CZ305040B6 - Způsob přípravy vysoce substituovaných amidů kyseliny hyaluronové - Google Patents
Způsob přípravy vysoce substituovaných amidů kyseliny hyaluronové Download PDFInfo
- Publication number
- CZ305040B6 CZ305040B6 CZ2010-687A CZ2010687A CZ305040B6 CZ 305040 B6 CZ305040 B6 CZ 305040B6 CZ 2010687 A CZ2010687 A CZ 2010687A CZ 305040 B6 CZ305040 B6 CZ 305040B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- added
- reaction mixture
- reaction
- process according
- Prior art date
Links
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims abstract description 52
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical class CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims abstract description 48
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 47
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 23
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 15
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 14
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical class CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 claims description 11
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- -1 amide derivatives of hyaluronic acid Chemical class 0.000 claims description 7
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000005270 trialkylamine group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000012048 reactive intermediate Substances 0.000 claims 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 abstract description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 abstract 1
- 125000002924 primary amino group Chemical class [H]N([H])* 0.000 abstract 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 53
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 27
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 26
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 26
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 26
- HEMHJVSKTPXQMS-DYCDLGHISA-M Sodium hydroxide-d Chemical compound [Na+].[2H][O-] HEMHJVSKTPXQMS-DYCDLGHISA-M 0.000 description 13
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 13
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 13
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 13
- 238000005570 heteronuclear single quantum coherence Methods 0.000 description 13
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- OYBOVXXFJYJYPC-UHFFFAOYSA-N 3-azidopropan-1-amine Chemical compound NCCCN=[N+]=[N-] OYBOVXXFJYJYPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 7
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 7
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 description 5
- IKXNIQJDNKPPCH-UHFFFAOYSA-N hydron;prop-2-yn-1-amine;chloride Chemical compound [Cl-].[NH3+]CC#C IKXNIQJDNKPPCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- JKANAVGODYYCQF-UHFFFAOYSA-N prop-2-yn-1-amine Chemical compound NCC#C JKANAVGODYYCQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 1-hexanamine Chemical compound CCCCCCN BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Chemical group CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical group O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 1
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000000914 diffusion-ordered spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000001050 lubricating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Způsob přípravy vysoce substituovaných amidů kyseliny hyaluronové obecného vzorce I s kontrolovatelným stupněm substituce, připravených v polárním aprotickém prostředí z kyselé formy kyseliny hyaluronové v přítomnosti ethylchlorformiátu, pomocí primárního aminu.
Description
Oblast techniky
Technické řešení se týká způsobu přípravy amidových derivátů kyseliny hyaluronové s vysokým stupněm substituce, které jsou dále použitelné v medicíně, farmacii a pro přípravu hydrogelů v tkáňovém inženýrství.
Dosavadní stav techniky
Kyselina hyaluronová je lineární heteropolysacharid skládající se z opakujících se disacharidových jednotek kyseliny D-glukuronové a V-acetyl-D-glukosaminu. Jedná se o nerozvětvený polysacharid, který pokud je izolovaný z přírodního zdroje, může dosahovat molekulové hmotnosti v rozmezí od 5 x 104 do 5 x 106 g.mof1 v závislosti na způsobu izolace a výchozím materiálu.
Kyselina hyaluronová je hlavní složkou mezibuněčné hmoty a díky svým viskoelastickým vlastnostem je důležitou součástí Teologických, fyziologických a biologických funkcí v těle. Díky své vysoké lubrikační kapacitě, schopnosti vysoké sorpce a zadržování vody je často aplikována v oční chirurgii. Likviduje volné kyslíkové radikály a ovlivňuje proliferací i diferenciaci buněk. Dále zabraňuje ukládání kolagenu a tím podporuje hojení ran a zamezuje vzniku jizev.
Pro široké klinické použití nativní kyseliny hyaluronové je problematická především její velmi rychlá degradace v roztoku a poměrně špatné mechanické vlastnosti. Zlepšení těchto vlastností a zároveň zvýšení odolnosti proti degradaci lze dosáhnout chemickou modifikací hyaluronanu.
Z tohoto důvodu byla v posledních letech pozornost zaměřena na přípravu syntetických hyaluronových derivátů, které jsou rozpustné ve vodných roztocích, a po určitých úpravách mohou být aplikovatelné jako biodegradabilní a biokompatibilní materiály v medicíně, chirurgii a tkáňovém inženýrství. Jednou z vhodných úprav materiálu jsou síťovací reakce, kdy se z modifikované kyseliny hyaluronové vytváří hydrogely.
Hydrogely jsou hydrofilní sítě polymerů, které mohou být používány pro kontrolní distribuci léků, bioaktivních a jiných látek v organismu, jako skafoldy nebo kožní plniva. Důležitou podmínkou pro přípravu hydrogelů je stabilita derivátů, které jsou použity jako vstupní prekurzory pro síťovací reakci.
Pro tvorbu hydrogelů byla vyzkoušena řada modifikovaných derivátů hyaluronanu. Jedněmi z nich byly i amidové deriváty. Tyto deriváty si zasloužily velkou pozornost z důvodu jejich poměrně vysoké stability vůči degradaci a hydrolýze ve fyziologických podmínkách v prostředí bez enzymatické aktivity.
