HU228061B1 - Prevention and treatment of amyloidogenic disease - Google Patents

Prevention and treatment of amyloidogenic disease Download PDF

Info

Publication number
HU228061B1
HU228061B1 HU0100627A HUP0100627A HU228061B1 HU 228061 B1 HU228061 B1 HU 228061B1 HU 0100627 A HU0100627 A HU 0100627A HU P0100627 A HUP0100627 A HU P0100627A HU 228061 B1 HU228061 B1 HU 228061B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
treatment
antibody
patient
peptide
disease
Prior art date
Application number
HU0100627A
Other languages
English (en)
Inventor
Dale B Schenk
Original Assignee
Janssen Alzheimer Immunotherap
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26748211&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU228061(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Janssen Alzheimer Immunotherap filed Critical Janssen Alzheimer Immunotherap
Publication of HUP0100627A1 publication Critical patent/HUP0100627A1/hu
Publication of HUP0100627A3 publication Critical patent/HUP0100627A3/hu
Publication of HU228061B1 publication Critical patent/HU228061B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/739—Lipopolysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0007—Nervous system antigens; Prions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/2031—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyethylene oxide, poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
    • A61K9/2054—Cellulose; Cellulose derivatives, e.g. hydroxypropyl methylcellulose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/4841—Filling excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/4866—Organic macromolecular compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4711—Alzheimer's disease; Amyloid plaque core protein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/605—MHC molecules or ligands thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2009—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
    • A61K9/7023—Transdermal patches and similar drug-containing composite devices, e.g. cataplasms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Description

