RU2644335C2 - Эпитоп, специфичный к олигомеру амилоида бета, и антитела - Google Patents
Эпитоп, специфичный к олигомеру амилоида бета, и антитела Download PDFInfo
- Publication number
- RU2644335C2 RU2644335C2 RU2012139043A RU2012139043A RU2644335C2 RU 2644335 C2 RU2644335 C2 RU 2644335C2 RU 2012139043 A RU2012139043 A RU 2012139043A RU 2012139043 A RU2012139043 A RU 2012139043A RU 2644335 C2 RU2644335 C2 RU 2644335C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibodies
- antibody
- oligomeric
- alzheimer
- epitope
- Prior art date
Links
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 8
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 71
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims abstract description 62
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 claims abstract description 51
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 claims abstract description 51
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 40
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 29
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 23
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 17
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 10
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 83
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 31
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 31
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 31
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 28
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 19
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 14
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 11
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 53
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 35
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 33
- 238000003639 Student–Newman–Keuls (SNK) method Methods 0.000 description 31
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 28
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 28
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 28
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 241000894007 species Species 0.000 description 14
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 13
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 13
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 13
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 13
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 13
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 13
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 11
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 11
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 11
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 10
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 10
- 238000011161 development Methods 0.000 description 10
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 10
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 10
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 10
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 8
- -1 polyoxypropylene Polymers 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 7
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 7
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 6
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 6
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 6
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 5
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 5
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 5
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 4
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 3
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 3
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008073 immune recognition Effects 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000001370 static light scattering Methods 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 2
- HEVGGTGPGPKZHF-UHFFFAOYSA-N Epilaurene Natural products CC1C(=C)CCC1(C)C1=CC=C(C)C=C1 HEVGGTGPGPKZHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002307 glutamic acids Chemical class 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 238000000329 molecular dynamics simulation Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000003977 synaptic function Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-5-amino-2-(aminomethyl)-6-[(2r,3s,4r,5s)-5-[(1r,2r,3s,5r,6s)-3,5-diamino-2-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-hydroxycyclohexyl]oxy-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl]oxyoxane-3,4-diol;sulfuric ac Chemical compound OS(O)(=O)=O.N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004042 4-aminobutyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 102100029470 Apolipoprotein E Human genes 0.000 description 1
- 101710095339 Apolipoprotein E Proteins 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 230000007134 Aβ oligomerisation Effects 0.000 description 1
- 230000005653 Brownian motion process Effects 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000000989 Complement System Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010069112 Complement System Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N D-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 229930182847 D-glutamic acid Natural products 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 1
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052688 Gadolinium Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000018899 Glutamate Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010027915 Glutamate Receptors Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 235000003332 Ilex aquifolium Nutrition 0.000 description 1
- 235000002296 Ilex sandwicensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002294 Ilex volkensiana Nutrition 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical compound SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 241000238367 Mya arenaria Species 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 108010064571 PrPC Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012412 Presenilin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010036933 Presenilin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010036908 Presenilin-2 Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108010021188 Superoxide Dismutase-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100038836 Superoxide dismutase [Cu-Zn] Human genes 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- RREGISFBPQOLTM-UHFFFAOYSA-N alumane;trihydrate Chemical compound O.O.O.[AlH3] RREGISFBPQOLTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 101150031224 app gene Proteins 0.000 description 1
- 150000001510 aspartic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004630 atomic force microscopy Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000006736 behavioral deficit Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- PSHNNUKOUQCMSG-UHFFFAOYSA-K bis[(2,2,2-trifluoroacetyl)oxy]thallanyl 2,2,2-trifluoroacetate Chemical compound [Tl+3].[O-]C(=O)C(F)(F)F.[O-]C(=O)C(F)(F)F.[O-]C(=O)C(F)(F)F PSHNNUKOUQCMSG-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000005537 brownian motion Methods 0.000 description 1
- 239000006189 buccal tablet Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid;ethene Chemical compound C=C.OC(=O)CC=C DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011132 calcium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000011111 cardboard Substances 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 238000002737 cell proliferation kit Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000852 deltoid muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000000280 densification Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000000104 diagnostic biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N gadolinium atom Chemical compound [Gd] UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000000848 glutamatergic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 229940032219 immunotherapy vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 1
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 description 1
- 201000011475 meningoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002052 molecular layer Substances 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003955 neuronal function Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N oxidized gamma-L-glutamyl-L-cysteinylglycine Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CSSCC(C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CCC(N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229960001639 penicillamine Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 210000002243 primary neuron Anatomy 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940074404 sodium succinate Drugs 0.000 description 1
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L sodium succinate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 230000003976 synaptic dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229910052713 technetium Inorganic materials 0.000 description 1
- GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N technetium atom Chemical compound [Tc] GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 239000003970 toll like receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000000277 virosome Substances 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4711—Alzheimer's disease; Amyloid plaque core protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4709—Amyloid plaque core protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
Abstract
Данное изобретение относится к области иммунологии. Предложено изолированное антитело, которое обладает способностью специфично связываться с амилоидом бета (Аβ), а также антигенные циклические пептиды, способные вызывать специфический иммунный ответ против олигомерного Аβ. Описаны: иммуноконъюгат, композиции, а также применение антитела, иммуноконъюгата и вакцинной композиции для лечения или профилактики болезни Альцгеймера. Кроме того, рассмотрены способы лечения или профилактики болезни Альцгеймера, способ и набор для диагностики болезни Альцгеймера, а также нуклеиновая кислота, кодирующая изолированное антитело. Настоящее изобретение может найти дальнейшее применение в терапии и диагностике заболеваний, связанных с амилоидом бета. 13 н. и 9 з.п. ф-лы, 15 ил., 1 табл., 9 пр.
Description
ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Для настоящей заявки испрашивается приоритет предварительной заявки США №61/310,167, поданной 3 марта 2010, которая целиком включена в настоящую заявку посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к новым конформационным эпитопам олигомеров Абета, к композициям антител, имеющих отношение к указанным эпитопам, и способам их применения.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Болезнь Альцгеймера (БА) - распространенное нейродегенеративное заболевание (сопровождающееся нарушениями памяти и познания), ассоциированное с накоплением в мозге внеклеточных бляшек, состоящих преимущественно из пептидов Абета (1-40), Aβ (1-42) и Aβ (1-43) (также обозначаемых как амилоид β или Aβ), которые являются протеолитическими продуктами амилоидного белка-предшественника (APP). К тому же, в внутри клеток гибнущих нейронов образуются нейрофибриллярные узлы, состоящие преимущественно из аномально фосфорилированного тау белка (белка нейронов, ассоциированного с микротрубочками). Aβ (1-41) является доминирующим видом в амилоидных бляшках больных БА.
Наследственные формы БА могут быть вызваны мутациями в гене АРР или в генах пресенилина 1 или 2, белковые продукты которых включены в процессинг APP до Aβ. Аллельные варианты аполипопротеина E также влияют на возраст возникновения обеих форм БА - спорадической и наследственной. Совсем недавно было выяснено, что отдельные молекулярные разновидности Aβ, в которых пептид представлен в виде олигомера, опосредуют основной компонент нейротоксичности, наблюдающейся при БА и в моделях болезни на мышах (Walsh et al. 2002). Токсичность олигомера Аβ может проявляться в дисфункции нейронных рецепторов инсулина (Zhao et al. 2008) и в препятствовании нормальной синаптической функции, в частности, в гиппокампе, путем эктопической активации глутаматэргических рецепторов (De Felice et al. 2007; Nimmrich et al. 2008). Сообщалось о наномолярной аффинности связывания при взаимодействии между олигомерами Aβ и нормальной клеточной изоформой белка-приона PrPC (Lauren et al. 2009). Более того, взаимодействие между PrPC и различными токсичными сигнальными путями (Solforosi et al. Lefebvre-Roque et al. 2007), включая субъединицы рецептора глутамата (Khosravani et al. 2008), может приводить к объединенному механизму токсичности олигомеров Аβ.
Хорошо известно, что иммунное распознавание Aβ может приводить как к развитию патологии, так и к улучшению поведения трансгенных мышей, экспрессирующих человеческий мутантный амилоидный белок-предшественник. Однако существует опасность, присущая лечению людей «неселективной» иммунотерапией Aβ. Например, у примерно 10% пациентов, получающих вакцину против болезни Альцгеймера, содержащую неселективный иммуноген Aβ, возникает аутоиммунный менингоэнцефалит (Gelinas et al. 2004; Robinson et al. 2004; Broytman and Malter 2004; Mathews and Nixon 2003). И хотя в итоге менингоэнцефалопатия возникала, очевидно, в связи с клеточной иммунной активацией по отношению к Aβ, также было показано, что пассивно введенные при инфузии моноклональные антитела против Aβ (МАТ), обособленные от клеточного иммунного ответа, ассоциировались с микрокровоизлияниями в мозге (Goni and Sigurdsson 2005). Другой риск неселективной иммунизации Aβ - это иммунное распознавание родительских белков APP, экспонированных на поверхности нейронов мозга и циркулирующих моноцитов (Jung et al. 1996; Jung et al. 1990). Такое распознавание мембранной молекулы клеточной поверхности может спровоцировать лизис или помешать функционированию внеклеточного домена белка APP, включая трофическую активность (Morimoto et al. 1998; Mileusnic et al. 2005; Mileusnic et al. 2005).
Другая проблема с «неспецифическим» распознаванием пептида Aβ состоит в том, что пептид Аβ является единственным предшественником токсичных молекулярных разновидностей Aβ - олигомеров Aβ. Было показано, что олигомеры Aβ способны вызывать гибель клеточных линий и нейронов в культуре (Lambert et al.2007; Lacor et al. 2007; Ronicke et al. 2008) Balducci et al. 2012; Shankar et al. 2008; Selcoe 2008; Klyubin et al. 2005; Walsh et al. 2002; Wamg et al. 2002). Специфические олигомеры Aβ были идентифицированы как пептиды, которые коррелируют с началом нарушений памяти у мышей и которые после очистки и введения нормальным молодым крысам вызывают негативные поведенческие нарушения, наблюдаемые у мышей (Lesne et al. 2006). Похожие исследования показали, что PrPC может выступать в качестве рецептора для олигомеров Aβ и может преобразовывать их токсичные эффекты в синаптические нарушения LTP (Lauren et al. 2009).
Хотя в прошлом были созданы вакцины Aβ и моноклональные антитела против пептидов Aβ, ни для одного из них к настоящему времени не доказано, что с их использованием достигается желаемый терапевтический эффект без дополнительного возникновения серьезных побочных эффектов у животных и/или людей. Существует терапевтическая необходимость в разработке биологических препаратов, которые бы блокировали или замедляли развитие заболевания и не оказывали негативные и потенциально летальные воздействия на организм человека. Эта необходимость особенно очевидна ввиду роста общей продолжительности жизни популяции и роста числа пациентов, у которого ежегодно диагностируется болезнь Альцгеймера. Было бы желательно идентифицировать иммунологические эпитопы, являющиеся болезнь-специфическими эпитопами (БСЭ), и разработать иммунотерапию, специфически нацеленную на токсичные олигомерные молекулярные разновидности Aβ. Также желательно разработать иммунотерапию, нацеленную на токсичные олигомерные молекулярные разновидности Aβ, и избежать аутоиммунного распознавания APP на поверхности клеток. Такие БСЭ-эпитопы могут стать целями для иммунотерапии и профилактических вакцин, специфически нейтрализующих токсичность белков-мишеней. Также желательно разработать диагностические инструменты, обеспечивающие идентификацию населения с риском развития БА для дифференциальной диагностики и возможности отличить БА от других синдромов слабоумия и для мониторинга ответа биологических маркеров на терапию БА.
Также желательно предоставить болезнь-специфический эпитоп, уникальный для токсической олигомерной молекулярной разновидности Aβ.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Целью настоящего изобретения является устранение либо минимизация, по крайней мере, одного недостатка предшествующих эпитопов, антител, композиций и методов диагностики, лечения и профилактики болезни Альцгеймера.
В первом аспекте настоящее изобретение частично основано на неожиданном открытии нового структурного эпитопа в Aβ с полезными свойствами для селективного присоединения антител.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предоставляется циклический пептид, полученный из Aβ и содержащий, по крайней мере, аминокислотную последовательность SNK, соответствующую экспонированному в раствор и доступному для антител шарнирному участку олигомерного Aβ.
В другом варианте реализации настоящего изобретения предоставляется антигенный пептид, содержащий эпитоп, который содержит конформационно напряженную циклическую конфигурацию, эпитоп, содержащий, по крайней мере, аминокислотную последовательность SNK, соответствующую экспонированному в раствор и доступному для антител шарнирному участку олигомерного Aβ.
В другом варианте реализации настоящего изобретения предоставляется антигенный пептид, содержащий эпитоп, который содержит конформационно напряженную циклическую конфигурацию, эпитоп, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую последовательности SEQ ID NO: 1, соответствующую экспонированному в раствор и доступному для антител шарнирному участку олигомерного Aβ.
В одном аспекте эпитоп антигенного пептида соответствует остаткам с 25 по 29 олигомерного Аβ (1-40) или олигомерного Aβ (1-42).
В другом варианте реализации настоящего изобретения предоставляется изолированное антитело, которое специфично связывается с циклическим пептидом - производным Aβ, циклическим пептидом, содержащим конформационный эпитоп, имеющий аминокислотную последовательность, по крайней мере, SNK, соответствующую гидрофильному и доступному антителам шарнирному участку олигомерного Aβ.
В еще одном варианте реализации настоящего изобретения оно представляет собой изолированное антитело, которое специфично связывается с циклическим пептидом, полученным из Aβ, циклическим пептидом, содержащим конформационный эпитоп, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую последовательности SEQ ID NO: 1, соответствующую экспонированному в раствор и доступному для антител шарнирному участку олигомерного Aβ.
В одном аспекте изолированное антитело специфически связывается с большей аффинностью с олигомерными формам Aβ и, чем с не олигомерными формами Aβ.
В еще одном аспекте изолированное антитело является моноклональным.
В еще одном аспекте изолированное антитело является гуманизированным.
В другом варианте реализации настоящего изобретения предоставляется иммуноконъюгат, содержащий изолированное антитело, которое специфически связывается с циклическим пептидом, полученным из Аβ, содержащим конформационный эпитоп, содержащим, по крайней мере, аминокислотную последовательность SNK, соответствующую экспонированному в раствор и доступному для антител шарнирному участку олигомерного Aβ, конъюгированное с детектируемой меткой.
В другом аспекте предоставляется нуклеиновая кислота, кодирующая изолированное антитело.
В еще одном варианте реализации настоящего изобретения предоставляется композиция, содержащая терапевтически эффективное количество изолированных антител, которые специфически связываются с циклическим пептидом, полученным из Aβ, циклическим пептидом, содержащим конформационный эпитоп, содержащий по крайней мере, аминокислотную последовательность SNK, соответствующую экспоинрованному в раствор и доступному для антител шарнирному участку олигомерного Aβ; и фармацевтически приемлемый адъювант.
В другом варианте реализации настоящего изобретения предоставляется антиолигомерная вакцинная композиция, содержащая антигенный пептид, который содержит эпитоп, содержащий конформационно напряженную циклическую конфигурацию, эпитоп, содержащий, по крайней мере, аминокислотную последовательность SNK, соответствующую экспонированному в раствор и доступному для антител шарнирному участку олигомерного Aβ; и фармацевтически приемлемый адъювант.
В еще одном аспекте предоставляется способ лечения либо профилактики болезни Альцгеймера у пациентов, нуждающихся в вышеупомянутом лечении, включающем введение фармацевтически эффективного количества изолированного антитела или иммуноконъюгата.
В еще одном аспекте предоставляется способ лечения и профилактики болезни Альцгеймера у пациентов, нуждающихся в вышеупомянутом лечении, включающий введение вакцины.
В еще одном аспекте предоставляется способ диагностики болезни Альцгеймера у пациентов с подозрением на болезнь Альцгеймера, включающий следующие стадии: а) получение биологического образца у пациента; б) контакт биологического образца с изолированным антителом на протяжении времени и при условиях, достаточных для формирования комплексов антиген-антитело в образце и в) определение наличия комплекса антиген-антитело в образце, где наличие комплекса означает диагностирование болезни Альцгеймера у пациента.
В еще одном варианте реализации настоящего изобретения предоставляется набор, состоящий из изолированного антитела и конъюгата, содержащего антиген, связанный с соединением, генерирующим сигнал.
В другом аспекте набор включает один детектирующий агент или более.
В другом варианте реализации настоящего изобретения предоставляется продукт производства, включающий: изолированное антитело, конъюгат, содержащий антиген, связанный с соединением, генерирующим сигнал, и инструкцию по применению для диагностики болезни Альцгеймера.
В еще одном аспекте предоставляется применение антитела или иммуноконъюгата для лечения и профилактики болезни Альцгеймера.