Současný stav přípravy amidových derivátů hyaluronanu pro následnou gelaci je založen na používání různých reakčních podmínek, které však vedou pouze k relativně nízkým stupňům amidace (do 30 %) (WO 2000/001733 (AI)). Velkou nevýhodou některých současných postupů je především to, že vlastní amidaci předchází deacetylace hyaluronanu (WO 2000/001733 (AI)). Amidový derivát hyaluronanu je následovně síťován až do vzniku hydrogelů. Síťování azidů a alkynů, které jsou navázány na polysacharid přes amidickou vazbu, je nejčastěji katalyzováno měďnými kationty, které jsou toxické. Čím nižší je stupeň substituce amidových derivátů vstupujících do reakce, tím větší množství katalyzátoru musí být použito (WO 2008/031525 AI)).
-1 CZ 305040 B6
Podstata vynálezu
Nízký stupeň amidových derivátů hyaluronanu může být navýšen aplikací specifických reakčních podmínek. Hlavní podstatou tohoto vynálezu je postup přípravy amidů kyseliny hyaluronové, při kterém dochází k selektivní amidaci karboxylové skupiny kyseliny hyaluronové za vzniku vysoce substituovaných produktů. Princip reakce spočívá v aktivaci karboxylové skupiny hyaluronanu pomocí ethylchlorformiátu, v přítomnosti báze, přičemž vzniklý intermediát - aktivovaný hyaluronan - následně reaguje s primárním aminem R-NH2 za vzniku amidu kyseliny hyaluronové obecného vzorce I podle schématu 1:
Schéma 1 Amidace kyseliny hyaluronové kde R je alkylový lineární nebo rozvětvený řetězec Ci až C30, volitelně s obsahem aromatických nebo heteroaromatických skupin. Příprava probíhá s výhodou v polárním aprotickém prostředí, zejména v dimethylsulfoxidu. Kyselina hyaluronová je s výhodou v kyselé formě a má střední molekulovou hmotnost v rozmezí 1 x 104 až 5 x 105 g.mof1, zejména 3,5 x 105 až 5 x 105 g.mof1.
Ve výhodném provedení vynálezu probíhá reakce při teplotě 25 °C po dobu 8 až 24 h, s výhodou po dobu 12 h.
Stupeň substituce kyseliny hyaluronové ve způsobu přípravy podle vynálezu je s výhodou řízen molámím množstvím přidaného aminu R-NH2, přičemž primární amin se s výhodou přidá do reakce v čase 0,1 až 2 h po přídavku ethylchlorformiátu a v molámím množství 3 až 5 ekvivalentů vzhledem k látkovému množství dimeru hyaluronanu. Primárním aminem R-NH2 může být například CHC-CH2-NH2, NH2-CH2-CH2-CH2-N3 nebo NH2(CH2)5-CH3.
Ve výhodném provedení vynálezu je látkové množství přidaného ethylchlorformiátu v molámím poměru 3 až 5 ekvivalentů vzhledem k látkovému množství dimeru hyaluronanu. Bází použitou ve způsobu podle vynálezu může být trialkylamin, například triethylamin, a to s výhodou v látkovém množství v molámím poměru 3 až 5 ekvivalentů báze vzhledem k látkovému množství dimeru hyaluronanu.
Výhodou oproti známým analogům je volitelně vysoký stupeň substituce, který vede k výrazné změně fyzikálně-chemických vlastností. Blokování karboxylové skupiny hyaluronanu v síťovaných produktech má za následek nižší bobtnavost, a tudíž lepší mechanickou stabilitu připravených síťovaných produktů.
Amidové deriváty hyaluronanu připravené tímto způsobem vykazují kontrolovatelný stupeň substituce v rozmezí 10 až 99 %. Stupeň substituce je kontrolovaný molámím poměrem primárního aminu, ethylchlorformiátu a báze, přičemž právě vhodně zvoleným množstvím primárního aminu R-NH2, jako poslední složky, která se přidává do reakční směsi, lze stupeň substituce kyseliny hyaluronové s výhodou řídit v rozmezí 10 až 99 %.
Amidové deriváty jsou vysoce stabilní vůči degradaci a hydrolýze, a proto mohou být použity pro tvorbu stabilních hydrogelů. V případě vysokého stupně substituce je k síťovací reakci třeba jen velmi malé množství katalyzátoru.
-2CZ 305040 B6
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1
Amidace kyseliny hyaluronové propargylaminem
0,5 g kyseliny hyaluronové (kyselá forma) o molekulové hmotnosti 1 x 105 g-mol4 a polydisperzitě 1,9 bylo rozpuštěno v 50 ml DMSO při teplotě 60 °C. Po rozpuštění se roztok kyseliny hyaluronové nechá ochladit na laboratorní teplotu. Po ochlazení se přidá 0,922 ml triethylaminu (5 eq) a reakční směs se nechá míchat 10 minut. Poté se přidá 0,378 ml ethylchlorformiátu (3 eq) a reakční směs se nechá hodinu míchat. Poté se do reakční směsi přidá 0,125 g (1,36 mmol) hydrochloridu propargylaminu a reakční směs se míchá dalších 24 h při laboratorní teplotě, směs se naředí na celkový objem 200 ml a přelije do dialyzačních střev (cut-off 12 až 14 x 103 g-mol“1), kde se dialyzuje 3x po 24 h proti 0,1% roztoku NaCl a NaHCO3 (celkový objem 10 1) a dále 3x po 24 h proti demi vodě. Dialyzovaný derivát se odpaří do sucha a vysuší pomocí acetonu. Struktura derivátu byla potvrzena NMR analýzou.
