DE3650501T2

DE3650501T2 - Hyaluronsäureester und ihre Salze.

Info

Publication number: DE3650501T2
Application number: DE3650501T
Authority: DE
Inventors: Valle Francesco Della; Aurelio Romeo
Original assignee: Fidia SpA
Current assignee: Fidia Farmaceutici SpA
Priority date: 1985-07-08
Filing date: 1986-07-07
Publication date: 1996-11-21
Anticipated expiration: 2006-07-08
Also published as: PH25189A; JPS6264802A; AU5983686A; FI892711A0; EP0696598A1; PT82941A; IL79362A0; FI892710A; EP0216453B1; FI892710A0; HU201966B; FI912618A0; AU591501B2; FI901341A0; NO862734L; US4851521A; NO910295L; HUT42512A; PT82941B; CA1341276C

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Polysaccharidester und insbesondere Hyaluronsäureester und deren Verwendung in der Pharmazie und Kosmetik und auf dem Gebiet biologisch abbaubarer Kunststoffe. Die Erfindung schließt deshalb neue Medikamente, kosmetische, medizinische und chirurgische Artikel ein.
Mit dem Begriff "Hyaluronsäure" (nachstehend auch mit "HY" bezeichnet) wird in der Literatur ein saures Polysaccharid unterschiedlichen Molekulargewichts bezeichnet, welches aus D-Glucuronsäure- und N-Acetyl-D-glucosaminresten aufgebaut ist, die in der Natur in Zelloberfiächen, in den extrazellulären Grundstoffen der Bindegewebe von Wirbeltieren, der Synovialflüssigkeit von Gelenken, in der Glaskörperflüssigkeit des Auges, im Gewebe der menschlichen Nabelschnur und in Hahnenkämmen vorkommen.
Hyaluronsäure spielt im biologischen Organismus eine wichtige Rolle, erstens als mechanische Stütze der Zellen vieler Gewebe, wie der Haut, der Sehnen, der Muskeln und des Knorpels und ist deshalb der Hauptbestandteil der intrazellulären Matrix. Hyaluronsäure hat in den biologischen Prozessen aber noch andere Funktionen, wie die Wasseranlagerung der Gewebe, Schmierung, Zellmigration, Zellfunktion und -differenzierung (siehe zum Beispiel A. Balazs et al., Cosmetics & Toiletries 5 (1984), 8-17). Hyaluronsäure kann aus den vorstehend erwähnten natürlichen Geweben, wie Hahnenkämmen, oder auch aus bestimmten Bakterien extrahiert werden. Hyaluronsäure kann heute auch durch mikrobiologische Verfahren hergestellt werden. Das Molekulargewicht der durch Extraktion gewonnenen vollständigen Hyaluronsäure liegt im Bereich von 8-13 Millionen. Die Molekülkette des Polysaccharids kann jedoch unter Einwirkung verschiedener physikalischer und chemischer Faktoren, wie Einwirkung von Strahlung, hydrolysierender, oxidierender oder enzymatischer Wirkstoffe, sehr leicht abgebaut werden. Aus diesem Grund werden mit den herkömmlichen Reinigungsverfahren für die ursprünglichen Extrakte oft abgebaute Fraktionen mit einem niedrigeren Molekulargewicht erhalten (siehe Balazs et al., vorstehend zitiert). Hyaluronsäure, ihre Molekulfraktionen und die dazugehörigen Salze wurden als Medikamente verwendet und auch ihre Verwendung in Kosmetika wurde vorgeschlagen (siehe zum Beispiel den vorstehend erwähnten Artikel von Balazs et al. und das Französische Patent Nr.2478468).
Als Heilmittel wurden Hyaluronsäure und ihre Salze insbesondere bei der Behandlung von Gelenkerkrankungen, wie in der Veterinärmedizin zur Heilung von Arthritis bei Pferden [Acta Vet. Scand 167 (1976), 379] verwendet. In der Augenchirurgie dienten Hyaluronsäure, ihre Molekülfraktionen und ihre Salze als Ersatzstoff und Substitutionsheilmittel für natürliche Gewebe und Organe (siehe zum Beispiel Balazs et al., Modern Problems in Ophthalmologie 10 (1970), 3- E. B. Strieff, S. Karger (Hrsg.), Basel; Viscosurgery and the Use of Sodium Hyaluronat During Intraocular Lens Implantation, eine zum Internationalen Kongreß und dem Ersten Filmfestival der Intraocularen Implantation, Cannes, 1979 vorgestellte Arbeit; U.S. Patent Nr.4 328 803 mit einer Zusammenfassung der Literatur über die Verwendung von HY in der Augenheilkunde; und U.S. Patent Nr. 4 141 973).
In der Europäischen Patentveröffentlichung Nr.0138572 wird eine Molekülfraktion der Hyaluronsäure beschrieben, die, zum Beispiel als Natriumsalz, für intraoculare und intraarticulare Injektionen verwendet werden kann und welche als Ersatz für die Flüssigkeiten im Augeninneren beziehungsweise für die Behandlung von Gelenkerkrankungen geeignet ist.
Hyaluronsäure kann auch als Zusatzstoff für viele verschiedene in medizinischen und chirurgischen Artikeln genutzte Polymerwerkstoffe, wie Polyurethane, Polyester, Polyolefine, Polyamide, Polysiloxane, Vinyl- und Acrylpolymere und Kohlefasern, verwendet werden, wodurch diese Materialien biokompatibel gemacht werden In diesem Fall erfolgt der Zusatz der HY oder eines ihrer Salze zum Beispiel durch Überziehen der Oberfläche dieser Materialien, durch Dispersion in derselben oder durch beide Verfahren. Diese Materialien können zur Herstellung verschiedener hygienischer und medizinischer Artikel, wie Herzklappen, intraoculare Linsen, Gefäßklemmen, Schrittmacher und dergleichen verwendet werden (siehe U.S. Patent Nr. 4 500 676).
Obwohl der Begriff "Hyaluronsäure" gewöhnlich nicht ordnungsgemäß verwendet wird, das bedeutet, wie aus dem vorstehenden ersichtlich ist, in der Bedeutung der vollständigen Polysaccharidfolge mit wechselnden D-Glucuronsäure- und N-Acetyl-D- Glucosaminresten unterschiedlichen Molekulargewichts oder auch nur in der Bedeutung abgebauter Fraktionen derselben, und obwohl die Pluralform "Hyaluronsäuren" passender zu sein scheint, soll in der Diskussion hier weiterhin die Singularforin zur Bezeichnung der Hyaluronsäure in ihren verschiedenen Formen, einschließlich der Molekulfraktionen, verwendet werden und auch die Abkurzung "HY" wird oft zur Beschreibung dieses Sammelbegriffes verwendet.
Die Hyaluronsäureester betreffend, wird in der Literatur der Methylester einer hochmolekularen Hyaluronsäure beschrieben, der durch Extraktion menschlicher Nabelschnuren erhalten wird [Jeanloz et al., J. Biol. Chem. 186 (1950), 495-511 und Jager et al., J. Bacteriology (1979), 1065-1067]. Dieser Ester wurde durch Behandlung freier Hyaloronsäure mit Diazomethan in Etherlösung erhalten und es erwies sich, daß im wesentlichen alle Carboxylgruppen verestert waren. Ferner wurden auch Methylester von Oligomeren der HY mit etwa 5 bis 15 Disaccharideinheiten beschrieben [siehe Biochem. J. 167 (1977), 711- 716]. Es wurde auch ein Hyaluronsäuremethylester beschrieben, der mit Methanol zu einem Teil der alkoholischen Hydroxylgruppen verethert war. [Jeanloz et al., J. Biol. Chem. 194 (1952), 141-150 und Jeanloz et al., Helvetica Chimica Acta, 35 (1952), 262-271]. Es wurde von keiner biologischen Wirkung und deshalb auch keiner pharmazeutischen Verwendung dieser Ester berichtet.
Abstract Nr. 92658Y der Chemical Abstracts 80 (1974) offenbart Hyaluronsäuremethylester mit einem Veresterungsgrad von 70 % und 80 %. Der Abstract betrifft Enzymversuche und offenbart keinerlei pharmazeutische oder biologische Verwendung dieser Ester.
EP-A-0044228 offenbart die Herstellung von Estern des Heparins und dessen Alkalisalzen, was insbesondere bei der Herstellung von Medikamenten Verwendung findet.