Az Abheimer kór (AD) egy súlyosbodó betegség, ami öregkori elmebajt okoz (Selkoe: TINS 16, 403-409 (1993); Hardy és mtsai: WO 92/13069; Selkoe: d, Neuropathol. Exp. Neurol. 53, 438-447 (1994); Duff és mtsai: Natúré 373, 476-477 (1995); Games és mtsai: Natúré 373, 523 (1995)]. Szélesebb értelemben a betegség két kategóriára osztható: az egyik a későn fellépő, ami öregkorban (65+ évek) lép fél, a másik a korán fellépő, ami jóval az öregkor előtt, azaz 35 és 60 év között lép fel. A betegségnek mindkét típusában a kórtan. ugyanaz, de az abnormalitások általában sokkal súlyosabbak és szélesebb körűek a viszonylag fiatalabb korban kezdődő esetekben. A betegséget két típusú lézió jellemzi, az egyik az öregkori tarfoltok, a másik a neurofí'brilláris fonadék. Az öregkori tarlóitok dezorganizált idegfonalakből állő területek, szélességük ISO am, és a középpontban az agyszövet metszeteinek mikroszkópos elemzésével extracelluláris amiloid lerakódások láthatok. A neurohhrilláris fonadékok a. tau fehérje mtracelluláris lerakodásai, amik két, egymás köré tekerede
II fonalból állnak.
A tarlóitok fő ke nevű peptid. Az AS p< nevű prekurzor fehérje onense egy' A6 vagy ü-amlloíd peptid egy amiloid prekurzor fehérje (APP)
Iső, a. 39-43-as aminosavakból álló » *
ű.
Φ ΦΦΦ φ Φχ φ * <
φ φ * φ φ
Φ Α » Λ Φ Φ * φ ♦ « X φ « Φ * φ φ ΦΦ Φ* Φ* fragmense. Az APP fehérje számos mutációját hozták kapcsolatba az Alzheímer kór jelenlétével (Goate és mtsai: Natúré 349, 704 (1991) (valm717~ről izoleucinra); C-harfier Marian és mtsai: Natúré 353, 844 (1991) fvalin717-ről glicinre); Murrell és mtsai: Science 254, 97 (1991) (valin? 17-rői fenílalaninra); Mullau és mtsai: Natúré Génét, 1? 345 (1992) (kettős-mutáció: lizin59S~me~ tiomn596-ról aszparagin595--leucin596-ra). Ezekről a mutációkról azt gondolják, hogy ezek idézik elő az Alzheímer kórt, azáltal hogy fokozzák vagy megváltoztatják az APP AB-vá való processzálődását, különösen azáltal, hogy az APP-nek az AB hosszú formájára (azaz AS1-42 és AS1-43) való nagyobb arányú átalakulását okozzák. A más génekben, azaz például a PS Í és PS2 presenílm génekben fellépő mutációról azt gondolják, hogy közvetve befolyásolják az APF proeesszálódását, ezzel az AB hosszú formájából nagyobb mennyiséget hozva létre (Hardy: TINS20, 154 (19979. Ezek a megfigyelések arra utalnak, hogy az AB, és főleg annak hosszú formája az Alzhelmer kórt előidéző tényező.
McMichael (EP 526,511) az AB homeopátiás (azaz 10-2 mg/nap, vagy annál kisebb) dózisainak beadását javasolja kialakult Alzhelmer kórban szenvedő betegeknek. Egy tipikus emberben, akinek körülbelül 5 liter plazmája van, ennek a dózisnak a felső határa várhatóan nem okoz 2 pg/ml-nél nagyobb koncentrációt. Az AB normális koncentrációja a humán plazmában tipikusan 50-200 pg/ml (Seubert és mtsai: Natúré 359,325327 (1992)(. Mivel az EP 526,511-ben javasolt dózis alig váltós* X 4
Φφ * φ φ < Χφφ φ »
X Φ X X Φ φ Φ Φ χ χ Φ Φ ν* φΧ Φ* tatja meg az endogén keringő AS szintjét, és 'mivel az EP 526,511-ben nem javasolják adjnváns használatát, ezért valószínűtlen, hogy ennek bármilyen terápiás haszna lenne.
Ezzel ellentétben a jelen találmány tárgyát többek között az Alzheimer és más amíioidogén betegségek kezelése képezi, A&nek vagy más immunogénnek egy betegnek való beadásával, olyan körülmények között, amik a betegben előnyös immunválaszt generálnak. A találmány ezzel kielégít egy hosszú ideje fennálló igényt, ami olyan terápiás kezelésekre vonatkozik, amikkel az AIzheimer kor neuropatológiáját. meg lehet előzni vagy
A jelen találmány tárgyát olyan módszerek képezik, amikkel meg lehet előzni, vagy kezelni lehet az amiloíd lerakódásokkal jellemezhető betegségeket. Az ilyen módszerekben immunválaszt indukálnak a betegben levő amiloíd lerakódás egy peptid komponense ellen. Az ilyen indukció lehet aktív, egy immunogén beadásával, vagy lehet passzív, egy ellenanyag, vagy az ellenanyag aktív íragmensének vagy származékának a beadásával. Néhány betegben az amiloíd lerakódás agregáiódölt AS peptid, és a betegség AIzheimer kór. Néhány eljárásban a beteg tünetmentes. Néhány eljárásban a beteg 50 évesnél fiatalabb. Néhány eljárásban a beteg öröklött kockázati faktorokkal rendelkezik., ami az AIzheimer kórra, való érzékenységét mutatja. Ilyen faktor például a PSÍ és PS2 presenílín gének variáns allélje, és az APF variáns formája. Más mód·> 4
X Φ * X ♦ X
szerekben a beteg nem rendelkezik az Alzheimer kór ismert
Az Alzheimer kórban szenvedő betegek kezelésére az egyik kezelési mód abból áll, hogy az AB pepiidből adunk be egy dózist a betegnek, hogy ezzel immunválaszt Indukáljunk. Néhány eljárásban az ÁS pepödet adjutánssal adjuk be. ami fokozza az AS peptid elleni immunválaszt. Néhány eljárásban az adjutáns timsó. Néhány eljárásban az adjutáns MPL. A betegnek beadott AS peptid dózisa tipikus esetben legalább 1-1Ö pg, ha adjutánssal adjuk be, és legalább 50 pg, ha adjutáns nélkül adjuk be. Néhány eljárásban a dózis legalább 100 pg.
Néhány eljárásban az AS pepiid az AS1-42. Néhány eljárásban az AS pepiidet aggregált formában adják be. Más módszerekben az AS pepiidet disszociált formában adják be. Néhány eljárásban a terápiás ágens egy hatékony dózis egy AS-t kódoló nukleinsavből, illetve annak egy aktív fragmense vagy származéka. Az AS-t vagy annak egy fragmensét kódoló nukleinsav expresszáiódik a. betegben, ezzel AS vágj? annak aktív fragmense termelődik, ami immunválaszt indukál. Néhány módszerben a nukleinsavat a bőrön keresztül, előnyösen egy tapasz alkalmazásával adják be. Néhány eljárás szerint egy terápiás ágenst úgy lehet azonosítani, hogy egy vegyület-könyvtárat vizsgálnak át, olyan vegyület keresése céljából, ami reagál az AS elleni ellenaválaszt indukáljanak.
nyagokkal, majd a vegyüíetet a betegnek k, hogy immunφ φ
Néhány eljárásban az immunválaszt anélkül hogy a disszociált AB az immun gokat, amik kötődnek az aggregálődott AB ArsaL·· & dísszociá aggregált AB ellen íránvíta: olyan ellenanya-
szerint az immunválasz olyan T-sej teket tartalmaz, amik kötőd nek az olyan AB-hez, ami az MHC I-gyel vagy az MHC II-vel képez oiexet a CDS vagy CD4 sejteken. Más eljárásokban az immunválaszt úgy indukálják, hogy egy AB elleni ellenanyagot adnak be a betegnek. Néhány eljárásban az immunválaszt úgy indukálják, hogy T~sejteket távolítanak el a betegből, majd a Tsejteket AB peptiddel hozzák érintkezésbe, olyan körülmények, között, amely körülmények között, a T-sejtek feltöltődnek, majd helyettesítik a betegben a T-sejteket.
xTt kVi s&gSű.í L CoCtkZtDli Ví CUISXXXX^ iXiLX CtlXC intradermálísan, szubkután, íntramuszkniárisan, topikálisan vagy intravénásán adják be. Néhány eljárásban a beteget a beadás utam megfigyelik, hogy megbecsüljék az immunválaszt... Ha a megfigyelés az immunválasz időbeli csökkenését mutatja, akkor a betegnek még egy vagy több dózist be lehet adni az ágensből
A találmány tárgyát képezik továbbá az AB-t és egy töltőanyagot tartalmazó .gyógyászati készítmények, amik alkalmasak orális és más beadási módokhoz. A találmány tárgyát képezik továbbá azok a gyógyászati készítmények, amik olyan ágenst tartalmaznak, ami hatékonyan indukál AB elleni immunválaszt egy
valamint tartalmaznak egy gyógyászatilag elfogadható
Néhány ilyen készítményben az ágens Αδ, vagy annak egy aktív fragmense. Néhány készítményben az adjuváns timsót tartalmaz. Néhány készítményben az adjuváns olaj-a-vízben készítményben az ÁS vagy annak aktív fragmen.se e?
), vagy más részecske, A találmány tárgyát képezik továbbá azok a készítmények, amik AS-t. vagy egy aktív fragmenst tartalmaznak olyan konjugált molekulához kapcsolva, ami elősegíti az Ab-nek egy beteg véráramába, való jutását, és/vagy elősegíti egy Ab elleni ímmunvt egy Ab elleni immunválasz kialakulását. Néhány készítményben a konjugátum koleratoxin. Néhány készítményben a konjugátum egy immunglobulin. Néhány készítményben a konjugátum attenuált díftéria. CRM 197 toxin [Gupta: Vaceíne 15, 1341-1343 (1997)),
A találmány tárgyát képezik továbbá olyan gyógyászati készítmények, amik olyan ágenst tartalmaznak, amik hatékonyan indukálnak AB elleni immunválaszt egy betegben, azzal a feltétellel, hogy a készítmény mentes a komplett Freund féle adjuvánstöl. A találmány tárgyát képezik továbbá az Ab-t vagy annak egy aktív fragmensét kódoló virális vektort tartalmazó készítmények, amik hatékonyan indukálnak Αδ elleni immunválaszt. A megfelelő vektorok közé tartozik a herpesz, adenovírus, adeno-asszociált vírus, retrovírus, sindbis, semílikí forest vírus, vakcínia vaw madár hím lő vírus.
A találmány tárgyát képezik továbbá az Alzbeimer kör megelőzésére vagy kezelésére szolgáló módszerek. Ezekben a módszerekben a betegnek hatékony mennyiségű AS pepiidet adunk be. A találmány tárgyát képezi továbbá az AS, vagy egy ellene készített ellenanyag alkalmazása olyan gyógyszer készítésében, ami alkalmas az Alzbeimer kór megelőzésére vagy kezetovábbá azok az· eljárások, amikkel egy betegben meg lehet, becsülni egy Alzheímer kezelési mód hatékonyságát. Ezekben a módszerekben az AS pepiidre specifikus ellenanyag alapmennyiségét határozzuk meg egy betegből származó szövetben, mielőtt a beteget, egy ágenssel kezelnénk, A betegből az ágenssel való kezelés után vett szövetmintában mért, az AE pepiidre specifikus ellenanyag mennyiségét az AS-pepíid specifikus ellenanyag alapmennyiségé · a kezelés után mért Αβ-peptid specifikus ellenanyag .mennyisége szignifikánsan nagyobb mint az Afi-peptid specifikus ellenanyag alapvonal! mennyisége, pozitív kezelési eredménynek
Más, egy betegben végzett Alzheímer tékonyságának becslésére alkalmazott módszerekben meghatározzák az Ah pepiidre specifikus ellenanyag alapmennyiségét egy beteg szövetében, aki egy bizonyos ágenssel való kezelés előtt áll. A betegben az ágenssel való kezelésután egy szövetmintában mért, az AB pepiidre specifikus ellenanyag, mennyiséget hason./ lítanak össze egy AS pepiidre specifikus ellenanyag alapmennyiségével. Ha nincs, vagy csökken a szignifikáns különbség a kezelés után mért AS pepiidre specifikus ellenanyag mennyisége az AS pepiidre specifikus ellenanyag alapmennyiségével összehasonlítva, akkor ez negatív kezelési eredményre utal.
Más, egy betegben végzett Alzheimer kezelési eljárások hatékonyságának becslésére alkalmazott módszerekben az AS pepiidre specifikus ellenanyag kontroll mennyiségét egy kontroll populációból származó szövetmintákban határozzák meg. Egy bizonyos ágenssel való kezelés után álló betegből származó szövetmintában levő, az Afi pepiidre specifikus ellenanyag mennyiségét az AS pepiidre specifikus ellenanyag kontroll mennyiségével hasonlítják össze. Ha az AS pepiidre specifikus ellenanyagnak a kezelés után mért mennyisége szignifikánsan nagyobb mint az AS pepiidre specifikus ellenanyagnak a kontrolt mennyisége, akkor ez pozitív kezelési eredményre utal.
Más, egy betegben végzett Alzheimer kezelési eljárások hatékonyságának becslésére alkalmazott módszerekben az AS pepiidre specifikus ellenanyag kontroll mennyiségét egy kontroll populádőből származó szövetmintákban határozzák meg. Egy bizonyos ágenssel való kezelés után áSó betegből származó szövetmintában levő, az Afi pepiidre specifikus ellenanyag mennyiségét az AS pepiidre specifikus ellenanyag kontroll mennyiségével hasonlítják össze. Ha nincs szignifikáns különbség az említett kezelés megkezdése után mért, AS pepiidre specifikus ellenanyag mennyisége és az AS pepiidre specifikus ellenanyagnak a kontroll mennyisége között, akkor ez negatív kezelési ~re
Az Alzheimer kör, vagy' az arra való hajlam más módszerei közé tartozik például egy AS peptid elleni immunválasz kimutatása a betegből származó mintában. Néhány ilyen a beteget olyan ágenssel kezeljük, amivel az .Alzheimer mi vagy kezelni, és a válasz nagykórt hatékonyan meg lehel sága meghatározza a bei gben veszett A kezelési eljárás tékonyságának becslésére alkalmazott módszerekben az AS pepiidre specifikus ellenanyag kontroll mennyiségét határozzák meg egy olyan, betegből származó szövetmintában, akit e.gy ágenssel kezeltek. Ezt az értéket hasonlítják össze egy kontroll értékkel, amit olyan betegpopulácíóből kaptak, akik megélték az Alzheimer kór enyhülését vagy éppen az attól való megszabadulást, az ágenssel való kezelés következtében. Ha a betegben mért érték .legalább egyenlő a kontroll értékkel, akkor ez pozitív kezelési
A találmány tárgyát képezik továbbá az előzőkben említett eljárások végrehajtásához szükséges diagnosztikai kittek. Az ilyen kittek tipikus esetben tartalmaznak egy reagenst, ami specifikusan kötődik az Ah elleni ellenanyaghoz, vagy ami serkenti az ÁS-vel reagáló T-seitek szaporodását.
Κ)
1. ábra: Ellenanyag titer transzgenikus egerek A&1-42V
Φ φ> X Φ φ» φ φ *·* ν φφ
2, ábra: Amijeid terhelés a híppocampus-ban. A hippocampus régió amiioid tarfoltokkal bontott területének százalékát, arait az AS-specíhkus mAf> 3D6-tal való reakcióképesség alapján lehet definiálni, az immunológiailag reagáló agyszekciók számítógépes mennyiségi képelemzése alapján határozzuk meg. Az egyes egereknél kapott értékeket mutatjuk, amiket a kezelési csoport alapján osztályozunk. Az egyes csoportok .horizontális vonala, az eloszlás középértékét jelöli,
3, ábra: Neurítiszes disztrőfia a hippocarapus-ban. A hippocampus régió diszíróíiás neuritokkal borított területének százalékát, amit a humán APF-speciíikus m.AB 8E5-feI való reakcióképesség alapján definiálunk, az immunológiailag reagáló agyszekciók számítógépes mennyiségi képelemzése alapján határozzuk meg. Az egyes egereknél az AN 1792-vel kezelt csoporttal és a PBS-sel kezelt kontroll csoporttal kapott értékeket mutatjuk, amiket a kezelési csoport alapján osztályozunk. Az egyes csoportok horizontális vonala az eloszlás középértékét jelöli.
4. ábra: Asztroeiíözis a retrospleniális kéregben. A gliális fonalas savas fehérje (GPAP)-pozitív asztrociták által a kortikális régióban elfoglalt terület százalékát az immunológiailag reagáló k számítógépes mennyiségi agy ián fc*fco * fc » fc * « \· V X fc» fc «ί rozzuk meg. Az egyes csoportok horizontális vonala az eloszlás
5. ábra: Az AB 1-42 elleni ellenanyag literek geometriai átlaga immunizálás után, nyolc AN1792 dózis után, amik 0,14, 0,4, ls2, 3,7, 11, 33, 100 vagy 3ÖÖ pg-ot tartalmaznak.
6. ábra: Az AMI792 immunizálásra adott immunválasz kinetikája. A litereket csoportonként 6 állatot tartalmazó értékek
7. ábra: A kortikális am.ilo.id terhelés mennyiségi képelemzése PBS-sel és ΑΝ 1792-vei kezelt egerekben.
3. ábra: A neuritlkus tarfolt terhelés mennyiségi elemzése PBS-sel és AN 1792-vel kezelt egerekben.
9. ábra: A retrospleniális körtekben az asztroeitózis által elfoglalt neurotikus tarfoltok százalékának mennyiségi zése PBS-sel és AN 1792-vel kezelt egerei
10, ábra: Limfocita szaporodási vizsgálat AMI792-vel (felső panel) vagy PBS-sel (alsó panel) kezelt lépsejtekben,
11. ábra: Ossz-AB szintek a kéregben. Az egyedi ÁB profilok szóródási ábrája Preund féle adjuvánsal kombinált ABvei vagy APP származékokkal kezelt egerekben.
:keiók mennyiségi képelemzésével határoz12. ábra: A kéregben az amiloíd terhelést az immunolóP.
A 4 9 * ,·, ν X * ** X “Ag > *4 zuk meg olyan egerekben, amiket az AB 1-5·, AB 1-12 és AB AS1328 AB peptid konjugátumokkal, valamint a teljes hosszúságú AN1792 (AS1-42) és AN1528 (A&Í~4Ö| AB aggregátumokkal kezeltünk, valamint a PBS-sel kezeit kontroll csoportban,
13. ábra: Áz AS-specifikus ellenanyag literek geometriai átlaga olyan egércsoportokra, amiket Freund féle adjuvánssal kombinált AB-vei vagy APP származékokkal immunizáltunk.
14. ábra: Az' ÁB-specifikus ellenanyag literek geometriai átlaga olyan tengerimalac csoportokra, amiket AN1792-vei, vagy annak egy pabmíoilezeti származékával kezeltünk, különböző adjuvánsokkal kombinálva.
15. ábra: Különböző adjuvánsokkal kombinát AN 1792-vel vagy AN 1528-cal kezelt 12 hónapos PDAPP egerek kódexének AB szintjei.
Az alábbiakban megadjuk a leírásban használt szakkifejezések definícióját.
A „lényegi azonosság” szakkifejezés azt. jelenti, hogy két peptid-szekvencia, ha optimális módon illesztjük őket, például a GAP vagy BESTÉIT programmal, alapértelmezés szerinti réssúlyozást alkalmazva, akkor legalább 65 százalékos szekvenciaazonosságot mutat, előnyösen legalább 80 vagy 90 százalékos szekvencia-azonosságot, előnyösebben legalább 95%-os szekvencia-azonosságot (azaz például 99 százalékos, vagy magasabb szekvencia-azonosságot). Az az előnyös, ha azok a pozíciók, fc * fc* « fc
S :j£' amikben nem azonos csoportok találhatók, konzervatív aminosav helyettesítéseket jelentenek.
A szekvenciák összehasonlításához általában az· egyik szekvencia a referencia szekvencia, amihez a vizsgált szekvenciákat nálunk, akkor a vizsgált és a referencia szekvenciát égy számítógépbe visszük, az alszekvencía koordinátákat, ha. szükséges, akkor megjelöljük·, és a szekvencia algoritmus program paramétereit megadjuk. A szekvencia-algoritmus program azután kiszámítja a szekvencia-azonosságot a vizsgált szekvenciáikéra, a referencia szekvenciához viszonyítva, a megadott program paraméterek alapján.
Az összehasonlításhoz a szekvenciák optimális illesztését elvégezhetjük például Smíth és Waterman lokális homológia algoritmusa alapján [Smíth és Waterman: Adv. Appl.Math. 2, 482 {!981)j, Needieman és Wunsch homológia illesztési algoritmusa alapján [Needieman és Wunsch: Journal of Moleeular- Biology' 48, 443 (1970)), Pearson és Lípman hasonlóság-keresési módszerével (Pearson és Lípman: Proceedings of the National Ácademy of Sciences, USA 85, 2444 (1988)], ezeknek az algoritmusoknak a számítógépes implementációjával (GAP, BESTFJT, FASTA és TFASTA a Wisconsih Genetícs Software Package-ben, Genetícs Computer Group, S7SSeienee Dr;, Madison, Wl), vagy vizuális áttekintéssel (Általánosságban lásd: Current Protocols in Moleeular Biology, szerk.: Ausubel és mtsai, Greene Publishíng es « « « e » *
K 0 X
X X 0 ♦ »* «
X « 0 φ 0 » « »*Φ 0Φ ;rscience;
azonosság és szekvencia hasonlóság meghatározásához használható algoritmusok egyik, példája a BLAST algoritmus, amit Altschul és munkatársai publikáltak (Altschul és mtsai: Journal of Molecular Biology 215, 403-410 (1990)]. Á RLAS'T elemzések végrehajtásához használható számítógépes program, bárki számára hozzáférhető a National Center fór Biology ínformatxon-on keresztül (http://www.nehLnlm,nih.gov), Tipikus esetben a alapbeállítás szerinti program paraméterek használhatók a szekvencia-összehasonlításhoz, bár egyéni paraméterek is használhatók. Az aminosav szekvenciákhoz a BLASTP program alapbeállításban kelésí mátrixot lehet használni (Henikoff és Henikoff: Proeeedings of the National Ácademy of Sciences, USA 89, 10915 (1989)] ,
Az aminosav helyettesítések konzervatív vagy nem-konzervatív osztályozása céljából az aminosavakat az alábbiak szerint osztályozzuk: I~e.s csoport (hidrofob oldailánc}: norieucin., metionin, alanin, valin, leuoín, tzoleucin; H-es csoport (semleges hidrofil oldalláncok); risztéin, szerin , treonín: ΗΙ-as csoport (savas oldalláncok); aszparaginsav, glut&mmsav; IV-es csoport (bázikus oldalláncok): aszparagín, gtutamin, hisztidin, lizin, arginin; V-ós csoport (a lánc orientációját beiolyásoló oldalláncok): glicin, prolin; és VI-os csoport (aromás oldalláncok): triptofán, tirozin, íenilaianin. A konzervatív helyettesítések azok a helyettesítések, amiknek során azonos osztályba tartalmazó aminosavak helyettesítik egymást. A nem konzervatív helyettesítések azok a helyet« * A Sr * tesítések, amik során egy amínosavat egy másik osztályba tartozó aminosav helyettesít.
A találmány szerinti terápiás ágensek általában lényegében tiszták. Ez azt jelenti, hogy egy ágens legalább 50 tömegszázalék tisztaságú, valamint lényegében mentes a zavaró és szennyező fehérjéktől Az ágens néha legalább 80 tömegszázalék tisztaságú, előnyösebben legalább 90 vagy körülbelül 95 tömegszázalék tisztaságú. .Azonban a hagyományos fehérjetisztításí technikák használatával legalább 99 tömegszázalék tisztaságú homogén peptidek nyerhetők ki.
A két egység közötti specifikus kötődés egy legalább 106, 10®, 109 vagy lö10 mol/I-es affinitást jelent. A 10® mol/l-nél reszesi
Az „ellenanyag” szakkifejezést érintetlen ellenanyagok és azok kötő fragmenseinek jelölésére használjuk, Tipikus esetben a iragmensek versengenek az antigénhez való specifikus kötődésben azokkal az érintetlen ellenanyagokkal, amikből származnak. Adott esetben az ellenanyagokat vagy azok kötő fragmenseit kémiailag konjugálhatjuk. vagy expresszálhatjuk más fehérjékkel
Az APP695, APP751, és az APP770 jelölések a 695, 751 és 770 aminosav hosszúságú polipeptideket jelölik.. amiket a humán APP gén kódol jKang és mtsai: Natúré 325, 773 (1987); Ponté és mtsai: Natúré 331, 525 (1988): Kitagpchi és mtsai.: Natúré 331, « φ φφφ
530 (1988)]. A humán arniloid prekurzor fehérjében (APF) levő aminosavakat az APF770 izoforniának megfelelően számozzuk. Az AS39, AS40, AÜ41. AS42 és AB43 kifejezések olyan AS pepiidet jelentenek, amik az 1-39-es, 1-40-es, 1-4l-es, 1-42-es és 143-as amínosavakat tartalmazzák.
Az „epitőp* vagy „antigén determináns” szakkifejezés az antigénnek arra a részére utal, amire a B és/vagy a T-sejlek reagálnak. A B-sejt epitopok mind egybefüggő aminosavakből, mind egymással összefüggésben nem levő, de a fehérje térszerkezete miatt egymás mellé kerülő amínosavákből állhatnak. Az egybefügő aminosavakből álló epitopok általában megmaradnak azután is, hogy denaturáló oldószerekkel érintkeztek, míg a térszerkezet révén kialakuló epitopok általában eltűnnek a denatulegalább 3, de inkább legalább 5 vagy 8-10 aminosavból áll, amik egyedi terkonformációban vesznek részt. A térkonformáciö meghatározásának módszerei közé tartozik például a röntgen-krisztallográSa valamint a 2~dimenziős magmágn.eses rezonancia (Epitope Mapping Protoeols in Methods in Molecular Bíology 66, szerk.; Gienn B. Morris (1996)]:. Az ugyanazt az epítopot. felismerő ellenanyagokat egy egyszerű immunesszével lehet azonosítani, kimutatva az egyik ellenanyagnak azt a képességét, hogy gátolja egy másik ellenanyagnak a cél-antigénhez való kötődését. A Tsejtek közül a CD8 sejtek körülbelül 9 aminosavból álló egybefüggő epitopokat ismernek fel, míg a CD4 sejtek körülbelül 13-15 aminosavból álló egybefüggő epitopokat ismernek fel. Az epitopot
X ♦») felismerő T-sej teke t in vitro vizs gálatokkal lehet azonosítani, amik mérik az antigén-dependens szaporodást, amit. a feltöltött T-sejteknek egy epitopra adott válaszaként való 3H-timidin beépülés alapján lehet meghatározni [Bürke és mtsai: J. Infect Dis. 170, 1110-1119 {1994)), vagy az antigénfüggő pusztítás [citotoxlkus T limfocita vizsgálat, Tigges és mtsai: 3, of Immunoi, 156, 3901-3910], vagy eitokín szekréció ala
Az „immunológiai” vagy „immun” válasz egy előnyős humo(elienanyagok által közvetített) és/vagy egy celluláris (antigén-specifikus T-sejtek vagy szekréciós termékeik által közvetített) válasz, ami a befogadó betegben egy amiloid peptid ellen irányul Egy ilyen válasz lehet egy aktív válasz, amit egy immunogén beadása, indukál, vagy lehet egy passzív válasz, amit ellenanyag vagy feltöltött T-sejtek beadása indukál. Celluláris immunválaszt polipeptid epitopok bemutatása válthat ki, I-es vagy Π-es osztályú MHC molekulákkal kapcsolatban, az antigén-specifikus CD4-t T segítő sejtek és/vagy a CD8+ citotoxikus Tsejtek aktiválására, A válasz magában foglalhatja a monöciták, makrofágok, NE sejtek, bazofilek, dendrites sejtek, asztrocíták, mikrogtía. sejtek, eozinofüek vagy a természetes immunitás más komponenseinek, aktiválását, E'gy sejt által közvetített immunológiai válasz jelenlétét a szaporodási vizsgálatokkal (CD4+ T sejtek) vagy CTL (eitotosákus T limfocita) vizsgálatokkal lehet meghatározni [Bürke és mtsai: d. Infect. Dis. 170, 1110-1119 (1994); Tigges és mtsai: d. of Immunoi. 156, 3901-3910). Egy immunogé n vv terápiás hatására adott humorális és celluláris vá~ laszoknak a relatív hozzájárulását úgy lehet megkülönböztetni, hogy külön izoláljuk az ÍgG-t és a T-sejteket egy immunizált szingenikus állatból, és mérjük a védő- vagy terápiás hatását egy
Egy „immunogén ágens” vagy Jmmunogén” képes immunológiai választ indukálni saját maga ellen egy betegbe való beadás után, adott esetben egy adjuvánssal együtt
A „puszta polinukieotid” szakkifejezés olyan polinukleotidra vonatkozik, ami nem képez komplexet kolloid anyagokkal A puszta polinukleotidokai: néha plazmid vektorokban klónozzuk.
Az „adjuváns” szakkifejezés jelentése egy olyan vegyület, ami egy antigénnel együtt beadva, erősíti az antigénre adott immunválaszt, de önmagában beadva nem generál az antigén elleni immunválaszt. Az adjuvánsok számos különböző mechanizmussal képesek erősíteni az immunválaszt, beleértve a limfociták összegyűjtését, a B és/vagy a. T s< iagok serkentését.
serkentését és a makro-
lezes ei ;t és más emlős alanyokat rtixus vagy terápiás kéz
A dezaggregált vagy monomer AB szakkifejezés az AB oldható, monomer pepíid-egységeit jelenti . A monomer AB előállításának egyik módszerre a liofilezett peptid feloldása tiszta DMSO-ban, ultrahangos besugárzással. A kapott oldatot centrifugáljuk minden oldhatatlan részecske eltávolítására. Az aggregall ÁS oligomerek keveréke, amikben a monomer egységeket nem-kovalens kötések tartják össze.
Azok a készítmények vagy eljárások, amik „tartalmazzák* az egyik vagy másik említett elemet, tartalmazhatnak más, .specifikusan nem említett elemeket is. Például egy készítmény, ami .AS pepiidet tartalmaz, tartalmazhat egy izolált AS pepiidet, valamint tartalmazhat egy AS pepiidet egy nagyobb polipeptid szekvencia részeként.
A jelen találmány tárgyát gyógyászati készítmények és eljárások képezik, olyan betegségek profilaktikus és terápiás kezelése céljából, amiket az amiloíd lerakódások jellemeznek. Áz audioid lerakódások egy oldhatatlan tömegbe aggregálódott pepiidből állnak. A peptid természete változik a különböző betegségekben, de a legtöbb esetben az aggregátum egy béta-redős lemez-struktúrával rendelkezik, és a Congo Red festékkel festődik. Az a.míloid lerakódásokkal jellemzett betegségek közé tartozik az. Alzheimer kór (AD), mind a korán, mind a késón fellépő formában. Mindkét esetben az amiloid. lerakódás egy AS nevű pepiidet tartalmaz, ami az érintett személyek agyában akkumulálódik. Néhány más, szintén az .amiloid lerakódások által jellemzett betegség az SAA amiloidözís, az öröklődő Izlandi szindróma, a. többszörös mielóma., és a szivacsos agyvelő betegségek, beleértve a kergemarha kórt, a Creutzfeld Jákob betegséget, a birka surlókört és a vidramenyét szivacsos agyvelő betegségét (Weissmann és mtsai: Curr. Opin. Neurobiol. 7, 695-700 ** * φ » > ,b (1997); Smits és mtsai: Veterinary Quarterly 19, 101-105 (1997); Nathanson. és mtsai.: Am. 3. EpidemioL 145, 959-969 (1997)].
szérum amiloid A, a eystantin C, az IgG kappa könnyű lánc az előzőkben említett első három esetben, és a prion fehérje a többiben.
A jelen találmányban, használt terápiás ágensek immunválaszt indukálnak az AB peptid ellen. Ezek közé az ágensek közé tartozik maga az Ab peptid és annak variánsai, analógjai és mimetikumai, amik az AB peptid elleni ellenanyagokat indukálják és/vagy azokkal keresztreakciókat adnak, valamint az AS pepiiddel reagáló T-sejtek, Egy immunválasz indukciója lehet aktív, vagyis, ha egy immunogént beadva egy betegnek az ellenanyagokat, vagy Ab pepiiddel reagáló T-sejteket. indukál, vagy lehet passzív, vagyis amikor egy ellenanyagot adunk be, ami maga kötődik az AS-hez egy betegben.
Az AB, ami béta-amiloid peptid vagy A4 peptid néven is ismert (4,666,829 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás; Glenner és Wong: Biochemical and Biophysical Research Communications 120, 1131 (1984)), egy 39-43 aminosavból álló peptid, ami az Alzheimer kór jellegzetes tarfoltjainak a fő komponense. Áz AB~t úgy lehet létrehozni, hogy egy nagyobb APP fehérjét két enzimmel, a béta- és gamma-szekretázzal [Hardy: TINS 20, 154 (1997)] processzálunk. Az APP ismert mutációi, amik az Alzheimer kórral állnak kapcsolatban, a béta és gamma szekretáz támadási pontja közelében találhatók, vagy az AB-ban. Például a 717-es pozíció az AB processzálásában
1PP gamma.- szekretáz hasítási helyének szomszédságáhan van, a 670/671-es pozíciók a feéta-szekretáz hasítási helyének szomszédságában találhatók. Az a vélemény alakult ki, hogy a mutációk okozzák az Alzheímer kórt, kölcsönhatásba lépve növelik az AB generált 42/43-es formájának mennyiségét.
Az AB azzal a szokatlan tulajdonsággal rendelkezik, hogy mind a klasszikus, mind az alternatív komplement kaszkádokat képes fixálni és aktiválni. Pontosabban, kötődik a Clq-hoz és végezetül a C3bi~hez. Ez az asszociáció megkönnyíti a makrofágokhoz való kötődést, ami a B-sejtek aktiválását eredményezi. Emellett a C3bí tovább bomlik, majd T-sejt függő módon a CR2höz kötődik a B-sejteken, ami ezeknek a sejteknek a 10000-es aktiválását eredményem. Ez a mechanizmus azt okozza, hogy az AB más antigénekéhez viszonyítva fölöslegben levő immunválaszt generál.
Az igényelt eljárásokban használt terápiás ágens az AB· pepiid bármelyik természetes formája lehet, főleg a humán formák (azaz például az AB39, az AB40, az AB40, AB41, az AB42 vagy az AB43). Ezeknek a pepiiteknek a szekvenciáit és az APf sorral való kapcsolatukat Hardy és munkatársai publikációjának
1. ábráján láthatjuk (Hardy és mtsai: T1NS 20, 155-153 (1997jj. Az AS42 szekvenciája például az alábbi:
* fc
H2N-Asp-Ala-Glü-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-HisGln-Lys-LeU“V^-Phe-Phe-Ála~Glu-Asp-Val.-'Gly-Ser-Asn-Lys-GlyAla-Ile-ne-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-lle-Ala-OH
Az AB41, AS40 és az AS39 abban tér el az A&42-től, hogy a C-terminálísről kimarad az Alá, az. Ala-Öe és az Ala-Öe-Val. Az A&43 abban tér el az AS42-től, hogy a C-terminálison egy treonin csoport található. A terápiás ágens lehet a természetes Afö peptid aktív fragmense vagy analógja is. amí olyan epitopot tartalmaz, ami beadás után hasonló védő vagy terápiás immunválaszt vált ki emberekben. Az ímmunogén fragmensek közé tartozik az ABl5, 1-6, 1-12, 13-28, 17-28, 25-25, 35-40 és 35-42. Néhány eljárásban az AB N-terminális feléből származó fragmenseket részesítik előnyben. Az analógok közé tartoznak az alléi-, a iáj- és indukált variánsok. Az analógok tipikus esetben egy vagy néhány pozícióban térnek el a természetes peptídektől, gyakran konzervatív helyettesítések révén. Az analógok tipikus esetben nemtermészetes aminosavakat is tartalmaznak, vagy az N- vagy Cterminálís azninosa.vak módosításait, A nem-természetes aminosavak jellegzetes példái az alfa,alía~kétszeresen helyettesített aminosavak, az N-alkil aminosavak, a tejsav, a 4-hidroxiprolín, a gamma-karboxiglutamát, az epszilon-NjNjN-trlmetilhzln, az epszilon-N-acetillizín, az O-foszfoszerin, az N-acetilszerin, az Nformílmetionin, a 3-metilhisztidm, az 5-hidroxiliz.in és az ómegaN-metiiargínin. A fragmenseket és analógokat átvizsgálhatjuk, hogy van-e proSlakökus vagy terápiás hatásuk a transzgeníkus állatokban, amint azt az alábbiakban ismertetjük.
ΦΦΧΧ « * V * φ φ * ΧΦΦ Φ » Φ Φ * Φ φ Φ X
X « Φ* »» % ί
Az AS-t, ír&gmenseü, analógjait és más amiloidogén peptideket szilárd fázisú peptid szintézissel vagy rekombináns expresszióval szintetizálhatjuk meg, vagy elöállíthatók természetes forrásokból. Az automata peptíd-szinietizátorok számos különböző gyártetőé szerezhetők be a kereskedelmi forgalomban, azaz például az Applied Biosystem.s~től (Foster City, Kalifornia). Á rekombináns expresszió lejátszódhat baktériumokban, azaz például Escherichia coli-bán, élesztőkben, rovarsejtekben vagy emlős sejtekben. A rekombináns expresszié eljárásait laboratóriumi szakkőnyvek is tartalmazzák (Sambrook és mtsai: Molecular Cloning: A Laboratory Manual; 2. kiadás, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)]. Az Ab peptid néhány formája kereskedelmi forgalomban is beszerezhető (például American Peptídes Company, Inc., Sunnyvale, CA és California
Terápiás ágensek lehetnek hosszabb polípeptidek, amik közé tartozik például az Ab polipeptid, az aktív fragmens vagy analóg, más aminosavakkal együtt. Az .Αδ peptid például érintetlen APP fehérje, vagy annak szegmense formájában lehet jelen, azaz például a C-löö fragmens formájában, ami az Áb N-terminálísán kezdődik és az APP végéig folytatódik. Ezeket a polipeptideket átvizsgálhatjuk, hogy van-e proíilaktikus vagy terápiás hatásuk az áll&ímodellekben, az alábbiakban ismertetett módon. Az Ab pepiid, annak analógja, aktív fragmense vagy más- polipeptid beadható asszociált formában (azaz például amiloid peptid ♦«»« « ί Φ < * X Φ * * φ φ φ.*. φ * φ φ ΦΦΦΦ φ Φ Φ Μ » χ φ φ χ* »* formájában) vagy disszociált formában. Á terápiás ágensek közé tartoznak a muhimer vagy monomer immunogén ágensek..
Egy további variáció szerint egy immunogén peptid, azaz például az Ά& bemutatható virális vagy bakteriális vakcina formájában. Az immunogén pepiidet kódoló nukleinsavat a vírus vagy a baktérium genomjába vagy' episzőmájába építjük be. Adott esetben a .nukleinsavat oly módon építjük be. hogy az immunogén peptid szekretált fehérje, vagy vírus külső membránfehérjéjével vagy egy baktérium transzmemhrán fehérjéjével készített fúziós fehérje formájában expresszálodik, ílymödon a peptid bemutatható. Az ilyen módszerekben használt vírusok vagy baktériumok vagy apatogének vagy attenuáltak legyenek. A megfelelő vírusok közé tartozik az adenovírus, a herpes símplex vírus, a vakolnia és a esirkehímlő. Egy immunogén pepiidnek a HBV HBsAg-jóhoz való fúziója különösen megfelelő. Á. terápiás ágensek közé tartoznak az olyan peptidek és más vegyületek, amik szükségszerűen rendelkeznek, szignifikáns aminosav hasonlósággal az AS-vel összehasonlítva, mindazonáltal az AS mímetikuma'ként működnek és hasonló immunválaszt indukálnak. Például bármelyik béta-redős lemezeket alkotó pepiid és fehérje átvizsgálható, hogy megfelelő-e. Használhatók az A.6 vagy más amiloidogén peptidek elleni monoklonális ellenanyagok elleni antíidiotípusos ellenanyagok is. Az ilyen anti-Id ellenanyagok utánozzák az antigént, és ellene immunválaszt generálnak ÍEssential Immunoiogy^ 64. kiadás, ISI. old., szerk.: .Blackwell Scientific Püblications, Palo Altoj.
* fc ν Φ ν ««?« *<>»
A peptidek vagy más vegyületek véletlenszerű könyvtárait ís átvizsgálhatjuk, hogy megfelelnek-e. A kombinaíoríális könyvtárakat számos különböző típusú vegyülefból előállíthatjuk, amiket lépésenként szintetizálhatunk meg. Ilyen vegyületek például a polipeptidek, béta-kanyar mimetikumok, poliszacharidok, foszfolipidek, hormonok, prosztaglandinok, szteroidok. aromás vegyületek, heterociklusos vegyületek, benzodiazepínek, oligomer N~ helyettesített glicínek és oligokarbamátok. A vegyületek nagy kombinaíoríális könyvtárait a szakirodalomban ismertetett kódolt, szintetikus könyvtár (ESI) módszerrel állíthatjuk elő (Affymax, WO 95/12608; Aífymax, WO 93/06121; Columbia Uníversíty. WO 94/08051; Pharmacopeia; WO 95/35503 és Scripps, WO 95/30642, amely publikációkat a továbbiakban referenciaként kezelünk). A peptid-könyvtárakat a fág-display módszerekkel ís
A komhinatoriális könyvtárakat és más vegyületeket először átvizsgáljuk, hogy alkalmasak--e, meghatározva a. kapacitásukat, hogy kötödnek-e azokhoz az ellenanyagokhoz vagy limfoeitákhoz (B és T), amikről ismert, hogy specifikusak az Afi-ra vagy más amiloidogén peptidekre. A kezdő szűrővizsgálatokat például bármilyen AS vagy más amiloidogén peptid elleni políklonális szérummal vagy monoklonális ellenanyaggal lehet elvégezni. Az Ilyen szűrővizsgálatok által kódolt vegyületeket azután tovább elemezzük, hogy van-e olyan kapacitásuk, amivel AS vagy más amíloidogén peptid elleni ellenanyagokat vagy reaktív limfocitákat indukálnak. Például a szérumok többszörös hígításait olyan mik* Φ * < ·>. * :φ Φ rotiter lemezeken vizsgálhatjuk., amiket előzőleg ÁS pepiiddel borítottunk, és standard ELJSÁ végezhető az AS elleni reaktív ellenanyagok vizsgálatára, A vegyűleteknek vizsgálható a profi.·· taktikus és terápiás hatékonysága olyan transzgenikus állatokban, amik hajlamosak egy amíloidogén betegségre, a példákban leírt módon. Ilyen állatok például a Garaes és munkatársai által az APP-ben leírt 717-es mutációt hordozó egerek (Games. és mtsai: Natúré 373, 523 (1995)], valamint a APP-ben leírt Svéd mutációt hordozó egerek (McConlogue és mtsaí: 5,612,486 számú Amerikai Egyesült Allamok-beli szabadalmi leírás; Hsiao és mtsai: Science 274, 99 (1.996); Staufenhíel és mtsai: Proeeedmgs of the National Academy of Sciences, USA 94, 13287-13292 (1.997); Sturcher-Pierrat és mtsai: Prooeedings of the National Academy oí Sciences, USA 94, 13287-13292 (1997); Borchelt és mtsaí: Neuron 19, 939-945 (1997)]:, Ugyanezt a .szűrővizsgálati megközelítést használhatjuk más potenciális ágensekre is, azaz például az AB íragmenseire, az ÁB analógjaira és hosszabb peptidekre, beleértve az AS-t is, amiket az előzőkben ismertettünk.
A találmány szerinti terápiás ágensek közé tartoznak azok az ellenanyagok is, amik specifikusan kötődnek az AE-hoz. Az ilyen ellenanyagok lehetnek poiíklonálisak vagy monoklonálisak. Néhány ilyen ellenanyag specifikusan az AS dísszociállt formájához kötődik, anélkül hogy az aggregált formájához kötődne. Néhány mind az aggregált mind a disszociált formához kötődik, A nem-humán, azaz például a. rágcsáló vagy patkány ellenanyagok β*» V ♦ V* ♦ X „ 4.
ν _ Α 0« ν » λ >
» * -Φί '•ν « &
♦Λ.
előállítását például ügy végezhetjük el, hogy az állatot AB-val immunizáljuk (Harlow & Lane: Antihodíes, A Laboratory Marnia! Cold Spring Harbor Press, NY (1988)], amely publikációt a. továbbiakban referenciaként kecelünk. Egy ilyen immunogént megkaphatunk természetes forrásokból, peptid-szintézissel vagy rekombínáns exoressziöval
Az egér ellenanyagok humanizált formáit úgy kaphatjuk meg, hogy egy nem-humán ellenanyag CDR régióit rekombínáns DNS technikákkal humán konstans régiókhoz kapcsoljuk [Queen és rntsai: Proceedings of the National Aeademy of Sciences, USA 86, 10029-10033 (1989); WO 9Ö/Ö7861], amely publikációt a. továbbiakban referenciaként kezelünk.
Humán ellenanyagokat fág-display módszerekkel is előállíthatunk jDower és rntsai: WO 91/17271; MeCafferty és rntsai: WO 92/01047). Ezekben az eljárásokban olyan fág-kónyvtárakat állítunk, elő, amiknek a tagjai külső felszínükön más-más ellenanyagot mutatnak he. Az ellenanyagok általában Fv vagy Fab fragbemutatő fágot AB-val, vagy annak fragmensével végzett affinitás-dúsítással szelektáljuk. Az AB elleni humán ellenanyagokat előállíthatjuk nem-humán transzgeníkus emlősökben, amikben olyan transzgének vannak, amik legalább a humán immunglobulin. lökusznak és egy inaktivált endogén immunglobulin lőkusznak a. szegmensét kódolják (honberg és rntsai: WO 93/12227 (1993); Eueheríapati: WO 91 /1.0741 (1991)), amely publikációkat a továbbiakban referenciaként kezelünk. A humán ellenanyagokat kompetitív kötési kísérletekkel vagy más módon lehet szelektálni, hogy ugyanazzal az epitóp speeifítással rendelkezzenek mint egy adott egér ellenanyag, Az ilyen ellenanyagokról különösen valószínű, hogy ugyanazokkal a hasznos funkcionális jellemzőkkel rendelkezik mint az egér ellenanyagok, A humán poliklonálís ellenanyagokat elő lehet állítani egy ímmunogén ágenssel immunizált emberek szérumának formájában, Adott esetben az ilyen polikionális ellenanyagokat affinitás-tisztítással lehet töményíteni, AS vagy más amíloid pepiidet használva affínítási reagensként.
Humán vagy humanizált ellenanyagok tervezhetők, amik IgG, IgD, IgA és ígB konstans régióval rendelkeznek, valamint bármilyen izoöpus, beleértve az IgGl-et. IgG2~t, IgG3-at és az IgG4-et. Az ellenanyagok tetramerek formájában expresszálhatők, amik két könnyű és két nehéz láncot tartalmaznak szeparált nehéz láncok, könnyű láncok, Fab, Fab', (Fab')2 és Fv formájában, vagy egyláncú ellenanyagokként, amikben a nehéz és könnyű lánc variábilis doménjeí egy térkitöltőn keresztül kapcsolódnak egymáshoz.
A jelen találmány szerinti eljárásokban használható terápiás ágensek közé tartoznak, azok a T-sejtek, amik kötődnek az AS poiipepfidhez. A T-sejtek például aktiváibatók az A& peptid ellen, ha egy rovarsejt-vonalből származó humán β-2-mikroglobulínt expresszálunk rovarsejt-vonalban, ezáltal egy üres komplex ke?<>
letkezik a sejtek felszínén, és képes kötődni az AS pepiidhez. A sejtvonallal érintkező T-sejtek specifikusan aktiválódnak a pepiid ellen jPeferson és mtsai: 5,314,813 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás]. Az egy MHC Π osztályba tartozó rovarsejt-vonalakat hasonlóképpen, lehet használni a CD4 Tsejtek aktiválására.
Ugyanilyen, vagy analóg elvek határozzák meg a más amiloídogén betegségek kezelésére használható terápiás ágensek termelését. Általában, az Alzhelmer kör kezelésében az előzőkben említett ágensek használhatók az Alzheímer kórnak a Down-kórhoz kapcsolódó korai fellépésének kezelésére. A kergemarhakórban a prion peptid, annak aktív fragmenseí és analógjai, valamint a prion peptid elleni ellenanyagok használhatók az Alzheimer kór kezelésében használt. AB peptid, annak aktív fragmenseí, analógjai, vagy az AB peptid elleni ellenanyagok helyett. A többszörös mieióma kezelésében az IgG könnyű láncai, valamint ennek analógjai és ellenanyagai használhatók, és ugyanez igaz más betegségekre is.
Néhány, immunválasz indukálására alkalmas ágens tartalmazza a megfelelő epiiopot az amiloid lerakódások elleni immunválasz indukálására, de ezek túl kicsik ahhoz, hogy immunogének legyenek, Ebben a helyzetben egy peptid imniunogén kapcsolható egy megfelelő hordozóhoz, hogy segítse az immunválasz kialakulását. A megfelelő hordozók, közé tartoznak a szérumalhumínok, a fúrócsiga hemoclanin, az immunglobulin moleku» « «ι If « ♦ * * 6 * * ♦ * ♦ φ * ♦>
< φ φ > *
Φ Φ ίΐψχ » Φ * 4 * Λ * ♦ Χ-* ** *
Iák, a tirogfobulin, az ovalburnin, a tetanusz toxoid, vagy egy másik patogén baktériumból, azaz. például diftériáből, Escherichia colí-ből, kolerából, Helicobacter pylori-ból származó toxoíd, vagy egy attenuált toxoid, Az immunválasz serkentésére vagy' erősítésére használható más hordozók lehetnek például a eitokinek, azaz például az interleukín-1, az interleukín-1 alfa és béta peptidek, az interieukin-2, a gamma-interferon, az interleukln-10, a GM-CSF és a kemokinek, azaz például az MlPlalfa és a RANTES., Az immunogén ágensek kapcsolhatók olyan pepíídekhez, amik fokozzák a szöveteken keresztül történő transzportot (O'Mahony: WO 97/17613 és WO 97/ 17614).
Az ímmnnogén ágensek kémiai keresztkötésekkel kapcsolhatók a hordozókhoz. Egy immunogénnek egy hordozóhoz való kapcsolására szolgáló technikák közé tartozik a diszulíidkötések kialakítása. N-szukcinimidil-3-(2-piridil-tio) propionáttal (SPDP) és szukcinimidil 4-(N~maleimídometil)cíkIobexán-l-karboxíláttal (SMCC) (ha a pepiidben nincs szulíhidril csoport, akkor ezt egy císztein-csoport hozzáadásával lehet megvalósítani). Ezek a reagensek diszulfid-kötést hoznak létre önmaguk és egy fehérjén lévő pepííd-císztem csoport' között, valamint egy amidkötést hoznak létre egy lizin epszílon-amíno csoportja között, vagy egy másik amínosav csoport szabad amínocsoportja között. Számos kúlönbözö ilyen díszulfid/amid-képző ágenst írnak. Ie a szakirodalomban (Immun. Rév. 62, 185 (1982)(.. Más bífunkcíós ágensek inkább tioéter kötést képeznek a diszulfid-híd helyett. Ezek közűi a tioétert képező ágensek közül számos beszerezhető kereskedel* « > « mi forgalomban, ide tartoznak a ö-malelmidokapronsav, a 2~ brőmecetsav és a 2-jöáecetsav reaktív észterei, a 4-(N-malimídometil)-ciklohexán-l-karbonsav. A karboxil--csoport aktiválható, ha szukcínimíddel, vagy l-hidroxi-2~nitro~4-szulfonsav nátriumsóval kombináljuk.
Az immunogén peptídek expresszálhatók hordozókkal képezett fúziós fehérjék formájában. Az immunogén peptid a hordozóval kapcsolható az. H-tenninálison, a C-terminálison, vagy a peptid belsejében, Adott esetben az immunogén peptid többszőAz amíloíd lerakódások elleni immunválaszok is indukálhatok az AB pepiidet vagy más peptid-immunogént kódoló nukleinsavak beadásával. /Íz ilyen nukleinsav lehet DNS vagy RNS, Az immunogént kódoló nukleinsav szegmens tipikusan szabályozó elemekhez kapcsolódik, azaz például promoterhez és fokozóhoz, amik lehetővé teszik a DNS szegmens expresszíóját egy beteg megcélzott sejtjeiben. A vérsejtekben valö expresszióhoz, amint az az immunválasz indukciójához szükséges lehet a. könnyű és nehéz lánc immunglobulin génekből származó promoter és fokopromo5 vezérléséhez, A gyakran zó elemeket, vagy a citomegalovirus fc tért és fokozó elemet használhatjuk, az expressziö kapcsolt szabályozó elemeket és kódoló ss egy' vektorba klónozzuk.
Számos virálís vektorhoz férhetünk hozzá, beleértve a retrovirálís rendszereket jLawrie és Tumin: Curr. Opin, Génét.
XX Φ
X « Φ Φ *♦
Develop. 3, 102-109 (1993)0 az adenovirális vektorokat (Bett és mtsai: 3. VíroL 67. 5911 (1993)], az adeno-asszociált vírus vektorokat [Zhou és mtsai: d. Bxp. Med. 179, 1867 (1994)}, a himlő családba tartozó virális vektorokat, beleértve a vakolnia vírust és a madárhimlő vírusokat, az alfa vírus nembe tartozó virálís vektorokat, azaz például a. Sindhis és Semliki Porest vírusokból származókat (Duhensky és mtsai: J, Viroh 70, 508-519 (1996)} és a papillómavírusokat (Ohe és mtsai: Humán Gene Therapy 6, 325Nucleic Acids Research 24,
Az egy iramunogént kódoló DNS-t, vagy egy ugyanazt' tartalmazó vektort liposzőmákba. pakolhatjuk. A. megfelelő lipideket és a rokon analógokat az 5,208,036, 5,264,6IS, 5,279,833 és
5,283,185 számú Amerikai Egyesült Allamok-beli szabadalmi leírásban találjuk meg. Az egy immunogént kódoló vektorokat és DNS-t részecske formájú hordozókra is adszorheálhatjuk 'vagy azzal asszociáltatjuk, amikre példák lehetnek a polimetil-metakrilát polimerek és poiilaktidok, valamint a. poli(laktid~ko~glikoli~ dók) [McGee és mtsai: J. Micro. Eneap. (1996)}.
A génterápiás vektorokat vagy a puszta DNS-t in vivő adhatjuk he az egyes betegeknek, tipikus esetben szisztémás beadási móddal (azaz például intravénás, mtraperifoneáiis, nazális, gasztrikus, intradermális, intramüszkuláris, szubdermális vagy íntrakraníálís infúzióval) vagy topikális alkalmazási móddal (5,399,346 számú Amerikai Egyesült Allamok-beli szabadalmi leírás). A DNS-t is beadhatjuk egy génpuskával (Xiao & Brandsma: Nucleic Acids Research 24, 2630-2622 (1996)]. Az egy immun.ogént kódoló DNS-t mikroszkópos fémgyongyök felszínére csapjuk ki. A mikrorészecskéket egy lökéshullámmal vagy táguló hélium gázzal gyorsítjuk fel, majd néhány sejtréteg vastagságban a szövetbe hatolnak Például az Ágacetus, Inc., Middleton WI által gyártott AccelTM Gene Delivery Devi.ce egy megfelelő berendezés. Egy másik változat szerint a puszta DNS-t ügy is bejuttathatjuk a bőrön keresztül a véráramba, hogy a DNS-t egyszerűen a bőrre csöppentsük kémiai vagy mechanikai irritáciőval (WO 95/05853).
Egy további variáció szerint az immunogéneket kódoló vektorokat ex vivő juttatjuk, be a sejtekbe, azaz például egy betegből kivett sejtekbe (azaz például Hmfocitákba, csontvelőből leszívott sejtekbe, szöveti biopsziákba), vagy univerzális donor hematopoietikus őssejtekbe, majd a sejteket visszaültetjük a betegbe, általában az után, hogy kiszelektáltuk azokat a sejteket, amikbe beépült a vektor.
A kezelésre alkalmas betegek közé tartoznak azok az egyének, akik a betegség kockázatával élnek, de nincsenek tüneteik, valamint azok a betegek, akiknek jelenleg nincsenek tüneteik. Az Alzheimer kór esetében tulajdonképpen mindenki az Alzheimer kör kockázatával él együtt, ha elég hosszú ideig éh Ennek következtében a jelen találmány szerinti eljárásokat alkalmazhatjuk profilaktikusan az egész populációra, anélkül hogy .megbecsülnénk, hogy a betegségnek mekkora a kockázata az egyes betegek esetében. A jelen találmány szerinti eljárások különösen jól használhatók olyan egyedek esetében, akiknél fennáll az Alzheímer kór genetikai kockázata.. Ilyen egyének azok, akiknek a rokonai ez a betegség, valamint azok, akiknél a kockázatot genetikai vagy biokémiai markerek elemzése alapján határozták meg. Az Alzheímer kár kockázatára utaló genetikai markerek például az APP génben található mutációk, különösen a 717-es és 670-es pozícióban levő mutáció, amiket Hardy és Svéd mutációknak neveznek (Hardy: TINS 20, 154 (1997)]. Más kockázati markerek a PS 1 és PS2 presenílín gének, valamint az ApoE4 mutációi, az Álzbeimer kér előfordulása a családban, a hiperkoleszterolémia. vagy az atheroszklerözis. A jelenleg Alzheimer kórban szenvedőket a jellegzetes dernenciáről ismerhetjük fel, valamint az előzőkben ismertetett kockázati faktorok jelenlétéről. Emellett számos diagnosztikát teszt kapható az Alzheimer kórban szenvedő emberek azonosítására. Ilyen teszt például a CSF tau és AB42 szintek mérése, A megnőtt tau és a csökkent AB42 szintek az Alzheimer kör jelenlétére utalnak. Az Alzheímer kórban szenvedő betegek az MMSE vagy ARDRA. kritériumok alapján diagnosztizálhatok, amint azt a példák között tárgyaljuk.
A tünetmentes betegekben a. kezelés bármilyen korban megkezdődhet (azaz például 10, 20, 30 éves korban). Azonban általában nem szükséges a kezelés megkezdése a beteg 40, 50, 60 vagy 70 éves kora előtt. A kezelés tipikus esőben több dózist jelent egy időtartam alatt. A kezelést követhetjük a terápiás ágensre (azaz például az AB pepiidre) adott ellenanyag vagy aktíváit T~ sejt vagy B-sejt válaszok időbeli változásával. Ha a válasz lecsökken, akkor egy gyorsító dózisra lehet szükség. A potenciális Down kór tüneteket mutató betegekben a kezelés már a születés előtt megkezdődhet, a terápiás ágenst az anyának beadva, vagy röviddel a születés után ís megkezdődhet.
A proülaktikus alkalmazásokban a nyékét vagy gyógyszereket egy bizonyos betegségre érzékeny, vagy más módon annak kockázatával élő betegnek adják be, olyan mennyiségben, ami elegendő ahhoz, hogy megszüntesse vagy más módon csökkentse a betegség megindulásának kockázatát, vagy késleltesse a megindulást. A terápiás alkalmazásokban a készítményeket vagy gyógyszereket olyan betegnek adják be, akiről várható hogy kitör rajta, vagy már szenved egy ilyen betegségben, olyan mennyiségben, ami elegendő ahhoz, hogy meggyógyítsa, vagy legalább részlegesen megszűntesse a betegség és komplikációinak tüneteit. Ennek az eléréséhez a megfelelő mennyiséget ügy határozzuk meg, mint egy terápiásán- vagy győsatilag hatékony dózist. Mind a profilaktikus, mind a terápiás kezelési, módokban az ágenseket általában több dózisban adják be, addig, amíg elérjük az elegendő mértékű immunválaszt. Tipikus esetben ismételt dózisokat adnak be, ha az immunválasz kezd gyengülni..
A jelen találmány szerinti készítmények hatékony dózisai az előzőkben említett állapotok kezelésére, számos különböző faktortól függenek, beleértve a beadás módját, a megcélzott pontot.
>*♦ a beteg fiziológiás állapotát, azt, hegy a beteg ember-e vagy állat, a még beadott gyógyszereket, és azt, hogy a kezelés profilaktikus vagy terápiás. A beteg általában ember, de néhány betegségben, mint például a kergemarha kórban a beteg lehet nem-humán emlős, azaz például szarvasmarha. A kezelés dózisait ütrálni kell, hogy optimalizáljuk a biztonságot és a hatékonyságot. Áz immunogén beadott mennyisége néha 5-500 pg per injekció között változik, embernek való beadás esetében. Néhány esetben magasabb, 1-2 mg per injekciós dózisok is használhatók. Az egyes humán injekciók általában 10, 20, 50 vagy 100 pg-ot tartalmaznak. A injekciók időzítése szignifikánsan változhat, lehet naponta egyszer, évente egyszer, tízévente egyszer. Azon a napon, amikor az immunogén egy dózisát beadjuk, a dózis nagysága nagyobb mint 1 pg/heteg, és általában nagyobb mint 10 ug/beteg, ha adjuvánst is adunk be, és nagyobb mint 100 pg/beteg, ha nem adunk be adjuvánst. Egy tipikus kezelési mód áll egy ímmunizáeiőből, majd hafhetente erősítő injekciókból. Egy másik kezelési mód áll egy ímmunizádöhől, majd 1, 2 és 12 hónappal később beadott erősítő injekciókból. A harmadik kezelési mód során kéthavonta, egy injekciót adnak be a beteg hátralevő életében. Egy másik változat szerint az erősítő injekciókat rendszertelenül is he lehet adni, az immunválasz követése alapján. Az egy ellenanyaggal végzett passzív immunválaszhoz a dozistartomány 0,0001-100 mg/kg között van, de gyakrabban 0,01-5 mg/testsúlykg között, a gazdaszervezetre számítva. Az immunogéneket kódoló nukleinsavak dózisai 10 ng és 1 g, 100 ng és 100 mg, 1 *·χ * * * * * ♦·*
pg és IÖ mg, vagy 3-300 gg DNS per beteg, A fertőzőképes virális vektorok dózisa 10-109, vagy több virion. per dózis.
Az immunválaszt indukáló immunogén ágenseket, azaz például a peptideket néha egy adjuvánssal kombinálva adják be. Számos különböző adjuvánst lehet használni egy pepiiddel, azaz például AB~val kombinálva, Immunválasz kiváltása céljából, Az előnyben részesített adjuvánsok erősítik az ímmunogénre adott belső választ, anélkül hogy konformációs változást okoznának az ímmunogénben, ami befolyásolja a válasz kvalitatív formáját. Az előnyben részesített adjuvánsok közé tartozik a timső, a 3~dez~Oacilezett monoíoszforil lipid A (MPL) (lásd a GB 2220211 számú szabadalmi leírást). A QS21 egy triterpén glikozid,vagy szaporán, amit a Dél-Amerikában élő Quillaja Saponaria Molina fa kérgéből lehet izolálni f&ensll és mtsai: Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant .Approach, szerk,: Powell és Neuman, Plennm Press, NY (1995): 5,057,540 számú Amerikai Egyesült Államok-belí szabadalmi leírás], A többi adjwáns olaj a vízben emulzió, (azaz például szkvalén vagy mogyoróolaj·),, ami adott esetben immun-stimulánsokkal, azaz például monofoszforil lipid A-val van kombinálva (Stoute és mtsai: The New England Journal of Medleine 336, 8691 (1997)], Egy másik adjuváns a CpG (Bioworld Today, 1998. november 15.]. Egy másik változat szerint az Ab-t kapcsolhatjuk egy adjuvánshoz, Például az Αβ-nek egy lípopeptid verziója állítható elő, palmitínsavat vagy más lipideket kapcsolva, közvetlenül az AS N-terminálísához, amint azt a hepatitisz B antigén vakéinálásánál leírták (Livingstone J. of Immunoi. 159, 1383-1392 * φ·
-ί.
(1997)]. Az ilyen kapcsolásnak azonban nem szabad lényegesen megváltoztatnia az AB konformációját, hogy ezzel érintse a rá adott immunválasz természetét. Az adjuvánsokat beadhatjuk egy gyógyászati készítmény komponenseként, egy aktív ágenssel, vagy beadhatjuk külön is, a terápiás ágens beadása előtt, közben vagy után.
Az adjuvánsok egy előnyben részesített osztálya az alumíníumsök (tímsőb azaz például az alumíniumbidroxid, az- alumíniumfoszfát, alummiumszuiíáL Ezeket az adjuvánsokat használhatjuk más immunserkentő ágensekkel együtt vagy azok nélkül is
monomer amínosavak, mint például a políglutamínsav vág}7 a polilizin. Az adjuvánsok egy másik osztálya az olaj-a-vízben emulziós készítmények. Az ilyen adjuvánsokat használhatjuk más specifikus immunserkentő anyagokkal együtt, vagy azok mint
3.
