CN110691795A

CN110691795A - 包含抗-lag3抗体、pd-1途径抑制剂和免疫治疗剂组合的组合物

Info

Publication number: CN110691795A
Application number: CN201880036532.7A
Authority: CN
Inventors: A·J·科曼; N·隆伯格; M·J·塞尔比; J·杰克逊
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2017-05-30
Filing date: 2018-05-30
Publication date: 2020-01-14
Also published as: EP3630842A2; US20210340250A1; CA3060989A1; JP2023126946A; AU2018277559A1; BR112019018759A2; MX2019012038A; US20230111786A1; EP4245375A3; EP4245375A2; KR20200010500A; JP2020522495A; WO2018222711A2; IL269090A

Abstract

本发明提供了一种用于临床治疗恶性肿瘤(例如晚期实体瘤)的方法，所述方法使用抗LAG‑3抗体，抗PD‑1抗体和免疫治疗剂的组合。

Description

包含抗-LAG3抗体、PD-1途径抑制剂和免疫治疗剂组合的组合物

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年5月30日提交的美国临时申请号62/512,618；和2017年6月1日提交的美国临时申请号62/513,812；的优先权，所述文献通过引用方式完整并入本文。

技术领域

本公开提供了用药物组合物治疗恶性肿瘤(例如，晚期实体瘤)的方法，所述药物组合物包含抗LAG-3抗体，PD-1途径抑制剂和免疫治疗剂的组合。

发明背景

人类癌症具有大量的遗传和表观遗传学改变，产生了免疫系统潜在地可识别的新抗原(Sjoblom等人，Science 314(5797)：268-274(2006))。由T和B淋巴细胞组成的适应性免疫系统具有强大的抗癌潜力，具有对多种肿瘤抗原作出反应的广泛能力和精湛的特异性。此外，免疫系统显示出相当大的可塑性和记忆成分。成功利用自适应免疫系统的所有这些属性将使免疫疗法在所有癌症治疗方式中独树一臶。

直到最近，癌症免疫疗法已将大量精力集中在通过激活的效应细胞的过继转移，针对相关抗原的免疫或提供非特异性免疫刺激剂如细胞因子来增强抗肿瘤免疫应答的方法上。但是，在过去的十年中，开发特定的免疫检查点途径抑制剂的深入努力已经开始提供新的免疫疗法来治疗癌症，包括开发结合并抑制CTLA-4的抗体(抗体)伊匹木单抗

用于治疗晚期黑素瘤患者(Hodi等，N Engl J Med 363：711-723(2010))，以及开发例如纳武单抗和派姆单抗(之前是lambrolizumab；USAN Council Statement(2013))的抗体，其特异性结合程序性死亡-1(PD-1)受体并阻断抑制性PD-1/PD-1配体途径(Topalian等，N Engl J Med 366：2443-54(2012a)；Topalian等，Curr Opin Immunol 24：207-12(2012b)；Topalian等人，J Clin Oncol 32(10)：1020-30(2014)；Hamid等人，N EnglJ Med 369：134-144(2013))；Hamid和Carvajal，Expert Opin Biol Ther 13(6)：847-61(2013)；以及McDermott和Atkins，Cancer Med 2(5)：662-73(2013))。

然而，在肿瘤发展和肿瘤复发的情况下观察到的免疫耐受似乎是由各种T细胞负性性调节受体的共表达介导的，而不仅仅是从LAG-3中表达。来自慢性病毒感染模型(Blackburn等，Nat.Immunol 10：29-37(2009)，Grosso等，J.Clin.Invest.117：3383-3392(2007)和Lyford-Pike等，Cancer Res.73(6)：1733-41(2013))、敲除小鼠(Woo等人，CancerRes.72：917-927(2012)；Okazaki等人，J.Exp Med.208：395-407(2011)和Bettini等人，J.Immunol.187：3493-3498(2011))、肿瘤复发模型(Goding等人，J.Immunol.190(9)：4899-4909(2013))和在更有限的范围内的人类癌症患者(Matsuzaki等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA.107：7875-7880(2010)和Gandhi MK等，Blood 108：2280-2289(2006))的数据支持一种模型，其中连续暴露于抗原的T细胞通过称为“耗竭”的过程逐渐失活。耗竭的T细胞的特征在于T细胞负性调节受体(主要是CTLA-4，PD-1和LAG-3)的表达，其作用是限制细胞增殖、产生细胞因子和杀死靶细胞和/或增加Treg活性的能力。因此，包含抗PD-1抗体和抗LAG-3抗体的联合疗法在某些类型的癌症中具有有希望的结果(美国公开号2016/0222116A1)。

淋巴细胞活化基因3(LAG-3、CD223)是一种I型跨膜蛋白，其在活化的CD4+和CD8+T细胞以及NK和树突状细胞的子集的细胞表面上表达(Triebel等人，J.Exp.Med.；171：1393-1405(1990)；Workman等人，J.Immunol.；182(4)：1885-91(2009))。LAG-3与CD4密切相关，而CD4是T辅助细胞激活的辅助受体。这两种分子均具有4个细胞外Ig样结构域，并需要结合其配体(主要组织相容性复合体(MHC)II类)以发挥其功能活性。与CD4不同，LAG-3仅在活化的T细胞的细胞表面表达，并且其从细胞表面的切割终止了LAG-3信号传导。LAG-3还能被发现是可溶性蛋白，但它不结合II类MHC，且其功能尚不清楚。

据报道，LAG-3在促进调节性T细胞(Treg)活性和下调T细胞活化和增殖中起重要作用(Workman等人，J.Immunol.；174：688-695(2005))。天然的和诱导的Treg都表达增加的LAG-3，这是其最大抑制功能所必需的(Camisaschi等人，J.Immunol.；184：6545-6551(2010)和Huang等人，Immunity.；21：503-513(2004))。此外，LAG-3在CD4+效应器T细胞上的异位表达降低了它们的增殖能力，并赋予它们对抗第三方T细胞的调节潜力(Huang，等人，Immunity.；21：503-513(2004))。最近的研究还显示，在耗竭的淋巴细胞性脉络膜脑膜炎病毒(LCMV)-特异性CD8+T细胞上的高LAG-3表达导致它们无响应状态，并限制了CD8+T细胞的抗肿瘤响应(Blackburn等人，Nat.Immunol.10：29-37(2009)和Grosso等人，J.Clin.Invest.117：3383-3392(2007))。实际上，在两个鼠模型中LAG-3通过对CD8+T细胞的直接作用维持了对自身和肿瘤抗原的耐受性(Grosso等人，J.Clin.Invest.；117：3383-3392(2007))。

程序性细胞死亡1(PD-1)是细胞表面信号传导受体，其在T细胞活化和耐受的调节中起关键作用(Keir等人，Annu.Rev.Immunol.26：677-704(2008))。它是一种I型跨膜蛋白，并与BTLA、CTLA-4，ICOS和CD28一起构成T细胞共刺激受体的CD28家族。PD-1主要在活化的T细胞、B细胞和髓样细胞上表达(Dong等人，Nat.Med；5：1365-1369(1999))。它还在自然杀伤(NK)细胞上表达(Terme等人，Cancer Res；71：5393-5399(2011))。PD-1与其配体PD-L1和PD-L2的结合导致近端细胞内免疫受体酪氨酸抑制域中的酪氨酸残基磷酸化，随后募集磷酸酶SHP-2，最终导致下调T细胞的活化。PD-1的一项重要作用是在感染后的炎症反应时限制外周组织中T细胞的活性，从而限制自身免疫的发展(Pardoll，Nat.Rev.Cancer；12：252-264(2012))。这种负调节作用的证据来自以下发现：PD-1缺陷的小鼠发展为狼疮样自身免疫性疾病，包括关节炎和肾炎，以及心肌病(Nishimura H.，等人，Immunity，1999；11：141-151；和Nishimura H.等人，Science，2001；291：319-322)。在肿瘤环境中，结果是在肿瘤微环境内免疫抵抗的发展。PD-1在浸润肿瘤的淋巴细胞上高度表达，并且其配体在许多不同肿瘤的细胞表面上被上调(Dong H.等人，Nat.Med.2002；8：793-800)。多种鼠类癌症模型表明，配体与PD-1的结合可导致免疫逃逸。另外，阻断该相互作用导致抗肿瘤活性(TopalianS.L.等人，NEJM 2012；366(26)：2443-2454；Hamid O.等人，NEJM 2013；369：134-144)。此外，已经显示，在临床前模型中，抑制PD-1/PD-L1相互作用介导了有效的抗肿瘤活性(美国专利号8,008,449和7,943,743)。

具有某些恶性肿瘤(例如转移性或难治性实体瘤)的患者的预后非常差(Rosenberg SA等人，Cancer immunotherapy in Cancer:Principles&Practice ofOncology(DeVita V.T.,Lawrence T.S.和Rosenberg S.A.编辑)2011；332-344(Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia Pa.))。尽管在多模式治疗方面取得了进展，但该患者群体的总生存率的增加却受到限制。因此，本发明的目的是提供用于治疗患有此类肿瘤(例如晚期难治性实体瘤)的个体的改进方法(例如包含抗-PD-1抗体、抗-LAG-3抗体和免疫治疗剂的组合的组合物)。

发明概述

本发明提供了一种治疗罹患恶性肿瘤的人类个体的方法，包括向个体施用治疗有效量的组合的：(a)LAG-3抑制剂；(b)PD-1途径抑制剂；和(c)免疫治疗剂。

在某些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗LAG-3抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体是双特异性抗体。在另一个实施方案中，其中抗LAG-3抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO：7所示的序列；和(b)重链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO：8所示的序列；(c)重链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO：9所示的序列；(d)轻链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO：10所示的序列；(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQ IDNO：11所示的序列；(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO：12所示的序列。在一些实施方案中，抗LAG-3抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链可变区，所述重链和轻链可变区分别包含SEQ ID NO：3和5所示的序列。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体是BMS 986016、MK-4280(28G-10)、REGN3767、GSK2831781、IMP731(H5L7BW)、BAP050、IMP-701(LAG-5250)、IMP321、TSR-033、LAG525、BI 754111或FS-118。

在某些实施方案中，LAG-3抑制剂是可溶性LAG-3多肽。在一个实施方案中，可溶性LAG-3多肽是融合多肽。在另一个实施方案中，可溶性LAG-3多肽包含LAG-3细胞外结构域的配体结合片段。在一些实施方案中，LAG-3细胞外结构域的配体结合片段包含与SEQ ID NO：44具有至少90％，至少95％，至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，可溶性LAG-3多肽还包含Fc结构域。

在一个实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗PD-1抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗PD-1抗体是派姆单抗(KEYTRUDA；MK-3475)、pidilizumab(CT-011)、纳武单抗(OPDIVO；BMS-936558)，PDR001、MEDI0680(AMP-514)、TSR-042、REGN2810、JS001、AMP-224(GSK-2661380)、PF-06801591、BGB-A317，BI 754091或SHR-1210。

在一个实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体是阿特朱单抗(Tecentriq；RG7446)、德瓦鲁单抗(MEDI4736)、BMS-936559、阿维鲁单抗(bavencio)、LY3300054、CX-072(Proclaim-CX-072)、FAZ053、KN035或MDX-1105。

在一个实施方案中，PD-1途径抑制剂是小分子药物。在某些实施方案中，PD-1途径抑制剂是CA-170。在另一个实施方案中，PD-1途径抑制剂是基于细胞的疗法。在一个实施方案中，基于细胞的疗法是装载有MiHA的PD-L1/L2沉默的树突细胞疫苗。在其他实施方案中，基于细胞的疗法是表达抗程序性细胞死亡蛋白1抗体的多能杀手T淋巴细胞、自体PD-1靶向的嵌合开关受体修饰的T淋巴细胞或PD-1敲除的自体T淋巴细胞。

在一个实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗PD-L2抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方案中，抗PD-L2抗体是rHIgM12B7。

在一个实施方案中，PD-1途径抑制剂是可溶性PD-1多肽。在某些实施方案中，可溶性PD-1多肽是融合多肽。在一些实施方案中，可溶性PD-1多肽包含PD-1细胞外结构域的配体结合片段。在其他实施方案中，可溶性PD-1多肽包含PD-1细胞外结构域的配体结合片段。在一个实施方案中，PD-1细胞外结构域的配体结合片段包含与SEQ ID NO：29具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，可溶性PD-1多肽还包含Fc结构域。

在一个实施方案中、免疫治疗剂为CTLA-4活性的调节剂、CD28活性的调节剂、CD80活性的调节剂、CD86活性的调节剂、4-1BB活性的调节剂、OX40活性的调节剂、KIR活性的调节剂、Tim-3活性的调节剂、CD27活性的调节剂、CD40活性的调节剂、GITR活性的调节剂、TIGIT活性的调节剂、CD20活性的调节剂、CD96活性的调节剂、IDO1活性的调节剂、STING活性的调节剂、GARP活性的调节剂、A2aR活性的调节剂、CEACAM1活性的调节剂、CEA活性的调节剂、CD47活性的调节剂、PVRIG活性的调节剂、TDO活性的调节剂、VISTA活性的调节剂、细胞因子、趋化因子、干扰素、白介素、淋巴因子、肿瘤坏死因子(TNF)家族成员或免疫刺激性寡核苷酸。

在一个实施方案中，免疫治疗剂是免疫检查点抑制剂。在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4拮抗剂、CD80拮抗剂、CD86拮抗剂、Tim-3拮抗剂、TIGIT拮抗剂、CD20拮抗剂、CD96拮抗剂、IDO1拮抗剂、STING拮抗剂、GARP拮抗剂、CD40拮抗剂、A2aR拮抗剂、CEACAM1(CD66a)拮抗剂、CEA拮抗剂、CD47拮抗剂、PVRIG拮抗剂、TDO拮抗剂、VISTA拮抗剂或KIR拮抗剂。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4拮抗剂。在某些实施方案中，CTLA-4拮抗剂是抗CTLA-4抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗CTLA-4抗体是伊匹单抗(YERVOY)、曲美木单抗(ticilimumab；CP-675,206)，AGEN-1884或ATOR-1015。

在一个实施方案中，CTLA-4拮抗剂是可溶性CTLA-4多肽。在一个实施方案中，可溶性CTLA-4多肽是阿巴西普(Orencia)，贝拉西普(Nulojix)，RG2077或RG-1046。在另一个实施方案中，CTLA-4拮抗剂是基于细胞的疗法。在一些实施方案中，CTLA-4拮抗剂是抗CTLA4mAb RNA/GITRL RNA转染的自体树突细胞疫苗或抗CTLA-4mAb RNA转染的自体树突细胞疫苗。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是KIR拮抗剂。在某些实施方案中，KIR拮抗剂是抗KIR抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗KIR抗体是lirilumab(1-7F9，BMS-986015，IPH 2101)或IPH4102。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是TIGIT拮抗剂。在一个实施方案中，TIGIT拮抗剂是抗TIGIT抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗TIGIT抗体是BMS-986207、AB 154，COM902(CGEN-15137)或OMP-313M32。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是Tim-3拮抗剂。在某些实施方案中，Tim-3拮抗剂是抗Tim-3抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗Tim-3抗体是TSR-022或LY3321367。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDO1拮抗剂。在另一个实施方案中，IDO1拮抗剂是吲哚昔莫德(NLG8189；1-甲基-D-TRP)，艾卡哚司他(INCB-024360，INCB-24360)，KHK2455，PF-06840003，navoximod(RG6078，GDC-0919，NLG919)，BMS-986205(F001287)或吡咯烷-2,5-二酮衍生物。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是STING拮抗剂。在某些实施方案中，STING拮抗剂是2’或3’-单氟取代的环状二核苷酸；2’3’-二氟取代的混合键2’,5’–3’,5’环状二核苷酸；2'-氟取代的双-3’,5’环状二核苷酸；2’,2”-二F-Rp,Rp,双-3’,5’环状二核苷酸；或氟化环状二核苷酸。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CD20拮抗剂。在一些实施方案中，CD20拮抗剂是抗CD20抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗CD20抗体是利妥昔单抗(RITUXAN；IDEC-102；IDEC-C2B8)、ABP 798、奥法木单抗(ofatumumab)或阿托珠单抗(obinutuzumab)。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CD80拮抗剂。在某些实施方案中，CD80拮抗剂是抗CD80抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗CD80抗体是加利昔单抗或AV1142742。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是GARP拮抗剂。在一些实施方案中，GARP拮抗剂是抗GARP抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗GARP抗体是ARGX-115。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CD40拮抗剂。在某些实施方案中，CD40拮抗剂是抗CD40抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗CD40抗体是BMS3h-56、鲁卡木单抗(lucatumumab)(HCD122和CHIR-12.12)、CHIR-5.9或达西珠单抗(dacetuzumab)(huS2C6、PRO 64553、RG 3636、SGN 14、SGN-40)。在另一个实施方案中，CD40拮抗剂是可溶性CD40配体(CD40-L)。在一个实施方案中，可溶性CD40配体是融合多肽。在一个实施方案中，可溶性CD40配体是CD40-L/FC2或单体CD40-L。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是A2aR拮抗剂。在一些实施方案中，A2aR拮抗剂是小分子。在某些实施方案中，A2aR拮抗剂是CPI-444、PBF-509、伊曲茶碱(KW-6002)、瑞德南特(preladenant)(SCH420814)、tozadenant(SYN115)、vipadenant(BIIB014)、HTL-1071、ST1535、SCH412348、SCH442416、SCH58261、ZM241385或AZD4635。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CEACAM1拮抗剂。在一些实施方案中，CEACAM1拮抗剂是抗CEACAM1抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗CEACAM1抗体是CM-24(MK-6018)。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CEA拮抗剂。在一个实施方案中，CEA拮抗剂是抗CEA抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗CEA抗体是cergutuzumabamunaleukin(RG7813，RO-6895882)或RG7802(RO6958688)。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CD47拮抗剂。在一些实施方案中，CD47拮抗剂是抗CD47抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗CD47抗体是HuF9-G4、CC-90002，TTI-621、ALX148、NI-1701、NI-1801、SRF231或Effi-DEM。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是PVRIG拮抗剂。在某些实施方案中，PVRIG拮抗剂是抗PVRIG抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗PVRIG抗体是COM701(CGEN-15029)。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是TDO拮抗剂。在一个实施方案中，TDO拮抗剂是4-(吲哚-3-基)-吡唑衍生物、3-吲哚取代的衍生物或3-(吲哚-3-基)-吡啶衍生物。在另一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDO和TDO双重拮抗剂。在一个实施方案中，IDO和TDO双重拮抗剂是小分子。

