CN116710486A - 用于治疗癌症的多特异性抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法中。本发明还涉及此类多特异性抗体以及与其相关的方法和其他方面。

Description

用于治疗癌症的多特异性抗体
技术领域
本发明涉及结合分子的领域。特别地，本发明涉及用于治疗涉及异常细胞、特别是癌细胞的疾病的治疗性结合分子的领域。特别地，本发明涉及结合两种或更多种不同膜相关蛋白的细胞外部分并从而调节细胞表达的生物活性的多特异性抗体。
背景技术
尽管在治疗癌症方面取得了许多进展并且对导致癌症的分子事件的了解有所增加，但癌症仍然是世界上发病和死亡的主要原因。
传统上，大多数癌症药物的发现都集中在阻断基本细胞功能和杀死分裂细胞的药剂。然而，在晚期癌症的情况下，无论应用多么积极，甚至达到患者因治疗而遭受危及生命的副作用的程度，化疗也很少能导致完全治愈。在大多数情况下，患者体内的肿瘤停止生长或暂时缩小(称为缓解)只是为了再次开始增殖，有时速度更快(称为复发)，并且变得越来越难以治疗。最近，癌症药物开发的重点已经从广泛细胞毒性的化学疗法转移到毒性较小的靶向细胞抑制疗法。晚期癌症的治疗已在白血病和其他一些癌症中得到临床验证。然而，在大多数癌症中，靶向方法仍被证明不足够有效以完全消除大多数患者的癌症。
癌症的靶向已经使用多种不同的方法实现，包括例如针对癌症赖以生存和/或生长的信号传导蛋白的小分子；具有肿瘤特异性蛋白的疫苗；使用主动杀死肿瘤细胞的免疫细胞和将细胞毒性分子靶向肿瘤的抗体的细胞疗法；干扰信号传导和/或将宿主的免疫系统(重新)引导至肿瘤细胞。
免疫系统的(重新)引导可以通过多种方式实现。一种方式是激活T细胞共刺激分子，诸如肿瘤坏死因子受体超家族，包括CD137(4-1BB，TNFRSF9)。CD137的激活导致T细胞增殖增加、细胞因子产生和CD8+T细胞存活延长。另一种方式是阻断由参与免疫检查点的分子诱导的负信号，诸如细胞毒性T淋巴细胞相关联的抗原4(CTLA-4)、在T细胞上表达的程序性细胞死亡(PD-1)或可在肿瘤细胞上表达的其同源配体程序性细胞死亡1配体1(PD-L1)。PD-L1与PD-1结合之后，信号转导导致T细胞受体(TCR)信号传导减弱和T细胞耗竭。这是肿瘤用来逃避和/或抑制免疫系统的机制。
这种免疫抑制可以被诸如针对PD-1或PD-L1的拮抗抗体的免疫检查点抑制剂疗法(ICI)阻断。ICI治疗已在与激活的CD8+T细胞浸润和增殖相关的癌症患者的亚组中展示了非常持久的反应。ICI的组合(例如，抗PD-1和抗CTLA-4)已被证明进一步增强功效，但以毒性为代价，因为大多数患者经历3级或4级治疗相关的不良事件。
PD-1/PD-L1轴和CD137的双重靶向可能有利于最佳地参与特异性抗肿瘤免疫。目前，在临床测试中最先进的两种治疗性CD137激动剂抗体是乌瑞芦单抗(urelumab)(IgG4)和乌托鲁单抗(utomilumab)(IgG2)。由于患者的CD137通路的全身激活导致剂量依赖性肝炎，所以乌瑞芦单抗的开发已经停止。乌瑞芦单抗的安全施用需要减少的剂量；选择0.1mg/kg用于与PD-1抑制剂的组合研究。乌托鲁单抗被患者更好地耐受，但作为单一疗法具有适度的抗肿瘤活性，并且在组合疗法中与PD-1阻断剂没有明显的协同作用。
因此，仍然需要为医疗保健专业人员提供更多且更好的选择来治疗癌症，特别是携带微卫星高度不稳定性(高度MSI或MSI-H)改变的任何实体瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、肺癌、脑癌和乳腺癌。
发明内容
本公开提供了用于在癌症治疗中(重新)引导免疫系统成分的手段和方法，所述癌症特别是携带高度MSI改变的任何实体瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、肺癌、脑癌和乳腺癌。
在某些实施方案中，本公开提供了一种多特异性抗体，其包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述多特异性抗体以25-300mg、优选地25-150mg或25-100mg、更优选地50-100mg的剂量施用。
在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述多特异性抗体以25-300mg、或25-150mg或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg的剂量施用。
在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)。
在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
宫颈癌，诸如PD-L1阳性宫颈癌或PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)、PD-L1阳性NSCLC或PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)。
在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是PD-L1高表达的NSCLC；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)，并且
其中所述多特异性抗体以10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg、最优选地50-100mg的剂量施用。
在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
宫颈癌，诸如PD-L1阳性宫颈癌或具有PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)、PD-L1阳性NSCLC或具有PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)，并且
其中所述多特异性抗体以10-1200mg、或25-600mg、或25-300mg、或25-150mg、或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg的剂量施用。
在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用25-300mg、优选地25-150mg或25-100mg、更优选地50-100mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点。
在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用25-300mg、或25-150mg、或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点。
在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的患者施用多特异性抗体，所述多特异性抗体包含可结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和可结合第二膜蛋白胞的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)。
在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的患者施用多特异性抗体，所述多特异性抗体包含可结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和可结合第二膜蛋白胞的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
宫颈癌，诸如PD-L1阳性宫颈癌或具有PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)、或PD-L1阳性NSCLC、或具有PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)。
在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg、最优选地50-100mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白胞的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)。
在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用10-1200mg、或25-600mg、或25-300mg、或25-150mg、或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白胞的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
宫颈癌，诸如PD-L1阳性宫颈癌或具有PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)、或PD-L1阳性NSCLC、或PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)。
附图说明
图1.结合CD137和PD-L1的示例性多特异性抗体的离体活性。上侧显示如通过流式细胞术所确定的，来源于五种人子宫内膜肿瘤的单细胞悬浮液中，不同区段中的T细胞亚组的相对比例和环形中心的CD3+细胞的百分比。下侧显示在与1)阴性对照抗体；2)结合CD137和PD-L1的多特异性抗体；3)乌瑞芦单抗类似物；4)阿替利珠单抗(atezolizumab)类似物；5)乌瑞芦单抗和阿替利珠单抗类似物的组合和可溶性抗CD3一起孵育6天之后，每个肿瘤外植体培养物中的IFNγ水平；ND＝未进行，*p<0.01；**p<0.0001，如通过单因素ANOVA和Tukey检验所确定。
图2.结合CD137和PD-L1的示例性多特异性抗体的体内活性。A)将表达NY-ESO特异性TCR的Ly95 T细胞转移至携带表达NY-ESO抗原和人PD-L1的A549肿瘤的NSG小鼠，并且用1)仅Ly95细胞；2)Ly95细胞加结合CD137和PD-L1的多特异性抗体；3)Ly95细胞加乌瑞芦单抗类似物；4)Ly95细胞加阿替利珠单抗类似物；5)Ly95细胞加乌瑞芦单抗和阿替利珠单抗类似物的组合治疗，显示终点数据，(n＝7)；B)堆叠直方图，显示来源于A)中每个治疗组的在红细胞(RBC)裂解之后的血液(空心条)和肿瘤(实心条)中总活细胞群体中人CD3+淋巴细胞的百分比；C)来源于A)中每个治疗组的肿瘤中NY-ESO-1特异性T细胞的比例，表达为CD3+肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的百分比，(n＝7，误差棒为SEM)；*p<0.05(多特异性抗体与Ly95相比)，如通过单因素ANOVA和Tukey检验所确定。
图3.结合CD137和PD-L1的示例性多特异性抗体的体内活性。A)个体人CD34+植入NSG小鼠在皮下接种MDA-MB-231细胞并且每5天用5mg/kg或0.5mg/kg多特异性抗体或5mg/kg参考抗体治疗一次(n＝9只小鼠/组)之后的肿瘤体积。治疗组：a)阴性对照IgG；b)多特异性抗体；c)乌瑞芦单抗类似物；d)阿替利珠单抗；e)阿替利珠单抗+乌瑞芦单抗类似物；和f)派姆单抗(pembrolizumab)。指示了每组单个小鼠的肿瘤生长和死亡时刻。B)来源于每个治疗组的肿瘤中CD8+(上侧)和CD4+(中间)肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的比例，表达为总肿瘤细胞群体的百分比；以及来源于每个治疗组的肿瘤中PD-L1+单核细胞(下侧)的比例，表达为所有单核细胞(CD11b+细胞)的百分比；n＝9，误差棒为SEM；*p<0.05，如通过单因素ANOVA和Tukey检验所确定。
图4.单个人CD34+植入NSG小鼠在皮下接种MDA-MB-231细胞之后和在治疗(n＝9只小鼠/组)之后的体重变化百分比：a)阴性对照；b)多特异性抗体；c)乌瑞芦单抗类似物；d)阿替利珠单抗；e)乌瑞芦单抗类似物和阿替利珠单抗；f)派姆单抗。
具体实施方式
在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述多特异性抗体以25-300mg、优选地25-150mg或25-100mg、更优选地25-75mg的剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以50-100mg或75-125mg的剂量施用。在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述多特异性抗体以25-300mg、或25-150mg、或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg的剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以50-100mg或75-125mg的剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以25-50mg的固定剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以25、30、35、40、45或50mg的剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以25、30、35、40、45或50mg的固定剂量施用。
在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用25-300mg、优选地25-150mg或25-100mg、更优选地25-75mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点。在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用25-300mg、或25-150mg、或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点。在某些实施方案中，多特异性抗体以50-100mg或75-125mg的剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以25-50mg的固定剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以25、30、35、40、45或50mg的剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以25、30、35、40、45或50mg的固定剂量施用。
在某些实施方案中，癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)。在某些实施方案中，癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
宫颈癌，诸如PD-L1阳性宫颈癌或PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)、或PD-L1阳性NSCLC、或PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)。在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)，并且
其中所述多特异性抗体以10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg、最优选地50-100mg的剂量施用。
在某些实施方案中，本公开提供一种多特异性抗体，其包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
宫颈癌，诸如PD-L1阳性宫颈癌或PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)、或PD-L1阳性NSCLC、或PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)，并且
其中所述多特异性抗体以10-1200mg、或25-600mg、或25-300mg、或25-150mg、或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg的剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以25-50mg的固定剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以25-50mg的固定剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以25、30、35、40、45或50mg的剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以25、30、35、40、45或50mg的固定剂量施用。
在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg、最优选地50-100mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白胞的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)。在某些实施方案中，本公开提供一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用10-1200mg、或25-600mg、或25-300mg、或25-150mg、或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白胞的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
宫颈癌，诸如PD-L1阳性宫颈癌或具有PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)、或PD-L1阳性NSCLC、或PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)。在某些实施方案中，多特异性抗体以25-50mg的固定剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以25、30、35、40、45或50mg的剂量施用。在某些实施方案中，多特异性抗体以25、30、35、40、45或50mg的固定剂量施用。
CD137可由激活的T细胞表达。CD137还存在于其他细胞中，诸如树突状细胞、自然杀伤细胞、粒细胞和炎症部位血管壁的细胞。该蛋白质因其激活T细胞的共刺激活性而闻名。已知CD137有许多不同的名称，诸如：TNFRSF9；TNF受体超家族成员9；肿瘤坏死因子受体超家族成员9；T细胞抗原4-1BB同系物；4-1BB配体受体；T细胞抗原ILA；CD137抗原；CDw137；ILA；白介素激活受体，小鼠Ly63的同系物；通过淋巴细胞激活(ILA)诱导的；小鼠4-1BB的同系物；受体蛋白4-1BB；T细胞抗原ILA；和4-1BB。CD137的外部Id是HGNC：11924；EntrezGene：3604；Ensembl：ENSG00000049249；OMIM：602250；和UniProtKB：Q07011。CD137是最常在激活的CD8+T细胞上被上调的诱导型受体。CD137信号传导通过激活NF-κB增强T细胞功能(Arch等人,1998)。其他细胞免疫细胞类型，包括CD4+T细胞、单核细胞、B细胞、树突状细胞(DC)亚群和粒细胞以及NK细胞，可以在不同水平下表达CD137(Shao等人,2011)。在单核细胞中，CD137可通过用脂多糖(LPS)和IL-1b激活来诱导。在B淋巴细胞中，CD137表达由针对细胞表面免疫球蛋白的抗体并且通过用EBV转化来诱导。在DC中，CD137接合通过上调B7共刺激分子(CD80和CD86)诱导它们成熟，此外还增强了它们的炎性细胞因子(IL-6和IL-12)的产生和它们的存活(Makkouk等人,2015)。CD137接合对中性粒细胞的自然功能是增加细菌和寄生虫感染的吞噬作用。此外，CD137的接合在体外阻断中性粒细胞和嗜酸性粒细胞中IL-3/IL-5/GM-CSF受体介导的抗凋亡信号，从而防止粒细胞积累(Simon,2001；Vinay等人,2011)。在非淋巴样细胞诸如软骨细胞、内皮细胞和肿瘤细胞中，CD137表达由细胞因子刺激驱动，诸如软骨细胞的IL-1b、内皮细胞的炎性细胞因子TNFα/IFNγ/IL-1b和肿瘤细胞的IFNγ。刺激CD137(CD137L)的配体在激活的抗原呈递细胞上表达。CD137呈单体和二聚体存在于膜中(Pollok等人,1993)。
B7家族包含许多结构相关的细胞表面蛋白，它们接合调控免疫反应的淋巴细胞上的受体。淋巴细胞的激活通过细胞表面抗原特异性T细胞受体或B细胞受体的接合来起始。B7配体同时递送的额外信号进一步决定了这些细胞的免疫反应。这些所谓的‘共刺激’或‘共抑制’信号由B7家族成员通过淋巴细胞上的CD28受体家族递送。B7家族成员与共刺激受体的结合增强免疫反应，而与共抑制受体的结合减弱免疫反应。目前，以下成员被认为是这个家族的一部分：B7.1(CD80)、B7.2(CD86)、诱导型共刺激配体(ICOS-L)、程序性死亡1配体(PD-L1)、程序性死亡2配体(PD-L2)、B7-H3(CD276)、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7。B7家族成员在淋巴样和非淋巴样组织中表达。成员对调控免疫反应的影响显示在B7家族基因突变的小鼠的免疫缺陷和自身免疫疾病的发展中。操纵B7配体所递送的信号已显示出治疗自身免疫、炎性疾病和癌症的潜力。
PD-L1是1型跨膜蛋白，其在特定事件(诸如怀孕、组织同种异体移植、自身免疫疾病和其他疾病状态(诸如肝炎))中发挥抑制免疫反应的作用。PD-L1在多种类型的癌症中表达，尤其在NSCLC(Boland等人,2013；Velcheti等人,2014)、黑色素瘤、肾细胞癌、胃癌、肝细胞癌以及各种白血病和多发性骨髓瘤(Bernstein等人,2014；Thompson等人,2005)中。PD-L1存在于癌细胞的细胞质和质膜中，但不是所有癌症或肿瘤内的所有细胞都表达PD-L1(Dong等人,2002)。多种肿瘤微环境细胞通过上调PD-L1表达来促进免疫抑制。这种效应称为“适应性免疫抵抗(adaptive immune resistance)”，因为肿瘤通过响应于激活的T细胞所产生的IFN-γ诱导PD-L1来保护自身(Sharma等人,2017)。PD-L1也可受致癌基因调控，这种机制被称为固有免疫抵抗(Akbay等人,2013)。在肿瘤微环境内，PD-L1也在髓样细胞和激活的T细胞上表达(Tumeh等人,2014)。PD-L1的表达通过多种促炎性分子诱导，所述促炎性分子包括I型和II型IFN-γ、TNF-α、LPS、GM-CSF和VEGF，以及细胞因子IL-10和IL-4，IFN-γ是最有效的诱导剂(Sznol和Chen,2013)。
程序性细胞死亡1蛋白(PD-1)是属于CD28受体家族并且在T细胞和pro-B细胞上表达的细胞表面受体。目前已知PD-1结合两种配体，即PD-L1和PD-L2。PD-1充当免疫检查点，通过抑制T细胞的激活在下调免疫系统中发挥重要作用，继而降低自身免疫并促进自我耐受。PD-1的抑制作用被认为是通过促进淋巴结中抗原特异性T细胞的凋亡(程序性细胞死亡)同时减少调控T细胞(抑制T细胞)的凋亡的双重机制来实现。还已知PD-1有许多不同的别名，诸如PDCD1；程序性细胞死亡1；系统性红斑狼疮易感性2；蛋白质PD-1；HPD-1；PD1；程序性细胞死亡1蛋白；CD279抗原；CD279；HPD-L；HSLE1；SLEB2；和PD-1。PD-1的外部Id是HGNC：8760；Entrez Gene：5133；Ensembl：ENSG00000188389；OMIM：600244；和UniProtKB：Q15116。PD-1抑制剂是阻断PD-1的活性的新型药物，其激活攻击肿瘤的免疫系统，并且因此成功用于治疗一些类型的癌症。
PD-L1与PD-1或B7.1(CD80)的结合传递抑制信号，从而减少表达PD-1的T细胞的增殖。PD-1被认为能够通过凋亡来控制外来抗原特异性T细胞的积累。PD-L1由多种癌细胞表达，并且其表达被认为至少部分负责抑制针对癌细胞的免疫反应。PD-L1是B7家族蛋白的成员，并且已知其有多种其他名称，诸如CD274分子；CD274抗原；B7同系物1；PDCD1配体1；PDCD1LG1；PDCD1L1；B7H1；PDL1；程序性细胞死亡1配体1；程序性死亡配体1；B7-H1；和B7-H。CD274的外部Id是HGNC：17635；Entrez Gene：29126；Ensembl：ENSG00000120217；OMIM：605402；UniProtKB：Q9NZQ7。