GENAUE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Gemäß einem Aspekt der vorliegenden Erfindung wird eine vollständig oder partiell mit einem aliphatischen oder araliphatischen Alkohol veresterte Hyaluronsäure oder ein Salz eines solchen Partialesters mit einer anorganischen oder organischen Base, ausgenommen die Hyaluronsäuremethylester, bereitgestellt. Solche Ester weisen interessante und edle bioplastische und pharmazeutische Eigenschaften auf und finden in unzähligen Bereichen Anwendung, einschließlich der Kosmetik, der Chirurgie und der Medizin. Im Falle der Hyaluronsäure, wo die neuen Produkte qualitativ die gleichen oder ähnliche physikalischchemische, pharmakologische und therapeutische Eigenschaften aufweisen, sind sie beträchtlich beständiger, besonders was die Einwirkung natürlicher, für den Abbau des Polysaccharidmoleküls im Organismus verantwortlicher Enzyme, besonders z.B. Hyaluronidase, betrifft, und bewahren die vorstehend erwähnten Eigenschaften deshalb über sehr lange Zeit.
Eine erste Gruppe von erfindungsgemäßen Estern, die sowohl in der Therapie als auch in den anderen vorstehend erwähnten Bereichen von Nutzen sind, umfaßt deshalb solche, bei denen die Qualitäten der Hyaluronsäure selbst ausschlaggebend sind und ausgenutzt werden können. Diese Ester stammen von den Alkoholen der vorstehend genannten Reihen ab, welche selbst keine feststellbare pharmakologische Wirksamkeit aufweisen, wie zum Beispiel gesättigte aliphatische Alkohole.
Bei den vorstehend genannten Estern, bei denen ein Teil der Carboxylgruppen frei vorliegt, können diese durch Metalle oder organische Basen, zum Beispiel durch Alkalioder Erdalkalimetalle oder Ammoniak oder stickstoffhaltige organische Basen in Salze überführt werden.
Die meisten Hyaluronsäureester weisen im Gegensatz zur HY selbst eine bestimmte Löslichkeit in organischen Lösungsmitteln auf Diese Löslichkeit hängt vom prozentualen Anteil veresterter Carboxylgruppen und von der Art der an die Carboxylgruppen gebundenen Alkylgruppen ab. Eine HY-Verbindung, deren Carboxylgruppen vollständig verestert sind, ist bei Raumtemperatur daher zum Beispiel in Dimethylsulfoxid gut löslich (Der Benzylester der HY löst sich in DMSO zu 200 mg/ml). Die meisten Vollester der HY sind im Gegensatz zur HY und besonders ihrer Salze auch in Wasser schlecht löslich.
Das zuvor erwähnte Löslichkeitsverhalten, in Verbindung mit besonderen und bemerkenswerten viskoelastischen Eigenschaften, macht es möglich, die Hyaluronsäureester zur Herstellung hygienischer und medizinischer Präparate zu verwenden, die in Kochsalzlösung unlöslich sind und eine besondere Form haben sollen. Diese Materialien werden erhalten, indem eine Lösung eines Hyaluronsäureesters in einem organischen Lösungsmittel hergestellt wird, die hochviskose Lösung in die Form des gewünschten Artikels gebracht wird, und das organische Lösungsmittel mit einem anderen Lösungsmittel, welches mit ersterem mischbar ist, aber in welchem der Hyaluronsäureester unlöslich ist, extrahiert wird.
Die erfindungsgemäßen Hyaluronsäureester sind alle neu, ausgenommen der vorstehend erwähnte, aus menschlichen Nabeischnuren extrahierte Hyaluronsäuremethylester und die Methylester der vorstehend erwähnten Hyaluronsäureoligomeren. Neu sind deshalb auch die Salze der partiell mit Methanol veresterten Hyaluronsäure mit Metallen oder organischen Basen. Die biologische und pharmakologische Wirksamkeit der vorstehend erwähnten und in der Literatur beschriebenen Methylester ist nicht bekannt, ebenso ihre ausgezeichneten Qualitäten als Biokunststoff und ihre hohe Stabilität. Nicht bekannt war deshalb auch die Verwendung dieser Ester bei der Herstellung von Medikamenten, Kosmetika, hygienischen und chirurgischen Artikeln und anderer neuer Produkte, von denen vorstehend die Rede war und die ein Teil der vorliegenden Erfindung sind. Insbesondere deshalb sind die Arzneimittel, die die allseits bekannten Methylester der HY enthaltenden, ebenfalls neu.
Schließlich schließt die vorliegende Erfindung auch die Verwendung der vorstehend erwähnten neuen Produkte und des vorstehend erwähnten bekannten Methylesters als Trägersubstanzen für pharmazeutische Wirkstoffe und Medikamente ein, die die vorstehend erwähnten veresterten Hyaluronsäurederivate und eine oder mehrere dieser Wirkstoffe einschließen. In diesen Medikamenten ist der Hyaluronsäureester oder eines seiner Salze bevorzugt von pharmakologisch unwirksamen Alkoholen abgeleitet, kann aber auch ein Ester sein, der von einem pharmakologisch wirksamen Alkohol abgeleitet ist und selbst pharmakologisch wirksam ist. Die Wirkung der durch den Hyaluronsäureester oder eines seiner Salze vertretenen Komponente als Trägersubstanz, muß sich in einer zufriedenstellenderen Assimilation des Wirkstoffes unter Bedingungen, welche mit der biologischen Umgebung des zu behandelnden Organes besonders vereinbar sind, bemerkbar machen. Das trifft besonders für das Gebiet der Ophthalmologie zu. Von diesen Medikamenten, die einen Hyaluronsäureester als Trägersubstanz enthalten, sind die ffir die örtliche Anwendung von besonderer Bedeutung.
Einen zweiten Aspekt der vorliegenden Erfindung stellen die Arzneimittel dar, die als Wirkstoff wie vorstehend beschrieben einen oder mehrere Hyaluronsäureester oder eines ihrer Salze, eingeschlossen der Hyaluronsäuremethylvollester enthalten, und die Verwendung dieser Ester für therapeutische Zwecke.
Ein dritter Aspekt der vorliegenden Erfindung sind Medikamente, umfassend
1) einen pharmakologischen Wirkstoff oder eine Kombination pharmakologischer Wirkstoffe und
2) eine Trägersubstanz, bestehend aus einer vollständig oder partiell mit einem aliphatischen oder araliphatischen Alkohol veresterten Hyaluronsäure oder aus dem Salz solcher Partialester mit einer anorganischen oder organischen Base, wenn gewünscht in Verbindung mit Hyaluronsäure oder einem ihrer Salze mit anorganischen oder organischen Basen,
und die Verwendung solcher Medikamente für therapeutische Zwecke.
Ein vierter Aspekt der vorliegenden Erfindung sind die vorstehend beschriebene Verwendung der Ester und deren Salze in Kosmetika und kosmetische Artikel, die solche Ester enthalten.
Ein fünfter Aspekt der vorliegenden Erfindung sind die vorstehend beschriebene Verwendung der Ester und deren Salze zur Herstellung hygienischer und chirurgischer Kunststoffartikel und diese Artikel selbst.
Eine weitere Verwendung der erfindungsgemäßen neuen und bekannten Ester betrifft die Herstellung von hygienischen, kosmetischen und chirurgischen Artikeln, in denen die Hyaluronsäureester als Trägersubstanz für die diesem Zweck dienenden Grundstoffe, wie die verschiedenen vorstehend genannten Polymere, wirken.
Eine weitere Aufgabe der Erfindung sind schließlich die Verfahren zur Herstellung der Hyaluronsäureester und der Salze der Partialester.
Die zur Veresterung der Carboxylgruppen der erfindungsgemäßen Hyaluronsäure verwendeten aliphatischen Alkohole sind zum Beispiel solche mit maximal 34 Kohlenstoffatomen, die gesättigt oder ungesättigt sein können und auch durch andere freie funktionelle oder fünktionell modifizierte Reste substituiert sein können, wie Amin-, Hydroxyl-, Aldehyd-, Keton-, Mercaptan- oder Carboxylgruppen, oder Reste, die von diesen abgeleitet sind, wie Kohlenwasserstoff- oder Dikohlenwasserstoffaminreste (nachstehend werden mit dem Begriff "Kohlenwasserstoffrest" nicht nur einwertige Kohlenwasserstoffreste vom Typ CnH2n+1 bezeichnet, sondern auch zweiwertige oder dreiwertige Reste, wie "Alkylene" CnH2n oder "Alkylidene" CnH2n), Ether- oder Estergruppen, Acetal- oder Ketalgruppen, Thioether- oder Thioestergruppen und veresterte Carboxyl- oder Carbamidgruppen und durch ein oder mehrere Kohlenwasserstoffreste, durch Nitrilgruppen oder Halogenatome substituiertes Carbamid.
Von den vorstehend erwähnten Gruppen, die Kohlenwasserstoffreste enthalten, sind niederaliphatische Reste, wie Alkylreste mit maximal 6 Kohlenstoffatomen, bevorzugt. Die Kohlenstoffkette dieser Alkohole kann auch durch Heteroatome, wie Sauerstoff-, Stickstoffund Schwefelatome, unterbrochen sein. Bevorzugt sind Alkohole, die mit einer oder zwei der fünktionellen Gruppen substituiert sind.
Die Alkohole der vorstehend genannten Gruppe, die im Rahmen der vorliegenden Erfindung bevorzugt verwendet werden sollen, sind Alkohole mit maximal 12 und im besonderen 6 Kohlenstoffatomen, bei denen die Kohlenwasserstoffreste in den vorstehend erwähnten Amin-, Ether-, Ester-, Thioether-, Thioester-, Acetal- und Ketalgruppen Alkylreste mit maximal 4 Kohlenstoffatomen sind und auch die Kohlenwasserstoffreste in den veresterten Carboxylgruppen oder substituierten Carbamidgruppen Alkylreste mit der gleichen Anzahl von Kohlenstoffatomen sind und bei denen die Amin- oder Carbamidgruppen Alkylenamin- oder Alkylencarbamidreste mit maximal 8 Kohlenstoffatomen sein können. Von diesen Alkoholen sollten speziell die gesättigten und nicht substituierten, wie Methanol, Ethanol, Propanol und Isopropanol, n-Butanol, Isobutanol, t-Butanol, Amylalkohol, Pentanol, Hexanol, Octanol, Nonanol und Dodecanol und vor allem die geradkettigen, wie n-Octanol und n-Dodecanol erwähnt werden. Von den substituierten Alkoholen dieser Gruppe sollten die zweiwertigen Alkohole, wie Ethylenglycol, Propylenglycol und Butylenglycol, die dreiwertigen Alkohole, wie Glycerin, die Hydroxyaldehyde, wie Tartronaldehyd, die Hydroxycarbonsäuren, wie Milchsäuren, zum Beispiel Glycolsäure, Maleinsäure, Weinsäure, Citronensäure, die Aminoalkohole, wie n-Aminoethanol, Aminopropanol, n-Arninobutanol und deren Dimethylamino- und Diethylaminoderivate, Cholin, Pyrrolidinylethanol, Piperidinylethanol, Piperazinylethanol und die entsprechenden n-Propanol- oder n-Butanolderivate, Monothioethylenglycol oder dessen Alkylderivate, wie das Ethylenderivat der Mercaptofünktion, aufgezählt werden.
Von den gesättigten höheraliphatischen Alkoholen, sollten folgende erwähnt werden: Cetylalkohol, Myricylalkohol, wobei für den Zweck der vorliegenden Erfindung jedoch die höheren ungesättigten Alkohole mit ein oder zwei Doppelbindungen besonders bedeutend sind, besonders solche die in vielen etherischen Ölen enthalten sind und mit Terpen chemisch verwandt sind, wie Citronellol, Geraniol, Nerol, Nerolidol, Linabol, Farnesol und Phytol. Von den ungesättigten Niederalkoholen müssen Allylalkohol und Propargylalkohol in Betracht gezogen werden. Von den araliphatischen Alkoholen sollte denen besondere Aufmerksamkeit gewidmet werden, die nur einen Benzolrest auiweisen und deren aliphatische Kette maximal 4 Kohlenstoffatome umfaßt, wobei der Benzolrest durch 1 bis 3 Methyl- oder Hydroxylgruppen oder Halogenatome, besonders Chlor, Brom und Iod, und die aliphatische Kette durch ein oder mehrere Funktionen, ausgewählt aus der Gruppe, die freie und mono- oder dimethylierte Aminogruppen, Pyrrolidin- oder Piperidingruppen enthält, substituiert sein kann. Von diesen Alkoholen sollte Benzylalkohol und Phenetylalkohol besondere Aufmerksamkeit gewidmet werden.
In manchen Fällen können Hyaluronsäureester von Interesse sein, bei denen die Estergruppen von zwei oder mehreren therapeutisch wirksamen Hydroxyverbindungen abgeleitet sind, wobei von Natur aus alle möglichen Arten erhalten werden können. Von besonderem Interesse sind die Stoffe, bei denen zwei unterschiedliche Arten von Estergruppen, die von hydroxylischen Arzneimitteln abgeleitet sind, vorhanden sind und bei denen die verbleibenden Carboxylgruppen frei, als Metallsalze oder Salze einer oder verschiedener, nachstehend aufgelisteter Basen vorliegen, wobei die Basen selbst auch therapeutisch wirksam sein können, zum Beispiel mit derselben oder einer ähnlichen Wirkung wie die zu veresternde Komponente. Insbesondere ist es möglich, Hyaluronsäureester zu erhalten, die von einem Vitamin, einem Alkaloid oder einem Antibiotikum, wie einem der aufgelisteten, abgeleitet sind.
Der Veresterungsgrad der Hyaluronsäure mit den vorstehend erwähnten Alkoholen hängt in erster Linie von den speziellen Eigenschaften ab, die in den verschiedenen Anwendungsbereichen erhalten werden sollen, zum Beispiel, was bestimmte Gewebe, wie die Haut, betrifft, eine größere oder geringere Lipophilie oder Hydrophilie.
Normalerweise verstärkt ein hoher Veresterungsgrad bis hin zur vollständigen Veresterung der Hyaluronsäure deren lipophilen Charakter und verringert deshalb deren Wasserlöslichkeit. Für eine therapeutische Anwendung der neuen Ester dieser Erfindung ist es zum Beispiel besonders wichtig, den Veresterungsgrad zu regeln, um trotz eines im Vergleich zur Hyaluronsäure oder deren Natriumsalz guten und höheren Lipophiliegrades eine ausreichende Wasserlöslichkeit zu sichern, zum Beispiel eine Löslichkeit von 10 mg/ml. Natürlich muß bei der gleichen veresternden Komponente der Einfluß der Molekulgröße, der die Wasserlöslichkeit gewöhnlich in entgegengesetzt proportionaler Weise beeinflußt, bedacht werden. Wie bereits gesagt wurde, kann die Veresterung der Carboxylgruppen der Hyaluronsäure verschiedene Rollen spielen, was in den verschiedenen Bereichen nützlich sein kann, zum Beispiel in der Medizin, die die Ester als therapeutische Mittel verwendet oder in der Chirurgie, die sie als Kunststoffartikel verwendet.
Ein besonders interessanter Aspekt der vorliegenden Erfindung ist die Möglichkeit, haltbarere Arzneimittel herzustellen, als die zur Zeit erhältlichen Einerseits können deshalb Hyaluronsäureester mit therapeutisch unwirksamen Alkoholen hergestellt werden, die in typischen Indikationen der Hyaluronsäure selbst, wie für intraartikuläre Injektionen, verwendet werden, wobei der Ester als Gleitmittel wirkt. Aufgrund der im Vergleich zur freien Hyaluronsäure besseren Beständigkeit der Ester gegenüber der Hyaluronidase, kann eine recht beträchtlich verlängerte Wirkung erzielt werden. Andererseits ist es möglich mit den vorstehend erwähnten Hyaluronsäureestern mit therapeutisch wirksamen Alkoholen, die auch als Salze therapeutisch wirksamer Basen vorliegen können, Arzneimittel mit "verzögerter" Wirkung zu erhalten. Die Freisetzung des wirksamen Alkohols durch Esterase und die der salzbildenden Gruppen durch Hydrolyse ist sehr langsam.
In der Kosmetik werden bevorzugt Voll- oder Partialester der Hyaluronsäure mit pharmakologisch inerten Alkoholen verwendet, wie gesättigte oder ungesättigte aliphatische Alkohole, zum Beispiel unsubstituierte unverzweigte und verzweigte Alkohole dieses Typs mit zum Beispiel 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, wie die vorstehend speziell genannten. Besonders interessant sind die ungesättigten Alkohole, z. B. mit einer oder mehreren Doppelbindungen, wie Vinyl- oder Allylalkohole und deren kondensierte Derivate, wie Polyvinylalkohole, oder mehrwertige Alkohole, wie Glycerin. In Abhängigkeit von dem verfolgten Zweck können in diesem Fall auch Mischester verwendet werden.
Die bevorzugt zur Herstellung von hygienischen und chirurgischen Artikeln zu verwendenden Alkohole, sind im wesentlichen die gleichen, wie sie vorstehend für den kosmetischen Anwendungsbereich aufgeführt wurden. In Abhängigkeit vom beabsichtigten Verwendungszweck des Produktes, das bedeutet hauptsächlich hinsichtlich der Verwendung in den verschiedenen vorstehend erwähnten Anwendungsbereichen, kann bei den erfindungsgemäßen Partialestern der prozentuale Anteil an veresterten Gruppen stark variieren.
Von besonderem Interesse sind jedoch solche Partialester, bei denen mindestens 5 % und höchstens 90 % aller Carboxylgruppen der HY verestert sind, und im besonderen solche, bei denen zwischen 50 und 80 % verestert sind.
In den gemischten Partialestern kann das Verhältnis zwischen den unterschiedlichen Arten von Estergruppen natürlich auch variieren. Bei zwei Arten solcher Gruppen variiert das Verhältnis zum Beispiel bevorzugt zwischen 0.1:1 und 1:0.1, wobei das gleiche für die Vollester zutrifft. Für die Ester, die für therapeutische Zwecke verwendet werden sollen, variiert das Verhältnis bevorzugt zwischen 0.5:1 und 1:0.5. Diese Verhältnisse gelten bevorzugt auch für Vollester und bei den Partialester sind sie zu bevorzugen mit Bezug auf die vorstehend angegebenen Prozentzahlen, die die einschließliche Zahl der veresterten Gruppen betreffen.
Bei den Partialestem der Erfindung können die nichtveresterten Carboxylgruppen frei oder als Salz vorliegen. Die Basen zur Bildung dieser Salze werden danach ausgewählt, wofür das Produkt bestimmt ist. Es können anorganische Salze hergestellt werden, die von Alkalimetallen, wie Kalium und insbesondere Natrium und Ammonium, von Erdalkalimetallen, wie Calcium oder Magnesium, oder von Aluminium abgeleitet sind.
Besonders interessant sind die Salze organischer Basen, insbesondere stickstoffhaltiger Basen, also aliphatischer, arylaliphatischer, cycloaliphatischer oder heterocyclischer Amine.
Diese Ammoniumsalze können von therapeutisch verträglichen, aber unwirksamen Aminen oder von Aminen mit therapeutischer Wirkung abstammen. Bei den ersteren sollten vor allem aliphatische Amine, wie Mono-, Di- und Trialkylamine, deren Alkylreste, maximal 18 Kohlenstoffatome aufweisen, oder Alkylarylamine mit der gleichen Anzahl Kohlenstoffatome im aliphatischen Teil, bei denen "-aryl-" für eine gegebenenfalls mit 1 oder 3 Alkylgruppen, Halogenatome oder Hydroxylgruppen substituierte Benzolgruppe steht, in Betracht gezogen werden. Die biologisch unwirksamen Basen für die Salzbildung können auch cyclische sein, wie monocyclische Alkylenamine mit Ringen aus 4 bis 6 Kohlenstoffatomen, wobei der Ring durch Heteroatome, ausgewählt aus der Gruppe die aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel besteht, unterbrochen sein kann, wie Piperidin oder Morpholin, die zum Beispiel mit Amin- oder Hydroxylfünktionen substituiert sein können, wie Aminoethanol, Ethylendiamin, Ephedrin oder Cholin.
Es können auch quartäre Anrmoniumsalze der Partialester hergestellt werden, zum Beispiel Tetraalkylammoniumsalze mit der vorstehend angegebenen Anzahl von Kohlenstoffatomen, wobei Salze, bei denen der vierte Alkylrest zwischen 1 und 4 Kohlenstoffatomen aufweist, wie zum Beispiel eine Methylgruppe, bevorzugt sind.
Die biologisch wirksamen Amine, deren therapeutische Wirksamkeit genutzt werden kann, schließen alle stickstoffhaltigen und basischen Arzneimittel ein, wie die der folgenden Gruppe:
Alkaloide, Peptide, Phenothiazine, Benzodiazepine, Thioxanthene, Hormone, Vitamine, krampflösende Mittel, Antipsychotika, Antiemetika, Anästhetika, Hypnotika, Appetitzügler, Tranquilizer, Muskelrelaxantien, koronare Vasodilatoren, antineoplastische Mittel, Antibiotika, antibakterielle Mittel, Antivirusmittel, Antimalariamittel, Carboanhydrasehemmer, nichtsteroide entzündungshemmende Mittel, Vasokonstriktoren, cholinerge Agonisten, cholinerge Antagonisten, adrenerge Agonisten, adrenerge Antagonisten, Antinarkotika.
Als Beispiele können alle derartigen Arzneimittel mit basischen stickstoffhaltigen Gruppen, die in der Erfindung aufgeführt sind und die Verwendung der Ester betreffen, genannt werden.
Ein besonderer Aspekt der vorliegenden Erfindung ist, daß die neuen Hyaluronsäureester und deren Salze ausgezeichnete Trägersubstanzen für therapeutische Wirkstoffe sind und als solche verwendet werden können. Zu diesem Zweck können die Vollester oder die Partialester verwendet werden, bei denen die verbleibenden Carboxylgruppen verseift sind, zum Beispiel mit einer der vorstehend erwahnten therapeutisch verträglichen aber biologisch unwirksamen Substanzen, vor allem mit Alkalimetallen, zum Beispiel Natrium. Dies sind die vorstehend erwähnten Medikamente, die aus einer Kombination aus zwei Komponenten bestehen:
Komponente (1) - ein pharmazeutischer Wirkstoff oder eine Kombination zweier oder mehrerer Wirkstoffe; und
Komponente (2) - eine Trägersubstanz, die einen Partial- oder Vollester der Hyaluronsäure mit einem Alkohol oder die Salze solcher Partialester mit einer organischen oder anorganischen Base umfaßt, wobei gegebenenfalls Hyaluronsäure oder ein Salz der HY mit einer anorganischen oder organischen Base zugegeben werden kann.
Die in diesen Medikamenten verwendbaren Hyaluronsäureester sind vor allem solche, bei denen der verestemde Alkohol selbst nicht pharmakologisch wirksam ist, zum Beispiel ein einfacher aliphatischer Alkohol wie vorstehend beschrieben. Medikamente, bei denen der Ester auch pharmakologisch wirksam ist, zum Beispiel ein einfacher aliphatischer Alkohol, wie vorstehend beschrieben, sind von diesem Aspekt der Erfindung nicht ausgeschlossen, wie zum Beispiel im Falle eines der vorstehend beschriebenen Ester, die von pharmakologisch wirksamen Alkoholen abgeleitet sind. Desgleichen schließt die Erfindung auch Medikamente ein, bei denen die Ester der Komponente (2) mit therapeutisch wirksamen Basen Salze bilden. Diese Basen können die gleichen pharmakologischen Wirkstoffe sein, wie die, die in die Hyaluronsäureester eingebettet sind, wobei das Gemisch in diesem Fall deshalb, wie nachstehend beschrieben, Salze eines Hyaluronsäurepartialesters mit therapeutisch wirksamen Basen enthält, gegebenenfalls in Anwesenheit eines Überschusses an wirksamer basischer Komponente (1). Das kann andererseits selbst dann der Fall sein wenn die eingebettete Substanz keine Base ist und freie Carboxylgruppen in dem Hyaluronsäureester noch mit therapeutisch wirksamen Basen Salze bilden.
Die Verwendung der Hyaluronsäureester als Trägersubstanz ermöglicht deshalb die Herstellung der vorstehend beschriebenen neuen Medikamente, einschließend 1) einen pharmakologischen Wirkstoff oder eine Kombination von zwei oder mehreren solcher Substanzen und 2) einen der vorstehend beschriebenen Hyaluronsäureester oder eines seiner Salze, wobei diese Medikamente ein weiterer Gegenstand der Erfindung sind. In solchen Medikamenten, wo die Partialester der HY verwendet werden, wird die mögliche Salzbildung der verbleibenden Carboxylgruppen bevorzugt mit therapeutisch neutralen anorganischen oder organischen Basen ausgeführt, insbesondere mit Alkalimetallen, wie Natrium, oder Arnmonium. Weist die Wirkstoffkomponente (1) oder eine entsprechende Kombination von Substanzen basische Gruppen auf, wie zum Beispiel amingruppenhaltige Antibiotika, und werden Hyaluronsäurepartialester mit verbleibenden freien Carboxylgruppen verwendet, bilden sich die entsprechenden Salze zwischen den Carboxylgruppen und diesen basischen Substanzen. Die neuen Medikamente schließen deshalb insbesondere Hyaluronsäurepartialester ein, die partiell oder vollständig als Salze pharmakologischer Wirkstoffe vorliegen und basischen Charakters sind. Wie vorstehend beschrieben, sind die kombinierten Medikamente des hier beschriebenen Typs, bei dem die Komponente (1) ein pharmakologischer Wirkstoff für die örtliche Anwendung ist, von besonderer Bedeutung. Die Verwendung der Hyaluronsäureester als eine Trägersubstanz für Medikamente, die örtlich angewendet werden sollen, ist besonders in der Ophthalmologie von Nutzen, wo die neuen Produkte mit dem Hornhautephitel besonders verträglich sein müssen und somit ausgezeichnet angenommen werden müssen, ohne irgendwelche Sensibilisierungen hervorzurufen. Werden die Medikamente in Form konzentrierter Lösungen mit viskoelastischem Verhalten oder in fester Form verabreicht, können außerdem homogene und stabile Filme erhalten werden, die vollkommen transparent sind und auf dem Hornhautephitel haften, was eine anhaltende biologische Verfügbarkeit der Medikamente sichert und sie deshalb ausgezeichnete Präparate mit einer verzögerten Wirkung darstellen.
Derartige ophthalmische Medikamente sind besonders im tierärztuchen Bereich wertvoll, angesichts dessen, daß es zur Zeit keine tierärztlichen Spezialartikel für die augenärztliche Verwendung gibt, die Chemotherapeutika enthalten. Allerdings werden gewöhnlich Präparate verwendet, die für die Verwendung beim Menschen gedacht sind, und diese garantieren nicht immer einen bestimmten Wirkungsbereich oder sie sind nicht zugelassen ffir die besonderen Bedingungen unter denen die Behandlung stattfinden muß. Dies ist zum Beispiel bei der Behandlung von infektiöser Keratoconjunctivitis, epidemischer Konjuktivitis oder IBK, einer Infektion, von der gewöhnlich Rinder, Schafe und Ziegen befallen werden, der Fall. Für diese drei Arten gibt es wahrscheinlich bestimmte etiologische Faktoren und insbesondere beim Rind scheint der hauptsächliche Mikroorganismus, um den es sich handelt, Moraxella bovis zu sein (obwohl andere Erreger viralen Ursprungs nicht ausgeschlossen werden sollten, wie zum Beispiel das Rinotracheitis-Virus, beim Schaf Mikoplasma, Rickettsiae und Clamidiae und bei der Ziegen Rickettsiae). Die Krankheit selbst äußert sich in akuter Form und neigt dazu, sich schnell auszubreiten. Die Symptome in den Anfangsstadien sind Blepharospasmus und übermäßige Tränensekretion, gefolgt von Eiterexudat, Bindehautentzündung und Hornhautentzündung, oftmals von Fieber, Appetitlosigkeit und Rückgang der Milchproduktion begleitet. Besonders ernst sind Hornhautverletzungen, die in den Endstadien sogar die Perforation der Hornhaut selbst verursachen können. Das klinische Fortschreiten der Krankheit variiert von einigen Tagen bis einigen Wochen.
Bei der Behandlung kommt eine riesige Auswahl an Chemotherapeutika zur Anwendung, die sowohl örtlich (oftmals in Verbindung mit steroiden entzündungshemmenden Mitteln) als auch systemisch verabreicht werden und Tetracycline, wie Oxytetracyclin, Penicilline, wie Cloxacillin und Benzylpenicillin, Sulfonamide, Polymyxin B (in Verbindung mit Miconazol und Prednisolon), Chloramphenicol, Tylosin und Chlormycetin einschließen. Die örtliche Behandlung der Erkrankung ist trotz ihrer scheinbaren Einfachheit noch ein ungelöstes Problem, da es mit den bisher verwendeten augenärztlichen Präparaten aus dem einen oder anderen Grund nicht möglich war, therapeutisch wirksame Konzentrationen der Antibiotika oder Sulfamide in der Tränensekretion zu erhalten. Das ist im Falle der Lösungen ganz verständlich, in Anbetracht der hauptsächlich geneigten Kopfposition bei diesen Tieren, es trifft aber auch für halbfeste Medikamente zu, da die gewöhnlich verwendeten Excipienten nicht die notwendigen Haftungsqualitäten auf der Hornhautoberfiäche besitzen, da sie gewöhnlich keine genügend hohe Wirkstoftkonzentration aufweisen und keine perfekte Verteilung derselben erreichen können (das heißt, es liegt ein Verteilungsgradient vor). Diese Mängel des herkömmiichen Collyriums bei der Anwendung in der Augenheilkunde sind zum Beispiel von Slatter et al., Austr. Vet. J. 59, 3 (1982), 69-72 beschrieben worden.
Mit den Estern der vorliegenden Erfindung können diese Schwierigkeiten überwunden werden. Die Anwesenheit des Hyaluronsäureesters als eine Trägersubstanz für ophthalmische Arzneimittel ermöglicht es tatsächlich, ausgezeichnete Präparate zu formulieren, die keine Konzentrationsgradienten des Wirkstoffes aufweisen und die deshalb vollkommen homogen sind, die vollkommen transparent sind und ohne Sensibilisierungseffekte ausgezeichnet auf dem Hornhautephitel haften, die ausgezeichnete Trägereigenschaften für den Wirkstoff und möglicherweise ein verzogerte Wirkung aufweisen.
Die vorstehend erwähnten Eigenschaften der neuen Medikamente können natürlich auch in anderen Bereichen als der Ophthalmologie ausgenutzt werden. Sie können in der Dermatologie und bei Erkrankungen der Schleimhäute, zum Beispiel im Mund, genutzt werden. Ferner können sie angewendet werden, um durch den Effekt der transkutanen Absorption, wie in Zäpfchen, eine systemische Wirkung zu erhalten. All diese Anwendungen sind sowohl in der Humanmedizin als auch in der Veterinärmedizin möglich. In der Humanmedizin sind die neuen Medikamente besonders geeignet für die Anwendung in der Pädiatrie. Die vorliegende Erfindung schließt deshalb insbesondere alle diese therapeutischen Anwendungen ein.
Um der Kürze Willen, soll von jetzt an, wenn der Wirkstoff der erfindungsgemäßen Komponente (1) erwähnt wird, davon ausgegangen werden, daß auch die Kombination zweier oder mehrerer Wirkstoffe eingeschlossen ist.
Die vorstehend beschriebene Komponente (1) kann vor allem nach ihrer Verwendung in den verschiedenen therapeutischen Bereichen definiert werden, angefangen von der Unterscheidung zwischen Human- und Veterinärmedizin bis zur Spezifizierung der verschiedenen Anwendungsgebiete bezüglich der zu behandelnden Organe oder Gewebe, wie, die örtliche Anwendung betreffend, Ophthalmologie, Dermatologie, Otorhinolaryngologie, Gynäkologie, Angiologie, Neurologie und alle Arten von Erkrankungen innerer Organe, die durch örtliche Anwendungen, zum Beispiel durch rektale Anwendungen, behandelt werden können.
Die Wirkung der Hyaluronsäureester als Träger kommt auch bei kombinierten Medikamenten des vorstehenden Typs, bei denen der Wirkstoff nicht nur örtlich oder durch nasale oder rektale Absorption, zum Beispiel durch Nasensprays oder Präparate zur Inhalation für die Mundhöhle oder den Rachen, wirkt, sondern auch auf oralem oder parenteralem Weg, zum Beispiel auf intramuskulärem, subkutanem oder intravenösem Wege, zum Tragen, da die Absorption des Arzneimittels am Ort der Anwendung begünstigt wird. Die neuen Medikamente können deshalb, abgesehen von den schon erwähnten Bereichen, auf allen Gebieten der Medizin angewendet werden, wie der inneren Medizin, zum Beispiel bei Erkrankungen des Herz-Kreislauf-Systems, bei Infektionen des Atmungssystems, des Verdauungssystems, des Nierensystems, bei hormonellen Erkrankungen, in der Onkologie, in der Psychiatrie usw. und können deshalb vielleicht auch von Standpunkt ihrer speziellen Wirkung aus gesehen klassifiziert werden, als Anästhetika, Analgetika, entzündungshemmende Mittel, Wundheilmittel, antimikrobielle Mittel, adrenergische Agonisten und Antagonisten, Zytostatika, Antirheumatika, Antihypertonika, diuretische Mittel, Sexualhormone, immunitätsstimulierende Mittel und Immunsuppressiva, zum Beispiel eines der Medikamente, welches die Wirkung aufweist, die bereits für die therapeutisch wirksamen Alkohole, die als erfindungsgemäße Veresterungsmittel verwendet werden oder die therapeutisch wirksamen Basen, die für die Verseifüng der freien Carboxylgruppen verwendet werden, beschrieben wurde.
Komponente (1) der vorstehend erwähnten Medikamente kann erfindungsgemäß auch eine Kombination zweier oder mehrerer Wirkstoffe sein, wie sie in vielen bekannten Medikamenten enthalten ist.
Im Bereich der Ophthalmologie, können die Indikationen zum Beispiel sein: miotische, entzündungshemmende, wundheilende und antimikrobielle Wirkungen.
Beispiele für pharmakologische Wirkstoffe, die erfindungsgemäß in ophthalmischen Medikamenten verwendet werden können, sind: basische und nichtbasische Antibiotika, wie Aminoglycoside, Makrolide, Tetracycline und Peptide, wie Gentamycin, Neomycin, Streptomycin, Dihydrostreptomycin, Kanamycin, Amikacin, Tobramycin, Spectinomycin, Erythromycin, Oleandomycin, Carbomycin, Spiramycin, Oxytetracyclin, Rolitetracyclin, Bacitracin, Polymyxin B, Gramicidin, Colistin, Chloramphenicol, Lincomycin, Vancomycin, Novobiocin, Ristocetin, Clindamycin, Amphotericin B, Gnseofülvin, Nystatin und gegebenenfalls deren Salze, wie Sulfate oder Nitrate, oder Kombinationen derselben untereinander oder mit anderen wirksamen Inhaltstoffen, wie die nachstehend erwähnten.
Andere ophthalmische Medikamente, die erfindungsgemäß vorteilhaft verwendet werden können sind: andere Antiinfektionsmittel, wie Diethylcarbamazin, Mebendazol, Sulfaminsäuren, wie Sulfacetamid, Sulfadiazin, Sulfisoxazol, Antivirusmittel und Antitumormittel, wie Iododeoxyuridin, Adeninarabinosid, Trifluorthymidin, Acyclovir, Ethyldesoxyuridin, Bromvinyldesoxyuridin, 5-Iod-5'-amino-2',5'-didesoxyuridin; steroidale entzündungshemmende Mittel, wie Dexamethason, Hydrocortison, Prednisolon, Fluormetholon, Medryson und gegebenenfalls deren Ester, zum Beispiel Phosphorsäureester; nichtsteroidale entzündungshemmende Mittel, wie Indomethacin, Oxyphenbutazon, Flurbiprofen; Wundheilmittel, wie der epidermale Wachstumsfaktor, EGF; lokale Anästhetika, wie Benoxinat, Proparacain und gegebenenfalls deren Salze; cholinergische Agonisten, wie Pilocarpin, Methcholin, Carbomylcholin, Aceclidin, Physostigmin, Neostigmin, Demecarium, und gegebenenfalls deren Salze; cholinergische Antagonisten, wie Atropin, und deren Salze; adrenergische Agonisten, wie Noradrenalin, Adrenalin, Naphazolin, Methoxamin, und gegebenenfalls deren Salze; adrenergische Antagonisten, wie Propanolol, Timolol, Pindolol, Bupranolol, Atenolol, Metopronol, Oxprenolol, Practolol, Butoxamin, Sotalol, Butathrin, Labetolol, und gegebenenfalls deren Salze.
Beispiele für die allein oder in Kombination untereinander oder mit anderen dermatologisch wirksamen Grundbestandteilen zu verwendenden Wirkstoffe sind: Heilmittel, wie Antiinfektionsmittel, Antibiotika, antimikrobielle Mittel, entzündungshemmende Mittel, Zytostatika, Zytotoxika, Antivirusmittel, Anästhetika, und Prophylaktika, wie Sonnenschutzmittel, Deodorants, Antiseptika und Desinfektionsmittel. Von den Antibiotika sind besonders wichtig: Erythromycin, Bacitracin, Gentamycin, Neomycin, Aureomycin, Gramicidin und deren Kombinationen, von den antibakteriellen Mitteln und Desinfektionsmitteln: Nitroflurzon, Mafenid, Chlorhexidin und Derivate des 8-Hydroxychinolin und gegebenenfalls deren Salze; von den entzündungshemmenden Mitteln vor allem die Corticosteroide, wie Prednisolon, Dexamethason, Flurmethazon, Clobetasol, Triamcinolonacetonid, Betamethason und deren Ester, wie Valerate, Benzoate, Dipropionate; von den Zytotoxika: Fluoruracil, Methotrexat, Pdophyllin; von den Anästhetika: Dibucain, Lidocain, Benzocain.
Diese Auflistung liefert natürlich nur einige Beispiele und es können alle anderen in der Literatur beschriebenen Mittel verwendet werden.
Als Kombination von Arzneimitteln, die in der Dermatologie verwendet werden können, sollten die verschiedenen Antibiotika erwähnt werden, wie Erythromycin, Gentamycin, Neomycin, Gramicidin, Polymyxin B untereinander, oder Kombinationen dieser Antibiotika mit entzündungshemmenden Mitteln, zum Beispiel Corticosteroide, wie zum Beispiel Hydrocortison + Neomycin, Hydrocortison + Neomycin + Polymyxin B + Gramicidin, Dexamethason + Neomycin, Fluormetholon + Neomycin, Prednisolon + Neomycin, Triamcinolon + Neomycin + Gramicidin + Nystatin, oder alle anderen in den herkömmiichen dermatologischen Präparaten verwendeten Kombinationen.
Die Kombinationen verschiedener Wirkstoffe sind natürlich nicht auf diesen Bereich beschränkt, sondern in jedem der vorstehend erwähnten Bereiche der Medizin können Kombinationen verwendet werden, die denen ähneln, die in bekannten Arzneimitteln des Fachgebietes bereits verwendet werden.
Wird wie im vorstehenden Fall eine Komponente (1) mit basischem Charakter verwendet, können die Salze, die mit einem Hyaluronsäurepartialester gebildet werden (da letzterer im Überschuß eingesetzt wird), verschiedene sein, das heißt, es können alle verbleibenden Carboxylgruppen Salze bilden oder nur ein aliquoter Teil, wodurch Ester-saure Salze oder Ester-Neutralsalze hergestellt werden. Die Zahl der sauren Gruppen, die frei gehalten werden, kann für die Herstellung von Medikamenten mit einem besonderen pH- Wert von Bedeutung sein. Umgekehrt ist es möglich, die basische Komponente (1) im Überschuß zu verwenden, in diesem Fall bilden alle in dem Hyaluronsäureester zur Verfügung stehenden Carboxylgruppen mit der Base Salze.
Gemäß einem besonderen Aspekt der Erfindung ist es möglich, bei der Herstellung von Medikamenten dieser Art, von zuvor isolierten und gegebenenfalls gereinigten Salzen auszugehen, in ihrem festen wasserfreien Zustand, als amorphe Pulver, die bei Kontakt mit dem zu behandelnden Gewebe eine wäßrige Lösung bilden, die viskos ist und elastische Eigenschaften aufweist. Diese Eigenschaften bleiben auch bei stärkerer Verdünnung erhalten und es ist deshalb möglich, anstelle der vorstehend erwähnten wasserfreien Salze, mehr oder weniger konzentrierte wäßrige Lösungen oder Kochsalzlösungen, denen gegebenenfalls andere Excipienten oder Zusatzstoffe, wie zum Beispiel andere Mineralsalze zur Regulierung des pH-Wertes und des osmotischen Druckes, zugesetzt sind, zu verwenden. Es ist natürlich möglich, die Salze auch für die Herstellung von Gelen, Einlagen, Cremes oder Salben zu verwenden, die auch andere Excipienten oder Inhaltstoffe enthalten, die in traditionellen Formulierungen dieser Arzneimittel verwendet werden.
Gemäß einem Hauptaspekt der Erfindung werden die Medikamente, die die Hyaluronsäureester oder deren Salze mit therapeutisch wirksamen oder unwirksamen Stoffen als eine Trägersubstanz enthalten, allein verwendet (außer gegebenenfalls mit einem wäßrigen Lösungsmittel). Die Erfindung schließt auch Gemische ein, die aus allen Arten der hier beschriebenen Medikamente erhältlich sind, Gemische derselben Medikamente und gegebenenfalls auch Gemische der neuen Hyaluronsäureester mit freier Hyaluronsäure oder Gemische ihrer Salze, zum Beispiel Natriumsalze.
Die erfindungsgemäße Komponente (1) kann auch Kombinationen oder Gemische von zwei oder mehreren dieser Arzneimittel und gegebenenfalls mit anderen Grundbestandteilen bedeuten. In der Ophthalmologie zum Beispiel kann ein Medikament mit einem Antibiotikum oder Antiphlogistikum und ein Vasokonstriktor mit verschiedenen Antibiotika, einem oder mehreren Antiphlogistika oder mit einem oder mehreren Antibiotika, einem Mydiatrikum oder einem Miotikum oder Wundheilmittel oder einem Antiallergikum usw. kombiniert werden. Folgende Kombinationen ophthalmischer Medikamente können zum Beispiel verwendet werden: Kanamycin + Phenylephrin + Dexamethasonphosphat; Kanamycin + Betamethasonphosphat + Phenylephrin; oder ähnliche Kombinationen mit anderen in der Ophthalmologie verwendeten Antibiotika, wie Rolitetracyclin, Neomycin, Gentamycin, Tetracyclin.
Werden anstelle von nur einer Wirkstoffkomponente (1) Wirkstoffkombinationen, wie die vorstehend erwähnten, verwendet, können die Salze der basischen Wirkstoffe und der Hyaluronsäurepartialester Mischsalze aus zwei oder mehreren dieser basischen Stoffe oder gegebenenfalls solche Mischsalze mit einer bestimmten Anzahl anderer saurer Reste der mit vorstehend erwähnten Metallen oder Basen salzbildenden Polysaccharide sein. Es ist zum Beispiel möglich, Salze eines Hyaluronsäurepartialesters oder einer der Molekülfraktionen Hyalastin oder Hyalectin mit einem pharmakologisch unwirksamen Alkohol, zum Beispiel einem Niederalkanol, und mit einem bestimmten Prozentsatz an sauren Resten, die mit dem Antibiotikum Kanamycin Salze bilden, einem anderen Prozentsatz an Carbonylgruppen, die mit dem Vasokonstriktor Phenylephrin Salze bilden, und einem verbleibenden Prozentsatz von sauren Resten, welche zum Beispiel frei vorliegen können oder mit Natrium oder einem der anderen vorstehend erwähnten Metalle Salze bilden können, herzustellen. Diese Mischsalze können auch mit freier Hyaluronsäure oder deren Fraktionen oder deren Metallsalzen gemischt werden, wie sie vorstehend für die Medikamente, die Salze eines einzigen Wirkstoffes mit den vorstehend erwähnten Polysaccharidestern enthalten, erwähnt wurden.
In Analogie zu den Beispielen, die für die Ophthalmologie und Dermatologie diskutiert wurden, kann auf erfindungsgemäße Medikamente geschlossen werden, die in den vorstehend erwähnten Bereichen der Medizin, wie zum Beispiel der Otorhinolaryngologie, Odontologie oder der inneren Medizin, zum Beispiel der Endokrinologie verwendbar sind. Solche Präparate können deshalb zum Beispiel entzündungshemmende Mittel, Vasokonstriktoren oder Vasokompressoren, wie sie schon in der Ophthalmologie erwähnt wurden, Vitamine, Antibiotika, wie sie vorstehend erwähnt wurden, Hormone, Chemotherapeutika, antibakterielle Mittel usw. sein, wie sie auch vorstehend für die Verwendung in der Dermatologie erwähnt wurden.
Die kombinierten Medikamente aus einem Hyaluronsäureester und einem pharmakologischen Wirkstoff können andere pharmazeutische Trägersubstanzen enthalten, wie die, die nachstehend für die Arzneimittel erwähnt werden, die nur Hyaluronsäureester enthalten, und können in Form von Salben, Cremes, Pastillen, Gelatinekapseln, Kapseln, wäßrigen oder öligen Lösungen, Sprays, Zäpfchen usw. vorliegen.
Gemäß einem besonderen Aspekt der vorliegenden Erfindung werden jedoch bevorzugt Medikamente verwendet, die eine Kombination aus Komponente (1) und (2) enthalten, wobei Komponente (2) (abgesehen von einem möglichen Lösungsmittel, wie einem wäßrigen Lösungsmittel) nur die Trägersubstanz darstellt.
Von den Medikamenten der Erfindung sind in jedem Fall die von besonderer Bedeutung, die einen für die Umgebung, in der sie angewendet werden sollen, geeigneten Aciditätsgrad, das heißt einen physiologisch tolerierbaren pH-Wert, aufweisen. Die Einstellung des pH-Wertes in den vorstehend erwähnten Salzen der Hyaluronsäurepartialester mit einem basischen Wirkstoff, zum Beispiel, kann durch entsprechende Regulierung der Mengen an Polysaccharid, dessen Salzen und des basisch Stoffes selbst erfolgen. Ist die Acidität eines Salzes eines Hyaluronsäurepartialesters mit einem basischen Stoff zum Beispiel zu hoch, kann der Überschuß an freien sauren Gruppen mit den vorstehend erwähnten anorganischen Basen, zum Beispiel mit Natrium-, Kalium oder Ammoniumhydroxid, neutralisiert werden.

