RU2686679C2 - Противоопухолевая композиция на основе гиалуроновой кислоты и неорганических наночастиц, способ ее получения и ее применение - Google Patents

Противоопухолевая композиция на основе гиалуроновой кислоты и неорганических наночастиц, способ ее получения и ее применение Download PDF

Info

Publication number
RU2686679C2
RU2686679C2 RU2016151263A RU2016151263A RU2686679C2 RU 2686679 C2 RU2686679 C2 RU 2686679C2 RU 2016151263 A RU2016151263 A RU 2016151263A RU 2016151263 A RU2016151263 A RU 2016151263A RU 2686679 C2 RU2686679 C2 RU 2686679C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
nanoparticles
composition according
composition
spion
antitumor composition
Prior art date
Application number
RU2016151263A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2016151263A3 (ru
RU2016151263A (ru
Inventor
Даниэла СМЕЖКАЛОВА
Кристина НЕСПОРОВА
Мартина ТЕПЛА
Якуб СИРОВАТКА
Глория ХУЭРТА-АНГЕЛЕС
Мартина ПОСПИСИЛОВА
Вит МАТУШКА
Жири МРАЗЕК
Андреа ГАЛИСОВА
Дэниэл ЖИРАК
Владимир ВЕЛЕБНИЙ
Original Assignee
КОНТИПРО Фарма а.с.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by КОНТИПРО Фарма а.с. filed Critical КОНТИПРО Фарма а.с.
Publication of RU2016151263A publication Critical patent/RU2016151263A/ru
Publication of RU2016151263A3 publication Critical patent/RU2016151263A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2686679C2 publication Critical patent/RU2686679C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/728—Hyaluronic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/26—Iron; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/30—Zinc; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A61K49/12—Macromolecular compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A61K49/1806—Suspensions, emulsions, colloids, dispersions
    • A61K49/1809—Micelles, e.g. phospholipidic or polymeric micelles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A61K49/1818—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles
    • A61K49/1821—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles
    • A61K49/1824—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles
    • A61K49/1827—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles having a (super)(para)magnetic core, being a solid MRI-active material, e.g. magnetite, or composed of a plurality of MRI-active, organic agents, e.g. Gd-chelates, or nuclei, e.g. Eu3+, encapsulated or entrapped in the core of the coated or functionalised nanoparticle
    • A61K49/1833—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles having a (super)(para)magnetic core, being a solid MRI-active material, e.g. magnetite, or composed of a plurality of MRI-active, organic agents, e.g. Gd-chelates, or nuclei, e.g. Eu3+, encapsulated or entrapped in the core of the coated or functionalised nanoparticle having a (super)(para)magnetic core coated or functionalised with a small organic molecule
    • A61K49/1839—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles having a (super)(para)magnetic core, being a solid MRI-active material, e.g. magnetite, or composed of a plurality of MRI-active, organic agents, e.g. Gd-chelates, or nuclei, e.g. Eu3+, encapsulated or entrapped in the core of the coated or functionalised nanoparticle having a (super)(para)magnetic core coated or functionalised with a small organic molecule the small organic molecule being a lipid, a fatty acid having 8 or more carbon atoms in the main chain, or a phospholipid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A61K49/1818—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles
    • A61K49/1887—Agglomerates, clusters, i.e. more than one (super)(para)magnetic microparticle or nanoparticle are aggregated or entrapped in the same maxtrix
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5115—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой противоопухолевую композицию на основе С18-ацилированного производного гиалуроновой кислоты в соответствии с общей формулой (I)
Figure 00000006
, где R представляет собой Н+ или Na+, и где R1 представляет собой Н или -C(=O)C17Hy или -C(=O)CH=CH-het, где у обозначает целое число в диапазоне от 29 до 35, и С17Ну представляет собой линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную С17-цепь, и het представляет собой гетероциклический или гетероароматический остаток, содержащий N, S или О-атомы, причем по меньшей мере в одном повторяющемся звене один или более R1 представляет собой -C(=O)C17Hy, и где n находится в диапазоне от 12 до 4000, отличающуюся тем, что дополнительно содержит суперпарамагнитные наночастицы со стабилизирующей олеиновой кислотой и не содержит цитостатик. Изобретения также включают способ получения указанной выше композиции. Упомянутая композиция является селективно цитотоксической как в отношении суспензионных, так и адгезивных клеточных опухолевых линий, особенно в отношении опухолевых клеточных линий колоректальной карциномы и аденокарциномы, карциномы легкого, гепатоцеллюлярной карциномы и аденокарциномы молочной железы. 2 н. и 17 з.п. ф-лы, 17 ил., 1 табл., 29 пр.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к композиции на основе гиалуроновой кислоты, которая может быть использована для лечения опухолевых заболеваний. Композиция включает в себя полимерные наномицеллы, содержащие гидрофобизированное производное гиалуроновой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли и наночастицы, стабилизированные с помощью олеиновой кислоты, предпочтительно суперпарамагнитные наночастицы железа, наночастицы цинка или апконвертирующие (способные к преобразованию энергии с повышением частоты) наночастицы.
Уровень техники
При лечении опухолевых заболеваний наиболее часто используется химиотерапия, когда пациенту вводят внутривенно или перорально лекарственные вещества, которые распределяются с кровотоком по всему организму. Противоопухолевые вещества, однако, обладают высокой токсичностью не только по отношению к опухолевым клеткам, но также и по отношению к здоровым клеткам. Следствием системного (с общим кровотоком) распределения является токсическое воздействие противоопухолевых терапевтических средств не только в областях с опухолевым заболеванием, но и в областях здоровых тканей и клеток. Кроме того, неселективное распределение препарата уменьшает количество лекарственного вещества, которое, в конечном итоге, достигает опухолевых клеток, таким образом уменьшая эффективность терапии.
Из-за вышеупомянутых фактов, существует огромный интерес к поиску подходящей стратегии, которая позволила бы повысить химиотерапевтическую эффективность, направленную против опухолевых клеток, и в то же время подавлять нежелательную системную токсичность терапевтических средств. Выяснилось, что нежелательные побочные эффекты лекарственных веществ подавляются в большей степени, иногда даже полностью устраняются, если лекарственный препарат вводится в матрикс систем-носителей. Поэтому задачей исследования часто является нацеливание (таргетинг) таких систем-носителей на опухолевые клетки.
В настоящее время существуют две наиболее распространенные стратегии, используемые для нацеливания. Одна из них основана на так называемом пассивном нацеливании, когда используется характерные для опухолевых тканей повышенная проницаемость и способность к удерживанию (так называемый EPR-эффект (enhanced permeability and retention)) (Maeda, 2001). В отличие от здоровых тканей, опухолевые ткани характеризуются перфорированными капиллярами с повышенной проницаемостью, благодаря чему молекулы нанометрового размера могут попадать из крови в опухоль. Однако, пассивное нацеливание, помимо других факторов, лимитируется малоэффективным и неспецифическим захватом опухолевыми клетками систем-носителей с лекарственным веществом (Duncan & Gaspar, 2011; El-Dakdouki, Pure & Huang, 2013). Тем не менее, если система-носитель имеет размер, подходящий для пассивного нацеливания, такой способ нацеливания может обеспечивать повышенный противоопухолевый эффект данного терапевтического средства по отношению к опухолевым клеткам за счет других свойств носителя. Например, в патентной заявке WO 2008/130121 заявлен селективный по отношению к опухолевым клеткам и биологически разлагаемый конъюгат циклофосфазена-платины (II), который образует полимерные мицеллы в водных растворах и, по сравнению с аналогичными конъюгатами US 2001/6333422, проявляет повышенную селективность в пассивном нацеливании на опухолевые ткани. Повышенная селективность по отношению к опухолевым клеткам при пассивном нацеливании также упоминается в заявке на патент WO 2013/188727, которая раскрывает биоразлагаемые пегилированные наночастицы, содержащие конъюгат лекарственного вещества (SN-38, PI-103, этопозид, фенретинид) с ретиноатом или его изомером, связанный через быстро расщепляемую сложноэфирную связь с фенольной группой. В обоих случаях повышенная селективность была обнаружена на основе анализа экспериментальных данных в сравнении с аналогичными системами.
Другой способ усиления эффективности нацеливания и, следовательно, селективности действия лекарственного препарата связан с возможностью модификации терапевтических средств лигандами, имеющими высокое сродство к рецепторам, локализованным на поверхности опухолевых клеток (Duncan & Gaspar, 2011; Ruoslahti, Bhatia & Sailor, 2010). Такая вторая стратегия, которая известна как активное нацеливание, должна обеспечивать селективное перераспределение терапевтического средства в опухолевые клетки. Примером может служить, например, решение, раскрытое в US 2007/0155807, где заявлены производные карбоновых кислот тиазолидинон-амидов и тиазолидинин-амидов, для которых было обнаружено селективное поведение по отношению к клеткам меланомы, проявляющим повышенную экспрессию LPL-рецепторов. Недостатком данного и подобных решений является то, что LPL-рецепторы также экспрессируются в здоровых клетках, например, в кардиомиоцитах, что может привести к их селективному взаимодействию также и в здоровой ткани. Еще одним недостатком данного и других аналогичных решений (например, WO 2012/173677, US 2013/02742200) является тот факт, что экспрессия рецепторов опухолевых клеток варьируется как только во времени, так и при сравнении различных больных (Duncan & Gaspar, 2011). Селективный лиганд связывания, предназначенный для активного нацеливания, может тогда оказывать воздействие только на клетки в определенной стадии опухолевого заболевания или только у некоторых из пациентов.
Другая возможность активного нацеливания заключается в нацеливании систем-носителей с помощью внешнего магнитного поля, в тех случаях, когда такие системы включают в себя либо ковалентно, либо нековалентно связанные магнитные наночастицы. В упомянутом случае предпочтительно могут быть использованы суперпарамагнитные наночастицы (superparamagnetic nanoparticles (SPION)). Чаще всего, они представляют собой наночастицы Fе3O4, которые считаются инертным контрастным веществом для магнитно-резонансной томографии (МРТ) без какой-либо им предназначенной фармакологической функции (Huang et al., 2013). До сих пор для наночастиц SPION не сообщалось о краткосрочной или долгосрочной токсичности после их интернализации в клетке (Huang et al., 2013). Помимо контрастного вещества для МРТ и магнитного нацеливания, SPION могут быть использованы в качестве носителей в сочетании с цитостатиками или другими лекарственными веществами. Другим предпочтительным применением является магнитожидкостная гипертермия, когда SPION поглощают энергию переменного магнитного поля и превращают ее в тепло. Таким образом, можно избирательно увеличивать температуру в зоне, где локализованы SPION. Если SPION локализуются в области опухоли, можно уничтожать раковые клетки с помощью повышенной температуры, так как они более чувствительны к температуре, чем здоровые клетки (Laurent, Dutz, Hafeli & Mahmoudi, 2011).
В сочетании с пассивным или активным нацеливанием, несколько отличительных свойств опухолевых клеток, по сравнению со здоровыми клетками, используются для того, чтобы повысить селективность терапевтического средства (Fleige, Quadir & Haag, 2012). Данные свойства включают в себя, например, более кислое значение pH или повышенный уровень активных форм кислорода (reactive forms of oxygen (ROS)). Патентная заявка US 2013/0230542 раскрывает терапевтические компоненты (производные фенола), которые активируются в среде, где присутствуют ROS, и, следовательно, они должны действовать избирательно в опухолевых клетках, имеющих повышенный уровень ROS. Недостатком упомянутого решения является тот факт, что повышенный уровень ROS наблюдается также в некоторых здоровых клетках. Примерами являются макрофаги, где высокий уровень ROS позволяет устранять патогенные микроорганизмы в фагосомах. Повышенный уровень ROS служит также в других клетках в качестве естественного механизма защиты против гипоксии, а также в качестве сигнальных молекул, влияющих на ряд физиологических функций.
Из литературных данных известны также противоопухолевые композиции, которые перспективны тем, что in vitro они оказывают противоопухолевое действие на некоторые виды опухолевых клеток. Примером может служить композиция, раскрытая в US 2005/0255173, содержащая от одного до трех компонентов, выбранных из следующей группы: лимонная кислота, цинк и альбумин. Упомянутая композиция была более цитотоксичной in vitro против человеческих клеточных линий, полученных из аденокарциномы NIH: OV-CAR-3 и SKOV-3, по сравнению с контрольными клетками WI38 (нормальные фибробласты легкого человека). Недостатком упомянутой композиции является тот факт, что ее противоопухолевое действие зависит от уровня концентрации отдельных компонентов (US 2005/0255173). Поскольку компоненты являются природными для организма, на эффект заявленной композиции может повлиять локальная концентрация отдельных веществ в данном месте введения (например, высокая концентрация альбумина в крови).
Приведенные литературные данные показывают, что исследования противоопухолевых терапевтических средств ведутся во всем мире. Тем не менее, успех клинического применения предлагаемых решений по-прежнему является проблематичным, особенно в связи с тем, что большинство решений включают органические полимеры, которые не являются биологически деградируемыми и не имеют достаточной селективности по отношению к опухолевым клеткам. Поэтому, по-прежнему, существует заинтересованность в поиске новых композиций, обладающих избирательными воздействиями на опухолевые клетки.
Объект изобретения
Объектом настоящего изобретения являются гиалуронановые наномицеллы в сочетании с неорганическими наночастицами в качестве селективных противоопухолевых терапевтических средств. Более конкретно, настоящее изобретение относится к композиции на основе гидрофобизированной гиалуроновой кислоты и неорганических наночастиц, которая действует селективно по отношению к клеткам, происходящим из колоректальной карциномы или аденокарциномы, карциномы легкого, гепатоцеллюлярной карциномы и карциномы молочной железы. Данная композиция также может быть использована в качестве in vivo контрастной среды. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу приготовления упомянутой композиции.
Композиция основана на загрузке неорганических наночастиц, стабилизированных олеиновой кислотой, в наномицеллы из гидрофобизированного гиалуронана. Загрузка может быть выполнена путем обработки ультразвуком растворов наночастиц в органическом растворителе с раствором гидрофобизированного гиалуронана в воде. Полученные наномицеллы, содержащие неорганические наночастицы, затем подвергаются центрифугированию и отделяются, таким образом, от свободных неорганических наночастиц и могут быть использованы для селективного воздействия на опухолевые клетки. Основным и уникальным преимуществом композиции по настоящему изобретению является ее селективная активность in vitro по отношению к опухолевым клеткам, даже в том случае, когда обрабатывают смесь опухолевых и контрольных клеток. Композиция содержит неорганические наночастицы, стабилизированные олеиновой кислотой, причем первоначальное назначение неорганических наночастиц состояло в том, чтобы позволить in vivo детектирование композиции после ее введения в организм. Однако, было неожиданно обнаружено, что, в сочетании с гидрофобизированной гиалуроновой кислотой, особенно с олеиловым производным гиалуроновой кислоты, упомянутая композиция является селективно цитотоксической по отношению к опухолевым клеткам in vitro, даже без какого-либо цитостатического или другого терапевтического вещества. Данный неожиданный и необъяснимый до сих пор эффект наблюдался для наночастиц SPION, наночастиц из оксида цинка и апконвертирующих наночастиц при условии, что они были стабилизированы олеиновой кислотой. Неожиданный эффект не может быть однозначно объяснен как рецептор-опосредованный эффект, опосредованный CD44-рецепторами, которые являются специфическими для гиалуронана, и наблюдаемая селективность не может быть, согласно данным, собранным до настоящего времени, связана с влиянием повышенного образования ROS. Тем не менее, такая селективность может быть вызвана другим механизмом внутриклеточного высвобождения ионов в виде наночастиц. Избирательное воздействие на опухолевые клетки тем более удивительно, что SPION, включенные в носители на основе полисахарида или другой полимерной матрицы, обычно считаются нецитотоксические (El-Dakdouki et al., 2012; Li, Kim, Tian, Yu, Jon & Moon, 2012).
