансери. 02091 У третьому форматі тесту, як показано в Таблиці 14, тестували чотири антитіла проти
РО-1 винаходу і ізотипічний контроль. Усі 4 антитіла проти РО-1 винаходу блокували 100 пМ (фіксована концентрація) пПРО-1-тЕс від зв'язування з покриттям ПРО-І2-пЕс на планшеті зі значеннями ІСво в інтервалі від 0,13 нМ до 1,3 НМ і з відсотковим максимальним блокуванням в інтервалі від 94 до 100 905.
Приклад 5. Блокування зв'язування РО-1 з РО-І1, визначене за допомогою біосенсорного тесту і поверхневого плазмонного резонансу 02101 Інгібування РО-1 людини від зв'язування з людським РО-Ї1 за допомогою різних моноклональних антитіл проти РО-1 досліджували, або використовуючи тест |з інтерферометрією біошару в режимі реального часу на біосенсорному приладі Осіеї Кеа96 (Гопіебіо Іпс.), або застосовуючи тест із поверхневим плазмонним резонансом біосенсора в режимі реального часу на приладі Віасоге 3000.
І0211| Дослідження інгібування моноклональних антитіл проти РО-1, експресованих з мишачим Ес, проводили на приладі Осієї Кед9б. Спочатку, 100 нМ рекомбінантного РО-1
Ко) людини, експресованого з С-кінцевою Ес-міткою мишачого ІдСсга (пРО-1-тЕс; ЗЕО І МО: 323), інкубували з 500 нМ кожного моноклонального антитіла проти РО-1 протягом щонайменше 1 години перед початком тесту на інгібування. Приблизно 0,8-1,2 нМ рекомбінантного людського
РО-І1, експресованого з С-кінцевою Ес-міткою людського ЇдДСї (пРО-І1-нЕс; 5ЕО ІЮО МО: 325), піддавалися захопленню з використанням захоплення Ес проти людського Ідсї біосенсором
Осіеї. Біосенсори Осієї, покриті ПРО-І 1-пЕс, потім занурювали в ямки, що містять суміш ПРО-1- тес і різних моноклональних антитіл проти РО-1. Весь експеримент проводили при 25"7С у буфері Осії НВЗТ (0,01М НЕРЕЗ5, рН 7,4, 0,15М Масі, З мМ ЕОТА, 0,05 95 об./06. поверхнево- активної речовини Р20, 0,1 мг/мл В5А) при струшуванні планшета зі швидкістю 1000 об./хв.
Біосенсори промивали в буфері Осієї НВ5Т між кожною стадією експерименту. Відповіді зв'язування в режимі реального часу реєстрували протягом усього проходження експерименту і відповідь зв'язування наприкінці кожної стадії записували. Зв'язування ПРО-1-тЕс із захопленим
АПРО-Г1-НпЕс порівнювали в присутності і за відсутності різних моноклональних антитіл проти РО- 1 ї використовували для визначення блокуючої поведінки тестованих антитіл, як показано в
Таблиці 15.
Таблиця 15
Інгібування зв'язування людського РО-11 з РО-1 моноклональними антитілами проти РО-1, експресованими з мишачим Ес, виміряне на приладі Осієї Кеа96
Кіпькість захоппеного Зв'язування суміші 100 нм пРО-1-
Антитіло проти РО-1 ПРО-І 1-ПЕс (НМ) тес ії 500 нМ моноклонального до блокування антитіла проти РО-1 (НМ
Безантитла | (А 077 | 7777777777171710171007.11111111111101 нгам/788М. | 7777/0747 | 7771717171717171000777777777717171711717111111001 нгам/790мМ | 7777717109077 | ...771717171700111111111111111114 нгам/у798М. | 77 085... | ....ЮюЮюЮюЮюЮюЮюЮюЮю/7л0017777171717171717171111111118в61 нім77994.ю.Й.Й.Й.ЙМЩЇ.ЮЙЮюЮЙМмь 01 171717171717171717171010007777777777111717111111001 нім/увоомМ | 7777096 | ...7юЮюЮюЮюЮюЮюЮювоо1111111111111ї111тлов1 (0212) Як показано в Таблиці 15, 9 з 11 антитіл проти РО-1, тестованих на приладі Осієї
Кеа96, демонстрували сильне блокування ПРО-1-тЕс від зв'язування з ПРО-Ї 1-ПЕс в інтервалі від 86 95 до повного блокування зв'язування. Одне тестоване антитіло проти РО-1 (НІМ7789М) показало більш слабке блокування зв'язування ПРО-1-тЕс з ПРО-Ї 1-пПЕс з 29 95 блокуванням.
Одне тестоване антитіло (Нгам7791М) демонструвало здатність підсилювати зв'язування пРО- 1-тЕс з пРО-І 1-НпЕс.
ІЇО213| Далі, дослідження інгібування для моноклональних антитіл проти РО-ї, експресованих з людським Ес, проводили на приладі Віасоге 3000. Спочатку, 100 нм рекомбінантного РО-1 людини, експресованого з С-кінцевою Ес-міткою людського да (пРО-1-
ПЕС; ЗЕО ІБ: 324), інкубували з 500 нМ кожного моноклонального антитіла проти РО-1 протягом щонайменше 2 годин до проходження тесту на інгібування. Поверхню сенсора СМ5 Віасоге спочатку дериватизували поліклональними кролячими антитілами проти мишачих антитіл (СЕ
Саїаїся йВА-1008-38), використовуючи стандартну хімію ЕОС-МН5З. Приблизно 730 КИ рекомбінантного людського РО-Ї1, експресованого з С-кінцневою Ес-міткою мишачого ІдСсСга (пРО-Г1-тЕс; 5ЕО І: 326), потім піддавали захопленню з наступною ін'єкцією 100 нм пРО-1- пес у присутності і за відсутності різних моноклональних антитіл проти РО-1 при швидкості потоку, що дорівнює 25 мкл/хв., протягом З хвилин. Весь експеримент проводили при 25 С у рухомому буфері, що містить 0,01М НЕРЕЗБ, рН 7,4, 0,15М Масі, З мМ ЕОТА, 0,05 95 об./об. поверхнево-активної речовини Тм'ееп-20 (рухомий буфер НВ5Б-ЕТ). Відповіді зв'язування в режимі реального часу реєстрували протягом всього експерименту і відповідь зв'язування наприкінці кожної стадії записували. Зв'язування ПРО-1-пЕс із захопленим ПРО-Ї1-тЕс порівнювали в присутності і за відсутності різних моноклональних антитіл проти РО-1 і застосовували для визначення блокуючої поведінки тестованих антитіл, як показано в Таблиці 16.
Таблиця 16
Інгібування зв'язування людського РО-11 з РО-1 моноклональними антитілами проти РО-1, експресованими з людським Ес, виміряне на приладі Віасоге 3000 «МЛЮЄТТ МВВ води сотня . й 1-пес і 500 нМ моноклонального бо блокування антитіло проти РО-1 | антитіла проти РО-1 (НІ) . антитіла проти РО-1 (В
Поети с лет: Тв В ПИ ОН КО: ПОН КОН х НИМИ нахнятгаоРаГ/////177777777717117111111111171111111111111111011111111111111711лоо
ПЕ ЕБти сек. ВИ ПИ: ПОН КО ОН КОН КТ: ХО нахнвеяаРГ//////17777777777711731111111171Ї111111111117121111111111117 1198 нахнвезеє Г////17777777771711711111111117Ї111111111111110111111111111111ло0
ПЕ ЕБт и лето: ел ПОН с ООН КОН КО КОН: С: ЛИН нанллявмМма /////1777777771111161111111111Ї711717171717171717171717611111111111111 11106 кети гілі: І: НИ ПО з ПОН КО ОН КОН КТ: ХІН нанеддвРаГ// С |177777777717171717ся4є1Ї1111111111716111111111111171|11194 (0214) Як показано в Таблиці 16, 18 з 20 антитіл винаходу проти РО-1, тестованих на приладі
Віасоге 3000, показали сильне блокування ПРО-1-пЕс від зв'язування з ПРО-ІЇ1-тЕс з показником блокування в інтервалі від 96 до 100 95. Одне антитіло демонструвало здатність підсилювати зв'язування ПРО-1-ПЕс з ПРО-ІЇ1-тЕс. У цьому дослідженні, одне з тестованих антитіл винаходу (Н4НУЗО57Р2) демонструвало неспецифічне фонове зв'язування з поверхню захоплення проти мишачого Ес.
Приклад 6. Перехресне конкурування між антитілами проти РО-1 на Осіеї (0215) Конкуренцію за зв'язування між моноклональними антитілами проти РО-1 визначали, використовуючи тест із інтерферометрією у режимі реального часу біошару без мітки на біосенсорі Осієї КЕОЗ384 (Раї! БопевВіо Согр.). Весь експеримент проводили при 25 "С у0,01м
НЕРЕФ5Б, рН 7,4, 0,15М Масі, З мМ ЕОТА, 0,05 95 об./06. поверхнево-активної речовини Тмееп- 20, 01 мг/мл В5А (Осіеї НВ5-ЕТ-буфер), при струшуванні планшета зі швидкістю 1000 об./хв.
Щоб оцінити, чи здатні 2 антитіла конкурувати одне з одним за зв'язування з їх відповідними епітопами на рекомбінантно експресованому РО-1 людини з С-кінцевою тус-тус- гексагістидиновою міткою (пПРО-1-ММН; 5ЕО ІЮ: 321), спочатку проводили захоплення приблизно 0,1 нм пРО-1-ММН поверхнею наконечників біосенсора Осієї, покритих антитілом проти пента-Ніз (Раї! РопевВіо Согр., 5418-5079), за допомогою занурення наконечників протягом 5 хвилин у ямки, що містять розчин 50 мкг/мл ПРО-1-ММН. Наконечники біосенсора з захопленим антигеном потім насичували першим моноклональним антитілом проти РО-1 (надалі іменованим тАр-1) за допомогою занурення в ямки, що містять розчин 50 мкг/мл тАб-1, протягом 5 хвилин. Наконечники біосенсора потім послідовно занурювали в ямки, що містять розчин 50 мкг/мл другого моноклонального антитіла проти РО-1 (надалі іменованого тАбр-г).
Наконечники біосенсора промивали в буфері Осієї НВ5-ЕТ між кожною стадією експерименту.
Відповідь зв'язування в режимі реального часу реєстрували в ході експерименту і відповідь зв'язування наприкінці кожної стадії записували. Відповідь зв'язування тАб-2 з ПРО-1-ММН, що попередньо утворило комплекс з тАбБ-1, порівнювали і визначали конкурентну/неконкурентну поведінку різних моноклональних антитіл проти РО-1. Результати узагальнені в Таблиці 17
Зо (х«Самоконкуруючі тАр-2 не наведені).
Таблиця 17
Перехресна конкуренція між парами вибраних антитіл проти РО-1
Нахнв999Р, НІМ7799М, Нгам77вомМ, НІМ780ОМ, Нгам7788М,
Нахнаооов Нгам7794М, Нгам7798М, Нахне145Р2, НаНнЗОБ57Р2, НаАХНУ120Р2,
Нахно128рР2, НАНЗОТ9Р, НаХхНУ1Т19Р2, НАХНУ1Т35Р2, НаХНУОЗаР,
Нгам7790М, НіхХНЗОЗБ5Р, НіХхНУ9ОЗ7Р, НіхНЗО45Р, Нгам7795М
Нахнво92Р, НІМ7799М, Нгам77вомМ, НІМ780ОМ, Нгам7788М,
Нгам7794М, Нгам7798М, Нахне145Р2, НаНнЗОБ57Р2, НаХНУ12ОР, нНахнвоворв Нахно128рР2, НАНЗОТ9Р, НаХНУ1Т19Р2, НАХНУ1Т35Р2, НаХНООЗа Р,
Нгам7790М, НіхХНЗОЗ5Р, НіХхНООЗ7Р, НаХхНЗО45Р, Нгам7795М, нахноровР
Нахнво92Р, НахНВ8999Р, Нгам778оМ, НІімМ780оМ, Нгам7788М, нНіІМ7799М Нгам7794М, Нгам7798М, Нахне145Р2, НаНнЗОБ57Р2, НаХНУ12ОР,
Нахно128рР2, НАНЗОТ9Р, НаХхНУ1Т19рР2, НаХхХНО135Р2, НаХНООЗа Р,
Нгам7790М, НіхХНЗОЗБ5Р, НіХхНУ9ОЗ7Р, НіхНЗО45Р, Нгам7795М
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, НІ М7800М, Нгам7788М,
Нгам7794М, Нгам7798М, Нахне145Р2, НаНнЗОБ57Р2, НаХНУ12ОР,
Нгам77вом Нахнот28рР2, НАНЗОТ9Р, НаХхНУ1Т19Р2, НАХНУ1Т35Р2, НаХНООЗа Р,
Нгам7790М, НіхХНЗОЗ5Р, НіХхНООЗ7Р, НаХхНЗО45Р, Нгам7795М, нахноровР
Нахнво92Р, НахНВ8999Р, НІМ7799М, Нгам778омМ, Нгам7788М,
Нгам7794М, Нгам7798М, Нахне145Р2, НаНнЗОБ57Р2, НаХНУ12ОР,
НтмМ780оМ Нахно128рР2, НАНЗОТ9Р, НаХхНУ1Т19Р2, НАХНУ1Т35Р2, НаХНУОЗаР,
Нгам7790М, НіхХНЗОЗ5Р, НіХхНООЗ7Р, НаХхНЗО45Р, Нгам7795М, нахноровР
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ7вооМ,
Нгам7794М, Нгам7798М, Нахне145Р2, НаНнЗОБ57Р2, НаХНУ12ОР,
Нгам778вм Нахно128рР2, НАНЗОТ9Р, НаХхНУ1Т19Р2, НАХНУ1Т35Р2, НаХНУОЗаР,
Нгам7790М, НіХхНЗОЗ5Р, НаХхНЗОЗ7Р, НахНЗО45Р, Нгам7795М,
Нгам7791М
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ7вооМ,
Нгам7788Мм, Нгам7798М, Нахне145Р2, НаНнЗОБ57Р2, НаХНУ12ОР,
Нгам7794М Нахно128рР2, НАНЗОТ9Р, НаХхНУ1Т19Р2, НАХНУ1Т35Р2, НаХНУОЗаР,
Нгам7790М, НіхХНЗОЗ5Р, НіХхНООЗ7Р, НаХхНЗО45Р, Нгам7795М, нахноровР
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ7вооМ,
Нгам7788Мм, Нгам7794М, Нахне145Р2, НаНнЗОБ57Р2, НаХНУ12ОР,
Нгам7798М Нахно128рР2, НАНЗОТ9Р, НаХхНУ1Т19Р2, НАХНУ1Т35Р2, НаХНУОЗаР,
Нгам7790М, НіхХНЗОЗ5Р, НіХхНООЗ7Р, НаХхНЗО45Р, Нгам7795М, нахноровР
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ7вооМ,
НахнНета4БРо Нгам7788Мм, Нгам7794М, Нгам7798М, На.нНЗОБ57Р2, НаХхНУ120Р2,
Нахно128рР2, НАНЗОТ9Р, НаХхНУ1Т19Р2, НАХНУ1Т35Р2, НаХНУОЗаР,
Нгам7790М, НіхНЗОЗ5Р, НіХхНУ9ОЗ7Р, НіхНЗО45Р, НаХНОООВвР
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ7вооМ,
Нгам7788Мм, Нгам7794М, Нгам7798М, НахНУ145Р2, НаХхНУ120Р2, нанзооб7р2 Нахно128рР2, НАНЗОТ9Р, НаХхНУ1Т19Р2, НАХНУ1Т35Р2, НаХНУОЗаР,
Нгам7790М, НіхХНЗОЗ5Р, НіХхНООЗ7Р, НаХхНЗО45Р, Нгам7795М,
Нгам7791Мм, НахнЗО48Р2
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ7вооМ,
Нахнеїгово Нгам7788Мм, Нгам7794М, Нгам7798М, НахНУ145Р2, Н4НЗОБ57Р2,
Нахно128рР2, НАНЗОТ9Р, НаХхНУ1Т19Р2, НАХНУ1Т35Р2, НаХНУОЗаР,
Нгам7790М, НіхХНЗОЗ5Р, НаіхНООЗ37Р, НахНЗО45Р, НахНУЗОдВР2
Продовження Таблиці 17
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ7вооМ,
Нгам7788Мм, Нгам7794М, Нгам7798М, НахНУ145Р2, Н4НЗОБ57Р2,
НахнНеО128Р2 Нахно120Р2, НАНЗОТ9Р, НаХхНУ1Т19Р2, НАХНУ1Т35Р2, НаХхНУОЗаР,
Нгам7790М, НіхХНЗОЗ5Р, НіХНУЗОЗ7Р, НаХхНЗО45Р, НаХнНОЗООВвР, нанзоббвР2, НахнОО48Р2
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ7вооМ, наноо1ор Нгам7794М, Нгам7798М, Нахне145Р2, НаНнЗОБ57Р2, НаХНУ12ОР,
Нахно128рР2, Нгам7788М, НахнНеО119Р2, НахНО1ТЗ35Р2, НаХНЗОЗа Р,
НахнНоозоР, НахНЗОЗ7Р, НахН9О45Р, Нгам7795М, Нгам7791М
Нахнво92Р, НаХхНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778о0М, НІМ780ОМ,
Нахно128Р2, Нгам7788М, Н4НЗО1Т9Р, НахНО135Р2, НаХНЗОЗа Р,
НахНоозоР, НахНЗОЗ7Р, НахНЗО45Р, Нгам7795М, Нгам7791М
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ78ООМ,
НаХНе1 БР Нгам7794М, Нгам7798М, Нахне145Р2, НаНнЗОБ57Р2, НаХНУ12ОР,
Нахно128Р2, Нгам7788М, Н4НЗО1Т9Р, НаХхнНО119Р2, НаХНЗОЗа Р,
НахНоозоР, НахНЗОЗ7Р, НахНЗО45Р, Нгам7795М, Нгам7791М
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ7вооМ,
Нгам7794М, Нгам7798М, Нахне145Р2, НаНнЗОБ57Р2, НаХхНУ12ОР,
НахноозарР Нахно1т28рР2, НАНЗОТ9Р, НаХхНУ1Т19рР2, НАХНУ1Т35Р2, Нгам7788М,
Нгам7790М, НіхХНЗОЗ5Р, НіХхНООЗ7Р, НаХхНЗО45Р, Нгам7795М,
Нгам7791М
Нахнво92Р, НІМ7799М, Нгам77вомМ, НІМ780ОМ, Нгам7788М,
Нгам7790М Нгам7794М, Нгам7798М, НахНУ145Р2, Н4НЗОБ57Р2, НаХхНУ120ОР2,
Нахно128Р2, НахНООЗарР, НахнН8999Р, НаХнНОООвВР
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ7вооМ,
Нахно128рР2, Нгам7788М, Н4НЗОТ9Р, НАХНУО1Т19Р2, НаАХхНОЗОЗаР,
Нахн9о135Р2, НахНЗОЗ7Р, НіхНУЗО45Р, Нгам7795М, Нгам7791М
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ7вооМ,
НахнооЗ7Р Нгам7794М, Нгам7798М, Нахне145Р2, НаНнЗОБ57Р2, НаХНУ12ОР,
Нахно128Р2, Нгам7788М, Н4НЗО1Т9Р, НаХхнНО119Р2, НаХНЗОЗа Р,
Нахн9о135Р2, НАхНЗОЗ5Р, НахНО0О45Р, Нгам7795М, Нгам7791М
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ7вооМ,
НахнобаБР Нгам7794М, Нгам7798М, Нахне145Р2, НаНнЗОБ57Р2, НаХНУ12ОР,
Нахно128Р2, Нгам7788М, Н4НЗО1Т9Р, НаХхнНО119Р2, НаХНЗОЗа Р,
Нахн9о135Р2, НАхНЗОЗ5Р, НіхНУЗОЗ37Р, Нгам7795М, Нгам7791М
Нахнво92Р, НахНВ999Р, НІМ7799М, Нгам778оМ, НІМ7вооМ,
Ноам795М Нгам7794М, Нгам7798М, НіНЗО57Р2, Нгам7788М, НанНЗО1ТоР,
Нахно119Р2, НаХхНЗОЗаР, НіхНУ1Т35Р2, НіХНООЗБР, НаХНЗОЗ7Р,
Нахноб45Р, Нгам7791М
Нахно128Р2, Нгам7790Мм, Н4нНеОбВР2, НІ М7799М, НахнНЗОдвРа2
НахноозаР, НахнНоозоР, НахнНЗ9ОЗ7Р, НіхН9О45Р, Нгам7795М нанзовврРаг, НІ М7799М
І0216| Другу конкуренцію за зв'язування між панеллю вибраних моноклональних антитіл проти РО-1 визначали, використовуючи тест із інтерферометрією у режимі реального часу, біошару без мітки на біосенсорі Осієї КЕОЗ384 (Раї! РопевВіо Согр.). Весь експеримент проводили при 25 "С у 0,01М НЕРЕФЗ, рн 7,4, 0,15М Масі, З мМ ЕОТА, 0,05 95 об./06. поверхнево-активної речовини Тмуееп-20, 0,1 мг/мл ВБА (Осієї НВЗ-ЕТ-буфер), при струшуванні планшета зі швидкістю 1000 об./хв. Щоб оцінити, чи здатні 2 антитіла конкурувати одне з одним за зв'язування з їх відповідними епітопами на ПРО-1-ММН, спочатку проводили захоплення приблизно 0,25 нМ пРО-1-ММН на поверхні наконечників біосенсора Осієї, покритих антитілом проти пента-Нів (Еопебіо Іпс., 2418-5079), за допомогою занурення наконечників на 150 секунд у ямки, що містять розчин 10 мкг/мл ПРО-1-ММН. Наконечники біосенсора з захопленим антигеном потім насичували першим моноклональним антитілом проти РО-1 (надалі названим тАБ-1) за допомогою занурення в ямки, що містять розчин 100 мкг/мл тАбБ-1, на 5 хвилин.
