JPS6028401A - トリグリセリド低下活性多糖類 - Google Patents

トリグリセリド低下活性多糖類

Info

Publication number
JPS6028401A
JPS6028401A JP58135982A JP13598283A JPS6028401A JP S6028401 A JPS6028401 A JP S6028401A JP 58135982 A JP58135982 A JP 58135982A JP 13598283 A JP13598283 A JP 13598283A JP S6028401 A JPS6028401 A JP S6028401A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
polysaccharide
centrifuged
triglyceride
protein
streptococcus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP58135982A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH0365362B2 (ja
Inventor
Yasuo Kawai
康雄 河合
Kazuyoshi Yazawa
矢沢　一良
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Advance Res & Dev Co Ltd
Advance Kaihatsu Kenkyujo KK
Original Assignee
Advance Res & Dev Co Ltd
Advance Kaihatsu Kenkyujo KK
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Advance Res & Dev Co Ltd, Advance Kaihatsu Kenkyujo KK filed Critical Advance Res & Dev Co Ltd
Priority to JP58135982A priority Critical patent/JPS6028401A/ja
Priority to AU30488/84A priority patent/AU563995B2/en
Priority to CA000458891A priority patent/CA1239364A/en
Priority to DE8484304791T priority patent/DE3480217D1/de
Priority to EP84304791A priority patent/EP0132981B1/en
Priority to MX841039U priority patent/MX7693E/es
Priority to US06/632,844 priority patent/US4687764A/en
Priority to DD84265684A priority patent/DD222895A5/de
Priority to SU843770904A priority patent/SU1732815A3/ru
Priority to HU842873A priority patent/HU191697B/hu
Priority to ES534629A priority patent/ES534629A0/es
Priority to PL1984248970A priority patent/PL147734B1/pl
Publication of JPS6028401A publication Critical patent/JPS6028401A/ja
Publication of JPH0365362B2 publication Critical patent/JPH0365362B2/ja
Granted legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なトリグリセリド低下活性多糖類ＴＲ３及
び有効成分としてこの多糖類ＴＲ８を含有するトリグリ
セリド低下乃至抗動脈硬化剤に関する。今日、所謂典型
的成人病の１種である動脈硬化性疾患乃至高脂血症等の
治療・予防薬としてはクロフィブレート関連製剤を始め
として幾つかが提案されでいるが、薬理効果及び副作用
等の点でこれらはかならずしも充分満足し得るものとは
云い難くより効果的な薬剤への希求が一段と高まってい
る。
本発明者らは新規抗動脈硬化剤につぎ鋭意研究の結果、
ストレプトコツカス属に属する各種微生物菌体乃至その
培養上清から得られる新規多糖ｌＴＲ３が血中トリグリ
セリド値を極めて効果的に低下せしめ得るものであり且