Другие преимущества упомянутой композиции включают совместимость с физиологическими растворами, возможность внутривенного введения in vivo и стабильность наномицелл во времени при физиологическом значении pH. Еще одним преимуществом данной композиции является применение гиалуронана в качестве полимера-носителя, образующего оболочку вокруг наномицеллярной системы, посредством чего обеспечивается совместимость композиции для введения in vivo. Предпочтительно, гиалуроновая кислота может также поддерживать связывание упомянутой композиции с опухолевыми клетками, характеризующимися повышенной экспрессией рецептора CD44. Присутствие наночастиц SPION в композиции может быть предпочтительно использовано для нацеливания носителей в нужное место в организме с помощью магнитного поля. Переменное магнитное поле может служить для индуцирования гипертермии, ведущей к разрушению ткани опухоли. Еще одно преимущество заключается в том, что данная композиция может быть объединена с другими активными веществами, такими как цитостатики. Подобно наночастицам SPION и наночастицам оксида цинка, присутствие апконвертирующих наночастиц может быть предпочтительно использовано для in vivo детектирования композиции в ткани. Кроме того, апконвертирующие наночастицы, имеющие определенный состав, могут быть использованы для фотодинамической терапии или для контролируемого высвобождения активных веществ лекарственного средства из композиции. Присутствие наночастиц оксида цинка может быть предпочтительно использовано в опухолевых тканях, имеющих более кислое значение pH, где наночастицы ZnO могут растворяться с высвобождением ионов Zn2+, которые, в то же время, являются локально цитотоксическими в более высоких концентрациях.
Таким образом, настоящее изобретение относится к противоопухолевой композиции на основе ацилированного гиалуронана и неорганических наночастиц, стабилизированных олеиновой кислотой и выбранных из группы, включающей суперпарамагнитные наночастицы, апконвертирующие наночастицы или наночастицы оксида цинка, особенно суперпарамагнитные наночастицы. Ацилированный гиалуронан может представлять собой C6-C18-ацилированное производное гиалуроновой кислоты, имеющее насыщенные и ненасыщенные связи, особенно C18:1 ацилированное производное гиалуроновой кислоты, и упомянутый ацилированный гиалуронан служит носителем неорганических наночастиц. В том случае, если композиция по настоящему изобретению содержит суперпарамагнитные наночастицы, они представляют собой предпочтительно наночастицы на основе оксидов железа, где количество железа в композиции составляет от 0,3 до 3% по массе, предпочтительно 1,0% по массе. Размер суперпарамагнитных наночастиц составляет от 5 до 20 нм, предпочтительно от 5 до 7 нм, более предпочтительно 5 нм. В том случае, если противоопухолевая композиция содержит наночастицы оксида цинка, они присутствуют в ней предпочтительно в количестве от 0,3 до 3% по массе Zn. В том случае, если противоопухолевая композиция содержит апконвертирующие наночастицы, они предпочтительно присутствуют в таком количестве, что общее количество редкоземельных элементов в композиции составляет от 0,3 до 3% hm. Апконвертирующие наночастицы могут содержать, например, Er, Yb и Y. Преимущество композиции в соответствии с композицией по настоящему изобретению заключается также в том факте, что ее можно стерилизовать в окончательной упаковке с помощью автоклавирования.
Противоопухолевая композиция по настоящему изобретению может быть использована в особенности для ингибирования роста как адгезивных, так и суспензионных человеческих опухолевых клеточных линий, полученных из колоректальной карциномы и аденокарциномы, карциномы легкого, гепатоцеллюлярной карциномы, карциномы молочной железы, предпочтительно колоректальной карциномы и аденокарциномы. Кроме того, противоопухолевая композиция, содержащая суперпарамагнитные наночастицы, может быть использована в качестве in vivo контрастного вещества, то есть для детектирования накопления композиции в организме, особенно в печени и в патологических образованиях, например, в опухолях. Выяснилось, что композиция по настоящему изобретению обладает возможностью иным образом высвобождать ионы металлов, in vitro в опухолевых и неопухолевых клетках, особенно в клетках, происходящих из колоректальной аденокарциномы человека (= опухоль) и дермальных фибробластов человека (= не опухоль).
Противоопухолевая композиция по настоящему изобретению может применяться в составе для парентерального или местного введения, например, внутривенно. Она может дополнительно включать и другие добавки, используемые в фармацевтических композициях, предпочтительно хлорид натрия, декстрозу или буферные соли.
Композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена следующим образом: готовят водный раствор ацилированного производного гиалуроновой кислоты, затем добавляют неорганические частицы, диспергированные в галогенидном растворителе, например, хлороформе, причем данные неорганические частицы стабилизированы олеиновой кислотой и выбраны из группы, включающей суперпарамагнитные наночастицы, апконвертирующие наночастицы или наночастицы оксида цинка, и полученную суспензию обрабатывают ультразвуком до образования гомогенной смеси, а затем свободные неорганические наночастицы отделяют от неорганических наночастиц, загруженных в наномицеллы, путем центрифугирования и последующей фильтрацией. Затем, фильтрат можно лиофилизовать или стерилизовать автоклавированием с целью долговременного хранения. Лиофилизат можно затем растворить в водном растворе и стерилизовать автоклавированием.
Для цели настоящего изобретения могут быть использованы коммерчески доступные наночастицы SPION, стабилизированные олеиновой кислотой.
Literature
Duncan, R., & Gaspar, R. (2011). Nanomedicine(s) under the Microscope. Molecular Pharmaceutics, 5 (6), 2101-2141.
El-Dakdouki, M.H., Pure, E., & Huang, X. (2013). Development of drug loaded nanoparticles for tumor targeting. Part 1: synthesis, characterization, and biological evaluation in 2D cell cultures. Nanoscale, 5 (9), 3895-3903.
El-Dakdouki, M.H., Zhu, D.C., El-Boubbou, K., Kamat, M., Chen, J., Li, W., & Huang, X. (2012). Development of Multifunctional Hyaluronan-Coated Nanoparticles for Imaging and Drug Delivery to Cancer Cells. Biomacromolecules, 13 (4), 1144-1151.
Fleige, E., Quadir, M.A., & Haag, R. (2012). Stimuli-responsive polymeric nanocarriers for the controlled transport of active compounds: Concepts and applications. Advanced Drug Delivery Reviews, 64 (9), 866-884.
Huang, G., Chen, H., Dong, Y., Luo, X., Yu, H., Moore, Z., Bey, E.A., Boothman, D.A., & Gao, J. (2013). Superparamagnetic iron oxide nanoparticles: amplifying ROS stress to improve anticancer drug efficacy. Theranostics, 3 (2), 116-126.
Laurent, S., Dutz, S., Hafeli, U.O., & Mahmoudi, M. (2011). Magnetic fluid hyperthermia: focus on superparamagnetic iron oxide nanoparticles. Advances in Colloid and Interface Science, 166 (1-2), 8-23.
Li, M., Kim, H.S., Tian, L., Yu, M.K., Jon, S., & Moon, W.K. (2012). Comparison of Two Ultrasmall Superparamagnetic Iron Oxides on Cytotoxicity and MR Imaging of Tumors. Theranostics, 2 (1), 76-85.
Maeda, H. (2001). The enhanced permeability and retention (EPR) effect in tumor vasculature: the key role of tumor-selective macromolecular drug targeting. Advances in Enzyme Regulation, 41 (1), 189-207.
Ruoslahti, E., Bhatia, S.N., & Sailor, M.J. (2010). Targeting of drugs and nanoparticles to tumors. The Journal of Cell Biology, 188 (6), 759-768.
Краткое описание чертежей
Фигура 1. Полученное с помощью ПЭМ (просвечивающей электронной микроскопии) изображение наночастиц (SPION), инкапсулированных в гидрофобизированный гиалуронан.
Фигура 2А, 2В, 2С. Ингибирование жизнеспособности опухолевой клеточной линии НТ-29 композицией ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION по сравнению с положительным/нейтральным эффектом в контрольных фибробластах NHDF и мышиной неопухолевой клеточной линии 3Т3.
Фигура 3. Влияние композиции ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION на ингибирование жизнеспособности различных линий опухолевых клеток по сравнению с положительным эффектом в контрольных фибробластах NHDF и мышиной неопухолевой клеточной линии 3T3.
Фигура 4А, 4В, 4С. Сравнение влияния композиций ацилированного гиалуронана с инкапсулированными наночастицами SPION размером 5 нм, 10 нм и 20 нм на жизнеспособность опухолевых клеток НТ-29 и здоровых клеток NHDF и 3Т3.
Фигура 5А, 5В, 5С. Ингибирование жизнеспособности с помощью композиции ацилированного гиалуронана с наночастицами цинка в опухолевой линии НТ-29 по сравнению с положительным/нейтральным эффектом в контрольных фибробластах NHDF и мышиной неопухолевой клеточной линии 3T3.
Фигура 6А, 6В, 6С. Ингибирование жизнеспособности с помощью композиции ацилированного гиалуронана с апконвертирующими наночастицами в опухолевой линии НТ-29 по сравнению с положительным/нейтральным эффектом в контрольных фибробластах NHDF и мышиной неопухолевой клеточной линии 3Т3.
Фигура 7. Совместное культивирование здоровых фибробластов NHDF и контрольных клеток НТ-29 с композицией ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION.
Фигура 8. Экспрессия рецептора CD44 на поверхности клеток NHDF, MCF-7 и MDA-MB-231, определяемая с помощью проточной цитометрии.
Фигура 9. Индукция образования ROS с помощью композиции ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION в NHDF и НТ-29.
Фигура 10. Внутриклеточное окрашивание на Fe в опухолевых клетках НТ-29 и контрольных клетках NHDF после инкубации с композицией ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION (масштаб: 10 мкм)
Фигура 11. Детектирование с помощью МРТ накопления во времени наночастиц SPION, загруженных в ацилированный гиалуронан, после внутривенного введения в опухоль (опухоль глиобластомы, 1,1 мг Fe/кг).
Фигура 12. МРТ печени с контрастом после внутривенного введения композиции наночастиц SPION, загруженной в ацилированный гиалуронан (1,1 мг Fe/кг).
Фигура 13. Детектирование Fe в гистологических срезах опухоли (через 2 и 24 часа после введения композиции наночастиц SPION) после их окрашивания берлинской лазурью.
Фигура 14. Детектирование Fe в гистологических срезах печени (через 2 и 24 часов после введения композиции наночастиц SPION) после их окрашивания берлинской лазурью.
Фигура 15. Полученное с помощью ПЭМ изображение наночастиц (SPION), инкапсулированных в гидрофобизированный гиалуронан после стерилизации.
Фигура 16. Селективная цитотоксичность композиции наночастиц SPION до и после стерилизации автоклавированием.
Фигура 17А, 17В, 17С. Индукция апоптоза с помощью композиции наночастиц SPION в опухолевых клетках линии мышиной лимфомы EL4.
Примеры
SS = степень замещения = 100% * молярное количество связанного заместителя/молярное количество всех полисахаридных димеров
Термин эквивалент (экв), используемый в данном описании, относится к димеру гиалуроновой кислоты, если не указано иное. Проценты являются массовыми процентами, если не указано иное.
Молекулярную массу гиалуроновой кислоты (источник: Contipro Pharma, a.s.,
Figure 00000001
Figure 00000002
, CZ) определяли с помощью SEC-MALLS.
Термин неорганические наночастицы означает неорганические наночастицы, имеющие диагностическую функцию, где данная диагностическая функция представляет собой существенное общее свойство неорганических наночастиц, используемых в композиции в соответствии с изобретением. Диагностическая функция означает возможность детектирования упомянутых частиц способами, доступными в медицине. Наночастицы SPION могут быть обнаружены с помощью магнитного резонанса, в то время как ZnO-наночастицы и апконвертирующие наночастицы могут быть обнаружены посредством люминесцентной визуализации, и все такие частицы специально оптимизированы для детектирования, и именно поэтому они используются. Таким образом, из множества неорганических наночастиц были выбраны те наночастицы, которые делают возможным детектирование (мицелл) in vivo или in vitro.
Термин апконвертирующие наночастицы означает апконвертирующие лантаноидные наночастицы, т.е. наночастицы, содержащие элементы из группы редкоземельных элементов, поскольку никакие другие неорганические наночастицы, способные к эффективному преобразованию энергии с повышением частоты, не известны.
Пример 1. Получение гидрофобизированной гиалуроновой кислоты, более конкретно, олеилового производного (С18:1) гиалуроновой кислоты с помощью смешанного ангидрида бензойной кислоты и олеиновой кислоты.
100 г гиалуронана натрия (250 ммоль, 15 кДа) растворяли в 2000 мл деминерализованной воды. Затем постепенно добавляли 1000 мл изопропанола. После этого к раствору добавляли TEA (70 мл, 3 экв.) и DMAP (1,52 г, 0,05 экв.). В то же время, олеиновую кислоту (35,3 г, 0,5 экв) растворяли в 1000 мл изопропанола, затем к раствору добавляли TEA (70 мл, 3 экв.) и бензоилхлорид (14,4 мл, 0,5 экв.). После активации кислоты осадок отфильтровывали в приготовленный раствор НА. Реакцию проводили в течение 3 часов при комнатной температуре. Затем реакционную смесь разбавляли с 1000 мл деминерализованной воды с добавлением 95 г NaCl. Ацилированное производное выделяли из реакционной смеси осаждением с использованием четырехкратного объема абсолютного изопропанола. После декантации осадок повторно промывали водным раствором изопропилового спирта (85% об.).
SS 13% (определено по ЯМР).
1Н-ЯМР (D2O): δ 0,88 (т, 3Н, -CH-CH 3 ), δ 1,22-1,35 (м, 20Н, (-CH2-)10),
δ 1,60 (м, 2Н, -CH 2 -CH2-СО-), δ 2,0 (4Н, (-CH2-)), δ 2,41 (т, 2Н, -CH2-СО-), δ 5,41 (д, 2Н, СН=СН)
В данном примере описан общий способ синтеза гидрофобизированного производного гиалуроновой кислоты. Тем не менее, данная процедура не ограничивается только олеиловым производным. Подробное описание синтеза гидрофобизированных производных упоминается в заявке на патент №CZ PV2012-842.
Пример 2. Получение наночастиц SPION со средним размером 5 нм
1,80 г олеата трехвалентного железа, 0,35 мл олеиновой кислоты и 13,35 мл 1-октадецена добавляли в трехгорлую колбу, имеющую объем 50 мл. Смесь медленно нагревали в вакууме до 100°C, где выдерживали в течение 30 минут для удаления летучих компонентов. Затем смесь нагревали при слабом токе аргона до 280°C и выдерживали при данной температуре в течение 60 минут. Смесь продували аргоном во время проведения реакции при 280°C. После охлаждения до комнатной температуры добавляли ацетон к реакционной смеси, и наночастицы разделяли центрифугированием. Осажденные наночастицы SPION затем 4 раза промывали смесью гексан/ацетон (соотношение последовательно от 1:4 до 1:1) и, в заключение, их диспергировали в толуоле и хранили при температуре 4°C в темноте.
Выход: 78%
Размер наночастиц: 5,2±0,8 нм (согласно фотографии, полученной с помощью электронного микроскопа)
Пример 3. Получение наночастиц SPION со средним размером 10 нм
1,80 г олеата трехвалентного железа, 0,35 мл олеиновой кислоты и 13,35 мл 1-октадецена добавляли в трехгорлую колбу, имеющую объем 50 мл. Смесь медленно нагревали в вакууме до 100°C, где выдерживали в течение 30 минут для удаления летучих компонентов. Затем смесь нагревали при слабом токе аргона до температуры кипения (~317°C) и выдерживали при данной температуре в течение 60 минут. После охлаждения до комнатной температуры наночастицы SPION разделяли таким же образом, как в примере 2.
Выход: 74%
Размер наночастиц: 9,8±0,5 нм (согласно фотографии, полученной с помощью электронного микроскопа)
Пример 4. Получение наночастиц SPION со средним размером 20 нм
1,80 г олеата трехвалентного железа, 0,35 мл олеиновой кислоты и 5,34 мл 1-октадецена и 6 г н-докозана добавляли в трехгорлую колбу, имеющую объем 50 мл. Смесь медленно нагревали в вакууме до 100°C, где выдерживали в течение 30 минут для удаления летучих компонентов. Затем смесь нагревали при слабом токе аргона до 315°C и выдерживали при данной температуре в течение 60 минут. После охлаждения до комнатной температуры наночастицы SPION разделяли таким же образом, как в примере 2.
Выход: 56%
Размер наночастиц: 21,1±3,1 нм (согласно фотографии, полученной с помощью электронного микроскопа)
Пример 5. Получение наночастиц ZnO
Дигидрат ацетата цинка (1185,30 мг; 5,4 ммоль) вносили в трехгорлую колбу, имеющую объем 250 мл, и растворяли в метаноле (90 мл) при комнатной температуре. В то же время, в двухгорлой колбе готовили раствор гидроксида тетраметиламмония (1622,91 мг; 8,96 ммоль) в метаноле (22,39 мл). Оба вышеупомянутых раствора дегазировали в ультразвуковой ванне, продувая аргоном в течение 15 минут (температура водной бани 50°C, выход 120 Вт). Раствор ацетата цинка в метаноле нагревали с обратным холодильником в масляной бане (температура бани 60°C). После добавления олеиновой кислоты (310 мкл, 0,99 ммоль) полученную смесь доводили до температуры кипения (температура бани 85°C). Раствор гидроксида тетраметиламмония в метаноле нагревали с обратным холодильником (температура бани 75°C) и быстро добавляли в трехгорлую колбу, содержащую ацетат цинка и олеиновую кислоту. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником при непрерывном перемешивании (600 оборотов в минуту) и продували аргоном в течение 2 минут (температура бани 85°C). Затем смесь разбавляли метанолом (90 мл) и охлаждали в течение 15 мин на бане со льдом. Охлажденную смесь центрифугировали в течение 15 мин (4000×g, 4°C). Частицы промывали этанолом (3×25 мл), за каждой стадией промывки следовало центрифугирование в течение 10 минут (4000×g, 25°C). Частицы диспергировали в хлороформе (45 мл) и хранили при температуре 4°C в темноте.