Наконечники біосенсора потім послідовно занурювали в ямки, що містять розчин 100 мкг/мл другого моноклонального антитіла проти РО-1 (надалі названого тАр-2), на 4 хвилини. Усі біосенсори промивали в буфері Осієї НВЗ-ЕТ між кожною стадією експерименту. Відповідь зв'язування в режимі реального часу реєстрували в ході експерименту і відповідь зв'язування наприкінці кожної стадії записували, як показано на Фіг. 2. Відповідь зв'язування тАбр-2 з ПРО-1-
МІМН, що попередньо утворило комплекс із тАбБ-1ї, порівнювали і визначали конкурентну/неконкурентну поведінку різних моноклональних антитіл проти РО-1. Результати узагальнені в Таблиці 18 ("Самоконкуруючі тАр-2 не наведені).
Таблиця 18
Перехресна конкуренція між парами вибраних антитіл проти РО-1
І0217| При експериментальних умовах, розкритих у даному Прикладі, Н4АН7795М2 перехресно конкурувало з Н4Н7798М; НаН7798М перехресно конкурувало з Н4Н7795М2 і
НаноООвР; НАНОООВР перехресно конкурувало з Н4Н7798М і нанзобвР2; нНАНЗОбВР2 перехресно конкурувало з НАНОООВР ї Н4НУО48Р2.
Приклад 7. Зв'язування антитіла з клітинами, надекспресуючими РО-1
І0218| Зв'язування антитіл проти РО-1 з людською лінією ембріональних клітин нирки (НЕК293; АТСС, ЯСВІ-1573), стабільно трансфікованих непроцесованим РО-1 людини (амінокислоти 1-289 з обліковим номером МР 005009.2) (НЕК293/пРО-1), визначали за допомогою ЕАС5.
І0219| Для тесту адгезивні клітини від'єднували з використанням трипсину або безферментного дисоціаційного буфера і блокували повним середовищем. Клітини центрифугували і ресуспендували при концентрації, що дорівнює 2,5-6х106 клітин/мл, у холодному РВ5, що містить 2 95 ЕВ5. Батьківські клітини НЕК293 їі клітини НЕК293З/РО-1 потім інкубували протягом 15-30 хв. на льоду з використанням 100 нМ кожного антитіла проти РО-1.
Незв'язані антитіла видаляли промиванням Ю-РВ5, що містить 2 95 ЕВ5, і клітини послідовно інкубували з алофікоціанін-кон'югованим вторинним Е(аб')», що розпізнає або людський Ес (Часквоп ІттипоВРезеагси, й109-136-170), або мишачий Ес (Часкзоп ІттипокКезеагсі, Ж115-136- 146), протягом 15-30 хвилин на льоду. Клітини промивали О-РВ5, що містить 2 95 ЕВ5, для видалення незв'язаного вторинного Б(ар)2 і вимірювання флуоресценції проводили, використовуючи або проточний цитометр НурегСуїе (ІпіеїїСуї, Іпс.), або проточний цитометр
Ассигі (ВО Віозсіепсе5). Дані аналізували, використовуючи програмне забезпечення РіІомо (Ттєе Баг).
Таблиця 19
Зв'язування антитіл проти РО-1 з клітинами НЕК29З/ПРО-1 і батьківськими клітинами НЕК293 за даними ЕАС5 клітинах НЕК293 |МЕЇ| НЕК293/пРО-1 |МНЇ) батьківських клітин НЕК29З онанеоваР2 | 285... | 7771940 17777171717111116811с1С нахнеозаР | 14777771 лов 17717171 690с1 (022091) Як показано в Таблиці 19, 25 з 27 антитіл проти РО-1 винаходу показували сильне зв'язування з клітинами НЕК293З/ПРО-1 у порівнянні зі зв'язуванням на батьківській лінії НЕК293.
Два антитіла винаходу (Нгам7795М і НАНООбВР2) зв'язувалися слабкіше з клітинами, експресуючими РО-1 людини, в порівнянні з іншими тестованими антитілами.
І(0221| Щоб додатково характеризувати антитіла винаходу проти РО-1, дозозалежне зв'язування з людською лінією ембріональних клітин нирки (НЕК293; АТСС, ЯЖСКІ-1573), стабільно трансфікованих непрцесованим РО-1 людини (амінокислоти 1-289 з обліковим номером МР 005009.2) (НЕК293/ПРО-1), визначали за допомогою ГАС5.
ІЇ0222| Для тесту адгезивні клітини від'єднували з використанням трипсину і блокували повним середовищем. Клітини центрифугували і ресуспендували при концентрації, що дорівнює бх109 клітин/мл, у забарвлюючому буфері (1 95 ЕВ5 у РВ5). Для визначення ЕсСвбо і Етах антитіл проти РО-1, 90 мкл суспензії клітин інкубували протягом 30 хвилин на льоду із серійним розведенням антитіл проти РО-1 і контролів, розведених до кінцевої концентрації в інтервалі від 5 пМ до 100 нМ (жодного зразка тАБ не було включено як негативний контроль) у забарвлюючому буфері. Клітини потім центрифугували і згустки однократно промивали забарвлюючим буфером для видалення незв'язаних антитіл. Клітини послідовно інкубували протягом 30 хвилин на льоду з алофікоціанін-кон'югованим вторинним Е(аб)г, що розпізнає людський Ес (дЧаскбоп ІтітипоКезеагсй, Ж109-136-170) або мишачий Ес (даск5оп
ІттипоНезеагси, 4115-136-071). Клітини центрифугували і згустки однократно промивали забарвлюючим буфером для видалення незв'язаного вторинного (ар), і потім фіксували протягом ночі з використанням 1:11 розведення Суїоїх (ВО Віозсіепсе5, 554655) і забарвлюючого буфера. Наступного дня, клітини центрифугували і згустки однократно промивали забарвлюючим буфером, ресуспендували й відфільтровували. Вимірювання флуоресценції проводили на цитометрі НурегсуїФ і аналізували в ЕогеСуї "м (ІпіейСує
АІридиегдие, ММ) для визначення середніх інтенсивностей флуоресценції (МЕ). Значення ЕСво розраховували по чотирипараметричному логістичному рівнянню для 11-точкової кривої відповіді, використовуючи сСгарпРаа Ргізт. Елпах для кожного антитіла визначали як зв'язування при найвищій дозі тестованого антитіла (100 нМ).
Таблиця 20
Дозозалежне РАСЗ-зв'язування антитіл проти РО-1 із клітинами НЕК29З/ПРО-1
Таблиця 21
Дозозалежне РАС5-зв'язування антитіл проти РО-1 з клітинами НЕК29З/ПРО-1 (0223) Як показано в Таблиці 20, 25 з 28 антитіл проти РО-1 винаходу показали дозозалежне зв'язування з клітинами НЕК293З/ПРО-1 зі значеннями ЕсСозо в інтервалі від 33,18 пМ до 2,59 НМ і значеннями Етах в інтервалі від 37,789 до 11,368 МЕН. Три антитіла винаходу проти РО-1 не демонстрували сильного зв'язування з клітинами НЕК29З/ПРО-1, і, отже, значення не могло бути визначене. Жоден з ізотипічних контролів не демонстрував якого-небудь вимірюваного зв'язування в даному тесті. (0224) Як показано в Таблиці 21, З з 6 антитіл проти РО-1 винаходу показали дозозалежне зв'язування з клітинами НЕК29З3/ПРО-1 зі значеннями Есозо в інтервалі від 509 пМ до 4,81 НМ і значеннями Етах в інтервалі від 39,774 до 14,111 МЕЇ. Три тестованих антитіла винаходу зв'язувалися з клітинами НЕК29З/ПРО-1, але не досягали плато. Отже, їх точні значення ЕСво не могли бути визначені і їх значення ЕСоо вважаються неостаточними. Жоден з ізотипічних контролів не демонстрував якого-небудь вимірюваного зв'язування в даному тесті.
Приклад 8. Блокування РО-1-індукованої понижувальної регуляції Т-клітин у тесті з Т- клітинним/АРС люциферазним репортером
І0225| Активація Т-клітин досягається за допомогою стимуляції Т-клітинних рецепторів (ТеВ), що розпізнають конкретні пептиди, представлені основними білками комплексу гістосумісності класу І або ІІ на антигенпрезентуючих клітинах (АРС). Активовані ТеА у свою чергу ініціюють каскад подій передачі сигналів, які можуть реєструватися репортерними генами, керованими факторами транскрипції, такими як активаторний білок 1 (АР-1), ядерний фактор активованих Т-клітин (МЕАТ) або енхансер ядерного фактора каппа-легкого ланцюга активованих В-клітин (МЕкб). Т-клітинна відповідь модулюється через мобілізацію корецепторів, експресованих або конститутивно, або індуковано на Т-клітинах. Одним таким рецептором є
РО-1, негативний регулятор Т-клітинної активності. РО-1 взаємодіє зі своїм лігандом, РО-І 1, що експресується на цільових клітинах, які включають АРС або пухлинні клітини, і діє для доставки інгібіторних сигналів за допомогою рекрутингу фосфатаз до ТеВ-сигналосоми, що приводить у результаті до пригнічення позитивної передачі сигналів. (0226) Здатність антитіл проти РО-1 антагонізувати РО-1/РО-І1-опосередковану передачу
Зо сигналів через рецептор РО-1 у людських Т-клітинних лініях оцінювали, використовуючи аналітичний тест іп міїго на клітинній основі, показаний на Фіг. 1. Біотест був розроблений для вимірювання передачі сигналів Т-клітинами, індукованої взаємодією між АРС і Т-клітинами з використанням змішаної культури, одержаної з двох клітинних ліній ссавців: клітин Юркат (лінія імморталізованих Т-клітин) і клітин Раджі (лінія В-клітин). Для першого компонента біотесту, клітини Юркат клону Еб-1 (АТОС, 2ТІВ-152) трансдукували з використанням репортера Сідпаї!
Їепії АР-1 ис (Оіадеп-Заріозсієпсе5, СІ 5-0111), відповідно до інструкцій виробника.
Лентивірус кодує ген люциферази світлячка під керуванням мінімального СММ-промотору, тандемні повтори елемента ТРА-індукованої транскрипційної відповіді («ТКЕ) і ген резистентності до пуроміцину. Сконструйовану клітинну лінію Юркат послідовно трансдукували химерою РО-1, що містить позаклітинний домен РО-1 людини (амінокислоти від 1 до 170 людського РО-1; обліковий номер МР 005009.2) і трансмембранний і цитоплазматичний домен людського СОЗО0ба (амінокислоти від 181 до 299 людського СОЗОба; обліковий номер
МР 009192.2). Одержану в результаті стабільну клітинну лінію (Юркат/АР1-І ис/пРО-1-НСОЗОба) відбирали і підтримували в КРМІ/1О 95 ЕВ5/пеніцилін/стрептоміцин/глутамін, доповненому 500 мкг/мл 5418-41 мкг/мл пуроміцину.
І0227| Для другого компонента біотесту, клітини Раджі (АТСС, ЖССІ -86) трансдукували з використанням людського гена РО-І1 (амінокислоти 1-290; обліковий номер МР 054862.1), які клонували в лентивірусну (р ЕХ) векторну систему (Тпегто Зсіепійіс Віозузіетв5, 2ЖОНБЗ4А735).
Клітини Раджі, позитивні до РО-Ї1 (Раджі/!РО-Ї1), ізолювали за допомогою ЕАС5Б, використовуючи антитіло до РО-мМ, і підтримували в Ібсоме/10 Фо
ЕВз/пеніцилін/стрептоміцин/глутамін, доповненому 1 мкг/мл пуроміцину. (0228) Для стимуляції взаємодії АРС/Т-клітини, використовували біспецифічне антитіло, яке складається з одного плеча Бар, що зв'язується з СЮОЗ на Т-клітинах, і одного іншого плеча зв'язування Бар, що зв'язується з СО20 на клітинах Раджі (біспецифічне антитілло СОЗХхСО20; наприклад, як розкрито в ОЗ 20140088295). Присутність біспецифічної молекули в аналітичному тесті приводить до активації Т-клітин і АРС за допомогою утворення містків між субодиницями
СОЗ она Т-клітинах з СО20, ендогенно експресованими в клітинах Раджі. Було продемонстровано, що лігування СОЗ з антитілами проти СОЗ веде до активації Т-клітин. У даному біотесті, антитіла, що блокують взаємодію РО-1/РО-І1, рятують активність Т-клітин за допомогою виведення з ладу інгібіторного сигнального шляху, що надалі приводить до збільшеної активації АР1-Ї ис.
І(0229| У люциферазному біотесті ВРМІТ640, доповнене 10 95 Ж БЬпЕВ5 і пеніцилін/стрептоміцин/глутаміном, застосовували як аналітичне середовище для одержання клітинних суспензій і розведень антитіла для проведення скринінгу моноклональних антитіл (тАбБ5) проти РО-1. У день скринінгу, визначали значення ЕС5о тАбБ5 проти РО-1, у присутності фіксованої концентрації біспецифічного антитіла СОЗХСО20 (30 пМ), а також ЕС»о для окремого біспецифічного антитіла. У наступному порядку клітини і реагенти додавали в 96-ямкові білі плоскодонні планшети. Для визначень ЕСво тАб проти РО-1, одержували першу фіксовану концентрацію біспецифічного антитіла СОЗхХСО20 (остаточна 30 пМ) і додавали в ямки планшета для мікротитрування. Потім додавали 12-точкові серійні розведення тАбБ проти РО-1 і контролі (кінцеві концентрації в інтервалі від 1,7 ПМ до 100 нМ; плюс ямки з середовищем для аналізу окремо). Для визначення ЕСво біспецифічного антитіла (окремо узятого), біспецифічне антитіло, при кінцевих концентраціях в інтервалі від 0,17 пМ до 10 нМ (плюс ямки з середовищем для аналізу окремо) додавали в ямки планшета для мікротитрування.
Послідовно одержували суспензію з 2,5х106/мл клітин Раджі/ПРО-1 1, і додавали 20 мкл на ямку (при кінцевому числі 5х107 клітин/'ямку). Планшети залишали при кімнатній температурі (15-20 хвилин), у той час як одержували суспензію з 2,5хі0б/мл Юркат/АР1-І ис/пРО-1(есіо)- пСрзоба(ТМ-цито). 20 мкл суспензії клітин Юркат (при кінцевому числі 5х107 клітин/ямку) додавали в ямки. Планшети, що містять суміщену культуру, інкубували протягом 5-6 годин при 37"С/5 96 СО». Зразки тестували в двох повторностях, і люциферазну активність потім виявляли після додавання реагенту ОМЕ-Сіотм (Рготеда, ЖЕб6О51), а відносні світлові одиниці (КЦ) вимірювали на люмінометрі Віктора.
І0О230| Значення КГ для кожного скринованого антитіла нормалізували за допомогою установлення умови аналізу з фіксованою (30 пМ) концентрацією біспецифічного антитіла сО3/С020, але без антитіла проти РО-1, до 100 95. Ця умова відповідає максимальній відповіді
АР1-Гис, що викликається біспецифічною молекулою в присутності інгібіторного сигналу РО- 1/РО-І1. При додаванні антитіла проти РО-1, інгібіторний сигнал пригнічується, і збільшена стимуляція показана тут як Етах, відсоткове збільшення сигналу в присутності найвищої тестованої дози антитіла (100 нМ). Для порівняння активності тестованого антитіла проти РО-1, концентрацію антитіла, при якій нормалізоване значення КІГО досягало 150 9о активації, визначали по чотирипараметричному логістичному рівнянню для 12-точкової кривої відповіді, використовуючи сгарпРавй Ргіхт. Результати узагальнені в Таблиці 22 і Таблиці 23, відповідно.
Таблиця 22
Блокування антитілом проти РО-1 РО-1/Р0-І 1-залежного інгібування сигнального шляху АР1-І ис в Експерименті 1 ше ЕЙ
Антитіло (М) антитіла при 150 95 активації середн. (90| (Ф 100 нм
Експеримент 1 Експеримент 1 контроль контроль контроль
М/А-незастосовно, оскільки при тестованих концентраціях ці антитіла не активують 150 95.
Таблиця 23
Блокування антитілом проти РО-1 РО-1/Р0-І 1-залежного інгібування сигнального шляху АР1-І ис в Експерименті 2
Антагоністичний аналіз Антагоністичний аналіз Е пах
Антитіло Концентрація (М) антитіла при 150 середн. (90| (Ф 100 нм
Фо активації Експеримент 2 Експеримент 2 (пдсба4ізотипічнийконтроль | (МА 77777777 ЇЇ 7777777771717179877сСс2
М/А-незастосовно, оскільки при тестованих концентраціях ці антитіла не активують 150 95. 0231) Як показано в Таблиці 22, 25 з 31 протестованого антитіла винаходу проти РО-1 блокували інгібування РО-1/РО-11 зі значеннями Етах в інтервалі від 239 до 163 95. Шість з 31 антитіла винаходу проти РО-1 не демонстрували суттєвої блокади взаємодії РО-1/РО-І1 при тестуванні в даному аналізі.
І0232| Як показано в Таблиці 23, 2 з 4 протестованих антитіл винаходу проти РО-1 блокували інгібування РО-1/РО-І 1 зі значеннями Етах, щО дорівнюють 150 і 343 95, відповідно. 2 з 4 антитіл винаходу проти РО-1 не демонстрували суттєвої блокади взаємодії РО-1/РО-І1 при тестуванні в даному аналізі.
Приклад 9. Ефективність дії антитіл проти РО-1 іп мімо (0233) Щоб визначити ефект вибраного числа антитіл винаходу проти РО-1 на релевантній моделі іп мімо, три дослідження росту пухлини МСОСЗ38.ома, що включають підшкірну ін'єкцію пухлинних клітин і починаються в різні Дні, проводили на мишах, які були гомозиготними для експресії позаклітинного домену РО-1 людини замість позаклітинного домену мишачого РО-1 (РО-1 мишей Нитіп) на основі 75 96 штаму 129 С57/ВІб/25 90.
І0234| Для досліджень, мишей рівномірно розділяли відповідно до маси тіла на 5 груп лікування або контрольних груп для Дослідження 1 (5 мишей на групу), 8 груп лікування або контрольних груп для Дослідження 2 (5 мишей на групу) і 5 груп лікування або контрольних груп для Дослідження З (7 мишей на групу). У День 0, мишей піддавали анестезії за допомогою інгаляції ізофлураном і потім вводили за допомогою підшкірної ін'єкції в правий бік клітини 5х105
МСОЗ38.ома у суспензії 100 мкл ОМЕМ для Дослідження 1 або клітини їх105 МО38.ома у суспензії 100 мкл ОМЕМ для Дослідження 2 і Дослідження 3. Для Дослідження 1, групам лікування вводили за допомогою внутрішньоочеревинної ін'єкції 200 мкг або одне з трьох антитіл винаходу проти РО-1, або ізотипічне контрольне антитіло з нерелевантною специфічністю в Дні
З, 7, 10, 14 їі 17 експерименту, у той час як одна група мишей не піддавався лікуванню. Для
Дослідження 2 групам лікування вводили за допомогою внутрішньоочеревинної ін'єкції або одне з трьох антитіл винаходу проти РО-1 при 10 мг/кг або 5 мг/кг на дозу, одне антитіло винаходу (НЯН7795М2) при 10 мг/кг на дозу, або ізотипічне контрольне антитіло з нерелевантною
Зо специфічністю при 10 мг/кг у Дні 3, 7, 10, 14 і 17 експерименту. Для Дослідження 3, групам лікування вводили за допомогою внутрішньоочеревинної ін'єкції або одне з двох антитіл винаходу проти РО-1 при 5 мг/кг або 2,5 мг/кг на дозу, або ізотипічне контрольне антитіло з нерелевантною специфічністю при 5 мг/кг у Дні З, 7, 10, 14 і 17 експерименту.
Експериментальне дозування і протокол лікування для груп мишей показані в Таблиці 24.
Таблиця 24
Експериментальне дозування і протокол лікування для груп мишей
Дослідженняж Тестованізрази | Яасовійточцідомвання | Мтерваллогування
Дослідження й| Тестовані зразки Щи й Інтервал дозування часовій точці дозування 1 ?