在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是VISTA拮抗剂。在一些实施方案中，VISTA拮抗剂是CA-170或JNJ-61610588。

在一个实施方案中，免疫治疗剂是免疫检查点增强剂或刺激剂。在一个实施方案中，免疫检查点增强剂或刺激剂是CD28激动剂、4-1BB激动剂、OX40激动剂、CD27激动剂、CD80激动剂、CD86激动剂、CD40激动剂、ICOS激动剂、CD70激动剂或GITR激动剂。

在一个实施方案中，免疫检查点增强剂或刺激剂是OX40激动剂。在某些实施方案中，OX40激动剂是抗OX40抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗OX40抗体是他佛利珠单抗(tavolixizumab)(MEDI-0562)、泊加珠单抗(pogalizumab)(MOXR0916，RG7888)、GSK3174998、ATOR-1015、MEDI-6383、MEDI-6469、BMS 986178、PF-04518600，或RG7888(MOXR0916)。在另一个实施方案中，OX40激动剂是基于细胞的疗法。某些实施方案中，OX40激动剂是GINAKIT细胞(表达iC9-GD2-CD28-OX40的T淋巴细胞)。

在一个实施方案中，免疫检查点增强剂或刺激剂是CD40激动剂。在一些实施方案中，CD40激动剂是抗CD40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗CD40抗体是ADC-1013(JNJ-64457107)、RG7876(RO-7009789)、HuCD40-M2、APX005M(EPI-0050)或Chi Lob 7/4。在另一个实施方案中，CD40激动剂是可溶性CD40配体(CD40-L)。在一个实施方案中，可溶性CD40配体是融合多肽。在某些实施方案中，可溶性CD40配体是三聚CD40-L

在一个实施方案中，免疫检查点增强剂或刺激剂是GITR激动剂。在某些实施方案中，GITR激动剂是抗GITR抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗GITR抗体是BMS-986156、TRX518、GWN323、INCAGN01876或MEDI1873。在一个实施方案中，GITR激动剂是可溶性GITR配体(GITRL)。在一些实施方案中，可溶性GITR配体是融合多肽。在另一个实施方案中，GITR激动剂是基于细胞的疗法。

在一个实施方案中，基于细胞的疗法是抗CTLA4 mAb RNA/GITRL RNA转染的自体树突细胞疫苗或GITRL RNA转染的自体树突细胞疫苗。在一个实施方案中，免疫检查点增强剂或刺激剂是4-1BB激动剂。在一些实施方案中，4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗4-1BB抗体是urelumab或PF-05082566。

在一个实施方案中，免疫检查点增强剂或刺激剂是CD80激动剂或CD86激动剂。在一些实施方案中，CD80激动剂或CD86激动剂是可溶性CD80或CD86配体(CTLA-4)。在某些实施方案中，可溶性CD80或CD86配体是融合多肽。在一个实施方案中，CD80或CD86配体是CTLA4-Ig(CTLA4-IgG4m，RG2077或RG1046)或阿巴西普(ORENCIA，BMS-188667)。在其他实施方案中，CD80激动剂或CD86激动剂是基于细胞的疗法。在一个实施方案中，基于细胞的疗法是MGN1601(同种异体肾细胞癌疫苗)。

在一个实施方案中，免疫检查点增强剂或刺激剂是CD28激动剂。在一些实施方案中，CD28激动剂是抗CD28抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗CD28抗体是TGN1412。

在一个实施方案中，CD28激动剂是基于细胞的疗法。在某些实施方案中，基于细胞的疗法是JCAR015(抗CD19-CD28-zeta修饰的CAR CD3+T淋巴细胞)；和表达CD28CAR/CD137CAR的T淋巴细胞；同种异体CD4+记忆Th1样T细胞/微粒结合的抗CD3/抗CD28；抗CD19/CD28/CD3zeta CARγ逆转录病毒载体转导的自体T淋巴细胞KTE-C19；抗CEA IgCD28TCR转导的自体T淋巴细胞；抗EGFRvIII CAR转导的同种异体T淋巴细胞；自体表达CD123CAR-CD28-CD3zeta-EGFRt的T淋巴细胞；自体表达CD171特异性CAR-CD28 zeta-4-1-BB-EGFRt的T淋巴细胞；自体表达CD19CAR-CD28-CD3zeta-EGFRt的Tcm富集T细胞；自体PD-1靶向的嵌合开关受体修饰的T淋巴细胞(嵌合体与CD28)；表达CD19CAR-CD28-CD3zeta-EGFRt的富含Tcm的T淋巴细胞；表达CD19CAR-CD28-CD3zeta-EGFRt的Tn/mem富集的T淋巴细胞；表达CD19CAR-CD28zeta-4-1BB的同种异体T淋巴细胞；表达CD19CAR-CD3zeta-4-1BB-CD28的自体T淋巴细胞；表达CD28CAR/CD137CAR的T淋巴细胞；CD3/CD28共刺激疫苗诱发的自体T淋巴细胞；或表达iC9-GD2-CD28-OX40的T淋巴细胞。

在一个实施方案中，免疫检查点增强剂或刺激剂是CD27激动剂。在某些实施方案中，CD27激动剂是抗CD27抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗CD27抗体是varlilumab(CDX-1127)。

在一个实施方案中，免疫检查点增强剂或刺激剂是CD70激动剂。在一些实施方案中，CD70激动剂是抗CD70抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗CD70抗体是ARGX-110。

在一个实施方案中，免疫检查点增强剂或刺激剂是ICOS激动剂。在某些实施方案中，ICOS激动剂是抗ICOS抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗-ICOS抗体是BMS986226、MEDI-570、GSK3359609或JTX-2011。在其他实施方案中，ICOS激动剂是可溶性ICOS配体。在一些实施方案中，可溶性ICOS配体是融合多肽。在一个实施方案中，可溶性ICOS配体是AMG 750。

在一个实施方案中，免疫治疗剂是抗CD73抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗CD73抗体是MEDI9447。

在一个实施方案中，免疫治疗剂是TLR9激动剂。在一个实施方案中，TLR9激动剂是agatolimod钠。

在一个实施方案中，免疫治疗剂是细胞因子。在某些实施方案中，细胞因子是趋化因子、干扰素、白介素、淋巴因子或肿瘤坏死因子家族的成员。在一些实施方案中，细胞因子是IL-2，IL-15或干扰素-γ。

在一个实施方案中，免疫治疗剂是TGF-β拮抗剂。在一些实施方案中，TGF-β拮抗剂是贝索莫单抗(fresolimumab)(GC-1008)；NIS793；IMC-TR1(LY3022859)；ISTH0036，trabedersen(AP 12009)、重组转化生长因子-β-2、自体HPV-16/18E6/E7特异性TGF-β抗性T淋巴细胞，或TGF-β抗性LMP特异性细胞毒性T淋巴细胞。

在一个实施方案中，免疫治疗剂是iNOS拮抗剂。在一些实施方案中，iNOS拮抗剂是N-乙酰半胱氨酸(NAC)，氨基胍，L-硝基精氨酸甲酯或S,S-1,4-亚苯基-双(1,2-乙二基)双-异硫脲)。

在一个实施方案中，免疫治疗剂是SHP-1拮抗剂。

在一个实施方案中，免疫治疗剂是CSF1R(集落刺激因子1受体)拮抗剂。在某些实施方案中，CSF1R拮抗剂是抗CSF1R抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗CSF1R抗体是艾马妥珠单抗(emactuzumab)。

在一些实施方案中，免疫治疗剂是TNF家族成员的激动剂。在一个实施方案中，TNF家族成员的激动剂是ATOR 1016/ABBV-621或阿达木单抗。

在一个实施方案中，免疫治疗剂是阿地白介素、托珠单抗(tocilizumab)或MEDI5083。

在一个实施方案中，免疫治疗剂是CD160(NK1)激动剂。在某些实施方案中，CD160(NK1)激动剂是抗CD160抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗CD160抗体是BY55。

在一个实施方案中，将LAG-3抑制剂、PD-1途径抑制剂和免疫治疗剂配制成用于静脉内施用。在一些实施方案中，将LAG-3抑制剂、PD-1途径抑制剂和免疫治疗剂配制在一起。在另一个实施方案中，将LAG-3抑制剂、PD-1途径抑制剂和所述免疫治疗剂分开配制。

在一个实施方案中，恶性肿瘤选自肝癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、口腔癌、头或颈癌、乳腺癌、肺癌——包括小细胞和非小细胞肺癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、肾癌、子宫癌、卵巢癌、结直肠癌、结肠癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童癌、淋巴细胞淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、Kaposi肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、环境所致癌(包括石棉诱导的那些癌症)、血液学恶性病，例如包括多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤/原发性纵隔B细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性髓样淋巴瘤、慢性髓性白血病、慢性淋巴样白血病、滤泡淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、急性淋巴母细胞性白血病、蕈样肉芽肿病、退行性大细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤和前体T-淋巴母细胞淋巴瘤及其任意组合。

在一个实施方案中，恶性肿瘤是非小细胞肺癌(NSCLC)、病毒相关的癌相关肿瘤或胃腺癌。在一些实施方案中，恶性肿瘤是黑素瘤、胃癌、胃食管结合部癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、头颈鳞状细胞癌或肾细胞癌。在一个实施方案中，其中肿瘤是肺癌、黑素瘤、头颈鳞状细胞癌、肾癌、胃癌或肝细胞癌。

在一个实施方案中，抗LAG-3抗体或其抗原结合片段和免疫治疗剂作为一线治疗施用。在另一个实施方案中，LAG-3抑制剂、PD-1途径抑制剂和所述免疫治疗剂作为二线治疗施用。在某些实施方案中，恶性肿瘤对于一线治疗是难治的。

在一个实施方案中，如上所述的，所述方法用于治疗罹患恶性肿瘤的患者，进一步包括施用至少一种额外的治疗剂。在某些实施方案中，至少一种额外的治疗剂是化疗剂。

通过以下详细描述和示例，本公开的其他特征和优点将变得显而易见，其应被解释为限制性的。

发明详述

I.术语

本文所用的“患者”包括患有癌症(例如，黑素瘤)的任何患者。术语“个体”和“患者”在本文可互换使用。

如本文所用的，术语“施用”是指使用本领域技术人员已知的任何各种方法和递送系统将包含治疗剂(例如，抗-PD-1抗体、抗LAG-3抗体和额外的免疫治疗剂)的组合物物理引入个体。施用途径包括静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、脊柱或其他肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。本文所用的短语“肠胃外施用”是指除肠内和局部给药以外的施用方式，通常通过注射施用，包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮内、关节内、包膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注、以及体内电穿孔。其他非肠胃外途径包括局部、表皮或粘膜施用途径，例如鼻内、阴道、直肠、舌下或局部施用。还可以例如一次、多次和/或历经一个或多个延长的时段执行施用。

如本文所用，“有效治疗”指产生有益作用(例如，改善疾病或病症的至少一种症状)的治疗。有益作用可以采取超过基线改善的形式，即，超过在启动根据本方法疗法前所做测量或观察的改善。有益作用还可以采取实体瘤标记物的有害进展中止、延缓、迟滞或稳定的形式。有效的治疗可以指减轻实体瘤的至少一种症状。这类有效治疗可以例如减少患者疼痛、减少病灶尺寸和/或数目，可以减少或防止肿瘤转移，和/或可以减慢肿瘤生长。

术语“有效量”指提供所需生物学结果、治疗结果和/或预防结果的活性剂的量。这种结果可以是一个或多个疾病体征、症状或病因减少、改善、缓和、减弱、延迟和/或减轻，或是生物系统的任何其他所需改变。提到实体瘤时，有效量包括足以造成肿瘤收缩和/或肿瘤生长速率下降(如抑制肿瘤生长)或防止或延迟其他不利细胞增殖的量。在一些实施方案中，有效量是足以延迟肿瘤形成的量。在一些实施方案中，有效量是足以防止或延迟肿瘤复发的量。可以在一次或多次施用中施用有效量。有效量药物或组合物可以：(i)减少癌细胞的数目；(ii)缩减肿瘤大小；(iii)某个程度抑制、迟滞、减慢癌细胞向外周器官浸润和可以终止癌细胞向外周器官浸润；(iv)抑制(即，某种程度减慢肿瘤转移并且可以终止肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)防止或延迟肿瘤出现和/或复发；和/或(vii)某种程度减轻一种或多种与癌症相关的症状。在一个实例中，“有效量”是这样的抗-LAG-3抗体量和抗-PD-1抗体量，在联用中，在临床上被证明所述量影响癌症显著减少或癌症(如晚期实体瘤)进展延缓。如本文所用，术语“固定剂量”、“平剂量(flat dose)”和“平固定剂量(flat-fixeddose)”互换使用并且指不考虑患者体重或体表面积(BSA)情况下向患者施用的剂量。固定剂量或平剂量因此不作为mg/kg剂量提供，而作为活性剂(例如，抗-LAG-3抗体和/或抗-PD-1抗体)的绝对量提供。

如本文所用，术语“免疫治疗”是指通过包括诱导、增强、抑制或以其他方式改变免疫反映的方法来治疗罹患疾病、或有罹患该疾病或复发该疾病的风险的个体。个体的“治疗”或“疗法”是指对个体进行或施用活性剂(例如，包含抗PD-1抗体，抗LAG-3抗体和额外的免疫治疗剂的组合的组合物)的任何类型的干预或过程，目标是逆转、缓解、改善、抑制、减慢或预防症状、并发症或病况或与之相关的生化标记的发作、进展、发展、严重性或复发。

如本文所用，术语“基于细胞的疗法”，“细胞疗法”，“细胞的疗法”或“细胞疗法(cytotherapy)”是指将细胞材料的递送移植到患者体内，目的是治疗疾病或病症(例如恶性肿瘤)。细胞材料可以是细胞片段或完整的活细胞(例如，T淋巴细胞，树突细胞或干细胞)。

就本发明的组合物而言，术语“固定剂量”的使用意指，在单一组合物中两种或更多种不同抗体按照彼此特定(固定)的比率存在于该组合物中。在一些实施方案中，固定剂量基于抗体重量(例如，mg)。在某些实施方案中，固定剂量基于抗体浓度(例如，mg/ml)。在一些实施方案中，该比率是至少约1:1、约1:2、约1:3、约1:4、约1:5、约1:6、约1:7、约1:8、约1:9、约1:10、约1:15、约1:20、约1:30、约1:40、约1:50、约1:60、约1:70、约1:80、约1:90、约1:100、约1:120、约1:140、约1:160、约1:180、约1:200、约200:1、约180:1、约160:1、约140:1、约120:1、约100:1、约90:1、约80:1、约70:1、约60:1、约50:1、约40:1、约30:1、约20:1、约15:1、约10:1、约9:1、约8:1、约7:1、约6:1、约5:1、约4:1、约3:1或约2:1mg第一抗体/mg第二抗体。例如，第一抗体和第二抗体的3:1比率可以意指，小瓶可以含有约240mg第一抗体和80mg第二抗体或约3mg/ml第一抗体和1mg/ml第二抗体。

就本发明的组合物而言，术语“平剂量”的使用意指不考虑患者体重或体表面积(BSA)情况下向患者施用的剂量。平剂量因此不作为mg/kg剂量提供，而作为活性剂(例如，抗-LAG-3抗体和/或抗-PD-1抗体)的绝对量提供。例如，60kg的人和100kg的人将接受相同剂量的组合物(例如，在含有240mg抗-PD-1抗体和80mg抗-LAG-3抗体二者的单一固定给药制剂小瓶中的240mg抗-PD-1抗体和80mg抗-LAG-3抗体(或含有120mg抗-PD-1抗体和40mg抗-LAG-3抗体的两个固定给药制剂小瓶等))。

