KR20220118481A - Dgk 억제제 및 체크포인트 길항제의 조합물 - Google Patents

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조셉 엘. 벤치
신유 왕
유펜더 벨라파르티
루이스 에스. 추팍
체탄 피. 다르네
민 딩
로버트 지. 젠틀레스
야종 후앙
스콧 더블유. 마틴
이바르 엠. 맥도널드
리차드 이. 올슨
샤오판 젱
존 에스. 토카르스키
비레슈와르 다스굽타
만주나타 나라야나 라오 캄블레
라주 만누리
하시부르 라하만
프라사다 라오 잘라감
사우미아 로이
고피키샨 토누쿠누루
시바수다르 벨라이아
자야쿠마르 산카라 와리에르
코타 라트나카르 레디
티루벤카담 라자
데니스 그루넨펠더
마이클 제이. 위치로스키
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Abstract

디아실글리세롤 키나제 (DGK)의 억제제, 및 DGK 억제제를 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 질환, 예컨대 암 및 감염 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

Description

DGK 억제제 및 체크포인트 길항제의 조합물
상호 참조
본 출원은 2019년 12월 19일에 출원된 미국 가출원 번호 62/950,570을 우선권 주장하며, 이는 그 전문이 본원에 포함된다.
인간 암은 수많은 유전적 및 후성적 변경을 보유하여, 면역계에 의해 잠재적으로 인식가능한 신생항원을 생성한다 (문헌 [Sjoblom et al. (2006) Science 314:268-74]). T 및 B 림프구로 구성된 적응 면역계는 다양한 종양 항원에 반응하는 광범위한 능력 및 정교한 특이성과 함께 강력한 항암 잠재력을 갖는다. 추가로, 면역계는 상당한 가소성 및 기억 성분을 나타낸다. 적응 면역계의 이러한 모든 속성들의 성공적인 활용은 면역요법을 모든 암 치료 양식들 중 고유한 것으로 만들 것이다. 그러나, 암에 대한 내인성 면역 반응이 전임상 모델 및 환자에서 관찰되기는 하지만, 이러한 반응은 효과적이지 못하며, 확립된 암은 "자기"로서 간주되고, 면역계에 의해 관용된다. 이러한 관용 상태에 기여하여, 종양은 항종양 면역을 적극적으로 파괴하기 위해 몇 가지 별개의 메카니즘을 이용할 수 있다. 이들 메카니즘은 기능장애성 T-세포 신호전달 (문헌 [Mizoguchi et al., (1992) Science 258:1795-98]), 억제성 조절 세포 (문헌 [Facciabene et al., (2012) Cancer Res. 72:2162-71]), 및 면역 파괴를 피하기 위해 종양에 의한 부수적 손상으로부터 정상 조직을 보호하고 적응 면역 반응의 강도를 하향 조정하는 역할을 하는 내인성 "면역 체크포인트"의 공동-선택 (문헌 [Topalian et al., (2012) Curr. Opin. Immunol. 24:1-6; Mellman et al. (2011) Nature 480:480-489])을 포함한다.
디아실글리세롤 키나제 (DGK)는 디아실글리세롤의 포스파티드산으로의 전환을 매개하여 TCR 신호전달 경로를 통해 전파되는 T 세포 기능을 종결시키는 지질 키나제이다. 따라서, DGK는 세포내 체크포인트로서의 역할을 하고, DGK의 억제는 T 세포 신호전달 경로 및 T 세포 활성화를 증진시킬 것으로 예상된다. 지지 증거는 과반응성 T 세포 표현형 및 개선된 항종양 면역 활성을 나타내는 DGKα 또는 DGKζ의 녹아웃 마우스 모델을 포함한다 (문헌 [Riese M.J. et al., Journal of Biological Chemistry, (2011) 7: 5254-5265; Zha Y et al., Nature Immunology, (2006) 12:1343; Olenchock B.A. et al., (2006) 11: 1174-81]). 또한, 인간 신세포 암종 환자로부터 단리된 종양 침윤 림프구는 DGKα를 과다발현하는 것으로 관찰되었고, 이는 T 세포 기능을 억제하였다 (문헌 [Prinz, P.U. et al., J Immunology (2012) 12:5990-6000]). 따라서, DGKα 및 DGKζ는 암 면역요법을 위한 표적으로 여겨진다 (문헌 [Riese M.J. et al., Front Cell Dev Biol. (2016) 4: 108; Chen, S.S. et al., Front Cell Dev Biol. (2016) 4: 130; Avila-Flores, A. et al., Immunology and Cell Biology (2017) 95: 549-563; Noessner, E., Front Cell Dev Biol. (2017) 5: 16; Krishna, S., et al., Front Immunology (2013) 4:178; Jing, W. et al., Cancer Research (2017) 77: 5676-5686]).
대상체에게 DGKα, DGKζ, 또는 DGKα 및 DGKζ 둘 다의 억제제, 예컨대 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 장애를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 예시적인 질환 또는 장애는 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 것, 예컨대 암 및 감염성 질환을 포함한다. 또한, 질환 또는 장애, 예컨대 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 것, 예컨대 암 및 감염성 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 DGKα, DGKζ, 또는 DGKα 및 DGKζ 둘 다의 억제제, 예컨대 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도이며, 여기서 억제제는 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제와 조합하여 투여되는 것인 용도가 제공된다. 질환 또는 장애, 예컨대 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 것, 예컨대 암 및 감염성 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 DGKα, DGKζ, 또는 DGKα 및 DGKζ 둘 다의 억제제, 예컨대 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도이며, 여기서 억제제는 PD1/PD-L1 축의 길항제 및 CTLA4의 길항제와 조합하여 투여되는 것인 용도가 본원에 제공된다.
또한, 질환 또는 장애, 예컨대 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 것, 예컨대 암 및 감염성 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 PD1/PD-L1 축의 길항제의 용도이며, 여기서 길항제는 DGKα, DGKζ, 또는 DGKα 및 DGKζ 둘 다의 억제제, 예컨대 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 CTLA4의 길항제와 조합하여 투여되는 것인 용도가 제공된다. 질환 또는 장애, 예컨대 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 것, 예컨대 암 및 감염성 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 PD1/PD-L1 축의 길항제의 용도이며, 여기서 길항제는 DGKα, DGKζ, 또는 DGKα 및 DGKζ 둘 다의 억제제, 예컨대 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 CTLA4의 길항제와 조합하여 투여되는 것인 용도가 제공된다.
또한, 질환 또는 장애, 예컨대 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 것, 예컨대 암 및 감염성 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 CTLA4의 길항제의 용도이며, 여기서 길항제는 DGKα, DGKζ, 또는 DGKα 및 DGKζ 둘 다의 억제제, 예컨대 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 PD1/PD-L1 축의 길항제와 조합하여 투여되는 것인 용도가 제공된다. 질환 또는 장애, 예컨대 면역계의 자극으로부터 이익을 얻을 것, 예컨대 암 및 감염성 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 CTLA4의 길항제의 용도이며, 여기서 길항제는 DGKα, DGKζ, 또는 DGKα 및 DGKζ 둘 다의 억제제, 예컨대 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 PD1/PD-L1 축의 길항제와 조합하여 투여되는 것인 용도가 제공된다.
예시적인 화합물, 예컨대 본원에 기재된 화학식 I의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염은 2019년 6월 26일에 출원된 PCT/US2019/039131 및 2019년 6월 26일에 출원된 PCT/US2019/039135에 기재되어 있으며, 이들 둘 다의 내용은 구체적으로 본원에 참조로 포함된다. 예시적인 화합물, 예컨대 본원에 기재된 화학식 II의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염은 2020년 8월 27일에 출원된 PCT/US2020/048070에 기재되어 있으며, 그의 내용은 구체적으로 본원에 참조로 포함된다.
신규 치료 방법의 이들 및 다른 특색은 개시내용이 계속됨에 따라 확장된 형태로 제시될 것이다.
도 1A 및 B는 니볼루맙 또는 이필리무맙의 부재 하의 동일한 검정에 비해 MLR 검정에서 증가하는 농도의 DGKi 및 니볼루맙 (A) 또는 이필리무맙 (B)과 함께 인큐베이션된 T 세포로부터의 증진된 IFN-γ 분비를 도시한다.
도 2A-H는 DGKi와 항-PD-1 항체 및 항-CTLA4 항체의 삼중 조합이 단지 항-PD-1 항체 및 항-CTLA4 항체로만 처리된 마우스에서의 것에 비해 종양 성장을 느리게 한다는 것을 보여준다. 도 2A-H는 마우스에 마우스 B16 흑색종 세포를 이식하고, 비히클 단독 (도 2A), 항-PD-1 항체 단독 (도 2B), 항-PD-1 항체 및 항-CTLA4 항체 (도 2C), DGKi 및 항-PD-1 항체 (도 2D), DGKi 및 항-CTLA4 항체 (도 2E), DGKi 단독 (도 2F), DGKi 및 항-PD-1 항체 및 항-CTLA4 항체 (도 2G)로 처리한 후 시간 경과에 따른 종양 크기를 도시한다. 도 2H는 (i) 항-PD-1 항체 및 항-CTLA4 항체, (ii) DGKi 및 항-PD1 항체, (iii) DGKi 및 CTLA4 항체 및 (iv) DGKi 및 항-PD1 항체 및 항-CTLA4 항체로 처리된 마우스에서 B16 세포의 이식 후 평균 종양 크기를 도시한다.
도 3A-I는 CT26 마우스 모델에서 DGK의 억제제 및 항-PD-1 항체 및/또는 항-CTLA4 항체로의 조합 치료가 개선된 완전 반응을 유발하고 (도 3A), 증가된 수준의 반응이 증가된 AH1+ CD8 T 세포와 상관관계가 있다는 것 (도 3B)을 도시한다.
도 4A-F는 DGK의 억제가 TCR 활성화에 요구되는 항원 역치를 낮춘다는 것을 보여준다. 도 4A-F는 펩티드 OVA (A), A2 (B), Q4 (C), T4 (D) 및 Q4H7 (E) 중 하나를 제공하고 증가하는 수준의 항원과 함께 인큐베이션된 OT1 CD8 T 세포로부터 분비된 IL-2의 수준을 도시하며, 이는 DGK 억제가 T 세포 활성화에 요구되는 종양 항원의 농도를 낮출 것임을 나타낸다. 도 4F는 도 4A-E에 도시된 각각의 펩티드의 1000 ng/ml에서 분비된 IL-2의 수준, 및 또한 스크램블된 펩티드로 수득된 수준을 도시하며, 이는 DGK 억제가 약한 종양 항원에 의해 유도된 T 세포 반응을 강화시킬 것임을 도시한다.
도 5A 및 B는 DGK의 억제가 인간 CTL 이펙터 기능을 증가시키고 종양 세포 사멸을 증진시킨다는 것을 보여준다. 도 5A는 증가하는 농도의 DGKi의 존재 하에 펩티드와 함께 인큐베이션된 T 세포로부터의 IFN-γ 분비 수준을 도시한다. 도 5B는 종양 세포를 증가된 동족 펩티드와 함께 인큐베이션하였을 때 제3일에서의 증가된 종양 세포 사멸을 도시한다.
도 6A 및 B는 DGKi가 감소된 B2M 수준을 극복하여 T 세포 이펙터 기능을 회복시킬 수 있음을 나타낸다. 도 6A는 HCT116 세포에서 B2M의 CRISPR KO에서의 β2 마이크로글로불린의 수준을 도시한다. 도 6B는 DGKi가 IFN-γ 수준을 증가시킨다는 것을 보여준다.
도 7은 CD8 고갈성 항체의 존재 또는 부재 하에 DGKi 화합물 16 및 항-PD-1 항체로 처리된 마우스에서 CT26 동물 모델의 종양 세포의 이식 후 일수의 함수로서의 종양 부피를 도시하며, 이는 CD8 고갈성 항체의 존재가 종양 감소를 감소시킨다는 것을 나타낸다.
도 8은 CD4 고갈성 항체의 존재 또는 부재 하에 DGKi 화합물 16 및 항-PD-1 항체로 처리된 마우스에서 CT26 동물 모델의 종양 세포의 이식 후 일수의 함수로서의 종양 부피를 도시하며, 이는 CD4 고갈성 항체의 존재가 종양 감소를 자극한다는 것을 나타낸다.
도 9는 NK 세포 고갈성 항체의 존재 또는 부재 하에 DGKi 화합물 16 및 항-PD-1 항체로 처리된 마우스에서 CT26 동물 모델의 종양 세포의 이식 후 일수의 함수로서의 종양 부피를 도시하며, 이는 NK 세포 고갈성 항체의 존재가 종양 감소를 감소시킨다는 것을 나타낸다.
도 10은 DGKi와 항-PD-1 또는 항-CTLA4의 조합이 MC38 종양 모델에서 완전 종양 퇴행 (CR)을 도출할 수 있음을 도시한다. 비히클 단독 (도 10A), DGKi (도 10B), 항-PD-1 (도 10C), 항-CTLA4 (도 10D), DGKi 및 항-PD-1 (도 10E) 또는 DGKi 및 항-CTLA4 (도 10F)로 처리 후에 개별 동물에 대한 종양 부피가 제시된다. DGKi, 항-PD-1 및 항-CTLA4 단독요법은 각각 종양 성장을 지연시킬 수 있다. DGKi 및 항-PD-1의 조합은 시험된 동물의 100%에서 종양의 CR을 도출한 반면에, DGKi 및 항-CTLA4의 조합은 시험된 마우스의 70%에서 CR을 도출하였다.
도 11은 항-PD-1 요법에 대한 DGKi의 첨가가 MC38 및 CT26 동물 모델 둘 다에서 종양의 완전 퇴행 (CR)을 도출할 수 있고, 이들 군으로부터 치유된 동물은 종양 재-챌린지를 거부하기에 충분한 면역 기억을 발생시킨다는 것을 보여준다. 비히클 단독 (도 11A & 11E), 항-PD-1 (도 11B & 11F) 또는 항-PD-1 및 DGKi (도 11C & 11G)로 처리 후에 개별 동물에 대한 종양 부피가 제시된다. DGKi는 각각 MC38 및 CT26 모델에서 종양의 100% 및 60% CR을 유발하는 항-PD-1과의 강건한 조합 효과를 도출한다. 치유된 동물에서의 면역 기억을 평가하기 위해, 마우스를 초기 이식에 사용된 종양 세포의 수의 10x로 재-챌린지하고, 종양 부피를 이식 후 일수의 함수로서 측정하였다. MC38 코호트 (도 11D) 및 CT26 코호트 (도 11H)에서 모든 재-챌린지된 동물은 자발적으로 종양을 거부하였으며, 이는 DGKi 및 항-PD-1 조합 요법이 장기간 면역 기억을 도출한다는 것을 확증한다.
도 12는 항-PD-1, 항-CTLA4 및 DGKi 삼중 요법이 체크포인트 억제제 불응성 B16F10 종양 모델에서 종양 성장을 감소시킬 수 있다는 것을 보여준다. 비히클 단독 (도 12A), 항-PD-1 및 항-CTLA4 (도 12B), 항-PD-1 및 DGKi (도 12C), 항-CTLA4 및 DGKi (도 12D) 또는 항-PD-1, 항-CTLA4 및 DGKi (도 12E)로 처리 후에 개별 동물에 대한 종양 부피가 제시된다. 각 군에 대한 평균 종양 부피를 도 12F에 제시한다.
증식성 질환, 예컨대 암, 또는 바이러스 감염, 또는 보다 일반적으로, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻는 질환, 장애 또는 상태, 뿐만 아니라 DGKα 및/또는 DGKζ 효소 활성을 억제함으로써 예방, 개선 또는 치유될 수 있는 임의의 질환, 장애 또는 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 (i) PD1/PD-L1 축의 길항제 (예를 들어, 인간 PD1 또는 인간 PD-L1의 길항제) 및/또는 (ii) 인간 CTLA4의 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
정의
치료 방법의 특색 및 이점은 하기 상세한 설명을 읽음으로써 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 보다 용이하게 이해될 수 있다. 명확성을 위해 개별 실시양태와 관련하여 상기 및 하기에 기재된 치료 방법의 특정 특색이 또한 조합되어 단일 실시양태를 형성할 수 있는 것으로 인지되어야 한다. 반대로, 간결성을 위해 단일 실시양태와 관련하여 기재된 치료 방법의 다양한 특색이 또한 조합되어 그의 하위-조합을 형성할 수 있다. 본원에서 예시적이거나 바람직한 것으로 확인된 실시양태는 예시적인 것으로 의도되며, 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
본원에서 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 단수로 이루어진 언급은 또한 복수를 포함할 수 있다. 예를 들어, 단수형은 하나 또는 하나 이상을 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 어구 "화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염"은 적어도 1종의 화합물, 화합물의 적어도 1종의 염 또는 그의 조합을 지칭한다. 예를 들어, 화학식 (I)의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염은 화학식 (I)의 화합물; 화학식 (I)의 2종의 화합물; 화학식 (I)의 화합물의 제약상 허용되는 염; 화학식 (I)의 화합물 및 화학식 (I)의 화합물의 1종 이상의 제약상 허용되는 염; 및 화학식 (I)의 화합물의 2종 이상의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
달리 나타내지 않는 한, 충족되지 않은 원자가를 갖는 임의의 원자는 원자가를 충족시키기에 충분한 수소 원자를 갖는 것으로 가정된다.
본원에 기재된 정의는 본원에 참조로 포함된 임의의 특허, 특허 출원 및/또는 특허 출원 공개에 기재된 정의보다 우선한다.
본원에 사용된 다양한 용어의 정의가 하기 열거된다. 이들 정의는 개별적으로 또는 보다 큰 군의 일부로서 (구체적인 경우에 달리 제한되지 않는 한) 명세서 전반에 걸쳐 사용된 경우의 용어에 적용된다.
명세서 전반에 걸쳐, 기 및 그의 치환기는 안정한 모이어티 및 화합물을 제공하도록 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 선택될 수 있다.
관련 기술분야에서 사용되는 규정에 따라,
Figure pct00001
은 본원의 구조 화학식에서 코어 또는 백본 구조에 대한 모이어티 또는 치환기의 부착 지점인 결합을 도시하는 데 사용된다.
본원에 사용된 용어 "할로" 및 "할로겐"은 F, Cl, Br 및 I를 지칭한다.
용어 "시아노"는 -CN 기를 지칭한다.
용어 "아미노"는 -NH2 기를 지칭한다.
용어 "옥소"는 =O 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알킬"은, 예를 들어 1 내지 12개의 탄소 원자, 1 내지 6개의 탄소 원자 및 1 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 분지쇄 및 직쇄 포화 지방족 탄화수소 기 둘 다를 지칭한다. 알킬 기의 예는 메틸 (Me), 에틸 (Et), 프로필 (예를 들어, n-프로필 및 i-프로필), 부틸 (예를 들어, n-부틸, i-부틸, sec-부틸 및 t-부틸) 및 펜틸 (예를 들어, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸), n-헥실, 2-메틸펜틸, 2-에틸부틸, 3-메틸펜틸 및 4-메틸펜틸을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 숫자가 기호 "C" 다음에 아래첨자로 나타나는 경우, 아래첨자는 특정한 기가 함유할 수 있는 탄소 원자의 수를 보다 구체적으로 정의한다. 예를 들어, "C1-4 알킬"은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 및 분지쇄 알킬 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "플루오로알킬"은 1개 이상의 플루오린 원자로 치환된 분지쇄 및 직쇄 포화 지방족 탄화수소 기 둘 다를 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, "C1-4 플루오로알킬"은 1개 이상의 플루오린 원자로 치환된 C1, C2, C3, 및 C4 알킬 기를 포함하는 것으로 의도된다. 플루오로알킬 기의 대표적인 예는 -CF3 및 -CH2CF3을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
용어 "시아노알킬"은 1개 이상의 시아노 기로 치환된 분지쇄 및 직쇄 포화 알킬 기 둘 다를 포함한다. 예를 들어, "시아노알킬"은 -CH2CN, -CH2CH2CN, 및 C1-4 시아노알킬을 포함한다.
용어 "아미노알킬"은 1개 이상의 아민 기로 치환된 분지쇄 및 직쇄 포화 알킬 기 둘 다를 포함한다. 예를 들어, "아미노알킬"은 -CH2NH2, -CH2CH2NH2, 및 C1-4 아미노알킬을 포함한다.
용어 "히드록시알킬"은 1개 이상의 히드록실 기로 치환된 분지쇄 및 직쇄 포화 알킬 기 둘 다를 포함한다. 예를 들어, "히드록시알킬"은 -CH2OH, -CH2CH2OH, 및 C1-4 히드록시알킬을 포함한다.
용어 "알케닐"은 2 내지 12개의 탄소 원자 및 1개 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 예시적인 이러한 기는 에테닐 또는 알릴을 포함한다. 예를 들어, "C2-6 알케닐"은 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 및 분지쇄 알케닐 기를 나타낸다.
용어 "알키닐"은 2 내지 12개의 탄소 원자 및 적어도 1개의 탄소 대 탄소 삼중 결합을 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 예시적인 이러한 기는 에티닐을 포함한다. 예를 들어, "C2-6 알키닐"은 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 및 분지쇄 알키닐 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬"은 포화 고리 탄소 원자로부터 1개의 수소 원자의 제거에 의해 비-방향족 모노시클릭 또는 폴리시클릭 탄화수소 분자로부터 유도된 기를 지칭한다. 시클로알킬 기의 대표적인 예는 시클로프로필, 시클로펜틸 및 시클로헥실을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 숫자가 기호 "C" 뒤 다음에 아래첨자로 나타나는 경우, 아래첨자는 특정한 시클로알킬 기가 함유할 수 있는 탄소 원자의 수를 보다 구체적으로 정의한다. 예를 들어, "C3-6 시클로알킬"은 3 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 시클로알킬 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "알콕시"는 산소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 알킬 기, 예를 들어 메톡시 기 (-OCH3)를 지칭한다. 예를 들어, "C1-3 알콕시"는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 알콕시 기를 나타낸다.
용어 "플루오로알콕시" 및 "-O(플루오로알킬)"은 산소 연결기 (-O-)를 통해 부착된 상기 정의된 바와 같은 플루오로알킬 기를 나타낸다. 예를 들어, "C1-4 플루오로알콕시"는 C1, C2, C3, 및 C4 플루오로알콕시 기를 포함하는 것으로 의도된다.
용어 "알킬렌"은 코어 또는 백본 구조에 대해 2개의 부착 지점을 갖는 포화 탄소 쇄를 지칭한다. 알킬렌 기는 구조 -(CH2)n-을 가지며, 여기서 n은 1이상의 정수이다. 알킬렌 연결의 예는 -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, 및 -(CH2)2-4-를 포함한다.
어구 "제약상 허용되는"은 타당한 의학적 판단의 범주 내에서, 합리적인 이익/위험 비에 상응하는, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭하기 위해 본원에 사용된다.
화합물, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물은 본원에 기재된 방법에 사용될 수 있는 제약상 허용되는 염을 형성할 수 있다. 달리 나타내지 않는 한, 화합물에 대한 언급은 그의 1종 이상의 제약상 허용되는 염에 대한 언급을 포함하는 것으로 이해된다. 용어 "염(들)"은 무기 및/또는 유기 산 및 염기를 사용하여 형성된 산성 및/또는 염기성 제약상 허용되는 염을 나타낸다. 또한, 용어 "염(들)"은, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물이 염기성 모이어티, 예컨대 아민 또는 피리딘 또는 이미다졸 고리, 및 산성 모이어티, 예컨대 카르복실산 둘 다를 함유하는 경우에 쯔비터이온 (내부 염)을 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 (즉, 비-독성, 생리학상 허용되는) 염, 예컨대 예를 들어 양이온이 염의 독성 또는 생물학적 활성에 유의하게 기여하지 않는 것인 허용되는 금속 및 아민 염이 바람직하다. 그러나, 다른 염이, 예를 들어 제조 동안 사용될 수 있는 단리 또는 정제 단계에서 유용할 수 있고, 따라서 본원에서 고려된다. 화합물, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물의 염은, 예를 들어 화합물, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물을 염이 침전되는 것과 같은 매질 또는 수성 매질 중에서 소정량, 예컨대 등량의 산 또는 염기와 반응시킨 후 동결건조시킴으로써 형성될 수 있다.
예시적인 산 부가염은 아세테이트 (예컨대, 아세트산 또는 트리할로아세트산, 예를 들어 트리플루오로아세트산에 의해 형성된 것들), 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 비술페이트, 보레이트, 부티레이트, 시트레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 히드로클로라이드 (염산에 의해 형성됨), 히드로브로마이드 (브로민화수소에 의해 형성됨), 히드로아이오다이드, 말레에이트 (말레산에 의해 형성됨), 2-히드록시에탄술포네이트, 락테이트, 메탄술포네이트 (메탄술폰산에 의해 형성됨), 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥살레이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 살리실레이트, 숙시네이트, 술페이트 (예컨대, 황산에 의해 형성된 것들), 술포네이트 (예컨대, 본원에 언급된 것들), 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔술포네이트, 예컨대 토실레이트, 운데카노에이트 등을 포함한다.
예시적인 염기성 염은 암모늄 염, 알칼리 금속 염, 예컨대 나트륨, 리튬 및 칼륨 염; 알칼리 토금속 염, 예컨대 칼슘 및 마그네슘 염; 바륨, 아연 및 알루미늄 염; 유기 염기 (예를 들어, 유기 아민), 예컨대 트리알킬아민, 예컨대 트리에틸아민, 프로카인, 디벤질아민, N-벤질-β-페네틸아민, 1-에페나민, N,N'-디벤질에틸렌-디아민, 데히드로아비에틸아민, N-에틸피페리딘, 벤질아민, 디시클로헥실아민 또는 유사한 제약상 허용되는 아민과의 염, 및 아미노산, 예컨대 아르기닌, 리신과의 염 등을 포함한다. 염기성 질소-함유 기는 저급 알킬 할라이드 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드), 디알킬 술페이트 (예를 들어, 디메틸, 디에틸, 디부틸 및 디아밀 술페이트), 장쇄 할라이드 (예를 들어, 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테아릴 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드), 아르알킬 할라이드 (예를 들어, 벤질 및 페네틸 브로마이드) 등과 같은 작용제로 4급화될 수 있다. 바람직한 염은 모노히드로클로라이드, 히드로겐술페이트, 메탄술포네이트, 포스페이트 또는 니트레이트 염을 포함한다.
화합물, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물은 무정형 고체 또는 결정질 고체로서 제공될 수 있다. 동결건조를 이용하여 화합물, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물을 고체로서 제공할 수 있다.
추가로, 화합물, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물의 용매화물 (예를 들어, 수화물)이 또한 본원에 기재된 방법에 사용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 용어 "용매화물"은 화합물, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물과, 유기이든 무기이든 1개 이상의 용매 분자의 물리적 회합을 의미한다. 이러한 물리적 회합은 수소 결합을 포함한다. 특정 경우, 예를 들어 1개 이상의 용매 분자가 결정질 고체의 결정 격자에 혼입되는 경우, 용매화물은 단리될 수 있을 것이다. "용매화물"은 용액-상 및 단리가능한 용매화물 둘 다를 포괄한다. 예시적인 용매화물은 수화물, 에탄올레이트, 메탄올레이트, 이소프로판올레이트, 아세토니트릴 용매화물 및 에틸 아세테이트 용매화물을 포함한다. 용매화 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
다양한 형태의 전구약물이 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 하기에 기재되어 있다:
a) The Practice of Medicinal Chemistry, Camille G. Wermuth et al., Ch 31, (Academic Press, 1996);
b) Design of Prodrugs, edited by H. Bundgaard, (Elsevier, 1985);
c) A Textbook of Drug Design and Development, P. Krogsgaard-Larson and H. Bundgaard, eds. Ch 5, pgs 113 - 191 (Harwood Academic Publishers, 1991); 및
d) Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Bernard Testa and Joachim M. Mayer, (Wiley-VCH, 2003).
또한, 화합물, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물을 그의 제조에 후속하여 단리 및 정제하여 99 중량% 이상의 양의 화합물, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물 ("실질적으로 순수한")을 함유하는 조성물을 수득할 수 있고, 이는 이어서 본원에 기재된 바와 같이 사용되거나 제제화된다. 이러한 "실질적으로 순수한" 화합물, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물이 또한 본원에서 고려된다.
"안정한 화합물" 및 "안정한 구조"는 화합물이 반응 혼합물로부터 유용한 정도의 순도로의 단리 및 효과적인 치료제로의 제제화를 견디기에 충분히 강건한 화합물을 나타내는 것으로 의도된다. 본원에 사용하기 위한 화합물은 안정한 화합물을 구현하도록 의도된다.
본원에 기재된 화합물은 본 발명의 화합물에서 발생하는 원자의 모든 동위원소를 포함하는 것으로 의도된다. 동위원소는 동일한 원자 번호를 갖지만 상이한 질량수를 갖는 원자를 포함한다. 일반적 예로서 및 비제한적으로, 수소의 동위원소는 중수소 (D) 및 삼중수소 (T)를 포함한다. 탄소의 동위원소는 13C 및 14C를 포함한다. 동위원소-표지된 화합물은 일반적으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술에 의해 또는 본원에 기재된 것과 유사한 방법에 의해, 달리 사용되는 비-표지된 시약 대신에 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 제조될 수 있다.
본원에 사용된 "치료"는 인간에서의 질환을 위한 치료제의 임의의 투여 또는 적용을 포괄하며, 질환 또는 질환의 진행 또는 1종 이상의 질환 증상을 억제하는 것, 질환 또는 그의 진행 또는 그의 증상 중 1종 이상을 늦추는 것, 그의 발달을 정지시키는 것, 질환 또는 그의 증상 중 1종 이상을 부분적으로 또는 완전히 완화시키는 것, 또는 질환의 1종 이상의 증상의 재발을 예방하는 것을 포함한다.
용어 "대상체" 및 "환자"는 달리 구체적으로 언급되지 않는 한 인간을 지칭하기 위해 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
"DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제"는 "DGKα 및/또는 DGKζ 효소 활성의 억제제"를 지칭하며, 이들 둘 다는 인간 DGKα 및/또는 인간 DGKζ의 억제제, 예컨대 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열, 또는 DGKα에 자연적으로 존재하지 않는 아미노산 (예를 들어, His 꼬리 또는 특정 N-말단 아미노산)이 없는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 DGKα, 및 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열, 또는 DGKζ에 자연적으로 존재하지 않는 아미노산 (예를 들어, His 꼬리 또는 특정 N-말단 아미노산)이 없는 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 DGKζ를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 표적 단백질, 예를 들어 DGK, PD-1, PD-L1 및 CTLA4는 달리 구체적으로 나타내지 않거나 또는 문맥이 달리 명백하게 나타내지 않는 한, 인간 표적 단백질을 지칭한다. 예를 들어, "마우스 DGK"는 구체적으로 나타낸 바와 같이 DGK의 마우스 버전을 지칭한다.
"PD1"은 "PD-1"과 상호교환가능하게 사용된다.
"CTLA4"는 "CTLA-4"와 상호교환가능하게 사용된다.
용어 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 대상체에서 질환 또는 장애의 치료에, 예컨대 1종 이상의 증상을 부분적으로 또는 완전히 완화시키는 데 효과적인 약물의 양을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 유효량은 목적하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량에서 및 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다.
용어 "암"은 비정상적으로 높은 수준의 증식 및 성장을 나타내는 세포의 군을 지칭하기 위해 본원에 사용된다. 암은 양성 (양성 종양으로도 지칭됨), 전암성 또는 악성일 수 있다. 암 세포는 고형 암 세포 또는 백혈병성 암 세포일 수 있다. 본원의 치료 방법에 적용가능한 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이러한 암의 보다 특정한 비제한적 예는 편평 세포암, 소세포 폐암, 뇌하수체암, 식도암, 성상세포종, 연부 조직 육종, 비소세포 폐암 (편평 세포 비소세포 폐암 포함), 폐의 선암종, 폐의 편평세포 암종, 복막암, 간세포성암, 위장암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암, 신세포 암종, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 뇌암, 자궁내막암, 고환암, 담관암종, 담낭 암종, 위암, 흑색종, 및 다양한 유형의 두경부암 (두경부의 편평 세포 암종 포함)을 포함한다.
용어 "종양 성장"은 암의 크기 또는 정도의 상응하는 증가로 이어지는 암을 포함하는 세포 또는 세포들에 의한 증식 또는 성장을 지칭하기 위해 본원에 사용된다.
적어도 1종의 추가의 치료제"와 조합하여" 투여하는 것은 동시 (공동) 및 임의의 순서의 연속 (순차적) 투여를 포함한다.
치료 방법
증식성 질환, 예컨대 암, 또는 바이러스 감염, 또는 보다 일반적으로, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻는 질환, 장애 또는 상태, 뿐만 아니라 DGKα 및/또는 DGKζ 효소 활성을 억제함으로써 예방, 개선 또는 치유될 수 있는 임의의 질환, 장애 또는 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 (i) DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제 및 (ii) PD1/PD-L1 축의 길항제 (예를 들어, 인간 PD1 또는 인간 PD-L1의 길항제) 및/또는 인간 CTLA4의 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 증식성 질환, 예컨대 암, 또는 바이러스 감염, 또는 보다 일반적으로, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻는 질환, 장애 또는 상태, 뿐만 아니라 DGKα 및/또는 DGKζ 효소 활성을 억제함으로써 예방, 개선 또는 치유될 수 있는 임의의 질환, 장애 또는 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 (i) DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제 및 (ii) PD1/PD-L1 축의 길항제 (예를 들어, 인간 PD1 또는 인간 PD-L1의 길항제)를 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 증식성 질환, 예컨대 암, 또는 바이러스 감염, 또는 보다 일반적으로, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻는 질환, 장애 또는 상태, 뿐만 아니라 DGKα 및/또는 DGKζ 효소 활성을 억제함으로써 예방, 개선 또는 치유될 수 있는 임의의 질환, 장애 또는 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 (i) DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제 및 인간 CTLA4의 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 특정 실시양태에서, 증식성 질환, 예컨대 암, 또는 바이러스 감염, 또는 보다 일반적으로, 면역계의 자극으로부터 이익을 얻는 질환, 장애 또는 상태, 뿐만 아니라 DGKα 및/또는 DGKζ 효소 활성을 억제함으로써 예방, 개선 또는 치유될 수 있는 임의의 질환, 장애 또는 상태의 치료는 그를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 (i) DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제 및 (ii) PD1/PD-L1 축의 길항제 (예를 들어, 인간 PD1 또는 인간 PD-L1의 길항제) 및 인간 CTLA4의 길항제를 투여하는 것을 포함한다.
(i) DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제 및 (ii) PD1/PD-L1 축의 길항제 (예를 들어, 인간 PD1 또는 인간 PD-L1의 길항제) 및/또는 인간 CTLA4의 길항제의 투여는 동시 또는 순차적일 수 있다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 면역 반응을 증가시킴으로써 치료될 수 있는 암 또는 질환을 치료하는 방법은 그를 필요로 하는 대상체에게 먼저 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여한 다음, 그 후에 (예를 들어, 6시간, 12시간, 24시간, 2일, 3일 또는 그 초과 후에) PD1/PD-L1 축의 길항제 (예를 들어, 인간 PD1 또는 인간 PD-L1의 길항제) 및/또는 인간 CTLA4의 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 방법, 예를 들어 암을 치료하는 방법은 암 또는 면역 반응을 증가시킴으로써 치료될 수 있는 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 먼저 PD1/PD-L1 축의 길항제 (예를 들어, 인간 PD1 또는 인간 PD-L1의 길항제) 및/또는 인간 CTLA4의 길항제를 투여하고, 이어서 그 후에 (예를 들어, 6시간, 12시간, 24시간, 2일, 3일 또는 그 초과 후에) DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여하는 것을 포함하는, 암 또는 면역 반응을 증가시킴으로써 치료될 수 있는 질환을 치료하는 것을 포함할 수 있다. 방법, 예를 들어 암을 치료하는 방법은 먼저 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여하고, 이어서 그 후에 (예를 들어, 6시간, 12시간, 24시간, 2일, 3일 또는 그 초과 후에) PD1/PD-L1 축의 길항제 (예를 들어, 인간 PD1 또는 인간 PD-L1의 길항제)를 투여하고, 동시에 인간 CTLA4의 길항제를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 방법, 예를 들어 암을 치료하는 방법은 먼저 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여하고, 이어서 그 후에 (예를 들어, 6시간, 12시간, 24시간, 2일, 3일 또는 그 초과 후에) PD1/PD-L1 축의 길항제 (예를 들어, 인간 PD1 또는 인간 PD-L1의 길항제)를 투여하고, 동시에 인간 CTLA4의 길항제를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 방법, 예를 들어 암을 치료하는 방법은 먼저 PD1/PD-L1 축의 길항제 (예를 들어, 인간 PD1 또는 인간 PD-L1의 길항제)를 투여하고, 동시에 인간 CTLA4의 길항제를 투여하고, 이어서 그 후에 (예를 들어, 6시간, 12시간, 24시간, 2일, 3일 또는 그 초과 후에), DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 방법은 암, 예컨대 진행암, 전이암, 고형 종양, 진행성 고형 종양, 혈액 종양, 체크포인트 억제제 (또는 체크포인트 길항제)에 대해 불응성인 암, 또는 체크포인트 억제제로의 치료 후에 진행된 암을 치료하는 데 사용될 수 있다.
치료를 위한 암의 비제한적 예는 편평 세포 암종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 편평 비소세포 폐암 (NSCLC), 비편평 NSCLC, 신경교종, 위장암, 신암 (예를 들어, 투명 세포 암종), 난소암, 간암, 결장직장암, 자궁내막암, 신장암 (예를 들어, 신세포 암종 (RCC)), 전립선암 (예를 들어, 호르몬 불응성 전립선 선암종), 갑상선암, 신경모세포종, 췌장암, 교모세포종 (다형성 교모세포종), 자궁경부암, 위암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장 암종, 및 두경부암 (또는 암종), 위암, 배세포 종양, 소아 육종, 부비동비강 자연 킬러, 흑색종 (예를 들어, 전이성 악성 흑색종, 예컨대 피부 또는 안내 악성 흑색종), 골암, 피부암, 자궁암, 항문부암, 고환암, 난관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 식도암, 소장암, 내분비계암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 소아기 고형 종양, 요관암, 신우 암종, 중추 신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양, 뇌암, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피양암, 편평 세포암, T-세포 림프종, 석면에 의해 유발된 것을 포함한 환경적으로 유발된 암, 바이러스-관련 암 또는 바이러스 기원의 암 (예를 들어, 인간 유두종 바이러스 (HPV-관련 또는 -기원 종양)), 및 2종의 주요 혈액 세포 계통, 즉, 골수 세포주 (과립구, 적혈구, 혈소판, 대식세포 및 비만 세포를 생산함) 또는 림프성 세포주 (B, T, NK 및 형질 세포를 생산함) 중 하나로부터 유래된 혈액 악성종양, 예컨대 모든 유형의 백혈병, 림프종 및 골수종, 예를 들어 급성, 만성, 림프구성 및/또는 골수 백혈병, 예컨대 급성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 및 만성 골수 백혈병 (CML), 미분화 AML (MO), 골수모구백혈병 (M1), 골수모구백혈병 (M2; 세포 성숙 동반), 전골수세포백혈병 (M3 또는 M3 변이체 [M3V]), 골수단핵구백혈병 (M4 또는 호산구증가증을 동반한 M4 변이체 [M4E]), 단핵구성 백혈병 (M5), 적백혈병 (M6), 거핵모구성 백혈병 (M7), 고립성 과립구성 육종, 및 녹색종; 림프종, 예컨대 호지킨 림프종 (HL), 비-호지킨 림프종 (NHL), B 세포 혈액 악성종양, 예를 들어 B-세포 림프종, T-세포 림프종, 림프형질세포양 림프종, 단핵구성 B-세포 림프종, 점막-연관 림프성 조직 (MALT) 림프종, 역형성 (예를 들어, Ki 1+) 대세포 림프종, 성인 T-세포 림프종/백혈병, 외투 세포 림프종, 혈관 면역모세포성 T-세포 림프종, 혈관중심성 림프종, 장 T-세포 림프종, 원발성 종격 B-세포 림프종, 전구체 T-림프모구성 림프종, T-림프모구성; 및 림프종/백혈병 (T-Lbly/T-ALL), 말초 T-세포 림프종, 림프모구성 림프종, 이식후 림프증식성 장애, 진성 조직구성 림프종, 원발성 중추 신경계 림프종, 원발성 삼출 림프종, B 세포 림프종, 림프모구성 림프종 (LBL), 림프계의 조혈 종양, 급성 림프모구성 백혈병, 미만성 대 B-세포 림프종, 버킷 림프종, 여포성 림프종, 미만성 조직구성 림프종 (DHL), 면역모세포성 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, 피부 T-세포 림프종 (CTLC) (균상 식육종 또는 세자리 증후군으로도 불림), 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 동반한 림프형질세포양 림프종 (LPL); 골수종, 예컨대 IgG 골수종, 경쇄 골수종, 비분비성 골수종, 무증상 골수종 (무통성 골수종으로도 불림), 고립 형질세포종 및 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 모발상 세포 림프종; 골수계의 조혈 종양, 섬유육종 및 횡문근육종을 비롯한 중간엽 기원의 종양; 정상피종, 기형암종, 성상세포종, 슈반세포종을 비롯한 중추 및 말초 신경의 종양; 섬유육종, 횡문근육종 및 골육종을 비롯한 중간엽 기원의 종양; 및 흑색종, 색소성 건피증, 각화극세포종, 정상피종, 갑상선 여포암 및 기형암종을 비롯한 다른 종양, 림프계의 조혈 종양, 예를 들어 T-세포 및 B-세포 종양, 예컨대 비제한적으로 T-세포 장애, 예컨대 T-전림프구성 백혈병 (T-PLL), 예컨대 소세포 및 대뇌양 세포 유형의 것; T-세포 유형의 거대 과립 림프구 백혈병 (LGL); a/d T-NHL 간비장 림프종; 말초/흉선후 T 세포 림프종 (다형성 및 면역모세포성 하위유형); 혈관중심성 (비강) T-세포 림프종; 두경부암, 신암, 직장암, 갑상선암; 급성 골수성 림프종, 뿐만 아니라 상기 암의 임의의 조합을 포함한다. 본원에 기재된 방법은 또한 전이성 암, 절제불가능한 불응성 암 (예를 들어, 예를 들어 차단 CTLA-4 또는 PD-1 항체를 사용한 이전 면역요법에 불응성인 암), 및/또는 재발성 암의 치료에 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조합 치료는 선행 치료, 예를 들어 면역-종양학 또는 면역요법 약물을 사용한 선행 치료에 대해 부적절한 반응을 나타내거나 또는 진행된 암을 갖는 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 암은 선행 치료에 대해 불응성 또는 저항성이며, 이는 내재적으로 불응성 또는 저항성 (예를 들어, PD-1 경로 길항제에 대해 불응성)이거나, 또는 저항성 또는 불응성 상태가 후천적인 것이다. 예를 들어, 본원에 기재된 조합 치료는 제1 요법에 대해 반응성이 아니거나 충분히 반응성이 아니거나, 또는 치료, 예를 들어 항-PD-1 경로 길항제 치료 후에 질환 진행을 갖는 대상체에게 단독으로 또는 또 다른 요법 (예를 들어, 항-PD-1 경로 길항제 요법)과 조합하여 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 조합 치료는 면역-종양학 작용제, 예를 들어 PD-1 경로 길항제를 이전에 받은 적이 없는 (즉, 그로 치료받지 않은) 환자에게 투여된다.
조합 치료는 하나 이상의 추가의 치료, 예컨대 방사선, 수술 또는 화학요법을 추가로 포함할 수 있다.
본원에 기재된 방법은 또한 특정한 독소 또는 병원체, 예컨대 감염성 질환을 갖는 것에 노출된 환자를 치료하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 본 개시내용은 또한 대상체가 감염성 질환에 대해 치료되도록 본원에 기재된 바와 같은 조합 치료를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 감염성 질환을 치료하는 방법을 고려한다. 상기 논의된 바와 같은 종양에 대한 그의 적용과 유사하게, 조합 치료는 병원체, 독소 및 자기-항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위해 단독으로 또는 아주반트로서 백신과 조합하여 사용될 수 있다. 이러한 치료 접근법이 특히 유용할 수 있는 병원체의 예는 현재 효과적인 백신이 없는 병원체, 또는 통상적인 백신이 덜 완전히 효과적인 병원체를 포함한다. 이들은 HIV, 간염 (A, B, & C), 인플루엔자, 헤르페스, 지아르디아, 말라리아, 리슈마니아, 스타필로코쿠스 아우레우스, 슈도모나스 아에루기노사를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 조합 치료는 작용제에 의한 확립된 감염, 예컨대 감염 과정에 걸쳐 변경된 항원을 제시하는 HIV에 대해 유용할 수 있다.
본원에 기재된 방법에 의해 치료가능할 수 있는 감염을 유발하는 병원성 바이러스의 일부 예는 HIV, 간염 (A, B 또는 C), 포진 바이러스 (예를 들어, VZV, HSV-1, HAV-6, HSV-II 및 CMV, 엡스타인 바르 바이러스), 아데노바이러스, 인플루엔자 바이러스, 플라비바이러스, 에코바이러스, 리노바이러스, 콕사키 바이러스, 코로나바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 볼거리 바이러스, 로타바이러스, 홍역 바이러스, 풍진 바이러스, 파르보바이러스, 백시니아 바이러스, HTLV 바이러스, 뎅기 바이러스, 유두종바이러스, 연속종 바이러스, 폴리오바이러스, 광견병 바이러스, JC 바이러스 및 아르보바이러스 뇌염 바이러스를 포함한다.
본원에 기재된 방법에 의해 치료가능할 수 있는 감염을 유발하는 병원성 박테리아의 일부 예는 클라미디아, 리케치아 박테리아, 미코박테리아, 스타필로코쿠스, 스트렙토코쿠스, 뉴모노코쿠스, 메닝고코쿠스 및 고노코쿠스, 클레브시엘라, 프로테우스, 세라티아, 슈도모나스, 레지오넬라, 디프테리아, 살모넬라, 바실루스, 콜레라, 파상풍, 보툴리눔독소증, 탄저병, 흑사병, 렙토스피라증 및 라임병 박테리아를 포함한다.
본원에 기재된 방법에 의해 치료가능할 수 있는 감염을 유발하는 병원성 진균의 일부 예는 칸디다 (알비칸스, 크루세이, 글라브라타, 트로피칼리스 등), 크립토코쿠스 네오포르만스, 아스페르길루스 (푸미가투스, 니거 등), 뮤코랄레스 속 (뮤코르, 압시디아, 리조푸스), 스포로트릭스 쉔크키이, 블라스토미세스 더마티티디스, 파라콕시디오이데스 브라실리엔시스, 콕시디오이데스 임미티스 및 히스토플라스마 캅술라툼을 포함한다.
본원에 기재된 방법에 의해 치료가능할 수 있는 감염을 유발하는 병원성 기생충의 일부 예는 엔트아메바 히스톨리티카, 발란티디움 콜라이, 네글레리아포울레리, 아칸트아메바 종, 지아르디아 람비아, 크립토스포리디움 종, 뉴모시스티스 카리니이, 플라스모디움 비박스, 바베시아 미크로티, 트리파노소마 브루세이, 트리파노소마 크루지, 리슈마니아 도노바니, 톡소플라스마 곤디이 및 니포스트롱길루스 브라실리엔시스를 포함한다.
상기 모든 방법에서, 조합 치료는 다른 형태의 면역요법, 예를 들어 본원에 기재된 것, 예컨대 시토카인 치료 (예를 들어, 인터페론, GM-CSF, G-CSF, IL-2), 또는 종양 항원의 증진된 제시를 제공할 수 있는 이중특이적 항체 요법 (예를 들어, 문헌 [Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak (1994) Structure 2: 1121-1123])과 조합할 수 있다.
특정 실시양태에서, 방법은 그를 필요로 하는 대상체, 예를 들어 암을 갖는 대상체에게 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제 및 또한 CD4+ T 세포를 억제하는 작용제 및/또는 CD8+ T 세포를 부스팅하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD4+ T 세포를 억제하는 작용제 및 CD8+ T 세포를 부스팅하는 작용제는 종양 환경에서 국부적으로 작용하는 작용제일 수 있다.
DGKα 및/또는 DGKζ 효소 활성의 예시적인 억제제
특정 실시양태에서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제는 DGKα의 억제제이다. 특정 실시양태에서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제는 DGKζ의 억제제이다. 특정 실시양태에서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제는 효소 둘 다를 억제한다. 효소 억제의 수준은 본원에 추가로 기재된 바와 같이 측정될 수 있다. 특정 실시양태에서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제는 다른 DGK 효소의 유의한 억제제가 아니다.
특정 실시양태에서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제는, 예컨대 T 세포 활성을 증가시킴으로써 면역 반응을 증가시킨다. 예를 들어, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제는, 예를 들어 본원에 추가로 기재된 바와 같이 측정될 수 있는 pERK/pPKC 신호전달의 증가에 의해 입증된 바와 같이 1차 T 세포 신호전달을 증가시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제는 다음 특성 중 하나 이상을 갖는다: (i) 항원 자극에 대한 역치를 낮추고; (ii) CTL 이펙터 기능을 증가시키고; (iii) 종양 세포 사멸을 증진시킴. DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 종양 세포 사멸을 증진시키는 경우, 이 활성은 예를 들어 CT26 동물 모델에서 나타난 바와 같이 CD8+ T 세포에 의존성일 수 있다. DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 종양 세포 사멸을 증진시키는 경우, 이 활성은 예를 들어 CT26 동물 모델에서 나타난 바와 같이 NK 세포에 의존성일 수 있다. DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 종양 세포 사멸을 증진시키는 경우, 이 활성은 예를 들어 CT26 동물 모델에서 나타난 바와 같이 CD8+ T 세포 및 NK 세포에 의존성일 수 있다. DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 종양 세포 사멸을 증진시키는 경우, 이 활성은 예를 들어 CT-26 동물 모델에서 CD4 세포 고갈에 의해 증진될 수 있다. 특정 실시양태에서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제는 CT-26 동물 모델에서 AH1+ 사량체 항원 제시를 증진시킨다. DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제는 바람직하게는 상기 언급된 특성 중 하나 이상을 포함하고, 이들 모두를 포함할 수 있다. 이들 특성의 존재는 본원에 기재된 검정, 예컨대 실시예의 "생물학적 검정" 표제의 섹션을 수행함으로써 결정될 수 있다.
질환, 예컨대 암을 치료하는 방법은 그를 필요로 하는 대상체에게 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제 및 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있다:
Figure pct00002
여기서:
R1은 H, F, Cl, Br, -CN, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알킬, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C3-4 시클로알킬, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알콕시, -NRaRa, -S(O)nRe, 또는 -P(O)ReRe이고;
각각의 R1a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, 또는 -NRaRa이고;
각각의 Ra는 독립적으로 H 또는 C1-3 알킬이고;
각각의 Re는 독립적으로 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알킬 또는 C3-4 시클로알킬이고;
R2는 H, 0 내지 4개의 R2a로 치환된 C1-3 알킬, 또는 0 내지 4개의 R2a로 치환된 C3-4 시클로알킬이고;
각각의 R2a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, -O(C1-2 알킬), C3-4 시클로알킬, C3-4 알케닐, 또는 C3-4 알키닐이고;
R3은 H, F, Cl, Br, -CN, C1-3 알킬, C1-2 플루오로알킬, C3-4 시클로알킬, C3-4 플루오로시클로알킬, 또는 -NO2이고;
R4는 -CH2R4a, -CH2CH2R4a, -CH2CHR4aR4d, -CHR4aR4b, 또는 -CR4aR4bR4c이고;
R4a 및 R4b는 독립적으로:
(i) F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -SCH3, C1-3 플루오로알콕시, -NRaRa, -S(O)2Re 또는 -NRaS(O)2Re로부터 독립적으로 선택된 0 내지 4개의 치환기로 치환된 C1-6 알킬이거나;
(ii) C3-6 시클로알킬, 헤테로시클릴, 페닐, 또는 헤테로아릴이고, 각각은 F, Cl, Br, -CN, -OH, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-4 히드록시알킬, -(CH2)1-2O(C1-3 알킬), C1-4 알콕시, -O(C1-4 히드록시알킬), -O(CH)1-3O(C1-3 알킬), C1-3 플루오로알콕시, -O(CH)1-3NRcRc, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), -P(O)(C1-3 알킬)2, -S(O)2(C1-3 알킬), -O(CH2)1-2(C3-6 시클로알킬), -O(CH2)1-2(모르폴리닐), 시클로프로필, 시아노시클로프로필, 메틸아제티디닐, 아세틸아제티디닐, (tert-부톡시카르보닐)아제티디닐, 트리아졸릴, 테트라히드로피라닐, 모르폴리닐, 티오페닐, 메틸피페리디닐, 및 Rd로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되거나; 또는
(iii) C3-6 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 및 헤테로아릴로부터 선택되는 1개의 시클릭 기로 치환된 C1-4 알킬이고, 상기 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), 및 C3-6 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
또는 R4a 및 R4b는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C3-6 시클로알킬 또는 3- 내지 6-원 헤테로시클릴을 형성하고, 각각은 0 내지 3개의 Rf로 치환되고;
각각의 Rf는 독립적으로 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, 또는 C3-6 시클로알킬, 3- 내지 6-원 헤테로시클릴, 페닐, 모노시클릭 헤테로아릴, 및 비시클릭 헤테로아릴로부터 선택되는 시클릭 기이고, 각각의 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, 및 -NRcRc로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R4c는 C1-6 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 각각은 F, Cl, -OH, C1-2 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, 및 -CN으로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되고;
R4d는 -OCH3이고;
각각의 Rc는 독립적으로 H 또는 C1-2 알킬이고;
Rd는 F, Cl, -CN, -CH3, 및 -OCH3으로부터 선택되는 0 내지 1개의 치환기로 치환된 페닐이고;
각각의 R5는 독립적으로 -CN, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C1-6 알킬, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-4 알케닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-4 알키닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C3-4 시클로알킬, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 페닐, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 옥사디아졸릴, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 피리디닐, -(CH2)1-2(0 내지 4개의 Rg로 치환된 헤테로시클릴), -(CH2)1-2NRcC(O)(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcC(O)O(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcS(O)2(C1-4 알킬), -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -C(O)O(C3-4 시클로알킬), -C(O)NRaRa 또는 -C(O)NRa(C3-4 시클로알킬)이고;
각각의 Rg는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, -O(CH2)1-2O(C1-2 알킬), 또는 -NRcRc이고;
m은 0, 1, 2, 또는 3이고;
n은 0, 1, 또는 2이다.
