JP2002512776A - 免疫原性の低下したモノクローナル抗体 - Google Patents

免疫原性の低下したモノクローナル抗体

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Abstract

(57)【要約】 免疫原性の減少した抗体およびその製法を開示する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本願は１９９８年４月２８日付け出願の米国仮出願番号６０／０８３,３６７
の利益を請求する。
【０００２】 （技術分野） 本発明はヒトにおいて免疫原性の低下したモノクローナル抗体（ｍＡｂ）に関
する。
【０００３】 （背景技術） 速度および簡便性の理由から、多くの可能性のある治療的ｍＡｂは、まずネズ
ミハイブリドーマ系で生成される。非ヒトｍＡｂは、ヒト患者に注入した場合に
免疫原性を示すであろう、実質的な範囲のアミノ酸配列を含有する。外来抗体、
例えば、ネズミ抗体を注入した後、患者は、最初に処理した後の抗体治療有用性
、ならびにその後に投与した他のネズミ抗体の有用性も本質的に排除する、強力
なヒト抗−マウス抗体（ＨＡＭＡ）を有しうることがよく知られている。 ヒト化技法が、本来の非ヒト親ｍＡｂの結合親和性を保持しながら、ヒトにお
いて免疫原性の低下したｍＡｂを産生することがよく知られている。例えば、米
国特許第５５８５０８９号；第５６９３７６１号；５６９３７６２号および第５
２２５５３９号に開示されている技法を参照のこと。
【０００４】 一般に、これらの方法は、ＣＤＲ移植法として知られている、ヒト可変重鎖お
よび軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）を抗原特異的な非ヒトＣＤＲと置換するこ
とによるものである。また、ＣＤＲ移植実験において、本来の抗原結合親和性の
保持が強化され、多くの場合、その保持がＣＤＲ供与抗体の対応するフレームワ
ークに最も親密に対合するヒト受容体フレームワーク領域を選択することに依存
することも周知である。 しかしながら、ヒトゲノムは重鎖および軽鎖フレームワーク領域の限定された
レパートリーを含有するため、これら方法では利用できるヒト受容体フレームワ
ークの制限を受ける。受容体フレームワークレパートリーにおけるこの制限は、
必然的に、非ヒト供与体およびヒト受容体抗体間の対合度を限定しうる。従って
、ＣＤＲ移植方法は、ヒトＶＨおよびＶＬフレームワーク領域の公知の利用でき
るレパートリーによって限定される。広範囲に及ぶ受容体Ｖ領域に対する要求が
あるのは明らかである。
【０００５】 （発明の開示） 本発明の一の態様は、非ヒト種の抗原特異的な供与体抗体より由来の供与体Ｃ
ＤＲおよび非ヒト霊長類より由来の受容体フレームワーク残基を含む抗体である
。 本発明のもう一つ別の態様は、抗原特異的な非ヒト抗体からのＣＤＲを相同性
のある非ヒト霊長類の受容体フレームワークに移植することを含むヒトにおける
免疫原性の低下した抗体の産生方法である。 本発明のもう一つ別の態様は、配列番号１０、１１、１２、１３、１４、１５
、１６、１７または１８に示されるアミノ酸配列を含むチンパンジーＶＨ受容体
フレームワークI、IIおよびIIIである。 本発明のもう一つ別の態様は、配列番号８１、８２、８３、８４または８５に
示されるアミノ酸配列を含むチンパンジーＶＨ受容体フレームワークIVである。
【０００６】 本発明のもう一つ別の態様は、配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３
、３４、３５または３６に示されるアミノ酸配列を含むチンパンジーＶκ受容体
フレームワークI、IIおよびIIIである。 本発明のもう一つ別の態様は、配列番号８６または８７に示されるアミノ酸配
列を含むチンパンジーＶκ受容体フレームワークIVである。 本発明のもう一つ別の態様は、配列番号４５、４６、４７、４８、４９、５０
、５１または５２に示されるアミノ酸配列を含むカニクイザルＶＨ受容体フレー
ムワークI、IIおよびIIIである。 本発明のもう一つ別の態様は、配列番号８８、８９、９０、９１、９２または
９３に示されるアミノ酸配列を含むカニクイザルＶＨ受容体フレームワークIVで
ある。
【０００７】 本発明のもう一つ別の態様は、配列番号５９、６０、６１、６２、６３または
６４に示されるアミノ酸配列を含むカニクイザルＶκ受容体フレームワークI、I
IおよびIIIである。 本発明のもう一つ別の態様は、配列番号９４、９５または９６に示されるアミ
ノ酸配列を含むカニクイザルVκ受容体フレームワークIVである。 本発明のさらにもう一つ別の態様は、配列番号１０、１１、１２、１３、１４
、１５、１６、１７、１８、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５
または３６のアミノ酸配列をコードする単離された核酸分子である。 本発明のさらにもう一つ別の態様は、配列番号８１、８２、８３、８４、８５
、８６または８７のアミノ酸配列をコードする単離された核酸分子である。 本発明のさらにもう一つ別の態様は、配列番号４５、４６、４７、４８、４９
、５０、５１、５２、５９、６０、６１、６２、６３または６４のアミノ酸配列
をコードする単離された核酸分子である。 本発明のさらにもう一つ別の態様は、配列番号８８、８９、９０、９１、９２
、９３、９４、９５または９６のアミノ酸配列をコードする単離された核酸分子
である。
【０００８】 （発明を実施するための最良の形態） 本願明細書中に引用される、特許および特許出願を含む（それに限定されない
）、全ての刊行物は、あたかも十分に開示されているように、出典明示により本
明細書の一部とする。 抗体構造の分子遺伝的態様は、Nature ３０２：５７５−５８１（１９８３）
にてS.Tonegawaによって概説されている。簡単に言えば、抗体は少なくとも２個
の重鎖および２個の軽鎖からなる異種二量体である。各重鎖および軽鎖のＮ−末
端ドメインは、各々、ＶＨおよびＶＬと称され、一緒に折り畳まれて、抗原結合
部位を形成する。遺伝的レベルでは、ＶＬドメインは、一緒に結合して１つの連
続したＶＬ領域を形成する、ＶκまたはＶｌとＪκまたはＪｌと称される２種の
遺伝子セグメントによってコードされる。同様に、ＶＨドメインは、一緒に結合
して１つの連続したＶＨ領域を形成する、ＶＨ、ＤＨおよびＪＨの３個の遺伝子
セグメントによってコードされる。従って、異なるＶＬおよびＶＨ領域は、Ｖκ
またはＶl、ＪκまたはＪlと、ＶＨ、ＤＨおよびＪＨの異なる組み合わせによっ
てもコードされ得る。このコンビナトリアル多様性は、ある意味で、免疫応答が
異なる抗体分子およびその関連した抗原特異性の無数の多様性を生み出す手段で
ある。
【０００９】 タンパク質レベルでは、各重鎖および軽鎖のＶ領域ドメインはさらに３つのＣ
ＤＲに分類される。３つの重鎖と３つの軽鎖のＣＤＲは一緒に折り畳まれ、抗原
結合部位の正確な三次元構造を維持するに必要な抗原結合表面および基礎をなす
支持体構造の一部を形成する。各フランキングＣＤＲは、ほとんどの場合、特異
的抗原と直接相互作用せず、むしろ、ＣＤＲの抗原結合性を支持するスカホール
ドを形成するのに供するフレームワーク領域である。各重鎖および軽鎖は４つの
フレームワーク領域を有し、３つはＶＨまたはＶＬ遺伝子セグメント由来であり
、４番目はＪＨ、ＪκまたはＪｌ遺伝子セグメント由来である。従って、Ｎ−末
端からのフレームワークおよびＣＤＲの順序は、フレームワークI、ＣＤＲI、フ
レームワークII、ＣＤＲII、フレームワークIII、ＣＤＲIII、フレームワークIV
である。遺伝子レベルでは、フレームワークIないしフレームワークIIIの全ては
、Ｖ領域遺伝子セグメントによってコードされ；ＣＤＲIIIはＶ領域およびＪ領
域遺伝子セグメントによって共同でコードされ；フレームワークIVはＪ遺伝子セ
グメントから完全にコードされる。
【００１０】 本明細書にて用いる「抗体」は、免疫グロブリンおよび免疫グロブリン定常領
域の全てまたは一部が欠失している免疫グロブリンフラグメント、例えば、Ｆｖ
、Ｆａｂ、Ｆａｂ'またはＦ(ａｂ')2などをいう。 「供与体抗体」なる語は、その可変領域、そのＣＤＲまたは他の機能的フラグ
メントまたはアナログの核酸配列を設計抗体に付与して設計抗体をコードする領
域を得、その結果、供与体抗体の抗原特異性および中和活性を有する設計抗体を
発現させる、モノクローナルまたは組換え抗体をいう。 「受容体抗体」なる語は、その重鎖および／または軽鎖フレームワーク領域お
よび／またはその重鎖および／または軽鎖定常領域をコードする核酸配列のすべ
てまたは一部あるいはＶ領域サブファミリーコンセンサス配列を、設計抗体に付
与する、供与体抗体と異種のモノクローナルまたは組換え抗体をいう。 「機能的フラグメント」は、フラグメントが由来する抗体と同一の抗原結合特
異性および親和性を保持する部分的重鎖または軽鎖可変配列（例えば、免疫グロ
ブリン可変領域のアミノまたはカルボキシ末端でのわずかな欠失）である。 「アナログ」は、少なくとも１個のアミノ酸で修飾されているアミノ酸配列で
あって、そのアミノ酸配列が非修飾配列の生物学的特性、例えば、抗原特異性お
よび高親和性を保持するように化学的に修飾または置換することができるもので
ある。
【００１１】 非ヒト抗体からヒトおよび霊長類において免疫原性の低下した設計抗体を作製
する方法を提供する。典型的には、齧歯動物起源の、抗原特異的な非ヒト抗体か
らのＣＤＲを相同的な非ヒト霊長類受容体フレームワークに移植する。好ましく
は、非ヒト霊長類受容体フレームワークは旧世界尾なしザル由来のものである。
最も好ましくは、旧世界尾なしザル受容体フレームワークはパン・トログロディ
テス（Pan troglodytes）、パン・パニスカス（Pan paniscus）またはゴリラ・
ゴリラ（Gorilla gorilla）由来である。特に好ましくは、チンパンジーのパン
・トログロディテスである。また、旧世界ザル受容体フレームワークも好ましい
。最も好ましくは、旧世界ザル受容体フレームワークはマカカ（Macaca）属由来
である。カニクイザルのマカカ・シノモルガス（Macaca cynomolgus）が特に好
ましい。
【００１２】 特に好ましいチンパンジー（パン・トログロディテス）の重鎖可変領域フレー
ムワーク（ＶＨ）は、配列番号１０に示されるフレームワークI、IIおよびIIIア
ミノ酸配列および配列番号８３に示されるフレームワークIVアミノ酸配列を有す
るＣＰＶＨ４１−１２；配列番号１１に示されるフレームワークI、IIおよびIII
アミノ酸配列および配列番号８５に示されるフレームワークIVアミノ酸配列を有
するＣＰＶＨ４１−１；配列番号１２に示されるフレームワークI、IIおよびIII
アミノ酸配列を有するＣＰＶＨ４１−４；配列番号１３に示されるフレームワー
クI、IIおよびIIIアミノ酸配列を有するＣＰＶＨ４１−７；配列番号１４に示さ
れるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列を有するＣＰＶＨ４１−８；配
列番号１５に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列および配列番
号８１に示されるフレームワークIVアミノ酸配列を有するＣＰＶＨ４１−９；配
列番号１６に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列および配列番
号８２に示されるフレームワークIVアミノ酸配列を有するＣＰＶＨ４１−１０；
配列番号１７に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列を有するＣ
