JP2003522735A - Ｉｌ−１１に関する組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明の１つの局面は、薬品として有用な、新規の組成物およびＩＬ−１１の濃縮調製物を提供するための方法を提供する。これらの組成物（凍結物、液体、または凍結乾燥物（好ましくは、凍結乾燥物）のいずれか）は、ＩＬ−１１、バルキング剤、および凍結防止剤を含み、そして、必要に応じて、ポリソルベート、メチオニン、およびこの組成物のｐＨを約６．０〜約８．０の範囲内に維持する緩衝剤を含む。本発明の別の局面では、最終投薬形態における投与に有用である濃度のＩＬ−１１の処方物を含む、組成物を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、一般に、インターロイキン−１１（「ＩＬ−１１」）を含む、新規
の処方物に関する。

【０００２】 （発明の背景） インターロイキン−１１（「ＩＬ−１１」）は、多面性（ｐｌｅｉｏｔｒｏｐ
ｉｃ）サイトカインであり、ＩＬ−１１は、種々の造血機能および免疫機能（例
えば、原始リンパ造血前駆細胞（ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｌｙｍｐｈｏｈｅｍａｔ
ｏｐｏｉｅｔｉｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ）、ならびに巨核球の増殖
および成熟を刺激する他の造血成長因子）を刺激する。ＩＬ−１１は、国際出願
ＰＣＴ／ＵＳ９０／０６８０３（１９９１年５月３０日公開）および米国特許第
５，２１５，８９５号（１９９３年６月１日公開）において詳細に記載されてい
る。クローン化されたヒトＩＬ−１１は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌ
ｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉ
ｔｙ Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａに、１９９０年３月３
０日、ＡＴＣＣ番号６８２８４の下で既に寄託されている。さらに、米国特許第
５，２７０，１８１号（１９９３年１２月１４日公開）および米国特許第５，２
９２，６４６号（１９９４年３月８日公開）に記載されるように、ＩＬ−１１は
、別のタンパク質との融合タンパク質として、組換え的に産生され得る。

【０００３】 バルクタンパク質（例えば、ＩＬ−１１）の濃縮形態にすることが望ましい。
このバルクタンパク質の濃縮形態は、次いで、保存され得、そしてタンパク質の
完成した投薬形態のさらなる製造に適している。代表的には、タンパク質につい
ての精製プロセスは、精製され、濃縮されたタンパク質を生じる。この濃縮され
たタンパク質（これはまた、バルクタンパク質として知られている）は、処方緩
衝液の中にあり得る。バルクタンパク質は、代表的には、約０．１〜少なくとも
２０ｍｇ／ｍｌの濃度で、次いで、充填／仕上げ施設（ｆｉｌｌ／ｆｉｎｉｓｈ
ｆａｃｉｌｉｔｙ）まで冷凍出荷され得る。この施設では、適切な濃度に希釈
され、そしてバイアルに充填される。これらの希釈されたサンプルは、凍結乾燥
され得る（すなわち、フリーズドライ（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）され得る）
。凍結乾燥されたサンプルは、長期間の貯蔵され得、そして後に、患者に用いる
直前に、適切な投与希釈剤を添加することによって、再構成される。

【０００４】 タンパク質の安定性は、とりわけ、イオン強度、ｐＨ、温度、凍結／解凍の繰
り返しサイクル、および剪断力への暴露のような因子によって、影響され得る。
活性なタンパク質は、物理的不安定性（変性および凝集（可溶性凝集体形成およ
び不溶性凝集体形成の両方）を含む）、および化学的不安定性（例えば、いくつ
か挙げると、加水分解、アミド分解および酸化を含む）の結果として失われ得る
。タンパク質医薬の安定性の一般的な総説については、例えば、Ｍａｎｎｉｎｇ
ら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６：９０３−９１８（
１９８９）を参照のこと。

【０００５】 タンパク質の不安定性のあり得る発生例は、広範に認められるが、特定のタン
パク質の特定の不安定性の問題を予想すること不可能である。任意のこれらの不
安定性は、低下した活性、増加した毒性、および／または増加した免疫原性を有
するタンパク質、タンパク質副産物、あるいは誘導体の形成を生じ得る。また、
ＩＬ−１１は、使用の際の産物の質および有効性に干渉し得る、可溶性の高分子
量凝集体を形成する傾向がある。従って、タンパク質の任意の薬学的処方物の安
全性および効力は、その安定性に依存する。

【０００６】 安定性の考慮に加えて、一般に、様々な世界の医療管理機関の認可を得ている
か、または得るであろう、賦形剤を選択する。この溶液は、等張かつ生理学的に
適した範囲内のｐＨであるべきである。用いられる緩衝液の選択および量は、所
望のｐＨ範囲を達成および維持するのに重要である。

【０００７】 理想的には、処方物はまた、適切な用量での充填／仕上のための比較的小さい
容量を可能にし、そして高タンパク質濃度を必要とし得る投与の代替的方法（例
えば、皮下投与）をもまた可能にする、高濃度（例えば、≧２０ｍｇ／ｍｌ）で
のＩＬ−１１バルク保存についても安定であるべきである。従って、濃縮プロセ
スおよび凍結乾燥プロセスの間、ＩＬ−１１タンパク質の安定性をモニタリング
する（および活性レベルを維持する）方法、ならびに長期保存の間、安定な処方
物を提供する方法についての当該分野での必要性が引き続き存在する。

