CZ304267B6 - Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití - Google Patents

Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití Download PDF

Info

Publication number
CZ304267B6
CZ304267B6 CZ2012-844A CZ2012844A CZ304267B6 CZ 304267 B6 CZ304267 B6 CZ 304267B6 CZ 2012844 A CZ2012844 A CZ 2012844A CZ 304267 B6 CZ304267 B6 CZ 304267B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
hyaluronic acid
derivative
photoreactive
preparation
aldehyde
Prior art date
Application number
CZ2012-844A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2012844A3 (cs
Inventor
Tomáš Bobula
Robert Pospíšil
Radovan Buffa
Jana Růžičková
Martina Moravcová
Pavel Klein
Vladimír Velebný
Original Assignee
Contipro Biotech S.R.O.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Contipro Biotech S.R.O. filed Critical Contipro Biotech S.R.O.
Priority to CZ2012-844A priority Critical patent/CZ2012844A3/cs
Priority to KR1020157015546A priority patent/KR20150082619A/ko
Priority to PCT/CZ2013/000155 priority patent/WO2014082608A1/en
Priority to US14/647,185 priority patent/US20150291706A1/en
Priority to RU2015125077A priority patent/RU2015125077A/ru
Priority to BR112015011896A priority patent/BR112015011896A2/pt
Priority to JP2015543315A priority patent/JP2016506422A/ja
Priority to EP13814822.6A priority patent/EP2925792A1/en
Priority to ARP130104358A priority patent/AR095455A1/es
Publication of CZ304267B6 publication Critical patent/CZ304267B6/cs
Publication of CZ2012844A3 publication Critical patent/CZ2012844A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/0212—Face masks
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
    • A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
    • A61L15/28—Polysaccharides or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0009—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials
    • A61L26/0023—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/20—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L31/00—Materials for other surgical articles, e.g. stents, stent-grafts, shunts, surgical drapes, guide wires, materials for adhesion prevention, occluding devices, surgical gloves, tissue fixation devices
    • A61L31/04—Macromolecular materials
    • A61L31/042—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/02—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques
    • C08J3/03—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques in aqueous media
    • C08J3/075—Macromolecular gels
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/24—Crosslinking, e.g. vulcanising, of macromolecules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/23—Carbohydrates
    • A61L2300/236—Glycosaminoglycans, e.g. heparin, hyaluronic acid, chondroitin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2305/00—Characterised by the use of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08J2301/00 or C08J2303/00
    • C08J2305/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

Podstatou řešení je fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové (vzorec I) a způsob jeho přípravy, kdy se nejprve připraví derivát kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu v poloze 6 glukosaminového cyklu, který následně reaguje s aminem nesoucím pyridonový skelet (fotoreaktivní částici), například 1-(2-aminoethyl)pyridin-2(1H)-onem, v přítomnosti redukčního činidla za vzniku fotoreaktivního derivátu. Připravený fotoreaktivní derivát lze následně fotochemicky síťovat prostřednictvím [4+4] fotocykloadičních reakcí. Řešení se dále týká 3D síťovaného derivátu kyseliny hyaluronové (vzorec II), který prokazuje zvýšenou hydrolytickou stabilitu a zlepšené sorpční vlastnosti, s možnostmi dalšího dizajnu jejich fyzikálních vlastností podle požadavků finálních aplikací, a dále jeho použití v tkáňovém inženýrství, regenerativní medicíně, zdravotnických prostředcích, či kosmetice.

