CZ2014451A3 - Protinádorová kompozice na bázi kyseliny hyaluronové a anorganických nanočástic, způsob její přípravy a použití - Google Patents

Protinádorová kompozice na bázi kyseliny hyaluronové a anorganických nanočástic, způsob její přípravy a použití Download PDF

Info

Publication number
CZ2014451A3
CZ2014451A3 CZ2014-451A CZ2014451A CZ2014451A3 CZ 2014451 A3 CZ2014451 A3 CZ 2014451A3 CZ 2014451 A CZ2014451 A CZ 2014451A CZ 2014451 A3 CZ2014451 A3 CZ 2014451A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
nanoparticles
composition according
antitumor composition
composition
hyaluronan
Prior art date
Application number
CZ2014-451A
Other languages
English (en)
Inventor
Daniela Šmejkalová
Kristina Nešporová
Martina Teplá
Jakub Syrovátka
Gloria Huerta-Angeles
Martina Pospíšilová
Vít Matuška
Jiří Mrázek
Andrea Gálisová
Daniel Jirák
Vladimír Velebný
Original Assignee
Contipro Pharma A.S.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Contipro Pharma A.S. filed Critical Contipro Pharma A.S.
Priority to CZ2014-451A priority Critical patent/CZ2014451A3/cs
Priority to EP15801986.9A priority patent/EP3160509B1/en
Priority to HUE15801986A priority patent/HUE049244T2/hu
Priority to RU2016151263A priority patent/RU2686679C2/ru
Priority to ES15801986T priority patent/ES2768798T3/es
Priority to PL15801986T priority patent/PL3160509T3/pl
Priority to JP2016575532A priority patent/JP6556765B2/ja
Priority to US15/322,776 priority patent/US10617711B2/en
Priority to KR1020177002613A priority patent/KR20170021351A/ko
Priority to DK15801986.9T priority patent/DK3160509T3/da
Priority to PCT/CZ2015/000068 priority patent/WO2016000669A2/en
Publication of CZ2014451A3 publication Critical patent/CZ2014451A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/728—Hyaluronic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/26—Iron; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/30—Zinc; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A61K49/12—Macromolecular compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A61K49/1806—Suspensions, emulsions, colloids, dispersions
    • A61K49/1809—Micelles, e.g. phospholipidic or polymeric micelles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A61K49/1818—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles
    • A61K49/1821—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles
    • A61K49/1824—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles
    • A61K49/1827—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles having a (super)(para)magnetic core, being a solid MRI-active material, e.g. magnetite, or composed of a plurality of MRI-active, organic agents, e.g. Gd-chelates, or nuclei, e.g. Eu3+, encapsulated or entrapped in the core of the coated or functionalised nanoparticle
    • A61K49/1833—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles having a (super)(para)magnetic core, being a solid MRI-active material, e.g. magnetite, or composed of a plurality of MRI-active, organic agents, e.g. Gd-chelates, or nuclei, e.g. Eu3+, encapsulated or entrapped in the core of the coated or functionalised nanoparticle having a (super)(para)magnetic core coated or functionalised with a small organic molecule
    • A61K49/1839—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles having a (super)(para)magnetic core, being a solid MRI-active material, e.g. magnetite, or composed of a plurality of MRI-active, organic agents, e.g. Gd-chelates, or nuclei, e.g. Eu3+, encapsulated or entrapped in the core of the coated or functionalised nanoparticle having a (super)(para)magnetic core coated or functionalised with a small organic molecule the small organic molecule being a lipid, a fatty acid having 8 or more carbon atoms in the main chain, or a phospholipid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A61K49/1818—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles
    • A61K49/1887—Agglomerates, clusters, i.e. more than one (super)(para)magnetic microparticle or nanoparticle are aggregated or entrapped in the same maxtrix
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5115—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Řešení se týká protinádorové kompozice na bázi hydrofobizovaného hyaluronanu a anorganických nanočástic, stabilizovaných kyselinou olejovou. Hydrofobizovaný hyaluronan ve formě acylovaného hyaluronanu slouží v kompozici jako nosič anorganických nanočástic. Ze skupiny anorganických nanočástic může kompozice zahrnovat superparamagnetické nanočástice, nanočástice ZnO a dále upkonverzní nanočástice. Daná kompozice je selektivně cytotoxická vůči suspenzním i adherentním nádorovým buněčným liniím, zejména vůči nádorovým buněčným liniím karcinomu a adenokarcinomu kolorekta a dále karcinomu plic, hepatocelulárního karinomu a prsního adenokarcinomu. Nejvyšší cytotoxické účinky byly zjištěny v případě kompozice na bázi oleyl derivátu hyaluronanu se SPIONy.