PD-L2是PD-1的第二配体。PD-1被PD-L2接合抑制T细胞受体(TCR)介导的增殖和CD4+T细胞的细胞因子产生。在低抗原浓度下，PD-L2/PD-1结合抑制B7-CD28信号。在高抗原浓度下，PD-L2/PD-1结合减少细胞因子产生。通过干扰素γ处理，PD-L表达在抗原呈递细胞上被上调。它在一些正常组织和多种肿瘤中均有表达。PD-L1和PD-L2被认为具有重叠功能并且调控T细胞反应。已知所述蛋白质有许多其他名称，诸如程序性细胞死亡1配体2；B7树突状细胞分子；程序性死亡配体2；嗜乳脂蛋白B7-DC；PDCD1配体2；PD-1配体2；PDCD1L2；B7-DC；CD273；B7DC；PDL2；PD-1-配体2；CD273抗原；BA574F11.2；和Btdc。PD-L2的外部Id是HGNC：18731；Entrez Gene：80380；Ensembl：ENSG00000197646；OMIM：605723；和UniProtKB：Q9BQ51。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体结合第二膜蛋白，所述第二膜蛋白不是TNF受体超家族成员。在某些实施方案中，第二膜蛋白是B7家族的成员。在某些实施方案中，第二膜蛋白是PD-L1或PD-L2，优选地PD-L1。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体包含一个抗原结合位点，所述抗原结合位点结合PD-L1的PD-1结合结构域。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体结合第二膜蛋白，所述第二膜蛋白未被T细胞显著表达。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体结合第二膜蛋白，所述第二膜蛋白在抗原呈递细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞或寄生虫感染细胞上表达。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体结合第二膜蛋白，所述第二膜蛋白存在于细胞膜上的一个或多个区中。优选地，所述区是细胞膜上的簇、结构域、微结构域或区室，优选地免疫突触。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体结合第二膜蛋白，所述第二膜蛋白作为包含所述第二膜蛋白中两种或更多种的多聚体膜蛋白的一部分而存在于细胞膜上。在某些实施方案中，第二膜蛋白作为同源二聚体或同源三聚体的一部分而存在于细胞膜上。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体包含一个抗原结合位点，所述抗原结合位点结合CD137的CD137L结合结构域。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体包含一个抗原结合位点，所述抗原结合位点阻断配体与CD137的结合或结合CD137的细胞外配体阻断结合位点，优选地CD137L阻断结合位点。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的可变结构域，所述可变结构域被定义为这样的可变结构域：当呈包含结合CD137的所述可变结构域中的两个的二价单特异性抗体形式时，其不刺激细胞上CD137的活性或者与作为具有结合肿瘤相关抗原的第二可变结构域的多特异性抗体的一部分的所述可变结构域之一相比以降低的水平刺激细胞上CD137的活性，所述肿瘤相关抗原优选地为B7家族的成员，更优选地为PD-L1。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的可变结构域，当所述多特异性抗体在表达CD137的第一细胞和表达PD-L1的第二细胞的存在下时，所述可变结构域在与结合PD-L1的第二可变结构域一起组合在多特异性抗体中时能够刺激细胞上的CD137的活性。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体能够同时结合CD137和PD-L1。
根据本公开的多特异性抗体结合CD137和第二膜蛋白(特别是作为B7家族的成员的膜蛋白)的细胞外部分，提供了以下优点，即可以特别好地促进所需免疫反应，因为B7家族成员向淋巴细胞递送‘共刺激’或‘共抑制’信号，从而增强或减弱免疫反应。因此，通过靶向第二跨膜蛋白，特别是作为B7家族的成员的跨膜蛋白，有可能增强刺激信号和/或抵消抑制信号，从而诱导或增强所需(例如针对异常细胞，诸如癌细胞)的免疫反应。因此，根据本公开，多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症，此时针对癌症中存在的异常细胞引发所需的免疫反应，所述癌症特别是高度MSI癌症；宫颈癌；子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)；脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和乳腺癌(breastcancer)，诸如乳腺癌(breast adenocarcinoma)和三阴性乳腺癌(TNBC)。
在某些实施方案中，根据本公开的多特异性抗体具有可以结合CD137的细胞外部分的一个抗原结合位点和可以结合第二膜蛋白的细胞外部分的第二抗原结合位点，所述第二膜蛋白不是TNF受体超家族的成员，但优选地B7家族的成员，更优选地PD-L1。这提供以下优点，即至少部分地避免了顺式激活(免疫)细胞，诸如表达TNF受体超家族的几种不同成员的T细胞，从而减少了由于非特异性T细胞激活引起的潜在不良副作用和毒性。现有技术方法可能导致顺式T细胞激活，这意味着在不存在第二靶标的情况下，并且可能涉及过度T细胞反应的风险，例如导致细胞因子风暴。因此，与根据本发明的具有可结合CD137的抗原结合位点和可结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点的结合分子相比，此类现有技术方法具有增加的不良副作用的可能性。
在某些实施方案中，本公开涉及一种多特异性抗体，其靶向PD-L1和CD137二者以部分避免顺式激活(免疫)细胞，诸如T细胞。在某些实施方案中，结合CD137的细胞外部分的可变结构域是以下结构域，当呈包含此类CD137结合结构域中的两个的二价单特异性抗体形式时，其不刺激细胞上CD137的活性或者与作为具有结合肿瘤相关抗原的第二可变结构域的多特异性抗体的一部分的所述可变结构域之一相比以降低的水平刺激细胞上CD137的活性，优选地B7家族的成员，更优选地PD-L1。WO 2018/056821中公开了合适的CD137结合臂。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体可以是激动性CD137抗体，例如能够刺激CD137的活性的抗体。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体可以是拮抗性CD137抗体，例如能够降低CD137的活性的抗体。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体可以是激动性B7抗体，例如能够刺激B7家族成员的活性的抗体。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体可以是拮抗性B7抗体，例如能够降低B7家族成员的活性的抗体。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体可以是激动性PD-L1抗体，例如能够刺激PD-L1的活性的抗体。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体可以是拮抗性PD-L1抗体，例如能够降低PD-L1的活性的抗体。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体在与B7家族成员结合时可以刺激CD137活性。在某些实施方案中，多特异性抗体在与CD137和PD-L1结合时刺激CD137活性。在某些实施方案中，多特异性抗体仅在存在PD-L1表达细胞的情况下诱导或激活CD137信号传导。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体包含由结合CD137的一个免疫球蛋白可变结构域和结合第二膜蛋白的细胞外部分的一个免疫球蛋白可变结构域组成的抗原结合位点。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体所包含的结合CD137的细胞外部分并且至少部分地阻断CD137配体与CD137结合的可变结构域是包含以下VH的氨基酸序列的可变结构域：MF6783(SEQ ID NO:1)；MF6861(SEQ ID NO:5)；MF6795(SEQID NO:9)；MF6808(SEQ ID NO:13)；MF6798(SEQ ID NO:17)；MF6754(SEQ ID NO:20)；MF6763(SEQ ID NO:24)；MF6744(SEQ ID NO:28)；MF6785(SEQ ID NO:31)；MF6825(SEQ IDNO:35)；MF6737(SEQ ID NO:39)；MF6749(SEQ ID NO:43)；MF6788(SEQ ID NO:46)；或MF6797(SEQ ID NO:49)。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的包含结合CD137的细胞外部分的可变结构域的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含具有CDR3区的重链可变区，其包含MF6754(SEQ ID NO:23)；MF6763(SEQ ID NO:27)；MF6785(SEQ ID NO:34)；或MF6797(SEQ ID NO:52)的重链可变区的CDR3区的氨基酸序列。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的包含结合CD137的细胞外部分的可变结构域的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含具有CDR2区的重链可变区，其包含MF6754(SEQ ID NO:22)；MF6763(SEQ ID NO:26)；MF6785(SEQ ID NO:33)；或MF6797(SEQ ID NO:51)的重链可变区的CDR2区的氨基酸序列。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的包含结合CD137的细胞外部分的可变结构域的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含具有CDR1区的重链可变区，其包含MF6754(SEQ ID NO:21)；MF6763(SEQ ID NO:25)；MF6785(SEQ ID NO:32)；或MF6797(SEQ ID NO:50)的重链可变区的CDR1区的氨基酸序列。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的包含结合CD137的细胞外部分的可变结构域的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含具有CDR1、CDR2和CDR3区的重链可变区，其包含为MF6754、MF6763、MF6785或MF6797呈递的VH之一的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列。CDR1、CDR2和CDR3序列优选地选自相同的VH区。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的包含结合CD137的细胞外部分的可变结构域的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含MF6754、MF6763、MF6785或MF6797的重链可变区的氨基酸序列，其相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列，可变重链区的氨基酸序列具有至多5个，优选地0、1、2、3或4个，更优选地0、1、2或3个，更优选地0、1或2个，最优选地0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，氨基酸插入、缺失、取代或其组合(如果有的话)不在CDR区的氨基酸序列中。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体所包含的结合CD137的细胞外部分的可变结构域或其功能部分、衍生物和/或类似物包含具有MF6754、MF6763、MF6785或MF6797的VH之一的CDR3的氨基酸序列或CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH区。在某些实施方案中，结合CD137的细胞外部分的可变结构域包含具有MF6754(SEQID NO:20)、MF6763(SEQ ID NO:24)、MF6785(SEQ ID NO:31)或MF6797(SEQ ID NO:49)的VH的氨基酸序列的VH区，其相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列，具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列，可变重链区的氨基酸序列具有至多5个，优选地0、1、2、3或4个，更优选地0、1、2或3个，更优选地0、1或2个，最优选地0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，氨基酸插入、缺失、取代或其组合(如果有的话)不在CDR区的氨基酸序列中。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物所包含的结合PD-L1的细胞外部分并阻断PD1与PD-L1结合的可变结构域是包含以下VH的氨基酸序列的可变结构域：MF5554(SEQ ID NO:53)；MF5576(SEQ ID NO:57)；MF5578(SEQ ID NO:59)；MF9375(SEQ ID NO:62)；MF9376(SEQ ID NO:64)；MF7702(SEQID NO:67)；MF5359(SEQ ID NO:69)；MF5377(SEQ ID NO:73)；MF5382(SEQ ID NO:77)；MF5424(SEQ ID NO:81)；MF5426(SEQ ID NO:85)；MF5439(SEQ ID NO:89)；MF5442(SEQ IDNO:92)；MF5553(SEQ ID NO:96)；MF5557(SEQ ID NO:97)；MF5561(SEQ ID NO:100)；MF5576(SEQ ID NO:103)；MF5594(SEQ ID NO:104)；或MF5708(SEQ ID NO:107)。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的包含结合PD-L1的细胞外部分的可变结构域的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含具有CDR3区的重链可变区，其包含MF5554(SEQ ID NO:56)；MF5576(SEQ IDNO:58)；MF5578(SEQ ID NO:61)；MF9375(SEQ ID NO:56)；MF9376(SEQ ID NO:56)；MF7702(SEQ ID NO:56)；MF5424(SEQ IDNO:84)；MF5561(SEQ ID NO:102)；MF5439(SEQ ID NO:91)；MF5553(SEQ ID NO:56)；MF5594(SEQ ID NO:106)；MF5426(SEQ ID NO:88)；或MF5442(SEQ ID NO:95)的重链可变区的CDR3区的氨基酸序列。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含结合PD-L1的细胞外部分的重链可变区，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:102或SEQ ID NO:106，优选地SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列或其变体的CDR3区。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的包含结合PD-L1的细胞外部分的可变结构域的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含具有CDR2区的重链可变区，其包含MF5554(SEQ ID NO:55)；MF5576(SEQ ID NO:55)；MF5578(SEQ ID NO:3)；MF9375(SEQ ID NO:63)；MF9376(SEQ ID NO:66)；MF7702(SEQ ID NO:55)；MF5424(SEQ IDNO:83)；MF5561(SEQ ID NO:101)；MF5439(SEQ ID NO:79)；MF5553(SEQ ID NO:55)；MF5594(SEQ ID NO:105)；MF5426(SEQ ID NO:87)；或MF5442(SEQ ID NO:94)的重链可变区的CDR2区的氨基酸序列。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含结合PD-L1的细胞外部分的可变结构域，其中抗体包含结合PD-L1的细胞外部分的重链可变区，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:55、SEQID NO:63、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:94、SEQID NO:101或SEQ ID NO:105所示的氨基酸序列或其变体的CDR2区。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的包含结合PD-L1的细胞外部分的可变结构域的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含具有CDR1区的重链可变区，其包含MF5554(SEQ ID NO:54)；MF5576(SEQ ID NO:54)；MF5578(SEQ ID NO:60)；MF9375(SEQ ID NO:60)；MF9376(SEQ ID NO:65)；MF7702(SEQ ID NO:68)；MF5424(SEQ IDNO:82)；MF5561(SEQ ID NO:93)；MF5439(SEQ ID NO:90)；MF5553(SEQ ID NO:68)；MF5594(SEQ ID NO:74)；MF5426(SEQ ID NO:86)；或MF5442(SEQ ID NO:93)的重链可变区的CDR1区的氨基酸序列。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的包含结合PD-L1的细胞外部分的可变结构域的多特异性抗体包含结合PD-L1的细胞外部分的重链可变区，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列或其变体的CDR1区。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的包含结合PD-L1的细胞外部分的可变结构域的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含具有CDR1、CDR2和CDR3区的重链可变区，其包含为MF5554、MF5576、MF5578、MF9375、MF9376、MF7702、MF5424、MF5561、MF5439、MF5553、MF5594、MF5426或MF5442呈递的VH之一的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列。CDR1、CDR2和CDR3序列优选地选自相同的VH区。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的包含结合PD-L1的细胞外部分的可变结构域的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含MF5554(SEQ ID NO:53)；MF5576(SEQ ID NO:57)；MF5578(SEQ ID NO:59)；MF9375(SEQ ID NO:62)；MF9376(SEQID NO:64)；MF7702(SEQ ID NO:67)；MF5424(SEQ ID NO:81)；MF5561(SEQ ID NO:100)；MF5439(SEQ ID NO:89)；MF5553(SEQ ID NO:96)；MF5594(SEQ ID NO:104)；MF5426(SEQ IDNO:85)；或MF5442(SEQ ID NO:92)的重链可变区的氨基酸序列，其相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列，可变重链区的氨基酸序列具有至多5个，优选地0、1、2、3或4个，更优选地0、1、2或3个，更优选地0、1或2个，最优选地0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，氨基酸插入、缺失、取代或其组合(如果有的话)不在CDR区的氨基酸序列中。
在某些实施方案中，根据本公开的用途和方法的多特异性抗体或功能部分、衍生物和/或类似物的尤其优选的组合是包含以下指示的序列或其变体的可变结构域的组合：MF6797(SEQ ID NO:49)和MF7702(SEQ ID NO:67)；MF6763(SEQ ID NO:24)和MF7702(SEQID NO:67)；MF6785(SEQ ID NO:31)和MF7702(SEQ ID NO:67)；MF6797(SEQ ID NO:49)和MF5553(SEQ ID NO:96)；MF6763(SEQ ID NO:24)和MF5553(SEQ ID NO:96)；MF6785(SEQ IDNO:31)和MF5553(SEQ ID NO:96)；MF6754(SEQ ID NO:20)和MF5424(SEQ ID NO:81)；MF6763(SEQ ID NO:24)和MF5561(SEQ ID NO:100)；MF6785(SEQ ID NO:31)和MF5439(SEQID NO:89)；MF6754(SEQ ID NO:20)和MF5553(SEQ ID NO:96)；MF6744(SEQ ID NO:28)和MF5594(SEQ ID NO:104)；或MF6783(SEQ ID NO:1)和MF5594(SEQ ID NO:104)。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6797(SEQ ID NO:49)的VH的CDR3的氨基酸序列或CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH区；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5554(SEQ ID NO:53)、MF5576(SEQ ID NO:57)、MF5578(SEQ ID NO:59)、MF9375(SEQ ID NO:62)、MF9376(SEQ ID NO:64)、MF7702(SEQID NO:67)、MF5594(SEQ ID NO:104)、MF5424(SEQ ID NO:81)、MF5426(SEQ ID NO:85)、MF5553(SEQ ID NO:96)、MF5442(SEQ ID NO:92)、MF5561(SEQ ID NO:100)或MF5439(SEQID NO:89)的VH的CDR3的氨基酸序列或CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH区。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6797(SEQ ID NO:49)的VH的氨基酸序列的VH区，相对于MF6797(SEQ ID NO:49)的VH的氨基酸序列，其具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5554(SEQ ID NO:53)、MF5576(SEQ ID NO:57)、MF5578(SEQ ID NO:59)、MF9375(SEQ ID NO:62)、MF9376(SEQ ID NO:64)、MF7702(SEQID NO:67)、MF5594(SEQ ID NO:104)、MF5424(SEQ ID NO:81)、MF5426(SEQ ID NO:85)、MF5553(SEQ ID NO:96)、MF5442(SEQ ID NO:92)、MF5561(SEQ ID NO:100)或MF5439(SEQID NO:89)的VH的氨基酸序列的VH区，相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列，其具有至多15个、优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列，可变重链区的氨基酸序列具有至多5个，优选地0、1、2、3或4个，更优选地0、1、2或3个，更优选地0、1或2个，最优选地0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。
某些实施方案进一步提供根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6763(SEQ ID NO:27)的VH的CDR3区的氨基酸序列的VH区；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5442(SEQ ID NO:95)的VH的CDR3区的氨基酸序列的VH区。
某些实施方案提供多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包括：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6763(SEQ ID NO:24)的VH的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列的VH区；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5442(SEQ ID NO:92)的VH的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列的VH区。