Description

Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
Oblast techniky
Vynález popisuje přípravu 3-D struktury kyseliny hyaluronové vytvořené metodou fotochemického síťování. Metodika vychází z intermolekulové fotocykloadiční nebo fotodimerizační reakce vhodné fotoreaktivní částice zabudované do polymerního řetězce kyseliny hyaluronové. Experimentálně provedené reakce nevyžadují přítomnost inertní atmosféry, reakce probíhá na vzduchu, při laboratorní teplotě, bez nutnosti použití organického rozpouštědla, bez nutnosti izolace žádaného produktu, nebo potřeby separace vedlejších odpadních látek. Produktem fotochemické reakce je dimemí struktura (tzv. kroslink) nízkomolekulámí fotoreaktivní částice vázaná na polymerní řetězec kyseliny hyaluronové. Touto formou je zabezpečena tvorba 3-D síťované struktur/ kyseliny hyaluronové, která vykazuje podstatně nižší rozpustnost a vyšší stabilitu ve vodném prostředí než výchozí materiál.
NH2
-(2-ami noethy I) py ridin-2(1 H)-on e
Schéma 1: Fotoreaktivní částice a dvojuhlíkatý linker l-{2-aminoethyl)pyridin-2(17/)-on (AEP) zabudovaný do molekuly kyseliny hyaluronové.
Současný stav techniky
Kyselina hyaluronová je přírodní heteropolysacharid glykosaminoglykanové řady, složený z Dglukuronové a V-acetyl-D-glukosaminové podjednotky, které jsou vzájemně vázané β(1—3) a β( 1 —4) <9—glykosidovou vazbou. Kyselina hyaluronová se přirozeně vyskytuje v mnohých pojivových tkáních, kloubovém mazu, oční tekutině, kůži a v chrupavkách (Smeds K. A., Grinstaff M. W. 2001. JBiomedMater Res 54: 115). Kyselina hyaluronová podléhá enzymatické degradaci (Burdick J. A., Chung C., Jia X., Randolph M. A. and Langer R. 2005. Biomacromolecules 6: 386) a hraje důležitou úlohu při hydrataci tkání, buňkové diferenciaci (Park Y. D., Tirelli N., Hubbel J. A. 2003. Biomaterials 24: 893), při léčbě kožních poranění (Leach J. B. and Schmidt C. E. 2003. Biotechnol Bioeng. 82: 578), angiogeneze (Leach J. B. and Schmidt C. E. 2005, Biomaterials 26: 125) a léčbě chronických onemocnění (Jia X. Q., Burdick J. A., Kobler J., Clifton R. J., Rosowski J. J., Zeitels S. M., Langer R. 2004. Macromolecules 37: 3239).
Kyselina hyaluronová je zajímavá z pohledu biomateriálových aplikací ve tkáňovém inženýrství, protože funkční skupiny (OH, COOH) obsažené v polymemí struktuře umožňují následnou chemickou derivatizaci (např. selektivní oxidaci Buffa R., Kettou S. a Velebný V., PV 2009-835, PV 2009-836) vedoucí k chemickému (Burdick J. A. a Prestwich D. G. 2011. Adv Mater 23, H41) nebo fotochemickému síťování za vzniku hydrolyticky stabilních kovalentních vazeb (Seidlits S. K., Khaing Z. Z., Petersen R. R., Nickels J. D., Vanscoy J. E., Shear J. B., Christine E. Schmidt Ch. E. 2010. Biomaterials 31: 3930).
Fotocykloadiční reakce HA
Jednou z často používaných fotochemických reakcí vedoucích k síťování makromemího řetězce
HA jsou tzv. [2+2] fotocykloadiční, resp. [2+2] fotodimerizační reakce. Při těchto intermolekulových reakcích dochází k transformaci dvou nenasycených π-vazeb na nasycené σ-vazby za současného vytvoření 4-členného cyklobutanového kruhu (kroslinku) s postranními řetězci vázanými na biopolymemí strukturu (schéma 2).
n —> tt
h.v
π π 2cr
Schéma 2: Všeobecné schéma tvorby cyklobutanového kruhu při [2+2] fotocykloadicí dvou olefinů.
V případě polysacharídů existuje celá řada fotoreaktivních částic obsahujících konjugovanou dvojnou vazbu, které po excitaci UV zářením podléhají [2+2] fotocykloadiční reakci. Mezi tyto fotoreaktivní sloučeniny patří kyselina akrylová, metakrylová, furylakrylová, thienylakrylová, kyselina fumarová, maleinová, sorbová, kyselina skořicová včetně jejího /?-amino derivátu, maleinimid ajeho alkylové a arylové deriváty, pyrimidinové báze (uráčil, thymin a cytosin), pyran-2on, kumarin, psoralen, /rans-chalkony, trans-stilbeny ajejich metoxylové deriváty a kvartérní pyridiniové soli (Zra«s-4-styrylpyridinium halidy).
Aplikace [2+2] fotocykloadičních reakcí
V roce 1993 vyšel komplexní patent japonské firmy Seikagaku Corporation, JP, (MatsudaT., Moghaddam M. J., Sakurai K. 1993, EP 0 554 898 Bl). Autoři popisují přípravu fotoreaktivních heteropolysacharidů, hlavně GAG (z angl. glucosaminoglycans) včetně kyseliny hyaluronové. Fotochemicky síťovanou kyselinu hyaluronovou na bázi kyseliny skořicové hodlají využívat v srdeční morfogenezi.
V patentu (Motaní Y., Seikagaku Corporation, JP, 1997, EP 0 763 754 A2) autoři prezentují deriváty kyseliny hyaluronové substituovanou kyselinou Zrans-skořicovou. 3-D síťované produkty našly uplatnění v podobě kontaktních čoček. Síťované deriváty byly transparentní, kompaktní hydrogely aplikovatelné na povrch oční bulvy. Autoři si nárokují tvarovou stabilitu, antiadhezní vlastnosti, přesné mechanické a sorpční vlastnosti (20 až 99 % objemu gelu je voda) použitých materiálů.
V patentovém spise (Waki M. a Motaní Y., Seikagaku Corporation JP, 2000, US 006025444) je rozšířená a optimalizovaná problematika použití kyseliny Zra»5-skořicové. Autorům se podařilo objasnit příčinu její nízké reaktivity ve struktuře kyseliny hyaluronové. Důvod připisují konkurenční fotochemické reakci - fotoizomerizaci. Podle autorů má koncentrace zvoleného fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové klíčový vliv na poměr vyskytujícího se fotocykloaduktu a jeho konkurenta v podobě fotochemicky inaktivního cA-izomeru kyseliny skořicové.
Komplexní patentová přihláška (Sáto T., 2003, Seikagaku Corporation, JP, EP 1 607 405 Bl) si nárokuje 2 fotoreaktivní skupiny, a to kyselinu Zrans-skořicovou a dusíkatou pyrimidinovou bázi - thymin. Inovativní krok autoři obhajují ozařováním zmražených fotoreaktivních derivátů biopolymeru, či přídavkem chelatačního činidla, detergentu do ozařovaného roztoku, což vede k tvorbě vhodných skefoldů pro proliferaci kmenových buněk.
V roce 2006 vyšel patent (Miyamoto K., Kurahashi Y., Seikagaku Corporation, JP, 2006, EP 1 217 008 Bl) v oblasti fotochemie kyseliny Zrazzs-skořicové vázané na kyselinu hyaluronovou. Inovativní krok jejich experimentů autoři vidí v aplikaci alkalického prostředí během sa-2 CZ 304267 B6 motné fotochemické reakce. Pozměněné pH (7,2 až 11,0), ideálně (7,5 až 10,0) reakce má zásadní vliv na rozpustnost (hydrofilicitu) kyseliny hyaluronové a charakter její sekundární a terciální struktury. Z toho pramení lepší organizace fotoreaktivních skupin a v konečném důsledku vyšší kvantové výtěžky fotochemické reakce.
Patentový spis (Miyamoto K., Yasuda Y., Seikagaku Corporation, JP, 2008, EP 1 905 456 Al, mezinárodní přihláška, 2007, WO 2007/004675) představuje fotoreaktivní deriváty HA odvozené od kyseliny /raws-skořicové, obsahující kovalentní inkorporovanou léčivou substanci (přednostně antiflogistikum). Sol-gel přechod derivátů kyseliny hyaluronové a parametry získaného hydrogelu odpovídaly subkutánní aplikaci (jehla 20 až 25) s tlakem (0,5 až 5 kg/cm2) do organizmu s časově dizajnovaným uvolňováním léčivé látky v místě podání. Jednalo se hlavně o nesteroidní protizánětlivá léčiva (z angl. NAID - non-steroidal inflammatory drugs) typu naproxen, ibuprofen, flubiprofen, felbinac, etodolac či actarit.