Description

PV ' *1 τ Protinádorová kompozice na bázi kyseliny hyaluronové a anorganických nariočástic, způsob její přípravy a použití
Oblast techniky
Vynález se týká kompozice na bázi kyseliny hyaluronové, která je využitelná při léčbě nádorových onemocnění. Kompozice zahrnuje polymemí nanomicely obsahující hydrofobizovaný derivát kyseliny hyaluronové nebo její farmaceuticky přijatelné soli a nanočástice stabilizované kyselinou olejovou, s výhodou superparamagnetické nanočástice železa, nanočástice zinku nebo upkonverzní nanočástice.
Dosavadní stav techniky
Při léčbě nádorových onemocnění se nej častěji používá chemoterapie, při které jsou pacientovi intravenózně nebo orálně podány léčivé látky, které jsou systémově distribuovány do celého těla. Protinádorové látky jsou však vysoce toxické nejenom vůči nádorovým, ale i vůči zdravým buňkám. Důsledkem systémové distribuce je potom toxicita protinádorových terapeutik nejenom v místech s nádorovým onemocněním, ale i v místech zdravých tkání a buněk. Navíc, neselektivní distribuce léčiva snižuje množství léčivé látky, která se nakonec dostane k nádorovým buňkám, a tím snižuje efektivitu terapie.
Z tohoto důvodu existuje enormní zájem o nalezení vhodné strategie, která by umožnila zvýšení chemoterapeutické selektivity vůči nádorovým buňkám a zároveň potlačila nežádoucí systémovou toxicitu terapeutik. Bylo zjištěno, že nežádoucí vedlejší efekty léčivých látek bývají z velké části potlačeny, někdy i eliminovány, pokud je léčivo zabudováno do matrice nosičových systémů. Za tímto účelem se výzkum často směřuje na cílení takovýchto nosičových systémů k nádorovým buňkám.
V současné době se nejčastěji pro cílení používají dvě strategie. Jedna z nich je založena na tzv. pasivním cílení, kdy se využívá zvýšené permeability a retence nádorových tkání (tzv. EPR efekt) (Maeda, 2001). Na rozdíl od zdravých tkání, nádorové tkáně bývají charakterizovány proděravělou vaskulaturou, pomocí které se z krevního řečiště mohou do nádoru dostávat molekuly v nanometrevých rozměrech. Pasivní cílení je však kromě jiného limitováno málo efektivním a nespecifickým vychytáváním nosičových systémů s léčivou látkou nádorovými buňkami (Duncan & Gaspar, 2011; El-Dakdouki, Pure & Huang, 2013). Pokud však nosičový systém má vhodnou velikost pro pasivní cílení, může být tento způsob
-2cílení spojený se zvýšeným protinádorovým účinkem daného terapeutika vůči nádorovým buňkám dalšími vlastnostmi nosiče. Například patent W02008/130121 si nárokuje nádorově selektivní a biodegradovatelný cyklotrifosfazen-platinový (II) konjugát, který tvoří ve vodných roztocích polymemí micely a oproti podobným konjugátům US2001/6333422 vykazuje zvýšenou selektivitu při pasivním cílení do nádorových tkání. Zvýšená selektivita vůči nádorovým buňkám při pasivním cílení je uvedena i v patentu WO2013/188727, nárokujícím si biodegradabilní PEGylované nanočástice obsahující konjugát léčivé látky (SN38, PI-103, etoposid, fenretinid) s retinoátem nebo jeho izomerem, vázaným přes rychle se štěpící esterovou fenolickou vazbu. Zvýšená selektivita byla v obou případech zjištěna na základě experimentálních dat při porovnání s podobnými systémy.
Jiným způsobem, jak zefektivnit cílení a tím selektivitu působení léčiva, je možnost, kdy se nanoterapeutika modifikují ligandy s vysokou afinitou k receptorům, vyskytujícím se na povrchu nádorových buněk (Duncan & Gaspar, 2011; Ruoslahti, Bhatia & Sailor, 2010). Tato druhá strategie, známá pod pojmem aktivní cílení, by měla zajistit selektivní distribuci terapeutika do nádorových buněk. Příkladem může být například řešení chráněné v patentu US2007/0155807, ve kterém jsou nárokovány deriváty karboxylových kyselin thiazolidinon amidů a thiazolidinin amidů, u kterých bylo zjištěno selektivní působení vůči buňkám melanomu se zvýšenou expresí LPL receptorů. Nevýhodou tohoto řešení je fakt, že LPL receptory jsou exprimovány i u zdravých buněk, např. kardiomyocytů a tím může dojít k jejich selektivnímu působení i ve zdravé tkáni. Další nevýhodou tohoto a podobných řešení (např. WO 2012/173677, US 2013/02742200) je však fakt, že exprese receptorů nádorových buněk je variabilní nejenom v čase, ale i mezi pacienty (Duncan & Gaspar, 2011). Zvolený navázaný ligand pro aktivní cílení potom může působit na buňky pouze v určitém stádiu nádorových onemocnění nebo pouze u některých pacientů.
Další možnost aktivního cílení spočívá v cílení nosičových systémů externím magnetickým polem v případě, že nosičové systémy obsahují buď kovalentně nebo nekovalentně navázané magnetické nanočástice. V tomto případě se s velkou výhodou mohou použít superparamagnetické nanočástice (SPIONy). Nejčastěji se jedná o nanočástice Fe3O4, které jsou považovány za inertní kontrastní MRI prostředky bez zamýšlené farmakologické funkce (Huang et al., 2013). Pro SPIONy zatím nejsou reportovány krátkodobé nebo dlouhodobé toxicity po jejich intemalizaci do buňky (Huang et al., 2013). Kromě MRI kontrastu a magnetického cílení je SPIONy možné využít jako nosičů v kombinaci
-3s cytostatiky nebo jinými léčivými látkami. Dalším výhodným použitím je magnetická fluidní hypertermie, kdy SPIONy absorbují energii střídavého magnetického pole a přeměňují ji na teplo. V místě, kde se SPIONy nacházejí lze tedy selektivně zvýšit teplotu. Pokud se SPIONy nacházejí v místě nádoru, zvýšenou teplotou lze zničit nádorové buňky, protože jsou na zvýšení teploty více citlivé než buňky zdravé (Laurent, Dutz, Hafeli & Mahmoudi, 2011).
V kombinaci s pasivním nebo aktivním cílením se pro zvýšení selektivity terapeutika vůči nádorovým buňkám využívají některé odlišné vlastnosti těchto buněk oproti zdravým buňkám (Fleige, Quadir & Haag, 2012). Mezi takovéto vlastnosti patří například kyselejší pH nebo zvýšená hladina reaktivních forem kyslíku (ROS). Patent US2013/0230542 uvádí terapeutické komponenty (deriváty fenolu), které jsou aktivovány právě v prostředí s vyskytujícími se ROS a měly by tedy selektivně působit v nádorových buňkách se zvýšenou hladinou ROS. Nevýhodou tohoto řešení je však fakt, že zvýšená hladina ROS je i v některých zdravých buňkách. Příkladem jsou makrofágy, u nichž vysoká hladina umožňuje likvidaci patogenů ve fagozómech. Zvýšená hladina ROS slouží i v jiných buňkách jako přirozený mechanismus obrany proti hypoxii a také jako signální molekuly ovlivňující celou řadu fyziologických funkcí.
V literatuře se objevují i protinádorové kompozice, které jsou slibné tím, že in vitro působí protinádorové proti některým typům nádorových buněk. Příkladem je kompozice (US 2005/0255173) obsahující jednu až tři komponenty z následujících skupiny: kyselina citrónová, zineka albumin. Tato kompozice byla více cytotoxická in vitro proti lidským buněčným liniím odvozeným od adenokarcinomů NIH:OV-CAR-3 a SKOV-3 ve srovnání s kontrolními buňkami WI38 (normální lidské plicní fibroblasty).Nevýhodou této kompozice je to, že její protinádorový účinek je závislý na koncentračním obsahu jednotlivých složek (US 2005/0255173). Tím, že jde o látky tělu vlastní, účinek nárokované kompozice může být ovlivněn lokální koncentrací jednotlivých látek v daném místě podání (například vysokou koncentrací albuminu v krvi).
Z citované literatury je vidět, že výzkum protinádorových terapeutik aktivně probíhá celosvětově. Úspěch klinického použití navržených řešení je však zatím stále výzvou, zejména z toho důvodu, že většina navrhovaných kompozic zahrnuje organické polymery, které nejsou biodegradabilní, a nemá dostatečnou selektivitu vůči nádorovým buňkám. Z tohoto důvodu stále existuje zájem o nalezení nových kompozic se selektivními účinky na nádorové buňky.
-4Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou nanomicely hyaluronanu kombinované s anorganickými nanočásticemi jako selektivní protinádorová terapeutika. Konkrétněji se vynález týká kompozice na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové a anorganických nanočástic, která selektivně působí na buňky odvozené z karcinomu a adenokarcinomu kolorekta, karcinomu plic, hepatocelulámího karcinomu a prsního adenokarcinomu. Kompozici lze rovněž využít jako in vivo kontrastní látku. Dále se vynález týká způsobu přípravy této kompozice.
Kompozice je založena na navázání anorganických nanočástic, stabilizovaných kyselinou olejovou, do nanomicel hydrofobizovaného hyaluronanu. Navázání lze uskutečnit sonikací roztoků nanočástic v organickém rozpouštědle s roztokem hydrofobizovaného hyaluronanu ve vodě. Vzniklé nanomicely, obsahující anorganické nanočástice, se následně oddělují v průběhu centrifugace od nenavázaných anorganických nanočástic a mohou se použít k selektivnímu ovlivnění nádorových buněk. Hlavní a unikátní výhodou kompozice předmětu vynálezu je její selektivní působení in vitro na nádorové buňky a to i v případě, kdy je ovlivněna směs nádorových a kontrolních buněk. Kompozice obsahuje anorganické nanočástice, stabilizované kyselinou olejovou, jejichž původní účel v kompozici byl, umožnit in vivo detekci kompozice po jejím podání do těla. V kombinaci s hydrofobizovanou kyselinou hyaluronovou, zejména s oleyl derivátem kyseliny hyaluronové, se však s překvapením zjistilo, že daná kompozice je i bez cytostatika nebo jiné terapeutické látky selektivně cytotoxická vůči nádorovým buňkám in vitro. Tento nečekaný a zatím nevysvětlený účinek byl zjištěn pro nanočástice ŠPIONŮ, oxidu zinečnatého a upkonverzní nanočástice v případě, že byly stabilizované kyselinou olejovou. Nečekaný účinek nelze jednoznačně vysvětlit jako receptorově zprostředkovaný přes CD44 receptory, specifické pro hyaluronan, a podle dosavadních dat zjištěnou selektivitu nelze spojit ani s vlivem zvýšené produkce ROS. Selektivita však může být způsobena jiným mechanismem intracelulámího uvolňování iontů nanočástice. Selektivní účinek na nádorové buňky je o to překvapivější, že SPIONy zabudované v nosičích na bázi polysacharidu nebo v jiné polymemí matrici bývají reportovány jako necytotoxické (El-Dakdouki et al., 2012; Li, Kim, Tian, Yu, Jon & Moon, 2012).
Dalšími výhodami této kompozice je kompatibilita s fyziologickými roztoky, možnost intravenózního podání in vivo a stabilita nanomicel v čase ve fyziologickém pH. Jinou výhodou kompozice je použití hyaluronanu jako nosného polymeru, který vytváří obal
-5nanomicelámích systémů a tím zajišťuje kompatibilitu kompozice pro in vivo podání. Hyaluronan může také s výhodou podpořit vazbu této kompozice na nádorové buňky, vyznačující se zvýšenou expresí receptoru CD44. Přítomnost ŠPIONŮ v kompozici může být s výhodou použita k cílení nosičů do požadovaného místa v těle magnetickým polem. Střídavým magnetickým polem lze vyvolat hypertermii vedoucí ke zničení nádorové tkáně. Další výhodou je, že danou kompozici je možné kombinovat s dalšími aktivními látkami, například cytostatiky. Podobně jako u ŠPIONŮ a nanočástic oxidu zinečnatého lze přítomnost upkonverzních nanočástic s výhodou využít pro in vivo detekci kompozice v tkáni. Upkonverzní nanočástice o specifickém složení lze navíc využít za účelem fotodynamické terapie nebo kříženému uvolňování léčiva z kompozice. Přítomnost nanočástic oxidu zinečnatého lze s výhodou využít v nádorových tkáních s kyselejším pH, kdy může dojít k rozpuštění nanočástic ZnO a uvolněníiontů Zn2+, které jsou ve vyšší koncentraci lokálně cytotoxické.
Vynález se tedy týká protinádorové kompozice na bázi acylovaného hyaluronanu a anorganických nanočástic stabilizovaných kyselinou olejovou a vybraných ze skupiny zahrnující superparamagnetické nanočástice, upkonverzní nanočástice nebo nanočástice oxidu zinečnatého, zejména superparamagnetické částice. Acylovaným hyaluronanem může být CéCis-acylovaný derivát kyseliny hyaluronové s nasycenými a nenasycenými vazbami, zejména Ci8:i acylovaný derivát kyseliny hyaluronové a tento acylovaný hyaluronan slouží jako nosič anorganických nanočástic. V případě, že kompozice podle vynálezu obsahuje superparamagnetické nanočástice, jde s výhodou o nanočástice na bázi oxidů železa, kde množství Fe v kompozici je 0,3-3% hm., s výhodou 1,0 % hm.Velikost superparamagnetických nanočástic je 5-20 nm, s výhodou 5-7 nm, ještě výhodněji 5 nm.V případě, že protinádorová kompozice obsahuje nanočástice oxidu zinečnatého, jsou v ní přítomny s výhodou v množství 0,3-3% hm. Zn.V případě, že protinádorová kompozice obsahuje upkonverzní nanočástice, obsahuje je s výhodou v takovém množství, že celkový obsah prvků vzácných zemin v kompozici je 0,3-3% hm. Upkonverzní nanočástice mohou obsahovat např. Er, Yb a Y. Výhodou kompozice podle vynálezu je také to, že je sterilizovatelná v konečném obalu autoklávováním.
Protinádorovou kompozici podle vynálezu lze použít zejména pro inhibici růstu adherentních i suspenzních lidských nádorových buněčných linií odvozených z karcinomu a adenokarcinomu kolorekta, karcinomu plic, hepatocelulámímu karcinomu, prsního adenokarcinomu, s výhodou karcinomu a adenokarcinomu kolorekta.Dále lze protinádorovou
-6kompozici obsahující superparamagnetické nanočástice použít jako in vivo kontrastní látku, tj. pro detekci akumulace kompozice v těle, zejména v játrech a patologických útvarech, např. v nádorech. Bylo zjištěno, že kompozice podle vynálezu vykazuje odlišný způsob uvolňování iontů kovu, in vitro v nádorových a nenádorových buňkách, zejména v buňkách odvozených z lidského adenokarcinomu kolorekta(=nádorové) a lidských dermálních fibroblastech (=nenádorové).
Protinádorovou kompozici podle vynálezu lze aplikovat ve formulaci pro parenterální nebo lokální podání, např. intravenózně. Může dále obsahovat další aditiva, používaná ve farmaceutických kompozicích, s výhodou chlorid sodný, dextrózu nebo pufrovací soli.
Kompozici podle vynálezu lze připravit tak, že se připraví vodný roztok acylovaného derivátu kyseliny hyaluronové, následně se přidají anorganické částice rozptýlené v halogenidovém rozpouštědle, např. v chloroformu, stabilizované kyselinou olejovou a vybrané ze skupiny zahrnující superparamagnetické nanočástice, upkonverzní nanočástice nebo nanočástice oxidu zinečnatého, a vzniklá suspenze se sonikuje do vzniku homogenní směsi a poté se nenavázané anorganické nanočástice oddělí od navázaných anorganických nanočástic v nanomicelách centrifugací a následnou filtrací. Filtrát se může následně lyofilizovat nebo sterilizovat autoklávováním za účelem dlouhodobého skladování. Lyofilizát se může následně rozpustit ve vodném roztoku a sterilizovat autoklávováním.
Pro účely vynálezu lze použiti komerčně dostupné špiony, stabilizované kyselinou olejovou.
Literatura
Duncan, R., & Gaspar, R. (2011). Nanomedicine(s) under the Microscope. Molecular Pharmaceutics, 8(6), 2101-2141.
El-Dakdouki, Μ. H., Pure, E., & Huang, X. (2013). Development of drug loaded nanoparticles for tumor targeting. Part 1: synthesis, characterization, and biological evaluation in 2D cell cultures. Nanoscale, 5(9), 3895-3903.
El-Dakdouki, Μ. H., Zhu, D. C., El-Boubbou, K., Kamat, M., Chen, J., Li, W., & Huang, X. (2012). Development of Multifunctional Hyaluronan-Coated Nanoparticles for Imaging and Drug Delivery to Cancer Cells. Biomacromolecules, 13(4), 1144-1151.
Fleige, E., Quadir, M. A., & Haag, R. (2012). Stimuli-responsive polymeric nanocarriers for the controlled transport of active compounds: Concepts and applications. Advanced Drug Delivery Reviews, 64(9), 866-884.
-i·· ♦ · η· · ···
Huang, G., Chen, H., Dong, Y., Luo, X., Yu, H., Moore, Z., Bey, E. A., Boothman, D. A., & Gao, J. (2013). Superparamagnetic iron oxide nanoparticles: amplifying ROS stress to improve anticancer drug efficacy. Theranostics, 3(2), 116-126.
Laurent, S., Dutz, S., Hafeli, U. 0., & Mahmoudi, M. (2011). Magnetic fluid hyperthermia: focus on superparamagnetic iron oxide nanoparticles. Advances in Colloid and Interface Science, 166(1-2), 8-23.
Li, M., Kim, H. S., Tian, L., Yu, Μ. K., Jon, S., & Moon, W. K. (2012). Comparison of Two Ultrasmall Superparamagnetic Iron Oxides on Cytotoxicity and MR Imaging of Tumors. Theranostics, 2(1), 76-85.
Maeda, H. (2001). The enhanced permeability and retention (EPR) effect in tumor vasculature: the key role of tumor-selective macromolecular drug targeting. Advances in Enzyme Regulation, 41(1), 189-207.
Ruoslahti, E., Bhatia, S. N., & Sailor, M. J. (2010). Targeting of drugs and nanoparticles to tumors. The Journal of Cell Biology, 188(6), 759-768.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1. TEM snímek enkapsulováných nanočástic (ŠPIONŮ) do hydrofobizováného hyaluronanu.
Obrázek 2. Inhibice viability kompozicí acylovaného hyaluronanu se SPIONy u nádorové linie HT-29 oproti pozitivnímu/neutrálnímu efektu u kontrolních fibroblastů NHDF a myší nenádorové linie 3T3
Obrázek 3. Vliv kompozice acylovaného hyaluronanu se SPIONy na inhibici viability různých nádorových buněčných linií oproti pozitivnímu efektu u kontrolních fibroblastů NHDF a myší nenádorové linie 3T3
