CZ304977B6 - Nanovlákna obsahující fototvrditelný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo její soli, fototvrzená nanovlákna, způsob jejich syntézy, přípravek obsahující fototvrzená nanovlákna a jejich použití - Google Patents

Nanovlákna obsahující fototvrditelný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo její soli, fototvrzená nanovlákna, způsob jejich syntézy, přípravek obsahující fototvrzená nanovlákna a jejich použití Download PDF

Info

Publication number
CZ304977B6
CZ304977B6 CZ2013-914A CZ2013914A CZ304977B6 CZ 304977 B6 CZ304977 B6 CZ 304977B6 CZ 2013914 A CZ2013914 A CZ 2013914A CZ 304977 B6 CZ304977 B6 CZ 304977B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
hyaluronic acid
ppm
salt
reaction
nanofibres
Prior art date
Application number
CZ2013-914A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2013914A3 (cs
Inventor
Gloria Huerta-Angeles
Martin Bobek
Eva Příkopová
Jana Růžičková
Martina Moravcová
Martina Brandejsová
Vladimír Velebný
Original Assignee
Contipro Biotech S.R.O.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Contipro Biotech S.R.O. filed Critical Contipro Biotech S.R.O.
Priority to CZ2013-914A priority Critical patent/CZ2013914A3/cs
Priority to US15/038,078 priority patent/US20160312385A1/en
Priority to EP14827154.7A priority patent/EP3071602B1/en
Priority to KR1020167016462A priority patent/KR102366202B1/ko
Priority to PCT/CZ2014/000138 priority patent/WO2015074632A1/en
Priority to ES14827154.7T priority patent/ES2648311T3/es
Priority to BR112016011519A priority patent/BR112016011519A8/pt
Publication of CZ304977B6 publication Critical patent/CZ304977B6/cs
Publication of CZ2013914A3 publication Critical patent/CZ2013914A3/cs

Links

Classifications

    • D—TEXTILES; PAPER
    • D01—NATURAL OR MAN-MADE THREADS OR FIBRES; SPINNING
    • D01F—CHEMICAL FEATURES IN THE MANUFACTURE OF ARTIFICIAL FILAMENTS, THREADS, FIBRES, BRISTLES OR RIBBONS; APPARATUS SPECIALLY ADAPTED FOR THE MANUFACTURE OF CARBON FILAMENTS
    • D01F6/00—Monocomponent artificial filaments or the like of synthetic polymers; Manufacture thereof
    • D01F6/88—Monocomponent artificial filaments or the like of synthetic polymers; Manufacture thereof from mixtures of polycondensation products as major constituent with other polymers or low-molecular-weight compounds
    • D01F6/94—Monocomponent artificial filaments or the like of synthetic polymers; Manufacture thereof from mixtures of polycondensation products as major constituent with other polymers or low-molecular-weight compounds of other polycondensation products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/785—Polymers containing nitrogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/785—Polymers containing nitrogen
    • A61K31/787—Polymers containing nitrogen containing heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/795—Polymers containing sulfur
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/0208—Tissues; Wipes; Patches
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/0241—Containing particulates characterized by their shape and/or structure
    • A61K8/027—Fibers; Fibrils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/81—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds obtained by reactions involving only carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • A61K8/8129—Compositions of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by an alcohol, ether, aldehydo, ketonic, acetal or ketal radical; Compositions of hydrolysed polymers or esters of unsaturated alcohols with saturated carboxylic acids; Compositions of derivatives of such polymers, e.g. polyvinylmethylether
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/81—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds obtained by reactions involving only carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • A61K8/817—Compositions of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a single or double bond to nitrogen or by a heterocyclic ring containing nitrogen; Compositions or derivatives of such polymers, e.g. vinylimidazol, vinylcaprolactame, allylamines (Polyquaternium 6)
    • A61K8/8176—Homopolymers of N-vinyl-pyrrolidones. Compositions of derivatives of such polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/84—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds obtained by reactions otherwise than those involving only carbon-carbon unsaturated bonds
    • A61K8/86—Polyethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/91—Graft copolymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F251/00—Macromolecular compounds obtained by polymerising monomers on to polysaccharides or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/24—Crosslinking, e.g. vulcanising, of macromolecules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/28—Treatment by wave energy or particle radiation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J5/00—Manufacture of articles or shaped materials containing macromolecular substances
    • C08J5/005—Reinforced macromolecular compounds with nanosized materials, e.g. nanoparticles, nanofibres, nanotubes, nanowires, nanorods or nanolayered materials
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08K—Use of inorganic or non-macromolecular organic substances as compounding ingredients
    • C08K7/00—Use of ingredients characterised by shape
    • C08K7/02—Fibres or whiskers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L29/00—Compositions of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by an alcohol, ether, aldehydo, ketonic, acetal or ketal radical; Compositions of hydrolysed polymers of esters of unsaturated alcohols with saturated carboxylic acids; Compositions of derivatives of such polymers
    • C08L29/02—Homopolymers or copolymers of unsaturated alcohols
    • C08L29/04—Polyvinyl alcohol; Partially hydrolysed homopolymers or copolymers of esters of unsaturated alcohols with saturated carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L33/00—Compositions of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical, or of salts, anhydrides, esters, amides, imides or nitriles thereof; Compositions of derivatives of such polymers
    • C08L33/02—Homopolymers or copolymers of acids; Metal or ammonium salts thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L71/00—Compositions of polyethers obtained by reactions forming an ether link in the main chain; Compositions of derivatives of such polymers
    • C08L71/02—Polyalkylene oxides
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D01—NATURAL OR MAN-MADE THREADS OR FIBRES; SPINNING
    • D01D—MECHANICAL METHODS OR APPARATUS IN THE MANUFACTURE OF ARTIFICIAL FILAMENTS, THREADS, FIBRES, BRISTLES OR RIBBONS
    • D01D5/00—Formation of filaments, threads, or the like
    • D01D5/0007—Electro-spinning
    • D01D5/0015—Electro-spinning characterised by the initial state of the material
    • D01D5/003—Electro-spinning characterised by the initial state of the material the material being a polymer solution or dispersion
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D01—NATURAL OR MAN-MADE THREADS OR FIBRES; SPINNING
    • D01F—CHEMICAL FEATURES IN THE MANUFACTURE OF ARTIFICIAL FILAMENTS, THREADS, FIBRES, BRISTLES OR RIBBONS; APPARATUS SPECIALLY ADAPTED FOR THE MANUFACTURE OF CARBON FILAMENTS
    • D01F6/00—Monocomponent artificial filaments or the like of synthetic polymers; Manufacture thereof
    • D01F6/44—Monocomponent artificial filaments or the like of synthetic polymers; Manufacture thereof from mixtures of polymers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds as major constituent with other polymers or low-molecular-weight compounds
    • D01F6/50—Monocomponent artificial filaments or the like of synthetic polymers; Manufacture thereof from mixtures of polymers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds as major constituent with other polymers or low-molecular-weight compounds of polyalcohols, polyacetals or polyketals
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D01—NATURAL OR MAN-MADE THREADS OR FIBRES; SPINNING
    • D01F—CHEMICAL FEATURES IN THE MANUFACTURE OF ARTIFICIAL FILAMENTS, THREADS, FIBRES, BRISTLES OR RIBBONS; APPARATUS SPECIALLY ADAPTED FOR THE MANUFACTURE OF CARBON FILAMENTS
    • D01F6/00—Monocomponent artificial filaments or the like of synthetic polymers; Manufacture thereof
    • D01F6/44—Monocomponent artificial filaments or the like of synthetic polymers; Manufacture thereof from mixtures of polymers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds as major constituent with other polymers or low-molecular-weight compounds
    • D01F6/56—Monocomponent artificial filaments or the like of synthetic polymers; Manufacture thereof from mixtures of polymers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds as major constituent with other polymers or low-molecular-weight compounds of polymers of cyclic compounds with one carbon-to-carbon double bond in the side chain
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/41—Particular ingredients further characterized by their size
    • A61K2800/413—Nanosized, i.e. having sizes below 100 nm
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/59—Mixtures
    • A61K2800/594—Mixtures of polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/81—Preparation or application process involves irradiation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2329/00—Characterised by the use of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by an alcohol, ether, aldehydo, ketonic, acetal, or ketal radical; Hydrolysed polymers of esters of unsaturated alcohols with saturated carboxylic acids; Derivatives of such polymer
    • C08J2329/02—Homopolymers or copolymers of unsaturated alcohols
    • C08J2329/04—Polyvinyl alcohol; Partially hydrolysed homopolymers or copolymers of esters of unsaturated alcohols with saturated carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2339/00—Characterised by the use of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a single or double bond to nitrogen or by a heterocyclic ring containing nitrogen; Derivatives of such polymers
    • C08J2339/04—Homopolymers or copolymers of monomers containing heterocyclic rings having nitrogen as ring member
    • C08J2339/06—Homopolymers or copolymers of N-vinyl-pyrrolidones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2371/00—Characterised by the use of polyethers obtained by reactions forming an ether link in the main chain; Derivatives of such polymers
    • C08J2371/02—Polyalkylene oxides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2451/00—Characterised by the use of graft polymers in which the grafted component is obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds; Derivatives of such polymers
    • C08J2451/02—Characterised by the use of graft polymers in which the grafted component is obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds; Derivatives of such polymers grafted on to polysaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L2203/00—Applications
    • C08L2203/02—Applications for biomedical use
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L2205/00—Polymer mixtures characterised by other features
    • C08L2205/14—Polymer mixtures characterised by other features containing polymeric additives characterised by shape
    • C08L2205/16—Fibres; Fibrils
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D10—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBLASSES OF SECTION D, RELATING TO TEXTILES
    • D10B—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBLASSES OF SECTION D, RELATING TO TEXTILES
    • D10B2321/00—Fibres made from polymers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • D10B2321/08—Fibres made from polymers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds polymers of unsaturated carboxylic acids or unsaturated organic esters, e.g. polyacrylic esters, polyvinyl acetate
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D10—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBLASSES OF SECTION D, RELATING TO TEXTILES
    • D10B—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBLASSES OF SECTION D, RELATING TO TEXTILES
    • D10B2331/00—Fibres made from polymers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polycondensation products
    • D10B2331/06—Fibres made from polymers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polycondensation products polyethers
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D10—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBLASSES OF SECTION D, RELATING TO TEXTILES
    • D10B—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBLASSES OF SECTION D, RELATING TO TEXTILES
    • D10B2509/00—Medical; Hygiene
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D10—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBLASSES OF SECTION D, RELATING TO TEXTILES
    • D10B—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBLASSES OF SECTION D, RELATING TO TEXTILES
    • D10B2509/00—Medical; Hygiene
    • D10B2509/02—Bandages, dressings or absorbent pads
    • D10B2509/022—Wound dressings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Textile Engineering (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Mechanical Engineering (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Manufacturing & Machinery (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

Vynález se týká nanovláken obsahujících fototvrditelné esterové deriváty kyseliny hyaluronové nebo její soli, způsobu jejich přípravy, a fototvrzených přípravků vytvořených z nanovláken pomocí světelného záření a jejich použití.

