CZ303137B6 - Konjugát obsahující Aß 1-5 nebo Aß 1-6, jeho použití a farmaceutický prostredek jej obsahující - Google Patents

Konjugát obsahující Aß 1-5 nebo Aß 1-6, jeho použití a farmaceutický prostredek jej obsahující Download PDF

Info

Publication number
CZ303137B6
CZ303137B6 CZ20001706A CZ20001706A CZ303137B6 CZ 303137 B6 CZ303137 B6 CZ 303137B6 CZ 20001706 A CZ20001706 A CZ 20001706A CZ 20001706 A CZ20001706 A CZ 20001706A CZ 303137 B6 CZ303137 B6 CZ 303137B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
peptide
pbs
mice
antibody
treatment
Prior art date
Application number
CZ20001706A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ20001706A3 (cs
Inventor
B. Schenk@Dale
Original Assignee
Janssen Alzheimer Immunotherapy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26748211&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ303137(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Janssen Alzheimer Immunotherapy filed Critical Janssen Alzheimer Immunotherapy
Publication of CZ20001706A3 publication Critical patent/CZ20001706A3/cs
Publication of CZ303137B6 publication Critical patent/CZ303137B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/739—Lipopolysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0007—Nervous system antigens; Prions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/2031—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyethylene oxide, poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
    • A61K9/2054—Cellulose; Cellulose derivatives, e.g. hydroxypropyl methylcellulose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/4841—Filling excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/4866—Organic macromolecular compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4711—Alzheimer's disease; Amyloid plaque core protein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/605—MHC molecules or ligands thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2009—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
    • A61K9/7023—Transdermal patches and similar drug-containing composite devices, e.g. cataplasms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Konjugát obsahující A.beta. 1-5 nebo A.beta. 1-6 vázaný na proteinový nosic, který zesiluje imunitní odpoved na A.beta., použití pri lécení nebo prevenci nemocí spojených s amyloidní sraženinou A.beta. v mozku pacienta. Farmaceutické prostredky obsahující tento konjugát urcené pro podání pacientovi v rámci lécby nebo prevence.

