CZ2012842A3 - Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití - Google Patents
Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2012842A3 CZ2012842A3 CZ2012-842A CZ2012842A CZ2012842A3 CZ 2012842 A3 CZ2012842 A3 CZ 2012842A3 CZ 2012842 A CZ2012842 A CZ 2012842A CZ 2012842 A3 CZ2012842 A3 CZ 2012842A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- hyaluronan
- acid
- water
- acylated
- nanomicellar
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 75
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 5
- WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-3-[(2s,3r,5s,6r)-3-acetamido-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5,6-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical class CC(=O)N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N 0.000 title 2
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 claims abstract description 206
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims abstract description 174
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 claims abstract description 132
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 54
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 43
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 42
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 28
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 12
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 10
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 238000000527 sonication Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims abstract description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 130
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 113
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 98
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 74
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 46
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 44
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 42
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 35
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 32
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 32
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 30
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 29
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 29
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 26
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 claims description 24
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 20
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 19
- OZGSEIVTQLXWRO-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trichlorobenzoyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=C(Cl)C=C(Cl)C=C1Cl OZGSEIVTQLXWRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 16
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 16
- RAFFVQBMVYYTQS-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trichlorobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=C(Cl)C=C(Cl)C=C1Cl RAFFVQBMVYYTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N dimethyl sulfoxide Natural products CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 14
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 claims description 13
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 claims description 12
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 11
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 11
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 11
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 claims description 11
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 claims description 11
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 claims description 11
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 claims description 11
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 claims description 11
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 10
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000007738 vacuum evaporation Methods 0.000 claims description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- ACTIUHUUMQJHFO-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q10 Natural products COC1=C(OC)C(=O)C(CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 claims description 8
- 235000017471 coenzyme Q10 Nutrition 0.000 claims description 8
- 229940110767 coenzyme Q10 Drugs 0.000 claims description 8
- ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N coenzyme Q10 Chemical compound COC1=C(OC)C(=O)C(C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N 0.000 claims description 8
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000007908 nanoemulsion Substances 0.000 claims description 8
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 claims description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 claims description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 claims description 6
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N heptanoic acid Chemical compound CCCCCCC(O)=O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 claims description 6
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 claims description 5
- ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N ammonium persulfate Chemical group [NH4+].[NH4+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 5
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 5
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 claims description 5
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 claims description 4
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 claims description 4
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 claims description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 4
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 4
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 4
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 4
- KKMZQOIASVGJQE-UHFFFAOYSA-N 3-thiophen-2-ylprop-2-enoic acid Chemical compound OC(=O)C=CC1=CC=CS1 KKMZQOIASVGJQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 claims description 3
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960001701 chloroform Drugs 0.000 claims description 3
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims description 3
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 238000007348 radical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 claims description 3
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 claims description 2
- 229910001870 ammonium persulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019395 ammonium persulphate Nutrition 0.000 claims description 2
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 2
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 claims description 2
- 150000003222 pyridines Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims 2
- 125000002941 2-furyl group Chemical group O1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 claims 1
- -1 2,4,6-trichlorobenzoic acid halide Chemical class 0.000 abstract description 52
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 abstract description 19
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 abstract description 15
- 230000035515 penetration Effects 0.000 abstract description 12
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 abstract description 11
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 abstract description 9
- 238000012546 transfer Methods 0.000 abstract description 6
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 abstract description 3
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 64
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 50
- 239000000047 product Substances 0.000 description 38
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 32
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 32
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 31
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 27
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 26
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 20
- VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N nile red Chemical compound C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=O)C2=C1 VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 18
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 18
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 17
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 17
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 17
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 17
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 14
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 14
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 12
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 12
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 11
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 10
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 9
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 9
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 9
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 9
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 9
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 9
- GZXJGTAOGZYNSM-UHFFFAOYSA-N (2,4,6-trichlorobenzoyl) 2,4,6-trichlorobenzoate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC(Cl)=C1C(=O)OC(=O)C1=C(Cl)C=C(Cl)C=C1Cl GZXJGTAOGZYNSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 8
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 7
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 7
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 7
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 6
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 7-aminoactinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=C(N)C=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 0.000 description 4
- 108700012813 7-aminoactinomycin D Proteins 0.000 description 4
- NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N Oil red O Chemical compound Cc1ccc(C)c(c1)N=Nc1cc(C)c(cc1C)N=Nc1c(O)ccc2ccccc12 NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 4
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical class C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- GYSCBCSGKXNZRH-UHFFFAOYSA-N 1-benzothiophene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2SC(C(=O)N)=CC2=C1 GYSCBCSGKXNZRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N Lactic Acid Natural products CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N benzyl(trichloro)silane Chemical compound Cl[Si](Cl)(Cl)CC1=CC=CC=C1 GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000005178 buccal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000013021 overheating Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000010349 pulsation Effects 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000001370 static light scattering Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 2
- ZDPHROOEEOARMN-UHFFFAOYSA-N undecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC(O)=O ZDPHROOEEOARMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XINQFOMFQFGGCQ-UHFFFAOYSA-L (2-dodecoxy-2-oxoethyl)-[6-[(2-dodecoxy-2-oxoethyl)-dimethylazaniumyl]hexyl]-dimethylazanium;dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].CCCCCCCCCCCCOC(=O)C[N+](C)(C)CCCCCC[N+](C)(C)CC(=O)OCCCCCCCCCCCC XINQFOMFQFGGCQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- ZCJLOOJRNPHKAV-ONEGZZNKSA-N (e)-3-(furan-2-yl)prop-2-enoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=CO1 ZCJLOOJRNPHKAV-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 1
- TVZDIFXOIOIPJG-UHFFFAOYSA-N 2,3,4-trichlorobenzoyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1Cl TVZDIFXOIOIPJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGMOBVGABMBZSB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropanoyl chloride Chemical compound CC(C)C(Cl)=O DGMOBVGABMBZSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004178 Anthoxanthum odoratum Species 0.000 description 1
- 101100312904 Arabidopsis thaliana ADA2A gene Proteins 0.000 description 1
- 241000694440 Colpidium aqueous Species 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 240000000233 Melia azedarach Species 0.000 description 1
- 229940121948 Muscarinic receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000003492 Neolamarckia cadamba Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- OCNZHGHKKQOQCZ-CLFAGFIQSA-N [(z)-octadec-9-enoyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC OCNZHGHKKQOQCZ-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- UKLDJPRMSDWDSL-UHFFFAOYSA-L [dibutyl(dodecanoyloxy)stannyl] dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)O[Sn](CCCC)(CCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC UKLDJPRMSDWDSL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000007933 aliphatic carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 1
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010078068 alpha-tocopherol transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 150000004648 butanoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- YHASWHZGWUONAO-UHFFFAOYSA-N butanoyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OC(=O)CCC YHASWHZGWUONAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000009924 canning Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000001244 carboxylic acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012468 concentrated sample Substances 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- AYOHIQLKSOJJQH-UHFFFAOYSA-N dibutyltin Chemical compound CCCC[Sn]CCCC AYOHIQLKSOJJQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001825 field-flow fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002795 fluorescence method Methods 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 231100000640 hair analysis Toxicity 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Chemical class 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 231100000110 immunotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002625 immunotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000004922 lacquer Substances 0.000 description 1
- 238000000707 layer-by-layer assembly Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 1
- 230000003551 muscarinic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001640 nerve ending Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000003957 neurotransmitter release Effects 0.000 description 1
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 description 1
- 125000004365 octenyl group Chemical group C(=CCCCCCC)* 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000003586 protic polar solvent Substances 0.000 description 1
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000001878 scanning electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940033816 solvent red 27 Drugs 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 125000005504 styryl group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000456 subacute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 231100000378 teratogenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000003439 teratogenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003390 teratogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002341 toxic gas Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 1
- PIILXFBHQILWPS-UHFFFAOYSA-N tributyltin Chemical compound CCCC[Sn](CCCC)CCCC PIILXFBHQILWPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
- A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
- A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
- A61K31/355—Tocopherols, e.g. vitamin E
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/66—Phosphorus compounds
- A61K31/683—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols
- A61K31/685—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols one of the hydroxy compounds having nitrogen atoms, e.g. phosphatidylserine, lecithin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
- A61K47/6907—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a microemulsion, nanoemulsion or micelle
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
- A61K8/0291—Micelles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
- A61K8/73—Polysaccharides
- A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08K—Use of inorganic or non-macromolecular organic substances as compounding ingredients
- C08K3/00—Use of inorganic substances as compounding ingredients
- C08K3/30—Sulfur-, selenium- or tellurium-containing compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/10—General cosmetic use
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
- A61K2800/41—Particular ingredients further characterized by their size
- A61K2800/413—Nanosized, i.e. having sizes below 100 nm
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
- A61K2800/56—Compounds, absorbed onto or entrapped into a solid carrier, e.g. encapsulated perfumes, inclusion compounds, sustained release forms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08K—Use of inorganic or non-macromolecular organic substances as compounding ingredients
- C08K3/00—Use of inorganic substances as compounding ingredients
- C08K3/30—Sulfur-, selenium- or tellurium-containing compounds
- C08K2003/3045—Sulfates
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Birds (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
Abstract
Řešení se týká způsobu přípravy hydrofobizovaného hyaluronanu (vzorec I) a dále způsobu enkapsulace biologicky aktivních látek do nanomicel hydrofobizovaného hyaluronanu sloužícího jako nosiče biologicky aktivních hydrofobních látek. Hydrofobizace hyaluronanu je provedena esterifikační reakcí hyaluronanu s karboxylovými kyselinami s dlouhými řetězci, které jsou aktivovány halogenidovým derivátem kyseliny 2,4,6-trichlorbenzoové nebo jiným organickým chloridem. Ve vodě rozpustné hydrofobizované hyaluronany mohou ve vodném prostředí vytvářet nanomicely, ve kterých mohou být nekovalentně fyzikálními interakcemi navázány nepolární látky. Jádro nanomicely tvoří hydrofobní funkční skupiny acylu, zatímco obal nanomicely tvoří hyaluronan. Enkapsulaci látek do nanomicel lze provést metodou výměny rozpouštědel nebo sonikací. Hyaluronové nanomicely podporují penetraci navázaných látek při topických aplikacích a umožňují transfer navázaných látek do buněk. Nanomicely z hydrofobizovaných hyaluronanů jsou využitelné v kosmetických i farmaceutických aplikacích.
Description
Nanomicelární kompozice na bázi Č6-Cls-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C)8acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu přípravy hydrotbbizovaného hyalurononanu a její aplikace jako nosiče biologicky aktivních hydrotbbních látek, kdy biologicky aktivní látka je enkapsulována do nanomicel hydrotbbizovaného hyaluronanu. Hydrotbbizace hyaluronanu je provedena esterifikační reakcí hyaluronanu s karboxylovými kyselinami s dlouhými řetězci, ktere jsou aktivovány halogenidovým derivátem kyseliny 2.4.6-trichlorbenzoové nebo jiným organickým chloridem R3-CO-CI. Ve vodě rozpustné hydrofobizované hyaluronany mohou ve vodném prostředí vytvářet nanomicely, ve kterých mohou být nekovalentně fyzikálními interakcemi navázány nepolární látky. Jádro nanomicely tvoří hydrofobní funkční skupiny acylu. zatímco obal nanomicely tvoří hyaluronan. Enkapsulaci látek do nanomicel lze provést metodou výměny rozpouštědel nebo sonikací. Hyaluronové nanomicely podporují penetraci navázaných látek při topických aplikacích a umožňují transfer navázaných látek do buněk. Dále se vynález tyká i způsobu přípravy stabilizovaných nanomicelárních kompozic. Nanomicely z hydrofbbizovaných hyaluronanu jsou využitelné v kosmetických i farmaceutických aplikacích.
Dosavadní stav techniky
Kyselina hyaluronová je významným polysacharidem složeným ze dvou opakujících se jednotek P-(l,3)-D-glukuronové kyseliny a P-(l ,4)-A-acetyl-D-gliikosaminu. Vyznačuje se vysokou molekulovou hmotností 5.104 až 5.106 g.mof1, která závisí na způsobu izolace a výchozím materiálu. Hyaluronan, tedy kyselina hyaluronová, respektive její sodná sůl, je nezbytnou součástí pojivových tkání, synoviální tekutiny kloubů, hraje významnou roli v řadě biologických procesů jako hydratace, organizace proteoglykanů. diferenciace buněk, prolitěrace a angiogenese. Tento značně hydrofilní polysacharid je ve vodě rozpustný ve formě soli v celé šíři pH.
Nosičové systémy na bázi kyseliny hyaluronové
Kyselina hyaluronová je hydrolilní. a proto v nativní formě nemůže sloužit jako efektivní nosič hydrofóbních látek. Z tohoto důvodu je třeba na polymerní řetězec kyseliny hyaluronové navázat hydrofobní funkční skupiny. V případě dostatečného množství a délky těchto hydrofóbních skupin může docházet k jejich autoagregaci a tvorbě hydro fóbnich domén ve struktuře hyaluronanu, do kterých je potom možné nekovalentne navazovat malé molekuly ve vodě nerozpustných látek. Vzniklý útvar se často v literatuře označuje jako polymerní micela. kde jádro micely je hydrofóbní a zajišťuje rozpouštění malých nepolárních molekul, zatímco obal micely je hydrotllní a zajišťuje rozpuštěni polymerní micely ve vodném prostředí. Polymerní micela, která svou velikostí (průměrem) nepřekračuje 200 nm se dá nazývat nanomicelou.
Nosičové systémy jako polymerní micely na bázi modifikované kyseliny hyaluronové jsou známé z konjugátů hyaluronanu s alkylaminy (Liu et al., 2011) a kyselinou listovou. Uvedená příprava hyaluronanového derivátu je však uvedena v přítomnosti formamidu, který je vysoce toxický a teratogenní. Podobná příprava polymerních micel byla použita pro získání redox-sensitivních micel (Li et al., 2012). Je zřejmé, že z důvodu použití vysoce toxického reagentu. jsou takovéto micelární systémy nepoužitelné pro biologické aplikace.
Konjugace kyseliny hyaluronové s jinými polymery (polymer kyseliny mléčné nebo glykolové) s vazbou přes karboxylovou skupinu na kyselině D-glukuronové a možnou inkorporaci nízko molekulárních látek je nárokovaná v patentu US 7767806, kde autoři zmiňují biokompatibilitu polymeru, kterou však nepopsali ani neotestovali. V jiném případě byl nízko molekulární hyaluronan (9-45 kDa) kovalentně modifikován v místě karboxylové skupiny kyseliny glukoronové hydrofóbními aminy s různou délkou řetězce a kladně nabitým sperminem jako kationickým segmentem (Shen, Li. Tu & Zhu. 2009). Účelem této práce bylo připravit nosič na geny. Použití sperminu pro tyto účely je však limitované kvůli jeho akutní a subakutní toxicitě (Til, Falke, Prinsen & Willems, 1997). Kritická micelární koncentrace vzniklých polymerních micel o velikosti 125-555 nm byla stanovena vyšší nez 0,04 mg.ml'. Kromě toho, že hodnota kritické micelární koncentrace je příliš vysoká a neumožní extrémní ředění micelárních systémů (např. v krevním řečišti), micely takové velikosti nejsou považovány za vhodné kandidáty pro pasivní distribuci léčiv v těle, kdy rozměr polymerní micely udává, jestli se dostane do místa tumoru nebo infarktu pres narušenou cévní stěnu. Pro tylo případy se obecně upřednostňují polymerní micely o velikosti 20-100 nm (Wang, Mongayt & Torchilin, 2005).
Modifikace karboxylové skupiny kyseliny glukuronové byla využita v případě přípravy polymerních hyaluronových micel na bázi elektrostatické interakce mezi negativně nabitou kyselinou hyaluronovou a pozitivně nabitým styryl pyridiniem (Tao, Xu. Chen. Bai & Liu, 2012). Použití těchto polymerních micel in vivo je však limitované z důvodu zatím ne zcela objasněné interakce styryl pyridinia s nervovými konci a dále s muskarinovými icceptory, které hrají důležitou úlohu při regulaci uvolňování neurotransmiterů z neuronů (Mazzone, Mori. Burman, Palovich, Belmonte & Canning, 2006).
' ' V
US patent 7993678 a WO 2007/03^677 si nárokuje přípravu aryl/alkyl sukcinových derivátů hyaluronanu. které jsou rovněž využitelné pro enkapsulaci aktivních nepolárních látek. V tomto případě modifikace probíhá na primárních hydroxylových skupinách hyaluronanu, zatímco karboxylová skupina j zůstává zachovaná. Nevýhodou dané modifikační reakce je alkalické pH ípH 8.5-9,0), při kterém probíhá reakce cyklických anhydridů s hyaluronanem. lakové alkalické pH totiž může vést k hydrolyze anhydridu, a tedy ke snížení efektivnosti modifikace, zejména v průmyslových měřítkách. U připravených aryl/alkyl sukcinových derivátů hyaluronanu se stupněm substituce 44 % byla ve vodě prokázána schopnost tvořit micely (agregovat) od koncentrací vyšších než 0,003-0.004 mg.ml·1. Velikost polymerních micel byla stanovena v rozmezí 50-200 nm. Nevýhodou těchto derivátů je však zvýšený celkový záporný náboj hyaluronanu díky přítomnosti další COO v akyl/aryl sukcinové modifikující funkční skupině. Záporný náboj molekuly může výrazně negativně ovlivňovat interakci mezi buňkou a nosičovým systémem (Wang. Mongayt & Torchilin, 2005). Limitujícím faktorem pro injekční aplikace takto připravených derivátů je rovněž jejich nízká rozpustnost (Eenschooten. Guillaumie. Kontogeorgis, Stenby & Schwach-Abdellaoui, 2010). Další nevýhodou takovýchto derivátů je labilita esterových vazeb při tepelných sterilizačních procesech jako je autoklávování. V patentech US 7993678 a WO 2007/033^77 je uvedený pouze způsob přímého rozpouštění nepolárních látek v roztocích alkyl/aryl sukcinových derivátů hyaluionanu včetně vzniku stabilní emulze. Hlavní nevýhodou přímého způsobu enkapsulace nepolárních látek jsou výsledné nízké vazebné kapacity polymerních micel (Kedar. Phutane. Shidhaye & Kadam, 2010). V uvedených patentech je sice nárokována struktura modifikovaného hyaluronanu pro nosičové systémy, ale kromě emulzního systému není uveden žádný další možný způsob navázání hydrofóbní látky do dané struktury hyaluronanu. Z tohoto důvodů zcela chybí uvedení i vazebné kapacity polymerního nosičového systému, což je jedna ze základních charakteristik pro reálné posouzení aplikace. Dále nejsou zmíněny parametry cytotoxicity a interakce s buňkou a nedá se tedy posoudit, jestli nárokovaná struktura skutečně může být použita na aktivní transfer hydrofóbních látek do buňky, což je ve farmaceutických aplikacích podstatné.