В еще одном аспекте предоставляется использование вакцины для лечения и профилактики болезни Альцгеймера.
В другом варианте реализации предоставляются изолированные антитела, способные связываться с циклическим пептидом, полученным из Aβ, содержащим аминокислотную последовательность SNK, соответствующую экспонированному в раствор и доступному для антител шарнирному участку олигомерного Aβ. В отдельном аспекте данне антитела связывают олигомерные формы Aβ с большей аффинностью, чем не олигомерные формы Aβ.
В еще одном варианте реализации настоящего изобретения предоставляется способ профилактики развития или прогрессирования БА у объекта, способ, включающий введение объекту терапевтически эффективного количества антигенного пептида, который содержит эпитоп, содержащий конформационо напряженную циклическую конфигурацию, содержащую аминокислотную последовательность SNK, соответствующую экспонированному в раствор и доступному для антител шарнирному участку олигомерного Aβ. При введении антигенный пептид вызывает иммунную реакцию против олигомерного Aβ. Вырабатываемые антитела способны специфически связываться с олигомерным Aβ. В определенных вариантах реализации данные антитела связывают олигомерные формы Aβ с большей аффинностью, чем не олигомерные формы Aβ.
Другие аспекты и черты настоящего изобретения будут очевидны для специалиста в данной области из нижеследующего описания частных вариантов реализации с сопроводительными иллюстрациями.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Варианты реализации настоящего изобретения будут описаны с использованием примеров, со ссылками на прилагаемые Фигуры.
Фиг.1 графически иллюстрирует результаты динамического рассеяния света, демонстрирующие динамические свойства мономерного Aβ.
Фиг.2 графически иллюстрирует результаты динамического рассеяния света, демонстрирующие динамические свойства олигомерного Aβ.
Фиг.3 графически иллюстрирует результаты динамического рассеяния света, демонстрирующие динамические свойства олигомерного Aβ.
Фиг.4 представляет собой трехмерную модель дисульфид-циклизованного пептида, содержащего эпитоп SNK.
Фиг.5 графически иллюстрирует результаты типичного аналитического цикла Biacore™ для скрининга анти-SNK моноклональных антител, связывающихся с конформационным пептидом, содержащим SNK.
Фиг.6 графически иллюстрирует сенсограмму наложения Biacore™, которая демонстрирует связывание конъюгированных с БСА линейных или циклических пептидов, содержащих эпитоп SNK, со специфичными к линейным формам (3F5, 3G2), специфичными к циклическим формам (5E3, 5D8) и специфичными к промежуточным формам (4D11, 4D12) моноклональными антителами и способность этих антител к связыванию с синтетическими олигомерами Aβ 1-42.
Фиг.7 графически иллюстрирует сенсограмму наложения Biacore™, которая демонстрирует связывание конъюгированных с БСА линейных или циклических пептидов, содержащих эпитоп SNK, со специфичными к линейным формам (3F5, 3G2), специфичными к циклическим формам (5E3, 5D8) и специфичными к промежуточным формам (4D11, 4D12) моноклональными антителами и способность этих антител к связыванию с синтетическими олигомерами Aβ 1-42.
Фиг.8 графически иллюстрирует результаты анализа Biacore™, которые демонстрируют связывание синтетических олигомеров Aβ 1-42 с моноклональным антителом 5E3, специфичным к циклическим формам, при разных концентрациях.
Фиг.9 представляет собой результат проточной цитометрии, который демонстрирует сравнительный анализ связывания с клетками меченных антител 6E10 и негативного контроля с белком APP, расположенным на поверхности клеток.
Фиг.10 представляет собой результат проточной цитометрии, который демонстрирует сравнительный анализ связывания с клетками меченных антител 5E3 и негативного контроля с белком APP, расположенным на поверхности клеток.
Фиг.11 графически иллюстрирует результаты анализа нейрональной токсичности, которые демонстрируют степень выживаемости клеток, инкубированных с холостым контролем, растворимыми мономерным и олигомерным Aβ 1-40 в присутствии и в отсутствие антител 5E3 в разных концентрациях.
Фиг.12 иллюстрирует результаты иммуноблотинга, которые демонстрируют гомогенизированные в солевом трис-буферном растворе (TBS) ткани мозга, фракционированные в трис-трициновых гелях, и проанализированные методом иммуноблотинга с пан-Aβ антителами 6E10.
Фиг.13 иллюстрирует результаты иммуноблотинга, которые демонстрируют гомогенизированные в солевом трис-буферном растворе (TBS) ткани мозга, фракционированные в трис-трициновых гелях, и проанализированные методом иммуноблотинга с антителами 5E3.
Фиг.14 изображает результаты статического рассеяния света для определения полимеризации Aβ в присутствии («5E3») и в отсутствие («C») антитела 5E3; и
Фиг.15 иллюстрирует нуклеотидную последовательность тяжелой и легкой цепей антитела 5ЕЗ в обоих прочтениях (5’ и 3’).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В общих чертах, настоящее изобретение представляет собой новый пептидный эпитоп с ограниченной подвижностью, полученный из Aβ, далее именуемый как «новый эпитоп» или «новый конформационный эпитоп», и композиции антител, имеющих отношение к указанному эпитопу. Антитела, способные связываться с новым конформационным эпитопом, полезны в качестве как диагностических, так и терапевтических агентов при лечении болезни Альцгеймера. Новый конформационно напряженный пептидный эпитоп Aβ, полезен для вакцин для профилактики БА и родственных видов слабоумия. Антитела, способные к связыванию с новым конформационным эпитопом также полезны для диагностики, лечения и профилактики слабоумий, родственных с болезнью Альцгеймера.
Любые термины, определение которых здесь прямо не приводится, должны пониматься как имеющие то значение, которое обычно ассоциируется с ними в рамках области техники, к которой относится данное изобретение.
Используемый здесь термин «выделенное антитело» используется для обозначения антител, способных связываться с новым конформационным эпитопом, которые обладают высокой степенью чистоты и являются свободными от постороннего клеточного материала, включая другие антитела и фрагменты антител, имеющие другую антигенную специфичность. Изолированное антитело, специфически связывающееся с новым конформационным эпитопом, может, тем не менее, иметь перекрестную реактивность к другим антигенам. Специалисту в данной области техники очевидно, что экспериментальные условия могут быть оптимизированы для получения антитела с максимальным специфическим связыванием. Термин «антитело» считается включающим его фрагменты, которые также специфически реагируют с новым конформационным эпитопом в соответствии с настоящим изобретением. Антитела могут быть фрагментированы с использованием традиционных методов, и отбор фрагментов по их пригодности проводится таким же образом, как описано выше. Фрагменты могут быть получены, например, путем обработки антител пепсином. Полученные фрагменты могут быть в дальнейшем обработаны для восстановления дисульфидных связей.
Термин «объект», используемый здесь, относится к животному, такому как птица или млекопитающее. Конкретные животные включают крыс, мышей, собак, коров, овец, лошадей, свиней или приматов. Объектом может также быть человек, альтернативно обозначаемым как пациент.Объектом может также быть трансгенное животное. Объектом может также быть грызун, такой как мышь или крыса.
Термин «эпитоп», используемый здесь, относится к участку молекулы, который может распознаваться специфичным антителом, или который индуцирует образование специфичных антител.
Термин «конформационный эпитоп», используемый здесь, относится к эпитопу, в котором аминокислотная последовательность имеет особенную трехмерную структуру. Антитела, которые специфически связываются с конформационно-специфичным эпитопом, распознают пространственное расположение аминокислот конформационно-специфичного эпитопа.
Термин Aβ, используемый здесь, может попеременно обозначать «амилоид бета», «амилоид β» или «Aβ». Амилоид бета - это пептид, состоящий из 39-43 аминокислот, который представляется основным компонентом амилоидных бляшек в мозге больных болезнью Альцгеймера. Было показано, что олигомеризация Аβ является ключевым звеном нейротоксичности при болезни Альцгеймера, как описано в данной заявке.
Термин «большая аффинность», используемый здесь, относится к степени связывания антитела, когда антитело X связывается с мишенью Y более сильно и с меньшей константой диссоциации, чем с мишенью Z, и в этом контексте антитело X имеет большую аффинность по отношению к мишени Y, чем к Z. Подобным образом, термин «меньшая аффинность» относится к степени связывания антитела, когда антитело X связывается с мишенью Y менее сильно и с большей константой диссоциации, чем с мишенью Z, и в этом контексте антитело X имеет меньшую аффинность по отношению к мишени Y, чем к Z.
Термин «мономер Aβ», используемый здесь, относится к изолированной линейной форме пептида Aβ (X-Y), предпочтительно, к форме пептида Aβ (X-Y), который не вовлечен в существенные нековалентные взаимодействия с другими пептидами Aβ.
Термин «олигомер Aβ», используемый здесь, относится к изолированной форме пептида Aβ, в которой предшественник мономера Aβ нековалентно связан в упорядоченную трехмерную структуру из не менее чем 50 мономеров.
Термин «фибрилла Aβ», используемый здесь, относится к молекулярной структуре, которая содержит агрегаты нековалетно связанных, индивидуальных пептидов Aβ (X-Y), которые под электронным микроскопом имеют фибриллярную структуру. Фибриллярная структура является типичной структурой «бета перекреста», для которой не существует теоретической верхней границы размера мультимеров, и фибриллы могут содержать тысячи мономеров.
Термин «антиген», используемый здесь, относится к молекуле, такой как белок, полипептид или их фрагмент, содержащей один эпитоп или более, которая будет вызывать в иммунной системе хозяина развитие гуморального и/или клеточного антиген-специфичного ответа. Этот термин используется взаимозаменяемо с термином «иммуноген». Антитела, такие как анти-идиотипические антитела или их фрагменты и синтетические пептидные мимотопы, которые могут имитировать антиген или антигенную детерминанту, также включены в определение термина антиген, используемым здесь. Аналогично олигонуклеотиды или полинуклеотиды, экспрессирующие антиген или антигенную детерминанту in vivo, например, при применении иммунизации ДНК, также включены в приведенное здесь определение антигена.
Номенклатура, используемая для описания пептидов настоящего изобретения, следует общепринятой практике, когда аминогруппа представляется слева, а карбоксигруппа - справа от каждого остатка аминокислоты. В последовательностях, представляющих избранные специфичные варианты реализации настоящего изобретения, амино- и карбокси-терминальные группы, даже конкретно не показанные, будут пониматься находящимися в форме, которую они принимают при физиологических значениях pH, если не указано другое.
В настоящем описании с целью пояснения приведено множество деталей для обеспечения исчерпывающего понимания вариантов реализации настоящего изобретения. Однако для специалиста в данной области техники эти специфические детали не являются обязательными.
Структура олигомеров Aβ на атомном уровне окончательно не выяснена из-за ограниченных возможностей кристаллографии и ЯМР в растворе и твердых телах. Биохимические, биофизические и иммунохимические данные свидетельствуют о фибриллярно/олигомерной модели, в которой мономеры Aβ упакованы в широкие β-шпильки, формирующие стерические структуры «застежки-молнии» (Luhrs et al. 2005; Sawaya et al. 2007; Rauk 2009). Естественным путем возникающие мономерные пептиды Aβ подвергаются конформационным изменениям во время агрегации, включающей фолдинг и формирование шпильки из стерических олигомерных структур Аβ по типу «застежки-молнии». Aβ (1-42) имеет большую склонность к агрегации β-слоев. Подробная структура олигомерных Aβ неизвестна, однако структуры олигомеров Aβ были охарактеризованы, используя комбинацию стимуляции молекулярной динамики, атомной силовой микроскопии и изучения замещения водорода амидной группы. Структура олигомеров Aβ (1-42) и Aβ (1-40) была проанализирована, используя вышеназванные методы. Ориентация β-слоев в олигомерах Aβ, как известно специалисту в данной области техники, включает внутримолекулярные солевые мостики между остатками D23 и K28. В этой конфигурации остаток K28 ориентирован преимущественно внутрь с образованием солевого мостика между D23 и K28 и стабилизирует поворот шпильки (Lurs et al. 2005; Rauk 2008).
Изучение предложенных структур олигомеров Aβ, известных в данной области техники, было проведено для идентификации участков, против которых может быть специфически направлен иммунный ответ и против которых могут быть созданы специфичные к олигомерам Aβ антитела. Исследование моделей олигомеров Aβ иллюстрирует три участка, имеющих гидрофильные, потенциально доступные для антител остатки, доступные для связывания: N-конец пептида олигомера Aβ, который распознается MAT 6E10 (остатки 4-9, последовательность FRHDSG, идентифицированная как SEQ ID NO: 2); смешанный полярно-гидрофобный домен в N-терминальной трети пептида олигомера Аβ (последовательность LVFFAEDV, идентифицированная как SEQ ID NO: 3), который распознается MAT 4G8 (остатки 17-24); и поворотный домен с ограниченной подвижностью пептида олигомера Aβ, содержащий остатки 25-29 (последовательность GSNKG). Поворотный домен с ограниченной подвижностью эпитопа, содержащего остатки SNK 26-28, является конформационно напряженным и не может присутствовать в линейном Aβ или APP. Поэтому нельзя ожидать, что антитела, направленные против этих конформационно напряженных эпитопов, будут присоединяться к линейному Aβ или APP; они являются антителами, специфичными к олигомеру Aβ.
Была проведена запись изображения моделирования с помощью молекулярной динамики циклического пептида, связанного дисульфидными связями, содержащего остатки 25-29 (CGSNKGC); неприродные цистеины были добавлены для образования в дисульфидного мостика. Моделирование показывает, что боковая цепь лизина 28 ориентирована вовне, как показано на Фиг.4, в отличие от ориентированной внутрь боковой цепи лизина 28, прогнозированной в ссылке Lurs et al. (2005) и Rauk (2008). Неожиданное открытие внешней ориентации остатка лизина 28 согласуется с высокой иммуногенностью этого циклического пептида, содержащего остатки 25-29 (CGSNKGC), в котором поверхность лизина экспонирована в растворитель, увеличена и заряжена посредством ε-аминогруппы. Антитела, мишенью которых является конформационный циклический эпитоп, содержащий, по крайней мере, остатки SNK, как было продемонстрировано в вышеописанных примерах, эффективно нейтрализуют токсичность олигомеров Aβ (см., например, Фиг.11). Неожиданное открытие внешней ориентации остатка лизина 28 согласуется также с аутентичными олигомерами Aβ, которые также демонстрируют схожую ориентацию боковой цепи лизина в растворитель в доступной для антител форме. Остатки серина 26, аспарагина 27 и лизина 28, т.е. SNK, локализированные в шарнирном участке олигомера Aβ, являются заряженными или полярными и имеют большую иммуногенность, чем маленькие неполярные аминокислоты. Циклическая конформация остатков SNK, локализированных в шарнирном участке олигомера Aβ, образует новый конформационный эпитоп, являющийся гидрофильным и доступным для связывания антителами. Следующие примеры, описанные ниже, подтверждают пригодность конформационно напряженного эпитопа SNK олигомеров Aβ для связывания. Открытие этого нового структурно напряженного эпитопа на поверхности олигомеров Aβ имеет преимущественные свойства для селективного связывания антител.
Новый конформационный эпитоп может в дальнейшем включать нативный глицин, локализированный на любом конце последовательности эпитопа SNK. Новый конформационный эпитоп может в дальнейшем включать нативные остатки глицина на обоих концах последовательности эпитопа. В одном из аспектов, остатки нативного глицина вносят ограниченный вклад в иммуногенность нового конформационного эпитопа либо не вносить в нее какой-либо вклад, однако остатки глицина могут ослаблять стерическую напряженность, возникающую при циклизации пептида. В аминокислотной структурной формуле каждый остаток может быть в общих чертах представлен с помощью однобуквенного или трехбуквенного обозначения, соответствующего тривиальному названию аминокислоты, в соответствии с Таблицей 1.
Таблица 1 | ||
Номенклатура и аббревиатуры 20 стандартных L-аминокислот, обычно обнаруживаемых в существующих в природе пептидах | ||
Полное название аминокислоты | Трехбуквенная аббревиатура | Однобуквенная аббревиатура |
Аланин | Ala | A |
Цистеин | Cys | C |
Аспарагиновая кислота | Asp | D |
Глутаминовая кислота | Glu | E |
Фенилаланин | Phe | F |
Глицин | Gly | G |
Гистидин | His | H |
Изолейцин | Ile | I |
Лизин | Lys | K |
Лейцин | Leu | L |
Метионин | Met | M |
Аспарагин | Asn | N |
Пролин | Pro | P |
Глутамин | Gln | Q |
Аргинин | Arg | R |
Серин | Ser | S |
Треонин | Thr | T |
Валин | Val | V |
Триптофан | Trp | W |
Тирозин | Tyr | Y |
Эпитоп на поверхности олигомеров Aβ содержит сильно полярные/заряженные остатки, которые являются гидрофильными и конформационно напряженными. Эпитоп содержит по крайней мере остатки 26-28, SNK, в циклической напряженной конформационно конфигурации. В другом аспекте эпитоп содержит остатки 25-28, GSNK, в циклической конформационно напряженной конфигурации. В еще одном аспекте эпитоп содержит остатки 26-29, SNKG, в циклической конформационно напряженной конфигурации. В еще одном аспекте эпитоп содержит остатки 25-29, GSNKG (последовательность SEQ ID NO: 1), в циклической конформационно напряженной конфигурации.