peptidek (azaz például az N-acetilmuramíl-L-treonil-D-izoglutamm (thr-MDP), az Nacetil-normuramíl-L-alanil-D-ízoglntamín (nor - MDP), N -aeetilmuramil-L-aJ.anil-D-izoglutaminil-L“aIanin-2-(l'-2'dipalmitoíl-sn~ghcero-3-bidroxifoszforiloxi)-et.ila.min (MTP-PE), N-acetilglükózaminil-N~acetilmuramíLL-Ala-D-izogln-L--Ala--dipa.lmí.toxi propilamid (DTP-DPF) theramideTM), valamint más bakteriális sejtfal komponensek. Az olaj-a-vízben emulziók közé tartozik (a) az M.F59 (WO 90/14837), ami 5% szkvalént, 0,5% Tween 80-at és 0,5% Span 85-öt tartalmaz (adott esetben különböző mennyiségű MTPPE-t is tartalmaz), egy mikrofiuídizálőval, azaz például egy Model
Λ «· ♦
ΟΥ mikroíluídízálőval (Microüuidics, Newton MA) szubmikronos méretű részecskék formájában kiszerelve, (b) a SA'F, ami 10% szkvalént, 0,4% Tween 80-at, 5% pluronnal blokkolt LI21 polimert és thr-DMP-t tartalmaz, szubmikronos emulzióvá mlkrofluidizált vagy nagyobb részecskeméretű emulzióvá vortexelt formában, és (c) a RibiTM adjuváns rendszer (RAS), (Ribi Immunochem, Hamilton MT), ami 2% szkvalént, 0,2% Tween 80at és egy vagy több bakteriális sejtfal komponenst tartalmaz az alábbi csoportból: monofoszforilipid A (MPL), trehalőz dimikolát (TDM) és sejtfalburok ÍCWS), előnyösen MPL+CW3 (DetoxTM). Az előnyben részesített adjuvánsok egy másik csoportja a szaporán adjuvánsok, azaz például a StímulonTM (QS21, Aquíla,
Worcester, MA), vagy az ebből készült részecskék, azaz az ISCOM-ok (ímmunserkentő komplexek) és az Más adjuváns lehet még a Komplett Freund féle adjuváns (CFA),
es az
lehetnek citokinek, azaz például interleukinok (mterleukín-1, ínterleukm-2 és mterleukín-12), a makrofág telepserkentö faktor (M-CSF), a tumor nekrőzis faktor (TNF),
Egy adjuvánst beadhatunk egy immunogénnel egyetlen készítmény formájában, vagy beadhatjuk az immunogén beadása előtt, közben vagy után . Az Immunogén és az adjuváns csomagolható egyetlen ampullába, és így is biztosítható, vagy külön amcsomagolhatjuk, amiken címke jelzi a megcélzott terápiás
Ha az immunogént és az adjuvánst külön csomagoljuk, akkor a csomagnak tartalmaznia kell a felhasználás el
A 4
4© * » * φ «.· φ φ * * > Φ X «l· Φ Χ Φ « 9 φ φ φ*
összekeverésre vonatkozó utasításokat. Egy adjutánsnak és/vagy egy hordozónak a megválasztása függ az adjuvánst tartalmazó vakcina stabilitásától, a beadás módjától, a dózistervtők az adjuváns hatékonysága a vakeínálandö fajban, és emberekben, a beadás módja az, amit jóváhagytak, vagy amit a megfelelő szabályozó testületek jóváhagyhatnak emberekhez való beadás tő embereknek való beadáshoz. A tinisót, az MPL-t és a QS21-et részesítjük előnyben. Adott esetben két vagy több különböző adjuvánst lehet egyszerre alkalmazni. Az előnyben részesített kombinációk közé tartozik a timsö· az MPL-lel, a timsö a QS21-gyel, az MPL a QS21-gyel, és a timsö, a QS21 és az MPL együtt. Emellett használható az Inkomplett Freund féle adjuváns [Chang és mtsai; Advanced Drug Delivery Reviews 32, 173-136 (1998)1, adott esetben timsőval, QS21-gyel és MPL-lel, vagy ezeknek bármilyen kombinációjával kombinálva.
A találmány szerint ágenseket gyakran gyógyászati készítmények. formájában adjuk he, amik egy aktív terápiás ágenst tartalmaznak, azaz például számos más gyógyászatilag elfogadható komponenst [Remington’s Pharmaceutieal Sciences, 15. kiadás.
Ma.ek Pnhtishing Company, Boston, Pennsylvania (1930)]. Áz előnyben részesített forrna függ a beadás szándékolt módjától, és a terápiás alkalmazástól. A készítmények emellett tartalmazhatnak, a kívánt formulától függően, gyógyászatilag elfogadható, nem-toxikus hordozókat vagy higítőszerekef, amik olyan, általánosan használt hordozóként vannak definiálva, amiket állatokφ * χΦ >χ, V vagy embereknek vaio neadasnoz készített gyógyászán készítmények kiszerelésénél használnak. A higítószert úgy választják meg, hogy ne befolyásolja a kombináció' biológiai aktivitását. Az ilyen liígítószerek közé tartozik például a desztillált víz, a fiziológiás foszfáttal pufferek sóoldat, a Ringer oldatok, a szőlőcukor oldat és a Hank oldat; Emellett a vagy formula tartalmazhat más 1 atoxikus, nem-terápiás, nem immunogén stabilizálőszereket és hasonlókat. Azonban néhány, az állatoknak való beadásra alkalmas reagens, azaz például a Komplett Freund féle adjuváns általában nem képezi a humán felhasználásra szánt készítményeknek.
vagy
A gyógyászati készítmények tartalmazhatnak nagy, lassaxi :, azaz például fehérjéket, pofiej savadat , poügiikolsavakat és kopolimereket (azaz például latexszel fonfccionalizált Sepharose, agaróz, cellulóz, és hasonlók), polimer aminosavakat, aminosav és lipíd aggregátumokat (azaz például olajcseppeket szómákat). Emellett, ezek a hordozók immunserkentő ágensekként is működhetnek (azaz például adjuváns).
A parenterális beadáshoz a találmány szerinti ágenseket beadhatjuk az anyag fiziológiásán elfogadható higfiőszerben készült oldatának vagy szuszpenziójának injekciózható dózisai formájában, egy olyan gyógyászati hordozóval együtt, ami lehet folyadék, mint például víz, olajok, sóoldat, glicerin vagy φφ φφ φ φφ
etanol. Emellett kiegészítő anyagok, azaz például nedvesítő vagy emulgeálö ágensek, felületaktív anyagok, pH-t pufferelő· anyagok és hasonlók ís jelen lehetnek a készítményekben, A gyógyászati készítmények más komponensei közé tartozik például a petróleum, az állati-, növényi- vagy szintetikus eredetű olaj, például mogyoróolaj:, szójaolaj és ásványolaj, Általában a glikolok, azaz például a propiléngiikol vagy a polietilénglíkoi az előnyben részesített folyékony hordozók, különösen az injekciózható oldatoknál.
A készítményeket általában injekciózható, vagy folyékony oldatok vagy szuszpenzíők formájában készítik el; a folyékony hordozókban az injekciözás előtt feloldható vagy szuszpendálhatőszilárd formák is készíthetők, A készítmény emulgeálhatö vagy liposzómákban, vagy mikrorészecskékben kapszulázható is, mint például polílaktídban, políglikolídban vagy a fokozott adjuváns hatáshoz készített kopolímerben (Langer: Science 249, 1527 (1990); Hanes: Advanced Drug Delivery Reviews 28, 97-119 (1997)}. A jelen találmány szerinti ágenseket, beadhatjuk depó injekció vagy implantáíum készítmény formájában, ami oly módon formulázhatő, hogy lehetővé tegye az aktív adalékanyag hosszan
A másféle beadáshoz alkalmas további készítmények közé tartoznak az orális, íntranazális és pulmonáris készítmények, kúpok és Íranszdermáiis alkalmazások,
A kúpokhoz használt kötőanyagok és hordozok közé tartoznak például a polialkilén glikolok vagy a triglicerídek; az Ilyen » *\.ν
Φ φ
X Φ X * kúpokat olyan keverékekből készíthetjük. el, .amik az aktív adalékanyagot 9,5-10% mennyiségben tartalmazzák, előnyösen 12%-ban. Az orális készítményekben levő töltőanyagok közé tartozik a gyógyszerészeti, minőségű mannit, Íaktóz, keményítő, magnézíum-sztearát, nátrium-szaccharinát, cellulóz és magnézium-karbonát. Ezeknek a készítményeknek a formája lehet oldat, szuszpenziő, tabletta, pirulák, kapszulák, hosszan tartó felszabadulást biztosító formulák vagy porok, és az aktív adalékanyagból 10-95%-ot, előnyösen 25-?0%-oí tartalmaznak.
A topíkális alkalmazások transzdermális vagy íntradermálís bejuttatást eredményeznek. A topíkális alkalmazást megkonnyíthetjük, ha az ágenst, együtt adjuk be koleratoxmnal. vagy annak detösdkált származékával vagy alegységével, vagy más hasonló bakteriális toxinnal [Glenn és mtsai: Natúré 391, 851 (1998)]. Az együtt történő beadást ügy hajthatjuk végre, hogy a komponenseket keverékként vagy kezelt molekulaként használjuk, amely utóbbiakat kémiai kereszlkötésekkel, vagy fúziós fehérjeként való expresszíőval kapjuk.
Egy másik változat szerint a. transzdermális bejuttatást bőrtapasszal vagy transzferoszőmákkal lehet elérni (Paul és mtsai: Eur. J. Immunot 25, 3521.-3524 (1995).; Cevc és mtsaí: Biochimiea et Biophysiea Ácta 1368, 201-215 (1998)].
A találmány tárgyát képezik azok az eljárások, amikkel egy A8 peptid elleni immunválaszt lehet kimutatni, egy olyan betegben, aki Álzheimer kórban szenved, vagy érzékeny erre a *:♦.*·* ♦
Φ * φ <
»>«ν» *
Φ*« <ί
ΧΦ»
Φ X
betegségre. Az eljárások különösen jól használhatók arra, hogy egy kezelést kapott betegnél kövessük: a kezelés lefolyását Az
tésére tünetekkel zelések hatásának követésére tünetmentes betegeknél
Néhány módszer magában foglalja egy alapértéknek a meghatározását egy betegben, mielőtt az ágens első dózisát megkapja, majd ezt az értéket hasonlítják a kezelés után kapott immunválaszhoz. Egy szignifikáns növekedés (azaz nagyobb, mint ugyanannak a mintának ismételt megmérésénél kapott kísérleti hiba, az ilyen mérések átlagából számított standard deviációban kifejezve) az immunválasz jelekben pozitív kezelési eredményre utal (azaz az ágens beadása kiváltott, vagy fokozott egy ímmunválaszt). Ha az immunválasz nagysága nem változik szignifikánsan, vagy éppen csökken, akkor ez negatív kezelési eredményre utal. Általában, azoktól a betegekéi, akik egy ágenssel végzett kezelés kezdetén vannak, az várható, hogy az immunválasz növekedését mutassák az egymást követő dózisok hatására, ami végül természetesen egy platót ér el. Az ágens beadása, általában az immunvg annak a jele, hogy a kezelés megszakítható, vagy csökkenthető a dózisa vagy gyakorisága.
Más módszerekben az immunválasz egy kontroll értékét (azaz az átlag plusz standard deviáció) határozzuk meg egy kontroll populációban. Áz egyebek a kontroll populációban általában * fr V * * φ φ ».
ν * ΦΦ#<ν Φ V ·
¢., * Φ ’4W' ''
Φ «I» nem kaptak előzetes kezelést. Az immunválasz mért értékeit egy betegben egy terápiás ágens beadása után összehasonlítjuk a kontroll értékkel. A kontroll értékhez viszonyított szignifikáns növekedés (azaz nagyobb mint az átlaghoz viszonyított egy standard deviáció) pozitív kezelési eredményre utal. A szignifikáns növekedés hiánya, vagy a csökkenő jel negatív kezelési eredményre utal. Az ágens beadását általában addig folytatjuk, amig az immunválasz a kontroll értékhez viszonyítva nő. Ugyanúgy mint az előzőkben, a kontroll értékekhez viszonyítva, egy platónak az elérése annak a jele, hogy a kezelést (a hatóanyag, beadásás) abba lehet hagyni, vagy a dózist vagy a gyakoriságot csökkenteni lehet.
Más eljárások szerint az immunválasz kontroll értékét (azaz az átlag és a standard deviáció) olyan egyedek kontroli populácikezelésen, és akiknek az. immunválasza a kezelésre adott válaszként elért egy platót. A betegekben mért immunválaszt hasonlítjuk össze a kontroll értékkel Ha egy betegben a mért érték nem tér el szignifikánsan (azaz több mint egy standard deviációval) a betegben a színt szignifikánsan a kontroll érték alatt van, akkor az ágens további beadását érdemes folytatni. Ha a betegben mért érték folyamatosan a kontroll érték alatt van, akkor ez a kezelés módjának megváltoztatását, például egy más adjuváns hasz·· nálatát teheti szükségessé.
»**S ϊ fr fc «.
·%. » fcfc*fc frv * fc:*«* Vy-v. *
Ífcfc ·* fc fc ' fcfcf W
Más módszerekben egy betegben, áld jelenleg nem kap kezelést, de korábban átesett egy kezelésen, követjük az immunválaszt, annak meghatározására, hogy szükség van-e a kezelés újrakezdésére. A betegben mért immunválasz értékét hasonlíthatjuk össze egy olyan immunválasz értékkel, amit korábban mértünk egy *öen, egy korábbi kezelés után. A .méréshez viszonyított szignifikáns csökkenés (azaz ami nagyobb, mint mint ugyanannak a mintának ismételt mérésével kapott hibahatár) arra utal, hogy a kezelést folytatni lehet. Egy másik változat szerint az egy betegben, mért értéket hasonlíthatjuk össze egy kontroll értékkel (átlag plusz standard deviáció), amit egy olyan betegpopulációban határoztunk meg,, amelyik már átesett egy kezelésen. Egy másik változat szerint az egy betegben mért érték hasonlítható össze olyan kontroll populációkban mért értékkel, amelyekben a profilaktikusan kezelt betegek tünetmentesek maradtak, vagy olyan populációkban, amelyekben a terápiásán kezelt betegek a betegség jellemzőinek enyhülését mutatják. Az összes ilyen esetben a kontroll szinthez viszonyított szignifikáns csökkenés (azaz a standard deviációnál nagyobb) azt mutatja, hogy a kezelést újra lehetne kezdeni egy betegben.
Az elemzéshez használt minta tipikus esetben a betegből származó vér, plazma, szérum, nyálka vágj’ gerincfolyadék. A mintát abból a szempontból vizsgáljuk,, hogy mutat-e immunválaszt az AS peptid bármelyik formájára, tipikus esetben az AS42re. Az immunválaszt például olyan ellenanyagokból vagy T-sejíekből határozhatjuk meg, amik specifikusan kötődnek az Áíé k « « Φ pepiidhez. Az AB-ra specifikus ellenanyagok kimutatására szol módszereket a Példák között ismertetjük. A reakciómódszereit az előzőkben ismertettük ;s T-sejtek ki (lásd a meghatározásokat)
A találmány tárgyát képezik továbbá a diagnosztikai kitek, amikkel az előzőkben ismertetett diagnosztikai módszereket végre lehet hajtani. Tipikus esetben egy ilyen kit egv olyan ágenst tartalmaz, amely specifikusan kötődik az AB elleni ellenanyagokhoz, vagy reagál az AB-ra specifikus T-sejtekkel. A kit emellett tartalmazhat egy jelölést is. Az AB elleni ellenanyagok kimutatására a jelölés tipikus esetben jelzett anti-idiotípusos ellenanyag. Az ellenanyagok kimutatására az ágenst egy szilárd fázisra előre rákötve biztosíthatjuk, azaz például egy míkrotiter lemez lakaiba kötve. A reakcióképes T-sejtek kimutatására, a jelölést 3H-tÍmídin formájában biztosíthatjuk, hogy mérjük a szaporodási választ A kitek emellett általában tartalmaznak használati utasítást is a kitek felhasználásához. A jelölés emellett tartalmazhat a mért jelölés egy más kezelési raódből származó szintjeit mutató diagrammot, az AB-re specifikus ellenanyagok vagy az ÁB-val reagáló T-sejtek szintjeivel. A jelölés szakkifejezés bármely írott vagy rögzített anyagra vonatkozik, ami egy kithez van kapcsolva, vagy azt más módon kíséri, a gyártás, szállítás, eladás vagy használat során bármikor. A jelölés szakkifejezés például vonatkozik hirdetési nyomtatványokra és brossűrákra, csomagoló anyagokra, instrukciókra, audio- és videokazettákra, számítógépes lemezekre, valamint: a kitekre közvetlenül rányomtatott feliratokra.
L Az AB profilaktikus hatékonysága Alzheimer kór ellen
Ezekben a példákban leírjuk az AB4-2 peptid beadását az ΆΡΡ-1 tűlexpresszálö transzgenikus egerekbe, amely APP a 717es pozícióban mutációt tartalmaz (APP717V—>F), ezzel az egereket hajlamossá teszi az Alzheimer kór-szeré neuropatológiára. Ezeknek az egereknek (PDAPP egerek) az előállítását és jellemzőit a szakirodalomban ismertetik [Games és mtsai: .Natúré 373, 523 (1995)). Ezekben az állatokban, heterozigóta formájukban hathónapos koruktól kezdődően lerakódik az AS. Tizenöt hőnapos korukra az AB lerakódás olyan szintjét mutatják, ami ekvivalens az Alzheimer kórnál megfigyeltteh A PDAPP egereket aggregált AB42-vel (aggregált AS42) vagy foszfáttal, puffereit sóoldattal in jekciózzuk, Azért választottuk az AS42-t, mivel képes az AB tői epitopja ellen ellenanyagokat indukálni
Az egerek fórrá
Harminc PDAPP heterogén nőstény egeret véletlenszerűen a következő csoportokba osztjuk: lö egeret injekciózunk aggregált AS42~vel (az egyik szállítás közben elpusztult), 5 egeret PBS/adjuvánssal vagy PBS-sel injekciózunk, és 10 nem kap ínjel egemeK szerűm
adunk.
2. Az ímmunogének előállítása
Aggregéit AS42 előállítása: két milligramm A£>42~t (US Peptides Inc. K-42-12 sarzs) oldunk fel 0,9 ml vízben, majd 1 mire egészítjük ki, 0,1 ml IÖ*PBS hozzáadásával. Vortexeljük, majd éjszakán át 37 °C-on Ínkubáljuk, ezalatt a peptid aggregálódik, A fel nem használt AS-t a következő injekciózásig száraz liofilezett por formájában tároljuk -20 °C-on.
3. Az injekciók készítése /Íz első immunizáláshoz egerenként 100 pg aggregált AS42t 1:1 arányban Komplett Freund féle adjuvánssal (CPA) emulgeálunk PBS-hen, majd 2 hét elteltével ugyanilyen mennyiségű ímmunogéni adunk he erősítésként inkomplett Freund féle adjuvánsban (IFA). Az Inkompiett Freund féle adjutánsnak két további dózisát használjuk havonta. Az ezt követő ímmunizá50 siókat havonta, végezzük, 500 μΐ PBS-hen. Az injekciókat íntraperitoneálisan adjuk. he.
A PBS injekciókat ugyanezzel a rendszerrel adjuk be, és az egereket egerenként 400 td PBS/adjuváns 1:1 arányú keverékével injekciózzuk, vagy egerenként 5ÖÖ μΐ PBS-sel. Az SAP injekciók ugyanezt a rendszert követik , 1ÖG gg per injekció dózis használatával.
4. Az egér véreztetesek, szöveti készítmények és az immnnhísztokémía títrálása
A címben említett eljárásokat az Anyagok és Módszerek
B.
egereket egált AS42-vel (aggregált A&42), SAP peptidekkel vagy foszfáttal puüereit sóoldattai Injekciózunk. Egy ADPP egércsoportot nem injekciózunk, ez a pozitív kontroll. Az aggregált AB42-re mért litereket a. negyedik erősítő injekció után minden második hónapban monitorozzuk, amíg az egerek elérik az egyéves korukat. Az egereket 13 hónapos korukban leöljük. Az összes vizsgált időpontban a. kilenc aggregált A&42. egér közül nyolcban magas ellenanyag titer fejlődött ki, ami magas maradt az ínjekelösorozat ideje alatt (a titerek 1/IÖÖOÖ-né! nagyobbak). A kilencedik egérben alacsonyabb, bár még mérhető titer alakult ki (1/1.000) (1.. ábra, 1. táblázat). A SAPP-vei injekciózott egerekben a titer 1:1000 és 1:30000 között változott ezekre az immuno51 génekre nézve, és csak egyetlen egérben haladta meg az l:lÖÖÖO~et
A PBS-sel kezelt egereknek az AB42 elleni literét hat, tíz és tizenkét hónap elteltével határozzuk meg. 1 / 10Ö0-es hígításnál a PBS egerek literét, aggregált AÉ42-vel szemben meghatározva ez egy mérési pontban csak körülbelül négyszer volt magasabb mint a háttér, másképpen, az összes mérési pontban négyszeresnél kisebb volt (1. táblázat). Az SAP-specifilrus válasz elhanyagolható ezekben az időpontokban, az összes ther 300-nál kisebb volt.
Az aggregált. AB 1-42 csoportban kilenc egérből hétnek az nem volt kimutatható amíloid, Ezzel ellentétben az SAP és PBS csoportba tartozó egerek agyszövetében számos 3D6-pozitív amíloid lerakodás volt. található a hippocampushan, valamint a frontális és cínguláris kéregben. A lerakódás mintázata a kezeletlen kontroliéhoz hasonló volt, sebezhető alrégiók jellegzetes megjelenésével, azaz ilyen például a hippoeampus fogazott agytekérvényének külső molekuláris rétege. Az AB.1-42-vei injekciózott
id terhelés, a hippoeampusra korlátozva. Egy izolált tarfoltot lehetett azonosítani egy másik, AB 1 -42-vel kezelt egérben.
A hippocampushan megfigyelt amiloid terhelés mennyiségi képkiértékelése igazolta az ÁN 1792-vel kezelt állatoknál elért drasztikus csökkenést (2. ábra). A PBS csoport amíloid terhelésének átlagértéke (2,22%) es a kezeletlen kontroll csoport amiloíd terhelésének átlagértéke (2,65%) szignifikánsan nagyobb mint az
AN 1792-vel ímmunlzáltaké (0,00% ρ-Ο,ΟΟΟδ). Ezzel ellentétben az SAP peptidekkel (SAPP) immunizált csoport átlegértéke 5,74%. A kezeletlen, kontroll egerekből származó agyszövet számos amilóid lerakódást tartalmaz, amiket a hippooampusban és a rétrespleniális kéregben 3D6 AS~speeífikus monoklonális ellenanyaggal (mAfo) lehet láthatóvá tenni. Az amiioid lerakódás hasonló mintázata figyelhető meg SAPP-vel vagy PBS-sel kezelt egerekben (2. ábra). Emellett ez utóbbi csoportban az agynak a klasszikus Alzheimer kór klasszikusan megfigyelhető sebezhető alrégióinak a jellegzetes megjelenése figyelhető meg, azaz ilyen például a hippocampus fogazott agytekervényének külső molekuláris rétege, mind a három említett csoportban.
Azok az agyak, amik nem tartalmaztak AB lerakódásokat, a neuritíkus tartóitoktól is mentesek voltak, amik a PDAPP egerekben általában a humán 8E5 ellenanyaggal tehetők láthatóvá. Az összes többi csoportból (SAP-vel vagy PBS-sel injekciózott és a kezeletlen egerek) származó agyak számos olyan neuritíkus tarfoltot tartalmaztak, amik a kezeletlen PDAPP egerekre jellemzők. Kisszámú neuritíkus tarfolt volt található egy AN 1792-vel kezelt egérben, és disztröfiás neuritek egyetlen kiasztere volt található AN 1792-vel kezelt egerekben, A hippocampus képelemzése, amint az a 3. ábrán látható, a disztröfiás neuritek eltűnését mutatja az AN 1792-vel kezelt egerekben (átlag 0,00%), a PBS-sel kezelt recipiensekkel összehasonlítva (átlag 0,28% p-0,0005).
ί.
A tarfolthoz kapcsolódó gyulladásra jellemző asztrocitőzís sem volt megfigyelhető az AS 1 -42-vei injekciózott csoportban. A más csoportokba tartozó egerek agya bőségesen és klaszterekben tartalmaz GEAP-pozitív asztrocitákat,. amik az AS tarfolthoz kapcsolt gliözisra jellemzőek. A GFAP-pal reagáló lemezeknek egy alcsoportját Thiofiavin S-sel ellenfestjük, hogy lokalizáljuk az AB lerakódásokat, A GPAP-pozitív asztrocíták az SAP-pal, PBS-sel kezelt és a kezeletlen kontroll csoportban asszoclálődnak az Ah tarfoltokkal. Nem található ilyan asszociáció a tarfolt-negatív ASI-42.-vel kezelt egerekben, miközben minimális tarfolthoz kapcsolódó gliózist lehetett azonosítani egy, AN 1792-vel kezelt egérben.
A retrospleniáiis kéreg képelemzése, amint az a 4. ábrán látható, igazolta, hogy az asztrocitőzís csökkenése szignifikáns, egy 1,56%-os átíegértékkel az An 1792-vel kezelt csoportok esetében, míg az SAP peptídekkel immunizált, PBS-sel kezelt vagy kezeletlen csoportokban az átlagérték nagyobb volt mint 6% (p-0,0017).
Az AB 1-42-vel és PBS-sel injekciózott egerek alcsoportjából származó bizonyíték azt mutatta, hogy a tarfolthoz kapcsolódó MHC 11 immunreaktivitás nincs meg az ASI-42-vel kezelt egerekben, ami összhangban van egy AS-hez kapcsolódó gyulladásos válasz hiányával.
Az egéragyak metszetei az MAC-1-re, egy sejtfelszíni fehérjére specifikus mAb-vel is reagálnak. Az MAC I (CD 11b) az:
integrin család egy tagja, és a CD18-cal képezett heterodimer formájában létezik. A. CD llb/CDI8 komplex a monooítákon, makrofágokon, neutrofileken és természetes ölősejteken (Mák és Siniarcl) található meg. Az agyban a rezidens MAC-1 -gyei reagáló sejttípus valószínűleg egy mikroglía, az MAC-1-gyei immunológiaüag reagáló metszetek hasonló fenotípusós morfológiája alapján. A tarfolthoz kapcsolódó MAC I jelölés alacsonyabb az AN 1792-vei kezelt, egerek agyában, a PBS-sel kezelt kontroll csoportokkal összehasonlítva·, .ami összhangban van azzal, .hogy nincs Ab-val indukált gyulladásos válasz.
55:
C. Következtetések
Az Agd-42-veI injekciózott egerek agyában az AB tarfoltok hiánya és a reaktív neuronális és gliotikus változások azt .mutatják, hogy nincs, vagy csak nagyon kis mennyiségű az amilóid lerakódás az agyukban, és a patológiai következmények, azaz a glíózís és a neuntikus patológia, hiányoznak. Az AB 1-42vel kezelt PDAPP egerekben a. patológiának ugyanaz, a hiánya, látható mint a kontroll, nem-transzgenikus egerekben. Ennek következtében az AB 1-42 injekciók nagyon hatékonyak a humán AB agyszóvetben. való lerakódásának megelőzésében, vagy onnan való eltávolításában, és az ebből kővetkező neuronális és gyullatidek. beadásának terápiás előnye van az Alzheimer kór megelőzésében.
IL Dózis-hatás vizsgálatok
Öthetes, nőstény Swiss Webster egereket (N™6 per csoport) Immunizálunk 300, 100, 33, 11, 3,7, 1,2, 0,4 vagy 0,13 gg, CFA/IFA-ban kiszerelt AB-val, íniraperítoneálísan beadva. Kéthetente három dózist adtunk, majd egy hónappal később beadtunk egy negyediket ís. Az első dózist Komplett Freund féle adjavaussal emulgeáltuk, a többit ínkomplett Freund féle adjuvánssal emulgeáltuk. Az állatokat az egyes immunizálások után 4-7 nappal véreztettük, ezt a második dózis után kezdtük, az ellenanyag literek mérése céljából, A három alcsoportban levő, 11, 33 ♦ Ar * * *
ί.
vagy 300 pg antigénnel immunizált állatokat emellett a negyedik immunizálás után négy hónapig havonta véreztettük, hogy kövessük az ellenanyag válasz lecsengését a vakcina dózisok egy adott tartományában. Ezek az állatok a vizsgálat megkezdése után hét hónappal kaptak egy végső, ötödik immunizálást ís. Egy héttel később ezeket az állatokat leöltük, hogy mérjük az ANI 792-re adott ellenanyag válaszokat és toxikológiai elemzéseket végezzünk.
a két legals vaiasz v nem
í. Az g körülbelül 1:1000 3 dózis után és pg-ot tartalmazó dózis után (lásd 5. ábra) ítő 300-3,7 pg között, agos ellenanyag títer
4, 11Az ellenanyag literek a legkisebb dözlscsoport kivételével drasztikusan emelkedtek a harmadik immunizálás után, és a. GMT~k 5-szörösrőI 25-szörösre emelkedtek. Az alacsony ellenanyag válaszok még 0,4 gg recipiens esetében is kimutathatók voltak. Az 1,2 és 3,7 pg-os csoportok összehasonlítható literekkel rendelkeztek, és a GMT-k körülbelül IGOÖ-es értéket mutattak, és a négy legmagasabb dózis körülbelül 25,000-es GMT értékek negyedik immunizálás után a legtöbb csoportban a liter növekedése enyhébb volt. Világos dózis-válasz volt az alacsony antigén-dózisű csoportokban (0,14-11 pg), ami a nem kimutatható ellenanyagtól (0,15 pg-os reciplensek) a 36000-es GMT-ig terjedt a 11 pg-os reclpíenseknél. A négy legmagasabb dóziscsoport (11φ «
300 pg) literei ismét egy csoportba vehetők. Tehát két immunizálást követően az ellenanyag titer az antigén dózisától függ, a széles, 0,4-300 ug-os tartományban. A harmadik immunizálásra a négy legmagasabb dózis literei mind összehasonlíthatók voltak,
Egy hónappal a negyedik immunizálás után a literek 2-3szor magasabbak a 300 gg-os csoportban mint azok. amiket az immunizálás utáni ötödik napon vett vérből mértünk (6. ábra). Ez a megfigyelés azt sugallja, hogy az előző ellenanyag csúcs az immunizálás után több mint 5 nappal alakult ki. Ebben az időpontban egy sokkal enyhébb (50%-os) növekedés volt látható a 33 pg-os csoportban, A 300 pg-os dózisban az utolsó dózis után két hónappal a GMT-fc meredeken körülbelül 70%-ra csökkentek. Egy újabb hőnap elteltével a csökkenés kevésbé meredek volt 45%-nál (1ÖÖ ag) és körülbelül 14%-nál a 33 és 11 gg-os dózisban. Tehát a keringő ellenanyag literének csökkenési sebessége az immunizálás leállítása után kétfázisúnak tűnik, a válasz· csiícs után az első hónapban egy meredek csökkenéssel, amit a csökkenésnek egy' kisebb sebessége követ.
Az ellenanyag merek es a valasz kinetikája ezekben a Webster egerekben hasonlít a hasonló módon immunizált fiatal heterozigóta PDAPP egerekben találtakhoz. Az egy immunválasz indukciójában hatékony dózisok emberekben tipikus esetben hasonlítanak az egerekben hatékony dózisokra.
hatékonyság keresése kialakult Alzheímer kör
Ezt a vizsgálatot arra terveztük, hogy megvizsgáljuk az immunogén ágensek aktivitását idős állatokban az Alzhelmer kór neuropatológiai jellemzőinek leállításában vagy megfordításában. A 42 aminosavhól álló AS-vei (AN1792) végzett immunizálást abban az időpontban kezdtük, amikor az amiloid tarfoltok már jelen voltak a PDÁPF egerek agyában.
Az ebben a vizsgálatban használt kezelési módban a kezeletlen PDAPF egerekben számos olyan neurodegeneratív változás fejlődik ki, amik hasonlítanak az Alzheímer kórban találtakhoz fGames és mtsai: Natúré 373, 523 (1995); Johnson-Woods és mtsai: Proceedings of tbe National Academy of Sciences, USA 94, 1550-1555 (1997)]. Az AS amiloid tarfoltokba való lerakódása egy degeneratív neuronáiis válasszal van kapcsolatban, ami a. disztróhás neuritoknak nevezett aberrált axonálís és dendrites elemekkel áll kapcsolatban, Az amiloid lerakódásokat, amik disztrőfiás neuritokat tartalmaznak és azok is veszik körül, neuritikus tarfoltoknak nevezik. Mind az Alzhelmer kóros mind a PDAFP egérben a disztrőfiás neurítok egy megkülönböztető globulárís struktúrával rendelkeznek, és reagálnak az APP~t és a eítöszkeletális komponenseket felismerő ellenanyag-panellel, és komplex szubcelluláris degeneratív változásokat mutat ultrastruktúrális szinten. Ezek a jellemzők lehetővé teszik a neuritiS9 kus tarfolt képződésnek a betegséggel releváns, szelektív és remérését.
neuiiükus tarfoltok disztrohás neuronáfis komponense könnyen láthatóvá tehető a humán APPre specifikus ellenanyaggal (8E5 mAb), és könnyen mérhető számítógépes képelemzéssel· Emellett, .azon kívül, hogy mértük az ΑΝΊ792 hatásait az amiloid tarfolt képződésére, követtük ennek a kezelésnek a neuritikus öisztrőfia sa.it.
Az asztrocíták és a mikrogtía nem-neu,roná.lís sejtek, amik reagálnak a neuronális sérülésre és tükrözik annak mértékét. A GFAP-pozitív asztrocíták' és az MHC II-·pozitív mikroglia általánosan megfigyelhető az Alzheimer kórban, és aktiválásuk nő a betegség súlyosságával. Ennek következtében mértük a reaktív asztrocíták kifejlődését és a mikrogliözist az Ánl 792-vel kezelt
A, Anyagok és módszerek.
Negyvennyolc heterozígöta, 11-11,5 hónapos nőstény PDAPP egeret (a Charles River-től beszerezve) véletlenszerűen két csoportra osztunk; 24 egeret immunizálunk löö ug AN 1792-vel és 24 egeret immunizálunk PBS-sel, mindegyiket Freund féle adjutánssal kombinálva.. Az Ánl.792 és PBS csoportokat ismét kettéosztottuk, amikor körülbelül 15 hónaposak lettek. 15 hónapos korban az ÁN 1792-vel és PBS-sel kezelt állatoknak köί λλ ί (Ό rülbelül a felét eutanizáltuk (n=10 és 9), a megmaradtokat tovább immunizáltuk a körülbelül 18 hónapos korban való leülésig (n~9 és 12), Összesen 8 állat (5 AKI792, 3 PBS) pusztult el a vizsgálat során. Az immunizált állatok mellett egyéves (n=lÖ), 15 hónapos (n=lÖ) és 18 hónapos m=löj kezeletlen PDAPP egereket is bevettünk a vizsgálatba, az ELISA. mérésekben való összehasonlítás céljából, amikben az agy A.S és APP színijeit mérjük; az egyéves állatokat is bevettük az immunhísztokémiai elemzésekbe.
Az eljárás ugyanaz mint amit az 1. eljárásban használunk, hacsak külön nem jelezzük az eltérést. Az AN 1792-nek az US Peptid es 12-es sarzsát és a Californía Peptídes MEÖ339 sarzsát használjuk a hat immunizáláshoz használt antigén előállításához, amit a 15 hónapos időpont előtt végzünk. A Calífornia Peptídes ME0399 és MBÖ439 sarzsait használjuk három további immunizáláshoz, a 15. és 1.8. hónap között elvégezve,
Az immunizálásokhoz löö pg ÁN1792-1 PBS-hem vagy csak PBS-t emulgeálunk Komplett Freund féle adjuvánsban (CFA), 1:1 térfogatarányban, vagy Inkompíett Freund féle adjuvánsban (IFA), vagy csak PBS-t használunk. 4ÖÖ pl végtérfogatban. Az első immunizálást Komplett Freund féle adjuvánssal végezzük, a következő négy dózist Inkompíett Freund féle adjuvánssal végezzük, és a végső négy dózist csak PBS-sel, hozzáadott a.djuváns nélkül, összesen kilenc immunizálást végzünk a héthónapos időtartam alatt, az első három dózist kéthetenként
♦ *
Φ Φ X φ X Φ' * φ Φ > φ * alkalmazva, majd a megmaradt injekciókat négyhetente adjuk be. A «egyhónapos kezelési csoport, amit 15 hónapos korában eutanizáltunk, csak az első hat immunizálást kapta meg.
Eredmények
Az AN1702 hatásai az amiloid terhelésre
Az AN1792 kezelésnek a kortikális amiloid terhelésre gyakorolt hatását kvantitatív képelemzéssel határozzuk meg, az eredmények a 7. ábrán láthatók. A kortikális amiloid terhelés átlagértéke 0.28% volt egy kezeletlen, 12 hónapos PDAPP egércsoportban, amely érték a tarfolt terhelést mutatja, az egerekben a vizsgalat megkezdésekor, 1.8 hónapos korra az amiloid terhelés 17-szeresére nőtt (4,87%) a PBS-sel kezelt egerekben, mig az AN 1792-vei kezelt egerekben nagymértékben lecsökkent az amilóid terhelés (0,01%, azaz lényegesen kevesebb mint a 12 hónapos kezeletlen csoportban és a 15, valamint 18 hónapos PBS-sel kezelt csoportban). Az amiloid terhelés lényegesen lecsökkent az AN 1792-t kapó állatokban, mind a 15 hónapos (96%-os csökkenés; p”0,003), mind a 18 hónapos (>99%~os p::::0,0002) állatokban.
esetben a kortlkoid amiloid lerakódás a PDAPP egerekben a frontális és retrospleniális kortexekben (RSC) iniciálódik, és ventrális-lat orális irányban halad előre, magába foglalva a temporáiís és entorinálís körtereket (EC) is. Nincs, vagy nagyon *Φ o w *Φ,Φ * « X Φ < * V * φ φ. φ φ * φ φ * * * kevés amiloid található a 12 hónapos egerek EC-jében, ez az a hozzávetőleges kor, amiben az AN 1792-t először beadjuk.
Nésyhó-napos ANI792 kezelés után az amiloid lerakódás nagymértékben lecsökken az RSC-hen, és az EC progresszív involválódását teljesen elimmálja az ÁN'1.792 kezelés. Ez utóbbi megfigyelés azt mutatja, hogy az ΑΝ1792 teljesen leállítja az amiloid kifejlődését, ami normális esetben behatol a temporális és ventrális kortexekhe, valamint leállítja és esetleg visszafordítja a lerakódást az RSC-ben.
Áz ΑΝ 1792 kezelés mélyreható- hatásait, a kifejlődő kortikális amiloid terhelésre a PDAPP egerekben tovább demonstrálja a 18 hónapos csoport, amit hét hónapig kezeltünk. Az AN 1792-vel kezelt egerekben a kortikális amiloid majdnem teljes hiánya figyelhető meg, a diffúz tarfoltok teljesen hiányoznak, valamint csökken, a kompakt lerakódások száma.
2. Az ÁN.I792 kezeléshez kapcsolódó celluláris és morfológiai változások
Az AB-pözidv sejtek populációját meg lehet találni azokban az agyi régiókban, amik tipikusan amiloid lerakódásokat tartalmaznak. Megjegyzendő, hogy az AN 1792 recipíensek közöl száaz agj nincs, vagy nagyon kevés amiloid tarfolt volt található.
mi gy az AIS immunre vitás részé nagy Jtooulans vagy csomos somaren63 <fcfc κ ν'»**
ÍV « >
fc φ K £·»« fc
4, fc V 9 9 ** reagamak: egy olyan.
delkező sejtekben van. Fenotipusosan ezek a sejtek az aktivált mikrogüára vagy monoeitákra hasonlítanak. Ezek olyan ellenanyagokkal reagálnak, amik az aktivált monociták és mikroglia által expresszált. ligandiunokat ismerik fel (MHC II és CDX Ib), majd adott alkalmanként a vérerek belső falához kapcsolódnak. Az AS- és MHC H-specifikus ellenanyagokkal jelzett közel szomszédos szekciók összehasonlításából kiderült, hogy ezeknek a sejteknek hasonló mintázatát ismeri fel az ellenanyagoknak mindkét osztálya. Az AH 1792-vel kezelt agyak részletes vizsgálatából kiderült, hogy az MHC Π-pozitív sejtek az ezekben az állatokban megmaradt. korlátozott árollóid szomszédságára korlátozódnak. A használt fixálási körülmények között a sejtek nem reagálnak immünológiailag azokkal az ellenanyagokkal, amik felismerik a T-sejt (CDS, CD3e) vagy B-sejt (CD45RA, CD45RB) vagy a lenkocita általános antigént (CD45), de 'lenanyaggal, ami felismeri a leukosialint (C.D43), and keresztreakciót ad a monoeitákkal. Egyik PBS-sel :zelt egérben sem χ&>· egerek mindig erős amiloíd lerakódást fejlesztenek ki a hippocampus fogazott agytekervényének külső molekuláris rétegében, A lerakódás egy elütő sávot alkot a perforációs pályán, egy olyan szubrégíóban, ami klasszikus esetben amiloíd tarfoltokat tartalmaz az Alzheimer kór esetében. Ezeknek a lerakódásoknak a jellegzetes megjelenése a PBS-sel kezelt egerekben arra emlékeztet, amit. korábban jellemeztünk a kezeletlen egerekben. Az amiloíd lerakódás mind diffúz, mind kompakt tarfol tokai tar64
kezelt egerek közül számosnak az agyában ez a mintázat drasztikusan megváltozott. Az amiloid lerakódás a híppocampusban többé nem tartalmazott difiúz amíloidot, és a csíkos mintázat teljesen megszűnt. Ehelyett számos különböző pontszerű struktúra volt jelen, amik reagáltak az anti-AB ellenanyagokkal, és ezk közül számos amíloidot tartalmazó sejtnek bizonyult.
Az MHC II-pozitiv sejtek gyakran, megfigyelhetők az AN 1.792-vei kezelt állatokben az extracelluláris amiloid szomszédságában. Az AB-pozitív sejtek amiloiddal való asszociációjának a mintázata nagyon hasonló számos, AN1792-vel kezelt egér agyában. Ezeknek a monocita sejteknek az eloszlása a lerakódott amiloid szomszédságára korlátozódott, és teljesen hiányzott más, az AB tartóitokat nem tartalmazó agyrégiókból.
Az MHC II-vei és MAC I-gyel jelzett szekciók kvantitatív hogy az AN 1792-vel kezelt egerekben és a híppocampusban, a PBS csoporttal összehasonlítva, ami a MAC 1 reaktivitásnak a hippocampnsban való mérésével ért el szignifikáns szintet.
Ezek az eredmények az amiloid aktív, sejtek által közvetített eltávolítására utalnak a tarfblt-hordozó agyrégiókból.
2. Az ΆΝΙ792 hatásai az AS szintekre: ELISÁ. meghatározások *·**! 2 (a) Kordkoíd szintek
Kezeletlen PDAPP egerekben az össz-AS átlagos szintje a kéregben 12 hónap elteltével 1,600 ng/g volt, ami 8700 ng/g-ra emelkedett 15 hónap elteltével (2. Táblázat). 18 hónap elteltével az érték 22,000 ng/g volt, ami a kísérlet ideje alatt megtörtént tízszeres növekedést jelent. A PBS-sel kezelt állatokban az ossz65 * * $«« * «, ««;* $* *
φ* χ ·\
AB mennyisége 8600 ng/g volt 15 hónap elteltével, ami a. 18. hónapra 19000 ng/g-ra nőtt. Ezzel ellentétben az An 1792-vel kezelt állatokban az ossz· AB mennyisége 15 hónap elteltével 81%-kal: kevesebb volt az ossz-AB (1600 ng/g) mint a PBS-sel immunizált csoportban. 18 hőnap elteltével szignifikánsan kevesebb (p”ö,0ööl) ossz-AB (5200 ng/g} volt található, amikor az AN1792-vel és a PBS-sel kezeit csoportokat hasonlítottuk össze (2. Táblázat), ami az AB egyébként jelenlevő mennyiségének 72%~ os csökkenését jelenti. Hasonló eredményeket kaptunk, araikor az AB42 kortikális szintjeit hasonlítottuk össze, nevezetesen azt, hogy az Anl792-vel kezelt csoport sokkal kevesebb Anl792-t tartalmazott, de ebben az esetben az AN 1792-vel és a PBS-sel kezel csoportok között a különbség szignifikáns volt 15 hónap (p-0,04) és 18 hónap (p-0,001) elteltével (2. Táblázat).
* φ W ™ « « V « X 9 4 X ♦ ♦ * * V
9 * ♦ > * ** * * *
2. Táblázat
Átlagos ÁB szintek (ng/g) a kortexben
Kezeletlen BBS AM1792
| Kor 12 | Öss?.-A£ 1600 Λ.Β42 1300 (n) {iO) Össz-AB AB42 ; Össz-AS AB42 (n)
15 | S700 S 3300 (10) 8600 7200 (9) | 1600 1300* (10)
IS j 22200 13500 (10) 19000 15900 (12) 5200** 4000** (9)
*p~ö,Ö4I2 **p=0,0Ö01 s szintek
A kezeletlen PDAPP egerekben az össz-AB közepes hippoeampus szintje tizenkét bőnapos korukban 15000 ng/g. volt, ami 51 OCX) ng/g-ra nőtt 15 hónap elteltével, majd 18 hónap elteltével 81000 ng/g-ra nőtt (3. táblázat). Hasonlóképpen, a PBS-sel immunizált egerek 40000- ng/g Illetve 65000 ng/g értéket mutattak 15 illetve 13 hónap elteltével. Az AN!792-vei immunizált állatokban kevesebb össz-AB volt, azaz 25000 ng/g illetve 51000 ng/g a megfelelő 15 hónap illetve 18 hónap elteltével. Az AN 1792 vei csoport 18 hónapos értéke szignifikánsan alacsonyabb volt mint a PBS-sel kezelt csoporté (p~ö,01.05; 3. táblázat). Az AS42 mérése ugyanilyen jellegű eredményeket adott, nevezetesen azt.
6?
hogy a 18 hónapos kiértékelésnél az AN 1792-vei kezelt csoportokban a szintek szignifikánsan alacsonyabbak voltak mint a PBS csoportban (39ÖÖÖ ng/g az 57ÖÖÖ ng/g-mal szemben; p=0,0022) (3, Táblázat).
Átlagos A.S szintek (ng/gj a hippocampushan
Kezeletlen PBS AN1792
Kor Ϊ ί Őssk-AS AB42 in) 7- | Össz-AS- AB42 ín) Össz-AS AB42
12 15500 111Ö0 {101 | 1
15 I 52500 44400 OO) 40100 35700 (9) 1 125400 22100 {10}
18 80800 64200 po; 65400 57100 (22) 50900* 38900** (9)
M-0 Π105 fcp=0,öö22 (ej Kísagyi szintek
A 12 hónapos kezeletlen PDAPP egerekben az ossz-Ah közepes kisagya szintje 15 ng/g volt (4. táblázat). 15 hónap elteltével ez az átlagérték 28 ng/g-ra változott és 18 hónap elteltével 35 ng/g-ra nőtt. A PBS-sel kezelt állatok össz-AS értékeinek átlaga 15 hónap elteltével 21 ng/g volt, míg 18 hónap elteltével ng/g volt. Az AN 1792-vel kezelt állatokról kiderült, hogy az ossz-AB színijük 15 hónap elteltével 22 ng/g volt, és szignifikánsan kevesebb (p-0,002} volt 13 hónap elteltével (25 ng/g), mint a megfelelő PBS csoportban (4. táblázat).
Átlagos AB szintek íng/g) a kortexben
Kezeletlei i PBS AN1792
Kor (hónap) Össz-AB (n) 1 össz~AB (n) | Össz-AB i R I
12 15,6 (10) i 5 1
15 27,7 (10) 20,8 (9) 1 21,7 (10) |
18 35,0 (10) 1 43,1 (12) | 24,8*
*p:::0,0018
4. Az AN 1792 kezelés hatásai az APP szintekre
Az APP-alía és a teljes hosszúságú APP molekula is tartalmazza az AB szekvenciát vagy annak egy részét, és így potenciálisan érinti az AN 1792-vel vezérelt immunválasz generálása, Az eddig végzett vizsgálatokban az APP szintek enyhe növekedését figyelték meg, ahogy a neuropatoiógia fokozódik a PDAPP egerekben. A .körtedben az APP-alfa/PL (teljes hosszúságú) vagy az APPalla szintjei nem változtak a kezelés hatására, azzal a kivételiét hogy az APP-alfa 19%-kal csökkent 18 hónap elteltével, az AN 1792-vel kezelt csoportot a PBS-sel. kezelt csoporttal összehasonlítva.. A 18 hónapos AN1792 kezeléssel kapott APP értékek nem tértek el szignifikánsan a 12 hónapos és a 15 hónapos kezeletlen és 15 hónapos PBS kezelést kapott csoportban. Mindegyik esetben, az APP értékek a PDAPP egerekben normális körülmények között talált tartományban maradtak.
Az AN1792 kezelés hatásai a. neurodegeneratív és gliotikus patológiára
A neurotikus tarfolt téri szignifikánsan lecsökkent az egerek frontális kertedében a PBS-sel csoporttal összehasonlítva, mind 15 hónapos (84%; p~0,03) mind. a 18 hónapos (55%; p™ö,Ö !) korban (8. ábra). A neuritikus tarfolt terhelés átlagértéke 0,32%-ról 0,49%-ra nőtt a PBS csoportban, a zel áll szemben a neuritikus ; kifejlődése az AN1792 csoportban, is tarfolt terhelés értéke 0,05% illetve és 18 tarfoltok erősen lecsökkent amiben az átlagos neuritik 0,22% a 15 illetve 18 hónapos
Az AN 1.792-vei végzett ímmunízácíókat láthatóan jól tolerálták és a reaktív asztrocitőzís ís szignifikánsan lecsökkent az
RSC-be.n az ΑΝ1792-vel kezelt egereknél, a PBS-sel kezelt csoporttal összehasoniitva mind a 15 (56%, p-0,011) mind a 18 (39%; p-0,028) hónapos korban (9. ábra). Az asztrocítózls százalékának átlagértékei a PBS-sel kezelt csoportban 15 és 18 hónap között 4,26%-ról 5,21%-ra nőttek. Az ANI792 kezelés mindkét időpontban elnyomta az asztrocitőzls kifejlődését, 189%-ra illetve 3,2%-ra. Ez azt sugallja., hogy a neuropilt nem károsította a
6, Ellenanyag válaszok
Amint azt az előzőkben ismertettük, tizenegy hónapos, heterozigóta PDAPP egerek (N-24) 5 immunizálás-sorozatot kaptak 100 pg ANI792-vei, amit Freund féle adjuvánssal emulgeáltunk, majd intraperitoneálisan adtunk be a 0, 2., 4., 8, és 12. héten, majd a hatodik immunizálást csak PBS-sel (Freund féle adjuváns nélkül) a 16. héten. Negatív kontrollként 24, azonos korú transzgenikns egeret immunizáltunk PBS-sel, ugyanazokkal az adjuvánsokkal emuigeálva, majd azonos rend szerint beadva. Az állatokat az egyes immunizálások után három-hét napon belül véreztettük, a második dózis beadása után. Az Anl792-re adott ellenanyag válaszokat ELISA-val mérjük. Áz Ani792-vel immunizált állatok literének geometriai átlaga (GMT) 1900, 7600 és 45000 volt a második, harmadik és az utolsó (hatodik) dózis után. A hatodik immunizálás után a kontroll állatokban nem volt mérhető Ab-speeibkus ellenanyag.
« φ
Az állatoknak körülbelül a felét további három hónapig kezeltük, amik körülbelül 20, 24 és 27 hétig kaptak immunizálást. Mindegyik dózist csak PBS-ben adtuk be, Preund féle adjuváns nélkül. Ez alatt az idő alatt az átlagos ellenanyag literek változatlanok maradtak, A tény az, hogy az ellenanyag literek stabilnak tűntek a negyedik és a nyolcadik végeztetés között, ami megfelel az ötödik és kilencedik injekciók közötti időszaknak.
Annak meghatározására, hogy az immunizálással kiváltott AB-speeíükus ellenanyagok, amiket az An 1792-vel kezelt egerek szérumában lehetett kimutatni szintén kapcsolódnak-e a lerakodott agyi am Holdhoz, az An 1792-vel és PBS-sel kezelt egerek metszeteinek egy alcsoportját az egér IgG-re specifikus ellenanyaggal reagáltattuk. A PBS csoporttal ellentétben, az Anl792vel kezelt agyakban az AB tarfoltokat endogén IgG borította. Ez a különbség a két csoport között mind a 15 hónapos, mind a 18 hónapos megfigyelhető volt. Különösen meglepő volt a jelölés hiánya a PBS csoportban annak ellenére, hogy ezekben az egerekben .nagyon erős volt az amiioid terhelés. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a szintetikus AB fehérjével végzett immunizálás ellenanyagokat generál, amik felismerik és In vivő kötődnek az AB-hoz az amiioid tartóitokban.
7.
Sejtek által közvetített immunválaszok < * .s.
Kilenc ΑΝ 1792-vel immunizált és 12 PBS-sel immunizált., 18 hónapos PDAPP egérből eltávolítjuk a lépőket a kilencedik immunizálás után kilenc napnak Szplenocitákat izolálunk ,majd 72 rendű fehérje) jelenlétében, A Con A mitogén szolgál pozitív kontrollként. Az optimum válaszokat >1,7 gmol/l fehérjével kaptuk. Mind a kilenc An 1792-vel kezelt állatból származó sejtek szaporodtak az AS1-4Ö vagj? az AB 1-42 fehérjére adott válaszként, mindkét fehérjét azonos szixiten beépítve (lö. ábra, felső panel).
állatokból származó sejtek nem reagáltak egyik AB fehérjére sem
C. Következtetések
Ennek, a vizsgálatnak az eredményei azt mutatják, hogy a létező amiloíd lerakódásokat hordozó PDAPP egerek AN1792-vel való immunizálása lelassítja és megelőzi a praresszív amiloíd lerakódást, majd késlelteti az abból következő neuropatoiógiai változásokat a koros PDAPP egerek, agyában. Az AN 1792-vel végzett immunízácíó lényegében leállítja az amiloíd fejlődését azokban a struktúrákban, amik normális esetben megadják magukat az amílöídőzisnak. Tehát az AB peptid beadásának megvan a terápiás előnye az Aizheímer kór kezelésében.
IV._________Az AB fragmensek szűrővizsgálata löö, 911 hónapos PDAPP egeret immunizálunk az APP és az AB kilenc különböző régiójával, annak meghatározása cljáből, hogy mely régiók felelősek a válaszért. A 9 különböző immunogént és egy kontrollt injekciózunk intraperitoneálísan, az előzőkben ismertetett módon. Az immunogének közé tartozik négy humán AB peptid konjugátum, az 1-12, 13-28, 32-42 és az 1-5, mindegyik birka antí-egér IgG-hez konjugálva egy cisztein. hídon keresztül; egy APP polipeptid, ami az 592-695-ös amínosavakat tartalmazza; az aggregált humán AB 1-40, és az aggregált humán AB 25-35, valamint az aggregált rágcsáló AB42. Az aggregált AB42-t és a PBS-t használjuk kontroliként. Kezelési csoportonként tíz egeret használunk. A litereket az előzőkben ismertetett módon követjük, majd az egereket az injekciók négy hónapjának a végén eutanizáljuk, A hisztokémiai, az AB szinteket és a toxikológiát post m őriem határozzuk meg.
A. Anyagok és módszerek
1. Az immunogének készítése
AB peptidek készítése: négy humán AB konjugátumot (1-5-ős, 1-12-es, 13-28-as és 13-42-es, mindegyik birka antí-egér IgG-vel konjugálva) készítünk, ügy, hogy egy, az AB pepiidhez adott mesterséges risztemen keresztül kapcsoljuk, a szulfo-EMCS keresztkötési reagens alkalmazásával. Az AB pép74 cat az alaom végső aunnosav szeKvenciaxxai szintetizáljuk meg. Mindegyik esetben a beszúrt cisztein csoportot aláhúzással jelezzük. Az AS13-28 peptid származék is rendelkezik két glicin csoporttal amiket korábban a C-íennináiis ciszlemhez adunk hozzá., a jelzett mádon.
AB 1-5 peptid NH2-DAEFRC COOH
AS33-42 peptid ΝΉ'2-C -aminoGGWIA COOH
AB 13-28
-HHQKLVFFAEDVGSNKGGC-COOH
A kapcsolási reakció elkészítéséhez 10 mg birka anti-egér IgG-t {daekson ImmunoResearch Laboratories) dlalizálunk éjszakán át lö mmol/1 nátrium-borát pufíerrel szemben {pH~8,5). A dializált ellenanyagot azután 2 ml-es térfogatra koncentráljuk. Arnicon Centripep csőben. 10 mg szulfo-EMCS {(s-maleímidokuprolloxí) szukcimmídj-et (Moleculer Sciences Co.) oldunk 1 ml ionmentesített vízben, A szulfo-EMCS· negyvenszeres mőlíöloslegét adjuk cseppenként, kevertetés közben a birka anti-egér IgGhez;, majd az oldatot további tíz percig kevertetjük. Az aktivált birka anti-egér IgG-t megtisztítjuk, majd a puffért egy 10 ml-es gélszűrési oszlopon ÍRerce Presto Colnmn, Pierce Chemicals) átbocsátva lecseréljük, amely oszlopot 0,1 mol/l NaPO4, 5 mmol/1
EDTA (pH-6,5) pufíerrel hoztunk egyensúlyba. Az ellenanyagot tartalmazó frakciókat, amiket a 280 nra-en mért elnyelés alapján azonosítjuk, egyesítjük, majd körülbelül 1 mg/ml 'koncentrációra hígítjuk, 1,4 mg per OD extínkcíós koefficienst alkalmazva. Az Ab peptid negyvenszeres móifölöslegét 20 ml 10 mmol/i NaPO4 (pH-8,0) oldatban oldjuk, az A&33-42 peptid kivételével, amiből 10 mgot először 0,5 ml DMSO-bán oldunk, majd 20 ml-re hígítjuk a. 1.0 mmol/l-es NaPO4 pufferrel. A peptid-oldatokat 10 ml aktíváit birka anti-egér IgG-bez adjuk, majd szobahőmérsékleten 4 óra hosszat rázatjuk. A kapott konjugátumokat kevesebb mint 10 ml végtérfogatra tőménvííjük egy Amicon Oentriprep csőben, majd PBS pufferrel szemben dializáljuk a pufier kicserélése és a szabad peptid eltávolítása céljából. A konjugátum okai sterilezés céljábólO,22 pm~es pórusméretű szűrőkön bocsátjuk át, majd 1 mg-os allkvot részekre osztjuk és lefagyasztva -20 ®C-on. tároljuk. A konjugátumok koncentrációit a BCA fehérje-vizsgálati módszerrel határozzuk meg (Rerce- Chemical), a standard görbéhez lő IgG~t használva. A konjugációt a konjugált peptideknek az aktíváit birka anti-egér IgG-vel szemben mért molekulasúly növekedés alapján dokumentáljuk. Az AS 1-5 birka anti-egér konjugátum két konjugáció egyesítéséből származik, a maradék egyetlen készítményből származik.
2. Aggregéit Ab peptidek készítése
Humán 1-40 (AN1528; California Peptides Inc., ME0541 sarzs), humán 1-42 (ΑΝΓ792; California Peptides Inc., M.E0339 ««4 és MEÖ439), humán 25-35 és rágcsáló 1-42 (Califomia Peptides Inc., M.EÖ218) pepüdeket az egyes injekciózásokhoz frissen oldunk a -20 aC-on kiszárítva tárolt liofilezett porokból. Ebből a célból két mg pepiidet adunk 0,9 ml ionmentesített vízhez, majd az elegyet egy viszonylag egyenletes· oldat vagy szuszpenzió előállításához vortexeljük. A négy említett peptid közül csak az AN1528 oldódott ebben a lépésben. lOxPBS (1*PBS: 0,15 mol/1 nátrium-kloríd, Ö,Ö1 mol/1 nátriumfoszfát. pH-7,5) löö gl-es alikvot részeit adjuk hozzá., ekkor az ANI528 elkezd kicsapódni.
A szuszpenziőt ismét vortexeljük, majd éjszakán át. 37 °C~on inkubáljuk a következő napon történő felhasználásig.
A pBxö fehérje előállítása: Egy pBx6~ot kódoló expressziós piazmidot készítünk Oltersdorf és munkatársai leírása szerint, amely pBx6 egy fúziós fehérje, ami. az MS-2 polimeráz N-terminális vezérszekvenciáját, valamint ehhez fúzionáltatva az APP (SAPP) 592-695-ős ammosavak tartalmazza [Oltersdorf és mtsai: Journal of Biological Chemistry 265, 4492-4497 (1990)]. A piazmidot Escherichia eolí-ha transzfektáljuk, majd a fehérjét a promotor indukálása után expresszáljnk. A baktériumokat 8 mol/1 karhamidhan lizáltatjuk, és a pBx.6-ot részlegesen tisztítjuk preparatív SDS políakrilamíd gélelektroforézíssek A pBxó-ot tartalmazó frakciőkt Western hlottal azonosítjuk, nyúl antí-ρΒχδ políklonális ellenanyag felhasználásával, majd egyesítjük, Amicon Centriprep csővel töményítjük, és PBS-sel szemben dializáljuk. A készítmény tisztasága, Coomassíe Blue-val festett. SDS poliakrilamíd gélelektroforézissei megbecsülve körülbelül 5-10% volt.
Τ
1.
transzgenikus
Száz nőstény és hím, kilenc-tizenegy hónapos heterozigőta fPP egeret szereztünk be a Charles Rívers Laboratory-tól és a Tanomé Laboratory-tői. Az egereket tizes csoportokba osztottuk, hogy az AB vagy az APP különböző régióival immunizáljuk őket, Freund féle adjuvánssal kombinálva. Az állatokat ügy osztottuk szét, hogy az a csoportokon belül a lehető legjobban illeszkedjen az állatok neméhez, korához, származásá hoz és forrásához, Immunogénként, a következőket használtuk: négy, humán szekvenciából származó AB peptid: 1-5, 1-12, 1328 és 33-42, mindegyik birka anti-egér IgG-vel konjugáltatva; négy aggregált AB peptid, a humán 1-40 (AN1528), a humán 1N1792b a humán 25-35 és a rágcsáló 1-42; valamint fúziós , ami az APP 592-695-ös amínosavait tartalmazza. Egy tizedik csoportot kontrollként adjuvánssal kombinált PBS-sel Immunizáltunk.
Mindegyik immunizáláshoz az egyes AB pep tidek bői 100 pg-ot 200 ul PBS-ben, vagy 200 ug pBx6 APP származékot ugyanilyen térfogatú PBS-ben, vagy csak PBS-t emulgeáltunk 1:1. arányban Komplett Freund féle adjuvánssal (CFA) 400 pl végtérfogatban az első immunizáláshoz, ezt kőveti egy azonos mennyiségű immunogénnel végzett erősítő injekció Inkompiett Freund
ί.
féle adjuvánssal a kővetkező· négy dózisban, végül pedig a végső dózisban PBS-sel. Áz immunízációkat' az első három dózis esetében kéthetenként intraperitoneálisan végeztük, majd ezután havonta. Az állatokat az egyes immunizálások után három-hét napon belül véreztettük, a második dózis beadása után, az ellenanyag literek meghatározása céljából· Az állatokat körülbelül egy héttel az utolsó dózis után eutanizákuk.
A különböző A£ peptídekkei vagy az APP származékkal végzett négyhönapos Immunizálás után az agyakat eltávolítottak a sóoldattal perfundált állatokból. Az egyik fél agyat az immunhisztokémiai elemzés céljára készítettük eló, majd a másodikat használtuk az AB és az APP szintek meghatározására. A béta amiloid peptid és az amiloid preknrzor lehelje különböző formái koncentrációjának meghatározásához az agyfelet felboncoljuk, és a hippoeanipálls, kortikális és cerebelláris régiókból homogenizatűm okát készítünk 5 mol/l guanidinben. Ezeket meghigítjuk, majd az amiloíd vagy az APP szintjét mennyiségileg meghatározzuk, ismert koncentrációjú AB peptid vagy APP standardok sorozathigításáva! összehasonlítva, ELISA formátumban.
A PBS-sel immunizált kontroll csoport össz-AB koncentrációjának átlaga 5,8-szor magasabb a hippocampusban mint a kortexhen (átlagosan 24,318 ng/g bippocampus szövet a .kortex
Χ**Φ φ szövet 4,221 ng/g értékével összehasonlítva). A kontroll csoport cerebellumában az átlagérté (2.3,4 ng/g szövet) körülbelül l.öööszer alacsonyabb mint a hippoeampushan. Ezek a szintek hasonlítanak ahhoz, amit korábban leírtak az ilyen korú heterozigőta transzgenikus PDAPP egerekre [döhnson-Woods és mtsai: Proeeedings of the National Academy of Sciences, USA 94, 15501555 (1997)9
A kortexnél a kezelési csoportok egv alcsoportjának azaz azoknak az állatoknak, amelyek ΆΝ1792, rágcsáló AB 1-42 vagy ÁS 1-5 peptid konjugátumot kaptak, átlagos AS és AB 1-42 szintje szignifikánsan eltért a kontroll csoportétól (p<Ö,O5), amint az a 11. ábrán látható. Áz össz-AB átlagos szintjei 75%-ra, 79%-ra és 61%-ra csökkentek, ezen kezelési csoportok kontrolljához viszonyítva. Egyik csoportban sem volt észrevehető korreláció az ABspecifikus ellenanyag literek es AB szintek között az agy kortikáA hippoeampushan az össz-AB AN1792 kezeléshez kapcsolódó átlagos csökkenése. (46%, p~ö,0543) nem volt olyan nagy mint a. kortexben megfigyelhető (75%, p=sO,OÖ21). Azonban a csökkenés nagyságrendje sokkal nagyobb volt a hippocampnsban mint a kortexben, a hippoeampushan a nettó csökkenés 11,186 ng/g szövet, a kortexben megfigyelt 3,171 ng/szövet értékkel szemben. A rágcsáló- ABI-42-t vagy ABl-5-öt kapó állatok csoportjában az átlagos össz-AB szint 36 illetve 26%-kal csökkent. Azonban a kis csoportméret és az amiloid peptid
SÖ
ΦΦΦ φ
Φφ* φ φ φ-
mindkét csoporton belül állatról állatra erősen változó szintje miatt ezek a csökkenések nem voltak szignifikánsak. Amikor az AB 1-42 szinteket a híppocampusban mértük, akkor egyik kezeléssel indukált csökkenés sem ért el szignifikáns értéket. Ezért a kortexben kisebb AB terhelés miatt az ebben a régióban beálló változások sokkal érzékenyebb indikátorai a kezelés hatékonyságának. Az ELíSÁ~val mért AB szintek kortexben mért változásai hasonlóak, de nem azonosak az immunhisztokémiai elemzésekkel kapottakkal (lásd az alábbiakban).
Az óssz-AB-t a cerebellumban mértük, egy olyan régióban, amit az Alzheimer kór patológiája általában nem énnt. Az agynak ebben a régiójában az átlagos AB koncentrációk a különböző AB peptidekkel vagy APP származékokkal immunizált egyik csoportban sem tértek el a kontroll csoportban mért értéktől. Ez az e~ redmény azt sugallja, hogy az AB· nem-patológiás szintjét nem érinti a kezelés.
