CZ306662B6 - Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití - Google Patents

Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití Download PDF

Info

Publication number
CZ306662B6
CZ306662B6 CZ2015-445A CZ2015445A CZ306662B6 CZ 306662 B6 CZ306662 B6 CZ 306662B6 CZ 2015445 A CZ2015445 A CZ 2015445A CZ 306662 B6 CZ306662 B6 CZ 306662B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
derivative
sulfated
preparation
sulfated polysaccharide
polysaccharide
Prior art date
Application number
CZ2015-445A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2015445A3 (cs
Inventor
Tomáš Bobula
Radovan Buffa
Hana Vágnerová
Romana Šuláková
Lucia Wolfová
Lenka Kohútová
Veronika Moravcová
Ondřej Židek
Pavlína Procházková
Vladimír Velebný
Original Assignee
Contipro A.S.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Contipro A.S. filed Critical Contipro A.S.
Priority to CZ2015-445A priority Critical patent/CZ306662B6/cs
Priority to JP2017567074A priority patent/JP6840683B2/ja
Priority to KR1020187002258A priority patent/KR102665664B1/ko
Priority to EP16751149.2A priority patent/EP3313893B1/en
Priority to ES16751149T priority patent/ES2742208T3/es
Priority to PCT/CZ2016/000071 priority patent/WO2016206661A1/en
Priority to BR112017027030-7A priority patent/BR112017027030B1/pt
Priority to US15/737,443 priority patent/US10414832B2/en
Priority to RU2018102154A priority patent/RU2708327C2/ru
Publication of CZ2015445A3 publication Critical patent/CZ2015445A3/cs
Publication of CZ306662B6 publication Critical patent/CZ306662B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0069—Chondroitin-4-sulfate, i.e. chondroitin sulfate A; Dermatan sulfate, i.e. chondroitin sulfate B or beta-heparin; Chondroitin-6-sulfate, i.e. chondroitin sulfate C; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/20—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/52—Hydrogels or hydrocolloids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/56—Porous materials, e.g. foams or sponges
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0036—Galactans; Derivatives thereof
    • C08B37/0042—Carragenan or carragen, i.e. D-galactose and 3,6-anhydro-D-galactose, both partially sulfated, e.g. from red algae Chondrus crispus or Gigantia stellata; kappa-Carragenan; iota-Carragenan; lambda-Carragenan; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G81/00—Macromolecular compounds obtained by interreacting polymers in the absence of monomers, e.g. block polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/24—Crosslinking, e.g. vulcanising, of macromolecules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2305/00—Characterised by the use of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08J2301/00 or C08J2303/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2305/00—Characterised by the use of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08J2301/00 or C08J2303/00
    • C08J2305/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

Řešení se týká přípravy a použití .alfa.,.beta.-nenasycených aldehydů ve struktuře sulfatovaných polysacharidů. Jedná se o deriváty s konjugovanou dvojnou vazbou v poloze 4 a 5 galaktopyranosové části umístěné vůči aldehydické skupině v poloze 6 podle obecného strukturního vzorce I nebo její hydratované formě podle obecného strukturního vzorce II. Způsob přípravy těchto derivátů vychází ze sulfatovaných polysacharidů obsahujících galaktopyranosový cyklus sulfatovaný v poloze 4, který je v polymerním řetězci vázán .alfa.(1→3) nebo .beta.(1→3) O-glykosidickou vazbou. V popsaném řešení sulfatované polysacharidy podléhají regio- a chemoselektivní oxidaci za vzniku C-6 nasyceného aldehydu, který přímou eliminaci sulfátové skupiny poskytuje .alfa.,.beta.-nenasycený derivát podle obecného vzorce I nebo II. Popsané řešení je technologicky výhodné, protože vede přímo k .alfa.,.beta.-nenasyceným aldehydům, bez nutnosti použití eliminačních činidel, zvýšené teploty, nebo izolace meziproduktu syntézy. Konjugace ve struktuře .alfa.,.beta.-nenasyceného aldehydu umožňuje ve fyziologických podmínkách vázat širší paletu biokompatibilních aminů ve struktuře sulfatovaných polysacharidů. Navrženým postupem se dají připravit materiály vhodné pro pH responsivní nosičové systémy, nebo pro přípravu scaffoldů ve tkáňovém inženýrství nebo regenerativní medicíně.