某些实施方案提供根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包括：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6763(SEQ ID NO:24)的VH的氨基酸序列的VH区，相对于MF6763的VH的氨基酸序列，其具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5442(SEQ ID NO:92)的VH的氨基酸序列的VH区，相对于MF5442的VH的氨基酸序列，其具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列，可变重链区的氨基酸序列具有至多5个，优选地0、1、2、3或4个，更优选地0、1、2或3个，更优选地0、1或2个，最优选地0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。
某些实施方案进一步提供根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6797(SEQ ID NO:52)的VH的CDR3区的氨基酸序列的VH区；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF7702(SEQ ID NO:56)的VH的CDR3区的氨基酸序列的VH区。
某些实施方案提供多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6797(SEQ ID NO:49)的VH的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列的VH区；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF7702(SEQ ID NO:67)的VH的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列的VH区。
某些实施方案提供根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6797(SEQ ID NO:49)的VH的氨基酸序列的VH区，相对于MF6797的VH的氨基酸序列，其具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF7702(SEQ ID NO:67)的VH的氨基酸序列的VH区，相对于MF7702的VH的氨基酸序列，其具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列，可变重链区的氨基酸序列具有至多5个，优选地0、1、2、3或4个，更优选地0、1、2或3个，更优选地0、1或2个，最优选地0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。
某些实施方案进一步提供根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6754(SEQ ID NO:23)的VH的CDR3区的氨基酸序列的VH区；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5561(SEQ ID NO:102)的VH的CDR3区的氨基酸序列的VH区。
某些实施方案提供多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6754(SEQ ID NO:20)的VH的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列的VH区；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5561(SEQ ID NO:100)的VH的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列的VH区。
某些实施方案提供根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6754(SEQ ID NO:20)的VH的氨基酸序列的VH区，相对于MF6754的VH的氨基酸序列，其具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5561(SEQ ID NO:100)的VH的氨基酸序列的VH区，相对于MF5561的VH的氨基酸序列，其具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列，可变重链区的氨基酸序列具有至多5个，优选地0、1、2、3或4个，更优选地0、1、2或3个，更优选地0、1或2个，最优选地0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。
某些实施方案进一步提供根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6785(SEQ ID NO:34)的VH的CDR3区的氨基酸序列的VH区；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5439(SEQ ID NO:91)的VH的CDR3区的氨基酸序列的VH区。
还提供了双特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6785(SEQ ID NO:31)的VH的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列的VH区；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5439(SEQ ID NO:89)的VH的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列的VH区。
某些实施方案提供根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6785(SEQ ID NO:31)的VH的氨基酸序列的VH区，相对于MF6785的VH的氨基酸序列，其具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5439(SEQ ID NO:89)的VH的氨基酸序列的VH区，相对于MF5439的VH的氨基酸序列，其具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列，可变重链区的氨基酸序列具有至多5个，优选地0、1、2、3或4个，更优选地0、1、2或3个，更优选地0、1或2个，最优选地0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。
某些实施方案进一步提供根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6785(SEQ ID NO:34)的VH的CDR3区的氨基酸序列的VH区；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5542(SEQ ID NO:95)的VH的CDR3区的氨基酸序列的VH区。
某些实施方案提供多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6785(SEQ ID NO:31)的VH的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列的VH区；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5442(SEQ ID NO:92)的VH的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列的VH区。
某些实施方案提供根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含：
-CD137结合可变结构域，其包含具有MF6785(SEQ ID NO:31)的VH的氨基酸序列的VH区，相对于MF6785的VH的氨基酸序列，其具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合；和
-PD-L1结合可变结构域，其包含具有MF5442(SEQ ID NO:92)的VH的氨基酸序列的VH区，相对于MF5542的VH的氨基酸序列，其具有至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列，可变重链区的氨基酸序列具有至多5个，优选地0、1、2、3或4个，更优选地0、1、2或3个，更优选地0、1或2个，最优选地0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。
某些实施方案提供根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含结合CD137的结合结构域，包括：
-包含根据SEQ ID NO:50的CDR1、根据SEQ ID NO:51的CDR2和根据SEQ ID NO:52的CDR3的可变结构域，每个CDR1、CDR2和/或CDR3具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合，或
-包含根据SEQ ID NO:40的CDR1、根据SEQ ID NO:41的CDR2和根据SEQ ID NO:42的CDR3的可变结构域，每个CDR1、CDR2和/或CDR3具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合，或
-包含根据SEQ ID NO:21的CDR1、根据SEQ ID NO:22的CDR2和根据SEQ ID NO:23的CDR3的可变结构域，每个CDR1、CDR2和/或CDR3具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合，或
-包含根据SEQ ID NO:32的CDR1、根据SEQ ID NO:33的CDR2和根据SEQ ID NO:34的CDR3的可变结构域，每个CDR1、CDR2和/或CDR3具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合；和/或结合PD-L1的结合结构域，包括：
-包含根据SEQ ID NO:68的CDR1、根据SEQ ID NO:55的CDR2和根据SEQ ID NO:56的CDR3的可变结构域，每个CDR1、CDR2和/或CDR3具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合，或
-包含根据SEQ ID NO:93的CDR1、根据SEQ ID NO:94的CDR2和根据SEQ ID NO:95的CDR3的可变结构域，每个CDR1、CDR2和/或CDR3具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合，或
-包含根据SEQ ID NO:93的CDR1、根据SEQ ID NO:101的CDR2和根据SEQ ID NO:102的CDR3的可变结构域，每个CDR1、CDR2和/或CDR3具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合，或
-包含根据SEQ ID NO:90的CDR1、根据SEQ ID NO:79的CDR2和根据SEQ ID NO:91的CDR3的可变结构域，每个CDR1、CDR2和/或CDR3具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，CDR的氨基酸序列具有至多5个，优选地0、1、2、3或4个，更优选地0、1、2或3个，更优选地0、1或2个，最优选地0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物包含：结合CD137的细胞外部分的可变结构域，其阻断CD137与CD137配体的结合；和结合PD-L1的细胞外部分的可变结构域，其阻断PD-1与PD-L1的结合。在某些实施方案中，此抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物中结合PD-L1的细胞外部分的可变结构域包含具有MF5554、MF5576、MF5578、MF9375、MF9376、MF7702、MF5424、MF5561、MF5439、MF5553、MF5594、MF5426、MF5442的VH之一的CDR3的氨基酸序列或CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列的VH区。在某些实施方案中，结合PD-L1的细胞外部分的可变结构域包含具有MF5554(SEQ ID NO:53)、MF5576(SEQ ID NO:57)、MF5578(SEQ ID NO:59)、MF9375(SEQ ID NO:62)、MF9376(SEQ ID NO:64)、MF7702(SEQ ID NO:67)、MF5424(SEQ ID NO:81)、MF5561(SEQID NO:100)、MF5439(SEQ ID NO:89)、MF5553(SEQ ID NO:96)、MF5594(SEQ ID NO:104)、MF5426(SEQ ID NO:85)、MF5442(SEQ ID NO:92)的VH的氨基酸序列的VH区，相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列，其具有至多15个、优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，并且优选地具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，相对于所指示的MF的VH的氨基酸序列，可变重链区的氨基酸序列具有至多5个，优选地0、1、2、3或4个，更优选地0、1、2或3个，更优选地0、1或2个，最优选地0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。
WO2018/056821A1的实例中显示，MF6797(SEQ ID NO:49)的CD137特异性VH的结合与包含CD137氨基酸序列的Arg66、Gly70和Phe72的氨基酸的存在相关联。
因此，在某些实施方案中，本公开还提供能够结合CD137的分离、合成或重组抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物的治疗用途或方法，其中所述抗体或功能部分、衍生物或类似物与CD137的结合与包含CD137氨基酸序列(SEQ ID NO:117)的Arg66、Gly70和Phe72的氨基酸的存在相关联。在某些实施方案中，所述抗体或功能部分、衍生物或类似物与CD137的结合还与包含CD137氨基酸序列的Val71的氨基酸相关联。
术语“Arg66”是指CD137序列在位置66处的精氨酸残基。术语“Gly70”是指根据SEQID NO 117的CD137序列在位置70处的甘氨酸残基。术语“Val71”是指CD137序列在位置71处的缬氨酸残基。术语“Phe72”是指CD137序列在位置72处的苯丙氨酸残基。
在某些实施方案中，本公开的多特异性抗体包含有包含根据SEQ ID NO:109的共同轻链的结合位点，具有0-5个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合。在某些实施方案中，每个结合位点包含根据SEQ ID NO:109的共同轻链，具有0-5个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合。
在某些实施方案中，如本文所述的多特异性抗体包含共同轻链可变结构域，优选地根据SEQ ID NO:110的共同轻链可变区，具有0-5个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合，优选地具有0、1、2、3或4个，更优选地具有0、1、2或3个，更优选地具有0、1或2个，最优选地具有0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，如本文所述的多特异性抗体包含共同轻链恒定结构域，优选地根据SEQ ID NO:111的共同轻链恒定区，具有0-5个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合。根据本公开的术语‘共同轻链(common lightchain)’是指可相同或具有一些氨基酸序列差异而全长抗体的结合特异性不受影响的轻链。例如，有可能在如本文所用的共同轻链的定义的范围内的是，制备或发现不相同但功能上仍然等效的轻链，例如，通过引入和测试保守氨基酸变化、当与重链配对时不会或仅部分有助于结合特异性的区域中的氨基酸变化等。在添加或不添加术语‘重排’的情况下，术语‘共同轻链’、‘共同LC’、‘cLC’、‘单个轻链’在本文中全部可互换使用。在添加或不添加术语‘重排’的情况下，术语‘共同轻链可变区’、‘共同VL’、‘共同LCv’、‘cLCv’、‘单个VL’在本文中全部可互换使用。在本公开的某些实施方案中，多特异性抗体具有共同轻链(可变区)，其可以与至少两条，并且优选地多条具有不同结合特异性的重链(可变区)组合，以形成具有功能性抗原结合结构域的抗体(WO2004/009618、WO2009/157771)。在某些实施方案中，共同轻链(可变区)是人轻链(可变区)。在某些实施方案中，共同轻链(可变区)具有种系序列。在某些实施方案中，种系序列是轻链可变区，其经常用于人类谱系(repertoire)中并且具有良好的热力学稳定性、产率和溶解度。在某些实施方案中，共同轻链是重排的种系人κ轻链IgVκ1-39*01/IGJκ1*01(SEQ ID NO 109)。在某些实施方案中，共同轻链可变区是重排的种系人κ轻链IgVκ1-39*01/IGJκ1*01的可变区。在某些实施方案中，共同轻链包含如SEQ IDNO 110所呈现的轻链可变区，具有0-5个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合，优选地具有0、1、2、3或4个，更优选地具有0、1、2或3个，更优选地具有0、1或2个，最优选地具有0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。在某些实施方案中，共同轻链还包含轻链恒定区，优选地κ轻链恒定区。编码共同轻链的核酸可以针对用于表达共同轻链蛋白的细胞系统进行密码子优化。编码核酸可以偏离种系核酸序列。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体是全长抗体或抗体片段，例如Fab片段或单链可变片段(scFv)。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体是全长抗体。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体是IgG。在某些实施方案中，多特异性抗体是没有Fc效应子功能的IgG1分子。
Fc区介导抗体的效应子功能，诸如补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。根据治疗性抗体或Fc融合蛋白应用，可能需要降低或增加效应子功能。减少的效应子功能在本公开中是优选的。当如本公开的一些实施方案中那样激活、增强或刺激免疫反应时，可能希望降低的效应子功能。效应子功能降低的抗体可用于靶向免疫细胞的细胞表面分子等。在某些实施方案中，本公开的多特异性抗体的CH2区被工程化以降低抗体的ADCC和/或CDC活性。在某些实施方案中，多特异性抗体的CH3区被工程化以促进重链的异二聚化。
效应子功能降低的抗体优选地是包含修饰的CH2/下铰链区的IgG抗体，例如以降低Fc-受体相互作用或降低C1q结合。在某些实施方案中，本公开的抗体是具有突变CH2和/或下铰链结构域的IgG抗体，使得多特异性IgG抗体与Fc-γ受体的相互作用降低。在某些实施方案中，本公开的CH2区包含根据SEQ ID NO:114的氨基酸序列，具有0-5个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合。在某些实施方案中，本公开的铰链区包含根据SEQ ID NO:113的氨基酸序列，具有0-5个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合。
在某些实施方案中，多特异性抗体的CH3区被工程化以促进重链的异二聚化。在某些实施方案中，存在这些变异以基本上仅产生多特异性全长IgG分子，其具有在位置351和366处的氨基酸取代，例如在第一CH3结构域的L351K和T366K(根据EU编号来编号)(‘KK-变体’重链)，以及在位置351和368处的氨基酸取代，例如在第二CH3结构域的L351D和L368E(‘DE-变体’重链)，或反之亦然。DE-变体重链(DE-DE同源二聚体)或KK变体重链(KK-KK同源二聚体)的同源二聚化几乎不发生，因为相同重链之间的CH3-CH3界面中带电荷的残基之间的排斥强烈。在某些实施方案中，本公开的多特异性抗体包含根据SEQ ID NO 115和SEQ IDNO 116的CH3结构域，具有0-5个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合，条件是DE/KK变体不改变。
在癌症选自携带高度MSI改变的任何实体瘤；子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是PD-L1高表达的NSCLC；和乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)的某些实施方案中，本公开的多特异性抗体以10-1200mg，优选地10-600mg、25-600mg、10-300mg或25-300mg，更优选地25-150mg或25-100mg，最优选地25-75mg的剂量施用。在癌症选自携带高度MSI改变的任何实体瘤；宫颈癌，诸如PD-L1阳性宫颈癌或PD-L1高表达的宫颈癌；子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)，或PD-L1阳性NSCLC，或PD-L1高表达的NSCLC；脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)的某些实施方案中，本公开的多特异性抗体以10-1200mg、或10-600mg、或25-600mg、或10-300mg、或25-300mg、或10-75mg、或10-50mg、或25-150mg、或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg的剂量施用。在癌症选自携带高度MSI改变的任何实体瘤；子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)的某些实施方案中，本公开的多特异性抗体以50-100mg或75-125mg的剂量施用。在癌症选自携带高度MSI改变的任何实体瘤；宫颈癌，诸如PD-L1阳性宫颈癌或PD-L1高表达的宫颈癌；子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)，或PD-L1阳性NSCLC，或PD-L1高表达的NSCLC；脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)的某些实施方案中，多特异性抗体以25-50mg、25-75mg、50-100mg或75-125mg的剂量施用。在癌症选自携带高度MSI改变的任何实体瘤；子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是PD-L1高表达的NSCLC；和乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)的某些实施方案中，本公开的多特异性抗体以25mg、50mg、75mg或100mg的剂量施用。在癌症选自携带高度MSI改变的任何实体瘤；宫颈癌，诸如PD-L1阳性宫颈癌或PD-L1高表达的宫颈癌；子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)，或PD-L1阳性NSCLC，或PD-L1高表达的NSCLC；脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)的某些实施方案中，多特异性抗体以10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、75mg或100mg的剂量施用。
