KR20220008316A

KR20220008316A - Lag-3/pd-l1 이중특이적 항체의 투여를 위한 투여 요법

Info

Publication number: KR20220008316A
Application number: KR1020217040782A
Authority: KR
Inventors: 미셸 모로우; 피오나 게르마셰브스키; 다니엘 글리돈; 킨-메이 렁; 크리스티안 그래디나루; 크리스토퍼 셰퍼드; 조세핀-비트 홀즈; 루이스 케이타리르
Original assignee: 에프-스타 테라퓨틱스 리미티드
Priority date: 2019-05-14
Filing date: 2020-05-14
Publication date: 2022-01-20
Also published as: AU2020275209A1; SG11202112136RA; CA3139003A1; US20220275092A1; IL287979A; EP3969477A1; BR112021022831A2; JP2022533578A; CN114206939A; MX2021013943A; WO2020229626A1

Abstract

본 출원은, 프로그램된 사멸-리간드 1(PD-L1) 및 림프구-활성화 유전자 3(LAG-3)에 결합하는 항체 분자의 투여를 위한 투여 섭생, 및 인간 환자의 암 치료에서 이들의 의학적 용도에 관한 것이다.

Description

LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체의 투여를 위한 투여 요법

본 발명은, 프로그램된 사멸-리간드 1(programmed death-ligand 1; PD-L1) 및 림프구-활성화 유전자 3(LAG-3)에 결합하는 항체 분자의 투여를 위한 투여 요법, 및 인간 환자의 암 치료에서 이들의 의학적 용도에 관한 것이다. 본 발명은 항체에 대한 인간 환자의 반응 가능성을 예측하기 위한 예후 역치를 추가로 제공한다.

암은 복잡한 질환이고, 여전히 만족되지 않은 중요한 니즈가 있다. 숙주 면역 체계와 종양 사이의 상호작용은 최근 비임상적 및 임상적 평가가 집중되고 있는 분야이다. 종양 침윤 림프구(TIL)에는 종양 세포의 성장을 제어하는 능력이 있고, TIL가 증가된 환자의 예후는 양호하다는 새로운 임상 증거가 있다. 전체적으로, T 세포는 암에 대한 면역 방어에서 중요한 역할을 하고, T 세포 활성화의 조절은 T 세포, 종양 세포 및 종양 미소환경 사이의 자극 및 억제 리간드-수용체 상호작용의 복잡한 상호작용에 의해 매개되고, 여기서 종양 세포는 면역 억제의 중요한 매개인자로서 기능한다.

종양 세포의 면역억제 활성에 대항하는 면역 체크포인트 억제제(checkpoint inhibitor)의 개발은, 임상 종양학 실습에서 급속하게 성장하는 치료 수단을 나타내고, PD-1/PD-L1(PD-1 리간드)을 표적화하는 면역 체크포인트 억제제는 항종양 활성의 몇몇 주목할 만한 증거를 입증했다. 단일요법으로 치료받은 환자의 약 20%는 깊고 지속적인 반응으로 임상적 이점을 달성한다. 그러나, 대부분의 환자들은 암 면역요법에 대한 1차적 내성, 적응적 내성, 후천적 내성을 극복하기 위해 조합 접근방식이 필요한 것으로 보이며, 1차 내성은 치료에 반응하지 않아 진행되는 암으로 분류되고, 후천적 내성은 초기에는 치료에 반응함에도 불구하고 궁극적으로 진행하는 암으로 분류되고, 적응 내성은, 1차 내성 또는 후천적 내성으로서 임상적으로 나타날 수 있는 요법에 대한 내성 메커니즘을 진화시키는 암으로 분류되어 있다[참조: Sharma et al., 2017]. PD-1/PD-L1 요법에 대한 내성의 확립은 복잡하고 다-인자적이고, 환경 및 유전적 요인, 개인 병력, 이전 요법의 효과를 포함한다[참조: Sharma et al., 2017].

림프구-활성화 유전자 3(LAG-3)은 면역 체크포인트 억제제에 대한 1차 및 잠재적 후천적 내성의 주요 매개인자 중 하나이고, 항-PD-1/PD-L1 요법에 재발 또는 불응성(refractive)인 고도로 사전-치료된 진행성 흑색종 환자에서 최초의 항체 병용 연구에서는 이 모집단에서 PD-(L)1 내성의 극복의 초기 증거가 나타났다.

단일특이적 항-PD-1/PD-L1 및 항-LAG-3 항체의 동시 투여에 대한 우수한 접근방식은 WO2017/220569 A1(F-star Delta Limited)에 기재되어 있고, 이는, 암의 치료를 위해, 항체 FS118을 포함하는 PD-L1 및 LAG-3 둘 다의 결합 부위를 포함하는 이중특이적 항체를 개시한다. FS118은, Fc 영역에 LAG-3 항원 결합 부위와 PD-L1의 Fab 결합 부위를 포함하는 이중특이적 IgG1(148,247Da) 모노클로날 항체이고, 인간 PD-L1(hPD-L1)과 인간 LAG-3(hLAG-3)을 비교적 높은 친화성으로 표적화하고, LAG-3의 차단 및 T-세포 활성화의 PD-L1 매개된 억제를 나타낸다. 이 기능, 및 LAG-3 및 PD-L1의 이중 표적화를 통해 T 세포와 종양 세포 사이의 브릿징을 증강하고 종양 미소환경 내에서 국소화하는 능력은, 이의 강력한 항-종양 활성을 유도할 것으로 예상되는 FS118의 고유한 속성이다.

특히, 림프절의 활성화된 T 세포는 LAG-3를 발현하고, FS118 등의 항-LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체는 림프절의 프라이밍된 LAG-3-양성 T 세포에 결합하고, 이어서 종양 부위로 이동하여 이들을 갖는 이중특이적 항체를 운반할 것으로 예상된다. 종양 미소환경 내에 들어가면, 이중특이적 항체를 운반하는 T 세포는 종양 세포 상의 PD-L1에 관여하고 차단할 수 있을 것으로 예상된다. 또는, 프라이밍된 LAG-3 양성 림프구는 이미 종양 미소환경에 침투했을 수 있다(소위 "종양 침윤 림프구" 또는 "TIL"). 따라서, FS118 등의 항-LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체는 종양 미소환경 내에서 프라이밍된 LAG-3-양성 TIL(예: T 세포)에 직접 결합할 수 있다. 따라서, 항-LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체에 의해 결합된 T 세포는 LAG-3 및 PD-L1/PD-1 신호전달 둘 다의 신호전달에 내성을 갖고, 이에 의해 이러한 면역 체크포인트 단백질을 통한 T 세포 고갈의 유도/유지를 방지할 것으로 예상된다.

유사하게는, PD-L1 발현은 종양에서 유의하게 증가하고, 따라서 FS118 등의 항-LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체는 PD-L1에 대한 결합을 통해 먼저 종양 미소환경에 국소화되고 집중될 수 있다. 이어서, 항-LAG-3 부분은, 종양 미소환경에 존재하는 T 세포의 표면에 발현된 LAG-3에 결합하여 T 세포의 LAG-3 매개된 억제를 방지할 수 있다.

FS118 등의 항-LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체를 사용하여 T 세포와 종양 세포 사이의 접촉을 유지하거나 연장하면, T 세포가 종양 항원을 성공적으로 인식하고, 이들 표적에 대한 개별 모노클로날 항체의 조합과 비교하여, 비활성화되어 종양 세포의 사멸을 진행하는 시간이 증가한다.

FS118은 마우스 LAG-3 또는 PD-L1과 교차 반응하지 않고/않거나 기능하지 않는다. 마우스 실험에서 FS118의 대리로서 작용할 수 있는 마우스 항-LAG-3/PD-L1(mLAG-3/mPD-L1; LALA 돌연변이를 갖는 FS18m-108-29/S1) 이중특이적 항체가 기재되어 있다. 암의 동계 마우스 모델에서, mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체는, 항체/항체들의 3개 용량을 3일 간격으로 투여한 경우, 각각 동일한 LAG-3 및 PD-L1 결합 부위를 포함하는 2개의 항체 분자의 조합 투여와 비교하여, 유사한 종양 성장 억제가 증강 또는 유사한 것으로 나타났다, 항-mLAG-3/mPD-L1 항체는 또한 9마리 중 7마리의 마우스에서 종양 성장을 방지할 수 있는 것으로 나타났지만, 동일한 LAG-3 및 PD-L1 결합 부위를 포함하는 2개의 항체 분자의 병용 투여는 시험된 임의의 동물에서 종양 성장을 방지하지 않았다(WO2017/220569; P2399 A LAG-3/PD-L1 mAb²는 단일-약제 체크포인트 차단에 의해 유도된 LAG-3의 보상성 상향조절을 극복할 수 있다, Faroudi et al., American Association for Cancer Research (AACR) Annual Meeting 2019, 29 March - 03 April 2019, Atlanta, Georgia, USA).

이의 종양 억제 활성 외에도, FS118 대리 mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체가 마우스 종양 모델에서 용량-반응을 나타내고, 보다 높은 용량(1mg/kg 내지 20mg/kg)은 일반적으로 감소된 종양 용적과 상관관계가 있다는 초기의 징후가 있다. mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체는 또한 LAG-3-발현 종양 침윤 림프구(TIL)에 대해 LAG-3 억제를 유도하는 것으로 밝혀진 반면, 마우스를 대리 mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체와 동일한 mLAG-3 및 mPD-L1 결합 부위를 포함하는 2개 항체 분자로 처리하는 경우, LAG-3 발현이 증가했다. 대리 mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체와 단일 약제 조합은 모두 치료된 마우스의 혈청에서 가용성 LAG-3 및 PD-L1 수준을 증가시키는 것으로 밝혀졌다(고유한 이중특이적 항체인 FS118에 의한 PD-L1 및 LAG-3의 P348 이중 차단은 강력한 항종양 면역 반응을 유도할 가능성이 있는 T 세포 활성화를 유도한다. Journal for ImmunoTherapy of Cancer 20175 (Suppl 2): 87; Abstract 2719: 고유한 이중특이적 항체인 FS118에 의한 PD-L1 및 LAG-3의 이중 차단은 CD8+ T-세포 활성화를 유도하고, 종양 미소환경을 조절하여 항종양 면역 반응을 촉진한다, Cancer Research, July 2018 Volume 78, Issue 13 Supplement; P2399 A LAG-3/PD-L1 mAb²는 단일-약제 체크포인트 차단에 의해 유발된 LAG-3의 PD-L1 매개 보상 상향조절을 극복할 수 있다, Faroudi et al., American Association for Cancer Research (AACR) Annual Meeting 2019, 29 March - 03 April 2019, Atlanta, Georgia, USA).

그러나, FS118 대리 mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체와 관련된 데이터는 FS118 분자 자체가 인간에서 치료적으로 효과적일 것이라는 것을 강력하게 나타내지만, 사용된 마우스 모델은 인간에서 사용하기 위한 특정 치료 용량을 예측하는 것과 관련하여 결점을 갖고 있다. 특히, 대리 mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체는 마우스에서 강력한 면역원성 반응 및 항-약물 항체(ADA) 생성을 자연적으로 유도하는 인간 IgG1 백본(backbone)을 갖는다. 따라서, 당업자는 마우스에서 사용된 유효 용량이 NHP 및 최종적으로 인간에 효과적일 것이라고 합리적으로 기대하지 않을 것이다.

투여 용량을 포함하여, 인간 환자 또는 비인간 영장류에서, FS118을 포함한 LAG-3/PD-L1 항체의 거동에 대한 데이터는 현재까지 이용 가능하지 않다.

FS118은, LAG-3 및 PD-L1에 모두 결합하는 이중특이적 항체이고, 상기 배경기술 섹션에서 설명한 단일특이적 항-PD-L1 및 LAG-3 항체와 비교하여 독특한 방식으로 항종양 효과를 매개할 것으로 기대된다. FS118의 이중특이적, 4가 특성, 및 단일특이적, 이가 항체와 비교한 경우의 결합의 화학량론의 수득되는 차이, 및 FS118의 작용 메커니즘에서 예상되는 차이를 고려하여, 인간에서 단일특이적 항-PD-L1 및 항-LAG3 항체에 사용되는 용량 수준 및 투여 스케쥴을 사용하여 FS118을 투여할 수 있는지의 여부는 불분명했다.

아벨루맙(avelumab), 더발루맙(durvalumab), 아테졸리주맙(atezolizumab) 등의 인간 암 치료용으로 승인된 항PD-L1 항체는 암 환자에게 800mg(균일 용량) 또는 10mg/kg(2주에 1회), 10mg/kg(2주에 1회) 및 1200mg(3주에 1회)(표준 100kg 환자에서는 약 12mg/kg에 상당)의 용량으로 투여된다. 항-LAG3 모노클로날 항체 렐라틀리맙(relatlimab)과 항-PD1 모노클로날 항체 니볼루맙(nivolumab)의 조합은 현재 임상 I상 시험에서 시험되고 있고, 4주에 1회 투여된다. 렐라틀리맙 치료 단독은 항체가 2주마다 투여되는 I상 시험에서도 평가되었다.

마우스 실험에서 FS118의 대리로서 기능할 수 있는 마우스 LAG-3/PD-L1(mLAG-3/mPD-L1; LALA 돌연변이를 갖는 FS18m-108-29/S1) 이중특이적 항체는, 항체가 동일한 용량 수준(1mg/kg, 3mg/kg 및 10mg/kg) 및 동일한 투여 스케쥴(3회 투여, 3일 간격)에 따라 투여하는 경우, mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체와 동일한 mLAG-3 및 mPD-L1 결합 부위를 포함하는 2개의 단일특이적 항체 분자로서 동계 마우스 종양 모델에서 우수한 또는 유사한 항-종양 효능을 나타냈다. 그러나, 대리 mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체는, 마우스에서 강력한 면역원성 반응과 항-약물 항체(ADA) 생산을 자연적으로 유발하는 인간 IgG1 백본을 갖고 있다. 따라서, 마우스에 사용된 유효 용량이 비-인간 영장류(NHP) 및 최종적으로 인간에게 효과적인지의 여부를 예측하는 것은 불가능했다.

mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체의 PK를 마우스에서 평가한 경우(1, 3, 10 및 20mg/kg), 본 발명자들은, 놀랍게도, mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체가 mLAG-3/mPD-L1 항체와 동일한 mPD-L1 결합 부위를 포함하는 단일특이적 항체보다 더 높은 비율로 혈청으로부터 클리어되었음을 밝혀냈다. mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체의 불포화 클리어런스는, 대조군 항-mPD-L1 mAb와 비교하여, mPD-L1 결합과 CH3 도메인의 허용 잔기의 표적-특이적 변화의 조합의 결과인 것으로 추가로 밝혀졌다. (실시예 1).

본 발명자들에 의해 수득된 마우스 PK 데이터를 마우스에서 항-종양 효능 데이터와 조합함으로써, 본 발명자들은, 마우스에서 항-종양 효능을 위해 ≥ 6㎍/mL의 마우스 대리 mAb²에 대한 노출(C_max)이 필요하고, 놀랍게도, 이러한 노출 수준이 투여 기간을 통해 유지될 필요가 없는 것을 밝혀냈다. 그러나, ADA 형성이 발생하는 것으로 나타났다(실시예 1).

사이노몰구스 원숭이에서, 단일 용량(4mg/kg) PK 연구, 비우량 실험실 기준(GLP) 용량 범위 소견(DRF) 연구(4주 동안 주 1회 10, 50 및 200mg/kg의 iv 용량) 및 4주 GLP 독성 연구(60 및 200mg/kg)에서 주 2회 반복 iv 투여는 FS118이 단일특이적 항-hPD-L1 mAb보다 더 신속하게 클리어되었음이 밝혀졌다(실시예 1).

투여 기간 동안 10㎍/ml 이상의 FS118 혈장 수준을 유지하는 것은 PD-L1 포획을 유지하기에 충분하고, 추론에 따르면 사이노몰구스 원숭이에서 PD-L1 억제 및 면역 약리학을 유지함으로써 충분한 것으로 밝혀졌다. 이 연구는 또한 FS118이 고용량에서도 내약성이 양호한 것을 나타냈고, 고용량이 인간에게도 내약성이 양호하다는 것을 나타냈다. 마우스에서와 같이, ADA 형성도 관찰되었다(실시예 1).

따라서, 마우스 및 사이노몰구스 원숭이 PK 연구로부터 수득된 결과는, 각각의 단일특이적 항-PD-L1 항체와 비교하여 FS118 및 FS18m-108-29AA/S1의 클리어런스 속도에도 불구하고, 투여량 사이에 관찰된 매우 낮은 항체 C_trough 수준이 그럼에도 불구하고 각각 지속적 항-종양 및 약력학적 반응을 제공하기에 충분했음을 예기치 않게 입증했다. 그럼에도 불구하고, 마우스 및 사이노몰구스 원숭이에서 ADA 형성이 관찰되었고, 이는 이러한 동물 모델이 관찰된 결과로부터 인간에 대한 외삽 측면에서 한계가 있음을 나타낸다.

이어서, 이전의 항-PD-1/PD-1 요법으로 진행되거나 또는 그 이후에 진행된 진행성 악성 종양을 갖는 환자(연구 대상)에서 FS118의 안전성, 내용성, 약물동태 및 활성에 대한 I상 용량 증량 및 코호트 확장 인간 최초 연구를 설계하고 개시했다. 안전성을 평가하기 위해, 단일 환자 코호트에는 800㎍, 2400㎍, 0.1mg/kg, 0.3mg/kg 및 1.0mg/kg 용량의 FS118을 투여했다. I상 연구의 용량 증량 부분을 위해, 환자에는 3mg/kg, 10mg/kg 및 20mg/kg의 FS118을 투여했다. 모든 용량은 주 1회(즉, 주 1회) 투여되었고, 따라서 마우스 및 사이노몰구스 원숭이 PK 데이터 단독에 기초하여 당초 필요하다고 생각되었던 것보다 빈도가 낮았다(실시예 1 및 2).

I상 연구의 초기에 24명의 대상체(43명 환자로 증가)의 중간 결과는, 최대 관찰 농도(C_max)가 사이노몰구스 원숭이 연구로부터 예측된 C_max와 일치했지만, 놀랍게도, FS118의 클리어런스 속도는 예상보다 높고, AUC(농도 대 시간 곡선하 면적)는 예상보다 30% 낮은 것을 확인했다. 이것은 당초 인간에서 FS118의 보다 높은 용량이 필요하다는 것을 시사할 수 있다. 그러나, 클리어런스 속도가 당초 예측된 것보다 더 신속함에도 불구하고, 치료 효능을 나타내는 장기간의 약력학적 효과가 관찰되었다(실시예 2).

특히, FS118은, 주 1회 투여되는 3mg/kg, 10mg/kg 및 20mg/kg의 용량에서 가용성 LAG-3(sLAG-3) 수준의 지속적 증가, 및 지속적 LAG-3 수용체 점유율을 유도하는 것으로 나타났다. sLAG-3는, MHCII와의 결합을 통해, 마크로파지 및 수지상 세포 등의 항원 제시 세포를 자극하여 T 세포 반응을 활성화하고, 종양 특이적 세포독성 T 세포를 증강하는 것으로 보고되어 있고, 이에 의해 항-종양 면역 반응을 증강할 것으로 예상된다. 또한, sLAG3 수준은 마우스에서 종양 성장 억제와 관련된 것으로 이전에 밝혀졌고, 이는 sLAG3 수준의 증가가 치료 효능을 나타냄을 보여준다. 초기 결과는 또한, sPD-L1 수준이 FS118 치료 후에 또한 증가되었음을 시사했다(실시예 2).

따라서, I상 연구에서 동원된 최초 24명의 대상체(43명의 환자로 증가)로부터의 중간 결과는 놀랍게도,

(i) FS118을 인간 암 환자에게 주 1회 3mg/kg 내지 20mg/kg의 용량으로 투여하면, 환자 혈청으로부터 FS118의 예측된 것보다 더 신속한 클리어런스 속도에도 불구하고, 항-종양 효능과 상관관계가 있는 것으로 예상되는 지속적 약력학적 반응이 수득되고,

(ii) 투여 간격 전체에 걸친 FS118 노출은 인간 환자의 약력학적 효과에 필요하지 않았음을 입증했다.

또한, 진행 중의 I상 연구의 초기 결과는 암 치료에서 FS118의 효능에 대한 초기의 직접적 증거를 제공했다(이는 연구의 주요 목적은 아니지만). 보다 구체적으로, 2019년 5월까지 적어도 1회의 "연구 중" 스캔이 보고된 14명의 환자 중 5명이 안정적인 질환을 보고했다. 2019년 8월까지, 이는 22명의 환자 중 11명까지 증가하고, 2020년 4월에는 30명의 환자 중 17명까지 증가했다(실시예 2).

I상 연구로부터의 데이터는 장래 시험을 위한 용량 선택을 유도하기 위해 분석되었다(실시예 6). I상의 최고 전체적 반응(BOR/iBOR) 데이터의 베이지안(Bayesian) 분석은, 주 1회 3mg/kg FS118보다 10mg/kg 또는 20mg/kg의 FS118을 투여받은 경우, 환자가 BOR/iBOR로서 안정한 질환을 나타낼 가능성이 높은 것으로 평가했다. 3mg/kg FS118을 주 1회 투여받은 환자는, 주 1회 10mg/kg 또는 20mg/kg FS118을 투여받은 환자와 비교하여 항-약물 항체의 수준도 또한 높았다. 따라서, 잠재적 면역원성 및 독성을 최소한으로 억제한다는 관점에서, FS118을 주 1회 10mg/kg 내지 20mg/kg으로 투여하는 것이 바람직하다. 삼량체 복합체 형성의 약물동태/약력학 모델링 및 시뮬레이션은, 삼량체 LAG3:FS118:PD-L1 복합체 농도가, 생체분포 계수를 10%로 가정할 때, 주 1회 10mg/kg FS118의 용량에서 가장 높을 것으로 예상된다는 것을 추가로 나타냈다. 보다 높은 삼량체 복합체 형성은 T 세포 활성화 및 종양 성장 억제로 해석되는 것으로 가정된다. 주 1회 3mg/kg의 낮은 용량을 투여받은 환자는 안정적인 질환을 나타냈지만(표 8), 효능 증가 및 독성 및 면역원성 감소에 대한 기대에 기초하여, 주 1회 10mg/kg 내지 20mg/kg의 FS118을 투여하는 것이 바람직하다. 주 1회 10mg/kg의 FS118과 같은 이 범위의 하한에서의 투여량이 특히 바람직한데, 이는, 보다 낮은 투여량이 T 세포 과잉자극 및 이에 따른 T 세포 고갈의 위험을 감소시키고, 이에 의해 지속적 치료 효과의 가능성을 높이고 치료 비용을 감소시킬 것으로 생각되기 때문이다.

FS118 항체는 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열(main chain sequence) 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함한다.

따라서, 일 태양에서, 본 발명은 인간 환자에서 암을 치료하는 방법에 사용하기 위한, PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자를 제공하고,

상기 항체 분자는 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하고;

상기 방법은, 항체 분자를 환자 체중 kg당 적어도 3mg의 용량으로 주 1회 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 인간 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은, PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자의 치료학적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하고,

상기 방법은, 항체 분자를 환자의 체중 kg당 적어도 3mg의 용량으로 주 1회 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

추가 태양에서, 본 발명은 인간 환자에서 암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자의 용도를 제공하고,

상기 치료는 항체 분자를 환자의 체중 kg당 적어도 3mg의 용량으로 주 1회 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

FS118은 환자의 체중 kg당 적어도 4mg(mg/kg), 적어도 5mg/kg, 적어도 6mg/kg, 적어도 7mg/kg, 적어도 8mg/kg, 적어도 9mg/kg, 적어도 10mg/kg, 적어도 11mg/kg, 적어도 12mg/kg, 적어도 13mg/kg, 적어도 14mg/kg, 적어도 15mg/kg, 적어도 16mg/kg, 적어도 17mg/kg, 적어도 18mg/kg, 적어도 19mg/kg, 또는 적어도 20mg/kg의 용량으로 환자에게 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, FS118은 적어도 10mg/kg의 용량으로 환자에게 투여된다. 대안의 바람직한 실시형태에서, FS118은 적어도 20mg/kg의 용량으로 환자에게 투여된다. 적어도 1mg/kg의 용량으로 FS118을 투여하는 것과 같은 다른 용량도 고려된다.

추가로 또는 대안적으로, FS118은 최대 10mg/kg, 최대 11mg/kg, 최대 12mg/kg, 최대 13mg/kg, 최대 14mg/kg, 최대 15mg/kg, 최대 16mg/kg, 최대 17mg/kg, 최대 18mg/kg, 최대 19mg/kg 또는 최대 20mg/kg의 용량으로 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, FS118은 최대 10mg/kg의 용량으로 투여된다. 대안의 바람직한 실시형태에서, FS118은 최대 20mg/kg의 용량으로 투여된다.

따라서, FS118은 1mg/kg 내지 20mg/kg, 3mg/kg 내지 20mg/kg, 또는 10mg/kg 내지 20mg/kg의 용량으로 투여될 수 있다. 대안적으로, FS118은 1mg/kg 내지 10mg/kg, 또는 3mg/kg 내지 10mg/kg의 용량으로 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, FS118은 3mg/kg 내지 20mg/kg, 보다 바람직하게는 10mg/kg 내지 20mg/kg의 용량으로 투여된다.

일 실시형태에서, FS118은 3mg/kg, 4mg/kg, 5mg/kg, 6mg/kg, 7mg/kg, 8mg/kg, 9mg/kg, 10mg/kg, 11mg/kg, 12mg/kg, 13mg/kg, 14mg/kg, 15mg/kg, 16mg/kg, 17mg/kg, 18mg/kg, 19mg/kg 또는 20mg/kg의 용량으로 환자에게 투여된다. 예를 들면, FS118은 3mg/kg의 용량으로 환자에게 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, FS118은 10mg/kg의 용량으로 환자에게 투여된다. 대안의 바람직한 실시형태에서, FS118은 20mg/kg의 용량으로 환자에게 투여된다.

FS118은 상기 제시된 바와 같이 환자의 체중(kg)을 기준으로 계산된 용량으로 환자에게 투여될 수 있다. 따라서, 10mg/kg의 용량을 투여받고 체중이 70kg인 환자는 700mg의 FS118 용량을 투여받게 된다. 대안적으로, FS118은 일정 용량, 즉 환자의 개별 체중을 기반으로 하지 않는 용량으로 환자에게 투여될 수 있다. FS118에 대한 적절한 일정 용량은 70kg, 75kg, 80kg, 85kg, 90kg, 95kg 또는 100kg 등의 환자 모집단에서 환자의 평균 체중을 기반으로 계산할 수 있다. 바람직한 실시형태에서, FS118에 대한 일정 용량은 평균 환자 체중으로서 70kg을 기준으로 계산된다. 대안의 바람직한 실시형태에서, FS118에 대한 일정 용량은 평균 환자 체중으로서 80kg을 기준으로 계산된다. 추가의 바람직한 실시형태에서, FS118에 대한 일정 용량은 평균 환자 체중으로서 100kg을 기준으로 계산된다.

따라서, 평균 환자 체중이 100kg이라고 가정하면, 본 발명은 다음을 제공한다:

인간 환자에서 암을 치료하는 방법에 사용하기 위한, PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자로서,

상기 방법은 항체 분자를 적어도 300mg의 용량으로 주 1회 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

인간 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자의 치료학적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하고,

인간 환자의 암 치료용 의약의 제조에 있어서 PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자의 용도로서,

상기 치료는 항체 분자를 적어도 300mg의 용량으로 주 1회 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

환자의 평균 체중을 100kg으로 가정하면, FS118은 대안적으로 적어도 400mg, 적어도 500mg, 적어도 600mg, 적어도 700mg, 적어도 800mg, 적어도 900mg, 적어도 1000mg, 적어도 1100mg, 적어도 1200mg, 적어도 1300mg, 적어도 1400mg, 적어도 1500mg, 적어도 1600mg, 적어도 1700mg, 적어도 1800mg, 적어도 1900mg 또는 적어도 2000mg의 용량으로 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들면, FS118은 적어도 300mg의 용량으로 환자에게 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, FS118은 적어도 1000mg의 용량으로 환자에게 투여된다. 대안의 바람직한 실시형태에서, FS118은 적어도 2000mg의 용량으로 환자에게 투여된다. 적어도 100mg의 용량으로 FS118을 투여하는 것과 같은 다른 용량도 고려된다. 추가로 또는 대안적으로, FS118은, 환자의 평균 체중을 100kg으로 가정하면, 최대 1000mg, 1100mg, 1200mg, 1300mg, 1400mg, 1500mg, 1600mg, 1700mg, 1800mg, 1900mg 또는 2000mg의 용량으로 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, FS118은 최대 1000mg의 용량으로 투여된다. 대안의 바람직한 실시형태에서, FS118은 최대 2000mg의 용량으로 투여된다.

따라서, FS118은 환자의, 평균 체중을 100kg으로 가정하여, 100mg 내지 2000mg, 300mg 내지 2000mg 또는 1000mg 내지 2000mg의 용량으로 투여될 수 있다. 대안적으로, FS118은 100mg 내지 1000mg, 또는 300mg 내지 1000mg의 용량으로 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, FS118은 300mg 내지 2000mg, 보다 바람직하게는 1000mg 내지 2000mg의 용량으로 투여된다.

예를 들면, FS118은, 환자의 평균 체중을 100kg으로 가정하여, 300mg, 400mg, 500mg, 600mg, 700mg, 800mg, 900mg, 1000mg, 1100mg, 1200mg, 1300mg, 1400mg, 1500mg, 1600mg, 1700mg, 1800mg, 1900mg 또는 2000mg의 용량으로 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들면, FS118은 300mg의 용량으로 환자에게 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, FS118은 1000mg의 용량으로 환자에게 투여된다. 대안의 바람직한 실시형태에서, FS118은 2000mg의 용량으로 환자에게 투여된다.

FS118에 대한 대안의 일정 용량 및 일정 용량 범위는 70kg, 75kg, 80kg, 85kg, 90kg 또는 95kg, 특히 70kg 또는 80kg 등의 환자 모집단의 대안 평균 체중을 사용하여 계산할 수 있고, 본 발명에 따른 인간 암 환자에게 투여할 수 있다.

예를 들면, 환자의 평균 체중을 70kg으로 가정하면, 본 발명은 다음을 제공한다:

상기 방법은 항체 분자를 적어도 210mg의 용량으로 주 1회 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

인간 환자의 암 치료용 약제의 제조에 있어서 PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자의 용도로서,

상기 치료는 항체 분자를 적어도 210mg의 용량으로 주 1회 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

환자의 평균 체중을 70kg으로 가정하면, FS118은 대안적으로 적어도 280mg, 적어도 350mg, 적어도 420mg, 적어도 490mg, 적어도 560mg, 적어도 630mg, 적어도 700mg, 적어도 770mg, 적어도 840mg, 적어도 910mg, 적어도 980mg, 적어도 1050mg, 적어도 1120mg, 적어도 1190mg, 적어도 1260mg, 적어도 1330mg 또는 적어도 1400 mg의 용량으로 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들면, FS118은 적어도 210mg의 용량으로 환자에게 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, FS118은 적어도 700mg의 용량으로 환자에게 투여된다. 대안의 바람직한 실시형태에서, FS118은 적어도 1400mg의 용량으로 환자에게 투여된다. 추가로 또는 대안적으로, FS118은, 환자의 평균 체중을 70kg으로 가정하며, 최대 700mg, 770mg, 840mg, 910mg, 980mg, 1050mg, 1120mg, 1190mg, 1260mg, 1330mg 또는 1400mg의 용량으로 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, FS118은 최대 700mg의 용량으로 투여된다. 대안의 바람직한 실시형태에서, FS118은 최대 1400mg의 용량으로 투여된다. 적어도 70mg의 용량으로 FS118을 투여하는 것과 같은 다른 용량도 고려된다.