Description

Konjugát obsahující Αβ 1-5 nebo Αβ 1-6, jeho použití a farmaceutický prostředek jej obsahující
Oblast techniky
Tento vynález spadá do oblasti techniky imunologie a medicíny.
Dosavadní stav techniky
Alzheimerova choroba (AD) je progresivní chorobou, a jejím výsledkem je senilní demence. Obecné viz. Selkoe, 77NS 16, 403 až 409 (1993); Hardy et al., WO 92·'!3069: Selkoe, J. NeuropathoL Exp. Neurol. 53, 438 až 447 (1994); Duff et at., Nátuře 373, 476 až 477 (1995); Games et al., Nátuře 373, 523 (1995). Siřeji řečeno tato choroba spadá do dvou kategorií: pozdní začátek, který' se objevuje v starším veku (65 a více let), a dřívější začátek, který' se dobře vyvíjí před obdobím senility, to znamená 35 a 60 lety věku. V obou typech choroby je její patologický dopad stejný, ale abnormality jsou mnohem vážnější a rozšířenější v případech začínajících v mladším věku. Choroba je charakterizovaná dvěma typy poškození mozku, senilními plaky a neorofibrilními zámotky. Senilní plaky jsou oblasti neorganizovaného neuropilu délky do 150 um překřížené s usazeninami extracelulámího amyloidu uprostřed sekce mozkové tkáně, která je viditelná mikroskopickou analýzou. Neurofibrilámí zámotky jsou intracelulámí usazeniny tau proteinu zahrnující dvě vlákna stočená navzájem v páry.
Základní složkou plaků je peptid označovaný jako A/? peptid, nebo /3-amyloidový peptid. Αβ peptid je vnitřní fragment o délce 39 až 43 aminokyselinových zbytků proteinového prekurzoru nazývaného amyloidový prekurzorový protein (APP). Několik mutací uvnitř APP proteinu se vztahovalo k přítomnosti Alzheimerovy choroby. Viz. například Goate et al., Nátuře 349, 704 (1991) (valin71 na isoleucin); Chartier Harlan et al., Nátuře 353, 844 (1991) (valin 1 na glycin); Murrel et al., Science 254, 97 (1991) (valin1, na fenylalanin); Mullan et al,, Nátuře Genet. 1, 345 (1992) (dvojitá mutace měnící lysin*''95 a methionin596 na asparagin595 a leucin596). Předpokládá se, že takovéto mutace způsobují Alzheimerovu chorobu prostřednictvím zvýšené nebo pozměněné úpravy APP proteinu na A/? peptid, zvláště pak úpravy APP proteinu vedoucí k zvýšeným množstvím dlouhé formy Αβ peptidu (to znamená, ΑβΙ-42 a Αβί-43). Předpokládá se. že mutace v jiných genech takových, jako jsou presenilní geny, PSI a PS2, nepřímo působí na úpravu APP proteinu a produkci zvýšených množství dlouhé formy Αβ peptid (viz. Hardy, 77NS 20, 154 (1997), Tato pozorování naznačují, že Αβ peptid, a zvláště pak jeho dlouhá forma, je příčinným prvkem v případě Alzheimerovy choroby.
McMichael, EP 526, 511, navrhuje podávání homeopatických dávek (méně než nebo shodně s 10”2 mg, den) Αβ peptidu pacientům s ještě nevyvinutou Alzheimerovou chorobou. U běžného člověka, který má 5 litrů plasmy, by dokonce i horní hranice této dávky očekávaně vytvářela koncentraci ne včtší 2 pg/ml. Normální koncentrace Αβ peptidu v lidské plasmě je obvykle v rozmezí od 50 do 200 pg/ml (Seubert et al., Nátuře 359, 325 až 327 (1992)). Protože navrhovaná dávka v EP 526. 511 by stěží nahradila hladinu Αβ peptidu endogenně uváděného do oběhu, a protože v EP 526. 511 není doporučeno použití jakéhokoliv podpůrného léku, zda se nepravděpodobné, že by výsledkem mohl být nějaký terapeutický prospěch.
Oproti tomu předkládaný vynález je zaměřen inter alia na léčbu Alzheimerovy choroby a jiných amy Endogenních onemocnění podáváním Αβ peptidu nebo jiného imunogenu pacientovi za podmínek, při nichž dochází u pacienta k tvorbě prospěšné imunitní odpovědi. Vynález tedy naplňuje dlouhodobou potřebu terapeutických režimů pro prevenci nebo zlepšení neuropatologickýeh projevů .Alzheimerovy choroby.
Podstata vynálezu
Vynález se tyká konjugátu obsahujícího Αβ 1-5 nebo Αβ 1-6, kterýje vázaný na proteinový 5 nosič, kde proteinový nosič zesiluje imunitní od poved* na ζ\β, pro použití při léčbě nebo prevenci nemocí spojených s amyloidní sraženou Αβ v mozku pacienta.
Konjugát muže být použít pro výrobu léčiva pro prevenci nebo léčení nemocí spojených samyloidní sraženinou Λβ v mozku pacienta, kde léčivo je přizpůsobeno pro další podání pomocné ni látky, která zesiluje imunitní odpověď na Αβ peptid. případně léčivo je ve formě příprav ku, kde pomocnou látku a činidlo lze podat dohromady.
Dále se vynález týká farmaceutického prostředku, který obsahuje tento konjugát. Prostředek je dále přizpůsoben pro další podání pomocné látky, která zesiluje imunitní odpověď na Αβ peptid.
Tato pomocná látka může být určena pro podání dohromady s činidlem, před nebo po podání činidla, nebo může být účinná látka spojena s pomocnou látkou.
Prevence nebo léčení je monitorována stanovením průběhu odpovědi protilátek na imunogenní činidlo v čase.
Tento prostředek může obsahovat vehikulum vhodné pro různé způsoby podání a pomocnou látku. Vynález bude v širších souvislostech ve všech svých aspektech popsán a vysvětlen v následující kapitole.
2?
Detailní popis vynálezu
Vynález zajišťuje způsoby prevence nebo léčby choroby, pro kterou je charakteristické ukládání amyloidu v těle pacienta. Takové metody způsobují u pacienta indukci imunitní odpovědi proti peptidové složce amyloidní usazeniny. Indukce imunitní reakce může být aktivní podáváním imunogcnu nebo pasivní podáváním protilátky nebo aktivního fragmentu nebo derivátu protilátky. L některých pacientů je amyloidní usazenina spojená s Αβ peptidem, a chorobou o kterou se pak jedná o Alzheimerova choroba. V případě některých metod je pacient bez příznaků.
V případě některých metod je pacientův věk pod hranicí 50 let. V případě některých metod má pacient dědičné rizikové faktory, které indikují náchylnost k A Izhei měrově chorobě. Takovéto rizikové faktory zahrnují různé alely u presenilních genů PSI nebo PS2 a různé formy APP. U jiných metod má pacient neznámé rizikové faktory pro Alzheimcrovu chorobu.
Při léčbě pacientů trpících Alzheimerovou chorobou jeden léčebný režim způsobí podáváním dávky Αβ peptidů pacientovy, aby došlo k indukci imunitní odpovědi. V případě některých metod je Αβ peptid podáván spolu s podpůrným lékem, který zesiluje imunitní odpověď na Αβ peptid. V případě některých metod je tímto podpůrným lékem síran hlinito-draselný. V případě některých metod je tímto podpůrnou látkou MPL. Dávka Αβ peptidů podávaná pacientovi je obvykle nejméně 1 nebo 10 pg pokud je podávána spolu s podpůrnou látkou, a nejméně 50 pg i? pokud je podávána bez podpůrné látky. V případě některých metod je dávka nejméně 100 pg.
V případě některých metod je Αβ peptidem Αβ 1—12. V případě některých je Αβ peptid podáván v agregované formě. V případě jiných metod je Αβ peptid podáván v disociované formě. V případě některých metod je terapeutickým činidlem účinná dávka nukleové kyseliny kódující A/7pep50 lid nebo jeho aktivní fragment nebo derivát. Nukleová kyselina kódující Αβ peptid nebo jeho fragment je exprimována u pacienta tak. aby došlo k produkci Αβ peptidů nebo jeho aktivního fragmentu, který indukuje imunitní odpověď. V případě některých těchto metod je nukleová kyselina podávána pacientovi přes kůži, volitelně cestou náplasti. V případě některých metod je terapeutické činidlo identifikováno prohlížením knihoven sloučenin, aby byla identifikována
- 9 .
sloučenina reaktivní s protilátkami k Αβ peptidu, a podáváním teto sloučeniny pacientovi, aby došlo k indukci imunitní odpovědi.
V případě některých metod je imunitní odpověď směřována k agregovanému Αβ peptidu bez toho. aby byla směřována k disociovanému Αβ peptidu. Například imunitní odpověd muže zahrnovat T—buňky. které se váží k Αβ peptidu. který vytváří komplex s NICH 1 nebo NICH 11 na CD8 nebo CD4 buňkách. V případě jiných metod je imunitní odpověď indukována podáváním protilátky k A β peptidu pacientovi, V případě některých metod je imunitní reakce indukována odebráním T-buněk pacientovi, kontaktováním T-buněk s Αβ peptidem za podmínek, při kte10 rých jsou T-buňky uvedeny do nejlepšího stavu, a navrácením těchto buněk zpět pacientovi.
Terapeutické činidlo je obvykle podáváno orálně, intranasálně, intradermálně, podkožně, intramuskulárnč, povrchově nebo intravenózně. V případě některých metod je pacient po podání následně monitorován, aby byla zhodnocena imunitní reakce. Jestliže je na základě pozorování zjiš15 těno snížení imunitní reakce v daném čase, může být pacientovi podána jedna nebo více dalších dávek činidla.
Z dalšího hlediska vynález zajišťuje farmaceutické prostředky, které zahrnují Αβ peptid a excipient vhodné pro podávání orálně a jinými dalšími cestami. Vynález také zajišťuje farmaceutické prostředky, zahrnující činidlo účinně u pacienta indukující imunogenní odpověď na Αβ peptid, a farmaceuticky akceptovatelné podpůrné látky. V případě některých takovýchto prostředků je činidlem Αβ peptid nebojeho aktivní fragment, V případě některých prostředků podpůrná látka zahrnuje síran hlinito—draselný. V případě některých prostředků podpůrná látka zahrnuje emulzi olej-ve-vodě. V případě některých prostředkuje Αβ peptid nebo aktivní fragment složkou poly25 laktid-polyglykolidového kopolymeru (PLPG) nebojiných částicí. Vynález dále zajišťuje prostředky zahrnují Αβ peptid nebo aktivní fragment připojený do konjugátu s molekulou, která podporuje dopravu Αβ peptidu do krevního řečiště pacienta a/nebo podporuje imunitní odpověď proti Αβ peptidu. Například může konjugát sloužit k podpoře imunitní reakce proti Αβ peptidu.
V případě některých prostředků je konjugátem toxin cholery. V případě některých prostředků je konjugátem imunoglobulin. V případě některých prostředkuje konjugátem zesílený toxic záškrtu
CRM 197(Gupta, Vaccine 15, 1341 až3 (1997)).
Vynález také zajišťuje farmaceutické prostředky zahrnující činidlo působící tak, aby vyvolalo imunogenní odpověď proti Αβ peptidu u pacienta s výhodou, že prostředek neobsahuje kompletní
Freundovu podpůrnou látku. Vynález také zajišťuje prostředky zahrnující virové vektory kódující Αβ peptid nebojeho aktivní fragment účinné tak, aby indukovaly imunitní reakci proti Αβ peptidu. Vhodné virové vektory zahrnují herpes virus, adenovirus, adenoasocíovaný virus, retrovirus. sindbis, semiliki lesní virus, vaccinia virus nebo avian poxvirus.
4o Vynález dále zajišťuje způsoby prevence nebo léčby Alzheimerovy choroby. V případě takovýchto metod je pacientovi podávána účinná dávka Αβ peptidu. Vynález dále zjišťuje použití Αβ peptidu nebo protilátky k tomuto peptidy při výrobě léku pro prevenci nebo léčbu Alzheimerovy choroby.
Z dalšího hlediska předkládaný vynález zajišťuje způsoby určení účinnosti léčebné metodv Alzheimerovy choroby u pacienta. U těchto metod je nejdříve určeno standardní množství protilátky specifické pro Αβ peptid v tkáňovém vzorku pacienta před použitím léčebného činidla. Množstv í specifické protilátky pro Αβ peptid v tkáňovém vzorku pacienta po použití léčebného činidla je porovnáno se standardním množstvím Αβ peptid-speeifické protilátky. Množství Αβ
5n peptid-specifieké protilátky změřené po podání léčebného činidla, které je podstatně vyšší než standardní množství Αβ peptid-speeifické protilátky určuje pozitivní léčebný výsledek.
- j CZ 303137 B6
V případe jiných metod určování účinnosti léčebné metody Alzheimerov v choroby u pacienta je určeno standardní množství protilátky specifické pro Λ/?peptid v tkáňovém vzorku pacienta před použitím léčebného činidla. Množství specifické protilátky pro A/7 peptid v tkáňovém vzorku subjektu po použití léčebného činidla je porovnáno se standardním množstvím A/7 peptid-speci5 fieké prot i látky. Snížení nebo nedostatek podstatného rozdílu mezi množstvím A/? peptid-speeifieké protilátky změřený po použití léčebného činidla v porovnání se standardním množstvím A/7 peptid-specifické protilátky určuje negativní léčebný výsledek.
V případě jiných metod určování účinnosti léčebné metody Alzheimerovy choroby u pacienta je určováno kontrolním množstvím protilátky specifické pro A/7 peptid v tkáňových vzorcích u kontrolní populace. Množství specifické protilátky pro A/3peptid v tkáňovém vzorku pacienta po použití léčebného činidla je porovnáno s kontrolním množstvím A/7 peptid-speeifieké protilátky. Množství A/? peptid-speeifieké protilátky změřené po podání léčebného činidla, které je podstatně vyšší než kontrolní množství A/7 peptid-speeifieké protilátky určuje pozitivní léčebný výs15 ledek.
V případě jiných metod určování léčebné metody Alzheimerovy choroby u pacienta je určováno kontrolním množstvím protilátky specifické pro A/? peptid v tkáňových vzorcích u kontrolní populace. Množství specifické protilátky pro Αβ peptid v tkáňovém vzorku pacienta po použití léčebného činidla je porovnáno s kontrolním množstvím Αβ peptid specifické protilátky. Nedostatek podstatného rozdílu mezi množstvím Αβ peptid-speeifieké protilátky změřené po zahájení zmíněné léčby v porovnání s kontrolním množství Αβ peptid-specífické protilátky určuje negativní léčebný výsledek.
Jiné způsoby monitorování Alzheimerovy choroby nebo její urči tel nosti u pacienta zahrnují detekování imunitní odpovědi proti Αβ peptidu ve vzorku získaném od pacienta. V případě některých takovýchto metod je pacientovi podávána účinná látka za účelem léčby nebo prevence před Alzheimerovou chorobou a úroveň odpovědi určuje následný léčebný režim u pacienta.
V případě jiných metod určování účinnosti léčebné metody Alzheimerovy choroby u pacienta je určována hodnota množství protilátky specifické pro Αβ peptid v tkáňovém vzorku u pacienta, který byl činidlem léčen. Hodnota je porovnávána s kontrolní hodnotou určenou u populace pacientů, u nichž proběhlo zlepšení nebo vymizení symptomů Alzheimerovy choroby z důvodu léčby zmíněným činidlem. Hodnota u pacienta, kteráje přinejmenším shodná s kontrolní hod35 notou, indikuje pozitivní odpověď na léčbu.
Vynález dále zjišťuje diagnostické sady pro provádění výše uvedených metod. Takovéto sady obvykle zahrnují činidlo, které specificky váže protilátky pro Αβ peptid, nebo které stimuluje proliferaci T-buněk reagujících s Αβ peptidem.
Definice - termín „podstatná identita znamená, že dvě peptidové sekvence, pokud jsou optimálně propojeny za použití takových programů, jako jsou GAP nebo BESTFIT, využívajících opominutí gap hmotnosti, sdílejí přinejmenším 65 procent sekvenční identity, vhodněji nejméně 80 nebo 90 procent sekvenční identity, nejvhodněji nejméně 95 procent sekvenční identitv nebo více (např.: 99 procent sekvenční identity nebo vyšší hodnotou). Vhodněji se pozice zbvtků. které nejsou identické, odlišují v substitucích konzervativních aminokyselin. Pro porovnávání sekvencí obvv kle jedna sekvence působí jako referenční sekvence, ke které jsou testované sekvence vztahovány. Pokud je používán sekvenční porovnávací algoritmus, jsou testovaná a referenční sekvence vloženy do počítače, subsekvenční koordinátor jsou nastaveny, pokud je to ne/bvtne. a parametr sekvenčního algoritmického programu jsou nastaveny. Sekvenční porovnávací algoritmus potom vypočítá procento sekvenční identity pro testovanou sekvenei(e) ve \/taliu k referenční sekvenci na základě nastavených programových parametru.
-4 CZ 303137 Bó
Optimální propojení sekvencí pro porovnávání muže byt prováděno například za použití algoritmu lokální homologie podle Sruithe & Watermana. Adv. Appl. Math 2:482 (1981): za použití algoritmu homologního propojení podle Needlemana & Wunsche. d. Mol. Bio/. 48:443 (1970); za použití metody hledání podobnosti podle Pearsona & Lipmana, Proč. Notl. Acad. Sci.
USA 85:2444 (1988): za použití počítačové realizace těchto algoritmu (GAP, BESTF1T. PASTA a TFASTA ve Winconsín Genetics Software Package, Genetics Computer Group. 575 Science Dr.. Madison. Wl), nebo za použití zrakové prohlídky (obecně viz. Ausubel et al.. vrše). Jedním příkladem algoritmu, kterýje vhodný pro určení procenta sekvenční identity a sekvenční podobnosti, je algoritmus BLAST, který· je popsán v Altschul et al.. Mol. Biol. 215:403 až 410 io (1990). Software pro provádění analýz za použití algoritmu BLAST je veřejně přístupný prostřednictvím The National Center ťor Biotechnology Information (http://www.ncbi.nim.nih.gov/). Obvykle mohou být použity programové parametry opominutí pro provádění porovnávání sekvencí. ačkoliv zákaznické parametry' mohou být také použity. Pro aminokyselinové sekvence program BLASTP používá jako opominutí vvordlength (W) 3. pravděpodobnost (E) 10 a stav předlohy BLOSUM62 (viz. Henikoff & 1 lenikoťf, Proč. Nud. Acad. Sci. USA 89, 10915 (1989)).
Pro účely klasifikování aminokyselinových substitucí jako konzervativních a nekonzervativních jsou aminokyseliny rozděleny do skupin následujícím způsobem: skupina 1 (hydrofobní postranní řetězce): norleucin, met. ala, val, leu, ile; skupina II (neutrální hyd rotí lni postranní řetězce): cys.
ser, thr; skupina 111 (kyselé postranní řetězce): asp. glu; skupina IV (zásadité postranní řetězce): asn, gin, his, lys. arg; skupina V (zbytky s vlivem na orientaci řetězce); gly. pro; a skupina VI (aromatické postranní řetězce): trp, tyr, phe.
Konzervativní substituce zahrnují substituce mezi aminokyselinami v rámci stejné skupiny.
Nekonzervativní substituce nastavují výměnu jednoho clena těchto tříd za člena jiné třídy.
Terapeutická činidla podle předkládaného vynálezu jsou obvykle podstatně čisté. To znamená, že činidlo má obvykle 50% w/w (hmotnost/hmotnost) čistotu právě tak, jako je podstatně čisté od interferujících proteinů a nečistot. Někdy mají činidla přinejmenším 80% w/w a nej v hodněji nejméně 90 nebo okolo 95% w/w čistotu. Nicméně za použití konvenčních proteinových purifikaěních technik mohou být získány homogenní peptidy přinejmenším 99% w/w.
Specifická vazba mezi dvěma entitami znamená, že afinita je přinejmenším 106, 10'. 10s, 10° M“1 nebo 1010 M1. Afinity větší než 10s M1 jsou upřednostňovány.
Termín „protilátka“ je zde použit tak. aby zahrnoval intaktní protilátky ajejich vazebné fragmenty. Obvykle fragmenty soutěží s intaktní protilátkou, od které byly odvozeny, o specifické vazebné místo antigenu. Volitelně mohou být protilátky ajejich vazebné fragmenty chemicky navázány do, nebo exprimovány jako, fuzní proteiny s jinými proteiny.
ΛΡΡ6/ APP'?1 a APP° odkazují k 695, 751 a 770 aminokyselinovým zbytkům dlouhých polypeptidů kódovaných lidským APP genem. Viz. Kang et al„ Nátuře 325. 773 (1987); Ponte et ak. Nátuře 331. 525 (1988); a Kitaguchi et aL, Nátuře 331, 530 (1988). Aminokyseliny uvnitř lidského amyloidního prekursorového proteinu (APP) mají přidělená čísla podle sekvence isoformy
APP770. Termíny takové, jako A/239, A/710. A/?41. A/412 a A/713 odkazují na peptid obsahující aminokyselinové zbytky 1 až 39. 1 až 40. 1 až 41. 1 až 42 a í až 43.
Termín „epitop nebo „antigenní determinanta“ odkazují na místo antigenu. na které B a/nebo Tbuňky odpovídají Epitopy pro B-buňky mohou být vytvořeny zobou, jak přilehlých aininokyse50 lín nebo nepři lehlých aminokyselin umístěných vedle sebe terciálním složením proteinu. Epitopy tvořené z přilehlých aminokyselin jsou obvykle vydrží expozici denaturačními rozpouštědly, zatímco epitopy tvořené terciální strukturou se obvykle ztrácí po expozici denaturačními činidly. Epitopy obvykle zahrnují přinejmenším 3 a častěji nejméně 5 nebo 8 až 10 aminokyselin v unikátní prostorové konformaci. Metody určení prostorové konformace epitopu zahrnují například rentgenovou krystalografii a dvou-rozměrnou nukleární magnetickou rezonanci. Viz. např.:
- 3 CZ 303137 B6
Epitope Mapping Protocols in Method in Molecular Biology. Vol. 66. Glenn E. Morris, vydáno (1996). Protilátky, které rozeznávají stejné epitopy. mohou být identifikovány jednoduchým imunotestem, který ukazuje schopnost jedné protilátky blokovat vazbu jiné protilátky na cílový antigen. T-buňky rozeznávají kontinuální epitopy okolo devíti aminokyselin pro CD8 buňky nebo okolo 13 až 15 aminokyselin pro CD4 buňky. T-buňky, které rozeznávají epitop. mohou být identifikovány in vitro testem, který měří antigen-dependentní proliferaci, která je určena inkorporací 'Ή-thy midinu T-buňkami v nejlepším stavu, jako odpověď na epitop (Burke et al.,,/. Inununol. 156,3901 až 3910) nebo cytokinovou sekreci.
io Termín „imunologická“ nebo „imunní“ odpověď je charakterizován, jako vyvinutí prospěšné humorální (zprostředkováváno protilátkou) a/nebo buněčné (zprostředkovávaného antigen-specifickými T-buňkami nebo jejich sekrečními produkty ) odpovědi řízené proti amyloídnímu peptidu v těle přijímajícího pacienta. Taková odpověd1 může být aktivní odpovědí indukovanou podáváním imunogenu nebo pasivní odpovědí indukovanou podáváním protilátky nebo T-buněk is v nejlepším stavu. Buněčná imunitní odpověď je vyvolána přítomností polypeptidových epitop v asociaci střídou I nebo třídou II MHC molekul, aby došlo k aktivaci antigen-specifíckých CD4' T pomocných buněk a/nebo CD8 cytotoxických T buněk. Odpověď může také zahrnovat aktivaci monocytů, makrofágů, NK buněk, basoilů, dendritických buněk, astrocytů, mikrogliiních buněk, eosinofilů nebo jiných složek přirozené imunity. Přítomnost buněk zprostředkujících buněčnou odpověď muže být určena proliferačními testy (CD4 T buňky) nebo CTL (cytotoxický T lymfocyt) testy (viz. Burke, výše; Tigges, výše). Relativní přispění humorální a buněčné odpovědi k ochrannému a terapeutickému účinku imunogenu může být charakterizováno separačním izolováním IgG a T-buněk z imunizovaného syngenního zvířete a měřením ochranného a terapeutického účinku v druhém subjektu.
„Imunogenní činidlo“ nebo „imunogen'‘ je schopný indukovat imunologickou odpověď proti sobě samému po podáváním pacientovi, volitelně ve spojení s podpůrnou látkou.
Termín „nahý polynukleotid“ odkazuje na polynukleotid, který není spojen s koloidními mate30 riály. Nahé polynukleotídy jsou někdy klonovány v plasmidových vektorech.
Termín „pomocná látka“ odkazuje na sloučeninu, která po podání ve spojení s antigenem zvyšuje imunitní odpověď na antigen, ale pokud je podána samotná nevyvolává imunitní odpověď na antigen. Pomocné látky mohou zvyšovat imunitní odpověď několika mechanismy, které zahrnují zamnožení lymfocytů, stimulaci B a/nebo T buněk a stimulaci makrofágů.
Termín „pacient“ zahrnuje lidský nebo savčí subjekt, který přijímá buď profylaktickou, nebo terapeutickou léčbu.
Neagregovaný nebo monomerní A/? peptid znamená rozpustné, monomemí peptidové jednotky Λ/7. Jednou z metod jak připravit monomerní A/?peptid je rozpustit lyofilizovaný peptid v čistém DMSO sonikací. Výsledný roztok je pak centrifugován, aby se odstranily jakékoliv nerozpustné částice. Agregovaný \β peptid je směsí oligomerú, v které jsou monomerní jednotky drženy pospolu nekovalentními vazbami.
Prostředky nebo metody „zahrnující jeden nebo více vyjmenovaných elementů mohou obsahovat jiné elementy, které nejsou specificky vyjmenovány. Například prostředek, který zahrnuje A/7 peptid zahrnuje oba. izolovaný \βpeptid a A/?peptid. jako složku větší polypeptidové sekvence.
5ii Vynález zajišťuje farmaceutické prostředky a metody pro profylaktickou a terapeutickou léčbu chorob charakterizovaných akumulací amyloidních usazenin. Amyloidní usazeniny zahrnují peptid agregovaný do nerozpustné hmoty. Původ peptidu je různý od typu onemocnění, ale ve většině případů má agregát β- strukturu a skvrnu barvy konžské červeni. Choroby charakterizované amyloidními usazeninami zahrnují Alzheimerovu chorobu (AD), obě, pozdní a ranný začátek.
-6CZ 303137 B6
V případě obou chorob amyloidní usazenina obsahuje peptid nazývaný A β peptid. který se kumuluje v mozku postižených individuí. Příklady některých dalších chorob charakterizovaných tvorbou amyloidních usazenin jsou SAA amyloidosa. dědičný Islandsky syndrom, mnohočelný myelom a spongifonnní encefalopatie, které zahrnují nemoc šílených krav. Creutzťeldov u-Jako5 bovu chorobu, nemoc ovcí scrapie a spongiformní cnceťalopatii norku (viz. Wcissman et ah. Cmt. Opin. Xeurobiof. 7, 695 až 700 (1997): Smits et al.. Veterinary Quarterly 19, 101 až i 05 (1997): Nathanson et ah. Am. J. Epidemiol. 145. 945 až 969 (1997)), Peptidy tvořící agregáty při těchto chorobách jsou sérový amyloid A. cystantin C. IgG kappa lehký řetězec, respektive pro první tři, a prionovy protein pro ostatní.
io
Terapeutická činidla - Alzheimerova choroba. Terapeutická činidla pro použití podle předkládaného vynálezu indukují imunitní odpověď proti Αβ peptidu. Tato činidla zahrnují Αβ peptid samotný ajeho varianty, analogy a napodobeniny Αβ peptidu. které indukují anebo křížně-reagují s protilátkami k Αβ peptidu. a protilátky nebo T-buňky reagující s Αβ peptidem. Indukce imunitní odpovědi může být aktivní tehdy, když je imunogen podáván, aby indukoval protilátky nebo T-buňky reagující u pacienta s Αβ peptidem, nebo pasivní tehdy, když je protilátka podávána tak, že se sama váže na Αβ peptid u pacienta.
Αβ peptid, tak známý jako ^-amyloidní peptid, nebo A4 peptid (viz. US 4 666 82í: Glenner &
Wong, Biochem. Biophys. Res. Commun. 120, i i3i (1984)). je 39 až 43 aminokyselin dlouhý peptid, který' je hlavní složkou charakteristických plaků Alzheimerovy choroby. Αβ peptid je vytvářen úpravou většího proteinu APP dvěma enzymy, nazývanými β a γ sekretázy (viz, Hardy, T/NS2Q. 154 (1997)). Známé mutace v APP spojené s Alzheimerovou chorobou se objevují bezprostředně v místě pro β nebo γ sekretázu nebo uvnitř Αβ peptidu. Například pozice 717 je bez25 prostředně v místě, kde γ sekretáza štípe APP při jeho sestřihu na Αβ peptid a pozice 670/671 jsou bezprostředně v místě, kde štěpí β sekretáza. Předpokládá se, že mutace způsobují Alzheimerovu chorobu interakcí s štěpícími reakcemi, při kterých vzniká Αβ peptid. takže je produkováno zvyšující se množství 42/43 aminokyselinové formy Αβ peptidu.
Αβ peptid má neobvyklou vlastnost, že může fixovat a aktivovat obě, klasickou i alternativní doplňovací kaskády. Zvláště se váže k Clq a konečně i k C3bi. Tyto asociační schopnosti vázání se k makrotagům vedou k aktivaci B-buněk. Kromě toho C3bi se dále přerušuje a pak se váže kCR2 na B buňkách způsobem závislém na T buňce, což vede k 10 000 násobnému zvýšení aktivace těchto buněk. Tento mechanismus způsobuje, že Αβ peptid vytváří imunitní odpověď v přebytku než jakékoliv jiné antigeny.
Terapeutickým činidlem používané v nárokovaných způsobech mohou být jakékoliv přirozeně se vyskytující formy A/?peptidu a zvláště lidské formy (to znamená A/739, A/ílO, A/341, A/342 nebo Ay^43). Sekvence těchto peptidů a jejich vztah k APP prekurzoru jsou vyjádřeny na obr. 1 publi40 kovaném Hardym et al., TINS 20, 155 až 158 (1998). Například A/M2 má sekvenci:
UN-Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His--Asp-Scr-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-GIn-Lys-Leu-ValPhe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Scr-Asn-Lys-Gly-Ala-lle-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-GlyVal-Val-lle-Ala-OH.
A/íll. A/Í40, A/239 se odlišují od A/ří2 nebo Ala. Ala—Ile a Ala-lle-Val. respektive z C-konce. A/343 se odlišuje od A/342 přítomností threoninového zbytku na C-konci. Terapeutickým činidlem muže také být aktivní fragment nebo analog přirozeného Λ β peptidu. který obsahuje epitop indukující podobnou ochranou nebo terapeutickou imunitní odpověď po podání lidskému pacientovi. Imunogcnní fragmenty mají obvykle sekvenci nejméně 3. 5. 6. 10 nebo 20 sousedních aminokyselin od přirozeného peptidu. Imunogen ni fragmenty zahrnují A/71-5, 1-6, 1-12, 13-28. 17-28. 25-25. 35—40 a 35-42. Fragmenty pocházející z N-koncové poloviny Αβ peptidu jsou v některých metodách upřednostňovány. Fragmenty zahrnují alelické. druhové a indukované
CZ 303137 Β6 varianty. Analogy jsou obvykle odlišují od přirozeně se vyskytujících peptidu v jedné nebo více pozicích, často přednostně v konzervativních substitucích. Analogy obvykle vykazují nejméně 80 až Wo sekvenční identitu s přirozenými peptidy . Některé analogy také zahrnují nepřirozené aminokyseliny nebo mod i Ukované N nebo C-konee aminokyselin. Příkladem nepřirozených aminokyselin jsou cz.a-disubstituované aminokyseliny. N-alky laminokyseliny. kyselina mléčná. 4-hydroxy prolili, γ-karboxy glutamát, ε-Ν,Ν,Ν-trimethyl lysin. ε-N-aeetyl lysin. O-ťostbserin, N-acetylserin, N-formy hnethionin. 3-methylhistidin, 5-hydroxy lysin, (o-N-methy larginin. Fragmenty a analogy mohou být testovány na proťylaktickou nebo terapeutickou účinnost v transgenních zvířecích modelech,jak je popsáno níže.
A/? peptid. jeho fragmenty, analogy a jiné amyloidogenní peptidy mohou být syntetizovány na pevné fázi peptidovou syntézou nebo rekombinantní expresí nebo mohou být získány z přírodních zdrojů. Automatické peptidové syntetizátory jsou komerčně dostupné od řady dodavatelů takových, jako jsou Applied Biosystems, Foster City, Califomia. Rekombinantní exprese může probíhat v bakteriálních buňkách takových, jako je E. coli, kvasinkách, buňkách hmyzu nebo savčích buňkách. Postupy pro rekombinantní expresi jsou popsány v Sambrook et al., Molecular Clon ing: A Laboratory Manual (C.S.H.P. Press, NY 2d ed., 1989). Některé formy A/? peptidu jsou také dostupné komerčně (např.: American Peptides Company, lne., Sunnyvale, CA and California Peptide Research, lne. Napa, CA).
Terapeutická činidla také zahrnují další polypeptidy, které obsahují, například, A/?peptid, aktivní fragment nebo analog společně s jinými aminokyselinami. Například Αβ peptid může být přítomen jako intaktní APP protein nebo jeho segment takový, jako C-100 fragment, který' začíná na N-konci Αβ peptidu a pokračuje do konce APP. Takové polypeptidy mohou být testovány na profylaktickou nebo terapeutickou účinnost ve zvířecích modelech, jak je popsáno níže. Αβ peptid, analog, aktivní fragment nebo jiné polypeptidy mohou být podávány v asociované formě (to znamená jako amyloidní peptid) nebo v dísociované formě. Terapeutická činidla také zahrnují multimery monomemích imunogenních činidel.
V případě další varianty imunogenní peptid takový, jako A/? peptid, může být uváděn jako virová nebo bakteriální vakcína. Nukleová kyselina kódující imunogenní peptid je začleněna do genomu nebo episomu viru nebo bakterie. Volitelně je nukleová kyselina začleněna takovým způsobem, že imunogenní peptid je exprimován jako sekreční protein nebo jako fúzní protein s vnějšímpovrchovým proteinem viru nebo s transmembránovým proteinem bakterie tak, že peptid je vykázán. Viry nebo bakterie používané v těchto metodách by měly být nepatogenní a oslabené. Vhodné viry zahrnují adenoviry, HSV, vaccinia a slepičí pox viry. Fúze imunogenního peptidu s HBsAg HSV viru je zvláště vhodná. Terapeutická činidla také obsahují peptidy a jiné sloučeniny, které nemají nezbytně hlavní sekvenční aminokyselinovou podobnost s Αβ peptidem, ale přesto však slouží jako náhražky Αβ peptidu a indukují podobnou imunitní odpověď. Například jakékoliv peptidy a proteiny tvořící /3-struktury mohou být testovány zda jsou vhodné. Anti-idiotypické protilátky proti monoklonálním protilátkám k Αβ peptidu nebo jiným amyloidogenní peptidům mohou být také použity. Takové anti-Id protilátky nahrazují antigen a vyvolávají imunitní odpověď vůči sobě (viz. Essential Imnntnology (Roit ed.. Blackwell Scientific Publication, Palo Alto. 6,h ed.), p. 181).
Náhodné knihovny peptidu nebo jiných sloučenin mohou být také testovány pro svou vhodnost. Kombinované knihovny mohou být vytvářeny z mnoha druhu sloučenin, které mohou být syntetizovány způsobem krok-za krokem. Takové sloučeniny zahrnují polypeptidy, napodobeniny s beta-ohybem. polysacharidy, fosfolipidy. hormony, prostaglandiny. steroidy, aromatické sloučeniny. heterocy klícké sloučeniny, benzodiazepany. oligomerní N-substituované gly činy a oligokarbamáty. Velké kombinované knihovny sloučenin mohou být konstruovány metodou kódovaných syntetických knihoven (ESL), která je popsána v Affymax, WO 95/12 608. Affymax. WO 93/06 121. Columbia University, WO 94/08051. Pharmacopeia. WO 95/35 503 a Scripps.
-8CZ 303137 B6
WO 95/30 642 (každý z nich je začleněn v odkazech ke všem účelům). Peptidové knihovny mohou také být vytvářeny metodami fázového vykázání. Viz. např.: Dev lin. WO 91/18 980.
Kombinované knihovny a jiné sloučeniny jsou z počátku testovány zda jsou vhodné určením jejich kapacity vázat protilátky nebo lymfocyty (B nebo T). o kterých se ví. že jsou specifické pro Λ/í peptid nebo jiné amyloidogenní peptidy. Například počáteční testy mohou být prováděny s jakýmkoliv póly klonálním sérem nebo monoklonální protilátkou k \β peptidu nebo jinému amyloidogennímu peptidu. Sloučeniny identifikované takovýmito testy jsou pak dále analyzovány pro svou kapacitu indukovat protilátky nebo reaktivní lymfocyty k \β peptidu nebo jinému ío amyloidogennímu peptidu. Například několikanásobná ředění séra mohou být testována na mikrotitračních destičkách, na které byl před tím nanesen A/? peptid a standardní ELISA muže být prováděna, aby byla určena reaktiv ita protilátek k \β peptidu. Sloučeniny mohou pak být testovány na proťylaktickou a terapeutickou účinnost v transgenníeh zvířatech, u kterých byla dříve vyvolána amyloidogenní choroba tak. jak je popsáno v příkladech provedení vy nálezu. Taková zvířata zahrnují například myši nesoucí 717 mutaci v APP. jak je popsáno v Games et al.. výše. a myši nesoucí Švédskou mutaci v APP tak. jak je popsáno v McConlogue et al., US 5 612 486 a Hsiao et al., Science 274, 99 (1996); Staufenbiel et al.. Proč. Natí Acad. Sci. USA 94, 13287 až 13292 (1997); Sturchler-Pierrat et al.. Proč. Nati. Acad. Sci. USA 94, 13287 až 13292 (1997); Borchelt et al., Neuron 19, 939 až 945 (1997)). Stejný testovací přístup může být použit na jiná potenciální činidla taková, jako fragmenty A/? peptidu, analogy Λ.β peptidu a dlouhé peptidy zahrnující A/? peptid. jak je popsáno výše.
Terapeutická činidla podle předkládaného vynálezu také zahrnují protilátky, které se specificky váží na A/? peptid. Takové protilátky mohou být monoklonální nebo polyklonální. Některé z těchto protilátek se specificky váží na agregovanou formu /\β peptidu, bez toho, aby se vázaly na formu disociovanou. Některé se váží specificky na disociovanou formu, aniž by se vázaly na agregovanou formu. Některé se váží specificky na disociovanou formu, aniž by se vázaly na agregovanou formu. Některé se váží k obou formám, jak na agregovanou, tak disociovanou formu. Produkce nehumánních monoklonálních protilátek, např.: myších nebo krysích, může být prováděna například imunizací zvířat A/?peptidem. Viz Harlow & Lané, Antibodies. A Laboratory Manual (CSHP NY, 1988) (začleněno v odkazech pro všechny účely). Takový imunogen může být získán z přírodního zdroje, peptidovou syntézou nebo rekombinantní expresí.
Humanizované formy myších protilátek mohou být vytvářeny připojením CDR oblastí nehumán35 nich protilátek k humánním konstantním oblastem za použití rekombinačních DNA technik. Viz. Queen et al.. Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 86, 10029 až 10033 (1989) a WO 90/07 861 (začleněno v odkazech pro všechny účely).
Humánní protilátky mohou být získány za použití metod fágového vykázání. Víz. např.: Dower et al., WO 91/17 271; McCaťferty et al., WO 92/01 047. Při těchto metodách jsou vytvářeny fágové knihovny, jejichž členové vykazují odlišné protilátky na svých vnějších površích. Protilátky jsou obvykle vykazovány jako Fv nebo Fab fragmenty. Fágově vykazované protilátky s požadovanou specifltou jsou vybírány afinitním nahromaděním na A/? peptidu. nebo jeho fragmentech. Humánní protilátky proti A/? peptidu mohou být také získávány z nehumánních transgenníeh savců, kteří mají transgeny kódující přinejmenším segment lidského imunoglobulinového lokusu a inaktivovaný endogenní imunoglobulinový lokus. Viz. např.: Lonberg et al,. WO 93/12 227 (1993); Kueberlapati. WO 91/10 741 (1991) (začleněno v odkazech v plném rozsahu pro všechny účely). Humánní protilátky mohou být vybírány na základě kompetetivních vazebných pokusu nebo jinak tak, aby měly stejnou speeífilu k epitopu, jako jednotlivá myší protilátka. Takové proso ti látky zvláště pravděpodobně sdílí užitečné funkční vlastnosti myších protilátek. Humánní polyklonální protilátky mohou také být zajišťovány ve formě séra z lidí imunizovaných ímunogenním činidlem. Volitelně mohou být takové protilátky koncentrovány afínitní purifikaci za použití \β peptidu nebo jiného amyloidního peptidu. jako afinitního činidla.
-9CZ 303137 B6
Humánní nebo humanizované protilátky mohou být navrhovány tak. aby měly IgG. IgD. IgA a IgE konstantní oblast a jakýkoliv isotyp. zahrnující IgG 1. IgG2. IgG3 a IgG4. Protilátky mohou být expr imovány jako tetramery obsahující dva lehké a dva těžké řetězce, jako dva oddělené těžké řetězce, lehké řetězce, jako Fab. Fab' F(ab')2 a Fv nebo jako jednoduchý řetězec protilátek, v kterých jsou těžký a lehký řetězec variabilními doménami spojenými prostřednictv ím raménka. Terapeutická činidla pro použití podle předkládaných metod také zahrnují T-buňky, které se v áží na A//peptid. Například T-buňky mohou být aktivovány proti \β peptidu expresí humánního genu MHC třídy 1 a humánního genu /3-2-míkroglobulinu z hmyzí buněčné linie, což znamená, že se vytváří prázdný komplex na povrchu buněk, a který muže vázat A/? peptid. T-buňky v kontaktu s buněčnou linií se stávají specificky aktivovanými proti peptidu. Viz. Peterson et al.. US 5 314 813. Hmyzí buněčné linie exprimující antigen MHC třídy II, mohou být podobně použity k aktivaci CD4 T buněk.
Ostatní choroby - Stejné nebo analogické principy určují produkci terapeutických činidel pro léčbu ostatních amyloidogenních chorob. Obecně řečeno činidla popsaná výše pro použití při léčbě Alzheimerovy choroby mohou být také použita při léčbě Alzheimerovy choroby s dřívějším začátkem spojené s Downovým syndromem. V případě nemoci šílených krav jsou místo A/7 peptidu, aktivních fragmentů, analogů a protilátek proti ι\βpeptidu používaných při léčbě Alzheimerovy choroby, použity prionový peptid, aktivní fragmenty, analogy a protilátky proti prionovému peptidu. Pří léčbě mnohočetného myelomu jsou používány IgG lehký řetězec, analogy a protilátky proti tomuto, a tak dále v případě dalších chorob.
Nosičové proteiny - Některá činidla indukující imunitní odpověď1 obsahují vhodný epitop pro vyvolání imunitní odpovědi proti amyloidním sraženinám, ale jsou příliš malá, aby byla imunogenní. V takové situaci může být peptidový imunogen připojen k vhodnému nosiči, aby došlo k napomožení vyvolání imunitní odpovědi. Vhodné nosiče zahrnují sérové albuminy, klíčový hemocyanin mořského plže, imunoglobulinové molekuly, thyroglobulin, ovalbumin, tetanus toxoid nebo toxoidy zjiných patogenních bakterií takových, jako jsou difteria, E. coli, cholera nebo H. pylori, nebo oslabený toxinový derivát. Jiné nosiče pro stimulaci nebo zesílení imunitní odpovědi zahrnují cytokiny takové, jako IL-1, IL-1 aap peptidy, IL—2, ylNF, IL—10, GM-CSF a chemokiny takové, jako Ml Pia a β a RANTES. Imunogenní činidla mohou být také připojena k peptidům, které zvyšují transport skrz tkáně, jak je popsáno v CFMahony, WO 97/17 613 a WO 97/17 614.
Imunogenní činidla mohou být připojena k nosičům chemickou vazbou. Techniky pro připojení imunogenu na nosič zahrnují vytvoření disulfidového můstku za použití N-sukcínimidy 1-3-(2pyridyl-thiojpropionátu (SPDP) a suke i nim idy M-fN-ma lei midomethyl)cyk lohexan-1-karboxylátu (SMCC) (jestliže peptid postrádá thiolovou skupinu, může být tato skupina zajištěna přidáním cysteinového zbytku). Tato činidla tvoří disulfidový můstek mezi sebou samým a peptidovými cysteinovými zbytky jednoho proteinu a amidovou vazbu prostřednictvím ε-aminoskupinou lysinu nebo jinou volnou aminoskupínou jiných aminokyselin. Různá takováto disulfíd/amid vytvořená Činidla jsou popsána v Imniun. Rev. 62, 185 (1982). Jiná bifunkčně spojená činidla, tvoří spíše thioether než disulfidový můstek. Mnoho těchto thio-ether-tvořících činidel je komerčně dostupných a zahrnuje reaktivní estery 6-maleimidokapronové kyseliny, 2-bromooctové kyseliny, 2-jodooctové kyseliny, 4-(N-maleimidoniethyl)eyklohexan-I-karboxyIové kyseliny. Karboxylové skupiny mohou být aktivovány reakcí s sukcinimidem nebo sodnou solí 1 -hydroxy 1-2-nilro-4-sulfonové ky seliny.
Imunogenní peptidy mohou také být exprimovaný jako fúzní proteiny s nosiči. Imunogenní peptid může být spojen s nosičem na N-konci, C-konci nebo uvnitř peptidu. Volitelně muže být uveden ve fúzním proteinu násobně se opakující imunogenní peptid.