ＰＶＨ４１−１８；配列番号１８に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミ
ノ酸配列および配列番号８４に示されるフレームワークIVアミノ酸配列を有する
ＣＰＶＨ４１−１９である。
【００１３】 特に好ましいチンパンジー（パン・トログロディテス）重鎖カッパ可変領域フ
レームワーク（Ｖκ）は、配列番号２８に示されるフレームワークI、IIおよびI
IIアミノ酸配列を有するＣＰＶκ４６−１；配列番号２９に示されるフレームワ
ークI、IIおよびIIIアミノ酸配列を有するＣＰＶκ４６−３；配列番号３０に示
されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列を有するＣＰＶκ４６−４；
配列番号３１に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列を有するＣ
ＰＶκ４６−５；配列番号３２に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ
酸配列および配列番号８６に示されるフレームワークIVアミノ酸配列を有するＣ
ＰＶκ４６−６；配列番号３３に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ
酸配列および配列番号８７に示されるフレームワークIVアミノ酸配列を有するＣ
ＰＶκ４６−７；配列番号３４に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ
酸配列を有するＣＰＶκ４６−８；配列番号３５に示されるフレームワークI、I
IおよびIIIアミノ酸配列を有するＣＰＶκ４６−１１；配列番号３６に示される
フレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列を有するＣＰＶκ４６−１４である
。
【００１４】 特に好ましいカニクイザル（マカナ・シノモルガス）重鎖可変領域フレームワ
ーク（ＶＨ）は、配列番号４５に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ
酸配列および配列番号８８に示されるフレームワークIVアミノ酸配列を有するＣ
ＹＶＨ２−１；配列番号４６に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸
配列および配列番号８９に示されるフレームワークIVアミノ酸配列を有するＣＹ
ＶＨ２−３；配列番号４７に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配
列および配列番号９０に示されるフレームワークIVアミノ酸配列を有するＣＹＶ
Ｈ２−４；配列番号４８に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列
および配列番号９３に示されるフレームワークIVアミノ酸配列を有するＣＹＶＨ
２−５；配列番号４９に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列お
よび配列番号９１に示されるフレームワークIVアミノ酸配列を有するＣＹＶＨ２
−６；配列番号５０に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列を有
するＣＹＶＨ２−７；配列番号５１に示されるフレームワークI、IIおよびIIIア
ミノ酸配列を有するＣＹＶＨ２−８；配列番号５２に示されるフレームワークI
、IIおよびIIIアミノ酸配列および配列番号９２に示されるフレームワークIVア
ミノ酸配列を有するＣＹＶＨ２−１０である。
【００１５】 特に好ましいカニクイザル（マカナ・シノモルガス）軽鎖カッパ可変領域フレ
ームワーク（Ｖκ）は、配列番号５９に示されるフレームワークI、IIおよびIII
アミノ酸配列を有するＣＹＶκ４−２であり；配列番号６０に示されるフレーム
ワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列および配列番号９４に示されるフレームワー
クIVアミノ酸配列を有するＣＹＶκ４−３；配列番号６１に示されるフレームワ
ークI、IIおよびIIIアミノ酸配列を有するＣＹＶκ４−５；配列番号６２に示さ
れるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列および配列番号９５に示される
フレームワークIVアミノ酸配列を有するＣＹＶκ４−６；配列番号６３に示され
るフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列を有するＣＹＶκ４−１０；配列
番号６４に示されるフレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列および配列番号
９６に示されるフレームワークIVアミノ酸配列を有するＣＹＶκ４−１１である
。
【００１６】 配列番号１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、２８、２
９、３０、３１、３２、３３、３４、３５または３６のチンパンジーＶＨおよび
Ｖκ受容体フレームワークI、IIおよびIIIアミノ酸配列および配列番号８１、８
２、８３、８４、８５、８６または８７のフレームワークIVアミノ酸配列をコー
ドする単離された核酸分子もまた、本発明の一部である。さらに、配列番号４５
、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５９、６０、６１、６２、６３
または６４のカニクイザルＶＨおよびＶκ受容体フレームワークI、IIおよびIII
アミノ酸配列および配列番号８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５
または９６のフレームワークIVアミノ酸配列をコードする単離された核酸分子も
また、本発明の一部である。ＶＨおよびＶκ受容体フレームワークアミノ酸配列
の機能的フラグメントまたはアナログをコードする核酸配列もまた、本発明の一
部である。
【００１７】 本明細書中に記載のＶＨおよびＶκ受容体フレームワークをコードする単離さ
れた核酸配列に加えて、これらフレームワーク領域に相補的な核酸配列もまた本
発明に含まれる。有用なＤＮＡ配列は、ストリンジェントなハイブリダイゼーシ
ョン条件下でＤＮＡ配列とハイブリダイズするこれら配列を含む。T.Maniatisら
、Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory
（１９８２）３８７−３８９頁を参照のこと。かかるストリンジェントなハイブ
リダイゼーション条件の一例は、６５℃、４ｘＳＳＣでのハイブリダイゼーショ
ン後、１時間６５℃で０.１ｘＳＳＣで洗浄することである。別法として、例示
的なストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、４２℃で５０％ホルム
アミド、４ｘＳＳＣである。好ましくは、これらのハイブリダイズするＤＮＡ配
列は長さが少なくとも１８個のヌクレオチドである。 適当なフレームワークは、旧世界尾なしザルまたはサルのＶＨおよびＶＬ領域
のデータベースの中からコンピューター相同性検索によって選択される。霊長類
抗体のフレームワーク部は治療的抗体の成分として有用である。さらに、霊長類
とヒトの遺伝子間の類似した配列相同性のためヒトの治療において霊長類抗体フ
レームワークを使用する場合、そのフレームワークは免疫寛容されているであろ
う。かくして、本発明は、抗原特異的な非ヒト供与体抗体からのＣＤＲを非ヒト
霊長類種から由来の受容体Ｖ領域に移植することを提供する。
【００１８】 齧歯類またはいずれか他の非ヒト起源であってもよい、供与体抗体の抗原特異
性および結合動力学（binding kinetics）は、供与体抗体と最も類似するように
コンピュータ相同性検索によって決定された霊長類受容体Ｖ領域を選択すること
によって最大限保持される。別法として、受容体抗体は、供与体抗体と最大相同
性を示す霊長類Ｖ領域サブファミリーまたはその一部から移植されるコンセンサ
ス配列であってもよい。 供与体ＣＤＲを霊長類受容体フレームワークに移植して得られた設計構築物は
、その後、例えば、Protein Data Bank、http://www.pdb.bnl.gov/pdb−bin/pdb
domainに見出される公知の抗体結晶構造に基づく三次元モデル分析によって精製
される。別法として、供与体抗体のコンピューター形成三次元モデルを、「Ａｂ
Ｍ」（Oxford Molecular, Oxford, UK）などの商業上入手可能なソフトウェアに
よってコンピューター処理することもできる。 これらモデルの構造分析から、ＣＤＲ接触残基であって、ＣＤＲループの提示
に重要であり、したがって結合活性であると思われる供与体フレームワーク残基
を明らかにすることができる。ＣＤＲ接触残基は、三次元モデルにて認められる
、ＣＤＲ残基のファン・デル・ワールス（van der Waals）径の範囲内に入るも
のであるか、塩架橋を介して、または疎水性相互作用によってＣＤＲ残基と相互
作用できるものであろう。かかる供与体フレームワーク（ＣＤＲ接触）残基は、
設計構築物に保持できる。
【００１９】 モデル実験はまた、いずれのフレームワーク残基が溶媒環境に大きく曝される
かを明らかにすることができる。設計構築物はさらに、これらの溶媒接近アミノ
酸残基のいくつかまたはすべてを、米国特許第５６３９６４１号に開示される設
計構築物と最も相同なヒトＶ領域の中から同じ位置にあるものと置換することに
よっても改良できる。 ついで、設計Ｖ領域は、相補的固定またはＦｃ受容体結合などの任意の二次免
疫機能に応じて、１またはそれ以上の異なるヒトまたは旧世界尾なしザル定常領
域に結合される。ヒト定常領域は、ＩｇＧ（サブタイプ１ないし４）、ＩｇＭ、
ＩｇＡおよびＩｇＥのごときヒト免疫グロブリンクラスおよびイソタイプから選
択できる。エフェクター機能の低下をもたらす重鎖定常領域にＳ２２８Ｐおよび
Ｌ２３５Ｅ（ＰＥ変異）変異を含むＩｇＧ４サブタイプ変種もまた選択できる。
米国特許第５６２４８２１号および第５６４８２６０号を参照のこと。
【００２０】 完全な重鎖および軽鎖遺伝子は、適当な発現ベクターに転移され、チャイニー
ズハムスター卵巣、ＣＯＳまたは骨髄腫細胞などの適当な宿主細胞内で同時発現
（co−expressed）される。得られた作製抗体は、ヒトに投与した場合、実質的
に免疫原性が低下しており、抗原に対して十分に結合親和性を保持していると考
えられる。 受容体Ｖ領域は、定方向性ＰＣＲ法、すなわち、非ヒト霊長類のｃＤＮＡライ
ブラリを供与体抗体の最も類似した受容体フレームワークについて検索する方法
によって、各供与体Ｖ領域に特異的に単離できる。供与体抗体フレームワークI
と相同なオリゴヌクレオチドＰＣＲプライマー（Ｃ−領域３'ＰＣＲプライマー
と対をなす）は、非ヒト霊長類、例えば、チンパンジーのリンパ球ｃＤＮＡライ
ブラリーの直接ＰＣＲ増幅に使用される。このことは、供与体抗体と類似したフ
レームワークI領域を有するＶ領域を選択できるであろうし、得られたクローン
の配列分析は関連したフレームワークIIおよびIII（およびIV）配列を示すであ
ろう。３'ＰＣＲプライマーは、ついで、こうして得られた非ヒト霊長類フレー
ムワークIII配列の知識に基づいて設計でき、ベクター特異的５'ＰＣＲプライマ
ーと一緒に元来のｃＤＮＡライブラリの直接ＰＣＲ増幅に使用できるであろう。
ＰＣＲ増幅の第二ラウンドから得られたｃＤＮＡクローンは供与体抗体と最も類
似したフレームワークIおよびIII配列を有し、フレームワークIIは、同程度の配