따라서, FS118은, 환자의 평균 체중을 70kg으로 가정하면, 70mg 내지 1400mg, 210mg 내지 1400mg 또는 700mg 내지 1400mg의 용량으로 투여될 수 있다. 대안적으로, FS118은 70mg 내지 700mg 또는 210mg 내지 700mg의 용량으로 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, FS118은 210mg 내지 1400mg, 보다 바람직하게는 700mg 내지 1400mg의 용량으로 투여된다.

예를 들면, FS118은, 환자의 평균 체중을 70kg으로 가정하면, 210mg, 280mg, 350mg, 420mg, 490mg, 560mg, 630mg, 700mg, 770mg, 840mg, 910mg, 980mg, 1050mg, 1120mg, 1190mg, 1260mg, 1330mg 또는 1400mg의 용량으로 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들면, FS118은 210mg의 용량으로 환자에게 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, FS118은 700mg의 용량으로 환자에게 투여된다. 대안의 바람직한 실시형태에서, FS118은 1400mg의 용량으로 환자에게 투여된다. 추가 대안으로서, FS118은 용량 사이에 적어도 0.1-10㎍/mL의 평균 최저 혈장 농도(C_trough)를 달성하기에 충분한 용량으로 환자에게 투여될 수 있다. 이론에 구속되지 않고, 이들 C_trough 수준은 시험관내 인간 1차 세포 기능 검정에서 FS118의 EC₅₀과 상관관계가 있고, 따라서 FS118의 약리학적 활성 수준을 나타낼 수 있다.

적어도 10㎍/mL의 평균 최저 혈장 농도는 PD-L1의 지속적 억제를 제공할 것으로 예상된다.

FS118이 주 1회 환자에게 투여되는 경우, FS118의 용량은 7일 또는 8일까지 시간적으로 분리될 수 있다. 당해 기술분야에서 이해되는 바와 같이, 용량 사이의 시간은 각각의 모든 용량이 정확하게 동일한 시간에 의해 분리되지 않도록 어느 정도 변화될 수 있다. 이것은 종종 주치의의 재량에 따라 지시될 것이다. 따라서, FS118의 용량은 약 7 또는 8일 등의 임상적으로 허용되는 시간 범위까지 시간적으로 분리될 수 있다.

FS118은 3주 치료 사이클로 환자에게 투여될 수 있다.

FS118은 바람직하게는 정맥내 주사에 의해 환자에게 투여된다.

본 발명에 따라 치료되는 암은 바람직하게는 FS118 이외의 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제에 의한 사전 치료를 받는다.

본 발명에 따라 치료될 암은 (i) 불응성일 수 있거나, (ii) 진행중 또는 후에 재발할 수 있거나, 또는 (iii) 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제에 의한 치료에 반응성일 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 본 발명에 따라 치료될 암은 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제(FS118 이외)에 의한 이전 치료 동안 또는 후에 재발했다. 면역 체크포인트 억제제는 바람직하게는 PD-1 또는 PD-L1 억제제, 보다 바람직하게는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체이다. 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제(FS118 이외)에 의한 이전 치료는 단독으로 또는 하나 이상의 추가 요법(예: 하나 이상의 화학요법제)과 조합하여 투여되었을 수 있다.

본 발명자들은, 놀랍게도, FS118 치료의 결과로서, 질환 제어의 수명, 즉 지속적 질환 제어를 경험할 가능성이 보다 큰 암 환자의 서브그룹을 확인했다. 이 서브그룹의 환자는 이전의 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대해 부분적 반응을 나타낸 종양을 갖는 환자, 또는 이전의 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법을 받는 동안 3개월 이상 동안 안정한 질환을 나타낸 종양을 갖는 환자이다. 따라서, 이러한 종양은, 이전의 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대해 "후천적 내성 표현형"을 갖는 것으로 간주된다. 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대해 완전한 반응을 나타낸 환자도 이 서브그룹에 포함되는 것으로 예상된다. 종양이 항-PD-1 또는 항-PD-L1 등의 항암 요법으로 치료하는 동안 완전 반응, 부분 반응, 안정한 질환 또는 진행성 질환을 나타내는지의 여부는 RECIST 1.1 기준(Eisenhauer, 2009) 또는 iRECIST 기준(Seymour, 2017), 바람직하게는 RECIST 1.1 기준에 따라 평가될 수 있다. 이것은 환자의 종양에 대한 스캔(예: MRI 스캔)을 수득하고 종양 병변의 크기/용적을 측정하는 것을 포함할 수 있다. 본원에서 후천적 내성을 정의할 목적으로, 예를 들면, 환자가 안정한 질환(또는 부분 반응 또는 완전 반응)을 나타내는 것을 분류되는 제1 스캔, 이어서 진행성 질환을 나타내는 것을 분류되는 후속 스캔을 갖는 경우, 환자는 진행성 질환을 나타내는 스캔이 수득될 때까지의 기간 동안 안정한 질환(또는 부분 반응 또는 완전 반응)을 나타낸 것으로 가정한다. 다시 말해서, 후천적 내성 표현형은 (a) 이전의 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 완전 반응 또는 부분 반응의 최상의 전체 반응(BOR)을 갖는 종양 또는 (b) 최상의 전체 반응(BOR)으로서 안정한 질환을 갖고 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법으로 3개월 이상 동안 치료된 종양으로서 정의될 수 있다. BOR 등의 임상 종점은 RECIST 1.1 기준(Eisenhauer, 2009) 또는 iRECIST 기준(Seymour, 2017), 바람직하게는 RECIST 1.1 기준에 따라 정의될 수 있다.

대조적으로, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법을 받으면서 3개월 이하 동안 안정한 질병을 나타낸 종양(따라서, 안정한 질환을 나타내지 않고, 따라서 치료 개시부터 진행성 질환을 나타낸 종양을 포함)을 갖는 환자(달리 말하면, 진행성 질환의 BOR을 갖는 종양을 포함하여, 안정한 질환의 BOR를 갖고 3개월 이하의 치료된 종양)는 질환 제어의 수명을 경험하지 못했고, 따라서 이러한 종양은 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 "1차 내성 표현형"을 갖는 것으로 간주된다. 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성 표현형을 갖는 종양을 갖는 환자는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성을 갖는 것으로 지칭될 수 있다. 유사하게는, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 1차 내성 표현형을 갖는 종양을 갖는 환자는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 1차 내성을 갖는 것으로 지칭될 수 있다. 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법은 단독으로 또는 하나 이상의 추가 요법(예: 하나 이상의 화학요법제 및/또는 면역요법제)과 조합하여 투여되었을 수 있다.

구체적으로, FS118 치료로 18주 이상 완료한 모든 환자는, BOR이 불명인 1명의 환자를 제외하고, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성 표현형을 갖는 종양을 갖는 것으로 밝혀졌다(도 7 및 8). 그러나, BOR이 불명인 이 후자의 환자는, 이전 항 PD-1 요법을 1년 이상 지속한 것으로 공지되어 있고, 따라서 이 환자는 후천적 내성을 갖는 것으로 분류되는 BOR을 가졌을 것으로 의심된다. 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 1차 내성 표현형을 갖는 종양 환자 중 어느 환자도 I상 연구에서 FS118 치료를 17주 이상 받은 환자는 없었다(도 7 및 8). 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성 표현형을 갖는 종양을 갖는 환자에서 FS118 요법에 대한 반응 수명의 증강 가능성의 증가는 투여된 FS118의 용량 및 종양 유형과 무관하게 관찰되었다(도 7 내지 9). 따라서, 이전 항 PD-1 또는 항 PD-L1 요법에 대한 종양의 내성 상태는 FS118 요법에 대한 지속적 반응의 가능성을 나타낸다. 구체적으로, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성 표현형을 갖는 종양은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 1차 내성 표현형과 비교하여, 18주 이상, 19주 이상 또는 20주 이상, 그러나 바람직하게는 18주 이상 동안 FS118에 의한 치료에 반응할 가능성, 특히 FS118 요법에 반응할 가능성이 높았다. 따라서, FS118에 의한 치료에 대한 반응은, 예를 들면, 18주 이상, 19주 이상, 또는 20주 이상, 그러나 바람직하게는 18주 이상 동안 안정한 질환, FS118 치료에 대한 부분적 반응 또는 완전한 반응을 나타내는 종양을 지칭한다.

본 발명자들의 상기 발견은, 치료 섭생을 포함하는 이전 PD-(L)1에서의 질환 진행 후의 PD-(L)1 항체에 의한 환자의 재-치료는 권장되지 않고, 역사적으로 환자는 이러한 요법으로부터 이점을 거의 유도하지 않는 것으로 밝혀졌기 때문에 특히 중요하다[참조: Fujita et al., Anticancer Res. 2019; Fujita et al., Thoracic Cancer, 2019; Martini et al., J. Immunotherapy Cancer, 2017].

따라서, 추가의 태양에서, 본 발명은 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 인간 환자에서 암을 치료 방법에 사용하기 위한, PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자를 제공하고, 상기 항체 분자는 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하고;

상기 환자의 종양은 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형을 갖는 것으로 결정되었고,

후천적 내성 표현형을 갖는 종양은 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료에 대해 완전한 또는 부분적 반응을 나타낸 종양이거나, 이전의 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받는 동안 3개월 이상 동안 안정한 질환을 나타낸 종양이다.

본원에서 지칭되는 종양은 종양 병변일 수 있다.

본 발명은 또한, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 인간 환자에서 암의 치료 방법에 사용하기 위한, PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자를 제공하고, 상기 항체 분자는 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하고,

상기 방법은, 환자의 종양이 항-PD-1 요법 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형을 갖는지의 여부를 결정하고, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대해 후천적 내성 표현형을 갖는 것으로 결정된 종양을 상기 항체로 치료하는 것을 포함하고,

후천적 내성 표현형을 갖는 종양은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료에 대해 완전 또는 부분적 반응을 나타낸 종양, 또는 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받는 동안 3개월 이상 동안 안정한 질환을 나타낸 종양이다.

또한, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 인간 환자에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 상기 방법은, PD-L1 및 LAG-3에 결합하고 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자의 치료학적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하고;

후천적 내성 표현형을 갖는 종양은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료에 대해 완전 또는 부분적 반응을 나타낸 종양이거나, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받는 동안 3개월 이상 동안 안정한 질환을 나타낸 종양이다.

이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 인간 환자에서 암을 치료하는 방법이 추가로 제공되고, 이 방법은, PD-L1 및 LAG-3에 결합하고 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자의 치료학적 유효량을 환자에게 투여하고; 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성 표현형을 갖는 갖는 것으로 결정된 종양을 상기 항체로 치료하는 것을 포함하고,

상기 방법은, 환자의 종양이 이전 항-PD-1 요법 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형을 갖는지의 여부를 결정하는 것을 포함하고,

추가 실시형태에서, 본 발명은, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 인간 환자의 암 치료용 약제의 제조에서, PD-L1 및 LAG-3에 결합하고 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자의 용도를 제공하고,

환자의 종양은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형을 갖는 것으로 결정되었고,

또 다른 추가 실시형태에서, 본 발명은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 암 환자가, PD-L1 및 LAG-3에 결합하고 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자에 의한 치료에 반응할 가능성이 있는지의 여부를 결정하는 방법을 제공하고,

상기 방법은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여, 환자의 종양이 후천적 내성 표현형 또는 1차 내성 표현형을 갖는지의 여부를 결정하는 것을 포함하고,

후천적 내성 표현형을 갖는 종양은 1차 내성 표현형을 갖는 종양보다 항체에 의한 치료에 반응할 가능성이 더 높고;

후천적 내성 표현형을 갖는 종양은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료에 대해 완전 또는 부분적 반응을 나타낸 종양이거나, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받는 동안 3개월 이상 동안 안정한 질환을 나타낸 종양이고,

1차 내성 표현형을 갖는 종양은, 진행성 질환의 최상의 전체 반응을 갖는 종양을 포함하여, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받는 동안 3개월 이하 동안 안정한 질환을 달성한 종양이다.

반응 가능성은 바람직하게는, 종양이 안정한 질환, FS118에 의한 치료에 대해 부분 반응 또는 완전한 반응을, 예를 들면, 18주 이상, 19주 이상 또는 20주 이상, 그러나 바람직하게는 18주 이상 동안 나타낼 가능성을 지칭한다.

본 발명은 또한, PD-L1 및 LAG-3에 결합하고 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자에 대한 암 환자의 반응 가능성을 예측하는 방법을 제공하고,

환자의 종양이 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형을 갖는 것으로 결정된 경우, 환자는 항체에 반응할 가능성이 있는 것으로 예측되고,

또 다른 실시형태에서, 본 발명은, PD-L1 및 LAG-3에 결합하고 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자에 의한 치료를 위해, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 환자를 선택하는 방법을 제공하고,

상기 방법은, 환자의 종양이, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여, 후천적 내성 표현형 또는 1차 내성 표현형을 갖는지의 여부를 결정하고, 후천적 내성 표현형을 갖는 것으로 결정된 종양을 갖는 환자를 항체에 의한 치료를 위해 선택하는 것을 포함하고,

여기서, 후천적 내성 표현형을 갖는 종양은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료에 대해 완전 또는 부분적 반응을 나타낸 종양이거나, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받는 동안 3개월 이상 동안 안정한 질환을 나타낸 종양이고,

1차 내성 표현형을 갖는 종양은, 진행성 질병의 최상의 전체적 반응을 갖는 종양을 포함하여, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받는 동안 3개월 이하 동안 안정한 질환을 달성한 종양이다.

항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법은 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체(PD-L1 및 LAG-3 둘 다에 결합하는 항체 제외, 예를 들면, FS118)에 의한 치료를 지칭하고, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아벨루맙, 더발루맙 또는 아테졸리주맙에 의한 치료를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.

본 발명자들은, 후천적 내성 표현형을 갖는 종양에서 FS118에 의한 치료 전에 PD-L1에 대해 양성 염색을 나타낸 종양 세포의 백분율이 FS118 치료의 결과로서 질환 제어의 수명과 양의 상관관계가 있는 것을 추가로 밝혀냈다. 후천적 내성 그룹에서는, FS118로 30주 이상 치료된 3명의 환자도 기준선에서 PD-L1에 대해 양성 염색을 나타낸 종양 세포의 비율이 가장 높았다. 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 1차 내성을 갖는 환자에서는 이러한 상관관계가 나타나지 않았다(도 10). 이들 결과는, 15% 이상, 20% 이상, 또는 25% 이상, 그러나 바람직하게는 15% 이상의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성 표현형을 갖는 종양이 FS118에 의한 치료에 반응할 가능성이 더 높은 것을 나타낸다. 예를 들면, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성 표현형을 갖는 종양은 15% 이상, 16% 이상, 17% 이상, 18% 이상, 또는 19% 이상의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함할 수 있다.

종양 샘플에서 PD-L1 양성 종양 세포의 백분율을 결정하는 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있고, 항-PD-L1 항체로 종양 샘플을 염색하고 종양 세포에 대한 항체의 결합을 직접 또는 간접적으로 검출하는 것을 포함할 수 있다. PD-L1 양성 종양 세포의 백분율은, 종양 세포의 수를, 예를 들면, 5개 고배율 필드에서 계수하고 항체가 결합되어 있는 상기 종양 세포의 백분율을 결정함으로써 결정될 수 있다.

추가 실시형태에서, 따라서 본 발명은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 인간 환자에서 암의 치료 방법에 사용하기 위한, PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자를 제공하고, 상기 항체 분자는 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하고;

환자의 종양은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형을 갖는 것으로 결정되었고, 상기 항체에 의한 치료 전에 환자로부터 수득된 종양의 샘플은 15% 이상의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는 것으로 결정되었고,

본 발명은 또한, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 인간 환자에서 암의 치료 방법에 사용하기 위한, PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자를 제공하고, 상기 항체 분자는 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하고;

상기 방법은, (i) 환자의 종양이 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성 표현형을 갖고;

(ii) 항체에 의한 치료 전에 환자로부터 수득된 종양 샘플이 15% 이상의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는지의 여부를 결정하는 단계; 및

후천적 내성 표현형을 갖고 15% 이상의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는 것으로 결정된 종양을 상기 항체로 치료하는 단계를 포함하고;

또한, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 인간 환자에서 암을 치료하는 방법이 제공되고, 상기 방법은, PD-L1 및 LAG-3에 결합하고 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자의 치료학적 유효량을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하고;

환자의 종양은 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형을 갖는 것으로 결정되었고, 상기 항체에 의한 치료 전에 환자로부터 수득된 종양의 샘플은 15% 이상의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는 것으로 결정되었고;

이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 인간 환자에서 암을 치료하는 방법이 추가로 제공되고, 상기 방법은, PD-L1 및 LAG-3에 결합하고 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자의 치료학적 유효량을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하고;

상기 방법은,

(i) 환자의 종양이 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형을 갖고;

후천적 내성 표현형을 갖고 15% 이상의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는 것으로 결정된 종양을 항체로 치료하는 단계를 포함하고;

추가 실시형태에서, 본 발명은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 인간 환자의 암 치료용 약제의 제조에서, PD-L1 및 LAG-3에 결합하고 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자의 용도를 제공하고,

여기서, 환자의 종양은 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형을 갖는 것으로 결정되었고, 항체에 의한 치료 전에 환자로부터 수득된 종양의 샘플은 15% 이상의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는 것으로 결정되었고;

상기 방법은,

(i) 환자의 종양이 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형 또는 1차 내성 표현형을 갖고;

(ii) 항체에 의한 치료 전에 환자로부터 수득된 종양 샘플의 샘플이 15% 이상의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는지의 여부를 결정하는 것을 포함하고;

적어도 15%의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는 후천적 내성 표현형을 갖는 종양은, 1차 내성 표현형을 갖는 종양 또는 15% 미만의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는 후천적 내성 표현형을 갖는 종양과 비교하여, 항체에 의한 치료에 대해 반응할 가능성이 더 높고;

1차 내성 표현형이 있는 종양은, 진행성 질환의 최상의 전체 반응을 갖는 종양을 포함하여, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받는 동안 3개월 이하 동안 안정한 질환을 달성한 종양이다. 이 방법은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대해 후천적 내성 표현형을 갖고 치료를 위해 15% 이상의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는 것으로 결정된 종양을 선택하거나, 또는 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성 표현형을 갖고 15% 이상의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는 암을 갖는 것으로 결정된 종양을 상기 항체로 치료하는 것을 추가로 포함할 수 있다.

여기서, 환자의 종양이 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형을 갖고, 항체에 의한 치료 전에 환자로부터 수득된 종양이 15% 이상의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는 것으로 결정되는 경우, 환자는 항체에 반응할 가능성이 있는 것으로 예측되고,

또 다른 실시형태에서, 본 발명은, PD-L1 및 LAG-에 결합하고 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자에 의한 치료를 위해, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 환자를 선택하는 방법을 제공하고,

상기 방법은,

항체에 의한 치료를 위해, 후천적 내성 표현형을 갖고 15% 이상의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는 것으로 결정된 종양을 갖는 환자를 선택하는 단계

를 포함하고,

본 발명 및 실시형태의 상기 태양에서, 항체는, 본원에 개시된 투여 스케쥴 및/또는 투여 경로에 따라서 용량으로 환자에게 투여될 수 있다.

따라서, 특히 바람직한 실시형태에서, 본 발명은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 인간 환자에서, 암, 바람직하게는 두경부 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma of the head and neck; SCCHN)의 치료 방법에 사용하기 위한, PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자를 제공하고, 상기 항체 분자는 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하고, 다 상기 방법은 항체 분자를 환자 체중 kg당 10mg의 용량으로 주 1회 환자에게 투여하는 것을 포함하고,

여기서, 환자의 종양은 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형을 갖는 것으로 결정되었고,

추가의 바람직한 실시형태에서, 본 발명은 또한, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 인간 환자에서 암, 바람직하게는 SCCHN을 치료하는 방법을 제공하고, 이 방법은, 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하는 PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자의 치료학적 유효량을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 방법은 항체 분자를 환자 체중 kg당 10mg의 용량으로 주 1회 환자에게 투여하는 것을 포함하고,

도 1은, 항-PD-1/PD-L1 단일요법(좌측 패널), 항-PD-1/PD-L1 및 항-LAG-3 단일요법의 조합(중앙 패널) 및 이중특이적 항-PD-1/PD-L1 항체 FS118(우측 패널)에 의한 종양의 치료 후의 T 세포 LAG-3 발현에 대한 효과를 나타낸다.
도 2는, 항-PD-1/PD-L1 요법에 대해 불응성이거나 이후 재발한 종양, 및 항-PD-1/PD-L1 요법에 반응하는 종양에 대한 FS118 치료의 예상 효과를 나타낸다.
도 3A는, 종양 이식 후 3일, 6일 및 9일에 10mg/kg 시험품(마우스당 200㎍)을 투여한 후의 평균(± SEM) 종양 용적을 나타낸다. FS118 마우스 대리 mAb² = mLAG-3/PD-L1; FS18m-108-29AA/4420 = mLAG-3/모의 mAb²; PD-L1 BM1 mAb = 항-PD-L1 mAb; mLAG-3 BM1 mAb = 항-LAG-3 mAb; IgG 대조군 = G1AA/4420. B는 PK 데이터를 나타낸다 - mLAG-3/PD-L1(백색 원 및 삼각형) 및 항-PD-L1 mAb(흑색 원 및 삼각형)에 대해 10mg/kg 단일 용량 i.v. 투여. 각각 원과 삼각형으로 표시되는 2개의 상이한 연구로부터의 데이터가 제시된다.
도 4는, 3회 용량의 G1AA/4420(IgG 대조군, 10mg/kg) 및 항-마우스 LAG-3/PD-L1 mAb₂ FS18m-108-29AA/S1으로 4개의 상이한 용량(1mg/kg, 3mg/kg, 10mg/kg 및 20mg/kg)으로 치료한 C57BL/6 마우스에서 피하 성장한 MC38 동계 종양 모델의 종양 용적 측정을 나타낸다. 각 용량은 x-축에 수직 흑색 화살표로 표시된다. 평균 종양 용적 플러스 또는 마이너스 표준 오차 평균(SEM)은 y-축에 표시된다. 일원 배치 분산 분석(ANOVA)를 사용하여, 이소형 대조군(G1AA/4420)과 LAG-3/PD-L1 mAb² 치료 그룹 사이에서 연구 17일차에 종양 크기의 비교를 수행했다. 그룹 사이의 유의차는 터키(Tukey)의 다중 비교 검정을 사용하여 결정되었다. *** P ≤ 0.001; **** P ≤ 0.0001.
도 5는, NHP 비-GLP 및 GLP PK 데이터(투여 후 0-7일)로부터 구축된 FS118에 대한 전신 노출을 기재하는 2구획 모집단 PK 모델의 구조를 나타낸다. V_P(V1이라고도 지칭함) = 중앙 용적; V_T(V2라고도 지칭함) = 주변부 용적; CL_d(CL2라고도 지칭함) = 교환 계수; CL_P(CL1이라고도 지칭함) = FS118 클리어런스; C_P = 혈장 구획; C_T = 조직 구획.
도 6은 실시예 2의 I상 연구에 대한 인간 최초(First-in-human; FIH) 연구 설계를 나타낸다.
도 7은, 내성 그룹 및 용량과 관련하여 2020년 3월 25일 시점에서 완료된 FS118 치료의 주를 나타낸다(다이아몬드 = 1mg/kg, 원 = 3mg/kg, 삼각형 = 10mg/kg, 사각형 = 20mg/kg). 본원에 정의된 항-PD-1/PD-L1 요법에 대한 1차 내성을 갖는 환자와 비교하여, 본원에 정의된 항-PD-1/PD-L1 요법에 대한 후천적 내성을 갖는 환자 사이에 유의차가 관찰되었고, 여기서 후천적 내성 환자는, 투여된 FS118 용량에 관계없이, 1차 내성 환자보다 평균적으로 보다 긴 FS118 치료를 유지한다.
도 8은, FS118 치료를 받는 동안 2019년 11월 27일 시점에서 평가 가능한 종양 스캔을 받은, 항-PD-1/PD-L1 요법(FS118 용량으로 정렬)에 대한 1차 또는 후천적 내성을 갖는 것으로 분류된 39명의 환자에 대한 스위머(swimmer) 플롯을 나타낸다. 1차 내성을 갖는 환자는 회색 막대로 제시되고, 후천적 내성을 갖는 환자는 농회색 막대로 제시된다. 완료된 FS118 치료의 주 수가 제시된다(PD = 진행성 질환; SD = 안정한 질환). 18주 이상의 FS118 치료가 완료된 모든 환자(이들 중 1명이 후천적 내성 표현형을 갖는 종양을 갖는 모든 막대)는 안정한 질환의 적어도 하나의 측정이 있었다.
도 9는, 도 7에 제시된 것과 동일한 데이터를 기반으로 하지만, 내성 그룹 및 종양 유형과 관련하여 2020년 3월 25일 시점에서 완료된 FS118 치료의 주를 나타낸다. FS118 치료에 대한 반응 가능성은 후천적 내성 표현형을 갖는 종양과 관련이 있었지만, 임상적 적응(종양 유형)과는 무관한 것으로 보인다.
도 10은, 2019년 12월 12일 시점에서 FS118 치료가 완료된 주의 수와 관련하여, FS118 치료 전의 PD-L1에 대해 양성 염색을 나타내는 종양 생검 샘플에서 종양 세포의 백분율(PD-L1 퍼센트 종양 양성 스코어[PD-L1 %TPS])을 나타낸다. A: 높은 기준선 PD-L1 %TPS는 PD-1/PD-L1 요법에 대한 후천적 내성을 갖는 환자의 FS118 치료 기간과 양의 상관관계를 나타냈다. 후천적 내성 그룹 중에서 가장 높은 PD-L1 %TPS를 갖는 3명의 환자는 FS118로 30주 이상 치료되었고, 이는 FS118에 의한 질환 제어를 입증한다. B: 항PD-1/PD-L1 요법에 대한 1차 내성을 갖는 환자에서는, PD-L1 %TPS와 FS118 치료 기간 사이에 상관관계가 관찰되지 않았다.
도 11은, 항-PD-1/PD-L1 요법에 대한 후천적 내성을 갖는 환자가 항-PD-1/PD-L1 요법에 대한 1차 내성을 갖는 환자보다 FS118 처리에 의해 보다 높은 크기의 면역 세포 반응을 나타냈다는 것을 보여준다. 시간 경과에 따른 면역 세포 수의 변화 백분율(백색 원형: CD3+ T 세포, 흑색 정사각형: CD4+ T 세포, 흑색 삼각형: CD8+ T 세포, 흑색 다이아몬드: NK 세포)은 FS118 치료 개시 전의 기준선으로부터의 변화 백분율로서 도시된다. A: 환자 1004-0003은 1차 내성을 갖는 대표적 환자 프로파일이다. B: 환자 1002-0014는 후천적 내성을 갖는 대표적 환자 프로파일이다. 제시된 데이터는 2019년 11월 26일에 수득했다.

항-LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체

본 발명에 사용하기에 적합한 항-LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체(예: 본원에 제시된 FS118)는 WO2017/220569 A1에 기재되어 있고, 이의 내용은 그 전체가 모든 목적을 위해 본원에 도입된다. FS118 항체는 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함한다.

암

PD-1, 이의 리간드 PD-L1 및 LAG-3은 면역 체크포인트 단백질의 예이다. 이러한 단백질에 결합하여 억제하는 항체 등의 분자는 집합적으로 면역 체크포인트 억제제로 지칭된다. 단일 요법으로 항PD-1/PD-L1 항체에 의한 암 환자의 치료는, T 세포에서 LAG-3 발현의 상향조절을 제공하고, 항-PD-L1/PD-1 요법에 대한 내성을 제공하는 것으로 밝혀졌다(도 1). 항-PD-1/PD-L1 항체와 항-LAG-3 항체의 병용 치료는, 항-PD-L1/PD-1 요법 단독과 비교하여 발현의 증가는 감소했지만, T 세포에서 LAG-3 발현의 증가를 방지할 수 없었다(도 1). 대조적으로, FS118(및 마우스 대리 항체 FS18m-108-29AA/S1)에 의한 치료는 T 세포 LAG-3 발현을 감소시키고, sLAG-3 수준을 증가시키는 것으로 밝혀졌다(도 1). 따라서, FS118은 항-PD-L1/PD-1 및 항-LAG-3 항체와 비교하여 상이한 작용 방식을 갖고, I상 연구의 초기 결과에 의해 입증된 바와 같이, PD-L1/PD-1 억제제에 대한 LAG-3 매개 내성을 방지 및/또는 역전시킬 수 있고, 이는, 국소 진행성, 절제 불가능 또는 전이성 고형 종양 또는 항-PD-1/PD-L1 요법 중 또는 요법 후에 진행된 혈액학적 악성 종양을 갖는 환자에서 FS118 치료 후, 몇몇 환자에서 안정적인 질환뿐만 아니라 약력학적 반응을 나타냈다.

이론에 구속됨이 없이, 항-PD-1/PD-L1 단일요법에 대해 불응성이거나, 또는 항-PD-1/PD-L1 단일요법 동안 또는 후에 재발한 종양, 및 항-PD-1/PD-L1 단일요법에 반응성인 종양에 대한 FS118 치료의 예상 효과는 도 2에 제시되어 있다.

하나 이상의 면역 체크포인트 억제제에 의한 치료에 대해 불응성인 암은 바람직하게는 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제(FS118 등의 LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체 제외)에 의한 치료에 내성이 있는 암을 지칭한다. 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제(들)에 의한 치료 동안 또는 후에 재발한 암은 바람직하게는, 상기 면역 체크포인트 억제제(들)에 의한 치료 동안 또는 후에 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제(FS118 등의 LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체 제외)에 대한 후천적 내성을 갖는 암을 의미한다.

구체적으로, 도 2는, 항-PD-1/PD-L1 단일요법에 불응성이었거나 그 동안 또는 이후에 재발하고 T 세포 고갈 또는 면역-억제를 나타내는 종양에서, T 세포 표면에서 발현된 LAG-3에 대한 결합의 결과로서 T 세포 고갈/면역-억제를 역전시키고(이는 면역 세포에 대한 억제 신호로서 작용한다), LAG-3의 T 세포 표면 과발현을 감소시키고, 가용성 LAG-3(sLAG-3)의 방출을 촉진함으로써 FS118 치료가 면역 매개 항-종양 효과를 강화할 것으로 예상된다는 것을 나타낸다. 따라서, FS118은, "표준 치료" 면역 체크포인트 억제제 요법에 대한 1차 또는 적응 내성을 갖는 환자를 구제하는 능력을 갖기 때문에, 면역 체크포인트 차단의 임상적 이점을 현저히 확장하는 잠재력을 갖는다.