Description

Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití
Oblast techniky
Vynález se týká derivátů sulfatovaných polysacharidů s konjugovanou dvojnou vazbou v poloze 4 a 5 galaktopyranosové části umístěné vůči aldehydické skupině v poloze 6. Dále se vynález týká způsobu jejich výroby, modifikace a použití.
Dosavadní stav techniky
Glykosaminoglykany jsou lineární polysacharidy, které sestávají z aminohexosy a uranové kyseliny s výjimkou keratan sulfátu. Tvoří velkou část mezibuněčné hmoty v pojivové tkáni, především chrupavek, vazů a šlach. K významným zástupcům glykosaminoglykanů vedle kyseliny hyaluronové patří také sulfatované polysacharidy např. chondroitin sulfát nebo dermatan sulfát.
Chondroitin sulfát je lineární, sulfatovaný a negativně-nabitý glykosaminoglykan složený z opakujících se monomerních jednotek A-acetyl-D-galaktosaminu a D-glukuronové kyseliny vzájemně propojených β( 1 ->3) a β(1 ->4) O-glykosidickými vazbami (strukturní vzorec chondroitin sulfátu viz níže).
kde
R1 je H nebo Na,
R2 je H, O-SO2-OH nebo O-SCh-ONa.
Zdrojem chondroitin sulfátu jsou živočišné pojivové tkáně, kde se váže na proteiny a tvoří tak součást proteoglykanů. Sulfatace chondroitinu se uskutečňuje pomocí sulfotransferáz v různých polohách a různém zastoupení. Jedinečný vzorec sulfatace jednotlivých poloh v polymerním řetězci kóduje specifickou biologickou aktivitu chondroitin sulfátu. Ten je důležitým stavebním blokem chrupavky v kloubech, kterým dodává odolnost v tlaku a obnovuje rovnováhu ve složení kloubového maziva (Baeurle S. A., Kiselev M. G., Makarova E. S.. Nogovitsin E. A. 2009. Polymer 50: 1805). Chondroitin sulfát se společně s glukosaminem používá jako výživový doplněk na léčení, nebo také prevenci vzniku osteoartritidy u lidí (např. Flextor®, Advance Nutraceutics, Ltd.) nebo u zvířat (např. Gelorendog®, Contipro Pliarma, Ltd.). Z farmaceutického hlediska se chondroitin sulfát považuje za léčivo se zpožděným nástupem účinku tlumení bolesti při degenerativním onemocnění kloubů (Aubry-Rozier B. 2012. Revue Médicale Suisse 14: 571).
Dermatan sulfát je lineární, sulfatovaný a negativně-nabitý glykosaminoglykan složený z opakujících se monomerních jednotek jV-acetyl-D-galaktosaminu a L-iduronové kyseliny vzájemně propojených a(l->3) a β( 1 ·->4) O-glykosidickými vazbami (strukturní vzorec dermatan sulfátu viz níže).
- 1 CZ 306662 B6
R1 je H nebo Na,
R2 je H, O-SO2-OH nebo O-SO2-ONa.
Dermatan sulfát se od chondroitin sulfátu odlišuje přítomností L-iduronové kyseliny, která je C5 epimerem D-glukuronové kyseliny. Opačná konfigurace iduronové kyseliny umožňuje lepší flexibilitu řetězců dermatan sulfátu a zabezpečuje jejich specifickou glykosaminoglykan-proteinovou interakci v okolním prostoru. Tyto interakce přispívají k regulaci vícero buněčných procesů, jako např. migraci, proliferaci, diferenciaci nebo angiogenezi. Proměna chondroitin sulfátu na dermatan sulfát je zabezpečená pomocí tří enzymů, a to dermatan sulfát epimerázy 1 (DS—epi 1), dermatan sulfát epimerázy 2 (DS-epi2) a dermatan 4-O-sulfotransferázy (D4ST1). Epimerizační reakce glukuronové kyseliny na idurónovou kyselinu spolu se způsobem sulfatace není náhodná ale cíleně enzymaticky řízena, čehož výsledkem je kódování informace o funkci konstruovaného glykosaminoglykanu (Thelin M.., et al. 2013. FEBS Journal 280: 2431).
Karagenany je skupina lineárně sulfátových polysacharidů, které se získávají extrakcí z červených mořských řas. Základními stavebnými jednotkami jsou galaktosa a její 3,6-anhydro derivát, které jsou vzájemně propojeny a(l->3) nebo β(1—>4) O-glykosidickými vazbami. Existují tři základní skupiny karagenanu, které se liší ve stupni sulfatace a rozpustnosti ve vodě. Kappakaragenan má jednu sulfátovou skupinu v dimeru a tvoří tvrdé gely ve vodném prostředí. lotakaragenan obsahuje dva sulfáty a tvoří měkké gely, přičemž lambda-karagenan se třemi sulfáty nevykazuje gelující vlastnosti. Karagenan je pro vegetariány a vegany alternativou k živočišné želatině. Používá se na zahuštění a stabilizaci potravinových výrobků a jako emulgátor ve farmaceutickém a textilním průmyslu.
Oxidace glykosaminoglykanů
Polysacharidy díky své funkční různorodosti mohou být oxidovány v různých polohách (Cumpstey I., 2013. ISRN Organic Chemistry, 1). V případě glykosaminoglykanů existují tři cesty oxidace. V první se oxiduje primární hydroxyl za vzniku karboxylové kyseliny. Nejčastěji se k oxidaci používá kombinace TEMPO/NaCIO (Jiang B., et al. 2000. Carbohydrate Research 327: 455; Huang L. et al. 2006. Chemistry, 12: 5264). Tahle metoda je díky sterické objemnosti TEMPO regioselektivní jen pro primární hydroxyly.
Druhá cesta naopak vede k oxidaci sekundárních hydroxylů, kde vznikají diketo sloučeniny. Oxidační činidla jsou v tomhle případě oxidy přechodných kovů na bázi Cr (VI) (Flassan R., et al. 2013. Carbohydrate Polymers, 92: 2321) nebo Μη (VII) (Gobouri A. A., et al. 2013. International Journal of Sciences, 2:1; Zaafarany I. A., et al. 2013. Journal of Materials Science Research, 2: 23).
Třetí typ oxidace vychází z použití jodistanu (IO4 ), který také atakuje sekundární hydroxylové skupiny, avšak za současného štěpení pyranosového kruhu (Dawlee S. et al. 2005. Biomacromolecules, 6: 2040; Liang Y., et al. 2011. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 82: 1; Xu Y., et al. 2012. Carbohydrate Polymers, 87: 1589). Při oxidaci nejdřív dochází ke vzniku dialdehydu, který se dále oxiduje na dikarboxylovou kyselinu.
Všechny zmíněné cesty oxidace mají vícero nedostatků. V případě oxidace pomocí TEMPO/NaClO vzniká přednostně polyuronová kyselina místo žádaného C-6 aldehydu. Reakce pro stadium aldehydu vyžaduje optimalizaci reakčních podmínek, jak bylo demonstrováno na příkla _ 7 CZ 306662 B6 du kyseliny hyaluronové (Buffa R., et al., WO 2011/069 475, Šedová P., et aL, 2013. Carbohydrate Research, 371: 8). Mimoto, zvýšený obsah karboxylových skupin v polymeru výrazným způsobem ovlivňuje konformaci, interakci a rozpoznávání polysacharidů s biologickým okolím (Zou X. H., et al. 2009. Acta Biomaterialia, 5: 1588).
I když v případě oxidace jodistanem je možné docílit chemoselektivní průběh reakce, cesta není preferována kvůli dramatickému poklesu molekulové hmotnosti polymeru a nevratnému štěpení pyranosového kruhu, který vede ke ztrátě nativního charakteru polysacharidů.
Co se týče použití oxidačních činidel odvozených od oxidů přechodných kovů, nelze u oxidovaných polysacharidů kvůli vysoké toxicitě residuí počítat s biomedicínskými aplikacemi (Normandin L., et al. 2002. Metabolic Brain Disease, 17: 375; Katz S. A., et al. 2006. Journal of Applied Toxicology, 13:217).
Dehydratační reakce oxidovaných derivátu polysacharidů
Přítomnost aldehydické skupiny ve struktuře polysacharidů způsobuje kyselý charakter atomu vodíku v sousední α-poloze. Ten se stává v bazickém prostředí lehce přístupný pro eliminační reakce za vzniku karbanionu, který se stabilizuje konjugací se sousední aldehydickou skupinou a vytěsní tak odstupující skupinu v β-poloze (cesta a, Schéma 1). K eliminaci může také docházet v kyselých podmínkách, kde nejprve dochází k aktivaci odstupující skupiny za vzniku karbkationu v β-poloze (cesta b, Schéma 1). Ten je v reakční směsi neutralizován volným elektronovým párem v α-poloze. Třetí možností je cesta bez přídavku báze nebo kyseliny pomocí simultánní eliminace molekuly (cesta c, Schéma 1).
Schéma 1. Eliminační reakce ve struktuře aldehydu: (a) tvorba karbanionu působením báze, mechanismus Elcb (b) tvorba karbkationu působením kyseliny, mechanismus El (c) simultánní eliminace, mechanismus E2.
Cílená dehydratace aldehydu kyseliny hyaluronové v poloze 6 v glukosaminové části byla popsána v patentu (Buffa a kol.: CZ 304 512). Autoři popisují přípravu, struktury α,β-nenasyceného aldehydu kyseliny hyaluronové a jejího použití v síťovacích reakcích. V syntéze je popsáno použití stericky objemných organických bází (např. diisopropylaminu, triethylaminu), anorganických bází, např. Ca(OH)2 ve směsi voda-organické rozpouštědlo typu DMSO, sulfolan v poměru 3/1 až 1/2 a za zvýšených teplot 50 až 60 °C. Dehydratace je také provedena v pevné fázi zahříváním polymeru na 50 až 100 °C po dobu 4 až 5 dnů. Autoři popisují oxidaci a dehydrataci kyseliny hyaluronové ve dvou krocích a nepopisují přímou dehydrataci během oxidačního stupně. Značnou nevýhodou tohoto řešení je dvoukroková syntéza a použití nevhodných reakčních podmínek v podobě žíravých (korodujících) eliminačních činidel, přítomnosti organického rozpouštědla, nutnosti zvýšené teploty a dlouhého reakčního času. Všechny tyto parametry syntézu prodražují a komplikují z technologického hlediska (např. koroze výrobního zařízení, náročná purifikace produktu, vyšší cena dipolárních aprotických solventů typu DMSO, sulfolan a elimi načních činidel typu Et3N a DIPEA, vysoká spotřeba energie a chladicí vody, zvýšené riziko nebezpečných reziduí v produktu, ohrožená biokompatibilita produktu, vyšší míra degradace polymeru kvůli bazickému prostředí a zvýšené teplotě). Zmíněné nevýhody u syntézy α,βnenasyceného aldehydu HA v CZ 304 512 jsou podle předmětného vynálezu úspěšně překonány, protože syntéza probíhá v jednom hrnci bez nutnosti izolace meziproduktu v podobě nasyceného Có aldehydu, bez přídavku eliminačního činidla, bez přídavku organického rozpouštědla, za laboratorní teploty a s hodinovými reakčními časy.
Síťovací reakce oxidovaných polysacharidů
Zavedení aldehydické skupiny do struktury polysacharidů umožňuje dodatečnou modifikaci polymerního řetězce pomocí nukleofilní adice. Je známo několik patentových dokumentů popisujících vázání aminů na aldehydy. Typickým příkladem pro glykosaminoglykany je reakce dialdehydu vytvořeného oxidací s jodistanem s různými nízko-molekulovými (aminy, hydrazidy, alkoxyaminy, semikarbazidy) nebo polymerními N-nukleofily (želatina, chitosan) nebo Snukleofily (thioly, aminothioly) s cílem přípravy biokompatibilních hydrogelu (Davvlee S., et al. 2005. Biomacromolecules, 6: 2040; Weng L.. et al. 2008. Journal of Biomedical Materiasl Research part A, 85: 352, Bergman K., et al.: WO 2009/108 100, Hilborn J., et al.: WO 2010/138 074). Síťování aldehydu kyseliny hyaluronové připraveného pomocí Dess-Martin periodinanu nebo kombinací TEMPO/NaClO s různými aminy bylo popsáno v patentových dokumentech (Buffa R., et al.: WO 2011/069 474; Buffa R., et al.: WO 2011/069 475).
Dehydratací C6-aldehydu v /V-acetyl-D-glukosaminové podjednotce byl připraven α,β-nenasycený aldehyd kyseliny hyaluronové (Buffa R.. a kol.: CZ 304 512). Autoři kromě oxidovaných derivátů kyseliny hyaluronové popisují také její použití v reakcích s alifatickými, aromatickými aminy s volitelným obsahem N, S, nebo O atomů. Nicméně jejich příprava probíhá za zvýšených teplot a použití korodujících eliminačních činidel, což je značně nepříznivé pro zachování jejich biologické aktivity z důvodu možné denaturace a také přítomnosti vedlejších produktů. Dále zmiňují síťovací reakce α,β-nenasyceného aldehydu kyseliny hyaluronové s deacetylovanými polysacharidy v úloze multifunkčního aminolinkeru, na kterých ilustrují výhody konjugace aldehydické skupiny ze strany polysacharidů, která se odráží v Teologických vlastnostech připravených hydrogelu. Nicméně takto připravené hydrogely nevykazují vyhovující mechanické vlastnosti, zvláště pokud jde o tvrdost hydrogelu.
Podstata vynálezu
Cílem vynálezu je připravit deriváty sulfatovaných polysacharidů za mírných reakčních podmínek, v kratším čase a bez použití nežádoucích příměsí eliminačních činidel či organických rozpouštědel. Tímto způsobem se zamezí výrazné degradaci a ztrátě biologických vlastností sulfatovaných polysacharidů, které jsou důležité pro tkáňové inženýrství, regenerativní medicínu nebo biomedicínské aplikace. Předmětem vynálezu jsou deriváty sulfatovaných polysacharidů mající jako součást svého polymerního řetězce alespoň jeden galaktopyranosový, resp. galaktosaminový cyklus, případně sulfatovaný v poloze 2, modifikovaný podle obecného vzorce I nebo II, který obsahuje dvojnou vazbu v polohách 4 a 5 s konjugovanou aldehydickou skupinou, respektive jeho hydratovanou formu (obecný vzorec II)
- 4 CZ 306662 sulfatovaný polysacharid —O .0— sulfatovaný polysacharid sulfatovaný polysacharid -q· .θ- sulfatovaný polysacharid kde
R je OH, O-SO2-OH, O-SO2-ONa nebo NH-C(O)-CH3.
Nutnou podmínkou je použití sulfatovaných polysacharidů obsahujících ve svém řetězci alespoň jeden galaktopyranosový cyklus, který je sulfatován v poloze 4, a zároveň vázán v řetězci oc( 1 —>3) nebo β(1 —>3) O-glykosidickou vazbou podle obecného strukturního vzorce III.
R O3S<
sulfatovaný polysacharid—O.
O—sulfatovaný polysacharid (HI), kde
R je OH, O-SO2-OH, O-SO2-ONa nebo NH-C(O)-CH3
R1 je H nebo Na.
Polysacharid je s výhodou vybrán ze skupiny zahrnující chondroitin sulfát, dermatan sulfát, karagenan a jejich farmaceuticky přijatelné deriváty a/nebo soli a má s výhodou molekulovou hmotnost v rozmezí 1x103 až 5xl04g.mor' a stupeň substituce v rozmezí 1 až 40 %, s výhodou 10 až 25 %. Pod pojmem „stupeň substituce“ se ve vzorci I, resp. vzorci II rozumí stupeň modifikace na nenasycený aldehyd, resp. jeho hydratovanou formu.
Toto řešení umožňuje stabilizovat konjugáty sulfatovaných polysacharidů s amino sloučeninami pomocí násobné vazby ze strany aldehydu, takže na takto modifikované sulfatované polysacharidy je možné ve fyziologických podmínkách stabilněji vázat podstatně širší spektrum aminů (Schéma 2)
-5CZ 306662 B6 sulfatovaný polysacharid—
O—sulfatovaný polysacharid
kde
R je OH, O-SO2-OH. O-SO2-ONa nebo NH-C(O)CH3
R2 je alkyl, aryl, lieteroaryl.
Schéma 2. Vázání aminu na α,β-nenasycený aldehyd sulfatovaného polysacharidu.
Dále se vynález týká způsobu přípravy derivátu obecného strukturního vzorce I nebo II, kde se nejprve sulfatovaný polysacharid, který je v nativní podobě rozpustný ve vodě a který ve své struktuře obsahuje alespoň jednu galaktopyranosovou jednotku sulfatovanou v poloze 4, která je 15 v polymerním řetězci vázaná a(l ->3) nebo β(1—>3) O-glykosidickou vazbou, oxiduje na aldehyd v poloze 6 a bezprostředně po oxidaci ve stávající reakční směsi přímou eliminací dává α,βnenasycený aldehyd (Schéma 3) r1o3s sulfatovaný polysacharid—O
(III)
O—sulfatovaný polysacharid R oxidace _1_ O
R O3SO X sulfatovaný polysacharid—sulfatovaný polysacharid R přímá eliminace
(II), kde
R je OH, O-SO2-OH, O-SO2-ONa nebo NH-C(O)CH3
R1 je H nebo Na.
Schéma 3. Způsob přípravy α,β-nenasyceného aldehydu ve struktuře sulfatovaného polysacharidu.
Selektivní oxidace primární hydroxylové skupiny v poloze 6 galaktopyranosy se dá uskutečnit např. pomocí oxidačního systému 2,2,6,6-tetramethyl-l-piperidinyloxyl radikálu R3-TEMPO/NaClO, kde R3 je vodík nebo TV-acetyl, ve vodě nebo ve vodném roztoku anorganických solí. Tento krok probíhá s výhodou ve vodě, při teplotě 5 až 25 °C. výhodněji 5 až 10 °C, molární množství NaClO je v rozmezí 0,1 až 2,0 ekvivalentu a molární množství R3-TEMPO je v rozmezí 0,01 až 0,2 ekvivalentu vzhledem k dimeru sulfatovaného polysacharidů. Výchozí sulfatovaný polysacharid má molekulovou hmotnost v rozsahu IxlO4 až 5xl06 g.mol1 a musí obsahovat galaktopyranosové podjednotky sulfatované v poloze 4 a je v polymerním řetězci vázán a(l—>3) nebo β(1—>3) (7-glykosidickými vazbami. S výhodou je výchozím sulfatovaným póly sacharidem chondroitin sulfát, dermatan sulfát, karagenan nebo jejich farmaceuticky přijatelný derivát a/nebo sůl. Vodným roztokem solí může být například vodný roztok obsahující sůl alkalického kovu a/nebo pufr, např. PBS.
Eliminační reakce oxidovaného a sulfatovaného polysacharidů probíhá bezprostředně po oxidačním stupni v té samé reakční směsi bez nutnosti přídavku eliminačního činidla, zejména kyseliny nebo báze, organického rozpouštědla nebo navýšení reakční teploty a bez izolace nasyceného C-6 aldehydu v galaktopyranosové podjednotce sulfatované v poloze 4. Eliminační reakce probíhá ve vodě nebo vodných roztocích anorganických solí (např. soli alkalických kovů), nebo pufrů (např. PBS) při teplotě 5 až 25 °C a nevyžaduje dodatečný reakční čas. Dále platí, že stupen eliminace je proporcionální k dosaženému stupni oxidace v reakční směsi. Způsob přípravy α,βnenasyceného aldehydu spojuje dva reakční kroky (oxidaci a eliminaci) do jednoho hrnce bez izolace meziproduktu z oxidačního stupně. Výsledkem oxidace je místo nasyceného C-6 aldehydu α,β-nenasycený aldehyd ve struktuře sulfatovaného polysacharidů. Ve srovnání s metodou přípravy α,β-nenasyceného aldehydu kyseliny hyaluronové (Buffa R., a kol.: CZ 304 512) se prezentovaný přístup odlišuje a je jednoznačně výhodný, a to v následujících bodech uvedených v tabulce 1.
Tabulka 1: Rozdíly v přípravě α,β-nenasycených aldehydů ve srovnání se stavem techniky.
parametr CZ304512 vynález
typ polysacharidů kyselina hyaluronová sulfatované polysacharidy
počet syntetických kroků 2 |
eliminační činidlo ano (10-15 ekvivalentů) ne
rozpouštědlo směs voda-organické rozpouštědlo voda
reakční teplota 50 až 100 °C laboratorní teplota - 5 až 25 °C
reakční čas 2 až 5 dní 1 až 2 h
stupeň substituce 5 až 7% 20 až 25%
Jak je patrné z tabulky 1 výše, způsob přípravy derivátů sulfatovaných polysacharidů podle vynálezu vede přímo k tvorbě α,β-nenasycených aldehydů místo jejich nasycených analogů. Dalším rozdílem navrženého způsobu podle vynálezu je to, že se nedá aplikovat na polysacharidy zmiňované v dosavadním stavu techniky, protože na svůj průběh vyžaduje přítomnost sulfátové skupiny. Dalšími výhodami je reakce probíhající výlučně ve vodném prostředí, bez nutnosti přídavku organického rozpouštědla nebo jakéhokoli eliminačního činidla. Navíc reakce probíhá za laboratorních teplot (20 až 25 °C) s krátkými reakčními časy (1 až 2 h) a není nutná izolace nasyceného C-6 aldehydu. Výsledkem výše uvedeného způsobu jsou deriváty sulfatovaných derivátů obecných vzorců I a/nebo 11 mající DS v rozsahu 20 až 25 %. Způsob jejich přípravy je technologicky zajímavý, časově a ekonomicky podstatně výhodnější oproti známým postupům.