Description

Nanovlákna obsahující fototvrditelný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo její soli, fototvrzená nanovlákna, způsob jejich syntézy, přípravek obsahující fototvrzená nanovlákna a jejich použití
Oblast techniky
Stávající vynález se týká nanovláken obsahujících fototvrditelný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo její soli, fototvrzených nanovláken a způsobů jejich syntézy a použití přípravku obsahujícího fototvrzená nanovlákna.
Dosavadní stav techniky
Hyaluronová kyselina (HA nebo hyaluronan, obrázek A) je lineární glykosaminoglykan sestávající ze střídajících se jednotek D-glukuronové kyseliny a /V-acetyl-D-glukosaminu. HA je neimunogenní, a proto má velký potenciál v medicíně. Bylo zjištěno, že HA, charakterizovaná vysokou molekulovou hmotností, je zvláště užitečná v různých klinických oborech, včetně hojení ran, oční chirurgie a ortopedie, díky svým viskózně-elastickým vlastnostem. HA je také potenciálně užitečná v různých nelékařských oborech včetně kosmetických aplikací.
Obrázek A. Hyaluronová kyselina (Hyaluronan nebo HA)
HA je ve vodě rozpustný polymer a tvoří vysoce viskózní roztoky. HA byla chemicky sesíťovaná (cross-linked) pomocí různých funkčních skupin, například, epoxy sloučenin, divinylsulfonu a podobně, s cílem prodloužit poločas rozpadu biopolymeru in vivo, jakož i pro přípravu materiálů pro lékařské použití ve formě filmů nebo hydrogelů. Hlavním problémem, který je třeba řešit pro lékařské a kosmetické aplikace materiálů z ní vyrobených, je úplné odstranění nezreagovaných chemických látek a/nebo katalyzátorů po reakci. Eliminace těchto složek je náročná z důvodu makromolekulámí konformace HA, nicméně je to velice důležité, protože pokud je podávána nebo implantována do živých těl, uvedené zbytkové chemikálie mohou vyvolat nežádoucí účinky, takže nejsou doporučovány pro praktické použití v oblasti biomedicíny.
V dříve uvedené zprávě, například US patent 7951936, která popisuje foto-sesíťovanou reaktivní kyselinu hyaluronovou, kde karboxylové funkční skupiny HA byly chemicky modifikované. Funkce používané pro foto-sesíťování mohou zahrnovat kyselinu skořicovou. Tyto aminoalkyl esterové deriváty byly navázány na polysacharid pomocí amidové vazby mezi aminovým zbytkem aminoalkylové skupiny a karboxylové skupiny HA. Taková modifikace karboxylu mění biokompatibilitu získaných látek, protože karboxylová skupina HA je známá jako rozpoznávací místo pro hyaluronidázu a HA receptory.
US patentová přihláška 2012289478 (Al) popisuje esterové deriváty kyseliny hyaluronové s hydroxy-skořicovou kyselinou používané jako ochranné prostředky v dermatologii. Syntéza takových esterů zahrnuje použití formamidu, který je velmi toxický a aktivace karboxylové skupiny derivátů hydroxy-skořicové kyseliny se provádí pomocí karbonyldiimidazolu (CDI). Získané vysoce viskózní roztoky nebo hydrogely nemohou být použity pro elektrostatické zvlákňování, protože CDI může způsobovat samo-sesíťování HA.
-1 CZ 304977 B6
Acylace HA byla uvedena v několika patentových dokumentech. Například, je katalyzována pomocí chloroformiátů v WO 2010/105582. Nicméně, použití tohoto činidla pro funkcionalizaci polysacharidů je obtížné vzhledem k počtu vedlejších reakcí v důsledku jejich vysoké reaktivity, jak je popsáno ve výzkumném článku (Wondraczek, a kol. Synthesis. Carbohydrate Polymers 2011, 83, (3), 1112-1118). Dále přeměna kyseliny hyaluronové na její kyselou formu snižuje výnosy polymeru a výrazně zvyšuje polydisperzitu. Je také nárokována nezbytnost bezvodého DMSO, který je velmi nákladný v průmyslovém měřítku. Kromě toho, jednou z nejdůležitějších nevýhod je vysoké množství 4-dimethyl-amínopyridinu (nebo DMAP) používaného pro reakční směs. Problém používání tohoto činidla vyplývá z jeho akutních letálních účinků (klasifikováno jako T+). Nicméně, činidlo je velmi běžně používáno pro acylaci jako činidlo pro přenos acylu. Použití DMAP pro acylaci hyaluronové kyseliny bylo nedávno publikováno (Smejkalová a kol. Carbohydrate Polymers, 87(2), 2012, 1460).
Příklady O-acylace v US patentu 7 041 310 zahrnují reakce využívající jednoho nebo více kyselých katalyzátorů, například, organické kyseliny, například kyselina chlorovodíková nebo kyselina sírová, organické kyseliny, například aromatická sulfonová kyselina a Lewisova kyseliny, jako je etherát fluoridu boritého a podobně, a reakce s organickými kyselinami využívající jednoho nebo více dehydratačních činidel, například, Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimid, 2-chlor-l-methyl pyridinium jodid a Ν,Ν'-karbonyl diimidazol nebo podobně. Nicméně kompozice zahrnuje komplex kyseliny hyaluronové nebo její soli a kvartémí amonnou sůl, která je obecně považována za toxickou.
Podobné reakční podmínky byly uvedeny v patentovém dokumentu W02005092929A1 a týkají se máselných esterů kyseliny hyaluronové, ve kterých hydroxylové skupiny hyaluronové kyseliny jsou částečně esterifíkovány s máselnými zbytky, charakterizovanými stupněm substituce rovným nebo menším než 0,1. Tyto estery s nízkým stupněm substituce jsou získány pomocí postupu prováděním v homogenní fázi za bezvodých podmínek, kde kyselina hyaluronová je použita ve formě kvartémí soli dusíku. Tyto podmínky se však obtížně dodržují ve vysokém provozním měřítku. US patent 20050119219A1 se týká esterových derivátů kyseliny hyaluronové a hydrogelů připravených fototvrzením. Hlavní nevýhoda syntézy je, že začíná z tetrabutylamonné soli kyseliny hyaluronové v bezvodých podmínkách, což je nákladný postup a výrazně degraduje polysacharidy.
US patent 8247546B2 popisuje deriváty kyselých polysacharidů, kde postup přípravy zahrnuje reakci v homogenní fázi při použití protického polárního rozpouštědla jako je formamid a anhydrid alkylkarboxylové kyseliny, v přítomnosti bazického katalyzátoru. Je zde několik nevýhod syntetické cesty, například použití formamidu, karcinogenního rozpouštědla, která vážně omezuje rozpětí reakce, jakož i použití modifikovaného polymeru ve zdravotnických zařízeních. Druhým omezením je použití vysokých teplot během reakce (95 °C), což degraduje polysacharidy. Podobné podmínky byly použity v US patentu 2012/0289478 AI. Byla popsána syntéza esterů kyseliny hyaluronové a skořicové, kávové nebo ferulové a použití materiálů pro síťování. Tato syntéza však zahrnuje opět použití formamidu pro rozpouštění reakční směsi. US patent 5 462 976 jasně ukazuje, že syntéza fototvrditelných derivátů glykosaminoglykanů vyžaduje vysokou teplotu a delší reakční čas, takže HA je degradována a jsou produkovány neznámé reakční subprodukty.
Dokument podobného stavu techniky, japonský patent JP-19940307050, poskytuje fotoreaktivní skořicový derivát, který má zavedený můstek mezi reaktivní skořicovou skupinu a hlavní řetězec polymeru. Nevýhoda jeho přípravy je dlouhá syntetická cesta jakož i použití velmi toxických činidel, například trifluoroctové kyseliny, která narušuje účinný nárůst výroby.
V literatuře bylo uvedeno několik aktivátorů karboxylové skupiny, například používané pro tvorbu peptidové vazby. Schéma 1 ukazuje aktivaci karboxylové skupiny pomocí thionylchloridu s cílem vytvořit chlorid kyseliny, publikováno nedávno v Molecules 2012, 17, 8661-8673. Nicméně, ne všechny takové aktivátory jsou považovány za použitelné pro modifikaci kyseliny hya-2CZ 304977 B6 luronové ve vodném roztoku, protože mohou reagovat prudce a/nebo výbušně, a uvolňovat nebezpečné plyny při styku s vodou a dalšími činidly v reakční směsi.
O
II ,SV
Cl Cl
-►
Cl + SCL + HCI
Schéma 1. Aktivace karboxylové skupiny pomocí thionylchloridu
Na druhé straně, elektrostatické zvlákňování je velmi univerzální metoda, která poskytuje vlákna v mikro- nebo nano-měřítku. Technika elektrostatického zvlákňování kapalin a/nebo roztoků je velmi známá a je popsána v předchozích patentech, například U.S. patentech 4 043 331 a 5 522 879. Postup elektrostatického zvlákňování zahrnuje zavedení kapaliny do elektrického pole z vzniku vláken. Tato vlákna jsou obvykle tažena k vodiči v elektrickém napětí příznivém pro sběr. Během přeměny kapaliny na vlákna, vlákna tvrdnou a/nebo se suší. Tohoto tvrdnutí a/nebo sušení může být dosaženo pomocí chlazení kapaliny, tj. kde kapalina je obvykle pevná při teplotě místnosti; pomocí vypařování rozpouštědla, nebo tvrdnoucím mechanismem. Jako příklad, US patentová přihláška 2011/0020917-A1 popisuje elektrostatické zvlákňování poly-s-kaprolaktonu pro imobilizaci biologicky aktivních sloučenin. Jsou určité výzkumné články, které se týkají elektrostatického zvlákňování polymerů, například poly(vinylalkoholů) (PVA), ale autoři jasně ukazují, že deriváty PVA nejsou dostatečně reaktivní pro síťování, postup pak vyžaduje zahřívání ve prospěch průběhu reakci (Zeng a kol., Macromolecular Rapid Communications, 2005, 26, 157). Nicméně, předehřátí není příznivé pro citlivé polymery, například HA, která se zahříváním výrazně degraduje.
US patent US20110111012 popisuje tvorbu obvazů, které používají genipin, diethyl skvarát nebo kyselinu šťavelovou jako sesíťující činidla. Nicméně inkorporovaná sesíťující činidla může být obtížné odstranit z obvazů. Další nevýhoda postupu je vysoká teplota (150 °C) během sušení, která nemůže být samozřejmě použita pro HA.
US patentová přihláška 2010/002155 popisuje externí aplikaci obvazů vyrobených z nanovláken. Nicméně, tento druh materiálu nemůže být rovněž použit pro vnitřní použití vzhledem k přítomnosti částic stříbra, které nejsou v těle vstřebatelné a biologicky odbouratelné.
Je několik vědeckých článků, které popisují elektrostatické zvlákňování nativní kyseliny hyaluronové. Články se zabývají především směsmi sestávajícími z HA kyseliny/želatmy (HA/GE) získanými v W-dimethylformamidu a vodou mísitelných rozpouštědlech (Li a kol. Macromolecular Rapid Communications 2006;27(2): 114-120). Bohužel použití DMF není výhodné pro materiály navržené pro biomedicínské aplikace vzhledem kjeho vysoké toxicitě. US patent US20080071001 se týká postupu přípravy polysacharidové houby, kde tvorba síťování zahrnuje kryogenní-zpracování materiálu pomocí ochlazení roztoku na -80 °C.
Obecně, jak je zmíněno výše, je několik nevýhod a problémů týkajících se postupu přípravy materiálu vyrobeného z HA derivátu aplikovatelného v oblasti medicíny, který obsahuje přítomnost toxických zbytků v materiálu, které musejí být odstraněny komplikovaným a nákladným způsobem, navíc používající reakční podmínky, které nejsou vhodné pro HA, například vysokou teplotu a bezvodé podmínky.
Podstata vynálezu
Výše uvedené problémy jsou řešeny ve stávajícím vynálezu, pokud jde o nanovlákna na bázi fototvrditelného esterového derivátu kyseliny hyaluronové nebo její soli a způsob jejich syntézy.
-3CZ 304977 B6
Fototvrditelné esterové deriváty kyseliny hyaluronové nebo její soli jsou vhodné pro tvorbu nanovláken pomocí elektrostatického zvlákňování a fototvrzeného přípravku z takových nanovláken, který je vhodný pro vnitřní a vnější medicínské použití. Hlavní výhody takového způsobu jsou provádění způsobu za použití ne příliš toxických složek za mírných reakčních podmínek, zvláště použití směsi vody a vodou-mísitelného polárního a ne-polámího rozpouštědla. Kromě toho, nanovlákna mohou být snadno fototvrzena (stabilizována) pomocí sesíťování zprostředkovaného světelným zářením bez přítomnosti iniciátorů nebo aktivátorů.
Předmět vynálezů se týká nanovláken obsahujících fototvrditelný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo její soli obecného vzorce IV
kde n je celé číslo v rozmezí 1 až 5000 dimerů.
R3 jsou nezávisle H nebo COCH=CHR’, kde Rl je 5- nebo óčlenný aryl nebo 5- nebo óčlenný heteroaryl, který má alespoň jeden nebo více stejných nebo různých heteroatomů vybraných ze skupiny obsahující N, O, S, s výhodou fenyl, furyl, furfuryl, thienyl, thiofenyl, pyridyl nebo imidazolyl;
za předpokladu, že alespoň jeden R3 je COCH^HR1;
R4 je H+ nebo farmaceuticky přijatelná sůl, s výhodou vybraná ze skupiny obsahující některý z iontů alkalických kovů nebo iontů kovů alkalických zemin, výhodněji Na+, K+, Mg2+ nebo Li+; a alespoň jeden nosný polymer.
HA nebo její sůl je hlavně modifikována alespoň v jedné pozici OH skupin kyseliny D-glukuronové nebo N-acetyl-glukosaminových jednotek HA, s výhodou na pozici C6 N-acetyl-glukosaminu HA a náhodně na pozicích C2, C3 kyseliny glukuronové nebo C4 N-acetyl-glukosaminu.
Množství fotoreakčních skupin (-COCH^CHR1) ve fototvrditelném esterovém derivátu kyseliny hyaluronové nebo její soli podle vynálezu je od 0,1 do 20 % na 100 dimerů kyseliny hyaluronové nebo její soli, s výhodou 5 až 10 %, výhodněji 5%. Takové množství fotoreaktivních skupin odpovídá stupni substituce (DS), který byl stanoven pomocí integrace signálů na 1HNMR (heteroaromatické zbytky odpovídající například furanu, thiofenu, pyridinu, imidazolu a podobně) vztaženo na methylovou skupinu odpovídající N-acetylové skupině.
Nosný polymer je vybrán ze skupiny obsahující polyvinyl alkohol (PVA), polyakrylovou kyselinu (PAA), polyethylenoxid (PEO), polyvinylpyrrolidon (PVP).
Množství nosného polymeru v nanovláknech podle stávajícího vynálezu je v rozpětí od 50 % (hm./hm.) do 99 % (hm./hm.), s výhodou v rozpětí od 70 % (hm./hm.) do 90 % (hm./hm.), nejlépe 80 % (hm./hm.).
Nanovlákna podle vynálezu mohou obsahovat biologicky kompatibilní polymer relativně snadno zvláknitelný a biologicky kompatibilní polymer, s výhodou karboxymethylcelulózu (CMC) želatinu, chitosan, polykaprolakton (PCL), kyselinu polymléčnou (PLA), polyamid (PA), polyuretan (PUR), poly-(laktid-ko-glykolovou) kyselinu; a jejich směsi nebo jejich kopolymery.
-4CZ 304977 B6
Další aspekt podle stávajícího vynálezu je způsob syntézy nanovláken podle stávajícího vynálezu obsahující fototvrditelný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo její soli obecného vzorce IV, jak bylo definováno výše, zahrnující aktivační reakci α,β-nenasycené substituované kyseliny akrylové obecného vzorce I
O
HOX>^R1 (O, kde
R1 je 5- nebo óčlenný aryl nebo 5- nebo óčlenný heteroaryl, který má alespoň jeden nebo více stejných nebo různých heteroatomů vybraných ze skupiny obsahující N, O, S;
se substituovaným nebo nesubstituovaným benzoyl chloridem nebo jeho deriváty obecného vzorce II
kde R2 je jeden nebo více substituentů vybraných ze skupiny obsahující H, -NO2, -COOH, halogenidy, Ci-C6alkyloxy, s výhodou halogenidy, methoxy nebo ethoxy, výhodněji Cl; v přítomnosti organické báze, to znamená alifatického aminu, s výhodou terciálního aminu, který má lineární nebo větvenou, nasycenou nebo nenasycenou, substituovanou nebo nesubstituovanou C3-C30alkylovou skupinu, s výhodou terciální amin, výhodněji triethylamin (TEA), diisopropylethylamin (DIPEA), Ν,Ν-diisopropylethylamin (DIEA); ve směsi vody a vodou mísitelného polárního nebo nepolárního rozpouštědla za vzniku reaktivní anhydrid obecného vzorce III
(ΠΙ), kde
