JP2008528638A - ポリペプチドの安定化液体処方 - Google Patents

ポリペプチドの安定化液体処方 Download PDF

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Abstract

本発明は、ポリペプチド、特に、抗体など、例えば抗Aβ抗体などの治療用抗原結合性ポリペプチドの安定化を維持するための処方を提供する。該処方は、一般に、副生物形成、例えば、高分子量ポリペプチド凝集体、低分子量ポリペプチド分解断片およびそれらの組み合わせの形成を阻害するように、十分量の酸化防止剤を含んでいる。本発明の処方は、マンニトールなどの等張化剤、および緩衝剤またはヒスチジンなどのアミノ酸を所望により含んでおり、したがって該処方は、幾つかの異なる投与経路に適合している。

Description

本出願は、「ポリペプチドの安定化液体処方」という名称の出願番号第60/648639号(2005年1月28日出願)を有する米国仮特許出願の利益を請求する。前掲の出願の全内容を出典明示により本明細書の一部とする。
本願全体を通して引用されるその他の全ての特許、特許出願、および参考文献は、その全体を出典明示により本明細書の一部とする。
任意のポリペプチドの薬理学的利益を最大限とするためには、安定であり、容易で再現性良く製造され、標準的な投与経路に合わせて設計されている最終剤形を有することが必須である。具体的には、後に所望の投与経路を介して投与できるポリペプチド最終剤形へと、製造を進めるのに適した、安定な濃縮形態のバルクタンパク質、例えば治療用ポリペプチドを有することが望ましい。
バルクポリペプチド、最終剤形の双方で、ポリペプチド安定性は、イオン強度、pH、温度、凍結/融解の反復サイクル、せん断力などの因子から影響を受けることができる。ほんの数例を挙げると、変性および凝集(可溶性および不溶性凝集体の形成)を含めた物理的不安定性、ならびに例えば加水分解、脱アミノ化および酸化を含めた化学的不安定性の結果、活性なポリペプチドが失われる恐れがある。タンパク質医薬の安定性に関する総説については、例えばManning,et al.,Pharmaceutical Research 6:903−918(1989)を参照されたい。その上、処方中に担体ポリペプチドが含まれていない場合は、安定性を維持することが望ましい。
こうしたポリペプチドの考え得る不安定性が起こり得ることは広く認識されているが、あるポリペプチドの調査を終了するまでは、特定のタンパク質に存在し得る特定の不安定性問題を予測することは、不可能である。こうしたポリペプチドのいずれも、活性の低下、毒性の増加および/または免疫原性の増加を示すポリペプチド副生物または誘導体の形成を起こす可能性を有する。実際、ポリペプチドの析出は、血栓症、剤形の不均一および免疫反応を起こす恐れがある。したがって、ポリペプチドの任意の医薬処方の安全性および効力は、それの安定性と直接関係している。
したがって、濃縮工程中のタンパク質安定性を改善すること、ならびに他の担体タンパク質の非存在下、多様な投与経路にとって十分高い濃度で安定性を賦与することを目的とした方法に対する必要性が、当分野に依然として存在する。
本発明は、安定性を賦与し、組み入れた生物活性タンパク質、特に抗原結合性ポリペプチド、例えば抗体またはその断片の生物活性を維持するように設計した処方を提供する。本発明は、更にポリペプチド処方、即ち、不要なポリペプチド副生物の形成に耐性を示す、ポリペプチドの安定化液体処方も提供する。
治療用の抗原結合性ポリペプチドの完全性は、そのポリペプチドが保存中に副生物、例えば凝集体または分解断片を形成すれば、生物活性が失われ、その結果、単位用量当たりのその分子の治療活性が脅かされる恐れがあるので、特に重要である。その上、ある種の生体兆候におけるデリバリーおよび使用、例えば、ポリペプチドが血液脳関門(BBB)を通過し、標的抗原に結合しなければならない神経変性状態の治療を目的とする、特化した機能を意図した治療用ポリペプチドを安定化したいという切迫した願望もある。
このような使用のために安定化しなければならない例示的抗体には、疾患標的、特に抗原性疾患標的、例えば癌抗原、自己免疫抗原、アレルゲンおよび病原体との結合に適した抗体が挙げられる。
したがって、本発明は、それだけに限らないが、以下の項目:
