CZ304267B6 - Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití - Google Patents
Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ304267B6 CZ304267B6 CZ2012-844A CZ2012844A CZ304267B6 CZ 304267 B6 CZ304267 B6 CZ 304267B6 CZ 2012844 A CZ2012844 A CZ 2012844A CZ 304267 B6 CZ304267 B6 CZ 304267B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- derivative
- photoreactive
- preparation
- aldehyde
- Prior art date
Links
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical class CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims abstract description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 11
- UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N pyridin-2-ol Chemical group OC1=CC=CC=N1 UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 6
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 claims abstract 3
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 30
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 25
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 12
- -1 alkali metal cation Chemical group 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 7
- 239000010409 thin film Substances 0.000 claims description 6
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 5
- NKLCNNUWBJBICK-UHFFFAOYSA-N dess–martin periodinane Chemical compound C1=CC=C2I(OC(=O)C)(OC(C)=O)(OC(C)=O)OC(=O)C2=C1 NKLCNNUWBJBICK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000004744 fabric Substances 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 3
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 claims description 3
- GDOPTJXRTPNYNR-UHFFFAOYSA-N methyl-cyclopentane Natural products CC1CCCC1 GDOPTJXRTPNYNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 3
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 claims description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 2
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000005670 electromagnetic radiation Effects 0.000 claims description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 2
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000475 sunscreen effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000516 sunscreening agent Substances 0.000 claims description 2
- 125000000467 secondary amino group Chemical class [H]N([*:1])[*:2] 0.000 claims 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 33
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 14
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 abstract description 6
- IZSOENLZRWXCER-UHFFFAOYSA-N 1-(2-aminoethyl)pyridin-2-one Chemical compound NCCN1C=CC=CC1=O IZSOENLZRWXCER-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 abstract description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 abstract description 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 37
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 23
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 description 14
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 7
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 7
- 238000006552 photochemical reaction Methods 0.000 description 7
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N anthracene Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C21 MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 5
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 5
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 description 5
- 238000011907 photodimerization Methods 0.000 description 5
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 5
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 5
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002585 base Substances 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 4
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 4
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002121 nanofiber Substances 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 4
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 4
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZPSJGADGUYYRKE-UHFFFAOYSA-N 2H-pyran-2-one Chemical compound O=C1C=CC=CO1 ZPSJGADGUYYRKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 3
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 3
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 3
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- TZRQZPMQUXEZMC-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-(2-bromoethyl)carbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCBr TZRQZPMQUXEZMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 3
- GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 2
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- 238000007872 degassing Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000005570 heteronuclear single quantum coherence Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 2
- ZCJLOOJRNPHKAV-ONEGZZNKSA-N (e)-3-(furan-2-yl)prop-2-enoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=CO1 ZCJLOOJRNPHKAV-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 1
- YNGDWRXWKFWCJY-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dihydropyridine Chemical class C1C=CNC=C1 YNGDWRXWKFWCJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003923 2,5-pyrrolediones Chemical class 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MAABLZJEPOZZEJ-UHFFFAOYSA-N 2-thiophen-2-ylprop-2-enoic acid Chemical compound OC(=O)C(=C)C1=CC=CS1 MAABLZJEPOZZEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXBLSWOMIHTQPH-UHFFFAOYSA-N 4-acetamido-TEMPO Chemical compound CC(=O)NC1CC(C)(C)N([O])C(C)(C)C1 UXBLSWOMIHTQPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000000644 6-membered heterocyclic compounds Chemical class 0.000 description 1
- MROJXXOCABQVEF-UHFFFAOYSA-N Actarit Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(CC(O)=O)C=C1 MROJXXOCABQVEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 238000006646 Dess-Martin oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001157 Fourier transform infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 102100039285 Hyaluronidase-2 Human genes 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001410 Microfiber Polymers 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 238000007126 N-alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910019093 NaOCl Inorganic materials 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical group C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GIIWGCBLYNDKBO-UHFFFAOYSA-N Quinoline 1-oxide Chemical group C1=CC=C2[N+]([O-])=CC=CC2=C1 GIIWGCBLYNDKBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000028990 Skin injury Diseases 0.000 description 1
- HEMHJVSKTPXQMS-DYCDLGHISA-M Sodium hydroxide-d Chemical compound [Na+].[2H][O-] HEMHJVSKTPXQMS-DYCDLGHISA-M 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000011908 [2 + 2] photodimerization Methods 0.000 description 1
- JZLUWZPEJDRDEO-UHFFFAOYSA-N [N].C1=CN=CN=C1 Chemical compound [N].C1=CN=CN=C1 JZLUWZPEJDRDEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical class C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950003218 actarit Drugs 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 230000001741 anti-phlogistic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000209 biodegradability test Toxicity 0.000 description 1
- QRZAKQDHEVVFRX-UHFFFAOYSA-N biphenyl-4-ylacetic acid Chemical compound C1=CC(CC(=O)O)=CC=C1C1=CC=CC=C1 QRZAKQDHEVVFRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 150000004777 chromones Chemical class 0.000 description 1
- 150000001851 cinnamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 150000001907 coumarones Chemical class 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000006352 cycloaddition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006392 deoxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000001523 electrospinning Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N etodolac Chemical compound C1COC(CC)(CC(O)=O)C2=N[C]3C(CC)=CC=CC3=C21 XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005293 etodolac Drugs 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 229960000192 felbinac Drugs 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000013100 final test Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- SYTBZMRGLBWNTM-UHFFFAOYSA-N flurbiprofen Chemical compound FC1=CC(C(C(O)=O)C)=CC=C1C1=CC=CC=C1 SYTBZMRGLBWNTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000004398 heart morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 239000003658 microfiber Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000002052 molecular layer Substances 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000005949 ozonolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 238000001782 photodegradation Methods 0.000 description 1
- 238000007699 photoisomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000760 phototoxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000119 phototoxicity / photoirritation testing Toxicity 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 238000001878 scanning electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 210000002374 sebum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- OIIWPAYIXDCDNL-UHFFFAOYSA-M sodium 3-(trimethylsilyl)propionate Chemical class [Na+].C[Si](C)(C)CCC([O-])=O OIIWPAYIXDCDNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- LFKDJXLFVYVEFG-UHFFFAOYSA-N tert-butyl carbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(N)=O LFKDJXLFVYVEFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KKWODXVNKQZVKV-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-(2-pyridin-2-yloxyethyl)carbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCOC1=CC=CC=N1 KKWODXVNKQZVKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 1
- DQFBYFPFKXHELB-VAWYXSNFSA-N trans-chalcone Chemical class C=1C=CC=CC=1C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 DQFBYFPFKXHELB-VAWYXSNFSA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-N trans-cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-N 0.000 description 1
- PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N trans-stilbene Chemical class C=1C=CC=CC=1/C=C/C1=CC=CC=C1 PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000002371 ultraviolet--visible spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 description 1
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 description 1
- 150000003952 β-lactams Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
- A61K8/0212—Face masks
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
- A61K8/73—Polysaccharides
- A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/28—Polysaccharides or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
- A61L26/0009—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials
- A61L26/0023—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/20—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L31/00—Materials for other surgical articles, e.g. stents, stent-grafts, shunts, surgical drapes, guide wires, materials for adhesion prevention, occluding devices, surgical gloves, tissue fixation devices
- A61L31/04—Macromolecular materials
- A61L31/042—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
- A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
- C08J3/02—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques
- C08J3/03—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques in aqueous media
- C08J3/075—Macromolecular gels
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
- C08J3/24—Crosslinking, e.g. vulcanising, of macromolecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
- C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
- A61L2300/23—Carbohydrates
- A61L2300/236—Glycosaminoglycans, e.g. heparin, hyaluronic acid, chondroitin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2305/00—Characterised by the use of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08J2301/00 or C08J2303/00
- C08J2305/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Birds (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Surgery (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Podstatou řešení je fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové (vzorec I) a způsob jeho přípravy, kdy se nejprve připraví derivát kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu v poloze 6 glukosaminového cyklu, který následně reaguje s aminem nesoucím pyridonový skelet (fotoreaktivní částici), například 1-(2-aminoethyl)pyridin-2(1H)-onem, v přítomnosti redukčního činidla za vzniku fotoreaktivního derivátu. Připravený fotoreaktivní derivát lze následně fotochemicky síťovat prostřednictvím [4+4] fotocykloadičních reakcí. Řešení se dále týká 3D síťovaného derivátu kyseliny hyaluronové (vzorec II), který prokazuje zvýšenou hydrolytickou stabilitu a zlepšené sorpční vlastnosti, s možnostmi dalšího dizajnu jejich fyzikálních vlastností podle požadavků finálních aplikací, a dále jeho použití v tkáňovém inženýrství, regenerativní medicíně, zdravotnických prostředcích, či kosmetice.