Az ÁPP koncentrációkat is meghatároztuk ELISA-val kezelt és kezeletlen egerek kortexéhen és cereheilumában. Két különböző ÁPP vizsgálatot használtunk. Az egyik, ennek a jelzése APPalla/FL mind az APP-alfát (alfa, az ÁPP székretált formája, ami az AB szekvenciában el van hasítva), mind az APP teljes hosszúságú formáját (PL) felismeri, míg a második csak az APP-alfát ismeri fel. Áz AB-nek a kezeléshez kapcsolódó csökkenésével szemben a kezelési csoportok egy alcsoportjában, az APP szintek a kontroll állatokkal összehasonlítva egyik kezelési csoportban sem változtak. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy az AB peptidekkel végzett ímmunizáeíó nem meríti ki az APP-t;. a kezelés hatása inkább az AB-ra specifikus.
Összefoglalva, az ossz-AB és AB 1 -42 szintek szignifikánsan lecsökkentek a kortexben az AN 1792-vel, a rágcsáló ABI-42-vel vagy’ az AB 1-5 konjugátummal végzett kezelés hatására. A híppo·· campusban az ossz-AB szintje szignifikánsan csak az AN1792 kezelés hatására csökkent le. Az AB vagy APP szinteknek más, a kezeléshez kapcsolódó változása nem volt szignifikáns a hippo2. Hisztokémiai elemzések
Hat csoport alcsoportjaiból preparáltunk egyet az immunhisztokémiai elemzésekhez, ezek közül három csoportot immunizáltunk az AB 1-5, AB 1-12 és AB 13-28 AB peptid konjugátumokkal; két. csoportot immunizáltunk, a teljes hosszúságú AB aggregátumokkal (AN1792 és AN1528) és ide tartozik a PBS-sel kezelt kontroll csoport. Az ezekből a csoportokból készített agyi metszetek amiloid terhelésének képelemzése látható a 12. ábrán. A kontroll állatokkal összehasonlítva a kezelési csoportok közül három kortlkoíd régiójában az amiloid terhelésben szignifikáns csökkenés volt megfigyelhető. Áz amiloid terhelés legnagyobb csökkenése abban a csoportban volt megfigyelhető, amelyik An 1792-t kapott, itt az átlagérték 97%-kal csökkent (p-ö.ööl).
««'φ * M-fcHk ί * » X X*
Φ* Φ*Χ
Szignifikáns csökkenések voltak (95%; ρ-0,005) és az AB 1-5 állatokban is (67%; p:::0,021.
az ΑΝ'1528-cal konjugátummal kezelt
Az össz-Αβ vagy AB 1-42 ELISA mérések mennyiségi kiértékelésével és az amiloid terhelés képelemzéssel való kiértékelésével kapott eredmények bizonyos mértékben eltérnek egymástól, Az AN1528-cal való kezelésnek szignifikáns hatása van. a kortikális amikkel terhelés szintjére, ha kvantitatív képelemzéssel mérjük, de nincs ilyen hatása az össz-AB koncentrációjára ugyanebben a régióban, ELISA-val mérve. Ezen két eredmény között az eltérés valószínűleg a vizsgálatok specifitásaitól függ. A képelemzés csak az oldhatatlan, a. tarlóitokba aggregálódott AB-t méri. Ezzel ellentétben az ELISA az AB összes formáját méri, mind az oldhatót, mind az oldhatatlant, a monomer és aggregálődott formát is. Mivel a betegség patológiájáról azt gondolják, hogy az ÁB oldhatatlan, tarfolthoz kapcsolódó formájával van kapcsolatban, ezért a képelemzést technika valószínűleg, sokkal érzékenyebben mutatja ki a kezelési hatásokat. Azonban, mivel az ELISA gyorsabb és egyszerűbb vizsgálat, szűrővizsgálati célokra jól használható, Emellett azt is kiderítheti, hogy az AB kezeléshez kapcsolódó csökkenése a tarfoltban levő AB esetében mint az ossz-AB esetében.
Annak meghatározására, hogy a kezelt állatokban az imdváltott AB-specifikus ellenanyagok reagálnak-e az lerak.0d.ott amiioiddaL a kezel állatokból és a kontroli ίθ
*. « φ.φ. φ * Φ « * X
X X φ Φ Φ* Φ φ Φ XX-φΦ Φ Φ * *« s Φ4«φ X Φ egerekből készített metszetek egy részét egér IgG~re specifikus ellenanyaggal reagáltatjuk. A PBS csoporttal ellentétben az AB-í tartalmazó tarlóitokat endogén IgG borítja azoknál az állatoknál, amiket az AB 1-5, AB 1-12: és AB 1.3-28 AB peptid feonjugátumokkal, valamint a teljes hosszúságik AN1792 és AN .1528 jelű AB konj ugátum okkal immunizáltunk, Ebben a vizsgálatban nem elemeztük azokat az állatokat, amiket a többi AB vagy §4 « *
*
Az ellenanyag literek mérése
Az egereket az egyes immunizálások után három-hét napon belül véreztettük, a második dózis beadása után, összesn ötször. Az ellenanyag litereket ASl-42-t kötő ellenanyagokként mértük, szendvics ELISA alkalmazásával, ÁB 1 -42-vel borított .műanyag többlukas lemezeken. Amint az a 13, ábrán látható, az ellenanyag literek csúcsértékéi annak a négy vakcinának a. negyedik dózisa után mértük, amelyik' az ΑΝ 1792-specifikus ellenanyagok legmagasabb titerét adta: AN1792 (csúcs GMT: 94,647), AN1528 (csúcs GMT: 88,231); ABl-1.2 konjugátum (csúcs GMT: 47,216) az ötödik és hatodik dózis után. A többi öt immunogén esetében a literek csúcsértékét az ötödik és hatodik dózisnál értük el, de ezeknek a nagyságrendje kisebb mint a négy legmagasabb csoport esetében: AB 1-5 konjugátum (csúcs GMT: 2,356), pBx6 (csúcs GMT: 1,986), AB 13-28 konjugátum (csúcs GMT: 1,138), AB33--42 konjugátum (csúcs GMT: 658), ÁS25-35 (csúcs GMT: 125). Az ellenanyag litereket a homológ, peptidek ellen. ís megmértük, ugyanazt az ELISA szendvics formátumot használva az immunogének egy alcsoportjára, aholis a csoportokat ABl-5-tel, AS13-28-eaI, A825~3S~feí, AB3342-vel vagy rágcsáló AB 1-42-vei immunizáltuk, Ezek a literek körülbelül ugyanakkorák mint amit az AB 1-42 ellen mértünk, a rágcsáló AB 1-42 ímnmnogén kivételével, aholis a homológ ímmunogén elleni ellenanyagok litere körülbelül kétszer nagyobb volt.
8.5 &*&fefe fe « fe * * »'«·*· fe « «fefe ·*· * * * «fefe* .*·*.-* k r$ 5 »fe fe *«*$·
Az A.N1792-specifikus ellenanyag liter nagyságrendje az egyes állatok esetében, vagy a .kezelési csoportok átlagértékei nem. korrelálnak a mért hatékonysággal, .amit az AB kódexben való csők4. Límfoproliferatív válaszok
Az Αδ-dependens limfoprolfieráeíót az utolsó, hatodik immunizálás után körülbelül egy' héttel, vett lépsejtekkel mérjük. A frissen gyűjtött sejteket (IÖ5 per luk) 5 napig AB1-40 jelenlétében tenyésztjük, arninak a serkentéshez 5 pmol/l a koncentrációja. A tíz csoportnak egy hetes alcsoportjából származó sejteket a fordított peptíd, az AB40-1 jelenlétében is tenyésztettük. Pozitív kontrollként további sejteket tenyésztettünk a. PH.A nevű T-sejt autogénnel, negatív kontrollként pedig a sejteket hozzáadott peptíd nélkül tenyésztettük.
A legtöbb állatból vett limfocíták szaporodtak a PHA-ra adott válaszként. De az AB4Ü-1 reverz peptidra nem volt szignifikáns válasz. A nagyobb aggregált AB peptidekkel, az AN 1792-vel, a rágcsáló AB1-42-vel és az AN1.528-cal immunizált állatokból vett sejtek robusztusán szaporodtak, ha AB 1-40-nel serkentettük, a legnagyobb beütésszámot az ΑΝΓ792 recípíensek esetében kaptuk. Az egyes, AB 1-12 konjugátummal, AB 13-28 konjugátummal és ÁB25-35 konjugátummal immunizált csoportokban egy állat szaporodott az ABl-40-re adott válaszként. A többi, AB 1-5 * ♦ * konjugátumot, AB33-42 konjugátumot, pBxó-ot vagy PSS-t kapott, csoportban nem volt olyan állat, ami AB-val serkentett választ adott. Az eredményeket az alábbi, 5. táblázatban foglaljuk Össze.
5, Táblázat i Ϊ
Ímmunogén j Konjugátum AB aminosavak [ Reagálok ! í
AB 1-5 Rgen j s 5 tagú 10/ 7
ÁS 1-12 igen 12 tagú 1/8 Ϊ 1 5 1_______________________1
AS13-28 Hgen 16 tagú | 1/9 j
AS25-35 1.1 tagú | 1/9
i 10 tagú j AB33-42 igen
0/10
AB 1-40 [ 40 tagú [ 5/8
AB 1-42 42 tagú £ 9/9
|rAi51~42 5 | j 42 tagú 8/8
r~ | 0/8
j
1 PBS | 0 tagú 0/8
Ezek az eredmények azt mutatják, hogy az AMI792 és az
ANI528· erős T-sejt válaszokat ad, legyalőszínűbben a CD4+ fenő*
S7 *♦ típusban. Az AS-spedfikus T-sejt válasz hiánya az ABl-5-tel immunizált állatokban nem meglepő, mivel a CD4* T-sejtek által felismert pepiid epítopok általában 15 aminosavból állnak, bár néha rövidebb peptidek is működhetnek, kisebb hatékonysággal. Ennek következtében a négy konjugátum pepiidhez rendelt segítő T-sejt epítopok legnagyobb része valószínűleg az IgG konjugátum partnerben van, nem az AB régióban. Ezt a feltételezést alátámasztja a proliferatív válaszok alacsony előfordulása az ezekben, a kezelési es levő állatoknál. Mivel az Alá 1-5 konjugátum haté AB-specífíkus T-sejtek végzett immunizálás csökkenti az AB szintjét az agyban, az látható hiányában, az ezzel a pepiiddel által indukált kulcs effeklor immunválasz tűnik.
A pBxó fúziós peptid - ami magában foglalja az APP 592695-ös aminosavait, beleértve az összes AB csoportot - által okozott T-sejtek hiánya és az alacsony ellenanyag válaszok ennek a készítménynek a gyenge ímmunogén hatásából eredeztethetek. Az AB25-35 aggregátum gyenge ímmunogén hatása valószínűleg annak köszönhető, hogy a peptid feltehetőleg túl kicsi ahhoz, hogy egy jó T-sejt epitopot tartalmazzon, ami segíti -egy ellenanyag válasz indukcióját. Ha ezt a pepiidet egy hordozó fehérjéhez konjugáinánk, akkor valószínűleg sokkal ímmunogénebb lenne.
V.
SS « φ nem transzgenikus egeret immunizálunk AB·· val vagy más ímmunogénnel, adott esetben egy adjuvánst is használva ehhez, majd. 4-5 hónappal később eutardzáljuk őket. Az immunizált egerekből vért veszünk. Adott esetben az IgG-t elválasztjuk a többi vérkomponenstől.. Az immunogénre specifikus ellenanyagot részlegesen tisztíthatjuk affinitáskromatográfiávat Egerenként átlagosan körülbelül 0,5-1 mg immunogén-specifikus ellenanyagot lehet kapni, így összesen 5-10 mg-ot kapunk.
VE Passzív immunizálás Ab elleni ellenanyagokkal
7-9 hónapos PDAPP egerek csoportjait injekciózzuk 0,5 mg pohklonálís anti-AB ellenanyaggal vagy specifikus anti-AB monoklonális ellenanyaggal PBS-ben, amint azt az alábbiakban Ismertetjük. Az összes ellenanyag készítményt addig tisztítjuk, amíg alacsony lesz az endotoxin szintjük. Monoklonális ellenanyagokat készíthetünk egy fragmens ellen, ha a fragmens a fragmenst vagy az Ab hosszabb formáját egy egérbe injekciózzuk, hiforidőmákat készítünk, majd átvizsgáljuk a hibridómákat, hogy tartalmaznak-e olyan ellenanyagot, ami specifikusan kötődik az ÁB egy kívánt tragmenséhez, anélkül hogy az AB más, nem átlapoló fragmenseihez kötődne.
ö.
Az egereket szükség szerint négy hónapig intraperitoneálisan injekciózzuk, hogy az ELISA-val mért, ÁS42 vagy más immunogén elleni keringő ellenanyag koncentrációt 1/1000-nél magasabb szinten tartsuk (ezt is EbISA-val mérve). A litereket az előzőkben ismertetett módon követjük, majd az egereket, az injékcíőzások négy hónapja végén eutanizáljuk. Post mortem bisztokémíát, AS szint meghatározást és toxikológiai vizsgálatot végzünk. Csoportonként tíz egeret használunk.
VII, A különböző adjuvánsok összehasonlítása
Ebben a vizsgálatban a Komplett. Freund fele adjuvánst, a tímsót, egy olaj-a-vízhen emulziót és az MPL-t hasonlítjuk össze,
X ο a ** .J abból a szempontból, hogy mennyire képes serkenteni egy immunválaszt..
1. Kísérleti terv
Száz hathetes, Hartley törzsbe tartozó nőstény tengerímalacot (beszerezhető az Eim Híll-ről) tíz csoportra osztunk, hogy AN 1792-vel vagy annak egy palmitoilezett származékával immunizáljuk őket, különböző adjuvánsokkal kombinálva. Hét csoport kapott AN1792 injekciókat (33 pg, hacsak külön nem jelezzük), a következőkkel kombinálva; a) PBS, b) Preund fele adjuváns, c) MPL, d) szávaién, e) MPL/szávaién» 1) kis dózísú tímső vagy g) nagy dőzisú tímső (300 pg AN1792). Két csoport kapott injekciókat az AN1792 palmitoilezett származékával (33 pg}, a). PBS-sel kombinálva, b) szkvalénnal kombinálva. Az utolsó, tizedik csoport csak PBS~t kapott, antigén vagy további adjuváns nélkül. A Freund féle adjuvánst kapott csoport esetében az első dózist Komplett Freund féle adjuvánssal emulgeáltuk, a többi négy dózist pedig Infcomplett Freund féle adjuvánssal. Az antigénből mindegyik csoport. 33 pg-ot kapott, a. magas dőzisú timsöt kapott csoport kivételével, amely 300 pg AN 1792-t kapott. A CFA/IFA esetében az injekciókat intraperiíoneálisan adtuk be, az összes többi csoport esetében pedig Íntramuszkulárisan a hátsó végtag négyfejü combizmába, a jobb és bal oldalon felváltva. Az első
949 »'·♦* «♦«'* rom dózist kéthetenként adtuk he, az utolsó két dózist havonta. A vért az egyes immunizálások utáni hatodik vagy hetedik, napon vettük le, a második dózis után kezdve, az ellenanyagok literének meghatározása céljából.
2. Az immunogének készítése
Két mg AS42 (Cahfornia Pepdde, ME0339 sarzs) pepiidet adunk 0,9 ml ionmentesített vízhez, majd az elegyet egy viszonylag egyenletes oldat vagy szuszpenzíö előállításához vortexeljük. IG'xPBS (t*PBS: 0,15 mol/1 nátrium-klorid, 0,01 mol/1 nátriumfoszfát, pH=7,5) IÖÖ μΐ-es ahkvot részeit adjuk hozzá. A szuszpenziót ismét vortexeljük, majd éjszakán át 37 °C-on inkubáljuk a kővetkező napon történő felhasználásig. A felhasználatlan A&I42-t szárítószer mellett, líofilezett por formájában -20 °C--on. tároljuk.
Az ΆΝΪ792 palmítoilezett származékát palmitinsav-ankidridnek az Anl792 N-terminális aminosavához való kapcsolásával állítjuk elő, majd dímetilfermamidhan oldjuk, mielőtt a naszcens pepiidet hiárogéníluoriddai való kezeléssel eltávolítjuk a gyantáAhhoz, hogy vakcina dózisokat állítsunk
Freund féle adjuvánssal (CFA) (2. csoport), 33 pg, 200 pl PBS-ben ♦ > * ♦**,,% >,„* “Γ .»* ~ záláshoz. A következő immunizálásokhoz az antigént hasonlóan immunizáljuk Inkomplett Freund féle adjuvánssai (IFA).
Ahhoz, hogy vakcina dózisokat állítsunk -elő MFL~.le! az 5. és 8, csoporthoz, liofilezett port (Bibi Immunochem, Hamilton MT) adunk 0,2% vizes trietitamhoz 1 m/ml végkoncentrációban, majd vortexeljúk. A keveréket 30 másodpercre 65-70 °C-ra melegítjük, így micellák enyhén opálos, uniform szuszpenzíóját oldatot eaz egyes injekciósorozatokhoz frissen s 5-ös csoportban mindegyik injekcióhoz 33 gg
AN1792-t 16,5 pl PBS-ben, 50 gg MPL-t (50 gí) és 162 pl PBS-t keverünk össze egy boroszííikái csőben, közvetlenül felhasználás
Ahhoz, hogy az alacsony olaj-a-vízben emulzióval készítvakcina dózisokat, PBS-ben levő AN1792-t adunk 5% szkvalénbez, 0,5% 'Tween 80-hoz, 0,5% Span 85-höz, PBS-ben, hogy így elérjük a végső, egyszeri dózisnak megfelelő koncentrációt azaz a 33 gg AN 1792-t 250 pl térfogatban (6-os csoport), A keveréket emuígeáljuk, úgy, hogy egy kétkamrás kézi berendezésen bocsátjuk át 15-20-szor, ameddig az emulziós cseppek azonos méretűeknek nem tűnnek egy 1,0 pm átmérőjű standard háncsuk gyönggyel, mikroszkóp alatt vizsgálva. A kapott szuszpenzió opaleszeens, tejfehér; Az emulziókat minden egyes injekeíősorozathoz frissen készítjük el A 8-as csoporthoz 0,2%-os trietilamínhan levő MFL-t adunk 50 pg per dózis koncentrácíóhana szkvalénbez, és a detergens keverékhez, az· előzőkben ismertetett * *# x?
emulgeálás céljából. A palmltoil származékhoz (7-es csoport), dózisonként 33 pg palmitöil-NH-ÁBl-42-t adunk a szkvalénhez, majd vortexeljük, Ezután Tween 80-at és Span 85-öt adunk hozzá, majd vortexeljük. Ezt a keveréket adjuk PBS-hez, hogy 5% szkvalén, 0,5% Tween 80 és 0,5% el, majd a keveréket az előzőkben s
Ahhoz, hogy timsős vakcina dózisokat állítsunk elő (9~es és 10-es csoport), PBS-ben levő AN1792-t adunk Alhydrogel-hez (alumínium-hídroxid gél, Accurate, Westbury, NY), a 33 pg (alacsony dózis, 9-es csoport) vagy 300 pg (magas dózis, 10-es csoport) AN1792 per 5 mg timsó koncentráció eléréséhez, 250 pl végső dózistérfogatban. A szuszpenziót 4 óra hosszat óvatosan
3, Az ellenanyag literek mérése
Az immunizálás utáni hatodik vagy hetedik napon, a második immunizálás után kezdve, tengerimalacokat véreztetűnk, összesen négyszer. Az AS42 elleni ellenanyag litereket ELISA-val mérjük, amint azt az Anyagok és módszerek részben ismertettük.
4. A szövetek elkészítése
Körülbelül 14 hét elteltével mindegyik tengerimalaeol elpusztítjuk CÖ2~vel. Gerinc folyadékot gyűjtünk belőlük, majd az «·* *»«·* · 4
A fcfc *** t eltávolítjuk és három agyrégiót (hippocampus, kortex és cerebellum) felboncolunk, és arra használjuk, hogy' ELISA-val megmérjük az össz-A5 koncentrációját.
1.
A különböző adjuvánsok potenciája széles tartományban változik, ha az immunizálás után az AN1792-.re adott ellenanyag válaszként értékeljük ki. Amint az a 14. ábrán látható, ha az AN 1792-t PBS-ben adjuk be, akkor két vagy három immunizálás után nincs kimutatható válasz, és elhanyagolható mértékű választ lehet kimutatni a negyedik és ötödik dózis után, aholís a títerek geometriai átlagértéke (GMT) csak körülbelül 45. Az o/w emulzió közepes litereket indukált a harmadik dózis után (GMT 255), amik megmaradtak a negyedik dózis után (GMT 301) és lecsökkentek az utolsó dózisnál (GMT 54). Világos antigén dózisválasz volt a timsóhoz kötött AN1792 esetében, ahol a 300 gg mindegyik odöponib&n sokkal immunogénebb mint a 33 gg. Az ellenanyag-válasz csúcsán, a negyedik immunizálást követően a két dózis közötti különbség 43% volt, a GMT a 33 gg esetében 1940, a 300 gg esetében 3400. A 33 pg AN1792 plusz MPL-re adott ellenanyag-válasz nagyon hasonlít arra, amit egy körülbelül tízszer nagyobb antigén dózis (300 pg) generál timsóhoz kötve. Az MPL-nek egy o/w emulzióhoz való hozzáadása körülbelül 75%95 «ΆΧ* kai csökkentette a vakcina, potenciáját ahhoz képest, amikor csak MPL-t használtunk adjutánsként Az AN1792 palmítoilezett származéka teljesen nem-ímmunogén PBS-ben. beadva, és közepes litereket adott, amikor egy o/w emulzióban adtuk be, a GMT érték 340 és 105 volt a harmadik és negyedik véreztetés után. A legmagasabb ellenanyag litereket Freund féle adjuvánssal kaptuk, a GMT csúcsértéke körülbelül 87,000 volt, ami majdnem harmincszorosa annak az értéknek, amit a mögötte álló két legerősebb vakcinával kaptunk, az MPL-lel és a magas dózisú AN1792/timső kombinációval.
Az ebben a vizsgálatban azonosított, két legígéretesebb adjuváns az MPL es a timső. Ügy tűnik, hogy ebből a kettőből az MPL-t. részesítjük előnyben, mivel 10-szer alacsonyabb dózisra volt szükség ugyanannak az ellenanyag-válasznak a kiváltásához mint amit a timsövai kaptunk. A választ növelhetjük, ha növeljük az antigén és/vagy az adjuváns dózisát, valamint ha optimalizáljuk az immunizálás ütemtervét. Az o/w emulzió nagyon gyenge adjuváns volt az ANI.792-köz, és ha egy o/w emulziót adtunk az MPL adjuvánshoz, akkor az teljesen megszüntette az MPL önmagában kifejtett adjuváns aktivitását.
2. AB szintek az agyban
Körülbelül 14 hetes korban a tengerimalacokat erősen érzéstelenítjük, majd gerincfolyadékot (CSF) veszünk tőlük, és az φ φ
X * φ „ φ χ ΦΦΦ φ φφτχφ
ΦΧ * X**
X* agyakat az állatok egy alcsoportjából kivágjuk. Az alcsoporok a következők: Freund féle adjuvánssal immunizáltak (2-es csoport), MPL-lel immunizáltak (5-ös csoport),, magas dózissal. (300 pg és timsóval immunizáltak (3-as csoport). Az AB peptid szintjének méréséhez az egyik agyfelet felboncoljuk, majd a bippocampus, kortlkális és cerebelláris régiók homogemzátumait 5 mol/l guanidínben készítjük el. Ezeket meghigítjuk, majd ELISÁ-val mennyiségileg meghatározzuk, ismert koncentrációjú standard fehérje sorozathigxtásával ősszehasonlitva.Az AB fehérje szintje mind a híppocampusban, mind a kortexben mind a cerebellumban hasonló volt mind a négy csoportban, annak ellenére, hogy ezek a vakcinák széles tartományban eltérő ellenanyag válaszokat okoztak az AB ellen. A híppocampusban körülbelül 25 ng/ g átlagos AB szintet lehetett mérni, a kortexben 21 ng/g-ot, és 12 ng/g-ot a cerebellumban. Tehát ezek közül az állatok közül néhányban a majdnem három hónapig keringő magas AB elleni ellenanyag liter nem változtatta meg az össz-AB szintet az agyukban. Áz AB szintek a CSP-ben szintén meglehetősen hasonlóak voltak ezekben a csoportokban. Az endogén AB elleni AN1792 immunizáció nagy hatásának a hiánya azt mutatja, hogy az immunválasz az AB patológiás formáira koncentrál.
Vili. Immunválasz a különböző adjuvánsokra egerekben
Hathetes nőstény Swiss Webster egereket használtunk ebben a vizsgálatban, csoportonként 10-13 állatot használva. Az immnnizációkat a O.? 14., 28., 60., 90. és 120 napon végeztük, szubkután 200 μί-es dózist adva be. Mindegyik készítményhez PBS-t használtunk púderként. A második dózis után kezdődően minden dózis után hét. nappa az állatokat véreztettük, hogy az ellenanyag ntereket ELÍSA-val meghatározzuk. Az egyes cso~
ι..« > »»♦**<
< -S * φφφ **'*· .
» > s>;’ \
φφ «Φ
Φ Φ * *
a Az egerek száma az egyes csoportokban a kísérlet b Az adjuvánsokat jelöljük. Mindegyik készítményben PBS volt a puffer, A 8-as csoportban sem adjuváns sem antigén nem volt.
Az AB42 elleni ellenanyag ELISA litereit az egyes esőin az alábbi, 8. táblázatban mutatjuk be.
WÖ
Wi
104 541
I 1609 x áf* Φ * X* . V <k y $ * X Φ »4 *
8. Táblázat (folyt.)
A táblázatból látható, hogy a legmagasabb titereket a 4-es,
5-ös és 18-as csoportnál kaptuk, amikben az adjuvánsok a kővetkezők voltak: 12 5 ug MPL, 50 gg MPL és QS21 plusz MPL<
IX. Á különböző adjuvánsok terápiás hatékonysága
Terápiás hatékonysági vizsgálatokat végeztünk PDAPP transzgenikus egerekben, egy sor olyan adjuvánssai, amik használhatók emberekben, azzal a céllal, hogy' meghatározzuk azt a képességüket, hogy mennyire potenciálják az AS elleni válaszokat és mennyire indukálják az amiloid lerakódások immun-közvetített féltisztulását az agyban.
«♦* φ
ΦΦΧ
103 κ Φ φ φ φ φ φφ φ φ φ
Száznyolcvan, 7.5-8,5 hónapos hím és nőstény heterozigőta PDAPP transzgenikus egeret szereztünk be a Charles Rívers Lahoratories-tól. Az egereket kilenc csoportra osztottuk, amik csoportonként 15-23 állatot tartalmaznak, majd AN 1792-vel vagy ÁN1528-cal immunizáljuk őket, különböző adjuvánsokkal kombinálva. Az állatokat úgy osztottuk szét, hogy nem, kor, leszármazás szempontjából a lehető legjobban- feleljenek meg a csoportokban levő állatoknak. Az adjuvánsok közé tartozik a fimső, az MPL, és a QS21, mindegyik mindkét antigénnel kombinálva, valamint a Freund féle adjuváns, csak AN 1792-vel kombinálva. Egy további csoportot immunizáltunk PBS-ben kiszerelt AN 1792-vel plusz a ibimerosal konzerváloszerrel, adjuváns nélkül. A kilencedik csoportot csak PBS-sel immunizáljuk, negatív kontrollként.
Az aggregéit AB peptidek készítése: humán AB 1-40 (AN1528; California Peptídes Inc,, Napa, CA; sarzsszám .MEÖ541): és humán AB 1-42 (AN1792; California Peptídes Inc., Napa, CA; sarzsszám MEÖ439) peptideket -29 °C-on tárolt, lioíilezett porokból frissen szolubílízálunk az egyes injekció-sorozatok elkészítéséhez. Ebből a célból két mg pepiidet adunk 0,9 ml ionmentesített vízhez, majd az elegyet vortexeljúk, ezzel egy viszonylag egyöntetű oldatot vagy szuszpenziót előállítva. Az AN 1792-vel ellentétben az AN1528 ebben a lépésben oldódik. 10*PBS UXPBS: 0,15 mol/1 nátríum-kiorid, 0,01 mol/1 nátriumfoszfát, p.H«7,5) 100 μΙ-es alíkvot részeit adjuk hozzá, ekkor az AN1528 elkezd
KM kicsapódni. A szusz-penziót ismét v« majd éjszakán át *C-on napon történő
A fim sót tartalmazó vakcina dózisok elkészítéséhez (1-es és 5-ös -csoport) PBS-ben levő AB pepiidet adunk Alhydrogel-hez (két százalék vizes alumínium-hidroxld gél, Sargeant, Inc., Clífton, NJ), ezzel 100 pg AB peptid per 1 mg timsö koncentrációt állítunk he, lÖxPBS-t adunk hozzá, így a dózis végtérfogata 200 μί Ix.PRS-bem A szuszpenziót azután az injekciózás előtt szobahőmérsékleten. körülbelül 4 óra hosszat óvatosan rázatjuk.
os csoport) liofilezett port (Ribi Immnnochem, Research, Inc., Hamílton, MT; sarzsszám 67039-E0896B) adunk 0,2% vizes trietilammhoz, 1 mg/ml végkoncentráciőhan, majd vortexeljük. A keveréket 30 másodpercre 65-70 °C-ra melegítjük, így egy enyhén opálos, egyenletes szuszpenziót kapunk. Az oldatot 4 °Con tároljuk. Az egyes ínjekciósorozatokhoz dózisonként 100 pg pepiidet 50 μί PBS-ben, 50 pg MPL-t (50 μ!) és löö pl PBS-t keverünk össze egy horoszílikát csőben, közvetlenül felhasználás
A vakcina dózisok QS21-gyei való elkészítéséhez (3-as és 7es csoport) liofilezett port (Aquíla, Pramingham, MA; A7Ö1SR sarzs) adunk PBS-hez (pH=6,6-7,6) 1 mg/ml koncentrációban.
majd vortexeljük. .Az oldatot -20 °C-ön tároljuk. Az egyes ínjekciósorozatokhoz dózisonként 100 pg pepiidet 50 pl PBS-hen, '25 pg
105
00» 0 « 0 0 »00 « »ΧΦ » ί »'
0 0 0« *0
QS21-et (25 pl): és 125 pl PBS-t keverünk össze egy boroszilikát esőben, közvetlenül felhasználás előtt.
léséhez (4-es csoport) az első immunizáláshoz 200 pl PBS-ben levő 100 pg AN1792-t emulgeálunk 1:1 térfogatarányban, Komplett Freund féle adjnvánssal (CPA), 400 ml véglérfogafban. A további immunizálásokhoz az antigént hasonlóképpen emuigeáljuk Inkomplett Freund féle adjnvánssal (IFA). Az adjutánsként timsőt. MPL-t vagy QS21-et tartalmazó vakcinákhoz dózisonként 100 pg per dózis AN1792-t vagy ANÍ528-af kombinálunk timsóval (1 mg per dózis) vagy MPL-lel (50 pg per dózis) vagy QS21~gyeI (25 pg per dózis) 200 al végtéríogaíű PBS-ben, majd szubkután a hátba oltjuk be a lapockacsontok közé. A Freund féle adjuvánst. kapó csoportnál löö pg AN 1792-t emulgeálunk 1:1 térfogatarányban Komplett Freund féle adjnvánssal (CPA) 4öö pl végtérfogatban, majd intraperitoneálísan adjuk be az első immunizáláshoz, majd a következő öt dózishoz ugyanilyen mennyiségű immunogént használunk az erősítő injekcióhoz Inkomplett Freund féle adjuvánsban (IFA). Az Án 1792-t adjuváns nélkül kapó csoportnál 1.0 pg AN1792-t kombinálunk 5 pg thirnerosallal 50 pg BBS végtérfogatban, majd szubkután adjuk be. A kilencedik, kontroll csoport csak 200 pl PBS-t kapott szubkután. Az immunizálásokat az. első hárem dózisnál kéthetente végezzük, majd havonta, a 0., ló., 28,, 56., 85 és 112. napon. Az állatokat a második dózis után minden egyes immunizálás után hat-hét nappal véreztetjük, az ellenanyag literek meghatározásához, Az
106 az utolsó után körülbelül egy héttel eutanizáljuk.
majd immnnhisztokémiai módszerrel értékeljük ki, hogy vannake amiloid tartóitok az agyi metszetekben. Emellett meghatározzuk az AB-specdlkus ellenanyag litereket, valamint az AB-dependens szaporodási és citokin válaszokat is.
A 9, táblázatból látható, hogy az ÁB 1-42 ellen a. legmagasabb ellenanyag litert Freund féle adjuvánssal és AN 1792-vel lehet kiváltani, ami a csúcsértéket a negyedik immunizálás után éri el (a legnagyobb GMT: 75,386), majd az utolsó, hatodik immunizálás után 59%-kal csökken. Az AMPL és ΆΝΊ792 kombináoiö által kiváltott legmagasabb átlagtiter 62%-kal alacsonyabb volt a Freund féle adjuvánssal kiváltott liternél (legnagyobb GMT: 28,867), és szintén az immunizálási séma korai szakaszában éri el, 3 dózis után., ezt a csúcsérték 28%-os csökkenése követi a hatodik ímmunizáeíó után. Az An1792-vel kombinált QS21-gyel kapott átlagtiter csúcsértéke' (GMT: 1,51.1) körülbelül ötször alacsonyabb mint amit az MFL-lel 'kapunk. Emellett a válaszkinetikája lassúbb volt, mivel további ímmunizáeióra volt szükség, hogy a válasz csúcsértékét elérjük. A tfmsőhoz kötött An 1792-vel kapott literek alig valamivel nagyobbak mint a QS21gyei kapottak, és a válasz kinetikája gyorsabb. A PBS-ben thimerosallal beadott AN1792 esetében a literek gyakorisága és nagysága alig valamivel volt nagyobb annál, mint amit csak PBS-sel kaptunk. Áz MPL és AN1528 kombinációjával kapott titere'k csúcsértéke (GMT: 3099) körülbelül kilencszer alacsonyabb volt
107 * * φ * * * * νφφ φ·» φ* annál, amit ΑΝ 1792-vel kaptunk. A timsőhoz kötött AN1528 nagyon gyengén immunogén volt, csak néhány állatban generált alacsony litereket. Á csak PBS-sel immunizált állatokban nem volt ellenanyag-válasz megfigyelhető.
108
Az ellenanyag üíereg geometriai átlagaa
Kezelés 3,3 A verezt 5,0 etés hete 9,0
Tírnsö/ 102 1,081 2,366
AN1792
(12/21)6 | (17/20) Ρ i/21)
MPL/ 6241 | 28,867 1 1,1242
ÁN 179.2
(21/21) ) (21/21) 4-*- (21/21)
| 1,083 1 (19/21)
5,665
17,0
572
QS21/
AN1792
AN1792
I 30
MZ
10,076 (15/15)
019) 1 (10/19)
61,279 I 75,386 (15/15) | (15/15)
1,511 | (17/18)
41.628 i
1(15/15) (14/18)
30,574 (15/15) | Timső/
Ián 1528
184
AN152S
AN1528
Í29
1(1/22)
Αν
Thimerosal (0/16)
PBS
I (1/21) /20) 1,156 (20/20) (2/20) | 3,099 (13/22) (4/22) U20/22) <21/22 (4/16) (3/16) ♦* *« * ** *
Φ X Φ * * φ φ X ΦΦΦ φ χ » ΦΦφΦ X Φ Φ
X φ » ΦΦΦ φ* *
Κ)9
a Az AB 1-42 elleni ellenanyag literek geometriai át!
b A reagálók száma csoportonként
A különböző adjuvánsokkal vagy thimemsaUal kombinált Ani. 792-vel vagy ANI.592-vel végzett kezelésnek 12 egerek kortíkális arníloíd terhelésére gyakorolt hatásával eredményeit láthatjuk a 15. ábrán, ELISA-val meghatározva. A PBS kontroll PDAPP egerekben, az össz-AB átlagos szintje a körtedben 12 hónapos egereknél 1,817 ng/g volt. Különösen csökkent színtű AB volt megfigyelhető ANI792 plusz CFA/IFA-val, ANI792 plusz timsovai, ANI.792 plusz MPL-lel és QS2Í plusz ÁN 1792-vel kezelt egerekben, A csökkenés csak az Ani792 plusz CFA/IFA esetben érte el a statisztikai szignifikanciát (p<0,05).. Azonban, amint, az az I. és Π1. példában látható, az immunizáció hatásai az AB szintek csökkentésében léntegesen nagyobbak a 15 és 18 hónapos egerekben. Tehát az várható, hogy legalább az ANI.792 plusz tknsó, az AN1792 plusz MPL és az ANI792 plusz QS21 készítmények elérik a statisztikai szignifikanciát idősebb egerek kezelésében. Ezzel ellentétben az ANI792 plusz a tbimerosal konzerválöszer kombináció körülbelül ugyanolyan átlagos AB szintet mutatott mint a PBS-sel kezelt egerek. Az AB42 átlagos szintje a PBS kontrollokban 1624 ng/g volt. Kűlö10 χ » « X χ.1 nősen alacsony, 403, 1149, 620 és '714 nagyságú átlagos szint figyelhető meg az AN1792 plusz CFA/IFA-veh AN1792 plusz timsóval, AN1792 plusz MPL-lel és AN1792 plusz QS2í~gyeI kezelt, és a statisztikailag szignifikáns csökkenést (p-0,05) az
AN1792 CFA/IPA kezelést kapott csoport érte el. Az Anl792 plusz Thimerosallal kezelt egerekben az AB42 átlagszintje 1619 ng/g volt.
X. Toxicitásl elemzés
A 2.. 3. és 7.
ismertetett vizsgálatok leállításakor szöveteket gyűjtünk a bisztopatológiás elemzéshez. Emellett hematológiai és klinikai kémiai vizsgálatokat végzünk a 3. és 7. példában vett végső vérmintákhók A legtöbb fő szervet kiértékeljük, beleértve az agyat, tüdőt, fimíoid szervet, gasztromtesztinális traktust, májat, vesét, mellékvesét és gonádokat. Bár a. vizsgált állatokban elszórt léziók figyelhetők meg, nincs nyilvánvaló különbség az AN 1792-vei kezelt és a kezeletlen állatok között sem az érintett szövetekben sem a léziő súlyosságában. A PBS-sel kezelt vagy kezeletlen állatokkal összehasonlítva az AN1782-vel immunizált állatoknál nem voltak megfigyelhetők egyedi hisztopaíolőgiás léziók. Emellett nem voltak különbségek a klinikai kémiai profilokban az adjuváns csoportok és a PBS-sel kezelt között a 7, példában. Bár szignifikáns növekedés volt nany hematológiai paraméterben a 7. példa szerint az
ΦΦ·Χ Φ ♦ ♦·>>! Φ » Φ * * φ φ > * Φ Φ *
Φ «ΦφτΦ * * «. * >« > φ*» «* ni
ΑΝ 1792-vél és Freund féle adjuvánssal kezelt állatoknál a PBSsel kezeit állatokhoz viszonyítva, az ilyen típusú hatások várhatók a Freund féle adjuváns kezeléstől és az azt kísérő hashártyagyulladástől, és ezek semmilyen, az AN1792 kezelésből származó káros hatásra nem utalnak. Bár nem része a toxikológiai kiértékelésnek, a. PDAPP egere agyának a morfológiáját behatóan vizsgáltuk, a hatékonysági végpontok részeként. Egyik vizsgálatban sem volt megfigyelhető a kezeléshez kapcsolódó káros hatás az agy morfológiájában. Ezek az eredmények azt sugallják, hogy az AN1792 kezelést az állatok jól tűrik, és legalábbis mentes a mellékhatásoktól.
e s az
-'»· egy zis 1 vizsgálatot, végeztünk. A terápiás ágenst növekvő dózisokban adjuk be a különböző pácienseknek, a feltételezett hatékonyság körülbelül 0,01 részenél kezdve, és hármas szorzófaktorral növelve, egészen addig, amíg elérjük a hatékony rülbelúl a tízszeresét.
Fázis Π vizsgálatot végzünk a terápiás hatékonyság meghatározására.. Az Alzheimer s disease and Related Disorders Association-nak (ARDRAj a valószínű Alzheimer kórra vonatkozó kritériumai alapján korai vagy közepes korú Alzheimer kórban szenvedő betegeket szelektáltunk. A megfelelő betegek értékszá112
χχ « * *
Φ * ·χ «
χΦ* ma. 12-16 a Mini-Menta! State Exam (MM SE) vizsgálatban.. Másik szelekciós kritérium az, hogy a betegek valószínűleg túlélik a vizsgálat időtartamát és nincsenek komplikációt okozó szituációk, azaz például más, esetleg zavart okozó egyidejű gyógyszeres kezelés. A beteg funkciójának alapértékelt klasszikus pszichometriaí mérésekkel vesszük fel, azaz például MMSE-vel és ADASsal, ami egy átfogó skála az Alzheimer kór státuszban és funkcióban levő betegek kiértékeléséhez. Ezek a. psziehometriai skálák mérési módot biztosítanak az Alzheimeres állapot előrehaladásának méréséhez. A kezelés követéséhez megfelelő életminőségi skálákat ís lehet használni. A betegség előrehaladását M.R1vel követjük. A betegek vérprofilját is követhetjük, beleértve az immunogén-speeífikus ellenanyagok és T-sejt válaszok vizsgálatait
Az alapértékek megmérése után a betegeket elkezdjük kezelni. A betegek randomizáiva vannak, és vagy a terápiás ágenst, vagy placebot kapnak, vakon. A betegeket legalább hatbavontn egyszer megvizsgáljuk. Á hatékonyságot egy kezelési csoportban a betegség fejlődésének egy placebo csoporthoz viszonyított szignifikáns csökkenésével határozzuk meg,
Egy második Fázis II rizsi atoí ís végzünk, hogy kiértékeljük a nem Alzheimer kóros korai memöriavesztésben szenvedő betegek (néha korhoz kötődő memóriakárosodásnak, azaz AAM.Inek is nevezik) konverzióját a valószínű. Alzheimer kórrá, az ARDRA kritériumok alapján. Az Alzheimer kórra való konverzió * fcmagas kockázatával élő betegeket egy nem-klinikai populációból választjuk ki, a referencia, populációkban keresve a memőriavesztés., vagy más, a pre-Alzheimer tünetekhez kapcsolódó nehézségek korai jeleit, az Aizheímer kór előfordulását a családban, a genetikán kockázati tényezőket, a kort, nemei és más tulajdonságokat figyelembe véve, amikről úgy találták, hogy az Aizheímer kór magas kockázatát előre jelezhetik. Összegyűjtjük a megfelelő mértékrendszerek alapértékeit, beleértve az MMSE-t és az ADÁS t, más mértékrendszerekkel együtt, amiket arra terveztek, hogy egy normálisabb populációt lehessen kiértékelni.. Ezeket a beteg-populációkat megfelelő csoportokra osztjuk, a placebot hasonlítva, össze az ágens dózis-altematíváívah Ezeket a beteg-populációkat körülbelül hathónapos intervallumokban ellenőrizzük, majd a megfigyelés végén az az egyes betegek végpontja, hogy konvertálódík-e a valószínű Alzheimer kórra az ARDRA kritériumok alapján.
XII. Anyagok és Módszerek általánosságban
1. Az ellenanyag titerek mérése
Egereket véreztetünk, kis vágást ejtve a farokvénájukon és körülbelül 200 pl vért véve egy mikrocentriíuga csőbe. A tengerimalacokat úgy véreztetjüfc, hogy először meghorotváljuk a. csülök hátsó részét, majd 18-as tűvel kissé megvágjuk a lábkőzép vénáját és a vért mikrocentriíuga csőbe gyűjtjük. A vért egy óra
Π4 hosszat szobahőmérsékleten hagyjuk alvadni, majd vortexeljük, és 10 percig 14Ö00xg-vel centrifugáljuk, hogy az alvadékot elválasszuk a szérumtól.. A szérumot utána tiszta mikrocentriftiga be visszük át, és a liter meghatározásáig 4 °C-on tartjuk.
Az ellenanyag litereket ELISA-val mérjük. 96 lukas mikrotiter lemezeket {Costar EIA lemezek) bontunk 100 μΐ oldattal, ami vagy 10 pg/ml AB42~t vagy SAPP-ot, vagy más antigént tartalmaz, amint azt az egyes leírásokban ismertettük, lukbevonó· pufferben (0,1 mol/l nátriumfoszfát, pH=8,5; 0,1% nátrium-azid), majd éjszakán át szobahőmérsékleten tartjuk. A iukakat leszívjuk, majd a szérumokat hozzáadjuk a Inkákhoz, a minta hígítószeréhen (0,014 mol/l nátriumfoszfát, pH~7,4, 0,15 mol/l nátrium-klorid, 0,6% szarvasmarha szérum-albumin, 0,05% thimerosal) tett 1/.100-as hígítással kezdve. A mintákból hét. sorozathigíben, hogy el· ük. a végső, 1/218,700-as hígítást. A hígításokat egy óra hosszat szobahőmérsékleten ínkubáljuk a beborított lemez-lukakban. A lemezeket azután négyszer mossuk 0,05% Tween 20-at tartalmazó PBS-sel A második ellenanyagot, egy ΐ antí-egér Ig-t, tormaperoxidázhoz konjugáltatva (heszereza Boehringer Mannheim-től)·, hozzáadjuk a Inkákhoz, a minta higítószerében tett 1 /3000-es hígításból 1ÖÖ μΙ-t használva erre a célra. A lemezeket ismét négyszer mossuk. PBS plusz
Tween 20 oldatban. A kromogén kifejlesztéséhez IÖÖ pl Slow
TMB-t (3,3',5,5'-tetram.etil~benzidin! beszerezhető a Pierce
Chemicals-íől) adunk az egyes Inkákhoz, majd 15 percig szobaφ * ♦
Φ
φ. χ-#hőmérsékleten ínkubáijuk. Á reakciót 25 μί 2 mol/1 H2SO4 hozzáadásával állítjuk le, A szín intenzitását azután egy Moíecular Devices berendezésen mérjük, Vmax (405-650) nm-nél.
A litereket a szérum azon hígításának reciprokaként határozzuk meg, ami a maximális OD felét adja, A maximális OD~t általában a kiindulási l/10Ö-as hígításból határozzuk meg, kivéve azokat az eseteket, amikben a literek nagyon magasak, amikor is magasabb kiindulási hígításra van szükség a maximális ÖD meghatározásához. Ha az 50%-os pont két hígítás közé esik, akkor a végső títer meghatározásához lineáris extrapolációt, végzünk. Az ellenanyag literek geometriai átlagának kiszámításához a löönál kisebb literekhez önhatalmúlag: a 25-ös értéket rendeljük hozzá.
2, Limfocíta szaporodási vizsgálat
Az egereket ísoOuorane nal érzéstelenítjük. A lépéket eltávolítjuk, majd kétszer öblítjük 5 ml, !0%~os hővel inaktivált borjúmagzat szérumot tartalmazó PBS-ben (PBS-FBS), utána 10 másodpercig 100 per pere fordulatszámmal homogenizáljuk 50 μos Centricon egységben (Dako A/S, Dánia) 1,5 ml PBS-PBS-ben, majd 100 μ-os nylonhálón szűrjük át. A szpienoeitákat egyszer mossuk! 5 ml PBS-FBS~ben,majd centriíugálással ülepítjük (200*g. 5 perc). A vörös vértesteket lizáltatjuk, oly módon, hogy az üledéket 5 percig szobahőmérsékleten 5 ml pufferben szuszΠ6 φ ΦΦΦ φ
ΧΦΦ * φ φ * φ pendáltatjuk, ami 0,15 m.oi/1 ammőmum-kloridot, 1 mol/1 káli··· um-hídrogénkarbonátot, 0,1 mol/1 NaEDTA-t (pH-7,4) tartalmaz, A leukocitákat azután az előzőkben ismertetett módon mossuk. A frissen izolált lépsej l eket (105 sejt per luk) 96 óra hosszat, 37 °C~ on három párhuzamosban tenyésztjük 96~lukas, U fenekű szőve ttenyésztő, kezeit mikrotiter lemezeken (Corning, Cambridge, MA), RPMI 1640 táptalajban (JRH Bíoscíences, Lenexa, KS), amit 2,05 mmol/1 L-glutammnal, 1% penicillin/ sztrepto.micinn.el és 10% hővel inaktívált PBS-sel egészítettünk ki. Különböző AS peptideket,az AS1-16, az AB 1-40, vagy az AS40-1 reverz szekvenciájü fehérjét szintén hozzáadjuk, 5 pmol/l ~~ 0,18 pmol/l dózístartományban, négy lépésben, A kontroll Inkákban a sejteket Concanavalín A-val (Con A) (Sigma, kát. sz.: #C-5275, 1 pg/ml koncentrációban) tenyésztjük, hozzáadott fehérje nélkül, A sejteket az utolsó 24 órára 3I-I~timídlnneI impulzus-jelezzük (1 pCi/iuk, Amersham Corp., Arlíngton Heights IL). A sejteket azután UníFilter lemezekre gyűjtjük, és egy Top Count Mieroplate Scintillation Counter-rel (Packard Instruments, Downers Grove, IL) számláljuk meg a beütéseket. Az eredményeket beűtésszám per perc (cpm), oldhatatlan makromolekulákba beépült radioaktivitás formájában fejezzük ki .
4.
Agyszövet készítés
Eutanázia után az agyakat eltávolítjuk, majd az egyik gyfelet használjuk immunhisztokémiai elemzésre, míg három
Φ*φφ φ * φ
ΧΦΦ φ φ φ φ φ
Φ φ * φφφ φφφ φ
ΦΧ * ν X Φ Φ * * £
X* Φ»φ (hippocampns, kortex és cerebellum) leválasztunk a másik agyfélről, és ebből mérjük a különböző AB fehérjék és APP fonnák koncentrációját, specifikus BUSA alkalmazásával fJobrison-Woods és mtsai: Proceedings of the National Ácademy of Sciences, USA 94, 1550-1555 (1997)].
Az E.USA~ra szánt szöveteket 10 térfogat jéghideg guanidin pufferhen homogenizálunk (5,0 mol/1 guanidin-HCl, 50 mmol/1 TRIS-HC1, pH=8,0)·. Á homogenizátumokat szobahőmérsékleten négy óra hosszat enyhe kevertetéssel összekeverjük egy Adams Nutator alkalmazásával (Pisher), majd az AS és az APP mennyiségi meghatározása előtt -20 ®C~on tároljuk. Az előző kísérletekből kiderült, bogy az analizált oldatok ilyen körülmények között stabilak, és bogy a szintetikus AS fehérje (Baehem) kvantitatíve kinyerhető, ha egér alomtársak kontroll agyszőveteiből nyert bomogenizátnmokra szúrjuk fel (Johnson-Woods és mtsai: Proceedings of the National Ácademy of Sciences, USA 94, 15501555 (1997)).
5. Az AB szintek mérése
Az agyliomögenizátumokat 1:10 arányban bígitjuk jéghideg kazein hígítóval (0,25% kazein, PBS, 0,05% nátrium-azid, 20 pg/ml aprotinin, 5 mol/1 EDTA pH=8,0, 10 pg/ml leupeptin), majd 16000xg-vel centrifugáljuk 20 percig, 4 °C~on. A szintetikus AS fehérje standardokat (I -42 aminosav) és az APP standardokat
US
X φ «χ Φ * * φ « φ φ ♦ ♦ ♦·>
úgy készítjük el, hogy a végső készítményben 0,5 mol/l guanidint és 0,1% botjúmagzat szérumalbumint (BSA) tartalmazzanak. Az „ossz* AB szendvics ELISA befogó ellenanyagként monokionális ellenanyagot alkalmaz, (mAh 266), ami az AB 13-2 8-as aminosavaira specifikus (Seubert és mtsai: Natúré 359,325-327 (1992)], és riporter ellenanyagként biotmilezett mAb 3D6 ellenanyagot alkalmaz, ami az AS 1-5. aminosavaira specifikus [Johnson-Woods és mtsai: Proeeedings of the National Academy of Sciences, USA 94, 1550-1555 (1997)). A 3D6 mAbnem ismeri fel a szekretált APP~t vagy a teljes hosszúságú APP-t, hanem csak az N-termínális aszparaginsavat tartalmazó AB fajtákat mutatja ki. Ebben a vizsgálatban az érzékenység alsó határa ~50 pg/ml (11 pM), és nem ad keresztreakciőt az endogén rágcsáló AB fehérjével egészen 1 ng/ml koncentrációig [Johnson-Woods és mtsai:
Proeeedings of the National f Sciences, USA 94. 15501555 (1997)
Az ABI-42 specifikus szendvics ELISA befogó ellenanyagként a 21F2 mAb-t használja, ami az AB 33-42-es aminosavaira érzékeny [Johnson-Woods és mtsai: Proeeedings of fhe National Academy of Sciences, USA 94, 1550-1555 (1997)). Ebben a vizsgálatban is a biötimlezett 3D6 mAh a riporter ellenanyag, aholi-s az érzékenység alsó határa körülbelül 125 pg/ml (28 pM) [Johnson-Woods és mtsaí: Proeeedings of the National Academy of Sciences, USA 94, 1550-1555 (1997)). Az AB ELlSA-khoz 100 μΐ 266-os mAb-t (10 pg/ml koncentrációban) vagy 100 pl 2-1P12es mAb-t (5 pg/ml koncentrációban) használunk 96-iukas im* « Φ :*·* ««** » Φ φ « * φφ· X « * * «- φ φ 40** *ί munesszé lemezek (Costar) beborítására, éjszakán, át, szobahőmérsékleten. Az. oldatot leszívjuk, majd a lukakat 200 μΐ, PBSpufferben készített 0,25%-os humán szérum-albuminnal blokkoljuk legalább 1 óra hosszat, szobahőmérsékleten. A blokkoló oldatot eltávolítjuk, majd a lemezeket felhasználásig kiszárítva tároljuk. 4 eC-on. A lemezeket mosőpufiferrel rehidráljuk [TRISZszel pufferelt sőoldat (0,15 mol/l nátrium-klorld, 0,01 mol/l TRIS-HC1 p.H-7,5), plusz 0,05% Tween 20] felhasználás előtt. A mintákat és a standardokat három párhuzamosban, 100 μΙ-es alíkvot részekben adjuk a Inkákhoz, majd éjszakán át 4 °C-on inkubaijuk. A lemezeket legalább háromszor mossuk mosópufíérrel a vizsgálat egyes lépései között. A blotinilezett 3D6 mAb~t, 0,5 pg/ml-re hígítva kazein vizsgáló pufferben (0,25% kazein, PBS, 0,05% Tween 20, pH~7,4) adjuk hozzá, majd 1 óra hosszat szobahőmérsékleten ínkubáljuk a Inkákban. Egy avidín-tormaperoxídáz konjugátumot (Avidin-HRP, beszerezhető a Vector-től, Burlingame, CA), 1:4000 arányban hígítva kazein vizsgáló pufferben, adunk a bikákhoz, I órára, szobahőmérsékleten. A kolorimetriás szubsztrátumot, a Slow TMB-ELISA~t (Pieree) adjuk hozzá, majd hagyjuk szobahőmérsékleten 15 percig reagálni, majd az enzimes reakciót 25 μΙ, 1 mol/l koncentrációjú H2SO4gyel állítjuk le. A reakcióterméket egy Moleeuiar Devices Vmax berendezéssel határozzuk meg mennyiségileg, a 450 és 650 nmen mért abszorbció különbsége alapján.
fc * *
<♦ * φ * « ** ν »jfc* fc fc «fcfc »»49 « * ** * a· #► *$♦
6, Αχ APP szintek mérése
Két különböző APP vizsgálatot használtunk. Az egyik, ennek a jelzése APP-alfa/PL mind az APP-alfát (alfa, az APP székre tált formája, ami az A& szekvenciában el van hasítva), mind az APP teljes hosszúságú formáját (FL) felismeri. A második csak az APP-alfát ismeri fel Az APP-alía/PL vizsgálat felismeri a székletéit APP-t beleértve az AS· első 12 aminosavát. Mivel a riporter ellenanyag (2Ή3) nem specifikus alfa-klip-pontra, ami azAPP695 612-613-as aminosavai között található [Psch és mtsai: Science 248, 1122-1124 (1990)), ezért ez a vizsgálat felismeri a teljes hosszúságú APP-t is (APP-FL), Az APP-FL citoplazmatikus farka elleni immobilizált APP ellenanyagokat használó előzetes kísérletek, amikkel az APP-PL agyhomogenizátumait próbálták kimeríteni, azt sugallják, hogy az APP-alfa/FL-nek körülbelül 30-40%-a PL (nem közölt adatok). Mind az APP-alfa/FL mind. az APP-alía vizsgálatokban a befogó ellenanyag a 8E5 rnAb, amit az APP695 forma 444-592-es aminosavai ellen készítettek (Games és mtsai: Natúré 373, 523 (1995)). Az APP-alfa/FL vizsgálatban a riporter ellenanyaga 2H3 mAb, ami az APP695 597-608-as aminosavaíra specifikus [Johnson-Woods és mtsai: Proceedings of the National Academy of Sciences, USA 94, 1550-1555 (1997)], és az APP-alfa vizsgálatban a riporter ellenanyag a 16H9 mAb bíotinílezetfc származéka, amit az APP 605-611-es aminosavai ellen készítettek. Az APP-alfa/FL vizsgálat érzékenységének alsó korlátja körülbelül 11 ng/mi (150 pM) (Johnson-Woods és mtsai; Proceedings of the National Academy of Sciences, USA 94, 1.550-1555 (1997)1, míg
121 *
» * ♦ fc az APF-alfa specifikus vizsgálaté 22 ng/ml (0,3 nM). Mindkét APP vizsgálathoza 8E5 mAb-t 96-lukas EIA lemezek lukaiba vittük, az előzők ben a 266-ös mAb-ra ismertetett módon. Tisztított, szekretált rekombináns APP-alfát használtunk referencia standardként az APP-alfa vizsgálatban és az APF-alfa/FL vizsgálatban [Esch. és mtsai: Science 248, 1122-11.24 (1990)]. Az 5 M guanidinben levő agyhomcgenizátum mintákat 1:10 arányban higitoltuk ELISA mintahigítóban (0,014 mol/l foszfát puffer, pH-7,4, 0,6% borjúmagzat szénim-albumin, 0,05% thimerosal, 0,5 mol/l .nátriumkloríd, 0,1% NF4Ö). Ezeket 1:4 arányban hígítottuk 0,5 mol/l uanldint tartalmazó mintahigítóban. A hígított homogenizátumokat azután 160ÖÖ*g-veI 15 másodpercig centrifugáljuk szobahőmérsékleten. Az APP standardokat és a mintákat két párhuzamos allkvot részben adtuk a lemezekhez, majd 1,5 óra hosszat szobahőmérsékleten inkubáituk., A biotiniíezett 2H3 vagy 16H9 riporter ellenanyagot 1 óra hosszat inkubáljuk a mintákkal. A szlreptavidin-alkalikus foszfatázt (Boehringer Mannhehn) 1:1000 arányban hígítjuk a mintahigítóban, majd 1 öra hosszat szobahőmérsékleten inkubáljuk. a Inkákban. A 4-metll-umbelliíeriIinkubálásra adjuk a lemezekhez, majd a lemezeket egy Cytofluor tm. 2350 fiuoriméterrel olvassuk le (Míllipore), 365 nm gerjesztési és 450 nm emissziós hullámhosszat alkalmazva.
Immnnhisztokémla
Í22 ♦
fi
Φ fi
$ »fi« *
Az agyakat három napig 4 aC-on, PBS-ben készített 4%~os paraformaldehidhen fixáljuk,, majd. a metszésig egy-hét napig 4 °C-on tároljuk 1%-os, PBS-ben készített paraformaldehidhen. Negyven mikron vastag koronális metszetet vágunk, egy vibrálómmal szobahőmérsékleten, majd fagyásgátiőban (30% glicerin, 30% etilénglikol foszfát pufferben) tároljuk -20 °€~onaz Immunhisztokémiai feldolgozás előtt. Mindegyik agyból hat szekciót a dorzáiis hippocampus szintjén, mindegyiket konszekutív 240 pmes íntervaOumokkei elválasztva, éjszakán át az alábbi ellenanyagok közül az egyikkel mkuhálunk: 1) biotinilezett anti-ÁB (mAb, 3D6, a humán Αβ-re specifikus), 2 pg/ml koncentrációra, hígítva PBS-t és 1% lószérumot tartalmazó oldatban; vagy 2) humán APP-re specifikus biotinilezett mAb, 8A5, 3 pg/ml koncentrációra hígítva PBS-t és 1% lószérumot tartalmazd oldatban; vagy 3) gliális fihriiláris savas fehérjére specifikus mAb (GFAP; Sigma Chemical Co.), .1:500 arányban hígítva 0,25% Triton Χ-100-zal és 1% lószérummal, TRISZ-szel puffereit sóoldatban, pH~7,4 (TBS); vagy 4) a CDllb-re specifikus mAb, MAC-1 antigén (Chemicon. International), 1:100 arányban hígítva 0,25% Triton Χ-100-zal és 1% nyúlszérummal TBS-ben; vagy 5) az MHC II antigénre specifikus mAb (Pharmingen), 1:100 .arányban hígítva 0,25% Triton Xlöö-zal és 1% nyúlszérummal TBS-ben; vagy 6) CD43-ra specifikus patkány mAb (Pharmingen), 1:100 arányban hígítva 1% nyúlszérummal PBS-ben, vagy 7) CD45RA~ra. specifikus patkány mAb (Pharmingen), 1:1.00 arányban. hígítva 1% nyúlszérummal PBS-ben, vagy 8) CB45RB-re specifikus patkány monoklonális j>,fe 9 * * * * > w . *** *·
ellenanyag (Pharmingen), 1:100 arányban hígítva 1% nyúlszérummal PBS-ben, vagy 9) CD45-re specifikus patkány monoklonális ellenanyag (Pharmingen), 1:100 arányban hígítva 1% nyúlszérummal PBS-ben, vagy 10) CD3e-re specifikus biotiniiezett polikionális hörcsög ellenanyag Pharmingen), 1:100 arányban hígítva 1% nyúlszérummal PBS-ben, vagy 11} CD3-.ra specifikus patkány monoklonális ellenanyag (Serotec), 1:200 arányban hígítva 1% nyúlszérummal PBS-ben, vagy 12} PBS oldat, amiben nincs primer ellenanyag, de 1% normális lószérumot tartalmaz.
Az előbbi listában szereplő l-es, 2-es és 6- 12-es ellenanyag oldatokkal reagáló metszeteket 1.0%-os Triton X-100 és 0,4% hidrogénperoxíd PBS-ben készült oldatával szobahőmérsékleten percig előkezeljük, hogy blokkoljuk az endogén peroxidázt. Ezután éjszakán át 4 °C-on inkubáljuk a primer ellenanyaggal. A 3D6 vagy 8E5 vagy CD3e monoklonális ellenanyaggal reagáló metszeteket azután egy óra hosszat szobahőmérsékleten reagáltatjuk tormaperoxidáz-avidm-hiotin komplexszel, PBS-ben 1:75 arányban hígított „A” és JET kit komponensekkel (Vector Elité Standard Kit, Vector Labs, Byrfingame, CA). A CD45RA-ra, €D45RB~re, CD45-re, CD3 e-re specifikus ellenanyagokkal és a primer ellenanyagot nem tartalmazó PBS oldattal reagáló metszeteket 1 óra hosszat szobahőmérsékleten reagáltatjuk biotínilezett anti-patkány IgG-vel (Vector),. 1:75 arányban hígítva PBS-ben, vagy biotiniiezett anti-egér IgG-vel (Vector}, 1:75 arányban hígítva PBS-ben. A metszeteket azután egy óra hosszat szobahőmérsékleten reagáltatjuk tormaperoxidáz-avídin-biotín komplexszel,
124
Φ « φ * W * « Φ
Φ Φ Φ Φ φ > Φ X Φ Φ *Χ Φ «ί* φφ Φ*φ
PBS-ben 1:75 arányban hígított „A” és „B” kit komponensekkel (Vector Elité Standard Kit, Vector Labs, Byrlíngame, CA).
A metszeteket 0,01% hidrogénperoxid, 0,05% 3,3'-díaminobenzidin (DAB) eleggyel hívjuk elő. Azokat a metszeteket, amiket GFAP-, MAC-l- és MHC II-specifikus ellenanyagokkal való mkuszántunk, szobahőmérsékleten 0,6% hidrogénperoxiddal begy blokkoljuk az endogén peroxidázt, majd éjszakán át 4 ’C-on inkubáíjuk a primer ellenanyaggal A GPAP ellenanyaggal reagáló metszeteket 1 óra hosszat inkubáíjuk szobahőmérsékleten lóban készített biotinllezett antí-egér ÍgG-vel (Vector Laboratories; Vectastatín Elité ABC Kit), 1:200 arányban hígítva TBS-sel. A metszeteket azután egy óra hosszat egy avldin-hiotínVector Laboratories; Vectastatín Elité
ABC Kit), 1:1000 arányban hígítva TBS-sel. A primer ellenanyagként MAC-l- vagy MHC II-specifikus monoklonális ellenanyaggal inkubált metszeteket azután 1 óra hosszat szobahőmérsékleten reagáltatjuk TBS-ben 1:200 arányban hígított, nyálban készített, biotinllezett anti-patkány ÍgG-vel, majd egy óra hosszat inkubáljuk TBS-hen 1:1000 arányban hígított avidin-biotin-peroxidáz komplexszel. A MAC-l- vagy MHC íl-specífikus monoklonális ellenanyaggal inkubált metszeteket azután úgy tesszük láthatóvá, hogy szobahőmérsékleten 0,05% 3,3'-diaminobenzídín, 0,01% hidrogénperoxid, 0,04% nikkelklorld TBS-ben készült oldatával kezeljük 4 Illetve 11 percig.
* Λ φ Φ Φ X X Φ « « *φ φ * « « φ φ
Φ Φ X χ Φ» ΦΦ ·* X
Φ »»
Az immunológiáikig jelzett metszeteket üveg tárgylemezekre visszük (VWR, Superfrost lemezek), éjszakán át levegőn szárítjuk, Propar~ba (Anatech) merítjük, majd fedőlemezekkel fedjük. Ie, Permount-ot f kisbér) használva felvivő közegként.
Az AB tarfoltok .ellenfestéséhez a GPAP-pozitív metszeteket Superfrost tárgylemezekre visszük, majd 7 percig vizes 1%-is Thioilavin S (Sigma) oldatban inkubáljuk, utána pedig immunhisztokémiai festést végzünk. A metszeteket Propar-ban dehidráljuk és tisztítjuk, majd fiermounl alkalmazásával fedőlemezekkel
8. Képelemzés
Az immunológiai reakciót adó tárgylemezek vizsgálatához egy Videometric 150 Image Analysis System-et (Oncor, Inc., Gaithersfourg, MD), CCD videokamerával egy Nikon MicrophotFX mikroszkóphoz kötve valamint egy Sony Trinitron monitort használunk. A metszet képét videó puíferben tároljuk, majd színéé telítési alapú küszöbértéket határozunk meg, hogy kiválasszuk és kiszámítsuk az immimolőgiailag jelzett struktúrák által elfoglalt pixelterúletet. Minden egyes metszetnél a hippocampust manuálisan körvonalazzuk, majd a hlppocampus által elfoglalt teljes pixelterületet kiszámítjuk. Az amiloid terhelés százalékát a következőképpen számítjuk ki:
126 * χ Φ Φφφ χ φ
Φ « *φφφ χ φ « φ
Φ Φ: φ ΦΦΦ ΦΦ χ * y »*φφ φ fa 3D6 monoklonális ellenanyaggal immunológiaiiag reagáló AB lerakódásokat tartalmazó hippocampus terület hányada) χ 1ÖÖ.
Hasonlóképpen, a neurites terhelés százalékát a következőképpen számítjuk ki:
fa 8E5 monoklonális ellenanyaggal reagáló disztrófiás nemiteket
A C-Im&ging System-et (Compix, Inc., Cranberry Township, PA),, amit a Simple 32 Software Application program, működtet, egy Optronics kamerán keresztül egyNikon Microphot-FX míkroszkapcsoljnk, majd mennyiségileg meghatározzuk a GFAPpozitív asztrocilák és a MAC-1- és MHC Π-pozitív mikroglia által elfoglalt retrospleniális kortex százalékát. Az immunológiai reakciót adó metszet képét videó pufferben tároljuk, majd egy monokróm alapú küszöbértéket határozunk meg, hogy kiválasszuk és kiszámítsuk az immunológiaiiag jelzett sejtek által elfoglalt teljes píxelternletet. Minden egyes metszet esetében a retrospleniális kortexet (RSC) manuálisan körvonalazzuk, majd az RSC által elfoglalt teljes pixelterületet kiszámítjuk. Az asztroeitózis százaiékáta kővetkezők, szerint határozzuk meg:
(a GFAP-pal reagáló asztroeiták által elfoglalt RSC hányada) χ 100
Hasonlóképpen, a míkrogliózis százalékát a kővetkezők szerint
Minden képelemzéshez minden egyes állatból hat, a dorzálís híppocampus szintjéről származó, egymástól 240 pm konszekutív intervallummal elválasztott metszetet használunk. Az állatok kezelési státusa egyik esetben sem volt ismert a megfigyelő számáΠ-vei reagáló míkroglia által elfoglalt
Bár az előzőkben ismertetett találmányt részletesen ismertettük, a világos érthetőség .kedvéért, az nyilvánvaló, hogy bizonyos módosítások tehetők a csatolt igénypontok oltalmi körén belük A leírásban idézett összes publikációt és szabadalmi leírást minden szempontból, teljes terjedelmében referenciának tekintjük, ugyanúgy, mintha ezt egyenként megjegyeztük volna.
I. Táblázat
A Msálís Ö.D. 5ö%-ánál mért titer ......... . :
AíwmH i
A PDAPF löö-as 101-es ÍÖ2-es í ;ί 104« 105-ös 106« Íö7-es 108-as
| kora cgcr egér < egér * (egér egér égér egér
Η ,ι 70000 150000 120000 :! 50000 80000 100000 J
1 <ζ> 1 €Ο 1 1 6500« '*™™™-™«****- 55000 300 0 .................... í 15000 i ......1 » »
s 1 20000 50000 50000 400 15000 18000 60000
<Ξ> ο 60000 ........j 900 15000 50000
,Λ ΐ 9 s «00 i anno /Uwb ! axSÖCÖ .ö
ΙΖ 4vlW OUvUv wUw ............J Zf UV wvlv ZVWb
! :! :j í :! í
ί * > ί ♦ ί » ♦ Λ» φ
««» « «ί* > < ί « *’ » ♦ V κ » > « ’ ί ί ί <»
PBS-sel ίι ιίΛπό'/ΜΙ ί ί ν λ\νλ νών ΪΛ 1 '* Λ 4 V 'TOö-nál 1 AVW UUl
:: í
Π 3-as 114-es llS-ős :egér 116 egér 117-es 1 j
δ Φ bkg Φ bkg Φ bkg ..........—............“ <í.bk5
ΙΟ 5-bkg <4 bkg
—,: 12 <«!g <«kg <4. bkg
X » Φ χ χ φ φ χ* «ΧΦΦ ί
φφφ
Φ
Φ ΦΧ» φ » χ ♦ Φ φ « >
ί <
Φ φ * φ >
» ΦΦ φ » *Φ X X *
130