酸化防止剤の添加により、ポリペプチド副生物の形成に対して安定化されている、ポリペプチドの安定化液体処方、
多様な投与経路における使用に適切である、ポリペプチドの安定化液体処方、
ポリペプチドの安定化液体処方として医薬に使用するための、治療用ポリペプチドの調製法、および
神経変性疾患の治療における使用に適した、Aβ結合性ポリペプチドの安定化処方
を包含する幾つかの利点を有する。
したがって一態様では、本発明は、安定性を賦与し、組み入れたポリペプチドの生物活性を維持するように設計した、ポリペプチドの安定化液体処方を提供する。更に別の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチドおよび酸化防止剤、例えばメチオニンまたはその類縁体を含有する処方であって、該酸化防止剤が、処方の保存中にポリペプチド副生物の形成を低下させるのに十分な量で存在する処方を提供する。
一実施形態では、該処方の治療活性な抗原結合性ポリペプチド成分は、抗体(例えば、IgM、IgG、IgG、IgG、IgG、IgG)、(例えば、ヒトのIgM、IgG、IgG、IgG、IgG、IgGイソタイプ抗体)、抗体Fv断片、抗体Fab断片、抗体Fab’(2)断片、抗体Fd断片、一本鎖抗体(scFv)、単一ドメイン抗体断片(Dab)、少なくとも1個の抗体相補性決定領域(CDR)を含むβプリーツシートポリペプチド、または少なくとも1個の抗体相補性決定領域(CDR)を含む非球状ポリペプチドである。
特定の実施形態では、該ポリペプチド液体処方は、高分子量ポリペプチド凝集体、低分子量ポリペプチド分解生成物、またはそれらの組み合わせなどの不要な副生物の形成に対して安定化されている。
治療用の該抗原結合性ポリペプチドが抗体である、関連の実施形態では、通常の高分子量凝集体は、例えば抗体−抗体複合体、抗体−抗体断片複合体、抗体断片−抗体断片複合体、またはそれらの組み合わせである。一般に、高分子量の複合体または副生物は、該抗原結合性ポリペプチドの単量体より大きい、例えばIgG抗体の場合、約150kDより大きい分子量を有する。
該治療用ポリペプチドが抗体である、別の関連実施形態では、通常の低分子量ポリペプチド分解生成物は、例えば、抗体軽鎖、抗体重鎖、抗体軽鎖・重鎖複合体、またはそれらの組み合わせからなる複合体である。一般に、低分子量の複合体または副生物は、該抗原結合性ポリペプチドの単量体より小さい、例えばIgG抗体の場合、約150kDより小さい分子量を有する。
一態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)と、不要な副生物の形成を抑制するのに十分な量の酸化防止剤として存在するメチオニンと、処方を投与、例えば静脈内注射に適合させるのに十分な量で存在する等張化剤(例えば、マンニトール)と、生理的に適正なpHを維持するのに十分な量で存在するアミノ酸(例えば、ヒスチジン)またはその誘導体との安定化処方を提供する。
一態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)と、不要な副生物の形成を抑制するのに十分な量の酸化防止剤として存在するメチオニンと、処方を静脈内注射に適合させるのに十分な量で存在する等張化剤(例えば、マンニトール)と、生理的に適正なpHを維持するのに十分な量で存在するアミノ酸(例えば、ヒスチジン)またはその誘導体との安定化処方を提供する。
別の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)と、マンニトールと、ヒスチジンとを含む処方を提供する。別の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)と、メチオニンと、マンニトールと、ヒスチジンとを含む安定化処方を提供する。
ある種の実施形態では、治療活性な該抗原結合性ポリペプチドは、例えば癌抗原、自己免疫抗原、アレルゲンおよび病原体を含む抗原クラスから選択される抗原に結合する、抗体(またはその部分もしくは断片)である。
