RU2818587C2

RU2818587C2 - Режимы дозирования при введении биспецифичного антитела против lag -3/pd-l1

Info

Publication number: RU2818587C2
Application number: RU2021135011A
Authority: RU
Inventors: Мишель МОРРОУ; Фиона ГЕРМАШЕВСКИ; Дэниел ГЛИДДОН; Кин-мэй ЛЮН; Кристиан ГРАДИНАРУ; Кристофер ШЕПЕРД; Йозефин-Беате ХОЛЬЦ; Луис КАЙИТАЛИРЕ
Original assignee: Ф-стар Терапьютикс Лимитед
Priority date: 2019-05-14
Filing date: 2020-05-14
Publication date: 2024-05-03

Abstract

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к использованию биспецифических антител в терапии различных раковых заболеваний. В рамках настоящего изобретения раскрывается возможность применения антитела, способного связывать лиганд запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) и белок гена активации лимфоцитов 3 (LAG-3) и содержащего последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2, в терапии такого типа рака, который является рефрактерным к лечению ингибитором белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1) или PD-L1 или рецидивирует во время или после лечения ингибитором PD-1 или PD-L1. При этом в настоящей заявке также раскрываются режимы дозирования для введения молекулы указанного антитела. 5 н. и 12 з.п. ф-лы, 11 ил., 11 табл., 7 пр.

Description

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к режимам дозирования при введении молекулы антитела, связывающей лиганд-1 запрограммированной гибели клеток (PD-L1) и белок гена активации лимфоцитов 3 (LAG-3), и их медицинскому применению для лечения рака у пациентов, представляющих собой людей. В настоящем изобретении дополнительно предложены прогностические пороговые значения для прогнозирования вероятности реакции пациента, представляющего собой человека, на антитело.

Уровень техники

Рак является комплексным заболеванием, и до сих пор существует значительная неудовлетворенная потребность в способах его лечения. Взаимодействие между иммунной системой хозяина и опухолью является областью интенсивной доклинической и клинической оценки в последние годы. Опухоль-инфильтрирующие лимфоциты (ОИЛ) обладают способностью контролировать рост опухолевых клеток, и получены клинические доказательства того, что пациенты с повышенным количеством ОИЛ характеризуются благоприятным прогнозом. В целом, Т-клетки играют важную роль в иммунной защите от рака, а регуляция активации Т-клеток опосредуется сложным взаимодействием стимулирующих и ингибирующих лиганд-рецепторных взаимодействий между Т-клетками, опухолевыми клетками и микроокружением опухоли, причем опухолевые клетки выступают в качестве важнейших медиаторов иммуносупрессии.

Разработка ингибиторов иммунной контрольной точки, противодействующих иммуносупрессивной активности опухолевых клеток, представляет собой интенсивно развивающееся терапевтическое направление в клинической онкологической практике, а ингибиторы иммунной контрольной точки, мишенями которых являются PD-1/PD-L1 (лиганд PD-1), продемонстрировали некоторые важные признаки противоопухолевой активности. Приблизительно у 20% пациентов, получавших монотерапию, достигается клинический благоприятный эффект, сопровождающийся выраженной и продолжительной реакцией на лечение. Тем не менее, большинство пациентов, по-видимому, нуждаются в комбинаторном подходе для преодоления первичной, адаптивной и приобретенной устойчивости к иммунотерапии рака, причем первичную устойчивость классифицируют как рак, который никогда не реагирует на терапию и, следовательно, прогрессирует, приобретенную устойчивость классифицируют как рак, который в конечном итоге прогрессирует, несмотря на первоначальную реакцию на терапию, а адаптивную устойчивость классифицируют как рак, который развивает механизмы устойчивости к терапии, которые могут клинически проявляться как первичная или приобретенная устойчивость (Sharma et al., 2017). Установление устойчивости к терапии на основе PD-1/PD-L1 является сложным и многофакторным процессом, включающим экологические и генетические факторы, индивидуальный анамнез заболевания, а также эффект предыдущих способов терапии (Sharma et al., 2017).

Ген активации лимфоцитов 3 (LAG-3) является одним из ключевых медиаторов первичной и потенциально приобретенной устойчивости к ингибиторам иммунной контрольной точки, и первые исследования комбинации антител у пациентов с тяжелой распространенной меланомой, ранее подвергавшейся лечению, у которых наблюдали рецидив или рефрактерность к лечению антителами против PD-1/PD-L1, продемонстрировали ранние признаки преодоления устойчивости к PD-(L)1 у этой популяции.

Улучшенный подход по сравнению с совместным введением моноспецифичных антител против PD-1/PD-L1 и антител против LAG-3 описан в заявке WO 2017/220569 А1 (F-star Delta Limited), где описаны биспецифичные антитела, содержащие сайты связывания как PD-L1, таки LAG-3, включая антитело FS118, для лечения рака. FS118 представляет собой биспецифичное моноклональное антитело IgG1 (148247 Да), содержащее сайт связывания антигена LAG-3 в Fc-области и Fab-сайт связывания PD-L1, мишенями которого являются как PD-L1 человека (hPD-L1), так и LAG-3 человека (hLAG-3) со сравнительно высокой аффинностью и которое проявляет способность блокировать опосредованное LAG-3 и PD-L1 ингибирование активации Т-клеток. Эта особенность и способность усиливать взаимодействие между Т-клетками и опухолевыми клетками посредством двойного нацеливания на LAG-3 и PD-L1, а также способность локализоваться в микроокружении опухоли, являются уникальными атрибутами FS118, которые, как ожидается, должны обуславливать его мощную противоопухолевую активность.

В частности, активированные Т-клетки в лимфатических узлах экспрессируют LAG-3 и ожидается, что биспецифичные антитела против LAG-3/PD-L1, например, FS118, будут связываться в лимфатических узлах с примированными LAG-3-положительными Т-клетками, которые затем мигрируют в область опухоли, перенося биспецифичное антитело с собой. Попав в микроокружение опухоли, Т-клетки, несущие биспецифичное антитело, как ожидается, будут способны взаимодействовать с PD-L1 на опухолевых клетках и блокировать его. В качестве альтернативы, примированные LAG-3-положительные лимфоциты могут уже инфильтрировать микроокружение опухоли (так называемые "опухоль-инфильтрирующие лимфоциты" или "ОИЛ"). Таким образом, биспецифичные антитела против LAG-3/PD-L1, например, FS118, могут связываться с примированными LAG-3-положительными ОИЛ (например, Т-клетками) непосредственно в микроокружении опухоли. Таким образом, ожидается, что Т-клетки, связанные биспецифичными антителами против LAG-3/PD-L1, будут устойчивы к передачи сигнала LAG-3 и PD-L1/PD-1, что позволит предотвращать индукцию/поддержание истощения Т-клеток за счет этих белков иммунной контрольной точки.

Аналогичным образом, экспрессия PD-L1 значительно повышена в опухолях, и биспецифичные антитела против LAG-3/PD-L1, например, FS118, могут, таким образом, в первую очередь локализоваться и концентрироваться в микроокружении опухоли за счет связывания с PD-L1. Затем фрагмент антитела против LAG-3 может связываться с LAG-3, экспрессируемым на поверхности Т-клеток, присутствующих в микроокружении опухоли, и предотвращать LAG-3-опосредованную суппрессию Т-клеток.

Поддержание или продление контакта между Т-клетками и опухолевыми клетками с использованием биспецифичных антител против LAG-3/PD-L1, например, FS118, увеличивает время, в течение которого Т-клетки могут успешно распознавать опухолевые антигены, активироваться и в дальнейшем уничтожать опухолевые клетки, по сравнению с комбинациями отдельных моноклональных антител против этих мишеней.

FS118 не вступает в перекрестную реакцию с LAG-3 или PD-L1 мыши и/или не функционирует по отношению к ним. Описано биспецифичное антитело против LAG-3/PD-L1 мыши (mLAG-3/mPD-L1; FS18m-108-29/S1 с мутацией LALA), способное действовать в качестве суррогата (замены) FS118 в экспериментах на мышах. В сингенных моделях рака у мышей показано, что биспецифичное антитело против mLAG-3/mPD-L1 способно усиливать или обеспечивать сходное подавление роста опухоли по сравнению с комбинированным введением двух молекул антител, содержащих те же сайты связывания LAG-3 и PD-L1, соответственно, при введении трех доз антитела/антител с интервалом в три дня. Кроме того, показано, что антитело против mLAG-3/mPD-L1 было способно предотвращать рост опухоли у семи из девяти мышей, тогда как комбинированное введение двух молекул антитела, содержащих те же сайты связывания LAG-3 и PD-L1, не предотвращало рост опухоли ни у одного из тестируемых животных (WO 2017/220569; Р2399 A LAG-3/PD-L1 mAb² can overcome PD-L1-mediated compensatory upregulation of LAG-3 induced by single-agent checkpoint blockade, Faroudi et al., American Association for Cancer Research (AACR) Annual Meeting 2019, 29 March-03 April 2019, Atlanta, Georgia, USA).

В дополнение к активности по отношению к подавлению опухоли, существуют предварительные признаки того, что биспецифичное антитело-суррогат FS118 против mLAG-3/mPD-L1 демонстрирует реакцию в зависимости от дозы в модели опухоли у мышей, причем более высокие дозы (от 1 мг/кг до 20 мг/кг) обычно коррелируют с уменьшением объема опухолей. Кроме того, показано, что биспецифичное антитело против mLAG-3/mPD-L1 индуцирует супрессию LAG-3 на LAG-3-экспрессирующих опухоль-инфильтрирующих лимфоцитах (ОИЛ), в то время как при обработке мышей двумя молекулами антитела, содержащими те же сайты связывания mLAG-3 и mPD-L1, что и суррогатное биспецифичное антитело против mLAG-3/mPD-L1, наблюдалои повышение экспрессии LAG-3. Показано, что как суррогатное биспецифичное антитело против mLAG-3/mPD-L1, так и комбинация отдельных агентов повышают уровни растворимых LAG-3 и PD-L1 в сыворотке подвергшихся обработке мышей (Р348 Dual blockade of PD-L1 and LAG-3 with FS118, a unique bispecific antibody, induces T-cell activation with the potential to drive potent anti-tumour immune responses, Journal for ImmunoTherapy of Cancer 20175 (Suppl 2): 87; Abstract 2719: Dual blockade of PD-L1 and LAG-3 with FS118, a unique bispecific antibody, induces CD8+ T-cell activation and modulates the tumour microenvironment to promote antitumour immune responses, Cancer Research, July 2018 Volume 78, Issue 13 Supplement; P2399 A LAG-3/PD-L1 mAb² can overcome PD-L1-mediated compensatory upregulation of LAG-3 induced by single-agent checkpoint blockade, Faroudi et al., American Association for Cancer Research (AACR) Annual Meeting 2019, 29 March-03 April 2019, Atlanta, Georgia, USA).

Однако в то время, как данные в отношении биспецифичного антитела-суррогата FS118 против mLAG-3/mPD-L1 убедительно свидетельствуют о том, что молекула FS118 сама по себе будет терапевтически эффективна у человека, используемая модель мыши обладает недостатком в отношении прогнозирования специфичных терапевтических доз для применения у человека. В частности, биспецифичное антитело-суррогат против mLAG-3/mPD-L1 содержит каркас IgG1 человека, который, естественно, вызывает сильный иммуногенный ответ у мышей и продукцию антител против лекарственного средства (АЛС). Таким образом, специалист в данной области техники не будет обоснованно предполагать, что эффективные дозы, используемые у мышей, будут эффективны у приматов, не являющихся человеком, и, в конечном счете, у людей.

На сегодняшний день данные о поведении антител против LAG-3/PD-L1, включая FS118, у пациентов, представляющих собой людей, или приматов, не являющихся человеком, в том числе дозировки для введения, отсутствуют.

Сущность изобретения

FS118 представляет собой биспецифичное антитело, связывающееся как с LAG-3, так и с PD-L1 и, согласно ожиданиям, опосредующее свой противоопухолевый эффект уникальным образом по сравнению с моноспецифичными антителами против PD-L1 и LAG-3, как описано в разделе «Уровень техники» выше. Ввиду биспецифичной четырехвалентной природы FS118 и следующих из этого различий в стехиометрии связывания по сравнению с моноспецифичными бивалентными антителами, а также ожидаемых различий в механизме действия FS118 неясно, можно ли вводить FS118 с использованием уровней доз и графиков (схем) введения, используемых для моноспецифичных антител против PD-L1 и антител против LAG3 у человека.

Антитела против PD-L1, одобренные для лечения рака у пациентов, представляющих собой людей, например, авелумаб, дурвалумаб и атезолизумаб, вводят имеющим рак пациентам в дозах 800 мг (фиксированная доза) или 10 мг/кг (раз в две недели), 10 мг/кг (раз в две недели) и 1200 мг (раз в три недели) (что соответствует приблизительно 12 мг/кг у стандартного пациента с массой тела 100 кг), соответственно. Комбинация моноклонального антитела против LAG3 (релатлимаба) и моноклонального антитела против PD1 (ниволумаба) в настоящее время тестируется в клиническом исследовании I фазы при введении раз в четыре недели. Лечение только релатлимабом также оценивали в исследовании I фазы, в котором антитело вводили каждые 2 недели.

Биспецифичное антитело против LAG-3/PD-L1 мыши (mLAG-3/mPD-L1; FS18m-108-29/S1 с мутацией LALA), способное действовать в качестве суррогата FS118 в экспериментах на мышах, демонстрировало повышенную или аналогичную противоопухолевую эффективность в сингенной модели опухоли у мышей по сравнению с двумя молекулами моноспецифичных антител, содержащих те же сайты связывания mLAG-3 и mPD-L1, что и биспецифичное антитело против mLAG-3/mPD-L1, при введении антител в тех же дозах (1 мг/кг, 3 мг/кг и 10 мг/кг) и в соответствии с тем же графиком дозирования (3 дозы с интервалом в 3 дня). Однако биспецифичное антитело-суррогат против mLAG-3/mPD-L1 содержит каркас IgG1 человека, который, естественно, вызывает сильный иммуногенный ответ у мышей и продукцию антител против лекарственного средства (АЛС). Таким образом, невозможно предсказать, будут ли эффективные дозы, используемые у мышей, эффективными у приматов, не являющихся человеком (NHP), и, в конечном счете, у людей.

При оценке ФК биспецифичного антитела против mLAG-3/mPD-L1 на мышах (при дозах 1, 3, 10 и 20 мг/кг) авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что биспецифичное антитело против mLAG-3/mPD-L1 выводилось из сыворотки с более высокой скоростью, чем моноспецифичное антитело, содержащее тот же сайт связывания mPD-L1, что и антитело против mLAG-3/mPD-L1. Кроме того, показано, что ненасыщающийся клиренс биспецифичного антитела против mLAG-3/mPD-L1 является следствием комбинации связывания mPD-L1 и мишень-специфичных изменений допустимых остатков в СН3-домене по сравнению с контрольным мАт против mPD-L1. (Пример 1).

Объединив данные по ФК у мышей, полученные авторами настоящего изобретения, с данными по противоопухолевой эффективности у мышей, авторы настоящего изобретения обнаружили, что было необходимо воздействие (С_макс) суррогата мАт² мыши ≥6 мкг/мл для противоопухолевой эффективности у мышей, и что этот уровень воздействия, как ни странно, не требовалось поддерживать в течение всего периода введения антител. В то же время образование АЛС, по-видимому, имеет место (Пример 1).

У яванских макаков исследование ФК однократной дозы (4 мг/кг), исследование по поиску диапазона доз (DRF) без соблюдения надлежащей лабораторной практики (GLP) (в/в введение доз 10, 50 и 200 мг/кг раз в неделю в течение 4 недель) и повторное в/в введение два раза в неделю в исследовании токсичности с соблюдением GLP продолжительностью 4 недели (60 и 200 мг/кг) показали, что FS118 выводилось быстрее, чем моноспецифичное мАт против PD-L1 (Пример 1).

Обнаружено, что поддержание уровней FS118 в плазме ≥10 мкг/мл в течение всего периода введения было достаточным для поддержания связывания PD-L1 и, таким образом, суппрессии PD-L1 и иммунной фармакологии у яванских макаков. Эти исследования также показали, что FS118 хорошо переносится даже в высоких дозах, и что высокие дозы также должны хорошо переноситься людьми. Как и у мышей, наблюдали образование АЛС (Пример 1).

Таким образом, результаты, полученные в исследованиях ФК на мышах и яванских макаках, неожиданно продемонстрировали, что, несмотря на скорость выведения FS118 и FS18m-108-29AA/S1 по сравнению с соответствующими моноспецифичными антителами против PD-L1, очень низкие уровни С_мин антител, наблюдаемые между введением доз, тем не менее, были достаточными для обеспечения устойчивого противоопухолевого и фармакодинамического ответа, соответственно. Тем не менее, у мышей и яванских макаков наблюдали образование АЛС, что указывало на то, что эти животные модели характеризовались ограничениями с точки зрения экстраполяции наблюдаемых результатов на человека.

Затем разработали и начали первое исследование I фазы с увеличением дозы и расширением когорт по оценке безопасности, переносимости, фармакокинетики и активности FS118 у пациентов (субъектов исследования), представляющих собой людей с распространенными злокачественными новообразованиями, прогрессировавшими в ходе предшествующей терапии антителами против PD-1/PD-L1 или после нее. Для оценки безопасности когортам, содержащим по одному пациенту, вводили FS118 в дозах 800 мкг, 2400 мкг, 0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг и 1,0 мг/кг. В части исследования I фазы, касающейся повышения дозы, пациентам вводили 3 мг/кг, 10 мг/кг и 20 мг/кг FS118. Все дозы вводили еженедельно (т.е. один раз в неделю) и, таким образом, реже, чем первоначально считалось необходимым на основании исключительно ФК-данных у мышей и яванских макаков (Примеры 1 и 2).

Промежуточные результаты, полученные изначально у 24 субъектов (с увеличением до 43 пациентов) в исследовании I фазы, подтвердили, что максимальная наблюдаемая концентрация (С_макс) соответствовала С_макс, прогнозируемой в исследовании на яванских макаках, но, как ни странно, скорость выведения FS118 была выше прогнозируемой, причем ППК (площадь под кривой зависимости концентрации от времени) была на 30% ниже, чем ожидалось. Это может изначально указывать на то, что для человека потребуется более высокая доза FS118. Однако несмотря на более высокую, чем первоначально прогнозировалось, скорость выведения, наблюдались более долгосрочные фармакодинамические эффекты, что указывало на терапевтическую эффективность (Пример 2).

В частности, показано, что FS118 в дозах 3 мг/кг, 10 мг/кг и 20 мг/кг, вводимых один раз в неделю, индуцирует устойчивое увеличение уровней растворимого LAG-3 (sLAG-3), а также устойчивое связывание с рецептором LAG-3. Сообщалось, что sLAG-3 посредством связывания с MHCII стимулирует активацию Т-клеточных реакций и усиление опухоль-специфичных цитотоксических Т-клеток антигенпрезентирующими клетками, например, макрофагами и дендритными клетками, и, таким образом, ожидается, что он будет усиливать противоопухолевый иммунный ответ. Кроме того, ранее показано, что уровни sLAG3 ассоциированы с подавлением роста опухоли у мышей, что указывает на то, что повышенные уровни sLAG3 являются индикатором терапевтической эффективности. Предшествующие результаты также свидетельствовали об увеличении уровней sPD-L1 после обработки FS118 (Пример 2).

Таким образом, промежуточные результаты для первых 24 субъектов, включенных в исследование I фазы (с увеличением количества пациентов до 43), неожиданно продемонстрировали, что:

(i) введение FS118 имеющим рак пациентам, представляющим собой людей, в дозах от 3 мг/кг до 20 мг/кг один раз в неделю приводило к устойчивой фармакодинамической реакции, которая, как ожидается, коррелирует с противоопухолевой эффективностью, несмотря на более высокую, чем прогнозировалось, скорость выведения FS118 из сыворотки пациента, и

(ii) Воздействие FS118 на протяжении всего интервала введения не требовалось для фармакодинамического эффекта у пациентов, представляющих собой людей.

Кроме того, первоначальные результаты продолжающегося исследования I фазы позволили получить прямые доказательства эффективности FS118 при лечении рака (несмотря на то, что это не является основной целью исследования). Конкретнее, к маю 2019 г. у 5 из 14 пациентов, у которых сообщали о по меньшей мере 1 сканировании «на время исследования», наблюдали некоторую стабилизацию заболевания. К августу 2019 г. этот показатель увеличился до 11 из 22 пациентов, а к апрелю 2020 г. - до 17 из 30 пациентов (Пример 2).

Данные из исследования I фазы проанализировали в целях выбора дозы для будущих исследований (Пример 6). Байесовский анализ данных I фазы по наилучшей общей реакции (BOR/IBOR) показал, что вероятность стабилизации заболевания у пациентов согласно показателю BOR/iBOR повышается, если они будут получать 10 мг/кг или 20 мг/кг FS118 раз в неделю, а не 3 мг/кг FS118 раз в неделю. Пациенты, получавшие 3 мг/кг FS118 раз в неделю, также характеризовались более высоким уровнем антител против лекарственного средства по сравнению с пациентами, получавшими 10 мг/кг или 20 мг/кг FS118 раз в неделю. Таким образом, с точки зрения минимизации потенциальной иммуногенности и токсичности предпочтительна доза FS118 от 10 мг/кг до 20 мг/кг раз в неделю. Фармакокинетическое/фармакодинамическое моделирование и моделирование образования тримерного комплекса дополнительно продемонстрировали, что ожидаемая концентрация тримерного комплекса LAG3:FS118:PD-L1 будет максимальна при дозе 10 мг/кг FS118 раз в неделю, исходя из коэффициента биораспределения 10%. Предполагается, что усиленное образование тримерного комплекса трансформируется в активацию Т-клеток и подавление роста опухоли. Хотя у пациентов, получавших дозы до 3 мг/кг один раз в неделю, наблюдали стабильное заболевание (Таблица 8), введение от 10 мг/кг до 20 мг/кг FS118 раз в неделю является предпочтительным на основании повышенной эффективности и ожидаемой пониженной токсичности и иммуногенности. Особенно предпочтительными являются дозы в нижней части этого диапазона, например, 10 мг/кг FS118 раз в неделю, поскольку считается, что более низкие дозы снижают риск избыточной стимуляции Т-клеток и, следовательно, истощения Т-клеток, тем самым увеличивая вероятность устойчивого терапевтического эффекта, а также снижая стоимость лечения.

Антитело FS118 содержит последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2.

Таким образом, в одном аспекте настоящего изобретения предложена молекула антитела, связывающая PD-L1 и LAG-3 для применения в способе лечения рака у пациента, представляющего собой человека,

причем указанная молекула антитела содержит последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2; и

причем указанный способ включает введение указанной молекулы антитела пациенту раз в неделю в дозе по меньшей мере 3 мг на кг массы тела пациента.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения рака у пациента, представляющего собой человека, причем указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества молекулы антитела, связывающей PD-L1 и LAG-3,

В дополнительном аспекте настоящего изобретения предложено применение молекулы антитела, связывающей PD-L1 и LAG-3, при производстве лекарственного средства для лечения рака у пациента, представляющего собой человека,

причем лечение включает введение указанной молекулы антитела пациенту раз в неделю в дозе по меньшей мере 3 мг на кг массы тела пациента.

FS118 можно вводить пациенту в дозе по меньшей мере 4 мг на кг массы тела пациента (мг/кг), по меньшей мере 5 мг/кг, по меньшей мере 6 мг/кг, по меньшей мере 7 мг/кг, по меньшей мере 8 мг/кг, по меньшей мере 9 мг/кг, по меньшей мере 10 мг/кг, по меньшей мере 11 мг/кг, по меньшей мере 12 мг/кг, по меньшей мере 13 мг/кг, по меньшей мере 14 мг/кг, по меньшей мере 15 мг/кг, по меньшей мере 16 мг/кг, по меньшей мере 17 мг/кг, по меньшей мере 18 мг/кг, по меньшей мере 19 мг/кг или по меньшей мере 20 мг/кг. В предпочтительном варианте реализации FS118 вводят пациенту в дозе по меньшей мере 10 мг/кг. В альтернативном предпочтительном варианте реализации FS118 вводят пациенту в дозе по меньшей мере 20 мг/кг. Также рассматриваются другие дозы, например, введение FS118 в дозе по меньшей мере 1 мг/кг.

В качестве дополнения или альтернативы, FS118 можно вводить в дозе до 10 мг/кг, до 11 мг/кг, до 12 мг/кг, до 13 мг/кг, до 14 мг/кг, до 15 мг/кг, до 16 мг/кг, до 17 мг/кг, до 18 мг/кг, до 19 мг/кг или до 20 мг/кг. В предпочтительном варианте реализации FS118 вводят в дозе до 10 мг/кг. В альтернативном предпочтительном варианте реализации FS118 вводят в дозе до 20 мг/кг.

Таким образом, FS118 можно вводить в дозе от 1 мг/кг до 20 мг/кг, от 3 мг/кг до 20 мг/кг или от 10 мг/кг до 20 мг/кг. В качестве альтернативы, FS118 можно вводить в дозе от 1 мг/кг до 10 мг/кг или от 3 мг/кг до 10 мг/кг. В предпочтительном варианте реализации FS118 вводят в дозе от 3 мг/кг до 20 мг/кг, более предпочтительно в дозе от 10 мг/кг до 20 мг/кг.

В одном варианте реализации FS118 вводят пациенту в дозе 3 мг/кг, 4 мг/кг, 5 мг/кг, 6 мг/кг, 7 мг/кг, 8 мг/кг, 9 мг/кг, 10 мг/кг, 11 мг/кг, 12 мг/кг, 13 мг/кг, 14 мг/кг, 15 мг/кг, 16 мг/кг, 17 мг/кг, 18 мг/кг, 19 мг/кг или 20 мг/кг. Например, FS118 можно вводить пациенту в дозе 3 мг/кг. В предпочтительном варианте реализации FS118 вводят пациенту в дозе 10 мг/кг. В альтернативном предпочтительном варианте реализации FS118 вводят пациенту в дозе 20 мг/кг.

FS118 можно вводить пациенту в дозе, рассчитанной на основе массы тела пациента в килограммах (кг), как описано выше. Таким образом, пациент, получающий дозу 10 мг/кг и весящий 70 кг, будет получать дозу FS118, равную 700 мг. В качестве альтернативы, FS118 можно вводить пациенту в фиксированной дозе, т.е. дозе, не основанной на индивидуальной массе пациента. Подходящую фиксированную дозу FS118 можно рассчитать на основе средней массы тела пациентов в популяции пациентов, например, 70 кг, 75 кг, 80 кг, 85 кг, 90 кг, 95 кг или 100 кг. В предпочтительном варианте реализации фиксированную дозу FS118 рассчитывают на основе 70 кг в качестве средней массы тела пациента. В альтернативном предпочтительном варианте реализации фиксированную дозу FS118 рассчитывают на основе 80 кг в качестве средней массы тела пациента. В дополнительном предпочтительном варианте реализации фиксированную дозу FS118 рассчитывают на основе 100 кг в качестве средней массы тела пациента.

Исходя из предположения о том, что средняя масса тела пациента составляет 100 кг, в настоящем изобретении, таким образом, предложены:

Молекула антитела, связывающая PD-L1 и LAG-3 для применения в способе лечения рака у пациента, представляющего собой человека,

причем указанный способ включает введение указанной молекулы антитела пациенту раз в неделю в дозе по меньшей мере 300 мг.

Способ лечения рака у пациента, представляющего собой человека, причем указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества молекулы антитела, связывающей PD-L1 и LAG-3,

Применение молекулы антитела, связывающей PD-L1 и LAG-3, при производстве лекарственного средства для лечения рака у пациента, представляющего собой человека,

причем лечение включает введение указанной молекулы антитела пациенту раз в неделю в дозе по меньшей мере 300 мг.

Исходя из предположения о том, что средняя масса тела пациента составляет 100 кг, FS118 можно в качестве альтернативы вводить пациенту в дозе по меньшей мере 400 мг, по меньшей мере 500 мг, по меньшей мере 600 мг, по меньшей мере 700 мг, по меньшей мере 800 мг, по меньшей мере 900 мг, по меньшей мере 1000 мг, по меньшей мере 1100 мг, по меньшей мере 1200 мг, по меньшей мере 1300 мг, по меньшей мере 1400 мг, по меньшей мере 1500 мг, по меньшей мере 1600 мг, по меньшей мере 1700 мг, по меньшей мере 1800 мг, по меньшей мере 1900 мг или по меньшей мере 2000 мг. Например, FS118 можно вводить пациенту в дозе по меньшей мере 300 мг. В предпочтительном варианте реализации FS118 вводят пациенту в дозе по меньшей мере 1000 мг. В альтернативном предпочтительном варианте реализации FS118 вводят пациенту в дозе по меньшей мере 2000 мг. Также рассматриваются другие дозы, например, введение FS118 в дозе по меньшей мере 100 мг.

В качестве дополнения или альтернативы, исходя из предположения о том, что средняя масса тела пациента составляет 100 кг, FS118 можно вводить в дозе до 1000 мг, 1100 мг, 1200 мг, 1300 мг, 1400 мг, 1500 мг, 1600 мг, 1700 мг, 1800 мг, 1900 мг или 2000 мг. В предпочтительном варианте реализации FS118 вводят в дозе до 1000 мг. В альтернативном предпочтительном варианте реализации FS118 вводят в дозе до 2000 мг.

Таким образом, исходя из предположения о том, что средняя масса тела пациента составляет 100 кг, FS118 можно вводить в дозе от 100 мг до 2000 мг, от 300 мг до 2000 мг или от 1000 мг до 2000 мг. В качестве альтернативы, FS118 можно вводить в дозе от 100 мг до 1000 мг или от 300 мг до 1000 мг. В предпочтительном варианте реализации FS118 вводят в дозе от 300 мг до 2000 мг, более предпочтительно в дозе от 1000 мг до 2000 мг.

