CZ308106B6 - Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití - Google Patents

Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití Download PDF

Info

Publication number
CZ308106B6
CZ308106B6 CZ2016-375A CZ2016375A CZ308106B6 CZ 308106 B6 CZ308106 B6 CZ 308106B6 CZ 2016375 A CZ2016375 A CZ 2016375A CZ 308106 B6 CZ308106 B6 CZ 308106B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
polysaccharide
aldehyde
polysaccharides
process according
derivatives
Prior art date
Application number
CZ2016-375A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2016375A3 (cs
Inventor
Radovan Buffa
Tomáš Bobula
Petra Šedová
Ivana Basarabová
Pavlína Procházková
Hana Vágnerová
Iva Dolečková
Soňa Moravčíková
Vladimír Velebný
Original Assignee
Contipro A.S.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Contipro A.S. filed Critical Contipro A.S.
Priority to CZ2016-375A priority Critical patent/CZ308106B6/cs
Priority to BR112018075531-1A priority patent/BR112018075531B1/pt
Priority to PL17746370T priority patent/PL3475310T3/pl
Priority to EP17746370.0A priority patent/EP3475310B1/en
Priority to RU2018147560A priority patent/RU2725500C1/ru
Priority to KR1020197002226A priority patent/KR102327939B1/ko
Priority to HUE17746370A priority patent/HUE049730T2/hu
Priority to DK17746370.0T priority patent/DK3475310T3/da
Priority to ES17746370T priority patent/ES2790837T3/es
Priority to JP2018566522A priority patent/JP6982321B2/ja
Priority to US16/311,745 priority patent/US10618984B2/en
Priority to PCT/CZ2017/050026 priority patent/WO2018001394A1/en
Publication of CZ2016375A3 publication Critical patent/CZ2016375A3/cs
Publication of CZ308106B6 publication Critical patent/CZ308106B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/728—Hyaluronic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/731—Carrageenans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0036—Galactans; Derivatives thereof
    • C08B37/0042—Carragenan or carragen, i.e. D-galactose and 3,6-anhydro-D-galactose, both partially sulfated, e.g. from red algae Chondrus crispus or Gigantia stellata; kappa-Carragenan; iota-Carragenan; lambda-Carragenan; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0069—Chondroitin-4-sulfate, i.e. chondroitin sulfate A; Dermatan sulfate, i.e. chondroitin sulfate B or beta-heparin; Chondroitin-6-sulfate, i.e. chondroitin sulfate C; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

Řešení se týká přípravy nových derivátů polysacharidů s dvojnou vazbou v polohách 4 a 5 pyranozového cyklu. Postu přípravy je založen na oxidaci OH skupiny v poloze 6 na aldehyd, následné elmininaci za vzniku dvojné −C=C− vazby v polohách 4 a 5 a finální redukci aldehydické skupiny v poloze 6 na původní alkohol. Takové deriváty polysacharidů vykazují zvýšenou antioxidační aktivitu a některé z nich i selektivní negativní vliv na viabilitu rakovinových buněk.

