FI94778B - Menetelmä hyaluronihappoestereistä tai niiden suoloista koostuvien kalvojen tai kuitujen valmistamiseksi sekä ei-terapeuttisesti käytettävät hyaluronihappoestereistä tai niiden suoloista valmistetut kuidut ja kalvot - Google Patents

Description

94778

Menetelmä hyaluronihappoestereletä tai niiden suoloista koostuvien kalvojen tai kuitujen valmistamiseksi sekä ei-terapeuttisesti käytettävät hyaluronihappoestereistä tai niiden suoloista valmistetut kuidut ja kalvot,

Keksinnön kohteena on patenttivaatimusten 1 ja 3 johdantojen mukaiset menetelmät hyaluronihappoestereistä tai niiden suoloista koostuvien kalvojen ja kuitujen valmistamiseksi. Keksinnön kohteena on myös patenttivaatimuksen 8 johdannon mukaiset, ei-terapeuttisesti käytettävät, hyaluronihappoestereistä tai niiden suoloista valmistetut kuidut ja kalvot, jotka soveltuvat saniteetti- ja kirurgiseen käyttöön.

Seuraavassa kuvataan esillä olevan keksinnön lisäksi hyal-uronihappoesterien ja niiden suolojen valmistusta, ominaisuuksia ja käyttöä yleisemmin.

Käsitettä "hyaluronihappo" (seuraavassa myös lyhennettynä "HY") käytetään kirjallisuudessa määrittämään hapanta polysakkaridia, jolla on erilaisia molekyylipainoja ja joka muodostuu D-glukoronihapon ja N-asetyyli-D-glukosamiinin tähteistä, joita esiintyy luonnollisesti sellulaarisissa pinnoissa, selkärakaisten sidekudosten emäksisissä solun ulkoisissa aineissa, nivelten synoviaalisessa nesteessä, silmän lasiaisnesteessä, ihmisen napanuoran kudoksessa ja kukon • heltoissa.

Hyaluronihapolla on tärkeä merkitys biologisessa organismissa, ensinnäkin useiden kudosten, kuten ihon, jänteiden, lihasten ja rustojen solujen mekaanisena tukena ja tästä syystä solun sisäisen matriisin komponenttina. Mutta hyaluronihapolla on myös muita toimintoja biologisissa prosesseissa, kuten kudosten kostutus, voitelu, solumigraatio, solutoiminta ja erittely (ks. esimerkiksi A. Balazs et ai., Cosmetics & Toiletries, No. 5/84, s. 8 - 17). Hyaluronihappo voidaan uuttaa yllä mainituista luonnollisista kudoksista, kuten kukon heltoista, tai myös määrätyistä bakteereista. Nykyisin hyaluronihappo voidaan * valmistaa myös mikrobiologisilla menetelmillä. Uuttamalla 2 94778 saadun koko hyaluronihapon molekyylipaino on 8 - 13 miljoonaa. Kuitenkin polysakkaridin molekyyliketjua voidaan hajottaa melko helposti erilaisten fysikaalisten ja kemiallisten tekijöiden vaikutuksessa, kuten mekaanisessa vaikutuksessa tai säteilytyksen, hydrolysointi-, hapetus- tai entsymaattisten aineiden vaikutuksessa. Tästä syystä alkuperäisten uutteiden tavallisissa puhdistusmenetelmissä saadaan hajotettuja fraktioita, joilla on alhaisempi molekyylipaino (ks. Balazs et ai., ks. yllä). Hy-aluronihappoa, sen molekyylifraktiota ja vastaavia suolojaon käytetty lääkeaineina ja niiden käyttöä on ehdotettu myös kosmetiikassa (ks. esimerkiksi yllä mainittu artikkeli Balazs et ai. ja FR-patentti 2 478 468).

Terapeuttisena aineena hyaluronihappoa ja sen suoloja on käytetty olennaisesti terapiassa artropatiaan, kuten veteri-näärilääketieteessa hevosten artriitin hoitamiseksi [Acta Vet. Scand. 167. 379 (1976)]. Luonnollisten kudosten ja elinten apu- ja korvaavana terapeuttisena aineena hyaluronihappoa, sen molekyylifraktioita ja sen suoloja on käytetty oftalmisessa kirurgiassa (ks. esimerkiksi Salazs et ai., Modern Problems in Ophthalmology, Voi. 10, 1970, s. 3 Strieff, S. Karger, Basel; Viscosurgery and the Use of Sodium Hyaluronate During Intraocular Lens Implantation, Paper presented at the International Congress and First Film Festival on Intraocular Implantation, Cannes, 1979; US-patentti 4 328 803 kirjallisuuden yhteenvetona HY:n käytöstä oftalmologiassa, ja US-patentti 4 141 973).

IT-patenttihakemuksessa 49 143A83, 11.10.1983, esitetään hyaluronihapon molekyylifraktio, jota voidaan käyttää esimerkiksi natriumsuolana, intraokulaarisiin ja intra-artikulaari-siin injektioihin, jotka soveltuvat korvaamaan silmän sisäiset nesteet, ja vastaavasti artropatiaterapiaan.

Hyaluronihappoa voidaan käyttää myös lisäaineena useissa polymeerisissä materiaaleissa, joita käytetään lääketieteel-. lisissä ja kirurgisissa artikkeleissa, kuten polyuretaaneissa, 3 - 94778 polyestereissä, polyolefiineissa, polyamideissa, polysiloksaa-neissa, vinyyli- ja akryylipolymeereissä ja hiilikuiduissa, jolloin ne tekevät näistä materiaaleista biologisesti sopivia. Tässä tapauksessa HY:n tai sen jokin suola lisätään siten, että peitetään tällaisten materiaalien pinta sillä tai disper-goidaan se näihin tai käytetään näitä molempia yhdessä. Tällaisia materiaaleja voidaan käyttää valmistettaessa sanitääri-siä ja lääketieteellisiä artikkeleita, kuten sydänläppiä, intraokulaarisia linssejä, vaskulaarisia kiinnittimiä, tahdistimia ja vastaavia (ks. US-patentti 4 500 676).

Käsitettä "hyaluronihappo" käytetään yleisesti virheellisessä merkityksessä tarkoittaen, kuten yllä olevasta voidaan nähdä, kaikkia niitä polysakkarideja, joissa on erilaiset, vaihtele-van molekyylipainon omaavat D-glukuronihapon ja N-asetyyli-D-glukosamiinin tähteet. Polysakkarideissa voi jopa esiintyä näiden hajonneita fraktioita. Vaikka monikkomuoto "hyaluroni-hapot" näin ollen näyttäisi tarkoituksenmukaisemmalta, käytetään tämän hakemuksen puitteissa kuitenkin yksikkömuotoa, joka tarkoittaa hyaluronihappoa sen erilaisissa muodoissa mukaanlukien sen molekyylifraktiot. Lyhennettä "HY" käytetään usein myös kuvaamaan sen kollektiivista muotoa.

Mitä tulee hyaluronihapon estereihin, kirjallisuudessa on esitetty hyaluronihapon metyyliesteri, jolla on korkea mole-kyylipaino ja joka saadaan uuttamalla ihmisen napanuoria [Jeanloz et ai., J. Biol. Chem. 186 (1950), 495 - 511 ja Jager et ai., J. Bacteriology 1065 - 1067 (1979)]. Tämä esteri saadaan käsittelemällä vapaa hyaluronihappo diatsometaanilla eetteriliuoksessa ja siinä on esteröity olennaisesti kaikki : karboksyyliryhmät. Edelleen HY:n oligomeerien metyylieste- reitä, joissa on n. 5 - 15 disakkaridiyksikköä, on myös esitetty [ks. Biochem. J. (1977) 167. 711 - 716]. Samoin on esitetty hyaluronihapon metyyliesteri, joka on eetteröity metyylialkoholilla osassa hydroksyylialkoholiryhmistä [Jeanloz et ai., J. Biol. Chem. IM (1952), 141 - 150 ja Jeanloz et . ; ai., Helvetica Chimica Acta 3Jä (1952), 262 - 271] . Näiden 4 - 94778 esterien biologista aktiivisuutta ja siten niiden farmaseuttista käyttöä ei ole esitetty.

Kantahakemuksessa 862878 on esitetty hyaluronihapon uusia estereitä, jotka on muodostettu alifaattisista, aralifaatti-sista, sykloalifaattisista tai heterosyklisista alkoholeista ja joissa kaikki tai ainoastaan osa hapon karboksyyliryhmistä on esteröity. Näillä estereillä ja mainittujen osittaisten esterien suoloilla, jotka on valmistettu metalleista tai orgaanisista emäksistä ja jotka ovat biologisesti sopivia tai farmaseuttisesti käyttökelpoisia, on mielenkiintoisia ja arvokkaita bioplastisiä ja farmaseuttisia ominaisuuksia ja niitä voidaan käyttää useilla aloilla, esimerkiksi kosmetiikassa, kirurgiassa ja lääketieteessä. Hyaluronihapon ollessa kyseessä, uusilla tuotteilla on kvalitatiivisesti samat tai samankaltaiset fysikaalis-kemialliset, farmakologiset ja terapeuttiset ominaisuudet. Ne ovat lisäksi huomattavasti vakaampia luonnollisia entsyymejä, kuten etenkin hyaluronidaa-sia, vastaan, jotka entsyymit hajottavat polysakkaridimolekyy-liä elimistössä. Uudet esterit ja osittaiset esterit säilyttävät tästä syystä yllä mainitut ominaisuutensa hyvin pitkiä ajanjaksoja.

Esillä olevassa keksinnössä käytetään kalvojen ja kuitujen valmistukseen erilaisia kantahakemuksessa 862878 mainittuja estereitä ja osittaisia estereitä.

Hyaluronihappoesterien ensimmäisen ryhmän muodostavat ne esterit, joita voidaan käyttää terapiassa samoin kuin muilla yllä mainituilla aloilla. Näissä itse hyaluronihapon ominaisuudet vallitsevat ja niitä voidaan käyttää hyväksi. Tällaiset esterit on johdettu yllä mainituista alkoholeista, joilla itsellään ei ole merkittävää farmakologista vaikutusta, kuten esimerkiksi alifaattisista tyydyttyneistä alkoholeista tai yksinkertaisista sykloalifaattisista alkoholeista.

; Toisen esteriryhmän, joita estereitä myös voidaan käyttää • · '* SK ; iti tl 1,1 I ia 94778 terapiassa, muodostuvat yhdisteistä, joissa alkoholikomponen-tin farmakologiset laadut ovat vallitsevia. S.o. HY:n esterit, jotka on muodostettu farmakologisesti aktiivisista alkoholeista, kuten steroidialkoholista, esim. kortisonityyppisista alkoholeista, joilla on tulehdusten vastainen vaikutus. Näillä yhdisteillä on ominaisuuksia, jotka ovat kvalitatiivisesti samanlaisia kuin alkoholin ominaisuudet, mutta niillä on eritellympi vaikutusalue verrattuna jo tunnettuihin esterei-hin, jolloin ne varmistavat paremmin tasapainotetun, vakion ja säännöllisen farmakologisen vaikutuksen ja ne saavat tavallisesti aikaan selvän hidastetun vaikutuksen.

Kolmannen HY:n esterien ryhmän muodostavat sellaiset esterit, joilla on vaihtelevampi luonne kuin kahdella edellisellä esteriryhmällä. S.o. esterit, joissa osa HY:n karboksyyliryh-mistä on esteröity farmakologisesti aktiivisella alkoholilla ja toinen osa farmakologisesti neutraalilla alkoholilla tai sellaisella, jonka aktiivisuus on mitätön. Esteröintikompo-nenttina käytettyjen näiden kahden erityyppisen alkoholin sopivan annosteluprosentin avulla on mahdollista saada este-reitä, joilla on sama farmakologinen aktiivisuus kuin farmakologisesti aktiivisella alkoholilla ilman hyaluronihapon spesifistä aktiivisuutta, mutta joilla on yllä mainitut paremman stabiiliuden ja biologisen sopivuuden ominaisuudet halutun ja farmakologisesti aktiivisen alkoholin luonteenomaisen aktiivisuuden suhteen ja farmakologisesti inertin alkoholin esteri -ryhmien ansiosta.