IV publikaci (Smejkalová, Hermannová. Šuláková. Průšová, Kučerík & Velebný. 2012) jsou uvedeny hydrofóbní domény hyaluronanu vznikající při agregaci acylových řetězců C6 kovalentně navázaných na hyaluronan. V těchto derivátech však nebyla kompletně odstraněna zbytková rozpouštědla a vznik polymerních micel a jejich charakterizace není náplní publikace. Navíc, symetrické anhydridy použité v publikaci nebyly použitelné pro vazbu dlouhých alkylových řetězců. Karboxylové kyseliny s dlouhými alifatickými řetězci jsou rovněž velmi drahé a během přípravy je navíc ztracen nejméně jeden mol kyseliny na mol reagentu. Článek rovněž nepojednává o cytotoxicitě připravených derivátů.
Příprava butyrových esterů polysacharidů včetně farmaceutické kompozice je nárokována v patentu EP 0941253. Nárokovaná metodika přípravy však vede pouze k velmi nízkým stupňům substitucí (max. 30/0). Množství nekovalentně vázané hydrofóbní látky na tyto deriváty je negativně ovlivněno tímto nízkým stupněm substituce. Butyrové v estery hyaluronanu byly dále připravené v patentu WO 2005/092929, kde jsou však n vyžadovány bezvodé podmínky, a tedy transformace hyaluronanu na kvartemí ammoniovou sůl, která může být doprovázena degradací hyaluronanu. Dosažený stupeň substituce je nižší než 0,1 %. tyto esterové deriváty tedy nejsou vhodné pro přípravu nosičových systémů. Podobných výsledku bylo dosaženo i při současné esterifikaci hyaluronanu anhydridem kyseliny butyrové a chloridem kyseliny retinové (WO/>2004/056877).
Λ
Kompozici polymerních micel na bázi modifikovaného hyaluronanu (HA)-[O(C=O)NH-M]p, kde M představuje modifikující jednotku, jejíž součástí je alkylová funkční skupina C2-i6a p je násobkem 3-4, a farmaceuticky aktivní enkapsulované molekuly je nárokována patentem US 2010/0^1^682 a EP1538J66A1. Hlavní nevýhodou těchto derivátů je, že na provedení modifikace hyaluronanu s dlouhým řetězcem je použit dibutylcín laurát, potenciální imunotoxická a teratogenní látka. Tato látka se většinou používá na modifikace lepidel a je na seznamu Evropské agentury pro životní prostředí kvůli své akutní toxicitě (Boyer. 1989). Další nevýhodou nárokovaných derivátů je jejich konjugace s polymeiy např. polyethylenglykolem, které nejsou tělu vlastní a mohou při intravenózních nebo topických aplikacích vést k zánětlivým reakcím, popř. ke vzniku cytotoxických degradačních produktů. Navíc, opakovaná aplikace polymerních micel. kde polyethylenglykol představuje hydrotilní segment, vedla k jejich zrychlenému odbourávání z krevního řečiště z důvodu vytvoření anti-PEG IgM protilátek (Gong, Chen. Zheng, Wang & Wang. 2012).
Paclitaxel byl úspěšně inkorporován do micel modifikovaného hyaluronanu poly(mléčnou-cO-glykolovou kyselinou, PLGA) (Kim, Lee, Jang & Park, 2009). Inkorporace proběhla metodou dialýzy. kdy se modifikovaný polymer i vázaná látka rozpustily v DMSO a vzniklý roztok byl dialyzován proti LEO. Vazebná kapacita připravených polymerních micel v tomto případě dosahovala 4,5 % (hm.). Nevýhodou těchto nosičových systému je přítomnost polymeru PLGA, který nepatří mezi polymery tělu vlastní a nemusí při topických a intravenózních aplikacích představovat plně biodegradabilní systém. Další nevýhodou je zbytkové DMSO ve finálních produktech.
Modifikace hyaluronanu karboxylovými kyselinami s dlouhým řetězcem
Modifikace polysacharidů karboxylovými kyselinami nejčastěji vyžaduje komerčně dostupný anhydrid dané kyseliny (WO 1996/03^720. WO 2007/033^77, (Smejkalová, Hermannová, Šuláková, Průšová, Kučerík & Velebný, 2012), EP 0893451). Hlavní nevýhodou těchto komerčně dostupných anhydridů je jejich náchylnost k hydrolýze a možná přítomnost nečistot. Pro některé kyseliny nejsou jejich anhydridy komerčně dostupné (např. kyselina undekanová) nebo jsou dostupné a jejich cena je velmi vysoká (např. kyselina olejová, linolová, linolenová). Nedostupnost, vysoká cena a nestabilita těchto anhydridů potom znesnadňují přípravu modifikovaných polysacharidů ve velkém měřítku.
Anhydrid kyseliny může být nahrazen jiným derivátem kyseliny použitelným pro esterifíkaci hyaluronanu. Patent WO 2010/105^82 si nárokuje aktivaci karboxylových kyselin ethylchlorformiátem, v bezvodých podmínkách, za vzniku O-acyl-O-alkylkarbonátů dále použitelných pro esterifíkaci hyaluronanu. Nevýhodou takovéto aktivace je vznik toxických a potenciálně výbušných plynů. Podobná aktivace alkylchlorfbrmiátem je nárokovaná v patentu US 5550225. Aktivace alkylchlorformiátem je rovněž uvedena v patentu US >720662 a CZ 20060605.
Známá je rovněž esterifikace polysacharidů karboxylovými kyselinami v přítomnosti imidazolu (US 2012/(^172^87). Nárokovaná metoda přípravy však vyžaduje vysoké reakční teploty (90-200 °C), které nejsou v případě hyaluronanu aplikovatelné vzhledem k jeho degradaci při vyšších teplotách.
Evropský patent EP 0893451 si nárokuje esterifíkaci polysacharidů anhydridy karboxylových kyselin za použití metody superkritické extrakce. Nevýhodou tohoto postupu jsou požadavky vysokého tlaku a vysoké náklady na pořízení výrobního zařízení.
Z těchto důvodů je velmi důležité nalézt alternativní metodu aktivace karboxylových
- 6 kyselin s dlouhými řetězci, která by byla aplikovatelná in situ. Jedním z možných řešení je aktivace karboxylových kyselin za použití derivátu 2,4.6-trichlorbcnzoové kyseliny za vzniku anhydridu. Anhydrid 2.4.6-trichlorbenzoové kyseliny v kombinaci s katalyzátorem DMAP byl poprvé použit v mírných reakčních podmínkách pro rychlou esterifikaci inakrocyklických látek (Inanaga, Hirata, Saeki, Katsuki & Yamaguchi, 1979). Tato metoda esteriťikace však nebyla dosud použita na modifikaci polysacharidů, zejména kyseliny hyaluronové, z důvodu možné exotermní reakce provázené degradací polysacharidů.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je syntéza hydrofobizovaného hyaluronanu a jeho aplikace jako nanomicelárního polymerního nosiče biologicky aktivních hydrotobních látek ve vodném prostředí, přičemž zůstává zachován nativní charakter a biologická aktivita vázaných látek.
Hydrofbbizace hyaluronanu dlouhými alifatickými estery (C6-C18) je založena na přímé aktivaci karboxylových kyselin s dlouhými řetězci za vzniku anhydridu kyseliny 2,4,6-trichlorbenzoové (Schéma 1). Tento anhydrid v dalším kroku reaguje s hyaluronanem za vzniku acylovaného hyaluronanu. Hlavní výhodou této aktivace je možné přímé využití alifatických karboxylových kyselin. Na rozdíl od podobných hydro fobizačních reakcí hyaluronanu uvedených v části stavu techniky nevyžaduje představená modifikace komerčně dostupný anhydrid. Další výhodou představené aktivace je průběh reakce při mírných podmínkách (od pokojové teploty až do 5Q°C) a krátká reakční doba. Uvedená aktivace rovněž nevyžaduje nadměrné molární množství alifatických kyselin a nevyžaduje speciální bezvodé podmínky jako v případě přihlášky vynálezu WO 2010/10^582. Aktivační reagent je stabilní a při jeho použití k hydrofobizaci polysacharidů nedochází k produkci toxických plynů nebo explozivních produktů jako v případě ethylchlorfbrmiátu. Další výhodou aktivačního činidla je to. že nevytváří vedlejší reakční produkty a nezpůsobuje síťovací reakce.
Aktivace karboxylových kyselin derivátem 2,4,6-trichlorbenzoové kyseliny s následnou aplikací na esterifikaci hyaluronanu je znázorněno na schématu 1 níže:
A)
RAN. organické rozpouštědlo
OK-ilH-A
OK-TCB-A = anhydrid organické kyseliny a kyseliny 2,4,6-triclilorbenzoove'
B)
R- Na nebo H . R1 - H nebo -C(=O)C.\Hy nebo -C(=O)CH=CH-het.
R1 -II. -N(CH,)2, r·. -(11.(11..
Schéma I.
Dále se vynález týká použití hydrofobizovaného hyaluronanu pro přípravu nanomicelárních systémů a aplikaci navázaných látek v nanomicelách hyaluronanu na kůži, vlasy a sliznice, přičemž jsou možné i jiné topické aplikace. Enkapsulované biologicky aktivní látky jsou v nanomicelách hyaluronanu vázány nekovalentné fyzikálními interakcemi s hydrofobními funkčními skupinami polymerního nosiče. Takto enkapsulované látky efektivně penetrují do vrchní části kůže (epidermis), a do celé struktury chlupů a vlasů a do epitelu sliznic. Výhodou je, že hloubka penetrace aktivních látek vázaných v nanomicelách je větší, než hloubka penetrace stejných látek rozpuštěných přímo v nepolárních rozpouštědlech.
I .,
Oproti podobným polymerním systémům (US patent 7993,678, WO 2007/033677), /Λ hyaluronové nanomicelární konjugáty vykázaly nečekaně 3-ÍO násobně nízkou kritickou micelární koncentraci a současně relativně vysokou stabilitu v solném a ve vodném prostředí. Velmi nízká hodnota kritické micelární koncentrace je výhodná pro možné intravenózní aplikace hyaluronových nanomicel. Vysokou stabilitu hyaluronových nanomicel lze oproti podobným systémům na bázi většiny jiných polymerů popsaných v části stavu techniky s výhodou použít na lyofllizaci materiálu, kdy není potřeba pro zachování enkapsulace do roztoku před vlastním vymražením přidávat lyoprotektant.
Výhodou nárokovaných hydro tbbizovaných hyaluronanů je absence syntetických polymeru (PLGA, PEG atd.) a kopolymerů, které jsou často nutné pro vytvoření nanomicel a které můžou vyvolat při opakovaném podání vznik protilátek (Gong. Chen. Zheng, Wang & Wang).
Na rozdíl od podobných polymerních micelárních systémů, tvorba nanomicel není založena na modifikovaném hyaluronanu se zvýšeným celkovým záporným nábojem, a tedy není z tohoto důvodu negativně ovlivněna interakce nosičového systému s buňkami.
Některé z nanomicelárních útvarů, zejména ty obsahující delší acylové řetězce na hyaluronanu, mohou tvořit v solném prostředí gelovou fázi, kterou lze s výhodou použít pro určité aplikace vyžadující vyšší viskozitu nosičového systému.
Rozměr připravených nanomicelárních systémů se nejčastěji pohybuje v rozmezí 20-? ’ 100 nm. což je optimální velikost pro farmaceutické aplikace, ve kterých se využívá zvýšený permeabilitní a retenční efekt (EPR efekt). Tato velikost nemusí být vždy dosažitelná u polymerních micel popsaných v části stav techniky.
Další výhodou hyaluronových nanomicel je přenos navázaných látek z hydrofobních domén nanomicely do buňky.
Inovovaný způsob enkapsulace je založen na přípravě směsi modifikovaného hyaluronanu rozpuštěného ve vodě a biologicky aktivní látky rozpuštěné v organickém rozpouštědle, energetickém narušení hydratační obálky hyaluronanu a následným odstraněním organického rozpouštědla z roztoku. Tento způsob na rozdíl od běžných enkapsulačních postupů není založen na rozpustnosti polymeru v organickém rozpouštědle, a z tohoto důvodu nevyžaduje ztrátu nativního charakteru hyaluronanu a výraznou modifikaci polymerního řetězce zejména v místě karboxylových skupin, které jsou důležité pro rozpoznání hyaluronanu buněčnými receptory. Preferované oreanické rozpouštědlo je takové které má nižší fbedf varu než voda. Vazebnou kapacitu hyaluronových nanomicel výrazně zvyšuje kompletní evaporace zbylé vodné fáze s následnou rehydratací nanomicel. Nenavázanou biologicky aktivní látku lze odstranit filtrací a výsledné nanomicely lze přímo lyofilizovat a skladovat v suchém stavu do doby následné rehydratace.
Vynález se tedy týká nanomicelární kompozice na bázi C6-CiX-acylovaného hyaluronanu podle obecného vzorce ,(!>.
ch3co (1)kde R je ΤΓ nebo Ν;Γ. a kde R* je H nebo -C(=O)CxHy nebo -C(=O)CH=CH-het , kde x je celé číslo v rozmezí 5-17 a y celé číslo v rozmezí 11-35 a C\Hy je lineární nebo rozvětvený nasycený, nenasycený řetězec C5-C|7 a het je heterocyklický nebo heteroaromatický zbytek s volitelným obsahem N. S nebo O atomů, přičemž alespoň v jedné opakující se jednotce je jeden nebo více R1 -C(=O)CxHy nebo -C(=O)CH=CH-het, a kde n je v rozmezí 12 až 4000. přičemž nanomicely obsahují hydroíobní jádro tvořené Cň-C|8acylovými skupinami navázanými na hyaluronan a hydrofilní obal tvořený hydrofilními funkčními skupinami hyaluronanu, a jednu nebo více biologicky aktivních látek fyzikálně vázaných v nanomicele. Ve výhodném provedení vynálezu je Có-Cis-acylovaná HA , oleyl HA, tzn. ve vzorci I je R H nebo NaF a R1 je -C(=O)(CH2)7-CH=CH-(CH2)7 CH;. Kompozice dále obsahuje vodu, může obsahovat i soli (např. 0.9% NaCl). Ve výhodném provedení nanomicelární kompozice obsahuje 0,3 až 50% hmotnostních biologicky aktivní látky vzhledem k hmotnostnímu obsahu C6-C)8-acylováného hyaluronanu, přičemž biologicky aktivní látka je vybrána ze skupiny zahrnující farmaceuticky a kosmeticky aktivní látky, zejména vitamíny, léčiva, cytostatika, steroidy, fytoextrakty. fytokomplexy nebo fytoaktivní látky, minerální nebo rostlinné oleje, nebo jejich směs. Příklady biologicky použitelných aktivních látek zahrnují například tokotěrol, paclitaxel, fosfátidylcholin nebo koenzym Q10. V jednom výhodném provedení obsahuje kompozice vyšší koncentraci C6-C]8-acylováného hyaluronanu než je jeho kritická agregační koncentrace. Koncentrace OCis-acylované hyaluronanu v kompozici ve vodném roztoku je v rozmezí 0,0001 mg.mf1 až 30 mg.ml'1. s výhodou 1 až 20 mg.mr1. V dalším výhodném provedení je biologicky aktivní látkou minerální nebo rostlinný olej v množství 0,05 až 40 % hmotn. vzhledem k hmotnostnímu obsahu Có-Cis-acylováného hyaluronanu, s výhodou 1 až 20 %hmotn. V ještě dalším výhodném provedení obsahuje kompozice biologicky aktivní látku, která je kapalná a nerozpustná ve vodě, a v níž je rozpuštěna další biologicky aktivní látka. Touto biologicky aktivní látkou, která je kapalná a nerozpustná ve vodě, může být například minerální nebo rostlinný olej, a uvedenou další biologicky aktivní látkou může být například farmaceuticky
-10nebo kosmeticky aktivní látka, zejména vitamíny, léčiva, cytostatika, steroidy. fytoextrakty, lýtokomplexy nebo fytoaktivní látky nebo jejich sines. Nanomicelární kompozice podle vynálezu může byt ve formě roztoku, nanoemulze, mikrocmulze. koacervátu nebo gelu.
Dále se vynález týká způsobu přípravy výše uvedeného C6-C|8-acylo váného hyaluronanu. obsaženého v nanomicelární kompozici podle vynálezu, kde hyaluronan reaguje ve směsi vody a aprotického rozpouštědla mísitelného s vodou, v přítomnosti báze a katalyzátoru s Ch-C]8 karboxylovou kyselinou aktivovanou chloridem 2.4,6-trichlorbenzoové kyseliny nebo aktivovanou organickým chloridem R3-CO-CI. kde R3 je alifatický nebo rozvětvený C1-C30 alkyl, případně obsahující heteroaromatické nebo aromatické fonkční skupiny. Příkladem heteroaromatické skupiny je pyridin nebo jeho deriváty (například podle vzorce i), příkladem aromatické skupiny je benzen a jeho halogenové deriváty (například podle vzorce i i):
Hyaluronan může byl ve formě volné kyseliny nebo stabilní farmaceuticky přijatelné soli, například Na. K, Ca, Mg, Zn. nebo Li soli, a má molekulovou hmotnost od 5x10J g/mol do 1,6x106 g/mol, s výhodou od 15χIO3 g/mol do 250xl03 g/mol, nejlépe 15x 1O3 až 50xl03 g/mol. Způsob přípravy podle vynálezu se provádí tak, že se rozpustí hyaluronan ve směsi vody a aprotického rozpouštědla mísitelného s vodou, kterým je polární organické rozpouštědlo, přičemž obsah vody je v rozmezí od 10 do 99 % objemových, s výhodou 50 % objemových. Aprotickým rozpouštědlem mísitelným s vodou může být například dimethylsulfoxid (DMSO), tetrahydrofiirane(THF), aceton, acetonitril nebo izopropanol (1PA). V reakční směsi je přítomna báze RVN. kde R' je lineární nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec CnHm, kde n je celé číslo v rozmezí 1-4 a m je celé číslo v rozmezí 3-9, jako např. triethylamin, v množství 0.01 až 20 ekvivalentů, s výhodou 6 ekvivalentů vzhledem k dimeru hyaluronanu, a katalyzátor vybraný ze skupiny zahrnující substituované pyridiny, jako dimethylaminopyridin a jeho deriváty, v množství 0,01 až 1 ekvivalent, s výhodou 0,05 ekvivalentů vzhledem k dimeru hyaluronanu. Ve způsobu podle vynálezu se nejprve provede aktivace Có-C|8 karboxylové kyseliny v polárním organickém rozpouštědle, v přítomnosti báze a kyseliny 2,4,6-trichlorbenzoové nebo jejích derivátů, nebo v přítomnosti báze a organického chloridu, následně se směs obsahující aktivovanou C(l-Cl8 karboxylovou kyselinu přidá k hyaluronanu rozpuštěného ve směsi vody, organického rozpouštědla, báze a katalyzátoru a nechá se proběhnout reakce za vzniku acylováného hyaluronanu podle obecného vzorce .jd)- C.,-C|8 karboxylové kyselina je vybrána ze skupiny zahrnující kyselinu kapronovou. enanthovou, kaprylovou, pelargonovou, kaprinovou, palmitovou, stearovou, olejovou, linolovou a linolenovou. Množství aktivované C0-Clx karboxylové kyseliny je v rozmezí 0,01 až 5 ekvivalentů, s výhodou 0.5 až 2 ekvivalentů vzhledem kdimeru hyaluronanu. Aktivace Ct,-C|X karboxylové kyseliny probíhá po dobu 5 až 120 minut, s výhodou 30 minut, při teplotě od 20 až 60 °C, s výhodou při 25 °C. Reakce hyaluronanu a aktivované karboxylové kyseliny probíhá po dobu I až 24 hodin, s výhodou 2 až 3 hodiny, při teplotě od 20 až 60 °C, s výhodou při 25 °C. CVCis-acylovaný hyaluronan se může následně izolovat zreakční směsi, promýt, sušit a lyofilizovat. Izolace hyaluronanu z reakční směsi muže být provedena srážením za použití NaCl a alkoholu. Promytí hyaluronanu lze provést například alkoholem, zejména izopropanolem nebo ethanolem.