Verfahren zur Herstellung der Hyaluronsäureester der Erfindung

Verfahren A

Die erfindungsgemäßen Hyaluronsäureester können durch Verfahren hergestellt werden, die per se für die Veresterung von Carbonsäuren bekannt sind, zum Beispiel durch Behandlung freier Hyaluronsäure mit den gewünschten Alkoholen in Gegenwart katalysierender Substanzen, wie starken anorganischen Säuren oder sauren Ionenaustauschern, oder mit einem Veretherungsmittel, welches geeignet ist, den gewünschten alkoholischen Rest in Gegenwart anorganischer oder organischer Basen einzuführen. Als Veretherungsmittel können die in der Literatur bekannten verwendet werden, speziell die Ester verschiedener anorganischer Säuren oder organischer Sulfonsäuren, wie Wasserstoffsäuren, das sind Halogenkohlenwasserstoffe, wie Methyl- oder Ethyliodid, oder neutrale Sulfate oder Kohlenwasserstoffsäuren, Alfite, Carbonate, Silikate, Phosphite oder Kohlenwasserstoffsulfonate, wie Benzol- oder p-Toluolsulfonsäuremethylester oder Chlorsulfonsäuremethylester oder -ethylester. Die Umsetzung kann in einem geeigneten Lösungsmittel stattfinden, zum Beispiel in einem Alkohol, der bevorzugt den in die Carboxylgruppe einzuführenden Alkylrest entspricht. Die Umsetzung kann aber auch in unpolaren Lösungsmitteln stattfinden, z.B. Ketone oder Ether, wie Dioxan, oder in aprotischen Lösungsmitteln, wie Dimethylsulfoxid. Als Base kann zum Beispiel ein Alkali- oder Erdalkalimetallhydroxid, ein Magnesium- oder Silberoxid oder ein basisches Salz eines dieser Metalle, wie ein Carbonat, und von den organischen Basen eine tertiäre azotierte Base, wie Pyridin oder Collidin, verwendet werden. Anstelle der Base kann auch ein basischer Ionenaustauscher verwendet werden.
Ein anderes Veresterungverfahren verwendet Metallsalze oder Salze organischer azotierter Basen, zum Beispiel Amnnoniumsalze oder ammoniumsubstituierte Salze. Bevorzugt werden die Salze der Alkali- oder Erdalkalimetalle verwendet, es können aber auch alle anderen Metallsalze verwendet werden. Die Veresterungsmittel sind auch in diesem Fall die gleichen, wie vorstehend erwähnt und dasselbe gilt für die Lösungsmittel. Es werden bevorzugt aprotische Lösungsmittel verwendet, zum Beispiel Dimethylsulfoxid und Dimethylformamid. Bei den nach diesem oder dem anderen nachstehend beschriebenen Verfahren erhaltenen Estern können die freien Carboxylgruppen der Partialester, wenn gewünscht, in einer per se bekannten Art und Weise Salze bilden.