Neljännen esterien ryhmän muodostavat ne, joilla on sekaluonne ja joissa esteriryhmät johtuvat kahdesta erilaisesta terapeuttisesti aktiivisesta aineesta. Tässä tapauksessa myös esterit voivat olla osittaisia tai kokonaisia, s.o. vain muutamat karboksyyliryhmät on esteröity kahdella erilaisella terapeuttisesti aktiivisella alkoholilla, esimerkiksi kortisoniste-roidilla ja antibiootilla tai fenotiatsiinilla, kun taas karboksyyliryhmät voivat olla vapaita tai muodostettu suolak- . si, esimerkiksi alkalimetalleilla, etenkin natriumilla, tai • · s - 94778 kaikki karboksyyliryhmät on esteröity yllä mainituilla alkoholeilla. On kuitenkin myös mahdollista valmistaa estereitä kolmen tai useamman alkoholikomponentin kanssa, kuten estereitä, joissa osa karboksyyliryhmistä on esteröity terapeuttisesti aktiivisella alkoholilla, toinen osa toisella terapeuttisesti aktiivisella alkoholilla, kolmas osa terapeuttisesti inaktiivisella alkoholilla ja neljäs osa on muodostettu mahdollisesti suolaksi metallilla ja terapeuttisesti aktiivisella tai inaktiivisella emäksellä tai se käsittää vapaassa muodossa esiintyviä karboksyyliryhmiä.

Yllä mainituissa estereissä, joissa muutamat karboksyylihap-poryhmät pysyvät vapaina, nämä voidaan muodostaa suolaksi metallien tai orgaanisten emästen, kuten alkali- tai maa-al-kalimetallien tai ammoniakin tai typpipitoisten orgaanisten emästen kanssa.

Esillä oleva keksintö perustuu mm. siihen, että useimmat HY:n estereistä, päinvastoin kuin itse HY, omaavat määrätynasteisen liukenevuuden orgaanisissa liuottimissa. Tämä liukenevuus riippuu esteröityjen karboksyyliryhmien prosenttimäärästä ja karboksyyliin liitetyn alkyyliryhmän tyypistä. Tästä syystä HY-yhdiste, jonka kaikki karboksyyliryhmät on esteröity, omaa huoneenlämpötilassa hyvän liukenevuuden esimerkiksi dimetyy-lisulfoksidissa (HY:n bentsyyliesteri liukenee DMSO:ssa 200 mg/ml:n määränä). Useimmat HY:n kokonaisestereistä liukenevat heikosti veteen päinvastoin kuin HY ja etenkin sen suolat.

Edellä mainitut liukenevuusominaisuudet yhdessä erityisten ja merkittävien viskoelastisten ominaisuuksien kanssa mahdollistavat HY-esterien käytön saniteetti- ja lääketieteellisten valmisteiden valmistamiseksi, jotka eivät liukene suolaliuokseen ja joilla on erityinen haluttu muoto. Nämä materiaalit saadaan valmistamalla HY-esterin liuos orgaanisessa liuotti-messa, muodostamalla erittäin viskoosi liuos halutun artikkelin muotoon ja uuttamalla orgaaninen liuotin toisella liuotti- : mella, joka sekoittuu ensimmäisen kanssa, mutta jossa HY-este- *« 4 · : Uf-l· Mti 11-tM , | | 7 94778 ri ei liukene.

Täsmällisemmin sanottuna keksinnön mukaiselle menetelmälle on pääasiallisesti tunnusomaista se, mikä on esitetty patenttivaatimuksen 1 ja vastaavasti patenttivaatimuksen 3 tunnusmerk-kiosissa.

Keksinnön mukaisille tuotteille on puolestaan tunnusomaista se, mikä on esitetty patenttivaatimuksen 8 tunnusmerkkiosassa.

Tässä keksinnössä käytettävät hyaluronihapon esterit ovat kaikki uusia paitsi edellä mainittu hyaluronihapon metyyli-esteri, joka uutetaan ihmisen napanuorista, ja HY:n yllämainittujen oligomeerien metyyliesterit. Samoin uusia ovat tästä syystä hyaluronihapon osittaiset esterit, jotka on valmistettu metyylialkoholista, ja niiden metallisuolat tai orgaanisista emäksistä muodostetut suolat. Kuten jo kanta-hakemuksessa todetaan ovat yllä mainittujen kirjallisuudessa esitettyjen metyyliesterien biologiset ja farmakologiset aktiivisuudet tuntemattomia, samoin kuin niiden erinomaiset bioplastiset ominaisuudet ja erittäin hyvä stabiilius .

Hyaluronihapon karboksyyliryhmien esteröintikomponentteinä . käytettäviä alifaattisia alkoholeja ovat esimerkiksi sellai set, joissa on korkeintaan 34 hiiliatomia, jotka voivat olla tyydyttyneitä tai tyydyttymättömiä ja jotka voivat olla mahdollisesti substituoituja muilla vapailla funktionaalisilla tai funktionaalisesti muunnetuilla ryhmillä, kuten amiini-, hydroksyyli-, aldehydi-, ketoni-, merkaptaani- tai karboksyy-liryhmillä tai ryhmillä, jotka on johdettu näistä, kuten hydrokarbyyli- tai di-hydrokarbyyliamiiniryhmillä (tästä lähtien käsitettä "hydrokarbyyli" käytetään tarkoittamaan sekä monovalenttisia hiilivetyjen radikaaleja, kuten C^n+i'tyYPPi*, että bivalenttisia tai trivalenttisia radikaaleja, kuten "alkyleenejä" CJi2n tai "alkylideenejä" C^n) , eetteri- tai .· esteriryhmillä, asetaali- tai ketaaliryhmillä, tioeetteri- tai 8 - 94778 tioesteriryhmillä ja esteröidyillä karboksyyli- tai karbamidi-ryhinillä ja karbamidilla, joka on substituoitu yhdellä tai useammalla hydrokarbyyliryhmällä, nitriiliryhmillä tai halogeeneilla.

Yllä mainituista, hydrokarbyyliradikaaleja sisältävistä ryhmistä etusijalla ovat alemmat alifaattiset radikaalit, kuten alkyylit, joissa on korkeintaan 6 hiiliatomia. Tällaiset alkoholit voi olla myös katkaistu hiiliatomiketjussa hetero-atomeilla, kuten happi-, typpi- tai rikkiatomeilla. Etenkin käytetään alkoholeja, jotka on substituoitu yhdellä tai kahdella edellä mainitulla funktionaalisella ryhmällä.

Yllä mainitun ryhmän alkoholeja ovat sellaiset, joissa on korkeintaan 12 ja etenkin 6 hiiliatomia, ja joissa hydrokar-byyliatomit yllä mainituissa amiini-, eetteri-, esteri-, tioeetteri-, tioesteri-, asetaali-, ketaaliryhmissä merkitsevät aikyyliryhmiä, joissa on korkeintaan 4 hiiliatomia, ja myös esteröidyissä karboksyyli- tai substituoiduissa karbami-diryhmissä hydrokarbyyliryhmät ovat alkyylejä, joissa on sama määrä hiiliatomeja, ja joissa amiini- tai karbamidiryhmissä voi olla alkyleeniamini- tai alkyleenikarbamidiryhmiä, joissa on korkeintaan 8 hiiliatomia. Näistä alkoholeista mainittakoon etenkin sellaiset, jotka ovat tyydyttyneitä ja substituoimat-tomia, kuten metyyli-, etyyli-, propyyli- ja isopropyylialko-holit, n-butyylialkoholi, isobutyylialkoholi, tert.-butyylial-koholi, amyyli-, pentyyli-, heksyyli-, oktyyli-, nonyyli- ja dodekyylialkoholit ja ennen kaikkea sellaiset, joissa on suora ketju, kuten n-oktyyli- ja dodekyylialkoholit. Tämän ryhmän substituoiduista alkoholeista mainittakoon bivalenttiset alkoholit, kuten etyleeniglykoli, propyleeniglykoli ja buty-leeniglykoli, trivalenttiset alkoholit, kuten glyseroli, aldehydialkoholit, kuten tartronialkoholi, karboksyylialkoholit, kuten maitohapot, esimerkiksi glykolihappo, omenahappo, viinihapot, sitruunahappo, aminoalkoholit, kuten normaali aminoetanoli, aminopropanoli, normaali aminobutanoli ja niiden .· amiinifunktiossa dimetyloidut ja dietyloidut johdannaiset, 9 - 94778 koliini, pyrrolidinyylietanoli, piperidinyylietanoli, piperat-sinyylietanoli ja vastaavat n-propyyli- ja n-butyylialkoholin johdannaiset, monotioetyleeniglykoli tai sen alkyylijohdannaiset, kuten merkaptaanifunktion etyylijohdannainen.

Korkeammista tyydyttyneistä alifaattisista alkoholeista tulisi mainita seuraavat: setyylialkoholi ja myristyylialkoholi, erittäin tärkeitä ovat korkeammat tyydyttymättömät, yhden tai kaksi kaksoissidosta sisältävät alkoholit, kuten etenkin sellaiset, jotka sisältyvät useihin eteerisiin öljyihin ja joilla on affiniteetti terpeenin suhteen, kuten sitronelloli, geranioli, neroli, nerolidoli, linalooli, farnesoli, fytoli. Tyydyttymättömistä alemmista alkoholeista mainittakoon sellaiset, joissa on vain yksi bentseenitähde ja joissa alifaatti-sessa ketjussa on korkeintaan 4 hiiliatomia, joissa bentseenitähde voi olla substituoitu 1-3 metyyli- tai hydrok-syyliryhmällä tai halogeeniatomeilla, etenkin kloorilla, bromilla ja jodilla, ja joissa alifaattinen ketju voi olla substituoitu yhdellä tai useammalla funktiolla, kuten vapaalla amiiniryhmällä tai mono- tai dimetyloidulla tai pyrrolidiini-tai piperidiiniryhmillä. Näistä alkoholeista mainittakoon etenkin bentsyylialkoholi ja fenetyylialkoholi.

Hyaluronihappoestereitä voidaan muodostaa myös sykloalifaatti-. sista tai alifaattis-sykloalifaattisista alkoholeista, jotka voivat johtua mono- tai polysyklisistä hiilivedyistä, niissä on mieluummin korkeintaan 34 hiiliatomia, ne voivat olla substituoimattomia ja voivat sisältää yhden tai useamman substituentin, kuten jonkin yllä alifaattisten alkoholien yhteydessä mainitun. Syklisistä yksirenkaisista hiilivedyistä johtuvista alkoholeista mainittakoon etenkin sellaiset, joissa on korkeintaan 12 hiiliatomia, renkaissa on mieluummin 5-7 hiiliatomia, jotka voivat olla substituoituja esimerkiksi 1 -3 alempialkyyliryhmällä, kuten metyyli-, etyyli-, propyyli-tai isopropyyliryhmällä. Tämän ryhmän erityisinä alkoholeina voidaan mainita seuraavat: sykloheksanoli, sykloheksaanidioli, 1,2,3-sykloheksaanitrioli ja 1,3,5-sykloheksaanitrioli (floro- - 94778 10 glusitoli), inositoli, ja alkoholit, jotka johtuvat p-metaa-nista, kuten karbomentoli, mentoli ja a-, /J-terpineoli, 1-ter-pinoeli, 4-terpineoli ja piperitoli tai näiden alkoholien seos, joka tunnetaan "terpineolina", 1,4- ja 1,8-terpiini. Alkoholeista, jotka johtuvat hiilivedyistä, joissa on konden-soitu rengas, kuten tujäänistä, pinaanista tai komfäänistä, voidaan mainita seuraavat: tujanoli, sabinoli, pinohydraatti, D- ja L-borneoli ja D- ja L-isoborneoli.