つその起源が所謂腸内細菌であるこれら菌体乃至培養上
清の当該抽出成分は経口では実質的無毒性であることを
知見し、本発明に到達したものである。
以下、本発明に於いて使用され得る微生物、多糖ＭＴＲ
３の製法、理化学的性質及び薬理作用等につき詳細に分
脱する。
徽生隻 １、種類 ストレプトコツカス属に属する各種微生物が使用され得
、就中、ストレフトコ・ンカス・７エシウム、ストレフ
トコ・ンカス・フエカー１）ス、ストレプトコッカス・
ボービス、ストレプトコッカス・エビラム、ストレプト
フッカス・デユランス、ストレプトフ・ンカス・サリヴ
アリウス、ストレプトコンカス・ミテイス、ストレプト
コッカス・イクイヌス等を好適なものとして例示し得る
。
更に、本発明に於いて特に有用な具体的菌株例を微工研
受託番号（ブタペスト条約寄託）により表示すれば下記
の通りである。
第１表 菌株名　受託番号 ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃｉｕ＋ｏ　ＦＥ
ＲＭ　ＢＰ−２９６Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｑ
ｕｉｎｕｓ　ＦＥＲＭ　ＢＰ−３０２２、菌学的性質 菌学的性質の点では、本発明で使用の微生物は同−分類
菌にっと公知各文献の示すものと同一の諸性質を有する
。
すなわち、本発明微生物の菌学的性質及び培養条件等に
関しては下記諸文献が参照される。
１）　Ｂｅｒｇｅｙ’　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅ
ｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ＋８ｔ
ｈ　ｅｄ、、　４９０　５０９　（１９７４）２）　Ｉ
ｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔ、　１６１１４　
（１９６６）３）　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　Ｉｖｏｕｎ
ｏｌ、　２５（３）、　２５７−２６９　（１９８１）
４）　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｐａｔｈｏｌ、　３３５３　
５７　（１９８０）５）　Ｊ、　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ、、　１２８７１３　７２０　（１９８
２）６）　八ｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、２
β　（６）　１１３１−１１３９　（１９７２）ここで
、前出各種菌株につきその主な菌学的性状を要約して表
示すれば次の通りである。
以下余白 ３、培養方法 これらの微生物の培養は上記の通り常法によるものであ
るが、例えばロゴサ（Ｒｏｇｏｓａ）液体培地（肚）に
て好気的に静置培養し、得られた培養液を遠心分離して
その菌体が採集される。
（註） ロゴサ液体培地の組成 蒸留水１ｐ中に トリプチケース　１０８ 酵母エキス　５ｇ トリプトース　３ｇ Ｋ２ＨＰＯ４３ｇ Ｋ　Ｈ２Ｐ　Ｏ＋　３　ｇ クエン酸三アンモニウム　２ｇ ツイーン８０　１ｇ グルコース　２０ｇ システィン塩酸塩　０．２ｇ 本塩類溶液　Ｓｈ＋１ （ｐＨ７＋　１２１℃　１５５分間カミ滅菌）＊塩類溶
液蒸留水１００ｍハこ Ｍｇ５Ｏ＜’　７８２０　１１．５８ ＦｅＳＯ，・７Ｈ２００，６８ｇ Ｍｎ５Ｏ，・２８２０　２．４ｇ 多糖類ＴＲ３の製法 本発明多糖類ＴＲ３の典型的製法の１例につきその概要
を各工程ごとに示せば次の通りである。
１、菌体採集工程 前記各微生物等の菌株を前述のロゴサ渡体培地に接種し
、３７°Ｃにて５〜１０時間好気的に静置培養して所定
生菌数濃度の培養液をつくり、得られた培養液を１２＋
０００ｒｐｍの連続遠心分離に（＝ｊし菌体を集め、生
理食塩水で２〜３回洗浄して採集菌体とする。
２、菌体破壊処理工程 ａ）前記採集菌体を生理食塩水（０，８５％　ＮａＣｌ
水溶液）に懸濁して得られる菌液を１１５°Ｃで１０分
間加熱（オートクレーブ）し、破壊菌体懸濁液とする。
ｂ）前項ａ）に示す菌液を超音波破壊処理（１５ＫＣ，
６０分）し、破壊菌体懸濁液とする。
３、脱脂処理工程 前記破壊菌体懸濁液をクロロホルム・メタ７−ル（２：
ＩＶ／Ｖ）混合溶媒により充分に脱脂する。次いで遠心
分離処理（３，０００ｒｐ＋＋＋　：　１０分ルでクロ
ロホルム層を捨て他を取り、これを以下の工程に付する
。
４、蛋白分解酵素処理工程 前記採取物を常法によりプロナーゼ、トリプシン、ペプ
シン等の蛋白分解酵素処理する。
ここにおいて各種蛋白分解酵素中プロナーゼが特に有用