Например, исходя из предположения о том, что средняя масса тела пациента составляет 100 кг, FS118 можно вводить пациенту в дозе 300 мг, 400 мг, 500 мг, 600 мг, 700 мг, 800 мг, 900 мг, 1000 мг, 1100 мг, 1200 мг, 1300 мг, 1400 мг, 1500 мг, 1600 мг, 1700 мг, 1800 мг, 1900 мг или 2000 мг. Например, FS118 можно вводить пациенту в дозе 300 мг. В предпочтительном варианте реализации FS118 вводят пациенту в дозе 1000 мг. В альтернативном предпочтительном варианте реализации FS118 вводят пациенту в дозе 2000 мг.

Альтернативные фиксированные дозы и диапазоны фиксированных доз для FS118 можно рассчитать с использованием альтернативной средней массы в популяции пациентов, например, 70 кг, 75 кг, 80 кг, 85 кг, 90 кг или 95 кг, в частности, 70 кг или 80 кг, и вводить имеющим рак пациентам, представляющим собой людей, в соответствии с настоящим изобретением.

Например, исходя из предположения о том, что средняя масса тела пациента составляет 70 кг, в настоящем изобретении предложены:

причем указанный способ включает введение указанной молекулы антитела пациенту один раз в неделю в дозе по меньшей мере 210 мг.

причем указанный способ включает введение указанной молекулы антитела пациенту раз в неделю в дозе по меньшей мере 210 мг.

причем лечение включает введение молекулы антитела пациенту раз в неделю в дозе по меньшей мере 210 мг.

При условии, что средняя масса тела пациента составляет 70 кг, FS118 можно в качестве альтернативы вводить пациенту в дозе по меньшей мере 280 мг, по меньшей мере 350 мг, по меньшей мере 420 мг, по меньшей мере 490 мг, по меньшей мере 560 мг, по меньшей мере 630 мг, по меньшей мере 700 мг, по меньшей мере 770 мг, по меньшей мере 840 мг, по меньшей мере 910 мг, по меньшей мере 980 мг, по меньшей мере 1050 мг, по меньшей мере 1120 мг, по меньшей мере 1190 мг, по меньшей мере 1260 мг, по меньшей мере 1330 мг или по меньшей мере 1400 мг. Например, FS118 можно вводить пациенту в дозе по меньшей мере 210 мг. В предпочтительном варианте реализации FS118 вводят пациенту в дозе по меньшей мере 700 мг. В альтернативном предпочтительном варианте реализации FS118 вводят пациенту в дозе по меньшей мере 1400 мг.

В качестве дополнения или альтернативы, исходя из предположения о том, что средняя масса тела пациента составляет 70 кг, FS118 можно вводить в дозе до 700 мг, 770 мг, 840 мг, 910 мг, 980 мг, 1050 мг, 1120 мг, 1190 мг, 1260 мг, 1330 мг или 1400 мг. В предпочтительном варианте реализации FS118 вводят в дозе до 700 мг. В альтернативном предпочтительном варианте реализации FS118 вводят в дозе до 1400 мг. Также рассматриваются другие дозы, например, введение FS118 в дозе по меньшей мере 70 мг.

Таким образом, исходя из предположения о том, что средняя масса тела пациента составляет 70 кг, FS118 можно вводить в дозе от 70 мг до 1400 мг, от 210 мг до 1400 мг или от 700 мг до 1400 мг. В качестве альтернативы, FS118 можно вводить в дозе от 70 мг до 700 мг или от 210 мг до 700 мг. В предпочтительном варианте реализации FS118 вводят в дозе от 210 мг до 1400 мг, более предпочтительно в дозе от 700 мг до 1400 мг.

Например, исходя из предположения о том, что средняя масса тела пациента составляет 70 кг, FS118 можно вводить пациенту в дозе 210 мг, 280 мг, 350 мг, 420 мг, 490 мг, 560 мг, 630 мг, 700 мг, 770 мг, 840 мг, 910 мг, 980 мг, 1050 мг, 1120 мг, 1190 мг, 1260 мг, 1330 мг или 1400 мг. Например, FS118 можно вводить пациенту в дозе 210 мг. В предпочтительном варианте реализации FS118 вводят пациенту в дозе 700 мг. В альтернативном предпочтительном варианте реализации FS118 вводят пациенту в дозе 1400 мг.

В качестве дополнительного альтернативного варианта, FS118 можно вводить пациенту в дозе, достаточной для достижения средней минимальной концентрации в плазме (С_мин (C_trough)), составляющей по меньшей мере 0,1-10 мкг/мл между дозами. Безотносительно к теоретическим представлениям, эти уровни С_мин коррелируют с ЕС₅₀ FS118 при функциональном анализе первичных клеток человека in vitro и, таким образом, могут представлять фармакологически активные уровни FS118.

Ожидается, что средняя минимальная концентрация в плазме, составляющая по меньшей мере 10 мкг/мл, обеспечит непрерывное ингибирование PD-L1.

Если FS118 вводят пациенту раз в неделю, дозы FS118 можно разделять промежутками времени по 7 или 8 дней. Как должен принимать во внимание специалист в данной области техники, время между дозами можно в некоторой степени изменять таким образом, чтобы промежутки времени между дозами не были строго одинаковыми. Это часто зависит от усмотрения лечащего врача. Таким образом, дозы FS118 можно разделять клинически приемлемым диапазоном времени, например, от приблизительно 7 или 8 дней.

FS118 можно вводить пациентам трехнедельными циклами лечения.

FS118 предпочтительно вводят пациенту путем внутривенной инъекции.

Рак, подлежащий лечению в соответствии с настоящим изобретением, предпочтительно ранее подвергали лечению с применением одного или более ингибиторов иммунной контрольной точки, отличных от FS118.

Рак, подлежащий лечению в соответствии с настоящим изобретением (i), может быть рефрактерным к, (ii) может рецидивировать во время или после, или (iii) может быть чувствительным к лечению одним или более ингибиторами иммунной контрольной точки. В предпочтительном варианте реализации рак, подлежащий лечению в соответствии с настоящим изобретением, рецидивирует во время или после предшествующего лечения одним или более ингибиторами иммунной контрольной точки (отличными от FS118). Ингибитор иммунной контрольной точки предпочтительно представляет собой ингибитор PD-1 или PD-L1, более предпочтительно антитело против PD-1 или против PD-L1. Предшествующее лечение одним или более ингибиторами иммунной контрольной точки (отличными от FS118) могло осуществляться в виде монотерапии или в комбинации с одним или более дополнительными терапевтическими средствами (например, одним или более химиотерапевтическими агентами).

Авторы настоящего изобретения неожиданно выявили подгруппу пациентов с раком, которые с большей вероятностью характеризуются продолжительным контролем заболевания, т.е. устойчивым контролем заболевания в результате лечения FS118. Пациенты в этой подгруппе являются пациентами с опухолями, демонстрировавшими частичную реакцию на предшествующую терапию антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, или демонстрировавшими стабильное заболевание в течение более 3 месяцев во время предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1. Таким образом, считается, что эти опухоли характеризуются «фенотипом приобретенной устойчивости» к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1. Ожидается, что пациенты, у которых наблюдалась полноценная реакция на терапию антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, также попадут в эту подгруппу. Характеризуется ли опухоль полноценной реакцией, частичной реакцией, стабильным заболеванием или прогрессирующим заболеванием во время лечения противораковым терапевтическим средством, например, терапевтическим средством на основе антитела против PD-1 или антитела против PD-L1, можно оценить в соответствии с критериями RECIST 1.1 (Eisenhauer, 2009) или критериями iRECIST (Seymour, 2017), предпочтительно критериями RECIST 1.1. Это может включать сканирование (например, МРТ) опухоли пациента и измерение размера/объема опухолевых очагов. Для целей определения приобретенной устойчивости в настоящей заявке предполагается, что, если у пациента было выполнено, например, первое сканирование, классифицированное как демонстрирующее стабильное заболевание (или частичную реакцию или полноценную реакцию), с последующим более поздним сканированием, классифицированным как демонстрирующее прогрессирующее заболевание, то пациент демонстрировал стабильное заболевание (или частичную реакцию или полноценную реакцию) в течение периода времени до сканирования, демонстрирующего прогрессирующее заболевание. Другими словами, фенотип приобретенной устойчивости можно определить как опухоли, которые (а) характеризовались лучшей общей реакцией (BOR), соответствующей полноценной реакции или частичной реакции на предшествующую терапию антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, или (b) характеризовались лучшей общей реакцией (BOR), соответствующей стабильному заболеванию, и подвергались терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 в течение более чем 3 месяцев. Клинические конечные показатели, например, BOR, можно задавать в соответствии с критериями RECIST 1.1 (Eisenhauer, 2009) или критериями iRECIST (Seymour, 2017), предпочтительно критериями RECIST 1.1.

В отличие от этого, пациенты с опухолями, демонстрировавшими стабильное заболевание в течение 3 месяцев или менее (таким образом, включая опухоли, не демонстрировавшие стабильного заболевания и, следовательно, демонстрировавшие прогрессирующее заболевание с начала лечения) во время предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 (другими словами, опухоли, характеризовавшиеся BOR, соответствующей стабильному заболеванию, и подвергавшиеся лечению в течение 3 месяцев или менее, включая опухоли, характеризовавшиеся BOR, соответствующей прогрессирующему заболеванию), не испытывали долгосрочного контроля заболевания, и поэтому считается, что эти опухоли характеризовались «фенотипом первичной устойчивости» к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1. Пациента с опухолью с фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, можно называть пациентом с приобретенной устойчивостью к терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1. Аналогично, пациент с опухолью с фенотипом первичной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, может называться пациентом с первичной устойчивостью к терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1. Предыдущее терапевтическое средство на основе антитела против PD-1 или антитела против PD-L1 можно вводить в качестве монотерапии или в комбинации с одним или более дополнительными терапевтическими средствами (например, одним или более химиотерапевтическими агентами и/или иммунотерапевтическими агентами).

В частности, у всех пациентов, завершивших лечение FS118 продолжительностью 18 недель или более, были выявлены опухоли с фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, за исключением одного пациента, у которого BOR была неизвестна (Фигуры 7 и 8). Тем не менее, для этого последнего пациента с неизвестной BOR было известно, что он продолжал получать предшествующее лечение антителом против PD-1 более одного года, и, таким образом, есть подозрение, что у этого пациента должна была быть BOR, классифицируемая как приобретенная устойчивость. Ни один из пациентов с опухолями с фенотипом первичной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 не получал лечение FS118 продолжительностью более 17 недель в исследовании I фазы (Фигуры 7 и 8). Повышенная вероятность увеличения продолжительности реакции на терапию FS118 у пациентов с опухолями с фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 наблюдалась независимо от дозы вводимого FS118 и типа опухоли (Фигуры 7-9). Таким образом, статус устойчивости опухоли к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 указывает на вероятность устойчивой реакции на терапию FS118. В частности, опухоль с фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 характеризуется повышенной вероятностью реакции на терапию FS118, в частности, реакции на терапию FS118 в течение 18 недель или более, 19 недель или более или 20 недель или более, но предпочтительно 18 недель или более, по сравнению с опухолью с фенотипом первичной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1. Таким образом, реакция на лечение FS118 предпочтительно относится к опухоли, демонстрирующей стабильное заболевание, частичную реакцию или полноценную реакцию на лечение FS118, например, в течение 18 недель или более, 19 недель или более или 20 недель или более, но предпочтительно 18 недель или более.

Вышеприведенный вывод авторов настоящего изобретения особенно важен, поскольку повторное лечение пациентов антителом против PD-(L)1 после прогрессирования заболевания при применении предыдущих режимов лечения, содержащих средства против PD-(L)1, не рекомендуется, и исторически показано, что такие пациенты получают мало пользы от такого лечения (Fujita et al., Anticancer Res. 2019; Fujita et al., Thoracic Cancer, 2019; Martini et al., J. Immunotherapy Cancer, 2017).

Таким образом, в дополнительном аспекте настоящего изобретения предложена молекула антитела, связывающая PD-L1 и LAG-3, для применения в способе лечения рака у пациента, представляющего собой человека, ранее получавшего лечение антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, причем указанная молекула антитела содержит последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2;

причем установлено, что опухоль пациента характеризуется фенотипом приобретенной устойчивости в отношении предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, и

опухоль с фенотипом приобретенной устойчивости представляет собой опухоль, демонстрировавшую полноценную или частичную реакцию на предшествующее лечение антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, или демонстрировавшую стабильное заболевание в течение более 3 месяцев во время предшествующего лечения антителом против PD-1 или антителом против PD-L1.

Опухоль, как указано в настоящей заявке, может представлять собой очаг опухоли.

В настоящем изобретении также предложена молекула антитела, связывающая PD-L1 и LAG-3 для применения в способе лечения рака у пациента, представляющего собой человека, ранее подвергавшегося лечению с помощью терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, причем указанная молекула антитела содержит последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2;

причем указанный способ включает определение того, характеризуется ли опухоль пациента фенотипом приобретенной устойчивости к терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, причем

причем опухоль с фенотипом приобретенной устойчивости представляет собой опухоль, демонстрировавшую полноценную или частичную реакцию на предшествующее лечение антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, или демонстрировавшую стабильное заболевание в течение более 3 месяцев во время предшествующего лечения антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, и

лечение опухоли, которая, как установлено, характеризуется фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или против PD-L1.

Также предложен способ лечения рака у пациента, представляющего собой человека, ранее подвергавшегося лечению антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, причем указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества молекулы антитела, связывающей PD-L1 и LAG-3 и содержащей последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2;

причем установлено, что опухоль пациента характеризуется фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, и

Дополнительно предложен способ лечения рака у пациента, представляющего собой человека, ранее подвергавшегося лечению антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, причем указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества молекулы антитела, связывающей PD-L1 и LAG-3 и содержащей последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2;

причем указанный способ включает определение того, характеризуется ли опухоль пациента фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, и

В дополнительном варианте реализации настоящего изобретения предложено применение молекулы антитела, связывающей PD-L1 и LAG-3 и содержащей последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2, при производстве лекарственного средства для лечения рака у пациента, представляющего собой человека, ранее получавшего лечение антителом против PD-1 или антителом против PD-L1,

В дополнительном варианте реализации настоящего изобретения предложен способ определения того, может ли имеющий рак пациент, ранее подвергавшийся лечению антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, реагировать на лечение молекулой антитела, связывающей PD-L1 и LAG-3 и содержащей последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2,

причем указанный способ включает определение того, характеризуется ли опухоль пациента фенотипом приобретенной устойчивости или фенотипом первичной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1,

причем опухоль с фенотипом приобретенной устойчивости характеризуется более высокой вероятностью реакции на лечение антителом, чем опухоль с фенотипом первичной устойчивости; и

причем опухоль с фенотипом приобретенной устойчивости представляет собой опухоль, демонстрировавшую полноценную или частичную реакцию на предшествующее лечение антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, или демонстрировала стабильное заболевание в течение более 3 месяцев во время предшествующего лечения антителом против PD-1 или антителом против PD-L1,

а опухоль с фенотипом первичной устойчивости представляет собой опухоль, достигшую стабильного заболевания в течение 3 месяцев или менее во время предшествующего лечения антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, включая опухоль с лучшей общей реакцией, соответствующей прогрессирующему заболеванию.

Вероятность реакции предпочтительно относится к вероятности того, что опухоль будет демонстрировать стабильное заболевание, частичную реакцию или полноценную реакцию на лечение FS118, например, в течение 18 недель или более, 19 недель или более или 20 недель или более, но предпочтительно 18 недель или более.

В настоящем изобретении также предложен способ прогнозирования вероятности реакции имеющего рак пациента на молекулу антитела, связывающую PD-L1 и LAG-3 и содержащую последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2,

причем прогнозируется, что пациент будет реагировать на антитело, если опухоль пациента будет характеризоваться фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1,

причем опухоль с фенотипом приобретенной устойчивости представляет собой опухоль, демонстрировавшую полноценную или частичную реакцию на предшествующее лечение антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, или демонстрировавшую стабильное заболевание в течение более 3 месяцев во время предшествующего лечения антителом против PD-1 или антителом против PD-L1.

В еще одном варианте реализации настоящего изобретения предложен способ выбора пациента, подвергавшегося предшествующему лечению антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, для лечения молекулой антитела, связывающей PD-L1 и LAG-3 и содержащей последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2,

опухоль с фенотипом первичной устойчивости представляет собой опухоль, достигшую стабильного заболевания в течение 3 месяцев или менее во время предшествующего лечения антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, включая опухоль с наилучшей общей реакцией, соответствующей прогрессирующему заболеванию; и

выбор пациента с опухолью, у которой выявлен фенотип приобретенной устойчивости, для лечения антителом.

Терапия антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 может относиться к лечению антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 (отличным от антитела, связывающегося как с PD-L1, так и с LAG-3, например, FS118), включая лечение ниволумабом, пембролизумабом, авелумабом, дурвалумабом или атезолизумабом, но не ограничиваясь ими.

Авторы настоящего изобретения дополнительно показали, что процент опухолевых клеток, демонстрировавших положительное окрашивание на PD-L1 до лечения FS118 в опухолях с фенотипом приобретенной устойчивости, положительно коррелирует с продолжительностью контроля заболевания в результате лечения FS118. В группе приобретенной устойчивости у трех пациентов, получавших FS118 в течение 30 недель или более, также был максимальный процент опухолевых клеток, демонстрировавших положительное окрашивание на PD-L1 на исходном уровне. У пациентов с первичной устойчивостью к терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 такой корреляции не наблюдали (Фигура 10). Эти результаты показывают, что опухоли с фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, содержащие 15% или более, 20% или более или 25% или более, но предпочтительно 15% или более PD-L1-положительных опухолевых клеток, с повышенной вероятностью будут реагировать на лечение FS118. Например, опухоли с фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 могут содержать 15% или более, 16% или более, 17% или более, 18% или более или 19% или более PD-L1-положительных опухолевых клеток.

Способы определения процента PD-L1-положительных опухолевых клеток в образце опухоли известны в данной области техники и могут включать окрашивание образца опухоли антителом против PD-L1 и прямое или косвенное обнаружение связывания антитела с опухолевыми клетками. Процент PD-L1-положительных опухолевых клеток можно определить путем подсчета количества опухолевых клеток, например, в 5 полях под большим увеличением, и определения процентной доли указанных опухолевых клеток, с которыми связано антитело.

В дополнительном варианте реализации настоящего изобретения, таким образом, предложена молекула антитела, связывающая PD-L1 и LAG-3 для применения в способе лечения рака у пациента, представляющего собой человека, ранее подвергавшегося лечению антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, причем указанная молекула антитела содержит последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2;

причем установлено, что опухоль пациента характеризуется фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, а образец опухоли, полученный от пациента до лечения антителом, содержал 15% или более PD-L1-положительных опухолевых клеток,

В настоящем изобретении также предложена молекула антитела, связывающая PD-L1 и LAG-3 для применения в способе лечения рака у пациента, представляющего собой человека, ранее подвергавшегося лечению антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, причем указанная молекула антитела содержит последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2; и

причем указанный способ включает определение наличия или отсутствия:

(i) фенотипа приобретенной устойчивости опухоли пациента к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1; и

(ii) содержания PD-L1-положительных опухолевых клеток в образце опухоли, полученном от пациента до лечения антителом, равного 15% или более; и

лечение опухоли, для которой установлен фенотип приобретенной устойчивости и которая содержит 15% или более PD-L1-положительных опухолевых клеток, с помощью антитела;

причем установлено, что опухоль пациента характеризуется фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, а образец опухоли, полученный от пациента до лечения антителом, содержал 15% или более PD-L1-положительных опухолевых клеток;

способ, включающий определение наличия или отсутствия:

(i) фенотипа приобретенной устойчивости или первичной устойчивости опухоли пациента к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1; и

(ii) содержания PD-L1-положительных опухолевых клеток в образце опухоли, полученном от пациента до лечения антителом, равного 15% или более;

причем опухоль с фенотипом приобретенной устойчивости, содержащая по меньшей мере 15% PD-L1-положительных опухолевых клеток, характеризуется повышенной вероятностью реакции на лечение антителом по сравнению с опухолью с фенотипом первичной устойчивости, или опухолью с фенотипом приобретенной устойчивости, содержащей менее 15% PD-L1-положительных опухолевых клеток;

опухоль с фенотипом первичной устойчивости представляет собой опухоль, достигшую стабильного заболевания в течение 3 месяцев или менее во время предшествующего лечения антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, включая опухоль с наилучшей общей реакцией, соответствующей прогрессирующему заболеванию. Указанный способ может дополнительно включать выбор опухоли, для которой установлен фенотип приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 и которая содержит 15% или более PD-L1-положительных опухолевых клеток, для лечения, или лечение опухоли, для которой установлен фенотип приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 и которая представляет собой раковую опухоль, содержащую 15% или более PD-L1-положительных опухолевых клеток, указанным антителом.

причем прогнозируется, что пациент, вероятно, будет реагировать на антитело, если опухоль пациента характеризуется фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, а образец опухоли, полученный от пациента до лечения антителом, содержит 15% или более PD-L1-положительных опухолевых клеток,

выбор пациента с опухолью, для которой установлен фенотип приобретенной устойчивости и которая содержит 15% или более PD-L1-положительных опухолевых клеток, для лечения с помощью антитела,

опухоль с фенотипом первичной устойчивости представляет собой опухоль, достигшую стабильного заболевания в течение 3 месяцев или менее во время предшествующего лечения антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, включая опухоль с наилучшей общей реакцией, соответствующей прогрессирующему заболеванию.

В вышеуказанных аспектах и вариантах реализации настоящего изобретения антитело можно вводить пациенту в дозе, соответствующей графику дозирования, и/или посредством пути введения, описанного в настоящей заявке.

В особенно предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения, таким образом, предложена молекула антитела, связывающая PD-L1 и LAG-3, для применения в способе лечения рака, предпочтительно плоскоклеточной карциномы головы и шеи (SCCHN), у пациента, представляющего собой человека, ранее подвергавшегося лечению антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, причем указанная молекула антитела содержит последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2, причем указанный способ включает введение указанной молекулы антитела пациенту раз в неделю в дозе 10 мг на кг массы тела пациента, и

установлено, что опухоль пациента характеризуется фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1,

В еще одном предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения также предложен способ лечения рака, предпочтительно SCCHN, у пациента, представляющего собой человека, ранее подвергавшегося лечению антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, причем указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества молекулы антитела, связывающей PD-L1 и LAG-3 и содержащей последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2, причем указанный способ включает введение указанной молекулы антитела пациенту раз в неделю в дозе 10 мг на кг массы тела пациента, и

Краткое описание чертежей

На Фигуре 1 показано влияние на экспрессию LAG-3 Т-клетками после лечения опухолей монотерапевтическим средством на основе антитела против PD-1/PD-L1 (левая панель), комбинацией монотерапевтических средств на основе антитела против PD-1/PD-L1 и антитела против LAG-3 (центральная панель) и биспецифичным антителом FS118 против PD-1/PD-L1 (правая панель).

На Фигуре 2 показано ожидаемое влияние лечения FS118 на опухоли, являющиеся рефрактерными кили рецидивировавшие после терапии антителом против PD-1/PD-L1, и опухоли, реагирующие на терапию антителом против PD-1/PD-L1.

На Фигуре 3А показан средний (±SEM) объем опухоли после введения 10 мг/кг исследуемого средства (200 мкг на мышь) на 3, 6 и 9 день после имплантации опухоли. мАт² мыши - суррогат FS118=mLAG-3/PD-L1; FS18m-108-29AA/4420=mLAG-3/имитатор мАт²; мАт PD-L1 ВМ1=мАт против PD-L1; мАт mLAG-3 ВМ1=мАт против LAG-3; контрольный IgG=G1AA/4420. На Фигуре В показаны ФК данные - однократное внутривенное введение 10 мг/кг антитела против mLAG-3/PD-L1 (пустые круги и треугольники) и мАт против PD-L1 (заполненные круги и треугольники). Показаны данные двух различных исследований, представленных кругами и треугольниками, соответственно.

На Фигуре 4 показаны измерения объема опухоли на модели сингенной опухоли МС38, выращенной под кожей у мышей C57BL/6, получавших 3 дозы G1AA/4420 (контрольный IgG, 10 мг/кг) и мАт² FS18m-108-29AA/S1 против LAG-3/PD-L1 мыши в 4 различных дозах (1 мг/кг, 3 мг/кг, 10 мг/кг и 20 мг/кг). Каждая доза обозначена вертикальной черной стрелкой на оси X. Средний объем опухоли плюс-минус стандартная ошибка среднего (SEM) показан по оси у. Сравнение размера опухоли на 17 день исследования выполняли между группой изотипического контроля (G1AA/4420) и группами мАт² LAG-3/PD-L1 с использованием одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA). Значимые различия между группами определяли с помощью критерия множественного сравнения Тьюки: *** Р≤0,001; **** Р≤0,0001.

На Фигуре 5 изображена структура 2-компартментной популяционной ФК модели, описывающей системное воздействие FS118, сконструированная из ФК-данных для NHP, не соответствующих и соответствующих GLP (через 0-7 дней после введения дозы). V_P (который также может называться V1)=центральный объем; V_T (который также может называться V2)=периферийный объем; CL_d (который также может называться CL2)=коэффициент обмена; CL_P (который также может называться CL1)=клиренс FS118; С_Р=компартмент плазмы; C_T=компартмент ткани.

На Фигуре 6 показан дизайн первого исследования на людях (FIH) I фазы в Примере 2.

На Фигуре 7 показана продолжительность лечения FS118 в неделях по состоянию на 25 марта 2020 года в зависимости от группы устойчивости и дозы (ромбы=1 мг/кг; круги=3 мг/кг; треугольники=10 мг/кг; квадраты=20 мг/кг). Наблюдались значимые различия между пациентами с приобретенной устойчивостью к терапии антителом против PD-1/PD-L1, определение которой приведено в настоящей заявке, по сравнению с пациентами с первичной устойчивостью к терапии антителом против PD-1/PD-L1, определение которой приведено в настоящей заявке, причем продолжительность лечения FS118 у пациентов с приобретенной устойчивостью в среднем была большей, чем у пациентов с первичной устойчивостью, независимо от введенной дозы FS118.

На Фигуре 8 показан график "дорожек бассейна" для 39 пациентов, классифицированных как пациенты с первичной или приобретенной устойчивостью к терапии антителом против PD-1/PD-L1 (с сортировкой по дозе FS118), у которых были поддающиеся оценке снимки опухоли по состоянию на 27 ноября 2019 года во время лечения FS118. Пациенты с первичной устойчивостью показаны как серые столбики, в то время как пациенты с приобретенной устойчивостью - как темно-серые полосы. Показано количество завершенных недель лечения FS118 (PD=прогрессирующее заболевание; SD=стабильное заболевание). У всех пациентов с продолжительностью лечения FS118 более 18 недель (все столбики, у одного из которых были опухоли с фенотипом приобретенной устойчивости) было по меньшей мере одно измерение стабильного заболевания.

На Фигуре 9 показана продолжительность лечения FS118 в неделях по состоянию на 25 марта 2020 года на основании тех же данных, что представлены на Фигуре 7, но в зависимости от группы устойчивости и типа опухоли. Вероятность реакции на лечение FS118 связана с опухолями с фенотипом приобретенной устойчивости, но, по-видимому, не зависела от клинических показаний (типа опухоли).

На Фигуре 10 показан процент опухолевых клеток в образцах биоптатов опухоли, демонстрирующих положительное окрашивание по PD-L1 (балльный показатель PD-L1-положительности опухоли [PD-L1 %TPS]) до лечения FS118 в зависимости от продолжительности лечения FS118 в неделях по состоянию на 12 декабря 2019 года. А: Высокий исходный уровень PD-L1 %TPS демонстрировал положительную корреляцию с продолжительностью лечения FS118 у пациентов с приобретенной устойчивостью к терапии на основе PD-1/PD-L1. Три пациента с максимальным PD-L1 %TPS в группе приобретенной устойчивости получали FS118 в течение 30 недель или более, что свидетельствует о контроле заболевания с помощью FS118. В: Корреляции между PD-L1 %TPS и продолжительностью лечения FS118 у пациентов с первичной устойчивостью к терапии антителом против PD-1/PD-L1 не наблюдали.

На Фигуре 11 показано, что пациенты с приобретенной устойчивостью к терапии антителом против PD-1/PD-L1 демонстрировали более высокий уровень иммунного клеточного ответа при лечении FS118, чем пациенты с первичной устойчивостью к терапии антителом против PD-1/PD-L1. Процентное изменение количества иммунных клеток с течением времени (пустой круг: CD3+ Т-клетки, заполненный квадрат: CD4+ Т-клетки, заполненный треугольник: CD8+ Т-клетки, заполненный ромб: NK-клетки) изображено как процентное изменение относительно исходного уровня до начала лечения FS118. А: Пациент 1004-0003 является типичным профилем пациента с первичной устойчивостью. В: пациент 1002-0014 является типичным профилем пациента с приобретенной устойчивостью. Представлены данные, полученные 26 ноября 2019 г.

Подробное описание изобретения

Биспецифичные антитела против LAG-3/PD-L1

Биспецифичные антитела против LAG-3/PD-L1 (например, FS118, описанное в настоящей заявке), подходящие для применения в настоящем изобретении, описаны в WO 2017/220569 А1, содержание которой полностью включено в настоящую заявку для всех целей. Антитело FS118 содержит последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1, и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2.