Квантовый выход флуоресценции: 34% (определено относительным способом, стандарт = norharman)
Размер наночастиц: 3,4±0,3 нм (согласно фотографии, полученной с помощью электронного микроскопа)
Пример 6. Получение апконвертирующих наночастиц
Молярные количества, соответствующие 1,60 ммоль ацетата иттрия (III), 0,36 ммоль ацетата иттербия (III) и 0,04 ммоль ацетата эрбия (III), вносили в трехгорлую колбу, имеющую объем 100 мл, и добавляли октадец-1-ен (34 мл) и олеиновую кислоту (12,0 мл). Смесь вакуумировали при сильном перемешивании (600 оборотов в минуту) и медленно нагревали на масляной бане до 80°C. При данной температуре смесь перемешивали в вакууме до полного осветления и с данного момента в течение еще 90 минут. Колбу со смесью заполняли аргоном и после охлаждения до комнатной температуры в атмосфере аргона добавляли раствор NaOH (200 мг) и NH4F (296,3 мг) в метаноле (20 мл), после чего смесь сразу становилась мутной. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, а затем медленно испаряли метанол при 65°C (масляная баня). Затем колбу со смесью переносили в нагревательный кожух, управляемый ПИД- (пропорционально-интегрально-дифференцирующим) регулятором. Смесь постепенно вводили в вакуум, в вакууме ее медленно нагревали до 112°C и при данной температуре ее дегазировали в течение 30 минут. Затем колбу, содержащую смесь, заполняли аргоном, и в атмосфере воздуха с обратным холодильником смесь нагревали до 305°C в слабом потоке аргона при скорости 2°C/мин. При 305°C смесь оставляли в течение 110 минут, после снятия с нагрева охлаждали естественным образом до комнатной температуры.
Апконвертирующие наночастицы осаждали из реакционной смеси с помощью этанола (двойной объем от объема реакционной смеси), а затем выделяли центрифугированием (RCF 3000×g, 10 минут). Наночастицы (осадок) диспергировали в гексане (5 мл), осаждали этанолом (10 мл) и отделяли центрифугированием (RCF 3000×g, 7 минут). Наночастицы очищали таким образом три раза с помощью системы гексан/этанол и три раза с помощью системы гексан/ацетон. В заключение, наночастицы диспергировали в хлороформе (10 мл) и хранили при комнатной температуре.
Композиция наночастиц (ICP-OES): NaYF4: …Yb/Er (80% мол Y, 18% мол Yb, 2% мол Er
Органическая составляющая часть (TGA): 7%
Размер наночастиц (электронный микроскоп): 34±2 нм
Пример 7. Получение композиции капронилового производного гиалуроновой кислоты (НАС6) с наночастицами SPION
150 мг ацилированного гиалуронана (НАС6, DS=60%, Mw=38 кДа), полученного согласно примеру 1, растворяли в течение 2 часов в 15 мл деминерализованной воды при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Наночастицы SPION (стабилизированные олеиновой кислотой, размер наночастиц: 5 нм), полученные в соответствии с примером 2, переносили из среды толуола в хлороформную среду.
Раствор ацилированного гиалуронана переносили в имеющий форму розетки сосуд для обработки ультразвуком (rosette sonication vessel) (RZ 1, объем: 25 мл), погруженный в баню со льдом. Сначала раствор обрабатывали ультразвуком в течение 60 секунд (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 65%, цикла 0,5 с и волновод S2). Далее, 5 мг наночастиц SPION, диспергированных в 3 мл CHCl3, постепенно добавляли к упомянутому раствору (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 85%, цикл 0,8 с и волновод S2). Гомогенизированную суспензию дополнительно обрабатывали ультразвуком в течение 15 мин (параметры обработки ультразвуком: амплитуда 65%, цикл 0,5 с и волновод S2). Свободные наночастицы отделяли с помощью повторного центрифугирования (3×4500 оборотов в минуту, 10 мин) и полученный супернатант, содержащий наномицеллы гиалуронана с загруженными наночастицами, отбирали, фильтровали через стеклянный фильтр 1,0 мкм и лиофилизировали.
Количество загруженного Fe (определение ICP): 1,1% (маc.)
Пример 8. Получение композиции капронилового производного гиалуроновой кислоты (НАС8) с наночастицами SPION
150 мг ацилированного гиалуронана (НАС8, DS=22%, Mw=20 кДа), полученного согласно примеру 1, растворяли в течение 2 часов в 15 мл деминерализованной воды при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Наночастицы SPION (стабилизированные олеиновой кислотой, размер наночастиц: 5 нм), полученные в соответствии с примером 2, переносили из среды толуола в хлороформную среду.
Раствор ацилированного гиалуронана переносили имеющий форму розетки сосуд для обработки ультразвуком (RZ 1, объем: 25 мл), погруженный в баню со льдом. Сначала раствор обрабатывали ультразвуком в течение 60 секунд (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 65%, цикла 0,5 с и волновод S2). Далее, 5 мг наночастиц SPION, диспергированных в 3 мл CHCl3, постепенно добавляли к упомянутому раствору (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 85%, цикл 0,8 с и волновод S2). Гомогенизированную суспензию дополнительно обрабатывали ультразвуком в течение 15 мин (параметры обработки ультразвуком: амплитуда 65%, цикл 0,5 с и волновод S2). Свободные наночастицы отделяли с помощью повторного центрифугирования (3×4500 оборотов в минуту, 10 мин) и полученный супернатант, содержащий наномицеллы гиалуронана с загруженными наночастицами, отбирали, фильтровали через стеклянный фильтр 1,0 мкм и лиофилизировали.
Количество загруженного Fe (определение ICP): 1,1% (маc.)
Пример 9. Получение композиции капронилового производного гиалуроновой кислоты (НАС10) с наночастицами SPION
150 мг ацилированного гиалуронана (НАС10, DS=15%, Mw=15 кДа), полученного согласно примеру 1, растворяли в течение 2 часов в 15 мл деминерализованной воды при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Наночастицы SPION (стабилизированные олеиновой кислотой, размер наночастиц: 5 нм), полученные в соответствии с примером 2, переносили из среды толуола в хлороформную среду.
Раствор ацилированного гиалуронана переносили в имеющий форму розетки сосуд для обработки ультразвуком (RZ 1, объем: 25 мл), погруженный в баню со льдом. Сначала раствор обрабатывали ультразвуком в течение 60 секунд (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 65%, цикла 0,5 с и волновод S2). Далее, 5 мг наночастиц SPION, диспергированных в 3 мл CHCl3, постепенно добавляли к упомянутому раствору (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 85%), цикл 0,8 с и волновод S2). Гомогенизированную суспензию дополнительно обрабатывали ультразвуком в течение 15 мин (параметры обработки ультразвуком: амплитуда 65%, цикл 0,5 с и волновод S2). Свободные наночастицы отделяли с помощью повторного центрифугирования (3×4500 оборотов в минуту, 10 мин) и полученный супернатант, содержащий наномицеллы гиалуронана с загруженными наночастицами, отбирали, фильтровали через стеклянный фильтр 1,0 мкм и лиофилизировали.
Количество загруженного Fe (определение ICP): 1,2% (маc.)
Пример 10. Получение композиции пальмитоильного производного гиалуроновой кислоты (НАС16) с наночастицами SPION
150 мг ацилированного гиалуронана (НАС16, DS=9%, Mw=15 кДа), полученного согласно примеру 1, растворяли в течение 2 часов в 15 мл деминерализованной воды при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Наночастицы SPION (стабилизированные олеиновой кислотой, размер наночастиц: 5 нм), полученные в соответствии с примером 2, переносили из среды толуола в хлороформную среду.
Раствор ацилированного гиалуронана переносили в имеюший форму розетки сосуд для обработки ультразвуком (RZ 1, объем: 25 мл), погруженный в баню со льдом. Сначала раствор обрабатывали ультразвуком в течение 60 секунд (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 65%, цикла 0,5 с и волновод S2). Далее, 5 мг наночастиц SPION, диспергированных в 3 мл CHCl3, постепенно добавляли к упомянутому раствору (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 85%, цикл 0,8 с и волновод S2). Гомогенизированную суспензию дополнительно обрабатывали ультразвуком в течение 15 мин (параметры обработки ультразвуком: амплитуда 65%, цикл 0,5 с и волновод S2). Свободные наночастицы отделяли с помощью повторного центрифугирования (3×4500 оборотов в минуту, 10 мин) и полученный супернатант, содержащий наномицеллы гиалуронана с загруженными наночастицами, отбирали, фильтровали через стеклянный фильтр 1,0 мкм и лиофилизировали.
Количество загруженного Fe (определение ICP): 1,2% (маc.)
Пример 11. Приготовление состава стеарильного производного гиалуроновой кислоты (НАС18) с наночастицами SPION
150 мг ацилированного гиалуронана (НАС18:0, DS=9%, Mw=15 кДа), полученного согласно примеру 1, растворяли в течение 2 часов в 15 мл деминерализованной воды при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Наночастицы SPION (стабилизированные олеиновой кислотой, размер наночастиц: 5 нм), полученные в соответствии с примером 2, переносили из среды толуола в хлороформную среду.
Раствор ацилированного гиалуронана переносили в имеюший форму розетки сосуд для обработки ультразвуком (RZ 1, объем: 25 мл), погруженный в баню со льдом. Сначала раствор обрабатывали ультразвуком в течение 60 секунд (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 65%, цикла 0,5 с и волновод S2). Далее, 5 мг наночастиц SPION, диспергированных в 3 мл CHCl3, постепенно добавляли к упомянутому раствору (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 85%, цикл 0,8 с и волновод S2). Гомогенизированную суспензию дополнительно обрабатывали ультразвуком в течение 15 мин (параметры обработки ультразвуком: амплитуда 65%, цикл 0,5 с и волновод S2). Свободные наночастицы отделяли с помощью повторного центрифугирования (3×4500 оборотов в минуту, 10 мин) и полученный супернатант, содержащий наномицеллы гиалуронана с загруженными наночастицами, отбирали, фильтровали через стеклянный фильтр 1,0 мкм и лиофилизировали.
Количество загруженного Fe (определение ICP): 1,0% (маc.)
Пример 12. Получение композиции олеилового производного гиалуроновой кислоты (НАС18:1) с наночастицами SPION
150 мг ацилированного гиалуронана (НАС18:1, DS=12%, Mw=15 кДа), полученного согласно примеру 1, растворяли в течение 2 часов в 15 мл деминерализованной воды при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Наночастицы SPION (стабилизированные олеиновой кислотой, размер наночастиц: 5 нм), полученные в соответствии с примером 2, переносили из среды толуола в хлороформную среду.
Раствор ацилированного гиалуронана переносили в имеюший форму розетки сосуд для обработки ультразвуком (RZ 1, объем: 25 мл), погруженный в баню со льдом. Сначала раствор обрабатывали ультразвуком в течение 60 секунд (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 65%, цикла 0,5 с и волновод S2). Далее, 5 мг наночастиц SPION, диспергированных в 3 мл CHCl3, постепенно добавляли к упомянутому раствору (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 85%, цикл 0,8 с и волновод S2). Гомогенизированную суспензию дополнительно обрабатывали ультразвуком в течение 15 мин (параметры обработки ультразвуком: амплитуда 65%, цикл 0,5 с и волновод S2). Свободные наночастицы отделяли с помощью повторного центрифугирования (3×4500 оборотов в минуту, 10 мин) и полученный супернатант, содержащий наномицеллы гиалуронана с загруженными наночастицами, отбирали, фильтровали через стеклянный фильтр 1,0 мкм и лиофилизировали.
Количество загруженного Fe (определение ICP): 1,0% (маc.)
Морфология кластеризованных наночастиц в полимерной мицелле показана на фиг. 1.
Пример 13. Получение композиции олеилового производного гиалуроновой кислоты (НАС18:1) с наночастицами SPION
120 мг ацилированного гиалуронана (НАС18:1, DS=12%, Mw=15 кДа), полученного согласно примеру 1, растворяли в течение 2 часов в 15 мл деминерализованной воды при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Наночастицы SPION (стабилизированные олеиновой кислотой, размер наночастиц: 5 нм), полученные в соответствии с примером 2, переносили из среды толуола в хлороформную среду.
Раствор ацилированного гиалуронана переносили в имеюший форму розетки сосуд для обработки ультразвуком (RZ 1, объем: 25 мл), погруженный в баню со льдом. Сначала раствор обрабатывали ультразвуком в течение 60 секунд (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 65%, цикла 0,5 с и волновод S2). Далее, 5 мг наночастиц SPION, диспергированных в 3 мл CHCl3, постепенно добавляли к упомянутому раствору (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 85%, цикл 0,8 с и волновод S2). Гомогенизированную суспензию дополнительно обрабатывали ультразвуком в течение 15 мин (параметры обработки ультразвуком: амплитуда 65%, цикл 0,5 с и волновод S2). Свободные наночастицы отделяли с помощью повторного центрифугирования (3×4500 оборотов в минуту, 10 мин) и полученный супернатант, содержащий наномицеллы гиалуронана с загруженными наночастицами, отбирали, фильтровали через стеклянный фильтр 1,0 мкм и лиофилизировали.
Количество загруженного Fe (определение ICP): 1,8% (маc.)
Пример 15. Получение композиции линоленильного производного гиалуроновой кислоты (НАС18:3) с наночастицами SPION
150 мг ацилированного гиалуронана (НАС18:3, DS=3%, Mw=15 кДа), полученного согласно примеру 1, растворяли в течение 2 часов в 15 мл деминерализованной воды при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Наночастицы SPION (стабилизированные олеиновой кислотой, размер наночастиц: 5 нм), полученные в соответствии с примером 2, переносили из среды толуола в хлороформную среду.
Раствор ацилированного гиалуронана переносили в имеюший форму розетки сосуд для обработки ультразвуком (RZ 1, объем: 25 мл), погруженный в баню со льдом. Сначала раствор обрабатывали ультразвуком в течение 60 секунд (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 65%, цикла 0,5 с и волновод S2). Далее, 5 мг наночастиц SPION, диспергированных в 3 мл CHCl3, постепенно добавляли к упомянутому раствору (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 85%, цикл 0,8 с и волновод S2). Гомогенизированную суспензию дополнительно обрабатывали ультразвуком в течение 15 мин (параметры обработки ультразвуком: амплитуда 65%, цикл 0,5 с и волновод S2). Свободные наночастицы отделяли с помощью повторного центрифугирования (3×4500 оборотов в минуту, 10 мин) и полученный супернатант, содержащий наномицеллы гиалуронана с загруженными наночастицами, отбирали, фильтровали через стеклянный фильтр 1,0 мкм и лиофилизировали.
Количество загруженного Fe (определение ICP): 1,0% (маc.)
Пример 16. Получение композиции олеилового производного гиалуроновой кислоты (НАС18:1) с наночастицами SPION
150 мг ацилированного гиалуронана (НАС18:1, DS=12%, Mw=15 кДа), полученного согласно примеру 1, растворяли в течение 2 часов в 15 мл деминерализованной воды при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Наночастицы SPION (стабилизированные олеиновой кислотой, размер наночастиц: 5 нм), полученные в соответствии с примером 2, переносили из среды толуола в хлороформную среду.
Раствор ацилированного гиалуронана переносили в имеюший форму розетки сосуд для обработки ультразвуком (RZ 1, объем: 25 мл), погруженный в баню со льдом. Сначала раствор обрабатывали ультразвуком в течение 60 секунд (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 65%, цикла 0,5 с и волновод S2). Далее, 5 мг наночастиц SPION, диспергированных в 3 мл CHCl3, постепенно добавляли к упомянутому раствору (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 85%, цикл 0,8 с и волновод S2). Гомогенизированную суспензию дополнительно обрабатывали ультразвуком в течение 15 мин (параметры обработки ультразвуком: амплитуда 65%, цикл 0,5 с и волновод S2). Свободные наночастицы отделяли с помощью повторного центрифугирования (3×4500 оборотов в минуту, 10 мин) и полученный супернатант, содержащий наномицеллы гиалуронана с загруженными наночастицами, отбирали, фильтровали через стеклянный фильтр 1,0 мкм и лиофилизировали.
Количество загруженного Fe (определение ICP): 0,4% (маc.)
Пример 17. Получение композиции олеилового производного гиалуроновой кислоты (НАС18:1) с наночастицами SPION
150 мг ацилированного гиалуронана (НАС18:1, DS=12%, Mw=15 кДа), полученного согласно примеру 1, растворяли в течение 2 часов в 15 мл деминерализованной воды при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Наночастицы SPION (стабилизированные олеиновой кислотой, размер наночастиц: 5 нм), полученные в соответствии с примером 2, переносили из среды толуола в хлороформную среду.
Раствор ацилированного гиалуронана переносили в имеюший форму розетки сосуд для обработки ультразвуком (RZ 1, объем: 25 мл), погруженный в баню со льдом. Сначала раствор обрабатывали ультразвуком в течение 60 секунд (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 65%, цикла 0,5 с и волновод S2). Далее, 5 мг наночастиц SPION, диспергированных в 3 мл CHCl3, постепенно добавляли к упомянутому раствору (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 85%, цикл 0,8 с и волновод S2). Гомогенизированную суспензию дополнительно обрабатывали ультразвуком в течение 15 мин (параметры обработки ультразвуком: амплитуда 65%, цикл 0,5 с и волновод S2). Свободные наночастицы отделяли с помощью повторного центрифугирования (3×4500 оборотов в минуту, 10 мин) и полученный супернатант, содержащий наномицеллы гиалуронана с загруженными наночастицами, отбирали, фильтровали через стеклянный фильтр 1,0 мкм и лиофилизировали.