PD-1/PD-L1 단일요법에 반응하는 종양에서, TIL은 이의 표면에서 LAG-3을 발현하고 종양은 PD-L1이 높을 것으로 예상된다. 상기 LAG-3 및 PD-L1에 결합함으로써, FS118은, 항-PD-1/PD-L1 단일요법에 추가하여 이들 환자에서 T-세포 활성화를 증강시킬 뿐만 아니라, 항-PD-L1 치료에 대한 반응으로 LAG-3의 과발현을 방지할 것으로 예상된다. 따라서, PD-L1 차단에 대한 내성의 발달이 억제될 것으로 예상된다. 따라서, 항-PD-1/PD-L1 요법 동안 또는 요법 후에 진행된 종양 또는 혈액학적 악성 종양을 갖는 몇몇 환자에서 약력학적 반응 뿐만 아니라 안정한 질환을 제공하는 초래하는 것으로 밝혀진, 본원에 개시된 바와 같은 FS118의 투여량은 또한 PD-1/PD-L1 단일요법에 반응하는 암을 효과적으로 치료하는데 적합할 것으로 예상된다.

면역 체크포인트 억제제 치료에 반응을 나타내는 암은 상기 효과를 매개하는 TIL을 포함해야 한다. 따라서, 항-PD-1/PD-L1 억제제 이외의 면역 체크포인트 억제제에 의한 치료 동안 또는 치료 후에 불응성이거나 재발한 암은 불활성 TIL(즉, 고갈되거나 면역 억제됨)을 포함할 것으로 예상되는 반면, 항-PD-1/PD-L1 억제제 이외의 면역 체크포인트 억제제에 의한 치료에 반응하는 암은 활성화된 TIL을 포함할 것으로 예상된다. 결과적으로, FS118은, 항-PD-1/PD-L1 억제제 이외의 면역 체크포인트 억제제에 의한 치료 동안 또는 치료 후에 불응성이거나 재발한 PD-L1 발현 암에 대해 유사한 효과를 갖거나, 또는 상기 항-PD-1/PD-L1 억제제 이외의 면역 체크포인트 억제제에 의한 치료에 반응하거나, 불응성 또는 재발하는 암에 대해 제시된 바와 같이, 상기 항-PD-1/PD-L1 억제제에 의한 치료에 반응할 것으로 예상된다.

따라서, 바람직한 실시형태에서, 본 발명에 따라 치료될 암은 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제(FS118 등의 LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체 제외)에 의한 사전 치료를 받았다.

따라서, 본 발명에 따라 치료될 암은 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제(FS118 등의 LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체 제외)에 의한 치료에 대해 불응성일 수 있거나 불응성인 것으로 결정되었을 수 있다. 또는, 본 발명에 따라 치료될 암은 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제(FS118 등의 LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체 제외)에 의한 치료 동안 또는 치료 후에 재발할 수 있다. 추가 대안으로서, 본 발명에 따라 치료될 암은 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제에 의한 치료에 반응할 수 있거나, 반응하는 것으로 결정될 수 있다. 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제에 의한 치료 동안 또는 치료 후에 암의 재발은 바람직하게는 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제에 의한 치료 동안 또는 치료 후의 암 진행을 지칭한다. 암 진행의 검출은 숙련자의 능력 범위 내에 있다.

면역 체크포인트 억제제는 PD-1, PDL-1, PD-L2, CTLA-4, CD80, CD86, LAG-3, B7-H3, VISTA, B7-H4, B7-H5, B7-H6, NKp30, NKG2A, 갈렉틴 9, TIM-3, HVEM, BTLA, KIR, CD47 또는 SiRP 알파 억제제일 수 있다. 면역 체크포인트 억제제는 문제의 면역 체크포인트 분자를 억제할 수 있는 항체일 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1 또는 PD-L1 억제제, 예컨대, 항-PD1/PD-L1 항체이다. 면역 체크포인트 분자를 억제할 수 있는 항체는 당해 기술분야에 공지되어 있고, CTLA-4의 억제를 위한 이필리무맙; PD-1에 대한 니볼루맙, 펨브롤리주맙 및 세미플리맙; 및 PD-L1에 대한 아테졸리주맙, 아벨루맙 및 더발루맙을 포함한다. 면역 체크포인트 분자, 이들의 리간드 및 억제제는 문헌[참조: Marin-Acevedo et al. Journal of Hematology & Oncology (2018)]에 검토되어 있다.

본 발명에 따라 치료되는 암은 PD-L1을 발현한다. 바람직하게는, 암은 PD-L1을 발현하는 것으로 결정되었다. 또한, 본 발명에 따라 치료되는 암은 TIL 등의 LAG-3 발현 면역 세포를 포함한다. 바람직하게는, 암은 LAG-3 발현 면역 세포를 포함하는 것으로 결정되었다. 바람직한 실시형태에서, 암은, 면역 세포의 표면 상에서 암 세포에 의한 PD-L1의 발현 및 면역 세포의 표면에서의 LAG-3 발현에 기인하여 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제(FS118 등의 LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체 제외)에 의한 치료에 내성이 있는 암일 수 있다. 특정 실시형태에서, 암 세포의 표면에서의 PD-L1의 발현 및 종양 미소환경 내에서 면역 세포의 표면에서의 LAG-3의 발현은 각각 정상 조직 세포 및 활성화된 면역 세포와 비교하여 높을 수 있다.

본 발명자들은, 놀랍게도, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성 표현형을 갖고, 특히 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성 표현형을 갖고, FS118에 의한 치료 전에 적어도 15% PD-L1-양성 종양 세포를 포함하는 종양이 FS118에 의한 치료에 반응하여, 지속적 반응, 특히 지속적 안정한 질환을 나타낼 가능성이 증가하는 것을 밝혀냈다. 이 효과는 종양 유형 및 투여된 FS118 투여량과는 무관하게 관찰되었다.

따라서, 본 발명에 따라 치료되는 암은 바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성 표현형을 갖는다. 보다 더 바람직하게는, 본 발명에 따라 치료되는 암은 본원에 정의된 바와 같은 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 후천적 내성 표현형을 갖고, 암의 종양(들)은 FS118에 의한 치료 전에 적어도 15% PD-L1-양성 종양 세포를 포함한다.

본 발명의 항체 분자를 사용하여 치료할 암은 두경부암(head and neck cancer)(예: 두경부 편평세포암(squamous cell carcinoma of the head and neck; SCCHN)), 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma)(예: 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B-cell lymphoma), 무통성 비호지킨 림프종(indolent non-Hodgkin's lymphoma), 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma), 난소암(ovarian cancer), 전립선암(prostate cancer), 결장직장암(colorectal cancer), 섬유육종(fibrosarcoma), 신장 세포 암종(renal cell carcinoma), 흑색종(melanoma), 췌장암(pancreatic cancer), 유방암(breast cancer), 다형 교모세포종(glioblastoma multiforme), 폐암(lung cancer)(예: 비-소세포 폐암(non-small cell lung cancer) 또는 소세포 폐암(small cell lung cancer)), 위장암(stomach cancer)(위암(gastric cancer)), 방광암(bladder cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁암(uterine cancer), 외음부암(vulvar cancer), 고환 생식세포암(testicular germ cell cancer), 음경암(penile cancer), 백혈병(leukemia)(예: 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia), 골수성 백혈병(myeloid leukemia), 급성 림프모구성 백혈병(acute lymphoblastoid leukaemia) 또는 만성 림프모구성 백혈병(chronic lymphoblastoid leukaemia)), 다발성 골수종(multiple myeloma), 편평 세포암(squamous cell cancer), 고환암(testicular cancer), 식도암(esophageal cancer)(예: 식도위 접합부의 선암종(adenocarcinoma of the esophagogastric junction)), 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 및 중추신경계(central nervous system; CNS) 림프종(lymphoma), 간세포 암종(hepatocellular carcinoma), 비인두암(nasopharyngeal cancer), 메르켈 세포 암종(Merkel cell carcinoma), 중피종(mesothelioma), 갑상선암(thyroid cancer)(예: 미분화 갑상선암(anaplastic thyroid cancer)) 및 육종(sarcoma)(예: 연조직 육종(soft tissue sarcoma))으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 이들 암의 종양은 세포 표면에서 PD-L1을 발현하고/하거나, PD-L1 및/또는 LAG-3을 발현하는 TIL 등의 면역 세포를 포함하는 것으로 공지되어 있거나 예상된다.

항-LAG-3 항체를 사용한 신장 세포암, 폐암(예: 비-소세포 폐암 또는 소세포 폐암), 비인두암, 결장직장암, 흑색종, 위장암(위암), 식도암(예: 식도위 접합부 선암), 난소암, 자궁경부암, 방광암, 두경부암(예: SCCHN), 백혈병(예: 만성 림프구성 백혈병, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종(예: 미만성 거대 B 세포 림프종, 무통성 비호지킨 림프종), 외투 세포 림프종) 및 다발성 골수종의 치료는 임상 시험에서 조사되었고 유망한 결과를 나타냈다. 따라서, 본 발명의 항체 분자를 사용하여 치료되는 암은 두경부암(예: SCCHN), 신장 세포암, 폐암(예: 비-소세포 폐암 또는 소세포 폐암), 비인두암, 결장직장암, 흑색종, 위장암(위암), 식도암(예: 식도위 접합부의 선암종), 난소암, 자궁경부암, 방광암, 백혈병(예: 만성 림프구성 백혈병, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종(예: 미만성 거대 B 세포 림프종, 무통성 비호지킨 림프종), 외피 세포 림프종) 또는 다발성 골수종일 수 있다.

또한, 항-PD-L1 항체를 사용하여 흑색종, 결장직장암, 유방암, 방광암, 신장 세포암, 방광암, 위암, 두경부암(예: SCCHN), 중피종, 폐암(예: 비-소세포 폐암 또는 소세포), 난소암, 메르켈-세포 암종, 췌장암, 흑색종 및 간세포 암종의 치료는 임상 시험에서 조사되었고 유망한 결과를 나타냈다. 따라서, 본 발명의 항체 분자를 사용하여 치료되는 암은 두경부암(예: SCCHN), 흑색종, 결장직장암, 유방암, 방광암, 신장 세포암종, 방광암, 위암, 중피종, 폐암(예: 비-소세포 폐암), 난소암, 메르켈-세포 암종, 췌장암, 흑색종 또는 간세포 암종일 수 있다.

본 발명의 항체 분자를 사용한 치료에 바람직한 암은 두경부암(예: SCCHN), 폐암(예: 비-소세포 폐암), 방광암, 미만성 거대 B 세포 림프종, 위암, 췌장암 및 간세포 암종이다. 이들 암의 종양은, LAG-3 발현 면역 세포를 포함하고, 세포 표면 상에서 PD-L1을 발현하거나 PD-L1을 발현하는 면역 세포를 포함하는 것으로 공지되어 있다.

바람직한 실시형태에서, 암은 두경부 편평 세포 암종(SCCHN), 위암, 식도위 접합부의 선암종(GEJ), 비-소세포 폐암(NSCLC)(예를 들면, 폐 선암종 또는 폐 편평 조직학적 서브타입), 흑색종(예: 피부 피부 흑색종(skin cutaneous melanoma)), 전립선암, 방광암(예: 방광 요로상피암), 유방암(예: 삼중 음성 유방암), 결장직장암(CRC; 예를 들면, 선암종 또는 결장 또는 직장), 신장 세포 암종(RCC), 간세포 암종(HCC), 소세포 폐암(SCLC) 및 메르켈 세포 암종으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

대안의 바람직한 실시형태에서, 암은 갑상선암(thyroid cancer)(바람직하게는 미분화 갑상선암), 육종(바람직하게는 연조직 육종), 다형성 교모세포종(GBM), 육종(예: 역분화 입술육종, 미분화 다형성 육종 및 평활근육종을 포함하는 연조직 육종), 난소암(예: 난소 고/저 악성도의 장액 또는 투명 세포 조직학), 기저 세포 암종, MSI-H 고형 종양, 삼중 음성 유방암(TNBC), 자궁경부암, 식도암(예: 식도위 접합부의 선암종(GEJ) 또는 식도의 편평 세포 암종), 다발성 골수종(MM), 췌장암(예: 췌장 선암종), 수막종(meningioma), 갑상선 암종(thyroid carcinoma), 자궁내막암(endometrial cancer)(예: MSI-H 자궁내막암), 흉선 암종(thymic carcinoma), 임신성 융모성 종양(gestational trophoblastic neoplasia), 림프종(lymphomas)(예: 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL) 또는 말초 T 세포 림프종), 복막 암종(peritoneal carcinomatosis), 미세위성 안정성(microsatellite stable)(MSS) 결장직장암 및 위장관 기질 종양(gastrointestinal stromal tumours; GIST)(예: 절제 불가능 GIST)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 희귀 암이다.

한 가지 바람직한 실시형태에서, 암은 갑상선암, 바람직하게는 미분화 갑상선암이다. 대안의 바람직한 실시형태에서, 암은 육종, 바람직하게는 연조직 육종이다. 최근, 육종 종양 조직 내의 3차 림프 구조(TLS)의 존재가 면역 체크포인트 차단 요법에 대한 반응을 예측할 수 있다는 것이 밝혀졌다[참조: Petitprez et al., 2020].

또 다른 실시형태에서, 치료되는 암은 두경부암(예: SCCHN), 위암, 식도암, NSCLC, 중피종, 자궁경부암, 갑상선암(예: 미분화 갑상선암) 및 육종(예: 연조직 육종)으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.

한 가지 특정 실시형태에서, 치료되는 암은 두경부암, 바람직하게는 두경부 편평 세포 암종(SCCHN), 보다 바람직하게는 구강, 인두, 후두 또는 하인두의 편평 세포 암종이다. 암은 재발하거나 전이될 수 있다. SCCHN 환자의 종양 미소환경에서 T 세포에서의 LAG-3 및 PD-1의 보다 높은 수준의 공-발현은 항-PD-1/PD-L1 약제에 대한 반응성의 결여와 상관관계가 있었고[참조: Hanna et al., 2018], 림프절 상태가 음성인 SCCHN 환자의 TIL에서의 LAG-3 발현은 낮은 생존율의 예후 마커인 것으로 밝혀졌다[참조: Deng et al., 2016]. LAG-3 및 PD-L1 둘 다를 동시에 표적화하는 FS118 등의 이중특이적 항체에 의한 치료는 본원에 제시된 바와 같이 면역 반응을 재활성화할 수 있다. 두경부암(예: SCCHN)은 단독으로 또는 다른 요법(예: 화학요법제)과 병용하여 투여된 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법(FS118 제외)으로 이미 치료를 받았거나 진행하지 않았을 수 있다. 환자는 인간 유두종 바이러스(HPV)에 대해 양성 또는 음성일 수 있다. 일 실시형태에서, 환자는 모두 HPV에 대해 양성이다. 대안의 실시형태에서, 환자는 모두 HPV에 대해 음성이다.

또 다른 실시형태에서, 치료되는 암은 높은 수준의 LAG-3을 발현하는 것으로 공지되어 있는 위암이다[참조: Morgado et al., 2018]. 위암은 단독으로 또는 다른 요법(예: 화학요법제)과 함께 투여된 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법(FS118 제외)으로 이미 치료를 받았을 수도 있고 진행하지 않았을 수도 있다. 추가 실시형태에서, 치료되는 암은 NSCLC, 바람직하게는 IV기 편평 상피암 및/또는 III기 NSCLC이다. NSCLC는 단독으로 또는 다른 요법(예: 화학요법제)과 함께 투여된 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법(FS118 제외)으로 이미 치료를 받았고 진행되었을 수 있다. 추가 실시형태에서, 치료되는 암은 SCLC, 바람직하게는 확장기 SCLC이다. SCLC는 단독으로 또는 다른 요법(예: 화학요법제)과 함께 투여된 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법(FS118 제외)으로 이미 치료를 받았고 진행되었을 수 있다. 또 다른 추가 실시형태에서, 치료되는 암은 난소암이다. 난소암은 백금 불응성일 수 있고/있거나, 단독으로 또는 다른 요법(예: 화학요법제)과 함께 투여된 면역요법(예: 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법(FS118 제외))으로 이전에 치료를 받았거나 받지 않았을 수 있다.

본 출원이 유방암 등의 특정 유형의 암을 언급하는 경우, 이는 관련 조직(이 경우 유방 조직)의 악성 형질전환을 지칭한다. 다른 조직(예: 난소 조직)의 악성 형질전환으로 인해 발생하는 암은 유방 등의 신체의 다른 장소에서 전이성 병변을 초래할 수 있지만, 이에 의해 본원에서 언급되는 유방암이 아니라 난소암이다.

본 발명에 따라 치료되는 암은 원발성 암일 수 있다. 또는, 암은 전이성 암일 수 있다.

투여 경로

FS118은 바람직하게는 정맥내 주사에 의해 환자에게 투여된다. 예를 들면, FS118은, 예를 들면, 연속 수액 펌프를 사용하여 정맥내 볼루스 주사 또는 정맥내 주입에 의해 환자에게 투여될 수 있다. 정맥내 주입은 최대 2400㎍의 용량에서는 30분에 걸쳐, 2400㎍ 이상의 용량에서는 60분에 걸쳐 연속 주입 펌프를 사용하여 수행할 수 있다. 이러한 투여 유형은 I상 연구(실시예 2)에서 FS118에 성공적으로 사용되었다.

제형

치료적 사용의 경우, FS118 항체는 약제학적으로 허용되고 정맥내 투여 등의 선택된 투여 경로에 의해 FS118 항체를 전달하기에 적합한 담체와 함께 제형화된다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체는 희석제 및 부형제 등의 항체 분자의 정맥내 투여에 통상 사용되는 것들이다. 치료적 사용을 위한 약학적으로 허용되는 담체는 약학 분야에 공지되어 있고, 예를 들면, 문헌[참조: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co.(A. R. Gennaro edit. 1985)]에 기재되어 있다.

병용 치료

본원에 개시된 바와 같은 암을 치료하는 방법은 단독으로 또는 다른 치료와 조합하여 환자에게 FS118 항체를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들면, FS118 항체는, 치료되는 암에 따라, 동시에, 또는 순차적으로, 또는 다른 치료제(들)와의 조합 제제로서 투여될 수 있다. 예를 들면, FS118 항체는 치료되는 암에 대해 공지된 치료제와 조합하여 투여될 수 있다. 예를 들면, FS118 항체는, 화학요법, 항종양 백신접종(암 백신접종으로도 지칭됨), 방사선요법, 면역요법, 종양용해성 바이러스, 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포 요법 또는 호르몬 요법 등의 제2 항암 요법과 조합하여 환자에게 투여될 수 있다.

FS118 항체는 화학요법, 항종양 백신, 방사선요법 등의 항암 요법의 보조제로서 기능할 것으로 기대된다. 이론에 구속되지 않고, 화학요법, 항종양 백신 또는 방사선요법과 조합하여 환자에게 FS118 항체를 투여하면, 화학요법, 항종양 백신 접종 또는 방사선요법 단독에 의해 달성되는 것보다, 종양-관련 항원에 대해 보다 큰 면역 반응을 유발할 것으로 생각된다.

따라서, 환자에서 암을 치료하는 방법은 화학요법제, 항종양 백신, 방사성핵종, 면역요법제, 종양용해성 바이러스, CAR-T 세포 또는 호르몬 요법용 약제와 조합하여 치료학적 유효량의 FS118 항체를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 화학요법제, 항종양 백신, 방사성핵종, 면역치료제, 종양용해성 바이러스, CAR-T 세포, 또는 호르몬 요법용 약제는 바람직하게는 해당 암을 위한 화학요법제, 항종양 백신, 방사성핵종, 면역치료제, 종양용해성 바이러스, CAR-T 세포, 또는 호르몬 요법용 약제, 즉 해당 암의 치료에 효과적인 것으로 밝혀진 화학요법제, 항종양 백신, 방사성핵종, 면역요법제, 종양용해성 바이러스, CAR-T 세포 또는 호르몬 요법용 약제이다. 해당 암에 효과적인 것으로 밝혀진 적합한 화학요법제, 항종양 백신, 방사성핵종, 면역요법제, 종양용해성 바이러스, CAR-T 세포 또는 호르몬 요법용 약제의 선택은 숙련된 실무자의 능력 범위 내에 있다.

예를 들면, 이 방법이 화학요법제와 조합하여 치료 유효량의 FS118 항체를 환자에게 투여하는 것을 포함하는 경우, 화학요법제는 탁산, 세포독성 항생제, 티로신 키나제 억제제, PARP 억제제, B_RAF 효소 억제제, HDAC 억제제, mTOR 억제제, 알킬화제, 백금 유사체, 뉴클레오시드 유사체, 탈리도마이드 유도체, 항종양 화학요법제 등으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 탁산은 도세탁셀, 파클리탁셀 및 냅-파클리탁셀을 포함하고; 세포독성 항생제는 악티노마이신, 블레오마이신, 안트라사이클린, 독소루비신 및 발루비신을 포함하고; 티로신 키나제 억제제는 에를로티닙, 제피티닙, 오시머티닙, 아파티닙, 악시티닙, PLX3397, 이마티닙, 코비미티닙, 트라메티닙, 렌바티닙, 카보잔티닙, 안로티닙, 소라페닙, 세디라닙, 레고라프리닙, 시트라바티닙, 파조피닙 및 데팍티닙을 포함하고, PARP 억제제는 니라파립, 올라파립, 루카파립 및 벨리파립을 포함하고; B-Raf 효소 억제제는 베무라페닙 및 다브라페닙을 포함하고; 알킬화제는 다카바진, 사이클로포스파미드, 테모졸로미드를 포함하고; 백금 유사체는 카보플라틴, 시스플라틴 및 옥살리플라틴을 포함하고; 뉴클레오시드 유사체는 젬시타빈 및 아자시티딘을 포함하고; 항종양제는 플루다라빈을 포함한다. HDAC 억제제는 엔티노스타트(entinostat), 파노비노스타트(panobinostat) 및 바리노스타트(varinostat)를 포함하고; mTOR 억제제는 에베롤리무스 및 시롤리무스를 포함한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 다른 화학요법제는 메토트렉세이트, 페메트렉세드, 카페시타빈, 에리불린, 이리노테칸, 플루오로우라실 및 빈블라스틴이 포함된다.

암 치료를 위한 백신접종 전략은 클리닉에서 시행되고, 과학 문헌[참조: Rosenberg, S. 2000 Development of Cancer Vaccines]에서 상세히 논의되어 있다. 이는 주로, 과립구-마크로파지 콜로니-자극 인자(GM-CSF)의 존재 또는 부재하에, 백신접종 방법으로서 이들 세포를 사용함으로써, 자가 또는 동종의 암 세포에 의해 발현되는 다양한 세포 마커에 반응하도록 면역계를 촉진하는 전략을 포함한다. GM-CSF는 항원 제시에서 강력한 반응을 유발하고, 상기 전략으로 사용되는 경우에 특히 양호하게 작동한다.

본 발명의 추가 태양 및 실시형태는 하기 실험적 예시를 포함하는 본 개시를 제공한 당업자에게 명백할 것이다.

본 명세서에 언급된 모든 문서는 참조에 의해 그 전체가 본원에 도입된다.

본원에서 사용된 "및/또는"은, 다른 것과 함께 또는 다른 것 없이, 2개의 특정의 특징 또는 구성요소 각각의 특정의 개시로서 해석되어야 한다. 예를 들면, "A 및/또는 B"는 각각이 본원에서 개별적으로 제시된 바와 같이 (i) A, (ii) B 및 (iii) A 및 B 각각의 특정의 개시로 해석되어야 한다.

문맥이 달리 지시하지 않는 한, 상기 설명된 특징의 설명 및 정의는 본 발명의 임의의 특정 태양 또는 실시형태로 한정되지 않고, 기재되는 모든 태양 및 실시형태에 동등하게 적용된다.

본 발명의 다른 태양 및 실시형태는, 문맥이 달리 지시하지 않는 한, 용어 "포함하는"을 "이루어진" 또는 "본질적으로 이루어진"이라는 용어로 치환하여 상기 제시된 태양 및 실시형태를 제공한다.

본 발명의 특정 태양 및 실시형태는, 예로서, 상기 설명된 도면을 참조하여 설명될 것이다.

실시예

실시예 1: FS118에 대한 인간 최초( FIH ) 용량 정당화 및 용량 증량 전략

FS118은 2개의 면역 체크포인트 단백질인 LAG-3 및 PD-L1을 동시에 표적화하는 이중특이적 항체 분자이다. FS118은 항-PD-L1 항체 등의 단일특이적 면역 체크포인트 억제제와는 다수의 중요한 점에서 상이한 것으로 나타났다. 이러한 차이로 인해, 인간 환자에서 FS118의 I상 연구에 적절한 투여량을 결정하기 위한 상세한 분석이 필요했다. 구체적으로, FS118을 시험관내 및 생체내 연구에서 시험하여, 진행된 또는 이전 PD-1/PD-L1 함유 요법 후에 진행성 악성종양 환자에서 FS118의 안전성, 내약성, 약물동태 및 활성을 결정하기 위해 설계된 I상 인간 연구를 위한 최적의 개시 용량 및 용량 증량 전략을 결정했다(하기 실시예 2 참조).

1.1 FS118 및 mLAG -3/PD-L1: 비-임상 연구의 개요

비-임상 연구에는, C57/BL6 야생형(wild type) wt 마우스, LAG-3 녹아웃(KO) 마우스(실시예 1.3.1.1 참조) 및 임상 후보 FS118을 갖는 비인간 영장류(NHP; 사이노몰구스 원숭이)에서의 PK 연구가 포함되었다. NHP 연구에는 단일 용량 PK 연구(실시예 1.3.2.1 참조), 항-약물 항체(ADA) 및 가용성 PD-L1(실시예 1.3.2.2 참조)의 정량화를 포함하는 용량 범위 소견 독성 연구, 및 유사한 정량화 파라미터를 갖는 GLP(Good Laboratory Practice) 독성 연구(실시예 1.3.2.3 참조)가 포함되었다.

마우스에서의 연구와 관련하여, FS118은 hLAG-3 및 hPD-L1과 비교하여 각각 mLAG-3 및 mPD-L1에 결합하는 능력이 감소했다. 결과적으로, 생체내 PK 연구는 또한, C57/BL6 배경의 C57/BL6 wt 마우스 및 LAG-3 녹-아웃 마우스에서 대리 마우스 mAb² 이중특이적 항체(mLAG-3/PD-L1[LALA 돌연변이를 갖는 FS18-7-108-29/S1])로 수행되었다(실시예 1.3.1.2 참조). 이 마우스 대리 mAb²는, FS118과 비교하여 보다 높은 친화성으로 각각의 마우스 표적 단백질에 결합한다. 약리학 연구의 일부로서, 마우스 대리 mAb²는 또한 마우스 MC38 동계 종양 모델에서 사용되었고, 분자의 PK 및 효능을 평가하기 위해 투여 기간 동안 선택된 시간에 노출 데이터가 수집되었다(실시예 1.3.1.3 참조).

이 연구의 결과는 NHP PK 모델의 개발(실시예 1.5.1 참조) 및 최고 비-중독성 용량(HNSTD, 실시예 1.5.2 참조)의 결정에 반영되었고, 이는 또한 FIH 개시 용량의 정당화를 유도했다(실시예 1.5.3 참조).

1.2 방법

1.2.1 FS118의 약물동태(PK)를 이해하기 위한, 마우스 및 NHP에서 혈청/혈장 FS118 및 혈청 mLAG-3/PD-L1의 측정

마우스 PK 연구에서는, 혈청 FS118 및 mLAG-3/PD-L1이 제조업체의 지시에 따라 메소스케일 디스커버리(MSD) 인간 IgG 키트(MSD 키트 K150JLD-2)를 사용하여 검출되었고; 따라서, PK 검정은 "총" FS118를 측정하는 것으로 예상되었고, 즉 sLAG-3 또는 sPD-L1에 대한 임의의 결합에 관계없이 측정할 것으로 예상되었다.

초기 단일 용량 NHP 연구(실시예 1.3.2.1 참조)에서는, 혈청 FS118을 검출하기 위해, 맞춤형 전기화학발광(ECL) 메소스케일 디스커버리(Mesoscale Discovery; MSD) 면역검정이 개발되었다. 요약하면, MSD 96-웰 플레이트(MSD #L15XB)는 FS118(Abcam # ab124055)을 포획하기 위해 항-인간 Fc mAb로 코팅하고, 실온에서 2시간 동안 MSD 차단제 A로 차단했다. 혈청 샘플을 MSD 희석제로 1:10 희석하고, 웰에 첨가하고, 진탕하면서 실온에서 2시간 동안 인큐베이팅한 후, 플레이트를 포스페이트 완충 식염수 + 0.05% 트윈으로 3회 세척했다. 이어서, 결합된 FS118을 검출하기 위해, 플레이트를 설포-태그된 항-인간 IgG와 함께 실온에서 2시간 동안 인큐베이팅하고, 이전 단계에서와 같이 세척하고, 2× MSD 판독 완충액을 사용하여 검출했다. 판독치는 50㎍/mL에서 개시하는 12개의 FS118 농도의 표준 곡선을 사용하여 보정되었다.

이어서, NHP에서의 반복 투여 연구(실시예 1.3.2.2 및 1.3.2.3 참조)에서는 혈장 FS118의 검출에 맞춤형 LAG-3 포획/PD-L1 검출 포맷을 사용했다. 예비 DRF 독성학 연구는 ECL MSD 면역검정을 사용하여 적격 PK 검정으로 분석되었다. 표준 및 샘플을, 포획 시약으로서 재조합 인간 LAG-3 Fc 키메라(R&D #2319-L3)로 사전 코팅된 MSD 미세역가 플레이트의 적절한 웰에 첨가했다. 세척 단계 후, 비오티닐화된 재조합 인간 PD-L1 Fc 융합 단백질(BPS, #71105)을 각 웰에 첨가하고, 인큐베이팅했다. 추가 세척 단계 후, 설포 태그된 스트렙트아비딘 검출 시약(MSD, #R32AD)을 첨가하고, 인큐베이팅했다. 또 다른 세척 단계 후, MSD 판독 용액을 첨가하고, FS118의 존재를 검출하기 위해 ECL을 측정했다. GLP(Good Laboratory Practice) 독성 연구에서는, 혈장 FS118 수준은, 비오틴화된 LAG-3 포획 및 알렉사 플루오르(Alexa Fluor®) 647-표지 PD-L1 검출을 갖는 검증된 Gyros 면역검정 플랫폼(Gyrolab)을 사용하여 측정했다. 간단히 말해서, 샘플을 Rexxip H 완충제에서 1:10으로 희석하고, 플레이트에 첨가한 다음, Gyrolab xP 워크스테이션에 로딩했다. FS118은 형광 발광에 의해 검출되었다. 표준 곡선은 Gyrolab Evaluator 소프트웨어에서 가중치 계수(1/Y²)로서 응답을 갖는 4개 파라미터 로지스틱 곡선을 사용하여 회귀되었다. 검증된 검정의 LLOQ는 39.1ng/mL이었다.