В одном аспекте структура нового конформационно-специфичного эпитопа зависит от относительно жесткой пространственной организации аминокислотных остатков.
В отличие от известных эпитопов, идентифицированных как последовательности SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, с которыми связываются известные антитела 6E10 и 4G8 соответственно, которые экспрессируются на экспонированной в раствор поверхности олигомеров Aβ и на поверхности клеток, поддерживающих экспрессию родительских белков APP (как нейронов, так и моноцитов), новый конформационный эпитоп, имеющий конформационно напряженную циклическую конфигурацию, не присутствует на молекулярной поверхности APP, и таким образом ограничивает аутоиммунное распознавание APP. Мотив GSNKG, присущий APP, локализованному на поверхности нейронов и моноцитов, по большей части не структурирован. Конформационно специфичные антитела, связывающиеся с новым конформационным эпитопом, содержащим конформационно напряженную циклическую конфигурацию, обладают ограниченной способностью, либо не обладают способностью к распознаванию не структурированного мотива GSNKG белка APP на поверхности клеток, как показано ниже в Примерах. Антитела, распознающие новый конформационный эпитоп, демонстрируют незначительную реакцию, либо отсутствие реакции с мономерным Aβ. В другом аспекте антитела, распознающие новый конформационный эпитоп, демонстрируют незначительную реакцию, либо отсутствие реакции с фибриллярным Aβ из-за стерического уплотнения эпитопа и/или других нежелательных аспектов.
Антитела к новому конформационному эпитопу представлены в еще одном аспекте настоящего изобретения. Анализ показывает, что антитела, связывающиеся с новым конформационным эпитопом, имеющим конформационно напряженную циклическую конфигурацию, распознают нелинейную структуру эпитопа между субъединицами в участке аминокислот 25-29 олигомеров Aβ. Специфичность антител к новому конформационному эпитопу делает возможным специфически направлять действие антител на олигомерную форму Aβ и таким образом ограничивать их связывание с мономерными Aβ и APP, которые, как известно, воздействуют на нейрональную и иммунную функцию и повышают способность антител к связыванию, поскольку мономерный Aβ представлен в значительно больших количествах, чем олигомерный Aβ.
Антитела, способные к связыванию с новым конформационным эпитопом, полезны как диагностические и как терапевтические агенты в лечении болезни Альцгеймера, а вакцины для профилактики БА представляют собой другой аспект настоящего изобретения.
Антитела, специфически связывающиеся с циклическим пептидом, содержащим новый конформационный эпитоп, производный Aβ, как показано здесь, включают антитела, синтезированные с помощью дисульфидного циклического пептида, содержащего новый конформационный эпитоп.
Для применения в качестве терапевтического средства антитело, специфически связывающееся с циклическим пептидом, производным Aβ, где циклический пептид содержит конформационный эпитоп, содержащий, по крайней мере, аминокислотную последовательность SNK, соответствующую шарнирному участку олигомерного Aβ, могут быть созданы с применением стандартных, хорошо разработанных способов производства антител. Терапевтическая композиция содержит антитело, специфически связывающееся с циклическим пептидом, производным Aβ, где циклический пептид содержит конформационный эпитоп, содержащий, по крайней мере, аминокислотную последовательность SNK, соответствующую шарнирному участку олигомерного Aβ, в комбинации с фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом. Такое терапевтическое средство может быть введено пациенту, нуждающемуся в терапии или профилактике болезни Альцгеймера. В одном из аспектов такое терапевтическое средство может отсрочить начало болезни Альцгеймера.
Выражение «фармацевтически приемлемый» означает приемлемый для применения в фармацевтической и ветеринарной областях, т.е. не являющийся неприемлемо токсичным или не подходящим иным образом. Примерами фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ являются вещества, которые обычно используются в лекарствах на основе пептидов - такие как растворители, формообразующие вещества и подобные им. Для общего руководства по лекарственным формам можно обратиться к «Remington’s: The Science and Practice of Pharmacy», 21st Ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005». Выбор вспомогательного вещества зависит от назначенного способа введения композиции. В одном из вариантов реализации настоящего изобретения компоненты предназначены для введения путем инфузии или инъекции подкожным либо внутримышечным, либо внутривенным путем и, соответственно, применяются в форме водных стерильных и апирогенных растворов, которые могут быть буферными или изотоническими. Таким образом, компоненты могут быть введены в дистиллированной воде или, что предпочтительнее, в солевом растворе, фосфатном буферном растворе или в 5% растворе декстрозы. Композицию для орального введения посредством таблеток, капсул или суспензий готовят, используя вспомогательные компоненты, включающие сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза, крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал, целлюлозу и ее производные, включая карбоксиметилцеллюлозу натрия, этилцеллюлозу и ацетаты целлюлозы, порошковые трагаканты, солод, желатин, тальк, стеариновые кислоты, стеарат магния, сульфат кальция, растительные масла, такие как арахисовое масло, масло семян хлопка, сезама, оливковое и кукурузное масла, полиолы, такие как пропиленгликоль, глицерин, сорбитол, маннитол и полиэтиленгликоль, агар, альгиновые кислоты, воду, изотонические солевые и фосфатные буферные растворы. Также могут присутствовать увлажняющие агенты, смазывающие вещества, такие как лаурилсульфат натрия, стабилизаторы, таблетирующие агенты, антиоксиданты, консерванты, окрашивающие агенты и вкусовые агенты. Кремы, лосьоны и мази могут быть приготовлены для местного применения с использованием подходящей основы, например, триглицеридов. Такие кремы, лосьоны и мази могут также содержать поверхностно-активные агенты. Также могут быть приготовлены аэрозольные композиции, например, для назального введения, с использованием подходящих вспомогательных пропеллентов. Другие вспомогательные вещества также могут быть включены в композицию в зависимости от того, каким способом она будет введена, например, антимикробные агенты могут быть добавлены в композицию для предотвращения микробного роста на протяжении долгого периода хранения. Терапевтические композиции обычно должны быть стерильными и стабильными в условиях производства и хранения.
При использовании в качестве вакцины антигенный пептид, содержащий конформационно напряженный эпитоп, содержащий, по крайней мере, аминокислотную последовательность SNK, соответствующую шарнирному участку олигомерного Aβ, в комбинации с фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, после введения вызывает образование антител, специфично направленных на связывание олигомерного Aβ. Эти антитела специфично связываются с эпитопом, содержащим, по крайней мере, аминокислотную последовательность SNK, соответствующую шарнирному участку олигомерного Aβ. Вакцина содержит антигенный пептид, содержащий конформационно напряженный эпитоп, содержащий, по крайней мере, аминокислотную последовательность SNK, соответствующую шарнирному участку олигомерного Aβ, в комбинации с фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом. Вакцина блокирует развитие амилоидоза мозга путем нейтрализации олигомерного Aβ и действует в качестве профилактики развития БА. Когда олигомерные Aβ заблокированы, также блокируется опосредованная ими токсичность. Такая токсичность может включать, например, синаптическую дисфункцию и смерть нейрональных клеток. В другом аспекте антитела, образующиеся при введении вакцины, описанной выше, замедляют размножение олигомерного Aβ, поскольку такие антитела препятствуют агрегации мономеров Aβ в токсичные формы олигомера Aβ. В еще одном аспекте антитела, образующиеся при введении вакцины, описанной выше, блокируют размножение олигомерного Aβ, поскольку такие антитела препятствуют агрегации мономеров Aβ в токсичные формы олигомера Aβ.
Примеры фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ могут включать гидроксид алюминия, квасцы, Alhydrogel™ (тригидрат алюминия) или другие соли, содержащие алюминий, виросомы, нуклеиновые кислоты, содержащие мотив CpG, сквалены, масла, MF59, QS21, разнообразные сапонины, вирус-подобные частицы, монофосфорил-липид A / дикориномиколат трегалозы, агонисты toll-like рецепторов, кополимеры, такие как полиоксипропилен и полиоксиэтилен или подобные.
Вакцина может быть введена пациентам из группы риска развития болезни Альцгеймера, например, людям преклонного возраста из группы риска со скрытой мутацией, провоцирующей БА.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения для лечения с помощью вакцины субъекты иммунизируют по схеме, которая может варьировать в пределах от одного раза в день до одного раза в неделю, одного раза в месяц, одного раза в год, одного раза в десять лет. Типичный режим заключается в иммунизации с последующими повторными инъекциями с интервалами в 6 недель. Другой режим заключается в иммунизации с последующими повторными инъекциями через 1, 2 и 12 месяцев. В качестве альтернативы повторные инъекции могут варьировать в зависимости от иммунного ответа и физиологических условий объекта. Антиолигомерная вакцина может быть введена для иммунизации в дозах, варьирующих от около 0,0001 микрограмма до 10 грамм, от около 0,01 микрограмма до около 1 грамма, около 1 микрограмма до около 1 мг, и около 100 до 250 микрограмм на лечение. В одном из вариантов реализации терапевтическое введение вакцины осуществляется в следующие моменты времени (либо чаще): 0 месяцев, 2 месяца; 6 месяцев; 9 месяцев; и/или 12 месяцев. В одном режиме введение дозы осуществляют через 2, 6, 9 и 12 месяцев после первой иммунизации. В другом режиме дозы вводятся через 2 и 4 недели после первой иммунизации, а затем вводятся каждый месяц. В альтернативном режиме дозы варьируют в зависимости от физиологического состояния субъекта и/или от ответа субъекта на предшествующую иммунизацию. Путь введения включает внутримышечные и внутрибрюшинные инъекции, но не ограничивается ими. В одном из вариантов реализации композиция инъецируется в дельтовидную мышцу.
При использовании настоящего изобретения в качестве диагностического биомаркера, либо биомаркера ответа на лечение подходящий биологический образец собирают у пациента; образец приводят в контакт с антителом, специфически связывающимся с циклическим пептидом, производным Aβ, где циклический пептид содержит эпитоп, содержащий, по крайней мере, аминокислотную последовательность SNK, соответствующую шарнирному участку олигомерного Aβ, на протяжении времени и при условиях, достаточных для формирования комплексов антиген-антитело в образце; затем определяется наличие комплексов. Если комплексы выявлены, это означает диагноз БА у пациента. Подходящий для этой цели биологический образец может быть представлен тканями, клетками и биологическими жидкостями, включая, например, спинномозговую жидкость (СМЖ) и кровь.
Применение антител, связывающихся с новым конформационным эпитопом, имеет большое значение для диагностики БА. С целью выявления субъектов, являющихся кандидатами для лечения с помощью антител или композиции вакцины настоящего изобретения, настоящее изобретение также предоставляет эпитоп для диагностических методов in vitro и in vivo.
Для определения наличия олигомерного Aβ в любом предоставленном образце настоящее изобретение предоставляет способ определения, в котором образец, предположительно содержащий олигомерный Aβ, обрабатывается с помощью антитела или его фрагмента, ответственного за связывание, которое селективно связывается с новым конформационным эпитопом, уникально представленным на олигомерном Aβ, родственном мономерному Aβ и белку APP; затем определяется формирование комплекса антиген/антитело, наличие которого является индикатором наличия в образце олигомерного Aβ. Наличие комплекса антиген/антитело означает диагноз БА у пациента.
При применении in vitro способ определения влечет за собой анализ биологического образца жидкости организма или ткани или образца органа субъекта, обычно субъекта, предположительно имеющего БА. Образец ткани или органа, например, полученный из твердой или полутвердой ткани или органа, может быть выпарен, экстрагирован или каким-либо иным образом переведен в жидкую форму. Биологический образец или образцы могут быть изъяты у субъекта в любое удобное время, включая время до того, как у субъекта было диагностировано или заподозрено наличие БА или родственного вида слабоумия, на протяжении терапевтического режима лечения или устранения симптомов болезни или расстройства, после смерти субъекта (независимо от ее причины или ее предполагаемой причины). Биологический образец поочередно может включать пожертвованную в рамках донорства жидкость организма или ткань (такую как кровь, плазму или тромбоциты), полученную при помощи централизованной организации или учреждения кровоснабжения.
Наличие олигомерного Aβ в образце подтверждается, если антитело образует детектируемый комплекс антиген/антитело. Образование такого комплекса может быть обнаружено с использованием широкого спектра методик, включающих ELISA, РИА, проточную цитометрию, Вестерн блоттинг, иммуногистохимию и подобные им. Для обнаружения комплекса и, таким образом, подтверждения наличия нового конформационного эпитопа в образце, антитело предпочтительно должно представлять собой меченное антитело, помеченное путем конъюгации или слияния с агентом, который можно обнаружить визуально или с применением инструментов. Агент или метка способны к продукции сигнала, который обнаруживается прямым или не прямым способом. Например, метка может быть рентгеноконтрастной или изотопной, такой как 3H, 14C, 32P, 35S, 123I, 125I, 131I; флуоресцентным (флуорофор) или хемилюминисцентым (хромофор) компонентом, таким как изотиоцианат флуоресцеина, родамин или люциферин; ферментом, таким как щелочная фосфатаза, бета-галоктозидаза или пероксидаза хрена; визуализирующим агентом или ионом металла. В качестве альтернативы новый конформационный эпитоп может быть обнаружен с использованием меченного вторичного реагента, который связывается с эпитоп-специфичным антителом, например, используя меченное антитело, которое связывается с эпитоп-специфичным антителом, для непрямого обнаружения эпитопа. Наличие комплекса антиген/антитело может быть обнаружено и непрямым методом, который не требует присутствия в растворе двух агентов. Например, комплекс можно обнаружить непрямым методом, используя проточную цитофлуориметрию, при которой антитело связывается с эпитопом, присутствующим на поверхности интактной клетки, и образует комплекс антиген/антитело. Было бы также предпочтительно, чтобы комплекс антиген/антитело можно было идентифицировать с применением методов, не основанных на использовании антител, например, методов, которые позволяют разделять белки на основании их размера, заряда и подвижности - таких как электрофорез, хроматография, масс-спектроскопия и подобные им.
В подобном варианте реализации меченные антитела согласно настоящему изобретению или меченные формы их фрагментов, ответственных за связывание, могут быть использованы in vivo для визуализации олигомерного Aβ, с которым связывается антитело. В этой связи настоящее изобретение представляет собой антитело или его фрагмент, связанное с агентом, позволяющим проводить визуализацию in vivo, таким как изотопы технеция, гадолиния и подобные.
В еще одном аспекте предмет производства (также обозначаемый как коммерческая упаковка) представляет собой фармацевтическую композицию в упаковочном материале. Композиция содержит фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество и терапевтически эффективное количество конформационно-чувствительного антитела, которое специфично связывается с циклическим пептидом, производным Aβ, где циклический пептид содержит эпитоп, содержпщий, по крайней мере, аминокислотную последовательность SNK, соответствующую шарнирному участку олигомерного Aβ. Упаковочный материал может содержать маркировку, указывающую, что композиция полезна для лечения болезни Альцгеймера. Упаковочным материалом может быть любой подходящий материал, обычно используемый для упаковки фармацевтических агентов, включая, например, стекло, пластик, фольгу и картон.
В еще одном аспекте предмет производства представляет собой фармацевтическую композицию в упаковочном материале. Композиция содержит пептид, содержащий конформационно напряженный эпитоп, содержащий, по крайней мере, аминокислотную последовательность SNK, соответствующую шарнирному участку олигомерного Aβ, в комбинации с фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, как представлено в настоящем документе. Композиция может включать физиологически или фармацевтически приемлемые наполнители, а упаковочный материал может включать маркировку, указывающую на активные компоненты композиции (т.е. пептид). Маркировка может также включать назначение композиции, например, использование в качестве терапевтического или профилактического реагента или в качестве композиции для индукции у субъекта иммунного ответа с целью продукции антисыворотки или антител, специфичных к олигомерному Aβ, для использования в составе набора, представленного здесь.
В еще одном варианте реализации настоящее изобретение представляет собой набор, содержащий композицию, которая содержит пептид, представленный здесь, вместе с инструкцией по применению компонента композиции для производства или скрининга конформационно-чувствительных антител для идентификации олигомерного Aβ. Набор может быть полезным для получения и/или идентификации специфичных к олигомерному Aβ антител или антисыворотки, а инструкция может включать, например, концентрации доз, интервалы доз, предпочтительные методы введения, методы иммунологического скрининга и тестирования и подобное.
