JPS59122428A - コレステロ−ル低下活性蛋白質 - Google Patents

コレステロ−ル低下活性蛋白質

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JPS59122428A
JPS59122428A JP57227395A JP22739582A JPS59122428A JP S59122428 A JPS59122428 A JP S59122428A JP 57227395 A JP57227395 A JP 57227395A JP 22739582 A JP22739582 A JP 22739582A JP S59122428 A JPS59122428 A JP S59122428A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なコレステロール低下活性蛋白質ＣＲＰ及
び有効成分としてこの蛋白質を含有するコレステロール
低下乃至抗動脈硬化剤に関する。今日、所謂典型的成人
病の１種である動脈硬化性疾患乃至高脂血症等の治療・
予防薬としてはクロフィブレート関連製剤を始めとして
幾つかが提案されているが、薬理効果及び副作用等の点
でこれらは必らずしも充分満足し得るものとは云い難く
より効果的な薬剤への希求が一段と高１っている。
本発明者らは新規抗動脈硬化剤につき鋭意研究の結果、
ストレプトコツカス属に属する各種微生物菌体乃至その
培養上清から得られる新規蛋白質が血中コレステロール
値乞極めて効果的に低下せしめ得るものであり且つその
起源が所謂腸内細菌であるこ１ら菌体乃至培養上清の当
該抽出成分は経口では実質的無毒性であることを知見し
、本発明に到達したものである。
以下、本発明に於いて使用され得る微生物、蛋白質ｅＲ
Ｐの製法、理化学的性質及び薬理作用等につき詳細に外
脱する。
微生物 １、種類 ストレプトコツカス属に属する各種微生物カ使用され得
、就中、ストレプトコッカス書フェシウム、ストレプト
コッカス・フエカーリス、ストレプトコッカス９ボービ
ス、ストレプトコッカス・エビウム、ストレフトコツカ
ス・デユランス、ストレブトコッ力スーサリヴアリウス
、ストレプトコッカス・ミティス、ストレプトコッカス
・イクィヌス等を好適なものとして例示し得る。
更に、本発明に於いて特に有用な具体的菌株例を微工研
受託番号と共に表示すれば下記の通りである。
第１表 菌　株　名　　　　　　　　　　受託番号５ｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃｉｕｒｎ　　ＡＤＶ１００９
　　ＦＥＲＭ　Ｐ−６６２４ｚ　　ｚ　　ｆａｅｃａｌ
ｉｓ　　ＡＤＶ９００１　　　ｚ　　ｚ　−６６２５ｔ
　　　　ｚ　　　ａｖｉｕｍ　　　　ＡＤ２００３　　
　　　＃　　　　＃−６６２６Ｉ　　ｔ　　５ａｌｉｖ
ａｒｉｕｓ　ＡＤＶｌｏｏＯＩ　　ｚ　　ｚ−６６２７
ｚ　　ｔ　　ｄｕｒａｎｓ　　ＡＤｖ３ｏ０１　　　＃
　　ｔ−６６２８１＃　　　ｍ１ｔｉｓ　　　　ＡＤＶ
７００１　　　　ｚ　　　　ｚ−６６２９ｚ　　　　ｔ
　　　ｅｑｕｉｎｕｓ　　　ＡＤＶ８００］　　　　　
＃　　　　＃−６６３０２、菌学的性質 菌学的性質の点では、本発明で使用の微生物は同−分類
菌につき公知各文献の示すものと同一の諸性質を有する
。