如本文提到的术语“基于体重的剂量”意指基于患者体重计算向患者施用的剂量。例如，当体重60kg的患者需要3mg/kg抗-LAG-3抗体与3mg/kg抗-PD-1抗体组合时，可以从抗LAG3抗体和抗-PD-1抗体的1:1比率固定给药制剂马上抽取适宜量的抗-LAG-3抗体(即，180mg)和抗-PD-1抗体(即，180mg)。

“抗体”(Ab)应包括但不限于糖蛋白免疫球蛋白，其特异性结合抗原并包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链，或其抗原结合部分。每个重链包含重链可变区(本文缩写为V_H)和重链恒定区(本文缩写为CH)。在某些抗体中，例如，天然存在的IgG抗体中，重链恒定区包含铰链和三个结构域，CH1、CH2和CH3。在某些抗体中，例如天然存在的IgG抗体中，每条轻链包含轻链可变区(本文中缩写为V_L)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域(缩写为CL)。V_H和V_L区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，散布在更保守的称为框架区(FR)的区域内。每个V_H和V_L包含三个CDR和四个FR，按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。重链可以具有或不具有C末端赖氨酸。除非本文另有说明，否则可变区中的氨基酸使用Kabat编号系统编号，而恒定区中的氨基酸使用EU系统编号。

免疫球蛋白可以来自任何已知的同种型，包括IgA、分泌型IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。IgG同种型在某些物种分类在亚类中：人中IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，和小鼠中IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3。“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别或亚类(例如，IgM或IgG1)。术语“抗体”包括例如单克隆和多克隆抗体；嵌合和人源化抗体；人或非人抗体；全合成抗体；和单链抗体。可以通过重组方法将非人类抗体人源化以降低其在人体中的免疫原性。在没有明确说明的地方，除非上下文另有说明，否则术语“抗体”包括单特异性、双特异性或多特异性抗体，以及单链抗体。在实施方案中，抗体是双特异性抗体。在其他实施方案中，抗体是单特异性抗体。

如本文所用，“IgG抗体”具有天然存在的IgG抗体的结构，即，其具有与相同亚类的天然存在的IgG抗体相同数目的重链和轻链和二硫键。例如，抗ICOS的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体由两条重链(HC)和两条轻链(LC)组成，其中所述两条重链和轻链通过相同数量和位置的二硫键连接，所述二硫键分别在天然存在的IgG1、IgG2、IgG3和IgG4抗体中发生(除非已对抗体进行了突变以修饰二硫键)。

“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，与PD-1特异性结合的分离的抗体基本上不含与PD-1以外的抗原特异性结合的抗体)。然而，与PD-1特异性结合的分离的抗体可能与其他抗原(例如来自不同物种的PD-1分子)具有交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。

抗体可以是已被改变的抗体(例如通过突变、缺失、取代、与非抗体部分的缀合)。例如，抗体可以包括一种或多种改变抗体的特性(例如功能特性)的变体氨基酸(与天然存在的抗体相比)。例如，本领域已知许多这样的改变，其影响例如半衰期、效应器功能和/或患者对抗体的免疫应答。术语抗体还包括人工多肽构建体，其包含至少一个来自抗体的抗原结合位点。

术语“单克隆抗体”(“mAb”)是指单一分子组成的抗体分子的非天然存在的制备物，即其一级序列基本相同且表现出对特定表位的单一结合特异性和亲和力的抗体分子。单克隆抗体是分离的抗体的实例。MAb可以通过杂交瘤、重组、转基因或本领域技术人员已知的其他技术产生。

“人”抗体(HuMAb)是指具有可变区的抗体，其中框架区和CDR区均源自人种系免疫球蛋白序列。此外，如果抗体含有恒定区，则恒定区也衍生自人种系免疫球蛋白序列。本发明的人抗体可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包括其中衍生自另一种哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的CDR序列已经移植到人框架序列上的抗体。术语“人抗体”和“完全人抗体”同义使用。

“人源化抗体”是指其中非人抗体的CDR结构域以外的一些、大多数或所有氨基酸被衍生自人免疫球蛋白的相应氨基酸替换的抗体。在人源化形式的抗体的一个实施方案中，CDR结构域之外的一些、大多数或所有氨基酸已被来自人免疫球蛋白的氨基酸替换，而一个或多个CDR区域内的一些、大多数或所有氨基酸未改变。氨基酸的少量添加、缺失、插入、取代或修饰是允许的，只要它们不消除抗体结合特定抗原的能力即可。“人源化”抗体保留了与原始抗体相似的抗原特异性。

“嵌合抗体”是指其中可变区衍生自一个物种并且恒定区衍生自另一物种的抗体，例如其中可变区衍生自小鼠抗体而恒定区衍生自人抗体的抗体。

“抗抗原”抗体是指与所述抗原特异性结合的抗体。例如，抗-PD-1抗体特异性结合PD-1，而抗-CTLA-4抗体特异性结合CTLA-4。

抗体的“抗原结合部分”(也称为“抗原结合片段”)是指抗体的一个或多个片段，其保留特异性结合由整个抗体结合的抗原的能力。已经显示，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段或部分来执行。抗体，例如本文所述的抗ICOS抗体的术语“抗原结合部分”或“抗原结合片段”所涵盖的结合片段的实例包括：

(1)Fab片段(木瓜蛋白酶切割的片段)或类似的由VL、VH、LC和CH1结构域组成的单价片段；

(2)F(ab′)2片段(胃蛋白酶切割的片段)或类似的二价片段，其包含两个通过铰链区的二硫键连接的Fab片段；

(3)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；

(4)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，

(5)单结构域抗体(dAb)片段(Ward等人，(1989)Nature 341：544-46)，其由VH结构域组成；

(6)双-单结构域抗体，其由通过铰链连接的两个VH结构域组成(双亲和性重靶向抗体(DART))；

(7)双重可变结构域免疫球蛋白；

(8)分离的互补决定区(CDR)；和

(9)两个或更多个分离的CDR的组合，所述CDR可任选地通过合成接头连接。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由不同的基因编码，然而它们可以使用重组方法通过合成的接头连接起来，从而使它们成为一条蛋白链，其中VL和VH区配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等人(1988)Science 242：423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)。这样的单链抗体也包含在抗体的术语“抗原结合部分”或“抗原结合片段”之内。这些抗体片段是使用本领域技术人员已知的常规技术获得的，并且以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。抗原结合部分可通过重组DNA技术或通过完整的免疫球蛋白的酶促或化学裂解产生。

术语“LAG-3”、“LAG3”或“淋巴细胞活化基因-3”是指淋巴细胞活化基因-3。本文所用的术语LAG-3包括人LAG-3(hLAG-3)、hLAG-3的变体、同工型和物种同源物，以及与hLAG-3具有至少一个共同表位的类似物。本文使用的术语LAG-3包括变体、同工型、同源物、直系同源物和旁系同源物。例如，在某些情况下，对人LAG-3蛋白具有特异性的抗体可与人类以外的种类的LAG-3蛋白发生交叉反应。在其他实施方案中，对人LAG-3蛋白特异的抗体可以对人LAG-3蛋白完全特异，并且可不表现出物种或其他类型的交叉反应性，或者可以与来自某些其他物种，但不是所有其他物种的LAG-3交叉反应(例如，与猴LAG-3而非小鼠LAG-3交叉反应)。术语“人LAG-3”是指人序列LAG-3，例如具有Genbank登录号NP 002277的人LAG-3的完整氨基酸序列(SEQ ID NO:13)。术语“小鼠LAG-3”是指小鼠序列LAG-3，例如具有Genbank登录号NP_032505的小鼠LAG-3的完整氨基酸序列。LAG-3在本领域中也称为例如CD223。人LAG-3序列与Genbank登录号NP_002277的人LAG-3的不同之处可能在于，例如具有保守突变或非保守区的突变，并且LAG-3具有与Genbank登录号NP_002277(SEQ ID NO:44)基本相同的生物学功能。例如，人LAG-3的生物学功能是在LAG-3的细胞外结构域中具有被本文公开的抗体特异性结合的表位，或者人LAG-3的生物学功能是与MHC II类分子结合。

特定的人LAG-3序列的氨基酸序列通常与GenBank登录号NP_002277的人LAG-3的氨基酸序列至少90％相同，并且包含与其他物种(例如鼠类)的LAG-3氨基酸序列相比时鉴定为人序列的氨基酸残基。在某些情况下，人LAG-3的氨基酸序列可以与GenBank登录号NP_002277的LAG-3至少95％、或甚至至少96％、97％、98％或99％相同。在某些实施方案中，人LAG-3序列与GenBank登录号NP_002277的LAG-3序列显示不超过10个氨基酸差异。在某些实施方案中，人LAG-3可与GenBank登录号NP_002277的LAG-3序列显示不超过5个，或甚至不超过4、3、2或1个氨基酸差异。可以如本文所述确定同一性百分比。

如本文所用，术语“程序性死亡1”、“程序性细胞死亡1”、“蛋白PD-1”、“PD-1”、“PD1”、“PDCD1”、“hPD-1”和“hPD-1”可互换使用，包括人PD-1的变体、同工型、物种同源物、以及具有至少一个与PD-1共同表位的类似物。完整的PD-1序列可以在GenBank登录号U64863(SEQ ID NO：29)和AAC51773.1(SEQ ID NO:45)下找到。

蛋白质程序性死亡1(PD-1)是CD28受体家族的抑制成员，该家族还包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。PD-1在活化的B细胞、T细胞和髓样细胞上表达(Agata等人，同上；Okazaki等人(2002)Curr.Opin.Immunol.14：391779-82；Bennett等人(2003)J Immunol170：711-8)。发现了该家族的最初成员CD28和ICOS通过加入单克隆抗体后增强T细胞增殖的功能作用(Hutloff等人，Nature(1999)；397：263-266；Hansen等人，Immunogenics(1980)；10：247-260)。通过筛选凋亡细胞中的差异表达发现了PD-1(Ishida等人，EMBO J(1992)；11：3887-95)。通过分别筛选细胞毒性T淋巴细胞和TH1细胞中的差异表达，发现了该家族的其他成员CTLA-4和BTLA。CD28、ICOS和CTLA-4均具有未配对的半胱氨酸残基，可进行同型二聚化。相反，PD-1被建议以单体形式存在，缺乏在其他CD28家族成员中未配对的半胱氨酸残基特征。

PD-1基因是55kDa的I型跨膜蛋白，其是Ig基因超家族的一部分(Agata等人(1996)Int Immunol 8：765-72)。PD-1包含膜近端免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)和膜远端基于酪氨酸的开关基序(ITSM)(Thomas，ML(1995)J Exp Med 181：1953-6；Vivier，E和Daeron，M(1997)Immunol Today 18：286-91)。尽管PD-1在结构上与CTLA-4相似，但PD-1缺乏对于B7-1和B7-2结合至关重要的MYPPPY基序。已经鉴定出PD-1的两个配体PD-L1和PD-L2，它们已经显示出在与PD-1结合后下调T细胞活化(Freeman等人(2000)J Exp Med 192：1027-34；和Latchman等人(2001)Nat Immunol 2：261-8；Carter等人(2002)Eur J Immunol 32：634-43)。PD-L1和PD-L2都是与PD-1结合但不与其他CD28家族成员结合的B7同源物。PD-L1在多种人类癌症中丰富(Dong等人(2002)Nat.Med.8：787-9)。PD-1和PD-L1之间的相互作用导致肿瘤浸润的淋巴细胞减少、T细胞受体介导的增殖减少以及癌细胞的免疫逃避(Dong等(2003)J.Mol.Med.81：281-7；Blank等人(2005)Cancer Immunol.Immunother.54：307-314；Konishi等人(2004)Clin.Cancer Res.10：5094-100)。可以通过抑制PD-1与PD-L1的局部相互作用来逆转免疫抑制作用，并且当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，这种效果是叠加的(Iwai等人(2002)Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 99：12293-7；Brown等人(2003)J.Immunol.170：1257-66)。

与PD-1是CD28家族的抑制成员一致，PD-1缺陷的动物发展出各种自身免疫表型，包括自身免疫性心肌病和具有关节炎和肾炎的狼疮样综合征(Nishimura等人(1999)Immunity 11：141-51；Nishimura等人，(2001)Science 291：319-22)。另外，已经发现PD-1在自身免疫性脑脊髓炎、系统性红斑狼疮、移植物抗宿主病(GVHD)、I型糖尿病和类风湿性关节炎中起作用(Salama等人(2003)J Exp Med 198：71-78；Prokunina和Alarcon-Riquelme(2004)Hum Mol Genet 13：R143；Nielsen等人(2004)Lupus 13：510)。在鼠B细胞肿瘤系中，PD-1的ITSM被证明对于阻断BCR介导的Ca2+-通量和酪氨酸磷酸化下游效应子分子至关重要(Okazaki等人，(2001)PNAS 98：13866-71)。

“程序性死亡配体-1(PD-L1)”是PD-1的两个细胞表面糖蛋白配体之一(另一个是PD-L2)，其与PD-1结合后下调T细胞活化和细胞因子分泌。本文所用的术语“PD-L1”包括人PD-L1(hPD-L1)、hPD-L1的变体、同工型和物种同源物，以及与hPD-L1具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-L1序列可在GenBank登录号Q9NZQ7下找到。

本文所用的术语“程序性死亡配体-2”和“PD-L2”包括人PD-L2(hPD-L2)、hPD-L2的变体、同工型和物种同源物，以及与hPD-L2具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-L2序列可在GenBank登录号Q9BQ51下找到。

“癌症”指宽泛类别的多种疾病，其特征在于身体内异常细胞失控生长。失调的细胞分裂和生长导致形成恶性肿瘤，所述恶性肿瘤侵入临近组织并且还可以通过淋巴系统或血流转移到身体远端部分。“癌症”或“癌组织”可以包括肿瘤。

如本文所用的术语“肿瘤”指因细胞过度生长或增殖产生的任何组织团块，或为良性(非癌)或为恶性(癌性的)，包括癌前病灶。

在本文中使用的术语“和/或”将被视为两个指定的特征或组分中的每个具有或不具有另一个的具体公开。因此，在本文中在诸如“A和/或B”之类的短语中使用的术语“和/或”旨在包括“A和B”，“A或B”，“A”(单独)和“B”(单独)。同样地，在诸如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下方面中的每个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。

应当理解，无论在何处用语言“包括”来描述方面，都还提供了根据“由...组成”和/或“基本上由...组成”描述的类似方面。

术语“约”或“基本上由......组成”是指在本领域普通技术人员确定的特定值或组成的可接受误差范围内的值或组成，其部分取决于如何测量或确定数值或组成，即，测量系统的局限性。例如，“约”或“基本上由......组成”可以表示本领域实践中1个或多于1个标准偏差之内。或者，“约”或“基本上由......组成”可以表示高达10％或20％(即±10％或±20％)的范围。例如，约3mg可包括2.7mg至3.3mg(对于10％)或2.4mg至3.6mg(对于20％)之间的任何数字。此外，特别是关于生物系统或过程，该术语可以表示高达一个数量级或高达5倍的值。当在本申请和权利要求中提供特定值或组成时，除非另有说明，否则应当假定“约”或“基本上包括”的含义在该特定值或组成的可接受的误差范围内。

如本文所述，任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应理解为包括所述范围内的任何整数的值，并且在适当时，除非另有说明，否则包括其分数(例如整数的十分之一和百分之一)。

除非另外定义，否则本文中所用的全部技术术语和科学术语具有与本公开所涉及领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。例如，Concise Dictionary of Biomedicineand Molecular Biology,Juo,Pei-Show,第2版,2002,CRC Press；The Dictionary ofCell and Molecular Biology,第5版,2013,Academic Press；和Oxford Dictionary OfBiochemistry And Molecular Biology,2006,Oxford University Press，为技术人员提供了本公开中所用诸多术语的通用词典。

单位、前缀和符号按其国际单位制(SI)接受的形式表示。数值范围包括界定该范围的数值。本文提供的小标题不是对本公开的各个方面的限制，其中可以通过参考作为一个整体的说明书来获得本公开。因此，通过完整参考本说明书，更完整地描述下文立即定义的术语。