Strukturní motiv α,β-nenasyceného aldehydu v sulfatovaných polysacharidech je z pohledu chemické modifikace využitelný hlavně pro kondenzační reakce s různými N-nukleofily. Aldehydická skupina v úloze reaktivního elektrofilního centra si zachovává svoji stabilitu a reaktivitu i ve vodném prostředí, což se dá s výhodou využít pro zmiňované vázání (konjugaci) biokompatibilních aminů s deriváty podle obecných vzorců I a II. Pojem amin je odborníkovi v dané oblasti dobře známý a může neomezeně představovat alky lam in, arylamin, heteroarylamin, aminokyselinu, peptid, nebo polymer s volnou amino skupinou. Ta může být přímou součástí polymeru nebo také je vázaná prostřednictvím vhodného linkeru, který může být lineární nebo rozvětvený, volitelně s obsahem N, S, nebo O atomů. Pod polymerem s amino skupinou se rozumí deacetylovaný polysacharid, protein, peptid nebo i jiný biopolymer, či biokompatibilní syntetický polymer.
Vynález se tedy dále týká způsobu modifikace derivátu podle obecného vzorce 1 nebo II, kde derivát reaguje s aminem obecného vzorce R2—NH2, kde R2 je alkylový, aromatický, heteroaromatický, lineární nebo rozvětvený řetězec C| až C3o, volitelně s obsahem N, S nebo O atomů. Aminem může být s výhodou biologicky aktivní amin, zejména aminokyselina nebo peptid, nebo biologicky akceptovatelný polymer, který obsahuje volnou aminoskupinu, přičemž tato aminoskupina je přímou součástí polymeru (např. želatiny, chitosanu, deacetylované kyseliny hyaluronové, deacetylovaného chondroitin sulfátu atd.) nebo je na polymer vázaná prostřednictvím linkeru obsahujícího aminovou, hydrazinovou, hydrazidovou, amino-alkoxylovou, hydroxylovou, karboxylovou, thiolovou skupinou, nebo jejich libovolnou kombinaci. Molární množství aminu se může s výhodou pohybovat v rozmezí 0,05 až 3 ekvivalentů vzhledem k dimeru sulfatovaného polysacharidů. Vázání aminu může probíhat ve vodě, ve fosfátovém pufru nebo v systému voda-organické rozpouštědlo při teplotě v rozmezí 20 až 60 °C po dobu 10 minut až 150 h. Vhodným organickým rozpouštědlem se rozumí s vodou mísitelné alkoholy, s výhodou isopropanol nebo etanol, a s vodou mísitelná polární aprotická rozpouštědla, s výhodou dimethylsulfoxid, přičemž jejich obsah v reakční směsi nepřekračuje 50% (v/v). Reakci s aminem je možné s výhodou uskutečnit za fyziologických podmínek (pH = 7,4 a T = 37 °C). Reakce kromě aminů také bez problémů probíhá s jinými N-nukleofily, které obsahují amino skupinu ve své struktuře,
O jako např. hydraziny, hydroxylaminy, hydrazidy, semikarbazidy nebo thiosemikarbazidy. V případě reakce s monofunkěními N-nukleofily dochází k jejich kovalentnímu navázaní na polymer, přičemž použití bi- a více funkčních N-nukleofilů poskytuje vzájemné propojení polymemích řetězců, tedy vznik tzv. hydrogelu. V závislosti na typu použitého N-nukleofilu, jeho množství 5 ve vztahu k poměru vazných míst, struktury polymeru, koncentrace roztoku, stupně substituce a molekulové hmotnosti polymeru je možné připravit síťované materiály s celou škálou viskoelastických a mechanických vlastností přesně podle požadavků cílených aplikací ve tkáňovém inženýrství nebo regenerativní medicíně. Reakce derivátu podle vynálezu s aminem může v některých konkrétních případech probíhat v celé škále pH, zatímco v jiných případech je hod10 nota pH pro reakci důležitá. To ovšem odborník v oboru předem snadno rozpozná, případně určí rutinním měřením.
Pod cílenými aplikacemi se rozumí hlavně příprava scaffoldů jako bioaktivních a biodegradabilních podpůrných materiálů imitujících mezibuněčnou hmotu. Tyto materiály mohou sloužit jako 15 nosná matrice pro buňky nebo biologicky aktivní látky, buněčné atraktanty, jako nosné médium pro doručení buněk do místa tkáňového defektu, výplň tkáně, adekvátní tkáňová náhrada, nebo také jako ochranná bariéra. Další požadavky kladené na funkční scaffoldy jsou zabezpečení vhodného chemického a fyziologického prostředí pro buněčnou proliferaci a diferenciaci, transport živin a odpadních látek buněčného metabolismu. V závislosti na způsobu aplikace scaffoldů 20 se dají ze zesítěných sulfatovaných polysacharidů připravit injekční scaffoldy v podobě gelotvorných roztoků, přičemž k samotné tvorbě scaffoldů a nové tkáně dochází in-vivo, nebo scaffoldy v pevné formě, které se do organismu implantují až po kultivaci buněk a vytvoření nové tkáně in-vitro. Navíc vhodnou volbou parametrů síťovací reakce (koncentrace a poměr vazných míst) je možno dosáhnout krátkých časů gelace řádově v sekundách (viz příklad 30), což se dá 25 s výhodou využít pro in situ gelace v přítomnosti biologického materiálu, tzv. enkapsulace buněk.
Síťovací reakce je znázorněna na Schématu 4:
(i) h2o
kde
R je OH, O-SO2-OH, O-SO2-ONa nebo NH-C(O)CH3
Schéma 4. Síťování sulfatovaného polysacharidů pomocí α,β—nenasyceného aldehydu a diaminu.
- 9 CZ 306662 B6
Vyšší stabilita vazby aminu s α,β-nenasyceným aldehydem v porovnání s klasickým nasyceným aldehydem je zabezpečena pomocí konjugace aldehydické skupiny se sousední dvojnou vazbou. To umožňuje připravit stabilnější a lépe zesítěné materiály na bázi sulfatovaných polysacharidů, jak už bylo ukázáno na příkladu nesulfatovaného polysacharidů kyseliny hyaluronové (Buffa R., a kol.: CZ 304 512).
Síťování se uskuteční tak, že derivát reaguje s ve vodě rozpustným biokompatibilním bi- a vícefunkčním N-nukleofilem vybraným ze skupiny zahrnující alkylaminy, arylaminy, heteroalkylaminy, heteroarylaminy, aminokyseliny, peptidy, polymery s volnou amino skupinou, hydraziny, hydroxylaminy, hydrazidy, semikarbazidy nebo thiosemikarbazidy, přičemž dochází k síťování derivátu. Výhodnými nukleofily jsou hydrazidy, dihydrazidy, deacetylované polysacharidy nebo alkoxyaminy. Reakce může s výhodou probíhat ve fosfátovém pufru.
Nicméně, jak vyplynulo ze srovnávací analýzy mechanických vlastností (Youngův modul pružnosti v kompresi, mez pružnosti v kompresi a míra deformace zesítěných gelů), byla prokázaná vyšší tvrdost u gelů z oxidovaného chondroitin sulfátu (viz příklad 31 podle vynálezu) ve srovnání s gely na bázi oxidovaného hyaluronanu. Vyšší tvrdost gelů je odrazem vyšší míry zesítění ve struktuře polysacharidů, čímž je zabezpečená lepší objemová a tvarová stabilita síťovaného materiálu. Navíc, lépe zesíťované materiály vykazují menší změny mechanických vlastností v čase, což splňuje požadavky kladené na funkční buněční scaffold. Účinnějšího zesítění je v tomto případě možné dosáhnout prostřednictvím vyššího stupně substituce α,β-nenasyceného aldehydu ve struktuře sulfatovaného polysacharidů (viz tabulka 1, výše), což je jedna z podstatných výhod vynálezu oproti dosavadnímu stavu techniky.
Druhou výhodou více zesítěných gelů je menší míra botnání ve fyziologickém prostředí, což se dá s výhodou použít pro scaffoldy ve tkáňovém inženýrství, u kterých se požaduje kontrolované chování materiálu v živém organismu při styku s tkání bez dramatických změn v jejich mechanických vlastnostech, či tvaru nebo objemu.
Třetí výhodou vyššího stupně substituce α,β-nenasyceného aldehydu ve struktuře sulfatovaného polysacharidů je možnost navázaní většího množství např. biologicky aktivního aminu. Tímto způsobem je možné dosáhnout vyšší koncentrace biologicky aktivní látky v místě účinku pro aplikace nosičových systémů, kde lze popsaný vynález také s výhodou použít. Navíc, navržený způsob umožňuje vázání širší škály biologicky aktivních aminů (např. aminokyselin, peptidů), které pak mohou být přirozeně uvolněny v nativní (aktivní) podobě. Bylo opakovaně zjištěno na více příkladech (butylamin, lysin, RGD peptid), že při nižším pH je vazba amin - α,β-nenasycený aldehyd hydrolyticky méně stabilní (schéma ), takže lze připravené konjugáty s výhodou využít jako pH responzivní biomateriály pro nosičové systémy.
i n
DS iinin
pH %
4,22 0
7,22 4
10,49 20
Schéma 5. Hydrolytická stabilita iminové vazby α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (DS = 20%) s RGD peptidem (aminohexanová kyselina-Gly-Arg-Gly-Asp-NH2).
Konkrétně lze tuto hydrolytickou stabilitu iminu na bázi alkyl, aryl nebo heteroarylaminu využít následovně: když je konjugát (imin), tvořený z biologicky aktivního aminu (např. léčivo, antiseptikum, peptid. AMK atd.) a polysacharidem (nosič), který je stabilní v mírně bazickém prostředí, vpraven do cílového místa v organismu, kde je pH odlišné (neutrální nebo mírně kyselé), dochází k rozkladu tohoto konjugátu a uvolnění biologicky aktivní látky v daném místě.
Bylo prokázáno, že samotný a,β-nenasycený aldehyd v struktuře chondroitin sulfátu není cytotoxický (viz příklad 32 podle vynálezu), takže konjugáty a síťované produkty α,β- nenasycených aldehydů podle vzorce 1 nebo 11 s biokompatibilními aminy jsou vhodné pro cílené aplikace v biomedicine a tkáňovém inženýrství. U těchto látek se dá předpokládat, že negativně neovlivní viabilitu buněk, nebudou vyvolávat imunitní reakci v organizmu, budou enzymaticky degradovatelné, přičemž produkty jejich degradace budou rovněž biokompatibilní. Deriváty podle vzorce I nebo II lze proto použít pro přípravu nosičů biologicky aktivních látek v kosmetice nebo farmacii i jako nosičů biologicky aktivních látek s řízeným uvolňováním pomocí změny hodnoty pH. Vzhledem k reakci, která probíhá hladce za fyziologických podmínek a navíc s biokompatibilními vstupními materiály, lze také síťované produkty sulfatovaných polysacharidů považovat za slibný materiál pro buněčné scaffoldy ve tkáňovém inženýrství nebo regenerativní medicíně, kde se dají s velkou výhodou použít pro zabudování buněk a jejich následnou kultivaci.
Realizace způsobu popsaného v tomto vynálezu je průmyslově lehce proveditelná, protože je levná a časově nenáročná. Důvodem je spojení dvou syntetických kroků do jednoho hrnce bez nutnosti izolace meziproduktu. Další výhodou je absence toxické, korodující nebo drahé chemikálie v úloze eliminačního činidla, a dále také absence organického rozpouštědla, protože reakce probíhá výhradně ve vodě. Reakční časy jsou krátké, navíc reakce probíhá za laboratorních teplot. Finální produkty se izolují srážením s alkoholy nebo roztoky anorganických solí bez škodli
- 11 CZ 306662 B6 vého dopadu na životní prostředí. Navíc se navrženým způsobem dosahují relativně vysoké stupně substituce (20 až 25%) za podstatně mírnějších podmínek než v (Buffa R., a kol.: CZ 304 512, viz tabulka 1 výše).
Sulfatované polysacharidy modifikované popsaným způsobem dle vynálezu jsou vhodné prekurzory pro konjugační nebo síťovací reakce s různými N-nukleofily, kde výstupem jsou biokompatibilní materiály vhodné pro biomedicínské aplikace, tkáňové inženýrství a regenerativní medicínu. Konkrétně lze deriváty připravené způsobem podle vynálezu použít jako nosiče biologicky aktivních látek s jejich kontrolovaným uvolňováním pomocí změny hodnoty pH v kosmetice a farmacii. Deriváty modifikované způsobem podle vynálezu lze použít jako biokompatibilní materiály pro biomedicínské aplikace a tvorbu scaffoldů pro tkáňové inženýrství, nebo pro regenerativní medicínu.
Objasnění výkresů
Obr. 1. Znázorňuje tvorbu hydrogelu na bázi oxidovaného chondroitin sulfátu s dihydrazid adipátem (Příklad 21): (a) roztok α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu v PBS, (b) gelace roztoku po přídavku PBS roztoku dihydrazid adipátu, (c) hydrogel po 1 h v PBS (pH = 7,4, c = 0,9 % hmotn./obj.), (d) použití ilustrační formy k přípravě hydrogelu, (e) použití definované formy k přípravě hydrogelu, (f) detailní záběr výseku v hydrogelu.
Obr. 2. Fotografie lyofilizovaného hydrogelu na bázi oxidovaného chondroitin sulfátu s dihydrazid adipátem pořízené skenovacím elektronovým mikroskopem: (a) příčný řez, zvětšení 200x, detekce sekundárních elektronů, (b) zvětšený výřez pórovité struktury hydrogelu se změřeným průměrem.
Obr. 3. Znázorňuje výsledky testů buněčné viability 3T3 fibroblastů v prostředí α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (Mw = 4 xlO4 g/mol, DS = 20 %). Křivka aktivace versus inhibice v procentuálním vyjádření vztažená vůči kontrole v čase T = 0 h (100 %). Vyhodnocení pomocí MTT metody v šesti opakováních.
Obr. 4. Kinetika gelace v příkladu 30 se stanovením bodu gelace (Tg = 97 s. δ = 45 °C). Grafické znázornění závislosti elastického (G') a viskózního (G) modulu v čase.
Příklady uskutečnění vynálezu
Zde používaný výraz ekvivalent (eq) se vztahuje na dimerní jednotku sulfatovaného polysacharidu, není-li uvedeno jinak. Procenta se uvádějí jako hmotnostní procenta, není-li uvedeno jinak. Molekulová hmotnost výchozího chondroitin sulfátu (zdroj: Sigma-Aldrich s.r.o., Praha. ČR) je hmotnostně střední v rozsahu 4x104 až 5x104 g.moL1.
Poměr chondroitin-4-sulfátu (typ A) a chondroitin-6-sulfátu (typ C) byl 3:2. Materiál byl izolován ze živočišného materiálu.
Sodná sůl dermatan sulfátu (chondroitin sulfát B sodná sůl) s rozpustností 5 mg/ml ve vodě byla zakoupená od Sigma-Aldrich. Materiál byl izolován ze živočišného materiálu.
Lambda karagenan s rozpustností 10 mg/ml ve vodě byl zakoupen od Sigma-Aldrich a byl izolován z mořských řas bez gelujících vlastností v nativní podobě.
Stupeň substituce α,β-nenasyceného aldehydu ve struktuře sulfatovaného polysacharidů byl stanovený podle následujícího výpočtu:
DS = stupeň substituce α,β-nenasyceného aldehydu = 100 % * (molámí množství modifikovaného dimeru sulfatovaného polysacharidů) / (molámí množství všech dimerů sulfatovaného polysacharidu)
Stupeň substituce aminační reakce ve struktuře sulfatovaného polysacharidů byl stanovený podle následujícího výpočtu:
DS = stupeň substituce pro aminaci = 100% * (molámí množství modifikovaného dimeru sulfatovaného polysacharidů) / (molámí množství všech dimerů sulfatovaného polysacharidů)
FT-IR spektra byla změřena v rozsahu 4000 až 400 cm 1 v KBr na spektrometrii Nicolet 6700 FTIR. UV-VIS spektra byla změřena na přístroji Shimadzu UV-2401PC v rozsahu 200 až 600 nm a zpracována softwarem UV Probe verze 2,00.
Kinetika gelace byla zjišťována na přístroji reometr AR-G2 a jako vyhodnocovací software byl použit TA Analysis. Bod gelace (Tg) byl stanovován ze závislosti elastického a viskózního modulu v čase.
Mechanické vlastnosti vybraných gelů byly měřeny pomocí kompresního testu na zařízení Instron 3433 a vyhodnoceny softwarem Bluehill. U vzorků byly zjišťovány parametry: Youngův modul pružnosti v kompresi, mez pevnosti v kompresi, deformace v mezi pevnosti a houževnatost.
Povrchová morfologie lyofilizovaných gelů byla zkoumána skenovacím elektronovým mikroskopem Zeiss Ultra Plus.
Deacetylovaná kyselina hyaluronová byla připravena deacetylací hydrazinem podle Buffa R., a kol., CZ 304 512.
Aminopropoxylový a hydrazidový derivát kyseliny hyaluronové byly připraveny reduktivní aminaci podle Buffa R., et al.: WO 2011/069 474.
Seznam zkratek
TEMPO - 2,2,6,6-tetramethyl-l-piperidinyloxylový radikál
4-AcNH-TEMPO - TEMPO s acetamidovou skupinou v poloze 4
PBS - fosfátový pufr
RGD peptid - peptid mající sekvenci aminohexanová kyselina-Gly-Arg-Gly-Asp-NH2
AMK - aminokyselina
IPA- izopropylalkohol
DMSO - dimethylsulfoxid
Příklad 1
Příprava α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu
Postup 1: Do dvouprocentního vodného roztoku chondroitin sulfátu (200 mg, Mw = 4,5xl04g.mol ') vychlazeného na 5 °C s obsahem hydrogenfosfátu sodného dodekahydrátu (2,2 eq), bromidu sodného (0,8 eq) a 4—AcNH—TEMPO (0,01%) se postupně přidával vodný roztok chlornanu sodného (0,8 eq, 11% aktivního chloru). Směs se míchala 2 h při teplotě 5 °C. Následně byl k reakci přidán etanol (10 eq) a reakce byla míchána další hodinu při laboratorní teplotě. Produkt byl izolován srážením s IPA a analyzován pomocí NMR.
. n CZ 306662 B6
DS = 23 % (stanoveno z NMR), Mw = 2,1 xlO4 g-mol 1 (stanoveno SEC MALLS)
Postup 2: Do dvouprocentniho vodného roztoku chondroitin sulfátu (200 mg, Mw = 4,5xl04g.mol ') vychlazeného na 5 °C s obsahem bromidu sodného (0,8 eq) a 4-AcNH-TEMPO (0,01%) se postupně přidával vodný roztok chlornanu sodného (0,8 eq, 11% aktivního chloru). Směs se míchala 2 h při teplotě 5 °C. Následně byl k reakci přidán etanol (10 eq) a reakce byla míchána další hodinu při laboratorní teplotě. Produkt byl izolován srážením s IPA a analyzován pomocí NMR.
DS = 20 % (stanoveno z NMR)
Spektrální analýza α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu: NMR 'H (500 MHz, D2O, δ ppm): 2,02 (3H, Ac-ΝΗ-, bs), 4,31 (1H, H2, bs),4,49 (1H, H3, bs), 5,20 (1H, Hl, bs), 6,34 (1H, H4, bs), 9,21 (IH, H6, bs);
NMR 'H-'H COSY (D2O), krospíky, δ ppm: 4,31^1,49, 4,31-5,20, 4,49-6,34; NMR 'H-I3C HSQC (D2O), krospíky, δ ppm: 2,02-25,1, 4,31-51,0, 4,49-73,1, 5,20-98,6, 6,34-122,0, 9,21189,0;
NMR DOSY (D2O), log D ((2,02, Ac-NH-), (4,31, H2), (4,49, H3), (5,20, Hl), (6,34, H4), (9,21, H6)) ~-10,3 m2s log D (4,72, H2O) ~-8,6 m2 s ';
IR(KBr, cm ): 1725, 1650 (v C=O st), 1615, 1663 (vC=C st);
UV/Vis (0,1%, H2O); ZmaX|,2 (Cp=Ca-C=O) = 254 nm (π^π*) 300-350 (η->π ).
Příklad 2
Příprava α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu
Do dvouprocentniho vodného roztoku chondroitin sulfátu (200 mg, Mw = 4,5x104 g.moL1) vychlazeného na 5 °C s obsahem hydrogenfosfátu sodného dodekahydrátu (2,2 eq), bromidu sodného (0,4 eq) a 4-AcNH-TEMPO (0,01%) se postupně přidával vodný roztok chlornanu sodného (0,4 eq, 11 % aktivního chloru). Směs se míchala 2 h při teplotě 5 °C. Následně byl k reakci přidán etanol (10 eq) a reakce byla míchána další hodinu při laboratorní teplotě. Produkt byl izolován srážením s IPA a analyzován pomocí NMR.