1.2.2 NHP에서 혈장 항-FS118 항체(ADA)의 측정

FS118에 반응하는 항체의 존재는, NHP 용량 범위 소견(DRF) 및 4주간 우량 실험실 기준(4주간 GLP) 독성 연구(각각 실시예 1.3.2.2 및 1.3.2.3 참조)에서 표준 전기화학적 발광 브리징 포맷을 사용하여 측정되었다. 약물 간섭을 제한하기 위해, 비오틴화된 FS118 및 설포 태그된 FS118을 산 해리된 샘플과 함께 인큐베이팅하고, 표지된 ADA 복합체를 스트렙트아비딘 플레이트에 고정화한 다음, 세척 및 후속 검출을 수행했다. 분석 감도는 폴리클로날 래빗 양성 대조군 항-FS118 항체에 대해 75ng/mL이었고, 96.5㎍/mL FS118의 존재하에서 150ng/mL의 양성 대조군을 검출할 수 있었다.

1.2.3 혈장 총 가용성 PD-L1( sPD -L1)의 측정

FS118 투여 후의 총 sPD-L1의 변화는, 퀀티킨(Quantikine®) 인간/시아노몰구스 원숭이 B7-H1/PD-L1 면역검정(R&D Systems # DB7H10)을 사용하여 제조업체의 프로토콜에 따라 NHP DRF 및 4주 GLP 독성 연구에서 정량화되었다(각각 실시예 1.3.2.2 및 1.3.2.3 참조). 이 검정에서, FS118은 Fc-표지된 PD-L1의 검출을 방해했지만, 내인성 PD-L1의 검출을 방해하는 것으로 나타나지 않았고, 따라서 검정은 총 PD-L1(즉, 유리 PD-L1 및 FS118-PD-L1 복합체)를 측정하는 것으로 상정되었다. 이 검정에서 검증된 LLOQ는 25pg/mL이다.

1.3 동물의 약물동태 및 약력학

1.3.1 마우스

1.3.1.1 wt 및 LAG-3 녹-아웃 마우스에서 FS118 PK

FS118은 mLAG-3에 결합하지만(hLAG-3와 비교하여 친화성이 낮음), mPD-L1에 결합하지 않고, 어느 표적에 대해서도 기능적 활성이 없었다. FS118은 C57/BL6 wt 마우스에서 정상 IgG 동태를 나타냈고, 이소형 대조군 항체에 필적했다(표 1). FS118은 LAG-3 KO 마우스에게도 투여되었고, 이들 동물에서 FS118은 정상 IgG 동태를 나타냈다(표 1).

wt 및 LAG-3 KO 마우스의 FS118 PK

연구	C57/BL6 wt 마우스				연구	LAG-3 KO 마우스
	용량 (mg/kg)	경로	Cmax (㎍/mL)	AUC(0-6) (h.㎍/mL)		용량 (mg/kg)	경로	Cmax (㎍/mL)	AUC(0-6) (h.㎍/mL)
MK033	10	iv	153 [99.9, 233]	13,050	MK028	10	iv	279 [256, 324]	12,180
					MK033	10	iv	154 [95.1, 248]	11,420
AUC(0-6) - 투여(단일 용량) 후의 AUC 0-6일 값은 평균 [95% CI)이고, n = 용량 그룹당 최대 3 공급원 데이터: [F-Star 연구 리포트 FS118_Pharm_015]

1.3.1.2 wt 및 LAG-3 녹아웃 마우스에서 mLAG-3/PD-L1 mAb² PK

FS118과는 대조적으로, 마우스 대리 mAb²(mLAG-3/PD-L1)는 wt 마우스의 혈청에서 보다 신속하게 클리어되었다(표 2). wt 마우스에게 단일 투여 후, 마우스 대리 mAb²의 PK 특성을 항-PD-L1 mAb(동일한 IgG1 프레임워크, 동일한 Fab PD-L1 결합 모이어티)와 비교했다. 동일한 PD-L1 결합 에피토프에도 불구하고, mAb² 작제물의 클리어런스 속도는 mAb의 클리어런스 속도보다 높았다(도 3B). 초기, 이는 항 PD-L1 mAb가 동일한 클리어런스 속도를 나타내지 않았기 때문에, mLAG-3 표적 결합이 마우스 대리 mAb²의 클리어런스 속도에 관여할 수 있음을 시사했다(도 3B). 그러나, LAG-3 KO 마우스를 사용한 후속 연구에서, 마우스 대리 mAb²는 이전에 관찰된 클리어런스 속도를 계속 나타냈고(표 2), 처음에는 이 프로세스가 mAb² 포맷과 조합하여 PD-L1 결합에 의해 촉진될 가능성이 가장 높은 것을 시사했다. 그러나, 이 현상은 다른 mAb²에서는 관찰되지 않았고, 이는 mAb² 포맷 자체가 원인은 아님을 나타낸다. 따라서, 대리 mAb² 클리어런스는, 항-PD-L1 mAb와 비교하여, PD-L1 결합과 CH3 도메인의 허용 잔기의 표적 특이적 변화의 조합에 기인하는 것 같다.

또한, 항-PD-L1 mAb와 비교하여 마우스 대리 mAb²의 보다 높은 클리어런스 속도에도 불구하고, 양 작제물 모두는 MC38 동계 종양 모델에서 유의한 항종양 반응을 달성했음이 주목되고(도 3A), 이는, 관찰된 클리어런스 속도가 장기간의 약력학적 효과와 단절된 것으로 보이고 항종양 효능을 배제하지 않음을 입증한다.

wt 및 LAG-3 KO 마우스의 mLAG-3/PD-L1 mAb² PK

연구	C57/BL6 wt 마우스				연구	LAG-3 KO 마우스
	용량 (mg/kg)	경로	Cmax (㎍/mL)	AUC(0-6) (h.㎍/mL)		용량 (mg/kg)	경로	Cmax (㎍/mL)	AUC(0-6) (h.㎍/mL)
MK033	10	iv	82.9 [61.1, 113]	1,340	MK028	10	iv	157 [98.1, 250]	1,700
					MK032	10	iv	92.8 [91.8, 93.9]	1,150
					MK033	10		88.2 [49.3, 158]	1,090
AUC(0-6) - 투여(단일 용량) 0-6일 후의 AUC 값은 평균 [95% CI)이고, n = 용량 그룹당 최대 3 공급원 데이터: [F-Star 연구 리포트 FS118_Pharm_015]

1.3.1.3. MC38 종양 모델에서 mLAG-3/PD-L1 mAb² PK

10-11주령이고 체중이 17.73-21.23g(평균 19.49g)인 암컷 C57/BL6 마우스(The Jackson Laboratory(Street Bar Harbor, ME, USA))에, 동물의 우측 어깨 바로 아래의 피하 공간에 1×10⁶ MC38 마우스 결장암 세포(National Cancer Institute(Bethesda, MD, USA))를 접종했다. 접종 8일 후(연구일 0), 접종된 동물 중 60마리는, 종양 크기(평균 종양 용적은 약 55.6mm³(2.1%의 변동성))를 기반으로 하는 정합 쌍 분포 방법을 사용하여 12마리의 6개 그룹으로 랜덤화하고, 치료를 개시했다. 각 그룹의 동물은, 200μL/동물의 고정 용적으로 FS18m-108-29AA/S1(0.40, 0.20, 0.06 또는 0.02mg/동물, 대략 20, 10, 3 및 1mg/kg에 상당) 또는 음성 대조군 항체 G1AA/4420(0.20mg/동물, 대략 10mg/kg에 상당)에 의한 복강내(ip) 치료를 제공받았다. 각각의 3개 용량이 투여되었다(연구일 0, 3 및 6). FS18m-108-29AA/S1을 제형 완충액에서 희석하고, G1AA/4420을 둘베코 인산염 완충 식염수에서 희석했다. 모든 종양 측정값은 동일한 휴대용 캘리퍼(Fowler Ultra-Cal V 전자 캘리퍼)로 취득했다. 종양 치수(길이 및 너비)는 제1 치료일(연구일 0)에 모든 동물에 대해 측정되고, 이어서 연구일 53일까지 주 2회(즉, 주당 2회) 측정되었다. 종양 용적은 하기 방정식을 사용하여 계산되었다. 종양 용적(mm³) = 길이 × 너비² × π /6.

혈청 샘플은, 제1 투여의 1시간 전, 및 제1 투여의 71h, 143h, 148h, 152h, 168h, 192h, 240h 및 288h 후에 최종 심장 출혈을 통해 채취했다. 용량은 0h, 71h 및 143h에 투여되었다. 샘플은 -80℃에서 보관되었고, 분석을 위해 드라이아이스로 선적되었다. 혈청 대리 mAb² 농도는 용량당 정량화되었다: C_trough 및 C_max 수준 및 AUC는 표 3에 제시되어 있다. 제2 및 최후 투여 전의 최저(trough) 농도는 대폭 감소하고, ADA 반응을 나타낸다.

MC38 종양 모델에서 mLAG-3/PD-L1 mAb² PK

연구	모델	용량 (mg/kg)	경로	Ctrough(1) (㎍/mL)	Ctrough(2) (㎍/mL)	Ctrough(3) (㎍/mL)	Cmax (㎍/mL)	D1 AUC(0-3) (h.㎍/mL)	D3 AUC(0-3) (h.㎍/mL)
MK029	MC38	1	ip	-	0.1 [0.05, 0.23]	0.2 [0.05, 0.79]	3.41 [0.26, 44.6]	-	47.5
		3	ip	0.81 [0.06, 10.6]	0.37 [0.23, 0.60]	0.23 [0.01, 5.60]	6.1 [1.18, 31.5]	-	56.9
		10	ip	2.91 [0.60, 14.2]	0.49 [0.29, 0.86]	0.25 [0.41, 0.15]	5.46 [3.28, 9.08]	-	44.9
		20	ip	20.1 [11.9, 33.9]	1.26 [0.51, 3.07]	0.22 [0.20, 0.24]	18.03 [12.6, 25.9]	-	147.6
Ctrough (1) - 투여 1 후, 제2 투여 직전의 최저 농도 Ctrough (2) - 투여 2 후, 최종 투여 직전의 최저 농도 Ctrough (3) - 투여 3 후, 최종 투여 72시간 후의 최저 농도 D3 Cmax - 최후 투여 후의 최대 관찰 농도 D3 AUC(0-3) - 제3 (즉, 최후) 투여 0-3일 후의 AUC 공급원 데이터: [F-Star 연구 리포트 FS118_Pharm_012] 값은 평균 [95% CI]이다.

투여 기간 동안 이러한 명백한 노출 감소에도 불구하고, 시험된 모든 용량에서 현저한 종양 축소가 관찰되었고, G1AA/4420과 비교하여 혼합 모델 분석(p≤0.05)을 사용하여, 3, 10 및 20mg/kg FS18m-108-29AA/S1의 용량에서 관찰된 연구의 전체 기간에 걸쳐 종양 성장 속도의 유의한 억제가 관찰되었다(도 4). 연구 17일차에 종양 크기의 비교는, 일원 배치 분산 분석(One-Way Analysis of Variance; ANOVA)를 사용하여, 이소형 대조군(G1AA/4420)과 FS18m-108-29AA/S1 치료 그룹 사이에서 구체적으로 수행되었고; 터키(Tukey)의 다중 비교 검정을 사용하여, 모든 용량 그룹(1, 3, 10 및 20mg/kg)에서의 FS18m-108-29AA/S1 치료 후의 종양 크기는 이소형 대조군과 비교하여 유의적으로 감소한 것으로 나타났다(p<0.05). 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 생존 분석은, FS18m-108-29AA/S1 mAb2가 3, 10 또는 20mg/kg으로 투여된 경우, MC38 동계 모델의 이소형 대조군과 비교하여 통계적으로 유의한 생존 이점을 유도함을 나타냈다. 최후 투여 후에 관찰된 C_max 및 AUC(0-3일)는 매우 가변적이었고, 이 연구로부터 용량-비례성과 관련하여 결정적 결론을 도출하는 것은 불가능했다.

전체적으로, 이러한 데이터는, 마우스 대리 mAb² ≥ 6㎍/mL(C_max, 최종 용량, 3mg/kg)에 대한 노출(C_max)이 항종양 효능에 필요하고, 이 노출 수준이 전체 투여 기간에 걸쳐 유지될 필요가 없음을 시사한다. wt 마우스에서, 마우스 대리 mAb²의 단일 10mg/kg 투여 후의 평균 C_max는 82.9㎍/mL이었고(표 2); 용량 비례성을 가정하면, 3mg/kg 용량에서 25㎍/mL에 상당한다. ADA 형성의 가능한 영향으로 인해, 이러한 보다 높은 C_max는 MC38 종양 보유 마우스에서 3mg/kg 용량으로 최초 투여한 후에 달성되었을 가능성이 있다.

1.3.2 비-인간 영장류

NHP에서 FS118의 약물동태-약력학적 거동은, 3개의 개별 연구에서 특성화되었다: (i) 단일 투여(4mg/kg) PK 연구, (ii) 비-GLP DRF 연구(4주 동안 주 1회의 정맥내 용량 10, 50 및 200mg/kg)에서 FS118의 정맥내 투여, 및 (iii) 4주간 GLP 독성 연구(60 및 200mg/kg)에서 주 2회 정맥내 투여.

FS118의 클리어런스 속도는, NHP의 인간 IgG-유사 분자에 대해 예상된 것보다 높았고, 클리어런스 속도는 최대 200mg/kg의 용량에서 전형적 "표적-매개" 거동(즉, 높은 노출 수준에서 표적-매개 제거의 포화)을 나타내지 않았다. 전체적으로, NHP 연구에서, 4 내지 200mg/kg의 용량 범위에 걸쳐 제1 투여 후에 C_max는 대략적인 용량에 비례하여 증가했고, 제1 투여 후의 제1 투여 간격 및 정상 상태에서의 AUC는 약간 과-비례하여 증가했다. 시험된 모든 용량 수준에서 PK 프로파일은 선형 PK 모델에 의해 적절하게 기재되었고, 이는 주 2회 제공되는 최대 200mg/kg의 용량에서 클리어런스 프로세스가 포화되지 않았음을 나타낸다.

1.3.2.1 FS118 단일 투여 PK

이 싱글 i.v. 용량 연구에서, 4mg/kg FS118의 클리어런스를 항-hPD-L1 mAb의 단일 정맥내 투여와 비교했다. 이 항-hPD-L1 mAb는, FS118과 비교하여 동일한 인간 IgG1 프레임워크 및 상이한 항-PD-L1 Fab 결합 모이어티(클론 S1)를 갖고 있음에 주의한다. 항-hPD-L1 mAb는 투여 후 최초 7일 동안 전형적 IgG 동태를 나타내고, 이어서 ADA 반응을 나타내는 급격한 노출 손실을 나타냈고; 대조적으로, FS118은 현저하게 신속한 클리어런스를 나타냈다. FS118 및 항-hPD-L1 mAb는 모두 PD-L1에 결합하지만, 결합 에피토프의 유사성은 불명이다. 이 현상은 다른 mAb²에서는 관찰되지 않고, 이는 mAb² 포맷 자체가 원인은 아니라는 것을 나타낸다. 대신, FS118의 CH3 도메인 및/또는 LAG-3 결합의 허용 잔기의 표적화된 변화가 항-hPD-L1 mAb와 비교하여 FS118의 보다 높은 클리어런스 속도의 원인인 것으로 보인다.

1.3.2.2 FS118 용량 범위 소견(DRF) 연구

DRF 연구(4주 동안 10, 50 및 200mg/kg의 주 1회 정맥내 투여)에서, 혈장 FS118 및 혈장 ADA의 측정을 각각 실시예 1.2.1 및 1.2.2에 제시된 바와 같이 수행했다. FS118(AUC)에 대한 노출은 최후 투여 후에 감소했고; 이것은 10mg/kg의 용량 그룹에서 특히 명백했고, 면역 반응을 나타내고, ADA의 존재에 의해 확인되었다. 이 면역 반응으로 인해, DRF 연구에서, FS118에 대한 노출은, 10 및 50mg/kg 용량 그룹에서의 투여 간격 전체에 걸쳐, 또는 200mg/kg 용량 그룹의 1/3 동물에서 유지되지 않았다. 이 현상은, NHP 모델에서 인간 IgG에 대한 면역원성 반응이 예상되기 때문에, NHP에 투여된 인간 IgG에서는 비정상적이지 않다.

1.3.2.3 FS118 4주 GLP 독성 연구

50mg/kg/wk 미만의 반복 투여 후에 노출의 유지가 달성될 가능성이 낮기 때문에, FS118은 i.v. 4주간의 GLP 독성 연구에서 주 2회 60 및 200mg/kg으로 투여했다. 4주간의 GLP 독성 연구에서 치료된 모든 동물은 ADA 반응을 나타냈지만, FS118 노출에 대한 영향은 거의 없었고, 예측된 임상 노출과 비교하여 적절한 노출 마진이 유지되었다.

주 2회의 투여를 반복한 후, FS118의 유의한 축적은 없었고, FS118의 PK에 대한 성별의 영향도 없었다.

1.3.2.4 총 가용성 PD-L1(sPD-L1)

총 sPD-L1의 혈장 수준은 실시예 1.2.3에 제시된 바와 같이 DRF 및 4주간의 GLP 독성 연구에서 측정되었다. sPD-L1-FS118 복합체의 클리어런스가 sPD-L1의 클리어런스보다 느린 경우, sPD-L1의 포획은 표적의 관여를 나타내고, 이는 혈장에서 sPD-L1-FS118 복합체의 수준의 증가를 유도한다. 막 결합 PD-L1이 주요 표적이지만, 전신 sPD-L1 전체의 증가는 표적 포화의 잠재적 바이오마커일 수 있다.

10 내지 200mg/kg 범위의 용량에서 FS118을 투여한 후, 24시간 이내에 혈장 총 sPD-L1의 ≥10배 증가가 관찰되었다. DRF 연구에서, 3개 용량 그룹 모두에서 제1 용량의 0-96시간 후에 총 sPD-L1가 증가하는 유사한 궤적이 있었고; 200mg/kg 투여 그룹에 대해서만, 제1 투여 간격에서 총 sPD-L1이 지속적으로 증가했다. 이 연구에서, FS118에 대한 ADA의 존재에 의해, 제1 투여 후 7일 이후 총 sPD-L1 증가에 대한 추가 분석이 손상되었다. 4주간의 GLP 독성 연구에서 달성된 보다 높은 노출 수준에서, 총 sPD-L1 포획의 평균은, 특히 200mg/kg 용량 그룹에서, 동물 사이의 변동성이 컸고, 연구 기간 중에 계속 증가했다. 안정기(최대 표적 포획을 나타냄)은, 주 2회 60 또는 200mg/kg로 치료한 후 2 내지 4주까지 관찰되지 않았다. 높은 변동성을 감안하면, 이 연구에서 최대 표적 포획이 달성되었다는 결론을 내릴 수 없었다. 그러나, 예상된 바와 같이, 회복 동물에서 FS118 노출의 상실은 FS118 농도가 10㎍/mL를 하회했을 때에, sPD-L1 포획 상실과 명백히 관련되었다. 60mg/kg 투여 그룹의 일부 동물에서 연구 22일차에 FS118 노출의 일시적 감소와는 별도로, 혈장 FS118은 60mg/kg 및 200mg/kg 용량 그룹 모두에서 투여 기간에 걸쳐 10㎍/mL 이상으로 유지되었고, 이는 PD-L1 억제도 이 기간 중에 유지되었음을 의미한다.

몰 기준으로 표현된 경우, 혈장 sPD-L1-FS118 복합체(즉, 총 sPD-L1)는 총 FS118 농도의 일부일 뿐이라는 것에 주의해야 한다. 예를 들면, 주 2회 200mg/kg을 반복 투여한 후의 평균 FS118 최저 농도는 220㎍/mL(1.5μM)이고; 동일한 시점에서 평균 총 sPD-L1 농도는 약 5ng/mL(0.2nM)이다. 결과적으로, 전신 FS118-PD-L1 복합체는 FS118의 클리어런스 속도에 관여할 수 없다.

결론적으로, FS118의 모든 용량 수준에서 총 sPD-L1의 급속한 증가가 관찰되었고, 증가율은 모든 용량 수준에서 유사했다. 최대 표적 포획이 달성되었는지의 여부와 관련하여, 결정적 결론을 도출할 수 없다. 그러나, 표적 관여는 10mg/kg FS118 이상에서 포화되었을 가능성이 있다. 총 SPD-L1 값은 회복 기간의 말기까지 기준선으로 반환된다. 동물의 혈장에서 10㎍/mL 이상의 FS118 역치는 지속적으로 증가된 총 sPD-L1 수준과 관련되어 있다.

1.4 FS118 및 mLAG -3/PD-L1의 클리어런스 조사

전체적으로, 이용가능한 PK 데이터는, wt 및 LAG-3 KO 마우스에서 mLAG-3/PD-L1 mAb²의 클리어런스 속도가 주로 LAG-3에 대한 결합을 가능하게 하는 CH3 도메인에서 기능적 PD-L1과 허용 잔기의 표적-특이적 변화의 조합의 결과임을 시사했다. NHP에서 관찰된 FS118의 클리어런스 속도는 동일한 메커니즘에 의해 유도되었을 가능성이 가장 높지만, NHP 및 인간(마우스와 비교하여)에서 보다 높은 친화성 LAG-3 결합으로부터의 기여를 배제할 수 없다.

이 클리어런스 속도에 기여할 수 있는 추가 요인이 조사되었고, 하기에 요약되어 있다:

· FS118은 FcRn에 대해 예상되는 pH 감수성 결합 특성을 나타내고, 이는 LAG-3에 대한 결합에 의해 영향을 받지 않았다.

· NHP 및 인간 조직에서 FS118을 사용한 조직 교차 반응성 연구는 FS118의 관찰된 클리어런스를 설명할 수 있는 오프-표적 결합을 나타내지 않았다. 또한, FS118은 밀접하게 관련된 표적에 대한 어떠한 결합도 나타내지 않았다.

· FS118은, 37℃에서 최대 15일 동안 인큐베이팅한 경우, 혈청에서 기능적 활성을 유지했고, 이는 이화작용이 설명될 가능성이 없음을 나타낸다.

· FS118 및 마우스 대리 mAb²를 각각 활성화된 인간 및 마우스 T 세포와 인큐베이팅하면, 항-CD3 항체와 비교하여, 3시간의 인큐베이팅 기간에 걸쳐 시험품의 내재화가 초래되지 않았다. 이러한 결과는, 다른 세포에서 발현된 표적에 의한 표적 관여 및 내재화는 평가되지 않았지만, FS118의 클리어런스는 내재화에 의해 매개되지 않았음을 나타낸다.

전체적으로, 이러한 데이터는, FS118 및 마우스 대리 mAb²의 불포화 클리어런스 속도가 유도된 PD-L1 표적이고 mAb² 작제물에서 LAG-3 표적화 CH3 변형과 관련되어 있음을 나타내지만, NHP에서는 LAG-3 결합으로부터 추가 기여에 대한 가능성이 제외될 수 있다. NHP PD-L1 & LAG-3 및 인간 PD-L1 & LAG-3에 대해 유사한 결합 특성을 갖는 FS118로 인해, 인간에서 유사한 클리어런스 속도가 예측되었다.

1.5 인간에서 예측되는 약물동태- 약력학적 거동

1.5.1 NHP PK 모델

FS118에 대한 전신 노출을 기재하는 2-구획 모집단 PK 모델은 NHP 단일-투여 PK, DRF 및 GLP 연구 PK 데이터(투여 후 0 내지 7일; 실시예 1.3.2.1 내지 1.3.2.3 참조)로부터 작성되었다. 모든 PK 모델링, 피팅 및 시뮬레이션은 ADAPT 버전 5를 사용하여 수행되었다[참조: D'Argenio et al 2009].

각 개별 동물의 PK는 처음에 2구획 모델에 적합하여, 동물당 4개의 PK 파리미터(CL1, CL2, V1 및 V2)가 생성되었다. 이는 모든 동물의 PK를 함께 풀링하고, 모집단 PK 모델의 일부로서 사용될 수 있는지의 여부를 평가하기 위해 수행되었다.

모집단 PK 적합은, 각 동물의 PK 파라미터가 특정 모집단 평균 벡터와 공분산 행렬을 특징으로 하는 로그-정규 분포로부터 도출되었다는 가정하에 수행되었다. 이는, 미지 수의 수를, 개별 PK 경우의 4 ×(동물 수) = 112로부터 14(4×4 공분산 행렬에 대한 4개 모집단 평균 값 및 10개의 상이한 공분산 행렬 요소)로 극적으로 감소시켰고, 이에 의해 공지-대-미지 비율을 현저히 개선시킨다.

FS118의 선형 동력학을 설명하는 NHP 및 인간 PK 모델의 전체적 구조는 도 5에 제시되어 있다. 이 모델은 NHP에서 관찰된 데이터를 충분히 설명하고(표 4), 4주간의 GLP 독성 연구에서 반복 투여한 후의 관찰된 데이터를 예측했고; 즉, FS118의 클리어런스에서 유의한 포화 성분을 시사하는 증거는 없었다. 이 모델은, FS118의 인간 PK를 예측하기 위해 전위계적으로 스케일링되었고, 클리어런스 및 구획간 교환에 대해서는 0.75의 지수를 사용하고, 용적에 대해서는 1.0의 지수를 사용했다(표 4). 표적-매개 동태가 관찰되지 않았기 때문에, 표적 결합 친화성은 PK 모델에 통합되지 않았다. 이러한 가정을 전제로 하여, 인간에서 FS118 노출은 다양한 투여 섭생에 대해 예측되었다. 이러한 파라미터 값을 사용하여, 1000명의 인간 대상체에서 PK 시뮬레이션을 수행하여 인간 최초(First-in-human; FIH) 임상 시험의 전에 인간 모집단의 PK 범위를 평가했다. 시뮬레이션은 또한, 20mg/kg 이하의 용량이 생체내에서 FS118 노출 수준을 생성하고, 이는 최고 비-중증 독성 용량(HNSTD; 하기 실시예 1.5.2 참조)보다 훨씬 낮을 것으로 예측했고, 따라서 이러한 용량은 안전성 문제를 나타내지 않았다.

NHP에서 FS118에 대해 관찰된 클리어런스 속도는 NHP에서 단일특이적 항체에 대해 통상 관찰된 것보다 높지만, 약리학적 효과를 배제할 정도로 높지는 않다는 점에 유의해야 한다.

FS118 - PK 모델 파라미터

PK 파라미터	단위	NHP	가정: 인간에 대한 스케일링	인간
중앙 용적(V1) 주변부 용적(V2) 교환 계수(CL2) FS118 클리어런스(CL1)	mL mL mL/h mL/h	132 96 1.65 7.22	지수=1; 단백질 치료에 전형적 지수=1; 단백질 치료에 전형적 지수=0.75; 단백질 치료에 전형적 지수=0.75; 단백질 치료에 전형적	3209 2326 18.06 79.04
체중 NHP 2.88Kg; 인간 70Kg 공급원 데이터: [F-Star 연구 리포트 022, 표 7 및 8]

1.5.2 최고 비-중증 독성 용량( HNSTD )

FS118은 NHP 4주 GLP 독성 연구에서 내약성이 양호했고(실시예 1.3.2.3 참조), HNSTD는 주 2회 200mg/kg으로 확립되었다. 인간 PBMC를 사용한 습식 코팅된 고정화 포맷 또는 인간 전혈 포맷 중 어느 하나를 사용한 시험관내 검정에서 사이토카인의 FS118 관련 증가가 관찰되지 않았다. 또한, NHP 4주 GLP 독성 연구에서 혈청 사이토카인(IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ 및 TNF-α) 패널에서 FS118 치료-관련 증가는 관찰되지 않았다.

ICH S9 지침(ICH S9)은 진행성 암 환자에서 FIH 연구를 위해 HNSTD의 1/6에서의 초기 임상 투여를 권장하고(표 5); 그러나, FDA로부터의 최근 간행물은 이것이 면역 종양 약물에 적합하지 않을 수 있고, 표적 점유 및 기능적 활동과 관련된 추가 요인을 고려해야 함을 시사한다[참조: Saber et al 2016].

주간 20mg/kg의 투여량까지 상승하는 800㎍의 제안된 FIH의 개시 일정 용량(실시예 1.5.3.1 참조)은 HNSTD보다 적어도 10배 낮고, 권장된 ICH S9 지침을 하회한다.

FDA 지침: S9 비임상 평가 항암제

단계*	설명	용량 (mg/kg)
1 2	HNSTD 비-설치류를 위한 1/6 HNSTD	200 33.3
* - ICH S9(FDA 산업 지침, 2010년 3월)

1.5.3 FIH 연구 설계

인간 최초 연구(실시예 2)는 비-맹검, 복수회 투여, 용량 증량 및 코호트 확장 연구로 설계되었다. FS118의 안전성, 내약성, 약물동태(PK) 및 활성을 특성화하기 위해, 진행된 종양으로 진단된 성인 환자에서 연구를 수행하기로 결정했다. 추가로, 초기 환자를 가속 적정 설계로 동원하고, 단일 환자 코호트를 평가하고, 이어서 3+3 증가 용량 증량 설계를 수행하기로 결정했다(도 6). 이 연구는, 안전성과 내약성을 체계적으로 평가하고, 진행성 종양 환자에서 FS118의 최대 내약성 용량(MTD) 및/또는 권장 2상 용량(RP2D)을 동정하기 위해 설계되었다. RP2D는 허용 가능한 독성을 수반하는 최대 생물학적 유효량으로 정의되었다.

안전한 용량 증량을 가능하게 하기 위해, 개시 용량과 최고 용량 사이의 용량 증분이 선택되었고, 적절한 FS118 용량-노출 관계를 포착하기 위해 PK 모델링에 의해 유도되었다. 유리 FS118(LAG-3 포획/PD-L1 검출 포맷)을 측정하는 검증된 가이로스(Gyros) 검정을 사용하여 인간의 PK를 평가하고, 예측된 인간 PK와 비교하여 용량-노출 관계의 평가를 가능하게 하도록 환자내 용량 증량 단계의 말기에 PK 데이터를 이용하는 것을 보장하도록 결정했다. 또한, 표적 관여의 잠재적 바이오마커로서 총 혈장 sLAG-3 및 sPD-L1의 증가를 측정하고, 각 3주간의 치료 사이클 후에 채취한 샘플로부터 ADA의 생성 가능성을 평가하기로 결정했다.

1.5.3.1 FIH 개시 용량 및 용량 증량 전략의 정당화

임상 시험을 위한 허용 가능한 개시 용량을 설정할 때, 잠재적 약리학적 활성과, 유사한 분자를 사용한 공적으로 이용 가능한 임상 경험을 고려하는 것이 중요했다[참조: Saber et al 2016]. 이용 가능한 모든 데이터를 기반으로, 제안된 FIH 개시 용량은 정맥내 800㎍이었고, FS118 노출을 항종양 효능에 대해 예상되는 노출에 안전하게 증가시키기 위해, 환자내 가속 용량 증량 단계가 제안되었고; 잠재적으로 비효과적인 투여 섭생에 대한 노출을 최소화한다. FIH 연구는 또한 투여 간격 전체에 걸쳐 표적 억제를 유지하는 투여 섭생의 필요성을 조사하기 위해 설계되었다.