Claims (13)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Gyógyászati' készítmény, amely egy AB amiloid pepiid elleni antitestet és egy gyógyászatilag elfogadható, nem toxikus hordozót vagy hígítószert tartalmaz, valamely páciensben amiloid lerakódással jellemezhető betegség megelőzésénél vagy kezelésénél történő alkalmazásra, ahol az antitest izotípusa humán lgG1.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti, valamely páciensben amiloid lerakódással jellemezhető betegség megelőzésénél vagy kezelésénél való alkalmazásra szolgáló gyógyászati készítmény, ahol az antitest egy monoklonális antitest.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti, valamely páciensben amiloid lerakódással jellemezhető betegség megelőzésénél vagy kezelésénél való alkalmazásra szolgáló gyógyászati készítmény, ahol az antitest egy humanizált antitest vagy egy humán antitest.
  4. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti, valamely páciensben amiloid lerakódással jellemezhető betegség megelőzésénél vagy kezelésénél való alkalmazásra szolgáié gyógyászati készítmény, ahol az antitest specifikusan kötődik az AB amiloid peptid aggregéit formájához, anélkül, hogy a disszociált formához kötődne.
  5. 5. Az 1-3. Igénypontok bármelyike szerinti, valamely páciensben amiloid lerakódással jellemezhető betegség megelőzésénél vagy kezelésénél való alkalmazásra szolgáié gyógyászati készítmény, ahol az antitest specifikusan kötődik az AB amiloid pepiid disszociált formájához, anélkül, hogy az aggregált formához kötődne.
    8, Az 1-3, igénypontok bármelyike szerinti, valamely páciensben amiloid lerakódással jellemezhető betegség megelőzésénél vagy kezelésénél való alkalmazásra szolgáló gyógyászati készítmény, ahol az antitest az AB amiloid peptid disszociált formájához és aggregált. formájához egyaránt kötődik.
  6. 7. Az 1-6, igénypontok bármelyike szerinti, valamely páciensben amiloid lerakódással jellemezhető betegség megelőzésénél vagy kezelésénél való alkalmazásra szolgáló gyógyászati készítmény, ahol az amiloid lerakódás aggregált AB amiloid pepiidet tartalmaz,
  7. 8. Az 1-7, igénypontok bármelyike szerinti, valamely páciensben amiloid lerakódással jellemezhető betegség megelőzésénél vagy kezelésénél való alkalmazásra szolgáló gyógyászati készítmény, ahol a páciens ember.
  8. 9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti, valamely páciensben amiloid lerakódással jellemezhető betegség megelőzésénél vagy kezelésénél való alkalmazásra szolgáló gyógyászati készítmény; ahol betegség Alzbeimer-kór.
    16. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti, valamely páciensben amiloid lerakódással jellemezhető betegség megelőzésénél vagy kezelésénél való alkalmazásra szolgáló gyógyászati készítmény, ahol a páciens tünetmentes, adott esetben ahol a páciens SO évnél fiatalabb és/vagy olyan örökletes rizikófaktorokkal rendelkezik, amelyek Álzheimer-körra való hajlamot jeleznek.
  9. 11. Az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti, valamely páciensben amiloid lerakódással jellemezhető betegség megelőzésénél vagy kezelésénél való alkalmazásra szolgáló gyógyászati készítmény, ahol az antitestet orális, szubkután, 'intramuszkuláris, toplkális vagy intravénás úton adjuk be.
  10. 12. Az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti, valamely páciensben amiloid lerakódással jellemezhető betegség megelőzésénél vagy kezelésénél való alkalmazásra szolgáló gyógyászati készítmény, ahol az antitestet a befogadó testtömegére vonatkoztatott 8.Ö1 - 5 mg/kg mennyiségben adjuk be,
  11. 13. Az 1-12. igénypontok bármelyike szerinti, valamely páciensben amiloid lerakódással jellemezhető betegség megelőzésénél vagy kezelésénél való alkalmazásra szolgáló gyógyászati készítmény, amely készítményt egy első immunizálás majd 6 hetenkénti utókezelés útján, vagy egy első immunizálás és egy 1, 2 és 12 , . . 132 hónappal későbbi utókezelés útján, vagy élethosszig tartó 2 hónapos időközönkénti beadás útján juttatunk be.
  12. 14. In vitro eljárás valamely páciens Aizheimer-kőqának vagy a kórra való hajlamának folyamatos megfigyelésére amely eljárás az alábbiakat tartalmazza: detektálunk egy antitestet, amely specifikusan kötődik a páciensből vett mintában található A& peptidhez, ahol a páciensnek 1-6. igénypontok szerinti gyógyászati készítmény Alzheimer-kór megelőzésére vagy kezelésére szolgáló hatásos mennyiségét adtuk, és ahol a detektált antitest szintje meghatározza a páciens jövőbeli kezelési
  13. 15. in vitro eljárás valamely páciensnél az Atebeimer-kor elleni kezelés hatékonyságának kiértékelésére, amely az alábbiakat tartalmazza: meghatározzuk az 16. igénypontok szerinti gyógyászati készifménnyei kezelt páciens szövetmintájában az A& pepiidre specifikus antitest mennyiségét; az igy kapott eredményt összehasonlítjuk az olyan pácienseknél kapott kontroli-értékekkel, amely pácienseknél az 1-6. igénypontok szerinti antitesttel való kezelés hatására az Alzheimer-kór tüneteinek enyhülése vagy megszűnése volt megfigyelhető; ahol: a páciensnél mért értéknek legalább a kontroli-értékkel való egyezése a kezelésre történő pozitív válaszként tekintendő.
HU0100627A 1997-12-02 1998-11-30 Prevention and treatment of amyloidogenic disease HU228061B1 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US6774097P 1997-12-02 1997-12-02
US8097098P 1998-04-07 1998-04-07
PCT/US1998/025386 WO1999027944A1 (en) 1997-12-02 1998-11-30 Prevention and treatment of amyloidogenic disease