Description
Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
Oblast techniky
Vynález popisuje přípravu 3-D struktury kyseliny hyaluronové vytvořené metodou fotochemického síťování. Metodika vychází z intermolekulové fotocykloadiční nebo fotodimerizační reakce vhodné fotoreaktivní částice zabudované do polymerního řetězce kyseliny hyaluronové. Experimentálně provedené reakce nevyžadují přítomnost inertní atmosféry, reakce probíhá na vzduchu, při laboratorní teplotě, bez nutnosti použití organického rozpouštědla, bez nutnosti izolace žádaného produktu, nebo potřeby separace vedlejších odpadních látek. Produktem fotochemické reakce je dimemí struktura (tzv. kroslink) nízkomolekulámí fotoreaktivní částice vázaná na polymerní řetězec kyseliny hyaluronové. Touto formou je zabezpečena tvorba 3-D síťované struktur/ kyseliny hyaluronové, která vykazuje podstatně nižší rozpustnost a vyšší stabilitu ve vodném prostředí než výchozí materiál.
NH2
-(2-ami noethy I) py ridin-2(1 H)-on e
Schéma 1: Fotoreaktivní částice a dvojuhlíkatý linker l-{2-aminoethyl)pyridin-2(17/)-on (AEP) zabudovaný do molekuly kyseliny hyaluronové.
Současný stav techniky
Kyselina hyaluronová je přírodní heteropolysacharid glykosaminoglykanové řady, složený z Dglukuronové a V-acetyl-D-glukosaminové podjednotky, které jsou vzájemně vázané β(1—3) a β( 1 —4) <9—glykosidovou vazbou. Kyselina hyaluronová se přirozeně vyskytuje v mnohých pojivových tkáních, kloubovém mazu, oční tekutině, kůži a v chrupavkách (Smeds K. A., Grinstaff M. W. 2001. JBiomedMater Res 54: 115). Kyselina hyaluronová podléhá enzymatické degradaci (Burdick J. A., Chung C., Jia X., Randolph M. A. and Langer R. 2005. Biomacromolecules 6: 386) a hraje důležitou úlohu při hydrataci tkání, buňkové diferenciaci (Park Y. D., Tirelli N., Hubbel J. A. 2003. Biomaterials 24: 893), při léčbě kožních poranění (Leach J. B. and Schmidt C. E. 2003. Biotechnol Bioeng. 82: 578), angiogeneze (Leach J. B. and Schmidt C. E. 2005, Biomaterials 26: 125) a léčbě chronických onemocnění (Jia X. Q., Burdick J. A., Kobler J., Clifton R. J., Rosowski J. J., Zeitels S. M., Langer R. 2004. Macromolecules 37: 3239).
Kyselina hyaluronová je zajímavá z pohledu biomateriálových aplikací ve tkáňovém inženýrství, protože funkční skupiny (OH, COOH) obsažené v polymemí struktuře umožňují následnou chemickou derivatizaci (např. selektivní oxidaci Buffa R., Kettou S. a Velebný V., PV 2009-835, PV 2009-836) vedoucí k chemickému (Burdick J. A. a Prestwich D. G. 2011. Adv Mater 23, H41) nebo fotochemickému síťování za vzniku hydrolyticky stabilních kovalentních vazeb (Seidlits S. K., Khaing Z. Z., Petersen R. R., Nickels J. D., Vanscoy J. E., Shear J. B., Christine E. Schmidt Ch. E. 2010. Biomaterials 31: 3930).
Fotocykloadiční reakce HA
Jednou z často používaných fotochemických reakcí vedoucích k síťování makromemího řetězce
HA jsou tzv. [2+2] fotocykloadiční, resp. [2+2] fotodimerizační reakce. Při těchto intermolekulových reakcích dochází k transformaci dvou nenasycených π-vazeb na nasycené σ-vazby za současného vytvoření 4-členného cyklobutanového kruhu (kroslinku) s postranními řetězci vázanými na biopolymemí strukturu (schéma 2).
| n —> tt | ||
| h.v |
π π 2cr
Schéma 2: Všeobecné schéma tvorby cyklobutanového kruhu při [2+2] fotocykloadicí dvou olefinů.
V případě polysacharídů existuje celá řada fotoreaktivních částic obsahujících konjugovanou dvojnou vazbu, které po excitaci UV zářením podléhají [2+2] fotocykloadiční reakci. Mezi tyto fotoreaktivní sloučeniny patří kyselina akrylová, metakrylová, furylakrylová, thienylakrylová, kyselina fumarová, maleinová, sorbová, kyselina skořicová včetně jejího /?-amino derivátu, maleinimid ajeho alkylové a arylové deriváty, pyrimidinové báze (uráčil, thymin a cytosin), pyran-2on, kumarin, psoralen, /rans-chalkony, trans-stilbeny ajejich metoxylové deriváty a kvartérní pyridiniové soli (Zra«s-4-styrylpyridinium halidy).
Aplikace [2+2] fotocykloadičních reakcí
V roce 1993 vyšel komplexní patent japonské firmy Seikagaku Corporation, JP, (MatsudaT., Moghaddam M. J., Sakurai K. 1993, EP 0 554 898 Bl). Autoři popisují přípravu fotoreaktivních heteropolysacharidů, hlavně GAG (z angl. glucosaminoglycans) včetně kyseliny hyaluronové. Fotochemicky síťovanou kyselinu hyaluronovou na bázi kyseliny skořicové hodlají využívat v srdeční morfogenezi.
V patentu (Motaní Y., Seikagaku Corporation, JP, 1997, EP 0 763 754 A2) autoři prezentují deriváty kyseliny hyaluronové substituovanou kyselinou Zrans-skořicovou. 3-D síťované produkty našly uplatnění v podobě kontaktních čoček. Síťované deriváty byly transparentní, kompaktní hydrogely aplikovatelné na povrch oční bulvy. Autoři si nárokují tvarovou stabilitu, antiadhezní vlastnosti, přesné mechanické a sorpční vlastnosti (20 až 99 % objemu gelu je voda) použitých materiálů.
V patentovém spise (Waki M. a Motaní Y., Seikagaku Corporation JP, 2000, US 006025444) je rozšířená a optimalizovaná problematika použití kyseliny Zra»5-skořicové. Autorům se podařilo objasnit příčinu její nízké reaktivity ve struktuře kyseliny hyaluronové. Důvod připisují konkurenční fotochemické reakci - fotoizomerizaci. Podle autorů má koncentrace zvoleného fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové klíčový vliv na poměr vyskytujícího se fotocykloaduktu a jeho konkurenta v podobě fotochemicky inaktivního cA-izomeru kyseliny skořicové.
Komplexní patentová přihláška (Sáto T., 2003, Seikagaku Corporation, JP, EP 1 607 405 Bl) si nárokuje 2 fotoreaktivní skupiny, a to kyselinu Zrans-skořicovou a dusíkatou pyrimidinovou bázi - thymin. Inovativní krok autoři obhajují ozařováním zmražených fotoreaktivních derivátů biopolymeru, či přídavkem chelatačního činidla, detergentu do ozařovaného roztoku, což vede k tvorbě vhodných skefoldů pro proliferaci kmenových buněk.
V roce 2006 vyšel patent (Miyamoto K., Kurahashi Y., Seikagaku Corporation, JP, 2006, EP 1 217 008 Bl) v oblasti fotochemie kyseliny Zrazzs-skořicové vázané na kyselinu hyaluronovou. Inovativní krok jejich experimentů autoři vidí v aplikaci alkalického prostředí během sa-2 CZ 304267 B6 motné fotochemické reakce. Pozměněné pH (7,2 až 11,0), ideálně (7,5 až 10,0) reakce má zásadní vliv na rozpustnost (hydrofilicitu) kyseliny hyaluronové a charakter její sekundární a terciální struktury. Z toho pramení lepší organizace fotoreaktivních skupin a v konečném důsledku vyšší kvantové výtěžky fotochemické reakce.
Patentový spis (Miyamoto K., Yasuda Y., Seikagaku Corporation, JP, 2008, EP 1 905 456 Al, mezinárodní přihláška, 2007, WO 2007/004675) představuje fotoreaktivní deriváty HA odvozené od kyseliny /raws-skořicové, obsahující kovalentní inkorporovanou léčivou substanci (přednostně antiflogistikum). Sol-gel přechod derivátů kyseliny hyaluronové a parametry získaného hydrogelu odpovídaly subkutánní aplikaci (jehla 20 až 25) s tlakem (0,5 až 5 kg/cm2) do organizmu s časově dizajnovaným uvolňováním léčivé látky v místě podání. Jednalo se hlavně o nesteroidní protizánětlivá léčiva (z angl. NAID - non-steroidal inflammatory drugs) typu naproxen, ibuprofen, flubiprofen, felbinac, etodolac či actarit.
Mezinárodní přihláška vynálezu (Francotte E., CIBA-Geigy, CH, 1996. WO 96/27615 patentová rodina: 2000, US 6 011 149, 2002, EP 08137546 Bl) poskytuje zajímavou a užitečnou aplikaci [2+2] fotocykloadičních reakcí v oblasti dizajnu nových stacionárních fází pro kolonovou chromatografii s cílem separace anomemí směsi. Autor využívá dimerizační reakci substituovaného maleinimidu navázaného karbamátovou vazbou na polysacharidový řetězec nesoucí potřebnou chirální informaci. Patent si nárokuje více typ. polysacharidů jako např. celulózu, amylózu, chitosan, dextran, xylan nebo inulin.