Description

Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití
Oblast techniky
Vynález se týká derivátů polysacharidů, obsahujících ve struktuře heterocyklus s dvojnou vazbou v polohách 4 a 5 podle strukturního vzorce X, polysgcharíd
OH
R pcrfysacharid (X), kde R je skupina -NH-CO-CH3 nebo -OH.
Dále se vynález týká přípravy derivátů podle vzorce X z výchozího polysacharidů obsahujícího strukturní fragment Y, kde samotná modifikace pak může být zjednodušeně popsána následujícím schématem:
polysBcf.i'··.:' θ ’
OH ,O^ ' V oolysachand r\
-O poiysscharid
'^“polysacíiarid (X) (Y) kde R je skupina -NH-CO-CH3 nebo -OH, a R1 je skupina -SO2-ONa, -SO2-OH, nebo -H, přičemž absolutní konfigurace na uhlíku 4 může být R nebo S.
Dále se vynález týká použití těchto nenasycených derivátů, které oproti nativním polysacharidům vykazují zvýšené antioxidační vlastnosti a některé z nich selektivně inhibují růst rakovinových buněk.
Dosavadní stav techniky
Polysacharidy obecného vzorce Y
Polysacharidy mají v organismech širokou škálu funkcí, například stavební, zásobní nebo i regulační. Mezi polymery přirozeně se vyskytující v organismech patří i polysacharidy obecného vzorce Y
R!O pólyššchariď' .OH
O v\ ,-O *R poíysscharid (Y), kde R je skupina CH3-CO-NH- nebo -OH, a R1 je skupina -SO2-ONa, -SO2-OH, nebo -H. Sem patří například chondroitin sulfát, dermatan sulfát, karagenan, keratan sulfát nebo kyselina hyaluronová.
Chondroitin sulfát je lineární, sulfatovaný a negativně-nabitý glykosaminoglykan složený z opakujících se monomemích jednotek /V-acctyl-D-galaktosaminu a D-glukuronové kyseliny vzájemně propojených β(1 —>3) a β(1^4) O-glykosidickými vazbami (strukturní vzorec chondroitin sulfátu viz níže),
kde
R1 je -H nebo -Na,
R2 je -H, -SO2-ONa nebo -SO2-OH.
Zdrojem chondroitin sulfátu jsou živočišné pojivové tkáně, kde se váže na proteiny a tvoří tak součást proteoglykanů. Sulfatace chondroitinu se uskutečňuje pomocí sulfotransferáz v různých polohách a různém zastoupení. Jedinečný vzorec sulfatace jednotlivých poloh v polymemím řetězci kóduje specifickou biologickou aktivitu chondroitin sulfátu. Chondroitin sulfát je důležitým stavebním blokem chrupavky v kloubech, kterým dodává odolnost v tlaku a obnovuje rovnováhu ve složení kloubového maziva (Baeurle S. A. a kol. Polymer 50, 1805, 2009).
Dermatan sulfát je lineární, sulfatovaný a negativně-nabitý glykosaminoglykan složený z opakujících se monomemích jednotek /V-acctyl-D-galaktosaminu a L-iduronové kyseliny vzájemně propojených β(1 —>3) a β(1^·4) O-glykosidickými vazbami (strukturní vzorec dermatan sulfátu viz níže),
kde
R1 je -H nebo -Na,
R2 je -H, -SO2-OH, nebo -SO2-ONa
Dermatan sulfát se od chondroitin sulfátu odlišuje přítomností L-iduronové kyseliny, která je C5 epimerem D-glukuronové kyseliny. Opačná konfigurace iduronové kyseliny umožňuje lepší flexibilitu řetězců dermatan sulfátu a zabezpečuje jejich specifickou glykosaminoglykanproteinovou interakci v okolním prostoru. Tyto interakce přispívají k regulaci vícero buněčných procesů, jako např. migraci, proliferaci, diferenciaci nebo angiogenezi. Proměna chondroitin sulfátu na dermatan sulfát je zabezpečená pomocí tří enzymů, a to dermatan sulfát epimerázy 1 (DS-epil), dermatan sulfát epimerázy 2 (DS-epi2) a dermatan 4-O-sulfotransferázy (D4ST1) (Thelin M„ a kol. FEBS Journal 280, 2431, 2013).
Keratan sulfát patří do skupiny lineárních sulfatovaných polysacharidů obsahující D-galaktózu, /V-acctylglukosamin a galaktóza-6-sulfát spojených vazbami β( 1 —>3) a β( 1 —>4), který se
-2CZ 308106 B6 stavbou a vazbami podobá chondroitin sulfátu. Nachází se v rohovce, chrupavkách, kostech a pojivové tkáni (strukturní vzorec keratan sulfátu viz níže),
HO
OR2 \ ..,-0 -i
OH \ -ta
NHAc kde R2 je -H, -SO2-OH, nebo -SCE-ONa
Karagenany patří do skupiny lineárních sulfatovaných polysacharidů, které se získávají extrakcí z červených mořských řas. Základními stavebnými jednotkami jsou galaktóza a její 3,6-anhydro derivát, které jsou vzájemně propojeny α(1^·3) nebo β( 1 —>4) O-glykosidickými vazbami. Existují tři základní skupiny karagenanů, které se liší ve stupni sulfatace a rozpustnosti ve vodě. Kappa-karagenan má jednu sulfátovou skupinu v dimeru a tvoří tvrdé gely ve vodném prostředí, lota-karagenan obsahuje dva sulfáty a tvoří měkké gely, přičemž lambda-karagenan se třemi sulfáty nevykazuje gelující vlastnosti.
Kyselina hyaluronová je nesulfatovaný glykosaminoglykan, který je složený ze dvou opakujících se jednotek D-glukuronové kyseliny a /V-acctyl-D-glukosaminu.
OH NHAC kde
R1 je H nebo Na.
Molekulová hmotnost nativní kyseliny hyaluronové se pohybuje v rozsahu 5.104 až 5.106g.mol_1. Tento značně hydrofilní polysacharid tvoří součást pojivových tkání, kůže, synoviální tekutiny kloubů, hraje významnou roli v řadě biologických procesů jako je organizace proteoglykanů, hydratace a diferenciace buněk. Vzhledem k tomu, že se jedná o polymer tělu vlastní a tudíž biodegradovatelný, stává se vhodným substrátem pro tkáňové inženýrství, nebo jako nosič biologicky aktivních látek.
Polysacharidy obsahující násobné vazby
Polysacharidy s -C=C- násobnou vazbou, která je součástí sacharidového cyklu, a přitom není umístěná na konci řetězce, jsou velmi vzácné. Z běžných polysacharidů jsou popsány například 5,6-nenasycené deriváty celulózy známe jako celulozény (Vigo T. L. a kol. Polymers for Advanced Technologies, 10, 6, 311-320, 1999), případně jejich 2,3-nenasycené analogy. Postup přípravy 5,6-nenasycených derivátů je založen na eliminační reakci odstupující skupiny v poloze 6 a vodíku v poloze 5 v bazickém prostředí, přičemž produktem je enol ether (-C=C- násobná vazba v konjugaci s heterocyklickým kyslíkem). Příprava 2,3-nenasycených derivátů celulózy, amylózy nebo xylanu (D. Horton a kol. Carbohydrate Research, 40,2,345-352, 1975) vyžaduje kromě přítomnosti odstupujících skupin i redukční činidlo, nej častěji zinek, přičemž produktem je standardní alken (bez konjugace násobné vazby s kyslíkem).
Využití polysacharidů obsahujících násobné vazby
-3CZ 308106 B6
Aplikace jsou převážně zaměřeny na modifikaci -C=C- násobné vazby, která není přímou součástí sacharidového cyklu. Tyto metody jsou postaveny na připojení nové substance na skelet polymeru, kde dochází k zásadní změně struktury čili ke ztrátě nativního charakteru póly sacharidů. V takových případech se násobná vazba běžně používá v polymerizačních (Bellini D. WO96/37519), adičních (Khetan S. a kol. Soft Matter, 5, 1601-1606, 2009) nebo cykloadičních reakcích (Nimmo Ch. M. a kol. Biomacromolecules, 12, 824—830,2011; Bobula, T. a kol. Carbohydrate. Polymers, 125, 153-160, 2015). Tyto způsoby mohou vést jak k efektivnímu síťování polysacharidů (Collins Μ. N. a kol. Carbohydrate Polymers, 92, 12621279, 2013; Hacker M. C. a kol., Inter. J. of Mol. Sc., 16, 27677-706, 2015), tak k selektivnímu vázaní aktivních substancí na polymer (Mero A. a kol. Polymers, 6, 346-369, 2014). Velmi populární je i možnost využít násobní vazby metakrylátové skupiny pro uskutečnění polymerizační reakce (Granstrom M. a kol. EP2899214).
Existuje jenom několik způsobů, jak zavést násobnou -C=C- vazbu přímo do sacharidového cyklu v polymemím řetězci. Jedním z nich je enzymatické štěpení polymerů pomocí lyáz, kde dvojná vazba vzniká na neredukujícím konci polymeru (Kelly S. J. a kol. Glycobiology, 11,4, 294-304, 2001), v tomto případě kyseliny hyaluronové (viz schéma níže).
lyázs
NaOOC
HOOn _,OH
NaOOC íVoi
NHAc
OH .--O .,OH
ŮHAc
To znamená, že zastoupení takové modifikace je silně závislé na molekulové hmotnosti, například při molekulové hmotnosti 4.104 g.rnol-1 je modifikován jeden disacharid ze sta, v případě molekulové hmotnosti 4.105 g.rnol-1 je modifikován jeden disacharid z tisíce. Je tedy zřejmé, že pokud se nejedná o oligomery polysacharidů, je tento typ modifikace pro vyšší molekulové hmotnosti polymerů nepatrný a výsledný vysokomolekulámí polymer se prakticky neliší od výchozího.
Druhý způsob umožňuje zavést dvojnou vazbu do struktury polysacharidů v poloze 4 a 5 po celé délce řetězce, takže lze efektivně modifikovat i polymery s vyšší molekulovou hmotností (Buffa R. a kol. WO2014/023272, Bobula T. a kol. Carbohydrate Polymers, 136, 1002-1009, 2016). Tento způsob však vytváří -C=C- násobnou vazbu, která je v přímé konjugaci se silně elektronakceptomí aldehydickou skupinou. Tato modifikace výrazně mění chemické vlastnosti polysacharidů, protože umožňuje kovalentní vázání poměrně široké škály nukleofilů, nej častěji aminů. Z výše uvedeného také vyplývá, že takhle modifikovaný polymer má citelně vyšší elektrofilní charakter, tudíž se chemicky výrazně liší od nativního polymeru. Lze ho taky považovat za méně aktivní antioxidant v porovnání s nemodifikovaným polymerem.
Tyto nedostatky odstraňuje řešení popsané v tomto vynálezu, kde modifikovaný polymer oproti nemodifikovanému neobsahuje žádnou reaktivní elektrofilní skupinu. Oproti tomu dvojnou vazbu v konjugaci s heterocyklickým kyslíkem lze považovat za seskupení s nukleofilními (antioxidačními) vlastnostmi.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou deriváty polysacharidů obsahující ve své struktuře heterocyklus s dvojnou vazbou v polohách 4 a 5 podle strukturního vzorce X,
-4CZ 308106 B6 χΟΗ \
^OÁ polysachand - C'V' 'polys^charíd
R (X), kde R je skupina -NH-CO-CH3 nebo -OH.
Deriváty mají molekulovou hmotnost v rozmezí 5.103 až 5.105 g.mol-1 a výchozí polysacharidy pro přípravu derivátů podle vynálezu jsou s výhodou vybrány ze skupiny obsahující chondroitin sulfát, karagenan, dermatan sulfát, kyselinu hyaluronovou nebo keratan sulfát.
Dále se vynález týká způsobu přípravy, který je založen na třech krocích (viz schéma níže):
RÝ ,-0H poíysacharíď poíysacherid .oxidace
poíysadiartó'''
poÍysacharid ii S.eliminace i
3.redukce
kde R je skupina -NH-CO-CH3 nebo -OH, a R1 je skupina -SO2-ONa, -SO2-OH nebo -H
1. Oxidace - zavedení aldehydické skupiny do polohy 6 sacharidového cyklu.
Oxidace primární hydroxylové skupiny v poloze 6 na aldehyd. Reakci lze provést například použitím oxidačního systému 2,2,6,6-tetramethyl-l-piperidinyloxyl radikálu TEMPO / NaClO ve vodě. Tento krok probíhá s výhodou ve vodě při teplotě 0 až 10 °C, molámí množství NaClO je v rozmezí 0,03 až 0,8 ekv. a molámí množství TEMPO je v rozmezí 0,005 až 0,2 ekv. vzhledem k opakující se jednotce póly sacharidů. Výchozí póly sacharid může mít molekulovou hmotnost v rozsahu 5.103 až 5.105 g.mol-1 a použije se s výhodou 0,1 až 8 % hmotn. vodný roztok póly sacharidů. Nakonec se do reakční směsi pro ukončení reakce za účelem likvidace zbytků nezreagovaného činidla (chlornanu) může přidat například etanol, thiosíran sodný aj. Alternativně lze oxidaci provést pomocí systému l,l,l-triacetoxy-l,l-dihydro-l,2benziodoxol-3(lH)-onu (DMP) při teplotě 10 až 50 °C v DMSO, kde množství DMP je v rozmezí 0,05 až 2 ekv. vzhledem k opakující se jednotce póly sacharidů.