Mezinárodní přihláška vynálezu (Francotte E., CIBA-Geigy, CH, 1996. WO 96/27615 patentová rodina: 2000, US 6 011 149, 2002, EP 08137546 Bl) poskytuje zajímavou a užitečnou aplikaci [2+2] fotocykloadičních reakcí v oblasti dizajnu nových stacionárních fází pro kolonovou chromatografii s cílem separace anomemí směsi. Autor využívá dimerizační reakci substituovaného maleinimidu navázaného karbamátovou vazbou na polysacharidový řetězec nesoucí potřebnou chirální informaci. Patent si nárokuje více typ. polysacharidů jako např. celulózu, amylózu, chitosan, dextran, xylan nebo inulin.
Souhrnný článek z roku 1989 (Katritzky A. R., Dennis N., 1989. Chem Rev 89: 827) podrobně rozebírá (foto)chemii cykloadičních reakcí 6-členných heterocyklických sloučenin. Autoři popisují formou příslušných odkazů do původní literatury problematiku [2+2] fotocykloadičních reakcí dusíkatých bází a jiných fotoreaktivních částic odvozených od chinolin-l-oxidu, pyran-2onu, kumarinu, substituovaného chromonu, dihydropyridinu a dihydropyran-2,4-dionu.
Aplikacím pyrimidinových bází (cytosin, thymin, uráčil) v oblasti fotodimerizačních reakcí bylo věnováno mnoho úsilí, z čehož vyplynulo vícero patentů, jako např. (Grasshoff J. M., Taylor D.
L., Warner N., Polaroid Corporation, UK, 1995, US 5 455 349); (Matsuda T., Nakao H., Seikagaku Kogyo, JP, 2000. US 6 075 066); (Sáto T., Seikagaku Corporation, JP, 2003. EP 1 369 441 Al); (Warner J. C., Morelli A., Ku M. Ch., University of Massachusetts, 2005. US 20050266546 Al); (Warner J. C., Cannon A. S., Raudys J., Undurti A., University of Massachusetts, 2009. US 7 550 136). Jejich aplikace byly cíleny do oblastí kosmetického průmyslu, optiky, tkáňového inženýrství a regenerativní medicíny.
Fotocykloadiční reakce [2+2] poskytují jako produkt nasycený cyklobutanový kruh (4-členný bez dvojných vazeb), u nějž není možnost další chemické modifikace a struktura nenese biologický motiv. Oproti tomu řešení podle vynálezu zahrnující fotocykloadiční reakce [4+4] je originální a obnáší několik výhod. Fotocykloadiční reakce [4+4] poskytují jako produkt nenasycený β-laktamový cyklus (8-členný s dvěma dvojnými vazbami), což znamená možnost další chemické modifikace a navíc se do struktury kroslinku zavádí zajímavý biologický motiv (Holten K. B., Onosuko Ε. M. 2000., American Family Physician 62: 611; Elander R. P., 2003. AppliedMicrobiology and Biotechnology 61: 385).
Další výhodou [4+4] fotocykloadičních reakcí oproti ostatním řešením založených na fotodimerizační strategii je charakter struktury vytvořeného kroslinku. Ten, ve srovnání s [2+2] fotocykloadiční reakcí, kde vzniká pouze 4-členný a nasycený cyklobutanový kruh, umožňuje vznik 8členného cyklu obsahujícího dvě násobné vazby. Izolované dvojné vazby v kroslinku jsou lehce přístupné dodatečné chemické modifikaci (oxidaci, redukci, případně adici). [4+4] fotocykloadiční reakce doposud nebyly využití k fotochemickému síťování kyseliny hyaluronové. Uvedené [4+4] fotocykloadiční reakce probíhají v tuhé fázi, a tedy nevyžadují rozpouštědlo, odplynění reakční směsi, složitou přípravu vzorku a nejsou závislé na parametrech roztoku, jakými jsou např. koncentrace nebo viskozita. Značnou výhodou předložené strategie je reakce bez toxických
-3 CZ 304267 B6 rozpouštědel, selektivita reakce, průběh bez přítomnosti inertní atmosféry a izolace finálního produktu, co výrazně finančně zvýhodňuje a ulehčuje samotný experiment. V neposlední řadě se podstatně navyšuje jeho výtěžnost (izolace, separace, purifikace, množství odpadu). Tyto faktory jsou z průmyslového hlediska více než žádoucí.
Mimoto, důležitým inovativním krokem řešení podle vynálezu je i charakter fotoreaktivní částice v podobě 2-pyridonu. Mnoho fotoreaktivních částic vykazuje zvýšenou senzitivitu vůči kyslíku a snadno podléhá nežádoucí ozonolýze, nebo dochází k tvorbě vysoce reaktivních radikálů, které způsobují fotodegradaci biopolymeru. Proto v těchto případech nelze provádět fotochemické reakce v přítomnosti vzdušné vlhkosti. Nejprve se musí zabezpečit odplynění (deoxygenace) reakční směsi, pak zabezpečit inertní atmosféra a až poté je možné uskutečnit samotnou fotochemickou reakci. Naše fotoreaktivní částice tuto předpřípravu nepotřebuje, protože není citlivá na přítomnost kyslíku (Sieburth S. M, Cunard Τ. N., 1996. Tetrahedron 52: 6251; Dilling W. L., Mitchell A. B., 1973. Mol. Photochem. 5; 371; Matsushima R., Terada K. 1985. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2, 1445). Její stabilita je odrazem její konjugace, která podstatně snižuje náchylnost dvojných vazeb k jejich degradaci. To znamená, že řešení podle našeho vynálezu se podstatně zjednoduší, i ekonomicky zvýhodní oproti současnému stavu v oblasti fotokroslinku polysacharidů.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je způsob fotochemického síťování fotoreaktivních derivátů kyseliny hyaluronové založený na [4+4] fotocykloadičních reakcích. Tyto reakce umožňují vznik příčné vazby (kroslinku), a tím vytvářejí síťované struktury kyseliny hyaluronové. Další výhodou [4+4] fotocykloadičních reakcí oproti ostatním řešením založeným na fotodimerizační strategii je charakter struktury vytvořeného kroslinku. Ten, ve srovnání s [2+2] fotocykloadičními reakcemi, kde vzniká pouze 4-členný a nasycený cyklobutanový kruh, umožňuje vznik 8-členného cyklu obsahujícího dvě násobné vazby. Izolované dvojné vazby v tomto uspořádání jsou lehce přístupné dodatečné chemické modifikaci (oxidaci, redukci, případně adici).
Navíc použití 2-pyridonu jako fotoreaktivní částice není tak náchylné na přítomnost vzdušného kyslíku, což do značné míry usnadňuje experimentální provedení v srovnání s ostatními fotoreaktivními částicemi. Důvodem je částečná delokalizace π-elektronů konjugovaných násobných vazeb, vyplývající z rezonance této heterocyklické struktury. Vynález samozřejmě není omezen pouze na 2-pyridon ajeho deriváty. Další potenciálně užitné fotoreaktivní částice zahrnují například akridiziniové soli, antracen, 2-pyrony, benzofurany apod.
Fotokroslinkovaný derivát kyseliny hyaluronové se vyznačuje změnou fyzikálních vlastností, a to: zvýšenou hydrolytickou stabilitou a omezenou rozpustností ve vodním prostředí. Dále se vyznačuje tím, že ve vodném prostředí bobtná, tvoří hydrogely, nerozpustné částice, vykazuje sorpční vlastnosti a zabezpečuje retenci kapalin, barviv, případně biologicky aktivních látek.
Prezentovaný přístup tvorby 3-D síťovaných produktů kyseliny hyaluronové se skládá ze tří kroků (schéma 1). Příprava fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové vychází z jeho oxidované formy v podobě aldehydu (krok 1, schéma 1) a aminu nesoucího cílovou pyridonový skelet. V reakční směsi se tvoří hydrolyticky nestabilní imin, který se přímo in šitu redukuje hydridem na hydrolyticky stabilní sekundární amin (krok 2, schéma 1). Za tímto účelem byl syntetizován Aaikylace pyridin-2(lH)-onu s 2-(Boc-amino)ethylbromidem. Posledním krokem je samostatný fotokroslink (krok 3, schéma 1) připravených HA derivátů vedoucí k tvorbě 3-D síťovaných produktů. Fotochemické síťování je iniciováno UVB zářením, probíhá v tuhé fázi, tedy bez použití rozpouštědla nebo chemické katalýzy a bez přítomnosti inertní atmosféry, a patří do skupiny [4+4] fotocykloadičních reakcí nebo [4+4] fotodimerizačních reakcí.
