RU2725500C1 - Ненасыщенные производные полисахаридов, способ их получения и их применения - Google Patents

Ненасыщенные производные полисахаридов, способ их получения и их применения Download PDF

Info

Publication number
RU2725500C1
RU2725500C1 RU2018147560A RU2018147560A RU2725500C1 RU 2725500 C1 RU2725500 C1 RU 2725500C1 RU 2018147560 A RU2018147560 A RU 2018147560A RU 2018147560 A RU2018147560 A RU 2018147560A RU 2725500 C1 RU2725500 C1 RU 2725500C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
polysaccharide
aldehyde
production method
temperature
unsaturated
Prior art date
Application number
RU2018147560A
Other languages
English (en)
Inventor
Радован БУФФА
Томас БОБУЛА
Петра СЕДОВА
Ивана БАСАРАБОВА
Павлина ПРОЧАЗКОВА
Хана ВАГНЕРОВА
Ива ДОЛЕСКОВА
Сона МОРАВЧИКОВА
Владимир ВЕЛЕБНИЙ
Original Assignee
Контипро А.С.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Контипро А.С. filed Critical Контипро А.С.
Application granted granted Critical
Publication of RU2725500C1 publication Critical patent/RU2725500C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/728—Hyaluronic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/731—Carrageenans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0036—Galactans; Derivatives thereof
    • C08B37/0042—Carragenan or carragen, i.e. D-galactose and 3,6-anhydro-D-galactose, both partially sulfated, e.g. from red algae Chondrus crispus or Gigantia stellata; kappa-Carragenan; iota-Carragenan; lambda-Carragenan; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0069—Chondroitin-4-sulfate, i.e. chondroitin sulfate A; Dermatan sulfate, i.e. chondroitin sulfate B or beta-heparin; Chondroitin-6-sulfate, i.e. chondroitin sulfate C; Derivatives thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к получению новых полисахаридных производных, содержащих в своей структуре гетероцикл, имеющий двойную связь в положениях 4 и 5 в соответствии со структурной формулой Xгде R представляет собой -NH-CO-СНили –ОН. Способ получения состоит в окислении группы ОН в положении 6 до альдегида, с последующим элиминированием, имеющим целью образование двойной -С=С- связи в положениях 4 и 5, и окончательным восстановлением альдегидной группы в положении 6 до исходного спирта. Полученные производные полисахаридов показывают повышенную антиоксидантную активность, а производные на основе гиалуроновой кислоты также характеризуются избирательным отрицательным действием на жизнеспособность клеток карциномы. 4 н. и 10 з.п. ф-лы, 2 ил., 27 пр.