Verfahren B

Die Hyaluronsäureester der vorliegenden Erfindung können jedoch auch vorteilhaft nach einem zweiten Verfahren hergestellt werden, welches im allgemeinen zur Herstellung von Carbonsäureestern sauren Polysacchariden mit Carboxylgruppen verwendet wird. Bei diesem Verfahren wird ein quartäres Annmoniumsalz eines sauren carboxylgruppenhaltigen Polysaccharids mit einem Veretherungsmittel bevorzugt in einem aprotischen organischen Lösungsmittel behandelt. Als organische Lösungsmittel werden bevorzugt aprotische Lösungsmittel, wie Dialkylsulfoxide, Dialkylcarboxamide, wie insbesondere Diniederalkylsulfoxide, speziell Dimethylsulfoxid, und Diniederalkylamide niederaliphatischer Säuren, wie Dimethyl- oder Diethylformamid oder Dimethyl- oder Diethylacetamid, verwendet.
Es sind aber auch andere Lösungsmittel, die nicht immer aprotisch sind, in Betracht zu ziehen, wie Alkohole, Ether, Ketone, Ester, speziell aliphatische oder heterocyclische Alkohole und Ketone mit einem niedrigen Siedepunkt, wie Hexafluorisopropanol, Trifluorethanol und N-Methylpyrrolidon.
Die Umsetzung erfolgt bevorzugt in einem Temperaturbereich von etwa 0 ºC bis 100 ºC, besonders von etwa 2 ºC bis 75 ºC, zum Beispiel bei etwa 30 ºC.
Die Veresterung wird bevorzugt durch allmähliche Zugabe des Veresterungsmittels zum vorstehend erwähnten Ammoniumsalz in einem der vorstehend erwähnten Lösungsmittel, zum Beispiel Dimethylsulfoxid, ausgeführt.
Als Alkylierungsmittel können die vorstehend erwähnten verwendet werden, speziell Halogenkohlenwasserstoffe, zum Beispiel Alkylhalogenide. Als Ausgangsstoff quartäres Ammoniumsalz werden bevorzugt Tetraniederalkylammoniumsalze verwendet, deren Alkylreste bevorzugt 1 bis 6 Kohlenstoffatome aufweisen. Am häufigsten werden Tetrabutylammoniumhyaluronate verwendet. Diese quartären Ammoniumsalze können auch hergestellt werden, indem ein Metallsalz der Hyaluronsäure, bevorzugt eines der vorstehend erwähnten, speziell ein Natrium- oder Kaliumsalz, in wäßriger Lösung mit einem Sulfonharz umgesetzt wird, welches mit einer quartären Ammoniumbase verseift ist.
Das Tetraalkylammoniumsalz der Hyaluronsäure kann durch Gefriertrocknen des Eluates erhalten werden. Die Tetraalkylammoniumsalze der Hyaluronsäure, die als Ausgangsverbindungen für das neue Verfahren verwendet werden und von Niederalkylen abgeleitet sind, speziell von Alkylresten mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, sind neu und bilden einen weiteren Gegenstand der vorliegenden Erfindung. Uberraschenderweise zeigte sich, daß diese Salze in den vorstehend erwähnten organischen Lösungsmitteln löslich sind, weshalb die Veresterung der Hyaluronsäure nach dem vorstehend erwähnten Verfahren B besonders einfach ist und reichliche Ausbeuten ergibt. Die Zahl der zu veresternden Carboxylgruppen der Hyaluronsäure kann daher nur bei Verwendung dieser Art von Verfahren exakt dosiert werden.
Das neue Verfahren B ist besonders zur Herstellung der erfindungsgemäßen Hyaluronsäureester gut geeignet. Insbesondere die quartären Ammoniumsalze der Hyaluronsäure, besonders die von Niederalkylen abgeleiteten und speziell von Alkylresten mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, als Ausgangsverbindungen für das neue Verfahren sind neu und bilden eine besonderen Gegenstand der vorliegenden Erfindung.
Eine Ausführungsform des zuvor beschriebenen Verfahrens ist die Umsetzung von Kaliumsalz oder saurem Polysaccharidnatrium, welche in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Dimethylsulfoxid, suspendiert sind, mit einem geeigneten Alkylierungsmittel in Gegenwart katalytischer Mengen eines quartären Ammoniumsalzes, wie Tetrabutylammoniumiodid.
Die zur Herstellung der neuen erfindungsgemäßen Ester verwendeten Hyaluronsäuren können auf beliebige Art und Weise gewonnen werden, wie zum Beispiel die Säuren, die aus den vorstehend erwähnten natürlichen Ausgangsmaterialien, zum Beispiel aus Hahnenkämmen, extrahiert wurden. Die Herstellung dieser Säuren ist in der Literatur beschrieben. Es werden bevorzugt gereinigte Hyaluronsäuren verwendet. Erfindungsgemäß werden besonders Hyaluronsäuren verwendet, die Molekülfraktionen der vollständigen Säuren umfassen, welche direkt durch Extraktion der organischen Materialien erhalten werden und deren Molekulargewichte in einem weiten Bereich variieren, zum Beispiel von etwa 90 %- 80 % (Mw 11.7-10.4 Millionen) bis 0.2 % (Mw = 30000) des Molekulargewichts der vollständigen Säure mit einem Molekulargewicht von 13 Millionen, bevorzugt zwischen 5 % und 0.2 %. Solche Fraktionen können durch verschiedene in der Literatur beschriebene Verfahren erhalten werden, wie durch Hydrolyse, Oxidation, enzymatische oder physikalische Verfahren, wie mechanische Verfahren oder Bestrahlungsverfahren. Während dieser Reinigungsverfahren werden deshalb oft primordiale Extrakte gebildet (siehe zum Beispiel den vorstehend zitierten Artikel von Balazs et al. in "Cosmetics & Toiletries"). Die Abtrennung und Reinigung der erhaltenen Molekülfraktionen wird durch bekannte Techniken bewerkstelligt, zum Beispiel durch Molekülfiltration.
Eine gereinigte HY-Fraktion, die für die erfindungsgemäße Verwendung geeignet ist, ist zum Beispiel die von Balazs in der Broschüre "Healon" - A guide to its use in Ophthalmic Surgery. D. Miller & R. Stegmann (Hrsg.), John Wiley & Sons N.Y. (1983), S.5., beschriebene, die als nichtentzündliches MF-NaHA-Natriumhyaluronat bekannt ist.
Von besonderer Bedeutung als Ausgangsstoffe für die Ester der vorliegenden Erfindung sind zwei von der Hyaluronsäure erhältliche gereinigte Fraktionen, die zum Beispiel aus Hahnenkämmen extrahierten werden und als "Hyalastin" und "Hyalectin" bekannt sind. Die Hyalastinfraktion hat ein mittleres Molekulargewicht von etwa 50000 bis 100000, während das mittlere Molekulargewicht die Hyalectinfraktion zwischen etwa 500000 und 730000 liegt. Eine vereinigte Fraktion dieser zwei Fraktionen ist auch isoliert worden, wobei ein mittleres Molekulargewicht von etwa 250000 bis etwa 350000 bestimmt worden ist. Diese vereinigte Fraktion kann mit einer Ausbeute von 80 % der vollständigen, aus dem betreffenden Ausgangsmaterial erhältlichen Hyaluronsäure, erhalten werden, während die Hyalectinfraktion mit einer Ausbeute von 30 % und die Hyalastinftaktion mit einer Ausbeute von 50 % der Ausgangs-HY erhalten werden können. Die Herstellung dieser Fraktionen ist in den Beispielen A-C beschrieben.
Die Verseifung der HY mit den vorstehenden Metallen zur Herstellung der Ausgangssalze für das spezielle vorstehend beschriebene Veresterungsverfahren der vorliegenden Erfindung wird in einer per se bekannten Art und Weise durchgeführt, zum Beispiel durch Umsetzung mit der berechneten Menge an Base, zum Beispiel mit Alkalimetallhydroxiden oder mit basischen Salzen solcher Metalle, wie Carbonaten oder Bicarbonaten.
In den Partialestern der vorliegenden Erfindung können alle verbleibenden Carboxylgruppen oder nur ein Teil von ihnen verseift werden, indem die Menge der Base so dosiert wird, daß der gewünschte stöchiometrische Verseifungsgrad erhalten wird. Mit dem richtigen Verseifüngsgrad können Ester erhalten werden, deren Dissoziationskonstanten in einem weiten Bereich variieren und die deshalb in der Lösung oder "in situ" zum Zeitpunkt der therapeutischen Anwendung den gewünschten pH-Wert ergeben.
Von den neuen Produkten der vorliegenden Erfindung sind die vorstehend beschriebenen Ester und deren Salze und die in den folgenden zur Veranschaulichung dienenden Beispielen beschriebenen von besonderer Bedeutung.
Die vorliegende Erfindung schließt auch Modifizierungen der Herstellungsverfahren für die neuen Ester und deren Salze ein, bei denen ein Verfahren in jeder beliebigen gegebenen Stufe unterbrochen wird oder mit einer Zwischenverbindung gestartet wird, an der die verbleibenden Stufen ausgeführt werden oder bei denen die Ausgangsprodukte in situ gebildet werden.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele veranschaulicht, wobei diese aber nicht als Einschränkung der Erfindung anzusehen sind.

Herstellungsbeispiele

Die folgenden Beispiele A-C beschreiben die Verfahren zur Herstellung der bevorzugten Hyaluronsäurefraktionen, die in der vorliegenden Erfindung verwendet werden.

Beispiel A - Verfahren zur Gewinnung eines Gemisches aus Hyalastin- und Hyalectinfraktionen die eine nichtentzündliche Wirkung haben

Frische oder gefrorene Hahnenkämme (3000 g) werden in einem Fleischwolfzerkleinert und dann in einem mechanischen Homogenisator sorgfältig homogenisiert. Die so erhaltene Paste wird in einen Behälter aus rostfreiem Stahl AISI 316 oder in ein Glas gegeben und mit 10 Volumenteilen wasserfreiem Aceton behandelt. Das Ganze wird 6 Stunden lang mit einer Geschwindigkeit von 50 U/min gerührt. Es wird 12 Stunden lang absetzen gelassen und das Aceton wird durch Absaugen abgezogen. Die Acetonextraktion wird solange wiederholt, bis das abgezogene Aceton den richtigen Feuchtigkeitsgrad erreicht hat (Karl- Fischer-Verfahren). Das Ganze wird dann zentrifügiert und bei einer geeigneten Temperatur 5-8 Stunden lang vakuumgetrocknet. Auf diese Weise werden 500600 g trockene, pulverisierte Hahnenkämme erhalten.
300 g des trockenen Pulvers werden im wäßrigen mit Phosphatpuffer gepuffertem Medium mit Papain (0.2 g) in Gegenwart einer geeigneten Menge Cysteinhydrochlorid enzymatisch aufgeschlossen. Das erhaltene Gemisch wird 24 Stunden lang mit einer Geschwindigkeit von 60 U/min gerührt, wobei die Temperatur konstant bei 60-65 ºC gehalten wird. Dann wird es auf 25 ºC gekühlt und es wird Celite (60 g) zugegeben, wobei eine weitere Stunde gerührt wird. Das erhaltene Gemisch wird filtriert, bis eine klare Flüssigkeit erhalten wird. Die klare Flüssigkeit wird dann einer Molekülultrafiltration unterzogen, bei der Membranen mit einer Molekülausschlußgrenze von 30000 verwendet werden, so daß Moleküle mit einem Molekulargewicht größer 30000 auf der Membran zurückgehalten werden.
Durch kontinuierliche Zugabe von destilliertem Wasser zum Produkt der Ultrafiltration wird auf das 5 bis 6-fache des ursprünglichen Volumens ultrafiltriert. Die Wasserzugabe wird eingestellt und die Ultrafiltration fortgesetzt bis das Volumen auf 1/3 des ursprünglichen Volumens reduziert wurde.
Die restliche Flüssigkeit wird durch Zugabe von Natriumchlorid 0.1 M gemacht und die Temperatur auf 50 ºC gebracht. Unter Rühren bei 60 Ulmin werden 45 g Cetylpyridiniumchlorid zugegeben. Es wird 60 Minuten lang gerührt und dann werden 50 g Celite zugegeben. Unter Rühren wird die Temperatur des Ganzen auf 25 ºC gebracht und der sich bildende Niederschlag wird durch Zentrifugation gesammelt. Der erhaltene Niederschlag wird in einer 0.01 M Natriumchloridlösung (5 Liter), die 0.05 % Cetylpyridiniumchlorid enthält, suspendiert. Die erhaltene Suspension wird 60 Minuten lang bei 50 ºC gerührt, die Temperatur wird dann auf 25 ºC gebracht und der Niederschlag wird zentrifugiert. Der Waschvorgang wird dreimal wiederholt und der Niederschlag danach in einem Sammelgefäß, welches 3 Liter 0.05 M Natriumchloridlösung enthält, die 0.05 % Cetylpyridiniumchlorid enthält, gesammelt. Es wird 60 Minuten lang bei 60 U/min gerührt und die Temperatur zwei Stunden lang auf 25 ºC konstantgehalten. Der Überstand wird durch Zentrifugation entfernt. Die Prozedur wird mehrmals mit 0.1 M Natriumchloridlösungen, die 0.05 % Cetylpyridiniumchlorid enthalten, wiederholt. Das Gemisch wird zentrifugiert und der Überstand verworfen. Der Niederschlag wird in einer 0.30 M Natriumchloridlösung, die 0.05 % Cetylpyridiniumchlorid enthält, (3 Liter) dispergiert. Das Gemisch wird gerührt und sowohl der Niederschlag als auch die klare Flüssigkeit werden gesammelt. Die Extraktion wird mit dem Niederschlag noch dreimal wiederholt, wobei jedesmal 0.5 Liter der gleichen wäßrigen Lösung verwendet werden.
Zum Schluß wird der Fällungsrückstand entfernt und die klaren Lösungen werden in einem Behälter alle zusammengegeben. Die Temperatur der Flüssigkeit wird unter gleichmäßigem Rühren auf 50 ºC gebracht. Die Lösung wird dann mit Natriumchlorid 0.23 M gemacht. Es wird 1 g Cetylpyridiniumchlorid zugegeben und 12 Stunden lang gerührt.
Das Gemisch wird auf 25 ºC gekühlt und dann zunächst durch eine Celite -Packung und dann durch einen Filter filtriert. Es wird dann nochmals einer Molekülultrafiltration durch eine Membran mit einer Molekülausschlußgrenze von 30000 unterworfen, wobei unter Zusatz von 0.33 M Natriumchloridlösung auf das dreifache des ursprünglichen Volumens ultrafiltriert wird. Die Zugabe der Natriumchloridlösung wird unterbrochen und das Volumen auf ¼ des Ausgangvolumens reduziert. Die so eingeengte Lösung wird bei 25 ºC unter Rühren (60 U/min) mit 3 Volumenteilen Ethanol (95%ig) ausgefällt. Der Niederschlag wird durch Zentrifügation gesammelt und der Überstand wird verworfen. Der Niederschlag wird in 1 Liter 0.01 M Natriumchloridlösung gelöst und die Fällung wird mit 3 Volumenteilen Ethanol (95%ig) wiederholt.
Der Niederschlag wird gesammelt und zuerst mit 75%igem Ethanol (dreimal), dann mit absolutem Ethanol (3 mal) und zuletzt mit absolutem Aceton (3 mal) gewaschen. Das so erhaltene Produkt (Hyalastin- und Hyalectinfraktionen) hat ein mittleres Molekulargewicht zwischen 250000 und 350000.
Die Ausbeute an HY beträgt 0.6 %, bezogen auf das ursprüngliche frische Gewebe.

Beispiel B - Verfahren zur Gewinnung der Hyalastinfraktion aus dem Gemisch. welches durch das in Beispiel A beschriebene Verfahren erhalten wurde.