であり、その処理条件等は次の文献に準する； Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　Ｖａｔ
、■、＋７２６　（１９６６）。
５、精製処理工程 前記酵素処理後の遠心分離上清液をトリクロロ酢酸、硫
酸アンモニウム等の蛋白沈澱剤等を添加して蛋白質画分
を沈澱除去し、その上清を分取する。次いでこの上清両
分に混入するＤＮＡ、ＲＮＡ等の核酸成分及び蛋白質成
分をそれらの分解酵素により分解処理し透析を繰り返し
て除去する。
このようにして精製の進んだ試料は、更にゲルろ過法、
カラムクロマトグラフ法等により精製が繰り返されて最
終的に単離された多糖類ＴＲ３精製標品を与える。
尚、増殖菌体等からの多糖類ＴＲ３の製造は、より一般
的にはその理化学的性質（後記）を参照して沈澱−再溶
解抽出、溶剤抽出、透析、カラムクロマトグラム、電気
泳動、ゲルろ過、或いはこれらの手段の組合わせなど当
該分野で汎用の多くの分別精製方法により達成され得、
従って本発明は特定の採取精製方法に何等限定されるも
のではない。
すなわち、当該薬理活性は糖両分に認められるのである
から、本発明はストレプトコツカス属微生物より糖成分
を採取することより成るトリグリセリド低下剤の製法に
も係わるものである。
そのより詳細は後記実施例か参照される。尚、培養上清
の活性は菌体の夫の約１１５程度である。
多糖類ＴＲ８の理化学的性質 本発明多糖ＭＴＲ３の理化学的乃至生理学的諸性質を要
約して示せば次の通りである。
１、存在状態及び溶解特性 脱塩後、凍結乾燥して得られる粉末標品は、非潮解性白
色粉末であり、１００　Ｉｎｇ／　Ｉｌｌ　＋程度まで
は室温で水に易溶、エタノール、メタ７−ル及びアセト
ンには難溶、エーテル及びクロロホルムには不溶。
２、分子量 ０．３Ｍ　ＮａＣ１付加２５０１Ｍ）リス塩酸緩衝液（
ｐＨ７，５）で平衡化させた東洋漕達社製Ｔｏｙｏｐｅ
ａｒｌ　ＨＷ　−５５Ｆカラム（２，２Ｘ８２ｃ＋ｎ）
を用い且つ各種分子量のデキストランを指標としたゲル
ろ過法による分子量は１４，０００±３，０００であ３
、比旋光度 １．８Ｗ／Ｖ％水溶液の２９℃に於ける比旋光度（日本
分光］二業社製０ＩＰ−４型デンタル旋光計）、［α１
背＝＋１９ｆＪ、１（右旋性）。
４、糖構成 ａ）試料４ｍｇを０．２Ｍ　ＴＥＡ（）リフロロ酢酸）
と混合し、１００°Ｃ１７時間加水分解処理し、更にＴ
ＭＳ化処理（０、２１ｏ１！ヘキサメチルジシラザン試
薬（２０％Ｖ／Ｖピリジン溶液）と０．０２ｍＮ）リメ
チルクロロシラン添加、１５分振とう、５労組注入）し
、カラム温度１７９°Ｃでグルコース、ラムノース等に
つトガスクロマトグラフ分析し、更に、カルバゾール硫
酸法（Ｂ　１ｔｔｅｒ　−Ｍｕｉｒの改良法：　ＢｉＬ
ｔｅｒ＋　Ｔ、　＆　Ｍｕｉｒ。
Ｈ，Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｌ＋ｅ＋ｎ、±　３３０（１９
６２））によりウロン酸等を定量した結果、グルコース
７０．３％、ラムノース１３．７％及びウロン酸１６．
０％。
５、酸塩基特性 試料０．１％及び０．５％水溶液のｌ）　Ｈは共に６．
７１であり、中性糖。
６、赤外線吸収スペクトル 日本分光工業社製ＪＡＳＣＯＡ−３０２型赤外分光光度
計によるＫＢｒタブレット赤外線吸収スペクトルは第１
図に示す通りであり、図中、横軸は波数（ｅｍ−’）縦
軸は透過率（％）を示す。
７、元素分析 パーキン・エルマ社製２４０Ｂ型元素分析計による元素
分析値は、Ｃ３７，２％、８６．４％及び０５６．４％
であり、これを示性式で示せばｃ、１ＨＧ４０３５゜８
、融　点。
柳本製作所社製Ｙａｎａｃｏ　ＭＰ−３型微量融点測定
装置による融点は、２３５〜２４１°Ｃ０ ９、生理学的性質 咄乳動物に対し経口投与によりその血中トリグリセリド
値低下作用を有する。
この活性は少なくとも−８０〜１１５°Ｃ或いはｐＨ４
〜１１のはん回内で安定である。
多糖ＭＴＲ８の薬理作用 １、薬理効果 後記実施例に示す通り本発明多糖類ＴＲ３より成る抗動
脈硬化剤は、血中トリグリセリド値を極めて効果的に低
下せしめるものであり、したがって、この指標と密接な
関連を有する動脈硬化症を始めとし、高脂血症、高リポ
蛋白血症、黄色腫症、胆石症、高血圧症、糖尿病等の疾
患に対しその治療乃至予防薬として有用なものと云い得
る。
本発明剤は又、経口投与、腹腔内投与、静注等の手段で
適用され得、その用量は通常約１μｇ〜約０．Ｓｇ／ｋ
ｇ体重（１回）、より好ましくは経口投与で約０．０１
．ｍｇ〜約１００＋ｎＢ／ｋｇ体重（１回）程度であり
、その剤型としては生理食塩水等への溶解液剤、注射液
剤、凍結乾燥等による粉末剤、或いは座剤、腸溶剤、舌
下錠、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等々、通常の剤型を適