Рак

PD-1, его лиганд PD-L1 и LAG-3 являются примерами белков иммунной контрольной точки. Молекулы, например, антитела, связывающиеся с этими белками и ингибирующие их, в совокупности называются ингибиторами иммунной контрольной точки. Показано, что лечение имеющих рак пациентов антителами против PD-1/PD-L1 в качестве монотерапии приводит к повышению уровня экспрессии LAG-3 на Т-клетках, что приводит к устойчивости к терапии антителом против PD-L1/PD-1 (Фигура 1). Комбинированное лечение антителами против PD-1/PD-L1 и антителами против LAG-3 не было способно предотвратить увеличение экспрессии LAG-3 на Т-клетках, хотя это увеличение экспрессии снижалось по сравнению с монотерапией антителом против PD-L1/PD-1 (Фигура 1). Напротив, показано, что лечение FS118 (и суррогатным антителом мыши FS18m-108-29AA/S1) приводит к снижению экспрессии LAG-3 Т-клетками, а также к повышению уровня SLAG-3 (Фигура 1). Таким образом, FS118 обладает иным принципом действия по сравнению с антителами против PD-L1/PD-1 и антителами против LAG-3 и способно предотвращать и/или купировать устойчивость, опосредованную LAG-3, к ингибиторам PD-L1/PD-1, как продемонстрировали ранние результаты исследования I фазы, продемонстрировавшие фармакодинамическую реакцию, а также стабильное заболевание у нескольких пациентов после лечения FS118 у пациентов с местно-распространенными, неоперабельными или метастатическими солидными опухолями или гематологическими злокачественными новообразованиями, прогрессировавшими во время или после терапии антителом против PD-1/PD-L1.

Безотносительно к теоретическим представлениям, ожидаемое влияние лечения FS118 на опухоли, которые рефрактерные к или рецидивировавшие во время или после монотерапии антителом против PD-1/PD-L1, и опухоли, реагирующие на монотерапию антителом против PD-1/PD-L1, показано на Фигуре 2.

Рак, рефрактерный по отношению к лечению одним или более ингибиторами иммунной контрольной точки, предпочтительно относится к раку, устойчивому к лечению одним или более ингибиторами иммунной контрольной точки (отличными от биспецифичного антитела LAG-3/PD-L1, например, FS118). Рак, рецидивировавший во время или после лечения одним или более ингибиторами иммунной контрольной точки, предпочтительно относится к раку, который приобрел устойчивость к одному или более ингибиторам иммунной контрольной точки (отличным от биспецифичного антитела LAG-3/PD-L1, например, FS118) во время или после лечения указанным ингибитором(ами) иммунной контрольной точки.

Конкретно, на Фигуре 2 показано, что при опухолях, рефрактерных или рецидивировавших во время или после монотерапии антителом против PD-1/PD-L1 и приводивших к истощению или иммуносупрессии Т-клеток, лечение FS118, как ожидается, усилит иммунно-опосредованный противораковый эффект путем купирования истощения/иммуносупрессии Т-клеток вследствие связывания с LAG-3, экспрессируемым на поверхности Т-клеток (который в противном случае действует на иммунные клетки как ингибирующий сигнал), снижая сверхэкспрессию LAG-3 на поверхности Т-клеток и способствуя высвобождению растворимого LAG-3 (sLAG-3). Таким образом, FS118 может значительно расширить клиническое преимущество блокады иммунной контрольной точки, поскольку оно может спасать пациентов с первичной или адаптивной устойчивостью к стандартной терапии ингибиторами иммунной контрольной точки.

При опухолях, реагирующих на монотерапию против PD-1/PD-L1, ожидается, что ОИЛ экспрессируют LAG-3 на своей поверхности, а опухоли характеризуются высоким уровнем PD-L1. Ожидается, что FS118 будет усиливать активацию Т-клеток у этих пациентов посредством связывания с указанными LAG-3 и PD-L1 в большей степени, чем монотерапия антителом против PD-1/PD-L1, а также будет предотвращать сверхэкспрессию LAG-3 в ответ на лечение антителом против PD-L1. Таким образом, ожидается подавление развития устойчивости к блокаде PD-L1. Таким образом, ожидается, что дозы FS118, описанные в настоящей заявке, которые, как было показано, приводят к фармакодинамической реакции, а также стабильному заболеванию у нескольких пациентов с опухолями или гематологическими злокачественными новообразованиями, прогрессировавшими во время или после терапии антителом против PD-1/PD-L1, также будут пригодны для эффективного лечения рака, реагирующего на монотерапию антителом против PD-1/PD-L1.

Рак, демонстрирующий реакцию на лечение ингибитором иммунной контрольной точки, должен содержать ОИЛ для опосредования указанного эффекта. Таким образом, ожидается, что злокачественные новообразования, рефрактерные к или рецидивировавшие во время или после лечения ингибитором иммунной контрольной точки, отличным от ингибитора на основе антитела против PD-1/PD-L1, содержат неактивные (т.е. истощенные или подвергшиеся иммуносупрессии) ОИЛ, в то время как злокачественные новообразования, реагирующие на лечение ингибиторами иммунной контрольной точки, отличными от ингибиторов на основе антитела против PD-1/PD-L1, содержать активированные ОИЛ. Как следствие, ожидается, что FS118 будет оказывать аналогичное влияние на PD-L1-экспрессирующие злокачественные новообразования, рефрактерные к или рецидивировавшие во время или после лечения ингибитором иммунной контрольной точки, отличным от ингибитора на основе антитела против PD-1/PD-L1, или реагирующие на лечение ингибитором иммунной контрольной точки, отличным от ингибитора на основе антитела против PD-1/PD-L1, как описано выше для раковых новообразований, рефрактерных, рецидивировавших или реагировавших на лечение ингибиторами на основе антитела против PD-1/PD-L1.

Таким образом, в предпочтительном варианте реализации рак, подлежащий лечению в соответствии с настоящим изобретением, ранее подвергали лечению с применением одного или более ингибиторов иммунной контрольной точки (отличных от биспецифичного антитела против LAG-3/PD-L1, например, FS118).

Таким образом, рак, подлежащий лечению в соответствии с настоящим изобретением, может являться или, как было установлено, является рефрактерным к лечению одним или более ингибиторами иммунной контрольной точки (отличными от биспецифичного антитела против LAG-3/PD-L1, например, FS118). В качестве альтернативы, рак, подлежащий лечению в соответствии с настоящим изобретением, может рецидивировать во время или после лечения одним или более ингибиторами иммунной контрольной точки (отличных от биспецифичного антитела против LAG-3/PD-L1, например, FS118). В качестве дополнительного альтернативного варианта, рак, подлежащий лечению в соответствии с настоящим изобретением, может реагировать или, как было установлено, реагирует на лечение одним или более ингибиторами иммунной контрольной точки. Рецидив рака во время или после лечения одним или более ингибиторами иммунной контрольной точки предпочтительно относится к прогрессированию рака во время или после лечения одним или более ингибиторами иммунной контрольной точки. Обнаружение прогрессирования рака находится в пределах возможностей специалистов в данной области техники.

Ингибитор иммунной контрольной точки может представлять собой ингибитор PD-1, PDL-1, PD-L2, CTLA-4, CD80, CD86, LAG-3, В7-Н3, VISTA, В7-Н4, В7-Н5, В7-Н6, NKp30, NKG2A, галектина 9, TIM-3, HVEM, BTLA, KIR, CD47 или SiRP-альфа. Ингибитор иммунной контрольной точки может представлять собой антитело, способное ингибировать рассматриваемую молекулу иммунной контрольной точки. В предпочтительном варианте реализации ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой ингибитор PD-1 или PD-L1, например, антитело против PD1/PD-L1. Антитела, способные ингибировать молекулы иммунной контрольной точки, известны в данной области техники и включают ипилимумаб, ингибирующий CTLA-4; ниволумаб, пембролизумаб и цемиплимаб, ингибирующие PD-1; и атезолизумаб, авелумаб и дурвалумаб, ингибирующие PD-L1. Молекулы иммунной контрольной точки, их лиганды и ингибиторы рассмотрены в источнике Marin-Acevedo et al. Journal of Hematology & Oncology (2018).

Рак, подлежащий лечению в соответствии с настоящим изобретением, экспрессирует PD-L1. Предпочтительно установлено, что рак экспрессирует PD-L1. Кроме того, рак, подлежащий лечению в соответствии с настоящим изобретением, содержит LAG-3-экспрессирующие иммунные клетки, например, ОИЛ. Предпочтительно установлено, что рак содержит LAG-3-экспрессирующие иммунные клетки. В предпочтительном варианте реализации рак может представлять собой рак, устойчивый к лечению одним или более ингибиторами иммунной контрольной точки (отличных от биспецифичного антитела против LAG-3/PD-L1, например, FS118) из-за экспрессии PD-L1 раковыми клетками и экспрессии LAG-3 на поверхности иммунных клеток. В конкретных вариантах реализации уровень экспрессии PD-L1 на поверхности раковых клеток и уровень экспрессии LAG-3 на поверхности иммунных клеток в микроокружении опухоли могут быть высокими по сравнению с клетками нормальной ткани и активированными иммунными клетками, соответственно.

Авторы настоящего изобретения неожиданно показали, что опухоли с фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 и, в частности, обладающие фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 и содержащие по меньшей мере 15% PD-L1-положительных опухолевых клеток до лечения FS118, характеризуются повышенной вероятностью проявления устойчивой реакции, в частности, устойчивого стабильного заболевания, в ответ на лечение FS118. Этот эффект наблюдали независимо от типа опухоли и введенной дозы FS118.

Таким образом, рак, подлежащий лечению в соответствии с настоящим изобретением, предпочтительно характеризуется фенотипом приобретенной устойчивости к терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, как определено в настоящей заявке. В еще более предпочтительном случае рак, подлежащий лечению в соответствии с настоящим изобретением, характеризуется фенотипом приобретенной устойчивости к терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, как определено в настоящей заявке, и раковая(ые) опухоль(и) содержит(ат) по меньшей мере 15% PD-L1-положительных опухолевых клеток до лечения с применением FS118. Рак, подлежащий лечению с применением молекулы антитела согласно настоящему изобретению, можно выбрать из группы, состоящей из рака головы и шеи (например, плоскоклеточной карциномы головы и шеи (SCCHN)), лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы (например, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, медленно растущей неходжкинской лимфомы, лимфомы из клеток мантии, рака яичников, рака предстательной железы, рака ободочной и прямой кишки, фибросаркомы, почечноклеточной карциномы, меланомы, рака поджелудочной железы, рака молочной железы, мультиформной глиобластомы, рака легких (например, немелкоклеточного рака легких или мелкоклеточного рака легких), рака желудка, рака мочевого пузыря, рака шейки матки, рака матки, рака вульвы, рака зародышевых клеток яичка, рака полового члена, лейкоза (например, хронического лимфоцитарного лейкоза, миелолейкоза, острого лимфобластного лейкоза или хронического лимфобластного лейкоза), множественной миеломы, плоскоклеточного рака, рака яичек, рака пищевода (например, аде но карциномы пищеводно-желудочного перехода), саркомы Капоши и лимфомы центральной нервной системы (ЦНС), гепатоцеллюлярной карциномы, рака носоглотки, карциномы из клеток Меркеля, мезотелиомы, рака щитовидной железы (например, анапластического рака щитовидной железы и саркомы (например, саркомы мягких тканей). Опухоли этих видов рака заведомо или предположительно экспрессируют PD-L1 на поверхности своих клеток и/или содержат иммунные клетки, например, ОИЛ, экспрессирующие PD-L1 и/или LAG-3.

Лечение почечноклеточной карциномы, рака легких (например, немелкоклеточного рака легких или мелкоклеточного рака легких), рака носоглотки, рака ободочной и прямой кишки, меланомы, рака желудка, рака пищевода (например, аденокарциномы пищеводно-желудочного перехода), рака яичников, рака шейки матки, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи (например, SCCHN), лейкоза (например, хронического лимфоцитарного лейкоза, лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы (например, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, медленно растущей неходжкинской лимфомы, лимфомы из клеток мантии) и множественной миеломы с применением антител против LAG-3 исследуется в клинических исследованиях и демонстрирует перспективные результаты. Таким образом, рак, подлежащий лечению с применением молекул антител согласно настоящему изобретению, может представлять собой рак головы и шеи (например, SCCHN), почечноклеточную карциному, рак легких (например, не мелкоклеточный рак легких или мелкоклеточный рак легких), рак носоглотки, рак ободочной и прямой кишки, меланому, рак желудка, рак пищевода (например, аденокарциному пищеводно-желудочного перехода), рак яичников, рак шейки матки, рак мочевого пузыря, лейкоз (например, хронический лимфоцитарный лейкоз, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому (например, диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому, медленно растущую неходжкинскую лимфому, лимфому из клеток мантии) или множественную миелому.

Лечение меланомы, рака ободочной и прямой кишки, рака молочной железы, рака мочевого пузыря, почечноклеточной карциномы, рака мочевого пузыря, рака желудка, рака головы и шеи (например, SCCHN), мезотелиомы, рака легких (например, немелкоклеточного рака легких или мелкоклеточного рака легких), рака яичников, карциномы из клеток Меркеля, рака поджелудочной железы, меланомы и гепатоцеллюлярной карциномы с применением антител против PD-L1 также исследуется в клинических исследованиях и демонстрирует перспективные результаты. Таким образом, рак, подлежащий лечению с применением молекул антител согласно настоящему изобретению, может представлять собой рак головы и шеи (например, SCCHN), меланому, рак ободочной и прямой кишки, рак молочной железы, рак мочевого пузыря, почечноклеточную карциному, рак мочевого пузыря, рак желудка, мезотелиому, рак легких (например, немелкоклеточный рак легких), рак яичников, карциному из клеток Меркеля, рак поджелудочной железы, меланому и гепатоцеллюлярную карциному.

Предпочтительными видами рака для лечения с применением молекул антител согласно настоящему изобретению являются рак головы и шеи (например, SCCHN), рак легких (например, немелкоклеточный рак легких), рак мочевого пузыря, диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома, рак желудка, рак поджелудочной железы и гепатоцеллюлярная карцинома. Известно, что опухоли при этих видах рака содержат LAG-3-экспрессирующие иммунные клетки и экспрессируют PD-L1 на поверхности своих клеток или содержат иммунные клетки, экспрессирующие PD-L1.

В предпочтительном варианте реализации изобретения рак выбран из группы, состоящей из: плоскоклеточной карциномы головы и шеи (SCCHN), рака желудка, аденокарциномы пищеводно-желудочного перехода (GEJ), немелкоклеточного рака легких (НМРЛ) (например, аденокарциномы легких или плоскоклеточных гистологических подтипов рака легких), меланомы (например, кожной меланомы), рака предстательной железы, рака мочевого пузыря (например, уротелиальной карциномы мочевого пузыря), рака молочной железы (например, тройного негативного рака молочной железы), рака ободочной и прямой кишки (CRC; например, аденокарциномы толстой кишки или прямой кишки), почечноклеточной карциномы (ПКК), гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК), мелкоклеточного рака легких (МРЛ) и карциномы из клеток Меркеля.

В альтернативном предпочтительном варианте реализации рак представляет собой редкий рак, выбранный из группы, состоящей из: рака щитовидной железы (предпочтительно анапластического рака щитовидной железы), саркомы (предпочтительно саркомы мягких тканей), мультиформной глиобластомы (GBM), саркомы (например, саркомы мягких тканей, включая дедифференцированную липсосаркому, недифференцированную плеоморфную саркому и лейомиосаркому), рака яичников (например, высокодифференцированной/низкодифференцированной серозной или светлоклеточной гистологии), базальноклеточной карциномы, солидных опухолей MSI-H, тройного негативного рака молочной железы (TNBC), рака шейки матки, рака пищевода (например, аденокарциномы пищеводно-желудочного перехода (GEJ) или плоскоклеточной карциномы пищевода), множественной миеломы (ММ), рака поджелудочной железы (например, аденокарциномы поджелудочной железы), менингомы, карциномы щитовидной железы, рака эндометрия (например, рака эндометрия MSI-H), карциномы тимуса, гестационного трофобластического новообразования, лимфом (например, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (DLBCL) или периферической Т-клеточной лимфомы), канцероматоза брюшины, рака ободочной и прямой кишки со стабильными микросателлитами (MSS) и стромальных опухолей желудочно-кишечного тракта (GIST) (например, неоперабельной GIST).

В одном предпочтительном варианте реализации рак представляет собой рак щитовидной железы, предпочтительно анапластический рак щитовидной железы. В альтернативном предпочтительном варианте реализации рак представляет собой саркому, предпочтительно саркому мягких тканей. Недавно показано, что наличие третичных лимфоидных структур (TLS) в опухолевой ткани саркомы может позволить прогнозировать реакцию на терапию блокадой иммунной контрольной точки (Petitprez et al., 2020).

В еще одном варианте реализации изобретения рак, подлежащий лечению, может быть выбран из: рака головы и шеи (например, SCCHN), рака желудка, рака пищевода, НМРЛ, мезотелиомы, рака шейки матки, рака щитовидной железы (например, анапластического рака щитовидной железы) и саркомы (например, саркомы мягких тканей).

В одном конкретном варианте реализации рак, подлежащий лечению, представляет собой рак головы и шеи, предпочтительно плоскоклеточную карциному головы и шеи (SCCHN), более предпочтительно плоскоклеточную карциному полости рта, ротоглотки, гортани или гортанной части глотки. Рак может быть рецидивирующим или метастатическим. Повышенные уровни совместной экспрессии LAG-3 и PD-1 на Т-клетках в микроокружении опухоли у пациентов с SCCHN коррелировали с отсутствием реакции на агенты против PD-1/PD-L1 (Hanna et al., 2018), и показано, что экспрессия LAG-3 на ОИЛ у пациентов с SCCHN с отрицательным статусом лимфатических узлов является прогностическим маркером пониженной выживаемости (Deng et al., 2016). Лечение биспецифичным антителом, например, FS118, мишенями которого являются одновременно LAG-3 и PD-L1, может активировать иммунный ответ, как описано в настоящей заявке. Рак головы и шеи (например, SCCHN) может подвергаться или не подвергаться предшествующему лечению и прогрессировать во время предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 (отличным от FS118), вводимым в качестве монотерапии или в комбинации с другим терапевтическим средством (например, химиотерапевтическим агентом). У пациентов может быть положительный или отрицательный результат анализа вируса папилломы человека (ВПЧ). В одном варианте реализации изобретения у всех пациентов имеет место положительный результат анализа ВПЧ. В альтернативном варианте реализации изобретения у всех пациентов имеет место отрицательный результат анализа ВПЧ.

В еще одном варианте реализации изобретения рак, подлежащий лечению, представляет собой рак желудка, заведомо экспрессирующий высокие уровни LAG-3 (Morgado et al., 2018). Рак желудка может подвергаться или не подвергаться предшествующему лечению и прогрессировать во время предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 (отличным от FS118), вводимым в качестве монотерапии или в комбинации с другим терапевтическим средством (например, химиотерапевтическим агентом). В дополнительном варианте реализации рак, подлежащий лечению, представляет собой НМРЛ, предпочтительно плоскоклеточный НМРЛ IV стадии и/или НМРЛ III стадии. НМРЛ может подвергаться предшествующему лечению и прогрессировать во время предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 (отличным от FS118), вводимым в качестве монотерапии или в комбинации с другим терапевтическим средством (например, химиотерапевтическим агентом). В дополнительном варианте реализации рак, подлежащий лечению, представляет собой МРЛ, предпочтительно МРЛ с отдаленными метастазами. МРЛ может подвергаться предшествующему лечению и прогрессировать во время предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 (отличным от FS118), вводимым в качестве монотерапии или в комбинации с другим терапевтическим средством (например, химиотерапевтическим агентом). В дополнительном варианте реализации рак, подлежащий лечению, представляет собой рак яичников. Рак яичников может быть рефрактерным к платине и/или может подвергаться или не подвергаться предшествующей иммунотерапии (например, терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 (отличным от FS118), вводимым в качестве монотерапии или в комбинации с другим терапевтическим средством (например, химиотерапевтическим агентом)).

Если заявка относится к конкретному виду рака, например, раку молочной железы, она относится к злокачественной трансформации соответствующей ткани, в данном случае - ткани молочной железы. Рак, происходящий от злокачественной трансформации другой ткани, например, ткани яичника, может приводить к появлению метастатических очагов в других частях тела, например, молочной железе, но при этом является не раком молочной железы, как указано в настоящей заявке, а раком яичников.

Рак, подлежащий лечению согласно настоящему изобретению, может быть первичным раком. В качестве альтернативы, рак может быть метастатическим раком.

Путь введения

FS118 предпочтительно вводят пациенту путем внутривенной инъекции. Например, FS118 можно вводить пациенту путем внутривенной болюсной инъекции или внутривенного вливания, например, с использованием насоса (помпы) для непрерывного вливания. Внутривенное вливание можно выполнять с помощью насоса для непрерывного вливания в течение 30 минут для доз до 2400 мкг и в течение 60 минут для доз более 2400 мкг. Эти типы введения успешно использовали для FS118 в исследовании I фазы (Пример 2).

Составы

В целях терапевтического применения антитело FS118 содержит носитель, который является фармацевтически приемлемым и подходит для доставки антитела FS118 выбранным путем введения, например, посредством внутривенного введения. Подходящие фармацевтически приемлемые носители представляют собой носители, обычно применяемые для внутривенного введения молекул антител, например, разбавители, вспомогательные вещества и т.п. Фармацевтически приемлемые носители для терапевтического применения хорошо известны в области фармацевтики и описаны, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A.R. Gennaro edit. 1985).

Комбинированные способы лечения

Способ лечения рака, описанный в настоящей заявке, может включать введение антитела FS118 пациенту отдельно либо в комбинации с другими способами лечения. Например, антитело FS118 можно вводить одновременно или последовательно или в виде комбинированного средства с другим терапевтическим агентом или агентами, в зависимости от рака, подвергаемого лечению. Например, антитело FS118 можно вводить в комбинации с известным агентом для лечения рака, подлежащего лечению. Например, антитело FS118 можно вводить пациенту в комбинации со вторым противораковым терапевтическим средством, например, химиотерапевтическим средством, противоопухолевой вакциной (также называемой вакциной против рака), лучевой терапией, иммунотерапевтическим средством, онколитическим вирусом, терапевтическим средством на основе Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) или гормональным терапевтическим средством.

Ожидается, что антитело FS118 будет действовать в качестве адьюванта при противораковой терапии, например, химиотерапии, противоопухолевой вакцинации или лучевой терапии. Безотносительно к теоретическим представлениям считается, что введение антитела FS118 пациенту в комбинации с химиотерапией, противоопухолевой вакцинацией или лучевой терапией будет вызывать более сильный иммунный ответ против опухоль-ассоциированных антигенов, чем ответ, достигаемый при применении только химиотерапии, противоопухолевой вакцинации или лучевой терапии.

Таким образом, способ лечения рака у пациента может включать введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела FS118 в комбинации с химиотерапевтическим агентом, противоопухолевой вакциной, радионуклидом, иммунотерапевтическим агентом, онколитическими вирусами, CAR-T-клетками или агентом для гормональной терапии. Химиотерапевтический агент, противоопухолевая вакцина, радионуклид, иммунотерапевтический агент, онколитические вирусы, CAR-T-клетки или агент для гормональной терапии предпочтительно представляет собой химиотерапевтический агент, противоопухолевую вакцину, радионуклид, иммунотерапевтический агент, онколитические вирусы, CAR-T-клетки или агент для гормональной терапии рассматриваемого вида рака, т.е. химиотерапевтический агент, противоопухолевую вакцину, радионуклид, иммунотерапевтический агент, онколитические вирусы, CAR-T-клетки или агент для гормональной терапии, характеризующиеся продемонстрированной эффективностью при лечении рассматриваемого вида рака. Практикующий специалист в данной области техники способен выбрать подходящий химиотерапевтический агент, противоопухолевую вакцину, радионуклид, иммунотерапевтический агент, онколитические вирусы, CAR-T-клетки или агент для гормональной терапии, характеризующийся продемонстрированной эффективностью при лечении рассматриваемого вида рака.

Например, если способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела FS118 в комбинации с химиотерапевтическим агентом, химиотерапевтический агент можно выбрать из группы, состоящей из таксанов, цитотоксических антибиотиков, ингибиторов тирозинкиназы, ингибиторов PARP, ингибиторов фермента B_RAF, ингибиторов HDAC, ингибиторов mTOR, алкилирующих агентов, аналогов платины, аналогов нуклеозидов, производных талидомида, противоопухолевых химиотерапевтических агентов и т.д. Таксаны включают доцетаксел, паклитаксел и паклитаксел; цитотоксические антибиотики включают актиномицин, блеомицин, антрациклины, доксорубицин и валрубицин; ингибиторы тирозинкиназы включают эрлотиниб, гефитиниб, осимертиниб, афатиниб, акситиниб, PLX3397, иматиниб, кобиметиниб, траметиниб, ленватиниб, кабозантиниб, анлотиниб, сорафениб, цедираниб, регорафриниб, ситраватиниб, пазопиниб и дефактиниб; ингибиторы PARP включают нирапариб, олапариб, рукапариб и велипариб; ингибиторы фермента B-Raf включают вемурафениб и дабрафениб; алкилирующие агенты включают дакарбазин, циклофосфамид, темозолид; аналоги платины включают карбоплатин, цисплатин и оксалиплатин; аналоги нуклеозидов включают гемцитабин и азацитидин; противоопухолевые средства включают флударабин. Ингибиторы HDAC включают энтиностат, панобиностат и вариностат; ингибиторы mTOR включают эверолимус и сиролимус. Другие химиотерапевтические агенты, подходящие для применения в настоящем изобретении, включают метотрексат, пеметрексед, капецитабин, эрибулин, иринотекан, фторурацил и винбластин.

Стратегии вакцинации для лечения рака внедрены в клиническую практику и обсуждаются в научной литературе (например, Rosenberg, S. 2000 Development of Cancer Vaccines). Основные используемые стратегии заключаются в стимуляции иммунной системы к ответу на различные клеточные маркеры, экспрессируемые аутологичными или аллогенными раковыми клетками, с использованием указанных клеток при способе вакцинации как с гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором (ГМКСФ), так и без него. ГМКСФ стимулирует сильный ответ при презентации антигена и действует в особенности эффективно при применении в рамках указанных стратегий.

Дополнительные аспекты и варианты реализации настоящего изобретения понятны для специалистов в данной области техники в свете настоящего описания, включающего их экспериментальную реализацию, описанную далее.

Все документы, упомянутые в настоящем описании, полностью включены в настоящую заявку посредством ссылок.

Союз "и/или", используемый в настоящей заявке, следует рассматривать как специфичное описание каждой из двух указанных особенностей или компонентов друг с другом или по отдельности. Например, "А и/или В" следует рассматривать как специфичное описание каждого из (i) A, (ii) В и (iii) А и В, как если бы каждый из этих вариантов по отдельности описывался в настоящей заявке.

Если иное не следует из контекста, описания и определения особенностей, изложенных выше, не ограничиваются каким-либо конкретным аспектом или вариантом реализации настоящего изобретения и в равной степени применимы ко всем описанным аспектам и вариантам реализации.

В других аспектах и вариантах реализации настоящего изобретения предложены аспекты и варианты реализации, описанные выше, с термином «содержащий», заменяемым термином «состоящий из» или «состоящий по существу из», если контекст не требует иного.

Некоторые аспекты и варианты реализации настоящего изобретения будут проиллюстрированы посредством примеров со ссылкой на фигуры, описанные выше.

Примеры

Пример 1: Первое исследование на людях (FIH) для обоснования дозы и стратегии увеличения дозы для FS118

FS118 представляет собой молекулу биспецифичного антитела, мишенями которой одновременно являются два белка иммунной контрольной точки - LAG-3 и PD-L1. Показано, что FS118 отличается в ряде важных аспектов от моноспецифичных ингибиторов иммунной контрольной точки, например, антител против PD-L1. Эти различия потребовали подробного анализа для определения соответствующих доз для исследования I фазы FS118 у пациентов, представляющих собой людей. В частности, FS118 тестировали в исследованиях in vitro и in vivo для определения оптимальной начальной дозы и стратегии увеличения дозы для исследования I фазы на людях, предназначенного для определения безопасности, переносимости, фармакокинетики и активности FS118 у пациентов с распространенными злокачественными новообразованиями, прогрессировавшими во время или после предшествующей терапии, включающей агенты против PD-1/PD-L1 (см. Пример 2 ниже).

1.1 FS118 и mLAG-3/PD-L1: обзор доклинических исследований

Доклинические исследования включали ФК-исследования клинического антитела-кандидата FS118 на мышах C57/BL6 дикого типа (дт), мышах с нокаутом LAG-3 (КО) (см. Пример 1.3.1.1) и приматах, не являющихся человеком (NHP; яванские макаки). Исследования на NHP включали ФК-исследование однократной дозы (см. Пример 1.3.2.1), токсикологическое исследование по подбору диапазона доз, которое включало количественное определение антител к лекарственному средству (АЛС) и растворимого PD-L1 (см. Пример 1.3.2.2) и исследование токсичности в соответствии с GLP (надлежащей лабораторной практикой) с аналогичными параметрами количественного определения (см. Пример 1.3.2.3).

Что касается исследований на мышах, то FS118 обладало пониженной способностью связываться с mLAG-3 и mPD-L1 по сравнению с hLAG-3 и hPD-L1, соответственно. Следовательно, ФК-исследования in vivo также выполняли с использованием суррогатного биспецифичного антитела мАт² мыши (mLAG-3/PD-L1 [FS18-7-108-29/S1 с мутацией LALA]) у мышей C57/BL6 дт и мышей с нокаутом LAG-3 и фоновым генотипом C57/BL6 (см. Пример 1.3.1.2). Это суррогатное мАт² мыши связывается с соответствующими белками-мишенями мыши с более высокой аффинностью по сравнению с FS118. В рамках фармакологических исследований указанное суррогатное мАт² мыши также использовали в модели сингенной опухоли МС38 мыши, собирая данные о воздействии в выбранные моменты времени в течение периода введения для оценки ФК и эффективности молекулы (см. Пример 1.3.1.3).