すなわち、本発明微生物の菌学的性質及び培養条件等に
関しては下記諸文献が参照される。
１　）　Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅ
ｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ。
８　　ｔｈ　ｅｄ、、　４９０−５０９　（１９７４）
２）　Ｉｎｔ、　Ｊ、５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔ、　１６　
１１４　（１９６６）３）　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ、　２５（３１，２５７−２６９（１９８
１）４）　Ｊ、Ｃｌ１ｎ、　Ｐａｔｈｏｌ、　３３５３
−５７　（１９８０）５）　Ｊ、Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍ４
ｃｒｏｂｉｏ１．、１２８７］　３−７２０　（１９８
２）６）　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　
２３（６１１１３１−１１３９（１９７２）ここで、前
出各種菌株につきその主な菌学的性状を要約して表示す
れば次の通りである。
第２表 （１１２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロリ
ド）３、培養方法 これらの微生物の培養は上記の通り常法によるものであ
るが、例えげロゴサ（Ｒｏｇｏｓａ　）液体培地（註）
にて好気的に静置培養し、得られた培養液を遠心分離し
てその菌体が採集される。
（註） 蒸留水Ｉｌ中に トリブチケース　　　　　　１０ｆ 酵母エキス　　　　　　　　５２ トリプトース　　　　　　　　３２ ＫｚＨＰＯａ　　　　　　　　　　　　３　ｆＫＨ２Ｐ
０４　　　　　　　　　　　３　ｆｔクエン酸三アンモ
ニウム　　　　２ｆ ツイーン８０　　　　　　　　１１ グルコース　　　　　　　２０１ システィン塩酸塩　　　　　０．２１ ※塩類溶液　　　　　　　　　５　ｙｎｌ（ＰＨ７，１
２１℃　１５分間加熱滅菌）※塩類溶液蒸留水１００ｉ
ａ／に 御所白質ＣＲＰの製法 本発明蛋白質ＣＲＰの典型的製法の１例につきその概要
を各工程ごとに示せば次の通りである。
１、菌体採集工程 前記各微生物等の菌株を前述のロゴサ液体培地に接種し
、３７℃にて５〜１０時間好気的に静置培養して所足生
菌数濃度の培養液をつくり、得られた培養液を１２．０
０　Ｏｒｐｍの連続遠心分離に付し菌体を集め、生理食
塩水で２〜３回洗浄して採集菌体とする。
２、菌体破壊処理工程 ａ）前記採集菌体を生理食塩水　（０，８５％ＮａＣ１
水溶液）に懸濁して得られる菌液を１１５℃で１０分間
加熱（オートクレーブ）し、破壊菌体懸濁液とする。
ｂ）　前項ａ）に示す菌液を超音波破壊処理（１５ＫＣ
，６０分）し、破壊菌体懸濁液とする。
３、脱脂処理工程 前記破壊菌体懸濁液をクロロホルム・メタノール（２：
ＩＶ／Ｖ）混合溶媒により充分に脱脂する。次いで遠心
分離処理（３，０００ｒｐｍ　：　１０分）してクロロ
ホルム層を捨て他を取り、これを以下の工程に付する。
４、蛋白分解酵素処理工程 前記採取物を常法によりプロナーゼ、トリプシン、ペプ
シン等の蛋白分解酵素処理する。