З
І0235| Для досліджень, реєстрували середній об'єм пухлин, визначений за допомогою вимірювань циркулем, і відсоток виживаності в День 14 або 17 і День 23 або 24 кожного експерименту для кожної групи лікування. На доповнення, також оцінювали число безпухлинних мишей наприкінці дослідження (День 42 для Дослідження 1 і День 31 для Дослідження 2 і
Дослідження 3). Результати, виражені у вигляді середнього об'єму пухлини (мм) (50), відсотка виживаності і числа безпухлинних мишей, показані в Таблиці 25 для Дослідження 1, Таблиці 26 для Дослідження 2 і Таблиці 27 для Дослідження 3.
Таблиця 25
Середній об'єм пухлини, відсоток виживаності і число безпухлинних мишей в кожній групі лікування за результатами Дослідження 1 пухлин іп мімо й иживаність, 90 .
Група лікування мм середнє (50 миші
Ізотипічний о о о нантловм | 000) | 00) | 5/Б(ООо | 10096 | 5/Б(10095) (0236) Як показано в Таблиці 25 для Дослідження 1, у мишей, підданих лікуванню одним антитілом винаходу, Н4і4Н7798М, не розвивалися виявлювані пухлини під час проходження дослідження. Миші, піддані лікуванню НАНО0ОВР, виявляли пролонгований знижений об'єм пухлини в порівнянні з контролями в Дні 17 ї 24 дослідження, причому З з 5 мишей або 4 з 5 мишей були безпухлинними до кінця експерименту, відповідно. Навпаки, лікування з використанням одного з антитіл проти РО-1, НаА4Н7795М2, не демонструвало суттєвої ефективності при зниженні об'єму пухлини в даному дослідженні в порівнянні з контролями. До
Дня 23 дослідження, 1 з 5 мишей вмерла в групі з Н4Н7795М2 і 2 з 5 мишей вмерли в групі лікування ізотипічним контролем. У групі без лікування і групі ізотипічного контролю декілька мишей виявляли спонтанну регресію пухлин (1 з 5 мишей і 2 з 5 мишей, відповідно).
Таблиця 26
Середній об'єм пухлини, відсоток виживаності і число безпухлинних мишей в кожній групі лікування за результатами Дослідження 2 пухлини іп мімо
Група | Об'єм пухлини, мм? среднє (580 лікування (п-5)
Ізотипічний 443 824 о о 1/5 оч, Ка 104 о с/ | 100 ос/ | 4/5 5/5
НАН?7798М |17 (38) | 0 (0) о (0) 100 95 |100 95 100 96 (80 96). (100 965) 91 228 96 о о о ос/ | 4/5 4А/Ь 94 328 67 о о о с/ | З/5 (60 | 4/5 нанеоавро во) 10 (ї21) 100 95 |100 95 | 80 95 | 100 96 95) (80 95) 124 359 о о 2/5
І0237| Як показано в Таблиці 26 для Дослідження 2, у мишей, підданих лікуванню одним антитілом винаходу, Н4Н7798М при 10 мг/кг, не розвивалися виявлювані пухлини під час проходження дослідження. Групи мишей, підданих лікуванню при 10 мг/кг або НАНЗ9ООВ8Р, або
НАНЗО48Р2, виявляли значно знижений об'єм пухлини в порівнянні з контролями в Дні 17 і 24 дослідження. Чотири з 5 мишей у кожній групі, підданій лікуванню 10 мг/кг або НАНОООВР, або
НАНО0О48Р2, були безпухлинними в День 31, у той час як у групі лікування ізотипічним контролем тільки 1 з 5 тварин була безпухлинною у результаті спонтанної регресії пухлини.
Одне антитіло, тестоване при 10 мг/кг, Н4Н7795М2, демонструвало значно зменшений об'єм пухлини в порівнянні з контролями в Дні 17 і 24 дослідження, але це антитіло було найменш ефективним антитілом проти РО-1, причому тільки 2 з 5 мишей вижили наприкінці експерименту. (0238) Дозозалежну відповідь при пригніченні пухлини при тестованих дозах (5 мг/кг і 10 мг/кг) спостерігали в групах, підданих лікуванню НАН7798М, НАНЗООВР ї Н4НЗО48Р2. Терапія з використанням Н4Н7798М або НАНОООВР при 5 мг/кг була менш ефективною, з 4 з 5 безпухлинних мишей наприкінці експерименту в День 21, у той час як 5 з 5 мишей залишалися безпухлинними в обох групах з дозою 10 мг/кг Н4Н7798М і НАНОООВР.
І0239| Тест Даннета при двофакторному дисперсійному аналізі АМОМА множинних порівнянь показав, що відмінності в рості пухлин між групою, підданою лікуванню ізотипічним контрольним антитілом при 10 мг/кг, як еталон, і групами, підданими лікуванню при 10 мг/кг
НаАнН7798М, НАНОООВР або Н4НО0О48Р2, були статистично значимими зі значенням р«0,005.
Відмінності в рості пухлини між групою, підданою лікуванню ізотипічним контрольним антитілом при 10 мг/кг, як еталон, і групами, підданими лікуванню при 5 мг/кг Н4Н7798М, НАНЗОООВР або
Наноо48Р2, були також статистично значимими зі значенням ре0,05.
Таблиця 27
Середній об'єм пухлини, відсоток виживаності і число безпухлинних мишей в кожній групі лікування за результатами Дослідження З пухлин іп мімо лікування (пт) мг/кг мг/кг
Ізотипічний 94 405 о о 0/7 о с/ | 100 су | 6/7 6/7 87 о с/ | 100 о/ | 4/7 6/7 (0240) Як показано в Таблиці 27 для Дослідження 3, 6 з 7 мишей, що піддавалися лікуванню одним антитілом винаходу, Н4Н7798М, або ще одним антитілом винаходу, НАНОООВ8Р, при 5 мг/кг були безпухлинними наприкінці експерименту, у той час як у групі ізотипічного контролю не було безпухлинних тварин. Одна пухлинонесуча миша в контрольній групі з Ї(3904 вмерла в День 17 після імплантації. Тільки 4 з 7 мишей, що піддавалися лікуванню НАНОООВ8Р при дозі 2,5 мг/кг, залишалися безпухлинними наприкінці експерименту. Відмінність в об'ємах пухлин на День 21 між групою з тестованими антитілами проти РО-1 і групою ізотипічного контролю була статистично значимою, як визначали за допомогою однофакторного дисперсійного аналізу
АМОМА з апостеріорним критерієм множинного порівняння Даннета з р«0,01. Усі чотири антитіла проти РО-1 були рівнозначно більш ефективними при дозі 5 мг/кг, ніж при дозі 2,5 мг/кг.
Приклад 10. Протипухлинні ефекти комбінації антитіла проти РО-1 і антагоніста МЕСЕ на мишачій моделі раннього лікування пухлини (0241| Модель раннього лікування пухлини була розроблена для тестування ефективності дії комбінації антитіла проти РО-1 і антагоніста МЕСЕ. Для даної моделі, комбіновану терапію вводять незабаром після імплантації пухлини. В експерименті також застосовували антитіло проти РО-І1 окремо й у комбінації з антагоністом МЕСЕ. Антитіло проти РО-1, застосовуване в даному експерименті, являло собою антитіло проти мишачого РО-1 клону "ЄРМІ-14" із щурячим
ІЯа2Ь (Віо Х СеїЇ, Умев5і І ерапоп, МН). Антагоніст МЕСЕ, застосовуваний у даному експерименті, являв собою афліберцепт (химерну молекулу на основі рецептора МЕСЕ, також відому як "МЕВЕ-пастка" або "МЕСЕВІТН2-ЕсАсС т (а)", повний опис якої представлений в іншому розділі даного опису). Антитіло проти РО-Ї1, застосовуване в даному експерименті, являло собою моноклональне антитіло проти РО-Ї1 з Мн/Мі- послідовностями антитіла "Ууу/243.55570" відповідно до Ше 20100203056А1 (Сепепіесп, Іпс.), з мишачим ІдС2га, і мало перехресну реактивність з мишачим РО-1 1.
І0242| Для даної експериментальної моделі, 1,0х106 пухлинних клітин Сооп-26 імплантували підшкірно мишам ВАЇ В/с у День 0. Починаючи в День 3, перед установленням вимірюваних пухлин, мишей піддавали лікуванню з використанням однієї з моно- або
Зо комбінованих терапій або контрольної комбінації, як наведено в Таблиці 28. бо
Таблиця 28
Експериментальне дозування і групи лікування
Група лікування Другий засіб
Контрольна комбінація во) ізотипічний контроль (250 мкг, пес контроль (250 мкг, ПШ) тільки МЕСЕ-пастка во) ізотипічний контроль (250 мкг, Афліберцепт (10 мг/кг, ПШ) тільки проти РО-1 проти РО-1 тАб АРМІ-14 (250 мкг, ВО) | пРс контроль (250 мкг, ПШ) тільки проти РО-Ї 1 проти РО-І1 тАБ (250 мкг, ВО) пес контроль (250 мкг, ПШ)
МЕСЕ-пастка ж проти РО-1 | проти РО-1 тАб АРМІ-14 (250 мкг, ВО) | Афліберцепт (10 мг/кг, ПШ) укаг пастка я проти РО- | проти РО-І1 ТАБ (250 мкг, ВО) Афліберцепт (10 мг/кг, ПШ) 0243) Різні терапії вводили в п'ятьох різних часових оцінках протягом двотижневого періоду (тобто ін'єкції в День 3, День 6, День 10, День 13 і День 19). (0244| Тварин у кожній терапевтичній групі оцінювали з позицій появи пухлини, об'єму пухлини, середнього часу виживаності і числа безпухлинних тварин до Дня 50. Ступінь росту пухлини узагальнена на Фіг. 2 (криві росту пухлини) і Фіг. З (об'єм пухлини на День 28).
Результати також узагальнені в Таблиці 29.
Таблиця 29
Безпухлинні миші в групах лікування
Ме безпухлинних тварин на День 50 оо тільки МЕСЕ-пастка зло 4ло тільки проти РО-Ї 1 5/10
МЕСЕ-пастка ж проти РО-1 тло
МЕСЕ-пастка я проти РО-І 1 9/10 (02451) Ріст пухлини значно знижувався у тварин, що піддаються лікуванню комбінацією
МЕС -пастка «з антитіло проти РО-1, у порівнянні з режимами лікування, що включають обидва терапевтичних засоби окремо (див. Фіг. 2 і 3). Крім того, виживаність суттєво зростала в групі
МЕСЕ-пастка ж антитіло проти РО-1, причому щонайменше 70 95 тварин виживали до дня 50 після імплантації пухлини. Навпаки, для груп з монотерапією антитілом проти РО-1 і МЕОСБ- пасткою, виживаність до дня 50 складала тільки 40 і 30 95, відповідно (див. Фіг. З і Таблиця 29).
Приклад 11. Клінічне випробування повторного дозування з використанням антитіла проти
РО-1 як єдиної терапії й у комбінації з іншими протипухлинними терапіями у пацієнтів з пухлинами на пізній стадії (0246) Дане випробування являє собою дослідження з підвищенням дози антитіла проти РО- 1, окремо або в комбінації з променевою терапією, циклофосфамідом або обома, у пацієнтів з пухлинами на пізній стадії. Ілюстративне антитіло проти РО-1 ("птАБ"), застосовуване в даному
Прикладі, містить НСМК з 5ЕО ІЮ МО: 16211 СМК з 5ЕО ІО МО: 170.
Цілі клінічного дослідження (0247| Первинною ціллю дослідження є характеризувати безпеку, переносимість, ОТ тАб, що вводяться ВВ у вигляді монотерапії або в комбінації з цілеспрямованим опроміненням (навмисно, щоб воно служило як імуностимулююча терапія більшою мірою, ніж, в основному, пухлиноаблятивна терапія), низькодозовим циклофосфамідом (терапією, що демонструвала інгібування регуляторних Т-клітинних відповідей), або обох варіантів, у пацієнтів з пухлинами на пізній стадії. (0248) Вторинними цілями дослідження є: (1) визначити рекомендовану дозу для фази 2 (КР2О) тАБ як о монотерапії й у комбінації з іншими протипухлинними терапіями (цілеспрямованим опроміненням, низькодозовим циклофосфамідом або обома); (2) описати попередню протипухлинну активність тАбБ, окремо і з кожним партнером (партнерами) комбінації; (3) характеризувати ФК тАБ як монотерапії й у комбінації з іншими протипухлинними терапіями (цілеспрямованим опроміненням, низькодозовим циклофосфамідом або обома); і (4) оцінити імуногенність тАб.
Проект дослідження (0249) Безпека буде оцінюватися в роздільних, стандартних 3-3 групах з підвищенням дози (при монотерапії, комбінації з променевою терапією, комбінації з циклофосфамідом і комбінації з променевою терапією плюс циклофосфамід). Вибір комбінованої терапії з опроміненням, циклофосфамідом або обома буде грунтуватися на оцінці дослідником кращого вибору терапії для індивідуального пацієнта при консультації зі спонсором. Щоб бути включеним у групу для променевої терапії, пацієнт повинен мати ушкодження, яке може бути безпечно опромінено і для якого опромінення при передбачених обмежених, паліативних дозах могло б вважатися відповідним у медичному відношенні, і щонайменше одне інше ушкодження, придатне для оцінки відповіді. Пацієнт зможе брати участь, тільки якщо в групі доступне вакантне місце для вибраного лікування. (0250) Пацієнти будуть проходити через процедури скринінгу для визначення відповідності вимогам в інтервалі 28 днів перед початковим введенням тАб. Після включення пацієнтів у групу монотерапії тАб, включення наступних груп буде визначатися наявністю ОТ у попередніх групах (тобто відсутністю ОТ у групі з З пацієнтів або не більше ніж 1 0ІТ у розширеній групі з 6 пацієнтів) і доступністю вакантних місць для пацієнтів. Заплановані рівні дози при монотерапії складають 1, З або 10 мг/кг, що вводяться ВВ кожні 14 днів (2 тижні). (0251 Як тільки періоди спостереження для однієї або обох груп із монотерапією по 1 мг/кг або З мг/кг тАбБ завершуються без ОІТ у групі з З пацієнтів або з не більше ніж 1 0ІТ у розширеній групі з б пацієнтів, пацієнти можуть бути включені в групу з комбінуванням циклофосфаміду або променевої терапії з тАбр при такому ж рівні дози, як для монотерапії.
Пацієнти можуть бути включені в групу з комбінацією тАбжциклофосфамід/променева терапія, як тільки періоди спостереження ОІ т як для групи з рівнем дози тАб ї- циклофосфамід, так і для групи з таким рівнем дози тАб «я такий же режим променевої терапії завершуються без ОТ у групі з З пацієнтів або з не більше ніж 1 І Т у розширеній групі з 6 пацієнтів. (02521) Як тільки період спостереження ПІ Т у групі з монотерапією З мг/кг тАБб завершується без 0І Т у групі з З пацієнтів або не більше ніж з 1 ОТ у розширеній групі з 6 пацієнтів, може
Зо бути також включена група з монотерапією 10 мг/кг тАб.
ІЇ0253| Групи з монотерапією тАб 3 мг/кг і 10 мг/кг будуть включені тільки тоді, коли необхідне число пацієнтів у групі з монотерапією попередньою дозою (тобто 1 мг/кг і З мг/кг, відповідно) пройде через день 28 періоду спостереження ОТ без демонстрації максимальної переносимої дози (МТО) для цього рівня дози. Група 1 мг/кг тАБб з комбінованим лікуванням буде включена тільки після завершення періоду спостереження 0 Т для групи з монотерапією 1 мг/кг. Комбіновані групи, що одержують З мг/кг тАБб, будуть включені тільки тоді, коли необхідне число пацієнтів у відповідних комбінованих групах з 1 мг/кг пройде через період спостереження
РТ без демонстрації МТО. Групи з потрійною комбінацією, що поєднують тА з циклофосфамідом і режимом опромінення, будуть включене тільки тоді, коли необхідне число пацієнтів в обох відповідних групах з подвійною комбінацією при даному рівні дозування пройде період спостереження 01 Т без демонстрації МТО. (0254) Таблиця 30 узагальнює групи з підвищенням дози, у які будуть включені пацієнти.
Таблиця 30
Можливі групи з підвищенням дози
З мг/кг (або МТО) тАБ «ж циклофосфамід
З мг/кг) (або МТО) тА «з променева терапія (6 Грх5) - циклофосфамід
З мг/кг) (або МТО) тА «з променева терапія (9 Грх3) - циклофосфамід
(0255) ОТ визначають як будь-яке з наступних: негематологічна токсичність (наприклад, увеїт або будь-яке інше ігАЕ) або гематологічна токсичність (наприклад, нейтропенія, тромбоцитопенія, фебрильна нейтропенія). (0256| Максимальну переносиму дозу (МТО) визначають як найвищу дозу, при якій менше ніж третина розширеної групи з 6 пацієнтів випробовує ОТ під час першого циклу лікування.
Таким чином, МТО визначають як рівень дози відразу ж нижче рівня, при якому дозування зупиняють унаслідок наявності 2 або більше ОТ у розширеній групі з б пацієнтів. Якщо збільшення дози не зупиняють внаслідок наявності СІТ, буде вважатися, що МТО не була визначена. Можливо, що МТО може не визначатися в даному дослідженні, або для групи монотерапії, або для індивідуальних комбінованих груп. Додатково, можливо, що МТО для тА можуть відрізнятися для монотерапії і кожного режиму комбінованого лікування.
Тривалість дослідження
І0257| Пацієнти будуть одержувати до 48 тижнів лікування, після яких буде 24-тижневий період наступного спостереження. Пацієнт буде одержувати лікування поки не завершиться 48- тижневий період лікування або до прогресування захворювання, неприйнятної токсичності, припинення згоди або настання відповідності ще одному критерію припинення участі в дослідженні. Після мінімального 24-тижневого лікування, пацієнти з підтвердженими повними відповідями (СК) можуть вибрати переривання лікування і продовження з усіма відповідними оцінками при дослідженні (наприклад, оцінками ефективності). Після мінімального 24-тижневого лікування, пацієнти з оцінками пухлинного навантаження стабільного захворювання (50) або часткової відповіді (РЕ), у яких не відбулося змін протягом З послідовних пухлинних оцінок, можуть також вибрати переривання лікування і продовження з усіма відповідними оцінками при дослідженні (наприклад, оцінками ефективності).
Популяція дослідження (0258) Цільова популяція для даного дослідження включає пацієнтів з пухлинами на пізній стадії, що не є кандидатами для стандартної терапії, не бажають проходити стандартну терапію або для яких не очікують сприятливого клінічного ефекту від доступної терапії; і пацієнтів зі злоякісними новоутвореннями, які є невиліковними і які не мали реакції або продемонстрували
Зо прогресування пухлини, незважаючи на стандартну терапію. 0259) Критерії включення. Пацієнт повинен відповідати наступним критеріям, щоб бути допущеним для включення в дослідження: (1) демонструвати прогресування солідної пухлини без альтернативної доступної терапевтичної опції стандартного лікування; (2) мати щонайменше 1 ушкодження для оцінки відповіді; пацієнтам, яким призначена променева терапія, потрібне щонайменше одне додаткове ушкодження, яке може бути безпечно опромінене при помірному показнику ушкоджень і для якого опромінення при передбачених обмежених, паліативних дозах буде вважатися відповідним у медичному відношенні; (3) мати показник загального стану по шкалі Східної об'єднаної онкологічної групи (ЕСОС) « 1; (4) бути старше 18 років; (5) функція печінки: а) загальний білірубін х 1,5х верхня межа норми (ШІ М; якщо метастази в печінці « Зх мкл), 5) трансамінази « Зх мкл (або «5,0х мкл, якщо є метастази в печінці), с) лужна фосфатаза (АГР) «2,5х мкл (або 5,0х мкл, якщо є метастази в печінці); (6) функція нирок: креатинін у сироватці « 1,5х мкл; (7) число нейтрофілів (АМС) » 1,5х109/л, число тромбоцитів » 75х109/л; (8) здатність надати підписану інформовану згоду; і (9) здатність і бажання додержуватися запланованих візитів, лікувальних планів, проходження лабораторних тестів і інших процедур, що мають відношення до дослідження. (02601 Критерії виключення. Пацієнт, що відповідає будь-якому з наступних критеріїв, буде виключений з дослідження: (1) триваюче або нещодавнє (в інтервалі 5 років) очевидне свідчення значного аутоїмунного захворювання, що вимагає лікування з використанням системних імуносупресорних терапій, які можуть препозитивно створити ризик для ігАЕ; (2) попереднє лікування засобом, що блокує шлях РО-1/РО-І11; (3) попереднє лікування іншими імуномодулюючими засобами в інтервалі менше 4 тижнів або 4 періодів напівжиття, незалежно від того, який більше, перед першою дозою тАБб; (4) приклади імуномодуляторів включають блокатори СТІ А-4, 4-188 (С0137), ОХ-40, терапевтичні вакцини або цитокінові терапії; (5) не піддавалися лікуванню метастази в мозку, що можуть вважатися активними; пацієнти з метастазами в мозку, що раніше піддавалися лікуванню, можуть взяти участь, за умови, що вони є стабільними (тобто без явних ознак прогресування при візуалізації, протягом щонайменше 4 тижнів перед першою дозою лікування при дослідженні, і будь-які неврологічні симптоми повернулися до вихідного рівня), і відсутні явні нові або збільшені метастази в мозку; (6) імуносупресорні дози кортикостероїдів (10 мг преднізону або еквівалента щодня) в 60 інтервалі 4 тижнів до першої дози тАбБ; (7) тромбоз глибоких вен, тромбоемболія легеневої артерії (включаючи асимптоматичну тромбоемболію, ідентифіковану при візуалізації) або інша тромбоемболічна подія в інтервалі б місяців, що передують першій дозі тАб; (8) активна інфекція, яка вимагає терапії, що включає відому інфекцію вірусом імунодефіциту людини, або активна інфекція вірусом гепатиту В або гепатиту С; (9) історія пневмонії в інтервалі останніх 5 років; (10) будь-яке дослідницьке або протипухлинне лікування в інтервалі ЗО днів перед початковим введенням тАБ; (11) історія документованих алергічних реакцій або гострої реакції гіперчутливості, що стосується лікувальних терапій з використанням антитіл у цілому або засобів, застосовуваних конкретно в дослідженні; (12) відома алергія на доксоциклін або тетрациклін (обережність унаслідок присутності слідових компонентів у тАбБ); (13) грудне вигодовування; (14) позитивний сироватковий тест на вагітність; (15) історія в інтервалі останніх 5 років інвазивного злоякісного новоутворення, що відрізняється від злоякісного новоутворення, яке піддається лікуванню в даному дослідженні, за винятком вирізаної/підданої абляції базальної або плоскоклітинної карциноми шкіри або раку шийки матки іп 5йи, або інші місцеві пухлини, що вважаються вилікуваними за допомогою місцевого лікування; (16) гострі або хронічні психіатричні проблеми, які, при оцінці дослідником, роблять пацієнта непридатним для участі; і (17) триваюча сексуальна активність у чоловіків або жінок з дітородним потенціалом, що не бажають практикувати адекватну контрацепцію під час дослідження.