Obrázek 4. Srovnání vlivu na viabilitu nádorových buněk HT-29 a zdravých NHDF a 3T3 kompozic acylovaného hyaluronanu s enkapsulovanými 5nm, lOnm a 20nm SPIONy.
Obrázek 5. Inhibice viability kompozicí acylovaného hyaluronanu se zinkovými nanočásticemi u nádorové linie HT-29 oproti pozitivnímu/neutrálnímu efektu u kontrolních fibroblastů NHDF a myší nenádorové linie 3T3.
Obrázek 6. Inhibice viability kompozicí acylovaného hyaluronanu s upkonverzními nanočásticemi u nádorové linie HT-29 oproti pozitivnímu/neutrálnímu efektu u kontrolních fibroblastů NHDFa myší nenádorové linie 3T3.
-8Obrázek 7.Kokultivace zdravých fibroblastů NHDF a kontrolních buněk HT-29 s kompozicí acylovaného hyaluronanu se SPIONy.
Obrázek 8.Exprese receptoru CD44 na povrchu buněk NHDF, MCF-7 a MDA-MB-231 stanovená pomocí průtokové cytometrie.
Obrázek 9. Indukce tvorby ROS kompozicí acylovaného hyaluronanu se SPIONy u NHDF a HT-29.
Obrázek 10. Intracelulámí značení Fe v nádorových HT-29 a kontrolních NHDF buňkách po inkubaci s kompozicí acylovaného hyaluronanu se SPIONy (měřítko: 10 pm)
Obrázek 11. MRI detekce časové akumulace ŠPIONŮ loadovaných vacylovaném hyaluronanu po intravenózním podání v nádoru (glioblastomový nádor, 1,1 mg Fe/kg).
Obrázek 12. MRI kontrast jater po intravenózním podání kompozice ŠPIONŮ loadovaných v acylo váném hyaluronanu (1,1 mg Fe/kg).
Obrázek 13. Detekce Fe v histologických řezech nádoru (po 2 a 24 hodinách od podání kompozice se SPIONy) po obarvení Pruskou modří.
Obrázek 14. Detekce Fe v histologických řezech jater (po 2 a 24 hodinách od podání kompozice se SPIONy) po obarvení Pruskou modří.
Obrázek 15.TEM snímek enkapsulovaných nanočástic (ŠPIONŮ) do hydrofobizovaného hyaluronanu po sterilizaci.
Obrázek 16. Selektivní cytotoxicita kompozice se SPIONy před a po sterilizaci autoklávováním.
Obrázek 17. Indukce apoptózy kompozicí se SPIONy v myší nádorové lymfomové linii EL4.
Příklady provedení vynálezu
SS = stupeň substituce = 100% * molámí množství navázaného substituentu / molámí množství všech dimerů polysacharidů
-9Zde používaný výraz ekvivalent (eq) se vztahuje na dimer kyseliny hyaluronové, není-li uvedeno jinak. Procenta se uvádějí jako hmotnostní procenta, pokud není uvedeno jinak. Molekulová hmotnost výchozí kyseliny hyaluronové (zdroj: ContiproPharma, a.s., Dolní Dobrouč, ČR) byla stanovena metodou SEC-MALLS.
Příklad 1 Příprava hydrofobizované kyseliny hyaluronové, konkrétně oleyl derivátu (C18:l) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhydridu kyseliny benzoové a kyseliny olejové.
100 g hyaluronanu sodného (250 mmol, 15 kDa) bylo rozpouštěno v 2000 ml demi vody. Poté bylo postupně přidáno 1000 ml isopropanolu. Poté se do roztoku přidaly TEA (70 ml, 3 eq.) a DMAP (1.52 g, 0,05 eq.). Současně byla rozpuštěna olejová kyselina (35,3 g 0,5 eq) v 1000 ml isopropanolu, poté se do roztoku přidal TEA (70 ml, 3 eq.) a benzoyl chlorid (14.4 ml, 0.5 eq.). Po aktivaci kyseliny byla sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 hod při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 1000 ml demi vody s přídavkem 95g NaCl. Acylovaný derivát byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního isopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla vodným roztokem izopropanolu (85% obj.).
SS 13 % (stanoveno z NMR).
‘H NMR (D2O): δ 0,88 (t, 3H, -CH2·®), δ 1,22-1,35 (m, 20H, (-CH2-)io), δ 1,60 (m, 2H, -CH2-CH2-CO-), δ 2,0 (4H, (-CH2-)2), δ 2,41 (t, 2H, -CH2-CO-), δ 5,41 (d, 2H, CH=CH)
Tento příklad popisuje obecnou syntézu hydrofobizovaného derivátu hyaluronanu. Postup ale není limitován pouze pro oleyl derivát. Detailní popis syntézy hydrofobizovaných derivátů je uveden v patentové přihlášce PV2012-842.
Příklad 2. Příprava ŠPIONŮ se střední velikostí 5 nm
Do tříhrdlé baňky s objemem 50 ml bylo přidáno 1,80 g oleátu železitého, 0,35 ml kyseliny olejové a 13,35 ml 1-oktadecenu. Směs byla pomalu zahřívána pod vakuem na 100 °C, kde byla ponechána 30 minut pro odtažení těkavých složek. Poté byla směs pod mírným proudem argonu zahřáta na 280 °C a při této teplotě ponechána 60 minut. Směs byla během reakce při 280 °C probublávána argonem. Po vychladnutí na pokojovou teplotu byl k reakční směsi přidán aceton a nanočástice byly odděleny centrifugách Vysrážené SPIONy byly poté 4x promyty
-10směsí hexan/aceton (poměr postupně 1:4 až 1:1) a nakonec rozptýleny do toluenu a skladovány při 4 °C ve tmě.
Výtěžek: 78%
Velikost nanočástic: 5,2 ± 0,8 nm (dle snímku z elektronového mikroskopu)
Příklad 3. Příprava ŠPIONůse střední velikostí 10 nm
Do tříhrdlé baňky s objemem 50 ml bylo přidáno 1,80 g oleátu železitého, 0,35 ml kyseliny olejové a 13,35 ml 1-oktadecenu. Směs byla pomalu zahřívána pod vakuem na 100 °C, kde byla ponechána 30 minut pro odtažení těkavých složek. Poté byla směs pod mírným proudem argonu zahřáta na bod varu (—317 °C) a při této teplotě ponechána 60 minut. Po vychladnutí na pokojovou teplotu byly SPIONy izolovány stejně jako v Příkladu 2.
Výtěžek: 74%
Velikost nanočástic: 9,8 ± 0,5 nm (dle snímku z elektronového mikroskopu)
Přiklad 4. Příprava SPIONůse střední velikostí 20 nm
Do tříhrdlé baňky s objemem 50 ml bylo přidáno 1,80 g oleátu železitého, 0,35 ml kyseliny olejové, 5,34 ml 1-oktadecenu a 6 g n-dokosanu. Směs byla pomalu zahřívána pod vakuem na 100 °C, kde byla ponechána 30 minut pro odtažení těkavých složek. Poté byla směs pod mírným proudem argonu zahřáta na 315 °C a při této teplotě ponechána 60 minut. Po vychladnutí na pokojovou teplotu byly SPIONy izolovány stejně jako v Příkladu 2.
Výtěžek: 56%
Velikost nanočástic: 21,1 ± 3,1 nm (dle snímku z elektronového mikroskopu)
Příklad 5. Příprava nanočástic ZnO
Dihydrát octanu zinečnatého (1185,30 mg; 5,4 mmol) byl vpraven do trojhrdlé baňky o objemu 250 ml a rozpuštěn v methanolu (90 ml) při laboratorní teplotě. Mezitím byl v dvojhrdlé baňce připraven roztok tetramethylamonium hydroxidu (1622,91 mg; 8,96 mmol) v methanolu (22,39 ml). Oba výše zmíněné roztoky byly odplyněny v ultrazvukové lázni za současného probublávání argonem po dobu 15 min (teplota vodní lázně 50 °C, výkon 120 W). Metanolový roztok octanu zinečnatého byl pod zpětným chladičem zahřát na olejové lázni (teplota lázně 60 °C), po přídavku kyseliny olejové (310 μΐ; 0,99 mmol) byla směs přivedena
-11 k varu (teplota lázně 85 °C). Roztok tetramethylamonium hydroxidu v methanolu byl zahřát pod zpětným chladičem (teplota lázně 75 °C) a rychle přidán do trojhrdlé baňky obsahující octan zinečnatý a kyselinu olejovou. Reakční směs byla refluxována za stálého míchání (600 rpm) a probublávání argonem po dobu 2 min (teplota lázně 85 °C). Poté byla směs zředěna methanolem (90 ml) a chlazena 15 min na ledové lázni. Ochlazená směs byla centrifugována 15 min (4000xg, 4 °C). Částice byly promyty ethanolem (3><25 ml), po každém promývacím kroku následovala centrifugace 10 min (4000xg, 25 °C). Částice byly rozptýleny v chloroformu (45 ml) a skladovány při 4 °C ve tmě.
Kvantový výtěžek fluorescence: 34 % (stanovený relativní metodou, standard = norharman) Velikost nanočástic: 3,4 ± 0,3 nm (dle snímku z elektronového mikroskopu)
Příklad 6. Příprava upkonverznich nanočástic
Do trojhrdlé baňky na 100 ml bylo naváženo množství odpovídající 1,60 mmol octanu yttritého, 0,36 mmol octanu ytterbitého, 0,04 mmol octanu erbitého a byl přidán oktadec-l-en (34 ml) a kyselina olejová (12,0 ml). Směs byla za intenzivního míchání (600 rpm) evakuována a pozvolna zahřívána na olejové lázni na 80 °C. Při této teplotě byla směs míchána ve vakuu do úplného vyčeření a od tohoto okamžiku dalších 90 minut. Baňka se směsí byla zaplněna argonem a po vychladnutí v atmosféře argonu na laboratorní teplotu byl ke směsi přidán roztok NaOH (200 mg) a NH4F (296,3 mg) v methanolu (20 ml), načež se směs okamžitě zakalila. Směs byla míchána při laboratorní teplotě přes noc, následně byl při 65 °C zvolna vyvařen methanol (olejová lázeň). Baňka se směsí byla poté přemístěna do topného hnízda řízeného PID regulátorem. Směs byla postupně uváděna do vakua, ve vakuu zvolna zahřívána na 112 °C a při této teplotě byla odplyňována po dobu 30 minut. Potom byla baňka se směsí zaplněna argonem a pod zpětným vzdušným chladičem byla v mírném proudu argonu zahřívána rychlostí 2 °C / min na 305 °C. Při 305 °C byla směs ponechána 110 minut, po odstavení záhřevu samovolně vychladla na pokojovou teplotu.
Upkonverzní nanočástice byly z reakční směsi vysráženy ethanolem (dvojnásobný objem než objem reakční směsi) a poté izolovány centrifugací (RCF 3000 x g; 10 minut). Nanočástice (sediment) byly rozptýleny v hexanu (5 ml), vysráženy ethanolem (10 ml) a odděleny centrifugací (RCF 3000 x g; 7 minut). Nanočástice byly takto přečištěny celkem třikrát systémem hexan/ethanol a třikrát systémem hexan/aceton. Nakonec byly částice rozptýleny v chloroformu (10 ml) a skladovány při pokojové teplotě.
Složení nanočástic (ICP-OES):NaYF4:Yb/Er (80 mol.% Y, 18 mol.% Yb, 2 mol.% Er
- 12Podíl organické složky (TGA): 7 %
Velikost nanočástic (elektronový mikroskop): 34 ± 2 nm
Příklad 7. Příprava kompozice kapronyl derivátu kyseliny hyaluronové (HAC6) se SPIONy
150 mg acylového derivátu hyaluronanu (HAC6, DS = 60%, Mw = 38 kDa) připraveného podle příkladu 1 bylo 2 hod rozpouštěno v 15 ml demivody za stálého míchání na magnetické míchačce. SPIONy (stabilizované kyselinou olejovou, velikost nanočástic 5 nm), připravené podle příkladu 2, byly převedeny z prostředí toluenu do prostředí chloroformu.
Roztok acylováného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikační nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 5 mg ŠPIONŮ rozptýlených ve 3ml CHCI3 (parametry sonikace: 200 W, amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice byly odděleny opakovanou centrifugací (3x 4500RPM, 10 min) a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi byl odebrán, zfiltrován přes l,0pm skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Fe (ICP stanovení): 1,1 % (hm)
Příklad 8. Příprava kompozice kaprylyl derivátu kyseliny hyaluronové (HAC8) se SPIONy
150 mg acylového derivátu hyaluronanu (HAC8, DS = 22%, Mw = 20 kDa)připraveného podle příkladu 1 bylo 2 hod rozpouštěno v 15 ml demivody za stálého míchání na magnetické míchačce. SPIONy (stabilizované kyselinou olejovou, velikost nanočástic 5 nm), připravené podle příkladu 2, byly převedeny z prostředí toluenu do prostředí chloroformu.
Roztok acylovaného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikační nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65 %, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 5 mg ŠPIONŮ rozptýlených ve 3 ml CHCI3 (parametry sonikace: 200 W, amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice byly odděleny opakovanou centrifugací (3x 4500RPM, 10 min)
- 13 a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi byl odebrán, zfiltrován přes l,0pm skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Fe (ICP stanovení): 1,1 % (hm)
Příklad 9. Příprava kompozice kaprinylderivátu kyseliny hyaluronové (HAC10) se SPIONy
150 mg acylového derivátu hyaluronanu (HAC10, DS = 15%, Mw =15 kDa) připraveného podle příkladu 1 bylo 2 hod rozpouštěno v 15 ml vody za stálého míchání na magnetické míchačce. SPIONy (stabilizované kyselinou olejovou, velikost nanočástic 5 nm), připravené podle příkladu 2, byly převedeny z prostředí toluenu do prostředí chloroformu.
Roztok acylovaného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikační nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 5 mg ŠPIONŮ rozptýlených ve 3ml CHC13 (parametry sonikace: 200 W, amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice byly odděleny opakovanou centrifugací (3x 4500RPM, 10 min) a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi byl odebrán, zfiltrován přes l,0pm skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Fe (ICP stanovení): 1,2 % (hm)
Příklad 10. Příprava kompozicepalmitoylderivátu kyseliny hyaluronové (HAC16) se
SPIONy
150 mg acylového derivátu hyaluronanu (HAC16, DS = 9%, Mw =15 kDa) připraveného podle příkladu 1 bylo 2 hod rozpouštěno v 15 ml demivody za stálého míchání na magnetické míchačce. SPIONy (stabilizované kyselinou olejovou, velikost nanočástic 5 nm), připravené podle příkladu 2, byly převedeny z prostředí toluenu do prostředí chloroformu.
Roztok acylovaného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikační nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 5 mg ŠPIONŮ rozptýlených ve 3 ml CHCI3 (parametry sonikace: 200 W, amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice byly odděleny opakovanou centrifugací (3* 4500RPM, 10 min)
- 14a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi byl odebrán, zfiltrován přes l,0pm skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Fe (ICP stanovení): 1,2 % (hm)
Příklad ll.Příprava kompozice stearylderivátu kyseliny hyaluronové (HAC18) se SPIONy 150 mg acylového derivátu hyaluronanu(HAC18:0, DS = 9%, Mw =15 kDa) připraveného podle příkladu 1 bylo 2 hod rozpouštěno v 15 ml demivody za stálého míchání na magnetické míchačce. SPIONy (stabilizované kyselinou olejovou, velikost nanočástic 5 nm), připravené podle příkladu 2, byly převedeny z prostředí toluenu do prostředí chloroformu.
Roztok acylovaného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikační nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 5 mg ŠPIONŮ rozptýlených ve 3 ml CHCI3 (parametry sonikace: 200 W, amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65 %, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice byly odděleny opakovanou centrifugací (3><4500RPM, 10 min) a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi byl odebrán, zfiltrován přes 1,0 pm skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Fe (ICP stanovení): 1,0 % (hm)
Příklad 12. Příprava kompozice oleylderivátu kyseliny hyaluronové (HAC18:1) se SPIONy
150 mg acylového derivátu hyaluronanu (HAC18:1, DS = 12%, Mw = 15 kDa) připraveného podle příkladu 1 bylo 2 hod rozpouštěno v 15 ml demivody za stálého míchání na magnetické míchačce. SPIONy (stabilizované kyselinou olejovou, velikost nanočástic 5 nm), připravené podle příkladu 2, byly převedeny z prostředí toluenu do prostředí chloroformu.
Roztok acylovaného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikační nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 5 mg ŠPIONŮ rozptýlených ve 3 ml CHCI3 (parametry sonikace: 200 W, amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice byly odděleny opakovanou centrifugací (3><4500RPM, 10 min)
-15a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi byl odebrán, zfiltrován přes l,0pm skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Fe (ICP stanovení): 1,0 % (hm)
Morfologie klastrováných nanočástic v polymemí micele je znázorněna na Obrázku 1.
Příklad 13. Příprava kompozice oleylderivátu kyseliny hyaluronové (HAC18:1) se SPIONy
120 mg acylového derivátu hyaluronanu(HAC18:l, DS = 12%, Mw =15 kDa) připraveného podle příkladu 1 bylo 2 hod rozpouštěno v 12 ml demi vody za stálého míchání na magnetické míchačce. SPIONy (stabilizované kyselinou olejovou, velikost nanočástic 5 nm), připravené podle příkladu 2, byly převedeny z prostředí toluenu do prostředí chloroformu.
Roztok acylovaného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikační nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 7,25 mg ŠPIONŮ rozptýlených ve 4 ml CHCI3 (parametry sonikace: 200 W, amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice byly odděleny opakovanou centrifugací (3><4500RPM, 10 min) a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi byl odebrán, zfiltrován přes l,0pm skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Fe (ICP stanovení): 1,8 % (hm)
Přiklad 14. Příprava kompozice linoleyl derivátu derivátu kyseliny hyaluronové (HAC18:2) se SPIONy
150 mg acylového derivátu hyaluronanu (HAC18:2, DS = 12%, Mw = 15 kDa) připraveného podle příkladu 1 bylo 4 hodiny rozpouštěno v 15 ml demivody za stálého míchání na magnetické míchačce. SPIONy (stabilizované kyselinou olejovou, velikost nanočástic 5 nm), připravené podle příkladu 2, byly převedeny z prostředí toluenu do prostředí chloroformu.
Roztok acylovaného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikaění nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 5 mg ŠPIONŮ rozptýlených ve 3 ml CHCI3 (parametry sonikace: 200 W, amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále
-16sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice byly odděleny opakovanou centrifugací (3x4500RPM, 10 min) a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi byl odebrán, zfiltrován přes Ι,Ομτη skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Fe (ICP stanovení): 0,98 % (hm)
Příklad 15. Příprava kompozice linolenyl derivátu derivátu kyseliny hyaluronové (HAC18:3) se SPIONy