DS = 2 % (stanoveno z NMR), Mw = 2,8x104g.moL' (stanoveno SEMALLS)
Strukturní analýza produktu je uvedená v příkladu 1.
Příklad 3
Příprava α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu
Do dvouprocentniho vodného roztoku chondroitin sulfátu (200 mg, Mw - 4,5x104 g.mol ') vychlazeného na 5 °C s obsahem hydrogenfosfátu sodného dodekahydrátu (2,2 eq), bromidu sodného (1 eq) a 4-AcNH-TEMPO (0,01%) se postupně přidával vodný roztok chlornanu sodného (1 eq, 1 1% aktivního chloru). Směs se míchala 2 h při teplotě 5 °C. Následně byl k reakci přidán etanol (10 eq) a reakce byla míchaná další hodinu při laboratorní teplotě. Produkt byl izolován srážením s IPA a analyzován pomocí NMR.
_ 14 .
DS = 21 % (stanoveno z NMR), Mw = 2,0x104 g.mol 1 (stanoveno SEC MALLS)
Strukturní analýza produktu je uvedená v příkladu 1.
Příklad 4
Příprava a,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního vodného roztoku chondroitin sulfátu (200 mg, Mw = 4,5x104 g.mol1). vychlazeného na 5 °C s obsahem hydrogenfosfátu sodného dodekahydrátu (2,2 eq), bromidu sodného (2 eq) a 4-AcNH-TEMPO (0,01 %) se postupně přidával vodný roztok chlornanu sodného (2 eq, 11% aktivního chloru). Směs se míchala 2 h při teplotě 5 °C. Následně byl k reakci přidán etanol (10 eq) a reakce byla míchána další hodinu při laboratorní teplotě. Produkt byl izolován srážením s IPA a analyzován pomocí NMR.
DS = 21 % (stanoveno z NMR), Mw = 1,8x104 g.mor' (stanoveno SEC MALLS)
Strukturní analýza produktu je uvedená v příkladu 1.
Příklad 5
Příprava α,β-nenasyceného aldehydu dermatan sulfátu
Do dvouprocentního vodného roztoku dermatan sulfátu (200 mg, 0,42 mmol) vychlazeného na 5 °C s obsahem hydrogenfosfátu sodného dodekahydrátu (2,2 eq), bromidu sodného (0,8 eq) a 4AcNH-TEMPO (0,01%) se postupně přidával vodný roztok chlornanu sodného (0,8 eq, 11% aktivního chloru). Směs se míchala 2 h při teplotě 5 °C. Následně byl k reakci přidán etanol (10 eq) a reakce byla míchána další hodinu při laboratorní teplotě. Produkt byl izolován srážením s IPA a analyzován pomocí NMR.
DS = 20 % (stanoveno z NMR)
Spektrální analýza α,β-nenasyceného aldehydu dermatan sulfátu: NMR 'H (500 MHz, D2O, δ ppm): 2,01 (3H, Ac-NH- bs), 6,30 (1H, H4, bs), 9,20 (1H, H6, bs).
Příklad 6
Příprava α,β-nenasyceného aldehydu karagenanu
Do jednoprocentního vodného roztoku karagenanu (200 mg, 0,31 mmol) vychlazeného na 10 °C s obsahem hydrogenfosfátu sodného dodekahydrátu (2,2 eq), bromidu sodného (0,8 eq) a 4AcNH-TEMPO (0,01%) se postupně přidával vodný roztok chlornanu sodného (0,8 eq, 11 % aktivního chloru). Směs se míchala 2 h při teplotě 10 °C. Následně byl k reakci přidán etanol (10 eq) a reakce byla míchána další hodinu při laboratorní teplotě. Produkt byl izolován srážením s IPA a analyzován pomocí NMR.
DS = 10 % (stanoveno z NMR)
Spektrální analýza α,β-nenasyceného aldehydu karagenanu: NMR 'H (500 MHz, D2O, δ ppm): 6,30 (1 Η, H4, bs), 9,20 (1 Η, H6, bs).
-15 CZ 306662 B6
Příklad 7
Vázání hydrazinu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg. DS = 23 %, Mw = 2,1x104 g.mor1) v D2O se přidal hydrazin hydrát (2 eq). Reakce byla míchána 24 h při laboratorní teplotě. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi. DS = 20 % (stanoveno z NMR)
NMR 'H (500 MHz, D2O, δ ppm): 5,40 (1H, -CH=C-CH=N-, bs), 7,38 (1H, -CH=C-CH=Nbs)
Příklad 8
Vázání butylaminu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Postup 1: Do dvouprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1 xlO4 g.mor1) v D2O se přidal butylamin (0,2 eq). Reakce byla míchána 24 h při laboratorní teplotě a pH = 11,20. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi.
DS = 20 % (stanoveno z NMR)
NMR 'H (500 MHz, D2O, δ ppm): 5,67 (1H, -CH=C-CH=N-, bs), 7,74 (1H, -CH=C-CH=Nbs)
Postup 2: K NMR vzorku z postupu 1 byla přidána deuterovaná kyselina octová (14,5 pL). Bylo změřeno pH = 4,10 a vzorek byl poté analyzován pomocí NMR.
DS = 0 % (stanoveno z NMR)
Příklad 9
Vázání butylaminu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1x104 g.mor1) v deuterovaném PBS se přidal butylamin (0,2 eq). Reakce byla míchána 24 h při laboratorní teplotě a pH = 7,30. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi.
DS = 0 % (stanoveno z NMR)
Příklad 10
Vázání hexan-l,6-diaminu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1x104 g.mor1) v D2O se přidal hexan-l,6-diamin (0,5 eq). Reakce byla míchána 24 h při laboratorní teplotě a pH = 11,60. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi.
DS = 20 % (stanoveno z NMR)
A
NMR 'H (500 MHz, D2O, δ ppm): 5,68 (1R -CH=C-CH=N-, bs), 7,74 (1H, -CH=C-CH=Nbs)
Příklad 11
Vázání propoxyaminu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %), Mw = 2,1x104 g.mor1) v D2O se přidal propoxyamin hydrochlorid (0,5 eq). Reakce byla míchána 24 h při laboratorní teplotě a pH = 3,90. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi.
DS = 20 % (stanoveno z NMR)
NMR 'H (500 MHz, D2O, δ ppm): 5,57 a 6,88 (1H, -CH=C-CH=N-, bs), 7,52 a 7,70 (1H, CH=C-CH=N-, bs)
Příklad 12
Vázání lysinu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1x104 g.mor1) v deuterovaném PBS se přidal lysin hydrochlorid (0,5 eq). Reakce byla míchána 24 h při laboratorní teplotě a pH = 7,46. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi.
DS = 4 % (stanoveno z NMR)
NMR 'H (500 MHz, D2O, δ ppm): 5,69-5,75 (1H, -CH=C-CH=N-, bs), 7,70-7,75 (1H, CH=C-CH=N-, bs)
Příklad 13
Vázání lysinu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního roztoku a,p-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1x104 g.mor1) v D2O se přidal lysin hydrochlorid (0,5 eq). pH reakce bylo upraveno přídavkem hydrogenuhličitanu sodného (2 eq) na hodnotu 8,40. Reakce byla míchána 24 h při laboratorní teplotě. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi.
DS = 7 % (stanoveno z NMR)
Strukturní analýza produktu je uvedená v příkladu 12.
- 17CZ 306662 B6
Příklad 14
Vázání RGD peptidu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1x104 g.mor1) v D2O se přidal RGD peptid (0,2 eq, sekvence Ahx-Gly-Arg-GlyAsp-NH2). Reakce byla míchána 24 h při laboratorní teplotě a pH = 4,22. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi.
DS = 0 % (stanoveno z NMR)
Příklad 15
Vázání RGD peptidu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1x104 g-moF1) v deuterovaném PBS se přidal RGD peptid (0,2 eq, sekvence AhxGly-Arg-Gly-Asp-NH2). Reakce byla míchána 24 h při laboratorní teplotě a pH = 7,22. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi.
DS = 4 % (stanoveno z NMR)
NMR 'H (500 MHz, D2O, δ ppm): 5,68 (1H, -CH=C-CH=N-, bs), 7,74 (1H, -CH=C-CH=Nbs)
Příklad 16
Vázání RGD peptidu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1x104 g.mor1) v D2O se přidal RGD peptid (0,2 eq, sekvence Ahx-Gly-Arg-GlyAsp-NH2). pH reakce bylo upraveno přídavkem uhličitanu sodného (2 eq) na hodnotu 10,49. Reakce byla míchaná 24 h při laboratorní teplotě. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi.
DS = 20 % (stanoveno z NMR)
Strukturní analýza produktu je uvedená v příkladu 15.
Příklad 17
Vázání anilinu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %, Mw = 2,lxl04 g.moP1) v D2O se přidal anilin (0,3 eq). pH reakce bylo upraveno přídavkem deuterované kyseliny octové (8,8 μΐ) na hodnotu 4,22. Reakce byla míchána 24 h při laboratorní teplotě. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi.
DS = 0 % (stanoveno z NMR)
- 18 CZ 306662 B6
Příklad 18
Vázání anilinu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1x104 g.mor1) v deuterovaném PBS se přidal anilin (0,3 eq). Reakce byla míchána 24 h při laboratorní teplotě a pH = 7,42. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi.
DS = 5 % (stanoveno z NMR)
NMR 'H (500 MHz, D2O, δ ppm): 5,93 (1H, -CH=C-CH=N-, bs), 8,03 (1H, -CH=C-CH=Nbs)
Příklad 19
Vázání anilinu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1x104 g.mor1) v D2O se přidal anilin (0,3 eq). pH reakce bylo upraveno přídavkem uhličitanu sodného na hodnotu 10,73. Reakce byla míchána 24 h při laboratorní teplotě. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi.
DS = 2 % (stanoveno z NMR)
Strukturní analýza produktu je uvedená v příkladu 18.
Příklad 20
Vázání diliydrazid adipátu na α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu
Do dvouprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1x104 g.mor1) v D2O se přidal dihydrazid adipát (3 eq). Reakce byla míchána 24 h při laboratorní teplotě a pH = 7,50. Produkt byl analyzován v podobě hrubé reakční směsi.
DS = 20 % (stanoveno z NMR)
NMR 'H (500 MHz, D2O, δ ppm): 1,64 (4H, DHA2;3, bs), 2,04 (3H, Ac-NH- bs), 2,34 (4H, DHA1>4, bs), 4,28 (1H, H2, bs), 4,36 (1H, H3, bs), 5,20 (1H, Hl, bs), 5,62 (1H, H4cis, bs), 5,68 (1H, H4trans, bs), 7,52-7,48 (1H, H6cis, bs), 7,61 (1H, Hótrans, bs);
NMR 'H-'H COSY (D2O), krospíky, δ ppm: 1,64-2,34, 4,28-5,20, 4,36-5,68; NMR 'H-I3C HSQC (D2O), krospíky, δ ppm: 1,64-24,9, 2,34-34,1, 4,28-51,0, 4,36-73,6, 5,20-98,8, 5,68111,3, 7,61-148,5;
NMR DOSY (D2O), log D ((2,04, Ac-NH-), (4,28, H2), (4,36, H3), (5,20, HI), (5,62 a 5,68, H4cis/trans), (7,52 a 7,68, H6cis/trans)) ~ -10.4 m2s log D (4,72, H2O) —8,6 mV;
IR (KBr, cm j: 1640-1650 (v -C=N- st);
UV/Vis (0.1%, H2O); Xmax] 2 (-C=N-) = 280 nm (π-»π*).
- 19CZ 306662 B6
Příklad 21
Síťování α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu dihydrazid adipátem
Do osmiprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (40 mg, DS = 23 %, Mw = 2,lxl04 g.mol·1) v PBS (pH = 7,40, c = 0,9% w/v) se přidal dihydrazid adipát (0,12 eq, poměr vazných míst 1:1) v PBS. Po přídavku roztoku dihydrazid adipátu došlo ke gelaci v čase (Tg = 34 s). Elastický gel byl vyfocen (obr. 1), zlyofilizován a podroben SEM analýze (obr. 2).
Youngův modul pružnosti v kompresi = 9x103 Pa
Mez pevnosti v kompresi = 64x103 Pa
Deformace v mezi pevnosti = 64%
Houževnatost = 3668 J.m 3
Příklad 22
Síťování α,β-nenasyceného aldehydu dermatan sulfátu dihydrazid adipátem
Do osmiprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu dermatan sulfátu (40 mg, DS = 20 %, Mw < 40 kDa) v PBS (pH = 7,40, c = 0,9% w/v) se přidal dihydrazid adipát (0,1 eq, poměr vazných míst 1:1) v PBS. Po přídavku roztoku dihydrazid adipátu došlo ke gelaci.
Příklad 23
Síťování α,β-nenasyceného aldehydu karagenanu dihydrazid adipátem
Do osmiprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu karagenanu (40 mg, DS = 10 %, Mw < 50 kDa) v PBS (pH = 7,40, c = 0,9% w/v) se přidalo 40 μΐ dihydrazid adipátu (0,05 eq) v PBS. Po přídavku roztoku dihydrazid adipátu došlo k nárůstu viskozity.
Příklad 24
Síťování α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu s hydrazidovým derivátem kyseliny hyaluronové
Do čtyřprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (10 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1 x 104 g.moE1) v PBS (pH = 7,40, c = 0,9% w/v) se přidal čtyřprocentní roztok hydrazidového derivátu kyseliny hyaluronové (9,2 mg, DS = 25%, Mw = 138x103 g.mol ') v PBS (pH = 7,4, c = 0,9% w/v). Po smíchání roztoků došlo ke gelaci v čase (Tg = 109 s).
Youngův modul pružnosti v kompresi = 6x103 Pa
Mez pevnosti v kompresi = 840x 103 Pa
Deformace v mezi pevnosti = 96%
-20CZ 306662 B6
Houževnatost = 11978 J.m 3
Příklad 25
Síťování α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu s deacetylovanou kyselinou hyaluronovou
Do čtyřprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (10 mg, DS = 23 %, Mw = 2,lxl04 g.mor1) v PBS (pH = 7,40, c = 0,9% w/v) se přidal dvouprocentní roztok deacetylované kyseliny hyaluronové (2 eq, DS = 1 Mw =116 kDa, poměr vazných míst 1:1) v PBS (pH = 7,4, c = 0,9% w/v). Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě, přičemž byl zaznamenán nárůst viskozity roztoku po 0,5 h a po 1 h vznikl elastický gel.
Youngův modul pružnosti v kompresi = 3xl03 Pa
Mez pevnosti v kompresi = 395x103 Pa
Deformace v mezi pevnosti = 95%
Houževnatost = 14670 J.m 3
Příklad 26
Příprava kyselé formy chondroitin sulfátu
Připravil se jednoprocentní roztok chondroitin sulfátu (500 mg, 1,1 mmol) v destilované vodě. Roztok se zchladil na 5 °C a přidalo se 1,2 ml katexu Amberlite IR 120 Na (H+). Reakční směs se míchala 24 h při 5 °C. Katex se zfiltroval, produkt se zamrazil a lyofilizoval. Otestovala se jeho rozpustnost v DMSO, která byla vyhovující.
Příklad 27
Příprava deacetylovaného chondroitin sulfátu
Připravil se jednoprocentní roztok kyselé formy chondroitin sulfátu (200 mg, 0,44 mmol, Mw < 40 kDa) v DMSO. Roztok se odplynil proudem dusíku. Přidalo se 10,6 ml hydrazin hydrátu a (3 eq) hydrazin sulfátu. Reakční směs se míchala 24 h při 60 °C pod dusíkem. Pak se do reakční směsi přidal NaHCOj. Produkt se izoloval srážením s IPA.
DS = 10 % (stanoveno z NMR), Mw = 1,8x104 g.mor1 (stanoveno SECMALLS)
NMR 'H (500 MHz, 1% NaOD v D2O, δ ppm): 3,01 (IH, -CH=C-CH=N-, bs)
HSQC (500 MHz, D2O, δ ppm): krospík: 3,42-52,2 ppm
-21 CZ 306662 B6
Příklad 28
Síťování α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulťátu s deacetylovaným chondroitin sulfátem
Do osmiprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (20 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1 xlO4 g.mof1) v PBS (pH = 7,40, c = 0,9% w/v) se přidá osmiprocentní roztok neacetylovaného chondroitin sulfátu (2 eq, DS = 10 %, Mw = 1,8x104 g.mof1, poměr vazných míst = 1/0,85) v PBS (pH = 7,4, c = 0,9% w/v). Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě, přičemž byl zaznamenán nárůst viskozity roztoku po 0,5 h a po 3 h vznikl elastický gel.
Youngův modul pružnosti v kompresi = 3,5x103 Pa
Mez pevnosti v kompresi = 774x103 Pa
Deformace v mezi pevnosti = 95%
Houževnatost = 16489 J.m 3
Příklad 29
Síťování α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu s propoxyaminem
Do desetiprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (50 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1xlO4 g.mof1) v PBS (pH = 7,40, c = 0,9% w/v) se přidal PBS roztok propoxyamin hydrochloridu (0,12 eq, poměr vazných míst 1/1), přičemž došlo k tvorbě gelu v čase (Tg = 110 s).
Youngův modul pružnosti v kompresi = 8x103 Pa
Mez pevnosti v kompresi = 74x103 Pa
Deformace v mezi pevnosti = 65%
Houževnatost = 3768 J.m 3
Příklad 30
Měření kinetiky gelace síťovací reakce α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu s aminopropoxylovým derivátem kyseliny hyaluronové
Měření kinetiky gelace bylo uskutečněno pomocí čtyřprocentního roztoku α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (10 mg, DS = 23 %, Mw = 2,1x104 g.mof1) v PBS (pH = 7,40, c = 0,9% w/v) se čtyřprocentním roztokem aminopropoxylového derivátu kyseliny hyaluronové (1 eq, DS = 25 %, Mw = 66 kDa) v PBS (pH = 7,4, c = 0,9% w/v). Čas gelace, tedy stádia, kdy docházelo k formování první makroskopické sítě gelu, byl stanoven na hodnotu (Tg = 97 s, Obr. 4).
-22CZ 306662 B6
Příklad 31
Porovnání mechanických vlastností hydrogelu na bázi síťovaného α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu a α,β-nenasyceného aldehydu hyaluronanu.
Roztok 1: Čtyřprocentní roztok α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu (DS = 23 %, Mw = 2,1x104 g.mol1, příklad 1) v PBS (pH = 7,40, c = 0,9% w/v).
Roztok 2: Čtyřprocentní roztok α,β-nenasyceného aldehydu kyseliny hyaluronové (DS = 7 %, Mw = 2,5x104 g-mor1) v PBS (pH = 7,40, c = 0,9% w/v).
Roztok 3: Čtyřprocentní roztok aminopropoxylového derivátu kyseliny hyaluronové (DS = 25 %, Mw = 66 kDa) v PBS (pH = 7,40, c = 0,9% w/v).
Z uvedených roztoků se připravily hydrogely vzájemným smícháním ekvivalentních objemových podílů v následujících kombinacích: roztok 1 + roztok 3 (vzorek A) a roztok 2 + roztok 3 (vzorek B). Vzorky A a B byly ponechány 3 h zrát při laboratorní teplotě. Poté byly u materiálů změřeny mechanické vlastnosti, a to Youngův modul pružnosti v kompresi, mez pevnosti v kompresi a deformace v mezi pevnosti (tabulka 2).
Tabulka 2: Porovnání mechanických vlastností hydrogelu na bázi síťovaných α,β-nenasycených aldehydů odvozených od chondroitin sulfátu a kyseliny hyaluronové
vzorek Youngův modul pružnosti v kompresi (kPa) mez pevnosti v kompresi (kPa) protažení v mezi pevnosti (%)
A 11 30 52
B 7 58 76
Z naměřených dat lze vidět výhody použití materiálu s vyšším stupněm substituce u derivátu chondroitin sulfátu (vzorek A), protože hydrogely z něj připravené mají vyšší tvrdost a vykazují nižší míru deformace ve srovnání s derivátem kyseliny hyaluronové (vzorek B). Při analýze vzorků se stejnou molekulovou hmotností a za stejných reakčních podmínek je tento fakt přisouzen vyšší míře zesítění, což je při zachování stejné molekulové hmotnosti srovnaných vzorků v přímé korelaci s vyšším stupněm substituce α,β-nenasyceného aldehydu ve struktuře modifikovaného polysacharidů.
Příklad 32
Testy viability 3T3 fibroblastů v přítomnosti α,β-nenasyceného aldehydu chondroitin sulfátu
Testovaná látka, α,β-nenasycený aldehyd chondroitin sulfátu (DS = 20 %, Mw = 40 kDa), byla rozpuštěna v kompletním 3T3 médiu. Roztok byl zfiltrován přes 0,22 pm filtr. Finální testovací koncentrace testovacího roztoku byly 10, 100, 500 a 1000 pg. mF1. Do 96-jamkových panelů byly nasazeny 3T3 buňky o hustotě 3000 buněk na jamku. Před samotným ovlivněním byly buňky kultivovány po dobu 24 hodin v kompletním médiu. Buněčná viabilita se vyhodnocovala spektrofotometricky pomocí 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-difenyl tetrazolium bromidu (MTT metody) v intervalech 0, 24, 48, 72 hodin. Celý experiment byl doplněn sadou neovlivněných kontrol a slepých vzorků. Ze změřených dat optické hustoty bylo vypočítáno procentuální vyjádření vztahující se ke kontrole v čase TO hodin (poměr optické hustoty ovlivněného vzorku
-23 CZ 306662 B6 k optické hustotě neovlivněné kontroly TO, násobený 100) a střední chyba průměru (SEM). Výsledky testu jsou graficky zpracovány na obr. 3.