2. Eliminace -
2a. pokud R1 = -H, dochází k eliminaci vody (dehydratace).
Je možné ji s výhodou uskutečnit ve vodně-organickém prostředí, kde organické rozpouštědlo je mísitelné s vodou a objemový poměr rozpouštědlo/voda je v rozsahu 3/1 až 1/2. S výhodou lze v tomto kroku použít báze například pyridin, triethylamin nebo /V./V-diisopiopylcthylamin, nebo anorganické báze, např. Ca(OH)2. Množství báze v reakci je 0,01 až 20 ekvivalentů, s výhodou 5 až 10 ekvivalentů přepočteno na opakující se jednotku póly sacharidů. Jako organická
-5CZ 308106 B6 rozpouštědla je možné použít aprotická polární rozpouštědla mísitelná s vodou, s výhodou DMSO nebo sulfolan. Oxidace probíhá 0,1 až 12 hod, s výhodou 1 až 4 hod, druhý krok reakce probíhá 12 až 150 hodin, s výhodu 20 až 40 h, při teplotě 30 až 80 °C, s výhodou 50 až 60 °C.
2b. pokud R1 = -SOz-ONa, resp. -SO2-OH, dochází k eliminaci NaO-SO2-Ona, resp. HO-SO2ONa. Pokud je skupina -OR1 v poloze 4 cyklu v antiperiplanámí pozici k vodíku v poloze 5, probíhá eliminace spontánně bez nutnosti přídavku bází a bez nutnosti navýšení reakční teploty. Doba trvání reakce kroku 1 + 2b je 0,1 až 12 hod, s výhodou 1 až 4 hod. Pokud není skupina OR1 v poloze 4 sacharidového cyklu v antiperiplanámí pozici k vodíku v poloze 5, k efektivní eliminaci lze použít i postup popsaný v části 2a.
3. Redukce - aldehydická skupina je selektivně redukovaná s borohydridy, s výhodou s NaBH4 za vzniku primárního alkoholu -CH2-OH se zachováním násobné vazby v poloze 4 a 5 sacharidového cyklu. Ačkoli by odborník očekával kromě redukce aldehydické skupiny -CHO (resp. geminálního diolu -CH(OH)2) i redukci -C=C- vazby, překvapivě k redukci dvojné vazby —C—C— při způsobu podle vynálezu nedochází. Množství redukčního činidla může být v rozsahu 0,1 až 10 ekvivalentů přepočteno na opakující se jednotku polysacharidů, s výhodou 0,3 až 2 ekvivalentů. Reakci lze provést ve vodě při teplotě 5 až 40 °C při pH 5 až 10, s výhodou při teplotě 15 až 25 °C a pH 6 až 8 v čase 1 až 24 h. Výchozí roztok aldehydu polysacharidů má s výhodou koncentraci 0,1 až 8 % hmotn.
Z uvedeného vyplývá, že pro přípravu derivátů polysacharidů podle způsobu chráněného tímto vynálezem je nezbytné, aby vstupní polysacharid obsahoval strukturu Y, _ 1Λ OH
R O ,z '\.Λ
Γ.Ο.Λ ..--.-A ,Ιθ'·. , . .
poiysachand'U '--v--- -polysachanc (Y) která zahrnuje (1^-3) propojený sacharidový cyklus, dále primární -CH2-OH skupinu v poloze 6 a -OH, -SO2-OH nebo -SO2-ONa skupinu v poloze 4. Skupina v poloze 2 není klíčová pro úspěšný průběh dané modifikace, pro většinu polysacharidů je R = -OH nebo -NH-CO-CH3.
Dále se vynález týká způsobu použití derivátů polysacharidů obecného vzorce X. Jak už bylo zmíněno výše, řešení popsané v tomto vynálezu nabízí nové typy derivátů polysacharidů se zvýšenou nukleofilicitou (antioxidačními vlastnostmi), přitom jenom s nepatrnou změnou primární struktury polysacharidů způsobenou eliminací vodíku z polohy 5 a skupiny -OH, -OSO2-OH nebo -O-SO2-ONa z polohy 4. Antioxidační schopnosti těchto nových derivátů byly prokázány standardním stanovením s 2,2-difenyl-l-pikrylhydrazyl radikálem, kde byl zjištěn významný rozdíl mezi nenasycenými deriváty polysacharidů připravenými podle vynálezu a nasycenými (nemodifikovanými) analogy. Proto lze deriváty podle vynálezu použít například pro přípravu materiálů s antioxidačním účinkem.
Dále bylo zjištěno, že pokud je polysacharidem kyselina hyaluronová, lze nenasycený derivát použít pro přípravu materiálů s antirakovinovým účinkem. Biologické vlastnosti připravených derivátů byly testovány na několika liniích rakovinových buněk, kde byla ve všech případech pozorována snížená viabilita, přičemž růst standardních fibroblastů nebyl potlačen v celém rozsahu testovaných koncentrací.
Termín polysacharid znamená polysacharid obsahující strukturní jednotku Y, jako například kyselinu hyaluronovou, karagenan, dermatan sulfát, keratan sulfát nebo chondroitin sulfát nebo jejich farmaceuticky přijatelnou sůl.
-6CZ 308106 B6
Termín farmaceuticky přijatelná sůl znamená soli, jež jsou bezpečné a účinné pro in vivo použití a mají požadovanou biologickou aktivitu. Farmaceuticky přijatelné soli zahrnují s výhodou ionty alkalických kovů nebo iontů kovů alkalických zemin, výhodněji Na+, K+, Mg+ nebo Li+.
Realizace řešení popsaného v tomto vynálezu není technologicky komplikovaná a nevyžaduje použití drahých chemikálií, rozpouštědel nebo izolačních postupů.
Objasnění výkresů
Obr. 1 - vliv ΔΗΑ připraveného podle Příkladu 25 na viabilitu buněk
Graf zobrazuje průběh inhibice růstu karcinogenních buněk MDA-MB-231 - prsní adenokarcinom, A-549 - plicní adenokarcinom, HEP-G2 - hepatocelulámí karcinom v porovnání s inhibicí NHDF - primárních lidských kožních fibroblastů
Postup je popsán v příkladu 27.
Obr. 2 - antioxidační vlastnosti materiálů AHA a ACS v porovnání s nemodifikovanými polysacharidy HA, CS a standardem Trolox - 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2karboxylová kyselina
HA - kyselina hyaluronová
AHA - kyselina hyaluronová dehydratovaná v poloze 4 a 5 (Příklad 22)
CS - chondroitin sulfát
ACS - chondroitin sulfát dehydratovaný v poloze 4 a 5 (Přiklad 2) testováno pomocí 2,2-difenyl-l-pikrylhydrazylu (DTTH) postupem popsaným v příkladu 23
T-test statistické významnosti - * p<0,05; ** p<0,01; *** p<0,001
Příklady uskutečnění vynalezu
DS = stupeň substituce = 100 % * (molámí množství modifikované jednotky polysacharidů) / (molámí množství opakujících se jednotek polysacharidů)
Zde používaný výraz ekvivalent (ekv) se vztahuje na opakující se jednotku příslušného polysacharidů, není-li uvedeno jinak. Procenta se uvádějí jako hmotnostní procenta, pokud není uvedeno jinak.
Molekulová hmotnost výchozích polysacharidů je hmotnostně střední stanovená pomocí metody SECMALLS.
Příklad 1
Oxidace a eliminace chondroitin sulfátu (CS) = Příprava α,β-nenasyceného aldehydu CS
Do dvouprocentního vodného roztoku CS (200 mg, Mw = 4.104 g.mol-1) vychlazeného na 5 °C s obsahem hydrogenfosfátu sodného dodekahydrátu (2,2 ekv), bromidu sodného (0,8 ekv) a 4AcNH-TEMPO (0,01 ekv.) se postupně přidával vodný roztok chlornanu sodného (0,8 ekv, 11%
-7CZ 308106 B6 aktivního chloru). Směs se míchala 2 h při teplotě 5 °C. Následně byl k reakci přidán etanol (10 ekv) a reakce byla míchána další hodinu při laboratorní teplotě. Produkt byl izolován srážením s IPA a analyzován pomocí NMR.
DS = 23 % (stanoveno z NMR)
Příklad 2
Redukce α,β-nenasyceného aldehydu CS = Příprava ACS
Byl připraven 2% w/v roztok α,β-nenasyceného aldehydu CS (200 mg, 0,5 mmol) v destilované vodě, roztok byl vychlazen na 5 °C a následně byly k němu přidány 2 ekvivalenty borohydridu sodného. Reakční směs byla míchána 4 h při 5 °C. Produkt byl izolován srážením s izopropanolem a analyzován pomocí NMR,
DS = 25 % (stanoveno z NMR), Mw = 2.104 g.mol-1 (stanoveno SECMALLS)
Spektrální analýza ACS: NMR 'H (500 MHz, D2O, δ ppm): 2,02 a 2,04 (3H; Ac-NH-; bs); 4,03 (2H; H6; bs); 4,22 (1H; H2; bs); 4,26 (1H; H3; bs); 5,06 (1H; Hl; bs); 5,18 (1H; H4; bs); NMR ’H-’H COSY (D2O); krospíky; δ ppm: 4,22-5,06; 4,26-5,18; NMR ’H-13C HSQC (D2O); krospíky; δ ppm: 4,03-61,0; 4,22-50,5; 4,26-73,4; 5,06-98,3; 5,18-98,9; NMR DOSY (D2O); log D ((2,02 and 2,04; Ac-NH-); (4,03; H6); (4,22; H2); (4,26; H3); (5,06; H4); (5,18; Hl)) ~ 10,4 m2s_1; log D (4,72; H2O) ~ -8;6 mV1; IR (KBr; cm1): 1660 (v -C=C- st);
Příklad 3
Oxidace a eliminace dermatan sulfátu (DeS) = Příprava α,β-nenasyceného aldehydu DeS
Do dvouprocentního vodného roztoku DeS (200 mg, 0,42 mmol) vychlazeného na 5 °C s obsahem hydrogenfosforečnanu sodného dodekahydrátu (2,2 ekv), bromidu sodného (0,8 ekv) a 4-AcNH-TEMPO (0,01 ekv) se postupně přidával vodný roztok chlornanu sodného (0,8 ekv, 11% aktivního chloru), směs se míchala 2 h při teplotě 5 °C. Následně byl k reakci přidán etanol (10 ekv) a reakce byla míchána další hodinu při laboratorní teplotě. Produkt byl izolován srážením s IPA a analyzován pomocí NMR.
DS = 20 % (stanoveno z NMR)
Příklad 4
Redukce α,β-nenasyceného aldehydu dermatan sulfátu = Příprava ADeS
Byl připraven 2% w/v roztok α,β-nenasyceného aldehydu DeS (200 mg, 0,5 mmol) v destilované vodě. Roztok byl vychlazen na 5 °C a následně byl k němu přidán borohydrid sodný (2 ekvivalenty na disacharid DeS). Reakční směs byla míchána 4 h při 5 °C. Produkt byl izolován srážením s izopropanolem a analyzován pomocí NMR.
DS = 23 % (stanoveno z NMR)
Spektrální analýza ADeS: NMR 'H (500 MHz, D2O, δ ppm): 2,01 (3H, Ac-ΝΗ-, bs), 5,05 (1H, Hl,bs), 5,17 (1H, Hl,bs).
-8CZ 308106 B6
Příklad 5
Oxidace a eliminace karagenanu (KA) = Příprava α,β-nenasyceného aldehydu KA
Do jednoprocentního vodného roztoku KA (200 mg, 0,31 mmol) vychlazeného na 10 °G s obsahem hydrogenfosforečnanu sodného dodekahydrátu (2,2 ekv), bromidu sodného (0,8 ekv) a 4-AcNH-TEMPO (0,01 ekv) se postupně přidával vodný roztok chlornanu sodného (0,8 ekv, 11% aktivního chloru). Směs se míchala 2 h při teplotě 10 °C. Následně byl k reakci přidán etanol (10 ekv) a reakce byla míchána další hodinu při laboratorní teplotě. Produkt byl izolován srážením s IPA a analyzován pomocí NMR.
DS = 10 % (stanoveno z NMR)
Příklad 6
Redukce α,β-nenasyceného aldehydu karagenanu = Příprava ΔΚΑ
Byl připraven 2% w/v roztok α,β-nenasyceného aldehydu KA (200 mg, 0,5 mmol) v destilované vodě. Roztok byl vychlazen na 5 °C a následně byl k němu přidán borohydrid sodný (2 ekvivalenty na disacharid KA). Reakční směs byla míchána 4 h při 5 °C. Produkt byl izolován srážením s izopropanolem a analyzován pomocí NMR.
DS = 13 % (stanoveno z NMR)
NMR Ή (500 MHz, D2O, δ ppm): 5,07 (IH, Hl, bs), 5,18 (IH, Hl, bs),
Příklad 7
Oxidace keratan sulfátu (KS) = Příprava KS-aldehydu
Do jednoprocentního vodného roztoku KS (1 g, 2.104 g.mol-1) s obsahem NaCl 1%, KBr 1%), TEMPO (0,01 ekv) a NaHCO; (20 ekv), se postupně přidával vodný roztok NaClO (0,3 ekv) pod dusíkem. Směs se míchala 24 h při teplotě 0 °C, pak se přidal 0,1 g tiosulfátu sodného a směs byla míchaná ještě 10 minut. Výsledný roztok pak byl zředěn destilovanou vodou na 0,2% a dialyzován oproti směsi (0,1% NaCl, 0,1% NaHCO3) třikrát 5 litrů (1 x denně) a oproti destilované vodě sedmkrát 5 litrů (2 x denně). Výsledný roztok byl pak odpařen a analyzován.
DS 3 % (stanoveno z NMR)
Příklad 8
Eliminace KS-aldehydu = Příprava α,β-nenasyceného aldehydu KS