本发明的多个方面在以下子部分进一步详细描述。

II.a抗-LAG-3抗体

可以使用本领域熟知的方法生成适用于本发明中的抗人LAG-3抗体(或从其中衍生的VH/VL结构域)。备选地，可以使用本领域公认的抗-LAG-3抗体。在某些实施方案中，LAG-3抑制剂包括抗-LAG-3双特异性抗体。在一些实施方案中，抗-LAG-3抗体结合LAG-3和PD-1。例如，在US2011/0150892A1中描述抗人LAG-3抗体，其教导通过引用并入本文，并且可以称为单克隆抗体25F7(也称为“25F7”和“LAG3.1”)。可以使用的其他本领域公认的抗LAG-3抗体包括描述于US 2011/007023的IMP731(H5L7BW)，描述于WO2016028672的MK-4280(28G-10)，描述于Journal for ImmunoTherapy of Cancer,(2016)Vol.4,Supp.Supplement 1Abstract Number:P195的REGN3767，描述于WO2017/019894的BAP050,IMP-701(LAG-525),IMP321(eftilagimod alpha)),Sym022,TSR-033,MGD013,BI754111,FS118,AVA-017和GSK2831781。用于所述本发明的这些和其他抗-LAG-3抗体可见于，例如:WO2016/028672,WO2017/106129,WO2017/062888,WO2009/044273,WO2018/069500,WO2016/126858,WO2014/179664,WO2016/200782,WO2015/200119,WO2017/019846,WO2017/198741,WO2017/220555,WO2017/220569,WO2018/071500,WO2017/015560,WO2017/025498,WO2017/087589,WO2017/087901,WO2018/083087,WO2017/149143,WO2017/219995,US2017/0260271,WO2017/086367,WO/2017/086419,WO2018/034227,and WO2014/140180。这些参考文献中每一个的内容都通过引用并入本文。

也可以使用与任何以上参考的本领域公认的抗体竞争结合LAG-3的抗体。

示例性的抗-LAG-3抗体是包含重链和轻链的BMS-986016，所述重链和轻链包含SEQ ID NOs:1和2中分别所示的序列，或其抗原结合片段及变体，如US专利号9,505,839中所述,其通过参考引入本文。

在其他实施方案中，抗体具有BMS-986016的重链CDR和轻链CDR或可变区。因此，在一个实施方案中，抗体包含BMS-986016的VH区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，所述VH区具有SEQ ID NO:3中所述的序列，和BMS-986016的VL区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，所述VL区具有SEQ ID NO:5中所述的序列。在另一个实施方案中，抗体包含这样的CDR1、CDR2和CDR3结构域，其包含SEQ ID NOs:7、8和9中分别所述的序列，和这样的CDR1、CDR2和CDR3结构域，其包含SEQ ID NOs:10、11和12中分别所述的序列。在另一个实施方案中，抗体包含这样的VH区和/或VL区，其包含SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:5中分别所述的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:6中分别所述的核酸序列编码的重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)。在另一个实施方案中，抗体与上文提到的抗体竞争结合和/或结合于LAG-3上与上文提到的抗体相同的表位。在另一个实施方案中，抗体结合人LAG-3的表位，所述表位包含氨基酸序列PGHPLAPG(SEQ ID NO:14)。在另一个实施方案中，抗体结合人LAG-3的表位，所述表位包含氨基酸序列HPAAPSSW(SEQ ID NO:15)或PAAPSSWG(SEQ ID NO:16)。

在另一个实施方案中，抗体与上文提到的抗体具有至少约90％的可变区氨基酸序列同一性(例如，与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5具有至少约90％、95％或99％可变区同一性)。

在实施方案中，抗LAG-3抗体是双特异性抗体。在实施方案中，抗LAG-3抗体是结合PD-1和LAG-3两者的双特异性抗体。

Ib.抗-PD-1抗体

以高亲和力与PD-1特异性结合的人单克隆抗体(HuMAbs)已经在美国专利号8,008,449和8,779,105中公开。已经例如在美国专利号6,808,710、7,488,802、8,168,757和8,354,509和PCT公开号WO 2012/145493中描述其他抗PD-1mAb。在美国专利号8,008449中公开的抗-PD-1HuMab中的每一个已经展示显示出以下一个或多个特征：(a)以1x 10^-7M或更小的K_D与人PD-1结合，如通过使用Biacore生物传感器系统的表面等离子体共振法所测定；(b)基本上与人CD28、CTLA-4或ICOS不结合；(c)在混合淋巴细胞反应(MLR)测定法中增加T细胞增殖；(d)在MLR测定法中增加干扰素-γ产生；(e)在MLR测定法中增加IL-2分泌；(f)与人PD-1和食蟹猴PD-1结合；(g)抑制PD-L1和/或PD-L2与PD-1结合；(h)刺激抗原特异性记忆应答；(i)刺激Ab应答；和(j)在体内抑制肿瘤细胞生长。可用于本发明的抗-PD-1抗体包括与人PD-1特异性结合并显示出至少一个、优选至少五个前述特征的mAb。

在一个实施方案中，抗PD-1抗体是纳武单抗。纳武单抗(也称为；BMS-936558；以前称为5C4，BMS-936558，MDX-1106或ONO-4538)是完全人的IgG4(S228P)PD-1免疫检查点抑制剂抗体，其可选择性地阻止与PD-1配体(PD-L1和PD-L2)的相互作用，从而阻断抗肿瘤T细胞功能的下调(美国专利号8,008,449；Wang等人，2014 Cancer ImmunolRes.2(9)：846-56)。在另一个实施方案中，抗PD-1抗体或其片段与纳武单抗交叉竞争。在其他实施方案中，抗PD-1抗体或其片段结合与纳武单抗相同的表位。在某些实施方案中，抗PD-1抗体具有与纳武单抗相同的CDR。

在另一个实施方案中，抗-PD-1抗体是派姆单抗。派姆单抗是针对人细胞表面受体PD-1(程序性死亡-1或程序性细胞死亡-1)的人源化单克隆IgG4(S228P)抗体。例如在美国专利号8,354,509和8,900,587中描述了派姆单抗。

可以使用本领域熟知的方法生成适用于本发明中的抗人-PD-1抗体(或从中衍生的VH和/或VL结构域)。备选地，可以使用本领域公认的抗-PD-1抗体。例如，可以使用在WO2006/121168(其教导通过引用并入本文)中描述的单克隆抗体5C4(在本文中称作纳武单抗或BMS-936558)、17D8、2D3、4H1、4A11、7D3和5F4。其他已知的PD-1抗体包括在WO 2008/156712中描述的lambrolizumab(MK-3475)和在WO 2012/145493中描述的AMP-514，所述文献的教导通过引用并入本文。其他已知的PD-1抗体和其他PD-1抑制剂包括在WO 2009/014708、WO 03/099196、WO 2009/114335和WO 2011/161699中描述的那些，所述文献的教导通过引用的方式并入本文。在一个实施方案中，抗-PD-1抗体是REGN2810。在一个实施方案中，抗-PD-1抗体是PDR001。另一种已知的抗-PD-1抗体是pidilizumab(CT-011)。也可以使用与任何这些抗体或拮抗剂竞争结合PD-1的抗体或其抗原结合片段。

已经例如在以下描述其他抗PD-1单克隆抗体：美国专利号6,808,710、7,488,802、8,168,757和8,354,509、美国公开号2016/0272708、和PCT公开号WO 2012/145493、WO2008/156712、WO 2015/112900、WO 2012/145493、WO 2015/112800、WO 2014/206107、WO2015/35606、WO 2015/085847、WO 2014/179664、WO 2017/020291、WO 2017/020858、WO2016/197367、WO 2017/024515、WO 2017/025051、WO 2017/123557、WO 2016/106159、WO2014/194302、WO 2017/040790、WO 2017/133540、WO 2017/132827、WO 2017/024465、WO2017/025016、WO 2017/106061、WO 2017/19846、WO 2017/024465、WO 2017/025016、WO2017/132825和WO 2017/133540，所述每篇文献均通过引用的方式并入本文。

在一些实施方案中，抗-PD-1抗体选自纳武单抗(又称作5C4、BMS-936558、MDX-1106和ONO-4538)、派姆单抗(Merck；又称作

lambrolizumab和MK-3475；参见WO2008/156712)、PDR001(Novartis；参见WO 2015/112900)、MEDI-0680(AstraZeneca；又称作AMP-514；参见WO 2012/145493)、cemiplimab(Regeneron；又称作REGN-2810；参见WO 2015/112800)、JS001(TAIZHOU JUNSHI PHARMA；参见Si-Yang Liu等人,J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、BGB-A317(Beigene；参见WO 2015/35606和US 2015/0079109)、INCSHR1210(Jiangsu Hengrui Medicine；又称作SHR-1210；参见WO 2015/085847；Si-Yang Liu等人,J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、TSR-042(TesaroBiopharmaceutical；又称作ANB011；参见WO2014/179664)、GLS-010(Wuxi/Harbin GloriaPharmaceuticals；又称作WBP3055；参见Si-Yang Liu等人,J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、AM-0001(Armo)、STI-1110(Sorrento Therapeutics；参见WO 2014/194302)、AGEN2034(Agenus；参见WO 2017/040790)、MGA012(Macrogenics；参见WO 2017/19846)和IBI308(Innovent；参见WO 2017/024465、WO 2017/025016、WO 2017/132825和WO 2017/133540)，所述文献通过引用的方式并入本文。

在另一个实施方案中，抗-PD-1抗体或其片段与派姆单抗交叉竞争。在一些实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段结合与派姆单抗相同的表位。在某些实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段具有与派姆单抗相同的CDR。在另一个实施方案中，抗-PD-1抗体是派姆单抗。派姆单抗(也称作

、lambrolizumab和MK-3475)是针对人细胞表面受体PD-1(程序性死亡-1或程序性细胞死亡-1)的人源化单克隆IgG4抗体。例如在美国专利号8,354,509和8,900,587中描述了派姆单抗；还参见http://www.cancer.gov/drugdictionary？cdrid＝695789(最后访问时间：2017年5月25日)。派姆单抗已经由FDA批准用于治疗复发性或难治性黑素瘤。

在其他实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段与MEDI0608交叉竞争。另外的实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段结合与MEDI0608相同的表位。在某些实施方案中，抗-PD-1抗体具有与MEDI0608相同的CDR。在其他实施方案中，抗-PD-1抗体是MEDI0608(前称AMP-514)，其是单克隆抗体。例如在美国专利号8,609,089中或在http://www.cancer.gov/drugdictionary？cdrid＝756047(最后访问时间：2017年5月25日)描述了MEDI0608。

在其他实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段与BGB-A317交叉竞争。在一些实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段结合与BGB-A317相同的表位。在某些实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段具有与BGB-A317相同的CDR。在某些实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段是BGB-A317，其是人源化单克隆抗体。美国公开号2015/0079109中描述了BGB-A317。

可用于本公开的组合物的抗PD-1抗体还包括分离的抗体，其特异性结合人PD-1并且与纳武单抗交叉竞争以结合人PD-1(参见，例如，美国专利号8,008,449和8,779,105；Int公开号WO 2013/173223)。抗体交叉竞争结合抗原的能力表明这些抗体与抗原的相同表位区域结合，并且在空间上阻碍其他交叉竞争抗体与该特定表位区域的结合。预期这些交叉竞争的抗体由于其与PD-1的相同表位区域的结合而具有与纳武单抗极为相似的功能特性。在标准PD-1结合测定(例如Biacore分析，ELISA测定或流式细胞术)中，可以根据交叉竞争抗体与纳武单抗交叉竞争的能力来轻松鉴定交叉竞争抗体(参见，例如，国际公开第WO2013/173223)。

可用于所公开方法中的抗-PD-1抗体还包括分离的抗体，所述分离的抗体与人PD-1特异性结合并且与本文公开的任何抗-PD-1抗体(例如，纳武单抗)交叉竞争结合人PD-1(例如，参见美国专利号8,008,449和8,779,105；WO 2013/173223)，所述文献通过引用并入本文。在一些实施方案中，抗-PD-1抗体结合与本文所述的任何抗-PD-1抗体(例如，纳武单抗)相同的表位。抗体交叉竞争结合某抗原的能力表示，这些单克隆抗体与该抗原的相同表位区域结合并且空间上阻碍其他交叉竞争性抗体与这个特定表位区域结合。因为它们与PD-1的相同表位区域结合，预期这些交叉竞争性抗体具有非常类似于那些参考抗体(例如，纳武单抗)的功能特性。可以基于这类交叉竞争性抗体在标准PD-1结合测定法(如Biacore分析、ELISA测定或流式细胞术)中与纳武单抗交叉竞争的能力，轻易鉴定这些抗体(例如，参见WO 2013/173223)。

在某些实施方案中，与纳武单抗交叉竞争结合人PD-1或与纳武单抗的相同人PD-1表位区域结合的抗体或其抗原结合片段是mAb。为了施用至人类个体，这些交叉竞争性抗体可以是嵌合抗体或人源化或人抗体。可以通过本领域熟知的方法制备并分离这类嵌合、人源化或人mAb。

可用于所公开的发明的组合物的抗-PD-1抗体还包含以上抗体的抗原结合部分。已经充分显示，抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段执行。涵盖于术语抗体的“抗原结合部分”范围内的结合片段的实例包括(i)Fab片段，一种由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')₂片段，一种包含由二硫键在铰链区连接的两个Fab片段的双价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；和(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段。

适用于所公开组合物中的抗-PD-1抗体是这样的抗体，它们以高特异性和高亲和力与PD-1结合、阻断对PD-L1和或PD-L2的结合并且抑制PD-1信号传导途径的免疫抑制作用。在某些实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合部分与纳武单抗交叉竞争结合人PD-1。在其他实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合部分是嵌合、人源化或人单克隆抗体或其部分。在某些实施方案中，抗体是人源化抗体。在其他实施方案中，抗体是人抗体。可以使用IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型抗体。

在某些实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段包含是人IgG1或IgG4同种型的重链恒定区。在某些其他实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段的IgG4重链恒定区的序列含有S228P突变，所述突变用正常情况在IgG1同种型抗体的相应位置处存在的脯氨酸残基替换铰链区中的丝氨酸残基。纳武单抗中存在的这个突变防止与内源IgG4抗体交换Fab臂，同时保留低亲和力以激活与野生型IgG4抗体缔合的Fc受体(Wang等人,2014)。在另外的其他实施方案中，抗体包含轻链恒定区，其是人κ或λ恒定区。在其他实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段是mAb或其抗原结合部分。在本文所述的包括施用抗-PD-1抗体的任何治疗方法的某些实施方案中，抗-PD-1抗体是纳武单抗。在其他实施方案中，抗-PD-1抗体是派姆单抗(pembrolizumab)。在其他实施方案中，抗-PD-1抗体选自美国专利号8,008,449中描述的人抗体17D8、2D3、4H1、4A11、7D3和5F4。在另外的实施方案中，抗-PD-1抗体是MEDI0608(前称AMP-514)、AMP-224或Pidilizumab(CT-011)。

在实施方案中，抗-PD-1抗体是双特异性抗体。在实施方案中，抗-PD-1抗体是结合PD-1和LAG-3两者的双特异性抗体。

IIc.抗-PD-L1抗体

可以使用本领域熟知的方法生成适用于本发明中的抗人-PD-L1抗体(或从其中衍生的VH和/或VL结构域)。可用于本文的方法的抗PD-L1抗体的实例包括美国专利号9,580,507(其通过参考并入本文)中公开的抗体。已证明美国专利号9,580,507公开的抗PD-L1人单克隆抗体表现出以下一种或多种特征：(a)以1x 10^-7M或更小的K_D结合人PD-L1，如使用Biacore生物传感器系统通过表面等离子共振确定；(b)在混合淋巴细胞反应(MLR)分析中增加T细胞增殖；(c)在MLR分析中增加γ-干扰素的产生；(d)在MLR分析中增加IL-2的分泌；(e)刺激抗体反应；(f)逆转T调节细胞对T细胞效应细胞和/或树突状细胞的作用。可用于本发明的抗PD-L1抗体包括与人PD-L1特异性结合并表现出至少一种上述特征、在一些实施方案中至少五种上述特征的单克隆抗体。

可以使用公认的抗PD-L1抗体。例如，可以使用美国专利号7,943,743中公开的人抗-PD-L1抗体，其内容通过引用并入本文。这样的抗PD-L1抗体包括3G10、12A4(也称为BMS-936559)，10A5、5F8、10H10、1B12、7H1、11E6、12B7和13G4。可以使用的其他本领域公认的抗PD-L1抗体包括例如在美国专利号7,635,757和8,217,149，美国公开号2009/0317368，以及PCT公开号WO 2011/066389和WO 2012/145493中描述的那些，其教导也通过引用并入此文。抗PD-L1抗体的其他实例包括阿特珠单抗(atezolizumab)(TECENTRIQ；RG7446)或德瓦鲁单抗(durvalumab)(IMFINZI；MEDI4736)或阿维鲁单抗(avelumab)(Bavencio)。也可以使用与这些本领域公认的抗体或抑制剂竞争与PD-L1结合的抗体或其抗原结合片段。