Estereissä käytettäviä alifaattis-sykloalifaattisia polysyklisiä alkoholeja ovat sterolit, koolihapot ja steroidit, kuten sukuhormonit ja niiden synteettiset analogit, etenkin korti-kosteroidit ja niiden johdannaiset. Tästä syystä on mahdollista käyttää seuraavia: kolesteroli, dihydrokolesteroli, epidi-hydrokolesteroli, koprostanoli, epikoprostanoli, sitosteroli, stigmasteroli, ergosteroli, koolihappo, deoksikoolihappo, litokoolihappo, estrioli, estradioli, ekileniini, ekiliini ja niiden alkylaattijohdannaiset, samoin kuin niiden 17-aseman etinyyli- tai propinyylijohdannaiset, kuten 17a-etinyyliestr-adioli tai 7a-metyyli-17a-etinyyli-estradioli, pregnenoloni, pregnaanidioli, testosteroni ja sen johdannaiset, kuten 17a--metyylitestosteroni, 1,2-dehydrostestosteroni ja 17a-metyyli--1,2dehydrotestosteroni, testosteronin ja 1,2-dihydrotesteste-ronin 17-aseman alkinylaattijohdannaiset, kuten 17a-etinyy-litestosteroni, 17a-propinyylitestosteroni, norgestrel, hyd-roksiprogesteroni, kortikosteroni, deoksikortikosteroni, 19-nortestosteroni, 19-nor-17a-metyylitestosteroni ja 19-nor--17a-etinyylitestosteroni, antihormonit, kuten syproteroni, kortisoni, hydrokortisoni, prednisoni, prednisoloni, fluori-kortisoni, deksametasoni, betametasoni, parametasoni, flume-tasoni, flukinoloni, fluprednylideeni, klobetasoli, beklome-tasoni, aldosteroni, deoksikortikosteroni, alfaksoloni, alfa-doloni, bolasteroni. Esterien esteröintikomponentteinä voidaan käyttää seuraavia: kardioaktiivisten glukosidien geniinit (aglykonit), kuten digitoksigeniini ja gitoksigeniini, digok-sigeniini, strofantidiini, tigogeniini ja saponiinit.

• 11 - 94778

Muita käytettäviä alkoholeja ovat vitamiinit, kuten akserofto-li, vitamiinit D2 ja D3, aneuriini, laktoflaviini, askorbiini-happo, riboflaviini, tiamiini, pantoteenihappo.

Heterosyklisistä hapoista seuraavia voidaan pitää yllä mainittujen sykloalifaattisten tai alifaattis-sykloalifaattisten alkoholien johdannaisina, jos niiden lineaariset tai sykliset ketjut on katkaisu yhdellä tai useammalla, esimerkiksi 1-3 heteroatomilla, esimerkiksi ryhmillä -O-, -S-, -N- ja -NH- ja näissä voi olla yksi tai useampi tyydyttymäton sidos, esimerkiksi kaksoissidos, etenkin 1-3, jolloin ne sisältävät myös aromaattisen rakenteen omaavia heterosyklisiä yhdisteitä. Esimerkiksi mainittakoon seuraavat: furfuryylialkoholi, alkaloidit ja niiden johdannaiset, kuten atropiini, skopolamini, kinkoniini, la-kinkonidiini, kiniini, morfiini, kodeiini, nalorfiini, N-butyyliskopolammoniumbromidi, ajmaliini, fenyy-lietyyliamiinit, kuten efedriini, isoproterenoli, epinefriini, fenotiatsiinilääkeaineet, kuten ferfenatsiini, pipotiatsiini, karfenatsiini, homofenatsiini, asetofenatsiini, fluofenatsii-ni, N-hydroksietyyliprometatsiinikloridi, tioksanteenilääkeai-neet, kuten flupentiksoli ja klopentiksoli, antikonvulsiiviset aineet, kuten meprofendioli, antipsykoottiset aineet, kuten opipramoli, antiemeettiset aineet, kuten oksipendyyli, anal-geettiset aineet, kuten karbetidiini ja fenoperidiini ja • metadoli, hypnoottiset aineet, kuten etodroksitsiini, anerok- tiset aineet, kuten bentsidroli ja difemetoksidiini, vähäpätöiset rauhoittavat aineet, kuten hydroksitsiini, lihaksia relaksoivat aineet, kuten kinnamedriini, difylliini, mefene-siini, metokarbamoli, klorfenesiini, 2,2-dietyyli-l,3-pro-paanidioli, kvaifenesiini, hydrosilamidi, koronaarivasodila-taattori, kuten dipyridamoli ja oksifedriini, adrenergiset salpaajat, kuten propanololi, timololi, pindololi, bupranolo-li, atenololi, metoprololi, praktololi, antineoplastiset aineet, kuten 6-atsauridiini, sytarabiini, floksuridiini, antibiootit, kuten kloramfenikoli, tiamfenikoli, erytromysiini, oleandomysiini, linkomysiini, antiviraaliset aineet, kuten / jodoksuridiini, periferaaliset vasodilataattorit, kuten iso-> 94778 12 nikotinyylialkoholi, karboanhydraasin inhibiittorit, kuten sulokarbilaatti, antiastraaattiset ja anti-inflammatoriset aineet, kuten tiaramidit, sulfamidit, kuten 2-p-sulfanilo-noetanoli.

Kuten yllä on esitetty, joissakin tapauksissa voivat olla mielenkiintoisia hyaluronihappoesterit, joissa esteriryhmät johtuvat kahdesta tai useammasta terapeuttisesti aktiivisesta hydroksyyllaineesta ja luonnollisesti voidaan saada kaikkia mahdollisia muunnelmia. Etenkin mielenkiintoisia ovat ne aineet, joissa on läsnä kaksi erityyppistä esteriryhmää, jotka johtuvat hydroksyyliluonteen omaavista lääkeaineista ja joissa jäljelle jäävät karboksyyliryhmät ovat vapaita, jotka on muodostettu suolaksi metallien tai yhden tai useamman emäksen kanssa, jolloin mahdollisesti kaikki emäkset ovat itse terapeuttisesti aktiivisia, esimerkiksi niillä on sama tai samankaltainen aktiivisuus kuin esteröintikomponentilla. Etenkin on mahdollista saada hyaluronihappoestereitä, jotka johtuvat toisaalta anti-inflammatorisesta steroidista, kuten jostakin yllä mainitusta, ja toisaalta vitamiinista, alkaloidista tai antibiootista, kuten jostakin yllä mainitusta.

Hyaluronihapon esteröintiaste yllä mainituilla alkoholeilla riippuu ensisijassa saatavista eri käyttöalueiden erityisistä , ominaisuuksista, esimerkiksi suuremmasta tai pienemmästä lipofiilisyydestä tai hydrofiilisyydestä määrättyjen kudosten, kuten ihon suhteen.

Normaalisti hyaluronihapon korkea-asteinen esteröinti aina sen täydelliseen esteröintiin asti lisää sen lipofiilistä luonnetta ja tästä syystä vähentää sen vesiliukoisuutta. Kantahake-muksessa mainittujen uusien esterien terapeuttista käyttöä varten on esimerkiksi erittäin tärkeää säätää esteröintiaste huolimatta lipofiilisyyden hyvästä ja lisääntyneestä tasosta hyaluronihappoon tai sen natriumsuolaan verrattuna riittävän hydroliukenevuuden, esimerkiksi 10 mg/ml:n liukenevuuden . varmistamiseksi. Luonnollisesti tulee pitää mielessä saman 13 -94778 esteröintikoraponentin molekyylikoon vaikutus, joka tavallisesti vaikuttaa vesiliukoisuuteen kääntäen verrannollisesti.

Kuten jo mainittiin, hyaluronihapon karboksyyliryhmien este-röinnillä voi olla useita merkityksiä, jotka voivat olla käyttökelpoisia eri aloilla, esimerkiksi lääketieteessä, jolloin käytetään estereitä terapeuttisina aineina, tai kirurgiassa, jolloin niitä käytetään muovituotteina.

Mitä tulee samankaltaisiin terapeuttisesti aktiivisiin alko-holeihin hyaluronihappo toimii tästä syystä erittäin tehokkaana apuaineena, joka on täydellisesti yhteensopiva biologisen ympäristön kanssa. Yllä olevassa alkoholien luettelossa, joita alkoholeja voidaan käyttää hyaluronihappoesterien valmistukseen, on esitetty useita näistä farmakologisesti aktiivisista alkoholeista ja tästä syystä vastaavien esterien mahdolliset sovellukset ovat selviä, koska indikaatiot ovat samat kuin vapaille alkoholeille. Jälleen, kuten on jo mainittu, terapeuttisesti aktiivisten alkoholien kanssa muodostetuissa osittaisestereissä on mahdollista esteröidä osa tai kaikki hylauronihappokomponentin jäljellä olevista karboksyy-liryhmistä farmakologisesti inertillä alkoholilla, kuten tyydyttyneillä alempialifaattisilla alkoholeilla, kuten etyy li- tai isopropyylialkoholilla.

Sanitääristen ja kirurgisten artikkelien valmistukseen käytetään mieluummin hyaluronihapon kokonais- tai osittais-estereitä, jotka on muodostettu farmakologisesti inerttien alkoholien, kuten tyydyttyneiden tai tyydyttymättömien ali-faattisten alkoholien, esimerkiksi tämäntyyppisten substi-tuoimattornien, suoran ja haaroittuneiden, esimerkiksi 1-8 hiiliatomia sisältävien alkoholien, kuten erityisesti edellä mainittujen alkoholien kanssa. Erityisen mielenkiintoisia ovat ne tyydyttymättömät alkoholit, kuten sellaiset, joissa on yksi tai useampi kaksoissidos, kuten vinyyli- tai allyylialkoholit ja niiden kondensoidut johdannaiset, kuten etenkin polyvinyy-lialkoholit tai polyvalenttiset alkoholit, kuten glyseroli.

Tässä tapauksessa on mahdollista käyttää aiotun tarkoituksen 1* 94778 mukaisesti sekaestereitä.

Hyaluronihappoestereitä voidaan myös valmistaa sykloalifaatti-sista alkoholeista, kuten syklopentaanin ja sykloheksaanin johdannaisista ja niiden johdannaisista, jotka on substituoitu alemmilla alkyyliryhmillä, kuten 1-4 hiiliatomia sisältävillä alkyyleillä, etenkin metyyliryhmillä. Erityisen mielenkiintoisia ovat esterit, jotka on muodostettu sykloalifaattisten ja alifaattisten alkoholien, terpeenistä johdettujen sykloalifaattisten alkoholien, kuten yllä mainittujen kanssa ja terapeuttisesti aktiivisista alkoholeista johdettujen sykloalifaattisten alkoholien kanssa ja joita voidaan käyttää myös kosmetiikassa.

Osittaisestereissä esteröityjen ryhmien prosenttimäärä voi vaihdella suuresti käytön suhteen, johon tuote on tarkoitettu, ja ennen kaikkea yllä mainituilla eri käyttöaloilla tapahtuvan käytön suhteen.

Erittäin mielenkiintoisia ovat kuitenkin ne osittaisesterit, joissa vähintään 5 % ja korkeintaan 90 % kaikista HY:n karbok-syyliryhmistä on esteröity ja etenkin sellaiset, joissa este-röintiprosenttimäärä on 50 - 80 %.

Erityyppisten esteriryhmien määrän välinen suhde voi tietenkin myös vaihdella osittaissekaestereissä. Esimerkiksi kun on kaksi tällaista ryhmää, suhde on mieluummin 0:1:1 ja 1:01 ja sama koskee kokonaisestereitä. Terapeuttiseen käyttöön tarkoitettujen esterien kohdalla suhde on mieluummin 0,5:1 - 1:0,5. Tällaiset suhteet pätevät myös kokonaisesterien kohdalla ja osittaisestereissä ne on valittava ottaen huomioon yllä mainitut prosenttimäärät koskien esteröityjen ryhmien koko määrää.

Osittaisestereissä esteröimättömät karboksyyliryhmät voidaan pitää vapaina tai ne voidaan muodostaa suolaksi. Tällaisten suolojen muodostukseen emäkset valitaan tuotteen käyttökritee-. reiden mukaisesti. On mahdollista muodostaa epäorgaanisia 1S · 94778 suoloja, jotka on johdettu alkalimetalleista, kuten kaliumista ja etenkin natriumista ja ammoniumista tai alkalimetal-lisuoloista, kuten kalsiumista tai magnesium- tai aluminium-suoloista.

Etenkin mielenkiintoisia ovat suolat, jotka on muodostettu orgaanisten emästen, etenkin typpeä sisältävien emästen ja tästä syystä alifaattisten, aryylialifaattisten, sykloalifaat-tisten tai heterosyklisten amiinien kanssa.