Description

Область техники изобретения
Настоящее изобретение относится к полисахаридным производным, содержащим, в своей структуре, гетероцикл, имеющий двойную связь в положениях 4 и 5 в соответствии со структурной формулой X,
Figure 00000001
где R представляет собой-NH-CO-CH3 или -ОН.
Кроме того, настоящее изобретение относится к получению производных формулы X из исходного полисахарида, содержащего структурный фрагмент Y, где сама модификация может быть упрощена в виде следующей схемы:
Figure 00000002
где R представляет собой -NH-CO-СН3 или -ОН, и R1 представляет собой -SO2-ONa, -SO2-ОН или Н, тогда как абсолютная конфигурация углерода 4 может быть R или S.
Кроме того, настоящее изобретение относится к применению данных ненасыщенных производных, которые, в отличие от нативных полисахаридов, проявляют повышенные антиоксидантные свойства, и некоторые из них селективно ингибируют пролиферацию раковых клеток.
Уровень техники изобретения
Полисахариды общей формулы Y
Полисахариды несут различные функции в живых организмах, участвуя в построении структур, хранении питательных веществ и в регуляции. Полисахариды общей формулы Y также относятся к полимерам, встречающимся естественным образом в организмах.
Figure 00000003
где R представляет собой СН3-CO-NH- или -ОН и R1 представляет собой -SO2-ONa, -SO2-ОН или Н. К ним относятся, например, хондроитинсульфат, дерматансульфат, каррагинан, кератансульфат или гиалуроновая кислота.
Хондроитинсульфат представляет собой линейный, сульфатированный и отрицательно заряженный гликозаминогликан, состоящий из повторяющихся мономерных звеньев N-ацетил-D-галактозамина и D-глюкуроновой кислоты, соединенных друг с другом β(1→3) и β(1→4) О-гликозидными связями (структурная формула хондроитинсульфата приведена ниже),
Figure 00000004
где
R1 представляет собой -Н или -Na,
R2 представляет собой -Н, -SO2-ONa или -SO2-OH.
Хондроитинсульфат получают из животной соединительной ткани, где он связан с белками и, таким образом, образует часть протеогликанов. Сульфатирование хондроитина в различных позициях обеспечивается различными типами сульфотрансфераз. Уникальный паттерн сульфатирования в конкретных позицииях полимерной цепи кодирует специфическую биологическую активность хондроитинсульфата. Хондроитинсульфат является важным структурным блоком хряща в суставах, обеспечивая их прочность при сжатии и обновление баланса химического состава суставной смазочной жидкости (Baeurle SA et al. Polymer 50, 1805, 2009).
Дерматансульфат представляет собой линейный, сульфатированный и отрицательно заряженный гликозаминогликан, состоящий из повторяющихся мономерных звеньев N-ацетил-D-галактозамина и L-идуроновой кислоты, соединенных друг с другом (1→3) и β(1→4) О-гликозидными связями (структурная формула дерматансульфата приведена ниже),
Figure 00000005
где
R1 представляет собой -Н или -Na,
R2 представляет собой -Н, -SO2-OH или -SO2-ONa.
Дерматансульфат отличается от хондроитинсульфата присутствием L-идуроновой кислоты, которая представляет собой С-5 эпимер D-глюкуроновой кислоты. Зеркальная конфигурация идуроновой кислоты придает больше гибкости дерматансульфатным цепям и обеспечивает их специфическое гликозаминогликан-белковое взаимодействие с непосредственным окружением. Данные взаимодействия вносят вклад в регуляцию нескольких клеточных процессов, таких как миграция, пролиферация, дифференцировка или ангиогенез. Превращение хондроитинсульфата в дерматансульфат обеспечивается с помощью трех ферментов, а именно, дерматансульфатэпимеразы 1 (DS-epil), дерматансульфатэпимеразы 2 (DS-epi2) и дерматансульфат-4-О-сульфотрансферазы (D4ST1) (Thelin М., et al., FEBS Journal 280, 2431, 2013).
Кератансульфат принадлежит к группе линейных сульфатированных полисахаридов, содержащих D-галактозу, N-ацетилглюкозамин и галактоза-6-сульфат, соединенные друг с другом β(1→3) и β(1→4) связями, имеющими структуру и связи, аналогичные хондроитинсульфату. Кератансульфат можно найти в роговице, хрящах, костях и соединительной ткани (структурная формула кератансульфата приведена ниже),
Figure 00000006
R2 представляет собой -Н, -SO2-OH или -SO2-ONa.
Каррагинаны принадлежат к группе линейных сульфатированных полисахаридов, получаемых в результате экстракции красных морских водорослей. Галактоза и ее 3,6-ангидропроизводное являются их основными структурными единицами, соединенными друг с другом β(1→3) и β(1→4) О-гликозидными связями. Существуют три основные группы каррагинанов, которые различаются степенью сульфатирования и растворимостью в воде. Каппа-каррагинан имеет одну сульфатную группу в димере и образует жесткие гели в водной среде. Йота-каррагинан содержит два сульфата и образует мягкие гели, в то время как лямбда-каррагинан, имеющий три сульфата, не обнаруживает каких-либо желирующих свойств.
Гиалуроновая кислота представляет собой несульфатированный гликозаминогликан, состоящий из двух повторяющихся блоков D-глюкуроновой кислоты и N-ацетил-D-глюкозамина.
Figure 00000007
где
R1 представляет собой Н или Na.
Молекулярная масса нативной гиалуроновой кислоты находится в диапазоне от 5×104 до 5×106 г⋅моль-1. Данный очень гидрофильный полисахарид является частью соединительных тканей, кожи, суставной синовиальной жидкости; он играет важную роль во многих биологических процессах, таких как организация протеогликанов, гидратация и дифференцировка клеток. Поскольку данный полимер возникает естественным путем в организме и, следовательно, является биодеградируемым, он полезен в качестве субстрата в исследованиях по тканевой инженерии или в качестве носителя биологически активных веществ.
Полисахариды, содержащие кратные связи
Полисахариды, имеющие кратную -С=С- связь, которая образует часть сахаридного цикла и не находится в конце цепи, очень редки. В качестве примера общих полисахаридов, описаны 5,6-ненасыщенные производные целлюлозы, известные как cellulosenes (Vigo Т.L. et al. Polymers for Advanced Technologies, 10, 6, 311-320, 1999) или их 2,3-ненасыщенные аналоги. Способ получения 5,6-ненасыщенных производных основан на реакции элиминации уходящей группы в положении 6 и атома водорода в положении 5 в основных условиях с получением енольного эфира (кратная связь -С=С- сопряжена с гетероциклическим атомом кислорода). Для получения 2,3-ненасыщенных производных целлюлозы, амилозы или ксилана (D. Horton et al. Carbohydrate Research, 40, 2, 345-352, 1975) требуется, в дополнение к наличию уходящих групп, восстанавливающий агент, как правило, цинк, для получения стандартного алкена (без сопряжения кратной связи и атома кислорода).
Использование полисахаридов, содержащих кратные связи
Приложения нацелены, главным образом, на модификацию кратной связи -С=С-, которая не является непосредственной частью сахаридного цикла. Данные способы основаны на присоединении к полимерному остову нового вещества, при котором структура значительно изменяется, то есть нативный характер полисахарида теряется. В таких случаях, кратная связь обычно используется в реакциях полимеризации (Bellini D. WO 96/37519), добавления (Khetan S. et al., Soft Matter, 5, 1601-1606, 2009) или циклоприсоединения (Nimmo Ch. M. et al., Biomacromolecules, 12, 824-830, 2011; Bobula, T. et al., Carbohydrate. Polymers, 125, 153-160, 2015). Данные способы могут приводить как к эффективному сшиванию полисахаридов (Collins М.N. et al., Carbohydrate Polymers, 92, 1262-1279, 2013; Hacker M.C. et al., Inter. J. Mol. Sc., 16, 27677-706, 2015), так и к селективному связыванию активных веществ с полимером (Mero A. et al., Polymers, 6, 346-369, 2014). Кратная связь метакрилатной группы также очень часто используется для проведения реакции полимеризации (Granstrom М. et al., ЕР 2899214).
Имеется только несколько способов введения кратной связи -С=С- непосредственно в сахаридное кольцо в полимерной цепи. Одним из них является ферментативное расщепление полимеров лиазами, когда двойная связь образуется в невосстанавливающем конце полимера (Kelly S.J. et al., Glycobiology, 11, 4, 294-304, 2001), которым является, в данном случае, гиалуроновая кислота (см. схему ниже).
Figure 00000008
Это означает, что возникновение такой модификации сильно зависит от молекулярной массы; например, при молекулярной массе, равной 4×104 г⋅моль-1, модифицируется только один из ста дисахаридов, если молекулярная масса составляет 4×105 г⋅моль-1, модифицируется один из тысячи дисахаридов. Таким образом, очевидно, что, за исключением случая полисахаридных олигомеров, данный тип модификации является незначительным и на самом деле не существует разницы между исходным и полученным высокомолекулярным полимером.
Второй способ позволяет осуществить встраивание двойной связи в полисахаридную структуру в положениях 4 и 5 по всей длине цепи, так что полимеры, имеющие более высокую молекулярную массу, могут быть эффективно модифицированы (Buffa R. et al. WO 2014/023272, Bobula Т. et al. Carbohydrate Polymers, 136, 1002-1009, 2016). Однако, в данном способе образуется кратная связь -С=С-, и данная связь непосредственно сопряжена с сильным электронным акцептором - альдегидной группой. Данная модификация существенно изменяет химические свойства полисахарида, поскольку она позволяет ковалентное связывание широкого спектра нуклеофилов, обычно аминов. Вышеупомянутый факт также подразумевает, что модифицированный таким образом полимер имеет значительно более высокую электрофильность и, следовательно, химически отличается от нативного полимера. Его можно также считать менее активным антиоксидантом по сравнению с немодифицированным полимером.
Решение, описанное в данном изобретении, может устранить подобные недостатки; в модифицированном полимере нет реактивной электрофильной группы, если сравнивать с немодифицированным полимером. Напротив, двойную связь, сопряженную с гетероциклическим атомом кислорода, можно рассматривать как группу, имеющую нуклеофильные (антиоксидантные) свойства.
Сущность изобретения
Предметом настоящего изобретения являются полисахаридные производные, содержащие в своей структуре гетероцикл, имеющий двойную связь в положениях 4 и 5 в соответствии со структурной формулой X,
Figure 00000009
где R представляет собой -NH-CO-СН3 или -ОН.
Молекулярная масса производных находится в пределах от 5×103 до 5×105 г⋅моль-1, и исходные полисахариды для получения производных по изобретению предпочтительно выбраны из группы, включающей хондроитинсульфат, каррагинан, дерматансульфат, гиалуроновую кислоту или кератансульфат.
Кроме того, настоящее изобретение относится к способу получения, основанному на трех стадиях (см. схему ниже):
Figure 00000010
где R представляет собой -NH-CO-СН3 или -ОН и R1 представляет собой -SO2-ONa, -SO2-ОН или -Н
1. Окисление - введение альдегидной группы в положении 6 сахаридного цикла.
Окисление первичной гидроксильной группы в положении 6 до альдегида. Реакцию можно проводить, например, с помощью окислительной системы 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилоксил радикал TEMPO/NaClO в воде. Данная стадия предпочтительно проводится в воде при температуре от 0 до 10°С, с NaClO в молярном количестве, находящемся в пределах диапазона от 0,03 до 0,8 экв., и молярном количестве TEMPO в диапазоне от 0,005 до 0,2 экв. в пересчете на повторяющуюся единицу полисахарида. Исходный полисахарид может иметь молекулярную массу в диапазоне от 5×103 до 5×105 г⋅моль-1, и предпочтительно используется от 0,1 до 8 мас. %. водный раствор полисахарида. В завершение, к реакционной смеси может быть добавлен этанол, тиосульфат натрий и т.д., чтобы закончить реакцию и устранить остатки непрореагировавшего вещества (гипохлорит). Альтернативно, окисление может быть осуществлено с помощью системы 1,1,1-триацетокси-1,1-дигидро-1,2-бензидоксол-3(1Н)-она (DMP) при температуре от 10 до 50°С в DMSO, причем количество DMP составляет от 0,05 до 2 экв. в расчете на повторяющуюся единицу полисахарида.
2. Элиминирование
2а. если R1 = -Н, проводят элиминирование воды (обезвоживание).
Его можно предпочтительно проводить в водно-органических средах, причем органический растворитель является смешивающимся с водой, а объемное соотношение растворителя/воды находится в диапазоне от 3/1 до 1/2. Предпочтительно, на данной стадии можно использовать основание, такое как пиридин, триэтиламин или N,N-диизопропилэтиламин, или неорганическое основание, например Са(ОН)2. Количество основания в реакционной смеси составляет от 0,01 до 20 экв., предпочтительно от 5 до 10 экв., в расчете на повторяющуюся единицу полисахарида. В качестве органических растворителей могут быть использованы смешивающиеся с водой апротонные полярные растворители, предпочтительно DMSO или сульфолан. Окисление проводят в течение от 0,1 до 12 часов, предпочтительно от 1 до 4 часов; вторую стадию реакции проводят в течение от 12 до 150 часов, предпочтительно от 20 до 40 часов, при температуре от 30 до 80°С, предпочтительно от 50 до 60°С.
2b. если R1 = -SO2-ONa или SO2-OH, выполняется элиминирование группы NaO-SO2-ONa или HO-SO2-ONa, соответственно. Если группа -OR1 в положении 4 в кольце находится в антиперипланарном положении по отношению к водороду в положении 5, элиминирование протекает самопроизвольно без необходимости добавления оснований и без необходимости увеличения температуры реакции. Продолжительность реакции стадий 1+2b составляет от 0,1 до 12 часов, предпочтительно от 1 до 4 часов. Если группа -OR1 в положении 4 в кольце не находится в антиперипланарном положении по отношению к водороду в положении 5, способ, описанный в части 2а, может быть также использован для эффективного элиминирования.
3. Восстановление - альдегидную группу селективно восстанавливают с борогидридами, предпочтительно с NaBH4, с образованием первичного спирта -СН2-ОН, при сохранении кратной связи в положении 4 и 5 сахаридного цикла. Несмотря на то, что специалист в данной области техники мог бы ожидать восстановления двойной связи -С=С- в дополнение к восстановлению альдегидной группы -СНО (или геминального диола -СН(ОН)2), на удивление, восстановление двойной связи -С=С- не происходит в способе в соответствии с настоящим изобретением. Количество восстановителя может находиться в диапазоне от 0,1 до 10 эквивалентов, в расчете на повторяющуюся единицу полисахарида, предпочтительно от 0,3 до 2 эквивалентов. Реакция может быть выполнена в воде при температуре от 50 до 40°С, рН от 5 до 10, предпочтительно при температуре от 15 до 25°С и рН от 6 до 8 в течение от 1 до 24 часов. Концентрация исходного раствора альдегида предпочтительно составляет от 0,1 до 8% мас.
Приведенные выше факты позволяют предполагать, что способ получения полисахаридных производных в соответствии с настоящим изобретением требует, чтобы исходный полисахарида включал структуру Y
Figure 00000011
которая включает (1→3) связанный сахаридный цикл, первичную группу -CH2-ОН в положении 6 и группу -ОН, -SO2-OH или -SO2-ONa в положении 4. Группа в положении 2 не является решающей для успешного выполнения данной модификации; для большинства полисахаридов R представляет собой -ОН или -NH-CO-СН3.
Кроме того, настоящее изобретение относится к применению производных полисахаридов общей формулы X. Как уже было отмечено выше, решение, описанное в данном изобретении, предлагает новые типы производных полисахаридов, имеющих улучшенную нуклеофильность (антиоксидантные свойства) и, в то же время, лишь незначительное изменение первичной структуры полисахарида, вызванное элиминированием атома водорода из положения 5 и группы -ОН, -SO2-OH или -SO2-ONa из положения 4. Антиоксидантные свойства данных новых производных были доказаны с помощью стандартного определения с радикалом 2,2-дифенил-1-пикрилгидразила, когда наблюдались значительные различия между ненасыщенными полисахаридными производными по настоящему изобретению и насыщенными (немодифицированными) аналогами. Именно поэтому производные по настоящему изобретению могут быть использованы, например, для получения материалов с антиоксидантным действием.
Кроме того, было обнаружено, что, если полисахаридом является гиалуроновая кислота, то ненасыщенное производное может быть использовано для получения материала с противораковым действием. Биологические свойства полученных производных тестировали на нескольких линиях клеток карциномы, и во всех случаях наблюдалось снижение выживаемости, тогда как рост стандартных фибробластов не был подавлен с во всем диапазоне протестированных концентраций.
Термин «полисахарид» относится к полисахариду, содержащему структурную единицу Y, такую как, например, гиалуроновая кислота, каррагинан, дерматансульфат, кератансульфат или хондроитинсульфат, или его фармацевтически приемлемой соли.
Термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к солям, которые являются безопасными и эффективными для использования in vivo и имеют требуемую биологическую активность. Фармацевтически приемлемые соли предпочтительно включают ионы щелочных металлов или ионов щелочноземельных металлов, более предпочтительно Na+, K+, Mg+ или Li+.
Реализация решения, описанного в данном изобретении, не является технологически сложной и не требует использования дорогостоящих химических веществ, растворителей или процедур выделения.
Подробное описание чертежей
Фиг. 1 - Влияние ДНА, полученной в соответствии с примером 25, на жизнеспособность клеток
Схема показывает развитие ингибирования роста раковых клеток MDA-MB-231 -аденокарцинома груди, А-549 - аденокарцинома легкого, HEP-G2 - гепатоцеллюлярная карцинома, по сравнению с ингибированием NHDF (primary human dermal fibroblasts) -первичные человеческие кожные фибробласты.
Процедура описана в примере 27.
Фиг. 2 - Антиоксидантные свойства материалов ΔНА и ΔCS по сравнению с немодифицированными полисахаридами НА, CS и со стандартом - Trolox - 6-гидрокси-2,5,7,8-тетраметилхроман-2-карбоновой кислотой
НА - гиалуроновая кислота