질환, 예컨대 암을 치료하는 방법은 그를 필요로 하는 대상체에게 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제 및 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서:
R1은 H, F, Cl, Br, -CN, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알킬, 0 내지 3개의 R1a로 치환된 시클로프로필, 0 내지 3개의 R1a로 치환된 C1-3 알콕시, -NRaRa, -S(O)nCH3, 또는 -P(O)(CH3)2이고;
각각의 R1a는 독립적으로 F, Cl, 또는 -CN이고;
각각의 Ra는 독립적으로 H 또는 C1-3 알킬이고;
R2는 H, 또는 0 내지 2개의 R2a로 치환된 C1-2 알킬이고;
각각의 R2a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, -O(C1-2 알킬), 시클로프로필, C3-4 알케닐, 또는 C3-4 알키닐이고;
R3은 H, F, Cl, Br, -CN, C1-2 알킬, -CF3, 시클로프로필, 또는 -NO2이고;
R4a 및 R4b는 독립적으로:
(i) F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -SCH3, C1-3 플루오로알콕시, 및 -NRaRa로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환된 C1-4 알킬이거나;
(ii) C3-6 시클로알킬, 헤테로시클릴, 페닐, 또는 헤테로아릴이고, 각각은 F, Cl, Br, -CN, -OH, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, -CH2OH, -(CH2)1-2O(C1-2 알킬), C1-4 알콕시, -O(C1-4 히드록시알킬), -O(CH)1-2O(C1-2 알킬), C1-3 플루오로알콕시, -O(CH)1-2NRcRc, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), -P(O)(C1-2 알킬)2, -S(O)2(C1-3 알킬), -O(CH2)1-2(C3-4 시클로알킬), -O(CH2)1-2(모르폴리닐), 시클로프로필, 시아노시클로프로필, 메틸아제티디닐, 아세틸아제티디닐, (tert-부톡시카르보닐)아제티디닐, 트리아졸릴, 테트라히드로피라닐, 모르폴리닐, 티오페닐, 메틸피페리디닐, 및 Rd로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되거나; 또는
(iii) C3-6 시클로알킬, 헤테로시클릴, 페닐, 및 헤테로아릴로부터 선택되는 1개의 시클릭 기로 치환된 C1-3 알킬이고, 상기 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-3 알킬, C1-2 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), 및 C3-4 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
또는 R4a 및 R4b는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C3-6 시클로알킬 또는 3- 내지 6-원 헤테로시클릴을 형성하고, 각각은 0 내지 3개의 Rf로 치환되고;
각각의 Rf는 독립적으로 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4 알킬, C1-2 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, 또는 C3-6 시클로알킬, 3- 내지 6-원 헤테로시클릴, 페닐, 모노시클릭 헤테로아릴, 및 비시클릭 헤테로아릴로부터 선택되는 시클릭 기이고, 각각의 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4 알킬, C1-2 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, 및 -NRcRc로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R4c는 C1-4 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 각각은 F, Cl, -OH, C1-2 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, 및 -CN으로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되고;
각각의 R5는 독립적으로 -CN, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C1-5 알킬, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-3 알케닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-3 알키닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C3-4 시클로알킬, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 페닐, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 옥사디아졸릴, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 피리디닐, -(CH2)1-2(0 내지 4개의 Rg로 치환된 헤테로시클릴), -(CH2)1-2NRcC(O)(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcC(O)O(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcS(O)2(C1-4 알킬), -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -C(O)O(C3-4 시클로알킬), -C(O)NRaRa 또는 -C(O)NRa(C3-4 시클로알킬)이다.
질환, 예컨대 암을 치료하는 방법은 그를 필요로 하는 대상체에게 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제 및 하기 구조를 갖는 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있다:
Figure pct00003
여기서:
R1은 -CN이고;
R2는 -CH3이고;
R3은 H, F, 또는 -CN이고;
R4는
Figure pct00004
Figure pct00005
이다.
질환, 예컨대 암을 치료하는 방법은 그를 필요로 하는 대상체에게 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제 및 하기 구조 또는 화학식 중 하나를 갖는 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 (또는 그의 이성질체)인 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있다:
메틸 1-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-4-(6-시아노-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-4-일)피페라진-2-카르복실레이트
Figure pct00006
;
4-((2R,5S)-4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-6-브로모-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-3-카르보니트릴
Figure pct00007
;
(R)-8-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2,7-디카르보니트릴
Figure pct00008
;
8-[(2S,5R)-4-[(4-클로로페닐)(5-메틸피리딘-2-일)메틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00009
;
4-[(2S,5R)-4-[(4-클로로페닐)(4-플루오로페닐)메틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-6-메톡시-1-메틸-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-2-온
Figure pct00010
;
8-[(2S,5R)-4-{[2-(디플루오로메틸)-4-플루오로페닐]메틸}-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00011
;
8-[(2S,5R)-4-[(4-플루오로페닐)(4-메틸페닐)메틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00012
;
8-[(2S,5R)-4-[1-(2,6-디플루오로페닐)에틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00013
;
8-((3R)-4-((4-클로로페닐)(5-플루오로피리딘-2-일)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2,7-디카르보니트릴
Figure pct00014
;
8-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)피페라진-1-일)-5-메틸-7-니트로-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00015
; 및
8-[(2S,5R)-4-[비스(4-메틸페닐)메틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00016
.
질환, 예컨대 암을 치료하는 방법은 그를 필요로 하는 대상체에게 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제 및 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 염인 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있다:
Figure pct00017
여기서:
R1은 H, F, Cl, Br, -CN, -OH, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알킬, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C3-4 시클로알킬, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알콕시, -NRaRa, -S(O)nRe, 또는 -P(O)ReRe이고;
각각의 R1a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, 또는 -NRaRa이고;
각각의 Ra는 독립적으로 H 또는 C1-3 알킬이고;
각각의 Re는 독립적으로 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알킬 또는 C3-4 시클로알킬이고;
R2는 H, 0 내지 4개의 R2a로 치환된 C1-3 알킬, 또는 0 내지 4개의 R2a로 치환된 C3-4 시클로알킬이고;
각각의 R2a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, -O(C1-2 알킬), C3-4 시클로알킬, C3-4 알케닐, 또는 C3-4 알키닐이고;
R4는 -CH2R4a, -CH2CH2R4a, -CH2CHR4aR4d, -CHR4aR4b, 또는 -CR4aR4bR4c이고;
R4a 및 R4b는 독립적으로:
(i) -CN, 또는 F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -SCH3, C1-3 플루오로알콕시, -NRaRa, -S(O)2Re, 또는 -NRaS(O)2Re로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환된 C1-6 알킬이거나;
(ii) C3-6 시클로알킬, 4- 내지 10-원 헤테로시클릴, 페닐, 또는 5- 내지 10-원 헤테로아릴이고, 각각은 F, Cl, Br, -CN, -OH, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-2 브로모알킬, C1-2 시아노알킬, C1-4 히드록시알킬, -(CH2)1-2O(C1-3 알킬), C1-4 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, C1-3 시아노알콕시, -O(C1-4 히드록시알킬), -O(CRxRx)1-3O(C1-3 알킬), C1-3 플루오로알콕시, -O(CH2)1-3NRcRc, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -NRcRc, -CH2NRaRa, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -(CRxRx)0-2NRaC(O)O(C1-4 알킬), -P(O)(C1-3 알킬)2, -S(O)2(C1-3 알킬), -(CRxRx)1-2(C3-4 시클로알킬), -(CRxRx)1-2(모르폴리닐), -(CRxRx)1-2(디플루오로모르폴리닐), -(CRxRx)1-2(디메틸모르폴리닐), -(CRxRx)1-2(옥사아자비시클로[2.2.1]헵타닐), (CRxRx)1-2(옥사아자스피로[3.3]헵타닐), -(CRxRx)1-2(메틸피페라지노닐), -(CRxRx)1-2(아세틸피페라지닐), -(CRxRx)1-2(피페리디닐), -(CRxRx)1-2(디플루오로피페리디닐), -(CRxRx)1-2(메톡시피페리디닐), -(CRxRx)1-2(히드록시피페리디닐), -O(CRxRx)0-2(C3-6 시클로알킬), -O(CRxRx)0-2(메틸시클로프로필), -O(CRxRx)0-2((에톡시카르보닐)시클로프로필), -O(CRxRx)0-2(옥세타닐), -O(CRxRx)0-2(메틸아제티디닐), -O(CRxRx)0-2(테트라히드로피라닐), -O(CRxRx)1-2(모르폴리닐), -O(CRxRx)0-2(티아졸릴), 시클로프로필, 시아노시클로프로필, 메틸아제티디닐, 아세틸아제티디닐, (tert-부톡시카르보닐)아제티디닐, 트리아졸릴, 테트라히드로피라닐, 모르폴리닐, 티오페닐, 메틸피페리디닐, 디옥솔라닐, 피롤리디노닐, 및 Rd로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되거나; 또는
(iii) C3-6 시클로알킬, 4- 내지 10-원 헤테로시클릴, 모노- 또는 비시클릭 아릴, 또는 5- 내지 10-원 헤테로아릴로부터 선택되는 1개의 시클릭 기로 치환된 C1-4 알킬이고, 상기 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), 및 C3-6 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
또는 R4a 및 R4b는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C3-6 시클로알킬 또는 3- 내지 6-원 헤테로시클릴을 형성하고, 각각은 0 내지 3개의 Rf로 치환되고;
각각의 Rf는 독립적으로 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, 또는 C3-6 시클로알킬, 3- 내지 6-원 헤테로시클릴, 페닐, 모노시클릭 헤테로아릴, 및 비시클릭 헤테로아릴로부터 선택되는 시클릭 기이고, 각각의 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, 및 -NRcRc로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R4c는 C1-6 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 각각은 F, Cl, -OH, C1-2 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, 및 -CN으로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되고;
R4d는 -OCH3이고;
각각의 Rc는 독립적으로 H 또는 C1-2 알킬이고;
Rd는 F, Cl, -CN, -CH3, 및 -OCH3으로부터 선택되는 0 내지 1개의 치환기로 치환된 페닐이고;
각각의 R5는 독립적으로 -CN, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C1-6 알킬, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-4 알케닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-4 알키닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C3-4 시클로알킬, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 페닐, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 옥사디아졸릴, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 피리디닐, -(CH2)1-2(0 내지 4개의 Rg로 치환된 4- 내지 10-원 헤테로시클릴), -(CH2)1-2NRcC(O)(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcC(O)O(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcS(O)2(C1-4 알킬), -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -C(O)O(C3-4 시클로알킬), -C(O)NRaRa 또는 -C(O)NRa(C3-4 시클로알킬)이고;
각각의 Rg는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, -O(CH2)1-2O(C1-2 알킬), 또는 -NRcRc이고;
m은 0, 1, 2, 또는 3이고;
n은 0, 1, 또는 2이다.
질환, 예컨대 암을 치료하는 방법은 그를 필요로 하는 대상체에게 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제 및 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서:
R1은 H, F, Cl, Br, -CN, -OH, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알킬, 0 내지 3개의 R1a로 치환된 시클로프로필, 0 내지 3개의 R1a로 치환된 C1-3 알콕시, -NRaRa, -S(O)nCH3, 또는 -P(O)(CH3)2이고;
R2는 H, 또는 0 내지 2개의 R2a로 치환된 C1-2 알킬이고;
각각의 R2a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, -O(C1-2 알킬), 시클로프로필, C3-4 알케닐, 또는 C3-4 알키닐이고;
R4a 및 R4b는 독립적으로:
(i) -CN, 또는 F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -SCH3, C1-3 플루오로알콕시, 및 -NRaRa로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환된 C1-4 알킬이거나;
(ii) C3-6 시클로알킬, 4- 내지 10-원 헤테로시클릴, 페닐, 또는 5- 내지 10-원 헤테로아릴이고, 각각은 F, Cl, Br, -CN, -OH, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-2 브로모알킬, C1-2 시아노알킬, C1-2 히드록시알킬, -CH2NRaRa, -(CH2)1-2O(C1-2 알킬), -(CH2)1-2NRxC(O)O(C1-2 알킬), C1-4 알콕시, -O(C1-4 히드록시알킬), -O(CRxRx)1-2O(C1-2 알킬), C1-3 플루오로알콕시, C1-3 시아노알콕시, -O(CH2)1-2NRcRc, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), -P(O)(C1-2 알킬)2, -S(O)2(C1-3 알킬), -(CH2)1-2(C3-4 시클로알킬), -CRxRx(모르폴리닐), -CRxRx(디플루오로모르폴리닐), -CRxRx(디메틸모르폴리닐), -CRxRx(옥사자비시클로[2.2.1]헵타닐), -CRxRx(옥사아자스피로[3.3]헵타닐), -CRxRx(메틸피페라지노닐), -CRxRx(아세틸피페라지닐), -CRxRx(피페리디닐), -CRxRx(디플루오로피페리디닐), -CRxRx(메톡시피페리디닐), -CRxRx(히드록시피페리디닐), -O(CH2)0-2(C3-4 시클로알킬), -O(CH2)0-2(메틸시클로프로필), -O(CH2)0-2((에톡시카르보닐)시클로프로필), -O(CH2)0-2(옥세타닐), -O(CH2)0-2(메틸아제티디닐), -O(CH2)1-2(모르폴리닐), -O(CH2)0-2(테트라히드로피라닐), -O(CH2)0-2(티아졸릴), 시클로프로필, 시아노시클로프로필, 메틸아제티디닐, 아세틸아제티디닐, (tert-부톡시카르보닐)아제티디닐, 디옥솔라닐, 피롤리디노닐, 트리아졸릴, 테트라히드로피라닐, 모르폴리닐, 티오페닐, 메틸피페리디닐, 및 Rd로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되거나; 또는
(iii) C3-6 시클로알킬, 4- 내지 10-원 헤테로시클릴, 모노- 또는 비시클릭 아릴, 또는 5- 내지 10-원 헤테로아릴로부터 선택되는 1개의 시클릭 기로 치환된 C1-3 알킬이고, 상기 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-3 알킬, C1-2 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), 및 C3-4 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
또는 R4a 및 R4b는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C3-6 시클로알킬 또는 3- 내지 6-원 헤테로시클릴을 형성하고, 각각은 0 내지 3개의 Rf로 치환되고;
각각의 Rf는 독립적으로 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4 알킬, C1-2 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, 또는 C3-6 시클로알킬, 3- 내지 6-원 헤테로시클릴, 페닐, 모노시클릭 헤테로아릴, 및 비시클릭 헤테로아릴로부터 선택되는 시클릭 기이고, 각각의 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4 알킬, C1-2 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, 및 -NRcRc로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R4c는 C1-4 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 각각은 F, Cl, -OH, C1-2 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, 및 -CN으로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되고;
각각의 R5는 독립적으로 -CN, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C1-5 알킬, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-3 알케닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-3 알키닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C3-4 시클로알킬, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 페닐, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 옥사디아졸릴, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 피리디닐, -(CH2)1-2(0 내지 4개의 Rg로 치환된 4- 내지 10-원 헤테로시클릴), -(CH2)1-2NRcC(O)(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcC(O)O(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcS(O)2(C1-4 알킬), -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -C(O)O(C3-4 시클로알킬), -C(O)NRaRa 또는 -C(O)NRa(C3-4 시클로알킬)이고;
각각의 Rx는 독립적으로 H 또는 -CH3이고;
m은 1, 2, 또는 3이다.
질환, 예컨대 암을 치료하는 방법은 그를 필요로 하는 대상체에게 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제, 및 m이 2이고; 1개의 R5가 R5a이고, 다른 R5가 R5c인 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있고; 상기 화합물은 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는다:
Figure pct00018
R5a는 -CH3 또는 -CH2CH3이고;
R5c는 -CH3, -CH2CH3, 또는 -CH2CH2CH3이다.
질환, 예컨대 암을 치료하는 방법은 그를 필요로 하는 대상체에게 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제 및 하기 화학식 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서
Figure pct00019
R1은 -CN이고;
R2는 -CH3이고;
R5a는 -CH3 또는 -CH2CH3이고;
R5c는 -CH3, -CH2CH3, 또는 -CH2CH2CH3이다.
질환, 예컨대 암을 치료하는 방법은 그를 필요로 하는 대상체에게 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제 및 하기 구조 중 하나를 갖는 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있다:
4-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)프로필)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00020
4-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-((S)-1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)프로필)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 및 4-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-((R)-1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)프로필)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 포함;
4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00021
4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-((S)-1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 및 4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-((R)-1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 포함;
4-((2S,5R)-5-에틸-4-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00022
4-((2S,5R)-5-에틸-4-((S)-(4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 및 4-((2S,5R)-5-에틸-4-((R)-(4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 포함;
4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(4-(트리플루오로메톡시)페닐)에틸)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00023
4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-((S)-1-(4-(트리플루오로메톡시)페닐)에틸)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 및 4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-((R)-1-(4-(트리플루오로메톡시)페닐)에틸)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 포함;
4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(4-(트리플루오로메톡시)페닐)프로필)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00024
4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-((S)-1-(4-(트리플루오로메톡시)페닐)프로필)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 및 4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-((R)-1-(4-(트리플루오로메톡시)페닐)프로필)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 포함;
4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)프로필)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00025
4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-((S)-1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)프로필)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 및 4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-((R)-1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)프로필)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 포함;
4-((2S,5R)-4-((4-클로로페닐)(피리딘-2-일)메틸)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00026
4-((2S,5R)-4-((R)-(4-클로로페닐)(피리딘-2-일)메틸)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 및 4-((2S,5R)-4-((S)-(4-클로로페닐)(피리딘-2-일)메틸)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 포함;
4-((2S,5R)-4-((3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)(4-플루오로페닐)메틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00027
4-((2S,5R)-4-((R)-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)(4-플루오로페닐)메틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 및 4-((2S,5R)-4-((S)-(3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)(4-플루오로페닐)메틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 포함;
4-((2S,5R)-4-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00028
4-((2S,5R)-4-((S)-(4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 및 4-((2S,5R)-4-((R)-(4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 포함;
4-((2S,5R)-4-(1-(4-(시클로프로필메톡시)-2-플루오로페닐)프로필)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00029
4-((2S,5R)-4-((S)-1-(4-(시클로프로필메톡시)-2-플루오로페닐)프로필)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 및 4-((2S,5R)-4-((R)-1-(4-(시클로프로필메톡시)-2-플루오로페닐)프로필)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 포함;
4-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)부틸)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00030
4-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-((S)-1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)부틸)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 및 4-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-((R)-1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)부틸)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 포함;
1-메틸-4-((2S,5R)-2-메틸-5-프로필-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00031
1-메틸-4-((2S,5R)-2-메틸-5-프로필-4-((S)-1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 및 1-메틸-4-((2S,5R)-2-메틸-5-프로필-4-((R)-1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 포함.
PD1/PD-L1 축의 길항제
DGK 억제제와 조합될 수 있는 PD1/PD-L1 축의 길항제는 하기를 포함한다.
PD1/PD-L1 축의 길항제는 음성 체크포인트를 억제함으로써 면역 반응을 자극하는 인간 PD1의 길항제 또는 인간 PD-L1의 길항제이다. 길항제는 임의의 유형의 분자, 예를 들어 단백질, 핵산 또는 소분자일 수 있다. 특정 실시양태에서, PD1/PD-L1 축의 길항제는 인간 PD1 또는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 항체이다.
관련 기술분야에 공지된 항-PD-1 항체가 본원에 기재된 방법에 사용될 수 있다. 높은 친화도로 PD-1에 특이적으로 결합하는 다양한 인간 모노클로날 항체가 미국 특허 번호 8,008,449에 개시되어 있다. 미국 특허 번호 8,008,449에 개시된 항-PD-1 인간 항체는 다음 특징 중 1개 이상을 나타내는 것으로 입증되었다: (a) 비아코어 바이오센서 시스템을 사용하여 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정 시 1 x 10-7 M 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합함; (b) 인간 CD28, CTLA-4 또는 ICOS에 실질적으로 결합하지 않음; (c) 혼합 림프구 반응 (MLR) 검정에서 T-세포 증식을 증가시킴; (d) MLR 검정에서 인터페론-γ 생산을 증가시킴; (e) MLR 검정에서 IL-2 분비를 증가시킴; (f) 인간 PD-1 및 시노몰구스 원숭이 PD-1에 결합함; (g) PD-1에 대한 PD-L1 및/또는 PD-L2의 결합을 억제함; (h) 항원-특이적 기억 반응을 자극함; (i) 항체 반응을 자극함; 및 (j) 생체내 종양 세포 성장을 억제함. 본 개시내용에 사용가능한 항-PD-1 항체는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고 상기 특징 중 적어도 1개, 일부 측면에서 적어도 5개를 나타내는 모노클로날 항체를 포함한다.
다른 항-PD-1 모노클로날 항체는, 예를 들어 미국 특허 번호 6,808,710, 7,488,802, 8,168,757 및 8,354,509, 미국 공개 번호 2016/0272708, 및 PCT 공개 번호 WO 2012/145493, WO 2008/156712, WO 2015/112900, WO 2012/145493, WO 2015/112800, WO 2014/206107, WO 2015/35606, WO 2015/085847, WO 2014/179664, WO 2017/020291, WO 2017/020858, WO 2016/197367, WO 2017/024515, WO 2017/025051, WO 2017/123557, WO 2016/106159, WO 2014/194302, WO 2017/040790, WO 2017/133540, WO 2017/132827, WO 2017/024465, WO 2017/025016, WO 2017/106061, WO 2017/19846, WO 2017/024465, WO 2017/025016, WO 2017/132825, 및 WO 2017/133540에 기재되어 있으며, 이들 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.
일부 측면에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙 (또한 옵디보(OPDIVO)®, 5C4, BMS-936558, MDX-1106, 및 ONO-4538로 공지됨), 펨브롤리주맙 (머크; 또한 키트루다(KEYTRUDA)®, 람브롤리주맙, 및 MK-3475로 공지됨; WO2008/156712 참조), PDR001 (노파르티스; WO 2015/112900 참조), MEDI-0680 (아스트라제네카; 또한 AMP-514로 공지됨; WO 2012/145493 참조), 세미플리맙 (레게네론; 또한 REGN-2810으로 공지됨; WO 2015/112800 참조), JS001 (타이조우 준시 파마; 또한 토리팔리맙으로 공지됨; 문헌 [Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)]), 신틸리맙, BGB-A317 (베이진; 또한 티셀리주맙으로 공지됨; WO 2015/35606 및 US 2015/0079109 참조), INCSHR1210 (지앙수 헹루이 메디신; 또한 SHR-1210으로 공지됨; WO 2015/085847; 문헌 [Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)]), TSR-042 (테사로 바이오파마슈티칼; 또한 ANB011로 공지됨; WO2014/179664 참조), GLS-010 (욱시/하르빈 글로리아 파마슈티칼스; 또한 WBP3055로 공지됨; 문헌 [Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)]), AM-0001 (아르모), STI-1110 (소렌토 테라퓨틱스; WO 2014/194302 참조), AGEN2034 (아제누스; WO 2017/040790 참조), MGA012 (마크로제닉스, WO 2017/19846 참조), BCD-100 (바이오캐드; 문헌 [Kaplon et al., mAbs 10(2):183-203 (2018)]), 및 IBI308 (이노벤트; WO 2017/024465, WO 2017/025016, WO 2017/132825, 및 WO 2017/133540 참조)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 측면에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다. 니볼루맙은 PD-1 리간드 (PD-L1 및 PD-L2)와의 상호작용을 선택적으로 방지함으로써 항종양 T-세포 기능의 하향-조절을 차단하는 완전 인간 IgG4 (S228P) PD-1 면역 체크포인트 억제제 항체이다 (미국 특허 번호 8,008,449; 문헌 [Wang et al., 2014 Cancer Immunol Res. 2(9):846-56]).
또 다른 측면에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 펨브롤리주맙은 인간 세포 표면 수용체 PD-1 (프로그램화된 사멸-1 또는 프로그램화된 세포 사멸-1)에 대해 지시된 인간화 모노클로날 IgG4 (S228P) 항체이다. 펨브롤리주맙은, 예를 들어 미국 특허 번호 8,354,509 및 8,900,587에 기재되어 있다.
개시된 방법에 사용가능한 항-PD-1 항체는 또한, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고 인간 PD-1에의 결합에 대해 본원에 개시된 임의의 항-PD-1 항체, 예를 들어 니볼루맙과 교차-경쟁하는 단리된 항체를 포함한다 (예를 들어, 미국 특허 번호 8,008,449 및 8,779,105; WO 2013/173223 참조). 일부 측면에서, 항-PD-1 항체는 본원에 기재된 임의의 항-PD-1 항체, 예를 들어 니볼루맙과 동일한 에피토프에 결합한다. 항원에의 결합에 대해 교차-경쟁하는 항체의 능력은 이들 모노클로날 항체가 항원의 동일한 에피토프 영역에 결합하고, 다른 교차-경쟁 항체가 그 특정한 에피토프 영역에 결합하는 것을 입체적으로 방해한다는 것을 나타낸다. 이들 교차-경쟁 항체는 PD-1의 동일한 에피토프 영역에 대한 그의 결합에 의해 참조 항체, 예를 들어 니볼루맙과 매우 유사한 기능적 특성을 가질 것으로 예상된다. 교차-경쟁 항체는 표준 PD-1 결합 검정, 예컨대 비아코어 분석, ELISA 검정 또는 유동 세포측정법에서 니볼루맙과 교차-경쟁하는 그의 능력에 기초하여 용이하게 확인될 수 있다 (예를 들어, WO 2013/173223 참조).
특정 측면에서, 인간 PD-1에의 결합에 대해 니볼루맙과 교차-경쟁하거나, 또는 그와 동일한 인간 PD-1 항체의 에피토프 영역에 결합하는 항체는 모노클로날 항체이다. 인간 대상체로의 투여의 경우, 이들 교차-경쟁 항체는 키메라 항체, 조작된 항체, 또는 인간화 또는 인간 항체이다. 이러한 키메라, 조작된, 인간화 또는 인간 모노클로날 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 제조 및 단리될 수 있다.
개시된 개시내용의 방법에 사용가능한 항-PD-1 항체는 또한 상기 항체의 항원-결합 부분을 포함한다. 항체의 항원-결합 기능이 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있다는 것이 충분히 입증되었다.
개시된 조성물 및 방법에 사용하기에 적합한 항-PD-1 항체는 PD-1에 높은 특이성 및 친화도로 결합하고, PD-L1 및/또는 PD-L2의 결합을 차단하고, PD-1 신호전달 경로의 면역억제 효과를 억제하는 항체이다. 본원에 개시된 임의의 조성물 또는 방법에서, 항-PD-1 "항체"는, PD-1 수용체에 결합하며 리간드 결합을 억제하고 면역계를 상향-조절하는 데 있어서 전체 항체의 기능적 특성과 유사한 기능적 특성을 나타내는 항원-결합 부분 또는 단편을 포함한다. 특정 측면에서, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 인간 PD-1에의 결합에 대해 니볼루맙과 교차-경쟁한다.
특정 측면에서, PD1/PD-L1 축의 길항제는 PD-L1의 길항제이다. 관련 기술분야에 공지된 항-PD-L1 항체가 본 개시내용의 조성물 및 방법에 사용될 수 있다. 본 개시내용의 조성물 및 방법에 유용한 항-PD-L1 항체의 예는 미국 특허 번호 9,580,507에 개시된 항체를 포함한다. 미국 특허 번호 9,580,507에 개시된 항-PD-L1 인간 모노클로날 항체는 다음 특징 중 1개 이상을 나타내는 것으로 입증되었다: (a) 비아코어 바이오센서 시스템을 사용하여 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정 시, 1 x 10-7 M 이하의 KD로 인간 PD-L1에 결합함; (b) 혼합 림프구 반응 (MLR) 검정에서 T-세포 증식을 증가시킴; (c) MLR 검정에서 인터페론-γ 생산을 증가시킴; (d) MLR 검정에서 IL-2분비를 증가시킴; (e) 항체 반응을 자극함; 및 (f) T 세포 이펙터 세포 및/또는 수지상 세포에 대한 T 조절 세포의 효과를 역전시킴. 본 개시내용에 사용가능한 항-PD-L1 항체는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하고 상기 특징 중 적어도 1개, 일부 측면에서 적어도 5개를 나타내는 모노클로날 항체를 포함한다.
특정 측면에서, 항-PD-L1 항체는 BMS-936559 (또한 12A4, MDX-1105로 공지됨; 예를 들어, 미국 특허 번호 7,943,743 및 WO 2013/173223 참조), 아테졸리주맙 (로슈; 또한 테센트릭(TECENTRIQ)®으로 공지됨; MPDL3280A, RG7446; US 8,217,149 참조; 또한, 문헌 [Herbst et al. (2013) J Clin Oncol 31(suppl):3000] 참조), 두르발루맙 (아스트라제네카; 또한 임핀지(IMFINZI)™, MEDI-4736으로 공지됨; WO 2011/066389 참조), 아벨루맙 (화이자; 또한 바벤시오(BAVENCIO)®, MSB-0010718C로 공지됨; WO 2013/079174 참조), STI-1014 (소렌토; WO2013/181634 참조), CX-072 (시톰엑스; WO2016/149201 참조), KN035 (3D 메드/알파맙; 문헌 [Zhang et al., Cell Discov. 7:3 (March 2017)] 참조), LY3300054 (일라이 릴리 컴퍼니; 예를 들어, WO 2017/034916 참조), BGB-A333 (베이진; 문헌 [Desai et al., JCO 36 (15suppl):TPS3113 (2018)] 참조), 및 CK-301 (체크포인트 테라퓨틱스; 문헌 [Gorelik et al., AACR:Abstract 4606 (Apr 2016)] 참조).
특정 측면에서, PD-L1 항체는 아테졸리주맙 (테센트릭®)이다. 아테졸리주맙은 완전 인간화 IgG1 모노클로날 항-PD-L1 항체이다.
특정 측면에서, PD-L1 항체는 두르발루맙 (임핀지™)이다. 두르발루맙은 인간 IgG1 카파 모노클로날 항-PD-L1 항체이다.
특정 측면에서, PD-L1 항체는 아벨루맙 (바벤시오®)이다. 아벨루맙은 인간 IgG1 람다 모노클로날 항-PD-L1 항체이다.
개시된 방법에 사용가능한 항-PD-L1 항체는 또한, 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하고 인간 PD-L1에의 결합에 대해 본원에 개시된 임의의 항-PD-L1 항체, 예를 들어 아테졸리주맙, 두르발루맙 및/또는 아벨루맙과 교차-경쟁하는 단리된 항체를 포함한다. 일부 측면에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 기재된 임의의 항-PD-L1 항체, 예를 들어 아테졸리주맙, 두르발루맙 및/또는 아벨루맙과 동일한 에피토프에 결합한다. 항원에의 결합에 대해 교차-경쟁하는 항체의 능력은 이들 항체가 항원의 동일한 에피토프 영역에 결합하고, 다른 교차-경쟁 항체가 그 특정한 에피토프 영역에 결합하는 것을 입체적으로 방해한다는 것을 나타낸다. 이들 교차-경쟁 항체는 PD-L1의 동일한 에피토프 영역에 대한 그의 결합에 의해 참조 항체, 예를 들어 아테졸리주맙 및/또는 아벨루맙과 매우 유사한 기능적 특성을 가질 것으로 예상된다. 교차-경쟁 항체는 표준 PD-L1 결합 검정, 예컨대 비아코어 분석, ELISA 검정 또는 유동 세포측정법에서 아테졸리주맙 및/또는 아벨루맙과 교차-경쟁하는 그의 능력에 기초하여 용이하게 확인될 수 있다 (예를 들어, WO 2013/173223 참조).
특정 측면에서, 인간 PD-L1에의 결합에 대해 아테졸리주맙, 두르발루맙 및/또는 아벨루맙과 교차-경쟁하거나, 또는 그와 동일한 인간 PD-L1 항체의 에피토프 영역에 결합하는 항체는 모노클로날 항체이다. 인간 대상체로의 투여의 경우, 이들 교차-경쟁 항체는 키메라 항체, 조작된 항체, 또는 인간화 또는 인간 항체이다. 이러한 키메라, 조작된, 인간화 또는 인간 모노클로날 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 제조 및 단리될 수 있다.
개시된 개시내용의 방법에 사용가능한 항-PD-L1 항체는 또한 상기 항체의 항원-결합 부분을 포함한다. 항체의 항원-결합 기능이 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있다는 것이 충분히 입증되었다.
개시된 방법에 사용하기에 적합한 항-PD-L1 항체는 PD-L1에 높은 특이성 및 친화도로 결합하고, PD-1의 결합을 차단하고, PD-1 신호전달 경로의 면역억제 효과를 억제하는 항체이다. 본원에 개시된 임의의 방법에서, 항-PD-L1 "항체"는, PD-L1에 결합하며 수용체 결합을 억제하고 면역계를 상향-조절하는 데 있어서 전체 항체와 유사한 기능적 특성을 나타내는 항원-결합 부분 또는 단편을 포함한다. 특정 측면에서, 항-PD-L1 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 인간 PD-L1에의 결합에 대해 아테졸리주맙, 두르발루맙 및/또는 아벨루맙과 교차-경쟁한다.
본 개시내용에 유용한 항-PD-L1 항체는 PD-L1에 특이적으로 결합하는 임의의 PD-L1 항체, 예를 들어 인간 PD-1에의 결합에 대해 두르발루맙, 아벨루맙 또는 아테졸리주맙과 교차-경쟁하는 항체, 예를 들어 두르발루맙, 아벨루맙 또는 아테졸리주맙과 동일한 에피토프에 결합하는 항체일 수 있다. 특정한 측면에서, 항-PD-L1 항체는 두르발루맙이다. 다른 측면에서, 항-PD-L1 항체는 아벨루맙이다. 일부 측면에서, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이다.
CTLA4의 길항제
DGK 억제제와 조합될 수 있는 CTLA4의 길항제는 하기를 포함한다.
CTLA-4의 길항제는 음성 체크포인트를 억제함으로써 면역 반응을 자극하는 인간 CTLA-4의 길항제이다. 길항제는 임의의 유형의 분자, 예를 들어 단백질, 핵산 또는 소분자일 수 있다. 특정 실시양태에서, CTLA-4의 길항제는 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체이다.
관련 기술분야에 공지된 항-CTLA-4 항체가 본 개시내용의 방법에 사용될 수 있다. 본 개시내용의 항-CTLA-4 항체는 인간 CTLA-4에 결합하여 CTLA-4와 인간 B7 수용체의 상호작용을 방해한다. CTLA-4와 B7의 상호작용은 CTLA-4 수용체를 보유하는 T-세포의 불활성화를 유발하는 신호를 전달하기 때문에, 상호작용의 파괴가 이러한 T 세포의 활성화를 효과적으로 유도, 증진 또는 연장시켜 면역 반응을 유도, 증진 또는 연장시킨다.
CTLA-4에 높은 친화도로 특이적으로 결합하는 인간 모노클로날 항체는 미국 특허 번호 6,984,720에 개시되어 있다. 다른 항-CTLA-4 모노클로날 항체는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,977,318, 6,051,227, 6,682,736, 및 7,034,121 및 국제 공개 번호 WO 2012/122444, WO 2007/113648, WO 2016/196237, 및 WO 2000/037504에 기재되어 있으며, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 미국 특허 번호 6,984,720에 개시된 항-CTLA-4 인간 모노클로날 항체는 다음 특징 중 1개 이상을 나타내는 것으로 입증되었다: (a) 비아코어 분석에 의해 결정된 바와 같이, 적어도 약 107 M-1, 또는 약 109 M-1, 또는 약 1010 M-1 내지 1011 M-1 또는 그 초과의 평형 회합 상수 (Ka)에 의해 반영되는 결합 친화도로 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합함; (b) 적어도 약 103, 약 104, 또는 약 105 m-1 s-1의 동역학적 회합 상수 (ka); (c) 적어도 약 103, 약 104, 또는 약 105 m-1 s-1의 동역학적 해리 상수 (kd); 및 (d) CTLA-4의 B7-1 (CD80) 및 B7-2 (CD86)에 대한 결합을 억제함. 본 개시내용에 유용한 항-CTLA-4 항체는 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하고 상기 특징 중 적어도 1개, 적어도 2개, 또는 적어도 3개를 나타내는 모노클로날 항체를 포함한다.
특정 측면에서, CTLA-4 항체는 이필리무맙 (또한 예르보이(YERVOY)®, MDX-010, 10D1로 공지됨; 미국 특허 번호 6,984,720 참조), MK-1308 (머크 (Merck)), AGEN-1884 (아제누스 인크.; WO 2016/196237 참조), 및 트레멜리무맙 (아스트라제네카; 또한 티실리무맙, CP-675,206으로 공지됨; WO 2000/037504 및 문헌 [Ribas, Update Cancer Ther. 2(3): 133-39 (2007)] 참조)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 측면에서, 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙이다.
특정한 측면에서, CTLA-4 항체는 본원에 개시된 방법에 사용하기 위한 이필리무맙이다. 이필리무맙은 CTLA-4의 그의 B7 리간드에 대한 결합을 차단함으로써, 진행성 흑색종을 갖는 환자에서 T 세포 활성화를 자극하고 전체 생존 (OS)을 개선시키는 완전 인간, IgG1 모노클로날 항체이다.
특정한 측면에서, CTLA-4 항체는 트레멜리무맙이다.
특정한 측면에서, CTLA-4 항체는 MK-1308이다.
특정한 측면에서, CTLA-4 항체는 AGEN-1884이다.
개시된 방법에 사용가능한 항-CTLA-4 항체는 또한 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하고 인간 CTLA-4에의 결합에 대해 본원에 개시된 임의의 항-CTLA-4 항체, 예를 들어 이필리무맙 및/또는 트레멜리무맙과 교차-경쟁하는 단리된 항체를 포함한다. 일부 측면에서, 항-CTLA-4 항체는 본원에 기재된 임의의 항-CTLA-4 항체, 예를 들어 이필리무맙 및/또는 트레멜리무맙과 동일한 에피토프에 결합한다. 항원에의 결합에 대해 교차-경쟁하는 항체의 능력은 이들 항체가 항원의 동일한 에피토프 영역에 결합하고, 다른 교차-경쟁 항체가 그 특정한 에피토프 영역에 결합하는 것을 입체적으로 방해한다는 것을 나타낸다. 이들 교차-경쟁 항체는 CTLA-4의 동일한 에피토프 영역에 대한 그의 결합에 의해 참조 항체, 예를 들어 이필리무맙 및/또는 트레멜리무맙과 매우 유사한 기능적 특성을 가질 것으로 예상된다. 교차-경쟁 항체는 표준 CTLA-4 결합 검정, 예컨대 비아코어 분석, ELISA 검정 또는 유동 세포측정법에서 이필리무맙 및/또는 트레멜리무맙과 교차-경쟁하는 그의 능력에 기초하여 용이하게 확인될 수 있다 (예를 들어, WO 2013/173223 참조).
특정 측면에서, 인간 CTLA-4에의 결합에 대해 이필리무맙 및/또는 트레멜리무맙과 교차-경쟁하거나, 또는 그와 동일한 인간 CTLA-4 항체의 에피토프 영역에 결합하는 항체는 모노클로날 항체이다. 인간 대상체로의 투여의 경우, 이들 교차-경쟁 항체는 키메라 항체, 조작된 항체, 또는 인간화 또는 인간 항체이다. 이러한 키메라, 조작된, 인간화 또는 인간 모노클로날 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 제조 및 단리될 수 있다.
개시된 개시내용의 방법에 사용가능한 항-CTLA-4 항체는 또한 상기 항체의 항원-결합 부분을 포함한다. 항체의 항원-결합 기능이 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있다는 것이 충분히 입증되었다.
개시된 방법에 사용하기에 적합한 항-CTLA-4 항체는 높은 특이성 및 친화도로 CTLA-4에 결합하고, CTLA-4의 활성을 차단하고, CTLA-4와 인간 B7 수용체의 상호작용을 방해하는 항체이다. 본원에 개시된 임의의 조성물 또는 방법에서, 항-CTLA-4 "항체"는, CTLA-4에 결합하며 CTLA-4와 인간 B7 수용체의 상호작용을 억제하고 면역계를 상향-조절하는 데 있어서 전체 항체의 기능적 특성과 유사한 기능적 특성을 나타내는 항원-결합 부분 또는 단편을 포함한다. 특정 측면에서, 항-CTLA-4 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 인간 CTLA-4에의 결합에 대해 이필리무맙 및/또는 트레멜리무맙과 교차-경쟁한다.
CTLA4의 길항제는 또한 CTLA4 항체의 변이체를 포함한다. CTLA4 항체의 예시적인 변이체는 비-푸코실화 항-CTLA4 항체, 예컨대 비-푸코실화 이필리무맙, 종양 내에서 선택적으로 절단되는 마스크를 갖는 활성화가능한 CTLA4 항체, 예컨대 활성화가능한 이필리무맙, 또는 비-푸코실화된 활성화가능한 CTLA-4 항체이다. 예시적인 비-푸코실화 및/또는 활성화가능한 항-CTLA4 항체, 예를 들어 이필리무맙은 WO2014/089113 및 WO2018/085555에 제공된다.
DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제 및 PD1/PD-L1 축 또는 CTLA4의 길항제의 투여
예를 들어, 화학식 (I) 또는 (II)에 따른 본원에 기재된 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염은 치료될 상태에 적합한 임의의 수단에 의해 투여될 수 있으며, 이는 부위-특이적 치료에 대한 필요성 또는 전달될 화합물의 양에 따라 달라질 수 있다.
또한, 화합물, 예를 들어 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 1종 이상의 비-독성의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제 및/또는 아주반트 (본원에서 집합적으로 "담체" 물질로서 지칭됨), 및 원하는 경우에 다른 활성 성분을 포함하는 제약 조성물의 부류가 본원에 포괄된다. 화합물, 예를 들어 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물은 임의의 적합한 경로에 의해, 바람직하게는 이러한 경로에 적합화된 제약 조성물의 형태로, 및 의도된 치료에 효과적인 용량으로 투여될 수 있다. 본원에 기재된 화합물 및 조성물은, 예를 들어 통상의 제약상 허용되는 담체, 아주반트 및 비히클을 함유하는 투여 단위 제제로 경구로, 점막으로, 또는 비경구로, 예컨대 혈관내로, 정맥내로, 복강내로, 피하로, 근육내로 및 흉골내로 투여될 수 있다. 예를 들어, 제약 담체는 만니톨 또는 락토스 및 미세결정질 셀룰로스의 혼합물을 함유할 수 있다. 혼합물은 추가의 성분, 예컨대 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘 및 붕해제, 예컨대 크로스포비돈을 함유할 수 있다. 담체 혼합물은 젤라틴 캡슐에 충전되거나 정제로서 압축될 수 있다. 제약 조성물은 예를 들어 경구 투여 형태 또는 주입으로서 투여될 수 있다.
경구 투여를 위해, 본원에 기재된 제약 조성물은, 예를 들어 정제, 캡슐, 액체 캡슐, 현탁액 또는 액체의 형태일 수 있다. 제약 조성물은 바람직하게는 특정한 양의 활성 성분을 함유하는 투여 단위의 형태로 제조된다. 예를 들어, 제약 조성물은 약 0.1 내지 1000 mg, 바람직하게는 약 0.25 내지 250 mg, 보다 바람직하게는 약 0.5 내지 100 mg 범위의 양의 활성 성분을 포함하는 정제 또는 캡슐로서 제공될 수 있다. 인간 또는 다른 포유동물에 적합한 1일 용량은 환자의 상태 및 다른 인자에 따라 광범위하게 달라질 수 있지만, 상용 방법을 사용하여 결정될 수 있다.
본원에서 고려되는 임의의 제약 조성물은, 예를 들어 임의의 허용되고 적합한 경구 제제를 통해 경구로 전달될 수 있다. 예시적인 경구 제제는, 예를 들어 정제, 트로키, 로젠지, 수성 및 유성 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 및 연질 캡슐, 액체 캡슐, 시럽 및 엘릭시르를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 경구 투여를 위해 의도된 제약 조성물은 경구 투여를 위해 의도된 제약 조성물을 제조하기 위한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 따라 제조될 수 있다. 제약상 맛우수한 제제를 제공하기 위해, 제약 조성물은 감미제, 향미제, 착색제, 완화제, 항산화제 및 보존제로부터 선택되는 적어도 1종의 작용제를 함유할 수 있다.
정제는, 예를 들어 적어도 1종의 화합물, 예를 들어 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염을 정제의 제조에 적합한 적어도 1종의 비-독성 제약상 허용되는 부형제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 예시적인 부형제는, 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대 예를 들어 탄산칼슘, 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 및 인산나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예컨대 예를 들어 미세결정질 셀룰로스, 소듐 크로스카르멜로스, 옥수수 전분 및 알긴산; 결합제, 예컨대 예를 들어 전분, 젤라틴, 폴리비닐-피롤리돈 및 아카시아; 및 윤활제, 예컨대 예를 들어 스테아르산마그네슘, 스테아르산 및 활석을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 추가로, 정제는 비코팅되거나, 또는 불쾌한 맛의 약물의 나쁜 맛을 차폐하기 위해 또는 위장관에서의 활성 성분의 붕해 및 흡수를 지연시켜 활성 성분의 효과를 보다 장기간 동안 지속시키기 위해 공지된 기술에 의해 코팅될 수 있다. 예시적인 수용성 맛 차폐 물질은 히드록시프로필-메틸셀룰로스 및 히드록시프로필-셀룰로스를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 시간 지연 물질은 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트 부티레이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
경질 젤라틴 캡슐은, 예를 들어 적어도 1종의 화합물, 예를 들어 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염을 적어도 1종의 불활성 고체 희석제, 예컨대 예를 들어 탄산칼슘; 인산칼슘; 및 카올린과 혼합함으로써 제조될 수 있다.
연질 젤라틴 캡슐은, 예를 들어 적어도 1종의 화합물, 예를 들어 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염을 적어도 1종의 수용성 담체, 예컨대, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜; 및 적어도 1종의 오일 매질, 예컨대, 예를 들어 땅콩 오일, 액체 파라핀, 및 올리브 오일과 혼합함으로써 제조될 수 있다.
수성 현탁액은, 예를 들어 적어도 1종의 화합물, 예를 들어 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염을 수성 현탁액의 제조에 적합한 적어도 1종의 부형제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 수성 현탁액의 제조에 적합한 예시적인 부형제는, 예를 들어 현탁화제, 예컨대, 예를 들어 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸-셀룰로스, 알긴산나트륨, 알긴산, 폴리비닐-피롤리돈, 트라가칸트 검 및 아카시아 검; 분산제 또는 습윤제, 예컨대, 예를 들어 자연-발생 포스파티드, 예를 들어 레시틴; 알킬렌 옥시드와 지방산의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어 폴리옥시에틸렌 스테아레이트; 에틸렌 옥시드와 장쇄 지방족 알콜의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어 헵타데카에틸렌-옥시세탄올; 에틸렌 옥시드와 지방산 및 헥시톨로부터 유래된 부분 에스테르의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레에이트; 및 에틸렌 옥시드와 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 부분 에스테르의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어 폴리에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 수성 현탁액은 또한 적어도 1종의 보존제, 예컨대 예를 들어 에틸 및 n-프로필 p-히드록시벤조에이트; 적어도 1종의 착색제; 적어도 1종의 향미제; 및/또는 예를 들어 수크로스, 사카린 및 아스파르탐을 포함하나 이에 제한되지는 않는 적어도 1종의 감미제를 함유할 수 있다.