Souhrnný článek z roku 1989 (Katritzky A. R., Dennis N., 1989. Chem Rev 89: 827) podrobně rozebírá (foto)chemii cykloadičních reakcí 6-členných heterocyklických sloučenin. Autoři popisují formou příslušných odkazů do původní literatury problematiku [2+2] fotocykloadičních reakcí dusíkatých bází a jiných fotoreaktivních částic odvozených od chinolin-l-oxidu, pyran-2onu, kumarinu, substituovaného chromonu, dihydropyridinu a dihydropyran-2,4-dionu.
Aplikacím pyrimidinových bází (cytosin, thymin, uráčil) v oblasti fotodimerizačních reakcí bylo věnováno mnoho úsilí, z čehož vyplynulo vícero patentů, jako např. (Grasshoff J. M., Taylor D.
L., Warner N., Polaroid Corporation, UK, 1995, US 5 455 349); (Matsuda T., Nakao H., Seikagaku Kogyo, JP, 2000. US 6 075 066); (Sáto T., Seikagaku Corporation, JP, 2003. EP 1 369 441 Al); (Warner J. C., Morelli A., Ku M. Ch., University of Massachusetts, 2005. US 20050266546 Al); (Warner J. C., Cannon A. S., Raudys J., Undurti A., University of Massachusetts, 2009. US 7 550 136). Jejich aplikace byly cíleny do oblastí kosmetického průmyslu, optiky, tkáňového inženýrství a regenerativní medicíny.
Fotocykloadiční reakce [2+2] poskytují jako produkt nasycený cyklobutanový kruh (4-členný bez dvojných vazeb), u nějž není možnost další chemické modifikace a struktura nenese biologický motiv. Oproti tomu řešení podle vynálezu zahrnující fotocykloadiční reakce [4+4] je originální a obnáší několik výhod. Fotocykloadiční reakce [4+4] poskytují jako produkt nenasycený β-laktamový cyklus (8-členný s dvěma dvojnými vazbami), což znamená možnost další chemické modifikace a navíc se do struktury kroslinku zavádí zajímavý biologický motiv (Holten K. B., Onosuko Ε. M. 2000., American Family Physician 62: 611; Elander R. P., 2003. AppliedMicrobiology and Biotechnology 61: 385).
Další výhodou [4+4] fotocykloadičních reakcí oproti ostatním řešením založených na fotodimerizační strategii je charakter struktury vytvořeného kroslinku. Ten, ve srovnání s [2+2] fotocykloadiční reakcí, kde vzniká pouze 4-členný a nasycený cyklobutanový kruh, umožňuje vznik 8členného cyklu obsahujícího dvě násobné vazby. Izolované dvojné vazby v kroslinku jsou lehce přístupné dodatečné chemické modifikaci (oxidaci, redukci, případně adici). [4+4] fotocykloadiční reakce doposud nebyly využití k fotochemickému síťování kyseliny hyaluronové. Uvedené [4+4] fotocykloadiční reakce probíhají v tuhé fázi, a tedy nevyžadují rozpouštědlo, odplynění reakční směsi, složitou přípravu vzorku a nejsou závislé na parametrech roztoku, jakými jsou např. koncentrace nebo viskozita. Značnou výhodou předložené strategie je reakce bez toxických
-3 CZ 304267 B6 rozpouštědel, selektivita reakce, průběh bez přítomnosti inertní atmosféry a izolace finálního produktu, co výrazně finančně zvýhodňuje a ulehčuje samotný experiment. V neposlední řadě se podstatně navyšuje jeho výtěžnost (izolace, separace, purifikace, množství odpadu). Tyto faktory jsou z průmyslového hlediska více než žádoucí.
Mimoto, důležitým inovativním krokem řešení podle vynálezu je i charakter fotoreaktivní částice v podobě 2-pyridonu. Mnoho fotoreaktivních částic vykazuje zvýšenou senzitivitu vůči kyslíku a snadno podléhá nežádoucí ozonolýze, nebo dochází k tvorbě vysoce reaktivních radikálů, které způsobují fotodegradaci biopolymeru. Proto v těchto případech nelze provádět fotochemické reakce v přítomnosti vzdušné vlhkosti. Nejprve se musí zabezpečit odplynění (deoxygenace) reakční směsi, pak zabezpečit inertní atmosféra a až poté je možné uskutečnit samotnou fotochemickou reakci. Naše fotoreaktivní částice tuto předpřípravu nepotřebuje, protože není citlivá na přítomnost kyslíku (Sieburth S. M, Cunard Τ. N., 1996. Tetrahedron 52: 6251; Dilling W. L., Mitchell A. B., 1973. Mol. Photochem. 5; 371; Matsushima R., Terada K. 1985. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2, 1445). Její stabilita je odrazem její konjugace, která podstatně snižuje náchylnost dvojných vazeb k jejich degradaci. To znamená, že řešení podle našeho vynálezu se podstatně zjednoduší, i ekonomicky zvýhodní oproti současnému stavu v oblasti fotokroslinku polysacharidů.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je způsob fotochemického síťování fotoreaktivních derivátů kyseliny hyaluronové založený na [4+4] fotocykloadičních reakcích. Tyto reakce umožňují vznik příčné vazby (kroslinku), a tím vytvářejí síťované struktury kyseliny hyaluronové. Další výhodou [4+4] fotocykloadičních reakcí oproti ostatním řešením založeným na fotodimerizační strategii je charakter struktury vytvořeného kroslinku. Ten, ve srovnání s [2+2] fotocykloadičními reakcemi, kde vzniká pouze 4-členný a nasycený cyklobutanový kruh, umožňuje vznik 8-členného cyklu obsahujícího dvě násobné vazby. Izolované dvojné vazby v tomto uspořádání jsou lehce přístupné dodatečné chemické modifikaci (oxidaci, redukci, případně adici).
Navíc použití 2-pyridonu jako fotoreaktivní částice není tak náchylné na přítomnost vzdušného kyslíku, což do značné míry usnadňuje experimentální provedení v srovnání s ostatními fotoreaktivními částicemi. Důvodem je částečná delokalizace π-elektronů konjugovaných násobných vazeb, vyplývající z rezonance této heterocyklické struktury. Vynález samozřejmě není omezen pouze na 2-pyridon ajeho deriváty. Další potenciálně užitné fotoreaktivní částice zahrnují například akridiziniové soli, antracen, 2-pyrony, benzofurany apod.
Fotokroslinkovaný derivát kyseliny hyaluronové se vyznačuje změnou fyzikálních vlastností, a to: zvýšenou hydrolytickou stabilitou a omezenou rozpustností ve vodním prostředí. Dále se vyznačuje tím, že ve vodném prostředí bobtná, tvoří hydrogely, nerozpustné částice, vykazuje sorpční vlastnosti a zabezpečuje retenci kapalin, barviv, případně biologicky aktivních látek.
Prezentovaný přístup tvorby 3-D síťovaných produktů kyseliny hyaluronové se skládá ze tří kroků (schéma 1). Příprava fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové vychází z jeho oxidované formy v podobě aldehydu (krok 1, schéma 1) a aminu nesoucího cílovou pyridonový skelet. V reakční směsi se tvoří hydrolyticky nestabilní imin, který se přímo in šitu redukuje hydridem na hydrolyticky stabilní sekundární amin (krok 2, schéma 1). Za tímto účelem byl syntetizován Aaikylace pyridin-2(lH)-onu s 2-(Boc-amino)ethylbromidem. Posledním krokem je samostatný fotokroslink (krok 3, schéma 1) připravených HA derivátů vedoucí k tvorbě 3-D síťovaných produktů. Fotochemické síťování je iniciováno UVB zářením, probíhá v tuhé fázi, tedy bez použití rozpouštědla nebo chemické katalýzy a bez přítomnosti inertní atmosféry, a patří do skupiny [4+4] fotocykloadičních reakcí nebo [4+4] fotodimerizačních reakcí.
-4CZ 304267 B6
krok 3
Schéma 3: Syntetická strategie provedení vynálezu.
Konkrétně se tedy vynález týká fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové podle vzorce I, kde R znamená vodík anebo kationt alkalického kovu:
R = H nebo M
Kyselina hyaluronová nebo její anorganická sůl má molekulovou hmotnost v rozsahu 1.104 až 5.106 g.moE1.
Dále se vynález týká způsobu přípravy derivátu vzorce I, kde se nejprve připraví derivát kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu v poloze 6 glukosaminového cyklu a následně se oxidovaný derivát nechá reagovat s aminem nesoucím pyridonový skelet v přítomnosti redukčního činidla za vzniku fotoreaktivního derivátu. Příprava derivátu kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu v poloze 6 glukosaminového cyklu se může provést použitím oxidačního činidla Dess-Martin periodinanu v aprotickém prostředí nebo TEMPO radikálu s NaClO ve vodném prostředí. Následně derivát kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu reaguje s aminoskupinou aminu nesoucího pyridonový skelet za vzniku iminu, který se přímo v jednom kroku redukuje v přítomnosti redukčního činidla NaBH3CN ve vodném prostředí nebo v systému voda-organické rozpouštědlo na sekundární amin. Aminem nesoucím pyridonový skelet (fotoreaktivní částici) může být například l-(2-aminoethyl)pyridin-2(l//)-on. V
V dalším aspektu se vynález týká způsobu přípravy 3D síťovaných derivátů kyseliny hyaluronové, kde se na fotoreaktivní derivát podle vzorce I působí elektromagnetickým zářením v rozsahu
-5 CZ 304267 B6 vlnových délek 280 až 315 nm. Fotoreaktivní derivát může být ve formě prášku, lyofilizátu, tenkého filmu, nanovlákenné, či mikrovlákenné struktur.