Результаты этих исследований использовали при разработке модели ФК для NHP (см. Пример 1.5.1) и определении максимальной нетоксичной дозы (HNSTD; см. Пример 1.5.2), что, в свою очередь, привело к обоснованию начальной дозы для FIH (см. Пример 1.5.3).

1.2 Способы

1.2.1 Измерение FS118 в сыворотке/плазме и mLAG-3/PD-L1 в сыворотке мышей и NHP для получения представления о фармакокинетике (ФК) FS118

В ФК-исследованиях на мышах FS118 и mLAG-3/PD-L1 обнаруживали в сыворотке с использованием набора для обнаружения IgG человека Mesoscale Discovery (MSD) в соответствии с инструкцией производителя (MSD Kit K150JLD-2); при этом ожидалось, что при анализе ФК будет выполняться измерение «общего» FS118, т.е. независимо от связывания с sLAG-3 или sPD-L1.

В первоначальном исследовании однократной дозы для NHP (см. Пример 1.3.2.1) разработали пользовательский электрохемилюминесцентный (ECL) способ иммуноанализа Mesoscale Discovery (MSD) для обнаружения FS118 в сыворотке. Вкратце, 96-луночные планшеты MSD (MSD #L15XB) покрывали мАт против Fc человека для захвата FS118 (Abcam # ab124055) и блокировали блокатором MSD А в течение 2 часов при комнатной температуре. Образцы сыворотки разбавляли разбавителем MSD в соотношении 1:10, добавляли в лунки и инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре со встряхиванием, а затем 3 раза промывали планшеты физиологическим раствором с фосфатным буфером с 0,05% твином. Затем для обнаружения связанного FS118 планшеты инкубировали с антителом против IgG человека, меченым сульфо-маркером, в течение 2 часов при комнатной температуре, промывали, как на предыдущем этапе, и выполняли обнаружение с использованием 2Х буфера для считывания MSD. Показания калибровали с использованием стандартной кривой по 12 концентрациям FS118, начиная с 50 мкг/мл.

В последующих исследованиях многократных доз у NHP (см. Примеры 1.3.2.2 и 1.3.2.3) использовали пользовательские форматы обнаружения захвата LAG-3/PD-L1 для обнаружения FS118 в плазме. Предварительное токсикологическое исследование DRF анализировали с помощью аттестованного ФК-анализа с использованием ECL-иммуноанализа MSD. Стандарты и образцы добавляли в соответствующие лунки титрационного микропланшета MSD, предварительно покрытого рекомбинантным химерным Fc против LAG-3 человека (R&D №2319-L3) в качестве реагента для захвата. После этапа промывки в каждую лунку добавляли биотинилированный рекомбинантный гибридный белок PD-L1 человека - Fc (BPS, # 71105) и выполняли инкубирование. После дальнейшего этапа промывки добавляли реагент для обнаружения - стрептавидин, меченый сульфо-маркером (MSD, # R32AD), и выполняли инкубирование. После еще одного этапа промывки добавляли раствор для считывания MSD и измеряли ECL для обнаружения присутствия FS118. Для исследования токсичности в соответствии с надлежащей лабораторной практикой (GLP) измеряли уровни FS118 в плазме с использованием валидированной платформы для иммуноанализа Gyros (Gyrolab) с захватом биотинилированного LAG-3 и обнаружением PD-L1, меченого Alexa Fluor® 647. Вкратце, образцы разбавляли в соотношении 1:10 буфером Rexxip Н и добавляли на планшеты, которые затем загружали на рабочую станцию Gyrolab хР. FS118 обнаруживали по излучению флуоресценции. Стандартную кривую подвергали регрессии с использованием 4-параметрической логистической кривой, используя ответ в качестве весового коэффициента (1/Y²), в программном обеспечении Gyrolab Evaluator. Валидированный анализ характеризовался НПКО 39,1 нг/мл.

1.2.2 Измерение антител против FS118 (АЛС) в плазме NHP

Присутствие антител, реагирующих на FS118, измеряли в исследованиях токсичности по определению диапазона доз у NHP (DRF) и 4-х недельных исследованиях в соответствии с надлежащей лабораторной практикой (4-недельное GLP-исследование) (см. Примеры 1.3.2.2 и 1.3.2.3, соответственно) с использованием стандартного электрохимического люминесцентного мостикового формата. Для ограничения мешающего влияния лекарственных средств биотинилированный FS118 и FS118, меченый сульфо-маркером, инкубировали с образцом, подвергнутым кислотной диссоциации, и меченый комплекс АЛС иммобилизовали на планшете со стрептавидином, после чего выполняли промывку с последующим обнаружением. Чувствительность анализа составляла 75 нг/мл для поликлонального положительного контрольного антитела кролика против FS118, причем можно было обнаружить 150 нг/мл положительного контроля в присутствии 96,5 мкг/мл FS118.

1.2.3 Измерение общего растворимого PD-L1 в плазме (sPD-L1) Изменение общего sPD-L1 после введения FS118 количественно определяли в исследованиях токсичности у NHP DRF и 4-недельном GLP-исследовании (см. Примеры 1.3.2.2 и 1.3.2.3, соответственно) с использованием иммуноанализа Quantikine^® Human/Cynomolgus Monkey B7-H1/PD-L1 (R&D Systems # DB7H10) в соответствии с протоколом производителя. В этом анализе FS118 мешало обнаружению PD-L1, меченного Fc, но, по-видимому, не мешало обнаружению эндогенного PD-L1, и поэтому предполагалось, что в данном анализе происходило измерение общего PD-L1 (т.е. свободного PD-L1 и комплекса FS118-PD-L1). Валидированный НПКО для этого анализа составлял 25 пг/мл.

1.3 Фармакокинетика и фармакодинамика у животных

1.3.1 Мышь

1.3.1.1 ФК FS118 у мышей дт и мышей с нокаутом LAG-3

Хотя FS118 связывалось с mLAG-3 (с более низкой аффинностью по сравнению с hLAG-3), оно не связывалось с mPD-L1 и не обладало функциональной активностью против любой из этих мишеней. FS118 характеризовалось нормальной кинетикой IgG у мышей C57/BL6 дт, сопоставимой с изотипическим контрольным антителом (Таблица 1). FS118 также вводили мышам LAG-3 КО, и у этих животных FS118 демонстрировало нормальную кинетику IgG (Таблица 1).

1.3.1.2 ФК мАт² mLG-3/PD-L1 у мышей дт и мышей с нокаутом LAG-3

В отличие от FS118, суррогатное мАт² мыши (mLAG-3/PD-L1) быстрее выводилось из сыворотки у мышей дт (Таблица 2). ФК-характеристики суррогатного мАт² мыши сравнивали с мАт против PD-L1 (с тем же каркасом IgG1 и тем же связывающим фрагментом Fab PD-L1) после однократного введения мышам дт. Несмотря на тот же эпитоп связывания PD-L1, скорость выведения конструкта мАт² была выше, чем для указанного мАт (Фигура 3В). Первоначально это позволило предположить, что связывание мишени mLAG-3 может обуславливать скорость выведения суррогатного мАт² мыши, поскольку мАт против PD-L1 не демонстрировало такой же скорости выведения (Фигура 3В). Однако в последующих исследованиях с мышами LAG-3 КО суррогатное мАт² мыши продолжало демонстрировать ранее наблюдаемую скорость выведения (Таблица 2), и это первоначально позволило предположить, что этот процесс, скорее всего, мог быть обусловлен связыванием PD-L1 в комбинации с форматом мАт². Однако это явление не наблюдали при использовании других мАт², что указывало на то, что формат мАт² как таковой не влиял на этот эффект. Таким образом, выведение суррогатного мАт², вероятно, было обусловлено комбинацией связывания PD-L1 и мишень-специфичных изменений некритичных остатков в СН3-домене по сравнению с мАт против PD-L1.

Следует также отметить, что, несмотря на более высокую скорость выведения суррогатного мАт² мыши по сравнению с мАт против PD-L1, оба эти конструкта позволяли достичь значимого противоопухолевого ответа на модели сингенной опухоли МС38 (Фигура 3А), демонстрируя, что наблюдаемая скорость выведения, по-видимому, не была связана с более долгосрочными фармакодинамическими эффектами и не исключала противоопухолевой эффективности.

1.3.1.3 ФК мАт² mLAG-3/PD-L1 в модели опухоли МС38

Самкам мышей C57/BL6 (The Jackson Laboratory (Бар Харбор, штат Мэн, США)) в возрасте 10-11 недель и массой 17,73-21,23 г (среднее значение 19,49 г) инокулировали в подкожное пространство чуть ниже правого плеча животного 1×10⁶ клеток карциномы толстой кишки мыши МС38 (National Cancer Institute (Вифезда, штат Мэриленд, США)). Через восемь дней после инокуляции (день 0 исследования) шестьдесят инокулированных животных рандомизировали с использованием способа распределения связанных пар на основании размера опухоли (средний объем опухоли составлял приблизительно 55,6 мм³ (дисперсия 2,1%)) на шесть групп по 12 особей, и начали лечение. Животным в каждой группе внутрибрюшинно (в/б) вводили FS18m-108-29AA/S1 (в дозах 0,40, 0,20, 0,06 или 0,02 мг/животное, что эквивалентно приблизительно 20, 10, 3 и 1 мг/кг) либо антитело, представляющее собой отрицательный контроль, G1AA/4420 (в дозе 0,20 мг/животное, что эквивалентно приблизительно 10 мг/кг) в фиксированном объеме 200 мкл/животное. Вводили по три дозы каждого агента (0, 3 и 6 дни исследования). FS18m-108-29AA/S1 разбавляли буфером для получения состава, a G1AA/4420 разбавляли физиологическим раствором с фосфатным буфером по Дульбекко. Все измерения опухоли получали с помощью одного и того же ручного штангенциркуля (электронного штангенциркуля Fowler Ultra-Cal V). Размеры (длину и ширину) опухоли измеряли для всех животных в первый день лечения (день 0 исследования), а затем дважды в неделю (т.е. два раза в неделю) до 53 дня исследования. Объем опухоли рассчитывали с помощью уравнения: Объем опухоли (мм³)=длина × ширина² × π/6.

Образцы сыворотки отбирали путем терминального кровотечения из сердца за час до первой дозы, а затем через 71 ч, 143 ч, 148 ч, 152 ч, 168 ч, 192 ч, 240 ч и 288 ч после первой дозы. Дозы вводили в моменты времени 0 ч, 71 ч и 143 ч. Образцы хранили при -80°С и транспортировали для анализа на сухом льду. Концентрацию суррогатного мАт² в сыворотке количественно определяли для каждой дозы: Уровни С_мин, С_макс и ППК показаны в Таблице 3. Минимальные концентрации перед второй и последней дозой значительно снизились, что свидетельствует об АЛС-ответе.

Несмотря на это кажущееся снижение воздействие в течение периода введения, при всех исследуемых дозах наблюдали заметное уменьшение опухоли, причем при введении доз 3, 10 и 20 мг/кг FS18m-108-29AA/S1 наблюдали значительное подавление скорости роста опухоли на протяжении всего времени исследования с использованием смешанного модельного анализа (р≤0,05) по сравнению с G1AA/4420 (Фигура 4). Сравнение размера опухоли на 17 день исследования, в частности, выполняли между группой изотипического контроля (G1AA/4420) и группами, получавшими FS18m-108-29AA/S1, с использованием одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA); с помощью критерия множественного сравнения Тьюки обнаружили, что размеры опухоли после лечения FS18m-108-29AA/S1 во всех экспериментальных группах (1, 3, 10 и 20 мг/кг) значительно уменьшились по сравнению с группой изотипического контроля (р<0,05). Анализ выживаемости по Каплану-Мейеру показал, что мАт² FS18m-108-29AA/S1 при введении дозы 3, 10 или 20 мг/кг индуцировало статистически значимый благоприятный эффект в отношении выживаемости по сравнению с изотипическим контролем в сингенной модели МС38. Наблюдаемые С_макс и ППК (0-3 дня) после последней дозы сильно варьировали, и какой-либо окончательный вывод относительно их пропорциональности дозе из этого исследования сделать не удалось. В целом, эти данные свидетельствуют о том, что для противоопухолевой эффективности требовалось воздействие (С_макс) суррогатного мАт² мыши ≥6 мкг/мл (С_макс, последняя доза, 3 мг/кг), и этот уровень воздействия не требовалось поддерживать в течение всего периода введения. У мышей дт средняя С_макс после однократной дозы суррогатного мАт² мыши 10 мг/кг составляла 82,9 мкг/мл (Таблица 2); что эквивалентно 25 мкг/мл для дозы 3 мг/кг, исходя из предположения о ее пропорциональности дозе. Из-за возможного влияния образования АЛС вероятно, что эта повышенная С_макс достигалась у мышей с опухолью МС38 после первой дозы 3 мг/кг.

1.3.2 Примат, не являющийся человеком

Фармакокинетически-фармакодинамическое поведение FS118 у NHP изучали в трех отдельных исследованиях: внутривенное введение FS118 в (i) исследовании ФК однократной дозы (4 мг/кг), (ii) исследовании DRF без соблюдения GLP (раз в неделю, в/в дозы 10, 50 и 200 мг/кг в течение 4 недель) и (iii) в/в введение два раза в неделю в 4-недельном исследовании токсичности с соблюдением GLP (60 и 200 мг/кг).

Скорость выведения FS118 была выше, чем ожидалось для молекулы, подобной IgG человека, у NHP, и скорость выведения не проявляла типичного «мишень-опосредованного» поведения (т.е. насыщения мишень-опосредованного выведения при высоких уровнях воздействия) в дозах до 200 мг/кг. В целом, в исследованиях на NHP наблюдали приблизительно пропорциональное дозе увеличение С_макс после первой дозы в диапазоне доз 4-200 мг/кг и несколько более, чем пропорциональное увеличение ППК в одном интервале дозирования после первой дозы и в равновесном состоянии. Профили ФК при всех протестированных уровнях доз адекватно описывались линейной ФК-моделью, что указывало на отсутствие насыщения процесса выведения при дозах до 200 мг/кг, вводимых два раза в неделю.

1.3.2.1 ФК однократной дозы FS118

В этом исследовании однократной внутривенной дозы выведение 4 мг/кг FS118 сравнивали с однократным внутривенным введением мАт против hPD-L1. Следует отметить, что это мАт против hPD-L1 содержало тот же каркас IgG1 человека и другой Fab-связывающий фрагмент против PD-L1 (клон S1) по сравнению с FS118. мАт против hPD-L1 демонстрировали кинетику типичного IgG в течение первых 7 дней после введения дозы с последующим быстрым снижением воздействия, что указывает на АЛС-ответ; по сравнению с этим, FS118 демонстрировало заметно более быстрое выведение. Как FS118, так и мАт против hPD-L1 связывались с PD-L1, хотя сходство связывающих эпитопов являлось неизвестным. Это явление не наблюдали при использовании других мАт², что указывало на то, что формат мАт² как таковой не влиял на этот эффект. Вместо этого, по-видимому, за более высокую скорость выведения FS118 по сравнению с мАт против hPD-L1 отвечают специфичные изменения в некритичных остатках в СН3-домене FS118 и/или связывании LAG-3.

1.3.2.2 Исследование по определению диапазона доз (DRF) FS118

В исследовании DRF (внутривенное введение дозы 10, 50 и 200 мг/кг раз в неделю в течение 4 недель) измерения FS118 и АЛС в плазме выполняли, как описано в Примерах 1.2.1 и 1.2.2, соответственно. Воздействие FS118 (ППК) снижалось после последней дозы; это было особенно явно для группы, получавшей дозу 10 мг/кг, и указывало на иммунный ответ, подтверждавшийся наличием АЛС. В связи с этим иммунным ответом в исследовании DRF воздействие FS118 не поддерживалось в течение всего интервала введения в группах, получавших дозы 10 и 50 мг/кг, а также у 1/3 животных в группе, получавшей дозу 200 мг/кг. Это явление не является редкостью для IgG человека, вводимого NHP, из-за ожидаемых иммуногенных реакций на IgG человека в модели NHP.

1.3.2.3 4-недельное исследование токсичности FS118B соответствии c GLP

Поскольку сохранение воздействия после многократных доз <50 мг/кг/нед являлось маловероятным, в 4-недельном исследовании токсичности в соответствии с GLP FS118 вводили в/в два раза в неделю в дозах 60 и 200 мг/кг. Хотя у всех животных, получавших лечение в 4-недельном исследовании токсичности в соответствии с GLP, развился АЛС-ответ, воздействие FS118 было незначительным, и по сравнению с прогнозируемым клиническим воздействием поддерживался адекватный предел воздействия.

Значительное накопление FS118 после повторного введения два раза в неделю, а также влияние пола на ФК FS118 отсутствовало.

1.3.2.4 Общий растворимый PD-L1 (sPD-L1)

Уровни общего sPD-L1 в плазме измеряли в исследовании DRF и 4-недельном исследовании токсичности в соответствии с GLP, как описано в Примере 1.2.3. Захват sPD-L1 указывал на вовлечение мишени, если скорость выведения комплекса sPD-L1-FS118 была ниже, чем скорость выведения sPD-L1, что приводило к повышению уровня комплекса SPD-L1-FS118 в плазме. Хотя основной мишенью являлся мембраносвязанный PD-L1, увеличение общего системного sPD-L1 может быть потенциальным биомаркером насыщения мишени.

В течение 24 часов после введения FS118 в дозах от 10 до 200 мг/кг наблюдали ≥10-кратное увеличение общего sPD-L1 в плазме. В исследовании DRF наблюдали аналогичный характер увеличения общего sPD-L1 в течение 0-96 часов после первой дозы в группах, получавших все три дозы; непрерывное увеличение общего sPD-L1 в течение первого интервала введения имело место только для группы, получавшей дозу 200 мг/кг. В этом исследовании на любой дальнейший анализ увеличения уровня общего sPD-L1 более чем через 7 дней после первой дозы влияло наличие АЛС против FS118. При более высоких уровнях воздействия, достигнутых в 4-недельном исследовании токсичности в соответствии c GLP, средний уровень захваченного общего sPD-L1 продолжал увеличиваться в течение всего исследования с большой вариабельностью между животными, особенно для группы, получавшей дозу 200 мг/кг. Плато (указывающее на максимальный захват мишени) не наблюдали до 2-4 недель после лечения 60 или 200 мг/кг два раза в неделю. Учитывая высокую вариабельность, сделать вывод о достижении максимального захвата мишени в данном исследовании представлялось невозможным. Однако, как и ожидалось, снижение воздействия FS118 у животных для наблюдения за обратимостью нежелательных явлений на фоне токсического воздействия было явным образом ассоциировано со снижением захвата sPD-L1 при падении концентрации FS118 ниже 10 мкг/мл. Помимо временного снижения уровня воздействия FS118 на 22 день исследования, у некоторых животных в группе, получавшей дозу 60 мг/кг, уровень FS118 в плазме поддерживался на уровне выше 10 мкг/мл в течение всего периода введения в группах, получавших дозы 60 и 200 мг/кг, что означает, что в течение этого периода также поддерживалась супрессия PD-L1.

Следует отметить, что при экспрессии на молярной основе комплекс SPD-L1-FS118 в плазме (т.е. общий sPD-L1) составлял лишь небольшую долю от концентрации общего FS118. Например, средняя минимальная концентрация FS118 после повторного введения 200 мг/кг два раза в неделю составляла 220 мкг/мл (1,5 мкМ); средняя концентрация общего sPD-L1 в тот же момент времени составляла ~5 нг/мл (0,2 нМ). Следовательно, системный комплекс FS118-PD-L1 не может отвечать за скорость выведения FS118.

В заключение следует отметить, что быстрое увеличение общего sPD-L1 наблюдали при всех уровнях дозы FS118, причем скорость увеличения была аналогичной для всех уровней дозы. Окончательных выводов в отношении достижения максимального захвата мишени сделать не удалось. Однако вовлечение мишени, вероятно, насыщалось при уровне FS118 10 мг/кг и выше. Значения общего sPD-L1 вернулись к исходному уровню к концу восстановительного периода. Пороговое значение FS118 в плазме животного выше 10 мкг/мл было ассоциировано с устойчивым повышением уровня общего sPD-L1.

1.4 Исследование выведения FS118 и mLAG-3/PD-L1

В целом, имеющиеся ФК-данные свидетельствуют о том, что скорость выведения мАт² mLAG-3/PD-L1 у мышей дт и мышей LAG-3 КО являлась в первую очередь следствием комбинации функционального PD-L1 и мишень-специфичных изменений некритичных остатков в СН3-домене, обеспечивающих связывание с LAG-3. Наблюдаемая скорость выведения FS118 у NHP, скорее всего, определялась тем же механизмом, хотя нельзя исключить вклад более высокой аффинности связывания LAG-3 у NHP и организме человека (по сравнению с мышами).

Ниже исследованы и обобщены дополнительные факторы, которые могут способствовать достижению этой скорости выведения:

FS118 демонстрировало ожидаемые характеристики рН-чувствительного связывания с FcRn, и связывание с LAG-3 не влияло на это.

Исследования перекрестной реакционной способности с использованием FS118 в тканях NHP и человека не продемонстрировали нецелевого связывания, которое могло бы объяснить наблюдаемую скорость выведения FS118. Кроме того, FS118 не демонстрировало связывания с близкородственными мишенями.

FS118 поддерживало функциональную активность в сыворотке при инкубировании при 37°С до 15 дней, что указывает на малую вероятность того, что объяснение этого факта связано с катаболизмом.

Инкубирование FS118 и суррогатного мАт² мыши с активированными Т-клетками человека и мыши, соответственно, не приводила к интернализации исследуемого агента в течение 3-часового периода инкубирования по сравнению с антителом против CD3. Эти результаты показывают, что выведение FS118 не было опосредовано интернализацией, хотя вовлечение мишени и интернализацию за счет мишени, экспрессируемой на других клетках, не оценивали.

В целом, эти данные указывают на то, что ненасыщаемая скорость выведения FS118 и суррогатного мАт² мыши обусловлены мишенью PD-L1 и ассоциированы с модификациями СН3 в конструкте мАт², мишенью которого является LAG-3, хотя нельзя исключить возможность дополнительного влияния связывания LAG-3 у NHP. Из-за аналогичных характеристик связывания FS118 с PD-L1 и LAG-3 NHP и PD-L1 и LAG-3 человека аналогичную скорость выведения прогнозировали в организме человека.

1.5 Прогнозируемое фармакокинетически-фармакодинамическое поведение у человека

1.5.1 Модель ФК у NHP

2-компонентную популяционную ФК-модель, описывающую системное воздействие FS118, строили на основании данных ФК-исследований однократной дозы у NHP, исследований DRF и GLP (через 0-7 дней после введения дозы; см. Примеры 1.3.2.1-1.3.2.3). Все ФК-моделирование, аппроксимацию и симуляции выполняли с использованием ADAPT версии 5 (D'Argenio et al 2009).

ФК каждого отдельного животного изначально соответствовала двухкомпартментной модели, что приводило к четырем параметрам ФК (CL1, CL2, V1 и V2) для каждого животного. Это делали для оценки возможности объединения ФК-данных всех животных и их использования в составе популяционной ФК-модели.

Аппроксимацию популяционной ФК выполняли, исходя из предположения, что ФК-параметры каждого животного получены на основе лог-нормального распределения, характеризуемого определенным средним вектором и ковариационной матрицей для популяции. Это резко уменьшило количество неизвестных элементов с 4 × (количество животных) = 112 в случае отдельных ФК до 14 (четыре средних значения в популяции и 10 отдельных элементов ковариационной матрицы для ковариационной матрицы 4×4), тем самым значительно улучшив соотношение известных и неизвестных.

Общая структура модели ФК для NHP и человека, описывающая линейную кинетику FS118, показана на Фигуре 5. Модель хорошо описывала наблюдаемые данные у NHP (Таблица 4) и позволяла прогнозировать наблюдаемые данные после многократного введения в 4-недельном исследовании токсичности в соответствии с GLP; другими словами, доказательства, указывающие на значимый насыщаемый компонент при выведении FS118, отсутствовали. Эту модель аллометрически масштабировали для прогнозирования ФК FS118 у человека с использованием показателей степени 0,75 для выведения и межкомпартментного обмена и 1,0 для объема (Таблица 4). Поскольку мишень-опосредованной кинетики не наблюдали, аффинность связывания с мишенью не включали в ФК-модель. Исходя из этих предположений, прогнозировали воздействие FS118 у человека для различных режимов дозирования. Используя эти значения параметров, выполнили моделирование ФК у 1000 субъектов, представляющих собой людей для оценки диапазона ФК в популяции людей до начала первого клинического исследования на людях (FIH). Моделирование позволило дополнительно прогнозировать, что дозы 20 мг/кг и ниже позволят получать уровни воздействия FS118 in vivo, значительно уступающие максимальной нетоксичной дозе (HNSTD; см. Пример 1.5.2 ниже), и, таким образом, эти дозы не представляли угроз с точки зрения безопасности.

Следует отметить, что наблюдаемая скорость выведения FS118 у NHP выше, чем обычно наблюдается для моноспецифичного антитела у NHP, но не настолько высока, чтобы исключить фармакологический эффект.

1.5.2 Максимальная нетоксичная доза (HNSTD)

FS118 хорошо переносилось в 4-недельном исследовании токсичности на NHP в соответствии с GLP (см. Пример 1.3.2.3), и установлено, что HNSTD составляла 200 мг/кг два раза в неделю. В анализах in vitro не наблюдали связанного с FS118 увеличения цитокинов при использовании иммобилизованного формата при влажном нанесении с использованием МПК человека или формата с использованием цельной крови человека. Кроме того, в 4-недельном исследовании токсичности у NHP в соответствии с GLP не наблюдали связанного с лечением FS118 повышения уровня цитокинов панели (ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИФН-γ и ФНО-α) в сыворотке.

Руководство ICH S9 (ICH S9) рекомендует применять начальную клиническую дозу, равную 1/6 HNSTD (Таблица 5) для FIH-исследований у пациентов с распространенным раком; однако в недавней публикации FDA указано, что это может быть нецелесообразно для иммуноонкологических препаратов, и следует рассматривать дополнительные факторы, связанные с занятостью мишени и функциональной активностью (Saber et al 2016).

Предлагаемая начальная фиксированная доза для FIH, составляющая 800 мкг, повышающаяся до 20 мг/кг еженедельно (см. Пример 1.5.3.1), по меньшей мере в 10 раз уступает HNSTD и значительно ниже рекомендуемой в руководстве ICH S9.

1.5.3 Дизайн FIH-исследования

Дизайн первого исследования на людях (Пример 2) соответствовал открытому исследованию с многократным введением дозы, увеличением дозы и расширением когорт. Было принято решение провести исследование у взрослых пациентов с диагностированными распространенными опухолями с целью изучения безопасности, переносимости, фармакокинетики (ФК) и активности FS118. Кроме того, было принято решение первоначально включать пациентов в схему ускоренного титрования, где оценивали когорты отдельных пациентов с последующим 3+3 нарастающим увеличением дозы (Фигура 6). Исследование выполняли в целях систематической оценки безопасности и переносимости, а также для определения максимально переносимой дозы (МПД) и/или дозы FS118, рекомендуемой для 2 фазы (RP2D) исследований у пациентов с распространенными опухолями. RP2D задали как максимальную биологически эффективную дозу с приемлемой токсичностью.

Приращение дозы между начальной дозой и максимальной дозой выбирали для обеспечения безопасного увеличения дозы и определяли с помощью ФК-моделирования, фиксируя адекватную зависимость между дозой и воздействием FS118. Было принять решение оценивать ФК у человека с использованием валидированного анализа Gyros, который измеряет свободное FS118 (формат с захватом LAG-3/обнаружением PD-L1), и обеспечить доступность ФК-данных в конце фазы увеличения дозы у одного пациента, чтобы позволить оценить зависимость воздействия от дозы по сравнению с прогнозируемой ФК у человека. Кроме того, было принять решение измерять увеличение уровня общих sLAG-3 и sPD-L1 в плазме как потенциальных биомаркеров вовлечения мишени и оценивать возможность образования АЛС в образцах, взятых после каждого 3-недельного цикла лечения.

1.5.3.1 Обоснование начальной дозы для FIH и стратегии повышения дозы

При определении приемлемой начальной дозы для клинических исследований важно учитывать потенциальную фармакологическую активность, а также общедоступный клинический опыт применения аналогичных молекул (Saber et al 2016). На основании всех имеющихся данных, предлагаемая начальная доза для FIH составляла 800 мкг внутривенно, и предложили фазу ускоренного увеличения дозы у одного пациента для безопасного увеличения воздействия FS118 до уровня, ожидаемого для противоопухолевой эффективности, и минимизации воздействия потенциально неэффективных режимов дозирования. Дизайн исследования FIH также предусматривал исследование необходимости режимов дозирования, которые поддерживают подавление мишени на протяжении всего интервала введения.