Do tříprocentního roztoku KS-aldehydu (0,1 g, stupeň oxidace DS=3 %, příklad 7) ve vodě se přidalo 6,7 ml DMSO a báze DIPEA (5 ekv). Směs se míchala 72 h při teplotě 60 °C. Výsledný roztok byl pak srážen směsí isopropanol/hexan a tuhý podíl sušen ve vakuu.
DS 2 % (stanoveno z NMR),
Ή NMR (D2O) δ 9,22 ( s, IH, CH=G), 6,32 (m, IH, -CW=C-CH=O)
Příklad 9
Redukce α,β-nenasyceného aldehydu KS = Příprava AKS
-9CZ 308106 B6
Do 2% roztoku α,β-nenasyceného aldehydu KS (200 mg, Příklad 8) v destilované vodě, byl přidán borohydrid sodný (2 ekv) při 5 °C. Reakční směs byla míchána 3 h při 5 °C pak srážena s izopropanolem a analyzována pomocí NMR.
DS = 2 % (stanoveno z NMR)
Ή NMR (D2O) 5,05 (1H, Hl, bs), 5,17 (1H, H4, bs)
Příklad 10
Oxidace kyseliny hyaluronové (HA) = Příprava HA-aldehydu
Do jednoprocentního vodného roztoku HA (1 g, 2.105 g.mol-1), s obsahem NaCl 1%, KBr 1%), TEMPO (0,01 ekv.) a NaHCOs (20 ekv), se postupně přidával vodný roztok NaClO (0,5 ekv) pod dusíkem. Směs se míchala 12 h při teplotě 0 °C, pak se přidal 0,5 ml etanolu a směs byla míchaná ještě 1 hodinu. Výsledný roztok pak byl zředěn destilovanou vodou na 0,2% a dialyzován oproti směsi (0,1 % NaCl, 0,1% NaHCOs) třikrát 5 litrů (1 x denně) a oproti destilované vodě sedmkrát 5 litrů (2 x denně). Výsledný roztok byl pak odpařen a analyzován.
DS 10 % (stanoveno z NMR)
Příklad 11
Oxidace HA = Příprava HA-aldehydu
Do jednoprocentního vodného roztoku HA (1 g, 2.105 g.mol-1), s obsahem NaCl 1%, KBr 1%), N-acetylamino-TEMPO (0,01 ekv) a NaHCOs (20 ekv), se postupně přidával vodný roztok NaClO (0, ekv) pod dusíkem. Směs se míchala 12 h při teplotě 10 °C, pak se přidal 0,1 ml etanolu a směs byla míchaná ještě 1 hodinu. Výsledný roztok pak byl zředěn destilovanou vodou na 0,2% a dialyzován oproti směsi (0,1% NaCl, 0,1% NaHCCh) třikrát 5 litrů (1 x denně) a oproti destilované vodě sedmkrát 5 litrů (2 x denně). Výsledný roztok byl pak odpařen a analyzován.
DS 9 % (stanoveno z NMR)
Příklad 12
Oxidace HA = Příprava HA-aldehydu
Do jednoprocentního vodného roztoku HA (1 g, 2.105 g.mol-1), s obsahem NaCl 1%, KBr 1%), TEMPO (0,2 ekv) a NaHCOs (10 ekv), se postupně přidával vodný roztok NaClO (0,3 ekv) pod dusíkem. Směs se míchala 48 h při teplotě 5 °C, pak se přidal 0,1 ml etanolu a směs byla míchaná ještě 1 hodinu. Výsledný roztok pak byl zředěn destilovanou vodou na 0,2% a dialyzován oproti směsi (0,1% NaCl, 0,1 % NaHCOs) třikrát 5 litrů (1 x denně) a oproti destilované vodě sedmkrát 5 litrů (2 x denně). Výsledný roztok byl pak odpařen a analyzován.
DS 5 % (stanoveno z NMR)
Příklad 13
Oxidace kyseliny hyaluronová (HA) = Příprava HA-aldehydu
Do jednoprocentního vodného roztoku hyaluronanu (1 g, 2.105 g.mol-1), s obsahem NaCl 1%, KBr 1%), TEMPO (0,01 ekv) a NaHCOs (20 ekv), se postupně přidával vodný roztok NaClO (0,7 ekv) pod dusíkem. Směs se míchala 0,5 h při teplotě 0 °C, pak se přidal 0,1 ml etanolu a směs byla míchaná ještě 1 hodinu. Výsledný roztok pak byl zředěn destilovanou vodou na 0,2% a
- 10CZ 308106 B6 dialyzován oproti směsi (0,1% NaCl, 0,1% NaHCCh) třikrát 5 litrů (Ix denně) a oproti destilované vodě sedmkrát 5 litrů (2 x denně). Výsledný roztok byl pak odpařen a analyzován.
DS 9 % (stanoveno z NMR)
Příklad 14
Oxidace kyseliny hyaluronová (HA) = Příprava HA-aldehydu
Do jednoprocentního vodného roztoku HA (1 g, 2.105 g.mol-1), s obsahem NaCl 1%, KBr 1%), TEMPO (0,01 ekv) a NaHCO; (20 ekv), se postupně přidával vodný roztok NaClO (0,5 ekv) pod dusíkem. Směs se míchala 12 h při teplotě 0 °C, pak se přidal 0,1 ml etanolu a směs byla míchaná ještě 1 hodinu. Výsledný roztok pak byl zředěn destilovanou vodou na 0,2% a dialyzován oproti směsi (0,1% NaCl, 0,1% NaHCOs) třikrát 5 litrů (1 x denně) a oproti destilované vodě sedmkrát 5 litrů (2 x denně). Výsledný roztok byl pak odpařen a analyzován.
DS 10 % (stanoveno z NMR)
Příklad 15
Oxidace kyseliny hyaluronová (HA) = Příprava HA-aldehydu
Do jednoprocentního roztoku kyselé formy hyaluronanu (1 g, 1.105 g.mol-1), v bezvodém DMSO, se pňdal 1,2 ekvivalentu l,l,l-triacetoxy-l,l-dihydro-l,2-benziodoxol-3(lH)-onu (Dess-Martin Periodinan) a směs se míchala 5 h při teplotě 20 °C. Výsledný roztok pak byl zředěn destilovanou vodou na 0,2% a dialyzován oproti směsi (0,1 % NaCl, 0,1% NaHCO3) třikrát 5 litrů (1 x denně) a oproti destilované vodě sedmkrát 5 litrů (2 x denně). Výsledný roztok byl pak odpařen a analyzován.
DS 40 % (stanoveno z NMR)
Příklad 16
Eliminace HA-aldehydu = Příprava α,β-nenasyceného aldehydu HA
Do tříprocentního roztoku HA-aldehydu (0,1 g, stupeň oxidace DS=40 %, příklad 15) ve vodě se přidalo 6,7 ml DMSO a báze DIPEA (5 ekv). Směs se míchala 72 h při teplotě 60 °C. Výsledný roztok byl pak srážen směsí isopropanol/hexan a tuhý podíl sušen ve vakuu.
DS 20 % (stanoveno z NMR),
Ή NMR (D2O) δ 9,24 (s, 1H, CH=O, 6,32 (m, 1H, -CH=C-CH=O)
UV-Vis (D2O) 252 nm, π-π* přechod α,β-nenasycený aldehyd
Příklad 17
Eliminace HA-aldehydu = Příprava α,β-nenasyceného aldehydu HA
Do tříprocentního roztoku HA-aldehydu (0,1 g, stupeň oxidace DS=10%, příklad 10) ve vodě se přidalo 6,7 ml DMSO a báze triethylaminu (20 ekv). Směs se míchala 150 h při teplotě 30 °C. Výsledný roztok byl pak srážen směsí isopropanol/hexan a tuhý podíl sušen ve vakuu.
DS 5 % (stanoveno z NMR)
- 11 CZ 308106 B6
Příklad 18
Eliminace HA-aldehydu = Příprava α,β-nenasyceného aldehydu HA
Do tříprocentního roztoku HA-aldehydu (0,1 g, stupeň oxidace DS=10 %, příklad 10) ve vodě se přidalo 6,7 ml DMSO a báze pyridinu (0,01 ekv). Směs se míchala 12 h při teplotě 80 °C. Výsledný roztok byl pak srážen směsí isopropanol/hexan a tuhý podíl sušen ve vakuu.
DS 3 % (stanoveno z NMR),
Příklad 19
Eliminace HA-aldehydu = Příprava α,β-nenasyceného aldehydu HA
Do tříprocentního roztoku HA-aldehydu (0,1 g, stupeň oxidace DS=10 %, příklad 10) ve vodě se přidalo 1,7 ml DMSO a báze pyridin (10 ekv). Směs se míchala 48 h při teplotě 60 °C. Výsledný roztok byl pak srážen směsí isopropanol/hexan a tuhý podíl sušen ve vakuu.
DS 4 % (stanoveno z NMR),
Příklad 20
Eliminace HA-aldehydu = Příprava α,β-nenasyceného aldehydu HA
Do tříprocentního roztoku HA-aldehydu (0,1 g, stupeň oxidace DS=10 %, příklad 10) ve vodě se přidalo 10 ml DMSO a báze DIPEA (5 ekv). Směs se míchala 48 h při teplotě 60 °C. Výsledný roztok byl pak srážen směsí isopropanol/hexan a tuhý podíl sušen ve vakuu.
DS 5 % (stanoveno z NMR),
Příklad 21
Eliminace HA-aldehydu = Příprava α,β-nenasyceného aldehydu HA
Do tříprocentního roztoku HA-aldehydu (0,1 g, stupeň oxidace DS=10 %, příklad 10) ve vodě se přidalo 6,7 ml sulfolanu a báze DIPEA (5 ekv). Směs se míchala 72 h při teplotě 50 °C. Výsledný roztok byl pak srážen směsí isopropanol/hexan a tuhý podíl sušen ve vakuu.
DS 5 % (stanoveno z NMR),
Příklad 22
Redukce α,β-nenasyceného aldehydu HA = Příprava ΔΗΑ
Do 2% roztoku α,β-nenasyceného aldehydu HA (200 mg, Příklad 16) v destilované vodě, byl přidán borohydrid sodný (10 ekv) při 5 °C. Reakční směs byla míchána 1 h při 5 °C, pak srážena s izopropanolem a analyzována pomocí NMR.
DS = 20 % (stanoveno z NMR)
Ή NMR (D2O) 5,06 (1H, Hl, bs), 5,17 (1H, Hl, bs)
- 12 CZ 308106 B6
Příklad 23
Redukce α,β-nenasyceného aldehydu HA = Příprava AHA
Do 2% roztoku α,β-nenasyceného aldehydu HA (200 mg, Příklad 17) v destilované vodě, byl přidán borohydrid sodný (0,1 ekv) při 5 °C. Reakční směs byla míchána 20 h při 5 °C, pak srážena s izopropanolem a analyzována pomocí NMR,
DS = 4 % (stanoveno z NMR)
Příklad 24
Redukce α,β-nenasyceného aldehydu HA = Příprava AHA
Do 2% roztoku α,β-nenasyceného aldehydu HA (200 mg, Příklad 17) v destilované vodě, byl přidán borohydrid sodný (1 ekv) při 40 °C. Reakční směs byla míchána 1 h při 40 °C, pak srážena s izopropanolem a analyzována pomocí NMR,
DS = 5 % (stanoveno z NMR)
Příklad 25
Redukce α,β-nenasyceného aldehydu HA = Příprava AHA
Do 2% roztoku α,β-nenasyceného aldehydu HA (200 mg, Příklad 17) v destilované vodě, byl přidán borohydrid sodný (2 ekv) při 20 °C. Reakční směs byla míchána 4 h při 20 °C, pak srážena s izopropanolem a analyzována pomocí NMR,
DS = 5 % (stanoveno z NMR)
Příklad 26
Stanovení antioxidační aktivity (obrázek 2).
Antioxidační aktivita polysacharidů AHA připraveného podle příkladu 22 a ACS připraveného podle příkladu 2, byla stanovená pomocí stabilního volného radikálu 2,2-difenyl-lpikrylhydrazylu (DPPH). Toto stanovení bylo uskutečněno podle literatury (Brand-Williams W. a kol, LWT - Food Science and Technology, 28, 1, 25-30, 1995) s malou modifikací. Stručně, 100 pl 0,01% roztoku DPPH v metanolu bylo přidáno do 100 μΐ testované substance rozpuštěné v 50 mM Tris pH 7,1. Pokles absorbance byl měřen po 15 min při 515 nm. Trolox (6-Hydroxy2,5,7,8-tetramethylchroman-2-karboxylová kyselina) byl použit jako pozitivní kontrola. Data byla měřena třemi nezávislými experimenty. Pro analýzu statistické významnosti byla data vyhodnocena T-testem * p<0,05, ** p<0,01, *** p<0,001 (obrázek 2).
Příklad 27
Testování cytotoxicity derivátů připravených podle příkladu 25 (obrázek 1)
Bylo porovnáváno cytotoxické působení derivátu HA na nenádorových buňkách - primárních lidských kožních fibroblastech (NHDF) a dále na nádorových liniích prsního karcinomu (MDAMB-231), plicního karcinomu (A-549) a hepatocelulámího karcinomu (HEP-G2). Pro experimenty byly buňky kultivovány za standardních podmínek (37 °C, 5% CCE) v příslušném médiu (10% FBS - fetální bovinní sérum). Při dosažení 80% konfluence byly buňky zpasážované, spočítané pomocí automatického počítadla ČASY TT, Roche a nasazené na 96jamkové panely v hustotě 5000 buněk na jamku v 200 μΐ média. Po 24 hodinách bylo médium
- 13 CZ 308106 B6 vyměněno za roztoky testovaných látek v koncentracích 1000, 500, 100 a 10 pg/ml 10% média.
V čase 24, 48 a 72 hodin po ovlivnění byla měřena viabilita buněk pomocí MTT testu - do každé jamky bylo přidáno 20 pl roztoku MTT (5 mg/ml), následovala 2,5 hodinová inkubace, po které byly buňky lyžovány solubilizačním roztokem (IPA:DMSO 1:1 s 10% Triton X-100 a 9,9% 37% HC1) po dobu 30 minut. Následně se měřila absorbance na přístroji Microplate reader VERSAmax při vlnové délce 570 run a 690 run (korekce pozadí). Viabilita ovlivněných buněk byla při vyhodnocení vztažena k neovlivněné kontrole, která na obrázku 1 odpovídá nulové hodnotě. Hodnoty vyšší, než nula značí aktivaci buněk (žádný cytotoxický efekt derivátů) a naopak hodnoty nižší, než nula ukazují na sníženou viabilitu buněk - tedy cytotoxický efekt derivátů. V případě NHDF je z obrázku č. 1 zřejmé, že testovaný derivát nepůsobil cytotoxický.
V případě nádorových linií (MDA-MB-231, A-549, HEP-G2) byl zaznamenán cytotoxický efekt derivátů. Na základě výsledků uvedených testů lze vyvodit potenciální protinádorový účinek derivátu (Obrázek 1).
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (14)