Vynález se také týká 3D síťovaného derivátu kyseliny hyaluronové podle vzorce II:
a rovněž jeho použití pro tkáňové inženýrství, regenerativní medicínu, zdravotnické prostředky nebo kosmetiku.
Připravené 3D síťované struktury kyseliny hyaluronové tedy vykazují zvýšenou hydrolytickou stabilitu, dobré sorpční vlastnosti a poskytují prostor pro jejich další design fyzikálních vlastností podle potřeby spolupracujících vědních disciplín. Z toho vyplývají jednotlivé aplikace jako např.: pro tkáňové inženýrství (skafoldy, výplně, nosiče léčiv), pro regenerativní medicínu (opěrné nano- či mikro-struktury pro růst buněk - kmenové buňky anebo diferencované buňky typu: chondrocytů, fibroblastů, neurocytů apod.), aplikace v oblasti zdravotnických prostředků (nano- či mikro-struktury, tkaniny, pleteniny je možné použít pro výrobu biodegradabilních povrchových krytů ran s řízeným uvolňováním biologicky aktivních látek) a taky široké aplikace v kosmetice (např. pro výrobu pleťových masek, přísada do opalovacích krémů s preventivním nebo regeneračním účinkem).
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 znázorňuje srovnání tří různých forem jednoho typu fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové (Mw = 25 kDa, DS = 18 %) před UV expozicí. Mikrosnímky SEM analýzy fotokroslinkovaných derivátů (t = 1 h, E = 23400 mJ.cm 2) po 48h bobtnání v PBS (pH = 7,4) při 20 °C. Nahoře - tenký fdm (T): rozsah 2 mm, 500 pm, 2 pm. Střed - lyofilizát (L): rozsah (500, 50, 10) pm. Dole - nanovlákenná vrstva (N): rozsah: (500, 50, 10) pm.
Obr. 2 znázorňuje mikrosnímek SEM analýzy fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové (25 kDa, DS = 18 %) v podobě nanovlákenné vrstvy, rozsah 10 pm, zvětšení 3,22 kx (k = 1000), průměry vláken 189 ± 50 nm.
Obr. 3 znázorňuje mikrosnímek SEM analýzy lyofilizovaných, fotokroslinkových derivátů kyseliny hyaluronové (25 kDa, DS = 18 %, texp = 1 h, E = 23400 mJ.cm2) v podobě nabobtnalé nanovlákenné vrstvy ve vodě po dobu (1 h), škála 20 pm, zvětšení 2,02 kx, (vlevo). Detailní záběr, škála 5 pm, zvětšení 5,54 kx, průměry vláken 314±202 nm (vpravo).
Obr. 4 znázorňuje výsledky testů buněčné viability 3T3 fibroblastů v prostředí fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové (Mw = 34 kDa, DS = 20 %). Růstová křivka v procentuálním vyjádření vztáhnutá vůči kontrole v čase T = 0 h (100 %). Vyhodnocení pomocí MTT metody v pěti opakováních n = 6.
Obr. 5 znázorňuje výsledky testů vlivu UVA (315 až 380 nm) na buněčnou viabilitu 3T3 fibroblastů. Pozitivní (antracen) a negativní (SDS) kontrola. Vyhodnocení pomocí MTT metody v 3 opakováních n = 3. Koncentrace látek: antracen (1 až 30 pg/ml), SDS (1 až 15 pg/ml), kontrola bez aditiv (100%).
-6CZ 304267 B6
Obr. 6 znázorňuje výsledky testů vlivu UVA (315 až 380 nm) na buněčnou viabilitu 3T3 fibroblastů. Vyhodnocení pomocí MTT metody v pěti opakováních n = 5. Koncentrace fotoreaktivního derivátu (Mw = 34 kDa, DS = 20 %) =1,3, 30, 100, 500, 1000, 5000 pg/ml, kontrola bez derivátu (100%).
Obr. 7 znázorňuje enzymatickou degradaci fotokroslinkovariých derivátů kyseliny hyaluronové vztáhnutou (Mw = 34 kDa, DS = 20 %) na 1 mg vzorku a vyjádřenou prostřednictvím ekvivalentů hemiacetalu glukózy.
Příklady provedení vynálezu
DS byl stanoven z NMR (nukleární magnetická rezonance) a vypočten podle následujícího vztahu: DS = stupeň substituce = 100% * molární množství navázaného substituentu / molámí množství všech dimerů polysacharidů. Kalkulace je ze vzájemného poměru hodnot integrálů signálů dvou diastereotropních vodíků v poloze 6 glukosaminové podjednotky charakteristických pro danou modifikaci oproti integrálu N-acetylové skupiny. TEMPO radikál je 2,2,6,6-tetramethylpiperidinyloxylový radikál.
NMR spektra vzorků byla změřena na přístroji BRUKER AVANCE 500MHz v D2O anebo CDCI3. Chemické posuny byly kalibrovány vůči vnitřnímu standardu deuterované sodné soli 3-trimethylsilylpropanové kyseliny (TSPA). Údaje byly zpracovány pomocí softwaru Bruker TOPSPIN 1.2 nebo software Spinworks 3.1.7.
Zde používaný výraz ekvivalent (ekv) se vztahuje k dimeru kyseliny hyaluronové, není-li uvedeno jinak. Procenta se uvádějí jako hmotnostní procenta, pokud není uvedeno jinak.
Molekulová hmotnost výchozího hyaluronanu (zdroj: Contipro Biotech s.r.o., Dolní Dobrouč, ČR) byla stanovena metodou SEC-MALLS.
FT-IR spektra byla změřena v rozsahu 4000 až 400 cm 1 v KBr tabletách anebo ve formě tenkého filmu na spektrometrii Nicolet 6700 FTIR.
UV-VIS spektra byla změřena na přístroji Shimadzu UV-2401PC v rozsahu 200 až 800 nm a zpracována softwarem UV Probe verze 2.00.
Povrchová morfologie lyofilizovaných vzorků byla zkoumána skenovacím elektronovým mikroskopem Tescan VEGA II LSU. Vzorky byly měřeny při 20 °C a vyhodnoceny softwarem VegaTC 3.5.2.1 (10 kV, pracovní vzdálenost 3.4 mm, zvětšení 1000 až 20 kx).
Fotokroslink byl uskutečněn v UV Crosslinkeru CL-1000M (302 nm, 6,75 mW/cm2) podle metod A-C.
Příklad 1. Oxidace kyseliny hyaluronové s DMP
Připraví se 2% roztok kyselé formy kyseliny hyaluronové (2,0 g, 5,29 mmol, Mw = 270 kDa) v suchém DMSO. K výslednému roztoku se přidá 1,91 g, 4,49 mmol) DMP a směs se míchá po dobu 5 h. Následně se přidá EtOH (3 ml). Produkt se ultrafiltruje a lyofilizuje.
-7CZ 304267 B6
Schéma 4: Oxidace kyseliny hyaluronové Dess-Martin periodinanem.
DS = 20 %, Mw = 34 'HNMR(D2O)
HSQC (D2O) krospík FT-1R (KBr) kDa, izolovaný výtěžek 91 % δ 5,26 (s, 1H, polymer-CH(OH)2) ppm - geminální diol (hydratovaný aldehyd) δ 5,26 ppm (' H) - 90 ppm (l3C) polymer-CH(OH)2 1740 cm1 -CH=O
Příklad 2. Oxidace kyseliny hyaluronové pomocí Tempo/NaOCl
Připraví se 2% (aq) roztok kyseliny hyaluronové (5,0 g, 12,50 mmol, Mw = 950 kDa). Přidá se (642,5 mg, 6,25 mmol) NaBr a (9,71 g, 27,12 mmol) Na2HPO4.12H2O. Reakční směs se míchá 15 min. při laboratorní teplotě. Následně se ochladí na 5 °C. Následně se přidá (26,7 mg, 0,13 mmol) 4-acetamido-TEMPO a (1,47 ml, 6,25 mmol) roztoku NaClO. Reakční směs se míchá 2 h při 5 °C. Následně se přidá EtOH (7,29 ml, 125,0 mmol). Produkt se ultrafiltruje a lyofilizuje.
Schéma 5: Oxidace kyseliny hyaluronové s Tempo radikálem v přítomnosti NaClO.