Das Gemisch, welches durch das in Beispiel A beschriebene Verfahren erhalten wurde, wird in bidestilliertem apyrogenem Wasser in einem Verhältnis von 10 mg Produkt zu je 1 mi Wasser gelöst. Die erhaltene Lösung wird durch einen Membranfilter mit einer Molekülausschlußgrenze von 200000 molekularfiltriert, und anschließend auf der Membran ohne Wasserzusatz eingeengt. Bei dem Ultrafiltrationsverfahrens durch Membrane mit einer Molekülausschlußgrenze von 200000 passen Moleküle mit einem Molekulargewicht größer 200000 nicht durch, während die kleineren Moleküle zusammen mit dem Wasser durch die Membran hindurchlaufen. Während des Filtrationsvorganges wird kein Wasser zugesetzt, so daß sich das Volumen verringert und deshalb eine höhere Konzentration an Molekülen mit einem Molekulargewicht größer 200000 erhalten wird. Das Produkt wird ultrafiltriert bis das Volumen über der Membran auf 10 % des Ausgangsvolumens vermindert ist. Es werden 2 Volumenteile bidestilliertes apyrogenes Wasser zugegeben und dann wird nochmals ultrafiltriert bis das Volumen auf 1/3 vermindert ist. Der Vorgang wird noch zweimal wiederholt. Die durch die Membran hindurchgelaufene Lösung wird mit Natriumchlorid 0.1 M gemacht und dann mit 4 Volumenteilen 95%igem Ethanol ausgefällt. Der Niederschlag wird dreimal mit 75%igem Ethanol gewaschen und dann vakuumgetrocknet.
Das so erhaltene Produkt (Hyalastinfraktion) hat ein mittleres Molekulargewicht zwischen 50000 und 100000. Die Ausbeute an HY beträgt 0.6 %, bezogen auf das ursprüngliche frische Gewebe.

Beispiel C - Verfahren zur Gewinnung der Hyalectinfraktion.

Die in dem Behälter über der Ultrazentrifugationsmembran mit einer Molekülausschlußgrenze von 200000, wie in Beispiel B, gesammelte aufkonzentrierte Lösung wird mit Wasser verdünnt, bis eine Lösung erhalten wird, die 5 mg/ml Hyaluronsäure enthält, was durch quantitative Analyse, bezogen auf die Einsatzmenge an Glucuronsäure, bestimmt wird.
Die Lösung wird mit Natriumchlorid 0.1 M gemacht und dann mit 4 Volumenteilen 95%igem Ethanol ausgefällt. Der Niederschlag wird 3 mal mit 75%igem Ethanol gewaschen und dann vakuumgetrocknet.
Das so erhaltene Produkt (Hyalectinfraktion) hat ein mittleres Molekulargewicht zwischen 500000 und 730000. Das entspricht einer bestimmten Hyaluronsäurefraktion mit einer definierten Molekülkettenlänge von etwa 2500 bis 3500 Saccharideinheiten in einem hohen Reinheitsgrad. Die Ausbeute an HY beträgt 0.2 %, bezogen auf das ursprüngliche frische Gewebe.

Beispiel D - Herstellung des Tetrabutylammoniumsalzes der Hyaluronsäure (HY).

4.02 g des Natriumsalzes der HY (10 m.Eq.) werden in 400 ml destilliertem H&sub2;O gelöst. Die Lösung wird dann in einer auf 4ºC thermostatierten Säule, welche 15 ml Sulfonharz (Dowex 50 x 8) in Tetrabutylammoniumform enthält, eluiert. Das natriumfreie Eluat wird sofort gefroren und gefriergetrocknet. Ausbeute: 6.18 g.

Beispiel 1 - Herstellung des (Partial)propylesters der Hyaluronsäure (Y).

- 50 % der Carboxylgruppen sind verestert
- 50 % der Carboxylgruppen liegen als Salz (Na) vor
12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 170000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25 ºC in 620 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 1.8 g (10.6 m.Eq.) Propyliodid dazugegeben und die erhaltene Lösung wird 12 Stunden bei einer Temperatur von 30 ºC gehalten.
Eine aus 62 ml Wasser und 9 g Natriumchlorid bestehende Lösung wird dazugegeben und das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird flltriert, dreimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit Aceton gewaschen und zum Schluß 8 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Das Produkt wird dann in 550 ml Wasser, welches 1 % Natriumchlorid enthält, gelöst und die Lösung wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3000 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, zweimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit 500 ml Aceton gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet. Es werden 7.9 g der Titelverbindung, des Partialpropylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von R.H. Cundiff und P.C. Markunas [Anal. Chem. 33 (1961), 1028-1030] angewendet.

Beispiel 2 - Herstellung des (Partial)isopropylesters der Hyaluronsäure (HY) - 50 % der Carboxylgruppen sind verestert - 50 % der Carboxylgruppen liegen als Salz (Na) vor.

12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 160000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25 ºC in 620 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 1.8 g (10.6 m.Eq.) Isopropyliodid dazugegeben und die erhaltene Lösung 12 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Eine aus 62 ml Wasser und 9 g Natriumchlorid bestehende Lösung wird dazugegeben und das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, dreimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit Aceton gewaschen und zum Schluß 8 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Das Produkt wird dann in 550 ml Wasser, welches 1 % Natriumchlorid enthält, gelöst und die Lösung wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3000 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird flitriert, zweimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit 500 ml Aceton gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet. Es werden 7.8 g der Titelverbindung, des Partialisopropylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von R.H. Cundiff und P.C. Markunas [Anal. Chem. 33 (1961), 1028-1030] angewendet.

Beispiel 3 - Herstellung des (Partial)ethylesters der Hyaluronsäure (HY) - 75 % der Carboxylgruppen sind verestert - 25 % der Carboxylgruppen liegen als Salz (Na) vor.

12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 250000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25 ºC in 620 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 2.5 g (15.9 m.Eq.) Ethyliodid dazugegeben und die erhaltene Lösung 12 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Eine aus 62 ml Wasser und 9 g Natriumchlorid bestehende Lösung wird dazugegeben und das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, dreimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit Aceton gewaschen und zum Schluß 8 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Das Produkt wird dann in 550 ml Wasser, welches 1 % Natriumchlorid enthält, gelöst und die Lösung wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3000 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, zweimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit 500 ml Aceton gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet. Es werden 7.9 g der Titelverbindung, des Partialethylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von R.H. Cundiff und P.C. Markunas [Anal. Chem. L3 (1961), 1028-1030] angewendet.

Beispiel 4 - Herstellung des (Partial)methylesters der Hyaluronsäure (HY) - 75 % der Carboxylgruppen sind verestert - 25 % der Carboxylgruppen liegen als Salz (Na) vor.

12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 80000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25 ºC in 620 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 2.26 g (15.9 m.Eq.) Methyliodid dazugegeben und die erhaltene Lösung 12 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Eine aus 62 ml Wasser und 9 g Natriumchlorid bestehende Lösung wird dazugegeben und das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, dreimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit Aceton gewaschen und zum Schluß 8 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Das Produkt wird dann in 550 ml Wasser, welches 1 % Natriumchlorid enthält, gelöst und die Lösung wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3000 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, zweimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit 500 ml Aceton gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 CC vakuumgetrocknet. Es werden 7.8 g der Titelverbindung, des Partialmethylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von R.H. Cundiff und P.C. Markunas [Anal. Chem. 33 (1961), 1028-1030] angewendet.

Beispiel 5 - Herstellung des Methylesters der Hyaluronsäure (HY)

12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 120000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25 ºC in 620 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 3 g (21.2 m.Eq.) Methyliodid dazugegeben und die erhaltene Lösung 12 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Ethylacetat gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, viermal mit 500 ml Ethylacetat gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Es werden 8 g der Titelverbindung, des Methylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von R.H. Cundiff und P.C. Markunas [Anal. Chem. 33 (1961), 1028-1030] angewendet.

Beispiel 6 - Herstellung des Ethylesters der Hyaluronsäure (HY)

12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 85000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25 ºC in 620 mi Dimethylsulfoxid gelöst, 3.3 g (21.2 m.Eq.) Ethyliodid dazugegeben und die erhaltene Lösung 12 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Ethylacetat gegossen. Der gebildete Niederschlag wird flltriert, viermal mit 500 ml Ethylacetat gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Es werden 8 g der Titelverbindung, des Ethylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von R.H. Cundiff und P.C. Markunas [Anal. Chem. 33 (1961), 1028-1030] angewendet.

Beispiel 7 - Herstellung des Propylesters der Hyaluronsäure (HY)

12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 170000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25 ºC in 620 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 3.6 g (21.2 m.Eq.) Propyliodid dazugegeben und die erhaltene Lösung 12 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Ethylacetat gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, viermal mit 500 ml Ethylacetat gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Es werden 8.3 g der Titelverbindung, des Propylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von R.H. Cundiff und P.C. Markunas [Anal. Chem. 33 (1961), 1028-1030] angewendet.

Beispiel 8 - Herstellung des (Partial)butylesters der Hyaluronsäure (HY) - 50 % der Carboxylgruppen sind verestert - 50 % der Carboxylgruppen liegen als Salz (Na) vor.

12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 620000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25 ºC in 620 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 1.95 g (10.6 m.Eq.) n-Butyliodid dazugegeben und die erhaltene Lösung 12 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Eine aus 62 ml Wasser und 9 g Natriumchlorid bestehende Lösung wird dazugegeben und das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, dreimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit Aceton gewaschen und zum Schluß 8 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Das Produkt wird dann in 550 ml Wasser, welches 1 % Natriumchlorid enthält, gelöst und die Lösung wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3000 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, zweimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit 500 ml Aceton gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet. Es werden 8 g der Titelverbindung, des Partialbutylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von R.H. Cundiff und P.C. Markunas [Anal. Chem. 33 (1961), 1028-1030] angewendet.

Beispiel 9 - Herstellung des (Partial)ethoxycarbonylmethylesters der Hyaluronsäure (HY) - 75 % der Carboxylgruppen sind verestert - 25 % der Carboxylgruppen liegen als Salz (Na) vor.

12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 180000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25 ºC in 620 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 2 g Tetrabutylammoniumiodid und 1.84 g (15 m.Eq.) Ethylchloracetat dazugegeben und die erhaltene Lösung 24 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Eine aus 62 ml Wasser und 9 g Natriumchlorid bestehende Lösung wird dazugegeben und das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, dreimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit Aceton gewaschen und zum Schluß 8 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Das Produkt wird dann in 550 ml Wasser, welches 1 % Natriumchlorid enthält, gelöst und die Lösung wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3000 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, zweimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit 500 ml Aceton gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet. Es werden 10 g der Titelverbindung, des Partialethoxycarbonylmethylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von R.H. Cundiff und P.C. Markunas [Anal. Chem. 33 (1961), 1028-1030] angewendet.

Beispiel 10 - Herstellung des n-Pentylesters der Hyaluronsäure (HY)

12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 620000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25 ºC in 620 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 3.8 g (25 m.Eq.) n-Pentylbromid und 0.2 g Tetrabutylammoniumiodid dazugegeben und die erhaltene Lösung 12 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Ethylacetat gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, viermal mit 500 ml Ethylacetat gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Es werden 8.7 g der Titelverbindung, des n-Pentylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von S. Siggia und J.G. Hanna ["Quantitative organic analysis via functional groups", 4. Auflage, John Wiley & Sons, S.169-172] angewendet.

Beispiel 11 - Herstellung des Isopentylesters der Hyaluronsäure (HY)

12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 170000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25 ºC in 620 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 3.8 g (25 m.Eq.) Isopentylbromid und 0.2 g Tetrabutylammoniumiodid dazugegeben und die erhaltene Lösung 12 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Ethylacetat gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, viermal mit 500 ml Ethylacetat gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Es werden 8.6 g der Titelverbindung, des Isopentylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von 5. Siggia und J.G. Hanna ["Quantitative organic analysis via fünctional groups", 4. Auflage, John Wiley & Sons, S.169- 172] angewendet.

Beispiel 12 - Herstellung des Benzylesters der Hyaluronsäure (HY)

12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 170000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25 ºC in 620 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 4.5 g (25 m.Eq.) Benzylbromid und 0.2 g Tetrabutylammoniumiodid dazugegeben und die erhaltene Lösung 12 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Ethylacetat gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, viermal mit 500 ml Ethylacetat gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Es werden 9 g der Titelverbindung, des Benzylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von S. Siggia und J.G. Hanna ["Quantitative organic analysis via fünctional groups", 4. Auflage, John Wiley & Sons, S.169-172] angewendet.

Beispiel 13 - Herstellung des (3-Phenylethylesters der Hyaluronsäure (HY)

12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 125000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht. werden bei 25 ºC in 620 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 4.6 g (25 m.Eq.) 2-Bromethylbenzol und 185 mg Tetrabutylammoniumiodid dazugegeben und die erhaltene Lösung 12 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Ethylacetat gegossen. Der so gebildete Niederschlag wird filtriert, viermal mit 500 ml Ethylacetat gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Es werden 9.1 g der Titelverbindung, des 13-Phenylethylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von S. Siggia und J.G. Hanna ["Quantitative organic analysis via functional groups", 4. Auflage, John Wiley & Sons, 5. 169-172] angewendet.

Beispiel 14 - Herstellung des Benzylesters der Hyaluronsäure (HY)

3 g des Kaliumsalzes der HY mit einem Molekulargewicht von 162000 werden in 200 ml Dimethylsulfoxid suspendiert, 120 g Tetrabutylammoniumiodid und 2.4 g Benzylbromid dazugegeben.
Die Suspension wird unter Rühren 48 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 1000 ml Ethylacetat gegossen. Der gebildete Niederschlag wird flitriert, viermal mit 150 ml Ethylacetat gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Es werden 3.1 g der Titelverbindung, des Benzylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von S. Siggia und J.G. Hanna ["Quantitative organic analvsis via fünctional groups", 4. Auflage, John Wiley & Sons, S.169- 172] angewendet.

Beispiel 15 - Herstellung des partiell mit Ethanol veresterten Streptomvcinsalzes der Hyaluronsäure (Hy) - 75 % der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert - 25 % der Carboxylgruppen liegen als Streptomycinsalz vor.

243 mg Streptomycinsulfat (1 m.Eq.) werden in 20 ml Wasser gelöst. Die Lösung wird in einer auf 5ºC thermostatierten Säule, welche 2 ml quartäres Ammoniumharz (Dowex 1 x 8) in OH&supmin;-Form enthält, eluiert.
Das sulfatfreie Eluat wird in einem auf 5 ºC thermostatierten Behälter gesarnmelt.
1.6 g eines Partialethylesters der Hyaluronsäure (75 % Ethylester, 25 % Natriumsalz) (entspricht 1 m.Eq. einer Monomereinheit, bezogen auf nichtveresterte Carboxylgruppen) werden in 400 ml Wasser gelöst. Die Lösung wird in einer auf 20ºC thermostatierten Säule, welche 2 ml Sulfonharz (Dowex 50 x 8) in H&spplus;-Form enthält, eluiert.
Das natriumfreie Eluat wird unter Rühren in der Lösung der Streptomycinbase gesammelt. Die erhaltene Lösung wird sofort gefroren und gefriergetrocknet. Ausbeute: 1.7g.
Die mikrobiologische Analyse mit B. subtilis ATCC 6633, bezogen auf einen Streptomycinstandard, ergab einen Gehalt an Streptomycinbase von 10.9 Gew.-%, was dem theoretisch berechneten Gehalt entspricht.

Beispiel 16 - Herstellung des partiell mit Ethanol veresterten Erythromycinsalzes der Hyaluronsäure (HY) - 75 % der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert - 25 % der Carboxylgruppen liegen als Erythromycinsalz vor.

1.6 g eines Partialethylesters der Hyaluronsäure (75 % Ethylester, 25 % Natriumsalz) (entspricht 1 m.Eq. einer Monomereinheit, bezogen auf nichtveresterte Carboxylgruppen) werden in 400 ml Wasser gelöst. Die Lösung wird in einer auf 20ºC thermostatierten Säule, welche 2 ml Sulfonharz (Dowex 50 x 8) in H&spplus;-Form enthält, eluiert.
Zu dem natriumfreien Eluat werden 734 mg der Erythromycinbase gegeben (1 m.Eq.). Die erhaltene Lösung wird sofort gefroren und gefriergetrocknet. Ausbeute. 2.1 g.
Die mikrobiologische Analyse mit St. aureus ATCC 6538, bezogen auf einen Erythromycinstandard, ergab einen Gehalt an Erythromycinbase von 31.7 Gew.-%, was dem theoretisch berechneten Gehalt entspricht.

Beispiel 17 - Herstellung des partiell mit Ethanol veresterten Neomycinsalzes der Hyaluronsäure (HY) - 75 % der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert - 25 % der Carboxylgruppen liegen als Neomycinsalz vor.

152 mg Neomycinsulfat (1 m.Eq.) werden in 20 mi Wasser gelöst. Die Lösung wird in einer auf 5ºC thermostatierten Säule, welche 2 ml quartäres Ammoniumharz (Dowex 1 x 8) in OH&supmin;-Form enthält, eluiert.
Das sulfatfreie Eluat wird in einem auf 5 ºC thermostatierten Behälter gesammelt.
1.6 g eines Partialethylesters der Hyaluronsäure (75 % Ethylester, 25 % Natriumsalz) (entspricht 1 m.Eq. einer Monomereinheit, bezogen auf nichtveresterte Carboxylgruppen) werden in 400 ml Wasser gelöst. Die Lösung wird in einer auf 20ºC thermostatierten Säule welche 2 ml Sulfonharz (Dowex 50 x 8) in H&spplus;-Form enthält, eluiert.
Das natriumfreie Eluat wird unter Rühren in der Lösung der Neomycinbase gesammelt. Die erhaltene Lösung wird sofort gefroren und gefriergetrocknet. Ausbeute: 1.65 g.
Die mikrobiologische Analyse mit St. aureus ATCC 6538, bezogen auf einen Neomycinstandard, ergab einen Gehalt an Neomycinbase von 6.1 Gew. -%, was dem theoretisch berechneten Wert entspricht.

Beispiel 18 - Herstellung des partiell mit Ethanol veresterten Gentamicinsalzes der Hyaluronsäure (HY) - 75 % der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert - 25 % der Carboxylgruppen liegen als Gentamicinsalz vor.

145 mg Gentamicinsulfat (1 m.Eq.) werden in 10 mi Wasser gelöst. Die Lösung wird in einer auf 5ºC thermostatierten Säule, welche 2 ml quartäres Ammoniumharz (Dowex 1 x 8) in OH&supmin;-Form enthält, eluiert.
Das sulfatfreie Eluat wird in einem auf 5 ºC thermostatierten Behälter gesammelt.
1.6 g eines Partialethylesters der Hyaluronsäure (75 % Ethylester, 25 % Natriumsalz) (entspricht 1 m.Eq. einer Monomereinheit, bezogen auf nichtveresterte Carboxylgruppen) werden in 400 ml Wasser gelöst. Die Lösung wird in einer auf 20ºC thermostatierten Säule welche 2 ml Sulfonharz (Dowex 50 x 8) in H&spplus;-Form enthält, eluiert.
Das natriumfreie Eluat wird unter Rühren in der Lösung der Gentamicinbase gesammelt. Die erhaltene Lösung wird sofort gefroren und gefriergetrocknet. Ausbeute: 1.7 g.
Die mikrobiologische Analyse mit S. epidermidus ATCC 12228, bezogen auf einen Gentamicinstandard, ergab einen Gehalt an Gentamicinbase von 6.50 Gew.-%, was dem theoretisch berechneten Wert entspricht.