Nukleová kyselina kódující imunogenny - Imunitní odpovědi proti amyloidním usazeninám mohou také být vyvolány podáváním nukleovýeh kyselin kódujících \β peptid nebo jiné pepti- 10 CZ 303137 B6 dové imunogeny. Takovými nukleovými kyselinami mohou být DNA nebo RNA. Segment nukleové kyseliny kódující imunogen je obvykle spojen $ regulačními prvky takovými, jako jsou promotor a zesilovač, které umožňují expresi segmentu DNA v předpokládaných cílových buňkách pacienta. Pro expresi v krevních buňkách, jak je požadováno pro vyvolání imunitní odpovědi, jsou pro přímou expresi vhodné promotorové a zesilovaěové elementy pocházející z lehkého nebo těžkého řetězce imunoglobulinovýeh genu nebo včasný promotor a zesilovač z hlavního meziproduktu CMV. Připojené regulační elementy a kódující sekvence jsou často klonovány do vektoru.
Řada virových vektorových systémů je přístupná, včetně retrovirovýeh systému (viz. např.: Lavvrie a Tumin, Cur. Opiu Genet. Develop. 3. 102 až 109 (1993)); adenovirovýeb vektoru (v iz. např.: Bett et al.. J Virol. 67, 591 1 (1993)); adenoasociované virové vektory (viz. např.: Zhou et al.../. Exp. Med 179. 1867 (1994)). virové vektory z rodiny poxvirů zahrnující vaccinia virus a ptačí poxviry, vírové vektory z rodu alfavirů takové, jako ty odvozené od Sindbis a Semliki lesních virů (viz. např.: Dubensky et al., J. Virol. 70, 508 až 519 (1996)) a papillomaviry (Ohe et al., Human Gene Therapy 6, 325 až 333 (1995); Woo et al., WO 94/12629 a Xiao &Brandsma. Nucleic Acids. Res. 24, 2630 až 2622 (1996)).
DNA kódující imunogen nebo vektor obsahující to samé mohou být zabaleny do liposomů. Vhodné lipidy a příbuzné analogy jsou popsány v US 5 208 036: US 5 264 618; US 5 279 833 a US 5 283 185. Vektory a DNA kódující imunogen mohou také být adsorbovány na nebo spojeny s čásťicovými nosiči, jejichž příklady zahrnují póly methy Imethakrylátové polymery a polylaktidy a poly(laktid—co-glykolid), viz. např.: McGee et al., J. Micro Encap. (1996).
Vektory genové terapie nebo prostá DNA mohou být dopraveny in vivo podáváním jednotlivému pacientovi, obvykle podáváním týkajícím se celého těla (např.: intravenózně, intraperitoneálně, do nosu, do žaludku, intradermálně, intramuskulámě, podkožně nebo intrakraniální infúzí) nebo místní aplikací (viz. např.: US 5 399 346). DNA může také být podávána za použití genovou pistolí. Viz. Xiao & Brandsma, výše. DNA kódující imunogen je vysrážena na povrchu mikroskopických kovových kuliček. Mikroprojektily jsou akcelerovány rázovou vlnou nebo expandujícím plynným heliem a prostupují tkáněmi do hloubky několika buněčných vrstev. Například The Accel·'1 Gene Delivery Device vyráběný firmou Agacetus, Inc. Míddleton WI je vhodný. Alternativně prostá DNA může procházet přes pokožku do krevního řečiště jednoduše nanesením DNA v místě chemického nebo mechanického narušení (viz. WO 95/05 853).
V další variantě vektory kódující imunogeny mohou být dopraveny do buněk ex vivo, takových buněk, jako jsou buňky odebrané jednotlivému pacientovi (např.: lymfocyty, kostní dřeň, tkáňová biopsie) nebo univerzální donorové buňky hematopoetické větve, a následuje zpětná implantace těchto buněk pacientovi obvykle po vyselektování buněk, které mají začleněný vektor.
Pacienti přístupní k léčbě - Pacienti přístupní k léčbě zahrnují osoby u nichž je riziko výskytu choroby, ale nevykazují symptomy, právě tak jak pacienti, kteří v tomto momentě symptomy vykazují. V případě Alzheímerovy choroby je ve skutečnosti u každého riziko trpění Alzheimerovou chorobou, pokud on nebo ona žije dostatečně dlouho. Proto uváděné metody mohou být aplikovány profylakticky na obecnou populaci bez jakéhokoliv určení rizika vystavenému pacientovi. Předkládané metody jsou zvláště užitečné pro jednotlivce, u nichž je známé dědičné riziko Alzheímerovy choroby. Takový jednotlivci zahrnují ty. kteří mají mezi příbuznými osoby, u nichž se vyskytla tato choroba, a ti. u nichž bylo riziko určeno analýzou genetických a biochemických standardů. Genetické standardy rizika vzhledem k Alzheimerově chorobě zahrnují mutace v APP genu, zvláště mutace v pozici 717 a pozicích 670 a 671. známých jako Hardy ho a švédská mutace, respektive (viz Hardy. TINS, výše). Ostatními standardy rizika jsou mutace v presen i línových genech, PSI a PS2. a ApoE4. rodinná historie Alzheimerovv choroby, hvpercholesterolémíe a atcroskleróza. Osoby právě trpící Alzheimcrovou chorobou mohou byt rozpoznáni podle charakteristických dcincnce. právě tak jako podle výše popsaných rizikových faktoru. Kromě toho existuje řada diagnostických testu vhodných pro identifikaci osoby, které mají
Alzheimerovu chorobu. Ty zahrnují měření hodnot CSF tau a Λ/7Ι2. Vzrostlá hodnota tau a snížená hodnota A/W2 naznačují přítomnost Alzheimerovy choroby. Osoby trpící Alzheimerovou chorobou mohou byt také diagnostikovány podle MMSE nebo ADRDA kritérií, jak je diskutováno v příkladech provedení vynálezu.
V případě asy mptomaticky ch pacientu může léčba začít v jakémkoliv věku (např.: v 10. 20. 30). Nicméně obvykle není nutné zahájit léčbu dříve než pacient dosáhne věku 40. 50. 60 nebo 70 let. Léčba obvykle vyžaduje násobné dávky po určitou dobu. Léčba může byt monitorována testováním protilátek nebo odpovědí T-buněk nebo B-buněk na terapeutické činidlo (např.: A/? peptid) io po stanovenou dobu. Jestliže se odpověď snižuje, je indikována zesílená dávka. V případě potenciálních pacientů s Dow novým syndromem léčba může alternativně začít podáváním terapeutického činidla matce nebo krátce po narození.
Léčebné režimy - U profy taktických aplikací jsou farmaceutické prostředky nebo medikamenty podávány pacientovi citlivému k, nebo naopak u něhož se vyskytuje riziko, konkrétní chorobě v množství dostatečném k eliminaci nebo redukci rizika nebo zbrždění začátku vývoje choroby. U terapeutických aplikací jsou podávány prostředky nebo medikamenty pacientovi podezřelému, nebo již trpícímu takovouto chorobou, v množství dostatečném léčit, nebo přinejmenším zvláště zastavit, symptomy choroby a jí způsobené komplikace. Množství adekvátní tomu, aby toho bylo dosaženo, je definováno jako terapeuticky- nebo farmaceuticky-efektivní dávka. U obou, jak profy taktického, tak terapeutického režimu, jsou činidla obvykle podávána v několika dávkách tak dlouho, dokud nebyla dosažena dostatečná imunitní odpověď. Obvykle je imunitní odpověď monitorována a opakované dávky jsou podávány, pokud se imunitní odpověď začíná snižovat.
Účinné dávky prostředků podle předkládaného vynálezu pro léčbu výše popsaných podmínek se odlišují v závislosti na řadě odlišných faktorů, které zahrnují způsoby podávání, cílové místo, fysiologický stav pacienta, zdaje pacientem lidská bytost nebo zvíře, ostatní podávané léky a zda léčba je terapeutická nebo profy taktická. Obvykle je pacientem lidská bytost, ale v případě některých onemocnění takových, jako je nemoc šílených krav, může být pacientem nehumánní savec takový, jako je hovězí dobytek. Léčebné dávky musejí mít optimální bezpečno a účinnou koncentraci. Množství imunogenu závisí na tom zda je podávána také pomocná látka, u vyšších dávek se vyžaduje vynechání pomocné látky. Množství podávaného imunogenu je někdy různé, od 1 do 500 pg na pacienta, a mnohem častěji od 5 do 500 pg na injekci při humánním podávání. Příležitostně je použita vyšší dávka od 1 do 2 mg na injekci. Obvykle je používáno okolo 10, 20.
50 nebo 100 pg na každou humánní injekci. Četnost podávání injekcí se může významně odlišovat, od jednou denně, přes jednou za rok, po jednou za deset let. Jakýkoliv daný den, během něhož je dávka imunogenu podávána, je dávka vyšší než 1 pg/pacienta a obvykle vyšší než 10 pg/pacienta, pokud je podávána také pomocná látka, a vyšší než 10 pg/pacienta a obvykle než 100 pg/pacienta v nepřítomnosti pomocné látky. Typický režim zahrnuje imunizaci následovanou zesílenými injekcemi v 6 týdenních intervalech. Jiný režim zahrnuje imunizaci následovanou zesílenými injekcemi o 1,2 a 12 měsíců později. Jiný režim vyžaduje injektáž každé dva měsíce v životě. Alternativně mohou být zesílené injekce na nepravidelném základě jak je indikováno monitorováním imunitní odpovědi. Pro pasivní imunizaci protilátkou je dávka v rozsahu od okolo 0.0001 do 100 mg/kg, mnohem častěji od 0,01 do 5 mg/kg hmotnosti hostitelova těla. Dávky nukleových kyselin, které kódují imunogeny. jsou v rozsahu od okolo 10 ng do lg, od 100 ng do 100 mg. 1 pg do 10 mg nebo 30 až 300 pg DNA na pacienta. Dávky infekčních virových vektorů se liší od 10 až 10 Č nebo \ íce virionú na dávku.
Činidla indukující imunitní odpověď mohou být podávána pro profvtaktickou a/nebo tcrapeutic5it kou léčbu parenterálním. lokálním, intravenózním. orálním, podkožním, intraperitoneálním. intranasálním nebo intramuskulámím způsobem. Nejobvyklejší cestou podávání je podkožní /působ, ačkoliv jiné způsoby mohou být stejně účinné. Dalším nejčastěji užívaným způsobem je intraimiskulártií injikace. Tento typ injikace je nejčastčji prováděn do svalů na paží nebo noze. Intravenózní injikace. právě tak jako intraperitoneální injikace. intraarteriální. intrakrantální nebo
- 12 CZ 303137 B6 intradermální injikaee jsou také účinné pro vyvolání imunitní odpovědi. V případě některých metod jsou činidla injikována přímo do dané tkáně, kde jsou nakumulovány sraženiny.
Činidla podle předkládaného vynálezu mohou být volitelně podávána v kombinaci s jinými činidly, která přinejmenším částečně účinná při léčbě amyloidních onemocnění. V případě Alzheimerovy choroby a Downova syndromu, u kterých se v mozku objevují amyloidní sraženiny. mohou být činidla podle předkládaného vynálezu podávána ve spojení s jiný mi činidly, která zvyšují průchod činidel podle předkládaného vynálezu přes bariéru krev-mozek.
io Imunogenní činidla podle předkládaného vynálezu taková, jako peptidy, jsou někdy podávána v kombinaci s pomocnou látkou. Různé typy pomocných látek mohou být podávány v kombinaci s peptidem takovým, jako je A/? peptid. aby byla vyvolána imunitní odpověď. Upřednostňované pomocné látky zvyšují základní odpověď na imunogen bez způsobování konformačních změn v imunogenu. který zajišťuje kvalitativní formu odpovědi. Upřednostňovanými pomocnými lát15 kam i jsou síran hlinito-draselný, 3 De-O-acylovaný monofosforyl lipid A (MPL) (viz. GB 2 220 211). QS21 je triterpenglykosid nebo saponin izolovaný z kúry stromu Quillaja Saponaria Molína, objeveného v Jižní Americe (viz. Kensil et al., in Vaccine Design: The Sub unii and Adjuvant Approach (eds. Powell & Nevvman, Plenům Press, NY, 1995); patent US 5 057 540). Jinými pomocnými látkami jsou emulze olej-ve-vodě (takové, jako squalen nebo olej z burských oříšků), volitelně v kombinaci s látkami stimulujícími imunitu takovými, jako je monofosforyl lipid A (viz. Stoute et al.. N. Engl. J. Med. 336, 86-91 (1997)). Jinou pomocnou látkou je CpG (Bioworld Today, Nov. 15, 1998). Alternativně může být \β peptid napojen na pomocnou látku. Například lipopeptidová verze \β peptidu může být připravena spojením palmitové kyseliny nebo jiných lipidu přímo sN-koncem A/? peptidu. jak je popsáno pro hepatitis B antigen vakci25 naci (Livingston, J. immunol. 159, 1383 až 1392 (1997)). Nicméně takové spojení by nemělo podstatně změnit konformaci A/? peptidu, zrovna tak jako by nemělo mít vliv na přirozenou imunitní odpověď na něj. Pomocné látky mohou být podávány jako složka terapeutického prostředku s aktivním činidlem nebo mohou být podávány odděleně před. souběžně s nebo po podání terapeutického činidla.
Upřednostňovanou třídou pomocných látek jsou hlinité sole (síran hlinito-draselný) takové, jako hydroxid hlinitý, fosforečnan hlinitý, síran hlinitý. Takovéto pomocné látky mohou být použity spolu nebo bez jiných specifických imunostimulujících činidel takových, jako jsou MPL nebo 3DMP, QS21, polymemí nebo monomerní aminokyseliny takové, jako jsou polyglutamová kyse35 lina nebo polylysin. Jinou třídou pomocných látek jsou emulze tvořící olej-ve-vodě. Takovéto pomocné látky mohou být použity spolu nebo bez jiných specifických imunostimulujících činidel takových, jakojsou muramyl peptidy (např.; N-acetylmuramyl-L-threonyl-D-isoglutamin (thr— MDP). N-acetyl-normuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin (nor-MDP), N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamyl-L-alanin-2-( I '-2 'd i palmitoy l-sn-glycero-3-hydroxy fosfory loxy)—ethy l40 amin (MTP-PE), N-acetylglucosaminyl-N-acetylmuramyl-L-Al-D-isoglu-L-Ala-dipalmitoxypropylamid (DTP-DPP) theramid M) nebo jiné složky bakteriální buněčné stěny. Emulze olejve-vodě zahrnují (a) MF59 (WO 90/14837), obsahující 5% Squalen. 0.5% Tween 80 a 0.5% Spán 85 (volitelně obsahují různá množství MTP-PE) tvořené submikronovými částicemi za použití inikrotluidizeru takového, jako je Model 11OY mikroíluidizeru (Microfluidics. Newton
MA). (b) SAF obsahující 10% Squalen. 0,4% Tween 80. 5% pluronik-blokovaný polymer LI21 a thr-MDP, bud1 inikrofluídizované na submikronovou emulzi, nebo vortexované tak. aby vznikly částice emulze o větší velikosti a (c) Ribi ‘ systém pomocné látky (RAS). (Ribi hnmunochem, Hamilton, MT) obsahující 2% Squalen, 0.2% Tween 80 a jednu nebo více složek bakteriální buněčné stěny ze skupiny zahrnující monofoslbrylipid A (MPL). trehalosdimykolát (TDM) a skelet buněčné stěny (CW'S). vhodněji MPL + CWS (Detox ). Jinou třídou upřednostňovaných pomocných látek jsou saponinové pomocně látky takové, jako je Stimulou“' (QS21. Aquila. Worcester, MA) nebo částice vytvořené od takových, jako jsou ISCOMy (imunostimulující komplexy) a ISCOMATRIX. Další pomocné látky zahrnují kompletní Freundovy pomocné látky (CI;A) a nekompletní Freundovy pomocné látky (1FA). Jiné pomocné látky zahrnují cytokiny
- 13 CZ 303137 B6 takové, jako interleukinv (IL-1. IL-2 a 1L-12). makroťágový kolonii stimulující faktor (M-CSF). nádorový nekrózní faktor (TNF).
Pomocná látka muže být podávána před. spolu s. nebo po podáni imunogenu. Imunogen a ? pomocná látka mohou být zabaleny a dodávány ve stejné lahvičce nebo mohou být zabaleny v oddělených lahvičkách a smíšeny před použitím. Imunogen a pomocná látka jsou obvy kle baleny s etiketou, která označuje zamýšlenou terapeutickou aplikaci. Jestliže imunogen a pomocná látka jsou zabaleny odděleně, balení obvy kle obsahuje instrukce pro smíšení před použití. Výběr pomocné látky a/nebo nosiče závisí na stabilitě vakcíny obsahující pomocnou látku, způsobu id aplikace, dávkovacímu programu, účinnosti pomocné látky pro druh organismů, u kterých je vakcína použita a, v případě lidských bytostí, je farmaceuticky akceptovatelná látka tou. která by la schválena nebo použitelná pro humánní podávání podle přiměřených regulačním podmínek.
Například kompletní Freundova pomocná látka není vhodná pro humánní aplikací. Síran hlinito— draselný, MPL a QS21 jsou upřednostňovány. Volitelně dvě nebo více odlišných pomocných i? látek může být použito společně. Upřednostňované kombinace zahrnují síran hlinito-draselný sMPL. síran hlinito-draselný sQS21, MPL sQS21 a síran hlinito-draselný, QS21 a MPL dohromady. Také nekompletní Freundova pomocná látka může být použita (Chang et al., Advanced Drug Dettvery Reviews 32, 173 až 186 (1998)), volitelně v kombinaci s jakoukoliv pomocnou látkou, jako jsou síran hlinito-draselný, QS21 a MPL a všechny jejich kombinace.
Činidla podle předkládaného vynálezu jsou často podávána jako farmaceutické prostředky zahrnující aktivní terapeutické Činidlo, a různé jiné farmaceuticky akceptovatelné složky. Viz, Remingtonů Pharmaceutical Science (15dl ed., Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 1980). Upřednostňované formy závisí na zamýšleném způsobu podávání a terapeutické apli25 kaci. Prostředky také mohou zahrnovat, v závislosti na požadovaném zadání, farmaceuticky akceptovatelné, netoxické nosiče a rozpouštědla, které jsou definovány jako částice obecně používané pro přípravu farmaceutických prostředků pro humánní a zvířecí použití. Rozpouštědlo je vybráno tak, aby nemělo vliv na biologickou aktivitu prostředku. Příkladem takových rozpouštědel je destilovaná voda, fyziologický fosfátem pufrovaný solný roztok, Ringerovy roztoky, roztok dextrózy Hanku v roztok. Kromě toho farmaceutické prostředky nebo složení mohou také obsahovat jiné nosiče, pomocné látky nebo netoxické, neterapeutické, neimunogenní stabilizátory a podobně. Nicméně některé látky vhodné pro podávání zvířatům takové, jako kompletní Freundova pomocná látka, nejsou obvykle zahrnuty v prostředcích pro humánní použití.
Farmaceutické prostředky mohou také zahrnovat velké, pomalu metabolizované makromolekuly takové, jako jsou proteiny, polysacharidy, polymléčné kyseliny, polyglykolové kyseliny a kopolymery (takové, jako jsou latexem upravená sepharóza, agaróza, celulóza a podobně), polymerní aminokyseliny, kopolymery aminokyselin a lipidové agregáty (takové, jako olejové kapičky a lipozomy). Kromě toho mohou mít tyto nosiče funkci jako imunostimulující činidla (to znamená jako pomocné látky).
Pro parenterální podávání mohou činidla podle předkládaného vynálezu být podávána jako injiko vatě lné dávky roztoků nebo suspenzí látky ve fyziologicky akceptovatelném rozpouštědle s farmaceutickým nosičem, který m může být sterilní kapalina taková, jako jsou vodní oleje, solný roztok, glycerol nebo ethanol. Kromě tolv» pomocné látky takové, jako zvlhčovači nebo emulzní činidla, surfaktanty. pH pufrující látky a podobné, mohou být přítomny v prostředcích. Jinými složkami farmaceutických prostředků jsou ty, které jsou ropného, zvířecího, rostlinného nebo syntetického původů, například olej z burských oříšků, sojový olej a minerální olej. Obecně glykoly takové, jako jsou propylenglykol nebo polyethylenglykol, jsou upřednostňovanými kapal5i) nými nosiči, zvláště u injikovatelných roztoků.
Obvykle jsou prostředky připravovány jako injikovatelné, buďjako kapalné roztoky, nebo suspenze; pevné formy vhodné pro rozpuštění, nebo uvedení do suspenze, a kapalné částice předcházející injikaci mohou být také připraveny. Přípravek muže být emulzifikován nebo enkapsu>5 lován v liposomech nebo mikročásticích takových, jako jsou polylaktid. polyglykolid ucho
- 14CZ 303137 B6 kopoly mer pro zesílené působení pomocné látky, jak by lo diskutováno výše (viz. Langer, Science 249. 1527 (1990) a Hanes. Advanced Drny Delivery Reviews 28, 97 až 1 19 (1997). Činidla podle předkládaného vynálezu mohou být podávána ve formě injekce nebo očkovacího přípravku, který může být připraven takovým způsobem, aby umožňoval udržované nebo pulzující vypouštění aktivní složky.
Další přípravky vhodné pro ostatní způsoby podávání zahrnují orální, intranasální a plicní přípravky, čípky a transdermální aplikace.
ίο V případě čípků, vazebná činidla a nosiče jsou obsaženy, například póly alkylenglyko ly nebo triglyceridy; takové čípky mohou být vytvořeny ze směsi obsahujících aktivní ingredienci v rozsahu od 0.5 do 10 %. vhodněji od 1 do 2 %. Orální přípravky zahrnují excipienty takové, jako jsou manitol farmaceutických stupňů, laktóza, škrob, stearát hořečnatý, sacharin sodný, celulóza a uhličitan hořečnatý. Tyto prostředky mají formu roztoků, suspenzí, tablet, pilulek.
kapslí, přípravků udržovaně vypouštějících aktivní látku nebo pudrů a obsahují od 10 do 95 % aktivní složky, vhodněji od 25 do 70 %.
Výsledkem povrchové aplikace může být transdermální nebo intradermáíní doprava. Povrchové podání muže být zajišťováno spolupodáváním činidla s toxinem cholery nebo deriváty zbave20 ným i toxicity nebo jejich podjednotkamí nebo jinými podobnými bakteriálními toxiny (viz.
Glenn et al.. Nátuře 391, 851 (1998)). Spolupodávání může být dosaženo použitím složek jako směsí, nebo jako spojených molekul získaných chemickou vazbou nebo expresí jako fúzní protein.
Alternativně muže být dosaženo transdermální dopravy použitím kožních náplastí nebo použitím transferosomů (Paul et al., Eur. J. Immunol. 25, 3521 až 24 (1995); Cevc et al.. Biochem. Biophys. Acta 1368, 201 až 15 (1998)).
Diagnostické metody - Předkládaný vynález zajišťuje metody detekce imunitní odpovědi na Αβ peptid u pacienta trpícího nebo přístupného Alzheimerově chorobě. Metody jsou zvláště užitečné pro monitorování průběhu léčby, která je poskytována pacientovy. Metody mohou být použity pro monitorování obou, jak terapeutické léčby symptomatických pacientů, tak proťylaktické léčby nesymptomatických pacientů.
Některé metody zajišťují určení základní hodnoty imunitní odpovědi u pacienta před podáním dávky činidla a porovnání této hodnoty' s hodnotou imunitní odpovědi po léčbě. Významné zvýšení (to znamená vyšší než obvyklé rozpětí experimentální chyby u opakovaných měření stejného vzorku, vyjádřené jako jedna standardní odchylka od průměru těchto měření) hodnoty signálů imunitní odpovědi výsledku pozitivní léčby (to znamená, že podáváním činidla bylo dosažena nebo zvýšena imunitní odpověď). Jestliže hodnota imunitní odpovědi se významně nezměnila nebo se snížila, je indikován negativní výsledek léčby. Obecně u pacientů, kteří procházejí počátečním průběhem léčby činidlem, je očekáváno vykázání zvýšené imunitní odpovědi li úspěšných dávek, které eventuálně dosahují plata. Podávání činidla obvykle pokračuje dokud se zvyšuje imunitní odpověď. Dosažení plata je indikátorem, že posky tovaná léčba může být přerušena nebo snížena dávka nebo frekvence podávání.
V případě jiných metod je určena kontrolní hodnota (to znamená průměr a standardní odchylka) imunitní odpovědi li kontrolní populace. Obvy kle jednotlivci v kontrolní populaci dříve nedostávali žádnou léčbu. Změřené hodnoty imunitní odpovědi u pacienta po podání terapeutického
5o činidla jsou pak porovnány s kontrolní hodnotou. Významné zvýšení vzhledem ke kontrolní hodnotě (např..; vyšší nez jedná standardní odchylka od průměru) signalizuje pozitivní léčebny výsledek. Podávání činidla obecně pokračuje do té doby. dokud se imunitní odpověď vzhledem ke kontrolní hodnotě zvy šuje. Stejně jako před tím. dosažení plata vzhledem ke kontrolním hodnotám indikuje, že podávání léčiva může být přerušeno nebo redukována jeho dávka nebo frek5? venee podávání.
- 15 CZ 303137 B6
V případě jiných metod kontrolní hodnota imunitní odpovědi (to znamená průměr a standardní odchylka) je určena u kontrolní populace jedinců, kteří podstoupili léčbu s terapeutickým činidlem a jejichž imunitní odpovědi dosáhly plata v odpovědi na léčbu. Změřené hodnoty imunitní odpovědi u pacienta jsou porovnávám s kontrolní hodnotou. Pokud změřená hladina u pacienta není významně odlišná (to znamená více nezjedná standardní odchylka) od kontrolní hodnoty, může být léčba přerušena. Jestliže hodnota u pacienta je významně pod kontrolní hodnotou, pokračující podávání činidla je zarušeno. Jestliže hladina u pacienta setrvává pod kontrolní hodnotou, pak může být indikována změna v léčebném režimu, například použití jiné podpůrné látky.
io
V případě jiných metod je u pacienta, který v současné době neprodělává léčbu, ale v minulosti prošel procesem léčby, monitorována imunitní odpověď, aby bylo určeno zdaje nezbytné znovuzahájeni léčby. Změřená hodnota imunitní odpovědi u pacienta muže být porovnána s hodnotou imunitní odpovědi u pacienta dříve dosažené po předchozím léčebném cyklu. Výz15 namné snížení vzhledem k předchozímu měření (to znamená vyšší než obvyklé rozpětí chyby u opakovaných měření stejného vzorku) je indikací, že léčba může být zahájena. Alternativně může být hodnota změřená u pacienta porovnána s kontrolní hodnotou (průměr plus standardní odchylka) určenou pro populaci pacientů, kteří prošli léčebným cyklem.
Alternativně může být hodnota změřená u pacienta porovnána s kontrolní hodnotou získané od populace profýlakticky léčených pacientů, u kterých se neobjevily symptomy choroby, nebo od populace terapeuticky léčených pacientů, kteří vykazují zlepšené charakteristiky choroby. Ve všech těchto případech je významné snížení vzhledem ke kontrolní hladině (to znamená více než standardní odchylka) indikátorem, že by léčba u pacienta měla být znovu zahájena.
Tkáňovým vzorkem pro analýzu je obvykle krev, plazma, sérum, kapalina mukózní sliznice nebo mozkomíšní kapalina pacienta. U vzorkuje analyzována indicie imunitní odpovědi na jakoukoliv formu Αβ peptidu, obvykle na Λ/342. Imunitní odpověď může být určena z přítomnosti, například, protilátek nebo T-buněk, které specificky váží Αβ peptid. ELISA metody detekce protilátek specifických pro Αβ peptid jsou popsány v příkladech provedení vynálezu. Metody detekce reaktivních T-buněk byly popsány výše (viz. definice).
Předkládaný vynález dále zajišťuje diagnostické sady pro provádění výše popsaných diagnostických metod. Obvykle takové sady obsahují činidlo, které se specificky váže k protilátkám proti
Αβ peptidu nebo reaguje s T-buňkami specifickými pro Αβ peptid. Sada také může obsahovat značku. Pro detekci protilátek proti Αβ peptidu je obvykle značka ve formě značených antiidiotypických protilátek. Pro detekci protilátek může být činidlo dodáváno navázané na pevnou fázi takovou, jako jsou jamky mikrotitrační destičky. Pro detekci reaktivních T-buněk může být značka dodávána jako H-thymidin, aby se změřila proliferační odpověď. Sady také obvykle
4o obsahují návod zjišťující značení při použití sady. Značení může také zahrnovat diagram nebo jiný odpovídající režim vztahující hladiny změřené značky k hladinám protilátek proti Αβ peptidu nebo T-buněk reaktivních s Αβ peptidem. Výraz značení odkazuje k jakémukoliv psanému nebo zaznamenanému materiálu, který je připojen k, nebo jinak spojen se sadou v jakékoliv době během níž je sada vyráběna, transportována, prodávána nebo používána. Například termín znače45 ní zahrnuje inzerční letáky a brožurky, obalové materiály, návody, audio a videokazety, počítačové disky právě tak, jako nápisy vytištěné přímo na sadách.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1: Koncentrace protilátky po injikaci A/>142 do transgenních myší.
Obrázek 2: Amyloidní zátěž v hipokampu. Procento plochy hipokampální oblasti, která je okupována amyloidnimi plaky. definovanými reaktivitou s A/Aspeeiťiekým mA/7 3D6. bylo určeno za pomoci počítače kvantitativní obrazovou analýzou mozkových imu- 16 CZ 303137 B6 noreaktivních sekcí. Hodnoty pro jednotlivé myši jsou uvedeny rozdělené podle léčené skupiny. Horizontální čára pro každé seskupení vyznačuje střední hodnotu distribuce.
Obrázek 3; Neuritická dvstrofie v hipokampu. Procento plochy hipokampální oblasti okupované dystrofiekými neurity. definovanými jejich reaktivitou s humánním APP-specifickým mA/?8E5. bylo určeno za pomoci počítače kvantitativní obrazovou analýzou mozkových imunoreaktivních sekcí. Hodnoty pro jednotlivé myši jsou uvedeny pro skupinu léčenou ANI792 a kontrolní skupinu léčenou PBS. Horizontální čára pro každé seskupení vyznačuje střední hodnotu distribuce.
Obrázek 4: Astrocytóza v retrospleniálním kortexu. Procento plochy kortikální oblasti, která je okupována gliálním fibrilániím acidickým proteinem (GFAP) - pozitivní astroeyty byly určeny za pomoci počítače kvantitativní obrazovou analýzou mozkových imunoreaktivních sekcí. Hodnoty pro jednotlivé myší jsou uvedeny rozdělené podle léčené skupiny. Horizontální Čára pro každé seskupení vyznačuje střední hodnotu distribuce.
Obrázek 5: Geometrický průměr koncentrací k A//1-42 následujících imunizaci v rozpětí osmi dávek ΑΝ 1792 obsahující 0,14; 0,4; 1,2: 3.7:11: 33; 100 nebo 300 pg.
Obrázek 6: Kinetika odpovědi protilátek na AN1792 imunizaci. Koncentrace jsou vyjádřeny jako geometrické průměry hodnot pro 6 zvířat v každé skupině.
Obrázek 7: Kvantitativní obrazová analýza kortikální amyloidní zátěže u PBS- a ΑΝ 1792-lécených myší.
Obrázek 8: Kvantitativní obrazová analýza neuritické plakové zátěže u PBS- a AN1792-léčených myší.
Obrázek 9: Kvantitativní obrazová analýza procenta retrospleníálního kortexu okupovaného astrocytózou u PBS- a ΑΝ 1792-léčených myší.
Obrázek 10; Test proliferace lymfocytů na slezinných buňkách z ΑΝ 1792-léčených (horní panel) nebo PBS-léčených (dolní panel).
Obrázek 11: Celková hladina Αβ peptidu v kortexu. Rozptýlení jednotlivých Αβ peptidových profilů v myších imunizovaných Αβ peptidem nebo APP deriváty kombinovanými s Freundovou pomocnou látkou.
Obrázek 12: Amyloidová zátěž v kortexu byla určena kvantitativní obrazovou analýzou mozkových imunoreaktivních sekcí u myší imunizovaných Αβ peptidovými konjugáty Αβ\-5, Αβ\-12 a A/713-28; celodélkovýtni Αβ peptidovými agregáty ANI792 (A/?l-42) a ANI528 (Λ//1—40) a pro PBS-léčenou kontrolní skupinu.
Obrázek 13: Geometrický průměr koncentraci A/T-specifické protilátky pro skupiny myší imunizovaných Αβ peptidem a APP deriváty kombinovanými s Freundovou pomocnou látkou.
Obrázek 14: Geometrický průměr koncentrací A/3-speeifické protilátky pro skupiny morčat imunizovaných AN 1792. nebojeho deriváty s palmítoylem. kombinované s různými pomocnými látkami.
Obrázek 15: Hladiny Αβ peptidu v kortexu u 12 měsíců starých PDAPP myší léčených ANI 792 nebo ANI528 s odlišnými pomocnými látkami.
Příklady provedení vynálezu 45
Příklad 1 - Profy laktická účinnost Αβ peptidu proti Alzheimerově chorobě
Tyto příklady popisují podáváni Αβ 42 peptidu transgenním myší se zvýšenou expresí APP 50 s mutací v pozici 717 (APP-rv_u ). která u nich předurčuje vyvinutí neuropatologic jako \ přípa- 17CZ 303137 Β6 dě Alzheimerovy choroby. Produkce a charakteristiky těchto myší (PDAPP myší) jsou popsány \ Games et al., Xuture. výše. Tato zvířata, v jejich heterozygotní formě, začínají předčasně ukládat A/7 peptid ve věku 6 měsíců. Ve věku patnácti měsíců vykazují hladiny uloženého Αβ peptidu ekvivalentní těm pozorovaným v případě Alzheimerovy choroby PDAPP myši bvlv inj i kovány agregovaným A/7t2 (agregovaný A/?)2) nebo fosfátem pufrovaným roztokem NaCI. Agregovaný A/7I2 byl vybrán díky své schopnosti zavést protilátky k násobným epitopům Αβ peptidu.
A. Metody
1. Zdroj myší - Třicet PDAPP heterogenních myších samiček bylo náhodně rozděleno do následujících skupin: 10 myší bylo inj i kováno agregovaným A/?42 (jedna zemřela při tranzitu), 5 myší bylo inj i kováno PBS/potnoenou látkou nebo PBS a 10 myší jako neinjikovaná kontrola. Pět myší bylo inj i kováno sérovým a my loi dním proteinem (SAP).
2. Příprava imunogeníi - Příprava agregovaného Αβ^ρ dva miligramy A/?42 (US Peptides lne, lot K-42-12) bylo rozpuštěno v 0,9 ml vody a doplněno na 1 ml přidáním 0,1 ml 10 x PBS. Směs byla vortexována a ponechána inkubovat přes noc při 37 °C, při těchto podmínkách se peptid agreaguje. Jakýkoliv nepoužitý Αβ peptid byl skladován jako lyofilizovaný prášek při -20 °C do následující injikace.
3. Příprava injekcí - 100 pg agregovaného A/742 v PBS na jednu myši bylo emulzifíkováno 1:1 s kompletní Freundovou pomocnou látkou (CFA) v konečném objemu 400 μΐ emulze pro první imunizaci, následovanou podporou stejným množstvím ímunogenu v nekompletní Freundově pomocné látce (IFA) po dvou týdnech. Dvě další dávky v IFA byly podány v měsíčních intervalech. Následující imunizace byly provedeny v měsíčních intervalech v 500 μΐ PBS. Injekce byly aplikovány íntraperitoneálně (i.p.)
PBS injekce byly podávány podle stejného programu a myši byly injikovány směsí 1:1 PBS/pomocná látka o objemu 400 μΐ najednu myši nebo 500 μΐ PBS na jednu myši. SAP injekce byly podobně podávány podle stejného programu za použití dávky 100 pg najednu injekci.
4. Titrace myší krve, příprava tkáně a imunohistochemie - zmíněné metody jsou popsány dále v obecných materiálech a metodách.
B. Výsledky
PDAPP myši byly injikovány buď agregovaným A/?42 (agregovaný A/?42), SAP peptidy, nebo fosfátem pufrovaným roztokem NaCI. Skupina PDAPP myší byla také ponechána neza inj i kovaná, pozitivní kontroly. Koncentrace agregovaného A/?42 u myší byly monitorovány každý další měsíc od čtvrté podpůrné dávky do té doby, dokud myši nebyly staré jeden rok. Myši byly utraceny v 13. měsících věku. Ve všech měřených časových bodech osm z devíti myší injikováných agregovaným ΑβΛ2 vytvořilo vysokou koncentraci protilátky, která zůstala vysoká po dobu celé série injikací (koncentrace vyšší než 1/10000). Devátá myš měla nízkou, ale měřitelnou koncentraci přibližně 1:1000 (obrázek 1. tabulka 1). SAPP injikované myši měly koncentraci od 1:1000 do 1:3()000 pro tento Ímunogen s pouze jednou myší přesahující 1:00000.
PBS-léčené my ši byly títrovány na agregovaný A/7]2 šesti, deseti a dvanácti měsících. Při ředění 1/100 PBS myši. když bvlv títrovány na agregovaný A/742. pouze v jednom datovém bodě přesáhív čtyřikrát pozadí, jinak měly méně než čtyřikrát pozadí ve všech datových bodech (tabulka 1). SAP-specitleká odpověď byla zanedbatelná v těch časových bodech, kde všechny koncentrace bv ly nižší než 300.
- 18CZ 303137 B6
U sedmi z devíti myší ze skupiny s agregovaným Λ/71-42 nebyl detekován amyloid v jejich mozcích. Naopak mozková tkáň u myší ze skupin SAP a PBS obsahovala řadu 3D6-positivních amy loidních sraženin v hipokampu právě tak. jako ve frontálním a eingulátním kortexu. Vzorek sraženiny byl stejný tomu, získanému s netečených kontrol, s charakteristickým obsahem napad5 nutelnýeh podoblastí takových, jako je vnější molekulová vrstva hipokampálního mozkového závitu. Jedna myš ze skupiny i ují kované ?\/7l 42 měla vysoce redukovanou amyloidní zátěž omezující se na hipokampus. Ohraničený plak byl identifikován ujiné A/71—12 léčené myši.
Kvantitativní obrazová analýza amyloidní zátěže v hipokampu určila dramatickou redukci dosaio ženou u ΑΝ 1792—léčených zvířat (obrázek 2). Střední hodnoty amyloidní zátěže u PBS skupiny (2.22%) a u neléěené kontrolní skupiny (2.65%) byly významně vyšší než u těch myší. které byly imunizovány ANI792 (0.00%. p = 0,0005). Naopak střední hodnota pro skupinu s SAP peptidy (S?\PP) byla 5,74%. Mozková tkán z neléčených kontrolních myší obsahovala řadu A/?amy loidních sraženin vizualizovaných A^-specifickou monoklonální protilátkou (mAb) 3D6v hipokamI? pu právě tak, jako v retrospleniálním kortexu. Podobný vzor amyloidní sraženiny byl také pozorován u myší imunizovaných buď SAPP. nebo PBS (obrázek 2). Kromě toho v těchto pozdějších třech skupinách by l charakteristický obsah napadnutelných podoblastí mozku klasicky pozorovatelných jako v případě Alzheimerovy choroby, takových, jako je vnější molekulová vrstva hipokampálního mozkového závitu, ve všech těchto třech skupinách.
Mozky, které neobsahují A/? sraženiny také postrádaly neuritické plaky, které jsou obvykle vizualizovány u PDAPP myší s humánní APP protilátkou 8E5. Všechny mozky ze zbývajících skupin (SAP-injikované, PBS a neinjikované myši) měly řadu neuritických plakň typických pro naléčené PDAPP myši. Malé množství neuritických plaků bylo přítomno v jedné myši léčené ANI 792 a jeden shluk dystrofických neuritů byl nalezen u druhé myši léčené ANI 792. Obrazová analýza hipokampu, ukázáno na obrázku 3, demonstrovala opravdovou eliminaci dystrofických neuritů u ΑΝ 1792-Iéčených myší (střed 0,00 %) v porovnání s PBS recipienty (střed 0,28 %, p = 0,0005).
Astrocytóza charakteristická pro zánět spojený s tvorbou plaků byla také nepřítomna v mozcích skupiny injí kované A/71-42. Mozky od myší z ostatních skupin obsahovaly hojné a shluklé GFAP-pozitivní astrocyty typické pro s A/? plaky spojenou gliózu. Podskupina GFAP-reagujících vzorků na podložním sklíčku byla obarvena thioflavinem S a počítána, aby byly lokalizovány A/? sraženiny. GFAP-pozitivní astrocyty byly asociovány s A/? plaky u SAP, PBS a neléčených kontrol. Žádná taková asociace nebyla pozorována u, na plaky negativních, A/?M2 léče35 ných myší, zatímco minimální, s plaky spojená, glióza byla identifikována v jedné myši léčené ANI 792.
Obrazové analýzy, ukázáno na obrázku 4, retrospleniálního kortexu určily, že snížení astrocytózy byio významné pro střední hodnotu 1,56 % u těch myší, které byly léčeny ANI792. oproti střed40 ním hodnotám vyšším než 6 % u skupin imunizovaných SAP peptidy, PBS nebo naléěených (p = 0.0017).
Důkaz z skupiny A/71-42 injikovaných a PBS injikovaných myší indikující splaky spojenou MHC II imunoreaktivitu byl nepřítomný u A/? 1-42 injikovaných myší v souladu s nedostateč45 nou. k \βpeptidu se vztahující, zánětlivou odpovědí.
Sekce myších mozku také reagovaly s mA/? specifickým pro MAC-l. buněčným povrchovým proteinem. MAC-l (CDIlb) je členem rodiny a existuje jako heterodimer sCDIS. Komplex CD11H/CD18 je přítomen v monocytech. makrofázích. neutrofileeh a přirozených zabijáekých ?o buňkách (Mak a Simard). MAC-l-reaktivní buněčný typ sídlící v mozku je pravděpodobně, aby byl mikrogl i i. založen na podobné lénotypické morfologií v MAC-l imunoreaktivních sekcích. Značení splaky spojeného MAC 1 bylo nižší v mozcích myší léčených ANI792 v porovnání s PBS kontrolní skupinou, nalézající soulad s nedostatečnou A/f-indukovanou zánětlivou odpovědí.
C. Závěr
Nedostatek λβ plakú a reaktivních neuronálníeh a gliotických změn v mozcích Ά/71 —42—injiko5 váných myší indikuje, že žádné nebo velmi malé množství amyloidu se srazilo v jejich mozcích a patologické následky takové, jako gliózy a neuritieká patologie nebyly přítomny. PDAPP myši léčené A/Jl-42 vykazují hlavně stejný nedostatek patologie jako kontrolní netransgenní myši.
Proto jsou A/71-42 injekce vysoce efektivní při prevenci před ukládáním nebo při odstraňování humánního A/?peptidu z mozkové tkáně a eliminaci následných neuronálníeh a zánětlivě degeneio rativních změn. Tudíž podávání A/? peptidu má terapeutický prospěch při prevenci proti Alzheimerovč chorobě.
Příklad 2 - Studie odpovědi na dávku
Skupiny pět týdnů starých, samiček Swiss Webstre myší (N = 6 na skupinu) byly imunizovány 300; 100; 33; 11; 3,7; 1,2; 0,4 nebo 0,13 pg A/? obsaženém v CFA/IFA podáváním intraperitoneálně. Tři dávky byly podány v dvoutýdenních intervalech a následovaly čtvrtou dávkou o jeden měsíc později. První dávka byla emulzifíkována sCFA a zbývající dávky byly emulzifikovány s IFA. Zvířatům byla odebrána krev 4 až 7 dní po každé imunizaci počínajíce druhou dávkou, aby byly změřeny koncentrace protilátky. Zvířatům z podskupin tří skupin, těm která byla imunizována 11; 33 nebo 300 pg antigenů, byla navíc odebrána krev v přibližně měsíčních intervalech po dobu čtyř následujících měsíců po čtvrté imunizaci, aby byl monitorován úpadek imunitní odpovědi v rozpětí vakcinačních dávek. Tato zvířata obdržela poslední pátou imunizaci sedmý měsíc poté, co byla studie zahájena. Zvířata byla utracena o jeden týden později, aby byly změřeny proti látkové odpovědi na ΑΝ 1792 a provedeny toxiko logické analýzy.
Snižující se odpověď na dávku byla pozorována od 300 do 3,7 pg s žádnou odpovědí na dvě nejnižší dávky. Průměrné koncentrace protilátky jsou okolo 1:1000 po 3 dávkách a okolo 1:10000 po 4 dávkách 1 1 až 300 pg antigenů (viz. obrázek 5).
Koncentrace protilátek rostou dramaticky pro všechny dávky, ale nejnižší dávková skupina následující třetí imunizaci má zvýšení v GMT v rozmezí od 5 do 25-krát. Nízké odpovědi protilátek byly pak detekovatelné pro dokonce 0,4 pg dávku u recipientů. Skupiny 1,2 a 3,7 pg měly porovnatelné koncentrace v GMT okolo 1000 a čtyři nejvyšší dávky shluknuté společně s G MT okolo 25000, kromě 33 pg dávkové skupiny s nižší GMT okolo 3000. Po čtvrté imunizaci bylo zvýšení koncentrace mnohem mírnější pro většinu skupin. Byla zde jasná dávková odpověd1 přes skupiny s nejnižší dávkou antigenů od 0,14 do 11 pg, kde škála byla od neděkované protilátky u recipientů s 0,14 pg k GMT 36 000 pro recipienty s 11 pg. Opět koncentrace pro čtyři nejvyšší dávkové skupiny od 11 do 300 pg byly shluklé dohromady. Tudíž po dvou imunizacích byla koncentrace protilátky závislá na dávce antigenů přes širokou škálu od 0,4 do 300 pg. Po třetí imunizaci byly koncentrace pro čtyři nejvyšší dávky všechny porovnatelné a zůstaly na platu po dodatečné imunizaci.
Jeden měsíc po čtvrté imunizaci byly koncentrace 2- až 3—krát vyšší u 300 pg skupiny, než ty. které by ly měřeny z krve odebrané pět dnu po imunizaci, (obrázek 6).
Na základě tohoto pozorováni se předpokládá, že se pík anam nést ické prot i látkové odpovědi objevil později než 5 dnu po imunizaci. Mnohem mírnější (50%) zvýšení bylo pozorováno v tom5o to případě u 33 pg skupiny. V případě 300 pg dávkové skupiny dva měsíce po poslední dávce se GMT prudce snížila o 70%, Po dalším měsíci bylo snížení méně prudké o 45% (100 pg) a o 14% pro dávky 33 a 1 1 pg. Tudíž rychlost snížení v cirkulujících koncentracích protilátky po imunizačni pauze se jeví být dvoulázová s prudkým snížením prvním měsíci po píku odpovědi, následovaná potom mnohem mírnější rychlostí poklesu.