Dále se vynález týká způsobu přípravy nanomicelární kompozice definované výše, kde se C6-C|X-acylovaný hyaluronan podle obecného vzorce {1/rozpustí ve vodě a biologicky aktivní látka se rozpustí v organickém rozpouštědle, oba roztoky se smíchají, poté se organické rozpouštědlo odstraní. Organickým rozpouštědlem může být těkavé chlorované rozpouštědlo jako trichlormethan, nebo alkohol jako ethanol nebo izopropanol. a jeho odstranění může proběhnout vakuovou evaporací, načež se vodná fáze usuší, rehydratuje, získané nanomicelární útvary se zfiltrují a nakonec lyofílizují; nebo se organické rozpouštědlo odstraní dialýzou, získané nanomicelární útvary se poté zfiltrují a nakonec lyofílizují. V jednom výhodném provedení se C6-C|X-acylovaný hyaluronan podle obecného vzorce (1^ rozpustí ve vodě a následně se smíchá s biologicky aktivní látkou, která je kapalná a nerozpustná ve vodě, načež se směs homogenizuje sonikací za tvorby mikroemulze nebo nanoemulze. V dalším výhodném provedení se C6-CI8-acylovaný hyaluronan podle obecného vzorce HFrozpustí ve vodě a následně se smíchá s biologicky aktivní látkou, která je kapalná a nerozpustná ve vodě a v níž je rozpuštěna další biologicky aktivní látka, načež se směs homogenizuje sonikací za tvorby mikroemulze nebo nanoemulze.
V ještě dalším aspektu se vynález týká použití nanomicelární kompozice pro farmaceutické nebo kosmetické aplikace, s výhodou zejména pro topické aplikace.
Dále lze připravit stabilizované nanomicelární kompozice, a to tak, že se připraví C6Cis-acylovaný hyaluronan v nanomicelární kompozici podle obecného vzorce
R= Na nebo H~ R - = -C(=O)CxHy. R:=
R'=R2neboRÚR2 (II), kde Rje H+ nebo Na, alespoň v jedné opakující se jednotce je jeden nebo více R1, kde R1 je lineární nebo heterocyklický řetězec Có-Cis, který může obsahovat nenasycené vazby a alespoň v jedné opakující se jednotce je jeden nebo více R2, kde R2je 3-(2-thienyl)akrylová kyselina nebo 3-(2-furyl)akrylová kyselina a jejich deriváty; který se stabilizuje síťovací reakcí. Konkrétně se stabilizace provede tak, že se nejprve připraví akrylovaný hyaluronan podle obecného vzorce.pil)?
OR
OH
NH /
ch3co + +2
R=H nebo Na , R z = o, s (III) tak, že se nejprve rozpustí HA ve vodě, pak se přidají báze (například TEA) a katalyzátor DMAP; zvlášť se připraví aktivovaná kyselina 3-(2-thienyl)akrylová nebo 3-(2-furyDakrylová nebo jejich derivát, a to aktivací v organickém rozpouštědle (např. THF) a bázi (např. TEA) přidáním chloridu 2.4.6-trichlorbenzoové kyseliny, a nakonec se obě směsi smíchají za vzniku akrylované hyaluronanu podle vzorce (Hl>. Následně se připraví aktivovaná Co-Cis-karboxylová kyselina, kterou se ukrylo váný hyaluronan podle vzorce ýlllX acyluje podobným způsobem, jak bylo uvedeno výše v případě způsobu přípravy C„-C|S-acylovaného hyaluronanu podle obecného vzorce )-1)- za vzniku acylovaného hyaluronanu podle vzorce |II)r. Z takovéhoto acylovaného hyaluronanu lze pak analogicky připravit nanomicely. které se pak mohou síťovat radikálovými reakcemi, například pomocí peroxydisulfátu amonného. Tento zesíťovaný hyaluronan není rozpustný ve vodě.
Literatura
Boyer, 1. J. (1989). Toxicity of dibutyltin. tributyltin and other organotin compounds to humans and to experimental animals. Toxicology, 55(3), 253-298.
Eenschooten. C.. Guillaumie. F., Kontogeorgis, G. M.. Stenby. E. IE, & Schwach-Abdellaoui. K. (2010). Preparation and structural characterisation of novel and versatile amphiphilic octenyl succinic anhydride-modified hvaluronic acid derivatives. Carbohvdrate Polymers 79(3). 597-605.
Gong, J., Chen, M., Zheng. Y.. Wang, S„ & Wang, Y. (2012). Polymeric micelles drug delivery system in oncology. Journal of Controlled Release. 159(3). 312-323.
Inanaga, J.. Hirata, K„ Saeki, HL, Katsuki, T., & Yamaguchi. M. (1979). A Rapid Esterification by Means of Mixed Anhydride and Its Application to Large-ring Lactonization. Bulletin of the Chemical Society of Japan, 52(7), 1989-1993.
Kedar, LI., Phutane, P., Shidhaye, S., & Kadam, V. (2010). Advances in polymeric micelles for drug delivery and tumor targeting. Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine, 6(6),714-729.
Kim. T. G., Lee, H„ Jang, Y., & Park, T. G. (2009). Controlled Release of Paclitaxel from Heparinized Metal Stent Fabricated by Layer-by-Layer Assembly of Polylysine and Hyaluronic Acid-g-Poly(lactic-co-glycolic acid) Micelles Encapsulating Paclitaxel. Biomacromolecules. 10(6). 1532-1539.
Li. J.. Huo, M., Wang, J., Zhou. J., Mohammad. J. M., Zhang, Y., Zhu, Q„ Waddad, A. Y.. & Zhang, Q. (2012). Redox-sensitive micelles self-assembled from amphiphilic hyaluronic aciddeoxycholic acid conjugates for targeted intracellular delivery of paclitaxel. Biomaterials 33(7),2310-2320.
Liu. Y., Sun. J.. Cao. W., Yang. J., Lian, H.. Li, X., Sun, Y., Wang. Y.. Wang. S., & He, Z. (2011) Dual targeting folate-conjugated hyaluronic acid polymeric micelles for paclitaxel delivery. International Journal of Pharmaceutics. 421(\), 160-169.
Mazzone. S. B., Mori, N., Burman. M., Palovich. M., Belmonte, K. E., & Canning, B. J. (2006). Fluorescent styryl dyes LM1-43 and FM2-I0 are muscarinic receptor antagonists: intravital visualization of receptor occupancy. The Journal of Physiology, 575(1), 23-35.
Shen. Y., Li. Q„ Tu. J.. & Zhu, J. (2009). Synthesis and characterization of low molecular weight hyaluronic acid-based cationic micelles for efficient siRNA delivery. Carbohydrate Polvmers. 77(1). 95-104.
- 14Šmejkalová. D.. Hermannová. M.. Šuláková. R„ Průšová, A.. Kučerik. J., & Velebný, V. (2012). Structural and conformational differences of acylated hyaluronan modified in protic and aprotic solvent system. Carbohydrate Polymers, 87(2). 1460-1466.
I ao, Y.. Xu, J., Chen, M„ Bai, H.. & Liu. X. Core cross-linked hyaluronan-styrylpyridinium micelles as a novel carrier for paclitaxel. (2012). Carbohydrate Polymers. 3(((1). 118-124.
Lil, Η. P., Falke. FL E., Prinsen, Μ. K., & Willems, Μ. I. (1997). Acute and subacute toxicity of tyrantine. spermidine, spermine, putrescine and cadaverine in rats. Food and Chemical Toxicology, 35(3-4), 337-348.
Wang, J., Mongayt, D., & Torchilin, V. P. (2005). Polymeric micelles for delivery of poorly soluble drugs: Preparation and anticancer activity in vitro of paclitaxel incorporated into mixed micelles based on polyethylene glycol)-lipid conjugate and positively charged lipids. Journal of Drug Targeting. 13(\). 73-80.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek L Stanovení kritické micelární (agregační) koncentrace cmc metodou fluorescence na acylovaném hyaluronanu (C6) a (Cl6) s enkapsulovanou nilskou červení ve vodě.
Obrázek 2. Stanovení kritické micelární (agregační) koncentrace cmc metodou statického rozptylu světla na acylovaném hyaluronanu (C6) a (Cl6) s enkapsulovanou olejovou červení ve vodě.
Obrázek 3. Cryo-SEM snímek nanomicel hyaluronanu s enkapsulováným vitamínem E (horní obrázek) a s enkapsulováným paclitaxelem (spodní obrázek).
Obrázek 4: Cytotoxicita paclitaxelu a paclitaxelu enkapsulováného v HAC6 a HAC16 v závislosti na koncentraci a době působení na buňky.
Obrázek 5: Transport doxorubicinu do buněk HCT 116 a MCF-7 po 1 h|4 působení.
Obrázek 6: Buněčná intemalizace 7AAD v živých buňkách z nosičů HA(C6) s enkapsulovanou 7AAD.
Obrázek 7. Profil uvolňování enkapsulovené olejové červeně z nosiče HAC6 do PBS a PBS s přídavkem 1% TWEEN 80. Koncentrace HAC6+olejová červeň 1 nebo 10 mg.mL''.
Obrázek 8. Profil uvolňování enkapsuloveného paclitaxelu z nosiče HAC6 a HAC16 (c = 10 mgmL'1) do PBS.
Obrázek 9. Penetrace enkapsulované nilské červeně (NR) z polymerních nanomicel hyaluronanu HA(C6) a HA (C10) a dále stejné koncentrace nilské červeně rozpuštěné v oleji a dispergované ve vodě do kůže.
Obrázek 10. Penetrace enkapsulované nilské červeně (NR) z polymerních nanomicel hyaluronanu HA(C6) a HA (C10) a dále stejné koncentrace nilské červeně rozpuštěné v oleji a dispergované ve vodě do vlasů (mikroskopický snímek zachycuje průřez svazkem vlasů).
- 15Obrázek 11. Penetrace enkapsulované nilské červeně (NR) z polymerních nanomicel hyaluronanu HA(C6) a HA (C10) a dále stejné koncentrace nilské červeně rozpuštěné v oleji a dispergované ve vodě do bukální sliznice.
Obrázek 12. Penetrace enkapsulované nilské červeně (NR) z polymerních nanomicel hyaluronanu HA(C6) a HA (C10) a dále stejné koncentrace nilské červeně rozpuštěné v oleji a dispergované ve vodě do vaginální sliznice.
Příklady provedení vynálezu
SS stupeň substituce = 100% * inolární množství navázaného substituentu / molární množství všech dimerů polysacharidů
Zde používaný výraz ekvivalent (eq) se vztahuje na dimer hyaluronanu, není-li uvedeno jinak. Procenta se uvádějí jako hmotnostní procenta, pokud není uvedeno jinak.
Molekulová hmotnost výchozího hyaluronanu (zdroj: Contipro Biotech spol. s r.o.. Dolní Dobrouč, ČR) byla stanovena metodou SEC-MALLS.
Příklad 1 Příprava kapronyl esteru (C6) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhydridu kyseliny 2,4,6-trichlorbenzoové a kyseliny kapronové.l g hyaluronanu sodného (2,5 mmol, 15 kDa) byl rozpouštěn v 10 ml demi vody. Poté byly postupně přidány 5 ml DMSO. Poté se do roztoku přidaly TEA (1,05 ml, 3 eq.) a DMAP (8,0 mg, 0.05 eq.). Současně byla rozpuštěna kyselina hexanová (0,63 ml, 2 eq) v 5 ml DMSO, poté se do roztoku přidal IEA (1.05 ml, 3 eq.) a 2,4,6-trichlorobenzoyl chlorid (1,6 ml, 4eq.). Po aktivaci kyseliny byla sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 h^<| při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0,25 g NaCl. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.) z důvodu odstranění DMSO a DMAP z produktu, a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 při teplotě 40 °C a následně lyofílizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 60 % (stanoveno z NMR) 1H NMR (D2O) signály acylu: δ 2.4 ppm (m. 2H, a CH2). δ 1,6 ppm (m, 2H, β CH2), δ 1,3 ppm ( m. 4H, γ, δ CH2). δ 0,8 ( m, 3H. CH3).
-16Příklad 2. Příprava kapronyl esteru (C6) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhydridů kyseliny 2,4,6-trichlorhenzoové a kyseliny kapronové
I g hyaluronanu sodného (2,5 mmol, 38 kDa) byl rozpouštěn v 10 ml demi vody. Poté byly postupně přidány 5 mi izopropanolu. Poté se do roztoku přidaly TEA (1.05 ml, 3 eq.) a pyridin (0,4 ml, 2.0 eq.). Současně byla rozpuštěna kyselina hexanová (0,32 ml, 1 eq) v 5 ml izopropanolu, poté se do roztoku přidal TEA (1,05 ml, 3 eq.) a 2,4,6-trichlorobenzoyl chlorid (0.391 ml, leq.j. Po aktivaci kyseliny byla sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 hH při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0,50 g NaCI. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.) z důvodů odstranění pyridinu z produktu a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 hH při teplotě 40°C a následně lyofilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 15 % (stanoveno z NMR) 1H NMR (D2O) signály acylu: δ 2.4 ppm (m, 2H, a CEL), δ 1,6 ppm (m, 2H, β CH2), δ 1,3 ppm ( m, 4H, γ, δ CH2), δ 0,8 ( m, 3Η, CHj).
- 17Příklad 3. Příprava enanthyl esteru (C7) kyseliny hyaiuronové pomocí směsného anhydridu kyseliny 2,4,6-trichlorhenzoové a kyseliny enanthové
I g hyaluronanu sodného (2,5 mmol. 15 kDa) bylo rozpouštěno v 10 ml demi vody. Poté bylo postupně přidáno 5 ml acetonitrilu. Poté se do roztoku přidaly TEA (0.70 ml, 2 eq.) a DMAP (15,0 mg, 0,05 eq.). Současně byla rozpuštěna kyselina enanthová (0,35 ml, 1 eq) v 5 ml acetonitrilu. poté se do roztoku přidal TEA (0.70 ml, 2 eq.) a 2,4,6-trichlorobenzoyl chlorid (0.39 ml. 1 eq.). Po aktivaci kyseliny byla sraženina /.filtrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 lifed při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0,75 g NaCl. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.) z důvodu odstranění acetonitrilu a DMAP z produktu, a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 h|>d| při teplotě 40 °C a následně lyofilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 12% (stanoveno z NMR) 'H NMR (ITO) signály acylu: Ó 2,4 ppm (m. 2H, a CH2), 5 1.6 ppm (m. 2H, β CH:).
1.3 ppm (m, 6H, γ, δ.ε (CH2)3) (m. 4H, γ, δ CH2), δ 0.8 (m. 3Η, CH3).
-18Pnklad 4. Příprava kapryiyl esteru (C8) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhvdridu kyseliny 2,4,6-trichlorbenzoové a kyseliny kaprylové
I g hyaluronanu sodného (2,5 mmol. 15 kDa) bylo rozpouštěno v 10 ml demi vody. Poté bylo postupně přidáno 5 ml acetonitrilu. Poté se do roztoku přidaly TEA (1.05 ml, 3 eq.) a DMAP (8.0 mg. 0,05 eq.). Současně byla rozpuštěna kyselina oktanová (0.63 g, 4 eq) v 5 ml acetonitrilu, poté se do roztoku přidal TEA (1,05 ml, 3 eq.) a 2,4,6-trichlorobenzoyl chlorid (0.8 ml. 4 eq.). Po aktivaci kyseliny byla sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 h|4 při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0,50 g NaCl. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.) z důvodů odstranění acetonitrilu a DMAP z produktu a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 h|4 při teplotě 40 °C a následně lyofilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 40% (stanoveno z NMR) '14 NMR (D2O) signály acylu: δ 2,4 ppm (m. 2H, a CH2), δ 1.6 ppm (m. 2H, β CH2). δ 1,3 ppm (m, 8H, (CH2)4), δ 0.8 (m. 3H, CH3).
Příklad 5. Příprava kaprinyl esteru (C10) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhydridu kyseliny 2,4,6 trichlorhenzoové a kyseliny kaprinové g hyaluronanu sodného (2.5 mmol, 15 kDa) bylo rozpouštěno v 10 ml demi vody. Poté byly postupně přidány 5 ml THF. Poté se do roztoku přidaly TEA (1,05 ml, 3 eq.) a DMAP (8,0 mg, 0.025 eq.). Současně byla rozpuštěna kyselina děkanova (0.8 g, 2 eq) v 5ml THF. poté se do roztoku přidal TEA (1,05 ml. 3 eq.) a 2,4,6-trichlorobenzoyl chlorid (0,8 ml, 2 eq.). Po aktivaci kyseliny byla sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 h^ při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0.25g NaCl. Acylovaný ý hyaluronnan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85,% obj.) z důvodu odstranění DMAP z produktu, a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 h^4 při teplotě 40 °C a následně lyofilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 15% (stanoveno z NMR)
- 191I I NMR (D?0) signály acylu: 6 2.4 ppm (m. 2H. a CH?). 8 1.6 ppm (m. 211, β CIL), δ 1,3 ppm (m, 12H. γ, δ.ε. ζ,η.θ CH?). δ 0,8 (ni, 3H. CIL,).