유성 현탁액은, 예를 들어 적어도 1종의 화합물, 예를 들어 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염을 식물성 오일, 예컨대, 예를 들어 아라키스 오일; 올리브 오일; 참깨 오일; 및 코코넛 오일 중에; 또는 미네랄 오일, 예컨대, 예를 들어 액체 파라핀 중에 현탁시킴으로써 제조될 수 있다. 유성 현탁액은 또한 적어도 1종의 증점제, 예컨대, 예를 들어 밀랍; 경질 파라핀; 및 세틸 알콜을 함유할 수 있다. 맛우수한 유성 현탁액을 제공하기 위해, 상기에 이미 기재된 적어도 1종의 감미제, 및/또는 적어도 1종의 향미제가 유성 현탁액에 첨가될 수 있다. 유성 현탁액은, 예를 들어 항산화제, 예컨대, 예를 들어 부틸화 히드록시아니솔 및 알파-토코페롤을 포함하나 이에 제한되지는 않는 적어도 1종의 보존제를 추가로 함유할 수 있다.
분산성 분말 및 과립은, 예를 들어 적어도 1종의 화합물, 예를 들어 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염을 적어도 1종의 분산제 및/또는 습윤제; 적어도 1종의 현탁화제; 및/또는 적어도 1종의 보존제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 적합한 분산제, 습윤제 및 현탁화제는 상기에 이미 기재된 바와 같다. 예시적인 보존제는, 예를 들어 항산화제, 예를 들어 아스코르브산을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 또한, 분산성 분말 및 과립은, 예를 들어 감미제; 향미제; 및 착색제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 적어도 1종의 부형제를 또한 함유할 수 있다.
적어도 1종의 화합물, 예를 들어 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염의 에멀젼은, 예를 들어 수중유 에멀젼으로서 제조될 수 있다. 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물을 포함하는 에멀젼의 유성 상은 공지된 방식으로 공지된 성분으로부터 구성될 수 있다. 유성 상은, 예를 들어 식물성 오일, 예컨대 예를 들어 올리브 오일 및 아라키스 오일; 미네랄 오일, 예컨대 예를 들어 액체 파라핀; 및 그의 혼합물에 의해 제공될 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 상은 단지 유화제만을 포함할 수 있지만, 1종 이상의 유화제와 지방 또는 오일 또는 지방 및 오일 둘 다의 혼합물을 포함할 수 있다. 적합한 유화제는, 예를 들어 자연-발생 포스파티드, 예를 들어 대두 레시틴; 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 에스테르 또는 부분 에스테르, 예컨대, 예를 들어 소르비탄 모노올레에이트; 및 부분 에스테르와 에틸렌 옥시드의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 친수성 유화제는 안정화제로서 작용하는 친지성 유화제와 함께 포함된다. 오일 및 지방 둘 다를 포함하는 것이 또한 바람직하다. 이와 함께, 안정화제(들)의 존재 또는 부재 하에 유화제(들)는 소위 유화 왁스를 구성하고, 왁스는 오일 및 지방과 함께 크림 제제의 유성 분산 상을 형성하는 소위 유화 연고 베이스를 구성한다. 에멀젼은 또한 감미제, 향미제, 보존제 및/또는 항산화제를 함유할 수 있다. 치료 방법에 사용하기 위한 제제에 사용하기에 적합한 유화제 및 에멀젼 안정화제는 트윈(Tween) 60, 스팬(Span) 80, 세토스테아릴 알콜, 미리스틸 알콜, 글리세릴 모노스테아레이트, 소듐 라우릴 술페이트, 글리세릴 디스테아레이트를 단독으로 또는 왁스와 함께, 또는 관련 기술분야에 널리 공지된 다른 물질과 함께 포함한다.
화합물, 예를 들어 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물, 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염은, 예를 들어 또한 정맥내로, 피하로, 및/또는 근육내로 임의의 제약상 허용되고 적합한 주사가능한 형태를 통해 전달될 수 있다. 예시적인 주사가능한 형태는, 예를 들어 허용되는 비히클 및 용매, 예컨대 예를 들어 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액을 포함하는 멸균 수용액; 멸균 수중유 마이크로에멀젼; 및 수성 또는 유질 현탁액을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
비경구 투여를 위한 제제는 수성 또는 비-수성 등장성 멸균 주사 용액 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 이들 용액 및 현탁액은 경구 투여를 위한 제제에 사용하기 위해 언급된 담체 또는 희석제 중 1종 이상을 사용하여 또는 다른 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용함으로써 멸균 분말 또는 과립으로부터 제조될 수 있다. 화합물은 물, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 에탄올, 옥수수 오일, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 참깨 오일, 벤질 알콜, 염화나트륨, 트라가칸트 검 및/또는 다양한 완충제 중에 용해될 수 있다. 다른 아주반트 및 투여 방식은 제약 업계에 널리 공지되어 있다. 활성 성분은 또한 염수, 덱스트로스 또는 물을 비롯한 적합한 담체, 또는 시클로덱스트린 (즉, 캅티솔), 공용매 가용화 (즉, 프로필렌 글리콜) 또는 미셀 가용화 (즉, 트윈 80)와 함께 조성물로서 주사에 의해 투여될 수 있다.
멸균 주사가능한 제제는 또한 비-독성의 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사가능한 용액 또는 현탁액, 예를 들어 1,3-부탄디올 중의 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균 고정 오일이 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용된다. 이러한 목적을 위해, 합성 모노- 또는 디글리세리드를 비롯한 임의의 무자극 고정 오일이 사용될 수 있다. 또한, 지방산, 예컨대 올레산이 주사제의 제조에 사용된다.
멸균 주사가능한 수중유 마이크로에멀젼은, 예를 들어 1) 적어도 1종의 화합물, 예를 들어 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염을 유성 상, 예컨대 예를 들어 대두 오일 및 레시틴의 혼합물 중에 용해시키고; 2) 유성 상을 함유하는 화합물, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염을 물 및 글리세롤 혼합물과 조합하고; 3) 조합물을 가공하여 마이크로에멀젼을 형성함으로써 제조될 수 있다.
멸균 수성 또는 유성 현탁액은 관련 기술분야에 이미 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 예를 들어, 멸균 수용액 또는 현탁액은 비-독성 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매, 예컨대 예를 들어 1,3-부탄 디올을 사용하여 제조될 수 있고; 멸균 유질 현탁액은 멸균 비-독성 허용되는 용매 또는 현탁 매질, 예컨대 예를 들어 멸균 고정 오일, 예를 들어 합성 모노- 또는 디글리세리드; 및 지방산, 예컨대 예를 들어 올레산을 사용하여 제조될 수 있다.
제약 조성물에 사용될 수 있는 제약상 허용되는 담체, 아주반트 및 비히클은 이온 교환체, 알루미나, 스테아르산알루미늄, 레시틴, 자기-유화 약물 전달 시스템 (SEDDS), 예컨대 d-알파-토코페롤 폴리에틸렌글리콜 1000 숙시네이트, 제약 투여 형태에 사용되는 계면활성제, 예컨대 트윈, 폴리에톡실화 피마자 오일, 예컨대 크레모포르(CREMOPHOR) 계면활성제 (바스프), 또는 다른 유사한 중합체 전달 매트릭스, 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민, 완충제 물질, 예컨대 포스페이트, 글리신, 소르브산, 소르브산칼륨, 포화 식물성 지방산의 부분 글리세리드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예컨대 프로타민 술페이트, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연 염, 콜로이드성 실리카, 삼규산마그네슘, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스-기재 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 및 양모 지방을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 시클로덱스트린, 예컨대 알파-, 베타- 및 감마-시클로덱스트린, 또는 화학적으로 변형된 유도체, 예컨대 히드록시알킬시클로덱스트린 (2- 및 3-히드록시프로필-시클로덱스트린 포함), 또는 다른 가용화된 유도체가 또한 본원에 기재된 화학식의 화합물의 전달을 증진시키는 데 유리하게 사용될 수 있다.
본원에 기재된 제약 활성 화합물은 인간 및 다른 포유동물을 비롯한 환자에게 투여하기 위한 의약 작용제를 제조하기 위해 제약학의 통상적인 방법에 따라 가공될 수 있다. 제약 조성물은 통상적인 제약 작업, 예컨대 멸균에 적용될 수 있고/거나 통상의 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 완충제 등을 함유할 수 있다. 정제 및 환제는 추가로 장용 코팅으로 제조될 수 있다. 이러한 조성물은 또한 아주반트, 예컨대 습윤제, 감미제, 향미제 및 퍼퓸제를 포함할 수 있다.
본원에 기재된 화합물 및/또는 조성물로 질환 상태를 치료하기 위해 투여되는 화합물의 양 및 투여 요법은 대상체의 연령, 체중, 성별, 의학적 상태, 질환의 유형, 질환의 중증도, 투여 경로 및 빈도, 및 사용되는 특정한 화합물을 포함한 다양한 인자에 따라 달라진다. 따라서, 투여 요법은 광범위하게 달라질 수 있지만, 표준 방법을 사용하여 통상적으로 결정될 수 있다. 약 0.001 내지 100 mg/kg 체중, 바람직하게는 약 0.0025 내지 약 50 mg/kg 체중, 가장 바람직하게는 약 0.005 내지 10 mg/kg 체중의 1일 용량이 적절할 수 있다. 1일 용량은 1일에 1 내지 4회 용량으로 투여될 수 있다. 다른 투여 스케줄은 주당 1회 용량 및 2일 주기당 1회 용량을 포함한다.
치료 목적을 위해, 본원에 기재된 활성 화합물은 지시된 투여 경로에 적절한 1종 이상의 아주반트와 통상적으로 조합된다. 경구로 투여되는 경우, 화합물은 락토스, 수크로스, 전분 분말, 알칸산의 셀룰로스 에스테르, 셀룰로스 알킬 에스테르, 활석, 스테아르산, 스테아르산마그네슘, 산화마그네슘, 인산 및 황산의 나트륨 및 칼슘 염, 젤라틴, 아카시아 검, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리돈 및/또는 폴리비닐 알콜과 혼합된 다음, 편리한 투여를 위해 정제화 또는 캡슐화될 수 있다. 이러한 캡슐 또는 정제는 히드록시프로필메틸 셀룰로스 중 활성 화합물의 분산액으로 제공될 수 있는 제어-방출 제제를 함유할 수 있다.
본원에 기재된 제약 조성물은 적어도 1종의 화합물, 예를 들어 화학식 (I)의 화합물 및/또는 그의 적어도 1종의 제약상 허용되는 염, 및 임의로 임의의 제약상 허용되는 담체, 아주반트 및 비히클로부터 선택되는 추가의 작용제를 포함한다. 본원에 기재된 대안적 조성물은 화합물, 예컨대 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 본원에 기재된 화합물 1 내지 34로부터 선택되는 화합물 또는 그의 전구약물, 및 제약상 허용되는 담체, 아주반트 또는 비히클을 포함한다.
일부 측면에서, 본원에 기재된 치료 방법에 사용되는 항-PD-L1 항체는 약 0.1 mg/kg 내지 약 20.0 mg/kg 체중, 약 2 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 11 mg/kg, 약 12 mg/kg, 약 13 mg/kg, 약 14 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 16 mg/kg, 약 17 mg/kg, 약 18 mg/kg, 약 19 mg/kg, 또는 약 20 mg/kg 범위의 용량으로 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8주마다 약 1회 투여된다.
일부 측면에서, 항-PD-L1 항체는 약 15 mg/kg 체중의 용량으로 3주마다 약 1회 투여된다. 다른 측면에서, 항-PD-L1 항체는 약 10 mg/kg 체중의 용량으로 2주마다 약 1회 투여된다.
다른 측면에서, 본 개시내용에 유용한 항-PD-L1 항체는 균일 용량이다. 일부 측면에서, 항-PD-L1 항체는 약 200 mg 내지 약 1600 mg, 약 200 mg 내지 약 1500 mg, 약 200 mg 내지 약 1400 mg, 약 200 mg 내지 약 1300 mg, 약 200 mg 내지 약 1200 mg, 약 200 mg 내지 약 1100 mg, 약 200 mg 내지 약 1000 mg, 약 200 mg 내지 약 900 mg, 약 200 mg 내지 약 800 mg, 약 200 mg 내지 약 700 mg, 약 200 mg 내지 약 600 mg, 약 700 mg 내지 약 1300 mg, 약 800 mg 내지 약 1200 mg, 약 700 mg 내지 약 900 mg, 또는 약 1100 mg 내지 약 1300 mg의 균일 용량으로 투여된다. 일부 측면에서, 항-PD-L1 항체는 적어도 약 240 mg, 적어도 약 300 mg, 적어도 약 320 mg, 적어도 약 400 mg, 적어도 약 480 mg, 적어도 약 500 mg, 적어도 약 560 mg, 적어도 약 600 mg, 적어도 약 640 mg, 적어도 약 700 mg, 적어도 720 mg, 적어도 약 800 mg, 적어도 약 840 mg, 적어도 약 880 mg, 적어도 약 900 mg, 적어도 960 mg, 적어도 약 1000 mg, 적어도 약 1040 mg, 적어도 약 1100 mg, 적어도 약 1120 mg, 적어도 약 1200 mg, 적어도 약 1280 mg, 적어도 약 1300 mg, 적어도 약 1360 mg, 또는 적어도 약 1400 mg의 균일 용량으로, 약 1, 2, 3, 또는 4주의 투여 간격으로 투여된다. 일부 측면에서, 항-PD-L1 항체는 약 1200 mg의 균일 용량으로 3주마다 약 1회 투여된다. 다른 측면에서, 항-PD-L1 항체는 약 800 mg의 균일 용량으로 2주마다 약 1회 투여된다. 다른 측면에서, 항-PD-L1 항체는 약 840 mg의 균일 용량으로 2주마다 약 1회 투여된다.
일부 측면에서, 아테졸리주맙은 약 1200 mg의 균일 용량으로 약 3주마다 1회 투여된다. 일부 측면에서, 아테졸리주맙은 약 800 mg의 균일 용량으로 약 2주마다 1회 투여된다. 일부 측면에서, 아테졸리주맙은 약 840 mg의 균일 용량으로 약 2주마다 1회 투여된다.
일부 측면에서, 아벨루맙은 약 800 mg의 균일 용량으로 약 2주마다 1회 투여된다.
일부 측면에서, 두르발루맙은 약 10 mg/kg의 용량으로 약 2주마다 1회 투여된다. 일부 측면에서, 두르발루맙은 약 800 mg/kg의 균일 용량으로 약 2주마다 1회 투여된다. 일부 측면에서, 두르발루맙은 약 1200 mg/kg의 균일 용량으로 약 3주마다 1회 투여된다.
일부 측면에서, 본원에 기재된 치료 방법에 사용된 항-CTLA-4 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 0.1 mg/kg 내지 10.0 mg/kg 체중 범위의 용량으로 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8주마다 1회 투여된다. 일부 측면에서, 항-CTLA-4 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 1 mg/kg 또는 3 mg/kg 체중의 용량으로 3, 4, 5, 또는 6주마다 1회 투여된다. 한 측면에서, 항-CTLA-4 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 3 mg/kg 체중의 용량으로 2주마다 1회 투여된다. 또 다른 측면에서, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 1 mg/kg 체중의 용량으로 6주마다 1회 투여된다.
일부 측면에서, 항-CTLA-4 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 균일 용량으로 투여된다. 일부 측면에서, 항-CTLA-4 항체는 약 10 내지 약 1000 mg, 약 10 mg 내지 약 900 mg, 약 10 mg 내지 약 800 mg, 약 10 mg 내지 약 700 mg, 약 10 mg 내지 약 600 mg, 약 10 mg 내지 약 500 mg, 약 100 mg 내지 약 1000 mg, 약 100 mg 내지 약 900 mg, 약 100 mg 내지 약 800 mg, 약 100 mg 내지 약 700 mg, 약 100 mg 내지 약 100 mg, 약 100 mg 내지 약 500 mg, 약 100 mg 내지 약 480 mg, 또는 약 240 mg 내지 약 480 mg의 균일 용량으로 투여된다. 한 측면에서, 항-CTLA-4 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 적어도 약 60 mg, 적어도 약 80 mg, 적어도 약 100 mg, 적어도 약 120 mg, 적어도 약 140 mg, 적어도 약 160 mg, 적어도 약 180 mg, 적어도 약 200 mg, 적어도 약 220 mg, 적어도 약 240 mg, 적어도 약 260 mg, 적어도 약 280 mg, 적어도 약 300 mg, 적어도 약 320 mg, 적어도 약 340 mg, 적어도 약 360 mg, 적어도 약 380 mg, 적어도 약 400 mg, 적어도 약 420 mg, 적어도 약 440 mg, 적어도 약 460 mg, 적어도 약 480 mg, 적어도 약 500 mg, 적어도 약 520 mg 적어도 약 540 mg, 적어도 약 550 mg, 적어도 약 560 mg, 적어도 약 580 mg, 적어도 약 600 mg, 적어도 약 620 mg, 적어도 약 640 mg, 적어도 약 660 mg, 적어도 약 680 mg, 적어도 약 700 mg, 또는 적어도 약 720 mg의 균일 용량으로 투여된다. 또 다른 측면에서, 항-CTLA-4 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 균일 용량으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8주마다 약 1회 투여된다.
일부 측면에서, 이필리무맙은 약 3 mg/kg의 용량으로 약 3주마다 1회 투여된다. 일부 측면에서, 이필리무맙은 약 10 mg/kg의 용량으로 약 3주마다 1회 투여된다. 일부 측면에서, 이필리무맙은 약 10 mg/kg의 용량으로 약 12주마다 1회 투여된다. 일부 측면에서, 이필리무맙은 4회 용량으로 투여된다.
화합물의 제조 방법
본원에 기재된 화합물은 유기 화학 분야의 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 이용가능한 많은 방법에 의해 합성될 수 있다. 본원에 포괄된 제조를 위한 일반적 합성 반응식이 하기 기재된다. 이들 반응식은 예시적이며, 관련 기술분야의 통상의 기술자가 본원에 개시된 화합물을 제조하는 데 사용할 수 있는 가능한 기술을 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본원에 포괄된 화합물을 제조하기 위한 다양한 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 반응식에 기재된 방법에 의해 제조된 화합물의 예는 하기 제시된 실시예 섹션에 제공된다. 호모키랄 실시예의 제조는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 기술에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 호모키랄 화합물은 키랄 상 정제용 HPLC에 의한 라세미 생성물 또는 부분입체이성질체의 분리에 의해 제조될 수 있다. 대안적으로, 실시예 화합물은 거울상이성질체적으로 또는 부분입체이성질체적으로 풍부한 생성물을 제공하는 것으로 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다.
본 섹션에 기재된 반응 및 기술은 사용된 시약 및 물질에 적절한 용매 중에서 수행되며, 변형을 실시하기에 적합하다. 또한, 하기 주어진 합성 방법의 설명에서, 용매, 반응 분위기, 반응 온도, 실험 지속기간 및 후처리 절차의 선택을 포함한 모든 제안된 반응 조건은 그 반응에 대한 표준 조건이 되도록 선택되며, 이는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 인지되어야 하는 것으로 이해되어야 한다. 분자의 다양한 부분에 존재하는 관능기가 제안된 시약 및 반응과 상용성이어야 한다는 것이 유기 합성 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해된다. 반응 조건과 상용성인 치환기에 대한 이러한 제한은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 명백할 것이며, 비상용성 치환기가 존재하는 경우에 대안이 요구된다. 이는 때때로 목적 화합물을 수득하기 위해 합성 단계의 순서를 변형하거나 또는 또 다른 것에 비해 하나의 특정한 공정 반응식을 선택하기 위한 판단을 필요로 할 것이다. 또한, 이 분야의 임의의 합성 경로의 계획에서 또 다른 주요 고려사항은 본원에 기재된 화합물에 존재하는 반응성 관능기의 보호에 사용되는 보호기의 신중한 선택임이 인식될 것이다. 숙련된 진료의에게 많은 대안을 설명하는 권위있는 설명서는 문헌 [Wuts and Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fourth Edition, Wiley and Sons (2007)]이다.
<실시예>
하기 실시예는 본 개시내용의 특정한 및 바람직한 실시양태를 예시하며, 본 개시내용의 범주를 제한하지 않는다. 화학적 약어 및 기호뿐만 아니라 과학적 약어 및 기호는, 달리 명시되지 않는 한, 그의 통상적이고 관례적인 의미를 갖는다. 실시예 및 본원의 다른 곳에서 사용된 추가의 약어는 본원에 정의된다. 공통 중간체는 일반적으로 하나 초과의 실시예의 제조에 유용하고, 순차적으로 확인되며 (예를 들어, 중간체 1, 중간체 2 등), Int. 1 또는 I1, Int. 2 또는 I2 등으로 약칭된다. 일부 경우에 중간체 또는 실시예의 대안적 제조가 기재된다. 빈번하게는, 합성 기술분야의 숙련된 화학자는 하나 이상의 고려사항, 예컨대 더 짧은 반응 시간, 덜 비싼 출발 물질, 작업 또는 단리의 용이성, 개선된 수율, 촉매작용에 적용가능성, 독성 시약의 회피, 전문화된 기기의 접근성, 및 감소된 선형 단계의 수 등에 기초하여 바람직할 수 있는 대안적 제조를 고안할 수 있다. 대안적 제조를 기재하는 의도는 본 개시내용의 실시예의 제조를 추가로 가능하게 하는 것이다. 일부 경우에, 약술된 실시예 및 청구범위에서의 일부 관능기는 관련 기술분야에 널리 공지된 생동배체 대체, 예를 들어 카르복실산 기의 테트라졸 또는 포스페이트 모이어티로의 대체에 의해 대체될 수 있다. 중수소화 디메틸 술폭시드에서 수집된1H NMR 데이터는 데이터 프로세싱에서 물 억제를 사용하였다. 기록된 스펙트럼은 물 억제의 효과에 대해 보정되지 않았다. 3.35 ppm의 물 억제 빈도에 인접한 양성자는 감소된 신호 강도를 나타낸다.
약어
Ac 아세틸
anhyd. 무수
aq. 수성
아자-HOBt 7-아자-1-히드록시벤조트리아졸
Bn 벤질
1-BOC-피페라진 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트
Bu 부틸
CV 칼럼 부피
DCE 디클로로에탄
DCM 디클로로메탄
DEA 디에틸아민
DIEA 디이소프로필 에틸 아민 (휘니그 염기)
DIPEA 디이소프로필 에틸 아민
DMA N,N-디메틸아세트아미드
DMF 디메틸포름아미드
DMSO 디메틸 술폭시드
EA 에틸 아세테이트
EDC 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드
Et 에틸
h, hours 또는 hrs 시간
HATU (1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트)
HCl 염산
HPLC 고압 액체 크로마토그래피
KHMDS 포타슘 비스(트리메틸실릴)아미드
LC 액체 크로마토그래피
LCMS 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법
M 몰
mM 밀리몰
Me 메틸
MHz 메가헤르츠
mins 분
M+1 (M+H)+
MS 질량분광법
n 또는 N 노르말
NaHMDS 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드
NBS N-브로모숙신이미드
nM 나노몰
NMP N-메틸피롤리디논
Ph 페닐
PYBROP 브로모트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트
RuPhos 전촉매 클로로(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐 (II)
RT 또는 Ret 시간 체류 시간
sat. 포화
t-BuOH 3급 부탄올
TEA 트리에틸아민
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라히드로푸란
TLC 박층 크로마토그래피
POCl3 옥시염화인
2nd Gen Xphos CAS 번호 1310584-14-5
실시예 1: DGKi는 동종반응성 MLR 검정에서 니볼루맙 및 이필리무맙의 활성을 증진시킴
본 실시예는 MLR 검정에서 분비된 인터페론-γ (IFN-γ)의 증가된 수준에 의해 입증된 바와 같이, DGK의 억제가 PD-1 및 CTLA-4 억제제의 활성을 증진시킨다는 것을 보여준다.
검정을 하기와 같이 수행하였다. 말초 혈액 단핵 세포를 피콜 세포 분리를 사용하여 EDTA 처리된 전혈로부터 단리하였다. 세포를 스템셀 이지셉(Stemcell EasySep) 인간 T 세포 농축 키트 (스템셀 19051)를 사용하여 T 세포로 추가로 단리하였다. 이전에 구입한 동결된 단핵구를 해동시키고, 37℃ CO2 인큐베이터에서 6일 동안 GMCSF 및 IL-4의 처리로 수지상 세포 (DC)로 분화시켰다. T 세포를 10% FBS RPMI 배지 중 96 웰 둥근 바닥 플레이트에 웰당 100,000개 세포로 플레이팅하였다. 동종이형 수지상 세포를 적절한 웰에 10:1 비의 T 세포:미성숙 DC로 첨가하였다. DGK 억제제 DGKi 화합물 15를 DMSO 중에 희석한 다음, 10% FBS RPMI 배지로 추가 희석하고, T 세포: 미성숙 DC의 적절한 웰에 250 μl의 최종 부피 중 0.1%의 최종 DMSO 농도로 첨가하였다. 혼합 림프구 반응물을 인큐베이터에 5일 동안 두었다. 제5일에, 130 μl의 배지를 제거하고, 10 μl를 IFN-γ ELISA 검정 (BD cat 555142)에 사용하였다.
도 1A 및 B에 도시된 결과는 DGK의 억제가 PD-1 또는 CTLA-4 억제제로 처리된 T 세포로부터의 IFN-γ 분비의 수준을 증진시킨다는 것을 나타낸다.
실시예 2: DGK의 억제는 B16 동물 종양 모델에서 PD-1 길항제 및 CTLA4 길항제의 조합 활성을 증진시킴
본 실시예는 PD-1 길항제 및 CTLA4 길항제와 동시에 DGKi의 투여가 PD-1 길항제 및 CTLA4 길항제의 조합에 비해 증진된 종양 감소 활성을 발생시킨다는 것을 보여준다.
본 검정은 B16 종양 모델 (인간 흑색종 종양 모델)에서 수행하였다. 마우스에게 항-PD-1 항체 (마우스 PD-1에 대해 지시된 mIgG1-D265A 모노클로날 항체), 항-CTLA4 항체 (마우스 CTLA4에 대해 지시된 mIgG2b 모노클로날 항체), 비히클 단독, 및/또는 DGKi를 투여하고, 종양 성장을 측정하였다. 도 2A-G에 도시된 결과는 개별 작용제 또는 2종의 작용제의 조합에 의해 어떠한 유의한 종양 감소도 관찰되지 않았지만, DGKi를 항-PD-1 항체 및 항-CTLA4 항체와 조합하는 것은 종양 감소를 유발하였음을 나타낸다 (도 2G).
실시예 3: DGK의 억제는 CT26 동물 종양 모델에서 PD-1 억제제 및/또는 CTLA-4 억제제의 활성을 증진시킴
본 실시예는 CT26 모델에서, DGK 억제제의 투여가 항-PD-1 및/또는 항-CTLA4 항체에 의해 유도된 종양 감소를 증진시킨다는 것을 보여준다.
검정을 다음과 같이 수행하였다: CT26 세포 (ATCC로부터의 뮤린 결장직장 암종 세포주)를 10% 태아 소 혈청 (인비트로젠/써모피셔 사이언티픽) 및 RPMI 1640 배지 (깁코/써모피셔 사이언티픽)에서 배양하였다. 엔비고로부터 입수한 암컷 BALB/c 마우스는 6-8주령에 도달하였다. 종양 이식을 위해 (제0일), 마우스에게 1x107개 세포/mL의 CT26 세포 현탁액의 0.1 mL 피하 주사를 우측 측복부 내로 제공하였다. 종양이 전형적으로 이식후 약 10일에 ~100 mm3의 미리 결정된 부피로 성장할 때, 마우스를 무작위화하고, 다양한 대조군 및 처리군으로 분류하고, 투여를 개시하였다. DGKi 화합물 16을 90% PEG400, 5%에탄올 및 5% TPGS 중에 제제화하고, 10 mL/kg 체중의 부피로 경구로 제공하였다. 항-CTLA4 (항-mCTLA4, mIgG2b) 및 항-PD1 (마우스 PD-1에 대해 지시된 mIgG1-D265A 모노클로날 항체) 및 이소형 대조군을 DPBS를 사용하여 10 mg/kg의 용량으로 희석하였다. 항체 요법을 복강내 주사 (I.P.)를 통해 4일마다 총 3회 용량 (Q4Dx3)에 대해 투여하였다. 종양이 완전히 퇴행하거나 (0 mm3) 또는 1000 mm3에 도달할 때까지 종양 부피를 디지털 캘리퍼로 1주 2회 측정하고, 안락사시켰다. AH1 사량체 염색을 위해, 100 μL의 혈액을 각각의 마우스로부터 리튬 헤파린 튜브 내로 수집하였다. 혈액을 AH1 사량체 (MBL), 항-Cd3, 항-cd4, 및 항-Cd8 (바이오레전드)로 염색하였다. 샘플을 용해/고정 완충제 (BD)를 사용하여 용해시키고, 샘플을 칸토엑스 세포측정기 (BD) 상에서 획득하고, 플로우조 (BD)에서 분석하였다.
도 3A-H에 도시된 결과는 CT26 마우스 모델에서 DGKi가 (i) PD1 억제제; (ii) CTLA-4 억제제; 및 (iii) PD1 억제제 및 CTLA-4 억제제에 의해 유도된 종양 부피 감소를 증진시킨다는 것을 나타낸다. 도 3I에 도시된 결과는 DGKi가 AH1+ 사량체 종양 항원에 대해 양성인 CD8 세포의 백분율을 증가시킨다는 것을 나타낸다. 따라서, 조합 치료는 개선된 완전 반응을 유발하고, CT26 모델에서 증가된 AH1+ T 세포와 상관관계가 있다. DGK 억제제와 CTLA4 길항제 및 PD1 길항제 둘 다의 조합은 가장 높은 수의 완전 반응, 즉 10개의 완전 반응 중 10개를 유발했다.
실시예 4: DGK의 억제는 TCR 활성화에 요구되는 항원 역치를 낮춤
본 실시예는 DGK 억제가 (1) 약한 종양 항원에 의해 유도된 T 세포 반응을 강화하고 (2) T 세포 활성화에 요구되는 종양 항원의 농도를 낮춘다는 것을 보여준다.
본 검정을 다음과 같이 수행하였다: MC38 세포 (뮤린 결장 선암종 세포)를 획득하고, 10% 태아 소 혈청 (인비트로젠/써모피셔 사이언티픽) 및 RPMI 1640 배지 (깁코/써모피셔 사이언티픽)에서 배양하였다. Ova 및 불규칙변화 펩티드 변이체를 아나스펙(AnaSpec)으로부터 획득하고, 제조업체의 프로토콜에 따라 재현탁시켰다. MC38 세포를 1 μg/mL의 펩티드 또는 지시된 농도로 3시간 동안 펄싱한 다음, 유리 펩티드를 세척 제거하였다. OT1 마우스 (오브알부민 (OVA (SIINFEKL)) 또는 OVA 펩티드의 다음 유도체: A2 (SAINFEKL), Q4 (SIIQFEKL), T4 (SIITFEKL), Q4H7 (SIIQFEHL)에 특이적인 TCR을 갖지만, 스크램블된 펩티드 FILKSINE는 인식하지 않는 부류 I 제한 TCR 트랜스제닉/C57B16 배경임)를 잭슨 랩스로부터 획득하였다. 이들 펩티드의 TCR 결합 친화도를 하기 표에 나타낸다. CD8 T 세포를 OT1 마우스의 총 비장세포 (스템셀)로부터 정제하고, CD3/CD28 비드 (인비트로젠)를 사용하여 활성화시킨 다음, 동결시켰다. 동결된 활성화된 OT-1 CD8 T 세포를 펩티드 펄스 동안 해동시키고, DGKi 화합물 15 또는 대조군 화합물 또는 DMSO로 1시간 동안 플레이팅하였다. MC38-단백질 펄스된 세포를 플레이트에 첨가하고, 37℃에서 밤새 공동-배양하였다. 상청액을 수집하고, IL-2를 알파리사(AlphaLISA) (퍼킨엘머)를 사용하여 측정하였다.
Figure pct00032
도 4A-F에 도시된 결과는 DGKi 화합물 15가 T 세포 항원 인식 및 활성화를 위한 항원의 친화도 요건 및 농도 요건 둘 다를 낮춘다는 것을 나타낸다.
실시예 5: DGK의 억제는 인간 CTL 이펙터 기능을 증가시키고, 종양 세포 사멸을 증진시킴
본 실시예는 DGK의 억제가 CTL 이펙터 기능 및 종양 세포 사멸을 증가시킨다는 것을 보여준다.
검정을 다음과 같이 수행하였다: HCT116-GFP (인간 결장직장암) 세포를 셀로믹스로부터 획득하였다. HCT116-GFP를 지시된 농도의 A2 및 B35 펩티드 (아스타르트)로 1시간 동안 펄싱한 후, 세척 제거하였다. 세포를 플레이팅하고, 밤새 부착되도록 하였다. CMV 특이적 인간 CD8 T 세포 (아스타르트)를 해동시키고, DGKi 화합물 15로 1시간 동안 처리한 다음, HCT116-GFP 세포에 첨가하였다. 상청액을 공동-배양 24시간 후에 수집하고, IFNg를 알파리사 (퍼킨엘머)를 사용하여 측정하였다. 형광 현미경을 사용하여 GFP의 영상을 찍었다.
도 5A 및 B에 도시된 결과는 DGKi 화합물 15가 인간 CTL 이펙터 기능을 증가시키고 종양 세포 사멸을 증진시킨다는 것을 나타낸다.
실시예 6: DGK의 억제는 감소된 B2M 수준을 극복하여 T 세포 이펙터 기능을 회복시킬 수 있음
많은 인간 종양은 T 세포가 종양 세포를 인식하고 사멸시키는 데 있어 결정적인 부류 I MHC의 부분적 또는 완전한 상실을 유발하는 돌연변이를 갖는다. 본 실시예는 DGK의 억제가, T 세포가 보다 낮은 수준의 MHC를 갖는 종양 세포를 인식하도록 한다는 것을 보여준다. 이들 표적 세포는 그렇지 않으면 T 세포에 의해 인식되지 않을 것이다.
검정을 다음과 같이 수행하였다: HCT116-GFP를 셀로믹스로부터 획득하고, 10% 태아 소 혈청 (인비트로젠/써모피셔 사이언티픽) 및 RPMI 1640 배지 (깁코/써모피셔 사이언티픽)에서 배양하였다. B2M 가이드 RNA (신테고)를 뉴클레오펙션 (론자)에 의해 HCT116-GFP 세포에 도입하였다. 회수 후, 세포를 개별 웰에 플레이팅하여 단일 세포 클론을 생성하였다. 클론을 B2M (바이오레전드)에 대해 염색하고, 유동 세포측정법에 의해 평가하였다. 이어서, 클론을 1시간 동안 1 mg/mL의 A2 또는 B35 펩티드 (아스타르트)로 펄싱한 후, 세척 제거하였다. 세포를 플레이팅하고, 밤새 부착되도록 하였다. CMV 특이적 인간 CD8 T 세포 (아스타르트)를 해동시키고, DGKi 화합물 15로 1시간 동안 처리한 다음, HCT116 세포에 첨가하였다. 상청액을 공동-배양 24시간 후에 수집하고, IFN-γ를 알파리사 (퍼킨엘머)를 사용하여 측정하였다.
도 6A 및 B에 도시된 결과는 DGKi 화합물 15가 감소된 부류 I MHC 항원을 갖는 종양 세포를 인식하는 T 세포로부터 IFN-γ 수준을 증가시킨다는 것을 나타낸다.
실시예 7: DGK 억제 및 PD1 길항제에 의한 치유적 종양 활성은 CD8+ T 세포에 의존성임
본 실시예는 치유적 종양 활성이 CT26 동물 모델에서 CD8+ T 세포에 의존성이라는 것을 보여준다.
검정을 다음과 같이 수행하였다: CT26 세포 (ATCC로부터)를 10% 태아 소 혈청 (인비트로젠/써모피셔 사이언티픽) 및 RPMI 1640 배지 (깁코/써모피셔 사이언티픽)에서 배양하였다. 엔비고로부터 입수한 암컷 BALB/c 마우스는 6-8주령에 도달하였다. 종양 이식을 위해 (제0일), 마우스에게 1x107개 세포/mL의 CT26 세포 현탁액의 0.1 mL 피하 주사를 우측 측복부 내로 제공하였다. CD8 고갈성 항체 (2.43, 바이오엑스셀(BioXCell))를 PBS 중에 희석하고, 100 μg/마우스로 투여하였다. 투여는 제1일에 개시하였고, 연구 완료까지 3-4일마다 계속하였다. 종양이 전형적으로 이식후 약 10일에 ~100 mm3의 미리 결정된 부피로 성장할 때, 마우스를 무작위화하고, 다양한 대조군 및 처리군으로 분류하고, 투여를 개시하였다. DGKi 화합물 16을 90% PEG400, 5%에탄올 및 5% TPGS 중에 제제화하고, 3일마다 5 mg/kg의 총 5회 용량 (Q3Dx5)에 대해 투여하여 10 mL/kg 체중의 부피로 경구로 제공하였다. 항-PD1 항체 (마우스 PD-1에 대해 지시된 mIgG1-D265A 모노클로날 항체) 및 이소형 대조군을 DPBS를 사용하여 10 mg/kg의 용량으로 희석하였다. 항체 요법을 복강내 주사 (I.P.)를 통해 4일마다 총 3회 용량 (Q4Dx3)에 대해 투여하였다. 종양이 완전히 퇴행하거나 (0 mm3) 또는 1000 mm3에 도달할 때까지 종양 부피를 디지털 캘리퍼로 1주 2회 측정하고, 안락사시켰다.
도 7에 도시된 결과는 항-PD-1 길항제 및 DGKi 화합물 16을 사용한 CT26 마우스의 처리에 의해 수득된 종양 부피 감소가 CD8+ 세포의 고갈에 의해 감소된다는 것을 나타낸다.
실시예 8: DGK 억제 및 PD1 길항제에 의한 종양 부피 감소는 CD4 세포 고갈에 의해 증진됨
본 실시예는 DGK 억제제 및 PD-1 길항제의 조합에 의해 수득된 종양 감소가 CD4 세포의 고갈에 의해 추가로 증진된다는 것을 보여준다.
검정을 다음과 같이 수행하였다: CT26 세포 (ATCC로부터)를 10% 태아 소 혈청 (인비트로젠/써모피셔 사이언티픽) 및 RPMI 1640 배지 (깁코/써모피셔 사이언티픽)에서 배양하였다. 엔비고로부터 입수한 암컷 BALB/c 마우스는 6-8주령에 도달하였다. 종양 이식을 위해 (제0일), 마우스에게 1x107개 세포/mL의 CT26 세포 현탁액의 0.1 mL 피하 주사를 우측 측복부 내로 제공하였다. CD4 고갈성 항체 (GK1.5, 바이오엑스셀)를 PBS 중에 희석하고, 100 μg/마우스로 투여하였다. 투여는 제1일에 개시하였고, 연구 완료까지 3-4일마다 계속하였다. 종양이 전형적으로 이식후 약 10일에 ~100 mm3의 미리 결정된 부피로 성장할 때, 마우스를 무작위화하고, 다양한 대조군 및 처리군으로 분류하고, 투여를 개시하였다. DGKi 화합물 16을 90% PEG400, 5%에탄올 및 5% TPGS 중에 제제화하고, 3일마다 5 mg/kg의 총 5회 용량 (Q3Dx5)에 대해 10 mL/kg 체중의 부피로 경구로 제공하였다. 항-PD1 (마우스 PD-1에 대해 지시된 mIgG1-D265A 모노클로날 항체) 및 이소형 대조군 (MOPC-21, 바이오엑스셀)을 DPBS를 사용하여 10 mg/kg의 용량으로 희석하였다. 항체 요법을 복강내 주사 (I.P.)를 통해 4일마다 총 3회 용량 (Q4Dx3)에 대해 투여하였다. 종양이 완전히 퇴행하거나 (0 mm3) 또는 1000 mm3에 도달할 때까지 종양 부피를 디지털 캘리퍼로 1주 2회 측정하고, 안락사시켰다.
도 8에 도시된 결과는 항-PD-1 길항제 및 DGKi 화합물 16을 사용한 MC38 마우스의 처리에 의해 수득된 종양 부피 감소가 CD4+ 세포의 고갈에 의해, 아마도 Treg 세포의 고갈로 인해 증진된다는 것을 나타낸다.
실시예 9: NK 세포는 DGKi 및 항-PD1 항종양 효능에 요구됨
본 실시예는 DGKi 및 PD1 길항제에 의해 유도된 종양 감소 활성이 CT26 동물 모델에서 NK 세포에 의존성이라는 것을 보여준다.
검정을 본질적으로 실시예 6 및 7에 기재된 바와 같이 수행하였으나, CD4 또는 CD8에 결합하는 항체를 첨가하는 대신에, 항-아시알로-GM1 (라이프 테크놀로지스)을 종양 주사 후 D4에 시작하여 연구의 종료까지 연속 7일마다 50 μg/마우스로 투여하였다.
도 9에 도시된 결과는 NK 세포가 CT26 마우스 모델에서 PD1 억제제와 조합된 DGKi 화합물 16의 항종양 활성에 기여한다는 것을 나타낸다.
실시예 10: 화학식 II의 DGKi와 항-PD-1 또는 항-CTLA4의 조합은 강건한 효능을 도출함
본 실시예는 화합물 17-34의 군으로부터의 화학식 II의 예시적인 DGKi가 항-PD-1 또는 항-CTLA4 항체와 함께 MC38 동물 모델에서 강한 항종양 활성을 갖는다는 것을 보여준다.
검정을 하기와 같이 수행하였다. 마우스 결장 선암종 종양 세포주 MC38을 T75 플라스크 내의 10% 태아 소 혈청 (FBS, 인비트로젠) 및 로스웰 파크 메모리얼 인스티튜트 (RPMI) 1640 배지 (깁코)에서 유지하였다. 세포를 전면생장률 미만으로 성장시키고, DPBS (둘베코 포스페이트-완충 염수, 깁코)로 간단히 헹구고, 세포를 수분 동안 정치시키고, 플라스크를 두드림으로써 1주에 2회 계대배양하였다. MC38 세포 계대비는 시기 및 전면생장률에 따라 1:16 내지 -1:20 범위였다. 생체내 이식을 위해, 세포를 DPBS로 헹군 다음, 얼음 상의 50 mL 원추형 튜브에서 빙냉 HBSS (행크 평형 염 용액, 깁코) 중에 수집하였다. 튜브를 1300 rpm에서 10분 동안 회전시키고, 상청액을 조심스럽게 제거하고, 펠릿을 HBSS로 세척하고, 다시 회전시켰다. 펠릿을 대략적인 이식 부피의 HBSS에 재현탁시켰다. 세포 농도를 목시(Moxi)-Z (오르플로)를 사용하여 측정하고, HBSS를 사용하여 최종 농도로 조정하였다. 세포 생존율을 카운테스(Countess) II (라이프 테크놀로지스) 상에서 트리판 블루 배제를 사용하여 측정하였다. 찰스 리버 래보러토리즈 (뉴욕주 킹스톤)로부터 입수한 암컷 C57Bl/6 마우스를 6-8주령에 사내 수용하여 3-7일 동안 순응시켰다. 종양 이식 시점 (제0일)에, 25 게이지 바늘을 갖는 1 mL 투베르쿨린 시린지를 사용하여 마우스에 8.5x106개 세포/ml의 농도의 MC38 세포 0.1 mL를 피하 주사하고, 좌측 및 우측 측복부 둘 다에 이식하였다. 종양을 미리 결정된 크기, 즉 ~78 mm로 성장시켰고, 이 때 동물을 유사한 평균 및 중앙 종양 값을 갖는 다양한 처리군 및 대조군으로 무작위화하였으며, 여기서 제6일 (이식 후 일수)에 군당 n=10이었다. 처리를 제7일 (이식 후 일수)에 개시하였으며, 여기서 종양은 ~100 mm3였다. 화합물 17-34의 군으로부터의 화학식 II의 DGKi를 90% PEG400, 5%에탄올 및 5% TPGS 중에 제제화하고, 매일 0.3 mg/kg의 총 28회 용량 (QDx28)에 대해 10 mL/kg 체중의 부피로 경구로 제공하였다. 항-PD-1 (마우스 PD-1에 대해 지시된 mIgG1-D265A 모노클로날 항체), 항-CTLA4 (마우스 CTLA4에 대해 지시된 mIgG2b 모노클로날 항체) 및 상응하는 이소형 대조군 (인비보플러스(InVivoPlus) 마우스 IgG1, 클론 MOPC-21, 및 인비보맙(InVivoMab) 마우스 IgG2b, 클론 MPC-11, 둘 다 바이오 X 셀 (뉴햄프셔주 웨스트 레바논)로부터의 각각 항-PD-1 및 항-CTLA4에 대한 이소형 대조군임)을 DPBS를 사용하여 10 mg/kg의 용량으로 희석하였다. 항체 요법을 복강내 주사 (I.P.)를 통해 4일마다 총 3회 용량 (Q4Dx3)에 대해 투여하였다. 종양이 완전히 퇴행하거나 (0 mm3) 또는 1000 mm3에 도달할 때까지 종양 부피를 디지털 캘리퍼로 1주 2회 측정하고, 안락사시켰다.
도 10에 도시된 결과는 단일 작용제가 보통의 효능을 도출하였지만 (도 10B-D), DGKi와 항-PD-1 또는 항-CTLA4 항체의 조합은 강건한 항종양 활성을 도출함 (각각 도 10E 및 F)을 나타낸다.
실시예 11: 화학식 II의 화합물과 항-PD-1 항체의 조합은 MC38 및 CT26 동물 모델 둘 다에서 강한 항종양 효능 및 지속적인 면역 기억을 나타냄
본 실시예는 항-PD-1과 함께 화합물 17-34의 군으로부터의 화학식 II의 예시적인 DGKi가 MC38 및 CT26 동물 모델 둘 다에서 완전한 종양 퇴행 및 지속적인 면역 기억을 도출할 수 있는 강한 항종양 효능을 갖는다는 것을 보여준다.
연구를 하기와 같이 수행하였다. MC38 동물 모델 연구를 실시예 10에 기재된 바와 같이 수행하였다. CT26 연구를 실시예 3에 예시된 바와 같이 수행하였다. DGKi 및 항-PD-1 (실시예 10에서와 동일)을 실시예 10에서와 같이 제조하고 투여하였다. 원래 치료 패러다임으로부터의 치유된 동물은 종양 부피의 변화가 10x TVDT (10 x 4.2일 = 42일) 동안 정체된 후에 유지되었다. 이들 동물에게 10x 초기 세포 농도를 우측 측복부에 피하로 이식하였다. 이들 동물을 42+일의 또 다른 기간 동안 매주 2회 측정하여 T 세포 기억 반응을 평가하였다.
도 11A-H에 도시된 결과는 화학식 II의 DGKi와 항-PD-1 항체의 조합이 시험된 동물 모델에서 강한 항종양 효과를 생성함을 나타낸다. 또한, MC38 및 CT26 모델에서 종양 세포로의 재-챌린지는 이식된 세포의 100% 거부를 유발하였다 (도 11D 및 H).
실시예 12: 화학식 II의 화합물과 항-PD-1 및 항-CTLA4의 조합은 B16F10 동물 모델에서 항-PD-1 또는 항-CTLA4와의 조합에 비해 더 강한 효능을 제공함
본 실시예는 화합물 17-34의 군으로부터의 화학식 II의 예시적인 DGKi와 항-PD-1 항체 및 항-CTLA4 항체의 삼중 조합이 B16F10 (흑색종/MHCIlo) 동물 모델에서 이중 조합의 효과보다 더 강한 항종양 효과를 생성한다는 것을 보여준다.
동물 모델 연구를 하기와 같이 수행하였다. 마우스 흑색종 종양 세포주 B16F10을 T75 플라스크 내의 10% 태아 소 혈청 (FBS, 인비트로젠) 및 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM) (깁코)에서 유지하였다. 세포를 전면생장률 미만으로 성장시키고, 플라스크를 DPBS (둘베코 포스페이트-완충 염수, 깁코)로 간단히 헹구고, 이어서 플라스크를 트립신 (0.25% 트립신, 깁코)으로 헹구고, 세포를 수분 동안 정치시키고 플라스크를 두드림으로써 1주에 2회 계대배양하였다. B16F10 세포 계대비는 시기 및 전면생장률에 따라 1:18 내지 -1:20 범위였다. 생체내 이식을 위해, 세포를 상기와 같이 트립신처리한 다음, 얼음 상의 50 mL 원추형 튜브에서 빙냉 HBSS (행크 평형 염 용액, 깁코) 중에 수집하였다. 튜브를 1300 rpm에서 10분 동안 회전시키고, 상청액을 조심스럽게 제거하고, 펠릿을 HBSS로 세척하고, 다시 회전시켰다. 펠릿을 대략적인 이식 부피의 HBSS에 재현탁시켰다. 세포 농도를 목시(Moxi)-Z (오르플로)를 사용하여 측정하고, HBSS를 사용하여 최종 농도로 조정하였다. 세포 생존율을 카운테스(Countess) II (라이프 테크놀로지스) 상에서 트리판 블루 배제를 사용하여 측정하였다. 찰스 리버 래보러토리즈 (노스캐롤라이나주 롤리)로부터 입수한 암컷 C57Bl/6 마우스를 6-8주령에 사내 수용하여 3-7일 동안 순응시켰다. 종양 이식 시점 (제0일)에, 25 게이지 바늘을 갖는 1 mL 투베르쿨린 시린지를 사용하여 마우스에 1x107개 세포/ml의 농도의 B16.F10 세포 0.1 mL를 피하 주사하고, 우측 측복부에 이식하였다. 종양이 미리 결정된 크기, 즉 ~50 mm3로 성장하였을 때 처리를 개시하였고, 이 때 동물을 유사한 평균 및 중앙 종양 값을 갖는 다양한 처리군 및 대조군으로 무작위화하였으며, 제8일 (이식 후 일수)에 군당 n=10이었다. 화합물 17-34의 군으로부터의 화학식 II의 DGKi를 90% PEG400, 5%에탄올 및 5% TPGS 중에 제제화하고, 매일 0.3 mg/kg의 총 28회 용량 (QDx28)에 대해 10 mL/kg 체중의 부피로 경구로 제공하였다. 항-PD-1, 항-CTLA4 및 상응하는 이소형 대조군 (실시예 10에서와 동일함)을 DPBS를 사용하여 10 mg/kg의 용량으로 희석하였다. 항체 요법을 복강내 주사 (I.P.)를 통해 4일마다 총 3회 용량 (Q4Dx3)에 대해 투여하였다. 종양이 완전히 퇴행하거나 (0 mm3) 또는 1000 mm3에 도달할 때까지 종양 부피를 디지털 캘리퍼로 1주 2회 측정하고, 안락사시켰다.
도 12A-F에 도시된 결과는 삼중 요법이 B16F10 동물 모델에서 이중 요법에 비해 반응을 개선하였음을 나타낸다.
실시예 13: DGK 억제제의 합성
DGKi 화합물 1
4-((2R,5S)-4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-6-브로모-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-3-카르보니트릴
Figure pct00033
DGKi 화합물 2
메틸 1-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-4-(6-시아노-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-4-일)피페라진-2-카르복실레이트
Figure pct00034
DGKi 화합물 3
(R)-4-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-6-브로모-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-3-카르보니트릴
Figure pct00035
DGKi 화합물 4
(R)-8-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2,7-디카르보니트릴
Figure pct00036
DGKi 화합물 5
8-[(2S,5R)-4-[(4-플루오로페닐)(페닐)메틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00037
DGKi 화합물 6 및 7
8-[(2S,5R)-4-[(4-플루오로페닐)(페닐)메틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00038
DGKi 화합물 8
4-[(2S,5R)-4-[(4-클로로페닐)(4-플루오로페닐)메틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-6-메톡시-1-메틸-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-2-온
Figure pct00039
DGKi 화합물 9
8-[(2S,5R)-4-{[2-(디플루오로메틸)-4-플루오로페닐]메틸}-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00040
DGKi 화합물 10
8-[(2S,5R)-4-[(4-플루오로페닐)(4-메틸페닐)메틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00041
DGKi 화합물 11
8-[(2S,5R)-4-[1-(2,6-디플루오로페닐)에틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00042
DGKi 화합물 12-14
8-((2S,5R)-4-(1-(2,4-디플루오로페닐)프로필)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00043
중간체 1
에틸 6-시아노-3-(N-메틸아세트아미도)피콜리네이트
Figure pct00044
실온에서 DCM (500 mL) 중 에틸 3-(N-메틸아세트아미도)-1-(l1-옥시다닐)-1l4-피리딘-2-카르복실레이트 (50 g, 210 mmol)의 교반된 연황색 용액에 트리메틸실릴 시아나이드 (39.4 mL, 294 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반하고, 혼합물을 -10℃로 냉각시켰다. 다음에, 벤조일 클로라이드 (34.1 mL, 294 mmol)를 50 mL 첨가 깔때기를 통해 15분에 걸쳐 첨가하고, 이어서 50 mL 첨가 깔때기를 통해 TEA (41.0 mL, 294 mmol)를 20분에 걸쳐 천천히 첨가하였다. TEA 첨가 동안 발열 반응이 관찰되었다. 반응 혼합물은 혼탁한 혼합물 (TEA 염)로 변하였으며, 이를 동일한 온도에서 2.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 10% NaHCO3 용액 (500 mL)으로 켄칭하고, DCM (3 x 300 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 용액을 염수 (2 x 250 mL)로 세척한 다음, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 담황색 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 용리액으로서 EA/석유 에테르를 사용하여 이스코(ISCO)® 상에서 정상 레디셉 실리카 칼럼을 통해 정제하였다. 생성물을 65-70% EA/석유 에테르에 의해 단리하고, 분획을 농축시켜 에틸 6-시아노-3-(N-메틸아세트아미도)피콜리네이트 (43 g, 83% 수율)를 담갈색 액체로서 수득하였다; LCMS: m/z = 248.0 (M+H); rt 1.255분; LC-MS 방법: 칼럼-키네텍스-XB-C18 (75 X 3 mm-2.6 μm); 이동상 A: 물 중 10 mM 포름산암모늄: 아세토니트릴 (98:2); 이동상 B: 물 중 10 mM 포름산암모늄:아세토니트릴 (2:98); 구배: 4분에 걸쳐 20-100% B, 유량 1.0 mL/분, 이어서 100% B에서 0.6분 유지, 유량 1.5 mL/분; 이어서 구배: 0.1분에 걸쳐 100-20% B, 유량 1.5 mL/분.
중간체 2
8-히드록시-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00045
테트라히드로푸란 (10 mL) 중 에틸 6-시아노-3-(N-메틸아세트아미도)피콜리네이트 (0.9 g, 3.64 mmol)의 교반 용액에 KHMDS (4.80 mL, 4.37 mmol)를 -78℃에서 10분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 30분에 걸쳐 천천히 가온한 다음, 추가로 90분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃으로 냉각시켰다. 반응물을 포화 중탄산나트륨 용액 (70 mL)으로 켄칭하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (2x100 mL)로 희석하였다. 수성 층을 수집하고, 1.5 N HCl로 산성화시켜 pH를 ~3.0으로 조정하였다. 혼합물을 15분 동안 교반하여 고체 물질을 형성하고, 이를 부흐너 깔때기를 통해 여과하여 8-히드록시-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴 (550 mg, 75% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS: m/z = 202.0 (M+H); rt 0.361분; LC-MS 방법: 칼럼-키네텍스-XB-C18 (75 X 3 mm-2.6 μm); 이동상 A: 물 중 10 mM 포름산암모늄:아세토니트릴 (98:2); 이동상 B: 물 중 10 mM 포름산암모늄:아세토니트릴 (2:98); 구배: 4분에 걸쳐 20-100% B, 유량 1.0 mL/분, 이어서 100% B에서 0.6분 유지, 유량 1.5 mL/분; 이어서 구배: 0.1분에 걸쳐 100-20% B, 유량 1.5 mL/분.
중간체 3
8-클로로-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00046
아세토니트릴 (10 mL) 중 8-히드록시-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴 (0.55 g, 2.73 mmol)의 교반 용액에 POCl3 (1.53 mL, 16.4 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분에 걸쳐 85℃까지 가열하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 반응 혼합물을 0℃으로 냉각시켰다. 반응물을 포화 중탄산나트륨 용액 (50 mL)으로 켄칭하였다. 반응물을 DCM (3 x 100 mL)으로 희석하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 8-클로로-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴 (0.25 g, 29.1% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS: m/z = 220.2 (M+H); rt 1.528분; LC-MS 방법: 칼럼-키네텍스-XB-C18 (75 X 3 mm-2.6 μm); 이동상 A: 물 중 10 mM 포름산암모늄: 아세토니트릴 (98:2); 이동상 B: 물 중 10 mM 포름산암모늄:아세토니트릴 (2:98); 구배: 4분에 걸쳐 20-100% B, 유량 1.0 mL/분, 이어서 100% B에서 0.6분 유지, 유량 1.5 mL/분; 이어서 구배: 0.1분에 걸쳐 100-20% B, 유량 1.5 mL/분.
중간체 4
입체화학: A
(시아노메틸)트리메틸포스포늄 아이오다이드
Figure pct00047
(시아노메틸)트리메틸포스포늄 아이오다이드를 문헌 [Zaragoza, F., et al., J. Org. Chem. 2001, 66, 2518-2521]에 기재된 일반적 방법에 따라 제조하였다. 1 L 둥근 바닥 플라스크에서, 톨루엔 중 트리메틸포스핀 (100 mL, 100 mmol)을 THF (50.0 mL) 및 톨루엔 (50.0 mL)으로 희석하고, 빙조에서 냉각시켰다. 반응 혼합물을 격렬히 교반하면서 아이오도아세토니트릴 (7 mL, 16.7 g, 68.3 mmol)을 적가하여 황갈색 침전물을 생성하였다. 냉각 조를 제거하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 플라스크를 소니케이터에 넣어 임의의 덩어리진 고체를 부수었다. 반응 혼합물을 추가로 4시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 진공 하에 건조시켜 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 아이오다이드 (16.6 g, 68.3 mmol, 68.3% 수율)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.03 (d, J=16.4 Hz, 2H), 2.05 (d, J=15.4 Hz, 9H).
중간체 5
입체화학: 호모키랄
8-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴, TFA
Figure pct00048
아세토니트릴 (1.3 L) 중 6-시아노-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-4-일 트리플루오로메탄술포네이트 (65 g, 195 mmol) 및 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (43.9 g, 205 mmol)의 용액에 DIPEA (0.102 L, 585 mmol)를 첨가하였다. 용액을 80℃에서 6시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 조 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하였다 (100% 에틸 아세테이트 중 생성물 Rf 0.4). 생성물, tert-부틸 (2R,5S)-4-(6-시아노-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (75 g, 189 mmol, 97% 수율)를 수득하였다. LCMS: m/z = 398.2 (M+H); rt 2.7분. 방법: 칼럼-키네텍스 XB-C18 (75X3 mm-2.6 μm), 유량 1 mL/분; 구배 시간 4분; 20% 용매 B에서 100% 용매 B; 254 nm에서 모니터링함 (용매 A: 98% 물: 2% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 용매 B: 2% 물: 98% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄.
0℃에서 에틸 아세테이트 (1000 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(6-시아노-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 g, 75 mmol)의 용액에 HCl (디옥산 중 4M) (189 mL, 755 mmol)을 첨가하고, 온도를 6시간 동안 교반하면서 실온에 도달하도록 하였다. LC/MS 분석은 0.44 RT에서 ~4%의 아미드 부산물 질량 (니트릴 가수분해와 일치함)과 함께 0.60 RT에서 ~90% 생성물 질량을 나타냈다. 반응 혼합물을 메틸 t-부틸 에테르 (MTBE, 2000 mL)로 희석하고, 15분 동안 교반하고, 생성물의 HCl 염을 여과하고, MTBE (100 ml)로 세척하였다. HCl 염을 물 (300 ml) 중에 용해시키고, 10% 수성 중탄산나트륨을 사용하여 pH를 ~8로 조정하였다. 유기부를 DCM (5 x 250 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (2 x 300 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 8-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴 (20 g, 65.2 mmol, 86% 수율)을 수득하였다. LCMS: m/z = 298.2 (M+H); rt 0.5분. 방법: 칼럼-키네텍스 XB-C18 (75X3 mm-2.6 μm), 유량 1 mL/분; 구배 시간 4분; 20% 용매 B에서 100% 용매 B; 254 nm에서 모니터링함 (용매 A: 98% 물: 2% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 용매 B: 2% 물: 98% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.79 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 12,3.2 Hz, 1H), 6.29 (s, 1H), 3.80 (dd, J= 8.8 Hz, 1H) 3.70 (m, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.29 (m, 2H), 2.80 (m, 2H), 1.19 (d, J= 6 Hz, 3H), 1.15 (d, J= 6 Hz, 3H). 13C NMR (75 MHz, 클로로포름-d) δ 161.9, 155.0, 138.5, 137.0, 128.2, 125.0, 122.2, 117.2, 111.3, 56.5, 51.9, 50.0, 49.5, 29.0, 18.8, 15.4.
중간체 6
8-클로로-5-메틸-7-니트로-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00049