Claims (22)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Derivát sulfatovaného polysacharidů, modifikovaný dvojnou vazbou v polohách 4 a 5 galaktosaminové, resp. galaktopyranosové části, která je případně sulfatovaná v poloze 2, v konjugaci s aldehydem v poloze 6 podle obecného strukturního vzorce I nebo v sousedství jeho hydratované formy podle obecného strukturního vzorce II sulfatovaný polysacharid —o q— sulfatovaný polysacharid
    OH
    HOsulfatovaný polysacharid -q.
    .θ- sulfatovaný polysacharid (II), kde
    R je OH, O-SO2-OH, O-SO2-ONa nebo NH-Ac.
  2. 2. Derivát sulfatovaného polysacharidů podle nároku 1, vyznačující se tím, že polysacharid je vybrán ze skupiny zahrnující chondroitin sulfát, dermatan sulfát, karagenan a jejich farmaceuticky přijatelné deriváty a/nebo soli.
  3. 3. Derivát sulfatovaného polysacharidů podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že polysacharid má molekulovou hmotnost v rozmezí 1x103 až 5x104 g.mof1 a stupeň substituce v rozmezí I až 40%, s výhodou 10 až 25%.
  4. 4. Způsob přípravy derivátů sulfatovaných polysacharidů definovaných v nárocích 1 až 3, vyznačující se tím, že sulfatovaný polysacharid, který je v nativní podobě rozpustný ve vodě a který ve své struktuře obsahuje alespoň jednu galaktopyranosovou jednotku sulfatovanou v poloze 4, která je v polymerním řetězci vázaná a(l—>3) nebo β(1—>3) O-glykosidickou vazbou, podle obecného strukturního vzorce (III) sulfatovaný polysacharid—O
    O—sulfatovaný polysacharid kde (III),
    R je OH, O-SO2-OH, O-SO2-ONa nebo NH-C(O)CH3,
    R1 je H nebo Na, se oxiduje na aldehyd v poloze 6 a reakční směs se bez izolace meziproduktů ihned podrobí eliminaci za vzniku derivátu sulfatovaného polysacharidů definovaného v nárocích 1 až 3.
  5. 5. Způsob přípravy podle nároku 4, vyznačující se tím, že se použije sulfatovaný polysacharid, který má molekulovou hmotnost v rozsahu 1x104 až 5x106 g.mol1.
  6. 6. Způsob přípravy podle nároku 4 nebo 5, vyznačující se tím, že se použije sulfatovaný polysacharid vybraný ze skupiny zahrnující chondroitin sulfát, dermatan sulfát, karagenan a jejich farmaceuticky přijatelné deriváty a/nebo soli.
  7. 7. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků 4 až 6, v y z n a č uj í c í se tím, že oxidace se provede pomocí systému R3-TEMPO/NaClO, kde R3 je vodík nebo N-acetyl a TEMPO znamená 2,2,6,6-tetramethyl-l-piperidinyloxylový radikál, ve vodě nebo ve vodném roztoku anorganických solí, při teplotě 5 až 25 °C.
  8. 8. Způsob přípravy podle nároku 7, vyznačující se tím, že molámí množství R3TEMPO je 0,01 až 0,2 ekvivalentu a molámí množství NaCIO je v rozmezí 0,1 až 2,0 ekvivalentu vzhledem k dimeru sulfatovaného polysacharidů.
  9. 9. Způsob přípravy podle nároku 7 nebo 8, vyznačující se tím, že vodným roztokem anorganických solí je vodný roztok obsahující sůl alkalického kovu a/nebo pufr, např. fosfátový pufr.
  10. 10. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků 4 až 9, vyznačující se tím, že eliminace probíhá při teplotě 5 až 25 °C a bez izolace nasyceného C-6 aldehydu v galaktopyranosové podjednotce sulfatované v poloze 4.
  11. 11. Způsob modifikace derivátu definovaného ve kterémkoli z nároků laž3, vyznačující se tím, že derivát reaguje s aminem obecného vzorce R2-NH2, kde R je alkylový, aromatický, heteroaromatický, lineární nebo rozvětvený řetězec C| až C30, volitelně s obsahem N, S nebo O atomů.
  12. 12. Způsob modifikace podle nároku 11, vyznačující se tím, že aminem je biologicky aktivní amin, zejména aminokyselina nebo peptid.
  13. 13. Způsob modifikace derivátu definovaného ve kterémkoli z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že derivát reaguje s aminem, kterým je biologicky akceptovatelný polymer s volnou aminoskupinou.
  14. 14. Způsob modifikace podle nároku 13, vyznačující se tím, že aminoskupina je přímou součástí polymeru, který je vybrán ze skupiny zahrnující želatinu, chitosan, deacetylovanou kyselinu hyaluronovou a deacetylovaný chondroitin sulfát.
  15. 15. Způsob modifikace podle nároku 13, vyznačující se tím, že aminoskupina je na polymer vázaná prostřednictvím linkeru obsahujícího aminovou, hydrazinovou, hydrazidovou, aminoalkoxylovou, hydroxylovou, karboxylovou, thiolovou skupinu, nebo jejich libovolnou kombinaci.
    -25 CZ 306662 B6
  16. 16. Způsob modifikace podle kteréhokoli z nároků 11 až 15, vyznačující se tím, že množství aminu, aminokyseliny, peptidu nebo volných amino skupin v polymeru je v rozmezí 0,05 až 3,0 ekvivalentů vzhledem k dimeru sulfatovaného polysacharidů.
  17. 17. Způsob modifikace podle kteréhokoli z nároků 11 až 16, vyznačující se tím, že reakce s aminem, aminokyselinou, peptidem nebo polymerem obsahujícím volnou aminoskupinu probíhá ve vodě, ve fosfátovém pufru nebo v systému voda-organické rozpouštědlo při teplotě v rozmezí 20 až 60 °C po dobu 10 minut až 150 h.
  18. 18. Způsob modifikace podle nároku 17, vyznačující se tím, že organické rozpouštědlo je vybráno ze skupiny zahrnující s vodou mísitelné alkoholy, zejména isopropanol nebo etanol, a s vodou mísitelná polární aprotická rozpouštědla, zejména dimethylsulfoxid, přičemž obsah vody ve směsi je minimálně 50 % objemových.
  19. 19. Způsob modifikace derivátu definovaného ve kterémkoli z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že derivát reaguje s ve vodě rozpustným biokompatibilním bi- a vícefunkčním Nnukleofilem vybraným ze skupiny zahrnující alkylaminy, arylaminy, heteroalkylaminy, heteroarylaminy, aminokyseliny, peptidy, polymery s volnou amino skupinou, hydraziny, hydroxylaminy, hydrazidy, semikarbazidy nebo thiosemikarbazidy, přičemž dochází k síťování derivátu.
  20. 20. Způsob modifikace podle nároku 19, vyznačující se tím, že N-nukleofilem je hydrazid, deacetylovaný polysacharid nebo alkoxyamin a že reakce probíhá ve fosfátovém pufru.
  21. 21. Použití derivátů definovaných v kterémkoli z nároků I až 3 jako nosičů biologicky aktivních látek s jejich kontrolovaným uvolňováním pomocí změny hodnoty pH v kosmetice a farmacii.
  22. 22. Použití derivátů modifikovaných způsobem definovaným v kterémkoli z nároků 11 až 20 pro přípravu biokompatibilních materiálů pro biomedicínské aplikace a tvorbu scaffoldů pro tkáňové inženýrství, nebo pro regenerativní medicínu.
CZ2015-445A 2015-06-26 2015-06-26 Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití CZ306662B6 (cs)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2015-445A CZ306662B6 (cs) 2015-06-26 2015-06-26 Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití
JP2017567074A JP6840683B2 (ja) 2015-06-26 2016-06-24 硫酸化多糖類の誘導体，ならびにその調製，修飾及び使用方法
KR1020187002258A KR102665664B1 (ko) 2015-06-26 2016-06-24 황산화 다당류의 유도체 및 이의 제조 방법, 변형 방법 및 용도
EP16751149.2A EP3313893B1 (en) 2015-06-26 2016-06-24 Derivatives of sulfated polysaccharides, method of preparation, modification and use thereof
ES16751149T ES2742208T3 (es) 2015-06-26 2016-06-24 Derivados de polisacáridos sulfatados, método de preparación, modificación y uso de los mismos
PCT/CZ2016/000071 WO2016206661A1 (en) 2015-06-26 2016-06-24 Derivatives of sulfated polysaccharides, method of preparation, modification and use thereof
BR112017027030-7A BR112017027030B1 (pt) 2015-06-26 2016-06-24 derivado de um polissacarídeo sulfatado, método de preparação de derivados de polissacarídeos sulfatados, método de modificação de derivado, uso de derivados e uso de derivados modificados
US15/737,443 US10414832B2 (en) 2015-06-26 2016-06-24 Derivatives of sulfated polysaccharides, method of preparation, modification and use thereof
RU2018102154A RU2708327C2 (ru) 2015-06-26 2016-06-24 Производные сульфатированных полисахаридов, их способ получения, модификация и применение