Příklad 6. Příprava kaprinyl esteru (C1O) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhydridu kyseliny 2,4,6-trichlorbenzoové a kyseliny kaprinové g hyaluronanu sodného (2.5 mmol, 15 kDa) bylo rozpouštěno v 10 ml demi vody. Poté bylo postupné přidáno 5 ml THF. Poté se do roztoku přidaly TEA (1,05 ml, 3 eq.) a DMAP (8,0 mg, 0.025 eq.). Současně byla rozpuštěna kyselina děkanova (0,8 g, 4 eq) v 5 ml THF, poté se do roztoku přidal TEA (1,05 ml. 3 eq.) a 2,4,6-trichlorobenzoyl chlorid (0,8 ml, 4 eq.). Po aktivaci kyseliny byla sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 h^d při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0,25 g NaCl. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolováný srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla
J nejprve vodným roztokem izopropanolu (85(% obj.) z důvodu odstranění THF a DMAP h z produktu, a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 h^4 při teplotě 40 °C a následně lyofilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 40% (stanoveno z NMR) *H NMR (D2O) signály acylu: δ 2,4 ppm (m, 2H, a CH?), δ 1.6 ppm (m. 2H. β CH?), δ 1,3 ppm (m, 12H, γ, δ.ε, ζη.θ CH?), δ 0.8 (m, 3H, CH3).
Příklad 7. Příprava palmitoyl esteru (C16) kyseliny hyaluronové pomoci směsného anhydridu kyseliny 2,4,6-trichlorbenzoové a kyseliny palmitové
0,5 g hyaluronanu sodného (1,25 mmol, 38 kDa) byl rozpouštěn v 20 ml demi vody. Poté bylo postupně přidáno 10 ml THF. Poté se do roztoku přidaly TEA (0.52 ml, 3 eq.) a DMAP (8,0 mg, 0.05 eq.). Současně byla rozpuštěna kyselina palmitová (0,16 g, 0,5 eq) v 10 ml THF, poté se do roztoku přidal TEA (0.52 ml, 3 eq.) a 2.4,6-trichlorobenzoyl chlorid (0,098 ml. 0,5 eq.). Po aktivaci kyseliny sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 h^4 při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0,25g NaCl. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolován
Λ srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85j% obj.) z důvodu odstranění DMAP z produktu, a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu.
-20Sraženina byla poté sušena po dobu 48 h^é| při teplotě 40 °C a následně lyoťilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
1H NMR (D2O) signály acylu: δ 2.4 ppm (m. 211, a CH2), δ 1,6 ppm (m. 2H, β Cil·). δ
1.3 ppm (m. 24H, (CH2)I2). δ 0,8 (m, 3H, CH3).
SS 14 % (stanoveno z NMR)
Příklad 8. Příprava stearyl esteru (C18) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhydridu kyseliny 2,4,6-trichlorbenzoové a kyseliny stearové
0,5 g hyaluronanu sodného (1.25 mmol. 15 kDa) bylo rozpouštěno v 10 ml demi vody. Poté bylo postupně přidáno 5 ml THF. Poté se do roztoku přidaly TEA (0,52 ml, 3 eq.) a DMAP (8.0 mg, 0,05 eq.). Současně byla rozpuštěna kyselina stearová (0.71 Ig, 2 eq) v 5ml THF, poté se do roztoku přidal TEA (0,52 ml. 3 eq.) a 2,4.6-trichlorobenzoyl chlorid (0.391 ml, 2 eq.). Po aktivaci byla kyseliny sraženina zťiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 h^d| při pokojové teplotě a následně byla reakční směs zahřívána po dobu 1 h při 50 °C. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0.25g NaCl. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.) z důvodu odstranění DMAP z produktu, a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 h^4 při teplotě 40 °C a následně lyofilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 7% (stanoveno z NMR) 'Η NMR (D2O) signály acylu: δ 2.4 ppm (m. 2H, a CH2), δ 1,6 ppm (m, 2H, β Cil·), δ
1.3 ppm (m, 28H. (CH2)U), δ 0,8 (m. 3H, CH3).
Příklad 9. Příprava oleyl esteru (Cl8:1) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhydridu kyseliny 2,4,6-trichlorbenzoové a kyseliny olejové
0,5 g hyaluronanu sodného (1.25 mmol. 15 kDa) bylo rozpouštěno v 10 ml demi vody. Poté bylo postupně přidáno 5 ml THF. Poté se do roztoku přidaly TEA (0.52 ml. 3 eq.) a DMAP (15.0 mg, 0,1 eq.). Současně byla rozpuštěna olejová kyselina (0,18 g, 0.5 eq) v 5 ml THF, poté se do roztoku přidal TEA (0,52 ml, 3 eq.) a 2.4.6-trichlorobenzoyl chlorid (0.098 ml, 0.5 eq.). Po aktivaci kyseliny sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3hH při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s
-21 přídavkem 0.25g NaCI. Acylovaný hyakirononan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.) z důvodů odstranění DMAP z produktu, a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 Ii(r| při teplotě 40 °C a následně lyofilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 10 % (stanoveno z NMR) 'H NMR (D2O): δ 0,88 (t, 3H, -CH2-CH3). 5 1,22-1,35 (m. 20H, (-CH2-)|0, δ 1,60 (m, 2H. -CH2-CH2-CO-), δ 2,0 ppm (m, 4H. (CH2)2), δ 2,41 (t, 2H, -CH2-CO-), δ 5,41 (d, 2H, CH=CH)
Příklad 10. Příprava oleyl esteru (C18:l) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhydridu kyseliny 2,4,6-trichlorhenzoové a kyseliny olejové
0.5 g hyaluronanu sodného (1,25 mmol, 130 kDa) bylo rozpouštěno v 5 ml demi vody. Poté byly postupně přidány 3 ml izopropanol. Poté se do roztoku přidaly TEA (0,52 ml, 3 eq.) a DMAP (15,0 mg, 0,1 eq.). Současně byla rozpuštěna olejová kyselina (0,4 ml, 1 eq.) v 5 ml izopropanol, poté se do roztoku přidal TEA (0,52 ml, 3 eq.) a 2.4.6-trichiorobenzoyl chlorid (0,195 ml, 1 eq). Po aktivaci kyseliny byla sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0,25 g NaCI. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.) z důvodu odstranění DMAP z produktu a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 h^4 při teplotě 40 °C a následně lyofilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 12 % (stanoveno z NMR) 'H NMR (D2O): δ 0.88 (t, 3H. -CH2-CH3), δ 1.22-1,35, (m, 20H, (-CH2-)l0, δ 1,60 (m. 2H, -CH2-CH2-CO-), δ 2,0 ppm (m. 4Η, (CH2)2), δ 2,41 (t, 2H, -CH2-CO-), δ 5,41 id. 2H, (.41(11)
Příklad ll. Příprava oleyl esteru (Cl8: l) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhydrídu isohutyryl chloridu a kyseliny olejové
1.0 g hyaluronanu sodného (2.5 mmol, 15 kDa) bylo rozpouštěno v 10 ml demi vody. Poté bylo postupné přidáno 5 ml THF. Poté se do roztoku přidaly TEA (1,05 ml, 3 eq.) a DMAP (15,0 mg, 0,05 eq.). Současně byla rozpuštěna olejová kyselina (0,787 ml. 1 eq.) v 5 ml THF, poté se do roztoku přidal TEA (1,05 ml, 3 eq.) a isobutyryl chlorid (0.26 ml. 1 eq.). Po aktivaci kyseliny byla sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 h^t| při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0,50 g NaCl. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.) z důvodu odstranění DMAP z produktu a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 h$4 při teplotě 40 °C a následně lyofilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 11 % (stanoveno z NMR) 'H NMR (D2O): δ 0,88 (t, 3H. -CH2- CH2), δ 1.22-1.35 (m, 20H, (-CH2-)io), δ 1,60 (m, 2H, -CH3-CH2-CO-), δ 2.0 ppm (m. 4H, (CH2)2). δ 2,41 (t, 2H, -CH2-CO-), δ 5,41 (d, 2H, CH=CH)
Příklad 12. Příprava oleyl esteru (C18:l) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhydrídu kyseliny 2,4,6-trichlorbenzoové a kyseliny olejové
0,5 g hyaluronanu sodného (1.25 mmol, 130 kDa) bylo rozpouštěno v 5 ml demi vody. Poté byly postupně přidány 3 ml THF. Poté se do roztoku přidaly TEA (1,2 ml, 3 eq.) a DMAP (15,0 mg, 0,1 eq.). Současně byla rozpuštěna olejová kyselina (0,787 ml, 2 eq.) v 10 ml THF, poté se do roztoku přidal TEA (0,52 ml. 3 eq.) a 2,4,6-trichlorobenzoyl chlorid (0.391 ml, 2 eq.). Po aktivaci byla kyseliny sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 h^ při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0.25g NaCl. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.) z důvodu odstranění DMAP z produktu, a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 hjxj při teplotě 40 °C a následně lyofilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
- 23 SS 18 % (stanoveno z NMR) ‘11 NMR (D2O): δ 0.88 (t. 3H. -Cil·- Cil·), δ 1.22-1.35 (ni, 2011, (-CH2-)i0),
Ó 1,60 (m, 2H, -CH;-CH2-CO-). δ 2,0 ppm (m. 4H. (Cl l2)2), δ 2,41 (t. 2H, -CH2-CO-), 6 5,41 (d. 2H. CH=CH)
Příklad. 13. Příprava linoleyl esteru (C18:2) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhydridů kyseliny 2,4,6-trichlorhenzoové a kyseliny linolové
0.5 g hyaluronanu sodného (1,25 mmol, 15 kDa) bylo rozpouštěno v 10 ml demi vody. Poté se do roztoku přidaly TEA (0,52 ml, 3 eq.) a DMAP (8 mg. 0,05 eq.). Současně byla rozpuštěna linolová kyselina (0.77 ml, 2 eq.) ve 3 ml THE. poté se do roztoku přidal TEA (1.2 ml. 7 eq.) a 2,4.6-trichlorobenzoyl chlorid (0,391 ml, 2 eq.). Po aktivaci kyseliny byla sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0.5g NaCl. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.) z důvodu odstranění DMAP z produktu, a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 Ii(h| při teplotě 40 °C a následně lyofilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 16% (stanoveno z NMR) 'H NMR (D2O): 6 0.88 (t, 3H, -CHrCFh), δ 1.22-1,35 (m, 14H, (-CH2-)7),
1.63 (m. 2H, -CH2-CH2-CO-), δ 2,0 ppm (m, 4H, (CH2)2), δ 2,44 (t, 2H, -CH2-CO-), 6 2,83 (m, 2H, =CH-CH2-CH=).
δ 5.45 (m. 4H, CH CH)
Příklad 14. Příprava linoleyl esteru (C18:2) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhydridů kyseliny 2,4,6-trichlorbenzoové a kyseliny linolové
0,5 g hyaluronanu sodného (1,25 mmol. 15 kDa) bylo rozpouštěno v 10 ml demi vody. Poté se do roztoku přidaly TEA (0.52 ml. 3 eq.) a DMA.P (8 mg, 0,05 eq.). Současně byla rozpuštěna linolová kyselina (0,77 ml, 2 eq.) ve 3 ml THF, poté se do roztoku přidal TEA (1,2 ml, 7 eq.) a 2,4.6-trichlorobenzoyl chlorid (0.391 ml, 2 eq.). Po aktivaci kyseliny byla sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 h^t| při pokojové teplotě a následně byla reakční směs zahřívána po dobu I h při 50 °C. Poté se
- 24reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0,75g NaCI. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.) z důvodu odstranění DMAP z produktu, a potom absolutním izopropanoietn z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 při teplotě 40 °C a následně lyofilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 20 % (stanoveno z NMR) 'H NMR (D2O): δ 0,88 (t, 3H. -CH2-CH3), δ 1.22-1,35 (m. 14H, (-CH2-)7), δ 1,63 (m. 2H. -CHrCH2-CO-). δ 2,0 ppm (m, 4H. (CH2)2), δ 2,44 (t. 2H. -CH2-CO-), δ 2,83 (m. 2H, =CH-CHS-CH=).
δ 5,45 (m, 4H. CH=CH)
Příklad 15. Příprava linolenyl esteru (Cl8:3) kyseliny hyaluronové pomocí směsného anhydridu kyseliny 2,4,6-trichlorbenzoové a kyseliny Unolenové
0.5 g hyaluronanu sodného (1,25 mmol, 15 kDa) bylo rozpouštěno v 10 ml demi vody. Poté se do roztoku přidaly TEA (0,52 ml, 3 eq.) a DMAP (8 mg, 0,05 eq.). Současně byla rozpuštěna linolenová kyselina (0,765 ml, 2,0 eq.) v 5 ml THF, poté se do roztoku přidal TEA (0,52 ml, 3 eq.) a 2,4.6-trichlorobenzoyl chlorid (0,391 ml, 2,0 eq.). Po aktivaci kyseliny byla sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 hM při pokojové teplotě. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0,75g NaCI. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.) z důvodu odstranění DMAP z produktu a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 h|w| při teplotě 40 °C a následně lyofilizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 15 % (stanoveno z NMR) 'H NMR (D2O): δ 0.88 (t. 3H, -CH2-CH3), δ 1,22-1,35 (m, 8H, (-CH2-)4), δ 1,61 (m, 2H. -CH2-CH2-CO-). δ 2,0 ppm (m, 4H, (CH2)2) δ 2,43 (t, 211. -CH2-CO-), δ 2,83 (m. 4H, =CH-CH2-CH=), δ 5.45 (m. 6H, CH=CH)
-25Příklad 16. Příprava Hnoíenyl esteru (C18:3) kyseliny hyuluronové pomocí směsného anhydrídu kyseliny 2,4,6-trichlorhenzoové a kyseliny Unolenové
0.5 g hyaluronanu sodného (1.25 rnmol, 15 kDa) bylo rozpouštěno v 10 ml demi vody. Poté se do roztoku přidaly TEA (0,52 ml, 3 eq.) a DMAP (8 mg, 0.05 eq.). Současně byla rozpuštěna linolenová kyselina (0.382 ml. 1 eq.) v 5 ml THF, poté se do roztoku přidal TEA (0.52 ml, 3 eq.) a 2.4,6-trichlorobenzoyI chlorid (0,195 ml. 1 eq.). Po aktivaci kyseliny byla sraženina zfiltrována do připraveného roztoku HA. Reakce probíhala po dobu 3 h^ při pokojové teplotě a následně byla reakční směs zahřívána po dobu I h při 50 °C. Poté se reakční směs naředila 5 ml demi vody s přídavkem 0,25'g NaCl. Acylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vyizolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanolu. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.) z důvodu odstranění DMAP z produktu, a potom absolutním izopropanolem z důvodu odstranění vody z produktu. Sraženina byla poté sušena po dobu 48 hM při teplotě 40°C a následně lyofílizována za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
SS 10% (stanoveno z NMR)
Ti NMR (D2O): δ 0,88 (t, 3H. -CH2-CH3), δ 1.22-1.35 (m, 8H, (-CH2-)4), δ 1,61 (m, 2H. -CH2-CH2-CO-). δ 2,0 ppm (m, 4H, (CH2)2), δ 2,43 (t, 2H, -CH2-CO-), δ 2,83 (m, 4H. =CH-CH2-CH=), δ 5,45 (m, 6H, CH-CH)
Příklad 17. Enkapsulace tokoferolu (vitamínu E) do kapronyl esteru (C6) kyseliny hyaluronové
100 mg acylového hyaluronanu připraveného v příkladu 1 bylo rozpouštěno 3 hodiny v 5 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání při teplotě 25 až 40 °C postupně přidáván roztok tokoferolu (10 mg ve 3 ml CHCI3) a dále byly postupně přidány další 3 ml CHCE. CHC13 byl z roztoku kontinuálně odstraňován vakuovou evaporací. Po odstranění CHCI3 byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes Fpm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázaného tokoferolu (HPLC stanovení): 2,3 % (hm)
-26Příklad 18. Enkapsulace nilské červeně do kapronyl esteru (C6) kyseliny hyaluronové
100 mg acylového hyaluronanu připraveného v příkladu 1 bylo rozpouštěno 3 hodiny v 5 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání při teplotě 25 až 40 °C postupně přidáván roztok nilské červeně (10 mg ve 3 ml CHCI3) a dále byly postupně přidány další 3 ml CHCI3. CHCI3 byl z roztoku kontinuálně odstraňován vakuovou evaporací. Po odstranění CHCI3 byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes liprn skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázané nilské červeně (UV-Vis stanovení): 0,4 % (hm)
Příklad 19. Enkapsulace paclitaxelu do kapronyl esteru (C6) kyseliny hyaluronové
100 mg acylového hyaluronanu připraveného v příkladu 1 bylo rozpouštěno 3 hodiny v 5 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání při teplotě 25 až 40 °C. postupně přidáván roztok paclitaxelu (10 mg ve 3 ml CHCI3) a dále byly postupně přidány další 3 ml CHCI3. CHCI3 byl z roztoku kontinuálně odstraňován vakuovou evaporací. Po odstranění CHCI3 byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a v
zfiltrována přes Lpm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
-- > A
Množství navázaného paclitaxelu (HPLC stanovení): 5 % (hm)
Příklad 20. Enkapsulace fosfatidylcholinu do kapronyl esteru (C6) kyseliny hyaluronové
100 mg acylového hyaluronanu připraveného v příkladu 1 bylo rozpouštěno 3 hodiny v 5 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně po kapkách přidáván roztok fosfatidylcholinu (10 mg v 5 ml etOH). EtOH byl z roztoku odstraněn vakuovou evaporací, zbylá vodní fáze byla vysušena do sucha, rehydratována na
Λ vodní lázni a zfiltrována přes l|gm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázaného fosfatidylcholinu (HPLC stanovení): 3,0 % (hm).