150 mg acylového derivátu hyaluronanu (HAC18:3, DS = 3%, Mw = 15 kDa) připraveného podle příkladu 1 bylo 4 hod rozpouštěno v 15 ml demivody za stálého míchání na magnetické míchačce. SPIONy (stabilizované kyselinou olejovou, velikost nanočástic 5 nm), připravené podle příkladu 2, byly převedeny z prostředí toluenu do prostředí chloroformu.
Roztok acylovaného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikační nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 5 mg ŠPIONŮ rozptýlených ve 3 ml CHCfi (parametry sonikace: 200 W, amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice byly odděleny opakovanou centrifugací (3x 4500RPM, 10 min) a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi byl odebrán, zfiltrován přes 1,0 μηι skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Fe (ICP stanovení): 1,0 % (hm)
Příklad 16. Příprava kompozice oleylderivátu kyseliny hyaluronové (HAC18:1) se SPIONy
150 mg acylového derivátu hyaluronanu (HAC18:1, DS = 12%, Mw = 15 kDa) připraveného podle příkladu 1 bylo 2 hod rozpouštěno v 15 ml demivody za stálého míchání na magnetické míchačce. SPIONy (stabilizované kyselinou olejovou, velikost nanočástic 10 nm), připravené podle příkladu 3, byly převedeny z prostředí toluenu do prostředí chloroformu.
Roztok acylovaného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikační nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 5 mg ŠPIONŮ rozptýlených ve 3ml CHCfi (parametry sonikace: 200 W, amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále
-17sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice byly odděleny opakovanou centrifugací (3x 4500RPM, 10 min) a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi byl odebrán, zfiltrován přes Ι,Ομιη skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Fe (ICP stanovení): 0,4 % (hm)
Příklad 17. Příprava kompozice oleylderivátu kyseliny hyaluronové (HAC18:1) se SPIONy
150 mg acylového derivátu hyaluronanu(HAC18:l, DS = 12%, Mw = 15 kDa) připraveného podle příkladu 1 bylo 2 hod rozpouštěno v 15 ml demivody za stálého míchání na magnetické míchačce. SPIONy (stabilizované kyselinou olejovou, velikost nanočástic 20 nm), připravené podle příkladu 4, byly převedeny z prostředí toluenu do prostředí chloroformu.
Roztok acylovaného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikační nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65 %, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 5 mg ŠPIONŮ rozptýlených ve 3 ml CHCI3 (parametry sonikace: 200 W, amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65 %, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice byly odděleny opakovanou centrifugací (3* 4500RPM, 10 min) a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi byl odebrán, zfiltrován přes Ι,Ομιη skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Fe (ICP stanovení): 1,7 % (hm)
Příklad 18. Příprava kompozice oleylderivátu kyseliny hyaluronové (HAC18:1) se SPIONy a paklitaxelem
150 mg acylového derivátu hyaluronanu(HAC18:l, DS = 12%, Mw =15 kDa) připraveného podle příkladu 1 bylo 2 hod rozpouštěno v 15 ml demivody za stálého míchání na magnetické míchačce. Po té bylo 5 mg ŠPIONŮ (stabilizovaných kyselinou olejovou, velikost nanočástic 5 nm), připravených podle příkladu 2, převedeno z toluenu do chloroformu. Takto připravené nanočástice byly smíseny s 6 mg paklitaxelu rozpuštěnými ve 3 ml chloroformu.
Roztok acylovaného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikační nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 5 mg ŠPIONŮ s 6 mg paklitaxelu v CHCI3 (parametry sonikace: 200 W,
- 18amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice a paklitaxel byly odděleny opakovanou centrifugaci (3x 4500 RPM, 10 min) a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi a paklitaxelem byl odebrán, zfiltrován přes l,0pm skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Fe (ICP stanovení): 1,5% (hm)
Množství navázaného PTX (HPLC stanovení): 0.3% (hm)
Příklad 19. Příprava kompozice oleylderivátu kyseliny hyaluronové (HAC18:1) s nanočásticemi ZnO
150 mg acylového derivátu hyaluronanu(HAC18:l, DS = 12%, Mw =15 kDa) připraveného podle příkladu 1 bylo 2 hod rozpouštěno v 15 ml demivody za stálého míchání na magnetické míchačce.
Roztok acylovaného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikační nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65 %, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 5 mg ZnO (z příkladu 5) rozptýlených ve 3 ml CHCI3 (parametry sonikace: 200 W, amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice byly odděleny opakovanou centrifugaci (3* 4500RPM, 10 min) a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi byl odebrán, zfiltrován přes l,0pm skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Zn (ICP stanovení): 1,6 % (hm)
Příklad 20. Příprava kompozice oleylderivátu kyseliny hyaluronové (HAC18:1) supkonverzními nanočásticemi
150 mg acylového derivátu hyaluronanu (HAC18:1, DS = 12%, Mw = 15 kDa) připraveného v příkladu 1 bylo 2 hod rozpouštěno v 15 ml vody za stálého míchání na magnetické míchačce.
Roztok acylovaného hyaluronanu byl převeden do rozetové sonikační nádobky (RZ 1, objem 25 ml), ponořené v ledové lázni. Roztok byl nejprve sonikován po dobu 60 s (parametry sonikace: 200 W, amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Dále bylo k tomuto roztoku postupně přidáváno 5 mg upkonverzních nanočástic (z příkladu 6) rozptýlených ve 3
- 19mlCHCh (parametry sonikace: 200 W, amplituda 85%, cyklus 0,8 s a sonotroda S2). Zhomogenizovaná suspenze byla dále sonikována po dobu 15 min (parametry sonikace: amplituda 65%, cyklus 0,5 s a sonotroda S2). Nenavázané nanočástice byly odděleny opakovanou centrifugací (3x 4500RPM, lOmin) a vzniklý supernatant obsahující nanomicely hyaluronanu s navázanými nanočásticemi byl odebrán, zfiltrován přes Ι,Ομιη skleněný filtr a zlyofilizován.
Množství navázaného Er; Y;Yb (ICP stanovení): 0,02; 0,50; 0,19% (hm)
Příklad 21. In vitro cytotoxicita kompozice acylovaného hyaluronanu se SPIONy
Primární buňky a nenádorové a nádorové linie (Tabulka 1) byly nasazeny na 96 jamkové panely a kultivovány po dobu 24 hod v 37°C/5 % CO2. Poté byly buňky ovlivněny roztoky kompozic acylovaného hyaluronanu se SPIONy z příkladů 7-12, 14 a 15 v koncentracích 10, 100, 200 a 500 pg/ml (koncentrace polymerních micel v kultivačním médiu). Současně byla měřena i viabilita samotného acylovaného hyaluronanu a samotných ŠPIONŮ (v odpovídajících koncentracích). Viabilita buněk byla sledována v čase 0, 24, 48 a 72h pomocí metody MTT a výsledné hodnoty vyjadřují inhibici či aktivaci buněčné viability v daném časovém bodě. Byla sledována inhibice buněčné viability u buněk ovlivněných kompozicemi různých acylovaných derivátů HA se SPIONy (Obrázek 2) a vliv kompozice HAC18:l+SPIONy (z příkladu 12) na různé nádorové linie (Obrázek 3). Obrázek 4 ukazuje srovnání cytotoxického působení kompozice (podle příkladu 12, 16, 17) s 5, 10 a 20 nmSPIONy. Buněčné linie jsou popsány v Tabulce 1.
Tabulka 1. Seznam testovaných adherentních buněčných linií.
Označení buněčné linie buněčný typ/původ
Kontrolní linie
NHDF primární lidské dermální fibroblasty
3T3 myší fibroblastová linie
Nádorové linie
HT29 lidský kolorektální adenokarcinom
A2058 lidský melanom
A549 lidský plicní karcinom
-20lidský hepatocelulámí karcinom lidský prsní adenokarcinom lidský kolorektální karcinom lidský prsní adenokarcinom lidský kolorektální adenokarcinom
C3A
MCF7
HCT116
MDA-MB231
Caco2
Výsledky na Obrázku 2 ukazují, že na rozdíl od kontrolních linií (NHDF a 3T3) dochází k výrazné inhibici růstu buněk v případě nádorové linie HT29. Nejvyšší inhibice byly zaznamenány pro kompozice na bázi C18aC18:l acylovaných derivátů.Kompozice na bázi Cl8:1 derivátů se SPIONy dokonce nejvíce podporovala viabilitu NHDF a 3T3 buněk. Samotný acylovaný hyaluronan a SPIONy viabilitu u žádných testovaných buněk neovlivňovaly (data neukázána).
Kompozice HAC18:1 se SPIONy se dále použila na ovlivnění dalších nádorových linií (Obrázek 3). Experimentální data ukázala zpomalení růstu u nádorových linií A549, HCT116, C3A, MCF7 a MDA-MB231 a Caco2. Výjimkou byla pouze melanomová linie A2058, kdy k inhibici došlo až při ovlivnění nejvyšší koncentrací kompozice (500 pg/ml).Kontrolní fibroblasty (NHDF i 3T3) byly naopak kompozicí výrazně stimulovány a ani nejvyšší koncentrace 500 pg/ml nevykazovala cytotoxické vlastnosti.
Obrázek 4 potvrzuje selektivní protinádorové působení kompozice s 5nm SPIONy. Tento efekt již není do takové míry pozorován u kompozice s 10 a 20nm SPIONy.
Příklad 22. In vitro cytotoxicita kompozice acylovaného hyaluronanu s nanočásticemi oxidu zinečnatého
Primární lidské fibroblasty (NHDF), střevní nádorové buňky HT-29 a myší fibroblastová linie 3T3 byly nasazeny na 96 jamkové panely a kultivovány po dobu 24 hod v 37°C/5%CO2. Poté byly buňky ovlivněny roztoky kompozice acylovaného hyaluronanu s nanočásticemi oxidu zinečnatého připravené v příkladu 19 v koncentracích 10, 100, 200 a 500 pg/ml (koncentrace polymemích micel). Viabilita buněk byla sledována v čase 0,24, 48 a 72 hod pomocí metody MTT a výsledné hodnoty vyjadřují inhibici či aktivaci buněčné viabilityv daném časovém bodě (Obrázek 5).
Výsledky na Obrázku 5 ukazují, že na rozdíl od kontrolních linií (NHDF a 3T3) s rostoucí dobou inkubace a dále ve vyšších koncentracích polymemích micel dochází k
-21 inhibici růstu nádorových buněk. V tomto případě byla však evidována inhibice růstu v případě koncentrace 500 pg/ml také u 3T3 buněk. V nižších koncentracích kompozice a dále u kontrolní NHDF buněčné linie inhibice pozorována nebyla.
Příklad 23. In vitro cytotoxicita kompozice acylovaného hyaluronanu s upkonverzními nanočásticemi
Primární lidské fibroblasty (NHDF), střevní nádorové buňky HT-29 a myší fibroblastová linie 3T3 byly nasazeny na 96jamkové panely a kultivovány po dobu 24 hod v 37°C/5%CO2. Poté byly buňky ovlivněny roztoky polymerních micel s upkonverzními nanočásticemi z příkladu 20 v koncentracích 10, 100, 200 a 500 pg/ml (koncentrace polymerních micel). Viabilita buněk byla sledována v čase 0, 24, 48 a 72 hod pomocí metody MTT a výsledné hodnoty vyjadřují inhibici či aktivaci buněčné viability v daném časovém bodě (Obrázek 6)
Výsledky na Obrázku 6 ukazují, že na rozdíl od kontrolních NHDF, kde je viabilita vysoce zvýšena, s rostoucí dobou inkubace dochází k inhibici růstu nádorových buněk. Mírná inhibice je však pozorována i u nenádorové linie 3T3.
Příklad 24. In vitro selektivní cytotoxicita kompozice acylovanéhohyaluronanu se SPIONy
Primární lidské fibroblasty značené DiO (zeleně) a nádorové buňky HT-29 značené Dii (červeně) byly v poměru 3:1 a celkové koncentraci 50.000 buněk/jamka nasazeny do jamek 24jamkového panelu v 1 ml RPMI 1640 (Roswell Park Memorial Institut) média. Po dosažení min 80% konfluence buněčné monovrstvy byly buňky ovlivněny 200 pg/ml roztokem kompozice se SPIONy z příkladu 12. Po 72 hod inkubaci byly buňky vyfoceny pomocí fluorescenčního mikroskopu Nikon Ti-Eclipse (Obrázek 7).
Pro vysvětlení možného mechanismu rozdílného působení na kontrolní a nádorové buňky byla anlyzována exprese receptoru pro hyaluronan CD44 pomocí průtokové cytometrie na buňkách NHDF, MCF-7 a MDA-MB-231. Buňky byly po dosažení 80% konfluence promyty PBS, inkubovány 15 min/RT s antiCD44-FITC protilátkou, po inkubaci byly opět 2x promyty PBS a analyzovány na průtokovém cytometru MACS Quant Analyzer (Miltenyi Biotec). Výsledky jsou uvedeny jako intenzita fluorescence (RFU) (Obrázek 8).
-22Dále bylo u buněk NHDF a HT-29 stanoven oxidativní stres po ovlivnění kompozicí acylovaného hyaluronanu se SPIONy z příkladu 12. Buňky byly kultivovány na 6 jamkových panelech a po dosažení 80% konfluence byly ovlivněny 200pg/ml roztokem kompozice se SPIONy po dobu 24 hod. Kontrolním buňkám bylo pouze vyměněno médium za čerstvé bez obsahu testované kompozice. Po inkubaci byly buňky promyty a ovlivněny DCF-DA (nefluorescenční látka, která je intracelulámími ROS oxidována na fluorescenční DCF, výsledná koncentrace 1 uM) po dobu 20 min/ 37°C/tma. Po následném promytí PBS byly buňky analyzovány na průtokovém cytometru MACSQuant Analyzer (Miltenyi Biotec). Výsledky jsou uvedeny jako relativní intenzita fluorescence (% neovlivněné kontroly) DCF uvnitř buněk (Obrázek 9).
Výsledky z Obrázku 7 potvrzují selektivní inhibici růstu nádorové linie HT-29, zatímco kontrolní fibroblasty NHDF nejsou negativně ovlivněny a dosahují konfluence. Tento efekt není způsoben rozdílnou indukcí tvorby ROS, ta je u obou typů buněk sice zvýšena, ale na stejnou úroveň (Obrázek 9). Vysvětlením může být rozdílná míra odpovědi na toto zvýšení produkce ROS u buněk NHDF a HT-29.
Rozdíl v působení na kontrolní a nádorové buňky není funkcí exprese hlavního povrchového receptoru pro hyaluronan, CD44. Obrázek 8 potvrzuje vysokou expresi CD44 u kontrolních fibroblastů NHDF, jejichž viabilita byla kompozicí zvýšena, a nižší expresi u nádorových linií MCF-7 a MDA-MB-231, u nichž byla pozorována výrazná inhibice viability (Obrázek 3).
Po obarvení buněk (detekce přítomnosti Fe Pruskou modří) inkubováných s kompozicí acylovaného hyaluronanu se SPIONy z příkladu 12 je vidět rozdílná distribuce iontů Fe zatímco rozpuštěné Fe bylo detekováno v nádorových buňkách, agregáty železa byly detekovány v kontrolních buňkách (Obrázek 10). Tento jev by mohl být příčinou selektivního působení kompozice v nádorových buňkách.
Příklad 25. Příprava kompozice pro intravenóznípodání
Ke20-30 mg sterilně připraveného acylovaného hyaluronanu se SPIONy z příkladu 12 je přidáno 650 μΐ sterilního 0,9% NaCl, roztok je občas protřepáván až do úplného rozpuštění lyofilizátu. Roztok je bezproblémově injektovatelný in vivo.
Takto připravený roztok je z hlediska hydrodynamické velikosti částic stabilní po dobu minimálně 2 dnů.
-23Příklad 26. Příprava kompozice pro intravenóznípodání
Ke 20-30 mg sterilně připraveného acylovaného hyaluronanu se SPIONy z příkladu 12 je přidáno 650 μΐ sterilní 5% dextrózy, roztok je občas protřepáván až do úplného rozpuštění lyofilizátu. Roztok je bezproblémově injektovatelný in vivo.
Takto připravený roztok je z hlediska hydrodynamické velikosti částic stabilní po dobu minimálně 2 dnů.
Příklad 27. In vivo detekce kompozice acylovanéhohyaluronanu se SPIONy
Na in vivo testování byly použití potkani Lewis Brown Norway s glioblastomovým nádorem. Nádory byly inokulovány injektováním suspenze 3xl06 glioblastomových buněk do svalu v noze a po 9 dnech byla potkanům intravenózně podána kompozice acylovaného hyaluronanu (HAC18:1) se SPIONy (750 pL roztoku v 0.9% NaCl s obsahem Fe 1.1 mg/kg). Potkani byli poté analyzováni pomocí Bruker Biospec (4.7 T).
Akumulace ŠPIONŮ v nádoru po intravenózním podání kompozice byla potvrzena na Obrázku 11, kde bylo detekováno zejména tmavnutí okrajů nádoru. Viditelná akumulace ŠPIONŮ byla detekovatelná i v játrech (Obrázek 12), daná kompozice se tedy dá použít i jako kontrastní činidlo do jater.
Akumulace ŠPIONŮ byla dále potvrzena po usmrcení zvířat na histologických řezech nádoru (Obrázek 13) a jater (Obrázek 14), kdy přítomnost Fe byla detekována obarvením Pruskou modří (modré skvrny na Obrázcích). Modré zbarvení nebylo detekováno v žádném z kontrolních vzorků.
Příklad 28. Sterilizace kompozice acylovaného hyaluronanu se SPIONy autoklávováním
Sterilizace kompozice připravené podle příkladu 12 (koncentrace: 30 mg/mL v 0.9% NaCl) byla provedena v autoklávu při 121 °C po dobu 15 min.
Roztok byl po sterilizaci stabilní, SPIONy zůstaly klastrovány v nanomicelách hyaluronanu (Obrázek 15), selektivní cytotoxické účinky vůči nádorovým buňkám zůstaly zachovány.
Cytotoxicita byla stanovena na nádorové linii HT-29 a kontrolních primárních fibroblastech NHDF podle postupu z příkladu 21. Obrázek 16 ukazuje srovnání kompozice z příkladu 12 před a po sterilizací autoklávováním, selektivní cytotoxicita vůči nádorovým buňkám zůstala i po sterilizaci autoklávováním zachována.
-24Příklad 29. Indukce apoptózy u myší nádorové suspenzní lymfomové linie EL4
Myší lymfomová linie EL4 (používaná pro indukci nádorů na myších experimentálních modelech karcinogeneze) byla kultivována v RPMI 1640 (Roswell Park Memorial Institut) médiu. V exponenciální fázi růstu byly z buněčné kultury připraveny alikvóty v koncentraci 5x105 buněk/ml RPMI média, které byly ovlivněny 100, 200 a 500pg/ml roztokem kompozice se SPIONy z příkladu 9. Po 72hod inkubaci byly buňky promyty a specificky obarveny fluorescenčními markéry buněčné smrti (propidium jodid, AnnexinV-FITC), které byly následně detekovány na průtokovém cytometru MACSQuant (Miltenyi Biotec).
Na Obrázku 17 je zřejmá indukce apoptózy (buněčná populace v pravém spodním kvadrantu) a mírně zvýšená indukce nekrózy (levý/pravý horní kvadrant) po ovlivnění 100pg/ml roztokem kompozice se SPIONy z příkladu 12. V grafu je názorně vyneseno zastoupení živých, apoptotických a nekrotických buněk po ovlivnění kompozicí v jednotlivých koncentracích.