Терапії в рамках дослідження
І0261| тАбБ будуть надані у вигляді рідини в стерильних пляшечках одноразового використання. Кожна пляшечка буде містити об'єм, достатній для забору 10 мл тАбБ при концентрації, що дорівнює 25 мг/мл. Інструкції по дозі препарату надані в довідковому посібнику з дослідження. тАб будуть вводитися в амбулаторній установі у вигляді ЗО0-хвилинної ВВ інфузії. Кожна доза для пацієнта буде залежати від індивідуальної маси тіла. Доза тАБб повинна регулюватися кожен цикл з урахуванням змін маси тіла 210 95. тАБб будуть вводитися окремо й у комбінації з опроміненням і/або циклофосфамідом.
Монотерапія (02621) тАБ будуть вводитися в амбулаторній установі за допомогою ВВ інфузії протягом 30 хвилин кожні 14 днів протягом 48 тижнів (тобто у Дні 1, 15-33, 29-33 і 43-43 56б-денного циклу).
Плановані режими монотерапії для призначення можуть включати: () ВВ інфузія 1 мг/кг
Зо протягом 30 хвилин кожні 14 днів протягом 48 тижнів; (ії) інфузія З мг/кг протягом 30 хвилин кожні 14 днів протягом 48 тижнів; (іїї) інфузія 10 мг/кг протягом 30 хвилин кожні 14 днів протягом 48 тижнів; і (ім) інфузія 0,3 мг/кг протягом 30 хвилин кожні 14 днів протягом 48 тижнів (якщо визначено, що МТО нижче 1 мг/кг).
Комбінована терапія
І0263| Супутні променева терапія і циклофосфамід будуть застосовуватися по призначенню і їх застосовність, доза, дозові модифікації, зниження або затримки, а також будь-які потенційні
АЕ, що є результатом їх застосування, будуть відслідковуватися поряд з такими ж діями для тА. (0264) Спільне введення тАБ і опромінення. тАб будуть вводитися за допомогою ВВ інфузії протягом 30 хвилин кожні 14 днів протягом 48 тижнів у комбінації з променевою терапією від дня 8 до дня 12. Плановані режими комбінації тАБб і променевої терапії можуть включати: інфузія 1 мг/кг тАр протягом 30 хвилин кожні 14 днів протягом 48 тижнів плюс 30 Гр променевої терапії (б Гр х 5 разів/тиждень; дається 1 тиждень після першої дози тАБ, переважно в наступні дні), інфузія 1 мг/кг тАБ протягом 30 хвилин кожні 14 днів протягом 48 тижнів плюс 27 Гр променевої терапії (9 Гр х З рази/тиждень; дається 1 тиждень після першої дози тА, переважно не в наступні дні), інфузія З мг/кг тАр протягом 30 хвилин кожні 14 днів протягом 48 тижнів плюс 30 Гр променевої терапії (б Гр х 5 разів/тиждень; дається 1 тиждень після першої дози таАБ, переважно в наступні дні), інфузія З мг/кг тАр протягом 30 хвилин кожні 14 днів протягом 48 тижнів плюс 27 Гр променевої терапії (9 Гр х З рази/тиждень; дається 1 тиждень після першої дози тА, переважно не в наступні дні). (0265) Пацієнти будуть одержувати або 30 Гр, які даються у вигляді 5 фракцій по 6 Гр, що вводяться щодня, починаючи з 1 тижня після першої дози тАб, або 27 Гр, які даються у вигляді
З фракцій по 9 Гр, що вводяться в кожний наступний день, починаючи з 1 тижня після першої дози тАб. Ушкодження, вибране для опромінення, повинно являти собою ушкодження, яке може бути безпечно опромінене фокусним опромінюванням при щадному показнику ушкодження (ушкоджень) і для якого опромінення при передбачених обмежених, паліативних 60 дозах буде вважатися придатним з медичної точки зору. Цільова доза для пацієнта буде основана на призначенні групи і повинна відповідати вимогам до нормальної тканини, згідно зі стандартною практикою опромінення в онкології. Лікування при встановленому в протоколі режимі дозування дозволяється, тільки якщо має місце відповідність критеріям для нормальної тканини. Якщо не можна досягти відповідності критеріям для нормальної тканини, при двох режимах променевої терапії, встановлених у протоколі, пацієнт не може бути допущений для включення в групу комбінованого з опроміненням лікування в даному дослідженні. (0266) Спільне введення тАб і циклофосфаміду. тАб будуть вводитися за допомогою ВВ інфузії протягом 30 хвилин кожні 14 днів (2 тижні) протягом 48 тижнів у комбінації з 200 мг/м? циклофосфаміду кожні 14 днів для всього 4 доз. Кожна з 4 доз циклофосфаміду буде вводитися за 1 день перед кожною з перших 4 доз тАБ (Дні 1, 14, 28 і 42 першого 56-денного циклу).
І0267| Незважаючи на те, що циклофосфамід успішно застосовувався супутнім чином разом з іншими лікарськими засобами, швидкість метаболізму і лейкопенічна активність циклофосфаміду, як повідомляють, збільшуються за допомогою постійного введення високих доз фенобарбіталу. Лікування циклофосфамідом викликає виражене й стійке інгібування холінестеразної активності, таким чином, потенціюючи ефект від сукцинілхолінхлориду.
Планований режим комбінації тАб і циклофосфаміду для призначення являє собою: 200 мг/м" циклофосфаміду кожні 14 днів (Дні 1, 14, 28 і 42 першого 56-денного циклу) при всього 4 дозах плюс інфузія З мг/кг тАб протягом 30 хвилин кожні 14 днів протягом 48 тижнів (надана доза монотерапії дорівнює З мг/кг х МТО; якщо З мг/кг» МТО, доза буде дорівнювати 1 мг/кг). (0268) Спільне введення тАБб, опромінення і циклофосфаміду. Планований режим комбінації тА, опромінення і циклофосфаміду включає: 200 мг/м циклофосфаміду кожні 14 днів (Дні 1, 14, 28, і 42 першого 56-денного циклу) при всього 4 дозах плюс 27 Гр променевої терапії (9 Гр х З рази/тиждень; що дається 1 тиждень після першої дози тАб, переважно не в наступні дні), або
Гр променевої терапії (6 Гр х 5 разів/тиждень; що дається 1 тиждень після першої дози тАбр, переважно в наступні дні) плюс інфузія З мг/кг тАб протягом 30 хвилин кожні 14 днів протягом 48 тижнів (надана доза монотерапії дорівнює З мг/кг х МТО; якщо З мг/кг» МТО, доза буде дорівнювати 1 мг/кг). 30 Змінні дослідження
І0269| Первинні змінні. Первинні змінні безпеки включають появу ОІТ, появу і тяжкість несприятливих явищ, що виникли на фоні лікування (ТЕАЕ), і аномальні результати лабораторних аналізів протягом 48 тижнів лікування.
І0270| Вторинні змінні. Ключові вторинні змінні включають наступне: концентрацію в сироватці і фармакокінетику (ФК) тА.
Протипухлинну активність оцінюють з використанням відповідних критеріїв для призначення: критерії оцінки відповіді при солідних пухлинах, виміряні за допомогою комп'ютерної томографії (КТ) або магнітно-резонансної томографії (МРТ).
Інші критерії оцінки також повинні застосовуватися для конкретних пухлин, для яких вимірювання по КЕСІ5Т не є стандартними.
Критерії оцінки відповіді, що стосується імунітету (ігкС), застосовувані до даних вимірювань по КЕСІЗТ.
В усіх випадках, іс буде направляючим інструментом для визначення прогресування захворювання (РО), 50, СК або РЕ. Стандартні дані КЕСІЗТ будуть також зібрані для інформаційних цілей.
Антитіла проти тАр
Методики дослідження
І0271| Наступні методики будуть виконуватися при скринінгу з метою визначення відповідності вимогам до дослідження або характеризації вихідної популяції: (ї) сироватковий р-
НОСОС (результат повинен бути їх72 години до першої дози); (ії) збирання архівованого пухлинного матеріалу: після підписання пацієнтом інформованої згоди, пацієнту буде запропоновано надати будь-які доступні раніше зібрані пухлинні зразки; (її) МРТ мозку: МРТ мозку потрібна при скринінгу, якщо не була проведена протягом попередніх 60 днів; і (їм) рентгенограма грудної клітки: рентгенограма грудної клітки потрібна при скринінгу, якщо не була проведена протягом попередніх 60 днів. (0272) Методики оцінки ефективності дії. КТ або МРТ для оцінки пухлини буде виконуватися при візиті на скринінг (в інтервалі 28 днів перед інфузією) і під час кожного циклу (приблизно кожні 8 тижнів) у День 563, і коли передбачають прогресування захворювання. Додатково, для пацієнтів, у яких не було прогресування при дослідженні, оцінка пухлини буде виконуватися бо протягом візитів 3, 5 і 7 наступного спостереження. Як тільки зроблений вибір застосування скануючої КТ або МРТ, наступні оцінки будуть проводитися з використанням такої ж модальності. (0273) Оцінка пухлинної відповіді буде виконуватися відповідно до критеріїв оцінки відповіді, що належить до імунітету (КС; Мізпіпо 2013). Оцінка відповідно до критеріїв оцінки відповіді при солідних пухлинах (КЕСІ5Т) версія 1.1 (Еізеппацег 2009) також буде проводитися як підтверджуюче обстеження; однак, первинне визначення прогресування захворювання для індивідуального пацієнта буде зроблене відповідно до ігеС. Вимірювані ушкодження, вибрані як цільові ушкодження для оцінок по КЕСІ5Т, також будуть включені як показник ушкоджень для оцінок згідно з ігКкс. (0274| Методики забезпечення безпеки. Будуть зібрані основні показники стану організму, які включають температуру, артеріальний тиск у стані спокою, пульс і дихання. При плануванні проведення в той же візит, що й інші методики, вимірювання основних показників стану організму повинно проводитися перед клінічними лабораторними оцінками, ФК або пошуковим збиранням зразків. Під час циклу 1, основні показники стану організму будуть реєструватися в
Дні лікування, перед лікуванням, наприкінці інфузії, кожні 30 хвилин протягом перших 4 годин після інфузії і при б і 8 годинах після введення досліджуваного лікарського засобу. При наступних циклах, основні показники стану організму в Дні лікування будуть оцінюватися і документуватися перед інфузією, кожні 30 хвилин протягом перших 2 годин і потім щогодини до 4 годин після введення досліджуваного лікарського засобу. 02751) При візитах буде виконуватися ретельний повний або обмежений медичний огляд.
Повний медичний огляд буде включати обстеження шкіри, голови, очей, носа, горла, шиї, суглобів, легень, серця, пульсу, черевної порожнини (включаючи печінку і селезінку), лімфатичних вузлів і кінцівок, а також коротке неврологічне обстеження. Обмежений медичний огляд буде включати легені, серце, черевну порожнину і шкіру. (0276) Буде виконуватися стандартна ЕКГ у 12 відведеннях. Будь-які результати ЕКГ, що на думку дослідника являють собою клінічно значиму зміну (погіршення) у порівнянні з вихідним значенням, будуть розглядатися як АЕ, реєструватися і спостерігатися. (0277) Аналітичні тести на імунологічну безпеку складаються з визначення ревматоїдного фактора (ЕЕ), тиреостимулюючого гормону (ТЗН), С-реактивного білка (СЕР) і титру і розподілу
Зо антиядерного антитіла (АМА). Якщо під час проходження дослідження, спостерігають 4-кратне або більш високе збільшення від вихідного рівня по КЕ або АМА або аномальні рівні Т2Н або
СЕР, можуть також проводитися наступні тести: на антитіло проти ДНК, антитіло проти антигену
А синдрому Шегрена (55А) (Ко), антитіло проти антигену В синдрому Шегрена (55Б) (Іа), антитіло до тиреоглобуліну, антитіло проти КМ, антитіло проти фосфоліпіду, антитіло проти острівцевих клітин, антитіло проти нейтрофілів С3, С4, СН5ЬО у цитоплазмі. Активований частковий тромбопластиновий час (аРтТТ) і Міжнародний коефіцієнт нормалізації (ІМК) будуть аналізуватися місцевою лабораторією лікувальної установи.
Безпека
І0278| Несприятливе явище (АЕ) являє собою будь-яке небажане медичне явище у пацієнта, якому введений досліджуваний лікарський засіб, що може мати або не мати причинно- наслідковий зв'язок з досліджуваним лікарським засобом. Отже, АЕ являє собою несприятливий і небажаний (що включає аномальний лабораторний результат) симптом або захворювання, які тимчасово асоційовані з застосуванням досліджуваного лікарського засобу, незалежно від того, чи вважають їх такими, що стосуються досліджуваного лікарського засобу. АЕ також включає будь-яке погіршення (тобто будь-яку клінічно значиму зміну частоти і/або інтенсивності) раніше існуючого стану, що тимчасово асоційована з застосуванням досліджуваного лікарського засобу. Прогресування основного злоякісного новоутворення не буде вважатися АЕ, якщо воно явним чином є наслідком типової схеми прогресування основного злоякісного новоутворення (включаючи період дії, уражені органи і т. д.). Клінічні симптоми прогресування можуть бути представлені в звіті як АЕ, якщо симптом не може бути визначений як винятково обумовлений прогресуванням основного злоякісного новоутворення або не відповідає очікуваній схемі прогресування для захворювання при дослідженні.
І0279| Серйозне несприятливе явище (ЗАЕ) являє собою будь-яке небажане медичне явище, яке при будь-якій дозі приводить до смерті, являє загрозу для життя, вимагає госпіталізації в стаціонар або пролонгації існуючої госпіталізації, приводить до стійкої або значної непрацездатності/недієздатності (суттєвого порушенню здатності виконувати звичайні життєві функції), є уродженою аномалією/патологією пологів. (02801 Інформація по всіх АЕ і 5АЕ у пацієнта буде реєструватися.
План статистичного аналізу
І0281| Підвищення досліджуваної дози основане на традиційному дизайні 3-3, 3 3-6 пацієнтами, віднесеними до рівня дози. Точне число пацієнтів, включених у дослідження, буде залежати від числа спостережуваних заданих протоколом ОТ і необхідності розширювати задані застосовувані рівні доз або відкривати додаткові групи при більш низьких дозових рівнях.
Після необхідного початкового включення в наступну групу при нарощуванні дози, включення в кожну з попередніх груп нижче МТО для такого лікування буде розширене (якщо раніше не розширювали під час нарощування) до всього 6 пацієнтів. (02821 Дані будуть узагальнені з використанням тільки описової статистики. У цілому, дані будуть узагальнюватися по дозових рівнях і комбінаціях. Узагальнення оцінок безпеки і їх аналізів будуть виконуватися на основі вибірки для аналізу безпеки (ЗАЕ). Первинний аналіз безпеки буде оснований на небажаних явищах (АЕ), що виникли на фоні лікування (ТЕАЕ). (0283) Даний винахід не буде обмежуватися по обсягу конкретними варіантами здійснення, описаними в даному документі. Безсумнівно, різні модифікації винаходу на доповнення до модифікацій, описаних тут, будуть зрозумілі фахівцям у даній галузі з попереднього опису і супровідних креслень. Такі модифікації мають на увазі як такі, що входять у межі обсягу прикладеної формули винаходу.

Claims (29)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Ізольоване антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, що специфічно зв'язується з людським білком програмованої смерті-ї (РО-1), де ізольоване антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент містить три ділянки важкого ланцюга, що визначають комплементарність (СОК) (НСОМКІ, НСОК2 та НСОКЗ) варіабельної ділянки важкого ланцюга (НСМУК), що має амінокислотну послідовність ЗЕ ІЮ МО: 162, і три СОК легкого ланцюга (СОМ, І СО2 та І СОКЗ) варіабельної ділянки легкого ланцюга (І СУК), що має амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 170.
2. Ізольоване антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, де еталонне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент має одну або декілька з наступних властивостей: (а) блокує зв'язування білка РО-1 людини з РО-11 з ІСво, меншою ніж З нМ, виміряною методом Зо конкурентного сендвіч-аналізу ЕГ ІЗА при 25 20; (б) зв'язується з мономерним РО-1 людини з рівноважною константою дисоціації для зв'язування (Ко), меншою ніж приблизно 50 нМ, виміряною при аналізі методом поверхневого плазмонного резонансу при 37 20; (с) зв'язується з мономерним РО-1 людини з Ко, меншою ніж приблизно 12 нМ, при аналізі методом поверхневого плазмонного резонансу при 25 26; (4) зв'язується з мономерним РО-1 мавпи з Ко, меншою ніж приблизно 8,5 нМ, при аналізі методом поверхневого плазмонного резонансу при 25 26; (є) зв'язується з мономерним РО-1 людини з періодом половинної дисоціації (172), більшим ніж приблизно 6,3 хвилини, виміряним при аналізі методом поверхневого плазмонного резонансу при 25 "С;і (Її) зв'язується з мономерним РО-1 людини з періодом половинної дисоціації (725), більшим ніж приблизно 0,9 хвилини, виміряним при аналізі методом поверхневого плазмонного резонансу при 37 "С.
3. Ізольоване антитіло або його антигензв'язувальний Фрагмент за п. 1 або п. 2, де: (а) НСОК'І має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 164; (б) НСОК2 має амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 166; (с) НСОКЗ має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 168; (4) СОСОК має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 172; (є) ГСОК2 має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 174; і (0 І СОКЗ має амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 176.
4. Ізольоване антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-3, де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент містить НСМА 5ЕО ІЮО МО: 162 і/або СУК ЗЕО І МО: 170.
5. Ізольоване антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-4, де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент містить важкий ланцюг і легкий ланцюг, де важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність 5ЕО 10 МО: 330.
6. Ізольоване антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-4, де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент містить важкий ланцюг і легкий ланцюг, де легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність ЖЕО ІЮ МО: 331.
7. Ізольоване антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-4, де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент містить пару амінокислотних послідовностей ЗЕО ІЮ МО: 330/331 важкого ланцюга/легкого ланцюга.
8. Ізольоване антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-7, де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент являє собою мультиспецифічну антигензв'язувальну молекулу.
9. Ізольоване антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, що специфічно зв'язується з людським білком програмованої смерті-ї (РО-1), де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент містить амінокислотну послідовність 5ЕБЕО ОО МО: 330 важкого ланцюга та амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 331 легкого ланцюга.
10. Фармацевтична композиція, яка містить ізольоване антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, що зв'язується з РО-1 людини відносно будь-якого з пп. 1-9, і фармацевтично прийнятний носій або розріджувач.
11. Ізольована полінуклеотидна молекула, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує НСМЕ антитіла або його антигензв'язувального фрагмента, як наведено в будь-якому з пп. 1-9.
12. Ізольована полінуклеотидна молекула, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує СМК антитіла або його антигензв'язувального фрагмента, як наведено в будь-якому з пп. 1-9.
13. Вектор, який містить полінуклеотидну послідовність за п. 11 або 12.
14. Клітина, яка експресує вектор за п. 13.
15. Спосіб продукування антитіла проти РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента, що включає вирощення клітини-хазяїна за п. 14 в умовах, які забезпечують вироблення антитіла або фрагмента антитіла, і витягання антитіла і фрагмента антитіла, продукованого таким чином.
16. Спосіб за п. 15, де клітина-хазяїн являє собою клітину СНО.