R1 a R2 jsou, jak je definováno výše, (viz také schéma 2 níže, krok A, aktivační krok), který reaguje s kyselinou hyaluronovou nebo její solí v přítomnosti organické báze, to znamená alifatického aminu, s výhodou terciálního aminu, který má lineární nebo větvenou, nasycenou nebo nenasycenou, substituovanou nebo nesubstituovanou C3-C30alkylovou skupinu, s výhodou terciální amin, výhodněji triethylamin nebo diisopropylethylamin; ve směsi vody a vodou mísi35 telného polárního nebo nepolárního rozpouštědla, (viz také schéma 2 níže, krok B, modifikační krok), za vzniku fototvrditelného esterového derivátu kyseliny hyaluronové nebo její soli obecného vzorce IV, jak je definováno výše, který je rozpuštěn v nosném polymeru molekulové hmotnosti od 5 x 104 g/mol do 1 x 106 g/mol, s výhodou 4 x 105 g/mol ve vodě za vzniku zvlákňovacího roztoku, který je zvlákňován pomocí elektrostatického zvlákňování.
Zvlákňovací roztoky mohou být vytvořeny pomocí PEO různých molekulových hmotností v závislosti na specifické aplikaci.
-5CZ 304977 B6
Koncentrace fototvrditelných esterových derivátů kyseliny hyaluronové nebo její soli ve zvlákňovacím roztoku je v rozmezí 0,5 do 12 % (hm./hm.), s výhodou 5 do 7,5% (hm./hm.), s větší výhodou 5 % (hm./hm.).
Substituenty R2 benzoylchloridu nebo jeho derivátů obecného vzorce II, jak je definováno výše, mohou být umístěny v pozicích ortho, metha- nebo para- k acylchloridové skupině, s výhodou v ortho- nebo para- pozicích. Použití benzoyl chloridu a jeho derivátů jako aktivátorů není obecně používáno pro chemickou modifikaci HA, protože se má za to, že katalyzuje transesterifikační reakce a možná reaguje s běžnými organickými rozpouštědly používanými pro chemickou modifikaci HA a respektive izolaci a purifikaci, například ethanolem, methanolem, a vyššími alkyl-alkoholy.
V souladu s výhodným provedením podle vynálezu a také se schématem 2 níže (viz část A), je aktivační krok prováděn pomocí smíchání 5členné nebo óčlenné heteroaromatické akrylové kyseliny obecného vzorce la nebo Ib níže
O
kde X je vybrán z O, S, N, s výhodou O nebo N, s výhodou 3-(2-furyl)akrylové kyseliny, s benzoyl chloridem jako aktivačním činidlem.
Aktivační krok může být prováděn po 5 až 120 minut při jakékoliv teplotě mezi 0 °C až 60 °C. Nicméně pokud je teplota vyšší než 60 °C, reakce může tvořit sub-produkty, zatímco pokud je reakce ochlazována, tak se reakce zpomalí, ale stále probíhá. Tedy je výhodné provádět reakci při teplotě 25 °C až 60 °C, výhodněji po 30 minut při 25 °C.
Aktivace benzoyl chloridu s jakýmkoliv derivátem z obrázku la nebo Ib se provádí téměř okamžitě. Nicméně, reaktivní meziprodukt struktury III může být připraven pomocí reakce meziproduktu la nebo Ib s II za intenzivního míchání po dobu dvou až pěti hodin, v přítomnosti terciálního aminu. Reakční doba se může měnit v důsledku míchacích faktorů, když je reakce prováděna ve větším provozním měřítku.
Navíc, reakce znázorněna v části B je prováděna bez přítomnosti 4-dimethylaminopyridinu (DMAP), organokatalyzátorů běžně používaných při acylaci alkoholů. Katalyzátor je velmi toxický a není přijatelný pro materiály určené pro použití ve zdravotnictví. To je velká výhoda způsobu podle vynálezu ve srovnání s předchozím uvedeným stavem techniky. Kromě toho bylo zjištěno, že používání kombinace benzoyl chloridu nebo jeho derivátů obecného vzorce II a DMAP produkuje vyšší stupeň substituce (>30%) a sebe-síťování HA derivátů. To je nežádoucí, protože to brání použití derivátů hyaluronanu pro elektrostatické zvlákňování (viz příklady 14 a 16)
Schéma 2
A) Aktivace α,β-nenasycené substituované akrylové kyseliny a tvorba reaktivního anhydridu aktivační krok.
-6CZ 304977 B6
B) Tvorba fototvrditelného esteru HA nebo její soli - modifikační krok smíšený aromatický anhydrid
R1 = 5 nebo óčlenný aiyl nebo heteroaryl
R3 = -H, nebo -COCH=CHR]
R4 = H nebo ionty alkalický kovů nebo ionty kovů alkalických zemin
Navíc kyselina hyaluronová nebo její sůl, používaná v modifíkačním kroku podle způsobu tohoto vynálezu má molekulovou hmotnost (hmotnostní průměr molekulové hmotnosti) od 5xl03 do l,6xl06 g/mol, s výhodou od l,5xl04 do 2,5xl05 g/mol, výhodněji 8,5xl04 do l,2xl05 g/mol. Nicméně způsob podle vynálezu není omezen na tento rozsah HA nebo její soli. Průměrná molekulová hmotnost a počet průměrů molekulových hmotností polymerů byly stanoveny pomocí SEC-MALLS, jakož i polydisperzita derivátů.
Reakce části B (viz schéma 2 výše, modifikační krok) se provádí po dobu 1 až 48 hodin, s výhodou 1 až 3 hodiny; při teplotě v rozmezí 0 °C až 80 °C, s výhodou od 20 °C do 60 °C, výhodněji při 25 °C.
Množství reaktivního anhydridu podle vynálezu smíchaného s HA nebo její solí odpovídá 0,01 až 5 ekvivalentům, s výhodou 0,5 až 2 ekvivalentům, výhodněji 0,5 ekvivalentům na dimer kyseliny hyaluronové nebo její soli za vzniku fototvrditelného esterového derivátu HA nebo její soli podle vynálezu, který má kovalentně navázanou fototvrditelnou skupinu (-COCH=CHR1). Fototvrditelné esterové deriváty kyseliny hyaluronové nebo její soli podle vynálezu nemají výrazně změněnou viskozitu a fyzikálně-chemické vlastnosti HA a vyznačují se nízkou polydisperzitou. Navíc, po chemické modifikaci je molekulová hmotnost derivátů mírně zvýšená. Tyto deriváty byly plně charakterizovány pomocí ’H a HSQC-NMR, IR a UV spektroskopie.
Kroky aktivace a modifikace (viz schéma 2 výše) jsou prováděny, jak je popsáno výše, ve směsi vody a vodou mísitelného polárního nebo nepolárního rozpouštědla mísitelného s vodou. Rozpouštědlo je vybráno ze skupiny obsahující isopropanol, aceton, ethylacetát, dimethylsulfoxid, acetonitril, dimethylformamid, tetrahydrofuran, ale s výhodou se používá isopropanol. Množství vody ve směsi vody a vodou mísitelného polárního rozpouštědla je od 10 % obj./obj. do 99 % obj./obj., s výhodou 50 % obj./obj.
-7CZ 304977 B6
Kromě toho, tato metodologie výše popsaného způsobu podle vynálezu umožňuje snadné rozšíření s cílem umožnit přípravu nanovláken podle vynálezu obsahujících vyšší množství fototvrditelných esterových HA-derivátů.
Nanovlákna v souladu se stávajícím vynálezem mohou být připravena například pomocí elektrostatického zvlákňování v zařízení pro přípravu nanovláken (například 4SPIN®, CONTIPROgroup s.r.o.) nebo pomocí jiné metody elektrostatického zvlákňování známé ve stavu techniky, například uniaxiální elektrostatické zvlákňování, koaxiální elektrostatické zvlákňování, nebo multiaxiální elektrostatické zvlákňování. Charakterizace síťky vláken byla provedena pomocí skenovací elektronové mikroskopie (SEM) jak je popsáno ve známém stavu techniky a ukázáno na Obrázcích 3, 4, 5.
Fototvrditelné esterové deriváty podle vynálezu mají různý stupeň substituce (DS). Všechny byly testovány na elektrostatické zvlákňování (tabulka 1, příklady 22, 23 a 24). V souladu s experimentálními daty esterové HA deriváty podle vynálezu, které mají nižší stupeň substituce (5 až 20 %), jsou snadno elektrozvlákňována a také vykazují lehce zvýšenou viskozitu vzhledem k modifikaci (viz Obrázek 6). Způsob chemické modifikace HA, jak je popsáno v modifikačním kroku (viz Schéma 2), umožňuje dát požadovanou viskozitu pro elektrostatické zvlákňování, což je velmi důležité pro získání velkého výnosu (velké množství produktu získaného z postupu).
Nanovlákna podle stávajícího vynálezu, jak je popsáno výše, s výhodou tvoří gel a jejich střední průměr je mezi 99 až 150 nm.
Získaná vlákna jsou schopná udržet svou strukturální integritu na absorpci exsudátu. Alternativně biologicky kompatibilní polymery obsažené v nanovláknech podle stávajícího vynálezu zvyšují mechanickou stabilitu nanovláken jako takových, jakož i konečného přípravku.
Vlákna tvořící gel mají s výhodou absorpci v rozpětí alespoň 2 až 25 gramů 0,9% roztoku chloridu sodného na gram nanovláken (měřeno pomocí free swell method - metoda volného bobtnání), s výhodou alespoň lOg/g. Taková nízká nasákavost (okolo 20 %) znamená, že materiály takto vyrobené jsou mechanicky robustní.
Kromě toho v souladu s jiným provedením nanovláken podle vynálezu, nanovlákna, jak je definováno výše, mohou být fototvrditelná pomocí světelného záření v rozsahu UV-Vis vlnových délek, čímž dochází k cykloadici alespoň dvou esterových skupin, alespoň dvou molekul kyseliny hyaluronové nebo její soli vzorce IV, za tvorby sloučeniny, která má cyklobutanový kruh obecného vzorce V
(V), kde
R1 je, jak je definováno výše a
R5 je hlavní řetězec kyseliny hyaluronové nebo její soli
Světelné záření je provedeno v rozpětí UV-Vis vlnových délek, s výhodou v rozpětí od 280 nm do 750 nm, výhodněji při 302 nm. Záření podle vynálezu je s výhodou prováděno při teplotě místnosti, po dobu expozice mezi 2 minutami a 60 minutami, a výhodněji mezi 3 až 10 minutami. Po sesíťování je síťka vláken propojena a tvoří 3D síť (viz Obrázek 5).
-8CZ 304977 B6
Obrázek 7 ukazuje UV-Vis spektrum vláken akrylového 2-furyl hyaluronátu sodného ozářených po různou dobu při 302 nm s cílem vyvolat sesíťování. Různé alikvoty byly odebrány z rozpustné části nanovláken po bobtnání ve vodě. Jak se zjistilo, intenzita absorpčního maxima se snížila. Se zvýšením doby UV záření bylo sledováno významné snížení. Po expozici UV-světlem po 60 minut nebyla sledována téměř žádná absorbance. Tyto materiály po elektrostatickém zvlákňování perfektně reagují v pevném stavu bez přítomnosti iniciátorů ani aktivátorů a jsou fototvrzeny. Fototvrzení může být rovněž provedeno pomocí postupu volné radikálové polymerizace.
Fototvrzená nanovlákna podle vynálezu obsahující sloučeniny, které mají cyklobutanový kruh vzorce V, jak bylo definováno výše, jsou s výhodou částí přípravku, který je ve formě vybrané ze skupiny obsahující vrstvu, film, podložku, obvaz na rány nebo tkáňové skafoldy používané v kosmetice, lékařství, nebo regenerativní medicíně, například, při péči o rány pomocí náplastí pro vnější nebo vnitřní použití.
Biokompatibilita fototvrditelných esterových derivátů podle stávajícího vynálezu byla stanovena pomocí studie cytotoxicity 3T3-NIH fibroblastových buněk (Obrázek 8 a 10), zahrnuté jako příklady v tomto dokumentu. Biokompatibilita produktů byla vyhodnocena rovněž pro jejich fotocytotoxicitu (Obrázky 9 a 11). Tedy, některé příklady prokázaly, že nanovláknová vrstva vyrobená v souladu podle stávajícího vynálezu může být použita pro zakrytí různých zranění, protože filmy z ní vyrobené byly v kontaktu s fibroblasty (vazivovými tkáňovými buňkami) bez zjevné cytotoxicity. Některé další buňky nebo jejich kombinace mohou být kultivovány na nanovláknové vrstvě. Nanovlákna popsaná ve stávajícím vynálezu mohou být použita pro tvorbu vrstvy, filmu, podložky, nebo krytí, které je částí obvazu na rány, nebo formy tkáňového skafoldu, ale bez omezení na tuto skupinu.
Přípravky podle stávajícího vynálezu, například filmy, nejsou po sesíťování více rozpustné ve vodě a mohou být použity na konkrétní místo jako gel nebo obvaz z nich vyrobený. Přípravek podle vynálezu může být použit v kosmetice, lékařství nebo regenerativní medicíně, s výhodou při péči o rány, nebo na náplasti pro vnější nebo vnitřní použití, jak se očekává od chemicky modifikovaných derivátů HA.
Výhody způsobu syntézy nanovláken obsahujících fototvrditelný esterový derivát podle vynálezu lze nalézt v jednoduchosti, nízkých nákladech, a také, že může probíhat v mírných reakčních podmínkách za použití netoxických činidel. Deriváty podle stávajícího vynálezu byly klasifikovány jako biokompatibilní a netoxické, tedy, jsou vhodné pro in vivo použití. Mohou být snadno elektrozvlákňovány s vysokou účinností. Způsob fototvrzení je rychlý a účinný a vyznačuje se tím, že je prováděn bez použití vnějšího katalyzátoru nebo iniciátoru.
Definice pojmů
Pojem „halogenidy“ znamená F, Cl, Br nebo I.
Pojem „smíšený aromatický anhydrid“ znamená substituovaný anhydrid kyseliny benzoové a kyseliny arylpropen-2-enové nebo anhydrid kyseliny benzoové a kyseliny heteroarylpropen-2enové, nebo organická složka charakterizovaná vzorcem nesymetrický anhydrid kyseliny.
y, kde Rx^Ry, jinými slovy
Pojem „organická báze“ je alifatický amin, s výhodou terciální amin, který má lineární nebo větvenou, nasycenou nebo nenasycenou, substituovanou nebo nesubstituovanou C3-C30alkylovou skupinu.
-9CZ 304977 B6
Pojem „HA dimer“ znamená opakující se disacharidové jednotky kyseliny hyaluronové. To znamená kyseliny glukuronové a N-acetylglukosaminu.
Pojem „farmaceuticky přijatelná sůl“ jak zde bylo použito, znamená takové soli esterových derivátů HA podle vynálezu, které jsou bezpečné a účinné pro lokální in vivo použití a které mají požadovanou biologickou aktivitu. Farmaceuticky přijatelné soli zahrnují soli kyselých nebo zásaditých skupin přítomných v esterových derivátech HA podle vynálezu, s výhodou ionty alkalických kovů nebo ionty kovů alkalických zemin, výhodněji Na+, K+, Mg+ nebo Li+.
Pojem „stupeň substituce fototvrditelného esterového HA-derivátu“ je (průměrné) množství COCH=CHR' připojených na 100 dimerů HA nebo její soli. Například, 5% znamená, že 5 z každých 100 dimerů HA může být substituováno skupinou COCH=CHR’
Pojem „fototvrzení“ znamená polymerizaci světlem nebo pevný stav sesíťování. Pojem se většinou týká postupu charakterizovaného volnou radikálovou nebo kationtovou foto-iniciovanou polymerizaci, která může produkovat sesíťování nebo prostupování polymemí sítě.
Pojem „gel-tvořící nanovlákno“ znamená, že vlákna jsou hydroskopická, což příjmem exsudátu z rány se stanou vlhká, kluzká nebo gelovitá a tudíž snižují tendenci okolních vláken přilnout k ráně.
Pojem „film“ znamená komplexní strukturu složenou z nanovláken charakterizovaných velkým povrchem a vysokou pórovitostí a je připraven pomocí elektrostatického zvlákňování nebo podobné techniky. Tato vlákna se vyznačují průměrem v rozmezí od 50 nm do 1000 nm nebo větším. Nanovlákna, která mohou být sesíťována nebo ne, obsahující esterové kyseliny hyaluronové nebo její soli popsané v tomto vynálezu, mohou být použita pro krytí nebo balení.
Pojem „nosný-polymer“ se označuje polymer, který je biokompatibilní a schopný elektrostatického zvlákňování. Jinými slovy, je to přirozený nebo syntetický polymer, který je určen pro farmaceutické účely a nezpůsobuje žádnou nežádoucí nebo systémovou toxicitu.
Objasnění obrázků
Obrázek 1. HSQC spektra 2-furyl akiylát hyaluronátu sodného získaného reakcí popsanou v příkladu 1.
Obrázek 2. 'H spektra řra«.s-3-(3-pyridyl)akryl esteru hyaluronátu sodného
Obrázek 3. SEM mikrografy zobrazující morfologii sítě nanovláken po elektrostatickém zvlákňování, pozorovanou při dvou různých amplifikacích (A) 2 pm a (B) 20 pm (C) po 10 minutách záření (D) po 20 minutách záření (320 nm), což odpovídá příkladu 22, tabulka 1 (příklad 2).
Obrázek 4. SEM mikrografy zobrazující morfologii sítě elektrozvlákňovaných nanovláken, což odpovídá materiálu popsanému v příkladu 22, tabulka 1 (příklad 3), pozorovanou při A) 2 pm a (B) 20 pm.
Obrázek 5. SEM snímky elektrozvlákňovaných vláken vzorků popsaných v příkladu 24.
Obrázek 6. SEM mikrografy zobrazující morfologii sítě elektrozvlákňovaných vláken po sesíťování derivátu (10 minut) a bobtnání po dobu 24 hodin v PBS, jak je popsáno v příkladu 27.
Obrázek 7. Dynamická viskozita vzorků před zvlákňováním, která ukazuje progresivní nárůst viskozity jako funkci stupně substituce.
-10CZ 304977 B6
Obrázek 8. UV-Vis spektrum vláken 2-furylakryl ester hyaluronátu sodného ozářených po různé doby při 302 nm.
Obrázek 9. 2-Furylakryl ester hyaluronátu sodného a jeho vliv na životaschopnost buněk, testováno na buňkách 3T3-NIH, MTT, n=6