Příklad 21. Enkapsulace koenzymu Old do palmitoyl esteru (C16) kyseliny hyaluronové
100 mg acylového hyaluronanu připraveného v příkladu 7 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání při teplotě 30 až 40 °C postupně přidáván roztok koenzymu Q10 (20 mg v 5 ml CHCI3) a dále byly postupně přidány další 3 ml CHCh. CHCI3 byl z roztoku kontinuálně odstraňován vakuovou evaporací. Po odstranění CHCI3 byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes Hgm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
-27 Množství navázaného koenzymu Q10 (UV-Vis stanovení): 12 % (hm)
Při rozpuštění produktu v 0,9% NaCI v závislosti na koncentraci rozpouštěného produktu dochází k tvorbě koacervátu nebo gelovitého roztoku.
Příklad 22. Enkapsulace tokoferolu (vitamínu E) do stearyl esteru (Cl 8) kyseliny hyaiuronové
100 mg acylového hyaluronanu připraveného v příkladu 8 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ’m| vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání při teplotě 25 až 40 °C postupně přidáván roztok tokoferolu (cca 50 mg v 5 ml ethanolu). Ethanol byl z roztoku kontinuálně odstraňován vakuovou evaporací. Po odstranění EtOH byla vodná táze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes Ijim skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázaného tokoferolu (UV-Vis stanovení): 30 % (hm)
Příklad 23. Enkapsulace tokoferolu (vitamínu E) do oleyl esteru (C18:l) kyseliny hyaiuronové
100 mg acylového hyaluronanu připraveného v příkladu 9 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání při teplotě 25 až 40 °C postupně přidáván roztok tokoferolu (cca 50 mg v 5 ml izopropanolu). Izopropanol byl z roztoku kontinuálně odstraňován vakuovou evaporací. Po odstranění izopropanolu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes Hgm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázaného tokoferolu (UV-Vis stanovení): 40 % (hm)'
Příklad 24. Enkapsulace koenzymu Old do palmitoyl esteru (C16) kyseliny hyaiuronové
100 mg acylového hyaluronanu připraveného v příkladu 7 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně přidáván roztok koenzymu Q10 (cca 30 mg ve 2 ml etOH). Po 3 hodinách míchání byla výsledná směs sonikována 30 min (100 W) a následně intenzivně dialyzována (2 dny) proti destilované vodě, zfiltrována přes ΐίμιη skleněný filtr a zlyofilizována.
A
Množství navázaného koenzymu Q10 (UV-Vis stanovení): 4,6 % (hm)
Při rozpuštění produktu v 0,9% NaCI v závislosti na koncentraci rozpouštěného produktu dochází k tvorbě koacervátu nebo gelovitého roztoku.
- 28 Příklad 25. Enkapsulace paclitaxelu do palmitoyl esteru (Cl 6) kyseliny hyaluronové
100 mg acyíového hyaluronanu připraveného v příkladu 7 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupně přidáván roztok paclitaxelu (cca 40 mg ve 2 ml etOH). Po 3 hodinách míchání byla výsledná směs sonikována 30 min (100 W) a následně intenzivně dialyzována (3.5 kDa cut off) proti destilované vodě, zfiltrována přes porcelánovou fritu S4 a zlyofilizována.
Množství navázaného paclitaxelu (HPLC stanovení): 25 % (hm)
Příklad 26. Enkapsulace chmelového extraktu do oleyl esteru (Cl8:1) kyseliny hyaluronové
100 mg acyíového hyaluronanu připraveného v příkladu 9 bylo přes noc rozpouštěno v 10 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku byl za stálého míchání postupné přidáván roztok směsi chmelového extraktu (cca 50 mg ve 5 ml izopropanolu). ). Izopropanol byl z roztoku kontinuálně odstraňován vakuovou evaporací. Po odstranění izopropanolu byla vodná fáze vysušena do sucha, rehydratována na vodní lázni a zfiltrována přes 1 gm skleněný filtr. Filtrát byl zlyofilizován.
Množství navázaného tokofěrolu (UV-Vis stanovení): 40 % (hm)
Příklad 27. Stanovení kritické micelární (agregační) koncentrace acylovaného esteru kyseliny hyaluronové.
(a) Fluorescenční metoda
Kritická micelární (agregační) koncentrace byla stanovena ze závislosti intenzity fluorescence na koncentraci roztoků (Obrázek I). Emisní spektra (580-700 nm) vodných roztoků acylovaných hyaluronanůHACó (SS = 60%) a HAC16 (SS = 14j%) s navázanou nilskou Λ i červení připravených podle postupu v příkladu 18 v rozsahu koncentrací 0,00002-1.5 ing.inl'1 byla proměřována na fluorometru RF-5301 (Shimadzu) při excitaci 543 nm.
Kritická micelární (agregační) koncentrace HA C6: 0,001 ď),003 mg.mf1 , HA Cl6 0.000060,0002 mg.mr'(Obrázek 1). Stejná hodnota byla naměřena i pro PBS a 0.9% NaCl.
(b) Metoda statického rozptylu světla
Kritická micelární (agregační) koncentrace byla stanovena ze závislosti intenzity rozptýleného světla (Z9o) na koncentraci roztoků (Obrázek 2). Intenzita rozptýleného světla vodních roztoků acylovaných HAC6 (SS = 60%) a HACI6 (SS = 14%) s navázanou olejovou červení
- 29 podle postupu v příkladu 18 v rozsahu koncentrací 0.00002-0.06 mg.ml·1 byla proměřována při úhlu 90 0 na fotometru DAWN EOS (Wyatt Technology Corporation) při vlnové délce 632 nm.
Kritická micelární (agregační) koncentrace HA C6: 0,002-0,004 mg.ml'1 , HA Cl6 0,000060,0001 nig.mT'(Obrázek 2). Stejná hodnota byla naměřena i pro PBS a 0,9% NaCl.
Příklad 28. Stanovení zeta potenciálu nanomicel hyaluronanu
Zeta potenciál byl stanoven na Zetasizeru Nano-ZS (Malvern Instruments) vybaveném He-Ne laserem (633 nm). Nezávisle na enkapsulované látce, nanomicely ve vodných roztocích vykazovaly zeta potenciál ~ - 50 mV při 5 mg.mT1 a v rozmezí —60 to -70 mV po 10-ti násobném naředění. V 0,9% NaCl zeta potenciál klesl na - 30 až -23 mV. Absolutní hodnota zeta potenciálu tedy indikuje vysokou stabilitu připravených nanomicel ve vodných roztocích a relativně vysokou stabilitu v solných roztocích.
Příklad 29. Morfologická analýza nanomicel hyaluronanu
Mikroskopické analýzy byly provedeny při -135 °C na skenovacím mikroskopu JEOL 7401F pracujícím při urychlovacím napětí 2 kV (jemný paprskový režim). Pro analýzu byly 2-3 μΕ koncentrovaného vzorku (cca 20 mg/0,4 ml) nakapány na Al destičku, ponořeny do kapalného dusíku v kryokomoře Alta 2500 (gatan) a pokoveny 2 min ve směsi Pt/Pd.
Velikost nanomicel hyaluronanu C6 s enkapsulováným vitamínem E (příklad 17) a HAC16 s enkapsulováným paclitaxelem (příklad 25): 20-50 nm (Obrázek 3).
Příklad 30. Distribuce acylovaných řetězců a nepolární látky v nanomicelach hyaluronanu
Separace nanomicel hydrofobizovaného hyaluronanu s enkapsulovaným vitamínem E byla provedena pomocí frakcionace tokem vtokovém poli (F1FFF) s použitím frit-inlet separačního kanálu. Pro analýzu bylo 10 mg lyofilizátu acylováného hyaluronanu s navázaným vitamínem E (připraveno za použití acylovaných hyaluronanu v tabulce I podle postupu v příkladu 23) rozpuštěno v 1 ml mobilní fáze (50 mM NaNO3 s 0.02% NaN3). přefiltrováno přes stříkačkový skleněný filtr s velikostí porú I μιη a 100 μΐ bylo injektováno do F1FFF.
Separace byla provedena pomocí gradientu cross flow z 2 na 0,1 ml/min během 15 minut. Průtok mobilní fáze do detektoru byl udržován konstantní na hodnotě I ml/min.
Separace probíhala při laboratorní teplotě. Eluát byl monitorován pomocí detektoru rozptylu světla DAWN EOS. diferenciálního relřaktometru Optilab rEX (oba od Wyatt Technology Corporation) a UV detektoru při 292 nm (Shimadzu).
Metodou lze zjistit, kolik procent navázané látky a hydrotbbizováného hyaluronanu je pevně inkorporováno uvnitř nanomicel a kolik je přítomno mimo zagregované útvary (viz tabulka o · o·
Tabulka I. Distribuce acylových řetězců a vitamínu E (tokolěrolu) v agregátech (nanomicelách) hyaluronanu a mimo ně.
| Nosič (stupeň substituce) | Vazebná kapacita tokoferolu (hm. %) | Nezagregované acylové skupiny (%) | Zagregované acylové skupiny (%) | Volný Vitamín E (%) | Vázaný Vitamín E (.%) |
| HAC6 (DS=55%) | 6.9 | 91,5 | 8,5 | 0.5 | 99.5 |
| HAC8 (DS = 15%) | 12,4 | 82.1 | 17,9 | 0.4 | 99,6 |
| HAC10 (DS = 15%) | 18,5 | 47,2 | 52,8 | 0,5 | 99.5 |
| HAC18 (DS = 10%) | 40 | 21.5 | 78,5 | 0.3 | 99,7 |
Výsledky v tabulce 1 ukazují, že distribuce acylových řetězců v nanomicelách hyaluronanu je ovlivněna především délkou acylového řetězce. Se vzrůstající délkou řetězce narůstá agregace acylových řetězců. Nezávisle na délce acylového řetězce dochází k inkorporaci nepolární látky do nanomicely. V tomto případě vždy zcela převažuje (> 99,5%) distribuce nepolární látky v micele.
Příklad 31. Cytotoxicita nanomicel nesoucí cytostatikum paclitaxel
Paclitaxel navázaný do acylovaných hyaluronanů C6 a Cl6 připravený podle postupu v příkladu 19 a 25 byl rozpuštěn v kultivačním médiu (s 10% FBS) na koncentraci 100 pg/ml. Na buňkách lidských dermálních fibroblastů (NHDF). linii lidského prsního karcinomu (MCF-7) a linii lidského střevního karcinomu (HCT 116) byly otestovány měřením buněčné viability koncentrace paclitaxelu 0,001; 0,01; 0,1; 1,0; 10,0 a 100,0 pg/ml neseného acylovánými hyaluronany C6 a Cl6. Účinek paclitaxelu neseného acylovánými hyaluronany C6 a C16 byl srovnáván se samotným paclitaxelem (Obrázek 4). Měření buněčné viability je založeno na detekci aktivity enzymu dehydrogenázy, který je aktivní v živých buňkách, a přeměňuje žlutý substrát na fialový roztok, jehož absorbance se detekuje při 540 nm a je přímo úměrná živým buňkám.
- 31 S rostoucí koncentrací nosiče, zejména v případě HACI6. docházelo ke zmírnění cytostatického účinku paclitaxelu (Obrázek 4).
Samotné acylované hyaluronany nevykazovaly cytotoxické účinky.
Příklad 32. Transfer enkapsulované látky do buňky
Látky doxorubicin a 7-aminoactinomycin D (7-AAD. látka pronikající pouze do mrtvých nebo permeabilizováných buněk) byly enkapsulovány do acylovaného hyaluronanu C6 podle postupu v příkladu 18 (nilská červeň nahrazena 7-AAD). Na buňkách lidských dermálních fibroblastů (NHDF). linii lidského prsního karcinomu (MCF-7) a linii lidského střevního karcinomu (HCT 116) bylo otestováno metodou fluorescenční mikroskopie (invertovaný mikroskop Nikon Eclipse Ti), zdaje rozdíl mezi průnikem nesené látky do buňky, pokud je samotná látka v roztoku, anebo pokud je nesena v acylovaném hyaluronanu C6. Doxorubicin byl testován v koncentracích 5,0 ,ug/ml (Obrázek 5) a 7-AAD (Obrázek 6) v koncentraci 15 pg/ml.
Transfer látek z nosiče do buněk byl úspěšný.
Příklad 33. Uvolňování enkapsulované olejové červeně z nanomicel do roztoku
Uvolňování olejové červeně (Oil Red O, solvent red 27) enkapsulované v HAC6 podle postupu v příkladu 18 (nilská červeň nahrazena Oil Red O) bylo studováno in vitro do roztoků PBS nebo PBS s přídavkem 1% TWEEN 80. Vodné roztoky acylováných hyaluronanu o koncentraci 1 a 10 mg.ml'1 s navázanou olejovou červení byly rozpuštěny v PBS nebo PBS s 1% TWEEN 80, kvantitativně převedeny do dialyzačního střeva (MWCO 12-14 kDa. Spectrum Laboratories) a byly dialyzovány při 37 °C proti PBS nebo PBS s přídavkem 1% TWEEN 80. 4 ml dialyzátu byly odebrány a nahrazeny čerstvým médiem v předem definovaných intervalech. Uvolněné množství olejové červeně bylo stanoveno s pomocí UV-Vis (Qbrázek 7).
Pomalé uvolňování navázané látky ukazuje na vysokou stabilitu nosičových systémů v PBS.
Příklad 34. Uvolňování enkapsulovaného paclitaxelu látek z nanomicel do roztoku
Uvolňování paclitaxelu enkapsulované v HAC6 a HAC16 podle postupu v příkladu 19 a 25 bylo studováno in vitro do roztoku při 37 °C. Vodné roztoky acylovaných hyaluronanů obsahující celkovou koncentraci paclitaxelu 0.2 mg byly rozpuštěny v PBS, kvantitativně převedeny do dialyzačního střeva (MWCO 12-14 kDa. Spectrum Laboratories) a byly dialyzovány při 37 °C proti 50 ml PBS. Dialyzát byl nahrazován čerstvým médiem v předem definovaných intervalech. Uvolněné množství paclitaxclu bylo stanoveno po jeho extrakci do chloroformu, odpaření a následném rozpuštění v acetonitrilu pomocí HPLC (Obrázek 8).
Pomalejší uvolňování evidováno pro HACI6 oproti HAC6. Pomalé uvolňování navázané látky ukazuje na vysokou stabilitu nosičových systému v PBS.
Příklad 35. Příprava nanoemulzí a mikroemulzí z oleyl esteru (C18:l) kyseliny hyaluronové a kyseliny olejové mg acylovaného hyaluronanu připraveného v příkladu 11 bylo přes noc rozpouštěno ve 4 ml vody za stálého míchání. K připravenému roztoku bylo za stálého míchání postupně přidáváno 8 mg kyseliny olejové. Po promíchání byla výsledná směs sonikována (Ultrasonic Processor, UPS 200S. output 200W) nejprve kontinuálně po dobu 25 min (amplituda 50%) a pojté s 0.8 s pulsací (amplituda 70 %) po dobu 25 min V průběhu sonikace byla skleněná nádoba se sonikovanou směsí ponořena v ledové lázni pro zamezení přehřívání.
Velikost částic (zetasizer): 200-^300 nm. Velikost je závislá na množství olejové táze ve směsi.
Příklad 36. Příprava nanoemulzí a mikroemulzí z. oleyl esteru (Cl 8:1) kyseliny hyaluronové, kyseliny olejové a koenzymu Q10 mg acylovaného hyaluronanu připraveného v příkladu 11 bylo přes noc rozpouštěno v 4 n)E vody za stálého míchání. K připravenému roztoku bylo za stálého míchání postupně přidáváno 8 mg kyseliny olejové sjiž rozpuštěným koenzymem Q10 (cca 0,5 mg). Po promíchání byla výsledná směs sonikována (Ultrasonic Processor, UPS 200S, output 200 W) nejprve kontinuálně po dobu 25 min (amplituda 50 %) a pojté s 0.8 s pulsací (amplituda 70 %) po dobu 25 min. V průběhu sonikace byla skleněná nádoba se sonikovanou směsí ponořena v ledové lázni pro zamezení přehřívání.
Velikost částic (zetasizer): 200-300 nm. Velikost je závislá na množství olejové táze ve směsi.
Příklad 3 7. Stabilizace nanomicel kovalentním síťováním g hyaluronanu sodného (25 mmol. 38 kDa) bylo rozpouštěno v 200 ml demi vody. Poté se do roztoku přidaly TEA (6.97 ml. 2 eq. vzhledem k dimeru HA) a DMAP (153 mg, 0,05 eq.). Aktivace: 3,5 g kyseliny 3-(2-ťuryl)akrylové (25 mmol) bylo rozpouštěno v 50 ml tetrahydrofuranu a 19.2 ml TEA (2 eq), následovalo chlazení v ledové lázni a přídavek trichlorobenzoyl chloridu (1.2 ml), reakce se nechala probíhat 15 minut. Poté byla aktivovaná kyselina přidána k roztoku hyaluronanu, reakce probíhala po dobu 24 h£4 P1’· 25 °C. Potom se reakční směs naředila vodou. Akrylovaný hyaluronan byl z reakční směsi vy izolován srážením za použití 4-násobku absolutního izopropanol. Po dekantaci se sraženina opakovaně promyla nejprve vodným roztokem izopropanolu (85% obj.). Sraženina byla poté sušena po dobu 48 hH při teplotě 40 °C. Získaný akrylovaný hyaluronan byl acylován, viz příklad 1, následně rozpuštěn ve vodě a lyofilizován za účelem odstranění zbytkových rozpouštědel.
Nosičový systém připravený z olejové červeně (Oil red O) a akrylováného hyaluronanu podle postupu v příkladu 18 (nilská červeň nahrazena olejovou červení) byl rozpuštěn jako \% vodný roztok, a zesíťován v tomto vodném roztoku za použití iniciátoru peroxydisulfátu amonného (10% eq.).
SS 20 % aktivní skupiny pro foto cross-link (stanoveno z NMR) 'H NMR (D2O): 5 7,83. 6,87 (d, J=3,5). 6.87. 6.61 (bs), 7,83, 7.59 (J/ra„s= 16,01), 6.39 (J/rans-1 5,85).
Příklad 38. Topická aplikace nanomicel hyaluronanu - penetrace do kůže, vlas a sliznic
Prasečí kůže, kravská vaginální a kravská bukální sliznice byly darovány od MasoEko, s.r.o. Kunčice 243, Letohrad. Vzorky byly ihned po odebrání vystaveny pasivnímu působení roztoku acylovaného hyaluronanu C6 a C10 (10 mg.ml’1) s enkapsulovanou nilskou červení (připraveno podle postupu v příkladu 18) a penetrace do vzorku byla porovnána měřením fluorescence na invertovaném mikroskopu Nikon Eclipse Ti. objektiv Pian Fluor 4x. Vzorky .f kůže byly inkubovány při 37 °C po dobu 20 hodin (®brázek 9), vzorky vlasů po dobu 15 s <
minut (®brázek 10) a vzorky sliznic po dobu 4 hodin (®brázek 11 a 12).