ある種の実施形態では、治療活性な該抗原結合性ポリペプチドは、Aβ結合性ポリペプチド、例えば抗Aβ抗体(またはその部分もしくは断片)である。幾つかの処方では、少なくとも1種のAβ結合性ポリペプチドは、例えば、Aβの残基1〜7番、1〜5番、3〜7番、3〜6番、13〜28番、15〜24番、16〜24番、16〜21番、19〜22番、33〜40番、33〜42番内、またはそのFab、Fab’(2)もしくはFv断片内のエピトープに特異的に結合する抗Aβ抗体である。例示的な抗Aβ抗体は、例えばAβの残基1〜7番、1〜5番、3〜7番または3〜6番内などの、Aβの残基1〜10番内のエピトープに特異的に結合する。他の例示的な抗Aβ抗体は、例えばAβの残基16〜21番または19〜22番内などの、Aβの残基13〜28番内のエピトープに特異的に結合する。更に他の例示的な抗Aβ抗体は、例えばAβの33〜40番または33〜42番などの、AβのC末端エピトープに特異的に結合する。一実施形態では、該Aβ抗体は、ヒト化抗体、例えばヒト化3D6抗体、ヒト化10D5抗体、ヒト化12B4抗体、ヒト化15C11抗体、またはヒト化12A11抗体である。
治療活性な該抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)は、約0.1mg/ml〜約200mg/ml(例えば、約20mg/mlまたは30mg/ml)存在してもよい。該抗体のイソタイプは、IgM、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、または他の任意の医薬として許容可能なイソタイプのいずれでもよい。好ましい処方では、該イソタイプは、ヒトIgG1またはヒトIgG4である。幾つかの液体処方では、該抗Aβ抗体の濃度は、約0.1mg/ml〜約60mg/ml、約40mg/ml〜約60mg/ml、約50mg/ml、約30mg/ml、約17mg/ml〜約23mg/ml、約20mg/ml、約17mg/ml、約10mg/ml、約5mg/ml、約2mg/ml、または約1mg/ml、好ましくは約17mg/ml〜約23mg/mlである。
ある種の実施形態では、マンニトールは、処方の等張性を維持するのに十分な量で存在する。マンニトールは、約2%w/v〜約6%w/v(例えば、約4%w/v)で存在することができる。前記各態様の多様な実施形態では、ヒスチジンは、生理的に適正なpHを維持するのに十分な量で存在し得る。ヒスチジン(例えば、L−ヒスチジン)は、約0.1mM〜約25mM(例えば、約10mM)で存在してもよい。
他の実施形態では、該処方は、メチオニンなどの酸化防止剤を更に含んでもよい。メチオニンは、約0.1mM〜約25mM(例えば、約10mM)で存在してもよい。別の実施形態では、該処方は、ポリソルベート80などの安定剤を含んでもよい。ポリソルベート80は、約0.001%w/v〜約0.01%w/v(例えば、約0.005%w/v)で存在し得る。ある種の実施形態では、該処方は、約5〜約7(例えば、約6)のpHを有する。
ある種の実施形態では、該処方は、凍結に対して安定とし得る。その上、該処方は、非経口的、静脈内、筋肉内、皮下、頭蓋内または硬膜外の投与に適切とし得る。多様な実施形態では、該処方は、対象の脳または脊髄液への標的デリバリーに適切とし得る。他の実施形態では、該処方は、防腐剤を実質的に含まなくもよい。該処方は、最低約12ヶ月、最低約18ヶ月、最低約24ヶ月、または最低約30ヶ月の間安定とし得る。多様な実施形態では、該処方は、約−80℃〜約40℃、約0℃〜約25℃、または約2℃〜約8℃で安定である。幾つかの処方は、最低約12ヶ月、最低約18ヶ月、最低約24ヶ月、または最低約30ヶ月の間安定である。幾つかの処方は、約−80℃〜約40℃、約0℃〜約25℃、約0℃〜約10℃、好ましくは約−80℃〜約−50℃、または約2℃〜約8℃で安定である。幾つかの処方は、凍結する前の温度から約10℃で最低約12ヶ月間安定であり、約5.5〜約6.5のpHを有する。
特定の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約20mg/ml、L−ヒスチジン約10mM、メチオニン約10mM、マンニトール約4%を含み、約6のpHを有する、静脈内投与に適切な処方を提供する。別の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約20mg/ml、L−ヒスチジン約10mM、メチオニン約10mM、マンニトール約4%、ポリソルベート80約0.01%を含み、約6のpHを有する、静脈内投与に適切な処方を提供する。別の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約20mg/ml、L−ヒスチジン約10mM、メチオニン約10mM、マンニトール約4%、ポリソルベート80約0.005%を含み、約6のpHを有する、静脈内投与に適切な処方を提供する。