Ключевые моменты, поддерживающие выбранную стратегию введения, приведены ниже:

Данные по воздействию в модели сингенной опухоли мыши с суррогатным мАт² мыши показывают, что для противоопухолевой эффективности непрерывное высокое воздействие FS118 не требовалось, и это сильно отличается от моноспецифичного мАт против PD-L1. В этой модели опухоли дозы суррогатного мАт² мыши ≥1 мг/кг были ассоциированы с подавлением прогрессирования опухоли, причем влияние доз 3, 10 и 20 мг/кг было статистически значимым. Противоопухолевая эффективность мАт против PD-L1 и суррогатного мАт² мыши, вводимых в дозе 10 мг/кг каждые 3 дня (3 дозы), и профили воздействия после однократной дозы обеих этих молекул у мышей дт без опухолей показаны на Фигуре 3А. В то время как воздействие мАт против PD-L1 поддерживалось на уровне выше 100 мкг/мл в течение 3-дневного периода, воздействие mLAG-3/PD-L1 за то же время снижалось до приблизительно 10 мкг/мл. Следует отметить, что в модели МС38 минимальное воздействие суррогатного мАт² мыши снижалось с течением времени, что, возможно, связано с образованием АЛС. При введении дозы 3 мг/кг суррогатного мАт² мыши каждые 3 дня расчетная С_макс после первой дозы составляла 25 мкг/мл, а наблюдаемая С_макс после последней дозы составляла 6 мкг/мл.

FS118 хорошо переносилось в 4-недельном исследовании токсичности у NHP в соответствии с GLP. Наблюдали инфильтрацию смешанных мононуклеарных клеток в головном мозге и других тканях, аналогичную наблюдаемой при применении других ингибиторов иммунной контрольной точки.

Связанного с FS118 повышения уровня цитокинов в анализах in vitro не наблюдали, как и повышения уровней цитокинов в сыворотке в 4-недельном исследовании токсичности у NHP в соответствии с GLP. Это согласуется с другими иммуноонкологическими биотерапевтическими препаратами, для которых дозы, ассоциированные с >90% занятостью мишени, не ассоциированы с синдромом острого высвобождения цитокинов (Herbst et al 2014, Heery et al 2017).

Анализ на Biacore показал, что аффинность связывания суррогатного мАт² мыши с mPD-L1 была приблизительно в 10 раз выше по сравнению со связыванием FS118 с hPD-L1. Напротив, показано, что при измерении на Biacore аффинность связывания суррогатного мАт² мыши с mLAG-3 была приблизительно в 20 раз ниже по сравнению со связыванием FS118 с hLAG-3. В то же время эти различия были гораздо менее явными при сравнении значений ЕС₅₀ для связывания с клетками HEK, сверхэкспрессирующими соответствующие белки-мишени, и значений ЕС₅₀ в функциональном анализе активации Т-клеток. Учитывая аналогичную скорость выведения FS118 и суррогатного мАт² мыши при функциональном связывании мишени PD-L1, влияние этих наблюдаемых различий аффинности связывания мишени на прогнозирование ФК FS118 у человека является маловероятным.

Анализ доступных доклинических и клинических данных по безопасности иммуноонкологических препаратов показывает, что дозы для FIH, основанные на 20-80% занятости мишени и/или 20-80% функциональной активности in vitro, характеризуются приемлемой клинической токсичностью. Системное воздействие для FIH, превышающее насыщение мишени, также было приемлемым для антител с нормальной или подавленной АЗКЦ-активностью (Saber et al 2016), и следует отметить, что FS118 содержит мутацию LALA для снижения АЗКЦ-активности. Расчетные значения системной занятости мишени и функциональной активности in vitro (в процентах от максимальной) составляли от 35,8% до 79,2% для С_макс (0,26 мкг/мл) при предлагаемой начальной дозе 800 мкг и считались подходящими для дозы для FIH.

При анализе активации Т-клеток человека с субоптимальной активацией FS118 стимулировало продукцию ИФНγ со средним значением ЕС₅₀ 0,22 мкг/мл, хотя при этом наблюдали значительную вариабельность.

Показано, что FS118 характеризовалось высокой скоростью выведения по сравнению с моноспецифичными антителами к тем же мишеням, и механизм этого, по-видимому, в основном был обусловлен связывающим компонентом PD-L1 в этом биспецифичном конструкте, по меньшей мере у мышей. Следует отметить, что FS118 характеризовалось нормальной кинетикой IgG у мышей дт и мышей с LAG-3 КО (без функционального связывания PD-L1), тогда как суррогатное мАт² быстро выводилось как у мышей дт, так и у мышей с LAG-3 КО. Процесс выведения не насыщался в дозах до 200 мг/кг у NHP, и прогнозируемый конечный период полувыведения у человека составлял 3,7 суток (95% доверительный интервал 0,35-10,4 суток).

С_макс и ППК (при одном 7-дневном интервале введения) в равновесном состоянии для HNSTD в 4-недельном исследовании токсичности у NHP сравнивали с прогнозируемым воздействием в равновесном состоянии у человека для каждой дозы в предлагаемом режиме схеме повышения дозы, и полученные пределы безопасности воздействия показаны в Таблице 6. Предполагается, что предлагаемая начальная доза 800 мкг (~11 мкг/кг для субъекта с массой тела 70 кг) обеспечивает у NHP >15000-кратно меньшее воздействие, чем HNSTD, и это значение снижается до >190-кратного в конце фазы ускоренного титрования у одного пациента. Большой резерв безопасности для дозы FIH позволяет FS118 демонстрировать, как ни странно, нормальную кинетику IgG у человека, и ФК-поведение FS118 у человека будет подтверждено до перехода к части исследования, связанной с увеличением дозы. При клиническом применении ожидается, что доза 20 мг/кг/неделю обеспечит С_мин FS118 >10 мкг/мл и 10-кратно меньшее воздействие (С_макс и ППК) по сравнению с HNSTD у NHP. Дозы и частоту введения, позволяющие достичь этой целевой концентрации, можно корректировать в конце фазы ускоренного титрования дозы.

Общий sPD-L1 в плазме не включали в ФК-модель, хотя имеются данные, полученные у NHP, которые позволяют предположить, что он может быть хорошим биомаркером вовлечения мишени, и его будут измерять в исследовании FIH. Модель сингенной опухоли мыши также указывает, что полная суппрессия PD-L1 в течение каждого цикла лечения может не требоваться. У NHP концентрация FS118 в плазме ≥10 мкг/мл была ассоциирована с поддержанием захвата PD-L1 (и, как следствие, с супрессией PD-L1), и клиническое исследование FIH было разработано для изучения как максимальной супрессии PD-L1 в течение ограниченного периода времени (С_макс≥10 мкг/мл), так и непрерывной супрессии PD-L1 в течение каждого цикла введения (С_мин≥10 мкг/мл).

В целом, эти данные показали, что доза 800 мкг представляла собой подходящую начальную дозу для начала клинического исследования FS118. Предполагалось, что эта предложенная начальная доза обеспечит максимальную концентрацию (С_макс 0,26 мкг/мл) в конце 1-часового вливания, что является приемлемым с точки зрения занятости рецептора-мишени и функциональной активности in vitro. Кроме того, эта С_макс приблизительно в 10-100 раз ниже С_макс, ассоциированной с противоопухолевой эффективностью молекулы-суррогата FS118 мАт², и в >15000 раз ниже С_макс воздействия FS118 при HNSTD у NHP; аналогичные пределы воздействия поддерживаются для ППК в интервале введения (Таблица 6). Для быстрого и безопасного достижения терапевтически значимого воздействия FS118 предложена схема увеличения дозы у одного пациента, которая минимизирует воздействие субтерапевтических доз на пациентов при сохранении безопасности. В конце фазы увеличения дозы у одного пациента ожидалось среднее значение С_макс, равное 25 мкг/мл, что находится в пределах диапазона воздействия, ассоциированного с противоопухолевой эффективностью суррогатного мАт² мыши в модели опухоли МС38, и выше уровня воздействия FS118 (10 мкг/мл), ассоциированного с поддержанием захвата sPD-L1 у NHP.

Хотя доклинические данные о противоопухолевой эффективности указывали на отсутствие необходимости непрерывной суппрессии PD-L1, было принято решение также исследовать дозы FS118, обеспечивающие поддержание захвата PD-L1 в течение всего интервала введения во время исследования FIH, и ожидалось, что дозы FS118≥10 мг/кг/неделю обеспечат среднюю С_мин≥10 мкг/мл.

1.6 Сводная информация и выводы

Данные по воздействию суррогатного мАт² (mLAG-3/PD-L1) мыши в сингенной модели опухоли у мышей показали, что для обеспечения противоопухолевой эффективности непрерывное высокое воздействие FS118 не требуется, в отличие от моноспецифичного мАт против PD-L1. В этой модели опухоли дозы суррогатного мАт² мыши ≥1 мг/кг были ассоциированы с подавлением прогрессирования опухоли, причем дозы 3, 10 и 20 мг/кг были статистически значимыми.

При наличии функционального связывания PD-L1 скорость выведения как FS118, так и суррогатного мАт² мыши была выше, чем наблюдаемая для стандартной моноспецифичной IgG-подобной молекулы. Несмотря на незначительное более чем пропорциональное увеличение воздействие при увеличении дозы, этот процесс выведения, по-видимому, не насыщался при применении доз до 200 мг/кг два раза в неделю у NHP и адекватно описывался линейной ФК-моделью. Другими словами, FS118 не демонстрировало насыщаемого мишень-опосредованного кинетического поведения, что иногда наблюдается с IgG-подобными молекулами, мишенью которых является мембранный рецептор. Однако этот процесс выведения, по-видимому, зависит от функционального связывания PD-L1 конструктом мАт², поскольку для FS118 у мышей дт и мышей с LAG-3 КО наблюдается нормальная кинетика IgG (FS118 не демонстрировало значимого связывания PD-L1 у мышей).

В 4-недельном исследовании токсичности у NHP в соответствии с GLP показано, что FS118 хорошо переносилось в дозах, обеспечивающих достаточные пределы воздействия для клинических исследований. Предполагалось, что предлагаемая начальная доза для FIH, равная 800 мкг, обеспечит максимальную концентрацию (С_макс) в конце 1-часового вливания, равную 0,26 мкг/мл, что приблизительно в 10 раз ниже С_макс, ассоциированной с противоопухолевой эффективностью молекулы суррогатного мАт² мыши и в >15000 раз ниже воздействия С_макс FS118 в дозе HNSTD у NHP. Аналогичные пределы воздействия поддерживались для ППК в интервале введения.

Показано, что общий sPD-L1 в плазме являлся полезным биомаркером вовлечения мишени PD-L1 у NHP. У NHP концентрация FS118 в плазме ≥10 мкг/мл была ассоциирована с поддержанием захвата PD-L1 (и, как следствие, с супрессией PD-L1), и клиническое исследование FIH было разработано для изучения как максимальной супрессии PD-L1 в течение ограниченного периода времени (С_макс FS118≥10 мкг/мл), так и непрерывной супрессии PD-L1 в течение каждого цикла введения (С_мин FS118≥10 мкг/мл). Стратегию увеличения дозы разработали с целью достижения С_макс, приблизительно равной 10 мкг/мл, в конце фазы ускоренного титрования дозы у одного пациента (при дозе FS118 1 мг/кг/нед), а затем для изучения более высоких уровней воздействия, позволяющих поддерживать уровень FS118≥10 мкг/мл в интервале введения. Прогнозировалось, что дозы 10 и 20 мг/кг/неделю обеспечат достижение средних концентраций FS118 в плазме >10 мкг/мл в течение всего интервала введения.

Пример 2: Открытое первое исследование на людях I фазы с повышением дозы и расширением когорт с целью изучения безопасности, переносимости, фармакокинетики и активности FS118, биспецифичного антитела против LAG-3/PD-L1 у пациентов с распространенными злокачественными новообразованиями, прогрессировавшими до или после предшествующей терапии на основе агента против PD-1/PD-L1.

2.1 Дизайн и параметры исследования

Данное исследование выполняли у взрослых пациентов с диагностированными распространенными опухолями для изучения характеристик безопасности, переносимости, фармакокинетики (ФК) и активности FS118. Это многоцентровое открытое первое исследование на людях I фазы с многократным приемом, начатое с ускоренным титрованием (во время которого оценивали когорты из одного пациента), с последующим увеличением дозы 3+3. Исследование выполняли в целях систематической оценки безопасности и переносимости, а также для определения максимально переносимой дозы (МПД) и/или дозы FS118, рекомендуемой для 2 фазы (RP2D) исследований у пациентов с распространенными опухолями. RP2D задали как максимальную биологически эффективную дозу с приемлемой токсичностью. Кроме того, оценивали фармакокинетику, фармакодинамику, иммуногенность и реакцию.

После получения информированного согласия все пациенты прошли скрининг для определения пригодности к участию в исследовании в течение 28 дней до начала лечения. Введение антитела пациентам выполняли внутривенно (в/в) раз в неделю 3-х недельными циклами лечения до iCPD (т.е. иммунологически подтвержденного прогрессирования заболевания) (или прогрессирования заболевания по классификации Лугано для пациентов с лимфомой), неприемлемой токсичности, отзыва согласия пациентом, прекращения участия пациента исследователем, решения спонсора о прекращении исследования или лечения, начала альтернативной противораковой терапии или смерти. Пациенты выполнили или выполнят визит окончания лечения (EOT) приблизительно через 28 дней (±7 дней) после приема последней дозы FS118 и 90-дневный визит последующего наблюдения приблизительно через 90 дней (±7 дней) после приема последней дозы FS118. Для всех пациентов после документированного iCPD (или прогрессирующего заболевания по классификации Лугано для пациентов с лимфомой) общую выживаемость (ОВ) оценивали или будут оценивать каждые 3 месяца с целью оценки выживаемости и назначаемой после исследования терапии рака.

Первые 5 когорт зачисляли последовательно как когорты из одного пациента, и пациентов наблюдали на предмет токсичности, ограничивающей дозу (DLT) в течение 1 цикла. Поскольку в каждой когорте не наблюдали DLT или нежелательных явлений 2 ≥степени, которые не были бы явным образом связаны с основным заболеванием пациента, другими медицинскими состояниями или сопутствующими лекарственными препаратами или процедурами, новому пациенту вводили антитело в следующей когорте с более высокой дозой и наблюдали в течение периода DLT. После завершения 1 цикла в 5 когорте без DLT или нежелательных явлений 2 ≥степени, которые не были бы явным образом связаны с основным заболеванием пациента, другими медицинскими состояниями или сопутствующими лекарственными препаратами или процедурами, режим повышения дозы продолжали применять в режиме 3+3 с 6 когорты и далее. Повышение дозы у одного пациента выполняли в когортах из одного пациента, если пациент переносил первоначальную дозировку, пациент(ы) в следующей когорте с более высокой дозой завершали период DLT без признаков DLT или нежелательных явлений 2 ≥степени, которые не были бы явным образом связаны с основным заболеванием пациента, другими медицинскими состояниями или сопутствующими лекарственными препаратами или процедурами, и комитет по обзору безопасности (SRC) признавал дозу безопасной.

Если бы в любой из когорт из одного пациента возникло бы нежелательное явление ≥2 степени, явным образом не связанное с основным заболеванием пациента, другими медицинскими состояниями или сопутствующими лекарственными препаратами или процедурами в течение периода DLT, на этом уровне дозы в исследование включили бы еще 2 пациентов и оценивали их с использованием правил схемы 3+3, но этого не произошло. Все последующие когорты включали в схему 3+3. В случае возникновения DLT когорту расширили бы до 6 пациентов, однако случаев DLT не наблюдали.

Токсичность оценивали в соответствии с общими терминологическими критериями нежелательных явлений Национального института рака (NCI) (СТСАЕ) в редакции 4.03.

Основные цели

Основными целями данного исследования являлись:

1. Оценка безопасности и определение MTD и/или RP2D FS118, и

2. Определение ФК-параметров FS118.

Второстепенные цели

Второстепенными целями данного исследования являлись:

1. Оценка предварительных доказательств противораковой активности FS118 в соответствии с критериями оценки реакции при солидных опухолях (RECIST) 1.1 или классификацией Лугано, в зависимости от обстоятельств, и iRECIST (модифицированными RECIST 1.1 для иммунотерапевтических препаратов); и

2. Изучение иммуногенности (антител против лекарственного средства [АЛС]) FS118.

Поисковая цель

Поисковая цель данного исследования заключалась в изучении фармакодинамического профиля и корреляции потенциальных первичных фармакологических характеристик с воздействием.

Популяция пациентов и количество пациентов

24 пациентов включили в исследование к маю 2019 года, затем количество пациентов увеличилось до 40 к августу 2019 года и до 43 к апрелю 2020 года. Пациентов включали в исследование в 4 исследовательских центрах в США. Пациенты были в возрасте ≥18 лет, у них были распространенные опухоли.

Введение лекарственного средства

FS118 вводили внутривенно первой когорте посредством медленной болюсной инъекции, а последующим когортам - с помощью насоса для непрерывного вливания раз в неделю 3-х недельными циклами до iCPD (или прогрессирующего заболевания по классификации Лугано для пациентов с лимфомой), неприемлемой токсичности, отзыва согласия пациентом, прекращения лечения пациента исследователем, решения спонсора о прекращении исследования или лечения, начала альтернативной противораковой терапии или смерти.

Продолжительность лечения и исследования

Пациенты считались завершившими лечение, если они завершили 16 циклов (или 12 месяцев) лечения FS118 или если у них было подтверждено прогрессирующее заболевание. После того как все пациенты, включенные в исследование, получат возможность завершить 16 циклов лечения FS118 и будут находиться под наблюдением в течение 90 дней после последнего введения исследуемого препарата, будут выполнены окончательные анализы для основного конечного показателя и составлен единый заключительный отчет о клиническом исследовании. Предполагаемый срок завершения исследования составляет 36 месяцев.

Критерии пригодности для включения

Для возможности участия в исследовании каждый включенный пациент должен был соответствовать всем следующим дополнительным требованиям:

1. Для повышения дозы: Пациенты с гистологически подтвержденными местно-распространенными неоперабельными или метастазирующими солидными опухолями или гематологическими злокачественными новообразованиями, прогрессирующими во время или после терапии антителом против белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1) или антителом против лиганда белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1), для которых отсутствует эффективная стандартная терапия или стандартная терапия не дала результатов;

2. Для расширения дозы: Пациенты с гистологически подтвержденной местно-распространенной неоперабельной или метастазирующей карциномой шейки матки, яичников, мочевого пузыря, почек, головы и шеи, плоскоклеточной карциномой, меланомой, не мелкоклеточным раком легких, тройным негативным раком молочной железы или неходжкинской или ходжкинской лимфомой, прогрессировавшими во время или после терапии антителом против PD-1 или PD-L1, для которых отсутствует эффективная стандартная терапия или стандартная терапия не дала результатов;

3. Минимальная продолжительность лечения при использовании предыдущего режима лечения, содержащего агент против PD-1 или PD-L1, составила 12 недель (или эквивалент 2 оценок реакции);

4. Измеримое заболевание (определяемое как по меньшей мере 1 измеримый очаг за пределами центральной нервной системы [ЦНС]), определенный исследователем с использованием RECIST 1.1 или классификации Лугано, в зависимости от обстоятельств;

5. Функциональный статус ≤1 согласно критериям Восточной объединенной онкологической группы (ECOG);

6. Предполагаемая продолжительность жизни не менее 3 месяцев;

7. Пациент согласился пройти биопсию опухоли до и во время лечения, и исследователь не считал, что процедура биопсии характеризуется высокой степенью риска. Для пациентов в когортах из одного пациента приемлемые исходные образцы опухоли включали недавно полученные образцы биоптатов опухоли и/или архивные образцы ткани (<6-месячного возраста), полученные во время постановки первоначального диагноза, при наличии таковых;

8. Высокоэффективная контрацепция (то есть способы с частотой неудач менее 1% в год) как для мужчин, так и для женщин, при наличии риска зачатия. Высокоэффективную контрацепцию следовало применять в течение 28 дней до первого введения исследуемого средства, на протяжении лечения исследуемым средством и по меньшей мере в течение 60 дней после прекращения введения исследуемого средства. Если пациентка забеременела или подозревает, что она была беременна во время участия ее или ее партнера в данном исследовании, лечащий врач и спонсор (или уполномоченное им лицо) должны быть немедленно проинформированы об этом; и

9. Желание и способность предоставить письменное информированное согласие.

Пациенты, которые соответствовали любому из следующих критериев при скрининге, не допускались к участию в исследовании:

1. Получал системную противораковую химиотерапию в течение 28 дней или 5 периодов полувыведения, в зависимости от того, какой из этих периодов короче, до введения первой дозы исследуемого препарата, предшествующее лечение более чем 1 ингибитором иммунной контрольной точки (за исключением комбинации по утвержденным показаниям), не являвшееся стандартным лечением, или предшествующее лечение ингибитором гена активации лимфоцитов 3 (LAG-3) или мультиспецифичными молекулами - ингибиторами иммунной контрольной точки;

2. Пациенты с активным аутоиммунным заболеванием, требующим лечения в предыдущие 2 года, и пациенты с любым документированным аутоиммунным заболеванием в анамнезе. Примечание: сюда входили пациенты с воспалительным заболеванием кишечника, язвенным колитом и болезнью Крона, ревматоидным артритом, системным прогрессирующим склерозом (склеродермией), системной красной волчанкой, аутоиммунным васкулитом (например, гранулематозом Вегенера), нейропатией ЦНС или двигательной нейропатией аутоиммунного происхождения (например, синдромом Гийена-Барре, миастенией гравис, рассеянным склерозом) и умеренным или тяжелым псориазом в анамнезе. Тем не менее, пациенты с ревматоидным артритом или псориазом со стабильной ремиссией в течение по меньшей мере 6 месяцев и без противопоказаний к возможному совместному лечению кортикостероидами в связи с нежелательными явлениями, связанными с иммунной системой, витилиго, синдромом Шегрена, интерстициальным циститом, болезнью Грейвса или Хасимото или гипотиреозом, стабильным при замене гормонов, были разрешены с одобрения медицинского монитора в данном исследовании;

3. Неконтролируемое перемежающееся заболевание в анамнезе, включая:

Документированную гипертензию, неконтролируемую при применении стандартного лечения (не стабилизирующуюся до 150/90 мм рт.ст. или ниже), или

Документированный неконтролируемый диабет, но не ограничиваясь ими. Примечание: можно рассмотреть участие пациентов с хорошо контролируемым сахарным диабетом, получающих стабильную инсулин-заместительную терапию в течение не менее 6 месяцев и не имеющих противопоказаний к возможному совместному лечению кортикостероидами в связи с нежелательными явлениями, связанными с иммунной системой;

4. Известные инфекции:

Вирус иммунодефицита человека, вирус гепатита В (ВГВ) (т.е. положительный результат анализа на поверхностный антиген гепатита В) или вирус гепатита С (ВГС) (т.е. обнаружимая рибонуклеиновая кислота [РНК] ВГВ). Примечание: пациенты с ранее подвергавшейся лечению инфекцией ВГВ с отрицательным результатом анализа на антиген, или пациенты с ранее подвергавшейся лечению инфекцией ВГС, у которых не обнаруживается РНК ВГС; или

Активные инфекции (в том числе бессимптомные инфекции с положительными титрами вирусов и заключение исследователя о том, что при приеме исследуемого препарата вероятно ухудшение состояния, или что состояние должно ухудшить/сделать невозможным участие пациента в исследовании;

5. Неконтролируемые метастазы в ЦНС, первичные опухоли ЦНС или солидные опухоли с метастазами в ЦНС как единственное поддающееся измерению заболевание. Пациенты с активным заболеванием, однако при наличии стабильного заболевания ЦНС было возможно включение в исследование;

6. Предшествующее или активное интерстициальное заболевание легких или пневмонит, энцефалит, судороги, тяжелые нежелательные явления, связанные с иммунной системой (например, пневмонит, гепатит, колит, гипофизит, панкреатит, миокардит, заболевание ЦНС или офтальмологическое заболевание) с предшествующим лечением, включавшим агент против PD-1/PD-L1, тяжелые или опасные для жизни нежелательные кожные реакции в анамнезе с предшествующим лечением другими иммуностимулирующими противораковыми средствами;

7. Применение иммуносупрессивных агентов, предшествующая трансплантация органов, требующая иммуносупрессии, гиперчувствительность или непереносимость моноклональных антител или вспомогательных веществ, или сохраняющиеся токсические явления, связанные с предшествующей терапией более чем 1 степени по NCI СТСАЕ вер. 4.03, за следующими исключениями:

Допускались все степени алопеции;

Допускалась эндокринная дисфункция при заместительной терапии (включая стабильный гипофизит при заместительной гормональной терапии);

Несистемные стероиды; допускалось применение стероидов для местного, внутриглазного, интраназального, внутрисуставного или ингаляционного применения;

Допускалось системное стероидозаместительное лечение в дозе 10 мг/сут или ниже эквивалента преднизона у пациентов с недостаточностью надпочечников; и

Включение пациентов, получавших системную стероидную терапию в дозе 10 мг/сут или ниже эквивалента преднизона в рамках паллиативной терапии или симптоматического контроля заболевания, должно было обсуждаться с медицинским монитором и/или спонсором;

8. Значимые кардиологические патологии, включая синдром удлиненного интервала QTc в анамнезе и/или наличие электрокардиостимулятора, нарушение/инсульт сосудов головного мозга (за <6 месяцев до включения в исследование), инфаркт миокарда (за <6 месяцев до включения в исследование), нестабильную стенокардию, застойную сердечную недостаточность (≥II класса по критериям Нью-Йоркской кардиологической ассоциации) или клинически значимую и симптоматическую сердечную аритмию, не поддающуюся медикаментозному контролю в течение по меньшей мере 6 месяцев;

9. Скрининговые лабораторные показатели со следующими критериями (с использованием NCI СТСАЕ версии 4.03):

Гемоглобин <9,0 г/дл (5,7 мкмоль/л);

Абсолютное количество нейтрофилов (АКН) <1,0×10⁹/л;

Количество тромбоцитов <100×10⁹/л;

Креатинин в сыворотке >1,5×верхняя граница нормы (ВГН);

Общий билирубин >1,5×ВГН; или аспартатаминотрансфераза (ACT) и аланинаминотрансфераза (АЛТ) >2,5×ВГН (≥5×ВГН при наличии метастазов в печени); или

10. Непереносимость исследуемого продукта или его вспомогательных веществ, или любое состояние, которое могло значительно нарушить и/или сделать невозможным участие пациента в исследовании, по мнению исследователя.

Основные критерии оценки и анализа

Основными конечными показателями данного исследования являлись:

Частота, тяжесть и продолжительность нежелательных явлений; и

ФК-параметры, включая максимальную наблюдаемую концентрацию (С_макс), время достижения С_макс (Т_макс), наблюдаемую минимальную концентрацию в сыворотке (С_мин), конечный период полувыведения (t_1/2), площадь под кривой «концентрация-время» (ППК) в 1 интервале введения [ППК(TAU)], среднюю концентрацию в интервале введения [ППК(TAU)/tau], системное выведение (CL), объем распределения в равновесном состоянии (V_ss) и коэффициент накопления от первой дозы до равновесного состояния.

Второстепенными конечными показателями данного исследования являлись:

Реакция, оцениваемая по критериям RECIST 1.1 или классификации Лугано, в зависимости от обстоятельств, и iRECIST. Эти реакции использовали для определения частоты контроля заболевания (DCR), частоты объективной реакции (ORR), продолжительности реакции (DoR) и выживаемости без прогрессирования (PFS)/iPFS. Кроме того, оценивали общую выживаемость; и

Частоту иммуногенности FS118, включая обнаружение и анализ АЛС.

Поисковые конечные показатели данного исследования включали:

Процент занятости рецепторов PD-L1 и LAG-3 в популяциях CD3+, CD4+ и CD8+ Т-клеток, измеряемый с помощью проточной цитометрии мононуклеарных клеток периферической крови;

Количественное определение растворимых PD-L1 и LAG-3.

Статистические соображения

Распределение пациентов представили в виде таблицы для всех включенных в исследование пациентов. Демографические и исходные данные (т.е. возраст, пол, расу, этническую принадлежность, рост и вес), а также анамнез и характеристики заболевания обобщали с использованием описательной статистики для популяции для анализа безопасности.

Анализы эффективности выполняли с использованием популяции для анализа эффективности. Использовали данные о реакции опухоли в соответствии с критериями RECIST 1.1 или классификацией Лугано, в зависимости от обстоятельств, и в соответствии с критериями iRECIST. Для ORR и DCR получали точечные оценки и 95% точные доверительные интервалы. Пациентов с неизвестной или отсутствующей реакцией считали не реагировавшими на лечение (т.е. их включали в знаменатель при расчете процентного показателя).

Наилучшую общую реакцию определяли в соответствии с критериями RECIST 1.1 или классификацией Лугано, в зависимости от обстоятельств, и в соответствии с критериями iRECIST.

Показатели времени до события, включая продолжительность лечения, DoR, PFS, iPFS и OB, обобщали описательно с использованием способа Каплана-Мейера. Методы цензурирования для показателей времени до события описаны в плане статистического анализа, для показателей времени до события получали кривые Каплана-Мейера.

Популяцию для ФК-анализа использовали для обобщения всех ФК-данных. Профили зависимости концентрации в сыворотке от времени представляли, при необходимости, графически вместе с табличными сводными данными непараметрических параметров С_макс, Т_макс, С_мин и ППК в интервале введения для каждого пациента и по когортам доз. При необходимости рассчитывали общую ППК, используя экстраполяцию до бесконечности от терминальной фазы профиля зависимости концентрации от времени, что также позволяло получать значения t_1/2, CL и V_ss в сыворотке.

Популяцию для фармакодинамического анализа использовали для фармакодинамического анализа.

Обобщали долю пациентов с положительным результатом анализа на АЛС FS118 и долю пациентов с положительным результатом анализа на нейтрализующие АЛС FS118 во время исследования. Выполнили корреляционный анализ титра АЛС FS118 и ФК параметров.

Профиль безопасности получали на основе нежелательных явлений (включая DLT и серьезные нежелательные явления), результатах физикального обследования (включая функциональный статус по шкале ECOG), измерениях основных показателей жизнедеятельности, стандартных клинических лабораторных измерениях и записях электрокардиограммы.