Claims (24)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Protinádorová kompozice na bázi acylovaného hyaluronanu a anorganických nanočástic stabilizovaných kyselinou olejovou a vybraných ze skupiny zahrnující superparamagnetické nanočástice, upkonverzní nanočástice nebo nanočástice oxidu zinečnatého, zejména superparamagnetické částice.
  2. 2. Protinádorová kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že acylovaný hyaluronan je Cg-Cis-acylovaný derivát kyseliny hyaluronové s nasycenými a nenasycenými vazbami, zejména Ci8:i acylovaný derivát kyseliny hyaluronové.
  3. 3. Protinádorová kompozice podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že acylovaný hyaluronan slouží jako nosič anorganických nanočástic.
  4. 4. Protinádorová kompozice podle kteréhokoli z předchozích nároků, vyznačující se tím, že anorganické nanočástice jsou superparamagnetické nanočástice.
  5. 5. Protinádorová kompozice podle nároku 4, vyznačující se tím, že obsahuje superparamagnetické nanočástice na bázi oxidů železa, kde množství Fe v kompozici je 0,3-3% hm., s výhodou 1,0 % hm.
  6. 6. Protinádorová kompozice podle nároku 4 nebo 5, vyznačující se tím, že obsahuje superparamagnetické nanočástice o velikosti 5-20 nm.
  7. 7. Protinádorová kompozice podle nároku 4 nebo 5, vyznačující se tím, že obsahuje superparamagnetické nanočástice o velikosti 5-7 nm.
  8. 8. Protinádorová kompozice podle nároku 4 nebo 5, vyznačující se tím, že obsahuje superparamagnetické nanočástice o velikosti 5 nm.
  9. 9. Protinádorová kompozice podle kteréhokoli z nároků 4 až 8, vyznačující se tím, že vykazuje odlišný způsob uvolňování iontů kovu in vitro v nádorových buňkách, zejména v buňkách odvozených z lidského adenokarcinomu kolorekta, od uvolňování iontů kovu in vitro v nenádorových buňkách, zejména v lidských dermálních fibroblastech.
  10. 10. Protinádorová kompozice podle kteréhokoli z nároků 1-3, vyznačující se tím, že obsahuje nanočástice oxidu zinečnatého v množství 0,3-3% hm. Zn.
  11. 11. Protinádorová kompozice podle kteréhokoli z nároků 1-3, vyznačující se tím, že obsahuje upkonverzní nanočástice v takovém množství, že celkový obsah prvků vzácných zemin v kompozici je 0,3-3% hm.
  12. 12. Protinádorová kompozice podle nároku 11, vyznačující se tím, že obsahuje upkonverzní nanočástice obsahující Er, Yb a Y.
  13. 13. Protinádorová kompozice podle kteréhokoliv z předchozích nároků pro inhibici růstu adherentních i suspenzních nádorových buněk.
  14. 14. Protinádorová kompozice podle kteréhokoli z předchozích nároků pro inhibici růstu nádorových buněk odvozených z karcinomu a adenokarcinomu kolorekta, karcinomu plic, hepatocelulámímu karcinomu, prsního adenokarcinomu, s výhodou karcinomu a adenokarcinomu kolorekta.
  15. 15. Protinádorová kompozice podle kteréhokoli z nároků 4 až 9 pro in vivo detekci akumulace kompozice v těle, zejména v nádoru a játrech.
  16. 16. Protinádorová kompozice podle kteréhokoli z nároků 4 až 9 pro in vivo detekci patologických útvarů v těle, zejména nádorů.
  17. 17. Protinádorová kompozice podle kteréhokoli z předchozích nároků, vyznačující se tím, zeje aplikovatelná ve formulaci pro parenterální nebo lokální podání.
  18. 18. Protinádorová kompozice podle kteréhokoli z předchozích nároků, vyznačující se tím, že dále obsahuje další aditiva, používaná ve farmaceutických kompozicích, s výhodou chlorid sodný, dextrózu nebo pufrovací soli.
  19. 19. Protinádorová kompozice podle kteréhokoli z předchozích nároků, vyznačující se tím, že dále obsahuje léčivou látku, s výhodou cytostatikum.
  20. 20. Protinádorová kompozice podle kteréhokoli z předchozích nároků, vyznačující se tím, že je sterilizovatelná v konečném obalu autoklávováním.
  21. 21. Způsob přípravy kompozice definované v nároku 1-20, vyznačující se tím, že se připraví vodný roztok acylovaného derivátu kyseliny hyaluronové, následně se přidají anorganické částice rozptýlené v halogenidovém rozpouštědle a stabilizované kyselinou olejovou a vybrané ze skupiny zahrnující superparamagnetické nanočástice, upkonverzní nanočástice nebo nanočástice oxidu zinečnatého, a vzniklá suspenze se sonikuje do vzniku homogenní směsi a poté se nenavázané anorganické nanočástice oddělí od navázaných anorganických nanočástic v nanomicelách centrifugací a následnou filtrací.
  22. 22. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že se filtrát následně lyofilizuje.
  23. 23. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že se filtrát následně sterilizuje autoklávováním v konečném obalu.
  24. 24. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že se lyofilizát následně rozpustí ve vodném roztoku a sterilizuje autoklávováním v konečném obalu.
CZ2014-451A 2014-06-30 2014-06-30 Protinádorová kompozice na bázi kyseliny hyaluronové a anorganických nanočástic, způsob její přípravy a použití CZ2014451A3 (cs)