8-히드록시-5-메틸-7-니트로-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴 (192 mg, 0.780 mmol)을 함유하는 2 드램 바이알에, 자기 교반 막대 및 아세토니트릴 (3.1 mL)을 첨가하였다. 다음에, DIEA (0.272 mL, 1.560 mmol)를 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물이 균질 황색 용액이 될 때까지 반응 혼합물을 1-2분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 옥시염화인 (0.131 mL, 1.404 mmol)을 첨가하였다. 오일 버블러로 환기시키면서 바이알을 질소 하에 캡핑하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (200 mg, 0.878 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 바이알을 질소 분위기 하에 캡핑하고, 오일조 (65℃)에 담그고, 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 반응 휘발성 물질을 회전 증발기를 사용하여 진공 하에 제거하였다. 반응 잔류물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 얼음 (~10 mL)을 함유한 비커에 부은 다음, 분리 깔때기로 옮겼다. 수성 상을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 1.5M K2HPO4, 포화 수성 중탄산나트륨, 및 염수로 순차적으로 세척하였다. 유기 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공 하에 제거하여 갈색빛 결정질 고체 204 mg을 수득하였다. LCMS: 칼럼: 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 0.05% 트리플루오로아세트산 함유 100% 물; 이동상 B: 0.05% 트리플루오로아세트산 함유 100% 아세토니트릴; 온도: 40℃; 구배: 1.5분에 걸쳐 2-98% B, 이어서 98% B에서 0.5분 유지; 유량: 0.8 mL/분; 검출: 220 nm에서의 UV. 체류 시간 = 1.01분; 관찰 부가물: [M+H]; 관찰 질량: 265.0 (약한 이온화). 1H NMR (클로로포름-d) δ 8.03 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.89-7.97 (m, 1H), 3.82 (s, 3H).
중간체 7
8-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴, TFA
Figure pct00050
아세토니트릴 (1.3 L) 중 6-시아노-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-4-일 트리플루오로메탄술포네이트 (65 g, 195 mmol) 및 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (43.9 g, 205 mmol)의 용액에 DIPEA (0.102 L, 585 mmol)를 첨가하였다. 용액을 80℃에서 6시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 조 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하였다 (100% 에틸 아세테이트 중 생성물 Rf 0.4). 생성물, tert-부틸 (2R,5S)-4-(6-시아노-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (75 g, 189 mmol, 97% 수율)를 수득하였다. LCMS: m/z = 398.2 (M+H); rt 2.7분. 방법: 칼럼-키네텍스 XB-C18 (75X3 mm-2.6 μm), 유량 1 mL/분; 구배 시간 4분; 20% 용매 B에서 100% 용매 B; 254 nm에서 모니터링함 (용매 A: 98% 물: 2% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 용매 B: 2% 물: 98% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄.
0℃에서 에틸 아세테이트 (1000 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(6-시아노-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (30 g, 75 mmol)의 용액에 HCl (디옥산 중 4M) (189 mL, 755 mmol)을 첨가하고, 온도를 6시간 동안 교반하면서 실온에 도달하도록 하였다. LC/MS 분석은 0.44 RT에서 ~4%의 아미드 부산물 질량 (니트릴 가수분해와 일치함)과 함께 0.60 RT에서 ~90% 생성물 질량을 나타냈다. 반응 혼합물을 메틸 t-부틸 에테르 (MTBE, 2000 mL)로 희석하고, 15분 동안 교반하고, 생성물의 HCl 염을 여과하고, MTBE (100 ml)로 세척하였다. HCl 염을 물 (300 ml) 중에 용해시키고, 10% 수성 중탄산나트륨을 사용하여 pH를 ~8로 조정하였다. 유기부를 DCM (5 x 250 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (2 x 300 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 8-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴 (20 g, 65.2 mmol, 86% 수율)을 수득하였다. LCMS: m/z = 298.2 (M+H); rt 0.5분. 방법: 칼럼-키네텍스 XB-C18 (75 X 3 mm-2.6 μm), 유량 1 mL/분; 구배 시간 4분; 20% 용매 B에서 100% 용매 B; 254 nm에서 모니터링함 (용매 A: 98% 물: 2% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 용매 B: 2% 물: 98% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.79 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 12,3.2 Hz, 1H), 6.29 (s, 1H), 3.80 (dd, J= 8.8 Hz, 1H) 3.70 (m, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.29 (m, 2H), 2.80 (m, 2H), 1.19 (d, J= 6 Hz, 3H), 1.15 (d, J= 6 Hz, 3H). 13C NMR (75 MHz, 클로로포름-d) δ 161.9, 155.0, 138.5, 137.0, 128.2, 125.0, 122.2, 117.2, 111.3, 56.5, 51.9, 50.0, 49.5, 29.0, 18.8, 15.4. 입체화학: 호모키랄.
DGKi 화합물 1의 합성 방법
4-((2R,5S)-4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-6-브로모-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-3-카르보니트릴
Figure pct00051
아세토니트릴 (5 mL) 중 6-브로모-3-시아노-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-4-일 트리플루오로메탄술포네이트 (80 mg, 0.194 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (0.102 mL, 0.582 mmol) 및 (2S,5R)-1-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-2,5-디메틸피페라진의 HCl 염 (75 mg, 0.214 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 85℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (15 mL) 중에 용해시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 24 g 플래쉬 칼럼을 사용하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 50-80% EtOAc로 용리시키면서 정제하였다. 분획을 감압 하에 농축시켜 4-((2R,5S)-4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-6-브로모-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-3-카르보니트릴 (95 mg, 85% 수율)을 수득하였다; LCMS: m/z = 578.2 (M+H); rt 3.916분.
DGKi 화합물 2의 합성 방법
메틸 1-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-4-(6-시아노-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-4-일)피페라진-2-카르복실레이트
Figure pct00052
DMA (1 mL) 및 t-부탄올 (4 mL) 중 8-클로로-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴 (22.90 mg, 0.104 mmol)의 교반 용액에 메틸 1-(비스(4-플루오로페닐)메틸)피페라진-2-카르복실레이트의 TFA 염 (40 mg, 0.087 mmol) 및 탄산세슘 (85 mg, 0.261 mmol)을 질소 분위기 하에 첨가하고, 이어서 클로로(2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐 (II) (3.37 mg, 4.34 μmol)을 첨가하였다. 반응 용기를 70℃에서 오일조에 침지시켰다. 조 온도를 2분에 걸쳐 90℃로 상승시키고, 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 층을 통해 여과하고, 고진공 하에 농축시켜 갈색 검을 수득하였다. 조 물질을 정제용 HPLC를 통해 다음 조건으로 정제하였다: 칼럼: 선파이어 C18, 19 x 150 mm, 5 μm 입자; 이동상 A: 아세트산 함유 10 mM 아세트산암모늄 pH 4.5; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 15분에 걸쳐 30-100% B, 이어서 100% B에서 5분 유지; 유량: 17 mL/분. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 메틸 1-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-4-(6-시아노-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-4-일)피페라진-2-카르복실레이트 (3.5 mg, 6.23 μmol, 7.17% 수율)를 수득하였다. LCMS: m/z = 530.2 (M+H); rt 2.20분. LC-MS 방법: 칼럼-X 브리지 BEH XP C18 (50 x 2.1 mm 2.5 μm; 유량 1.1 mL/분; 구배 시간 3분; 온도: 50℃, 0% 용매 B에서 100% 용매 B; 220 nm에서 모니터링함 (용매 A: 95% 물:5% 아세토니트릴; 10 mM 아세트산암모늄; 용매 B: 5% 물:95% 아세토니트릴; 10 mM 아세트산암모늄). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.16 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.08 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.57 (dd, J=8.8, 5.6 Hz, 2H), 7.42-7.28 (m, 2H), 7.22-7.08 (m, 4H), 6.14 (s, 1H), 5.17 (s, 1H), 4.78 (d, J=12.2 Hz, 1H), 3.64 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.54 (s, 3H), 3.45-3.35 (m, 2H), 3.15(dd, J=12.5, 3.9 Hz, 1H), 3.04 (td, J=11.7, 2.9 Hz, 1H), 2.71-2.63 (m, 1H).
DGKi 화합물 3의 합성 방법
(R)-4-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-6-브로모-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-3-카르보니트릴
Figure pct00053
아세토니트릴 (8 mL) 중 6-브로모-3-시아노-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-4-일 트리플루오로메탄술포네이트 (100 mg, 0.243 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (0.127 mL, 0.728 mmol) 및 (R)-1-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-2-메틸피페라진의 HCl 염 (82 mg, 0.243 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분에 걸쳐 85℃까지 가열하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 고진공 하에 농축시켜 갈색 검을 수득하였다. 조 화합물을 12 g 실리카 겔 칼럼; 60-67% 에틸 아세테이트/석유 에테르를 사용하여 이스코®에 의해 정제하여 (R)-4-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-6-브로모-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-3-카르보니트릴 (90 mg, 42.7% 수율)을 갈색 검으로서 수득하였다; LCMS: m/z = 566.0 (M+2H); rt 2.23분. LC-MS 방법: 칼럼-액퀴티 UPLC BEH C18 (3.0 x 50 mm) 1.7 μm; 이동상 A: 완충제: 아세토니트릴 (95:5); 이동상 B: 완충제: 아세토니트릴 (5:95), 완충제: 10 mM 아세트산암모늄; 구배: 2.0분에 걸쳐 20-100% B, 이어서 100% B에서 0.2분 유지, 유량 0.7 mL/분.
DGKi 화합물 4의 합성 방법
(R)-8-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2,7-디카르보니트릴
Figure pct00054
NMP (5 mL) 중 (R)-4-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-6-브로모-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-3-카르보니트릴 (90 mg, 0.159 mmol)의 교반 용액에 질소 하에 아연 (2.085 mg, 0.032 mmol) 및 시안화아연 (37.4 mg, 0.319 mmol)을 첨가하였다. 질소 퍼징을 3분 동안 계속하고, dppf (5.30 mg, 9.57 μmol) 및 Pd2(dba)3 (14.6 mg, 0.016 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분에 걸쳐 80℃까지 가열하고, 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 층을 통해 여과하고, 고진공 하에 농축시켜 갈색 검을 수득하였다. 조 물질을 정제용 HPLC를 통해 정제하였다. HPLC 방법: 칼럼-선파이어 C18 (150 mm x 19 mm ID, 5 μm); 이동상 A: 물 중 10 mM 아세트산암모늄; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 3.0분에 걸쳐 40-60% B, 유량 17 mL/분, 이어서 60-100% B에서 17분 유지, 유량 17 mL/분. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 고진공 하에 농축시켰다. 이어서, 샘플을 EtOH/H2O, 1:3으로 희석하고, 밤새 동결건조시켜 (R)-8-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)-3-메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2,7-디카르보니트릴 (50 mg, 61.4% 수율)을 연황색 고체로서 수득하였다. LCMS: m/z = 511.2 (M+H); rt 3.520분. LC-MS 방법: 칼럼-키네텍스-XB-C18 (75 x 3 mm-2.6 μ); 이동상 A: 물 중 10 mM 포름산암모늄: 아세토니트릴 (98:2); 이동상 B: 물 중 10 mM 포름산암모늄: 아세토니트릴 (2:98); 구배: 4분에 걸쳐 20-100% B, 유량 1.0 mL/분, 이어서 100% B에서 0.6분 유지, 유량 1.5 mL/분; 이어서 구배: 0.1분에 걸쳐 100-20% B, 유량 1.5 mL/분. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.26 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.15 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.56 (dd, J=11.9, 8.7 Hz, 2H), 7.57 (dd, J=11.7, 8.8 Hz, 2H), 7.16 (t, J=8.9 Hz, 4H), 4.90 (s, 1H), 4.10 (d,J=13.0 Hz, 1H), 4.01 (d, J=12.5 Hz, 1H), 3.86 (dd, J=12.2, 2.9 Hz, 1H), 3.66-3.55 (m, 1H),3.53 (s, 3H), 3.08-2.97 (m, 1H), 2.97-2.90 (m, 1H), 2.90 (s, 1H), 1.03 (d, J=6.6 Hz, 3H).
DGKi 화합물 5의 합성 방법
8-[(2S,5R)-4-[(4-플루오로페닐)(페닐)메틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00055
2 드램 밀봉된 반응 용기에서, 8-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴, TFA (41.1 mg, 100 μmol), (4-플루오로페닐)(페닐)메탄올 (28.3 mg, 140 μmol) 및 (시아노메틸) 트리메틸포스포늄 아이오다이드 (48.6 mg, 200 μmol)를 아세토니트릴 (200 μl) 중에서 합하였다. 휘니그 염기 (75 μL, 429 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 12 g 실리카 겔 칼럼 상에 직접 주입하고, 헥산 중 20-100% 에틸 아세테이트로 용리시켜 실시예 182를 부분입체이성질체 혼합물로서 수득하였다. 분석용 LC/MS 조건: 주입 부피 = 3 μL, 출발 %B 0, 최종 %B 100, 구배 시간 2분, 유량 1 mL/분, 파장 220 nm, 용매 쌍 아세토니트릴/물/TFA, 용매 A 10% 아세토니트릴, 90% 물/0.05% TFA, 용매 B 10% 물, 90% 아세토니트릴/0.05% TFA, 칼럼 액퀴티 BEH C18 21. X 50 mm 1.7 μm, 오븐 온도 = 40℃. LC/MS 결과; 체류 시간 1.4분, 관찰 질량 482.5 (M+).
조 물질을 추가로 정제용 LC/MS를 통해 다음 조건으로 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 200 mm x 19 mm, 5 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 47% B에서 0분 유지, 20분에 걸쳐 47-87% B, 이어서 100% B에서 4분 유지; 유량: 20 mL/분; 칼럼 온도: 25℃. 분획 수집을 MS 신호에 의해 촉발시켰다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켜 표제 화합물 14.4 mg (30% 수율)을 수득하였다. 분자량 계산치 481.575. LC/MS 조건 QC-ACN-TFA-XB: 관찰 MS 이온 482.2, 체류 시간 1.6분. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.18-8.10 (m, 1H), 8.06 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.68-7.48 (m, 4H), 7.39-7.26 (m, 2H), 7.25-7.08 (m, 3H), 6.00 (s, 1H), 4.67 (br s, 1H), 4.59 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 3.76-3.62 (m, 1H), 3.55 (br d, J=12.8 Hz, 1H), 3.15-3.04 (m, 1H), 2.90-2.81 (m, 1H), 2.36 (br dd, J=17.4, 11.9 Hz, 1H), 1.35-1.28 (m, 3H), 1.24 (s, 1H), 1.07 (br t, J=5.6 Hz, 3H).
DGKi 화합물 6 및 7의 합성 방법
8-[(2S,5R)-4-[(4-플루오로페닐)(페닐)메틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00056
실시예 5를 키랄 고체 상 크로마토그래피를 이용하여 개별 부분입체이성질체로 분리하였다: 칼럼: 키랄팩 OJ-H, 21 x 250 mm; 5 마이크로미터, 이동상: 90% CO2/10% 메탄올, 유량 조건: 45 mL/분, 검출기 파장: 225 nm, 주입 세부사항: 500 μL, 1 mL 메탄올/아세토니트릴 중에 용해된 15 mg.
제1 용리 부분입체이성질체, 실시예 6 (66.4 mg)을 20.2% 수율로 단리하였다. 분석용 LC/MS를 사용하여 최종 순도를 결정하였다. 주입 1 조건: 칼럼: 워터스 엑스브리지 C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0%B에서 100%B, 이어서 100%B에서 0.50분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm). 주입 1 결과: 순도: 100.0%; 관찰 질량: 482.1; 체류 시간: 2.49분. 주입 2 조건: 칼럼: 워터스 엑스브리지 C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0%B에서 100%B, 이어서 100%B에서 0.50분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm). 주입 2 결과: 순도: 100.0%; 관찰 질량: 482.11; 체류 시간: 1.75분.
제2 용리 부분입체이성질체, 실시예 7 (71.7 mg)을 21.9% 수율로 단리하였다. 분석용 LC/MS를 사용하여 최종 순도를 결정하였다. 주입 1 조건: 칼럼: 워터스 엑스브리지 C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0%B에서 100%B, 이어서 100%B에서 0.50분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm). 주입 1 결과: 순도: 100.0%; 관찰치 질량: 482.11; 체류 시간: 2.51분. 주입 2 조건: 칼럼: 워터스 엑스브리지 C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0%B에서 100%B, 이어서 100%B에서 0.50분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm). 주입 2 결과: 순도: 100.0%; 관찰 질량: 482.1; 체류 시간: 1.76분.
DGKi 화합물 8의 합성 방법
4-[(2S,5R)-4-[(4-클로로페닐)(4-플루오로페닐)메틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-6-메톡시-1-메틸-1,2-디히드로-1,5-나프티리딘-2-온
Figure pct00057
4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-6-메톡시-1-메틸-1,5-나프티리딘-2(1H)-온 (50 mg, 0.165 mmol) 및 1-(브로모(4-클로로페닐)메틸)-4-플루오로벤젠 (49.5 mg, 0.165 mmol)을 아세토니트릴 (3 mL) 중 디이소프로필 에틸 아민 (0.173 mL, 0.992 mmol)과 합하고, 반응 혼합물을 55℃에서 밤새 가열하였다. LC/MS는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 조 물질을 정제용 LC/MS를 통해 다음 조건으로 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 200 mm x 19 mm, 5 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 42% B에서 0분 유지, 25분에 걸쳐 42-82% B, 이어서 100% B에서 5분 유지; 유량: 20 mL/분; 칼럼 온도: 25℃. 분획 수집을 MS 신호에 의해 촉발시켰다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 분자량 계산치 521.03. LC/MS 조건 QC-ACN-AA-XB: 관찰 MS 이온 521.1, 체류 시간 2.77분.
DGKi 화합물 9의 합성 방법
8-[(2S,5R)-4-{[2-(디플루오로메틸)-4-플루오로페닐]메틸}-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00058
8-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴 (30 mg, 0.081 mmol)의 DMF (2 mL) 용액에 2-(디플루오로메틸)-4-플루오로벤즈알데히드 (16.86 mg, 0.097 mmol)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 소듐 시아노보로히드라이드 (15.22 mg, 0.242 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LC/MS 분석은 반응이 완결되었음을 나타냈다. 조 물질을 정제용 LC/MS를 통해 다음 조건으로 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 200 mm x 19 mm, 5 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴: 물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴: 물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 31% B에서 0분 유지, 25분에 걸쳐 31-71% B, 이어서 100% B에서 5분 유지; 유량: 20 mL/분; 칼럼 온도: 25℃. 분획 수집을 MS 및 UV 신호에 의해 촉발시켰다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 13.0 mg이었고, LCMS 분석에 의한 추정된 순도는 100%였다. 분석용 LC/MS를 사용하여 최종 순도를 결정하였다. 주입 1 조건: 칼럼: 워터스 엑스브리지 C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0%B에서 100%B, 이어서 100%B에서 0.50분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm). 주입 1 결과: 순도: 100.0%; 관찰 질량: 456.08; 체류 시간: 1.39분. 주입 2 조건: 칼럼: 워터스 엑스브리지 C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0%B에서 100%B, 이어서 100%B에서 0.50분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm). 주입 2 결과: 순도: 100.0%; 관찰 질량: 456.07; 체류 시간: 2.22분. 3분에 걸쳐 %B, 이어서 100%B에서 0.50분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm). 주입 2 결과: 순도: 100.0%; 관찰 질량: 456.07; 체류 시간: 2.22분.
DGKi 화합물 10의 합성 방법
8-[(2S,5R)-4-[(4-플루오로페닐)(4-메틸페닐)메틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00059
아세토니트릴 (0.3 mL) 중 8-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴, TFA (68.6 mg, 60 중량%, 0.1 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 아이오다이드 (48.6 mg, 0.200 mmol) 및 (4-플루오로페닐)(p-톨릴)메탄올 (26.0 mg, 0.120 mmol)의 혼합물에 휘니그 염기 (0.105 mL, 0.600 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 아이오다이드 (48.6 mg, 0.200 mmol), (4-플루오로페닐)(p-톨릴)메탄올 (26.0 mg, 0.120 mmol) 및 휘니그 염기 (0.058 mL, 0.300 mmol)를 두번째로 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 추가 2시간 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물을 플래쉬 크로마토그래피용 12g Si-레디셉 Rf 상에 헥산 중 20-100% 에틸 아세테이트에 의해 직접 주입하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 진공에 의해 건조시켰다. 생성된 물질을 추가로 정제용 LC/MS를 통해 다음 조건으로 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 200 mm x 19 mm, 5 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 구배: 20% B에서 0분 유지, 25분에 걸쳐 20-60% B, 이어서 100% B에서 5분 유지; 유량: 20 mL/분; 칼럼 온도: 25℃. 분획 수집을 MS 및 UV 신호에 의해 촉발시켰다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 부분입체이성질체 생성물 TFA 염의 수율은 47.1 mg이었다.
부분입체이성질체 생성물을 SFC-키랄 크로마토그래피를 사용하여 다음 조건으로 2종의 부분입체이성질체로 분해하였다: 칼럼: 키랄 AD, 30 x 250 mm, 5 마이크로미터 입자; 이동상: 80% CO2/20% IPA w/0.1%DEA; 유량: 100 mL/분; 칼럼 온도: 25℃. 표제 화합물을 2nd 용리액 피크, > 91% de로서 수집하였다. 분자량 계산치 495.602. 분석용 LC/MS를 사용하여 최종 순도를 결정하였다. 주입 1 조건: 칼럼: 워터스 엑스브리지 C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0%B에서 100%B, 이어서 100%B에서 0.50분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm). 주입 1 결과: 순도: 97.6%; 관찰 질량: 496.26; 체류 시간: 2.52분. 주입 2 조건: 칼럼: 워터스 엑스브리지 C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0%B에서 100%B, 이어서 100%B에서 0.50분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm). 주입 2 결과: 순도: 98.2%; 관찰 질량: 496.28; 체류 시간: 1.73분.
DGKi 화합물 11의 합성 방법
8-[(2S,5R)-4-[1-(2,6-디플루오로페닐)에틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00060
아세토니트릴 (0.3 mL) 중 2-(1-브로모에틸)-1,3-디플루오로벤젠 (15.12 mg, 0.065 mmol) 및 5-메틸-6-옥소-8-(피페라진-1-일)-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2,7-디카르보니트릴, TFA (34.0 mg, 60 중량%, 0.05 mmol)의 혼합물에 휘니그 염기 (0.052 mL, 0.300 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 55℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 생성물로의 완전한 전환을 나타냈다. 조 물질을 정제용 LC/MS를 통해 다음 조건으로 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 200 mm x 19 mm, 5 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 37% B에서 0분 유지, 20분에 걸쳐 37-77% B, 이어서 100% B에서 5분 유지; 유량: 20 mL/분; 칼럼 온도: 25℃. 분획 수집을 MS 및 UV 신호에 의해 촉발시켰다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 12.1 mg이었다. 분자량 계산치 437.495. 분석용 LC/MS를 사용하여 최종 순도를 결정하였다. 주입 1 조건: 칼럼: 워터스 엑스브리지 C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0%B에서 100%B, 이어서 100%B에서 0.50분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm). 주입 1 결과: 순도: 100.0%; 관찰 질량: 438.14; 체류 시간: 2.36분. 주입 2 조건: 칼럼: 워터스 엑스브리지 C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0%B에서 100%B, 이어서 100%B에서 0.50분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm). 주입 2 결과: 순도: 100.0%; 관찰 질량: 438.14; 체류 시간: 1.2분.
DGKi 화합물 12-14의 합성 방법
8-((2S,5R)-4-(1-(2,4-디플루오로페닐)프로필)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00061
아세토니트릴 (0.3 mL) 중 8-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴 (29.7 mg, 0.1 mmol) 및 1-(1-브로모프로필)-2,4-디플루오로벤젠 (25.9 mg, 0.110 mmol)의 혼합물에 휘니그 염기 (87 μL, 0.500 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 핫 플레이트 상에서 55℃에서 16시간 동안 교반하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS를 통해 다음 조건으로 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 200 mm x 19 mm, 5-μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 구배: 3% B에서 0분 유지, 25분에 걸쳐 3-43% B, 이어서 100% B에서 5분 유지; 유량: 20 mL/분; 칼럼 온도: 25℃. 분획 수집을 MS 및 UV 신호에 의해 촉발시켰다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 입체화학: 부분입체이성질체 혼합물.
DGKi 화합물 12의 합성의 부분입체이성질체 혼합물을 다음 조건으로 SFC-키랄 크로마토그래피를 사용하여 추가로 분리하여 2종의 호모키랄 부분입체이성질체를 분해하였다: 칼럼: 키랄 OD, 30 x 250 mm . 5 마이크로미터 입자; 이동상: 15% IPA/85% CO2 w/0.1% DEA; 유량: 100 mL/분; 검출기 파장: 220 nm.
DGKi 화합물 13 (이성질체 1)을 95% de에서 제1 용리액 피크로서 수집하였다. 입체화학: 호모키랄.
DGKi 화합물 14 (이성질체 2)를 95% de에서 제2 용리액 피크로서 수집하였다. 입체화학: 호모키랄.
DGKi 화합물 15의 합성 방법
8-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)피페라진-1-일)-5-메틸-7-니트로-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00062
DMF를 질소로 1시간 동안 폭기하였다. 1 드램 바이알에 아연 (0.95 mg, 0.015 mmol), 브로모(트리-tert-부틸포스핀)팔라듐(I) 이량체 (9.96 mg, 0.013 mmol) 및 4-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)피페라진-1-일)-6-브로모-1-메틸-3-니트로-1,5-나프티리딘-2(1H)-온 (21.38 mg, 0.037 mmol)을 충전하였다. 폭기된 DMF (0.3 mL)를 첨가하고, 혼합물을 질소 하에 캡핑하고, 50℃ 오일 조에 15분 동안 침지시켰다. 디시아노아연 (2.86 mg, 0.024 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 캡핑하고, 50℃ 오일 조에 3시간 동안 침지시켰다. LC/MS 분석은 반응이 완결되었음을 나타냈다. 조 물질을 정제용 LC/MS를 통해 다음 조건으로 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 19 x 200 mm, 5 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 15분에 걸쳐 50-90% B, 이어서 100% B에서 5분 유지; 유량: 20 mL/분. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 표제 화합물 (11.4 mg)을 59.7% 수율로 단리하였다.
대안적 합성: 8-클로로-5-메틸-7-니트로-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴 (750 mg, 2.83 mmol)의 DMF (6 mL) 용액을 1-(비스(4-플루오로페닐)메틸)피페라진 (899 mg, 3.12 mmol))과 합하고, 이어서 휘니그 염기 (0.990 mL, 5.67 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LC/MS 분석은 반응이 완결되었음을 나타냈다. 조 물질을 여과하고, 완충제로서 아세트산암모늄을 함유하는 수성 아세토니트릴을 사용하여 정제용 HPLC에 의해 정제하여 황색 고체 1.02 g를 수득하였다. 2회의 분석용 LC/MS 주입을 사용하여 최종 순도를 결정하였다. 주입 1 조건: 칼럼: 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0-100% B, 이어서 100% B에서 0.75분 유지; 유량: 1.0 mL/분; 검출: 220 nm에서의 UV. 주입 2 조건: 칼럼: 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0-100% B, 이어서 100% B에서 0.75분 유지; 유량: 1.0 mL/분; 검출: 220 nm에서의 UV. 주입 1 결과: 순도: 100%; 관찰 질량: 517.0; 체류 시간: 2.4분. 주입 2 결과: 순도: 98.4%; 관찰 질량: 517.0; 체류 시간: 1.7분. 1H NMR (500 MHz, 클로로포름-d) δ 7.88 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.76 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=8.5, 5.5 Hz, 4H), 7.02 (t, J=8.7 Hz, 4H), 4.34 (s, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.62-3.55 (m, 4H), 2.64 (br s, 4H). 13C NMR (126 MHz, 클로로포름-d) δ 163.0, 161.0, 155.4, 147.0, 138.0, 137.7, 137.7, 135.9, 132.4, 129.5, 129.2, 129.2, 126.0, 123.1, 116.5, 115.8, 115.6, 74.3, 51.6, 51.2, 29.7.
DGKi 화합물 16의 합성 방법
8-[(2S,5R)-4-[비스(4-메틸페닐)메틸]-2,5-디메틸피페라진-1-일]-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴
Figure pct00063
아세토니트릴 (0.3 mL) 중 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 아이오다이드 (46.2 mg, 0.19 mmol), 디-p-톨릴메탄올 (23.46 mg, 0.108 mmol), 및 8-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-5-메틸-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴, TFA (72.4 mg, 54wt%, 0.095 mmol)의 혼합물에 휘니그 염기 (0.10 mL, 0.57 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 조 물질을 정제용 LC/MS를 통해 다음 조건으로 정제하였다: 칼럼: 엑스브리지 C18, 200 mm x 19 mm, 5 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 구배: 55% B에서 0분 유지, 20분에 걸쳐 55-95% B, 이어서 100% B에서 4분 유지; 유량: 20 mL/분; 칼럼 온도: 25℃. 분획 수집을 MS 및 UV 신호에 의해 촉발시켰다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 원심 증발을 통해 건조시켰다. 생성물의 수율은 23.4 mg이었다. 분자량 계산치 491.639. 분석용 LC/MS를 사용하여 최종 순도를 결정하였다. 주입 1 조건: 칼럼: 워터스 엑스브리지 C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0%B에서 100%B, 이어서 100%B에서 0.75분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm). 주입 1 결과: 순도: 100.0%; 관찰 질량: 492.21; 체류 시간: 2.77분. 주입 2 조건: 칼럼: 워터스 엑스브리지 C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 μm 입자; 이동상 A: 5:95 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 이동상 B: 95:5 아세토니트릴:물, 0.1% 트리플루오로아세트산 함유; 온도: 50℃; 구배: 3분에 걸쳐 0%B에서 100%B, 이어서 100%B에서 0.75분 유지; 유량: 1 mL/분; 검출: MS 및 UV (220 nm). 주입 2 결과: 순도: 100.0%; 관찰 질량: 492.2; 체류 시간: 1.71분. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.15 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 8.04-8.09 (m, 1 H), 7.81 (s, 4 H), 7.57-7.63 (m, 2 H), 7.12-7.19 (m, 2 H), 6.00 (s, 1 H), 4.82 (s, 1 H), 4.52-4.63 (m, 1 H), 3.64-3.76 (m, 1 H), 3.51-3.58 (m, 4 H), 2.99-3.10 (m, 1 H), 2.86 (br d, J = 8.5 Hz, 1 H), 2.28-2.37 (m, 1 H), 1.31 (d, J = 6.5 Hz, 3 H), 1.07 (d, J = 6.5 Hz, 3 H). 13C NMR (100.66 MHz, DMSO-d6) δ ppm 162.4, 160.9, 159.9, 153.5, 148.0, 138.7, 138.6, 135.0, 132.6, 129.3 (d, J = 8.0 Hz), 128.8 (d, J = 10.0 Hz), 124.0, 122.8, 118.6, 117.5, 115.6, 115.4, 109.8, 104.8, 69.0, 51.8, 49.4, 48.9, 47.2, 28.6, 13.4, 7.4.
참고문헌: PCT/US2020/048070
DGKi 화합물 17 및 18
4-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)프로필)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00064
아세토니트릴 (10 mL) 중 4-((2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴, TFA (0.12 g, 0.27 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (0.14 mL, 0.82 mmol), 1-(1-클로로프로필)-4-(트리플루오로메틸)벤젠 (0.12 g, 0.55 mmol), 및 아이오딘화나트륨 (0.04 g, 0.27 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 85℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 감압 하에 제거하여 조 생성물을 수득하고, 이를 정제용 HPLC [HPLC 방법: 칼럼: 선파이어 C18, 150 x 19 mm ID, 5 μm; 이동상 A: 물 중 10 mM 아세트산암모늄; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 18분에 걸쳐 0-100% B에 이어서 100% B에서 5분 유지; 유량: 17 mL/분]에 의해 정제하였다. 분획을 감압 하에 농축시키고, EtOH/H2O (1:5)로부터 동결건조시켜 화합물 17 및 18을 수득하였다.
화합물 17: (10 mg, 7% 수율); LCMS: m/z = 513.3 (M+H); rt 2.52분; (LCMS 방법: 칼럼: 엑스브리지 BEH XP C18 (50 x 2.1) mm, 2.5 μm 이동상 A: 95% 물:5% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 이동상 B: 5% 물:95% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 유량: 1.1 mL/분; 온도: 50℃; 시간 (분): 0-4; %B: 0-100; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.24 (d, J=6.6 Hz, 1H), 7.98 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J=8.1 Hz, 2H), 7.56 (d, J=7.1 Hz, 2H), 5.83-5.48 (m, 1H), 4.98-4.86 (m, 1H), 3.64 (br. s., 1H), 3.43 (s, 3H), 3.08 (d, J=9.8 Hz, 1H), 2.93-2.82 (m, 2H), 2.42-2.26 (m, 1H), 2.13-2.08 (m, 1H), 1.98-1.82 (m, 3H), 1.66-1.54 (m, 1H), 1.44-1.31 (m, 1H), 0.98-0.91 (br. s., 3H), 0.69-0.53 (m, 6H).
화합물 18: (3 mg, 2% 수율); LCMS: m/z = 513.3 (M+H); rt 2.54분; (LCMS 방법: 칼럼: 엑스브리지 BEH XP C18 (50 x 2.1) mm, 2.5 μm 이동상 A: 95% 물:5% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 이동상 B: 5% 물:95% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 유량: 1.1 mL/분; 온도: 50℃; 시간 (분): 0-4; %B: 0-100; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.28-8.19 (m, 1H), 8.01-7.95 (m, 1H), 7.72 (d, J=7.8 Hz, 2H), 7.58 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.06-5.28 (m, 1H), 5.08-4.76 (m, 1H), 3.64-3.50 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.16-3.08 (m, 1H), 2.25-2.14 (m, 2H), 2.00-1.83 (m, 3H), 1.57-1.53 (m, 3H), 1.03-0.89 (m, 3H), 0.65-0.54 (m, 6H).
DGKi 화합물 19 및 20
4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00065
실온에서 아세토니트릴 (2 mL) 중 4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴, TFA (70 mg, 0.22 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (0.12 mL, 0.67 mmol), 1-(1-클로로에틸)-4-(트리플루오로메틸)벤젠 (93 mg, 0.45 mmol), 아이오딘화나트륨 (33.6 mg, 0.22 mmol)을 첨가하고, 85℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (100 mL) 중에 용해시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 정제용 HPLC [HPLC 방법: 칼럼: 선파이어 C18 (150 mm x 19.2 mm ID, 5 μm), 이동상 A=물 중 10 mM 아세트산암모늄, 이동상 B=아세토니트릴, 유량: 19 mL/분]에 의해 정제하고, 분획을 감압 하에 농축시키고, EtOH/H2O (1:5)로 희석하고, 동결건조시켜 화합물 19 및 20을 수득하였다.
화합물 19: (9 mg, 8% 수율); LCMS: m/z = 485.1 (M+H); rt 2.34분; (LCMS 방법: 칼럼: 엑스브리지 BEH XP C18 (50 x 2.1 mm), 2.5 μm; 이동상 A: 95% 물: 5% 아세토니트릴; 10 mM 아세트산암모늄; 이동상 B: 5% 물: 95% 아세토니트릴; 10 mM 아세트산암모늄; 유량: 1.1 mL/분; 온도: 50℃; 시간 (분): 0-3; %B: 0-100. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.32-8.17 (m, 1H), 8.05-7.94 (m, 1H), 7.76-7.66 (m, 2H), 7.66-7.55 (m, 2H), 6.11-5.42 (m, 1H), 5.10-4.79 (m, 1H), 3.78-3.59 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.17-3.05 (m, 1H), 2.64-2.55 (m, 1H), 2.26-2.09 (m, 1H), 1.65-1.34 (m, 3H), 1.31-1.16 (m, 5H), 1.01 (br t, J=7.1 Hz, 3H).
화합물 20: (9 mg, 8% 수율); LCMS: m/z = 485.1 (M+H); rt 2.29분; (LCMS 방법: 칼럼: 엑스브리지 BEH XP C18 (50 x 2.1 mm), 2.5 μm; 이동상 A: 95% 물:5% 아세토니트릴; 10 mM 아세트산암모늄; 이동상 B: 5% 물:95% 아세토니트릴; 10 mM 아세트산암모늄; 유량: 1.1 mL/분; 온도: 50℃; 시간 (분): 0-3; %B: 0-100%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.24 (br d, J=8.6 Hz, 1H), 7.99 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.61 (br d, J=8.3 Hz, 2H), 5.87-5.63 (m, 1H), 5.10-4.79 (m, 1H), 3.90-3.80 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.46-3.15 (m, 1H), 2.89-2.73 (m, 2H), 2.41-2.34 (m, 1H), 1.63-1.34 (m, 5H), 1.29 (br d, J=6.1 Hz, 3H), 0.79-0.64 (m, 3H).
DGKi 화합물 21 및 22
4-((2S,5R)-5-에틸-4-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00066
아세토니트릴 (10 mL) 중 4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴, TFA (0.5 g, 1.17 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (1.02 mL, 5.86 mmol), 및 이어서 2-(브로모(4-플루오로페닐)메틸)-5-(트리플루오로메틸)피리딘 (0.78 mg, 2.35 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 감압 하에 제거하여 조 생성물을 수득하고, 이를 정제용 HPLC (HPLC 방법: 칼럼: 이너트실 ODS 21.2 X 250 mm, 5 μm; 이동상 A: 물 중 0.1% TFA; 이동상 B: 아세토니트릴; 구배: 14분에 걸쳐 30-80% B, 이어서 100% B에서 5분 유지; 유량: 17 mL/분)에 의해 정제하고, 분획을 감압 하에 농축시키고, (EtOH/H2O, 1:5)로부터 동결건조시켜 화합물 21 및 화합물 22를 수득하였다.
화합물 21: 140 mg, 21% 수율; LCMS: m/z = 566.2 (M+H); rt 3.26분; (LCMS 방법: 칼럼: 칼럼-키네텍스 XB-C18 (75 X 3 mm-2.6 μm), 이동상 A: 98% 물:2% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 이동상 B: 2% 물:98% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 유량: 1.0 mL/분; 온도: 50℃; 시간 (분): 0-4; %B: 0-100%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.83 (br s, 1 H), 8.19-8.31 (m, 2 H), 7.95-8.12 (m, 2 H), 7.53-7.63 (m, 2 H), 7.12-7.26 (m, 2 H), 5.41-6.26 (m, 1 H), 4.79-5.20 (m, 2 H), 3.60-3.74 (m, 1 H), 3.44 (s, 3 H), 2.73-2.87 (m, 1 H), 2.22-2.42 (m, 2 H), 1.40-1.68 (m, 5 H), 0.53-0.71 (m, 3 H).
화합물 22: 155 mg, 23% 수율; LCMS: m/z = 566.2 (M+H); rt 3.25분; (LCMS 방법: 칼럼: 칼럼-키네텍스 XB-C18 (75 X 3 mm-2.6 μm), 이동상 A: 98% 물: 2% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 이동상 B: 2% 물: 98% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 유량: 1.0 mL/분; 온도: 50℃; 시간 (분): 0-4; %B: 0-100%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.92 (s, 1 H), 8.17-8.27 (m, 2 H), 7.90-8.02 (m, 2 H), 7.60-7.67 (m, 2 H), 7.14-7.22 (m, 2 H), 5.52-6.07 (m, 1 H), 4.87-5.08 (m, 2 H), 3.39-3.71 (m, 4 H), 2.69-2.78 (m, 1 H), 2.37-2.45 (m, 1 H), 1.37-1.69 (m, 5 H), 0.58-0.77 (m, 3 H).
DGKi 화합물 23-24
(4-((2S,5R)-4-((4-클로로페닐)(피리딘-2-일)메틸)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00067
아세토니트릴 (5 mL) 중 4-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 (100 mg, 0.32 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (0.3 mL, 1.60 mmol)에 이어서 2-(브로모(4-클로로페닐)메틸)피리딘 (181 mg, 0.64 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 감압 하에 제거하여 조 생성물을 수득하고, 이를 정제용 HPLC (HPLC 방법: 칼럼: 셀룰로스-5 (250* 20 ID) 5 마이크로미터; 이동상 A: IPA 중 0.1% DEA; 이동상 B: ACN 중 0.1% DEA; 구배: 90%의 B에 이어서 100% B에서 5분 유지; 유량: 18 mL/분)에 의해 정제하고, 분획을 감압 하에 농축시키고, (EtOH/H2O, 1:5)로부터 동결건조시켜 화합물 23 및 화합물 24를 수득하였다.
화합물 23: 24 mg, 14% 수율; LCMS: m/z = 514.2 (M+H); rt 2.94분; (LCMS 방법: 칼럼: 칼럼-키네텍스 XB-C18 (75 X 3 mm-2.6 μm), 이동상 A: 98% 물:2% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 이동상 B: 2% 물:98% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 유량: 1.0 mL/분; 온도: 50℃; 시간 (분): 0-4; %B: 0-100%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 8.52 (d, J=4.5 Hz, 1 H), 8.23 (d, J=9.0 Hz, 1 H), 7.96-8.02 (m, 1 H), 7.75-7.81 (m, 1 H), 7.59-7.68 (m, 3 H), 7.39 (d, J=8.5 Hz, 2 H), 7.22-7.29 (m, 1 H), 5.54-5.95 (m, 1 H), 4.81-5.07 (m, 2 H), 3.39-3.68 (m, 5 H), 2.69-2.76 (m, 1 H), 2.35-2.44 (m, 1 H), 1.37-1.67 (m, 5 H), 0.58-0.67 (m, 3 H).
화합물 24: 22 mg, 13% 수율; LCMS: m/z = 514.2 (M+H); rt 2.94분; (LCMS 방법: 칼럼: 칼럼-키네텍스 XB-C18 (75X3 mm-2.6 μm), 이동상 A: 98% 물: 2% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 이동상 B: 2% 물: 98% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 유량: 1.0 mL/분; 온도: 50℃; 시간 (분): 0-4; %B: 0-100%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 8.41-8.45 (m, 1 H), 8.23 (d, J=9.0 Hz, 1 H), 7.96-8.02 (m, 1 H), 7.78-7.85 (m, 2 H), 7.53-7.61 (m, 2 H), 7.40 (d, J=8.5 Hz, 2 H), 7.20-7.26 (m, 1 H), 5.52-5.97 (m, 1 H), 4.87-5.04 (m, 1 H), 4.78-4.86 (m, 1 H), 3.37-3.71 (m, 4 H), 2.72-2.78 (m, 1 H), 2.54-2.63 (m, 1 H), 2.35-2.46 (m, 1 H), 1.40-1.64 (m, 5 H), 0.58-0.70 (m, 3 H).
DGKi 화합물 25 및 26
4-((2S,5R)-4-((3-시클로프로필-1,2,4-옥사디아졸-5-일)(4-플루오로페닐)메틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00068
DMF (2 mL) 중 2-((2R,5S)-4-(6-시아노-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-4-일)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-2-(4-플루오로페닐)아세트산 (0.045 g, 0.09 mmol), N-히드록시시클로프로판카르복스이미드아미드 (9.4 mg, 0.09 mmol)의 교반 용액에, BOP (0.01 g, 0.23 mmol) 및 트리에틸아민 (0.04 mL, 0.23 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 키랄 분리 방법: 칼럼: DAD-1-셀룰로스-2 (250 X 4.6 mm), 5 마이크로미터. 이동상: 아세토니트릴 중 0.1% DEA, 유량: 2.0 mL/분.
화합물 25: (1.9 mg, 6% 수율): LCMS: m/z, 543.3 (M+H); rt 2.21분; LCMS 방법: 칼럼: 엑스브리지 BEH XP C18 (50 x 2.1) mm, 2.5 μm; 이동상 A: 95% 물:5% 아세토니트릴; 10 mM 아세트산암모늄; 이동상 B: 5% 물:95% 아세토니트릴; 10 mM 아세트산암모늄; 유량: 1.1 mL/분; 온도: 50℃; 시간 (분) 시간 (분): 0-3; %B: 0-100%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.29-8.16 (m, 1H), 8.06-7.92 (m, 1H), 7.75-7.58 (m, 2H), 7.26 (m, 2H), 6.01-5.32 (m, 1H), 5.28 (br s, 1H), 5.00-4.79 (m, 1H), 3.66-3.56 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 2.65-2.57 (m, 1H), 2.44-2.34 (m, 2H), 2.18-2.00 (m, 1H), 1.95-1.74 (m, 2H), 1.68-1.34 (m, 2H), 1.15-1.02 (m, 2H), 0.93-0.83 (m, 2H), 0.81-0.62 (m, 6H).
화합물 26: (1.0 mg, 3% 수율): LCMS: m/z, 543.3 (M+H); rt 2.20분; LCMS 방법: 칼럼: 엑스브리지 BEH XP C18 (50 x 2.1) mm, 2.5 μm; 이동상 A: 95% 물: 5% 아세토니트릴; 10 mM 아세트산암모늄; 이동상 B: 5% 물: 95% 아세토니트릴; 10 mM 아세트산암모늄; 유량: 1.1 mL/분; 온도: 50℃; 시간 (분) 시간 (분): 0-3; %B: 0-100%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.23 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.06-7.91 (m, 1H), 7.62 (dd, J=6.2, 7.5 Hz, 2H), 7.26 (t, J=8.8 Hz, 2H), 5.92-5.31 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 4.96-4.78 (m, 1H), 3.60-3.50 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.25-3.10 (m, 1H), 2.97-2.75 (m, 2H), 2.27-1.65 (m, 3H), 1.49-1.24 (m, 2H), 1.11-0.97 (m, 2H), 0.94-0.75 (m, 5H), 0.74-0.50 (m, 3H).
DGKi 화합물 27 및 28
4-((2S,5R)-4-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00069
아세토니트릴 (10 mL) 중 4-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴 (1 g, 3.35 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (5.9 mL, 33.5 mmol), 및 이어서 2-(브로모(4-플루오로페닐) 메틸)-5-(트리플루오로메틸)피리딘 (2.24 g, 6.70 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 감압 하에 제거하여 조 생성물을 수득하고, 이를 정제용 HPLC (HPLC 방법: 칼럼: 선파이어 C18, 150 x 19 mm ID, 5 μm; 이동상 A: 물 중 0.1% TFA; 이동상 B: 아세토니트릴:MeOH (1:1); 구배: 20분에 걸쳐 50-100% B, 이어서 100% B에서 5분 유지; 유량: 19 mL/분)에 의해 정제하고, 분획을 감압 하에 농축시키고, (EtOH/H2O, 1:5)로부터 동결건조시켜 화합물 27 및 화합물 28을 수득하였다.
화합물 27: 110 mg, 6% 수율; LCMS: m/z = 552.2 (M+H); rt 3.09분; (LCMS 방법: 칼럼: 칼럼-키네텍스 XB-C18 (75 X 3 mm-2.6 μm), 이동상 A: 98% 물: 2% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 이동상 B: 2% 물: 98% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 유량: 1.0 mL/분; 온도: 50℃; 시간 (분): 0-4; %B: 20-100%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.83 (s, 1H), 8.22 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 8.11-7.95 (m, 2H), 7.71-7.58 (m, 2H), 7.25-7.13 (m, 2H), 5.76-5.44 (m, 1H), 5.13-4.67 (m, 2H), 3.86-3.49 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.19-3.08 (m, 1H), 2.84 (dd, J = 3.8, 12.3 Hz, 1H), 2.38-2.26 (m, 1H), 1.67-1.39 (m, 3H), 1.11-0.86 (m, 3H).