В другом варианте реализации настоящее изобретение представляет собой набор для приготовления медикамента, содержащего композицию, которая содержит один пептид или более, вместе с инструкцией по его применению. Инструкция может содержать серии шагов для приготовления лекарства, которое было бы полезно для стимулирования терапевтического или профилактического иммунного ответа у объекта, которому оно было введено. Набор может также содержать инструкцию по применению лекарства в лечении, для терапии, профилактики или ослабления одного или более симптомов БА или родственных видов слабоумия, которая включает, например, концентрации доз, интервалы доз, предпочтительные методы введения и подобное.
В еще одном варианте реализации настоящее изобретение представляет собой набор для диагностики БА или родственных видов слабоумия. Набор содержит одно или более конформационно-чувствительное селективное антитело или антисыворотку, представленных здесь, вместе с инструкцией по применению. Антитела также могут быть связанными с детектирующим реагентом. Примеры детектирующих реагентов включают вторичные антитела, такие как антимышиные антитела, антикроличьи антитела и подобные им. Такие вторичные антитела могут быть связанными с ферментом, который, при наличии подходящего субстрата, обеспечивает прохождение детектируемой колориметрической или хемилюминисцентной реакции. Набор может также содержать реагенты для проведения реакции детектирования, включая ферменты, такие как протеиназа К, блокирующий буфер, гомогенизирующий буфер, буфер для выделения, буфер для разведения и подобные им.
В еще одном варианте реализации настоящее изобретение представляет собой набор для определения наличия олигомерного Aβ в биологических образцах. Набор содержит одно или более конформационно-чувствительное антитело или антисыворотку, которые специфически связываются с олигомерным Aβ, вместе с инструкцией по применению. Антитела также могут быть связанными с детектирующим реагентом. Примеры детектирующих реагентов включают вторичные антитела, такие как антимышиные антитела, антикроличьи антитела и подобные. Такие вторичные антитела могут быть связанны с ферментом, который, при наличии подходящего субстрата, обеспечивает прохождение детектируемой колориметрической или хемилюминисцентной реакции. Набор может также содержать реагенты для проведения реакции детектирования, включая ферменты, такие как протеиназа К, блокирующий буфер, гомогенизирующий буфер, буфер для выделения, буфер для разведения и подобные. им
Для получения конформационно-чувствительных антител могут быть использованы подходящие методы, включая использование поликлональной антисыворотки или моноклональных антител. Для получения поликлональных антител млекопитающее (например, мышь, хомяк или кролик) может быть иммунизировано с помощью иммуногенной формы нового конформационного эпитопа, который вызывает образование антител у млекопитающего. Например, связанный дисульфидной связью циклизованный пептид, содержащий последовательность нового конформационного эпитопа, может быть получен напряженным в конформационной петле с использованием дисульфидной связи между цистеинами на C и N-концах пептида. Связанный дисульфидной связью циклизованный пептид может быть синтезирован с использованием общепринятых методик, и введен в млекопитающее.
Приемы наделения пептида иммуногенностью хорошо известны в данной области техники и включают, например, конъюгацию с носителями. Пептид может быть введен в присутствии адъюванта. За развитием иммунизации можно следить путем измерения титров антител в плазме или сыворотке. Для оценки уровня антител может быть применен стандартный метод ELISA или другая процедура иммуноанализа с использованием иммуногена в качестве антигена. После иммунизации может быть получена антисыворотка и, при необходимости, поликлональные антитела могут быть изолированы из сыворотки.
Для получения моноклональных антител у иммунизированного животного отбирают антитело-продуцирующие клетки (B-лимфоциты) и объединяют их с клетками миеломы путем процедур стандартного слияния соматических клеток для формирования бессмертных клеток гибридомы. Такие методики хорошо известны в данной области техники (например, методика получения гибридомы, изначально разработанная Kohler and Milstein (Nature 256, 495-497 (1975)), также как и другие способы, такие как методика получения В-клеточной гибридомы человека (Kozbor et al, Immunol. Today 4, 72 (1983)), способ получения моноклональных антител человека методом EBV-гибридомы (Cole et al., Monoclonal Antibodies in Cancer Therapy (1985) Allen R. Bliss, Inc., pages 77-96), и способ скрининга библиотек комбинаторных антител (Huse et al., Science 246, 1275 (1989)). Клетки гибридомы могут быть отобраны иммунохимически для продукции антител, специфически реакционноспособных по отношению к новому конформационному эпитопу, и монокланальные антитела могут быть изолированы.
Типичное антитело состоит из двух «тяжелых цепей» иммуноглобулина (Ig) и двух «легких цепей» Ig и может быть представлено как имеющее общее Y-образную форму. Существует несколько различных типов тяжелых цепей, что определяет классы или изотипы антител. У млекопитающих существует пять типов тяжелых цепей иммуноглобулинов: γ, δ, α, μ, ε которые определяют классы иммуноглобулинов: IgG, IgD, IgA, IgM и IgE, соответственно. У млекопитающих существует два типа легких цепей: каппа (κ) цепь и лямбда (λ) цепь.
Каждая тяжелая цепь содержит два участка: константный участок, являющийся одинаковым для всех иммуноглобулинов одного класса, но различающийся у иммуноглобулинов разных классов (тяжелые цепи λ, α и δ имеют константный регион, состоящий из трех тандемных иммуноглобулиновых доменов (CH1, CH2, CH3) и имеют шарнирный участок, придающий гибкость; тяжелые цепи μ и ε имеют константный участок, состоящий из четырех доменов); и вариабельный участок (VH), который отличается у иммуноглобулинов, вырабатываемых разными В-клетками, но является одинаковым для иммуноглобулинов, вырабатываемых одной и той же В-клеткой или клоном В-клеток. Вариабельный домен любой тяжелой цепи состоит из одного иммуноглобулинового домена. Эти домены имеют длину около 110 аминокислот.
Каждая легкая цепь состоит из двух тандемных иммуноглобулиновых доменов: одного константного (CL) домена и одного вариабельного (VL), важных для связывания антигена.
Некоторые части антитела имеют уникальные функции. Плечи Y-образного антитела, например, содержат сайты, которые могут связать два антигена (обычно идентичных) и таким образом распознать специфичные чужеродные объекты. Этот участок антитела называют «Fab» участок (Fab-фрагмент, Aг-связывающий фрагмент). Он состоит из одного константного и одного вариабельного домена от каждой тяжелой и легкой цепи антитела. На N-конце мономера антитела находится «паратоп», сформированный вариабельными доменами тяжелых и легких цепей. Вариабельные домены также обозначаются как FV-участок и являются наиболее важным участком для связывания с антигеном. Вариабельные петли β-слоев, по три на легкой (VL) и тяжелой (VH) цепях, отвечают за специфичное связывание с антигеном. Эти петли обозначаются как участки, определяющие комплементарность («CDR-участки»).
Участки, определяющие комплементарность («CDR-участки»), являются участками антитела, в которых данные белки являются комплементарными по форме антигену. Таким образом, CDR-участки определяют аффинность и специфичность связывания белков со специфичными антигенам. CDR-участки являются наиболее вариабельной частью молекулы и вносят вклад в разнообразие молекул антител, что позволяет антителам распознавать широкий репертуар антигенов.
В аминокислотной последовательности вариабельного домена антигенного рецептора находятся три CDR-участка (CDR1, CDR2 и CDR3), расположенные не последовательно. Поскольку антигенный рецептор обычно состоит их двух вариабельных доменов (находящихся на двух разных полипептидных цепях, тяжелой и легкой цепях), существует шесть CDR-участков для каждого антигенного рецептора, которые могут совместно контактировать с антигеном. Одиночная молекула антитела имеет два антигенных рецептора и, таким образом, содержит двенадцать CDR-участков.
Основание Y-образного антитела играет роль в модуляции активности клеток иммунной системы. Этот участок называют Fc-участок (Fc-фрагмент, кристаллизирующийся фрагмент); он состоит из двух тяжелых цепей, которые содержат по два или три константных домена в зависимости от класса антитела. Fc-фрагмент обеспечивает то, что каждое антитело вызывает развитие соответствующего иммунного ответа на введение антигена путем связывания со специфичным классом Fc-рецепторов и других молекул иммунной системы, таких как белки комплемента. Тем самым опосредуются различные физиологические эффекты, включая распознавание опсонизированных частиц, лизис клеток или дегрануляцию тучных клеток, базофилов или эозинофилов.
Есть несколько способов определения CDR-участков в аминокислотной последовательности. Наиболее часто используется определение «Kabat», основанное на выявлении различий в последовательностях. Существует также определение «Chotia», основанное на расположении участков структурных петель. Определение «AbM» является компромиссным между этими двумя определениями и используется в программном обеспечении Oxford Molecular’s AbM antibody modelling. «Контактное» определение основано на анализе доступных кристаллических структур комплексов.
Специалист в данной области техники может легко идентифицировать CDR-участки в любой предложенной последовательности, содержащей CDR-участки, используя известные паттерны и методы выравнивания последовательностей. В другом аспекте для идентификации CDR-участков может быть также использовано моделирование или другие методы, известные специалисту в данной области техники. Существуют хорошо известные руководства, например, расположенное на следующем веб-сайте (http://www.bioinf.org.uk/abs/), для помощи специалисту в идентификации CDR-участков в последовательности антитела.
Тяжелая и легкая цепи антитела 5E3 были секвенированы. Последовательность тяжелой цепи и последовательность легкой цепи соответствуют последовательностям, представленным на Фиг.15. Специалисту в данной области техники очевидно, что части указанной последовательности, являющиеся детерминантами связывания антигена, могут быть перенесены в рамку считывания другого антитела, например, для создания «химерного» или «гуманизированного» антитела.
Специалист в данной области техники может легко совместить последовательности с 3’ и 5’ -концов, приведенные на Фиг.15, для получения консенсусной последовательности (например, используя доступные пакеты программ, такие как GCG или Sequencher) и может проверить признаки последовательности, необходимые для выявления различий. Любое упомянутое различие может быть разрешено методом повторного секвенирования. Различия, например, в среднем стоп-кодоне, расположенном в нуклеотидной последовательности, будут разрешены специалистом в данной области техники как, очевидно, неправильно прочитанные нуклеотиды. В данной области техники хорошо известно, что последовательности аминокислот и нуклеотидов, кодирующие ошибки или неточности чтения, могут возникать, когда метод секвенирования считывает одно или более оснований некорректно, приводя к неточному прочтению. Из-за не предсказуемости молекулярной биологии ни один из лабораторных методов секвенирования ДНК не является совершенно точным; все они допускают случайные механические ошибки при чтении оснований. Такие ошибки чтения становятся очевидными, когда прочитанная последовательность сравнивается с другими прочтениями или с последовательностью сравнения.
«Химерные» антитела также рассматроиваются в рамках данного изобретения. Химерные антитела могут содержать последовательности двух разных антител. Они могут содержать последовательности антител двух разных видов. Молекулы химерного антитела могут включать, например, антиген-связывающий домен антитела мыши, крысы или другого вида и константный пептидный участок человека. Для создания химерных антител, содержащих вариабельный участок иммуноглобулина, который распознает новый конформационный эпитоп изобретения, могут быть использованы соответствующие методы (см., например, Morrison et al., Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A. 81,6851 (1985); Takeda et al., Nature 314, 452 (1985), Cabilly et al, Патент США No. 4,816,567; Boss et al. Патент США No. 4,816,397; Tanaguchi et al., Европейский патент EP 171496; Европейский патент 0173494, Патент Великобритании GB 21770966) 4,816,397; Tanaguchi et al., Европейский патент EP 171496; Европейский патент 0173494, Патент Великобритании GB 21770966))
«Гуманизированные антитела» содержат последовательности антитела вида, отличного от человека, последовательность белка которого была изменена для повышения его схожести с вариантами антитела, которые обычно образуются у человека. В некоторых случаях они могут рассматриваться как особый подтип химерных антител. Однако «гуманизация» обычно рассматривается как процесс, отличный от простого создания химеры. Процесс гуманизации может включать создание химеры мышь-человек на начальном этапе (например, мышиный Fab-фрагмент может быть объединен с Fc-фрагментом человека). После этого химера может быть гуманизирована селективным изменением последовательности аминокислот в Fab-части молекулы. Процесс обычно является «селективным» в отношении сохранения специфичности, для которой антитело было изначально создано. Например, помимо CDR-участков, части последовательности Fab, которые отличаются от аналогичных последовательностей человека, могут быть мутированы путем замены соответствующих индивидуальных аминокислот. Это осуществляется на уровне ДНК путем мутагенеза. Возможно создать гуманизированное антитело и без создания химерного промежуточного продукта. «Прямое» создание гуманизированного антитела может быть осуществлено путем вставки соответствующего сегмента, кодирующего CDR-участок (ответственный за желаемые свойства связывания), в «каркас» антитела человека. Как описано выше, это достигается с помощью методов рекомбинантной ДНК с использованием экспрессии соответствующего вектора в клетках млекопитающих. То есть после того как, например, в мыши создают антитело, которое демонстрирует желаемые свойства, ДНК, кодирующая это антитело, может быть изолирована, клонирована в вектор и секвенирована. Затем может быть определена последовательность ДНК, соответствующая CDR-участкам антитела. Однажды определив точную последовательность желаемого CDR-участка, можно разработать стратегию вставки этой последовательности соответствующим образом в конструкцию, содержащую ДНК различных вариантов антитела человека. Эта стратегия может также включать синтез линейных фрагментов ДНК, основываясь на прочтенной последовательности CDR-участков. Могут быть созданы библиотеки различий в последовательности с использованием синтетических олигонуклеотидных праймеров, содержащих такие различия. Среди полученной в результате этого совокупности клонов можно в дальнейшем провести скрининг для выявления оптимизированных гуманизированных клонов антител, используя известные методы.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения моноклональные или химерные антитела, специфически реагирующие с новым конформационным эпитопом изобретения, представленным здесь, могут быть затем гуманизированы путем создания химер константного участка человека, в котором части вариабельного участка, в частности, консервативные участки рамок считывания антиген-связывающего домена, имеют человеческое происхождение и только гипервариабельные участки имеют не человеческое происхождения. Такие молекулы иимуноглобулинов могут быть созданы с использованием методик, известных в данной области техники (см., например, Teng et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.., 80, 7308-7312 (1983); Kozbor et al, Immunology Today, 4, 7279 (1983); Olsson et al., Meth. Enzymol., 92, 3-16 (1982)), и PCT Publication W092/06193 или Европейский патент 0239400). Гуманизированные антитела также могут быть произведены коммерчески (Scotgen Limited, 2 Holly Road, Twickenham, Middlesex, Great Britain).
В одном аспекте настоящее изобретение представляет собой химерное гуманизированное антитело, содержащее тяжелую и/или легкую цепи последовательности 5E3, или его часть или части. Части могут быть детерминантами антигенного связывания. В некоторых вариантах реализации детерминанты могут содержать последовательности CDR-участков 5E3. Эти антитела связываются с тем же эпитопом, что и 5E3. Они также могут связываться с эпитопом, который, по крайней мере, частично совпадает с эпитопом, с которым связывается 5Е3.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения химерное или гуманизированное антитело может содержать последовательность CDR-участков, по большей части идентичную последовательности CDR-участков 5E3. В некоторых вариантах реализации антитела могут содержать изменения в консервативной последовательности в сравнении с последовательностями 5E3.
«Замена консервативной аминокислоты» среди распространенных аминокислот иллюстрируется заменой аминокислот в каждой из следующих групп: (1) глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; (2) фенилаланин, тирозин и троптофан; (3) серии и треонин; (4) аспарагиновая и глутаминовая кислоты; (5) глутамин и аспарагин и (6) лизин, аргинин, гистидин.
Таблица BLOSUM62, хорошо известная в данной области техники, является матрицей аминокислотных замен, производной 2000 локальных множественных выравниваний сегментов белковой последовательности, представляющей высоко консервативные участки более чем 500 групп родственных белков (См. Henikoff and Henikoff, Proc. Nat’I Acad. Sci. USA 89:10915 (1992)). Соответственно, частота замен BLOSUM62 может быть использована для определения консервативных аминокислотных замен, которые могут быть включены в аминокислотную последовательность настоящего изобретения. Хотя возможно создать аминокислотные замены, основываясь исключительно на химических свойствах (что обсуждалось выше), выражение «консервативная аминокислотная замена» предпочтительно относится к заменам, со значениями BLOSUM62 большими, чем -1. Например, аминокислотная замена консервативна, если замена характеризуется значениями BLOSUM62 0, 1, 2 или 3. Согласно этой системе, предпочтительные консервативные аминокислотные замены характеризуются значениями BLOSUM62, по крайней мере, 1 (например, 1, 2 или 3), тогда как более предпочтительные консервативные аминокислотные замены характеризуются значениями BLOSUM62, по крайней мере, 2 (т.е. 2 или 3).