DS = 8 %, Mw = 288 kDa, izolovaný výtěžek 82 % 'HNMR (D2O) δ 5,26 (s, 1H, poiymer-CH(OH)2) ppm
HSQC (D2O) krospík δ 5,26 ppm ('H) - 90 ppm (13C) polymer-CH(OH)2 FT-IR (KBr) 1740 cnT1 -CH=O
Příklad 3. Syntéza l-(2-aminoethyl)pyridin-2(lH)-onu (AEP). N-alkylace pyridin-2(lH)-onu s 2-(Boc-amino)ethylbromidem. V
V 3-hrdlé baňce opatřené míchadlem, chladičem a balónkem s inertním plynem se rozpustí (100,0 mg, 1,051 mmol) pyridin-2(lH)-onu v 2 ml EtOH (suchý). K roztoku se přidá KOH (66,1 mg, 1,182 mmol) a reakční směs se nechá míchat 30 min. Následně se přidá (313,3 mg, 1,398 mmol) 2-(boc-amino)ethylbromidu. Reakční směs se refluxuje po dobu 5 h. Rozpouštědlo se odpaří na vakuové rotační odparce. Odparek se rozpustí v 10 ml CHCf. K roztoku se přidá 10 ml 25% roztoku NH4OH. Následně se organická fáze promyje (2x5ml) H2O a (lx5ml) nasyceným roztokem NaCl. Suší se nad MgSO4, fdtruje, a rozpouštědlo se odpaří na vakuové rotační odparce. Produkt se izoluje pomocí kolonové chromatografie na Si-gelu s použitím gradientové eluce (MeOH, CHCf).
-8CZ 304267 B6
o
H
Br 'NH-Boc
EtOH, KC)H reflux, N 5h
Boc
Schéma 6: Alky láce pyridin-2(17/)-onu.
N-alkyl produkt: terc-butyl 2%2-oxopyridin-l (2//)-yl)ethylkarbamát, Ci2H]8N2O3, Mw== 238,283 g/mol, bezbarvé krystaly, Rt. (TB-16-F2) = 0,70 (CHC13 : MeOH/9 : 1), izolovaný výtěžek = 41 %. 'HNMR (500 MHz, CDC13): δ = 7.31 (ddd, 7== 9,0; 6,6; 2,1 Hz, IH), 7,24 - 7,26 (m; IH); 6,54 (d;7=9,0 Hz; IH); 6,16 (t; 7= 6,6 Hz; IH); 5,13 (bs; IH); ,07 (t;7=6,0 Hz; 2H); 3,42 (q, J = 6,0 Hz; 2H); 1,39 (s; 9H) ppm '5
O-alkyl produkt: řerc-butyl 2-(pyridin-2-yloxy)ethylkarbamát; Ci2Hi8N2O3; Mw = 238,283 g/mol; bezbarvý viskózní olej; Rt. = 0,80 (CHC13 : MeOH/9 : 1); izolovaný výtěžek == 5 %;
HNMR (500 MHz; CDC13): δ = 8,12 (dd;7=4,9; 1,6 Hz; IH); 7,55 -7,58 (m; IH); 6,85 (ddd; 7= 5,9; 5,1; 0,7 Hz; IH); 6,72 (t; J= 8,4 Hz; 1H); 4,95 (bs; 1H); 4,36 (t; 7= 5,2 Hz; 2H); 3,45 (q;
7= 5,2 Hz; 2H); 1,44 (s; 9H) ppm nC NMR (125 MHz; CDC13): δ = 163,5; 155,6; 146,9; 138,7; 116,9; 110,9; 81,1; 65,0; 40,2; 27,8 (3C) ppm
Příklad 4. Deprotekce fórc-butyl 2-(2-oxopyridin-l(2H)-yl)ethylkarbamátu
Boc-amin (43,0 mg, 0,180 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (300 μΐ) pod inertní atmosférou N2. Přidá se (275 μΐ, 3,6 mmol) TFA a reakční směs se míchá 2 h při laboratorní teplotě. Přebytek trifluoroctové kyseliny (t.v. = 72,4 °C) a dichlormethan se odpaří na vakuové rotační odparce a odparek se neutralizuje nasyceným roztokem NaHCO3. K vodnému roztoku se přidají (2 ml) CHC13. Extrakt se promyje (lx2ml) H2O, (lx2ml) nasyceným roztokem NaCl a suší nad MgSO4. Reakční směs se filtruje a odpaří na vakuové rotační odparce.
NH
Boc
TFA:DCM
1:1
2h, r.t.
NH
Schéma 7: Deprotekce terc-butyl 2-(2-oxopyridin-l(2H)-yl)ethylkarbamátu.
l-(2-aminoethyl)pyridin-2(l//)-on, C7Hl0N2O, Mw = 138,167 g/mol, nažloutlá viskózní kapalina; Rj. = 0,18 (CHC13: MeOH/ 1:1); izolovaný výtěžek = 80 %,
-9CZ 304267 B6 ’Η NMR (500 MHz; D2O): δ = 7,65 - 7,68 (m; 2H); 6,66 (d; J= 9,5; 1H); 6,72 (dt; J= 6,8; 1,2
Hz; 1H); 4,09 (t; J= 6,1 Hz; 2H); 2,99 (t; J= 6,1 Hz; 2H) ppm 13CNMR(125 MHz; D2O): δ = 167,1; 145,2; 142,2; 122,0; 112,2; 55,1; 42,4 ppm
Příklad 5. Reduktivní aminace s použitím 2 ekv. AEP. Zavedení pyridonového skeletu do biopolymeru
Oxidovaná forma hyaluronanu (100,0 mg, 0,265 mmol, DS = 20 %, Mw = 34,4 kDa) se rozpustí v 10 ml dest. vody (1% roztok). K roztoku se přidá 14,6 mg, 0,106 mmol, 2 ekv.) AEP. Reakční směs se míchá 2 h. Následně se přidá (26,5 mg, 0,425 mmol) NaBH3CN a reakční směs se míchá dalších 12 h. Výsledný roztok se dialyzuje a lyofilizuje.
Schéma 8: Reduktivní aminace - vázání pyridonového skeletu do struktury kyseliny hyaluronové.
DS = 16 %; Mw = 34 kDa; izolovaný výtěžek 65 % ]HNMR(D2O+NaOD) δ 2,78 (bs; 1H; polymer-H6a); 2,99 (bs; 1H; polymer-H6b); 2,94 3,00 (m; 2H; -NHCH2-); 4,13 - 4,17 (m; 2H; -NCH2-); 6,58 (bs; 1H; Hhetar); 6,66 (bs; 1H; Hhetar); 7,64 - 7,70 (m; 2H; Hhetar) ppm,
H-H COSY (D2O+NaOD) krospík δ 2,78 - 2,99; 3,00 - 4,16; 6,58 - 7,65; 6,66 - 7,69 ppm HSQC (D2O+NaOD) krospík δ 2,78 ('H) - 49,0 (l3C); 2,99 (lH) - 49,0 (13C); 3,00 (’H) 47,4 (i3C); 4,16 ('H) - 50,0 (13C); 6,58 (*H) - 110,2 (13C); 6,66 (’Η) - 118,1 (13C); 7,69 (’H) - 136,4 (l3C); 7,65 (’H) — 145,0 (13C) ppm
DOSY NMR (D2O+NaOD) log D (2,03 ppm; Me-CO-NH-polymer) ~ -10,45 m2/s log D (2,78 ppm; polymer-H6a) —10,45 m2/s log D (2,99 ppm; polymer-H6b) —10,45 m2/s log D (3,00 ppm; -NHCH2-) —10,45 m2/s log D (4,16 ppm; -NCH2-) —10,45 m2/s log D (6,58 ppm; Hhetar) ~ -10,45 m2/s log D (7,65 ppm; Hhetar) —10,45 m2/s log D (7,65 - 7,69 ppm; Hhetar) ~-10,45 m2/s log D (4,72 ppm; H2O) —8,6 m2/s
FT-1R (KBr) 1654 cm 1 Nhetar-C=O
UV/vis (0,005 %; H2O) λπκιχ = 299 nm; n—»K*Nhetar-C=O
Příklad 6. Reduktivní aminace s použitím 1 ekv. AEP.
- 10CZ 304267 B6
Oxidovaná forma hyaluronanu (100,0 mg, 0,265 mmol, DS = 8 %, Mw = 288 kDa) se rozpustí v 10 ml dest. vody (1% roztok). K. roztoku se přidá (3,1 mg, 0,022 mmol, 1 ekv.) AEP. Reakční směs se míchá 2 h. Následně se přidá (26,5 mg, 0,425 mmol) NaBHjCN a reakční směs se míchá dalších 12 h. Výsledný roztok se dialyzuje a lyofilizuje.
DS = 3 %, Mw = 229 kDa, izolovaný výtěžek 95 % (stanoveno z NMR, podrobně příklad 6)
Příklad 7. Reduktivní aminace s použitím 2 ekv. AEP a 2% (aq) roztok.
Oxidovaná forma hyaluronanu (100,0 mg, 0,265 mmol, DS = 20 %, Mw = 34,4 kDa) se rozpustí v 5 ml dest. vody (2% roztok). K roztoku se přidá (14,6 mg, 0,106 mmol, 2 ekv.) AEP. Reakční směs se míchá 2 h. Následně se přidá (26,5 mg, 0,425 mmol) NaBH3CN a reakční směs se míchá dalších 12 h. Výsledný roztok se dialyzuje a lyofilizuje.
DS = 20 %, Mw = 34 kDa, izolovaný výtěžek 74 % (stanoveno z NMR, podrobně příklad 6)
Příklad 8. Reduktivní aminace s použitím 1,5 ekv. AEP, přídavek 1 ekv. NaHCO3 a 2% (aq) roztok.