Nosiče zajistily efektivnější penetrace látek do kůže, vlasů a sliznic oproti olejovému a vodnému rozpouštědlu.
Claims (35)
- P A T E N T O V É NÁROKYI. Nanomicelární kompozice na bázi Có-Cis-acylováného hyaluronanu, vyznačující se tím, že obsahuje CĎ-Cis-acylovaný hyaluronan podle obecného vzorcekde R je HT nebo Na, a kde R1 je H nebo -C(=O)CxHy. kde x je celé číslo v rozmezí 5x17 a vtz y celé číslo v rozmezí 11 <35 a CxHy je lineární nebo rozvětvený, nasycený nebo nenasycený řetězec C5-C17 a, přičemž alespoň v jedné opakující se jednotce je jeden nebo více R1 -C(=O)CxHy, kde n je v rozmezí 12 až 4000, přičemž nanomicely představují hydrofbbní jádro tvořené Có-Cis-acylovými skupinami navázanými na hyaluronan a hydrofílní obal tvořený hydrolílními funkčními skupinami hyaluronanu, a jednu nebo více biologicky aktivních látek fyzikálně vázaných v nanomicele.
- 2. Nanomicelární kompozice podle nároku I, vyznačující se tím, ž.e obsahuje Có-Cjsacylovaný hyaluronan podle obecného vzorce (1), kde R je ΕΓ nebo Na' a R1 je - •’C(=OXCH2)7-CH=CH-(CH2)7-CH3.
- 3. Nanomicelární kompozice podle kteréhokoliv z nároku 1 až 2. vyznačující se tím, že obsahuje 0,3 až 50 % hmotnostních biologicky aktivní látky vzhledem k hmotnostnímu obsahu C6-Ci8-acylováného hyaluronanu, přičemž biologicky aktivní látka je vybrána ze skupiny zahrnující farmaceuticky a kosmeticky aktivní látky, zejména vitamíny, léčiva, cytostatika, steroidy. fytoextrakty, fytokomplexy nebo fytoaktivní látky, minerální nebo rostlinné oleje, nebo jejich směs.
- 4. Nanomicelární kompozice podle nároku 3. vyznačující se tím, že biologicky aktivní látkou je tokoferol. paclitaxel, fbsfatidylcholin nebo koenzym Q10.
- 5. Nanomicelární kompozice podle kteréhokoli z nároků I až 4, vyznačující se tím, že obsahuje vyšší koncentraci Cb-Cis-acylovaného hyaluronanu než je jeho kritická agregační koncentrace.
- 6. Nanomicelární kompozice podle kteréhokoli z nároků I až 5. vyznačující se tím, že koncentrace CĎ-Cis-acylo váného hyaluronanu v kompozici ve vodném roztoku je v rozmezíj0,0001 |mgTtnl4 až 30 mg.ml'1, s výhodou I až 20 mg.ml'1.
- 7. Nanomicelární kompozice podle kteréhokoli z nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že biologicky aktivní látkou je minerální nebo rostlinný olej v množství 0.05 až 40 % hmotn. vzhledem k hmotnostnímu obsahu C6-Ci8-acylovaného hyaluronanu. s výhodou 1 až 20 • %hmotn.
- 8. Nanomicelární kompozice podle kteréhokoli z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že obsahuje biologicky aktivní látku, která je kapalná a nerozpustná ve vodě, v níž je rozpuštěna další biologicky aktivní látka.
- 9. Nanomicelární kompozice podle nároku 8. vyznačující se tím, že biologicky aktivní látkou, která je kapalná a nerozpustná ve vodě, je minerální nebo rostlinný olej, a další biologicky aktivní látkou je farmaceuticky nebo kosmeticky aktivní látka, zejména vitamíny, léčiva, cytostatika, steroidy, fytoextrakty, fytokomplexy nebo fytoaktivní látky nebo jejich směs.
- 10. Nanomicelární kompozice podle kteréhokoli z nároků 1 až 9, vyznačující se tím, že je ve formě roztoku, nanoemulze, mikroemulze. koacervátu nebo gelu.
- 11. Nanomicelární kompozice podle kteréhokoliv z nároků 1 až 10, vyznačující se tím, že v alespoň jedné opakující se jednotce je jeden nebo více R1 -C(=O)CxHy a jeden nebo více -C(-O)CH=CH-het, kde het je heterocyklický nebo heteroaromatický zbytek s volitelným obsahem N, S nebo O atomů.
- 12. Způsob přípravy Cé-Cis-acylovaněho hyaluronanu podle obecného vzorce (I) obsaženého v nanomicelární kompozici definované v kterémkoliv z nároků 1 až 10, vyznačující se tím, že hyaluronan reaguje ve směsi vody a aprotického rozpouštědla mísitelného s vodou, v přítomnosti báze a katalyzátoru s Ce-Cjs karboxylovou kyselinou aktivovanou chloridem2.4,6-trichlorbenzoové kyseliny nebo aktivovanou organickým chloridem Rj-CO-CI, kde- 36 R.3 je alifatický nebo rozvětvený C1-C30 alkyl, heteroaromatická nebo aromatická funkční skupina.
- 13. Způsob přípravy podle nároku 12, vyznačující se tím, že hyaluronan je ve formě volné kyseliny nebo stabilní farmaceuticky přijatelné soli a má molekulovou hmotnost od 5x10J gZmoJjdo 1,6x10° g/mol, s výhodou od 15xl03 )j4neJ|do 250xl0J g/mol, nejlépe 15x10’až 50x103 g/mol.
- 14. Způsob přípravy podle nároku 12 nebo 14,'vyznačující se tím, že se rozpustí hyaluronan ve směsi vody a aprotického rozpouštědla mísitelného s vodou, kterým je polární organické rozpouštědlo, přičemž obsah vody je v rozmezí od 10 do 99 % objemových, s výhodou 50 % objemových.
- 15. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků 12 až 14, vyznačující se tím, že aprotickým rozpouštědlem mísitelným s vodou se rozumí dimethylsulfoxid. tetrahydro furan, aceton, acetonitril nebo izopropanol.
- 16. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků 12 až 15, vyznačující se tím, že v reakční směsi je přítomna báze RSN. kde R1 je lineární nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec CnHm, kde n je celé číslo v rozmezí 1-4 a m je celé číslo v rozmezí 3-9, jako např. triethylamin, v množství 0,01 až 20 ekvivalentů, s výhodou 6 ekvivalentů vzhledem k dimeru hyaluronanu, a katalyzátor vybraný ze skupiny zahrnující substituované pyridiny, jako dimethylaminopyridin a jeho deriváty, v množství 0,01 až I ekvivalent, s výhodou 0,05 ekvivalentů vzhledem k dimeru hyaluronanu.
- 17. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků 12 až 16, vyznačující se tím, že se nejprve provede aktivace Có-Cis karboxylové kyseliny v polárním organickém rozpouštědle, v přítomnosti báze a kyseliny 2,4,6-trichlorbenzoové nebo jejích derivátů, nebo v přítomnosti báze a organického chloridu, následně se směs obsahující aktivovanou CóCis karboxylovou kyselinu přidá k hyaluronanu rozpuštěného ve směsi vody, organického rozpouštědla, báze a katalyzátoru a nechá se proběhnout reakce za vzniku Có-Cjs- •acylovaného hyaluronanu podle obecného vzorce (I).
- 18. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků 12 až 17, vyznačující se tím, že C(,-Ci8 karboxylová kyselina je vybrána ze skupiny zahrnující kyselinu kapronovou, enanthovou, kaprylovou. kaprinovou, palmitovou. stearovou. olejovou, linolovou a linolenovou.
- 19. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků 12 až 18. vyznačující se tím, že množství aktivované Cř-Cis karboxylové kyseliny je v rozmezí 0,01 až 5 ekvivalentů, s výhodou 0.5 až 2 ekvivalentů vzhledem k dimeru hyaluronanu.
- 20. Způsob přípravy podle nároku 12 až 19. vyznačující se tím, že aktivace C6-Cis karboxylové kyseliny probíhá po dobu 5 až 120 minut, s výhodou 30 minut, při teplotě od 20 až 60 °C, s výhodou při 25 °C.
- 21. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků 12 až 20. vyznačující se tím, že reakce hyaluronanu s aktivovanou CVO karboxylovou kyselinou probíhá po dobu I až 24 hodin, s výhodou 2 až 3 hodiny, při teplotě od 20 až 60 °C. s výhodou při 25 °C.
- 22. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků 12 až 21, vyznačující se tím, že se CĎ-Cisacylovaný hyaluronan následně izoluje z reakční směsi, promyje, suší a lyofilizuje.
- 23. Způsob přípravy podle nároku 22, vyznačující se tím, že se CY-Cis-acylovaný hyaluronan izoluje z reakční směsi srážením za použití NaCI a alkoholu.
- 24. Způsob přípravy podle nároku 22 nebo 23, vyznačující se tím, že se Có-Cjs-acylovaný hyaluronan promyje alkoholem, zejména izopropanolem nebo ethanolem.
- 25. Způsob přípravy nanomicelární kompozice definované v kterémkoli z nároků 1 až II, vyznačující se tím, že se CJ-Cis-acylovaný hyaluronan podle obecného vzorce rozpustí ve vodě a biologicky aktivní látka se rozpustí v organickém rozpouštědle, oba roztoky se smíchají, poté se organické rozpouštědlo odstraní.
- 26. Způsob přípravy podle nároku 25, vyznačující se tím, že organické rozpouštědlo se odstraní vakuovou evaporací, následně se vodná fáze usuší, rehydratuje, získané nanomicelární útvary se zfiltrují a nakonec lyofilizují.
- 27. Způsob přípravy podle nároku 25, vyznačující se tím, že organické rozpouštědlo se odstraní dialýzou, získané nanomicelární útvary se poté zfiltrují a nakonec lyofilizují.
- 28. Způsob přípravy podle kteréhokoli z nároků 25 až 27. vyznačující se tím. že organickým rozpouštědlem je těkavé chlorované rozpouštědlo jako trichlormethan, nebo alkohol jako ethanol nebo izopropanol.
- 29. Způsob přípravy nanomicelámí kompozice definované v kterémkoliv z nároků 1 až II, vyznačující se tím, že se C(,-Cis-acylovaný hyaluronan podle obecného vzorce ýlfř rozpustí ve vodě a následně se smíchá s biologicky aktivní látkou, která je kapalná a nerozpustná ve vodě, načež se směs homogenizuje sonikací za tvorby mikroemulze nebo nanoemulze.
- 30. Způsob přípravy nanomicelámí kompozice definované v nároku 29, vyznačující se tím, že se Cň-Cis-acylovaný hyaluronan podle obecného vzorce ýl?rozpustí ve vodě a následně se smíchá s biologicky aktivní látkou, která je kapalná a nerozpustná ve vodě a v níž je rozpuštěna další biologicky aktivní látka, načež se směs homogenizuje sonikací za tvorby mikroemulze nebo nanoemulze.
- 31. Použití nanomicelámí kompozice definované v kterémkoli z nároků 1 až 11 pro farmaceutické nebo kosmetické aplikace, s výhodou zejména pro topické aplikace.
- 32. Způsob přípravy stabilní nanomicelámí kompozice, vyznačující se tím, že se připraví C'ó'Cis-acylovaný hyaluronan podle obecného vzorceýll)?R— Na“ nebo H . R* ~ H aefco (Π).kde R je fT nebo Na , alespoň v jedné opakující se jednotce je jeden nebo více R* představován Có-Cis lineárním řetězcem, který může obsahovat nenasycené vazby, a alespoň v jedné opakující se jednotce je jeden nebo více R1 představován 3-(2thienyDakrylovou kyselinou nebo 3-(2-fiiryl)akrylovou kyselinou nebo jejich deriváty: načež se z C^-Cis-acylováného hyaluronanu podle obecného vzorce (II) připraví nanomicelámí kompozice, která se stabilizuje síťovací reakcí.
- 33. Způsob přípravy podle nároku 32, vyznačující se tím, že nejprve hyaluronan reaguje ve směsi vody a aprotického rozpouštědla mísitelného s vodou, v přítomnosti báze a katalyzátoru, s 3-(2-thienyl)akrylovou kyselinou nebo 3-(2-furyl)akrylovou kyselinou nebo jejich derivátem, aktivovanou chloridem 2,4,6-trichlorbenzoové kyseliny nebo aktivovanou organickým chloridem R3-CO-CI, kde R3 je alifatický nebo rozvětvený CjC.50 alkyl, případně obsahující heteroaromatické nebo aromatické funkční skupiny, za vzniku akrylovaného hyaluronanu podle vzorce,(lll>-CH3COR=H * nebo Na +, R1 =poté akrylovaný hyaluronan podle vzorce .jJIIjř reaguje ve směsi vody a aprotického rozpouštědla mísitelného s vodou, v přítomnosti báze a katalyzátoru, s Cé-Cis karboxylovou kyselinou aktivovanou chloridem 2,4,6-trichlorbenzoové kyseliny nebo aktivovanou organickým chloridem R3-CO-CI, kde R; je alifatický nebo rozvětvený CiC30 alkyl, příležitostně obsahující heteroaromatické nebo aromatické funkční skupiny, za vzniku C6-C]s-acylováného hyaluronanu podle vzorce fll)· následně se z hyaluronanu podle vzorce Jity připraví nanomicelární kompozice způsobem definovaným v kterémkoli z nároků 25 až 30, která se poté podrobí síťovací reakci pomocí radikálových reakcí.
- 34. Způsob přípravy podle kteréhokoliv z nároků 32 až 33, vyznačující se tím, že radikálová reakce je katalyzovaná síťovacím činidlem.
- 35. Způsob přípravy podle nároku 34, vyznačující se tím, že síťovacím činidlem je peroxydisulfát amonný.