화합물 28: 145 mg, 8% 수율; LCMS: m/z = 552.2 (M+H); rt 3.09분; (LCMS 방법: 칼럼: 칼럼-키네텍스 XB-C18 (75 X 3 mm-2.6 μm), 이동상 A: 98% 물:2% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 이동상 B: 2% 물:98% 아세토니트릴; 10 mM 포름산암모늄; 유량: 1.0 mL/분; 온도: 50℃; 시간 (분): 0-4; %B: 0-100%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.91 (s, 1H), 8.27-8.16 (m, 2H), 7.99 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.69-7.57 (m, 2H), 7.23-7.13 (m, 2H), 5.77-5.41 (m, 1H), 5.09-4.62 (m, 2H), 3.90-3.65 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.14-3.02 (m, 1H), 2.80-2.74 (m, 1H), 1.61-1.40 (m, 3H), 1.10-0.93 (m, 3H) [1H는 용매 피크로 가려짐].
DGKi 화합물 29 및 30
4-((2S,5R)-4-(1-(4-(시클로프로필메톡시)-2-플루오로페닐)프로필)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00070
아세토니트릴 (5 mL) 중 4-((2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴, HCl (200 mg, 0.55 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (0.3 mL, 1.65 mmol), 아이오딘화나트륨 (83 mg, 0.55 mmol) 및 1-(1-클로로프로필)-4-(시클로프로필메톡시)-2-플루오로벤젠 (268 mg, 1.1 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 1-(1-클로로프로필)-4-(시클로프로필메톡시)-2-플루오로벤젠 (268 mg, 1.102 mmol)의 또 다른 로트를 첨가하고, 추가 16시간 동안 가열을 계속하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (10 x 20 mL) 중에 용해시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. HPLC 방법: 칼럼: EXRS (20 X 250 mm, 5 μm), 이동상 A- 물 중 10 mM 아세트산암모늄 R, 이동상 A-B: 아세토니트릴, 유량: 20 mL/분.
분획 1을 감압 하에 농축시키고, 생성물을 (EtOH/H2O, 1:5)로 희석하고, 동결건조시켜 화합물 29 (35 mg, 11.6% 수율)를 수득하였다; LCMS: m/z, 533.4 [M+H]+, rt 1.57분; (LCMS 방법: 칼럼: KINETIX XB C18 (75 x 3 mm, 2.6 μm); 이동상 A: 물 중 10 mM 아세트산암모늄 (pH 3.3), 이동상 B: 아세토니트릴. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ (ppm) 8.23 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.97 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.33 (m, 1H), 6.62-6.92 (m, 2H), 5.29-6.06 (m, 1H), 4.70-5.05 (m, 1H), 3.82 (m, 3H), 3.43 (s, 3H), 2.99-3.10 (m, 1H), 2.80-2.87 (m, 1H), 2.63-2.78 (m, 1H), 2.33 (s, 1H), 1.74-2.11 (m, 3H), 1.51-1.66 (m, 1H), 1.17-1.46 (m, 3H), 0.84-1.01 (m, 3H), 0.61-0.78 (m, 6H), 0.53-0.61 (m, 2H), 0.29-0.35 (m, 2H).
분획 2를 감압 하에 농축시키고, 생성물을 (EtOH/H2O, 1:5)로 희석하고, 동결건조시켜 화합물 30 (37 mg, 12.35% 수율)을 수득하였다; LCMS: m/z, 533.4 [M+H]+, rt 2.72분; [(LCMS 방법: 칼럼: KINETIX XB C18 (75 x 3 mm, 2.6 μm); 이동상 A: 물 중 10 mM 아세트산암모늄 (pH 3.3), 이동상 B: 아세토니트릴. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ (ppm) 8.13-8.35 (m, 1H), 7.98 (m, 1H), 7.38 (m, 1H), 6.61-6.89 (m, 2H), 5.18-6.15 (m, 1H), 4.66-5.13 (m, 1H), 3.63-3.90 (m, 3H), 3.43 (s, 3H), 3.25 (m, 1H), 3.00-3.15 (m, 1H), 2.63-2.70 (m, 1H), 2.26-2.38 (m, 1H), 1.81 (m, 3H), 1.35-1.61 (m, 2H), 1.15-1.26 (m, 2H), 0.88-1.00 (m, 3H), 0.61-0.71 (m, 6H), 0.51-0.59 (m, 2H), 0.32 (m, 2H).
DGKi 화합물 31 및 32
4-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)부틸)피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00071
아세토니트릴 (10 mL) 중 4-((2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴, HCl (0.4 g, 1.1 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (0.6 mL, 3.31 mmol), 및 이어서 1-(1-클로로부틸)-4-트리플루오로메틸)벤젠 (0.783 g, 3.31 mmol) 및 아이오딘화나트륨 (0.165 g, 1.102 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 85℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하고, 이를 정제용 HPLC [HPLC 방법: 칼럼: YMC ExRS (250 mm x 21.2 mm, 5 μm) 이동상 A = 물 중 10 mM 아세트산암모늄 pH 4.5. 이동상 B = 아세토니트릴 구배: 2분에 걸쳐 80% B, 이어서 100% B에서 16분 유지; 유량: 19 mL/분]에 의해 정제하여 화합물 31 및 32를 수득하였다.
화합물 31: (10 mg, 1.7% 수율), LCMS: m/z = 527.4 (M+H); rt 2.626분; [LCMS 방법: 칼럼: 엑스브리지 BEH XP C18 (50 x 2.1 mm), 2.5 μm; 이동상 A: 95% 물:5% 아세토니트릴; 10 mM NH4OAC; 이동상 B: 5% 물:95% 아세토니트릴; 10 mM NH4OAC; 유량: 1.1 mL/분; 온도: 50℃; 시간 (분)]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.30-8.16 (m, 1H), 7.98 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.56 (br d, J = 7.8 Hz, 2H), 5.86-5.44 (m, 1H),5.01-4.77 (m, 1H), 3.730-3.718(m, 1H), 3.46 (s, 3H), 3.43-3.35(m, 1H) 3.13-3.01 (m, 1H), 2.93-2.75 (m, 2H), 2.38-2.26 (m, 1H), 2.17-1.74 (m, 3H), 1.63-1.22 (m, 3H), 1.01-0.86 (m, 4H), 0.84-0.75 (m, 3H), 0.73-0.54 (m, 3H).
화합물 32: (7.2 mg, 1.23% 수율), LCMS: m/z = 527.3 (M+H); rt 2.654분; [LCMS 방법: 칼럼: 엑스브리지 BEH XP C18 (50 x 2.1) mm, 2.5 μm; 이동상 A: 95% 물: 5% 아세토니트릴; 10 mM NH4OAC; 이동상 B: 5% 물:95% 아세토니트릴; 10 mM NH4OAC; 유량: 1.1 mL/분; 온도 50℃; 시간 (분)]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.29-8.15 (m, 1H), 7.96-8.02 (m, 1H), 7.70 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.58 (br d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.09-5.22 (m,1H), 5.13-4.66 (m, 1H), 3.68-3.52 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.28-3.04 (m, 2H), 2.60-2.53 (m, 1H), 2.25-2.12 (m, 1H), 2.04-1.68 (m, 3H), 1.60-1.29 (m,3H), 1.05-0.74 (m, 7H), 0.59 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
DGKi 화합물 33 및 34
1-메틸-4-((2S,5R)-2-메틸-5-프로필-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,2-d]피리미딘-6-카르보니트릴
Figure pct00072
DMF (2 mL) 중 6-클로로-1-메틸-4-((2S,5R)-2-메틸-5-프로필-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)피리도[3,2-d]피리미딘-2(1H)-온 (0.1 g, 0.19 mmol)의 용액에 아르곤 분위기 하에 실온에서 시안화아연 (0.046 g, 0.39 mmol), 아연 (0.7 mg, 9.8 μmol) 및 트리에틸아민 (0.1 mL, 0.59 mmol), 및 이어서 디클로로[9,9-디메틸-4,5-비스(디페닐포스피노)크산텐]팔라듐 (II) (0.015 g, 0.02 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 mL)로 희석하고, 셀라이트® 패드를 통해 여과하고, 추가의 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 세척하였다. 여과물을 물 (50 mL), 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 정제용 HPLC (HPLC 방법: 칼럼: YMC EXRS (250 x 19 mm, 5 μm); 이동상 A: 물 중 10 mM 아세트산암모늄 pH ~4.5; 이동상 B: 아세토니트릴 유량: 20 mL/분)에 의해 정제하여 화합물 33 및 화합물 34를 수득하였다.
화합물 33: (13 mg, 14% 수율). LCMS: m/z = 499.3 [M+H]+; rt 2.376분; (LCMS 방법: 칼럼: 엑스브리지 BEH XP C18 (50 x 2.1 mm, 2.5 μm); 이동상 A: 95% 물:5% 아세토니트릴;10 mM NH4OAc; 이동상 B: 5% 물:95% 아세토니트릴; 10 mM NH4OAC; 유량: 1.1 mL/분; 온도: 50℃). 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ (ppm) = 8.22 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.70-7.72 (m, 2H), 7.59-7.61 (m, 2H), 5.84-5.59 (m, 1H), 5.10-4.67 (m, 1H), 3.91-3.75 (m, 1H), 3.38-3.43 (m, 4H), 2.86-2.70 (m, 2H), 2.47-2.36 (m, 1H), 1.63-1.51 (m, 1H), 1.47-1.18 (m, 8H), 0.9-0.99 (m, 1H), 0.75-0.59 (m, 3H).
화합물 34: (13 mg, 13% 수율); LCMS: m/z = 499.3 [M+H]+; rt 2.436분; (LCMS 방법: 칼럼: 엑스브릿지 BEH XP C18 (50 x 2.1 mm, 2.5 μm); 이동상 A: 95% 물:5% 아세토니트릴; 10 mM NH4OAc; 이동상 B: 5% 물:95% 아세토니트릴;10 mM NH4OAC; 유량: 1.1 mL/분; 온도: 50℃). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) = 8.25 (br d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.06-7.92 (m, 1H), 7.77-7.65 (m, 2H), 7.65-7.54 (m, 2H), 6.09-5.44 (m, 1H), 5.04-4.68 (m, 1H), 3.81-3.59 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.28-3.13 (m, 1H), 2.52-2.61 (m, 1H), 2.24-2.05 (m, 1H), 1.72-1.48 (m, 2H), 1.47-1.15 (m, 8H), 0.98-0.75 (m, 3H).
생물학적 검정
본원에 기재된 화합물의 약리학적 특성은 다수의 생물학적 검정에 의해 확인될 수 있다.
1. 시험관내 DGK 억제 검정
DGKα 및 DGKζ 반응을 압출된 리포솜 (DGKα 및 DGKζ LIPGLO 검정) 또는 세제/지질 미셀 기질 (DGKα 및 DGKζ 검정)을 사용하여 수행하였다. 반응을 50 mM MOPS pH 7.5, 100 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1 μM CaCl2, 및 1 mM DTT (검정 완충제) 중에서 수행하였다. 세제/지질 미셀 기질을 사용한 반응은 또한 50 mM 옥틸 B-D-글루코피라노시드를 함유하였다. 지질 기질 농도는 세제/지질 미셀 반응의 경우 11 mM PS 및 1 mM DAG였다. 지질 기질 농도는 압출된 리포솜 반응의 경우 2 mM PS, 0.25 mM DAG, 및 2.75 mM PC였다. 반응을 150 μM ATP 중에서 수행하였다. DGKα 및 DGKζ에 대한 효소 농도는 5 nM이었다.
화합물 억제 연구를 다음과 같이 수행하였다: DMSO 중에 가용화된 각각의 시험 화합물 (최고 농도 10 mM, 11 포인트, 각각의 화합물에 대해 3배 연속 희석)의 50 nL 액적을 백색 1536 웰 플레이트 (코닝 3725)의 웰로 옮겼다. 2.5 mL의 4x 효소 용액 (검정 완충제 중 20 nM DGKα 또는 DGKζ (하기 기재된 바와 같이 제조됨)) 및 2.5 mL의 4x 리포솜 또는 4x 세제/지질 미셀 용액 (하기 기재된 조성물)을 합하여 2x 최종 반응 농도의 5 mL 효소/기질 용액을 제조하고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 1 μL 2x 효소/기질 용액을 시험 화합물을 함유하는 웰에 첨가하고, 1 μL 300 uM ATP를 첨가하여 반응을 개시하였다. 반응을 1시간 동안 진행시킨 후, 2 μL 글로 시약 (프로메가 V9101)을 첨가하고, 40분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 4 μL 키나제 검출 시약을 첨가하고, 30분 동안 인큐베이션하였다. 발광을 엔비전 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 기록하였다. 100% 억제에 대한 효소 무함유 대조군 반응 및 0% 억제에 대한 비히클-단독 반응에 의해 생성된 ATP 전환으로부터 퍼센트 억제를 계산하였다. 화합물을 11가지 농도에서 평가하여 IC50을 결정하였다.
4x 세제/지질 미셀 제조
15 g 포스파티딜세린 (아반티 840035P) 및 1 g 디아실글리세롤 (800811O)을 합하고, 2 L 둥근 바닥 플라스크에서 150 mL 클로로포름에 용해시켜 세제/지질 미셀을 제조하였다. 클로로포름을 고진공 하에 회전 증발에 의해 제거하였다. 생성된 무색의 점착성 오일을 400 mL의 50 mM MOPS pH 7.5, 100 mM NaCl, 20 mM NaF, 10 mM MgCl2, 1 μM CaCl2, 1 mM DTT 및 200 mM 옥틸 글루코시드에 격렬한 혼합하여 재현탁시켰다. 지질/세제 용액을 5 mL 분취물로 분할하고, -80℃에서 저장하였다.
4x 리포솜 제조
지질 조성은 4x 리포솜 용액의 경우 15.2 mg/mL의 총 지질 농도에서 5 mol% DAG (아반티 800811O), 40 mol% PS (아반티 840035P), 및 55 mol% PC (아반티 850457)였다. PC, DAG 및 PS를 클로로포름 중에 용해시키고, 합하고, 진공 하에 건조시켜 박막을 수득하였다. 지질을 50 mM MOPS pH 7.5, 100 mM NaCl, 5 mM MgCl2에서 20 mM로 수화시키고, 5회 동결-해동시켰다. 지질 현탁액을 100 nm 폴리카르보네이트 필터를 통해 11회 압출하였다. 동적 광 산란을 수행하여 리포솜 크기 (50-60 nm 반경)를 확인하였다. 리포솜 제제를 4℃에서 4주 동안 저장하였다.
인간 DGKα 및 DGKζ의 바큘로바이러스 발현
인간 DGK-알파-TVMV-His-pFB게이트 및 인간 DGK-제타-전사체 변이체-2-TVMV-His-pFB게이트 바큘로바이러스 샘플을 백-투-백(Bac-to-Bac) 바큘로바이러스 발현 시스템 (인비트로젠)을 사용하여 제조업체의 프로토콜에 따라 생성하였다. DGK-알파 및 DGK-제타의 발현에 사용된 DNA는 각각 서열식별번호: 1 및 3을 갖는다. 바큘로바이러스 증폭을 감염된 Sf9 세포를 사용하여 1:1500 바이러스/세포 비로 달성하고, 형질감염 후 27℃에서 65시간 동안 성장시켰다.
각각의 단백질에 대한 발현 규모 확대를 지이 헬스케어 바이오사이언스로부터의 셀백 50L 웨이브-바이오리액터 시스템 20/50에서 수행하였다. ESF921 곤충 배지 (익스프레션 시스템)에서 성장시킨 12 L의 2 x 106개 세포/mL Sf9 세포 (익스프레션 시스템, 캘리포니아주 데이비스)를 바이러스 스톡으로 1:200 바이러스/세포 비로 감염시키고, 감염 후 27℃에서 66-68시간 동안 성장시켰다. 감염된 세포 배양물을 소르발(SORVALL)® RC12BP 원심분리기에서 4℃에서 20분 동안 2000 rpm에서의 원심분리에 의해 수거하였다. 세포 펠릿을 정제 시까지 -70℃에서 저장하였다.
인간 DGK-알파 및 DGK-제타의 정제
각각 TVMV-절단가능한 C-말단 Hexa-His 태그 서열을 함유하여 발현되고 (각각 서열식별번호: 2 및 4) 상기 기재된 바와 같이 생산된 전장 인간 DGKα 및 DGKζ를 Sf9 바큘로바이러스-감염된 곤충 세포 페이스트로부터 정제하였다. 질소 용기(파르 인스트루먼츠)로 질소 공동화 방법을 사용하여 세포를 용해시키고, 용해물을 원심분리에 의해 정화하였다. 정화된 용해물을 AKTA 퓨리파이어 플러스 시스템 상에서 3회 연속 칼럼 크로마토그래피 단계를 이용하여 ~90% 균질성으로 정제하였다. 3 단계 칼럼 크로마토그래피는 니켈 친화성 수지 포획 (즉, HisTrap FF 조 물질, 지이 헬스케어), 및 이어서 크기 배제 크로마토그래피 (즉, DGK-알파의 경우 하이로드 26/600 슈퍼덱스 200 정제용 등급, 지이 헬스케어, 및 DGK-제타의 경우 하이프렙 26/600 세파크릴 S 300_HR, 지이 헬스케어)를 포함하였다. 제3 단계는 이온 교환 크로마토그래피였고, 2종의 이소형에 대해 상이하였다. DGKα를 Q-세파로스 음이온 교환 크로마토그래피 (지이 헬스케어)를 사용하여 폴리싱하였다. DGKζ를 SP 세파로스 양이온 교환 크로마토그래피 (지이 헬스케어)를 사용하여 폴리싱하였다. 단백질을 ≥ 2 mg/mL의 농도로 전달하였다. 제제 완충제는 두 단백질 모두에 대해 동일하였다: 50 mM Hepes, pH 7.2, 500 mM NaCl, 10% v/v 글리세롤, 1 mM TCEP, 및 0.5 mM EDTA.
2. Raji CD4 T 세포 IL2 검정
1536-웰 IL-2 검정을 사전-활성화된 CD4 T 세포 및 Raji 세포를 사용하여 4 μL 부피로 수행하였다. 검정 전에, CD4 T 세포를 각각 1.5 μg/mL, 1 μg/mL 및 10 μg/mL의 α-CD3, α-CD28 및 PHA로 처리하여 사전-활성화시켰다. Raji 세포를 10,000 ng/mL의 스타필로코쿠스 장독소 B (SEB)로 처리하였다. 연속 희석된 화합물을 먼저 1536-웰 검정 플레이트 (코닝, #3727)로 옮기고, 이어서 2 μL의 사전-활성화된 CD4 T 세포 (6000개 세포/웰의 최종 밀도) 및 2 μL의 SEB-처리된 Raji 세포 (2000개 세포/웰)를 첨가하였다. 37℃/5% CO2 인큐베이터에서 24시간 인큐베이션 후, 4 μl의 IL-2 검출 시약을 검정 플레이트 (시스바이오, #64IL2PEC)에 첨가하였다. 검정 플레이트를 엔비전 판독기 상에서 판독하였다. 화합물 세포독성을 평가하기 위해, Raji 또는 CD4 T 세포를 연속 희석된 화합물과 함께 인큐베이션하였다. 24시간 인큐베이션 후, 4 μL의 셀 타이터 글로 (프로메가, #G7572)를 첨가하고, 플레이트를 엔비전 판독기 상에서 판독하였다. 50% 유효 농도 (IC50)를 4-파라미터 로지스틱 식 y = A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))을 사용하여 계산하였고, 여기서 A 및 B는 각각 최소 및 최대% 활성화 또는 억제를 나타내고, C는 IC50이고, D는 힐 기울기이고, x는 화합물 농도를 나타낸다.
3. 셀타이터-글로 CD8 T 세포 증식 검정
동결된 나이브 인간 CD8 T 세포를 RPMI+10% FBS에서 해동시키고, 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하고, 계수하였다. 384-웰 조직 배양 플레이트를 플레인 RPMI 중 0.1 μg/mL의 20 μl 항-인간 CD3으로 4℃에서 밤새 코팅하고, 이를 플레이트로부터 제거한 후, 0.5 μg/ml 가용성 항-인간 CD28을 갖는 20k/40 μL CD8 T 세포를 각각의 웰에 첨가하였다. 세포를 플레이팅한 직후에 화합물을 세포 플레이트에 에코처리하였다. 37℃ 인큐베이터에서 72시간 인큐베이션 후, 10 μL 셀타이터-글로 시약 (프로메가 카탈로그 번호 G7570)을 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 5분 동안 격렬히 진탕시키고, 실온에서 추가 15분 동안 인큐베이션하고, 엔비전 상에서 CD8 T 세포 증식에 대해 판독하였다. 분석에서, 0.1 μg/mL 항-CD3 및 0.5 μg/mL 항-CD28 자극된 CD8 T 세포 신호는 배경이었다. 3 μM의 참조 화합물, 8-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)피페라진-1-일)-5-메틸-7-니트로-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴을 사용하여 100% 범위를 설정하였고, EC50은 데이터를 정규화하기 위해 절대 50%였다.
4. DGK AP1-리포터 검정
Jurkat AP1-루시페라제 리포터를 SAB바이오사이언시스(SABiosciences)로부터의 시그널 렌티(Cignal Lenti) AP1 리포터 (luc) 키트 (CLS-011L)를 사용하여 생성하였다.
화합물을 에코 LDV 플레이트로부터 384-웰 플레이트 (백색, 고체-바닥, 불투명 PE 컬쳐플레이트 6007768)의 개별 웰로 에코550 기기를 사용하여 옮겼다. 샘플 크기는 웰당 30 nL였고; 공급원 플레이트당 1개의 목표 플레이트였다. 40 mL 세포 (2x 20 mL)를 깨끗한 50 mL 원추형 튜브로 옮김으로써 세포 현탁액을 제조하였다. 세포를 원심분리 (1200 rpm; 5분; 주위 온도)에 의해 농축시켰다. 상청액을 제거하고, 모든 세포를 RPMI (깁코 11875) + 10% FBS 중에 현탁시켜 1.35x106개 세포/ml 농도를 만들었다. 다중-채널 피펫, 30 μL/웰의 세포 현탁액을 사용하여 세포를 웰당 4.0x104개 세포로 화합물을 함유하는 384-웰 TC 플레이트에 수동으로 첨가하였다. 세포 플레이트를 37℃ 및 5% CO2에서 20분 동안 인큐베이션하였다.
인큐베이션 동안, 3 μL aCD3 (1.3 mg/mL)을 10 mL 배지 [최종 농도 = 0.4 μg/mL]와 혼합하여 항-CD3 항체 (αCD3) 용액을 제조하였다. 이어서, 1.5 μl aCD3 (1.3 mg/mL)을 0.5 mL 배지 [최종 농도 = 4 μg/ml]와 혼합하였다. 20분 후, 10 μL 배지를 칼럼 1의 모든 웰, 웰 A 내지 M에 첨가하고, 웰당 10 μL αCD3 (4 ug/mL)을 칼럼 1의 참조용 N 내지 P 열에 첨가하였다. 이어서, 다중-채널 피펫을 사용하여, 웰당 10 μL αCD3 (0.4 ug/mL)을 첨가하였다. αCD3 자극된 +/- 화합물-처리된 세포를 37℃, 5% CO2에서 6시간 동안 인큐베이션하였다.
이 인큐베이션 기간 동안, 스테디-글로 (프로메가 E2520) 시약을 주위 온도로 천천히 해동시켰다. 다음에, 웰당 20 μL 스테디-글로 시약을 멀티-드롭 콤비-분배기를 사용하여 첨가하였다. 기포를 원심분리 (2000 rpm, 주위 온도, 10초)에 의해 제거하였다. 세포를 실온에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 발광 프로토콜 상에서 엔비전 플레이트 판독기 기기를 사용하여 상대 광 단위 (RLU)를 측정함으로써 특징화하였다. 참조 화합물, 8-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)피페라진-1-일)-5-메틸-7-니트로-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴을 사용하여 데이터를 분석하여 100% 억제를 정규화하였다.
5. 뮤린 세포독성 T 림프구 검정
이펙터 T 세포 매개 종양 세포 사멸 활성을 증진시키는 DGKα 및 DGKζ 억제제의 능력을 기능적으로 평가하기 위해 항원-특이적 세포용해 T-세포 (CTL) 검정을 개발하였다. OT-1 트랜스제닉 마우스로부터 단리된 CD8+ T-세포는 오브알부민 유래 펩티드 SIINFEKL을 제시하는 항원 제시 세포, MC38을 인식한다. 동족 항원의 인식은 OT-1 항원-특이적 CD8+ T 세포의 세포용해 활성을 개시한다.
기능성 CTL 세포를 다음과 같이 생성하였다: 8-12주령 마우스로부터의 OT-1 비장세포를 단리하고, 1 μg/mL의 SIINFEKL 펩티드 및 10 U/mL의 mIL2의 존재 하에 확장시켰다. 3일 후, mIL2 U/ml를 갖는 신선한 배지를 첨가하였다. 확장 제5일에, CD8+ T 세포를 단리하고, 이는 즉시 사용가능하였다. 활성화된 CTL 세포는 6개월 동안 동결 저장될 수 있다. 별도로, 1백만개의 MC38 종양 세포를 37℃에서 3시간 동안 1 μg/mL의 SIINFEKL-OVA 펩티드로 펄싱하였다. 세포를 신선한 배지로 세척하여 (3X) 과량의 펩티드를 제거하였다. 최종적으로, 96-웰 U 바닥 플레이트에서 1시간 동안 DGK 억제제로 전처리된 CTL 세포를 항원 로딩된 MC38 종양 세포와 1:10 비로 합하였다. 이어서, 세포를 700 rpm에서 5분 동안 회전시키고, 37℃에서 밤새 인큐베이터에 두었다. 24시간 후, 상청액을 퍼킨 엘머로부터 구입한 알파리사에 의한 IFN-γ시토카인 수준의 분석을 위해 수집하였다.
6. PHA 증식 검정
동결된 스톡으로부터의 피토헤마글루티닌 (PHA)-자극 모세포를 10% 소 태아 혈청 (시그마 알드리치, 미주리주 세인트 루이스)으로 보충된 RPMI 배지 (깁코, 써모피셔 사이언티픽, 매사추세츠주 월섬)에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 384-웰 플레이트의 개별 웰에 첨가하였다 (웰당 10,000개 세포). 화합물을 384-웰 플레이트의 개별 웰로 옮기고, 처리된 세포를 인간 IL2 (20 ng/mL)를 함유하는 배양 배지 중에서 72시간 동안 37℃, 5% CO2에서 유지한 후, MTS 시약 [3-(4,5-디메틸-2-일)-5-(3-카르복시메톡시페닐)-2-(4-술포페닐)-2H-테트라졸륨]을 제조업체의 지침 (프로메가, 위스콘신주 매디슨)에 따라 사용하여 성장을 측정하였다. 퍼센트 억제를 IL2 자극된 (0% 억제) 및 비자극된 대조군 (100% 억제) 사이의 값을 비교하여 계산하였다. 억제 농도 (IC50) 결정은 IL2 자극된 및 비자극된 처리 사이의 배수-유도에 대한 50% 억제에 기초하여 계산하였다.
7. 인간 CD8 T 세포 IFN-γ 검정
동결된 나이브 인간 CD8 T 세포를 AIM-V 배지에서 해동시키고, 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하고, 계수하였다. 384-웰 조직 배양 플레이트를 PBS 중 0.05 μg/mL의 20 μL 항-인간 CD3으로 4℃에서 밤새 코팅하고, 이를 플레이트로부터 제거한 후, 0.1 μg/mL 가용성 항-인간 CD28을 갖는 40 마이크로리터 CD8 T 세포당 40,000개 세포를 각각의 웰에 첨가하였다. 세포를 플레이팅한 직후에 화합물을 에코 액체 핸들러를 사용하여 세포 플레이트로 옮겼다. 37℃ 인큐베이터에서 20시간 인큐베이션 후, 시토카인 측정을 위해 웰당 3 마이크로리터의 상청액을 새로운 384-웰 백색 검정 플레이트로 옮겼다.
인터페론-γ (IFN-γ)를 제조업체 매뉴얼 (퍼킨 엘머)에 의해 기재된 바와 같이 알파리사 키트 (Cat#AL217)를 사용하여 정량화하였다. 각각의 웰로부터의 계수를 IFN-γ 농도 (pg/mL)로 전환시켰다. 화합물 EC50 값은, 0.05 μg/mL 항-CD3 + 0.1 μg/mL 항-CD28을 기준선으로 설정하고, 3 μM의 참조 화합물, 8-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸) 피페라진-1-일)-5-메틸-7-니트로-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴과 항-CD3 + 항-CD28의 공동 자극을 100% 활성화로 설정하여 결정하였다.
8. 인간 CD8 T 세포 pERK 검정
동결된 나이브 인간 CD8 T 세포를 AIM-V 배지에서 해동시키고, 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하고, 계수하였다. CD8 양성 T 세포를 AIM-V 배지 중 웰당 20,000개 세포로 384-웰 조직 배양 플레이트에 첨가하였다. 1종의 화합물을 각각의 웰에 첨가한 다음, 비드 결합된 항-인간 CD3 및 항-CD28 mAb를 0.3 μg/mL의 최종 농도로 첨가하였다. 세포를 37℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 알파리사 슈어파이어 키트로부터의 용해 완충제를 첨가함으로써 반응을 정지시켰다. (퍼킨 엘머, cat# ALSU-PERK-A). 용해물 (웰당 5 μL)을 pERK 활성화 측정을 위해 새로운 384-웰 백색 검정 플레이트로 옮겼다.
화합물 EC50은, 항-CD3 + 항-CD28을 기준선으로 설정하고, 3 μM 8-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)피페라진-1-일)-5-메틸-7-니트로-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴과 항-CD3 + 항-CD28의 공동-자극을 100% 활성화로 설정하여 결정하였다.
9. 인간 전혈 IFN-γ 검정
건강한 공여자로부터 수득된 인간 정맥 전혈 (웰당 22.5 μL)을 가습 95% 공기/5% CO2 인큐베이터에서 37℃에서 1시간 동안 화합물로 전처리하였다. 혈액을 각각 1 μg/mL의 최종 농도의 2.5 μL 항-인간 CD3 및 항-CD28 mAb로 24시간 동안 37℃에서 자극하였다. 상청액 중 IFN-γ를 알파리사 키트 (Cat#AL217)를 사용하여 측정하였다.
화합물 EC50은, 항-CD3 + 항-CD28을 기준선으로 설정하고, 3 μM의 참조 화합물, 8-(4-(비스(4-플루오로페닐)메틸)피페라진-1-일)-5-메틸-7-니트로-6-옥소-5,6-디히드로-1,5-나프티리딘-2-카르보니트릴과 항-CD3 + 항-CD28의 공동-자극을 100% 활성화로 설정하여 결정하였다.
표 A
시험관내 DGK 억제 IC50 활성 값
Figure pct00073
Figure pct00074
표 A는 DGKα 및 DGKζ 리포솜 (LIPGLO) 검정에서 측정된 시험관내 DGK 억제 IC50 활성 값을 열거한다.
본원에 기재된 화합물은 DGKα 및 DGKζ 효소 중 하나 또는 둘 다의 억제제(들)로서의 활성을 보유하고, 따라서 DGKα 및 DGKζ 활성의 억제와 연관된 질환의 치료에 사용될 수 있다.
hDGKα-(M1-S735)-Ct-TVMV-His를 코딩하는 뉴클레오티드 서열:
Figure pct00075
Figure pct00076
hDGKα-(M1-S735)-Ct-TVMV-His의 아미노산 서열:
Figure pct00077
hDGK ζ -(M1-A928)-전사체 변이체-2 Ct-TVMV-His를 코딩하는 뉴클레오티드 서열:
Figure pct00078
Figure pct00079
hDGKζ-(M1-A928)-전사체 변이체-2 Ct-TVMV-His의 아미노산 서열:
Figure pct00080
SEQUENCE LISTING <110> BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY WEE, Susan et. al. <120> COMBINATIONS OF DGK INHIBITORS AND CHECKPOINT ANTAGONISTS <130> MXI-725PC <140> PCT/US2020/066198 <141> 2020-12-18 <150> US 62/950,570 <151> 2019-12-19 <160> 10 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 2256 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Nucleotide sequence encoding hDGK-alpha-(M1-S735)-Ct-TVMV-His <400> 1 atggccaagg agaggggcct aataagcccc agtgattttg cccagctgca aaaatacatg 60 gaatactcca ccaaaaaggt cagtgatgtc ctaaagctct tcgaggatgg cgagatggct 120 aaatatgtcc aaggagatgc cattgggtac gagggattcc agcaattcct gaaaatctat 180 ctcgaagtgg ataatgttcc cagacaccta agcctggcac tgtttcaatc ctttgagact 240 ggtcactgct taaatgagac aaatgtgaca aaagatgtgg tgtgtctcaa tgatgtttcc 300 tgctactttt cccttctgga gggtggtcgg ccagaagaca agttagaatt caccttcaag 360 ctgtacgaca cggacagaaa tgggatcctg gacagctcag aagtggacaa aattatccta 420 cagatgatgc gagtggctga atacctggat tgggatgtgt ctgagctgag gccgattctt 480 caggagatga tgaaagagat tgactatgat ggcagtggct ctgtctctca agctgagtgg 540 gtccgggctg gggccaccac cgtgccactg ctagtgctgc tgggtctgga gatgactctg 600 aaggacgacg gacagcacat gtggaggccc aagaggttcc ccagaccagt ctactgcaat 660 ctgtgcgagt caagcattgg tcttggcaaa cagggactga gctgtaacct ctgtaagtac 720 actgttcacg accagtgtgc catgaaagcc ctgccttgtg aagtcagcac ctatgccaag 780 tctcggaagg acattggtgt ccaatcacat gtgtgggtgc gaggaggctg tgagtccggg 840 cgctgcgacc gctgtcagaa aaagatccgg atctaccaca gtctgaccgg gctgcattgt 900 gtatggtgcc acctagagat ccacgatgac tgcctgcaag cggtgggcca tgagtgtgac 960 tgtgggctgc tccgggatca catcctgcct ccatcttcca tctatcccag tgtcctggcc 1020 tctggaccgg atcgtaaaaa tagcaaaaca agccagaaga ccatggatga tttaaatttg 1080 agcacctctg aggctctgcg gattgaccct gttcctaaca cccacccact tctcgtcttt 1140 gtcaatccta agagtggcgg gaagcagggg cagagggtgc tctggaagtt ccagtatata 1200 ttaaaccctc gacaggtgtt caacctccta aaggatggtc ctgagatagg gctccgatta 1260 ttcaaggatg ttcctgatag ccggattttg gtgtgtggtg gagacggcac agtaggctgg 1320 attctagaga ccattgacaa agctaacttg ccagttttgc ctcctgttgc tgtgttgccc 1380 ctgggtactg gaaatgatct ggctcgatgc ctaagatggg gaggaggtta tgaaggacag 1440 aatctggcaa agatcctcaa ggatttagag atgagtaaag tggtacatat ggatcgatgg 1500 tctgtggagg tgatacctca acaaactgaa gaaaaaagtg acccagtccc ctttcaaatc 1560 atcaataact acttctctat tggcgtggat gcctctattg ctcatcgatt ccacatcatg 1620 cgagagaaat atccggagaa gttcaacagc agaatgaaga acaagctatg gtacttcgaa 1680 tttgccacat ctgaatccat cttctcaaca tgcaaaaagc tggaggagtc tttgacagtt 1740 gagatctgtg ggaaaccgct ggatctgagc aacctgtccc tagaaggcat cgcagtgcta 1800 aacatcccta gcatgcatgg tggctccaac ctctggggtg ataccaggag accccatggg 1860 gatatctatg ggatcaacca ggccttaggt gctacagcta aagtcatcac cgaccctgat 1920 atcctgaaaa cctgtgtacc agacctaagt gacaagagac tggaagtggt tgggctggag 1980 ggtgcaattg agatgggcca aatctatacc aagctcaaga atgctggacg tcggctggcc 2040 aagtgctctg agatcacctt ccacaccaca aaaacccttc ccatgcaaat tgacggagaa 2100 ccctggatgc agacgccctg tacaatcaag atcacccaca agaaccagat gcccatgctc 2160 atgggcccac ccccccgctc caccaatttc tttggcttct tgagcggatc ctcggagaca 2220 gtgcggtttc agggacacca ccaccatcac cactga 2256 <210> 2 <211> 751 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Amino acid sequence of hDGK-alpha-(M1-S735)-Ct-TVMV-His <400> 2 Met Ala Lys Glu Arg Gly Leu Ile Ser Pro Ser Asp Phe Ala Gln Leu 1 5 10 15 Gln Lys Tyr Met Glu Tyr Ser Thr Lys Lys Val Ser Asp Val Leu Lys 20 25 30 Leu Phe Glu Asp Gly Glu Met Ala Lys Tyr Val Gln Gly Asp Ala Ile 35 40 45 Gly Tyr Glu Gly Phe Gln Gln Phe Leu Lys Ile Tyr Leu Glu Val Asp 50 55 60 Asn Val Pro Arg His Leu Ser Leu Ala Leu Phe Gln Ser Phe Glu Thr 65 70 75 80 Gly His Cys Leu Asn Glu Thr Asn Val Thr Lys Asp Val Val Cys Leu 85 90 95 Asn Asp Val Ser Cys Tyr Phe Ser Leu Leu Glu Gly Gly Arg Pro Glu 100 105 110 Asp Lys Leu Glu Phe Thr Phe Lys Leu Tyr Asp Thr Asp Arg Asn Gly 115 120 125 Ile Leu Asp Ser Ser Glu Val Asp Lys Ile Ile Leu Gln Met Met Arg 130 135 140 Val Ala Glu Tyr Leu Asp Trp Asp Val Ser Glu Leu Arg Pro Ile Leu 145 150 155 160 Gln Glu Met Met Lys Glu Ile Asp Tyr Asp Gly Ser Gly Ser Val Ser 165 170 175 Gln Ala Glu Trp Val Arg Ala Gly Ala Thr Thr Val Pro Leu Leu Val 180 185 190 Leu Leu Gly Leu Glu Met Thr Leu Lys Asp Asp Gly Gln His Met Trp 195 200 205 Arg Pro Lys Arg Phe Pro Arg Pro Val Tyr Cys Asn Leu Cys Glu Ser 210 215 220 Ser Ile Gly Leu Gly Lys Gln Gly Leu Ser Cys Asn Leu Cys Lys Tyr 225 230 235 240 Thr Val His Asp Gln Cys Ala Met Lys Ala Leu Pro Cys Glu Val Ser 245 250 255 Thr Tyr Ala Lys Ser Arg Lys Asp Ile Gly Val Gln Ser His Val Trp 260 265 270 Val Arg Gly Gly Cys Glu Ser Gly Arg Cys Asp Arg Cys Gln Lys Lys 275 280 285 Ile Arg Ile Tyr His Ser Leu Thr Gly Leu His Cys Val Trp Cys His 290 295 300 Leu Glu Ile His Asp Asp Cys Leu Gln Ala Val Gly His Glu Cys Asp 305 310 315 320 Cys Gly Leu Leu Arg Asp His Ile Leu Pro Pro Ser Ser Ile Tyr Pro 325 330 335 Ser Val Leu Ala Ser Gly Pro Asp Arg Lys Asn Ser Lys Thr Ser Gln 340 345 350 Lys Thr Met Asp Asp Leu Asn Leu Ser Thr Ser Glu Ala Leu Arg Ile 355 360 365 Asp Pro Val Pro Asn Thr His Pro Leu Leu Val Phe Val Asn Pro Lys 370 375 380 Ser Gly Gly Lys Gln Gly Gln Arg Val Leu Trp Lys Phe Gln Tyr Ile 385 390 395 400 Leu Asn Pro Arg Gln Val Phe Asn Leu Leu Lys Asp Gly Pro Glu Ile 405 410 415 Gly Leu Arg Leu Phe Lys Asp Val Pro Asp Ser Arg Ile Leu Val Cys 420 425 430 Gly Gly Asp Gly Thr Val Gly Trp Ile Leu Glu Thr Ile Asp Lys Ala 435 440 445 Asn Leu Pro Val Leu Pro Pro Val Ala Val Leu Pro Leu Gly Thr Gly 450 455 460 Asn Asp Leu Ala Arg Cys Leu Arg Trp Gly Gly Gly Tyr Glu Gly Gln 465 470 475 480 Asn Leu Ala Lys Ile Leu Lys Asp Leu Glu Met Ser Lys Val Val His 485 490 495 Met Asp Arg Trp Ser Val Glu Val Ile Pro Gln Gln Thr Glu Glu Lys 500 505 510 Ser Asp Pro Val Pro Phe Gln Ile Ile Asn Asn Tyr Phe Ser Ile Gly 515 520 525 Val Asp Ala Ser Ile Ala His Arg Phe His Ile Met Arg Glu Lys Tyr 530 535 540 Pro Glu Lys Phe Asn Ser Arg Met Lys Asn Lys Leu Trp Tyr Phe Glu 545 550 555 560 Phe Ala Thr Ser Glu Ser Ile Phe Ser Thr Cys Lys Lys Leu Glu Glu 565 570 575 Ser Leu Thr Val Glu Ile Cys Gly Lys Pro Leu Asp Leu Ser Asn Leu 580 585 590 Ser Leu Glu Gly Ile Ala Val Leu Asn Ile Pro Ser Met His Gly Gly 595 600 605 Ser Asn Leu Trp Gly Asp Thr Arg Arg Pro His Gly Asp Ile Tyr Gly 610 615 620 Ile Asn Gln Ala Leu Gly Ala Thr Ala Lys Val Ile Thr Asp Pro Asp 625 630 635 640 Ile Leu Lys Thr Cys Val Pro Asp Leu Ser Asp Lys Arg Leu Glu Val 645 650 655 Val Gly Leu Glu Gly Ala Ile Glu Met Gly Gln Ile Tyr Thr Lys Leu 660 665 670 Lys Asn Ala Gly Arg Arg Leu Ala Lys Cys Ser Glu Ile Thr Phe His 675 680 685 Thr Thr Lys Thr Leu Pro Met Gln Ile Asp Gly Glu Pro Trp Met Gln 690 695 700 Thr Pro Cys Thr Ile Lys Ile Thr His Lys Asn Gln Met Pro Met Leu 705 710 715 720 Met Gly Pro Pro Pro Arg Ser Thr Asn Phe Phe Gly Phe Leu Ser Gly 725 730 735 Ser Ser Glu Thr Val Arg Phe Gln Gly His His His His His His 740 745 750 <210> 3 <211> 2838 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Nucleotide sequence encoding hDGK -zeta - (M1-A928)-transcript variant-2 Ct-TVMV-His <400> 3 atggagccgc gggacggtag ccccgaggcc cggagcagcg actccgagtc ggcttccgcc 60 tcgtccagcg gctccgagcg cgacgccggt cccgagccgg acaaggcgcc gcggcgactc 120 aacaagcggc gcttcccggg gctgcggctc ttcgggcaca ggaaagccat cacgaagtcg 180 ggcctccagc acctggcccc ccctccgccc acccctgggg ccccgtgcag cgagtcagag 240 cggcagatcc ggagtacagt ggactggagc gagtcagcga catatgggga gcacatctgg 300 ttcgagacca acgtgtccgg ggacttctgc tacgttgggg agcagtactg tgtagccagg 360 atgctgcaga agtcagtgtc tcgaagaaag tgcgcagcct gcaagattgt ggtgcacacg 420 ccctgcatcg agcagctgga gaagataaat ttccgctgta agccgtcctt ccgtgaatca 480 ggctccagga atgtccgcga gccaaccttt gtacggcacc actgggtaca cagacgacgc 540 caggacggca agtgtcggca ctgtgggaag ggattccagc agaagttcac cttccacagc 600 aaggagattg tggccatcag ctgctcgtgg tgcaagcagg cataccacag caaggtgtcc 660 tgcttcatgc tgcagcagat cgaggagccg tgctcgctgg gggtccacgc agccgtggtc 720 atcccgccca cctggatcct ccgcgcccgg aggccccaga atactctgaa agcaagcaag 780 aagaagaaga gggcatcctt caagaggaag tccagcaaga aagggcctga ggagggccgc 840 tggagaccct tcatcatcag gcccaccccc tccccgctca tgaagcccct gctggtgttt 900 gtgaacccca agagtggggg caaccagggt gcaaagatca tccagtcttt cctctggtat 960 ctcaatcccc gacaagtctt cgacctgagc cagggagggc ccaaggaggc gctggagatg 1020 taccgcaaag tgcacaacct gcggatcctg gcgtgcgggg gcgacggcac ggtgggctgg 1080 atcctctcca ccctggacca gctacgcctg aagccgccac cccctgttgc catcctgccc 1140 ctgggtactg gcaacgactt ggcccgaacc ctcaactggg gtgggggcta cacagatgag 1200 cctgtgtcca agatcctctc ccacgtggag gaggggaacg tggtacagct ggaccgctgg 1260 gacctccacg ctgagcccaa ccccgaggca gggcctgagg accgagatga aggcgccacc 1320 gaccggttgc ccctggatgt cttcaacaac tacttcagcc tgggctttga cgcccacgtc 1380 accctggagt tccacgagtc tcgagaggcc aacccagaga aattcaacag ccgctttcgg 1440 aataagatgt tctacgccgg gacagctttc tctgacttcc tgatgggcag ctccaaggac 1500 ctggccaagc acatccgagt ggtgtgtgat ggaatggact tgactcccaa gatccaggac 1560 ctgaaacccc agtgtgttgt tttcctgaac atccccaggt actgtgcggg caccatgccc 1620 tggggccacc ctggggagca ccacgacttt gagccccagc ggcatgacga cggctacctc 1680 gaggtcattg gcttcaccat gacgtcgttg gccgcgctgc aggtgggcgg acacggcgag 1740 cggctgacgc agtgtcgcga ggtggtgctc accacatcca aggccatccc ggtgcaggtg 1800 gatggcgagc cctgcaagct tgcagcctca cgcatccgca tcgccctgcg caaccaggcc 1860 accatggtgc agaaggccaa gcggcggagc gccgcccccc tgcacagcga ccagcagccg 1920 gtgccagagc agttgcgcat ccaggtgagt cgcgtcagca tgcacgacta tgaggccctg 1980 cactacgaca aggagcagct caaggaggcc tctgtgccgc tgggcactgt ggtggtccca 2040 ggagacagtg acctagagct ctgccgtgcc cacattgaga gactccagca ggagcccgat 2100 ggtgctggag ccaagtcccc gacatgccag aaactgtccc ccaagtggtg cttcctggac 2160 gccaccactg ccagccgctt ctacaggatc gaccgagccc aggagcacct caactatgtg 2220 actgagatcg cacaggatga gatttatatc ctggaccctg agctgctggg ggcatcggcc 2280 cggcctgacc tcccaacccc cacttcccct ctccccacct caccctgctc acccacgccc 2340 cggtcactgc aaggggatgc tgcaccccct caaggtgaag agctgattga ggctgccaag 2400 aggaacgact tctgtaagct ccaggagctg caccgagctg ggggcgacct catgcaccga 2460 gacgagcaga gtcgcacgct cctgcaccac gcagtcagca ctggcagcaa ggatgtggtc 2520 cgctacctgc tggaccacgc ccccccagag atccttgatg cggtggagga aaacggggag 2580 acctgtttgc accaagcagc ggccctgggc cagcgcacca tctgccacta catcgtggag 2640 gccggggcct cgctcatgaa gacagaccag cagggcgaca ctccccggca gcgggctgag 2700 aaggctcagg acaccgagct ggccgcctac ctggagaacc ggcagcacta ccagatgatc 2760 cagcgggagg accaggagac ggctgtggga tcctcggaga cagtgcggtt tcagggacac 2820 caccaccatc accactga 2838 <210> 4 <211> 945 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Amino acid sequence of hDGK-zeta-(M1-A928)-transcript variant-2 Ct-TVMV-His <400> 4 Met Glu Pro Arg Asp Gly Ser Pro Glu Ala Arg Ser Ser Asp Ser Glu 1 5 10 15 Ser Ala Ser Ala Ser Ser Ser Gly Ser Glu Arg Asp Ala Gly Pro Glu 20 25 30 Pro Asp Lys Ala Pro Arg Arg Leu Asn Lys Arg Arg Phe Pro Gly Leu 35 40 45 Arg Leu Phe Gly His Arg Lys Ala Ile Thr Lys Ser Gly Leu Gln His 50 55 60 Leu Ala Pro Pro Pro Pro Thr Pro Gly Ala Pro Cys Ser Glu Ser Glu 65 70 75 80 Arg Gln Ile Arg Ser Thr Val Asp Trp Ser Glu Ser Ala Thr Tyr Gly 85 90 95 Glu His Ile Trp Phe Glu Thr Asn Val Ser Gly Asp Phe Cys Tyr Val 100 105 110 Gly Glu Gln Tyr Cys Val Ala Arg Met Leu Gln Lys Ser Val Ser Arg 115 120 125 Arg Lys Cys Ala Ala Cys Lys Ile Val Val His Thr Pro Cys Ile Glu 130 135 140 Gln Leu Glu Lys Ile Asn Phe Arg Cys Lys Pro Ser Phe Arg Glu Ser 145 150 155 160 Gly Ser Arg Asn Val Arg Glu Pro Thr Phe Val Arg His His Trp Val 165 170 175 His Arg Arg Arg Gln Asp Gly Lys Cys Arg His Cys Gly Lys Gly Phe 180 185 190 Gln Gln Lys Phe Thr Phe His Ser Lys Glu Ile Val Ala Ile Ser Cys 195 200 205 Ser Trp Cys Lys Gln Ala Tyr His Ser Lys Val Ser Cys Phe Met Leu 210 215 220 Gln Gln Ile Glu Glu Pro Cys Ser Leu Gly Val His Ala Ala Val Val 225 230 235 240 Ile Pro Pro Thr Trp Ile Leu Arg Ala Arg Arg Pro Gln Asn Thr Leu 245 250 255 Lys Ala Ser Lys Lys Lys Lys Arg Ala Ser Phe Lys Arg Lys Ser Ser 260 265 270 Lys Lys Gly Pro Glu Glu Gly Arg Trp Arg Pro Phe Ile Ile Arg Pro 275 280 285 Thr Pro Ser Pro Leu Met Lys Pro Leu Leu Val Phe Val Asn Pro Lys 290 295 300 Ser Gly Gly Asn Gln Gly Ala Lys Ile Ile Gln Ser Phe Leu Trp Tyr 305 310 315 320 Leu Asn Pro Arg Gln Val Phe Asp Leu Ser Gln Gly Gly Pro Lys Glu 325 330 335 Ala Leu Glu Met Tyr Arg Lys Val His Asn Leu Arg Ile Leu Ala Cys 340 345 350 Gly Gly Asp Gly Thr Val Gly Trp Ile Leu Ser Thr Leu Asp Gln Leu 355 360 365 Arg Leu Lys Pro Pro Pro Pro Val Ala Ile Leu Pro Leu Gly Thr Gly 370 375 380 Asn Asp Leu Ala Arg Thr Leu Asn Trp Gly Gly Gly Tyr Thr Asp Glu 385 390 395 400 Pro Val Ser Lys Ile Leu Ser His Val Glu Glu Gly Asn Val Val Gln 405 410 415 Leu Asp Arg Trp Asp Leu His Ala Glu Pro Asn Pro Glu Ala Gly Pro 420 425 430 Glu Asp Arg Asp Glu Gly Ala Thr Asp Arg Leu Pro Leu Asp Val Phe 435 440 445 Asn Asn Tyr Phe Ser Leu Gly Phe Asp Ala His Val Thr Leu Glu Phe 450 455 460 His Glu Ser Arg Glu Ala Asn Pro Glu Lys Phe Asn Ser Arg Phe Arg 465 470 475 480 Asn Lys Met Phe Tyr Ala Gly Thr Ala Phe Ser Asp Phe Leu Met Gly 485 490 495 Ser Ser Lys Asp Leu Ala Lys His Ile Arg Val Val Cys Asp Gly Met 500 505 510 Asp Leu Thr Pro Lys Ile Gln Asp Leu Lys Pro Gln Cys Val Val Phe 515 520 525 Leu Asn Ile Pro Arg Tyr Cys Ala Gly Thr Met Pro Trp Gly His Pro 530 535 540 Gly Glu His His Asp Phe Glu Pro Gln Arg His Asp Asp Gly Tyr Leu 545 550 555 560 Glu Val Ile Gly Phe Thr Met Thr Ser Leu Ala Ala Leu Gln Val Gly 565 570 575 Gly His Gly Glu Arg Leu Thr Gln Cys Arg Glu Val Val Leu Thr Thr 580 585 590 Ser Lys Ala Ile Pro Val Gln Val Asp Gly Glu Pro Cys Lys Leu Ala 595 600 605 Ala Ser Arg Ile Arg Ile Ala Leu Arg Asn Gln Ala Thr Met Val Gln 610 615 620 Lys Ala Lys Arg Arg Ser Ala Ala Pro Leu His Ser Asp Gln Gln Pro 625 630 635 640 Val Pro Glu Gln Leu Arg Ile Gln Val Ser Arg Val Ser Met His Asp 645 650 655 Tyr Glu Ala Leu His Tyr Asp Lys Glu Gln Leu Lys Glu Ala Ser Val 660 665 670 Pro Leu Gly Thr Val Val Val Pro Gly Asp Ser Asp Leu Glu Leu Cys 675 680 685 Arg Ala His Ile Glu Arg Leu Gln Gln Glu Pro Asp Gly Ala Gly Ala 690 695 700 Lys Ser Pro Thr Cys Gln Lys Leu Ser Pro Lys Trp Cys Phe Leu Asp 705 710 715 720 Ala Thr Thr Ala Ser Arg Phe Tyr Arg Ile Asp Arg Ala Gln Glu His 725 730 735 Leu Asn Tyr Val Thr Glu Ile Ala Gln Asp Glu Ile Tyr Ile Leu Asp 740 745 750 Pro Glu Leu Leu Gly Ala Ser Ala Arg Pro Asp Leu Pro Thr Pro Thr 755 760 765 Ser Pro Leu Pro Thr Ser Pro Cys Ser Pro Thr Pro Arg Ser Leu Gln 770 775 780 Gly Asp Ala Ala Pro Pro Gln Gly Glu Glu Leu Ile Glu Ala Ala Lys 785 790 795 800 Arg Asn Asp Phe Cys Lys Leu Gln Glu Leu His Arg Ala Gly Gly Asp 805 810 815 Leu Met His Arg Asp Glu Gln Ser Arg Thr Leu Leu His His Ala Val 820 825 830 Ser Thr Gly Ser Lys Asp Val Val Arg Tyr Leu Leu Asp His Ala Pro 835 840 845 Pro Glu Ile Leu Asp Ala Val Glu Glu Asn Gly Glu Thr Cys Leu His 850 855 860 Gln Ala Ala Ala Leu Gly Gln Arg Thr Ile Cys His Tyr Ile Val Glu 865 870 875 880 Ala Gly Ala Ser Leu Met Lys Thr Asp Gln Gln Gly Asp Thr Pro Arg 885 890 895 Gln Arg Ala Glu Lys Ala Gln Asp Thr Glu Leu Ala Ala Tyr Leu Glu 900 905 910 Asn Arg Gln His Tyr Gln Met Ile Gln Arg Glu Asp Gln Glu Thr Ala 915 920 925 Val Gly Ser Ser Glu Thr Val Arg Phe Gln Gly His His His His His 930 935 940 His 945 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: OVA peptide <400> 5 Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu 1 5 <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: A2 peptide <400> 6 Ser Ala Ile Asn Phe Glu Lys Leu 1 5 <210> 7 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Q4 peptide <400> 7 Ser Ile Ile Gln Phe Glu Lys Leu 1 5 <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: T4 peptide <400> 8 Ser Ile Ile Thr Phe Glu Lys Leu 1 5 <210> 9 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Q4H7 peptide <400> 9 Ser Ile Ile Gln Phe Glu His Leu 1 5 <210> 10 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Scrambled peptide <400> 10 Phe Ile Leu Lys Ser Ile Asn Glu 1 5