ここにおいて各種蛋白分解酵素中プロナーセが特に有用
であり、その処理条件等は次の文献に準する； Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　Ｖｏｌ
　、■、　ｐ２６　（１９６６）。
５、精製処理工程 前記酵素処理後の遠心分離上溝液をトリクロロ酢酸、硫
酸アンモニウム等の蛋白沈澱剤等を添加して蛋白質画分
を沈澱、分取する。
次いでこの画分に混入するＤＮＡ、ＲＮＡ等の核酸成分
をそれらの分解酵素により分解処理し透析を繰り返して
除去する。
このようにして精製の進んだ試料は、更にゲルろ過性、
硫安沈澱法等により精製が繰り返されて最終的に単離さ
れた蛋白質ＣＲＰ精製標品な与える。
尚、増殖菌体等からの蛋白質ＣＲＰの製造クロマトグラ
ム、電気泳動、ゲルろ過、或いはこれらの手段の組合せ
など当該分野で汎用の多くの分別精製方法により達成さ
れ得、従って本発明は特定の採取精製方法に同等限定さ
れるものではない。
丁なわち、当該薬理活性は蛋白質画分に認められるので
あるから、本発明はストレプトコツカス属微生物より蛋
白質成分を採取することより成るコレステロール低下剤
の製法にも係わるものである。
そのより詳細は後記実施例が８照される。尚、培養上清
の活性は菌体の夫の約１１５程度である。
蛋白質ＣＲＰの理化学的性質 本発明蛋白質ＣＲＰの理化学的乃至生理学的諸性質を要
約して示せば次の通りである。
１、　存在状態及び溶解特性 脱塩後、凍結乾燥して得られる粉末標品は、非潮解性白
色粉末であり、１００Ｗ／−程度までは室温で水に易溶
、アセトン等の有機溶媒に易溶。
冷時（４℃）、蛋白質ＣＲＰの水溶液に硫安、トリクロ
ロ酢酸の添加により各々白濁、沈澱を生ずる。
２、分子量 ０、３　Ｍ　ＮａＣ１付加２５　ｍＭ　）リス塩酸緩衝
液（ｐＨ７，５）　　で平衡化させた東洋漕達社製Ｔｏ
ｙｏｐｅａｒｌ　ＨＷ−５５カラム（２，７Ｘ４５５１
）を用いたゲルろ適法による分子量は３０，０００±７
，０００である。
３、等電点 ＬＫＢ社製Ａｍｐｈｏｌｉｎｅ■（ｐＨ３，５−１０）
終濃度２％を含む５チポリアクリルアミドゲル（５７０
■）、電極液０．０２　Ｍ　Ｈａ　ＰＯ４（＋）、ＩＭ
ＮａＣｌ（−３，４℃、２００Ｖ定電圧下通電３時間、
試料添加量１００μｆ、クーマシーブリリアントブルー
による検出の条件下でのゲルディスク等電点分離法によ
る等電点ｐＨは参照蛋白質ラットヘモグロビン及び同マ
ッコウクジラミオグロビンの間に位置し、７．９　±０
．２゜４、アミノ酸組成 試料１■を１１１１７６ＮＨＣ１に懸濁した後、アンプ
ルに注入し、ドライアイス・メタノール寒剤にて凍結し
真空ポンプ減圧下、　Ｎ２　ガス置換する。この減圧置
換操作を３回繰り返した後、減圧状態で封管する。次に
、１１０℃ドライブロックバスにて２４時間加水分解処
理し、ロータリエバポレータにより完全に塩酸を除去し
、１１５０　ＮＨＣｌ　２００μｌに懸濁し、その５０
μ）をアミノ酸分析（日立製作所社製８３５型日立高速
アミノ酸分 析計）操作に付した。
結果を下記第３表に示す。