幾つかの処方は、凍結する前の温度から約10℃で最低約12ヶ月間安定であり、約5.5〜約6.5のpHを有する。このような処方は、濃度約1mg/ml〜約30mg/mlの少なくとも1種の治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)、濃度約4%w/vのマンニトールまたは濃度約150mMのNaCl、濃度約5mM〜約10mMのヒスチジンまたはコハク酸、およびメチオニン約10mMを含む。このような一処方は、約6.0のpH、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約1mg/ml、ヒスチジン約10mM、およびマンニトール約4%w/vを有する。他の処方は、約2℃〜約8℃の温度で最低約24ヶ月間安定であり、濃度約0.001%w/v〜約0.01%w/vのポリソルベート80を含む。このような処方の幾つかは、約6.0〜約6.5のpHを有し、ヒスチジン約10mM、マンニトール約4%w/v、および治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約1mg/ml、約2mg/mlまたは約5mg/mlを含む。このような他の処方は、好ましくは約6.0〜約6.2のpHで、ヒスチジン約10mM、マンニトール約4%w/v、ポリソルベート80約0.005%、および治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約10mg/ml、約20mg/mlまたは約30mg/mlを含む。
好ましい処方は、約2℃〜約8℃の温度で最低約24ヶ月間安定であり、約5.5〜約6.5のpHを有し、ヒト化3D6抗体約2mg/ml〜約23mg/ml、好ましくは約17mg/ml〜約23mg/ml、ヒスチジン約10mM、およびメチオニン約10mMを含む。好ましくは、該処方はマンニトール約4%w/vを更に含む。好ましくは、該処方は、濃度約0.001%w/v〜約0.01%w/vのポリソルベート80、より好ましくはポリソルベート80約0.005%w/vを含む。このような処方では、該ヒト化3D6抗体は、約20mg/ml〜約23mg/mlの濃度で存在することができる。
別の処方は、約2℃〜約8℃の温度で最低約24ヶ月間安定であり、約5.5〜約6.5のpHを有し、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約2mg/ml〜約23mg/ml、コハク酸約10mM、メチオニン約10mM、マンニトール約4%w/v、およびポリソルベート80約0.005%w/vを含む。このような処方の幾つかでは、治療活性な該抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)は、約17mg/ml〜約23mg/mlの濃度で存在する。
本発明は、約−50℃〜約−80℃で融解した際に安定であり、約6.0のpHを有し、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約40〜約60mg/ml、ヒスチジン約1.0mg/ml〜約2.0mg/ml、メチオニン約1.0mg/ml〜約2.0mg/ml、およびポリソルベート80約0.005mg/mlを含む処方も提供する。好ましくは、マンニトールが除外される。
本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)、マンニトールおよびヒスチジンを含む液体処方も提供する。このような処方の幾つかでは、治療活性な該抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)は、約1mg/ml〜約30mg/mlで存在している。好ましくは、マンニトールは、処方の等張性を維持するのに十分な量で存在する。好ましくは、ヒスチジンは、生理的に適正なpHを維持するのに十分な量で存在する。このような一処方は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約20mg/ml、L−ヒスチジン約10mM、メチオニン約10mM、マンニトール約4%を含み、約6のpHを有する。