17. Спосіб за п. 15 або п. 16, який додатково включає отримання антитіла або антигензв'язувального фрагмента у вигляді фармацевтичної композиції з вмістом прийнятного носія.
18. Антитіло проти РО-1 або його антигензв'язувальний фрагмент може бути отримано у спосіб за п. 15 або п. 16.
19. Застосування ізольованого антитіла або його антигензв'язувального фрагмента за будь- Зо яким з пп. 1-9 або фармацевтичної композиції за п. 10 для посилення імунної відповіді у суб'єкта.
20. Застосування ізольованого антитіла або його антигензв'язувального фрагмента за будь- яким з пп. 1-9 або фармацевтичної композиції за п. 10 для інгібування Т-регуляторних (Тгед) клітин у суб'єкта.
21. Застосування ізольованого антитіла або його антигензв'язувального фрагмента за будь- яким з пп. 1-9 або фармацевтичної композиції за п. 10 для посилення активації Т-клітин у суб'єкта.
22. Застосування за будь-яким з пп. 19-21, де суб'єкт має захворювання або розлад, що включає рак мозку, нирковоклітинну карциному, рак яєчника, рак простати, рак товстої кишки, недрібноклітинний рак легень, плоскоклітинний рак ділянки голови і шиї, рак ободової і прямої кишок, рак шлунка, рак нирки, рак молочної залози, множинну мієлому або меланому.
23. Застосування за будь-яким з пп. 19-21, де суб'єкт має вірусну інфекцію, яка включає ВІЛ, НСМ, НВУ, НРУ, І СММУ і 5ІМ або їхню комбінацію.
24. Застосування ізольованого антитіла або його антигензв'язувального фрагмента за будь- яким з пп. 1-9 або фармацевтичної композиції за п. 10 для інгібування росту пухлини або пухлинних клітин у суб'єкта.
25. Застосування за п. 24, де пухлина або пухлинна клітина включає рак мозку, нирковоклітинну карциному, рак яєчника, рак простати, рак товстої кишки, недрібноклітинний рак легень, плоскоклітинний рак ділянки голови і шиї, рак ободової і прямої кишки, рак шлунка, рак нирки, рак молочної залози, множинну мієлому або меланому.
26. Застосування за будь-яким з пп. 19-25, де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент або фармацевтичну композицію, що містить антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, вводять суб'єкту в комбінації з другим терапевтичним засобом або терапією.
27. Застосування за п. 26, де другий терапевтичний засіб або терапія включає М5АЇО, кортикостероїд, антитіло до різних Т-клітинних співінгібіторів, антитіло до пухлиноспецифічного антигену, інгібітор індоламін-2,3-діоксигенази (ІРО), Апод2-інгібітор, вакцину проти раку, інгібітор рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК), інгібітор трансформуючого фактора росту бета (ТОД), антитіло до РО-11, інгібітор СТІ А-4, інгібітор ГАС, інгібітор ТІМ3, харчову добавку, антиоксидант, антагоніст МЕСЕ, антитіло проти МЕСЕ, низькомолекулярний інгібітор кінази рецептора МЕСЕ, злитий білок, що інгібує МЕСЕ, хірургічне втручання, опромінювання, хіміотерапевтичний засіб, цитотоксичний засіб або їхню комбінацію.
28. Застосування за будь-яким з пп. 19-27, де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент вводять підшкірно, внутрішньовенно, внутрішньошкірно, внутрішньоочеревинно, перорально, внутрішньом'язово або інтракраніально.
29. Застосування за будь-яким з пп. 19-28, де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент вводять при дозі, що дорівнює від приблизно 0,1 мг/кг маси тіла до приблизно 60 мг/кг маси тіла суб'єкта. Активовані Кріт за звер Кутя допомогою ютстеруВаННЯ Непактивні Юрках теВ. а ге кт й й /Юркат АРА-ЦІК, А: і Юркату АР В Їж Рклітнна) Го бі'кзнино / | із і х ї х їх й К ї г т чі ія що я у -ТЕТОВ/СОЗ комплекс 7 ТСВ/СОЗ комплекс Осо Ь ак РОС ПЗОда щу Г-кліхжна Й й Как т А. о у тя сд-- сиа ж НЯ ну МІйВУюЮЧчО р ра рай І СО стецявічне КІ о Кк - й Х ї х І Раджі / Раджі с ФАР) і (АРС) / у ! / і х Я ух щі С Ка М а Фрі Ажвивація РО-Ї осивониє відчевіде Баакуважня БОМ) делегує у активованих Крках відновіде в активованих Корхиу сн роми че й зу кч у що и Юрат АРХ, б ! Юркаті АРЛА це; НВ ! (бкнітнна) З «(Т-кайнн ї 5 і х Коди я Х у я Я 7 ї ай а і; й «ВІЗА ин «ДОЛ нн зе оо ТТ ТОВІСОЗ комплек Ка ДИСНСОЗ комплекс щі Й оЛ.кайнна ун ох пивний Що свя ВЕТНВУЮЧЕ пи Манн Роль що Біспецифічно ГРЕЯ Сороє Біспедифічне с У с М її Х й х ! Раджі | І Рахожі х (АРКУ / ц САРІ І х рі К Я ва Он дядя
Фіг. | (пролювження
UAA201608946A 2014-01-23 2015-01-23 Ізольоване антитiло або його антигензв'язувальний фрагмент, що специфічно зв'язується з людським білком програмованої смерті-1 (pd-1) UA122666C2 (uk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461930576P 2014-01-23 2014-01-23
US201462014181P 2014-06-19 2014-06-19
PCT/US2015/012589 WO2015112800A1 (en) 2014-01-23 2015-01-23 Human antibodies to pd-1

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA122666C2 true UA122666C2 (uk) 2020-12-28

Family

ID=52462456

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201608946A UA122666C2 (uk) 2014-01-23 2015-01-23 Ізольоване антитiло або його антигензв'язувальний фрагмент, що специфічно зв'язується з людським білком програмованої смерті-1 (pd-1)

Country Status (30)

Country Link
US (3) US9987500B2 (uk)
EP (2) EP3967710A1 (uk)
JP (4) JP6425730B2 (uk)
KR (2) KR20210152583A (uk)
CN (2) CN106068275B (uk)
AU (1) AU2015209233B2 (uk)
BR (2) BR112016016699A2 (uk)
CA (2) CA3207270A1 (uk)
CL (1) CL2016001871A1 (uk)
CY (1) CY1124747T1 (uk)
DK (1) DK3097119T3 (uk)
EA (1) EA034770B8 (uk)
ES (1) ES2888224T3 (uk)
HR (1) HRP20211794T1 (uk)
HU (1) HUE056332T2 (uk)
IL (2) IL246818B (uk)
LT (1) LT3097119T (uk)
MX (3) MX2016009554A (uk)
MY (1) MY176475A (uk)
NZ (1) NZ722342A (uk)
PH (1) PH12016501330A1 (uk)
PL (1) PL3097119T3 (uk)
PT (1) PT3097119T (uk)
RS (1) RS62507B1 (uk)
SG (1) SG11201605482SA (uk)
SI (1) SI3097119T1 (uk)
TW (1) TWI681969B (uk)
UA (1) UA122666C2 (uk)
UY (1) UY35964A (uk)
WO (1) WO2015112800A1 (uk)

Families Citing this family (495)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI686405B (zh) 2008-12-09 2020-03-01 建南德克公司 抗ｐｄ-ｌ１抗體及其於增進ｔ細胞功能之用途
PL3409278T3 (pl) 2011-07-21 2021-02-22 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Heterocykliczne inhibitory kinazy białkowej
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
TWI635098B (zh) 2013-02-01 2018-09-11 再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
RS61400B1 (sr) 2013-05-02 2021-02-26 Anaptysbio Inc Antitela usmerena protiv programirane smrti-1 (pd-1)
AR097306A1 (es) 2013-08-20 2016-03-02 Merck Sharp & Dohme Modulación de la inmunidad tumoral
WO2015048312A1 (en) 2013-09-26 2015-04-02 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
SG11201604738TA (en) 2013-12-12 2016-07-28 Shanghai Hengrui Pharm Co Ltd Pd-1 antibody, antigen-binding fragment thereof, and medical application thereof
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
NZ725006A (en) 2014-03-12 2019-11-29 Yeda Res & Dev Reducing systemic regulatory t cell levels or activity for treatment of disease and injury of the cns
WO2017042633A2 (en) * 2015-09-10 2017-03-16 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory t cell levels or activity for treatment of disease and injury of the cns
US10618963B2 (en) 2014-03-12 2020-04-14 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US9394365B1 (en) 2014-03-12 2016-07-19 Yeda Research And Development Co., Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of alzheimer's disease
US10519237B2 (en) 2014-03-12 2019-12-31 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
TWI701042B (zh) 2014-03-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
US9982053B2 (en) 2014-08-05 2018-05-29 MabQuest, SA Immunological reagents
US9982052B2 (en) 2014-08-05 2018-05-29 MabQuest, SA Immunological reagents
WO2016040880A1 (en) 2014-09-13 2016-03-17 Novartis Ag Combination therapies of alk inhibitors
RS60739B1 (sr) 2014-11-17 2020-09-30 Regeneron Pharma Postupci za lečenje tumora upotrebom cd3xcd20 bispecifičnog antitela
EP3984542A1 (en) * 2014-11-20 2022-04-20 Promega Corporation Systems and methods for assessing modulators of immune checkpoints
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
CN114380909A (zh) 2015-03-30 2022-04-22 斯特库比股份有限公司 特异性针对糖基化的pd-l1的抗体及其使用方法
US10556952B2 (en) 2015-03-30 2020-02-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Heavy chain constant regions with reduced binding to Fc gamma receptors
US11933786B2 (en) 2015-03-30 2024-03-19 Stcube, Inc. Antibodies specific to glycosylated PD-L1 and methods of use thereof
CN108136001B (zh) 2015-04-03 2022-07-29 佐马技术有限公司 使用TGF-β抑制剂和PD-1抑制剂治疗癌症
BR112017024757A2 (pt) 2015-05-18 2018-11-13 TCR2 Therapeutics Inc. composições e métodos para reprogramação de tcr utilizando proteínas de fusão
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
TW201709929A (zh) 2015-06-12 2017-03-16 宏觀基因股份有限公司 治療癌症的聯合療法
EA201890285A1 (ru) 2015-07-13 2018-08-31 Сайтомкс Терапьютикс, Инк. Антитела против pd-1, активируемые антитела против pd-1 и способы их применения
CN116059219A (zh) 2015-07-16 2023-05-05 比奥克斯塞尔医疗股份有限公司 一种使用免疫调节治疗癌症的新颖方法
EP3328419B1 (en) 2015-07-30 2021-08-25 MacroGenics, Inc. Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
TW202330904A (zh) 2015-08-04 2023-08-01 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法
JP2018526989A (ja) 2015-08-07 2018-09-20 ピエリス ファーマシューティカルズ ゲーエムベーハー Ｌａｇ−３およびｐｄ−１に特異的な新規融合ポリペプチド
CA2993276A1 (en) 2015-08-11 2017-02-16 Yong Zheng Novel anti-pd-1 antibodies
AR105654A1 (es) * 2015-08-24 2017-10-25 Lilly Co Eli Anticuerpos pd-l1 (ligando 1 de muerte celular programada)
CN107949573B (zh) * 2015-09-01 2022-05-03 艾吉纳斯公司 抗-pd-1抗体及其使用方法
JP7023231B2 (ja) 2015-09-23 2022-02-21 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 最適化抗ｃｄ３二重特異性抗体及びその使用
ES2907486T3 (es) * 2015-09-24 2022-04-25 Univ North Carolina Chapel Hill Métodos y composiciones para reducir metástasis
MX2018003689A (es) 2015-09-29 2018-04-30 Celgene Corp Proteinas de union a pd-1 y metodos para usarlas.
WO2017058115A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 Asia Biotech Pte. Ltd. Pd-1 antibodies and uses thereof
KR102146319B1 (ko) 2015-10-02 2020-08-25 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd1 및 tim3에 특이적인 이중특이성 항체
MY190324A (en) 2015-10-02 2022-04-14 Symphogen As Anti-pd-1 antibodies and compositions
MA45429A (fr) 2015-10-08 2019-05-01 Macrogenics Inc Polythérapie pour le traitement du cancer
TWI756187B (zh) 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途
MA43186B1 (fr) * 2015-11-03 2022-03-31 Janssen Biotech Inc Anticorps se liant spécifiquement à pd-1 et leurs utilisations
TW202216787A (zh) 2015-11-18 2022-05-01 美商默沙東藥廠 Pd1及／或 lag3結合劑
CN106699889A (zh) * 2015-11-18 2017-05-24 礼进生物医药科技（上海）有限公司 抗pd-1抗体及其治疗用途
KR20180085793A (ko) * 2015-12-02 2018-07-27 주식회사 에스티큐브 글리코실화된 pd-1에 대해 특이적인 항체 및 이의 사용 방법
AU2016370376B2 (en) 2015-12-14 2023-12-14 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules having immunoreactivity with PD-1 and CTLA-4, and methods of use thereof
US10392442B2 (en) 2015-12-17 2019-08-27 Bristol-Myers Squibb Company Use of anti-PD-1 antibody in combination with anti-CD27 antibody in cancer treatment
MA44146B1 (fr) * 2015-12-22 2023-10-31 Regeneron Pharma Combinaison d'anticorps anti-pd-1 et d'anticorps bispécifiques anti-cd20/anti-cd3 pour traiter le cancer
CN105669864B (zh) * 2015-12-23 2018-10-16 杭州尚健生物技术有限公司 抗人程序性死亡受体1抗体及其制备方法和用途
EP3405499A4 (en) * 2016-01-21 2020-03-18 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University TREATING CANCER WITH COMBINATIONS OF IMMUNE REGULATORS
US11214617B2 (en) 2016-01-22 2022-01-04 MabQuest SA Immunological reagents
CN109311981B (zh) * 2016-01-22 2022-08-23 马布奎斯特公司 Pd1特异性抗体
US11513127B2 (en) 2016-01-25 2022-11-29 Genentech, Inc. Methods for assaying T-cell dependent bispecific antibodies
US11180546B2 (en) 2016-02-17 2021-11-23 Novartis Ag TGFbeta 2 antibodies
BR112018067458A2 (pt) 2016-03-04 2019-01-02 Abmuno Therapeutics Llc anticorpos para tigit
US11549099B2 (en) 2016-03-23 2023-01-10 Novartis Ag Cell secreted minibodies and uses thereof
EP3432927A4 (en) * 2016-03-24 2019-11-20 Gensun Biopharma Inc. TRIPLE-SPECIFIC INHIBITORS FOR CANCER TREATMENT
US11542332B2 (en) 2016-03-26 2023-01-03 Bioatla, Inc. Anti-CTLA4 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
CA3039910A1 (en) 2016-03-28 2017-10-05 The Regents Of The University Of California Anti-ryk antibodies and methods of using the same
MX2018011939A (es) 2016-03-29 2019-05-20 Stcube Inc Anticuerpos de funcion doble especificos para pd-l1 glicosilada y metodos de uso de los mismos.
EP3452084A4 (en) 2016-05-02 2020-01-01 Tetragenetics, Inc. ANTI-KV 1.3 ANTIBODIES AND METHODS OF PRODUCING AND USING THE SAME
TWI822521B (zh) * 2016-05-13 2023-11-11 美商再生元醫藥公司 藉由投予pd-1抑制劑治療皮膚癌之方法
US11083790B2 (en) 2016-06-02 2021-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of Hodgkin lymphoma using an anti-PD-1 antibody
KR20190008962A (ko) 2016-06-02 2019-01-25 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 림프종 치료에서의 항-cd30 항체와 조합된 항-pd-1 항체의 용도
JP2019517498A (ja) 2016-06-03 2019-06-24 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 再発性小細胞肺癌の処置方法において使用するための抗ｐｄ−１抗体
KR20190015408A (ko) 2016-06-03 2019-02-13 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법에 사용하기 위한 항-pd-1 항체
KR102515509B1 (ko) 2016-06-03 2023-03-28 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 결장직장암을 갖는 환자의 치료에서의 항-pd-1 항체의 용도
WO2017214182A1 (en) * 2016-06-07 2017-12-14 The United States Of America. As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Fully human antibody targeting pdi for cancer immunotherapy
MA45192A (fr) * 2016-06-07 2019-04-10 Macrogenics Inc Traitement d'association
AU2017279046B2 (en) * 2016-06-10 2020-07-02 Novartis Ag Therapeutic uses of a c-Raf inhibitor
CN109563170B (zh) 2016-06-10 2023-10-13 瑞泽恩制药公司 抗gitr抗体及其用途
CA3029813A1 (en) 2016-06-13 2017-12-21 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
US9567399B1 (en) 2016-06-20 2017-02-14 Kymab Limited Antibodies and immunocytokines
MX2018016364A (es) 2016-06-20 2019-11-28 Kymab Ltd Anticuerpos anti-pd-l1.
GB2569463A (en) * 2016-07-18 2019-06-19 Harvard College Human lymphoid tissue-on-chip
WO2018017673A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Stcube, Inc. Methods of cancer treatment and therapy using a combination of antibodies that bind glycosylated pd-l1
NL2017267B1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Aduro Biotech Holdings Europe B V Anti-pd-1 antibodies
AU2017306432A1 (en) 2016-08-02 2019-03-21 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for TCR reprogramming using fusion proteins
MY189412A (en) * 2016-08-05 2022-02-10 Y Biologics Inc Antibody to programmed cell death 1 (pd-1) and use thereof
WO2018026248A1 (ko) * 2016-08-05 2018-02-08 주식회사 와이바이오로직스 프로그램화된 세포 사멸 단백질(pd-1)에 대한 신규 항체 및 이의 용도
US11858996B2 (en) 2016-08-09 2024-01-02 Kymab Limited Anti-ICOS antibodies
EP3500294A4 (en) * 2016-08-22 2020-07-29 Arbutus Biopharma Corporation ANTI-PD-1 ANTIBODIES OR FRAGMENTS THEREOF FOR TREATING HEPATITIS B
WO2018035710A1 (en) 2016-08-23 2018-03-01 Akeso Biopharma, Inc. Anti-ctla4 antibodies
CN106967172B (zh) 2016-08-23 2019-01-08 康方药业有限公司 抗ctla4-抗pd-1 双功能抗体、其药物组合物及其用途
CN106977602B (zh) * 2016-08-23 2018-09-25 中山康方生物医药有限公司 一种抗pd1单克隆抗体、其药物组合物及其用途
WO2018039499A1 (en) 2016-08-24 2018-03-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Host cell protein modification
JP2019531284A (ja) 2016-09-19 2019-10-31 セルジーン コーポレイション Ｐｄ−１結合タンパク質を使用して免疫障害を治療する方法
US10766958B2 (en) 2016-09-19 2020-09-08 Celgene Corporation Methods of treating vitiligo using PD-1 binding antibodies
EA201990285A1 (ru) 2016-09-29 2019-12-30 Бейджин Ханми Фармасьютикал Ко., Лтд. Гетеродимерные иммуноглобулиновые конструкции и способы их получения
PL3445787T3 (pl) 2016-10-07 2021-05-31 TCR2 Therapeutics Inc. Kompozycje i sposoby reprogramowania receptorów limfocytów t przy użyciu białek fuzyjnych
US20190315865A1 (en) 2016-10-28 2019-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating urothelial carcinoma using an anti-pd-1 antibody
KR20190101364A (ko) 2016-11-01 2019-08-30 테사로, 인코포레이티드 예정 사멸-1(pd-1)에 대한 항체
AU2017355401A1 (en) 2016-11-02 2019-05-02 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to PD-1 and uses thereof
BR112019008223A2 (pt) 2016-11-03 2019-07-16 Bristol-Myers Squibb Company anticorpos anti-ctla-4 ativáveis e usos dos mesmos
WO2018083248A1 (en) 2016-11-03 2018-05-11 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods
AU2017356860A1 (en) 2016-11-08 2019-05-16 Qilu Puget Sound Biotherapeutics Corporation Anti-PD1 and anti-CTLA4 antibodies
MX2019005858A (es) 2016-11-18 2019-08-12 Beijing Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo biespecifico heterodimerico estructural de anticuerpo natural anti-pd-1/anti-her2 y metodo para preparar el mismo.