Количество загруженного Fe (определение ICP): 1,7% (маc.)
Пример 18. Получение композиции олеилового производного гиалуроновой кислоты (НАС18:1) с наночастицами SPION и паклитакселом
150 мг ацилированного гиалуронана (НАС18:1, DS=12%, Mw=15 кДа), полученного согласно примеру 1, растворяли в течение 2 часов в 15 мл деминерализованной воды при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Наночастицы SPION (стабилизированные олеиновой кислотой, размер наночастиц: 5 нм), полученные в соответствии с примером 2, переносили из толуола в хлороформ. Наночастицы, полученные таким образом, смешивали с 6 мг паклитаксела, растворенного в 3 мл хлороформа.
Раствор ацилированного гиалуронана переносили в имеюший форму розетки сосуд для обработки ультразвуком (RZ 1, объем: 25 мл), погруженный в баню со льдом. Сначала раствор обрабатывали ультразвуком в течение 60 секунд (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 65%, цикла 0,5 с и волновод S2). Далее, 5 мг SPION и 6 мг паклитаксела в CHCl3 постепенно добавляли к упомянутому раствору (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 85%, цикл 0,8 с и волновод S2). Гомогенизированную суспензию дополнительно обрабатывали ультразвуком в течение 15 мин (параметры обработки ультразвуком: амплитуда 65%, цикл 0,5 сек и волновод S2). Свободные наночастицы и паклитаксела отделяли с помощью повторного центрифугирования (3×4500 оборотов в минуту, 10 мин) и полученный супернатант, содержащий наномицеллы гиалуронана с загруженными наночастицами и паклитакселом отбирали, фильтровали через стеклянный фильтр 1,0 мкм и лиофилизировали.
Количество загруженного Fe (определение ICP): 1,5% (маc.)
Количество загруженного РТХ (определение ВЭЖХ): 0,3% (маc.)
Пример 19. Получение композиции олеилового производного гиалуроновой кислоты (НАС18:1) с наночастицами ZnO
150 мг ацилированного гиалуронана (НАС18:1, DS=12%, Mw=15 кДа), полученного согласно примеру 1, растворяли в течение 2 часов в 15 мл деминерализованной воды при постоянном перемешивании на магнитной мешалке.
Раствор ацилированного гиалуронана переносили в имеюший форму розетки сосуд для обработки ультразвуком (RZ 1, объем: 25 мл), погруженный в баню со льдом. Сначала раствор обрабатывали ультразвуком в течение 60 секунд (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 65%, цикла 0,5 с и волновод S2). Далее, 5 мг оксида цинка (из примера 5), диспергированного в 3 мл CHCl3, постепенно добавляли к упомянутому раствору (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 85%, цикл 0,8 с и волновод S2). Гомогенизированную суспензию дополнительно обрабатывали ультразвуком в течение 15 мин (параметры обработки ультразвуком: амплитуда 65%, цикл 0,5 сек и волновод S2). Свободные наночастицы отделяли с помощью повторного центрифугирования (3×4500 оборотов в минуту, 10 мин), и полученный супернатант, содержащий наномицеллы гиалуронана с загруженными наночастицами, отбирали, фильтровали через стеклянный фильтр 1,0 мкм и лиофилизировали.
Количество загруженного (определение ICP) Zn: 1,6% (маc.)
Пример 20. Получение композиции олеилового производного гиалуроновой кислоты (НАС18:1) с апконвертирующими наночастицами
150 мг ацилированного гиалуронана (НАС18:1, DS=12%, Mw=15 кДа), полученного согласно примеру 1, растворяли в течение 2 часов в 15 мл деминерализованной воды при постоянном перемешивании на магнитной мешалке.
Раствор ацилированного гиалуронана переносили в имеюший форму розетки сосуд для обработки ультразвуком (RZ 1, объем: 25 мл), погруженный в баню со льдом. Сначала раствор обрабатывали ультразвуком в течение 60 секунд (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 65%, цикла 0,5 с и волновод S2). Далее, 5 мг апконвертирующих наночастиц (из примера 6), диспергированных в 3 мл CHCl3, постепенно добавляли к упомянутому раствору (параметры обработки ультразвуком: 200 Вт, амплитуда 85%, цикл 0,8 с и сонотрод S2). Гомогенизированную суспензию дополнительно обрабатывали ультразвуком в течение 15 мин (параметры обработки ультразвуком: амплитуда 65%, цикл 0,5 сек и волновод S2). Свободные наночастицы отделяли с помощью повторного центрифугирования (3×4500 оборотов в минуту, 10 мин), и полученный супернатант, содержащий наномицеллы гиалуронана с загруженными наночастицами, отбирали, фильтровали через стеклянный фильтр 1,0 мкм и лиофилизировали.
Количество загруженного Er; Y; Yb (определение ICP): 0,02; 0,50; 0,19% (маc.)
Пример 21. In vitro цитотоксичность композиции ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION
Первичные клетки и неопухолевые и опухолевые линии (таблица 1) высевали в 96-луночные панели и культивировали в течение 24 часов при 37°C/5% CO2. Затем клетки обрабатывали растворами композиций ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION из примеров 7-12, 14 и 15 в концентрациях 10, 100, 200 и 500 мкг/мл (концентрация полимерных мицелл в культуральной среде). Одновременно измеряли влияние на жизнеспособность только одного ацилированного гиалуронана и только одних наночастиц SPION (в соответствующих концентрациях). Жизнеспособность клеток контролировали в моменты времени 0, 24, 48 и 72 ч с помощью способа МТТ; результирующие значения указывали на ингибирование или активацию жизнеспособности клеток в данный момент времени. Контролировали ингибирование клеточной жизнеспособности клеток, обработанных композициями различных ацилированных производных НА с наночастицами SPION (фигуры 2А-С), и влияние состава НАС18:1 + SPION (из примера 12) на различные опухолевые линии (фигура 3). Фигуры 4А-С показывают сравнение цитотоксического действия композиции (в соответствии с примером 12, 16, 17) с 5, 10 и 20 нм SPION. Клеточные линии описаны в таблице 1.
Figure 00000003
Результаты на фигурах 2А-С показывают, что, в отличие от контрольных линий (NHDF и 3T3), в случае опухолевой линии НТ29 наблюдается значительное ингибирование роста клеток. Самые высокие уровни ингибирования были зарегистрированы для композиции на основе С18- и С18:1-ацилированных производных. Композиция на основе С18:1-производных с наночастицами SPION даже способствовала улучшению жизнеспособности клеток NHDF и 3Т3. Ацилированный гиалуронан и наночастицы SPION порознь не оказывали влияния на жизнеспособность любых из тестируемых клеток (данные не приведены).
Композицию НАС 18:1 с наночастицами SPION дополнительно применяли для обработки других опухолевых линий (фигура 3). Экспериментальные данные показали замедление роста опухолевых линий А549, НСТ116,
Figure 00000004
, MCF7 и MDA-MB231 и Сасо2. Исключением была лишь линия меланомы А2058, где ингибирование обнаруживалось только при обработке с самой высокой концентрацией композиции (500 мкг/мл). Контрольные фибробласты (обе линии NHDF и 3Т3), напротив, значительно стимулировались композицией, и даже самая высокая концентрация 500 мкг/мл не показала какие-либо цитотоксические свойства.
Фигуры 4А-С подтверждают селективную противоопухолевую активность композиции с наночастицами SPION размером 5 нм. Данный эффект не наблюдается в той же степени для композиций с наночастицами SPION размером 10 и 20 нм.
Пример 22. In vitro цитотоксичность композиции ацилированного гиалуронана с наночастицами оксида цинка
Первичные человеческие фибробласты (NHDF), клетки НТ-29 опухоли кишечника и линию 3T3 фибробластов мышей высевали на 96-луночные панели и культивировали в течение 24 часов при 37°C/5% CO2. Затем клетки обрабатывали растворами композиций ацилированного гиалуронана с наночастицами оксида цинка из примера 19 в концентрациях 10, 100, 200 и 500 мкг/мл (концентрация полимерных мицелл). Жизнеспособность клеток контролировали в моменты времени 0, 24, 48 и 72 ч с помощью способа МТТ, и результирующие значения указывали на ингибирование или активацию жизнеспособности клеток в данной временной точке (фигуры 5А-С).
Результаты, представленные на фигурах 5А-С, показывают, что, в отличие от контрольных линий (NHDF и 3T3), с увеличением времени инкубации и, кроме того, при более высоких концентрациях полимерных мицелл, происходит ингибирование роста опухолевых клеток. Однако, в данном случае также наблюдалось ингибирование роста при концентрации 500 мкг/мл в клетках 3T3. При более низких концентрациях композиции, а также в контрольной клеточной линии NHDF, не наблюдалось никакого ингибирования.
Пример 23. In vitro цитотоксичность композиции ацилированного гиалуронана с апконвертирующими наночастицами
Первичные человеческие фибробласты (NHDF), клетки НТ-29 опухоли кишечника и линию 3T3 фибробластов мышей высевали на 96-луночные панели и культивировали в течение 24 часов при 37°C/5% СО2. Затем клетки обрабатывали растворами композиций ацилированного гиалуронана с наночастицами оксида цинка из примера 19 в концентрациях 10, 100, 200 и 500 мкг/мл (концентрация полимерных мицелл). Жизнеспособность клеток контролировали в моменты времени 0, 24, 48 и 72 ч с помощью способа МТТ, и результирующие значения указывали на ингибирование или активацию жизнеспособности клеток в данной временной точке (фигуры 6А-С).
Результаты, представленные на фигурах 6А-С, показывают, что в отличие от контрольных линий NHDF, где жизнеспособность сильно увеличивается, с увеличением времени инкубации происходит ингибирование роста опухолевых клеток. Однако, небольшое ингибирование наблюдается также в неопухолевой 3T3 линии.
Пример 24. In vitro селективная цитотоксичность композиции ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION
Первичные человеческие фибробласты, помеченные DiO (зеленый), и клетки НТ-29 опухоли, помеченные DiI (красный), которые были в соотношении 3:1 и с общей концентрацией 50000 клеток/лунку, высевали в лунки 24-луночной панели в 1 мл среды RPMI 1640 (Roswell Park Memorial Institut). По достижении по меньшей мере 80% слияния клеточного монослоя, клетки обрабатывали 200 мкг/мл раствором композиции с наночастицами SPION из примера 12. После 72 часов инкубации получали изобрежение клеток с помощью флуоресцентного микроскопа Nikon Ti-Eclipse (фигура 7).
Для объяснения возможного механизма различной активности по отношению к контрольным клеткам и опухолевым клеткам, экспрессию рецептора CD44 для гиалуронана анализировали с помощью проточной цитометрии на клетках NHDF, MCF-7 и MDA-MB-231. После достижения 80% слияния клетки промывали PBS, инкубировали в течение 15 мин/RT с анти-CD44-FITC-антителом, после инкубации их снова 2х промывали PBS и анализировали на проточном цитометре MACSQuant Analyzer (Miltenyi Biotec). Результаты представлены в виде интенсивности флуоресценции (RFU) (фигура 8).
Кроме того, окислительный стресс для клеток NHDF и НТ-29 определяли после обработки композицией ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION из примера 12. Клетки культивировали на 6-луночньгх панелях, и после достижения 80% слияния их обрабатывали 200 мкг/мл раствором композиции с наночастицами SPION в течение 24 часов. Что же касается рассматриваемых контрольных клеток, в их случае только среду заменяли на более свежую, не содержащую испытываемой композиции. После инкубации клетки промывали и обрабатывали DCF-DA (нефлуоресцентное вещество, которое окисляется внутриклеточными ROS до флуоресцентного DCF, конечная концентрация: 1 мкМ) в течение 20 мин/37°C/в темноте. После последующего промывания PBS, клетки анализировали на проточном цитометре MACSQuant Analyzer (Miltenyi Biotec). Результаты показаны в виде относительной интенсивности флуоресценции (% от необработанного контроля) DCF внутри клеток (фигура 9).
Результаты, представленные на фигуре 7, подтверждают селективное ингибирование роста в опухолевой линии НТ-29, в то время как контрольные фибробласты NHDF не подвергались негативному влиянию и достигали слияния. Данный эффект не был вызван различной индукцией образования ROS, упомянутая индукция возрастает в обоих типах клеток, но она возрастает до одинакового уровня (фигура 9). Объяснением может служить различная степень ответа на упомянутое увеличение продукции ROS в клетках NHDF и НТ-29.
Различие в активности по отношению к контрольным клеткам и к опухолевым клеткам не зависит от экспрессии основного поверхностного рецептора для гиалуронана, CD44. Фигура 8 подтверждает высокий уровень экспрессии CD44 в контрольных фибробластах NHDF, жизнеспособность которых увеличивалась композицией, и низкий уровень экспрессии в опухолевых клеточных линиях MCF-7 и MDA-MB-231, в которых наблюдалось значительное ингибирование жизнеспособности (фигура 3).
После окрашивания клеток (детектирование присутствия Fe с помощью берлинской лазури), инкубированных с композицией ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION из примера 12, наблюдается другое распределение ионов Fe - в то время как растворенный Fe был обнаружен в опухолевых клетках, агрегаты железа были обнаружены в контрольных клетках (фигура 10). Данное явление может служить причиной селективной активности композиции в опухолевых клетках.
Пример 25. Приготовление композиции для внутривенного введения
650 мкл стерильного 0,9% NaCl добавляют к от 20 до 30 мг ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION из примера 12, приготовленным стерильным способом, раствор перемешивают время от времени до полного растворения лиофилизата. Раствор готов для инъекций in vivo без проблем.
Раствор, полученный таким образом, является стабильным, насколько об этом можно судить по гидродинамическому размеру частиц, по меньшей мере в течение 2 дней.
Пример 26. Приготовление композиции для внутривенного введения
650 мкл стерильного 5% раствора декстрозы добавляют к от 20 до 30 мг ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION из примера 12, приготовленным стерильным способом, раствор перемешивают время от времени до полного растворения лиофилизата. Раствор готов для инъекций in vivo без проблем.
Раствор, полученный таким образом, является стабильным, насколько об этом можно судить по гидродинамическому размеру частиц, по меньшей мере в течение 2 дней.
Пример 27. In vivo детектирование композиции ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION
Крысы Lewis Brown Norway с опухолью глиобластомы были использованы для тестирования in vivo. Опухоли прививали путем инъекции суспензии 3×106 клеток глиобластомы в мышцу на ноге, и через 9 дней после этого крысам вводили внутривенно состав ацилированного гиалуронана (НАС18:1) с наночастицами SPION (750 мкл раствора в 0,9% NaCl, с содержанием Fe, составляющим 1,1 мг/кг). Затем крыс анализировали с помощью Bruker BioSpec (4,7 Т).
Накопление наночастиц SPION в опухоли после внутривенного введения композиции было подтверждено на фигуре 11, где было обнаружено особенно потемнение краев опухоли. Заметное накопление наночастиц SPION было обнаружено также в печени (фигура 12), причем упомянутая композиция, следовательно, может быть использована в качестве контрастного агента для печени.
Накопление наночастиц SPION было дополнительно подтверждено после умерщвления животных на гистологических срезах опухоли (фигура 13) и печени (фигура 14), где присутствие Fe был обнаружено по окраске берлинской лазурью (синие пятна на фигурах). Синий краситель не был обнаружен ни в одном из контрольных образцов.
Пример 28. Стерилизация композиции ацилированного гиалуронана с наночастицами SPION автоклавированием
Стерилизацию композиции, полученной в соответствии с примером 12 (концентрация: 30 мг/мл в 0,9% NaCl), проводили в автоклаве при температуре 121°C в течение 15 минут.
Раствор был стабилен после стерилизации, наночастицы SPION оставались кластеризованными в наномицеллах гиалуронана (фигура 15), селективные цитотоксические эффекты по отношению к опухолевым клеткам сохранялись.
Цитотоксичность определяли на опухолевой линии НТ-29 и в контрольных первичных фибробластах NHDF в соответствии с процедурой, описанной в примере 21. На фигуре 16 приведено сравнение композиции из примера 12 до и после стерилизации автоклавированием, селективная цитотоксичность по отношению к опухолевым клеткам сохранялась даже после стерилизации автоклавированием.
Пример 29. Индукция апоптоза в суспензии опухолевых клеток линии EL4 мышиной лимфомы
Клеточную линию EL4 мышиной лимфомы (используется для индукции опухолей в мышиных экспериментальных моделях канцерогенеза) культивировали в среде RPMI 1640 (Roswell Park Memorial Institut). В экспоненциальной фазе роста приготавливали аликвоты из культуры клеток с концентрацией 5×105 клеток/мл питательной среды RPMI, которые обрабатывали 100, 200 и 500 мкг/мл раствора композиции с наночастицами SPION из примера 9. Через 72 ч инкубации клетки отмывали и специфически окрашивали с помощью флуоресцентных маркеров клеточной смерти (пропидий иодид, AnnexinV-FITC), которые впоследствии детектировали на проточном цитометре MACSQuant (Miltenyi Biotec).
На фигурах 17А-С имеется явная индукция апоптоза (клеточная популяция в правом нижнем квадранте, фиг. 17В) и незначительное увеличение индукции некроза (левый/правый верхний квадрант, фиг. 17В) после обработки с 100 мкг/мл раствора композиции с наночастицами SPION из примера 12. Представление живых, апоптотических и некротических клеток после обработки композицией в отдельных концентрациях приведено на графике (фиг. 17С).