【０００８】 （発明の要旨） 本発明の１つの局面は、薬品として有用な、新規の組成物およびＩＬ−１１の
濃縮調製物を提供するための方法を提供する。これらの組成物（凍結物、液体、
または凍結乾燥物（好ましくは、凍結乾燥物）のいずれか）は、ＩＬ−１１、バ
ルキング剤、および凍結防止剤を含み、そして、必要に応じて、ポリソルベート
、メチオニン、およびこの組成物のｐＨを約６．０〜約８．０の範囲内に維持す
る緩衝剤を含む。

【０００９】 本発明の別の局面では、最終投薬形態における投与に有用である濃度のＩＬ−
１１の処方物を含む、組成物を提供する。

【００１０】 好ましくは、バルキング剤は、グリシン、マンニトール、およびＮａＣｌ、な
らびにこれらの組合せからなる群より選択される（最も好ましくは、グリシンで
ある）。グリシンが用いられる場合、このグリシンは、約１ｍＭ〜約１Ｍの濃度
、好ましくは、約１００〜約４００ｍＭの濃度、および最も好ましくは、約３０
０ｍＭの濃度で存在する。

【００１１】 好ましくは、凍結防止剤は、スクロース、トレハロース、ヒドロキシエチルデ
ンプン、およびこれらの組合せからなる群より選択される（最も好ましくは、ス
クロースである）。好ましくは、凍結防止剤は、約０．５〜約５％の組成物を含
む。スクロースが用いられる場合、好ましい濃度は、約０．５〜約２％、最も好
ましくは、約１％である。

【００１２】 好ましくは、ポリソルベートは、Ｔｗｅｅｎ−２０（登録商標）およびＴｗｅ
ｅｎ−８０（登録商標）からなる群より選択される（最も好ましくは、Ｔｗｅｅ
ｎ−２０（登録商標）である）。特定の実施形態では、ポリソルベートは、約０
．００１〜０．１％の濃度、好ましくは、約０．００５〜約０．１％の濃度、最
も好ましくは、約０．０２％の濃度で存在する。複数のポリソルベートもまた用
いられ得る。

【００１３】 特定の実施形態では、組成物は、好ましくは、約０．００１ｍＭ〜約１Ｍの濃
度、より好ましくは、約１〜約１００ｍＭの濃度、そして最も好ましくは約１０
ｍＭの濃度のメチオニンを含む。

【００１４】 好ましい実施形態では、緩衝剤は、この組成物のｐＨを約６．０〜約８．０の
範囲内に、最も好ましくは、約７．０に維持する。好ましい緩衝剤は、リン酸、
ヒスチジン、コハク酸、Ｔｒｉｓ、およびジエタノールアミンからなる群より選
択される（リン酸（特に、そのナトリウム塩およびカリウム塩）およびヒスチジ
ンが最も好ましい）。緩衝剤は、約１ｍＭ〜１００ｍＭ、好ましくは、約５〜約
４０ｍＭの濃度にわたり得る（１０ｍＭが、リン酸ナトリウムに最も好ましく、
そして２０ｍＭがヒスチジンに最も好ましい）。

【００１５】 好ましくは、タンパク質は、約１μｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌ、より好まし
くは、約１〜約１０ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約１〜約５ｍｇ／ｍｌの濃度で
存在する。

【００１６】 本発明の特に好ましい実施形態は、約１〜約５ｍｇ／ｍｌ ＩＬ−１１、約３
００ｍＭグリシン、約１％のスクロースを含み、そして約７．０のｐＨを有する
。特に好ましい実施形態はまた、必要に応じて、約０．０２％のポリソルベート
および約１０ｍＭのメチオニンを含む。

【００１７】 （発明の詳細な説明） 本明細書中で使用される場合、用語凍結乾燥、凍結乾燥した（ｌｙｏｐｈｉｌ
ｉｚｅｄ）、および凍結乾燥した（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）は、溶液を「凍
結」させる工程、続いて、必要に応じて真空下で「乾燥」させる工程を包含する
プロセスを含むが、これらに限定されない。本明細書中で使用される場合、用語
「バルキング剤」は、優れた凍結乾燥ケークの特性を提供する薬剤を含み、この
特性は、タンパク質が凍結乾燥プロセスに関連する種々のストレス（例えば、剪
断／凍結）を克服するのを助け、そしてタンパク質の活性レベルを維持するのを
助ける。例示的なバルキング剤としては、グリシン、マンニトール、ＮａＣｌな
どが挙げられるが、これらに限定されない。これらの薬剤は、処方物の張性に寄
与する。凍結保護剤（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）もまた、張性に寄与する
。用語「凍結保護剤」は、一般的に、凍結誘導ストレスからタンパク質の安定性
を提供する薬剤を含む；しかし、この用語はまた、例えば、非凍結誘導ストレス
から保存中のバルク薬物処方物に対する安定性を提供する薬剤を含む。例示的な
凍結保護剤としては、糖類（例えば、スクロースおよびマンニトール）ならびに
界面活性剤（例えば、ポリソルベート、ポリオール、およびポリエチレングリコ
ールなど）が挙げられる。用語「凍結保護剤」は、乾燥プロセス中に系から水を
除去する間、おそらく、タンパク質の水素結合を介する適切なコンホメーション
を維持することによってタンパク質に安定性を提供する薬剤を含む。凍結保護剤
はまた、分散保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）の効果を有し得る；従って
、この用語「凍結保護剤」および「分散保護剤」は、本明細書中で相互交換可能
である。本発明者らは、凍結保護剤によるタンパク質の安定化がさらに、凍結保
護剤（例えば、スクロースおよびポリソルベート）の組み合わせを用いることに
よって増加され得ることを発見した。