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP0100627A1 HUP0100627A1 (hu) 2001-06-28
HUP0100627A3 HUP0100627A3 (en) 2006-03-28
HU228061B1 true HU228061B1 (en) 2012-09-28

Family

ID=26748211

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0100627A HU228061B1 (en) 1997-12-02 1998-11-30 Prevention and treatment of amyloidogenic disease
HU1200431A HU228493B1 (en) 1997-12-02 1998-11-30 Prevention and treatment of amyloidogenic disease

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU1200431A HU228493B1 (en) 1997-12-02 1998-11-30 Prevention and treatment of amyloidogenic disease

Country Status (38)

Country Link
US (26) US20040171816A1 (hu)
EP (5) EP1033996B1 (hu)
JP (4) JP4677094B2 (hu)
KR (3) KR101248711B1 (hu)
CN (1) CN100374151C (hu)
AR (1) AR020050A1 (hu)
AT (4) ATE433760T1 (hu)
AU (1) AU1706199A (hu)
BG (1) BG104562A (hu)
BR (1) BR9815357A (hu)
CA (1) CA2312920C (hu)
CO (1) CO4980846A1 (hu)
CY (3) CY1108331T1 (hu)
CZ (1) CZ303137B6 (hu)
DE (7) DE06075704T1 (hu)
DK (4) DK1679080T3 (hu)
EA (3) EA009283B1 (hu)
EE (1) EE05377B1 (hu)
ES (4) ES2310017T3 (hu)
GE (2) GEP20043319B (hu)
HK (2) HK1095265A1 (hu)
HR (2) HRP20000443B1 (hu)
HU (2) HU228061B1 (hu)
ID (1) ID25504A (hu)
IL (5) IL136252A0 (hu)
IS (1) IS5500A (hu)
MY (1) MY134906A (hu)
NO (3) NO328865B1 (hu)
NZ (1) NZ504569A (hu)
PE (1) PE20001383A1 (hu)
PL (2) PL202706B1 (hu)
PT (4) PT1994937E (hu)
SA (1) SA99191269B1 (hu)
SG (1) SG111083A1 (hu)
SI (4) SI1033996T1 (hu)
TR (1) TR200001608T2 (hu)
TW (1) TWI239847B (hu)
WO (1) WO1999027944A1 (hu)

Families Citing this family (293)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997021728A1 (en) 1995-12-12 1997-06-19 Karolinska Innovations Ab PEPTIDE BINDING THE KLVFF-SEQUENCE OF AMYLOID $g(b)
US8173127B2 (en) * 1997-04-09 2012-05-08 Intellect Neurosciences, Inc. Specific antibodies to amyloid beta peptide, pharmaceutical compositions and methods of use thereof
US6703015B1 (en) 1999-09-03 2004-03-09 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Filamentous bacteriophage displaying an β-amyloid epitope
US7790856B2 (en) 1998-04-07 2010-09-07 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US6750324B1 (en) 1997-12-02 2004-06-15 Neuralab Limited Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies
US6787523B1 (en) 1997-12-02 2004-09-07 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US20080050367A1 (en) * 1998-04-07 2008-02-28 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
TWI239847B (en) 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
US6743427B1 (en) 1997-12-02 2004-06-01 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US6761888B1 (en) * 2000-05-26 2004-07-13 Neuralab Limited Passive immunization treatment of Alzheimer's disease
US7179892B2 (en) * 2000-12-06 2007-02-20 Neuralab Limited Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7964192B1 (en) * 1997-12-02 2011-06-21 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidgenic disease
US7588766B1 (en) * 2000-05-26 2009-09-15 Elan Pharma International Limited Treatment of amyloidogenic disease
US20050059802A1 (en) * 1998-04-07 2005-03-17 Neuralab Ltd Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US20030147882A1 (en) 1998-05-21 2003-08-07 Alan Solomon Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies
DE69942274D1 (de) * 1998-05-21 2010-06-02 Univ Tennessee Res Foundation Methoden zur amyloidentfernung mit anti-amyloid-antikörper
US7060670B1 (en) 1999-05-05 2006-06-13 Neurochem (International) Limited Stereoselective antifibrillogenic peptides and peptidomimetics thereof
CN1192799C (zh) 1999-05-13 2005-03-16 惠氏控股有限公司 佐剂组合制剂
AU2008203784B2 (en) * 1999-05-28 2012-01-19 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US6787637B1 (en) 1999-05-28 2004-09-07 Neuralab Limited N-Terminal amyloid-β antibodies
UA81216C2 (en) * 1999-06-01 2007-12-25 Prevention and treatment of amyloid disease
AU2005202644B2 (en) * 1999-06-01 2009-03-05 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidogenic disease
PE20010212A1 (es) * 1999-06-01 2001-02-22 Neuralab Ltd Composiciones del peptido a-beta y procesos para producir las mismas
US6582945B1 (en) 1999-06-16 2003-06-24 Boston Biomedical Research Institute Immunological control of β-amyloid levels in vivo
IL142948A0 (en) * 1999-09-03 2002-04-21 Univ Ramot Agents and compositions and methods utilizing same useful in diagnosing and/or treating or preventing plaque forming diseases
US7384640B1 (en) 1999-09-30 2008-06-10 Wyeth Holdings Corporation Mutant cholera holotoxin as an adjuvant
US20070135337A2 (en) * 1999-11-29 2007-06-14 Neurochem (International) Limited Vaccine for the Prevention and Treatment of Alzheimer's and Amyloid Related Diseases
US20020094335A1 (en) * 1999-11-29 2002-07-18 Robert Chalifour Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
EP1752472A3 (en) * 1999-12-08 2007-04-25 Intellect Neurosciences, Inc. Chimeric amyloid beta peptides
IL149976A0 (en) * 1999-12-08 2002-12-01 Mindset Biopharmaceuticals Usa Chimeric peptides as immunogens, antibodies thereto, and methods for immunization using chimeric peptides or antibodies
EP1259251B1 (en) * 2000-02-21 2005-10-19 Pharmexa A/S Novel method for down-regulation of amyloid
CA2400838C (en) * 2000-02-21 2013-04-23 Pharmexa A/S Novel method for down-regulation of amyloid
CZ306683B6 (cs) 2000-02-24 2017-05-03 Washington University Léčivo pro prevenci nebo léčení preklinické nebo klinické Alzheimerovy nemoci
US7485616B2 (en) 2000-04-05 2009-02-03 University Of Tennessee Research Foundation Methods of investigating, diagnosing, and treating amyloidosis
DE60108111T2 (de) 2000-05-22 2005-12-08 New York University Synthetische immunogene jedoch nicht amyloidogene peptide, die homolog zu amyloid beta sind und deren verwendung zur induktion einer immunantwort gegen amyloid beta und amyloidaggregate
JP2003516929A (ja) * 2000-06-01 2003-05-20 ニユーララブ・リミテツド アミロイド形成性疾患の予防および治療
US7371920B2 (en) 2000-06-20 2008-05-13 The Governing Council Of The University Of Toronto Transgenic mouse model of neurodegenerative disorders
PT1292187E (pt) * 2000-06-20 2006-07-31 Univ Toronto Modelo animal transgenico de disturbios neurodegenerativos
JP5008244B2 (ja) 2000-06-23 2012-08-22 ワイス・ホールディングズ・コーポレイション 野性型およびキメラのインフルエンザウイルス様粒子（ｖｌｐ）のアセンブリー
NZ523428A (en) * 2000-06-28 2008-03-28 Prana Biotechnology Ltd Neurotoxic oligomers
JP5362164B2 (ja) * 2000-07-07 2013-12-11 バイオアークティック ニューロサイエンス アーベー アルツハイマー病の予防及び治療
AU2007200047B2 (en) * 2000-07-07 2009-11-26 Bioarctic Neuroscience Ab Prevention and treatment of Alzheimer's disease
DK1317479T3 (da) * 2000-09-06 2009-11-23 Aventis Pharma Sa Fremgangsmåder og sammensætninger for sygdomme, der er associeret med amyloidosis
US20040038302A1 (en) * 2000-09-19 2004-02-26 Roger Nitsch Methods and compounds for treating brain amyloidosis
IL139308A0 (en) * 2000-10-26 2001-11-25 Marikovsky Moshe Peptides from amyloid precursor protein which inhibit tumor growth and metastasis
BR0115271A (pt) 2000-11-10 2005-12-13 Wyeth Corp Composição antigênica, método para incrementar a capacidade de uma composição antigênica em elicitar a resposta imunológica de um hospedeiro vertebrado, em elicitar linfócitos t citotóxicos em um hospedeiro vertebrado, em elicitar um efeito terapêutico ou profilático anti-câncer em um hospedeiro vertebrado, em moderar uma resposta alérgica em um hospedeiro vertebrado, e em prevenir ou tratar doença caracterizada por deposição amilóide em um hospedeiro vertebrado, e, formulação adjuvante
DE60141976D1 (de) 2000-11-29 2010-06-10 Univ Rochester Helfervirus-freie herpesvirus-amplifikatpartikel und deren verwendungen
US7700751B2 (en) 2000-12-06 2010-04-20 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize β-amyloid peptide
PE20020574A1 (es) * 2000-12-06 2002-07-02 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta
US7118756B2 (en) 2000-12-28 2006-10-10 Wyeth Recombinant protective protein from Streptococcus pneumoniae
US7264810B2 (en) 2001-01-19 2007-09-04 Cytos Biotechnology Ag Molecular antigen array
US6815175B2 (en) 2001-03-16 2004-11-09 Cornell Research Foundation, Inc. Anti-amyloid peptide antibody based diagnosis and treatment of a neurological disease or disorder
GB0109297D0 (en) 2001-04-12 2001-05-30 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
WO2002088307A2 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Eli Lilly And Company Humanized antibodies
EP1385545B1 (en) 2001-04-30 2009-01-07 Eli Lilly And Company Humanized antibodies recognizing the beta-amyloid peptide
US8092791B2 (en) 2001-05-23 2012-01-10 University Of Rochester Method of producing herpes simplex virus amplicons, resulting amplicons, and their use
US6906169B2 (en) 2001-05-25 2005-06-14 United Biomedical, Inc. Immunogenic peptide composition comprising measles virus Fprotein Thelper cell epitope (MUFThl-16) and N-terminus of β-amyloid peptide
IL159209A0 (en) 2001-06-07 2004-06-01 Wyeth Corp Mutant forms of cholera holotoxin as an adjuvant
KR100898648B1 (ko) 2001-06-07 2009-05-22 와이어쓰 홀딩스 코포레이션 보조제로서 콜레라 홀로톡신의 돌연변이체 형태
US7829087B2 (en) 2001-07-09 2010-11-09 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cognitive impairment
JP4351043B2 (ja) 2001-07-09 2009-10-28 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド アミロイド毒性の阻害方法
EP1519740A4 (en) * 2001-08-17 2005-11-09 Lilly Co Eli FASTER IMPROVEMENT OF COGNITION IN DISEASES ASSOCIATED WITH A-BETA
US20040192898A1 (en) * 2001-08-17 2004-09-30 Jia Audrey Yunhua Anti-abeta antibodies
CA2452104A1 (en) * 2001-08-17 2003-02-27 Eli Lilly And Company Use of antibodies having high affinity for soluble ass to treat conditions and diseases related to ass
US7771722B2 (en) * 2001-08-17 2010-08-10 Eli Lilly And Company Assay method for alzheimer's disease
PT1416965E (pt) * 2001-08-17 2008-04-01 Lilly Co Eli Método de ensaio para a doença de alzheimer
MY144532A (en) * 2001-08-20 2011-09-30 Lundbeck & Co As H Novel method for down-regulation of amyloid
US20030082191A1 (en) * 2001-08-29 2003-05-01 Poduslo Joseph F. Treatment for central nervous system disorders
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
CA2466841A1 (en) * 2001-11-21 2003-06-05 New York University Synthetic immunogenic but non-deposit-forming polypeptides and peptides homologous to amyloid .beta., prion protein, amylin, .alpha.-synuclein, or polyglutamine repeats for induction of an immune response thereto
US20040052928A1 (en) 2002-09-06 2004-03-18 Ehud Gazit Peptides and methods using same for diagnosing and treating amyloid-associated diseases
AR038568A1 (es) 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
US20040001848A1 (en) * 2002-03-01 2004-01-01 Szu-Yi Chou Method of producing disease-specific antigens
EP1480666B1 (en) 2002-03-05 2012-06-13 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Immunizing composition and method for inducing an immune response against the beta-secretase cleavage site of amyloid precursor protein
MY139983A (en) * 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
CA2493119A1 (en) * 2002-07-17 2004-01-22 Mindset Biopharmaceuticals Usa Inc. Peptides and methods of screening immunogenic peptide vaccines against alzheimer's disease
SI1524994T1 (sl) 2002-07-19 2011-08-31 Cytos Biotechnology Ag Sestavki cepiv, ki vsebujejo amiloidne beta 1-6 antigenske mreĹľe
AU2003256789A1 (en) 2002-08-13 2004-02-25 U.S. Department Of Veterans Affairs Method of detecting and preventing alzheimer's disease, particularly at prodromal and early stages
US7785608B2 (en) 2002-08-30 2010-08-31 Wyeth Holdings Corporation Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
US9535076B2 (en) 2002-09-12 2017-01-03 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for eliciting an amyloid-selective immune response
JP2006516535A (ja) * 2002-09-12 2006-07-06 ザ、リージェンツ、オブ、ザ、ユニバーシティ、オブ、カリフォルニア 異なる配列のタンパク質から形成されたアミロイドに共通する高分子量凝集中間体に対して特異的な免疫原および対応する抗体
US20040146512A1 (en) * 2002-10-09 2004-07-29 Arnon Rosenthal Methods of treating Alzheimer's disease using antibodies directed against amyloid beta peptide and compositions thereof
US9034337B2 (en) 2003-10-31 2015-05-19 Prothena Biosciences Limited Treatment and delay of outset of synucleinopathic and amyloidogenic disease
US8697082B2 (en) 2002-11-01 2014-04-15 Neotope Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
TW200509968A (en) 2002-11-01 2005-03-16 Elan Pharm Inc Prevention and treatment of synucleinopathic disease
US20080014194A1 (en) 2003-10-31 2008-01-17 Elan Pharmaceuticals, Inc. Prevention and Treatment of Synucleinopathic and Amyloidogenic Disease
US8506959B2 (en) * 2002-11-01 2013-08-13 Neotope Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
CN100450551C (zh) * 2002-11-29 2009-01-14 中国医学科学院基础医学研究所 用于治疗和预防阿尔茨海默病的重组腺相关病毒基因疫苗及其用途
US20070010435A1 (en) 2002-12-19 2007-01-11 New York University Method for treating amyloid disease
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
CN1745175A (zh) * 2003-02-01 2006-03-08 神经实验室有限公司 自动免疫产生针对可溶性A－β的抗体
ES2344645T3 (es) 2003-02-10 2010-09-02 Applied Molecular Evolution, Inc. Moleculas de union al abeta.
JP5036302B2 (ja) * 2003-02-10 2012-09-26 ティオー − ビービービー ホールディング ベスローテン フェンノートシャップ 炎症状態下に血液脳関門で示差的（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ）に発現される核酸
US8663650B2 (en) 2003-02-21 2014-03-04 Ac Immune Sa Methods and compositions comprising supramolecular constructs
US20060251675A1 (en) * 2003-03-17 2006-11-09 Michael Hagen Mutant cholera holotoxin as an adjuvant and an antigen carrier protein
KR100546066B1 (ko) * 2003-03-21 2006-01-26 한국생명공학연구원 베타아밀로이드 유전자의 다중 연결체를 발현하는 형질전환 식물 세포 및 이로부터 배양된 식물
WO2004087733A2 (en) * 2003-03-28 2004-10-14 New York University Prevention and treatment of alzheimer amyloid deposition
US7732162B2 (en) 2003-05-05 2010-06-08 Probiodrug Ag Inhibitors of glutaminyl cyclase for treating neurodegenerative diseases
ES2246178B1 (es) * 2003-05-08 2007-03-01 Universidad De Zaragoza. Uso de anticuerpos para el tratamiento de enfermedades amiloideas.
US7358331B2 (en) 2003-05-19 2008-04-15 Elan Pharmaceuticals, Inc. Truncated fragments of alpha-synuclein in Lewy body disease
TWI306458B (en) 2003-05-30 2009-02-21 Elan Pharma Int Ltd Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
JP4888876B2 (ja) 2003-06-13 2012-02-29 田平 武 アルツハイマー病の治療のための組換えアデノ随伴ウィルスベクター
CA2530927A1 (en) 2003-06-30 2005-01-06 Tel Aviv University Future Technology Development L.P. Peptides antibodies directed thereagainst and methods using same for diagnosing and treating amyloid-associated diseases
WO2005014041A2 (en) * 2003-07-24 2005-02-17 Novartis Ag Use of an amyloid beta dna vaccine for the treatment and/or prevention of amyloid diseases
US7807171B2 (en) 2003-07-25 2010-10-05 Ac Immune Sa Therapeutic vaccine targeted against P-glycoprotein 170 for inhibiting multidrug resistance in the treatment of cancers
GB0321615D0 (en) 2003-09-15 2003-10-15 Glaxo Group Ltd Improvements in vaccination
EP1682171A4 (en) * 2003-11-07 2008-02-27 Univ Rochester COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATING NEUROLOGICAL ILLNESSES
US7674599B2 (en) 2003-11-08 2010-03-09 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods of using antibodies to detect alpha-synuclein in fluid samples
PT2336147E (pt) * 2003-12-17 2014-07-16 Janssen Alzheimer Immunotherap Conjugados transportadores de péptidos beta imunogénicos e seus processos de produção
US20050225165A1 (en) * 2004-04-13 2005-10-13 Naik Sanjeev M Brake by-wire control system
WO2005102385A1 (en) 2004-04-26 2005-11-03 Innate Pharma Adjuvant composition and methods for its use
GB0410220D0 (en) 2004-05-07 2004-06-09 Kirkham Lea Ann Mutant pneumolysin proteins
SE0401601D0 (sv) 2004-06-21 2004-06-21 Bioarctic Neuroscience Ab Protofibril specific antibodies and uses thereof
KR101347105B1 (ko) * 2004-06-25 2014-01-02 더 브리검 앤드 우먼즈 하스피털, 인크. 신경계 장애의 예방을 위한 조성물 및 방법
US7955812B2 (en) 2004-07-19 2011-06-07 The General Hospital Corporation Methods of diagnosing alzheimer's disease by detecting antibodies to cross-linked β-amyloid oligomers
US7807165B2 (en) 2004-07-30 2010-10-05 Rinat Neuroscience Corp. Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods using same
CN101080421A (zh) 2004-08-11 2007-11-28 三菱化学株式会社 抗体以及其利用
ZA200703561B (en) * 2004-10-05 2009-09-30 Wyeth Corp Methods and compositions for improving recombinant protein production
WO2006044666A2 (en) * 2004-10-15 2006-04-27 Northeastern University Detection of disease associated proteolysis by direct mass spectrometry analysis of low molecular weight peptides
GB0424563D0 (en) 2004-11-05 2004-12-08 Novartis Ag Organic compounds
AR052051A1 (es) 2004-12-15 2007-02-28 Neuralab Ltd Anticuerpos ab humanizados usados en mejorar la cognicion
TW200635608A (en) * 2004-12-15 2006-10-16 Neuralab Ltd Aβ antibodies for use in improving cognition
CA2593846A1 (en) * 2005-01-14 2006-08-10 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for inhibiting drusen formation and for diagnosing or treating drusen-related disorders
CA2589860A1 (en) 2005-01-24 2006-08-03 Amgen Inc. Humanized anti-amyloid antibody
JP2008528638A (ja) * 2005-01-28 2008-07-31 ワイス ポリペプチドの安定化液体処方
GT200600031A (es) 2005-01-28 2006-08-29 Formulacion anticuerpo anti a beta
CA2605957A1 (en) * 2005-04-20 2006-10-26 Dnavec Corporation Highly safe intranasally administrable gene vaccines for treating alzheimer's disease
JP4903159B2 (ja) * 2005-04-20 2012-03-28 ディナベック株式会社 アルツハイマー病の治療のための安全性に優れた鼻腔内投与可能遺伝子ワクチン
MY148086A (en) * 2005-04-29 2013-02-28 Rinat Neuroscience Corp Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods using same
WO2006119352A2 (en) * 2005-05-03 2006-11-09 University Of South Florida Method of treating cognitive decline and synaptic loss related to alzheimer's disease
CA2607868A1 (en) 2005-05-05 2006-11-16 Merck & Co., Inc. Peptide conjugate compositions and methods for the prevention and treatment of alzheimer's disease
WO2006126682A1 (ja) * 2005-05-27 2006-11-30 Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute アルツハイマー病の予防・治療用ワクチン
ES2402650T3 (es) * 2005-06-17 2013-05-07 Janssen Alzheimer Immunotherapy Métodos de purificación de anticuerpos anti A beta
AU2006268293B2 (en) 2005-07-10 2011-03-17 Assia Spe, Llc Adaptive margin and band control
WO2007056401A1 (en) * 2005-11-09 2007-05-18 Merck & Co., Inc. Method for identifying modulators of osbp useful for treating alzheimer's disease
EP1963369B1 (en) * 2005-11-28 2013-05-15 Zymogenetics, Inc. Il-21 antagonists
JP2009517406A (ja) * 2005-11-28 2009-04-30 ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド Ｉｌ−２１受容体アンタゴニスト
DK1954718T3 (en) 2005-11-30 2014-12-15 Abbvie Inc Anti-A-globulomer antibodies antigenbindingsgrupper thereof, corresponding hybridomas, nucleic acids, vectors, host cells, methods for producing said antibodies,
EP1976877B2 (en) 2005-11-30 2016-10-05 AbbVie Inc. Monoclonal antibodies against amyloid beta protein and uses thereof
WO2007067512A2 (en) * 2005-12-08 2007-06-14 Merck & Co., Inc. Method for identifying modulators of adprh useful for treating alzheimer's disease
MX358175B (es) * 2005-12-12 2018-08-08 Ac Immune Sa Anticuerpos monoclonales especificos 1-42 beta con propiedades terapeuticas.
TWI382990B (zh) 2005-12-12 2013-01-21 Hoffmann La Roche 可變區域抗體之糖化
CA2638775A1 (en) * 2006-02-22 2007-08-30 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Peptide vaccine for inducing production of anti-amyloid-.beta.-peptide antibody
ATE492561T1 (de) 2006-03-23 2011-01-15 Bioartic Neuroscience Ab Verbesserte protofibrilselektive antikörper und deren verwendung
WO2009017467A1 (en) 2007-07-27 2009-02-05 Elan Pharma International Limited Treatment of amyloidogenic diseases
US8784810B2 (en) 2006-04-18 2014-07-22 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of amyloidogenic diseases
US7479550B2 (en) 2006-06-02 2009-01-20 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Amyloid β gene vaccines
WO2008011348A2 (en) * 2006-07-14 2008-01-24 Ac Immune S.A. Humanized antibody against amyloid beta
WO2008021296A2 (en) * 2006-08-14 2008-02-21 Thymon, L.L.C. Compositions and methods for the treatment and prophylaxis of alzheimer's disease
MX2009003542A (es) * 2006-10-12 2009-04-15 Wyeth Corp Metodos y composiciones con opalescencia reducida.
US8188046B2 (en) * 2006-10-16 2012-05-29 University Of South Florida Amyloid beta peptides and methods of use
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
US20080214987A1 (en) 2006-12-22 2008-09-04 Nanomed Devices, Inc. Microdevice And Method For Transdermal Delivery And Sampling Of Active Substances
AR064642A1 (es) 2006-12-22 2009-04-15 Wyeth Corp Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi
KR101735257B1 (ko) 2007-01-05 2017-05-12 유니버시티 오브 취리히 질환 특이적 결합 분자 및 표적을 제공하는 방법
IL199534A (en) 2007-01-05 2013-01-31 Univ Zuerich An isolated human antibody capable of detecting a neoepitope in a disease-related protein, a polynucleotide encoding an antibody, a vector containing the polynucleotide, a host cell containing the polynucleotide or vector, a preparation containing the antibody and related methods and uses.
DK2104682T3 (en) 2007-01-11 2017-01-16 Michael Bacher DIAGNOSIS AND TREATMENT OF ALZHEIMER'S AND OTHER DEMENTIA DISEASES
ES2535641T3 (es) 2007-01-18 2015-05-13 Eli Lilly & Company Amiloide beta Fab pegilado
US8147833B2 (en) 2007-02-23 2012-04-03 Neotope Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
EP2583978B1 (en) 2007-02-23 2016-04-06 Prothena Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
EP2486928A1 (en) 2007-02-27 2012-08-15 Abbott GmbH & Co. KG Method for the treatment of amyloidoses
US7618944B2 (en) * 2007-03-01 2009-11-17 Intezyne Technologies, Inc. Encapsulated amyloid-beta peptides
NZ579310A (en) 2007-03-01 2012-03-30 Probiodrug Ag Use of glutaminyl cyclase inhibitors for the treatment of mild cognitive impairment and diagnostic purposes thereof
EP2142514B1 (en) 2007-04-18 2014-12-24 Probiodrug AG Thiourea derivatives as glutaminyl cyclase inhibitors
JP2011526240A (ja) * 2007-04-18 2011-10-06 ヤンセン アルツハイマー イミュノセラピー 脳アミロイド血管症の予防および治療
US8003097B2 (en) 2007-04-18 2011-08-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of cerebral amyloid angiopathy
EP2012122A1 (en) * 2007-07-06 2009-01-07 Medigene AG Mutated parvovirus structural proteins as vaccines
JP2010528583A (ja) * 2007-06-11 2010-08-26 エーシー イミューン ソシエテ アノニム アミロイドβに対するヒト化抗体
US8048420B2 (en) 2007-06-12 2011-11-01 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
US8613923B2 (en) 2007-06-12 2013-12-24 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
EP2170389B1 (en) * 2007-06-12 2014-10-29 AC Immune S.A. Humanized antibodies to amyloid beta
ES2466916T3 (es) 2007-06-27 2014-06-11 Admune Therapeutics Llc Complejos de IL-15 e IL-15R alfa y usos de los mismos
AU2008303023B2 (en) 2007-09-27 2014-01-09 Immunovaccine Technologies Inc. Use of liposomes in a carrier comprising a continuous hydrophobic phase for delivery of polynucleotides in vivo
EP2205631B1 (en) * 2007-10-05 2016-11-23 Genentech, Inc. Methods and compositions for diagnosis and treatment of amyloidosis
SG178809A1 (en) * 2007-10-05 2012-03-29 Genentech Inc Use of anti-amyloid beta antibody in ocular diseases
CA2701793C (en) 2007-10-05 2017-04-25 Genentech, Inc. Use of anti-amyloid beta antibody in ocular diseases
JO3076B1 (ar) * 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
WO2009057664A1 (ja) * 2007-10-29 2009-05-07 Mitsubishi Chemical Corporation 抗体及びその利用
CA2707026C (en) * 2007-12-07 2017-04-11 Zymogenetics, Inc. Anti-human il-21 monoclonal antibodies
EP2261254A3 (en) 2007-12-21 2011-04-13 Amgen, Inc Anti-amyloid antibodies and uses thereof
WO2009090650A2 (en) * 2008-01-16 2009-07-23 Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Vaccine for alzheimer's disease
US20110070298A1 (en) * 2008-06-05 2011-03-24 Immunovaccine Technologies Inc. Compositions Comprising Liposomes, An Antigen, A Polynucleotide and A Carrier Comprising a Continuous Phase of a Hydrophobic Substance
JP5699081B2 (ja) * 2008-09-05 2015-04-08 アイ ディー バイオメディカル コーポレーション オブ ケベック 新規の組成物及びアジュバント
US20110263450A1 (en) * 2008-09-26 2011-10-27 The University Of Melbourne Alzheimer's disease biomarkers
US9067981B1 (en) 2008-10-30 2015-06-30 Janssen Sciences Ireland Uc Hybrid amyloid-beta antibodies
CN102272301A (zh) * 2008-10-31 2011-12-07 生物载体株式会社 用于治疗阿尔茨海默病的载体
RU2478396C2 (ru) 2008-11-05 2013-04-10 ВАЙЕТ ЭлЭлСи МНОГОКОМПОНЕНТНАЯ ИММУНОГЕННАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ, ВЫЗВАННОГО β-ГЕМОЛИТИЧЕСКИМИ СТРЕПТОКОККАМИ (БГС)
EP2949666B1 (en) 2008-12-19 2018-12-19 Biogen International Neuroscience GmbH Human anti-alpha-synuclein antibodies
US8614297B2 (en) * 2008-12-22 2013-12-24 Hoffmann-La Roche Inc. Anti-idiotype antibody against an antibody against the amyloid β peptide
US9925282B2 (en) 2009-01-29 2018-03-27 The General Hospital Corporation Cromolyn derivatives and related methods of imaging and treatment
AU2010221418B2 (en) 2009-03-02 2015-06-04 Dignity Health Diagnostic devices and methods of use
FR2945538B1 (fr) 2009-05-12 2014-12-26 Sanofi Aventis Anticorps humanises specifiques de la forme protofibrillaire du peptide beta-amyloide.
JP5883384B2 (ja) 2009-08-13 2016-03-15 ザ ジョンズ ホプキンス ユニバーシティー 免疫機能を調節する方法
CA2772488C (en) 2009-09-11 2018-04-17 Probiodrug Ag Heterocyclic derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase
US9757398B2 (en) 2010-02-20 2017-09-12 Euroespes Biotecnnologia, S.L. Prevention and treatment of alzheimer's disease by amyloid beta peptide and sphin-gosine-1-phosphate
PE20130527A1 (es) 2010-03-03 2013-05-09 Boehringer Ingelheim Int Polipeptidos de union a a-beta biparatopicos
SG183854A1 (en) * 2010-03-03 2012-10-30 Univ British Columbia Oligomer-specific amyloid beta epitope and antibodies
US9181233B2 (en) 2010-03-03 2015-11-10 Probiodrug Ag Inhibitors of glutaminyl cyclase
US8269019B2 (en) 2010-03-10 2012-09-18 Probiodrug Ag Inhibitors
CA2796339C (en) 2010-04-15 2020-03-31 Abbott Laboratories Amyloid-beta binding proteins
EP2560953B1 (en) 2010-04-21 2016-01-06 Probiodrug AG Inhibitors of glutaminyl cyclase
EP2576617B1 (en) 2010-06-04 2016-04-27 Georg-August-Universität Göttingen Stiftung Öffentlichen Rechts Universitätsmedizin MONOCLONAL ANTIBODIES TARGETING Aß OLIGOMERS
CN103179981B (zh) 2010-07-30 2017-02-08 Ac免疫有限公司 安全和功能性的人源化抗β‑淀粉样蛋白抗体
WO2012020124A1 (en) 2010-08-12 2012-02-16 Ac Immune S.A. Vaccine engineering
US9062101B2 (en) 2010-08-14 2015-06-23 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Amyloid-beta binding proteins
ES2639035T3 (es) 2010-08-23 2017-10-25 Wyeth Llc Formulaciones estables de antígenos rLP2086 de Neisseria meningitidis
RU2546873C2 (ru) 2010-09-10 2015-04-10 УАЙТ ЭлЭлСи Нелипидизированные варианты антигенов neisseria meningitidis orf2086
CA2817973C (en) 2010-10-15 2019-06-25 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Antibodies that bind amyloid oligomers
AR083561A1 (es) 2010-10-26 2013-03-06 Ac Immune Sa Preparacion de una construccion antigenica
MX2013005413A (es) 2010-11-15 2014-02-27 Univ Ramot Analogos de dipeptidos para el tratamiento de afecciones asociadas con la formacion de fibrillas amiloides.
JP6050264B2 (ja) 2011-03-16 2016-12-21 プロビオドルグ エージー グルタミニルシクラーゼの阻害剤としてのベンゾイミダゾール誘導体
RU2473133C2 (ru) * 2011-03-30 2013-01-20 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения и социального развития РФ Способ профилактики системного амилоидоза и его нефропатической формы у экспериментальных животных
EP2691393B1 (en) 2011-03-31 2016-09-14 Pfizer Inc Novel bicyclic pyridinones
BR112013030963B1 (pt) * 2011-06-01 2020-12-01 Xiamen University proteína de fusão, polinucleotídio, constructo, vetor, célula hospedeira, composição farmacêutica ou vacina, uso da proteína de fusão, método para modificar uma proteína alvo para melhorar sua imunogenicidade e uso do fragmento de crm197 ou um fragmento do mesmo
WO2012172449A1 (en) 2011-06-13 2012-12-20 Pfizer Inc. Lactams as beta secretase inhibitors
PT2723379T (pt) 2011-06-23 2018-11-14 Univ Of Zuerich Moléculas de ligação anti-alfa-sinucleína
WO2013012811A2 (en) 2011-07-19 2013-01-24 New York University Immunotherapeutic modulation of amyloidogenic disease using non-fibrillogenic, non-amyloidogenic polymerized proteins and peptides
WO2013013056A1 (en) 2011-07-19 2013-01-24 New York University Method for treating amyloid disease
CN102895659B (zh) * 2011-07-29 2014-10-29 复旦大学 一种防治老年痴呆症复合疫苗及其制备方法
US20150065449A1 (en) 2011-08-12 2015-03-05 Florida State University Research Foundation, Inc. Treating Amyloidoses With A Vitamin B12 Composition Including Melatonin, Resveratrol, and EGCG
US20150065448A1 (en) * 2011-08-12 2015-03-05 The Florida State University Research Foundation Inc. Methods of treating amyloidoses with vitamin b12 and diagnostic test for detecting the presence of amyloid-beta peptides
EP2751116B1 (en) 2011-08-31 2016-10-12 Pfizer Inc Hexahydropyrano [3,4-d][1,3]thiazin-2-amine compounds
PL2579042T3 (pl) 2011-10-04 2014-12-31 Affiris Ag Sposób wykrywania przeciwciał swoistych wobec Aß w próbce biologicznej
CA2853100A1 (en) * 2011-10-24 2013-05-02 Intellect Neurosciences, Inc. Compositions and methods for treatment of proteinopathies
JP2012102131A (ja) * 2012-01-05 2012-05-31 Elan Pharma Internatl Ltd アミロイド形成性疾患の予防および治療
AU2013229063B2 (en) 2012-03-09 2016-10-06 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
SA115360586B1 (ar) 2012-03-09 2017-04-12 فايزر انك تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها
ES2585262T3 (es) 2012-05-04 2016-10-04 Pfizer Inc Compuestos heterocíclicos de hexahidropiran[3,4-d][1,3]tiazin-2-amina sustituidos como inhibidores de PPA, BACE1 y BACE2
ES2637245T3 (es) 2012-06-29 2017-10-11 Pfizer Inc. Nuevas 4-(amino sustituido)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidinas como inhibidores de LRRK2
EP2897964A1 (en) 2012-09-20 2015-07-29 Pfizer Inc. Alkyl-substituted hexahydropyrano [3,4-d][1,3]thiazin-2-amine compounds
UA110688C2 (uk) 2012-09-21 2016-01-25 Пфайзер Інк. Біциклічні піридинони
US10058530B2 (en) 2012-10-25 2018-08-28 The General Hospital Corporation Combination therapies for the treatment of Alzheimer's disease and related disorders
JP6499077B2 (ja) 2012-10-25 2019-04-10 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション アルツハイマー病と関連疾患の治療のための併用療法
US9295393B2 (en) 2012-11-09 2016-03-29 Elwha Llc Embolism deflector
EP2931731A1 (en) 2012-12-11 2015-10-21 Pfizer Inc. Hexahydropyrano [3,4-d][1,3]thiazin-2-amine compounds as inhibitors of bace1
WO2014097038A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Pfizer Inc. CARBOCYCLIC- AND HETEROCYCLIC-SUBSTITUTED HEXAHYDROPYRANO[3,4-d][1,3]THIAZIN-2-AMINE COMPOUNDS
AU2014203873A1 (en) 2013-01-07 2015-07-30 Biomedical Research Models, Inc. Therapeutic vaccines for treating herpes simplex virus type 2 infections
EP2956458B1 (en) 2013-02-13 2017-08-09 Pfizer Inc Heteroaryl-substituted hexahydropyrano[3,4-d][1,3]thiazin-2-amine compounds
US9233981B1 (en) 2013-02-15 2016-01-12 Pfizer Inc. Substituted phenyl hexahydropyrano[3,4-d][1,3]thiazin-2-amine compounds
PE20151332A1 (es) 2013-02-19 2015-09-20 Pfizer Compuestos de azabencimidazol
EP2964665B1 (en) 2013-03-08 2018-08-01 Pfizer Inc Immunogenic fusion polypeptides
WO2014159614A1 (en) * 2013-03-14 2014-10-02 Flow Pharma, Inc. Adjuvant and antigen particle formulation
US9102752B2 (en) 2013-03-15 2015-08-11 United Biomedical, Inc. Peptide vaccine for prevention and immunotherapy of dementia of the Alzheimer's type
EP2787347A1 (en) 2013-04-03 2014-10-08 Affiris AG Method for detecting Aß-specific antibodies in a biological sample
US10525005B2 (en) 2013-05-23 2020-01-07 The General Hospital Corporation Cromolyn compositions and methods thereof
EP3027205A4 (en) 2013-07-28 2017-07-19 Qantu Therapeutics, Inc. Vaccine formulations that induce a th2 immune response
KR20210002757A (ko) 2013-09-08 2021-01-08 화이자 인코포레이티드 나이세리아 메닌지티디스 조성물 및 그의 방법
WO2015049616A1 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Pfizer Inc. Novel bicyclic pyridinones as gamma-secretase modulators
CN106102737B (zh) 2013-10-22 2019-06-14 综合医院公司 色甘酸衍生物以及成像和治疗的相关方法
WO2015092592A1 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Pfizer Inc. Novel 3,4-disubstituted-1h-pyrrolo[2,3-b]pyridines and 4,5-disubstituted-7h-pyrrolo[2,3-c]pyridazines as lrrk2 inhibitors
BR112016022519A8 (pt) 2014-04-01 2018-03-06 Pfizer cromeno e 1,1a,2,7b-tetra-hidrociclopropa[c]cromeno piridopirazinadionas como moduladores de gama-secretase
CR20160455A (es) 2014-04-10 2016-12-16 Pfizer 2-AMINO-6-METIL-4,4a,5,6-TETRAHIDROPIRANO[3,4-d][1,3]TIAZIN-8a(8H)-IL-1,3-TIAZOL-4-ILA
DK3137094T3 (da) 2014-04-29 2023-02-27 Advantage Therapeutics Inc Behandling og forebyggelse af alzheimers sygdom (ad)
WO2015165961A1 (en) 2014-04-29 2015-11-05 Affiris Ag Treatment and prevention of alzheimer's disease (ad)
WO2015165964A1 (en) * 2014-04-29 2015-11-05 Affiris Ag Treatment and prevention of alzheimer's disease (ad)
WO2015165971A1 (en) * 2014-04-29 2015-11-05 Affiris Ag Treatment and prevention of alzheimer's disease (ad)
SI3137093T1 (en) * 2014-04-29 2018-01-31 Affiris Ag Treatment and prevention of Alzheimer's disease
KR101892837B1 (ko) * 2014-06-17 2018-08-28 아카데미아 시니카 B 림프구 상에서 CD23을 가교시키지만 비만 세포는 감작하지 않는 인간화된 항-IgE 항체
JO3537B1 (ar) 2014-07-10 2020-07-05 Bioarctic Neuroscience Ab أجسام مضادة لييفية أولية لاميلويد بيتا الببتيد ab المحسنة
JP6713982B2 (ja) 2014-07-24 2020-06-24 ファイザー・インク ピラゾロピリミジン化合物
KR102061952B1 (ko) 2014-08-06 2020-01-02 화이자 인코포레이티드 이미다조피리다진 화합물
MA41115A (fr) 2014-12-02 2017-10-10 Biogen Int Neuroscience Gmbh Procédé de traitement de la maladie d'alzheimer
KR102000382B1 (ko) 2015-02-03 2019-07-15 화이자 인코포레이티드 신규 시클로프로파벤조푸라닐 피리도피라진디온
RU2723045C2 (ru) 2015-02-19 2020-06-08 Пфайзер Инк. Композиции neisseria meningitidis и способы их получения
CA2989456C (en) 2015-06-17 2022-01-04 Pfizer Inc. Tricyclic compounds and their use as phosphodiesterase inhibitors
EP4074730A1 (en) 2015-06-24 2022-10-19 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-transferrin receptor antibodies with tailored affinity
CN108137586B (zh) 2015-09-14 2021-04-13 辉瑞大药厂 作为LRRK2抑制剂的新颖咪唑并[4,5-c]喹啉和咪唑并[4,5-c][1,5]萘啶衍生物
WO2017051303A1 (en) 2015-09-24 2017-03-30 Pfizer Inc. Tetrahydropyrano[3,4-d][1,3]oxazin derivatives and their use as bace inhibitors
EP3353174A1 (en) 2015-09-24 2018-08-01 Pfizer Inc N-[2-(3-amino-2,5-dimethyl-1,1-dioxido-5,6-dihydro-2h-1,2,4-thiadiazin-5-yl)-1,3-thiazol-4-yl]amides useful as bace inhibitors
BR112018003489A2 (pt) 2015-09-24 2018-09-25 Pfizer n-[2-(2-amino-6,6-dissubstituído-4,4a,5,6-tetra-hidropirano[3,4-d][1,3]tiazin-8a(8h)-il)-1,3-tiazol-4-il]amidas
NZ741067A (en) 2015-10-02 2023-07-28 Hoffmann La Roche Bispecific anti-human cd20/human transferrin receptor antibodies and methods of use
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
EP3374381A4 (en) * 2015-11-09 2019-05-15 The University Of British Columbia EPITAOPES IN THE CENTRAL REGION OF BETA-AMYLOID AND RELATED CONFORMATIONAL ANTIBODIES
JP7452829B2 (ja) * 2015-11-09 2024-03-19 ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア アミロイドベータのエピトープおよびそれに対する抗体
EP3374379A4 (en) 2015-11-09 2019-05-15 The University Of British Columbia N-TERMINAL EPITOPES IN BETA-AMYLOID AND CONFORMATIONALLY SELECTIVE ANTIBODIES THEREOF
RU2719599C2 (ru) 2016-02-23 2020-04-21 Пфайзер Инк. Соединения 6, 7-дигидро-5H-пиразоло[5,1-b][1,3]оксазин-2-карбоксамида
JP7046018B2 (ja) 2016-07-01 2022-04-01 ファイザー・インク 神経性疾患および神経変性疾患を処置するための５，７－ジヒドロピロロピリジン誘導体
US20190240194A1 (en) 2016-08-31 2019-08-08 The General Hospital Corporation Macrophages/microglia in neuro-inflammation associated with neurodegenerative diseases
US20180125920A1 (en) 2016-11-09 2018-05-10 The University Of British Columbia Methods for preventing and treating A-beta oligomer-associated and/or -induced diseases and conditions
IL303108B1 (en) 2017-01-31 2024-03-01 Pfizer NEISSERIA MENINGITIDIS preparations and methods therefor
ES2910083T3 (es) 2017-03-10 2022-05-11 Pfizer Derivados de imidazo[4,5-c]quinolina cíclicos sustituidos
JP7219223B2 (ja) 2017-03-10 2023-02-07 ファイザー・インク ＬＲＲＫ２阻害剤としての新規のイミダゾ［４，５－ｃ］キノリン誘導体
RU2678987C2 (ru) 2017-04-28 2019-02-05 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная фирма ВЕРТА" Пептид для лечения болезни альцгеймера
WO2018226992A1 (en) 2017-06-07 2018-12-13 Adrx, Inc. Tau aggregation inhibitors
KR20200013783A (ko) 2017-06-22 2020-02-07 화이자 인코포레이티드 디히드로-피롤로-피리딘 유도체
US11209638B2 (en) * 2017-07-05 2021-12-28 West Virginia University Systems and methods for supporting and positioning body tissue samples in a microscope
CA3070386A1 (en) 2017-07-20 2019-01-24 Aztherapies, Inc. Powdered formulations of cromolyn sodium and ibuprofen
US11453701B2 (en) 2017-08-18 2022-09-27 Adrx, Inc. Tau aggregation peptide inhibitors
CA3073066A1 (en) 2017-08-22 2019-02-28 Biogen Ma Inc. Pharmaceutical compositions containing anti-beta amyloid antibodies
PL3461819T3 (pl) 2017-09-29 2020-11-30 Probiodrug Ag Inhibitory cyklazy glutaminylowej
EP4219464A1 (en) 2018-03-23 2023-08-02 Pfizer Inc. Piperazine azaspiro derivaves
JP2021529771A (ja) 2018-07-02 2021-11-04 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション クロモリンナトリウムおよびα−ラクトースの粉末製剤
TW202208409A (zh) 2020-05-19 2022-03-01 愛爾蘭商歐薩爾普羅席納有限公司 用於治療阿茲海默症之多抗原決定基疫苗