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения антитело может содержать последовательность CDR, в которой по крайней мере 70%, по крайней мере 75%, по крайней мере 80%, по крайней мере 85%, по крайней мере 90% идентичны последовательности CDR 5E3. Они также могут быть по крайней мере на 91%, по крайней мере на 92%, по крайней мере на 93%, по крайней мере на 94%, по крайней мере на 95%, по крайней мере на 96%, по крайней мере на 97%, по крайней мере на 98%, по крайней мере на 99% или более чем на 99% идентичны последовательностям CDR 5E3.
Стандартные методики рекомбинантной ДНК и молекулярного клонирования, используемые при создании антител, хорошо известны в данной области техники и более полно описаны в Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T., Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press: Cold Spring Harbor, 1989 (здесь и далее «Sambrook»).
Термин «рекомбинантный» относится к искусственной комбинации двух во всех других случаях разделенных сегментов последовательности, созданной, например, путем химического синтеза или путем манипулирования изолированными участками нуклеиновых кислот, используя технологии генной инженерии.
Доза композиции или ее компонентов определенного варианта реализации изобретения может варьировать в зависимости от способа введения (оральное, внутривенное введение, ингаляция или подобные) и от формы, в которой вводится композиция или ее компоненты (раствор, контролированное высвобождение или подобное). Определение соответствующих дозировок является прерогативой специалиста в данной области техники.
«Фармацевтически приемлемый носитель» включает в себя любой из перечисленных компонентов: все растворители, дисперсионные среды, оболочки, антибактериальные и антигрибковые агенты, изотонические и препятствующие всасыванию агенты и подобные физиологически совместимые агенты. Примеры фармацевтически приемлемых носителей включают одно или более из следующих веществ: вода, солевой раствор, фосфатный буферный раствор, декстроза, глицерин, этанол и подобные, а также их комбинации.
Во многих случаях будет предпочтительно включение в композицию изотонических агентов, таких как сахара, полиспирты (такие как маннитол, сорбитол), натрия хлорид. Фармацевтически приемлемые носители могут, кроме того, содержать небольшие количества вспомогательных веществ, таких как увлажняющие агенты, эмульгаторы, консерванты или буферы, повышающие срок годности или эффективность антитела или его частей.
Фармацевтическая композиция изобретения может включать «эффективное количество», «терапевтически эффективное количество» или «профилактически эффективное количество» антитела или части антитела настоящего изобретения. «Терапевтически эффективное количество» означает количество, являющееся эффективным в необходимых дозах и на протяжении необходимого периода времени для достижения желаемого терапевтического результата. Терапевтически эффективное количество антитела или части антитела может быть определено специалистом в данной области техники и может варьировать в зависимости от различных факторов, таких как состояние болезни, возраст, пол, вес индивидуума и способность антитела или части антитела вызывать желаемый ответ у индивидуума. Терапевтически эффективным количеством также должно быть такое количество, в котором терапевтически целебный эффект превосходит любые токсические или пагубные эффекты антитела или части антитела. «Профилактически эффективное количество» означает количество, являющееся эффективным в необходимых дозах и на протяжении необходимого периода времени для достижения желаемого профилактического результата. Поскольку профилактическая доза применяется к объекту на ранних стадиях возникновения заболевания или до его возникновения, профилактически эффективное количество обычно бывает меньшим, чем терапевтически эффективное количество. Эффективное количество может быть вычислено на основании соотношения масса/масса (т.е. микрограммы или миллиграммы на килограмм объекта), или может быть вычислено на основании соотношения масса/объем (т.е. концентрация, микрограммы или миллиграммы на миллилитр). При использовании единицы масса/объем, антитело может присутствовать в количестве от около 0,1 мкг/мл до около 20 мг/мл, или в любом количестве, промежуточным между ними, например, 0,1; 0,5; 1; 2; 5; 10; 15; 20; 25; 30; 35; 40; 50; 60; 70; 80; 90; 100; 120; 140; 160; 180; 200; 250; 500; 750; 1000; 1500; 2000; 5000; 10000; 20000 мкг/мл или в любом количестве между ними; или от около 1 мкг/мл до около 2000 мкг/мл или в любом количестве между ними, например, 1,0; 2,0; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0; 25,0; 30,0; 35,0; 40,0; 50,0; 60,0; 70,0; 80,0; 90,0; 100; 120; 140; 160; 180; 200; 250; 500; 750; 1000; 1500; 2000 мкг/мл или в любом количестве между ними; или от около 10 мкг/мл до около 1000 мкг/мл или в любом количестве между ними, например, 10,0; 15,0; 20,0; 25,0; 30,0; 35,0; 40,0; 50,0; 60,0; 70,0; 80,0; 90,0; 100; 120; 140; 160; 180; 200; 250; 500; 750; 1000 мкг/мл или в любом количестве между ними; или от около 30 мкг/мл до около 1000 мкг/мл или в любом количестве между ними, например, 30,0; 35,0; 40,0; 50,0; 60,0; 70,0; 80,0; 90,0; 100; 120; 140; 160; 180; 200; 250; 500; 750; 1000 мкг/мл.
Количества и/или концентрации могут быть рассчитаны на основании соотношения масса/масса (т.е. микрограммы или миллиграммы на килограмм объекта), или могут быть вычислены на основании соотношения масса/объем (т.е. концентрация, микрограммы или миллиграммы на миллилитр). При использовании единицы масса/объем, антитело или петид может присутствовать в количестве от около 0,1 мкг/мл до около 20 мг/мл, или в любом количестве между ними, например, 0,1; 0,5; 1; 2; 5; 10; 15; 20; 25; 30; 35; 40; 50; 60; 70; 80; 90; 100; 120; 140; 160; 180; 200; 250; 500; 750; 1000; 1500; 2000; 5000; 10000; 20000 мкг/мл или в любом количестве между ними; или от около 1 мкг/мл до около 2000 мкг/мл или в любом количестве между ними, например, 1,0; 2,0; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0; 25,0; 30,0; 35,0; 40,0; 50,0; 60,0; 70,0; 80,0; 90,0; 100; 120; 140; 160; 180; 200; 250; 500; 750; 1000; 1500; 2000 мкг/мл или в любом количестве между ними; или от около 10 мкг/мл до около 1000 мкг/мл или в любом количестве между ними, например, 10,0; 15,0; 20,0; 25,0; 30,0; 35,0; 40,0; 50,0; 60,0; 70,0; 80,0; 90,0; 100; 120; 140; 160; 180; 200; 250; 500; 750; 1000 мкг/мл или в любом количестве между ними; или от около 30 мкг/мл до около 1000 мкг/мл или в любом количестве между ними, например, 0,0; 35,0; 40,0; 50,0; 60,0; 70,0; 80,0; 90,0; 100; 120; 140; 160; 180; 200; 250; 500; 750; 1000 мкг/мл.
Антитела настоящего изобретения могут быть включены в фармацевтическую композицию, подходящую, например, для парентерального введения. Предпочтительно антитело будет приготовлено как раствор для инъекций, содержащий эффективное количество антитела. Инъецируемый раствор может состоять из жидкой или лиофилизированной дозированной формы во флаконах прозрачного или темного стекла, ампулах или преднаполненных шприцах. Для приготовления фармацевтической композиции может быть использован любой подходящий буфер. Примеры таких буферов включают сукцинат натрия, цитрат натрия, фосфат натрия или фосфат калия, но не ограничиваются ими. В лиофилизированную дозированную форму могут быть включены криопротекторы и агенты, увеличивающие объем. Как для жидкой, так и для лиофилизированной дозированной формы могут быть использованы стабилизаторы.
Композиции, предназначенные для различного применения изобретения, включая терапевтические композиции, могут вводиться в дозе, содержащей эффективное количество антитела или пептида. Доза может содержать от около 0,1 мкг/кг до около 20 мг/кг (в зависимости от массы объекта), например, 0,1; 0,5; 1; 2; 5; 10; 15; 20; 25; 30; 35; 40; 50; 60; 70; 80; 90; 100; 120; 140; 160; 180; 200; 250; 500; 750; 1000; 1500; 2000; 5000; 10000; 20000 мкг/кг или в любом количестве между ними; или от около 1 мкг/кг до около 2000 мкг/мл или в любом количестве между ними, например, 1,0; 2,0; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0; 25,0; 30,0; 35,0; 40,0; 50,0; 60,0; 70,0; 80,0; 90,0; 100; 120; 140; 160; 180; 200; 250; 500; 750; 1000; 2000 мкг/мл или в любом количестве между ними; или от около 10 мкг/кг до около 1000 мкг/кг или в любом количестве между ними, например, 10,0; 15,0; 20,0; 25,0; 30,0; 35,0; 40,0; 50,0; 60,0; 70,0; 80,0; 90,0; 100; 120; 140; 160; 180; 200; 250; 500; 750; 1000 мкг/кг или в любом количестве между ними; или от около 30 мкг/кг до около 1000 мкг/кг или в любом количестве между ними, например, 30,0; 35,0; 40,0; 50,0; 60,0; 70,0; 80,0; 90,0; 100; 120; 140; 160; 180; 200; 250; 500; 750; 1000 мкг/кг.
Специалист в данной области техники способен при необходимости перевести представленные данные, касающиеся массы объекта, концентрации фармацевтической композиции, индивидуальных компонентов или их комбинации, объема фармацевтической композиции, индивидуальных компонентов или их комбинации, в формат, подходящий для предпочтительного применения.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут находиться в различных формах. Эти формы включают, например, жидкую, полутвердую, твердую дозированную форму, такую как жидкий раствор (например, инъецируемый и инфузионный раствор), дисперсия или суспензия, таблетки, пилюли, порошки, липосомы и суппозитории. Предпочитаемая форма зависит от предназначенного способа введения и терапевтического применения. Типичные предпочтительные композиции изготавливаются в форме инъеционных или инфузионных растворов, таких как композиции, схожие с используемыми для пассивной иммунизации людей другими антителами. Предпочитаемым способом введения является парентеральный (например, внутривенный, подкожный, внутрибрюшинный, внутримышечный). В предпочтительном варианте реализации антитело вводится путем внутривенной инфузии или инъекции. В другом предпочтительном варианте реализации антитело вводится путем внутримышечной или подкожной инъекции.
Антитела согласно настоящему изобретению могут вводиться различными методами, известными в данной области техники, хотя для многих терапевтических применений предпочтительным путем/способом введения является подкожная инъекция, внутривенная инъекция или инфузия. Как очевидно специалисту в данной области техники, путь и/или способ введения может варьировать в зависимости от желаемых результатов. В частных вариантах реализации активный компонент может быть приготовлен с носителем, защищающим компонент от быстрого высвобождения; это могут быть, например, формы с контролируемым выходом, включая имплантаты, трансдермальные повязки и микроинкапсулированные системы доставки. Также могут использоваться такие биодеградирующие, биосовместимые полимеры как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Многие методы приготовления таких форм запатентованы или общеизвестны специалисту в данной области техники. См., например, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
В частных вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению может быть введено орально, например, вместе с инертным растворителем или с ассимилируемым съедобным носителем. Компонент (и другие ингредиенты, если это необходимо) могут также быть заключенными в твердые или мягкие оболочные желатиновые капсулы, спрессоваными в таблетки или напрямую включенными в питание объекта. Для орального терапевтического введения компоненты могут включаться вместе с наполнителем и использоваться в форме нерастворимых таблеток, буккальных таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, брикетов и подобного. Для введения компонента изобретения иным способом, кроме парентерального введения, может возникнуть необходимость покрыть компонент материалом (или вводить компонент совместно с материалом), предотвращающим его инактивацию.
В фармацевтические композиции могут также включаться вспомогательные активные компоненты. В частных вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению может быть приготовлено как часть лекарственной формы и/или может быть введено совместно с одним или более дополнительными терапевтическими агентами, полезными для терапии БА и родственных видов слабоумия. Например, одно из антител согласно настоящему изобретению или часть этого антитела может быть приготовлено как часть лекарственной формы и/или может быть введено совместно с одним или более дополнительными антителами, которые связываются с другими мишенями.
В частных вариантах реализации настоящего изобретения антитело согласно настоящему изобретению или его фрагмент может быть связано с носителем, повышающим его срок годности, известным в данной области техники. Такие носители включают Fc-домен, полиэтиленгликоль (ПЭГ) и декстран. но не ограничиваются ими. Такие носители описаны, например, в Заявке на Патент США Ser. No. 09/428,082 и в опубликованной Заявке No. WO 99/25044, которые включены в качестве ссылки для любых целей.
В одном из вариантов реализации изобретения оно представляет собой антигенный пептид, содержащий эпитоп, который имеет конформационно напряженную циклическую конфигурацию, эпитоп, который содержит аминокислотную последовательность, по крайне мере, SNK, эпитоп, соответствующий гидрофильному и доступному антителу шарнирному участку олигомерного Aβ.
В другом варианте реализации изобретения оно представляет собой антигенный пептид, содержащий эпитоп, который имеет конформационно напряженную циклическую конфигурацию, эпитоп, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, эпитоп, соответствующий гидрофильному и доступному антителу шарнирному участку олигомерного Aβ.
В еще одном варианте реализации изобретения оно представляет собой антитела, способные связываться с циклическим пептидом, производным Aβ, циклическим пептидом, содержащим конформационный эпитоп который имеет конформационно напряженную циклическую конфигурацию, эпитоп, который содержит аминокислотную последовательность, по крайне мере, SNK, эпитоп, соответствующий гидрофильному и доступному антителу шарнирному участку олигомерного Aβ.
В еще одном варианте реализации изобретения оно представляет собой антитела способные связываться с циклическим пептидом, производным Aβ, циклическим пептидом, содержащим конформационный эпитоп, который имеет конформационно напряженную циклическую конфигурацию, эпитоп, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, соответствующий гидрофильному и доступному антителу шарнирному участку олигомерного Aβ.
В частных вариантах реализации такие антитела могут связываться с олигомерными формами Aβ с большей аффинностью, чем с не олигомерными формами Aβ.
В другом варианте реализации настоящее изобретение представляет собой способ лечения объекта, имеющего болезнь Альцгеймера или подозрение на нее, способ, включающий введение объекту терапевтически эффективного количества антитела, способного связываться с циклическим пептидом, производным Aβ, где циклический пептид содержит конформационный эпитоп, имеющий аминокислотную последовательность, по крайне мере, SNK, и соответствующий гидрофильному и доступному антителу шарнирному участку олигомерного Aβ. В частных вариантах реализации антитело может связываться с олигомерными формами Aβ с большей аффинностью, чем с не олигомерными формами Aβ.
В еще одном варианте реализации оно представляет собой способ профилактики развития или прогрессии БА у объекта, способ, включающий введение объекту терапевтически эффективного количества антитела, способного связываться с циклическим пептидом, производным Aβ, где циклический пептид содержит конформационный эпитоп, имеющий аминокислотную последовательность, по крайне мере, SNK, и соответствующий гидрофильному и доступному антителу шарнирному участку олигомерного Aβ. В частных вариантах реализации настоящего изобретения антитело может связываться с олигомерными формами Aβ с большей аффинностью, чем с не олигомерными формами Aβ.
Другие аспекты изобретения будут понятны из условий приведенного ниже описания предпочтительных вариантов реализации изобретения. Специалисту в данной области техники очевидно, что другие варианты реализации также возможны и что детали изобретения могут быть модифицированы, исходя из концепции изобретения. Таким образом, фигуры и примеры являются иллюстративными способами практического применения настоящего изобретения и не ограничивают объем настоящего изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Очистка и агрегация Aβ, а также характеристика олигомеров.
Трансформация, экспрессия и очистка.