【００１８】 本明細書中で使用される場合、「抗酸化剤」は、ＩＬ−１１内のＭｅｔ⁵⁸の酸
化を抑制する薬剤を含み、これによってタンパク質の分解を妨害し、かつタンパ
ク質の活性レベルを維持することを助ける。例示的な抗酸化剤としては、チオエ
ステル（例えば、チオエステルおよびメチルチオエタン）が挙げれるが、これら
に限定されない。これらの薬剤は、おそらく、溶液中での酸化反応のための代替
の基質を提供することによってタンパク質の安定性に寄与する。

【００１９】 用語「緩衝化剤」は、凍結乾燥の前に受容可能な範囲の溶液ｐＨを維持する薬
剤を包含し、そしてこの緩衝化剤としては、ホスフェート（ナトリウムまたはカ
リウム）、ヒスチジン、スクシネート、Ｔｒｉｓ（トリス（ヒドロキシメチル）
アミノメタン）、ジエタノールアミンなどが挙げられ得る。濃度の上限は一般的
に、当業者に容易に理解されるように、「投薬」タンパク質形態よりも「バルク
」タンパク質形態の方が高い。例えば、緩衝液濃度は、数ｍＭからそれらの溶解
度の上限までの範囲（例えば、スクシネートは、２００ｍＭと同じくらいの高さ
であり得る）であるが、当業者はまた、適切な生理学的に適切な濃度を達成／維
持することを考慮する。パーセンテージは、固体に言及する場合、重量／重量で
あり、そして液体に言及する場合、重量／容量である。用語「等張性」（３００
±５０ｍＯｓＭ）は、再構成後のタンパク質溶液の浸透圧重量モル濃度の尺度を
意味する。；再構成は代表的に、注射用水（ＷＦＩ）を用いる。生理学的な浸透
圧重量モル濃度を維持することは、投薬処方物に重要である。しかし、バルク処
方物について、非常に高い濃度は、この溶液が使用前に等張にされる限り、効果
的に利用され得る。用語「賦形剤」は、優れた凍結乾燥ケーク特性（バルキング
剤）を提供するため、ならびにタンパク質の分散保護および凍結保護、ｐＨの維
持、および生物学的活性（タンパク質の安定性）の実質的な保持を維持するよう
に保存中にタンパク質の適切なコンホメーションを提供するための薬学的に受容
可能な試薬を含む。好ましくは、賦形剤の組み合わせた濃度は、１ｋｇあたり約
２５０〜約３５０ミリ浸透圧モル（ｍＯｓｍ）、より好ましくは約３００ｍＯｓ
ｍ／ｋｇの組み合わせた浸透圧モル濃度を提供する。

【００２０】 出願人は、いくつかのＩＬ−１１の化学不安定性がＡｓｐ¹³³とＰｒｏ¹³⁴との
間での加水分解の結果であることを見出す。また、Ａｓｎ⁴⁹のＡｓｐ⁴⁹への脱ア
ミノ反応（ｄｅａｍｉｄａｔｉｏｎ）が検出される。さらに、Ｍｅｔ⁵⁸の酸化が
観察される。これらの化学反応の全てがＩＬ−１１タンパク質の化学不安定性の
証拠である。ＩＬ−１１はまた、脱アミノ反応プロセスを含む特定の物理的な不
安定性ならびに凝集形成を受けやすい。ＩＬ−１１の化学不安定性、ならびに安
定性を改善するためのグリシンおよび緩衝化剤の使用は、１９９４年４月２１日
に出願された同時係属中の米国出願第０８／２３０，９８２号（これは、本明細
書中にその全体が参考として援用される）に開示される。

【００２１】 本発明に従って、バルキング剤（例えば、グリシン）、凍結保護剤（例えば、
スクロースおよび／またはＴｗｅｅｎ−２０（登録商標）のようなポリソルベー
ト）の添加は、ＩＬ−１１の凝集を妨害するようにおよび剪断および凍結の悪影
響からＩＬ−１１を保護するように作用する。次に、これは、タンパク質を処理
する能力が上昇し、そしてＩＬ−１１産物の増強された貯蔵寿命を提供する。さ
らに、本発明に従って、チオエーテル（例えば、メチオニン）のような抗酸化剤
の添加は、おそらく競合的な酸化還元機構を通じて、Ｍｅｔ⁵⁸の酸化速度を低下
させる。