Obrázek 10. 2-Furylakryl ester hyaluronátu sodného a test fototoxicity testovaný při koncentracích (c=l-1000 pg/ml), 3T3-NIH buněčná linie, MTT, T24, n=5.
Obrázek 11. Thiofenyl-acryliový ester hyaluronanu sodného a jeho vliv na životaschopnost buněk, testováno na buňkách 3T3-NIH, MTT, n=6.
Obrázek 12. Thiofenyl-akrylový ester hyaluronanu sodného a test fototoxicity testovaný při koncentracích (c= 1-1000 pg/ml), 3T3-NIH buněčná linie, MTT, T24, n=5.
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1. Aktivace 2-furylakrylové kyseliny pomocí benzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem
Hyaluronát sodný (1,0 g, 2,5 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností l,5xl04 g/mol byl rozpuštěn ve 20 ml destilované vody. Isopropanol (IPA, 10 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně 0,7 ml triethylaminu odpovídajícímu 2 ekvivalentům HA dimeru bylo přidáno do reakční směsi. Ve druhé baňce, 0,17 g (1,25 mmol) 2-fuiyl-akrylové kyseliny bylo rozpuštěno v isopropanolu (10 ml). Po té, 0,7 ml triethylaminu (TEA) (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 0,15 ml benzoyl chloridu (což odpovídá 0,5 ekvivalentům HA dimeru). Aktivace byla prováděna po 30 minut při teplotě místnosti (25 °C). Po té byl roztok přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce je prováděna 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přídavkem vody a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt srážen nadbytkem isopropanolu (250 ml). Produkt byl promyt jedenkrát pomocí 50 ml isopropanolem (100%), poté 4krát promyt pomocí 50 ml směsi isopropanol a voda (85% obj./obj.). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% isopropanolem a sušena v sušárně při 40 °C. Výtěžek reakce 95%, Mw derivátu (SEC-MALLS) = 1,2lxlO4 g/mol a polydisperzita = 1,19.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce byl vypočítán na 2,5% podle *H NMR.
’H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC (Obrázek 2), δ ppm: 6,4-114,9 (signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3), 7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: krok-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 309 nm.
Příklad 2. Aktivace 2-Furylakrylové kyseliny pomocí benzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem
Hyaluronát sodný (1,0 g, 2,5 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 4,0x104 g/mol byl rozpuštěn ve 20 ml destilované vody. Isopropanol (10 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně 0,7 ml triethylaminu odpovídají-11 CZ 304977 B6 čímu 2 ekvivalentům na HA dimer bylo přidáno do reakční směsi. Ve druhé baňce, 0,17 g (1,25 mmol) 2-furyl-akrylové kyseliny bylo rozpuštěno v isopropanolu (10 ml). Po té, 0,7 ml TEA (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 0,15 ml benzoyl chloridu (což odpovídá 0,5 ekvivalentům HA dimeru). Aktivace byla prováděna po 30 minut při teplotě místnosti (25 °C). Po té byl roztok přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce je prováděna 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přídavkem vody, a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt srážen nadbytkem isopropanolu (250 ml). Produkt byl promyt jedenkrát pomocí 50 ml isopropanolem (100%), poté 4 krát promyt pomocí 50 ml směsi isopropanolu a vody (85% obj./obj.). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Výtěžek reakce 98,8%, Mw derivátu (SEC-MALLS) = 4,2x104 g/mol a polydisperzita =1,5.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce byl vypočítán na 3,5% podle 1H NMR.
'H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC (Obrázek 2), δ ppm: 6,4-114,9 (signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3), 7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: krok-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Zmax = 309 nm.
Příklad 3. Aktivace 2-Furylakrylové kyseliny pomocí benzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem.
Hyaluronát sodný (1,0 g, 2,5 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 8,0x104 g/mol byl rozpuštěn ve 20 ml destilované vody. Isopropanol (IPA, 10 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně 0,7 ml triethylaminu odpovídajícímu 2 ekvivalentům na HA dimer bylo přidáno do reakční směsi. Ve druhé baňce, 0,17 g (1,25 mmol) 2-furyl-akrylové kyseliny bylo rozpuštěno v isopropanolu (10 ml). Po té, 0,7 ml TEA (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 0,15 ml benzoyl chloridu (což odpovídá 0,5 ekvivalentům HA dimeru). Aktivace byla prováděna po 30 minut při teplotě místnosti (25 °C). Po té byl roztok přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce je prováděna 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přídavkem vody a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt srážen nadbytkem isopropanolu (250 ml). Produkt byl promyt jedenkrát pomocí 50 ml isopropanolu (100%), po té 4 krát promyt pomocí 50 ml směsi isopropanol a vody (85% obj./obj.). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Výtěžek reakce 92,8%, Mw derivátu (SEC-MALLS) = 8,5x104 g/mol a polydisperzita =1,5.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce byl vypočítán na 5,3%podle ‘HNMR.
‘H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC (Obrázek 2), δ ppm: 6,4-114,9 (signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3), 7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kross-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Zmax = 309 nm.
- 12CZ 304977 B6
Příklad 4. Aktivace 2-Furyl akrylové kyseliny pomocí benzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem.
Hyaluronát sodný (30,0 g, 75 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 8,3 x 104g/mol byl rozpuštěn ve 500 ml destilované vody. Isopropanol (250 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně, 21 ml triethylaminu odpovídajícímu 2 ekvivalentům na HA dimer bylo přidáno do reakční směsi. Ve druhé baňce, 10,37 g (75 mmol) 2-furyl-akrylové kyseliny bylo rozpuštěno v isopropanolu (50 ml). Po té, 21 ml TEA (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 9 ml benzoyl chloridu (což odpovídá 0,5 ekvivalentům HA dimeru). Aktivace byla prováděna po 30 minut při teplotě místnosti (25 °C). Po té byl roztok přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce je prováděna 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přídavkem vody, a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt srážen nadbytkem isopropanolu (2500 ml). Produkt byl promyt jedenkrát pomocí 300 ml isopropanolu (100%), po té 4 krát promyt pomocí 200 ml směsi isopropanol a vody (85% obj./obj.). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Výtěžek reakce 92,8%, Mw derivátu (SEC-MALLS) = 8,9xl04 g/mol a polydisperzita = 1,5.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce byl vypočítán na 10% podle *H NMR.
’H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC (Obrázek 2), δ ppm: 6,4-114,9 (signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3), 7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kross-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 309 nm.
Příklad 5. Aktivace 2-Furyl akrylové kyseliny pomocí benzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem.
Hyaluronát sodný (1,0 g, 2,5 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 2,7 x 105 g/mol byl rozpuštěn ve 20 ml destilované vody. Isopropanol (10 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně, 0,7 ml triethylaminu odpovídajícímu 2 ekvivalentům na HA dimer bylo přidáno do reakční směsi. Ve druhé baňce, 0,346 g (2,5 mmol) 2-furyl-akrylové kyseliny bylo rozpuštěno v isopropanolu (10 ml). Po té, 0,7 ml TEA (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 30,0 ml benzoyl chloridu (což odpovídá 0,5 ekvivalentům HA dimeru). Aktivace byla prováděna po 30 minut při teplotě místnosti (25 °C). Po té byl roztok přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce je prováděna 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přídavkem vody, a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt srážen nadbytkem isopropanolu (250 ml). Produkt byl promyt jedenkrát pomocí 50 ml isopropanolu (100%), po té 4 krát promyt pomocí 50 ml směsi isopropanol a vody (85% obj./obj.). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Výtěžek reakce 92,5%, Mw derivátu (SEC-MALLS) = 2,9x105 g/mol a polydisperzita = 1,65.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce byl vypočítán na 17% podle 'H NMR.
- 13 CZ 304977 B6 'H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC (Obrázek 2), δ ppm: 6,4-114,9 (signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3), 7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kross-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 309 nm.
Příklad 6. Aktivace 2-Furyl akrylové kyseliny pomocí benzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem.
Hyaluronát sodný (1,0 g, 2,5 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 5,0 x 105 g/mol byl rozpuštěn ve 17 ml destilované vody. Isopropanol (10 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně, 1,0 ml triethylaminu odpovídajícímu 3 ekvivalentům na HA dimer bylo přidáno do reakční směsi. Ve druhé baňce, 0,173 g (1,25 mmol) 2-furyl-akrylové kyseliny bylo rozpuštěno v isopropanolu (10 ml). Po té, 1,0 ml TEA (což odpovídá 3 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 0,15 ml benzoyl chloridu (což odpovídá 0,5 ekvivalentům HA dimeru). Aktivace byla prováděna po 30 minut při teplotě místnosti (25 °C). Po té byl roztok přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce je prováděna 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přídavkem vody, a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt srážen nadbytkem isopropanolu (250 ml). Produkt byl promyt jedenkrát pomocí 50 ml isopropanolu (100%), po té 4 krát promyt pomocí 50 ml směsi isopropanol a vody (85% obj./obj.). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Výtěžek reakce 95,8%, Mw derivátu (SEC-MALLS) = 5,2xl05 g/mol a polydisperzita = 1,65.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce byl vypočítán na 14% podle ]H NMR.
'H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC (Obrázek 2), δ ppm: 6,4-114,9 (signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3), 7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kros-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 309 nm.
Příklad 7. Aktivace 2-Furyl akrylové kyseliny pomocí benzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem.
Hyaluronát sodný (1,0 g, 2,5 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 1,0 x 106 g/mol byl rozpuštěn ve 20 ml destilované vody. Isopropanol (10 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně, 0,7 ml triethylaminu odpovídajícímu 2 ekvivalentům na HA dimer bylo přidáno do reakční směsi. Ve druhé baňce, 0,17 g (1,25 mmol) 2-furyl-akrylové kyseliny bylo rozpuštěno v isopropanolu (10 ml). Po té, 0,7 ml TEA (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 0,15 ml benzoyl chloridu (což odpovídá 0,5 ekvivalentům HA dimeru). Aktivace byla prováděna po 30 minut při teplotě místnosti (25 °C). Po té byl roztok přidán do prvního roztoku (obsahující- 14CZ 304977 B6 ho HA). Reakce je prováděna 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přídavkem vody, a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt srážen nadbytkem isopropanolu (250 ml). Produkt byl promyt jedenkrát pomocí 50 ml isopropanolu (100%), po té 4 krát promyt pomocí 50 ml směsi isopropanol a vody (85% obj./obj.). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Výtěžek reakce 95,8%, Mw derivátu (SEC-MALLS) = 1,0x106 g/mol a polydisperzita = 1,8.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce byl vypočítán na 4,8% podle *H NMR.
’H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC (Obrázek 2), δ ppm: 6,4-114,9 (signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3), 7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kros-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Zmax = 309 nm.
Příklad 8. Aktivace 2-Furyl akrylové kyseliny pomocí benzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem.
Hyaluronát sodný (1,0 g, 2,5 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 1,6 x 106 g/mol byl rozpuštěn ve 20 ml destilované vody. Isopropanol (10 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně, 0,7 ml triethylaminu odpovídajícímu 2 ekvivalentům na HA dimer bylo přidáno do reakční směsi. Ve druhé baňce, 0,17 g (1,25 mmol) 2-furyl-akrylové kyseliny bylo rozpuštěno v isopropanolu (10 ml). Po té, 0,7 ml TEA (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 0,15 ml benzoyl chloridu (což odpovídá 0,5 ekvivalentům HA dimeru). Aktivace byla prováděna po 30 minut při teplotě místnosti (25 °C). Po té byl roztok přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce je prováděna 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přídavkem vody, a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt srážen nadbytkem isopropanolu (250 ml). Produkt byl promyt jedenkrát pomocí 50 ml isopropanolu (100%), po té 4 krát promyt pomocí 50 ml směsi isopropanol a vody (85% obj./obj.). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Výtěžek reakce 95,8%, Mw derivátu (SEC-MALLS) 1,7x106 g/mol a polydisperzita = 1,7.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce byl vypočítán na 4,2% podle ' H NMR.
*H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC (Obrázek 2), δ ppm: 6,4 - 114,9 (signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3), 7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kros-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log(m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Zmax = 309 nm.
- 15 CZ 304977 B6
Příklad 9. Aktivace 2-Furylakrylové kyseliny pomocí benzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem.
Hyaluronát sodný (1,0 g, 2,5 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 1,6 x 106 g/mol byl rozpuštěn ve 20 ml destilované vody. Isopropanol (10 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně, 0,7 ml triethylaminu odpovídajícímu 2 ekvivalentům na HA dimer bylo přidáno do reakční směsi. Ve druhé baňce, 0,259 g (1,88 mmol) nebo 0,75 ekvivalentů 2-furyl-akrylové kyseliny bylo rozpuštěno v isopropanolu (10 ml). Po té, 0,7 ml TEA (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 0,21 ml benzoyl chloridu (což odpovídá 0,75 ekvivalentům HA dimeru). Aktivace byla prováděna po 30 minut při teplotě místnosti. Po té byl roztok přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce je prováděna 3 hodiny při 60 °C. Reakce byla ukončena přídavkem vody, a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt srážen nadbytkem isopropanolu (250 ml). Produkt byl promyt jedenkrát pomocí 50 ml isopropanolu (100%), po té 4 krát promyt pomocí 50 ml směsi isopropanol a vody (85% obj./obj.). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Výtěžek reakce 80%. Průměrná molekulová hmotnost derivátu byla stanovena na l,59xl06 a polydisperzita 1,52.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce byl vypočítán na 10% podle 'H NMR.