Nämä ammoniumsuolat voivat johtua terapeuttisesti sopivista, mutta inaktiivisista amiineista tai amiineista. Edellä mainituista on mainittava ennen kaikkea alifaattiset amiinit, kuten mono-, di- ja trialkyyli-amiinit, joiden alkyyliryhmissä on korkeintaan 18 hiiliatomia, tai aralkyyliamiinit, joissa on sama määrä hiiliatomeja alifaattisessa osassa ja joissa aryyli merkitsee bentseeniryhmää, joka on mahdollisesti substituoitu 1-3 metyyliryhmällä tai halogeeniatomeilla tai hydroksyyli-ryhmillä. Suolojen muodostukseen tarkoitetut biologisesti inaktiiviset emäkset voivat olla myös syklisiä, kuten monosyk-lisiä alkyleeniamiineja, joiden sykleissä on 4 - 6 hiiliatomia ja jotka voi olla katkaistu heteroatomeilla, kuten typellä, hapella ja rikillä, kuten piperidiini tai morfOliini, ja jotka voivat olla substituoituja esimerkiksi amiini- tai hydroksyy-lifunktioilla, kuten aminoetanoli, etyleenidiamiini, efedriini tai koliini.

On myös mahdollista muodostaa osittaisesterien kvaternaarisia ammoniumsuoloja, esimerkiksi tetra-alkyyliammoniumin suoloja, joissa on yllä mainittu määrä hiiliatomeja, ja etenkin sentyyppisiä suoloja, joissa neljännessä alkyyliryhmässä on 1 - 4 * hiiliatomia, esimerkiksi metyyliryhmässä.

Mitä tulee uusien HY:n esterien ja osittaisten esterien käyttöön lääkeaineina ja kosmeettisina aineina, viitattakoon kantahakemuksessa 862878 annettuun selvitykseen.

16 94778

Uusia hyaluronihappoestereitä voidaan käyttää saniteetti- ja kirurgisisissa tuotteissa. Keksintö käsittää siten myös kaikki tuotteet, jotka ovat samanlaisia kuin ne hyaluronihappoon perustuvat tuotteet, jotka jo esiintyvät markkinoilla, mutta ne sisältävät hyaluroniesteriä tai sen suoloja vapaan hapon tai sen suolojen sijasta ja ne on tarkoitettu esimerkiksi kiinnittimiä tai oftalmisia linssejä varten.

Tämän keksinnön mukaan uudet kirurgiset ja sanitääriset tuotteet voidaan valmistaa hyaluronihapon estereistä, jotka on regeneroitu sellaisenaan sopivilla orgaanisilla liuottimilla, joista on mahdollista saada sopivien toimenpiteiden avulla kalvoja, ohuita levyjä tai lankoja, joita käytetään kirurgiassa, ihon apuaineita tai korvaavia aineita ihon vakavissa vammoissa, kuten esimerkiksi palovammoissa, kirurgisissa operaatioissa käytettäviä sutuuroita. Keksintö koskee etenkin näitä käyttöaloja ja se käsittää tällaisten artikkelien valmistusmenetelmän, jossa muodostetaan hyaluroniesterin tai sen suolan liuos sopivassa orgaanisessa liuottimessa, kuten kar-boksyylihapon amidissa, etenkin alifaattisen hapon dialkyyli-amidissa, joka sisältää 1-5 hiiliatomia ja joka johtuu 1-6 hiiliatomia sisältävistä alkyyliryhmistä, ja ennen kaikkea orgaanisesta sulfoksidista, s.o. dialkyylisulfoksidissa, jossa on korkeintaan 6 hiiliatomia sisältäviä alkyyliryhmiä, kuten etenkin dimetyylisulfoksidissa tai dietyylisulfoksidissa, ja jälleen mikä tärkeintä fluoratussa liuottimessa, jonka kiehumispiste on alhainen, kuten etenkin heksafluori-isopropanolis-sa. Keksintöön kuuluu tällaisten liuosten muuntaminen levy-tai lankamuotoon_ja orgaanisen liuottimen poistaminen saattamalla kosketuksiin toisen orgaanisen tai vesipitoisen liuottimen kanssa, joka voidaan sekoittaa ensimmäisen liuottimen kanssa ja johon hyaluroniesteri ei liukene, etenkin alemman alifaattisen alkoholin, esimerkiksi etyylialkoholin kanssa (märkäkehräys) tai, jos on käytettävä liuotinta, jolla ei liian korkea kiehumispiste, hyaluronijohdannaisen valmistamiseksi, poistetaan tällainen liuotin kuivissa olosuhteissa . kaasuvirralla, etenkin sopivasti kuumennetulla typpivirralla 17 94778 (kuivakehräys). On myös mahdollista saada erinomaisia tuloksia kuiva-märkäkehräyksellä.

Hyaluronihappoestereistä valmistettuja lankoja voidaan käyttää haavojen lääkintää ja kirurgiaa varten käytettävien harsokan-kaiden valmistukseen. Tällaisten harsokankaiden käyttö on erittäin edullista, koska ne soveltuvat biologisesti hyvin elimistöön, mikä on mahdollista niitä sisältävien entsyymien ansiosta. Nämä entsyymit hajottavat esterin hyaluronihapoksi ja vastaavaksi alkoholiksi ja siten yhdisteeksi, joka on jo olemassa elimistössä, ja vaarattomaksi yhdisteeksi, kuten alkoholiksi, jos käytetään hyaluroniesteriä, joka on johdettu farmakologisesti sopivasta alkoholista, kuten etyylialkoholista .

Nämä harsot ja myös edellä mainitut langat voidaan siitä syystä jättää elimistöön kirurgisen toimenpiteen jälkeen, koska ne absorpoituvat hitaasti edellä mainitun hajaantumisen ansiosta.

Valmistettaessa yllä esitettyjä sanitäärisiä ja kirurgisia artikkeleita on mahdollista lisätä pehmennysaineita, jotka parantavat niiden mekaanisia ominaisuuksia, kuten lankojen yhteydessä niiden solmujen kestävyyden parantamiseksi. Nämä pehmennysaineet voivat olla esimerkiksi rasvahappojen alka-lisuoloja, esimerkiksi natriumstearaattia tai natriumpalmi-taattia, orgaanisten happojen estereitä, joissa on useita hiiliatomeja jne.

Eräs toinen uusien esterien lääketieteessä ja kirurgiassa esiintyvä sovellutus koskee erilaisten kiinteiden kiinnitti-mien, kuten levyjen, kiekkojen jne. valmistusta, jotka korvaavat jo käytössä olevat metallisessa muodossa tai synteettisestä materiaalista valmistetussa muodossa esiintyvät kiinnittimet, jotka on tarkoitettu poistettaviksi määrätyn ajan kuluttua. Eläinten pollageenista, joka on proteenityyppinen, valmistetut valmisteet aiheuttavat usein ei-toivottuja sivu- 94778 18 vaikutuksia, kuten tulehdusta tai hylkimistä. Eläinten, ei ihmisten, hyaluronihapon ollessa kyseessä tätä vaaraa ei ole olemassa, koska erilaisten eläinlajien polysakkaridien välillä ei ole yhteensopimattomuutta.

Eräs toinen sovellutus koskee pehmeiden kudosten vaurioiden korjaamista. Turvallisen ja tehokkaan biomateriaalin tarve, jolla voidaan korvata puuttuva tai vaurioitunut pehmeä kudos, on tiedetty pitkään. Useita alloplastisia materiaaleja, kuten parafiinia, Teflon-tahnaa, silikoni- ja boorikollageenia on tähän asti käytetty menetetyn pehmeän kudoksen korvaamiseksi. Kuitenkin näihin materiaaleihin liittyy pysyviä ei-toivottuja muutoksia iholla, jolloin ne siirtyvät istutuspaikasta ja aiheuttavat haitallisia käsittelyreaktioita. Siten lääketieteessä esiintyy edelleen monipuolisen biomateriaalin tarve. Hyaluronihappoestereitä voidaan käyttää turvallisesti ja tehokkaasti pehmeän kudoksen vaurioiden, kuten aknearpien, leikkauksen jälkeen esiintyvien surkastumien, huulihalkioiden ja iän aiheuttamien ryppyjen korjaamiseksi.

Osa uusien esterien lääketieteen ja kirurgian sovellutuksista koskee paisuvia materiaaleja, etenkin sienien muodossa olevia, haavojen ja erilaisten vammojen lääkintää varten.

« % II 1 tä t »Ib i i i H i 19

Biologisen aktiivisuuden tutkimukset - 94778

Entsyymistablillus ja hapen läpipäästökyky Aineet Tämän keksinnön mukaan aikaansaatavien kalvojen ja kuitujen arvokkaat ominaisuudet, jotka osittain on jo esitetty, luovat perustan niiden teknisille eduille suhteessa tunnetun tekniikan tuotteisiin. Näitä ominaisuuksia selostetaan kuitenkin seuraavassa lähemmin entsyymistabiiliutta ja kalvojen hapen läpäisevyyttä koskevilla koetuloksilla, jotka on saatu seuraavista yhdisteistä: HYAFF2 hyaluronihappo, joka on esteröity 100 %:sesti metano-lilla, HYAFF7 hyaluronihappo, joka on esteröity 100 %:sesti etanolilla, HYAFF0 hyaluronihappo, joka on esteröity 100 %:sesti isopro-panolilla, HYAFFg hyaluronihappo, joka on esteröity 100 %:sesti n-pro-panolilla, HYAFFg hyaluronihappo, joka on esteröity 100 %:sesti bent-syylialkoholilla, HYAAF20 hyaluronihappo, joka on esteröity 100 %:sesti β-fe-nyylietyylialkoholilla, HYAFF22 hyaluronihappo, joka on esteröity 100 %:sesti iso-* pentyylialkoholilla.

Kalvot voidaan valmistaa esimerkissä 39 esitetyllä tavalla.

HYAFF-kalvojen entsyymistabiilius

Stabiilius seerumiesteraasin suhteen

Jokainen kalvo (n. 20 mg) sijoitettiin polyeteenikapseliin yhdessä kanin seerumin (5 ml) kanssa ja pidettiin vakiossa lämpötilassa (37 *C).

Arviointiparametrinä oli aika (tunteina), joka tarvittiin kalvon liukenemiseksi. Tulokset on esitetty taulukossa 6.

20 94778

Stabiilius hyaluronldaasin suhteen

Jokainen kalvo (n. 20 mg) sijoitettiin polyeteenikapseliin yhdessä pH 5-puskurin (asetaatti 0,1M, NaCl 0,15M) tai pH

7-puskurin kanssa (fosfaatti 0,1M, NaCl 0,15m), joka sisälsi 100 U entsyymiä (kivesten hyaluronidaasia, Miles-erä 8062, aktiivisuus 342 turbidometristä yksikköä/mg) kussakin mlrssa ja pidettiin vakiossa lämpötilassa (37eC). Arviointiparamet-rinä oli kalvon liukenemiseen tarvittava aika (tunteina). Tulokset on esitetty taulukossa 6.

Taulukko 6 HYAFF-johdannaisten kalvojen stabiilius seerumiesteraasin (37eCj ja hyaluronldaasin (37*C, pH 5 ja pH 7,2) läsnäollessa

Yhdisteet_Stabiilius (h)_

Seerumiesteraasi Hyaluronidaasi _pH 5_pH 7,2_ » · HYAFF2 72 120 120 HYAFFg 120 168 168 HYAFF7 90 150 150 HYAFFn 60 140 140 HYAFF2o 130 180 180 HYAFF22 130 175 175 HYAFF-johdannaisten kalvojen läpipäästökyky hapen suhteen

Jokainen kalvo sijoitettiin säiliöön, jossa oli kaksi osas-' toa, jotka oli erotettu itse kalvolla. Toinen osasta (tilavuus =1,2 cm3) täytettiin osittain kaasusta vapautetulla vedellä (P02 = 45 mm Hg 23eC:ssa), toiseen johdettiin 02:n ja C02:n virtaus (95 % ja vastaavasti 5 %), joka pidettiin vakiona (l kupla/sek.). Koko järjestelmä eristettiin typellä.

sl m ) iin; r: mi 1 1 94778 Määrättyinä aikoina (15, 30, 60, 90, 120, 240 min.) poistettiin sopiva määrä vettä (1,2 cm3) ja määritettiin C>2:n osittainen paine Gas System analyser 1302-laitteella (Instrumentation Laboratories). Kyllästymispaine (550 mg Hg) otettiin vertailuksi ja laskettiin edellä esitetyissä koeolosuhteissa puhaltamalla 02-atmosfääriä.