ΔНА - гиалуроновая кислота, дегидратированная в положениях 4 и 5 (пример 22)
CS - хондроитинсульфат
ΔCS - хондроитинсульфат, дегидратированный в положениях 4 и 5 (пример 2) протестировано с помощью 2,2-дифенил-1-пикрилгидразила (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DTTH)) в соответствии с процедурой, описанной в примере 23
Статистическая значимость t-теста - * р <0,05; ** р <0,01; *** р <0,001
Предпочтительные варианты осуществления изобретения
DS = степень замещения = 100% * (молярное количество модифицированной единицы сахарида) /(молярное количество повторяющейся единицы полисахарида)
Используемый в настоящем изобретении термин эквивалент (экв.) относится к повторяющейся единице конкретного полисахарида, если не указано иное. Процентное значение указано в массовых процентах, если не указано иное.
Молекулярная масса исходных полисахаридов представляет собой среднемасссовую молекулярную массу, определенную способом SECMALLS.
Пример 1
Окисление и элиминирование хондроитинсульфата (CS) = Получение α,β-ненасыщенного CS альдегида
Раствор гипохлорита натрия (0,8 экв., 11% активного хлора) постепенно добавляли в 2%-ный водный раствор CS (200 мг, Mw = 4×104 г⋅моль-1), охлажденного до 5°С и содержащего додекагидрат гидрофосфата динатрия (2,2 экв.), бромид натрия (0,8 экв.) и 4-AcNH-TEMPO (0,01 экв.). Смесь перемешивали в течение 2 часов при температуре 5°С. Затем к реакционной смеси добавляли этанол (10 экв.) и реакционную смесь перемешивали еще один час при комнатной температуре. Продукт выделяли осаждением с помощью IPA и анализировали с помощью ЯМР.
DS = 23% (установлено с помощью ЯМР)
Пример 2.
Восстановление α,β-ненасыщенного CS альдегида = Получение ΔCS
Готовили 2%-ный раствор мас./об. α,β-ненасыщенного CS-альдегида (200 мг, 0,5 ммоль) в дистиллированной воде, раствор охлаждали до 5°С и затем добавляли 2 эквивалента боргидрида натрия. Реакционную смесь перемешивали в течение 4 часов при 5°С. Продукт выделяли осаждением изопропанолом и анализировали с помощью ЯМР.
DS = 25% (определено с помощью ЯМР), Mw = 2×104 г⋅моль-1 (определено с помощью SECMALLS)
Спектральный анализ ACS: ЯМР 1H (500 МГц, D2O, δ м.д.): 02 и 2,04 (3Н, Ac-NH-; bs); 4,03 (2Н, Н6; bs); 4,22 (1Н, Н2, bs); 4,26 (1Н, Н3; bs); 5,06 (1Н, H1; bs); 5,18 (1Н, Н4, bs); ЯМР 1Н-1Н COZY (D2O); кросс-пики; δ м.д.: 4,22-5,06; 4,26-5,18; ЯМР 1Н-13С HSQC (D2O); кросс-пики; δ м.д.: 4,03-61,0; 4,22-50,5; 4,26-73,4; 5,06-98,3; 5,18-98,9; ЯМР DOSY (D2O); log D ((2,02 и 2,04; Ac-NH-); (4,03; Н6); (4,22; Н2); (4,26; Н3); (5,06; Н4); (5,18; H1)) ~ -10,4 m2s-1; log D (4,72; H2O) ~ -8;6 m2s-1; ИК (KBr; см-1): 1660 (v -С=С- st);
Пример 3
Окисление и элиминирование дерматансульфата (DeS) = Получение α,β-ненасыщенного DeS-альдегида
Водный раствор гипохлорита натрия (0,8 экв., 11% активного хлора) постепенно добавляли в 2%-ный водный раствор DeS (200 мг, 0,42 ммоль), охлажденного до 5°С и содержащего додекагидрат гидрофосфата динатрия (2,2 экв.), бромид натрия (0,8 экв.) и 4-AcNH-TEMPO (0,01 экв.), смесь перемешивали в течение 2 часов при 5°С. Затем к реакционной смеси добавляли этанол (10 экв.) и реакционную смесь перемешивали еще один час при комнатной температуре. Продукт выделяли осаждением с помощью IPA и анализировали с помощью ЯМР.
DS = 20% (определено с помощью ЯМР)
Пример 4
Восстановление α,β-ненасыщенного альдегида дерматансульфата = Получение ΔDeS
Готовили 2%-ный раствор мас./об. α,β-ненасыщенного DeS-альдегида (200 мг, 0,5 ммоль) в дистиллированной воде. Раствор охлаждали до 5°С и затем добавляли боргидрид натрия (2 эквивалента на дисахарид DeS). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 часов при 5°С. Продукт выделяли осаждением изопропанолом и анализировали с помощью ЯМР.
DS = 23% (определено с помощью ЯМР)
Спектральный анализ ΔDeS: ЯМР 1Н (500 МГц, D2O, δ м.д.): 2,01 (3Н, Ac-NH-, bs), 5,05 (1H, Hl, bs), 5,17(lH, Hl, bs).
Пример 5
Окисление и элиминирование каррагинана (КА) = Получение α,β-ненасыщенного КА-альдегида
Водный раствор гипохлорита натрия (0,8 экв., 11% активного хлора) постепенно добавляли в 1%-ный водный раствор КА (200 мг, 0,31 ммоль), охлажденного до №% °С, содержащего содержащего додекагидрат гидрофосфата динатрия (2,2 экв.), бромид натрия (0,8 экв.) и 4-AcNH-TEMPO (0,01 экв.). Смесь перемешивали в течение 2 часов при 10°С. Затем к реакции добавляли этанол (10 экв.) и реакционную смесь перемешивали еще один час при комнатной температуре. Продукт выделяли осаждением с помощью IPA и анализировали с помощью ЯМР.
DS = 10% (определено с помощью ЯМР)
Пример 6
Восстановление α,β-ненасыщенного альдегида каррагинана = Получение ΔКА
Готовили 2%-ный раствор мас./об. α,β-ненасыщенного альдегида КА (200 мг, 0,5 ммоль) в дистиллированной воде. Раствор охлаждали до 5 °С и затем добавляли боргидрид натрия (2 эквивалента на дисахарид КАА). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 часов при 5°С. Продукт выделяли осаждением изопропанолом и анализировали с помощью ЯМР.
DS = 13% (определено с помощью ЯМР)
ЯМР 1Н (500 МГц, D2O, δ м.д.): 5,07 (1Н, H1, bs), 5,18 (1Н, H1, bs),
Пример 7
Окисление кератансульфата (КS) = Получение KS-альдегида
Водный раствор NaClO (0,3 экв.) постепенно добавляли, в атмосфере азота, в 1%-ный водный раствор KS (1 г, 2×104 г⋅моль-1), содержащий NaCl 1%, KBr 1%, TEMPO (0,01 экв.) и NaHCO3 (20 экв.). Смесь перемешивали в течение 24 часов при 0°С, затем добавляли 0,1 г тиосульфата натрия и смесь перемешивали дополнительно в течение 10 минут. Полученный раствор разбавляли дистиллированной водой до 0,2% и диализовали против смеси (0,1% NaCl, 0,1% NaHCO3), 5 литров 3 раза (один раз в день), и против дистиллированной воды, 5 литров 7 раз (2 раза в день). Затем полученный раствор выпаривали и анализировали.
DS 3% (определено с помощью ЯМР)
Пример 8
Элиминирование KS-альдегида = Получение α,β-ненасыщенного альдегида KS
6,7 мл DMSO и DIPEA основания (5 экв.) добавляли в 3% раствор КS-альдегида (0,1 г, степень окисления DS = 3%, пример 7) в воде. Смесь перемешивали в течение 72 часов при температуре 60°С. Затем полученный раствор осаждали смесью изопропанол/гексан и твердую часть сушили в вакууме.
DS 2% (определено с помощью ЯМР),
ЯМР 1Н (D2O) δ 9,22 (с, 1Н, -CH=O), 32 (м, 1Н, -СН= С-СН=O)
Пример 9
Восстановление α,β-ненасыщенного альдегида KS = Получение ΔKS
Боргидрид натрия (2 экв.) добавляли в 2%-ный раствор α,β-ненасыщенного KS-альдегида (200 мг, пример 8) в дистиллированной воде. Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов при 5°С, затем осаждали изопропанолом и анализировали с помощью ЯМР.
DS = 2% (определено с помощью ЯМР)
ЯМР 1H (D2O) 5,05 (1Н, H1, bs), 5,17 (1Н, Н4, bs)
Пример 10
Окисление гиалуроновой кислоты (НА) = Получение НА-альдегида
Водный раствор NaClO (0,5 экв.) постепенно добавляли, в атмосфере азота, в 1%-ный водный раствор НА (1 г, 2×105 г⋅моль-1), содержащий NaCl, 1%, KBr l%, TEMPO (0,01 экв.) и NaHCO3 (20 экв.). Смесь перемешивали в течение 12 часов при 0°С, затем добавляли 0,5 мл этанола и смесь перемешивали еще 1 час. Полученный раствор разбавляли дистиллированной водой до 0,2% и диализовали против смеси (0,1% NaCl, 0,1% NaHCO3), 5 литров 3 раза (один раз в день), и против дистиллированной воды, 5 литров 7 раз (2 раза в день). Затем полученный раствор выпаривали и анализировали.
DS 10% (определено с помощью ЯМР)
Пример 11
Окисление НА = Получение НА-альдегида
Водный раствор NaClO (0,5 экв.) постепенно добавляли, в атмосфере азота, в 1%-ный водный раствор НА (1 г, 2×105 г⋅моль-1), содержащий 1% NaCl, КВг 1%, N-ацетиламино -TEMPO (0,01 экв.) и NaHCO3 (20 экв.). Смесь перемешивали в течение 12 ч при 10°С, затем добавляли 0,1 мл этанола и смесь перемешивали еще в течение 1 часа. Полученный раствор разбавляли дистиллированной водой до 0,2% и диализовали против смеси (0,1% NaCl, 0,1% NaHCO3), 5 литров 3 раза (один раз в день), и против дистиллированной воды, 5 литров 7 раз (2 раза в день). Затем полученный раствор выпаривали и анализировали.
DS 9% (определено с помощью ЯМР)
Пример 12
Окисление НА = Получение НА-альдегида
Водный раствор NaClO (0,3 экв.) постепенно добавляли, в атмосфере азота, в 1%-ный водный раствор НА (1 г, 2×105 г⋅моль-1), содержащий NaCl, 1%, 1% KBr, TEMPO (0, 2 экв.) и NaHCO3 (20 экв.). Смесь перемешивали в течение 48 ч при 5°С, затем добавляли 0,1 мл этанола и смесь перемешивали еще 1 час. Полученный раствор разбавляли дистиллированной водой до 0,2% и диализовали против смеси (0,1% NaCl, 0,1% NaHCO3), 5 литров 3 раза (один раз в день), и против дистиллированной воды, 5 литров 7 раз (2 раза в день). Затем полученный раствор выпаривали и анализировали.
DS 5% (определено с помощью ЯМР)
Пример 13
Окисление гиалуроновой кислоты (НА) = Получение НА-альдегида
Водный раствор NaClO (0,7 экв.) постепенно добавляли, в атмосфере азота, в 1%-ный водный раствор НА (1 г, 2×105 г⋅моль-1), содержащий NaCl, 1%, 1% KBr, TEMPO (0,01 экв.) и NaHCO3 (20 экв.). Смесь перемешивали в течение 0,5 ч при 0°С, затем добавляли 0,1 мл этанола и смесь перемешивали еще 1 час. Полученный раствор разбавляли дистиллированной водой до 0,2% и диализовали против смеси (0,1% NaCl, 0,1% NaHCO3), 5 литров 3 раза (один раз в день), и против дистиллированной воды, 5 литров 7 раз (2 раза в день). Затем полученный раствор выпаривали и анализировали.
DS 9% (определено с помощью ЯМР)
Пример 14
Окисление гиалуроновой кислоты (НА) = Получение НА-альдегида
Водный раствор NaClO (0,5 экв.) постепенно добавляли, в атмосфере азота, в 1%-ный водный раствор НА (1 г, 2×105 г⋅моль-1), содержащий NaCl, 1%, 1% KBr, TEMPO (0,01 экв.) и NaHCO3 (20 экв.). Смесь перемешивали в течение 12 ч при 0°С, затем добавляли 0,1 мл этанола и смесь перемешивали еще 1 час. Полученный раствор разбавляли дистиллированной водой до 0,2% и диализовали против смеси (0,1% NaCl, 0,1% NaHCO3), 5 литров 3 раза (один раз в день), и против дистиллированной воды, 5 литров 7 раз (2 раза в день). Затем полученный раствор выпаривали и анализировали.
DS 10% (определено с помощью ЯМР)
Пример 15
Окисление гиалуроновой кислоты (НА) = Получение НА-альдегида 1,2 экв. 1,1,1-триацетокси-1,1-дигидро-1,2-бензиодоксол-3(1Н)-она (реагент Десс-Мартина) добавляли в 1%-ный раствор кислой формы гиалуронана (1 г, 1×105 г⋅моль-1) в неводном DMSO, и смесь перемешивали в течение 5 ч при 20°С. Полученный раствор затем разбавляли дистиллированной водой до 0,2% и диализовали против смеси (0,1% NaCl, 0,1% NaHCO3), 5 литров 3 раза (один раз в день), и против дистиллированной воды, 5 литров 7 раз (2 раза в день). Затем полученный раствор выпаривали и анализировали.
DS 40% (определено с помощью ЯМР)
Пример 16
Элиминирование НА-альдегида = Получение α,β-ненасыщенного НА-альдегида
6,7 мл DMSO и основания DIPEA (5 экв.) добавляли в 3%-ный раствор НА-альдегида (0,1 г, степень окисления DS = 40%, пример 15) в воде. Смесь перемешивали в течение 72 часов при 60°С. Полученный раствор затем осаждали смесью изопропанол/гексан, и твердое вещество сушили в вакууме.
DS 20% (определено с помощью ЯМР),
ЯМР 1Н (D2O) δ 9,24 (с, 1H, -CH=O), 6,32 (м, 1Н, -CH=С-СН=O)
UV-Vis (D2O) 252 нм, π-π* переход α,β-ненасыщенный альдегид
Пример 17
Элиминирование НА-альдегида = Получение α,β-ненасыщенного НА-альдегида
6,7 мл DMSO и основание триэтиламин (20 экв.) добавляли в 3%-ный раствор НА-альдегида (0,1 г, степень окисления DS = 10%, пример 10) в воде. Смесь перемешивали в течение 150 часов при температуре 3°С. Полученный раствор затем осаждали смесью изопропанол/гексан, и твердое вещество сушили в вакууме.
DS 5% (определено с помощью ЯМР)
Пример 18
Элиминирование НА-альдегида = Получение α,β-ненасыщенного НА-альдегида
6,7 мл DMSO и пиридиновое основание (0,01 экв.) добавляли в 3%-ный раствор НА-альдегида (0,1 г, степень окисления DS = 10%, пример 10) в воде. Смесь перемешивали в течение 12 часов при 8°С. Полученный раствор затем осаждали смесью изопропанол/гексан, и твердое вещество сушили в вакууме.
DS 3% (определено с помощью ЯМР)
Пример 19
Элиминирование НА-альдегида = Получение α,β-ненасыщенного НА-альдегида
1 0,7 мл DMSO и пиридиновое основание (10 экв.) добавляли в 3%-ный раствор НА-альдегида (0,1 г, степень окисления DS = 10%, пример 10) в воде. Смесь перемешивали в течение 48 часов при температуре 6°С. Полученный раствор затем осаждали смесью изопропанол/гексан, и твердое вещество сушили в вакууме.
DS 4% (определено с помощью ЯМР)
Пример 20
Элиминирование НА-альдегида = Получение α,β-ненасыщенного НА-альдегида
10 мл DMSO и основание DIPEA (5 экв.) добавляли в 3%-ный раствор НА-альдегида (0,1 г, степень окисления DS = 10%, пример 10) в воде. Смесь перемешивали в течение 48 часов при температуре 6°С. Полученный раствор затем осаждали смесью изопропанол/гексан, и твердое вещество сушили в вакууме.
DS 5% (определено с помощью ЯМР)
Пример 21
Элиминирование НА-альдегида = Получение α,β-ненасыщенного НА-альдегида
6,7 мл сульфонана и основание DIPEA (5 экв.) добавляли в 3%-ный раствор НА-альдегида (0,1 г, степень окисления DS = 10%, пример 10) в воде. Смесь перемешивали в течение 7 часов при температуре 5°С. Полученный раствор затем осаждали смесью изопропанол/гексан и твердую часть сушили в вакууме.
DS 5% (определено с помощью ЯМР)
Пример 22
Восстановление α,β-ненасыщенного НА-альдегида = получение ΔНА
Боргидрид натрия (10 экв.) добавляли в 2%-ный раствор α,β-ненасыщенного НА-альдегида (200 мг, пример 16) в дистиллированной воде, при температуре 5°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при 5 С, затем осаждали изопропанолом и анализировали с помощью ЯМР.
DS 20% (определено с помощью ЯМР)
ЯМР 1Н (D2O) 5,06 (1Н, H1, bs), 5,17 (1Н, H1, bs)
Пример 23
Восстановление α,β-ненасыщенного НА-альдегида = получение ΔHA
Боргидрид натрия (0,1 экв.) добавляли в виде 2%-ного раствора α,β-ненасыщенного НА-альдегида (200 мг, пример 17) в дистиллированной воде, при температуре 5°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 часов при 5°С, затем осаждали изопропанолом и анализировали с помощью ЯМР.
DS = 4% (определено с помощью ЯМР)
Пример 24
Восстановление α,β-ненасыщенного НА-альдегида = получение ΔHA
Боргидрид натрия (1 экв.) добавляли в виде 2%-ного раствора α,β-ненасыщенного НА-альдегида (200 мг, пример 17) в дистиллированной воде при 40°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при 40°С, затем осаждали изопропанолом и анализировали с помощью ЯМР.
DS = 5% (определено с помощью ЯМР)
Пример 25
Восстановление α,β-ненасыщенного НА-альдегида = получение ΔНА
Боргидрид натрия (2 экв.) добавляли в виде 2%-ного раствора α,β-ненасыщенного НА-альдегида (200 мг, пример 17) в дистиллированной воде при 20°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 4 часов при 20°С, затем осаждали изопропанолом и анализировали с помощью ЯМР.
DS = 5% (определено с помощью ЯМР)
Пример 26
Определение окислительной активности (Фигура 2)
Антиоксидантную активность ДНА полисахаридов, полученных в соответствии с примером 22, и ΔCS, полученного в соответствии с примером 2, определяли с помощью стабильного свободного радикала 2,2-дифенил-1-пикрилгидразила (ДФПГ, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)). Данное определение было выполнено в соответствии с описанием в (Brand-Williams W. et al., LWT- Science Science and Technology, 28, 1, 25-30, 1995) с незначительной модификацией. Вкратце, 100 мкл 0,01%-ного раствора ДФПГ в метаноле добавляли в 100 мкл тестируемого вещества, растворенного в 50 мМ Tris рН 7,1. Уменьшение оптической плотности измеряли через 15 мин при 515 нм. В качестве положительного контроля использовали Trolox (6-гидрокси-2,5,7,8-тетраметилхроман-2-карбоновую кислоту). Данные измерялись в трех независимых экспериментах. Т-тест был использован для оценки статистической значимости * р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001 (Фигура 2).
Пример 27
Испытание цитотоксичности производных, полученных в соответствии с примером 25 (фиг. 1)
Цитотоксическое действие производного НА сравнивали для нераковых клеток -первичных дермальных фибробластов человека, а также для клеточных линий карциномы молочной железы (MDA-MB-231), клеточных линий карциномы легких (А-549) и клеточных линий гепатоцеллюлярной карциномы (HEP-G2). Для целей экспериментов, клетки культивировали в стандартных условиях (37°С, 5% СО2) в соответствующей среде (10% FBS (fetal bovine serum) - эмбриональная бычья сыворотка). После достижения 80% конфлюэнтности клетки пассировали, подсчитывали с помощью автоматического счетчика CASY ТТ, Roche, и наносили на 96-луночные планшеты с плотностью 5000 клеток на лунку в 200 мкл среды. Через 24 часа заменяли среду растворами тестируемых веществ с концентрациями 1000; 500; 100; и 10 мкг/мл в 10% среды. Жизнеспособность клеток измеряли через 24, 48 и 72 часа после обработки с помощью теста МТТ - 20 мкл раствора МТТ (5 мг/мл) добавляли в каждую лунку, а затем проводили инкубацию в течение 2,5 часов с последующим лизисом клеток раствором для солюбилизации (IPA:DMSO 1:1 с 10% Triton Х-100 и 9,9% 37% HCl) в течение 30 минут. Затем измеряли поглощение с помощью устройства считывания микропланшетов VERSAmax при 570 нм и 690 нм (коррекция фона). Жизнеспособность обработанных клеток оценивали по корреляции с необработанным контролем, который соответствует нулю на фигуре 1. Значения выше нуля относятся к клеточной активации (отсутствие цитотоксического действия производных соединений), и значения ниже нуля указывают на пониженную клеточную жизнеспособность - т.е. цитотоксическое действие производных соединений. В случае NHDF, очевидно, на фигуре 1, что тестируемое производное соединение не имело цитотоксического действия. В случае с линиями карциномы (MDA-MB-231, А-549, НЕР-G2), наблюдалось цитотоксическое действие производных соединений. На основании результатов представленных испытаний, может быть выведен потенциальный противораковое действие производного соединения (фигура 1).