このような別の処方は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約30mg/ml、コハク酸約10mM、メチオニン約10mM、マンニトール約6%を含み、約6.2のpHを有する。このような更に別の処方は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約20mg/ml、L−ヒスチジン約10mM、メチオニン約10mM、マンニトール約4%、ポリソルベート80約0.005%を含み、約6のpHを有する。このような別の処方は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約10mg/ml、コハク酸約10mM、メチオニン約10mM、マンニトール約10%、ポリソルベート80約0.005%を含み、約6.5のpHを有する。
このような更に別の処方は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約5mg/ml〜約20mg/ml、L−ヒスチジン約5mM〜約10mM、メチオニン約10mM、マンニトール約4%、ポリソルベート80約0.005%を含み、約6.0〜約6.5のpHを有する。このような更に別の処方は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約5mg/ml〜約20mg/ml、L−ヒスチジン約5mM〜約10mM、メチオニン約10mM、NaCl約150mM、ポリソルベート80約0.005%を含み、約6.0〜約6.5のpHを有する。
本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約20mg/ml、L−ヒスチジン約10mM、メチオニン約10mM、マンニトール約4%を含み、約6のpHを有する、静脈内投与に適切な処方も提供する。好ましくは、このような処方はポリソルベート80約0.005%を含む。
本発明は、液体医薬処方中の抗原結合性ポリペプチド、例えば抗体の安定性を高める方法であって、該ポリペプチドは、そうしないと液体処方中での保存時に副生物形成を示す恐れがある、前記方法を提供する。したがって、この方法は、酸化防止剤、例えばメチオニンまたはその類縁体を、副生物の形成量を低下させるのに十分な量で該処方中に組み入れることを含む。
本発明は、約−50℃〜約−80℃の温度で保存後、約2℃〜約8℃の温度で保存することになる、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)処方の安定性を維持する方法であって、(i)治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約40mg/ml〜約60mg/ml、L−ヒスチジン約1mg/ml〜約2mg/ml、メチオニン約1mg/ml〜約2mg/mlおよびポリソルベート80約0.05mg/mlを混合し、(ii)pHを約6.0に調節し、(iii)ろ過して低温容器中に入れ、更に凍結し、(iv)融解し、(v)マンニトール約4%またはNaCl約150mM、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約2mg/ml〜約20mg/ml、ヒスチジン約5mM〜約10mM、メチオニン約10mMおよびポリソルベート80約0.005%の最終濃度とするのに十分な量のマンニトールまたはNaClおよび希釈剤を添加し、(vi)ろ過し、(vii)ガラスバイアルに移して密封し、(viii)約2℃〜約8℃の温度で保存することを含む方法も提供する。
本発明は、本明細書に記載の処方入り容器および使用説明書を含んだキットも提供する。
本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約10mg〜約250mg、マンニトール約4%またはNaCl約150mM、ヒスチジンまたはコハク酸約5mM〜約10mM、およびメチオニン約10mMの処方を含む医薬単位剤形も提供する。このような医薬単位剤形の幾つかは、ポリソルベート80を約0.001%〜約0.1%含む。このような医薬単位剤形の幾つかは、治療活性な該抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)を約40mg〜約60mg、約60mg〜約80mg、約80mg〜約120mg、約120mg〜約160mgまたは約160mg〜約240mg含む。このような剤形の幾つかは、患者に投与する前に、約2℃〜約8℃の温度でガラスバイアル中に維持できる。