*H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC (Obrázek 2), δ ppm: 6,4 - 114,9 (signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3), 7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kros-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 309 nm.
Příklad 10. Aktivace 2-Furyl akrylové kyseliny pomocí benzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem.
Hyaluronát sodný (1,0 g, 2,5 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 1,8 x 106 g/mol byl rozpuštěn ve 10 ml destilované vody. Isopropanol (10 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně, 0,7 ml triethylaminu odpovídajícímu 2 ekvivalentům na HA dimer bylo přidáno do reakční směsi. Ve druhé baňce, 0,34 g (2,5 mmol) 2-furyl-akiylové kyseliny bylo rozpuštěno v isopropanolu (10 ml). Po té, 0,7 ml TEA (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 0,29 ml benzoyl chloridu (což odpovídá 1,0 ekvivalentům HA dimeru). Aktivace byla prováděna po 30 minut při teplotě místnosti (25 °C). Po té, byl roztok přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce je prováděna 2 hodiny při 40 °C. Reakce byla ukončena přídavkem vody, a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt srážen nadbytkem isopropanolu (250 ml). Produkt byl promyt jedenkrát pomocí IPA, po té promyt pomocí roztoku IPA:voda (85% obj./obj., 4 x 50 ml). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Výtěžek reakce 99%, Mw derivátu (SEC-MALLS) byla stanovena na 1,8x106 g/mol a polydisperzita = 1,61.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce (odpovídající 12% fotoreaktivních skupin) *H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d,lH)
-16CZ 304977 B6
2D HSQC (Obrázek 2), δ ppm: 6,4 - 114,9 (signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3), 7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kros-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Xrnax = 309 nm.
Příklad 11. Aktivace 3-(2-furyl)akrylové kyseliny pomocí 2,4,6-trichlorbenzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem
Hyaluronát sodný (30 g, 75 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 1, x 106 g/mol byl rozpuštěn ve 1000 ml destilované vody. THF (1000 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně, 21 ml triethylaminu (TEA) bylo přidáno do reakční směsi (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer). Ve druhé baňce, 5,18 (37,4 mmol) g 2-furfuryl-akrylové kyseliny bylo rozpuštěno v THF (300 ml). Po té, 21 ml TEA (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 0,4 ml 2,4,6-trichlorbenzoyl chloridu (což odpovídá 0,5 ekvivalentům HA dimeru). Aktivace byla prováděna po 30 minut. Poté filtrovaný roztok (rozpustná část) byl přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce je prováděna 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přídavkem vody, a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt promyt jedenkrát pomocí IPA, po té pomocí roztoku IPA:voda (85% obj./obj., 4 x 500 ml). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Pro všechny reakce, „výtěžek reakce“ je uveden. Výtěžek reakce: 98% (průměr tří opakování).
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce (odpovídající 3% fotoreaktivních skupin)
Ή NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC (Obrázek 2), δ ppm: 6,4 - 114,9 (signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3), 7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kros-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 309 nm.
Příklad 12. Aktivace 3-(2-furyl) akrylové kyseliny pomocí 2,4,6-trichlorbenzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem
Hyaluronát sodný (30 g, 75 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 8,5 x 104 g/mol byl rozpuštěn ve 600 ml destilované vody. THF (300 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně bylo přidáno do reakční směsi 21 ml triethylaminu (TEA) (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer). Ve druhé nádobě, 10,36 g (75 mmol) 2-furfuryl-akrylové kyseliny bylo rozpuštěno v THF (300 ml). Po té, 21 ml TEA (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 12 ml 2,4,6-trichlorbenzoyl chloridu (odpovídajícímu 1 ekvivalentu HA dimeru). Aktivace byla prováděna po 30 minut. Poté filtrovaný roztok (rozpustná část) byl přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce je prováděna 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přídavkem vody, a roztoku chloridu sodného. Produkt byl promyt jedenkrát pomocí IPA, po té pomocí roztoku IPA:voda (85% obj./obj„ 4 x 500 ml). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Pro všechny reakce, „výtěžek reakce“ je uveden. To
- 17CZ 304977 B6 znamená procentuální zisk/ztráta produktu ve srovnání s množstvím hmotnosti HA-Na v reakci. Výtěžek reakce byl 91% (průměr tří opakování). Stanovení molekulové hmotnosti pomocí SECMALLS je 9,0xl04g/mol a polydisperzita = 1,52.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce (odpovídající 6,2% fotoreaktivních skupin) 'H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC (Obrázek 2), δ ppm: 6,4 - 114,9 (signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3), 7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kros-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 309 nm.
Příklad 13. Aktivace 3-(2-furyl) akrylové kyseliny pomocí benzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem
Hyaluronát sodný (30 g, 75 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 8,5 x 104 g/mol byl rozpuštěn ve 600 ml destilované vody. THF (300 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidů. Následně, 31 ml triethylaminu (TEA) bylo přidáno do reakční směsi (což odpovídá 3 ekvivalentům na HA dimer). Ve druhé nádobě, 20,73 g 2furfuryl-akrylové kyseliny odpovídající 2 ekvivalentům HA dimeru bylo rozpuštěno v THF (300 ml). Po té, 31 ml TEA (což odpovídá 3 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 0,2 ml benzoyl chloridu (což odpovídá 2 ekvivalentům na HA dimer). Aktivace byla prováděna po 30 minut při 0 °C. Po té, filtrovaný roztok (rozpustná část) byl přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce je prováděna 3 hodiny při 0 °C. Reakce byla ukončena přídavkem vody, a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt srážen nadbytkem isopropanolu (1000 ml). Produkt byl promyt jedenkrát pomocí IPA, po té pomocí roztoku IPA:voda (85% obj./obj., 4 x 500 ml). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Stanovení molekulové hmotnosti pomocí SEC-MALLS je 9,0x104 g/mol a polydisperzita = 1,52.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce (odpovídající 18±2% fotosenzitivních skupin) 'H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC, δ ppm: 6,4 - 114,9 (kros pík, signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3),
7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kros-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19- 7,62 ppm, 7,47 -7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 309 nm.
Příklad 14. Aktivace 3-(2-furyl) akrylové kyseliny pomocí 2,4,6-trichlorbenzoyl chloridu a přídavkem hyaluronanu, kde reakce je katalyzována pomocí DMAP
- 18CZ 304977 B6
Hyaluronát sodný (30 g, 75 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 8,5 x 104 g/mol byl rozpuštěn ve 600 ml destilované vody. THF (300 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně, 31 ml triethylaminu (TEA) bylo přidáno do reakční směsi (což odpovídá 3 ekvivalentům na HA dimer), následně 0,458 g 4-dimethylaminopyridinu (DMAP), odpovídající 0,05 ekvivalentům HA dimeru. Ve druhé baňce, 31 g 2— furfuryl-akrylové kyseliny odpovídající 3 ekvivalentům HA dimeru bylo rozpuštěno v THF (300 ml). Po té, 31 ml TEA (což odpovídá 3 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 35,1 ml 2,4,6-trichlorbenzoyl chloridu (což odpovídá 3 ekvivalentům na HA dimer). Aktivace byla prováděna po 30 minut. Poté filtrovaný roztok (rozpustná část) byl přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce je prováděna 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přídavkem vody a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt srážen nadbytkem isopropanolu (1000 ml). Produkt byl promyt jedenkrát pomocí IPA, po té pomocí roztoku IPA:voda (85% obj./obj., 4 x 500 ml). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Pro všechny reakce jsme uvedli „výtěžek reakce“. To znamená procentuální zisk/ztrátu produktu ve srovnání s množstvím hmotnosti HA-Na v reakci. Výtěžek reakce: 99%. V důsledku vysoké viskozity derivátu, molekulová hmotnost nemůže být stanovena pomocí SEC-MALLS metodologie vzhledem k možnému sesíťování.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce (odpovídající 30^40% fotosenzitivních skupin) ’H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC, δ ppm: 6,4 - 114,9 (kros pík, signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3),
7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kros-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Zmax = 309 nm.
Příklad 15. Aktivace 2-thienyl akrylové kyseliny pomocí 2,4,6-trichlorbenzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem
Hyaluronát sodný (5,0 g, 12,5 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 1,01 x 104 g/mol byl rozpuštěn ve 100 ml destilované vody. THF (50 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně, 3,5 ml triethylaminu odpovídajícího 2 ekvivalentům na HA dimer bylo přidáno do reakční směsi. Ve druhé baňce, 1,0 g 2thienyl-akrylové kyseliny bylo rozpuštěno v THF (50 ml). Po té, 2,5 ml TEA (což odpovídá 3 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 0,95 ml benzoyl chloridu (což odpovídá 0,5 ekvivalentu HA dimeru). Aktivace byla prováděna po 30 minut při 60 °C. Poté roztok byl filtrován a přidán do roztoku obsahujícího HA. Reakční směs byla míchána po 3 hodiny při 60 °C. Reakce byla ukončena přídavkem vody a roztoku chloridu sodného. Po té byl produkt srážen nadbytkem isopropanolu (250ml). Produkt byl promyt jedenkrát pomocí IPA, po té pomocí roztoku IPA:voda (85% obj./obj., 4 x 50 ml). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C.
Výtěžek reakce 92,18%, Mw derivátu (SEC-MALLS) je 1,08x105 a polydisperzita = 1,482 Chemický popis derivátu
Stupeň substituce (odpovídající 5% fotosenzitivních skupin) ’H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
-19CZ 304977 B6
2D HSQC, δ ppm: 6,4 - 114,9 (kros pík, signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3),
7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kros-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 314 nm.
Příklad 16. Aktivace 3-(2-thienyl) akrylové kyseliny pomocí 2,4,6-trichlorbenzoyl chloridu a přidání k hyaluronanu, kde reakce je katalyzována pomocí DMAP
Hyaluronát sodný (5,0 g, 12,5 mmol) s průměrnou molekulovou hmotností 1,01 x 105 g/mol byl rozpuštěn ve 100 ml destilované vody. THF (50 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku s cílem vyhnout se možnému srážení polysacharidu. Následně, 5,2 ml triethylaminu odpovídajícího 3 ekvivalentům na HA dimer bylo přidáno do reakční směsi, následně přidáno 0,076 g 4dimethyl aminopyridinu (DMAP). Ve druhé baňce, 6,36 g 2-thienyl-akrylové kyseliny bylo rozpuštěno v THF (50 ml). Po té, 5,2 ml TEA (což odpovídá 3 ekvivalentům na HA dimer) bylo přidáno do reakce, následně bylo přidáno 5,8 ml 2,4,6-trichlorbenzoyl chloridu (což odpovídá 3 ekvivalentům na HA dimer). Aktivace byla prováděna po 30 minut při teplotě místnosti (25 °C). Po té byl roztok filtrován a přidán do prvního roztoku (obsahujícího HA). Reakce byla prováděna po 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakce byla ukončena přídavkem vody, a roztoku chloridu sodného. Produkt byl promyt jedenkrát pomocí IP A, po té pomocí roztoku IPA:voda (85% obj./obj., 4 x 50 ml). Nakonec byla sraženina promyta ještě třikrát 100% IPA a sušena v sušárně při 40 °C. Výtěžek reakce 95%. Vzhledem k vysoké viskozitě derivátu, molekulová hmotnost nemohla být stanovena pomocí (SEC-MALLS) metodologie.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce (odpovídající 30% fotosenzitivních skupin) *H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
2D HSQC, δ ppm: 6,4 - 114,9 (kros pík, signál 1), 7,18 - 128,6 (signál 4), 7,47 - 132,2 signál 3),
7,62 - 129,7 (signál 5), 7,95 - 139,1 (signál 2).
H-H COSY: kros-pík signál 6,40 - 7,95 ppm, 7,19 - 7,62 ppm, 7,47 - 7,19 ppm.
DOSY NMR (500 MHz, D2O): 6,40 - 7,95 ppm: -11 do -12 log (m2/s), 1,90 - 4,70 ppm: -11 12 log (m2/s)
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 314 nm.
Příklad 17. Aktivace 3-(2-furanyl) akrylové kyseliny pomocí 4-methoxybenzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem
1,0 sodné soli hyaluronové kyseliny (2,5 mmol, 8,5xl04 g/mol) byl rozpuštěn ve 20 ml destilované vody. Tetrahydrofuran (10 ml) byl pomalu přidáván k tomuto roztoku, následně 0,7 ml triethylaminu (5 mmol). Ve druhé baňce, 0,17 g furyl akiylové kyseliny (1,25 mmol) bylo rozpuštěno v 10 ml tetrahydrofuranu, po 5 minutách smíchávání bylo přidáno 0,7 ml triethylaminu (TEA), následně 0,17 ml p-methoxybenzoyl chloridu (1,25 mmol). K aktivaci dochází po dobu 30 minut. Po té, byl přidán druhý roztok do prvního (obsahujícího kyselinu hyaluronovou). Směs se nechá reagovat 2 hodiny při teplotě místnosti. Po té bylo přidáno 200 ml absolutního isopropanolu, následně 1 ml přesyceného roztoku chloridu sodného. Produkt byl promyt třikrát pomocí 100% isopropanolu, a 4 krát pomocí roztoku isopropanol: voda (85:15) a 2 krát ještě jednou 100% isopropanolem. Reakční produkt byl sušen v sušárně přes noc a charakterizován. Stanovení molekulové hmotnosti pomocí SEC-MALLS je 9,5xl04 g/mol a polydisperzita = 1,52
-20CZ 304977 B6
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce (odpovídající 1% fotosenzitivních skupin) 'H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 309 nm.
Příklad 18. Aktivace 3-(2-furanyl) akrylové kyseliny pomocí 4-nitrobenzoyl chloridu a reakce s hyaluronanem
1,0 sodné soli hyaluronové kyseliny (2,5 mmol, 5x103 g/mol) byl rozpuštěn ve 20 ml destilované vody. Do tohoto roztoku bylo pomalu přidáno 10 ml tetrahydrofuranu, následně 0,7 ml triethylaminu (5 ml). Ve druhé baňce bylo rozpuštěno 0,17 g furyl akrylové kyseliny (1,25 mmol) v 10 ml tetrahydrofuranu, po 5 minutách smíchávání bylo přidáno 0,7 ml triethylaminu (TEA), následně 0,23 g p-nitro-benzoyl chloridu (1,25 mmol). K aktivaci dochází po dobu 30 minut. Po té, byl přidán druhý roztok do prvního (obsahujícího kyselinu hyaluronovou). Směs se nechá reagovat 2 hodiny při teplotě místnosti. Po té bylo přidáno 200 ml absolutního isopropanolu, následně 1 ml přesyceného roztoku chloridu sodného. Produkt byl promyt třikrát pomocí absolutního isopropanolu, a 4 krát pomocí roztoku isopropanohvoda (85:15) a 2 krát absolutním isopropanolem. Reakční produkt byl sušen v sušárně přes noc a charakterizován. Stanovení molekulové hmotnosti pomocí SEC-MALLS je 5,5xl03 g/mol a polydisperzita = 1,52
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce (odpovídající 1% fotosenzitivních skupin) *H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,95 (d, 1H)
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 309 nm.