Claims (18)

1. Ненасыщенное производное полисахаридов, содержащее в своей структуре по меньшей мере один гетероцикл, имеющий двойную связь в положениях 4 и 5 в соответствии со структурной формулой X
Figure 00000012
где R представляет собой -NH-CO-СН3 или -ОН.
2. Ненасыщенное производное полисахаридов по п. 1, характеризующееся тем, что его молекулярная масса находится в диапазоне от 5×103 до 5×105 г⋅моль-1 и что полисахариды выбраны из группы, включающей хондроитинсульфат, каррагинан, дерматансульфат, гиалуроновую кислоту или кератансульфат.
3. Способ получения полисахаридного производного по п. 1 или 2, характеризующийся тем, что исходный полисахарид, включающий фрагмент Y
Figure 00000013
где R представляет собой -NH-CO-СН3 или -ОН, и R1 представляет собой -SO2-ONa, -SO2-ОН или -Н, на первой стадии окисляется до альдегида в положении 6, на второй стадии подвергается элиминированию в положениях 4 и 5 цикла с образованием двойной связи, и на третьей стадии альдегидная группа селективно восстанавливается.
4. Способ получения по п. 3, характеризующийся тем, что исходный полисахарид представляет собой хондроитинсульфат, каррагинан, дерматансульфат, гиалуроновую кислоту или кератансульфат.
5. Способ получения по п. 3, характеризующийся тем, что на первой стадии окисление в положении С-6 протекает либо с помощью системы R3-TEMPO/NaClO, где R3 представляет собой водород или N-ацетильную группу, в воде при температуре от 0 до 10°С, причем молярное количество NaClO находится в пределах диапазона от 0,3 до 0,8 экв. и молярное количество R3-TEMPO находится в пределах диапазона от 0,005 до 0,2 экв., в расчете на повторяющуюся единицу полисахарида, либо с помощью 1,1,1-триацетокси-1,1-дигидро-1,2-бензиодоксол-3(1Н)-она (DMP) в DMSO при температуре от 10 до 50°С, причем количество DMP находится в пределах диапазона от 0,05 до 2 экв., в расчете на повторяющуюся единицу полисахарида.
6. Способ получения по п. 3, характеризующийся тем, что исходный полисахарид представляет собой гиалуроновую кислоту или кератансульфат, и что на второй стадии окисленный полисахарид подвергается реакции элиминирования в смеси вода/полярный апротонный растворитель в присутствии основания при температуре от 30 до 80°С, предпочтительно при температуре от 50 до 60°С.
7. Способ получения по п. 6, характеризующийся тем, что количество основания составляет от 0,01 до 20 экв., предпочтительно от 5 до 10 экв., в расчете на повторяющуюся единицу полисахарида, причем основание выбрано из группы, включающей органические основания, например пиридин, триэтиламин или N,N-диизопропилэтиламин, или неорганические основания, например Са(ОН)2.
8. Способ получения по п. 6, характеризующийся тем, что апротонный растворитель смешивается с водой и включает в себя, например, DMSO или сульфолан, и объемное соотношение растворителя/воды находится в пределах диапазона от 3/1 до 1/2.
9. Способ получения по п. 6, характеризующийся тем, что вторая стадия реакции протекает в течение от 12 до 150 часов.
10. Способ получения по п. 3, характеризующийся тем, что исходный полисахарид представляет собой хондроитинсульфат, каррагинан или дерматансульфат, и что окисленный полисахарид спонтанно элиминируется на второй стадии, непосредственно в реакционной смеси с образованием α,β-ненасыщенного альдегида, и спонтанное элиминирование протекает без необходимости добавления какого-либо основания, органического растворителя и без повышения температуры реакции.
11. Способ получения по п. 3, характеризующийся тем, что молекулярная масса исходного полисахарида находится в диапазоне от 5×103 до 5×105 г⋅моль-1.
12. Способ получения по п. 3, характеризующийся тем, что на третьей стадии добавляют боргидрид натрия в количестве от 0,1 до 10 экв., предпочтительно от 0,3 до 2 экв., в расчете на повторяющуюся единицу полисахарида, в воде, при температуре от 5 до 40°С, предпочтительно при температуре от 15 до 25°С, при рН в диапазоне от 5 до 10, предпочтительно от 6 до 8.
13. Применение производного по п. 1 или 2 для получения материала, обладающего повышенным антиоксидантным действием.
14. Применение производного по п. 2, причем полисахарид представляет собой гиалуроновую кислоту, для получения материала, имеющего противораковое действие.
RU2018147560A 2016-06-27 2017-06-26 Ненасыщенные производные полисахаридов, способ их получения и их применения RU2725500C1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2016-375A CZ308106B6 (cs) 2016-06-27 2016-06-27 Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití
CZPV2016-375 2016-06-27
PCT/CZ2017/050026 WO2018001394A1 (en) 2016-06-27 2017-06-26 Unsaturated derivatives of polysaccharides, method of preparation thereof and use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2725500C1 true RU2725500C1 (ru) 2020-07-02

Family

ID=59506028

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018147560A RU2725500C1 (ru) 2016-06-27 2017-06-26 Ненасыщенные производные полисахаридов, способ их получения и их применения

Country Status (12)

Country Link
US (1) US10618984B2 (ru)
EP (1) EP3475310B1 (ru)
JP (1) JP6982321B2 (ru)
KR (1) KR102327939B1 (ru)
BR (1) BR112018075531B1 (ru)
CZ (1) CZ308106B6 (ru)
DK (1) DK3475310T3 (ru)
ES (1) ES2790837T3 (ru)
HU (1) HUE049730T2 (ru)
PL (1) PL3475310T3 (ru)
RU (1) RU2725500C1 (ru)
WO (1) WO2018001394A1 (ru)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018081425A1 (en) * 2016-10-26 2018-05-03 Wake Forest University Health Sciences Hydrogen-bonding compounds, compositions comprising the same, and methods of preparing and using the same
US11629329B2 (en) 2017-10-11 2023-04-18 Wake Forest University Health Sciences Bioink compositions and methods of preparing and using the same
CN116003639B (zh) * 2023-01-31 2024-02-09 新疆农业大学 一种纤维素醛及其制备方法和应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA004046B1 (ru) * 1999-10-22 2003-12-25 Авентис Фарма С.А. Олигосахариды, способ их получения и содержащие их фармацевтические композиции
RU2240329C2 (ru) * 2001-08-29 2004-11-20 Государственное унитарное предприятие "Северное отделение Полярного научно-исследовательского института морского рыбного хозяйства и океанографии" Способ получения биологически активного кислого сульфатированного полисахарида из морских водорослей - фукоидана
RU2332424C2 (ru) * 2002-10-10 2008-08-27 Авентис Фарма С.А. Смесь полисахаридов, являющихся производными гепарина, их получение и фармацевтические композиции, их содержащие
WO2014023272A1 (en) * 2012-08-08 2014-02-13 Contipro Biotech S.R.O. Hyaluronic acid derivative, method of preparation thereof, method of modification thereof and use thereof
RU2550602C2 (ru) * 2009-12-11 2015-05-10 КОНТИПРО Фарма а.с. Производное гиалуроновой кислоты, способ его получения и способ его модификации