Клетки E. coli BL21 (DE3) pLysS и E. coli DH5α трансформировали с помощью конструкции, кодирующей Aβ 1-40. Клетки E. coli из культуры объемом 1 л ресуспендировали в 25 мл лизирующего буфера (50 мМ Трис-HCl, pH 8,0+1 мМ этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА)) для получения гомогенизированной суспензии (ингибиторы протеаз не добавляли). Суспензию переносили в центрифужную пробирку вместимостью 40 мл (JA-20), помещали на лед и подвергали ультразвуковой обработке в течение 3 мин при интенсивности 6 (т.е. максимальной для маленькой УЗ-установки) и периодичностью 50 Гц с последующим центрифугированием в течение 10 мин при 18000 g при температуре 4°C. Процесс УЗ-обработки повторяли трижды. Растворимую фракцию отбирали после каждого цикла УЗ-обработки и анализировали методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-ПААГ) (в данном случае преципитация ТХУ необязательна). Затем осадок ресуспендировали в 12,5 мл буфера, содержащего 8 M мочевину, 10 мМ Трис-HCl, pH 8,0 и 1 мМ ЭДТА, с последующим дополнительным шагом УЗ-обработки и центрифугирования (18000 об./мин в течение 10 мин). Полученный раствор затем разводили в 4 раза (добавлением 37,5 мл 10 мМ Трис, pH 8,0+1 мМ ЭДТА). Белковый раствор затем инкубировали с ДЕАЕ-целлюлозой (052, Whatman) (предварительно регенерированной 0,5 н NaOH в течение 15 мин с последующей промывкой водой и 0,5 М HCl, с последующими несколькими промывками водой и концентрированным буферным раствором (50 мМ Трис-HCl, pH 8,0+1 мМ ЭДТА)) и затем уравновешивали буфером для очистки (25 мМ Трис-HCl, pH 8,0+1 мМ ЭДТА). При этом происходило связывание пептида со смолой при условиях аккуратного перемешивания (т.е. в пробирке фалкон с магнитной мешалкой внутри, поставленной на магнитное перемешивающее устройство) в течение 20 мин. Несвязанный белок отбирали из раствора после центрифугирования в течение 1 мин при 1200 об./мин для седиментации осадка. Осадок отбирали с помощью пипетки.
Было проведено несколько промывок для удаления фракций, по 5 мин инкубации каждая, с краткой стадией центрифугирования (в течение 1 мин при 1200 об./мин) раствором следующего состава: 25 мМ ТрисHCl, pH 8,0+1 мМ EDTA с использованием, соответственно 0, 50, 75, 100, 125, 150, 200, 250, 300, 500 мМ NaCI. Элюированные фракции помещали на лед для предотвращения образования мономерной формы пептидов.
С этой целью 250 мкл отобранных фракций были проанализированы с помощью ДСН-ПААГ после преципитации ТХУ. Для преципитации ТХУ образцы инкубировали в 20% трихлоруксусной кислоте (ТХУ) по крайней мере 30 мин на льду, затем центрифугировали в течение 15 мин при 14000 об./мин. Ацетон удаляли, осадки оставляли для подсушивания. Осадок повторно растворяли с помощью красителя, окрашивающего белки, и анализировали по 8-10 мкл полученного раствора методом ДСН-ПААГ.
Методика агрегации Aβ и олигомеризации Aβ.
Для достижения мономеризации Aβ очищенный Aβ диализовали против воды miliQ и лиофилизировали. После лиофилизации Aβ восстанавливали в одном объеме ТХУ или муравьиной кислоты и высушивали для образования мономерного молекулярного слоя в стеклянной пробирке. Мономерный Aβ был ресуспендирван в 5 мМ фосфатном буферном растворе (ФБР), pH около 6,8, для поддержания Аβ в мономерной форме.
Для достижения олигомеризации Aβ в качестве исходного материала использовали мономерный Aβ; его инкубировали в количестве 200 мкМ в УЗ бане в течение 12 ч при температуре 33°C. Процедура приводила к образованию олигомеров Aβ чаще, чем фибрилл Aβ.
Характеристика олигомеров.
Размер олигомера был охарактеризован с помощью метода динамического рассеяния света (ДРС), общеизвестной методики, которую можно использовать для определения размера профиля распространения частиц в суспензии. В случае если источником света является лазер, и он является монохроматическим и когерентным, наблюдается зависимая от времени флуктуация интенсивности рассеяния. Эти флуктуации являются результатом того, что маленькие молекулы в растворе подвергаются Броуновскому движению и, таким образом, расстояние между рассеивающими свет частицами в растворе постоянно меняется со временем. Когда свет ударяется о маленькие частицы, он рассеивается во всех направлениях, что составляет процесс, известный как рассеяние Рэлея. Рассеянный свет затем подвергается конструктивной либо деструктивной интерференции со стороны окружающих частиц, в ходе чего меняется интенсивность флуктуации, содержащая информацию о временном масштабе движения частиц. Метод ДРС был использован для определения размера распространения Абета в образце в растворе и для подтверждения того, что Абета присутствует в мономерной либо в олигомерной форме.
Фиг.1 иллюстрирует, что образец Aβ, проанализированный методом ДРС, является мономерным Aβ. Коммерчески доступный Aβ (1-40) (50 мкМ) инкубировали в 5 мМ ФБР при температуре 10°C. Вычисляли радиус гидратации (Rh), который составил менее 1 нм. Эти результаты соотносятся с прогнозируемым значением Rh мономерного Aβ, составляющим менее 1 нм, который, как очевидно специалисту в данной области техники, типичен для мономерного Aβ.
Фиг.2 иллюстрирует, что образец Aβ, проанализированный методом ДРС, является олигомерным Aβ. Коммерчески доступный Aβ (1-40) (80 мкМ) инкубировали в 150 мМ ФБР при температуре 10°C. Результаты демонстрируют квазимонодисперсное распределение. Вычисляли радиус гидратации (Rh), который составил 200 нм. Эти результаты соотносятся с прогнозируемым значением Rh олигомерного Aβ, составляющим от 100 до 200 нм, который, как очевидно специалисту в данной области техники, типичен для мономерного Aβ.
Фиг.3 иллюстрирует, что образец Aβ, проанализированный методом ДРС, является олигомерным Аβ. Коммерчески доступный Aβ (1-40) (50 мкМ) инкубировали в 150 мМ ФБР при температуре 10°C. Результаты демонстрируют квазимонодисперсное распределение. Вычисляли радиус гидратации (Rh), который составил менее 190 нм. Эти результаты соотносятся с прогнозируемыми значениями для олигомерного Aβ.
Пример 2: Получение циклического пептида, содержащего конформационно напряженный эпитоп
Циклический пептид, содержащий новый конформационный эпитоп, был создан в конформации напряженной петли, используя дисульфидную связь между остатками цистеина, расположенными на N- и C-концах этого пептида. В последовательность GSNKG были добавлены два не нативных цистеина: один на C-конце и один на N-конце. Эти два цистеина были окислены в контролируемых условиях для формирования дисульфидной связи.
Структура циклического пептида была создана для имитации «шарнирной» конформации и ориентации шарнирного участка олигомеров Aβ, содержащего новый конформационный эпитоп.
Фиг 4 иллюстрирует трехмерную модель дисульфидно-циклизованного пептида, содержащего новый конформационный эпитоп SNK.
Специалисту в данной области техники очевидно, что существуют и другие методы формирования конформационно напряженного эпитопа. Например, пептид может быть циклизован путем образования связи между двумя остатками пептида с образованием замкнутой петли. Циклические пептиды могут быть описаны как гомодетные (когда все связи являются пептидными связями) или гетеродетные (когда существуют как пептидные связи, так и другие типы связей, такие как сложноэфирные, эфирные, амидные или дисульфидные связи внутри циклического пептида). Пептиды могут быть циклизованы с использованием химических или ферментативных методов. Патент США 2009/0215172 описывает рекомбинантные белки, катализирующие циклизацию пептидов от «головы» до «хвоста» с помощью амидных связей, не зависимо от последовательности пептида. Распознавание последовательностей в препептидах, окружающих интересующий пептид, вызывает циклизацию. Bourne et al (Methods in Molecular Biology, 2005 298:151-166) описывает комбинаторные методы приготовления сетей циклических пептидов путем использования безопасного захватывающего линкера и выбранной процедуры. Патент США 2004/0014100 содержит методику получения циклических пептидов in vivo. Патент США 2010/0240865, Патент США 2010/0137559 и Патент США 7,569,541 описывают различные методы циклизации пептидов; например, пептиды могут быть циклизованы путем окисления тиол- или меркаптан-содержащих остатков на С-конце, на N-конце или в середине пептида. Примерами тиол-содержащих остатков являются цистеин, гомоцистеин, пеницилламин. В некоторых вариантах реализации первый тиол-содержащий остаток является цистеином. В еще одних вариантах реализации оба (и первый, и второй) тиол-содержащие остатки являются цистеинами. Два тиол-содержащих остатка в пептиде могут быть окислены для формирования димерной аминокислоты цистеина, связанной дисульфидными связью. Для достижения такой тиол-дисульфидной конверсии может быть использовано множество окисляющих реагентов, например, кислород (воздух), диметил сульфоксид, окисленный глутатион, феррицианид калия, трифторацетат таллия (III) или другие окисляющие реагенты, известные специалисту в данной области техники, и соответствующие методы, известные специалисту в данной области техники. Примеры таких методов описаны в PCT Publication W001/92466, and Andreu et al., 1994. Methods in Molecular Biology 35:91.
Пример 3: Получение и скрининг специфичных к олигомеру Aβ моноклональных антител.
Моноклональные антитела (МАТ) к специфичному олигомеру Аβ конформационному эпитопу (SEQ ID NO: 1) были созданы путем получения антител, направленных на эпитоп с конформацией, напряженной в петле, используя дисульфидную связь между цистеинами на N- и С-концах этого пептида, как описано в Примере 2.
Мыши BALB/C были иммунизированы новым конформационно напряженным в петле эпитопом (CLE), обозначаемым далее как GSNKG-CLE, связанным с множественным антигенным пептидом (МАП) или с гемоцианином лимфы улитки (ГЛУ), которые использовали для эпитопов, специфичных к PrP и неправильно свернутым SOD1 (Paramithiotis et al. 2003; Rakhit et al. 2007). Сыворотка мыши подвергалась скринингу с помощью GSNKG-CLE, связанного с бычьим сывороточным альбумином (БСА); затем у мышей со специфичным и сильным взаимодействием с GSNKG-CLE и не структурированным растворимым Аβ выделяли клетки селезенки и осуществляли их слияние с миеломой для получения гибридомы, после чего проводили скрининг полученной гибридомы. Позитивно отобранные IgG-секретирующие клоны использовали для крупномасштабного производства с последовательной характеристикой иммунологическими методами с применением циклических и линейных GSNKG-БСА, синтетических олигомеров Аβ и олигомеров Аβ, выделенных из мозга БА.
Были созданы моноклональные антитела (МАТ) против циклических пептидов GSNKG-БСА и был проведен их предварительный скрининг методом пептидной ELISA в отношении параметров связывания. Некоторые антитела, созданные против циклических пептидов GSNKG, распознавали предпочтительно циклические пептиды, некоторые антитела распознавали линейные пептиды, а некоторые антитела распознавали как циклические, так и линейные пептиды. Способность антител распознавать линейные и циклические пептиды может быть связана, например, с иммунным распознаванием циклического пептида, который был частично или полностью линеаризован путем восстановления цистеиновых мостиков in vivo. Антитела, созданные против промежуточных пептидов GSNKG, представляют собой антитела, которые распознают и циклический, и линейный пептид. Основываясь на результатах ELISA, для дальнейших анализов были отобраны следующие клоны IgG: два антитела, специфичных к циклическим пептидам (5D8, 5E3), два антитела, специфичных к линейным пептидам (3F5, 3G2), и два антитела промежуточной специфичности (4011, 4012). Для дальнейшего анализа была использована платформа Biacore™, которая использует оптический феномен поверхностного плазмонного резонанса для мониторинга биомолекулярных взаимодействий в режиме реального времени и без необходимости мечения.
На Фиг.5 представлены показательные результаты, полученные с помощью платформы Biacore™. Моноклональные антитела были выделены из супернатанта культуры тканей и были ковалентно иммобилизованы на сенсорный чип СМ5 с помощью кроличьих антимышиных Fc-специфичных антител (RAMFc). Затем анализировали связывание антитела с конъюгированными с БСА пептидами GSNKG (линейными и циклическими) и олигомерным Aβ (1-42) путем пропускания этих аналитов через захватывающие МАТ. Полученные результаты, характеризующие связывание, сравнивали с результатами, полученными в проточной ячейке, содержащей иммобилизованные RAMFc, но не содержащей присоединенные МАТ, в растворителе образца (буферном солевом растворе Hepes, содержащем 1 мг/мл карбоксиметилдекстран), которые использовали как холостой образец. К тому же, полученные результаты были нормализованы против количества захваченных МАТ для того, чтобы обеспечить точность сравнения между несколькими МАТ.
На Фиг.6 и Фиг.7 представлены итоговые сенсограммы Biacore™, демонстрирующие отобранные с помощью ELISA клоны, предпочитающие линейный пептид (3F5, 3G2), не связавшиеся ни с линейными, ни с циклическими пептидами, связанными с БСА на чипах Biacore™; отобранные с помощью ELISA клоны, предпочитающие промежуточные пептиды (4011, 4012), связавшиеся как с циклическими, так и с линейными пептидами на чипах Biacore™; а также отобранные с помощью ELISA клоны, связавшиеся преимущественно с циклическим пептидом, связанным с БСА на чипах Biacore™. Циклические клоны 5E3 и 5D8 демонстрируют наиболее сильное связывание с олигомером Aβ (1-42) и циклическими пептидами, при этом также демонстрирует незначительное связывание с линейными пептидами, сопоставимое с промежуточными клонами, либо не демонстрируют его. Данные иллюстрируют, что антитела 5E3 демонстрируют наиболее сильное связывание с олигомером 1-42, хотя с циклическим пептидом связываются оба антитела, и 5E3, и 5D8. Эти результаты свидетельствуют, что при скрининге антител, произведенном с использованием циклического пептида из Примера 2, репертуар циклически-специфичных антител демонстрировал предпочтительное распознавание антителом эпитопа олигомерного Aβ.
Фиг.8 демонстрирует, что связывание с олигомером Aβ (1-42) MAT 5E3, клона, связывающегося преимущественно с циклическим пептидом, происходит в концентрационно-зависимом режиме. Это наблюдение демонстрирует доступный и конформационно напряженный эпитоп в олигомере Aβ, который является титруемым и совместимым с аутентичным иммунологическими взаимодействиями антиген-антитело. Таким образом, анализ с помощью Biacore™ демонстрирует, что циклический пептид GSNKG и полноразмерный олигомерный Aβ (1-42) имеют общую молекулярную черту, конформационно напряженный эпитоп, который особым образом распознается конформационно-чувствительным MAT 5E3.
МАТ, специфичные к олигомеру Aβ (1-42), могут быть также проанализированы с терапевтической целью на клеточных и животных моделях БА, а также для нейтрализации активности в нейрофизиологических анализах синаптической функции, ослабляемой олигомером Aβ.
Пример 4: Анализ методом проточной цитометрии.
Анализ методом проточной цитометрии проводили для определения степени связывания антитела с белком APP на поверхности клеток.
Здоровые взрослые мыши Black/6 были умерщвлены в камере, содержащей диоксид углерода. Мозг незамедлительно извлекали и промывали фосфатным буферным раствором (ФБР) с последующим погружением в ФБР + 1% бычью фетальную сыворотку (БФС). Отдельные суспензии клеток были получены путем крошения мозга анатомическими ножницами и серийного пропускания через сита с диаметром отверстий 100 мкм и 70 мкм. Клетки инкубировали в ФБР + 1% БФС для блокирования 30 мин при комнатной температуре. Клетки затем по отдельности инкубировали (или не инкубировали) в 100 мкл ФБР + 1% БФС плюс 10 мкг/мл или 1 мкг/мл 6E10 и 5E3. Через 1 ч при комнатной температуре клетки дважды промывали (400 g, 5 мин) и ресуспендировали в ФБР + 1% БФС с добавлением антимышиных антител, конъюгированных с аллофикоцианином (АФЦ) или флуоресцеином (ФИТЦ); оба конъюгата использовали в разведении 1:1000. Помимо чистого контроля, некоторые клетки инкубировали вместе с вторичными антителами для контроля неспецифичного взаимодействия. Вторичные антитела инкубировали с образцом 30 мин при комнатной температуре, после чего клетки промывали и либо немедленно анализировали, либо фиксировали на ночь в 4% параформальдегиде при 4°C. Для сбора данных использовали проточный цитометр A BD LSRII, для анализа данных использовали программу FlowJo.
На Фиг.9 и Фиг.10 представлены результаты анализа методом проточной цитометрии. Фиг.9 представляет собой график, полученный методом проточной цитометрии, демонстрирующий сравнение связывания меченных пан-Aβ антител 6E10 и вторичных антител негативного контроля с белком APP, расположенным на поверхности клеток. Фиг.10 демонстрирует сравнение связывания меченных антител 5E3 и вторичных антител негативного контроля с белком APP, расположенным на поверхности клеток. Антитела 6Е10, меченные ФИТЦ, представленные на Фиг.9, демонстрируют значительную степень связывания с APP, расположенным на поверхности клеток. Антитела 5E3, меченные ФИТЦ, представленные на Фиг.10, напротив, демонстрируют очень низкую степень связывания с клетками в сравнении с контролем. Эти результаты ясно показывают, что 5E3, меченные ФИТЦ, демонстрируют значительно меньшее связывание с АРР на поверхности клеток в сравнении с 6E10, меченным ФИТЦ. Результаты этих анализов демонстрируют, что конформационно напряженный специфичный олигомеру новый конформационный эпитоп не присутствует на клеточной поверхности нейронов, которая представлена линейным неструктурированным нативным мотивом GSNKG нативного APP. Отсутствие конформационно напряженного нового конформационного эпитопа на поверхности клеток свидетельствует о том, что иммунный ответ, возникающий против используемого в лечении болезни Альцгеймера циклического эпитопа, не будет нацелен на нативные APP. Эти результаты свидетельствуют, что антитела, специфически связывающиеся с циклическим эпитопом GSNKG олигомерного Aβ, имеют предпочитаемый профиль безопасности в сравнении с известными антителами 6E10.