Family Cites Families (433)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US589566A (en) * 1897-09-07 meevten
US6096318A (en) 1973-05-07 2000-08-01 The Ohio State University Antigenically modified HCG polypeptides
JPS57212347A (en) * 1981-06-25 1982-12-27 Nissan Motor Co Ltd Air-fuel ratio control system
US4902506A (en) * 1983-07-05 1990-02-20 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
GB8308235D0 (en) * 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) * 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5158769A (en) 1984-03-07 1992-10-27 New York Blood Center, Inc. Pre-S gene coded peptide hepatitis B immunogens, vaccines, diagnostics, and synthetic lipid vesicle carriers
US5417986A (en) 1984-03-16 1995-05-23 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Vaccines against diseases caused by enteropathogenic organisms using antigens encapsulated within biodegradable-biocompatible microspheres
US5208036A (en) 1985-01-07 1993-05-04 Syntex (U.S.A.) Inc. N-(ω, (ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω, (ω-1)-dialkenyloxy)-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US4666829A (en) 1985-05-15 1987-05-19 University Of California Polypeptide marker for Alzheimer's disease and its use for diagnosis
IT1190383B (it) * 1985-08-01 1988-02-16 Eniricerche Spa Sostanze peptidominetiche ad azione ipotensiva
EP0247091B1 (en) 1985-11-01 1993-09-29 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US5618920A (en) * 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US4713366A (en) * 1985-12-04 1987-12-15 The Ohio State University Research Foundation Antigenic modification of polypeptides
US5096706A (en) * 1986-03-25 1992-03-17 National Research Development Corporation Antigen-based treatment for adiposity
US5225539A (en) * 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US6548640B1 (en) * 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5278049A (en) * 1986-06-03 1994-01-11 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Recombinant molecule encoding human protease nexin
US5231170A (en) * 1986-08-27 1993-07-27 Paul Averback Antibodies to dense microspheres
US5223482A (en) 1986-11-17 1993-06-29 Scios Nova Inc. Recombinant Alzheimer's protease inhibitory amyloid protein and method of use
US5187153A (en) * 1986-11-17 1993-02-16 Scios Nova Inc. Methods of treatment using Alzheimer's amyloid polypeptide derivatives
US5220013A (en) * 1986-11-17 1993-06-15 Scios Nova Inc. DNA sequence useful for the detection of Alzheimer's disease
US4879213A (en) 1986-12-05 1989-11-07 Scripps Clinic And Research Foundation Synthetic polypeptides and antibodies related to Epstein-Barr virus early antigen-diffuse
US4818397A (en) * 1986-12-22 1989-04-04 Sundstrand Corporation Shut-off valve seal
DE3702789A1 (de) 1987-01-30 1988-08-18 Bayer Ag Vorlaeuferprotein des apc-polypeptids, dafuer codierende dna und diagnostische verwendung der dna und des proteins
US4912206A (en) * 1987-02-26 1990-03-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services CDNA clone encoding brain amyloid of alzheimer's disease
DE3883899T3 (de) * 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
US4883666A (en) 1987-04-29 1989-11-28 Massachusetts Institute Of Technology Controlled drug delivery system for treatment of neural disorders
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
US5245015A (en) 1991-04-26 1993-09-14 Tanox Biosystems, Inc. Monoclonal antibodies which neutralize HIV-1 through reaction with a conformational epitope in vitro
US5583112A (en) 1987-05-29 1996-12-10 Cambridge Biotech Corporation Saponin-antigen conjugates and the use thereof
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US5571500A (en) * 1987-06-24 1996-11-05 Autoimmune, Inc. Treatment of autoimmune diseases through administration by inhalation of autoantigens
US5571499A (en) * 1987-06-24 1996-11-05 Autoimmune, Inc. Treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens
WO1988010120A1 (en) 1987-06-24 1988-12-29 Brigham And Women's Hospital Treatment of autoimmune diseases by oral administration of autoantigens
US5645820A (en) * 1987-06-24 1997-07-08 Autoimmune, Inc. Treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens
US5869054A (en) * 1987-06-24 1999-02-09 Autoimmune Inc. Treatment of multiple sclerosis by oral administration of autoantigens
US5641474A (en) * 1987-06-24 1997-06-24 Autoimmune, Inc. Prevention of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens
US5849298A (en) 1987-06-24 1998-12-15 Autoimmune Inc. Treatment of multiple sclerosis by oral administration of bovine myelin
US4912208A (en) * 1987-06-29 1990-03-27 Abbott Laboratories Fluorophores for encapsulation into liposomes
US5004697A (en) 1987-08-17 1991-04-02 Univ. Of Ca Cationized antibodies for delivery through the blood-brain barrier
US4966753A (en) 1987-08-18 1990-10-30 Molecular Rx, Inc. Immunotherapeutic methods and compositions employing antigens characteristic of malignant neoplasms
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
US5231000A (en) * 1987-10-08 1993-07-27 The Mclean Hospital Antibodies to A4 amyloid peptide
CA1339014C (en) 1987-10-08 1997-03-25 Ronald E. Majocha Antibodies to a4 amyloid peptide
AU2728588A (en) 1987-10-23 1989-05-23 Genetics Institute Inc. Composition and method for treating cancers characterized by over-expression of the c-fms proto-oncogene
US5089603A (en) * 1989-06-21 1992-02-18 Tanox Biosystems, Inc. Antigenic epitopes present on membrane-bound but not secreted iga
WO1989006689A1 (en) 1988-01-13 1989-07-27 The Mclean Hospital Corporation Genetic constructs containing the alzheimer brain amyloid gene
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
US5576184A (en) * 1988-09-06 1996-11-19 Xoma Corporation Production of chimeric mouse-human antibodies with specificity to human tumor antigens
US5098706A (en) * 1988-11-01 1992-03-24 The Regents Of The University Of California Juvenile hormone esterase for insect control
EP0442926A1 (en) 1988-11-10 1991-08-28 Imperial Cancer Research Technology Limited Polypeptides
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5227159A (en) 1989-01-31 1993-07-13 Miller Richard A Anti-idiotype antibodies reactive with shared idiotopes expressed by B cell lymphomas and autoantibodies
US5262332A (en) 1989-04-05 1993-11-16 Brigham And Women's Hospital Diagnostic method for Alzheimer's disease: examination of non-neural tissue
AU5439790A (en) 1989-04-14 1990-11-16 Research Foundation For Mental Hygiene, Inc. Cerebrovascular amyloid protein-specific monoclonal antibody sv17-6e10
AU5525090A (en) 1989-04-14 1990-11-16 Research Foundation For Mental Hygiene, Inc. Monoclonal antibody to amyloid peptide
CA2017507C (en) 1989-05-25 1996-11-12 Gary Van Nest Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion
US5399346A (en) 1989-06-14 1995-03-21 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Gene therapy
DE69033487T2 (de) 1989-12-20 2000-06-29 Autoimmune Inc Behandlung von autoimmunkrankheiten durch verabreichung von autoantigenen in form von aerosol
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
GB8928874D0 (en) * 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
CA2050918A1 (en) 1990-01-12 1991-07-13 Raju Kucherlapati Generation of xenogeneic antibodies
JPH05508621A (ja) 1990-03-02 1993-12-02 オートイミューン　インク 自己抗原の経口投与による自己免疫疾患のダウンコントロール
GB9005705D0 (en) 1990-03-14 1990-05-09 Health Lab Service Board Particle manipulation
US5279833A (en) 1990-04-04 1994-01-18 Yale University Liposomal transfection of nucleic acids into animal cells
EP0451700A1 (en) 1990-04-10 1991-10-16 Miles Inc. Recombinant APP minigenes for expression in transgenic mice as models for Alzheimers's disease
US5264618A (en) 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
EP0527823A1 (en) * 1990-04-24 1993-02-24 The Regents Of The University Of California Purification, detection and methods of use of protease nexin-2
US5753624A (en) 1990-04-27 1998-05-19 Milkhaus Laboratory, Inc. Materials and methods for treatment of plaquing disease
GB9009548D0 (en) 1990-04-27 1990-06-20 Celltech Ltd Chimeric antibody and method
DE69126304T2 (de) * 1990-04-27 1997-09-04 John Mcmichael Verfahren und zusammensetzung zur behandlung von erkrankungen des zns hervorgerufen durch abnormales beta-amyloid-protein
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
CA2084307A1 (en) 1990-06-01 1991-12-02 Cetus Oncology Corporation Compositions and methods for identifying biologically active molecules
AU646877B2 (en) * 1990-06-15 1994-03-10 Scios Nova Inc. Transgenic non-human mammal displaying the amyloid-forming pathology of alzheimer's disease
US5914109A (en) * 1990-06-15 1999-06-22 New York University Heterohybridomas producing human monoclonal antibodies to HIV-1
CA2085897A1 (en) 1990-06-19 1991-12-20 George Pieczenik Nonpathogenic variant virus
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
KR970005049B1 (ko) * 1990-07-16 1997-04-11 더 리젠츠 오브 더 유니벌시티 오브 캘리포니아 바쿨로비루스 발현 시스템, 이 벡터 시스템을 포함하는 이종성 무척추동물 숙주세포, 상기 시스템에 의해 생산되는 가용성의 정제된 야생형 망막아세포종 폴리펩티드 및 이 폴리펩티드의 생산 방법
US5780587A (en) * 1990-08-24 1998-07-14 President And Fellows Of Harvard College Compounds and methods for inhibiting β-protein filament formation and neurotoxicity
NZ239643A (en) 1990-09-17 1996-05-28 North American Vaccine Inc Vaccine containing bacterial polysaccharide protein conjugate and adjuvant (c-nd-che-a-co-b-r) with a long chain alkyl group.
US5702906A (en) 1990-09-25 1997-12-30 Genentech, Inc. Antibodies to neurotrophic factor-4 (NT-4)
CA2092823A1 (en) 1990-09-28 1992-03-29 Barry D. Greenberg Transgenic animals with alzheimer's amyloid precursor gene
EP0553244B8 (en) * 1990-10-05 2005-06-08 Celldex Therapeutics, Inc. Targeted immunostimulation with bispecific reagents
AU9023791A (en) 1990-10-15 1992-05-20 Brigham And Women's Hospital Treatment of autoimmune diseases by oral administration of autoantigens
GB9023352D0 (en) * 1990-10-26 1990-12-05 Lynxvale Ltd Vaccinia vectors,vaccinia genes and expression products thereof
ES2335720T3 (es) 1991-01-21 2010-03-31 Elan Pharmaceuticals, Inc. Ensayo y modelo para la enfermedad de alzheimer.
WO1992015330A1 (fr) * 1991-03-01 1992-09-17 Rhône Merieux Procede d'immunoneutralisation anti-lhrh des animaux domestiques males non castres et peptide pour cela
DE4107857A1 (de) * 1991-03-12 1992-09-17 Thomae Gmbh Dr K Cyclische harnstoffderivate, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und verfahren zu ihrer herstellung
US5192753A (en) * 1991-04-23 1993-03-09 Mcgeer Patrick L Anti-rheumatoid arthritic drugs in the treatment of dementia
CA2086831C (en) 1991-05-08 1999-03-16 Reinhard Gluck Immunostimulating and immunopotentiating reconstituted influenza virosomes and vaccines containing them
WO1994004679A1 (en) * 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
EP0590058B1 (en) 1991-06-14 2003-11-26 Genentech, Inc. HUMANIZED Heregulin ANTIBODy
US5672805A (en) 1991-07-18 1997-09-30 The Regents Of The University Of California Transgenic mice expressing the neurotoxic C-terminus of β-amyloid precursor protein
US5434050A (en) 1991-08-13 1995-07-18 Regents Of The University Of Minnesota Labelled β-amyloid peptide and methods of screening for Alzheimer's disease
US5283185A (en) 1991-08-28 1994-02-01 University Of Tennessee Research Corporation Method for delivering nucleic acids into cells
JP2001524926A (ja) 1991-09-18 2001-12-04 アフィマックス テクノロジーズ ナームロゼ フェンノートシャップ オリゴマーの雑多ライブラリーの集合体を合成する方法
US5837268A (en) 1991-10-16 1998-11-17 University Of Saskatchewan GnRH-leukotoxin chimeras
EP0746609A4 (en) 1991-12-17 1997-12-17 Genpharm Int NON-HUMAN TRANSGENIC ANIMALS CAPABLE OF PRODUCING HETEROLOGOUS ANTIBODIES
CA2127450C (en) 1992-01-07 2007-04-17 Samuel Wadsworth Transgenic animal models for alzheimer's disease
US5679348A (en) * 1992-02-03 1997-10-21 Cedars-Sinai Medical Center Immunotherapy for recurrent HSV infections
AU685047B2 (en) 1992-02-11 1998-01-15 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Dual carrier immunogenic construct
US5314813A (en) 1992-02-19 1994-05-24 Scripps Research Institute Drosophila cell lines expressing genes encoding MHC class I antigens and B2-microglobulin and capable of assembling empty complexes and methods of making said cell lines
BR9306042A (pt) 1992-02-28 1997-11-18 Autoimmune Inc Método para tratar uma doença auto-immune em um mamifero e formas de dosagens farmacêuticas oral e inalável
US5714350A (en) * 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
EP0561087B1 (en) 1992-03-20 1999-08-04 N.V. Innogenetics S.A. Mutated form of the beta-amyloid precursor protein gene
US5604102A (en) 1992-04-15 1997-02-18 Athena Neurosciences, Inc. Methods of screening for β-amyloid peptide production inhibitors
US5441870A (en) * 1992-04-15 1995-08-15 Athena Neurosciences, Inc. Methods for monitoring cellular processing of β-amyloid precursor protein
US5851787A (en) * 1992-04-20 1998-12-22 The General Hospital Corporation Nucleic acid encoding amyloid precursor-like protein and uses thereof
EP0640094A1 (en) 1992-04-24 1995-03-01 The Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
GB9209118D0 (en) 1992-04-28 1992-06-10 Sb 120 Amsterdam Bv Vaccine compositions
CA2138137C (en) 1992-06-18 2004-11-09 R. John Collier Diphtheria toxin vaccines
ES2143716T3 (es) * 1992-06-25 2000-05-16 Smithkline Beecham Biolog Composicion de vacuna que contiene adyuvantes.
US6610493B1 (en) 1993-06-17 2003-08-26 Brigham And Women's Hospital Screening compounds for the ability to alter the production of amyloid-β peptide
US5766846A (en) * 1992-07-10 1998-06-16 Athena Neurosciences Methods of screening for compounds which inhibit soluble β-amyloid peptide production
US5837672A (en) * 1992-07-10 1998-11-17 Athena Neurosciences, Inc. Methods and compositions for the detection of soluble β-amyloid peptide
WO1994001772A1 (en) 1992-07-13 1994-01-20 The Children's Medical Center Corporation SCREEN FOR ALZHEIMER'S DISEASE THERAPEUTICS BASED ON β-AMYLOID PRODUCTION
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
US6680182B1 (en) 1992-07-31 2004-01-20 Acambis Research Limited Expression of recombinant fusion proteins in attenuated bacteria
BR9306984A (pt) * 1992-08-27 1999-01-12 Deakin Res Ltd Análogo de antígeno de peptídeo de um antígeno de peptídeo nativo vacina anticorpo processo para vacinar um hospedeiro necessitando deste tratamento estojo diagnóstico processos para preparar um análogo de um antiígeno de um antígeno de peptídeo nativo para preparar uma vacina para analisar uma amostra para um antígeno de peptídeo nativo e para analisar uma amostra para um anticorpo
FI96267C (sv) 1992-09-16 1996-06-10 Formit Foodprocessing Ab Oy Vals och maskin för skalning eller formning av potatis och liknande produkter
US5958883A (en) * 1992-09-23 1999-09-28 Board Of Regents Of The University Of Washington Office Of Technology Animal models of human amyloidoses
DE69311048T2 (de) * 1992-09-29 1997-12-11 Nippon Telegraph & Telephone Multi/Demultiplexer mit Gitter aus gruppierten Wellenleitern und zurückgefürten optischen Wegen
ATE244769T1 (de) 1992-10-01 2003-07-15 Univ Columbia Komplexe kombinatorische chemische banken, die mit markierungen versehen sind
WO1994009364A1 (en) 1992-10-13 1994-04-28 Duke University Method of inhibiting binding of amyloid precursor protein to beta-amyloid protein
PT1298436E (pt) 1992-10-26 2010-10-21 Lilly Co Eli Métodos para a identificação de compostos inibidores da libertação de péptido beta-amilóide (bap)
US5605811A (en) * 1992-10-26 1997-02-25 Athena Neurosciences, Inc. Methods and compositions for monitoring cellular processing of beta-amyloid precursor protein
US5972336A (en) * 1992-11-03 1999-10-26 Oravax Merieux Co. Urease-based vaccine against helicobacter infection
US5733647A (en) * 1992-11-05 1998-03-31 Polymer Innovations, Inc. Insole
US6210671B1 (en) * 1992-12-01 2001-04-03 Protein Design Labs, Inc. Humanized antibodies reactive with L-selectin
WO1994012629A1 (en) 1992-12-02 1994-06-09 Baylor College Of Medicine Episomal vectors for gene therapy
ATE237357T1 (de) * 1993-01-22 2003-05-15 Sloan Kettering Inst Cancer Gangliosid-klh-konjugatimastoffe mit qs-21
US5955317A (en) * 1993-01-25 1999-09-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibodies to β-amyloids or their derivatives and use thereof
EP0683234B2 (en) * 1993-01-25 2007-06-06 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibody against beta-amyloid or their derivative and use thereof
US5750106A (en) * 1993-01-28 1998-05-12 Novartis Ag Human monoclonal antibodies to cytomegalovirus
US5989565A (en) * 1993-01-29 1999-11-23 University Of Pittsburgh Elution and identification of T cell epitopes from viable cells
US5358708A (en) 1993-01-29 1994-10-25 Schering Corporation Stabilization of protein formulations
US5472693A (en) * 1993-02-16 1995-12-05 The Dow Chemical Company Family of anti-carcinoembryonic antigen chimeric antibodies
DE614989T1 (de) * 1993-02-17 1995-09-28 Morphosys Proteinoptimierung Verfahren für in vivo Selektion von Ligandenbindende Proteine.
CA2115900A1 (en) 1993-02-22 1994-08-23 Gerald W. Becker Pharmaceutical screens and antibodies
AU692152B2 (en) * 1993-03-17 1998-06-04 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The Immunogenic chimeras comprising nucleic acid sequences encoding endoplasmic reticulum signal sequence peptides and at least one other peptide, and their uses in vaccines and disease treatments
DE69433870T2 (de) * 1993-03-18 2005-06-30 Cytimmune Sciences, Inc. Zusammensetzung und methode zur reduktion der toxizität von biologisch-aktiven faktoren
EP0689454B2 (en) * 1993-03-23 2005-02-23 SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. Vaccine compositions containing 3-o deacylated monophosphoryl lipid a
CA2119090A1 (en) * 1993-03-26 1994-09-27 Wayne R. Gombotz Compositions for controlled release of biologically active tgf-.beta.
IT1270939B (it) 1993-05-11 1997-05-26 Angeletti P Ist Richerche Bio Procedimento per la preparazione di immunogeni e reagenti diagnostici,e immunogeni e reagenti diagnostici cosi' ottenibili.
ES2150493T5 (es) 1993-05-25 2004-07-01 Wyeth Holdings Corporation Adyuvantes para vacunas contra el virus sincitico respiratorio.
AU7043894A (en) 1993-05-28 1994-12-20 Miriam Hospital, The Composition and method for (in vivo) imaging of amyloid deposits
ES2171454T3 (es) 1993-06-04 2002-09-16 Whitehead Biomedical Inst Proteinas de estres y sus usos.
US5464823A (en) * 1993-07-20 1995-11-07 The Regents Of The University Of California Mammalian antibiotic peptides
JPH09500540A (ja) 1993-07-30 1997-01-21 メデヴァ ホールディングス ビー．ヴイ． ワクチン組成物
JPH08503490A (ja) 1993-08-18 1996-04-16 モルフォシス・ゲゼルシャフト・フュア・プロタインオプティミールング・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング リポ多糖結合性および中和能のあるペプチド
DK96493D0 (da) 1993-08-26 1993-08-26 Mouritsen Og Elsner Aps Fremgangsmaade til at inducere antistofresponser mod selvproteiner og autovaccine fremstillet ved fremgangsmaaden
WO1995005853A1 (en) 1993-08-26 1995-03-02 The Regents Of The University Of California Method, compositions and devices for administration of naked polynucleotides which encode biologically active peptides
AU707083B2 (en) 1993-08-26 1999-07-01 Bavarian Nordic Inc. Inducing antibody response against self-proteins with the aid of foreign T-cell epitopes
FR2709247B1 (fr) * 1993-08-27 1995-09-29 Martin Jean Raymond Dispositif d'ancrage d'une instrumentation rachidienne sur une vertèbre.
WO1995006407A1 (en) 1993-08-30 1995-03-09 The Regents Of The University Of California Novel component of amyloid in alzheimer's disease and methods for use of same
ES2236693T3 (es) 1993-09-07 2005-07-16 Smithkline Beecham Corporation Anticuerpos recombinantes contra il4 utiles en el tratamiento de afecciones mediadas por il4.
US5652334A (en) * 1993-09-08 1997-07-29 City Of Hope Method for design of substances that enhance memory and improve the quality of life
US5385887A (en) 1993-09-10 1995-01-31 Genetics Institute, Inc. Formulations for delivery of osteogenic proteins
ES2318848T3 (es) * 1993-09-14 2009-05-01 Pharmexa Inc. Peptidos que se unen a pan dr para potenciar la respuesta inmunitaria.
US5415584A (en) 1993-09-21 1995-05-16 Tomco2 Equipment Company Particle blast cleaning apparatus
US5470951A (en) 1993-09-29 1995-11-28 City Of Hope Peptides for antagonizing the effects of amyloid βprotein
US5858981A (en) * 1993-09-30 1999-01-12 University Of Pennsylvania Method of inhibiting phagocytosis
WO1995011311A1 (en) 1993-10-20 1995-04-27 Duke University METHOD OF BINDING MATERIAL TO THE β-AMYLOID PEPTIDE
CA2172507C (en) 1993-10-22 2008-12-02 Jeffrey L. Cleland Methods and compositions for microencapsulation of antigens for use as vaccines
CA2175587A1 (en) 1993-11-02 1995-05-11 Jeffrey H. Sugarman Synthesizing and screening molecular diversity
US5744368A (en) * 1993-11-04 1998-04-28 Research Foundation Of State University Of New York Methods for the detection of soluble amyloid β-protein (βAP) or soluble transthyretin (TTR)
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
US5434170A (en) * 1993-12-23 1995-07-18 Andrulis Pharmaceuticals Corp. Method for treating neurocognitive disorders
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
JPH09511388A (ja) * 1994-01-27 1997-11-18 リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ ミネソタ 進行性神経疾患を持つヒト以外のトランスジェニック哺乳類
US5877399A (en) * 1994-01-27 1999-03-02 Johns Hopkins University Transgenic mice expressing APP-Swedish mutation develop progressive neurologic disease
EP0802797A1 (en) * 1994-02-03 1997-10-29 The Picower Institute For Medical Research Compositions and methods for advanced glycosylation endproduct-mediated modulation of amyloidosis
AUPM411994A0 (en) * 1994-02-25 1994-03-24 Deakin Research Limited Epitopes
CN1069667C (zh) 1994-02-28 2001-08-15 住友化学工业株式会社 聚烯烃系树脂组合物及树脂薄膜
US5795954A (en) 1994-03-04 1998-08-18 Genentech, Inc. Factor VIIa inhibitors from Kunitz domain proteins
US6270757B1 (en) 1994-04-21 2001-08-07 Genetics Institute, Inc. Formulations for IL-11
US6372716B1 (en) 1994-04-26 2002-04-16 Genetics Institute, Inc. Formulations for factor IX
EP0758313A4 (en) 1994-05-06 1999-09-15 Pharmacopeia Inc COMBINATORIAL LIBRARY OF DIHYDROBENZOPYRANES
CA2191101C (en) 1994-05-25 2001-08-07 Ellis L. Kline Materials and methods for treatment of plaquing diseases
US5622701A (en) * 1994-06-14 1997-04-22 Protein Design Labs, Inc. Cross-reacting monoclonal antibodies specific for E- and P-selectin
US5663046A (en) 1994-06-22 1997-09-02 Pharmacopeia, Inc. Synthesis of combinatorial libraries
US5798100A (en) * 1994-07-06 1998-08-25 Immunomedics, Inc. Multi-stage cascade boosting vaccine
US6417178B1 (en) * 1994-07-19 2002-07-09 University Of Pittsburgh Amyloid binding nitrogen-linked compounds for the antemortem diagnosis of alzheimer's disease, in vivo imaging and prevention of amyloid deposits
NZ290089A (en) 1994-07-27 1999-05-28 Queensland Inst Med Res Recombinant polyepitope cytotoxic t lymphocyte (ctl) vaccines
EP0784684B8 (en) 1994-09-16 2008-03-26 Cancer Research Institute of Contra Costa RECOMBINANT PEPTIDES DERIVED FROM THE Mc3 ANTI-BA46 ANTIBODY, METHODS OF USE THEREOF, AND METHODS OF HUMANIZING ANTIBODY PEPTIDES
DE69508521T2 (de) * 1994-10-14 1999-10-07 Oriental Sangyo Co Ltd Elektrolytische Vorrichtung zur Herstellung von Kohlenstoff-Dioxyd
NL9401735A (nl) * 1994-10-19 1996-06-03 Crown Gear Bv Tandwieloverbrenging van een cilindrisch rondsel met een kroonwiel, het kroonwiel dat toegepast wordt in deze tandwieloverbrenging, een werkwijze volgens welke het kroonwiel gemaakt kan worden alsmede een gereedschap waarmee het kroonwiel gemaakt kan worden.
US5872005A (en) * 1994-11-03 1999-02-16 Cell Genesys Inc. Packaging cell lines for adeno-associated viral vectors
JPH08137927A (ja) * 1994-11-07 1996-05-31 Hitachi Ltd 部品配置配線表示方法
US6114133A (en) * 1994-11-14 2000-09-05 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods for aiding in the diagnosis of Alzheimer's disease by measuring amyloid-β peptide (x-≧41)
US5589154A (en) 1994-11-22 1996-12-31 Rutgers, The State University Of New Jersey Methods for the prevention or treatment of vascular hemorrhaging and Alzheimer's disease
US5688651A (en) 1994-12-16 1997-11-18 Ramot University Authority For Applied Research And Development Ltd. Prevention of protein aggregation
AU695129B2 (en) * 1995-02-06 1998-08-06 Genetics Institute, Llc Formulations for IL-12
US5786180A (en) 1995-02-14 1998-07-28 Bayer Corporation Monoclonal antibody 369.2B specific for β A4 peptide
US5624937A (en) 1995-03-02 1997-04-29 Eli Lilly And Company Chemical compounds as inhibitors of amyloid beta protein production
US5854215A (en) * 1995-03-14 1998-12-29 Praecis Pharmaceuticals Incorporated Modulators of β-amyloid peptide aggregation
US6303567B1 (en) * 1995-03-14 2001-10-16 Praecis Pharmaceuticals, Inc . Modulators of β-amyloid peptide aggregation comprising D-amino acids
US5817626A (en) * 1995-03-14 1998-10-06 Praecis Pharmaceuticals Incorporated Modulators of beta-amyloid peptide aggregation
WO1996028471A1 (en) 1995-03-14 1996-09-19 Praecis Pharmaceuticals Incorporated Modulators of amyloid aggregation
EP0871755A1 (en) * 1995-03-23 1998-10-21 Cantab Pharmaceuticals Research Limited Vectors for gene delivery
US5869046A (en) * 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
ATE274064T1 (de) 1995-05-23 2004-09-15 Morphosys Ag Multimere proteine
WO1996039176A1 (en) 1995-06-05 1996-12-12 Brigham & Women's Hospital USE OF ORAL TOLERANCE TO SUPPRESS BOTH Th1 AND Th2 IMMUNE RESPONSES AND TO SUPPRESS ANTIBODY PRODUCTION
US5948763A (en) 1995-06-07 1999-09-07 New York University Peptides and pharmaceutical compositions thereof for treatment of disorders or diseases associated with abnormal protein folding into amyloid or amyloid-like deposits
AU6264996A (en) 1995-06-07 1996-12-30 Athena Neurosciences, Inc. Method for identifying alzheimer's disease therapeutics usin g transgenic animal models
IT1276680B1 (it) * 1995-06-08 1997-11-03 Oris Spa Processo di sintesi dell'1-piridiniopropan-3-solfonato
US5910427A (en) 1995-06-22 1999-06-08 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Antigen non-specific glycosylation inhibiting factor derivatives
US5780361A (en) * 1995-06-23 1998-07-14 Nec Corporation Salicide process for selectively forming a monocobalt disilicide film on a silicon region
PT750907E (pt) * 1995-06-30 2002-08-30 American Cyanamid Co Formulacoes de vacinas estaveis para administracao parenterica metodo para a sua utilizacao e processo para a sua preparacao
EP1637600A1 (en) * 1995-07-07 2006-03-22 Darwin Molecular Corporation Chromosome 1 gene and gene products related to Alzheimer's disease
AUPN443995A0 (en) 1995-07-27 1995-08-17 Csl Limited Papillomavirus polyprotein
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
DE69621940T2 (de) 1995-08-18 2003-01-16 Morphosys Ag Protein-/(poly)peptidbibliotheken
US5824322A (en) * 1995-08-21 1998-10-20 Cytrx Corporation Compositions and methods for growth promotion
BR9610580A (pt) 1995-09-14 2000-10-24 Univ California Anticorpos especìficos para prpse nativos
US5664823A (en) * 1995-09-18 1997-09-09 Ford Global Technologies, Inc. Instrument panel brace
US5731284A (en) 1995-09-28 1998-03-24 Amgen Inc. Method for treating Alzheimer's disease using glial line-derived neurotrophic factor (GDNF) protein product
AU3804995A (en) 1995-10-10 1997-04-30 Novartis Ag Melanoma-associated protein
US5985242A (en) * 1995-10-27 1999-11-16 Praecis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of β-amyloid peptide aggregation comprising D-amino acids
US5750361A (en) * 1995-11-02 1998-05-12 The Regents Of The University Of California Formation and use of prion protein (PRP) complexes
ES2203722T3 (es) 1995-11-10 2004-04-16 Elan Corporation, Plc Peptidos que faccilitan el transporte a traves de tejidos y metodos de identificarlos y usarlos.
WO1997018855A1 (en) 1995-11-21 1997-05-29 Eduard Naumovich Lerner Device for enhanced delivery of biologically active substances and compounds in an organism
WO1997021728A1 (en) 1995-12-12 1997-06-19 Karolinska Innovations Ab PEPTIDE BINDING THE KLVFF-SEQUENCE OF AMYLOID $g(b)
JPH09178743A (ja) 1995-12-27 1997-07-11 Oriental Yeast Co Ltd 可溶性ａｐｐの定量法
US6015662A (en) 1996-01-23 2000-01-18 Abbott Laboratories Reagents for use as calibrators and controls
ZA97452B (en) 1996-01-25 1997-08-15 Trinity College Dublin Streptococcus equi vaccine.
US5770700A (en) 1996-01-25 1998-06-23 Genetics Institute, Inc. Liquid factor IX formulations
AU1832797A (en) 1996-01-26 1997-08-20 Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The A polypeptide from lung extract which binds amyloid-beta peptide
GB9602294D0 (en) * 1996-02-05 1996-04-03 Zeneca Ltd Heterocyclic compounds
US6096313A (en) 1996-02-09 2000-08-01 Ludwig Institute For Cancer Research Compositions containing immunogenic molecules and granulocyte-macrophage colony stimulating factor, as an adjuvant
WO1997032017A1 (en) 1996-02-26 1997-09-04 Morphosys Gesellschaft Für Proteinoptimierung Mbh Novel method for the identification of nucleic acid sequences encoding two or more interacting (poly)peptides
US6150091A (en) * 1996-03-06 2000-11-21 Baylor College Of Medicine Direct molecular diagnosis of Friedreich ataxia
US5870587A (en) * 1996-03-20 1999-02-09 International Business Machines Corporation Information-handling system, method, and article of manufacture including a mechanism for providing an improved application binary interface
JP4229341B2 (ja) 1996-03-23 2009-02-25 財団法人阪大微生物病研究会 破傷風毒素の機能的フラグメント抗原及び破傷風ワクチン
JP2000507449A (ja) * 1996-03-29 2000-06-20 ユニバーシティ オブ オタゴ パラポックスウイルスベクター
AU713067B2 (en) * 1996-04-03 1999-11-25 Anergen, Inc. Cyclic peptide vaccines for treatment and prevention of diabetes
JP2002506419A (ja) * 1996-04-19 2002-02-26 アメリカ合衆国 Ａ型肝炎ウイルスポリタンパク質の抗原反応性領域
US6284533B1 (en) * 1996-05-01 2001-09-04 Avant Immunotherapeutics, Inc. Plasmid-based vaccine for treating atherosclerosis
EP0938506B1 (en) 1996-07-16 2003-11-05 Plückthun, Andreas, Prof. Dr. Immunoglobulin superfamily domains and fragments with increased solubility
JP2000516090A (ja) 1996-07-26 2000-12-05 スローン―ケッタリング インスティチュート フォー キャンサー リサーチ 遺伝子的免疫化のための方法と試薬
US7147851B1 (en) 1996-08-15 2006-12-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Humanized immunoglobulin reactive with α4β7 integrin
GB9617616D0 (en) 1996-08-22 1996-10-02 Osteometer Biotech As Assaying protein fragments in body fluids
CA2183901A1 (en) 1996-08-22 1998-02-23 Johanna E. Bergmann Targets for therapy and diagnosis of alzheimer's disease and down syndrome in humans
DK0929574T3 (da) 1996-08-27 2005-10-31 Praecis Pharm Inc Modulatorer af beta-amyloidpeptidaggregering, som omfatter D-aminosyrer
US6057367A (en) * 1996-08-30 2000-05-02 Duke University Manipulating nitrosative stress to kill pathologic microbes, pathologic helminths and pathologically proliferating cells or to upregulate nitrosative stress defenses
US6797495B2 (en) * 1996-11-05 2004-09-28 The Regents Of The University Of California Somatic cells with ablated PrP gene and methods of use
US6022859A (en) * 1996-11-15 2000-02-08 Wisconsin Alumni Research Foundation Inhibitors of β-amyloid toxicity
WO1998022120A1 (en) 1996-11-19 1998-05-28 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Diagnostic and therapeutic reagents for alzheimer's disease
US6962984B2 (en) 1996-12-05 2005-11-08 Nihon University IgA nephropathy-related DNA
US20030068316A1 (en) 1997-02-05 2003-04-10 Klein William L. Anti-ADDL antibodies and uses thereof
US6218506B1 (en) * 1997-02-05 2001-04-17 Northwestern University Amyloid β protein (globular assembly and uses thereof)
US6277375B1 (en) * 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
WO1998039303A1 (en) 1997-03-03 1998-09-11 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Small molecules useful in the treatment of inflammatory disease
US5798102A (en) 1997-03-04 1998-08-25 Milkhaus Laboratory, Inc. Treatment of cardiomyopathy
US6611610B1 (en) * 1997-04-02 2003-08-26 Gentex Corporation Vehicle lamp control
US6057098A (en) 1997-04-04 2000-05-02 Biosite Diagnostics, Inc. Polyvalent display libraries
US8173127B2 (en) * 1997-04-09 2012-05-08 Intellect Neurosciences, Inc. Specific antibodies to amyloid beta peptide, pharmaceutical compositions and methods of use thereof
WO1998044955A1 (en) 1997-04-09 1998-10-15 Mindset Ltd. Recombinant antibodies specific for beta-amyloid ends, dna encoding and methods of use thereof
US20020086847A1 (en) * 1997-04-09 2002-07-04 Mindset Biopharmaceuticals (Usa) Recombinant antibodies specific for beta-amyloid ends, DNA encoding and methods of use thereof
PL194221B1 (pl) 1997-04-15 2007-05-31 Pharmexa As Zmodyfikowana cząsteczka ludzkiego TNFalfa, dimery, oligomery lub multimery zmodyfikowanej cząsteczki ludzkiego TNFalfa, wyizolowana cząsteczka DNA, wektor, wektor ekspresyjny, komórka gospodarza, sposób wytwarzania zmodyfikowanej cząsteczki ludzkiego TNFalfa, szczepionki przeciwko TNFalfa oraz zastosowanie przynajmniej jednej zmodyfikowanej cząsteczki ludzkiego TNFalfa
US6787319B2 (en) * 1997-04-16 2004-09-07 American Home Products Corp. β-amyloid peptide-binding proteins and polynucleotides encoding the same
US5858205A (en) * 1997-05-13 1999-01-12 Uop Llc Multizone catalytic reforming process
AU7690898A (en) 1997-05-20 1998-12-11 Ottawa Civic Hospital Loeb Research Institute Vectors and methods for immunization or therapeutic protocols
EP0999853B1 (en) 1997-06-13 2003-01-02 Genentech, Inc. Stabilized antibody formulation
AU8269898A (en) 1997-06-27 1999-01-19 Regents Of The University Of California, The Drug targeting of a peptide radiopharmaceutical through the primate blood-brain barrier in vivo with a monoclonal antibody to the human insulin receptor
IT1293511B1 (it) 1997-07-30 1999-03-01 Gentili Ist Spa Anticorpi monoclonali catalitici ad attivita' proteasica per la lisi selettiva della componente proteica di placche e aggregati correlati
WO1999006545A2 (en) 1997-08-01 1999-02-11 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Composition and method for the detection of diseases associated with amyloid-like fibril or protein aggregate formation
WO1999006587A2 (en) 1997-08-01 1999-02-11 Morphosys Ag Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex
DE69840962D1 (de) 1997-08-29 2009-08-20 Antigenics Inc Adjuvant qs-21 enthaltende zusammensetzungen mit polysorbate oder cyclodextrin als hilfsmittel
US6175057B1 (en) 1997-10-08 2001-01-16 The Regents Of The University Of California Transgenic mouse model of alzheimer's disease and cerebral amyloid angiopathy
US7588766B1 (en) * 2000-05-26 2009-09-15 Elan Pharma International Limited Treatment of amyloidogenic disease
US6787523B1 (en) 1997-12-02 2004-09-07 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
TWI239847B (en) 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
US6923964B1 (en) 1997-12-02 2005-08-02 Neuralab Limited Active immunization of AScr for prion disorders
US6761888B1 (en) 2000-05-26 2004-07-13 Neuralab Limited Passive immunization treatment of Alzheimer's disease
US6750324B1 (en) * 1997-12-02 2004-06-15 Neuralab Limited Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies
US20080050367A1 (en) 1998-04-07 2008-02-28 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7790856B2 (en) 1998-04-07 2010-09-07 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US6913745B1 (en) * 1997-12-02 2005-07-05 Neuralab Limited Passive immunization of Alzheimer's disease
US7179892B2 (en) 2000-12-06 2007-02-20 Neuralab Limited Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7964192B1 (en) 1997-12-02 2011-06-21 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidgenic disease
US6743427B1 (en) * 1997-12-02 2004-06-01 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US6710226B1 (en) * 1997-12-02 2004-03-23 Neuralab Limited Transgenic mouse assay to determine the effect of Aβ antibodies and Aβ Fragments on alzheimer's disease characteristics
JP2002511385A (ja) 1997-12-03 2002-04-16 ニューララブ リミテッド アルツハイマー病におけるβ−アミロイド関連変化を抑制する方法
HUP0004821A2 (hu) 1997-12-03 2001-06-28 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Lágy pellet alakjában lévő gyógyszerkészítmény és előállítása
FR2777015B3 (fr) 1998-02-23 2000-09-15 Financ De Biotechnologie Procede et moyens pour l'obtention de modeles cellulaires et animaux de maladies neurodegeneratives
US6528624B1 (en) * 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6194551B1 (en) * 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US20050059591A1 (en) * 1998-04-07 2005-03-17 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US20050059802A1 (en) * 1998-04-07 2005-03-17 Neuralab Ltd Prevention and treatment of amyloidogenic disease
JP2002512776A (ja) * 1998-04-28 2002-05-08 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 免疫原性の低下したモノクローナル抗体
NO314086B1 (no) 1998-05-08 2003-01-27 Gemvax As Peptider og farmasöytiske sammensetninger inneholdende disse, nukleinsyresekvenser som koder for slike peptider, plasmider og virusvektoreromfattende slike DNA-sekvenser samt anvendelse av disse for fremstilling avfarmasöytiske preparater til
EP1080110A2 (en) 1998-05-19 2001-03-07 Yeda Research And Development Co. Ltd. Use of activated t cells, nervous system-specific antigens for treating disorders of the nevrous system
US20030147882A1 (en) * 1998-05-21 2003-08-07 Alan Solomon Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies
DE69942274D1 (de) 1998-05-21 2010-06-02 Univ Tennessee Res Foundation Methoden zur amyloidentfernung mit anti-amyloid-antikörper
US6432710B1 (en) 1998-05-22 2002-08-13 Isolagen Technologies, Inc. Compositions for regenerating tissue that has deteriorated, and methods for using such compositions
US6710228B1 (en) * 1998-05-29 2004-03-23 Mycogen Corporation Cotton cells, plants, and seeds genetically engineered to express insecticidal and fungicidal chitin binding proteins (lectins)
US6727349B1 (en) * 1998-07-23 2004-04-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Recombinant anti-CCR2 antibodies and methods of use therefor
EA003634B1 (ru) 1998-10-05 2003-08-28 Фармэкса А/С Новые способы терапевтической вакцинации
CA2354862A1 (en) * 1998-10-19 2000-04-27 Yeda Research And Development Co. Ltd. Treatment of systemic lupus erythematosus by down-regulating the autoimmune response to autoantigens
US7112661B1 (en) 1998-10-30 2006-09-26 The Research Foundation Of State University Of New York Variable heavy chain and variable light chain regions of antibodies to human platelet glycoprotein Ib alpha
GB2348203B (en) 1998-11-04 2002-06-19 Imp College Innovations Ltd Solube beta-forms of prion proteins, methods of preparation and use
ES2216509T3 (es) 1999-01-19 2004-10-16 PHARMACIA &amp; UPJOHN COMPANY Procedimiento de envasado para sustancias medicinales sensibles a la oxidacion.
EP1146898A1 (en) 1999-01-22 2001-10-24 Matthew John During Vaccine-mediated treatment of neurological disorders
US7629311B2 (en) 1999-02-24 2009-12-08 Edward Lewis Tobinick Methods to facilitate transmission of large molecules across the blood-brain, blood-eye, and blood-nerve barriers
US7282570B2 (en) 1999-04-20 2007-10-16 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
ATE384077T1 (de) 1999-05-05 2008-02-15 Neurochem Int Ltd Stereoselektive antifibrillogene peptide
US6787637B1 (en) * 1999-05-28 2004-09-07 Neuralab Limited N-Terminal amyloid-β antibodies
UA81216C2 (en) 1999-06-01 2007-12-25 Prevention and treatment of amyloid disease
PE20010212A1 (es) 1999-06-01 2001-02-22 Neuralab Ltd Composiciones del peptido a-beta y procesos para producir las mismas
US6582945B1 (en) 1999-06-16 2003-06-24 Boston Biomedical Research Institute Immunological control of β-amyloid levels in vivo
JP2003503083A (ja) 1999-07-01 2003-01-28 サイオス，インコーポレーテッド アミロイド関連疾患の予防及び治療
WO2001005355A2 (en) 1999-07-15 2001-01-25 Genetics Institute, Inc. Formulations for il-11
ATE445639T1 (de) 1999-08-04 2009-10-15 Univ Southern California Globularer aufbau vom amyloid-beta- protein und deren verwendungen
IL142948A0 (en) 1999-09-03 2002-04-21 Univ Ramot Agents and compositions and methods utilizing same useful in diagnosing and/or treating or preventing plaque forming diseases
US6294171B2 (en) 1999-09-14 2001-09-25 Milkhaus Laboratory, Inc. Methods for treating disease states comprising administration of low levels of antibodies
US6824780B1 (en) 1999-10-29 2004-11-30 Genentech, Inc. Anti-tumor antibody compositions and methods of use
US20020094335A1 (en) 1999-11-29 2002-07-18 Robert Chalifour Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
AU784312B2 (en) 1999-11-29 2006-03-09 Bellus Health (International) Limited Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
IL149976A0 (en) 1999-12-08 2002-12-01 Mindset Biopharmaceuticals Usa Chimeric peptides as immunogens, antibodies thereto, and methods for immunization using chimeric peptides or antibodies
US6399314B1 (en) * 1999-12-29 2002-06-04 American Cyanamid Company Methods of detection of amyloidogenic proteins
EP1259251B1 (en) 2000-02-21 2005-10-19 Pharmexa A/S Novel method for down-regulation of amyloid
CA2400838C (en) * 2000-02-21 2013-04-23 Pharmexa A/S Novel method for down-regulation of amyloid
CZ306683B6 (cs) 2000-02-24 2017-05-03 Washington University Léčivo pro prevenci nebo léčení preklinické nebo klinické Alzheimerovy nemoci
US6294221B1 (en) * 2000-03-08 2001-09-25 E. I. Du Pont De Nemours And Company Process for spray-coating with frequent changes between aqueous and non-aqueous coating agents inside a spray-coating chamber
US6548840B1 (en) * 2000-04-03 2003-04-15 Hrl Laboratories, Llc Monolithic temperature compensation scheme for field effect transistor integrated circuits
US7485616B2 (en) 2000-04-05 2009-02-03 University Of Tennessee Research Foundation Methods of investigating, diagnosing, and treating amyloidosis
AU5162201A (en) 2000-04-13 2001-10-30 Corixa Corporation Immunostimulant compositions comprising an aminoalkyl glucosaminide phosphate and qs-21
DE60108111T2 (de) * 2000-05-22 2005-12-08 New York University Synthetische immunogene jedoch nicht amyloidogene peptide, die homolog zu amyloid beta sind und deren verwendung zur induktion einer immunantwort gegen amyloid beta und amyloidaggregate
JP5362164B2 (ja) 2000-07-07 2013-12-11 バイオアークティック ニューロサイエンス アーベー アルツハイマー病の予防及び治療
US20020009445A1 (en) * 2000-07-12 2002-01-24 Yansheng Du Human beta-amyloid antibody and use thereof for treatment of alzheimer's disease
EP1172378A1 (en) 2000-07-12 2002-01-16 Richard Dr. Dodel Human beta-amyloid antibody and use thereof for treatment of alzheimer's disease
US7199102B2 (en) * 2000-08-24 2007-04-03 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides synergize statin activity
US20030092145A1 (en) * 2000-08-24 2003-05-15 Vic Jira Viral vaccine composition, process, and methods of use
DK1317479T3 (da) 2000-09-06 2009-11-23 Aventis Pharma Sa Fremgangsmåder og sammensætninger for sygdomme, der er associeret med amyloidosis
IT1319277B1 (it) 2000-10-24 2003-09-26 Chiesi Farma Spa Proteine di fusione utili per il trattamento di immunizzazione dellamalattia di alzheimer.
IL139308A0 (en) 2000-10-26 2001-11-25 Marikovsky Moshe Peptides from amyloid precursor protein which inhibit tumor growth and metastasis
WO2002064084A2 (en) 2000-11-02 2002-08-22 Cornell Research Foundation, Inc. In vivo multiphoton diagnostic detection and imaging of a neurodegenerative disease
PT1346041E (pt) * 2000-11-27 2007-06-05 Praecis Pharm Inc Agentes terapêuticos e métodos para a sua utilização no tratamento de uma doença amiloidogénica.
PE20020574A1 (es) * 2000-12-06 2002-07-02 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta
US7700751B2 (en) 2000-12-06 2010-04-20 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize β-amyloid peptide
WO2002060920A2 (en) * 2000-12-27 2002-08-08 Board Of Regents, University Of Texas System Prion isomers, methods of making, methods of using, and compositions and products comprising prion isomers
US20020160394A1 (en) * 2001-01-24 2002-10-31 Bayer Corporation Regulation of transthyretin to treat obesity
DE60121729T2 (de) * 2001-04-19 2007-11-29 Dr. Hermann Schätzl Prion Proteindimere für Impfungen
EP1385545B1 (en) 2001-04-30 2009-01-07 Eli Lilly And Company Humanized antibodies recognizing the beta-amyloid peptide
WO2002088307A2 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Eli Lilly And Company Humanized antibodies
US6524624B1 (en) * 2001-05-16 2003-02-25 Alcide Corporation Two-part disinfecting systems and compositions and methods related thereto
US6906169B2 (en) * 2001-05-25 2005-06-14 United Biomedical, Inc. Immunogenic peptide composition comprising measles virus Fprotein Thelper cell epitope (MUFThl-16) and N-terminus of β-amyloid peptide
GB0113179D0 (en) 2001-05-31 2001-07-25 Novartis Ag Organic compounds
US6888849B2 (en) * 2001-06-15 2005-05-03 Lucent Technologies Inc. Method for evaluating capacity utilization of a terminus in a communication system
AU2002345843A1 (en) * 2001-06-22 2003-01-08 Panacea Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for preventing protein aggregation in neurodegenerative diseases
JP4317010B2 (ja) 2001-07-25 2009-08-19 ピーディーエル バイオファーマ，インコーポレイティド ＩｇＧ抗体の安定な凍結乾燥医薬製剤
US20030135035A1 (en) 2001-08-09 2003-07-17 Mark Shannon Human ZZAP1 protein
CA2452104A1 (en) 2001-08-17 2003-02-27 Eli Lilly And Company Use of antibodies having high affinity for soluble ass to treat conditions and diseases related to ass
US20040192898A1 (en) 2001-08-17 2004-09-30 Jia Audrey Yunhua Anti-abeta antibodies
EP1519740A4 (en) 2001-08-17 2005-11-09 Lilly Co Eli FASTER IMPROVEMENT OF COGNITION IN DISEASES ASSOCIATED WITH A-BETA
US20030082191A1 (en) 2001-08-29 2003-05-01 Poduslo Joseph F. Treatment for central nervous system disorders
EP1435774B1 (en) 2001-09-10 2010-08-25 AntiCancer, Inc. Enhanced resolution of tumor metastasis
US6736142B2 (en) * 2001-09-13 2004-05-18 Gines Sanchez Gomez Protective tube and harness
US6907297B2 (en) 2001-09-28 2005-06-14 Ethicon, Inc. Expandable intracardiac return electrode and method of use
US6597198B2 (en) * 2001-10-05 2003-07-22 Intel Corporation Current mode bidirectional port with data channel used for synchronization
GB0124446D0 (en) * 2001-10-11 2001-12-05 Short Brothers Ltd Aircraft propulsive power unit
US7781413B2 (en) 2001-10-31 2010-08-24 Board Of Regents, The University Of Texas System SEMA3B inhibits tumor growth and induces apoptosis in cancer cells
WO2003039485A2 (en) 2001-11-08 2003-05-15 Protein Design Labs Stable liquid pharmaceutical formulation of igg antibodies
CA2466841A1 (en) * 2001-11-21 2003-06-05 New York University Synthetic immunogenic but non-deposit-forming polypeptides and peptides homologous to amyloid .beta., prion protein, amylin, .alpha.-synuclein, or polyglutamine repeats for induction of an immune response thereto
WO2003051374A2 (en) 2001-12-17 2003-06-26 New York State Office Of Mental Health SEQUESTRATION OF Aβ IN THE PERIPHERY IN THE ABSENCE OF IMMUNOMODULATING AGENT AS A THERAPEUTIC APPROACH FOR THE TREATMENT OR PREVENTION OF BETA-AMYLOID RELATED DISEASES
AR038568A1 (es) 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
US6688651B2 (en) * 2002-02-21 2004-02-10 Dmt Co., Ltd. Device for locking cap nut for coupling
EP1476120B1 (en) 2002-02-21 2010-09-29 Duke University Treatment methods using anti-cd22 antibodies
MY139983A (en) * 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
CA2390700C (en) * 2002-06-11 2004-09-07 Henry Tsang Illuminated soap bar with sound
GB0213437D0 (en) 2002-06-12 2002-07-24 Univ Cranfield Temporary tattoos: A novel vehicle for skin testing
US6892535B2 (en) * 2002-06-14 2005-05-17 Volvo Construction Equipment Holding Sweden Ab Hydraulic circuit for boom cylinder combination having float function
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
SI1524994T1 (sl) 2002-07-19 2011-08-31 Cytos Biotechnology Ag Sestavki cepiv, ki vsebujejo amiloidne beta 1-6 antigenske mreĹľe
WO2004013172A2 (en) 2002-07-24 2004-02-12 Innogenetics N.V. Fragments of beta-amyloid as targets for vaccination against alzheimer disease
JP2006508072A (ja) 2002-10-01 2006-03-09 ノースウエスタン ユニバーシティ アミロイドベータ由来拡散性リガンド（ＡＤＤＬｓ）、ＡＤＤＬ代替物、ＡＤＤＬ結合性分子、およびそれらの使用
US20040080762A1 (en) * 2002-10-25 2004-04-29 Xerox Corporation Half-tone based enhancement of black
US20060019850A1 (en) * 2002-10-31 2006-01-26 Korzenski Michael B Removal of particle contamination on a patterned silicon/silicon dioxide using dense fluid/chemical formulations
FR2846667B1 (fr) 2002-11-06 2004-12-31 Pasteur Institut Fragments variables d'anticorps de camelides a chaine unique diriges contre le peptide beta-amyloide 1-42 et leurs applications pour le diagnostic et le traitement des maladies neuroagregatives
WO2004055164A2 (en) 2002-12-13 2004-07-01 Abgenix, Inc. System and method for stabilizing antibodies with histidine
US6787129B1 (en) 2003-01-13 2004-09-07 Zenitech Llc Castor polyester as gloss agents in anionic systems
CN1745175A (zh) 2003-02-01 2006-03-08 神经实验室有限公司 自动免疫产生针对可溶性A－β的抗体
ES2344645T3 (es) 2003-02-10 2010-09-02 Applied Molecular Evolution, Inc. Moleculas de union al abeta.
AU2004229335C1 (en) 2003-04-04 2010-06-17 Genentech, Inc. High concentration antibody and protein formulations
EP1480041A1 (en) 2003-05-22 2004-11-24 Innogenetics N.V. Method for the prediction, diagnosis and differential diagnosis of Alzheimer's disease
TWI306458B (en) 2003-05-30 2009-02-21 Elan Pharma Int Ltd Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
WO2005002444A1 (en) 2003-07-07 2005-01-13 Agency For Science, Technology And Research Method and apparatus for extracting third ventricle information
WO2005014041A2 (en) 2003-07-24 2005-02-17 Novartis Ag Use of an amyloid beta dna vaccine for the treatment and/or prevention of amyloid diseases
US20060233788A1 (en) 2003-09-05 2006-10-19 Heiman Mark L Anti-ghrelin antibodies
CA2445743A1 (en) 2003-10-08 2005-04-08 The University Of British Columbia Methods for modulating neuronal responses
AU2003271174A1 (en) 2003-10-10 2005-04-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Double specific antibodies substituting for functional protein
PT2336147E (pt) 2003-12-17 2014-07-16 Janssen Alzheimer Immunotherap Conjugados transportadores de péptidos beta imunogénicos e seus processos de produção
SG182163A1 (en) 2003-12-17 2012-07-30 Wyeth Corp Immunogenic peptide carrier conjugates and methods of producing same
US20050214222A1 (en) 2004-02-13 2005-09-29 Mckinnon Stuart J In vivo imaging of amyloid plaques in glaucoma using intravenous injectable dyes
DK2653465T3 (da) 2004-03-15 2016-08-22 Janssen Pharmaceutica Nv Opioid-receptormodulatorer
AU2005270026A1 (en) 2004-07-02 2006-02-09 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Use of thioflavin radiolabeled derivatives in amyloid imaging for assessing anti-amyloid therapies
US7807165B2 (en) 2004-07-30 2010-10-05 Rinat Neuroscience Corp. Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods using same
US7328838B2 (en) * 2004-09-09 2008-02-12 Igt Counterfeit cashless instrument detection methods and systems
CN101035564A (zh) 2004-09-10 2007-09-12 惠氏公司 人源化的抗5t4抗体和抗5t4抗体/加利车霉素缀合物
ZA200703561B (en) 2004-10-05 2009-09-30 Wyeth Corp Methods and compositions for improving recombinant protein production
US20060160161A1 (en) 2004-10-26 2006-07-20 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods for assessing antibodies to neurodegenerative disease-associated antigens
US20060026911A1 (en) * 2004-11-18 2006-02-09 Sutton Adam F Footer track with moisture vent
WO2006066118A2 (en) 2004-12-15 2006-06-22 Neuralab Limited Contextual fear test for predicting efficacy of alzheimer immunotherapeutic treatment
TW200635608A (en) 2004-12-15 2006-10-16 Neuralab Ltd Aβ antibodies for use in improving cognition
AR052051A1 (es) 2004-12-15 2007-02-28 Neuralab Ltd Anticuerpos ab humanizados usados en mejorar la cognicion
WO2006066233A1 (en) 2004-12-15 2006-06-22 Neuralab Limited An immunoprecipitation-based assay for predicting in vivo efficacy of beta-amyloid antibodies
US7625560B2 (en) 2004-12-15 2009-12-01 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
GT200600031A (es) 2005-01-28 2006-08-29 Formulacion anticuerpo anti a beta
JP2008528638A (ja) 2005-01-28 2008-07-31 ワイス ポリペプチドの安定化液体処方
CA2607868A1 (en) 2005-05-05 2006-11-16 Merck & Co., Inc. Peptide conjugate compositions and methods for the prevention and treatment of alzheimer's disease
ES2402650T3 (es) 2005-06-17 2013-05-07 Janssen Alzheimer Immunotherapy Métodos de purificación de anticuerpos anti A beta
WO2007011833A2 (en) 2005-07-18 2007-01-25 Merck & Co., Inc. Spiropiperidine beta-secretase inhibitors for the treatment of alzheimer's disease
EP1951750A4 (en) 2005-11-10 2009-12-09 Roskamp Res Llc MODULATION OF THE ANGIOGENESIS BY A-BETA PEPTIDE FRAGMENTS
EA015654B9 (ru) 2006-03-30 2012-01-30 Глаксо Груп Лимитед Антитела против бета-амилоидного пептида
WO2009017467A1 (en) 2007-07-27 2009-02-05 Elan Pharma International Limited Treatment of amyloidogenic diseases
WO2010044803A1 (en) 2008-10-17 2010-04-22 Elan Pharma International Limited Treatment of amyloidogenic diseases
US8784810B2 (en) 2006-04-18 2014-07-22 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of amyloidogenic diseases
WO2008011348A2 (en) 2006-07-14 2008-01-24 Ac Immune S.A. Humanized antibody against amyloid beta
JP2010521651A (ja) 2007-03-12 2010-06-24 独立行政法人放射線医学総合研究所 脳内のアミロイド関連神経炎症の画像化
US8003097B2 (en) 2007-04-18 2011-08-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of cerebral amyloid angiopathy
JP2011526240A (ja) 2007-04-18 2011-10-06 ヤンセン アルツハイマー イミュノセラピー 脳アミロイド血管症の予防および治療
WO2011133919A1 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Janssen Alzheimer Immunotherapy Use of tau to monitor immunotherapy
JO3076B1 (ar) 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
PT2237803E (pt) 2007-12-28 2015-10-16 Prothena Biosciences Ltd Tratamento e profilaxia da amiloidose
TR201816335T4 (tr) 2008-09-18 2018-11-21 Cedars Sinai Medical Center Alzheimer hastalığının tespitine yönelik optik yöntem.
US20130084245A1 (en) 2010-02-25 2013-04-04 Wyeth Llc Pet monitoring of a-beta-directed immunotherapy