-20CZ 303137 B6
Koncentrace protilátky a kinetika odpovědi těchto Swiss Webster myší jsou podobné mladým heterozygótním PDAPP transgenním myším imunizovaným paralelním zpusobem. Dávky účinné k vyvolání imunitní odpovědi u lidí jsou obvykle podobné dávkám účinným u myší.
Příklad 3 - Hledání terapeutické účinnosti proti již rozv inuté Alzheimerově chorobě
Tento test je vytvořen tak, aby mohla být testována imunogenní činidla na jejich aktivitu zastavit to nebo zvrátit neuropatologické charakteristiky Alzheimerovy choroby u starých zvířat. Imunizace s 42 aminokyselin dlouhým A/?(ANI792) byla zahájena v době. kdy byly amyloidní plaky již přítomny v mozcích PDAPP myší.
Po dobu stanovenou pro tuto studii se u ne léčených PDAPP myší vyvíjela řada neurodegenera15 tivních změn. které se podobají těm, které byly nalezeny v případě Alzheimerovy choroby (Games et al., výše a Johanson-Wood et ak. Proč. Natí Acad. Sci. USA 94. 1550 až 1555 (1997)). Ukládání A/? amy loidních plaků je spojeno s degenerativní neuronální odpovědí, která zahrnuje aberační axonal a dendritické elementy, nezývané dystrofické neurity. /Vmyloidní sraženiny, které jsou obklopeny a obsahují dystrofické neurity, se nazývají neuritícké plaky. U obou, jak myši s Alzheimerovou chorobou, tak PDAPP myši. mají dystrofické neurity zřetelnou globulární strukturu, jsou imunoreaktivní s skupinou protilátek, které rozeznávají APP a cytoskeletální složky a vykazují komplexní subcelulární degenerativní změny na ultrastruktumí úrovni. Tyto charakteristiky umožňují měření určující závažnost onemocnění, selektivní a reprodukovatelné měření neuritických plakový ch formací v PDAPP mozcích. Dystrofická neuronální složka
PDAPP neuritických plaků je snadno vizualizovatelná protilátkou specifickou pro humánní APP (mA/?8E5), a je rychle měřitelná za pomoci počítače obrazovou analýzou. Proto, kromě měření účinků ANI 792 na amyloidní plakové formace, jsme monitorovali účinky této léčby na vývoj neuritícké dystrofie.
Astrocyty a mikroglia jsou neneuronální buňky, které odpovídají stupni a odrážejí stupeň neuronálního poškození GFAP-pozitivní astrocyty a MHC II—pozitivní mikroglia jsou obecně pozorovány v případě Alzheimerovy choroby ajejich aktivace se zvyšuje stím. jak je choroba těžká. Proto jsme také monitorovali vývoj reaktivních astrocytů a mikroglií u ΑΝ 1792-léčcných myší.
A. Materiál a metody
Čtyřicet osm heterozygotních samiček PDAPP myší, věku od 11 do 11.5 měsíců, získaných od Charles River, bylo náhodně rozděleno do dvou skupin: 24 myší, aby bylo imunizováno 100 pg ANI 792 a 24 myší, aby bylo imunizováno PBS. každé činidlo v kombinaci s Freundovou pomocnou látkou. Skupiny ANI792 a PBS byly opět rozděleny, když myší dosáhly -15 měsíců věku. V patnácti měsících věku byla přibližně polovina z každé skupiny ANI792- a PBS-lécených zvířat utracena (n = 10 a 9. respektive), zbytek pokračoval v přijímání imunizace až do ukončení v -18 měsících věku (n-9a 12. respektive). Celkem 8 zvířat zemřelo během studie (5 ANI792. 3 PBS). Kromě imunizovaných zvířat pokus zahrnoval jeden rok staré (n ~ 10),
15 měsíců staré (n - 10) a 18 měsíců staré (n = 10) neléčené PDAPP myši pro porovnání metodou ELISA, aby byly měřeny hladiny A/7a APP v mozku: jednoroční zvířata byla také začleněna do imunohistochemických analýz.
Metodologie byla stejná jako v příkladu jedna jestliže není uvedeno jinak. US Peptides šarže 12 a
5u California Peptides šarže ME0339 látky ΑΝ 1 792 bvlo použito k přípravě antigenu pro šest imunizací podávaných před časovým bodem 15 měsíců. California Peptidcs šarže ME0339 a ME0439 bv Iv použity pro tři další imunizace podávané mezi 15 a 18 měsíci.
-21 CZ 303137 B6
Pro imunizaci bylo emulzifikováno 100 gg AN1792 v 200 gl PBS nebo PBS samotné 1:1 (V,'V) s kompletní Freundovou pomocnou látkou (CFA) nebo nekompletní Freundovou pomocnou látkou (IFA) nebo PBS do konečného objemu 400 gl. První imunizace byla podána s CFA jako pomocnou látkou, další čtyři dávky byly podány s IFA a poslední čtyři dávky se samotným PBS bez přidané pomocné látky. Všech devět imunizací bylo podáno v časovém období sedmi měsíců v dvoutýdenních plánu pro první tři dávky, následováno čtyřtýdenním intervalem pro zbývající injekce. Skupina léčená čtyři měsíce byla utracena ve věku 15 měsíců a obdržela tedy pouze prvních šest imunizací.
ίο B. Výsledky
1. Účinky léčby ANI 792 na amyloidní zátěž - Výsledky léčby ANI792 kortikální amy loidní zátěže určené kvantitativní obrazovou analýzou jsou ukázány na obrázku 7. Střední hodnota kortikální amyloidní zátěže byla 0,28 % ve skupině netečených 12 měsíců starých PDAPP myší, hodnota reprezentujících plakové zatížení u myší na počátku studie. Po 18 měsících amyloidní zátěž vzrostla 17—krát na 4,87 % u PBS-léčenýeh myší. zatímco ΑΝ 1792-léčené myši měly amyloidní zátěž vysoce redukovanou na pouze 0,01 %, významně méně než 12 měsíců netečené a obě 15 a 18 měsíců PBS-léčené skupiny. Amyloidní zátěž byla významně snížena u ANI792 příjemců, u obou, jak 15 měsíců (96% snížení p = 0,003), tak 18 měsíců (>99% snížení,
2i) p - 0,0002) starých.
Obvykle amyloidní ukládání začíná u PDAPP myší ve frontální a retrospleniální kůře (RSC) a vyvíjí se ve ventrálně-laterálním směru, aby dosáhlo temporální a entorhinální kůry (EC). Malé množství amyloidu nebo žádné bylo nalezeno v EC oblasti u 12 měsíců starých myší, což je při25 bližně věk, ve kterém bylo poprvé podáno ANI792. Po 4 měsících ANI792 léčby se amyloidní ukládání významně snížilo v RSC a progresivní zapojení EC bylo zcela eliminováno ANI792 léčbou. Pozdější pozorování ukázalo, že ANI792 zcela zastavilo progresi amyloidu, který by normálně napadnul temporální a ventrální kůry právě tak, jako zastavilo nebo možná zvrátilo ukládání v RSC.
Vážné účinky ANI792 léčby na vývoj kortikální amyloidní zátěže u PDAPP myší jsou dále demonstrovány na skupině myší 18 měsíců starých, která byla tečena po dobu sedmi měsíců. Byla nalezena téměř kompletní absence kortikálního amyloidu u ΑΝ 1792-léčených myší, s totálním úbytkem rozptýlených plaků právě tak, jako úbytek kompaktních sraženin.
2. Buněčné a morfologické změny spojené s ANI792 léčbou - Populace A/?-pozitivních buněk byla nalezena v oblastech mozku, které obvykle obsahují amyloidní sraženiny. Pozorovatelně, v několika mozcích od ANI 792 příjemců, bylo nalezeno jen velmi málo nebo žádné extracelulární kortikální plaky. Většina Αβ imunoreaktivity se jeví být obsažena uvnitř buněk s velkým lobulámim nebo chomáčovitým sóma. Fenotypicky se tyto buňky podobají aktivovaným mikrogliím nebo monocytům. Byly imunoreaktivní s protilátkami rozeznávajícími ligandy exprimovanými aktivními monocyty a mikroglíi (MHC II a CDI lb) a byly příležitostně spojeny s stěnou nebo lumen krevních řečišť. Porovnání blízko přilehlých oblastí značených A/Pncbo MHC IIspeciťiekými protilátkami odhalilo, že podobné vzory těchto buněk byly rozpoznávány oběma třídami protilátek. Detailní prozkoumání ΑΝ 1 792-tečených mozků odhalilo, že MHC li-pozitivní buňky by ly omezeny sousedstvím limitovaného amyloidu zbývajícího u těchto zvířat. Za použití daných podmínek buňky nebyly imunoreaktivní s protilátkami, které rozeznávají T buněčné (CD3. CD3e) nebo B buněčné (CD4RA. CD4RB) ligandy nebo obecný leukocytový antigen (CD45). ale reagovaly s protilátkou rozeznávající leukosialin (CD43). který křížově reaguje
5o s monocyty. Žádné takové buňky nebv ly nalezeny u PBS-léěených myší.
PDAPP myši konstantně vyvíjejí těžké ukládání amy loidu ve vnější molekulární vrstvě hípokampálního mozkového závitu. Ukládání tvoří odlišný pruh uvnitř perťorační cesty, podoblasti, která obvykle obsahuje amyloidní plaky v případě Alzheimerovy choroby, Charakteristické zjevení se těchto sraženin u PBS-léčených myší se podobá tomu, již dříve charakterizovanému u neléče- 22 CZ 303137 B6 ných PDAPP myší. Ukládání amyloidu zahrnovalo obě. jak rozptýlené, tak kompaktní ptáky v kontinuálních skupinách. Naopak u řady mozků od ΑΝ 1792-léčenýeh myší byl tento vzor drasticky změněn. Hipokampální amyloidové ukládání více neobsahovalo rozptýlený amyloid a skupinový vzor byl zcela přerušen. Navíc byla přítomna řada neobvyklých tečkovaných struktur.
? které jsou reaktivní s anti-A/3 protilátkami, a řada z nich se jeví být buňkami, které obsahují amyloid.
MHC II—pozitivní buňky byly často pozorovány v sousedství extracelulámího amyloidu u ΑΝ 1792-léčenýeh zvířat. Vzor asociace A/C pozitivních buněk s amyloidem byl velmi podobny io v řadě mozků z ΑΝ 1792-léčenýeh myší. Distribuce těchto monocy tichých buněk byla omezena bezprostřední přítomnost uloženého amyloidu a byla zcela nepřítomná v jiných oblastech mozku postrádajících A/?plaky.
Kvantitativní obrazová analýza MHC II a MAC I-značených oblastí odhalila trend směrem is k zvyšující se imunoreaktivitě v RSC a hipokampu u ΑΝ 1792-léčenýeh myší v porovnání se skupinou PBS, která dosáhla významu s měřením MAC I reaktivity v hipokampu.
Tyto výsledky indikují aktivní, buňkami zprostředkovávané odstranění amyloidu z oblastí mozku nesoucích plaky.
3. Vlivy ANI792 na hladiny Αβ: ELISA určení (a) Kortikální hladiny - U neléčených PDAPP myší byla střední hladina celkového Αβ peptidu v kortexu, v 12 měsíci, 1600 ng/g, a která se zvýšila na 8700 ng/g v 15 měsíci (tabulka 2). V
18 měsících byla hodnota 22000 ng/g, zvýšení bylo více než 10-násobné za dobu průběhu experimentu. PBS-léčení zvířata měla 8600 ng/g celkového Αβ peptidu v 15 měsících, což se zvýšilo na 19000 ng/g v 18 měsících. Naopak ANI 792-léčená zvířata měla o 81 % menší hladinu celkového Αβ peptid v 15 měsících (1600 ng/g), než PBS-imunizovaná skupina. Významně nižší (p = 0,0001) celkové množství Αβ peptidu (5200 ng/g) bylo nalezeno u 18 měsíčních myší, když byly porovnávány ANI792 a PBS skupiny (tabulka 2), což představovalo 72% snížení Αβ peptidu, který' by jinak byl přítomen. Podobné výsledky byly získány, když byly porovnány kortikální hladiny A/342, zejména ΑΝ 1792-léčená skupina obsahovala mnohem méně A/342, ale v tomto případě odlišnosti mezi ANI792 a PBS skupinami byly významné u obou, jak u 15 měsíců (p = 0,04), tak u 18 měsíců (p = 0,0001; tabulka 2).
Tabulka 2: Střední hladiny A/?(ng/g) v kortexu nelečene PBS ANI 792
věk celkový Αβ A/342 (η) ,-—— ' celkový Αβ Λ/242 (η) celkový Αβ Α//42 (η)
12 1600 1300 (10) ί 1 1 ι
15 ί 8700 8300 ί 10) j 8600 7200 (9) 1600 1300* (10)
18 ί 1 1 22200 18500 (10) j 1 19000 I 5900 (12) 5200 4000** (9)
*pp-í).í)412 **p --0.0001 (b) Hipokampální hladiny - L neléčených PDAPP myší by ly střední hladiny celkového Αβ peptidu v dvanácti měsíci 15000 ng/g. a které vzrostly na 51000 ng/g v 15 měsících a dále na 81000
4? ngg v 18 měsících (tabulka 3). Podobně PBS imunizované myši vy kazovaly hodnoty 40000 ng/g a 65000 ng/g v 15 měsících a 18 měsících, respektive. ΑΝ 1 792 imunizovaná zvířata vykazovala menší celkové množství Αβ peptidu, specificky 25000 ng/g a 51000 ng/g časových bodech 15 tněsícu a 18 měsíců, respektive. Hodnota 18—měsíční ΑΝ 1792-léěené skupiny byla významně nižší než hodnota u PBS-léčené skupiny (p = 0,0105; tabulka 3). Měření A/M2 podalo stejný vzor výsledků, zejména tyto hladiny u ANI 792-léěené skupiny byly významně nižší než u PBS skupinv (39000 ng/g vs. 57 000 nďc. respektive: p = 0.0022) v 18—měsíčním hodnocení (tabulka 3).
Tabulka 3: Střední hladiny A/?(ng/g) v hipokampu neleéene PBS ANI 792
věk celkově Afi A/W2 (n) celkový Αβ A/242 (n) celkový Αβ A/M2 (π)
12 15500 11100 (10) —
15 51500 44400 (JO) 40100 35700 (9) 24500 22100* (10)
18 80800 04200 (10) 65400 57100 (12) 50900 (9) 38900**
*p = 0.105 **p = 0.0022 (c) Cerebrální hladiny - U 12-měsíČních ne léčených PDAPP myší byla střední hladina cerebrální hladina celkového A/? peptidu 15 ng/g (tabulka 4), V 15 měsících se tento střed zvedl na 28 ng/g a v 18 měsících vzrostl na 35 ng/g. PBS-léčená zvířata vykazovala střední hodnoty celkového Αβ peptidu 21 ng/g v 15 měsících a 43 ng/g v 18 měsících. U AN1792-léčených zvířat bylo nalezeno 22 ng/g celkového Αβ peptidu v 15 měsících a významně nižší (p = 0,002) celkové množství Αβ peptidu v 18 městcích (25 ng/g), než u odpovídající PBS skupiny (tabulka 4).
Tabulka 4: Střední hladiny A/?(ng/g) v cerebelu neléčené PBS ANI 792
věk (měsíce) celkový Αβ (n) celkový Αβ (n) celkový Αβ (n)
12 1 5.6 (10)
15 27.7 (10) 20 8 (9) 21,7 (10)
18 35.0 (10) 1 43.1 (12) 24,8* (9)
*p- 0.0018
4. Účinky ANI792 léčby na hladiny APP - APP-a a celodélková molekula APP obsahují obě celou nebo části Αβ sekvence a tudíž by mohly být potenciálně potlačeny vyvinutím ΑΝ 1 792řízené imunitní odpovědi. V současných studiích nepatrné zvýšení APP hladin bylo uvedeno, jako neuropatologické zvýšení li PDAPP myší. V kortexu byly hlavně hladiny bud APP-a/FL (eelodčlkový), nebo APP-a nezměněny léčbou, kromě toho. že APP-a byl redukován o 19% v časovém bodě 18 měsíců li ANI 792 léčené skupiny vs. PBS-léčené skupině. IJ 18—měsíční ΑΝ 1792-léčené skupiny nebvly hodnotv významně odlišné od hodnot 12-měsíění a 15-měsíční naléčené a 15—měsíční PBS skupin. Ve všech případech zůstaly hodnoty uvnitř škál. které jsou normálně nalézány u PDAPP myši.
5. Účinky ANI 792 léčby na neurodegenerativní a gliotickou pathologii - Neuritieká plaková zátěž bvla vvznamně redukována ve frontálním kortexu ΑΝ 1792-léěených myší v porovnání
-24CZ 303137 Bó s PBS skupinou, v obou, jak v 15 (84%: p - 0.03). tak 18 (55%: p 0.01) měsících věku (obrázek 8). Střední hodnota neuritické plakové zátěže se zvýšila z 0,32 na 0,49 % u skupiny PBS mezi 15 a 18 měsíci věku. Toto kontrastuje s velmi redukovaným vývojem neuritiekýeh plaku u ANI 792 skupiny, se středními hodnotami neuritické plakové zátěže od 0.05 do 0.22 %. v 15 a 18-mčsícnícb skupinách, respektive.
Imunizace s ANI792 se zdá být dobře tolerována a reaktivní astroeytóza byla také významně snížena v RSC ΑΝ 1792-léěenýeh myší. když je toto porovnáváno s PBS skupinou v obou. jak 15 (56%; p - 0.011) a 18 (39%; p = 0,028) měsících v ěku (obrázek 9). Procentuální střední Hodnoty astroeytózy u PBS skupiny se zvýšily mezi 15 a 18 měsíci z 4.26% na 5.21%. AN'1792-léěba potlačila vývoj astroeytózy, v obou časových bodech na 1.89 a 3.2 %. respektive. Předpokládá se tedy, že neuropil nebyl poškozen během procesu odstraňování.
6. Odpovědi na protilátky - Jak bylo popsáno výše. jedenáct měsíců staré, heterozygotní PDAPP myši (N = 24) obdržely série 5 imunizací 100 pg ANI792 emulzifikovaných s Freundovou pomocnou látkou a podávaných intraperitoneálně v týdnech 0, 2, 4. 8 a 12 a šestou imunizaci se samotným PBS (žádná Freundova pomocná látka) šestnáctý týden. Jako negativní kontrola obdržela paralelní skupina 24 věkově shodných transgenníeh myší imunizace PBS emulzifikovaného s stejnou pomocnou látkou a podávaného stejným způsobem. Zvířatům byla odbírána krev od tří do sedmi dnů po každé imunizaci, což bylo zahájeno po druhé dávce. Odpovědi na protilátky k ΛΝ 1792 byly měřeny metodou ELISA. Geometrické průměry koncentrací (GMT) pro zvířata, která byla imunizována ANI792, byly přibližně 1900, 7600 a 45 000 po druhé, třetí a poslední (šesté) dávce, respektive. Žádná A/?-specifická protilátka nebyla změřena u kontrolních zvířat po šesté imunizaci.
Přibližně jedna polovina zvířat byla léčena po dobu dalších tří měsíců, a přijímala tak imunizaci 20, 24 a 27 týdnů. Každá z těchto dávek byla podávána v PBS dopravní látce bez Freundovy pomocné látky. Průměrné koncentrace protilátky zůstaly nezměněné po toto časové období. Ve skutečnosti se koncentrace protilátky jevily stabilní od čtvrtého do osmého odebírání krve. což odpovídá období pokrývajícímu pátou až devátou injekci.
Aby se určilo, jestli jsou A/2-specifieké protilátky vyvolávány imunizací, ty protilátky, které byly detekovaný v séru AN1792-léčených, a které byly také spojeny s arnyloidem uloženým v mozku, byly podskupiny sekcí z ANI792- a PBS-léčených myší /reagovány s protilátkou specifickou pro myšímu IgG. Oproti PBS skupině byly A/? plaky u ΑΝ 1792-léčených mozků pokryty endogenním IgG. Tento rozdíl mezi dvěma skupinami byl pozorován u obou, jak 15-, tak 18-mčsíčních skupin. Zvláště překvapující bylo oslabení značení u PBS skupiny vzdor přítomnosti těžké amyloidní zátěže u těchto myší. Tyto výsledky ukazují, že imunizace synthetickým Λ/7proteinem vyvolává protilátky, které rozeznávají a váží se in vivo na A/?amyloidní plaky.
7. Buněěné-zprostředkované imunitní odpovědi - Byly odebrány sleziny devíti AN1792imunizovaným a dvanácti PBS-imunizovaným 18-měsíců starým PDAPP myším, sedm dní po deváté imunizaci. Splenocyty byly izolovány a kultivovány po dobu 72 li v přítomnosti A/TtO. Λ/242 nebo A/340-1 (protein opačného pořadí). Mitogen Con A sloužil jako pozitivní kontrola. Optimální odpovědi byly získány s >1.7 μΜ proteinem. Buňky ze všech devíti ANI792-léěenýeh zvířat proliferovaly v odpověď na buď A/?I-40. nebo A/71-42 protein, se stejnými hladinami začlenění pro oba proteiny (obrázek 10, horní panel). Nebyla pozorována žádná odpověď na Λ/.40-! reverzní protein. Buňky z kontrolních zvířat neodpověděly na žádný z Λβ proteinu (obrázek 10. dolní panel).
C. Závěr
Výsledky této studie ukazují, že ΑΝ 1 792 imunizace PDAPP myší, které mají existující amyloidní sraženiny, zpomaluje a ochraňuje od progresivního ukládání amyloidu a zabraňuje následným neuropatologiekým změnám v mozku staré PDAPP myši. Imunizace ANI792 zabraňuje vývoji
-25 CZ 303137 B6 amyloidní zátěže ve strukturách, které by normálně zvrhly do amyloidózy. Tudíž podávání A/7 peptidů má terapeutický prospěch pri léčbě Alzheimerovy choroby.
? Příklad 4 - Hledání Αβ fragmentů
100 PDAPP myší \e věku od 9 do 11 měsíců jsou imunizovány 9 různými oblastmi APP a A/7 peptidů. aby bylo určeno, které epítopy vedou k odpovědi 9 různých imunogenu a jedna kontrola jsou injikovánv i.p., jak je popsáno výše. Imunogeny zahrnují čtyři humánní A/? peptidové konin jugáty 1 až 12, 13 až 28, 32 až 42, 1 až 5. všechny spojené s ovčím proti-myším IgG přes eysteinový můstek: APP polypeptid aa 592 až 695, agregovaný humánní Αβ 1 až 40, agregovaný humánní A/7 2 5 až 35 a agregovaný hlodavci Λ/342.
Agregovaný Λ/312 a PBS jsou použity jako kontroly. Deset my ší je použito v každé léčené skulí pině. Koncentrace jsou monitorovány tak, jak je popsáno výše a my ši jsou utráceny na konci čtyř měsíců imunizace. Histochemie, A/?hladtny a toxikologie jsou určovány po smrti.
A. Materiál a metody
1. Příprava imunogenů - Příprava spojených A/?peptidů: čtyři humánní Αβ peptidové konjugáty (aminokyselinové zbytky 1 až 5, 1 až 12, 13 až 28 a 33 až 42, každý spojen s ovčím proti— mýším IgG) byly připraveny propojením přes cystein, uměle přidaný do Αβ peptidů, s použitím reakčního činidla sulfo-EMCS. Αβ peptidové deriváty byly synthetizovány podle následujících konečných sekvencí. V každém případě je pozice vloženého cysteinového zbytku označena pod25 tržením. A/713-28 peptidový derivát měl také přidané dva glycinové zbytky před C-koncovým cysteinem, jak je naznačeno.
A/71-12 peptid A/71-5 peptid A/733-42 peptid A/713-28 peptid
NH2- DAEFRHDSGYVC COOH NH2-DAEFRC COOH
NH2 - C - amino-heptanová kyselina - GLMVGGVVIA COOH Ac - NH - HHQKLVFFAEDVGSNKGGC - COOH
Pro přípravu spojovací reakce bylo dialyzováno deset mg ovčího proti-myšího IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories) přes noc proti 10 mM pufru borátu sodného, pH 8,5. Dialyzova3? ná protilátka byla potom zakoncentrována na objem 2 ml za použití Amicon Centriprep kyvety. Deset mg sulfo-EMCS [N (ε-maleimidokuproyloxy) sukcinimid] (Molecular Sciences Co.) bylo rozpuštěno v jednom ml deionizované vody. Byl po kapkách za stálého míchání přidán 40násobný molární přebytek sulfo-EMCS k ovčímu proti-myŠímu IgG, a poté byl roztok míchán dalších deset minut. Aktivovaný ovčí proti-myší IgG byl přečištěn a pufrován průchodem přes 10 ml gelovou filtrační kolonu (Pierce Presto Column, získána od Pierce Chemicals), která byla ekvilibrována 0,1 M NaPO4, 5 mM EDTA, pH 6,5, Frakce obsahující protilátku, identifikované absorbanci při 280 nm, byly spojeny a rozpuštěny do koncentrace přibližně 1 mg/ml, za použití 1,4 mg/OD coby extinkčního koeficientu. 40-násobný molární přebytek Αβ peptidů byl rozpuštěn v 20 ml 10 niM NaPOj. pH 8.0. s výjimkou A/733—42 peptidů. kterého 10 mg bylo nejdříve
4? rozpuštěno v 0,5 ml DMSO a pak rozpuštěno v 20 ml 10 inM NaPO4 pufru. Roztoky peptidů byly každý přidán do 10 ml aktivovaného ovčího proti-myšího IgG a míchány při laboratorní teplotě po dobu 4 hodin. Výsledné konjugáty byly zakoncentrovány na konečný objem menší než 10 ml za použití Amicon Centriprep kyvety a poté dialyzovány proti PBS. aby došlo k výměně pufru a byl odstraněn volný peptid. Konjugáty byly převedeny přes 0.22 μ-pór velikostní filtry su z důvodů sterilizace a pak rozděleny alikvotné do frakcí po 1 mg a uskladněny zmrzlé při -2(1 CC. Koncentrace konjugátů byly určeny za použití BCA proteinového testu (Pierce Chemicals) s koňským IgG pro standardní křivku.
-26CZ 303137 Β6
2. Příprava agregovaných A/7 peptidů - Humánní 1 až 40 (ANI 528: Californta Peptides lne., šarže ME0541). humánní 1 až 42 (ANI792; California Peptides lne., šarže ME0339 a ME0439), humánní 25 až 35 a hlodavci 1 až 42 (California Peptides lne., šarže X1E0218) peptidy byly čerstvě rozpuštěny pro přípravu každé ze sady injekcí z lyofilizovaný ch prášků, které byly skladovány vysušené při -20 °C. Pro tento účel byly 2 mg peptidu přidány do 0.9 ml deionizované vody a směs byla vortexována tak, aby se vytvořil relativně homogenní roztok nebo suspenze. Ze čtyř peptidů byl pouze ANI528 rozpustný v tomto kroku. 100 μΐ stejného množství 10X PBS (1X PBS: 0,1 5 Xí NaCI. 0,01 XI fosforečnan sodný. pH 7,5) pak by lo přidáno, což znamenalo, že se v tomto momentě začal ANI528 srážet. Suspenze byla opět vortexována a inkubována přes noc při 37 °C, aby byla následující den použita.
Příprava pBx6 proteinu: expresní plazmid kódující pBxó, fúzní protein obsahující sto aminokyselinovou N-koncovou vedoucí sekvencí bakteriofágové X1S-2 polymerázy následovanou aminokyselinami 592 až 695 APP (/7APP), byl zkonstruován tak, jak je popsáno v Oltersdorť et al..J. Biol. Chem. 265, 4492 až 4497 (1990). Plasmid byl transfekci vnesen do E. coli a po indukci promotoru byl exprimován protein. Bakterie byly lyžovány v 8M močovině a pBxó byl zvláště přečištěn metodou preparativní SDS PAGE. Frakce obsahující pBxó byly identifikovány metodou Western blot za použití králičí proti-pBx6 polyklonální protilátky, spojeny, zakoncentrovány za použití Amicon Centriprep kyvety a dialyzovány proti PBS. Čistota přípravy vyhodnocená metodou SDS PAGE barvenou látkou Coomassie Blue byla přibližně 5 až 10%.
B. Výsledky a diskuse
1. Plán studie - Sto samčích a samičích, devět až jedenáct měsíců starých heterozygótních PDAPP transgenních myší bylo získáno z Charles River Laboratory a Taconic Laboratory. Myši byly rozděleny do deseti skupin, aby byly imunizovány rozdílnými oblastmi A/7 peptidu nebo APP, kombinovanými s Freundovou pomocnou látkou. Zvířata byly rozdělena tak, aby se shodoval rod. věk, původ a zdroj zvířat uvnitř skupiny tak těsně, jak jen to bude možné. Imunogeny zahrnovaly čtyři A/7 peptidy odvozené od humánních sekvencí. 1 až 5, 1 až 12, 13 až 28 a 33 až 42, každý spojeny z ovčím proti-myším IgG; čtyři agregované A/7 peptidy, humánní 1 až 40 (ANI528), humánní 1 až 42 (ANI 792), humánní 25 až 35 a hlodavci I až 42; a fúzní polypeptid, označený jako pBxó, obsahující APP aminokyselinové zbytky 592 až 695. Deset skupin bylo imunizováno PBS kombinovaným s pomocnou látkou jako kontrola.
Pro každou imunizaci bylo emulzifíkováno s Freundovou pomocnou látkou (CFA) v poměru 1:1 (V/V) 100 pg každého A/7 peptidu v 200 μΙ PBS nebo 200 pg APP odvozeného od pBxó ve stejném objemu PBS nebo PBS samotné, do konečného objemu 400 μΐ pro první imunizaci, což bylo následováno podporou stejného množství imunogenu v nekompletní Freundově pomocné látce (IFA) pro následné čtyři dávky a s PBS pro konečnou dávku, imunizace byty podávány intrapcritoneálně v dvoutýdenním režimu pro první tři dávky, a pak v měsíčním režimu. Zvířatům by la odebírána krev čtyři až sedm dní po každé imunizaci, což bylo zahájeno po druhé dávce, aby mohly být změřeny koncentrace protilátky. Zvířata byla utracena přibližně jeden týden po poslední dávce.
2. Hladiny Αβ peptidu a APP v mozku - Po přibližně čtyřech měsících imunizace s různými ty py A/7 peptidů nebo deriváty APP byly odebrány mozky ze zvířat prostoupených roztokem NaCI. Jedna heniisféra byla připravena pro imunohistochemickou analýzu a druhá byla použita pro kvantifikaci hladin Αβ peptidu a APP. Pro měření koncentrací různých forem beta am v klidového peptidu a amyloidního prekurzorového proteinu byla heniisféra rozpitvána a homogenáty hipokampu. kortikalu a ecrebrálních oblastí byly připraveny v 5M guanidinu. Pak byly rozpuštěny a hladina amy loidu nebo APP byla kvantifikována porovnáním se sérií rozpuštěných standardů Αβ peptidu nebo APP o známých koncentracích metodou ELIS A.
Střední koncentrace celkového Αβ peptidu pro kontrolní skupinu imunizovanou PBS byla 5,8krát vyšší v hipokampu. než v kortexu (střední hodnota 24,318 ng/g hipokampáíní tkáně v porovnání k 4.221 ng/g v kortexu). Střední hladina v cerebelu pro kontrolní skupinu (23,4 ng/g tkáně) byla přibližně 1000—krát nižší než v hipokampu. Tyto hladiny jsou podobné těm. které jsme dříve uvedli pro heterozygotní PDAPP transgenní myši tohoto věku (Johnson-Woods et al., 1997. výše).
Pro korte.x, měl podsoubor léčených skupin střední celkové hladiny Αβ peptidu a A/31-42, které se významně lišily od těch z kontrolní skupiny (p < 0.05), a od těch zvířat, která obdržela ANI792, hlodavci A/71-42 nebo A/?l-5 peptidové konjugáty, jak je ukázáno na obrázku 11. Střední hladiny celkového Αβ peptidu byly redukovány na 75, 79 a 61 %. respektive, v porovnání s kontrolou pro tyto léčené skupiny. Nebyly zde rozeznatelné korelace mezi koncentracemi Αβ~ specifieké protilátky a hladinami Αβ peptidu v kortikální oblasti mozku pro jakékoliv skupiny.
V Iii pokání pu nebylo střední snížení celkového Αβ peptidu spojené s ANI 792 léčbou (46%, p = 0,0543) tak velké, jako bylo pozorováno v kortexu (75%, p = 0.0021).
Nicméně velikost redukce byla mnohem větší v hipokampu než v kortexu, konečná redukce 11,186 ng/g tkáně v hipokampu proti 3,171 ng/g tkáně v kortexu. Pro skupiny zvířat, které obdržely hlodavci A/31-42 nebo A/řl-5 byly střední celkové hladiny Αβ peptidu sníženy na 36 a 26 % respektive. Nicméně vzhledem k malé velikosti skupiny a vysoké variabilitě hladin amyloidového peptidu od zvířete ke zvířeti uvnitř obou skupin nebyla tato snížení významná. Když byly měřeny hladiny A/?,l-42 v hipokampu, žádná snížení léčbou indukovaná nedosáhla významnosti. Tudíž z důvodu mešní Αβ peptidové zátěže v kortexu jsou změny v této oblasti mnohem citlivějším indikátorem léčebných účinků. Změny v hladinách Αβ peptidu měřené metodou ELISA v kortexu jsou podobné, ale ne identické, výsledkům z imunohistochemické analýzy (viz. níže).
Celkové množství Αβ peptidu bylo měřeno také v cerebelu, oblasti obvykle nepostižené při patologii Alzheimerovy choroby. Žádná střední hodnota koncentrací A/? peptidu v jakékoliv skupině imunizované různými Αβ peptidy nebo APP deriváty se nelišila od té, která byla zjištěna u kontrolní skupiny v této oblasti mozku. Tento výsledek naznačuje, že nepatologické hladiny A/?peptidu nejsou léčbou postiženy.
Koncentrace APP byla také určena metodou ELISA v kortexu a cerebelu u léčených a kontrolních myší. Dva odlišné APP testy byly použity. První, označený jako ΑΡΡ-α/FL, rozeznává oba APP-alfa (a, vypouštěnou formu APP, která byla štěpena uvnitř Αβ sekvence) a celodéfkově formy (FL) APP, zatímco druhý rozeznává pouze APP-a. Oproti s léčbou spojenému úbytku Αβ peptidu v podsouboru léčených skupin byly hladiny APP nezměněny u všech léčených v porovnání s kontrolními zvířaty. Tyto výsledky naznačují, že imunizace Αβ peptidy nezmenšují APP; spíše je léčebný účinek specifický pro Αβ peptid.
Na závěr, celkové hladiny Αβ peptidu a A/?I—42 byly významně sníženy v kortexu léčbou ANI792, hlodavčím Λ//1—12 nebo A/?l—5 konjugátem. V hipokampu byl celkový Αβ peptid významně snížen jen léčbou ANI 792. Žádné jiné změny v hladinách Αβ peptidu nebo APP spojené s léčbou v hipokampu. kortikální nebo eerebrální oblasti nebyly významné.
3. 1 listochemieké analýzy - Mozky z podsouboru šesti skupin byly připraveny pro imunohistochemické analýzy, tří skupin imunizovaný ch Αβ peptidovými konjugáty Αβ\- 5, A//I-I2 a Λ//13-28; dvou skupin imunizovaných celodélkovými Αβ agregáty ΑΝ 1 792 a ANI 528 a PBSléčené kontrolní skupiny. Výsledky obrazové analýzy amyloidní zátěže v mozkových sekcích z těchto skupin jsou uvedeny na obrázku 12. Byla zde významná sníženi amyloidní zátěže \ kortikálních oblastech u tří z léčených skupin v porovnání s kontrolními zvířaty. Největší snížení amyloidní zátěže bylo pozorováno ve skupině, která obdržela ANI792. kde byla průměrná
-28CZ 303137 B6 hodnota snížena o 97 % (p = 0.001). Významná snížení byla také pozorována u zvířat léčených AN 1528 (95% p - 0.005) a A/7I-5 peptídovým konjugátem (67%. p = 0,02).
Výsledky obdržené kvantifikaci celkového množství A/? peptidu nebo A/71-42 metodou ELISA a amyloidní zátěže metodou obrazové analýzy se v některém parametru liší. Léčení ANI528 mělo významný vliv na hladinu kortikální amyloidní zátěže, když bylo měřeno kvantitativní obrazovou analýzou, ale ne na koncentraci celkového Αβ peptidu ve stejné oblasti, když bylo měřeno metodou ELISA. Rozdíl mezi těmito dvěma výsledky je pravděpodobně z důvodu specifik těchto testů. Obrazová analýza měří pouze nerozpustný Αβ peptid agregovaný do plaků. Naopak metoda
ELISA měří všechny formy Αβ peptidu, obě, rozpustnou i nerozpustnou, monomemí i agregovanou. Protože patologie choroby je považována za spojenou s nerozpustnou formou Αβ peptidu asociovanou do plaků, může technika obrazové analýzy mít větší senzitivitu odkryt léčebné účinky. Nicméně, protože metoda ELISA je mnohem ry chlejším a jednodušším testem, je velmi užitečná pro účely screcningu. Navíc může odkrýt to, že snížení hladiny Αβ peptidu spojené is s léčbou je větší pro Αβ peptid asociovaný s plaky než pro celkové Αβ peptid. Pro určení, zda A/?-specifické protilátky vyvolané imunizací u léčených zvířat reagovaly s amyloidem uloženým v mozku, byl podsoubor sekcí z léčených zvířat a kontrolních myší podroben reakci s protilátkou specifickou pro myší IgG. Oproti PBS skupině, byly plaky obsahující Αβ peptid pokryty endogenním IgG u zvířat, která byla imunizována Αβ peptidovými konjugáty Αβ\-5, A/71-12 a co A/713-28, a celodélkovými Αβ agregáty AN1792 a AN1528. Mozky ze zvířat imunizovaných jinými Αβ peptidy nebo APP peptidem pBx6 nebyly tímto testem analyzovány.
4. Měření koncentrací protilátky - Myším byla odebrána krev čtyři až sedm dní po každé imunizaci, což bylo zahájeno druhou imunizací, celkem pět odběrů. Koncentrace protilátky byly měřeny jako Λ/71—42vázající protilátka za použití sendvičové metody ELISA s plastovými násobnými miskami pokrytými A/71-42. Jakje znázorněno na obrázku 13, píkové koncentrace protilátek byly vyvolány po čtvrté dávce pro ty čtyři vakcíny, které vyvolaly nejvyšší koncentrace ΑΝ 1792-specifických protilátek: ANI792 (pík GMT: 94647), ANI528 (pík GMT: 88231), A/7112 konjugát (pík GMT: 47216) a hlodavci A/71 —42 (pík GMT: 10766). Koncentrace pro tylo sku30 piny trochu poklesly po páté a šesté dávce. Pro zbývajících šest imunogenů byly píkové koncentrace dosaženy po páté a šesté dávce a byly mnohem nižší velikosti, než ty ze čtyř vyšších koncentračních skupin: A/?l—5 konjugát (pík GMT: 2356), pBx6 (pík GMT: 1986), A/713-28 konjugát (pík GMT: 1183), A/733—i2 konjugát (pík GMT: 658), A/725-35 (pík GMT: 125). Koncentrace protilátky byly také měřeny proti homologním peptídům za použití stejné sendvičové rozmě35 ru metody ELISA pro podsoubor imunogenů, těch skupin imunizovaných A/71—5, A/713-28, A/S5-35, z\/733-42 nebo hlodavčím A/71-42. Tyto koncentrace byly přibližně stejné, jako ty měřené proti A/71—42, kromě té pro hlodavci A//f—42 imunogen. v jehož případě koncentrace protilátky proti homolognímu imunogenu byly přibližně dvakrát vyšší. Velikost koncentrace ΑΝ 1792-specifické protilátky u jednotlivých zvířat nebo průměrné hodnoty u léčených skupin nekorelovaly s účinností změřenou jako snížení Αβ peptidu v kortexu.
5. Lvmfoprol iterativní odpovědi - A/?-závislá lymfoproliferace byla měřena za použití buněk sleziny, které byly odebrány přibližně jeden týden po poslední, šesté, imunizaci. Čerstvě odebrané buňky. 10' na jehlu, byly kultivovány po dobu 5 dnů v přítomnosti A/71 -10 o koncentraci
5 μΜ. z důvodů stimulace. Buňky z podsouboru sedmi z deseti skupin byly také kultivovány v přítomnosti reverzního peptidu. A/240-1. Jako pozitivní kontrola byly další buňky kultivovány s T buněčným mitogenem. PHA, a jako negativní kontrola byly buňky kultivovány bez přidaného peptidu. Lymfocyty od většiny zvířat prol iterovaly jako odpověď na PHA. Nebyly zde žádné významné odpovědi na A/740-1 reverzní peptid. Buňky ze zv ířat imunizovaných většími agrego50 vánými peptidy, ΑΝ 1 792. hlodavčím A/71-42 a ΑΝ 1 528 proltferovaly masivně, když byly stimulovány A/71-40. s vyšším cpm u příjemců ANI 792. Jedno zvíře v každé skupině imunizované konjugátem A/71-12. konjugátem A/713-28 a A/725-35 proliterovalo v odpověď na A/71-40. l·
-29 CZ 303137 B6 zbývajících skupin, které obdržely konjugát A/?l-5. konjugát A//33—12. pBxó nebo PBS. nebylo žádné zvíře s A/3-stimulovanou odpovědi. Tyto výsledky jsou shrnuty v tabulce 5 dole.
i-- I Tabulka 5 j
imunogen konjugát Αβ aminokyseliny odpovědi j
A/íl-5 i ano i 5-mer 0/7
A/íl-12 i ano 12-mer 1/8 (
A/Í13-28 ano : í 6-mer 1/9
Α/Ώ5-35 11-mer 1/9
Λ/83-42 : ano í 10-mer 0/10
A/?l -40 I 1 40-mer 5/8
A/íl-42 42-mer 9/9
r A/řl-42 42-mer 8/8
pBxó j 0/8
PBS ’ 0-iner 0/8
Tyto výsledky ukazují, že ANI792 a ANI528 stimulují silné odpovědi T-buněk, pravděpodobněji CD4 fenotyp. Absence A/Tspecifické T-buněčné odpovědi u zvířat imunizovaných A/íl-5 není překvapující, protože peptidové epitopy rozpoznávané CD4 T-buňkami jsou obvykle okolo délky 15 aminokyselin, ačkoliv kratší peptidy občas mohou působit s menší účinností. Tudíž io většina pomocných T-buněěných epitopů pro čtyři konjugované peptidy je pravděpodobně umístěna na IgG konjugovaném partnerovi, a ne v oblasti Αβ peptidu. Tato hy potéza je podporována velmi nízkou příěinností proliferaěních odpovědí u zvířat v každé z těchto léčebných skupin.
Protože A/íl-5 konjugát byl účinný při významné redukci hladiny A/?peptidu v mozku, v zjevné nepřítomnosti A/í-specífických T-buněk, jeví se být klíčovým efektorem imunitní odpovědi indukované imunizací s tímto peptidem protilátka.
Nedostatek T-buněk a nízká odpověd1 protilátky u fúzního proteinu pBx6, které zahrnuje aminokyseliny 592 až 695 obsahující všechny Αβ zbytky, může být z důvodu slabé imunogenicity zvláště tohoto přípravku. Slabé imunogenicita agregátu Αβ15-35 je pravděpodobně z toho důvo20 du. že peptid je příliš malý, aby pravděpodobně obsahoval dobrý T-buněěný epitop a tím pomohl k indukci protilátkové odpovědi. Pokud by tento peptid byl spojen s nosičovým proteinem, byl by pravděpodobně více imunogenní.
Příklad 5 - Příprava póly klonálních protilátek pro pasivní ochranu netransgenníeli myši je imunizováno Αβ peptidem nebo jiným imunogenem, volitelně spolu s pomocnou látkou, a je utraceno po 4 až 5 měsících. Krev je sloučena z imunizovaných my ší. Volitelné je IgG oddělen od ostatních složek krve. Protilátka specifická pro imunogen muže být su zvlášť přečištěna afinitní chromatografii. Je získáno v průměrů okolo 0,5 až 1 mg imunogenspecifické protilátky z jedné myši, což poskytuje celkové množství 5 až 10 mg.
-30CZ 303137 Bó
Příklad 6 - Pasivní imunizace s protilátkami k \βpeptidu
Skupiny 7 až 9 měsíců starých PDAPP myší jsou každý injikována 0.5 mg poly klonální proti-A/7 protilátkou v PBS nebo specifickými proti-A/7 monoklonáhiími protilátkami v PBS. jak je uká5 záno níže. Všechny proti látkové přípravky jsou přečištěny, aby měly nízké hladiny endotoxinu. Monoklonální protilátky mohou být připraveny proti fragmentu injikaci tohoto fragmentu nebo delší formy A/? peptidu do myši. čímž jsou připraveny hybridomy a tyto hybridomy jsou testovány na protilátku, která se specificky váže na požadov aný fragment λβ peptidu. bez jakéhokoliv vázání se na jiné nepřesahující fragmenty A/? peptidu.
io
Tabulka 6
proti kli ka epitop
2H3 A/7 1-12
!0D5 A/? 1-12
200 A/? 13-28
21F12 A/? 33-42
myší polyklonální proti-humanni A/342 proti-agregovaný A/34-2
Myši jsou injikovány i.p. jak je potřeba po dobu přes 4 měsíce, aby se udržovala cirkulující koncentrace protilátky, měřená metodou ELISA titr, větší než 1/1000 a definovaná metodou ELISA vztaženou k A/74 2 nebo jinému imunogenu. Koncentrace jsou monitorovány tak, jak je popsáno výše, a myši jsou utráceny konci 4 měsíců injikace.
Histochemie, hladiny \β peptidu a toxikologie jsou určována po smrti. Na každou skupinu připadá deset myší.
Příklad 7 - Porovnání různých pomocných látek
Tyto příklady porovnávají CFA, síran hlinito-draselný, emulzi olej-ve-vodč a MPL pro kapacitu stimulovat imunitní odpověď.
.to A. Materiál a metody
I. Plán studie - Jedno sto samiček, šest týdnů starých morčat kmene Hartley. získaných od Elin Hill. bylo rozděleno do deseti skupin, aby bylo imunizováno ANI792 nebo jeho deriváty s palmitoyleiTi. a které byly kombinovány s různými pomocnými látkami. Sedm skupin obdrželo injekce ANI 792 (33 pg pokud není určeno jinak) kombinovaným s a) PBS, b) Frcundovou pomocnou látkou, c) MPL. d) squalenem, e) MPL/skvalen. f) malou dávkou síranu hlinito-drasehiého nebo g) vysokou dávkou síranu hlinito-draselného (300 pg ANI 792). Dvě skupiny obdržely injekce derivátu AN 1792 (33 pg) s palmitoylem kombinované s a) PBS nebo b) squalenem. Nakonec desátá skupina obdržela samotné PBS bez antigenů nebo dodatečné pomocné látky. Pro •to skupinu, která obdržela Freundovu pomocnou látku, byla první dávka emulzifíkována s CLA a zbývající Čtyři dávky s IFA. Antigen byl podáván v dávce 33 pg pro všechny skupiny kromě skupiny s vysokou dávkou síranu hlinito-draselného, která obdržela 300 pg ANI 792. Injekce byly podávány intraperitoneálně pro CFA/IFA a intramuskulámě do kvadricepsu zadní končeti-31 CZ 303137 B6 ny. alternativ ně na pravou a levou stranu, pro všechny ostatní skupiny. První tři dávky bylv podávány v dvoutýdenním programu, což následovaly dvě dávky v měsíčním intervalu. Krev byla odebrána šest nebo sedm dní po každé imunizaci, což bylo zahájeno po druhé dávce, pro měření koncentrací protilátky.
2. Příprava imunogenu - Dva mg A/342 (Calitornia Peptide. šarže ME0339) byly přidány do 0.9 ml deíonizované vody a směs byla vortexována. aby se vytvořila jednotná suspenze. Byl přidán 100 pl alikvot Ι0Χ PBS (IX PBS. 0.15 M NaCl. 0.01 M fosforečnan sodný. pH 7,5). Suspenze byla znovu vortexována a ínkubována přes noc při 37 °C a použita následující den. NepouKi žitý A/342 byl skladován se sušidlem,jako Ivotllizovaný prášek při -20 CC.
Palmitoylovaný derivát ANI792 byl připraven spojením anhydridu kyseliny palmitové, kletý byl rozpuštěný v dimethylformamidu, s koncovým aminokyselinovým zbytkem ANI792, čemuž předcházelo odstranění vzniklého peptidu z polymerního nosiče ky selinou fluorovodíkovou.
Pro přípravu dávkových vakcín s Freundovou pomocnou látkou (CFA) (skupina 2), bylo 33 pg ANI792 v 200 pl PBS emulzifikováno 1:1 (V/V) sCFA do konečného objemu 400 μΐ pro první imunizaci. Pro následující imunizace byl antigen podobně emulzifikován s nekompletní Freundovou pomocnou látkou (1FA).
Pro přípravu dávkových vakcín s MPL pro skupiny 5 a 8 byl přidán lyofilizovaný prášek (Ribi ImunoChem Research, lne., Hamilton, MT) do 0,2% vodného triethylaminu tak, aby konečná koncentrace byla 1 mg/ml a směs byla vortexována. Směs byla zahřívána od 65 do 70 °C po dobu 30 sekund, aby vznikla nepatrně neprůhledná jednotná suspenze micek Roztok byl čerstvě při25 praven pro každou sadu injekcí. Pro každou injekci ve skupině 5 bylo 33 pg ANI792 v 16,5 pl PBS, 50 pg MPL (50 pi) a 162 μΐ PBS smíšeno v borosilikátové kývete těsně před použitím.