US11359018B2 (en) 2016-11-18 2022-06-14 Symphogen A/S Anti-PD-1 antibodies and compositions
US11279694B2 (en) 2016-11-18 2022-03-22 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
CA3044593A1 (en) 2016-11-22 2018-05-31 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
WO2018098352A2 (en) 2016-11-22 2018-05-31 Jun Oishi Targeting kras induced immune checkpoint expression
MY191926A (en) * 2016-12-01 2022-07-18 Regeneron Pharma Radiolabeled anti-pd-l1 antibodies for immuno-pet imaging
CN110168105A (zh) 2016-12-09 2019-08-23 瑞泽恩制药公司 用于对t细胞受体进行测序的系统和方法及其用途
JP7122758B2 (ja) * 2016-12-23 2022-08-22 アールイーエムディー バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド プログラム死－１（ｐｄ－１）に結合する抗体を使用する免疫療法
CN106674209B (zh) * 2016-12-23 2020-03-06 深圳先进技术研究院 程序性死亡受体1基因抑制剂及其制备方法与应用
CN108203464B (zh) * 2016-12-25 2021-07-20 南京金斯瑞生物科技有限公司 高亲和力、高特异性、多抗原识别表位的具有更高功能性的抗人pd-1抗体
CN113480530A (zh) 2016-12-26 2021-10-08 阿里根公司 芳香烃受体调节剂
WO2018128939A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Gensun Biopharma Inc. Checkpoint regulator antagonists
US11407830B2 (en) 2017-01-09 2022-08-09 Tesaro, Inc. Methods of treating cancer with anti-PD-1 antibodies
WO2018134279A1 (en) 2017-01-18 2018-07-26 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Novel fusion polypeptides specific for lag-3 and pd-1
EA201991729A1 (ru) * 2017-01-20 2019-12-30 Санофи Антитела к tgf-бета и их применение
TW202313678A (zh) 2017-01-20 2023-04-01 法商賽諾菲公司 抗TGF-β抗體及其用途
AR110755A1 (es) 2017-01-20 2019-05-02 Genzyme Corp Anticuerpos dirigidos a hueso
US20200237874A1 (en) 2017-01-20 2020-07-30 Novartis Ag Combination therapy for the treatment of cancer
WO2018133842A1 (zh) 2017-01-20 2018-07-26 大有华夏生物医药集团有限公司 人程序性死亡受体pd-1的单克隆抗体及其片段
AR110904A1 (es) * 2017-01-20 2019-05-15 Sanofi Sa ANTICUERPOS ANTI-TGF-b Y SU USO
KR20190115053A (ko) 2017-02-10 2019-10-10 노파르티스 아게 1-(4-아미노-5-브로모-6-(1h-피라졸-1-일)피리미딘-2-일)-1h-피라졸-4-올 및 암 치료에 있어서의 이의 용도
EP3580238A1 (en) 2017-02-10 2019-12-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled anti-lag3 antibodies for immuno-pet imaging
TWI674261B (zh) 2017-02-17 2019-10-11 美商英能腫瘤免疫股份有限公司 Nlrp3 調節劑
KR20240011262A (ko) 2017-02-21 2024-01-25 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 폐암의 치료를 위한 항-pd-1 항체
EP3585431A4 (en) 2017-02-24 2020-12-16 MacroGenics, Inc. BISPECIFIC BINDING MOLECULES CAPABLE OF BINDING TO CD137 AND TUMOR ANTIGENS, AND THEIR USES
UY37621A (es) 2017-02-28 2018-09-28 Sanofi Sa Arn terapéutico que codifica citoquinas
CN110637031B (zh) * 2017-03-04 2024-04-16 湘潭腾华生物科技有限公司 程序性死亡蛋白1(pd-1)的重组抗体及其用途
BR112019018915A2 (pt) 2017-03-15 2020-04-14 Pandion Therapeutics Inc imunotolerância direcionada
AU2018246252A1 (en) * 2017-03-29 2019-09-19 Celgene Corporation Formulations comprising PD-1 binding proteins and methods of making thereof
KR20190133213A (ko) 2017-03-31 2019-12-02 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법
SG11201909156RA (en) 2017-04-01 2019-10-30 Beijing hanmi pharm co ltd Anti-pd-l1/anti-pd-1 natural antibody structure-like heterodimeric bispecific antibody and preparation thereof
PE20191494A1 (es) * 2017-04-03 2019-10-21 Hoffmann La Roche Inmunoconjugados de un anticuerpo anti-pd-1 con un il-2 mutante o con il-15
CA3055769A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Oncologie, Inc. Methods for treating cancer using ps-targeting antibodies with immuno-oncology agents
CN116375876A (zh) 2017-04-05 2023-07-04 豪夫迈·罗氏有限公司 特异性结合pd1和lag3的双特异性抗体
MA49042A (fr) 2017-04-05 2020-02-12 Symphogen As Polythérapies ciblant pd-1, tim-3 et lag-3
US11603407B2 (en) * 2017-04-06 2023-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable antibody formulation
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
AR111760A1 (es) 2017-05-19 2019-08-14 Novartis Ag Compuestos y composiciones para el tratamiento de tumores sólidos mediante administración intratumoral
US11547741B2 (en) * 2017-05-22 2023-01-10 Oncoimmune, Inc. Methods of use of soluble CD24 for treating immune related adverse events in cancer therapies
CN111010866A (zh) 2017-05-24 2020-04-14 潘迪恩治疗公司 靶向免疫耐受性
EP3630179A2 (en) 2017-05-30 2020-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising an anti-lag-3 antibody or an anti-lag-3 antibody and an anti-pd-1 or anti-pd-l1 antibody
CN110691795A (zh) 2017-05-30 2020-01-14 百时美施贵宝公司 包含抗-lag3抗体、pd-1途径抑制剂和免疫治疗剂组合的组合物
CA3060984A1 (en) 2017-05-30 2018-12-06 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of lag-3 positive tumors
JOP20190279A1 (ar) 2017-05-31 2019-11-28 Novartis Ag الصور البلورية من 5-برومو -2، 6-داي (1h-بيرازول -1-يل) بيريميدين -4- أمين وأملاح جديدة
JP2020522508A (ja) 2017-06-01 2020-07-30 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｐｄ−１抗体を用いる腫瘍の治療方法
BR112019025574A2 (pt) 2017-06-05 2020-06-23 Janssen Biotech, Inc. Anticorpos que se ligam especificamente ao pd-1 e métodos de uso
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
GB201709808D0 (en) 2017-06-20 2017-08-02 Kymab Ltd Antibodies
EP3641812A1 (en) 2017-06-22 2020-04-29 Novartis AG Antibody molecules to cd73 and uses thereof
WO2018237173A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag ANTIBODY MOLECULES DIRECTED AGAINST CD73 AND CORRESPONDING USES
JP2020524694A (ja) 2017-06-22 2020-08-20 ノバルティス アーゲー がんの処置における使用のためのＩＬ−１β結合性抗体
WO2018235056A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag IL-1BETA BINDING ANTIBODIES FOR USE IN THE TREATMENT OF CANCER
JP2020529862A (ja) * 2017-06-25 2020-10-15 システィミューン， インク．Ｓｙｓｔｉｍｍｕｎｅ， Ｉｎｃ． 抗ｐｄ−１抗体とその作製及び使用方法
CA3066747A1 (en) 2017-06-27 2019-01-03 Novartis Ag Dosage regimens for anti-tim-3 antibodies and uses thereof
EP3421494A1 (en) 2017-06-29 2019-01-02 Sanofi Use of isatuximab in combination with an anti-pd-1 antibody
SG11201912548XA (en) 2017-07-06 2020-01-30 Regeneron Pharma Cell culture process for making a glycoprotein
EP3652166A1 (en) 2017-07-14 2020-05-20 Innate Tumor Immunity, Inc. Nlrp3 modulators
US20200172617A1 (en) 2017-07-20 2020-06-04 Novartis Ag Dosage regimens of anti-lag-3 antibodies and uses thereof
JP7304846B2 (ja) * 2017-07-24 2023-07-07 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 抗ｃｄ８抗体およびその使用
TWI799432B (zh) 2017-07-27 2023-04-21 美商再生元醫藥公司 抗ctla-4抗體及其用途
KR20200032180A (ko) 2017-07-28 2020-03-25 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항암제로서의 시클릭 디뉴클레오티드
EP3661556A4 (en) * 2017-07-29 2021-04-28 University of Southern California SYNTHETIC EXTRACELLULAR VESICLES FOR NEW THERAPIES
CN111164100B (zh) 2017-08-03 2024-03-12 美国安进公司 白介素-21突变蛋白和治疗方法
JP7208225B2 (ja) 2017-08-31 2023-01-18 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗癌剤としての環状ジヌクレオチド
KR102651946B1 (ko) 2017-08-31 2024-03-26 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항암제로서의 시클릭 디뉴클레오티드
CN111032672A (zh) 2017-08-31 2020-04-17 百时美施贵宝公司 作为抗癌剂的环二核苷酸
US11021540B2 (en) * 2017-09-07 2021-06-01 Augusta University Research Institute, Inc. Antibodies to programmed cell death protein 1
JP7196160B2 (ja) 2017-09-12 2022-12-26 スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド Ｍｃｌ－１阻害剤アルボシジブを用いた、ｂｃｌ－２阻害剤に対して非感受性である癌の治療レジメン
SG11202002282TA (en) 2017-09-20 2020-04-29 Regeneron Pharma Immunotherapy methods for patients whose tumors carry a high passenger gene mutation burden
CN111344297B (zh) 2017-10-10 2023-10-20 百时美施贵宝公司 作为抗癌剂的环二核苷酸
JP2020536894A (ja) 2017-10-15 2020-12-17 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 腫瘍処置法
KR20200065065A (ko) 2017-10-16 2020-06-08 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항암제로서의 시클릭 디뉴클레오티드
WO2019081983A1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Novartis Ag CD32B TARGETING ANTIBODIES AND METHODS OF USE
CN111263771A (zh) * 2017-11-03 2020-06-09 诺华股份有限公司 用于治疗干燥综合征的抗cd40抗体
CN111213059B (zh) 2017-11-06 2024-01-09 豪夫迈·罗氏有限公司 用于癌症的诊断和治疗方法
CN111315397A (zh) 2017-11-06 2020-06-19 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
WO2019090390A1 (en) * 2017-11-08 2019-05-16 University Of Canberra Immunogenic compositions and uses therefor
CN111655288A (zh) 2017-11-16 2020-09-11 诺华股份有限公司 组合疗法
TW201925194A (zh) 2017-11-20 2019-07-01 美商雅里俊公司 吲哚化合物及其用途
KR20200096253A (ko) 2017-11-30 2020-08-11 노파르티스 아게 Bcma-표적화 키메라 항원 수용체, 및 이의 용도
US10174091B1 (en) 2017-12-06 2019-01-08 Pandion Therapeutics, Inc. IL-2 muteins
US10946068B2 (en) 2017-12-06 2021-03-16 Pandion Operations, Inc. IL-2 muteins and uses thereof
CN109912577B (zh) * 2017-12-12 2021-10-22 深圳先进技术研究院 用于抑制eb病毒相关肿瘤的化合物及其制备方法和用途
WO2019122882A1 (en) 2017-12-19 2019-06-27 Kymab Limited Bispecific antibody for icos and pd-l1
EP3727629A1 (en) 2017-12-22 2020-10-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. System and method for characterizing drug product impurities
WO2019136432A1 (en) 2018-01-08 2019-07-11 Novartis Ag Immune-enhancing rnas for combination with chimeric antigen receptor therapy
TW201930344A (zh) 2018-01-12 2019-08-01 美商安進公司 抗ｐｄ-１抗體及治療方法
EP3740506A1 (en) 2018-01-16 2020-11-25 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating cancer with antibodies against tim3
SG11202006823XA (en) 2018-01-22 2020-08-28 Bristol Myers Squibb Co Compositions and methods of treating cancer
CA3096287A1 (en) 2018-01-22 2019-07-25 Pascal Biosciences Inc. Cannabinoids and derivatives for promoting immunogenicity of tumor and infected cells
CA3090249A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
EA202091689A1 (ru) 2018-01-31 2020-10-22 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Система и способ определения характеристик примесей, представляющих собой варианты, отличающиеся по размеру и заряду, в продукте, представляющем собой лекарственное средство
KR102171766B1 (ko) * 2018-02-02 2020-10-29 주식회사 뉴라클제네틱스 Pd-l1 결합력이 증대된 pd-1 변이체
TWI786265B (zh) 2018-02-02 2022-12-11 美商再生元醫藥公司 用於表徵蛋白質二聚合之系統及方法
WO2019153200A1 (zh) 2018-02-08 2019-08-15 北京韩美药品有限公司 抗pd-1/抗her2天然抗体结构样异源二聚体形式双特异抗体及其制备
US10519187B2 (en) 2018-02-13 2019-12-31 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
EP3752203A1 (en) 2018-02-13 2020-12-23 Novartis AG Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
GB201802573D0 (en) * 2018-02-16 2018-04-04 Crescendo Biologics Ltd Therapeutic molecules that bind to LAG3
WO2019168774A1 (en) 2018-02-28 2019-09-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for identifying viral contaminants
AU2019227715B2 (en) 2018-02-28 2022-03-31 Ap Biosciences, Inc. Bifunctional proteins combining checkpoint blockade for targeted therapy
JP7250808B2 (ja) 2018-03-08 2023-04-03 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗がん剤としての環状ジヌクレオチド
IL307577A (en) 2018-03-19 2023-12-01 Regeneron Pharma In-house capillary electrophoresis tests and reagents
MX2020009550A (es) * 2018-03-22 2020-11-11 Keires Ag Proteinas de union a antigeno antagonistas.
EP3768277A1 (en) * 2018-03-23 2021-01-27 Isr Immune System Regulation Holding Ab (Publ) Combinations of macrolide compounds and immune checkpoint inhibitors
CN111886256A (zh) 2018-03-23 2020-11-03 百时美施贵宝公司 抗mica和/或micb抗体及其用途
CN108546297B (zh) * 2018-03-29 2019-08-02 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 针对pd-1的单克隆抗体及其应用
CN111971306A (zh) 2018-03-30 2020-11-20 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
WO2019195452A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Bristol-Myers Squibb Company Anti-cd27 antibodies and uses thereof
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
CN109336975B (zh) * 2018-04-18 2022-05-13 中国科学院微生物研究所 一种靶向pd-1的肿瘤抑制性抗体及其应用
CN112074516A (zh) 2018-04-25 2020-12-11 先天肿瘤免疫公司 Nlrp3调节剂
CN110404066B (zh) * 2018-04-28 2022-06-17 齐鲁制药有限公司 一种抗人pd-1的单克隆抗体制剂、联合用药物及其用途
CN108840932B (zh) * 2018-04-28 2022-03-29 中国科学院微生物研究所 一种pd-1特异性抗体及其抗肿瘤应用
MX2020011684A (es) 2018-05-04 2020-12-10 Merck Patent Gmbh Inhibicion combinada de pd-1/pd-l1, tgfbeta y dna-pk para el tratamiento del cancer.
TW202016125A (zh) 2018-05-10 2020-05-01 美商再生元醫藥公司 用於定量及調節蛋白質黏度之系統與方法
WO2019219709A1 (en) 2018-05-14 2019-11-21 Immunocore Limited Bifunctional binding polypeptides
WO2019219064A1 (en) * 2018-05-17 2019-11-21 Nanjing Leads Biolabs Co.Ltd Antibody binding pd-1 and use thereof
UY38247A (es) 2018-05-30 2019-12-31 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
US20210214459A1 (en) 2018-05-31 2021-07-15 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
EP3810109A4 (en) 2018-05-31 2022-03-16 Peloton Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING CD73
CN112384531A (zh) 2018-06-01 2021-02-19 诺华股份有限公司 针对bcma的结合分子及其用途
CN112351820A (zh) 2018-06-21 2021-02-09 瑞泽恩制药公司 双特异性抗psma x抗cd28抗体及其用途
TW202005985A (zh) 2018-06-21 2020-02-01 美商再生元醫藥公司 用雙特異性抗ＣＤ３ｘＭＵＣ１６抗體及抗ＰＤ－１抗體治療癌症的方法
TWI819011B (zh) 2018-06-23 2023-10-21 美商建南德克公司 以pd-1 軸結合拮抗劑、鉑劑及拓撲異構酶ii 抑制劑治療肺癌之方法
US11795206B2 (en) 2018-06-24 2023-10-24 Yunbiao Lu Specific bifunctional BY-001 (active composition of homomultimer of chimeric protein pd-L1 / fc-gamma1) down regulates the activation of human immune cells and the use thereof
JP2021529556A (ja) 2018-06-29 2021-11-04 ジェンサン バイオファーマ、 インコーポレイテッドＧｅｎｓｕｎ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ， Ｉｎｃ． 抗腫瘍アンタゴニスト
KR20210042909A (ko) * 2018-07-09 2021-04-20 프레시전 인코포레이티드 융합 구조물 및 그의 이용 방법
CA3103385A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Novartis Ag 3-(5-hydroxy-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and their use in the treatment of ikaros family zinc finger 2 (ikzf2)-dependent diseases
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
JP2021530502A (ja) 2018-07-18 2021-11-11 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｐｄ−１軸結合アンタゴニスト、代謝拮抗剤、及びプラチナ製剤で肺がんを治療する方法
CN112424231B (zh) * 2018-07-19 2022-09-13 大有华夏生物医药集团有限公司 抗pd-1抗体及其剂量和用途
WO2020021465A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. Method of treatment of neuroendocrine tumors
WO2020021061A1 (en) 2018-07-26 2020-01-30 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Humanized anti-pd-1 antibodies and uses thereof
JP2021532143A (ja) 2018-07-26 2021-11-25 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーBristol−Myers Squibb Company 癌の処置のためのｌａｇ−３併用療法
EP3837015B1 (en) 2018-08-16 2024-02-14 Innate Tumor Immunity, Inc. Imidazo[4,5-c]quinoline derived nlrp3-modulators
MX2021001581A (es) 2018-08-16 2021-04-19 Innate Tumor Immunity Inc Compuestos de 4-amino-1h-imidazo[4,5-c]quinolina sustituidos y metodos mejorados para su preparacion.
KR20210046023A (ko) 2018-08-16 2021-04-27 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 이미다조[4,5-c]퀴놀린 유래 NLRP3-조정제
TW202026423A (zh) 2018-08-24 2020-07-16 法商賽諾菲公司 用於實體瘤癌症的治療性ｒｎａ
BR112020024296A2 (pt) 2018-08-27 2021-03-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Métodos para produção de um intermediário de purificação de proteína concentrado, para monitoramento e controle dos atributos de qualidade críticos em um intermediário de purificação de proteína e para monitorar e controlar os níveis de excipientes no fluido de cultura de células colhido e/ou intermediário de purificação de proteína, e, intermediário de purificação de proteína
US20210246219A1 (en) 2018-08-27 2021-08-12 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Combination therapies comprising cd137/her2 bispecific agents and pd-1 axis inhibitors and uses thereof
EA202190032A1 (ru) 2018-08-30 2021-03-12 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Способы определения характеристик белковых комплексов
WO2020044252A1 (en) 2018-08-31 2020-03-05 Novartis Ag Dosage regimes for anti-m-csf antibodies and uses thereof
CN112771077A (zh) 2018-08-31 2021-05-07 瑞泽恩制药公司 针对cd3/c20双特异性抗体的减轻细胞因子释放综合征的给药策略
TW202024023A (zh) 2018-09-03 2020-07-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 治療性化合物及其使用方法
WO2020049534A1 (en) 2018-09-07 2020-03-12 Novartis Ag Sting agonist and combination therapy thereof for the treatment of cancer
KR20210072059A (ko) 2018-10-09 2021-06-16 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 암을 치료하기 위한 항-MerTK 항체
EP3867409A1 (en) 2018-10-16 2021-08-25 Novartis AG Tumor mutation burden alone or in combination with immune markers as biomarkers for predicting response to targeted therapy
MX2021003903A (es) 2018-10-19 2021-06-04 Bristol Myers Squibb Co Terapia combinada para el melanoma.
JP2022505647A (ja) 2018-10-23 2022-01-14 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 腫瘍の処置方法
EP3873532A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Novartis AG Dc-sign antibody drug conjugates
MX2021005594A (es) * 2018-11-13 2021-10-22 Compass Therapeutics Llc Constructos multiespecificos de union contra moleculas de puntos de control y usos de los mismos.
CN113038939A (zh) 2018-11-14 2021-06-25 瑞泽恩制药公司 损害内施用pd-1抑制剂用于治疗皮肤癌
EP3880708A1 (en) 2018-11-16 2021-09-22 Bristol-Myers Squibb Company Anti-nkg2a antibodies and uses thereof
TW202038943A (zh) 2018-11-19 2020-11-01 美商雅里俊公司 治療癌症之方法
KR20210116437A (ko) 2018-11-20 2021-09-27 코넬 유니버시티 방사성핵종의 마크로사이클릭 복합체 및 암의 방사선 요법에서의 이의 용도
MX2021006544A (es) 2018-12-04 2021-07-07 Sumitomo Pharma Oncology Inc Inhibidores de cinasa dependiente de ciclina 9 (cdk9) y polimorfos de los mismos para uso como agentes para el tratamiento de cancer.