Beispiel 19 - Herstellung des partiell mit Ethanol veresterten Amikacinsalzes der Hyaluronsäure (HY) - 75 % der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert - 25 % der Carboxylgruppen liegen als Amikacinsalz vor.

147 mg Amikacin (1 m.Eq.) werden in 20 ml Wasser gelöst.
1.6 g eines Partialethylesters der Hyaluronsäure (75 % Ethylester, 25 % Natriumsalz) (entspricht 1 m.Eq. einer Monomereinheit, bezogen auf nichtveresterte Carboxylgruppen) werden in 400 ml Wasser gelöst. Die Lösung wird in einer auf 20ºC thermostatierten Säule welche 2 ml Sulfonharz (Dowex 50 x 8) in H&spplus;-Form enthält, eluiert.
Das natriumfreie Eluat wird unter Rühren in der Lösung der Amikacinbase gesammelt. Die erhaltene Lösung wird sofort gefroren und gefriergetrocknet. Ausbeute: 1.7 g.
Die mikrobiologische Analyse mit St. aureus ATCC 29737, bezogen auf einen Amikacinstandard, ergab einen Gehalt an Amikacinbase von 8.5 Gew.-%, was dem theoretisch berechneten Wert entspricht.

Beispiel 20 - Herstellung des partiell mit Ethanol veresterten Kanamycinsalzes der Hyaluronsäure (HY) - 75 % der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert - 25 % der Carboxylgruppen liegen als Kanamycinsalz vor.

146 mg Kanamycinsulfat (1 m.Eq.) werden in 20 ml Wasser gelöst. Die Lösung wird in einer auf 5ºC thermostatierten Säule, welche 2 ml quartäres Ammoniumharz (Dowex 1 x 8) in OH&supmin;-Form enthält, eluiert.
Das sulfatfreie Eluat wird in einem auf 5 ºC thermostatierten Behälter gesammelt.
1.6 g eines Partialethylesters der Hyaluronsäure (75 % Ethylester, 25 % Natriumsalz) (entspricht 1 m.Eq. einer Monomereinheit, bezogen auf nichtveresterte Carboxylgruppen) werden in 400 ml Wasser gelöst. Die Lösung wird in einer auf 20ºC thermostatierten Säule welche 2 ml Sulfonharz (Dowex 50 x 8) in H&spplus;-Form enthält, eluiert.
Das natriumfreie Eluat wird unter Rühren in der Lösung der Kanamycinbase gesammelt. Die erhaltene Lösung wird sofort gefroren und gefriergetrocknet. Ausbeute: 1.5 g.
Die mikrobiologische Analyse mit B. subtilis ATCC 6633, bezogen auf einen Kanamycinstandard, ergab einen Gehalt an Kanamycinbase von 7 Gew. -%, was dem theoretisch berechneten Wert entspricht.

Beispiel 21 - Herstellung des partiell mit Ethanol veresterten Pilocarpinsalzes der Hyaluronsäure (HY) - 75 % der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert - 25 % der Carboxylgruppen liegen als Pilocarpinsalz vor.

245 mg Pilocarpinhydrochlorid (1 m.Eq.) werden in 20 ml Wasser gelöst. Die Lösung wird in einer auf 5ºC thermostatierten Säule, welche 2 ml quartäres Ammoniumharz (Dowex 1 x 8) in OH&supmin;-Form enthält, eluiert.
Das chloridfreie Eluat wird in einem aufs ºC thermostatierten Behälter gesammelt.
1.6 g eines Partialethylesters der Hyaluronsäure (75 % Ethylester, 25 % Natriumsalz) (entspricht 1 m.Eq. einer Monomereinheit, bezogen auf nichtveresterte Carboxylgruppen) werden in 400 ml Wasser gelöst. Die Lösung wird in einer auf 20ºC thermostatierten Säule welche 2 ml Sulfonharz (Dowex 50 x 8) in H+-Form enthält, eluiert.
Das natriumfreie Eluat wird unter Rühren in der Lösung der Pilocarpinbase gesammelt. Die erhaltene Lösung wird sofort gefroren und gefriergetrocknet. Ausbeute: 1.89 g.

Beispiel 22 - Herstellung des (Partial)propylesters der Hyaluronsäure (HY) - 85 % der Carboxylgruppen sind verestert - 15 % der Carboxylgruppen liegen als Salz (Na) vor.

12.4 g des Tetrabutylammoniumsalzes der Hy mit einem Molekulargewicht von 165000, was 20 m.Eq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25 ºC in 620 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 2.9 g (17 m.Eq.) Propyliodid dazugegeben und die erhaltene Lösung 12 Stunden lang bei 30 ºC gehalten.
Eine aus 62 ml Wasser und 9 g Natriumchlorid bestehende Lösung wird dazugegeben und das erhaltene Gemisch wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3500 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird filtriert, dreimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit Aceton gewaschen und zum Schluß 8 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet.
Das Produkt wird dann in 550 ml Wasser, welches 1 % Natriumchlorid enthält, gelöst und die Lösung wird unter gleichmäßigem Rühren langsam in 3000 ml Aceton gegossen. Der gebildete Niederschlag wird flitriert, zweimal mit 500 ml Aceton/Wasser (5:1) und dreimal mit 500 ml Aceton gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet. Es werden 8 g der Titelverbindung, des Partialpropylesters, erhalten. Zur quantitativen Bestimmung der Estergruppen wird das Verfahren von R.H. Cundiff und P.C. Markunas [Anal. Chem. L3 (1961), 1028-1030] angewendet.

Beispiel 23 - Herstellung des partiell mit n-Propanol veresterten Pilocarpinsalzes der Hyaluronsäure (HY) - 85 % der Carboxylgruppen sind mit n-Propanol verestert - 15 % der Carboxylgruppen liegen als Pilocarpinsalz vor.

245 mg Pilocarpinhydrochlorid (1 m.Eq.) werden in 10 ml Wasser gelöst. Die Lösung wird in einer auf 5ºC thermostatierten Säule, welche 2 ml quartäres Ammoniumharz (Dowex 1 x 8) in OH&supmin;-Form enthält, eluiert.
Das chloridfreie Eluat wird in einem auf 5 ºC thermostatierten Behälter gesammelt.
4.1 g eines Propylesters der Hyaluronsäure (85 % Propylester, 15 % Tetrabutylammoniumsalz) (entspricht 1 m.Eq. einer Monomereinheit, bezogen auf nichtveresterte Carboxylgruppen) werden in 100 ml Dimethylsulfoxid gelöst. Die Lösung wird in einer auf 20ºC thermostatierten Säule, welche 2 ml feuchtes Sulfonharz (Dowex 50 x 8) in H&spplus;-Form enthält, eluiert.
Das Eluat wird unter Rühren in der Lösung der Pilocarpinbase gesammelt. Die erhaltene Lösung wird mit Ethylacetat (600 ml) ausgefällt.
Der Niederschlag wird filtriert, viermal mit 200 ml Ethylacetat gewaschen und zum Schluß 24 Stunden lang bei 30 ºC vakuumgetrocknet. Es werden 3.5 g der Titelverbindung erhalten.

Untersuchung der biologischen Wirksamkeit

1) Untersuchung der Wasseranlagerung der Haut

Die Hydrolyse der Esterbindung ist, wie allgemein gesagt wird, ein Sättigungsvorgang; das heißt sie entspricht einer Kinetik 0. Ordnung. Dies ist, in einer verzögerten Form, eine sehr erwünschte Tatsache, da ein kontrolliert freisetzendes Präparat, per Definition, ein Präparat ist, welches die Freisetzung eines konstanten Aliquoten des wirksamen Grundbestandteils in einer vorgegeben Zeit bestimmt, und das ist der Zustand der durch eine Kinetik 0. Ordnung erreicht wird.
Die Haut kann aufgrund der komplexen Natur ihrer physiologischen Funktionen nicht ausschließlich als ein passives umhüllendes Organ betrachtet werden, sondern eher als ein dynamisches mehrfünktionelles Organ. Die volle Funktionsfähigkeit der Haut wird grundlegend durch das Vorhandensein einer intakten hydrolipiden Umhüllung garantiert, was einen richtigen Feuchtigkeitsgehalt in der Homschicht erfordert, welcher sich mit dem Speichervermögen sehr verändert (Die Werte variieren zwischen 10 % und 60 % Wassergehalt). Die Feuchtigkeit der Haut hängt von einer Reihe endogener und exogener Faktoren ab.
Die Feuchtigkeit der Haut beeinflußt grundlegend die Bildung des hautspezifischen hydrolipiden Filmes, welcher die Stoffe, die sie abgibt, modifiziert und speichert und so die Grundlage für die Ausübung ihrer Schutzfunktionen bildet.
Die Schutzmittel, die verwendet werden, um den maximalen Hydratationsgrad der Haut weitgehend wiederherzustellen, bringen die Verwendung von stark hygroskopischen Substanzen, wie Glycerin, Natriumiactat und Propylenglycol, mit sich. Diese Stoffe haben jedoch den Nachteil, daß sie unter trockenen Bedingungen die Feuchtigkeit von der Haut selbst anstatt von der äußeren Umgebung abziehen und so die Haut noch trockener machen.
Aus diesem Grund werden zur Zeit biologische Substanzen bevorzugt, was, und das ist ihr besonderes Merkmal, in den vorstehend erwähnten natürlichen Hydratationsfaktoren begründet ist.
In diesem Zusammenhang ist das beträchtliche Interesse an der Verwendung der Hyaluronsäure zu sehen.
Die Hydratation der Haut und ihre Ernährung scheint eng mit dem HY-Gehalt des Hautgewebes verbunden zu sein. Es ist tatsächlich demonstriert worden, daß das Einbringen von HY von außen feststellbar zum Hydratationzustand des Hautgewebes beiträgt. Dieses besondere Verhalten der HY wurde auch, und in noch verstärktem Maße, bei den erfindungsgemäßen Esterderivaten der HY gefunden, die aus diesem Grund im Bereich der Kosmetika in einem größeren Umfang angewendet werden können.
Um die Hyaluronsäure mit ihren erfindungsgemäßen Derivaten zu vergleichen, wurden einige Versuche durchgefilhrt, wobei die Hydratationseigenschaften der Verbindungen nach der örtlichen Anwendung instrumentell untersucht wurden.

Substanzen

Als erfindungsgemäße Hyaluronsäurederivate wurden folgende Ester verwendet.
HYAFF&sub2; Hyaluronsäure, zu 75 % mit Methanol verestert
HYAFF&sub7; Hyaluronsäure, zu 75 % mit Ethanol verestert
HYAFF&sub8; Hyaluronsäure, zu 50 % mit Isopropanol verestert
HYAFF&sub9; Hyaluronsäure, zu 50 % mit n-Propanol verestert
HYAFF&sub1;&sub0; Hyaluronsäure, zu 50 % mit n-Butanol verestert
Natriumsalz der Hyaluronsäure (Hyalastinfraktion)
Alle diese Verbindungen wurden mit einer Konzentration von 0.2 % in eine Salbe mit folgender Zusammensetzung eingetragen:
- Polyethylenglycolmonostearat 400, 10.000 g
- Cetiol V, 5.000 g
- Lanette SX, 2.000 g
- Paraoxybenzoesäuremethylester, 0.075 g
- Paraoxybenzoesäurepropylester, 0.050 g
- Natriumdehydroacetat, 0.100 g
- Glycerin F.U., 1.000 g
- Sorbit 70, 1.500 g
- Testcreme, 0.050 g
- Wasser für Injektionspräparate q.b.a., 100.000 g
Die Formulierung des Placebos enthielt nur Trägersubstanz.

Verfahren

Prüflinge

Die Untersuchung wurde an 10 gesunden Freiwilligen (6 Frauen und 4 Männer, die an keinerlei Form von Hautkrankheit leiden) im Alter von 20 bis 60 Jahren durchgeführt.

Behandlung

Jeder Freiwillige wurde (einmalige Verabreichung) mit allen zu prüfenden Formulierungen, welche (1 g/Salbe) auf die Oberfläche der Innenseite des Unterarmes aufgebracht wurde, behandelt, wobei der Anwendungsbereich (etwa 25 cm²) jedes Produktes mit einem dermographischen Stift gekennzeichnet und die Prozedur weitestgehend vereinheitlicht wurde. Auf den rechten Unterarm wurden die unter HYAFF&sub2;, HYAFF&sub7;, HYAFF&sub8; und HYAFF&sub9; bekannten Verbindungen aufgetragen, während auf den linken HYAFF&sub1;&sub0;, das Placebo und die Hyaluronsäure aufgetragen wurden.

Bewertungsparameter

Zu den festgesetzten Zeiten (0, 3, 6 und 24 Stunden nach der Behandlung) wurde mit Hilfe eines Corneometers der Hydratationsgrad der Hornschicht in jedem Anwendungsbereich gemessen.
Am eingehendsten wurde die Durchschlagfestigkeit des Wassers (in 0.8 Sekunden) nach der Anwendung des Sensors (Kondensators) auf die Hautoberfläche gemessen. Der so erhaltene Wert, dessen Maßeinheit auf 0.07 mg Wasser bezogen ist (Normalwerte liegen zwischen 90 und 100 Einheiten) wurde auf der Skala des Instrumentes abgelesen.
Die Meßwerte wurden unter konstanten Feuchtigkeitsbedingungen aufgenommen.

Ergebnisse

Wie aus den in Tabelle 1 aufgeführten Ergebnissen ersichtlich ist, führte die Behandlung mit den HYAFF-Verbindungen in allen Fällen zu einer feststellbaren Erhöhung des Hydratationsgrades der Hornschicht, was sich insbesondere nicht nur in den Stunden unmittelbar nach der Anwendung, sondern auch nach der letzten Meßwertaufnahme zeigte. Es erwies sich, daß diese Wirkung sowohl der der Placeboformulierung als auch der Formulierung die das Natriumsalz der Hyaluronsäure enthält, überlegen ist. Von den getesteten Verbindungen erschienen die Derivate HYAFF&sub2; und HYAFF&sub9; besonders interessant.

Schlußfolgerungen

Aus den erhaltenen Ergebnissen konnte geschlossen werden, das die HYAFF-Esterderivate tatsächlich eine feststellbare und längere Hydratisierungswirkung in der Hautschicht hervorrufen, welche der bei den hyaluronsäurehaltigen Formulierungen beobachteten, überlegen ist, und die so die Unversehrtheit und physiologische Wirkungsfähigkeit des hydrolipiden Filmes garantieren. Diese zufriedenstellenden Ergebnisse bilden deshalb eine gültige Basis filr die Verwendung dieser Verbindungen, um aufgesprungener Haut vorzubeugen (oder diese zu behandeln), Verbrennungen und Verbrühungen zu behandeln und die physiologische Ernährung und Elastizität der Haut zu erhalten. Tabelle 1 Wirkung der HYAFF-Verbindungen auf den Hydratationwsgrad der Hornschicht (alle Werte sind Mittelwerte aus 10 Subjekten) Produkt Stunde PLACEBO HYALURONSÄURE HYAFF

2) Untersuchungen zur Enzymbeständigkeit und Sauerstoffdurchlässigkeit Materialien

Die wertvollen Eigenschaften der neuen erfindungsgemäßen Ester, die teilweise schon beschrieben wurden und die deren technische Vorteile gegenüber den in den jeweiligen Bereichen bereits bekannten Produkten ausmachen, werden durch die folgenden Ergebnisse, welche die Stabilität gegenüber Enzymen und die Sauerstoffdurchlässigkeit der mit den folgenden Verbindungen erhaltenen Folien betreffen, weiter veranschaulicht.
HYAFF&sub2;, Hyaluronsäure, zu 100 % mit Methanol verestert
HYAFF&sub7;, Hyaluronsäure, zu 100 % mit Ethanol verestert
HYAFF&sub8;, Hyaluronsäure, zu 100 % mit Isopropanol verestert
HYAFF&sub9;, Hyaluronsäure, zu 100 % mit n-Propanol verestert
HYAFF&sub1;&sub1;, Hyaluronsäure, zu 100 % mit Benzylalkohol verestert
HYAFF&sub2;&sub0;, Hyaluronsäure, zu 100 % mit β-Phenylethylalkohol verestert
HYAFF&sub2;&sub2;, Hyaluronsäure, zu 100 % mit Isopentylalkohol verestert
Die Folien können nach dem in Beispiel 39 beschriebenen Verfahren hergestellt werden.

Beständigkeit der HYAFF-Folien gegenüber Enzymen

Beständigkeit gegenüber Serumesterase

Jede Folie (Gewicht etwa 20 mg) wurde zusammen mit 5 ml Kaninchenserum in eine Polyethylenkapsel gegeben und bei einer konstanten Temperatur (37 ºC) gehalten. Der Bewertungsparameter war die Zeit (in Stunden), die die Folie brauchte, sich aufzulösen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt.