【００２２】 インターロイキン１１は、原始のリンパ造血始原細胞を刺激し、そして他の造
血増殖因子と共同作用して、巨核球の増殖および成熟化を刺激する、多面的なサ
イトカインである。ＩＬ−１１は、国際出願 ＰＣＴ／ＵＳ９０／０６８０３（
１９９１年５月３０日に公開）ならびに米国特許第５，２１５，８９５号（１９
９３年６月１日発行）に詳細に記載される。クローン化されたヒトＩＬ−１１は
、１９９０年３月３０日にＡＴＣＣ番号６８２８４の下でアメリカン タイプ
カルチャー コレクション（ＡＴＣＣ）（バージニア、マナサス、ユニバーシテ
ィーブールバード１０８０１）に以前に寄託された。さらに、米国特許第５，２
７０，１８１号（１９９３年１２月１４日に発行）および米国特許第５，２９２
，６４６号（１９９４年３月８日に発行）に記載されるように、ＩＬ−１１はま
た、別のタンパク質との融合タンパク質として組換え的に産生され得る。ＩＬ−
１１は、従来の遺伝子工学技術の手段によって種々の宿主細胞において産生され
得る。さらに、ＩＬ−１１は、種々の細胞株（例えば、ヒト肺線維芽細胞株（Ｍ
ＲＣ−５）（ＡＴＣＣ受託番号ＣＣＬ １７１）およびＰａｕｌら、ヒト栄養膜
細胞株（ＴＰＡ３０−１）（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ １５８３））から単離さ
れ得る。ヒトＩＬ−１１をコードするｃＤＮＡ、ならびに推定アミノ酸配列（ア
ミノ酸１〜１９９）は、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７
：７５１２（１９９０）に記載される。米国特許第５，２９２，６４６号（前出
）は、ＩＬ−１１の成熟形態（アミノ酸２２〜１９９）のＮ末端プロリンが除去
されている、ＩＬ−１１のｄｅｓ−Ｐｒｏ形態（アミノ酸２３〜１９９）を記載
する。当業者によって理解されるように、ＩＬ−１１活性を保持するＩＬ−１１
の任意の形態（例えば、アミノ酸の置換または欠失を介する改変体、ＩＬ−１１
のアナログおよび誘導体）は、本発明に従って有用である。上記の刊行物の各々
の開示は、その内容が参考として本明細書中に援用される。

【００２３】 組換え技術に加えて、ＩＬ−１１はまた、公知の従来の化学合成によって産生
され得る。本発明において有用であるポリペプチドを合成手段によって構築する
ための方法は、当業者に公知である。合成的に構築されたサイトカインポリペプ
チド配列の、一次構造、二次構造、または三次構造およびコンホメーションの特
徴が天然のサイトカインポリペプチドとの共有によって、天然のサイトカインポ
リペプチドと共通の生物学的活性を有することが予期される。このような合成的
に構築されたサイトカインポリペプチド配列またはそのフラグメントは、複製さ
れるか、または部分的に複製されるので、それらの機能性はまた、本発明の組成
物において使用され得る。従って、これらは、本発明において有用である天然の
、精製されたサイトカインのための生物学的活性な置換物または免疫学的な置換
物として使用され得る。

【００２４】 これらのサイトカインのタンパク質、ペプチドまたはＤＮＡ配列もしくはその
活性なフラグメントにおける改変はまた、本発明の組成物において使用され得る
タンパク質を産生し得る。こような改変サイトカインは、公知の技術を使用して
当業者によって作製され得る。このサイトカイン配列（例えば、ＩＬ−１１配列
）における目的の改変は、コード配列において１つ以上の選択されたアミノ酸残
基の置換、挿入または欠失を含み得る。このような置換、挿入または欠失のため
の変異誘発技術は、当業者に周知である（例えば、米国特許第４，５１８，５８
４号）。

【００２５】 本明細書中に記載されるような治療的に有用であり得るサイトカインポリペプ
チドの配列の他の特異的な変異は、例えば、１つ以上のグリコシル化部位の挿入
を含む。アスパラギン結合型グリコシル化認識部位は、アミノ酸のペプチド配列
への欠失、置換または付加によって、またはヌクレオチドＤＮＡ配列への欠失、
置換または付加によって挿入され得る。このような変化は、分子の任意の部位に
おいて作製され得、この分子は、Ｏ結合型糖質の付加によって改変される。この
ような改変ヌクレオチド配列またはペプチド配列の発現は、分子の任意の部位に
おいてグリコシル化され得る改変体を産生する。

【００２６】 全て、または一部の選択されたサイトカインの活性を保持または延長すると予
期されるおよび、本発明において有用であると予期される、このサイトカインの
配列のさらなるアナログおよび誘導体は、当業者によって容易に作製され得る。
１つのこような改変は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のサイトカイン配列
中に存在するリジン残基への付加、あるいは１つ以上のリジン残基またはＰＥＧ
部分の付加を可能にする従来の技術による配列へのＰＥＧまたはＰＥＧ誘導体を
反応させ得る他のアミノ酸残基の挿入であり得る。

【００２７】 これらの選択されたサイトカインのさらなるアナログはまた、それらをコード
するＤＮＡ配列における対立遺伝子改変体によって特徴付けられ得るか、または
それらをコードするＤＮＡ配列におけるバリエーションが誘導され得る。上記の
参考した刊行物において開示された全てのアナログ（ストリンジェントなハイブ
リダイゼーション条件下または非ストリンジェント条件下（Ｓａｍｂｒｏｏｋら
、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９））で開示されたサイトカイン配列にハイブリダ
イズし得るＤＮＡ配列によって特徴付けられるアナログを含む）は、本発明にお
いて同様に有用であると予期される。

【００２８】 融合分子もまた、これらの方法において有用な誘導体としてみなされ、これら
は、あるサイトカインの配列のまたはその配列の生物学的に活性なフラグメント
を、別のサイトカインまたはタンパク質性治療剤に融合させることによって調製
される（例えば、ＩＬ‐６に融合されたＩＬ−１１）（例えば、ＰＣＴ／ＵＳ９
１／０６１１８６（ＷＯ９２／０４４５５）（１９９２年、３月１９日公開）に
記載される融合のための方法を参照のこと）。あるいは、サイトカインの組み合
わせが、この方法に従って一緒に投与され得る。