선택된 투여 전략을 서포트하는 중요한 포인트는 다음과 같다:

· 마우스 대리 mAb²를 사용한 마우스 동계 종양 모델의 노출 데이터는, 항-종양 효과를 위해 FS118에 대한 지속적 높은 노출이 필요하지 않고, 이는 단일특이적 항-PD-L1 mAb와는 뚜렷이 대조적임을 시사한다. 이 종양 모델에서, 마우스 대리 mAb² ≥1mg/kg의 용량은 종양 진행의 억제와 연관되었고, 3, 10 및 20mg/kg의 용량은 통계적으로 유의했다. 3일마다 10mg/kg으로 투여된 항-PD-L1 mAb 및 마우스 대리 mAb²에 대한 항종양 효능(3회 투여) 및 wt 비종양 보유 마우스에서 두 분자의 단일 투여 후의 노출 프로파일은 도 3A에 제시되어 있다. 항-PD-L1 mAb에 대한 노출은 3일간에 걸쳐 100㎍/mL 이상으로 유지되었지만, mLAG-3/PD-L1에 대한 노출은 동일한 기간에 약 10㎍/mL로 저하되었다. MC38 모델에서, 마우스 대리 mAb²에 대한 최저 노출은 시간의 경과에 따라 감소했고, 이는 아마도 ADA 형성과 관련될 수 있음에 주의해야 한다. 3mg/kg으로 3일마다 마우스 대리 mAb²에서, 제1 투여 후의 추정된 C_max는 25㎍/mL이고, 최후 투여 후에 관찰된 C_max는 6㎍/mL이었다.

· FS118은 NHP 4주 GLP 독성 연구에서 내약성이 양호했다. 다른 면역 체크포인트 억제제에서 관찰된 것과 유사하게, 뇌 및 기타 조직에서 혼합 단핵 세포 침윤이 관찰되었다.

· 시험관내 검정에서 사이토카인의 FS118 관련 증가가 관찰되지 않았고, NHP 4주 GLP 독성 연구에서는 혈청 사이토카인 수준의 증가가 관찰되지 않았다. 이는, 90% 이상의 표적 점유율과 관련된 용량이 급성 사이토카인 방출 증후군과 관련이 없는 다른 면역 종양학 생물요법과 일치한다[참조: Herbst et al 2014, Heery et al 2017].

· mPD-L1에 대한 마우스 대리 mAb²의 Biacore 결합 친화성은, hPD-L1에 대한 FS118의 결합과 비교한 경우에 약 10배 더 높은 것으로 나타났다. 대조적으로, mLAG-3에 대한 마우스 대리 mAb²의 Biacore 결합 친화성은, hLAG-3에 대한 FS118의 결합과 비교한 경우에 약 20배 더 낮은 것으로 나타났다. 그러나, 이러한 차이는, 각각의 표적 단백질을 과발현하는 HEK 세포에 대한 결합에 대한 EC₅₀ 값과, 기능적 T 세포 활성화 검정에서 EC₅₀ 값을 비교할 때에 훨씬 덜 명백했다. 기능적 PD-L1 표적 결합의 존재하에, FS118 및 마우스 대리 mAb²에 대한 유사한 클리어런스 속도를 감안하면, 표적 결합 친화성에서 이러한 관찰된 차이는 인간에서 FS118 PK의 예측에 영향을 미칠 가능성이 낮다.

· 면역-항암제에 대한 이용 가능한 비임상 및 임상 안전성 데이터의 분석은, 20-80% 표적 점유율 및/또는 20-80% 시험관내 기능 활성을 기반으로 FIH 용량이 허용 가능한 임상 독성을 갖는 것으로 나타났다. 표적 포화 이상의 FIH 전신 노출은, 정상 또는 침묵 ADCC 활성을 갖는 항체에 대해서도 허용 가능했고[참조: Saber et al 2016], FS118에는 ADCC 활성을 감소시키는 LALA 돌연변이가 있다는 점에 유의해야 한다. 전신 표적 점유율 및 시험관내 기능 활성(최대 백분율)의 추정치는 제안된 개시 용량 800㎍에서 C_max(0.26㎍/mL)의 35.8% 내지 79.2%였고, FIH 용량에 적합한 것으로 간주되었다.

· 최적 이하의 활성화를 갖는 인간 T 세포 활성화 검정에서, FS118은 평균 EC₅₀ 0.22㎍/mL로 IFNγ 생산을 자극했지만, 상당한 변동이 관찰되었다.

· FS118은, 동일한 표적에 대한 단일특이적 항체와 비교하여 높은 클리어런스 속도를 갖는 것으로 나타났고, 이 메커니즘은, 적어도 마우스에서, 이 이중특이적 작제물의 PD-L1 결합 성분에 의해 주로 유도되는 것으로 나타났다. FS118은 wt 및 LAG-3 KO 마우스에서 정상 IgG 동태를 나타낸 반면(기능적 PD-L1 결합 없음), 대리 mAb²는 wt 마우스 및 LAG-3 KO 마우스 모두에서 신속하게 클리어되었음에 유의해야 한다. 클리어런스 프로세스는, NHP에서 최대 200mg/kg의 용량에서 포화되지 않았고, 인간에서 예측되는 최종 반감기는 3.7일이었다(95% 신뢰 구간 0.35 내지 10.4일).

· NHP 4주 독성 연구에서 HNSTD에 대한 정상 상태에서의 C_max 및 AUC(1개의 7일간 투여 간격하)를, 제안된 용량 증량 섭생의 각 용량에 대해, 인간의 정상 상태에서의 예측 노출과 비교하고, 수득되는 노출 안전성 마진은 표 6에 제시되어 있다. 제안된 800㎍ 개시 용량(70kg 대상체의 경우 약 11㎍/kg)은, NHP의 HNSTD보다 >15,000배 더 낮은 노출을 제공할 것으로 예상되고, 이는 환자내 가속 적정 단계가의 종료시에 >190배까지 감소한다. FIH 용량에 대한 더 큰 안전 마진은 FS118이 인간에서 예상치 못한 정상 IgG 동태를 가질 수 있게 하고, 인간에서 FS118의 PK 거동은 연구의 용량 증량 부분으로 진행하기 전에 확인될 것이다. 클리닉에서, 20mg/kg/wk의 용량은 FS118 >10㎍/mL의 C_trough 농도, 및 NHP의 HNSTD보다 10배 더 낮은 노출(C_max 및 AUC)를 제공할 것으로 예상된다. 이 표적 농도를 달성하기 위한 투여량 및 투여 빈도는 가속 투여 적정 단계의 종료시에 조정할 수 있다.

예상 노출 마진 - 인간 대 FIH

용량	빈도	경로	노출 마진
			Cmax	AUC
800㎍ 0.1mg/kg 0.3mg/kg 1.0mg/kg 3mg/kg 10mg/kg 20mg/kg	q1wk q1wk q1wk q1wk q1wk q1wk q1wk	iv iv iv iv iv iv iv	16,735 1,911 636 191 63 19 9	17,095 1,948 645 194 65 19 10
4wk GLP 독성 연구에서 시험된 최고 용량에서 Cmax 및 AUC(0 내지 7일, 고정 상태)와 비교한 예측된 노출 마진, Cmax 및 AUC(고정-상태): 200mg/kg/주 2회 NHP(즉, 관찰된 AUC(0-tau)×2)

· 혈장 총 sPD-L1은 PK 모델에 포함되지 않았지만, 이것이 표적 관여의 우수한 바이오마커일 수 있음을 시사하는 NHP로부터의 증거가 있고, 이는 FIH 연구에서 측정될 것이다. 마우스 동계 종양 모델은 또한, PD-L1의 완전한 억제가 각 치료 사이클 전체에 걸쳐 필요하지 않을 수 있음을 시사한다. NHP에서, 혈장 FS118 농도 ≥ 10㎍/mL는 PD-L1 포획의 유지와 연관되었고(추론에 따르면, PD-L1 억제), FIH 임상 연구는, 제한된 기간 동안 PD-L1의 최대 억제(C_max ≥ 10㎍/mL) 및 각 투여 사이클 동안 PD-L1의 지속적 억제(C_trough ≥ 10㎍/mL) 둘 다를 조사하도록 설계되었다.

전체적으로, 이러한 데이터는 800㎍이 FS118의 임상 시험을 개시하기에 적절한 개시 용량임을 나타낸다. 이 제안된 개시 용량은 1시간 주입 종료시에 최대 농도(C_max 0.26㎍/mL)를 제공할 것으로 예측되었고, 이는 표적 수용체의 점유율 및 시험관내 기능 활성의 측면에서 허용된다. 또한, 이 C_max는 FS118 mAb² 대리 분자의 항종양 효능과 관련된 C_max보다 약 10-100배 낮고, NHP의 HNSTD에서 FS118에 대한 C_max 노출보다 15,000배 이상 낮았고; 유사한 노출 마진은 투여 간격하에서 AUC에 대해 유지된다(표 6). FS118에 대한 치료 관련 노출을 신속하고 안전하게 달성하기 위해, 환자내 용량 증량 계획이 제안되었고, 이는 안전성을 유지하면서 치료 용량 미만에 대한 환자의 노출을 최소화한다. 환자내 용량 증량 단계의 종료시에, 평균 C_max는 25㎍/mL로 예상되었고, 이는 MC38 종양 모델에서 마우스 대리 mAb²에 대한 항종양 효능과 관련된 노출 범위 내에 있고, NHP에서 sPD-L1 포획의 유지와 관련된 FS118 노출(10㎍/mL)을 상회한다.

비-임상 종양의 효능 데이터는 PD-L1의 지속적 억제가 필요하지 않음을 시사했지만, FIH 연구 동안 투여 간격 전체에 걸쳐 PD-L1 포획을 유지하는 FS118의 용량을 검토하기로 결정했고, FS118 ≥10mg/kg/wk의 용량은, 평균 C_trough 농도 ≥ 10 ㎍/mL를 제공할 것으로 예상되었다.

1.6 요약 및 결론

마우스 대리 mAb²(mLAG-3/PD-L1)을 사용한 마우스 동계 종양 모델의 노출 데이터는, 단일특이적 항PD-L1 mAb와 달리, FS118에 대한 지속적 고노출이 항종양 효능을 위해 필요하지 않음을 시사했다. 이 종양 모델에서, 마우스 대리 mAb² ≥1mg/kg의 용량은 종양 진행의 억제와 관련이 있었고, 3, 10 및 20mg/kg의 용량은 통계적으로 유의했다.

기능적 PD-L1 결합의 존재하에, FS118 및 마우스 대리 mAb² 둘 다의 클리어런스 속도는 표준 단일특이적 IgG-유사 분자에서 관찰된 것보다 더 높다. 용량 증가에 따라 노출이 약간 과도하게 증가하지만, 이 클리어런스 프로세스는, NHP에서 주 2회 최대 200mg/kg의 용량에서 포화되지 않는 것으로 보이고, 선형 PK 모델에 의해 적절하게 설명된다. 다시 말해서, FS118은, 막 수용체를 표적화하는 IgG-유사 분자에서 관찰되는 포화 가능한 표적-매개 동적 거동을 나타내지 않는다. 그러나, 이 클리어런스 프로세스는, wt 및 LAG-3 KO 마우스에서 FS118에 대해 정상 IgG 동태가 관찰되기 때문에, mAb² 작제물의 기능적 PD-L1 결합에 의존하는 것으로 보인다(FS118은 마우스에서 현저한 PD-L1 결합을 결여함).

NHP 4주 GLP 독성 연구에서, FS118은 임상 시험을 위한 적절한 노출 마진을 제공하는 용량에서 내약성이 충분한 것으로 나타났다. 800㎍의 제안된 FIH 개시 용량은, 0.26㎍/mL의 1시간 주입 종료시에 최대 농도(C_max)를 제공할 것으로 예측되고, 이는, 마우스 대리 mAb² 분자의 항종양 효능과 관련된 C_max보다 약 10배 낮고, NHP의 HNSTD에서 FS118에 대한 C_max 노출보다 >15,000배 더 낮았다. 유사한 노출 마진은 투여 간격하에서 AUC에 대해 유지된다.

혈장 총 sPD-L1은 NHP에서 PD-L1 표적 관여의 유용한 바이오마커인 것으로 나타났다. NHP에서, 혈장 FS118 농도 ≥ 10㎍/mL는 PD-L1 포획의 유지와 관련이 있고(추론에 따르면, PD-L1 억제), FIH 임상 연구는, 제한된 기간 동안 PD-L1의 최대 억제(FS118 C_max ≥ 10㎍/mL), 및 각 투여 사이클에 걸쳐 PD-L1의 지속적 억제(FS118 C_trough ≥ 10㎍/mL) 둘 다를 조사하도록 설계되었다. 용량 증량 전략은, 환자내 가속 용량 적정 단계(1mg/kg/wk FS118에서)의 종료시에 약 10㎍/mL의 C_max를 달성하고, 이어서 투여 간격 내에서 FS118 ≥ 10㎍/mL를 유지하는 더 높은 노출 수준을 조사하도록 설계되었다. 10 및 20mg/kg/wk의 용량은 투여 간격 전체에 걸쳐 평균 혈장 FS118 농도 >10㎍/mL를 달성하는 것으로 예측되었다.

실시예 2: 이전 PD-1/PD-L1 함유 요법으로 또는 후에 진행되는 진행성 악성종양을 갖는 환자에서, LAG-3/PD-L1 이중특이적 항체인 FS118의 안전성, 내약성 , 약물동태 및 활성에 대한 I상, 비-맹검, 용량-증량 및 코호트 확장 인간 최초 연구

2.1 연구 설계 및 파라미터

이 연구는, FS118의 안전성, 내약성, 약물동태(PK) 및 활성을 특성화하기 위해, 진행된 종양으로 진단된 성인 환자에서 수행되었다. 이 I상, 다중-센터, 비-맹검, 다중 용량, 인간 최초 연구는 가속 적정 설계(그 사이에 단일 환자 코호트가 평가됨), 이어서 3+3의 상승 용량 증량 설계로 개시되었다. 이 연구는 안전성과 내약성을 체계적으로 평가하고, 진행성 종양 환자에서 FS118의 최대 내약성 용량(MTD) 및/또는 권장된 2상 용량(RP2D)을 동정하기 위해 설계되었다. RP2D는 허용 가능한 독성을 갖는 최대 생물학적 유효량으로 정의되었다. 약물동태, 약력학, 면역원성 및 반응도 평가했다.

사전 동의 후, 모든 환자는 치료 개시 전의 28일 이내에 적격성을 결정하기 위한 스크리닝을 받았다. 환자에 대한 투여는, iCPD(즉, 면역-확인된 진행성 질환)(또는 림프종 환자에 대한 Lugano 분류에 따른 진행성 질환), 허용할 수 없는 독성, 환자에 의한 동의 철회, 조사자에 의한 환자의 중지, 연구 또는 치료를 종료하는 스폰서의 결정, 대체 항암 요법의 개시 또는 사망까지 3주간 치료 사이클에서 매주 정맥내(IV)로 수행했다. 환자는, FS118의 최후의 투여로부터 약 28일(±7일) 후에 치료 종료(EOT) 방문, 및 FS118의 최후 투여로부터 약 90일(±7일) 후에 90일 추적 방문을 받았거나 받을 것이다. 문서화된 iCPD(또는 림프종 환자에 대한 Lugano 분류에 따른 진행성 질환) 이후의 모든 환자에 대해, 전체 생존(OS)은 생존율 및 투여된 연구 후의 암 요법을 평가하기 위해 3개월마다 평가되었거나 평가될 것이다.

처음 5개 코호트는 단일 환자 코호트로서 순차적으로 등록되었고, 환자는 사이클 1 동안 용량 제한 독성(DLT)에 대해 관찰되었다. 각 코호트에서 환자의 기저 질환, 기타 의학적 병태 또는 병용 의약 또는 절차에 명확하게 기인하지 않는 DLT 또는 ≥등급 2 이상의 유해 사상이 관찰되지 않았기 때문에, 새로운 환자는 후속의 고용량 코호트에서 투여되고, DLT 기간 동안 관찰되었다. 환자의 기저 질환, 기타 의학적 병태 또는 병용 의약 또는 절차에 명확하게 기인하지 않는 DLT 또는 ≥등급 2 유해 사상을 갖지 않는 코호트 5의 사이클 1이 완료된 후, 코호트 6 이후부터 용량 증량 섭생은 3+3 설계로서 계속되었다. 환자가 최초 투여에 내약성이 있는 경우, 환자내 용량 증량은 단일-환자 코호트에서 진행하고, 후속 고용량 코호트의 환자는, 환자의 기저 질환, 기타 의학적 병태 또는 병용 의약 또는 절차에 명확하게 기인하지 않는 DLT 또는 ≥등급 2 유해 사상의 증거를 갖지 않는 DLT 기간을 완료했고, 용량은 안전성 심사 위원회(Safety Review Committee; SRC)에 의해 안전한 것으로 선언되었다.

단일 환자 코호트 중 어느 하나에서, 환자가 DLT 기간 동안 환자의 기저 질환, 기타 의학적 병태 또는 병용 의약 또는 절차에 확하게 기인하지 않는 ≥등급 2 유해 사상을 경험한 경우, 추가 2명의 환자는 해당 용량 수준에 등록하고, 3+3 설계 규칙을 사용하여 평가했지만, 이것은 발생하지 않았다. 모든 후속 코호트가 3+3 디자인에 등록되었다. DLT가 발생한 경우, 코호트는 6명의 환자로 확장되었지만, DLT는 관찰되지 않았다.

독성은 미국 국립 암 연구소(National Cancer Institute; NCI)의 유해 사상 공통 용어 기준(Common Terminology Criteria for Adverse Events; CTCAE) 버전 4.03에 따라 평가되었다.

주요 목적

이 연구의 주요 목적은 다음과 같다:

1. 안전성을 평가하고, FS118의 MTD 및/또는 RP2D를 결정하기 위해, 및

2. FS118의 PK 파라미터를 결정하기 위해.

2차 목적

이 연구의 2차 목적은 다음과 같다:

1. 고형 종양 반응 평가 기준(RECIST) 1.1 또는 Lugano 분류(해당되는 경우) 및 iRECIST(변형된 RECIST 1.1)에 따라 FS118의 항암 활성에 대한 예비적 증거를 평가하기 위해, 및

2. FS118의 면역원성(항약물 항체[ADA])을 특성화하기 위해.

탐색 목적

이 연구의 탐색적 목적은 약력학적 프로파일을 특성화하고, 잠재적 1차 약리학을 노출과 연관시키는 것이었다.

환자 모집단 및 환자 수

2019년 5월까지 24명의 환자가 등록되었고, 2019년 8월까지 40명의 환자, 및 2020년 4월까지 43명의 환자로 증가시켰다. 환자는 미국의 4개 연구 기관에 등록되었다. 환자는 진행성 종양을 갖는 18세 이상이었다.

치료 투여

FS118은, 느린 볼루스 주사로서 최초 코호트에 정맥내 투여하고, iCPD(또는 림프종 환자의 경우 Lugano 분류에 따른 진행성 질환), 허용할 수 없는 독성, 환자에 의한 동의 철회, 연구자에 의한 환자의 중단, 연구 또는 치료를 중단하는 스폰서의 결정, 대체 항암 요법의 개시 또는 사망까지, 3주 치료 사이클에서 매주 후속 코호트에 연속 주입 펌프에 의해 투여했다.

치료 및 연구 기간

환자는, 16사이클(또는 12개월)의 FS118 치료를 완료한 경우, 또는 확인된 진행성 질환을 경험한 경우에 치료를 완료한 것으로 간주되었다. 주요 평가 항목의 최종 분석을 실시하고, 단일 최종 임상 연구 보고서를 작성하고, 연구에 등록된 모든 환자가 FS118에 의한 치료의 16사이클을 완료하는 기회를 가진 후, 최종 연구 약물 투여후 90일 동안 추적했다. 연구 완료의 추정 기간은 36개월이다.

적격 기준

등록된 각 환자는 연구에 등록할 수 있는 자격을 수득하기 위해 하기 추가 요건을 모두 충족해야 했다:

1. 용량 증량의 경우: 항-프로그램된 세포 사멸 단백질 1(PD-1) 또는 항-프로그램된 사멸-리간드 1(PD-1) 요법 동안 또는 그 이후에 유효 표준 요법이 이용 불가능하거나 표준 요법이 실패한, 조직학적으로 확인된, 국소적으로 진행된, 절제할 수 없는 또는 전이성의 고형 종양 또는 진행된 혈액학적 악성종양을 갖는 환자;

2. 용량 확장의 경우: 항-PD-1 또는 PD-L1 요법 동안 또는 그 이후에 유효한 표준 요법이 이용 불가능하거나 표준 요법이 실패한, 조직학적으로 확인된, 국소적으로 진행성, 절제할 수 없는 또는 전이성 자궁경부, 난소, 방광, 신장, 두경부 편평세포암, 흑색종, 비-소세포 폐암, 삼중-음성 유방암 또는 비호지킨 환자 또는 호지킨 림프종;

3. 이전 PD-1 또는 PD-L1 함유 섭생의 최소 치료 기간은 12주였고(또는 2개의 반응 평가에 상당);

4. 필요에 따라, RECIST 1.1 또는 Lugano 분류를 사용하여 조사자가 결정한, 측정 가능한 질병(중추 신경계[CNS] 외측에 있는 적어도 1개의 측정 가능한 병변으로 정의됨);

5. 동부 공동 종양학 그룹(Eastern Cooperative Oncology Group; ECOG) 성능 상태 ≤1;

6. 적어도 3개월인 것으로 추정되는 기대 수명;

7. 환자는 종양의 치료 전 및 치료 중 생검을 받는 데 동의했고, 생검 절차는 조사자에 의해 고위험으로 판단되지 않았다. 단일 환자 코호트의 환자의 경우, 허용 가능한 기준선 종양 샘플에는 새롭게 수득된 종양 생검 샘플 및/또는 원래 진단으로부터 수득된 아카이브 조직 샘플(< 6개월령)이 포함되었다(가능한 경우);

8. 임신의 위험이 존재하는 경우, 남성 및 여성 환자 모두에게 매우 효과적인 피임법(즉, 연간 1% 미만의 실패율을 갖는 방법). 매우 효과적인 피임법은, 제1 연구 치료제 투여의 28일 전, 연구 치료제 기간 동안, 및 연구 치료제 중단 후 최소 60일 동안 사용해야 했다. 여성 환자가 이 연구에 참여하는 동안 임신했거나 임신이 의심되는 경우, 치료 의사 및 스폰서(또는 피지명인)에게 즉시 통지한다; 및

9. 서면 동의서를 제공할 의사 및 능력.

스크리닝에서 하기 기준 중 어느 하나를 충족하는 환자는 연구에 참여할 자격이 없었다:

1. 연구 약물의 제1 투여의 28일 또는 5 반감기 중 더 짧은 기간 내에 전신 항암 화학요법, 표준 관리가 아닌 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제(승인된 적응증의 조합 제외)에 의한 이전 치료, 또는 림프구-활성화 유전자 3(LAG-3) 억제제 또는 다중-특이적 면역 체크포인트 억제제 분자에 의한 이전 치료를 받았다;

2. 과거 2년 동안 치료가 필요한 활동성의 자가면역 질환을 갖는 환자 및 임의의 자가면역 질환의 기록된 병력을 갖는 환자. 주: 여기에는 염증성 장 질환, 궤양성 대장염 및 크론병, 류마티스 관절염, 전신성 진행성 경화증(강피증), 전신 홍반성 루푸스, 자가면역 혈관염(예: 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis)), CNS 또는 자가면역 기원으로 간주되는 운동 신경병증(예: 길랭 바레 증후군, 중증 근무력증, 다발성 경화증), 및 중등도 또는 중증 건선의 병력을 갖는 환자가 포함된다. 그러나, 류마티스 관절염 또는 건선이 적어도 6개월 동안 안정하여 관해하고, 면역-관련 유해 사상, 백반증, 쇼그렌 증후군, 간질성 방광염, 그레이브스병 또는 하시모토병, 또는 호르몬 대체로 안정한 갑상선 기능 저하증에 대한 코르티코스테로이드의 가능한 병용-치료에 대한 금기 사항이 없는 환자는 연구 메디컬 모니터 승인으로 허용되었다;

3. 하기를 포함하지만 이들로 한정되지 않는, 제어되지 않는 병발 질환의 병력:

o 표준 요법으로 제어되지 않는 기록된 고혈압(150/90mmHg 이하로 안정화되지 않음), 또는

o 제어되지 않는 기록된 당뇨병. 주: 적어도 6개월 동안 안정적인 인슐린 대체 요법을 받고 있고 면역-관련 유해 사상에 대한 코르티코스테로이드의 가능한 병용-치료에 대한 금기 사항이 없는, 충분히 관련된 환자를 고려할 수 있다;

4. 공지된 감염증:

o 인간 면역결핍 바이러스, B형 간염 바이러스(HBV)(즉, B형 간염 표면 항원 양성) 또는 C형 간염 바이러스(HCV)(즉, 검출 가능한 HCV 리보핵산[RNA]). 주: 항원 음성인 HBV 감염의 치료 병력이 있는 환자, 또는 HCV RNA 검출이 불가능한 HCV 감염의 치료 병력이 있는 환자를 고려될 수 있다; 또는

o 활성 감염증(양성 바이러스 역가(titer)를 갖는 무증상 감염증, 및 연구 치료 또는 병태에 의해 병태가 악화할 가능성이 있거나 연구에 대한 환자의 참여를 손상/금지할 가능성이 있는 조사자의 판단을 포함);

5. 제어되지 않은 CNS 전이, 원발성 CNS 종양 또는 측정 가능한 질환으로서 CNS 전이를 갖는 고형 종양. 활동성 질환을 갖지만 안정한 CNS 질환을 갖는 환자는 등록할 수 있다;

6. 이전 PD-1/PD-L1 함유 치료제에 의한 이전 병력 또는 활동성 간질성 폐질환 또는 폐렴, 뇌염, 발작, 중증 면역 관련 유해 사상(즉, 폐렴, 간염, 대장염, 뇌하수체염, 췌장염, 심근염, CNS 또는 안과), 다른 면역 자극성 항암제에 의한 이전 치료에 대한 중증 생명-위협 피부 유해 반응의 병력;

7. 면역억제제의 사용, 면역억제를 필요로 하는 이전 장기 이식, 모노클로날 항체 또는 이의 부형제에 대한 과민증 또는 불내증, 또는 하기의 예외를 제외하고 등급 1 이상의 NCI CTCAE v4.03의 이전 요법과 관련된 지속적인 독성:

o 모든 등급의 탈모증은 허용 가능했다;

o 대체 요법에 대한 내분비 기능장애는 허용 가능했다(호르몬 대체 요법에 대한 안정한 뇌하수체염 포함);

o 비-전신 스테로이드; 국소, 안내, 비강내, 관절내 또는 흡입 스테로이드가 허용되었다;

o 부신 기능부전 환자에서는 10mg/일 이하의 프레드니손 등가물의 전신 스테로이드 대체 치료가 허용되었다: 및

o 완화 치료 또는 증상 질환 제어의 일부로서 10mg/일 이하의 프레드니손 등가물의 전신 스테로이드 치료를 받는 환자의 등록은 의료 모니터 및/또는 스폰서와 논의해야 했다;

8. 긴 QTc 증후군 및/또는 페이스메이커의 병력, 뇌혈관 장애/뇌졸중(등록전 6개월 미만), 심근경색증(등록전 6개월 미만), 불안정 협심증, 울혈성 심부전(뉴욕 심장 협회 분류 클래스 ≥II), 또는 적어도 6개월 동안 약물에 의해 제어되지 않은 임상적으로 중대한 및 증후성의 심장 부정맥을 포함하는, 중대한 심장 이상;

9. 하기 기준에 따른 스크리닝 실험실 값(NCI CTCAE, 버전 4.03 사용):

o 헤모글로빈 <9.0g/dL(5.7μmol/L);

o 호중구 절대 수(ANC) <1.0 × 10⁹/L;

o 혈소판 <100 × 10⁹/L;

o 혈청 크레아티닌 >1.5 × 정상 상한(ULN);

o 총 빌리루빈 >1.5 × ULN; 또는 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST) 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT) >2.5 × ULN(간 전이의 경우 ≥5 × ULN); 또는

10. 조사 제품 또는 이의 부형제에 대한 불내성, 또는 연구자의 판단에 따라 연구에 대한 환자의 참여를 현저하게 손상 및/또는 금지하는 임의의 상태.

평가 및 분석의 주요 기준

이 연구의 1차 종점은 다음과 같다:

· 유해 사상의 발생율, 중증도 및 기간; 및

· 최대 관찰 농도(C_max), C_max까지의 시간(T_max), 관찰된 최저 혈청 농도(C_trough), 최종 소실 반감기(t_1/2), 1회 투여시 농도-시간 곡선하 면적(AUC)[AUC(TAU)], 투여 간격에 걸친 평균 농도[AUC(TAU)/tau], 전신 클리어런스(CL), 정상 상태에서의 분포 용적(V_ss) 및 제1 투여로부터 정상 상태까지의 누적 비율을 포함하는 PK 파라미터.

이 연구의 2차 종점은 다음과 같다:

· RECIST 1.1 또는 Lugano 분류(해당되는 경우) 및 iRECIST에 의해 평가된 반응. 이러한 반응은 질병 통제 비율(DCR), 객관적 반응율(ORR), 반응 기간(DoR) 및 무진행 생존기간(PFS)/iPFS를 결정하기 위해 사용되었다. 전체 생존도 평가된다; 및

· ADA 검출 및 분석을 포함한 FS118 면역원성의 발생률.

이 연구의 탐색적 종점은 다음과 같다:

· 말초 혈액 단핵 세포의 유세포 분석에 의한 CD3+, CD4+ 및 CD8+ T 세포 모집단에서 PD-L1 및 LAG-3 수용체 점유율 백분율;

· 가용성 PD-L1 및 LAG-3 정량화.

통계적 고려사항

환자 경향은 등록된 모든 환자에 대해 표로 작성되었다. 인구 통계 및 기준 데이터(예: 연령, 성별, 인종, 민족, 신장 및 체중), 병력 및 특성은 안전성 분석 세트에 대한 기술 통계를 사용하여 요약되었다.

효능 분석은 효능 분석 세트를 사용하여 수행되었다. RECIST 1.1 기준 또는 Lugano 분류(해당되는 경우) 및 iRECIST 기준에 따른 종양 반응 데이터가 사용되었다. ORR 및 DCR의 경우, 점 추정치 및 95% 정확한 신뢰 구간이 제공되었거나 제공될 것이다. 반응이 불명이거나 누락된 환자는 무-응답자로 처리된다(즉, 백분율을 계산할 때에 분모에 포함됨).

최상의 전체 응답은 RECIST 1.1 기준 또는 Lugano 분류(해당하는 경우) 및 iRECIST 기준에 따라 결정되었다.

치료 기간, DoR, PFS, iPFS 및 OS를 포함한 사상 발생 시간 변수는 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 방법을 사용하여 기술적으로 요약되었다. 사상 발생 시간 변수에 대한 관측 중단 방법은 통계 분석 계획에 설명되어 있다. 사상 발생 시간 변수에 대한 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 곡선이 생성된다.