Family Cites Families (189)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3075527A (en) 1960-06-02 1963-01-29 Chemway Corp Sterile medicated strips
US3720662A (en) 1971-09-13 1973-03-13 Nat Starch Chem Corp Preparation of starch esters
US3728223A (en) 1971-10-08 1973-04-17 Amano Pharma Co Ltd Production of hyaluronidase from a strain of streptomyces
GB1527592A (en) 1974-08-05 1978-10-04 Ici Ltd Wound dressing
CH628088A5 (en) 1975-09-17 1982-02-15 Dresden Arzneimittel Process for obtaining streptococcal metabolic products
US4205025A (en) 1975-12-22 1980-05-27 Champion International Corporation Synthetic polymeric fibrids, fibrid products and process for their production
JPS6033474B2 (ja) 1978-05-11 1985-08-02 藤沢薬品工業株式会社 新規なヒアルロニダ−ゼｂｍｐ−８２３１およびその製造法
US4716224A (en) 1984-05-04 1987-12-29 Seikagaku Kogyo Co. Ltd. Crosslinked hyaluronic acid and its use
US4713448A (en) 1985-03-12 1987-12-15 Biomatrix, Inc. Chemically modified hyaluronic acid preparation and method of recovery thereof from animal tissues
US4851521A (en) 1985-07-08 1989-07-25 Fidia, S.P.A. Esters of hyaluronic acid
GB8519416D0 (en) 1985-08-01 1985-09-04 Unilever Plc Oligosaccharides
JPS62104579A (ja) 1985-10-30 1987-05-15 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd ヒアルロニダ−ゼの製造法
JPH0751064B2 (ja) 1986-08-13 1995-06-05 生化学工業株式会社 新規なヒアルロニダ−ゼｓｄ−６７８およびその製造法
IT1219587B (it) 1988-05-13 1990-05-18 Fidia Farmaceutici Polisaccaridi carbossiilici autoreticolati
JPH0214019A (ja) 1988-06-30 1990-01-18 Tonen Corp 繊維状成形物及びその製造方法
JPH0755961B2 (ja) 1989-04-18 1995-06-14 工業技術院長 新規なヒアルロン酸誘導体及びその製造方法
US5522879A (en) 1991-11-12 1996-06-04 Ethicon, Inc. Piezoelectric biomedical device
IT1254704B (it) 1991-12-18 1995-10-09 Mini Ricerca Scient Tecnolog Tessuto non tessuto essenzialmente costituito da derivati dell'acido ialuronico
US5824335A (en) 1991-12-18 1998-10-20 Dorigatti; Franco Non-woven fabric material comprising auto-crosslinked hyaluronic acid derivatives
JP2855307B2 (ja) 1992-02-05 1999-02-10 生化学工業株式会社 光反応性グリコサミノグリカン、架橋グリコサミノグリカン及びそれらの製造方法
FR2689131B1 (fr) 1992-03-30 1994-05-20 Oreal Procede de preparation de monoesters majoritairement en position 6' du d-maltose et leur utilisation dans les domaines cosmetique, bucco-dentaire, pharmaceutique et alimentaire.
JPH0625306A (ja) 1992-04-21 1994-02-01 Shiseido Co Ltd 溶媒不溶化ヒアルロン酸及びその製造方法
IT1263316B (it) 1993-02-12 1996-08-05 Fidia Advanced Biopolymers Srl Tessuto non tessuto multistrato in cui uno degli strati e' costituito essenzialmente da esteri dell'acido ialuronico
NL9700003A (nl) 1993-09-28 1997-07-01 House Foods Corp Werkwijze voor het inoculeren van Fistulina hepatica.
US5616568A (en) 1993-11-30 1997-04-01 The Research Foundation Of State University Of New York Functionalized derivatives of hyaluronic acid
EP0701704B1 (en) 1994-03-14 1999-12-15 Seikagaku Corporation Material to be worn on the eyeball
US5455349A (en) 1994-05-13 1995-10-03 Polaroid Corporation Vinylbenzyl thymine monomers
WO1996009840A1 (en) 1994-09-27 1996-04-04 Nycomed Imaging A/S Contrast agent
JP3308742B2 (ja) 1994-11-17 2002-07-29 生化学工業株式会社 光架橋性ヒアルロン酸誘導体とその架橋体およびそれらの製造方法
US6025444A (en) 1994-11-17 2000-02-15 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) Cinnamic acid derivative
US5690961A (en) 1994-12-22 1997-11-25 Hercules Incorporated Acidic polysaccharides crosslinked with polycarboxylic acids and their uses
WO1996027615A1 (en) 1995-03-07 1996-09-12 Novartis Ag Photochemically cross-linked polysaccharide derivatives as supports for the chromatographic separation of enantiomers
IT1281877B1 (it) 1995-05-10 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Sali di metalli pesanti di succinil derivati dell'acido ialuronico e loro impiego come potenziali agenti terapeutici
IT1281886B1 (it) 1995-05-22 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Processo per la preparazione di idrogel ottenuti da derivati chimici dell'acido ialuronico mediante irradiazioni ultraviolette e loro
DE69634823T2 (de) 1995-08-29 2006-03-23 Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. Aus hyaluronsäurederivaten bestehenden biomaterialien zur hemmung der postoperativen adhäsionsbildung
DE69625658T2 (de) 1995-09-13 2003-07-17 Seikagaku Kogyo K.K.(Seikagaku Corp.), Tokio/Tokyo Kontaktlinse auf Basis photogehärteter Hyaluronsäure
DE19604706A1 (de) 1996-02-09 1997-08-14 Merck Patent Gmbh Vernetzungsprodukte von Aminogruppen-haltigen Biopolymeren
DE19616010C2 (de) 1996-04-23 1998-07-09 Seitz Filter Werke Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung von Fibrets (Fibriden) aus Zellulosederivaten
IT1287698B1 (it) 1996-08-29 1998-08-18 Fidia Advanced Biopolymers Srl Fili da sutura essenzialmente costituiti da derivati esterei dello acido ialuronico
US6632802B2 (en) 1996-08-29 2003-10-14 Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. Hyaluronic acid esters, threads and biomaterials containing them, and their use in surgery
US6162537A (en) 1996-11-12 2000-12-19 Solutia Inc. Implantable fibers and medical articles
WO1999001143A1 (en) 1997-07-03 1999-01-14 Orquest, Inc. Cross-linked polysaccharide drug carrier
ITPD980037A1 (it) 1998-02-25 1999-08-25 Fidia Advanced Biopolymers Srl Acido ialuronico solfatato e i suoi derivati legati covalentemente a polimeri sintetici pe la preparazione di biomateriali e per il rivesti
CA2330388A1 (en) 1998-04-30 1999-11-11 Maruha Corporation Compounds having glucuronic acid derivative and glucosamine derivative in structure thereof, method for producing the compounds, and uses of the compounds
NZ507873A (en) 1998-05-07 2002-05-31 Tno Process for selective oxidation of primary alcohols
US6630457B1 (en) 1998-09-18 2003-10-07 Orthogene Llc Functionalized derivatives of hyaluronic acid, formation of hydrogels in situ using same, and methods for making and using same
US6472541B2 (en) 1998-11-20 2002-10-29 The Regents Of The University Of California Protecting groups with increased photosensitivities
IT1302534B1 (it) 1998-12-21 2000-09-05 Fidia Advanced Biopolymers Srl Composizioni iniettabili, biocompatibili e biodegradabili comprendentialmeno un derivato dell'acido ialuronico, cellule condrogeniche, per
EP1140199B1 (de) 1998-12-23 2003-07-23 Esparma GmbH Hyaluronatlyase als penetrationsförderer in topischen mitteln
DE19917614C2 (de) 1999-04-19 2001-07-05 Thueringisches Inst Textil Verfahren zur Herstellung von cellulosischen Formkörpern mit hohem Adsorptionsvermögen
US6288043B1 (en) 1999-06-18 2001-09-11 Orquest, Inc. Injectable hyaluronate-sulfated polysaccharide conjugates
US7033603B2 (en) 1999-08-06 2006-04-25 Board Of Regents The University Of Texas Drug releasing biodegradable fiber for delivery of therapeutics
US6592794B1 (en) 1999-09-28 2003-07-15 Organogenesis Inc. Process of making bioengineered collagen fibrils
JP2003516939A (ja) 1999-11-08 2003-05-20 エスシーエイ・ハイジーン・プロダクツ・ゼイスト・ベー・ブイ 第一級アルコールを酸化する方法
US6180087B1 (en) 2000-01-18 2001-01-30 Mallinckrodt Inc. Tunable indocyanine dyes for biomedical applications
DE10003397A1 (de) 2000-01-27 2001-08-09 Hartmann Paul Ag Polyelektrolyt-Feststoffsystem, Verfahren zur Herstellung desselben sowie Wundverband
DE10009996B4 (de) 2000-03-02 2005-10-13 Cognis Ip Management Gmbh Feststoffgranulate mit monodisperser Korngrößenverteilung, ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung
IT1317358B1 (it) 2000-08-31 2003-06-16 Fidia Advanced Biopolymers Srl Derivati cross-linkati dell'acido ialuronico.
IT1317359B1 (it) 2000-08-31 2003-06-16 Fidia Advanced Biopolymers Srl Polisaccaridi percarbossilati, quali l'acido ialuronico, processo perla loro preparazione e loro impiego in campo farmaceutico e
US6669926B1 (en) 2000-10-16 2003-12-30 Mallinckrodt, Inc. Hydrophilic light absorbing indole compounds for determination of physiological function in critically ill patients
US6498269B1 (en) 2000-10-17 2002-12-24 The University Of Connecticut Method for the oxidation of aldehydes, hemiacetals and primary alcohols
AU2002219718A1 (en) 2000-12-13 2002-06-24 Sca Hygiene Products Zeist B.V. Process for oxidising primary alcohols
EP1217008B1 (en) 2000-12-19 2006-03-01 Seikagaku Corporation Photocurable hyaluronic acid derivative and process for producing the same, and photocured crosslinked hyaluronic acid derivative and medical material using the same
FR2819808B1 (fr) 2001-01-19 2003-04-18 Simafex Compositions stabilisees d'acide o-iodoxybenzoique et leur procede de preparation
JP4135502B2 (ja) 2001-01-31 2008-08-20 生化学工業株式会社 架橋多糖スポンジ
US6902548B1 (en) 2001-03-19 2005-06-07 Ed Schuler Use of Streptomyces hyalurolyticus enzyme in ophthalmic treatments
US6673919B2 (en) 2001-03-30 2004-01-06 Chisso Cororation Chemically modified hyaluronic acid or salts thereof, and a process for producing thereof
US6946284B2 (en) 2001-11-16 2005-09-20 University Of Massachusetts Solubilizing cross-linked polymers with photolyase
FR2833493B1 (fr) 2001-12-18 2005-09-23 Ioltechnologie Production Forme galenique solide et soluble pour l'administration occulaire de principes actifs et procede de fabrication d'un insert ophtalmique solide et soluble
US20060189516A1 (en) 2002-02-19 2006-08-24 Industrial Technology Research Institute Method for producing cross-linked hyaluronic acid-protein bio-composites
ITPD20020064A1 (it) 2002-03-12 2003-09-12 Fidia Advanced Biopolymers Srl Derivati esterei dell'acido ialuronico per la preparazione di idrogelda utilizzare in campo biomedico, sanitario e chirurgico e come sistem
JP3975267B2 (ja) 2002-06-03 2007-09-12 独立行政法人産業技術総合研究所 多糖物質のアシル化方法
US20040101546A1 (en) 2002-11-26 2004-05-27 Gorman Anne Jessica Hemostatic wound dressing containing aldehyde-modified polysaccharide and hemostatic agents
JP4323148B2 (ja) 2002-09-30 2009-09-02 チッソ株式会社 ｎ−アルカノイル化ヒアルロン酸もしくはその塩およびその製造法
US6965040B1 (en) 2002-11-04 2005-11-15 Xiaolian Gao Photogenerated reagents
US20040116018A1 (en) 2002-12-17 2004-06-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Method of making fibers, nonwoven fabrics, porous films and foams that include skin treatment additives
US7550136B2 (en) 2002-12-20 2009-06-23 University Of Massachusetts Photo-reactive polymers and devices for use in hair treatments
US7465766B2 (en) 2004-01-08 2008-12-16 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US6982298B2 (en) 2003-01-10 2006-01-03 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US20050126338A1 (en) 2003-02-24 2005-06-16 Nanoproducts Corporation Zinc comprising nanoparticles and related nanotechnology
FR2852012B1 (fr) 2003-03-04 2006-06-23 Oreal Procede de preparation de derives o-acyles du glucose
JP4813179B2 (ja) 2003-03-11 2011-11-09 生化学工業株式会社 光架橋多糖組成物およびその製造方法
US7947766B2 (en) 2003-06-06 2011-05-24 The Procter & Gamble Company Crosslinking systems for hydroxyl polymers
ES2226567B1 (es) 2003-06-20 2006-07-01 Universidad De Santiago De Compostela Nanoparticulas de acido hialuronico.
DE10331342B4 (de) 2003-07-11 2009-03-12 Thüringisches Institut für Textil- und Kunststoff-Forschung e.V. Thermostabile Form- oder Spinnmasse
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
RU2333223C2 (ru) * 2003-08-12 2008-09-10 Лайпоксен Текнолоджиз Лимитед Альдегидные производные сиаловой кислоты, способы их получения, конъюгаты альдегидных производных сиаловой кислоты и фармацевтическая композиция на их основе
WO2005025630A1 (en) 2003-09-10 2005-03-24 Cato T Laurencin Polymeric nanofibers for tissue engineering and drug delivery
WO2005028632A2 (en) 2003-09-19 2005-03-31 Colorado State University Research Foundation (Csurf) Hyaluronan (ha) esterification via acylation technique for moldable devices
US8313765B2 (en) 2003-12-04 2012-11-20 Industrial Technology Research Institute Biodegradable hyaluronic acid derivative, biodegradable polymeric micelle composition and pharmaceutical or bioactive composition
US20100330143A1 (en) 2003-12-04 2010-12-30 University Of Utah Research Foundation Modified macromolecules and methods of making and using thereof
GB2408741B (en) 2003-12-04 2008-06-18 Ind Tech Res Inst Hyaluronic acid derivative with urethane linkage
GB0406013D0 (en) 2004-03-17 2004-04-21 Chiron Srl Analysis of saccharide vaccines without interference