Claims (22)

1. Противоопухолевая композиция на основе С18-ацилированного производного гиалуроновой кислоты в соответствии с общей формулой (I)
Figure 00000005
где R представляет собой Н+ или Na+, и где R1 представляет собой Н или -C(=O)C17Hy или -C(=O)CH=CH-het, где у обозначает целое число в диапазоне от 29 до 35, и С17Ну представляет собой линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную С17-цепь, и het представляет собой гетероциклический или гетероароматический остаток, содержащий N, S или О-атомы, причем по меньшей мере в одном повторяющемся звене один или более R1 представляет собой -C(=O)C17Hy, и где n находится в диапазоне от 12 до 4000,
отличающаяся тем, что дополнительно содержит суперпарамагнитные наночастицы со стабилизирующей олеиновой кислотой и не содержит цитостатик.
2. Противоопухолевая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что ацилированный гиалуронан служит носителем неорганических наночастиц.
3. Противоопухолевая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что суперпарамагнитные наночастицы представляют собой наночастицы на основе оксидов железа, где количество железа в композиции составляет от 0,3 до 3 мас. %, предпочтительно 1,0 мас. %.
4. Противоопухолевая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит суперпарамагнитные наночастицы, имеющие размер от 5 до 20 нм.
5. Противоопухолевая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит суперпарамагнитные наночастицы, имеющие размер от 5 до 7 нм.
6. Противоопухолевая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит суперпарамагнитные наночастицы, имеющие размер 5 нм.
7. Противоопухолевая композиция по любому из предшествующих пунктов для применения в ингибировании роста как адгезивных, так и суспензионных опухолевых клеток.
8. Противоопухолевая композиция по любому из предшествующих пунктов для применения в ингибировании роста опухолевых клеток, происходящих из колоректальной карциномы и аденокарциномы, карциномы легких, печеночно-клеточного рака, аденокарциномы молочной железы.
9. Противоопухолевая композиция по любому из пп. 1-7 для применения в in vivo детектировании накопления композиции в организме.
10. Противоопухолевая композиция по п. 9 для применения в in vivo детектировании накопления композиции в опухоли и печени.
11. Противоопухолевая композиция по любому из пп. 1-7 для применения в in vivo детектировании патологических образований в организме.
12. Противоопухолевая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что она применима в композиции для парентерального или местного введения.
13. Противоопухолевая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит другие добавки, используемые в фармацевтических композициях, выбранные из группы, включающей хлорид натрия, декстрозу или буферные соли.
14. Противоопухолевая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит лекарственное вещество.
15. Противоопухолевая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что она является стерилизуемой в окончательной упаковке автоклавированием.
16. Способ получения композиции по пп. 1-15, отличающийся тем, что готовят водный раствор ацилированного производного гиалуроновой кислоты, затем добавляют суперпарамагнитные наночастицы, диспергированные в органическом галогенидном растворителе и стабилизированные олеиновой кислотой, и полученную суспензию обрабатывают ультразвуком до образования гомогенной смеси, а затем свободные суперпарамагнитные наночастицы отделяют от суперпарамагнитных наночастиц, загруженных в наномицеллы, центрифугированием и последующей фильтрацией.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что фильтрат затем лиофилизируют.
18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что фильтрат затем стерилизуют автоклавированием в окончательной упаковке.
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что лиофилизат затем растворяют в водном растворе и стерилизуют автоклавированием в окончательной упаковке.
RU2016151263A 2014-06-30 2015-06-30 Противоопухолевая композиция на основе гиалуроновой кислоты и неорганических наночастиц, способ ее получения и ее применение RU2686679C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZPV2014-451 2014-06-30
CZ2014-451A CZ2014451A3 (cs) 2014-06-30 2014-06-30 Protinádorová kompozice na bázi kyseliny hyaluronové a anorganických nanočástic, způsob její přípravy a použití
PCT/CZ2015/000068 WO2016000669A2 (en) 2014-06-30 2015-06-30 Antitumor composition based on hyaluronic acid and inorganic nanoparticles, method of preparation thereof and use thereof