Pro přípravu dávkových vakcín s malou emulzí olej-ve-vodě bylo přidáno ANI792 v PBS do 5% squalenu, 0,5% Tweenu 80, 0,5% Spánu 85 v PBS, aby bylo dosaženo konečné koncentrace v jednotlivé dávce 33 pg ANI 792 v 250 μΐ (skupina 6). Směs byla emulzifikována průchodem přes dvoukomorové ruční zařízení 15 až 20 krát dokud to nevypadalo, že kapky emulze mají přibližně stejný průměr k 1,0 pm průměru standardní latexové kuličky, když byly pozorovány pod mikroskopem. Výsledná suspenze byla opalescentní, mléčně bílá. Emulze byly čerstvě připravené pro každou sérii injekcí. Pro skupinu 8 bylo MPL v 0,2% triethylaminu přidáno v kon35 centraci 50 pg na dávku k skvalenu a detergentní směsi pro emulzifikaci, jak bylo poznamenáno výše. Pro derivát palmitoylu (skupina 7) bylo 33 pg paImítoyl-NH-A/íl-42 na dávku přidáno k skvalenu a vortexováno. Tween 80 a Spán 85 byly pak přidány během vortexování. Tato směs byla přidána k PBS tak, aby bylo dosaženo konečné koncentrace 5% skvalenu, 0,5% Tweenu 80, 0,5% Spánu 85 a pak byla směs emulzifikována. jak bylo poznamenáno výše.
Pro přípravu dávkových vakcín se síranem hIinito-draselným (skupiny 9 a 10), bylo ANI792 v PBS přidáno k Alhydrogelu (gel hydroxidu hlinitého, Accurate, Westbury, NY) tak, aby byla dosažena koncentrace 33 pg (nízká dávka, skupina 9) nebo 300 pg (vysoká dávka, skupina 10) ANI792 na 5 mg síranu hliníto-draselného v konečném objemu dávky, v 250 pl. Suspenze byla jemně míchána po dobu 4 hodin při pokojové teplotě.
3. Měření koncentrací protilátky - morčatům byla odebrána krev šest až sedm dní po imunizaci. což bvlo zahájeno po druhé imunizaci, celkem byly provedeny čtyři odběry. Koncentrace protilátkv proti A/Ll 2 bv Iv měřenv metodou ELISA, jak bvlo popsáno v obecných materiálech a
5i> metodách.
4. Příprava tkáně - Po přibližně 14 týdnech byl všem morčatům aplikován C()>. Cerebrospinální kapalina by la sloučena a mozk> byly odebrány a tři mozkově oblasti (hipokampus, kor- 39 CZ 303137 B6 tex a cerebelum) byly odpitvány a použity pro měření koncentrace celkového A/?peptidů za použití metody ELISA.
B. Výsledky
1. Proti látkové odpovědi - Bylo nalezeno široké rozpětí v síle různých pomocných látek, když byla měřena jako proti látková odpověď na ANI 792 po imunizaci. Jak je ukázáno na obrázku 14. když bylo ANI792 podáváno v PBS, nebyla detekována žádná protilátka po dvou nebo třech imunizacích a byly zaznamenány bezvýznamné odpovědi po čtvrté a páté dávce s geometrickým průměrem koncentrací (GMT) pouze okolo 45. Emulze olej-ve-vodě indukovala mírné koncentrace po třetí dávce (GMT 255). které se udržely po Čtvrté dávce (GMT 301) a poklesly po poslední dávce (GMT 54). Byla zde jasná antigenní dávková odpověď pro ANI792 navázaný na síran hlinito—draselný, a který byl pro 300 pg více imunogenní ve všech časových bodech než pro 33 pg. U píku protilátkové odpovědi po Čtvrté imunizaci byl rozdíl mezí dvěmi dávkami 43% s geometrickými průměry koncentrací 1940 (33 pG) a 3400 (300 pg). Protilátková odpověď na 33 pg ANI792 s MPL byla velmi podobná té, kterou vyvolala téměř desetkrát vyšší dávka antigenu (300 pg) vázaného na síran hlinito-draselný. Přídavek MPL k emulzi olej-ve-vodě snížil sílu vakcíny v porovnání s tou, kde bylo MPL jako jediná pomocná látka, o tolik, jak 75 %. Paimitoylované deriváty ANI792 byly kompletně neimunogenní, když byly podávány v PBS a vykazovaly mírné koncentrace, když byly v přítomnosti emulze olej ve -vodě s geometrickými průměry koncentrací 340 a 105 v třetím a čtvrtém odběru krve. Nejvyšší koncentrace protilátky byly vyvolány s Freundovou pomocnou látkou s pikem GMT okolo 87000, hodnotou téměř 30krát větší, než geometrické průměry koncentrací další dvou silných vakcín, MPL a vysoké dávky ΑΝ 1792/síran hlinito-draselný.
Nejslibnějšími pomocnými látkami identifikovanými v této studii jsou MPL a síran hlinito-draselný. Z těchto dvou se MPL jeví vhodnější, protože byla nezbytná desetkrát nižší dávka antigenu pro vyvolání stejné protilátkové odpovědi, než jaká byla obsažena v síranu hlinito-draselném. Odpověď může být zvýšena zvýšením dávky antigenu a/nebo pomocné látky a také optimalizací imunizaěního programu. Emulze olej-ve-vodě byla velmi slabou pomocnou látkou pro ANI792 a přidání emulze olej-ve-vodě k MPL pomocné látce zmenšilo hlavní aktivitu pomocné látky MPL samotné.
2. Hladiny A/?peptidů v mozku - Po přibližně 14 týdnech byla morčata hluboce anestetikována, cerebrospinální kapalina (CSF) byla odebrána a mozky byly zvířatům vyříznuty v podsouborech podle skupin, ty které byly imunizovány s Freundovou pomocnou látkou (skupina 2), s MPL (skupina 5). s vysokou dávkou síranu hlinito-draselného. 300 pg ANI792 (skupina 10) a PBS imunizovaná kontrolní skupina (skupina 3). Pro měření hladiny A/?peptídu byla jedna hemisféra od pitvána a homogenáty h i pokam palních, kortikálních a cerebe lámích oblastí byly připraveny v 5M guaninu. Tyto vzorky byly rozpuštěny a kvantifikovány porovnáním se sérií rozpuštěných standardů Αβ proteinu o známých koncentrací metodou ELISA. Hladiny Αβ proteinu v hipokampu, kortexu a cerebelu byly velmi podobné pro všechny čtyři skupiny navzdory široké škále protilátkových odpovědí na Αβ peptid vyvolaných těmito vakcínami. Průměrné hladiny Αβ peptídu okolo 25 ngg tkáně byly změřeny v hipokampu, 21 ng/g v kortexu a 12 ng/g v cerebelu. Tudíž přítomnost vysoké cirkulující koncentrace protilátky k Αβ peptidů po dobu tří měsíců u některých s těchto zvířat nezměnila celkové hladiny Αβ v jejich mozcích. Hladiny Αβ v CSF byly také docela podobné mezi skupinami. Snížení velkého účinku ANI792 imunizace na endogenní Αβ naznačuje, že imunitní odpověď je zaměřena na patologické formace Αβ.
Příklad 8 - Imunitní odpověď na různé pomocné látky u myší
Šest týdnu staré samičky Swiss Webster myší byly použity pro tuto studii, v každé skupině bylo 10 až 13 zvířat. Imunizace byly aplikovány v dne 0. 14, 28, 60. 90 a 20 a byly podávány pod- jj kožně \ dávkovém objemu 200 gl. PBS bylo použito jako pufr pro všechny přípravky. Zvířatům by ta odebrána krev sedm dní po každé imunizaci, což bylo zahájeno po druhé dávce, pro analýzu koncentrací protilátky metodou ELISA, Léčebný režim pro každou skupinu je shrnut v tabulce 7.
Tabulka 7
experimentální plán betablokove studie 010
skupina Ν’* pomocná látkab dávka antigen dávka (gg)
1 10 MPL 12,5 gg AN 1792 33
2 10 MPL. 33 Pg ANI 792 33
3 10 MPL 50 gg ANI 792 33
4 13 MPL 125 gg ANI 792 33
5 13 MPL 50 gg ANI 792 150
6 13 MPL 50 gg ANI 528 JJ
7 10 PBS ANI 792 33
8 10 PBS žádný
9 10 sk valen emulzifikovaný 5 % ANI 792 33 |
10 10 squalen přimíšený 5 % ANI 792 33
11 10 stran hlinito-draselný 2 mg ANI 792 33
l·2 13 MPL-stran hl in i to-draselnv 50 gg/2 mg ANI 792 33
13 10 QS2 1 5 gg ANI 792 33
14 10 QS2 1 Ϊ0 Hg ANI 792 33
15 10 QS21 25 gg ANI 792 33
16 13 QS2 i 25 gg ANI 792 150
17 13 QS2! 25 gg .ANI 528 33
IS 13 ' OS2 1 i-MPL 25 gg/50 gg AN 1792 33
19 13 1 1 i QS2 i - síran f i i i i n i: o-drasel r, v j 25 gg/2 mg 1 ANI 792 33
ni poznámky:
Počet myší v každé skupině na počátku experimentu.
Použité pomocné látky. Pufrem pro všechny tyto pomocné látky bylo PBS. L skupiny 8 něhy la použita žádná pomocná látka a žádný antigen.
- 34CZ 303137 B6
Metodou ELISA určené koncentrace protilátky proti A/342 u každé skupiny jsou uvedeny v tabulce 8 níže.
Tabulka 8
geometrický průměr koncentrací protilátky i
týden odběru krve
léčebna skupina 2,9 5.0 8,7 12,9 16,7
1 248 1797 2577 6180 4177
2 5 98 3114 3984 5287 6S78
3 1372 5000 7159 12333 12781
4 1278 20791 14368 20097 25631
5 3 288 26242 Í3229 9315 23742
6 ol 2536 2301 1442 4504
7 8 7 395 484 972 2149
8 25 i 25 25 25 25
9 25 183 744 952 1823
10 25 89 311 513 817
11 20 708 2618 2165 3666
12 |o§ 1·'— '—— — 1458 i 1079 612 797
13 í 88 433 566 1080 626
14 1 104 i 541 3247 1609 838
15 212 2630 2472 1224 1496
16 1S3 2616 6680 2085 1631
17 28 1 201 1 375 222 1540
18 3 1 699 15544 23095 6412 9059
19 ó3 243 554 299 ’4' j
io Tabulka ukazuje, že nejvyšší koncentrace byly získány u skupin 4. 5 a 18. v kterých byly pomocnými látkami 125 pg MPL. 50pgMPLaQS21 plus MPL.
Příklad 9 - Terapeutická účinnost různých pomocných látek
Studie terapeutické účinnosti byla prováděna na PDAPP transgenních myších se sadou pomocných látek vhodných pro použití u lidí. aby byla určena jejich schopnost způsobit imunitní odpověď na A/? peptid a indukovat imunitně-zprostředkovávané odstranění amy loidních sraženin z mozku.
2o
Sto osmdesát samečku a samiček. 7,5 až 8.5 měsíců starých heterozygotních PDAPP transgenních myší. bylo získáno z Charles River Laboratories. Myši byly rozděleny do devíti skupin.
-35 CZ 303137 B6 každá obsahující 15 až 23 zvířat, aby byl imunizovány ANI792 a ANI528 kombinovanými s různými pomocnými látkami. Zvířata byla rozdělena tak. aby se rovnal jejich rod, věk a původ zvířat uvnitř skupin tak těsně, jak jen to bylo možné. Pomocné látky zahrnovaly síran hlinito— draselný, MPL a QS21. každá kombinovaná s oběma antigeny. a Freundovou pomocnou látkou (FA) kombinovanou pouze s ANI792. Další skupina byla imunizována ANI792 v PBS pufru plus ochranným thimerosalem bez pomocné látky. Devátá skupina byla imunizována samotným PBS, jako negativní kontrola.
Příprava agregovaných A/? peptidu: humánní A//1—40 (ANI528; California Peptides Inc., Napa. CA; šarže ME0541) a humánní A/71—42 (ANI792; California Peptides inc., šarže ME0439) peptidy byl čerstvě rozpuštěny, pro přípravu každé sady injekcí, z lyofil izo váných prášku, které byly sušené skladovány při -20 °C. Pro tento účel byly 2 mg peptidu přidány k 0,9 ml deionizované vody a směs byla vortexována, aby vznikl relativně jednotný roztok nebo suspenze. ANI 528 byl rozpustný v tomto kroku, naopak ANI792 ne. 100 μΐ alikvot 10X PBS (IX PBS: 0,15 M NaCl. 0,01 M fosforečnan sodný. pH 7,5) byl pak přidán v tom bodě, kdy se ANI528 začat srážet. Suspenze byly opět vortexovány a inkubovány přes noc při 37 °C, aby byly použity následující den.
Pro přípravu dávkových vakcín se síranem hlinito-draselným (skupiny 1 a 5) byl Αβ peptid v PBS přidán k Alhydrogelu (dvouprocentní vodný gel hydroxidu hlinitého, Sargent, Inc., Clifton, NJ), aby byly dosaženy koncentrace 100 pg Αβ peptidu na 1 mg síranu hlinito-draselného. 10X PBS bylo přidáno, aby byl dosažen konečný objem dávky, 200 μΐ v IX PBS. Suspenze byla pak jemně míchána po dobu přibližně 4 hodin za pokojové teploty před vlastní injikaci.
Pro přípravu dávkových vakcín s MPL (skupiny 2 a 6) byt přidán lyofilizovaný prášek (Ribi ImunoChem Research, Inc., Hamilton, MT; šarže 67039-E0896B) do 0,2% vodného triethylaminu tak, aby konečná koncentrace byla 1 mg/ml, a pak byl vortexován. Směs byla zahřívána od 65 do 70 °C po dobu 30 sekund, aby se vytvořila slabě matná, jednotná suspenze micek Roztok byl skladován při 4 °C. Pro každou sadu injekcí bylo smíšeno 100 pg peptidu na dávku v 50 μΐ PBS, 50 pg MPL na dávku (50 pl) a 100 μΐ PBS na dávku, v borosilíkátové kývete těsně před použitím.
Pro přípravu dávkových vakcín s QS21 (skupiny 3 a 7) byl přidán lyofilizovaný prášek (Aquila, Framingham, MA; šarže A7018R) do PBS, pH 6,6 až 6,7 tak, aby konečná koncentrace byla mg/ml, a vortexován. Roztok byl skladován při -20 °C. Pro každou sadu injekcí bylo smíšeno 100 pg peptidu na dávku v 50 μΙ PBS, 25 pg QS21 na dávku v 25 pt PBS a 125 pt PBS na dávku, v borosilíkátové kývete těsně před použitím.
Pro přípravu dávkových vakcín s Freundovou pomocnou látkou (skupina 4) bylo 100 pg ANI792 v 200 pl PBS emulzifikováno 1:1 (V/V) s kompletní Freundovou pomocnou látkou (CFA) do konečného objemu 400 pl pro první imunizaci. Pro následující imunizace byl antigen podobně emulzifikován s nekompletní Freundovou pomocnou látkou (IFA). Pro vakcíny obsahující jako pomocné látky síran hlinito-draselný, MPL nebo QS21. bylo 100 pg ANI792 nebo ANI528 na dávku zkombinováno se síranem hlinito—d rase lným (1 mg na dávku) nebo s MPL (50 pg na dávku) nebo s QS21 (25 pg na dávku) do konečného objemu 200 pl PBS a podáváno podkožní inokulací na zádech mezi ramena. Pro skupinu, která obdržela FA. bylo 100 pg ANI 792 emulzifikováno 1:1 (V/V) s kompletní Freundovou pomocnou látkou (CFA) do konečného objemu 400 pl a podáváno intraperitoneálně u první imunizace, což následovalo, pro posílení, stejné množství imunogenu v nekompletní Freundově pomocné látce (IFA) v dalších pěti dávkách. Pro skupinu, která obdržela AN t 792 bez pomocné látky, bylo 10 pg AN1792 zkombinováno s 5 pg thiinerosalu do konečného objemu 50 pg PBS a podáváno podkožně. Devátá, kontrolní skupina obdržela pouze 200 pl PBS podávaného podkožně. Imunizace byly podávány v dvoutýdenním programu pro první tři dávky, a pak v měsíčním programu, potom tedy ve dnech 0, 16, 28, 56, 85 a 112. /vířatum byla odebírána krev šest až sedm dní po každé imunizaci, což bylo zahájeno po druhé dávce, aby mohly být měřeny koncentrace protilátky. Zvířata by la utracena přibližně jeden týden
-36CZ 303137 B6 po poslední dávce. Výsledky byly měřeny ELISA testem hladin A/? peptidů a APP v mozku a imunohistoehemickým určen ím přítomnosti ainyloidníeh plaku v mozkových oblastech. Kromě toho byly určeny koncentrace Α/λ-speeifické protilátky. A/3-závislé proliferační a cytokinin' odpovědi.
Tabulka 9 ukazuje, že nejvyšší koncentrace protilátky k A/71-42 byly vyvolány s FA a ANI792. koncentrace které měly pík po čtvrté imunizaci (pík GMT: 75386). a pak poklesly o 59% po poslední. Šesté imunizací. Píková průměrná koncentrace vyvolaná MPL s ANI 792 byla o 62 % nižší, než ta s FA (pík GMT: 28867) a byla také dosažena dříve v inuinizaěním schématu, po o třech dávkách, a poklesla o 28 % píkové hodnoty po šesté imunizaci. Píková průměrná koncentrace vyvolaná sQS21 kombinovaným s ANI792 (GMT: 151 1) byla přibližně 5—krát menší, než ta dosažená s MPL. Kromě toho kínetiky odpovědi byly pomalejší, protože by la nezbytná další imunizace, aby bylo dosaženo píkové odpovědi. Koncentrace vyvolané ANI792 vázaným na síran hlinito-draselný byly nepatrně větší než ty, které byly dosaženy s QS2I a kínetiky odpovědi byly mnohem rychlejší. Pro ANI792 dopravovaném v PBS s thimerosalem byly frekvence a velikost koncentrací stěží větší, než ty pro PBS samotné. Píkové koncentrace vyvolané MPL a ANI528 (pík GMT: 3099) byly přibližně 9-krát nižší než ty' s ANI792. ANI528 navázaný na síran hlinito-draselný byl velmi slabě imunogenní, s nízkými koncentracemi vyvolanými pouze u některých zvířat. Žádné protilátkové odpovědi nebyly zaznamenány u kontrolních zvířat imunio zovaných samotným PBS.
Tabulka 9
geometrický průměr koncentraci protilátky'1
| týden odběru krve
léčba 3,3 5,0 9,0 13,0 17,0
stran hlinito-draselný' 102 1081 2366 1083 572
ANI 792 (12,21 )'' (17/20) (21/21) (19/21) (18/21)
MPL/AM792 : 629 1 2S867 11242 5665 S204
(21 21) (21/21) í (21/21) (20/20) (20/20)
QS21/AN1792 30 227 327 1511 1188
(1/20) (10/19) (10/19) (17/18) (14/18)
CFA/ANI792 10076 61279 75386 41628 30574
(15,15) (15/15) (15/15) -1 (15/15) (15/15)
síran hlinito-draselný 25 53 39 , %7 31
ANI 528 (0/21) (1/21) (3/20) (1/20) (2/20) l
MPL/AN1528 184 2591 1653 1 156 3099
( 1521) i (20/21) (21/21) (20/20) (20/20)
QS21/AN1528 í ' -»o í 221 51 820 2994
(1.22) j (13/22) (4/22) (20/22) (21/22)
PBS plus Thimeiosal š [ 33 39 37 47
1 i (Od 6) ; (2/16) (4/16) (3/16) (4/16)
PBS ' . - ------ j % i 25 25 25 25 ]
s (0/16) i (0/1% (0/12) 1 (0-4 6) |
poznámky:
L' Geometrický průměr koncentrací protilátky měřený proti A/?l—12. b Počet respondentů na skupinu
Výsledky léčby s ANI 792 nebo ANI 528 s různými pomocný mt látkami nebo tliimerosalem kortikální amyloidní zátěže u 12 měsíců starých myší určené metodou ELISA jsou ukázány na obrázku 15. U PBS kontrolních PDAPP myší byla střední hladina celkového Αβ peptidu v kortexu ve 12 měsíci 1817 ng/g. Pozoruhodně snížené hladiny Αβ peptidu by ly pozorovány u myší léčených ΑΝ 1792 plus CFA/IFA, ΑΝ 1792 plus síran hlinito-draselný, ΑΝ 1 792 plus MPL a io QS2I plus AN1792. Snížení dosáhlo statistické významnosti (p < 0.05) pouze pro AN1792 plus CFA/IFA. Nicméně jak je ukázáno v příkladech I a 3, účinky imunizace na snížení hladin Αβ peptidu začínají být podstatně větší u 15 měsíců a 18 měsíců starých myší. Tudíž je předpokládáno, že nejméně prostředky ANI792 plus síran hlinito-draselný, ANI792 plus MPL a ANI792 plus QS21 budou dosahovat statistické významnosti v léčbě u starších myší. Naopak ANI792 i? plus ochranná látka thimerosal vykázaly střední hladinu Αβ peptidu přibližně stejnou, jako v případě PBS léčených myší. Podobné výsledky byly získány, když byly porovnány kortikální hladiny A/342. Střední hladina A/34 2 u PBS kontrol byla 1624 ng/g. Pozoruhodně snížené střední hladiny 403, 1149, 620 a 714 byly pozorovány u myší léčených ANI 792 plus CFA/IFA, ANI792 plus síran hlinito-draselný, ANI792 plus MPL a ANI792 plus QS21 respektive, se snížením dosahujícím statistické významnosti (p = 0,05) pro ANI792 CFA/IFA léčenou skupinu. Střední hladina u ΑΝ 1792-thimerosal léčených myší byla 1619 ng/g.
Příklad 10 - Analýzy toxicity 25
Tkáně byly sloučeny pro histopatologický test po ukončení studií popsaných v příkladech 2, 3 a 7. Navíc byly provedeny hematologický test a test klinické chemie u posledních krevních vzorků z příkladů 3 a 7. Většina hlavních orgánů byla vyhodnocena, včetně mozku, plicního traktu, lymfatických uzlin, gastrointestinálního traktu, jater, ledvin, žláz vylučujících adrenalin a gonád.
3o Ačkoliv byly pozorovány sporadická poškození u studovaných zvířat, nebyly zde zřetelné rozdíly, buď u ovlivňovaných tkání nebo silná poškození, mezi ANI792 léčenými a neléčenými zvířaty. Nebylo zde žádné unikátní histopatologické poškození zaznamenané u ΑΝ 1792-imunizovaných zvířat v porovnání s PBS-léčenými nebo neléčenými zvířaty. Nebyly také žádné rozdíly v testovací profilu klinické chemie mezi skupinami pomocných látek a PBS léčenými zvířaty v příkladu 7. Ačkoliv zde byla významná zvýšení v řadě hematologických parametrů mezi zvířaty léčenými ANI792 a Freundovou pomocnou látkou v příkladu 7 vzhledem k PBS léčeným zvířatům, tyto typy účinků jsou od léčby Freundovou pomocnou látkou očekávány a doprovázejí zánětlivou chorobu peritonea a neindikují jakékoliv nepříznivé účinky léčby ANI 792. Ačkoliv ne jako součást toxikologického testu, byla patologie mozku PDAPP myšího mozku extensivně
4o zkoušena jako část účinných koncových bodů. Nebyl zaznamenán žádný znak léčby, který by měl nepříznivý vliv na morfologii mozku u jakékoliv studie. Tyto výsledky naznačují, že ΑΝ 1 792 léčba je dobře tolerována a přinejmenším skutečně prostá vedlejších příznaků.
Příklad I 1 - Prevence a léčba subjektů
Pokus s jedno-dávkovou fází I je prováděn, aby byla určena bezpečnost. Terapeutické činidlo je podáváno ve zvyšujících se dávkách různým pacientům, začínající od okolo 0.01, hladiny předpokládané účinnosti, a zvyšující faktorem 3 do hladiny přibližně 10—krát vyšší než je dosažena
5u účinná mvší dáv ka.
Pokus fáze li je prováděn, aby byla určena terapeutická účinnost. Jsou vybráni pacienti s časnou až střední Alzheimerovou chorobou definovanou podle kritéria Alzheimer s Disease and Related Disorders Association (ADRDA) pro pravděpodobnou Alzheimerovu chorobu. Vhodní pacienti
-38 CZ 303137 Β6 spadají do Škály 12 až 26 podle Mini-Mental State Exam (MMSE). Jinými selekčními kritérii jsou ta. že u pacientů je pravděpodobnost přežít délku studie a snížení komplikujících problému takových, jako je použití asociovaných léků. které mohou interferovat. Základní hodnoty určující pacientovo chování jsou získávány za použití klasických psychometrických měření takových, jako jsou MMSE a ADAS, která jsou vyčerpávající škálou pro určení stavu pacientu s Alzheimerovou chorobou a chováním. Tyto psychometrické škály zajišťuji měření progrese stavu Alzheimerovy choroby. Vhodné kvalitativní životní škály mohou také být použity pro monitorování léčby. Progrese choroby může být také monitorována metodou MRI. Krevní obraz pacienta může také být monitorován včetně testů na imunogen-specifické protilátky a odpovědi T-buněk.
Po změření základních hodnot je u pacientů zahájena léčba. Jsou náhodně rozděleni a léčení bud' terapeutickým činidlem, nebo placebo léčbou podle náhodného výběru. Pacienti jsou monitorováni přinejmenším každých šest měsíců. Účinnost je určena významným snížením progrese u léčené skupiny v porovnání s placebo skupinou.
Druhý pokus fáze II je proveden tak, aby určil konverzi pacientů ze stavu časné ztráty paměti nezaviněného Alzheimerovou chorobou, někdy odkazující k s věkem souvisejícímu poškození paměti (AAMI), do stavu pravděpodobné Alzheimerovy choroby tak definované, jak by lo popsáno podle ADRDA kritéria. Pacienti s vy sokým rizikem konverze na Alzheimerovu chorobu jsou vybráni z neklinické populace testováním populací odkazujících se k znakům časné ztráty paměti nebo jiným obtížím spojeným se symptomatologií pre-AIzhei měrový choroby, populacím s rodinnou historií Alzheimerovy choroby, s genetickými rizikovými faktory, podle věku, pohlaví a jiných rysů zjištěných předpovědět vysoké riziko Alzheimerovy choroby. Základní hodnoty vhodných měřeních zahrnujících MMSE a ADAS společně s dalšími jinými měřeními vytvořenými pro určení normálnější populace jsou sebrány. Tyto populace pacientů jsou rozděleny do vhodných skupin s placebo léčbou porovnávanou proti dávkovým alternativám s činidlem. Tyto populace pacientů následují v intervalech okolo šesti měsíců a konečným bodem pro každého pacienta je zdali ano nebo ne, se u něho či ní na konci pozorování vyvine pravděpodobná Alzheimerova choroba tak, jak je definována kritériem ADRDA.
Příklad 12 - Obecné materiály a metody
1. Měření koncentrací protilátky - Myším byla odebírána krev tak. že jim byl udělán malý řez v ocasní žíle a bylo odebráno přibližně 200 μΐ krve do mikrocentrifugační kyvety. Morčatům byla odebírána krev tak, že jim byla nejdříve vyholena zadní pánevní oblast a za použití jehly rozměru 18 byla napíchnuta metatarsální žíla a krev byla odebrána do mikrocentrifugační kyvety. Krev by la ponechána se srážet po dobu jedné hodiny při pokojové teplotě (RT), vortexována, pak centrifugována při 14000 x g po dobu 10 minut, aby se sraženina oddělila od séra. Sérum bylo pak převedeno do čisté mikrocentrifugační kyvety a skladováno při 4 °C dokud neby lo titrováno.
Koncentrace protilátky byly měřeny metodou ELISA. 96-jamkové mikrotitrační destičky (Costar EIA plates) byly pokryty- 100 μΙ roztoku, který' obsahoval bud1 10 μ^/'Κ buď A/42 nebo SAPP, nebo jiné antigeny, jak je popsáno v jednotlivých zprávách, v Well Coating Buffer (0.1M fosforečnan sodný, pH 8,5. 0,1% azid sodný) a ponechány přes noc při pokojové teplotě. Jamky bv lv vysáty a séra byla přidána do jamek s počátečním ředěním 1/1000 v Specimen Diluent (0.014M fosforečnan sodný. pH 7,4. 0,15 M NaCI, 0,6% hovězí sérový albumin, 0.05% thimerosal). Sedm následných ředění vzorku bylo vytvořeno přímo na destičkách v trojnásobných krocích, aby bylo dosaženo konečného ředění 1/218700. Ředění byla inkubována v naplněných jamkách destiček po dobu jedné hodiny při pokojové teplotě. Destičky pak byly omyty čtyřikrát v PBS obsahujícím 0.05% Tween 20. Druhá protilátka, ovčí proti-myší Ig spojený s křenovou peroxidázou (získáno od firmy Boehringer Mannheim), byla přidána do jamek jako 100 μΐ ředění 1/3000 v Specimen Diluent a inkubována po dobu jedné hodiny při pokojové teplotě. Destičky byly poté opět omyty čtyřikrát v PBS, Tween 20. Aby došlo k vývoji ehromogenu bylo přidáno 100 μΐ Slow TMB
-39CZ 303137 B6 (3.3 25.5'-tetramethy lbenzidin získaný od firmy Pierce Chemicals) do každé jamky a inkubováno pro dobu 15 minut při pokojové teplotě. Reakce byla zastavena přidáním 25 μΐ 2 M ITSO(. Intenzita barvy pak byla čtena na zařízení Molecular Devices Vmax při (450 nm až 650 nm).
Koncentrace byly definovány jako reciproční hodnoty ředění séra, které vykazuje jednu polovinu maximální OD. Maximální OD byla obecně vzata z počátečního ředění 1/100, kromě případu velmi vysokých koncentrací, kdy v těchto případech bylo nezbytné nastavit vyšší počáteční ředění pro maximální OD. Jestliže 50% bod spadal mezi dvě ředění, byla provedena lineární extrapolace, aby byla vypočtena konečná koncentrace. Pro výpočet geometrického průměrů koncentrací protilátky byla koncentracím menší než 100 arbitrážně přidělena hodnota koncentrace 25.
2. Test proliferace lymfocytů - Myši byly utraceny isofluranem. Sleziny byly odebrány a dvakrát opláchnuty v 5 ml PBS obsahujícím 10% srdce-inaktivlijící fetální hovězí sérum (PBS-FBS) a pak homogenizovány v 50 μ Centricon jednotce (Dako A/S, Dánsko) v 1,5 ml PBS-FBS po dobu 10 sekund při 100 rpm v Medimachine (Dako), což následovala filtrace přes 100 μ porézní nylonový filtr. Splenocyty byly omyty jednou v 15 ml PBS-FBS, pak centrifugovány při 200 x g po dobu 5 minut. Červené krvinky lyžovaly resuspendaci pelety v 5 ml pufru obsahujícího 0,15 M NH4C1, 1 M KHCO3, 0,1 M NaEDTA, pH 7,4 pro dobu pěti minut při pokojové teplotě. Leukocyty byly pak omyty jak je popsáno výše. Čerstvě izolované slezinné buňky (105 buněk na jamku) byly kultivovány v trojitých sadách, pro kultivaci upravených, 96-jamkových mikrotitračních destiček (Corning, Cambridge, MA), které měly dno ve tvaru U, v RPMI 1640 médiu (JRH Biosciences, Lenexa, KS) doplněným 2,05 mM L-glutaminem, 1% penicilín/streptomycinem a 10% srdce-inaktivujícím FBS, po dobu 96 hodin při 37 °C. Různé Αβ peptidy, A/31-16, A//W2 nebo A/340— 1 peptid s reverzní sekvencí, byly také přidány do dávek v škále od 5 μΜ do 0,18 μΜ ve čtyřech krocích. Buňky v kontrolních jamkách byly kultivovány v Concanavalinem A (Con A) (Sigma, cat, # C-5275, o 1 pg/ml) bez přidaného proteinu. Buňky byly ponechány pulzovat po dobu posledních 24 hodin s 3H-thymidinem (1 pCi/jamku, získáno od firmy Amersham Corp., Arlington Heights, IL). Buňky pak byly přemístěny na UniFilter misky a spočítány v zařízení Top Count Microplate Scintillation Counter (Packard Instruments, Downers Grove, IL). Výsledky jsou vyjádřeny pulsy za minutu (cpm) radioaktivity začleněné v nerozpustných makromolekulách.
3. Příprava mozkové tkáně - Po utracení byly mozky odebrány a jedna hemisféra byla připravena pro imunohistochemické analýzy, zatímco tři mozkové oblasti (hipokampus, kortex a cerebelum) byly odpitvány od druhé hemisféry a použity pro měření koncentrace různých Αβ peptidů a APP forem za použití specifických metod ELISA (Johnson-Wood et al., výše).
Tkáně určené pro metody ELISA byly homogenizovány v 10 objemech ledově studeného guanidinového pufru (5.0 M guanidin-HCl, 50 mM Tris-HCÍ, pH 8,0). Homogenáty byly míchány jemnou rozrušováním za použití zařízení Adams Nutator (Fisher) po dobu tri až čtyř hodin při pokojové teplotě, a pak skladovány pri -20 °C před kvantifikací Αβ peptidu a APP. Předchozí experimenty ukazují, že analyty byly stabilní za těchto skladovacích podmínek, a že syntetický Αβ protein (Bachem) mohl být kvantitativně nahrazen, když byl injikován do homogenátu kontrolních mozkových tkání z čerstvě vržených myší (Johnson-Wood et al.. výše).
4. Měření hladin Αβ peptidu - Mozkové homogenáty byly rozpuštěny 1; 10 v ledově studeném Casein Diluentu (0.25% kasein, PBS, 0,05% azid sodný. 20 pg/ml aprotininu. 5 mM EDTA pil 8.0. 10 pg/ml leupeptinu). a pak centrifugovány při 16000 x g po dobu 20 minut při 4 CC. Syntetické A/7proteinové standardy (1 až 42 aminokyselin) a APP standardy by ty připraveny tak, aby zahrnovaly 0,5M guanidin a 0,1% hovězí sérový albumin (BSA) v konečném složení. ..Totální Αβ sendvičová metoda ELISA používá monoklonální protilátku (mA/7) 266. specifickou pro aminokyseliny 13 až 28 Αβ peptidu (Seubert. et al.), jako zachycenou protilátku a biotinyknou niA^ff 3D6, specifickou pro aminokyseliny 1 až 5 Αβ peptidu (Johnson-Wood. et al.). jako referenční protilátku. 3D6 mA/7 nerozpoznává vypuštěný APP nebo eelodélkový APP. ale
-40CZ 303137 B6 detekuje pouze druhy A/7 peptidů s aspartovou kyselinou na aminokonei. Tento test má nízký limit citlivosti -50 pg/ml (ll pM) a nevykazuje žádnou křížovou reaktivitu kendogennímu murinovému A/7 proteinu při koncentracích do 1 ng/ml (Johnson-Wood et al., výše).
? A/71-42 specifická sendvičová ELISA využívá mA/72lF12, specifickou pro aminokyseliny 33 až (Johnson-Wood, et al.), jako zachycenou protilátku. Biotinylovaná mA/7 3D6 je také jako referenční protilátka v tomto testu, která má nižší limit citlivosti přibližně 125 pg/ml (28 pM. Johnson-Woods et al.). Pro metody A/7 ELISA bylo naplněno 100 μί buď mA/7 266 (při 10 μη/ιηΐ). nebo mA/71F12 (při 5 pg/ml) do jamek 96-jainkových destiček (Costar) imunotestu in pro celonoční inkubaci při pokojové teplotě. Roztok by l odstraněn odsátím a jamky byly zablokovány přidáním 200 μί 0,25% humánního sérového albuminu v PBS pufru po dobu přinejmenším 1 hodiny při pokojové teplotě. Blokovací roztok byl odstraněn a destičky byly skladovány vysušené při 4 °C do té doby, než byly použity. Destičky byly opět hydrátovány ve Wash Buffer [Ťris-pufrovaný roztok NaCl (0,15 M NaCl. 0,01 tris-HCL pH 7.5). plus Tween 20] před dalším použitím. Vzorky a standardy byly přidány v trojnásobných alikvotech 100 μί na jamku a pak inkubovány přes noe při 4 °C. Destičky pak byly přinejmenším třikrát omyty ve Wash Buffer mezi každým krokem tohoto testu Biotinylovaný ni A/7 3 D6. rozpuštěná v 0.5 pg/ml v Casein Assay Buffer (0,25% kasein, PBS, 0.0 5% Tween 20, pH 7,4) byla přidána a inkubována v jamkách po dobu 1 hodiny pri pokojové teplotě. Konjugát avidin-křenová peroxidasa (Avidin20 HRP získaný od firmy Vector, Burlingame, CA), rozpuštěný v Casein Assay Buffer, by i přidán do jamek na 1 hodinu pri pokojové teplotě. Kolorimetrický substrát, Slow TMB-ELISA (Pierce). byl přidán a ponechán reagovat po dobu 15 minut při pokojové teplotě, po kterých byla enzymová reakce zastavena přidáním 25 μΙ 2 N H2SO4. Reakční produkt byl kvantifikován za použití zařízení Molecular Devices Vmax měřením rozdílu absorbance při 450 nm a 650 nm.
5. Měření hladin APP - Byly použity dva odlišné APP testy. První označený jako APP-a/FL, rozeznávající oba, jak APP-alfa (a), tak celodélkové (FL) formy APP. Druhý test je specifický pro APP-α. APP-ct/FL test rozeznává sekretovaný APP, který zahrnuje prvních 12 aminokyselin Αβ peptidů. Protože referenční protilátka (2H3) není specifická pro α-clip-místo, objevující se mezi aminokyselinami 612 až 613 APP695 (Esch et aL, Science 248, 1122-1124 (1990)); tento test také rozeznává celodélkový APP (APP-FL). Předběžné experimenty používají imobilizované APP protilátky k cytoplasmatickému konci APP-FL. aby vyčerpaly mozkové homogenaty od APP-FL za předpokladu, že přibližně 30 až 40 % ΑΡΡ-α/FL APP je FL (data nejsou uvedena). Zachycenou protilátkou pro oba, ΑΡΡ-α/FL a APP-α testy, je mA/?8E5. vyzvednutá proti ami35 nokyselinám od 444 do 592 APP695 formy (Games et al., výše). Referenční mA/7pro APP-a/FL test je mA/?2H3, specifická pro aminokyseliny 597 až 608 APP695 (Johnson-Wood et al„ výše) a referenční protilátkou pro APP-α test je biotiny lovaný derivát mA/7 16H9, vyzvednutý proti aminokyselinám 605 až 611 APP. Nižší limit citlivosti ΑΡΡ-α/FL testuje okolo 11 ng/ml (150 pM) (Johnson-Wood et al.) a nižší limit citlivosti APP-α specifického testu je 22 ng/ml (0.33 nM). Pro oba APP testy je mA/7 8E5 naplněno do jamek 96-jamkovýeh E1A destiček tak, jak je popsáno pro mA/7 266. Přečištěný, rekombinantní sekretovaný APP-α byl použit jako referenční standard pro APP-α test a ΑΡΡ-α/FL test (Esch et al., výše). Mozkové homogenátové vzorky v 5M guanidinu byly rozpuštěny 1:10 v ELISA Specimen Diluentu (0,014 M fosfátový pufr, pH 7,4, 0,6% hovězí sérový albumin. 0,05% trimerosal. 0,5 tn NaCl. 0,1% NP40). Pak byly rozředěny 1:4 v Specimen Diluentu obsahujícím 0.5 M guanidin. Rozředěné homogenátv byly pak centrifugovány při 16000 x g po dobu 15 sekund při pokojové teplotě. APP standardy a vzorky byly přidány na destičku v dvojnásobných alikvotech a inkubovány po dobu 1.5 hodinv při pokojové teplotě. Biotinylovaná referenční protilátka 2H3 nebo 16H9 byla inkubována se vzorky po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Streptavidin-alka!ieká fosfatáza (Boehringer
Mannheim), rozředěná v specimen diluentu. byla inkubována v jamkách po dobu 1 hodiny pří pokojové teplotě. Fluorescentní substrát 4-methy lumbeliferyl-fosfát byl přidán pro 30 minutovou inkubaci pri pokojové teplotě a destičky byly čteny na fluor i metru Cy to fluor tm 2350 (Millipore) při excitaci 365 nm a emisi 450 nm.
-41 CZ 303137 Bó
6. Imunohistochemie - Mozky byly umístěny po dobu tří dnů při 4 °C v 4% parafonnaldehy du v PBS a pak skladovány od jednoho do sedmí dnu při 4 °C v 1% paraformaldehydu v PBS dokud neby ly pitvány. Čtyřicet mikronů silné koronální oblasti byly vyříznuty na vibratomu za pokojo? vé teploty a skladovány v kryoprotektantu (30% glycerol. 30% ethylenglykol ve fosfátovém pufru) při -20 °C před imunohistochemickým procesem. Z každého mozku bylo šest oblastí z hladiny dorzálního hipokampu. každá oddělena v konsekutivních 250 pm intervalech, inkubováno přes noc s jednou z následujících protilátek: (1) biotiny lovaná proti-A/?(mA/7 3D6. specifická pro humánní Αβ peptid) rozpuštěná do koncentrace 2 pg/ml v PBS a 1% koňském séru; i o nebo (2) biotiny lovaná mA/7 specifická pro humánní APP. 8E5, rozpuštěná do koncentrace 3 pg/ml v PBS a 1% koňském séru; nebo (3) mA/?specifická pro glíální ťibrilární aeidický protein (GEAP; Sigma Chemical Co.) rozpuštěná 1:500 s 0,25% Tritonem X-100 a 1% koňským sérem, v Tris-puťrovanéin roztoku NaCl, pH 7,4 (TBS): nebo (4) mA/7specifická pro CD1 lb, MAC-1 antigen, (Cbemicon International) rozpuštěná 1:100 s 0,25% Tritonem X-100 a 1% králičím sérem v TBS; nebo (5) mA// specifická pro MHC 11 antigen, (Pharmingen) rozpuštěná 1:100 s 0,25% Tritonem X-100 a 1% králičím sérem v TBS; nebo (6) krysí mA/? specifická pro CD43 (Pharmingen) rozpuštěná 1:100 s 1% králičím sérem v PBS nebo (7) krysí mA/? specifická pro CD45A (Pharmingen) rozpuštěná 1:100 s 1% králičím sérem v PBS; nebo (8) krysí monoklonální A/?specifická pro CD45RB (Pharmingen) rozpuštěná 1:100 s 1% králičím sérem v PBS; nebo (9) krysí monoklonální Αβ specifická pro CD 45 (Pharmingen) rozpuštěná 1:100 s 1% králičím sérem v PBS; nebo (10) biotinylovaná polyklonální křečci Αβ specifická pro CD3e (Pharmingen) rozpuštěná 1:100 s 1% králičím sérem v PBS nebo (11) krysí mA/?specifická pro CD3 (Serotec) rozpuštěná 1:200 s 1% králičím sérem v PBS; nebo s (12) roztokem PBS postrádajícím primární protilátku obsahujícím 1% normální koňské sérum.
Oblasti, které reagovaly s roztoky protilátky uvedenými výše pod čísly 1, 2 a 6 a 12, byly předpřipraveny v 1,0% Tritonu X-100, 0,4% peroxidu vodík v PBS po dobu 20 minut za pokojové teploty, aby došlo k zablokování endogenní peroxidázy. Pak byly inkubovány přes noc pří 4 °C s primární protilátkou. Oblasti, které reagovaly s 3D6 nebo 8E5 nebo CD3e mA/? protilátkami, byly pak nechány reagovat po dobu jedné hodiny při pokojové teplotě s komplexem křenová peroxidáza-avidin-biotin spolu se složkami sady „A“ a „B“ rozředěnými 1:75 v PBS (Vector Elitě Standard Kit, Vector Labs, Burlingame, CA). Oblasti, které reagovaly s CD 45RA, CD45RB, CD45, CD3 a PBS roztokem postrádajícím primární protilátku, byly inkubovány po dobu jedné hodiny pří pokojové teplotě s biotinylovaným proti-krysím IgG (Vector) rozředěným
1:75 v PBS nebo biotinylovaným proti-myším IgG (Vector) rozředěným 1:75 v PBS, respektive.
Oblasti byly pak ponechány reagovat po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě s komplexem křenová peroxidáza-avidin-biotin spolu se složkami sady „A a „B“ rozředěnými 1:75 v PBS (Vector Elitě Standard Kit, Vector Labs, Burlingame, CA).
Oblasti byly vyvíjeny v 0,01% peroxidu vodíku, 0,05% 3,3'-diamínobenzidinu (DAB) pri pokojové teplotě. Oblasti předurčené pro inkubací s GFAP-, MAC-1- a MHC fI-specifíckými protilátkami byly předpřipraveny v 0,6% peroxidu vodíku pri pokojové teplotě, aby došlo k zablokování endogenní peroxidázy, a pak inkubovány přes noc s primární protilátkou pri 4 °C. Oblasti reagovaly s GFAP protilátkou byly inkubovány po dobu jedné hodiny při pokojové tep45 lote s biotinylovaným proti-myším IgG. připraveným imunizaci koně (Veetro Laboratories: Vectastain Elitě ABC Kit), rozpuštěným 1:200 v TBS. Oblasti byly potom nechány reagovat po dobu jedné hodiny komplexem avidin-biotin-peroxidáza (Vector Laboratories; Vectastain Elitě ABC Kit) rozředěným 1:1000 s TBS. Oblasti inkubované s MAC-1- nebo MHC ll-specifiekou mA/? jako primární protilátkou byly následně ponechány reagovat po dobu jedné hodiny při
5o pokojové teplotě s biotiny lovaným proti-krysím IgG. který’ byl připraven imunizací králíka, rozředěným 1:200 s I BS. což následovala inkubace po dobu jedné hodiny s komplexem avidinbiotin-peroxidáza. rozředěným 1:1000 s TBS. Oblasti inkubované s GEAP- MAC-1- a MHC 1l—specifický mi protilátkami byl pak v Ízualizovány úpravou za pokojové teploty s 0,05% DAB. 0.01% peroxidem vodíku, 0.04% chloridem nikelnalým, TBS po dobu 4 a 1 I minut, res-42 CZ 303137 B6 pektive. Imunoznačené oblasti byly umístěny na skleněná sklíčka (VWR. Superfrost slides). sušeny přes noc na vzduchu, namočeny v Propar (Anatech) a překryty sklíčky za použití Perinountu (Fisher) jako pomocného média.
Pro počítání Αβ plaků byl podsoubor GFAP-pozitivníeh oblastí umístěn na Superfrost sklíčka a inkubován ve vodném 1% Thioflaviiiu S (Sigma) po dobu 7 minut, což následoval imunohistoehmieký proces. Oblasti byly pak dehydratovány a očištěny v Proparu. pak překryty sklíčky s pomocí Permountu.
io 7. Obrazová analýza - Videometric 150 Image Analysis System (Oncor. hic,. Gaithersburg, MD) spojený s Nikon Mierophot-FX mikroskopem přes CCD video kameru a Sony Trinitron monitorem byl použit pro kvantifikaci imunoreaktivních sklíček. Obrázek sekce byl skladován ve video pufru a byl určen limit založený na barvě a založený na saturaci, aby mohla být vybrána a spočítána celková bodová plocha, která je zabírána ímunoznačenýmí strukturami. Pro každou oblast byl hipokampus ručně ohraničen a celková bodová plocha zabíraná hipokampem byla spočítána. Procento amyloidní zátěže bylo měřeno jako: (frakce hipokampální oblasti obsahující Αβ sraženiny, které jsou imunoreaktivní s mA/?3D6) x 100. Podobně bylo měřeno procento neuritické zátěže, jako: (frakce hipokampální oblasti, která obsahuje dystrofické neurity, které reagují s mA/?8E5) x 100. C-Imaging System (Compix, lne., Cranberry Township, PA) pracující s Simple 32 Software Application program byl propojen s Nikon Microphot-FX mikroskopem přes Optronics kameru a použit pro kvantifikaci procenta retrospeniálního kortexu, který byl obsazen GFAP-pozitivními astrocyty a MAC-1- a MHC Π-pozitivními mikroglíi. Obrázek imuno-reagované oblasti byl skladován ve video pufru a byl určen monochromálně podmíněný limit, aby mohla být spočítána celková bodová plocha, která je zabírána imunoznačenými buň25 kární. Pro každou oblast byl retrospleniální kortex (RSC) ručně ohraničen a celková bodová plocha zabíraná RSC byla spočítána. Procento astrocytózy bylo měřeno jako: (frakce RSC zabíraná GFAP-reaktivními astrocyty) x 100. Podobně bylo definováno procento mikrogliózy, jako: (frakce RSC zabíraná MAC-l a MHC II-reaktivními mikroglií) x 100. Pro všechny obrazové analýzy, šest oblastí na úrovni dorsálního hipokampu, každá oddělená v konsekutivních 240 μιη intervalech, byly kvantifikováno pro každé zvíře. Ve všech případech byl typ léčby daného zvířete pozorovateli neznámí.
Ačkoliv uvedený vynález byl popsán detailně z důvodu jasného pochopení, bude jasně patrné, že jisté modifikace mohou být uplatněny v rámci připojených patentových nároků. Všechny publi35 kace a dokumenty uvedené v předkládaném vynálezu jsou začleněny v odkazech v jejich úplnosti pro všechny účely ve stejném rozsahu, v jakém byly každý individuálně vydán.
Tabulka 1 koncentrace při 50% maximální OD myši injikované agregovaným Αβ
věk PDAPP myš 100 ; m\.š 1 u 1 mys HD myš 103 myš 104 myš 105 inyš 106 myš 107 myš 108
4 70000 i D00O0 1 15000 120000 1000 15000 50000 80000 100000
6 !5000 í 65000 i i 30000 55000 300 15000 15000 50000 60000
8 20000 50606' 50000 i 400 15000 18000 50000 60000
10 40000 'Χϋ,η,ι Ί ' <>0000 5O000 ooo ; 1000 500O0 20000 4O000
12 25000 L... . .. _ 60000 40000 2700 ; 20006) i 70000 25000 20000
-43CZ 303137 B6 myši ínjikované PBS s oběma imunogeny při 1/100
věk PDAPP 1ΓΛ š 1 ί i í m\ š i i 4 ! mvš 115 myš 11 b mvš 117
b < -i \ bkj - 4 x hk- j 4 x bkg 4 x bkg < 4 x bkg
10 5 x bkg 4 x bkg .4 xbkg < 4 x bkg < 4 x bkg
12 4 \ bkg 1 < 4 x bkg < 4 x bkg < 4 x bkg < 4 x bkg
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (13)