Also Published As

Publication number Publication date
WO1999027944A9 (en) 1999-09-23
ES2310017T3 (es) 2008-12-16
ES2262460T1 (es) 2006-12-01
US20090191231A1 (en) 2009-07-30
KR100936419B1 (ko) 2010-01-12
EE200000379A (et) 2001-04-16
ATE435659T1 (de) 2009-07-15
JP4677334B2 (ja) 2011-04-27
US20040228865A1 (en) 2004-11-18
JP4677094B2 (ja) 2011-04-27
EE05377B1 (et) 2011-02-15
SI1033996T1 (sl) 2009-02-28
NO20002784L (no) 2000-07-31
SG111083A1 (en) 2005-05-30
DE69840922D1 (de) 2009-07-30
US8034348B2 (en) 2011-10-11
CY1109368T1 (el) 2014-07-02
WO1999027944A1 (en) 1999-06-10
CY1111370T1 (el) 2015-08-05
HUP0100627A1 (hu) 2001-06-28
US20080227718A1 (en) 2008-09-18
US20050163788A1 (en) 2005-07-28
US20050191314A1 (en) 2005-09-01
US20050249727A1 (en) 2005-11-10
US20050048049A1 (en) 2005-03-03
PL342649A1 (en) 2001-06-18
IL136252A0 (en) 2001-05-20
ID25504A (id) 2000-10-05
EP2305282A3 (en) 2011-05-18
GEP20053715B (en) 2005-12-26
DE69840969D1 (de) 2009-08-20
EA009283B1 (ru) 2007-12-28
HU228493B1 (en) 2013-03-28
DE06075479T1 (de) 2006-11-16
EP2305282A2 (en) 2011-04-06
PT1679080E (pt) 2009-09-10
TWI239847B (en) 2005-09-21
CA2312920A1 (en) 1999-06-10
US6946135B2 (en) 2005-09-20
SI2305282T1 (sl) 2013-10-30
CZ303137B6 (cs) 2012-04-25
NZ504569A (en) 2005-01-28
US20050196399A1 (en) 2005-09-08
JP2006131639A (ja) 2006-05-25
CY1108331T1 (el) 2014-02-12
ATE493149T1 (de) 2011-01-15
NO332813B1 (no) 2013-01-21
US20130058869A1 (en) 2013-03-07
EP1033996A4 (en) 2004-05-26
NO20092874L (no) 2000-07-31
ES2428740T3 (es) 2013-11-11
CA2312920C (en) 2016-07-12
DK2305282T3 (da) 2013-10-07
DE1033996T1 (de) 2001-06-07
HRP20000443A2 (en) 2000-10-31
NO331425B1 (no) 2011-12-27
US6972127B2 (en) 2005-12-06
EA200601132A1 (ru) 2007-02-27
EP1690547A1 (en) 2006-08-16
GEP20043319B (en) 2004-05-10
US20050037026A1 (en) 2005-02-17
EP1033996A1 (en) 2000-09-13
DE69839647D1 (de) 2008-08-07
US20080227719A1 (en) 2008-09-18
KR101248711B1 (ko) 2013-03-28
IL191904A (en) 2014-05-28
CZ20001706A3 (cs) 2000-11-15
US8535673B2 (en) 2013-09-17
DE69842082D1 (de) 2011-02-10
US20040171816A1 (en) 2004-09-02
HRP20000443B1 (en) 2009-11-30
SI1994937T1 (sl) 2011-04-29
AU1706199A (en) 1999-06-16
DK1679080T3 (da) 2009-09-28
ES2263408T1 (es) 2006-12-16
JP2002502802A (ja) 2002-01-29
CO4980846A1 (es) 2000-11-27
IL193245A0 (en) 2009-09-22
US20050031629A1 (en) 2005-02-10
KR20090078366A (ko) 2009-07-17
US20080096818A1 (en) 2008-04-24
NO328865B1 (no) 2010-06-07
SI1679080T1 (sl) 2009-12-31
EA200000608A1 (ru) 2000-12-25
US20050013815A1 (en) 2005-01-20
PT1994937E (pt) 2011-02-22
IL191904A0 (en) 2008-12-29
JP2010215651A (ja) 2010-09-30
ATE433760T1 (de) 2009-07-15
DK1994937T3 (da) 2011-02-07
DK1033996T3 (da) 2008-09-22
IL136252A (en) 2010-11-30
PE20001383A1 (es) 2000-11-25
EP1679080B1 (en) 2009-06-17
EP1679080A2 (en) 2006-07-12
MY134906A (en) 2007-12-31
BG104562A (en) 2001-01-31
BR9815357A (pt) 2000-10-24
ATE399016T1 (de) 2008-07-15
TR200001608T2 (tr) 2001-07-23
EP1679080A3 (en) 2006-07-19
NO20002784D0 (no) 2000-05-31
EP1994937A3 (en) 2008-12-24
HRP20090568A2 (hr) 2010-06-30
JP4677333B2 (ja) 2011-04-27
US20050019330A1 (en) 2005-01-27
PL202706B1 (pl) 2009-07-31
US8034339B2 (en) 2011-10-11
IL205298A0 (en) 2011-07-31
KR20120135915A (ko) 2012-12-17
US6808712B2 (en) 2004-10-26
PT1033996E (pt) 2008-10-02
EP2305282B1 (en) 2013-07-10
US20060029611A1 (en) 2006-02-09
US20140227274A1 (en) 2014-08-14
NO20100061L (no) 2000-07-31
KR20010032635A (ko) 2001-04-25
PT2305282E (pt) 2013-09-27
US20120276116A1 (en) 2012-11-01
EP1033996B1 (en) 2008-06-25
US20040171815A1 (en) 2004-09-02
EA200401473A1 (ru) 2005-04-28
AR020050A1 (es) 2002-04-10
PL202698B1 (pl) 2009-07-31
US20040170641A1 (en) 2004-09-02
US20050249725A1 (en) 2005-11-10
JP2006077030A (ja) 2006-03-23
CN100374151C (zh) 2008-03-12
DE06075704T1 (de) 2006-12-28
EP1994937B1 (en) 2010-12-29
IS5500A (is) 2000-05-17
ES2263408T3 (es) 2009-11-16
EP1690547B1 (en) 2009-07-08
HK1095265A1 (en) 2007-05-04
HK1094535A1 (en) 2007-04-04
US8642044B2 (en) 2014-02-04
US20060034858A1 (en) 2006-02-16
HUP0100627A3 (en) 2006-03-28
CN1281366A (zh) 2001-01-24
US7014855B2 (en) 2006-03-21
SA99191269B1 (ar) 2006-03-15
EA007218B1 (ru) 2006-08-25
EP1994937A2 (en) 2008-11-26
US20050019343A1 (en) 2005-01-27
US20050142132A1 (en) 2005-06-30
US6982084B2 (en) 2006-01-03
US20050191292A1 (en) 2005-09-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU228061B1 (en) Prevention and treatment of amyloidogenic disease
JP5580504B2 (ja) アミロイド形成疾患の予防および処置
US6905686B1 (en) Active immunization for treatment of alzheimer&#39;s disease
US6787637B1 (en) N-Terminal amyloid-β antibodies
US6750324B1 (en) Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies
US7575880B1 (en) Method of screening an antibody for activity in clearing an amyloid deposit
US20050059802A1 (en) Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US20050059591A1 (en) Prevention and treatment of amyloidogenic disease
HRP20010893A2 (en) Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US7588766B1 (en) Treatment of amyloidogenic disease
MXPA00005426A (en) Prevention and treatment of amyloidogenic disease

Legal Events

Date Code Title Description
GB9A Succession in title

Owner name: ELAN PHARMA INTERNATIONAL LIMITED, IE

Free format text: FORMER OWNER(S): NEURALAB LTD., GB

GB9A Succession in title

Owner name: JANSSEN ALZHEIMER IMMUNOTHERAPY, IE

Free format text: FORMER OWNER(S): NEURALAB LTD., GB; ELAN PHARMA INTERNATIONAL LIMITED, IE