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2016151263A RU2016151263A (ru) 2018-07-30
RU2016151263A3 RU2016151263A3 (ru) 2018-12-12
RU2686679C2 true RU2686679C2 (ru) 2019-04-30

Family

ID=54754397

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016151263A RU2686679C2 (ru) 2014-06-30 2015-06-30 Противоопухолевая композиция на основе гиалуроновой кислоты и неорганических наночастиц, способ ее получения и ее применение

Country Status (11)

Country Link
US (1) US10617711B2 (ru)
EP (1) EP3160509B1 (ru)
JP (1) JP6556765B2 (ru)
KR (1) KR20170021351A (ru)
CZ (1) CZ2014451A3 (ru)
DK (1) DK3160509T3 (ru)
ES (1) ES2768798T3 (ru)
HU (1) HUE049244T2 (ru)
PL (1) PL3160509T3 (ru)
RU (1) RU2686679C2 (ru)
WO (1) WO2016000669A2 (ru)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102187362B1 (ko) 2018-12-26 2020-12-07 서울대학교산학협력단 페로토시스를 통한 암세포의 선택적 사멸을 위한 나노 입자, 이의 제조 방법 및 이의 용도
CN112442355B (zh) * 2020-11-28 2022-04-05 江西师范大学 一种稀土-透明质酸配位聚合物包覆的vs2纳米结构及其制备方法和应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2621899A1 (en) * 2005-09-26 2007-03-29 Novozymes Biopolymer A/S Aryl/alkyl succinic anhydride hyaluronan derivatives
WO2010108493A1 (en) * 2009-03-25 2010-09-30 Pharmacosmos Holding A/S A stable iron oligosaccharide compound
RU2417104C2 (ru) * 2005-06-29 2011-04-27 Конинклейке Филипс Электроникс Н.В. Композиции, содержащие магнитные частицы оксида железа, и применение указанных композиций при способах получения изображений
WO2012152872A1 (en) * 2011-05-12 2012-11-15 Gnosis S.P.A. "biotechnological sulphated chondroitin sulphate at position 4 or 6 on the same polysaccharide chain, and process for the preparation thereof"
RU2496525C2 (ru) * 2008-04-03 2013-10-27 Конинклейке Филипс Электроникс Н.В. Биосовместимые продукты для визуализации магнитных частиц