Výtěžek reakce: 0,3957 g
Mw derivátu po reakci: 8 x 104 g-mol“1.
Stupeň substituce = 44 %.
'H NMR přiřazené pomocí HSQC (500 MHz, NaOD, δ ppm):
2,01 (s, 3H, 8a), 3,36 (bs, 1H, 2b), 3,46 (bs, 1H, 5a), 3,54 (bs, 1H, 4a), 3,70 (bs, 2H, 3a a 3b), 3,82 (bs, 1H, 4b), 3,90 (bs, 1H, 5b), 3,91 (d, 1H, la), 4,10 (d, 1H, 1 β), 4,50 (bs, 2H, la a lb) DOSY NMR:
log D (2,03 ppm CH3-CO-NH-Polymer) ~ -10,5 m2/s log D (2,7 ppm -CH2NH-R) ~ -10,5 m2/s log D (3,0 ppm -CH2NH-R) ~ -10,5 m2/s
Příklad 2
Amidace kyseliny hyaluronové propargylaminem
0,5 g kyseliny hyaluronové (kyselá forma) o molekulové hmotnosti 248 x 103 g-mol“1 a polydisperzitě 1,6 bylo rozpuštěno v 50 ml DMSO při teplotě 60 °C. Po rozpuštění se roztok kyseliny hyaluronové nechá ochladit na laboratorní teplotu. Po ochlazení se přidá 0,922 ml triethylaminu (5 eq) a reakční směs se nechá míchat 10 minut. Poté se přidá 0,378 ml ethylchlorformiátu (3 eq) a reakční směs se nechá hodinu míchat. Poté se do reakční směsi přidá 0,125 g (1,36 mmol) hydrochloridu propargylaminu a reakční směs se míchá dalších 24 h při laboratorní teplotě, směs se naředí na celkový objem 200 ml a přelije do dialyzačních střev (cut-off 12 až 14 x 103 g-mol“1), kde se dialyzuje 3x po 24 h proti 0,1% roztoku NaCl a NaHCO3 (celkový objem 10 1) a dále 3x po 24 h proti demi vodě. Dialyzovaný derivát se odpaří do sucha a vysuší pomocí acetonu. Struktura derivátu byla potvrzena NMR analýzou.
Výtěžek reakce: 0,3957 g
Mw derivátu po reakci: 12 x 104 g-mol“1.
Stupeň substituce = 98 %.
’H NMR přiřazené pomocí HSQC (500 MHz, NaOD, δ ppm): viz příklad 1
DOSY NMR: viz příklad 1
-3CZ 305040 B6
Příklad 3
Amidace kyseliny hyaluronové propargylaminem
0,5 g kyseliny hyaluronové (kyselá forma) o molekulové hmotnosti 3 66 x 103 g.mol1 a polydisperzitě 1,6 bylo rozpuštěno v 50 ml DMSO při teplotě 60 °C. Po rozpuštění se roztok kyseliny hyaluronové nechá ochladit na laboratorní teplotu. Po ochlazení se přidá 0,922 ml triethylaminu (3 eq) a reakční směs se nechá míchat 10 minut. Poté se přidá 0,378 ml ethylchlorformiátu (3 eq) a reakční směs se nechá hodinu míchat. Poté se do reakční směsi přidá 0,125 g (1,36 mmol) hydrochloridu propargylaminu a reakční směs se míchá dalších 12 h při laboratorní teplotě, směs se naředí na celkový objem 200 ml a přelije do dialyzačních střev (cut-off 12 až 14 x 103 g.mol“1), kde se dialyzuje 3x po 24 h proti 0,1% roztoku NaCl a NaHCO3 (celkový objem 10 1) a dále 3x po 24 h proti demi vodě. Dialyzovaný derivát se odpaří do sucha a vysuší pomocí acetonu. Struktura derivátu byla potvrzena NMR analýzou.
Výtěžek reakce: 0,3957 g
Mw derivátu po reakci: 177,4 x 103 g.mol“1.
Stupeň substituce = 50 %.