第３表 グリシン　　　　　　　２５．２３ アラニン　　　　　　　１０．９８ グルタミンＦＩ！１０．３４ アスパラギン酸　　　　　８．２０ リジン　　　　　　　　　６．３９ ０イシン　　　　　　　　５．５８ バリン　　　　　　　　５．４１ イソロイシン　　　　　　５．１８ スレオニン　　　　　　　４．２３ チロシン　　　　　　　　　４．１９ セリン　　　　　　　　３．４６ プロリン　　　　　　　　　２．６２ アルギニン　　　　　　　２．６０ フエニルアラニン　　　　２．５１ メチオニン　　　　　　　１．５６ ヒスチジン　　　　　　　１．３０ システイン　　　　　　　　０．１６ ５、　ディスク電気泳動パターン ポリアクリルアミドゲル（ポリアクリルアミド濃度７チ
、トリス・グリシン緩衝液（ｐＨ８，３））、試料２５
μ２、通電４ｍＡ、２．５時間／ゲル１本、ブロモフェ
ノールブルーによる検出の条件下でのディスク電気泳動
に於いて。
距離（スペーサ・ゲル先端を基準として）４．２±０．
２１の位置に先鋭な単一のバンドを与える。
第１図はそのゲル状態図及びデンシトメータによる泳動
図である。
６、生理学的性質 哺乳動物に対し経口投与によりその血中コレステロール
値低下作用を有する。
この活性は少なくとも−８０〜１１５℃或いはｐＨ４，
１〜１０．９のはん曲内で安定である。
蛋白質ＣＲＰの薬理作用 １、　薬理効果 後記実施例に示す通り本発明蛋白質ＣＲＰより成る抗動
脈硬化剤は、血中コレステロール値な極めて効果的に低
下せしめるものであり、したがって、この指標と密接な
関連を有する動脈硬化症を始めとし７、高脂血症、高リ
ボ蛋白血症、黄色腫症、胆石症、高血圧症。
糖尿病等の疾患に対しその治療乃至予防薬として有用な
ものと云い得る。
本発明剤は又、経口投与、腹腔内投与、静注等の手段で
適用され得、その用量は通常約１μＶ〜約１　ｆ／Ｋｇ
体重（１回）、より好１しくけ経口投与で約０．１η〜
約１００■／Ｋｆ体重（１回）程度であり、その剤型と
しては生理食塩水等への溶解液剤、注射液剤、凍結乾燥
等による粉末剤、或いは座剤、腸溶剤、舌下錠、顆粒剤
１錠剤、カプセル剤等々、通常の剤型を適当なキャリヤ
、増量剤、希釈剤等と共に適宜選択使用し得る。
２、急性毒性 後記実施例に示す通り、本発明蛋白質ＣＲＰのＬＤｓｏ
値は８０２ｗｑ／に４体重＋１？ウス（腹腔内投与）以
上であり、経口投与の場合は実質的に無毒性である。
、町ｑｆｌｌＪＩ− （蛋白質ＣＲＰの製造及び精製） ６６２４）菌株をロゴサ液体培地２ノに生菌濃度Ｉ　Ｘ
　１０’個／ｄ接種し、３７℃にて１０時間。
好気的に静置培養して生菌数１０９個／１の培養液を調
製し、これを１２００　Ｏｒｐｍの連続遠心分離に付し
て菌体を採集しく菌体乾燥重量２．０２）、生理食塩水
（０，８５１ＮａＣ１水溶液）で充分洗浄した後、生理
食塩水に懸濁して菌液１００　ＩＩ／　（２Ｘ　１０”
／１４）を得た。
次にこの菌液な１１５℃、１０分間オートクレーブ処理
し、更にこれをクロロホルム・メタノール（２：ＩＶ／
Ｖ）混合溶媒２００１１１７７回で３回脱脂処理した。
脱脂処理後の菌液な３００　Ｏｒｐｍ、１０分間遠心分
離しその下層のクロロホルム層を捨て、残りを以下の精
製単離の出発材料とした。
次いで前記材料に０．００１５　ＭＣａＣ１ｇ付加リン
酸緩衝液（ｐＨ７，８）　１００１４を加え、これをプ
ロナーゼ（シグマ社製プロテアーゼ・タイプＸｆＶ）２
０′ｑにより４７℃、２４時間酵素処理し、その後更に
プロナーゼ１ＯＮＩを添加して４７℃。
２４時間酵素処理した。尚、プロナーゼによる処理条件
等は次の文献に準拠した； Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　Ｖｏｌ