在癌症选自携带高度MSI改变的任何实体瘤；子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)的某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以10-1200mg，优选地10-600mg、25-600mg、10-300mg或25-300mg，更优选地25-150mg或25-100mg，最优选地50-100mg的固定剂量施用。在癌症选自携带高度MSI改变的任何实体瘤；宫颈癌，诸如PD-L1阳性宫颈癌或PD-L1高表达的宫颈癌；子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)，或PD-L1阳性NSCLC，或PD-L1高表达的NSCLC；脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)的某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以10-1200mg、或10-600mg、或25-600mg、或10-300mg、或25-300mg、或25-150mg、或25-100mg、或25-75mg、或25-50mg的固定剂量施用。在癌症选自携带高度MSI改变的任何实体瘤；子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)的某些实施方案中，本公开的多特异性抗体以50mg、75mg或100mg的剂量施用。在癌症选自携带高度MSI改变的任何实体瘤；宫颈癌，诸如PD-L1阳性宫颈癌或PD-L1高表达的宫颈癌；子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)，或PD-L1阳性NSCLC，或PD-L1高表达的NSCLC；脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)的某些实施方案中，多特异性抗体以10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、75mg或100mg的剂量施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以固定剂量施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以50-150mg、优选地75-150mg、更优选地100-150mg的剂量或固定剂量施用。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以50-150mg、或75-150mg、或100-150mg的剂量或固定剂量施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以75-125mg的剂量或固定剂量施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以50-100mg或优选地75-100mg的剂量或固定剂量施用。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以50-100mg或75-100mg的剂量或固定剂量施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以50-75mg的剂量或固定剂量施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以10-50mg或优选地25-50mg的剂量或固定剂量施用。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以10-50mg或25-50mg的剂量或固定剂量施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体每周施用一次、每两周施用一次或每三周施用一次。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体每两周施用一次。在某些实施方案中，如果根据本公开的用途或方法的多特异性抗体每周施用一次，则多特异性抗体以10-100mg、优选地15-75mg的剂量施用。在某些实施方案中，如果根据本公开的用途或方法的多特异性抗体每周施用一次，则多特异性抗体以10-100mg或15-75mg，诸如15-50mg、或15-40mg、或15-30mg、或15-25mg的剂量施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以固定剂量每两周施用一次。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以25、30、35、40、45或50mg的剂量或固定剂量每两周施用一次。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以25mg的剂量或固定剂量每两周施用一次。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体以50mg的剂量或固定剂量每两周施用一次。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体呈单一剂疗法施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体通过静脉内施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体在30分钟至4小时、优选地1至3小时、最优选地2小时的时间段内施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体在30分钟至4小时、优选地1至3小时、最优选地2小时的时间段内施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体在28天周期中每14天在2小时的时间段内以固定剂量静脉内施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体在28天周期中每14天在2小时的时间段内以25mg的固定剂量静脉内施用。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体在28天周期中每14天在2小时的时间段内以30mg的固定剂量静脉内施用。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体在28天周期中每14天在2小时的时间段内以40mg的固定剂量静脉内施用。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体在28天周期中每14天在2小时的时间段内以50mg的固定剂量静脉内施用。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体在28天周期中每14天在2小时的时间段内以60mg的固定剂量静脉内施用。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体在28天周期中每14天在2小时的时间段内以70mg的固定剂量静脉内施用。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体在28天周期中每14天在2小时的时间段内以75mg的固定剂量静脉内施用。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体被配制为浓度为1mg/mL至100mg/mL、优选地为或约20mg/mL的液体。在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体被配制为浓度为1mg/mL至100mg/mL或为或约20mg/mL的液体。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体在施用抗组胺剂、非甾体抗炎药物(NSAID)、麻醉剂、静脉输液、退热剂、支气管扩张药、氧气、皮质类固醇(IV/口服)、血管加压剂或其任何组合之前、同时或更优选地之后施用，以减少输注相关反应。如果发生输液相关反应，可以为受试者选择以所指示物质的术前用药，以预防和减轻其发生率和严重程度。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体在受试者已经用针对晚期转移性疾病的标准护理疗法诸如化学疗法、免疫疗法或靶向疗法预治疗之后施用。
在某些实施方案中，将根据本公开的用途或方法的多特异性抗体施用于尚未用抗PD-L1剂诸如抗PD-L1抗体或T细胞激动剂治疗的受试者。
在某些实施方案中，癌症选自：子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)。在某些实施方案中，癌症选自：携带高度MSI改变的实体瘤；宫颈癌，诸如PD-L1阳性宫颈癌或PD-L1高表达的宫颈癌；子宫内膜癌，诸如高度MSI子宫内膜癌；肺癌，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)，或PD-L1阳性NSCLC，或PD-L1高表达的NSCLC；脑癌，诸如胶质母细胞瘤；和乳腺癌，诸如转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)。
携带高度MSI改变的实体瘤包括例如但不限于高度MSI结肠直肠癌、高度MSI胃癌、高度MSI乳腺癌、高度MSI前列腺癌、高度MSI膀胱癌、高度MSI卵巢癌、高度MSI子宫内膜癌(endometrial cancer)、高度MSI子宫内膜癌(endometrial carcinoma)、胰腺导管腺癌、滤泡性甲状腺癌和肾上腺皮质癌。
PD-L1表达由本领域普通临床医生确定，参见de Ruiter等人(2021)的示例性方法，其整体并入本文。如通过这些方法中的任何一种所确定的高表达应构成用于本公开的目的的高表达。当通过肿瘤比例评分(TPS)进行评估时，TPS评分大于等于1％为PD-L1阳性癌症。当通过组合的阳性评分(CPS)进行评估时，评分大于或等于1％为PD-L1阳性癌症。当使用肿瘤比例评分(TPS)确定时，如果PD-L1表达评分为10％或更高、20％或更高、30％或更高、40％或更高或50％或更高，则癌症为高PD-L1的。当使用组合的阳性评分(CPS)确定时，如果PD-L1表达评分为5％或更高、15％或更高或20％或更高，则癌症为高PD-L1的。如果通过多种此类方法进行评估，如果任何一种或多种方法将肿瘤鉴定为PD-L1阳性或高PD-L1的，则其符合本公开的标准。
在某些实施方案中，受试者尚未接受过免疫检查点抑制剂的先前治疗。在某些实施方案中，受试者尚未接受过免疫检查点抑制剂的先前治疗并且正在针对高度MSI癌症进行治疗。在某些实施方案中，受试者尚未接受过免疫检查点抑制剂的先前治疗并且正在针对子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌进行治疗。在某些实施方案中，受试者尚未接受过免疫检查点抑制剂的先前治疗并且正在针对肺癌，特别是非小细胞肺癌进行治疗。在某些实施方案中，受试者尚未接受过免疫检查点抑制剂的先前治疗并且正在针对乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)进行治疗。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体增加CD8+T细胞的数目，特别是在乳腺癌中，更特别是在携带人MDA-MB-231肿瘤的免疫缺陷小鼠中增加CD8+T细胞的数目。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体的毒性显著低于乌瑞芦单抗和阿替利珠单抗的组合，优选地如在同一研究中所确定，特别是在乳腺癌中，更特别是在携带人MDA-MB-231肿瘤的免疫缺陷小鼠中所确定。
在某些实施方案中，根据本公开的用途或方法的多特异性抗体不诱导移植物抗宿主病。
如本文所用的术语“抗体”意指蛋白质分子，优选地属于免疫球蛋白类别的蛋白质，其含有结合抗原上的表位的一个或多个可变结构域，其中此类结构域源自抗体的可变结构域或与抗体的可变结构域共享序列同源性。用于治疗用途的抗体优选地尽可能接近待治疗受试者的天然抗体(例如，用于人受试者的人抗体)。抗体结合可以特异性和亲和力来表示。特异性决定哪种抗原或其表位被结合结构域特异性结合。亲和力是与特定抗原或表位的结合强度的量度。诸如本公开的多特异性抗体的抗体通常包含天然抗体的恒定结构域(Fc部分)，其可以如本文别处所述地进行工程化，例如以降低ADCC和/或CDC活性。
“多特异性抗体”是指包含具有不同抗原或表位特异性的至少两个结合位点的抗体。在某些实施方案中，一个或多个抗原结合位点包含免疫球蛋白VH/VL对。在某些实施方案中，每个抗原结合位点包含免疫球蛋白VH/VL对。
在某些实施方案中，根据本公开的多特异性抗体具有不超过两个抗原结合位点。这意味着，此类多特异性抗体的抗原结合部分由两个抗原结合位点组成，不存在额外的抗原结合位点。在某些实施方案中，两个抗原结合位点中的每一个均包含免疫球蛋白VH/VL对。
在某些实施方案中，每个VH/VL对中的VL是相似的。在某些实施方案中，每个VH/VL对中的VL是相同的。在某些实施方案中，多特异性抗体是全长抗体，其具有结合CD137的细胞外部分的一条重链/轻链(H/L)组合和结合B7家族成员的细胞外部分的一条H/L链组合。在某些实施方案中，所述第一H/L链组合中的轻链与所述第二H/L链组合中的轻链相似。在某些实施方案中，第一和第二H/L链组合中的轻链是相同的。
在某些实施方案中，多特异性抗体是双特异性抗体。
术语‘双特异性抗体’意指抗体的一个部分结合抗原上的一个表位，而第二部分结合同一抗原或不同抗原上的不同表位。不同的表位通常存在于不同的抗原上。然而，不同的表位也可以存在于同一抗原上。根据双特异性抗体所识别的两种抗原的表达水平、(亚)细胞定位和化学计量，抗体的两个Fab臂可能或可能不同时结合它们的表位。双特异性抗体的一个臂通常包含一个抗体的可变结构域，并且另一个臂包含另一抗体的可变结构域(即，双特异性抗体的一个臂通过一条重链与一条轻链配对而形成，而另一个臂通过不同的重链与轻链配对而形成)。在某些实施方案中，本公开的双特异性抗体的重链可变区彼此不同，而轻链可变区在本公开的双特异性抗体中相同。其中不同重链可变区与相同或共同轻链可变区缔合的双特异性抗体也称为具有共同轻链可变区(cLcv)的双特异性抗体。在某些实施方案中，轻链恒定区也是相同的。此类双特异性抗体被称为具有共同轻链(cLc)。
某些优选的实施方案是具有IgG形式的免疫球蛋白，提供了以下优点，即与多价化合物相比，根据本发明的二价结合分子/抗体/变体的半衰期通常更长。此外，与多价化合物相比，根据本发明的二价结合分子的免疫原性通常较低。根据这些实施方案的分子/抗体/变体优选地维持天然IgG的结构，并且因此维持与天然IgG的结构相关联的所有益处。
如本文所述的抗体或多特异性抗体的“变体”包括抗体或多特异性抗体的功能部分、衍生物和/或类似物。变体可以是抗体片段，例如Fab片段。变体可以是单链可变片段(scFv)。所述变体维持抗体的结合特异性。所述功能部分、衍生物和/或类似物维持抗体的结合特异性。结合特异性由结合如本文所述的第一膜蛋白和第二膜蛋白的细胞外部分的能力定义。变体可以相对于给定氨基酸序列(例如SEQ ID NO.)具有氨基酸插入、缺失、取代或其组合，相对于给定SEQ ID NO的氨基酸序列，至多15个，优选地0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个，更优选地0、1、2、3、4或5个，更优选地0、1、2、3或4个，更优选地0、1、2或3个，更优选地0、1或2个，最优选地0或1个氨基酸插入、缺失、取代或其组合。
如本文所用，术语“抗原结合位点”意指结合分子或抗体的特异性结合抗原表位的位点。此类抗原结合位点优选地来源于抗体的可变结构域，特别是其CDR区，或与其具有序列同源性。在一些优选的实施方案中，所述抗原结合位点是由免疫球蛋白VH/VL对形成的免疫球蛋白可变结构域。在其他实施方案中，所述抗原结合位点来源于抗体模拟物，诸如来源于亲和抗体分子、affilin、affimer、affitin、alphabody、anticalin、avimer、DARPin、fynomer、kunitz结构域肽或单体，它们先前在本文中有所描述。
根据本发明，术语‘全长’被定义为包含基本上完整的抗体，不含一个或多个人工添加的大小大于20个氨基酸残基的部分，例如额外的抗原结合位点、或额外的激活位点、或额外的配体、或额外的配体结合部分。然而，全长抗体不一定具有完整抗体的所有功能。为避免疑义，全长抗体含有两条重链和两条轻链。每条链包含恒定(C)区和可变(V)区，它们可以分解为针对重链指定为CH1、CH2、CH3、VH以及针对轻链指定为CL、VL的结构域。重链的结构域优选地以天然抗体的顺序存在(VHCH1-CH2-CH3；意指VH结构域与CH1结构域相邻，之后是CH2结构域，随后是CH3结构域)。轻链的结构域也优选地以天然抗体的顺序存在(VL-CL；意指VL结构域与CL结构域相邻)。抗体经由Fab片段部分中包含的可变结构域与抗原结合。抗体可以通过恒定结构域，主要通过Fc部分与免疫系统的分子和细胞相互作用。
在某些实施方案中，全长IgG抗体是优选的，因为其具有典型有利的半衰期，并且出于免疫原性的原因希望尽量接近完全自体同源(人)分子。在某些实施方案中，本公开的多特异性抗体是全长IgG1、全长IgG2、全长IgG3或全长IgG4抗体。
全长抗体涵盖其中可能存在提供所需特征或仅替代原始链中的特征的突变的抗体。此类突变通常不是任何区域的实质部分的缺失。然而，其中一个或几个氨基酸残基被插入、缺失、取代或其组合而基本上不改变所得抗体的抗原结合特征的抗体涵盖在术语“全长抗体”内。例如，IgG抗体可以在恒定区中具有1-20个氨基酸残基插入、取代、缺失或其组合。
实施例
实施例1：结合PD-L1和CD137的多特异性抗体。
如WO2018/056821中所述获得包含如表1中提及的重链可变区的多特异性抗体。
表1：结合CD137和PD-L1的多特异性抗体的重链可变区的SEQ ID NO。
实施例2-子宫内膜肿瘤外植体中关于T细胞功能的体外活性
为了研究在治疗相关条件下结合CD137和PD-L1的多特异性抗体的活性，对含有肿瘤特异性效应因子T细胞和调控T细胞(Treg)的新鲜肿瘤外植体进行了评估。
将五个手术切除的原发性子宫内膜肿瘤分离成单细胞悬浮液。然后通过流式细胞术分析肿瘤样品的细胞计数，或在存在可溶性抗CD3抗体的情况下将其与结合CD137和PD-L1的多特异性抗体或参考抗体一起孵育，以测量IFNγ产生。可以使用本文所述的结合CD137和PD-L1的任何多特异性抗体，包括包含MF6797和MF7702的VH的抗体，如本文所例示的。参考抗体包括单特异性乌瑞芦单抗类似物、单特异性阿替利珠单抗类似物以及乌瑞芦单和阿替利珠单抗类似物的组合。阿替利珠单抗类似物是基于WO 2010/077634中公开的信息制备的。用于制备乌瑞芦单抗类似物的信息获自WO 2005/035584。
肿瘤样品用18色流式细胞术表型分析组套染色。使用对死细胞的染色(Biolegend，目录号423110)将活细胞与死细胞区分开来。通过首先分离CD45+细胞(BDBiosciences，目录号560178)，然后排除CD14+细胞(Thermo Fisher Scientific，目录号15-0149-42)和CD19+细胞(Biolegend，目录号302210)，然后选择CD3+细胞(BDBiosciences，目录号563546)来鉴定T细胞。然后将T细胞分离成CD4+细胞(BDBiosciences，目录号564305)和CD8+细胞(BD Biosciences，目录号564804)。通过双阳性FoxP3染色(Thermo Fisher Scientific，目录号25-4777-42)和CD25+细胞(BDBiosciences，目录号563159)将CD4+进一步分离成Treg细胞。然后通过以下的阳性表达对CD4+Treg-、Treg+和CD8+T细胞亚组进行分类：CD226(Biolegend，目录号338330)、ICOS(Thermo Fisher Scientific，目录号62-9948-42)、CTLA-4(BD Biosciences，目录号555853)、CD137(BD Biosciences，目录号745256)、OX40(Biolegend，目录号350018)、Lag-3(Biolegend，目录号369312)、Tim-3(BD Biosciences，目录号565564)、IL-10(Biolegend，目录号501411)、GITR(BD Biosciences，目录号747661)和PD-L1(BD Biosciences，目录号565188)。染色样品在LSR Fortessa X-20细胞分析仪(BD Biosciences)上运行，并使用荧光减一(FMO)对照绘制门。
CD3+T细胞的百分比；CD4+、CD8+和Treg亚组的比例；以及IFNγ产生水平在肿瘤样品之间是不均一的(图1；上侧组)。用多特异性抗体的治疗相对于阴性对照抗体，增加所有肿瘤样品中的IFNγ产生，并且相对于比较物乌瑞芦单抗和阿替利珠单抗类似物以及其组合，在较小程度上增加所有肿瘤样品中的IFNγ产生。即使在高Treg数目的情况下也观察到这种效果(图1；下侧组)。
实施例3-携带人A549肿瘤的免疫缺陷小鼠中的体内功效
在鼠异种移植模型中进行结合CD137和PD-L1的多特异性抗体的体内功效评估。可以使用本文所述的结合CD137和PD-L1的任何多特异性抗体，包括包含MF6797和MF7702的VH的抗体，如本文所例示的。这种多特异性抗体的结合臂不与PD-L1和CD137的鼠同系物交叉反应。因此，使用了人源化鼠异种移植模型。在此模型中，将类似于患者肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的人转基因Ly95 T细胞过继转移到携带人A549肿瘤的免疫缺陷小鼠中。这允许在模拟人类肿瘤微环境的非人模型中研究抗体治疗对此类TIL的影响。NSCLC细胞系A549在适当的HLA环境中表达NY-ESO抗原，并针对研究进行了修饰以稳定表达高水平的PD-L1。Ly95细胞表达PD-1和CD137。
NSG小鼠(6-8周龄；The Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)首先皮下接种5×106个A549-A2-ESO肿瘤细胞，所述肿瘤细胞等体积悬浮在100μL无血清培养基和matrigel膜基质(Corning)中。建立肿瘤(平均体积150mm3)之后，将小鼠随机分为六个组，每组七只小鼠，由此一个组接受单次静脉内尾部静脉注射单独PBS，并且五个组注射含有10×106个NY-ESO1反应性Ly95 TCR构建体表达人T细胞的PBS。随后每五天用PBS、阿替利珠单抗(5mg/kg)、乌瑞芦单抗类似物(5mg/kg)、阿替利珠单抗和乌瑞芦单抗类似物的等摩尔混合物(5mg/kg)或多特异性抗体(5mg/kg)腹膜内治疗接受了肿瘤特异性转基因Ly95 T细胞的过继转移的五个组。在四周的时间段里，使用研究日志系统每周记录肿瘤体积两次。
在植入A549 PD-L1hi细胞的小鼠中，与对照组相比，用乌瑞芦单抗类似物、阿替利珠单抗或乌瑞芦单抗类似物和阿替利珠单抗的组合以及Ly95细胞的治疗未显著改变肿瘤生长(图2中的A)。所有用多特异性抗体治疗的小鼠都能够控制肿瘤生长(图2中的A)。重要的是，多特异性抗体依赖性肿瘤生长抑制明显与过继转移的huCD3+Ly95细胞对于肿瘤相对于血液的偏态分布(图2中的B)以及与用对照治疗的小鼠相比，肿瘤内NY-ESO抗原特异性T细胞增加(图2中的C)相关联。
实施例4-携带人MDA-MB-231肿瘤的免疫缺陷小鼠中的体内功效
为了评估在异质T细胞群的情境下使用结合CD137和PD-L1的多特异性抗体的治疗的影响，将人CD34+造血干细胞植入NSG小鼠中，然后移植表达PD-L1的人MDA-MB-231乳腺癌细胞系。可以使用本文所述的结合CD137和PD-L1的任何多特异性抗体，包括包含MF6797和MF7702的VH的抗体，如本文所例示的。
为了得到人干细胞植入的NSG小鼠，免疫缺陷NSG小鼠(6-8周龄；The JacksonLaboratory,Bar Harbor,ME)接受了15mg/kg腹腔内白消安(Busilvex,Pierre Fabre)，并在24小时后进行含有1×105个人CD34+脐带血细胞(购自STEMCELL Technologies)的静脉内注射，如先前所述(Ishikawa F.等人,Development of functional human blood andimmune systems in NOD/SCID/IL2receptorγchain null mice.Blood.2005年1月9日；106(5):1565-73)。所述实验仅包括外周血中具有>25％huCD45+细胞并且T细胞水平高于80计数/μL的小鼠。小鼠皮下接种总计3×106个MDA-MB-231肿瘤细胞，所述肿瘤细胞等体积悬浮在100μL无血清培养基和matrigel基质(Corning)中。当肿瘤达到大约80-100mm3时，将小鼠随机分为以下各组(每组n＝7)：1)Fc沉默的IgG1对照(5mg/kg)；2)阿替利珠单抗(5mg/kg)；3)乌瑞芦单抗类似物(5mg/kg)；4)阿替利珠单抗和乌瑞芦单抗类似物的等摩尔混合物(5mg/kg)；5)派姆单抗(5mg/kg)；和6)结合CD137和PD-L1的多特异性抗体(0.5和5mg/kg)。将抗体稀释于PBS(Life Technologies)中并腹膜内施用。动物每5天腹膜内给药一次，持续31天。使用卡尺测量肿瘤，并且通过使用以下公式将它们同化为椭圆体来计算肿瘤体积：l(长度)×w2(宽度)×1/2。统计显著性由单因素ANOVA确定。在整个研究过程中还监测体重。
在接受对照IgG的动物中，肿瘤在前40天内逐渐生长，之后在大多数动物中观察到更快速的生长动力学(图3A中的a)。用CD137激动剂乌瑞芦单抗类似物治疗的组显示出与对照非常相似的肿瘤生长模式(图3A中的c)。在用派姆单抗(图3A中的f)、阿替利珠单抗(图3A中的d)或阿替利珠单抗和乌瑞芦单抗类似物的组合(图3A中的e)治疗的组中，一些小鼠的肿瘤生长得到了控制，但在观察期结束时，所有存活小鼠的肿瘤都在快速生长。相比之下，用多特异性抗体治疗的所有动物都经历了肿瘤控制，包括两次完全反应，并在治疗期结束时显示出较慢的生长动力学(图3A中的b)。用低10倍剂量的多特异性抗体(0.5mg/kg)治疗的小鼠队列也显示出相似的肿瘤生长抑制(图3A中的b)。与NY-ESO模型一致，对此模型中TIL的分析显示，用多特异性抗体治疗导致肿瘤中CD8+T细胞的频率增加(图3B；上侧)。乌瑞芦单抗类似物治疗减少了肿瘤中CD8+细胞的数目，并且这与CD4+T细胞和PD-L1+单核细胞的频率增加相关联。这些结果表明，体外用多特异性抗体观察到的有效T细胞激动作用也转化为体内PD-L1依赖性肿瘤控制。
还注意到，派姆单抗、阿替利珠单抗或乌瑞芦单抗类似物组中的一些小鼠以及组合治疗组中的所有小鼠都表现出褶皱的皮毛和皮肤以及弓背的姿势，在一些情况下，这与过度体重减轻相关联(图4)，需要安乐死(每组3-5只小鼠)。对照组或多特异性抗体组中没有动物表现出应激迹象(但是多特异性抗体组中的一只动物因无关原因被安乐死)。具体地，观察到乌瑞芦单抗类似物和阿替利珠单抗的组合治疗(图4中的e)的毒性显著比对照或用多特异性抗体的治疗(图4中的b)的毒性大。
实施例5-在具有晚期或转移性恶性肿瘤的参与者中的针对靶向CD137和PD-L1的多特异性抗体的剂量发现、安全性和初步功效的1期剂量递增单剂研究