Priority Applications (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2014-451A CZ2014451A3 (cs) 2014-06-30 2014-06-30 Protinádorová kompozice na bázi kyseliny hyaluronové a anorganických nanočástic, způsob její přípravy a použití
EP15801986.9A EP3160509B1 (en) 2014-06-30 2015-06-30 Antitumor composition based on hyaluronic acid and inorganic nanoparticles, method of preparation thereof and use thereof
HUE15801986A HUE049244T2 (hu) 2014-06-30 2015-06-30 Hialuronsav és szervetlen nanorészecskéken alapuló tumorellenes kompozíció, eljárás annak elõállítására és annak alkalmazása
RU2016151263A RU2686679C2 (ru) 2014-06-30 2015-06-30 Противоопухолевая композиция на основе гиалуроновой кислоты и неорганических наночастиц, способ ее получения и ее применение
ES15801986T ES2768798T3 (es) 2014-06-30 2015-06-30 Composición antitumoral basada en ácido hialurónico y nanopartículas inorgánicas, método de preparación de la misma y uso de la misma
PL15801986T PL3160509T3 (pl) 2014-06-30 2015-06-30 Kompozycja przeciwnowotworowa na bazie kwasu hialuronowego i nieorganicznych nanocząsteczkach, metoda jej przygotowania i użycie
JP2016575532A JP6556765B2 (ja) 2014-06-30 2015-06-30 ヒアルロン酸及び無機ナノ粒子をベースとする抗腫瘍組成物，その調製法，並びにその使用
US15/322,776 US10617711B2 (en) 2014-06-30 2015-06-30 Antitumor composition based on hyaluronic acid and inorganic nanoparticles, method of preparation thereof and use thereof
KR1020177002613A KR20170021351A (ko) 2014-06-30 2015-06-30 히알루론산과 무기 나노입자를 기재로 하는 항종양 조성물, 그 제조 방법 및 용도
DK15801986.9T DK3160509T3 (da) 2014-06-30 2015-06-30 Antitumorsammensætning baseret på hyaluronsyre og uorganiske nanopartikler, fremgangsmåde til fremstilling deraf og anvendelse deraf
PCT/CZ2015/000068 WO2016000669A2 (en) 2014-06-30 2015-06-30 Antitumor composition based on hyaluronic acid and inorganic nanoparticles, method of preparation thereof and use thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2014-451A CZ2014451A3 (cs) 2014-06-30 2014-06-30 Protinádorová kompozice na bázi kyseliny hyaluronové a anorganických nanočástic, způsob její přípravy a použití