、■、Ｐ２６　（１９６６）。
得られた被処理物を３．００　Ｏｒｐｍ、１０分間遠心
分離処理に付し上清と沈澱に分別しその上清を取り試料
液とした。
次に試料液に１００’ＪＴＣＡ（トリクロロ酢酸；Ｗ／
Ｖ）Ｔ容加え４℃、３時間攪拌し、３．０００ｒｐｍ、
１０分間遠心分離処理し上清と沈澱に分別した。沈澱は
更に１０　％ＴＣＡ同量により４℃、３時間攪拌、次い
で同様に遠心分離により再採取後、エーテルにてＴＣＡ
除去、洗浄処理しく３回）、蒸留水５９　ｍｌに溶解し
てｌＮＮａＯＨ水溶液にて中和し、透析して完全にＴＣ
Ａを除去、遠心分離して最終的に沈澱画分（乾燥重量３
４５■）を得た。
この沈澱画分（３４５ｗｇ）に０．１　Ｍ　トリス酢酸
緩衝液（ｐＨ８，０）５ゴ、０．１Ｍ酢酸マグネシウム
１ｄ及びＤＮＡ分解酵素（シグマ社製Ｄｅｏｘｙ−ｒｉ
ｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ　Ｉ　）水溶液（２ｉｙ／ｓｌ）
　ｏ、ｏ　６−を加え、３７℃、１時間振盪反応させ１
分子量３．５００以下透過性透析膜（半井化学栗品社製
セロチューブ）で３昼夜、蒸留水で透析し、透析内液減
圧濃縮試料を調製した。次いで、この試料を４４０　Ｕ
ｎｉｔｓのＲＮＡ分解酵素（シグマ社製Ｒｉｂｏｎｕｃ
ｌｅａｓｅ　Ｔ＊　）の添加された０、０５Ｍ酢酸緩衝
液（ｐＨ４，６）　５　ｄｖｃ分散、３７℃、３時間反
応させ、透析処理しその透析内液（分子量〉２０．００
０　）として精製画分Ｉ　（乾燥重量２８５Ｗ）を得た
。
精製画分Ｉは上記と同一の条件下で再度ＲＮＡ分解酵素
処理及び透析処理されて精製画分■（乾燥重量２７４Ｗ
）を与える。この両分Ｙ　０．３　Ｍ　ＮａＣ１付加２
５　ｍＭ　Ｔｒｉｓ＠ＨＣＩ緩衝液で平衡化させたＴｏ
ｙｏｐｅａｒｌ　ＨＷ　５５カラム（前出）により溶出
速度１１１ｔ／分でゲルろ過したときのカラムクロマト
グラフ図を第２図に示す。
図中、曲ＭＡは２８０　ｎｍで比色足置した蛋白質、四
Ｂは２６　Ｏｎｍ比色足量核酸％同Ｃはフェノール・硫
酸法による糖を示すものである。
次に第２図破線Ｄ（溶出容量６７ゴ）以上の部分を分取
し、硫安分画（５５チ飽和上清ン処理しその上清として
８８画分ｍ（乾燥重量２０５．５り）を得た。
第３図は前記と同一の条件下での精ＭＦｈ分ｍのカラム
クロマトグラフ図である。
この両分は未だわずかに糖を會むのでこれを前記と同様
に１０チＴＣＡで３回除糖、透析処理して最終的に単離
、精製された本発明蛋白質ＣＲＰ　（乾燥重量１９７．
３岬）を得た。
前記と同等条件下での蛋白質ＣＲＰのカラムクロマトグ
ラフ図を第４図に示す。
このようにして単離された蛋白質ＣＲＰの理化学的性質
は前記の通りである。
ここで、以上の各工程ごとの収量（乾燥重量）。
蛋白質量（Ｌｏｗｒｙ法）、ＲＮＡ量（オルシノール法
）　、ＤＮＡ！−（ジフェニルアミン法）及び糖質量（
フェノールｌｌＷｃ酸法）を要約して示せば下記第４表
の通りである。
表中、単位は全て乾燥重量（ツ）である。
第４表 尚、第４表中、比活性は通常ラットに於けるコレステロ
ール低下活性につき死菌体の夫を１としたときの単位重
量当りの相対活性を示すものであり、測定条件等は後記
実施例■に準する。
他方、前記第１表に掲示の他の菌株を使用した場合も、
収率に多少はあるが本例と全く同様に蛋白質ＣＲＰが精