-4CZ 304267 B6
krok 3
Schéma 3: Syntetická strategie provedení vynálezu.
Konkrétně se tedy vynález týká fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové podle vzorce I, kde R znamená vodík anebo kationt alkalického kovu:
R = H nebo M
Kyselina hyaluronová nebo její anorganická sůl má molekulovou hmotnost v rozsahu 1.104 až 5.106 g.moE1.
Dále se vynález týká způsobu přípravy derivátu vzorce I, kde se nejprve připraví derivát kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu v poloze 6 glukosaminového cyklu a následně se oxidovaný derivát nechá reagovat s aminem nesoucím pyridonový skelet v přítomnosti redukčního činidla za vzniku fotoreaktivního derivátu. Příprava derivátu kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu v poloze 6 glukosaminového cyklu se může provést použitím oxidačního činidla Dess-Martin periodinanu v aprotickém prostředí nebo TEMPO radikálu s NaClO ve vodném prostředí. Následně derivát kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu reaguje s aminoskupinou aminu nesoucího pyridonový skelet za vzniku iminu, který se přímo v jednom kroku redukuje v přítomnosti redukčního činidla NaBH3CN ve vodném prostředí nebo v systému voda-organické rozpouštědlo na sekundární amin. Aminem nesoucím pyridonový skelet (fotoreaktivní částici) může být například l-(2-aminoethyl)pyridin-2(l//)-on. V
V dalším aspektu se vynález týká způsobu přípravy 3D síťovaných derivátů kyseliny hyaluronové, kde se na fotoreaktivní derivát podle vzorce I působí elektromagnetickým zářením v rozsahu
-5 CZ 304267 B6 vlnových délek 280 až 315 nm. Fotoreaktivní derivát může být ve formě prášku, lyofilizátu, tenkého filmu, nanovlákenné, či mikrovlákenné struktur.
Vynález se také týká 3D síťovaného derivátu kyseliny hyaluronové podle vzorce II:
a rovněž jeho použití pro tkáňové inženýrství, regenerativní medicínu, zdravotnické prostředky nebo kosmetiku.
Připravené 3D síťované struktury kyseliny hyaluronové tedy vykazují zvýšenou hydrolytickou stabilitu, dobré sorpční vlastnosti a poskytují prostor pro jejich další design fyzikálních vlastností podle potřeby spolupracujících vědních disciplín. Z toho vyplývají jednotlivé aplikace jako např.: pro tkáňové inženýrství (skafoldy, výplně, nosiče léčiv), pro regenerativní medicínu (opěrné nano- či mikro-struktury pro růst buněk - kmenové buňky anebo diferencované buňky typu: chondrocytů, fibroblastů, neurocytů apod.), aplikace v oblasti zdravotnických prostředků (nano- či mikro-struktury, tkaniny, pleteniny je možné použít pro výrobu biodegradabilních povrchových krytů ran s řízeným uvolňováním biologicky aktivních látek) a taky široké aplikace v kosmetice (např. pro výrobu pleťových masek, přísada do opalovacích krémů s preventivním nebo regeneračním účinkem).
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 znázorňuje srovnání tří různých forem jednoho typu fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové (Mw = 25 kDa, DS = 18 %) před UV expozicí. Mikrosnímky SEM analýzy fotokroslinkovaných derivátů (t = 1 h, E = 23400 mJ.cm 2) po 48h bobtnání v PBS (pH = 7,4) při 20 °C. Nahoře - tenký fdm (T): rozsah 2 mm, 500 pm, 2 pm. Střed - lyofilizát (L): rozsah (500, 50, 10) pm. Dole - nanovlákenná vrstva (N): rozsah: (500, 50, 10) pm.
Obr. 2 znázorňuje mikrosnímek SEM analýzy fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové (25 kDa, DS = 18 %) v podobě nanovlákenné vrstvy, rozsah 10 pm, zvětšení 3,22 kx (k = 1000), průměry vláken 189 ± 50 nm.
Obr. 3 znázorňuje mikrosnímek SEM analýzy lyofilizovaných, fotokroslinkových derivátů kyseliny hyaluronové (25 kDa, DS = 18 %, texp = 1 h, E = 23400 mJ.cm2) v podobě nabobtnalé nanovlákenné vrstvy ve vodě po dobu (1 h), škála 20 pm, zvětšení 2,02 kx, (vlevo). Detailní záběr, škála 5 pm, zvětšení 5,54 kx, průměry vláken 314±202 nm (vpravo).
Obr. 4 znázorňuje výsledky testů buněčné viability 3T3 fibroblastů v prostředí fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové (Mw = 34 kDa, DS = 20 %). Růstová křivka v procentuálním vyjádření vztáhnutá vůči kontrole v čase T = 0 h (100 %). Vyhodnocení pomocí MTT metody v pěti opakováních n = 6.
Obr. 5 znázorňuje výsledky testů vlivu UVA (315 až 380 nm) na buněčnou viabilitu 3T3 fibroblastů. Pozitivní (antracen) a negativní (SDS) kontrola. Vyhodnocení pomocí MTT metody v 3 opakováních n = 3. Koncentrace látek: antracen (1 až 30 pg/ml), SDS (1 až 15 pg/ml), kontrola bez aditiv (100%).
-6CZ 304267 B6
Obr. 6 znázorňuje výsledky testů vlivu UVA (315 až 380 nm) na buněčnou viabilitu 3T3 fibroblastů. Vyhodnocení pomocí MTT metody v pěti opakováních n = 5. Koncentrace fotoreaktivního derivátu (Mw = 34 kDa, DS = 20 %) =1,3, 30, 100, 500, 1000, 5000 pg/ml, kontrola bez derivátu (100%).
Obr. 7 znázorňuje enzymatickou degradaci fotokroslinkovariých derivátů kyseliny hyaluronové vztáhnutou (Mw = 34 kDa, DS = 20 %) na 1 mg vzorku a vyjádřenou prostřednictvím ekvivalentů hemiacetalu glukózy.
Příklady provedení vynálezu
DS byl stanoven z NMR (nukleární magnetická rezonance) a vypočten podle následujícího vztahu: DS = stupeň substituce = 100% * molární množství navázaného substituentu / molámí množství všech dimerů polysacharidů. Kalkulace je ze vzájemného poměru hodnot integrálů signálů dvou diastereotropních vodíků v poloze 6 glukosaminové podjednotky charakteristických pro danou modifikaci oproti integrálu N-acetylové skupiny. TEMPO radikál je 2,2,6,6-tetramethylpiperidinyloxylový radikál.
NMR spektra vzorků byla změřena na přístroji BRUKER AVANCE 500MHz v D2O anebo CDCI3. Chemické posuny byly kalibrovány vůči vnitřnímu standardu deuterované sodné soli 3-trimethylsilylpropanové kyseliny (TSPA). Údaje byly zpracovány pomocí softwaru Bruker TOPSPIN 1.2 nebo software Spinworks 3.1.7.
Zde používaný výraz ekvivalent (ekv) se vztahuje k dimeru kyseliny hyaluronové, není-li uvedeno jinak. Procenta se uvádějí jako hmotnostní procenta, pokud není uvedeno jinak.
Molekulová hmotnost výchozího hyaluronanu (zdroj: Contipro Biotech s.r.o., Dolní Dobrouč, ČR) byla stanovena metodou SEC-MALLS.
FT-IR spektra byla změřena v rozsahu 4000 až 400 cm 1 v KBr tabletách anebo ve formě tenkého filmu na spektrometrii Nicolet 6700 FTIR.
UV-VIS spektra byla změřena na přístroji Shimadzu UV-2401PC v rozsahu 200 až 800 nm a zpracována softwarem UV Probe verze 2.00.
Povrchová morfologie lyofilizovaných vzorků byla zkoumána skenovacím elektronovým mikroskopem Tescan VEGA II LSU. Vzorky byly měřeny při 20 °C a vyhodnoceny softwarem VegaTC 3.5.2.1 (10 kV, pracovní vzdálenost 3.4 mm, zvětšení 1000 až 20 kx).
Fotokroslink byl uskutečněn v UV Crosslinkeru CL-1000M (302 nm, 6,75 mW/cm2) podle metod A-C.
Příklad 1. Oxidace kyseliny hyaluronové s DMP
Připraví se 2% roztok kyselé formy kyseliny hyaluronové (2,0 g, 5,29 mmol, Mw = 270 kDa) v suchém DMSO. K výslednému roztoku se přidá 1,91 g, 4,49 mmol) DMP a směs se míchá po dobu 5 h. Následně se přidá EtOH (3 ml). Produkt se ultrafiltruje a lyofilizuje.
-7CZ 304267 B6
Schéma 4: Oxidace kyseliny hyaluronové Dess-Martin periodinanem.
DS = 20 %, Mw = 34 'HNMR(D2O)
HSQC (D2O) krospík FT-1R (KBr) kDa, izolovaný výtěžek 91 % δ 5,26 (s, 1H, polymer-CH(OH)2) ppm - geminální diol (hydratovaný aldehyd) δ 5,26 ppm (' H) - 90 ppm (l3C) polymer-CH(OH)2 1740 cm1 -CH=O