Claims (42)

  1. 대상체에게 치료 유효량의 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제 및 PD1/PD-L1 축의 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  2. 대상체에게 치료 유효량의 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제 및 CTLA4의 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  3. 대상체에게 치료 유효량의 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제, PD1/PD-L1 축의 길항제 및 CTLA4의 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 DGKα의 억제제이고, DGKζ의 유의한 억제제가 아닌 것인 방법.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 DGKζ의 억제제이고, DGKα의 유의한 억제제가 아닌 것인 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 DGKα 및 DGKζ의 억제제인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 다른 DGK의 유의한 억제제가 아닌 것인 방법.
  8. 제1항 및 제3항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, PD1/PD-L1 축의 길항제가 PD1, 예를 들어 인간 PD1의 길항제인 방법.
  9. 제8항에 있어서, PD-1의 길항제가 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 또는 본원에 기재된 임의의 다른 PD-1 길항제인 방법.
  10. 제1항 및 제3항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, PD1/PD-L1 축의 길항제가 PD-L1, 예컨대 인간 PD-L1의 길항제인 방법.
  11. 제10항에 있어서, PD-L1의 길항제가 아테졸리주맙 또는 본원에 기재된 임의의 다른 PD-L1 길항제인 방법.
  12. 제2항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, CTLA4의 길항제가 이필리무맙 또는 본원에 기재된 임의의 다른 CTLA4 길항제인 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ 길항제가, 예를 들어 pERK/pPKC 신호전달의 증가에 의해 입증된 바와 같이, 1차 T 세포 신호전달을 증가시키는 것인 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 T 세포 항원 인식 및 활성화에 대하여 항원 자극에 대한 역치를 낮추고/거나; 친화도 요건을 낮추고/거나 항원의 농도 요건을 낮추는 것인 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 CTL 이펙터 기능을 증가시키는 것인 방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 종양 세포 사멸을 증진시키는 것인 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제의 항종양 활성이 CT26 동물 모델에서 CD8+ T 세포에 의존성인 것인 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제의 항종양 활성이 CT26 동물 모델에서 NK 세포에 의존성인 것인 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제의 항종양 활성이 CT-26 동물 모델에서 CD4 세포 고갈에 의해 증진되는 것인 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 CT-26 동물 모델에서 AH1+ 사량체 항원 제시를 증진시키거나 또는 감소된 B2M 수준을 극복하여 T 세포 이펙터 기능을 회복시키는 것인 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법:
    Figure pct00081