PK 분석 세트는 모든 PK 데이터의 요약에 사용되었다. 혈청 농도 대 시간 프로필은, 필요한 경우, 각 환자에 대한 투여 간격 및 투여 코호트별로 비모수 파라미터 C_max, T_max, C_trough 및 AUC의 표 요약과 함께 그래픽으로 제시되었다. 적절한 경우, 총 AUC는 농도 대 시간 프로파일의 최종 단계에서 무한대로의 외삽을 사용하여 계산되었고, 혈청 t_1/2, CL 및 V_ss도 유도되도록 한다.

약력학 분석 세트는 약력학적 분석에 사용되었다.

연구 기간 동안 양성 FS118 ADA를 갖는 환자의 비율 및 양성 중화 FS118 ADA를 갖는 환자의 비율이 요약되었다. FS118 ADA 역가와 PK의 상관관계 분석이 수행되었다.

안전성 프로파일은, 유해 사상(DLT 및 중대한 유해 사상 포함), 신체 검사 소견(ECOG 성능 상태 포함), 바이탈 징후 측정, 표준적 임상 실험실 측정 및 심전도 기록을 기반으로 한다.

샘플 크기 정당화

2019년 5월까지 24명의 환자가 등록되었고, 2019년 8월까지 40명의 환자로, 및 2020년 4월까지 43명의 환자로 증가했다. 가속 적정 부분은 최소 5명의 환자로 구성되었고, 연구의 3+3 점증하는 용량-증량 부분은 용량 수준당 3~6명의 환자로 구성되었다. 코호트는, 안전상의 이유(최대 3명의 환자), PK 및/또는 약력학의 강화(최대 10명의 환자), RP2D 수준 또는 그 이전의 임상 효능(최대 24명의 환자)을 추가로 특성화하기 위해 확장할 수 있다. 연구의 샘플 크기는 실제적 고려사항에 의해 결정되었다. 공식 통계적 평가는 수행되지 않았다.

2.2 중간 결과(2019년 5월)

2.2.1 중간 임상 데이터

2019년 5월까지, 가속 적정 설계(800㎍, 2400㎍, 0.1mg/kg, 0.3mg/kg 및 1.0mg/kg 용량)의 단일 환자 코호트가 완료되었다. I상 연구의 3+3 점증 용량-증량 설계 부분에서, 3mg/kg이 완료되었고, 10mg/kg 및 20mg/kg 용량 수준의 투여가 진행중이었다. 코호트 중 2개는 확장되었다(1mg/kg에서 3명의 대상체, 3mg/kg에서 10명의 대상체).

2019년 5월까지 I상 연구에 등록된 24명의 환자 중 8명의 환자가 치료에 적극적이었다. 16명의 환자, 4명의 환자는 iCPD로 인해, 2명의 환자는 진행성 질환 RECIST 1.1으로 인해, 10명의 환자는 기타 고려사항으로 인해 치료를 중단했다: TBC/임상 PD/PI 결정.

2019년 5월까지 I상 연구 동안 관찰된 치료 긴급 유해 사상 중, 20%가 FS118과 관련된 것으로 평가되었고, 모두 경증 내지 중등도였다. 관찰된 10개의 심각한 유해 사상 중, FS118과 관련된 것은 없었다. 시험된 모든 용량에서 DLT는 관찰되지 않았다. 이는 최대 20mg/kg의 용량이 양호하게 내약성이고, FS118의 안전성 프로파일이 다른 면역 체크포인트 차단제와 일치함을 입증했다.

FS118에 의한 치료 기간은 평균 9.2주 = 3사이클(0-24주) 동안 계속되었다. 14명의 대상체에 대해, 적어도 1회의 "연구 중" 스캔이 보고되었다. 14명의 환자 중, 5명은 안정한 질환을 갖고, 9명은 진행성 질환을 가졌다. 효능의 결정은 I상 연구의 주요 목적은 아니었지만, 환자가 FS118 치료에 소비한 평균 시간 및 연구 중 스캔에서 14명의 환자 중 5명의 환자에서 질환의 안정화가 나타났다는 사실은, FS118이 질환 안정화 능력이 있고, 따라서 인간 환자의 종양 성장을 억제할 가능성이 있음을 입증했다. 이 데이터를 평가할 때, I상 연구에 등록한 환자는 모두 진행성 악성 종양을 갖고 있었고, FS118 치료의 혜택을 받기에는 너무 위험할 수 있음을 염두에 두어야 한다. 2상 연구에서 조사될 수 있는 바와 같이, 위험성이 낮은 암 환자의 치료는 FS118의 추가로 높은 효능을 나타낼 수 있다.

2.2.2 중간 약물동태/ 약력학 데이터

최초 7개 코호트(800㎍, 2400㎍, 0.1, 0.3, 1, 3, 10mg/kg/Q1wk 용량)에 걸쳐 20명의 환자에 대한 약물동태/약력학 분석을 수행하여, PK 및 약력학(혈액 중의 LAG-3 또는 PD-L1 수용체의 FS118 관여[가용성 또는 T 세포 발현])을 측정했다. PK 분석은 20mg/kg/Q1wk 용량 코호트에서 1명의 환자에 대해서만 수행되었다.

2.2.2.1 PK 분석

PK 분석을 위해, 혈청 FS118 수준은, 비오티닐화된 LAG-3 포획 및 Alexa Fluor® 647 표지 PD-L1 검출을 갖는 GyroLab 플랫폼을 사용하는 검증된 리간드 결합 분석을 사용하여 측정했다. 간단히 말해서, 혈청 샘플을 Rexxip HN에서 1:10의 최소 필수 희석율(MRD)로 희석하고, 플레이트에 첨가한 다음, BioAffy 1000 CD와 함께 Gyrolab XP 워크스테이션에 로딩했다. FS118은 형광 발광에 의해 검출되었다. 표준 곡선은 Gyrolab Evaluator 어플리케이션에서 가중치 인자(1/y2)로서 반응을 갖는 5-파라미터 로지스틱 곡선을 사용하여 회귀되었다. 검증된 검정의 LLOQ는 100ng/mL이다.

결과는 7개 코호트(800㎍, 2400㎍, 0.1, 0.3, 1, 3, 10mg/kg/Q1wk 용량)(C_max, AUC)에 걸쳐 용량의 증가에 따라 노출의 용량 선형 증가를 나타냈다. C_max는 비-인간 영장류로부터 스케일링된 예측과 거의 동등했지만, 클리어런스 속도는 예측보다 더 높았다(AUC는 예측보다 30% 더 낮음). 3mg/kg의 용량까지 매주 투여시 노출의 선형 증가(Cm_ax)가 있었고 FS118의 축적은 없었다. 3, 10 및 20mg/kg 코호트의 일부 대상체는 측정 가능한 C_trough FS118 농도를 나타냈다. 투여 7일 후(후속 주입 전)의 혈청 FS118 농도는 1mg/kg 미만의 모든 환자에 대해 100ng/mL(LLOQ) 미만이었다.

2.2.2.2 가용성 LAG-3

혈청 총 sLAG-3은 포화된 양의 FS118의 존재하에 검증된 효소 결합 면역-검정(ELISA)을 사용하여 정량화되었다. 간단히 말해서, 혈청 샘플 중의 sLAG-3은 플레이트-코팅된 항-LAG-3 모노클로날 항체(비경쟁적 결합)로 포획되었다. FS118을 시험관내에서 추가하여 sLAG-3의 결합을 포화시켰다. 포획된 sLAG-3:FS118 복합체를 sLAG-3 수용체와 결합된 FS118 Fcab 도메인에 대한 비오틴화된 항-유전자형 항체로 검출한 후, 스트렙트아비딘 접합-HRP 및 발원체를 첨가했다. 검증된 검정의 LLOQ는 0.675ng/mL였다.

1, 3 및 10mg/kg/Q1wk 용량 수준에서 가용성 LAG-3(sLAG-3)의 분석은 사이클 1 및 사이클 2의 최초 투여 후에 총 sLAG-3의 약 10배 증가를 나타냈고 C_max는 투여 후 2-3일에 피크에 도달했다.

sLAG-3 수준의 상승은 수용체의 FS118 관여를 확인한다. 1mg/kg 용량 수준에서, 총 sLAG-3 농도는 후속 용량 전에 기준선 값으로 돌아갔다(사이클 1 8일; C1D8). 3 및 10mg/kg/Q1wk 코호트에서, 후속 투여 전에 총 sLAG-3(최저 농도)의 축적에 대한 일부 증거가 있었다. 3mg/kg 및 10mg/kg 용량에서 총 가용성 LAG-3의 증가 정도 및 지속 기간은 FS118에 의한 가용성 LAG-3 포획의 포화가 거의 달성되었음을 시사했다.

2.2.2.3 가용성 PD-L1

혈장 총 가용성 PD-L1(sPD-L1)은 포화량의 FS118의 존재하에 Meso-Scale Discovery 면역검정을 사용하여 정량화했다. 검정의 LLOQ는 0.458ng/mL이다. 결과는, 각 투여 후의 총 가용성 PD-L1(sPD-L1)의 일시적 증가에 대한 초기 증거를 나타냈지만, 이는 모든 환자에 걸쳐 일관되지 않았고, 다수 환자의 기준 농도는 검정의 정량화 수준 미만이었다.

2.2.2.4 PD-L1 및 LAG-3 수용체 점유율

PD-L1 및 LAG-3 수용체 점유율은 전혈 T 세포 및 단핵구에서 측정되었다. 간단히 말해서, 이 방법은 Cyto-Chex® 튜브에 전혈을 수집하고, 처리할 때까지 4℃에서 보관하는 것이다(시험당 100μL). 먼저, 비특이적 결합을 5μL의 Human BD Fc Block 용액으로 RT에서 10분 동안 차단했다. 이어서, 샘플을 3개의 패널(유리 수용체, 총 수용체 및 FMO/Isotype) 항체 칵테일(50μL) 중 어느 하나로 염색하고, 실온에서 30분 동안 인큐베이팅하고, 이어서 적혈구를 용해하고, 900μL의 BD FACS 용해 용액으로 실온에서 10분 동안 고정했다. 이어서, 샘플을 2% FBS로 2회 세척한 다음, 사이토미터(LSR Fortessa)로 수집했다. 수용체 점유율은 하기 공식을 사용하여 계산되었다(가정: PD-L1 또는 LAG-3 표적 발현 수준은 조사 기간 동안 변화되지 않은 상태로 유지됨):

C - 동형 비함유 표적(경쟁) mAb로부터의 중앙 형광 강도(MdFI)

D - 유리 표적(경쟁) mAb로부터의 MdFI

C₀, D₀: 약물 투여 전의 샘플로부터의 MdFI 값

C_t, D_t: 소정 시점에서 약물 투여 후의 샘플의 MdFI

전체적으로, LAG-3 발현은 PD-L1 발현과 비교하여 40-130배 더 낮았고, 추정된 수용체 점유율의 변동은 상당히 높았다(CV는 통상 >50%). 제1 투여로부터 3시간 후, 평균 PD-L1 수용체 점유율은 3 및 10mg/kg 용량 코호트에서 각각 49% 및 54%였고, PD-L1 수용체 점유율과 혈청 FS118 농도 사이에 명백한 관계는 없었다. 유사하게는, 제1 투여로부터 3시간 후, 평균 LAG-3 수용체 점유율은 3 및 10mg/kg 용량 코호트에서 각각 23% 및 32%였고, LAG-3 수용체 점유율과 혈청 FS118 농도 사이에 명백한 관계는 없었다. 제2 투여 직전, PD-L1 및 LAG-3 수용체 점유율은 투여 후 3시간 시점과 비교하여 더 낮았다.

PK 값이 정량화 수준 미만이거나 매우 낮은 3, 10 및 20mg/kg/Q1wk 코호트에 대한 C_trough 수준에서 일부 환자의 혈액 내 총 sLAG-3 및 sPD-L1의 축적 및 LAG-3 T 세포 수용체 점유율은 C_trough 수준에서 지속적 약력학적 반응의 증거를 제공하고, 이는 놀랍게도 투여 간격 전체에 걸친 FS118 노출이 인간 환자의 약력학적 효과에 필요하지 않음을 나타낸다.

상기 결과는, FS118과 복합체화된 sLAG-3은 FS118의 클리어런스가 FS118의 클리어런스보다 느린 것으로 밝혀졌기 때문에, 마우스 대리 항-LAG3/PD-L1 항체를 갖는 마우스에서 관찰된 결과와 대조적으로, 인간에서 FS118의 클리어런스가 주로 LAG-3 매개, 보다 구체적으로는 막 LAG-3 매개되는 것을 나타낸다.

2.2.3 결론

I상 연구로부터 2019년 5월까지 입수할 수 있는 중간 결과는, FS118의 내약성이 양호하고, 최대 관찰 농도(C_max)가 사이노몰구스 원숭이 연구에서 예측된 C_max와 일치하지만, FS118의 클리어런스 속도는 예상외로 예측된 것보다 높은 것을 입증했다. 이것은 당초, 인간에서 보다 고용량의 FS118이 필요할 수 있음을 시사했지만, 더 빠른 클리어런스 속도에도 불구하고, 치료 효능을 나타내는 시험된 보다 낮은 용량에서 지속적인 약력학적 반응이 관찰되었다.

특히, 수득된 결과는, FS118이 주 1회 투여되는 3mg/kg, 10mg/kg 및 20mg/kg의 용량에서 가용성 LAG-3(sLAG-3) 수준의 지속적 증가, 게다가 지속적 LAG-3 수용체 점유율을 유도할 수 있음을 나타냈다. sLAG3 수준은, 마우스의 치료 효능과 관련이 있는 것으로 나타났다. 이러한 중간 결과는 또한 sPD-L1 수준이 FS118 치료 후에 증가했음을 시사했다.

2.3 중간 데이터(2019년 8월)

2.3.1 중간 임상 데이터(2019년 8월)

2019년 8월까지, 추가로 16명의 환자가 I상 연구에 등록되었다. 따라서, 총 40명의 환자가 등록되었다. 이 40명의 환자 중, 16명이 적극적으로 치료를 받고 있었다. 나머지 24명의 환자는 치료를 중단했다: iCPD로 인한 11명의 환자, 관련 없는 유해 사상으로 인한 3명의 환자, 의사의 결정 또는 진행성 질환의 임상적 징후로 인한 8명의 환자, 및 기타 고려사항으로 인한 2명의 환자.

주 1회의 FS118 투여는 최대 20mg/kg까지 양호하게 내약성이 있었고, 사이클 1 또는 후속 사이클에서 용량 제한 독성(DLT)이 관찰되지 않았다. 연구 관련 치료 긴급 유해 사상(TEAE)은 환자의 62.5%에서 관찰되었다. 이들 중 어느 것도, 치료 긴급 중대한 유해 사상(Treatment Emergent Serious Adverse Events; TE-SEAE)로 간주되지 않았고, 2개는 트랜스아미나제의 상승된 수준에 기초하여 등급 3의 TEAE로 간주되었다. 이 2개의 후자의 증례는, 상승된 수준이 명백한 임상적 영향이 없는 것으로 간주하고 높은 수준을 비제한적 독성으로 분류한 시험의 안전 위원회에 의해 검토되었다. TEAE와 FS118 치료 사이에 명백한 용량 관계는 관찰되지 않았다. 관찰된 사망 또는 TE-SAE는 FS118과 관련된 것으로 보이지 않았다.

3, 10 또는 20mg/kg을 투여받은 코호트의 32명 중 22명의 대상체는 평가 가능한 종양 스캔을 받았다. 이 22명의 환자 중, 11명은 일부 안정한 질환을 갖고 있었고, 11명은 최상의 전체적 반응(BOR 및 iBOR)에 기초한 진행성 질환을 갖고 있었다. 이것은 34.4%의 질병 통제 비율(DCR)을 나타낸다.

예를 들면, 표 7(하기)의 모든 환자는 진행중의 시험 동안 일부 안정한 질환을 나타냈고, 적어도 10주 동안 연구를 계속했다.

일부 안정한 질환을 나타내고 적어도 10주 동안 연구를 계속한 환자

용량 (mg/kg)	종양 유형	연구 중의 주 수	스캔 수
1.0	NSCLC	24	3
3.0	NSCLC**	35	3
3.0	H&N	28	3
10.0	H&N	17	2
	중피종**	27	3
	CRC	16	2
	자궁경부**	18	2
20.0	갑상선**	23	2
20.0	H&N**	21	2

*NSCLC - 비소세포폐암; H&N - 두경부암; CRC - 결장직장암

**연구는 2019년 8월 현재 진행 중이다.

특히, 대상체 1004-0001(NSCLC를 앓고 있음)은 안정한 질환(RECIST 1.1 최상의 반응)을 나타냈고, FS118 투여 후 8주 및 16주차에 관찰된 28.13%(직경의 합계(SoD)의 기준선으로부터의 변화)를 나타냈고, 이는 24주차에 25% 종양 감소로 약간 감소했다. 따라서, 이 특정 환자는 이들의 표적 병변의 측정에 기초하여 거의 부분적 반응을 나타냈다.

따라서, 이러한 결과는, 환자 모집단이 복수의 상이한 유형의 암을 포함하고, 모든 환자가 진행된 악성 종양을 갖고 있었고, 시험에 참여하기 전에 복수의 대체 치료 섭생에 실패했고, 일부 환자가 FS118에 의한 치료로부터 혜택을 받기에는 너무 위험할 수 있다는 것을 염두에 두고 FS118이 질환 안정화를 수행할 수 있음을 입증한다.

2.3.2 중간 약물동태/ 약력학 데이터

2019년 8월까지, 8개 코호트(800㎍, 2400㎍, 0.1, 0.3, 1, 3, 10 및 20mg/kg/Q1wk 용량)에 걸쳐 최대 29명의 환자에 대해 약물동태/약력학 분석이 수행되었다. 실시예 2.2.2에 제시된 바와 같이, 유리 FS118 혈청 농도를 가용성 LAG-3과 함께 측정했다. 또한, 혈액 중 증식(Ki67+) 및 총 이펙터 기억 또는 중앙 기억 CD4⁺ 및 CD8⁺ T 세포의 빈도를 측정하고, FS118의 초회 투여 전후의 종양 조직에서 LAG-3 및 PD-L1 발현의 정량화 뿐만 아니라 면역 세포 서브세트를 계수했다.

2.3.2.1 PK 분석

2019년 5월로부터의 결과(실시예 2.2.2.1 참조)에 이어서, 매주 투여되는 20mg/kg(Q1W) 코호트의 환자를 포함하여 추가 9명의 환자에서 유리 FS118 혈청 농도 수준을 정량화했다. 유리 FS118 혈청 농도 수준은 실시예 2.2.2.1에 제시된 검증된 리간드-결합 검정을 사용하여 정량화했다.

치료 사이클 1 및 사이클 2(사이클당 3주) 개시 후 제1 주에 걸쳐 유리 FS118 혈청 PK 프로필의 분석은 800㎍, 2400㎍, 0.1, 0.3, 1, 3 또는 10mg/kg Q1W 중 어느 하나를 제공받은 환자 코호트에 걸쳐 노출읜 용량 선형 증가(C_max, AUC)를 나타냈다. 20mg/kg을 제공받은 환자의 샘플에 대한 PK 분석이 진행 중이었다. 추정된 C_max 및 AUC 값은 각 환자 코호트 내에서 사이클 1과 사이클 2의 PK 프로파일 사이에 동등했고, 이는 낮은 항-약물 항체(ADA) 반응, FS118의 낮은 ADA-매개 가속 클리어런스 또는 이의 부재를 나타낸다.

2019년 5월의 결과에서 볼 수 있는 바와 같이, C_max는 비-인간 영장류에서 측정한 것과 대략 동등했지만, 클리어런스 속도는 예측보다 높았다(AUC는 예측보다 30% 낮음). 이용 가능한 I상 연구 데이터에 적합시킨 1구획 모델링으로부터의 유리 FS118의 말단 클리어런스 반감기(T_1/2)는 19.6시간으로 추정된다.

투여 개시로부터 1주 후(사이클 1 및 2) 및 후속 FS118 투여 전에, ≤ 1mg/kg을 투여받은 환자에 대한 혈청내 유리 FS118의 C_trough 수준은 검정의 정량 하한(LLOQ) 미만이었고, 이는 < 1mg/kg Q1W의 투여 스케쥴에서 혈액내 유리 FS118 축적의 결여를 시사한다. 3, 10 및 20mg/kg 코호트의 일부 대상체는 투여 후 7일차에 약 0.1~10㎍/mL 범위에서 측정가능한 유리 FS118의 C_trough 수준을 나타낸다.

2.3.2.2 가용성 LAG-3

2019년 5월의 결과(실시예 2.2.2.2 참조)에 이어서, 매주 투여되는 20mg/kg(Q1W) 코호트의 환자를 포함하여 추가 9명의 환자에서 혈청 총 가용성 LAG-3(sLAG-3) 수준이 정량화되었다. 혈청 총 가용성 LAG-3(sLAG-3) 수준은 실시예 2.2.2.2에 제시된 검증된 ELISA를 사용하여 정량화되었다.

2019년 5월의 중간 결과와 일치하게, 분석은 혈청 총 sLAG-3의 용량 의존적 증가를 나타냈다. 보다 구체적으로, 1, 3, 10 또는 20mg/kg/Q1wk 용량 수준을 제공받은 환자는, 투여후 약 2일 내지 3일에서 관찰되는 최대 농도(T_max)까지의 시간과 함께, 사이클 1 및 사이클 2의 최초 투여 후에 총 sLAG-3의 대략 10~150배 증가를 나타냈다. 1mg/kg 용량 수준에서, 총 sLAG-3 농도는 후속 용량(C1D8)의 전에 기준선 값으로 돌아갔다. 3, 10 및 20mg/kg/Q1wk 코호트에서, 후속 투여 전에 총 sLAG-3(최저 농도) 축적에 대한 일부 증거가 있었고; 이는 사이클 1과 비교하여 사이클 2에서 관찰된 더 높은 수준의 sLAG-3에 의해 추가로 입증된다. 2019년 5월의 분석을 추가로 발전시키면, 특히 10 및 20mg/kg 용량에서 총 가용성 LAG-3의 증가 정도 및 기간은 이러한 용량 수준에서 FS118에 의한 가용성 LAG-3 포획의 포화가 거의 달성되었음을 시사한다. 그러나, 이 명백한 관찰을 확인하기 위해, 20mg/kg 환자 코호트에는 추가 환자 수가 필요하다.

이 데이터를 활용하여, 1구획 모델링은 sLAG-3:FS118 복합체에 대해 15.8일의 최종 클리어런스 반감기(T_1/2)를 추정했다. 유리 sLAG-3의 추정된 말단 T_1/2는 1.6시간이었다. FS118 PK 및 sLAG-3 데이터의 모집단 및 개별 분석과 약물동태/약력학 모델링 데이터의 높은 상관관계가 관찰되었다. 이것은 ADA 간섭 및 ADA-매개된 FS118의 가속 클리어런스가 모두 없다는 것을 확인한다.

요약하면, 이 분석은 FS118 투여 후의 총 sLAG-3 수준의 용량-의존적 증가가 표적 LAG-3 수용체의 FS118 관여의 약력학적 마커로서 사용될 수 있음을 나타냈다. 이 발견은, FS118의 제안된 작용 메커니즘을 서포트하고, 이에 의해 표적 세포 표면에서 발현된 LAG-3 수용체에 대한 FS118의 결합은 세포 표면에서 발현된 LAG-3의 탈락을 통해 잠재적으로 전신 가용성 LAG-3 수준의 증가를 유도한다.

2.3.2.3 혈액에서 증식 및 총 이펙터 및 중앙 기억 CD4⁺ 및 CD8⁺ T 세포의 빈도

혈액에서 Ki67⁺ CD4⁺ 및 Ki67⁺ CD8⁺ 이펙터 기억 및 중앙 기억 T 세포의 증식 빈도를 유세포 분석에 의해 시간 경과에 따라 모니터링했다. 간단히 말해서, 전혈을 Cyto-Chex®에 수집하고, 처리할 때까지 냉장 보관했다. 시험당 100μL의 각 샘플을 사용했다. 먼저, 비-특이적 결합은 인간 BD Fc 차단 용액으로 차단했다. 이어서, 샘플을 표면 항체 칵테일(50μL)로 염색하고, 이어서 적혈구를 용해하고 BD FACS 용해 용액으로 고정했다. 세척된 세포를 Fix/Perm 완충제로 투과 처리한 다음, 1× Perm 완충제로 2회 세척했다. 세포내 항체 칵테일(50μL)을 첨가하고, 2-8℃에서 30분 동안 인큐베이팅했다. 이어서, 세포를 2% FBS로 2회 세척하고, 사이토미터(BD LSR)에서 수집하기 위해 TruCount 튜브로 옮겼다.

CD4⁺ 또는 CD8⁺ 중앙 기억 T 세포(각각 CD45⁺ CD3⁺ CD19^neg CD4⁺ 또는 CD8⁺에 의해 정의됨, CD45RA^neg CCR7^pos 발현) 또는 CD4⁺ 또는 CD8⁺ 이펙터 기억 T 세포(각각 CD45⁺ CD3⁺ CD19^neg CD4⁺ 또는 CD8⁺에 의해 정의됨, CD45RA^neg CCR7^neg)의 빈도를 측정했다. 또한, CD4⁺ 또는 CD8⁺ 이펙터 또는 중앙 기억 T 세포 모집단 내의 Ki67⁺ 세포의 빈도를 측정했다. 3, 10 및 20mg/kg의 환자 코호트로부터의 이용 가능한 데이터 분석은, FS118이 기준선 측정과 비교하여 사이클 1에서의 투여 후에 Ki67⁺ CD4⁺ 및 Ki67⁺ CD8⁺ 이펙터 기억 및 중앙 기억 T 세포의 증식 빈도의 증가를 유도할 수 있음을 나타냈다. 이 말초 약력학적 반응의 동태 및 일시적 특성은 전임상 데이터에서 관찰된 것과 일치하는 T 세포 활성화를 나타낸다.

상기에서 설명한 것과 동일한 유세포 분석에서, 시간 경과에 따른 혈액내 면역 세포 서브세트의 계수가 수행되었다. 초기 데이터는 FS118 투여에 의해 CD3⁺, CD4⁺, CD8⁺ T-세포 및 NK 세포의 절대 수가 증가하는 것을 나타냈다. 반응 동태는 일시적이었고, 혈액에서 증식하는 이펙터 또는 중앙 기억 CD4⁺ 및 CD8⁺ T 세포의 빈도에서 관찰된 약력학적 효과와 유사했다. 이것은 특히 중피종, 자궁경부암, 미분화 갑상선암 및 후두암을 앓고 있는 4명의 환자에서 관찰되었다. 종합하면, 예비 데이터는 FS118이 환자에서 전신 면역 활성화 반응을 유발할 수 있음을 시사한다.

2.3.2.4 종양에서 PD-L1 및 LAG-3 발현

마우스 종양 모델에 대한 전임상 연구는 이전에 mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체가 LAG-3 발현 종양 침윤 림프구(TIL)에 대해 LAG-3 억제를 유도할 수 있는 반면, 마우스를 대리 mLAG-3/mPD-L1 이중특이적 항체와 동일한 mLAG-3 및 mPD-L1 결합 부위를 포함하는 2개의 항체 분자로 치료하는 경우, LAG-3 발현이 증가하는 것을 나타냈다(P2399 A LAG3/PD-L1 mAb²는 단일-약제 체크포인트 차단에 의해 유도된 LAG-3의 PD-L1 매개된 보상적 상향조절을 극복할 수 있다, Faroudi et al., 미국 암 연구 협회(AACR) 연례 회의 2019, 2019년 3월 29일 - 4월 3일, 미국 조지아주 애틀랜타).

FS118의 맥락에서 이러한 잠재적 효과를 조사하기 위해, 이는 이중특이적 hPD-L1/hLAG-3 항체이고, 쌍을 이룬 종양 샘플(N=4)가 환자의 사전 투여(-3일차 내지 -12일차 범위) 및 투여 후(19일차 내지 41일차 범위)로부터 수득되었다. 포르말린 고정 및 파라핀 포매(FFPE) 종양 코어 바늘 생검에서 PD-L1 및 LAG-3 발현은, 각각 시험관내 진단(IVD) 항-PD-L1(클론 SP263) 검정(Roche Diagnostics/Ventana Medical Systems) 및 검증된 항-LAG-3(클론 17B4) 면역조직화학(IHC) 검정(Ventana BenchMark Ultra 염색 플랫폼)을 사용하여 평가했다. IHC 염색 후의 후속 평가를 위해, 100개 이상의 종양 세포 및 >25% 종양 함량의 선택 기준이 적용되었다. 평가에는, 종양 세포의 막성 항-PD-L1 염색의 백분율 및 강도를 기반으로 종양 양성 스코어 백분율(%TPS)의 결정, 및 하기 구획에서 최대 5개의 고배율 필드에서 PD-L1⁺ 또는 LAG-3⁺ 면역 세포의 정량화가 포함되었다: 종양내 기질, 상피내 종양 성분, 또는 종양주위 영역(해당되는 경우).

전체적으로, 연구의 이 시점에서의 예비 결과는 FS118 투여 후의 종양에서 PD-L1 또는 LAG-3 발현의 보상적 상향조절의 징후를 나타내지 않았다.

2.3.3 결론

2019년 8월까지 이용 가능한 중간 결과는 2019년 5월에 관찰된 결론을 서포트한다(실시예 2.2.3 참조). 요약하면, FS118은 내약성이 양호했고, 최대 관찰 농도(C_max)는 사이노몰구스 원숭이 연구에서 예측된 C_max와 일치했다. FS118의 클리어런스 속도는 예상보다 예상외로 높았지만, 시험된 용량에서 지속적 약력학적 반응이 관찰되었고, 이는 치료 효능을 나타낸다. 실제로, 2019년 8월까지, 11명의 환자가 34.4%의 질병 통제 비율(DCR)을 나타내는 일부 안정한 질환을 앓고 있는 것으로 관찰되었다. 이러한 결과는, 환자 모집단이 복수의 상이한 유형의 암을 포함하고, 모든 환자가 진행성 악성종양을 갖고 있고, 시험에 참여하기 전에 복수의 대체 치료 요법에 실패했고, 이용 가능한 다른 치료 옵션이 없었고, 일부 환자는 FS118 치료로부터의 혜택을 받기에는 너무 위험할 수 있다는 점을 염두에 두고 FS118이 질환을 안정화시킬 수 있음을 입증한다.

추가 서포트로서, 2019년 8월의 결과는 FS118이 매주 1회 투여되는 3mg/kg, 10mg/kg 및 20mg/kg의 용량에서 가용성 LAG-3(sLAG-3) 수준의 지속적 증가를 유도할 수 있음을 나타냈다. sLAG3 수준은 마우스의 치료 효능과 관련이 있는 것으로 나타났다.

추가로, FS118은 3, 10 및 20mg/kg의 환자 코호트에서 T 세포 활성화를 나타내는 동적 및 일시적 말초 약력학적 반응을 유도하는 것으로 나타났다. 또한, C_trough 수준에서 CD4+ 및 CD8+ 중앙 기억 및 이펙터 T 세포의 증가된 증식은 C_trough 수준에서 지속적 약력학적 반응에 대한 추가 증거를 제공하고, FS118의 가정된 작용 메커니즘과 일치하는 FS118 투여 후의 종양에서 PD-L1 또는 LAG-3 발현의 보상적 상향조절의 징후는 없었다.