EP2329852A1 (en) 2004-03-26 2011-06-08 SurModics, Inc. Composition and method for preparing biocompatible surfaces
ITMI20040605A1 (it) 2004-03-29 2004-06-29 Coimex S C R L United Companie Esteri butirrici dell'acido ialuronico a basso grado di sostituzione procedimento per la loro preparazione ed uso
CN101052684B (zh) 2004-07-09 2014-02-12 克利夫兰临床基金会 羟基苯交联大分子网络及其应用
US7323425B2 (en) 2004-08-27 2008-01-29 Stony Brook Technology And Applied Research Crosslinking of hyaluronan solutions and nanofiberous membranes made therefrom
US8143391B2 (en) 2004-09-07 2012-03-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for producing water-soluble hyaluronic acid modification
US7214759B2 (en) 2004-11-24 2007-05-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biologically absorbable coatings for implantable devices based on polyesters and methods for fabricating the same
ES2636998T3 (es) 2004-11-24 2017-10-10 Albumedix A/S Método de reticulación de ácido hialurónico con divinil sulfona
WO2006078914A1 (en) 2005-01-21 2006-07-27 Washington University In St. Louis Compounds having rd targeting motifs
JP2008538300A (ja) 2005-03-22 2008-10-23 タイコ ヘルスケア グループ リミテッド パートナーシップ 生体活性の広く織られたメッシュ
US7680038B1 (en) 2005-04-25 2010-03-16 Electronic Arts, Inc. Dynamic bandwidth detection and response for online games
GB0513552D0 (en) 2005-07-01 2005-08-10 Bristol Myers Squibb Co Bandage
EP1905456A4 (en) 2005-07-06 2010-12-22 Seikagaku Kogyo Co Ltd PHARMACEUTICAL LIGHT-NETWORKED HYALURONIC DERIVATIVE GEL
ITPD20050206A1 (it) 2005-07-07 2007-01-08 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriali in forma di fibra da impiegarsi come dispositivi medici nel trattamento delle ferite e loro processi di produzione
ITMI20051415A1 (it) 2005-07-22 2007-01-23 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriali a base di corbossimetilcellulosa salificata con zinco associata a derivati dell'acido ialuronico da impiegarsi come dispositivi medici con attivita' antimicrobica ed antifungina e loro processo di produzione
WO2007035116A1 (en) 2005-09-21 2007-03-29 Kode Biotech Limited Cell surface coating with hyaluronic acid oligomer derivative
US7993678B2 (en) 2005-09-26 2011-08-09 Novozymes Biopolymer A/S Hyaluronic acid derivatives
US20070202084A1 (en) 2005-12-14 2007-08-30 Anika Therapeutics, Inc. Bioabsorbable implant of hyaluronic acid derivative for treatment of osteochondral and chondral defects
US20070202570A1 (en) 2006-02-24 2007-08-30 Kikkoman Corporation Enzyme composition, low molecular weight hyaluronan and process for preparing the same
CN101432311A (zh) 2006-02-28 2009-05-13 诺维信生物聚合物公司 透明质酸衍生物
JP4892679B2 (ja) 2006-03-27 2012-03-07 国立大学法人弘前大学 ゲル紡糸によるヒアルロン酸繊維およびその製造方法
KR20070118730A (ko) 2006-06-13 2007-12-18 주식회사 코오롱 보습성이 우수한 창상피복재 및 그의 제조방법
US20080124395A1 (en) 2006-06-22 2008-05-29 Weiliam Chen Formulations and devices for treatment or prevention of neural ischemic damage
US20100207078A1 (en) 2006-07-12 2010-08-19 Seth Marder Deprotection of functional groups by multi-photon induced electron transfer
JP2009545637A (ja) 2006-08-04 2009-12-24 ノボザイムス バイオファーマ デーコー アクティーゼルスカブ 分岐ヒアルロン酸及びその製造方法
US20080063617A1 (en) 2006-09-07 2008-03-13 Abrahams John M Cosmetics formulations
ITMI20061726A1 (it) 2006-09-11 2008-03-12 Fidia Farmaceutici Derivati crosslinkati a base di acido ialuronico reticolato via click chemistry
CZ302856B6 (cs) 2006-09-27 2011-12-14 Cpn Spol. S R. O. Zpusob prípravy derivátu polysacharidu
US8979931B2 (en) 2006-12-08 2015-03-17 DePuy Synthes Products, LLC Nucleus replacement device and method
AU2007336692B2 (en) 2006-12-22 2013-12-12 Croma-Pharma Gesellschaft M.B.H. Use of polymers
EP1942117A1 (en) 2006-12-29 2008-07-09 Sigea S.R.L. Derivatives of acid polysaccharides
KR20080062092A (ko) 2006-12-29 2008-07-03 주식회사 핸슨바이오텍 세포전달체로서의 히알루론산 유도체 및 이의 제조 방법
JP5329767B2 (ja) 2007-02-26 2013-10-30 帝人株式会社 芳香族コポリアミド繊維の製造装置
WO2008115799A1 (en) 2007-03-21 2008-09-25 William Marsh Rice University Novel gene delivery vectors for human mesenchymal stem cells
CZ2007299A3 (cs) 2007-04-24 2009-02-04 Cpn Spol. S R. O. Príprava nanovláken z polysacharidu a jejich smesí s polyvinylalkoholem
JP5165281B2 (ja) 2007-06-01 2013-03-21 株式会社バイオベルデ ２反応剤型の医療用含水ゲル形成剤、及び、これより得られるヒアルロン酸ゲル
US8288142B2 (en) 2007-06-19 2012-10-16 Uvarkina Tamara P Hyaluronidase and method of use thereof
KR101226851B1 (ko) 2007-06-20 2013-01-25 (주)엘지하우시스 이중노즐을 이용한 나노섬유의 제조방법
CA2691541A1 (en) 2007-06-22 2008-12-31 Innovative Surface Technologies, Inc. Nanofibers containing latent reactive groups
US8268638B2 (en) 2007-07-18 2012-09-18 Advantageous Systems, Llc Methods and apparatuses for detecting analytes in biological fluid of an animal
FR2920786B1 (fr) 2007-09-07 2010-09-10 Univ Claude Bernard Lyon Fibres creuses, notamment multi membranaires, leur procede de preparation par filage et dispositif pour la mise en oeuvre dudit procede
FR2921675B1 (fr) 2007-09-28 2010-03-19 Univ Claude Bernard Lyon Filament a base d'acide hyaluronique et son procede d'obtention.
US20130136784A1 (en) 2007-10-11 2013-05-30 Robert J. Staab Methods for delivery of medication using dissolvable devices
US7976825B2 (en) 2007-12-06 2011-07-12 Janos Borbely Cancer cell diagnosis by targeting delivery of nanodevices
EP2242794B1 (de) 2008-02-11 2014-04-30 Basf Se Verfahren zur herstellung poröser strukturen aus synthetischen polymeren
US20110028062A1 (en) 2008-02-14 2011-02-03 Chester Stephen O Bicomponent fibers, textile sheets and use thereof
EP3456749B1 (en) 2008-02-29 2021-07-14 PVAC Medical Technologies Ltd. A substituted polyvinyl alcohol reagent
AU2009246822B2 (en) 2008-03-31 2012-05-03 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Site specific fluorescence marking and contrast marker for same
JP5563563B2 (ja) 2008-06-05 2014-07-30 エージェンシー フォー サイエンス， テクノロジー アンド リサーチ ペルオキシダーゼおよび低濃度の過酸化水素の存在下でのヒドロゲルの形成方法
JP2010014784A (ja) 2008-07-01 2010-01-21 Fuji Xerox Co Ltd 光書込型表示装置、書込装置、及び光書き込み方法
IT1391734B1 (it) 2008-07-29 2012-01-27 Anika Therapeutics Srl Nuovi biomateriali, loro preparazione per elettrospinning e loro uso in campo biomedico e chirurgico.
FR2934999B1 (fr) 2008-08-13 2011-07-29 Adocia Polysaccharides fonctionnalises par des derives du tryptophane
EP3184552B1 (en) 2008-09-02 2020-08-12 Tautona Group LP Threads of hyaluronic acid, methods of making thereof and uses thereof
CZ2008705A3 (cs) 2008-11-06 2010-04-14 Cpn S. R. O. Zpusob prípravy DTPA sítovaných derivátu kyseliny hyaluronové a jejich modifikace
ITRM20080636A1 (it) 2008-11-28 2010-05-29 Univ Palermo Procedimento per la produzione di derivati funzionalizzati dell acido ialuronico e relativi idrogeli.
JP2010138276A (ja) 2008-12-11 2010-06-24 Nipro Corp ヒアルロン酸単糸の製造方法
EP2398850B1 (en) 2009-02-21 2018-08-22 Sofradim Production Medical devices with an activated coating
US8648144B2 (en) 2009-02-21 2014-02-11 Sofradim Production Crosslinked fibers and method of making same by extrusion
WO2010095052A2 (en) 2009-02-21 2010-08-26 Sofradim Production Compounds and medical devices activated with solvophobic linkers
CZ301899B6 (cs) 2009-03-17 2010-07-21 Contipro C, A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové pomocí O-acyl-O´-alkylkarbonátu v prítomnosti substituovaného pyridinu
US8551378B2 (en) 2009-03-24 2013-10-08 North Carolina State University Nanospinning of polymer fibers from sheared solutions
US20120219554A2 (en) 2009-05-14 2012-08-30 Fidia Farmaceutici S.P.A. Extracellular yaluronidase from streptomyces koganeiensis
WO2010138074A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Hilborn Joens Hyaluronic acid based delivery systems
CN102458370A (zh) 2009-06-09 2012-05-16 卢克斯生物科技公司 用于眼科用途的表面药物递送系统
EP2459239A1 (en) 2009-07-30 2012-06-06 Carbylan Biosurgery, Inc. Modified hyaluronic acid polymer compositions and related methods
KR101103423B1 (ko) 2009-09-04 2012-01-06 아주대학교산학협력단 생체 주입형 조직 접착성 하이드로젤 및 이의 생의학적 용도
EP3067069B1 (en) 2009-11-11 2023-07-26 Hy2Care B.V. Hydrogels based on polymers of dextran tyramine and tyramine conjugates of natural polymers
EP2498830B1 (en) 2009-11-11 2016-09-21 University of Twente, Institute for Biomedical Technology and Technical Medicine (MIRA) Dextran-hyaluronic acid based hydrogels
US20110111012A1 (en) 2009-11-12 2011-05-12 Hemcon Medical Technologies, Inc. Nanomaterial wound dressing assembly
CZ302503B6 (cs) 2009-12-11 2011-06-22 Contipro C A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové oxidovaného v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd a zpusob jeho modifikace
US8197849B2 (en) 2010-02-12 2012-06-12 National Health Research Institutes Cross-linked oxidated hyaluronic acid for use as a vitreous substitute
US20110229551A1 (en) 2010-03-17 2011-09-22 Notus Laboratories, Inc. Drug delivery compositions and methods using nanofiber webs
IT1399202B1 (it) 2010-03-30 2013-04-11 Corbelli Metodo per la produzione di manufatti elastomerici funzionalizzati e manufatti cosi' ottenuti
EP2585096B1 (en) 2010-06-24 2021-05-05 University Of Kansas Bifunctional conjugate compositions and associated methods
CN101897976A (zh) 2010-07-16 2010-12-01 沈阳药科大学 一种药物增溶载体及其制备方法和应用
CZ305040B6 (cs) 2010-09-14 2015-04-08 Contipro Biotech S.R.O. Způsob přípravy vysoce substituovaných amidů kyseliny hyaluronové
CZ302994B6 (cs) 2010-12-31 2012-02-08 Cpn S.R.O. Hyaluronová vlákna, zpusob jejich prípravy a použití
WO2012105983A1 (en) 2011-02-03 2012-08-09 Empire Technology Development Llc Selective 3d biopatterning
KR101201412B1 (ko) 2011-04-19 2012-11-14 한양대학교 에리카산학협력단 다공성 코어쉘 나노웹의 제조방법
CZ304072B6 (cs) 2011-04-26 2013-09-25 Contipro Biotech S.R.O. Amfoterní materiál na bázi sítované kyseliny hyaluronové, zpusob jeho prípravy, materiály obsahující aktivní cinidla uzavrené v síti hyaluronanu, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití
CN102154738B (zh) 2011-05-10 2012-08-01 青岛大学 一种红藻琼胶纤维的制备方法
ITTO20110428A1 (it) 2011-05-13 2012-11-14 Rottapharm Spa Esteri dell'acido ialuronico, loro preparazione ed uso in dermatologia
ES2657756T3 (es) 2011-10-18 2018-03-06 Heiq Pty Ltd Proceso de formación de fibra y fibras producidas por medio del proceso
KR20130085294A (ko) 2012-01-19 2013-07-29 충남대학교산학협력단 림프노드 탐지용 형광 고분자 나노젤 및 이를 이용한 림프노드 확인 방법
CZ2012136A3 (cs) 2012-02-28 2013-06-05 Contipro Biotech S.R.O. Deriváty na bázi kyseliny hyaluronové schopné tvorit hydrogely, zpusob jejich prípravy, hydrogely na bázi techto derivátu, zpusob jejich prípravy a pouzití
CZ2012282A3 (cs) 2012-04-25 2013-11-06 Contipro Biotech S.R.O. Zesítovaný derivát hyaluronanu, zpusob jeho prípravy, hydrogel a mikrovlákna na jeho bázi
WO2013171764A2 (en) 2012-04-30 2013-11-21 Rubicon Research Private Limited Ophthalmic formulations
CZ304651B6 (cs) 2012-05-11 2014-08-20 Contipro Biotech S.R.O. Způsob přípravy mikrovláken, způsob výroby krytů ran, kryty ran a zařízení pro přípravu polysacharidových vláken
CZ304266B6 (cs) 2012-11-27 2014-02-05 Contipro Biotech S.R.O. Nekonečná vlákna na bázi hyaluronanu selektivně oxidovaného v poloze 6 N-acetyl-D-glukosaminové části, jejich příprava, použití, nitě, střiže, příze, textilie a způsob jejich úpravy
CZ2012844A3 (cs) 2012-11-27 2014-02-05 Contipro Biotech S.R.O. Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
CZ2012842A3 (cs) 2012-11-27 2014-08-20 Contipro Biotech S.R.O. Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití
CZ304303B6 (cs) 2012-11-27 2014-02-19 Contipro Biotech S.R.O. Vlákna založená na hydrofobizovaném hyaluronanu, způsob jejich přípravy a použití, textilie na jejich bázi a použití
KR101386096B1 (ko) 2013-02-28 2014-04-21 강원대학교산학협력단 음이온성 단백질 약물 전달을 위한 키토산 나노섬유, 그 제조방법 및 그 키토산 나노섬유를 포함하는 경점막 투여제
CN103505736A (zh) 2013-09-23 2014-01-15 天津大学 基于改性透明质酸的高分子脂质体及其制备方法
CN103789874B (zh) 2014-01-23 2016-02-10 北京化工大学常州先进材料研究院 平行电场诱导相分离法制备核壳结构天然聚电解质纳米纤维
EP2899214A1 (en) 2014-01-27 2015-07-29 Basf Se Ethylenically unsaturated polysaccharides, method for their production and their use
CZ2014150A3 (cs) 2014-03-11 2015-05-20 Contipro Biotech S.R.O. Konjugáty oligomeru kyseliny hyaluronové nebo její soli, způsob jejich přípravy a použití