Priority Applications (12)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2012-842A CZ2012842A3 (cs) | 2012-11-27 | 2012-11-27 | Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití |
| PCT/CZ2013/000156 WO2014082609A1 (en) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | C6-c18-acylated derivative of hyaluronic acid, method of preparation thereof, nanomicellar composition on its basis, method of preparation thereof and method of preparation stabilized nanomicellar composition, and use thereof |
| US14/647,626 US9999678B2 (en) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | C6-C18-acylated derivative of hyaluronic acid and method of preparation thereof |
| JP2015543316A JP2016500130A (ja) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | ヒアルロン酸のｃ６‐ｃ１８‐アシル化誘導体とその調製方法，それをベースとするナノミセル組成物及びその調製方法，並びに安定化されたナノミセル組成物の調製方法及びその使用 |
| HUE13829034A HUE038664T2 (hu) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | Hialuronsav C6-C18-acilezett származéka, eljárás annak elõállítására, erre épülõ nanomicelláris kompozíció, eljárás annak elõállítására és eljárás stabilizált nanomicelláris kompozíció elõállítására, valamint annak alkalmazása |
| RU2015125076A RU2640287C2 (ru) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | С6-с18-ацилированное производное гиалуроновой кислоты, способ его получения, наномицеллярная композиция на его основе, способ ее получения и способ получения стабилизированной наномицеллярной композиции и ее применение |
| EP13829034.1A EP2934592B1 (en) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | C6-c18-acylated derivative of hyaluronic acid, method of preparation thereof, nanomicellar composition on its basis, method of preparation thereof and method of preparation stabilized nanomicellar composition, and use thereof |
| PL13829034T PL2934592T3 (pl) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | C6-c18-acylowana pochodna kwasu hialuronowego, sposób jej wytwarzania, mieszanina nanomicelarna na jej bazie, sposób jej wytwarzania oraz sposób wytwarzania stabilizowanej mieszanki nanomicelarnej i jej zastosowanie |
| DK13829034.1T DK2934592T3 (en) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | C6-C18 acylated hyaluronic acid derivative, method of preparation thereof, on the basis of nanomicellar composition, method of preparation thereof, and method of preparation of a stabilized nanomicellar composition and use thereof |
| BR112015012191A BR112015012191A8 (pt) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | derivado c6-c18 acilado de ácido hialurônico, método de preparação de um derivado de ácido hialurônico, composição nanomicelar com base em um derivado c6-c18 acilado de ácido hialurônico, método de preparação da composição nanomicelar, uso de composição nanomicelar, método de preparação de composição nanomicelar estabilizada |
| ES13829034.1T ES2683993T3 (es) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | Derivado acilado de C6-C18 de ácido hialurónico, su método de preparación, composición nanomicelar basada en él, su método y preparación y método de preparación de la composición nanomicelar estabilizada, y su uso |
| KR1020157016788A KR102191353B1 (ko) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | 히알루론산의 c6-c18-아실화된 유도체, 이의 제조 방법, 이를 기재로 하는 나노미쉘형 조성물, 이의 제조 방법, 및 안정화된 나노미쉘형 조성물의 제조 방법, 및 이의 용도 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2012-842A CZ2012842A3 (cs) | 2012-11-27 | 2012-11-27 | Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ304654B6 CZ304654B6 (cs) | 2014-08-20 |
| CZ2012842A3 true CZ2012842A3 (cs) | 2014-08-20 |
Family
ID=50097520
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2012-842A CZ2012842A3 (cs) | 2012-11-27 | 2012-11-27 | Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9999678B2 (cs) |
| EP (1) | EP2934592B1 (cs) |
| JP (1) | JP2016500130A (cs) |
| KR (1) | KR102191353B1 (cs) |
| BR (1) | BR112015012191A8 (cs) |
| CZ (1) | CZ2012842A3 (cs) |
| DK (1) | DK2934592T3 (cs) |
| ES (1) | ES2683993T3 (cs) |
| HU (1) | HUE038664T2 (cs) |
| PL (1) | PL2934592T3 (cs) |
| RU (1) | RU2640287C2 (cs) |
| WO (1) | WO2014082609A1 (cs) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ307158B6 (cs) * | 2016-12-23 | 2018-02-07 | Contipro A.S. | Oftalmologický prostředek |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ2012842A3 (cs) | 2012-11-27 | 2014-08-20 | Contipro Biotech S.R.O. | Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití |
| CZ2014150A3 (cs) | 2014-03-11 | 2015-05-20 | Contipro Biotech S.R.O. | Konjugáty oligomeru kyseliny hyaluronové nebo její soli, způsob jejich přípravy a použití |
| CZ2014451A3 (cs) | 2014-06-30 | 2016-01-13 | Contipro Pharma A.S. | Protinádorová kompozice na bázi kyseliny hyaluronové a anorganických nanočástic, způsob její přípravy a použití |
| CZ309295B6 (cs) | 2015-03-09 | 2022-08-10 | Contipro A.S. | Samonosný, biodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití |
| EP3305304A4 (en) * | 2015-05-29 | 2019-01-23 | Seikagaku Corporation | COMPOSITION WITH GLUCOSAMINATE SCANDERIVATE AND CHEMOKIN RECEPTOR ACTIVITY CONTROLLER |
| CZ306479B6 (cs) | 2015-06-15 | 2017-02-08 | Contipro A.S. | Způsob síťování polysacharidů s využitím fotolabilních chránicích skupin |
| CZ306662B6 (cs) | 2015-06-26 | 2017-04-26 | Contipro A.S. | Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití |
| CZ307511B6 (cs) | 2015-12-23 | 2018-10-31 | Contipro A.S. | Fluorescenční konjugát kyseliny hyaluronové nebo jeho sůl, hydrofobizovaný konjugát, způsoby jejich přípravy a použití |
| CZ308106B6 (cs) | 2016-06-27 | 2020-01-08 | Contipro A.S. | Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití |
| CZ2016826A3 (cs) | 2016-12-22 | 2018-07-04 | Contipro A.S. | Léčivý prostředek s nosičem na bázi hyaluronanu a/nebo jeho derivátů, způsob výroby a použití |
| US12324789B2 (en) * | 2017-08-28 | 2025-06-10 | Apirx Pharmaceutical Usa, Llc | Method to treat psoriasis |
| WO2020002597A1 (en) | 2018-06-29 | 2020-01-02 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Fatty acid-grafted hyaluronic acid, dermal filler formulations comprising same, process for preparation and use thereof |
| FR3105922B1 (fr) | 2020-01-08 | 2022-12-02 | Le Rouge Francais | Composition cosmétique pour le traitement des lèvres sous forme de solide compact contenant au moins un agent probiotique et au moins un composé choisi parmi l'acide hyaluronique et ses dérivés. |
| TWI834948B (zh) * | 2020-02-05 | 2024-03-11 | 日商旭化成股份有限公司 | 玻尿酸衍生物組合物、醫藥組合物及玻尿酸衍生物－藥物結合體組合物 |
| US20230066990A1 (en) * | 2020-02-07 | 2023-03-02 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Hyaluronic acid derivative, pharmaceutical composition, and hyaluronic acid derivative-drug complex |
| KR102547183B1 (ko) * | 2020-10-19 | 2023-06-26 | 주식회사 메피온 | 필러 및 필러 제조 방법 |
| CN112159527B (zh) * | 2020-10-29 | 2023-06-06 | 绍兴文理学院 | 一种含有透明质酸基团的聚甘油脂肪酸酯ha-pg及其合成方法和其在制备药物制剂中的应用 |
| CN113476426B (zh) * | 2021-06-29 | 2023-11-24 | 大连工业大学 | 一种基于透明质酸的双靶向功能因子递送体系的制备及其在炎症性肠病中的应用 |
| CN114561827B (zh) * | 2022-02-25 | 2023-04-21 | 华南理工大学 | 一种全生物质基蜡乳液防水涂料及其制备方法与应用 |
| CN116444695B (zh) * | 2022-12-27 | 2024-09-06 | 山东丰金美业科技有限公司 | 一种低成本、低分子量乙酰化透明质酸钠的制备方法 |
| CN116459213A (zh) * | 2023-02-20 | 2023-07-21 | 莫佳杰 | 一种具有过氧化氢响应性胶束及制备方法和应用 |
| FR3148720A1 (fr) | 2023-05-18 | 2024-11-22 | Le Rouge Francais | Composition cosmétique aqueuse contenant un agent probiotique, un composé choisi parmi l'acide hyaluronique et ses dérivés, un colorant particulier et une huile végétale. |
| FR3151215A1 (fr) | 2023-07-23 | 2025-01-24 | Le Rouge Francais | Composition cosmétique topique anhydre pulvérulente comprenant un agent probiotique, de l'acide hyaluronique ou un de ses dérivés, un colorant particulier et une poudre minérale particulière. |
| CN116874640B (zh) * | 2023-07-24 | 2025-08-08 | 江南大学 | 一种长驻留的用于头发修护的透明质酸钠衍生物及其制备方法 |
| WO2025029805A2 (en) * | 2023-08-03 | 2025-02-06 | Pmidg, Llc | Hemostatic compositions and methods |
Family Cites Families (157)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3720662A (en) | 1971-09-13 | 1973-03-13 | Nat Starch Chem Corp | Preparation of starch esters |
| US3728223A (en) | 1971-10-08 | 1973-04-17 | Amano Pharma Co Ltd | Production of hyaluronidase from a strain of streptomyces |
| GB1527592A (en) | 1974-08-05 | 1978-10-04 | Ici Ltd | Wound dressing |
| CH628088A5 (en) | 1975-09-17 | 1982-02-15 | Dresden Arzneimittel | Process for obtaining streptococcal metabolic products |
| US4205025A (en) | 1975-12-22 | 1980-05-27 | Champion International Corporation | Synthetic polymeric fibrids, fibrid products and process for their production |
| JPS6033474B2 (ja) | 1978-05-11 | 1985-08-02 | 藤沢薬品工業株式会社 | 新規なヒアルロニダ−ゼｂｍｐ−８２３１およびその製造法 |
| US4716224A (en) | 1984-05-04 | 1987-12-29 | Seikagaku Kogyo Co. Ltd. | Crosslinked hyaluronic acid and its use |
| US4713448A (en) | 1985-03-12 | 1987-12-15 | Biomatrix, Inc. | Chemically modified hyaluronic acid preparation and method of recovery thereof from animal tissues |
| US4851521A (en) | 1985-07-08 | 1989-07-25 | Fidia, S.P.A. | Esters of hyaluronic acid |
| GB8519416D0 (en) | 1985-08-01 | 1985-09-04 | Unilever Plc | Oligosaccharides |
| JPS62104579A (ja) | 1985-10-30 | 1987-05-15 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | ヒアルロニダ−ゼの製造法 |
| JPH0751064B2 (ja) | 1986-08-13 | 1995-06-05 | 生化学工業株式会社 | 新規なヒアルロニダ−ゼｓｄ−６７８およびその製造法 |
| IT1219587B (it) | 1988-05-13 | 1990-05-18 | Fidia Farmaceutici | Polisaccaridi carbossiilici autoreticolati |
| JPH0214019A (ja) | 1988-06-30 | 1990-01-18 | Tonen Corp | 繊維状成形物及びその製造方法 |
| JPH0755961B2 (ja) * | 1989-04-18 | 1995-06-14 | 工業技術院長 | 新規なヒアルロン酸誘導体及びその製造方法 |
| US5522879A (en) | 1991-11-12 | 1996-06-04 | Ethicon, Inc. | Piezoelectric biomedical device |
| IT1254704B (it) | 1991-12-18 | 1995-10-09 | Mini Ricerca Scient Tecnolog | Tessuto non tessuto essenzialmente costituito da derivati dell'acido ialuronico |
| US5824335A (en) | 1991-12-18 | 1998-10-20 | Dorigatti; Franco | Non-woven fabric material comprising auto-crosslinked hyaluronic acid derivatives |
| JP2855307B2 (ja) | 1992-02-05 | 1999-02-10 | 生化学工業株式会社 | 光反応性グリコサミノグリカン、架橋グリコサミノグリカン及びそれらの製造方法 |
| FR2689131B1 (fr) | 1992-03-30 | 1994-05-20 | Oreal | Procede de preparation de monoesters majoritairement en position 6' du d-maltose et leur utilisation dans les domaines cosmetique, bucco-dentaire, pharmaceutique et alimentaire. |
| JPH0625306A (ja) | 1992-04-21 | 1994-02-01 | Shiseido Co Ltd | 溶媒不溶化ヒアルロン酸及びその製造方法 |
| IT1263316B (it) | 1993-02-12 | 1996-08-05 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Tessuto non tessuto multistrato in cui uno degli strati e' costituito essenzialmente da esteri dell'acido ialuronico |
| NL9700003A (nl) | 1993-09-28 | 1997-07-01 | House Foods Corp | Werkwijze voor het inoculeren van Fistulina hepatica. |
| US5616568A (en) | 1993-11-30 | 1997-04-01 | The Research Foundation Of State University Of New York | Functionalized derivatives of hyaluronic acid |
| AU697739B2 (en) | 1994-03-14 | 1998-10-15 | Seikagaku Corporation | Material to be worn on the eyeball |
| US5455349A (en) | 1994-05-13 | 1995-10-03 | Polaroid Corporation | Vinylbenzyl thymine monomers |
| DK0783325T3 (da) | 1994-09-27 | 2000-05-01 | Nycomed Imaging As | Kontrastmiddel |
| US6025444A (en) | 1994-11-17 | 2000-02-15 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) | Cinnamic acid derivative |
| JP3308742B2 (ja) | 1994-11-17 | 2002-07-29 | 生化学工業株式会社 | 光架橋性ヒアルロン酸誘導体とその架橋体およびそれらの製造方法 |
| US5690961A (en) | 1994-12-22 | 1997-11-25 | Hercules Incorporated | Acidic polysaccharides crosslinked with polycarboxylic acids and their uses |
| ATE220691T1 (de) | 1995-03-07 | 2002-08-15 | Novartis Erfind Verwalt Gmbh | Fotochemisch vernetzte polysaccharidderivate zur chromatographischen trennung von enantiomeren |
| IT1281877B1 (it) | 1995-05-10 | 1998-03-03 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Sali di metalli pesanti di succinil derivati dell'acido ialuronico e loro impiego come potenziali agenti terapeutici |
| IL123500A (en) | 1995-08-29 | 2003-06-24 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Composite biomaterials for preventing post-surgical adhesions of tissues |
| US5789462A (en) | 1995-09-13 | 1998-08-04 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) | Photocured crosslinked-hyaluronic acid contact lens |
| DE19604706A1 (de) | 1996-02-09 | 1997-08-14 | Merck Patent Gmbh | Vernetzungsprodukte von Aminogruppen-haltigen Biopolymeren |
| DE19616010C2 (de) | 1996-04-23 | 1998-07-09 | Seitz Filter Werke | Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung von Fibrets (Fibriden) aus Zellulosederivaten |
| US6632802B2 (en) | 1996-08-29 | 2003-10-14 | Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. | Hyaluronic acid esters, threads and biomaterials containing them, and their use in surgery |
| IT1287698B1 (it) | 1996-08-29 | 1998-08-18 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Fili da sutura essenzialmente costituiti da derivati esterei dello acido ialuronico |
| IT1286510B1 (it) | 1996-11-29 | 1998-07-15 | Cooperativa Centro Ricerche Po | Esteri butirrici ad attivita' antiproliferativa e composizioni farmaceutiche che li contengono |
| JP4247846B2 (ja) | 1997-07-03 | 2009-04-02 | デュピュイ・スパイン・インコーポレーテッド | 架橋ポリサッカリド薬物キャリア |
| US5977348A (en) | 1997-07-25 | 1999-11-02 | National Starch And Chemical Investment Holding Corporation | Polysaccharide modification in densified fluid |
| AU758575C (en) | 1998-04-30 | 2003-11-20 | Maruha Corporation | Compounds having glucuronic acid derivative and glucosamine derivative in structure thereof, method for producing the compounds, and uses of the compounds |
| HUP0101777A3 (en) | 1998-05-07 | 2003-04-28 | Tno | Process for selective oxidation of primary alcohols |
| US6630457B1 (en) | 1998-09-18 | 2003-10-07 | Orthogene Llc | Functionalized derivatives of hyaluronic acid, formation of hydrogels in situ using same, and methods for making and using same |
| IT1302534B1 (it) | 1998-12-21 | 2000-09-05 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Composizioni iniettabili, biocompatibili e biodegradabili comprendentialmeno un derivato dell'acido ialuronico, cellule condrogeniche, per |
| ES2203230T3 (es) | 1998-12-23 | 2004-04-01 | Esparma Gmbh | Hialuronatoliasa como promotor de penetracion en agentes topicos. |
| DE19917614C2 (de) | 1999-04-19 | 2001-07-05 | Thueringisches Inst Textil | Verfahren zur Herstellung von cellulosischen Formkörpern mit hohem Adsorptionsvermögen |
| US6288043B1 (en) | 1999-06-18 | 2001-09-11 | Orquest, Inc. | Injectable hyaluronate-sulfated polysaccharide conjugates |
| US6592794B1 (en) | 1999-09-28 | 2003-07-15 | Organogenesis Inc. | Process of making bioengineered collagen fibrils |
| WO2001034657A1 (en) | 1999-11-08 | 2001-05-17 | Sca Hygiene Products Zeist B.V. | Process of oxidising primary alcohols |
| DE10003397A1 (de) | 2000-01-27 | 2001-08-09 | Hartmann Paul Ag | Polyelektrolyt-Feststoffsystem, Verfahren zur Herstellung desselben sowie Wundverband |
| DE10009996B4 (de) * | 2000-03-02 | 2005-10-13 | Cognis Ip Management Gmbh | Feststoffgranulate mit monodisperser Korngrößenverteilung, ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung |
| IT1317358B1 (it) | 2000-08-31 | 2003-06-16 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Derivati cross-linkati dell'acido ialuronico. |
| IT1317359B1 (it) | 2000-08-31 | 2003-06-16 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Polisaccaridi percarbossilati, quali l'acido ialuronico, processo perla loro preparazione e loro impiego in campo farmaceutico e |
| US6498269B1 (en) | 2000-10-17 | 2002-12-24 | The University Of Connecticut | Method for the oxidation of aldehydes, hemiacetals and primary alcohols |
| WO2002048197A1 (en) | 2000-12-13 | 2002-06-20 | Sca Hygiene Products Zeist B.V. | Process for oxidising primary alcohols |
| EP1217008B1 (en) | 2000-12-19 | 2006-03-01 | Seikagaku Corporation | Photocurable hyaluronic acid derivative and process for producing the same, and photocured crosslinked hyaluronic acid derivative and medical material using the same |
| FR2819808B1 (fr) | 2001-01-19 | 2003-04-18 | Simafex | Compositions stabilisees d'acide o-iodoxybenzoique et leur procede de preparation |
| CA2435491C (en) | 2001-01-31 | 2010-02-02 | Seikagaku Corporation | Crosslinked polysaccharide sponge |
| US6902548B1 (en) | 2001-03-19 | 2005-06-07 | Ed Schuler | Use of Streptomyces hyalurolyticus enzyme in ophthalmic treatments |
| US6673919B2 (en) | 2001-03-30 | 2004-01-06 | Chisso Cororation | Chemically modified hyaluronic acid or salts thereof, and a process for producing thereof |
| US6946284B2 (en) | 2001-11-16 | 2005-09-20 | University Of Massachusetts | Solubilizing cross-linked polymers with photolyase |
| US20060189516A1 (en) | 2002-02-19 | 2006-08-24 | Industrial Technology Research Institute | Method for producing cross-linked hyaluronic acid-protein bio-composites |
| ITPD20020064A1 (it) | 2002-03-12 | 2003-09-12 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Derivati esterei dell'acido ialuronico per la preparazione di idrogelda utilizzare in campo biomedico, sanitario e chirurgico e come sistem |
| JP3975267B2 (ja) | 2002-06-03 | 2007-09-12 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 多糖物質のアシル化方法 |
| US20040101546A1 (en) | 2002-11-26 | 2004-05-27 | Gorman Anne Jessica | Hemostatic wound dressing containing aldehyde-modified polysaccharide and hemostatic agents |
| JP4323148B2 (ja) * | 2002-09-30 | 2009-09-02 | チッソ株式会社 | ｎ−アルカノイル化ヒアルロン酸もしくはその塩およびその製造法 |