列相同性を示すであろう。
【００２１】 （実施例） 以下の具体的かつ限定するものではない実施例を用いて本発明を説明する。 実施例１ チンパンジーＶＨ領域のランダムｃＤＮＡクローニングおよび配列分析 ３匹のチンパンジー（パン・トログロディテス）から末梢血５ｍｌを採血し、
プールし、末梢血単核細胞を標準的密度遠心法によって単離した。リンパ球を産
生する抗体を含むこれら細胞をＴＲＩzol試薬（GIBCO, Gaithersburg, MD, USA
）に溶解し、製造者の説明書に従って溶媒抽出および沈殿操作を行い、全ＲＮＡ
をこの物質から回収した。
【００２２】 ３'Ｃｇ１遺伝子特異的プライマーを用い製造者のプロトコルに正確に従って
、マラソンＲＡＣＥ法（Clontech, Palo Alto, CA, USA）を使用して、全ＲＮＡ
からチンパンジー重鎖Ｖ領域をクローン化した。ＲＡＣＥ ＰＣＲ増幅後、期待
された大きさのＤＮＡバンドをアガロースゲルから切り出し、ＤＮＡを精製して
プラスミドベクターにクローン化した。このｃＤＮＡライブラリは多くの別個の
重鎖Ｖ領域クローンを含むが、配列分析に対しランダムに９個を選択した。チン
パンジーＶＨｃＤＮＡクローン４１−１２、４１−１、４１−４、４１−７、４
１−８、４１−９、４１−１０、４１−１８および４１−１９の完全な核酸配列
および推定タンパク質配列をそれぞれ配列番号１、２、３、４、５、６、７、８
および９に示す。これらクローンの成熟ＶＨ領域の第一アミノ酸配列からＣＤＲ
IIIに隣接する位置９２の第二の保存されたシステイン残基までの領域のアミノ
酸配列、すなわち、ＣＰＶＨ４１−１２、ＣＰＶＨ４１−１、ＣＰＶＨ４１−４
、ＣＰＶＨ４１−７、ＣＰＶＨ４１−８、ＣＰＶＨ４１−９、ＣＰＶＨ４１−１
０、ＣＰＶＨ４１−１８およびＣＰＶＨ４１−１９をそれぞれ配列番号１０、１
１、１２、１３、１４、１５、１６、１７および１８に示す。これらクローンの
フレームワークIVをコードする領域のアミノ酸配列ＣＰＶＨ４１−９、ＣＰＶＨ
４１−１０、ＣＰＶＨ４１−１２、ＣＰＶＨ４１−１９およびＣＰＶＨ ４１−
１をそれぞれ配列番号８１、８２、８３、８４および８５に示す。
【００２３】 成熟Ｎ−末端からのチンパンジーＶＨアミノ酸配列およびＣＤＲIIIの隣の位
置９２の第二の保存されたシステイン残基を、Sequences of Proteins of Immun
ological InterstのKabatデータベース（ftp://ncbi.nlm.nih.gov/repository/k
abat/）のコンピューター相同性検索における疑問配列として使用した。この分
析結果を表１に示す。 各々のケースで、最類似対合はヒトＶＨ領域とで、アミノ酸レベルで７６％（
４１−１／ＨＨＣ２０Ｇ）および９４％（４１−１０/ＨＨＣ２０Ｙ）間の配列
同一性を示した。対合は３種の主要なヒトＶＨサブグループの各々にも見出され
、チンパンジーＶＨレパートリーは少なくとも、ヒトのサブグループ各々と相同
ないくつかの部材を含むことを示した。ヒトサブグループ相同性を表１に示す。
【００２４】
【表１】
【００２５】 結果は、チンパンジーおよびヒトＶＨ領域間の全体の配列同一性が７６および
９５％間にあり、平均同一性が８４％であることを示した。この観察に基づけば
、チンパンジーランダムＶＨライブラリをさらにサンプリングし、その中から個
々の供与体ＶＨ領域に最適となる受容体フレームワークを選択するための、ＶＨ
配列の実質的により大きい多様性が得られるであろう。
【００２６】 実施例２ チンパンジーＶκ領域のランダムｃＤＮＡクローニングおよび配列分析 製造者のプロトコルに正確に従い、Ｃκ３'遺伝子特異的プライマーを用いて
、マラソンＲＡＣＥ法（Clontech、Palo Alto、CA、USA）を使用して、チンパン
ジー軽鎖Ｖκ領域を全ＲＮＡよりクローン化した。ＲＡＣＥ ＰＣＲ増幅後、予
想された大きさのＤＮＡバンドをアガロースゲルから切り出し、ＤＮＡを精製し
てプラスミドベクターにクローン化した。このｃＤＮＡライブラリは多くの別個
の軽鎖Ｖκ領域クローンを含むが、配列分析に対しランダムに９個を選択した。
チンパンジーＶκｃＤＮＡクローン４６−１、４６−３、４６−４、４６−５、
４６−６、４６−７、 ４６−８、４６−１１および４６−１４の完全な核酸配
列および推定タンパク質配列をそれぞれ配列番号１９、２０、２１、２２、２３
、２４、２５、２６および２７に示す。これらクローンの成熟Ｖκ領域の第一ア
ミノ酸配列から、ＣＤＲIIIの隣の位置８８の第二の保存されたシステイン残基
までの領域のアミノ酸配列、すなわち、ＣＰＶ４６−１、ＣＰＶ４６−３、ＣＰ
Ｖ４６−４、ＣＰＶ４６−５、ＣＰＶ４６−６、ＣＰＶ４６−７、ＣＰＶ４６−
８、 ＣＰＶ４６−１１およびＣＰＶ４６−１４をそれぞれ配列番号２８、２９
、３０、３１、３２、３３、３４、３５および３６に示す。これらクローンのフ
レームワークIVをコードする領域のアミノ酸配列ＣＰＶ４６−６およびＣＰＶ４
６−７をそれぞれ配列番号８６および８７に示す。
【００２７】 成熟Ｎ−末端および位置８８の第二の保存されたシステイン残基を含むチンパ
ンジーＶκアミノ酸配列をKabatデータベースのコンピューター相同性検索にお
ける疑問配列として使用した。この分析結果を表２に示す。各々のケースで、最
類似対合はヒトＶκ領域とで、アミノ酸レベルで６８％（４６−４／ＨＫＬ３１
０）および９７％（４６−１１／ＨＫＬ１０６）間の配列同一性を示した。チン
パンジーＶκ配列はKabatデータベースに見出されるヒトＶκの収集物と異なる
のは明らかである。 ヒトサブグループ相同性を表２に示す。４個の主要なヒトＶκサブグループの
中で、対合は２個の最も頻繁に単離されたものに見出され、それはチンパンジー
ＶκレパートリーがヒトＶκレパートリーの主要な部材と少なくとも相同的であ
ることを示した。残りの２種のヒトＶκサブグループ（ＶκIIおよびＶκIV）に
相同するものを含め、チンパンジーＶκｃＤＮＡライブラリをさらにサンプリン
グし、チンパンジーＶκ領域のより大きな多様性が同定されるであろう。
【表２】
【００２８】 実施例３ カニクイザルＶＨ領域のランダムｃＤＮＡクローニングおよび配列分析 標準的実験室操作によって、脾臓ＲＮＡを単一供与体カニクイザル（マカカ・
シノモルガス）から回収した。製造者のプロトコルに正確に従い、３'Ｃｇ１遺
伝子特異的プライマーを用い、マラソンＲＡＣＥ法（Clontech、Palo Alto、CA
、USA）を使用して、カニクイザル重鎖Ｖ領域を全ＲＮＡよりクローン化した。
ＲＡＣＥ ＰＣＲ増幅後、予想される大きさのＤＮＡバンドをアガロースゲルか
ら切り出し、ＤＮＡを精製してプラスミドベクターにクローン化した。このｃＤ
ＮＡライブラリは多くの別個のＨＶ領域クローンを含有するが、配列分析に対し
ランダムに８個を選択した。カニクイザルＶＨｃＤＮＡクローン２−１、２−３
、２−４、２−５、２−６、２−７、２−８および２−１０の完全な核酸配列お
よび推定タンパク質配列をそれぞれ配列番号３７、３８、３９、４０、４１、４
２、４３および４４に示す。これらクローンの成熟ＶＨ領域の第一アミノ酸配列
からＣＤＲIIIの隣の位置９２の第二の保存されたシステイン残基までの領域の
アミノ酸配列、すなわち、ＣｙＶＨ２−１、ＣｙＶＨ２−３、ＣｙＶＨ２−４、
ＣｙＶＨ２−５、ＣｙＶＨ２−６、ＣｙＶＨ２−７、ＣｙＶＨ２−８およびＣｙ
ＶＨ２−１０をそれぞれ配列番号４５、４６、４７、４８、４９、５０，５１お
よび５２に示す。これらクローンのフレームワークIVをコードする領域のアミノ
酸配列ＣｙＶＨ２−１、ＣｙＶＨ２−３、ＣｙＶＨ２−４、ＣｙＶＨ２−６、Ｃ
ｙＶＨ２−１０およびＣｙＶＨ２−５をそれぞれ配列番号８８、８９、９０、９
１、９２および９３に示す。
【００２９】 成熟Ｎ−末端からのカニクイザルＶＨアミノ酸配列およびＣＤＲIIIに隣接す
る位置９２の第二の保存されたシステイン残基をKabatデータベースのコンピュ
ーター相同性検索における疑問配列として使用した。この分析結果を表３に示す
。各場合で、最類似対合はヒトＶＨ領域とで、アミノ酸レベルで６２％（２−６
／ＨＨＣ２０Ｅ）および８４％（２−５／ＨＨＣ２０Ｆ）間の配列同一性を示し
た。カニクイザルＶＨ配列がKabatデータベースに見出されるヒトＶＨの収集物
から区別されることは明らかである。対合は３個の主要なヒトＶＨサブグループ
の各々にも見出され、カニクイザルＶＨレパートリーは少なくとも、主要なヒト
サブグループ各々と相同ないくつかの部材を含むことを示した。ヒトサブグルー
プ相同性を表３に示す。
【００３０】
【表３】
【００３１】 結果は、カニクイザルおよびヒトのＶＨ領域間の全体の配列同一性が６２およ
び８４％の間にあり、平均同一性が７７％であることを示す。この観察に基づけ
ば、カニクイザルランダムＶＨライブラリをさらにサンプリングし、その中から
個々の供与体ＶＨ領域に最適となる受容体フレームワークを選択するための、Ｖ
Ｈ配列の実質的により大きい多様性が得られるであろう。
【００３２】 実施例４ カニクイザルＶκ領域のランダムｃＤＮＡクローニングおよび配列分析 製造者のプロトコルに正確に従い、Ｃκ３'遺伝子特異的プライマーを用いて
、マラソンＲＡＣＥ法（Clontech、Palo Alto、CA、USA）を使用して、脾臓全体
のＲＮＡからカニクイザル軽鎖Ｖκ領域をクローン化した。ＲＡＣＥ ＰＣＲ増
幅後、予想された大きさのＤＮＡバンドをアガロースゲルから切り出し、ＤＮＡ
を精製してプラスミドベクターにクローン化した。このｃＤＮＡライブラリは多
くの別個の軽鎖Ｖκ領域クローンを含むが、配列分析に対しランダムに６個を選
択した。カニクイザルＶκｃＤＮＡクローン４−２、４−３、４−５、４−６、
４６−１０および４−１１の完全な核酸配列および推定タンパク質配列をそれぞ
れ配列番号５３、５４、５５、５６、５７および５８に示す。これらクローンの
成熟Ｖκ領域の第一アミノ酸からＣＤＲIIIに隣接する位置８８の第二の保存さ
れたシステイン残基までの領域のアミノ酸配列、すなわち、ＣｙＶ４−２、Ｃｙ
Ｖ４−３、ＣｙＶ４−５、ＣｙＶ４−６、ＣｙＶ４−１０およびＣｙＶ４−１１
をそれぞれ配列番号５９、６０、６１、６２、６３および６４に示す。これらク
ローンのフレームワークIVをコードする領域のアミノ酸配列ＣｙＶ４−３、Ｃｙ
Ｖ４−６およびＣｙＶ４−１１をそれぞれ配列番号９４、９５および９６に示す
。
【００３３】 成熟Ｎ−末端および位置８８の第二の保存されたシステイン残基を含むカニク
イザルＶκアミノ酸配列をKabatデータベースのコンピューター相同性検索にお
ける疑問配列として使用した。この分析結果を表４に示す。各々のケースで、最
類似対合は、ヒトＶκ領域と、アミノ酸レベルで７３％（４−１１／ＨＫＬ１０
Ｓ）および９４％（４−３／ＨＫＬ４００）間の配列同一性を示した。カニクイ
ザルのＶκ配列が公の遺伝子データベースに見られるヒトＶκの収集物と異なる
ことは明らかである。ヒトサブグループ相同性を表４に示す。４個の主要なヒト
Ｖκサブグループのうち、３個に対合が見られ、カニクイザルＶκレパートリー
がヒトＶκレパートリーの大部分の部材とかなり相同性のあることがわかった。
カニクイザルＶκｃＤＮＡライブラリをさらにサンプリングし、残りのヒトＶκ
サブグループ（ＶκIII）に相同的であるものを含め、カニクイザルＶκ領域の
より大きな多様性が同定されるであろう。
【００３４】
【表４】
【００３５】 結果は、カニクイザルおよびヒトＶκ領域間の全体の配列同一性が７３および
９４％の間にあり、平均同一性が７７％であることを示す。この観察によれば、
カニクイザルランダムＶκライブラリをさらにサンプリングし、その中から特定
の供与体Ｖκ領域に最適の受容体フレームワークを選択するための、Ｖκ配列の