【００２９】 従って、本発明の組成物の記載においてＩＬ−１１が名前で言及される場合、
ＩＬ−１１が、当該分野で現在開示されている配列によって産生されるタンパク
質、および上記の改変によって特徴付けられるが、なお実質的に類似の活性を維
持するタンパク質を包含することが、当業者に理解される。

【００３０】 以下の実施例は、本発明の実施を例示する。これらの実施例は、例示目的のた
めのみであり、特許請求される本発明の範囲を限定することをいかようにも意図
されない。実施例１は、ｒｈＩＬ−１１処方物へのスクロースの添加の利点を示
す。実施例２は、ＩＬ−１１の剪断に対するポリソルベートの効果を記載する。
実施例３は、液体処方物中のＩＬ−１１の酸化に対するＬ−メチオニンの効果を
記載する。実施例４は、湿顆粒錠剤中のＩＬ−１１の酸化に対するＬ−メチオニ
ンの効果を記載する。実施例５は、腸溶性ｒｈＩＬ−１１多粒子状（ｍｕｌｔｉ
ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ）ペレットの安定性に対する、Ｌ−メチオニンおよびポ
リソルベートの効果を記載する。

【００３１】 （実施例） （実施例１：スクロースの効果） 凍結乾燥化組換えヒトインターロイキン−１１（ｒｈＩＬ−１１）の安定性に
対するスクロースの効果を、２つの安定性研究において試験した。第１に、１０
ｍＭ リン酸ナトリウム、３００ｍＭ グリシン、ｐＨ７．０を含む組成物（本
明細書中でベース処方物と呼ばれる）中のｒｈＩＬ−１１の２６週間の研究を、
１％ スクロース含有および非含有で、１ｍｇおよび５ｍｇの投薬形態で試験し
た。サンプルを、バイアルに無菌的に充填し、そして凍結乾燥し、次いで、４℃
、３０℃および４０℃でインキュベートした。第２に、ベース処方物（１０ｍＭ
リン酸ナトリウム、３００ｍＭ グリシン、ｐＨ７．０）中のｒｈＩＬ−１１
の３４週間の研究を、スクロースを含まずに、２ｍｇ／ｍＬおよび５ｍｇ／ｍＬ
で、ならびに１％ スクロースを含んで、０．５ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ
および２．０ｍｇ／ｍＬで試験した。サンプルを、バイアルに無菌的に充填し、
そして凍結乾燥した。次いで、これらを、４℃、２５℃および４０℃でインキュ
ベートした。両方の研究において、サンプルを、酸性逆相ＨＰＬＣによって周期
的に分析した。

【００３２】 図１Ａは、スクロース含有および非含有で処方し、そして４０℃で２６週間イ
ンキュベートした、１ｍｇ／バイアルの凍結乾燥化ｒｈＩＬ−１１の投薬形態の
酸性逆相ＨＰＬＣ分析の結果を示す。これらのサンプルを、水で再構成し、そし
てＰｏｒｏｓ Ｒ１／Ｈカラム（４．６ｍｍ ＩＤ×１００ｍｍ Ｌ）上に、周
囲温度にて６４μｇのロードで注入した。移動相は、アセトニトリルの直線勾配
を有する０．１％ＴＦＡ水溶液であった。この方法を、２１４ｎｍで検出するＷ
ａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ＨＰＬＣシステム上で実行した。

【００３３】 図１Ｂは、スクロース含有および非含有で処方し、そして４０℃で２６週間イ
ンキュベートした、５ｍｇ／バイアルの凍結乾燥化ｒｈＩＬ−１１の投薬形態の
酸性逆相ＨＰＬＣ分析の結果を示す。図１Ａについての上記の教示は、使用した
逆相ＨＰＬＣ法を概略する。

【００３４】 図２は、スクロースを含まずに処方した２ｍｇ／バイアルおよび５ｍｇ／バイ
アルならびに１％ スクロースと共に処方した０．５ｍｇ／バイアル、１．０ｍ
ｇ／バイアルおよび２．０ｍｇ／バイアルの、４０℃で３４週間インキュベート
した、凍結乾燥化ｒｈＩＬ−１１の酸性ＲＰ−ＨＰＬＣ分析の結果を示す。図１
Ａについての上記の教示は、使用した逆相ＨＰＬＣ法を概略する。

【００３５】 要するに、両研究からのこの４０℃ ＲＰ−ＨＰＬＣデータは、凍結乾燥化ｒ
ｈＩＬ−１１処方物に添加したスクロース（１ｍｇ／バイアル、２ｍｇ／バイア
ルおよび５ｍｇ／バイアル）が、安定性に対して生成される凝集の量の減少にお
いて有利であることを示す。

【００３６】 （実施例２：ポリソルベートの効果） 液体ｒｈＩＬ−１１の安定性に対するポリソルベート−２０の効果を、短期振
盪研究において試験した。１０ｍＭ リン酸ナトリウム、３００ｍＭ グリシン
、ｐＨ７．０の組成物（ベース処方物）中のｒｈＩＬ−１１を、１ｍＬ ｒｈＩ
Ｌ−１１溶液（４．８ｍｇ／ｍＬ）を０％、０．００５％、０．０１％および０
．０２％のポリソルベート−２０を含む２ｍＬの管状バイアルに充填することに
よって、ポリソルベート２０含有および非含有で試験した。これらのバイアルに
栓をし、そして平台ゲル振盪機上に水平に圧着および確保した。二連のバイアル
を、以下の期間で約１２０ＲＰＭで振盪させた：０時間、１時間、２時間、４時
間、８時間、１６時間および２４時間。適切な時点で、サンプルを、光散乱およ
びＳＥＣ−ＨＰＬＣによる分析のために取り出した。