1. Nenasycené deriváty polysacharidů obsahující ve struktuře minimálně jeden heterocyklus s dvojnou vazbou v polohách 4 a 5 podle strukturního vzorce X, .OH (X), kde R je skupina -NH-CO-CH3 nebo -OH a kde póly sacharidy jsou vybrány ze skupiny sestávající z chondroitin sulfátu, karagenanu, dermatan sulfátu, kyseliny hyaluronové nebo keratan sulfátu.
2. Deriváty polysacharidů podle nároku 1, kde molekulová hmotnost derivátů je v rozmezí 5.103 až 5.104 5 g.mol-1.
3. Způsob přípravy derivátů polysacharidů definovaných v nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se výchozí polysacharid obsahující fragment Y
(Y) kde R je skupina -NH-CO-CH3 nebo -OH, a R1 je skupina -SO2-ONa, -SO2-OH nebo -H, v prvém kroku oxiduje na aldehyd v poloze 6, v druhém kroku se eliminuje v polohách 4 a 5 cyklu za vzniku dvojné vazby a ve třetím kroku se selektivně redukuje aldehydická skupina -CHO v poloze 6 na skupinu -CH2OH při současném zachování dvojné vazby v polohách 4 a 5 cyklu.
4. Způsob přípravy podle nároku 3, vyznačující se tím, že výchozím polysacharidem je chondroitin sulfát, karagenan, dermatan sulfát, kyselina hyaluronová nebo keratan sulfát.
- 14CZ 308106 B6
5. Způsob přípravy podle nároku 3 nebo 4, vyznačující se tím, že oxidace v pozici C-6 v prvém kroku probíhá buď pomocí systému 2,2,6,6-tetramethyl-l-piperidinyloxyl radikálu neboli TEMPO-radikálu, nebo R3-TEMP0/NaC10, kde R3 je vodík nebo skupina N-acetyl, ve vodě při teplotě 0 až 10 °C, kde molámí množství NaClO je v rozmezí 0,3 až 0,8 ekv. a molámí množství R3-TEMPO je v rozmezí 0,005 až 0,2 ekv. vzhledem k opakující se jednotce polysacharidů, nebo pomocí l,l,l-triacetoxy-l,l-dihydro-l,2-benziodoxol-3(lH)-onu (DMP) při teplotě 10 až 50 °C v DMSO, kde množství DMP je v rozmezí 0,05 až 2 ekv. vzhledem k opakující se jednotce polysacharidů.
6. Způsob přípravy podle kteréhokoliv z nároků 3 až 5, vyznačující se tím, že výchozím póly sacharidem je kyselina hyaluronová nebo keratan sulfát a že oxidovaný póly sacharid ve druhém kroku podléhá eliminaění reakci ve směsi voda/polámí aprotické rozpouštědlo v přítomnosti báze při teplotě 30 až 80 °C, s výhodou při teplotě 50 až 60 °C.
7. Způsob přípravy podle nároku 6, vyznačující se tím, že množství báze je 0,01 až 20 ekvivalentů, s výhodou 5 až 10 ekvivalentů vzhledem k opakující se jednotce polysacharidů, přičemž báze je vybrána ze skupiny zahrnující organické báze, s výhodou pyridin, triethylamin nebo N-diisopropylethylamin, nebo anorganické báze, s výhodou Ca(OH)2.
8. Způsob přípravy podle nároku 6 nebo 7, vyznačující se tím, že aprotické rozpouštědlo je mísitelné s vodou a zahrnuje s výhodou DMSO nebo sulfolan, a objemový poměr rozpouštědlo/voda je v rozsahu 3/1 až 1/2.
9. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků 6 až 8, vyznačující se tím, že druhý krok reakce probíhá po dobu 12 až 150 hodin.
10. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků 3 až 5, vyznačující se tím, že výchozím polysacharidem je chondroitin sulfát, karagenan nebo dermatan sulfát a že se oxidovaný polysacharid ve druhém kroku spontánně eliminuje přímo v reakční směsi za vzniku α,βnenasyceného aldehydu a spontánní eliminace probíhá při stejných podmínkách, při kterých proběhl první krok oxidace.
11. Způsob přípravy podle kteréhokoliv z nároků 3 až 10, vyznačující se tím, že výchozí polysacharid má molekulovou hmotnost v rozsahu 5.103 až 5.105 g-mol“1.
12. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků 3 až 11, vyznačující se tím, že ve třetím kroku se přidá borohydrid sodný v množství 0,1 až 10 ekvivalentů, s výhodou 0,3 až 2 ekvivalentů přepočteno na opakující se jednotku polysacharidů, ve vodě při teplotě 5 až 40 °C, s výhodou při teplotě 15 až 25 °C, při pH v rozmezí 5 až 10, s výhodou 6 až 8.
13. Použití derivátů definovaných v nároku 1 nebo 2 pro přípravu prostředku se zvýšeným antioxidačním účinkem.
14. Použití derivátů definovaných v nároku 2, kde polysacharidem je kyselina hyaluronová, pro přípravu prostředku s antirakovinovým účinkem.
CZ2016-375A 2016-06-27 2016-06-27 Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití CZ308106B6 (cs)