Příklad 19. Aktivace Zrans-3-(3-pyridyl) akrylové kyseliny reakce s hyaluronanem
1,0 sodné soli hyaluronové kyseliny (2,5 mmol, 8,5xl04 g/mol) byl rozpuštěn ve 20 ml destilované vody. Isopropanol (10 ml) byl pomalu přidán do tohoto roztoku, následně 0,7 ml triethylaminu (5 mmol). Ve druhé baňce, 0,19 g Zra«s-3-(3-pyridyl) akrylové kyseliny (1,25 mmol) bylo rozpuštěno v 10 ml isopropanolu, po 5 minutách smíchávání bylo přidáno 0,8 ml diisopropylethylaminu (DIPEA), následně 0,15 ml benzoyl chloridu (1,25 mmol). K aktivaci dochází po dobu 30 minut. Po té, byl přidán druhý roztok do prvního (obsahujícího kyselinu hyaluronovou). Směs se nechá reagovat 2 hodiny při teplotě místnosti. Po té bylo přidáno 200 ml absolutního isopropanolu, následně 1 ml přesyceného roztoku chloridu sodného. Produkt byl promyt třikrát pomocí absolutního isopropanolu, a 4 krát pomocí roztoku isopropanol: voda (85:15) a 2 krát absolutním isopropanolem. Reakční produkt byl sušen v sušárně přes noc a charakterizován. Stanovení molekulové hmotnosti pomocí SEC-MALLS je 9,0xl04 g/mol a polydisperzita = 1,6.
Stupeň substituce byl stanoven na 9% (odpovídající množství fotosenzitivních skupin). *H NMR spectrum je znázorněno na obrázku 2.
Chemický popis derivátu 'H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,74 (d, 1H, J = 15,9), 7,53 (m, 1H), 7,70 (d, 1H, J = 17,5), 8,09 (m, 1H), 8,55 (m, 1H), 8,76 (m, 1H).
UV/vis (0,05 %; H2O) Ámax = 263 nm.
-21 CZ 304977 B6
Příklad 20. Aktivace 3-(4-imidazolyl) akrylové kyseliny a reakce s hyaluronanem
1,0 sodné soli hyaluronové kyseliny (2,5 mmol, 8,5xl04 g/mol) byl rozpuštěn ve 20 ml destilované vody. Isopropanol (10 ml) byl pomalu přidán do tohoto roztoku, následně 0,7 ml triethylaminu (5 mmol). Ve druhé baňce, 0,173 g 3-(4-imidazolyl) akrylové kyseliny (1,25 mmol) bylo rozpuštěno v 10 ml isopropanolu, po 5 minutách smíchávání bylo přidáno 0,7 ml triethylaminu (TEA), následně 0,15 ml benzoyl chloridu (1,25 mmol). K aktivaci dochází po dobu 30 minut. Po té, byl přidán druhý roztok do prvního (obsahujícího kyselinu hyaluronovou). Směs se nechá reagovat 2 hodiny při teplotě místnosti. Po té bylo přidáno 200 ml absolutního isopropanolu, následně 1 ml přesyceného roztoku chloridu sodného. Produkt byl promyt třikrát pomocí absolutního isopropanolu, a 4 krát pomocí roztoku isopropanol: voda (85:15) a 2 krát absolutním isopropanolem. Reakční produkt byl sušen v sušárně přes noc a charakterizován.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce (odpovídající 5% fotosenzitivních skupin) 'H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,40 (m, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,38 (m, 1H), 7,52 (2H), 7,71 (m, 1H), 8,0 (1H).
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 286 nm.
Příklad 21. Aktivace fenyl akrylové kyseliny pomocí benzoyl chloridu a reakce s kyselinou hyaluronovou
1,0 sodné soli hyaluronové kyseliny (2,5 mmol, 5xl03 g/mol) byl rozpuštěn ve 10 ml destilované vody. Isopropanol (5 ml) byl pomalu přidán do tohoto roztoku, následně 0,7 ml triethylaminu (5 mmol). Ve druhé baňce, 0,37 g fenyl akrylové kyseliny (2,5 mmol) bylo rozpuštěno v 5 ml isopropanolu, po 5 minutách smíchávání bylo přidáno 0,7 ml triethylaminu (5 mmol), následně 0,29 ml benzoyl chloridu (1,25 mmol). K aktivaci dochází po dobu 30 minut. Po té, byl přidán druhý roztok do prvního (obsahujícího kyselinu hyaluronovou). Směs se nechá reagovat 2 hodiny při teplotě místnosti. Po té bylo přidáno 200 ml absolutního isopropanolu, následně 1 ml přesyceného roztoku chloridu sodného. Produkt byl promyt třikrát pomocí absolutního isopropanolu, a 4 krát pomocí roztoku isopropanol: voda (85:15) a 2 krát absolutním isopropanolem. Reakční produkt byl sušen v sušárně přes noc a charakterizován.
Chemický popis derivátu
Stupeň substituce (odpovídající 9% fotosenzitivních skupin) 'H NMR (500 MHz, D2O), δ ppm, pro linker: 6,64 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,50 (bs, 3H), 7,70 (m, 2H), 7,52 (2H), 7,82 (d, J = 16,5 Hz, 1H).
UV/vis (0,05 %; H2O) Xmax = 281 nm.
Příklad 22. Získání nanovláken obsahujících nativní HA a esterové deriváty HA
Roztok je připraven rozpuštěním derivátů popsaných v tabulce 1. Byly tedy připraveny a použity roztoky, které mají koncentraci konkrétního esterového derivátu HA dříve popsaných příkladů a polyethylenoxid byl 5% (hm./obj.) ve vodě, udržující poměr 80:20 (HA/PEO 4x 105 g/mol. Tyto nanovláknové vrstvy byly vytvořeny z těchto roztoků. Elektrostatické zvlákňování bylo provedeno za použití široké multi trysky používající zařízení 4spin® (CONTIPRO, Biotech s.r.o.). Nicméně výroba nanovláken není omezena tímto zařízením. Nanovlákna byla produkována pomocí sběrné elektrody ve vzdálenosti 20 cm a měnícího se elektrického napětí od 60-80kV. A povrchové napětí roztoku (58,1 mN. m_1). Vodivost a viskozita produkovaných roztoků jsou shrnuty v tabulce 1. Mohou být získány nanovlákna různých velikostí průměrů v průměru od 99 až 150 nm. (viz tabulka 1). Mikrostruktura nanovláken byla charakterizována pomocí SEM (jako
-22CZ 304977 B6 vybraný příklad, mikrostruktura derivátu se stupněm substituce 5% odpovídajícím předchozím příkladům je uvedena na obrázku 3 a 4, podle pořadí). Tabulka rovněž obsahuje referenční vzorek nanovláken získaných na základě nativní hyaluronové kyseliny (na vstupu 1) a esterových derivátů připravených v dříve popsaných příkladech, které tvořily (příklady 2,3,4,12,13) nebo netvořily nanovlákna (popsáno v příkladech 14, 16). Poslední dva příklady používají toxický katalyzátor DMAP, který vyvolává samosesíťování před elektrostatickým zvlákňováním. Nanovlákna byla připravena alespoň ve třech nezávislých časech.
Tabulka 1. Parametry zpracování HA a 3-(2-Furanyl)akryloyl esteru hyaluronátu sodného jak je popsáno v průběžných příkladech
Příklady DSfoto(%) Viskozita Elektrická vodivost pS cm1 Střední průměr vláken (nm)
HA+ PEO (400,000) 0 3,54 6,2-7.3 109,1-121,68
2 4,242 1,25 4,1 133,1
3 5,342 1,40 4,9 120,7± 10
12 6,242 1,54 4,5 127,4
4 104 2 1,79 4.9 126,543,5
13 184 2 1,85 4,4 141,5415,9
14,16 30-40 3,5 4.2 žádný
žádný= nezískáno
Příklad 23. Získání nanovláken obsahujících esterový derivát HA připravený v příkladu 3 a různé složení polyethylenoxidu
Zvlákňovací roztok byl připraven rozpuštěním derivátů z příkladu 3, charakterizovaných molekulovou hmotností 8,6 x 104 g/mol a polyethylenoxidu molekulové hmotnosti 6x10s g/mol ve vodě. Roztok byl připraven mícháním 8 hodin. Použitá koncentrace byla 9,7% (hm./hm.) a hmotnostní poměr HA/PEO byl (74/26). Zvlákňování bylo provedeno elektrostatickým zvlákňováním z široké multitrysky v zařízení 4Spin® od Contipro Biotech s.r.o., kde sběrná elektroda měla elektrické napětí mezi (60 až 80) kV, roztok vykazoval povrchové napětí roztoku 55,1 mN.m’1 a vodivost 7,35 mS.cm1, a viskozitu 6,72 Pa.s. Střední průměr elektrostaticky zvlákňovaných nanovláken detekovaných pomocí skenovací elektronové mikroskopie a analýzy obrazu byla okolo 261 nm.
Příklad 24. Získání nanovláken obsahujících esterový derivát HA v příkladu 3 a polyvinylalkohol
Roztok je připravený rozpuštěním derivátů popsaných v příkladu 3. Tedy, koncentrace 5% (hm./hm. ve vodě a polyvinylalkohol (PVA) molekulové hmotnosti 4xl05 g/mol udržující poměr 80:20 (HA/PVA). Nanovláknové vrstvy byly vytvořeny z těchto roztoků. Elektrostatické zvlákňování bylo provedeno pomocí široké multitiysky pomocí zařízení 4spin® (CONTIPRO, Biotech s.r.o.). Nicméně produkce nanovláken není limitována na toto zařízení. Nanovlákna byla produkována pomocí sběrné elektrody ve vzdálenosti 20 cm a měnícího se elektrického napětí od 6080kV. A povrchové napětí roztoku (58,1 mN. m_1) a konduktivita 7,35 mS.cm-1, a viskozita 6,5 Pa s. Mikrostruktura elektrostaticky zvlákňovaných nanovláken je ukázána na obrázku 5.
-23 CZ 304977 B6
Příklad 25. Získání nanovláken obsahujících esterový derivát HA v příkladu 3 a polyvinylpyrrolidon
Roztok je připravený rozpuštěním derivátů popsaných v příkladu 3 ve směsi 1:1 voda a ethanol. Tedy, koncentrace 5% (hm./hm. ve vodě a polyvinyl pyrrolidonu molekulové hmotnosti 4x 105 g/mol udržující poměr 80:20 (HA/PVA). Tyto nanovláknové vrstvy byly vytvořeny z těchto roztoků. Elektrostatické zvlákňování bylo provedeno pomocí široké multitiysky pomocí zařízení 4Spin® (CONTIPRO, Biotech s.r.o.). Nicméně produkce nanovláken není limitována na toto zařízení. Nanovlákna byla produkována pomocí sběrné elektrody ve vzdálenosti 20 cm a měnícího se elektrického napětí od 60 až 80kV.
Příklad 26. Získání nanovláken obsahujících esterové deriváty HA a PEO
Roztok je připravený rozpuštěním derivátů popsaných v příkladu 15 nebo s derivátem popsaným v příkladu 20. Tedy roztoky, které mají koncentraci tohoto konkrétního esterového derivátu HA dříve popsaných příkladů a polyethylenoxid byl 5% (hm./obj.) ve vodě, a udržující poměr 80:20 (HA/PVA 4x 105 g/mol) byl připraven a použit. Tyto nanovláknové vrstvy byly vytvořeny z těchto roztoků. Elektrostatické zvlákňování bylo provedeno pomocí široké multitrysky pomocí zařízení 4Spin® (CONTIPRO, Biotech s.r.o.). Nicméně produkce nanovláken není limitována na toto zařízení. Nanovlákna byla produkována pomocí sběrné elektrody ve vzdálenosti 20 cm a měnícího se elektrického napětí od 60 až 80kV.
Příklad DSfM0(%) Viskozita Pa.s Elektrická vodivost gS cm'1 Střední průměr vlákna
15 5+2 1,29 4.8 99,58+10.9
20 5+2 1,35 5,2 100,22 + 4,4
Příklad 27. UV-vyvolané sesíťování nanovláken
Různé vzorky nanovláknových sítí byly připraveny, jak je popsáno v příkladu 22 a vystaveny UV záření pece navržené firmou Eppendorf Czech & Slovakia s.r.o. pod označením CL-1000 (302 nm). Toto zařízení poskytuje rovnoměrné UV záření v UV/Vis oblasti spektra, je obvykle od 280 do 315 nm s konstantním výkonem (přibližně 6,75 mW.cm2). Maximální hodnota relativní energie záření je deklarována při vlnové délce 302 nm. UV záření je vyzařováno pěti paralelními výbojkovými trubicemi, z nichž každá má výkon 8 watů, umístěnými pod horní stěnou. Dávka záření je E = 24300 pJ.cm2) a konstantní výkon (6,75 mW.cm2). Nanovlákna jsou vystavena po dobu 5, 10, 20, 30 a 60 minut po 10 nebo 60 minutách. Mikrostruktura nanovláken po bobtnání v PBS odpovídající příkladu 3 v tabulce 1 je ukázána na obrázku 6.
Příklad 28. Výpočet obsahu vody nanovláknových materiálů z nich získaných
Vzorky kruhového tvaru se středním průměrem 5,0 cm byly vyříznuty speciálním nástrojem. Oblast vzorků byla stanovena jako 0,0078 metrů čtverečných. Abychom byly přesnější, počáteční množství derivátu bylo váženo s cílem mít ve všech případech asi 0,2 g nebo 0,5 g na vzorek podle pořadí. Po té byly vzorky ponořeny do demineralizované vody nebo chloridu sodného o koncentraci 0,9 % (hm./obj.) chloridu sodného rozpuštěného ve vodě. Vzorky byly ponořeny do definovaného objemu 30 ml na 0,5 g vzorku a 12 ml v případě 0,2 g vzorku na 5 minut. Po máčení materiálu byl vzorek filtrován přes pletivo (velikost pórů 90-160 pm). Materiál byl pak vážen, takže množství absorbované vody nebo chloridu sodného bylo stanoveno (ws). Nasákavost je
-24CZ 304977 B6 stanovena pomocí vzorce Qw = (Wd-ws/wd) x 100; kde wd a ws jsou hmotnosti suchého vzorku a nabobtnalého podle pořadí.
Bobtnacf medium Počáteční hmotnost (g) Čas sesíťování (m) Nasákavost Qw
h2o 0,2 10 20,0
h2o 0,5 10 20,6
0,9% (hm./obj.) NaCl 0,2 10 10,2
0.9%(hm./obj.) 0,2 60 17,1
NaCl
Příklad 29. Test životaschopnosti buněk furan-2-akryl esteru hyaluronanu sodného
Biokompatibilita esterů kyseliny hyaluronové, jak je popsáno v dříve popsaných příkladech (19), byla testována pomocí 3T3-NIH buněčných linií. Tedy, 0,1 (hm./obj.) % roztok derivátu byl rozpuštěn v kompletním mediu buněčné kultuiy během míchání přes noc. Po té byl roztok filtrován přes sterilní filtrační zařízení (0,22 pm), vytvářející konečné koncentrace derivátu například 1, 0,5 a 0,1 mg/ml. 3000 buněčných linií (3T3-NIH) bylo nasazeno do jamek 96 jamkových testovacích destiček. Buňky byly pěstovány po dobu 24 hodin před přidáním testovaných roztoků. Buněčná životaschopnost byla měřena 0, 24, 48, 72 hodin po ošetření pomocí testu s 3-(4,5dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyl tetrazolium bromidem (MTT). Stručně, 20 pl MTT zásobního roztoku (5 mg/ml) bylo přidáno do 200 pl media buněčné kultury v každé jamce. Destičky byly inkubovány při 37 °C v inkubátoru buněčných kultur po 2,5 hodiny. MTT roztok byl odstraněn a bylo přidáno 220 pl lyzačního roztoku. Buňky byly lyžovány po 30 minut při teplotě místnosti na orbitální třepačce a optická hustota byla měřena pomocí Microplate reader VERSAmax při 570 nm. Experimentální provedení bylo doplněno sadou kontrolních buněk pěstovaných v běžném mediu bez ošetření a blankovými vzorky. MTT test byl využit ke získání základních informací o buněčném metabolismu a proliferaci. Tedy, tyto deriváty byly nalezeny tak, aby nebyly toxické do koncentrace 1000 pg/ml.
Příklad 30. Vyhodnocení fyto-cytotoxicity derivát furan-2-akiyl ester hyaluronanu sodného
000 buněk (3T3-NIH) bylo vyseto do jamek 96-jamkových destiček. Buňky byly pěstovány 24 hodin před ošetřením pomocí testovaných roztoků v plném mediu. Poté byly buňky opláchnuty PBS a inkubovány po 1 hodinu s deriváte, dříve rozpuštěným v PBS (1-1000 pg/ml). Buňky s derivátem byly ozářeny dávkou 0,1 J/cm2 UVA/UVB pomocí lampy (Orien Instruments). Výkon lampy byl stanoven pomocí fotometru PMA 2100 (Solární světlo Co.). 10 minut po expozici byl supematant odstraněn a bylo přidáno plné medium. Životaschopnost buněk byla měřena 24 hodin po ozáření a pomocí MTT metody. Experimentální provedení bylo doplněno sadou kontrolních buněk pěstovaných v běžném mediu bez ošetření a UV záření a také pozitivní a negativní kontrolou. Test fototoxicity může být použit k identifikaci možného fototoxického účinku derivátu furanyl-akryl esteru hyaluronanu sodného. Test fototoxicity byl opakován minimálně čtyřikrát a jsou vypočítány průměr (v procentech) ve srovnání s kontrolou a směrodatná odchylka průměrů (SEMs). Optická hustota byla měřena a procento ve srovnání s kontrolou bylo počítáno jako funkce času.
-25CZ 304977 B6
Příklad 31. Test životaschopnosti buněk thiofenylakryl esteru hyaluronanu sodného
Thiofenylakryl ester hyaluronanu sodného připravený, jak bylo popsáno ve výše, uvedených příkladech a jeho kompatibilita byla testována pomocí 3T3-NIH buněčných linií. Tedy, 0,1 (hm./obj.) % roztok derivátu byl rozpuštěn v kompletním mediu pro buněčnou kultivaci důkladným promícháváním (přes noc). Způsob popsaný v příkladu 7 byl proveden rovněž s tímto derivátem. Bylo zjištěno, že tyto deriváty také nejsou toxické do koncentrace 1000 μΐ/ml.
Příklad 32. Vyhodnocení íyto-cytotoxicity derivát sódium thiofenyl-akrylový ester hyaluronanu
Thiofenylakryl ester hyaluronanu sodného připravený, jak bylo popsáno ve výše uvedených příkladech, a jeho biokompatibilita byla testována pomocí 3T3-NIH buněčných linií a testu fototoxicity. Způsob popsaný v příkladu 9 byl proveden také s tímto derivátem. Bylo zjištěno, že derivát také není fotocytotoxický. Všechny deriváty byly testovány jako necytotoxické a ne-fotocytotoxické pro 3T3-NIH buněčné linie. Tedy, životaschopnost buněk po jejich ošetření nebyla výrazně změněna v celém monitorovaném intervalu.