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2015-445A CZ306662B6 (cs) 2015-06-26 2015-06-26 Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2015445A3 CZ2015445A3 (cs) 2017-01-04
CZ306662B6 true CZ306662B6 (cs) 2017-04-26

Family

ID=56684394

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2015-445A CZ306662B6 (cs) 2015-06-26 2015-06-26 Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití

Country Status (9)

Country Link
US (1) US10414832B2 (cs)
EP (1) EP3313893B1 (cs)
JP (1) JP6840683B2 (cs)
KR (1) KR102665664B1 (cs)
BR (1) BR112017027030B1 (cs)
CZ (1) CZ306662B6 (cs)
ES (1) ES2742208T3 (cs)
RU (1) RU2708327C2 (cs)
WO (1) WO2016206661A1 (cs)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109053929B (zh) * 2018-08-28 2021-06-18 中国科学院过程工程研究所 一种低聚乙酰氨基糖酸及选择性氧化制备方法
CN113574075B (zh) * 2019-03-14 2023-01-10 高丽大学校产学协力团 卡拉胶衍生物、用于标记巨噬细胞的探针及用于制备其的方法
CN110787318A (zh) * 2019-11-12 2020-02-14 上海市第六人民医院 一种具有免疫成骨功能的人工韧带及其制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010132857A1 (en) * 2009-05-14 2010-11-18 Central Michigan University Composition and method of preparation of polysaccharide gel-based artificial, biodegradable skin scaffolds
WO2010138074A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Hilborn Joens Hyaluronic acid based delivery systems
WO2013023793A2 (en) * 2011-08-18 2013-02-21 Albert-Ludwigs-Universität Freiburg Matrices comprising a modified polysaccharide
WO2014023272A1 (en) * 2012-08-08 2014-02-13 Contipro Biotech S.R.O. Hyaluronic acid derivative, method of preparation thereof, method of modification thereof and use thereof