【００３７】 図３Ａは、ポリソルベート−２０含有および非含有の処方物中における、１６
時間の振盪後の液体ｒｈＩＬ−１１の光散乱結果を示す。光散乱は、Ｈｉｔａｃ
ｈ ＵＶ／Ｖｉｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（ここで、ｌ＝３２０
ｎｍ）において石英キュベットを用いて行った。

【００３８】 図３Ｂは、ポリソルベート−２０含有および非含有の処方物中における、１６
時間の振盪後の液体ｒｈＩＬ−１１のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−
ＨＰＬＣ）の結果を示す。ＳＥＣ−ＨＰＬＣは、Ｔｏｓｏ Ｈａａｓ ＴＳＫ２
０００ＳＷ_XLカラム（７．８ｍｍ ＩＤ×３００ｍｍ Ｌ）を用いて行い、そし
て５０ｍＭ ＭＥＳ、０．５Ｍ ＮａＣｌ、０．１ｍＭ グリシン、ｐＨ６．０
（移動相）を使用して１．０ｍＬ／分で平等に（ｉｓｏｃｒａｔｉｃａｌｌｙ）
流した。この方法は、３０μｇのカラムロードを使用して、２２５ｎｍで検出す
るＷａｔｅｒｓ ＨＰＬＣシステム上で実行した。

【００３９】 要するに、この１６時間振盪のデータは、ｒｈＩＬ−１１液体処方物に対する
ポリソルベート−２０の添加が、３２０ｎｍでの光散乱および生成されるｒｈＩ
Ｌ−１１マルチマー％を有意に減少することによって、その安定性に有利である
ことを示す。

【００４０】 （実施例３：ＩＬ−１１処方物に対するＬ−メチオニンの効果） Ｌ−メチオニンは、酸化種に対するスカベンジャーとして作用することによっ
て、ＩＬ−１１のメチオニン残基を酸化から保護すると考えられる。いくつかの
実験を行い、１０ｍＭのメチオニンが、ＩＬ−１１内のＭｅｔ５８の酸化を最小
化するために適切かつ十分な濃度であることを決定した（データは示さず）。

【００４１】 ポリソルベート（過酸化水素のような種々のレベルの酸化種を含む）の存在下
でのＬ−メチオニンの利点を試験するために、ＩＬ−１１を、１０ｍＭ メチオ
ニン含有および非含有の処方物中、２つの濃度（０．２ｍｇ／ｍＬおよび１．０
ｍｇ／ｍＬ）の液体投薬形態および凍結乾燥投薬形態として無菌的に調製した。
１０個までの異なるポリソルベートの供給源（種々の供給者製）を、０．０２％
の濃度（ｖ／ｖ）で各処方物に添加した。１ｍＬサンプルを、２８℃（データは
示さず）および４０℃でインキュベートした。

【００４２】 図４ａおよび４ｂは、１０ｍＭ メチオニン含有および非含有の処方物におけ
る、４０℃で８週間後の液体ＩＬ−１１の安定性を示す。図５ａおよび５ｂは、
１０ｍＭ メチオニン含有および非含有の処方物における、４０℃で８週間後の
凍結乾燥化ＩＬ−１１の安定性を示す。Ｍｅｔ５８酸化のレベルを、Ｐｏｒｏｓ
Ｒ１／Ｈカラムおよびアセトニトリルの直線勾配を有する０．１％ＴＦＡ水溶
液の移動相を使用する、逆相高速液体クロマトグラフィーによってモニターした
。検出は、２１４ｎｍであった。

【００４３】 図４ａ、４ｂ、５ａおよび５ｂに示されるデータは、１０ｍＭのメチオニンの
添加が、ＩＬ−１１内のＭｅｔ５８酸化のレベルを減少することを実証する。さ
らに、タンパク質濃度が０．２ｍｇ／ｍＬから１．０ｍｇ／ｍＬに変化するにつ
れて、タンパク質内の酸化のレベルが、タンパク質濃度の増加と共に減少する。
これは、メチオニン酸化の程度が、酸化種に利用可能な基質（メチオニン）のレ
ベルに依存するという概念と一貫する。この実験の結論は、１０ｍＭのメチオニ
ンが、ＩＬ−１１内のＭｅｔ５８酸化のレベルを劇的に減少することである。

【００４４】 （実施例４：ＩＬ−１１錠剤に対するＬ−メチオニンの効果） ｒｈＩＬ−１１錠剤処方物におけるメチオニンの効果を、この４週間の安定性
研究において試験した。ｒｈＩＬ−１１錠剤を、１０ｍＭメチオニンを含んでか
、または含まずに調製し（２．５ｍｇ活性／錠剤）、そして０週間、２週間およ
び４週間ＨＤＰＥボトル中、４℃、２５℃および４０℃でインキュベートした。
サンプルを、１０ｍＭ リン酸ナトリウム、３００ｍＭ グリシン、０．０２％
ポリソルベート−８０、１０ｍＭ メチオニン、ｐＨ７．０緩衝液を使用して、
平台ゲル振盪機上で低速で、周囲温度にて一晩粉砕および抽出した。サンプルを
、各時点で逆相ＨＰＬＣによって分析した。