Testit suoritettiin vertaamalla läpipäästämätöntä kalvoa ja silastista (Lepetit:n luettelo, n:o 500-1). Tulokset on esitetty taulukossa 7.

22 94778 c

•H

E

o o o o co o m o o σι ro cti cm co o t" r·* rr n rr n 'f n n

CM

c

•H

• E o cm o r- o o o ro σι CM CTl CM rr O 00 I— o M" co m1 m m1 n ro

CM »H

c

•H

E O CM 00 rH O O Γ- CM

σι cm m* r~ ro in ro in O "β· ro ro ro ro ro ro σο «l I i w E o cm oouooor-o

•h σι CM O CM i—I (M H i—I

:¾ ifl O M· ro ro ro ro ro ro CL en vo

:<X3 M

rH ·· I u

CM O

O ro · CM e 5 σι E oeoincoaooioco •ro 33 en o oo o oi rl in co

O o cm ro cm ro CM CM

> E ro rH fe

S

e § S3 -h e v & -g SI ooioorHomcn cm in σι *3· en m 3 ιο h 3

I O r-l ro ' CM CM CM CM CM CM

ie e

-W

E

in in in m in in m in O M" M1 3 3 3 3 3 3 e

- ;S

O K E O

P 0 <D *H rH O CM

Se E-· tn 4J cm σι σ» rH cm cm S en -r^ptnpijuCubCHb ä s 45 5 aasasi g S 3.S '3 ££££££ 23 94778

Keksinnössä käytettävien uusien esterien ja osittaisten esterien biologisten ominaisuuksien osalta viitattakoon kantahake-muksessa 862878 annettuun yksityiskohtaiseen selvitykseen.

HY-esterien valmistusmenetelmä

Menetelmä A

Hyaluronihapon esterit voidaan valmistaa sinänsä tunnetuilla karboksyylihappojen esteröintimenetelmillä, esimerkiksi käsittelemällä vapaa hyaluronihappo halutuilla alkoholeilla katalysoivien aineiden, kuten vahvojen epäorgaanisten happojen tai happotyyppisten ioninvaihtimien läsnäollessa, tai eetteröinti-aineella, joka pystyy liittämään halutun alkoholitähteen, epäorgaanisten tai orgaanisten emästen läsnäollessa. Eette-röintiaineina on mahdollista käyttää kirjallisuudesta tunnettuja aineita, kuten etenkin erilaisten epäorgaanisten happojen tai orgaanisten sulfonihappojen, kuten vetyhappoja estereitä, s.o. hydrokarbyylihalogenideja, kuten metyyli- tai etyylijodi-dia, tai neutraaleja sulfaatteja tai hydrokarbyylihappoja, alfiitteja, karbonaatteja, silikaatteja, fosfiitteja tai hydrokarbyylisulfonaatteja, kuten metyylibentseeniä tai p-to-lueenisulfonaattia tai metyyli- tai etyylikloorisulfonaattia. Reaktio voi tapahtua sopivassa liuottimessa, esimerkiksi alkoholissa, mieluummin sellaisessa, joka vastaa karboksyyli-ryhmään liitettävää alkyyliryhmää. Reaktio voidaan suorittaa myös ei-polaarisissa liuottimissa, kuten ketoneissa, eettereissä, kuten dioksaanissa, tai aproottisissa liuottimissa, kuten dimetyylisulfoksidissa. Emäksenä voidaan käyttää esimerkiksi alkali- tai maa-alkalimetallin tai magnesiumin hydraat-tia tai hopeaoksidia tai emäksistä suolaa tai jotakin näistä metalleista, kuten karbonaattia ja epäorgaanisista emäksistä tertiääristä atsotisoitua emästä, kuten pyridiiniä tai kol-lidiiniä. Emäksen sijasta on mahdollista käyttää myös emäs-tyyppistä ioninvaihdinta.

Eräässä toisessa esteröintimenetelmässä käytetään metalli-

I I

* » 24 94778 suoloja tai orgaanisten atsotisoitujen emästen kanssa muodostettuja suoloja, esimerkiksi ammonium- tai ammoniumsubsti-tuoituja suoloja. Mieluummin käytetään alkali- tai maa-alkali-metallien suoloja, mutta voidaan käyttää myös muita metal-lisuoloja. Esteröintiaineet ovat myös tässä tapauksessa samat kuin yllä mainitut ja sama koskee myös liuottimia. Mieluummin käytetään aproottisia liuottimia, esimerkiksi dimetyylisulfoksidia ja dimetyyliformamidia.

Tämän menetelmän tai jonkin muun myöhemmin esitettävän menetelmän mukaisesti saaduissa estereissä osittaisesterien vapaat karboksyyliryhmät voi olla muodostettu suolaksi haluttaessa sinänsä tunnetulla tavalla.

Menetelmä B:

Hyaluronihappoesterit voidaan kuitenkin valmistaa edullisesti erään toisen menetelmän mukaisesti, jota voidaan yleisesti soveltaa valmistettaessa karboksyyliryhmiä sisältävien happamien polysakkaridien karboksyyliestereitä. Tässä menetelmässä käsitellään karboksyyliryhmiä sisältävän happaman polysakkaridin kvaternäärinen ammoniumsuola eetteröintiaineella, mieluummin aproottisessa orgaanisessa liuottimessa. Lähtöaineena käytettävinä happamina polysakkarideina on mahdollista käyttää esimerkiksi hyaluronihapon sijasta muita happamia eläin- tai kasvisperäisiä polysakkarideja ja niiden synteettisesti muunnettuja johdannaisia, kun hapanta hemiselluloosaa, jota saadaan määrättyjen kasvien alkaliuutteista ja ksylaanin saosta-misen jälkeen, jonka disakkaridikomponentit muodostuvat D-glu-kuronihaposta ja D-ksylopyranoosista (ks. "The Carbohydrates-, W. Pigman, s. 668 - 669 - R.L. Whistler, W.M. Corbett)- pek-tiineja ja happamia polysakkarideja, jotka saadaan niistä, s.o. galakturonaania, happamia polysakkarideja, jotka saadaan kumikasvista (neste), kuten arabikumista, tragantista, ja lopuksi happamia polysakkarideja, jotka on johdettu merilevästä, kuten agaria ja karrageeniä. Lähtöaineena on tietenkin myös mahdollista käyttää molekyylifraktioita, joita saadaan 2= 94778 hajottamalla kaikista yllä mainituista polysakkarideista.

Orgaanisina liuottimina käytetään mieluummin aproottisia liuottimia, kuten dialkyylisulfoksideja, dialkyylikarboksami-deja, kuten etenkin alempialkyylidialkyylisulfoksideja, etenkin dimetyylisulfoksidia, ja alempialifaattisten happojen alempialkyylidialkyyliamideja, kuten dimetyyli- tai dietyyli-formamidia tai dimetyyli- tai dietyyliasetamidia.

Voidaan kuitenkin käyttää myös muita liuottimia, jotka eivät aina ole aproottisia, kuten alkoholeja, eettereitä, ketoneja, estereitä, etenkin alifaattisia tai heterosyklisiä alkoholeja ja ketoneja, joilla on alhainen kiehumispiste, kuten heksa-fluori-isopropanolia, trifluorietanolia ja N-metyylipyrrolido-nia.

Reaktio suoritetaan mieluummin n. 0 - 100 °C:n, etenkin n. 25 - 75 °C:n lämpötilassa, esimerkiksi n. 30 °C:ssa.

Esteröinti suoritetaan mieluummin lisäämällä asteittain es-teröintiainetta yllä mainittuun ammoniumsuolaa, joka ori jossakin yllä mainitussa liuottimessa, esimerkiksi dimetyylisulf oksidissa .

Alkylointiaineena on mahdollista käyttää yllä mainittuja aineita, etenkin hydrokarbyylihalogeeneja, esimerkiksi alkyy-lihalogeeneja. Lähtöaineena käytettävinä kvaternäärisinä am-moniumsuoloina käytetään mieluummin alempia ammoniumtetra-alkylaatteja, joiden alkyyliryhmissä on mieluummin 1-6 hiiliatomia. Useimmiten käytetään tetrabutyyliammoniumin , ' hyaluronaattia. Nämä kvaternääriset ammoniumsuolat on mahdollista valmistaa saattamalla happaman polysakkaridin metallinen suola, mieluummin jokin yllä mainittu suola, etenkin natrium- tai kaliumsuola reagoimaan vesipitoisessa liuoksessa kvaternäärisen ammoniumemäksen kanssa suolaksi muodostetun sulfonihartsin kanssa.

« 94778

Happaman polysakkaridin tetra-alkyyliammoniumsuola voidaan saada jäädytyskuivattamalla eluaatti. Happamien polysakkaridien tetra-alkyyliammoniumsuolat, joita käytetään uuden menetelmän lähtöyhdisteinä ja jotka on johdettu alempialkyy-leistä, etenkin 1-6 hiiliatomia sisältävistä alkyyleistä, ovat uusia ja muodostavat tämän keksinnön vielä erään kohteen. Yllättävästi tällaiset suolat ovat osoittautuneet liukeneviksi yllä mainituissa orgaanisissa liuottimissa ja tästä syystä yllä mainitun menetelmän B mukainen happaman polysakkaridin esteröinti on erityisen helppo ja se tuottaa runsaita saantoja. Tästä syystä käytettäessä tämäntyyppistä menetelmää voidaan helposti annostella happaman polysakkaridin karboksyyli-ryhmät, jotka on esteröitävä.

Uusi menetelmä B soveltuu erityisen hyvin hyaluroniesterien valmistukseen. Etenkin tästä syystä uuden menetelmän lähtöyhdisteinä käytettävät hyaluronihapon kvaternääriset ammonium-suolat, etenkin ne, jotka on johdettu alempialkyyleistä ja erityisesti 1-6 hiiliatomia sisältävistä alkyyleistä, ovat uusia ja muodostavat tämän keksinnön erään erityisen kohteen.

Eräässä edellä esitetyn menetelmän muunnelmassa happaman polysakkaridin kalium- tai natriumsuola, joka on suspendoitu sopivaa liuokseen, kuten dimetyylisulfoksidiin, saatetaan reagoimaan sopivan alkylointiaineen kanssa kvaternäärisen ammoniumsuolan, kuten tetrabutyyliammoniumjodidin katalyyttisten määrien läsnäollessa.

Uusien esterien valmistamiseksi on mahdollista käyttää mitä tahansa alkuperää olevia hyaluronihappoja, kuten esimerkiksi happoja, jotka on uutettu yllä mainituista luonnollisista lähtömateriaaleista, esimerkiksi kukon heltoista. Tällaisten happojen valmistusta on esitetty kirjallisuudessa: mieluummin käytetään puhdistettuja hyaluronihappoja. Keksinnön mukaisesti käytetään etenkin hyaluronihappoja, jotka sisältävät integraa-listen happojen molekyylifraktioita, jotka on saatu suoraan uuttamalla orgaanisia materiaaleja ja joiden molekyylipainot

Il li | i · m , « 94778 vaihtelevat n. 90 - 80 %:sta (MP = 11,7 - 10,4 miljoonaa) 0,2 %:iin (MP = 30.000) kokonaishapon molekyylipainosta, joka on 13 miljoonaa, sopivimmin niiden molekyylipaino on 5 - 0,2 %. Tällaiset fraktiot voidaan saada useilla kirjallisuudessa esitetyillä menetelmillä, kuten hydrolysoimalla, hapettamalla, entsymaattisilla tai fysikaalisilla menetelmillä, kuten mekaanisilla tai säteilytysmenetelmillä. Primordiaalisia uutteita muodostuu tästä syystä usein näiden samojen puhdistus-menetelmien kuluessa (esim. ks. Balazs et ai., "Cosmetics & Toiletries"). Saatujen molekyylifraktioiden erottaminen ja puhdistaminen suoritetaan tunnetuilla menetelmillä, esimerkiksi molekyylisuodatuksen avulla.