実質的により大きい多様性が得られるであろう。
【００３６】 実施例５ 設計抗−ＩＬ−５モノクローナル抗体の調製 ラット抗−インターロイキン−５（ＩＬ−５）抗体４Ａ６のＶκおよびＶＨ遺
伝子をそれぞれ配列番号６５および６６に示す。これら遺伝子は、喘息治療に有
用なヒトＩＬ−５に特異的な高親和性中和モノクローナル抗体をコードする。米
国特許第５６９３３２３号を参照のこと。 ４Ａ６軽鎖を以下のごとく設計した。図１に示すごとく、供与体抗体Ｖκ４Ａ
６の配列（配列番号６５）をチンパンジーＭａｂ Ｃ１０８Ｇからの受容体抗体
軽鎖Ｖκ領域（Mol.Immnol.３２:１０８１−１０９２（１９９５））（配列番号
６７）と一列に並べた。天然のＶκ４Ａ６は残基１０に独特の欠失を有するので
、配列の並びではその位置にギャップを挿入した。ＣＤＲ残基をKabatら、Seque
nces of Proteins of immunological Interest、第４版、米国保健社会福祉省、
国民保健協会（１９８７）によって定義されるごとく同定した。
【００３７】 ＣＤＲ提示に影響を及ぼすであろうフレームワーク残基を公知の抗体結晶構造
に基づく三次元モデル分析によって同定した。このＣＤＲ−接触セットの残基を
、並べたＶκ４Ａ６およびＶκC１０８Ｇ配列の中から比較し、Ｖκ４Ａ６およ
びＶκC１０８Ｇ間で異なる対の位置を標識した（図１、星印）。Ｖκ４Ａ６（
供与体抗体）のＣＤＲおよび標識したフレームワーク残基を転移させ、ＶκＣ１
０８Ｇ（受容体抗体）の対応する残基を置換した。設計の完了した４Ａ６軽鎖Ｖ
領域を配列番号６８に示す。６個の供与体フレームワーク残基が残基１ないし４
、４９および６０の設計分子中に保持された。 類似様式で、同様の方法を４Ａ６重鎖を設計するのに使用した。図２に示すご
とく供与体抗体ＶＨ４Ａ６（配列番号６６）の配列をチンパンジーＭａｂＣ１０
８Ｇ（配列番号６９）由来の受容体抗体重鎖Ｖ領域と一緒に一列に並べた。ＶＨ
Ｃ１０８ＧのＣＤＲIIIが１０残基長いごとく、ＶＨ４Ａ６ＣＤＲIIIに大きなギ
ャップを導入した。ＣＤＲ残基を前記のKabatらの操作によって定義されるごと
く同定した。
【００３８】 ＣＤＲ提示に影響を及ぼし得るフレームワーク残基を公知の抗体結晶構造に基
づいた三次元モデル分析によって同定した。このＣＤＲ−接触セットの残基を並
べたＶＨ４Ａ６およびＶＨＣ１０８Ｇ配列の中から比較し、ＶＨ４Ａ６およびＶ
ＨＣ１０８Ｇ間で異なる対の位置を標識した（図２、星印）。総じて、ＶＨ４Ａ
６およびＶＨＣ１０８Ｇ間で異なる１１個のかかるＣＤＲ接触残基を選択して標
識した。ＶＨ４Ａ６（供与体抗体）のＣＤＲおよび標識したＣＤＲ接触フレーム
ワーク残基を転移させ、ＶＨＣ１０８Ｇ（受容体抗体）に対応する残基を置換し
た。設計の完了した４Ａ６重鎖Ｖ領域を配列番号７０を示す。１１個の供与体フ
レームワーク残基が残基２７、３０、３８、４９、６６、６７、６９、７１、７
３、７８および９４で設計分子中に保持された。
【００３９】 設計４Ａ６は当業者に公知の方法を使用して細胞内で発現できる。簡単に言え
ば、完全な設計４Ａ６ＶＨおよびＶκ領域をコードする遺伝子を長い合成オリゴ
ヌクレオチドから組み立て、所望の抗体定常領域を含む適当な真核細胞発現ベク
ターに連結させることができる。かかる発現ベクターは、十分な長さの抗体重鎖
および軽鎖の発現を指向させるのに必要な選択的マーカー、例えばネオマイシン
耐性、および制御配列、例えば、ＣＭＶプロモーターを含むであろう。その後、
適当な宿主細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣のトランスフェクション
は、十分に活性な設計４Ａ６の発現を引き起こすであろう。
【００４０】 実施例６ 設計抗インテグリンモノクローナル抗体の調製 ネズミ抗−インテグリン抗体Ｂ９のＶκおよびＶＨ遺伝子をそれぞれ配列番号
７１および７２に示す。これら遺伝子は血管疾患の治療に有用なヒトインテグリ
ンαvβ３に特異的な高親和性中和モノクローナル抗体をコードする。 Ｂ９軽鎖を以下のごとく設計した。供与体抗体ＶκＢ９のアミノ酸配列（配列
番号７２）を前記の９個のチンパンジーＶκ配列各々と比較し、LASERGENEプロ
グラム「ＭＥＧＡＬＩＧＮ」（ＤＮＡSTAR、Inc.、Madison、WI）を使用してコ
ンピューター相同性検索によって配列同一性の割合を決定した。クローンＣＰＶ
κ４６−３（配列番号２９）およびＣＰＶκ４６−１４（配列番号３６）を、Ｂ
９供与体Ｖκに対して最高の全体配列類似性（７７％）を有するチンパンジーＶ
κ領域であるとして同定した。ＣＰＶκ４６−３を受容体フレームワークとして
選択した。
【００４１】 同様に、ＣＰＶκ４６−１のチンパンジーＪκ遺伝子セグメント（配列番号９
７）を受容体フレームワークIVとして選択した。供与体ＶκＢ９および受容体Ｃ
ＰＶκ４６−３、ＣＰＶκ４６−１Ｖ領域の配列を並べ、その各フレームワーク
およびＣＤＲの位置を図３に示されるように決定した。 ＣＤＲ残基を、前記のKabatらの操作によって定義されるように同定した。結
果はＶκＢ９およびＣＰＶκ４６−３が８１％の配列同一性を共有するフレーム
ワーク領域IないしIIIを有して、７７％の全体配列同一性を共有することを示す
。 ＣＤＲ提示に影響を及ぼしうるフレームワーク残基を公知の抗体結晶構造に基
づく三次元モデル分析によって同定した。並べたＶκＢ９およびＣＰＶκ４６−
３配列の間での、このＣＤＲ−接触対の残基を比較し、ＶκＢ９およびＣＰＶκ
４６−３間で異なる対は見出されなかった。従って、ＶκＢ９（供与体抗体）の
ＣＤＲだけを転移させ、ＣＰＶκ４６−３（受容体抗体）の対応する残基を置換
した。最後に、ＣＰＶκ４６−１のフレームワークIV配列をＢ９軽鎖可変領域の
対応するフレームワークIV残基と置換した。設計の完了したＢ９軽鎖Ｖ領域を配
列番号７３に示す。供与体フレームワーク残基は設計軽鎖可変領域に保持されな
かった。
【００４２】 Ｂ９重鎖を同様の様式で設計した。供与体抗体ＶＨＢ９のアミノ酸配列（配列
番号７１）をコンピューター相同性検索によって前記の９個のチンパンジーＶＨ
配列の各々と比較した。クローンＣＰＶＨ４１−１８（配列番号１７）をＢ９供
与体ＶＨと最高の全体配列類似性（５８％）を有するチンパンジーＶＨ領域とし
て同定した。 ＣＰＶＨ４１−１０のチンパンジーＪＨ遺伝子セグメント（配列番号８２）を
受容体フレームワークIVとして選択した。供与体ＶＨＢ９およびチンパンジー受
容体Ｖ領域の配列を並べ、その各々のフレームワークおよびＣＤＲの位置を図４
に示すごとく決定した。 ＣＤＲ残基をKabatらの操作（前掲）によって定義されるごとく同定した。結
果はＶＨＢ９およびＣＰＶＨ４１−１８が６５％の配列同一性を共有するフレー
ムワーク領域IないしIIIを有して、５８％の全体配列同一性を共有することを示
す。
【００４３】 ＣＤＲ提示に影響を及ぼしうるフレームワーク残基を公知の抗体結晶構造に基
づく三次元モデル分析によって同定した。一列に並べたＶＨＢ９およびＣＰＶＨ
４１−１８配列の間で、このＣＤＲ−接触対の残基を比較し、ＶＨＢ９およびチ
ンパンジー受容体フレームワーク間で異なるセットの９個の残基を標識した。供
与体抗体ＶＨＢ９のＣＤＲおよび標識したフレームワーク残基を転移させ、ＣＰ
ＶＨ４１−１８（受容体抗体）の対応する残基を置換した。最後に、ＣＰＶＨ４
１−１０のフレームワークIV配列をＢ９重鎖可変領域の対応するフレームワーク
IV残基と置換した。設計の完了したＢ９重鎖Ｖ領域を配列番号７４に示す。９個
の供与体フレームワーク残基が、位置２４、２７、３８、４８、６６、６７、６
９、９３および９４で、設計重鎖可変領域中に保持された。
【００４４】 実施例７ 設計抗インテグリンモノクローナル抗体の発現および特徴化 設計Ｂ９抗体は当業者に公知の方法を用いて細胞内で発現させることができる
。簡単には、完全な設計Ｂ９ＶＨおよびＶκ領域をコードする遺伝子を長い合成
オリゴヌクレオチドから組み立て、ＩｇＧ１、κ抗体定常領域を含む適当な真核
細胞発現ベクターに連結した。発現ベクターは、ネオマイシン耐性選択的マーカ
ーおよびＣＭＶプロモーター制御配列を含んだ。その後のＣＯＳ宿主細胞のトラ
ンスフェクションは設計Ｂ９（ＣＰＢ９）の発現を引き起した。
【００４５】 ＣＰＢ９の相対的結合活性を以下のごとく元来のネズミＢ９抗体の活性と比較
した。発現構築物と共にトランスフェクトした後に５日間培養液内に維持された
細胞からの培養液上清中に存在するＣＰＢ９抗体を、ＯＲＩＧＥＮ技法（IGEN I
nc、Gainthersburg、MD）を使用して親のネズミＢ９抗体と比較した。簡単には
、Ｂ９変種の異なる希釈液を先にビオチン化した精製ヒトαvβ３インテグリン
および抗体Ｃ領域に特異的な電気化学的発光性ＴＡＧ基とインキュベートした。
インテグリンと結合したＢ９変種抗体を、免疫複合体をストレプトアビジンビー
ズ上に捕獲し、つづいてＯＲＩＧＥＮ装置で分析することによって測定した。結
果はＣＰＢ９およびネズミＢ９の結合曲線がわずか約３倍まで置換されているこ
とを明らかにし、このことは、αvβ３に対するＣＰＢ９およびネズミＢ９の全
体の比結合活性が互いに３倍以内であることを示した。従って、結果は、本発明
に記載される、齧歯類ＣＤＲのチンパンジーフレームワークへのＣＤＲ移植が親
の齧歯類のｍＡｂの結合活性をほとんど全て保持したことを示す。
【００４６】 実施例８ 設計抗エリスロポイエチン受容体モノクローナル抗体の調製 ネズミ抗−エリスロポイエチン受容体抗体３Ｇ９のＶＨおよびＶκ遺伝子をそ
れぞれ配列番号７５および７６に示す。これら遺伝子は造血疾患の治療に有用な
ヒトエリスロポイエチン受容体（ＥＰＯｒ）に特異的な高親和性中和モノクロー
ナル抗体をコードする。 ３Ｇ９軽鎖を以下のごとく設計した。供与体抗体Ｖκ３Ｇ９のアミノ酸配列（
配列番号７６）を前記載のコンピューター相同性検索によって９個のチンパンジ
ーＶκ配列各々と比較した。クローンＣＰＶκ４６−３（配列番号２９）、ＣＰ
Ｖκ４６−５（配列番号３１）、ＣＰＶκ４６−８（配列番号３４）およびＣＰ
Ｖκ４６−１４（配列番号３６）を３Ｇ９供与体Ｖκに対して最高の全体配列類
似性（６５％）を有するチンパンジーＶκ領域として同定した。ＣＰＶκ４６−
１４を受容体フレームワークとして選択した。
【００４７】 ＣＰＶκ４６−１４のチンパンジーＪκ遺伝子セグメントはＣＰＶκ４６−１
のそれ（配列番号９７）と同一であり、受容体フレームワークIVとして選択した
。供与体Ｖκ３Ｇ９および受容体ＣＰＶκ４６−１４Ｖ領域の配列を並べ、その
各フレームワークおよびＣＤＲの位置を図５に示されるごとく決定した。 ＣＤＲ残基をKabatらの操作（前掲）によって定義されるごとく同定した。結
果はＶκ３Ｇ９およびＣＰＶκ４６−１４が７３％の配列同一性を共有するフレ
ームワーク領域IないしIIIを有して、６５％の全体配列同一性を共有することを
示す。 ＣＤＲ提示に影響できるであろうフレームワーク残基を公知の抗体結晶構造に
基づいた三次元モデル分析によって同定した。このＣＤＲ−接触対の残基を並べ
たＶκ３Ｇ９およびＣＰＶκ４６−１４配列の中から比較し、Ｖκ３Ｇ９および
ＣＰＶκ４６−３間で異なるこの対の位置に標識した。Ｖκ３Ｇ９（供与体抗体
）のＣＤＲおよび標識された残基を転移させ、ＣＰＶκ４６−１４（受容体抗体
）の対応する残基を置換した。最後に、ＣＰＶκ４６−１４のフレームワークIV
配列を３Ｇ９軽鎖可変領域の対応するフレームワークIV残基と置換した。設計の
完了した３Ｇ９軽鎖Ｖ領域を配列番号７７に示す。３個の供与体フレームワーク
残基は設計軽鎖可変領域に位置３、４６および６０で保持された。
【００４８】 ３Ｇ９重鎖を同様の様式で設計した。供与体抗体ＶＨ３Ｇ９のアミノ酸配列（