EP3891508A1 (en) 2018-12-04 2021-10-13 Bristol-Myers Squibb Company Methods of analysis using in-sample calibration curve by multiple isotopologue reaction monitoring
EP3894401A2 (en) 2018-12-11 2021-10-20 Theravance Biopharma R&D IP, LLC Naphthyridine and quinoline derivatives useful as alk5 inhibitors
EP3898695A1 (en) 2018-12-19 2021-10-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bispecific anti-muc16 x anti-cd28 antibodies and uses thereof
HUE063732T2 (hu) * 2018-12-19 2024-01-28 Humabs Biomed Sa Hepatitisz B vírust semlegesítõ antitestek és alkalmazásaik
MA54540A (fr) 2018-12-19 2021-10-27 Regeneron Pharma Anticorps anti-cd28 x anti-cd22 bispécifiques et leurs utilisations
CA3123511A1 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Novartis Ag Dosing regimen and pharmaceutical combination comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
US20200369762A1 (en) 2018-12-21 2020-11-26 Novartis Ag Use of il-1beta binding antibodies
KR20210108422A (ko) 2018-12-21 2021-09-02 노파르티스 아게 IL-1β 결합 항체의 용도
WO2020128637A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1 binding antibodies in the treatment of a msi-h cancer
WO2020128613A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1beta binding antibodies
KR20210109564A (ko) 2018-12-21 2021-09-06 옹쎄오 신규의 컨쥬게이티드 핵산 분자 및 이의 용도
EP3899951A1 (en) 2018-12-23 2021-10-27 F. Hoffmann-La Roche AG Tumor classification based on predicted tumor mutational burden
WO2020140088A1 (en) * 2018-12-27 2020-07-02 Gigagen, Inc. Anti-pd-1 binding proteins and methods of use thereof
JP2022517111A (ja) 2019-01-14 2022-03-04 イネイト・テューマー・イミュニティ・インコーポレイテッド がんの治療に用いるためのヘテロ環ｎｌｒｐ３モジュレーター
CN113286787A (zh) 2019-01-14 2021-08-20 先天肿瘤免疫公司 Nlrp3调节剂
WO2020150152A1 (en) 2019-01-14 2020-07-23 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with a pd-1 axis binding antagonist and an rna vaccine
EP3911416A1 (en) 2019-01-14 2021-11-24 Innate Tumor Immunity, Inc. Substituted quinazolines as nlrp3 modulators, for use in the treatment of cancer
CN113286786A (zh) 2019-01-14 2021-08-20 先天肿瘤免疫公司 Nlrp3调节剂
ES2942024T3 (es) 2019-01-16 2023-05-29 Regeneron Pharma Métodos para caracterizar enlaces disulfuro
TW202043274A (zh) 2019-01-21 2020-12-01 法商賽諾菲公司 用於晚期實性瘤癌症之治療性ｒｎａ及抗ｐｄ１抗體
WO2020160375A1 (en) 2019-02-01 2020-08-06 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination treatments for cancer comprising belantamab mafodotin and an anti ox40 antibody and uses and methods thereof
EP3923940A1 (en) 2019-02-12 2021-12-22 Novartis AG Pharmaceutical combination comprising tno155 and a pd-1 inhibitor
JP2022520361A (ja) 2019-02-12 2022-03-30 スミトモ ダイニッポン ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド 複素環式タンパク質キナーゼ阻害剤を含む製剤
US20220144807A1 (en) 2019-02-15 2022-05-12 Novartis Ag 3-(1-oxo-5-(piperidin-4-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
AU2020222346B2 (en) 2019-02-15 2021-12-09 Novartis Ag Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
SG11202108089SA (en) * 2019-02-28 2021-08-30 Regeneron Pharma Administration of pd-1 inhibitors for treating skin cancer
JP2022523804A (ja) 2019-03-06 2022-04-26 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド がんの処置における増強された有効性のためのｉｌ－４／ｉｌ－１３経路阻害剤
JP2022525149A (ja) 2019-03-20 2022-05-11 スミトモ ダイニッポン ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド ベネトクラクスが失敗した急性骨髄性白血病（ａｍｌ）の処置
JP2022519923A (ja) 2019-03-22 2022-03-25 スミトモ ダイニッポン ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド Ｐｋｍ２モジュレーターを含む組成物およびそれを使用する処置の方法
KR20210142659A (ko) 2019-03-22 2021-11-25 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. Egfr×cd28 다중특이성 항체
US20220041733A1 (en) 2019-03-28 2022-02-10 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
EP3946628A1 (en) 2019-03-28 2022-02-09 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
CN113710265A (zh) 2019-04-12 2021-11-26 脉管生物生长有限公司 抗肿瘤治疗的方法
CN113906021A (zh) 2019-04-15 2022-01-07 阿里根公司 手性吲哚化合物及其用途
EP3725370A1 (en) 2019-04-19 2020-10-21 ImmunoBrain Checkpoint, Inc. Modified anti-pd-l1 antibodies and methods and uses for treating a neurodegenerative disease
CN114364703A (zh) 2019-04-19 2022-04-15 豪夫迈·罗氏有限公司 抗mertk抗体及它们的使用方法
EP3969908A1 (en) 2019-05-13 2022-03-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Improved competitive ligand binding assays
US20230295087A1 (en) 2019-05-13 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
MX2021013815A (es) 2019-05-13 2021-12-14 Regeneron Pharma Combinacion de inhibidores de pd-1 e inhibidores de lag-3 para mejorar la eficacia en el tratamiento contra el cancer.
US20230242478A1 (en) 2019-05-13 2023-08-03 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
MX2021014178A (es) 2019-05-20 2022-01-04 Pandion Operations Inc Inmunotolerancia dirigida a la molecula de adhesion celular de adresina vascular de mucosas (madcam).
JP2022534889A (ja) 2019-05-24 2022-08-04 ファイザー・インコーポレイテッド Ｃｄｋ阻害剤を使用した組合せ療法
US20220363760A1 (en) 2019-05-30 2022-11-17 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signature for suitability to immuno-oncology therapy
EP3977132A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and combination therapy
CN114127315A (zh) 2019-05-30 2022-03-01 百时美施贵宝公司 鉴定适合于免疫肿瘤学(i-o)疗法的受试者的方法
US20220275088A1 (en) * 2019-06-14 2022-09-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antibodies against pd-1 and methods of use thereof
KR20220041080A (ko) 2019-06-18 2022-03-31 얀센 사이언시즈 아일랜드 언리미티드 컴퍼니 B형 간염 바이러스(hbv) 백신 및 항-pd-1 또는 항-pc-l1 항체의 조합
CN114206379A (zh) 2019-06-18 2022-03-18 爱尔兰詹森科学公司 乙型肝炎病毒(hbv)疫苗和抗pd-1抗体的组合
CN114340735A (zh) 2019-06-28 2022-04-12 璟尚生物制药公司 突变的TGFβ1-RII胞外域和免疫球蛋白支架组成的抗肿瘤拮抗剂
MX2022000164A (es) 2019-07-03 2022-04-01 Sumitomo Pharma Oncology Inc Inhibidores de tirosina cinasa no receptora 1 (tnk1) y usos de los mismos.
TW202328206A (zh) 2019-07-05 2023-07-16 日商小野藥品工業股份有限公司 以ｐｄ－１／ｃｄ３雙特異性蛋白質所進行之血液性癌症治療
CA3143478A1 (en) * 2019-07-09 2021-01-14 Tomer Hertz Antibodies with reduced immunogenicity
US20210032322A1 (en) * 2019-08-01 2021-02-04 Vaccinex, Inc. Combined inhibition of semaphorin-4d and tgf-beta and compositions therefor
US20220306630A1 (en) 2019-08-06 2022-09-29 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
EP4011918A4 (en) 2019-08-08 2023-08-23 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. DUAL SPECIFIC PROTEIN
US11629190B2 (en) 2019-08-15 2023-04-18 Oregon State University Canine antibody therapeutic for treating cancer
EP4031578A1 (en) 2019-09-18 2022-07-27 Novartis AG Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
CN114450028A (zh) 2019-09-22 2022-05-06 百时美施贵宝公司 Lag-3拮抗剂治疗的定量空间剖析
CA3216345A1 (en) 2019-09-24 2021-04-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for chromatography use and regeneration
CN114728046A (zh) 2019-09-25 2022-07-08 思进公司 联合抗cd30 adc、抗pd-1和化疗以治疗血液癌症
JP2022549337A (ja) 2019-09-25 2022-11-24 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー がん療法のための複合バイオマーカー
BR112022007179A2 (pt) 2019-10-21 2022-08-23 Novartis Ag Inibidores de tim-3 e usos dos mesmos
TW202128166A (zh) 2019-10-21 2021-08-01 瑞士商諾華公司 組合療法
EP4055033A4 (en) * 2019-11-04 2023-12-06 Inovio Pharmaceuticals, Inc. COMBINATION THERAPY FOR THE TREATMENT OF BRAIN CANCER
KR20220092578A (ko) 2019-11-05 2022-07-01 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 M-단백질 검정 및 이의 용도
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
MX2022004501A (es) 2019-11-07 2022-05-06 Oncxerna Therapeutics Inc Clasificacion de microambientes tumorales.
MX2022005474A (es) 2019-11-08 2022-06-02 Bristol Myers Squibb Co Tratamiento de melanoma con antagonistas del gen 3 de activacion de linfocitos (lag-3).
MX2022005775A (es) 2019-11-13 2022-06-09 Genentech Inc Compuestos terapeuticos y metodos de uso.
US20220395553A1 (en) 2019-11-14 2022-12-15 Cohbar, Inc. Cxcr4 antagonist peptides
US20230000864A1 (en) 2019-11-22 2023-01-05 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Solid dose pharmaceutical composition
KR20220104208A (ko) 2019-11-22 2022-07-26 세라밴스 바이오파마 알앤디 아이피, 엘엘씨 Alk5 억제제로서 치환된 1,5-나프티리딘 또는 퀴놀린
CA3158119A1 (en) 2019-11-25 2021-06-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Sustained release formulations using non-aqueous emulsions
CA3164124A1 (en) 2019-12-09 2021-06-17 Seagen Inc. Combination therapy with liv1-adc and pd-1 antagonist
KR20220118481A (ko) 2019-12-19 2022-08-25 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Dgk 억제제 및 체크포인트 길항제의 조합물
CN115052662A (zh) 2019-12-20 2022-09-13 诺华股份有限公司 抗TGFβ抗体和检查点抑制剂用于治疗增殖性疾病的用途
EP4079763A4 (en) * 2019-12-20 2023-10-11 Guangdong Feipeng Pharmaceutical Co., Ltd MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST HUMAN PROGRAMMED DEATH-1 (PD-1)
KR20220127848A (ko) 2020-01-10 2022-09-20 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 Nlrp3 조정제
US20230058489A1 (en) 2020-01-17 2023-02-23 Novartis Ag Combination comprising a tim-3 inhibitor and a hypomethylating agent for use in treating myelodysplastic syndrome or chronic myelomonocytic leukemia
BR112022014212B1 (pt) 2020-01-21 2024-01-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc Métodos de análise de uma amostra incluindo uma proteína de interesse
KR20210095781A (ko) 2020-01-24 2021-08-03 주식회사 에이프릴바이오 항원결합 단편 및 생리활성 이펙터 모이어티로 구성된 융합 컨스트럭트를 포함하는 다중결합항체 및 이를 포함하는 약학조성물
BR112022014962A2 (pt) 2020-01-30 2022-09-20 Ona Therapeutics S L Terapia de combinação para tratamento de câncer e metástase de câncer
CN115397459A (zh) 2020-01-31 2022-11-25 基因泰克公司 用pd-1轴结合拮抗剂和rna疫苗诱导新表位特异性t细胞的方法
KR20220139915A (ko) 2020-02-06 2022-10-17 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Il-10 및 그의 용도
CN113244385A (zh) * 2020-02-07 2021-08-13 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd-1抗体在治疗恶性肿瘤中的用途
AU2021225491A1 (en) 2020-02-28 2022-10-20 Novartis Ag A triple pharmaceutical combination comprising dabrafenib, an Erk inhibitor and a RAF inhibitor
CA3168173A1 (en) 2020-03-06 2021-09-10 Robert Babb Anti-gitr antibodies and uses thereof
WO2021176424A1 (en) 2020-03-06 2021-09-10 Ona Therapeutics, S.L. Anti-cd36 antibodies and their use to treat cancer
CN115484958A (zh) 2020-03-06 2022-12-16 赛尔基因昆蒂赛尔研究公司 用于治疗sclc或sqnsclc的lsd-1抑制剂和纳武单抗的组合
WO2021194942A1 (en) 2020-03-23 2021-09-30 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ccr8 antibodies for treating cancer
US20230107609A1 (en) * 2020-03-26 2023-04-06 Cureimmune Therapeutics Inc. Anti-pd-1 antibodies and methods of use
US11673879B2 (en) 2020-03-31 2023-06-13 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Substituted pyrimidines and methods of use
MX2022013031A (es) 2020-04-21 2023-01-04 Novartis Ag Regimen de dosificacion para el tratamiento de una enfermedad modulada por csf-1r.
CA3176515A1 (en) 2020-04-22 2021-10-28 Merck Sharp & Dohme Llc Human interleukin-2 conjugates biased for the interleukin-2 receptor beta gammac dimer and conjugated to a nonpeptidic, water-soluble polymer
EP4157464A1 (en) 2020-05-26 2023-04-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cervical cancer by administering the pd-1 inhibitor antibody cemiplimab
WO2021243028A1 (en) * 2020-05-27 2021-12-02 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bispecific molecules for selectively modulating t cells
EP4157875A1 (en) 2020-06-02 2023-04-05 Arcus Biosciences, Inc. Antibodies to tigit
WO2021253041A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Naphthyridine derivatives useful as alk5 inhibitors
AR122644A1 (es) 2020-06-19 2022-09-28 Onxeo Nuevas moléculas de ácido nucleico conjugado y sus usos
EP4168007A1 (en) 2020-06-23 2023-04-26 Novartis AG Dosing regimen comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
WO2022003568A1 (en) 2020-06-30 2022-01-06 Dcprime B.V. Use of leukemia-derived cells in ovarian cancer vaccines
WO2022008519A1 (en) 2020-07-07 2022-01-13 BioNTech SE Therapeutic rna for hpv-positive cancer
WO2022009157A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 Novartis Ag Lhc165 and spartalizumab combinations for treating solid tumors
US11787775B2 (en) 2020-07-24 2023-10-17 Genentech, Inc. Therapeutic compounds and methods of use
US20230271940A1 (en) 2020-08-03 2023-08-31 Novartis Ag Heteroaryl substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
WO2022046833A1 (en) 2020-08-26 2022-03-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cancer by administering a pd-1 inhibitor
BR112023003427A2 (pt) 2020-08-28 2023-03-21 Bristol Myers Squibb Co Terapia com antagonista de lag-3 para carcinoma hepatocelular
AU2021332355A1 (en) 2020-08-31 2023-03-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Asparagine feed strategies to improve cell culture performance and mitigate asparagine sequence variants
US20230321285A1 (en) 2020-08-31 2023-10-12 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
JP2023538955A (ja) 2020-08-31 2023-09-12 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 細胞局在シグネチャーおよび免疫療法
WO2022043558A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
EP4208482A1 (en) 2020-09-02 2023-07-12 Pharmabcine Inc. Combination therapy of a pd-1 antagonist and an antagonist for vegfr-2 for treating patients with cancer
JP2023542490A (ja) 2020-09-03 2023-10-10 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｐｄ－１阻害剤を投与することによりがん疼痛を処置する方法
BR112023001864A2 (pt) 2020-09-14 2023-03-28 Boehringer Ingelheim Int Vacina de reforço primário heteróloga
EP4214234A1 (en) 2020-09-18 2023-07-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antigen-binding molecules that bind cd38 and/or cd28, and uses thereof
BR112023005377A2 (pt) 2020-09-24 2023-04-25 Merck Sharp & Dohme Llc Formulações estáveis de anticorpos de receptor de morte programada 1 (pd-1) e variantes de hialuronidase e fragmentos das mesmas e métodos de uso das mesmas
US20230374160A1 (en) 2020-10-02 2023-11-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combination of antibodies for treating cancer with reduced cytokine release syndrome
JP2023544410A (ja) 2020-10-05 2023-10-23 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー タンパク質を濃縮するための方法
WO2022076596A1 (en) 2020-10-06 2022-04-14 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicle-aso constructs targeting stat6
WO2022086957A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Genentech, Inc. Peg-conjugated anti-mertk antibodies and methods of use
EP4232019A1 (en) 2020-10-23 2023-08-30 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for lung cancer
AU2021369590A1 (en) 2020-10-28 2023-06-22 Ikena Oncology, Inc. Combination of an ahr inhibitor with a pdx inhibitor or doxorubicine
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
CA3196076A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Chi-Chung Li Subcutaneous dosing of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
KR20230095119A (ko) 2020-11-04 2023-06-28 제넨테크, 인크. 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체를 사용한 치료를 위한 투약
CA3196191A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Chi-Chung Li Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and anti-cd79b antibody drug conjugates
AU2021373366A1 (en) 2020-11-06 2023-06-01 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
WO2022104043A1 (en) * 2020-11-13 2022-05-19 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd Pd-1 decoy variants for immunotherapy
MX2023006077A (es) 2020-11-25 2023-06-06 Regeneron Pharma Formulaciones de liberacion sostenida mediante emulsificacion por membrana no acuosa.