Příklad 2. Oxidace kyseliny hyaluronové pomocí Tempo/NaOCl
Připraví se 2% (aq) roztok kyseliny hyaluronové (5,0 g, 12,50 mmol, Mw = 950 kDa). Přidá se (642,5 mg, 6,25 mmol) NaBr a (9,71 g, 27,12 mmol) Na2HPO4.12H2O. Reakční směs se míchá 15 min. při laboratorní teplotě. Následně se ochladí na 5 °C. Následně se přidá (26,7 mg, 0,13 mmol) 4-acetamido-TEMPO a (1,47 ml, 6,25 mmol) roztoku NaClO. Reakční směs se míchá 2 h při 5 °C. Následně se přidá EtOH (7,29 ml, 125,0 mmol). Produkt se ultrafiltruje a lyofilizuje.
Schéma 5: Oxidace kyseliny hyaluronové s Tempo radikálem v přítomnosti NaClO.
DS = 8 %, Mw = 288 kDa, izolovaný výtěžek 82 % 'HNMR (D2O) δ 5,26 (s, 1H, poiymer-CH(OH)2) ppm
HSQC (D2O) krospík δ 5,26 ppm ('H) - 90 ppm (13C) polymer-CH(OH)2 FT-IR (KBr) 1740 cnT1 -CH=O
Příklad 3. Syntéza l-(2-aminoethyl)pyridin-2(lH)-onu (AEP). N-alkylace pyridin-2(lH)-onu s 2-(Boc-amino)ethylbromidem. V
V 3-hrdlé baňce opatřené míchadlem, chladičem a balónkem s inertním plynem se rozpustí (100,0 mg, 1,051 mmol) pyridin-2(lH)-onu v 2 ml EtOH (suchý). K roztoku se přidá KOH (66,1 mg, 1,182 mmol) a reakční směs se nechá míchat 30 min. Následně se přidá (313,3 mg, 1,398 mmol) 2-(boc-amino)ethylbromidu. Reakční směs se refluxuje po dobu 5 h. Rozpouštědlo se odpaří na vakuové rotační odparce. Odparek se rozpustí v 10 ml CHCf. K roztoku se přidá 10 ml 25% roztoku NH4OH. Následně se organická fáze promyje (2x5ml) H2O a (lx5ml) nasyceným roztokem NaCl. Suší se nad MgSO4, fdtruje, a rozpouštědlo se odpaří na vakuové rotační odparce. Produkt se izoluje pomocí kolonové chromatografie na Si-gelu s použitím gradientové eluce (MeOH, CHCf).
-8CZ 304267 B6
o
H
Br 'NH-Boc
EtOH, KC)H reflux, N 5h
Boc
Schéma 6: Alky láce pyridin-2(17/)-onu.
N-alkyl produkt: terc-butyl 2%2-oxopyridin-l (2//)-yl)ethylkarbamát, Ci2H]8N2O3, Mw== 238,283 g/mol, bezbarvé krystaly, Rt. (TB-16-F2) = 0,70 (CHC13 : MeOH/9 : 1), izolovaný výtěžek = 41 %. 'HNMR (500 MHz, CDC13): δ = 7.31 (ddd, 7== 9,0; 6,6; 2,1 Hz, IH), 7,24 - 7,26 (m; IH); 6,54 (d;7=9,0 Hz; IH); 6,16 (t; 7= 6,6 Hz; IH); 5,13 (bs; IH); ,07 (t;7=6,0 Hz; 2H); 3,42 (q, J = 6,0 Hz; 2H); 1,39 (s; 9H) ppm '5
O-alkyl produkt: řerc-butyl 2-(pyridin-2-yloxy)ethylkarbamát; Ci2Hi8N2O3; Mw = 238,283 g/mol; bezbarvý viskózní olej; Rt. = 0,80 (CHC13 : MeOH/9 : 1); izolovaný výtěžek == 5 %;
HNMR (500 MHz; CDC13): δ = 8,12 (dd;7=4,9; 1,6 Hz; IH); 7,55 -7,58 (m; IH); 6,85 (ddd; 7= 5,9; 5,1; 0,7 Hz; IH); 6,72 (t; J= 8,4 Hz; 1H); 4,95 (bs; 1H); 4,36 (t; 7= 5,2 Hz; 2H); 3,45 (q;
7= 5,2 Hz; 2H); 1,44 (s; 9H) ppm nC NMR (125 MHz; CDC13): δ = 163,5; 155,6; 146,9; 138,7; 116,9; 110,9; 81,1; 65,0; 40,2; 27,8 (3C) ppm
Příklad 4. Deprotekce fórc-butyl 2-(2-oxopyridin-l(2H)-yl)ethylkarbamátu
Boc-amin (43,0 mg, 0,180 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (300 μΐ) pod inertní atmosférou N2. Přidá se (275 μΐ, 3,6 mmol) TFA a reakční směs se míchá 2 h při laboratorní teplotě. Přebytek trifluoroctové kyseliny (t.v. = 72,4 °C) a dichlormethan se odpaří na vakuové rotační odparce a odparek se neutralizuje nasyceným roztokem NaHCO3. K vodnému roztoku se přidají (2 ml) CHC13. Extrakt se promyje (lx2ml) H2O, (lx2ml) nasyceným roztokem NaCl a suší nad MgSO4. Reakční směs se filtruje a odpaří na vakuové rotační odparce.
NH
Boc
TFA:DCM
1:1
2h, r.t.
NH
Schéma 7: Deprotekce terc-butyl 2-(2-oxopyridin-l(2H)-yl)ethylkarbamátu.
l-(2-aminoethyl)pyridin-2(l//)-on, C7Hl0N2O, Mw = 138,167 g/mol, nažloutlá viskózní kapalina; Rj. = 0,18 (CHC13: MeOH/ 1:1); izolovaný výtěžek = 80 %,
-9CZ 304267 B6 ’Η NMR (500 MHz; D2O): δ = 7,65 - 7,68 (m; 2H); 6,66 (d; J= 9,5; 1H); 6,72 (dt; J= 6,8; 1,2
Hz; 1H); 4,09 (t; J= 6,1 Hz; 2H); 2,99 (t; J= 6,1 Hz; 2H) ppm 13CNMR(125 MHz; D2O): δ = 167,1; 145,2; 142,2; 122,0; 112,2; 55,1; 42,4 ppm
Příklad 5. Reduktivní aminace s použitím 2 ekv. AEP. Zavedení pyridonového skeletu do biopolymeru
Oxidovaná forma hyaluronanu (100,0 mg, 0,265 mmol, DS = 20 %, Mw = 34,4 kDa) se rozpustí v 10 ml dest. vody (1% roztok). K roztoku se přidá 14,6 mg, 0,106 mmol, 2 ekv.) AEP. Reakční směs se míchá 2 h. Následně se přidá (26,5 mg, 0,425 mmol) NaBH3CN a reakční směs se míchá dalších 12 h. Výsledný roztok se dialyzuje a lyofilizuje.
Schéma 8: Reduktivní aminace - vázání pyridonového skeletu do struktury kyseliny hyaluronové.
DS = 16 %; Mw = 34 kDa; izolovaný výtěžek 65 % ]HNMR(D2O+NaOD) δ 2,78 (bs; 1H; polymer-H6a); 2,99 (bs; 1H; polymer-H6b); 2,94 3,00 (m; 2H; -NHCH2-); 4,13 - 4,17 (m; 2H; -NCH2-); 6,58 (bs; 1H; Hhetar); 6,66 (bs; 1H; Hhetar); 7,64 - 7,70 (m; 2H; Hhetar) ppm,
H-H COSY (D2O+NaOD) krospík δ 2,78 - 2,99; 3,00 - 4,16; 6,58 - 7,65; 6,66 - 7,69 ppm HSQC (D2O+NaOD) krospík δ 2,78 ('H) - 49,0 (l3C); 2,99 (lH) - 49,0 (13C); 3,00 (’H) 47,4 (i3C); 4,16 ('H) - 50,0 (13C); 6,58 (*H) - 110,2 (13C); 6,66 (’Η) - 118,1 (13C); 7,69 (’H) - 136,4 (l3C); 7,65 (’H) — 145,0 (13C) ppm
DOSY NMR (D2O+NaOD) log D (2,03 ppm; Me-CO-NH-polymer) ~ -10,45 m2/s log D (2,78 ppm; polymer-H6a) —10,45 m2/s log D (2,99 ppm; polymer-H6b) —10,45 m2/s log D (3,00 ppm; -NHCH2-) —10,45 m2/s log D (4,16 ppm; -NCH2-) —10,45 m2/s log D (6,58 ppm; Hhetar) ~ -10,45 m2/s log D (7,65 ppm; Hhetar) —10,45 m2/s log D (7,65 - 7,69 ppm; Hhetar) ~-10,45 m2/s log D (4,72 ppm; H2O) —8,6 m2/s
FT-1R (KBr) 1654 cm 1 Nhetar-C=O
UV/vis (0,005 %; H2O) λπκιχ = 299 nm; n—»K*Nhetar-C=O
Příklad 6. Reduktivní aminace s použitím 1 ekv. AEP.
- 10CZ 304267 B6
Oxidovaná forma hyaluronanu (100,0 mg, 0,265 mmol, DS = 8 %, Mw = 288 kDa) se rozpustí v 10 ml dest. vody (1% roztok). K. roztoku se přidá (3,1 mg, 0,022 mmol, 1 ekv.) AEP. Reakční směs se míchá 2 h. Následně se přidá (26,5 mg, 0,425 mmol) NaBHjCN a reakční směs se míchá dalších 12 h. Výsledný roztok se dialyzuje a lyofilizuje.
DS = 3 %, Mw = 229 kDa, izolovaný výtěžek 95 % (stanoveno z NMR, podrobně příklad 6)
Příklad 7. Reduktivní aminace s použitím 2 ekv. AEP a 2% (aq) roztok.
Oxidovaná forma hyaluronanu (100,0 mg, 0,265 mmol, DS = 20 %, Mw = 34,4 kDa) se rozpustí v 5 ml dest. vody (2% roztok). K roztoku se přidá (14,6 mg, 0,106 mmol, 2 ekv.) AEP. Reakční směs se míchá 2 h. Následně se přidá (26,5 mg, 0,425 mmol) NaBH3CN a reakční směs se míchá dalších 12 h. Výsledný roztok se dialyzuje a lyofilizuje.
DS = 20 %, Mw = 34 kDa, izolovaný výtěžek 74 % (stanoveno z NMR, podrobně příklad 6)
Příklad 8. Reduktivní aminace s použitím 1,5 ekv. AEP, přídavek 1 ekv. NaHCO3 a 2% (aq) roztok.
Oxidovaná forma hyaluronanu (100,0 mg, 0,265 mmol, DS = 20 %, Mw = 34,4 kDa) se rozpustí v 5 ml dest. vody (2% roztok). K roztoku se přidá (11,0 mg, 0,080 mmol, 1,5 ekv.) AEP a (22,2 mg, 0,265 mmol) NaHCO3. Reakční směs se míchá 2 h. Následně se přidá (26,5 mg, 0,425 mmol) NaBH3CN a reakční směs se míchá dalších 12 h. Výsledný roztok se dialyzuje a lyofilizuje.
DS = 17 %, Mw = 31 kDa, izolovaný výtěžek 79 % (stanoveno z NMR, podrobně příklad 6)
Příklad 9. Fotochemické síťování fotoreaktivních derivátů kyseliny hyaluronové - metoda A