2.4 중간 데이터(2020년 4월)

2.4.1 중간 임상 데이터(2020년 4월)

2020년 4월까지, 추가로 3명의 환자가 연구에 등록되었다. 따라서, 총 43명의 환자가 등록되었다. 이 43명의 환자 중, 2명의 환자는 적극적으로 치료를 받고 있었다. 나머지 41명의 환자는 치료를 완료/중단했다: iCPD로 인한 14명의 환자, 관련 없는 유해 사상으로 인한 4명의 환자, 의사의 결정 또는 진행성 질환의 임상 징후로 인한 10명의 환자, 및 기타 고려사항으로 인한 10명의 환자. 이 41명의 환자 중, 14명은 추적 관찰 중이었고, 27명은 연구를 완료했다.

연구에 등록된 추가 3명의 환자와 관련하여, 20mg/kg의 용량 수준으로 FS118 IV 투여를 매주 1회 투여하는 것은 내약성이 양호했고, 스폰서에게 용량 제한 독성이 보고되지 않았다.

연구에 등록한 모든 환자와 관련하여, 관찰된 치료 긴급 부작용의 약 20%는 FS118과 관련되었고, 대부분은 경증 내지 중등도였다(등급 1 또는 2, 유해 사상에 대한 공통 용어 기준 v4.3). FS118-관련 유해 사상의 약 5%가 3등급으로 분류되었다. FS118과 관련하여 심각한 유해 사상(SAE)은 보고되지 않았다. SAE는, 사망을 초래하고, 생명을 위협하고, 입원이 필요하고, 장애를 일으키거나, 환자의 신체에 영구적 손상 또는 선천적 기형/선천적 결함을 일으키고, 영구적 손상 또는 상해 또는 기타 심각한 사상(예: 알레르기성 기관지경련)을 예방하기 위한 개입을 필요로 하는 모든 유해 사상으로 정의된다. 연구 동안 발생한 사망은 FS118과 관련된 것으로 간주되지 않았다. 요약하면, 새로운 안전상 위험은 확인되지 않았다.

2020년 3월 25일 시점에서, 3, 10 또는 20mg/kg 코호트에서 30/36명의 환자가 평가 가능한 종양 스캔을 받았다. FS118(BOR 및 iBOR)에 의한 치료에 대한 최상의 반응으로서, 17명의 환자는 안정한 질환(SD)을 갖고, 13명의 환자가 진행성 질환(PD)을 갖는 것으로 기록되었다. 이는 47.2%의 질병 통제 비율(DCR)을 나타내고, 2019년 8월로부터 12.8%의 증가에 상당한다. 안정한 질환을 갖는 것으로 기록된 17명의 환자는 하기 표 8에 수록되어 있다.

FS118을 주 1회 3, 10 또는 20mg/kg의 용량으로 투여한 경우에 BOR/iBOR로서 안정한 질환을 나타내는 17명의 환자

용량 (mg/kg)	종양 유형	연구의 주 수
3	두경부	26
	NSCLC	44
	난소	11
10	자궁경부암	28
	CRC	15
	CUP	6
	두경부	15
	흑색종	15
	중피종	35
	NSCLC	12
20	미분화 갑상선	55**
	두경부	11
		12
		27
	난소	21
	전립선	10
	평활근육종	32**

NSCLC - 비-소세포 폐암; CRC - 결장직장암; CUP - 미지의 원발성 암

**연구는 2020년 3월 25일 시점에서 진행 중이다.

I상 연구에 잔류하는 2명의 환자(둘 모두는 주 1회 20mg/kg 용량을 투여받음) 중, 1명의 환자는 평활근육종(연조직 육종)이 있었고 2020년 3월 25일 시점에서 32주 동안 연구에 참여했고; 다른 환자는 미분화 갑상선암(ATC)이 있었고 2020년 3월 25일 시점에서 1년(55주) 이상 동안 현저히 연구 중이었다.

2.4.2 결론

이러한 결과는, FS118이 장기간에 걸쳐 투여된 경우에 양호한 내약성을 나타내고, 보다 중요하게는 1-20mg/kg 범위 내의 용량으로 FS118에 의한 치료가 장기간의 질병 안정화를 초래할 수 있음을 계속 입증한다(18주 초과의 복수 환자가 SD를 BOR/iBOR로서 완료했다; 1명의 환자 > 1년 및 연구 중). 시험의 환자 모집단이 복수의 상이한 유형의 암을 포함하고, 모든 환자가 진행성 악성종양을 갖고 있었고, 시험에 참여하기 전에 복수의 대체 치료 섭생에 실패한 적이 있고, 일부 환자가 FS118에 의한 치료로부터 혜택을 받기에는 너무 위험할 수 있기 때문에, 이는 특히 중요하다. 이 곤란한 환자 모집단에도 불구하고, FS118은, 2019년 8월로부터 12.8% 증가에 상당하는, 47.2%의 질병 통제 비율(DCR)을 달성할 수 있었다. 이 증가는 추가로 FS118의 3-20mg/kg 범위의 용량이 질환 안정화를 달성할 수 있음을 나타낸다.

실시예 3: 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 내성을 기반으로 하여 FS118에 반응할 가능성이 높은 환자의 선택

3.1 배경

진행 중의 FS118 시험에 포함된 모든 환자는 PD-1/PD-L1 함유 요법을 받는 동안 또는 받은 후에 이전에 진행되었다.

초기 결과(2019년 8월)는 FS118이 질병 통제 비율(DCR)에서, 2020년 4월까지 47.2%로 상승하는(실시예 2.4.1 참조) 일부 환자에서 질환을 안정화할 수 있음을 입증했다. 본 발명자들은, PD-L1 억제와 조합된 LAG-3 억제(이중 체크포인트 억제) 또는 PD-L1 및 LAG-3의 이중특이적 표적화(WO2017220569A1)에 의해 제공되는 신규 생물학에 의해 제공되는 추가 이점으로 인해, FS118이 이들 환자에게 이점을 제공할 수 있다고 가정했다. 항-PD-1 또는 항-PD-L1 함유 섭생 단독으로 재치료하여 임상적 이점을 달성할 것으로 기대되지 않았다[참조: Fujita et al., Anticancer Res. (2019); Fujita et al., Thoracic Cancer(2019), Martini et al., J. Immunotherapy Cancer (2017)].

PD-1/PD-L1 차단에 대한 내성 메커니즘 중 하나는 T 세포 기능을 손상시킬 수 있는 신호전달 수용체의 상향조절일 수 있고[참조: Nowicki et al., The Cancer Journal(2018)]; 이 부류의 수용체에는 LAG-3가 포함된다. 이 내서 메커니즘은 T 세포가 초기에는 반응하지만, 그 후에는 고갈되어 T 세포 기능을 상실하는 후천적 내성의 형태인 것으로 생각된다. 이는 환자가 초기 요법에 반응하지 않는 1차 내성과 대조적이다.

따라서, 본 발명자들은 FS118이 항-PD-1/PD-L1 요법에 대한 후천적 내성을 갖는 환자에게 임상적 이점을 제공할 가능성이 가장 높을 수 있다고 가정하고, 분석을 수행하여, FS118에 의한 치료를 위한 환자를 선택하는 데 사용될 수 있는 특정 기준을 정의했다. 이러한 기준을 정의하기 위해, 항-PD-1/PD-L1 요법에 의한 각 환자의 이전 치료 이력을 기반으로 하는 서브-그룹이 정의되었다(이 요법에 대한 최고 전체 반응(BOR) 및 이러한 요법에 의한 치료 개월 수). FS118로부터 유도된 임상 이점은 각 환자가 FS118 치료를 받은 주 수를 기반으로 했고, "FS118 완료 주"라고 지칭했다.

3.2 방법론

2019년 12월까지 I상 시험에 등록된 환자 중, 43명의 환자에서 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료 이력이 공지되었다. 이러한 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아벨루맙, 더발루맙, 아테졸리주맙, 세미플리맙, MSB-2311 또는 KN035를 단독으로 또는 또 다른 약제(예: 화학요법제 또는 면역요법제(예: 항-CTLA-4))와 조합하여 치료하는 것이 포함된다. 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법이 FS118에 의한 치료 직전에 반드시 수행된 것은 아니지만, 오히려 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법은 해당 암에 대한 환자의 치료 이력의 임의의 시점에서 발생할 수 있다.

초기에, 치료 이력에 따라 6개의 서브-그룹을 다음과 같이 정의했다:

· PD(치료 기간에 관계없이 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 함유 요법에 대한 BOR로서의 진행성 질환(RECIST 1.1에 의함; Eisenhauer et al., 2009));

· SD(임의의 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 함유 요법에 의한 BOR 또는 3개월 이하의 치료 기간으로서의 안정한 질환(RECIST 1.1에 의함)("0-3개월"로서 표시));

· SD(임의의 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 함유 요법에 의한 BOR 및 3개월 초과 6개월 미만의 치료 기간으로서의 안정한 질환(RECIST 1.1에 의함)("3-6개월"로 표시));

· SD(임의의 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 함유 요법에 의한 BOR 및 6개월 이상의 치료 기간으로서의 안정한 질환(RECIST 1.1에 의함) 및 ("6개월 이상"으로 표시)) 및

· PR(임의의 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 함유 요법에 대한 BOR로서의 부분 반응(RECIST 1.1에 의함)).

· 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 함유 요법에 의한 치료 기간에 관계없이, 이전 항-PD-1/PD-L1 요법("UNK")에 대한 불명의 RECIST 기준(BOR).

이 연구에서 평가된 환자 중 누구도, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 함유 요법에 대해 CR(완전 반응)을 나타내지 않았고, 따라서 CR 환자에 대한 서브-그룹은 확립되지 않았다.

상기 정의된 각 서브-그룹의 환자는 각 환자가 FS118 치료를 받은 주 수 "FS118 완료 주"에 대해 먼저 플로팅되었다.

이 초기 분석에 따라, 1차 내성 및 후천적 내성에 대한 하기 정의가 도출되었다:

· PD 서브-그룹과 SD 0-3개월 서브-그룹의 조합으로 정의된 "일차 내성".

· SD 3-6개월, SD 6+ 개월 및 PR 서브-그룹의 조합으로 정의된 "후천적 내성".

· 불명(이전 항-PD-1/PD-L1 요법에 대한 BOR는 불명).

이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 함유 요법에 대해 CR을 갖는 환자가 연구에 참가한 경우, 이들 환자는, SD 3-6개월, SD 6+ 개월 및 PR 서브-그룹과 유사하게, 진행 전의 이전 요법으로부터 유의한 임상적 이익을 달성한 것에 기초하여, 후천적 내성 그룹으로 또한 분류될 수 있다. 이는 항 PD-1 및 항 PD-L1 요법이 완전한 반응을 초래할 수 있고 이러한 환자 중 일부는 이후에 내성 메커니즘과 진행성 질환을 발증하기 때문이다. 항 PD-1 또는 항 PD-L1 후에 완전 반응을 달성한 환자의 내성 메커니즘은 부분 반응을 달성한 환자와 유사할 것으로 예상된다.

각 1차 내성, 후천적 내성 및 불명 서브-그룹은 각각 "FS118 완료 주"에 대해 플로팅되었다.

플롯의 경우, "FS118 완료 주" 데이터는 2020년 3월 25일까지 정확했다. 이 데이터는, 진행 중의 시험으로부터의 것이다. 모든 플롯은, 패키지 'ggplot'을 사용한 R 버전 3.6.1(www.cran.r-project.org)을 사용하여 생성되었고, 비-모수적 윌콕손 순위 검정(Wilcoxon Rank Test) 계산을 사용한 통계 분석은 동일한 버전의 R을 사용하여 수행되었다.

3.3 결과

2019년 12월까지 정확한 환자 데이터를 사용하여, 항-PD-1/PD-L1 함유 요법(PD, SD 0-3m, SD 3-6m, SD 6m+, PR, UNK)는, 분석시에 이들 환자들이 완료한 FS118 치료 주 수와 관련하여, 이들 그룹 사이에 유의차(Wilcoxon Rank Sum Test p>0.05)를 나타내지 않았다. 그러나, 3개월 이상 동안 동안 이 항-PD-1 또는 항-PD-L1을 제공받은 안정한 질환(SD)의 이전 항-PD-1/PD-L1 함유 치료에 대해 최상의 전체 반응(BOR)을 나타낸 환자(부분 반응자 포함)는, PD 및 SD 0-3m 서브-그룹과 비교하는 경우, FS118에 대한 보다 긴 반응 기간을 나타내는 경향이 관찰되었다.

이 놀라운 관찰에 기초하여, 6개의 초기 서브-그룹은 항-PD-1/PD-L1 함유 요법에 의한 이전 치료에 대한 환자의 반응에 기초하여 2개 그룹으로 후속적으로 분석되었다. 제1 그룹은 PD 및 SD 0-3개월의 서브-그룹을 포함했고, 이들 환자가 이전 항-PD-1/PD-L1 요법으로부터 유의한 임상적 이점을 유도하지 못했다는 사실에 근거하여 "1차 내성"으로 명명되었다. 제2 그룹은 SD 3-6개월, SD 6개월+ 및 PR 서브-그룹을 포함하고, 후속적으로 진행성 질환을 경험하기 전에 3개월 이상 동안 동안 이전 항-PD-1/PD-L1 요법으로 임상적 이점을 유도한 환자를 기준으로 "후천적 내성"으로 명명되었다.

환자를 1차 및 후천적 내성 그룹으로 그룹화한 경우, 각 그룹의 환자가 FS118 치료를 유지한 주 수와 비교한 경우, 이들 2개 환자 그룹 사이에 현저한 차이가 관찰되었다(Mann-Whitney-Wilcoxon 검정 p=0.059). 보다 구체적으로, 후천적 내성 그룹의 환자는 FS118에 의한 치료에 더 잘 반응하고, 치료로부터 이익을 유도할 가능성이 더 높은 것으로 관찰되었다. 특히, FS118 치료에 대해 18주 이상을 완료한 모든 환자는, 이전 항-PD-1 치료에 대한 BOR이 불명한 1명의 환자를 제외하고 후천적 내성 그룹의 환자였다. 그러나, BOR이 불명인 이 후자의 환자는 이전 항 PD-1 요법을 1년 이상 지속한 것으로 공지되어 있었고, 따라서 이 환자는 후천적 내성을 갖는 것으로 분류되는 BOR을 가졌을 것으로 의심된다. 1차 내성 환자 중 누구도 17주 이상 동안 연구를 유지할 수 없었다. 이러한 관찰은 2020년 3월 25일에 이용 가능한 추가 임상 데이터에 의해 추가로 서포트되었고, 이 데이터는 후천적 내성 그룹의 환자가 계속 치료를 받고 있기 때문에, 1차 내성 환자 그룹과 후천적 내성 환자 그룹 사이에 관찰된 차이의 통계적 유의성이 개선되었음을 발견했다( Mann-Whitney-Wilcoxon 검정 p=0.048, 도 7).

또한, 이 분석은 진행 중의 연구로부터의 것이지만, 1차 내성 환자의 누구도 연구를 유지할 수 없다는 점에 유의하는 것이 중요하다.

2019년 12월까지, 39명의 환자가 FS118 치료 중에 평가 가능한 종양 스캔을 받았다. 이러한 환자는, 각 환자가 후천성 또는 일차 내성 표현형을 갖고 있는지의 여부에 대한 표시와 함께 도 8에 제시되어 있다. 18주 이상의 FS118 치료가 완료된 모든 환자(후천적 내성 표현형을 가짐)는 안정성 질환의 적어도 하나의 측정치를 나타냈지만(도 8), 후천성 및 1차 내성 모집단 모두에서 안정한 질환이 관찰되었다.

FS118 치료에 대한 반응 가능성의 관점에서 후천적 내성 환자에서 관찰된 현상은 특정 용량 수준(도 7) 또는 임상 적응증(도 8 및 9)과 무관한 것으로 나타났다.

3.4 결론

요약하면, 후천적 내성을 갖는 환자(SD, PR 또는 CR의 BOR를 갖고, 따라서 후속적으로 진행성 질환을 경험하기 전에 3개월 이상 동안의 치료 기간에 걸쳐 이전 항-PD-1/PD-L1 요법을 받는 동안 일부 임상적 이점을 갖는 것으로 정의됨)는 놀랍게도 1차 내성 환자(3개월 이내의 이전 항-PD-1/PD-L1 요법으로부터 임상적 이익을 유도하지 않거나 일부 임상적 이익을 유도하는 환자로서 정의됨)보다 FS118 치료에 장기간 동안 적극적으로 반응할 가능성이 높은 것으로 밝혀졌다. 이는, 이전 PD-(L)1 함유 치료 섭생에서 질환 진행 후에 PD-(L)1 항체에 의한 환자의 재치료가 권장되지 않고 역사적으로 환자가 거의 이익을 유도하지 못하기 때문에 특히 중요하다[참조: Fujita et al., Anticancer Res. 2019; Fujita et al., Thoracic Cancer, 2019; Martini et al., J. Immunotherapy Cancer, 2017]. 따라서, 본 발명자들은 FS118 치료에 반응할 가능성이 높은 환자를 선택하기 위한 역치를 확인했다. 이 역치는 FS118 용량 또는 암 유형과 무관한 것으로 보인다.

참고로, 본 발명자들은, 이어서, BI-754091(항-PD-1 mAb)과 조합된 IgG4 모노클로날 항체 BI-754111(항-LAG-3)을 조사하는 3개의 임상 연구: NCT03697304, NCT03780725 및 NCT03156114를 확인했다. 이러한 연구는 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 기반 요법에 대해 2차 내성(후천적 내성)을 나타내는 환자 코호트의 사용을 참조한다. 이러한 임상 연구와 관련하여 공개적으로 이용 가능한 정보는 어느 것도, 이러한 코호트가 선택된 이유, 2차 내성의 정의가 어떻게 도출되었는지를 나타내지 않고, 1차 내성 환자 모집단과 비교하여 2차 내성 환자 코호트에서 개선된 반응을 입증하는 제안 또는 데이터를 제공하지 않는다. 따라서, 이러한 임상 연구는 FS118의 맥락에서 지원을 제공하지 않고, 본 연구와 관련이 있는 것으로 보이지 않는다.

실시예 4: 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 대한 내성을 기반으로 FS118에 의한 치료를 위한 환자를 선택하기 위한 마커로서의 PD-L1 발현

4.1 배경

진행 중의 FS118 시험에 참가하는 모든 환자는 항 PD-1 또는 항 PD-L1 요법에 의한 사전 치료를 받았고 문헌[참조: Faroudi et al. (AACR(American Association for Cancer Research) 연례 회의 2019, 2019년 3월 29일 - 4월 3일, 미국 조지아주 애틀랜타]에서 이러한 경로를 표적화하는 것이 체크포인트 수용체의 수준을 변경할 수 있다는 것이 밝혀졌기 때문에, FS118로 치료하기 전에 PD-L1 및 LAG-3의 발현 수준("기준선")을 결정하고, FS118에 의한 치료에 대한 이러한 발현 수준과 시간 사이에 상관관계가 존재하는지를 결정하고자 했다. 이 분석을 위해, 환자는 실시예 3에 정의된 바와 같이 항-PD-1 또는 PD-L1 요법에 의한 이전 치료에 대해 "후천성" 또는 "1차" 내성을 갖는 것으로 그룹화되었다.

4.2 방법

PD-L1 발현은 FS118에 의한 치료 전에 환자로부터 채취한 생검에서 측정되었다("기준선"). 생검이 분석에 적격이기 위해, 종양 세포 함량이 25% 이상이어야 하고, 100개 이상의 종양 세포가 존재해야 한다. 종양 샘플을 포르말린-고정 및 파라핀 포매(FFPE)하고, 염색하고, 실시예 2.3.2.4에 제시된 바와 같이 평가했다. PD-L1 퍼센트 종양 양성 스코어(%TPS)는 PD-L1에 대해 양성 염색을 나타내는 생검 샘플 중의 종양 세포의 백분율로서 계산되었다. %TPS는 이용 가능한 모든 샘플에 대해 측정했고, 이들 샘플은 후천적 내성을 갖는 13명의 대상체와 1차 내성을 갖는 4명의 대상체였다.

4.3 결과

기준선에서의 PD-L1 %TPS와 FS118에 의한 치료의 주 수를 비교하면, 후천적 내성 그룹에서 양의 상관관계가 관찰되었다(편측 스피어만 상관 계수 r=0.57, p=0.022). 반대로, 1차 내성 환자 그룹에서는 PD-L1 %TPS와 FS118 치료 시간 사이에서 상관관계는 발견되지 않았다(편측 스피어만 상관 계수 r=-0.40, p=0.37). 추가로, 후천적 내성 그룹 내에서, 3명의 환자는 FS118로 30주 이상 치료되었고, 이는 FS118에 의한 질병 통제를 입증하는 것이다. 이 3명의 환자는 또한 그룹 내에서 가장 높은 PD-L1 %TPS를 가졌다(도 10 참조). 후천적 내성 그룹에 대한 양의 상관관계를 사용하여, FS118에 의한 치료에 반응할 가능성이 높은 환자를 선택하기 위해 사용할 수 있는 예후 역치를 결정했다. 이는 상관 경향선을 플로팅하고, 보간을 통해, 이를 사용하여, 18주간의 FS118 치료와 상관관계가 있는 PD-L1 %TPS 스코어를 결정함으로써 수행되었다. 후천적 내성 그룹에서는 18주 이상의 치료가 계속되는 것이 관찰되었지만, 1차 내성 그룹에서는 관찰되지 않았고, 따라서 FS118에 의한 임상적 이점을 나타내는 것으로 간주되었기 때문에 18주를 선택했다. 이렇게 결정된 PD-L1 %TPS 스코어는 15%였다.

4.4 결론

전체적으로, 이러한 결과는 후천적 내성 환자에서 종양에 의한 PD-L1의 발현(PD-L1 %TPS)이 FS118에 의해 달성된 질병 통제의 수명과 양의 상관관계가 있음을 입증한다. 후천적 내성 그룹에서 PD-L1 %TPS가 가장 높은 3명의 환자는 모두 FS118에 의한 장기간의 질병 통제를 가졌다(FS118 치료에서 30주간 이상). 후천적 내성 그룹에 대한 양의 상관관계를 사용하여, 15%의 PD-L1 %TPS가, FS118에 의한 치료에 대해 지속적 반응을 나타낼 가능성이 특히 높은 후천적 내성 그룹의 환자를 선택하기 위한 예후 역치로서 확립되었다.

실시예 5: 후천성 및 1차 내성 환자의 면역 반응에 대한 FS118의 효과

5.1 배경

후천적 내성 환자는 1차 내성 환자보다 더 장기간 FS118 치료를 계속할 가능성이 높다는 실시예 3의 관찰에 이어서, 본 발명자들은 이들 2개 그룹 사이에서 FS118에 대한 약리학적 반응에 차이가 있는지의 여부를 결정하고자 했다. 1차 내성을 갖는 환자는, 종양의 억제 인자 또는 면역계에 의한 종양의 인식 부족의 결과로서 부적절한 T 세포 기능으로 인해 이전 항 PD-1/PD-L1 치료에 실패할 수 있다[참조: Nowicki et al., 2018]. 후천적 내성을 갖는 환자는, 초기에 T 세포 반응을 나타낼 수 있지만, LAG-3의 상향조절을 포함하는 복수의 메커니즘에 기인할 수 있는 T 세포 기능의 손실이 있는 것으로 믿어진다. FS118에 의한 T 세포의 활성화는 시험관내에서 FS118의 작용 메커니즘인 것으로 입증되었다(WO2017220569A1). 따라서, 본 발명자들은, FS118에 반응하는 환자의 면역계의 능력이 이전 항-PD-1/PD-L1 요법에 대한 환자의 반응에 의존할 수 있고, 면역 반응을 증강시키는 FS118의 능력이 임상적 이점을 제공하는 FS118에서 중요할 수 있는 것으로 가정했다.

5.2 방법론

FS118에 의한 치료 동안, 시험 중의 35명의 환자의 혈류 중의 말초 면역 세포 수에 대한 FS118의 효과가 평가되었다(실시예 3에 정의된 바와 같이, 후천적 내성 환자 24명, 1차 내성 환자 8명, 불명 3명). 혈액 샘플은 환자로부터 수득했고, 전혈 면역 세포의 CD3+ 림프구, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, B 세포 및 NK 세포(TBNK 세포 수)의 절대 세포 계수를 카프리온 바이오사이언시스(Caprion Biosciences, Inc., Montreal, Quebec, Canda)에 의해 수행했다. 간단히 말해서, 수집된 혈액은 처리될 때까지 4℃에서 Cyto-Chex® BCT 튜브에 저장되었다. 이어서, 100μL의 전혈을 사용하여 Caprion에 의한 단일 복제로 미리 정의된 TBNK 패널로 염색했다. 염색 후, 샘플은 BD LSR 유세포 분석기에서 24시간 이내에 취득되었고, FlowJo 소프트웨어를 사용하여 정량화되었다. 절대 세포 수는 FS118 처리 전("기준선"이라고 함) 및 FS118 처리 중의 복수의 시점에서 측정되었다.

절대 세포 수에 대한 후속 데이터 분석에서는, 1mg/kg 이상의 FS118의 용량을 투여받은 환자만이 고려되었다.

세포 유형당 기준선으로부터의 세포 수의 백분율 변화는 다음과 같이 계산되었다:

기준선으로부터의 백분율 변화 = [(세포 수_{치료일에서} - 세포 수_{기준선에서}) / 세포 수_{기준선에서}] * 100

이어서, 각 세포 유형에 대해, 기준선으로부터의 백분율 변화를 FS118 처리 시간에 대해 플로팅했다. 면역 세포 수를 기반으로 면역 반응 프로파일은 각 환자에 대해 개별적으로 계산되었다.

환자는, 실시예 3에 정의된 바와 같이, "1차" 또는 "후천적" 내성으로 분류되었다.

5.3 결과

도 11은 2명의 대표적 환자에 대한 기준선으로부터의 백분율 변화를 나타낸다. "1차 내성"을 갖는 환자에 대한 면역 세포 반응 프로파일의 대표적 예로서의 환자 1004-0003, 및 "후천적 내성"을 갖는 환자의 면역 세포 반응의 대표적 예로서의 환자 1002-0014. 후천적 내성을 갖는 환자는 1차 내성을 갖는 환자보다 CD3+ 림프구, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 및 NK 세포의 수가 증가하는 경향을 나타냈다(이러한 세포 서브-세트에 대한 기준선으로부터의 백분율 변화를 기준으로).

또한, FS118 치료의 과정에서 관찰된 기준선으로부터의 CD3+ 림프구의 최대 배수 변화를 각 환자에 대한 FS118 치료 시간에 대해 플로팅했다. 이것은 1차 및 후천적 내성 그룹 모두에 대해 수행되었다. 기준선과 비교하여 면역 세포 수의 배수 변화에 의해 측정된 CD3+ 림프구 반응의 크기는 후천적 내성 그룹에서 FS118 치료 기간과 유의하게 양의 상관관계가 있는 것으로 밝혀졌고(편측 스피어만 상관 계수 r=0.45, p=0.025), 그러나 이것은 1차 내성 그룹에서는 유의하지 않았다(편측 스피어만 상관 계수 r=0.52, p=0.098).

5.4 결론

이 데이터는, 환자 혈액에서 관찰된 T 및 NK 세포의 증가, 및 CD3+ 림프구의 배수 변화의 증가가 FS118에 의한 치료의 결과인 것을 나타내고, 후천적 내성을 갖는 환자의 면역계가 FS118 치료에 의한 면역 반응을 더욱 상승시킬 수 있음을 나타낸다. 따라서, 본원에서 정의된 후천적 내성은 FS118에 반응할 가능성이 높은 환자를 선택하기 위한 역치로서 사용될 수 있다.

실시예 6: FIH 데이터 및 모델링에 기반한 I상 확장 및/또는 II상 시험에 대한 용량 권장

6.1 개요

장래의 임상 연구를 위한 용량 선택을 유도하기 위해, FIH I상 시험 데이터(실시예 2-5에 기재됨)의 다중 파라미터를 수집하여 분석했다. FIH I상 시험에서 시험된 용량당, 이러한 파라미터에는 항-약물 항체(ADA) 및 치료 긴급 유해 사상(TEAE)의 존재, 게다가 치료 시간, 종양 성장률, 직경의 합계에 의한 종양 크기 및 응답자 수에 따라 평가된 효능이 포함되었다. 혈청 중의 LAG3:FS118:PD-L1 수용체 삼량체 복합체 형성, 총 sLAG3 및 총 sPD-L1 프로파일의 시뮬레이션도 수행되었다. 용량, ADA 수준, 응답자 수에 의해 평가된 효능, 및 삼량체 복합체 형성의 시뮬레이션을 비교한 경우, 대부분의 파라미터에서 차이가 관찰되지 않았지만, 바람직한 용량을 추가 연구에 권장할 수 있도록 하기 위해 용량 사이에 충분한 차이를 나타냈다.

6.2 FIH 혈청 샘플의 ADA 분석

FS118 등의 단백질 치료제의 투여는 항-약물 항체(ADA)를 유도할 수 있고, 이는 약물동태/약력학적 특성에 영향을 미칠 수 있다. FIH 연구에서 인간 혈청 샘플 중의 FS118에 대한 ADA의 검출 및 특성화는 임상 연구를 서포트하기 위해 수행되었다. FS118 ADA 검정은 BioAgilytix Labs에서 개발되었다. 간단히 말해서, 실시예 1.2.2에 제시된 것과 유사한 전기화학발광(ECL) MSD 플랫폼을 사용하는 브릿징 검정을 사용하여, 인간 혈청 중의 FS118에 결합하는 항체를 측정하고; 비오틴화된 FS118을 사용하여 ADA를 포획하고, 이어서 MSD TAG-NHS-에스테르(MSD #R91BN)로 태그된 FS118을 사용하여 검출했다. 환자 혈청 샘플로부터의 ADA 수준(ECL 신호)을 측정하고, 풀링된 미처리 인간 혈청으로 이루어진 음성 대조군으로 정규화하고, FS118 용량으로 그룹화했다(표 9).

FIH I상 시험에서 환자의 정규화된 ADA 수준

용량 (mg/kg)	ADA 수준 (정규화된 ECL 신호)	SEM	*p 값*
3	8908	6375	해당 없음
10	120.0	81.24	0.048 (대 3 mg/kg; 만 휘트니 검정)
20	38.13	22.77	0.006 (대 3 mg/kg; 만 휘트니 검정)

3mg/kg의 주 1회 투여 그룹은 10mg/kg 또는 20mg/kg의 주 1회 투여 섭생과 비교하여 유의하게 높은 수준의 ADA를 가졌다(p≤0.05, 만 휘트니 검정). 보다 낮은 약물 용량에서 보다 높은 ADA 수준(이는 또한 ADA 반응을 "통해 투여하는" 보다 높은 용량이라고도 함)은 일반적으로 관찰되는 현상이다[참조: Chirmule, 2012]. ADA 수준의 차이에도 불구하고, TEAE와 FS118 치료 사이에 명백한 용량 관계는 관찰되지 않았다(실시예 2.3.1 참조). 면역원성, 약물동태/약력학 특성 및 독성에 대한 ADA의 가능한 영향을 최소화하기 위해, 장래 연구에서는 10mg/kg 및 20mg/kg의 주 1회 투여 섭생이 선호될 것이다.