Family Cites Families (202)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2001633A (en) 1934-09-22 1935-05-14 Crispin B Segovia Geographical clock
US3075527A (en) 1960-06-02 1963-01-29 Chemway Corp Sterile medicated strips
US3720662A (en) 1971-09-13 1973-03-13 Nat Starch Chem Corp Preparation of starch esters
US3728223A (en) 1971-10-08 1973-04-17 Amano Pharma Co Ltd Production of hyaluronidase from a strain of streptomyces
GB1527592A (en) 1974-08-05 1978-10-04 Ici Ltd Wound dressing
CH628088A5 (en) 1975-09-17 1982-02-15 Dresden Arzneimittel Process for obtaining streptococcal metabolic products
US4205025A (en) 1975-12-22 1980-05-27 Champion International Corporation Synthetic polymeric fibrids, fibrid products and process for their production
JPS6033474B2 (ja) 1978-05-11 1985-08-02 藤沢薬品工業株式会社 新規なヒアルロニダ−ゼｂｍｐ−８２３１およびその製造法
US4716224A (en) 1984-05-04 1987-12-29 Seikagaku Kogyo Co. Ltd. Crosslinked hyaluronic acid and its use
US4713448A (en) 1985-03-12 1987-12-15 Biomatrix, Inc. Chemically modified hyaluronic acid preparation and method of recovery thereof from animal tissues
US4851521A (en) 1985-07-08 1989-07-25 Fidia, S.P.A. Esters of hyaluronic acid
GB8519416D0 (en) 1985-08-01 1985-09-04 Unilever Plc Oligosaccharides
JPS62104579A (ja) 1985-10-30 1987-05-15 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd ヒアルロニダ−ゼの製造法
JPH0751064B2 (ja) 1986-08-13 1995-06-05 生化学工業株式会社 新規なヒアルロニダ−ゼｓｄ−６７８およびその製造法
IT1219587B (it) 1988-05-13 1990-05-18 Fidia Farmaceutici Polisaccaridi carbossiilici autoreticolati
JPH0214019A (ja) 1988-06-30 1990-01-18 Tonen Corp 繊維状成形物及びその製造方法
JPH0755961B2 (ja) 1989-04-18 1995-06-14 工業技術院長 新規なヒアルロン酸誘導体及びその製造方法
IT1248666B (it) 1990-05-30 1995-01-26 Fidia Spa Gel in forma di film autosupportanti altamente idrati, processo per laloro preparazione e impiego nella terapia di lesioni e/o patologie cutanee
US5522879A (en) 1991-11-12 1996-06-04 Ethicon, Inc. Piezoelectric biomedical device
US5824335A (en) 1991-12-18 1998-10-20 Dorigatti; Franco Non-woven fabric material comprising auto-crosslinked hyaluronic acid derivatives
IT1254704B (it) 1991-12-18 1995-10-09 Mini Ricerca Scient Tecnolog Tessuto non tessuto essenzialmente costituito da derivati dell'acido ialuronico
JP2855307B2 (ja) 1992-02-05 1999-02-10 生化学工業株式会社 光反応性グリコサミノグリカン、架橋グリコサミノグリカン及びそれらの製造方法
FR2689131B1 (fr) 1992-03-30 1994-05-20 Oreal Procede de preparation de monoesters majoritairement en position 6' du d-maltose et leur utilisation dans les domaines cosmetique, bucco-dentaire, pharmaceutique et alimentaire.
JPH0625306A (ja) 1992-04-21 1994-02-01 Shiseido Co Ltd 溶媒不溶化ヒアルロン酸及びその製造方法
IT1263316B (it) 1993-02-12 1996-08-05 Fidia Advanced Biopolymers Srl Tessuto non tessuto multistrato in cui uno degli strati e' costituito essenzialmente da esteri dell'acido ialuronico
NL9700003A (nl) 1993-09-28 1997-07-01 House Foods Corp Werkwijze voor het inoculeren van Fistulina hepatica.
US5616568A (en) 1993-11-30 1997-04-01 The Research Foundation Of State University Of New York Functionalized derivatives of hyaluronic acid
CN1128065A (zh) 1994-03-14 1996-07-31 生化学工业株式会社 戴在眼球上的材料
US5455349A (en) 1994-05-13 1995-10-03 Polaroid Corporation Vinylbenzyl thymine monomers
DK0783325T3 (da) * 1994-09-27 2000-05-01 Nycomed Imaging As Kontrastmiddel
US6025444A (en) 1994-11-17 2000-02-15 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) Cinnamic acid derivative
JP3308742B2 (ja) 1994-11-17 2002-07-29 生化学工業株式会社 光架橋性ヒアルロン酸誘導体とその架橋体およびそれらの製造方法
US5690961A (en) 1994-12-22 1997-11-25 Hercules Incorporated Acidic polysaccharides crosslinked with polycarboxylic acids and their uses
US6011149A (en) 1995-03-07 2000-01-04 Novartis Ag Photochemically cross-linked polysaccharide derivatives as supports for the chromatographic separation of enantiomers
IT1281877B1 (it) 1995-05-10 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Sali di metalli pesanti di succinil derivati dell'acido ialuronico e loro impiego come potenziali agenti terapeutici
IT1281886B1 (it) 1995-05-22 1998-03-03 Fidia Advanced Biopolymers Srl Processo per la preparazione di idrogel ottenuti da derivati chimici dell'acido ialuronico mediante irradiazioni ultraviolette e loro
AU718484B2 (en) 1995-08-29 2000-04-13 Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. Biomaterials for preventing post-surgical adhesions comprised of hyaluronic acid derivatives
EP0763754B1 (en) 1995-09-13 2003-01-08 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) Photocured crosslinked-hyaluronic acid contact lens
DE19604706A1 (de) 1996-02-09 1997-08-14 Merck Patent Gmbh Vernetzungsprodukte von Aminogruppen-haltigen Biopolymeren
DE19616010C2 (de) 1996-04-23 1998-07-09 Seitz Filter Werke Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung von Fibrets (Fibriden) aus Zellulosederivaten
IT1287698B1 (it) 1996-08-29 1998-08-18 Fidia Advanced Biopolymers Srl Fili da sutura essenzialmente costituiti da derivati esterei dello acido ialuronico
US6632802B2 (en) 1996-08-29 2003-10-14 Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. Hyaluronic acid esters, threads and biomaterials containing them, and their use in surgery
US6162537A (en) 1996-11-12 2000-12-19 Solutia Inc. Implantable fibers and medical articles
EP1011690A4 (en) 1997-07-03 2006-08-23 Depuy Spine Inc RETICULATED POLYSACCHARIDE MEDICINE VECTOR
ITPD980037A1 (it) 1998-02-25 1999-08-25 Fidia Advanced Biopolymers Srl Acido ialuronico solfatato e i suoi derivati legati covalentemente a polimeri sintetici pe la preparazione di biomateriali e per il rivesti
ATE302785T1 (de) 1998-04-30 2005-09-15 Maruha Corp Verbindungen, deren struktur derivate von glukuronsäure und glukosamin enthält, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung
ES2174605T3 (es) 1998-05-07 2002-11-01 Tno Procedimiento para la oxidacion selectiva de alcoholes primarios.
ITPD980169A1 (it) * 1998-07-06 2000-01-06 Fidia Advanced Biopolymers Srl Ammidi dell'acido ialuronico e dei suoi derivati e processo per la loro preparazione.
US6630457B1 (en) 1998-09-18 2003-10-07 Orthogene Llc Functionalized derivatives of hyaluronic acid, formation of hydrogels in situ using same, and methods for making and using same
US6472541B2 (en) 1998-11-20 2002-10-29 The Regents Of The University Of California Protecting groups with increased photosensitivities
IT1302534B1 (it) 1998-12-21 2000-09-05 Fidia Advanced Biopolymers Srl Composizioni iniettabili, biocompatibili e biodegradabili comprendentialmeno un derivato dell'acido ialuronico, cellule condrogeniche, per
EP1140199B1 (de) 1998-12-23 2003-07-23 Esparma GmbH Hyaluronatlyase als penetrationsförderer in topischen mitteln
DE19917614C2 (de) 1999-04-19 2001-07-05 Thueringisches Inst Textil Verfahren zur Herstellung von cellulosischen Formkörpern mit hohem Adsorptionsvermögen
US6288043B1 (en) 1999-06-18 2001-09-11 Orquest, Inc. Injectable hyaluronate-sulfated polysaccharide conjugates
US7033603B2 (en) 1999-08-06 2006-04-25 Board Of Regents The University Of Texas Drug releasing biodegradable fiber for delivery of therapeutics
US6592794B1 (en) 1999-09-28 2003-07-15 Organogenesis Inc. Process of making bioengineered collagen fibrils
WO2001034657A1 (en) 1999-11-08 2001-05-17 Sca Hygiene Products Zeist B.V. Process of oxidising primary alcohols
US6180087B1 (en) 2000-01-18 2001-01-30 Mallinckrodt Inc. Tunable indocyanine dyes for biomedical applications
DE10003397A1 (de) 2000-01-27 2001-08-09 Hartmann Paul Ag Polyelektrolyt-Feststoffsystem, Verfahren zur Herstellung desselben sowie Wundverband
DE10009996B4 (de) 2000-03-02 2005-10-13 Cognis Ip Management Gmbh Feststoffgranulate mit monodisperser Korngrößenverteilung, ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung
IT1317359B1 (it) 2000-08-31 2003-06-16 Fidia Advanced Biopolymers Srl Polisaccaridi percarbossilati, quali l'acido ialuronico, processo perla loro preparazione e loro impiego in campo farmaceutico e
IT1317358B1 (it) 2000-08-31 2003-06-16 Fidia Advanced Biopolymers Srl Derivati cross-linkati dell'acido ialuronico.
US6669926B1 (en) 2000-10-16 2003-12-30 Mallinckrodt, Inc. Hydrophilic light absorbing indole compounds for determination of physiological function in critically ill patients
US6498269B1 (en) 2000-10-17 2002-12-24 The University Of Connecticut Method for the oxidation of aldehydes, hemiacetals and primary alcohols
WO2002048197A1 (en) 2000-12-13 2002-06-20 Sca Hygiene Products Zeist B.V. Process for oxidising primary alcohols
DE60117502T2 (de) 2000-12-19 2006-08-24 Seikagaku Corp. Photohärtbare Derivate von Hyaluronsäure, Verfahren zu deren Herstellung, vernetztes und photogehärtetes Derivat der Hyaluronsäure und diese enthaltendes medizinisches Material
FR2819808B1 (fr) 2001-01-19 2003-04-18 Simafex Compositions stabilisees d'acide o-iodoxybenzoique et leur procede de preparation
WO2002060971A1 (en) 2001-01-31 2002-08-08 Seikagaku Corporation Crosslinked polysaccharide sponge
US6902548B1 (en) 2001-03-19 2005-06-07 Ed Schuler Use of Streptomyces hyalurolyticus enzyme in ophthalmic treatments
US6673919B2 (en) 2001-03-30 2004-01-06 Chisso Cororation Chemically modified hyaluronic acid or salts thereof, and a process for producing thereof
US6946284B2 (en) 2001-11-16 2005-09-20 University Of Massachusetts Solubilizing cross-linked polymers with photolyase
FR2833493B1 (fr) 2001-12-18 2005-09-23 Ioltechnologie Production Forme galenique solide et soluble pour l'administration occulaire de principes actifs et procede de fabrication d'un insert ophtalmique solide et soluble
US20060189516A1 (en) 2002-02-19 2006-08-24 Industrial Technology Research Institute Method for producing cross-linked hyaluronic acid-protein bio-composites
ITPD20020064A1 (it) 2002-03-12 2003-09-12 Fidia Advanced Biopolymers Srl Derivati esterei dell'acido ialuronico per la preparazione di idrogelda utilizzare in campo biomedico, sanitario e chirurgico e come sistem
US7163919B2 (en) 2002-03-16 2007-01-16 Seog-Nyeon Bae Anticancer composition
JP3975267B2 (ja) 2002-06-03 2007-09-12 独立行政法人産業技術総合研究所 多糖物質のアシル化方法
US20040101546A1 (en) 2002-11-26 2004-05-27 Gorman Anne Jessica Hemostatic wound dressing containing aldehyde-modified polysaccharide and hemostatic agents
JP4323148B2 (ja) 2002-09-30 2009-09-02 チッソ株式会社 ｎ−アルカノイル化ヒアルロン酸もしくはその塩およびその製造法
US6965040B1 (en) 2002-11-04 2005-11-15 Xiaolian Gao Photogenerated reagents
US20040116018A1 (en) 2002-12-17 2004-06-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Method of making fibers, nonwoven fabrics, porous films and foams that include skin treatment additives
US7550136B2 (en) 2002-12-20 2009-06-23 University Of Massachusetts Photo-reactive polymers and devices for use in hair treatments
US6982298B2 (en) 2003-01-10 2006-01-03 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US7465766B2 (en) 2004-01-08 2008-12-16 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US20050126338A1 (en) 2003-02-24 2005-06-16 Nanoproducts Corporation Zinc comprising nanoparticles and related nanotechnology
FR2852012B1 (fr) 2003-03-04 2006-06-23 Oreal Procede de preparation de derives o-acyles du glucose
EP1607405B1 (en) 2003-03-11 2011-05-04 Seikagaku Corporation Photocrosslinked polysaccharide composition and process for producing the same
US7947766B2 (en) 2003-06-06 2011-05-24 The Procter & Gamble Company Crosslinking systems for hydroxyl polymers
ES2226567B1 (es) 2003-06-20 2006-07-01 Universidad De Santiago De Compostela Nanoparticulas de acido hialuronico.
DE10331342B4 (de) 2003-07-11 2009-03-12 Thüringisches Institut für Textil- und Kunststoff-Forschung e.V. Thermostabile Form- oder Spinnmasse
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
US7235295B2 (en) 2003-09-10 2007-06-26 Laurencin Cato T Polymeric nanofibers for tissue engineering and drug delivery
WO2005028632A2 (en) 2003-09-19 2005-03-31 Colorado State University Research Foundation (Csurf) Hyaluronan (ha) esterification via acylation technique for moldable devices
US7307093B2 (en) 2003-11-18 2007-12-11 The University Of Tennessee Research Foundation Thiazolidinone amides, thiazolidine carboxylic acid amides, methods of making, and uses thereof
GB2408741B (en) 2003-12-04 2008-06-18 Ind Tech Res Inst Hyaluronic acid derivative with urethane linkage
US8313765B2 (en) 2003-12-04 2012-11-20 Industrial Technology Research Institute Biodegradable hyaluronic acid derivative, biodegradable polymeric micelle composition and pharmaceutical or bioactive composition
US20100330143A1 (en) 2003-12-04 2010-12-30 University Of Utah Research Foundation Modified macromolecules and methods of making and using thereof
GB0406013D0 (en) 2004-03-17 2004-04-21 Chiron Srl Analysis of saccharide vaccines without interference
EP1732619A1 (en) 2004-03-26 2006-12-20 SurModics, Inc. Composition and method for preparing biocompatible surfaces
ITMI20040605A1 (it) 2004-03-29 2004-06-29 Coimex S C R L United Companie Esteri butirrici dell'acido ialuronico a basso grado di sostituzione procedimento per la loro preparazione ed uso
WO2006010066A2 (en) 2004-07-09 2006-01-26 The Cleveland Clinic Foundation Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof
US7323425B2 (en) 2004-08-27 2008-01-29 Stony Brook Technology And Applied Research Crosslinking of hyaluronan solutions and nanofiberous membranes made therefrom
WO2006028110A1 (ja) 2004-09-07 2006-03-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 水溶性ヒアルロン酸修飾物の製造方法
US7214759B2 (en) 2004-11-24 2007-05-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biologically absorbable coatings for implantable devices based on polyesters and methods for fabricating the same
CN101107270B (zh) 2004-11-24 2011-11-23 诺维信生物制药丹麦公司 用二乙烯基砜交联透明质酸的方法
US8053415B2 (en) 2005-01-21 2011-11-08 Washington University In St. Louis Compounds having RD targeting motifs
AU2006227112A1 (en) 2005-03-22 2006-09-28 Tyco Healthcare Group Lp Bioactive wide-weave mesh
US7680038B1 (en) 2005-04-25 2010-03-16 Electronic Arts, Inc. Dynamic bandwidth detection and response for online games
GB0513552D0 (en) 2005-07-01 2005-08-10 Bristol Myers Squibb Co Bandage
JP5147396B2 (ja) 2005-07-06 2013-02-20 生化学工業株式会社 薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル
ITPD20050206A1 (it) 2005-07-07 2007-01-08 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriali in forma di fibra da impiegarsi come dispositivi medici nel trattamento delle ferite e loro processi di produzione
ITMI20051415A1 (it) 2005-07-22 2007-01-23 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriali a base di corbossimetilcellulosa salificata con zinco associata a derivati dell'acido ialuronico da impiegarsi come dispositivi medici con attivita' antimicrobica ed antifungina e loro processo di produzione
US8183214B2 (en) 2005-09-21 2012-05-22 Kode Biotech Limited Cell surface coating with hyaluronic acid oligomer derivative
EP3028677A1 (en) 2005-12-14 2016-06-08 Anika Therapeutics Inc. Treatment of arthritis and other musculoskeletal disorders with crosslinked hyaluronic acid
US20070202570A1 (en) 2006-02-24 2007-08-30 Kikkoman Corporation Enzyme composition, low molecular weight hyaluronan and process for preparing the same
CN101432311A (zh) 2006-02-28 2009-05-13 诺维信生物聚合物公司 透明质酸衍生物
JP4892679B2 (ja) 2006-03-27 2012-03-07 国立大学法人弘前大学 ゲル紡糸によるヒアルロン酸繊維およびその製造方法
KR20070118730A (ko) 2006-06-13 2007-12-18 주식회사 코오롱 보습성이 우수한 창상피복재 및 그의 제조방법
US20080124395A1 (en) 2006-06-22 2008-05-29 Weiliam Chen Formulations and devices for treatment or prevention of neural ischemic damage
US20100207078A1 (en) 2006-07-12 2010-08-19 Seth Marder Deprotection of functional groups by multi-photon induced electron transfer
JP2009545637A (ja) 2006-08-04 2009-12-24 ノボザイムス バイオファーマ デーコー アクティーゼルスカブ 分岐ヒアルロン酸及びその製造方法
US20080063617A1 (en) 2006-09-07 2008-03-13 Abrahams John M Cosmetics formulations
ITMI20061726A1 (it) 2006-09-11 2008-03-12 Fidia Farmaceutici Derivati crosslinkati a base di acido ialuronico reticolato via click chemistry
CZ302856B6 (cs) 2006-09-27 2011-12-14 Cpn Spol. S R. O. Zpusob prípravy derivátu polysacharidu
US8979931B2 (en) 2006-12-08 2015-03-17 DePuy Synthes Products, LLC Nucleus replacement device and method
AU2007336692B2 (en) 2006-12-22 2013-12-12 Croma-Pharma Gesellschaft M.B.H. Use of polymers
KR20080062092A (ko) 2006-12-29 2008-07-03 주식회사 핸슨바이오텍 세포전달체로서의 히알루론산 유도체 및 이의 제조 방법
EP1942117A1 (en) 2006-12-29 2008-07-09 Sigea S.R.L. Derivatives of acid polysaccharides
KR20100014809A (ko) * 2007-01-19 2010-02-11 트리톤 바이오시스템즈, 인코포레이티드 열치료 서셉터 및 이를 사용하는 방법
JP5329767B2 (ja) 2007-02-26 2013-10-30 帝人株式会社 芳香族コポリアミド繊維の製造装置
WO2008115799A1 (en) 2007-03-21 2008-09-25 William Marsh Rice University Novel gene delivery vectors for human mesenchymal stem cells
KR100807358B1 (ko) 2007-04-18 2008-02-28 (주)나노하이브리드 암조직 선택성과 생분해성을 갖는 고리형 삼합체포스파젠-백금(ｉｉ) 착물 컨쥬게이트 항암제 및 그 제조방법
CZ2007299A3 (cs) 2007-04-24 2009-02-04 Cpn Spol. S R. O. Príprava nanovláken z polysacharidu a jejich smesí s polyvinylalkoholem
JP5165281B2 (ja) 2007-06-01 2013-03-21 株式会社バイオベルデ ２反応剤型の医療用含水ゲル形成剤、及び、これより得られるヒアルロン酸ゲル
RU2471867C2 (ru) 2007-06-19 2013-01-10 Тамара П. Уваркина Гиалуронидаза и способ ее применения
KR101226851B1 (ko) 2007-06-20 2013-01-25 (주)엘지하우시스 이중노즐을 이용한 나노섬유의 제조방법
CA2691541A1 (en) 2007-06-22 2008-12-31 Innovative Surface Technologies, Inc. Nanofibers containing latent reactive groups
WO2009012372A1 (en) * 2007-07-18 2009-01-22 Advantageous Systems, Llc Methods and apparatuses for detecting analytes in biological fluid of an animal
FR2920786B1 (fr) 2007-09-07 2010-09-10 Univ Claude Bernard Lyon Fibres creuses, notamment multi membranaires, leur procede de preparation par filage et dispositif pour la mise en oeuvre dudit procede
FR2921675B1 (fr) 2007-09-28 2010-03-19 Univ Claude Bernard Lyon Filament a base d'acide hyaluronique et son procede d'obtention.
US20130136784A1 (en) 2007-10-11 2013-05-30 Robert J. Staab Methods for delivery of medication using dissolvable devices
US7976825B2 (en) * 2007-12-06 2011-07-12 Janos Borbely Cancer cell diagnosis by targeting delivery of nanodevices
BRPI0908352A2 (pt) 2008-02-11 2015-07-28 Basf Se Processo para produzir estruturas porosas, estrutura porosa, e, uso da mesma
EP2245222A1 (en) 2008-02-14 2010-11-03 Fiberweb Corovin GmbH Bicomponent fibers, textile sheets and use thereof
WO2009108100A1 (en) 2008-02-29 2009-09-03 Ipr-Systems Sweden Ab Composition for the formation of gels
AU2009246822B2 (en) 2008-03-31 2012-05-03 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Site specific fluorescence marking and contrast marker for same
WO2009148405A1 (en) 2008-06-05 2009-12-10 Agency For Science, Technology And Research Formation of hydrogel in the presence of peroxidase and low concentration of hydrogen peroxide
JP2010014784A (ja) 2008-07-01 2010-01-21 Fuji Xerox Co Ltd 光書込型表示装置、書込装置、及び光書き込み方法
IT1391734B1 (it) 2008-07-29 2012-01-27 Anika Therapeutics Srl Nuovi biomateriali, loro preparazione per elettrospinning e loro uso in campo biomedico e chirurgico.
FR2934999B1 (fr) 2008-08-13 2011-07-29 Adocia Polysaccharides fonctionnalises par des derives du tryptophane
ES2829971T3 (es) 2008-09-02 2021-06-02 Tautona Group Lp Hilos de ácido hialurónico y/o derivados de los mismos, métodos para fabricar los mismos y usos de los mismos
CZ2008705A3 (cs) 2008-11-06 2010-04-14 Cpn S. R. O. Zpusob prípravy DTPA sítovaných derivátu kyseliny hyaluronové a jejich modifikace
ITRM20080636A1 (it) 2008-11-28 2010-05-29 Univ Palermo Procedimento per la produzione di derivati funzionalizzati dell acido ialuronico e relativi idrogeli.
JP2010154842A (ja) 2008-12-03 2010-07-15 Koji Kawakami Ｅｇｆｒを標的にした新規抗がんキメラペプチド
JP2010138276A (ja) 2008-12-11 2010-06-24 Nipro Corp ヒアルロン酸単糸の製造方法
WO2010095052A2 (en) 2009-02-21 2010-08-26 Sofradim Production Compounds and medical devices activated with solvophobic linkers
WO2010095056A2 (en) 2009-02-21 2010-08-26 Sofradim Production Medical devices with an activated coating
WO2010095049A1 (en) 2009-02-21 2010-08-26 Sofradim Production Crosslinked fibers and method of making same by extrusion
CZ2009168A3 (cs) * 2009-03-17 2010-07-21 Contipro C, A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové pomocí O-acyl-O´-alkylkarbonátu v prítomnosti substituovaného pyridinu
US8551378B2 (en) 2009-03-24 2013-10-08 North Carolina State University Nanospinning of polymer fibers from sheared solutions
US20120219554A2 (en) 2009-05-14 2012-08-30 Fidia Farmaceutici S.P.A. Extracellular yaluronidase from streptomyces koganeiensis
WO2010138074A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Hilborn Joens Hyaluronic acid based delivery systems
US9017725B2 (en) 2009-06-09 2015-04-28 Aurinia Pharmaceuticals Inc. Topical drug delivery systems for ophthalmic use
WO2011014432A1 (en) 2009-07-30 2011-02-03 Carbylan Biosurgery, Inc. Modified hyaluronic acid polymer compositions and related methods
KR101103423B1 (ko) 2009-09-04 2012-01-06 아주대학교산학협력단 생체 주입형 조직 접착성 하이드로젤 및 이의 생의학적 용도
EP2498824B1 (en) 2009-11-11 2016-04-20 University of Twente, Institute for Biomedical Technology and Technical Medicine (MIRA) Hydrogels based on polymers of dextran tyramine and tyramine conjugates of natural polymers
WO2011059325A2 (en) 2009-11-11 2011-05-19 University Of Twente, Institute For Biomedical Technology And Technical Medicine (Mira) Dextran-hyaluronic acid based hydrogels
US20110111012A1 (en) 2009-11-12 2011-05-12 Hemcon Medical Technologies, Inc. Nanomaterial wound dressing assembly
CZ302504B6 (cs) 2009-12-11 2011-06-22 Contipro C A.S. Derivát kyseliny hyaluronové oxidovaný v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd, zpusob jeho prípravy a zpusob jeho modifikace
CZ302503B6 (cs) 2009-12-11 2011-06-22 Contipro C A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové oxidovaného v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd a zpusob jeho modifikace
US8197849B2 (en) 2010-02-12 2012-06-12 National Health Research Institutes Cross-linked oxidated hyaluronic acid for use as a vitreous substitute
US20110229551A1 (en) 2010-03-17 2011-09-22 Notus Laboratories, Inc. Drug delivery compositions and methods using nanofiber webs
IT1399202B1 (it) 2010-03-30 2013-04-11 Corbelli Metodo per la produzione di manufatti elastomerici funzionalizzati e manufatti cosi' ottenuti
WO2011163568A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 University Of Kansas Conjugates comprising an n-oxime bond and associated methods
CN101897976A (zh) 2010-07-16 2010-12-01 沈阳药科大学 一种药物增溶载体及其制备方法和应用
CZ305040B6 (cs) 2010-09-14 2015-04-08 Contipro Biotech S.R.O. Způsob přípravy vysoce substituovaných amidů kyseliny hyaluronové
CZ302994B6 (cs) 2010-12-31 2012-02-08 Cpn S.R.O. Hyaluronová vlákna, zpusob jejich prípravy a použití
WO2012105983A1 (en) 2011-02-03 2012-08-09 Empire Technology Development Llc Selective 3d biopatterning
CN103619331A (zh) 2011-03-23 2014-03-05 印第安纳大学研究及科技公司 抗癌治疗剂
KR101201412B1 (ko) 2011-04-19 2012-11-14 한양대학교 에리카산학협력단 다공성 코어쉘 나노웹의 제조방법
CZ304072B6 (cs) 2011-04-26 2013-09-25 Contipro Biotech S.R.O. Amfoterní materiál na bázi sítované kyseliny hyaluronové, zpusob jeho prípravy, materiály obsahující aktivní cinidla uzavrené v síti hyaluronanu, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití
CN102154738B (zh) 2011-05-10 2012-08-01 青岛大学 一种红藻琼胶纤维的制备方法
ITTO20110428A1 (it) 2011-05-13 2012-11-14 Rottapharm Spa Esteri dell'acido ialuronico, loro preparazione ed uso in dermatologia
ES2657756T3 (es) 2011-10-18 2018-03-06 Heiq Pty Ltd Proceso de formación de fibra y fibras producidas por medio del proceso
KR20130085294A (ko) 2012-01-19 2013-07-29 충남대학교산학협력단 림프노드 탐지용 형광 고분자 나노젤 및 이를 이용한 림프노드 확인 방법
EP2808036A4 (en) * 2012-01-27 2015-08-19 Soluciones Nanotecnológicas S L SUPERPARAMAGNETIC NANOPARTICLES AS A CONTRAST AGENT IN MAGNETIC RESPONSE MAGNETIC RESONANCE IMAGING (MRI) (T2 *)
CZ2012136A3 (cs) 2012-02-28 2013-06-05 Contipro Biotech S.R.O. Deriváty na bázi kyseliny hyaluronové schopné tvorit hydrogely, zpusob jejich prípravy, hydrogely na bázi techto derivátu, zpusob jejich prípravy a pouzití
CA2866080C (en) 2012-03-01 2021-01-19 University Of Cincinnati Ros-activated compounds as selective anti-cancer therapeutics
CZ2012282A3 (cs) 2012-04-25 2013-11-06 Contipro Biotech S.R.O. Zesítovaný derivát hyaluronanu, zpusob jeho prípravy, hydrogel a mikrovlákna na jeho bázi
WO2013171764A2 (en) 2012-04-30 2013-11-21 Rubicon Research Private Limited Ophthalmic formulations
CZ304651B6 (cs) 2012-05-11 2014-08-20 Contipro Biotech S.R.O. Způsob přípravy mikrovláken, způsob výroby krytů ran, kryty ran a zařízení pro přípravu polysacharidových vláken
US20150119388A1 (en) 2012-06-15 2015-04-30 The Children's Hospital Philadelphia Novel pro- and codrug derivatives for nanoparticle delivery of select anticancer agents formed using rapidly cleavable phenolic ester bridges
CZ304512B6 (cs) 2012-08-08 2014-06-11 Contipro Biotech S.R.O. Derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, způsob jeho modifikace a použití
CZ2012841A3 (cs) 2012-11-27 2014-02-19 Contipro Biotech S.R.O. Vlákna založená na hydrofobizovaném hyaluronanu, způsob jejich přípravy a použití, textilie na jejich bázi a použití
CZ2012843A3 (cs) 2012-11-27 2014-02-05 Contipro Biotech S.R.O. Nekonečná vlákna na bázi hyaluronanu, selektivně oxidovaného v poloze 6 N-acetyl-D-glukosaminové části, jejich příprava, použití, nitě, střiže, příze, textilie a způsob jejich úpravy
CZ304267B6 (cs) 2012-11-27 2014-02-05 Contipro Biotech S.R.O. Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
CZ304654B6 (cs) * 2012-11-27 2014-08-20 Contipro Biotech S.R.O. Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití
KR101386096B1 (ko) 2013-02-28 2014-04-21 강원대학교산학협력단 음이온성 단백질 약물 전달을 위한 키토산 나노섬유, 그 제조방법 및 그 키토산 나노섬유를 포함하는 경점막 투여제
CN103505736A (zh) * 2013-09-23 2014-01-15 天津大学 基于改性透明质酸的高分子脂质体及其制备方法
CN103789874B (zh) 2014-01-23 2016-02-10 北京化工大学常州先进材料研究院 平行电场诱导相分离法制备核壳结构天然聚电解质纳米纤维
EP2899214A1 (en) 2014-01-27 2015-07-29 Basf Se Ethylenically unsaturated polysaccharides, method for their production and their use
CZ2014150A3 (cs) 2014-03-11 2015-05-20 Contipro Biotech S.R.O. Konjugáty oligomeru kyseliny hyaluronové nebo její soli, způsob jejich přípravy a použití
GB201411294D0 (en) * 2014-06-25 2014-08-06 Trw Ltd An electric power assisted steering system