Beständigkeit gegenüber Hyaluronidase

Jede Folie (Gewicht etwa 20 mg) wurde zusammen mit pH 5-Puffer (0.1 M Acetat, 0.15 M NaCl) oder pH 7.2-Puffer (0.1 M Phosphat, 0.15 M NaCl) in eine Polyethylenkapsel gegeben, die pro ml 100 U Enzym (Testikelhyaluronidase von MILES Charge 8062, Wirksamkeit 342 turbidometrische Einheiten/mg) enthielt und bei einer konstanten Temperatur (37ºC) gehalten. Der Bewertungsparameter war die Zeit (in Stunden), die die Folie brauchte, sich aufzulösen, Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt. Tabelle 2 Beständigkeit der aus den Derivaten der HYAFF-Serie erhaltenen Folien in Gegenwart von Serumesterase (37 ºC) und in Gegenwart von Hyaluronidase (37 ºC; pH 5 und pH 7.2) Verbindungen Beständigkeit (Stunden) Serumesterase HYAFF Hyaluronidase

Sauerstoffdurchlässigkeit der Folien der HYAFF-Serie

Jeder Folie wurde in einen Behälter gegeben, der durch die Membran selbst in 2 Abteilungen unterteilt war. Eine Abteilung (Volumen = 1, 2 cm³) wurde mit teilweise entgastem Wasser (PO&sub2; = 45 mmHg bei 23 ºC) gefüllt, in die andere wurde ein O&sub2;- und CO&sub2;-Strom (95 % beziehungsweise 5 %) eingeleitet und zeitlich konstant gehalten (1 Gasblase/Sekunde). Das gesamte System wurde in Stickstoff isoliert.
Zu bestimmten Zeiten (15, 30, 60, 90, 120, 240 Minuten) wurde ein geeignetes Miquot Wasser abgezogen (1.2 cm³) und mittels eines Gas System-Analysers 1302 von INSTRUMENTATION LABORATORIES wurde der O&sub2;-Partialdruck bestimmt. Der Sättigungsdruck (550 mmHg) wurde als Referenzwert genommen und unter den zuvor beschriebenen experimentellen Bedingungen durch Einblasen der O&sub2;-Atmosphäre bestimmt.
Die Tests wurden in Vergleich zu einer undurchlässigen Membran und Silicongummi (Lepetit Kat. Nr.500-1) ausgeführt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 dargestellt. Tabelle 3 O&sub2;-Durchlässigkeit der Folien der HYAFF-Serien VERBINDUNGEN O&sub2; - DRUCK (mmHg bei 23 ºC) undurchlässige Membran Silicongummi HYAFF

Arzneimittel

Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung von Arzneimitteln, die einen oder mehrere der vorstehend erwähnten Hyaluronsäureester und deren Salze enthalten, oder eines oder mehrere Medikamente, wie sie vorstehend beschrieben sind und die aus der Kombination von einem dieser Ester mit einem pharmakologischen Wirkstoff für die örtliche Anwendung bestehen, das heißt Medikamente, in denen der Hyaluronsäurester als Trägersubstanz für den Wirkstoff dient.
Die Arzneimittel, die die Hyaluronsäureester als einen wirksame Grundbestandteil enthalten, enthalten sowohl im Falle von Estern mit therapeutisch unwirksamen Alkoholen, die für die gleichen Anwendungen wie die Hyaluronsäure selbst bestimmt sind, als auch von Estern mit therapeutisch wirksamen Alkoholen, die für die gewöhnlichen Anwendungen dieser Alkohole bestimmt sind, die herkömmlichen Excipienten und können oral, rektal, parenteral, subkutan, örtlich oder intradermal verwendet werden. Sie liegen deshalb in fester oder halbfester Form vor, zum Beispiel als Pastillen, Tabletten, Gelatinekapseln, Kapseln, Zäpfchen und Weichgelatinekapseln. Für die parenterale und subkutane Anwendung können die Formen verwendet werden, die für die intramuskuläre oder intradermale Verabreichung bestimmt sind oder die für Infüsionen oder intravenöse Injektionen geeignet sind. Lösungen oder gefriergetrocknete Pulver der Wirkstoffe können bereitgestellt werden, indem die Wirkstoffe zu einem oder mehreren pharmazeutisch verträglichen Excipienten oder Verdünnern, die für die vorstehend erwähnten Verwendungen geeignet sind und eine Osmolarität aufweisen, die mit physiologischen Flüssigkeiten kompatibel ist, zugesetzt werden. Für die örtliche Anwendung können Präparate in Form von Sprays, zum Beispiel Nasenspray, in Form von Cremes und Salben angewendet werden, für die intradermale Verabreichung speziell hergestellte Heftpflaster. Aufgrund der Löslichkeit der Hyaluronsäureester in organischen Lösungsmitteln mit niedrigen Siedepunkten sind sie besonders für die Herstellung von "Sprays" geeignet.
Die Präparate der Erfindung können Menschen und Tieren verabreicht werden. Sie enthalten bei Lösungen, Sprays, Salben und Cremes bevorzugt zwischen 0.01 % und 10 % des Wirkstoffes und bei Präparaten in fester Form zwischen 1 % und 100 %, bevorzugt zwischen 5 % und 50 % des Wirkstoffes. Die zu verabreichende Dosis hängt von den individuellen Erfordernissen, der gewünschten Wirkung und dem gewählten Verabreichungsweg ab. Die tägliche Dosis solcher Präparate kann anhand der entschieden werden, die bei entsprechenden bekannten Präparaten verwendet wird, sowohl was die Hyaluronsäure für die entsprechenden Heilungen, zum Beispiel die Heilung von Arthritis, zum Beispiel beim Menschen oder beim Pferd, als auch den therapeutisch wirksamen Alkohol, dessen Wirkung bei der Verwendung berücksichtigt werden muß, betrifft. So kann zum Beispiel die Dosis eines Hyaluronsäureesters mit Cortison von dessen Gehalt an diesem Steroid und von der gewöhnlichen Dosis in bekannten Arzneimitteln abgeleitet werden.
Eine besondere Form der Präparate stellen die vorstehend erwähnten Medikamente dar, die die Kombination eines Hyaluronsäureesters mit einem oder mehreren Wirkstoffen enthalten. Diese können auch in fester Form, zum Beispiel als gefriergetrocknete Pulver, die nur die zwei Komponenten (1) und (2) zusammen oder einzeln enthalten, vorliegen.
Diese galenische Form ist besonders für die örtliche Anwendung geeignet. Tatsächlich bildet diese feste Form der Medikamente beim Kontakt mit der zu behandelnden Oberfläche entsprechend der Natur des speziellen Ephitels mehr oder weniger konzentrierte Lösungen, die dasselbe Verhalten wie die zuvor in vitro hergestellten Lösungen, die einen weiteren besonders wichtigen Aspekt der vorliegenden Erfindung darstellen, aufweisen. Dies sind bevorzugt Lösungen in destilliertem Wasser oder steriler Kochsalzlösung und enthalten außer dem Hyaluronsäureester oder einem seiner Salze bevorzugt keine anderen pharmazeutischen Trägersubstanzen. Die Konzentrationen solcher Lösungen können innerhalb ausreichend großer Grenzen auch variieren, zum Beispiel zwischen 0.01 und 75 %, sowohl jede der zwei Komponenten getrennt, als auch deren Gemische oder Salze betrachtet. Besonders bevorzugt sind Lösungen mit einem ausgesprochen viskoelastischen Charakter, zum Beispiel mit einem Gehalt an dem Medikament oder an jedem seiner Komponenten von 10% bis 90%.
Derartige Medikamente sind für die Verwendung in der Ophthalmologie von besonderer Bedeutung, sowohl in wasserfreier Form (gefriergetrocknetes Pulver) als auch in Form konzentrierter oder verdünnter Lösungen in Wasser oder Kochsalzlösung, denen gegebenenfalls Additive oder Zusatzmittel, insbesondere Desinfektionsmittel, als Puffer wirkende Mineralsalze oder andere zugesetzt werden.
Von den Medikamenten der Erfindung sind gegebenenfalls solche besonders wichtig, die einen Aciditätsgrad aufweisen, der für die Umgebung geeignet ist, auf die sie angewendet werden sollen, das heißt einen physiologisch tolerierbaren pH-Wert aufweisen.
Die Einstellung des pH-Wertes kann in den vorstehend erwähnten Salzen der Hyaluronsäureester zum Beispiel mit einer basisch wirkenden Substanz durch entsprechende Regulierung der Mengen an Polysaccharid oder der Salze der basischen Substanz selbst erfolgen. Ist die Acidität eines Salzes eines Hyaluronsäureesters mit einer basischen Substanz zum Beispiel zu hoch, so wird der Überschuß an freien sauren Gruppen mit den vorstehend erwähnten anorganischen Basen, zum Beispiel mit Natrium-, Kalium- oder Ammoniumhydroxid, neutralisiert.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Salze kann in einer per se bekannten Art und Weise erfolgen, indem wäßrige oder organische Lösungen der zwei Komponenten (1) und (2) und gegebenenfalls Basen oder basische Salze der vorstehend erwähnten Alkali- oder Erdalkalimetalle oder Magnesium oder Aluminium in den richtigen Mengen zusammengegeben werden und die Salze mittels bekannter Verfahren in amorpher wasserfreier Form isoliert werden. Es können zu Beispiel zuerst wäßrige Lösungen der zwei Komponenten (1) und (2) hergestellt werden, indem diese Komponenten mit geeigneten lonenaustauschern aus wäßrigen Lösungen ihrer Salze freigesetzt werden und die zwei Lösungen bei einer niedrigen Temperatur, zum Beispiel zwischen 0 ºC und 20 ºC gemischt werden. Ist das so erhaltene Salz leicht in Wasser löslich, kann es gefriergetrocknet werden, während schwer lösliche Salze durch Zenrifügation, Filtration oder Dekantieren abgetrennt und hinterher gegebenenfalls getrocknet werden können.
Auch für diese kombinierten Medikamente basiert die Dosis allein auf den verwendeten wirksamen Grundbestandteilen und kann deshalb durch einen Fachmann leicht bestimmt werden, indem die für die entsprechenden bekannten Arzneimittel empfohlenen Dosen in Betracht gezogen werden.
In den erfindungsgemäßen Kosmetikartikeln werden die Hyaluronsäureester und deren Salze mit Excipienten gemischt, die gewöhnlich auf diesem Gebiet verwendet werden, zum Beispiel solche, die vorstehend schon für Arzneimittel aufgeführt wurden. Am häufigste werden Cremes, Salben und Lotionen für die örtliche Verwendung angewendet, bei denen der Hyaluronsäureester oder eines seiner Salze der kosmetisch wirkende Grundbestandteil ist und dem gegebenenfalls andere kosmetisch wirkende Grundbestandteile, wie zum Beispiel Steroide, zum Beispiel Pregnenolon oder einer der vorstehend erwähnten Grundbestandteile beigegeben ist. In solchen Präparaten ist der Hyaluronsäureester bevorzugt ein Ester mit einem kosmetisch unwirksamen Alkohol, wie einem niederaliphatischen Alkohol, wie einem der bereits erwähnten. Die Wirkung beruht wie im Fall der freien Hyaluronsäure oder deren Salzen auf den spezifischen kosmetischen Eigenschaften der Polysaccharidkomponente.
Die kosmetischen Artikel können jedoch auf Stoffen basieren, deren spezielle Wirkung sich von der der Hyaluronsäure unterscheidet, zum Beispiel Desinfektionsmittel, Sonnenschutzmittel, wasserabweisende oder regenerierende oder faltenmindernde Substanzen oder Odorierungsmittel, besonders Parfüm. In diesem Fall kann der Hyaluronsäureester selbst der wirksame Bestandteil sein und von Mkoholen mit denselben Eigenschaften abgeleitet sein, im Falle von Parfümen zum Beispiel von höheraliphatischen Alkoholen oder Terpentenalkoholen, oder vor allem als Träger für Substanzen mit solchen damit in Zusammenhang stehenden Eigenschaften wirken.
Von besonderer Bedeutung sind deshalb kosmetische Zusammensetzungen, die den vorstehend beschriebenen Medikamenten ähnlich sind und bei denen die pharmazeutisch wirksame Komponente (1) durch einen kosmetischen Faktor ersetzt ist, und die verwandten Salze.
Die Verwendung der vorstehend erwähnten Ester, die von Alkoholen abgeleitet sind, die in der Parfümindustrie verwendet werden, ist in der Technologie ein bedeutender Schritt nach vorn, das sie eine langsame, konstante und verzögerte Freisetzung der Geruchsbestandteile ermöglichen.
Eine wichtige Anwendung der vorliegenden Erfindung betrifft die vorstehend bereits beschriebenen hygienischen und chirurgischen Artikel und Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung. Die Erfindung schließt deshalb alle Artikel ein, die denen ähnlich sind, die bereits auf dem Markt sind und auf Hyaluronsäure basieren, die aber anstelle der freien Säure oder eines ihrer Salze einen Hyaluronsäureester oder eines seiner Salze enthalten, zum Beispiel Einlagen oder ophthalmische Linsen.
Vollkommen neue erfindungsgemäße chirurgische und hygienische Artikel stellen die Hyaluronsäureester dar, die zum Beispiel als solche aus entsprechenden organischen Lösungen gewonnen werden, aus denen mittels geeigneter Verfahren Folien, dünne Platten oder Fäden erhalten werden können, und die in der Chirurgie bei schwerer Beschädigung der Haut, wie zum Beipsiel in Folge von Verbrennungen, als Hilfsstoff oder Ersatzstoff für dieses Organ und als Nähfaden bei chirurgischen Operationen verwendet werden. Die Erfindung schließt insbesondere diese Verwendungen ein und ein Verfahren zur Herstellung solcher Artikel, umfassend die Herstellung einer Lösung eines Hyaluronsäureesters oder eines seiner Salze in einem geeigneten organischen Lösungsmittel, wie einem Carbonsäureamid, besonders einem Dialkylamid einer aliphatischen Säure mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen, wobei die Alkylreste 1 bis 6 Kohlenstoffatome aufweisen, und vor allen einem organischen Sulfoxid, das heißt einem Dialkylsulfoxid, dessen Alkylreste maximal 6 Kohlenstoffatome aufweisen, speziell Dimethylsulfoxid oder Diethylsulfoxid, und von größter Bedeutung ist noch ein fluoriertes Lösungsmittel mit einem niedrigen Siedepunkt, besonders z.B. Hexafluorisopropanol. Die Erfindung schließt das Überführen solcher Lösungen in Platten- oder Fadenform und das Entfernen des organischen Lösungsmittels durch Inkontaktbringen mit einem anderen organischen oder wäßrigen Lösungsmittel ein, welches mit dem ersten Lösungsmittel mischbar ist und in welchem der Hyaluronsäureester nicht löslich ist, besonders ein niederaliphatischer Alkohol, zum Beispiel Ethanol (Naßspinnen) oder, sollte ein Lösungmittel mit einem nicht zu hohen Siedepunkt zur Herstellung der Lösung des Hyaluronsäurederivates verwendet werden, das Entfernen eines solchen Lösungsmittel unter trockenen Bedingungen mit einem Gasstrom, besonders mit geeignet erhitztem Stickstoff (Trockenspinnen).
Ausgezeichnete Ergebnisse können auch durch Trocken-Naß-Spinnen erhalten werden.
Die aus den Hyaluronsäureestern erhaltenen Fäden können zur Herstellung von Gazen für die medizinische Behandlung von Wunden und in der Chirurgie verwendet werden. Die Verwendung solcher Gazen hat den außergewöhnlichen Vorteil der biologischen Abbaubarkeit in Organismen, der durch Enzyme, die sie enthalten, möglich ist. Diese Enzyme spalten den Ester in Hyaluronsäure und den entsprechenden Alkohol und so in eine Verbindung, die im Organismus schon vorhanden ist und in eine harmlose Verbindung, wie einen Alkohol, der bei Verwendung eines Hyaluronsäureesters von einem therapeutisch verträglichen Alkohol, wie Ethanol, abgeleitet ist.
Diese Gazen und auch die vorstehend erwähnten Fäden verbleiben deshalb nach der chirurgischen Behandlung im Organismus, da sie dank der vorstehend erwähnten Zersetzung langsam absorbiert werden.
Bei der Herstellung der vorstehend beschriebenen hygienischen und chirurgischen Artikel können weichmachende Materialien zugesetzt werden, die die mechanischen Kennwerte verbessern, bei Fäden z. B die Festigkeit beim Knoten. Diese weichmachenden Materialien können zum Beispiel Alkalisalze von Fettsäuren sein, zum Beispiel Natriumstearat oder Natriumpalmitat, Ester organischer Säuren mit vielen Kohlenstoffatomen usw.
Eine weitere Verwendung der neuen Ester, die den Vorteil ihrer biologischen Abbaubarkeit durch die im Organismus vorhandenen Esterasen nutzt, ist die Herstellung von Kapseln für die subkutane Implantation von Medikamenten oder von Mikrokapseln zur Injektion, zum Beispiel auf subkutanem oder intramuskulärem Weg. Für die Anwendungen subkutaner Medikamente sind, um eine langsame Freisetzung und deshalb eine "verzögerte" Wirkung zu erhalten, bisher meistens Kapseln aus Siliconmaterialien verwendet worden, mit dem Nachteil, daß die Kapsel dazu neigt, sich im Organismus umherzubewegen und es nicht möglich ist, sie wiederzugewinnen. Offensichtlich existiert diese Gefahr bei den neuen Hyaluronsäureestern nicht mehr.
Auch die Herstellung von Mikrokapseln, die aus Hyaluronsäureestern bestehen, ist von großer Bedeutung, da dadurch die Probleme bezüglich ihrer Verwendung, die bisher aus denselben Gründen, wie sie vorstehend erwähnt wurden, eingeschränkt war, beseitigt werden und ein weites Anwendungsgebiet eröfihet wird, bei dem nach einer "verzögerten" Wirkung gesucht wurde, die auf dem Wege der Injektion erreicht werden kann.
Eine weitere Anwendung der neuen Ester im Bereich der Medizin und der Chirurgie betriffi die Herstellung einer großen Vielfalt von festen Einlagen, wie Platten, Scheiben, Folien usw., die solche aus Metall oder Kunststoffmaterialien, die bereits in Verwendung sind, ersetzen, im Falle von Einlagen, die die nach einer bestimmten Zeit entfernt werden sollen. Präparate, die aus tierischem Kollagen bestehen, das Proteinnatur hat, rufen oft unerwünschte Nebenwirkungen hervor, wie Entzündung oder Abstoßung. Bei tierischer und nicht-menschlicher Hyaluronsäure existiert diese Gefahr nicht, da es keine Unverträglichkeit zwischen den Polysacchariden unterschiedlicher Tierspezies gibt.
Eine weitere Anwendung betrifft die Verwendung zum Aufbau oder zur Korrektur von Weichteildefekten. Die Notwendigkeit eines sicheren und wirksamen Biomaterials als Ersatz für fehlende oder beschädigte Weichteile ist lange erkannt worden. Mehrere alloplastische Materialien, einschließlich Paraffin, Teflonpaste, Silicon und Borincollagen wurden als Ersatz für verlorengegangene Weichteile verwendet. Bei diesen Materialien traten jedoch permanent unerwünschte Gewebeveränderungen in der Haut auf, mit Migration von der Stelle der Implantation und mit widrigen Behandlungsreaktionen. Daher besteht der Bedarf für ein vielseitiges Biomaterial in der Medizin weiterhin. Die Hyaluronsäureester können sicher und wirksam zum Aufbau und zur Korrektur von Weichteildefekten, wie Akne-Narben, Atrophie nach chirurgischen Unregelmäßigkeiten, Mohs' Chemochirurgie, Hasenscharte-Narben und altersbedingte Falten, verwendet werden.
Teil der Anwendungen der neuen erfindungsgemäßen Ester im Bereich der Medizin und Chirurgie, sind dehnbare Materialien, besonders schwammförmi2e für die Behandlung von Wunden und verschiedenen Läsionen.
Die folgenden Arzneimittel sind für die Erfindung besonders beispielhaft.
Formulierung 1 - cortisonhaltiges Augenwasser, von dem 100 ml enthalten:
- Partialester der Hyaluronsäure mit Cortison (Bsp. 10), 0.200 g
- p-Hydroxybenzoesäureethylester, 0.010 g
- p-Hydroxybenzoesäuremethylester, 0.050 g
- Natriumchlorid, 0.900 g
- Wasser für Injektionspräparate / q.b.a., 100 ml
Formulierung 2 - injizierbare hydrocortisonhaltige Lösung, von der 100 ml enthalten:
- Partialester der Hyaluronsäure mit Hydrocortison (Bsp. 11), 0.1 g
- Natriumchlorid, 0.9 g
- Wasser für Injektionspräparate 1 q.b.a., 100 ml
Formulierung 3 - Creme, die einen Partialester der Hyaluronsäure mit. Ethanol (Bsp. 3) enthält, von der 100 ml enthalten:
- Partialester der Hyaluronsäure mit Ethanol, 0.2 g
- Polyethylenglycolmonostearat 400, 10.000 g
- Cetiol V, 5.000 g
- Lanette SX, 2.000 g
- Paraoxybenzoesäuremethylester, 0.075 g
- Paraoxybenzoesäurepropylester, 0.050 g
- Natriumdehydroacetat, 0.100 g
- Glycerin F.U., 1.5009
- Sorbit 70, 1.500 g
- Testcreme, 0.050 g
- Wasser für Injektionspräparate / q.b.a., 100 g
Die folgenden Produkte, die die Hyaluronsäureester der Erfindung verwenden, dienen als Beispiel.