治疗组和持续时间：
发起了开放标签、非随机、1期研究，以确定在具有晚期或转移性恶性肿瘤的成年参与者中靶向CD137和PD-L1的多特异性抗体的安全性、耐受性和初步功效。
以下多特异性抗体适用于此研究并且用于本发明的方法：MF6797 xMF7702、MF6763 x MF5442、MF6754 x MF5561、MF6785 x MF5439和MF6785x MF5442，优选地MF6797x MF7702。每个多特异性抗体包含：两个VH，如由分别能够结合CD137和PD-L1的MF编号所指定；具有KK/DE CH3异源二聚化结构域的Fc区，如分别通过SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:116所指示；CH2结构域，如通过SEQ ID NO:114所指示；CH1结构域，如SEQ ID NO:112所指示；和共同轻链，如SEQ ID NO:109所指示。
进行剂量递增研究以确定在具有晚期或复发/转移性实体瘤的参与者中多特异性抗体的MTD和/或RDE。参与者每2周接受递增剂量的上述示例性多特异性抗体之一(在本文中进一步称为“研究抗体”)，直到达到MTD或RDE。每个治疗周期的持续时间为28天。总共计划了10个剂量：0.4mg、1.2mg、3.5mg、10mg、25mg、75mg、150mg、300mg、600mg和1200mg。
总体研究设计
此为开放标签1期剂量递增研究，以确定具有晚期或转移性恶性肿瘤的成年参与者中研究抗体的安全性、耐受性和初步功效，将分两部分进行。研究抗体将在28天的周期中每14天在2小时内以固定剂量静脉内施用。
第1部分：剂量递增
第1部分是剂量递增，以确定在具有晚期或转移性实体瘤的参与者中每14天施用的研究抗体的MTD和/或RDE，不管PD-L1表达如何。在剂量递增期间，参与者队列将用研究抗体治疗，直到达到MTD或确定较低的推荐剂量。剂量递增将通过适应性BLRM指导，遵循超剂量控制原则递增。
在剂量递增过程中，可以在低于下一个剂量水平或MTD的任何计划剂量或中间剂量水平下入组最多6名参与者的额外队列，以便更好地表征安全性、PK和/或药效学活性。在第1部分的所有剂量水平上，最多可以入组5名具有给定肿瘤类型的参与者，除非医疗监测人员批准该肿瘤类型的额外入组。
第1部分入组将从剂量水平1(研究抗体为0.4mg IV)开始，基于确定的标准选择递增或递减。直到第28天(包括第28天)发生的剂量限制性毒性将指导剂量递增/递减和RDE或MTD的确定。然而，在评估安全性时，将考虑研究治疗开始后90天内的迟发性免疫介导的毒性，并且因此，随后可能基于第28天之后变得明显的相关毒性确定较低的RDE或MTD。如果最低剂量水平被认为不安全，则第1部分入组将停止。
第2部分：剂量确认/安全性扩大
第2部分是剂量扩大，以通过进一步评估安全性、耐受性、PK、初步抗肿瘤活性和功能靶标接合来确认研究抗体的剂量。
将如下入组具有晚期或转移性肿瘤的参与者，而不管PD-L1表达如何：
·具有抗PD-1疗法复发或难治性NSCLC的参与者；
·具有抗PD-1疗法难治性MSI-H/dMMR肿瘤的参与者；
·具有未接受过免疫疗法的TNBC的参与者；
·来自第1部分的具有肿瘤组织学的参与者，使用研究抗体观察到其初步功效。
可以探索至多两个确定性剂量水平。将基于PK、抗肿瘤和药效学活性(包括受体调节、安全性和耐受性)选择确定性剂量水平。
每个适应症每个确定性剂量水平的初始入组将限于10或20名参与者。如果至少1名参与者在1个或两个确定性剂量水平上有确认的反应，则适应症可以扩大到在不同的剂量水平上总共40名参与者。如果入组第2部分的三个或更多个适应症显示出临床活性(即，前10名参与者中有≥1个确认反应)，则每个适应症可允许扩大至40名参与者。每个适应症的扩大决定将由研究指导委员会决定。
如果如研究指导委员会所确定的，第1部分的临床活性证据不足，则第2部分将仅评估1个剂量。此队列将包含至少20名具有PD-L1阳性肿瘤的参与者，如通过Ventana PD-L1SP263测定所评估，CPS截止值≥1％。如果在第2部分的完全入组之前发现20名参与者具有PD-L1阴性肿瘤，则随后的具有PD-L1阴性肿瘤的参与者将没有资格入组第2部分。
纳入标准
只有适用所有以下标准，参与者才有资格被纳入本研究。
具有NSCLC、MSI-H/dMMR肿瘤或TNBC的参与者必须满足此处针对“所有参与者”列出的所有标准以及下面列出的适用肿瘤专用标准以确认资格。
所有参与者
-能够理解并愿意为研究签署书面ICF；
-签署知情同意书时至少18岁；
-愿意并能够遵守并顺应所有方案要求，包括所有计划的访视，和方案程序；
-预期寿命≥12周；
-ECOG行为状态为0或1；
-第1部分：组织学或细胞学确认的晚期转移性实体瘤，被认为不适合手术或其他治愈性治疗或程序(如果适用)；
第2部分：参与者必须诊断为以下肿瘤类型之一，并符合适用的肿瘤专用标准：NSCLC、MSI-H/dMMR肿瘤、TNBC或其他在用研究抗体治疗后显示出初步功效的恶性肿瘤；
-根据RECIST v1.1或Lugano标准可测量的疾病；
注意：位于先前照射的区域或经受其他局部疗法的区域中的肿瘤病变在已证明该病变中有明显进展的情况下被认为是可测量的；
-接受了适用于肿瘤类型的针对晚期转移性疾病的先前标准疗法；
-接受了最多四种针对晚期或复发/转移性疾病的先前全身治疗方案(包括化学疗法、免疫疗法和靶向疗法方案)；
-在晚期/转移性环境中接受了最多一种包含免疫疗法方案的先前抗PD-1疗法。
注意：此标准不适用于第2部分中未接受过免疫疗法的TNBC参与者。
-愿意接受治疗前和治疗中肿瘤活检以获得肿瘤组织。
注意：如果出于本研究的目的，计划参与者进行肿瘤活检，并且随后确定无法安全获得肿瘤组织，则参与者仍可入组所述研究；
-仅第2部分：参与者必须在筛选期间从新鲜肿瘤活检获得可评估的PD-L1；
-愿意基于以下标准避免怀孕或生育孩子：
a.男性必须同意在最后一剂研究抗体之后的90天内采取适当的避免生育孩子的预防措施(至少99％的确定性)，并且必须避免在此期间捐献精子。应向参与者传达防止怀孕至少99％有效的允许方法，并确认他们理解；
b.有生育能力的女性在筛选时和第1天第一剂之前的血清妊娠测试必须呈阴性，并且必须同意从筛选到最后一剂研究抗体之后90天采取适当的避免怀孕的预防措施(至少99％的确定性)。应向参与者传达防止怀孕至少99％有效的允许方法，并确认他们理解。有生育能力的女性从第一剂研究抗体之前30天到最后一剂研究抗体之后90天应避免捐献卵母细胞；
c.无生育能力的女性(即，通过子宫切除术和/或双侧卵巢切除术手术绝育或闭经≥12个月且至少50岁)是合格的。
用于具有组织学或细胞学上确认的TNBC的参与者的肿瘤专用标准
-具有组织学或细胞学上确认的HER2阴性/ER阴性/PR阴性乳腺癌有来源文件证明且定义为以下两项：
a.雌激素受体(ER)和孕酮受体(PgR)阴性：在存在样品可表达ER或PgR的证据的情况下(阳性内在对照)，＜1％的肿瘤细胞核具有免疫反应性；
b.根据美国临床肿瘤学会-美国病理学家学会(ASCO/CAP)指南，人表皮生长因子受体2(HER2)呈阴性：免疫组织化学(IHC)0或1，或荧光原位杂交(FISH)阴性(或等同的阴性测试)。具有IHC 2的受试者必须通过荧光原位杂交(FISH)(或等同的阴性测试)呈阴性；
-根据目前的AJCC分期系统不可切除的晚期或转移性TNBC，其不适合局部疗法；
-必须在晚期或转移性环境中，接受了用含紫杉烷的化学疗法方案的先前治疗；
-仅第2部分参与者：必须未接受过先前免疫疗法，包括PD-1、PD-L1、CTLA-4或其他免疫检查点抑制剂，单独或作为组合治疗方案的一部分。
用于具有组织学或细胞学上确认的NSCLC的参与者的肿瘤专用标准
-组织学或细胞学上确认的NSCLC(非鳞状或鳞状)诊断。
a.如果肿瘤仅属于非鳞状组织学，则记录针对EGFR、ALK、BRAF和ROS1的突变或基因重排的测试结果(分子测试目前不是主要鳞状组织学诊断指南的一部分)。如果存在突变或基因排列，则参与者必须在靶向疗法中具有进展或无法耐受；
-根据目前的AJCC分期系统不可切除的晚期或转移性NSCLC，其不适合局部疗法；
-仅第2部分参与者：必须记录了如满足以下标准之一所定义的关于抗PD-1疗法的进展：
a.原发性难治性：必须在晚期或转移性环境中接受了先前抗PD-1疗法(单独或作为组合的一部分)，持续最少12周，并且
具有PD作为对治疗的最佳反应；
b.继发性抗性：必须在晚期或转移性情况下接受了先前抗PD-1疗法(单独或作为组合的一部分)并达到CR、PR或SD，但后来在接受抗PD-1疗法时被确认为PD(之后至少4周(不少于28天)确认PD)。
用于具有确认的MSI-H或dMMR状态的实体瘤适应症的参与者的肿瘤专用标准
-MSI-H或dMMR实体瘤，如通过当地实验室使用IHC或聚合酶链反应方法所确定，并且必须还具有可用于诊断的主要确认的组织；
-被认为是抗PD-1疗法原发性难治的第2部分参与者定义如下：在晚期或转移性环境中接受了先前抗PD-1疗法(单独或作为组合的一部分)，持续最少12周，并且已记录了PD作为他们对治疗的最佳反应。
结果
若干患者入组了这项研究。至少在具有高度MSI子宫内膜癌的患者亚群中观察到了临床活性。在这个亚群中，40岁的患者被诊断为患有高度MSI子宫内膜癌，PD-L1表达为10-50％，在用研究药物治疗之前，接受了卡铂+紫杉醇、顺铂+5FU、表柔比星/环磷酰胺、他莫昔芬和阿霉素的辅助治疗。治疗开始时，靶病变的总和为51mm。研究药物以75mg施用。治疗8周之后，靶病变的总和减少至42mm。
在患有胶质母细胞瘤的患者群体中也观察到了临床活性。在这个亚群中，35岁的患者被诊断为患有胶质母细胞瘤，在用研究药物治疗之前，接受了放射疗法、手术和替莫唑胺。研究药物以25mg施用。患者显示疾病稳定，基线靶病变尺寸为9.88mm x 14.62mm，治疗19个月之后，减少至4.87mm x 6.01mm。
还在患有宫颈癌的患者群体中观察到了临床活性。在这个亚群中，70岁的患者被诊断为患有宫颈癌，在肿瘤细胞上的PD-L1表达为1％并且在肿瘤免疫细胞上为30％，在用研究药物治疗之前，接受了放射疗法、手术、卡铂、紫杉醇和阿瓦斯汀(avastin)。治疗开始时，靶病变的总和为40mm。研究药物以50mg施用。治疗16周之后，靶病变的总和减少至26mm。根据RECIST v1.1，如研究人员所确定，即使在中止用研究药物的治疗之后，此患者也实现部分反应(35％减少)。
序列
SEQ ID NO:1：重链可变区
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNFAMNWVRRAPGQGLEWMGWINTNTGNPTYAQGFTGRFVFSLDTSVNTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDWGVIGGHYMDVWGKGTTVTVSS
SEQ ID NO:2：来自SEQ ID NO:1的根据Kabat的HCDR1
NFAMN
SEQ ID NO:3：来自SEQ ID NO:1的根据Kabat的HCDR2
WINTNTGNPTYAQGFTG
SEQ ID NO:4：来自SEQ ID NO:1的根据Kabat的HCDR3
DWGVIGGHYMDV
SEQ ID NO:5重链可变区
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDSDGYGPKAFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:6：根据Kabat的HCDR1
SYGIS
SEQ ID NO:7：根据Kabat的HCDR2
WISAYNGNTNYAQKLQG
SEQ ID NO:8：根据Kabat的HCDR3
DSDGYGPKAFDY
SEQ ID NO:9重链可变区
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPDDSDTRYSPSFQGQVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDTAMYYCASFYTGIVGATGAFDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:10：根据Kabat的HCDR1
SYWIG
SEQ ID NO:11：根据Kabat的HCDR2
IIYPDDSDTRYSPSFQG
SEQ ID NO:12：根据Kabat的HCDR3
FYTGIVGATGAFDV
SEQ ID NO:13重链可变区
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSDAISWVRQAPGQGLEWMGGMIPILGTANYAQKFQGRVTITADRSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCVRGATYYYGSGTYYSINWFDPWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:14：根据Kabat的HCDR1
SDAIS
SEQ ID NO:15：根据Kabat的HCDR2
GMIPILGTANYAQKFQG
SEQ ID NO:16：根据Kabat的HCDR3
GATYYYGSGTYYSINWFDP
SEQ ID NO:17重链可变区
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCRASGYTFTNFAMTWVRQAPGQGPEYMGWINTNTGNPTYAQGFTGRFVFSLDTSVNTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDWASVMVRGDLDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:18：根据Kabat的HCDR1
NFAMT
SEQ ID NO:19：根据Kabat的HCDR3
DWASVMVRGDLDY
SEQ ID NO:20重链可变区
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLSELSIHWVRQAPGKGVEWMGGFYPEDVEPIYARKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELNSLRSEDTAVYYCAAEGFDNYGSGIRGNWFDPWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:21：根据Kabat的HCDR1
ELSIH
SEQ ID NO:22：根据Kabat的HCDR2
GFYPEDVEPIYARKFQG
SEQ ID NO:23：根据Kabat的HCDR3
EGFDNYGSGIRGNWFDP
SEQ ID NO:24重链可变区
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSMHWVRQSPGKGLEWMGSFYPEDGETIYAQKFQGRITMTEDTSADTAYMELSSLRSEDTAVYYCATEGVGVIRGNWFDPWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:25：根据Kabat的HCDR1
ELSMH
SEQ ID NO:26：根据Kabat的HCDR2
SFYPEDGETIYAQKFQG
SEQ ID NO:27：根据Kabat的HCDR3
EGVGVIRGNWFDP
SEQ ID NO:28重链可变区
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIFPDDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKPSDTAMYYCVRLGGYSGYAEDFVDFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:29：根据Kabat的HCDR2
IIFPDDSDTRYSPSFQG
SEQ ID NO:30：根据Kabat的HCDR3
LGGYSGYAEDFVDF
SEQ ID NO:31重链可变区
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTKLSMHWVRQAPGKGLEWMGGFEPEDGETINAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATDLRLGASYYYSYMDVWGRGTMVTVSS
SEQ ID NO:32：根据Kabat的HCDR1
KLSMH
SEQ ID NO:33：根据Kabat的HCDR2
GFEPEDGETINAQKFQG
SEQ ID NO:34：根据Kabat的HCDR3
DLRLGASYYYSYMDV
SEQ ID NO:35重链可变区
QITLKESGPTLVKPTQTLTLSCTFSGFSLSTSGMSVGWIRQPPGKALEWLALIYWNDDKYFSPSLKSRLTITKDTSKNQVVLTLTNMDPVDTATYYCAHTLWGSDDVFDVWGQGTMVTVSS
SEQ ID NO:36：根据Kabat的HCDR1
TSGMSVG
SEQ ID NO:37：根据Kabat的HCDR2
LIYWNDDKYFSPSLKS
SEQ ID NO:38：根据Kabat的HCDR3
TLWGSDDVFDV
SEQ ID NO:39重链可变区
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKVSGYSFTNYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWHTLKASDTAMYYCARHQGYSFSGSHIDDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:40：根据Kabat的HCDR1
NYWIG
SEQ ID NO:41：根据Kabat的HCDR2
IIYPGDSDTRYSPSFQG
SEQ ID NO:42：根据Kabat的HCDR3
HQGYSFSGSHIDDY
SEQ ID NO:43重链可变区
EVQLVQSGAEVRKPGESLKISCKGSGYSFTTYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTVYLQWSSLKASDTAMYYCARHAGFIITSQNIDDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:44：根据Kabat的HCDR1
TYWIG
SEQ ID NO:41：根据Kabat的HCDR2
IIYPGDSDTRYSPSFQG
SEQ ID NO:45：根据Kabat的HCDR3
HAGFIITSQNIDDY
SEQ ID NO:46重链可变区
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SEQ ID NO:47：根据Kabat的HCDR2
WINTNTGNPTYAQDFTG
SEQ ID NO:48：根据Kabat的HCDR3
DWGLVAIGYFDY
SEQ ID NO:49重链可变区
QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTTGVGVNWIRQPPGEALEWLALIY
WNDDTYYSPSLKSRLTITKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAHEGIIGFLGGNWFDPWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:50：根据Kabat的HCDR1
TTGVGVN
SEQ ID NO:51：根据Kabat的HCDR2
LIYWNDDTYYSPSLKS
SEQ ID NO:52：根据Kabat的HCDR3
EGIIGFLGGNWFDP
SEQ ID NO:53重链可变区
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SHAMN
SEQ ID NO:55：根据Kabat的HCDR2
WINPNTGNPTYAQGFTG
SEQ ID NO:56：根据Kabat的HCDR3
DRKYVTNWVFAEDFQH
SEQ ID NO:57重链可变区
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SEQ ID NO:58：根据Kabat的HCDR3
DRGYMSNWVFAEYFPH
SEQ ID NO:59重链可变区
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAMNWVRQAPGQGLEWMGWINTNTGNPTYAQGFTGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCATDRGYISSWVFAEDFQHWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:60：根据Kabat的HCDR1
SYAMN
SEQ ID NO:61：根据Kabat的HCDR3
DRGYISSWVFAEDFQH
SEQ ID NO:62重链可变区
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCTASGYTFTSYAMNWVRQAPGQRLEWMACVNPNTGSPTYAQGSTGRFVVSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDRKYVTNWVFAEDFQHWGHGTLVTVSS
SEQ ID NO:63：根据Kabat的HCDR2
CVNPNTGSPTYAQGSTG
SEQ ID NO:64重链可变区
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYAMNWVRQAPGQGLEWMGWMNPNTGNPTYAQGSTGRFVVSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDRKYVTNWVFAEDFQHWGRGTLVTVSS
SEQ ID NO:65：根据Kabat的HCDR1
NYAMN
SEQ ID NO:66：根据Kabat的HCDR2
WMNPNTGNPTYAQGSTG
SEQ ID NO:67重链可变区
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SEQ ID NO:68：根据Kabat的HCDR1
NYAIN
SEQ ID NO:69重链可变区
EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGDTFNTYSITWVRQAPGQGLEWMGSIVPIFGTINNAQKFQGRVTITADKSANTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDNTMVRGVDYYYMDVWGKGTMVTVSS
SEQ ID NO:70：根据Kabat的HCDR1
TYSIT
SEQ ID NO:71：根据Kabat的HCDR2
SIVPIFGTINNAQKFQG
SEQ ID NO:72：根据Kabat的HCDR3
DNTMVRGVDYYYMDV
SEQ ID NO:73重链可变区
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SEQ ID NO:74：根据Kabat的HCDR1
TYAIS
SEQ ID NO:75：根据Kabat的HCDR2
GIIPIFDTPNYAQKFQG
SEQ ID NO:76：根据Kabat的HCDR3
NVRGYSAYDLDY
SEQ ID NO:77重链可变区
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SEQ ID NO:78：根据Kabat的HCDR1
TYGTN
SEQ ID NO:79：根据Kabat的HCDR2
GIIPIFGTANYAQKFQG
SEQ ID NO:80：根据Kabat的HCDR3
GGADMGTLDY
SEQ ID NO:81重链可变区
EVQLVQSGAEVMRPGSSVKVSCKASGGIFNTYTIIWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFDTPNFAQKFQGRLTITADKSTNTAYMELTSLRSEDTAVYYCAREGCNHGVCYPYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:82：根据Kabat的HCDR1
TYTII
SEQ ID NO:83：根据Kabat的HCDR2
GIIPIFDTPNFAQKFQG
SEQ ID NO:84：根据Kabat的HCDR3
EGCNHGVCYPY
SEQ ID NO:85重链可变区
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SEQ ID NO:86：根据Kabat的HCDR1
SYGIT
SEQ ID NO:87：根据Kabat的HCDR2
GIIPIFGTTNYAQKFQG
SEQ ID NO:88：根据Kabat的HCDR3
RRGYSNPHWLDP
SEQ ID NO:89重链可变区
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SEQ ID NO:90：根据Kabat的HCDR1
TYGIL
SEQ ID NO:91：根据Kabat的HCDR3
GGGNYYEFVY
SEQ ID NO:92重链可变区
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SEQ ID NO:93：根据Kabat的HCDR1
TYAIN
SEQ ID NO:94：根据Kabat的HCDR2
RIIPIFDTANYAQKFQG
SEQ ID NO:95：根据Kabat的HCDR3
DETGYSSSNFQH
SEQ ID NO:96重链可变区