Обоснование размера выборки

24 пациентов включили в исследование к маю 2019 года, затем количество пациентов увеличилось до 40 к августу 2019 года и до 43 к апрелю 2020 года. Группа ускоренного титрования состояла как минимум из 5 пациентов, а группа увеличения дозы 3+3-расширения исследования состояла из 3-6 пациентов на уровень дозы. Когорты можно было расширять по соображениям безопасности (до 3 пациентов) с целью обогащения ФК и/или фармакодинамических покаателей (до 10 пациентов) и дополнительного изучения клинической эффективности на уровне RP2D или до него (до 24 пациентов). Размер выборки для исследования определяли с учетом практических соображений. Официальную статистическую оценку не выполняли.

2.2 Промежуточные результаты (май 2019 г.)

2.2.1 Промежуточные клинические данные

К маю 2019 г. завершили исследование когорт пациентов с ускоренным титрованием (800 мкг, 2400 мкг, 0,1 мг/кг, 0,3 мг/кг и 1,0 мг/кг). В части исследования I фазы, использовавшей схему увеличения дозы 3+3-расширения, завершили исследование дозы 3 мг/кг и продолжали исследование уровней доз 10 мг/кг и 20 мг/кг. Две когорты расширили (1 мг/кг до 3 субъектов; 3 мг/кг до 10 субъектов).

8 из 24 пациентов, включенных в исследование I фазы к маю 2019 г., продолжали активное лечение. 16 пациентов прекратили лечение - 4 пациента из-за iCPD, 2 пациента из-за прогрессирующего заболевания согласно RECIST 1.1 и 10 пациентов из-за других соображений: ТВС/клиническое решение PD/PI.

20% нежелательных явлений, возникших после начала лечения и наблюдавшихся в ходе исследования I фазы до мая 2019 г., оценивались как связанные с FS118; все они характеризовались легкой или умеренной тяжестью. Ни одно из 10 зарегистрированных серьезных нежелательных явлений не было связано с FS118. DLT не наблюдали ни при одной из исследуемых дозировок. Это демонстрировало хорошую переносимость доз до 20 мг/кг и соответствие профиля безопасности FS118 профилю безопасности других блокаторов иммунной контрольной точки.

Продолжительность лечения FS118 составляла в среднем 9,2 недели=3 цикла (0-24 недели). У 14 субъектов было зарегистрировано по меньшей мере 1 сканирование «в ходе исследования». У 5 из этих 14 пациентов наблюдали стабильное заболевание, а у 9 - прогрессирующее. Хотя определение эффективности не являлось основной целью исследования I фазы, среднее время лечения пациентов FS118 и тот факт, что сканирование во время исследования показало стабилизацию заболевания у 5 из 14 пациентов, демонстрировали, что FS118 было способно вызывать стабилизацию заболевания и, таким образом, обладало потенциалом подавления роста опухоли у пациентов, представляющих собой людей. При оценке этих данных следует иметь в виду, что у всех пациентов, включенных в исследование I фазы, были распространенные злокачественные новообразования и, возможно, слишком сильные нарушения для проявления благоприятного эффекта от лечения FS118. Лечение имеющих рак пациентов с менее выраженными нарушениями, которое можно исследовать в исследовании 2 фазы, может продемонстрировать еще более высокую эффективность FS118.

2.2.2 Промежуточные фармакокинетические/фармакодинамические данные

Выполнен фармакокинетический/фармакодинамический анализ 20 пациентов в первых 7 когортах (800 мкг, 2400 мкг, 0,1, 0,3, 1,3, 10 мг/кг/1 р/нед.), включающий измерения ФК и фармакодинамических показателей (связывание рецептора LAG-3 или PD-L1 в крови [растворимого или экспрессируемого на Т-клетках] с FS118). ФК-анализ выполняли только у одного пациента из когорты, получавшей продукт в дозе 20 мг/кг/1 р/нед.

2.2.2.1 ФК-анализ

Для ФК-анализа измеряли уровни FS118 в сыворотке с использованием валидированного анализа связывания лиганда с использованием платформы GyroLab с захватом биотинилированного LAG-3 и обнаружением PD-L1, меченого Alexa Fluor® 647. Вкратце, образцы сыворотки разбавляли Rexxip HN до минимального требуемого разведения (MRD) 1:10 и добавляли на планшеты, которые затем загружали вместе с BioAffy 1000 CD(s) на рабочую станцию Gyrolab ХР. FS118 обнаруживали по излучению флуоресценции. Стандартную кривую подвергали регрессии с использованием 5-параметрической логистической кривой, используя ответ в качестве весового коэффициента (1/у²), в приложении Gyrolab Evaluator. Валидированный анализ характеризовался НПКО 100 нг/мл.

Результаты показали линейное увеличение воздействия при увеличении дозы в 7 когортах (800 мкг, 2400 мкг, 0,1, 0,3, 1, 3, 10 мг/кг/Q1 нед.) (С_макс, ППК). С_макс приблизительно соответствовала прогнозируемому значению, полученному путем масштабирования соответствующего показателя у приматов, не являющихся человеком, однако скорость выведения была выше прогнозируемой (ППК на 30% ниже прогнозируемой). При еженедельном введении препарата в дозе до 3 мг/кг наблюдали линейное увеличение воздействия (С_макс) и отсутствие накопления FS118. У некоторых субъектов в когортах 3, 10 и 20 мг/кг были измеримые концентрации С_мин FS118. Концентрация FS118 в сыворотке через 7 дней после введения дозы (перед следующим вливанием) была менее 100 нг/мл (НПКО) для всех пациентов при использовании доз <1 мг/кг.

2.2.2.2 Растворимый LAG-3

Уровень общего sLAG-3 в сыворотке определяли количественно с использованием валидированного твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) в присутствии насыщающего количества FS118. Вкратце, sLAG-3 в образцах сыворотки захватывали на планшете с иммобилизованным моноклональным антителом против LAG-3 (неконкурентное связывание). FS118 добавляли in vitro для насыщения связывания sLAG-3. Захваченные комплексы sLAG-3:FS118 обнаруживали с помощью биотинилированного антиидиотипического антитела против домена Fcab FS118, связанного с рецептором sLAG-3, с последующим добавлением ПХ, конъюгированной со стрептавидином, и хромогена. Валидированный анализ характеризовался НПКО 0.675 нг/мл.

Анализ растворимого LAG-3 (sLAG-3) при уровнях дозы 1, 3 и 10 мг/кг/Q1 нед показал приблизительно 10-кратное увеличение общего sLAG-3 после первой дозы 1 и 2 циклов, причем С_макс достигала максимума через 2-3 дня после введения дозы.

Повышение уровней sLAG-3 подтверждало связывание FS118 с рецептором. При уровне дозы 1 мг/кг общая концентрация sLAG-3 вернулась к исходным значениям до введения следующей дозы (1 цикл, 8 день; C1D8). В когортах, получавших 3 и 10 мг/кг/1 р/нед, обнаружены некоторые доказательства накопления общего SLAG-3 (минимальная концентрация) перед введением следующей дозы. Степень и продолжительность увеличения общего растворимого LAG-3 при применении доз 3 мг/кг и 10 мг/кг указывали на то, что почти достигалось насыщение захвата растворимого LAG-3 посредством FS118.

2.2.2.3 Растворимый PD-L1

Общий растворимый PD-L1 (sPD-L1) в плазме количественно определяли с использованием иммуноанализа Meso-Scale Discovery в присутствии насыщающего количества FS118. Этот способ характеризовался НПКО 0.458 нг/мл. Результаты демонстрировали ранние доказательства временного увеличения общего растворимого PD-L1 (sPD-L1) после каждой дозы, хотя они имели место не у всех пациентов; у многих пациентов исходные концентрации были ниже уровня количественного определения анализа.

2.2.2.4 Занятость рецепторов PD-L1 и LAG-3

Занятость рецепторов PD-L1 и LAG-3 измеряли в Т-клетках и моноцитах цельной крови. Вкратце, способ включал сбор цельной крови в пробирки Cyto-Chex®, хранившиеся при 4°С до обработки (100 мкл на анализ). Сначала блокировали неспецифичное связывание в течение 10 минут при КТ 5 мкл блокирующего раствора Fc человека BD. Затем образцы окрашивали смесью антител (50 мкл), относящейся к одной из трех панелей (свободный рецептор, общий рецептор и FMO/изотип) и инкубировали в течение 30 минут при КТ, с последующим лизисом эритроцитов и фиксацией 900 мкл лизирующего раствора BD FACS в течение 10 минут при КТ. Затем образцы дважды промывали 2% FBS перед регистрацией на цитометре (LSR Fortessa). Занятость рецепторов рассчитывали по следующей формуле (допущение: уровни экспрессии мишени PD-L1 или LAG-3 остаются неизменными в течение периода исследования):

С - средняя интенсивность флуоресценции (MdFI) изотипического свободного мАт против мишени (конкурирующего).

D - MdFI свободного мАт против мишени (конкурирующего).

С₀, D₀: Значения MdFI в образцах, взятых до введения лекарственного средства

C_t, D_t: MdFI в образцах, взятых после введения лекарственного средства в заданный момент времени.

В целом, экспрессия LAG-3 была понижена в 40-130 раз по сравнению с экспрессией PD-L1, и дисперсия предполагаемой занятости рецептора была довольно высокой (CV обычно >50%). Через 3 ч после введения первой дозы средняя занятость рецептора PD-L1 составляла 49 и 54% для когорт, получавших дозы 3 и 10 мг/кг, соответственно, причем явная связь между занятостью рецептора PD-L1 и концентрацией FS118 в сыворотке отсутствовала. Аналогичным образом, через 3 ч после введения первой дозы средняя занятость рецептора LAG-3 составляла 23 и 32% для когорт, получавших дозы 3 и 10 мг/кг, соответственно, причем явная связь между занятостью рецептора LAG-3 и концентрацией FS118 в сыворотке отсутствовала. Непосредственно перед введением второй дозы уровень занятости рецепторов PD-L1 и LAG-3 был ниже по сравнению с моментом времени через 3 часа после введения дозы.

Накопление общего sLAG-3 и SPD-L1 и занятости LAG-3 в Т-клеточном рецепторе в крови некоторых пациентов на уровнях С_мин для когорт, получавших 3, 10 и 20 мг/кг/1 р/нед, где значения ФК параметров были ниже уровня количественного определения или очень низкими, является доказательством устойчивой фармакодинамической реакции на уровнях С_мин, что демонстрировало, что, как ни странно, для получения фармакодинамического эффекта у пациентов воздействие FS118 на протяжении всего интервала введения не требовалось.

Вышеуказанные результаты показывают, что в отличие от результатов, наблюдаемых у мышей с суррогатным антителом мыши против LAG3/PD-L1, выведение FS118 у человека в основном было опосредовано LAG-3, конкретнее - мембранным LAG-3, поскольку обнаружено, что sLAG-3 в комплексе с FS118 выводился медленнее, чем FS118.

2.2.3 Выводы

Промежуточные результаты, доступные к маю 2019 года из исследования фазы I, показали, что FS118 хорошо переносится и что максимальная наблюдаемая концентрация (С_макс) соответствует С_макс, прогнозируемой из исследования на яванских макаках, но скорость клиренса FS118 неожиданно выше, чем прогнозировалось. При этом первоначально предполагали, что для человека могут потребоваться более высокие дозы FS118, но, несмотря на более высокую скорость выведения, устойчивую фармакодинамическую реакцию наблюдали при более низких исследуемых дозах, что свидетельствует о терапевтической эффективности.

В частности, полученные результаты показали, что FS118 в дозах 3 мг/кг, 10 мг/кг и 20 мг/кг, вводимых раз в неделю, было способно вызывать устойчивое повышение уровней растворимого LAG-3 (sLAG-3), а также устойчивую занятость рецепторов LAG-3. Показано, что уровни sLAG3 были ассоциированы с терапевтической эффективностью у мышей. Эти промежуточные результаты также свидетельствовали о том, что уровни sPD-L1 увеличивались после лечения FS118.

2.3 Промежуточные данные (август 2019 г.)

2.3.1 Промежуточные клинические данные (август 2019 г.)

К августу 2019 г. в исследование I фазы были включены еще 16 пациентов. Таким образом, в исследование было включено в общей сложности 40 пациентов. 16 из этих 40 пациентов 16 продолжали активное лечение. Оставшиеся 24 пациента были исключены из лечения: 11 пациентов из-за iCPD, 3 пациента из-за несвязанных нежелательных явлений, 8 пациентов из-за решения врача или клинических признаков прогрессирующего заболевания и 2 пациента по другим причинам.

При введении раз в неделю FS118 хорошо переносилось в дозах до 20 мг/кг, и в 1 цикле или последующих циклах токсичности, ограничивающей дозу (DLT), не наблюдали. Связанные с исследованием нежелательные явления, возникшие во время лечения (НЯВЛ), наблюдали у 62,5% пациентов. Ни одно из этих нежелательных явлений не считалось серьезным нежелательным явлением, возникшим во время лечения (СНЯВЛ); 2 из них считались НЯВЛ 3 степени на основе повышенных уровней трансаминаз. Эти 2 последних случая были рассмотрены комитетом по безопасности исследования, который посчитал, что указанные повышенные уровни не оказывали явного клинического воздействия, и классифицировал повышенные уровни как токсические явления, не ограничивающие дозу. Явной зависимости между НЯВЛ и дозой FS118 не наблюдали. Ни один из летальных исходов или наблюдаемых СНЯВЛ не считались связанными с FS118.

У 22 из 32 субъектов в когортах, получавших 3, 10 или 20 мг/кг, выполнили сканирование опухоли, позволяющее выполнить ее оценку. У 11 из этих 22 пациентов имело место в некоторой степени стабильное заболевание, а у 11 - прогрессирующее заболевание на основании наилучшей общей реакции (BOR и iBOR). Это отражает частоту контроля заболевания (DCR), равную 34,4%.

Например, у всех пациентов в Таблице 7 (ниже) имело место в некоторой степени стабильное заболевание во время текущего исследования, и они продолжали участие в исследовании в течение по меньшей мере 10 недель.

В частности, у субъекта 1004-0001 (страдающего от НМРЛ) наблюдали стабильное заболевание (наилучшая реакция по RECIST 1.1) и наилучшее уменьшение опухоли на 28,13% (по сумме диаметров (SoD) по сравнению с исходным уровнем), которое наблюдали на 8 и 16 неделях после введения дозы FS118 и незначительно снизилось до 25% на 24 неделе. Таким образом, у данного конкретного пациента наблюдали почти частичную реакцию, согласно измерениям целевых очагов.

Таким образом, эти результаты демонстрируют, что FS118 было способно вызывать стабилизацию заболевания с учетом того, что популяция пациентов включала несколько различных типов рака, у всех пациентов были распространенные злокачественные новообразования, они подвергались неудачному лечению с использованием нескольких альтернативных режимов лечения до начала исследования, и у некоторых пациентов могли быть слишком сильные нарушения для получения благоприятного эффекта от лечения FS118.

2.3.2 Промежуточные фармакокинетические/фармакодинамические данные

К августу 2019 г. выполнили фармакокинетический/фармакодинамический анализ у 29 пациентов в 8 когортах (800 мкг, 2400 мкг, 0,1, 0,3, 1, 3, 10 и 20 мг/кг/1 р/нед). Как описано в Примере 2.2.2, концентрацию свободного FS118 в сыворотке измеряли вместе с растворимым LAG-3. Кроме того, измеряли частоту пролиферации (Ki67+) и общее количество эффекторных клеток памяти или центральных CD4⁺ и CD8⁺ Т-клеток памяти в крови, выполняли подсчет субпопуляций иммунных клеток, а также количественную оценку экспрессии LAG-3 и PD-L1 в опухолевых тканях до и после введения первой дозы FS118.

2.3.2.1 ФК-анализ

На основании результатов, полученных в мае 2019 г. (см. Пример 2.2.2.1), уровни концентрации свободного FS118 в сыворотке количественно определяли еще у 9 пациентов, включая пациентов в когорте, получавшей дозу 20 мг/кг еженедельно (1 р/нед). Уровни концентрации свободного FS118 в сыворотке количественно определяли с использованием валидированного анализа связывания лиганда, описанного в Примере 2.2.2.1.

Анализ свободных ФК профилей FS118 в сыворотке в течение первой недели после начала 1 и 2 циклов лечения (3 недели на цикл) показал линейное увеличение воздействия (С_макс, ППК) в зависимости от дозы в когортах пациентов, получавших 800 мкг, 2400 мкг, 0,1, 0,3, 1, 3 или 10 мг/кг 1 р/нед. ФК-анализ образцов пациентов, получавших препарат в дозе 20 мг/кг, продолжался. Расчетные значения С_макс и ППК были сопоставимы между ФК-профилями из 1 и 2 цикла в каждой когорте пациентов, что свидетельствовало о низком уровне антител против лекарственного средства (АЛС), низком опосредованном АЛС ускоренном выведении FS118 или его отсутствии.

Как видно из результатов, полученных в мае 2019 г., С_макс приблизительно соответствовала прогнозируемому значению, полученному путем масштабирования соответствующего показателя у приматов, не являющихся человеком, однако скорость выведения была выше прогнозируемой (ППК на 30% ниже прогнозируемой). Расчетный конечный период полувыведения (T_1/2) свободного FS118 на основе 1-компартментного моделирования, рассчитанного на основе имеющихся данных исследования I фазы, составил 19,6 часа.

Через неделю после начала введения (в 1 и 2 циклах) и до следующей дозы FS118 уровни С_мин свободного FS118 в сыворотке пациентов, получавших средство в дозе ≤1 мг/кг, были менее нижнего предела количественного определения (НПКО) данного анализа, что свидетельствовало об отсутствии накопления свободного FS118 в крови при графике дозирования <1 мг/кг 1 р/нед. У некоторых субъектов в когортах, получавших 3, 10 и 20 мг/кг, наблюдали количественно определяемые уровни С_мин свободного FS118 на 7 день после введения дозы в диапазоне приблизительно от 0,1 до 10 мкг/мл.

2.3.2.2 Растворимый LAG-3

На основании результатов, полученных в мае 2019 г. (см. Пример 2.2.2.2), уровни общего растворимого LAG-3 (sLAG-3) в сыворотке количественно определяли еще у 9 пациентов, включая пациентов в когорте, получавшей дозу 20 мг/кг еженедельно (1 р/нед). Уровни общего растворимого LAG-3 (sLAG-3) в сыворотке количественно определяли с использованием валидированного твердофазного ИФА, описанного в Примере 2.2.2.2.

В соответствии с промежуточными результатами, полученными в мае 2019 г., анализ продемонстрировал увеличение общего уровня SLAG-3 в сыворотке в зависимости от дозы. Конкретнее, у пациентов, получавших уровни дозы 1, 3, 10 или 20 мг/кг/1 р/нед, наблюдали приблизительно 10-150-кратное увеличение общего sLAG-3 после первой дозы 1 и 2 цикла, причем время достижения максимальной концентрации (Т_макс) имело место приблизительно через 2-3 дня после введения дозы. При уровне дозы 1 мг/кг общая концентрация sLAG-3 возвращалась к исходным значениям до введения следующей дозы (C1D8). В когортах, получавших 3, 10 и 20 мг/кг/1 р/нед, обнаружены некоторые доказательства накопления общего sLAG-3 (минимальная концентрация) перед введением следующей дозы; это дополнительно подтверждалось более высокими уровнями sLAG-3, наблюдаемыми во 2 цикле по сравнению с 1 циклом. Дальнейшее развитие анализа, выполненного в мае 2019 года, степень и продолжительность увеличения количества общего растворимого LAG-3 при применении доз 10 и 20 мг/кг, в частности, позволяло предположить, что при этих уровнях доз почти достигалось насыщение захвата растворимого LAG-3 антителом FS118. Тем не менее, для подтверждения этого явного наблюдения для когорты пациентов с дозой 20 мг/кг требуются дополнительные пациенты.

При использовании этих данных 1-компартментное моделирование позволило оценить конечный период полувыведения (Т_1/2) комплекса SLAG-3:FS118 как 15,8 дней. Расчетный конечный Т_1/2 свободного SLAG-3 составил 1,6 часа. Наблюдали высокую корреляцию популяционного и индивидуального анализов данных ФК FS118 и sLAG-3 с данными фармакокинетического/фармакодинамического моделирования. Это подтверждает отсутствие мешающего влияния АЛС и АЛС-опосредованного ускоренного выведения FS118.

Таким образом, этот анализ показал, что повышение уровня общего sLAG-3 в зависимости от дозы после введения FS118 можно использовать в качестве фармакодинамического маркера связывания FS118 с рецептором-мишенью LAG-3. Этот вывод подтвердил предложенный механизм действия FS118, в соответствии с которым связывание FS118 с рецепторами LAG-3, экспрессируемыми на поверхности клеток-мишеней, приводило к повышению системных уровней растворимого LAG-3, возможно, за счет отсоединения экспрессируемого на поверхности клетки LAG-3.

2.3.2.3 Частота пролиферирующих и общих эффекторных клеток и центральных CD4⁺ и CD8⁺ Т-клеток памяти в крови

Частоты пролиферирующих Ki67⁺ CD4⁺ и Ki67⁺ CD8⁺ эффекторных клеток памяти и центральных Т-клеток памяти в крови контролировали с течением времени с помощью проточного цитометрического анализа. Вкратце, цельную кровь собирали в Cyto-Chex® и хранили в холодильнике до обработки. Для каждого анализа использовали по 100 мкл каждого образца. Сначала блокировали неспецифичное связывание блокирующим раствором Fc человека BD. Затем образцы окрашивали смесью поверхностных антител (50 мкл) с последующим лизисом эритроцитов и фиксацией лизирующим раствором BD FACS. Промытые клетки пермеабилизировали буфером Fix/Perm, затем дважды промывали 1Х буфером Perm. Добавляли смесь внутриклеточных антител (50 мкл) и инкубировали в течение 30 мин при 2-8°С. Затем клетки дважды промывали 2% FBS и переносили в пробирки TruCount для регистрации на цитометре (BD LSR).

Определяли частоты центральных CD4⁺ или CD8⁺ Т-клеток памяти (определяемых по экспрессии CD45⁺ CD3⁺ CD19^neg CD4⁺ или CD8⁺, соответственно, CD45RA^neg CCR7^pos) или эффекторных CD4⁺ или CD8⁺ клеток памяти (определяемых по CD45⁺ CD3⁺ CD19^neg CD4⁺ или CD8⁺, соответственно, CD45RA^neg CCR7^neg). Кроме того, определяли частоты клеток Ki67⁺ в популяциях эффекторных или центральных CD4⁺ или CD8⁺ Т-клеток памяти. Анализ доступных данных из когорт пациентов, получавших дозы 3, 10 и 20 мг/кг, показал, что FS118 было способно увеличивать частоты пролиферирующих Ki67⁺ CD4⁺ и Ki67⁺ CD8⁺ эффекторных клеток памяти и центральных Т-клеток памяти после введения дозы в 1 цикле по сравнению с исходными измерениями. Кинетический и временный характер этой периферической фармакодинамической реакции свидетельствовал об активации Т-клеток в соответствии с данными, полученными в доклинических исследованиях.

В том же проточном цитометрическом анализе, описанном выше, выполняли подсчет субпопуляций иммунных клеток в крови с течением времени. Исходные данные показали, что введение FS118 приводило к увеличению абсолютного количества CD3⁺, CD4⁺, CD8⁺ Т-клеток и NK-клеток. Кинетика ответа была временной, аналогичной фармакодинамическому эффекту, наблюдаемому в отношении частот пролиферирующих CD4⁺ и CD8⁺ эффекторных клеток памяти или центральных Т-клеток памяти в крови. Это в особенности наблюдали у 4 пациентов, страдающих мезотелиомой, раком шейки матки, анапластическим раком щитовидной железы и раком гортани, соответственно. В совокупности эти предварительные данные свидетельствовали о том, что FS118 могло вызывать системный иммунный ответ у пациентов.

2.3.2.4 Экспрессия PD-L1 и LAG-3 в опухоли

Доклинические исследования с использованием моделей опухолей у мышей ранее показали, что биспецифичное антитело против mLAG-3/mPD-L1 могло индуцировать супрессию LAG-3 на LAG-3-экспрессирующих опухоль-инфильтрирующих лимфоцитах (ОИЛ), в то время как уровень экспрессии LAG-3 повышался при обработке мышей двумя молекулами антител, содержащими те же самые сайты связывания mLAG-3 и mPD-L1, что и суррогатное биспецифичное антитело против mLAG-3/mPD-L1 (Р2399 А LAG3/PD-L1 mAb² can overcome PD-L1-mediated compensatory upregulation of LAG-3 induced by single-agent checkpoint blockade, Faroudi et al., American Association for Cancer Research (AACR) Annual Meeting 2019, 29 March-03 April 2019, Atlanta, Georgia, USA).

Для исследования этого потенциального эффекта в контексте FS118, представляющего собой биспецифичное антитело против hPD-L1/hLAG-3, парные образцы опухоли (N=4) получали у пациентов до введения дозы (в диапазоне от -3 до -12 дней) и после введения дозы (в диапазоне от 19 до 41 дня). Экспрессию PD-L1 и LAG-3 в фиксированных формалином и включенных в парафин (FFPE) биоптатах средней части опухоли оценивали с помощью диагностики in vitro (IVD) с использованием антитела против PD-L1 (клон SP263) (Roche Diagnostics/Ventana Medical Systems) и валидированного иммуногистохимического (ИГХ) анализа с использованием антитела против LAG-3 (клон 17В4) (платформа окрашивания Ventana BenchMark Ultra), соответственно. Для последующей оценки после ИГХ-окрашивания применяли критерии выбора ≥100 опухолевых клеток и >25% содержания опухоли. Оценка включала определение положительного процентного балльного показателя для опухоли (%TPS) на основании процентного содержания и интенсивности мембранного окрашивания опухолевых клеток антителом против PD-L1 и количественное определение иммунных клеток PD-L1⁺ или LAG-3⁺ в до 5 полях при большом увеличении в следующих компартментах: внутриопухолевой строме, внутриэпителиальном компоненте опухоли или перитуморальной области, в зависимости от обстоятельств.

В целом, предварительные результаты на данном этапе исследования не показали признаков компенсаторного повышения уровня экспрессии PD-L1 или LAG-3 в опухоли после введения дозы FS118.

2.3.3 Выводы

Промежуточные результаты, доступные к августу 2019 г., подтверждали выводы, сделанные в мае 2019 г. (см. Пример 2.2.3). Вкратце, FS118 хорошо переносилось, а максимальная наблюдаемая концентрация (С_макс) соответствовала С_макс, прогнозируемой на основании данных исследования на яванских макаках. Скорость выведения FS118 была неожиданно выше, чем прогнозировалось, однако при исследуемых дозах наблюдали устойчивую фармакодинамическую реакцию, что свидетельствует о терапевтической эффективности. Действительно, к августу 2019 г. у 11 пациентов наблюдали в некоторой степени стабильное заболевание, что отражало частоту контроля заболевания (DCR), равную 34,4%. Эти результаты демонстрируют, что FS118 было способно вызывать стабилизацию заболевания с учетом того, что популяция пациентов включала несколько различных типов рака, у всех пациентов были распространенные злокачественные новообразования, они подвергались неудачному лечению с использованием нескольких альтернативных режимов до начала исследования, для них не было других доступных вариантов лечения, и у некоторых пациентов могли быть слишком сильные нарушения для получения благоприятного эффекта от лечения FS118.

В качестве дополнительной поддержки, результаты, полученные в августе 2019 г., показали, что FS118 в дозах 3 мг/кг, 10 мг/кг и 20 мг/кг, вводимых раз в неделю, было способно вызывать устойчивое повышение уровней растворимого LAG-3 (sLAG-3). Показано, что уровни sLAG3 были ассоциированы с терапевтической эффективностью у мышей.

Кроме того, показано, что FS118 индуцировало кинетическую и временную периферическую фармакодинамическую реакцию, указывающую на активацию Т-клеток в когортах пациентов, получавших дозы 3, 10 и 20 мг/кг. Кроме того, повышенная пролиферация центральных CD4+ и CD8+ клеток памяти и эффекторных Т-клеток при уровнях С_мин обеспечивала дополнительные доказательства устойчивой фармакодинамической реакции на уровнях С_мин, а признаки компенсаторного повышения экспрессии PD-L1 или LAG-3 в опухоли после введения FS118 отсутствовали в соответствии с гипотетическим механизмом действия FS118.

2.4 Промежуточные данные (апрель 2020 г.)

2.4.1 Промежуточные клинические данные (апрель 2020 г.)

К апрелю 2020 года в исследование включили еще 3 пациентов. Таким образом, в исследование были включены в общей сложности 43 пациента. 2 из этих 43 пациентов получали активное лечение. 41 пациент завершил/прекратил лечение: 14 пациентов из-за iCPD, 4 пациента из-за несвязанных нежелательных явлений, 10 пациентов из-за решения врача или клинических признаков прогрессирующего заболевания и 10 пациентов из-за других соображений. 14 из этих 41 пациента подвергались последующему наблюдению, а 27 завершили исследование.

У дополнительных 3 пациентов, включенных в исследование, еженедельное введение дозы FS118 в/в в дозе 20 мг/кг хорошо переносилось, и сообщения для спонсора о токсичности, ограничивающей дозу, отсутствовали.

В отношении всех пациентов, включенных в исследование, приблизительно 20% наблюдаемых нежелательных явлений, возникших во время лечения, были связаны с FS118, причем большинство из них были легкой или умеренной степени тяжести (1 или 2 степени согласно общим терминологическим критериям нежелательных явлений вер. 4.3). Приблизительно 5% нежелательных явлений, связанных с FS118, относились к 3 степени тяжести. О серьезных нежелательных явлений (СНЯ), связанных с FS118, не сообщалось. СНЯ определяют как любое нежелательное явление, ведущее к смерти, опасное для жизни, требующее госпитализации, вызывающее инвалидность, необратимое повреждение организма пациента или врожденные аномалии/дефекты, требующее вмешательства для предотвращения необратимого нарушения или повреждения или других серьезных явлений, например, аллергический бронхоспазм. Летальные исходы, которые произошли во время исследования, считались не связанными с FS118. Таким образом, новых рисков для безопасности выявлено не было.