在某些实施方案中，抗PD-L1抗体是BMS-936559(以前为12A4或MDX-1105)(参见例如美国专利号7,943,743；WO 2013/173223)。在其他实施方案中，抗PD-L1抗体是MPDL3280A(也称为RG7446和阿特珠单抗)(参见例如Herbst等人，2013J Clin Oncol 31(增刊)：3000；美国专利号8,217,149)，MEDI4736(Khleif，2013年，在2013年欧洲癌症大会的论文集中；2013年9月27日至10月1日；荷兰阿姆斯特丹，摘要802)或MSB0010718C(也称为阿维鲁单抗(Avelumab)；参见US 2014/0341917)。在某些实施方案中，与上述PD-L1抗体交叉竞争结合人PD-L1或结合人PD-L1相同表位区域的抗体是mAb。为了施用于人类个体，这些相互竞争的抗体可以是嵌合抗体，或者可以是人源化或人抗体。此类嵌合的、人源化的或人的mAb可以通过本领域众所周知的方法来制备和分离。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体选自BMS-936559(也称为12A4、MDX-1105；参见例如美国专利号7,943,743和WO 2013/173223、阿特珠单抗(Roche；也称为

MPDL3280A，RG7446；参见US 8,217,149；也参见Herbst等人(2013)J Clin Oncol 31(增刊)：3000)、度伐鲁单抗(阿斯利康；也称为IMFINZI^TM，MEDI-4736；参见WO2011/066389)、阿维鲁单抗(辉瑞；也称为

MSB-0010718C；参见WO 2013/079174)、STI-1014(Sorrento；参见WO2013/181634)、CX-072(Cytomx；参见WO2016/149201)、KN035(3D Med/Alphamab；参见Zhang等人，Cell Discov.7:3(2017年3月)、LY3300054(礼来公司，参见例如WO 2017/034916)以及CK-301(CheckpointTherapeutics；参见Gorelik等人，AACR:Abstract 4606(2016年4月))。

在某些实施方案中，PD-L1抗体是阿特珠单抗

阿特珠单抗是一种完全人源化的IgG1单克隆抗PD-L1抗体。

在某些实施方案中，PD-L1抗体是度伐鲁单抗(IMFINZI^TM)。度伐鲁单抗是人IgG1κ单克隆抗PD-L1抗体。

在某些实施方案中，PD-L1抗体是阿维鲁单抗

阿维鲁单抗是一种人类IgG1λ单克隆抗PD-L1抗体。

在其他实施方案中，抗PD-L1单克隆抗体选自28-8、28-1、28-12、29-8、5H1及其任意组合。

可用于公开的方法中的抗PD-L1抗体还包括分离的抗体，其与人PD-L1特异性结合并且与本文公开的任何抗PD-L1抗体例如阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗交叉竞争结合人PD-L1。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体结合与本文所述的任何抗PD-L1抗体例如阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗相同的表位。抗体交叉竞争结合抗原的能力表明这些抗体与抗原的相同表位区域结合，并且在空间上阻碍其他交叉竞争抗体与该特定表位区域的结合。这些交叉竞争抗体由于其与PD-L1的相同表位区域的结合而具有与参照抗体例如阿特珠单抗和/或阿维鲁单抗非常相似的功能特性。可以在标准的PD-L1结合测定例如Biacore分析、ELISA测定或流式细胞术中，根据与阿特珠单抗和/或阿维鲁单抗交叉竞争的能力来轻松鉴定交叉竞争性抗体(参见，例如WO 2013/173223)。

在某些实施方案中，与阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗交叉竞争人PD-L1抗体或者结合与阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗的人PD-L1抗体的相同表位区的抗体是单克隆抗体。为了施用于人类个体，这些交叉竞争抗体是嵌合抗体、工程抗体或人源化或人抗体。可以通过本领域众所周知的方法来制备和分离所述嵌合的、工程的、人源化的或人的单克隆抗体。

可用于所公开的发明的方法中的抗PD-L1抗体还包括上述抗体的抗原结合部分。已经充分证明，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来实现。

适用于所公开的方法或组合物中的抗PD-L1抗体是与PD-L1以高特异性和亲和力结合，阻断PD-1的结合并抑制PD-1信号通路的免疫抑制作用的抗体。在本文公开的任何组合物或方法中，抗PD-L1“抗体”包括与PD-L1结合并在抑制受体结合和上调免疫系统方面表现出与完整抗体相似的功能特性的抗原结合部分或片段。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体或其抗原结合部分与阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗交叉竞争结合人PD-L1。

IId.免疫治疗剂

本公开中使用的“免疫治疗剂”和“免疫肿瘤药”包括能够调节宿主的免疫系统的任何活性剂、化合物或生物制剂。免疫治疗剂可以是免疫检查点抑制剂，免疫检查点增强剂或刺激剂。本文所述的免疫治疗剂可与一种或多种其他免疫治疗剂(例如，抗PD-1抗体和抗LAG-3抗体)组合使用。

在一个实施方案中，免疫治疗剂是免疫检查点抑制剂。此类免疫治疗剂的非限制性实例包括：

(i)CTLA-4(CD152)拮抗剂(例如，(伊匹单抗(ipilimumab))(U.S.专利号6,984,720)；曲美木单抗(之前称作ticilimumab和CP-675,206)；AGEN-1884；和AT或-1015(抗-OX40和抗-CTLA-4双特异性性抗体))。与CTLA-4特异性结合的具有高亲和力的人单克隆抗体公开在U.S.专利号6,984,720。其他抗-CTLA-4单克隆抗体描述在例如U.S.专利号5,977,318、6,051,227,6,682,736,和7,034,121和国际公开号WO 2012/122444,WO 2007/113648,WO 2016/196237,和WO 2000/037504。

(ii)TIM-3(HAVCR2)拮抗剂(例如，TSR-022和LY3321367)；

(iii)TIGIT(具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)拮抗剂(例如，BMS-986207,OMP-313M32,COM902(CGEN-15137),和AB154)；

(iv)IDO1(吲哚胺-2,3-二氧酶1)拮抗剂(例如，吲哚昔莫德(indoximod))(NLG8189,1-甲基-D-TRP),艾卡哚司他(epacadostat)(INCB-024360),KHK2455,PF-06840003(PCT公开号WO 2016/181348 A1),吡咯烷-2,5-二酮衍生物(PCT公开号WO 2015/173764 A1),navoximod(RG6078,GDC-0919,NLG919),和BMS-986205(F001287))；

(v)KIR(杀伤细胞免疫球蛋白样受体)拮抗剂(例如，lirilumab(I-7F9,BMS-980615,或IPH2101)和IPH4102(抗-KIR3DL2单克隆抗体)；

(vi)TDO(色氨酸2,3-二加氧酶)拮抗剂(例如，4-(吲哚-3-基)-吡唑衍生物(U.S.专利号9,126,984 B2和U.S.公开号2016/0263087 A1)；3-吲哚取代的衍生物(PCT公开号WO2015140717 A1,WO 2017025868 A1,WO 2016147144 A1),3-(吲哚-3-基)-吡啶衍生物(U.S.公开号20150225367 A1和PCT公开号WO 2015121812 A1)；

(vii)双重IDO/TDO拮抗剂(例如，小分子双重IDO/TDO抑制剂，如PCT公开号WO2015150097 A1,WO 2015082499 A2,WO 2016026772 A1,WO 2016071283 A1,WO2016071293 A2,和WO 2017007700 A1所公开的)；

(viii)CD40拮抗剂(例如，品系BMS3h-56(U.S.专利号9,475,879),lucatumumab(HCD122和CHIR-12.12),CHIR-5.9,和达西珠单抗(dacetuzumab)(huS2C6,PRO 64553,RG3636,SGN 14,SGN-40))；

(ix)腺苷A2a受体(A2aR)拮抗剂(例如，CPI-444,PBF-509,伊曲茶碱(istradefylline)(KW-6002),瑞德南特(preladenant)(SCH420814),tozadenant(SYN115),vipadenant(BIIB014),HTL-1071,ST1535,SCH412348,SCH442416,SCH58261,ZM241385,和AZD4635(小分子A2aR抑制剂))；

(x)VISTA(T细胞激活的V-结构域含免疫球蛋白(Ig)抑制子)拮抗剂(例如，CA-170(抗-PD-L1/L2和抗-VISTA小分子)和JNJ-61610588)；

(xi)CEACAM1(CD66a)拮抗剂(例如，CM-24(MK-6018))；

(xii)CEA(癌胚抗原)拮抗剂(例如，cergutuzumab amunaleukin(RG7813,RO-6895882),RG7802(RO6958688))；

(xiii)CD47拮抗剂(例如，HuF9-G4,CC-90002,TTI-621,ALX148,NI-1701,NI-1801,SRF231,和Effi-DEM)；

(xiv)PVRIG(含脊髓灰质炎病毒受体相关免疫球蛋白结构域,CD122R)拮抗剂(例如，COM701)；

(xv)GARP(主要糖蛋白A重复子)拮抗剂(例如，ARGX-115)；

(xvi)a STING(IFN基因刺激子)激动剂(例如，2’或3’-单氟取代的，或2’3’-二氟取代的混合键2’,5’–3’,5’环状二核苷酸(PCT公开号WO 2017/075477 A1)；2'-氟取代的双-3’,5’环状二核苷酸和2’,2”-二F-Rp,Rp,双-3’,5’环状二核苷酸(PCT公开号WO 2016/145102A1)；和氟化环状二核苷酸(PCT公开号WO 2016/096174 A1)；

(xvii)CD20激动剂(例如，

和ABP 798)；

(xviii)CD80拮抗剂(例如，加利昔单抗(galiximab)(IDEC-114)和AV 1142742(RhuDex)；

(xix)CD86拮抗剂；和

(xx)CD96拮抗剂.

在另一个实施方案中，免疫治疗剂是免疫检查点刺激剂或增强剂。此类免疫治疗剂的非限制性实例包括：

(i)a CD28激动剂(例如，TGN1412(抗-CD28抗体)和JCAR015(抗-CD19-CD28-zeta修饰的嵌合抗原受体))；

(ii)CD80或CD86激动剂(例如，CTLA4-Ig融合构建体(CTLA-4-IgG4m,RG2077,或RG1046)；

(阿巴西普(abatacept)或BMS-188667)；和MGN1601；

(iii)ICOS或ICOS-配体激动剂(例如，BMS986226,MEDI-570,GSK3359609,JTX-2011,和AMG 570)；

(iv)4-1BB(CD137)激动剂(例如，urelumab和PF-05082566)；

(v)OX40(CD134或TNFRS4)激动剂(例如，他佛利珠单抗(tavolixizumab)(MEDI-0562)；泊加珠单抗(pogalizumab)(MOXR0916,RG7888)；GSK3174998；ATOR-1015(抗-OX40和抗-CTLA-4双特异性性抗体)；MEDI-6383；MEDI-6469；BMS 986178；PF-04518600；和GINAKIT细胞(表达iC9-GD2-CD28-OX40的T淋巴细胞))；

(vi)CD27激动剂(例如，varilumab(CDX-1127))；

(vii)CD40激动剂(例如，ADC-1013(JNJ-64457107),RG7876(RO-7009789),HuCD40-M2；APX005M(EPI-0050)(U.S.Patent No.9,556,278)；Chi Lob 7/4(IgG1嵌合激动剂CD40单克隆抗体))；

(viii)CD70激动剂(例如，ARGX-110)；和

(ix)GITR激动剂(例如，BMS-986156,TRX518,GWN323,INCAGN01876,和MEDI1873)。

在一个实施方案中，免疫治疗剂是细胞因子，例如趋化因子，干扰素(例如，干扰素-γ)，白介素(例如，aldesleukin(具有免疫调节和抗肿瘤活性的IL-2的重组类似物)，托珠单抗(tocilizumab)(抗IL-6受体抗体))；淋巴因子或肿瘤坏死因子(TNF)家族的成员(例如ATOR-1016，ABBV-621和阿达木单抗)。其他免疫治疗剂的实例包括：CSF1R(集落刺激因子1受体，CD115)拮抗剂(例如艾马妥珠单抗)；Toll样受体9(TLR9)激动剂(例如，agatolimod钠)；CD160(NK1)激动剂(例如BY55)；CD73拮抗剂(5'-核苷酸酶或ecto-5'-核苷酸酶)(例如MEDI9447)；iNOS(诱导型NO合酶，NOS2)拮抗剂(例如N-乙酰半胱氨酸(NAC)，氨基胍，L-硝基精氨酸甲酯，S,S-1,4-亚苯基-双(1,2-乙二基)双-异硫脲)；和SHP-1(含Src同源性2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶1)拮抗剂(参见Watson等人，Biochem Soc Trans 44(2)：356-362(2016))。

III.药物组合物

一般配制适于施用人类患者的药物组合物用于肠胃外施用，例如，配制在液态载体中，或适于复溶成液态溶液剂或混悬剂用于静脉内施用。

通常，这类组合物一般包含可药用载体。如本文所用，术语“可药用”意指由政府监管机构批准或者列于美国药典或另一部普遍认可的药典中，用于动物中，尤其用于人类中。术语“载体”指与化合物一起施用的稀释剂、辅助剂、赋形剂或溶媒。这类药用载体可以是无菌液体，如水和油，包括石油来源、动物来源、植物来源或合成来源的那些油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油、甘油、聚乙二醇、乙二醇蓖麻醇酸酯等。可以使用水或水溶液盐水和右旋糖水溶液和甘油溶液作为载体，特别地用于可注射溶液剂(例如，包含抗-PD-1抗体、抗LAG-3抗体和/或另一免疫治疗剂)。可以配制用于肠胃外施用的液态组合物，以通过注射或连续输注施用。注射或输注施用途径包括静脉内、腹膜内、肌内、鞘内和皮下。在一个实施方案中，(例如，在分立的制剂中或一起(在相同制剂中或在分立的制剂中))静脉内施用包含抗-PD-1抗体、抗LAG-3抗体和免疫治疗剂的组合物。

IV.患者群体

本文提供使用抗LAG-3抗体、PD-1途径抑制剂和另一免疫治疗剂的组合，治疗人类患者中实体肿瘤癌症(例如，晚期难治性实体瘤)的临床方法。

可以使用本发明方法治疗的癌的实例包括肝癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、口腔癌、乳腺癌、肺癌(包括小细胞和非小细胞肺癌)、皮肤或眼内恶性黑素瘤、肾癌、子宫癌、卵巢癌、结直肠癌、结肠癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、淋巴细胞淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、Kaposi肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、环境所致癌(包括石棉诱导的那些癌症)、血液学恶性病，例如包括多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤/原发性纵隔B细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性髓样淋巴瘤、慢性髓性白血病、慢性淋巴样白血病、滤泡淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、急性淋巴母细胞性白血病、蕈样肉芽肿病、退行性大细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤和前体T-淋巴母细胞淋巴瘤及所述癌的任何组合。本发明还适用于治疗转移性癌症。

在一个实施方案中，人类患者罹患非小细胞肺癌(NSCLC)或病毒相关的癌症(例如，人乳头瘤病毒(HPV)相关的肿瘤)或胃腺癌。在一个具体实施方案中，HPV相关的肿瘤是HPV+头颈癌(HNC)。在另一个具体实施方案中，胃腺癌与Epstein-Barr病毒(EBV)病毒感染相关。

可以在治疗之前、其期间或之后，针对一个或多个上述临床属性检验或选择患者。

V.组合疗法

本文提供的组合疗法涉及施用抗-LAG-3抗体、PD-1途径抑制剂和另一种阻断抑制性免疫受体(例如，与其天然配体结合时抑制/中和活性(如细胞毒活性)的受体)的免疫治疗剂，以治疗患有恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤)的个体。

在一个实施方案中，本发明根据限定的临床剂量方案提供处于组合的抗-LAG-3抗体、抗-PD-1抗体和另一种免疫治疗剂，以治疗患有恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤)的个体。在一个具体实施方案中，抗-LAG-3抗体是BMS-986016。在另一个实施方案中，抗-PD-1抗体是BMS-936558。在另一个实施方案中，调节剂量方案以提供最佳的所需反应(例如，有效反应)。

如本文所用，辅助或联合施用(共施用)包括同时施用处于相同或不同剂型的化合物，或分开施用化合物(例如，依次施用)。因此，抗-LAG-3、PD-1途径抑制剂和免疫治疗剂可以在单一制剂中同时施用。备选地，可以为分开施用配制抗-LAG-3、PD-1途径抑制剂和免疫治疗剂，并且将它们同步或依次施用(例如，将一种抗体在施用第二种抗体前约30分钟内施用)，并且以任何顺序。

例如，可以首先施用抗-PD-1抗体，接着(例如，紧接着)施用抗-LAG-3抗体和/免疫治疗剂。在一个实施方案中，在施用抗-LAG-3抗体和/或免疫治疗剂之前施用PD-1途径抑制剂。在另一个实施方案中，在施用抗-LAG-3抗体和/或免疫治疗剂后施用PD-1途径抑制剂。在另一个实施方案中，同步施用抗-LAG-3抗体、PD-1途径抑制剂和免疫治疗剂。这种同步或依次施用优选地导致所有三个组分同时存在于受治患者中。

VI.治疗方案

治疗人类患者中恶性肿瘤的合适治疗方案包括例如包括向患者施用有效量的下述每者：

(a)抗-LAG-3抗体，如这样一种抗-LAG-3抗体，其包含具有SEQ ID NO:3中所述序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:5中所述序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，