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SEQ ID NO:97重链可变区
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SEQ ID NO:98：根据Kabat的HCDR2
GIIPVFGTSKYAQKFQD
SEQ ID NO:99：根据Kabat的HCDR3
DPSFSSSSGWFDP
SEQ ID NO:100重链可变区
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFNTYAINWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFDTANYAQRFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCAKDQTGYSSTLFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:101：根据Kabat的HCDR2
GIIPIFDTANYAQRFQG
SEQ ID NO:102：根据Kabat的HCDR3
DQTGYSSTLFDY
SEQ ID NO:103重链可变区
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTSHAMNWVRQAPGQGLEWMGWINPNTGNPTYAQGFTGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAIDRGYMSNWVFAEYFPHWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:104重链可变区
EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSTYAISWVRQAPGQGLEWMGWIIPIFDTGNYAQKIQGRVTITADKSTSTAYMELTSLRSEDTAVYYCARHDYTNTVDAFDIWGQGTMVTVSS
SEQ ID NO:105：根据Kabat的HCDR2
WIIPIFDTGNYAQKIQG
SEQ ID NO:106：根据Kabat的HCDR3
HDYTNTVDAFDI
SEQ ID NO:107重链可变区
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGDTFRSYGITWVRQAPGQGLEWMGGIIPVFGTTNYAQKFQGRVTITADKSTSTVFMELNSLRSEDTAVYYCARRRGYSNPHWLDPWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:108：根据Kabat的HCDR2
GIIPVFGTTNYAQKFQG
SEQ ID NO:109：人共同轻链IGKV1-39/jk1的氨基酸序列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:110：共同轻链可变结构域的氨基酸序列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGTKVEIKSEQ ID NO:111：共同轻链恒定结构域的氨基酸序列
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:112：CH1的氨基酸序列
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRV
SEQ ID NO:113：铰链的氨基酸序列
EPKSCDKTHTCPPCP
SEQ ID NO:114：CH2的氨基酸序列
APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK
SEQ ID NO:115：具有KK突变的CH3的氨基酸序列
GQPREPQVYTKPPSREEMTKNQVSLKCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:116：具有DE突变的CH3的氨基酸序列
GQPREPQVYTDPPSREEMTKNQVSLTCEVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:117：CD137的氨基酸序列
MGNSCYNIVATLLLVLNFERTRSLQDPCSNCPAGTFCDNNRNQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDWCGPSPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSPQIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSWKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL。
序列表
<110> 美勒斯公司
<120> 用于治疗癌症的多特异性抗体
<130> P4345PC00
<140> NL 2027131
<141> 2020-12-16
<160> 117
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Trp Gly Val Ile Gly Gly His Tyr Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
<400> 2
Asn Phe Ala Met Asn
1 5
<210> 3
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 3
Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr
1 5 10 15
Gly
<210> 4
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 4
Asp Trp Gly Val Ile Gly Gly His Tyr Met Asp Val
1 5 10
<210> 5
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 5
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Asp Gly Tyr Gly Pro Lys Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 6
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
<400> 6
Ser Tyr Gly Ile Ser
1 5
<210> 7
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 7
Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 8
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 8
Asp Ser Asp Gly Tyr Gly Pro Lys Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 9
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Asp Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Phe Tyr Thr Gly Ile Val Gly Ala Thr Gly Ala Phe Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 10
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
<400> 10
Ser Tyr Trp Ile Gly
1 5
<210> 11
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 11
Ile Ile Tyr Pro Asp Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 12
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 12
Phe Tyr Thr Gly Ile Val Gly Ala Thr Gly Ala Phe Asp Val
1 5 10
<210> 13
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asp
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Met Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Thr Tyr Tyr Ser Ile
100 105 110
Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
<400> 14
Ser Asp Ala Ile Ser
1 5
<210> 15
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 15
Gly Met Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 16
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 16
Gly Ala Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Thr Tyr Tyr Ser Ile Asn
1 5 10 15
<210> 17
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Trp Ala Ser Val Met Val Arg Gly Asp Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 18
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
<400> 18
Asn Phe Ala Met
1
<210> 19
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 19
Asp Trp Ala Ser Val Met Val Arg Gly Asp Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 20
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Ser Glu Leu
20 25 30
Ser Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Phe Tyr Pro Glu Asp Val Glu Pro Ile Tyr Ala Arg Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Glu Gly Phe Asp Asn Tyr Gly Ser Gly Ile Arg Gly Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
<400> 21
Glu Leu Ser Ile His
1 5
<210> 22
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 22
Gly Phe Tyr Pro Glu Asp Val Glu Pro Ile Tyr Ala Arg Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 23
Glu Gly Phe Asp Asn Tyr Gly Ser Gly Ile Arg Gly Asn Trp Phe Asp
1 5 10 15
Pro
<210> 24
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 24
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu
20 25 30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ser Phe Tyr Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ile Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Ala Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Glu Gly Val Gly Val Ile Arg Gly Asn Trp Phe Asp Pro Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 25
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
<400> 25
Glu Leu Ser Met His
1 5
<210> 26
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 26
Ser Phe Tyr Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 27
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 27
Glu Gly Val Gly Val Ile Arg Gly Asn Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 28
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 28
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Phe Pro Asp Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Pro Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Leu Gly Gly Tyr Ser Gly Tyr Ala Glu Asp Phe Val Asp Phe
100 105 110
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115 120
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<211> 17
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<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 29
Ile Ile Phe Pro Asp Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 30
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 30
Arg Leu Gly Gly Tyr Ser Gly Tyr Ala Glu Asp Phe Val Asp Phe
1 5 10 15
<210> 31
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 31
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Lys Leu
20 25 30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Phe Glu Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Asn Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Thr Asp Leu Arg Leu Gly Ala Ser Tyr Tyr Tyr Ser Tyr Met Asp
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Val Trp Gly Arg Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
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Lys Leu Ser Met His
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<223> HCDR2
<400> 33
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Gly
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<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
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Thr Leu Thr Leu Ser Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
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Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
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50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
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100 105 110
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<211> 7
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<220>
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<213> 人工序列
<220>
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Thr Leu Trp Gly Ser Asp Asp Val Phe Asp Val
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<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 39
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
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Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
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Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
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Gly
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<213> 人工序列
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 43
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Arg Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
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Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
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65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
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100 105 110
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<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 45
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 46
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe
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Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Asp Phe
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100 105 110
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 47
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Gly
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 48
Asp Trp Gly Leu Val Ala Ile Gly Tyr Phe Asp Tyr
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 49
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Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Thr
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Gly Val Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Glu Ala Leu Glu
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Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
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Cys Ala His Glu Gly Ile Ile Gly Phe Leu Gly Gly Asn Trp Phe Asp
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<220>
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Leu Ile Tyr Trp Asn Asp Asp Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Leu Lys Ser
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 52
Glu Gly Ile Ile Gly Phe Leu Gly Gly Asn Trp Phe Asp Pro
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 53
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His
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Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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<213> 人工序列
<220>
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Gly
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<220>
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<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His
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Gly Trp Ile Asn Pro Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe
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<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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<211> 5
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<213> 人工序列
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<223> HCDR3
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<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 62
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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Gly
<210> 64
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 64
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
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Gly Trp Met Asn Pro Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Ser
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65 70 75 80
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100 105 110
Gln His Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列
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<220>
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<400> 66
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Gly
<210> 67
<211> 125
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<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 67
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
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<220>
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<400> 68
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<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 69
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<211> 5
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<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
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<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
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Gly
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<211> 15
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<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 72
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<210> 73
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 73
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
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100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 74
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
<400> 74
Thr Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 75
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 75
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Asp Thr Pro Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 76
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 76
Asn Val Arg Gly Tyr Ser Ala Tyr Asp Leu Asp Tyr
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<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 77
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Asn Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gly Thr Phe Asn Thr Tyr
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Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ala Asp Met Gly Thr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 78
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
<400> 78
Thr Tyr Gly Thr Asn
1 5
<210> 79
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 79
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 80
Gly Gly Ala Asp Met Gly Thr Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 81
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 81
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Met Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ile Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Thr Ile Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Asp Thr Pro Asn Phe Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Leu Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Cys Asn His Gly Val Cys Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 82
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
<400> 82
Thr Tyr Thr Ile Ile
1 5
<210> 83
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 83
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Asp Thr Pro Asn Phe Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 84
Glu Gly Cys Asn His Gly Val Cys Tyr Pro Tyr
1 5 10
<210> 85
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 85
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Gly Tyr Ser Asn Pro His Trp Leu Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 86
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
<400> 86
Ser Tyr Gly Ile Thr
1 5
<210> 87
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 87
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 88
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 88
Arg Arg Gly Tyr Ser Asn Pro His Trp Leu Asp Pro
1 5 10
<210> 89
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 89
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Ile Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Ile Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gly Asn Tyr Tyr Glu Phe Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 90
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
<400> 90
Thr Tyr Gly Ile Leu
1 5
<210> 91
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 91
Gly Gly Gly Asn Tyr Tyr Glu Phe Val Tyr
1 5 10
<210> 92
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 92
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Ile Pro Ile Phe Asp Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Phe Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Glu Thr Gly Tyr Ser Ser Ser Asn Phe Gln His Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 93
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1
<400> 93
Thr Tyr Ala Ile Asn
1 5
<210> 94
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 94
Arg Ile Ile Pro Ile Phe Asp Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 95
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 95
Asp Glu Thr Gly Tyr Ser Ser Ser Asn Phe Gln His
1 5 10
<210> 96
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 96
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Lys Tyr Val Thr Asn Trp Val Phe Ala Glu Asp Phe
100 105 110
Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 97
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 97
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ser Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Val Phe Gly Thr Ser Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Ser Phe Ser Ser Ser Ser Gly Trp Phe Asp Pro Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 98
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 98
Gly Ile Ile Pro Val Phe Gly Thr Ser Lys Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Asp
<210> 99
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 99
Asp Pro Ser Phe Ser Ser Ser Ser Gly Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 100
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 100
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Asp Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gln Thr Gly Tyr Ser Ser Thr Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 101
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 101
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Asp Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 102
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 102
Asp Gln Thr Gly Tyr Ser Ser Thr Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 103
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 103
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ile Asp Arg Gly Tyr Met Ser Asn Trp Val Phe Ala Glu Tyr Phe
100 105 110
Pro His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 104
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 104
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ile Pro Ile Phe Asp Thr Gly Asn Tyr Ala Gln Lys Ile
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Asp Tyr Thr Asn Thr Val Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 105
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 105
Trp Ile Ile Pro Ile Phe Asp Thr Gly Asn Tyr Ala Gln Lys Ile Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 106
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 106
His Asp Tyr Thr Asn Thr Val Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 107
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 107
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Val Phe Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Phe
65 70 75 80
Met Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Gly Tyr Ser Asn Pro His Trp Leu Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 108
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2
<400> 108
Gly Ile Ile Pro Val Phe Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 109
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人共同轻链IGKV1-39/jk1
<400> 109
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 110
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 共同轻链可变结构域
<400> 110
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 111
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 共同轻链恒定结构域
<400> 111
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 112
<211> 98
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH1
<400> 112
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val
<210> 113
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链
<400> 113
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 114
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CH2
<400> 114
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100 105 110
<210> 115
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有KK突变的CH3
<400> 115
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 116
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有DE突变的CH3
<400> 116
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Asp Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Glu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 117
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD137
<400> 117
Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro
20 25 30
Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys
35 40 45
Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
50 55 60
Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65 70 75 80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
85 90 95
Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu
100 105 110
Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln
115 120 125
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
130 135 140
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Trp Cys Gly Pro Ser
145 150 155 160
Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala Pro
165 170 175
Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala
180 185 190
Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg
195 200 205
Phe Ser Trp Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln
210 215 220
Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser
225 230 235 240
Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250

Claims (62)

1.一种多特异性抗体，其包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法中，其中所述多特异性抗体以25-300mg、优选地25-150mg或25-100mg、更优选地50-100mg的剂量施用。
2.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述有需要的受试者施用25-300mg、优选地25-150mg或25-100mg、更优选地50-100mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点。
3.如权利要求1所述的供使用的多特异性抗体或如权利要求2所述的方法，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