配列番号７５）をコンピューター相同性検索によって前記の９個のチンパンジー
ＶＨ配列各々と比較した。クローンＣＰＶＨ４１−１８（配列番号１７）を３Ｇ
９供与体ＶＨと最高の全体配列類似性（５３％）を有するチンパンジーＶＨ領域
として同定した。 ＣＰＶＨ４１−１８のチンパンジーＪＨ遺伝子セグメントはＣＰＶＨ４１−９
（配列番号８１）と同一であり、受容体フレームワークIVとして選択した。供与
体ＶＨ３Ｇ９およびチンパンジー受容体Ｖ領域の配列を並べ、その各々のフレー
ムワークおよびＣＤＲの位置を図６に示すごとく決定した。 ＣＤＲ残基をKabatらの操作（前掲）によって定義されるごとく同定した。結
果はＶＨ３Ｇ９およびＣＰＶＨ４１−１８が６２％の配列同一性を共有するフレ
ームワーク領域IないしIIIを有して、５３％の全体配列同一性を共有することを
示す。
【００４９】 ＣＤＲ提示に影響を及ぼしうるフレームワーク残基を公知の抗体結晶構造に基
づく三次元モデル分析によって同定した。このＣＤＲ−接触対の残基を一対とし
たＶＨ３Ｇ９およびＣＰＶＨ４１−１８配列の中から比較し、ＶＨ３Ｇ９および
チンパンジー受容体フレームワーク間で異なる対の１２個の残基を標識した。供
与体抗体ＶＨ３Ｇ９のＣＤＲおよび標識したフレームワーク残基を転移させ、Ｃ
ＰＶＨ４１−１８（受容体抗体）の対応する残基を置換した。最後に、ＣＰＶＨ
４１−１８のフレームワークIV配列を３Ｇ９重鎖可変領域の対応するフレームワ
ークIV残基と置換した。設計の完了した３Ｇ９重鎖Ｖ領域を配列番号７８に示す
。１２個の供与体フレームワーク残基は位置２４、２７、３０、３８、４８、６
６−６９、７１、７３および９４で、設計重鎖可変領域に保持された。
【００５０】 実施例９ 設計抗エリスロポイエチン受容体モノクローナル抗体の発現および特徴化 設計３Ｇ９抗体は当業者に公知の方法を用いて細胞内で発現させることができ
る。簡単に言えば、完全な設計３Ｇ９ＶＨおよびＶκ領域をコードする遺伝子を
長い合成オリゴヌクレオチドから組み立て、ＩｇＧ１、κ抗体定常領域を含む適
当な真核細胞発現ベクターに連結した。発現ベクターは、ネオマイシン耐性選択
的マーカーおよびＣＭＶプロモーター制御配列を含んだ。その後にＣＯＳ宿主細
胞をトランスフェクションに付し、設計３Ｇ９（ＣＰ３Ｇ９）の発現を引き起し
た。 チンパンジーフレームワークで一時的にトランスフェクトされたＣＯＳ細胞か
らの培養液上清をヒトＥＰＯｒの結合能についてもう一つ別の３Ｇ９変種と比較
した。ＲＰＯｒの細胞外ドメイン全体を組み換えタンパク質として発現させ、精
製し、ＥＬＩＺＡプレートのウェル上に吸着させた。ついで、異なる抗体の希釈
液を固層関連ＥＰＯｒと特異的に結合する能力につき試験した。
【００５１】 ＨＺ３Ｇ９は、伝統的ＣＤＲ移植実験においてヒトフレームワークを用いた、
３Ｇ９のヒト化変種である。ヒト化３Ｇ９重鎖アミノ酸配列を配列番号７９に示
す。ヒト化３Ｇ９軽鎖配列を配列番号８０に示す。先の実験により、ＨＺ３Ｇ９
は親のネズミ３Ｇ９の十分な結合親和性および結合活性を保持することが示され
た。従って、ＨＺ３Ｇ９はＶ領域カセット以外全ての点においてチンパンジー版
と同一であるので、この比較結合実験においてネズミ３Ｇ９のサロゲートとして
使用した。ヒトインテグリン特異的ヒト化抗体であるＨＺＤ１２および前記のヒ
トインテグリン特異的チンパンジーフレームワークの設計抗体であるＣＰＢ９を
含む陰性対照抗体もまた試験した。異なる濃度の３Ｇ９変種および対照抗体を１
時間インキュベートした。洗浄後、結合した抗体を抗−ヒトＨ＋Ｌ抗体−酵素接
合体とのインキュベーション、最終洗浄およびクロマゲンの添加によって検出し
た。
【００５２】 ＣＰ３Ｇ９およびＨＺ３Ｇ９に関して得られた結合曲線は重ねることができた
。この結果は、３Ｇ９のヒトおよびチンパンジーフレームワークの設計バージョ
ンが特異的抗原ヒトＥＰＯｒについて同一の全体結合活性を有することを示す。
ＨＺ３Ｇ９およびＣＰ３Ｇ９の定常領域が同一であるので、この結果はまた、元
来の齧歯類３Ｇ９の十分な結合親和性が３Ｇ９のチンパンジーバージョンに保持
されていることを示唆する。従って、結果は、本発明に記載の、齧歯類ＣＤＲの
チンパンジー受容体フレームワークへのＣＤＲ移植が親の齧歯類抗体の十分な結
合活性を保持したことを示す。 ネズミ３Ｇ９およびＣＰ３Ｇ９のヒトＥＰＯｒに対する結合親和性を測定する
ためにＢＩＡｃｏｒｅ分析（Phrmacia）を行った。ＥＰＯｒとのＣＰ３Ｇ９並び
にネズミ３Ｇ９の相互作用をＢＩＡｃｏｒｅ１０００バイオセンサーを使用して
特徴化した。装置およびセンサー表面の記載は、Brigham−Burkeら、Anal.Bioch
em.、２０５：１２５−１３１（１９９２）に記載される。
【００５３】 ＣＰ３Ｇ９を固定化タンパク質Ａのセンサー表面上に捕獲した。モノマーのＥ
ＰＯｒ溶液を表面に通過させ、時間に対する結合をモニターすることによって動
力学的結合定数を測定した。ついで、相互作用の平衡解離定数を動力学定数の割
合から得た。ウサギ抗−ネズミＦｃ特異的ポリクローナル抗体捕獲タンパク質Ａ
の表面に親のネズミ３Ｇ９を捕獲した。ＥＰＯｒとの相互作用の動力学および解
離定数は前記のごとく測定した。測定は全て、１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５
０ｍＭＮａＣl（ｐＨ７.２）、３ｍＭ ＥＤＴＡおよび０.００５％Ｔｗｅｅｎ２
０にて行った。流速は６０μＬ／分であった。温度は２０℃であった。 Ｋass（Ｍ-1s-1） Ｋdiss（s-1） ＫD（ｎＭ） ネズミ３Ｇ９ １.２x１０6 ４.０x１０-3 ３.３ ＣＰ３Ｇ９ １.０x１０6 ９.１x１０-3 ９.１
【００５４】 これら結果は、３Ｇ９のネズミおよびチンパンジーフレームワークバージョン
に測定された解離平衡定数が互いに３倍以内であることを示す。このデータは、
前記のＥＬＩＳＡに基づいた研究結果と良好にも一致する。従って、結果は、３
Ｇ９のチンパンジーバージョンを生成するのに使用した方法が、元来の齧歯類の
ｍＡｂの結合活性を大部分保持したことを示す。
【００５５】 本発明は、精神またはその本質から逸脱することなく、他の具体的な形態で具
現化することができ、従って、本発明の範囲を示すものとして、上記した発明の
詳細な説明よりも、特許請求の範囲を参照すべきである。
【００５６】
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】 設計４Ａ６ＶＬ領域のアミノ酸配列を示す図である。４Ａ６配列
の上にある星印は設計分子に保持される４Ａ６フレームワーク残基を示す。太字
および斜字はＣＤＲsを示す。
【図２】 設計４Ａ６ＶＨ領域のアミノ酸配列を示す図である。４Ａ６配列
の上にある星印は設計分子に保持される４Ａ６フレームワーク残基を示す。太字
および斜字はＣＤＲsを示す。
【図３】 ネズミ抗体Ｂ９Ｖκと、最類似対合するチンパンジーＶκおよび
選択されるＪκ配列とを比較するアミノ酸配列の並びを示す図である。ＣＤＲ領
域は太字および斜字によって示される。ギャップはドットによって示される。番
号付けは、前掲したＫabatらによるものである。
【図４】 ネズミ抗体Ｂ９ＶＨと、最類似対合するチンパンジーＶＨおよび
選択されるＪＨ配列とを比較するアミノ酸配列の並びを示す図である。ＣＤＲ領
域は太字および斜字によって示される。ギャップはドットによって示される。星
印はＣＤＲと相互作用し抗原結合親和性に影響すると予測されるフレームワーク
残基を示す。番号付けは前掲したＫabatらによるものである。
【図５】 ネズミ抗体３Ｇ９Ｖκと、最類似対合するチンパンジーＶκおよ
び選択されるＪκ配列とを比較するアミノ酸配列の並びを示す図である。ＣＤＲ
領域は太字および斜字によって示される。ギャップはドットによって示される。
星印はＣＤＲと相互作用し抗原結合親和性に影響すると予測されるフレームワー
ク残基を示す。番号付けは前掲したＫabatらによるものである。
【図６】ネズミ抗体３Ｇ９Ｖκと、最類似対合するチンパンジーＶＨおよび
選択されるＪＨ配列とを比較するアミノ酸配列の並びを示す図である。ＣＤＲ領
域は太字および斜字によって示される。ギャップはドットによって示される。星
印はＣＤＲと相互作用し抗原結合親和性に影響すると予測されるフレームワーク
残基を示す。番号付けは前掲したＫabatらによるものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA43 CA07 4B064 AG27 CA19 CC24 DA01 4C085 AA14 DD62 4H045 AA11 BA10 BA41 CA40 DA76 EA22 FA74

Claims (31)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 非−ヒト種の抗原特異的供与体抗体から由来の供与体ＣＤＲ
    および非−ヒト霊長類から由来の受容体フレームワーク残基を含む抗体。
  2. 【請求項２】 非−ヒト霊長類が旧世界尾なしザルである請求項１記載の抗
    体。
  3. 【請求項３】 旧世界尾なしザルがパン・トログロディテス、パン・パニス
    カスまたはゴリラ・ゴリラである請求項２記載の抗体。
  4. 【請求項４】 旧世界尾なしザルがパン・トログロディテスである請求項３
    記載の抗体。
  5. 【請求項５】 供与体抗体の１またはそれ以上のＣＤＲ−接触残基をさらに
    含む請求項１記載の抗体。
  6. 【請求項６】 ヒトまたは旧世界尾なしザルの定常領域を含む請求項１記載
    の抗体。
  7. 【請求項７】 １またはそれ以上の溶媒−暴露フレームワーク残基が選択さ
    れた相同的非−ヒト霊長類フレームワークからの対応する残基と置換されている
    請求項１記載の抗体。
  8. 【請求項８】 非−ヒト霊長類が旧世界ザルである請求項１記載の抗体。
  9. 【請求項９】 旧世界ザルの属がマカカである請求項８記載の抗体。
  10. 【請求項１０】 旧世界ザルがマカナ・シノモルガスである請求項９記載の
    抗体。
  11. 【請求項１１】 供与体抗体の１またはそれ以上のＣＤＲ−接触残基をさら
    に含む請求項８記載の抗体。
  12. 【請求項１２】 ヒトまたは旧世界尾なしザルの定常領域を含む請求項８記
    載の抗体。
  13. 【請求項１３】 １またはそれ以上の溶媒−暴露フレームワーク残基が選択
    された相同的非−ヒト霊長類フレームワークからの対応する残基と置換されてい
    る請求項８記載の抗体。
  14. 【請求項１４】 ＣＤＲを抗原−特異的非−ヒト抗体から相同的な旧世界尾
    なしザル受容体フレームワークに移植することを特徴とするヒトにおいて免疫原
    性の低下した抗体を産生する方法。
  15. 【請求項１５】 旧世界尾なしザル受容体フレームワークがパン・トログロ
    ディテス、パン・パニスカスまたはゴリラ・ゴリラ由来である請求項１４記載の
    方法。
  16. 【請求項１６】 旧世界尾なしザル受容体フレームワークがパン・トログロ
    ディテス由来である請求項１５記載の方法。
  17. 【請求項１７】 ＣＤＲを抗原−特異的非−ヒト抗体から相同的な旧世界ザ
    ル受容体フレームワークに移植することを特徴とするヒトにおいて免疫原性の低
    下した抗体を産生する方法。
  18. 【請求項１８】 旧世界ザル受容体フレームワークがマカカ属由来である請
    求項１７記載の抗体。
  19. 【請求項１９】 旧世界ザル受容体フレームワークがマカナ・シノモルガス
    由来である請求項１８記載の抗体。
  20. 【請求項２０】 配列番号１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１