Пример 5: Нейрональный анализ.
Анализ нейрональной токсичности проводился для определения степени выживаемости клеток на клетках, инкубированных с холостым контролем (среда), с растворимым (линейным) и олигомерным Аβ (1-40) в присутствии и при отсутствии антител 5Е3 в разных концентрациях. Холостой контроль обрабатывали только сывороткой (без антител).
Нейроны выращивали в лунках 96-луночного планшета, содержащих по 10000 крысиных первичных нейронов на каждую лунку, обработанную поли-L-Лизином (ScienCell #0403; 2 микрограмм/см2, 1 ч, 37 градусов Цельсия, промытых трижды ФБР), и содержащую по 0,2 мл нейрональной среды (ScienCell #1521). Культуральную среду меняли каждый день на протяжении 7 дней. Растворимые и олигомерные Aβ (1-40) инкубировали 4 ч в отсутствии или при наличии антител 5E3 в разных концентрациях (см. Фиг.11) в нейрональной среде при комнатной температуре на перемешивающем устройстве. 0,2 мл этой смеси добавляли к нейронам после их отделения от среды. Через 24 ч измеряли выживаемость клеток, используя Roche Cell Proliferation kit II (#11465015001) в соответствии с инструкцией производителя. Оптическую плотность измеряли с помощью плашечного считывающего устройства.
Фиг.11 иллюстрирует результаты анализа нейрональной токсичности. Аβ токсичен по отношению к нейронам в обеих, линейной и мономерной конфигурациях, а также в олигомерной конфигурации. Антитела 5E3, направленные против конформационно напряженного эпитопа Aβ, как было показано, имели протекторный эффект по отношению к олигомерным формам Aβ. Антитела 5E3 не имели протекторного эффекта по отношению к линейному Aβ. Эти результаты показывают конформационную специфичность связывания антитела 5E3.
Пример 6: Анализ методом иммуноблотинга.
Анализ методом иммуноблотинга проводили для определения относительного связывания антител 6E10 и 5E3 с APP, мономерные Aβ и олигомерные Aβ.
Гомогенизация.
Образцы тканей мозга взвешивали и последовательно погружали в объем свежего трисового буферного раствора (ТБР) на льду (с добавлением 5 мМ этилен гликоль тетрауксусной кислоты (ЕГТА), 5 мМ ЭДТА и смеси ингибиторов протеаз) таким образом, чтобы конечная концентрация тканей мозга была 20%. Ткань гомогенизировали в этом буфере, используя механический гомогенизатор, следующим образом: ткань помещали в гомогенизатор трижды на 30 сек и держали по 30 сек на льду между каждой стадией гомогенизации. Гомогенизированные в ТБР образцы помещали на ультрацентрифугу (70000 g, 90 мин). Супернатант отбирали и хранили при температуре -80°C.
Концентрацию белка в гомогенатах ТБР определяли, используя белковый анализ ВСА. В некоторых случаях эквивалентное количество белка разделяли на фракции методом ДСН-ПААГ, используя Трис-Трициновые 4-20% гели после кипячения в Трис-Трициновом буфере для образцов (Invitrogen), и переносили на 0,2 мкМ поливинилиден флоридные (ПВДФ) мембраны. После переноса мембраны погружали в ФБР и кипятили 2 раза по 3 мин каждую для теплового восстановления эпитопа. Мембраны использовали для иммуноблотинга, применяя либо антитела E610, либо антитела 5E3, специфичные к олигомеру, в качестве первичных антител. Оба антитела использовались в концентрации 1 мкг/мл.
Фиг.12 иллюстрирует результаты иммуноблотинга, демонстрирующие ткань мозга, гомогенизированную в ТБР, фракционированную на Трис-Трициновых гелях и проанализированную методом иммуноблотинга с пан- Aβ антителами 6E10. Очевидна реакция антител с APP и с мономерными формами Aβ, а также незначительная реактивность к полосе олигомера Aβ.
Фиг.13 иллюстрирует результаты иммуноблотинга для антитела 5Е3. Антитело 5E3 специфически распознает олигомерные виды массой около 45-55 кДа, очевидно, стабильные в ДСН, что свидетельствует о сильном нековалентном взаимодействии мономеров Aβ в олигомерных видах. Не наблюдалось никакой реакции с мономерными формами Aβ, хотя при иммуноблотинге выявлена некоторая ограниченная реакция с APP, что, предположительно, связано с денатурацией и частичной нативной и не нативной ренатурацией мембраны для иммуноблотинга. Пан-Aβ антитела 6E10 показали ограниченное распознавание олигомерных видов либо его отсутствие. Результаты анализа Biacore™, которые обсуждались в Примере 3 (основываясь на эмпирической формуле Biacore™ и принимая коэффициент стехиометрии между 5E3 и AB42 за 1), находятся в соответствии с результатами иммуноблотинга, демонстрирующими, что виды Aβ (1-42), которые связываются с 5E3, находятся в промежуточной форме между декамером и тридекамером, которая имеет молекулярную массу 4,0-4,3 кДа на мономер. При этом данные Biacore™ определяют молекулярную массу олигомерных видов равной около 50 кДа, что соответствует молекулярной массе основных полос, выявляемых с помощью MAT 5E3.
Пример 7: Анализ ингибирования образования олигомера Aβ.
Анализ ингибирования Aβ был проведен для определения способности антител 5E3 вызывать ослабление размножения олигомеров Aβ.
Статическое рассеяние света (CPC) - метод физической химии, который измеряет интенсивность рассеянного света для получения средней молекулярной массы (Mw) макромолекулы, такой как полимер или белок. Измерение интенсивности рассеяния под разными углами позволяет рассчитать квадратный корень радиуса, также называемого радиусом циркуляции (Rg). Измеряя интенсивность рассеивания для многих образцов в различных концентрациях, может быть рассчитан второй вириальный коэффициент A2. Для экспериментов по статическому рассеянию света монохроматический свет высокой интенсивности (обычно лазер) направляют в раствор, содержащий макромолекулы. Для измерения интенсивности рассеяния под одним или несколькими углами (θ) при данной длине волны (X) используют один или несколько детекторов.
Для измерения средней молекулярной массы напрямую, без калибровки, исходя из интенсивности рассеивания света, должны быть известны интенсивность лазера, квантовая эффективность детектора, общей объем рассеяния и пространственный угол детектора. Поскольку на практике это трудно достижимо, все коммерческие инструменты откалиброваны используют известное сильное рассеяние, например толуола, поскольку соотношение Рэлея для толуола и некоторых других растворителей было измерено, используя абсолютный рассеивающий свет инструмент.
Фиг.14 иллюстрирует способность антитела 5E3 угнетать агрегацию мономера Aβ в токсичную форму олигомера Aβ. Образование олигомера Аβ было изучено в отсутствии 5ЕЗ («C» на Фиг.14)) или в присутствии 5E3 («5E3» на Фиг.14). Aβ (1-40) коммерческого происхождения 23 (мкМ) был инкубирован при температуре 39°C в реакционной смеси объемом 150 мкл с антителами 5E3 (2,0 мкМ). Сдвиг интенсивности CPC, отмеченный с помощью стрелки, соответствовал вкладу антител 5E3 в интенсивность рассеяния. Фиг.14 иллюстрирует, что в результате инкубирования с антителами 5E3 существенно снижается образование олигомеров Aβ.
Этот ингибирующий полимеризацию эффект подтверждает терапевтическую роль антитела 5E3, а также гуманизированных и химерных антител, родственных ему, а также нового конформационного эпитопа самого по себе, например, при создании вакцин.
Пример 8: Определение олигомера Aβ в биологических образцах.
Было предположено, что очищенные антитела 5E3 могут быть использованы для определения олигомеров Aβ в биологических образцах, таких как гомогенаты тканей, включая мозг. Такое определение, которое можно проводить, используя различные способы определения, включая платформу Biacore™, может иметь диагностическое и/или прогностическое значение.
Пример 9: Терапия 5E3 и родственными антителами и вакцинами.
Терапия антителами 5E3 может быть полезной для специфичного и/или селективного очищения токсического олигомера Aβ и может быть полезной при терапии и/или предотвращении появления или развития болезней, связанных с токсичностью олигомера Aβ, таких как болезнь Альцгеймера. Человеческие либо гуманизированные антитела, направленные на тот же эпитоп, что и 5E3, будут полезны для терапии и/или профилактики болезни Альцгеймера. В другом аспекте эпитоп, совпадающий с эпитопом, распознаваемым антителом 5E3, будет полезен для терапии и/или профилактики болезни Альцгеймера.
Аналогично, описанный новый конформационный эпитоп будет, очевидно, полезным для того, чтобы вызывать специфичный иммунный ответ к олигомеру Aβ, что является полезным для терапии или профилактики, например, болезни Альцгеймера.
Вышеописанные варианты реализации являются только примерами. Изменения, модификации и вариации, являющиеся результатами частных вариантов реализации настоящего изобретения в данной области техники, неотделимы от объема изобретения, исключительно определяемого изложенными в нем притязаниями.
Список литературы
Gelinas, D.S., et al., Immunotherapy for Alzheimer’s disease. Proc Natl Acad Sci USA, 2004. 101 Suppl 2: p.14657-62.
Robinson, S.R., et al., Lessons from the AN 1792 Alzheimer vaccine: lest we forget. Neurobiol Aging, 2004. 25(5): p.609-15.
Broytman, O. and J.S. Malter, Anti-Abeta: The good, the bad, and the unforeseen. J Neurosci Res, 2004. 75(3): p.301-6.
Mathews, P.M. and R.A. Nixon, Setback for an Alzheimer’s disease vaccine: lessons learned. Neurology, 2003. 61 (1): p.7-8.
Goni, F. and E.M. Sigurdsson, New directions towards safer and effective vaccines for Alzheimer's disease. Curr Opin Mol Ther, 2005. 7(1): p.17-23.
Jung, S.S., J. Nalbantoglu, and N.R. Cashman, Alzheimer’s beta-amyloid precursor protein is expressed on the surface of immediately ex vivo brain cells: a flow cytometric study. J Neurosci Res, 1996. 46(3): p.336-48.
Jung, S.S., S. Gauthier, and N.R. Cashman, Beta-amyloid precursor protein is detectable on monocytes and is increased in Alzheimer's disease. Neurobiol Aging, 1999. 20(3): p.249-57. Morimoto, T., et al., Involvement of amyloid precursor protein in functional synapse formation in cultured hippocampal neurons. J Neurosci Res, 1998. 51 (2): p.185-95.
Mileusnic, R., C.L. Lancashire, and S.P. Rose, Amyloid precursor protein: from synaptic plasticity to Alzheimer's disease. Ann N Y Acad Sci, 2005. 1048: p.149-65.
Mileusnic, R., et al., APP is required during an early phase of memory formation. Eur J Neurosci, 2000. 12(12): p.4487-95.
Lambert, M.P., et al., Monoclonal antibodies that target pathological assemblies of Abeta. J Neurochem, 2007. 100(1): p.23-35.
Lacor, P.N., et al., Abeta oligomer-induced aberrations in synapse composition, shape, and density provide a molecular basis for loss of connectivity in Alzheimer's disease. J Neurosci, 2007. 27(4): p.796-807.
Ronicke, R., et al., Abeta mediated diminution of MTT reduction-an artefact of single cell culture? PLoS One, 2008. 3(9): p. e3236.
Balducci, C, et al., Synthetic amyloid-beta oligomers impair long-term memory independently of cellular prion protein. Proc Natl Acad Sci USA. 2010, 107(5): p.2295-300.
Shankar, G.M., et al., Amyloid-beta protein dimers isolated directly from Alzheimer’s brains impair synaptic plasticity and memory. Nat Med, 2008. 14(8): p.837-42.
Selkoe, D.J., Soluble oligomers of the amyloid beta-protein impair synaptic plasticity and behavior. Behav Brain Res, 2008. 192(1): p.106-3.
Klyubin, I., et al., Amyloid beta protein immunotherapy neutralizes Abeta oligomers that disrupt synaptic plasticity in vivo. Nat Med, 2005. 11 (5): p.556-61.
Walsh, D.M., et al., Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo. Nature, 2002. 416(6880): p.535-9.
Wang, H.W., et al., Soluble oligomers of beta amyloid (1-42) inhibit long-term potentiation but not long-term depression in rat dentate gyrus. Brain Res, 2002. 924(2): p.133-40.
Lesne, S., et al., A specific amyloid-beta protein assembly in the brain impairs memory. Nature, 2006. 440(7082): p.352-7.
Lauren, J., et al., Cellular prion protein mediates impairment of synaptic plasticity by amyloidbeta oligomers. Nature, 2009. 457(7233): p.1 128-32.
Luhrs, T., et al, 3D structure of Alzheimer's amyloid-beta(1-42) fibrils. Proc Natl Acad Sci USA, 2005. 102(48): p.17342-7.
Rauk, A., Why is the amyloid beta peptide of Alzheimer's disease neurotoxic? Dalton Trans, 2008(10): p.1273-82.
Claims (26)
1. Изолированное антитело, специфически связывающееся с конформационным эпитопом, присутствующим на циклическом пептиде, причем указанный конформационный эпитоп имеет аминокислотную последовательность, состоящую из по меньшей мере SNK, где K (лизин) конформационного эпитопа экспонирован в раствор, причем указанное антитело обладает способностью специфично связываться с амилоидом бета (Аβ), причем указанное антитело содержит последовательности CDR (участков, определяющих комплементарность), кодируемых последовательностями нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 4 и 6, причем указанное антитело специфически с большей аффинностью связывается с олигомерной формой Аβ, чем с не олигомерной формой Аβ.
2. Изолированное антитело по п. 1, отличающееся тем, что указанное антитело является моноклональным.
3. Изолированное антитело по п. 1, отличающееся тем, что указанное антитело является гуманизированным.
4. Изолированное антитело по п. 1, отличающееся тем, что указанный эпитоп соответствует экспонированному в раствор доступному антителам шарнирному участку олигомерного Аβ.
5. Изолированное антитело по п. 1, дополнительно содержащее детектируемую метку, выбранную из группы, состоящей из рентгеноконтрастного соединения, радиоизотопа, флюорофора, хромофора, фермента, иона металла и любых их комбинаций.
6. Изолированное антитело по п. 1, которое связано с носителем, увеличивающим время полужизни.
7. Изолированное антитело по п. 6, отличающееся тем, что носитель, увеличивающий время полужизни, выбран из группы, состоящей из Fc-домена, полиэтиленгликоля (ПЭГ), декстрана и любых их комбинаций.
8. Антигенный циклический пептид, способный вызывать специфический иммунный ответ против олигомерного Аβ, причем указанный антигенный пептид содержит конформационный эпитоп, имеющий аминокислотную последовательность, состоящую по меньшей мере из SNK, причем K (лизин) конформационного эпитопа экспонирован в раствор, и при этом указанный конформационный эпитоп соответствует экспонированному в раствор, доступному антителам шарнирному участку олигомерного Аβ.
9. Антигенный циклический пептид, способный вызывать специфический иммунный ответ против олигомерного Aβ, причем указанный антигенный пептид содержит конформационный эпитоп, имеющий аминокислотную последовательность GSNKG (SEQ ID NO: 1), причем K (лизин) конформационного эпитопа экспонирован в раствор, и при этом указанный конформационный эпитоп соответствует экспонированному в раствор, доступному антителам шарнирному участку олигомерного Аβ.
10. Антигенный пептид по п. 8 или 9, отличающийся тем, что указанный экспонированный в раствор, доступный антителам шарнирный участок олигомерного Аβ соответствует остаткам с 25 по 29 олигомерного Аβ (1-40) или олигомерного Аβ (1-42).
11. Иммуноконъюгат для лечения или предотвращения болезни Альцгеймера, содержащий изолированное антитело по любому из пп. 1-3, дополнительно содержащий детектируемую метку.
12. Композиция для лечения или предотвращения болезни Альцгеймера, содержащая терапевтически эффективное количество изолированного антитела по любому из пп. 1-3 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество или носитель.