(b)抗PD-1抗体，如这样一种抗-PD-1抗体，其包含具有SEQ ID NO:19中所述序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:21中所述序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，

(c)免疫治疗剂，

其中该方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是八周时间，其中对于至少一个周期的每者，将至少四剂量的抗-LAG-3抗体按约1、3、10、20、50、80、100、130、150、180、200、240或280mg的平剂量施用，至少四剂量的抗-PD-1抗体按约50、80、100、130、150、180、200、240或280mg的平剂量施用，和至少四剂量的免疫治疗剂按约平剂量施用。在另一个实施方案中，将四剂量的抗-LAG-3抗体按0.01、0.03、0.25、0.1、0.3、1或3、5、8或10mg/kg体重的剂量施用，将四剂量的抗-PD-1抗体按0.1、0.3、1、3、5、8或10mg/kg体重的剂量施用，和至少四剂量的免疫治疗剂按约平剂量施用。

在一个实施方案中，根据体重计算抗-LAG-3、PD-1途径抑制剂、免疫治疗剂的剂量，例如，mg/kg体重。在另一个实施方案中，抗-LAG-3、PD-1途径抑制剂、和/或免疫治疗剂的剂量是平固定剂量。在另一个实施方案中，抗-LAG-3、抗-PD-1途径抑制剂、和/或免疫治疗剂的剂量随时间推移变动。例如，抗-LAG-3、PD-1途径抑制剂、和/或免疫治疗剂可以初始按高剂量施用并且可以随时间推移减少。在另一个实施方案中，抗-LAG-3、PD-1途径抑制剂、和/或免疫治疗剂初始按低剂量施用并随时间推移增加。

在另一个实施方案中，对于每剂量，施用的抗-LAG-3、PD-1途径抑制剂、和/或免疫治疗剂的量恒定。在另一个实施方案中，施用的抗体和/或免疫治疗剂的量随每剂量变动。例如，抗体和/或免疫治疗剂的维持(或后续)剂量可以较高或与首次施用的负荷剂量相同。在另一个实施方案中，抗体和/或免疫治疗剂的维持剂量可以较低或与负荷剂量相同。

在另一个实施方案中，配制抗-LAG-3、PD-1途径抑制剂、和/或免疫治疗剂用于静脉内施用。在一个实施方案中，将抗-PD-1抗体在每个周期的第1、第15、第29和第43天施用。在另一个实施方案中，将抗-LAG-3抗体在每个周期的第1、第15、第29和第43天施用。在一些实施方案中，将免疫治疗剂在每个周期的第1、第15、第29和第43天施用。

在其他实施方案中，按以下方式施用抗-LAG-3、PD-1途径抑制剂、和/或免疫治疗剂：每周一次、每二或三周一次、每月一次或只要观察到临床获益或直至存在完全反应、确认的进展经或不可管理的毒性为止。

在另一个实施方案中，施用周期是八周，如需要，这可以重复。在另一个实施方案中，治疗由多达12个周期组成。

在另一个实施方案中，每八周周期施用4剂量的PD-1途径抑制剂。在另一个实施方案中，每八周周期施用4剂量的PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，每八周周期施用4剂量的治疗剂。

在另一个实施方案中，PD-1途径抑制剂、抗-LAG-3抗体和/或免疫治疗剂作为一线治疗施用(例如，初始或首次治疗)。在另一个实施方案中，PD-1途径抑制剂、抗-LAG-3抗体和/或免疫治疗剂作为二线治疗施用(例如，在初始或首次治疗后，包括在复发后和/或首次治疗已经失败的情况下)。

在另一个方面，本发明的特征在于任何前述的实施方案，其中将抗-PD-1抗体替换为抗PD-L1或抗PD-L2抗体或与之组合。

VII.结局根据本文所公开的方法治疗的患者优选地出现至少一个癌症体征的改善。在一个实施方案中，依据可度量肿瘤病灶的量和/或大小减少，度量改善。在另一个实施方案中，可以在胸部X光片或CT或MRI片上测量病灶。在另一个实施方案中，细胞学或组织学可以用来评价对疗法的反应性。

在一个实施方案中，受治疗的患者显示完全反应(CR)、部分反应(PR)、稳定疾病(SD)、免疫相关的完全反应(irCR)、免疫相关的部分反应(irPR)或免疫相关的稳定疾病(irSD)。在另一个实施方案中，受治疗的患者出现肿瘤收缩和/或生长速率下降，即，阻抑肿瘤生长。在另一个实施方案中，减少或抑制不想要的细胞增殖。在又一个实施方案中，可以出现以下一种或多种情况：可以减少癌细胞的数目；可以减少肿瘤大小；可以抑制、迟滞、减慢或终止癌细胞向外周器官浸润；可以减慢或抑制肿瘤转移；可以抑制肿瘤生长；可以防止或延迟肿瘤复发；可以缓解一个或多个与癌症相关的症状到某个程度。

在其他实施方案中，根据本文提供的任何方法施用有效量的抗-LAG-3抗体、PD-1途径抑制剂和免疫治疗剂，产生了至少一个治疗作用，所述治疗作用选自选自肿瘤的大小减少，出现的转移性病灶的数目随时间推移减少、完全反应、部分反应或稳定疾病。在另外的实施方案中，这些治疗方法产生的可比较的临床获益率(CBR＝CR+PR+SD≥6个月)比抗-LAG-3抗体、PD-1途径抑制剂或免疫治疗剂单独所实现的临床获益率更好。在其他实施方案中，相比抗-LAG-3抗体、PD-1途径抑制剂或免疫治疗剂单独，临床获益率改善是约20％20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更大。

VIII.试剂盒和单位剂量形式

本文中还提供以适应于前述方法中使用的治疗有效量包含药物组合物的试剂盒，所述药物组合物含有抗-LAG-3抗体(如BMS-986016)和PD-1途径抑制剂(如BMS-936558)，免疫治疗剂和可药用载体。试剂盒任选地还可以包括说明，例如，其包含施用方案，以允许实施者(例如，医师、护士或患者)向患有癌症(例如，实体瘤)的患者施用含于其中的组合物。试剂盒还可以包含注射器。

任选地，试剂盒包含单剂量药物组合物的多个包装，所述包装各自含有有效量的抗-LAG-3、PD-1途径抑制剂和/或免疫治疗剂，供根据上文提供的方法单次施用。还可以在试剂盒中包含为施用药物组合物必需的仪器或装置。例如，试剂盒可以提供一个或多个含有有效量的抗-LAG-3、抗PD-1抗体和/或免疫治疗剂的预充式注射器。

在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗人类患者的恶性肿瘤的试剂盒，所述试剂盒包含例如：

(a)某剂量的抗-LAG-3抗体，如这样一种抗-LAG-3抗体，其包含具有SEQ ID NO:3中所述序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:5中所述序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；

(b)某剂量的PD-1途径抑制剂，如抗体，其包含具有SEQ ID NO:19中所述序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:21中所述序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；

(c)某剂量的免疫治疗剂；和

(c)在本文所述的方法中使用抗-LAG-3、抗-PD-1抗体、PD-1途径抑制剂和免疫治疗剂的说明。

以下实施例仅是示例性的，不应解释为以任何方式对本公开保护范围的限制，因为在阅读本公开之后，许多变化和等同方案对于本领域技术人员而言将是显而易见的。

实施例

实施例1

纳武单抗单一疗法对比纳武单抗+BMS 986016(抗LAG-3抗体)+免疫治疗剂对恶性肿瘤的治疗

为了确定与纳武单抗单一疗法相比总生存率(OS)是否有所改善，在患有复发性转移性肿瘤的患者中测试了包含纳武单抗、BMS 986016和免疫治疗剂组合的药物组合物。进行了实验组之间OS的正式成对比较(即，纳武单抗单一疗法v.纳武单抗+BMS 986016+免疫治疗剂联合疗法)。

该研究还比较了复发性转移性肿瘤个体中纳武单抗、BMS 986016和免疫治疗剂的组合(“联合疗法”)与纳武单抗单一疗法的无进展生存(PFS)和客观缓解率(ORR)，这是基于盲独立中心审查(Blinded Independent Central Review(BICR))评估。评估了不同组之间的PFS和ORR的差异。

该研究的其他目的包括：1)与纳武单抗相比，评估联合疗法的总体安全性和耐受性；2)表征联合疗法的药代动力学，并探索暴露安全性和暴露功效之间的关系；3)表征联合疗法的免疫原性；4)表征联合疗法的免疫相关性；5)评估对联合治疗的临床反应的预测性肿瘤和周围生物标志物；和6)使用EQ-5D指数和直观模拟量表评估接受联合疗法的个体的总体健康状况。

方法

研究设计

该研究是在患有IV期或复发性非小细胞肺癌(NSCLC)，PD-L1阳性或阴性的以前未进行过晚期疾病治疗成年(大于或等于18岁)男性和女性个体中的开放标签、2-组、随机研究。

关键纳入标准包括：1)ECOG性能状态大于或等于1；2)经组织学证实为IV期或复发性NSCLC的患者(根据第七届International Association for the Study of LungCancer分类鳞状或非鳞状组织学)，且之前未给予全身抗癌疗法(包括EGFR和ALK抑制剂)作为晚期或转移性疾病主要疗法；3)根据RECIST 1.1标准通过CT或MRI可测量的疾病。

关键排除标准包括：1)具有已知EGFR突变且对可用靶向抑制剂疗法敏感的个体；2)具有已知ALK易位的个体，其对可用的靶向抑制剂疗法敏感；3)未经治疗的CNS转移患者；4)患有活动性、已知或疑似自身免疫性疾病的个体(患有I型糖尿病、仅需激素替代的甲状腺功能减退症、不需要全身治疗的皮肤疾病(如白癜风、牛皮癣或脱发)或预期不会在没有外部触发的情况下复发的病症的个体允许参加)；和5)具有在随机分配的14天之内需要接受皮质类固醇(>10mg每日泼尼松当量)或其他免疫抑制药物的全身治疗的病症的个体(没有活动性自身免疫疾病的情况下，允许吸入或局部类固醇，以及肾上腺素替代类固醇>10mg每日泼尼松当量)。

将个体按1：1：1：1的比例随机分组，并按照组织学(鳞状和非鳞状)和PD-L1状态进行分层。通过免疫组化(IHC)染色在随机分组之前提交的肿瘤样本中的PD-L1蛋白来确定PD-L1的状态。如果在至少100个可评估的肿瘤细胞中观察到大于或等于5％的肿瘤细胞膜染色，则将个体鉴定为PD-L1阳性；或者如果在至少100个可评估肿瘤细胞中观察到小于或等于5％的肿瘤细胞膜染色，则将个体鉴定为PD-L1阴性。

个体从两个研究组之一接受开放标签治疗。给药方案如表1所示。

研究中的肿瘤评估在随机后第6周(±7天)开始，并且每6周(±7天)进行一次，直到第48周。在第48周之后，每12周(±7天)进行肿瘤评估。直至进展或治疗中止，以较晚发生者为准。超出研究者评估的RECIST 1.1定义进展的接受纳武单抗或联合疗法的个体，也必须继续进行肿瘤评估，直至中止治疗。大约1200名个体被随机分组后，入组将结束。该研究的主要终点是总体生存(OS)。从入选开始到主要OS终点分析的研究持续时间预计约为大约48个月。

研究组

纳武单抗单一疗法(A组)

在每个周期的第1天，每2周进行超过30分钟的静脉内(IV)施用纳武单抗240mg，直到疾病进展，终止是由于不可接受的毒性、撤回同意或研究结束。如果个体具有研究者评估的临床获益并且耐受治疗，则允许超出初始研究者评估的RECIST 1.1定义的进展的治疗。给药完成后，个体进入随访阶段。

纳武单抗+BMS 986016+免疫治疗剂联合疗法(B组)

每3周静脉内施用1mg/kg的纳武单抗超过30分钟，联合超过30分钟的静脉内施用BMS9860161mg/kg和免疫治疗剂，进行四个周期，直到疾病进展、不可接受的毒性、撤回同意或研究结束。如果个体具有研究者评估的临床获益并且耐受治疗，则允许超出初始研究者评估的RECIST 1.1定义的进展的治疗。给药完成后，个体进入随访阶段。

治疗后随访

当做出使个体停止所有治疗的决定时，开始治疗后的随访；这包括任选的持续维持治疗。因疾病进展以外的原因而中止治疗的个体将继续接受肿瘤评估(如果临床可行)，直到进展或任何后续疗法开始为止(以先发生者为准)。跟踪个体的药物相关毒性，直到这些毒性消退、恢复至基线或被认为不可逆。在研究药物最后一个剂量后至少100天内记录所有不良事件。在完成前两次随访后，每3个月对个体进行随访生存。

样本量

大约1200名个体以1：1：1：1的比例被随机分为4个治疗组。对照组中发生257个事件后，才进行最终分析，这些事件将由支持DMC的非盲性独立统计学家进行监控。假设筛查失败率达到20％，则估计将招募约1500名个体，以使1200名个体随机分组，假设分阶段恒定的应计率(第1月至第2月期间，8个体/月，第3月至第4月期间，40个体/月；第5月至第6月期间，85个体/月；第7月至第8月期间，138个体/月；第8月后，170个个体/月)，大约需要48个月才能获得最终OS分析所需的死亡人数(应计14个月，生存随访34个月)。

终点

OS是该研究的主要终点。如果在至少一个比较中证明了OS的优越性，则针对关键次要终点的把关测试方法(gate keeping tesging approach)将应用于统计分析计划中所述的其他实验与对照比较。主要的次要终点包括基于BICR评估的PFS和ORR。

将使用双侧log-rank检验进行三个主要的OS分析中的每一个，所述检验在所有随机个体中采用组织学和PD-L1状态分层，使用Hochberg程序解决多重性。危险比(HR)和相应的双侧(1调整后的α)％置信区间(CI)将使用Cox比例风险模型评估，其中治疗组为单个协变量，并按上述因素分层。使用Kaplan-Meier方法可以评估OS曲线，CI为95％的OS中位数，以及CI为95％的12个月和24个月时的OS率。如果至少有一个比较证明了OS的优越性，则针对关键次要终点的把关测试方法将应用于统计分析计划中所述的其他实验与对照比较。关键的次要终点将按照以下层次顺序进行测试：

1)PFS(基于BICR评估)分析将在所有随机个体中使用通过组织学和PD-L1状态进行分层的双侧log-rank检验进行，以将三种实验治疗中的每一种与对照组进行比较。将使用Cox比例风险模型评估HR和相应的双侧(1调整后的α)％CI，并将治疗组作为单个协变量，并按上述因素进行分层。将使用Kaplan-Meier方法评估PFS曲线、CI为95％的PFS中位数，以及CI为95％的6个月和12个月时的PFS率。

2)ORR(基于BICR的评估)分析将使用通过PD-L1状态和组织学分层的双侧Cochran-Mantel-Haenszel(CMH)测试进行，以将三种实验治疗中的每一种与对照组进行比较。还将计算相关的优势比和(1调整后的α)％CI。此外，将使用Clopper-Pearson方法为四个治疗组中的每组计算ORR及其对应的95％准确CI。

3)实验组中OS的成对比较将使用通过组织学和PD-L1状态分层的双侧log-rank检验进行。将使用Cox比例风险模型评估HR和相应的双侧(1调整后的α)％CI，并将治疗组作为单个协变量，并按上述因素进行分层。

分析

PD-L1表达的分析将是描述性的。将根据总体群体检查PD-L1表达的分布。将评估PD-L1表达与疗效量度(ORR，OS和PFS)之间的潜在关联。如果有迹象表明存在有意义的关联，将通过评估PD-L1表达与治疗之间的相互作用效应，进行进一步评估，以探索PD-L1表达作为预测性生物标记物。

结果表明，与纳武单抗单一疗法相比，联合疗法(纳武单抗+BMS 986016+免疫治疗剂)是否会改善总生存期(OS)。

序列

SEQ ID NO:1重链氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHRGSTNSNPSLKSRVTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGYSDYEYNWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

SEQ ID NO:2轻链氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGQGTNLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO:3重链可变区(VH)氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHRGSTNSNPSLKSRVTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGYSDYEYNWFDPWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:4重链可变区(VH)核苷酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

caggtgcagctacagcagtggggcgcaggactgttgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcgctgtctatggtgggtccttcagtgattactactggaactggatccgccagcccccagggaaggggctggagtggattggggaaatcaatcatcgtggaagcaccaactccaacccgtccctcaagagtcgagtcaccctatcactagacacgtccaagaaccagttctccctgaagctgaggtctgtgaccgccgcggacacggctgtgtattactgtgcgtttggatatagtgactacgagtacaactggttcgacccctggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca

SEQ ID NO:5轻链可变区(VL)氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGQGTNLEIK

SEQ ID NO:6轻链可变区(VL)核苷酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtattagcagctacttagcctggtaccaacagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatgatgcatccaacagggccactggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcaactggcctctcacttttggccaggggaccaacctggagatcaaa