【００４５】 図６は、メチオニン含有および非含有処方物における酸化されたメチオニン⁵⁸ 種の割合（％）を検出するためのＲＰ−ＨＰＬＣによる、４０℃でインキュベー
トしたｒｈＩＬ−１１錠剤についての安定性結果を示す。サンプルを、４０℃に
てインキュベートしたｐｏｒｏｓ Ｒ１／Ｈカラム（４．６ｍｍ ＩＤ×１００
ｍｍ Ｌ）上に８μｇのロードで注入した。移動相は、アセトニトリルの直線勾
配を有する０．１％ＴＦＡ水溶液であった。この方法を、２１４ｎｍで検出する
Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ＨＰＬＣシステム上で実行した。

【００４６】 要約すると、ｒｈＩＬ−１１錠剤処方物にへのメチオニンの添加は、メチオニ
ン⁵⁸酸化の量を減少する。これは、メチオニンが、酸化防止剤としてｒｈＩＬ−
１１処方物に有利であることを示す。

【００４７】 （実施例５：ＩＬ−１１多粒子に対するＬ−メチオニンおよびポリソルベート
の効果） ｒｈＩＬ−１１多粒子状処方物におけるメチオニンおよびポリソルベート−８
０の効果を、この２ヶ月の安定性研究において試験した。ｒｈＩＬ−１１多粒子
を、１０ｍＭメチオニンおよび０．０２％ポリソルベート−８０を含んでか、ま
たは含まずに調製し（１ｍｇ活性／１００ｍｇ多粒子）、そして２ヶ月間ＨＤＰ
Ｅボトル中、４℃、２５℃および４０℃でインキュベートした。多粒子を、１０
０ｍＭ リン酸ナトリウム、３００ｍＭ グリシン、０．０２％ポリソルベート
−８０、１０ｍＭ メチオニン、ｐＨ７．０緩衝液を使用して、平台ゲル振盪機
上で低速で、周囲温度にて一晩粉砕および抽出した。サンプルを、逆相ＨＰＬＣ
によって周期的に分析した。

【００４８】 図７は、メチオニンおよびポリソルベート−８０含有および非含有処方物にお
ける酸化されたメチオニン⁵⁸種の割合（％）を検出するためのＲＰ−ＨＰＬＣに
よる、４０℃でインキュベートしたｒｈＩＬ−１１多粒子についての安定性結果
を示す。サンプルを、４０℃にてインキュベートしたｐｏｒｏｓ Ｒ１／Ｈカラ
ム（４．６ｍｍ ＩＤ×１００ｍｍ Ｌ）上に８μｇのロードで注入した。移動
相は、アセトニトリルの直線勾配を有する０．１％ＴＦＡ水溶液であった。この
方法を、２１４ｎｍで検出するＷａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ＨＰＬＣシス
テム上で実行した。

【００４９】 要約すると、ｒｈＩＬ−１１多粒子状処方物への１０ｍＭ メチオニンおよび
０．０２％ ポリソルベート−８０の添加は、メチオニン⁵⁸酸化の量を減少する
。これは、メチオニンが、酸化防止剤としてｒｈＩＬ−１１処方物に有利である
ことを確認する。

【００５０】 本発明は、特定の方法および組成物について記載したが、変更および改変が、
本発明を考慮して当業者に想到することが理解される。

【００５１】 上記の例示的な実施例において記載されるような、本発明における多くの改変
および変更は、当業者に想到すると予測され、従って、添付の特許請求の範囲に
示されるような限定のみが、本発明になされるべきである。従って、添付の特許
請求の範囲において、特許請求されるような本発明の範囲内に生じるこのような
全ての等価的改変を包含することが意図される。

【図面の簡単な説明】

【図１Ａ】 図１Ａは、１％のスクロースを含有する処方物および１％のスクロースを含有
しない処方物における４０℃で２６週間後の１ｍｇの、ＩＬ−１１の凍結乾燥し
た投薬形態の安定性を示す。

【図１Ｂ】 図１Ｂは、１％のスクロースを含有する処方物および１％のスクロースを含有
しない処方物における４０℃で２６週間後の５ｍｇの、ＩＬ−１１の凍結乾燥し
た投薬形態の安定性を示す。

【図２】 図２は、１％のスクロースを含有する処方物および１％のスクロースを含有し
ない処方物における３４週間後の凍結乾燥したＩＬ−１１の安定性を示す。

【図３Ａ】 図３Ａは、ポリソルベート−２０を含有する処方物およびポリソルベート−２
０を含有しない処方物における１６時間の攪拌後の液体ＩＬ−１１の安定性を示
す。

【図３Ｂ】 図３Ｂは、ポリソルベート−２０を含有する処方物およびポリソルベート−２
０を含有しない処方物における１６時間の攪拌後の液体ＩＬ−１１の安定性を示
す。

【図４Ａ】 図４Ａは、１０ｍＭのメチオニンを含有する処方物および１０ｍＭのメチオニ
ンを含有しない処方物における４０℃での０．２ｍｇ／ｍｌの液体投薬形態での
ＩＬ−１１の安定性を示す。