    ７または１８に示されるアミノ酸配列を含むチンパンジーＶＨ受容体フレームワ
    ークI、IIおよびIII。
  21. 【請求項２１】 配列番号８１、８２、８３、８４または８５に示されるア
    ミノ酸配列を含むチンパンジーＶＨ受容体フレームワークIV。
  22. 【請求項２２】 配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３
    ５または３６に示されるアミノ酸配列を含むチンパンジーＶκ受容体フレームワ
    ークI、IIおよびIII。
  23. 【請求項２３】 配列番号８６または８７に示されるアミノ酸配列を含むチ
    ンパンジーＶκ受容体フレームワークIV。
  24. 【請求項２４】 配列番号４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１また
    は５２に示されるアミノ酸配列を含むカニクイザルＶＨ受容体フレームワークI
    、IIおよびIII。
  25. 【請求項２５】 配列番号８８、８９、９０、９１、９２または９３に示さ
    れるアミノ酸配列を含むカニクイザルＶＨ受容体フレームワークIV。
  26. 【請求項２６】 配列番号５９、６０、６１、６２、６３または６４に示さ
    れるアミノ酸配列を含むカニクイザルＶκ受容体フレームワークI、IIおよびIII
    。
  27. 【請求項２７】 配列番号９４、９５または９６に示されるアミノ酸配列を
    含むカニクイザルＶκ受容体フレームワークIV。
  28. 【請求項２８】 配列番号１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１
    ７、１８、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５または３６のアミ
    ノ酸配列をコードする単離された核酸分子。
  29. 【請求項２９】 配列番号８１、８２、８３、８４、８５、８６または８７
    のアミノ酸配列をコードする単離された核酸分子。
  30. 【請求項３０】 配列番号４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５
    ２、５９、６０、６１、６２、６３または６４のアミノ酸配列をコードする単離
    された核酸分子。
  31. 【請求項３１】 配列番号８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９
    ５または９６のアミノ酸配列をコードする単離された核酸分子。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006033386A1 (ja) * 2004-09-22 2006-03-30 Kirin Beer Kabushiki Kaisha 安定化されたヒトIgG4抗体
WO2007108559A1 (ja) * 2006-03-23 2007-09-27 Kirin Pharma Kabushiki Kaisha ヒトトロンボポエチン受容体に対するアゴニスト抗体
US7438910B2 (en) 2002-09-06 2008-10-21 Amgen Inc. Therapeutic human anti-IL1-R1 monoclonal antibody
JP2009504685A (ja) * 2005-08-15 2009-02-05 アラーナ・テラピューティクス・リミテッド 新世界霊長類フレームワーク領域を用いる設計された抗体
JP2016507555A (ja) * 2013-02-06 2016-03-10 インヒブルクス エルピー 血小板非減少性かつ赤血球非減少性ｃｄ４７抗体及びその使用方法
US11634495B2 (en) 2017-04-07 2023-04-25 Miltenyi Biotec B.V. & Co. KG Methods of activating CD32b/c comprising administering an antibody that binds BDCA-2 (CD303)

Families Citing this family (93)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI239847B (en) 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
US7790856B2 (en) 1998-04-07 2010-09-07 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7964192B1 (en) 1997-12-02 2011-06-21 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidgenic disease
US20080050367A1 (en) 1998-04-07 2008-02-28 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7179892B2 (en) * 2000-12-06 2007-02-20 Neuralab Limited Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US6761888B1 (en) * 2000-05-26 2004-07-13 Neuralab Limited Passive immunization treatment of Alzheimer's disease
US6160099A (en) 1998-11-24 2000-12-12 Jonak; Zdenka Ludmila Anti-human αv β3 and αv β5 antibodies
JP2002544123A (ja) * 1999-04-14 2002-12-24 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション エリトロポイエチン受容体抗体
US20030059427A1 (en) * 2000-04-28 2003-03-27 Force Walker R. Isolation and characterization of highly active anti-CD40 antibody
AU2005200250B2 (en) * 2000-05-08 2007-10-25 Celldex Therapeutics, Inc. Human monoclonal antibodies to dendritic cells
US7560534B2 (en) 2000-05-08 2009-07-14 Celldex Research Corporation Molecular conjugates comprising human monoclonal antibodies to dendritic cells
MXPA02010869A (es) 2000-05-08 2003-04-14 Medarex Inc Anticuerpos monoclonales humanos para celulas dendriticas.
US7700751B2 (en) 2000-12-06 2010-04-20 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize β-amyloid peptide
TWI255272B (en) * 2000-12-06 2006-05-21 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
EP2011802A3 (en) 2001-04-27 2009-04-15 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Anti-CD40 monoclonal antibody
ES2552281T3 (es) 2001-05-11 2015-11-26 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Proteínas de unión específica y usos de las mismas
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
US7084257B2 (en) 2001-10-05 2006-08-01 Amgen Inc. Fully human antibody Fab fragments with human interferon-gamma neutralizing activity
MY139983A (en) 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US9259459B2 (en) 2003-01-31 2016-02-16 Celldex Therapeutics Inc. Antibody vaccine conjugates and uses therefor
CA2514979A1 (en) 2003-01-31 2004-09-02 Celldex Therapeutics, Inc. Antibody vaccine conjugates and uses therefor
AU2004209981B2 (en) * 2003-02-01 2009-02-26 Janssen Sciences Ireland Uc Active immunization to generate antibodies to soluble A-beta
TWI306458B (en) * 2003-05-30 2009-02-21 Elan Pharma Int Ltd Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
CA2894300A1 (en) 2003-12-08 2005-06-23 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secreatary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind or neutralize dengue virus
CA2551008C (en) 2003-12-25 2013-10-01 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Anti-cd40 antibody mutants
PL1730191T3 (pl) 2004-03-30 2011-12-30 Glaxo Group Ltd Immunoglobuliny wiążące hosm
US20050227289A1 (en) * 2004-04-09 2005-10-13 Reilly Edward B Antibodies to erythropoietin receptor and uses thereof
TWI307630B (en) 2004-07-01 2009-03-21 Glaxo Group Ltd Immunoglobulins
CN101023102B (zh) * 2004-09-17 2013-05-29 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗-ox40l抗体
TWI309240B (en) * 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