Claims (27)

1. Nanovlákna na bázi esterových derivátů kyseliny hyaluronové a její soli, vyznačující se tím, že obsahují fototvrditelný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo její soli obecného vzorce IV kde n je celé číslo v rozmezí 1 až 5000 dimerů,
R3 jsou nezávisle H nebo COCH=CHR', kde R1 je 5- nebo óčlenný aryl nebo 5- nebo óčlenný heteroaryl mající alespoň jeden nebo více identických nebo odlišných heteroatomů vybraných ze skupiny obsahující N, O, S, za předpokladu, že alespoň jeden R3 derivátu je COCH=CHR‘;
R4 je íT nebo farmaceuticky přijatelná sůl; a alespoň jeden nosný polymer.
2. Nanovlákna podle nároku 1, vyznačující se tím, že R1 je vybrán ze skupiny obsahující fenyl, furyl, furfuryl, thienyl, thiofenyl, pyridyl nebo imidazolyl;
R4 je vybrán ze skupiny obsahující některý z iontů alkalických kovů nebo iontů kovů alkalických zemin, s výhodou Na+, K+, Mg2+ nebo Li+.
3. Nanovlákna podle kteréhokoliv z nároků la2, vyznačující se tím, že množství
COCH=CHR’ ve fototvrditelném esteru HA-derivátu je od 0,1 do 20% v rámci 100 dimerů hyaluronové kyseliny nebo její soli, s výhodou 5 až 10 %, výhodněji 5 %.
-26CZ 304977 B6
4. Nanovlákna podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že nosný polymer je vybrán ze skupiny obsahující polyvinylalkohol, polyakrylovou kyselinu, polyethylenoxid, polyvinylpyrrolidon.
5. Nanovlákna podle nároku 4, vyznačující se tím, že množství nosného polymeru je v rozmezí 50 až 99 % (hm./hm.), s výhodou v rozmezí 70 až 90 % (hm./hm.), výhodněji 80 % (hm./hm.).
6. Nanovlákna podle kteréhokoliv z nároků laž5, vyznačující se tím, že obsahují biologicky kompatibilní polymer, s výhodou karboxymethyl celulózu, želatinu, chitosan, polykaprolakton, kyselinu polymléčnou, polyamid, polyuretan, kyselinu poly-0aktid-co-glykolovou); nebo jejich směs nebo kopolymery.
7. Nanovlákna podle kteréhokoliv z nároků laž6, vyznačující se tím, že jejich střední průměr je mezi 1 až 500 nm, s výhodou 99 až 300 nm.
8. Nanovlákna podle kteréhokoliv z nároků laž7, vyznačující se tím, že jsou ve formě gelu.
9. Způsob výroby nanovláken podle kteréhokoliv z nároků 1 až 8, vyznačující se tím, že α,β-nenasycená substituovaná akrylové kyselina obecného vzorce I
HO
O kde
R1 je 5- nebo óčlenný aryl nebo 5- nebo óčlenný heteroaryl, který má alespoň jeden nebo více identických nebo různých heteroatomů vybraných ze skupiny obsahující N, O, S;
je aktivována pomocí substituovaného nebo nesubstituovaného benzoyl chloridu nebo jeho derivátů obecného vzorce II
Cl kde R2 jejeden nebo více substituentů vybraných ze skupiny obsahující H, -NO2, -COOH, halogenidy, Cj-Céalkyloxy, s výhodou halogenidy, methoxy nebo ethoxy, výhodněji Cl;
v přítomnosti organické báze, s výhodou terciálního aminu, výhodněji triethylaminu, diisopropylethylaminu nebo Ν,Ν-diisopropylethylaminu; směsi vody a vodou mísitelného polárního nebo nepolárního rozpouštědla za vzniku reaktivního anhydridu obecného vzorce III (III), kde
R1 a R2 jsou jak je definováno výše,
-27CZ 304977 B6 který reaguje s kyselinou hyaluronovou nebo její solí v přítomnosti organické báze, s výhodou terciálního aminu, výhodněji triethylaminu, diisopropylethylaminu nebo N,Ndiisopropylethylaminu; směsi vody a vodou mísitelného polárního nebo nepolárního rozpouštědla za vzniku fototvrditelného esterového derivátu kyseliny hyaluronové nebo její soli obecného vzorce IV, jak je definováno v nároku 1 nebo nároku 2, kteiý je rozpuštěn v nosném polymeru molekulové hmotnosti od 5 x 104 g/mol do 1 x 106 g/mol, s výhodou 4 x
105 g/mol ve vodě za vzniku zvlákňovacího roztoku, který je zvlákňován elektrostatickým zvlákňováním.
10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že α,β-nenasycená substituovaná akrylová kyselina je 5členná nebo óčlenná aromatická nebo heteroaromatická akrylová kyselina obecného vzorce Ia nebo Ib
X'
OH
O (Ib) kde X je vybrán z C, O, S, N, s výhodou O nebo N a substituovaný benzoyl chlorid obecného vzorce lije trichlorbenzoyl chlorid.
11. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že α,β-nenasycená substituovaná akrylová kyselina je 3-(2-furyl) akrylová kyselina.
12. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 9 až 11, vyznačující se tím, že nosný polymer je vybrán ze skupiny obsahující polyvínylalkohol, polyakrylovou kyselinu, polyethylenoxid, polyvinylpyrrolidon.
13. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 8 až 11, vyznačující se tím, že aktivace α,β-nenasycené substituované akrylové kyseliny obecného vzorce I je prováděna od 5 do 120 minut při teplotě v rozmezí od 0 °C až 60 °C, s výhodou 25 °C do 60 °C, výhodněji po 30 minut při 25 °C.
14. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že množství reaktivního anhydridu smíchaného s kyselinou hyaluronovou nebo její solí odpovídá 0,01 až 5 ekvivalentům, s výhodou 0,5 až 2 ekvivalentům, výhodněji 0,5 ekvivalentům na dimer kyseliny hyaluronové nebo její soli.
15. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 9ažl4, vyznačující se tím, že kyselina hyaluronová nebo její sůl má molekulovou hmotnost od 5xl03 do l,6xl06 g/mol, s výhodou od l,5xl04 do 2,5xl05 g/mol, výhodněji 8,5xl04 do l,20xl05 g/mol.
16. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 9 až 15, vyznačující se tím, že tvorba fototvrditelného esterového derivátu kyseliny hyaluronové nebo její soli je prováděna po 1 až 48 hodin, s výhodou 1 až 3 hodiny.
17. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 9 až 16, vyznačující se tím, že tvorba fototvrditelného esterového derivátu kyseliny hyaluronové nebo její soli je prováděna při teplotách v rozsahu 0 °C až 80 °C, s výhodou od 20 °C do 60 °C, výhodněji při 25 °C.
18. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 9ažl7, vyznačující se tím, že vodou mísitelné polární nebo nepolární rozpouštědlo je vybráno ze skupiny obsahující isopropanol, aceton, ethyl acetát, dimethyl sulfoxid, acetonitril, dimethylformamid, tetrahydrofuran, s výhodou isopropanol, tetrahydrofuran, výhodněji isopropanol.
-28CZ 304977 B6
19. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 9 až 18, vyznačující se tím, že množství vody ve směsi voda a vodou mísitelné polární rozpouštědlo je od 10 % do 99 % obj/obj., s výhodou 50 % obj./obj.
20. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 9 až 19, vyznačující se tím, že koncentrace fototvrditelného esterového derivátu kyseliny hyaluronové nebo její soli ve zvlákňujícím roztoku je v rozmezí od 0,5 do 12% (hm./obj.), s výhodou od 5 do 7,5% (hm./obj.), výhodněji 5% (hm./obj).
21. Způsob fototvrzení nanovláken definovaných v kterémkoliv z nároků laž9, vyznačující se tím, že nanovlákna jsou fototvrzena pomocí světelného záření v rozsahu UV-Vis vlnových délek, přičemž dochází k cykloadici alespoň dvou esterových skupin alespoň dvou molekul kyseliny hyaluronové, nebo její soli obecného vzorce IV za vzniku sloučeniny mající cyklobutanový kruh obecného vzorce V kde
R1 je definován v nároku 1 a
R5 je hlavní řetězec kyseliny hyaluronové nebo její soli.
22. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že UV-světlo má vlnovou délku v rozmezí od 280 nm do 750 nm, s výhodou 302 nm.
23. Způsob podle nároku 21 nebo nároku 22, vyznačující se tím, že fototvrzení je prováděno od 2 minut do 60 minut, s výhodou od 3 do 10 minut.
24. Fototvrzená nanovlákna na bázi derivátů kyseliny hyaluronové, vyznačující se tím, že obsahují sloučeninu, která má cyklobutanový kruh vzorce V, definovaný v nároku 21.
25. Přípravek obsahující fototvrzená nanovlákna, vyznačující se tím, že fototvrzená nanovlákna jsou, jak je definováno v nároku 24 a že přípravek je ve formě vybrané ze skupiny obsahující vrstvu, film, síť, obvaz rány nebo tkáňové skafold.
26. Přípravek podle nároku 25 pro použití v kosmetice, lékařství nebo regenerativní medicíně.
27. Přípravek podle nároku 26 pro použití při péči o rány, nebo v místech pro vnější nebo vnitřní použití.
CZ2013-914A 2013-11-21 2013-11-21 Nanovlákna obsahující fototvrditelný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo její soli, fototvrzená nanovlákna, způsob jejich syntézy, přípravek obsahující fototvrzená nanovlákna a jejich použití CZ2013914A3 (cs)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2013-914A CZ2013914A3 (cs) 2013-11-21 2013-11-21 Nanovlákna obsahující fototvrditelný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo její soli, fototvrzená nanovlákna, způsob jejich syntézy, přípravek obsahující fototvrzená nanovlákna a jejich použití
US15/038,078 US20160312385A1 (en) 2013-11-21 2014-11-21 Nanofibers Containing Photocurable Ester Derivative of Hyaluronic Acid or Its Salt, Photocured Nanofibers, Method of Synthesis Thereof, Preparation Containing Photocured Nanofibers and Use Thereof
EP14827154.7A EP3071602B1 (en) 2013-11-21 2014-11-21 Nanofibers containing photocurable ester derivative of hyaluronic acid or its salt, photocured nanofibers, method of synthesis thereof, preparation containing photocured nanofibers and use thereof
KR1020167016462A KR102366202B1 (ko) 2013-11-21 2014-11-21 히알루론산 또는 이의 염의 광경화성 에스테르 유도체를 포함하는 나노섬유, 광경화된 나노섬유, 이의 제조 방법, 광경화된 나노섬유를 포함하는 조제물 및 이의 용도
PCT/CZ2014/000138 WO2015074632A1 (en) 2013-11-21 2014-11-21 Nanofibers containing photocurable ester derivative of hyaluronic acid or its salt, photocured nanofibers, method of synthesis thereof, preparation containing photocured nanofibers and use thereof
ES14827154.7T ES2648311T3 (es) 2013-11-21 2014-11-21 Nanofibras que contienen derivado éster fotocurable de ácido hialurónico o su sal, nanofibras fotocuradas, método de síntesis de las mismas, preparación que contiene nanofibras fotocuradas y su uso
BR112016011519A BR112016011519A8 (pt) 2013-11-21 2014-11-21 Nanofibras à base de derivados de éster de ácido hialurônico e seu sal, método de síntese de nanofibras, método de fotocura de nanofibras, nanofibras fotocuradas à base de derivados de ácido hialurônico, preparação compreendendo nanofibras fotocuradas