13. Композиция вакцины против олигомеров Аβ, содержащая антигенный пептид по любому из пп. 8-10 и фармацевтически приемлемый адъювант.
14. Способ лечения или профилактики болезни Альцгеймера у пациента, нуждающегося в указанном лечении, включающий введение фармацевтически эффективного количества изолированного антитела по любому из пп. 1-3 или иммуноконъюгата по п. 11.
15. Способ лечения и профилактики болезни Альцгеймера у пациента, нуждающегося в указанном лечении, включающий введение вакцинной композиции по п. 13.
16. Способ диагностики болезни Альцгеймера у пациента, у которого предполагается наличие болезни Альцгеймера, включающий следующие шаги:
а) введение в контакт биологического образца, взятого у пациента, с антителом по любому из пп. 1-3 на протяжении времени и при условиях, достаточных для формирования комплексов антиген/антитело в образце; и
б) определение присутствия комплексов антиген/антитело в образце, где наличие комплексов означает диагноз болезни Альцгеймера у пациента.
17. Набор для диагностики болезни Альцгеймера, включающий в себя:
антитело по любому из пп. 1-3; и
конъюгат, содержащий антиген, присоединенный к соединению, генерирующему сигнал.
18. Набор по п. 17, включающий один или более агентов для детекции.
19. Набор по п. 17 или 18, дополнительно включающий инструкцию по применению для диагностики болезни Альцгеймера.
20. Применение антитела по любому из пп. 1-3 или иммуноконъюгата по п. 11 для лечения или профилактики болезни Альцгеймера.
21. Применение вакцинной композиции по п. 13 для лечения или профилактики болезни Альцгеймера.
22. Нуклеиновая кислота, кодирующая изолированное антитело по любому из пп. 1-3, причем последовательность указанной нуклеиновой кислоты идентифицирована в последовательностях SEQ ID NO: 4 и 6.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US31016710P | 2010-03-03 | 2010-03-03 | |
US61/310,167 | 2010-03-03 | ||
PCT/CA2011/000238 WO2011106885A1 (en) | 2010-03-03 | 2011-03-03 | Oligomer-specific amyloid beta epitope and antibodies |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2012139043A RU2012139043A (ru) | 2014-04-10 |
RU2644335C2 true RU2644335C2 (ru) | 2018-02-08 |
Family
ID=44541581
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012139043A RU2644335C2 (ru) | 2010-03-03 | 2011-03-03 | Эпитоп, специфичный к олигомеру амилоида бета, и антитела |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US9216217B2 (ru) |
EP (2) | EP3056510B1 (ru) |
JP (2) | JP6190113B2 (ru) |
KR (1) | KR101831459B1 (ru) |
CN (1) | CN102858796B (ru) |
AU (1) | AU2011223456A1 (ru) |
BR (1) | BR112012022229A2 (ru) |
CA (1) | CA2791538C (ru) |
CL (1) | CL2012002438A1 (ru) |
CO (1) | CO6640211A2 (ru) |
IL (1) | IL221695B (ru) |
MX (1) | MX341536B (ru) |
NZ (1) | NZ602548A (ru) |
RU (1) | RU2644335C2 (ru) |
SG (1) | SG183854A1 (ru) |
WO (1) | WO2011106885A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201206916B (ru) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101831459B1 (ko) | 2010-03-03 | 2018-04-04 | 더 유니버시티 오브 브리티시 콜롬비아 | 올리고머 특이적 아밀로이드 베타 에피토프 및 항체 |
TWI571207B (zh) | 2011-06-26 | 2017-02-21 | 安麗托克斯公司 | 用於條件化動物飼料之寒冷天氣調配物 |
AU2012335014A1 (en) * | 2011-11-10 | 2014-06-19 | Cangene U.S., Incorporated | Compositions and methods for treating Alzheimer's disease |
CN107652356A (zh) * | 2012-04-05 | 2018-02-02 | 于利希研究中心有限公司 | 包含多价结合淀粉样β蛋白的D‑肽的聚合物及其应用 |
EP3102611A4 (en) * | 2014-02-03 | 2017-08-23 | Cangene Corporation | Humanized beta-amyloid binding molecules and uses thereof |
WO2016008047A1 (en) * | 2014-07-14 | 2016-01-21 | Cangene Corporation | Cyclic peptide vaccination for treatment of amyloid beta-related disorders |
JP6952351B2 (ja) | 2015-11-09 | 2021-10-20 | ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア | 集団座標バイアシングによりミスフォールディングタンパク質エピトープを予測するためのシステムおよび方法 |
KR20180088828A (ko) | 2015-11-09 | 2018-08-07 | 더 유니버시티 오브 브리티쉬 콜롬비아 | 아밀로이드 베타에서의 n-말단 에피토프 및 이에 형태적으로-선택적인 항체 |
JP7452829B2 (ja) * | 2015-11-09 | 2024-03-19 | ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア | アミロイドベータのエピトープおよびそれに対する抗体 |
CN108350052A (zh) * | 2015-11-09 | 2018-07-31 | 英属哥伦比亚大学 | 淀粉样蛋白β中间区域中的表位及其构象选择性抗体 |
US20180326027A1 (en) * | 2015-11-09 | 2018-11-15 | The University Of British Columbia | Epitopes in amyloid beta and conformationally-selective antibodies thereto |
US20180125920A1 (en) | 2016-11-09 | 2018-05-10 | The University Of British Columbia | Methods for preventing and treating A-beta oligomer-associated and/or -induced diseases and conditions |
WO2020033756A1 (en) * | 2018-08-09 | 2020-02-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Determination of parkinson's disease |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997037228A1 (en) * | 1996-03-29 | 1997-10-09 | The Trustees Of Boston University | Methods for diagnosing and treating alzheimer's disease |
WO2006047254A1 (en) * | 2004-10-22 | 2006-05-04 | Regents Of The University Of Minnesota | Assemblies of oligomeric amyloid beta protein and uses thereof |
WO2010002251A1 (en) * | 2008-07-01 | 2010-01-07 | De Staat Der Nederlanden, Vert. Door De Minister Van Vws | Vaccine against amyloid folding intermediate |
WO2010011947A2 (en) * | 2008-07-25 | 2010-01-28 | Abbott Laboratories | AMYLOID ß PEPTIDE ANALOGUES, OLIGOMERS THEREOF, PROCESSES FOR PREPARING AND COMPOSITIONS COMPRISING SAID ANALOGUES OR OLIGOMERS, AND THEIR USES |
Family Cites Families (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8308235D0 (en) | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
JPS6147500A (ja) | 1984-08-15 | 1986-03-07 | Res Dev Corp Of Japan | キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法 |
EP0173494A3 (en) | 1984-08-27 | 1987-11-25 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Chimeric receptors by dna splicing and expression |
GB8422238D0 (en) | 1984-09-03 | 1984-10-10 | Neuberger M S | Chimeric proteins |
GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
IL162181A (en) | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
GB9021679D0 (en) | 1990-10-05 | 1990-11-21 | Gorman Scott David | Antibody preparation |
US6127977A (en) | 1996-11-08 | 2000-10-03 | Cohen; Nathan | Microstrip patch antenna with fractal structure |
US6750324B1 (en) * | 1997-12-02 | 2004-06-15 | Neuralab Limited | Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies |
TWI239847B (en) * | 1997-12-02 | 2005-09-21 | Elan Pharm Inc | N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease |
US6660843B1 (en) | 1998-10-23 | 2003-12-09 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
US7252952B2 (en) | 2000-03-06 | 2007-08-07 | Rigel Pharmaceuticals, Inc. | In vivo production of cyclic peptides for inhibiting protein—protein interaction |
US6686443B1 (en) | 2000-05-26 | 2004-02-03 | The Regents Of The University Of California | Chemical reagents for formation of disulfide bonds in peptides |
WO2004092202A1 (en) | 2003-04-07 | 2004-10-28 | Novetide, Ltd. | Process for production of cyclic peptides |
EP1484336A1 (en) | 2003-06-02 | 2004-12-08 | Pevion Biotech Ltd. | Methods for synthesizing conformationally constrained peptides, peptidometics and the use thereof as synthetic vaccines |
IL169622A0 (en) | 2005-07-11 | 2007-07-04 | Yeda Res & Dev | Methods of screening modulators of interleukin-32 (il-32)modulators of il-32 identified by said methods and their use |
EP1907423A4 (en) * | 2005-07-13 | 2010-01-13 | Coimmune Inc | CATALYTIC IMMUNOGLOBULINS |
CA2644952A1 (en) | 2006-03-01 | 2007-09-13 | The University Of Utah Research Foundation | Methods and compositions related to cyclic peptide synthesis |
NZ574215A (en) | 2006-07-18 | 2012-07-27 | Sanofi Aventis | Antagonist antibody against epha2 for the treatment of cancer |
WO2010010469A2 (en) | 2008-07-25 | 2010-01-28 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Abeta (x-38..43) oligomers, and processes, compositions, and uses thereof |
US8410243B2 (en) | 2008-12-17 | 2013-04-02 | The Governors Of The University Of Alberta | Aromatic ether-containing fluorene monomers, processes for their preparation and polymerization thereof |
JP2012513471A (ja) | 2008-12-22 | 2012-06-14 | スローン − ケタリング・インスティテュート・フォー・キャンサー・リサーチ | アルツハイマー病および癌の治療のためのクマリン系化合物 |
KR20130043088A (ko) | 2010-02-09 | 2013-04-29 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 면역검정 표준물 및 검정내 보정 표준물을 사용한 임상 바이오마커의 측정 |
KR101831459B1 (ko) | 2010-03-03 | 2018-04-04 | 더 유니버시티 오브 브리티시 콜롬비아 | 올리고머 특이적 아밀로이드 베타 에피토프 및 항체 |
US9320793B2 (en) | 2010-07-14 | 2016-04-26 | Acumen Pharmaceuticals, Inc. | Method for treating a disease associated with soluble, oligomeric species of amyloid beta 1-42 |
AU2012335014A1 (en) | 2011-11-10 | 2014-06-19 | Cangene U.S., Incorporated | Compositions and methods for treating Alzheimer's disease |
-
2011
- 2011-03-03 KR KR1020127025471A patent/KR101831459B1/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-03-03 BR BR112012022229A patent/BR112012022229A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-03-03 US US13/582,308 patent/US9216217B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-03-03 SG SG2012064770A patent/SG183854A1/en unknown
- 2011-03-03 CN CN201180020228.1A patent/CN102858796B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-03-03 NZ NZ602548A patent/NZ602548A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-03-03 CA CA2791538A patent/CA2791538C/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-03-03 JP JP2012555265A patent/JP6190113B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2011-03-03 EP EP15203261.1A patent/EP3056510B1/en active Active
- 2011-03-03 EP EP11750124.7A patent/EP2542571B1/en active Active
- 2011-03-03 RU RU2012139043A patent/RU2644335C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-03-03 WO PCT/CA2011/000238 patent/WO2011106885A1/en active Application Filing
- 2011-03-03 AU AU2011223456A patent/AU2011223456A1/en not_active Abandoned
- 2011-03-03 MX MX2012010175A patent/MX341536B/es active IP Right Grant
-
2012
- 2012-08-30 IL IL221695A patent/IL221695B/en not_active IP Right Cessation
- 2012-09-03 CL CL2012002438A patent/CL2012002438A1/es unknown
- 2012-09-14 ZA ZA2012/06916A patent/ZA201206916B/en unknown
- 2012-10-03 CO CO12173790A patent/CO6640211A2/es not_active Application Discontinuation
- 2012-11-12 US US14/357,399 patent/US20140314773A1/en not_active Abandoned
-
2015
- 2015-12-16 US US14/971,529 patent/US9849165B2/en active Active
-
2016
- 2016-05-19 JP JP2016100462A patent/JP6494565B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997037228A1 (en) * | 1996-03-29 | 1997-10-09 | The Trustees Of Boston University | Methods for diagnosing and treating alzheimer's disease |
WO2006047254A1 (en) * | 2004-10-22 | 2006-05-04 | Regents Of The University Of Minnesota | Assemblies of oligomeric amyloid beta protein and uses thereof |
WO2010002251A1 (en) * | 2008-07-01 | 2010-01-07 | De Staat Der Nederlanden, Vert. Door De Minister Van Vws | Vaccine against amyloid folding intermediate |
WO2010011947A2 (en) * | 2008-07-25 | 2010-01-28 | Abbott Laboratories | AMYLOID ß PEPTIDE ANALOGUES, OLIGOMERS THEREOF, PROCESSES FOR PREPARING AND COMPOSITIONS COMPRISING SAID ANALOGUES OR OLIGOMERS, AND THEIR USES |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
O’NUALLAIN B. et al. "Human plasma contains cross-reactive Aβ conformer-specific IgG antibodies." Biochemistry, 2008, 47: 12254-12256. * |
O’NUALLAIN B. et al. "Human plasma contains cross-reactive Aβ conformer-specific IgG antibodies." Biochemistry, 2008, 47: 12254-12256. ПОПОВА М.С., СТЕПАНИЧЕВ М.Ю., "Индукция клеточного цикла, амилоид-бета и свободные радикалы в механизме развития нейродегенеративных процессов в мозге." Нейрохимия, 2008, 25(3): 170-178. * |
ПОПОВА М.С., СТЕПАНИЧЕВ М.Ю., "Индукция клеточного цикла, амилоид-бета и свободные радикалы в механизме развития нейродегенеративных процессов в мозге." Нейрохимия, 2008, 25(3): 170-178. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6494565B2 (ja) | 2019-04-03 |
MX2012010175A (es) | 2012-11-23 |
KR101831459B1 (ko) | 2018-04-04 |
US20130084283A1 (en) | 2013-04-04 |
CA2791538C (en) | 2019-04-16 |
JP2016193914A (ja) | 2016-11-17 |
EP2542571A4 (en) | 2013-07-31 |
EP3056510A1 (en) | 2016-08-17 |
CL2012002438A1 (es) | 2013-09-13 |
AU2011223456A1 (en) | 2012-10-18 |
US20160228522A1 (en) | 2016-08-11 |
JP6190113B2 (ja) | 2017-08-30 |
CA2791538A1 (en) | 2011-09-09 |
SG183854A1 (en) | 2012-10-30 |
EP2542571A1 (en) | 2013-01-09 |
JP2013524774A (ja) | 2013-06-20 |
ZA201206916B (en) | 2014-03-26 |
KR20130045850A (ko) | 2013-05-06 |
US20140314773A1 (en) | 2014-10-23 |
EP3056510B1 (en) | 2018-10-03 |
WO2011106885A1 (en) | 2011-09-09 |
NZ602548A (en) | 2014-12-24 |
US9216217B2 (en) | 2015-12-22 |
RU2012139043A (ru) | 2014-04-10 |
CN102858796A (zh) | 2013-01-02 |
EP2542571B1 (en) | 2016-05-25 |
MX341536B (es) | 2016-08-24 |
CN102858796B (zh) | 2016-05-11 |
CO6640211A2 (es) | 2013-03-22 |
US9849165B2 (en) | 2017-12-26 |
BR112012022229A2 (pt) | 2016-07-05 |
IL221695B (en) | 2019-01-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2644335C2 (ru) | Эпитоп, специфичный к олигомеру амилоида бета, и антитела | |
JP6290212B2 (ja) | タウオパチーの処置方法 | |
JP6446443B2 (ja) | タウオパチーの処置方法 | |
AU2006326284B2 (en) | A beta 1-42 specific monoclonal antibodies with therapeutic properties | |
US9535076B2 (en) | Methods and compositions for eliciting an amyloid-selective immune response | |
US11919947B2 (en) | Antibody binding active α-synuclein | |
JP2017512751A (ja) | タウペプチド、抗タウ抗体、およびそれらの使用方法 | |
BR112013008765B1 (pt) | Anticorpos monoclonais anti-tau humano isolados ou um fragmento de ligação à tau dos mesmos, métodos de preparação dos mesmos, polinucleotídeo ou polinucleotídeos, vetor ou vetores, composição, método in vitro de diagnóstico ou monitoramento da progressão de uma tauopatia neurodegenerativa em um indivíduo humano, método in vitro para diagnosticar uma tauopatia neurodegenerativa em um indivíduo humano, e kit útil para o diagnóstico de uma tauopatia neurodegenerativa | |
TW200911830A (en) | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide | |
CA2753621A1 (en) | Antibodies and epitopes specific to misfolded prion protein | |
JP2018139530A (ja) | 認知症治療又は予防のためのヒト化抗体及びその製造方法、並びにそれを用いた認知症治療剤又は予防剤 | |
JP7254931B2 (ja) | 抗アルファ-シヌクレイン抗体およびその使用 | |
AU2013205000B2 (en) | Oligomer-specific amyloid beta epitope and antibodies | |
JP2018508193A (ja) | メディンを認識する抗体 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190304 |