US8916165B2 (en) 2004-12-15 2014-12-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized Aβ antibodies for use in improving cognition
CA2611814A1 (en) * 2005-06-20 2007-01-04 Medarex, Inc. Cd19 antibodies and their uses
US8784810B2 (en) 2006-04-18 2014-07-22 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of amyloidogenic diseases
WO2009017467A1 (en) 2007-07-27 2009-02-05 Elan Pharma International Limited Treatment of amyloidogenic diseases
CA2657681C (en) 2006-07-14 2019-03-19 Ac Immune S.A. Humanized antibodies against beta amyloid protein
JP5235881B2 (ja) 2006-08-11 2013-07-10 シーエスエル、リミテッド 肺疾患病態の処理
JP2010507365A (ja) 2006-10-19 2010-03-11 メルク アンド カンパニー インコーポレイテッド 抗ＩＬ−１３Ｒα１抗体およびその使用
WO2008060813A2 (en) 2006-10-19 2008-05-22 Merck & Co., Inc. High affinity antibody antagonists of interleukin-13 receptor alpha 1
CL2007003622A1 (es) * 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
JP5276017B2 (ja) 2007-01-25 2013-08-28 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド Ｅｇｆｒ変異体仲介性疾患の治療における抗ｅｇｆｒ抗体の使用
WO2008115404A1 (en) 2007-03-15 2008-09-25 Ludwing Institute For Cancer Research Treatment method using egfr antibodies and src inhibitors and related formulations
HUE041818T2 (hu) 2007-03-22 2019-05-28 Biogen Ma Inc Kötõ proteinek, beleértve az antitesteket, CD154-et specifikusan kötõ antitest származékokat és antitest fragmenseket is, és alkalmazásaik
CN101802015B (zh) 2007-03-29 2015-05-06 根马布股份公司 双特异性抗体及其制造方法
US8003097B2 (en) 2007-04-18 2011-08-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of cerebral amyloid angiopathy
US8404235B2 (en) 2007-05-21 2013-03-26 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US7906117B2 (en) * 2007-05-21 2011-03-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever
US8178101B2 (en) 2007-05-21 2012-05-15 Alderbio Holdings Inc. Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia
US8062864B2 (en) 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
US9701747B2 (en) 2007-05-21 2017-07-11 Alderbio Holdings Llc Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration
KR101829776B1 (ko) * 2007-05-21 2018-02-19 앨더바이오 홀딩스 엘엘씨 Ｉｌ-６에 대한 항체 및 이의 용도
US8252286B2 (en) 2007-05-21 2012-08-28 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
NZ581418A (en) * 2007-05-21 2012-08-31 Alderbio Holdings Llc Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
WO2008145140A2 (en) 2007-05-31 2008-12-04 Genmab A/S Transgenic animals producing monovalent human antibodies and antibodies obtainable from these animals
CA2688275A1 (en) 2007-05-31 2008-12-04 Genmab A/S Stable igg4 antibodies
US8048420B2 (en) * 2007-06-12 2011-11-01 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
US8613923B2 (en) 2007-06-12 2013-12-24 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
WO2008156622A1 (en) * 2007-06-12 2008-12-24 Ac Immune S.A. Humanized antibodies to amyloid beta
JP5532486B2 (ja) 2007-08-14 2014-06-25 ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサー リサーチ Ｅｇｆ受容体を標的とするモノクローナル抗体１７５ならびにその誘導体および用途
RU2538709C2 (ru) * 2007-10-05 2015-01-10 Дженентек, Инк. Гуманизированное антитело
RS53174B (en) * 2007-10-05 2014-06-30 Genentech Inc. USE OF ANTIAMYLOID BETA ANTIBODY IN THE EVENT OF ANY DISEASE
JO3076B1 (ar) 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
WO2009061996A2 (en) 2007-11-07 2009-05-14 Celldex Therapeutics Inc. Antibodies that bind human dendritic and epithelial cell 205 (dec-205)
EP2172481B1 (en) * 2008-10-06 2014-10-29 Novoplant GmbH Proteolytically stable antibody formats
US9067981B1 (en) 2008-10-30 2015-06-30 Janssen Sciences Ireland Uc Hybrid amyloid-beta antibodies
US8992920B2 (en) 2008-11-25 2015-03-31 Alderbio Holdings Llc Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis
US9452227B2 (en) * 2008-11-25 2016-09-27 Alderbio Holdings Llc Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments
US8337847B2 (en) 2008-11-25 2012-12-25 Alderbio Holdings Llc Methods of treating anemia using anti-IL-6 antibodies
US8420089B2 (en) 2008-11-25 2013-04-16 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US8323649B2 (en) 2008-11-25 2012-12-04 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and use thereof
US9212223B2 (en) 2008-11-25 2015-12-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
WO2011066371A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antibodies to il-6 and use thereof
US9775921B2 (en) 2009-11-24 2017-10-03 Alderbio Holdings Llc Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody
SG10201800757TA (en) 2010-04-20 2018-02-27 Genmab As Heterodimeric antibody fc-containing proteins and methods for production thereof
WO2012016173A2 (en) 2010-07-30 2012-02-02 Ac Immune S.A. Safe and functional humanized antibodies
EP2643016A2 (en) 2010-11-23 2013-10-02 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Anti-il-6 antibodies for the treatment of anemia
WO2012103165A2 (en) 2011-01-26 2012-08-02 Kolltan Pharmaceuticals, Inc. Anti-kit antibodies and uses thereof
US8785603B2 (en) * 2011-05-20 2014-07-22 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Antibodies to 25-hydroxyvitamin D2 and D3 and uses thereof
AU2012328322A1 (en) 2011-10-27 2014-06-12 Genmab A/S Production of heterodimeric proteins