1. Konjugát obsahující Αβ 1-5 nebo Αβ 1-6 vázaný na proteinový nosič, kde proteinový nosič zesiluje imunitní odpověď na Αβ, pro použití při léčbě nebo prevenci nemocí spojených s amyloidní sraženinou Αβ v mozku pacienta.
2. Konjugát podle nároku 1, kde Αβ 1-5 nebo Αβ 1—6 je vázané na proteinový nosič chemickým zesíťováním.
3. Konjugát podle nároku 1, kde Αβ 1-5 nebo Αβ 1-6 je vyjádřeno jako fúzní protein s pro20 teinovým nosičem.
4. Konjugát podle nároku 3, kde Αβ 1-
5 nebo Αβ 1—6 je vázáno na koncovou aminoskupinu proteinového nosiče.
25 5. Konjugát podle nároku 3, kde Αβ 1-5 nebo Αβ 1-6 je vázáno na koncovou karboxylovou skupinu proteinového nosiče.
6. Konjugát podle nároku 3, kde Αβ 1-5 nebo Αβ 1-6 je vnitřně vázáno na část proteinového nosiče.
7. Konjugát podle nároků 4 až 6, kde Αβ 1-5 nebo Αβ 1-6 je mnohonásobně přítomno ve fúzním proteinu.
8. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje konjugát podle náro35 ků 1 až 7 a farmaceuticky přijatelné složky určené pro použití při terapii.
9. Farmaceutický prostředek podle nároku 8. vyznačující se tím, že dále obsahuje vehikulum vhodné pro orální nebojiné podání.
ni
10. Farmaceutický prostředek podle nároku 9, vyznačující se tím. že dále obsahuje farmaceuticky přijatelnou pomocnou látku.
11. Farmaceutický prostředek podle nároku 10. vyznačující se t í ni. že pomocná látka je určena pro podání dohromady s konjugátem.
12. Farmaceutický prostředek podle nároku 10. vyznačující se tím. že pomocná látka je určena pro podání před nebo po podání konjugátu.
-44 CZ 303137 B6
13. Použiti konjugátu podle nároků 1 až 7 pro výrobu léčiva pro prevenci nebo léčení nemocí spojených s amyloidní sraženinou Λβ v mozku pacienta, kde léčivo je přizpůsobeno pro další podání pomocné látky, která zesiluje imunitní odpověď na Αβ peptid. případně léčivo je ve tormě přípravku, kde pomocnou látku a činidlo lze podat dohromady.
CZ20001706A 1997-12-02 1998-11-30 Konjugát obsahující Aß 1-5 nebo Aß 1-6, jeho použití a farmaceutický prostredek jej obsahující CZ303137B6 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US6774097P 1997-12-02 1997-12-02
US8097098P 1998-04-07 1998-04-07