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ2014451A3 true CZ2014451A3 (cs) 2016-01-13

Family

ID=54754397

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2014-451A CZ2014451A3 (cs) 2014-06-30 2014-06-30 Protinádorová kompozice na bázi kyseliny hyaluronové a anorganických nanočástic, způsob její přípravy a použití

Country Status (11)

Country Link
US (1) US10617711B2 (cs)
EP (1) EP3160509B1 (cs)
JP (1) JP6556765B2 (cs)
KR (1) KR20170021351A (cs)
CZ (1) CZ2014451A3 (cs)
DK (1) DK3160509T3 (cs)
ES (1) ES2768798T3 (cs)
HU (1) HUE049244T2 (cs)
PL (1) PL3160509T3 (cs)
RU (1) RU2686679C2 (cs)
WO (1) WO2016000669A2 (cs)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102187362B1 (ko) 2018-12-26 2020-12-07 서울대학교산학협력단 페로토시스를 통한 암세포의 선택적 사멸을 위한 나노 입자, 이의 제조 방법 및 이의 용도
CN112442355B (zh) * 2020-11-28 2022-04-05 江西师范大学 一种稀土-透明质酸配位聚合物包覆的vs2纳米结构及其制备方法和应用

Family Cites Families (207)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2001633A (en) 1934-09-22 1935-05-14 Crispin B Segovia Geographical clock
US3075527A (en) 1960-06-02 1963-01-29 Chemway Corp Sterile medicated strips
US3720662A (en) 1971-09-13 1973-03-13 Nat Starch Chem Corp Preparation of starch esters
US3728223A (en) 1971-10-08 1973-04-17 Amano Pharma Co Ltd Production of hyaluronidase from a strain of streptomyces
GB1527592A (en) 1974-08-05 1978-10-04 Ici Ltd Wound dressing
CH628088A5 (en) 1975-09-17 1982-02-15 Dresden Arzneimittel Process for obtaining streptococcal metabolic products
US4205025A (en) 1975-12-22 1980-05-27 Champion International Corporation Synthetic polymeric fibrids, fibrid products and process for their production
JPS6033474B2 (ja) 1978-05-11 1985-08-02 藤沢薬品工業株式会社 新規なヒアルロニダ−ゼｂｍｐ−８２３１およびその製造法
US4716224A (en) 1984-05-04 1987-12-29 Seikagaku Kogyo Co. Ltd. Crosslinked hyaluronic acid and its use
US4713448A (en) 1985-03-12 1987-12-15 Biomatrix, Inc. Chemically modified hyaluronic acid preparation and method of recovery thereof from animal tissues
US4851521A (en) 1985-07-08 1989-07-25 Fidia, S.P.A. Esters of hyaluronic acid
GB8519416D0 (en) 1985-08-01 1985-09-04 Unilever Plc Oligosaccharides
JPS62104579A (ja) 1985-10-30 1987-05-15 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd ヒアルロニダ−ゼの製造法
JPH0751064B2 (ja) 1986-08-13 1995-06-05 生化学工業株式会社 新規なヒアルロニダ−ゼｓｄ−６７８およびその製造法
IT1219587B (it) 1988-05-13 1990-05-18 Fidia Farmaceutici Polisaccaridi carbossiilici autoreticolati
JPH0214019A (ja) 1988-06-30 1990-01-18 Tonen Corp 繊維状成形物及びその製造方法
JPH0755961B2 (ja) 1989-04-18 1995-06-14 工業技術院長 新規なヒアルロン酸誘導体及びその製造方法
IT1248666B (it) 1990-05-30 1995-01-26 Fidia Spa Gel in forma di film autosupportanti altamente idrati, processo per laloro preparazione e impiego nella terapia di lesioni e/o patologie cutanee
US5522879A (en) 1991-11-12 1996-06-04 Ethicon, Inc. Piezoelectric biomedical device
US5824335A (en) 1991-12-18 1998-10-20 Dorigatti; Franco Non-woven fabric material comprising auto-crosslinked hyaluronic acid derivatives
IT1254704B (it) 1991-12-18 1995-10-09 Mini Ricerca Scient Tecnolog Tessuto non tessuto essenzialmente costituito da derivati dell'acido ialuronico
JP2855307B2 (ja) 1992-02-05 1999-02-10 生化学工業株式会社 光反応性グリコサミノグリカン、架橋グリコサミノグリカン及びそれらの製造方法
FR2689131B1 (fr) 1992-03-30 1994-05-20 Oreal Procede de preparation de monoesters majoritairement en position 6' du d-maltose et leur utilisation dans les domaines cosmetique, bucco-dentaire, pharmaceutique et alimentaire.
JPH0625306A (ja) 1992-04-21 1994-02-01 Shiseido Co Ltd 溶媒不溶化ヒアルロン酸及びその製造方法
IT1263316B (it) 1993-02-12 1996-08-05 Fidia Advanced Biopolymers Srl Tessuto non tessuto multistrato in cui uno degli strati e' costituito essenzialmente da esteri dell'acido ialuronico
NL9700003A (nl) 1993-09-28 1997-07-01 House Foods Corp Werkwijze voor het inoculeren van Fistulina hepatica.
US5616568A (en) 1993-11-30 1997-04-01 The Research Foundation Of State University Of New York Functionalized derivatives of hyaluronic acid
EP0701704B1 (en) 1994-03-14 1999-12-15 Seikagaku Corporation Material to be worn on the eyeball
US5455349A (en) 1994-05-13 1995-10-03 Polaroid Corporation Vinylbenzyl thymine monomers
ES2139097T3 (es) * 1994-09-27 2000-02-01 Nycomed Imaging As Agente de contraste.
US6025444A (en) 1994-11-17 2000-02-15 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) Cinnamic acid derivative
JP3308742B2 (ja) 1994-11-17 2002-07-29 生化学工業株式会社 光架橋性ヒアルロン酸誘導体とその架橋体およびそれらの製造方法
US5690961A (en) 1994-12-22 1997-11-25 Hercules Incorporated Acidic polysaccharides crosslinked with polycarboxylic acids and their uses
AU708454B2 (en) 1995-03-07 1999-08-05 Novartis Ag Photochemically cross-linked polysaccharide derivatives as supports for the chromatographic separation of enantiomers
IT1281877B1 (it) 1995-05-10 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Sali di metalli pesanti di succinil derivati dell'acido ialuronico e loro impiego come potenziali agenti terapeutici
IT1281886B1 (it) 1995-05-22 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Processo per la preparazione di idrogel ottenuti da derivati chimici dell'acido ialuronico mediante irradiazioni ultraviolette e loro
PT850074E (pt) 1995-08-29 2005-09-30 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriais para prevencao de aderencias pos-cirurgicas, constituidos por derivados de acido hialuronico
DE69625658T2 (de) 1995-09-13 2003-07-17 Seikagaku Kogyo K.K.(Seikagaku Corp.), Tokio/Tokyo Kontaktlinse auf Basis photogehärteter Hyaluronsäure
DE19604706A1 (de) 1996-02-09 1997-08-14 Merck Patent Gmbh Vernetzungsprodukte von Aminogruppen-haltigen Biopolymeren
DE19616010C2 (de) 1996-04-23 1998-07-09 Seitz Filter Werke Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung von Fibrets (Fibriden) aus Zellulosederivaten
US6632802B2 (en) 1996-08-29 2003-10-14 Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. Hyaluronic acid esters, threads and biomaterials containing them, and their use in surgery
IT1287698B1 (it) 1996-08-29 1998-08-18 Fidia Advanced Biopolymers Srl Fili da sutura essenzialmente costituiti da derivati esterei dello acido ialuronico
US6162537A (en) 1996-11-12 2000-12-19 Solutia Inc. Implantable fibers and medical articles
CA2294756C (en) 1997-07-03 2008-04-29 Orquest, Inc. Cross-linked polysaccharide drug carrier
ITPD980037A1 (it) 1998-02-25 1999-08-25 Fidia Advanced Biopolymers Srl Acido ialuronico solfatato e i suoi derivati legati covalentemente a polimeri sintetici pe la preparazione di biomateriali e per il rivesti
DE69926876T2 (de) 1998-04-30 2006-06-14 Maruha Corp Verbindungen, deren struktur derivate von glukuronsäure und glukosamin enthält, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung
WO1999057158A1 (en) 1998-05-07 1999-11-11 Nederlandse Organisatie Voor Toegepast Natuurwetenschappelijk Onderzoek Tno Process for selective oxidation of primary alcohols
ITPD980169A1 (it) * 1998-07-06 2000-01-06 Fidia Advanced Biopolymers Srl Ammidi dell'acido ialuronico e dei suoi derivati e processo per la loro preparazione.
US6630457B1 (en) 1998-09-18 2003-10-07 Orthogene Llc Functionalized derivatives of hyaluronic acid, formation of hydrogels in situ using same, and methods for making and using same
US6472541B2 (en) 1998-11-20 2002-10-29 The Regents Of The University Of California Protecting groups with increased photosensitivities
IT1302534B1 (it) 1998-12-21 2000-09-05 Fidia Advanced Biopolymers Srl Composizioni iniettabili, biocompatibili e biodegradabili comprendentialmeno un derivato dell'acido ialuronico, cellule condrogeniche, per
AU1865100A (en) 1998-12-23 2000-07-31 Esparma Gmbh Hyaluronate lyase used for promoting penetration in topical agents
DE19917614C2 (de) 1999-04-19 2001-07-05 Thueringisches Inst Textil Verfahren zur Herstellung von cellulosischen Formkörpern mit hohem Adsorptionsvermögen
US6288043B1 (en) 1999-06-18 2001-09-11 Orquest, Inc. Injectable hyaluronate-sulfated polysaccharide conjugates
US7033603B2 (en) 1999-08-06 2006-04-25 Board Of Regents The University Of Texas Drug releasing biodegradable fiber for delivery of therapeutics
US6592794B1 (en) 1999-09-28 2003-07-15 Organogenesis Inc. Process of making bioengineered collagen fibrils
AU1741101A (en) 1999-11-08 2001-06-06 Sca Hygiene Products Zeist B.V. Process of oxidising primary alcohols
US6180087B1 (en) 2000-01-18 2001-01-30 Mallinckrodt Inc. Tunable indocyanine dyes for biomedical applications
DE10003397A1 (de) 2000-01-27 2001-08-09 Hartmann Paul Ag Polyelektrolyt-Feststoffsystem, Verfahren zur Herstellung desselben sowie Wundverband
DE10009996B4 (de) 2000-03-02 2005-10-13 Cognis Ip Management Gmbh Feststoffgranulate mit monodisperser Korngrößenverteilung, ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung
IT1317359B1 (it) 2000-08-31 2003-06-16 Fidia Advanced Biopolymers Srl Polisaccaridi percarbossilati, quali l'acido ialuronico, processo perla loro preparazione e loro impiego in campo farmaceutico e
IT1317358B1 (it) 2000-08-31 2003-06-16 Fidia Advanced Biopolymers Srl Derivati cross-linkati dell'acido ialuronico.
US6669926B1 (en) 2000-10-16 2003-12-30 Mallinckrodt, Inc. Hydrophilic light absorbing indole compounds for determination of physiological function in critically ill patients
US6498269B1 (en) 2000-10-17 2002-12-24 The University Of Connecticut Method for the oxidation of aldehydes, hemiacetals and primary alcohols
WO2002048197A1 (en) 2000-12-13 2002-06-20 Sca Hygiene Products Zeist B.V. Process for oxidising primary alcohols
EP1217008B1 (en) 2000-12-19 2006-03-01 Seikagaku Corporation Photocurable hyaluronic acid derivative and process for producing the same, and photocured crosslinked hyaluronic acid derivative and medical material using the same
FR2819808B1 (fr) 2001-01-19 2003-04-18 Simafex Compositions stabilisees d'acide o-iodoxybenzoique et leur procede de preparation
WO2002060971A1 (en) 2001-01-31 2002-08-08 Seikagaku Corporation Crosslinked polysaccharide sponge
US6902548B1 (en) 2001-03-19 2005-06-07 Ed Schuler Use of Streptomyces hyalurolyticus enzyme in ophthalmic treatments
US6673919B2 (en) 2001-03-30 2004-01-06 Chisso Cororation Chemically modified hyaluronic acid or salts thereof, and a process for producing thereof
US6946284B2 (en) 2001-11-16 2005-09-20 University Of Massachusetts Solubilizing cross-linked polymers with photolyase
FR2833493B1 (fr) 2001-12-18 2005-09-23 Ioltechnologie Production Forme galenique solide et soluble pour l'administration occulaire de principes actifs et procede de fabrication d'un insert ophtalmique solide et soluble
US20060189516A1 (en) 2002-02-19 2006-08-24 Industrial Technology Research Institute Method for producing cross-linked hyaluronic acid-protein bio-composites
ITPD20020064A1 (it) 2002-03-12 2003-09-12 Fidia Advanced Biopolymers Srl Derivati esterei dell'acido ialuronico per la preparazione di idrogelda utilizzare in campo biomedico, sanitario e chirurgico e come sistem
WO2003077899A1 (en) 2002-03-16 2003-09-25 Seog-Nyeon Bae Anticancer composition
JP3975267B2 (ja) 2002-06-03 2007-09-12 独立行政法人産業技術総合研究所 多糖物質のアシル化方法
US20040101546A1 (en) 2002-11-26 2004-05-27 Gorman Anne Jessica Hemostatic wound dressing containing aldehyde-modified polysaccharide and hemostatic agents
JP4323148B2 (ja) 2002-09-30 2009-09-02 チッソ株式会社 ｎ−アルカノイル化ヒアルロン酸もしくはその塩およびその製造法
US6965040B1 (en) 2002-11-04 2005-11-15 Xiaolian Gao Photogenerated reagents
US20040116018A1 (en) 2002-12-17 2004-06-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Method of making fibers, nonwoven fabrics, porous films and foams that include skin treatment additives
US7550136B2 (en) 2002-12-20 2009-06-23 University Of Massachusetts Photo-reactive polymers and devices for use in hair treatments
US7465766B2 (en) 2004-01-08 2008-12-16 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US6982298B2 (en) 2003-01-10 2006-01-03 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US20050126338A1 (en) 2003-02-24 2005-06-16 Nanoproducts Corporation Zinc comprising nanoparticles and related nanotechnology
FR2852012B1 (fr) 2003-03-04 2006-06-23 Oreal Procede de preparation de derives o-acyles du glucose
US7365059B2 (en) 2003-03-11 2008-04-29 Seikagaku Corporation Photocrosslinked-polysaccharide composition and production process of the same
US7947766B2 (en) 2003-06-06 2011-05-24 The Procter & Gamble Company Crosslinking systems for hydroxyl polymers
ES2226567B1 (es) 2003-06-20 2006-07-01 Universidad De Santiago De Compostela Nanoparticulas de acido hialuronico.
DE10331342B4 (de) 2003-07-11 2009-03-12 Thüringisches Institut für Textil- und Kunststoff-Forschung e.V. Thermostabile Form- oder Spinnmasse
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
US7235295B2 (en) 2003-09-10 2007-06-26 Laurencin Cato T Polymeric nanofibers for tissue engineering and drug delivery
CA2538793C (en) 2003-09-19 2011-01-11 Colorado State University Research Foundation (Csurf) Hyaluronan (ha) esterification via acylation technique for moldable devices
JP2007513090A (ja) 2003-11-18 2007-05-24 ユニバーシティ オブ テネシー リサーチ ファウンデーション チアゾリジノンアミド、チアゾリジンカルボン酸アミド、その製造方法、およびその使用方法
US8313765B2 (en) 2003-12-04 2012-11-20 Industrial Technology Research Institute Biodegradable hyaluronic acid derivative, biodegradable polymeric micelle composition and pharmaceutical or bioactive composition
US20100330143A1 (en) 2003-12-04 2010-12-30 University Of Utah Research Foundation Modified macromolecules and methods of making and using thereof
GB2408741B (en) 2003-12-04 2008-06-18 Ind Tech Res Inst Hyaluronic acid derivative with urethane linkage
GB0406013D0 (en) 2004-03-17 2004-04-21 Chiron Srl Analysis of saccharide vaccines without interference
EP2329852A1 (en) 2004-03-26 2011-06-08 SurModics, Inc. Composition and method for preparing biocompatible surfaces
ITMI20040605A1 (it) 2004-03-29 2004-06-29 Coimex S C R L United Companie Esteri butirrici dell'acido ialuronico a basso grado di sostituzione procedimento per la loro preparazione ed uso
WO2006010066A2 (en) 2004-07-09 2006-01-26 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US7323425B2 (en) 2004-08-27 2008-01-29 Stony Brook Technology And Applied Research Crosslinking of hyaluronan solutions and nanofiberous membranes made therefrom
WO2006028110A1 (ja) 2004-09-07 2006-03-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 水溶性ヒアルロン酸修飾物の製造方法
DK1817347T3 (en) 2004-11-24 2017-08-14 Albumedix As Process for Crosslinking Hyaluronic Acid with Divinyl Sulfone
US7214759B2 (en) 2004-11-24 2007-05-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biologically absorbable coatings for implantable devices based on polyesters and methods for fabricating the same
WO2006078914A1 (en) 2005-01-21 2006-07-27 Washington University In St. Louis Compounds having rd targeting motifs
EP1861055A4 (en) 2005-03-22 2013-01-16 Covidien Lp WIDE BIOACTIVE NETWORK
US7680038B1 (en) 2005-04-25 2010-03-16 Electronic Arts, Inc. Dynamic bandwidth detection and response for online games
EP1738774A1 (de) * 2005-06-29 2007-01-03 Schering AG Magnetische Eisenoxidpartikel enthaltende Zusammensetzungen und deren Verwendung in bildgebenden Verfahren
GB0513552D0 (en) 2005-07-01 2005-08-10 Bristol Myers Squibb Co Bandage
RU2429018C2 (ru) 2005-07-06 2011-09-20 Сейкагаку Корпорейшн Гель, полученный из фотосшитой гиалуроновой кислоты с введенным лекарственным средством
ITPD20050206A1 (it) 2005-07-07 2007-01-08 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriali in forma di fibra da impiegarsi come dispositivi medici nel trattamento delle ferite e loro processi di produzione
ITMI20051415A1 (it) 2005-07-22 2007-01-23 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriali a base di corbossimetilcellulosa salificata con zinco associata a derivati dell'acido ialuronico da impiegarsi come dispositivi medici con attivita' antimicrobica ed antifungina e loro processo di produzione
CN101282985B (zh) 2005-09-21 2013-07-10 科德生物工程有限公司 用透明质酸低聚衍生物覆盖的细胞表面
US7993678B2 (en) 2005-09-26 2011-08-09 Novozymes Biopolymer A/S Hyaluronic acid derivatives
US20070202084A1 (en) 2005-12-14 2007-08-30 Anika Therapeutics, Inc. Bioabsorbable implant of hyaluronic acid derivative for treatment of osteochondral and chondral defects
EP1826274A1 (en) 2006-02-24 2007-08-29 Kikkoman Corporation Enzyme composition, low molecular weight hyaluronan and process for preparing the same
JP2009528438A (ja) 2006-02-28 2009-08-06 ノボザイムス バイオポリマー アクティーゼルスカブ ヒアルロン酸誘導体
JP4892679B2 (ja) 2006-03-27 2012-03-07 国立大学法人弘前大学 ゲル紡糸によるヒアルロン酸繊維およびその製造方法
KR20070118730A (ko) 2006-06-13 2007-12-18 주식회사 코오롱 보습성이 우수한 창상피복재 및 그의 제조방법
US20080124395A1 (en) 2006-06-22 2008-05-29 Weiliam Chen Formulations and devices for treatment or prevention of neural ischemic damage
WO2008008481A2 (en) 2006-07-12 2008-01-17 Georgia Tech Research Corporation Deprotection of functional groups by multi-photon induced electron transfer
JP2009545637A (ja) 2006-08-04 2009-12-24 ノボザイムス バイオファーマ デーコー アクティーゼルスカブ 分岐ヒアルロン酸及びその製造方法
US20080063617A1 (en) 2006-09-07 2008-03-13 Abrahams John M Cosmetics formulations
ITMI20061726A1 (it) 2006-09-11 2008-03-12 Fidia Farmaceutici Derivati crosslinkati a base di acido ialuronico reticolato via click chemistry
CZ302856B6 (cs) 2006-09-27 2011-12-14 Cpn Spol. S R. O. Zpusob prípravy derivátu polysacharidu
US8979931B2 (en) 2006-12-08 2015-03-17 DePuy Synthes Products, LLC Nucleus replacement device and method
AU2007336692B2 (en) 2006-12-22 2013-12-12 Croma-Pharma Gesellschaft M.B.H. Use of polymers
KR20080062092A (ko) 2006-12-29 2008-07-03 주식회사 핸슨바이오텍 세포전달체로서의 히알루론산 유도체 및 이의 제조 방법
EP1942117A1 (en) 2006-12-29 2008-07-09 Sigea S.R.L. Derivatives of acid polysaccharides
SG177996A1 (en) * 2007-01-19 2012-02-28 Triton Biosystems Inc Thermotherapy susceptors and methods of using same
JP5329767B2 (ja) 2007-02-26 2013-10-30 帝人株式会社 芳香族コポリアミド繊維の製造装置
WO2008115799A1 (en) 2007-03-21 2008-09-25 William Marsh Rice University Novel gene delivery vectors for human mesenchymal stem cells
KR100807358B1 (ko) 2007-04-18 2008-02-28 (주)나노하이브리드 암조직 선택성과 생분해성을 갖는 고리형 삼합체포스파젠-백금(ｉｉ) 착물 컨쥬게이트 항암제 및 그 제조방법
CZ2007299A3 (cs) 2007-04-24 2009-02-04 Cpn Spol. S R. O. Príprava nanovláken z polysacharidu a jejich smesí s polyvinylalkoholem
JP5165281B2 (ja) 2007-06-01 2013-03-21 株式会社バイオベルデ ２反応剤型の医療用含水ゲル形成剤、及び、これより得られるヒアルロン酸ゲル
WO2009037566A2 (en) 2007-06-19 2009-03-26 Uvarkina Tamara P Hyaluronidase and method of use thereof
KR101226851B1 (ko) 2007-06-20 2013-01-25 (주)엘지하우시스 이중노즐을 이용한 나노섬유의 제조방법
WO2009002869A2 (en) 2007-06-22 2008-12-31 Innovative Surface Technologies, Inc. Nanofibers containing latent reactive groups
WO2009012372A1 (en) * 2007-07-18 2009-01-22 Advantageous Systems, Llc Methods and apparatuses for detecting analytes in biological fluid of an animal
FR2920786B1 (fr) 2007-09-07 2010-09-10 Univ Claude Bernard Lyon Fibres creuses, notamment multi membranaires, leur procede de preparation par filage et dispositif pour la mise en oeuvre dudit procede
FR2921675B1 (fr) 2007-09-28 2010-03-19 Univ Claude Bernard Lyon Filament a base d'acide hyaluronique et son procede d'obtention.
US20130136784A1 (en) 2007-10-11 2013-05-30 Robert J. Staab Methods for delivery of medication using dissolvable devices
US7976825B2 (en) * 2007-12-06 2011-07-12 Janos Borbely Cancer cell diagnosis by targeting delivery of nanodevices
CA2713489A1 (en) 2008-02-11 2009-08-20 Basf Se Producing porous structures from synthetic polymers
CN101952491A (zh) 2008-02-14 2011-01-19 博爱科罗温有限公司 双组分纤维,纺织片材及其用途
US9585987B2 (en) 2008-02-29 2017-03-07 Pvac Medical Technologies Ltd Composition for the formation of gels
AU2009246822B2 (en) 2008-03-31 2012-05-03 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Site specific fluorescence marking and contrast marker for same
JP2011516462A (ja) * 2008-04-03 2011-05-26 コーニンクレッカ フィリップス エレクトロニクス エヌ ヴィ 磁性粒子イメージング用生体適合物
WO2009148405A1 (en) 2008-06-05 2009-12-10 Agency For Science, Technology And Research Formation of hydrogel in the presence of peroxidase and low concentration of hydrogen peroxide
JP2010014784A (ja) 2008-07-01 2010-01-21 Fuji Xerox Co Ltd 光書込型表示装置、書込装置、及び光書き込み方法
IT1391734B1 (it) 2008-07-29 2012-01-27 Anika Therapeutics Srl Nuovi biomateriali, loro preparazione per elettrospinning e loro uso in campo biomedico e chirurgico.
FR2934999B1 (fr) 2008-08-13 2011-07-29 Adocia Polysaccharides fonctionnalises par des derives du tryptophane
US9228027B2 (en) 2008-09-02 2016-01-05 Allergan Holdings France S.A.S. Threads of Hyaluronic acid and/or derivatives thereof, methods of making thereof and uses thereof
CZ2008705A3 (cs) 2008-11-06 2010-04-14 Cpn S. R. O. Zpusob prípravy DTPA sítovaných derivátu kyseliny hyaluronové a jejich modifikace
ITRM20080636A1 (it) 2008-11-28 2010-05-29 Univ Palermo Procedimento per la produzione di derivati funzionalizzati dell acido ialuronico e relativi idrogeli.
JP2010154842A (ja) 2008-12-03 2010-07-15 Koji Kawakami Ｅｇｆｒを標的にした新規抗がんキメラペプチド
JP2010138276A (ja) 2008-12-11 2010-06-24 Nipro Corp ヒアルロン酸単糸の製造方法
WO2010095052A2 (en) 2009-02-21 2010-08-26 Sofradim Production Compounds and medical devices activated with solvophobic linkers
WO2010095049A1 (en) 2009-02-21 2010-08-26 Sofradim Production Crosslinked fibers and method of making same by extrusion
CA2753173C (en) 2009-02-21 2017-05-30 Sofradim Production Medical devices with an activated coating
CZ301899B6 (cs) * 2009-03-17 2010-07-21 Contipro C, A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové pomocí O-acyl-O´-alkylkarbonátu v prítomnosti substituovaného pyridinu
US8551378B2 (en) 2009-03-24 2013-10-08 North Carolina State University Nanospinning of polymer fibers from sheared solutions
ES2840074T3 (es) * 2009-03-25 2021-07-06 Pharmacosmos Holding As Un oligosacárido y un proceso para su preparación
US20120219554A2 (en) 2009-05-14 2012-08-30 Fidia Farmaceutici S.P.A. Extracellular yaluronidase from streptomyces koganeiensis
WO2010138074A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Hilborn Joens Hyaluronic acid based delivery systems
CA2764635C (en) 2009-06-09 2018-05-22 Lux Biosciences, Inc. Topical drug delivery systems for ophthalmic use
KR101551681B1 (ko) 2009-07-30 2015-09-09 카르빌란 테라퓨틱스, 인코포레이티드 변형된 히알루론산 폴리머 조성물 및 관련방법
KR101103423B1 (ko) 2009-09-04 2012-01-06 아주대학교산학협력단 생체 주입형 조직 접착성 하이드로젤 및 이의 생의학적 용도
EP3067069B1 (en) 2009-11-11 2023-07-26 Hy2Care B.V. Hydrogels based on polymers of dextran tyramine and tyramine conjugates of natural polymers
WO2011059325A2 (en) 2009-11-11 2011-05-19 University Of Twente, Institute For Biomedical Technology And Technical Medicine (Mira) Dextran-hyaluronic acid based hydrogels
US20110111012A1 (en) 2009-11-12 2011-05-12 Hemcon Medical Technologies, Inc. Nanomaterial wound dressing assembly
CZ2009836A3 (cs) 2009-12-11 2011-06-22 Contipro C A.S. Derivát kyseliny hyaluronové oxidovaný v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd, zpusob jeho prípravy a zpusob jeho modifikace
CZ2009835A3 (cs) 2009-12-11 2011-06-22 Contipro C A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové oxidovaného v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd a zpusob jeho modifikace
US8197849B2 (en) 2010-02-12 2012-06-12 National Health Research Institutes Cross-linked oxidated hyaluronic acid for use as a vitreous substitute
US20110229551A1 (en) 2010-03-17 2011-09-22 Notus Laboratories, Inc. Drug delivery compositions and methods using nanofiber webs
IT1399202B1 (it) 2010-03-30 2013-04-11 Corbelli Metodo per la produzione di manufatti elastomerici funzionalizzati e manufatti cosi' ottenuti
EP2585096B1 (en) 2010-06-24 2021-05-05 University Of Kansas Bifunctional conjugate compositions and associated methods
CN101897976A (zh) 2010-07-16 2010-12-01 沈阳药科大学 一种药物增溶载体及其制备方法和应用
CZ305040B6 (cs) 2010-09-14 2015-04-08 Contipro Biotech S.R.O. Způsob přípravy vysoce substituovaných amidů kyseliny hyaluronové
CZ302994B6 (cs) 2010-12-31 2012-02-08 Cpn S.R.O. Hyaluronová vlákna, zpusob jejich prípravy a použití
US9200271B2 (en) 2011-02-03 2015-12-01 Empire Technology Development Llc Selective 3D biopatterning
JP2014511839A (ja) 2011-03-23 2014-05-19 インディアナ・ユニバーシティ・リサーチ・アンド・テクノロジー・コーポレイション 抗癌治療薬
KR101201412B1 (ko) 2011-04-19 2012-11-14 한양대학교 에리카산학협력단 다공성 코어쉘 나노웹의 제조방법
CZ304072B6 (cs) 2011-04-26 2013-09-25 Contipro Biotech S.R.O. Amfoterní materiál na bázi sítované kyseliny hyaluronové, zpusob jeho prípravy, materiály obsahující aktivní cinidla uzavrené v síti hyaluronanu, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití
CN102154738B (zh) 2011-05-10 2012-08-01 青岛大学 一种红藻琼胶纤维的制备方法
PL2707396T3 (pl) * 2011-05-12 2019-04-30 Gnosis Spa Biotechnologiczny siarczanowany siarczan chondroityny w pozycji 4 lub 6 na tym samym łańcuchu polisacharydowyn i sposób jego wytwarzania
ITTO20110428A1 (it) 2011-05-13 2012-11-14 Rottapharm Spa Esteri dell'acido ialuronico, loro preparazione ed uso in dermatologia
ES2657756T3 (es) 2011-10-18 2018-03-06 Heiq Pty Ltd Proceso de formación de fibra y fibras producidas por medio del proceso
KR20130085294A (ko) 2012-01-19 2013-07-29 충남대학교산학협력단 림프노드 탐지용 형광 고분자 나노젤 및 이를 이용한 림프노드 확인 방법
US10987436B2 (en) * 2012-01-27 2021-04-27 Soluciones Nanotecnológicas, S.L. Superparamagnetic nanoparticles as a contrast agent for magnetic resonance imaging (MRI) of magnetic susceptibility (T2*)
CZ303879B6 (cs) 2012-02-28 2013-06-05 Contipro Biotech S.R.O. Deriváty na bázi kyseliny hyaluronové schopné tvorit hydrogely, zpusob jejich prípravy, hydrogely na bázi techto derivátu, zpusob jejich prípravy a pouzití
WO2013130968A1 (en) 2012-03-01 2013-09-06 University Of Cincinnati Ros-activated compounds as selective anti-cancer therapeutics
CZ2012282A3 (cs) 2012-04-25 2013-11-06 Contipro Biotech S.R.O. Zesítovaný derivát hyaluronanu, zpusob jeho prípravy, hydrogel a mikrovlákna na jeho bázi
WO2013171764A2 (en) 2012-04-30 2013-11-21 Rubicon Research Private Limited Ophthalmic formulations
CZ304651B6 (cs) 2012-05-11 2014-08-20 Contipro Biotech S.R.O. Způsob přípravy mikrovláken, způsob výroby krytů ran, kryty ran a zařízení pro přípravu polysacharidových vláken
WO2013188727A2 (en) 2012-06-15 2013-12-19 The Children's Hospital Of Philadelphia Novel pro- and codrug derivatives for nanoparticle delivery of select anticancer agents formed using rapidly cleavable phenolic ester bridges
CZ304512B6 (cs) 2012-08-08 2014-06-11 Contipro Biotech S.R.O. Derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, způsob jeho modifikace a použití
CZ2012844A3 (cs) 2012-11-27 2014-02-05 Contipro Biotech S.R.O. Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
CZ304266B6 (cs) 2012-11-27 2014-02-05 Contipro Biotech S.R.O. Nekonečná vlákna na bázi hyaluronanu selektivně oxidovaného v poloze 6 N-acetyl-D-glukosaminové části, jejich příprava, použití, nitě, střiže, příze, textilie a způsob jejich úpravy
CZ2012842A3 (cs) * 2012-11-27 2014-08-20 Contipro Biotech S.R.O. Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití
CZ304303B6 (cs) 2012-11-27 2014-02-19 Contipro Biotech S.R.O. Vlákna založená na hydrofobizovaném hyaluronanu, způsob jejich přípravy a použití, textilie na jejich bázi a použití
KR101386096B1 (ko) 2013-02-28 2014-04-21 강원대학교산학협력단 음이온성 단백질 약물 전달을 위한 키토산 나노섬유, 그 제조방법 및 그 키토산 나노섬유를 포함하는 경점막 투여제
CN103505736A (zh) * 2013-09-23 2014-01-15 天津大学 基于改性透明质酸的高分子脂质体及其制备方法
CN103789874B (zh) 2014-01-23 2016-02-10 北京化工大学常州先进材料研究院 平行电场诱导相分离法制备核壳结构天然聚电解质纳米纤维
EP2899214A1 (en) 2014-01-27 2015-07-29 Basf Se Ethylenically unsaturated polysaccharides, method for their production and their use
CZ305153B6 (cs) 2014-03-11 2015-05-20 Contipro Biotech S.R.O. Konjugáty oligomeru kyseliny hyaluronové nebo její soli, způsob jejich přípravy a použití
GB201411294D0 (en) * 2014-06-25 2014-08-06 Trw Ltd An electric power assisted steering system