'H NMR přiřazené pomocí HSQC (500 MHz, NaOD, δ ppm): viz příklad 1
DOSY NMR: viz příklad 1
Příklad 4
Amidace kyseliny hyaluronové propargylaminem
0,5 g kyseliny hyaluronové (kyselá forma) o molekulové hmotnosti 393 x 103 g.mol“1 a polydisperzitě 1,6 bylo rozpuštěno v 50 ml DMSO při teplotě 60 °C. Po rozpuštění se roztok kyseliny hyaluronové nechá ochladit na laboratorní teplotu. Po ochlazení se přidá 0,922 ml triethylaminu (5 eq) a reakční směs se nechá míchat 10 minut. Poté se přidá 0,378 ml ethylchlorformiátu (3 eq) a reakční směs se nechá hodinu míchat. Poté se do reakční směsi přidá 0,111 g (1,32 mmol) hydrochloridu propargylaminu a reakční směs se míchá dalších 12 h při laboratorní teplotě, směs se naředí na celkový objem 200 ml a přelije do dialyzačních střev (cut-off 12 až 14 x 103 g.mol“1), kde se dialyzuje 3x po 24 h proti 0,1% roztoku NaCl a NaHCO3 (celkový objem 10 1) a dále 3x po 24 h proti demi vodě. Dialyzovaný derivát se odpaří do sucha a vysuší pomocí acetonu. Struktura derivátu byla potvrzena NMR analýzou.
Výtěžek reakce: 0,4452 g
Mw derivátu po reakci: 24 x 104 g.mol1.
Stupeň substituce = 60 %.
1H NMR přiřazené pomocí HSQC (500 MHz, NaOD, δ ppm): viz příklad 1
DOSY NMR: viz příklad 1
Příklad 5
Amidace kyseliny hyaluronové propargylaminem
0,5 g kyseliny hyaluronové (kyselá forma) o molekulové hmotnosti 485 x 103 g.mol“1 a polydisperzitě 1,6 bylo rozpuštěno v 50 ml DMSO při teplotě 60 °C. Po rozpuštění se roztok kyseliny hyaluronové nechá ochladit na laboratorní teplotu. Po ochlazení se přidá 0,922 ml triethylaminu (5 eq) a reakční směs se nechá míchat 10 minut. Poté se přidá 0,378 ml ethylchlorformiátu (3 eq) a reakční směs se nechá hodinu míchat. Poté se do reakční směsi přidá 0,111 g (1,32 mmol) hydrochloridu propargylaminu a reakční směs se míchá dalších 12 h při laboratorní teplotě, směs se
-4CZ 305040 B6 naředí na celkový objem 200 ml a přelije do dialyzačních střev (cut-off 12 až 14 x 103 g.mor1), kde se dialyzuje 3x po 24 h proti 0,1% roztoku NaCl a NaHCO3 (celkový objem 10 1) a dále 3x po 24 h proti demi vodě. Dialyzovaný derivát se odpaří do sucha a vysuší pomocí acetonu. Struktura derivátu byla potvrzena NMR analýzou.
Výtěžek reakce: 0,4452 g
Mw derivátu po reakci: 133,4 x 103 g.mol“1.
Stupeň substituce = 88 %.
1H NMR přiřazené pomocí HSQC (500 MHz, NaOD, δ ppm): viz příklad 1
DOSY NMR: viz příklad 1
Příklad 6
Amidace kyseliny hyaluronové 3-azidopropylaminem
1,0 g kyseliny hyaluronové (kyselá forma) o molekulové hmotnosti 42 x 103 g.mol1 a polydisperzitě 1,6 bylo rozpuštěno v 50 ml DMSO při teplotě 60 °C. Po rozpuštění se roztok kyseliny hyaluronové nechá ochladit na laboratorní teplotu. Po ochlazení se přidá 0,922 ml triethylaminu (3 eq) a reakční směs se nechá míchat 10 minut. Poté se přidá 0,378 ml ethylchlorformiátu (3 eq) a reakční směs se nechá hodinu míchat. Poté se do reakční směsi přidá 0,228 g (2,65 mmol) 3azidopropylaminu a reakční směs se míchá dalších 12 h při laboratorní teplotě, směs se naředí na celkový objem 200 ml a přelije do dialyzačních střev (cut-off 12 až 14 x 103 g.mol”1), kde se dialyzuje 3x po 24 h proti 0,1% roztoku NaCl a NaHCO3 (celkový objem 10 1) a dále 3x po 24 h proti demi vodě. Dialyzovaný derivát se odpaří do sucha a vysuší pomocí acetonu. Struktura derivátu byla potvrzena NMR analýzou.
Výtěžek reakce: 0,8001 g
Mw derivátu po reakci: 2 x 104 g.mol“1.
Stupeň substituce = 75 %.