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20001706A3 CZ20001706A3 (cs) 2000-11-15
CZ303137B6 true CZ303137B6 (cs) 2012-04-25

Family

ID=26748211

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20001706A CZ303137B6 (cs) 1997-12-02 1998-11-30 Konjugát obsahující Aß 1-5 nebo Aß 1-6, jeho použití a farmaceutický prostredek jej obsahující

Country Status (38)

Country Link
US (26) US20040171815A1 (cs)
EP (5) EP1033996B1 (cs)
JP (4) JP4677094B2 (cs)
KR (3) KR100936419B1 (cs)
CN (1) CN100374151C (cs)
AR (1) AR020050A1 (cs)
AT (4) ATE493149T1 (cs)
AU (1) AU1706199A (cs)
BG (1) BG104562A (cs)
BR (1) BR9815357A (cs)
CA (1) CA2312920C (cs)
CO (1) CO4980846A1 (cs)
CY (3) CY1108331T1 (cs)
CZ (1) CZ303137B6 (cs)
DE (7) DE69840922D1 (cs)
DK (4) DK2305282T3 (cs)
EA (3) EA200000608A1 (cs)
EE (1) EE05377B1 (cs)
ES (4) ES2428740T3 (cs)
GE (2) GEP20043319B (cs)
HK (2) HK1095265A1 (cs)
HR (2) HRP20000443B1 (cs)
HU (2) HU228061B1 (cs)
ID (1) ID25504A (cs)
IL (5) IL136252A0 (cs)
IS (1) IS5500A (cs)
MY (1) MY134906A (cs)
NO (3) NO328865B1 (cs)
NZ (1) NZ504569A (cs)
PE (1) PE20001383A1 (cs)
PL (2) PL202698B1 (cs)
PT (4) PT1679080E (cs)
SA (1) SA99191269B1 (cs)
SG (1) SG111083A1 (cs)
SI (4) SI1994937T1 (cs)
TR (1) TR200001608T2 (cs)
TW (1) TWI239847B (cs)
WO (1) WO1999027944A1 (cs)

Families Citing this family (294)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997021728A1 (en) 1995-12-12 1997-06-19 Karolinska Innovations Ab PEPTIDE BINDING THE KLVFF-SEQUENCE OF AMYLOID $g(b)
US8173127B2 (en) * 1997-04-09 2012-05-08 Intellect Neurosciences, Inc. Specific antibodies to amyloid beta peptide, pharmaceutical compositions and methods of use thereof
US6703015B1 (en) 1999-09-03 2004-03-09 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Filamentous bacteriophage displaying an β-amyloid epitope
US6905686B1 (en) 1997-12-02 2005-06-14 Neuralab Limited Active immunization for treatment of alzheimer's disease
TWI239847B (en) 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
US6750324B1 (en) 1997-12-02 2004-06-15 Neuralab Limited Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies
US6787523B1 (en) 1997-12-02 2004-09-07 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US6761888B1 (en) * 2000-05-26 2004-07-13 Neuralab Limited Passive immunization treatment of Alzheimer's disease
US7588766B1 (en) * 2000-05-26 2009-09-15 Elan Pharma International Limited Treatment of amyloidogenic disease
US7179892B2 (en) * 2000-12-06 2007-02-20 Neuralab Limited Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7790856B2 (en) 1998-04-07 2010-09-07 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US7964192B1 (en) * 1997-12-02 2011-06-21 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidgenic disease
US20080050367A1 (en) * 1998-04-07 2008-02-28 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US20050059802A1 (en) * 1998-04-07 2005-03-17 Neuralab Ltd Prevention and treatment of amyloidogenic disease
CA2325600A1 (en) * 1998-05-21 1999-11-25 The University Of Tennessee Research Corporation Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies
US20030147882A1 (en) 1998-05-21 2003-08-07 Alan Solomon Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies
US7060670B1 (en) 1999-05-05 2006-06-13 Neurochem (International) Limited Stereoselective antifibrillogenic peptides and peptidomimetics thereof
ATE516046T1 (de) 1999-05-13 2011-07-15 Wyeth Corp Adjuvans kombinationsformulierungen
AU2008203784B2 (en) * 1999-05-28 2012-01-19 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US6787637B1 (en) 1999-05-28 2004-09-07 Neuralab Limited N-Terminal amyloid-β antibodies
UA81216C2 (en) * 1999-06-01 2007-12-25 Prevention and treatment of amyloid disease
AU2005202644B2 (en) * 1999-06-01 2009-03-05 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidogenic disease
AR024558A1 (es) * 1999-06-01 2002-10-16 Neuralab Ltd Composiciones del peptido a-beta y procesos para producir las mismas
CA2376693C (en) 1999-06-16 2013-09-10 Boston Biomedical Research Institute Immunological control of .beta.-amyloid levels in vivo
JP2003509020A (ja) * 1999-09-03 2003-03-11 ラモット・ユニバーシティ・オーソリティ・フォー・アプライド・リサーチ・アンド・インダストリアル・ディベロップメント・リミテッド プラーク形成疾患の診断、治療、予防に有用な薬剤、組成物、その使用法
US7384640B1 (en) 1999-09-30 2008-06-10 Wyeth Holdings Corporation Mutant cholera holotoxin as an adjuvant
US20070135337A2 (en) * 1999-11-29 2007-06-14 Neurochem (International) Limited Vaccine for the Prevention and Treatment of Alzheimer's and Amyloid Related Diseases
US20020094335A1 (en) * 1999-11-29 2002-07-18 Robert Chalifour Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
EP1237930B1 (en) * 1999-12-08 2006-11-08 Intellect Neurosciences, Inc. Chimeric amyloid beta peptides
EP1752472A3 (en) * 1999-12-08 2007-04-25 Intellect Neurosciences, Inc. Chimeric amyloid beta peptides
JP5025871B2 (ja) * 2000-02-21 2012-09-12 エイチ．リュンドベック エイ／エス アミロイドの新規なダウン−レギュレート方法
CA2400838C (en) 2000-02-21 2013-04-23 Pharmexa A/S Novel method for down-regulation of amyloid
EP1257584B2 (en) * 2000-02-24 2013-03-06 Washington University St. Louis Humanized antibodies that sequester amyloid beta peptide
US7485616B2 (en) 2000-04-05 2009-02-03 University Of Tennessee Research Foundation Methods of investigating, diagnosing, and treating amyloidosis
DE60108111T2 (de) 2000-05-22 2005-12-08 New York University Synthetische immunogene jedoch nicht amyloidogene peptide, die homolog zu amyloid beta sind und deren verwendung zur induktion einer immunantwort gegen amyloid beta und amyloidaggregate
JP2003516929A (ja) * 2000-06-01 2003-05-20 ニユーララブ・リミテツド アミロイド形成性疾患の予防および治療
US7371920B2 (en) 2000-06-20 2008-05-13 The Governing Council Of The University Of Toronto Transgenic mouse model of neurodegenerative disorders
JP4938956B2 (ja) * 2000-06-20 2012-05-23 ザ ガバニング カウンシル オブ ザ ユニバーシティ オブ トロント 神経変性性障害のトランスジェニック動物モデル
BRPI0111830B8 (pt) 2000-06-23 2021-05-25 American Cyanamid Co método de produção de partículas semelhantes ao vírus da influenza (vlps), vlps da influenza, vlps quiméricas, composições imunogênica e farmacêutica, e, usos de vlps da influenza e de vlps quiméricas
WO2002000245A1 (en) * 2000-06-28 2002-01-03 Prana Biotechnology Limited Neurotoxic oligomers
AU2007200047B2 (en) * 2000-07-07 2009-11-26 Bioarctic Neuroscience Ab Prevention and treatment of Alzheimer's disease
EP1309341A2 (en) 2000-07-07 2003-05-14 Lars Lannfelt Prevention and treatment of alzheimer's disease
US7067133B2 (en) * 2000-09-06 2006-06-27 Aventis Pharma S.A. Methods and compositions for diseases associated with amyloidosis
WO2002025279A2 (en) * 2000-09-19 2002-03-28 Evotec Neurosciences Gmbh Use of amyloid precursor protein for treating brain amyloidosis
IL139308A0 (en) * 2000-10-26 2001-11-25 Marikovsky Moshe Peptides from amyloid precursor protein which inhibit tumor growth and metastasis
WO2002038177A2 (en) 2000-11-10 2002-05-16 Wyeth Holdings Corporation Adjuvant combination formulations
ATE466078T1 (de) 2000-11-29 2010-05-15 Univ Rochester Helfervirus-freie herpesvirus-amplifikatpartikel und deren verwendungen
PE20020574A1 (es) * 2000-12-06 2002-07-02 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta
US7700751B2 (en) 2000-12-06 2010-04-20 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize β-amyloid peptide
EP1355918B9 (en) 2000-12-28 2012-01-25 Wyeth LLC Recombinant protective protein from $i(streptococcus pneumoniae)
US7264810B2 (en) 2001-01-19 2007-09-04 Cytos Biotechnology Ag Molecular antigen array
US6815175B2 (en) 2001-03-16 2004-11-09 Cornell Research Foundation, Inc. Anti-amyloid peptide antibody based diagnosis and treatment of a neurological disease or disorder
GB0109297D0 (en) 2001-04-12 2001-05-30 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
ATE409047T1 (de) 2001-04-30 2008-10-15 Lilly Co Eli Humanisierte antikörper
ES2318006T3 (es) 2001-04-30 2009-05-01 Eli Lilly And Company Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido beta-amiloide.
US8092791B2 (en) 2001-05-23 2012-01-10 University Of Rochester Method of producing herpes simplex virus amplicons, resulting amplicons, and their use
US6906169B2 (en) 2001-05-25 2005-06-14 United Biomedical, Inc. Immunogenic peptide composition comprising measles virus Fprotein Thelper cell epitope (MUFThl-16) and N-terminus of β-amyloid peptide
DE60234695D1 (de) 2001-06-07 2010-01-21 Univ Colorado Mutantenformen von cholera holotoxin als adjuvans
JP2005508143A (ja) 2001-06-07 2005-03-31 ワイス・ホールデイングス・コーポレーシヨン アジュバントとしてのコレラホロトキシンの突然変異形
US7829087B2 (en) 2001-07-09 2010-11-09 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cognitive impairment
WO2003006893A2 (en) 2001-07-09 2003-01-23 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods of inhibiting amyloid toxicity
ES2295401T3 (es) * 2001-08-17 2008-04-16 Washington University Metodo de ensayo para la enfermedad de alzheimer.
US20060073149A1 (en) * 2001-08-17 2006-04-06 Bales Kelly R Rapid improvement of cognition in condition related to abeta
EP1944040B1 (en) 2001-08-17 2012-08-01 Washington University Assay method for Alzheimer's disease
WO2003016467A2 (en) * 2001-08-17 2003-02-27 Eli Lilly And Company Use of antibodies having high affinity for soluble ass to treat conditions and diseases related to ass
JP2005503789A (ja) * 2001-08-17 2005-02-10 イーライ・リリー・アンド・カンパニー 抗Ａβ抗体
MY144532A (en) * 2001-08-20 2011-09-30 Lundbeck & Co As H Novel method for down-regulation of amyloid
US20030082191A1 (en) * 2001-08-29 2003-05-01 Poduslo Joseph F. Treatment for central nervous system disorders
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
CA2466841A1 (en) * 2001-11-21 2003-06-05 New York University Synthetic immunogenic but non-deposit-forming polypeptides and peptides homologous to amyloid .beta., prion protein, amylin, .alpha.-synuclein, or polyglutamine repeats for induction of an immune response thereto
US20040052928A1 (en) 2002-09-06 2004-03-18 Ehud Gazit Peptides and methods using same for diagnosing and treating amyloid-associated diseases
AR038568A1 (es) 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
US20040001848A1 (en) * 2002-03-01 2004-01-01 Szu-Yi Chou Method of producing disease-specific antigens
CA2477675C (en) * 2002-03-05 2013-05-21 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Immunizing composition and method for inducing an immune response against the .beta.-secretase cleavage site of amyloid precursor protein
MY139983A (en) * 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
EP1575529A4 (en) * 2002-07-17 2007-08-08 Intellect Neurosciences Inc PEPTIDES AND METHOD FOR THE INVESTIGATION OF IMMUNOGENOUS PEPTIDE VACCINES AGAINST ALZHEIMER DISEASE
RU2450827C2 (ru) 2002-07-19 2012-05-20 Цитос Биотехнологи Аг Композиции вакцин, содержащие наборы антигенов в виде амилоида бета 1-6
AU2003256789A1 (en) 2002-08-13 2004-02-25 U.S. Department Of Veterans Affairs Method of detecting and preventing alzheimer's disease, particularly at prodromal and early stages
US7785608B2 (en) 2002-08-30 2010-08-31 Wyeth Holdings Corporation Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease
DE60336848D1 (de) * 2002-09-12 2011-06-01 Univ California Immunogene und entsprechende antikörper, die spezifisch sind für häufige hochmolekulare aggregations-zwischenprodukte von amyloiden aus proteinen unterschiedlicher sequenz
WO2010011999A2 (en) 2008-07-25 2010-01-28 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for eliciting an amyloid-selective immune response
WO2004032868A2 (en) * 2002-10-09 2004-04-22 Rinat Neuroscience Corp. Methods of treating alzheimer's disease using antibodies directed against amyloid beta peptide and compositions thereof
US8697082B2 (en) 2002-11-01 2014-04-15 Neotope Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
US20080014194A1 (en) * 2003-10-31 2008-01-17 Elan Pharmaceuticals, Inc. Prevention and Treatment of Synucleinopathic and Amyloidogenic Disease
US8506959B2 (en) 2002-11-01 2013-08-13 Neotope Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
US9034337B2 (en) 2003-10-31 2015-05-19 Prothena Biosciences Limited Treatment and delay of outset of synucleinopathic and amyloidogenic disease
TW200509968A (en) 2002-11-01 2005-03-16 Elan Pharm Inc Prevention and treatment of synucleinopathic disease
CN100450551C (zh) * 2002-11-29 2009-01-14 中国医学科学院基础医学研究所 用于治疗和预防阿尔茨海默病的重组腺相关病毒基因疫苗及其用途
US20070010435A1 (en) 2002-12-19 2007-01-11 New York University Method for treating amyloid disease
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
EP1594969B1 (en) * 2003-02-01 2015-05-20 Janssen Sciences Ireland UC Active immunization to generate antibodies to soluble a-beta
JP5036302B2 (ja) * 2003-02-10 2012-09-26 ティオー − ビービービー ホールディング ベスローテン フェンノートシャップ 炎症状態下に血液脳関門で示差的（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ）に発現される核酸
DE602004027348D1 (de) 2003-02-10 2010-07-08 Applied Molecular Evolution Abeta-bindende moleküle
US8663650B2 (en) 2003-02-21 2014-03-04 Ac Immune Sa Methods and compositions comprising supramolecular constructs
US20060251675A1 (en) * 2003-03-17 2006-11-09 Michael Hagen Mutant cholera holotoxin as an adjuvant and an antigen carrier protein
KR100546066B1 (ko) * 2003-03-21 2006-01-26 한국생명공학연구원 베타아밀로이드 유전자의 다중 연결체를 발현하는 형질전환 식물 세포 및 이로부터 배양된 식물
WO2004087733A2 (en) * 2003-03-28 2004-10-14 New York University Prevention and treatment of alzheimer amyloid deposition
US7732162B2 (en) 2003-05-05 2010-06-08 Probiodrug Ag Inhibitors of glutaminyl cyclase for treating neurodegenerative diseases
ES2246177B1 (es) 2003-05-08 2007-03-01 Universidad De Zaragoza. Uso de anticuerpos para el tratamiento de enfermedades amiloideas.
US7358331B2 (en) 2003-05-19 2008-04-15 Elan Pharmaceuticals, Inc. Truncated fragments of alpha-synuclein in Lewy body disease
PE20050627A1 (es) 2003-05-30 2005-08-10 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido beta amiloideo
JP4888876B2 (ja) * 2003-06-13 2012-02-29 田平 武 アルツハイマー病の治療のための組換えアデノ随伴ウィルスベクター
EP2719394B1 (en) 2003-06-30 2015-07-29 Tel Aviv University Future Technology Development L.P. Peptides for treating amyloid-associated diseases
WO2005014041A2 (en) * 2003-07-24 2005-02-17 Novartis Ag Use of an amyloid beta dna vaccine for the treatment and/or prevention of amyloid diseases
US7807171B2 (en) 2003-07-25 2010-10-05 Ac Immune Sa Therapeutic vaccine targeted against P-glycoprotein 170 for inhibiting multidrug resistance in the treatment of cancers
GB0321615D0 (en) 2003-09-15 2003-10-15 Glaxo Group Ltd Improvements in vaccination
US20070264280A1 (en) * 2003-11-07 2007-11-15 Federoff Howard J Compositions and Methods for Treating Neurological Diseases
WO2005047860A2 (en) 2003-11-08 2005-05-26 Elan Pharmaceuticals, Inc. Antibodies to alpha-synuclein
EA009559B1 (ru) 2003-12-17 2008-02-28 Элан Фармасьютикелз, Инк. КОНЪЮГАТЫ Aβ ИММУНОГЕННЫХ ПЕПТИДНЫХ НОСИТЕЛЕЙ И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ
US20050225165A1 (en) * 2004-04-13 2005-10-13 Naik Sanjeev M Brake by-wire control system
EP1761278B1 (en) 2004-04-26 2008-12-31 Innate Pharma Adjuvant composition and methods for its use
GB0410220D0 (en) 2004-05-07 2004-06-09 Kirkham Lea Ann Mutant pneumolysin proteins
SE0401601D0 (sv) 2004-06-21 2004-06-21 Bioarctic Neuroscience Ab Protofibril specific antibodies and uses thereof
EP2332569A3 (en) * 2004-06-25 2011-09-14 ID Biomedical Corporation of Quebec Compositions and methods for treating neurological disorders
WO2006014638A2 (en) * 2004-07-19 2006-02-09 The General Hospital Corporation ANTIBODIES TO CROSS-LINKED AMYLOID β OLIGOMERS
WO2006036291A2 (en) 2004-07-30 2006-04-06 Rinat Neuroscience Corp. Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods using same
EP1787998A4 (en) 2004-08-11 2008-08-27 Mitsubishi Chem Corp ANTIBODIES AND USE RELATING THERETO
AU2005294131A1 (en) * 2004-10-05 2006-04-20 Wyeth Methods and compositions for improving recombinant protein production
WO2006044666A2 (en) * 2004-10-15 2006-04-27 Northeastern University Detection of disease associated proteolysis by direct mass spectrometry analysis of low molecular weight peptides
GB0424563D0 (en) 2004-11-05 2004-12-08 Novartis Ag Organic compounds
CA2590337C (en) 2004-12-15 2017-07-11 Neuralab Limited Humanized amyloid beta antibodies for use in improving cognition
EP1838349A1 (en) * 2004-12-15 2007-10-03 Neuralab, Ltd. Amyloid beta antibodies for use in improving cognition
WO2006083533A2 (en) * 2005-01-14 2006-08-10 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for inhibiting drusen formation and for diagnosing or treating drusen-related disorders
WO2006081171A1 (en) 2005-01-24 2006-08-03 Amgen Inc. Humanized anti-amyloid antibody
MX2007009091A (es) * 2005-01-28 2008-01-11 Wyeth Corp Formulaciones de polipeptido liquidas estabilizadas.
GT200600031A (es) 2005-01-28 2006-08-29 Formulacion anticuerpo anti a beta
CN101228272A (zh) * 2005-04-20 2008-07-23 生物载体株式会社 用于治疗阿尔茨海默病的具有较高安全性的经鼻腔内给药基因疫苗
AU2006237903A1 (en) * 2005-04-20 2006-10-26 Dna Vec Corporation Highly safe intranasally administrable gene vaccines for treating Alzheimer's disease
PE20061323A1 (es) * 2005-04-29 2007-02-09 Rinat Neuroscience Corp Anticuerpos dirigidos contra el peptido amiloide beta y metodos que utilizan los mismos
WO2006119352A2 (en) * 2005-05-03 2006-11-09 University Of South Florida Method of treating cognitive decline and synaptic loss related to alzheimer's disease
CN101171031B (zh) 2005-05-05 2011-09-28 默沙东公司 防止和治疗阿尔茨海默病的肽偶联物组合物和方法
JPWO2006126682A1 (ja) * 2005-05-27 2008-12-25 財団法人化学及血清療法研究所 アルツハイマー病の予防・治療用ワクチン
US7825223B2 (en) 2005-06-17 2010-11-02 Janssen Alzheimer Immunotherapy Methods of purifying anti A β antibodies
JP4921468B2 (ja) 2005-07-10 2012-04-25 アダプティブ スペクトラム アンド シグナル アラインメント インコーポレイテッド マージンおよび帯域の適応制御
WO2007056401A1 (en) * 2005-11-09 2007-05-18 Merck & Co., Inc. Method for identifying modulators of osbp useful for treating alzheimer's disease
EP2567973B1 (en) * 2005-11-28 2014-05-14 Zymogenetics, Inc. IL-21 antagonists
AU2006341398B9 (en) * 2005-11-28 2012-02-02 Zymogenetics, Inc. IL-21 receptor antagonists
KR101439828B1 (ko) 2005-11-30 2014-09-17 애브비 인코포레이티드 아밀로이드 베타 단백질에 대한 모노클로날 항체 및 이의 용도
KR20080090408A (ko) 2005-11-30 2008-10-08 아보트 러보러터리즈 항-Ａβ 글로불로머 항체, 이의 항원-결합 잔기, 상응하는하이브리도마, 핵산, 벡터, 숙주 세포, 당해 항체의 제조방법, 당해 항체를 포함하는 조성물, 당해 항체의 용도 및당해 항체의 사용 방법
WO2007067512A2 (en) * 2005-12-08 2007-06-14 Merck & Co., Inc. Method for identifying modulators of adprh useful for treating alzheimer's disease
EP2361638B1 (en) * 2005-12-12 2014-01-15 AC Immune S.A. A beta 1-42 specific monoclonal antibodies with therapeutic properties
PE20100748A1 (es) 2005-12-12 2010-11-12 Hoffmann La Roche Anticuerpo anti beta-4-amiloide que contiene asparagina glicosilada en la region variable de vh
JP5097695B2 (ja) 2006-02-22 2012-12-12 株式会社林原 抗アミロイドβペプチド抗体産生誘導用のペプチドワクチン
JP5033868B2 (ja) 2006-03-23 2012-09-26 バイオアークティック ニューロサイエンス アーベー 改良型プロトフィブリル選択的抗体及びその使用
US8784810B2 (en) 2006-04-18 2014-07-22 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of amyloidogenic diseases
US7479550B2 (en) 2006-06-02 2009-01-20 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Amyloid β gene vaccines
TWI551607B (zh) * 2006-07-14 2016-10-01 Ａｃ免疫公司 人類化抗體
US20090123488A1 (en) * 2006-08-14 2009-05-14 Thymon, Llc Compositions and methods for the treatment and prophylaxis of Alzheimer's disease
EP2076287A2 (en) * 2006-10-12 2009-07-08 Wyeth Methods and compositions with reduced opalescence
WO2008070284A2 (en) * 2006-10-16 2008-06-12 Johnnie B. Byrd, Sr. Alzheimer's Center And Research Institute Amyloid beta peptides and methods of uses thereof
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
AR064642A1 (es) 2006-12-22 2009-04-15 Wyeth Corp Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi
US20080214987A1 (en) 2006-12-22 2008-09-04 Nanomed Devices, Inc. Microdevice And Method For Transdermal Delivery And Sampling Of Active Substances
IL199534A (en) 2007-01-05 2013-01-31 Univ Zuerich An isolated human antibody capable of detecting a neoepitope in a disease-related protein, a polynucleotide encoding an antibody, a vector containing the polynucleotide, a host cell containing the polynucleotide or vector, a preparation containing the antibody and related methods and uses.
EP3239175A1 (en) 2007-01-05 2017-11-01 University of Zurich Method of providing disease-specific binding molecules and targets
DK2104682T3 (en) 2007-01-11 2017-01-16 Michael Bacher DIAGNOSIS AND TREATMENT OF ALZHEIMER'S AND OTHER DEMENTIA DISEASES
UA95996C2 (ru) 2007-01-18 2011-09-26 Эли Лилли Энд Компани Пегилированный fab-фрагмент антитела, который специфически связывается с бета-амилоидным пептидом
US8147833B2 (en) 2007-02-23 2012-04-03 Neotope Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
EP2118300B1 (en) 2007-02-23 2015-05-27 Prothena Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
US8895004B2 (en) 2007-02-27 2014-11-25 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Method for the treatment of amyloidoses
ZA200905537B (en) 2007-03-01 2010-10-27 Probiodrug Ag New use of glutaminyl cyclase inhibitors
US7618944B2 (en) * 2007-03-01 2009-11-17 Intezyne Technologies, Inc. Encapsulated amyloid-beta peptides
MX2009011127A (es) * 2007-04-18 2010-03-10 Janssen Alzheimer Immunotherap Metodo de prevencion y tratamiento de angiopatia amiloide cerebral.
US8003097B2 (en) 2007-04-18 2011-08-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of cerebral amyloid angiopathy
ES2533484T3 (es) 2007-04-18 2015-04-10 Probiodrug Ag Derivados de tiourea como inhibidores de la glutaminil ciclasa
EP2012122A1 (en) * 2007-07-06 2009-01-07 Medigene AG Mutated parvovirus structural proteins as vaccines
JP2010528583A (ja) * 2007-06-11 2010-08-26 エーシー イミューン ソシエテ アノニム アミロイドβに対するヒト化抗体
US8048420B2 (en) 2007-06-12 2011-11-01 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
CN104761641A (zh) * 2007-06-12 2015-07-08 Ac免疫有限公司 β淀粉样蛋白的人源化抗体
US8613923B2 (en) 2007-06-12 2013-12-24 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
EP2173378B1 (en) 2007-06-27 2014-03-19 Admune Therapeutics LLC Complexes of il-15 and il-15ralpha and uses thereof
SI2182983T1 (sl) 2007-07-27 2014-09-30 Janssen Alzheimer Immunotherapy Zdravljenje amiloidogenih bolezni s humaniziranimi protitelesi proti abeta
JP5731198B2 (ja) 2007-09-27 2015-06-10 イムノバクシーン・テクノロジーズ・インコーポレイテッドＩｍｍｕｎｏｖａｃｃｉｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ． インビボでのポリヌクレオチドの送達のための連続疎水相を含む担体におけるリポソームの使用
AU2008311366B2 (en) * 2007-10-05 2015-03-12 Ac Immune S.A. Use of anti-amyloid beta antibody in ocular diseases
CN101883791B (zh) * 2007-10-05 2015-11-25 基因技术公司 人源化抗体
PT2238166E (pt) 2007-10-05 2014-02-11 Genentech Inc Utilização do anticorpo anti-amilóide beta em doenças oculares
JO3076B1 (ar) 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
CN101878301B (zh) * 2007-10-29 2014-08-20 道健康生活医药株式会社 抗体及其应用
WO2010055366A2 (en) 2007-12-07 2010-05-20 Zymogenetics, Inc. Anti-human il-21 monoclonal antibodies
EP2261254A3 (en) 2007-12-21 2011-04-13 Amgen, Inc Anti-amyloid antibodies and uses thereof
WO2009090650A2 (en) * 2008-01-16 2009-07-23 Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Vaccine for alzheimer's disease
WO2009146523A1 (en) * 2008-06-05 2009-12-10 Immunovaccine Technologies Inc. Compositions comprising liposomes, an antigen, a polynucleotide and a carrier comprising a continuous phase of a hydrophobic substance
US20110171259A1 (en) * 2008-09-05 2011-07-14 Martin Gagne Novel Compositions and Adjuvants
US20110263450A1 (en) * 2008-09-26 2011-10-27 The University Of Melbourne Alzheimer's disease biomarkers
US9067981B1 (en) 2008-10-30 2015-06-30 Janssen Sciences Ireland Uc Hybrid amyloid-beta antibodies
WO2010050585A1 (ja) * 2008-10-31 2010-05-06 ディナベック株式会社 アルツハイマー病治療用ベクター
AU2009313615B2 (en) 2008-11-05 2012-11-29 Regents Of The University Of Minnesota Multicomponent immunogenic composition for the prevention of beta-hemolytic streptococcal (BHS) disease
NZ593964A (en) 2008-12-19 2012-12-21 Univ Zuerich Human anti-alpha-synuclein autoantibodies
US8614297B2 (en) 2008-12-22 2013-12-24 Hoffmann-La Roche Inc. Anti-idiotype antibody against an antibody against the amyloid β peptide
US9925282B2 (en) 2009-01-29 2018-03-27 The General Hospital Corporation Cromolyn derivatives and related methods of imaging and treatment
AU2010221418B2 (en) 2009-03-02 2015-06-04 Dignity Health Diagnostic devices and methods of use
FR2945538B1 (fr) 2009-05-12 2014-12-26 Sanofi Aventis Anticorps humanises specifiques de la forme protofibrillaire du peptide beta-amyloide.
AU2010282340B2 (en) 2009-08-13 2016-12-22 The Johns Hopkins University Methods of modulating immune function
EA022007B1 (ru) 2009-09-11 2015-10-30 Пробиодруг Аг Гетероциклические производные в качестве ингибиторов глутаминилциклазы
WO2011102901A1 (en) * 2010-02-20 2011-08-25 Ebiotec (Euroespes Biotechnology) Prevention and treatment of alzheimer's disease by amyloid beta peptide and sphingosine-1-phosphate
SG183369A1 (en) 2010-03-03 2012-09-27 Boehringer Ingelheim Int Biparatopic abeta binding polypeptides
BR112012022229A2 (pt) * 2010-03-03 2016-07-05 Univ British Columbia epítopo beta amilóide epecíficio para oligômero e anticorpos
JP6026284B2 (ja) 2010-03-03 2016-11-16 プロビオドルグ エージー グルタミニルシクラーゼの阻害剤
KR101790806B1 (ko) 2010-03-10 2017-11-20 프로비오드룩 아게 글루타미닐 사이클라제(ｑｃ, ｅｃ 2.3.2.5)의 헤테로사이클릭 억제제
WO2011130377A2 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Abbott Laboratories Amyloid-beta binding proteins
EP2560953B1 (en) 2010-04-21 2016-01-06 Probiodrug AG Inhibitors of glutaminyl cyclase
EP2576617B1 (en) 2010-06-04 2016-04-27 Georg-August-Universität Göttingen Stiftung Öffentlichen Rechts Universitätsmedizin MONOCLONAL ANTIBODIES TARGETING Aß OLIGOMERS
RU2607368C2 (ru) 2010-07-30 2017-01-10 Ац Иммуне С.А. Безопасные и функциональные гуманизированные антитела
US9289488B2 (en) 2010-08-12 2016-03-22 Ac Immune Sa Vaccine engineering
CN103298833B (zh) 2010-08-14 2015-12-16 Abbvie公司 β淀粉样蛋白结合蛋白
PL3246044T5 (pl) 2010-08-23 2024-06-17 Wyeth Llc Stabilne preparaty antygenów rLP2086 Neisseria meningitidis
MY166172A (en) 2010-09-10 2018-06-07 Wyeth Llc Non-lipidated variants of neisseria meningitidis orf2086 antigens
CA2817973C (en) 2010-10-15 2019-06-25 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Antibodies that bind amyloid oligomers
CA2813833C (en) 2010-10-26 2020-09-22 Ac Immune S.A. Liposome-based construct comprising a peptide modified through hydrophobic moieties
MX2013005413A (es) 2010-11-15 2014-02-27 Univ Ramot Analogos de dipeptidos para el tratamiento de afecciones asociadas con la formacion de fibrillas amiloides.
WO2012123563A1 (en) 2011-03-16 2012-09-20 Probiodrug Ag Benz imidazole derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase
RU2473133C2 (ru) * 2011-03-30 2013-01-20 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения и социального развития РФ Способ профилактики системного амилоидоза и его нефропатической формы у экспериментальных животных
EP2691393B1 (en) 2011-03-31 2016-09-14 Pfizer Inc Novel bicyclic pyridinones
US9512185B2 (en) 2011-06-01 2016-12-06 Xiamen University Fusion protein comprising diphtheria toxin non-toxic mutant CRM197 or fragment thereof
WO2012172449A1 (en) 2011-06-13 2012-12-20 Pfizer Inc. Lactams as beta secretase inhibitors
US9580493B2 (en) 2011-06-23 2017-02-28 Biogen International Neuroscience Gmbh Anti-α synuclein binding molecules
US9926353B2 (en) 2011-07-19 2018-03-27 New York University Immunotherapeutic modulation of amyloidogenic disease using non-fibrillogenic, non-amyloidogenic polymerized proteins and peptides
US8906382B2 (en) 2011-07-19 2014-12-09 New York University Method for treating amyloid disease
CN102895659B (zh) * 2011-07-29 2014-10-29 复旦大学 一种防治老年痴呆症复合疫苗及其制备方法
US20150065449A1 (en) 2011-08-12 2015-03-05 Florida State University Research Foundation, Inc. Treating Amyloidoses With A Vitamin B12 Composition Including Melatonin, Resveratrol, and EGCG
US20150065448A1 (en) * 2011-08-12 2015-03-05 The Florida State University Research Foundation Inc. Methods of treating amyloidoses with vitamin b12 and diagnostic test for detecting the presence of amyloid-beta peptides
WO2013030713A1 (en) 2011-08-31 2013-03-07 Pfizer Inc. Hexahydropyrano [3,4-d][1,3] thiazin-2-amine compounds
RS53496B1 (en) 2011-10-04 2015-02-27 Affiris Ag PROCEDURE FOR THE DETECTION OF Aβ-SPECIFIC ANTIBODIES IN A BIOLOGICAL SAMPLE
WO2013063086A1 (en) * 2011-10-24 2013-05-02 Intellect Neurosciences, Inc. Compositions and methods for treatment of proteinopathies
JP2012102131A (ja) * 2012-01-05 2012-05-31 Elan Pharma Internatl Ltd アミロイド形成性疾患の予防および治療
SA115360586B1 (ar) 2012-03-09 2017-04-12 فايزر انك تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها
NZ628449A (en) 2012-03-09 2016-04-29 Pfizer Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
CA2872154C (en) 2012-05-04 2016-08-23 Pfizer Inc. Heterocyclic substituted hexahydropyrano [3,4-d] [1,3] thiazin-2-amine compounds as inhibitors of app, bace1 and bace2
AP3902A (en) 2012-06-29 2016-11-17 Pfizer Novel 4-(substituted-amino)-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidines as LRRK2 inhibitors
WO2014045162A1 (en) 2012-09-20 2014-03-27 Pfizer Inc. ALKYL-SUBSTITUTED HEXAHYDROPYRANO[3,4-d] [1,3]THIAZIN-2-ANIME COMPOUNDS
UA110688C2 (uk) 2012-09-21 2016-01-25 Пфайзер Інк. Біциклічні піридинони
CN104869993B (zh) 2012-10-25 2019-01-15 通用医疗公司 治疗阿尔茨海默病及相关疾病的组合疗法
US10058530B2 (en) 2012-10-25 2018-08-28 The General Hospital Corporation Combination therapies for the treatment of Alzheimer's disease and related disorders
US9414752B2 (en) 2012-11-09 2016-08-16 Elwha Llc Embolism deflector
WO2014091352A1 (en) 2012-12-11 2014-06-19 Pfizer Inc. Hexahydropyrano [3,4-d][1,3]thiazin-2-amine compounds as inhibitors of bace1
JP6162820B2 (ja) 2012-12-19 2017-07-12 ファイザー・インク 炭素環式および複素環式置換ヘキサヒドロピラノ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−アミン化合物
JP6469585B2 (ja) 2013-01-07 2019-02-13 バイオメディカル リサーチ モデルズ， インコーポレイテッド 単純ヘルペスウイルス２型感染を処置するための治療用ワクチン
WO2014125394A1 (en) 2013-02-13 2014-08-21 Pfizer Inc. HETEROARYL-SUBSTITUTED HEXAHYDROPYRANO [3,4-d][1,3] THIAZIN-2-AMINE COMPOUNDS
US9233981B1 (en) 2013-02-15 2016-01-12 Pfizer Inc. Substituted phenyl hexahydropyrano[3,4-d][1,3]thiazin-2-amine compounds
CA2900302C (en) 2013-02-19 2018-07-03 Pfizer Inc. Azabenzimidazole compounds as inhibitors of pde4 isozymes for the treatment of cns and other disorders
ES2685894T3 (es) 2013-03-08 2018-10-15 Pfizer Inc. Polipéptidos de fusión inmunogénicos
WO2014159614A1 (en) * 2013-03-14 2014-10-02 Flow Pharma, Inc. Adjuvant and antigen particle formulation
US9102752B2 (en) 2013-03-15 2015-08-11 United Biomedical, Inc. Peptide vaccine for prevention and immunotherapy of dementia of the Alzheimer's type
EP2787347A1 (en) 2013-04-03 2014-10-08 Affiris AG Method for detecting Aß-specific antibodies in a biological sample
US10525005B2 (en) 2013-05-23 2020-01-07 The General Hospital Corporation Cromolyn compositions and methods thereof
US10195257B2 (en) 2013-07-28 2019-02-05 Qantu Therapeutics, Inc. Vaccine formulations comprising quillaja desacylsaponins and beta amyloid peptides or tau protein to induce a Th2 immune response
KR101905278B1 (ko) 2013-09-08 2018-10-08 화이자 인코포레이티드 나이세리아 메닌지티디스 조성물 및 그의 방법
EP3052495B1 (en) 2013-10-04 2019-06-26 Pfizer Inc Novel bicyclic pyridinones as gamma-secretase modulators
AU2014340182B2 (en) 2013-10-22 2019-05-23 The General Hospital Corporation Cromolyn derivatives and related methods of imaging and treatment
EP3083618B1 (en) 2013-12-17 2018-02-21 Pfizer Inc Novel 3,4-disubstituted-1h-pyrrolo[2,3-b]pyridines and 4,5-disubstituted-7h-pyrrolo[2,3-c]pyridazines as lrrk2 inhibitors
BR112016022519A8 (pt) 2014-04-01 2018-03-06 Pfizer cromeno e 1,1a,2,7b-tetra-hidrociclopropa[c]cromeno piridopirazinadionas como moduladores de gama-secretase
EP3129388A1 (en) 2014-04-10 2017-02-15 Pfizer Inc. 2-AMINO-6-METHYL-4,4a,5,6-TETRAHYDROPYRANO[3,4-d][1,3]THIAZIN-8a(8H)-YL-1,3-THIAZOL-4-YL AMIDES
WO2015165961A1 (en) 2014-04-29 2015-11-05 Affiris Ag Treatment and prevention of alzheimer's disease (ad)
EP3269376B1 (en) 2014-04-29 2020-07-15 Affiris AG Treatment and prevention of alzheimer's disease (ad)
WO2015165971A1 (en) * 2014-04-29 2015-11-05 Affiris Ag Treatment and prevention of alzheimer's disease (ad)
WO2015165974A1 (en) * 2014-04-29 2015-11-05 Affiris Ag Treatment and prevention of dementias associated with amyloid deposition, preferably alzheimer's disease (ad)
EP3137094B1 (en) * 2014-04-29 2022-12-07 ADvantage Therapeutics, Inc. Treatment and prevention of alzheimer's disease (ad)
WO2015195631A1 (en) * 2014-06-17 2015-12-23 Academia Sinica HUMANIZED ANTI-IgE ANTIBODIES THAT CROSSLINK CD23 ON B LYMPHOCYTES BUT DO NOT SENSITIZE MAST CELLS
KR102564384B1 (ko) 2014-07-10 2023-08-07 바이오악틱 에이비 개선된 Aβ 프로토피브릴 결합 항체
JP6713982B2 (ja) 2014-07-24 2020-06-24 ファイザー・インク ピラゾロピリミジン化合物
JP6506833B2 (ja) 2014-08-06 2019-04-24 ファイザー・インク イミダゾピリダジン化合物
MA41115A (fr) 2014-12-02 2017-10-10 Biogen Int Neuroscience Gmbh Procédé de traitement de la maladie d'alzheimer
AU2016214102B2 (en) 2015-02-03 2018-09-27 Pfizer Inc. Novel cyclopropabenzofuranyl pyridopyrazinediones
EP3270959A1 (en) 2015-02-19 2018-01-24 Pfizer Inc Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
SG10201912333PA (en) 2015-06-17 2020-02-27 Pfizer Tricyclic compounds and their use as phosphodiesterase inhibitors
IL302486A (en) 2015-06-24 2023-06-01 Hoffmann La Roche Antibodies against the transnephrine receptor with adapted affinity
WO2017046675A1 (en) 2015-09-14 2017-03-23 Pfizer Inc. Novel imidazo [4,5-c] quinoline and imidazo [4,5-c][1,5] naphthyridine derivatives as lrrk2 inhibitors
WO2017051303A1 (en) 2015-09-24 2017-03-30 Pfizer Inc. Tetrahydropyrano[3,4-d][1,3]oxazin derivatives and their use as bace inhibitors
EP3353174A1 (en) 2015-09-24 2018-08-01 Pfizer Inc N-[2-(3-amino-2,5-dimethyl-1,1-dioxido-5,6-dihydro-2h-1,2,4-thiadiazin-5-yl)-1,3-thiazol-4-yl]amides useful as bace inhibitors
JP2018531923A (ja) 2015-09-24 2018-11-01 ファイザー・インク Ｎ−［２−（２−アミノ−６，６−二置換−４，４ａ，５，６−テトラヒドロピラノ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−８ａ（８Ｈ）−イル）−１，３−チアゾール−４−イル］アミド
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
PE20231655A1 (es) 2015-10-02 2023-10-17 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos contra el cd20 humano y el receptor de transferrina humano y metodos de uso
WO2017079831A1 (en) 2015-11-09 2017-05-18 The University Of British Columbia N-terminal epitopes in amyloid beta and conformationally-selective antibodies thereto
EP3374383A4 (en) * 2015-11-09 2019-05-15 The University Of British Columbia BETA-AMYLOID EPITOPES AND ASSOCIATED ANTIBODIES
WO2017079833A1 (en) 2015-11-09 2017-05-18 The University Of British Columbia Epitopes in amyloid beta mid-region and conformationally-selective antibodies thereto
BR112018015191B1 (pt) 2016-02-23 2023-10-17 Pfizer Inc Compostos de 6,7-di-hidro-5h-pirazolo[5,1-b][1,3]oxazina-2-carboxamida, seu uso e composição farmacêutica que os compreende
HUE054857T2 (hu) 2016-07-01 2021-10-28 Pfizer 5,7-dihidro-pirrolo-piridinszármazékok neurológiai és neurodegeneratív betegségek kezelésére
CN116889562A (zh) 2016-08-31 2023-10-17 通用医疗公司 与神经退行性疾病相关的神经炎症中的巨噬细胞/小胶质细胞
US20180125920A1 (en) 2016-11-09 2018-05-10 The University Of British Columbia Methods for preventing and treating A-beta oligomer-associated and/or -induced diseases and conditions
SG11201906519RA (en) 2017-01-31 2019-08-27 Pfizer Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
BR112019018688A2 (pt) 2017-03-10 2020-04-07 Pfizer derivados de imidazo[4,5-c] quinolina como inibidores de lrrk2
EP3592740B1 (en) 2017-03-10 2022-02-09 Pfizer Inc. Cyclic substituted imidazo[4,5-c]quinoline derivatives
RU2678987C2 (ru) 2017-04-28 2019-02-05 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная фирма ВЕРТА" Пептид для лечения болезни альцгеймера
JP2020523035A (ja) 2017-06-07 2020-08-06 エーディーアールエックス， インコーポレイテッド タウ凝集阻害剤
HUE060914T2 (hu) 2017-06-22 2023-04-28 Pfizer Dihidro-pirrolo-piridin származékok
US11209638B2 (en) * 2017-07-05 2021-12-28 West Virginia University Systems and methods for supporting and positioning body tissue samples in a microscope
CN111565711B (zh) 2017-07-20 2023-01-03 阿茨治疗股份有限公司 色甘酸钠和布洛芬的粉末化制剂
EP3668886A2 (en) 2017-08-18 2020-06-24 Adrx, Inc. Tau aggregation peptide inhibitors
AU2018321335A1 (en) 2017-08-22 2020-02-27 Biogen Ma Inc. Pharmaceutical compositions containing anti-beta amyloid antibodies
PL3461819T3 (pl) 2017-09-29 2020-11-30 Probiodrug Ag Inhibitory cyklazy glutaminylowej
ES2942837T3 (es) 2018-03-23 2023-06-07 Pfizer Derivados de azaespiro piperazina
US12018069B2 (en) 2018-06-28 2024-06-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods and compositions for imaging amyloid deposits
KR20210071943A (ko) 2018-07-02 2021-06-16 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 크로몰린 소듐 및 α-락토스의 분말화된 제형
IL298215A (en) 2020-05-19 2023-01-01 Othair Prothena Ltd A multi-epitope vaccine for the treatment of Alzheimer's disease