Beispiel 27- Herstellung von Folien unter Verwendung von Hyaluronsäureestern

Es wird eine Lösung des n-Propylesters der HY (MW 130000) in Dimethylsulfoxid mit einer Konzentration von 180 mg/ml hergestellt.
Mittels eines Beschichters wird eine dünne Schicht der Lösung auf eine Glasplatte aufgetragen; sie muß 10 mal dicker sein als die endgültige Folie. Die Glasplatte wird in Ethanol getaucht, welches das Dimethylsulfoxid absorbiert, den Hyaluronsäureester jedoch nicht löst, welcher fest wird. Die Folie wird von der Glasplatte abgenommen und wiederholt mit Ethanol, dann mit Wasser und dann wieder mit Ethanol gewaschen. Die erhaltene Folie wird in einer Presse 48 Stunden lang bei 30 ºC getrocknet.

Beispiel 28 - Herstellung von Fäden unter Verwendung von Hyaluronsäureestern

Es wird eine Lösung des Hyaluronsäurebenzylesters (MW 165000) in Dimethylsulfoxid mit einer Konzentration von 200 mg/ml hergestellt. Die so erhaltene Lösung wird mittels einer Pumpe durch eine Spinndüse mit 0.5 mm Löchern gepreßt.
Die Spinndüse ist in Ethanol/Dimethylsulfoxid 80:20 getaucht (Diese Konzentration wird durch Zugabe von Ethanol konstantgehalten); wobei die auf diese Weise getränkte Dimethylsulfoxidlösung den größten Teil des Dimethylsulfoxids verliert und der Faden fest wird.
Der Faden wird gereckt solange er noch Dimethylsulfoxid enthält, dann wiederholt gereckt und mit Ethanol gewaschen. Der Faden wird im Stickstoffstrom getrocknet.

Beispiel 29 - Herstellung eines aus Hyaluronsäureestern bestehenden Schwammaterials

1 g Hyaluronsäurebenzylester mit einem Molekulargewicht von 170000, bei welchem alle Carboxylgruppen verestert sind (erhältlich zum Beispiel wie in Beispiel 14 beschrieben) wird in 5 ml Dimethylsulfoxid gelöst. Zu jeweils 10 ml der hergestellten Lösung wird ein Gemisch von 31.5 g Natriumchlorid mit einem Körnungsgrad der 300 µ entspricht, 1.28 g Natriumbicarbonat und 1 g Citronensäure gegeben und das Ganze in einem Mischer homogenisiert.
Das pastenartige Gemisch wird auf verschiedene Weisen geschichtet, zum Beispiel mittels einer Mangel, die aus zwei gegenläufigen Walzen besteht, deren Abstand zueinander einstellbar ist. Unter Regulierung dieses Abstandes wird die Paste zusammen mit einem Siliconpapierstreifen, der als ein Träger für die so erzeugte Schicht der Paste wirkt, zwischen den Walzen durchgeleitet. Die Schicht wird auf die gewünschte Länge und Breite geschnitten, vom Silicon entfernt, in Filterpapier gehüllt und in ein geeignetes Lösungsmittel, wie Wasser, getaucht. Die so erhaltenen Schwämme werden mit einem geeigneten Lösungsmittel, wie Wasser, gewaschen und gegebenenfalls mit Gammastrahlung sterilisiert.

Beispiel 30 - Herstellung eines aus Hyaluronsäureestern bestehenden Schwammaterials

Auf die in Beispiel 29 beschriebene Art und Weise können Schwammaterialien mit anderen Hyaluronsäureestern hergestellt werden. Anstelle des Dimethylsulfoxides kann, wenn gewünscht, irgendein anderes Lösungsmittel, welches den gewählten Ester lösen kann, verwendet werden. Änstelle des Natriumchlorids kann irgendeine andere feste Verbindung verwendet werden, die in dem zum Lösen des Hyaluronsäureesters verwendeten Lösungsmittel unlöslich, aber in dem zur Fällung des Hyaluronsäureesters nach der vorstehend erwähnten mechanischen Behandlung verwendeten Lösungsmittel löslich ist und schließlich den richtigen Körnungsgrad aufweist, um in dem Schwammaterial den gewunschen Porentyp zu erhalten.
Anstelle des Natriumbicarbonates und der Citronensäure können auch andere Kombinationen ähnlicher Verbindungen verwendet werden, das heißt Verbindungen die in einer Suspension oder Lösung des zum Lösen des Hyaluronsäureesters verwendeten Lösungsmittels unter Bildung eines Gases, wie Kohlendioxid, miteinander reagieren, welches bewirkt, daß ein weniger kompaktes schwammartiges Material erzeugt wird. Auf diese Weise können anstelle des Natriumbicarbonates, andere Bicarbonate oder Alkali- oder Erdalkalicarbonate und anstelle der Citronensäure andere feste Säuren, wie Weinsäure, verwendet werden.

Claims

1. Vollständig oder partiell mit einem aliphatischen oder araliphatischen Alkohol veresterte Hyaluronsäure oder Salz eines solchen Partialesters mit einer anorganischen oder organischen Base, ausgenommen die Hyaluronsäuremethylester.

2. Hyaluronsäureester gemäß Anspruch 1, bei dem die aliphatischen Alkohole maximal 34 Kohlenstoffatome aufweisen und unsubstituiert oder durch eine oder mehrere funktionelle Reste substituiert sind, ausgewählt aus Amino-, Hydroxy-, Mercapto-, Aldehyd-, Keto-, Carboxy-, Kohlenwasserstoff-, Dikohlenwasserstoffamino-, Ether-, Ester-, Thioether-, Thioester-, Acetyl-, Ketal-, Carbalkoxy-, Carbamid- und durch eine oder zwei Alkylreste substituierte Carbamidgruppen, wobei die Kohlenwasserstoffreste dieser funktionell modifizierten Reste maximal 6 Kohlenstoffatome aufweisen, und wobei die Kohlenstoffkette der aliphatischen Alkohole durch Heteroatome, ausgewählt aus Sauerstoff, Schwefel oder Stickstoff, unterbrochen sein kann.

3. Hyaluronsäureester gemäß Anspruch 2, bei dem die veresternde Alkoholkomponente von Ethylalkohol, Propylalkohol, Isopropylalkohol, n-Butylalkohol, Isobutylalkohol, tert- Butylalkohol, Amylalkohol, Pentylalkohol, Hexylalkohol, Octylalkohol, Ethylenglycol, Propylenglycol, Butylenglycol oder Glycerin stammt.

4. Hyaluronsäureester gemäß Anspruch 1, bei dem die araliphatischen Alkohole nur einen Benzolrest aufweisen und die aliphatische Kette maximal 4 Kohlenstoffatome aufweist, wobei der Benzolrest durch 1 bis 3 Methylgruppen, Hydroxygruppen oder Halogenatome substituiert sein kann und die aliphatische Kette durch eine oder zwei Funktionen, ausgewählt aus Aminogruppen oder Mono- oder Diethylaminogruppen, oder durch Pyrrolidinyl- oder Piperidinylgruppen substituiert sein kann.

5. Hyaluronsäureester gemäß Anspruch 4, bei dem der Alkohol aus Benzylalkohol, Phenetylalkohol, Ephedrin und Adrenalin ausgewählt ist.

6. Alkali- oder Erdalkalimetall-, Magnesium- oder Aluminiumsalz eines Hyaluronsäurepartialesters gemäß einem der Ansprüche 1-5.

7. Salz eines Hyaluronsäurepartialesters gemäß einem der Ansprüche 1-5, nämlich ein Natrium- oder Ammoniumsalz.

8. Salz eines Hyaluronsäurepartialesters gemäß einem der Ansprüche 1-5 mit einer therapeutisch verträglichen Ammoniumbase, aliphatischen, araliphatischen, cycloaliphatischen oder heterocyclischen Base.

9. Verbindung gemäß Anspruch 1, ausgewählt aus:

dem Partialpropylester der Hyaluronsäure, wobei 50 % der Carboxygruppen verestert sind und 50 % der Carboxygruppen als Natriumsalz vorliegen;

dem Partialisopropylester der Hyaluronsäure, wobei 50 % der Carboxygruppen verestert sind und 50 % der Carboxygruppen als Natriumsalz vorliegen;

dem Partialpropylester der Hyaluronsäure, wobei 85 % der Carboxygruppen verestert sind und 15 % der Carboxygruppen als Natriumsalz vorliegen;

dem Partialethylester der Hyaluronsäure, wobei 75 % der Carboxygruppen verestert sind und 25 % der Carboxygruppen als Natriumsalz vorliegen;

dem Partialmethylester der Hyaluronsäure, wobei 75 % der Carboxygruppen verestert sind und 25 % der Carboxygruppen als Natriumsalz vorliegen;

dem Vollethylester der Hyaluronsäure;

dem Vollpropylester der Hyaluronsäure;

dem Partialbutylester der Hyaluronsäure, wobei 50 % der Carboxygruppen verestert sind und 50 % der Carboxygruppen als Natriumsalz vorliegen;

dem Partialethoxycarbonylmethylester der Hyaluronsäure, wobei 75 % der Carboxygruppen verestert sind und 25 % der Carboxygruppen als Natriumsalz vorliegen;

dem Vollpentylester der Hyaluronsäure;

dem Vollisopentylester der Hyaluronsäure;

dem Vollbenzylester der Hyaluronsäure;

dem Voliphenethylester der Hyaluronsäure;

dem Streptomycinsalz einer Hyaluronsäure, die teilweise mit Ethanol (75 %) verestert ist und deren Carboxygruppen zu 25 % als Streptomycinsalz vorliegen;

dem Erythromycinsalz einer Hyaluronsäure, die teilweise mit Ethanol (75 %) verestert ist und deren Carboxygruppen zu 25 % als Erythromycinsalz vorliegen;

dem Neomycinsalz einer Hyaluronsäure, die teilweise mit Ethanol (75 %) verestert ist und deren Carboxygruppen zu 25 % als Neomycinsalz vorliegen:

dem Gentamycinsalz einer Hyaluronsäure, die teilweise mit Ethanol (75 %) verestert ist und deren Carboxygruppen zu 25 % als Gentamycinsalz vorliegen;

dem Amikacinsalz einer Hyaluronsäure, die teilweise mit Ethanol (75 %) verestert ist und deren Carboxygruppen zu 25 % als Amikacinsalz vorliegen;

dem Kanamycinsalz einer Hyaluronsäure, die teilweise mit Ethanol (75 %) verestert ist und deren Carboxygruppen zu 25 % als Kanamycinsalz vorliegen;

dem Pilocarpinsalz einer Hyaluronsäure, die teilweise mit Ethanol (75 %) verestert ist und deren Carboxygruppen zu 25 % als Pilocarpinsalz vorliegen und

dem Pilocarpinsalz einer Hyaluronsäure, die teilweise mit Ethanol (85 %) verestert ist und deren Carboxygruppen zu 15 % als Pilocarpinsalz vorliegen.

10. Hyaluronsäureester gemäß Anspruch 1, ausgewählt aus dem Vollbenzylester, dem Voll-n-propylester und dem Vollethylester.

11. Ärzneimittel, welches einen Ester oder ein Salz davon, wie in Anspruch 1 definiert) oder einen Hyaluronsäuremethylester als Wirkstoff zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Excipienten oder Träger enthält.

12. Arzneimittel, welches einen Hyaluronsäureester gemäß einem der Ansprüche 1-10 als Wirkstoff zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Excipienten oder Träger enthält.

13. Medikament, umfassend:

a) einen oder mehrere pharmakologische Wirkstoffe und

b) ein Trägervehikel, umfassend eine vollständig oder partiell mit einem aliphatischen oder araliphatischen Alkohol veresterte Hyaluronsäure oder ein Salz aus einem solchen Partialester mit einer anorganischen oder organischen Base, und gegebenenfalls

c) einen für Arzneimittel gewöhnlich verwendeten Excipienten.

14. Medikament gemäß Anspruch 13, bei welchem das Trägervehikel b) einen Hyaluronsäureester mit einem pharmakologisch unwirksamen Alkohol enthält.

15. Medikament gemäß Anspruch 13, bei welchem das Trägervehikel b) einen Hyaluronsäureester mit einem pharmakologisch wirksamen Alkohol enthält.

16. Medikament gemäß Anspruch 13, bei welchem mit einem Träger versehene Substanz basisch ist und der Träger eine partiell veresterte Hyaluronsäure enthält, deren nicht veresterte Gruppen als Salz mit einer pharmakologisch wirksamen Substanz vorliegen.

17. Medikament gemäß einem der Ansprüche 13-16, bei welchem der pharmakologische Wirkstoff aus einem Anästhetikum, einem Analgetikum, einem entzündungshemmenden Mittel, einem Gefäßverengungsmittel, einem Antibiotikum-Antibakterium und einem Antivirenmittel ausgewählt ist.

18. Medikament gemäß einem der Ansprüche 13-16, bei welchem der Wirkstoff a) lokal wirksam ist.

19. Verwendung eines Hyaluronsäureesters oder eines Salzes desselben gemäß Anspruch 1 zur Herstehung eines Medikamentes zur Verwendung in der Augenheilkunde.

20. Verwendung eines Hyaluronsäureesters oder eines Salzes desselben gemäß Anspruch 1 zur Herstellung eines Medikamentes zur Verwendung in der Dermatologie, Hals- Nasen-Ohrenheilkunde, Zahnheilkunde, Angiologie, Gynäkologie, Neurologie oder allen Arten der inneren Medizin.

21. Kosmetischer Artikel, welcher einen Hyaluronsäureester oder ein Salz desselben gemäß einem der Ansprüche 1 - 10 oder einen Hyaluronsäuremethylester enthält.

22. Hygiene- oder chirurgischer Artikel, welcher einen Hyaluronsäureester oder ein Salz desselben gemäß einem der Ansprüche 1 - 10 oder einen Hyaluronsäuremethylester enthält.

23. Hygiene- oder chirurgischer Artikel gemäß Anspruch 22 in Form einer Folie oder eines Fadens.

24. Folie oder Faden gemäß Anspruch 22 oder 23 in Form einer künstlichen Haut zur Verwendung in der chirurgischen Dermatologie und in diesem Zusammenhang als ein Nähfaden bei chirurgischen Operationen.

25. Gaze bestehend aus einem Faden gemäß einem der Ansprüche 22-24 zur Behandlung von Wunden und für die Chirurgie.

26. Verfahren zur Herstellung einer Folie oder eines Fadens aus einem Hyaluronsäureester gemäß einem der Ansprüche 22-25, wobei der Hyaluronsäureester in einem organischen Lösungsmittel gelöst wird, die Lösung in eine Folien- bzw. Fadenform gebracht wird und das organische Lösungsmittel dann durch Behandlung mit einem anderen geeigneten organischen oder wäßrigen Lösungsmittel, welches in ersterem Lösungsmittel löslich ist, entfernt wird.

27. Verfahren zur Herstellung einer Folie oder eines Fadens aus einem Hyaluronsäureester gemäß einem der Ansprüche 22-25, wobei der Hyaluronsäureester in einem organischen Lösungsmittel gelöst wird, die Lösung in eine Folien- bzw. Fadenform gebracht wird und das organische Lösungsmittel dann durch Behandlung mit einem Strom eines geeigneten heißen Inertgases entfernt wird.

28. Hygiene- oder chirurgischer Artikel gemäß Anspruch 22 in Form einer Kapsel zur subkutanen Implantation von Medikamenten; in Form einer Mikrokapsel zur subkutanen, intramuskulären oder intravenösen Injektion;

in Form einer festen Einlage, die nach einer bestimmten Zeit wieder entfernt wird; oder

in Form eines Schwammes für die Behandlung von Wunden und verschiedenen Verletzungen.

29. Verfahren zur Herstellung eines Hyaluronsäureesters, wobei ein quartäres Ammoniumsalz der Hyaluronsäure in einem aprotischen Lösungsmittel mit einem Veresterungsmittel behandelt wird und, wenn gewünscht, in dem erhaltenen Partialester freie Carboxygruppen in ein Salz überführt werden oder als Salz vorliegende Gruppen zu Carboxygruppen freigesetzt werden.

30. Verfahren gemäß Anspruch 29, wobei Dimethylsulfoxid als aprotisches Lösungsmittel verwendet wird.

31. Verfahren gemäß Anspruch 29, wobei ein Tetraniederalkylammoniumsalz der Hyaluronsäure als Ausgangssalz verwendet wird.

32. Verfahren gemäß Anspruch 29, wobei das Tetrabutylammoniumsalz der Hyaluronsäure verwendet wird.

33. Ester gemäß einem der Ansprüche 1 - 10, bei welchem der Hyaluronsäureester von einer Hyaluronsäure mit einem Molekulargewicht zwischen 8 und 13 Millionen abstammt.

34. Ester gemäß einem der Ansprüche 1 - 10, bei welchem der Hyaluronsäureester von einer Hyaluronsäurefraktion mit einem Molekulargewicht zwischen etwa 90-80% und 0.23% des Molekulargewichts der vollständigen Hyaluronsäure mit einem Molekulargewicht von 13 Millionen abstammt.

35. Ester gemäß einem der Ansprüche 1 - 10, bei welchem der Hyaluronsäureester von einer Molekülfraktion mit einem Molekulargewicht zwischen etwa 50000 und 100000, die im wesentlichen frei von Hyaluronsäure mit einem Molekulargewicht von weniger als 30000 ist, abstammt.

36. Ester gemäß einem der Ansprüche 1 - 10, bei welchem der Hyaluronsäureester von einer Molekülfraktion mit einem Molekulargewicht zwischen etwa 500000 und 730000, die im wesentlichen frei von Hyaluronsäure mit einem Molekulargewicht von weniger als 30000 ist, abstammt.