1H NMR přiřazené pomocí HSQC (500 MHz, NaOD, δ ppm):
1,8 (q, 3H, 2), 2,01 (s, 3H, 8a), 3,19 (bs, 1H), la), 3,30 (bs, 1H, 2b), 3,36 (bs, 2H, 3), 3,50 (bs, 3H, lp,6a,5a), 3,57 (bs, 1H, 3b), 3,70 (bs, 4H, 6a,3b,4b,3a), 3,89 (bs, 5H,6a,3b,4b,3a,5b), 4,50 (bs, 2H, la a lb)
DOSY NMR:
log D (2,03 ppm C773-CO-NH-Polymer) ~ -10,5 m2/s log D (2,7 ppm -CH2 NH-R) ~ — 10,5 m2/s log D (3,0 ppm -CH2NH-R) — 10,5) m2/s
Příklad 7
Amidace kyseliny hyaluronové 3-azidopropylaminem
1,0 g kyseliny hyaluronové (kyselá forma) o molekulové hmotnosti 42 x 103 g.mol“1 a polydisperzitě 1,6 bylo rozpuštěno v 50 ml DMSO při teplotě 60 °C. Po rozpuštění se roztok kyseliny hyaluronové nechá ochladit na laboratorní teplotu. Po ochlazení se přidá 0,922 ml triethylaminu (3 eq) a reakční směs se nechá míchat 10 minut. Poté se přidá 0,378 ml ethylchlorformiátu (4 eq) a reakční směs se nechá hodinu míchat. Poté se do reakční směsi přidá 0,228 g (2,65 mmol) 3azidopropylaminu a reakční směs se míchá dalších 12 h při laboratorní teplotě, směs se naředí na celkový objem 200 ml a přelije do dialyzačních střev (cut-off 12 až 14 x 103 g.mol“1), kde se dialyzuje 3x po 24 h proti 0,1% roztoku NaCl a NaHCO3 (celkový objem 10 1) a dále 3x po 24 h
-5CZ 305040 B6 proti demi vodě. Dialyzovaný derivát se odpaří do sucha a vysuší pomocí acetonu. Struktura derivátu byla potvrzena NMR analýzou.
Výtěžek reakce: 0,8067 g Mw derivátu po reakci: 2 x 104 g.mol”1.
Stupeň substituce = 50 %.
'Η NMR přiřazené pomocí HSQC (500 MHz, NaOD, δ ppm): viz příklad 6
DOSY NMR: viz příklad 6
Příklad 8
Amidace kyseliny hyaluronové 3-azidopropylaminem
1,0 g kyseliny hyaluronové (kyselá forma) o molekulové hmotnosti 42 x 103 g.mol”1 a polydisperzitě 1,6 bylo rozpuštěno v 50 ml DMSO při teplotě 60 °C. Po rozpuštění se roztok kyseliny hyaluronové nechá ochladit na laboratorní teplotu. Po ochlazení se přidá 0,922 ml triethylaminu (3 eq) a reakční směs se nechá míchat 10 minut. Poté se přidá 0,378 ml ethylchlorformiátu (5 eq) a reakční směs se nechá hodinu míchat. Poté se do reakční směsi přidá 0,228 g (2,65 mmol) 3azidopropylaminu a reakční směs se míchá dalších 12 h při laboratorní teplotě, směs se naředí na celkový objem 200 ml a přelije do dialyzačních střev (cut-off 12 až 14 x 103 g.mor1), kde se dialyzuje 3x po 24 h proti 0,1% roztoku NaCl a NaHCO3 (celkový objem 10 1) a dále 3x po 24 h proti demi vodě. Dialyzovaný derivát se odpaří do sucha a vysuší pomocí acetonu. Struktura derivátu byla potvrzena NMR analýzou.
Výtěžek reakce: 0,8067 g
Mw derivátu po reakci: 2 x 104 g.mol”1.
Stupeň substituce = 40 %.
'Η NMR přiřazené pomocí HSQC (500 MHz, NaOD, δ ppm): viz příklad 6
DOSY NMR: viz příklad 6
Příklad 9
Amidace kyseliny hyaluronové 3-azidopropylaminem
1,0 g kyseliny hyaluronové (kyselá forma) o molekulové hmotnosti 72 x 103 g.mol”1 a polydisperzitě 1,7 bylo rozpuštěno v 50 ml DMSO při teplotě 60 °C. Po rozpuštění se roztok kyseliny hyaluronové nechá ochladit na laboratorní teplotu. Po ochlazení se přidá 0,922 ml triethylaminu (3 eq) a reakční směs se nechá míchat 10 minut. Poté se přidá 0,378 ml ethylchlorformiátu (5 eq) a reakční směs se nechá hodinu míchat. Poté se do reakční směsi přidá 0,228 g (2,65 mmol) 3azidopropylaminu a reakční směs se míchá dalších 24 h při laboratorní teplotě, směs se naředí na celkový objem 200 ml a přelije do dialyzačních střev (cut-off 12 až 14 x 103 g.mol”1), kde se dialyzuje 3x po 24 h proti 0,1% roztoku NaCl a NaHCO3 (celkový objem 10 1) a dále 3x po 24 h proti demi vodě. Dialyzovaný derivát se odpaří do sucha a vysuší pomocí acetonu. Struktura derivátu byla potvrzena NMR analýzou.
Výtěžek reakce: 0,7826 g
Mw derivátu po reakci: 52 x 103 g.mol“1.
Stupeň substituce = 54 %.