Family Cites Families (194)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3075527A (en) 1960-06-02 1963-01-29 Chemway Corp Sterile medicated strips
US3720662A (en) 1971-09-13 1973-03-13 Nat Starch Chem Corp Preparation of starch esters
US3728223A (en) 1971-10-08 1973-04-17 Amano Pharma Co Ltd Production of hyaluronidase from a strain of streptomyces
GB1527592A (en) 1974-08-05 1978-10-04 Ici Ltd Wound dressing
CH628088A5 (en) 1975-09-17 1982-02-15 Dresden Arzneimittel Process for obtaining streptococcal metabolic products
US4205025A (en) 1975-12-22 1980-05-27 Champion International Corporation Synthetic polymeric fibrids, fibrid products and process for their production
JPS6033474B2 (ja) 1978-05-11 1985-08-02 藤沢薬品工業株式会社 新規なヒアルロニダ−ゼｂｍｐ−８２３１およびその製造法
US4716224A (en) 1984-05-04 1987-12-29 Seikagaku Kogyo Co. Ltd. Crosslinked hyaluronic acid and its use
US4713448A (en) 1985-03-12 1987-12-15 Biomatrix, Inc. Chemically modified hyaluronic acid preparation and method of recovery thereof from animal tissues
US4851521A (en) 1985-07-08 1989-07-25 Fidia, S.P.A. Esters of hyaluronic acid
GB8519416D0 (en) 1985-08-01 1985-09-04 Unilever Plc Oligosaccharides
JPS62104579A (ja) 1985-10-30 1987-05-15 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd ヒアルロニダ−ゼの製造法
JPH0751064B2 (ja) 1986-08-13 1995-06-05 生化学工業株式会社 新規なヒアルロニダ−ゼｓｄ−６７８およびその製造法
IT1219587B (it) 1988-05-13 1990-05-18 Fidia Farmaceutici Polisaccaridi carbossiilici autoreticolati
JPH0214019A (ja) 1988-06-30 1990-01-18 Tonen Corp 繊維状成形物及びその製造方法
JPH0755961B2 (ja) 1989-04-18 1995-06-14 工業技術院長 新規なヒアルロン酸誘導体及びその製造方法
US5522879A (en) 1991-11-12 1996-06-04 Ethicon, Inc. Piezoelectric biomedical device
US5824335A (en) 1991-12-18 1998-10-20 Dorigatti; Franco Non-woven fabric material comprising auto-crosslinked hyaluronic acid derivatives
IT1254704B (it) 1991-12-18 1995-10-09 Mini Ricerca Scient Tecnolog Tessuto non tessuto essenzialmente costituito da derivati dell'acido ialuronico
JP2855307B2 (ja) 1992-02-05 1999-02-10 生化学工業株式会社 光反応性グリコサミノグリカン、架橋グリコサミノグリカン及びそれらの製造方法
FR2689131B1 (fr) 1992-03-30 1994-05-20 Oreal Procede de preparation de monoesters majoritairement en position 6' du d-maltose et leur utilisation dans les domaines cosmetique, bucco-dentaire, pharmaceutique et alimentaire.
JPH0625306A (ja) 1992-04-21 1994-02-01 Shiseido Co Ltd 溶媒不溶化ヒアルロン酸及びその製造方法
IT1263316B (it) 1993-02-12 1996-08-05 Fidia Advanced Biopolymers Srl Tessuto non tessuto multistrato in cui uno degli strati e' costituito essenzialmente da esteri dell'acido ialuronico
NL9700003A (nl) 1993-09-28 1997-07-01 House Foods Corp Werkwijze voor het inoculeren van Fistulina hepatica.
US5616568A (en) 1993-11-30 1997-04-01 The Research Foundation Of State University Of New York Functionalized derivatives of hyaluronic acid
CN1128065A (zh) 1994-03-14 1996-07-31 生化学工业株式会社 戴在眼球上的材料
US5455349A (en) 1994-05-13 1995-10-03 Polaroid Corporation Vinylbenzyl thymine monomers
EP0783325B2 (en) 1994-09-27 2004-03-31 Amersham Health AS Contrast agent
US6025444A (en) 1994-11-17 2000-02-15 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) Cinnamic acid derivative
JP3308742B2 (ja) 1994-11-17 2002-07-29 生化学工業株式会社 光架橋性ヒアルロン酸誘導体とその架橋体およびそれらの製造方法
US5690961A (en) 1994-12-22 1997-11-25 Hercules Incorporated Acidic polysaccharides crosslinked with polycarboxylic acids and their uses
HUP9802744A3 (en) 1995-03-07 1999-04-28 Novartis Ag Photochemically cross-linked polysaccharide derivatives as supports for the chromatographic separation of enantiomers
AUPN261895A0 (en) * 1995-04-28 1995-05-18 Australian National University, The Preparation and use of sulfated oligosaccharides
IT1281877B1 (it) 1995-05-10 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Sali di metalli pesanti di succinil derivati dell'acido ialuronico e loro impiego come potenziali agenti terapeutici
IT1281886B1 (it) 1995-05-22 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Processo per la preparazione di idrogel ottenuti da derivati chimici dell'acido ialuronico mediante irradiazioni ultraviolette e loro
WO1997007833A2 (en) 1995-08-29 1997-03-06 Fidia Advanced Biopolymers, S.R.L. Biomaterials for preventing post-surgical adhesions comprised of hyaluronic acid derivatives
DE69625658T2 (de) 1995-09-13 2003-07-17 Seikagaku Kogyo K.K.(Seikagaku Corp.), Tokio/Tokyo Kontaktlinse auf Basis photogehärteter Hyaluronsäure
DE19604706A1 (de) 1996-02-09 1997-08-14 Merck Patent Gmbh Vernetzungsprodukte von Aminogruppen-haltigen Biopolymeren
DE19616010C2 (de) 1996-04-23 1998-07-09 Seitz Filter Werke Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung von Fibrets (Fibriden) aus Zellulosederivaten
IT1287698B1 (it) 1996-08-29 1998-08-18 Fidia Advanced Biopolymers Srl Fili da sutura essenzialmente costituiti da derivati esterei dello acido ialuronico
US6632802B2 (en) 1996-08-29 2003-10-14 Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. Hyaluronic acid esters, threads and biomaterials containing them, and their use in surgery
US6162537A (en) 1996-11-12 2000-12-19 Solutia Inc. Implantable fibers and medical articles
CN1161127C (zh) 1997-07-03 2004-08-11 奥奎斯特公司 交联的多糖药物载体
ITPD980037A1 (it) 1998-02-25 1999-08-25 Fidia Advanced Biopolymers Srl Acido ialuronico solfatato e i suoi derivati legati covalentemente a polimeri sintetici pe la preparazione di biomateriali e per il rivesti
DE69926876T2 (de) 1998-04-30 2006-06-14 Maruha Corp Verbindungen, deren struktur derivate von glukuronsäure und glukosamin enthält, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung
ATE215097T1 (de) 1998-05-07 2002-04-15 Tno Verfahren zur selektiven oxidierung von primären alkoholen
US6630457B1 (en) 1998-09-18 2003-10-07 Orthogene Llc Functionalized derivatives of hyaluronic acid, formation of hydrogels in situ using same, and methods for making and using same
US6472541B2 (en) 1998-11-20 2002-10-29 The Regents Of The University Of California Protecting groups with increased photosensitivities
IT1302534B1 (it) 1998-12-21 2000-09-05 Fidia Advanced Biopolymers Srl Composizioni iniettabili, biocompatibili e biodegradabili comprendentialmeno un derivato dell'acido ialuronico, cellule condrogeniche, per
AU1865100A (en) 1998-12-23 2000-07-31 Esparma Gmbh Hyaluronate lyase used for promoting penetration in topical agents
DE19917614C2 (de) 1999-04-19 2001-07-05 Thueringisches Inst Textil Verfahren zur Herstellung von cellulosischen Formkörpern mit hohem Adsorptionsvermögen
US6288043B1 (en) 1999-06-18 2001-09-11 Orquest, Inc. Injectable hyaluronate-sulfated polysaccharide conjugates
US7033603B2 (en) 1999-08-06 2006-04-25 Board Of Regents The University Of Texas Drug releasing biodegradable fiber for delivery of therapeutics
US6592794B1 (en) 1999-09-28 2003-07-15 Organogenesis Inc. Process of making bioengineered collagen fibrils
EP1237933A1 (en) 1999-11-08 2002-09-11 SCA Hygiene Products Zeist B.V. Process of oxidising primary alcohols
US6180087B1 (en) 2000-01-18 2001-01-30 Mallinckrodt Inc. Tunable indocyanine dyes for biomedical applications
DE10003397A1 (de) 2000-01-27 2001-08-09 Hartmann Paul Ag Polyelektrolyt-Feststoffsystem, Verfahren zur Herstellung desselben sowie Wundverband
DE10009996B4 (de) 2000-03-02 2005-10-13 Cognis Ip Management Gmbh Feststoffgranulate mit monodisperser Korngrößenverteilung, ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung
FR2811992B1 (fr) * 2000-07-21 2003-07-04 Aventis Pharma Sa Melanges de polysaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant
IT1317358B1 (it) 2000-08-31 2003-06-16 Fidia Advanced Biopolymers Srl Derivati cross-linkati dell'acido ialuronico.
IT1317359B1 (it) 2000-08-31 2003-06-16 Fidia Advanced Biopolymers Srl Polisaccaridi percarbossilati, quali l'acido ialuronico, processo perla loro preparazione e loro impiego in campo farmaceutico e
US6669926B1 (en) 2000-10-16 2003-12-30 Mallinckrodt, Inc. Hydrophilic light absorbing indole compounds for determination of physiological function in critically ill patients
US6498269B1 (en) 2000-10-17 2002-12-24 The University Of Connecticut Method for the oxidation of aldehydes, hemiacetals and primary alcohols
WO2002048197A1 (en) 2000-12-13 2002-06-20 Sca Hygiene Products Zeist B.V. Process for oxidising primary alcohols
DE60117502T2 (de) 2000-12-19 2006-08-24 Seikagaku Corp. Photohärtbare Derivate von Hyaluronsäure, Verfahren zu deren Herstellung, vernetztes und photogehärtetes Derivat der Hyaluronsäure und diese enthaltendes medizinisches Material
FR2819808B1 (fr) 2001-01-19 2003-04-18 Simafex Compositions stabilisees d'acide o-iodoxybenzoique et leur procede de preparation
CA2435491C (en) 2001-01-31 2010-02-02 Seikagaku Corporation Crosslinked polysaccharide sponge
US6902548B1 (en) 2001-03-19 2005-06-07 Ed Schuler Use of Streptomyces hyalurolyticus enzyme in ophthalmic treatments
US6673919B2 (en) 2001-03-30 2004-01-06 Chisso Cororation Chemically modified hyaluronic acid or salts thereof, and a process for producing thereof
RU2240329C2 (ru) * 2001-08-29 2004-11-20 Государственное унитарное предприятие "Северное отделение Полярного научно-исследовательского института морского рыбного хозяйства и океанографии" Способ получения биологически активного кислого сульфатированного полисахарида из морских водорослей - фукоидана
US6946284B2 (en) 2001-11-16 2005-09-20 University Of Massachusetts Solubilizing cross-linked polymers with photolyase
FR2833493B1 (fr) 2001-12-18 2005-09-23 Ioltechnologie Production Forme galenique solide et soluble pour l'administration occulaire de principes actifs et procede de fabrication d'un insert ophtalmique solide et soluble
US20060189516A1 (en) 2002-02-19 2006-08-24 Industrial Technology Research Institute Method for producing cross-linked hyaluronic acid-protein bio-composites
ITPD20020064A1 (it) 2002-03-12 2003-09-12 Fidia Advanced Biopolymers Srl Derivati esterei dell'acido ialuronico per la preparazione di idrogelda utilizzare in campo biomedico, sanitario e chirurgico e come sistem
JP3975267B2 (ja) 2002-06-03 2007-09-12 独立行政法人産業技術総合研究所 多糖物質のアシル化方法
US20040101546A1 (en) 2002-11-26 2004-05-27 Gorman Anne Jessica Hemostatic wound dressing containing aldehyde-modified polysaccharide and hemostatic agents
JP4323148B2 (ja) 2002-09-30 2009-09-02 チッソ株式会社 ｎ−アルカノイル化ヒアルロン酸もしくはその塩およびその製造法
US6965040B1 (en) 2002-11-04 2005-11-15 Xiaolian Gao Photogenerated reagents
US20040116018A1 (en) 2002-12-17 2004-06-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Method of making fibers, nonwoven fabrics, porous films and foams that include skin treatment additives
US7550136B2 (en) 2002-12-20 2009-06-23 University Of Massachusetts Photo-reactive polymers and devices for use in hair treatments
US6982298B2 (en) 2003-01-10 2006-01-03 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US7465766B2 (en) 2004-01-08 2008-12-16 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US20050126338A1 (en) 2003-02-24 2005-06-16 Nanoproducts Corporation Zinc comprising nanoparticles and related nanotechnology
FR2852012B1 (fr) 2003-03-04 2006-06-23 Oreal Procede de preparation de derives o-acyles du glucose
EP1607405B1 (en) 2003-03-11 2011-05-04 Seikagaku Corporation Photocrosslinked polysaccharide composition and process for producing the same
US7947766B2 (en) 2003-06-06 2011-05-24 The Procter & Gamble Company Crosslinking systems for hydroxyl polymers
ES2226567B1 (es) 2003-06-20 2006-07-01 Universidad De Santiago De Compostela Nanoparticulas de acido hialuronico.
DE10331342B4 (de) 2003-07-11 2009-03-12 Thüringisches Institut für Textil- und Kunststoff-Forschung e.V. Thermostabile Form- oder Spinnmasse
WO2005012364A2 (fr) * 2003-07-30 2005-02-10 Anteis S.A. Matrice complexe a usage biomedical
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
WO2005025630A1 (en) 2003-09-10 2005-03-24 Cato T Laurencin Polymeric nanofibers for tissue engineering and drug delivery
WO2005028632A2 (en) 2003-09-19 2005-03-31 Colorado State University Research Foundation (Csurf) Hyaluronan (ha) esterification via acylation technique for moldable devices
US8313765B2 (en) 2003-12-04 2012-11-20 Industrial Technology Research Institute Biodegradable hyaluronic acid derivative, biodegradable polymeric micelle composition and pharmaceutical or bioactive composition
US20100330143A1 (en) 2003-12-04 2010-12-30 University Of Utah Research Foundation Modified macromolecules and methods of making and using thereof
GB2408741B (en) 2003-12-04 2008-06-18 Ind Tech Res Inst Hyaluronic acid derivative with urethane linkage
GB0406013D0 (en) 2004-03-17 2004-04-21 Chiron Srl Analysis of saccharide vaccines without interference
CA2560507C (en) 2004-03-26 2011-08-16 Surmodics, Inc. Composition and method for preparing biocompatible surfaces
ITMI20040605A1 (it) 2004-03-29 2004-06-29 Coimex S C R L United Companie Esteri butirrici dell'acido ialuronico a basso grado di sostituzione procedimento per la loro preparazione ed uso
WO2006010066A2 (en) 2004-07-09 2006-01-26 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US7323425B2 (en) 2004-08-27 2008-01-29 Stony Brook Technology And Applied Research Crosslinking of hyaluronan solutions and nanofiberous membranes made therefrom
JP5060131B2 (ja) 2004-09-07 2012-10-31 中外製薬株式会社 水溶性ヒアルロン酸修飾物の製造方法
US8481080B2 (en) 2004-11-24 2013-07-09 Novozymes Biopolymer A/S Method of cross-linking hyaluronic acid with divinulsulfone
US7214759B2 (en) 2004-11-24 2007-05-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biologically absorbable coatings for implantable devices based on polyesters and methods for fabricating the same
WO2006078914A1 (en) 2005-01-21 2006-07-27 Washington University In St. Louis Compounds having rd targeting motifs
AU2006227112A1 (en) 2005-03-22 2006-09-28 Tyco Healthcare Group Lp Bioactive wide-weave mesh
US7680038B1 (en) 2005-04-25 2010-03-16 Electronic Arts, Inc. Dynamic bandwidth detection and response for online games
GB0513552D0 (en) 2005-07-01 2005-08-10 Bristol Myers Squibb Co Bandage
WO2007004675A1 (ja) 2005-07-06 2007-01-11 Seikagaku Corporation 薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル
ITPD20050206A1 (it) 2005-07-07 2007-01-08 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriali in forma di fibra da impiegarsi come dispositivi medici nel trattamento delle ferite e loro processi di produzione
ITMI20051415A1 (it) 2005-07-22 2007-01-23 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriali a base di corbossimetilcellulosa salificata con zinco associata a derivati dell'acido ialuronico da impiegarsi come dispositivi medici con attivita' antimicrobica ed antifungina e loro processo di produzione
CN101282985B (zh) 2005-09-21 2013-07-10 科德生物工程有限公司 用透明质酸低聚衍生物覆盖的细胞表面
US7993678B2 (en) 2005-09-26 2011-08-09 Novozymes Biopolymer A/S Hyaluronic acid derivatives
CA2633978A1 (en) 2005-12-14 2007-06-21 Anika Therapeutics, Inc. Bioabsorbable implant of hyaluronic acid derivative for treatment of osteochondral and chondral defects
EP1826274A1 (en) 2006-02-24 2007-08-29 Kikkoman Corporation Enzyme composition, low molecular weight hyaluronan and process for preparing the same
US20100273734A1 (en) 2006-02-28 2010-10-28 Novozymes Biopolymer A/S Derivatives of Hyaluronic Acids
JP4892679B2 (ja) 2006-03-27 2012-03-07 国立大学法人弘前大学 ゲル紡糸によるヒアルロン酸繊維およびその製造方法
KR20070118730A (ko) 2006-06-13 2007-12-18 주식회사 코오롱 보습성이 우수한 창상피복재 및 그의 제조방법
US20080124395A1 (en) 2006-06-22 2008-05-29 Weiliam Chen Formulations and devices for treatment or prevention of neural ischemic damage
WO2008008481A2 (en) 2006-07-12 2008-01-17 Georgia Tech Research Corporation Deprotection of functional groups by multi-photon induced electron transfer
AU2007280846B2 (en) 2006-08-04 2012-06-14 Novozymes Biopharma Dk A/S Branched hyaluronic acid and method of manufacture
US20080063617A1 (en) 2006-09-07 2008-03-13 Abrahams John M Cosmetics formulations
ITMI20061726A1 (it) 2006-09-11 2008-03-12 Fidia Farmaceutici Derivati crosslinkati a base di acido ialuronico reticolato via click chemistry
CZ302856B6 (cs) 2006-09-27 2011-12-14 Cpn Spol. S R. O. Zpusob prípravy derivátu polysacharidu
US8979931B2 (en) 2006-12-08 2015-03-17 DePuy Synthes Products, LLC Nucleus replacement device and method
US9597277B2 (en) 2006-12-22 2017-03-21 Croma-Pharma Gesellschaft M.B.H. Use of polymers
KR20080062092A (ko) 2006-12-29 2008-07-03 주식회사 핸슨바이오텍 세포전달체로서의 히알루론산 유도체 및 이의 제조 방법
EP1942117A1 (en) 2006-12-29 2008-07-09 Sigea S.R.L. Derivatives of acid polysaccharides
JP5329767B2 (ja) 2007-02-26 2013-10-30 帝人株式会社 芳香族コポリアミド繊維の製造装置
WO2008115799A1 (en) 2007-03-21 2008-09-25 William Marsh Rice University Novel gene delivery vectors for human mesenchymal stem cells
CZ2007299A3 (cs) 2007-04-24 2009-02-04 Cpn Spol. S R. O. Príprava nanovláken z polysacharidu a jejich smesí s polyvinylalkoholem
JP5165281B2 (ja) 2007-06-01 2013-03-21 株式会社バイオベルデ ２反応剤型の医療用含水ゲル形成剤、及び、これより得られるヒアルロン酸ゲル
US8288142B2 (en) 2007-06-19 2012-10-16 Uvarkina Tamara P Hyaluronidase and method of use thereof
KR101226851B1 (ko) 2007-06-20 2013-01-25 (주)엘지하우시스 이중노즐을 이용한 나노섬유의 제조방법
EP2160484A2 (en) 2007-06-22 2010-03-10 Innovative Surface Technologies, Inc. Nanofibers containing latent reactive groups
WO2009012372A1 (en) 2007-07-18 2009-01-22 Advantageous Systems, Llc Methods and apparatuses for detecting analytes in biological fluid of an animal
FR2920786B1 (fr) 2007-09-07 2010-09-10 Univ Claude Bernard Lyon Fibres creuses, notamment multi membranaires, leur procede de preparation par filage et dispositif pour la mise en oeuvre dudit procede
FR2921675B1 (fr) 2007-09-28 2010-03-19 Univ Claude Bernard Lyon Filament a base d'acide hyaluronique et son procede d'obtention.
US20130136784A1 (en) 2007-10-11 2013-05-30 Robert J. Staab Methods for delivery of medication using dissolvable devices
US8394782B2 (en) * 2007-11-30 2013-03-12 Allergan, Inc. Polysaccharide gel formulation having increased longevity
US7976825B2 (en) 2007-12-06 2011-07-12 Janos Borbely Cancer cell diagnosis by targeting delivery of nanodevices
KR101601993B1 (ko) 2008-02-11 2016-03-17 바스프 에스이 합성 중합체로부터 다공성 구조의 제조 방법
WO2009100732A1 (en) 2008-02-14 2009-08-20 Fiberweb Corovin Gmbh Bicomponent fibers, textile sheets and use thereof
US9585987B2 (en) 2008-02-29 2017-03-07 Pvac Medical Technologies Ltd Composition for the formation of gels
WO2009139972A2 (en) 2008-03-31 2009-11-19 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Site specific fluorescence marking and contrast marker for same
WO2009148405A1 (en) 2008-06-05 2009-12-10 Agency For Science, Technology And Research Formation of hydrogel in the presence of peroxidase and low concentration of hydrogen peroxide
US7932237B2 (en) * 2008-05-15 2011-04-26 Consejo Nacional De Investigaciones Cientificas Y Technicas (CONICET) Pharmaceutical compositions for use in the treatment of wounds
JP2010014784A (ja) 2008-07-01 2010-01-21 Fuji Xerox Co Ltd 光書込型表示装置、書込装置、及び光書き込み方法
IT1391734B1 (it) 2008-07-29 2012-01-27 Anika Therapeutics Srl Nuovi biomateriali, loro preparazione per elettrospinning e loro uso in campo biomedico e chirurgico.
FR2934999B1 (fr) 2008-08-13 2011-07-29 Adocia Polysaccharides fonctionnalises par des derives du tryptophane
US9228027B2 (en) 2008-09-02 2016-01-05 Allergan Holdings France S.A.S. Threads of Hyaluronic acid and/or derivatives thereof, methods of making thereof and uses thereof
CZ2008705A3 (cs) 2008-11-06 2010-04-14 Cpn S. R. O. Zpusob prípravy DTPA sítovaných derivátu kyseliny hyaluronové a jejich modifikace
ITRM20080636A1 (it) 2008-11-28 2010-05-29 Univ Palermo Procedimento per la produzione di derivati funzionalizzati dell acido ialuronico e relativi idrogeli.
JP2010138276A (ja) 2008-12-11 2010-06-24 Nipro Corp ヒアルロン酸単糸の製造方法
CA2753179A1 (en) 2009-02-21 2010-08-26 Sofradim Production Crosslinked fibers and method of making same by extrusion
US9273191B2 (en) 2009-02-21 2016-03-01 Sofradim Production Medical devices with an activated coating
CA2753165A1 (en) 2009-02-21 2010-08-26 Sofradim Production Compounds and medical devices activated with solvophobic linkers
CZ2009168A3 (cs) 2009-03-17 2010-07-21 Contipro C, A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové pomocí O-acyl-O´-alkylkarbonátu v prítomnosti substituovaného pyridinu
US8551378B2 (en) 2009-03-24 2013-10-08 North Carolina State University Nanospinning of polymer fibers from sheared solutions
US20120219554A2 (en) 2009-05-14 2012-08-30 Fidia Farmaceutici S.P.A. Extracellular yaluronidase from streptomyces koganeiensis
EP2440185B1 (en) 2009-06-09 2015-04-08 Aurinia Pharmaceuticals Inc. Topical drug delivery systems for ophthalmic use
RU2539395C2 (ru) 2009-07-30 2015-01-20 Карбилан Терапьютикс, Инк. Полимерные композиции модифицированной гиалуроновой кислоты и способы их применения
KR101103423B1 (ko) 2009-09-04 2012-01-06 아주대학교산학협력단 생체 주입형 조직 접착성 하이드로젤 및 이의 생의학적 용도
EP3067069B1 (en) 2009-11-11 2023-07-26 Hy2Care B.V. Hydrogels based on polymers of dextran tyramine and tyramine conjugates of natural polymers
US20120301441A1 (en) 2009-11-11 2012-11-29 Hermanus Bernardus Johannes Karperien Dextran-hyaluronic acid based hydrogels
US20110111012A1 (en) 2009-11-12 2011-05-12 Hemcon Medical Technologies, Inc. Nanomaterial wound dressing assembly
CZ2009835A3 (cs) 2009-12-11 2011-06-22 Contipro C A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové oxidovaného v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd a zpusob jeho modifikace
CZ2009836A3 (cs) 2009-12-11 2011-06-22 Contipro C A.S. Derivát kyseliny hyaluronové oxidovaný v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd, zpusob jeho prípravy a zpusob jeho modifikace
US8197849B2 (en) 2010-02-12 2012-06-12 National Health Research Institutes Cross-linked oxidated hyaluronic acid for use as a vitreous substitute
US20110229551A1 (en) 2010-03-17 2011-09-22 Notus Laboratories, Inc. Drug delivery compositions and methods using nanofiber webs
IT1399202B1 (it) 2010-03-30 2013-04-11 Corbelli Metodo per la produzione di manufatti elastomerici funzionalizzati e manufatti cosi' ottenuti
EP2585108A4 (en) 2010-06-24 2016-04-13 Univ Kansas CONJUGATES WITH AN N-OXIM BINDING AND ASSOCIATED METHODS
CN101897976A (zh) 2010-07-16 2010-12-01 沈阳药科大学 一种药物增溶载体及其制备方法和应用
CZ305040B6 (cs) 2010-09-14 2015-04-08 Contipro Biotech S.R.O. Způsob přípravy vysoce substituovaných amidů kyseliny hyaluronové
CZ20101001A3 (cs) 2010-12-31 2012-02-08 Cpn S.R.O. Hyaluronová vlákna, zpusob jejich prípravy a použití
US9200271B2 (en) 2011-02-03 2015-12-01 Empire Technology Development Llc Selective 3D biopatterning
KR101201412B1 (ko) 2011-04-19 2012-11-14 한양대학교 에리카산학협력단 다공성 코어쉘 나노웹의 제조방법
CZ304072B6 (cs) 2011-04-26 2013-09-25 Contipro Biotech S.R.O. Amfoterní materiál na bázi sítované kyseliny hyaluronové, zpusob jeho prípravy, materiály obsahující aktivní cinidla uzavrené v síti hyaluronanu, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití
CN102154738B (zh) 2011-05-10 2012-08-01 青岛大学 一种红藻琼胶纤维的制备方法
ITTO20110428A1 (it) 2011-05-13 2012-11-14 Rottapharm Spa Esteri dell'acido ialuronico, loro preparazione ed uso in dermatologia
US9920454B2 (en) 2011-10-18 2018-03-20 Heiq Pty Ltd Fibre-forming process and fibres produced by the process
KR20130085294A (ko) 2012-01-19 2013-07-29 충남대학교산학협력단 림프노드 탐지용 형광 고분자 나노젤 및 이를 이용한 림프노드 확인 방법
CZ303879B6 (cs) 2012-02-28 2013-06-05 Contipro Biotech S.R.O. Deriváty na bázi kyseliny hyaluronové schopné tvorit hydrogely, zpusob jejich prípravy, hydrogely na bázi techto derivátu, zpusob jejich prípravy a pouzití
CZ2012282A3 (cs) 2012-04-25 2013-11-06 Contipro Biotech S.R.O. Zesítovaný derivát hyaluronanu, zpusob jeho prípravy, hydrogel a mikrovlákna na jeho bázi
WO2013171764A2 (en) 2012-04-30 2013-11-21 Rubicon Research Private Limited Ophthalmic formulations
CZ304651B6 (cs) 2012-05-11 2014-08-20 Contipro Biotech S.R.O. Způsob přípravy mikrovláken, způsob výroby krytů ran, kryty ran a zařízení pro přípravu polysacharidových vláken
CZ2012844A3 (cs) 2012-11-27 2014-02-05 Contipro Biotech S.R.O. Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
CZ304303B6 (cs) 2012-11-27 2014-02-19 Contipro Biotech S.R.O. Vlákna založená na hydrofobizovaném hyaluronanu, způsob jejich přípravy a použití, textilie na jejich bázi a použití
CZ2012843A3 (cs) 2012-11-27 2014-02-05 Contipro Biotech S.R.O. Nekonečná vlákna na bázi hyaluronanu, selektivně oxidovaného v poloze 6 N-acetyl-D-glukosaminové části, jejich příprava, použití, nitě, střiže, příze, textilie a způsob jejich úpravy
CZ304654B6 (cs) 2012-11-27 2014-08-20 Contipro Biotech S.R.O. Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití
KR101386096B1 (ko) 2013-02-28 2014-04-21 강원대학교산학협력단 음이온성 단백질 약물 전달을 위한 키토산 나노섬유, 그 제조방법 및 그 키토산 나노섬유를 포함하는 경점막 투여제
CN103505736A (zh) 2013-09-23 2014-01-15 天津大学 基于改性透明质酸的高分子脂质体及其制备方法
CN103789874B (zh) 2014-01-23 2016-02-10 北京化工大学常州先进材料研究院 平行电场诱导相分离法制备核壳结构天然聚电解质纳米纤维
EP2899214A1 (en) 2014-01-27 2015-07-29 Basf Se Ethylenically unsaturated polysaccharides, method for their production and their use
CZ2014150A3 (cs) 2014-03-11 2015-05-20 Contipro Biotech S.R.O. Konjugáty oligomeru kyseliny hyaluronové nebo její soli, způsob jejich přípravy a použití