По состоянию на 25 марта 2020 г. у 30/36 пациентов в когортах, получавших дозы 3, 10 или 20 мг/кг были поддающиеся оценке снимки опухоли. 17 пациентов зарегистрировали как пациентов со стабильным заболеванием (SD), а 13 - как пациентов с прогрессирующим заболеванием (PD) в качестве наилучшей реакции на лечение FS118 (BOR и iBOR). Это отражает частоту контроля заболевания (DCR), равную 47,2%, что соответствовало увеличению на 12,8% по сравнению с августом 2019 г. 17 пациентов, зарегистрированных как пациенты со стабильным заболеванием, перечислены в Таблице 8 (ниже).

У одного из двух оставшихся пациентов в исследовании I фазы (оба они получали дозу 20 мг/кг раз в неделю) была леймиосаркома (саркома мягких тканей), и он находился в исследовании в течение 32 недель по состоянию на 25 марта 2020 г.; у другого пациента был анапластический рак щитовидной железы (АТС), и он находился в исследовании в течение >1 года (55 недель) по состоянию на 25 марта 2020 г.

2.4.2 Выводы

Эти результаты продолжают демонстрировать, что FS118 проявляло благоприятную переносимость при введении в течение длительного периода и, что более важно, что лечение FS118 в диапазоне доз 1-20 мг/кг могло вызывать долгосрочную стабилизацию заболевания (несколько пациентов в течение >18 недель с SD в качестве BOR/iBOR; 1 пациент в течение >1 года, продолжающий принимать участие в исследовании). Это особенно важно, поскольку популяция пациентов в исследовании включала несколько различных типов рака, у всех пациентов были распространенные злокачественные новообразования, они подвергались неудачному лечению с использованием нескольких альтернативных режимов лечения до начала исследования, и у некоторых пациентов могли быть слишком сильные нарушения для получения благоприятного эффекта от лечения FS118. Несмотря на эту сложную популяцию пациентов, FS118 позволяло достичь частоты контроля заболевания (DCR), равной 47,2%, что соответствовало увеличению на 12,8% по сравнению с августом 2019 г. Это увеличение дополнительно демонстрирует, что дозы FS118 в диапазоне 3-20 мг/кг позволяли достичь стабилизации заболевания.

Пример 3: Выбор пациентов с более высокой вероятностью реакции на FS118 на основании устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1

3.1 Базовая проблематика

Все пациенты, включенные в продолжающееся исследование FS118, ранее прогрессировали во время или после получения терапии, содержащей агент против PD-1/PD-L1.

Первоначальные результаты (август 2019 г.) продемонстрировали, что FS118 было способно стабилизировать заболевание у некоторых пациентов с частотой контроля заболевания (DCR), равной 34,4% (см. Пример 2.3.1), причем этот показатель увеличился до 47,2% к апрелю 2020 г. (см. Пример 2.4.1). Авторы изобретения предположили, что FS118 может приносить пользу этим пациентам благодаря дополнительному благоприятному эффекту, обеспечиваемому ингибированием LAG-3 в комбинации с ингибированием PD-L1 (ингибирование двух контрольных точек), или новому биологическому эффекту, обеспечиваемому биспецифичным адресным воздействием на PD-L1 и LAG-3 (WO 2017220569 A1). Ожидалось, что у пациентов не будет достигаться клинический благоприятный эффект при повторном лечении монотерапевтическими режимами, содержащими антитело против PD-1 или антитело против PD-L1 (Fujita et al., Anticancer Res. (2019); Fujita et al., Thoracic Cancer (2019); Martini et al., J. Immunotherapy Cancer (2017)).

Одним из механизмов устойчивости к блокаде PD-1/PD-L1 может являться повышение регуляции сигнальных рецепторов, которое может нарушать функциональность Т-клеток (Nowicki et al., The Cancer Journal (2018)); этот класс рецепторов включает LAG-3. Считается, что этот механизм устойчивости является формой приобретенной устойчивости, при которой Т-клетки первоначально реагируют на лечение, но впоследствии истощаются, что приводит к потере функции Т-клеток. Это отличается от первичной устойчивости, при которой пациенты не реагируют на начальное лечение.

Поэтому авторы изобретения предположили, что FS118 может с наибольшей вероятностью обеспечить клинический благоприятный эффект для пациентов с приобретенной устойчивостью к терапии антителом против PD-1/PD-L1, и выполнили анализ для определения конкретных критериев, которые можно применять для выбора пациентов для лечения с применением FS118. Для определения этих критериев задали подгруппы на основе истории предшествующего лечения каждого пациента антителом против PD-1/PD-L1 (наилучшая общая реакция (BOR) на эти терапевтические средства и количество месяцев лечения этими средствами). Клинический благоприятный эффект, обеспечиваемый FS118, был основан на количестве недель, в течение которых каждый пациент получал лечение FS118, называемых «завершенными неделями FS118».

3.2 Методология

Для 43 из всех пациентов, включенных в исследование I фазы к декабрю 2019 года, была известна история лечения антителом против PD-1 или антителом против PD-L1. Это предшествующее лечение антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 включало лечение ниволумабом, пембролизумабом, авелумабом, дурвалумабом, атезолизумабом, цемиплимабом, MSB-2311 или KN035 в качестве монотерапии либо в комбинации с другим агентом (например, химиотерапевтическим или иммунотерапевтическим средством (например, антителом против CTLA-4)). Предшествующая терапия антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 не обязательно непосредственно предшествовала лечению FS118, скорее предшествующая терапия антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 могла иметь место в любое время в истории лечения рассматриваемого рака у пациента.

Первоначально на основании истории лечения задали 6 следующих подгрупп:

PD (прогрессирующее заболевание (по RECIST 1.1; Eisenhauer et al., 2009) в качестве BOR при любом предшествующем лечении, включавшем антитело против PD-1 или антитело против PD-L1, независимо от продолжительности лечения);

SD (стабильное заболевание (по RECIST 1.1) в качестве BOR при продолжительности лечения 3 месяца или менее при любом предшествующем лечении, включавшем антитело против PD-1 или антитело против PD-L1 (представлено как «0-3 месяца»);

SD (стабильное заболевание (по RECIST 1.1) в качестве BOR при продолжительности лечения более 3 месяцев, но менее 6 месяцев при любом предшествующем лечении, включавшем антитело против PD-1 или антитело против PD-L1 (представлено как «3-6 месяцев»);

SD (стабильное заболевание (по RECIST 1.1) в качестве BOR при продолжительности лечения 6 месяцев или более при любом предшествующем лечении, включавшем антитело против PD-1 или антитело против PD-L1 (представлено как «6+ месяцев») и

PR (частичная реакция (по RECIST 1.1) в качестве BOR при любом предшествующем лечении, включавшем антитело против PD-1 или антитело против PD-L1).

Неизвестные критерии RECIST (BOR) по отношению к предыдущему лечению антителом против PD-1/PD-L1 («UNK»), независимо от продолжительности предшествующего лечения, включавшего антитело против PD-1 или антитело против PD-L1.

Ни у одного из пациентов, оцениваемых в этом исследовании, не наблюдали CR (полноценной реакции) на предшествующее лечение, включавшее антитело против PD-1 или антитело против PD-L1, и поэтому подгруппу для пациентов c CR не создавали.

Пациентов в каждой подгруппе, заданной выше, сначала наносили на график в зависимости от количества недель, в течение которых каждый пациент получал лечение FS118 «завершенные недели FS118».

После этого первоначального анализа получили следующие определения первичной и приобретенной устойчивости:

«Первичную устойчивость» определяли как комбинацию подгруппы PD и подгруппы SD 0-3 месяца.

«Приобретенную устойчивость» определяли как комбинацию подгрупп SD 3-6 месяцев, SD 6+ месяцев и PR.

Неизвестно (BOR на предшествующую терапию антителом против PD-1/PD-L1 неизвестна).

Если бы в исследовании присутствовали пациенты с CR на предшествующую терапию, включавшую антитело против PD-1 или антитело против PD-L1, их также включили бы в группу приобретенной устойчивости на основании того, что они достигли значительного клинического благоприятного эффекта от предшествующей терапии до прогрессирования, аналогично подгруппам SD 3-6 месяцев, SD 6+ месяцев и PR. Это связано с тем, что терапия антителом против PD-1 и антителом против PD-L1 может привести к полноценной реакции, но у некоторых из этих пациентов впоследствии развиваются механизмы устойчивости и прогрессирующее заболевание. Ожидается, что механизмы устойчивости у пациентов, достигающих полноценной реакции после лечения антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, аналогичны таковым у пациентов, которые достигают частичной реакции.

Каждая из подгрупп «Первичная устойчивость», «Приобретенная устойчивость» и «Неизвестно» была отображена на графике в зависимости от «количества завершенных недель FS118».

Для графиков данные «количество завершенных недель FS118» были точными по 25 марта 2020 г. Эти данные получили в ходе продолжающегося исследования. Все графики получали с использованием R версии 3.6.1 (www.cran.r-project.org) с пакетом «ggplot», а статистический анализ с расчетом непараметрического критерия Уилкоксона выполнили с использованием той же версии R.

3.3 Результаты

Используя данные пациентов, которые являлись точными до декабря 2019 г., анализ 6 исходных подгрупп, заданных на основе предшествующей реакции на терапию, включавшую антитело против PD-1/PD-L1 (PD, SD 0-3m, SD 3-6m, SD 6m+, PR, UNK), не демонстрировал существенных различий (критерий суммы рангов Уилкоксона, р>0,05) между этими группами в отношении продолжительности лечения FS118 в неделях, завершенных этими пациентами на момент анализа. Тем не менее, наблюдали тенденцию к тому, что пациенты, получавшие предшествующее лечение, включающее антитело против PD-1/PD-L1 и продолжавшееся более 3 месяцев, с наилучшей общей реакцией (BOR) на это лечение, соответствовавшей стабильному заболеванию (включая пациентов с частичной реакцией), демонстрировали большую продолжительность реакции на FS118 по сравнению с подгруппами PD и SD 0-3m.

Основываясь на этом неожиданном наблюдении, 6 исходных подгрупп впоследствии разделили на две группы на основании реакций пациентов на предшествующее лечение, включавшее антитело против PD-1/PD-L1. Первая группа содержала подгруппы PD и SD 0-3 месяца и получила название «Первичная устойчивость» на основании того, что эти пациенты не получали значимого клинического благоприятного эффекта от предшествующей терапии антителом против PD-1/PD-L1. Вторая группа содержала подгруппы SD 3-6 месяцев, SD 6 месяцев+ и PR и получила название «Приобретенная устойчивостью» на основе того, что пациенты получали клинический благоприятный эффект от предшествующей терапии антителом против PD-1/PD-L1 в течение более чем 3 месяцев до последующего прогрессирования заболевания.

При группировке пациентов в группы первичной и приобретенной устойчивости наблюдали разительное различие между этими двумя группами пациентов, когда каждую из них сравнивали по количеству недель, в течение которых пациенты в соответствующей группе продолжали получать лечение FS118 (критерий Манна-Уитни-Уилкоксона, р=0,059). Конкретнее, наблюдали более высокую вероятность того, что пациенты в группе приобретенной устойчивости реагировали на лечение FS118 и получали от него благоприятный эффект. В частности, все пациенты, завершившие 18 или более недель лечения FS118, были из группы приобретенной устойчивости, за исключением одного пациента, у которого BOR при предыдущей терапии антителом против PD-1 была неизвестна. Тем не менее, для этого последнего пациента с неизвестной BOR было известно, что он продолжал получать предшествующее лечение антителом против PD-1 более одного года, и, таким образом, есть подозрение, что у этого пациента должна была быть BOR, классифицируемая как приобретенная устойчивость. Ни один из пациентов с первичной устойчивостью не смог оставаться в исследовании более 17 недель. Эти наблюдения дополнительно подтверждались дополнительными клиническими данными, доступными по состоянию на 25 марта 2020 г., которые в связи с тем, что пациенты в группе приобретенной устойчивости продолжали получать лечение, позволили обнаружить улучшение статистической значимости различий, наблюдаемых между группами пациентов с первичной и приобретенной устойчивостью (критерий Манна-Уитни-Уилкоксона, р=0,048, Фигура 7).

Кроме того, важно отметить, что, хотя этот анализ был основан на продолжающемся исследовании, ни один из пациентов с первичной устойчивостью не остался в исследовании.

К декабрю 2019 г. 39 пациентов прошли поддающееся оценке сканирование опухоли во время лечения FS118. Эти пациенты показаны на Фигуре 8 с указанием наличия у каждого пациента фенотипа приобретенной или первичной устойчивости. У всех пациентов с более чем 18-недельным завершенным лечением FS118 (и фенотипом приобретенной устойчивости) было по меньшей мере одно измерение стабильного заболевания (Фигура 8), хотя стабильное заболевание наблюдали в популяциях как с приобретенной, так и с первичной устойчивостью.

Явление, наблюдаемое у пациентов с приобретенной устойчивостью с точки зрения вероятности реакции на лечение FS118, по-видимому, не зависело от конкретного уровня дозы (Фигура 7) или клинических показаний (Фигуры 8 и 9).

3.4 Выводы

Таким образом, неожиданно обнаружили, что пациенты с приобретенной устойчивостью (определяемые как пациенты с BOR, соответствующей SD, PR или CR и, следовательно, получавшие определенный клинический благоприятный эффект во время предшествующей терапии антителом против PD-1/PD-L1 в течение периода лечения более 3 месяцев до последующего прогрессирования заболевания) характеризовались более высокой вероятностью положительной реакции на лечение FS118 в течение более длительного времени, чем пациенты с первичной устойчивостью (определяемые как пациенты, не получавшие клинического благоприятного эффекта или получавшие некоторый клинический благоприятный эффект от предшествующей терапии антителом против PD-1/PD-L1 в течение 3 месяцев или менее). Это особенно важно, поскольку повторное лечение пациентов антителом против PD-(L)1 после прогрессирования заболевания при использовании предыдущих режимов лечения, включавших агенты против PD-(L)1, не рекомендуется, и исторически пациенты получают мало пользы от этого (Fujita et al., Anticancer Res. 2019; Fujita et al., Thoracic Cancer, 2019; Martini et al., J. Immunotherapy Cancer, 2017). Таким образом, авторы настоящего изобретения определили порог для выбора пациентов, которые с большей вероятностью будут реагировать на лечение FS118. Этот порог, по-видимому, не зависел от дозы FS118 или типа рака.

В качестве дополнительной информации авторы настоящего изобретения затем определили три текущих клинических исследования, в которых исследовали моноклональное антитело IgG4 BI-754111 (антитело против LAG-3) в комбинации с BI-754091 (антителом против PD-1 мАт): NCT03697304, NCT03780725 и NCT03156114. Эти исследования относились к использованию когорт пациентов, демонстрировавших вторичную устойчивость (приобретенную устойчивость) к предшествующей терапии на основе антитела против PD-1 или антитела против PD-L1. В общедоступных данных в отношении этих клинических исследований не указано, почему выбрали эти когорты, как получали определения вторичной устойчивости, и не предложены каких-либо предположения или данные, демонстрирующие улучшенную реакцию в когортах пациентов с вторичной устойчивостью по сравнению с популяцией пациентов с первичной устойчивостью. Таким образом, эти клинические исследования не дают полезной информации в контексте FS118 и не представляются значимыми для настоящих исследований.

Пример 4: Экспрессия PD-L1 в качестве маркера для выбора пациентов для лечения FS118 на основании устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1

4.1 Базовая проблематика

Поскольку все пациенты, принимавшие участие в текущем исследовании FS118, ранее получали терапию антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, и в источнике Faroudi et al. (American Association for Cancer Research (AACR) Annual Meeting 2019, 29 March-03 April 2019, Atlanta, Georgia, USA) продемонстрировано, что адресное воздействие на эти пути может изменить уровни рецепторов контрольной точки, авторы изобретения попытались определить уровни экспрессии PD-L1 и LAG-3 до лечения FS118 («исходный уровень») и определить, существовала ли какая-либо корреляция между этими уровнями экспрессии и продолжительностью лечения FS118. Для этого анализа пациентов разделили на группы как пациентов с «приобретенной» или «первичной» устойчивостью к предшествующему лечению антителом против PD-1 или PD-L1, как определено в Примере 3.

4.2 Способы

Экспрессию PD-L1 измеряли в биоптатах, взятых у пациентов до лечения FS118 («исходный уровень»). Чтобы биоптат был пригоден для анализа, содержание опухолевых клеток должно было составлять 25% или более, и должно было присутствовать ≥100 опухолевых клеток. Образцы опухоли фиксировали формалином и заливали парафином (FFPE), окрашивали и оценивали, как описано в Примере 2.3.2.4. Процентный показатель PD-L1 положительного окрашивания в опухоли (%TPS) рассчитывали как процент опухолевых клеток в образце биоптата, демонстрирующий положительное окрашивание по PD-L1. %TPS измеряли для всех доступных образцов, которые представляли: 13 субъектов с приобретенной устойчивостью и 4 субъектов с первичной устойчивостью.

4.3 Результаты

При сравнении PD-L1 %TPS на исходном уровне и количества недель лечения FS118 наблюдали положительную корреляцию для группы приобретенной устойчивости (односторонний коэффициент корреляции Спирмена r=0,57, р=0,022). И наоборот, корреляция между %TPS PD-L1 и временем лечения FS118 для группы пациентов с первичной устойчивостью не обнаружена (односторонний коэффициент корреляции Спирмена r=-0,40, р=0,37). Кроме того, в группе приобретенной устойчивости три пациента получали FS118 в течение 30 недель или более, что свидетельствует о контроле заболевания с помощью FS118. У этих трех пациентов также был самый высокий %TPS PD-L1 в группе (см. Фигура 10). Используя положительную корреляцию для группы приобретенной устойчивости, определили прогностический порог, который можно применять для выбора пациентов, которые с большей вероятностью будут реагировать на лечение с применением FS118. Это выполнили путем построения линейного графика корреляции и путем его интерполяции, используя его для определения показателя %TPS PD-L1, который коррелировал с 18 неделями лечения FS118. Срок 18 недель выбрали, потому что пациенты, продолжавшие лечение в течение 18 недель или более, относились к группе приобретенной устойчивости, но не к группе первичной устойчивости, и поэтому считали, что это значение являлось индикатором клинического благоприятного эффекта при применении FS118. Показатель %TPS PD-L1, определенный таким образом, составлял 15%.

4.4 Выводы

В целом, эти результаты демонстрируют, что экспрессия PD-L1 опухолью (%TPS PD-L1) у пациентов с приобретенной устойчивостью положительно коррелировала с продолжительностью контроля заболевания, достигнутого с помощью FS118. У 3 пациентов с максимальным %TPS PD-L1 в группе приобретенной устойчивости имел место продолжительный контроль заболевание с помощью FS118 (30 недель или более при лечении FS118). Используя положительную корреляцию для группы приобретенной устойчивости, в качестве прогностического порога для выбора пациентов в группе приобретенной устойчивости, с особенно высокой вероятностью демонстрирующих устойчивую реакцию на лечение FS118, установили значение %TPS PD-L1, равное 15%.

Пример 5: Влияние FS118 на иммунный ответ у пациентов с приобретенной и первичной устойчивостью

5.1 Базовая проблематика

После наблюдения в Примере 3 о том, что пациенты с приобретенной устойчивостью с большей вероятностью продолжали лечение FS118 в течение более длительного времени, чем пациенты с первичной устойчивостью, авторы изобретения попытались определить, имели ли место различия в фармакологической реакции на FS118 между этими двумя группами. Пациенты с первичной устойчивостью могли подвергаться неудачной предшествующей терапии антителом против PD-1/PD-L1 из-за неадекватной функции Т-клеток в результате действия супрессивных факторов в опухоли или недостаточного распознавания опухоли иммунной системой (Nowicki et al., 2018). У пациентов с приобретенной устойчивостью изначально мог иметь место Т-клеточный ответ, однако считается, что у них происходила потеря функции Т-клеток, которая могла быть обусловлена несколькими механизмами, включая повышение уровня экспрессии LAG-3. Продемонстрировано, что механизмом действия FS118 in vitro является активация Т-клеток с помощью FS118 (WO 2017220569 A1). Таким образом, авторы изобретения предположили, что способность иммунной системы пациента реагировать на FS118 может зависеть от их реакции на предшествующую терапию антителом против PD-1/PD-L1 и что способность FS118 усиливать иммунный ответ может иметь важное значение при обеспечении клинического благоприятного эффекта FS118.

5.2 Методология

В ходе лечения FS118 оценивали влияние FS118 на количество периферических иммунных клеток в кровотоке 35 пациентов, принимавших участие в исследовании (24 пациента с приобретенной устойчивостью, 8 пациентов с первичной устойчивостью и 3 неизвестных, согласно определению в Примере 3). Образцы крови получали от пациентов, абсолютное количество иммунных клеток цельной крови - CD3+ лимфоцитов, CD4+ Т-клеток, CD8+ Т-клеток, В-клеток и NK-клеток (количество TBNK-клеток) измеряли с помощью Caprion Biosciences (Caprion Biosciences, Inc., Монреаль, Квебек, Канада). Вкратце, собранную кровь хранили в пробирках Cyto-Chex® ВСТ при 4°С до обработки. Затем 100 мкл цельной крови использовали для окрашивания с помощью заранее заданной панели TBNK при единичных измерениях с помощью Caprion. После окрашивания образцы измеряли в течение 24 часов на проточном цитометре BD LSR и количественно оценивали с использованием программного обеспечения FlowJo. Абсолютное количество клеток измеряли в несколько моментов времени, как до лечения FS118 («исходный уровень»), так и во время лечения FS118.

При последующем анализе данных абсолютного количества клеток учитывали только тех пациентов, которые получали дозу, превышающую или равную 1 мг/кг FS118.

Процентное изменение количества клеток каждого типа по сравнению с исходным уровнем рассчитывали следующим образом:

Процентное изменение по сравнению с исходным уровнем = [(количество клеток_{в день лечения} - количество клеток_{в исходный момент}) / количество клеток_{в исходный момент}] * 100

Затем процентное изменение по сравнению с исходным уровнем для каждого типа клеток наносили на график в зависимости от времени лечения FS118. Профиль иммунного ответа, основанный на количестве иммунных клеток, рассчитывали для каждого пациента отдельно.

Пациентов классифицировали в отношении «первичной» или «приобретенной» устойчивости, согласно определению в Примере 3.

5.3 Результаты

На Фигуре 11 показано процентное изменение по сравнению с исходным уровнем для двух типичных пациентов: Пациента 1004-0003 в качестве типичного примера профиля иммунного клеточного ответа для пациента с «первичной устойчивостью» и пациент 1002-0014 в качестве типичного примера иммунного клеточного ответа пациента с «приобретенной устойчивостью». Пациенты с приобретенной устойчивостью демонстрировали тенденцию к увеличению количества CD3+ лимфоцитов, CD4+ Т-клеток, CD8+ Т-клеток и NK-клеток по сравнению с пациентами с первичной устойчивостью (на основании процентного изменения клеток этих субпопуляций по сравнению с исходным уровнем).

Кроме того, для каждого пациента строили график максимального кратного изменения количества CD3+ лимфоцитов, наблюдаемого во время лечения FS118 по сравнению с исходным уровнем, в зависимости от времени лечения FS118. Это выполнили для групп как с первичной, так и с приобретенной устойчивостью. Обнаружено, что величина ответа CD3+ лимфоцитов, измеренная как кратность изменения количества иммунных клеток по сравнению с исходным уровнем, значимо положительно коррелировала с продолжительностью лечения FS118 в группе с приобретенной устойчивостью (односторонний коэффициент корреляции Спирмена r=0,45, р=0,025), однако эта корреляция не была значимой в группе с первичной устойчивостью (односторонний коэффициент корреляции Спирмена r=0,52, р=0,098).

5.4 Выводы

Эти данные демонстрируют, что увеличение количества Т- и NK-клеток, наблюдаемое в крови пациента, а также кратность изменения количества CD3+ лимфоцитов являлись следствием лечения FS118, и указывают на то, что иммунные системы пациентов с приобретенной устойчивостью в большей степени способны генерировать иммунный ответ при лечении FS118. Таким образом, приобретенную устойчивость, согласно определению в настоящей заявке, можно использовать в качестве порогового значения для выбора пациентов с большей вероятностью реакции на FS118.

Пример 6: Рекомендации по дозе для расширения I фазы и/или исследований II фазы на основе данных FIH-исследования и моделирования

6.1 Обзор

Для выбора дозы для будущих клинических исследований собрали и проанализировали несколько параметров данных FIH-исследования I фазы (описанных в Примерах 2-5). В соответствии с дозой, исследованной в FIH-исследовании I фазы, эти параметры включали наличие антител против лекарственного средства (АЛС) и нежелательных явлений, возникших в ходе лечения (НЯВЛ), а также эффективность, оцениваемую по времени лечения, скорость роста опухоли, размер опухоли по сумме диаметра и количество пациентов, реагировавших на лечение. Кроме того, выполнили моделирование образования тримерного комплекса рецепторов LAG3:FS118:PD-L1, профиля общего sLAG3 и профиля общего sPD-L1 в сыворотке. Несмотря на отсутствие различий в большинстве параметров при сравнении доз, уровень АЛС, эффективность, оцениваемая по количеству пациентов, реагировавших на лечение, и моделирование образования тримерного комплекса продемонстрировали достаточные различия между дозами, позволяющие рекомендовать предпочтительную дозу для дальнейших исследований.

6.2 Анализ АЛС в образцах сыворотки в ходе FIH-исследования

Введение белковых терапевтических средств, например, FS118, может индуцировать образование антител против лекарственного средства (АЛС), которые могут оказывать влияние на его фармакокинетические/фармакодинамические характеристики. Обнаружение и определение характеристик АЛС против FS118 в образцах сыворотки человека в FIH-исследовании выполнили для поддержки клинического исследования. Анализ АЛС против FS118 разработали в BioAgilytix Labs. Вкратце, мостиковый анализ с использованием электрохемилюминесцентной (ECL) платформы MSD, аналогичный описанному в Примере 1.2.2, использовали для измерения антител, связывающихся с FS118 в сыворотке человека; биотинилированный FS118 использовали для захвата АЛС, которые затем обнаруживали с использованием FS118, меченного сложным эфиром TAG-NHS MSD (MSD #R91BN). Уровни АЛС (сигнал ECL) измеряли в образцах сыворотки пациентов, нормировали по отрицательному контролю, состоящему из объединенной необработанной сыворотки человека, и группировали по дозе FS118 (Таблица 9).

В группе, получавшей дозу 3 мг/кг раз в неделю, наблюдали значительно более высокие уровни АЛС по сравнению с режимами дозирования 10 мг/кг или 20 мг/кг раз в неделю (р≤0,05, критерий Манна-Уитни). Более высокие уровни АЛС при более низкой дозе лекарственного средства, что также можно считать «сквозным введением» более высоких доз при АЛС-реакции, являются широко наблюдаемым явлением (Chirmule, 2012). Несмотря на различия в уровнях АЛС, кажущейся зависимости от дозы между НЯВЛ и лечением FS118 не наблюдали (см. Пример 2.3.1). Для минимизации возможного влияния АЛС на иммуногенность, фармакокинетические/фармакодинамические характеристики и токсичность, в будущих исследованиях предпочтительно использовать режимы дозирования 10 мг/кг и 20 мг/кг раз в неделю.

6.3 Байесовский анализ данных по эффективности из FIH-исследования I фазы

Используя данные по эффективности FIH BOR/iBOR, собранные при исследовании реакции на лечение FS118, для прогнозирования в будущих исследованиях частоты пациентов со стабильным заболеванием в каждой из групп, получавших дозы 3, 10 и 20 мг/кг раз в неделю, применили байесовский анализ.

Частоту возникновения стабильного заболевания в виде BOR/iBOR у пациентов из FIH-исследования I фазы рассчитывали для пациентов в группах, получавших дозы 3 мг/кг, 10 мг/кг и 20 мг/кг раз в неделю. Эти данные использовали для оценки вероятности возникновения у пациента стабильного заболевания при каждом уровне дозы в будущих исследованиях, как показано в Таблице 10 ниже:

Например, исходя из предположения о включении 24 пациентов в будущее исследование (например, расширенное исследование I фазы или II фазы) и используя расчетные значения вероятности, показанные в Таблице 10, с учетом 90% доверительных интервалов, то количество пациентов, реагирующих на лечение (т.е. пациентов, у которых наблюдали по меньшей мере стабильное заболевание в качестве BOR/iBOR), будет следующим для различных доз FS118:

3 мг/кг раз в неделю: 4-14 реагирующих на лечение;

10 мг/кг раз в неделю: 11-19 реагирующих на лечение;

20 мг/кг раз в неделю: 11-19 реагирующих на лечение.

Как показано выше, как доза 10 мг/кг раз в неделю, так и доза 20 мг/кг раз в неделю, согласно прогнозам, позволяли достичь наилучшей реакции за счет стабилизации заболевания у максимальной доли пациентов. Таким образом, на основании этого байесовского анализа, любая из этих доз могла была бы быть предпочтительной для будущих исследований.