Also Published As

Publication number Publication date
RU2686679C2 (ru) 2019-04-30
US20170143756A1 (en) 2017-05-25
HUE049244T2 (hu) 2020-09-28
EP3160509B1 (en) 2019-12-18
DK3160509T3 (da) 2020-02-10
EP3160509A2 (en) 2017-05-03
PL3160509T3 (pl) 2020-07-13
US10617711B2 (en) 2020-04-14
RU2016151263A3 (cs) 2018-12-12
WO2016000669A2 (en) 2016-01-07
RU2016151263A (ru) 2018-07-30
JP6556765B2 (ja) 2019-08-07
ES2768798T3 (es) 2020-06-23
WO2016000669A3 (en) 2016-02-25
KR20170021351A (ko) 2017-02-27
JP2017519785A (ja) 2017-07-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Pan et al. Passion fruit-like exosome-PMA/Au-BSA@ Ce6 nanovehicles for real-time fluorescence imaging and enhanced targeted photodynamic therapy with deep penetration and superior retention behavior in tumor
Baig et al. Current status of nanomaterial-based treatment for hepatocellular carcinoma
Li et al. Cancer cell membrane-coated biomimetic platform for tumor targeted photodynamic therapy and hypoxia-amplified bioreductive therapy
Ding et al. Plasmon‐driven catalytic chemotherapy augments cancer immunotherapy through induction of immunogenic cell death and blockage of IDO pathway
Natesan et al. Artemisinin loaded chitosan magnetic nanoparticles for the efficient targeting to the breast cancer
Baneshi et al. A novel theranostic system of AS1411 aptamer-functionalized albumin nanoparticles loaded on iron oxide and gold nanoparticles for doxorubicin delivery
Labala et al. Transcutaneous iontophoretic delivery of STAT3 siRNA using layer-by-layer chitosan coated gold nanoparticles to treat melanoma
Xia et al. pH-responsive gold nanoclusters-based nanoprobes for lung cancer targeted near-infrared fluorescence imaging and chemo-photodynamic therapy
Li et al. PEG-functionalized iron oxide nanoclusters loaded with chlorin e6 for targeted, NIR light induced, photodynamic therapy
Sasikala et al. An implantable smart magnetic nanofiber device for endoscopic hyperthermia treatment and tumor-triggered controlled drug release
Falsafi et al. Aptamer targeted red blood cell membrane-coated porphyrinic copper-based MOF for guided photochemotherapy against metastatic breast cancer
Cai et al. Hybrid cell membrane-functionalized biomimetic nanoparticles for targeted therapy of osteosarcoma
Wang et al. Novel micelle formulation of curcumin for enhancing antitumor activity and inhibiting colorectal cancer stem cells
Sun et al. Bioreducible PAA-g-PEG graft micelles with high doxorubicin loading for targeted antitumor effect against mouse breast carcinoma
Li et al. Effects of magnetic dihydroartemisinin nano-liposome in inhibiting the proliferation of head and neck squamous cell carcinomas
Liao et al. Self-assembled metallo-supramolecular nanoflowers for NIR/acidic-triggered multidrug release, long-term tumor retention and NIR-II fluorescence imaging-guided photo-chemotherapy
Hałupka-Bryl et al. Synthesis and in vitro and in vivo evaluations of poly (ethylene glycol)-block-poly (4-vinylbenzylphosphonate) magnetic nanoparticles containing doxorubicin as a potential targeted drug delivery system
KR102187362B1 (ko) 페로토시스를 통한 암세포의 선택적 사멸을 위한 나노 입자, 이의 제조 방법 및 이의 용도
Zhang et al. Magnetofluorescent photothermal micelles packaged with GdN@ CQDs as photothermal and chemical dual-modal therapeutic agents
Li et al. Polysialic acid-functionalized liposomes for efficient honokiol delivery to inhibit breast cancer growth and metastasis
Mu et al. Biconcave Carbon Nanodisks for Enhanced Drug Accumulation and Chemo‐Photothermal Tumor Therapy
Deng et al. Novel T7-modified pH-responsive targeted nanosystem for co-delivery of docetaxel and curcumin in the treatment of esophageal cancer
Chen et al. Deep tumor‐penetrated nanosystem eliminates cancer stem cell for highly efficient liver cancer therapy
Faustova et al. High-effective reactive oxygen species inducer based on Mn-tetraphenylporphyrin loaded PLGA nanoparticles in binary catalyst therapy
Prasad et al. Ultrasound-triggered spatiotemporal delivery of topotecan and curcumin as combination therapy for cancer