Eräs puhdistetun HY:n fraktio on esimerkiksi se, joka tunnetaan nimellä "ei-inflammatorinen NIF-NaHA-natriumhyaluronaat-ti" (Balazs, "Healon" - A guide to its use in Ophthalmic Surgery D. Miller & R. Stegman, eds. John Wiley & Sons N.Y.

81983 : S. 5) .

Erityisen tärkeitä esterien lähtöaineita ovat kaksi puhdistettavaa hyaluronihaposta saatavaa fraktiota, esimerkiksi kukon heltoista saadut, jotka tunnetaan nimillä hyalastiini ja hyalektiini. Hyalastiinifraktion keskimääräinen molekyylipaino on n. 50.000 100.000, kun taas hyalektiini-fraktion molekyyli-paino on n. 500.000 - 730.000. Näiden kahden fraktion yhdistetty fraktio on myös eristetty ja sen keskimääräinen molekyylipaino on n. 250.000 - 350.000. Tämä yhdistetty fraktio voidaan saada 80 %:n saannolla koko erityisestä lähtöaineesta saatavasta hyaluronihaposta, kun taas hyalektiini voidaan saada 30 %:n sannolla ja hyalastiini-fraktio voidaan saada 50 %:n saannolla lähtöaineena käytetystä HY.-stä. Näiden fraktioiden valmistusta on esitetty esimerkeissä A - C.

HY:n suolaksimuodostaminen yllä olevien metallien kanssa lähtöaineiden valmistamiseksi yllä esitettyä erityistä este-röintimenetelmää varten suoritetaan sinänsä tunnetulla taval- . la, esimerkiksi saattamalla HY reagoimaan lasketun emäsmäärän, * 28 94778 esimerkiksi alkalihydraatin tai tällaisten metallien emäksisten suolojen, kuten karbonaattien tai bikarbonaattien kanssa.

Osittaisestereissä on mahdollista muodostaa suolaksi kaikki jäljellä olevat karboksyyliryhmät tai vain osa niistä, annostamalla emäsmäärät siten, että saadaan haluttu suolanmuodos-tuksen stökiometrinen aste. Suolanmuodostuksen oikean asteen avulla on mahdollista saada estereitä, joilla on eri dissosi-aatiovakioiden laaja ala ja jotka tästä syystä antavat halutun pH-arvon, liuoksessa tai "in situ" terapeuttisen käytön aikana.

Uusista tuotteista erityisen tärkeitä ovat yllä esitetyt esterit ja niiden suolat sekä seuraavissa havainnollistavissa esimerkeissä esitetyt.

Uusien esterien ja niiden suolojen valmistusmenetelmien muunnelmat, joissa menetelmä katkaistaan jossakin vaiheessa tai aloitetaan väliyhdisteestä, minkä jälkeen suoritetaan puuttuvat vaiheet tai joissa lähtötuotteet valmistetaan in situ.

Keksintöä havainnollistetaan seuraavilla esimerkeillä. Valmistusesimerkit

Seuraavat esimerkit A - C selittävät hyaluronihappojen fraktioiden valmistusmenetelmiä.

Esimerkki A: Menetelmä sellaisten hyalastiini- ia hvalektiini-fraktjoiden seoksen valmistamiseksi, jolla ei ole inflammatorista aktiivisuutta

Tuoreita tai jäädytettyjä kukon helttoja (3000 g) hienonnetaan lihamyllyssä ja sitten ne homogenoidaan varovasti mekaanisessa homogenointilaitteessa. Näin saatu tahna käsitellään sitten ** · «tt-t eitti | | t M ; · , 2S 94778 ruostumattomasta teräksestä valmistetussa säiliössä (AISI 316) tai lasissa 10 tilavuusosalla vedetöntä asetonia. Seosta sekoitetaan sitten 6 tunnin ajan 50 rpm:n nopeudella. Annetaan erottua 12 tunnin aikana, minkä jälkeen asetoni poistetaan uuttamalla. Asetonin uuttaminen toistetaan, kunnes poistettu asetoni saavuttaa oikean kosteusasteen (Karl-Fischer-menetel-mä). Seos lingotaan sitten ja tyhjökuivatetaan sopivassa lämpötilassa 5-8 tunnin kuluessa. Näin saadaan noin 500 -600 g kuivaa kukon helttojen jauhetta.

300 g kuivaa jauhetta käsitellään entsymaattisesti papaiinilla (0,2 g) vesipitoisissa olosuhteissa ja puskuroidaan fosfaatti-puskurilla kysteiinihydrokloridin sopivan määrän läsnäollessa. Saatua seosta sekoitetaan 24 tunnin ajan 60 rpm:n nopeudella pitäen samalla lämpötila 60-65 °C:ssa. Sitten se jäähdytetään 25 °C:ssa ja lisätään Celite®:ä (60 g) ja sekoitetaan edelleen tunnin ajan. Näin saatu seos suodatetaan, kunnes saadaan kirkas neste. Kirkas neste alistetaan molekyyliult- ·* rasuodatukseen käyttämällä kalvoja, joiden molekyylisulkuraja * · on 30.000, niiden molekyylien pitämiseksi kalvolla, joiden molekyylipaino on suurempi kuin 30.000.

Tuote ultrasuodatetaan 5:stä 6:een alkuperäistä tilavuusosaa lisäämällä jatkuvasti tislattua vettä tuotteeseen ultrasuo-·. datuksen aikana. Veden lisäys lopetetaan ja ultrasuodatusta jatketaan, kunnes määrä on pienentynyt kolmannekseen alkuperäisestä määrästä.

Jäljelle jäävä neste pidetään 0,1 molaarisena lisäämällä natriumkloridia ja lämpötila saatetaan 50 °C:seen. Sekoittaen 60 rpm:n nopeudella lisätään 45 g setyylipyridiniumkloridia. Liuosta sekoitetaan 60 minuutin ajan ja sitten lisätään 50 g Celite®:ä. Sekoittaen seoksen lämpötila saatetaan 25 °C:seen ja muodostunut sakka kerätään linkoamalla. Saatu sakka sus-pendoidaan 0,01 M natriumkloridissa olevaan liuokseen (5 1), joka sisältää 0,05 % setyylipyridiniumkloridia. Muodostunutta suspensiota sekoitetaan 60 minuutin ajan 50 °C:ssa, lämpötila 3„ 94778 saatetaan sitten 25 °C:seen ja sakka lingotaan. Pesu toistetaan 3 kertaa, minkä jälkeen sakka kerätään säiliöön, jossa on 3 litraa 0,05 M natriumkloridin liuosta, joka sisältää 0,05 % setyylipyridiniumkloridia. Sekoitetaan 60 rpm:n nopeudella 60 minuutin ajan ja lämpötila pidetään vakiosti 25 °C:ssa kahden tunnin ajan. Supernatantti poistetaan linkoamalla. Tämä toimenpide toistetaan useita kertoja 0,1 M natriumkloridin liuoksilla, jotka sisältävät 0,05 % setyylipyridiniumkloridia. Seos lingotaan ja supernatantti heitetään pois. Sakka dispergoidaan 0,30 M natriumkloridin liuokseen, joka sisältää 0,05 % setyylipyridiniumkloridia (3 litraa). Seosta sekoitetaan ja kerätään sekä sakka että kirkas liuos. Uuttaminen toistetaan vielä 3 kertaa sakalla käyttämällä kulloinkin 0,5 1 samaa vesipitoista liuosta.

Lopuksi sakkajäännös poistetaan ja kirkkaat nesteet sijoitetaan yhdessä yhteen ainoaan säiliöön. Nesteen lämpötila saatetaan 50 °C:seen sekoittaen koko ajan. Neste tehdään sitten 0,23 molaariseksi natriumkloridilla. Lisätään 1 g setyylipyridiniumkloridia ja nestettä sekoitetaan 12 tunnin ajan.

Seos jäähdytetään 25 °C:seen ja sitten se suodatetaan ensin Celite®-pakkauksen päällä ja sitten suodattimen läpi. Sitten se alistetaan jälleen molekyyliultrasuodatukseen kalvolla, . jonka molekyylisulkuraja on 30.000, ultrasuodattamalla kolme alkuperäistä tilavuusosaa lisäämällä 0,33 M natriumkloridin liuosta. Natriumkloridiliuoksen lisäys keskeytetään ja määrää vähennetään neljännekseen alkuperäisestä määrästä. Näin konsentroitu liuos seostetaan sekoittaen (60 rpm) 25 °C:ssa 3 tilavuusosalla etanolia (95 %). Sakka kerätään linkoamalla ja supernatantti heitetään pois. Sakka liuotetaan 1 litraan natriumkloridin 0,1 M liuosta ja saostus toistetaan 3 tilavuusosalla etanolia (95 %).

Sakka kerätään ja pestään ensin 75 %:sella etanolilla (3 kertaa) , sitten absoluuttisella etanolilla (3 kertaa) ja lopuksi absoluuttisella asetonilla (3 kertaa).

’ 1 IM 1 Kilu I I r II ; ; 31 94778 Näin saadun tuotteen (hyalestiini- + hyalektiinifraktiot keskimääräinen molekyylipaino on 250.000 - 350.000.

HY:n saanto on 0,6 paino- % alkuperäisestä tuoreesta kudoksesta .

Esimerkki B: Menetelmä hvalastiinifraktion valmistamiseksi esimerkissä A esitetyllä menetelmällä valmistetusta seoksesta

Esimerkissä A esitetyllä menetelmällä valmistettu seos liuotetaan kahdesti tislattuun, apyrogeeniseen veteen, 10 ml tuotetta 1 ml vettä kohden. Saatu liuos alistetaan molekyy-lisuodatukseen suodatinkalvojen läpi, joiden molekyylisulku-raja on 200.000, minkä jälkeen konsentroidaan kalvolla lisäämättä vettä. Kalvojen läpi tapahtuvan ultrasuodatuksen aikana, joiden kalvojen molekyylisulkuraja on 200.000, molekyylit, joiden molekyylipaino on yli 200.000, eivät pääse läpi, kun taas pienemmät molekyylit kulkevat kalvon läpi yhdessä veden kanssa. Suodatuksen aikana vettä ei lisätä, niin että tilavuus pienenee ja tästä syystä niiden molekyylien kon-sentraatio, joiden molekyylipaino on yli 200.000, kasvaa.

Tuotetta ultrasuodatetaan, kunnes tilavuus kalvon yläosassa on vähentynyt 10 %:iin alkuperäisestä tilavuudesta. Kaksi tila-vuusosaa apyrogeenistä, kahdesti tislattua vettä lisätään ja liuos ultrasuodatetaan sitten jälleen, kunnes tilavuus on · < pienentynyt kolmannekseen. Tämä toistetaan vielä kaksi kertaa. Kalvon läpi kulkenut liuos saatetaan 0,1 molaariseksi nat-riumkloridilla ja sitten se saostetaan 4 tilavuusosalla 95 %:sta etanolia. Sakka pestään 3 kertaa etanolilla (75 %) ja sitten se tyhjökuivatetaan.

Näin saadun tuotteen (hyalastiinifraktion) keskimääräinen molekyylipaino on 50.000 - 100.000. HY:n saanto on 0,4 paino-% alkuperäisestä tuoreesta kudoksesta.

32 94778

Esimerkki C: Menetelmä hvalektiinifraktion valmistamiseksi

Konsentroitu liuos, joka kerättiin säiliöön esimerkissä B ultrasuodatuskalvon yläosassa, jonka molekyylisulkuraja oli 200.000, laimennetaan vedellä, kunnes saadaan liuos, joka sisältää 5 mg/ml hyaluronihappoa määritettynä kvantitatiivisella analyysillä, joka perustuu glukuronihapon annostukseen.

Liuos saatetaan 0,1 molaariseksi natriumkloridissa ja sitten se saostetaan 4 tilavuusosalla etanolia {95 %). Sakka pestään 3 kertaa etanolilla (75 %) ja sitten se tyhjökuivatetaan.

Näin saadun tuotteen (hyalektiinifraktion) keskimääräinen molekyylipaino on 500.000 - 730.000. Tämä vastaa hyaluroni-hapon fraktiota, jonka määritelty molekyyliketjun pituus on n. 2.500 - 3.500 sakkaridiyksikköä, jotka ovat erittäin puhtaita.