| US7550136B2 (en) | 2002-12-20 | 2009-06-23 | University Of Massachusetts | Photo-reactive polymers and devices for use in hair treatments |
| ITMI20022745A1 (it) | 2002-12-23 | 2004-06-24 | Coimex Scrl United Companies | Esteri misti dell'acido ialuronico ad attivita' citostatica e prodifferenziante e procedimento per la loro produzione. |
| US7465766B2 (en) | 2004-01-08 | 2008-12-16 | The Cleveland Clinic Foundation | Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof |
| US6982298B2 (en) | 2003-01-10 | 2006-01-03 | The Cleveland Clinic Foundation | Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof |
| US20050126338A1 (en) * | 2003-02-24 | 2005-06-16 | Nanoproducts Corporation | Zinc comprising nanoparticles and related nanotechnology |
| FR2852012B1 (fr) | 2003-03-04 | 2006-06-23 | Oreal | Procede de preparation de derives o-acyles du glucose |
| EP1607405B1 (en) | 2003-03-11 | 2011-05-04 | Seikagaku Corporation | Photocrosslinked polysaccharide composition and process for producing the same |
| ES2226567B1 (es) * | 2003-06-20 | 2006-07-01 | Universidad De Santiago De Compostela | Nanoparticulas de acido hialuronico. |
| DE10331342B4 (de) | 2003-07-11 | 2009-03-12 | Thüringisches Institut für Textil- und Kunststoff-Forschung e.V. | Thermostabile Form- oder Spinnmasse |
| WO2005014655A2 (en) | 2003-08-08 | 2005-02-17 | Fresenius Kabi Deutschland Gmbh | Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein |
| TW200524959A (en) | 2003-09-08 | 2005-08-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Hyaluronic acid modification product and drug carrier therefrom |
| US7235295B2 (en) | 2003-09-10 | 2007-06-26 | Laurencin Cato T | Polymeric nanofibers for tissue engineering and drug delivery |
| CA2538793C (en) | 2003-09-19 | 2011-01-11 | Colorado State University Research Foundation (Csurf) | Hyaluronan (ha) esterification via acylation technique for moldable devices |
| US20100330143A1 (en) | 2003-12-04 | 2010-12-30 | University Of Utah Research Foundation | Modified macromolecules and methods of making and using thereof |
| US8313765B2 (en) | 2003-12-04 | 2012-11-20 | Industrial Technology Research Institute | Biodegradable hyaluronic acid derivative, biodegradable polymeric micelle composition and pharmaceutical or bioactive composition |
| GB2408741B (en) | 2003-12-04 | 2008-06-18 | Ind Tech Res Inst | Hyaluronic acid derivative with urethane linkage |
| ITMI20040605A1 (it) | 2004-03-29 | 2004-06-29 | Coimex S C R L United Companie | Esteri butirrici dell'acido ialuronico a basso grado di sostituzione procedimento per la loro preparazione ed uso |
| JP2008505716A (ja) | 2004-07-09 | 2008-02-28 | ザ クリーヴランド クリニック ファウンデーション | ヒドロキシフェニル架橋高分子ネットワーク及びその用途 |
| US7323425B2 (en) | 2004-08-27 | 2008-01-29 | Stony Brook Technology And Applied Research | Crosslinking of hyaluronan solutions and nanofiberous membranes made therefrom |
| US7214759B2 (en) | 2004-11-24 | 2007-05-08 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Biologically absorbable coatings for implantable devices based on polyesters and methods for fabricating the same |
| DK1817347T3 (en) | 2004-11-24 | 2017-08-14 | Albumedix As | Process for Crosslinking Hyaluronic Acid with Divinyl Sulfone |
| US7680038B1 (en) | 2005-04-25 | 2010-03-16 | Electronic Arts, Inc. | Dynamic bandwidth detection and response for online games |
| GB0513552D0 (en) | 2005-07-01 | 2005-08-10 | Bristol Myers Squibb Co | Bandage |
| WO2007004675A1 (ja) | 2005-07-06 | 2007-01-11 | Seikagaku Corporation | 薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル |
| ITPD20050206A1 (it) | 2005-07-07 | 2007-01-08 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Biomateriali in forma di fibra da impiegarsi come dispositivi medici nel trattamento delle ferite e loro processi di produzione |
| ITMI20051415A1 (it) | 2005-07-22 | 2007-01-23 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Biomateriali a base di corbossimetilcellulosa salificata con zinco associata a derivati dell'acido ialuronico da impiegarsi come dispositivi medici con attivita' antimicrobica ed antifungina e loro processo di produzione |
| CA2622947C (en) | 2005-09-21 | 2014-10-28 | Kode Biotech Limited | Cell surface coating with hyaluronic acid oligomer derivative |
| US7993678B2 (en) | 2005-09-26 | 2011-08-09 | Novozymes Biopolymer A/S | Hyaluronic acid derivatives |
| EP1968499A1 (en) | 2005-12-14 | 2008-09-17 | Anika Therapeutics Inc. | Bioabsorbable implant of hyaluronic acid derivative for treatment of osteochondral and chondral defects |
| EP1826274A1 (en) | 2006-02-24 | 2007-08-29 | Kikkoman Corporation | Enzyme composition, low molecular weight hyaluronan and process for preparing the same |
| US20100273734A1 (en) | 2006-02-28 | 2010-10-28 | Novozymes Biopolymer A/S | Derivatives of Hyaluronic Acids |
| WO2007098770A1 (en) * | 2006-03-02 | 2007-09-07 | Novozymes Biopolymer A/S | Aryl/alkyl vinyl sulfone hyaluronic acid derivatives |
| JP4892679B2 (ja) | 2006-03-27 | 2012-03-07 | 国立大学法人弘前大学 | ゲル紡糸によるヒアルロン酸繊維およびその製造方法 |
| KR20070118730A (ko) | 2006-06-13 | 2007-12-18 | 주식회사 코오롱 | 보습성이 우수한 창상피복재 및 그의 제조방법 |
| US20080124395A1 (en) | 2006-06-22 | 2008-05-29 | Weiliam Chen | Formulations and devices for treatment or prevention of neural ischemic damage |
| CN101501075B (zh) | 2006-08-04 | 2013-07-10 | 诺维信生物制药丹麦公司 | 支化透明质酸和制造方法 |
| US20080063617A1 (en) | 2006-09-07 | 2008-03-13 | Abrahams John M | Cosmetics formulations |
| ITMI20061726A1 (it) | 2006-09-11 | 2008-03-12 | Fidia Farmaceutici | Derivati crosslinkati a base di acido ialuronico reticolato via click chemistry |
| CZ302856B6 (cs) * | 2006-09-27 | 2011-12-14 | Cpn Spol. S R. O. | Zpusob prípravy derivátu polysacharidu |
| RU2432181C2 (ru) | 2006-12-22 | 2011-10-27 | Кромафарма Гезельшафт М.Б.Х. | Применение полимеров |
| EP1942117A1 (en) | 2006-12-29 | 2008-07-09 | Sigea S.R.L. | Derivatives of acid polysaccharides |
| KR20080062092A (ko) | 2006-12-29 | 2008-07-03 | 주식회사 핸슨바이오텍 | 세포전달체로서의 히알루론산 유도체 및 이의 제조 방법 |
| JP5329767B2 (ja) | 2007-02-26 | 2013-10-30 | 帝人株式会社 | 芳香族コポリアミド繊維の製造装置 |
| WO2008115799A1 (en) | 2007-03-21 | 2008-09-25 | William Marsh Rice University | Novel gene delivery vectors for human mesenchymal stem cells |
| CZ2007299A3 (cs) | 2007-04-24 | 2009-02-04 | Cpn Spol. S R. O. | Príprava nanovláken z polysacharidu a jejich smesí s polyvinylalkoholem |
| JP5165281B2 (ja) | 2007-06-01 | 2013-03-21 | 株式会社バイオベルデ | ２反応剤型の医療用含水ゲル形成剤、及び、これより得られるヒアルロン酸ゲル |
| RU2471867C2 (ru) | 2007-06-19 | 2013-01-10 | Тамара П. Уваркина | Гиалуронидаза и способ ее применения |
| JP5393662B2 (ja) | 2007-06-22 | 2014-01-22 | イノベイティブ サーフェイス テクノロジーズ， インコーポレイテッド | 潜在反応基を含有するナノ繊維 |
| US8268638B2 (en) | 2007-07-18 | 2012-09-18 | Advantageous Systems, Llc | Methods and apparatuses for detecting analytes in biological fluid of an animal |
| FR2921675B1 (fr) | 2007-09-28 | 2010-03-19 | Univ Claude Bernard Lyon | Filament a base d'acide hyaluronique et son procede d'obtention. |
| US7976825B2 (en) | 2007-12-06 | 2011-07-12 | Janos Borbely | Cancer cell diagnosis by targeting delivery of nanodevices |
| BRPI0908352A2 (pt) | 2008-02-11 | 2015-07-28 | Basf Se | Processo para produzir estruturas porosas, estrutura porosa, e, uso da mesma |
| WO2009108100A1 (en) | 2008-02-29 | 2009-09-03 | Ipr-Systems Sweden Ab | Composition for the formation of gels |
| JP5563563B2 (ja) | 2008-06-05 | 2014-07-30 | エージェンシー フォー サイエンス， テクノロジー アンド リサーチ | ペルオキシダーゼおよび低濃度の過酸化水素の存在下でのヒドロゲルの形成方法 |
| JP2010014784A (ja) | 2008-07-01 | 2010-01-21 | Fuji Xerox Co Ltd | 光書込型表示装置、書込装置、及び光書き込み方法 |
| FR2934999B1 (fr) | 2008-08-13 | 2011-07-29 | Adocia | Polysaccharides fonctionnalises par des derives du tryptophane |
| US9228027B2 (en) | 2008-09-02 | 2016-01-05 | Allergan Holdings France S.A.S. | Threads of Hyaluronic acid and/or derivatives thereof, methods of making thereof and uses thereof |
| CZ301555B6 (cs) | 2008-11-06 | 2010-04-14 | Cpn S. R. O. | Zpusob prípravy DTPA sítovaných derivátu kyseliny hyaluronové a jejich modifikace |
| ITRM20080636A1 (it) | 2008-11-28 | 2010-05-29 | Univ Palermo | Procedimento per la produzione di derivati funzionalizzati dell acido ialuronico e relativi idrogeli. |
| JP2010138276A (ja) | 2008-12-11 | 2010-06-24 | Nipro Corp | ヒアルロン酸単糸の製造方法 |
| US9273191B2 (en) | 2009-02-21 | 2016-03-01 | Sofradim Production | Medical devices with an activated coating |
| AU2010215199B2 (en) | 2009-02-21 | 2015-01-15 | Sofradim Production | Compounds and medical devices activated with solvophobic linkers |
| WO2010095049A1 (en) | 2009-02-21 | 2010-08-26 | Sofradim Production | Crosslinked fibers and method of making same by extrusion |
| CZ2009168A3 (cs) | 2009-03-17 | 2010-07-21 | Contipro C, A.S. | Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové pomocí O-acyl-O´-alkylkarbonátu v prítomnosti substituovaného pyridinu |
| US8551378B2 (en) | 2009-03-24 | 2013-10-08 | North Carolina State University | Nanospinning of polymer fibers from sheared solutions |
| US20120219554A2 (en) | 2009-05-14 | 2012-08-30 | Fidia Farmaceutici S.P.A. | Extracellular yaluronidase from streptomyces koganeiensis |
| DE102009022805B4 (de) | 2009-05-27 | 2013-04-25 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Verfahren zur Herstellung von Polysaccharidestern oder Polysaccharidmischestern |
| WO2010138074A1 (en) | 2009-05-29 | 2010-12-02 | Hilborn Joens | Hyaluronic acid based delivery systems |
| JP2012529509A (ja) * | 2009-06-09 | 2012-11-22 | ラックス・バイオサイエンシーズ・インコーポレイテッド | 眼科用用途のための局所薬物送達システム |
| SG178146A1 (en) | 2009-07-30 | 2012-03-29 | Carbylan Biosurgery Inc | Modified hyaluronic acid polymer compositions and related methods |
| KR101103423B1 (ko) | 2009-09-04 | 2012-01-06 | 아주대학교산학협력단 | 생체 주입형 조직 접착성 하이드로젤 및 이의 생의학적 용도 |
| EP2498830B1 (en) | 2009-11-11 | 2016-09-21 | University of Twente, Institute for Biomedical Technology and Technical Medicine (MIRA) | Dextran-hyaluronic acid based hydrogels |
| US9132201B2 (en) | 2009-11-11 | 2015-09-15 | University Of Twente, Institute For Biomedical And Technical Medicine (Mira) | Hydrogels based on polymers of dextran tyramine and tyramine conjugates of natural polymers |
| US20110111012A1 (en) | 2009-11-12 | 2011-05-12 | Hemcon Medical Technologies, Inc. | Nanomaterial wound dressing assembly |
| CZ2009836A3 (cs) | 2009-12-11 | 2011-06-22 | Contipro C A.S. | Derivát kyseliny hyaluronové oxidovaný v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd, zpusob jeho prípravy a zpusob jeho modifikace |
| CZ302503B6 (cs) | 2009-12-11 | 2011-06-22 | Contipro C A.S. | Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové oxidovaného v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd a zpusob jeho modifikace |
| US8197849B2 (en) | 2010-02-12 | 2012-06-12 | National Health Research Institutes | Cross-linked oxidated hyaluronic acid for use as a vitreous substitute |
| CN101897976A (zh) * | 2010-07-16 | 2010-12-01 | 沈阳药科大学 | 一种药物增溶载体及其制备方法和应用 |
| CZ302994B6 (cs) | 2010-12-31 | 2012-02-08 | Cpn S.R.O. | Hyaluronová vlákna, zpusob jejich prípravy a použití |
| CZ304072B6 (cs) | 2011-04-26 | 2013-09-25 | Contipro Biotech S.R.O. | Amfoterní materiál na bázi sítované kyseliny hyaluronové, zpusob jeho prípravy, materiály obsahující aktivní cinidla uzavrené v síti hyaluronanu, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití |
| CN102154738B (zh) | 2011-05-10 | 2012-08-01 | 青岛大学 | 一种红藻琼胶纤维的制备方法 |
| ITTO20110428A1 (it) | 2011-05-13 | 2012-11-14 | Rottapharm Spa | Esteri dell'acido ialuronico, loro preparazione ed uso in dermatologia |
| BR112014009292B1 (pt) | 2011-10-18 | 2021-06-15 | Heiq Pty Ltd | Processo para a preparação de fibras |
| CZ2012282A3 (cs) | 2012-04-25 | 2013-11-06 | Contipro Biotech S.R.O. | Zesítovaný derivát hyaluronanu, zpusob jeho prípravy, hydrogel a mikrovlákna na jeho bázi |
| CZ304512B6 (cs) | 2012-08-08 | 2014-06-11 | Contipro Biotech S.R.O. | Derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, způsob jeho modifikace a použití |
| CZ2012844A3 (cs) | 2012-11-27 | 2014-02-05 | Contipro Biotech S.R.O. | Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití |
| CZ2012842A3 (cs) | 2012-11-27 | 2014-08-20 | Contipro Biotech S.R.O. | Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití |
| CZ304303B6 (cs) | 2012-11-27 | 2014-02-19 | Contipro Biotech S.R.O. | Vlákna založená na hydrofobizovaném hyaluronanu, způsob jejich přípravy a použití, textilie na jejich bázi a použití |
| CN103505736A (zh) | 2013-09-23 | 2014-01-15 | 天津大学 | 基于改性透明质酸的高分子脂质体及其制备方法 |
| CZ2014150A3 (cs) | 2014-03-11 | 2015-05-20 | Contipro Biotech S.R.O. | Konjugáty oligomeru kyseliny hyaluronové nebo její soli, způsob jejich přípravy a použití |
-
2012
- 2012-11-27 CZ CZ2012-842A patent/CZ2012842A3/cs unknown
-
2013
- 2013-11-26 DK DK13829034.1T patent/DK2934592T3/en active
- 2013-11-26 EP EP13829034.1A patent/EP2934592B1/en active Active
- 2013-11-26 US US14/647,626 patent/US9999678B2/en active Active
- 2013-11-26 BR BR112015012191A patent/BR112015012191A8/pt not_active Application Discontinuation
- 2013-11-26 JP JP2015543316A patent/JP2016500130A/ja active Pending
- 2013-11-26 PL PL13829034T patent/PL2934592T3/pl unknown
- 2013-11-26 HU HUE13829034A patent/HUE038664T2/hu unknown
- 2013-11-26 KR KR1020157016788A patent/KR102191353B1/ko active Active
- 2013-11-26 ES ES13829034.1T patent/ES2683993T3/es active Active
- 2013-11-26 RU RU2015125076A patent/RU2640287C2/ru active
- 2013-11-26 WO PCT/CZ2013/000156 patent/WO2014082609A1/en active Application Filing
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ307158B6 (cs) * | 2016-12-23 | 2018-02-07 | Contipro A.S. | Oftalmologický prostředek |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK2934592T3 (en) | 2018-07-02 |
| WO2014082609A1 (en) | 2014-06-05 |
| US20150320873A1 (en) | 2015-11-12 |
| JP2016500130A (ja) | 2016-01-07 |
| CZ304654B6 (cs) | 2014-08-20 |
| RU2640287C2 (ru) | 2017-12-27 |
| ES2683993T3 (es) | 2018-10-01 |
| EP2934592B1 (en) | 2018-05-16 |
| HUE038664T2 (hu) | 2018-11-28 |
| PL2934592T3 (pl) | 2018-12-31 |
| RU2015125076A (ru) | 2017-01-13 |
| BR112015012191A8 (pt) | 2018-01-23 |
| US9999678B2 (en) | 2018-06-19 |
| EP2934592A1 (en) | 2015-10-28 |
| BR112015012191A2 (pt) | 2017-07-11 |
| KR102191353B1 (ko) | 2020-12-16 |
| KR20150088848A (ko) | 2015-08-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ2012842A3 (cs) | Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití | |
| Lee et al. | Inflammation-responsive drug-conjugated dextran nanoparticles enhance anti-inflammatory drug efficacy | |
| Li et al. | Redox-sensitive micelles self-assembled from amphiphilic hyaluronic acid-deoxycholic acid conjugates for targeted intracellular delivery of paclitaxel | |
| Zhang et al. | A facile approach for dual-responsive prodrug nanogels based on dendritic polyglycerols with minimal leaching | |
| Wang et al. | Engineering multifunctional bioactive citric acid-based nanovectors for intrinsical targeted tumor imaging and specific siRNA gene delivery in vitro/in vivo | |
| Jia et al. | Multi-functionalized hyaluronic acid nanogels crosslinked with carbon dots as dual receptor-mediated targeting tumor theranostics | |
| Chiang et al. | Reactive oxygen species and glutathione dual redox-responsive micelles for selective cytotoxicity of cancer | |
| Jiang et al. | Novel polymer micelles prepared from chitosan grafted hydrophobic palmitoyl groups for drug delivery | |
| Yoon et al. | Photo-crosslinked hyaluronic acid nanoparticles with improved stability for in vivo tumor-targeted drug delivery | |
| Zhan et al. | Acid-activatable prodrug nanogels for efficient intracellular doxorubicin release | |
| Hu et al. | Photo-triggered release of caged camptothecin prodrugs from dually responsive shell cross-linked micelles | |
| Lee et al. | Endolysosomal environment-responsive photodynamic nanocarrier to enhance cytosolic drug delivery via photosensitizer-mediated membrane disruption | |
| Tian et al. | The effect of the molecular weight of hyaluronic acid on the physicochemical characterization of hyaluronic acid-curcumin conjugates and in vitro evaluation in glioma cells | |
| Cao et al. | Folate-conjugated polyphosphoester with reversible cross-linkage and reduction sensitivity for drug delivery | |
| Hu et al. | Core cross-linked polyphosphoester micelles with folate-targeted and acid-cleavable features for pH-triggered drug delivery | |
| Deng et al. | Hydrophobic IR780 loaded sericin nanomicelles for phototherapy with enhanced antitumor efficiency | |
| Shaki et al. | Self-assembled amphiphilic-dextran nanomicelles for delivery of rapamycin | |
| Zhang et al. | pH-sensitive prodrug conjugated polydopamine for NIR-triggered synergistic chemo-photothermal therapy | |
| Sun et al. | A photo-controlled hyaluronan-based drug delivery nanosystem for cancer therapy | |
| Wang et al. | Diselenide-crosslinked carboxymethyl chitosan nanoparticles for doxorubicin delivery: Preparation and in vivo evaluation | |
| Shirani et al. | Redox responsive polymeric micelles of gellan gum/abietic acid for targeted delivery of ribociclib | |
| Tahvilian et al. | Preparation and characterization of pH-sensitive camptothecin-cis-aconityl grafted chitosan oligosaccharide nanomicelles | |
| Li et al. | Tailored Trojan horse nanocarriers for enhanced redox-responsive drug delivery | |
| Huerta-Ángeles et al. | Grafting of steroids to hyaluronan towards the design of delivery systems for antioxidants: The role of hydrophobic core | |
| CN103381273B (zh) | 阿霉素前药及其制备方法和可注射的组合物 |