製単離されることが確認された。
一天】１列」− （蛋白質ＣＲＰの薬理効果） １、　コレステロール低下活性ｉｌｌ 蛋白質ＣＲＰ凍結乾燥精製標品各５０■／〜体重相当量
を生理食塩水（０，８５チＮ　ａ　Ｃ１水溶液）１１１
７に溶解して試料を調製し、これを通常ラット（雄１８
週令、平均体重２４６２；各群１０匹）、通常及び無菌
マウス（雄１８週令、平均体重３０ｆ；各群１０匹）に
経口的に連日投与後、１２及び８週間飼育し。
次いでこれらラットの工大動脈より動脈血を採集、遠心
分離して血清標品な得、コレスキット（商品名；関東化
学社製、Ｚｕｒｋｏｗｓｋｉ法）により血清標品中コレ
ステロール値を測定した。結果を第５表に要約して示す
。
尚、表中、対照は試料無投与ラット及びマウス群であり
、各数値は対照群を１００俤としたときの低下率肩であ
る。
又、ダイエツト−ｆなわち飼料の組成（重量％）は下記
第６表の通りでありこれを自由摂取とした（以下、同様
）。
第５表 通常ラット（１２週間）　　　　２５．２±０．７通常
マウス（８週間３　　　３３．５±１．１無菌マウス（
８週間）　　　　２１．７±０．９第６表 カゼイン　　　　　　　　２０ 大豆油　　　　　　　　１゜ 小麦でんぷん　　　　　６１ ミネラル　　　　　　　　　４ ビタミン混合物　　　　　２ ろ紙粉末　　　　　　　　３ ２、　コレステロール低下活性（Ｉｌｌ前記試料１ｄを
通常ラット（雄１８週令。
平均体重２３８ｆ；各群１５匹）、通常及び無菌マウス
（雄１８週令、平均体重３１ｆ：各群１０匹）に１２週
間、経口的に連日投与し、前記と同様にして血清中コレ
ステロール値を測定した。結果７第７表に示す。
尚、表中、“コレステロール負荷”又は“果糖負荷”は
、前記飼料に更に１チコレステロールを添加したもの或
いは小麦でんぷんを果糖にて全量置換した飼料を使用し
た場合な示すものであり、数値は無投与群を１００チと
したときの低下率（チ）である。
第７表 動物種　　　　　　低下率 無菌、ウニ（巖　　　　　３５．４±１．３通常、ウニ
（＊　　　　　　３Ｂ、９±０．７通常ラット（葺　　
　　　４９．２±１．１通常ラット（＊＊　　　　　　
４１．５±１．３１１）コレステロール負荷ダイエツト 真っ果糖負荷ダイエツト ３、　コレステロール低下活性１１１Ｄ蛋白質ＣＲＰ精
製標品各１０ツ／生理食塩水１ゴの試料を、コレステロ
ール負荷ダイエツトにより作製した高脂血ラット（雄１
８週令、平均体重２５０ｖ、各群５匹）に連日経口的に
２週間投与し、前記と同様にしてその血清中コレステロ
ール値を測定した。
結果を第８表に示す。表中、対照群は試料無投与群であ
り、数値は無投与群を対照としたときの低下率である。
第８表 コレステロール低下率（チ） 投与群　　　　　４９．９ 対照群　　　　　０ ４、用量−反応関係 蛋白質ＣＲＰ精製標品各０．１　ｊｌｌｒ〜２０′ｑを
生食水１１に溶解して試料を調製し、これを通常ラット
（雄６週令、平均体重２１６　ｆ。
各群５匹）に４週間、経口的に連日投与し、前記と同様
にして血清中コレステロール値を測定した（対照無投与
群）。
結果を第９表に示す。
第９表 対照　　　　　　　　　　　０ ０、１　　　　　　　　　　９．８±０．７１　　　　
　　　　　１４．３±１．２１０　　　　　　　　４７
、９±１．１２０　　　　　　、　　５１．１±０．９
５、急性毒性 ＩＣＲ系マウス（雄６週令、平均体重３１．４±０．６