6.3 FIH I상 시험의 효능 데이터에 대한 베이지안 분석

FS118에 의한 치료에 대한 반응으로 수집된 FIH BOR/iBOR 효능 데이터를 사용하여, 베이지안 분석을 사용하여, 3, 10 및 20mg/kg의 각 주 1회 투여 그룹 내에서, 장래의 시험에서 안정한 질환을 나타낼 환자의 빈도를 예측했다.

FIH I상 시험의 환자에서 BOR/iBOR로서 안정한 질환의 발생은 3mg/kg, 10mg/kg 및 20mg/kg의 주 1회 용량 그룹의 환자에 대해 계산되었다. 이 데이터는 하기 표 10에 제시된 바와 같이 장래의 시험에서 각 용량 수준에서 환자가 안정한 질환을 나타낼 확률을 추정하기 위해 사용되었다.

FS118을 사용한 장래의 시험에서, 상이한 용량 수준에서 안정한 질환을 나타내는 환자의 추정 확률

투여된 FS118 용량 (mg/kg 주 1회)	투여된 환의 총 수	BOR / iBOR로서 안정한 질환을 갖는 환자의 수	추정 확률
3	8	3	0.375
10	11	7	0.636
20	11	7	0.636

예를 들면, 장래의 시험(예: I상 확장 또는 II상)에 24명의 환자를 등록하고, 90% 신뢰 구간을 고려하여 표 10에 제시된 추정 확률을 활용한다고 가정하면, FS118의 용량당 응답자의 수(즉, BOR/iBOR로서 적어도 안정한 질환을 나타내는 환자)는 다음과 같다:

3mg/kg 주 1회: 4-14명의 응답자

10mg/kg 주 1회: 11-19명의 응답자

20mg/kg 주 1회: 11-19명의 응답자

상기에 제시된 바와 같이, 10mg/kg 주 1회 및 20mg/kg 주 1회 용량 모두 가장 높은 비율의 환자에서 안정한 질환을 유도함으로써 최상의 반응 결과를 달성할 것으로 예측된다. 따라서, 이 베이지안 분석을 기반으로 장래의 시험에서 이러한 용량 중 어느 하나가 선호된다.

6.4 약력학적 마커로서의 삼량체 LAG3:FS118:PD -L1 수용체 복합체 형성

FS118에 의한 T 세포의 활성화는 시험관내에서 FS118의 작용 메커니즘인 것으로 입증되었다(WO2017220569A1). 종양에서 FS118의 치료 효능은, 종양 특이적 T 세포가 LAG-3 및 PD-L1에 동시에 결합하고 LAG-3 및 PD-L1 신호전달에 의해 생성된 면역억제 신호를 억제하는 결과로서 종양 미소환경에서 활성화된 결과인 것으로 가정되었다. FIH I상 시험으로부터의 혈청 유래 데이터를 사용하여, 혈청과 종양 미소환경 모두에서 삼량체 복합체 형성을 시뮬레이션하고, 특히 10mg/kg 내지 20mg/kg 주 1회 투여 섭생을 선택하기 위한 용량 섭생 선택의 약력학적 마커로서 사용했다.

FIH 연구에서 수집된 약물동태/약력학 데이터로부터, 1주차 및 4주차에 투여량에 따른 유리 FS118의 중앙값, 총 sLAG3 및 총 sPD-L1 혈청 농도 프로파일이 유도되었다. 이러한 데이터는, FS118 용량이 높아지면, 혈청 및 종양 미소환경 모두에서 유리 FS118 농도가 높아진다는 것을 예측하는 기초를 제공했다. 이 데이터로부터, 진행성 고형 종양 환자에서 유리 FS118, 총 sLAG-3 및 총 sPD-L1 혈청 농도에 대한 모집단 모델이 개발되었다. 이 모델은 장래의 시험을 위한 용량 섭생의 선택을 통지하기 위해, 용량 섭생을 종양 내의 삼량체 복합체의 형성과 관련시키는 시뮬레이션을 실행하기 위해 사용되었다. 모델 개발에는 단계적 접근방식이 사용되었다(표 11). 먼저, 유리 FS118 혈청 농도는 1-구획 PK 모델 및 선형 제거로 모델링되었다. 이어서, 총 sLAG-3 및 총 sPD-L1 혈청 농도를 추가하고, 결합 모델에 적합시켰다. FS118에 대한 결합의 시뮬레이션 및 유리 sLAG-3 및 유리 sPD-L1과 비교한 FS118:sLAG-3 및 FS118:sPD-L1 복합체의 느린 제거는, 환자에서 관찰된 FS118 치료시의 총 sLAG-3 및 총 sPD-L1 혈청 농도의 관찰된 증가를 설명할 수 있었다. 당초, 시험관내에서 측정된 평형 해리 상수가 각 복합체에 사용되었지만, 추정된 평형 해리 상수를 갖는 모델은 관찰된 프로파일을 더 잘 설명할 수 있었다. 유리 FS118 혈청 농도 프로파일의 적합성은 sLAG-3 및 sPD-L1의 결합 및 제거의 추가에 의해 변경되지 않았다. sLAG-3 및 sPD-L1은 불특정 공급원으로부터 지속적으로 생산되는 것으로 가정했다.

이 시점에서, 모델은, 관찰된 유리 FS118, 총 sLAG-3 및 총 sPD-L1 혈청 농도를 기재할 수 있었다. FS118 용량 섭생을 효능과 관련시키기 위해, 혈청 및 종양 미소환경 모두에서 세포 표면 LAG-3 및 PD-L1 수용체에 대한 결합을, 파라미터 추정 후에 모델에 추가하여, 혈청 및 종양 미소환경에서 삼량체 FS118:LAG-3:PD-L1 복합체를 결정했다.

종양 미소환경의 모델링을 위해, 단순한 가정이 이루어졌다. 첫째, 유리 FS118 종양 농도는 항상 유리 FS118 혈청 농도(생체내분포 계수로서 표시)의 일부이고, 혈청과 종양 사이에 일순 평형이 있다고 가정했다. 종양 질량이 낮고, 전신 FS118 농도에 영향을 미치지 않을 것이라는 가정하에, 혈청으로부터 종양으로의 FS118 질량 유동은 모델링되지 않았다. 따라서, 종양 중의 유리 FS118 농도는 생체분포 계수(BC)를 [FS118]_종양 = BC [FS118]_혈청으로서 추정되었다. LAG-3 및 PD-L1의 종양 농도는, 일정하다고 가정된 LAG-3 및 PD-L1 수용체의 혈청 농도와 동일한 것으로 가정했다. 세포 표면 수용체에 대한 결합은, 가용성 표적에 대한 결합에 대해 추정된 것과 동일한 평형 해리 상수를 사용하여 모델링되었다.

모델 개발의 주요 단계

단계	작용	결과
1. 관찰된 유리 FS118 혈청 농도를 적합시킴	선형 소거를 사용한 1-구획 모델	양호한 적합: 모델 전진
1. 관찰된 유리 FS118 혈청 농도를 적합시킴	표적 수용체에 의한 내재화를 통한 제거	관찰 결과를 기재할 수 없음: 모델 해제
2. 관찰된 총 sLAG3 및 sPD-L1 혈청 농도를 적합시킴	추정 K_D 대 sLAG1 및 sPD-L1 결합을 위한 시험관내 측정된 값으로 고정	추정 K_D와의 우수한 적합성: 추정 K_D를 갖는 모델 전진
2. 관찰된 총 sLAG3 및 sPD-L1 혈청 농도를 적합시킴	시험관내 LAG3 쉐딩 데이터에 기초하여 일정 sLAG3 생산 대 FS118 의존성 sLAG3 생산	일정 생산율을 갖는 총 sLAG3 관찰의 우수한 적합성: 일정 sLAG3 생성율을 갖는 모델 전진
3. 시뮬레이션을 위한 모델에 추가	LAG3 및 PD-L1 세포 표면 수용체를 추가함	관찰된 유리 FS118, 총 sLAG3 및 총 sPD-L1의 관측치의 적합성에 변화 없음
	삼량체성 복합체를 추가함	관찰된 유리 FS118, 총 sLAG3 및 총 sPD-1의 관측치의 적합성에 변화 없음
	BC를 갖는 종양 구획을 추가함	모델 설계에 의해, 혈청 농도에 대한 영향 없음

하기 용량 섭생이 시뮬레이션되었다: (i) 1시간 IV 주입으로 주 1회 투여되는 1, 3, 10 또는 20mg/kg, 또는 (ii) 1시간 IV 주입으로서 2주 1회 투여되는 3, 10 또는 20mg/kg. 시뮬레이션은 mlxR 4.0.0 라이브러리를 사용하여 R 3.6.0(R Development Core Team 2008)에서 수행되었다. 시뮬레이션은 FIH I상 시험 환자로부터의 Monolix(조건부 분포 모드)에 의한 개별 파라미터 추정치를 사용했다. 이어서, 이러한 개별 예측 프로파일의 평균을 플로팅했다. 시뮬레이션된 용량 섭생 중 어느 것이 혈청 및 종양에서 최고의 삼량체 복합체 농도(LAG3:FS118:PD-L1)를 생성하는지를 조사했다.

시뮬레이션된 개별 세포 표면 삼량체 복합체(LAG3:FS118:PD-L1)의 평균은, I상 시험 환자로부터의 개별 추정치를 사용하여, 상이한 BC에 대한 혈청 및 종양에서 총 LAG-3 수용체의 백분율로서 수득되었고, 플로팅되었다. 시뮬레이션에 의해, 유리 FS118 농도가 높으면, 삼량체 LAG3:FS118:PD-L1 복합체 농도가 저하되고, 이량체 FS118:LAG3 및 FS118:PD-L1 복합체가 유리해지는 것으로 나타났다. 또한, FIH 연구에서 수집된 데이터를 사용하여, FS118 용량이 높으면, 유리 FS118 농도가 높아지는 것으로 나타났다. 최적 유리 FS118 농도 범위는 약 0.1 내지 1㎍/mL이다. 생체내 종양 미소환경을 가장 밀접하게 모방하는 것으로 가정되는 10%의 BC의 경우, 10mg/kg 주 1회 투여는 0.1 내지 1㎍/mL 범위의 유리 FS118 농도를 생성할 가능성이 높기 때문에, 20mg/kg의 주 1회 투여보다 삼량체 복합체 농도가 높았다.

이것은 또한, 너무 높은 용량 및/또는 너무 빈번한 용량이 삼량체 복합체 농도를 감소시키고, 따라서 LAG-3 및 PD-L1에 대한 FS118의 동시 결합에 의해 유도된 T 세포 활성화를 감소시키고, 따라서 종양의 억제에 대한 감소된 효과를 초래한다.

6.5 결론

FIH I상 시험 데이터의 복수 요소를 분석하고, 장래의 시험을 위한 용량 선택을 유도하기 위해 사용했다. 첫째, 상이한 FS118 용량에서 ADA의 분석은, 10mg/kg 또는 20mg/kg의 주 1회 투여와 비교하여, 3mg/kg의 주 1회 투여에서 더 높은 수준의 ADA가 검출되었음을 나타냈다. 잠재적 면역원성과 독성을 최소화하기 위해, 10mg/kg의 주 1회 및 20mg/kg의 주 1회 섭생이 3mg/kg의 주 1회보다 선호된다. 둘째, I상 BOR 데이터의 베이지안 분석은, 10mg/kg의 주 1회 섭생 또는 20mg/kg의 주 1회 섭생을 투여하는 경우, 3mg/kg의 주 1회 섭생보다 환자가 BOR/iBOR로서 SD를 나타내는 가능성이 높을 것으로 추정했다. 마지막으로, 약물동태/약력학 모델링 및 삼량체 복합체 형성의 시뮬레이션에 의해, 삼량체 LAG3:FS118:PD-L1 복합체 농도는, BC 10%를 가정할 때, 주 1회 10mg/kg의 용량에서 가장 높은 것으로 밝혀졌다. 더 높은 삼량체 복합체는 T 세포 활성화 및 종양 성장의 억제로 해석되는 것으로 가정된다.

상기 관찰을 조합하면, 장래의 시험에서는 10mg/kg을 주 1회 투여하는 것이 선호된다.

상기 데이터로부터 도출하여, 주 1회 700mg의 일정 용량의 대안도 제안되었다. 모집단의 평균 환자 체중이 70kg이라고 가정하면, 주 1회 700mg의 용량은 주 1회 10mg/kg의 용량에 상당한다. 모집단에서 환자의 실제 체중이 35 내지 100kg 범위인 경우, 주 1회 700mg의 용량은 환자의 실제 중량에 따라 주 1회 20mg/kg 내지 7mg/kg 범위의 용량에 상당한다. 이는 FIH I상 시험에서 TEAE 없이 안정한 질환 반응이 관찰된 용량 범위 내에 있고, 따라서 효과적일 것으로 예상된다. 유사한 이론적 근거를 문제의 특정 환자 모집단에 적용될 수 있고, 따라서 당업자는 본원의 교시에 기초하여 임의의 특정 환자 모집단에 적합한 일정 용량을 확인할 수 있을 것이다. 예를 들면, 모집단에서 환자의 평균 체중이 80kg으로 추정되는 경우, 주 1회 800mg의 용량은 주 1회 10mg/kg의 용량에 상당한다. 모집단에서 환자의 실제 체중이 40 내지 100kg 범위인 경우, 주 1회 800mg의 용량은 환자의 실제 체중에 따라 주 1회 20mg/kg 내지 7mg/kg 범위의 용량에 상당한다. 이것은 또한 상기 설명한 이유로부터 효과적일 것으로 예상된다.

실시예 7: I상 확장 시험을 위한 SCCHN 프로토콜

특정 종양 유형에서 FS118의 임상 활성을 조사하기 위해, I상 임상 시험으로의 확장이 계획되어 있다. 이는 I상 확장 코호트라고 하고, FS118의 안전성, 약물동태/약력학 및 임상 효능을 추가로 평가하기 위해, 사전에 지정된 수의 환자를 모집하는 것을 포함한다.

계획된 확장 코호트에는 두경부의 재발성 또는 전이성 편평 세포 암종(SCCHN) 환자만이 포함된다. SCCHN이 특별히 선택된 이유는, FIH I상 시험(실시예 2 참조)에서 3명의 SCCHN 환자가 있었고, 각각 3, 10 및 20mg/kg FS118을 주 1회 투여받았고, 이들은 각각 26주, 15주 및 27주 동안 연구를 계속했기 때문이고(실시예 2.4.1, 표 8 참조), 이는 FS118이 SCCHN의 치료에 특히 효과적일 수 있음을 나타낸다. 또한, SCCHN 환자의 종양 미소환경에서 T 세포 상의 LAG-3 수준 증가는, PD-1의 수준의 증가와 마찬가지로, 이전에 관찰되었고[참조: Hanna et al., 2018; Deng et al., 2016], 이는 또한 PD-L1의 상승된 수준을 시사한다. 따라서, LAG-3와 PD-L1을 모두 표적화하는 FS118이 SCCHN 종양 미소환경에서 효과적이라는 명확한 생물학적 근거가 있다. 보다 구체적으로, 확장 코호트에는 구강, 중인두, 후두 또는 하인두의 질환 부위가 있고, 수술이나 방사선 등의 치료 요법을 받을 자격이 없는 SCCHN 환자가 포함될 것이다. 항-PD-1 항체는 현재, 이러한 질환 부위에 대한 규제 당국의 승인을 받았기 때문에, 모집된 환자는 하기에 설명된 환자 모집 전략에 중요한 항-PD-1 항체로 사전 치료될 것이다. 인간 유두종 바이러스(HPV)는 SCCHN의 약 20%, 특히 중인두암으로 공지된 중인두의 질환을 유발하는 것으로 생각된다. 이러한 환자는 통상, 담배 및/또는 알코올의 사용으로 인해 유발될 수 있는 다른 SCCHN 환자보다 항암 치료에 대한 반응에서 더 양호한 임상적 결과를 갖는다. 따라서, HPV 상태는 환자가 연구에 참가하기 전에 기록되고, 불명인 경우는 연구에 참가한 후에 검사된다.

상기에서 설명한 이유 때문에, 모든 환자는, 연구에 참가하기 전에, 단일 요법으로 또는 화학요법과 병용하여 승인된 항-PD-1 항체로 사전에 치료되었을 것이고, 진행성 질환을 가질 것이다. 환자는, 본원에 정의된 이전 PD-1 요법에 대한 후천적 내성을 갖고 있어야 한다(즉, 환자는 이전 항-PD-1 요법에 대해 완전 또는 부분 반응을 나타내거나, 3개월 이상 동안 안정한 질환을 나타냈지만 이후 진행성 질환으로 이행했다). 이것은, 후천적 내성을 갖는 환자가 FS118에 대해 더 양호하게 반응할 가능성이 매우 높다는 본 발명자의 발견을 고려한 것이다(예를 들면, 안정한 질환을 나타내고, 치료를 보다 장기간 유지함으로써)(실시예 3 참조).

승인된 항-PD-1 항체에 의한 사전 치료를 받기 위해, 환자는 약물 라벨에 따라 결합 양성 스코어(CPS) 또는 종양 비율 스코어(TPS) 중의 어느 하나에 의해 >1%의 PD-L1 수준을 갖고 있어야 한다. 따라서, I상 확장 시험에 참가하는 모든 환자의 PD-L1 수준은 1% 이상일 것으로 예상되고, 이들이 기록될 것이다. 본 발명자들은 후천적 내성 환자에서 FS118 치료 전의 기준선 PD-L1 수준이 FS118에 의한 치료 기간과 양의 상관관계가 있음을 입증했기 때문에, 이것은 중요하다(실시예 4 참조). 이전 항-PD-1 요법이 각 환자의 시스템으로부터 제거되기 위해서는, 계획된 I상 확장 시험에 참가하기 전에 최소 28일을 기다려야 한다. 추가로, 환자는 최후의 항-PD-1 요법의 종료 및 FS118에 의한 치료 개시로부터 12주를 초과할 수 없다. 이에 의해, I상 확장 시험에 참가하는 환자는 진행성 질환에 대해 즉시의 추가 요법을 필요로 한다.

I상 확장 시험에 참가하기 전에, 모든 환자는 혈액 샘플뿐만 아니라 종양의 생검을 제공해야 한다. 생검으로부터, 종양 미소환경 내의 CD8+ T 세포의 백분율 등과 같이 암의 다른 특징과 함께 종양 세포 및 T 세포에 대한 기준선 PD-L1 및 LAG-3의 발현 수준이 각각 측정 및 분석될 것이다. 혈액 샘플은, 실시예 2.3.2.3에 제시된 바와 같은 Ki67+ 면역 세포 및/또는 혈장 중의 가용성 LAG-3 또는 가용성 PD-L1을 포함하는 면역 세포 모집단의 수준을 측정하고 분석하기 위해 사용될 것이다. 모든 환자는 실시예 6에 제시된 용량 섭생 권장사항과 일치하는 주 1회 기준으로 10mg/kg의 FS118을 투여받는다. SCCHN에서 FS118의 효능은 치료시 24주 후의 질병 통제 비율(DCR)의 임상 종점을 사용하여 평가될 것이다. 이것은 FS118에 의한 치료 개시부터 24주 기간에 걸쳐 완전 반응(CR), 부분 반응(PR) 및/또는 안정한 질환(SD)을 갖는 환자의 비율이다. 따라서, 이것은, 예를 들면, 초기에 부분 반응을 나타내지만, 그 후에 안정한 질환으로 이행되거나, 또는 그 반대의 경우로 이행하는 환자를 포함한다. 항-PD-1 요법 후에 표준 요법을 제공받은 환자(예: 도세탁셀 또는 파클리탁셀, 세툭시맙 또는 메토트렉세이트 등의 탁산)는, 주요 연구자의 경험에 기초하여, 통상 24주간에서 DCR 비율이 <20%이다. 이것은, 이러한 환자의 >80%가 표준 치료 요법의 개시으로부터 24주간까지 진행성 질환을 가질 것임을 의미한다. FS118이 항-PD-1 요법 후에 투여된 표준 치료 요법에 대해 상기 DCR 비율을 초과하는 것이 최소의 목적이다. I상 확장 시험의 환자는 FIH 및 용량 증량 I상 임상 시험의 환자보다 사전 치료를 덜 받을 것이라는 점을 감안하면(실시예 2 참조), 이 목적은 달성 가능한 것으로 간주된다.

I상 확장 시험의 통계적 설계는 사이몬(Simon)의 2단계 미니맥스 설계(Simon, 1989)로 불리우는 방법을 이용한다. 제1 단계에서는 10명의 환자를 모집한다. FS118에 의한 치료 개시로부터 24주간에 걸쳐, 상기 10명의 환자 중 1명 또는 아무도 질병 통제(CR, PR 및/또는 SD)를 달성하지 못한 경우, 등록은 종료되고, FS118은 지속적 모집을 보장하기 위해 표준 치료 요법과 비교하여 충분히 효과적인 것으로 간주되지 않을 것이다. 그렇지 않으면, 추가로 12명의 환자가 제2 단계로서 등록된다. 제2 단계가 완료되면, 22명의 평가 가능한 환자 중 6명 이상의 환자가 FS118에 의한 치료의 개시로부터 24주간에 걸쳐 질병 통제(CR, PR 및/또는 SD)를 달성한 경우, FS118은 이들 환자에서 효과적인 것으로 간주된다.

어느 환자가 FS118에 의한 치료로부터 가장 많은 이익을 받을 수 있는지를 추가로 이해하기 위해, 환자의 암에서 PD-L1 및 LAG-3의 발현 수준(필수 생검 재료를 사용하여 기준선에서 기록됨)은 어떠한 상관관계가 존재하는지를 확인하기 위해 FS118에 대한 임상적 유익성과 비교한다(연구 중의 CR, PR 및/또는 SD 및 치료 기간). 추가로, 환자 혈장 샘플 중의 가용성 LAG-3 수준의 변화 및 말초 면역 세포 모집단의 빈도 및 Ki67 발현 수준의 변화도 FS118에 대한 반응의 약력학적 마커로서 모니터링될 것이다.

서열 목록

항-인간 LAG-3/PD-L1 mAb² FS118(LALA 돌연변이 포함)의 중쇄의 아미노산 서열(서열번호 1)

CDR에는 밑줄되어 있다. AB, CD 및 EF 루프 서열은 볼드체 및 밑줄로 표시되어 있다.

항-인간 LAG-3/PD-L1 mAb² FS118의 경쇄의 아미노산 서열(서열번호 2)

CDR에는 밑줄되어 있다.

항-마우스 LAG-3/PD-L1 mAb² FS18-7-108-29/S1(LALA 돌연변이 포함)의 중쇄의 아미노산 서열(서열번호 3)

CDR에는 밑줄되어 있다. AB, CD 및 EF 루프 서열의 위치는 볼드체 및 밑줄로 표시되어 있다. LALA 돌연변이의 위치는 볼드체로 표시되어 있다.

항-마우스 LAG-3/PD-L1 mAb² FS18-7-108-29/S1의 경쇄의 아미노산 서열(서열번호 4)

CDR에는 밑줄되어 있다.

항-FITC mAb G1AA/4420(LALA 돌연변이 포함)의 중쇄의 아미노산 서열(서열번호 5)

CDR의 위치에는 밑줄되어 있다. LALA 돌연변이의 위치는 볼드체로 표시된다.

항-FITC mAb G1AA/4420 경쇄의 아미노산 서열(서열번호 6)

CDR의 위치에는 밑줄되어 있다.

참고 문헌

본 명세서에 제시된 모든 문서는 참조에 의해 그 전체가 본 명세서에 도입된다.

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Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Trp Asp Glu Pro Trp Gly Glu Asp Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Pro Tyr Asp Arg Trp Val Trp Pro Asp Glu Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly 450 <210> 2 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain of anti-human LAG-3/PD-L1 mAb2 FS118 <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile 35 40 45 Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Ser Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Asn Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 3 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain of anti-mouse LAG-3/PD-L1 mAb2 FS18-7-108-29/S1 (with LALA mutation) <400> 3 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe 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214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain of anti-mouse LAG-3/PD-L1 mAb2 FS18-7-108-29/S1 <400> 4 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Phe Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 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Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims

인간 환자에서 암을 치료하는 방법에 사용하기 위한, 프로그램된 사멸-리간드 1(programmed death-ligand 1; PD-L1) 및 림프구-활성화 유전자 3(LAG-3)에 결합하는 항체 분자로서,
상기 항체 분자는 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열(main chain sequence) 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하고;
상기 방법은, 항체 분자를 환자 체중 kg당 3mg 내지 20mg의 용량으로 주 1회 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 항체 분자.
인간 환자에서 암을 치료하는 방법으로서,
상기 방법은, PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자의 치료학적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하고,
상기 항체 분자는 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하고;
상기 방법은, 항체 분자를 환자 체중 kg당 3mg 내지 20mg의 용량으로 주 1회 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 방법이, 상기 항체 분자를 환자의 체중 kg당 10mg 내지 20mg의 용량으로 투여하는 것을 포함하는, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이, 항체 분자를 환자의 체중 kg당 10mg의 용량으로 투여하는 것을 포함하는, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 방법이, 항체 분자를 210mg 내지 1400mg의 용량으로 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
제1항 내지 제3항 또는 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이, 항체 분자를 700mg 내지 1400mg의 용량으로 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이, 항체 분자를 700mg의 용량으로 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 종양이, 하나 이상의 체크포인트 억제제(checkpoint inhibitor)에 의한 치료에 대해 불응성(refractive)이거나, 하나 이상의 체크포인트 억제제에 의한 치료 동안 또는 치료 후에 재발했거나, 또는 하나 이상의 체크포인트 억제제에 의한 치료에 반응성인, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
제8항에 있어서, 상기 면역 체크포인트 억제제가 프로그램된 세포-사멸 단백질 1(PD-1) 또는 PD-L1 억제제인, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 인간 환자에서 암을 치료하는 방법에 사용하기 위한 PD-L1 및 LAG-3에 결합하는 항체 분자로서,
상기 항체 분자는 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하고;
상기 환자의 종양은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형을 갖는 것으로 결정되었고,
후천적 내성 표현형을 갖는 종양은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료에 대해 완전한 또는 부분적 반응을 나타낸 종양이거나, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받는 동안 3개월 이상 동안 안정한 질환을 나타낸 종양인, 항체 분자.
이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법으로 치료를 받은 인간 환자에서 암을 치료하는 방법으로서,
상기 방법은, PD-L1 및 LAG-3에 결합하고 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자의 치료학적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하고;
상기 환자의 종양은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형을 갖는 것으로 결정되었고,
후천적 내성 표현형을 갖는 종양은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료에 대해 완전한 또는 부분적 반응을 나타낸 종양이거나, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받는 동안 3개월 이상 동안 안정한 질환을 나타낸 종양인, 방법.
제10항 또는 제11항에 있어서, 항체에 의한 치료 전에 환자로부터 수득된 종양 샘플에서 종양 세포의 적어도 15%가 PD-L1 양성인 것으로 결정되는, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받은 암 환자가, PD-L1 및 LAG-3에 결합하고 서열번호 1에 제시된 중쇄 서열 및 서열번호 2에 제시된 경쇄 서열을 포함하는 항체 분자에 의한 치료에 반응할 가능성이 있는지의 여부를 결정하는 방법으로서,
상기 방법은, 환자의 종양이 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법과 관련하여 후천적 내성 표현형 또는 1차 내성 표현형을 갖는지의 여부를 결정하는 것을 포함하고,
후천적 내성 표현형을 갖는 종양은 1차 내성 표현형을 갖는 종양보다 항체에 의한 치료에 반응할 가능성이 더 높고;
후천적 내성 표현형을 갖는 종양은, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료에 대해 완전한 또는 부분적 반응을 나타낸 종양이거나, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받는 동안 3개월 이상 동안 안정한 질환을 나타낸 종양이고,
1차 내성 표현형을 갖는 종양은, 진행성 질환의 최상의 전체 반응을 갖는 종양을 포함하여, 이전 항-PD-1 또는 항-PD-L1 요법에 의한 치료를 받는 동안 3개월 이하 동안 안정한 질환을 달성한 종양인, 방법.
제13항에 있어서, 상기 방법은, 항체에 의한 치료 전에 환자로부터 수득된 종양의 샘플에서 종양 세포의 적어도 15%가 PD-L1 양성인지의 여부를 결정하는 것을 추가로 포함하고,
적어도 15%의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는 후천적 내성 표현형을 갖는 종양은 1차 내성 표현형을 갖는 종양, 또는 15% 미만의 PD-L1 양성 종양 세포를 포함하는 후천적 내성 표현형을 갖는 종양보다 항체에 의한 치료에 반응할 가능성이 더 높은, 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 두경부 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma of the head and neck; SCCHN), 위암(gastric cancer), 식도암(oesophageal cancer), 비소세포 폐암(non-small cell lung cancer; NSCLC), 중피종(mesothelioma), 흑색종(melanoma), 전립선암(prostate cancer), 방광암(bladder cancer), 유방암(breast cancer), 결장직장암(colorectal cancer; CRC), 식도위 접합부 선암(adenocarcinoma of the esophagogastric junction; GEJ), 신세포암(renal cell carcinoma; RCC), 간세포암(hepatocellular carcinoma; HCC), 소세포 폐암(small-cell lung cancer; SCLC), 자궁암(uterine cancer), 외음부암(vulvar cancer), 고환암(testicular cancer), 음경암(penile cancer), 백혈병(leukaemia), 메르켈 세포 암종(Merkel cell carcinoma) 및 비인두암(nasopharyngeal cancer)으로 이루어진 목록으로부터 선택되는, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 육종(sarcoma), 갑상선암(thyroid cancer), 다형성 교모세포종(glioblastoma multiforme; GBM), 난소암(ovarian cancer), 기저 세포 암종(basal cell carcinoma), MSI-H 고형 종양(MSI-H solid tumours), 삼중 음성 유방암(triple negative breast cancer; TNBC), 자궁경부암(cervical cancer), 식도암(oesophageal cancer), 다발성 골수종(multiple myeloma; MM), 췌장암(pancreatic cancer), 수막종(meningioma), 자궁내막암(endometrial cancer), 흉선암(thymic carcinoma), 임신성 융모성 종양(gestational trophoblastic neoplasia), 림프종(lymphomas), 복막 암종증(peritoneal carcinomatosis), 안정 미세위성(microsatellite stable; MSS) 결장직장암(colorectal cancer) 및 위장관 기질 종양(gastrointestinal stromal tumours; GIST)으로 이루어진 목록으로부터 선택되는, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 두경부암(head and neck cancer), 위암(gastric cancer), 식도암(oesophageal cancer), NSCLC, 중피종(mesothelioma), 자궁경부암(cervical cancer), 갑상선암(thyroid cancer) 및 연조직 육종(soft-tissue sarcoma)으로 이루어진 목록으로부터 선택되고; 바람직하게는 상기 두경부암이 SCCHN인, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 두경부암, 바람직하게는 SCCHN인, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
제18항에 있어서, 상기 SCCHN 질환 부위가 구강, 구강인두, 후두 또는 하인두인, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
제18항 또는 제19항에 있어서, 상기 방법이, 환자 체중 kg당 10mg의 용량으로 항체 분자를 주 1회 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 분자가 정맥내 투여되는, 사용하기 위한 항체 분자 또는 방법.