6.4 Образование тримерного комплекса рецепторов LAG3:FS118:PD-L1 в качестве фармакодинамического маркера

Продемонстрировано, что активация Т-клеток с помощью FS118 является механизмом действия FS118 in vitro (WO 2017220569 A1). Предполагалось, что терапевтическая эффективность FS118 в опухоли является результатом активации опухоль-специфичных Т-клеток в микроокружении опухоли вследствие одновременного связывания FS118 с LAG-3 и PD-L1 и ингибирования иммуносупрессивных сигналов, в противном случае генерируемых сигнальными путями LAG-3 и PD-L1. Используя полученные в FIH-исследовании I фазы данные для сыворотки, выполняли моделирование образования тримерного комплекса как в сыворотке, так и в микроокружении опухоли, которое использовали в качестве фармакодинамического маркера для выбора режима дозирования, в частности, для выбора между режимами дозирования 10 мг/кг и 20 мг/кг раз в неделю.

На основании фармакокинетических/фармакодинамических данных, собранных в FIH-исследовании, получили профили медианной концентрации свободного FS118, общего sLAG3 и общего sPD-L1 в сыворотке в зависимости от дозы на 1 и 4 неделях. Эти данные послужили основой для прогнозирования того, что чем выше доза FS118, тем выше концентрации свободного FS118 как в сыворотке, так и в микроокружении опухоли. На основании этих данных разработали популяционную модель для концентраций свободного FS118, общего sLAG-3 и общего sPD-L1 в сыворотке у пациентов с распространенными солидными опухолями. Эту модель использовали для выполнения моделирования, связывающего режим дозирования с образованием тримерного комплекса в опухоли, в целях обоснования выбора режима дозирования для будущих исследований. Для разработки модели использовали поэтапный подход (Таблица 11). Во-первых, моделировали концентрацию свободного FS118 в сыворотке с использованием однокомпартментной ФК-модели и линейного выведения. Затем добавляли общую концентрацию sLAG-3 и общую концентрацию sPD-L1 в сыворотке и аппроксимировали их моделью связывания. Моделирование связывания с FS118 и более медленное выведение комплексов FS118:sLAG-3 и FS118:sPD-L1 по сравнению со свободным sLAG-3 и свободным sPD-L1 смогли объяснить увеличение концентрации общего sLAG-3 и общего sPD-L1 в сыворотке при лечении FS118, наблюдаемое у пациентов. Первоначально для соответствующих комплексов использовали измеренные in vitro константы равновесной диссоциации, однако модель с расчетными константами равновесной диссоциации смогла лучше описать наблюдаемые профили. Аппроксимация профилей концентрации свободного FS118 в сыворотке не менялась при добавлении связывания и выведения sLAG-3 и sPD-L1. Предполагалось, что sLAG-3 и sPD-L1 постоянно образуются из неустановленного источника.

На этом этапе модель смогла описать наблюдаемые концентрации свободного FS118, общего sLAG-3 и общего sPD-L1 в сыворотке. Для связывания режима введения FS118 с эффективностью в модель добавили связывание с рецепторами клеточной поверхности LAG-3 и PD-L1 как в сыворотке, так и в микроокружении опухоли после оценки параметров для определения тримерного комплекса FS118:LAG-3:PD-L1 в сыворотке и микроокружении опухоли.

Для моделирования микроокружения опухоли сделали упрощенные допущения. Во-первых, концентрацию свободного FS118 в опухоли всегда считали долей от концентрации свободного FS118 в сыворотке (представленной как коэффициент биораспределения) и считали, что между сывороткой и опухолью было постоянное равновесие. С учетом предположения, что масса опухоли была небольшой и что она не влияла на системные концентрации FS118, массовый поток FS118 из сыворотки в опухоль не моделировали. Таким образом, концентрацию свободного FS118 в опухоли оценивали с коэффициентом биораспределения (ВС), равным [FS118]_{опухоль} = ВС [FS118]_{сыворотка}. Предполагалось, что концентрации LAG-3 и PD-L1 в опухоли совпадали с концентрациями рецепторов LAG-3 и PD-L1 в сыворотке, которые считали постоянными. Связывание с рецепторами клеточной поверхности моделировали с использованием тех же констант равновесной диссоциации, что и для связывания с растворимыми мишенями.

Смоделированы следующие режимы дозирования: (i) доза 1, 3, 10 или 20 мг/кг, вводимая раз в неделю в виде 1-часового в/в вливания или (ii) доза 3, 10 или 20 мг/кг, вводимая раз в две недели в виде 1-часового в/в вливания. Моделирование выполняли в R 3.6.0 (R Development Core Team 2008) с использованием библиотеки mIxR 4.0.0. В моделировании использовали индивидуальные расчетные значения параметров Monolix (режим условных распределений), полученные для пациентов, участвовавших в FIH-исследовании I фазы. Затем строили график средних значений этих отдельных прогнозируемых профилей. Изучили, какой из смоделированных режимов дозирования позволял получить максимальную концентрацию тримерного комплекса (LAG3:FS118:PD-L1) в сыворотке и в опухоли.

Получали и строили график среднего значения смоделированного отдельного тримерного комплекса рецепторов клеточной поверхности (LAG3:FS118:PD-L1) в процентах от общего количества рецепторов LAG-3 в сыворотке и опухоли для различных ВС с использованием индивидуальных расчетных значений для пациентов в исследовании I фазы. Моделирование показало, что повышение концентрации свободного FS118 приводило к снижению концентрации тримерного комплекса LAG3:FS118:PD-L1 в пользу димерных комплексов FS118:LAG3 и FS118:PD-L1. Кроме того, с использованием данных, собранных в FIH-исследовании, показали, что чем выше доза FS118, тем выше концентрация свободного FS118. Оптимальный диапазон концентраций свободного FS118 составлял приблизительно 0,1-1 мкг/мл. Для ВС, равного 10%, предположительно наиболее близко имитирующего микроокружение опухоли in vivo, доза 10 мг/кг раз в неделю приводила к получению более высокой концентрации тримерного комплекса, чем доза 20 мг/кг раз в неделю, в силу большей вероятности обеспечения свободной концентрации FS118 в диапазоне 0,1-1 мкг/мл.

Это также означает, что слишком высокие и/или слишком частые дозы снижают концентрацию тримерного комплекса и, следовательно, снижают активацию Т-клеток, индуцированную одновременным связыванием FS118 с LAG-3 и PD-L1, что приводит к снижению влияния на подавление опухолей.

6.5 Выводы

Несколько элементов данных FIH-исследования I фазы проанализировали и использовали для выбора дозы для будущих исследований. Во-первых, анализ АЛС при различных дозах FS118 показал, что более высокие уровни АЛС обнаруживали при дозе 3 мг/кг, вводимой раз в неделю, по сравнению с дозами 10 мг/кг или 20 мг/кг, вводимыми раз в неделю. Для минимизации потенциальной иммуногенности и токсичности режимы введения 10 мг/кг раз в неделю и 20 мг/кг раз в неделю были предпочтительнее, чем введение 3 мг/кг раз в неделю. Во-вторых, байесовский анализ данных BOR I фазы позволил получить оценку наличия большей вероятности того, что пациенты, характеризующиеся SD в качестве BOR/iBOR, будут получать введение в режиме 10 мг/кг раз в неделю или 20 мг/кг раз в неделю, чем в режиме 3 мг/кг раз в неделю. Наконец, фармакокинетическое/фармакодинамическое моделирование и моделирование образования тримерного комплекса показали, что концентрация тримерного комплекса LAG3:FS118:PD-L1 была максимальной при дозе 10 мг/кг раз в неделю, что указывало на значение ВС, равное 10%. Предполагалось, что более высокие уровни тримерного комплекса соответствуют активации Т-клеток и подавлению роста опухоли.

Исходя из всех вышеприведенных наблюдений, доза 10 мг/кг раз в неделю являлась предпочтительной для будущих исследований.

Исходя из вышеприведенных данных, в качестве альтернативы также предложили фиксированную дозу 700 мг раз в неделю. Исходя из допущения, что средняя масса тела пациента в популяции составляла 70 кг, доза 700 мг раз в неделю была эквивалентна дозе 10 мг/кг раз в неделю. Если фактическая масса тела пациентов в популяции составляла от 35 до 100 кг, доза 700 мг раз в неделю была эквивалентна дозе в диапазоне от 20 мг/кг до 7 мг/кг раз в неделю, в зависимости от фактической массы тела пациентов. Это значение находилось в пределах диапазона доз, в котором стабильные реакции на лечение наблюдались без НЯВЛ в FIH-исследовании I фазы, и, следовательно, ожидалось, что они будут эффективными. Аналогичное обоснование можно использовать для любой конкретной рассматриваемой популяции пациентов, и, таким образом, специалист в данной области, основываясь на описании, приведенном в данной заявке, может определить подходящую фиксированную дозу для любой конкретной популяции пациентов. Например, если расчетная средняя масса тела пациентов в популяции составляет 80 кг, доза 800 мг раз в неделю будет эквивалентна дозе 10 мг/кг раз в неделю. Если фактическая масса тела пациентов в популяции составляет от 40 до 100 кг, доза 800 мг раз в неделю будет эквивалентна дозе в диапазоне от 20 мг/кг до 7 мг/кг раз в неделю, в зависимости от фактической массы тела пациентов. Ожидается, что такая доза также будет эффективна по причинам, изложенным выше.

Пример 7: Протокол SCCHN для расширенного исследования I фазы

Для исследования клинической активности FS118 при опухолях определенного типа планируется расширение клинического исследования I фазы. Это называется когортой расширения I фазы и включает набор заранее определенного количества пациентов для дальнейшей оценки безопасности, фармакокинетики/фармакодинамики и клинической эффективности FS118.

Запланированная когорта расширения будет включать только пациентов с рецидивирующей или метастазирующей плоскоклеточной карциномой головы и шеи (SCCHN). SCCHN выбрали специально, поскольку в FIH-исследовании I фазы (см. Пример 2) было три пациента с SCCHN, получавшие 3, 10 и 20 мг/кг FS118 раз в неделю, соответственно, которые продолжали участие в исследовании в течение 26, 15 и 27 недель, соответственно (см. Пример 2.4.1, Таблица 8), что указывает на то, что FS118 может быть особенно эффективным при лечении SCCHN. Кроме того, у пациентов с SCCHN ранее наблюдали повышенные уровни LAG-3 на Т-клетках в микроокружении опухоли, а также повышенные уровни PD-1 (Hanna et al., 2018; Deng et al., 2016), что также свидетельствует о повышенном уровне PD-L1. Таким образом, существует четкое биологическое обоснование того, что FS118, мишенями которого являются как LAG-3, так и PD-L1, является эффективным в микроокружении опухоли SCCHN. Конкретнее, когорта для расширения будет содержать пациентов с SCCHN, у которых имеет место заболевание в полости рта, ротоглотке, гортани или гортанной части глотки и которые не подходят для радикального лечения, например, хирургического вмешательства или лучевой терапии. В настоящее время нормативно-правовыми органами одобрено применение антител против PD-1 для этих областей заболевания, и, таким образом, набранные пациенты ранее должны были пройти лечение антителами против PD-1, что важно для стратегии набора пациентов, описанной ниже. Считается, что вирус папилломы человека (ВПЧ) вызывает приблизительно 20% SCCHN, в особенности заболевание ротоглотки, известное как рак ротоглотки. Эти пациенты, как правило, характеризуются лучшим клиническим исходом в ответ на противораковое лечение, чем другие пациенты с SCCHN, у которых заболевание может быть вызвано употреблением табака и/или алкоголя. Таким образом, статус ВПЧ будут регистрировать до включения пациентов в исследование, и, если он был неизвестен, для них будут выполнять такой анализ после включения в исследование.

По вышеизложенной причине все пациенты будут предварительно получать лечение одобренными антителами против PD-1 в виде монотерапии либо в комбинации с химиотерапией, и у них будет иметь место прогрессирующее заболевание до включения в исследование. Пациенты должны характеризоваться приобретенной устойчивостью к предшествующей терапии, включавшей антитела против PD-1, согласно определению в настоящей заявке (т.е. у пациентов была полноценная или частичная реакция на предшествующую терапию антителом против PD-1 или стабильное заболевание в течение более 3 месяцев, но затем у них развилось прогрессирующее заболевание). Это согласуется с открытием авторов настоящего изобретения повышенной вероятности улучшенной реакции на FS118 (например, стабилизации заболевания и большей продолжительности лечения) у пациентов с приобретенной устойчивостью - см. Пример 3.

Для получения предшествующего лечения одобренными антителами против PD-1 пациенты должны были характеризоваться уровнями PD-L1>1% согласно комбинированному положительному балльному показателю (CPS) либо согласно оценке доли опухоли (TPS) в соответствии с инструкциями по медицинскому применению препарата. Таким образом, ожидается, что все пациенты, участвующие в расширенном исследовании I фазы, будут характеризоваться уровнями PD-L1>1%, и это будет записано. Это важно, поскольку авторы настоящего изобретения продемонстрировали, что исходные уровни PD-L1 до лечения FS118 у пациентов с приобретенной устойчивостью положительно коррелируют с продолжительностью лечения FS118 (см. Пример 4). Для вымывания предшествующего терапевтического антитела против PD-1 из организма каждого пациента требуется подождать не менее 28 дней перед их включением в запланированное расширенное исследование I фазы. Кроме того, срок пребывания пациентов с момента прекращения последнего курса лечения антителом против PD-1 до начала лечения FS118 не должен превышать 12 недель. Это гарантирует, что пациенты, вступающие в расширенное исследование I фазы, нуждаются в немедленной дальнейшей терапии для лечения своего прогрессирующего заболевания.

Перед включением в расширенное исследование I фазы все пациенты должны будут сдать биопсию опухоли, а также образцы крови. В биоптате будут измерять и анализировать исходные уровни экспрессии PD-L1 и LAG-3 на опухолевых клетках и Т-клетках, соответственно, в дополнение к другим особенностям раковых опухолей, например, процентному содержанию CD8+ Т-клеток в микроокружении опухоли. Образцы крови будут использовать для измерения и анализа уровней популяций иммунных клеток, включая иммунные Ki67+ клетки, описанные в Примере 2.3.2.3, и/или уровни растворимого LAG-3 или растворимого PD-L1 в плазме. Всем будут вводить 10 мг/кг FS118 раз в неделю в соответствии с рекомендацией по режиму дозирования, описанному в Примере 6. Эффективность FS118 при SCCHN будут оценивать с использованием клинического конечного показателя - частоты контроля заболевания (DCR) после 24 недель лечения. Он представляет собой процентную долю пациентов с полноценной реакцией (CR), частичной реакцией (PR) и/или стабильным заболеванием (SD) в течение 24-недельного периода, начиная с начала лечения FS118. Таким образом, сюда входят пациенты, которые, например, сначала демонстрировали частичную реакцию, но затем переходили к стабильному заболеванию или наоборот. Пациенты, получающие стандартную терапию после лечения антителом против PD-1 (например, таксаны, например, доцетаксел или паклитаксел, цетуксимаб или метотрексат), как правило, характеризовались бы <20% частотой DCR на уровне 24 недель, исходя из опыта главных исследователей. Это означает, что >80% таких пациентов страдали бы прогрессирующим заболеванием к 24 неделям с начала стандартной терапии. Минимальная цель заключается в превышении указанного показателя DCR для стандартных способов лечения, применяемых после лечения антителом против PD-1, за счет FS118. Учитывая, что пациенты в расширенном исследовании I фазы будут получать менее высокую дозу, чем пациенты в клинических FIH-исследованиях I фазы и исследованиях с повышением дозы (см. Пример 2), эту цель считают достижимой.

В статистической схеме расширенного исследования I фазы будут использовать способ, называемый двухстадийной минимаксной схемой Саймона (Simon, 1989). На первом этапе будут набирать 10 пациентов. Если у 1 или ни у одного из указанных 10 пациентов не достигается контроль заболевания (CR, PR и/или SD) в течение 24 недель с начала лечения FS118, включение в исследование прекратят, и FS118 будут считать недостаточно эффективным по сравнению со стандартными способами лечения, чтобы обеспечить продолжение набора. В противном случае в качестве второго этапа включат еще 12 пациентов. По завершении второго этапа, если у 6 или более из 22 пригодных для оценки пациентов будет достигнут контроль заболевания (CR, PR и/или SD) в течение 24 недель с начала лечения FS118, то FS118 считают эффективным у этих пациентов.

Для дальнейшего понимания того, какие пациенты могут получить наибольший благоприятный эффект от лечения FS118, уровни экспрессии PD-L1 и LAG-3 в раковых опухолях пациентов (зарегистрированные на исходном уровне с использованием материала обязательного биоптата) будут сравнивать с клиническим благоприятным эффектом (CR, PR и/или SD во время исследования и продолжительностью лечения) за счет FS118, с целью определить наличие или отсутствие каких-либо корреляций. Кроме того, будут отслеживать изменения уровней растворимого LAG-3 в образцах плазмы пациентов и частоты и уровня экспрессии Ki67 в популяциях периферических иммунных клеток в качестве фармакодинамических маркеров реакции на FS118.

Перечень последовательностей

Аминокислотная последовательность тяжелой цепи мАт² FS118 против LAG-3/PD-L1 человека (с мутацией LALA) (SEQ ID NO: 1)

CDR подчеркнуты. Последовательности петель АВ, CD и EF выделены полужирным шрифтом и подчеркнуты.

Аминокислотная последовательность легкой цепи мАт² FS118 против LAG-3/PD-L1 человека (SEQ ID NO: 2)

CDR подчеркнуты.

Аминокислотная последовательность тяжелой цепи мАт² FS18-7-108-29/S1 против LAG-3/PD-L1 мыши (c мутацией LALA) (SEQ ID NO: 3)

CDR подчеркнуты. Положение последовательностей петель АВ, CD и EF выделено полужирным шрифтом и подчеркнуто. Положение мутации LALA показано полужирным шрифтом.

Аминокислотная последовательность легкой цепи мАт² FS18-7-108-29/S1 против LAG-3/PD-L1 мыши (SEQ ID NO: 4)

CDR подчеркнуты.

Аминокислотная последовательность тяжелой цепи мАт G1AA/4420 против FITC (содержащего мутацию LALA) (SEQ ID NO: 5)

Положения CDR подчеркнуты. Положение мутации LALA выделено полужирным шрифтом.

Аминокислотная последовательность легкой цепи мАт G1AA/4420 против FITC (SEQ ID NO: 6)

Положения CDR подчеркнуты.

Библиография

1. Chirmule et al. Immunogenicity to Therapeutic Proteins: Impact on PK/PD and Efficacy, The AAPS Journal, 2012, 14:296-302.

2. D'Argenio DZ, Schumitzky A, Wang X. ADAPT 5 User's Guide: Pharmacokinetic/Pharmacodynamic Systems Analysis Software. Los Angeles: Biomedical Simulations Resource; 2009.

3. Deng et al. LAG-3 confers poor prognosis and its blockade reshapes antitumor response in head and neck squamous cell carcinoma, Oncoimmunology, 2016, 5(11):e1239005.

4. Eisenhauer et al. New response evaluation criteria in solid tumours: Revised RECIST guideline (version 1.1), European Journal of Cancer, 2009, 28-247.

5. Fujita et al., Retreatment With Anti-PD-L1 Antibody in Advanced Non-small Cell Lung Cancer Previously Treated With Anti-PD-1 Antibodies, Anticancer Res, 2019, 39(7):3917-3291.

6. Fujita et al. Retreatment with anti-PD-1 antibody in non-small cell lung cancer patients previously treated with anti-PD-L1 antibody, Thoracic Cancer, 2019, 1759-7706.

7. Hanna et al. Frameshift events predict anti-PD-1/L1 response in head and neck cancer, JCI Insight, 2018, 3(4):e98811.

8. Heery CR, O'Sullivan-Coyne G, Madan RA et al. Avelumab for metatstatic or locally advanced previously treated solid tumours (JAVELIN Solid Tumour): a phase 1a, muticohort, dose-escalation trial. The Lancet Oncol 2017; 18(5): 587-598.

9. Herbst R, Soria J-C, Kowanetz M et al. Predictive correlates of response to the anti-PD-L1 antibody MPDL3280A in cancer patients. Nature 2014; 515(7528): 563-567.

10. Marin-Acevedo et al. Next generation of immune checkpoint therapy in cancer: new developments and challenges. Journal of Hematology & Oncology (2018); 11:39.

11. Martini et al. Response to single agent PD-1 inhibitor after progression on previous PD-1/PD-L1 inhibitors: a case series, J. Immunotherapy Cancer, 2017, 5:66.

12. Morgado et al. Simultaneous measurement and significance of PD-1, LAG-3 and TIM-3 expression in human solid tumors, Cancer Res., 2018, 78(13 Suppl): Abstract nr 1681.

13. Nowicki et al. Mechanisms of Resistance to PD-1 and PD-L1 Blockade, The Cancer Journal, 2018, 24(1):47-53.

14. Petitprez et al. В cells are associated with survival and immunotherapy response in sarcoma, Nature, 2020, 577(7791):556-560.

15. Saber H et al. An FDA oncology analysis of immune activating products and first-in-human dose selection. Regulatory Toxicology and Pharmacology 2016; 81: 448-456.

16. Sharma et al. Primary, Adaptive and Acquired Resistance to Cancer Immunotherapy. Cell, 2017, 168(4)707-723.

17. Seymour et al., iRECIST: guidelines for response criteria for use in trial testing immunotherapeutics, Lancet Oncol., 2017, 18(3):e143-e152.

18. Simon R, Optimal Two-Stage Designs for Phase II Clinical Trials, Controlled Clinical Trials, 1989, 10:1-10.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> F-STAR DELTA LIMITED

<120> РЕЖИМЫ ДОЗИРОВАНИЯ ПРИ ВВЕДЕНИИ БИСПЕЦИФИЧНОГО

АНТИТЕЛА ПРОТИВ LAG-3/PD-L1

<130> 007663313

<150> GB1906807.1

<151> 14.05.2019

<150> GB1914040.9

<151> 30.09.2019

<150> GB2000318.2

<151> 09.01.2020

<160> 6

<170> PatentIn, версия 3.5

<210> 1

<211> 451

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь мАт2 FS118 против LAG-3/PD-L1 человека (с мутацией

LALA)

<400> 1

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Trp Lys Ser Asn Ile Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Ile Thr Gly Ser Gly Ser Tyr Gly Trp Phe Asp Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Trp Asp Glu Pro Trp Gly Glu Asp Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

405 410 415

Val Pro Tyr Asp Arg Trp Val Trp Pro Asp Glu Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Pro Gly

450

<210> 2

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь мАт2 FS118 против LAG-3/PD-L1 человека

<400> 2

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Ser Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Asn Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 3

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь мАт2 FS18-7-108-29/S1 против LAG-3/PD-L1 мыши (с мутацией

LALA)

<400> 3

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Trp Asp Glu Pro Trp Gly Glu Asp Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Val Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Pro Phe Glu

405 410 415

Arg Trp Met Trp Pro Asp Glu Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 4

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь мАт2 FS18-7-108-29/S1 против LAG-3/PD-L1 мыши

<400> 4

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Phe Thr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 5

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь мАт G1AA/4420 против FITC (содержащего мутацию LALA)

<400> 5

Glu Val Lys Leu Asp Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Pro Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr Tyr Tyr Ser Asp

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser

65 70 75 80

Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Val Glu Asp Met Gly Ile Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Gly Ser Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 6

<211> 219

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь мАт G1AA/4420 против FITC

<400> 6

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Val Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<---

Claims

1. Применение антитела, которое связывает лиганд запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) и белок гена активации лимфоцитов 3 (LAG-3), в способе лечения рака у пациента, представляющего собой человека,

причем указанное антитело содержит последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2; и

причем указанный способ включает введение указанной молекулы антитела указанному пациенту раз в неделю в дозе от 10 мг до 20 мг на кг массы тела указанного пациента, и

причем указанный рак является рефрактерным к лечению ингибитором белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1) или PD-L1 или рецидивирует во время или после лечения ингибитором PD-1 или PD-L1.

2. Способ лечения рака у пациента, представляющего собой человека,

причем указанный способ включает введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества молекулы антитела, которая связывает PD-L1 и LAG-3,

причем указанная молекула антитела содержит последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2; и

3. Применение или способ по п. 1 или 2, отличающиеся тем, что указанный способ включает введение указанной молекулы антитела в дозе 10 мг на кг массы тела указанного пациента.

4. Применение или способ по п. 1 или 2, отличающиеся тем, что указанный способ включает введение указанной молекулы антитела указанному пациенту в дозе от 700 мг до 1400 мг.

5. Применение или способ по любому из пп. 1-4, отличающиеся тем, что указанный способ включает введение указанной молекулы антитела указанному пациенту в дозе 700 мг.

6. Применение антитела, которое связывает PD-L1 и LAG-3, в способе лечения рака у пациента, представляющего собой человека, которого подвергали лечению предшествующей терапией антителом против PD-1 или антителом против PD-L1,

причем указанная молекула антитела содержит последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2;

причем установлено, что опухоль указанного пациента характеризуется фенотипом приобретенной устойчивости в отношении предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, и

причем опухоль с фенотипом приобретенной устойчивости представляет собой опухоль, демонстрировавшую полноценную или частичную реакцию на лечение предшествующей терапией антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 или демонстрировавшую стабильное заболевание в течение более 3 месяцев во время лечения предшествующей терапией антителом против PD-1 или антителом против PD-L1.

7. Способ лечения рака у пациента, представляющего собой человека, которого подвергали лечению предшествующей терапией антителом против PD-1 или антителом против PD-L1,

причем указанный способ включает введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества молекулы антитела, связывающей PD-L1 и LAG-3 и содержащей последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2;

причем установлено, что опухоль указанного пациента характеризуется фенотипом приобретенной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, и

8. Применение или способ по п. 6 или 7, отличающиеся тем, что по меньшей мере 15% опухолевых клеток в образце указанной опухоли, полученном от указанного пациента до лечения указанным антителом, определены как PD-L1-положительные.

9. Способ определения того, будет ли имеющий рак пациент, которого подвергали лечению предшествующей терапией антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, с высокой вероятностью реагировать на лечение молекулой антитела, связывающей PD-L1 и LAG-3 и содержащей последовательность тяжелой цепи согласно SEQ ID NO: 1 и последовательность легкой цепи согласно SEQ ID NO: 2,

причем указанный способ включает определение того, характеризуется ли опухоль указанного пациента фенотипом приобретенной устойчивости или фенотипом первичной устойчивости к предшествующей терапии антителом против PD-1 или антителом против PD-L1,

причем опухоль с фенотипом приобретенной устойчивости характеризуется более высокой вероятностью реакции на лечение указанным антителом, чем опухоль с фенотипом первичной устойчивости; и

причем опухоль с фенотипом приобретенной устойчивости представляет собой опухоль, демонстрировавшую полноценную или частичную реакцию на лечение предшествующей терапией антителом против PD-1 или антителом против PD-L1 или демонстрировавшую стабильное заболевание в течение более 3 месяцев во время лечения предшествующей терапией антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, и

опухоль с фенотипом первичной устойчивости представляет собой опухоль, достигшую стабильного заболевания в течение 3 месяцев или менее во время лечения предшествующей терапией антителом против PD-1 или антителом против PD-L1, включая опухоль с наилучшей общей реакцией, соответствующей прогрессирующему заболеванию.

10. Способ по п. 9, указанный способ дополнительно включает определение того, являются ли по меньшей мере 15% опухолевых клеток в образце указанной опухоли, полученном от указанного пациента до лечения указанным антителом, PD-L1-положительными,

причем опухоль с фенотипом приобретенной устойчивости, содержащая по меньшей мере 15% PD-L1-положительных опухолевых клеток, характеризуется повышенной вероятностью реакции на лечение указанным антителом по сравнению с опухолью с фенотипом первичной устойчивости, или опухолью с фенотипом приобретенной устойчивости, содержащей менее 15% PD-L1-положительных опухолевых клеток.

11. Применение или способ по любому из пп. 1-10, отличающиеся тем, что указанный рак выбран из перечня, состоящего из: плоскоклеточной карциномы головы и шеи (SCCHN), рака желудка, рака пищевода, немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ), мезотелиомы, меланомы, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, рака ободочной и прямой кишки (CRC), аденокарциномы пищеводно-желудочного перехода (GEJ), почечноклеточной карциномы (RCC), гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК), мелкоклеточного рака легкого (МРЛ), рака матки, рака вульвы, рака яичка, рака полового члена, лейкоза, карциномы из клеток Меркеля и рака носоглотки.

12. Применение или способ по любому из пп. 1-10, отличающиеся тем, что указанный рак выбран из перечня, состоящего из: саркомы, рака щитовидной железы, мультиформной глиобластомы (GBM), рака яичника, базально-клеточной карциномы, солидных опухолей MSI-H, тройного негативного рака молочной железы (TNBC), рака шейки матки, рака пищевода, множественной миеломы (MM), рака поджелудочной железы, менингиомы, рака эндометрия, карциномы тимуса, гестационного трофобластического новообразования, лимфом, перитонеального карциноматоза, рака ободочной и прямой кишки со стабильными микросателлитами (MSS) и стромальных опухолей желудочно-кишечного тракта (GIST).

13. Применение или способ по любому из пп. 1-10, отличающиеся тем, что указанный рак выбран из перечня, состоящего из: рака головы и шеи, рака желудка, рака пищевода, НМРЛ, мезотелиомы, рака шейки матки, рака щитовидной железы и саркомы мягких тканей; причем указанный рак головы и шеи предпочтительно представляет собой SCCHN.

14. Применение или способ по любому из пп. 1-10, отличающиеся тем, что указанный рак представляет собой рак головы и шеи, предпочтительно SCCHN.

15. Применение или способ по п. 14, отличающиеся тем, что область заболевания SCCHN представляет собой полость рта, ротоглотку, гортань или гортанную часть глотки.

16. Применение или способ по п. 14 или 15, отличающиеся тем, что указанный способ включает введение указанной молекулы антитела указанному пациенту раз в неделю в дозе 10 мг на кг массы тела указанного пациента.

17. Применение или способ по любому из пп. 1-16, отличающиеся тем, что указанную молекулу антитела вводят внутривенно.