１、各群１０匹）を使用し、蛋白質ＣＲＰ精製標品ＩＷ
、１０ｗ９及び１００■の３段階の投与量でその生理食
塩水Ｑ、５　ａｔ溶解液を腹腔内投与し、１４日間マウ
スの生死を観察した。
Ｂ　ｅｈｒｅｎｓ−Ｋｉｊｒｂｅｒ法に従って算出した
Ｌ　Ｄ　ｓ。
値はｓ　０２　ｍｉ／Ｋｙ体重以上であり、経口投与の
場合は実質的に無毒性であった。
尚、対照は生理食塩水である。
６、製剤例 ■　蛋白質ＣＲＰ精製標品５０ｑを精製でんぷん末２５
０岬と均一に混合、打錠して経口投与用錠剤とした。こ
の錠剤は体重５０匂の成人における死菌体用量約１０１
０個／Ｋｆ体重に相当する。
■　蛋白質ＣＲＰは炭酸カルシウム、ラクトース等の賦
形剤、でんぷん、アルギン酸塩等の顆粒形成剤、ステア
リン酸、タルク等の滑沢剤等々と混合、打錠して軽口投
与用錠剤形態を取り得るものであるが、その１日当りの
投与量は通常、０．１■〜１００１ｑ／Ｋｆ・体重程度
である。
■　本品９００Ｗをシロップで呈味した精製水３０　ｃ
ｃに分散、溶解してシロップ液剤を調製した。
【図面の簡単な説明】
添付第１図は本発明蛋白質ＣＲＰのポリアクリルアミド
ゲル電気泳動実験説明図、第２乃至４図は本発明実施例
■の実験説明図である。 特許出願人　　株式会社アドバンス開発研究所手続補正
書（自発） 昭和５８年７月２７日 特許庁氏官若杉和夫　殿 １、事件の表示 昭和５７年特許願第２２７３９５号 ２、発明の名称 コレステロール低下活性蛋白質 ３、補正をする者 事件との間係　　　特許出願人 （置　　０３−６６７−１５５１） ４、補正の対象 明細書の［発明の詳細な説明１の欄 ５．１ｍ正の内容 明細書第４頁第８行目から１６行目第１表を下記の通り
に訂正する。 ＃１表

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 （ＩＨａ）　　ゲルろ過性による分子量：３０，０００
    ±７．０００ （ｂ）　　等電点ニア、９±０．２ （ｃ）　　アミノ酸組成（モル比チ）ニゲリシン２５．
    ２３．　アラニ／１０．９８＊　グルタミン酸１０．３
    ４．アスパラギン酸８．２０．　　リジン６．３９．　
    　ロイシン５．５８．バリン５．４１゜イソロイシン５
    ．１８．スレオニン４．２３゜チロシン４．１９．　　
    セリン３．４６．プロリン２．６２．フルギニン２．６
    ０．　　フェニルアラニン２．５１．　メチオニン１．
    ５６．　　ヒスチジｙｌ、３０及びシスティン０．１６ （ｄ）　　電気泳動パターン：ポリアクリルアミドゲル
    電気泳動（ポリアクリルアミド濃度７チ、トリス・グリ
    シン緩衝液（ｐＨ８，３））に於いて陽極１１＋［先鋭
    な単一のバンドを与え、且つ （ｅ）　　ｌｌｉ乳動物に対しその血中コレステロール
    低下作用を有することを特徴とする、コレステロール低
    下活性蛋白質ＣＲＰ。 （２）　　ストレプトコツカス属に属する微生物より得
    られることを更に特徴とする特許請求の範囲第（１１項
    に記載の前記蛋白質ＣＲＰ。 （３）　　有効成分として前記蛋白質ＣＲＰを含有する
    ことを特徴とするコレステロール低下乃至抗動脈硬化剤
    。
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