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2417104C2 (ru) * 2005-06-29 2011-04-27 Конинклейке Филипс Электроникс Н.В. Композиции, содержащие магнитные частицы оксида железа, и применение указанных композиций при способах получения изображений
CA2621899A1 (en) * 2005-09-26 2007-03-29 Novozymes Biopolymer A/S Aryl/alkyl succinic anhydride hyaluronan derivatives
RU2496525C2 (ru) * 2008-04-03 2013-10-27 Конинклейке Филипс Электроникс Н.В. Биосовместимые продукты для визуализации магнитных частиц
WO2010108493A1 (en) * 2009-03-25 2010-09-30 Pharmacosmos Holding A/S A stable iron oligosaccharide compound
WO2012152872A1 (en) * 2011-05-12 2012-11-15 Gnosis S.P.A. "biotechnological sulphated chondroitin sulphate at position 4 or 6 on the same polysaccharide chain, and process for the preparation thereof"

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Dong-Eun Lee et al. Amphiphilic hyaluronic acid-based nanoparticles for tumor-specific optical/MR dual imaging // Journal of Dynamic Article LinksC< Materials Chemistry. - 2012. - 22, P. 10444-10447. *
Dong-Eun Lee et al. Amphiphilic hyaluronic acid-based nanoparticles for tumor-specific optical/MR dual imaging // Journal of Dynamic Article LinksC< Materials Chemistry. - 2012. - 22, P. 10444-10447. Yanhua Liu et al. Dual targeting folate-conjugated hyaluronic acid polymeric micelles for paclitaxel delivery // International Journal of Pharmaceutics. - 2011. - 421. - P. 160-169. *
Wooram Park et al. Cancer cell specific targeting of nanogels from acetylated hyaluronic acid with low molecular weight // European Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2010. - V. 40, I. 4. - P. 367-375. *
Yanhua Liu et al. Dual targeting folate-conjugated hyaluronic acid polymeric micelles for paclitaxel delivery // International Journal of *
БЕЛИКОВ В.Г. Фармацевтическая химия, М., Высшая школа, 1993. "Краткий курс молекулярной фармакологии" под ред. П.В.Сергеева, М., 1975. Л.Е.Холодов и др. "Клиническая фармакокинетика", М., "Медицина", 1985. JONGNAM PARK et al. Ultra-large-scale syntheses of monodisperse nanocrystals // nature materials. - 20014. - VOL 3. Corinne Eenschooten et al. Preparation and structural characterisation of novel and versatile amphiphilic octenyl succinic anhydride-modified hyaluronic acid derivatives // C. Eenschooten et al. / Carbohydrate Polymers.- 2010. - 79. - P. 597-605. *
формула. *

Also Published As

Publication number Publication date
DK3160509T3 (da) 2020-02-10
PL3160509T3 (pl) 2020-07-13
KR20170021351A (ko) 2017-02-27
EP3160509B1 (en) 2019-12-18
HUE049244T2 (hu) 2020-09-28
RU2016151263A3 (ru) 2018-12-12
RU2016151263A (ru) 2018-07-30
JP2017519785A (ja) 2017-07-20
US10617711B2 (en) 2020-04-14
EP3160509A2 (en) 2017-05-03
ES2768798T3 (es) 2020-06-23
CZ2014451A3 (cs) 2016-01-13
WO2016000669A2 (en) 2016-01-07
WO2016000669A3 (en) 2016-02-25
JP6556765B2 (ja) 2019-08-07
US20170143756A1 (en) 2017-05-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Yu et al. Sequentially responsive biomimetic nanoparticles with optimal size in combination with checkpoint blockade for cascade synergetic treatment of breast cancer and lung metastasis
Liu et al. Theranostic size-reducible and no donor conjugated gold nanocluster fabricated hyaluronic acid nanoparticle with optimal size for combinational treatment of breast cancer and lung metastasis
Saneja et al. Development and evaluation of long-circulating nanoparticles loaded with betulinic acid for improved anti-tumor efficacy
Yang et al. Red fluorescent ZnO nanoparticle grafted with polyglycerol and conjugated RGD peptide as drug delivery vehicles for efficient target cancer therapy
KR100762954B1 (ko) 항암제가 봉입된, 소수성 담즙산이 결합된 친수성 키토산올리고당 나노입자 및 그 제조방법
Huang et al. Amphiphilic prodrug-decorated graphene oxide as a multi-functional drug delivery system for efficient cancer therapy
Kelkar et al. Near infrared fluorescent nanoparticles based on hyaluronic acid: Self-assembly, optical properties, and cell interaction
EP2736493A1 (en) Antioxidant, neuroprotective and antineoplastic nanoparticles comprising a therapeutic agent on an amphiphilic spacer or an amphiphilic polymer
JP7164205B2 (ja) キナ酸修飾ナノ粒子およびその使用
Yuan et al. Systemic delivery of micelles loading with paclitaxel using N-succinyl-palmitoyl-chitosan decorated with cRGDyK peptide to inhibit non-small-cell lung cancer
KR20130030229A (ko) 폴리에틸렌옥사이드-폴리프로필렌옥사이드 블록공중합체와 광감작제가 공유 결합된 광역학 치료용 복합체
Li et al. A macromolecular prodrug strategy for combinatorial drug delivery
Mu et al. Biconcave Carbon Nanodisks for Enhanced Drug Accumulation and Chemo‐Photothermal Tumor Therapy
Sivasubramanian et al. Carboxymethyl dextran-cyclodextrin conjugate as the carrier of doxorubicin
Kumar et al. Redox-sensitive nanoparticles based on xylan-lipoic acid conjugate for tumor targeted drug delivery of niclosamide in cancer therapy
CA3226732A1 (en) Micelle complex and drug carrier comprising same
RU2686679C2 (ru) Противоопухолевая композиция на основе гиалуроновой кислоты и неорганических наночастиц, способ ее получения и ее применение
Li et al. Polysialic acid-functionalized liposomes for efficient honokiol delivery to inhibit breast cancer growth and metastasis
Sun et al. Supramolecular engineering of polymeric nanodrugs for antitumor chemotherapy
Jeon et al. pH-Responsive hyaluronic acid-based nanocarrier for treatment of rheumatoid arthritis
Park et al. Bile acid conjugated chitosan oligosaccharide nanoparticles for paclitaxel carrier
CN113307824B (zh) 一种双亲性材料及其在制备脂质体中的应用
CN113384551B (zh) 一种减少肿瘤内过量钙离子的仿生纳米载体的制备方法和应用
Ding et al. Dextran-based micelles for combinational chemo-photodynamic therapy of tumors via in vivo chemiluminescence
Zhang et al. Pegylation of ginsenoside rg3‐entrapped bovine serum albumin nanoparticles: preparation, characterization, and in vitro biological studies

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Correction of name of patent owner