Ozařovaný materiál je v podobě tenkého filmu, který se připravil odpařováním 5% (aq) roztoku fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové (DS = 18 %, Mw = 25 kDa). Roztok se napipetoval do Petriho misek a v teplovzdušné sušárně odpařoval při 40 °C po dobu 12 h. Připravený tenký film se položil na aluminiovou fólii v Petriho misce a ozařoval po dobu 1 h (E = 24300 mJ/cm2). Po expozici materiálu se testovala změna jeho fyzikálních vlastností (rozpustnost a stabilita) oproti neozařovanému vzorku. Analýza probíhala v destilované vodě a PBS (pH = 7) při 25 °C. Nerozpuštěný materiál byl odfiltrován a lyofilizován za účelem SEM analýzy. Filtrát byl odpařen a analyzován pomocí NMR. Výsledky testů a NMR analýzy extraktů exponovaného materiálu jsou uvedeny v tabulce 1. Obrazová analýza je uvedena na obrázku 1.
Tabulka 1
Vzorek DS Mw E rozpustnost/stabilita gelace/bobtnání NMR extrakt HA/PEO
čas [h]
[%] fkDal |mJ.cm’2] 12 24 36 48
TB-40-L 18 25 24300 -/+ -/+ -/+ -/+ +/+ -/-
TB-40-N 18 25 24300 -/+ -/+ -/+ -/- +/+ -/+
TB-40-T 18 25 24300 -/+ -/+ -/+ -/+ +/+ -/-
TB-39-L 20 15 24300 -/+ -/+ -/+ -/+ +/+ -/-
TB-31-N 20 34 24300 -/+ -/+ -/- -/- +/+ -/+
TB-23-L 3 229 24300 -/+ -/+ -/+ -/+ +/+ -/-
- 11 CZ 304267 B6
Výsledky analýzy fotokroslinkovaných derivátů kyseliny hyaluronové v H2O a PBS (pH = 7,4).
L - lyofilizovaná forma, N - nanovlákenná vrstva, T - tenký film. + znamená pozitivní výsledek a - znamená negativní výsledek.
Příklad 10. Fotochemické síťování fotoreaktivních derivátů kyseliny hyaluronové - metoda B
Ozařovaný materiál je v podobě lyofilizátu, který se připravil lyofilizací 5% (aq) roztoku fotoreaktivního derivátu kyseliny hyaluronové (DS = 18 %, Mw = 25 kDa). Tenká vrstva o hloubce (cca 0,5 až 1,0 mm) a rozměrech (2x2 cm) lyofilizátu se umístila na Al fólii v Petriho misce. Lyofilizát se ozařoval po dobu 1 h (E = 24300 mJ/cm2). Po expozici materiálu se testovala změna jeho fyzikálních vlastností (rozpustnost a stabilita) oproti neozařovanému vzorku. Analýza probíhala v destilované vodě a fosfátovém pufu (PBS z angl. phosphate buffered šalině, pH = 7) při 25 °C. Nerozpuštěný materiál byl odfiltrován a lyofilizován za účelem SEM (skenovací elektronový mikroskop) analýzy. Filtrát byl odpařen a analyzován pomocí NMR. Výsledky testů a NMR analýzy extraktů exponovaného materiálu jsou uvedeny v tabulce 1. Obrazová analýza je uvedena na obrázku 1.
Příklad 11. Fotochemické síťování fotoreaktivních derivátů kyseliny hyaluronové - metoda C
Ozařovaný materiál je v podobě nanovlákenné vrstvy o průměrné plošné hmotnosti 0,3 mg/cm2. Nanovlákenná vrstva se připravila metodou elektrostatického zvlákňování na přístroji 4Spin ve společnosti Contipro Biotech s.r.o. Koncentrace zvlákněného vodného roztoku byla 10 % hmotn.. Vzájemný hmotnostní poměr fotoreaktivního polymeru kyseliny hyaluronové (DS = 18 %, Mw = 25 kDa) a nosného polyethylenoxidu (Mw = 600 kDa) byl (80/20). Nanovrstvy polypropylenové podkladové textilie o rozměrech (2x2 cm) se umístily na aluminiovou fólii v Petriho misce. Materiál se ozařoval po dobu 1 h (E = 24300 mJ/cm2). Po expozici materiálu se testovala změna jeho fyzikálních vlastností (rozpustnost a stabilita) oproti neozařovanému vzorku. Analýza probíhala v destilované vodě a PBS (pH = 7) při 25 °C. Nerozpuštěný materiál byl odfiltrován a lyofilizován za účelem SEM analýzy. Filtrát byl odpařen a analyzován pomocí NMR. Výsledky testů a NMR analýzy extraktů exponovaného materiálu jsou uvedeny v tabulce 1. Obrazová analýza je uvedena v příloze (obrázky 1, 2, 3).
Příklad 12. Testy buněčné viability fotoreaktivních derivátů
Testovaná látka (DS = 18 %, Mw = 25 kDa) byla rozpuštěna v kompletním 3T3 médiu. Roztok byl filtrovaný přes 0,22 pm filtr. Finální testovací koncentrace roztoku byly 100, 500, 1000 pg/ml. Do 96—jamkových panelů byly nasazeny 3T3 buňky o hustotě 3 000 buněk na jamku. Před ovlivněním byly buňky kultivovány po dobu 24 hodin v kompletním médiu. Buněčná viabilita se měřila pomocí 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-difenyl tetrazolium bromidu (MTT) metody v intervalech 0, 24, 48, 72 hodin. V této metodě je MTT redukován živými buňkami na fialový ve vodě nerozpustný formazan, který je následně spektrofotometricky stanoven.
K 200 pl média bylo přidáno 20 pl zásobního roztoku MTT (5 mg/ml). Inkubace proběhla při 37 °C v termostatu po dobu 2,5 hodin. Následně byl odsán roztok nad buňkami a přidán solubilizační roztok o objemu 220 pl. Optická hustota roztoku byla měřena pomocí Microplate reader VERSAmax při 570 nm (690 nm pozadí). Celý experiment byl doplněn sadou neovlivnitelných kontrol a slepých vzorků. Ze změřených dat optické hustoty bylo vypočítáno procentuální vyjádření vztahující se ke kontrole v čase TO hodin (poměr optické hustoty ovlivnitelného vzorku k optické hustotě neovlivnitelné kontroly TO, násobený 100) a standardní odchylka průměru (SEM). Výsledky testu sou graficky zpracovány v příloze (obrázek 4)
- 12CZ 304267 B6
Příklad 13. Testy fototoxicity fotoreaktivních derivátů
Do 96-jamkových panelů byly nasazeny 3T3 buňky o hustotě 10 000 buněk na jamku. Před ovlivněním byly buňky nejdříve kultivovány po dobu 24 hodin v kompletním médiu. Následně se buňky omyly PBS (pH = 7,00) a 1 hodinu inkubovaly s testovanými látkami rozpuštěnými v PBS (testovaná látka TB-13: DS = 20 %, Mw = 34kDa, 1, 3, 30, 100, 500, 1000, 5000 pg/ml; fototoxický antracen-1, 3, 30 pg/ml; nefototoxický SDS-1, 3, 15 pg/ml). Buňky byly ozářeny dávkou 0,1 J/cm2 UVA (315 až 400 nm) pomocí lampy (Oriel Instruments) a její výkon byl stanoven pomocí fotometru PMA 2100 (Solar light Co.). 10 minut po expozici byl od buněk odsán supernatant a bylo přidáno kompletní médium. Buněčná viabilita se vyhodnocovala spektrofotometricky pomocí MTT metody 24 hodin po ozáření. Výsledky testu jsou graficky zpracovány v příloze (obrázek 5 a 6).
Příklad 14. Testy biodegradability fotokroslinkovaných derivátů
Fotokroslinkované deriváty kyseliny hyaluronové: forma lyofilizátů m (L) = 16,3 mg a forma nanovrstvy: m (N) = 9,0 mg byly připraveny za sterilních podmínek, převrstveny 2 ml PBS (pH =7,38) a ponechány k nabobtnání po dobu 24 h. Ke každému vzorku bylo přidáno 200 U BTH (BTH = bovinní testikulámí hyaluronidáza, EC 3.2.1.35) a vzorky se inkubovaly po dobu 43 h při 37 °C. V časových intervalech 0, 4, 8, 19 a 43 h bylo z každého vzorku odebráno 100 pl objemu roztoku a do finální analýzy byly ponechány při -20 °C. Současně byly inkubovány kontroly (PBS + BTH a samotné deriváty v PBS). Absorbance kontroly PBS+BTH byla odečítána jako pozadí 1. Jako pozadí 2 byla odečítána absorbance pufru s derivátem po nabobtnání (čas T = 0). Současně byl inkubován i vzorek derivátu pouze v čistém PBS, aby se touto cestou zjistilo, zda vzorek podléhá spontánní degradaci. Volně redukující konce byly stanoveny reakcí Somogyiho a Nelsonovým činidlem následujícím postupem: 50 pl vzorku bylo smícháno se stejným objemem čerstvě připraveného Somogyiho činidla. Směs byla po promíchání inkubována v termobloku 15 min. při 100 °C. Po ochlazení bylo přidáno 100 pl Nelsonova činidla, vzorky byly promíchány, odstředěny a byla zjištěna jejich absorbance při 540 nm. Po odečtení pozadí byly z kalibračn í křivky zjištěny hodnoty ekvivalentů glukózy (analogie volných redukujících konců). Výsledky testů jsou graficky zpracovány v příloze (obrázek 7).