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA004046B1 (ru) * 1999-10-22 2003-12-25 Авентис Фарма С.А. Олигосахариды, способ их получения и содержащие их фармацевтические композиции
RU2240329C2 (ru) * 2001-08-29 2004-11-20 Государственное унитарное предприятие "Северное отделение Полярного научно-исследовательского института морского рыбного хозяйства и океанографии" Способ получения биологически активного кислого сульфатированного полисахарида из морских водорослей - фукоидана
RU2332424C2 (ru) * 2002-10-10 2008-08-27 Авентис Фарма С.А. Смесь полисахаридов, являющихся производными гепарина, их получение и фармацевтические композиции, их содержащие
RU2550602C2 (ru) * 2009-12-11 2015-05-10 КОНТИПРО Фарма а.с. Производное гиалуроновой кислоты, способ его получения и способ его модификации
WO2014023272A1 (en) * 2012-08-08 2014-02-13 Contipro Biotech S.R.O. Hyaluronic acid derivative, method of preparation thereof, method of modification thereof and use thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KUHN A.V. et al.: "Identification of hyaluronic acid oligosaccharides by direct coupling of capillary electrophoresis with electrospray ion trap mass spectrometry : СЕ/MS identification of hyaluronic acid oligosaccharides", RAPID COMMUNICATIONS IN MASS SPECTROMETRY, 2003, v.17, no.6, p.576-582. *