CA3202523A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Genentech, Inc. Methods and compositions for neoadjuvant and adjuvant urothelial carcinoma therapy
US20220168293A1 (en) 2020-12-02 2022-06-02 Pfizer Inc. Time to resolution of axitinib-related adverse events
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
TW202237119A (zh) 2020-12-10 2022-10-01 美商住友製藥腫瘤公司 Ａｌｋ﹘５抑制劑和彼之用途
JP2023553210A (ja) * 2020-12-15 2023-12-20 バイカラ セラピューティクス インコーポレイテッド がんの処置のための併用療法
US20220257707A1 (en) 2020-12-17 2022-08-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fabrication of protein-encapsulating microgels
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
CA3196999A1 (en) 2020-12-28 2022-07-07 Masano HUANG Methods of treating tumors
CA3201348A1 (en) 2020-12-28 2022-07-07 Masano HUANG Antibody compositions and methods of use thereof
AU2022209730A1 (en) 2021-01-20 2023-07-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of improving protein titer in cell culture
EP4281102A1 (en) 2021-01-22 2023-11-29 Mendus B.V. Methods of tumor vaccination
JP2024505049A (ja) 2021-01-29 2024-02-02 ノバルティス アーゲー 抗ｃｄ７３及び抗ｅｎｔｐｄ２抗体のための投与方式並びにその使用
WO2022169921A1 (en) 2021-02-04 2022-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Benzofuran compounds as sting agonists
CA3170208A1 (en) 2021-02-11 2022-08-18 Elizabeth Miller Methods of treating cancer by administering a neoadjuvant pd-1 inhibitor
AU2022230987A1 (en) 2021-03-03 2023-08-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for quantifying and modifying protein viscosity
AU2022235341A1 (en) 2021-03-12 2023-09-21 Mendus B.V. Methods of vaccination and use of cd47 blockade
EP4308935A1 (en) 2021-03-18 2024-01-24 Novartis AG Biomarkers for cancer and methods of use thereof
WO2022204672A1 (en) 2021-03-23 2022-09-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cancer in immunosuppressed or immunocompromised patients by administering a pd-1 inhibitor
TW202304506A (zh) 2021-03-25 2023-02-01 日商安斯泰來製藥公司 涉及抗claudin 18.2抗體的組合治療以治療癌症
CA3213049A1 (en) 2021-03-25 2022-09-29 Laura E. BENJAMIN Targeted therapies in cancer
BR112023018665A2 (pt) 2021-03-26 2023-10-03 Regeneron Pharma Métodos e sistemas para desenvolvimento de protocolos de mistura
IL307262A (en) 2021-03-29 2023-11-01 Juno Therapeutics Inc METHODS FOR DOSAGE AND THERAPY IN COMBINATION OF CHECKPOINT INHIBITOR AND CAR T CELL THERAPY
WO2022212876A1 (en) 2021-04-02 2022-10-06 The Regents Of The University Of California Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
CA3213079A1 (en) 2021-04-13 2022-10-20 Kristin Lynne ANDREWS Amino-substituted heterocycles for treating cancers with egfr mutations
JP2024516230A (ja) 2021-04-30 2024-04-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんのための治療及び診断方法並びに組成物
KR20240005691A (ko) 2021-04-30 2024-01-12 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체 및 항-cd79b 항체 약물 접합체를 이용한 병용 치료를 위한 투약
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
WO2022251853A1 (en) 2021-05-25 2022-12-01 Edelweiss Immune Inc C-x-c motif chemokine receptor 6 (cxcr6) binding molecules, and methods of using the same
WO2022251359A1 (en) 2021-05-26 2022-12-01 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Bicyclic inhibitors of alk5 and methods of use
TW202314240A (zh) 2021-06-01 2023-04-01 美商再生元醫藥公司 微晶片毛細管電泳分析及試劑
EP4346904A1 (en) 2021-06-03 2024-04-10 Synthorx, Inc. Head and neck cancer combination therapy comprising an il-2 conjugate and cetuximab
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
TW202317623A (zh) * 2021-06-14 2023-05-01 美商再生元醫藥公司 基於il2之治療劑及其使用方法
US20230036928A1 (en) 2021-06-18 2023-02-02 Genzyme Corporation Anti-tgf-beta antibody formulations and their use
TW202309078A (zh) 2021-07-02 2023-03-01 美商建南德克公司 治療癌症之方法及組成物
CA3225254A1 (en) 2021-07-13 2023-01-19 BioNTech SE Multispecific binding agents against cd40 and cd137 in combination therapy for cancer
US20230051304A1 (en) 2021-07-19 2023-02-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Il12 receptor agonists and methods of use thereof
WO2023004287A1 (en) 2021-07-19 2023-01-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combination of checkpoint inhibitors and an oncolytic virus for treating cancer
CA3224180A1 (en) 2021-07-28 2023-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating cancer
WO2023010094A2 (en) 2021-07-28 2023-02-02 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
CA3226281A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 ONA Therapeutics S.L. Anti-cd36 antibodies and their use to treat cancer
WO2023022965A2 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Novel il27 receptor agonists and methods of use thereof
TW202326138A (zh) 2021-09-08 2023-07-01 美商再生元醫藥公司 用於定量抗體及其他含Ｆｃ蛋白之高通量及基於質譜之方法
CA3232463A1 (en) 2021-09-20 2023-03-23 Philip Mellors Methods of controlling antibody heterogeneity
WO2023051926A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 BioNTech SE Treatment involving non-immunogenic rna for antigen vaccination and pd-1 axis binding antagonists
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
TW202327595A (zh) 2021-10-05 2023-07-16 美商輝瑞大藥廠 用於治療癌症之氮雜內醯胺化合物的組合
CA3234647A1 (en) 2021-10-06 2023-04-13 Genmab A/S Multispecific binding agents against pd-l1 and cd137 in combination therapy
US20230116199A1 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods of ph modeling and control
WO2023059803A1 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ph meter calibration and correction
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
WO2023076340A1 (en) 2021-10-26 2023-05-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for generating laboratory water and distributing laboratory water at different temperatures
IL309227A (en) 2021-10-29 2024-02-01 Bristol Myers Squibb Co LAG-3 antagonist therapy for hematological cancer
WO2023079428A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Pfizer Inc. Combination therapies using tlr7/8 agonist
WO2023080900A1 (en) 2021-11-05 2023-05-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for classifying and treating kidney cancer
WO2023083439A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 BioNTech SE Tlr7 agonist and combinations for cancer treatment
WO2023084445A1 (en) 2021-11-12 2023-05-19 Novartis Ag Combination therapy for treating lung cancer
US20230203062A1 (en) 2021-11-24 2023-06-29 Genentech, Inc. Therapeutic compounds and methods of use
TW202332429A (zh) 2021-11-24 2023-08-16 美商建南德克公司 治療性化合物及其使用方法
WO2023122573A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Synthorx, Inc. Head and neck cancer combination therapy comprising an il-2 conjugate and pembrolizumab
WO2023133280A1 (en) 2022-01-07 2023-07-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating recurrent ovarian cancer with bispecific anti-muc16 x anti-cd3 antibodies alone or in combination with anti-pd-1 antibodies
WO2023147371A1 (en) 2022-01-26 2023-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for hepatocellular carcinoma
WO2023154799A1 (en) 2022-02-14 2023-08-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Combination immunotherapy for treating cancer
WO2023159102A1 (en) 2022-02-17 2023-08-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combinations of checkpoint inhibitors and oncolytic virus for treating cancer
WO2023164638A1 (en) 2022-02-25 2023-08-31 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for colorectal carcinoma
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
WO2023170606A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Alentis Therapeutics Ag Use of anti-claudin-1 antibodies to increase t cell availability
WO2023177772A1 (en) 2022-03-17 2023-09-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating recurrent epithelioid sarcoma with bispecific anti-muc16 x anti-cd3 antibodies alone or in combination with anti-pd-1 antibodies
WO2023178329A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
TW202346856A (zh) 2022-03-18 2023-12-01 美商里珍納龍藥品有限公司 分析多肽變體的方法及系統
WO2023191816A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
CN116925223A (zh) * 2022-04-02 2023-10-24 普米斯生物技术(珠海)有限公司 抗pd-1单克隆抗体及其衍生物和用途
WO2023196987A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
US20230326022A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Machine Learning Identification, Classification, and Quantification of Tertiary Lymphoid Structures
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
WO2023220647A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific binding molecule proproteins and uses thereof
WO2023219613A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023218046A1 (en) 2022-05-12 2023-11-16 Genmab A/S Binding agents capable of binding to cd27 in combination therapy
WO2023224912A1 (en) 2022-05-16 2023-11-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating metastatic castration-resistant prostate cancer with bispecific anti-psma x anti-cd3 antibodies alone or in combination with anti-pd-1 antibodies
US20230416396A1 (en) 2022-05-18 2023-12-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific antigen binding molecules that bind cd38 and 4-1bb, and uses thereof
WO2023230554A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Pfizer Inc. Combination of a braf inhibitor, an egfr inhibitor, and a pd-1 antagonist for the treatment of braf v600e-mutant, msi-h/dmmr colorectal cancer
US20230382969A1 (en) 2022-05-27 2023-11-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Interleukin-2 proproteins and uses thereof
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2023235848A1 (en) 2022-06-04 2023-12-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Interleukin-2 proproteins and uses thereof
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2024015897A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020432A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4310197A1 (en) 2022-07-21 2024-01-24 Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario Puerta de Hierro Majadahonda Method for identifying lung cancer patients for a combination treatment of immuno- and chemotherapy
WO2024018069A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Philogen S.P.A Anti-cd28 antibodies
WO2024023740A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Astrazeneca Ab Combinations of recombinant virus expressing interleukin-12 with pd-1/pd-l1 inhibitors
WO2024030453A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating metastatic castration-resistant prostate cancer with bispecific anti-psma x anti-cd28 antibodies in combination with anti-pd-1 antibodies
WO2024040247A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Interferon proproteins and uses thereof
US20240067691A1 (en) 2022-08-18 2024-02-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Interferon receptor agonists and uses thereof
WO2024049949A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
WO2024069009A1 (en) 2022-09-30 2024-04-04 Alentis Therapeutics Ag Treatment of drug-resistant hepatocellular carcinoma
WO2024076926A1 (en) 2022-10-03 2024-04-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cancer with bispecific egfr x cd28 antibodies alone or in combination with anti-pd-1 antibodies
WO2024077095A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for classifying and treating bladder cancer
WO2024077166A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for classifying and treating lung cancer

Family Cites Families (92)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH07291996A (ja) 1994-03-01 1995-11-07 Yuu Honshiyo ヒトにおけるプログラムされた細胞死に関連したポリペプチド、それをコードするｄｎａ、そのｄｎａからなるベクター、そのベクターで形質転換された宿主細胞、そのポリペプチドの抗体、およびそのポリペプチドまたはその抗体を含有する薬学的組成物
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US7087411B2 (en) 1999-06-08 2006-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion protein capable of binding VEGF
WO2001014557A1 (en) 1999-08-23 2001-03-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
MXPA02001878A (es) 1999-08-23 2003-08-20 Dana Farber Cancer Inst Inc Moleculas b7-4 novedosas y usos de las mismas.
WO2001039722A2 (en) 1999-11-30 2001-06-07 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h1, a novel immunoregulatory molecule
CA2414331C (en) 2000-06-28 2011-11-29 Genetics Institute, Llc. Pd-l2 molecules: novel pd-1 ligands and uses therefor
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
AR036993A1 (es) 2001-04-02 2004-10-20 Wyeth Corp Uso de agentes que modulan la interaccion entre pd-1 y sus ligandos en la submodulacion de respuestas inmunologicas
WO2002086083A2 (en) 2001-04-20 2002-10-31 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of enhancing cell responsiveness
CA2466279A1 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof
PT1537878E (pt) 2002-07-03 2010-11-18 Ono Pharmaceutical Co Composições de imunopotenciação
JP2004104681A (ja) 2002-09-12 2004-04-02 Renesas Technology Corp 入力バッファ回路
US20040101920A1 (en) 2002-11-01 2004-05-27 Czeslaw Radziejewski Modification assisted profiling (MAP) methodology
AU2003288675B2 (en) 2002-12-23 2010-07-22 Medimmune Limited Antibodies against PD-1 and uses therefor
EP2270051B1 (en) * 2003-01-23 2019-05-15 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Antibody specific for human PD-1 and CD3
US7276585B2 (en) 2004-03-24 2007-10-02 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the Fc region
SG172616A1 (en) 2004-04-13 2011-07-28 Hoffmann La Roche Anti-p-selectin antibodies
EP1740946B1 (en) 2004-04-20 2013-11-06 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
US8257740B1 (en) 2011-08-15 2012-09-04 Gp Medical, Inc. Pharmaceutical composition of nanoparticles
KR101498834B1 (ko) 2005-05-09 2015-03-05 오노 야꾸힝 고교 가부시키가이샤 예정 사멸 인자 1(ｐｄ-1)에 대한 인간 모노클로날 항체, 및 항-ｐｄ-1 항체를 단독 사용하거나 기타 면역 요법제와 병용한 암 치료 방법
US8246995B2 (en) 2005-05-10 2012-08-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Hydrophobic nanotubes and nanoparticles as transporters for the delivery of drugs into cells
CA2611814A1 (en) 2005-06-20 2007-01-04 Medarex, Inc. Cd19 antibodies and their uses
HUE026039T2 (en) 2005-07-01 2016-05-30 Squibb & Sons Llc Human monoclonal antibodies programmed for death ligand 1 (PD-L1)
CN102875681A (zh) 2005-07-08 2013-01-16 拜奥根Idec马萨诸塞公司 抗-αvβ6抗体及其用途
EP1820513A1 (en) 2006-02-15 2007-08-22 Trion Pharma Gmbh Destruction of tumor cells expressing low to medium levels of tumor associated target antigens by trifunctional bispecific antibodies
WO2007100098A1 (ja) 2006-03-03 2007-09-07 Kyoto University 細胞表面機能分子の細胞外領域多量体
CA2652976C (en) 2006-06-02 2015-08-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity antibodies to human il-6 receptor
DK2170959T3 (da) 2007-06-18 2014-01-13 Merck Sharp & Dohme Antistoffer mod human programmeret dødsreceptor pd-1
WO2009014708A2 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
WO2009024531A1 (en) 2007-08-17 2009-02-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for treating and diagnosing hematologic malignancies
CA2698419C (en) 2007-09-07 2019-11-12 Edward Dolk Binding molecules with multiple binding sites, compositions comprising the same and uses thereof
ES2639857T3 (es) 2008-02-11 2017-10-30 Cure Tech Ltd. Anticuerpos monoclonales para el tratamiento del tumor
WO2009114335A2 (en) 2008-03-12 2009-09-17 Merck & Co., Inc. Pd-1 binding proteins
KR101001360B1 (ko) 2008-06-16 2010-12-14 (주)기가레인 전자 기기의 접지에 전기적으로 연결되는 인쇄회로기판
DK2350129T3 (en) 2008-08-25 2015-08-31 Amplimmune Inc PREPARATIONS WITH PD-1 ANTAGONISTS AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
JP5794917B2 (ja) 2008-09-12 2015-10-14 アイシス・イノベーション・リミテッドＩｓｉｓ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｌｉｍｉｔｅｄ Ｐｄ−１特異抗体およびその使用
US8927697B2 (en) 2008-09-12 2015-01-06 Isis Innovation Limited PD-1 specific antibodies and uses thereof
HUE030807T2 (en) 2008-09-26 2017-05-29 Dana Farber Cancer Inst Inc Human anti-PD-1, anti-PD-L1 and anti-PD-L2 antibodies and their applications
KR101050829B1 (ko) 2008-10-02 2011-07-20 서울대학교산학협력단 항 ｐｄ-1 항체 또는 항 ｐｄ-ｌ1 항체를 포함하는 항암제
TWI686405B (zh) 2008-12-09 2020-03-01 建南德克公司 抗ｐｄ-ｌ１抗體及其於增進ｔ細胞功能之用途
WO2010089411A2 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Universite De La Mediterranee Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
MY164121A (en) 2009-06-26 2017-11-30 Regeneron Pharma Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format
CN102740887B (zh) 2009-09-30 2015-04-15 斯隆凯特林防癌纪念中心 用于治疗癌症的组合免疫疗法
US20130017199A1 (en) 2009-11-24 2013-01-17 AMPLIMMUNE ,Inc. a corporation Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2
KR101790767B1 (ko) 2009-11-24 2017-10-26 메디뮨 리미티드 Ｂ７―ｈ１에 대한 표적화된 결합 물질
LT3095871T (lt) 2010-02-08 2019-05-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bendros lengvosios grandinės pelė
TW201134488A (en) * 2010-03-11 2011-10-16 Ucb Pharma Sa PD-1 antibodies
WO2011110604A1 (en) 2010-03-11 2011-09-15 Ucb Pharma, S.A. Pd-1 antibody
WO2011159877A2 (en) 2010-06-18 2011-12-22 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Bi-specific antibodies against tim-3 and pd-1 for immunotherapy in chronic immune conditions
EP2910572B1 (en) 2010-11-11 2017-09-06 Versitech Limited Soluble pd-1 variants, fusion constructs, and uses thereof
DK2699264T3 (en) 2011-04-20 2018-06-25 Medimmune Llc ANTIBODIES AND OTHER MOLECULES BINDING B7-H1 AND PD-1
CA2840018C (en) 2011-07-24 2019-07-16 Curetech Ltd. Variants of humanized immunomodulatory monoclonal antibodies
EA026924B1 (ru) 2011-08-01 2017-05-31 Дженентек, Инк. Способы лечения рака с использованием антагонистов, связывающихся с осью pd-1, и ингибиторов mek
DK2785375T3 (da) 2011-11-28 2020-10-12 Merck Patent Gmbh Anti-pd-l1-antistoffer og anvendelser deraf
GB201120527D0 (en) 2011-11-29 2012-01-11 Ucl Business Plc Method
CA2899433A1 (en) 2012-01-27 2013-08-01 Gliknik Inc. Fusion proteins comprising igg2 hinge domains
CN104302169B (zh) * 2012-03-16 2017-11-17 瑞泽恩制药公司 组氨酸工程改造的轻链抗体和用于生成所述抗体的经基因修饰的非人动物
EP3511343A1 (en) 2012-05-04 2019-07-17 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Affinity matured anti-ccr4 humanized monoclonal antibodies and methods of use
WO2013169693A1 (en) 2012-05-09 2013-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating cancer using an il-21 polypeptide and an anti-pd-1 antibody
US20130303250A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Ryan Moore Method of Playing a Card Game
BR112014028826A8 (pt) 2012-05-15 2021-07-20 Bristol Myers Squibb Co anticorpos monoclonais, uso de anticorpos anti-pd1, anti-pd-l1 e anti-ctla-4 em imunoterapia e tratamento de câncer, bem como kits e processo de seleção de indivíduo para tratamento com anticorpo anti-pd-1
BR112014029887A8 (pt) 2012-05-31 2021-09-14 Genentech Inc Método para tratar ou retardar a progressão do câncer, kits e uso de um antagonista de ligação do eixo pd-1, oxaliplatina, leucovorina e 5-fu
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
PL2904011T3 (pl) 2012-10-02 2018-01-31 Bristol Myers Squibb Co Połączenie przeciwciał anty-kir i przeciwciał anty-pd-1 w leczeniu raka
EP2911669B1 (en) 2012-10-26 2024-04-10 The University of Chicago Synergistic combination of immunologic inhibitors for the treatment of cancer
TWI635098B (zh) 2013-02-01 2018-09-11 再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
WO2014127917A1 (en) 2013-02-22 2014-08-28 Curevac Gmbh Combination of vaccination and inhibition of the pd-1 pathway
US20160067337A1 (en) 2013-03-14 2016-03-10 Bristol-Myers Squibb Company Combination of dr5 agonist and anti-pd-1 antagonist and methods of use
WO2014151006A2 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Genentech, Inc. Biomarkers and methods of treating pd-1 and pd-l1 related conditions
RS61400B1 (sr) 2013-05-02 2021-02-26 Anaptysbio Inc Antitela usmerena protiv programirane smrti-1 (pd-1)
WO2014194293A1 (en) 2013-05-30 2014-12-04 Amplimmune, Inc. Improved methods for the selection of patients for pd-1 or b7-h4 targeted therapies, and combination therapies thereof
WO2014209804A1 (en) 2013-06-24 2014-12-31 Biomed Valley Discoveries, Inc. Bispecific antibodies
RU2019129525A (ru) 2013-07-16 2019-11-05 Дженентек, Инк. Способы лечения рака с использованием антагонистов, связывающих с осью pd-1, и ингибиторов tigit
CA2917858A1 (en) 2013-08-02 2015-02-05 Aduro Biotech Holdings, Europe B.V. Combining cd27 agonists and immune checkpoint inhibition for immune stimulation
AR097306A1 (es) 2013-08-20 2016-03-02 Merck Sharp & Dohme Modulación de la inmunidad tumoral
CA2920113A1 (en) 2013-08-20 2015-02-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Treating cancer with a combination of a pd-1 antagonist and dinaciclib
ES2728578T3 (es) 2013-09-20 2019-10-25 Bristol Myers Squibb Co Combinación de anticuerpos anti-LAG-3 y anticuerpos anti-PD-1 para tratar tumores
WO2015048312A1 (en) 2013-09-26 2015-04-02 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
HUE047194T2 (hu) 2013-09-27 2020-04-28 Hoffmann La Roche Anti-PDL1 antitest készítmények
PE20210648A1 (es) 2013-12-17 2021-03-26 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd3 y metodos de uso
TWI681969B (zh) * 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
TWI701042B (zh) 2014-03-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
US10092645B2 (en) 2014-06-17 2018-10-09 Medimmune Limited Methods of treatment with antagonists against PD-1 and PD-L1 in combination with radiation therapy
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
TN2017000129A1 (en) 2014-10-14 2018-10-19 Dana Farber Cancer Inst Inc Antibody molecules to pd-l1 and uses thereof
MA42971A (fr) 2015-03-13 2018-08-15 Cytomx Therapeutics Inc Anticorps anti-pdl1, anticorps anti-pld1 activables, et leurs procédés d'utilisation
EA201890285A1 (ru) * 2015-07-13 2018-08-31 Сайтомкс Терапьютикс, Инк. Антитела против pd-1, активируемые антитела против pd-1 и способы их применения
MA44146B1 (fr) 2015-12-22 2023-10-31 Regeneron Pharma Combinaison d'anticorps anti-pd-1 et d'anticorps bispécifiques anti-cd20/anti-cd3 pour traiter le cancer
US11603407B2 (en) * 2017-04-06 2023-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable antibody formulation

Also Published As

Publication number Publication date
TWI681969B (zh) 2020-01-11
JP6425730B2 (ja) 2018-11-21
WO2015112800A1 (en) 2015-07-30
EP3967710A1 (en) 2022-03-16
US20200330794A1 (en) 2020-10-22
CY1124747T1 (el) 2022-07-22
AU2015209233B2 (en) 2020-03-05
CA3207270A1 (en) 2015-07-30
IL267798B (en) 2020-09-30
MX2016009554A (es) 2016-11-17
BR112016016699A2 (pt) 2017-10-03
JP2022160558A (ja) 2022-10-19
US9987500B2 (en) 2018-06-05
IL246818A0 (en) 2016-08-31
ES2888224T3 (es) 2022-01-03
JP2019038823A (ja) 2019-03-14
DK3097119T3 (en) 2021-09-27
PL3097119T3 (pl) 2022-01-03
LT3097119T (lt) 2021-10-11
US10737113B2 (en) 2020-08-11
PH12016501330B1 (en) 2016-08-15
KR20210152583A (ko) 2021-12-15
JP2020146050A (ja) 2020-09-17
EP3097119B1 (en) 2021-08-25
BR122022010183B1 (pt) 2024-01-30
EA034770B8 (ru) 2020-07-10
KR102337042B1 (ko) 2021-12-08
CA2936075C (en) 2023-09-19
JP6711883B2 (ja) 2020-06-17
SI3097119T1 (sl) 2021-11-30
EP3097119A1 (en) 2016-11-30
CA2936075A1 (en) 2015-07-30
HRP20211794T1 (hr) 2022-03-18
NZ722342A (en) 2022-05-27
MY176475A (en) 2020-08-11
IL267798A (en) 2019-09-26
RS62507B1 (sr) 2021-11-30
MX2021003436A (es) 2021-06-15
IL246818B (en) 2019-07-31
PT3097119T (pt) 2021-09-29
EA201691482A1 (ru) 2016-11-30
CN106068275B (zh) 2021-06-01
AU2015209233A1 (en) 2016-08-04
PH12016501330A1 (en) 2016-08-15
UY35964A (es) 2015-08-31
CN106068275A (zh) 2016-11-02
US20180185668A1 (en) 2018-07-05
TW201540726A (zh) 2015-11-01
US20150203579A1 (en) 2015-07-23
KR20160132010A (ko) 2016-11-16
MX2021009852A (es) 2021-09-10
HUE056332T2 (hu) 2022-02-28
CN113248614A (zh) 2021-08-13
JP2017505125A (ja) 2017-02-16
SG11201605482SA (en) 2016-08-30
EA034770B1 (ru) 2020-03-18
CL2016001871A1 (es) 2017-05-19
JP7174009B2 (ja) 2022-11-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA122666C2 (uk) Ізольоване антитiло або його антигензв'язувальний фрагмент, що специфічно зв'язується з людським білком програмованої смерті-1 (pd-1)
JP7170691B2 (ja) 抗ｌａｇ３抗体およびその使用
US20240018257A1 (en) Antibodies specific to human poliovirus receptor (pvr)
US20230322927A1 (en) EGFR x CD28 MULTISPECIFIC ANTIBODIES
EA039718B1 (ru) Антитела к lag3 и их применения