その上、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)約10mg〜約250mg、マンニトール約4%またはNaCl約150mM、ヒスチジン約5mM〜約10mM、およびメチオニン約10mMを含む処方入りのガラスバイアルを含んだ治療製品も提供する。このような治療製品の幾つかは、患者において約0.15mg/kg〜約5mg/kgの用量を実現するのに必要な適当な容量を使用するために、説明書きを含む使用法ラベルを更に含む。該バイアルは、通常1mL、2mL、5mL、10mL、25mL、または50mLのバイアルである。このような治療製品の幾つかの用量は、約0.5mg/kg〜約3mg/kg、好ましくは約1mg/kg〜約2mg/kgである。幾つかのこのような治療製品では、治療活性な該抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)の濃度は、約10mg/ml〜約60mg/ml、好ましくは約20mg/mlである。該治療製品は、好ましくはポリソルベート80を約0.005%含む。幾つかのこのような治療製品の処方は、皮下投与または静脈内投与のためである。
別の態様では、本発明は、液体医薬処方中の抗原結合性ポリペプチド、例えば抗体の安定性を高める方法であって、該ポリペプチドは、そうしないと液体処方中での保存時に副生物形成を示す恐れがある、前記方法を提供する。したがって、この方法は、酸化防止剤、例えばメチオニンまたはその類縁体を、副生物の形成量を低下させるのに十分な量で該処方中に組み入れることを含む。
更に別の態様では、本発明は、本明細書に記載の処方入り容器および使用説明書を含んだキットを提供する。
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細なる説明および特許請求の範囲から明らかとなろう。
本明細書および特許請求の範囲を明確に理解するために、以下の定義を便宜のために下記に示す。
本明細書で使用する場合、用語「抗原結合性ポリペチド」には、標的分子、例えば抗原、例えばAβペプチド(複数も)、または前記Aβペプチド内のエピトープ(複数も)に特異的に結合できるポリペチドが含まれる。抗原結合性ポリペチドは、通常、そのポリペチドに特異結合特性を賦与する1個または複数の可変領域または相補性決定領域(CDR)を含む、免疫グロブリンまたは免疫グロブリン様ドメイン(例えば、受容体)の少なくとも機能部を含んでいる。好ましい抗原結合性ポリペチドには、抗体、例えばIgM、IgG1、IgG2、IgG3またはIgG4が挙げられる。
用語「抗体」には、モノクローナル抗体(全長モノクローナル抗体を含む)、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、キメラ抗体、CDRグラフト抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体および一本鎖抗体(scFv)が含まれる。用語「一本鎖抗体」は、軽鎖および重鎖からなる2ポリペチド鎖構造であって、前記各鎖が例えば連鎖間ペプチドリンカーで安定化された構造を有し、抗原に対する特異的結合能を有するタンパク質を指す。用語「抗体断片」には、F(ab’)2断片、Fab断片、Fd断片、Fv断片および単一ドメイン抗体断片が含まれる。
用語「ドメイン」とは、免疫グロブリンの折畳部を含んだ、軽鎖または重鎖ポリペチドの球状領域を指す。該免疫グロブリン折畳部は、βプリーツシート二次構造からなり、ジスルフィド結合を含む。本明細書では更に、ドメインを「定常」または「可変」とも称するが、この呼称は、「定常」ドメインの場合は多様なクラス員のドメイン内で配列変動が相対的に欠如していること、または「可変」ドメインの場合は多様なクラス員のドメイン内で相当な変動があることに基づく。抗体またはポリペプチド「ドメイン」は、当分野では抗体またはポリペプチド「領域」と互換的に称することも多い。抗体軽鎖の「定常」ドメインは、「軽鎖定常領域」、「軽鎖定常ドメイン」、「CL」領域または「CL」ドメインと互換的に称する。抗体重鎖の「定常」ドメインは、「重鎖定常領域」、「重鎖定常ドメイン」、「CH」領域または「CH」ドメインと互換的に称する。抗体軽鎖の「可変」ドメインは、「軽鎖可変領域」、「軽鎖可変ドメイン」、「VL」領域または「VL」ドメインと互換的に称する。抗体重鎖の「可変」ドメインは、「重鎖定常領域」、「重鎖定常ドメイン」、「VH」領域または「VH」ドメインと互換的に称する。