当なキャリヤ、増量剤、希釈剤等と共に適宜選択使用し
得る。
２、急性毒性 後記実施例に示す通り、本発明多糖類ＴＲ３のＬ　Ｄ　
ｓ　ｏ値は１　、２００　ｍｇ／ｋｇ体重・マウス（腹
腔内投与）以上であり、経Ｌ１投与の場合は実質的に無
毒性である。
実施例Ｉ （多糖ＭＴＲ３の製造及び精製） ストレプトフッカス０フエシウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ　ｆａｅｃｉｕ＋ｏ）ＦＥＲＭ　ＢＰ−２９６
菌株をロゴサ液体培地２１に生菌濃度１×１０６個／　
＋ｎρ接種し、３７°Ｃにて１０時間、好気的に静置培
養して生菌数１０９個／【ｎｌの培養液を調製し、これ
を１２．０００ｒｌｌｌｆｌの連続遠心分離に付して菌
体を採集しく菌体乾燥重量２．０ｇ）、生理食塩水（０
，８５％ＮａＣｌ水溶液）で充分洗浄した後、生理食塩
水に懸濁して菌液１００ｍ１（２Ｘ　１０１０７ｍ１）
を得た。
次にこの菌液を１１５℃、１０分間オートクレーブ処理
し、更にこれをクロロホルム・メタノール（２：　ＩＶ
／Ｖ）混合溶媒２００Ｉｎ１！／回で３回脱脂処理した
。
脱脂処理後の菌液を３＋０００ｒｐｍ、１０分間遠心分
離しその下層のクロロホルム層を捨て、残りを以下の精
製単離の出発材料とした。
次いで前記材料に０　、　ＯＯ１５Ｍ　ＣａＣ＋２付加
リン酸緩衝液（１）Ｈ７，８）１００ｍ１を加え、これ
をプロナーゼ（シグマ社製プロテアーゼ・タイプＸＩＶ
）２０１０ｇにより４７℃、２４時間酵素処理し、その
後走にプロナーゼ１０＋ｎｇを添加して４７°Ｃ，２４
時間酵素処理した。尚、プロナーゼによる処理条件等は
次の文献に準拠した；Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙ
ｍｏｌｏｇｙ　Ｖｏｌ、　■、Ｐ２６（１９６６）。
得られた被処理物を３＋０００ｒｐｍ、１０分間遠心分
離処理に付し上清と沈澱に分別しその上清を取り試料液
とした。
次に試料液に１００％ＴＣＡ（）リクロロ酢酸；Ｗ／Ｖ
）１／９容加え４℃、３時間攪袢腰３＋０００ｒｐｍ、
１０分間遠心分離処理し上清と沈澱に分別した。沈澱は
更に１０％ＴＣＡ同量により４°Ｃ１３時間攪拌、次い
で同様に遠心分離によりその上清を再採取後、先の上清
と合わせて↓−チルにてＴＣＡ除去、洗浄処理（３回）
、蒸留水５０Ｊで希釈してｌＮＮａＯＨ水溶液にて中和
し、透析して完全にＴＣＡを除去して最終的に上清画分
（乾燥重量２５８ＩＩＩｇ）を得た。
この上滑両分を前記と同様にプロナーゼ処理し、更に透
析処理しその透析内液（分子量＞３，５００）として精
製画分Ｉ　（乾燥重量１７６ｍｇ）を得た。
次に、この精製画分Ｉを０．０５Ｍ）ｌｊス・塩酸緩衝
液で平衡化した５ｅｐｈａｃｉｅｘ　Ｇ　１００カラム
（ファルマシア社製）により溶出速度１ｍρ／分でゲル
ろ過し、１２４ｍ１以下の７ラクシヨンを分取し、精製
画分■（乾燥重量９３．６ｍｇ）とした。第２図は上記
ゲルろ過のカラムクロマトグラフ図であり、図中、横軸
は溶出液量（＋Ｉｌβ）、縦軸は溶出物濃度（μｇ／社
）を示す。
第３図は０．３ＭＮａＣ１付加２．５ｍＭ）リス・塩酸
緩衝液で平衡化させたＴＯｙｏｐｅａｒｌ　ＨＷ　５５
　Ｆカラム（前出）により溶出速度１ｍＮ／分でこの精
製画分■をゲルろ過した時のカラムクロマトグラフ図で
あり、図中、符号１〜３は各々糖、蛋白質、核酸成分を
示す。
このゲルろ過に於いて、同図溶出液量８０〜１００＋Ｊ
の範囲のものを再度分取することにより、最終的に単離
、精製された本発明多糖ｌＴＲ５（乾燥重量８７．９ｍ
Ｂ）を得た。
第４図はＴｏｙｏｐｅａｒｌ　ＨＷ　５５　Ｆカラムを
用いた上記と同条件下での多糖類ＴＲ３のカラムクロマ
トグラフ図である。
このようにして単離された多糖類ＴＲ３の理化学的性質
は前記の通りである。
ここで、以上の各工程ごとの収量（乾燥重量＋ｏｇ）、
蛋白質量（ローリ−法）、ＲＮＡ量（オルジアール法）
、ＤＮＡ量（ノフェニルアミン法）及び糖質量（フェノ
ール・硫酸法）を要約して示せば下記第３表の通りであ
る。
表中、単位は収量を除き全て重量％である。
尚、第３表中、比活性は通常ラットに於けるトリグリセ
リド低下活性につ軽死菌体（オートクレーブ処理菌体）
の夫を１としたと外の単位重量当りの相対活性を示すも
のであり、測定条件等は後記実施例Ｈに準する。
他方、前記第１表に掲示の他の菌株を使用した場合も、
収率に多少はあるが本例と全く同様に多糖ＭＴＲＳが精
製単離されることが確認された。
実施例■ （多糖類ＴＲ３の薬理効果） １、トリグリセリド低下活性（１） 多糖類ＴＲ３凍結乾燥精製標品各ＩＧＩｆ１ｇ／ｋｇ体
重相当量を生理食塩水（０，８５％ＮａＣｌ水溶液）１
ｍｊに溶解して試料を調製し、これを通常ラット（雄１