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010132857A1 (en) * 2009-05-14 2010-11-18 Central Michigan University Composition and method of preparation of polysaccharide gel-based artificial, biodegradable skin scaffolds
WO2010138074A1 (en) * 2009-05-29 2010-12-02 Hilborn Joens Hyaluronic acid based delivery systems
WO2013023793A2 (en) * 2011-08-18 2013-02-21 Albert-Ludwigs-Universität Freiburg Matrices comprising a modified polysaccharide
WO2014023272A1 (en) * 2012-08-08 2014-02-13 Contipro Biotech S.R.O. Hyaluronic acid derivative, method of preparation thereof, method of modification thereof and use thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bobula, Tomás, et al. "One-pot synthesis of alpha, beta-unsaturated polyaldehyde of chondroitin sulfate." Carbohydrate polymers 136 (2016): 1002-1009. *

Also Published As

Publication number Publication date
US20180171034A1 (en) 2018-06-21
US10414832B2 (en) 2019-09-17
JP6840683B2 (ja) 2021-03-10
WO2016206661A1 (en) 2016-12-29
RU2018102154A (ru) 2019-07-26
BR112017027030B1 (pt) 2021-06-08
EP3313893B1 (en) 2019-05-22
CZ2015445A3 (cs) 2017-01-04
EP3313893A1 (en) 2018-05-02
JP2018519391A (ja) 2018-07-19
ES2742208T3 (es) 2020-02-13
KR20180021829A (ko) 2018-03-05
RU2018102154A3 (cs) 2019-07-26
RU2708327C2 (ru) 2019-12-05
KR102665664B1 (ko) 2024-05-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5874417A (en) Functionalized derivatives of hyaluronic acid
KR102060026B1 (ko) 히알루론산 유도체, 이의 제조 방법, 이의 변형 방법, 및 이의 용도
Pouyani et al. Novel hydrogels of hyaluronic acid: synthesis, surface morphology, and solid-state NMR
JP5397770B2 (ja) “クリックケミストリー”架橋によって得られたヒアルロン酸誘導体
JP7015784B2 (ja) 炭水化物架橋剤
US7879818B2 (en) Hyaluronic acid-based cross-linked nanoparticles
CZ303485B6 (cs) Zpusob výroby zesítených polysacharidu
US8039447B2 (en) Derivatives of hyaluronic acid, their preparation process and their uses
Prestwich Biomaterials from chemically-modified hyaluronan
RU2708327C2 (ru) Производные сульфатированных полисахаридов, их способ получения, модификация и применение
WO2022034889A1 (ja) 多糖誘導体、多糖誘導体－薬物コンジュゲート、その製造方法
US20080292664A1 (en) Hydrogels and Hyaluronic Acid and Alpha, Beta-Polyaspartyl-Hydrazide and Their Biomedical and Pharmaceutical Uses
US10759878B2 (en) Method of crosslinking of polysaccharides using photoremovable protecting groups
CZ2010687A3 (cs) Zpusob prípravy vysoce substituovaných amidu kyseliny hyaluronové
ES2859625T3 (es) Productos de enlace de polisacáridos aminados
Russo et al. Carbohydrate, Biomaterials, and Tissue Engineering Applications