Priority Applications (12)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2016-375A CZ308106B6 (cs) 2016-06-27 2016-06-27 Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití
BR112018075531-1A BR112018075531B1 (pt) 2016-06-27 2017-06-26 Derivados de polissacarídeos insaturados, método de preparação dos derivados de polissacarídeos e uso dos mesmos
PL17746370T PL3475310T3 (pl) 2016-06-27 2017-06-26 Nienasycone pochodne polisacharydów, sposób ich przygotowania i zastosowanie
EP17746370.0A EP3475310B1 (en) 2016-06-27 2017-06-26 Unsaturated derivatives of polysaccharides, method of preparation thereof and use thereof
RU2018147560A RU2725500C1 (ru) 2016-06-27 2017-06-26 Ненасыщенные производные полисахаридов, способ их получения и их применения
KR1020197002226A KR102327939B1 (ko) 2016-06-27 2017-06-26 다당류의 불포화 유도체, 그 제조 방법 및 용도
HUE17746370A HUE049730T2 (hu) 2016-06-27 2017-06-26 Poliszacharidok telítetlen származékai, azok elõállítási eljárása és azok alkalmazása
DK17746370.0T DK3475310T3 (da) 2016-06-27 2017-06-26 Umættede derivater af polysaccharider, fremgangsmåder til fremstilling deraf og anvendelse deraf
ES17746370T ES2790837T3 (es) 2016-06-27 2017-06-26 Derivados insaturados de polisacáridos, método de preparación y uso de los mismos
JP2018566522A JP6982321B2 (ja) 2016-06-27 2017-06-26 多糖類の不飽和誘導体，その調製方法及びその使用
US16/311,745 US10618984B2 (en) 2016-06-27 2017-06-26 Unsaturated derivatives of polysaccharides, method of preparation thereof and use thereof
PCT/CZ2017/050026 WO2018001394A1 (en) 2016-06-27 2017-06-26 Unsaturated derivatives of polysaccharides, method of preparation thereof and use thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2016-375A CZ308106B6 (cs) 2016-06-27 2016-06-27 Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2016375A3 CZ2016375A3 (cs) 2018-01-03
CZ308106B6 true CZ308106B6 (cs) 2020-01-08

Family

ID=59506028

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2016-375A CZ308106B6 (cs) 2016-06-27 2016-06-27 Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití

Country Status (12)

Country Link
US (1) US10618984B2 (cs)
EP (1) EP3475310B1 (cs)
JP (1) JP6982321B2 (cs)
KR (1) KR102327939B1 (cs)
BR (1) BR112018075531B1 (cs)
CZ (1) CZ308106B6 (cs)
DK (1) DK3475310T3 (cs)
ES (1) ES2790837T3 (cs)
HU (1) HUE049730T2 (cs)
PL (1) PL3475310T3 (cs)
RU (1) RU2725500C1 (cs)
WO (1) WO2018001394A1 (cs)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11286231B2 (en) * 2016-10-26 2022-03-29 Wake Forest University Health Sciences Hydrogen-bonding compounds, compositions comprising the same, and methods of preparing and using the same
US11629329B2 (en) 2017-10-11 2023-04-18 Wake Forest University Health Sciences Bioink compositions and methods of preparing and using the same
CN116003639B (zh) * 2023-01-31 2024-02-09 新疆农业大学 一种纤维素醛及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011069474A2 (en) * 2009-12-11 2011-06-16 Contipro C A.S. Oxidized derivative of hyaluronic acid, a method of preparation thereof and a method of modification thereof
WO2014023272A1 (en) * 2012-08-08 2014-02-13 Contipro Biotech S.R.O. Hyaluronic acid derivative, method of preparation thereof, method of modification thereof and use thereof