SEQ ID NO:7重链CDR1氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

DYYWN

SEQ ID NO:8重链CDR2氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

EINHRGSTNSNPSLKS

SEQ ID NO:9重链CDR3氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

GYSDYEYNWFDP

SEQ ID NO:10轻链CDR1氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

RASQSISSYLA

SEQ ID NO:11轻链CDR2氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

DASNRAT

SEQ ID NO:12轻链CDR3氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

QQRSNWPLT

SEQ ID NO:13 Human LAG-3氨基酸序列

MWEAQFLGLLFLQPLWVAPVKPLQPGAEVPVVWAQEGAPAQLPCSPTIPLQDLSLLRRAGVTWQHQPDSGPPAAAPGHPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRYTVLSVGPGGLRSGRLPLQPRVQLDERGRQRGDFSLWLRPARRADAGEYRAAVHLRDRALSCRLRLRLGQASMTASPPGSLRASDWVILNCSFSRPDRPASVHWFRNRGQGRVPVRESPHHHLAESFLFLPQVSPMDSGPWGCILTYRDGFNVSIMYNLTVLGLEPPTPLTVYAGAGSRVGLPCRLPAGVGTRSFLTAKWTPPGGGPDLLVTGDNGDFTLRLEDVSQAQAGTYTCHIHLQEQQLNATVTLAIITVTPKSFGSPGSLGKLLCEVTPVSGQERFVWSSLDTPSQRSFSGPWLEAQEAQLLSQPWQCQLYQGERLLGAAVYFTELSSPGAQRSGRAPGALPAGHLLLFLTLGVLSLLLLVTGAFGFHLWRRQWRPRRFSALEQGIHPPQAQSKIEELEQEPEPEPEPEPEPEPEPEPEQL

SEQ ID NO:14LAG-3Epitope

PGHPLAPG

SEQ ID NO:15LAG-3Epitope

HPAAPSSW

SEQ ID NO:16LAG-3Epitope

PAAPSSWG

SEQ ID NO:17重链氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

SEQ ID NO:18轻链氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO:19重链可变区(VH)氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:20重链可变区(VH)核苷酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)

caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactcgactgtaaagcgtctggaatcaccttcagtaactctggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatttggtatgatggaagtaaaagatactatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtttctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgacaaacgacgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca

SEQ ID NO:21轻链可变区(VL)氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK

SEQ ID NO:22轻链可变区(VL)核苷酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)

gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagtagttacttagcctggtaccaacagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatgatgcatccaacagggccactggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagagtagcaactggcctcggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaa

SEQ ID NO:23重链CDR1氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)

NSGMH

SEQ ID NO:24重链CDR2氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)

VIWYDGSKRYYADSVKG

SEQ ID NO:25重链CDR3氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)

NDDY

SEQ ID NO:26轻链CDR1氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)

RASQSVSSYLA

SEQ ID NO:27轻链CDR2氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)

DASNRAT

SEQ ID NO:28轻链CDR3氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)

QQSSNWPRT

SEQ ID NO:29完全人PD-1序列

agtttcccttccgctcacctccgcctgagcagtggagaaggcggcactctggtggggctgctccaggcatgcagatcccacaggcgccctggccagtcgtctgggcggtgctacaactgggctggcggccaggatggttcttagactccccagacaggccctggaacccccccaccttcttcccagccctgctcgtggtgaccgaaggggacaacgccaccttcacctgcagcttctccaacacatcggagagcttcgtgctaaactggtaccgcatgagccccagcaaccagacggacaagctggccgccttccccgaggaccgcagccagcccggccaggactgccgcttccgtgtcacacaactgcccaacgggcgtgacttccacatgagcgtggtcagggcccggcgcaatgacagcggcacctacctctgtggggccatctccctggcccccaaggcgcagatcaaagagagcctgcgggcagagctcagggtgacagagagaagggcagaagtgcccacagcccaccccagcccctcacccaggccagccggccagttccaaaccctggtggttggtgtcgtgggcggcctgctgggcagcctggtgctgctagtctgggtcctggccgtcatctgctcccgggccgcacgagggacaataggagccaggcgcaccggccagcccctgaaggaggacccctcagccgtgcctgtgttctctgtggactatggggagctggatttccagtggcgagagaagaccccggagccccccgtgccctgtgtccctgagcagacggagtatgccaccattgtctttcctagcggaatgggcacctcatcccccgcccgcaggggctcagccgacggccctcggagtgcccagccactgaggcctgaggatggacactgctcttggcccctctgaccggcttccttggccaccagtgttctgcagaccctccaccatgagcccgggtcagcgcatttcctcaggagaagcaggcagggtgcaggccattgcaggccgtccaggggctgagctgcctgggggcgaccggggctccagcctgcacctgcaccaggcacagccccaccacaggactcatgtctcaatgcccacagtgagcccaggcagcaggtgtcaccgtcccctacagggagggccagatgcagtcactgcttcaggtcctgccagcacagagctgcctgcgtccagctccctgaatctctgctgctgctgctgctgctgctgctgctgcctgcggcccggggctgaaggcgccgtggccctgcctgacgccccggagcctcctgcctgaacttgggggctggttggagatggccttggagcagccaaggtgcccctggcagtggcatcccgaaacgccctggacgcagggcccaagactgggcacaggagtgggaggtacatggggctggggactccccaggagttatctgctccctgcaggcctagagaagtttcagggaaggtcagaagagctcctggctgtggtgggcagggcaggaaacccctcccacctttacacatgcccaggcagcacctcaggccctttgtggggcagggaagctgaggcagtaagcgggcaggcagagctggaggcctttcaggccagccagcactctggcctcctgccgccgcattccaccccagcccctcacaccactcgggagagggacatcctacggtcccaaggtcaggagggcagggctggggttgactcaggcccctcccagctgtggccacctgggtgttgggagggcagaagtgcaggcacctagggccccccatgtgcccaccctgggagctctccttggaacccattcctgaaattatttaaaggggttggccgggctcccaccagggcctgggtgggaaggtacaggcgttcccccggggcctagtacccccgcgtggcctatccactcctcacatccacacactgcacccccactcctggggcagggccaccagcatccaggcggccagcaggcacctgagtggctgggacaagggatcccccttccctgtggttctattatattataattataattaaatatgagagcatgct

SEQ ID NO:30重链核苷酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

caggtgcagctacagcagtggggcgcaggactgttgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcgctgtctatggtgggtccttcagtgattactactggaactggatccgccagcccccagggaaggggctggagtggattggggaaatcaatcatcgtggaagcaccaactccaacccgtccctcaagagtcgagtcaccctatcactagacacgtccaagaaccagttctccctgaagctgaggtctgtgaccgccgcggacacggctgtgtattactgtgcgtttggatatagtgactacgagtacaactggttcgacccctggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcagctagcaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagtccaaatatggtcccccatgcccaccatgcccagcacctgagttcctggggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaacccaaggacactctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccgtcctccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctgcccccatcccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaggctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctctgggtaaatga

SEQ ID NO:31轻链核苷酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)

gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtattagcagctacttagcctggtaccaacagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatgatgcatccaacagggccactggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcaactggcctctcacttttggccaggggaccaacctggagatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttag

SEQ ID NO:32Motif

MYPPPY

SEQ ID NO:33重链氨基酸序列；抗-ICOS mAb(BMS986226)

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYFMHWVRQAPGKGLEWVGVIDTKSFNYATYYSDLVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTATIAVPYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO:34轻链氨基酸序列；抗-ICOS mAb(BMS986226)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLSWYQQKPGKAPKLLIYYTNLLAEGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYYNYRTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO:35重链可变区(VH)氨基酸序列；抗-ICOS mAb(BMS986226)

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYFMHWVRQAPGKGLEWVGVIDTKSFNYATYYSDLVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTATIAVPYYFDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:36轻链可变区(VL)氨基酸序列；抗-ICOS mAb(BMS986226)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLSWYQQKPGKAPKLLIYYTNLLAEGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYYNYRTFGPGTKVDIK

SEQ ID NO:37重链CDR1氨基酸序列；抗-ICOS mAb(BMS986226)

GFTFSDYFMH

SEQ ID NO:38重链CDR2氨基酸序列；抗-ICOS mAb(BMS986226)

VIDTKSFNYATYYSDLVKG

SEQ ID NO:39重链CDR3氨基酸序列；抗-ICOS mAb(BMS986226)

TIAVPYYFDY

SEQ ID NO:40轻链CDR1氨基酸序列；抗-ICOS mAb(BMS986226)

QASQDISNYLS

SEQ ID NO:41轻链CDR2氨基酸序列；抗-ICOS mAb(BMS986226)

YTNLLAE

SEQ ID NO:42轻链CDR3氨基酸序列；抗-ICOS mAb(BMS986226)

QQYYNYRT

SEQ ID NO:43轻链CDR3氨基酸序列；抗-ICOS mAb(BMS986226)

QQYYNYRT

SEQ ID NO:44淋巴细胞活化基因3蛋白质氨基酸序列(人,NP_002277)

MWEAQFLGLLFLQPLWVAPVKPLQPGAEVPVVWAQEGAPAQLPCSPTIPLQDLSLLRRAGVTWQHQPDSGPPAAAPGHPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRYTVLSVGPGGLRSGRLPLQPRVQLDERGRQRGDFSLWLRPARRADAGEYRAAVHLRDRALSCRLRLRLGQASMTASPPGSLRASDWVILNCSFSRPDRPASVHWFRNRGQGRVPVRESPHHHLAESFLFLPQVSPMDSGPWGCILTYRDGFNVSIMYNLTVLGLEPPTPLTVYAGAGSRVGLPCRLPAGVGTRSFLTAKWTPPGGGPDLLVTGDNGDFTLRLEDVSQAQAGTYTCHIHLQEQQLNATVTLAIITVTPKSFGSPGSLGKLLCEVTPVSGQERFVWSSLDTPSQRSFSGPWLEAQEAQLLSQPWQCQLYQGERLLGAAVYFTELSSPGAQRSGRAPGALPAGHLLLFLILGVLSLLLLVTGAFGFHLWRRQWRPRRFSALEQGIHPPQAQSKIEELEQEPEPEPEPEPEPEPEPEPEQL

SEQ ID NO:45PD-1氨基酸序列(人,AAC51773.1)

MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFFPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL

Claims

1.一种治疗人类患者恶性肿瘤的方法，包括施用治疗有效量的：

LAG-3抑制剂；

PD-1途径抑制剂；和

免疫治疗剂。

2.权利要求1所述的方法，其中LAG-3抑制剂是抗LAG-3抗体或其抗原结合片段。

3.权利要求1或2所述的方法，其中抗LAG-3抗体是双特异性抗体。

4.权利要求1-3中任一项所述的方法，其中抗LAG-3抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO：7所示的序列；和(b)重链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO：8所示的序列；(c)重链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO：9所示的序列；(d)轻链可变区CDR1，其包含SEQ ID NO：10所示的序列；(e)轻链可变区CDR2，其包含SEQ ID NO：11所示的序列；(f)轻链可变区CDR3，其包含SEQ ID NO：12所示的序列。

5.权利要求1-4中任一项所述的方法，其中抗LAG-3抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链可变区，所述重链和轻链可变区分别包含SEQ ID NO：3和5所示的序列。

6.权利要求1-5中任一项所述的方法，其中抗LAG-3抗体是BMS 986016、MK-4280(28G-10)、REGN3767、GSK2831781、IMP731(H5L7BW)、BAP050、IMP-701(LAG-5250)、IMP321、TSR-033、LAG525、BI 754111或FS-118。

7.权利要求1所述的方法，其中LAG-3抑制剂是可溶性LAG-3多肽。

8.权利要求7所述的方法，其中可溶性LAG-3多肽是融合多肽。

9.权利要求7或8所述的方法，其中可溶性LAG-3多肽包含LAG-3细胞外结构域的配体结合片段。

10.权利要求9所述的方法，其中LAG-3细胞外结构域的配体结合片段包含与SEQ IDNO：44具有至少90％，至少95％，至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。

11.权利要求7至10中任一项所述的方法，其中可溶性LAG-3多肽还包含Fc结构域。

12.权利要求1至11中任一项所述的方法，其中PD-1途径抑制剂是抗PD-1抗体或其抗原结合片段。

13.权利要求12所述的方法，其中抗PD-1抗体是派姆单抗(KEYTRUDA；MK-3475)、pidilizumab(CT-011)、纳武单抗(OPDIVO；BMS-936558)，PDR001、MEDI0680(AMP-514)、TSR-042、REGN2810、JS001、AMP-224(GSK-2661380)、PF-06801591、BGB-A317，BI 754091或SHR-1210。

14.权利要求1至11中任一项所述的方法，其中PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。

15.权利要求14所述的方法，其中抗PD-L1抗体是阿特朱单抗(Tecentriq；RG7446)、德瓦鲁单抗(MEDI4736)、BMS-936559、阿维鲁单抗(bavencio)、LY3300054、CX-072(Proclaim-CX-072)、FAZ053、KN035或MDX-1105。

16.权利要求1至11中任一项所述的方法，其中PD-1途径抑制剂是小分子药物。

17.权利要求16所述的方法，其中PD-1途径抑制剂是CA-170。

18.权利要求16所述的方法，其中PD-1途径抑制剂是基于细胞的疗法。

19.权利要求18所述的方法，其中基于细胞的疗法是装载有MiHA的PD-L1/L2沉默的树突细胞疫苗。

20.权利要求19所述的方法，其中基于细胞的疗法是表达抗程序性细胞死亡蛋白1抗体的多能杀手T淋巴细胞、自体PD-1靶向的嵌合开关受体修饰的T淋巴细胞或PD-1敲除的自体T淋巴细胞。

21.权利要求1至11中任一项所述的方法，其中PD-1途径抑制剂是抗PD-L2抗体或其抗原结合片段。

22.权利要求21所述的方法，其中抗PD-L2抗体是rHIgM12B7。

23.权利要求1至11所述的方法，其中PD-1途径抑制剂是可溶性PD-1多肽。

24.权利要求23所述的方法，其中可溶性PD-1多肽是融合多肽。

25.权利要求23或24所述的方法，其中可溶性PD-1多肽包含PD-1细胞外结构域的配体结合片段。

26.权利要求23至25中任一项所述的方法，其中可溶性PD-1多肽包含PD-1细胞外结构域的配体结合片段。

27.权利要求26所述的方法，其中PD-1细胞外结构域的配体结合片段包含与SEQ IDNO：45具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。

28.权利要求23至27中任一项所述的方法，其中可溶性PD-1多肽还包含Fc结构域。

29.权利要求1至28中任一项所述的方法、其中免疫治疗剂为CTLA-4活性的调节剂、CD28活性的调节剂、CD80活性的调节剂、CD86活性的调节剂、4-1BB活性的调节剂、OX40活性的调节剂、KIR活性的调节剂、Tim-3活性的调节剂、CD27活性的调节剂、CD40活性的调节剂、GITR活性的调节剂、TIGIT活性的调节剂、CD20活性的调节剂、CD96活性的调节剂、IDO1活性的调节剂、STING活性的调节剂、GARP活性的调节剂、A2aR活性的调节剂、CEACAM1活性的调节剂、CEA活性的调节剂、CD47活性的调节剂、PVRIG活性的调节剂、TDO活性的调节剂、VISTA活性的调节剂、细胞因子、趋化因子、干扰素、白介素、淋巴因子、肿瘤坏死因子(TNF)家族成员或免疫刺激性寡核苷酸。

30.权利要求1至28中任一项所述的方法、其中免疫治疗剂是免疫检查点抑制剂。

31.权利要求30所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是CTLA-4拮抗剂、CD80拮抗剂、CD86拮抗剂、Tim-3拮抗剂、TIGIT拮抗剂、CD20拮抗剂、CD96拮抗剂、IDO1拮抗剂、STING拮抗剂、GARP拮抗剂、CD40拮抗剂、A2aR拮抗剂、CEACAM1(CD66a)拮抗剂、CEA拮抗剂、CD47拮抗剂、PVRIG拮抗剂、TDO拮抗剂、VISTA拮抗剂或KIR拮抗剂。

32.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是CTLA-4拮抗剂。

33.权利要求32所述的方法，其中CTLA-4拮抗剂是抗CTLA-4抗体或其抗原结合片段。

34.权利要求33所述的方法，其中抗CTLA-4抗体是伊匹单抗(YERVOY)、曲美木单抗(ticilimumab；CP-675,206)，AGEN-1884或ATOR-1015。

35.权利要求32所述的方法，其中CTLA-4拮抗剂是可溶性CTLA-4多肽。

36.权利要求35所述的方法，其中可溶性CTLA-4多肽是阿巴西普(Orencia)，贝拉西普(Nulojix)，RG2077或RG-1046。

37.权利要求32所述的方法，其中CTLA-4拮抗剂是基于细胞的疗法。

38.权利要求37所述的方法，其中CTLA-4拮抗剂是抗CTLA4 mAb RNA/GITRL RNA转染的自体树突细胞疫苗或抗CTLA-4mAb RNA转染的自体树突细胞疫苗。