KR102268351B1 (ko) 2012-07-25 2021-06-22 셀덱스 쎄라퓨틱스, 인크. 항-kit 항체 및 그의 용도
MX2015008534A (es) 2012-12-26 2017-07-04 Oncosynergy Inc COMPOSICIONES DE ANTICUERPO ANTI-INTEGRINA ß1 Y METODOS DE USO DE LAS MISMAS.
IL293212B2 (en) 2014-05-28 2023-12-01 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-GITR antibodies and methods of using them
DK3233907T3 (da) 2014-12-19 2021-06-07 Genmab As Bispecifikke heterodimeriske proteiner hos gnavere
CN115368460A (zh) 2015-03-17 2022-11-22 纪念斯隆-凯特林癌症中心 抗muc16抗体及其应用
CA2984794A1 (en) 2015-05-07 2016-11-10 Agenus Inc. Anti-ox40 antibodies and methods of use thereof
AU2016303688B2 (en) 2015-07-31 2023-06-15 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Peptides and antibodies for the removal of biofilms
EP3365027B1 (en) 2015-10-14 2022-03-30 Research Institute at Nationwide Children's Hospital Hu specific antibodies and their use in inhibiting biofilm
AU2018206552A1 (en) 2017-01-04 2019-07-18 Research Institute At Nationwide Children's Hospital DNABII vaccines and antibodies with enhanced activity
AU2018206560A1 (en) 2017-01-04 2019-07-18 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Antibody fragments for the treatment of biofilm-related disorders
EP3595445A1 (en) 2017-03-15 2020-01-22 The Research Institute at Nationwide Children's Hospital Composition and methods for disruption of bacterial biofilms without accompanying inflammation
JP7303802B2 (ja) * 2017-09-23 2023-07-05 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター Ａ３３抗体組成物および放射性免疫療法におけるその使用方法
CA3114925A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Compositions and methods for enzymatic disruption of bacterial biofilms
EP3997120A4 (en) 2019-07-08 2023-11-22 Research Institute at Nationwide Children's Hospital ANTIBODY COMPOSITIONS FOR DISRUPTING BIOFILM

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) * 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
GB8928874D0 (en) * 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
JP3854306B2 (ja) * 1991-03-06 2006-12-06 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング ヒト化及びキメラモノクローナル抗体
US5756096A (en) * 1991-07-25 1998-05-26 Idec Pharmaceuticals Corporation Recombinant antibodies for human therapy
SK285046B6 (sk) * 1991-07-25 2006-05-04 Idec Pharmaceuticals Corporation Chimérna protilátka, ktorá sa špecificky viaže na ľudský antigén, farmaceutický prostriedok s jej obsahom, spôsob jej výroby a použitie
GB9203459D0 (en) * 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
ES2162823T5 (es) * 1992-08-21 2010-08-09 Vrije Universiteit Brussel Inmunoglobulinas desprovistas de cadenas ligeras.
US5639641A (en) * 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
AU6808194A (en) * 1993-05-31 1994-12-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reconstructed human antibody against human interleukin-6
GB9424449D0 (en) * 1994-12-02 1995-01-18 Wellcome Found Antibodies

Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8710203B2 (en) 2002-09-06 2014-04-29 Amgen Inc. Therapeutic human anti-IL-1R1 monoclonal antibody
US7438910B2 (en) 2002-09-06 2008-10-21 Amgen Inc. Therapeutic human anti-IL1-R1 monoclonal antibody
US9534053B2 (en) 2002-09-06 2017-01-03 Amgen Inc. Therapeutic human anti-IL-1R1 monoclonal antibody
US8236559B2 (en) 2002-09-06 2012-08-07 Medarex, Inc. Therapeutic human anti-IL-1R1 monoclonal antibody
US8518407B2 (en) 2002-09-06 2013-08-27 Amgen Inc. Therapeutic human anti-IL-1R1 monoclonal antibody
US9688766B2 (en) 2004-09-22 2017-06-27 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Stabilized human IgG4 antibodies
JPWO2006033386A1 (ja) * 2004-09-22 2008-05-15 キリンファーマ株式会社 安定化されたヒトＩｇＧ４抗体
US8911726B2 (en) 2004-09-22 2014-12-16 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Stabilized human Igg4 antibodies
WO2006033386A1 (ja) * 2004-09-22 2006-03-30 Kirin Beer Kabushiki Kaisha 安定化されたヒトIgG4抗体
JP2009504685A (ja) * 2005-08-15 2009-02-05 アラーナ・テラピューティクス・リミテッド 新世界霊長類フレームワーク領域を用いる設計された抗体
US8236314B2 (en) 2006-03-23 2012-08-07 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Agonist antibody to human thrombopoietin receptor
US8048421B2 (en) 2006-03-23 2011-11-01 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Agonist antibody to human thrombopoietin receptor
US8999329B2 (en) 2006-03-23 2015-04-07 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Agonist antibody to human thrombopoietin receptor
JP2009017881A (ja) * 2006-03-23 2009-01-29 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd ヒトトロンボポエチン受容体に対するアゴニスト抗体の製造方法
WO2007108559A1 (ja) * 2006-03-23 2007-09-27 Kirin Pharma Kabushiki Kaisha ヒトトロンボポエチン受容体に対するアゴニスト抗体
JP2016507555A (ja) * 2013-02-06 2016-03-10 インヒブルクス エルピー 血小板非減少性かつ赤血球非減少性ｃｄ４７抗体及びその使用方法
US11634495B2 (en) 2017-04-07 2023-04-25 Miltenyi Biotec B.V. & Co. KG Methods of activating CD32b/c comprising administering an antibody that binds BDCA-2 (CD303)

Also Published As

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EP1073464A1 (en) 2001-02-07
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CA2327505A1 (en) 1999-11-04
DE69920897T2 (de) 2005-10-13
US20020062009A1 (en) 2002-05-23

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