８週令、平均体重２４６Ｈ：各群１０匹）、通常及び無
菌マウス（雄１８週令、平均体重３０Ｆｉ；各群１０匹
）に経口的に連日投与後、］２及び８週間飼育し、次い
でこれらラットの工大動脈より動脈血を採集、遠心分離
して血清標品を得、トリグリセライドＴＧＷＡＫＯ（和
光純薬社製；アセチルアセトン抽出法）により血清標品
中トリグリセリド値を測定した。結果を第４表に要約し
て示す。
尚、表中、各数値は試料無投与ラット及びマウス群を対
照としたときの低下率（％）である。
又、ダイエツトすなわち飼料の組成（重量％）は下表第
５表の通りでありこれを自由摂取とした（以下、同様）
。
第４表 動　物　種　低下率（％） 通常ラット（１２週問）　４０．５ 通常マウス（８週間）　４５．１ 無菌マウス（８週間）　３９．６ 第５表 カゼイン　２０ 大豆油　１゜ 小麦でんぷん　６１ ミネラル　４ ビタミン混合物　２ ろ紙粉末　３ ２、トリグリセリド低下活性（ＩＩ） 前記試料１＋ｏＮを通常う帰（雄１８週令、平均体重２
３８ｇ；各群１５匹）、通常及び無菌マウス（雄１８週
令、平均体重３１ｇ；各群１０匹）に４週間、経口的に
連日投与し、前記と同様にして血清中トリグリセリド値
を測定した。結果を第６表に示尚、表中、′”コレステ
ロール負荷゛又は“果糖負荷゛は、前記飼料に更に１％
コレステロールを添加したもの或いは小麦でんぷんを果
糖にて全量置換した飼料を使用した場合を示すものであ
り、数値は無投与群を対照としたときの低下率（％）で
ある。
第６表 動　物　種　低下率 （ネ 無菌マウス　４５．４ 通常−ウス（＊ ４１．６ （＊ 通常ラン）　４３．２ 通常５２ト（” ４２．０ ＊）コレステａ−ル負荷ダイエツト ＊＊）果糖負荷ダイエツト ３、トリグリセリド低下活性（Ｉｌｌ）多糖ｌＴＲ３精
製標品各４＋ｎｇ／生理食塩水１ｗβの試料を、コレス
テロール負荷ダイエツトにより作製した高脂血ラット（
雄１８週令、平均体重２，５０ｇ、各群５匹）に連日経
口的に２週問投与し、前記と同様にしてその血清中トリ
グリセリド値を測定した。
結果を第７表に示す。表中、対照群は試料無投与群であ
り、数値は無投与群を対照としたと器の低下率である。
第７表 投与群　４５．４ 対照群　０ ４６用量−反応関係 多糖類ＴＲ８精製標品各０．１ｍ６〜２０ｍｇを生食水
ＩＩΩｅに溶解して試料を調製し、これを通常ラット（
雄６週令、平均体重２１．６ｇ＋各群５匹）１こ４週間
、経口的に連日投与し、前記と同様にして血清中トリグ
リセリド値を測定した（対照無投与群）。
結果を第８表に示す。
第　８　表 対照　０ ０．１　＜１．０．０ １　１７．４ １．０　４３．０ ２０４８．２ ５、急性毒性 ＩＣＲ系マウス（雄６週令、平均体重３１．６±０　、
６　ｇ、各群１０匹）を使用し、多糖類ＴＲＳ精製標品
１ｍＢ＋　１０ｍＢ及び１００ｒｎＨの３段階の投与量
でその生理食塩水０．５ｍρ溶解液を腹腔内投与し、１
４日間マウスの生死を観察した。
Ｂｅｈｒｅｎｓ　Ｋ；１ｒｂｅｒ法に従って算出したＬ
Ｄ、値は１＋２００ｍ８／ｋｇ体重以上であり、経口投
与の場合は実質的に無毒性であった。
尚、対照は生理食塩水である。
６、製剤例 ■　多糖類ＴＲ３精製標品２５Ｂを精製でんぷん末２７
５＋ｎｇと均一に混合、打錠して経口投与用錠剤とした
。この錠剤は体重５０ｋＦｉの成人における死菌体用量
約１０１０個／ｋｇ体重に相当する。
■　多糖類Ｔ　ＲＳは炭酸カルシウム、ラクトース井の
賦形剤、でんぷん、アルギン酸塩等の顆粒形成剤、ステ
アリン酸、タルク等の滑沢剤等々と混合、打錠して経口
投与用錠剤態を取り得るものであるが、その１日当りの
投与量は通常、０．１ｍｇ〜１１００ＩＩＩ／ｋｇ・体
重程度である。
■　水晶９００Ｂをシロップで呈味した精製水３０ｃｃ
に分散、溶解してシロップ液剤を調製した。
【図面の簡単な説明】 添イ」第１図は本発明多糖ＭＴＲ３の赤外線吸収スペク
トル図、第２乃至４図は本発明実施例Ｈの実験説明図で
ある。 特許出願人　株式会社アドバンス開発研究所−〇 第１図 賭１ ４０００　２０００　１００（Ｊ　（、−一・１４（，
１（Ｊ第２図 鵠 、）０　１００　Ｌ１２４’、Ｊ　１５０　（ｍ１１２
００第３図 闇仙］ 第４図 −〜］ 手続補正書（方式） 昭和５８年１２月２６日 特許庁長官若杉和夫　殿 １、事件の表示 昭和５８年特許願第１３５９８２号 ２、発明の名称 トリグリセリド低下活性多糖類 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　〒１０３　東京都中央区日本橋小舟町５番７号（
置、０３−６６７−１５５１） 昭和５８年１１月８日 （発送日　昭和５８年１１月２９日） ５、補正の対象

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）　（ａ）比旋光度：［αｌ習　−＋１９０．１（