    여기서:
    R1은 H, F, Cl, Br, -CN, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알킬, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C3-4 시클로알킬, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알콕시, -NRaRa, -S(O)nRe, 또는 -P(O)ReRe이고;
    각각의 R1a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, 또는 -NRaRa이고;
    각각의 Ra는 독립적으로 H 또는 C1-3 알킬이고;
    각각의 Re는 독립적으로 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알킬 또는 C3-4 시클로알킬이고;
    R2는 H, 0 내지 4개의 R2a로 치환된 C1-3 알킬, 또는 0 내지 4개의 R2a로 치환된 C3-4 시클로알킬이고;
    각각의 R2a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, -O(C1-2 알킬), C3-4 시클로알킬, C3-4 알케닐, 또는 C3-4 알키닐이고;
    R3은 H, F, Cl, Br, -CN, C1-3 알킬, C1-2 플루오로알킬, C3-4 시클로알킬, C3-4 플루오로시클로알킬, 또는 -NO2이고;
    R4는 -CH2R4a, -CH2CH2R4a, -CH2CHR4aR4d, -CHR4aR4b, 또는 -CR4aR4bR4c이고;
    R4a 및 R4b는 독립적으로:
    (i) F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -SCH3, C1-3 플루오로알콕시, -NRaRa, -S(O)2Re 또는 -NRaS(O)2Re로부터 독립적으로 선택된 0 내지 4개의 치환기로 치환된 C1-6 알킬이거나;
    (ii) C3-6 시클로알킬, 헤테로시클릴, 페닐, 또는 헤테로아릴이고, 각각은 F, Cl, Br, -CN, -OH, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-4 히드록시알킬, -(CH2)1-2O(C1-3 알킬), C1-4 알콕시, -O(C1-4 히드록시알킬), -O(CH)1-3O(C1-3 알킬), C1-3 플루오로알콕시, -O(CH)1-3NRcRc, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), -P(O)(C1-3 알킬)2, -S(O)2(C1-3 알킬), -O(CH2)1-2(C3-6 시클로알킬), -O(CH2)1-2(모르폴리닐), 시클로프로필, 시아노시클로프로필, 메틸아제티디닐, 아세틸아제티디닐, (tert-부톡시카르보닐)아제티디닐, 트리아졸릴, 테트라히드로피라닐, 모르폴리닐, 티오페닐, 메틸피페리디닐, 및 Rd로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되거나; 또는
    (iii) C3-6 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 및 헤테로아릴로부터 선택되는 1개의 시클릭 기로 치환된 C1-4 알킬이고, 상기 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), 및 C3-6 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
    또는 R4a 및 R4b는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C3-6 시클로알킬 또는 3- 내지 6-원 헤테로시클릴을 형성하고, 각각은 0 내지 3개의 Rf로 치환되고;
    각각의 Rf는 독립적으로 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, 또는 C3-6 시클로알킬, 3- 내지 6-원 헤테로시클릴, 페닐, 모노시클릭 헤테로아릴, 및 비시클릭 헤테로아릴로부터 선택되는 시클릭 기이고, 각각의 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, 및 -NRcRc로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되고;
    R4c는 C1-6 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 각각은 F, Cl, -OH, C1-2 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, 및 -CN으로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되고;
    R4d는 -OCH3이고;
    각각의 Rc는 독립적으로 H 또는 C1-2 알킬이고;
    Rd는 F, Cl, -CN, -CH3, 및 -OCH3으로부터 선택되는 0 내지 1개의 치환기로 치환된 페닐이고;
    각각의 R5는 독립적으로 -CN, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C1-6 알킬, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-4 알케닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-4 알키닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C3-4 시클로알킬, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 페닐, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 옥사디아졸릴, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 피리디닐, -(CH2)1-2(0 내지 4개의 Rg로 치환된 헤테로시클릴), -(CH2)1-2NRcC(O)(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcC(O)O(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcS(O)2(C1-4 알킬), -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -C(O)O(C3-4 시클로알킬), -C(O)NRaRa 또는 -C(O)NRa(C3-4 시클로알킬)이고;
    각각의 Rg는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, -O(CH2)1-2O(C1-2 알킬), 또는 -NRcRc이고;
    m은 0, 1, 2, 또는 3이고;
    n은 0, 1, 또는 2이다.
  22. 제21항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이고, 여기서:
    R1은 H, F, Cl, Br, -CN, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알킬, 0 내지 3개의 R1a로 치환된 시클로프로필, 0 내지 3개의 R1a로 치환된 C1-3 알콕시, -NRaRa, -S(O)nCH3, 또는 -P(O)(CH3)2이고;
    각각의 R1a는 독립적으로 F, Cl, 또는 -CN이고;
    각각의 Ra는 독립적으로 H 또는 C1-3 알킬이고;
    R2는 H, 또는 0 내지 2개의 R2a로 치환된 C1-2 알킬이고;
    각각의 R2a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, -O(C1-2 알킬), 시클로프로필, C3-4 알케닐, 또는 C3-4 알키닐이고;
    R3은 H, F, Cl, Br, -CN, C1-2 알킬, -CF3, 시클로프로필, 또는 -NO2이고;
    R4a 및 R4b는 독립적으로:
    (i) F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -SCH3, C1-3 플루오로알콕시, 및 -NRaRa로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환된 C1-4 알킬이거나;
    (ii) C3-6 시클로알킬, 헤테로시클릴, 페닐, 또는 헤테로아릴이고, 각각은 F, Cl, Br, -CN, -OH, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, -CH2OH, -(CH2)1-2O(C1-2 알킬), C1-4 알콕시, -O(C1-4 히드록시알킬), -O(CH)1-2O(C1-2 알킬), C1-3 플루오로알콕시, -O(CH)1-2NRcRc, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), -P(O)(C1-2 알킬)2, -S(O)2(C1-3 알킬), -O(CH2)1-2(C3-4 시클로알킬), -O(CH2)1-2(모르폴리닐), 시클로프로필, 시아노시클로프로필, 메틸아제티디닐, 아세틸아제티디닐, (tert-부톡시카르보닐)아제티디닐, 트리아졸릴, 테트라히드로피라닐, 모르폴리닐, 티오페닐, 메틸피페리디닐, 및 Rd로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되거나; 또는
    (iii) C3-6 시클로알킬, 헤테로시클릴, 페닐, 및 헤테로아릴로부터 선택되는 1개의 시클릭 기로 치환된 C1-3 알킬이고, 상기 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-3 알킬, C1-2 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), 및 C3-4 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
    또는 R4a 및 R4b는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C3-6 시클로알킬 또는 3- 내지 6-원 헤테로시클릴을 형성하고, 각각은 0 내지 3개의 Rf로 치환되고;
    각각의 Rf는 독립적으로 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4 알킬, C1-2 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, 또는 C3-6 시클로알킬, 3- 내지 6-원 헤테로시클릴, 페닐, 모노시클릭 헤테로아릴, 및 비시클릭 헤테로아릴로부터 선택되는 시클릭 기이고, 각각의 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4 알킬, C1-2 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, 및 -NRcRc로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되고;
    R4c는 C1-4 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 각각은 F, Cl, -OH, C1-2 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, 및 -CN으로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되고;
    각각의 R5는 독립적으로 -CN, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C1-5 알킬, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-3 알케닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-3 알키닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C3-4 시클로알킬, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 페닐, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 옥사디아졸릴, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 피리디닐, -(CH2)1-2(0 내지 4개의 Rg로 치환된 헤테로시클릴), -(CH2)1-2NRcC(O)(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcC(O)O(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcS(O)2(C1-4 알킬), -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -C(O)O(C3-4 시클로알킬), -C(O)NRaRa 또는 -C(O)NRa(C3-4 시클로알킬)인
    방법.
  23. 제22항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 하기 구조를 갖는 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법:
    Figure pct00082