Oxidovaná forma hyaluronanu (100,0 mg, 0,265 mmol, DS = 20 %, Mw = 34,4 kDa) se rozpustí v 5 ml dest. vody (2% roztok). K roztoku se přidá (11,0 mg, 0,080 mmol, 1,5 ekv.) AEP a (22,2 mg, 0,265 mmol) NaHCO3. Reakční směs se míchá 2 h. Následně se přidá (26,5 mg, 0,425 mmol) NaBH3CN a reakční směs se míchá dalších 12 h. Výsledný roztok se dialyzuje a lyofilizuje.
DS = 17 %, Mw = 31 kDa, izolovaný výtěžek 79 % (stanoveno z NMR, podrobně příklad 6)
Příklad 9. Fotochemické síťování fotoreaktivních derivátů kyseliny hyaluronové - metoda A
Ozařovaný materiál je v podobě tenkého filmu, který se připravil odpařováním 5% (aq) roztoku fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové (DS = 18 %, Mw = 25 kDa). Roztok se napipetoval do Petriho misek a v teplovzdušné sušárně odpařoval při 40 °C po dobu 12 h. Připravený tenký film se položil na aluminiovou fólii v Petriho misce a ozařoval po dobu 1 h (E = 24300 mJ/cm2). Po expozici materiálu se testovala změna jeho fyzikálních vlastností (rozpustnost a stabilita) oproti neozařovanému vzorku. Analýza probíhala v destilované vodě a PBS (pH = 7) při 25 °C. Nerozpuštěný materiál byl odfiltrován a lyofilizován za účelem SEM analýzy. Filtrát byl odpařen a analyzován pomocí NMR. Výsledky testů a NMR analýzy extraktů exponovaného materiálu jsou uvedeny v tabulce 1. Obrazová analýza je uvedena na obrázku 1.
Tabulka 1
| Vzorek | DS | Mw | E | rozpustnost/stabilita | gelace/bobtnání | NMR extrakt HA/PEO | |||
| čas | [h] | ||||||||
| [%] | fkDal | |mJ.cm’2] | 12 | 24 | 36 | 48 | |||
| TB-40-L | 18 | 25 | 24300 | -/+ | -/+ | -/+ | -/+ | +/+ | -/- |
| TB-40-N | 18 | 25 | 24300 | -/+ | -/+ | -/+ | -/- | +/+ | -/+ |
| TB-40-T | 18 | 25 | 24300 | -/+ | -/+ | -/+ | -/+ | +/+ | -/- |
| TB-39-L | 20 | 15 | 24300 | -/+ | -/+ | -/+ | -/+ | +/+ | -/- |
| TB-31-N | 20 | 34 | 24300 | -/+ | -/+ | -/- | -/- | +/+ | -/+ |
| TB-23-L | 3 | 229 | 24300 | -/+ | -/+ | -/+ | -/+ | +/+ | -/- |
- 11 CZ 304267 B6
Výsledky analýzy fotokroslinkovaných derivátů kyseliny hyaluronové v H2O a PBS (pH = 7,4).
L - lyofilizovaná forma, N - nanovlákenná vrstva, T - tenký film. + znamená pozitivní výsledek a - znamená negativní výsledek.
Příklad 10. Fotochemické síťování fotoreaktivních derivátů kyseliny hyaluronové - metoda B
Ozařovaný materiál je v podobě lyofilizátu, který se připravil lyofilizací 5% (aq) roztoku fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové (DS = 18 %, Mw = 25 kDa). Tenká vrstva o hloubce (cca 0,5 až 1,0 mm) a rozměrech (2x2 cm) lyofilizátu se umístila na Al fólii v Petriho misce. Lyofilizát se ozařoval po dobu 1 h (E = 24300 mJ/cm2). Po expozici materiálu se testovala změna jeho fyzikálních vlastností (rozpustnost a stabilita) oproti neozařovanému vzorku. Analýza probíhala v destilované vodě a fosfátovém pufu (PBS z angl. phosphate buffered šalině, pH = 7) při 25 °C. Nerozpuštěný materiál byl odfiltrován a lyofilizován za účelem SEM (skenovací elektronový mikroskop) analýzy. Filtrát byl odpařen a analyzován pomocí NMR. Výsledky testů a NMR analýzy extraktů exponovaného materiálu jsou uvedeny v tabulce 1. Obrazová analýza je uvedena na obrázku 1.
Příklad 11. Fotochemické síťování fotoreaktivních derivátů kyseliny hyaluronové - metoda C
Ozařovaný materiál je v podobě nanovlákenné vrstvy o průměrné plošné hmotnosti 0,3 mg/cm2. Nanovlákenná vrstva se připravila metodou elektrostatického zvlákňování na přístroji 4Spin ve společnosti Contipro Biotech s.r.o. Koncentrace zvlákněného vodného roztoku byla 10 % hmotn.. Vzájemný hmotnostní poměr fotoreaktivního polymeru kyseliny hyaluronové (DS = 18 %, Mw = 25 kDa) a nosného polyethylenoxidu (Mw = 600 kDa) byl (80/20). Nanovrstvy polypropylenové podkladové textilie o rozměrech (2x2 cm) se umístily na aluminiovou fólii v Petriho misce. Materiál se ozařoval po dobu 1 h (E = 24300 mJ/cm2). Po expozici materiálu se testovala změna jeho fyzikálních vlastností (rozpustnost a stabilita) oproti neozařovanému vzorku. Analýza probíhala v destilované vodě a PBS (pH = 7) při 25 °C. Nerozpuštěný materiál byl odfiltrován a lyofilizován za účelem SEM analýzy. Filtrát byl odpařen a analyzován pomocí NMR. Výsledky testů a NMR analýzy extraktů exponovaného materiálu jsou uvedeny v tabulce 1. Obrazová analýza je uvedena v příloze (obrázky 1, 2, 3).
Příklad 12. Testy buněčné viability fotoreaktivních derivátů
Testovaná látka (DS = 18 %, Mw = 25 kDa) byla rozpuštěna v kompletním 3T3 médiu. Roztok byl filtrovaný přes 0,22 pm filtr. Finální testovací koncentrace roztoku byly 100, 500, 1000 pg/ml. Do 96—jamkových panelů byly nasazeny 3T3 buňky o hustotě 3 000 buněk na jamku. Před ovlivněním byly buňky kultivovány po dobu 24 hodin v kompletním médiu. Buněčná viabilita se měřila pomocí 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-difenyl tetrazolium bromidu (MTT) metody v intervalech 0, 24, 48, 72 hodin. V této metodě je MTT redukován živými buňkami na fialový ve vodě nerozpustný formazan, který je následně spektrofotometricky stanoven.
K 200 pl média bylo přidáno 20 pl zásobního roztoku MTT (5 mg/ml). Inkubace proběhla při 37 °C v termostatu po dobu 2,5 hodin. Následně byl odsán roztok nad buňkami a přidán solubilizační roztok o objemu 220 pl. Optická hustota roztoku byla měřena pomocí Microplate reader VERSAmax při 570 nm (690 nm pozadí). Celý experiment byl doplněn sadou neovlivnitelných kontrol a slepých vzorků. Ze změřených dat optické hustoty bylo vypočítáno procentuální vyjádření vztahující se ke kontrole v čase TO hodin (poměr optické hustoty ovlivnitelného vzorku k optické hustotě neovlivnitelné kontroly TO, násobený 100) a standardní odchylka průměru (SEM). Výsledky testu sou graficky zpracovány v příloze (obrázek 4)
- 12CZ 304267 B6
Příklad 13. Testy fototoxicity fotoreaktivních derivátů
Do 96-jamkových panelů byly nasazeny 3T3 buňky o hustotě 10 000 buněk na jamku. Před ovlivněním byly buňky nejdříve kultivovány po dobu 24 hodin v kompletním médiu. Následně se buňky omyly PBS (pH = 7,00) a 1 hodinu inkubovaly s testovanými látkami rozpuštěnými v PBS (testovaná látka TB-13: DS = 20 %, Mw = 34kDa, 1, 3, 30, 100, 500, 1000, 5000 pg/ml; fototoxický antracen-1, 3, 30 pg/ml; nefototoxický SDS-1, 3, 15 pg/ml). Buňky byly ozářeny dávkou 0,1 J/cm2 UVA (315 až 400 nm) pomocí lampy (Oriel Instruments) a její výkon byl stanoven pomocí fotometru PMA 2100 (Solar light Co.). 10 minut po expozici byl od buněk odsán supernatant a bylo přidáno kompletní médium. Buněčná viabilita se vyhodnocovala spektrofotometricky pomocí MTT metody 24 hodin po ozáření. Výsledky testu jsou graficky zpracovány v příloze (obrázek 5 a 6).