用語「領域」とは、抗体鎖または抗体鎖ドメインの一部または部分(例えば、本明細書で定義した場合、重鎖または軽鎖の一部または部分、あるいは定常または可変ドメインの一部または部分)、ならびに前記鎖またはドメインのもっと個々の一部または部分を指すこともできる。例えば、重鎖および軽鎖、または重鎖および軽鎖の可変ドメインは、本明細書で定義した場合、「フレームワーク領域」または「FR」の間に分散した「相補性決定領域」または「CDR」を含んでいる。
用語「抗Aβ抗体」は、Aβペプチドのエピトープ(複数も)に結合できる抗体(およびその断片)を包含する。抗Aβ抗体には、例えば米国特許公開第20030165496A1号、米国特許公開第20040087777A1号、国際特許公開第WO02/46237A3号および国際特許公開第WO04/080419A2号に記載の抗体が挙げられる。他の抗Aβ抗体は、例えば、共に「Humanized Antibodies that Recognize Beta Amyloid Peptide」という名称の国際特許公開第WO03/077858A2号および国際特許公開第WO04/108895A2号、「Anti−Aβ Antibodies」という名称の国際特許公開第WO03/016466A2号、「Humanized Antibodies that Sequester Amyloid Beta Peptide」という名称の国際特許公開第WO0162801A2号、および「Humanized Antibodies」という名称の国際特許公開第WO02/088306A2号に記載されている。
用語「断片」は、無傷または完全な抗体または抗体鎖より少ないアミノ酸残基を含む、抗体または抗体鎖の一部または部分を指す。断片は、無傷または完全な抗体または抗体鎖の化学的または酵素的処理を介して得ることができる。断片は、組換え手段によっても得ることができる。例示的断片には、Fab、Fab’、F(ab’)2および/またはFvが含まれる。用語「抗原結合性断片」は、抗原に結合するか、または抗原結合(即ち、特異結合)に関して無傷抗体(即ち、それの由来源の無傷抗体)と競合する、免疫グロブリンまたは抗体のポリペプチド断片を指す。
用語「コンホメーション」は、タンパク質またはポリペプチド(例えば、抗体、抗体鎖、そのドメインまたは領域)の三次構造を指す。例えば、語句「軽鎖(または重鎖)コンホメーション」とは、軽鎖(または重鎖)可変領域の三次構造を指し、「抗体コンホメーション」または「抗体断片コンホメーション」とは、抗体またはその断片の三次構造を指す。
抗体の「特異結合」とは、該抗体が、特定の抗原またはエピトープに対して相当な親和性を示し、一般に交差反応性をさほど示さないことを言う。例示的な実施形態では、該抗体は交差反応性を示さない(例えば、非Aβペプチド、または離れたエピトープ、例えばAβ上の非隣接エピトープと交差反応をしない)。「相当な」または好ましい結合とは、少なくとも10、10、10、10−1または1010−1の親和性を有する結合を包含する。10−1より大、好ましくは10−1より大なる親和性が、より好ましい。ここに示した値の中間に入る値も、本発明の範囲に入ることを意図しており、好ましい結合親和性は、ある範囲の親和性、例えば10〜1010−1、好ましくは10〜1010−1、より好ましくは10〜1010−1として示すことができる。「有意な交差反応性を示さない」抗体は、望ましくないもの(例えば、望ましくないタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド)とは相当程度に結合しないと見込まれる抗体である。例えば、Aβに特異的に結合する抗体は、Aβに相当程度に結合しようが、非Aβタンパク質またはペプチド(例えば、プラーク中に含まれる非Aβタンパク質またはペプチド)とは有意に反応しないであろう。特定のエピトープに特異的な抗体は、例えば、同じタンパク質またはペプチド上の離れたエピトープとはさほど交差反応をしないであろう。特異結合は、このような結合を定量する当分野認知の手段に従って定量することができる。好ましくは、特異結合は、スキャッチャード分析および/または結合タンパク競合アッセイに従って定量する。