39.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是KIR拮抗剂。

40.权利要求39所述的方法，其中KIR拮抗剂是抗KIR抗体或其抗原结合片段。

41.权利要求40所述的方法，其中抗KIR抗体是lirilumab(1-7F9，BMS-986015，IPH2101)或IPH4102。

42.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是TIGIT拮抗剂。

43.权利要求42所述的方法，其中TIGIT拮抗剂是抗TIGIT抗体或其抗原结合片段。

44.权利要求43所述的方法，其中抗TIGIT抗体是BMS-986207、AB 154，COM902(CGEN-15137)或OMP-313M32。

45.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是Tim-3拮抗剂。

46.权利要求45所述的方法，其中Tim-3拮抗剂是抗Tim-3抗体或其抗原结合片段。

47.权利要求46所述的方法，其中抗Tim-3抗体是TSR-022或LY3321367。

48.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是IDO1拮抗剂。

49.权利要求48所述的方法，其中IDO1拮抗剂是吲哚昔莫德(NLG8189；1-甲基-D-TRP)，艾卡哚司他(INCB-024360，INCB-24360)，KHK2455，PF-06840003，navoximod(RG6078，GDC-0919，NLG919)，BMS-986205(F001287)或吡咯烷-2,5-二酮衍生物。

50.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是STING拮抗剂。

51.权利要求50所述的方法，其中STING拮抗剂是2’或3’-单氟取代的环状二核苷酸；2’3’-二氟取代的混合键2’,5’–3’,5’环状二核苷酸；2'-氟取代的双-3’,5’环状二核苷酸；2’,2”-二F-Rp,Rp,双-3’,5’环状二核苷酸；或氟化环状二核苷酸。

52.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是CD20拮抗剂。

53.权利要求52所述的方法，其中CD20拮抗剂是抗CD20抗体或其抗原结合片段。

54.权利要求53所述的方法，其中抗CD20抗体是利妥昔单抗(RITUXAN；IDEC-102；IDEC-C2B8)、ABP 798、奥法木单抗(ofatumumab)或阿托珠单抗(obinutuzumab)。

55.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是CD80拮抗剂。

56.权利要求55所述的方法，其中CD80拮抗剂是抗CD80抗体或其抗原结合片段。

57.权利要求56所述的方法，其中抗CD80抗体是加利昔单抗或AV 1142742。

58.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是GARP拮抗剂。

59.权利要求58所述的方法，其中GARP拮抗剂是抗GARP抗体或其抗原结合片段。

60.权利要求59所述的方法，其中抗GARP抗体是ARGX-115。

61.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是CD40拮抗剂。

62.权利要求61所述的方法，其中CD40拮抗剂是抗CD40抗体或其抗原结合片段。

63.权利要求62所述的方法，其中抗CD40抗体是BMS3h-56、鲁卡木单抗(lucatumumab)(HCD122和CHIR-12.12)、CHIR-5.9或达西珠单抗(dacetuzumab)(huS2C6、PRO 64553、RG3636、SGN 14、SGN-40)。

64.权利要求61所述的方法，其中CD40拮抗剂是可溶性CD40配体(CD40-L)。

65.权利要求64所述的方法，其中可溶性CD40配体是融合多肽。

66.权利要求64或65所述的方法，其中可溶性CD40配体是CD40-L/FC2或单体CD40-L。

67.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是A2aR拮抗剂。

68.权利要求67所述的方法，其中A2aR拮抗剂是小分子。

69.权利要求67或68所述的方法，其中A2aR拮抗剂是CPI-444、PBF-509、伊曲茶碱(KW-6002)、瑞德南特(preladenant)(SCH420814)、tozadenant(SYN115)、vipadenant(BIIB014)、HTL-1071、ST1535、SCH412348、SCH442416、SCH58261、ZM241385或AZD4635。

70.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是CEACAM1拮抗剂。

71.权利要求70所述的方法，其中CEACAM1拮抗剂是抗CEACAM1抗体或其抗原结合片段。

72.权利要求71所述的方法，其中抗CEACAM1抗体是CM-24(MK-6018)。

73.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是CEA拮抗剂。

74.权利要求73所述的方法，其中CEA拮抗剂是抗CEA抗体或其抗原结合片段。

75.权利要求74所述的方法，其中抗CEA抗体是cergutuzumab amunaleukin(RG7813，RO-6895882)或RG7802(RO6958688)。

76.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是CD47拮抗剂。

77.权利要求76所述的方法，其中CD47拮抗剂是抗CD47抗体或其抗原结合片段。

78.权利要求77所述的方法，其中抗CD47抗体是HuF9-G4、CC-90002，TTI-621、ALX148、NI-1701、NI-1801、SRF231或Effi-DEM。

79.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是PVRIG拮抗剂。

80.权利要求79所述的方法，其中PVRIG拮抗剂是抗PVRIG抗体或其抗原结合片段。

81.权利要求80所述的方法，其中抗PVRIG抗体是COM701(CGEN-15029)。

82.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是TDO拮抗剂。

83.权利要求82所述的方法，其中TDO拮抗剂是4-(吲哚-3-基)-吡唑衍生物、3-吲哚取代的衍生物或3-(吲哚-3-基)-吡啶衍生物。

84.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是IDO和TDO双重拮抗剂。

85.权利要求84所述的方法，其中IDO和TDO双重拮抗剂是小分子。

86.权利要求31所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是VISTA拮抗剂。

87.权利要求86所述的方法，其中VISTA拮抗剂是CA-170或JNJ-61610588。

88.权利要求1-29中任一项所述的方法，其中免疫治疗剂是免疫检查点增强剂或刺激剂。

89.权利要求88所述的方法，其中免疫检查点增强剂或刺激剂是CD28激动剂、4-1BB激动剂、OX40激动剂、CD27激动剂、CD80激动剂、CD86激动剂、CD40激动剂、ICOS激动剂、CD70激动剂或GITR激动剂。

90.权利要求89所述的方法，其中免疫检查点增强剂或刺激剂是OX40激动剂。

91.权利要求90所述的方法，其中OX40激动剂是抗OX40抗体或其抗原结合片段。

92.权利要求91所述的方法，其中抗OX40抗体是他佛利珠单抗(tavolixizumab)(MEDI-0562)、泊加珠单抗(pogalizumab)(MOXR0916，RG7888)、GSK3174998、ATOR-1015、MEDI-6383、MEDI-6469、BMS 986178、PF-04518600，或RG7888(MOXR0916)。

93.权利要求90所述的方法，其中OX40激动剂是基于细胞的疗法。

94.权利要求93所述的方法，其中OX40激动剂是GINAKIT细胞。

95.权利要求89所述的方法，其中免疫检查点增强剂或刺激剂是CD40激动剂。

96.权利要求95所述的方法，其中CD40激动剂是抗CD40抗体或其抗原结合片段。

97.权利要求96所述的方法，其中抗CD40抗体是ADC-1013(JNJ-64457107)、RG7876(RO-7009789)、HuCD40-M2、APX005M(EPI-0050)或Chi Lob 7/4。

98.权利要求95所述的方法，其中CD40激动剂是可溶性CD40配体(CD40-L)。

99.权利要求98所述的方法，其中可溶性CD40配体是融合多肽。

100.权利要求98或99所述的方法，其中可溶性CD40配体是三聚CD40-L(AVREND)。

101.权利要求89所述的方法，其中免疫检查点增强剂或刺激剂是GITR激动剂。

102.权利要求101所述的方法，其中GITR激动剂是抗GITR抗体或其抗原结合片段。

103.权利要求102所述的方法，其中抗GITR抗体是BMS-986156、TRX518、GWN323、

INCAGN01876或MEDI1873。

104.权利要求101所述的方法，其中GITR激动剂是可溶性GITR配体(GITRL)。

105.权利要求104所述的方法，其中可溶性GITR配体是融合多肽。

106.权利要求101所述的方法，其中GITR激动剂是基于细胞的疗法。

107.权利要求106所述的方法，其中基于细胞的疗法是抗CTLA4 mAb RNA/GITRL RNA转染的自体树突细胞疫苗或GITRL RNA转染的自体树突细胞疫苗。

108.权利要求89所述的方法，其中免疫检查点增强剂或刺激剂是4-1BB激动剂。

109.权利要求108所述的方法，其中4-1BB激动剂是抗4-1BB抗体或其抗原结合片段。

110.权利要求109所述的方法，其中抗4-1BB抗体是urelumab或PF-05082566。

111.权利要求89所述的方法，其中免疫检查点增强剂或刺激剂是CD80激动剂或CD86激动剂。

112.权利要求111所述的方法，其中CD80激动剂或CD86激动剂是可溶性CD80或CD86配体(CTLA-4)。

113.权利要求112所述的方法，其中可溶性CD80或CD86配体是融合多肽。

114.权利要求112或113所述的方法，其中CD80或CD86配体是CTLA4-Ig(CTLA4-IgG4m，RG2077或RG1046)或阿巴西普(ORENCIA，BMS-188667)。

115.权利要求111所述的方法，其中CD80激动剂或CD86激动剂是基于细胞的疗法。

116.权利要求115所述的方法，其中基于细胞的疗法是MGN1601。

117.权利要求89所述的方法，其中免疫检查点增强剂或刺激剂是CD28激动剂。

118.权利要求117所述的方法，其中CD28激动剂是抗CD28抗体或其抗原结合片段。

119.权利要求118所述的方法，其中抗CD28抗体是TGN1412。

120.权利要求117所述的方法，其中CD28激动剂是基于细胞的疗法。

121.权利要求120所述的方法，其中基于细胞的疗法是JCAR015(抗CD19-CD28-zeta修饰的CAR CD3+T淋巴细胞)；和表达CD28CAR/CD137CAR的T淋巴细胞；同种异体CD4+记忆Th1样T细胞/微粒结合的抗CD3/抗CD28；抗CD19/CD28/CD3zeta CARγ逆转录病毒载体转导的自体T淋巴细胞KTE-C19；抗CEA IgCD28TCR转导的自体T淋巴细胞；抗EGFRvIII CAR转导的同种异体T淋巴细胞；自体表达CD123CAR-CD28-CD3zeta-EGFRt的T淋巴细胞；自体表达CD171特异性CAR-CD28 zeta-4-1-BB-EGFRt的T淋巴细胞；自体表达CD19CAR-CD28-CD3zeta-EGFRt的Tcm富集T细胞；自体PD-1靶向的嵌合开关受体修饰的T淋巴细胞(嵌合体与CD28)；表达CD19CAR-CD28-CD3zeta-EGFRt的富含Tcm的T淋巴细胞；表达CD19CAR-CD28-CD3zeta-EGFRt的Tn/mem富集的T淋巴细胞；表达CD19CAR-CD28zeta-4-1BB的同种异体T淋巴细胞；表达CD19CAR-CD3zeta-4-1BB-CD28的自体T淋巴细胞；表达CD28CAR/CD137CAR的T淋巴细胞；CD3/CD28共刺激疫苗诱发的自体T淋巴细胞；或表达iC9-GD2-CD28-OX40的T淋巴细胞。

122.权利要求89所述的方法，其中免疫检查点增强剂或刺激剂是CD27激动剂。

123.权利要求122所述的方法，其中CD27激动剂是抗CD27抗体或其抗原结合片段。

124.权利要求123所述的方法，其中抗CD27抗体是varlilumab(CDX-1127)。

125.权利要求89所述的方法，其中免疫检查点增强剂或刺激剂是CD70激动剂。

126.权利要求125所述的方法，其中CD70激动剂是抗CD70抗体或其抗原结合片段。

127.权利要求126所述的方法，其中抗CD70抗体是ARGX-110。

128.权利要求89所述的方法，其中免疫检查点增强剂或刺激剂是ICOS激动剂。

129.权利要求128所述的方法，其中ICOS激动剂是抗ICOS抗体或其抗原结合片段。

130.权利要求129所述的方法，其中抗-ICOS抗体是BMS986226、MEDI-570、GSK3359609或JTX-2011。

131.权利要求128所述的方法，其中ICOS激动剂是可溶性ICOS配体。

132.权利要求131所述的方法，其中可溶性ICOS配体是融合多肽。

133.权利要求131或132所述的方法，其中可溶性ICOS配体是AMG 750。

134.权利要求89所述的方法，其中免疫治疗剂是抗CD73抗体或其抗原结合片段。

135.权利要求134所述的方法，其中抗CD73抗体是MEDI9447。

136.权利要求1-28中任一项所述的方法，其中免疫治疗剂是TLR9激动剂。

137.权利要求136所述的方法，其中TLR9激动剂是agatolimod钠。

138.权利要求1-28中任一项所述的方法，其中免疫治疗剂是细胞因子。

139.权利要求138所述的方法，其中细胞因子是趋化因子、干扰素、白介素、淋巴因子或肿瘤坏死因子家族的成员。

140.权利要求138或139所述的方法，其中细胞因子是IL-2，IL-15或干扰素-γ。

141.权利要求1-28中任一项所述的方法，其中免疫治疗剂是TGF-β拮抗剂。

142.权利要求141所述的方法，其中TGF-β拮抗剂是贝索莫单抗(fresolimumab)(GC-1008)、NIS793、IMC-TR1(LY3022859)、ISTH0036，trabedersen(AP 12009)、重组转化生长因子-β-2、自体HPV-16/18E6/E7特异性TGF-β抗性T淋巴细胞，或TGF-β抗性LMP特异性细胞毒性T淋巴细胞。

143.权利要求1-28中任一项所述的方法，其中免疫治疗剂是iNOS拮抗剂。

144.权利要求143所述的方法，其中iNOS拮抗剂是N-乙酰半胱氨酸(NAC)，氨基胍，L-硝基精氨酸甲酯或S,S-1,4-亚苯基-双(1,2-乙二基)双-异硫脲)。

145.权利要求1-28中任一项所述的方法，其中免疫治疗剂是SHP-1拮抗剂。

146.权利要求1-28中任一项所述的方法，其中免疫治疗剂是CSF1R(集落刺激因子1受体)拮抗剂。

147.权利要求146所述的方法，其中CSF1R拮抗剂是抗CSF1R抗体或其抗原结合片段。

148.权利要求147所述所述的方法，其中抗CSF1R抗体是艾马妥珠单抗(emactuzumab)。

149.权利要求1-28中任一项所述的方法，其中免疫治疗剂是TNF家族成员的激动剂。

150.权利要求149所述的方法，其中TNF家族成员的激动剂是ATOR 1016/ABBV-621或阿达木单抗。

151.权利要求1-28中任一项所述的方法，其中免疫治疗剂是阿地白介素、托珠单抗

(tocilizumab)或MEDI5083。

152.权利要求1-28中任一项所述的方法，其中免疫治疗剂是CD160(NK1)激动剂。

153.权利要求152所述的方法，其中CD160(NK1)激动剂是抗CD160抗体或其抗原结合片段。

154.权利要求152或153所述的方法，其中抗CD160抗体是BY55。

155.权利要求1-154中任一项所述的方法，其中将LAG-3抑制剂、PD-1途径抑制剂和免疫治疗剂配制成用于静脉内施用。

156.权利要求1-155中任一项所述的方法，其中将LAG-3抑制剂、PD-1途径抑制剂和免疫治疗剂配制在一起。

157.权利要求1-155中任一项所述的方法，其中将LAG-3抑制剂、PD-1途径抑制剂和所述免疫治疗剂分开配制。

158.根据权利要求1至157中任一项所述的方法，其中恶性肿瘤选自肝癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、乳腺癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、肾癌、子宫癌、卵巢癌、结直肠癌、结肠癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童癌、淋巴细胞淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、Kaposi肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、环境所致癌(包括石棉诱导的那些癌症)、血液学恶性病，例如包括多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤/原发性纵隔B细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性髓样淋巴瘤、慢性髓性白血病、慢性淋巴样白血病、滤泡淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、急性淋巴母细胞性白血病、蕈样肉芽肿病、退行性大细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤和前体T-淋巴母细胞淋巴瘤及其任意组合。

159.根据权利要求158所述的方法，其中恶性肿瘤是非小细胞肺癌(NSCLC)、病毒相关的癌相关肿瘤或胃腺癌。

160.根据权利要求1至157中任一项所述的方法，其中恶性肿瘤是黑素瘤、胃癌、胃食管结合部癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、头颈鳞状细胞癌或肾细胞癌。

161.根据权利要求1至157中任一项所述的方法，其中肿瘤是肺癌、黑素瘤、头颈鳞状细胞癌、肾癌、胃癌或肝细胞癌。

162.权利要求1-161中任一项所述的方法，其中抗LAG-3抗体或其抗原结合片段和免疫治疗剂作为一线治疗施用。

163.权利要求1-161中任一项所述的方法，其中LAG-3抑制剂、PD-1途径抑制剂和所述免疫治疗剂作为二线治疗施用。

164.权利要求1-163中任一项所述的方法，其中恶性肿瘤对于一线治疗是难治的。

165.权利要求1-164中任一项所述的方法，进一步包括施用至少一种额外的治疗剂。

166.权利要求165所述的方法，其中至少一种额外的治疗剂是化疗剂。