Příklad 14. Testy biodegradability fotokroslinkovaných derivátů
Fotokroslinkované deriváty kyseliny hyaluronové: forma lyofilizátů m (L) = 16,3 mg a forma nanovrstvy: m (N) = 9,0 mg byly připraveny za sterilních podmínek, převrstveny 2 ml PBS (pH =7,38) a ponechány k nabobtnání po dobu 24 h. Ke každému vzorku bylo přidáno 200 U BTH (BTH = bovinní testikulámí hyaluronidáza, EC 3.2.1.35) a vzorky se inkubovaly po dobu 43 h při 37 °C. V časových intervalech 0, 4, 8, 19 a 43 h bylo z každého vzorku odebráno 100 pl objemu roztoku a do finální analýzy byly ponechány při -20 °C. Současně byly inkubovány kontroly (PBS + BTH a samotné deriváty v PBS). Absorbance kontroly PBS+BTH byla odečítána jako pozadí 1. Jako pozadí 2 byla odečítána absorbance pufru s derivátem po nabobtnání (čas T = 0). Současně byl inkubován i vzorek derivátu pouze v čistém PBS, aby se touto cestou zjistilo, zda vzorek podléhá spontánní degradaci. Volně redukující konce byly stanoveny reakcí Somogyiho a Nelsonovým činidlem následujícím postupem: 50 pl vzorku bylo smícháno se stejným objemem čerstvě připraveného Somogyiho činidla. Směs byla po promíchání inkubována v termobloku 15 min. při 100 °C. Po ochlazení bylo přidáno 100 pl Nelsonova činidla, vzorky byly promíchány, odstředěny a byla zjištěna jejich absorbance při 540 nm. Po odečtení pozadí byly z kalibračn í křivky zjištěny hodnoty ekvivalentů glukózy (analogie volných redukujících konců). Výsledky testů jsou graficky zpracovány v příloze (obrázek 7).
Claims (13)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové podle vzorce I, kde R znamená vodík anebo kationt alkalického kovu
- 2. Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové podle nároku 1, kde kyselina hyaluronová nebo její anorganická sůl má molekulovou hmotnost v rozsahu 1.103 4 až 5.106 g.mof1.
- 3. Způsob přípravy fotoreaktivního derivátu definovaného podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se nejprve připraví derivát kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu- 13 CZ 304267 B6 v poloze 6 glukosaminového cyklu a následně se nechá reagovat s aminem nesoucím pyridonový skelet v přítomnosti redukčního činidla za vzniku fotoreaktivního derivátu.
- 4. Způsob přípravy podle nároku 3, vyznačující se tím, že k selektivní přípravě aldehydu v poloze 6 glukosaminové části kyseliny hyaluronové se použije oxidační činidlo DessMartin periodinan v aprotickém prostředí nebo TEMPO radikál s NaCIO ve vodném prostředí.
- 5. Způsob přípravy fotoreaktivního derivátu podle nároku 3 nebo 4, vyznačující se tím, že se derivát kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu nechá reagovat s aminem nesoucím pyridonový skelet za vzniku iminu, který se přímo v jednom kroku redukuje v přítomnosti redukčního činidla NaBH3CN ve vodném prostředí nebo v systému voda-organické rozpouštědlo na sekundární amin.
- 6. Způsob přípravy fotoreaktivního derivátu podle kteréhokoli z nároků 3 až 5, vyznačující se tím, že aminem nesoucím pyridonový skelet je l-(2-aminoethyl)pyridin-2(177)-on.
- 7. Způsob přípravy fotoreaktivního derivátu podle nároků 3 až 6, vyznačující se tím, že se stupeň substituce derivátu kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu pohybuje v rozsahu od 1 až 40 %, a stupeň substituce sekundárního aminu nesoucího pyridonový skelet v rozsahu od 1 až 40 %, s výhodou 15 až 20 %.
- 8. Způsob přípravy fotoreaktivního derivátu podle kteréhokoli z nároků 3 až 7, vyznačující se tím, že se připraví 1 až 2 % hmotn. vodný roztok derivátu kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu, přidá se 1 až 2 ekv. aminu nesoucího pyridonový skelet a následně se přidá 1 až 3,5 ekv. redukčního činidla NaBH3CN, za vzniku fotoreaktivního derivátu podle vzorce I.
- 9. Způsob přípravy 3D síťovaných derivátů kyseliny hyaluronové, vyznačující se tím, že se na fotoreaktivní derivát podle nároku 1 nebo 2 působí elektromagnetickým zářením v rozsahu vlnových délek 280 až 315 nm.
- 10. Způsob přípravy podle nároku 9, vyznačující se tím, že fotoreaktivní derivát podle vzorce I je ve formě prášku, lyofílizátu, tenkého filmu, nanovlákenné, či mikrovlákenné struktury.
- 11. 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové podle vzorce II:
- 12. Použití 3D síťovaného derivátu definovaného v nároku 11 pro tkáňové inženýrství, regenerativní medicínu, zdravotnické prostředky nebo kosmetiku.
- 13. Použití 3D síťovaného derivátu definovaného v nároku 11 jako skafoldy, výplně, nosiče léčiv, opěrné nano- či mikro-struktury pro růst buněk, zejména kmenových buněk nebo diferencovaných buněk typu chondrocytů, fibroblastů, neurocytů apod., pro přípravu nano- či mikrostruktur, tkanin, pletenin pro výrobu biodegradabilních povrchových krytů ran s řízeným uvolňováním biologicky aktivních látek, pro výrobu pleťových masek nebo jako přísada do opalovacích krémů s preventivním nebo regeneračním účinkem.
Priority Applications (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2012-844A CZ2012844A3 (cs) | 2012-11-27 | 2012-11-27 | Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití |
| PCT/CZ2013/000155 WO2014082608A1 (en) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | Photoreactive derivative of hyaluronic acid, method of preparation thereof, 3d-crosslinked derivative of hyaluronic acid, method of preparation and use thereof |
| RU2015125077A RU2015125077A (ru) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | Фотореактивное производное гиалуроновой кислоты, способ его получения, 3d-сшитое производное гиалуроновой кислоты, способ его получения и применение |
| BR112015011896A BR112015011896A2 (pt) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | derivado fotorreativo de ácido hialurônico, método de preparação do derivado fotorreativo, método de preparação de derivados 3d reticulados de ácido hialurônico, derivado 3d reticulado de ácido hialurônico e uso do derivado 3d reticulado |
| KR1020157015546A KR20150082619A (ko) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | 히알루론산의 광반응성 유도체, 이의 제조 방법, 히알루론산의 3ｄ-가교된 유도체, 이의 제조 방법 및 용도 |
| US14/647,185 US20150291706A1 (en) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | Photoreactive Derivative of Hyaluronic Acid, Method of Preparation Thereof, 3D.Crosslinked Derivative of Hyaluronic Acid, Method of Preparation and Use Thereof |
| EP13814822.6A EP2925792A1 (en) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | Photoreactive derivative of hyaluronic acid, method of preparation thereof, 3d-crosslinked derivative of hyaluronic acid, method of preparation and use thereof |
| JP2015543315A JP2016506422A (ja) | 2012-11-27 | 2013-11-26 | ヒアルロン酸の光反応性誘導体，その調製方法，ヒアルロン酸の３ｄ架橋誘導体，その調製方法及び使用 |
| ARP130104358A AR095455A1 (es) | 2012-11-27 | 2013-11-27 | Derivado fotorreactivo del ácido hialurónico, método para su preparación, derivado del ácido hialurónico con entrecruzamiento tridimensional, método para su preparación y sus usos |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2012-844A CZ2012844A3 (cs) | 2012-11-27 | 2012-11-27 | Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ304267B6 true CZ304267B6 (cs) | 2014-02-05 |
| CZ2012844A3 CZ2012844A3 (cs) | 2014-02-05 |
Family
ID=49886553
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2012-844A CZ2012844A3 (cs) | 2012-11-27 | 2012-11-27 | Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20150291706A1 (cs) |
| EP (1) | EP2925792A1 (cs) |
| JP (1) | JP2016506422A (cs) |
| KR (1) | KR20150082619A (cs) |
| AR (1) | AR095455A1 (cs) |
| BR (1) | BR112015011896A2 (cs) |
| CZ (1) | CZ2012844A3 (cs) |
| RU (1) | RU2015125077A (cs) |
| WO (1) | WO2014082608A1 (cs) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ306479B6 (cs) * | 2015-06-15 | 2017-02-08 | Contipro A.S. | Způsob síťování polysacharidů s využitím fotolabilních chránicích skupin |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ2012842A3 (cs) | 2012-11-27 | 2014-08-20 | Contipro Biotech S.R.O. | Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití |
| CZ2013913A3 (cs) * | 2013-11-21 | 2015-06-03 | Contipro Biotech S.R.O. | Objemný nanovlákenný materiál na bázi kyseliny hyaluronové, jejích solí nebo jejich derivátů, způsob jeho přípravy, způsob jeho modifikace, modifikovaný nanovlákenný materiál, nanovlákenný útvar a jejich použití |
| CZ2013914A3 (cs) * | 2013-11-21 | 2015-02-25 | Contipro Biotech S.R.O. | Nanovlákna obsahující fototvrditelný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo její soli, fototvrzená nanovlákna, způsob jejich syntézy, přípravek obsahující fototvrzená nanovlákna a jejich použití |