*H NMR přiřazené pomocí HSQC (500 MHz, NaOD, δ ppm): viz příklad 6
DOSY NMR: viz příklad 6
-6CZ 305040 B6
Příklad 10
Amidace kyseliny hyaluronové 3-azidopropylaminem
1,0 g kyseliny hyaluronové (kyselá forma) o molekulové hmotnosti 7 x 104 g.mol“1 a polydisperzitě 1,7 bylo rozpuštěno v 50 ml DMSO při teplotě 60 °C. Po rozpuštění se roztok kyseliny hyaluronové nechá ochladit na laboratorní teplotu. Po ochlazení se přidá 0,922 ml triethylaminu (3 eq) a reakční směs se nechá míchat 10 minut. Poté se přidá 0,378 ml ethylchlorformiátu (5 eq) a reakční směs se nechá hodinu míchat. Poté se do reakční směsi přidá 0,228 g (2,65 mmol) 3azidopropylaminu a reakční směs se míchá dalších 24 h při laboratorní teplotě, směs se naředí na celkový objem 200 ml a přelije do dialyzačních střev (cut-off 12 až 14 x 103 g.mol“1), kde se dialyzuje 3x po 24 h proti 0,1% roztoku NaCl a NaHCO3 (celkový objem 10 1) a dále 3x po 24 h proti demi vodě. Dialyzovaný derivát se odpaří do sucha a vysuší pomocí acetonu. Struktura derivátu byla potvrzena NMR analýzou.
Výtěžek reakce: 0,7826 g
Mw derivátu po reakci: 35 x 103 g-mol“1.
Stupeň substituce = 60 %.
*H NMR přiřazené pomocí HSQC (500 MHz, NaOD, δ ppm): viz příklad 6
DOSY NMR: viz příklad 6
Příklad 11
Amidace kyseliny hyaluronové 3-azidopropylaminem
1,0 g kyseliny hyaluronové (kyselá forma) o molekulové hmotnosti 393 x 103 g.mol“1 a polydisperzitě 1,7 bylo rozpuštěno v 50 ml DMSO při teplotě 60 °C. Po rozpuštění se roztok kyseliny hyaluronové nechá ochladit na laboratorní teplotu. Po ochlazení se přidá 0,922 ml triethylaminu (3 eq) a reakční směs se nechá míchat 10 minut. Poté se přidá 0,378 ml ethylchlorformiátu (3 eq) a reakční směs se nechá hodinu míchat. Poté se do reakční směsi přidá 0,228 g (2,65 mmol) 3azidopropylaminu a reakční směs se míchá dalších 8 h při laboratorní teplotě, směs se naředí na celkový objem 200 ml a přelije do dialyzačních střev (cut-off 12 až 14 x 103 g.mol“1), kde se dialyzuje 3x po 24 h proti 0,1% roztoku NaCl a NaHCO3 (celkový objem 10 1) a dále 3x po 24 h proti demi vodě. Dialyzovaný derivát se odpaří do sucha a vysuší pomocí acetonu. Struktura derivátu byla potvrzena NMR analýzou.
Výtěžek reakce: 0,7826 g
Mw derivátu po reakci: 165 x 103 g.mol“1.
Stupeň substituce = 85 %.
'H NMR přiřazené pomocí HSQC (500 MHz, NaOD, δ ppm): viz příklad 6
DOSY NMR: viz příklad 6
Příklad 12
Amidace kyseliny hyaluronové 3-azidopropylaminem
1,0 g kyseliny hyaluronové (kyselá forma) o molekulové hmotnosti 485 x 103 g.mol“1 a polydisperzitě 1,7 bylo rozpuštěno v 50 ml DMSO při teplotě 60 °C. Po rozpuštění se roztok kyseliny hyaluronové nechá ochladit na laboratorní teplotu. Po ochlazení se přidá 0,922 ml triethylaminu (3 eq) a reakční směs se nechá míchat 10 minut. Poté se přidá 0,378 ml ethylchlorformiátu (3 eq) a reakční směs se nechá hodinu míchat. Poté se do reakční směsi přidá 0,228 g (2,65 mmol) 3azidopropylaminu a reakční směs se míchá dalších 10 h při laboratorní teplotě, směs se naředí na
-7CZ 305040 B6 celkový objem 200 ml a přelije do dialyzačních střev (cut-off 12 až 14 x 103 g.mol“1), kde se dialyzuje 3x po 24 h proti 0,1% roztoku NaCl a NaHCO3 (celkový objem 10 1) a dále 3x po 24 h proti demi vodě. Dialyzovaný derivát se odpaří do sucha a vysuší pomocí acetonu. Struktura derivátu byla potvrzena NMR analýzou.
Výtěžek reakce: 0,7826 g
Mw derivátu po reakci: 177 x 103 g.mol“1.
Stupeň substituce = 98 %.
'Η NMR přiřazené pomocí HSQC (500 MHz, NaOD, δ ppm): viz příklad 6
DOSY NMR: viz příklad 6
Příklad 13
Amidace kyseliny hyaluronové hexylaminem
1,0 g kyseliny hyaluronové (kyselá forma) o molekulové hmotnosti 485 x 103 g.mol“1 a polydisperzitě 1,7 bylo rozpuštěno v 50 ml DMSO při teplotě 60 °C. Po rozpuštění se roztok kyseliny hyaluronové nechá ochladit na laboratorní teplotu. Po ochlazení se přidá 0,922 ml triethylaminu (5 eq) a reakční směs se nechá míchat 10 minut. Poté se přidá 0,378 ml ethylchlorformiátu (3 eq) a reakční směs se nechá hodinu míchat. Poté se do reakční směsi přidá 0,253 g (2,5 mmol) hexylaminu a reakční směs se míchá dalších 12 h při laboratorní teplotě, směs se naředí na celkový objem 200 ml a přelije do dialyzačních střev (cut-off 12 až 14 x 103 g.mol“1), kde se dialyzuje 3x po 24 h proti 0,1% roztoku NaCl a NaHCO3 (celkový objem 10 1) a dále 3x po 24 h proti demi vodě. Dialyzovaný derivát se odpaří do sucha a vysuší pomocí acetonu. Struktura derivátu byla potvrzena NMR analýzou.