Also Published As

Publication number Publication date
KR102327939B1 (ko) 2021-11-17
CZ308106B6 (cs) 2020-01-08
PL3475310T3 (pl) 2020-11-02
JP6982321B2 (ja) 2021-12-17
BR112018075531A2 (pt) 2019-03-19
JP2019522705A (ja) 2019-08-15
BR112018075531B1 (pt) 2022-11-16
US20190169317A1 (en) 2019-06-06
DK3475310T3 (da) 2020-04-06
KR20190022717A (ko) 2019-03-06
HUE049730T2 (hu) 2020-10-28
ES2790837T3 (es) 2020-10-29
CZ2016375A3 (cs) 2018-01-03
WO2018001394A1 (en) 2018-01-04
EP3475310B1 (en) 2020-03-18
EP3475310A1 (en) 2019-05-01
US10618984B2 (en) 2020-04-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2510016B1 (en) A method of preparation of an oxidized derivative of hyaluronic acid and a method of modification thereof
RU2725500C1 (ru) Ненасыщенные производные полисахаридов, способ их получения и их применения
EP2510017B1 (en) Oxidized derivative of hyaluronic acid, a method of preparation thereof and a method of modification thereof
JP6649892B2 (ja) ヒアルロン酸オリゴマーの複合体又はその塩，その調製法及びその使用
EP3494144B1 (en) Method of crosslinking glycosaminoglycans
Bobula et al. One-pot synthesis of α, β-unsaturated polyaldehyde of chondroitin sulfate
EP3494145B1 (en) Method of crosslinking glycosaminoglycans
KR102665664B1 (ko) 황산화 다당류의 유도체 및 이의 제조 방법, 변형 방법 및 용도
JP6753610B2 (ja) Ｎ−脱硫酸化グリコサミノグリカンの誘導体、及び薬物としての使用
US20080182982A1 (en) Methyl esters of hyaluronic acid
US6482941B1 (en) Carboxylated polysaccharides 6-substituted
KR102113905B1 (ko) 카르복실화된(carboxylated) 글리코스아미노글리칸 유도체 및 약물로서의 용도
AU2017307331A1 (en) Method of crosslinking glycosaminoglycans