    １，８ｕ＋／ｖ％水溶液）（ｂ）ゲルろ適法による分子
    量：　１４，０００±３，０００（ｃ）ガスクロマトグ
    ラフによる糖構成：グルフース７０．３％、ラム７−ス
    １３．７％及び残部ウロン酸（、ｌ）酸塩基特性：中性
    多糖類、且つ（ｅ）生理学的活性：哺乳動物に対しその
    血中トリグリセリド低下作用を有すること、を特徴とす
    るトリグリセリド低下活性多糖＠ＴＲ３゜
  2. （２）ストレプトコツカス属に属する微生物より得られ
    ることを更に特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記
    載の前記多糖類ＴＲ８゜
  3. （３）有効成分として前記多糖類ＴＲ３を含有すること
    を特徴とするトリグリセリド低下乃至抗動脈硬化剤。
JP58135982A 1983-07-27 1983-07-27 トリグリセリド低下活性多糖類 Granted JPS6028401A (ja)

Priority Applications (12)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP58135982A JPS6028401A (ja) 1983-07-27 1983-07-27 トリグリセリド低下活性多糖類
AU30488/84A AU563995B2 (en) 1983-07-27 1984-07-11 Hypotriglyceridemically active polysaccharides
CA000458891A CA1239364A (en) 1983-07-27 1984-07-13 Hypotriglyceridemically active polysaccharides
DE8484304791T DE3480217D1 (en) 1983-07-27 1984-07-13 Hypotriglyceridemically active polysaccharides
EP84304791A EP0132981B1 (en) 1983-07-27 1984-07-13 Hypotriglyceridemically active polysaccharides
MX841039U MX7693E (es) 1983-07-27 1984-07-20 Metodo para preparar polisacaridos hipotrigliceridemicamente activos
US06/632,844 US4687764A (en) 1983-07-27 1984-07-20 Hypotriglyceridemically active polysaccharides
DD84265684A DD222895A5 (de) 1983-07-27 1984-07-26 Verfahren zur herstellung eines hypotriglyceridemisch aktiven polysaccharids
SU843770904A SU1732815A3 (ru) 1983-07-27 1984-07-26 Способ получени гипотриглицеридально-активных полисахаридов
HU842873A HU191697B (en) 1983-07-27 1984-07-26 Process for preparing a new polysaccharide decreasing triglyceride blood level and pharmaceutical compositions containing thereof
ES534629A ES534629A0 (es) 1983-07-27 1984-07-26 Procedimiento para preparar un polisacarido hipotrigliceridemicamente activo
PL1984248970A PL147734B1 (en) 1983-07-27 1984-07-27 Method of obtaining new active polysaccharides capable of lowering trigliceride level

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP58135982A JPS6028401A (ja) 1983-07-27 1983-07-27 トリグリセリド低下活性多糖類

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS6028401A true JPS6028401A (ja) 1985-02-13