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0526511A1 (en) * 1990-04-27 1993-02-10 John Mcmichael METHOD AND COMPOSITION FOR TREATING CONDITIONS OF THE CENTRAL NERVOUS SYSTEM ASSOCIATED WITH THE ABNORMAL AMYLOID PROTEIN BETA.
WO1994000153A1 (en) * 1992-06-25 1994-01-06 Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) Vaccine composition containing adjuvants

Family Cites Families (431)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US589566A (en) * 1897-09-07 meevten
US6096318A (en) 1973-05-07 2000-08-01 The Ohio State University Antigenically modified HCG polypeptides
JPS57212347A (en) * 1981-06-25 1982-12-27 Nissan Motor Co Ltd Air-fuel ratio control system
US4902506A (en) * 1983-07-05 1990-02-20 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
GB8308235D0 (en) * 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) * 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5158769A (en) * 1984-03-07 1992-10-27 New York Blood Center, Inc. Pre-S gene coded peptide hepatitis B immunogens, vaccines, diagnostics, and synthetic lipid vesicle carriers
US5417986A (en) 1984-03-16 1995-05-23 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Vaccines against diseases caused by enteropathogenic organisms using antigens encapsulated within biodegradable-biocompatible microspheres
US5208036A (en) 1985-01-07 1993-05-04 Syntex (U.S.A.) Inc. N-(ω, (ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω, (ω-1)-dialkenyloxy)-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US4666829A (en) 1985-05-15 1987-05-19 University Of California Polypeptide marker for Alzheimer's disease and its use for diagnosis
IT1190383B (it) * 1985-08-01 1988-02-16 Eniricerche Spa Sostanze peptidominetiche ad azione ipotensiva
EP0247091B1 (en) 1985-11-01 1993-09-29 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US5618920A (en) * 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US4713366A (en) * 1985-12-04 1987-12-15 The Ohio State University Research Foundation Antigenic modification of polypeptides
US5096706A (en) * 1986-03-25 1992-03-17 National Research Development Corporation Antigen-based treatment for adiposity
US6548640B1 (en) * 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5225539A (en) * 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5278049A (en) * 1986-06-03 1994-01-11 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Recombinant molecule encoding human protease nexin
US5231170A (en) * 1986-08-27 1993-07-27 Paul Averback Antibodies to dense microspheres
US5187153A (en) 1986-11-17 1993-02-16 Scios Nova Inc. Methods of treatment using Alzheimer's amyloid polypeptide derivatives
US5220013A (en) * 1986-11-17 1993-06-15 Scios Nova Inc. DNA sequence useful for the detection of Alzheimer's disease
US5223482A (en) 1986-11-17 1993-06-29 Scios Nova Inc. Recombinant Alzheimer's protease inhibitory amyloid protein and method of use
US4879213A (en) 1986-12-05 1989-11-07 Scripps Clinic And Research Foundation Synthetic polypeptides and antibodies related to Epstein-Barr virus early antigen-diffuse
US4818397A (en) * 1986-12-22 1989-04-04 Sundstrand Corporation Shut-off valve seal
DE3702789A1 (de) 1987-01-30 1988-08-18 Bayer Ag Vorlaeuferprotein des apc-polypeptids, dafuer codierende dna und diagnostische verwendung der dna und des proteins
US4912206A (en) * 1987-02-26 1990-03-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services CDNA clone encoding brain amyloid of alzheimer's disease
JP3101690B2 (ja) * 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US4883666A (en) 1987-04-29 1989-11-28 Massachusetts Institute Of Technology Controlled drug delivery system for treatment of neural disorders
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
US5245015A (en) 1991-04-26 1993-09-14 Tanox Biosystems, Inc. Monoclonal antibodies which neutralize HIV-1 through reaction with a conformational epitope in vitro
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US5583112A (en) * 1987-05-29 1996-12-10 Cambridge Biotech Corporation Saponin-antigen conjugates and the use thereof
US5645820A (en) * 1987-06-24 1997-07-08 Autoimmune, Inc. Treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens
US5571499A (en) * 1987-06-24 1996-11-05 Autoimmune, Inc. Treatment of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens
US5571500A (en) * 1987-06-24 1996-11-05 Autoimmune, Inc. Treatment of autoimmune diseases through administration by inhalation of autoantigens
US5849298A (en) * 1987-06-24 1998-12-15 Autoimmune Inc. Treatment of multiple sclerosis by oral administration of bovine myelin
US5641474A (en) * 1987-06-24 1997-06-24 Autoimmune, Inc. Prevention of autoimmune diseases by aerosol administration of autoantigens
US5869054A (en) * 1987-06-24 1999-02-09 Autoimmune Inc. Treatment of multiple sclerosis by oral administration of autoantigens
ATE258065T1 (de) 1987-06-24 2004-02-15 Brigham & Womens Hospital Behandlung von autoimmun-erkrankungen durch orale verabreichung von autoantigenen
US4912208A (en) * 1987-06-29 1990-03-27 Abbott Laboratories Fluorophores for encapsulation into liposomes
US5004697A (en) * 1987-08-17 1991-04-02 Univ. Of Ca Cationized antibodies for delivery through the blood-brain barrier
US4966753A (en) 1987-08-18 1990-10-30 Molecular Rx, Inc. Immunotherapeutic methods and compositions employing antigens characteristic of malignant neoplasms
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
US5231000A (en) * 1987-10-08 1993-07-27 The Mclean Hospital Antibodies to A4 amyloid peptide
CA1339014C (en) 1987-10-08 1997-03-25 Ronald E. Majocha Antibodies to a4 amyloid peptide
JP2518911B2 (ja) 1987-10-23 1996-07-31 森永乳業株式会社 ｃ―ｆｍｓ癌原遺伝子の過剰発現によって特徴づけられた癌の処置用組成物および方法
US5089603A (en) * 1989-06-21 1992-02-18 Tanox Biosystems, Inc. Antigenic epitopes present on membrane-bound but not secreted iga
AU3056289A (en) 1988-01-13 1989-08-11 Mclean Hospital Corporation, The Genetic constructs containing the alzheimer brain amyloid gene
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
US5576184A (en) * 1988-09-06 1996-11-19 Xoma Corporation Production of chimeric mouse-human antibodies with specificity to human tumor antigens
US5098706A (en) * 1988-11-01 1992-03-24 The Regents Of The University Of California Juvenile hormone esterase for insect control
WO1990005142A1 (en) 1988-11-10 1990-05-17 Imperial Cancer Research Technology Ltd. Polypeptides
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) * 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5227159A (en) 1989-01-31 1993-07-13 Miller Richard A Anti-idiotype antibodies reactive with shared idiotopes expressed by B cell lymphomas and autoantibodies
US5262332A (en) 1989-04-05 1993-11-16 Brigham And Women's Hospital Diagnostic method for Alzheimer's disease: examination of non-neural tissue
WO1990012870A1 (en) 1989-04-14 1990-11-01 Research Foundation For Mental Hygiene, Inc. Monoclonal antibody to amyloid peptide
AU5439790A (en) 1989-04-14 1990-11-16 Research Foundation For Mental Hygiene, Inc. Cerebrovascular amyloid protein-specific monoclonal antibody sv17-6e10
HU212924B (en) 1989-05-25 1996-12-30 Chiron Corp Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion
US5399346A (en) 1989-06-14 1995-03-21 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Gene therapy
DK0506785T3 (da) 1989-12-20 2000-07-24 Autoimmune Inc Forbedret behandling af autoimmune sygdomme ved aerosol-administration af autoantigener
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
DK0463151T3 (da) 1990-01-12 1996-07-01 Cell Genesys Inc Frembringelse af xenogene antistoffer
DE69127470T2 (de) 1990-03-02 1998-02-19 Autoimmune Inc Verstärkung der unterdrückungsregulation von autoimmunkrankheiten durch orale oder enterale verabreichung von autoantigenen
GB9005705D0 (en) 1990-03-14 1990-05-09 Health Lab Service Board Particle manipulation
US5279833A (en) 1990-04-04 1994-01-18 Yale University Liposomal transfection of nucleic acids into animal cells
EP0451700A1 (en) 1990-04-10 1991-10-16 Miles Inc. Recombinant APP minigenes for expression in transgenic mice as models for Alzheimers's disease
US5264618A (en) 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
CA2079880A1 (en) 1990-04-24 1991-10-25 William E. Van Nostrand Purification, detection and methods of use of protease nexin-2
US5753624A (en) * 1990-04-27 1998-05-19 Milkhaus Laboratory, Inc. Materials and methods for treatment of plaquing disease
GB9009548D0 (en) 1990-04-27 1990-06-20 Celltech Ltd Chimeric antibody and method
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
AU8081491A (en) 1990-06-01 1991-12-31 Cetus Corporation Compositions and methods for identifying biologically active molecules
US5914109A (en) * 1990-06-15 1999-06-22 New York University Heterohybridomas producing human monoclonal antibodies to HIV-1
AU646877B2 (en) * 1990-06-15 1994-03-10 Scios Nova Inc. Transgenic non-human mammal displaying the amyloid-forming pathology of alzheimer's disease
WO1991019795A1 (en) 1990-06-19 1991-12-26 Immuvax Nonpathogenic variant virus
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
KR970005049B1 (ko) * 1990-07-16 1997-04-11 더 리젠츠 오브 더 유니벌시티 오브 캘리포니아 바쿨로비루스 발현 시스템, 이 벡터 시스템을 포함하는 이종성 무척추동물 숙주세포, 상기 시스템에 의해 생산되는 가용성의 정제된 야생형 망막아세포종 폴리펩티드 및 이 폴리펩티드의 생산 방법
US5780587A (en) * 1990-08-24 1998-07-14 President And Fellows Of Harvard College Compounds and methods for inhibiting β-protein filament formation and neurotoxicity
WO1993012227A1 (en) 1991-12-17 1993-06-24 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
NZ239643A (en) 1990-09-17 1996-05-28 North American Vaccine Inc Vaccine containing bacterial polysaccharide protein conjugate and adjuvant (c-nd-che-a-co-b-r) with a long chain alkyl group.
US5702906A (en) 1990-09-25 1997-12-30 Genentech, Inc. Antibodies to neurotrophic factor-4 (NT-4)
AU8768191A (en) 1990-09-28 1992-04-28 Upjohn Company, The Transgenic animals with alzheimer's amyloid precursor gene
WO1992005793A1 (en) 1990-10-05 1992-04-16 Medarex, Inc. Targeted immunostimulation with bispecific reagents
AU9023791A (en) 1990-10-15 1992-05-20 Brigham And Women's Hospital Treatment of autoimmune diseases by oral administration of autoantigens
GB9023352D0 (en) 1990-10-26 1990-12-05 Lynxvale Ltd Vaccinia vectors,vaccinia genes and expression products thereof
EP0971033B1 (en) 1991-01-21 2009-10-28 Elan Pharmaceuticals, Inc. Test and model for Alzheimer's disease
CA2081660C (en) * 1991-03-01 2001-05-01 Raymond Dufour Method for improving the organoleptic qualities of the meat from uncastrated male domestic animals and vaccine set for use in this method
DE4107857A1 (de) * 1991-03-12 1992-09-17 Thomae Gmbh Dr K Cyclische harnstoffderivate, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und verfahren zu ihrer herstellung
US5192753A (en) * 1991-04-23 1993-03-09 Mcgeer Patrick L Anti-rheumatoid arthritic drugs in the treatment of dementia
ES2135406T3 (es) 1991-05-08 1999-11-01 Schweiz Serum & Impfinst Virosomas de la influenza reconstituidos inmunoestimulantes e inmunopotencializadores y vacunas que los contienen.
WO1994004679A1 (en) * 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
ATE255131T1 (de) 1991-06-14 2003-12-15 Genentech Inc Humanisierter heregulin antikörper
US5672805A (en) 1991-07-18 1997-09-30 The Regents Of The University Of California Transgenic mice expressing the neurotoxic C-terminus of β-amyloid precursor protein
US5434050A (en) 1991-08-13 1995-07-18 Regents Of The University Of Minnesota Labelled β-amyloid peptide and methods of screening for Alzheimer's disease
US5283185A (en) 1991-08-28 1994-02-01 University Of Tennessee Research Corporation Method for delivering nucleic acids into cells
CA2118806A1 (en) 1991-09-18 1993-04-01 William J. Dower Method of synthesizing diverse collections of oligomers
US5837268A (en) 1991-10-16 1998-11-17 University Of Saskatchewan GnRH-leukotoxin chimeras
DE69233109T2 (de) 1992-01-07 2004-05-19 Elan Pharmaceuticals, Inc., San Francisco Transgene tiermodelle fur alzheimer-krankheit
US5679348A (en) * 1992-02-03 1997-10-21 Cedars-Sinai Medical Center Immunotherapy for recurrent HSV infections
ATE245446T1 (de) 1992-02-11 2003-08-15 Jackson H M Found Military Med Dualer träger für immunogene konstrukte
US5314813A (en) 1992-02-19 1994-05-24 Scripps Research Institute Drosophila cell lines expressing genes encoding MHC class I antigens and B2-microglobulin and capable of assembling empty complexes and methods of making said cell lines
CA2117492C (en) 1992-02-28 2009-04-07 Howard L. Weiner Bystander suppression of autoimmune diseases
US5714350A (en) * 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
EP0561087B1 (en) 1992-03-20 1999-08-04 N.V. Innogenetics S.A. Mutated form of the beta-amyloid precursor protein gene
US5604102A (en) 1992-04-15 1997-02-18 Athena Neurosciences, Inc. Methods of screening for β-amyloid peptide production inhibitors
US5441870A (en) * 1992-04-15 1995-08-15 Athena Neurosciences, Inc. Methods for monitoring cellular processing of β-amyloid precursor protein
US5851787A (en) * 1992-04-20 1998-12-22 The General Hospital Corporation Nucleic acid encoding amyloid precursor-like protein and uses thereof
AU4116793A (en) 1992-04-24 1993-11-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
GB9209118D0 (en) 1992-04-28 1992-06-10 Sb 120 Amsterdam Bv Vaccine compositions
ATE188508T1 (de) 1992-06-18 2000-01-15 Harvard College Impfstoffe gegen diphtherietoxin
US5766846A (en) * 1992-07-10 1998-06-16 Athena Neurosciences Methods of screening for compounds which inhibit soluble β-amyloid peptide production
US6610493B1 (en) 1993-06-17 2003-08-26 Brigham And Women's Hospital Screening compounds for the ability to alter the production of amyloid-β peptide
US5837672A (en) * 1992-07-10 1998-11-17 Athena Neurosciences, Inc. Methods and compositions for the detection of soluble β-amyloid peptide
WO1994001772A1 (en) 1992-07-13 1994-01-20 The Children's Medical Center Corporation SCREEN FOR ALZHEIMER'S DISEASE THERAPEUTICS BASED ON β-AMYLOID PRODUCTION
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
DK0652962T3 (da) 1992-07-31 1999-08-23 Medeva Holdings Bv Ekspression af rekombinante fusionsproteiner i attenuerede bakterier
EP0667786B1 (en) 1992-08-27 2004-01-21 Deakin Research Limited Retro-, inverso-, and retro-inverso synthetic peptide analogues
FI96267C (sv) 1992-09-16 1996-06-10 Formit Foodprocessing Ab Oy Vals och maskin för skalning eller formning av potatis och liknande produkter
US5958883A (en) * 1992-09-23 1999-09-28 Board Of Regents Of The University Of Washington Office Of Technology Animal models of human amyloidoses
CA2107181C (en) * 1992-09-29 1998-12-29 Yoshiaki Tachikawa Arrayed-wave guide grating multi/demultiplexer with loop-back optical paths
DK0665897T3 (da) 1992-10-01 2003-10-20 Univ Columbia Komplekse, kombinatoriske, kemiske biblioteker kodet med etiketter
WO1994009364A1 (en) 1992-10-13 1994-04-28 Duke University Method of inhibiting binding of amyloid precursor protein to beta-amyloid protein
US5605811A (en) * 1992-10-26 1997-02-25 Athena Neurosciences, Inc. Methods and compositions for monitoring cellular processing of beta-amyloid precursor protein
DK1298436T3 (da) 1992-10-26 2010-10-25 Elan Pharm Inc Fremgangsmåde til identificering af inhibitorforbindelser for frisætning af beta-amyloidpeptid (BAP)
US5972336A (en) * 1992-11-03 1999-10-26 Oravax Merieux Co. Urease-based vaccine against helicobacter infection
US5733647A (en) * 1992-11-05 1998-03-31 Polymer Innovations, Inc. Insole
US6210671B1 (en) * 1992-12-01 2001-04-03 Protein Design Labs, Inc. Humanized antibodies reactive with L-selectin
AU6014094A (en) 1992-12-02 1994-06-22 Baylor College Of Medicine Episomal vectors for gene therapy
ES2196024T3 (es) * 1993-01-22 2003-12-16 Sloan Kettering Inst Cancer Vacunas conjugadas de gangliosido-klh con qs-21.
EP0683234B2 (en) * 1993-01-25 2007-06-06 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibody against beta-amyloid or their derivative and use thereof
US5955317A (en) * 1993-01-25 1999-09-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibodies to β-amyloids or their derivatives and use thereof
US5750106A (en) * 1993-01-28 1998-05-12 Novartis Ag Human monoclonal antibodies to cytomegalovirus
US5358708A (en) 1993-01-29 1994-10-25 Schering Corporation Stabilization of protein formulations
US5989565A (en) * 1993-01-29 1999-11-23 University Of Pittsburgh Elution and identification of T cell epitopes from viable cells
US5472693A (en) * 1993-02-16 1995-12-05 The Dow Chemical Company Family of anti-carcinoembryonic antigen chimeric antibodies
CA2115811A1 (en) * 1993-02-17 1994-08-18 Claus Krebber A method for in vivo selection of ligand-binding proteins
CA2115900A1 (en) 1993-02-22 1994-08-23 Gerald W. Becker Pharmaceutical screens and antibodies
CA2158455C (en) * 1993-03-17 2003-05-27 Nicholas P. Restifo Immunogenic chimeras comprising nucleic acid sequences encoding endoplasmic reticulum signal sequence peptides and at least one other peptide and their uses in vaccines and disease treatments
WO1994021288A1 (en) 1993-03-18 1994-09-29 Cytimmune Sciences, Inc. Composition and method for reducing toxicity of biologically-active factors
ATE204762T1 (de) * 1993-03-23 2001-09-15 Smithkline Beecham Biolog 3-0-deazylierte monophosphoryl lipid a enthaltende impfstoff-zusammensetzungen
CA2119090A1 (en) * 1993-03-26 1994-09-27 Wayne R. Gombotz Compositions for controlled release of biologically active tgf-.beta.
IT1270939B (it) 1993-05-11 1997-05-26 Angeletti P Ist Richerche Bio Procedimento per la preparazione di immunogeni e reagenti diagnostici,e immunogeni e reagenti diagnostici cosi' ottenibili.
JP3734263B2 (ja) 1993-05-25 2006-01-11 ワイス・ホールディングズ・コーポレイション 呼吸器シンシチウムウイルスに対するワクチンのためのアジュバント
WO1994028412A1 (en) 1993-05-28 1994-12-08 The Miriam Hospital Composition and method for in vivo imaging of amyloid deposits
DE69429723T2 (de) 1993-06-04 2002-09-26 Whitehead Biomedical Inst Stressproteine und ihre verwendung
US5464823A (en) * 1993-07-20 1995-11-07 The Regents Of The University Of California Mammalian antibiotic peptides
ATE215124T1 (de) 1993-07-30 2002-04-15 Medeva Holdings Bv Rekombinante tetc-fusionsprotein enthaltene impfstoffzusammensetzungen
EP0664814A1 (en) 1993-08-18 1995-08-02 MorphoSys AG Lipopolysaccharide-binding and neutralizing peptides
DK96493D0 (da) 1993-08-26 1993-08-26 Mouritsen Og Elsner Aps Fremgangsmaade til at inducere antistofresponser mod selvproteiner og autovaccine fremstillet ved fremgangsmaaden
AU707083B2 (en) 1993-08-26 1999-07-01 Bavarian Nordic Inc. Inducing antibody response against self-proteins with the aid of foreign T-cell epitopes
EP0714308A4 (en) 1993-08-26 1998-07-29 Univ California METHOD, COMPOSITIONS AND DEVICES FOR THE DELIVERY OF NAKED POLYNUCLEOTIDES THAT ENCODE BIOLOGICALLY ACTIVE PEPTIDES
FR2709247B1 (fr) * 1993-08-27 1995-09-29 Martin Jean Raymond Dispositif d'ancrage d'une instrumentation rachidienne sur une vertèbre.
WO1995006407A1 (en) 1993-08-30 1995-03-09 The Regents Of The University Of California Novel component of amyloid in alzheimer's disease and methods for use of same
EP0730609B1 (en) 1993-09-07 2005-01-05 Smithkline Beecham Corporation Recombinant il4 antibodies useful in treatment of il4 mediated disorders
US5652334A (en) * 1993-09-08 1997-07-29 City Of Hope Method for design of substances that enhance memory and improve the quality of life
US5385887A (en) 1993-09-10 1995-01-31 Genetics Institute, Inc. Formulations for delivery of osteogenic proteins
ATE415173T1 (de) 1993-09-14 2008-12-15 Pharmexa Inc Pan dr-bindeproteinen zur erhöhung der immunantwort
US5415584A (en) 1993-09-21 1995-05-16 Tomco2 Equipment Company Particle blast cleaning apparatus
US5470951A (en) 1993-09-29 1995-11-28 City Of Hope Peptides for antagonizing the effects of amyloid βprotein
US5858981A (en) 1993-09-30 1999-01-12 University Of Pennsylvania Method of inhibiting phagocytosis
JPH09506170A (ja) 1993-10-20 1997-06-17 デューク・ユニヴァーシティ β‐アミロイドペプチドに物質を結合する方法
DK0724431T3 (da) 1993-10-22 2003-01-06 Genentech Inc Fremgangsmåder og sammensætninger til mikroindkapsling af adjuvanser
CN1134156A (zh) 1993-11-02 1996-10-23 阿菲马克斯技术公司 合成和筛选多种分子
US5744368A (en) 1993-11-04 1998-04-28 Research Foundation Of State University Of New York Methods for the detection of soluble amyloid β-protein (βAP) or soluble transthyretin (TTR)
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
US5434170A (en) * 1993-12-23 1995-07-18 Andrulis Pharmaceuticals Corp. Method for treating neurocognitive disorders
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
CA2182311A1 (en) * 1994-01-27 1995-08-03 Karen Hsiao Transgenic non-human mammals with progressive neurologic disease
US5877399A (en) * 1994-01-27 1999-03-02 Johns Hopkins University Transgenic mice expressing APP-Swedish mutation develop progressive neurologic disease
US5935927A (en) * 1994-02-03 1999-08-10 The Picower Institute For Medical Research Compositions and methods for stimulating amyloid removal in amyloidogenic diseases using advanced glycosylation endproducts
AUPM411994A0 (en) 1994-02-25 1994-03-24 Deakin Research Limited Epitopes
ES2129809T3 (es) 1994-02-28 1999-06-16 Sumitomo Chemical Co Composicion para resina poliolefinica y pelicula de resina.
US5795954A (en) 1994-03-04 1998-08-18 Genentech, Inc. Factor VIIa inhibitors from Kunitz domain proteins
US6270757B1 (en) 1994-04-21 2001-08-07 Genetics Institute, Inc. Formulations for IL-11
US6372716B1 (en) * 1994-04-26 2002-04-16 Genetics Institute, Inc. Formulations for factor IX
WO1995030642A1 (en) 1994-05-06 1995-11-16 Pharmacopeia, Inc. Combinatorial dihydrobenzopyran library
ATE202940T1 (de) 1994-05-25 2001-07-15 John Mcmichael Mittel und methoden zur behandlung von plaque- krankheiten
US5622701A (en) * 1994-06-14 1997-04-22 Protein Design Labs, Inc. Cross-reacting monoclonal antibodies specific for E- and P-selectin
US5663046A (en) 1994-06-22 1997-09-02 Pharmacopeia, Inc. Synthesis of combinatorial libraries
US5798100A (en) * 1994-07-06 1998-08-25 Immunomedics, Inc. Multi-stage cascade boosting vaccine
US6417178B1 (en) * 1994-07-19 2002-07-09 University Of Pittsburgh Amyloid binding nitrogen-linked compounds for the antemortem diagnosis of alzheimer's disease, in vivo imaging and prevention of amyloid deposits
CN1180843C (zh) 1994-07-27 2004-12-22 昆士兰医学研究所 多表位疫苗
EP0784684B8 (en) 1994-09-16 2008-03-26 Cancer Research Institute of Contra Costa RECOMBINANT PEPTIDES DERIVED FROM THE Mc3 ANTI-BA46 ANTIBODY, METHODS OF USE THEREOF, AND METHODS OF HUMANIZING ANTIBODY PEPTIDES
ATE178104T1 (de) * 1994-10-14 1999-04-15 Oriental Sangyo Co Ltd Elektrolytische vorrichtung zur herstellung von kohlenstoff-dioxyd
NL9401735A (nl) * 1994-10-19 1996-06-03 Crown Gear Bv Tandwieloverbrenging van een cilindrisch rondsel met een kroonwiel, het kroonwiel dat toegepast wordt in deze tandwieloverbrenging, een werkwijze volgens welke het kroonwiel gemaakt kan worden alsmede een gereedschap waarmee het kroonwiel gemaakt kan worden.
US5872005A (en) * 1994-11-03 1999-02-16 Cell Genesys Inc. Packaging cell lines for adeno-associated viral vectors
JPH08137927A (ja) * 1994-11-07 1996-05-31 Hitachi Ltd 部品配置配線表示方法
US6114133A (en) * 1994-11-14 2000-09-05 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods for aiding in the diagnosis of Alzheimer's disease by measuring amyloid-β peptide (x-≧41)
US5589154A (en) 1994-11-22 1996-12-31 Rutgers, The State University Of New Jersey Methods for the prevention or treatment of vascular hemorrhaging and Alzheimer's disease
US5688651A (en) 1994-12-16 1997-11-18 Ramot University Authority For Applied Research And Development Ltd. Prevention of protein aggregation
DE69620877T2 (de) 1995-02-06 2002-12-12 Genetics Inst Arzneimittelformulierungen für il-12
US5786180A (en) 1995-02-14 1998-07-28 Bayer Corporation Monoclonal antibody 369.2B specific for β A4 peptide
US5624937A (en) * 1995-03-02 1997-04-29 Eli Lilly And Company Chemical compounds as inhibitors of amyloid beta protein production
DE69621607T2 (de) 1995-03-14 2003-01-02 Praecis Pharm Inc VERBINDUNGEN MIT AGGREGATIONS-MODULIERENDEN WIRKUNG AUF DAS AMYLOiD PROTEIN
US5817626A (en) * 1995-03-14 1998-10-06 Praecis Pharmaceuticals Incorporated Modulators of beta-amyloid peptide aggregation
US6303567B1 (en) * 1995-03-14 2001-10-16 Praecis Pharmaceuticals, Inc . Modulators of β-amyloid peptide aggregation comprising D-amino acids
US5854215A (en) 1995-03-14 1998-12-29 Praecis Pharmaceuticals Incorporated Modulators of β-amyloid peptide aggregation
AU711702B2 (en) * 1995-03-23 1999-10-21 Cambridge University Technical Services Limited Vectors for gene delivery
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) * 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
ATE274064T1 (de) 1995-05-23 2004-09-15 Morphosys Ag Multimere proteine
AU6113896A (en) 1995-06-05 1996-12-24 Brigham And Women's Hospital Use of oral tolerance to suppress both th1 and th2 immune re sponses and to suppress antibody production
EP0832205A1 (en) 1995-06-07 1998-04-01 Athena Neurosciences, Inc. Method for identifying alzheimer's disease therapeutics using transgenic animal models
US5948763A (en) 1995-06-07 1999-09-07 New York University Peptides and pharmaceutical compositions thereof for treatment of disorders or diseases associated with abnormal protein folding into amyloid or amyloid-like deposits
IT1276680B1 (it) * 1995-06-08 1997-11-03 Oris Spa Processo di sintesi dell'1-piridiniopropan-3-solfonato
US5910427A (en) 1995-06-22 1999-06-08 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Antigen non-specific glycosylation inhibiting factor derivatives
US5780361A (en) * 1995-06-23 1998-07-14 Nec Corporation Salicide process for selectively forming a monocobalt disilicide film on a silicon region
DK0750907T3 (da) * 1995-06-30 2002-07-08 American Cyanamid Co Stabile vaccinepræparater til parenteral administrering, en fremgangsmåde til deres anvendelse og en fremgangsmåde til deres fremstilling
CA2226255A1 (en) * 1995-07-07 1997-01-30 Darwin Molecular Corporation Chromosome 1 gene and gene products related to alzheimer's disease
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
AUPN443995A0 (en) 1995-07-27 1995-08-17 Csl Limited Papillomavirus polyprotein
DE69621940T2 (de) 1995-08-18 2003-01-16 Morphosys Ag Protein-/(poly)peptidbibliotheken
AU6898996A (en) * 1995-08-21 1997-03-12 Cytrx Corporation Compositions and methods for growth promotion
ES2218598T3 (es) 1995-09-14 2004-11-16 The Regents Of The University Of California Anticuerpo especifico del prpsc natural.
US5664823A (en) * 1995-09-18 1997-09-09 Ford Global Technologies, Inc. Instrument panel brace
US5731284A (en) 1995-09-28 1998-03-24 Amgen Inc. Method for treating Alzheimer's disease using glial line-derived neurotrophic factor (GDNF) protein product
WO1997013855A1 (en) 1995-10-10 1997-04-17 Novartis Ag Melanoma-associated protein
US5985242A (en) * 1995-10-27 1999-11-16 Praecis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of β-amyloid peptide aggregation comprising D-amino acids
US5750361A (en) * 1995-11-02 1998-05-12 The Regents Of The University Of California Formation and use of prion protein (PRP) complexes
ES2203722T3 (es) 1995-11-10 2004-04-16 Elan Corporation, Plc Peptidos que faccilitan el transporte a traves de tejidos y metodos de identificarlos y usarlos.
WO1997018855A1 (en) 1995-11-21 1997-05-29 Eduard Naumovich Lerner Device for enhanced delivery of biologically active substances and compounds in an organism
WO1997021728A1 (en) 1995-12-12 1997-06-19 Karolinska Innovations Ab PEPTIDE BINDING THE KLVFF-SEQUENCE OF AMYLOID $g(b)
JPH09178743A (ja) 1995-12-27 1997-07-11 Oriental Yeast Co Ltd 可溶性ａｐｐの定量法
US6015662A (en) 1996-01-23 2000-01-18 Abbott Laboratories Reagents for use as calibrators and controls
ZA97452B (en) 1996-01-25 1997-08-15 Trinity College Dublin Streptococcus equi vaccine.
US5770700A (en) 1996-01-25 1998-06-23 Genetics Institute, Inc. Liquid factor IX formulations
AU1832797A (en) 1996-01-26 1997-08-20 Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The A polypeptide from lung extract which binds amyloid-beta peptide
GB9602294D0 (en) * 1996-02-05 1996-04-03 Zeneca Ltd Heterocyclic compounds
US6096313A (en) 1996-02-09 2000-08-01 Ludwig Institute For Cancer Research Compositions containing immunogenic molecules and granulocyte-macrophage colony stimulating factor, as an adjuvant
WO1997032017A1 (en) 1996-02-26 1997-09-04 Morphosys Gesellschaft Für Proteinoptimierung Mbh Novel method for the identification of nucleic acid sequences encoding two or more interacting (poly)peptides
US6150091A (en) * 1996-03-06 2000-11-21 Baylor College Of Medicine Direct molecular diagnosis of Friedreich ataxia
US5870587A (en) * 1996-03-20 1999-02-09 International Business Machines Corporation Information-handling system, method, and article of manufacture including a mechanism for providing an improved application binary interface
WO1997035612A1 (fr) 1996-03-23 1997-10-02 The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University Antigene a fragment fonctionnel de la toxine du tetanos, et vaccin contre le tetanos
AU2182697A (en) * 1996-03-29 1997-10-22 University Of Otago Parapoxvirus vectors
CA2250814A1 (en) * 1996-04-03 1997-10-09 Anergen, Inc. Cyclic peptide vaccines for treatment and prevention of diabetes
JP2002506419A (ja) * 1996-04-19 2002-02-26 アメリカ合衆国 Ａ型肝炎ウイルスポリタンパク質の抗原反応性領域
US6284533B1 (en) * 1996-05-01 2001-09-04 Avant Immunotherapeutics, Inc. Plasmid-based vaccine for treating atherosclerosis
CA2267620A1 (en) 1996-07-16 1998-01-22 Andreas Pluckthun Immunoglobulin superfamily domains and fragments with increased solubility
US6294378B1 (en) 1996-07-26 2001-09-25 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Method and reagents for genetic immunization
US7147851B1 (en) 1996-08-15 2006-12-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Humanized immunoglobulin reactive with α4β7 integrin
GB9617616D0 (en) 1996-08-22 1996-10-02 Osteometer Biotech As Assaying protein fragments in body fluids
CA2183901A1 (en) 1996-08-22 1998-02-23 Johanna E. Bergmann Targets for therapy and diagnosis of alzheimer's disease and down syndrome in humans
ES2245003T3 (es) 1996-08-27 2005-12-16 Praecis Pharmaceuticals Incorporated Moduladores de la agregacion de peptidos beta-amiloides que comprenden d-aminoacidos.
US6057367A (en) * 1996-08-30 2000-05-02 Duke University Manipulating nitrosative stress to kill pathologic microbes, pathologic helminths and pathologically proliferating cells or to upregulate nitrosative stress defenses
US6797495B2 (en) * 1996-11-05 2004-09-28 The Regents Of The University Of California Somatic cells with ablated PrP gene and methods of use
US6022859A (en) * 1996-11-15 2000-02-08 Wisconsin Alumni Research Foundation Inhibitors of β-amyloid toxicity
AU5508798A (en) 1996-11-19 1998-06-10 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Diagnostic and therapeutic reagents for alzheimer's disease
US6962984B2 (en) 1996-12-05 2005-11-08 Nihon University IgA nephropathy-related DNA
US6218506B1 (en) 1997-02-05 2001-04-17 Northwestern University Amyloid β protein (globular assembly and uses thereof)
US20030068316A1 (en) 1997-02-05 2003-04-10 Klein William L. Anti-ADDL antibodies and uses thereof
US6277375B1 (en) * 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
CA2278547A1 (en) 1997-03-03 1998-09-11 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Small molecules useful in the treatment of inflammatory disease
US5798102A (en) 1997-03-04 1998-08-25 Milkhaus Laboratory, Inc. Treatment of cardiomyopathy
US6611610B1 (en) * 1997-04-02 2003-08-26 Gentex Corporation Vehicle lamp control
US6057098A (en) * 1997-04-04 2000-05-02 Biosite Diagnostics, Inc. Polyvalent display libraries
US20020086847A1 (en) * 1997-04-09 2002-07-04 Mindset Biopharmaceuticals (Usa) Recombinant antibodies specific for beta-amyloid ends, DNA encoding and methods of use thereof
US8173127B2 (en) 1997-04-09 2012-05-08 Intellect Neurosciences, Inc. Specific antibodies to amyloid beta peptide, pharmaceutical compositions and methods of use thereof
DK0994728T3 (da) 1997-04-09 2008-12-01 Intellect Neurosciences Inc Rekombinante antistoffer, som er specifikke for beta-amyloide ender, DNA, der koder derfor, samt fremgangsmåder til anvendelse heraf
CN1178955C (zh) 1997-04-15 2004-12-08 法默卡有限公司 经修饰的TNFα分子和编码该TNFα分子的DNA以及含有该TNFα分子和该DNA的疫苗
US6787319B2 (en) * 1997-04-16 2004-09-07 American Home Products Corp. β-amyloid peptide-binding proteins and polynucleotides encoding the same
US5858205A (en) * 1997-05-13 1999-01-12 Uop Llc Multizone catalytic reforming process
WO1998052581A1 (en) * 1997-05-20 1998-11-26 Ottawa Civic Hospital Loeb Research Institute Vectors and methods for immunization or therapeutic protocols
ATE230277T1 (de) 1997-06-13 2003-01-15 Genentech Inc Stabilisierte antikörperformulierung
WO1999000150A2 (en) 1997-06-27 1999-01-07 Regents Of The University Of California Drug targeting of a peptide radiopharmaceutical through the primate blood-brain barrier in vivo with a monoclonal antibody to the human insulin receptor
IT1293511B1 (it) 1997-07-30 1999-03-01 Gentili Ist Spa Anticorpi monoclonali catalitici ad attivita' proteasica per la lisi selettiva della componente proteica di placche e aggregati correlati
WO1999006587A2 (en) 1997-08-01 1999-02-11 Morphosys Ag Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex
WO1999006545A2 (en) 1997-08-01 1999-02-11 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Composition and method for the detection of diseases associated with amyloid-like fibril or protein aggregate formation
ATE435661T1 (de) 1997-08-29 2009-07-15 Antigenics Inc Adjuvant qs-21 enthaltende zusammensetzungen mit polysorbate oder cyclodextrin als hilfsmittel
US6175057B1 (en) * 1997-10-08 2001-01-16 The Regents Of The University Of California Transgenic mouse model of alzheimer's disease and cerebral amyloid angiopathy
US7588766B1 (en) * 2000-05-26 2009-09-15 Elan Pharma International Limited Treatment of amyloidogenic disease
US6905686B1 (en) 1997-12-02 2005-06-14 Neuralab Limited Active immunization for treatment of alzheimer's disease
US6923964B1 (en) 1997-12-02 2005-08-02 Neuralab Limited Active immunization of AScr for prion disorders
US6710226B1 (en) * 1997-12-02 2004-03-23 Neuralab Limited Transgenic mouse assay to determine the effect of Aβ antibodies and Aβ Fragments on alzheimer's disease characteristics
US7790856B2 (en) 1998-04-07 2010-09-07 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US6787523B1 (en) 1997-12-02 2004-09-07 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US6750324B1 (en) * 1997-12-02 2004-06-15 Neuralab Limited Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies
US6913745B1 (en) * 1997-12-02 2005-07-05 Neuralab Limited Passive immunization of Alzheimer's disease
US7964192B1 (en) 1997-12-02 2011-06-21 Janssen Alzheimer Immunotherapy Prevention and treatment of amyloidgenic disease
TWI239847B (en) 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
US7179892B2 (en) 2000-12-06 2007-02-20 Neuralab Limited Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US20080050367A1 (en) * 1998-04-07 2008-02-28 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US6761888B1 (en) 2000-05-26 2004-07-13 Neuralab Limited Passive immunization treatment of Alzheimer's disease
BR9815345A (pt) 1997-12-03 2000-11-21 Fujisawa Pharmaceutical Co Composição mole de droga peletizada, inalador utilizando a mesma e método para sua fabricação
EP1033998B1 (en) 1997-12-03 2005-10-19 Neuralab, Ltd. Suppressing beta-amyloid-related changes in alzheimer's disease
FR2777015B3 (fr) 1998-02-23 2000-09-15 Financ De Biotechnologie Procede et moyens pour l'obtention de modeles cellulaires et animaux de maladies neurodegeneratives
US6528624B1 (en) * 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6194551B1 (en) * 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US20050059802A1 (en) * 1998-04-07 2005-03-17 Neuralab Ltd Prevention and treatment of amyloidogenic disease
US20050059591A1 (en) * 1998-04-07 2005-03-17 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
CA2327505A1 (en) * 1998-04-28 1999-11-04 Smithkline Beecham Corporation Monoclonal antibodies with reduced immunogenicity
NO314086B1 (no) 1998-05-08 2003-01-27 Gemvax As Peptider og farmasöytiske sammensetninger inneholdende disse, nukleinsyresekvenser som koder for slike peptider, plasmider og virusvektoreromfattende slike DNA-sekvenser samt anvendelse av disse for fremstilling avfarmasöytiske preparater til
EP1080110A2 (en) 1998-05-19 2001-03-07 Yeda Research And Development Co. Ltd. Use of activated t cells, nervous system-specific antigens for treating disorders of the nevrous system
CA2325600A1 (en) 1998-05-21 1999-11-25 The University Of Tennessee Research Corporation Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies
US20030147882A1 (en) * 1998-05-21 2003-08-07 Alan Solomon Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies
US6432710B1 (en) 1998-05-22 2002-08-13 Isolagen Technologies, Inc. Compositions for regenerating tissue that has deteriorated, and methods for using such compositions
US6710228B1 (en) * 1998-05-29 2004-03-23 Mycogen Corporation Cotton cells, plants, and seeds genetically engineered to express insecticidal and fungicidal chitin binding proteins (lectins)
US6727349B1 (en) * 1998-07-23 2004-04-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Recombinant anti-CCR2 antibodies and methods of use therefor
EE200100203A (et) 1998-10-05 2002-10-15 M & E Biotech A/S Meetod immuunvastuse indutseerimiseks polüpeptiidse antigeeni vastu ja rakuga seotud polüpeptiidse antigeeni mahasurumiseks loomorganismil, selle meetodi kasutamine eesnäärme- ja rinnavähi raviks ning immunogeenne kompositsioon
CA2354862A1 (en) * 1998-10-19 2000-04-27 Yeda Research And Development Co. Ltd. Treatment of systemic lupus erythematosus by down-regulating the autoimmune response to autoantigens
US7112661B1 (en) 1998-10-30 2006-09-26 The Research Foundation Of State University Of New York Variable heavy chain and variable light chain regions of antibodies to human platelet glycoprotein Ib alpha
GB2348203B (en) 1998-11-04 2002-06-19 Imp College Innovations Ltd Solube beta-forms of prion proteins, methods of preparation and use
WO2000043049A1 (en) 1999-01-19 2000-07-27 Pharmacia & Upjohn Company Gamma-irradiation sterilized polyethylene packaging
JP2002535289A (ja) 1999-01-22 2002-10-22 ドウアリング，マシユー・ジヨン 神経疾患のワクチン媒介治療
US7629311B2 (en) 1999-02-24 2009-12-08 Edward Lewis Tobinick Methods to facilitate transmission of large molecules across the blood-brain, blood-eye, and blood-nerve barriers
US7282570B2 (en) * 1999-04-20 2007-10-16 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
WO2000068263A2 (en) 1999-05-05 2000-11-16 Neurochem, Inc. Stereoselective antifibrillogenic peptides and peptidomimetics thereof
US6787637B1 (en) * 1999-05-28 2004-09-07 Neuralab Limited N-Terminal amyloid-β antibodies
UA81216C2 (en) 1999-06-01 2007-12-25 Prevention and treatment of amyloid disease
AR024558A1 (es) 1999-06-01 2002-10-16 Neuralab Ltd Composiciones del peptido a-beta y procesos para producir las mismas
CA2376693C (en) * 1999-06-16 2013-09-10 Boston Biomedical Research Institute Immunological control of .beta.-amyloid levels in vivo
CA2377382A1 (en) 1999-07-01 2001-01-11 Scios, Inc. Prevention and treatment of amyloid-associated disorders
PL360914A1 (en) 1999-07-15 2004-09-20 Genetics Institute Inc. Formulations for il-11
ES2235926T3 (es) 1999-08-04 2005-07-16 The University Of Southern California Ensamblaje globular de proteina beta amiloide y sus usos.
JP2003509020A (ja) 1999-09-03 2003-03-11 ラモット・ユニバーシティ・オーソリティ・フォー・アプライド・リサーチ・アンド・インダストリアル・ディベロップメント・リミテッド プラーク形成疾患の診断、治療、予防に有用な薬剤、組成物、その使用法
US6294171B2 (en) * 1999-09-14 2001-09-25 Milkhaus Laboratory, Inc. Methods for treating disease states comprising administration of low levels of antibodies
US6824780B1 (en) 1999-10-29 2004-11-30 Genentech, Inc. Anti-tumor antibody compositions and methods of use
WO2001039796A2 (en) 1999-11-29 2001-06-07 Neurochem Inc. Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
US20020094335A1 (en) 1999-11-29 2002-07-18 Robert Chalifour Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases
EP1237930B1 (en) 1999-12-08 2006-11-08 Intellect Neurosciences, Inc. Chimeric amyloid beta peptides
US6399314B1 (en) * 1999-12-29 2002-06-04 American Cyanamid Company Methods of detection of amyloidogenic proteins
CA2400838C (en) * 2000-02-21 2013-04-23 Pharmexa A/S Novel method for down-regulation of amyloid
JP5025871B2 (ja) 2000-02-21 2012-09-12 エイチ．リュンドベック エイ／エス アミロイドの新規なダウン−レギュレート方法
EP1257584B2 (en) * 2000-02-24 2013-03-06 Washington University St. Louis Humanized antibodies that sequester amyloid beta peptide
US6294221B1 (en) * 2000-03-08 2001-09-25 E. I. Du Pont De Nemours And Company Process for spray-coating with frequent changes between aqueous and non-aqueous coating agents inside a spray-coating chamber
US6548840B1 (en) * 2000-04-03 2003-04-15 Hrl Laboratories, Llc Monolithic temperature compensation scheme for field effect transistor integrated circuits
US7485616B2 (en) 2000-04-05 2009-02-03 University Of Tennessee Research Foundation Methods of investigating, diagnosing, and treating amyloidosis
ATE398463T1 (de) 2000-04-13 2008-07-15 Corixa Corp Immunostimulierende zusammnensetzungen die aminoalkyl glucosaminidephosphat und qs-21 enthalten
DE60108111T2 (de) 2000-05-22 2005-12-08 New York University Synthetische immunogene jedoch nicht amyloidogene peptide, die homolog zu amyloid beta sind und deren verwendung zur induktion einer immunantwort gegen amyloid beta und amyloidaggregate
EP1309341A2 (en) * 2000-07-07 2003-05-14 Lars Lannfelt Prevention and treatment of alzheimer's disease
US20020009445A1 (en) * 2000-07-12 2002-01-24 Yansheng Du Human beta-amyloid antibody and use thereof for treatment of alzheimer's disease
EP1172378A1 (en) 2000-07-12 2002-01-16 Richard Dr. Dodel Human beta-amyloid antibody and use thereof for treatment of alzheimer's disease
US7199102B2 (en) * 2000-08-24 2007-04-03 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides synergize statin activity
US20030092145A1 (en) * 2000-08-24 2003-05-15 Vic Jira Viral vaccine composition, process, and methods of use
US7067133B2 (en) 2000-09-06 2006-06-27 Aventis Pharma S.A. Methods and compositions for diseases associated with amyloidosis
IT1319277B1 (it) 2000-10-24 2003-09-26 Chiesi Farma Spa Proteine di fusione utili per il trattamento di immunizzazione dellamalattia di alzheimer.
IL139308A0 (en) 2000-10-26 2001-11-25 Marikovsky Moshe Peptides from amyloid precursor protein which inhibit tumor growth and metastasis
WO2002064084A2 (en) * 2000-11-02 2002-08-22 Cornell Research Foundation, Inc. In vivo multiphoton diagnostic detection and imaging of a neurodegenerative disease
WO2002042462A2 (en) * 2000-11-27 2002-05-30 Praecis Pharmaceuticals Inc. Therapeutic agents and methods of use thereof for treating an amyloidogenic disease
US7700751B2 (en) 2000-12-06 2010-04-20 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized antibodies that recognize β-amyloid peptide
PE20020574A1 (es) 2000-12-06 2002-07-02 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta
US6900036B2 (en) * 2000-12-27 2005-05-31 University Of Texas Health Science Center Houston Prion isomers, methods of making, methods of using, and compositions and products comprising prion isomers
WO2002059621A2 (en) * 2001-01-24 2002-08-01 Bayer Corporation Regulation of transthyretin to treat obesity
EP1251138B1 (en) * 2001-04-19 2006-07-26 Hermann Dr. Schätzl Prion protein dimers useful for vaccination
ATE409047T1 (de) 2001-04-30 2008-10-15 Lilly Co Eli Humanisierte antikörper
ES2318006T3 (es) 2001-04-30 2009-05-01 Eli Lilly And Company Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido beta-amiloide.
US6524624B1 (en) * 2001-05-16 2003-02-25 Alcide Corporation Two-part disinfecting systems and compositions and methods related thereto
US6906169B2 (en) 2001-05-25 2005-06-14 United Biomedical, Inc. Immunogenic peptide composition comprising measles virus Fprotein Thelper cell epitope (MUFThl-16) and N-terminus of β-amyloid peptide
GB0113179D0 (en) 2001-05-31 2001-07-25 Novartis Ag Organic compounds
US6888849B2 (en) * 2001-06-15 2005-05-03 Lucent Technologies Inc. Method for evaluating capacity utilization of a terminus in a communication system
US20020197258A1 (en) 2001-06-22 2002-12-26 Ghanbari Hossein A. Compositions and methods for preventing protein aggregation in neurodegenerative diseases
JP4317010B2 (ja) 2001-07-25 2009-08-19 ピーディーエル バイオファーマ，インコーポレイティド ＩｇＧ抗体の安定な凍結乾燥医薬製剤
US20030135035A1 (en) 2001-08-09 2003-07-17 Mark Shannon Human ZZAP1 protein
US20060073149A1 (en) 2001-08-17 2006-04-06 Bales Kelly R Rapid improvement of cognition in condition related to abeta
WO2003016467A2 (en) 2001-08-17 2003-02-27 Eli Lilly And Company Use of antibodies having high affinity for soluble ass to treat conditions and diseases related to ass
JP2005503789A (ja) 2001-08-17 2005-02-10 イーライ・リリー・アンド・カンパニー 抗Ａβ抗体
US20030082191A1 (en) 2001-08-29 2003-05-01 Poduslo Joseph F. Treatment for central nervous system disorders
ATE478556T1 (de) * 2001-09-10 2010-09-15 Anticancer Inc Verbesserte beobachtungsgenauigkeit bei der absiedelung von tumoren
US6736142B2 (en) * 2001-09-13 2004-05-18 Gines Sanchez Gomez Protective tube and harness
US6907297B2 (en) 2001-09-28 2005-06-14 Ethicon, Inc. Expandable intracardiac return electrode and method of use
US6597198B2 (en) * 2001-10-05 2003-07-22 Intel Corporation Current mode bidirectional port with data channel used for synchronization
GB0124446D0 (en) * 2001-10-11 2001-12-05 Short Brothers Ltd Aircraft propulsive power unit
US7781413B2 (en) 2001-10-31 2010-08-24 Board Of Regents, The University Of Texas System SEMA3B inhibits tumor growth and induces apoptosis in cancer cells
DK1441589T3 (da) 2001-11-08 2012-08-06 Abbott Biotherapeutics Corp Stabil, flydende, farmaceutisk sammensætning af IgG-antistoffer
CA2466841A1 (en) * 2001-11-21 2003-06-05 New York University Synthetic immunogenic but non-deposit-forming polypeptides and peptides homologous to amyloid .beta., prion protein, amylin, .alpha.-synuclein, or polyglutamine repeats for induction of an immune response thereto
AU2002366355A1 (en) 2001-12-17 2003-06-30 New York State Office Of Mental Health SEQUESTRATION OF ABeta IN THE PERIPHERY IN THE ABSENCE OF IMMUNOMODULATING AGENT AS A THERAPEUTIC APPROACH FOR THE TREATMENT OR PREVENTION OF BETA-AMYLOID RELATED DISEASES
AR038568A1 (es) 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
US6688651B2 (en) * 2002-02-21 2004-02-10 Dmt Co., Ltd. Device for locking cap nut for coupling
KR20040094705A (ko) 2002-02-21 2004-11-10 듀크 유니버시티 자가면역질환에 대한 시약 및 치료 방법
MY139983A (en) 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
CA2390700C (en) * 2002-06-11 2004-09-07 Henry Tsang Illuminated soap bar with sound
GB0213437D0 (en) 2002-06-12 2002-07-24 Univ Cranfield Temporary tattoos: A novel vehicle for skin testing
US6892535B2 (en) * 2002-06-14 2005-05-17 Volvo Construction Equipment Holding Sweden Ab Hydraulic circuit for boom cylinder combination having float function
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
RU2450827C2 (ru) 2002-07-19 2012-05-20 Цитос Биотехнологи Аг Композиции вакцин, содержащие наборы антигенов в виде амилоида бета 1-6
EP1911765A3 (en) 2002-07-24 2008-04-23 Innogenetics N.V. Prevention, treatment and diagnosis of diseases associated with Beta-Amyloid formation and/or aggregation
AU2003279728B2 (en) 2002-10-01 2007-09-27 Northwestern University Amyloid beta-derived diffusible ligands (addls), addl-surrogates, addl-binding molecules, and uses thereof
US20040080762A1 (en) * 2002-10-25 2004-04-29 Xerox Corporation Half-tone based enhancement of black
US20060019850A1 (en) * 2002-10-31 2006-01-26 Korzenski Michael B Removal of particle contamination on a patterned silicon/silicon dioxide using dense fluid/chemical formulations
FR2846667B1 (fr) 2002-11-06 2004-12-31 Pasteur Institut Fragments variables d'anticorps de camelides a chaine unique diriges contre le peptide beta-amyloide 1-42 et leurs applications pour le diagnostic et le traitement des maladies neuroagregatives
US20040191243A1 (en) 2002-12-13 2004-09-30 Bei Chen System and method for stabilizing antibodies with histidine
US6787129B1 (en) 2003-01-13 2004-09-07 Zenitech Llc Castor polyester as gloss agents in anionic systems
EP1594969B1 (en) 2003-02-01 2015-05-20 Janssen Sciences Ireland UC Active immunization to generate antibodies to soluble a-beta
DE602004027348D1 (de) 2003-02-10 2010-07-08 Applied Molecular Evolution Abeta-bindende moleküle
ZA200507757B (en) 2003-04-04 2007-01-31 Genentech Inc High concentration antibody and protein formulations
EP1480041A1 (en) 2003-05-22 2004-11-24 Innogenetics N.V. Method for the prediction, diagnosis and differential diagnosis of Alzheimer's disease
PE20050627A1 (es) 2003-05-30 2005-08-10 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido beta amiloideo
US20060182321A1 (en) 2003-07-07 2006-08-17 Agency For Science, Technology And Research Method and apparatus for extracting third ventricle information
WO2005014041A2 (en) 2003-07-24 2005-02-17 Novartis Ag Use of an amyloid beta dna vaccine for the treatment and/or prevention of amyloid diseases
US20060233788A1 (en) 2003-09-05 2006-10-19 Heiman Mark L Anti-ghrelin antibodies
CA2445743A1 (en) 2003-10-08 2005-04-08 The University Of British Columbia Methods for modulating neuronal responses
WO2005035753A1 (ja) 2003-10-10 2005-04-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 機能蛋白質を代替する二重特異性抗体
EA009559B1 (ru) 2003-12-17 2008-02-28 Элан Фармасьютикелз, Инк. КОНЪЮГАТЫ Aβ ИММУНОГЕННЫХ ПЕПТИДНЫХ НОСИТЕЛЕЙ И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ
WO2005058940A2 (en) 2003-12-17 2005-06-30 Wyeth Immunogenic peptide carrier conjugates and methods of producing same
US20050214222A1 (en) 2004-02-13 2005-09-29 Mckinnon Stuart J In vivo imaging of amyloid plaques in glaucoma using intravenous injectable dyes
SI2653465T1 (sl) 2004-03-15 2016-10-28 Janssen Pharmaceutica N.V. Modulatorji opiodnih receptorjev
JP2008505115A (ja) 2004-07-02 2008-02-21 ユニバーシティー オブ ピッツバーグ 抗アミロイド治療の有効性に対する代用マーカーとしてのアミロイドイメージング
WO2006036291A2 (en) * 2004-07-30 2006-04-06 Rinat Neuroscience Corp. Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods using same
US7328838B2 (en) * 2004-09-09 2008-02-12 Igt Counterfeit cashless instrument detection methods and systems
CA2578131A1 (en) 2004-09-10 2006-03-23 Wyeth Humanized anti-5t4 antibodies and anti-5t4 antibody/calicheamicin conjugates
AU2005294131A1 (en) 2004-10-05 2006-04-20 Wyeth Methods and compositions for improving recombinant protein production
US20060160161A1 (en) 2004-10-26 2006-07-20 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods for assessing antibodies to neurodegenerative disease-associated antigens
US20060026911A1 (en) * 2004-11-18 2006-02-09 Sutton Adam F Footer track with moisture vent
CA2590337C (en) 2004-12-15 2017-07-11 Neuralab Limited Humanized amyloid beta antibodies for use in improving cognition
WO2006066118A2 (en) 2004-12-15 2006-06-22 Neuralab Limited Contextual fear test for predicting efficacy of alzheimer immunotherapeutic treatment
US20060240486A1 (en) 2004-12-15 2006-10-26 Johnson-Wood Kelly L Immunoprecipitation-based assay for predicting in vivo efficacy of beta-amyloid antibodies
EP1838349A1 (en) 2004-12-15 2007-10-03 Neuralab, Ltd. Amyloid beta antibodies for use in improving cognition
WO2006066049A2 (en) 2004-12-15 2006-06-22 Neuralab Limited Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
GT200600031A (es) 2005-01-28 2006-08-29 Formulacion anticuerpo anti a beta
MX2007009091A (es) 2005-01-28 2008-01-11 Wyeth Corp Formulaciones de polipeptido liquidas estabilizadas.
CN101171031B (zh) 2005-05-05 2011-09-28 默沙东公司 防止和治疗阿尔茨海默病的肽偶联物组合物和方法
US7825223B2 (en) 2005-06-17 2010-11-02 Janssen Alzheimer Immunotherapy Methods of purifying anti A β antibodies
US8211904B2 (en) 2005-07-18 2012-07-03 Merck, Sharp & Dohme Corp. Spiropiperidine beta-secretase inhibitors for the treatment of alzheimer's disease
KR20080095836A (ko) 2005-11-10 2008-10-29 로스캄프 리서치 엘엘씨 Ａ―베타 펩티드 단편에 의한 혈관형성의 조정
ES2338179T3 (es) 2006-03-30 2010-05-04 Glaxo Group Limited Anticuerpos contra el peptido beta-amiloide.
WO2010044803A1 (en) 2008-10-17 2010-04-22 Elan Pharma International Limited Treatment of amyloidogenic diseases
US8784810B2 (en) 2006-04-18 2014-07-22 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of amyloidogenic diseases
TWI551607B (zh) 2006-07-14 2016-10-01 Ａｃ免疫公司 人類化抗體
WO2008114801A1 (en) 2007-03-12 2008-09-25 National Institute Of Radiological Sciences Pet visualization of amyloid-associated neuroinflammation in the brain
US8003097B2 (en) 2007-04-18 2011-08-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of cerebral amyloid angiopathy
MX2009011127A (es) 2007-04-18 2010-03-10 Janssen Alzheimer Immunotherap Metodo de prevencion y tratamiento de angiopatia amiloide cerebral.
SI2182983T1 (sl) 2007-07-27 2014-09-30 Janssen Alzheimer Immunotherapy Zdravljenje amiloidogenih bolezni s humaniziranimi protitelesi proti abeta
US9272030B2 (en) 2007-10-17 2016-03-01 Janssen Sciences Ireland Uc Use of tau to monitor immunotherapy
JO3076B1 (ar) 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
EA036059B1 (ru) 2007-12-28 2020-09-21 Протена Байосайенсиз Лимитед Способ получения антитела или его фрагмента, которое специфически связывается с агрегированным амилоидным белком
ES2694278T3 (es) 2008-09-18 2018-12-19 Cedars-Sinai Medical Center Método óptico para la detección de la enfermedad de Alzheimer
WO2011106732A1 (en) 2010-02-25 2011-09-01 Wyeth Llc Pet monitoring of ab-directed immunotherapy

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0526511A1 (en) * 1990-04-27 1993-02-10 John Mcmichael METHOD AND COMPOSITION FOR TREATING CONDITIONS OF THE CENTRAL NERVOUS SYSTEM ASSOCIATED WITH THE ABNORMAL AMYLOID PROTEIN BETA.
WO1994000153A1 (en) * 1992-06-25 1994-01-06 Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) Vaccine composition containing adjuvants

Also Published As

Publication number Publication date
ID25504A (id) 2000-10-05
EP1994937A3 (en) 2008-12-24
IL193245A0 (en) 2009-09-22
NO331425B1 (no) 2011-12-27
HRP20000443B1 (en) 2009-11-30
PT1679080E (pt) 2009-09-10
EP1033996A4 (en) 2004-05-26
BG104562A (en) 2001-01-31
JP4677334B2 (ja) 2011-04-27
AU1706199A (en) 1999-06-16
IL136252A0 (en) 2001-05-20
EP1033996B1 (en) 2008-06-25
ES2262460T1 (es) 2006-12-01
US20050163788A1 (en) 2005-07-28
EP1994937B1 (en) 2010-12-29
US20050142132A1 (en) 2005-06-30
TWI239847B (en) 2005-09-21
US20050249725A1 (en) 2005-11-10
US8034339B2 (en) 2011-10-11
PL202706B1 (pl) 2009-07-31
SI2305282T1 (sl) 2013-10-30
EP1690547B1 (en) 2009-07-08
EE200000379A (et) 2001-04-16
US20050037026A1 (en) 2005-02-17
DE69840969D1 (de) 2009-08-20
JP2006077030A (ja) 2006-03-23
CN100374151C (zh) 2008-03-12
US7014855B2 (en) 2006-03-21
NO20002784D0 (no) 2000-05-31
IS5500A (is) 2000-05-17
NO328865B1 (no) 2010-06-07
SI1679080T1 (sl) 2009-12-31
US6972127B2 (en) 2005-12-06
US20050196399A1 (en) 2005-09-08
PT1033996E (pt) 2008-10-02
GEP20053715B (en) 2005-12-26
EP2305282B1 (en) 2013-07-10
US20050191292A1 (en) 2005-09-01
HK1094535A1 (en) 2007-04-04
EP1679080A3 (en) 2006-07-19
EP2305282A2 (en) 2011-04-06
SA99191269B1 (ar) 2006-03-15
HRP20000443A2 (en) 2000-10-31
EP1033996A1 (en) 2000-09-13
CA2312920A1 (en) 1999-06-10
JP4677094B2 (ja) 2011-04-27
IL136252A (en) 2010-11-30
US20040171816A1 (en) 2004-09-02
PL342649A1 (en) 2001-06-18
TR200001608T2 (tr) 2001-07-23
BR9815357A (pt) 2000-10-24
US20050031629A1 (en) 2005-02-10
DE69840922D1 (de) 2009-07-30
WO1999027944A1 (en) 1999-06-10
US6982084B2 (en) 2006-01-03
ES2263408T3 (es) 2009-11-16
EE05377B1 (et) 2011-02-15
PL202698B1 (pl) 2009-07-31
HU228493B1 (en) 2013-03-28
US6946135B2 (en) 2005-09-20
US20040228865A1 (en) 2004-11-18
JP2010215651A (ja) 2010-09-30
US20040171815A1 (en) 2004-09-02
JP4677333B2 (ja) 2011-04-27
EA200000608A1 (ru) 2000-12-25
EP1679080B1 (en) 2009-06-17
US20080227718A1 (en) 2008-09-18
GEP20043319B (en) 2004-05-10
DE06075479T1 (de) 2006-11-16
ATE435659T1 (de) 2009-07-15
US20080227719A1 (en) 2008-09-18
CO4980846A1 (es) 2000-11-27
EA200601132A1 (ru) 2007-02-27
ES2428740T3 (es) 2013-11-11
CY1109368T1 (el) 2014-07-02
NO20002784L (no) 2000-07-31
SG111083A1 (en) 2005-05-30
EA009283B1 (ru) 2007-12-28
IL205298A0 (en) 2011-07-31
EP2305282A3 (en) 2011-05-18
ATE493149T1 (de) 2011-01-15
WO1999027944A9 (en) 1999-09-23
US20130058869A1 (en) 2013-03-07
NO20092874L (no) 2000-07-31
DK1033996T3 (da) 2008-09-22
NZ504569A (en) 2005-01-28
DE06075704T1 (de) 2006-12-28
US20140227274A1 (en) 2014-08-14
HK1095265A1 (en) 2007-05-04
JP2002502802A (ja) 2002-01-29
US20050013815A1 (en) 2005-01-20
PT2305282E (pt) 2013-09-27
HU228061B1 (en) 2012-09-28
DK1994937T3 (da) 2011-02-07
US20080096818A1 (en) 2008-04-24
PT1994937E (pt) 2011-02-22
ES2263408T1 (es) 2006-12-16
IL191904A (en) 2014-05-28
KR20120135915A (ko) 2012-12-17
US6808712B2 (en) 2004-10-26
HUP0100627A1 (hu) 2001-06-28
SI1994937T1 (sl) 2011-04-29
US8642044B2 (en) 2014-02-04
AR020050A1 (es) 2002-04-10
DK1679080T3 (da) 2009-09-28
CZ20001706A3 (cs) 2000-11-15
JP2006131639A (ja) 2006-05-25
IL191904A0 (en) 2008-12-29
DE69839647D1 (de) 2008-08-07
SI1033996T1 (sl) 2009-02-28
DK2305282T3 (da) 2013-10-07
US20090191231A1 (en) 2009-07-30
NO20100061L (no) 2000-07-31
CA2312920C (en) 2016-07-12
HUP0100627A3 (en) 2006-03-28
NO332813B1 (no) 2013-01-21
EP1679080A2 (en) 2006-07-12
ES2310017T3 (es) 2008-12-16
CN1281366A (zh) 2001-01-24
US20050191314A1 (en) 2005-09-01
US20050048049A1 (en) 2005-03-03
HRP20090568A2 (hr) 2010-06-30
CY1111370T1 (el) 2015-08-05
US8535673B2 (en) 2013-09-17
ATE433760T1 (de) 2009-07-15
US20050019330A1 (en) 2005-01-27
EP1690547A1 (en) 2006-08-16
US20060029611A1 (en) 2006-02-09
MY134906A (en) 2007-12-31
US20050249727A1 (en) 2005-11-10
CY1108331T1 (el) 2014-02-12
US20050019343A1 (en) 2005-01-27
US20120276116A1 (en) 2012-11-01
PE20001383A1 (es) 2000-11-25
KR100936419B1 (ko) 2010-01-12
EP1994937A2 (en) 2008-11-26
EA200401473A1 (ru) 2005-04-28
US20060034858A1 (en) 2006-02-16
DE69842082D1 (de) 2011-02-10
KR20010032635A (ko) 2001-04-25
US8034348B2 (en) 2011-10-11
US20040170641A1 (en) 2004-09-02
EA007218B1 (ru) 2006-08-25
ATE399016T1 (de) 2008-07-15
KR20090078366A (ko) 2009-07-17
DE1033996T1 (de) 2001-06-07
KR101248711B1 (ko) 2013-03-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ303137B6 (cs) Konjugát obsahující Aß 1-5 nebo Aß 1-6, jeho použití a farmaceutický prostredek jej obsahující
KR100961485B1 (ko) 아밀로이드증 질환의 예방 및 치료
KR100930559B1 (ko) 아밀로이드 형성성 질환의 예방 및 치료
US6787144B1 (en) Prevention and treatment of amyloidogenic disease
AU2016256668A1 (en) Prevention and treatment of amyloidogenic disease
MXPA00005426A (en) Prevention and treatment of amyloidogenic disease
JP2012102131A (ja) アミロイド形成性疾患の予防および治療
PL203431B1 (pl) Kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie srodka immunogennego
AU2009227858A1 (en) Prevention and treatment of amyloidogenic disease

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MK4A Patent expired

Effective date: 20181130