    여기서:
    R1은 -CN이고;
    R2는 -CH3이고;
    R3은 H, F, 또는 -CN이고;
    R4는
    Figure pct00083

    이다.
  24. 제21항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 하기 구조를 갖는 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
    Figure pct00084

    Figure pct00085

    Figure pct00086

    Figure pct00087
  25. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 염인 방법:
    Figure pct00088

    여기서:
    R1은 H, F, Cl, Br, -CN, -OH, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알킬, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C3-4 시클로알킬, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알콕시, -NRaRa, -S(O)nRe, 또는 -P(O)ReRe이고;
    각각의 R1a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, 또는 -NRaRa이고;
    각각의 Ra는 독립적으로 H 또는 C1-3 알킬이고;
    각각의 Re는 독립적으로 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알킬 또는 C3-4 시클로알킬이고;
    R2는 H, 0 내지 4개의 R2a로 치환된 C1-3 알킬, 또는 0 내지 4개의 R2a로 치환된 C3-4 시클로알킬이고;
    각각의 R2a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, -O(C1-2 알킬), C3-4 시클로알킬, C3-4 알케닐, 또는 C3-4 알키닐이고;
    R4는 -CH2R4a, -CH2CH2R4a, -CH2CHR4aR4d, -CHR4aR4b, 또는 -CR4aR4bR4c이고;
    R4a 및 R4b는 독립적으로:
    (i) -CN, 또는 F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -SCH3, C1-3 플루오로알콕시, -NRaRa, -S(O)2Re, 또는 -NRaS(O)2Re로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환된 C1-6 알킬이거나;
    (ii) C3-6 시클로알킬, 4- 내지 10-원 헤테로시클릴, 페닐, 또는 5- 내지 10-원 헤테로아릴이고, 각각은 F, Cl, Br, -CN, -OH, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-2 브로모알킬, C1-2 시아노알킬, C1-4 히드록시알킬, -(CH2)1-2O(C1-3 알킬), C1-4 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, C1-3 시아노알콕시, -O(C1-4 히드록시알킬), -O(CRxRx)1-3O(C1-3 알킬), C1-3 플루오로알콕시, -O(CH2)1-3NRcRc, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -NRcRc, -CH2NRaRa, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -(CRxRx)0-2NRaC(O)O(C1-4 알킬), -P(O)(C1-3 알킬)2, -S(O)2(C1-3 알킬), -(CRxRx)1-2(C3-4 시클로알킬), -(CRxRx)1-2(모르폴리닐), -(CRxRx)1-2(디플루오로모르폴리닐), -(CRxRx)1-2(디메틸모르폴리닐), -(CRxRx)1-2(옥사아자비시클로[2.2.1]헵타닐), (CRxRx)1-2(옥사아자스피로[3.3]헵타닐), -(CRxRx)1-2(메틸피페라지노닐), -(CRxRx)1-2(아세틸피페라지닐), -(CRxRx)1-2(피페리디닐), -(CRxRx)1-2(디플루오로피페리디닐), -(CRxRx)1-2(메톡시피페리디닐), -(CRxRx)1-2(히드록시피페리디닐), -O(CRxRx)0-2(C3-6 시클로알킬), -O(CRxRx)0-2(메틸시클로프로필), -O(CRxRx)0-2((에톡시카르보닐)시클로프로필), -O(CRxRx)0-2(옥세타닐), -O(CRxRx)0-2(메틸아제티디닐), -O(CRxRx)0-2(테트라히드로피라닐), -O(CRxRx)1-2(모르폴리닐), -O(CRxRx)0-2(티아졸릴), 시클로프로필, 시아노시클로프로필, 메틸아제티디닐, 아세틸아제티디닐, (tert-부톡시카르보닐)아제티디닐, 트리아졸릴, 테트라히드로피라닐, 모르폴리닐, 티오페닐, 메틸피페리디닐, 디옥솔라닐, 피롤리디노닐, 및 Rd로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되거나; 또는
    (iii) C3-6 시클로알킬, 4- 내지 10-원 헤테로시클릴, 모노- 또는 비시클릭 아릴, 또는 5- 내지 10-원 헤테로아릴로부터 선택되는 1개의 시클릭 기로 치환된 C1-4 알킬이고, 상기 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), 및 C3-6 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
    또는 R4a 및 R4b는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C3-6 시클로알킬 또는 3- 내지 6-원 헤테로시클릴을 형성하고, 각각은 0 내지 3개의 Rf로 치환되고;
    각각의 Rf는 독립적으로 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, 또는 C3-6 시클로알킬, 3- 내지 6-원 헤테로시클릴, 페닐, 모노시클릭 헤테로아릴, 및 비시클릭 헤테로아릴로부터 선택되는 시클릭 기이고, 각각의 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, 및 -NRcRc로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되고;
    R4c는 C1-6 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 각각은 F, Cl, -OH, C1-2 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, 및 -CN으로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되고;
    R4d는 -OCH3이고;
    각각의 Rc는 독립적으로 H 또는 C1-2 알킬이고;
    Rd는 F, Cl, -CN, -CH3, 및 -OCH3으로부터 선택되는 0 내지 1개의 치환기로 치환된 페닐이고;
    각각의 R5는 독립적으로 -CN, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C1-6 알킬, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-4 알케닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-4 알키닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C3-4 시클로알킬, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 페닐, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 옥사디아졸릴, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 피리디닐, -(CH2)1-2(0 내지 4개의 Rg로 치환된 4- 내지 10-원 헤테로시클릴), -(CH2)1-2NRcC(O)(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcC(O)O(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcS(O)2(C1-4 알킬), -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -C(O)O(C3-4 시클로알킬), -C(O)NRaRa 또는 -C(O)NRa(C3-4 시클로알킬)이고;
    각각의 Rg는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, C1-3 알콕시, C1-3 플루오로알콕시, -O(CH2)1-2O(C1-2 알킬), 또는 -NRcRc이고;
    m은 0, 1, 2, 또는 3이고;
    n은 0, 1, 또는 2이다.
  26. 제25항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이고, 여기서:
    R1은 H, F, Cl, Br, -CN, -OH, 0 내지 4개의 R1a로 치환된 C1-3 알킬, 0 내지 3개의 R1a로 치환된 시클로프로필, 0 내지 3개의 R1a로 치환된 C1-3 알콕시, -NRaRa, -S(O)nCH3, 또는 -P(O)(CH3)2이고;
    R2는 H, 또는 0 내지 2개의 R2a로 치환된 C1-2 알킬이고;
    각각의 R2a는 독립적으로 F, Cl, -CN, -OH, -O(C1-2 알킬), 시클로프로필, C3-4 알케닐, 또는 C3-4 알키닐이고;
    R4a 및 R4b는 독립적으로:
    (i) -CN, 또는 F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -SCH3, C1-3 플루오로알콕시, 및 -NRaRa로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환된 C1-4 알킬이거나;
    (ii) C3-6 시클로알킬, 4- 내지 10-원 헤테로시클릴, 페닐, 또는 5- 내지 10-원 헤테로아릴이고, 각각은 F, Cl, Br, -CN, -OH, C1-6 알킬, C1-3 플루오로알킬, C1-2 브로모알킬, C1-2 시아노알킬, C1-2 히드록시알킬, -CH2NRaRa, -(CH2)1-2O(C1-2 알킬), -(CH2)1-2NRxC(O)O(C1-2 알킬), C1-4 알콕시, -O(C1-4 히드록시알킬), -O(CRxRx)1-2O(C1-2 알킬), C1-3 플루오로알콕시, C1-3 시아노알콕시, -O(CH2)1-2NRcRc, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), -P(O)(C1-2 알킬)2, -S(O)2(C1-3 알킬), -(CH2)1-2(C3-4 시클로알킬), -CRxRx(모르폴리닐), -CRxRx(디플루오로모르폴리닐), -CRxRx(디메틸모르폴리닐), -CRxRx(옥사자비시클로[2.2.1]헵타닐), -CRxRx(옥사아자스피로[3.3]헵타닐), -CRxRx(메틸피페라지노닐), -CRxRx(아세틸피페라지닐), -CRxRx(피페리디닐), -CRxRx(디플루오로피페리디닐), -CRxRx(메톡시피페리디닐), -CRxRx(히드록시피페리디닐), -O(CH2)0-2(C3-4 시클로알킬), -O(CH2)0-2(메틸시클로프로필), -O(CH2)0-2((에톡시카르보닐)시클로프로필), -O(CH2)0-2(옥세타닐), -O(CH2)0-2(메틸아제티디닐), -O(CH2)1-2(모르폴리닐), -O(CH2)0-2(테트라히드로피라닐), -O(CH2)0-2(티아졸릴), 시클로프로필, 시아노시클로프로필, 메틸아제티디닐, 아세틸아제티디닐, (tert-부톡시카르보닐)아제티디닐, 디옥솔라닐, 피롤리디노닐, 트리아졸릴, 테트라히드로피라닐, 모르폴리닐, 티오페닐, 메틸피페리디닐, 및 Rd로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되거나; 또는
    (iii) C3-6 시클로알킬, 4- 내지 10-원 헤테로시클릴, 모노- 또는 비시클릭 아릴, 또는 5- 내지 10-원 헤테로아릴로부터 선택되는 1개의 시클릭 기로 치환된 C1-3 알킬이고, 상기 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-3 알킬, C1-2 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3 알킬), -NRaC(O)(C1-3 알킬), -NRaC(O)O(C1-4 알킬), 및 C3-4 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
    또는 R4a 및 R4b는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 C3-6 시클로알킬 또는 3- 내지 6-원 헤테로시클릴을 형성하고, 각각은 0 내지 3개의 Rf로 치환되고;
    각각의 Rf는 독립적으로 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4 알킬, C1-2 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -NRcRc, 또는 C3-6 시클로알킬, 3- 내지 6-원 헤테로시클릴, 페닐, 모노시클릭 헤테로아릴, 및 비시클릭 헤테로아릴로부터 선택되는 시클릭 기이고, 각각의 시클릭 기는 F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4 알킬, C1-2 플루오로알킬, C1-3 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, 및 -NRcRc로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 치환기로 치환되고;
    R4c는 C1-4 알킬 또는 C3-6 시클로알킬이고, 각각은 F, Cl, -OH, C1-2 알콕시, C1-2 플루오로알콕시, 및 -CN으로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 4개의 치환기로 치환되고;
    각각의 R5는 독립적으로 -CN, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C1-5 알킬, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-3 알케닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C2-3 알키닐, 0 내지 4개의 Rg로 치환된 C3-4 시클로알킬, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 페닐, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 옥사디아졸릴, 0 내지 3개의 Rg로 치환된 피리디닐, -(CH2)1-2(0 내지 4개의 Rg로 치환된 4- 내지 10-원 헤테로시클릴), -(CH2)1-2NRcC(O)(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcC(O)O(C1-4 알킬), -(CH2)1-2NRcS(O)2(C1-4 알킬), -C(O)(C1-4 알킬), -C(O)OH, -C(O)O(C1-4 알킬), -C(O)O(C3-4 시클로알킬), -C(O)NRaRa 또는 -C(O)NRa(C3-4 시클로알킬)이고;
    각각의 Rx는 독립적으로 H 또는 -CH3이고;
    m은 1, 2, 또는 3인
    방법.
  27. 제26항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 하기 구조를 갖는 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법:
    Figure pct00089

    R1은 -CN이고;
    R2는 -CH3이고;
    R5a는 -CH3 또는 -CH2CH3이고;
    R5c는 -CH3, -CH2CH3, 또는 -CH2CH2CH3이다.
  28. 제25항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 하기 구조를 갖는 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
    Figure pct00090

    Figure pct00091
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 고형 종양 또는 혈액 (액상) 종양인 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 본원에 기재된 암의 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 1종 이상의 다른 암 치료를 투여하는 것을 포함하는 방법.
  32. 제31항에 있어서, 1종 이상의 다른 암 치료가 방사선, 수술, 화학요법 또는 생물학적 약물의 투여를 포함하는 것인 방법.
  33. 제31항에 있어서, 1종 이상의 다른 암 치료가 생물학적 약물의 투여이고, 생물학적 약물이 면역계를 자극하는 약물인 방법.
  34. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제, PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제를 사용한 치료 동안 또 다른 암 치료를 투여하는 것을 포함하지 않는 방법.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제, PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제의 투여 전에 PD1/PD-L1 축의 길항제 또는 CTLA4의 길항제로 치료받은 적이 없는 것인 방법.
  36. 제35항에 있어서, 대상체에게 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제, PD1/PD-L1 축의 길항제 및 CTLA4의 길항제를 투여하는 것을 포함하는 방법.
  37. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 체크포인트 억제제의 길항제, 예컨대 PD1/PD-L1 축의 길항제 및/또는 CTLA4의 길항제를 사용한 치료에 대해 내성 또는 불응성인 방법.
  38. 제37항에 있어서, 대상체에게 DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제, PD1/PD-L1 축의 길항제 및 CTLA4의 길항제를 투여하는 것을 포함하는 방법.
  39. 제21항 또는 제25항에 있어서, 대상체에게 PD1/PD-L1 축의 길항제 및 CTLA4의 길항제를 투여하는 것을 포함하는 방법.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 PD1/PD-L1 축의 길항제 및 CTLA4의 길항제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 PD1/PD-L1 축의 길항제가 본원에 기재된 PD1/PD-L1 또는 CTLA4 길항제 또는 그의 변이체 또는 유도체인 방법.
  41. 제40항에 있어서, PD1/PD-L1 축의 길항제가 니볼루맙 또는 그의 변이체이고, CTLA4의 길항제가 이필리무맙 또는 그의 변이체, 예를 들어 이필리무맙에 비해 감소된 독성을 갖는 변이체인 방법.
  42. 제1항 내지 제3항 및 제6항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, DGKα 및/또는 DGKζ의 억제제가 DGKα 및 DGKζ의 억제제인 방법.
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