【図４Ｂ】 図４Ｂは、１０ｍＭのメチオニンを含有する処方物および１０ｍＭのメチオニ
ンを含有しない処方物における４０℃での１．０ｍｇ／ｍｌの液体投薬形態での
ＩＬ−１１の安定性を示す。

【図５Ａ】 図５Ａは、１０ｍＭのメチオニンを含有する処方物および１０ｍＭのメチオニ
ンを含有しない処方物における４０℃での０．２ｍｇ／バイアルの凍結乾燥した
投薬形態でのＩＬ−１１の安定性を示す。

【図５Ｂ】 図５Ｂは、１０ｍＭのメチオニンを含有する処方物および１０ｍＭのメチオニ
ンを含有しない処方物における４０℃での１．０ｍｇ／バイアルの凍結乾燥した
投薬形態でのＩＬ−１１の安定性を示す。

【図６】 図６は、メチオニンを含有する処方物およびメチオニンを含有しない処方物に
おいて４０℃でインキュベートされたＩＬ−１１の錠剤の安定性を示す。

【図７】 図７は、メチオニンおよびＴｗｅｅｎを含有するか、またはメチオニンおよび
Ｔｗｅｅｎを含有しない処方物において４０℃でインキュベートされたＩＬ−１
１の多粒子の安定性を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 47/26 Ａ６１Ｋ 47/34 47/34 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｕ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ， ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，Ｌ Ｓ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ， ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，Ｔ Ｔ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 イングラム， レベッカ エル． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 01865， ナッティング レイク， ウォ ーター ストリート ８ (72)発明者 マクミラン， シャノン アメリカ合衆国 ニューハンプシャー 03049， ホリス， ラネルズ ロード 57 Ｆターム(参考） 4C076 AA29 CC03 CC29 DD26 DD51 DD55 DD67 EE23 FF63 FF64 FF65 4C084 AA02 AA03 BA44 DA14 MA05 MA44 NA03 ZA51 ZB02 ZB09

Claims (25)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＩＬ−１１、グリシン、および凍結防止剤を含む、組成物。
2. 【請求項２】 前記凍結防止剤がスクロースである、請求項１に記載の組成
   物。
3. 【請求項３】 前記グリシンが、約１００〜約４００ｍＭの濃度で存在する
   、請求項１に記載の組成物。
4. 【請求項４】 前記グリシンが、約３００ｍＭの濃度で存在する、請求項１
   に記載の組成物。
5. 【請求項５】 前記スクロースが、約０．５〜約２．０％の濃度で存在する
   、請求項２に記載の組成物。
6. 【請求項６】 前記スクロースが、約１．０％の濃度で存在する、請求項２
   に記載の組成物。
7. 【請求項７】 さらにポリソルベートを含む、請求項１に記載の組成物。
8. 【請求項８】 前記ポリソルベートが、Ｔｗｅｅｎ−２０である、請求項７
   に記載の組成物。
9. 【請求項９】 前記ポリソルベートが、約０．００５〜約０．１％の濃度で
   存在する、請求項７に記載の組成物。
10. 【請求項１０】 前記ポリソルベートが、約０．０２％の濃度で存在する、
    請求項７に記載の組成物。
11. 【請求項１１】 さらに酸化防止剤を含む、請求項１に記載の組成物。
12. 【請求項１２】 前記酸化防止剤が、Ｌ−メチオニンである、請求項１１に
    記載の組成物。
13. 【請求項１３】 前記Ｌ−メチオニンが、約１〜約１００ｍＭの濃度で存在
    する、請求項１２に記載の組成物。
14. 【請求項１４】 前記Ｌ−メチオニンが、約１０ｍＭの濃度で存在する、請
    求項１２に記載の組成物。
15. 【請求項１５】 さらに緩衝剤を含む、請求項１に記載の組成物。
16. 【請求項１６】 前記緩衝剤が、前記組成物のｐＨを約６．０〜約８．０の
    範囲に維持する、請求項１５に記載の組成物。
17. 【請求項１７】 前記緩衝剤が、前記組成物のｐＨを約７．０に維持する、
    請求項１５に記載の組成物。
18. 【請求項１８】 前記緩衝剤が、リン酸ナトリウムである、請求項１５に記
    載の組成物。
19. 【請求項１９】 前記ＩＬ−１１が、約１μｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌの
    濃度で存在する、請求項１に記載の組成物。
20. 【請求項２０】 前記ＩＬ−１１が、約１〜約５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在す
    る、請求項１に記載の組成物。
21. 【請求項２１】 約１〜約５ｍｇ／ｍｌのＩＬ−１１、約３００ｍＭのグリ
    シン、および約１％のスクロースを含む、請求項２に記載の組成物。
22. 【請求項２２】 約１〜約５ｍｇ／ｍｌのＩＬ−１１、約３００ｍＭのグリ
    シン、および約１％のスクロース、および約０．０２％のポリソルベートを含む
    、請求項７に記載の組成物。
23. 【請求項２３】 約１〜約５ｍｇ／ｍｌのＩＬ−１１、約３００ｍＭのグリ
    シン、および約１％のスクロース、約０．０２％のポリソルベート、および約１
    ０ｍＭのＬ−メチオニンを含む、請求項１２に記載の組成物。
24. 【請求項２４】 約７．０のｐＨを有する、請求項２３に記載の組成物。
25. 【請求項２５】 前記組成物が凍結乾燥されている、請求項１に記載の組成
    物。