Family Cites Families (192)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3075527A (en) 1960-06-02 1963-01-29 Chemway Corp Sterile medicated strips
US3720662A (en) 1971-09-13 1973-03-13 Nat Starch Chem Corp Preparation of starch esters
US3728223A (en) 1971-10-08 1973-04-17 Amano Pharma Co Ltd Production of hyaluronidase from a strain of streptomyces
GB1527592A (en) 1974-08-05 1978-10-04 Ici Ltd Wound dressing
CH628088A5 (en) 1975-09-17 1982-02-15 Dresden Arzneimittel Process for obtaining streptococcal metabolic products
US4205025A (en) 1975-12-22 1980-05-27 Champion International Corporation Synthetic polymeric fibrids, fibrid products and process for their production
JPS6033474B2 (ja) 1978-05-11 1985-08-02 藤沢薬品工業株式会社 新規なヒアルロニダ−ゼｂｍｐ−８２３１およびその製造法
US4716224A (en) 1984-05-04 1987-12-29 Seikagaku Kogyo Co. Ltd. Crosslinked hyaluronic acid and its use
US4713448A (en) 1985-03-12 1987-12-15 Biomatrix, Inc. Chemically modified hyaluronic acid preparation and method of recovery thereof from animal tissues
US4851521A (en) 1985-07-08 1989-07-25 Fidia, S.P.A. Esters of hyaluronic acid
GB8519416D0 (en) 1985-08-01 1985-09-04 Unilever Plc Oligosaccharides
JPS62104579A (ja) 1985-10-30 1987-05-15 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd ヒアルロニダ−ゼの製造法
JPH0751064B2 (ja) 1986-08-13 1995-06-05 生化学工業株式会社 新規なヒアルロニダ−ゼｓｄ−６７８およびその製造法
IT1219587B (it) 1988-05-13 1990-05-18 Fidia Farmaceutici Polisaccaridi carbossiilici autoreticolati
JPH0214019A (ja) 1988-06-30 1990-01-18 Tonen Corp 繊維状成形物及びその製造方法
JPH0755961B2 (ja) 1989-04-18 1995-06-14 工業技術院長 新規なヒアルロン酸誘導体及びその製造方法
US5522879A (en) 1991-11-12 1996-06-04 Ethicon, Inc. Piezoelectric biomedical device
US5824335A (en) 1991-12-18 1998-10-20 Dorigatti; Franco Non-woven fabric material comprising auto-crosslinked hyaluronic acid derivatives
IT1254704B (it) 1991-12-18 1995-10-09 Mini Ricerca Scient Tecnolog Tessuto non tessuto essenzialmente costituito da derivati dell'acido ialuronico
JP2855307B2 (ja) 1992-02-05 1999-02-10 生化学工業株式会社 光反応性グリコサミノグリカン、架橋グリコサミノグリカン及びそれらの製造方法
FR2689131B1 (fr) 1992-03-30 1994-05-20 Oreal Procede de preparation de monoesters majoritairement en position 6' du d-maltose et leur utilisation dans les domaines cosmetique, bucco-dentaire, pharmaceutique et alimentaire.
JPH0625306A (ja) 1992-04-21 1994-02-01 Shiseido Co Ltd 溶媒不溶化ヒアルロン酸及びその製造方法
IT1263316B (it) 1993-02-12 1996-08-05 Fidia Advanced Biopolymers Srl Tessuto non tessuto multistrato in cui uno degli strati e' costituito essenzialmente da esteri dell'acido ialuronico
NL9700003A (nl) 1993-09-28 1997-07-01 House Foods Corp Werkwijze voor het inoculeren van Fistulina hepatica.
US5616568A (en) 1993-11-30 1997-04-01 The Research Foundation Of State University Of New York Functionalized derivatives of hyaluronic acid
AU697739B2 (en) 1994-03-14 1998-10-15 Seikagaku Corporation Material to be worn on the eyeball
US5455349A (en) 1994-05-13 1995-10-03 Polaroid Corporation Vinylbenzyl thymine monomers
DK0783325T3 (da) 1994-09-27 2000-05-01 Nycomed Imaging As Kontrastmiddel
JP3308742B2 (ja) 1994-11-17 2002-07-29 生化学工業株式会社 光架橋性ヒアルロン酸誘導体とその架橋体およびそれらの製造方法
US6025444A (en) 1994-11-17 2000-02-15 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) Cinnamic acid derivative
US5690961A (en) 1994-12-22 1997-11-25 Hercules Incorporated Acidic polysaccharides crosslinked with polycarboxylic acids and their uses
ATE220691T1 (de) 1995-03-07 2002-08-15 Novartis Erfind Verwalt Gmbh Fotochemisch vernetzte polysaccharidderivate zur chromatographischen trennung von enantiomeren
IT1281877B1 (it) 1995-05-10 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Sali di metalli pesanti di succinil derivati dell'acido ialuronico e loro impiego come potenziali agenti terapeutici
IT1281886B1 (it) 1995-05-22 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Processo per la preparazione di idrogel ottenuti da derivati chimici dell'acido ialuronico mediante irradiazioni ultraviolette e loro
IL123500A (en) 1995-08-29 2003-06-24 Fidia Advanced Biopolymers Srl Composite biomaterials for preventing post-surgical adhesions of tissues
US5789462A (en) 1995-09-13 1998-08-04 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) Photocured crosslinked-hyaluronic acid contact lens
DE19604706A1 (de) 1996-02-09 1997-08-14 Merck Patent Gmbh Vernetzungsprodukte von Aminogruppen-haltigen Biopolymeren
DE19616010C2 (de) 1996-04-23 1998-07-09 Seitz Filter Werke Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung von Fibrets (Fibriden) aus Zellulosederivaten
IT1287698B1 (it) 1996-08-29 1998-08-18 Fidia Advanced Biopolymers Srl Fili da sutura essenzialmente costituiti da derivati esterei dello acido ialuronico
US6632802B2 (en) 1996-08-29 2003-10-14 Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. Hyaluronic acid esters, threads and biomaterials containing them, and their use in surgery
US6162537A (en) 1996-11-12 2000-12-19 Solutia Inc. Implantable fibers and medical articles
JP4247846B2 (ja) 1997-07-03 2009-04-02 デュピュイ・スパイン・インコーポレーテッド 架橋ポリサッカリド薬物キャリア
ITPD980037A1 (it) 1998-02-25 1999-08-25 Fidia Advanced Biopolymers Srl Acido ialuronico solfatato e i suoi derivati legati covalentemente a polimeri sintetici pe la preparazione di biomateriali e per il rivesti
AU758575C (en) 1998-04-30 2003-11-20 Maruha Corporation Compounds having glucuronic acid derivative and glucosamine derivative in structure thereof, method for producing the compounds, and uses of the compounds
HUP0101777A3 (en) 1998-05-07 2003-04-28 Tno Process for selective oxidation of primary alcohols
US6630457B1 (en) 1998-09-18 2003-10-07 Orthogene Llc Functionalized derivatives of hyaluronic acid, formation of hydrogels in situ using same, and methods for making and using same
US6472541B2 (en) 1998-11-20 2002-10-29 The Regents Of The University Of California Protecting groups with increased photosensitivities
IT1302534B1 (it) 1998-12-21 2000-09-05 Fidia Advanced Biopolymers Srl Composizioni iniettabili, biocompatibili e biodegradabili comprendentialmeno un derivato dell'acido ialuronico, cellule condrogeniche, per
ES2203230T3 (es) 1998-12-23 2004-04-01 Esparma Gmbh Hialuronatoliasa como promotor de penetracion en agentes topicos.
DE19917614C2 (de) 1999-04-19 2001-07-05 Thueringisches Inst Textil Verfahren zur Herstellung von cellulosischen Formkörpern mit hohem Adsorptionsvermögen
US6288043B1 (en) 1999-06-18 2001-09-11 Orquest, Inc. Injectable hyaluronate-sulfated polysaccharide conjugates
US7033603B2 (en) 1999-08-06 2006-04-25 Board Of Regents The University Of Texas Drug releasing biodegradable fiber for delivery of therapeutics
US6592794B1 (en) 1999-09-28 2003-07-15 Organogenesis Inc. Process of making bioengineered collagen fibrils
FR2800074B1 (fr) * 1999-10-22 2001-12-21 Aventis Pharma Sa Nouveaux oligosaccharides, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant
WO2001034657A1 (en) 1999-11-08 2001-05-17 Sca Hygiene Products Zeist B.V. Process of oxidising primary alcohols
US6180087B1 (en) 2000-01-18 2001-01-30 Mallinckrodt Inc. Tunable indocyanine dyes for biomedical applications
DE10003397A1 (de) 2000-01-27 2001-08-09 Hartmann Paul Ag Polyelektrolyt-Feststoffsystem, Verfahren zur Herstellung desselben sowie Wundverband
DE10009996B4 (de) 2000-03-02 2005-10-13 Cognis Ip Management Gmbh Feststoffgranulate mit monodisperser Korngrößenverteilung, ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung
IT1317358B1 (it) 2000-08-31 2003-06-16 Fidia Advanced Biopolymers Srl Derivati cross-linkati dell'acido ialuronico.
IT1317359B1 (it) 2000-08-31 2003-06-16 Fidia Advanced Biopolymers Srl Polisaccaridi percarbossilati, quali l'acido ialuronico, processo perla loro preparazione e loro impiego in campo farmaceutico e
US6669926B1 (en) 2000-10-16 2003-12-30 Mallinckrodt, Inc. Hydrophilic light absorbing indole compounds for determination of physiological function in critically ill patients
US6498269B1 (en) 2000-10-17 2002-12-24 The University Of Connecticut Method for the oxidation of aldehydes, hemiacetals and primary alcohols
WO2002048197A1 (en) 2000-12-13 2002-06-20 Sca Hygiene Products Zeist B.V. Process for oxidising primary alcohols
EP1217008B1 (en) 2000-12-19 2006-03-01 Seikagaku Corporation Photocurable hyaluronic acid derivative and process for producing the same, and photocured crosslinked hyaluronic acid derivative and medical material using the same
FR2819808B1 (fr) 2001-01-19 2003-04-18 Simafex Compositions stabilisees d'acide o-iodoxybenzoique et leur procede de preparation
CA2435491C (en) 2001-01-31 2010-02-02 Seikagaku Corporation Crosslinked polysaccharide sponge
US6902548B1 (en) 2001-03-19 2005-06-07 Ed Schuler Use of Streptomyces hyalurolyticus enzyme in ophthalmic treatments
US6673919B2 (en) 2001-03-30 2004-01-06 Chisso Cororation Chemically modified hyaluronic acid or salts thereof, and a process for producing thereof
RU2240329C2 (ru) * 2001-08-29 2004-11-20 Государственное унитарное предприятие "Северное отделение Полярного научно-исследовательского института морского рыбного хозяйства и океанографии" Способ получения биологически активного кислого сульфатированного полисахарида из морских водорослей - фукоидана
US6946284B2 (en) 2001-11-16 2005-09-20 University Of Massachusetts Solubilizing cross-linked polymers with photolyase
FR2833493B1 (fr) 2001-12-18 2005-09-23 Ioltechnologie Production Forme galenique solide et soluble pour l'administration occulaire de principes actifs et procede de fabrication d'un insert ophtalmique solide et soluble
US20060189516A1 (en) 2002-02-19 2006-08-24 Industrial Technology Research Institute Method for producing cross-linked hyaluronic acid-protein bio-composites
ITPD20020064A1 (it) 2002-03-12 2003-09-12 Fidia Advanced Biopolymers Srl Derivati esterei dell'acido ialuronico per la preparazione di idrogelda utilizzare in campo biomedico, sanitario e chirurgico e come sistem
JP3975267B2 (ja) 2002-06-03 2007-09-12 独立行政法人産業技術総合研究所 多糖物質のアシル化方法
US20040101546A1 (en) 2002-11-26 2004-05-27 Gorman Anne Jessica Hemostatic wound dressing containing aldehyde-modified polysaccharide and hemostatic agents
JP4323148B2 (ja) 2002-09-30 2009-09-02 チッソ株式会社 ｎ−アルカノイル化ヒアルロン酸もしくはその塩およびその製造法
FR2845686B1 (fr) * 2002-10-10 2013-08-30 Aventis Pharma Sa Melanges de polysaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant
US6965040B1 (en) 2002-11-04 2005-11-15 Xiaolian Gao Photogenerated reagents
US20040116018A1 (en) 2002-12-17 2004-06-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Method of making fibers, nonwoven fabrics, porous films and foams that include skin treatment additives
US7550136B2 (en) 2002-12-20 2009-06-23 University Of Massachusetts Photo-reactive polymers and devices for use in hair treatments
US6982298B2 (en) 2003-01-10 2006-01-03 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US7465766B2 (en) 2004-01-08 2008-12-16 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US20050126338A1 (en) 2003-02-24 2005-06-16 Nanoproducts Corporation Zinc comprising nanoparticles and related nanotechnology
FR2852012B1 (fr) 2003-03-04 2006-06-23 Oreal Procede de preparation de derives o-acyles du glucose
EP1607405B1 (en) 2003-03-11 2011-05-04 Seikagaku Corporation Photocrosslinked polysaccharide composition and process for producing the same
US7947766B2 (en) 2003-06-06 2011-05-24 The Procter & Gamble Company Crosslinking systems for hydroxyl polymers
ES2226567B1 (es) 2003-06-20 2006-07-01 Universidad De Santiago De Compostela Nanoparticulas de acido hialuronico.
DE10331342B4 (de) 2003-07-11 2009-03-12 Thüringisches Institut für Textil- und Kunststoff-Forschung e.V. Thermostabile Form- oder Spinnmasse
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
US7807824B2 (en) * 2003-08-12 2010-10-05 Lipoxen Technologies Limited Sialic acid derivatives for protein derivatisation and conjugation
US7235295B2 (en) 2003-09-10 2007-06-26 Laurencin Cato T Polymeric nanofibers for tissue engineering and drug delivery
CA2538793C (en) 2003-09-19 2011-01-11 Colorado State University Research Foundation (Csurf) Hyaluronan (ha) esterification via acylation technique for moldable devices
US20100330143A1 (en) 2003-12-04 2010-12-30 University Of Utah Research Foundation Modified macromolecules and methods of making and using thereof
US8313765B2 (en) 2003-12-04 2012-11-20 Industrial Technology Research Institute Biodegradable hyaluronic acid derivative, biodegradable polymeric micelle composition and pharmaceutical or bioactive composition
GB2408741B (en) 2003-12-04 2008-06-18 Ind Tech Res Inst Hyaluronic acid derivative with urethane linkage
GB0406013D0 (en) 2004-03-17 2004-04-21 Chiron Srl Analysis of saccharide vaccines without interference
CA2560507C (en) 2004-03-26 2011-08-16 Surmodics, Inc. Composition and method for preparing biocompatible surfaces
ITMI20040605A1 (it) 2004-03-29 2004-06-29 Coimex S C R L United Companie Esteri butirrici dell'acido ialuronico a basso grado di sostituzione procedimento per la loro preparazione ed uso
JP2008505716A (ja) 2004-07-09 2008-02-28 ザ クリーヴランド クリニック ファウンデーション ヒドロキシフェニル架橋高分子ネットワーク及びその用途
US7323425B2 (en) 2004-08-27 2008-01-29 Stony Brook Technology And Applied Research Crosslinking of hyaluronan solutions and nanofiberous membranes made therefrom
EP1790665B1 (en) 2004-09-07 2014-11-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for producing water-soluble modified hyaluronic acid
US7214759B2 (en) 2004-11-24 2007-05-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biologically absorbable coatings for implantable devices based on polyesters and methods for fabricating the same
DK1817347T3 (en) 2004-11-24 2017-08-14 Albumedix As Process for Crosslinking Hyaluronic Acid with Divinyl Sulfone
US8053415B2 (en) 2005-01-21 2011-11-08 Washington University In St. Louis Compounds having RD targeting motifs
AU2006227112A1 (en) 2005-03-22 2006-09-28 Tyco Healthcare Group Lp Bioactive wide-weave mesh
US7680038B1 (en) 2005-04-25 2010-03-16 Electronic Arts, Inc. Dynamic bandwidth detection and response for online games
GB0513552D0 (en) 2005-07-01 2005-08-10 Bristol Myers Squibb Co Bandage
WO2007004675A1 (ja) 2005-07-06 2007-01-11 Seikagaku Corporation 薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル
ITPD20050206A1 (it) 2005-07-07 2007-01-08 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriali in forma di fibra da impiegarsi come dispositivi medici nel trattamento delle ferite e loro processi di produzione
ITMI20051415A1 (it) 2005-07-22 2007-01-23 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriali a base di corbossimetilcellulosa salificata con zinco associata a derivati dell'acido ialuronico da impiegarsi come dispositivi medici con attivita' antimicrobica ed antifungina e loro processo di produzione
CA2622947C (en) 2005-09-21 2014-10-28 Kode Biotech Limited Cell surface coating with hyaluronic acid oligomer derivative
US7993678B2 (en) 2005-09-26 2011-08-09 Novozymes Biopolymer A/S Hyaluronic acid derivatives
EP1968499A1 (en) 2005-12-14 2008-09-17 Anika Therapeutics Inc. Bioabsorbable implant of hyaluronic acid derivative for treatment of osteochondral and chondral defects
EP1826274A1 (en) 2006-02-24 2007-08-29 Kikkoman Corporation Enzyme composition, low molecular weight hyaluronan and process for preparing the same
US20100273734A1 (en) 2006-02-28 2010-10-28 Novozymes Biopolymer A/S Derivatives of Hyaluronic Acids
JP4892679B2 (ja) 2006-03-27 2012-03-07 国立大学法人弘前大学 ゲル紡糸によるヒアルロン酸繊維およびその製造方法
KR20070118730A (ko) 2006-06-13 2007-12-18 주식회사 코오롱 보습성이 우수한 창상피복재 및 그의 제조방법
US20080124395A1 (en) 2006-06-22 2008-05-29 Weiliam Chen Formulations and devices for treatment or prevention of neural ischemic damage
WO2008008481A2 (en) 2006-07-12 2008-01-17 Georgia Tech Research Corporation Deprotection of functional groups by multi-photon induced electron transfer
CN101501075B (zh) 2006-08-04 2013-07-10 诺维信生物制药丹麦公司 支化透明质酸和制造方法
US20080063617A1 (en) 2006-09-07 2008-03-13 Abrahams John M Cosmetics formulations
ITMI20061726A1 (it) 2006-09-11 2008-03-12 Fidia Farmaceutici Derivati crosslinkati a base di acido ialuronico reticolato via click chemistry
CZ302856B6 (cs) 2006-09-27 2011-12-14 Cpn Spol. S R. O. Zpusob prípravy derivátu polysacharidu
US8979931B2 (en) 2006-12-08 2015-03-17 DePuy Synthes Products, LLC Nucleus replacement device and method
RU2432181C2 (ru) 2006-12-22 2011-10-27 Кромафарма Гезельшафт М.Б.Х. Применение полимеров
EP1942117A1 (en) 2006-12-29 2008-07-09 Sigea S.R.L. Derivatives of acid polysaccharides
KR20080062092A (ko) 2006-12-29 2008-07-03 주식회사 핸슨바이오텍 세포전달체로서의 히알루론산 유도체 및 이의 제조 방법
JP5329767B2 (ja) 2007-02-26 2013-10-30 帝人株式会社 芳香族コポリアミド繊維の製造装置
WO2008115799A1 (en) 2007-03-21 2008-09-25 William Marsh Rice University Novel gene delivery vectors for human mesenchymal stem cells
CZ2007299A3 (cs) 2007-04-24 2009-02-04 Cpn Spol. S R. O. Príprava nanovláken z polysacharidu a jejich smesí s polyvinylalkoholem
JP5165281B2 (ja) 2007-06-01 2013-03-21 株式会社バイオベルデ ２反応剤型の医療用含水ゲル形成剤、及び、これより得られるヒアルロン酸ゲル
RU2471867C2 (ru) 2007-06-19 2013-01-10 Тамара П. Уваркина Гиалуронидаза и способ ее применения
KR101226851B1 (ko) 2007-06-20 2013-01-25 (주)엘지하우시스 이중노즐을 이용한 나노섬유의 제조방법
JP5393662B2 (ja) 2007-06-22 2014-01-22 イノベイティブ サーフェイス テクノロジーズ， インコーポレイテッド 潜在反応基を含有するナノ繊維
US8268638B2 (en) 2007-07-18 2012-09-18 Advantageous Systems, Llc Methods and apparatuses for detecting analytes in biological fluid of an animal
FR2920786B1 (fr) 2007-09-07 2010-09-10 Univ Claude Bernard Lyon Fibres creuses, notamment multi membranaires, leur procede de preparation par filage et dispositif pour la mise en oeuvre dudit procede
FR2921675B1 (fr) 2007-09-28 2010-03-19 Univ Claude Bernard Lyon Filament a base d'acide hyaluronique et son procede d'obtention.
US20130136784A1 (en) 2007-10-11 2013-05-30 Robert J. Staab Methods for delivery of medication using dissolvable devices
US7976825B2 (en) 2007-12-06 2011-07-12 Janos Borbely Cancer cell diagnosis by targeting delivery of nanodevices
BRPI0908352A2 (pt) 2008-02-11 2015-07-28 Basf Se Processo para produzir estruturas porosas, estrutura porosa, e, uso da mesma
US20110028062A1 (en) 2008-02-14 2011-02-03 Chester Stephen O Bicomponent fibers, textile sheets and use thereof
WO2009108100A1 (en) 2008-02-29 2009-09-03 Ipr-Systems Sweden Ab Composition for the formation of gels
WO2009139972A2 (en) 2008-03-31 2009-11-19 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Site specific fluorescence marking and contrast marker for same
JP5563563B2 (ja) 2008-06-05 2014-07-30 エージェンシー フォー サイエンス， テクノロジー アンド リサーチ ペルオキシダーゼおよび低濃度の過酸化水素の存在下でのヒドロゲルの形成方法
JP2010014784A (ja) 2008-07-01 2010-01-21 Fuji Xerox Co Ltd 光書込型表示装置、書込装置、及び光書き込み方法
IT1391734B1 (it) 2008-07-29 2012-01-27 Anika Therapeutics Srl Nuovi biomateriali, loro preparazione per elettrospinning e loro uso in campo biomedico e chirurgico.
FR2934999B1 (fr) 2008-08-13 2011-07-29 Adocia Polysaccharides fonctionnalises par des derives du tryptophane
US9228027B2 (en) 2008-09-02 2016-01-05 Allergan Holdings France S.A.S. Threads of Hyaluronic acid and/or derivatives thereof, methods of making thereof and uses thereof
CZ301555B6 (cs) 2008-11-06 2010-04-14 Cpn S. R. O. Zpusob prípravy DTPA sítovaných derivátu kyseliny hyaluronové a jejich modifikace
ITRM20080636A1 (it) 2008-11-28 2010-05-29 Univ Palermo Procedimento per la produzione di derivati funzionalizzati dell acido ialuronico e relativi idrogeli.
JP2010138276A (ja) 2008-12-11 2010-06-24 Nipro Corp ヒアルロン酸単糸の製造方法
WO2010095049A1 (en) 2009-02-21 2010-08-26 Sofradim Production Crosslinked fibers and method of making same by extrusion
US9273191B2 (en) 2009-02-21 2016-03-01 Sofradim Production Medical devices with an activated coating
AU2010215199B2 (en) 2009-02-21 2015-01-15 Sofradim Production Compounds and medical devices activated with solvophobic linkers
CZ2009168A3 (cs) 2009-03-17 2010-07-21 Contipro C, A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové pomocí O-acyl-O´-alkylkarbonátu v prítomnosti substituovaného pyridinu
US8551378B2 (en) 2009-03-24 2013-10-08 North Carolina State University Nanospinning of polymer fibers from sheared solutions
US20120219554A2 (en) 2009-05-14 2012-08-30 Fidia Farmaceutici S.P.A. Extracellular yaluronidase from streptomyces koganeiensis
WO2010138074A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Hilborn Joens Hyaluronic acid based delivery systems
JP2012529509A (ja) 2009-06-09 2012-11-22 ラックス・バイオサイエンシーズ・インコーポレイテッド 眼科用用途のための局所薬物送達システム
SG178146A1 (en) 2009-07-30 2012-03-29 Carbylan Biosurgery Inc Modified hyaluronic acid polymer compositions and related methods
KR101103423B1 (ko) 2009-09-04 2012-01-06 아주대학교산학협력단 생체 주입형 조직 접착성 하이드로젤 및 이의 생의학적 용도
EP2498830B1 (en) 2009-11-11 2016-09-21 University of Twente, Institute for Biomedical Technology and Technical Medicine (MIRA) Dextran-hyaluronic acid based hydrogels
US9132201B2 (en) 2009-11-11 2015-09-15 University Of Twente, Institute For Biomedical And Technical Medicine (Mira) Hydrogels based on polymers of dextran tyramine and tyramine conjugates of natural polymers
US20110111012A1 (en) 2009-11-12 2011-05-12 Hemcon Medical Technologies, Inc. Nanomaterial wound dressing assembly
CZ302503B6 (cs) 2009-12-11 2011-06-22 Contipro C A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové oxidovaného v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd a zpusob jeho modifikace
US8197849B2 (en) 2010-02-12 2012-06-12 National Health Research Institutes Cross-linked oxidated hyaluronic acid for use as a vitreous substitute
US20110229551A1 (en) 2010-03-17 2011-09-22 Notus Laboratories, Inc. Drug delivery compositions and methods using nanofiber webs
IT1399202B1 (it) 2010-03-30 2013-04-11 Corbelli Metodo per la produzione di manufatti elastomerici funzionalizzati e manufatti cosi' ottenuti
WO2011163568A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 University Of Kansas Conjugates comprising an n-oxime bond and associated methods
CN101897976A (zh) 2010-07-16 2010-12-01 沈阳药科大学 一种药物增溶载体及其制备方法和应用
CZ305040B6 (cs) 2010-09-14 2015-04-08 Contipro Biotech S.R.O. Způsob přípravy vysoce substituovaných amidů kyseliny hyaluronové
CZ302994B6 (cs) 2010-12-31 2012-02-08 Cpn S.R.O. Hyaluronová vlákna, zpusob jejich prípravy a použití
US9200271B2 (en) 2011-02-03 2015-12-01 Empire Technology Development Llc Selective 3D biopatterning
KR101201412B1 (ko) 2011-04-19 2012-11-14 한양대학교 에리카산학협력단 다공성 코어쉘 나노웹의 제조방법
CZ304072B6 (cs) 2011-04-26 2013-09-25 Contipro Biotech S.R.O. Amfoterní materiál na bázi sítované kyseliny hyaluronové, zpusob jeho prípravy, materiály obsahující aktivní cinidla uzavrené v síti hyaluronanu, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití
CN102154738B (zh) 2011-05-10 2012-08-01 青岛大学 一种红藻琼胶纤维的制备方法
ITTO20110428A1 (it) 2011-05-13 2012-11-14 Rottapharm Spa Esteri dell'acido ialuronico, loro preparazione ed uso in dermatologia
BR112014009292B1 (pt) 2011-10-18 2021-06-15 Heiq Pty Ltd Processo para a preparação de fibras
KR20130085294A (ko) 2012-01-19 2013-07-29 충남대학교산학협력단 림프노드 탐지용 형광 고분자 나노젤 및 이를 이용한 림프노드 확인 방법
CZ303879B6 (cs) 2012-02-28 2013-06-05 Contipro Biotech S.R.O. Deriváty na bázi kyseliny hyaluronové schopné tvorit hydrogely, zpusob jejich prípravy, hydrogely na bázi techto derivátu, zpusob jejich prípravy a pouzití
CZ2012282A3 (cs) 2012-04-25 2013-11-06 Contipro Biotech S.R.O. Zesítovaný derivát hyaluronanu, zpusob jeho prípravy, hydrogel a mikrovlákna na jeho bázi
WO2013171764A2 (en) 2012-04-30 2013-11-21 Rubicon Research Private Limited Ophthalmic formulations
CZ304651B6 (cs) 2012-05-11 2014-08-20 Contipro Biotech S.R.O. Způsob přípravy mikrovláken, způsob výroby krytů ran, kryty ran a zařízení pro přípravu polysacharidových vláken
CZ2012844A3 (cs) 2012-11-27 2014-02-05 Contipro Biotech S.R.O. Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
CZ304266B6 (cs) 2012-11-27 2014-02-05 Contipro Biotech S.R.O. Nekonečná vlákna na bázi hyaluronanu selektivně oxidovaného v poloze 6 N-acetyl-D-glukosaminové části, jejich příprava, použití, nitě, střiže, příze, textilie a způsob jejich úpravy
CZ304303B6 (cs) 2012-11-27 2014-02-19 Contipro Biotech S.R.O. Vlákna založená na hydrofobizovaném hyaluronanu, způsob jejich přípravy a použití, textilie na jejich bázi a použití
CZ2012842A3 (cs) 2012-11-27 2014-08-20 Contipro Biotech S.R.O. Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití
KR101386096B1 (ko) 2013-02-28 2014-04-21 강원대학교산학협력단 음이온성 단백질 약물 전달을 위한 키토산 나노섬유, 그 제조방법 및 그 키토산 나노섬유를 포함하는 경점막 투여제
CN103505736A (zh) 2013-09-23 2014-01-15 天津大学 基于改性透明质酸的高分子脂质体及其制备方法
CN103789874B (zh) 2014-01-23 2016-02-10 北京化工大学常州先进材料研究院 平行电场诱导相分离法制备核壳结构天然聚电解质纳米纤维
EP2899214A1 (en) 2014-01-27 2015-07-29 Basf Se Ethylenically unsaturated polysaccharides, method for their production and their use
CZ2014150A3 (cs) 2014-03-11 2015-05-20 Contipro Biotech S.R.O. Konjugáty oligomeru kyseliny hyaluronové nebo její soli, způsob jejich přípravy a použití