HY:n saanto on 0,2 paino- % alkuperäisestä tuoreesta kudoksesta .

Esimerkki D: Hvaluronihapon (HY) tetrabutwliammoniumsuolan valmistus 4,02 g HY-natriumsuolaa (10 mooliekv.) liuotetaan 400 ml:aan tislattua H20:ta. Liuos eluoidaan sitten 4 °C:ssa termostaat-tisessa pylväässä, joka sisältää 15 ml sulfonihartsia (Dowex 50 x 8) tetrabutyyliammoniumin muodossa. Natriumista vapaa eluaatti jäädytetään heti ja jäädytyskuivatetaan. Saanto: 6,18 g.

Esimerkki 1: HYaluronihapon (HY) (osittaisen) propvvliesterin valmistus - 50 % esteröityä karboksyyliryhmiä - 50 % suolaksi muodostettuja karboksyyliryhmiä (Na) 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipaino on 170.000, joka vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksik- • · im mu 11 i il , 33 94778 köä, liuotetaan 620 mlraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 1,8 g (10,6 mooliekv.) propyylijodidia ja muodostunut liuos pidetään 30 °C:n lämpötilassa 12 tunnin ajan.

Lisätään liuos, joka sisältää 62 ml vettä ja 9 g natriumklo-ridia ja muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 mlraan asetonia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään kolmee kertaa 500 ml:11a asetonin ja veden 5:l-seosta ja kolme kertaa asetonilla ja lopuksi se tyhjö-kuivatetaan kahdeksan tunnin kuluessa 30 °C:ssa.

Tuote liuotetaan sitten 550 mlraan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia, ja liuos kaadetaan hitaasti 3.000 mlraan asetonia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään kaksi kertaa 500 ml:11a asetoni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa 500 ml :11a asetonia ja lopuksi se tyhjö-kuivatetaan 24 tunnin kuluessa 30 °C:ssa. Saadaan 7,9 g otsikossa esitetty osittaista propyyliesteriyhdistettä. Esteriryh-mien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttämällä menetelmää, jonka R.H. Cundiff ja P.C. Markunas ovat esittäneet [Anal. Chem. 33, 1028 - 1030 (1961)].

Esimerkki 2: Hvaluronihapon (HY) (osittaisen) isopropvvlies-terin valmistamiseksi - 50 % esteröitviä karboksvvlirvhmiä.

50 % suolaksi muodostettuja karboksvvliryhmiä (Na) 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipaino on 160.000, mikä vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksikköä, liuotetaan 620 mlraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 1,8 g (10,6 mooliekv.) isopropyylijodidia ja muodostunut seos pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Lisätään liuos, joka sisältää 62 ml vettä ja 9 g natriumkloridia ja muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 mlraan asetonia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään kolme kertaa 500 ml:11a asetoni/vettä (5:1) ja kolme kertaa asetonilla ja lopuksi sitä tyhjökuivatetaan 34 94778 kahdeksan tunnin ajan 30 °C:ssa.

Tuote liuotetaan sitten 550 ml:aan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia, ja liuos kaadetaan hitaasti 3.000 ml:aan asetonia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään kaksi kertaa 500 ml :11a asetoni/vettä {5:1) ja kolme kertaa 500 ml:11a asetonia ja lopuksi sitä tyhjö-kuivatetaan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa. Saadaan 7,8 g otsikossa esitettyä osittaista isopropyyliesteriyhdistettä. Esteriryhmi-en kvantitatiivinen määritys suoritetaan R.H. Cundiffin ja P.C. Markunasin menetelmän mukaisesti [Anal. Chem. 33, 1028 -1030 (1961)] .

Esimerkki 3: Hvaluronihapon (HY) (osittaisen) etvvliesterin valmistus - 75 % esteröitviä karboksyyliryhmiä. 25 % suolaksi muodostettuja karboksyvlirvhmiä (Na) 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipaino on 250.000 ja joka vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksikköä, liuotetaan 620 ml:aan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 2,5 g (15,9 mooliekv.) etyylijodidia ja muodostunut seos pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Lisätään liuos, jossa on 62 ml vettä ja 9 g natriumkloridia ja muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 ml:aan asetonia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään kolme kertaa 500 ml :11a asetoni/vettä (5:1) ja kolme kertaa asetonilla ja lopuksi sitä tyhjökuivatetaan kahdeksan tunnin ajan 30 °C:ssa.

Tuote liuotetaan sitten 550 ml:aan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia ja liuos kaadetaan hitaasti 3.000 ml:aan asetonia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään kaksi kertaa 500 ml :11a asetoni/vettä (5:1) ja kolme kertaa 500 ml :11a asetonia ja lopuksi sitä tyhjö-kuivatetaan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa. Saadaan 7,9 g otsikossa esitettyä osittaista etyyliesteriyhdistettä. Esteriryhmien ’I li i liiti |:i | st 35 94778 kvantitatiivinen määritys suoritetaan R.H. Cundiffin ja P.C. Markunasin menetelmän mukaisesti [Anal. Chem. 33, 1028 - 1030 (1961)] .

Esimerkki 4: Hvaluronihanon (HY) (osittaisen) metvvliesterin valmistus - 75 % esteröitviä karboksvvliryhmiä. 25 % suolaksi muodostettu karboksvyliryhmiä (Na) 12.4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipaino on 80.000, mikä vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksikköä, liuotetaan 620 ml:aan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 2,26 g (15,9 mooliekv.) metyylijodidia ja muodostunut seos pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Lisätään liuos, joka sisältää 62 ml vettä ja 9 g natriumklo-ridia ja muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 ml:aan asetonia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään kolme kertaa 500 ml:11a asetoni/vettä (5:1) ja kolme kertaa asetonilla ja lopuksi sitä tyhjökuivatetaan 8 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Tuote liuotetaan sitten 550 ml:aan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia, ja liuos kaadetaan hitaasti 3.000 ml:aan asetonia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään kaksi kertaa 500 ml :11a asetoni/vettä (5:1) ja kolme kertaa 500 ml:11a asetonia ja lopuksi sitä tyhjö-kuivatetaan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa. Saadaan 7,8 g otsikossa esitettyä osittaista metyyliesteriyhdistettä. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttämällä R.H. Cundiffin ja P.C. Markunasin menetelmää [Anal. Chem. 33., 1028 - 1030 (1961)].

Esimerkki 5: Hvaluronihapon (HY) metvvliesterin valmistus 12.4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipaino on 120.000, mikä vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksikköä, liuotetaan 620 ml:aan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, 36 9 4 7 7 8 lisätään 3 g (21,2 mooliekv.) metyylijodidia ja liuos pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 ml:aan etyyliasetaattia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään 4 kertaa 500 ml :11a etyyliasetaattia ja lopuksi sitä tyhjökuivatetaan 20 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Saadaan 8 g otsikossa esitettyä metyyliesterituotetta. Este-riryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan R.H. Cundiffin ja P.C. Markunasin menetelmän mukaisesti [Anal. Chem. 33, 1028 - 1030 (1961)].

Esimerkki 6: Hvaluronihapon (HY) etvvliesterin valmistus 12.4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipaino on 85.000, mikä vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksikköä, liuotetaan 620 mlraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 3,3 g (21,2 mooliekv.) etyylijodidia ja liuos pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 mlraan etyyliasetaattia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään 4 kertaa 500 ml :11a etyyliasetaattia ja lopuksi sitä tyhjökuivatetaan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Saadaan 8 g otsikossa esitettyä etyyliesterituotetta. Este-riryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan R.H. Cundiffin . ja P.C. Markunasin menetelmän mukaisesti [Anal. Chem. 33., 1028 - 1030 (1961)].

Esimerkki 7: Hvaluronihapon (HY) propyyliesterin valmistus 12.4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipaino on 170.000, mikä vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksikköä, liuotetaan 620 mlraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 3,26 g (21,2 mooliekv.) propyylijodidia ja liuos 37 . 94778 pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 ml:aan etyyliasetaattia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään 4 kertaa 500 ml :11a etyyliasetaattia ja lopuksi sitä tyhjökuivatetaan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Saadaan 8,3 g otsikossa esitettyä propyyliesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttämällä R.H. Cundiffin ja P.C. Markunasin menetelmää [Anal.

Chem. 33, 1028 - 1030 (1961)].

Esimerkki 8: Hvaluronihapon (HY) (osittaisen) butvvliesterin valmistus - 50 % esteröitviä karboksvvlirvhmiä. 50 % suolaksi muodostettuja karbokswliryhmiä (Na) 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipaino on 620.000, mikä vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksikköä, liuotetaan 620 mlraan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 1,95 g (10,6 mooliekv.) n-butyylijodidia ja muodostu-. nut liuos pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Lisätään liuos, joka sisältää 62 ml vettä ja 9 g natriumklo-ridia ja muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 ml:aan asetonia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään kolmee kertaa 500 ml:11a asetonin ja veden 5:l-seosta ja kolme kertaa asetonilla ja lopuksi sitä tyhjö-kuivatetaan 8 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Tuote liuotetaan sitten 550 ml .-aan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia, ja liuos kaadetaan hitaasti 3.000 mlraan asetonia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään kaksi kertaa 500 ml:11a asetoni/vesi-seosta (5:1) ja kolme kertaa 500 ml:11a asetonia ja lopuksi sitä tyhjökuivatetaan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa. Saadaan 8 g otsikossa esitettyä osittaista butyyliesteriyhdistettä. Esteri-; ryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttämällä 38 94778 menetelmää, jonka R.H. Cundiff ja P.C. Markunas ovat esittäneet [Anal. Chem. 33, 1028 - 1030 (1961)].

Esimerkki 9: Hvaluronihapon (HY) (osittaisen) etoksikarbo-nvvlimetyyliesterin valmistus - 75 % esteröitviä karboksyyli-rvhmiä. 25 % suolaksi muodostettuja karboksyvliryhmiä (Na) 12.4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipa!no on 180.000, mikä vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksikköä, liuotetaan 620 ml:aan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 2 g tetrabutyyliammoniumjodidia ja 1,84 g (15 moo-liekv.) etyyliklooriasetaattia ja muodostunut liuos pidetään 24 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Lisätään liuos, joka sisältää 62 ml vettä ja 9 g natriumklo-ridia ja muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 mitään asetonia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään kolme kertaa 500 ml:11a asetoni/vettä (5:1) ja kolme kertaa asetonilla ja lopuksi sitä tyhjökuivatetaan kahdeksan tunnin ajan 30 °C:ssa.

Tuote liuotetaan sitten 550 ml:aan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia, ja liuos kaadetaan hitaasti 3.000 mitään asetonia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään kaksi kertaa 500 ml :11a asetoni/vettä (5:1) ja kolme kertaa 500 ml:11a di-asetonia ja lopuksi sitä tyhjö-kuivatetaan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa. Saadaan 10 g otsikossa esitettyä osittaista etoksikarbonyylimetyyliesteriä. Esteri-ryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan R.H. Cundiffin ja P.C. Markunasin menetelmän mukaisesti [Anal. Chem. 33., 1028 - 1030 (1961)].

Esimerkki 10: Hvaluronihapon (HY) n-pentwliesterin valmistus 12.4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipaino on 620.000, mikä vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksikköä, liuotetaan 620 ml:aan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, 39 94778 lisätään 3,8 g (25 mooliekv.) n-pentyylibromidia ja 0,2 g tetrabutyyliammoniumjodidia ja liuos pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 ml:aan etyyliasetaattia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään 4 kertaa 500 ml :11a etyyliasetaattia ja lopuksi sitä tyhjökuivatetaan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Saadaan 8,7 g otsikossa esitettyä n-pentyyliesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan julkaisun Siggia S. ja Hann J.G. "Quantitative organic analysis via functional groups", s. 169-172, 4. painos John Wiley & Sons, mukaisesti.