Claims (13)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové podle vzorce I, kde R znamená vodík anebo kationt alkalického kovu
  2. 2. Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové podle nároku 1, kde kyselina hyaluronová nebo její anorganická sůl má molekulovou hmotnost v rozsahu 1.103 4 až 5.106 g.mof1.
  3. 3. Způsob přípravy fotoreaktivního derivátu definovaného podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se nejprve připraví derivát kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu
    - 13 CZ 304267 B6 v poloze 6 glukosaminového cyklu a následně se nechá reagovat s aminem nesoucím pyridonový skelet v přítomnosti redukčního činidla za vzniku fotoreaktivního derivátu.
  4. 4. Způsob přípravy podle nároku 3, vyznačující se tím, že k selektivní přípravě aldehydu v poloze 6 glukosaminové části kyseliny hyaluronové se použije oxidační činidlo DessMartin periodinan v aprotickém prostředí nebo TEMPO radikál s NaCIO ve vodném prostředí.
  5. 5. Způsob přípravy fotoreaktivního derivátu podle nároku 3 nebo 4, vyznačující se tím, že se derivát kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu nechá reagovat s aminem nesoucím pyridonový skelet za vzniku iminu, který se přímo v jednom kroku redukuje v přítomnosti redukčního činidla NaBH3CN ve vodném prostředí nebo v systému voda-organické rozpouštědlo na sekundární amin.
  6. 6. Způsob přípravy fotoreaktivního derivátu podle kteréhokoli z nároků 3 až 5, vyznačující se tím, že aminem nesoucím pyridonový skelet je l-(2-aminoethyl)pyridin-2(177)-on.
  7. 7. Způsob přípravy fotoreaktivního derivátu podle nároků 3 až 6, vyznačující se tím, že se stupeň substituce derivátu kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu pohybuje v rozsahu od 1 až 40 %, a stupeň substituce sekundárního aminu nesoucího pyridonový skelet v rozsahu od 1 až 40 %, s výhodou 15 až 20 %.
  8. 8. Způsob přípravy fotoreaktivního derivátu podle kteréhokoli z nároků 3 až 7, vyznačující se tím, že se připraví 1 až 2 % hmotn. vodný roztok derivátu kyseliny hyaluronové v podobě aldehydu, přidá se 1 až 2 ekv. aminu nesoucího pyridonový skelet a následně se přidá 1 až 3,5 ekv. redukčního činidla NaBH3CN, za vzniku fotoreaktivního derivátu podle vzorce I.
  9. 9. Způsob přípravy 3D síťovaných derivátů kyseliny hyaluronové, vyznačující se tím, že se na fotoreaktivní derivát podle nároku 1 nebo 2 působí elektromagnetickým zářením v rozsahu vlnových délek 280 až 315 nm.
  10. 10. Způsob přípravy podle nároku 9, vyznačující se tím, že fotoreaktivní derivát podle vzorce I je ve formě prášku, lyofílizátu, tenkého filmu, nanovlákenné, či mikrovlákenné struktury.
  11. 11. 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové podle vzorce II:
  12. 12. Použití 3D síťovaného derivátu definovaného v nároku 11 pro tkáňové inženýrství, regenerativní medicínu, zdravotnické prostředky nebo kosmetiku.
  13. 13. Použití 3D síťovaného derivátu definovaného v nároku 11 jako skafoldy, výplně, nosiče léčiv, opěrné nano- či mikro-struktury pro růst buněk, zejména kmenových buněk nebo diferencovaných buněk typu chondrocytů, fibroblastů, neurocytů apod., pro přípravu nano- či mikrostruktur, tkanin, pletenin pro výrobu biodegradabilních povrchových krytů ran s řízeným uvolňováním biologicky aktivních látek, pro výrobu pleťových masek nebo jako přísada do opalovacích krémů s preventivním nebo regeneračním účinkem.
CZ2012-844A 2012-11-27 2012-11-27 Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití CZ2012844A3 (cs)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2012-844A CZ2012844A3 (cs) 2012-11-27 2012-11-27 Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
KR1020157015546A KR20150082619A (ko) 2012-11-27 2013-11-26 히알루론산의 광반응성 유도체, 이의 제조 방법, 히알루론산의 3ｄ-가교된 유도체, 이의 제조 방법 및 용도
PCT/CZ2013/000155 WO2014082608A1 (en) 2012-11-27 2013-11-26 Photoreactive derivative of hyaluronic acid, method of preparation thereof, 3d-crosslinked derivative of hyaluronic acid, method of preparation and use thereof
US14/647,185 US20150291706A1 (en) 2012-11-27 2013-11-26 Photoreactive Derivative of Hyaluronic Acid, Method of Preparation Thereof, 3D.Crosslinked Derivative of Hyaluronic Acid, Method of Preparation and Use Thereof
RU2015125077A RU2015125077A (ru) 2012-11-27 2013-11-26 Фотореактивное производное гиалуроновой кислоты, способ его получения, 3d-сшитое производное гиалуроновой кислоты, способ его получения и применение
BR112015011896A BR112015011896A2 (pt) 2012-11-27 2013-11-26 derivado fotorreativo de ácido hialurônico, método de preparação do derivado fotorreativo, método de preparação de derivados 3d reticulados de ácido hialurônico, derivado 3d reticulado de ácido hialurônico e uso do derivado 3d reticulado
JP2015543315A JP2016506422A (ja) 2012-11-27 2013-11-26 ヒアルロン酸の光反応性誘導体，その調製方法，ヒアルロン酸の３ｄ架橋誘導体，その調製方法及び使用
EP13814822.6A EP2925792A1 (en) 2012-11-27 2013-11-26 Photoreactive derivative of hyaluronic acid, method of preparation thereof, 3d-crosslinked derivative of hyaluronic acid, method of preparation and use thereof
ARP130104358A AR095455A1 (es) 2012-11-27 2013-11-27 Derivado fotorreactivo del ácido hialurónico, método para su preparación, derivado del ácido hialurónico con entrecruzamiento tridimensional, método para su preparación y sus usos