Výtěžek reakce: 0,7826 g
Mw derivátu po reakci: 2 x 105 g.mol“1
Stupeň substituce = 88 %.
Ή NMR přiřazené pomocí HSQC (500 MHz, NaOD, δ ppm):
0,8 (bs, 2H, 6), 1,2 (bs, 2H, 5), 1,45 (bs, 6H, 3, 4 a 5), 1,8 (q, 3H, 8), 2,01 (s, 3H, 8a), 3,19 (bs, IH, la), 3,30 (bs, IH, 2b), 3,36 (bs, 2H, 3), 3,50 (bs, 3H, lp,6a,5a), 3,57 (bs, IH, 3b), 3,70 (bs, 4H, 6a,3b,4b,3a), 3,89 (bs, 5H,6a,3b,4b,3a,5b), 4,50 (bs, 2H, la a lb)
DOSY NMR:
log D (2,03 ppm C7/3-CO-NH-Polymer) ~ - 10,5 m2/s log D (2,7 ppm -CH2NH-R) ~ - 10,5 m2/s log D (3,0 ppm -CH2NH-R) ~ - 10,5) m2/s
Uvedené příklady provedení jsou pouze ilustrativní a nijak neomezují ani nevyěerpávají všechny varianty provedení vynálezu.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (10)
1. Způsob přípravy amidových derivátů kyseliny hyaluronové, vyznačující se tím, že se nejprve v přítomnosti báze aktivuje skupina COOH kyseliny hyaluronové ethylchlorformiátem za vzniku reaktivního intermediátu, který následně reaguje s primárním aminem R-NH2 za vzniku amidu kyseliny hyaluronové obecného vzorce I:
-8CZ 305040 B6 (I), kde R je alkylový lineární nebo rozvětvený řetězec Ci až C30, volitelně s obsahem aromatických nebo heteroaromatických skupin, případně R je CH=C-CH2-NH2 nebo NH2-CH2-CH2-CH2-N3; přičemž stupeň substituce v rozmezí 10 až 99 % kyseliny hyaluronové je řízen molámím množstvím přidaného aminu R-NH2.
2. Způsob přípravy podle nároku 1, vyznačující se tím, že probíhá v polárním aprotickém prostředí, zejména v dimethylsulfoxidu.
3. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků la2, vyznačující se tím, že kyselina hyaluronová je v kyselé formě a má střední molekulovou hmotnost v rozmezí 1 χ 104 až 5 χ 105 g.moT1, zejména 3,5 χ 105 až 5 χ 105 g.mol-1.
4. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků laž3, vyznačující se tím, že reakce probíhá při teplotě 25 °C po dobu 8 až 24 h, s výhodou po dobu 12 h.
5. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků laž4, vyznačující se tím, že primární amin se přidá do reakce v čase 0,1 až 2 h po přídavku ethylchlorformiátu.
6. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků laž5, vyznačující se tím, že primární amin se přidá do reakce v molámím množství 3 až 5 ekvivalentů vzhledem k látkovému množství dimerů hyaluronanu.
7. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků Íaž6, vyznačující se tím, že primárním aminem R-NH2 je CH=C-CH2-NH2, NH2-CH2-CH2-CH2-N3 nebo NH2(CH2)5-CH3.
8. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků laž7, vyznačující se tím, že látkové množství přidaného ethylchlorformiátu je v molámím pornem 3 až 5 ekvivalentů vzhledem k látkovému množství dimerů hyaluronanu.
9. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků laž8, vyznačující se tím, že bází je trialkylamin, zejména triethylamin.
10. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků laž9, vyznačující se tím, že látkové množství přidané báze je v molámím poměru 3 až 5 ekvivalentů vzhledem k látkovému množství dimerů hyaluronanu.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2010-687A CZ305040B6 (cs) | 2010-09-14 | 2010-09-14 | Způsob přípravy vysoce substituovaných amidů kyseliny hyaluronové |
| PCT/CZ2011/000089 WO2012034544A2 (en) | 2010-09-14 | 2011-09-08 | Method of preparation of highly substituted hyaluronic acid amides |
| ARP110103318A AR082965A1 (es) | 2010-09-14 | 2011-09-13 | Metodo de preparacion de amidas de acido hialuronico altamente sustituidas |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2010-687A CZ305040B6 (cs) | 2010-09-14 | 2010-09-14 | Způsob přípravy vysoce substituovaných amidů kyseliny hyaluronové |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2010687A3 CZ2010687A3 (cs) | 2012-03-21 |
| CZ305040B6 true CZ305040B6 (cs) | 2015-04-08 |
Family
ID=45047494
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2010-687A CZ305040B6 (cs) | 2010-09-14 | 2010-09-14 | Způsob přípravy vysoce substituovaných amidů kyseliny hyaluronové |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| AR (1) | AR082965A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ305040B6 (cs) |
| WO (1) | WO2012034544A2 (cs) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ2014451A3 (cs) | 2014-06-30 | 2016-01-13 | Contipro Pharma A.S. | Protinádorová kompozice na bázi kyseliny hyaluronové a anorganických nanočástic, způsob její přípravy a použití |
| CZ309295B6 (cs) | 2015-03-09 | 2022-08-10 | Contipro A.S. | Samonosný, biodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití |
| CZ306479B6 (cs) | 2015-06-15 | 2017-02-08 | Contipro A.S. | Způsob síťování polysacharidů s využitím fotolabilních chránicích skupin |
| CZ306662B6 (cs) | 2015-06-26 | 2017-04-26 | Contipro A.S. | Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití |
| CZ307511B6 (cs) | 2015-12-23 | 2018-10-31 | Contipro A.S. | Fluorescenční konjugát kyseliny hyaluronové nebo jeho sůl, hydrofobizovaný konjugát, způsoby jejich přípravy a použití |
| CZ308106B6 (cs) | 2016-06-27 | 2020-01-08 | Contipro A.S. | Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004011503A1 (en) * | 2002-07-26 | 2004-02-05 | Lg Life Sciences Ltd. | Hyaluronic acid derivative gel and method for preparing the same |
| EP1790665A1 (en) * | 2004-09-07 | 2007-05-30 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Process for producing water-soluble hyaluronic acid modification |
| CN101367884A (zh) * | 2008-09-25 | 2009-02-18 | 复旦大学 | 一种半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITPD980169A1 (it) | 1998-07-06 | 2000-01-06 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Ammidi dell'acido ialuronico e dei suoi derivati e processo per la loro preparazione. |
| ITMI20061726A1 (it) * | 2006-09-11 | 2008-03-12 | Fidia Farmaceutici | Derivati crosslinkati a base di acido ialuronico reticolato via click chemistry |
-
2010
- 2010-09-14 CZ CZ2010-687A patent/CZ305040B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-09-08 WO PCT/CZ2011/000089 patent/WO2012034544A2/en active Application Filing
- 2011-09-13 AR ARP110103318A patent/AR082965A1/es unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004011503A1 (en) * | 2002-07-26 | 2004-02-05 | Lg Life Sciences Ltd. | Hyaluronic acid derivative gel and method for preparing the same |
| EP1790665A1 (en) * | 2004-09-07 | 2007-05-30 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Process for producing water-soluble hyaluronic acid modification |
| CN101367884A (zh) * | 2008-09-25 | 2009-02-18 | 复旦大学 | 一种半胱胺修饰的巯基化透明质酸偶合物及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Journal of Chromatografym 508, (1990), str. 333-339; hlavne str. 333, 335 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AR082965A1 (es) | 2013-01-23 |
| WO2012034544A3 (en) | 2012-05-03 |
| WO2012034544A2 (en) | 2012-03-22 |
| CZ2010687A3 (cs) | 2012-03-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Park et al. | RGD-conjugated chitosan-pluronic hydrogels as a cell supported scaffold for articular cartilage regeneration | |
| CN112812329B (zh) | 巯基改性高分子化合物的水凝胶及其制备方法和用途 | |
| CZ305040B6 (cs) | Způsob přípravy vysoce substituovaných amidů kyseliny hyaluronové | |
| Shi et al. | Characterization of ph-and thermosensitive hydrogel as a vehicle for controlled protein delivery | |
| CZ296842B6 (cs) | Zesítené hyaluronové kyseliny | |
| JP2002519481A (ja) | ヒアルロン酸アミドおよびそれらの誘導体、並びにそれらの製造法 | |
| Du et al. | Mussel-Inspired epoxy bioadhesive with enhanced interfacial interactions for wound repair | |
| CN112516075B (zh) | 一种载有泼尼松的透明质酸-壳聚糖温敏水凝胶及其制备方法 | |
| WO2021098098A1 (zh) | 巯基改性透明质酸及其制备方法和用途 | |
| KR20220104196A (ko) | 메르캅토 변성 고분자 화합물 및 이의 제조 방법 및 용도 | |
| EP1773399B1 (en) | Hydrogels of hyaluronic acid and alpha, beta-polyaspartylhydrazide and their biomedical and pharmaceutical uses | |
| AU2010237752A1 (en) | Polysaccharide derivative and hydrogel thereof | |
| EP3307790B1 (en) | Method of crosslinking of polysaccharides using photoremovable protecting groups | |
| CN111247174B (zh) | 在炎症状态的治疗中的官能化的透明质酸或其衍生物 | |
| Torlopov et al. | Ethylenediamine-modified alginate-A hemocompatible platform for polymer-drug conjugates | |
| RU2708327C2 (ru) | Производные сульфатированных полисахаридов, их способ получения, модификация и применение | |
| CN113906055B (zh) | 官能化的透明质酸的交联的聚合物及其在炎症状态的治疗中的用途 | |
| Trifan et al. | Strategies of hyaluronan chemical modifications for biomedical applications | |
| CN119505032A (zh) | 一种双官能化吡喃环衍生物及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20160914 |