JPH0365362B2 JPH0365362B2 (ja) 1991-10-11

Family

ID=15164420

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP58135982A Granted JPS6028401A (ja) 1983-07-27 1983-07-27 トリグリセリド低下活性多糖類

Country Status (12)

Country Link
US (1) US4687764A (ja)
EP (1) EP0132981B1 (ja)
JP (1) JPS6028401A (ja)
AU (1) AU563995B2 (ja)
CA (1) CA1239364A (ja)
DD (1) DD222895A5 (ja)
DE (1) DE3480217D1 (ja)
ES (1) ES534629A0 (ja)
HU (1) HU191697B (ja)
MX (1) MX7693E (ja)
PL (1) PL147734B1 (ja)
SU (1) SU1732815A3 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007099997A1 (ja) * 2006-03-01 2007-09-07 Ucc Ueshima Coffee Co., Ltd. 免疫賦活剤とその製造方法

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5927833A (ja) * 1982-08-06 1984-02-14 Advance Res & Dev Co Ltd コレステロール乃至トリグリセリド低下剤
JPS59122428A (ja) * 1982-12-28 1984-07-14 Advance Res & Dev Co Ltd コレステロ−ル低下活性蛋白質
JPS61151128A (ja) * 1984-12-24 1986-07-09 Advance Res & Dev Co Ltd コレステロ−ル低下活性ｒｎａ画分
JPS625991A (ja) * 1985-07-03 1987-01-12 Advance Res & Dev Co Ltd コレステロ−ル乃至トリグリセリド低下活性ｒｎａ画分
US4851521A (en) * 1985-07-08 1989-07-25 Fidia, S.P.A. Esters of hyaluronic acid
US5202431A (en) * 1985-07-08 1993-04-13 Fidia, S.P.A. Partial esters of hyaluronic acid
US6756361B1 (en) 1997-10-14 2004-06-29 Nabi Enterococcus antigens and vaccines
CN103012615B (zh) * 2013-01-08 2015-02-25 广东海洋大学 一种高效提取乌贼墨酸性多糖的方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS52117492A (en) * 1975-12-11 1977-10-01 Hayashibara Biochem Lab Inc Preparation of water-insoluble glucan
US4251519A (en) * 1979-07-30 1981-02-17 Anheuser-Busch, Incorporated Process for the prevention and reduction of elevated blood cholesterol and triglycerides levels
JPS5943929B2 (ja) * 1979-08-13 1984-10-25 サッポロビール株式会社 多糖体ｒｂｓ物質，その製法およびそれを有効成分とする抗腫瘍性剤
JPS601877B2 (ja) * 1981-01-14 1985-01-17 明治乳業株式会社 高分子多糖類物質ｍｐｓ−８０及びその製造法
DE3305047A1 (de) * 1982-02-19 1983-09-22 Terumo Kabushiki Kaisha trading as Terumo Corp., Tokyo Polysaccharide, ihre herstellung und diese enthaltende therapeutische zusammensetzungen
JPS5927833A (ja) * 1982-08-06 1984-02-14 Advance Res & Dev Co Ltd コレステロール乃至トリグリセリド低下剤