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2013-914A CZ2013914A3 (cs) 2013-11-21 2013-11-21 Nanovlákna obsahující fototvrditelný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo její soli, fototvrzená nanovlákna, způsob jejich syntézy, přípravek obsahující fototvrzená nanovlákna a jejich použití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ304977B6 true CZ304977B6 (cs) 2015-02-25
CZ2013914A3 CZ2013914A3 (cs) 2015-02-25

Family

ID=52347048

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2013-914A CZ2013914A3 (cs) 2013-11-21 2013-11-21 Nanovlákna obsahující fototvrditelný esterový derivát kyseliny hyaluronové nebo její soli, fototvrzená nanovlákna, způsob jejich syntézy, přípravek obsahující fototvrzená nanovlákna a jejich použití

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20160312385A1 (cs)
EP (1) EP3071602B1 (cs)
KR (1) KR102366202B1 (cs)
BR (1) BR112016011519A8 (cs)
CZ (1) CZ2013914A3 (cs)
ES (1) ES2648311T3 (cs)
WO (1) WO2015074632A1 (cs)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ309182B6 (cs) * 2021-01-26 2022-04-20 Contipro A.S. Prostředek pro hojení ran, způsob jeho výroby a použití

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2017071873A (ja) * 2015-10-07 2017-04-13 キヤノン株式会社 ポリマーナノファイバ集積体及びその製造方法
CZ307158B6 (cs) * 2016-12-23 2018-02-07 Contipro A.S. Oftalmologický prostředek
KR101884873B1 (ko) 2017-10-12 2018-08-02 충남대학교산학협력단 반응기를 가지는 섬유 및 이의 제조방법
KR102203403B1 (ko) * 2019-04-10 2021-01-15 주식회사 아이코어바이오 신규한 구조를 가지는 고분자, 이의 제조 방법, 고분자로부터 합성된 나노섬유 및 이의 제조 방법
WO2022063312A1 (zh) * 2020-09-28 2022-03-31 吾奇生物医疗科技(江苏)有限公司 透明质酸水凝胶和透明质酸膜及其制备方法和应用
CN115558040B (zh) * 2022-09-30 2024-01-23 华熙生物科技股份有限公司 一种无防腐剂添加的透明质酸或其盐的生产方法
CN116874640B (zh) * 2023-07-24 2025-08-08 江南大学 一种长驻留的用于头发修护的透明质酸钠衍生物及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010105582A1 (en) * 2009-03-17 2010-09-23 Contipro C A.S. A method of modification of hyaluronic acid by means of (o-acyl-o'-alkyl carbonate - substituted pyridine) complex
CZ302994B6 (cs) * 2010-12-31 2012-02-08 Cpn S.R.O. Hyaluronová vlákna, zpusob jejich prípravy a použití
EP2522337A2 (en) * 2011-05-13 2012-11-14 Rottapharm S.P.A. Hyaluronic acid esters, their preparation and use in dermatology

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US216453A (en) * 1879-06-10 Improvement in thill-supports for vehicles
GB1527592A (en) 1974-08-05 1978-10-04 Ici Ltd Wound dressing
US5522879A (en) 1991-11-12 1996-06-04 Ethicon, Inc. Piezoelectric biomedical device
JP2855307B2 (ja) 1992-02-05 1999-02-10 生化学工業株式会社 光反応性グリコサミノグリカン、架橋グリコサミノグリカン及びそれらの製造方法
CA2435491C (en) 2001-01-31 2010-02-02 Seikagaku Corporation Crosslinked polysaccharide sponge
EP1249247B1 (en) 2001-03-30 2007-02-28 Chisso Corporation Pharmaceutical preparation for the treatment of gynecological diseases
ITPD20020064A1 (it) 2002-03-12 2003-09-12 Fidia Advanced Biopolymers Srl Derivati esterei dell'acido ialuronico per la preparazione di idrogelda utilizzare in campo biomedico, sanitario e chirurgico e come sistem
US7235295B2 (en) * 2003-09-10 2007-06-26 Laurencin Cato T Polymeric nanofibers for tissue engineering and drug delivery
CA2538090C (en) * 2003-09-12 2012-03-06 Seikagaku Corporation Polysaccharide pseudo-sponge
ITMI20040605A1 (it) 2004-03-29 2004-06-29 Coimex S C R L United Companie Esteri butirrici dell'acido ialuronico a basso grado di sostituzione procedimento per la loro preparazione ed uso
US7830833B2 (en) * 2004-05-04 2010-11-09 Qualcomm Incorporated Method and apparatus for ranking of media services and program packages
EP1942117A1 (en) 2006-12-29 2008-07-09 Sigea S.R.L. Derivatives of acid polysaccharides
JP5393662B2 (ja) 2007-06-22 2014-01-22 イノベイティブ サーフェイス テクノロジーズ， インコーポレイテッド 潜在反応基を含有するナノ繊維
JP2010014784A (ja) 2008-07-01 2010-01-21 Fuji Xerox Co Ltd 光書込型表示装置、書込装置、及び光書き込み方法
US20110111012A1 (en) 2009-11-12 2011-05-12 Hemcon Medical Technologies, Inc. Nanomaterial wound dressing assembly
JP2013049927A (ja) * 2011-08-30 2013-03-14 Shinshu Univ 生体適合性を有するナノ繊維及びその製造方法並びに創傷被覆材
CZ2012282A3 (cs) * 2012-04-25 2013-11-06 Contipro Biotech S.R.O. Zesítovaný derivát hyaluronanu, zpusob jeho prípravy, hydrogel a mikrovlákna na jeho bázi
CZ2012844A3 (cs) * 2012-11-27 2014-02-05 Contipro Biotech S.R.O. Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010105582A1 (en) * 2009-03-17 2010-09-23 Contipro C A.S. A method of modification of hyaluronic acid by means of (o-acyl-o'-alkyl carbonate - substituted pyridine) complex
CZ302994B6 (cs) * 2010-12-31 2012-02-08 Cpn S.R.O. Hyaluronová vlákna, zpusob jejich prípravy a použití
EP2522337A2 (en) * 2011-05-13 2012-11-14 Rottapharm S.P.A. Hyaluronic acid esters, their preparation and use in dermatology

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ309182B6 (cs) * 2021-01-26 2022-04-20 Contipro A.S. Prostředek pro hojení ran, způsob jeho výroby a použití

Also Published As

Publication number Publication date
US20160312385A1 (en) 2016-10-27
BR112016011519A8 (pt) 2018-04-03
BR112016011519A2 (cs) 2017-08-08
KR20160089431A (ko) 2016-07-27
WO2015074632A1 (en) 2015-05-28
ES2648311T3 (es) 2017-12-29
EP3071602A1 (en) 2016-09-28
CZ2013914A3 (cs) 2015-02-25
EP3071602B1 (en) 2017-08-23
KR102366202B1 (ko) 2022-02-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3071602B1 (en) Nanofibers containing photocurable ester derivative of hyaluronic acid or its salt, photocured nanofibers, method of synthesis thereof, preparation containing photocured nanofibers and use thereof
Nisar et al. γ-Radiation induced L-glutamic acid grafted highly porous, pH-responsive chitosan hydrogel beads: A smart and biocompatible vehicle for controlled anti-cancer drug delivery
ES2237971T3 (es) Procedimiento de reticulacion de polisacaridos carboxilados.
Qi et al. Design of Salecan-containing semi-IPN hydrogel for amoxicillin delivery
Lee et al. Photocrosslinkable gellan gum film as an anti-adhesion barrier
CN102227448A (zh) 生产透明质酸官能化衍生物的方法及透明质酸官能化衍生物的水凝胶的形成
He et al. Synthesis of a chitosan-based photo-sensitive hydrogel and its biocompatibility and biodegradability
KR20150082619A (ko) 히알루론산의 광반응성 유도체, 이의 제조 방법, 히알루론산의 3ｄ-가교된 유도체, 이의 제조 방법 및 용도
Pohjanlehto et al. The use of N, N′-diallylaldardiamides as cross-linkers in xylan derivatives-based hydrogels
WO2015057645A9 (en) Zwitterionic polysaccharide polymers having antifouling, antimicrobial and optical transparency properties
JPH11504668A (ja) ヒアルロン酸との又はヒアルロン酸エステルとのコハク酸ヘミエステルの重金属塩類、それらの製造方法及びその医薬組成物
WO2021098098A1 (zh) 巯基改性透明质酸及其制备方法和用途
CN112812200B (zh) 巯基改性高分子化合物及其制备方法和用途
CA3163069A1 (en) Hydrogel of mercapto-modified macromolecular compound, and preparation method therefor and use thereof
Sun et al. Controllable biodegradation and drug release behavior of chitosan-graft-poly (D, L-lactic acid) synthesized by an efficient method
Maity et al. A dynamic sugar based bio-inspired, self-healing hydrogel exhibiting ESIPT
Feng et al. Solubility, chain characterization, and derivatives of chitin
CN101831006A (zh) 一种新型含香豆素荧光基团透明质酸衍生物的制备方法
Atmani et al. Development of tailored polysaccharide gels through selective Diels–Alder crosslinking
Santos et al. Temperature-responsive fibres of cellulose-based copolymers
RU2713295C2 (ru) Способ сшивания полисахаридов при помощи фотоудаляемых защитных групп
CN100545191C (zh) 一种聚乳酸与氨基聚糖接枝共聚材料的制备方法
De Lima et al. Synthesis and characterization of a hydrophobic association hydrogel for drug delivery
ITMI20130162A1 (it) Derivati fotoreticolati di acido ialuronico, loro processo di preparazione ed impiego
Buffa et al. A new unsaturated derivative of hyaluronic acid–Synthesis, analysis and applications

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20241121