| CZ2014150A3 (cs) | 2014-03-11 | 2015-05-20 | Contipro Biotech S.R.O. | Konjugáty oligomeru kyseliny hyaluronové nebo její soli, způsob jejich přípravy a použití |
| CZ2014451A3 (cs) | 2014-06-30 | 2016-01-13 | Contipro Pharma A.S. | Protinádorová kompozice na bázi kyseliny hyaluronové a anorganických nanočástic, způsob její přípravy a použití |
| CZ309295B6 (cs) | 2015-03-09 | 2022-08-10 | Contipro A.S. | Samonosný, biodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití |
| CZ306662B6 (cs) | 2015-06-26 | 2017-04-26 | Contipro A.S. | Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití |
| CZ308106B6 (cs) | 2016-06-27 | 2020-01-08 | Contipro A.S. | Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití |
| KR102499267B1 (ko) * | 2020-06-02 | 2023-02-14 | 포항공과대학교 산학협력단 | 실리콘 하이드로젤 콘택트렌즈 표면개질 및 응용 |
| WO2022063312A1 (zh) * | 2020-09-28 | 2022-03-31 | 吾奇生物医疗科技(江苏)有限公司 | 透明质酸水凝胶和透明质酸膜及其制备方法和应用 |
| CN114316085B (zh) * | 2021-12-22 | 2023-06-02 | 北京佗林医药科技有限公司 | 一种顺式透明质酸六糖及其制备方法和用途 |
| JPWO2024038783A1 (cs) * | 2022-08-16 | 2024-02-22 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5763504A (en) * | 1992-02-05 | 1998-06-09 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha(Seikagaku Corporation) | Photcurable glycosaminoglycan derivatives, crosslinked glycosaminoglycans and method of production thereof |
| US6031017A (en) * | 1995-11-15 | 2000-02-29 | Seikagaku Corporation | Photocured cross-linked-hyaluronic acid gel and method of preparation thereof |
| US20080025950A1 (en) * | 2003-12-04 | 2008-01-31 | Prestwich Glenn D | Modified Macromolescules and Associated Methods of Synthesis and Use |
| CZ302503B6 (cs) * | 2009-12-11 | 2011-06-22 | Contipro C A.S. | Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové oxidovaného v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd a zpusob jeho modifikace |
| WO2012027834A1 (en) * | 2010-09-02 | 2012-03-08 | Mcmaster University | Hyaluronic acid-containing biopolymers |
| CZ2011241A3 (cs) * | 2011-04-26 | 2012-11-07 | Contipro Biotech S.R.O. | Amfoterní materiál na bázi sítované kyseliny hyaluronové, zpusob jeho prípravy, materiály obsahující aktivní cinidla uzavrené v síti hyaluronanu, zpusob jejich prípravy a jejich použití |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU697739B2 (en) | 1994-03-14 | 1998-10-15 | Seikagaku Corporation | Material to be worn on the eyeball |
| US5455349A (en) | 1994-05-13 | 1995-10-03 | Polaroid Corporation | Vinylbenzyl thymine monomers |
| US6025444A (en) | 1994-11-17 | 2000-02-15 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) | Cinnamic acid derivative |
| ATE220691T1 (de) | 1995-03-07 | 2002-08-15 | Novartis Erfind Verwalt Gmbh | Fotochemisch vernetzte polysaccharidderivate zur chromatographischen trennung von enantiomeren |
| US5789462A (en) | 1995-09-13 | 1998-08-04 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) | Photocured crosslinked-hyaluronic acid contact lens |
| EP1217008B1 (en) | 2000-12-19 | 2006-03-01 | Seikagaku Corporation | Photocurable hyaluronic acid derivative and process for producing the same, and photocured crosslinked hyaluronic acid derivative and medical material using the same |
| CA2435491C (en) | 2001-01-31 | 2010-02-02 | Seikagaku Corporation | Crosslinked polysaccharide sponge |
| US6946284B2 (en) | 2001-11-16 | 2005-09-20 | University Of Massachusetts | Solubilizing cross-linked polymers with photolyase |
| US7550136B2 (en) | 2002-12-20 | 2009-06-23 | University Of Massachusetts | Photo-reactive polymers and devices for use in hair treatments |
| EP1607405B1 (en) | 2003-03-11 | 2011-05-04 | Seikagaku Corporation | Photocrosslinked polysaccharide composition and process for producing the same |
| WO2007004675A1 (ja) | 2005-07-06 | 2007-01-11 | Seikagaku Corporation | 薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル |
-
2012
- 2012-11-27 CZ CZ2012-844A patent/CZ2012844A3/cs not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-11-26 US US14/647,185 patent/US20150291706A1/en not_active Abandoned
- 2013-11-26 RU RU2015125077A patent/RU2015125077A/ru not_active Application Discontinuation
- 2013-11-26 EP EP13814822.6A patent/EP2925792A1/en not_active Withdrawn
- 2013-11-26 WO PCT/CZ2013/000155 patent/WO2014082608A1/en active Application Filing
- 2013-11-26 KR KR1020157015546A patent/KR20150082619A/ko not_active Withdrawn
- 2013-11-26 JP JP2015543315A patent/JP2016506422A/ja active Pending
- 2013-11-26 BR BR112015011896A patent/BR112015011896A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2013-11-27 AR ARP130104358A patent/AR095455A1/es unknown
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5763504A (en) * | 1992-02-05 | 1998-06-09 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha(Seikagaku Corporation) | Photcurable glycosaminoglycan derivatives, crosslinked glycosaminoglycans and method of production thereof |
| US6031017A (en) * | 1995-11-15 | 2000-02-29 | Seikagaku Corporation | Photocured cross-linked-hyaluronic acid gel and method of preparation thereof |
| US20080025950A1 (en) * | 2003-12-04 | 2008-01-31 | Prestwich Glenn D | Modified Macromolescules and Associated Methods of Synthesis and Use |
| CZ302503B6 (cs) * | 2009-12-11 | 2011-06-22 | Contipro C A.S. | Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové oxidovaného v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd a zpusob jeho modifikace |
| WO2012027834A1 (en) * | 2010-09-02 | 2012-03-08 | Mcmaster University | Hyaluronic acid-containing biopolymers |
| CZ2011241A3 (cs) * | 2011-04-26 | 2012-11-07 | Contipro Biotech S.R.O. | Amfoterní materiál na bázi sítované kyseliny hyaluronové, zpusob jeho prípravy, materiály obsahující aktivní cinidla uzavrené v síti hyaluronanu, zpusob jejich prípravy a jejich použití |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Carole E. Schanté a kol.: Chemical modifications of hyaluronic acid for the synthesis of derivatives for broad range of biomedical applications, Carbohydrate Polymers 85 (2011), 469-489 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ306479B6 (cs) * | 2015-06-15 | 2017-02-08 | Contipro A.S. | Způsob síťování polysacharidů s využitím fotolabilních chránicích skupin |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2016506422A (ja) | 2016-03-03 |
| EP2925792A1 (en) | 2015-10-07 |
| WO2014082608A1 (en) | 2014-06-05 |
| RU2015125077A (ru) | 2017-01-10 |
| BR112015011896A2 (pt) | 2017-07-11 |
| KR20150082619A (ko) | 2015-07-15 |
| US20150291706A1 (en) | 2015-10-15 |
| CZ2012844A3 (cs) | 2014-02-05 |
| AR095455A1 (es) | 2015-10-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ304267B6 (cs) | Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití | |
| US5652347A (en) | Method for making functionalized derivatives of hyaluronic acid | |
| EP3071602B1 (en) | Nanofibers containing photocurable ester derivative of hyaluronic acid or its salt, photocured nanofibers, method of synthesis thereof, preparation containing photocured nanofibers and use thereof | |
| KR100507545B1 (ko) | 히알루론산 유도체 및 그의 제조방법 | |
| AU2007296939B9 (en) | Hyaluronic acid derivatives obtained via "click chemistry" crosslinking | |
| JP4791921B2 (ja) | ヒアルロン酸アミドおよびそれらの誘導体、並びにそれらの製造法 | |
| EP3354665A1 (en) | Modified alginates for cell encapsulation and cell therapy | |
| CZ304072B6 (cs) | Amfoterní materiál na bázi sítované kyseliny hyaluronové, zpusob jeho prípravy, materiály obsahující aktivní cinidla uzavrené v síti hyaluronanu, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití | |
| KR20080073419A (ko) | 의료용 히알루론산 유도체 마이크로비드 및 이의 제조 방법 | |
| CA3163069A1 (en) | Hydrogel of mercapto-modified macromolecular compound, and preparation method therefor and use thereof | |
| Huerta-Angeles et al. | Synthesis of photo-crosslinkable hyaluronan with tailored degree of substitution suitable for production of water resistant nanofibers | |
| RU2713295C2 (ru) | Способ сшивания полисахаридов при помощи фотоудаляемых защитных групп | |
| Li et al. | Synthesis, properties, and applications of a polyampholyte hydroxypropyl chitosan derivative with the phenylboronic acid functional group | |
| CN101864046A (zh) | 氨基葡萄糖改性聚乙二醇双丙烯酸酯水凝胶及其制备方法与应用 | |
| US20100227836A1 (en) | Parenteral administration of a glucosamine | |
| EP3052529A1 (en) | Single-step functionalization and cross-linking of hyaluronic acid | |
| CN111153952A (zh) | N-叠氮基乙酰-d-甘露糖胺衍生物及其制备方法和在检测酯酶中的应用 | |
| Zhang et al. | Heparin mimetics as tools for modulation of biology and therapy | |
| CN106467612A (zh) | 糖簇化合物及其药学上可接受的盐、它们的用途和一种药物组合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20161127 |