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007099997A1 (ja) * 2006-03-01 2007-09-07 Ucc Ueshima Coffee Co., Ltd. 免疫賦活剤とその製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
DD222895A5 (de) 1985-05-29
PL248970A1 (en) 1985-04-09
SU1732815A3 (ru) 1992-05-07
MX7693E (es) 1990-08-24
ES8505722A1 (es) 1985-06-01
JPH0365362B2 (ja) 1991-10-11
AU563995B2 (en) 1987-07-30
EP0132981A3 (en) 1986-01-29
EP0132981A2 (en) 1985-02-13
DE3480217D1 (en) 1989-11-23
AU3048884A (en) 1985-01-31
CA1239364A (en) 1988-07-19
HU191697B (en) 1987-03-30
EP0132981B1 (en) 1989-10-18
PL147734B1 (en) 1989-07-31
ES534629A0 (es) 1985-06-01
US4687764A (en) 1987-08-18
HUT34773A (en) 1985-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0101209B1 (en) Hypocholesterolemically and/or hypotriglyceridemically active products
JPS608117B2 (ja) 新生理活性物質エステラスチンおよびその製造法
GB2137649A (en) A lipopolysaccharide and a process for its preparation
JPS5816685A (ja) 固定化酵素，その製造法および製剤
JPS6028401A (ja) トリグリセリド低下活性多糖類
SU1423002A3 (ru) Способ получени белка,понижающего содержание холестерина в крови млекопитающих животных
IE47885B1 (en) Microbial fractions
JPS58126797A (ja) ジサツカライドトリペプチド及びジサツカライドテトラペプチドの製法
US3875007A (en) Lipid metabolism improving and anti-atheromatic agent
JPS59118712A (ja) 抗腫瘍剤及びその製造法
JP4854841B2 (ja) 肝障害低減剤
KR900008247B1 (ko) 새로운 생리활성물질 아르파메닌(Arphamenine)의 제조방법
US5000953A (en) Biologically active substance
EP0196858B1 (en) Liver function-improving agent and blood pressure-lowering agent
NO853461L (no) Nye alfa-glukosidaseinhibitor, fremgangsmaate til dens fremstilling, dens anvendelse og farmasoeytiske preparater.
CA1276897C (en) Hypocholesterolemically active rna fractions
US3959467A (en) Lipid metabolism improving and anti-atheromatic agent
JPS5980610A (ja) コレステロ−ル低下活性画分の製造方法及び当該活性画分含有抗動脈硬化剤
PL91664B1 (ja)
JPS625991A (ja) コレステロ−ル乃至トリグリセリド低下活性ｒｎａ画分
JPH07501328A (ja) 殺菌性生成物、これを含む医薬組成物および食品添加物
JPS6339591A (ja) 新規生理活性物質ＮＫ−Ａ−１７−ｅ−２３３およびその製造法
JPS59109182A (ja) コレステロ−ル低下活性画分の製造方法及び当該活性画分含有抗動脈硬化剤
JPH03240496A (ja) 新規生理活性物質ｋｄｃ１６５
JPS59162890A (ja) 生理活性物質ムタステインの製造法