Esimerkki 11: Hvaluronihapon (HY) isopentwliesterin valmistus 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipaino on 170.000, mikä vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksikköä, liuotetaan 620 ml:aan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 3,8 g (25 mooliekv.) isopentyylibromidia ja 0,2 g tetrabutyyliammoniumjodidia ja liuos pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 ml:aan etyyliase-** taattia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suoda tetaan ja pestään 4 kertaa 500 ml:11a etyyliasetaattia ja lopuksi sitä tyhjökuivatetaan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Saadaan 8,6 g otsikossa esitettyä isopentyyliesterituotetta Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan julkaisun Siggia S. ja Hanna J.G. "Quantitative organic analysis via functional groups", s. 169 - 172, 4. painos, John Wiley &

Sons, mukaisesti.

. ψ 40 94778

Esimerkki 12: Hvaluronihapon (HY) bentsvvliesterin valmistus 12.4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipaino on 170.000, mikä vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksikköä, liuotetaan 620 ml:aan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 4,5 g (25 mooliekv.) isopentyylibromidia ja 0,2 g tetrabutyyliammoniumjodidia ja liuos pidetään 12 tunnin ajan 30 °G:ssa.

Muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 ml:aan etyyliasetaattia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään 4 kertaa 500 ml:11a etyyliasetaattia ja lopuksi .sitä tyhjökuivatetaan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Saadaan 8,6 g otsikossa esitettyä isopentyyliesteriä. Este-riryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan julkaisun Siggia S. ja Hanna J.G. "Quantitative organic analysis via functional groups", s. 169 - 172, 4. painos, John Wiley &

Sons, mukaisesti.

Esimerkki 13: Hvaluronihapon (HY) fl-fenwlietwliesterin valmistus 12.4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipaino on 125.000, mikä vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksikköä, liuotetaan 620 ml:aan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 4,6 g (25 mooliekv.) 2-bromietyylibentseeniä ja 185 mg tetrabutyyliammoniumjodidia ja liuos pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 ml .-aan etyyliasetaattia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään 4 kertaa 500 ml :11a etyyliasetaattia jalo-puksi sitä tyhjökuivatetaan 20 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Saadaan 9,1 g otsikossa esitettyä β-fenyylietyyliesteriä.

il . «H , |lf f 4i 94778

Esteriryhraien kvantitatiivinen määritys suoritetaan julkaisun Siggia S. ja Hanna J.G. "Quantitative organic analysis via functional goups", s. 168 - 172, 4. painos, John Wileys &

Sons, mukaisesti.

Esimerkki 14: Hvaluronihapon (HY) bentswliesterin valmistus 3 g HY:n kaliumsuolaa, jonka molekyylipaino on 162.000, sus-pendoidaan 200 ml-.aan dimetyylisulfoksidia ja lisätään 120 mg tetrabutyyliammoniumjodidia ja 2,4 g bentsyylibromidia.

Suspensiota sekoitetaan 48 tunnin ajan 30 °C:ssa. Muodostunut seos kaadetaan hitaasti 1.000 ml:aan etyyliasetaattia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään 4 kertaa 500 ml :11a etyyliasetaattia ja lopuksi sitä tyh/ö-kuivatetaan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Saadaan 3,1 g otsikossa esitettyä bentsyyliesterituotetta. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan julkaisun Siggia S. ja Hanna J.G. "Quantitative organic analysis via functional groups", s. 169 - 172, 4. painos, John Wiley &

Sons, mukaisesti.

Esimerkki 15: Hvaluronihapon (HY) (osittaispropwli)esterin valmistus - 85 % esteröitviä karboksvvlirvhmiä. 15 % suolaksi muodostettuja karboksvvlirvhmiä (Na) 12,4 g HY-tetrabutyyliammoniumsuolaa, jonka molekyylipaino on 165.000, mikä vastaa 20 mooliekvivalenttia monomeeristä yksikköä, liuotetaan 620 ml:aan dimetyylisulfoksidia 25 °C:ssa, lisätään 2,9 g (17 mooliekv.) propyylijodidia ja saatu liuos : pidetään 12 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Lisätään liuos, joka sisältää 62 ml vettä ja 9 g natriumklo-ridia ja muodostunut seos kaadetaan hitaasti 3.500 ml:aan asetonia sekoittaen jatkuvasti. Muodostuu sakka, joka suoda-; tetaan ja pestään kolme kertaa 500 ml:11a asetoni/vettä (5:1) « 94778 ja kolme kertaa asetonilla ja lopuksi sitä tyhjökuivatetaan kahdeksan tunnin ajan 30 °C:ssa.

Tuote liuotetaan sitten 550 ml:aan vettä, joka sisältää 1 % natriumkloridia, ja liuos kaadetaan hitaasti 3.000 ml:aan asetonia jatkuvasti sekoittaen. Muodostuu sakka, joka suodatetaan ja pestään kaksi kertaa 500 ml :11a asetoni/vettä (5:1) ja kolme kertaa 500 ml :11a asetonia ja lopuksi sitä tyhjö-kuivatetaan 24 tunnin ajan 30 °C:ssa. Saadaan 8 g otsikossa esitettyä osittaista propyyliesteriä. Esteriryhmien kvantitatiivinen määritys suoritetaan R.H. Cundiffin ja P.C. Markuna-sin menetelmän mukaisesti [Anal. Chem. 33, 1028 1030 (1961)].

Esimerkki 16: Hvaluronihaoon estereitä sisältävien kalvojen valmistus

Liuos valmistetaan HY:n n-propyyliesteristä (MP 130.000) di-metyylisulfoksidissa 180 mg/ml:n konsentraatiossa.

Kerrostuslaitteella levitetään ohut kerros liuosta lasilevylle; paksuuden on oltava 10 kertaa suurempi kuin kalvon lopullinen paksuus. Lasilevy upotetaan etanoliin, joka absorboi dimetyylisulfoksidin, mutta ei liuota HY-esteriä, joka muuttuu kiinteäksi. Kalvo irrotetaan lasilevyltä, pestään jälleen etanolilla, sitten vedellä ja jälleen etanolil Näin saatu levyä kuivatetaan puristimessa 48 tunnin ajan 30 °C:ssa.

Esimerkki 17: Hvaluronihaoon estereitä sisältävien lankojen eli kuitujen valmistus

Valmistetaan liuos dimetyylisulfoksidissa HY:n bentsyylies-teristä (MP 165.000) 200 mg/ml:n konsentraatiossa. Näin saatu liuos puristetaan pumpun avulla langanvalmistuskoneen läpi, jossa on 0,5 mm:n reikiä.

43 94778

Langanvalmistuskone upotetaan etanoli/dimetyylisulfoksidiin (80:20, tämä konsentraatio pidetään vakiona lisäämällä jatkuvasti etanolia). Kun liuos on liuennut dimetyylisulfoksidissa tällä tavalla, se pyrkii irrottamaan suurimman osan dimetyylisulfoksidista ja lanka jähmettyy.

Lanka venytetään, kun se vielä sisältää dimetyylisulfoksidia, sitten se venytetään uudestaan ja pestään etanolilla. Lanka kuivataan typpivirrassa.

Claims (8)

1. Menetelmä hyaluronihappoestereistä tai niiden suoloista koostuvien kalvojen tai kuitujen muodostamiseksi, tunnettu siitä, että hyaluronihapon täydellinen tai osittainen esteri, joka on muodostettu alifaattisen tai arali-faattisen sarjan alkoholeista, liuotetaan orgaaniseen liuot-timeen, liuos saatetaan kalvo- tai vastaavasti kuitumuotoon, minkä jälkeen orgaaninen liuotin poistetaan käsittelemällä sitä sopivalla ensimmäiseen liuottimeen liukenevalla orgaanisella tai vesipitoisella liuottimella.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että liuottimena käytetään dimetyylisulfoksidia.

3. Menetelmä hyaluronihappoestereistä tai niiden suoloista koostuvien kalvojen tai kuitujen muodostamiseksi, tunnettu siitä, että hyaluronihapon täydellinen tai osittainen esteri, joka on muodostettu alifaattisen tai aralifaattisen sarjan alkoholeista liuotetaan orgaaniseen liuottimeen, liuos saatetaan kalvo- tai vastaavasti kuitumuotoon minkä jälkeen orgaaninen liuotin poistetaan käsittelemällä sitä sähkövirralla tai sopivasti kuumennetulla inertti-kaasulla.

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että liuottimena käytetään heksafluori-isopropanolia.

4* 94778

5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kalvot tai kuidut valmistetaan alifaattisen sarjan estereistä, joissa alifaattisen sarjan alkoholeilla on korkeintaan 12 hiiliatomia ja ovat substitu-oimattomia tai substituoituja yhdellä tai kahdella funktionaalisella ryhmällä, joka on amino-, hydroksi-, merkapto-, aldehydi-, keto-, karboksi-, vetykarbyyli- tai divetykarbyy-liaminoryhmä, eetteri-, esteri-, tioeetteri-, asetaali-, 45 94778 ketaali-, karbalkoksi-, karbamidi- tai substituoitu karbami-diryhmä, jolloin vetykarbyyliradikaaleissa yhdellä tai kahdella alkyyliryhmällä on näissä funktionaalisesti modifioiduissa ryhmissä korkeintaan 6 hiiliatomia, ja jolloin tällaisten alifaattisen sarjan alkoholien hiiliatomiketjussa voi olla heteroatomeja, jotka ovat happea, rikkiä tai typpeä.

6. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kalvot tai kuidut valmistetaan aralifaattisen sarjan estereistä, joissa aralifaattisen sarjan alkoholeilla on korkeintaan yksi bentseenitähde ja alifaattisessa ketjussa on korkeintaan 4 hiiliatomia ja bentseenitähteessä voi substituentteinä olla 1-3 metyyli-tai hydroksiryhmää tai halogeeniatomeja, ja alifaattisessa ketjussa voi substituentteinä olla yksi tai kaksi funktionaalista ryhmää, jotka ovat vapaita aminoryhmiä, mono- tai dietyyliryhmiä tai pyrrolidiini- tai piperidiiniryhmiä.

7. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kalvojen tai kuitujen valmistukseen käytetään yhtä tai useampaa seuraavista aineista: hyaluronihapon osittainen propyyliesteri, jossa 50 % karbok-syyliryhmistä on esteröitynyt ja 50 % karboksyyliryhmistä on natriumsuolan muodossa, • c hyaluronihapon osittainen isopropyyliesteri, jossa 50 % karboksyyliryhmistä on esteröitynyt ja 50 % karboksyyliryhmistä on natriumsuolan muodossa, hyaluronihapon osittainen propyyliesteri, jossa 85 % karbok-* syyliryhmistä on esteröitynyt ja 15 % karboksyyliryhmistä on natriumsuolan muodossa, hyaluronihapon osittainen etyyliesteri, jossa 75 % karboksyyliryhmistä on esteröitynyt ja 25 % karboksyyliryhmistä on natriumsuolan muodossa, os 94778 hyaluronihapon osittainen metyyliesteri, jossa 75 % karbok-syyliryhmistä on esteröitynyt ja 25 % karboksyyliryhmistä on natriurasuolan muodossa, hyaluronihapon täydellinen metyyliesteri, hyaluronihapon täydellinen etyyliesteri, hyaluronihapon täydellinen propyyliesteri, hyaluronihapon osittainen butyyliesteri, jossa 50 % karboksyyliryhmistä on esteröitynyt ja 50 % karboksyyliryhmistä on natriumsuolan muodossa, hyaluronihapon osittainen etoksikarbonyylimetyyliesteri, jossa 75 % karboksyyliryhmistä on esteröitynyt ja 25 % karboksyyliryhmistä on natriumsuolan muodossa, hyaluronihapon täydellinen pentyy1iesteri, hyaluronihapon täydellinen isopentyyliesteri, hyaluronihapon täydellinen bentseeniesteri, hyaluronihapon täydellinen fenyylietyyliesteri, «

8. Saniteetti- ja kirurgiseen käyttöön soveltuvat, ei-tera-peuttisesti käytettävät kalvot tai kuidut, tunnetut siitä, että ne sisältävät alifaattisen tai aralifaattisen sarjan alkoholeista muodostettuja hyaluronihapon täydellisiä tai osittaisia estereitä tai näiden estereiden epäorgaanisten tai orgaanisten happojen kanssa muodostamia suoloja. « 47 94778