宫颈癌，特别是PD-L1阳性宫颈癌，更特别是具有PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是PD-L1阳性NSCLC，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，特别是胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)。
4.如权利要求1所述的供使用的多特异性抗体或如权利要求2所述的方法，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)。
5.一种多特异性抗体，其包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白的细胞外部分的抗原结合位点，所述多特异性抗体用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症选自：
携带微卫星高度不稳定性(高度MSI)改变的任何实体瘤；
宫颈癌，特别是PD-L1阳性宫颈癌，更特别是具有PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是PD-L1阳性NSCLC，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，特别是胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)，并且
其中所述多特异性抗体以10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg或25-75mg、最优选地25-50mg或50-100mg的剂量施用。
6.如权利要求5所述的供使用的多特异性抗体，其中所述癌症选自：
携带微卫星高度不稳定性(高度MSI)改变的任何实体瘤；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)，并且
其中所述多特异性抗体以10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg、最优选地50-100mg的剂量施用。
7.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg或25-75mg、最优选地25-50mg或50-100mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白胞的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述癌症选自：
携带微卫星高度不稳定性(高度MSI)改变的任何实体瘤；
宫颈癌，特别是PD-L1阳性宫颈癌，更特别是具有PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是PD-L1阳性NSCLC，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，特别是胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)。
8.如权利要求7所述的方法，所述方法包括向患有癌症的受试者施用10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg、最优选地50-100mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的细胞外部分的抗原结合位点和结合第二膜蛋白胞的细胞外部分的抗原结合位点，其中所述癌症选自：
携带微卫星高度不稳定性(高度MSI)改变的任何实体瘤；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)。
9.如权利要求1-8中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体通过静脉内施用。
10.如权利要求1-9中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体每两周施用一次。
11.如权利要求1-10中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述第二膜蛋白不是TNF受体超家族的成员。
12.如权利要求1-11中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述第二膜蛋白是B7家族的成员。
13.如权利要求1-12中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述第二膜蛋白是PD-L1或PD-L2，优选地PD-L1。
14.如权利要求1-13中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含结合PD-L1的PD-1结合结构域的一个抗原结合位点。
15.如权利要求1-14中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含结合CD137的CD137L结合结构域的一个抗原结合位点。
16.如权利要求1-15中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含一个抗原结合位点，所述抗原结合位点阻断配体与CD137的结合或结合CD137的细胞外配体阻断结合位点，优选地CD137L阻断结合位点。
17.如权利要求1-16中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中结合CD137的细胞外部分的可变结构域被定义为以下可变结构域：当呈包含结合CD137的所述可变结构域中的两个的二价单特异性抗体形式时，其不刺激细胞上的CD137的活性或者与作为具有结合肿瘤相关抗原的第二可变结构域的双特异性抗体的一部分的所述可变结构域之一相比以降低的水平刺激细胞上的CD137的活性，所述肿瘤相关抗原优选地为B7家族的成员，更优选地为PD-L1。
18.如权利要求1-17中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中当所述多特异性抗体在表达CD137的第一细胞和表达PD-L1的第二细胞的存在下时，结合CD137的细胞外部分的可变结构域在与结合PD-L1的第二可变结构域一起组合在多特异性抗体中时能够刺激细胞上的CD137的活性。
19.如权利要求1-18中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体能够结合CD137和PD-L1，优选地同时结合CD137和PD-L1。
20.如权利要求1-19中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体仅在存在PD-L1表达细胞的情况下诱导或激活CD137信号传导。
21.如权利要求1-20中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体的所述抗原结合位点由结合CD137的一个免疫球蛋白可变结构域和结合第二膜蛋白的所述细胞外部分的一个免疫球蛋白可变结构域组成。
22.如权利要求1-21中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体是全长抗体。
23.如权利要求1-22中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体是不具有Fc效应子功能的IgG1分子。
24.如权利要求1-23中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述第二膜蛋白未被T细胞显著表达。
25.如权利要求1-24中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述第二膜蛋白作为包含所述第二膜蛋白中两种或更多种的多聚体膜蛋白的一部分存在于细胞膜上。
26.如权利要求1-25中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述第二膜蛋白作为同源二聚体或同源三聚体的一部分存在于细胞膜上。
27.如权利要求1-26中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述抗体包含结合CD137的细胞外部分的重链可变区，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:23、SEQID NO:27、SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列或其变体的CDR3区。
28.如权利要求1-27中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述抗体包含结合CD137的细胞外部分的重链可变区，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:22、SEQID NO:26、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列或其变体的CDR2区。
29.如权利要求1-27中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述抗体包含结合CD137的细胞外部分的重链可变区，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:21、SEQID NO:25、SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列或其变体的CDR1区。
30.如权利要求1-29中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述抗体包含结合CD137的细胞外部分的重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:28、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46或EQ IDNO:49，优选地SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列或其变体。
31.如权利要求1-30中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述抗体包含结合PD-L1的细胞外部分的重链可变区，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:56、SEQID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:95、SEQID NO:102或SEQ ID NO:106，优选地SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:95或SEQ IDNO:102所示的氨基酸序列或其变体的CDR3区。
32.如权利要求1-31中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述抗体包含结合PD-L1的细胞外部分的重链可变区，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:3、SEQID NO:55、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:87、SEQID NO:94、SEQ ID NO:101或SEQ ID NO:105所示的氨基酸序列或其变体的CDR2区。
33.如权利要求1-32中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述抗体包含结合PD-L1的细胞外部分的重链可变区，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:54、SEQID NO:60、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:86、SEQID NO:90或SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列或其变体的CDR1区。
34.如权利要求1-33中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述抗体包含结合PD-L1的细胞外部分的重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:57、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQ IDNO:73、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ IDNO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、优选地SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92或SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列或其变体。
35.如权利要求1-34中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含MF6797的CDR 1、CDR 2和CDR 3以及MF7702的CDR 1、CDR 2和CDR 3，或其变体。
36.如权利要求1-34中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含SEQ ID NO.49和SEQ ID NO.67，或其变体。
37.一种多特异性抗体，其用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法中，其中所述抗体包含结合CD137的结合结构域，所述结合结构域包含：
包含具有如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；和/或
其中所述抗体包含结合PD-L1的结合结构域，所述结合结构域包含：
包含具有如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域，
每个单独的SEQ ID NO具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失或取代或其组合，
其中所述多特异性抗体以25-300mg、优选地25-150mg或25-100mg或25-75mg、更优选地25-50mg或50-100mg的剂量施用。
38.如权利要求37所述的供使用的多特异性抗体，其中所述多特异性抗体以25-300mg、优选地25-150mg或25-100mg、更优选地50-100mg的剂量施用。
39.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括施用25-300mg、优选地25-150mg或25-100mg或25-75mg、更优选地25-50mg或50-100mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的结合结构域，所述结合结构域包含：
包含具有如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；和/或
其中所述抗体包含结合PD-L1的结合结构域，所述结合结构域包含：
包含具有如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域，
每个单独的SEQ ID NO具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失或取代或其组合。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述多特异性抗体以25-300mg、优选地25-150mg或25-100mg、更优选地50-100mg的剂量施用。
41.如权利要求37-40中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
宫颈癌，特别是PD-L1阳性宫颈癌，更特别是具有PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是PD-L1阳性NSCLC，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，特别是胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)。
42.如权利要求37-40中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)。
43.一种多特异性抗体，其用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法中，其中所述抗体包含结合CD137的结合结构域，所述结合结构域包含：
包含具有如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；和/或
其中所述抗体包含结合PD-L1的结合结构域，所述结合结构域包含：
包含具有如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域，
每个单独的SEQ ID NO具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失或取代或其组合，
其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
宫颈癌，特别是PD-L1阳性宫颈癌，更特别是具有PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是PD-L1阳性NSCLC，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，特别是胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)，并且
其中所述多特异性抗体以10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg或25-75mg、最优选地25-50mg或50-100mg的剂量施用。
44.如权利要求43所述的供使用的多特异性抗体，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)，并且
其中所述多特异性抗体以10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg、最优选地50-100mg的剂量施用。
45.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
宫颈癌，特别是PD-L1阳性宫颈癌，更特别是具有PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是PD-L1阳性NSCLC，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，特别是胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)，
所述方法包括施用10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg或25-75mg、最优选地25-50mg或50-100mg多特异性抗体，所述多特异性抗体包含结合CD137的结合结构域，所述结合结构域包含：
包含具有如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ IDNO:41所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；和/或
其中所述抗体包含结合PD-L1的结合结构域，所述结合结构域包含：
包含具有如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域；或
包含具有如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列的CDR2和具有如SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列的CDR3的可变结构域，
每个单独的SEQ ID NO具有0、1、2、3、4或5个氨基酸插入、缺失或取代或其组合。
46.如权利要求45所述的方法，其中所述癌症选自：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌或三阴性乳腺癌(TNBC)，并且
其中所述多特异性抗体以10-1200mg、优选地25-600mg或25-300mg、更优选地25-150mg或25-100mg、最优选地50-100mg的剂量施用。
47.如权利要求37-46中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体通过静脉内施用。
48.如权利要求37-47中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体每两周施用一次。
49.如权利要求37-48中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含MF6797的CDR 1、CDR 2和CDR 3以及MF7702的CDR 1、CDR 2和CDR 3，或其变体。
50.如权利要求49所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含SEQ ID NO.49和SEQ ID NO.67，或其变体。
51.如权利要求37-48中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含MF6783的CDR 1、CDR 2和CDR 3以及MF5542的CDR 1、CDR 2和CDR 3，或其变体。
52.如权利要求51所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.92，或其变体。
53.如权利要求37-48中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含MF6754的CDR 1、CDR 2和CDR 3以及MF5561的CDR 1、CDR 2和CDR 3，或其变体。
54.如权利要求53所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.100，或其变体。
55.如权利要求37-48中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含MF6785的CDR 1、CDR 2和CDR 3以及MF5439的CDR 1、CDR 2和CDR 3，或其变体。
56.如权利要求55所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.89，或其变体。
57.如权利要求37-48中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含MF6795的CDR 1、CDR 2和CDR 3以及MF5442的CDR 1、CDR 2和CDR 3，或其变体。
58.如权利要求57所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述多特异性抗体包含SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.92，或其变体。
59.如权利要求1-58中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述抗体包含具有如SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列的共同轻链可变结构域或具有如SEQ ID NO:109所示的氨基酸序列的共同轻链，或其变体。
60.如权利要求1-59中任一项所述的供使用的多特异性抗体或方法，其中所述抗体包含具有如SEQ ID NO:112所示的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)、具有如SEQ ID NO:114所示的氨基酸序列的重链恒定结构域2(CH2)、具有如SEQ ID NO:115所示的氨基酸序列的重链恒定结构域3(CH3)和具有如SEQ ID NO:116所示的氨基酸序列的重链恒定结构域3(CH3)，或其变体。
61.一种多部分药盒，其包括如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体和以25-75mg或25-50mg或25-40mg或25-30mg、或25mg或30mg或40mg或50mg或60mg或70mg或75mg的剂量或固定剂量使用所述多特异性抗体的说明。
62.如权利要求61所述的多部分药盒，其中所述药盒包括在选自由以下组成的组的任何一种适应症中使用所述多特异性抗体的说明：
携带高度MSI改变的任何实体瘤；
宫颈癌，特别是PD-L1阳性宫颈癌，更特别是具有PD-L1高表达的宫颈癌；
子宫内膜癌，特别是高度MSI子宫内膜癌；
肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，更特别是PD-L1阳性NSCLC，更特别是具有PD-L1高表达的NSCLC；
脑癌，特别是胶质母细胞瘤；和
乳腺癌，特别是转移性乳腺癌和三阴性乳腺癌(TNBC)。
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