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011069474A2 (en) * 2009-12-11 2011-06-16 Contipro C A.S. Oxidized derivative of hyaluronic acid, a method of preparation thereof and a method of modification thereof
WO2014023272A1 (en) * 2012-08-08 2014-02-13 Contipro Biotech S.R.O. Hyaluronic acid derivative, method of preparation thereof, method of modification thereof and use thereof

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A.V.Kühn et al.: "Behaviour of 4,5-unsaturated hyaluronic acid oligosaccharides under electrospray ionisation" Rapid Communication in Mass Spectrometry 18, 733-734 (2004) *
I. Cumpstey: "Chemical Modification of Polysaccharides" Hindawi Publishing Corporation, ISRN Organic Chemistry, Vol. 2013, Article ID 417672 , http://dx.doi.org/10.1155/2013/417672 *
J.G. Beeley: "Laboratory Techniques" in Biochemistry and Molecular Biology (P.H.Burdon, O.H. Knippenberg Eds.), Elsevier, Amsterodam 1985 *
R.D. Guthrie et al. Carbohydrate chemistry - A Specialist Periodical Report, The Chemical Society, London 1969 (SBN 85156 012 5) *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2725500C1 (ru) 2020-07-02
US20190169317A1 (en) 2019-06-06
KR20190022717A (ko) 2019-03-06
BR112018075531A2 (pt) 2019-03-19
WO2018001394A1 (en) 2018-01-04
US10618984B2 (en) 2020-04-14
JP2019522705A (ja) 2019-08-15
EP3475310A1 (en) 2019-05-01
PL3475310T3 (pl) 2020-11-02
KR102327939B1 (ko) 2021-11-17
JP6982321B2 (ja) 2021-12-17
CZ2016375A3 (cs) 2018-01-03
HUE049730T2 (hu) 2020-10-28
ES2790837T3 (es) 2020-10-29
DK3475310T3 (da) 2020-04-06
EP3475310B1 (en) 2020-03-18
BR112018075531B1 (pt) 2022-11-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ308106B6 (cs) Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití
JP6063103B1 (ja) グリコサミノグリカンの硫酸化方法
JP2017508050A (ja) ヒアルロン酸オリゴマーの複合体又はその塩，その調製法及びその使用
EP3494145B1 (en) Method of crosslinking glycosaminoglycans
HK1254817B (en) Derivatives of n-desulfated glucosaminoglycans and use as drugs
HK1254817A1 (en) Derivatives of n-desulfated glucosaminoglycans and use as drugs
DK3065747T3 (en) Carboxylated derivatives of glucosaminoglycans and use as drugs
US6482941B1 (en) Carboxylated polysaccharides 6-substituted
CZ2015445A3 (cs) Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití
Jia et al. Preparation and in vitro activity of β-glucan-rich polysaccharide extracts from Lentinula edodes fruiting bodies.
US20200062868A1 (en) Method of crosslinking glycosaminoglycans
HK1222873B (zh) N-脱硫酸化糖胺聚糖的衍生物以及作为药物的用途