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2012-844A CZ2012844A3 (cs) 2012-11-27 2012-11-27 Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ304267B6 true CZ304267B6 (cs) 2014-02-05
CZ2012844A3 CZ2012844A3 (cs) 2014-02-05

Family

ID=49886553

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2012-844A CZ2012844A3 (cs) 2012-11-27 2012-11-27 Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20150291706A1 (cs)
EP (1) EP2925792A1 (cs)
JP (1) JP2016506422A (cs)
KR (1) KR20150082619A (cs)
AR (1) AR095455A1 (cs)
BR (1) BR112015011896A2 (cs)
CZ (1) CZ2012844A3 (cs)
RU (1) RU2015125077A (cs)
WO (1) WO2014082608A1 (cs)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ306479B6 (cs) * 2015-06-15 2017-02-08 Contipro A.S. Způsob síťování polysacharidů s využitím fotolabilních chránicích skupin

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ304654B6 (cs) 2012-11-27 2014-08-20 Contipro Biotech S.R.O. Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití
CZ2013913A3 (cs) * 2013-11-21 2015-06-03 Contipro Biotech S.R.O. Objemný nanovlákenný materiál na bázi kyseliny hyaluronové, jejích solí nebo jejich derivátů, způsob jeho přípravy, způsob jeho modifikace, modifikovaný nanovlákenný materiál, nanovlákenný útvar a jejich použití
CZ304977B6 (cs) * 2013-11-21 2015-02-25 Contipro Biotech S.R.O. Nanovlákna obsahující fototvrditelný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo její soli, fototvrzená nanovlákna, způsob jejich syntézy, přípravek obsahující fototvrzená nanovlákna a jejich použití
CZ2014150A3 (cs) 2014-03-11 2015-05-20 Contipro Biotech S.R.O. Konjugáty oligomeru kyseliny hyaluronové nebo její soli, způsob jejich přípravy a použití
CZ2014451A3 (cs) 2014-06-30 2016-01-13 Contipro Pharma A.S. Protinádorová kompozice na bázi kyseliny hyaluronové a anorganických nanočástic, způsob její přípravy a použití
CZ309295B6 (cs) 2015-03-09 2022-08-10 Contipro A.S. Samonosný, biodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
CZ306662B6 (cs) 2015-06-26 2017-04-26 Contipro A.S. Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití
CZ308106B6 (cs) 2016-06-27 2020-01-08 Contipro A.S. Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití
KR102499267B1 (ko) * 2020-06-02 2023-02-14 포항공과대학교 산학협력단 실리콘 하이드로젤 콘택트렌즈 표면개질 및 응용
WO2022063312A1 (zh) * 2020-09-28 2022-03-31 吾奇生物医疗科技(江苏)有限公司 透明质酸水凝胶和透明质酸膜及其制备方法和应用
CN114316085B (zh) * 2021-12-22 2023-06-02 北京佗林医药科技有限公司 一种顺式透明质酸六糖及其制备方法和用途
WO2024038783A1 (ja) * 2022-08-16 2024-02-22 株式会社高研 アルデヒド基付加環状分子を含むポリロタキサン及び該ポリロタキサンの製造方法、並びに、伸縮性を有する生体材料及び該生体材料の製造方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5763504A (en) * 1992-02-05 1998-06-09 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha(Seikagaku Corporation) Photcurable glycosaminoglycan derivatives, crosslinked glycosaminoglycans and method of production thereof
US6031017A (en) * 1995-11-15 2000-02-29 Seikagaku Corporation Photocured cross-linked-hyaluronic acid gel and method of preparation thereof
US20080025950A1 (en) * 2003-12-04 2008-01-31 Prestwich Glenn D Modified Macromolescules and Associated Methods of Synthesis and Use
CZ302503B6 (cs) * 2009-12-11 2011-06-22 Contipro C A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové oxidovaného v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd a zpusob jeho modifikace
WO2012027834A1 (en) * 2010-09-02 2012-03-08 Mcmaster University Hyaluronic acid-containing biopolymers
CZ2011241A3 (cs) * 2011-04-26 2012-11-07 Contipro Biotech S.R.O. Amfoterní materiál na bázi sítované kyseliny hyaluronové, zpusob jeho prípravy, materiály obsahující aktivní cinidla uzavrené v síti hyaluronanu, zpusob jejich prípravy a jejich použití

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0701704B1 (en) 1994-03-14 1999-12-15 Seikagaku Corporation Material to be worn on the eyeball
US5455349A (en) 1994-05-13 1995-10-03 Polaroid Corporation Vinylbenzyl thymine monomers
US6025444A (en) 1994-11-17 2000-02-15 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) Cinnamic acid derivative
EP0813546B1 (en) 1995-03-07 2002-07-17 Novartis AG Photochemically cross-linked polysaccharide derivatives as supports for the chromatographic separation of enantiomers
EP0763754B1 (en) 1995-09-13 2003-01-08 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) Photocured crosslinked-hyaluronic acid contact lens
DE60117502T2 (de) 2000-12-19 2006-08-24 Seikagaku Corp. Photohärtbare Derivate von Hyaluronsäure, Verfahren zu deren Herstellung, vernetztes und photogehärtetes Derivat der Hyaluronsäure und diese enthaltendes medizinisches Material
AU2002230102B9 (en) 2001-01-31 2008-05-01 Seikagaku Corporation Crosslinked polysaccharide sponge
US6946284B2 (en) 2001-11-16 2005-09-20 University Of Massachusetts Solubilizing cross-linked polymers with photolyase
US7550136B2 (en) 2002-12-20 2009-06-23 University Of Massachusetts Photo-reactive polymers and devices for use in hair treatments
WO2004081054A1 (ja) 2003-03-11 2004-09-23 Seikagaku Corporation 光架橋多糖組成物およびその製造方法
EP1905456A4 (en) 2005-07-06 2010-12-22 Seikagaku Kogyo Co Ltd PHARMACEUTICAL LIGHT-NETWORKED HYALURONIC DERIVATIVE GEL

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5763504A (en) * 1992-02-05 1998-06-09 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha(Seikagaku Corporation) Photcurable glycosaminoglycan derivatives, crosslinked glycosaminoglycans and method of production thereof
US6031017A (en) * 1995-11-15 2000-02-29 Seikagaku Corporation Photocured cross-linked-hyaluronic acid gel and method of preparation thereof
US20080025950A1 (en) * 2003-12-04 2008-01-31 Prestwich Glenn D Modified Macromolescules and Associated Methods of Synthesis and Use
CZ302503B6 (cs) * 2009-12-11 2011-06-22 Contipro C A.S. Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové oxidovaného v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd a zpusob jeho modifikace
WO2012027834A1 (en) * 2010-09-02 2012-03-08 Mcmaster University Hyaluronic acid-containing biopolymers
CZ2011241A3 (cs) * 2011-04-26 2012-11-07 Contipro Biotech S.R.O. Amfoterní materiál na bázi sítované kyseliny hyaluronové, zpusob jeho prípravy, materiály obsahující aktivní cinidla uzavrené v síti hyaluronanu, zpusob jejich prípravy a jejich použití

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Carole E. Schanté a kol.: Chemical modifications of hyaluronic acid for the synthesis of derivatives for broad range of biomedical applications, Carbohydrate Polymers 85 (2011), 469-489 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ306479B6 (cs) * 2015-06-15 2017-02-08 Contipro A.S. Způsob síťování polysacharidů s využitím fotolabilních chránicích skupin

Also Published As

Publication number Publication date
US20150291706A1 (en) 2015-10-15
WO2014082608A1 (en) 2014-06-05
JP2016506422A (ja) 2016-03-03
AR095455A1 (es) 2015-10-21
KR20150082619A (ko) 2015-07-15
EP2925792A1 (en) 2015-10-07
CZ2012844A3 (cs) 2014-02-05
RU2015125077A (ru) 2017-01-10
BR112015011896A2 (pt) 2017-07-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ304267B6 (cs) Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití
US5652347A (en) Method for making functionalized derivatives of hyaluronic acid
AU2007296939B9 (en) Hyaluronic acid derivatives obtained via &#34;click chemistry&#34; crosslinking
JP4791921B2 (ja) ヒアルロン酸アミドおよびそれらの誘導体、並びにそれらの製造法
EP3071602B1 (en) Nanofibers containing photocurable ester derivative of hyaluronic acid or its salt, photocured nanofibers, method of synthesis thereof, preparation containing photocured nanofibers and use thereof
AU2001291815B2 (en) Percarboxylated polysaccharides, and a process for their preparation
JP5818969B2 (ja) 架橋ヒアルロン酸ベースの両性材料，その調製法，活性剤を封入した材料，その調製法，及び前記材料の使用
CN100420486C (zh) 生物分解性聚合微胶粒组合物和药学组合物
KR20080073419A (ko) 의료용 히알루론산 유도체 마이크로비드 및 이의 제조 방법
Huerta-Angeles et al. Synthesis of photo-crosslinkable hyaluronan with tailored degree of substitution suitable for production of water resistant nanofibers
RU2713295C2 (ru) Способ сшивания полисахаридов при помощи фотоудаляемых защитных групп
US20100227836A1 (en) Parenteral administration of a glucosamine
CA3163069A1 (en) Hydrogel of mercapto-modified macromolecular compound, and preparation method therefor and use thereof
US10047172B2 (en) Single step functionalization and cross-linking of hyaluronic acid
Li et al. Synthesis, properties, and applications of a polyampholyte hydroxypropyl chitosan derivative with the phenylboronic acid functional group
CN111153952B (zh) N-叠氮基乙酰-d-甘露糖胺衍生物及其制备方法和在检测酯酶中的应用
JP2022529953A (ja) 官能化ヒアルロン酸の架橋ポリマーと、炎症状態の治療におけるその使用
Zhang Chemical Synthesis of Heparin Like Head to Tail Multimers

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20161127