結合性断片は、組換えDNA技法、または無傷な免疫グロブリンの酵素切断もしくは化学切断によって生成される。結合性断片には、Fab、Fab’、F(ab’)、Fv、一本鎖および一本鎖抗体が含まれる。「二重特異性」または「二官能性」の免疫グロブリンまたは抗体以外では、免疫グロブリンまたは抗体は、同一の結合部位の各々を有すると理解される。「二重特異性」または「二官能性抗体」は、2種の重鎖/軽鎖対および2種の結合部位を有する人工的ハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはFab’断片の連結を含めた多様な方法によって生成できる。例えば、Songsivilai & Lachman,Clin.Exp.Immunol.79:315−321(1990);Kostelny et al.,J.Immunol.148,1547−1553(1992)を参照されたい。
「抗原」は、抗体が特異的に結合する抗原決定基を含んだ分子(例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチドまたは糖質)である。
用語「エピトープ」または「抗原決定基」とは、免疫グロブリンまたは抗体(もしくはその抗原結合性断片)が特異的に結合する、抗原上の部位を指す。エピトープは、隣接アミノ酸群、またはタンパク質の三次折畳によって並置された非隣接アミノ酸群から形成できる。隣接アミノ酸群から形成されるエピトープは、変性溶媒に曝しても通常保持されているが、三次折畳によって形成されるエピトープは、変性溶媒で処理すると通常失われる。エピトープは、特異な空間的コンホメーション中にアミノ酸を通常少なくとも3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個または15個含む。エピトープの空間的コンホメーションを決定する方法には、例えばX線結晶解析、二次元核磁気共鳴などが挙げられる。例えばEpitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology,Vol.66,G.E.Morris,Ed.(1996)を参照されたい。
「安定化処方」または「ポリペプチドの安定化液体処方」という用語には、その中のポリペプチドが、保存時に物理的・化学的同一性および完全性を本質的に保持している処方が含まれる。タンパク質安定性を測定する多種の分析法が、当分野で利用でき、本明細書に記載されている(総説としては、Peptide and Protein Drug Delivery,247−301,Vincent Lee Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,Pubs.(1991)およびJones,A.Adv.Drug Delivery Rev.10:29−90(1993))。安定性は、選定した温度で選定した期間測定することができる。迅速な試験のためには、該処方をより高いまたは「加速された」温度、例えば40℃に2週から1ヶ月以上の間保ち、その後安定性を測定してもよい。例示的な実施形態では、該処方は、成分ポリペプチドの副生物、例えば高分子量凝集体生成物、低分子量の分解もしくは断片化生成物、またはそれらの組み合わせの形成に対する耐性が高い。
用語「副生物」には、所与の処方中にある治療性ポリペプチドの割合を減少または低下させる不要な生成物が含まれる。通常の副生物には、治療性ポリペプチドの凝集体、治療性ポリペプチドの断片(例えば、脱アミド化または加水分解による該ポリペプチドの分解で生成する)、またはそれらの組み合わせが含まれる。
用語「高分子量ポリペプチド凝集体」には、治療性ポリペプチドの凝集体、後に凝集する、治療性ポリペプチドの断片(例えば、加水分解などによる該ポリペプチドの分解で生成する)またはそれらの組み合わせが含まれる。高分子量凝集体は、通常、治療性単量体ポリペプチドより大なる分子量を有する複合体である。抗体、例えばIgG抗体の場合、このような凝集体は約150kDより大きい。しかし、他の治療性ポリペプチド、例えば、通常25kDの分子量を有する一本鎖抗体の場合、このような凝集体は約25kDより大なる分子量を有しよう。
用語「低分子量ポリペプチド分解生成物」には、例えば、脱アミド化または加水分解で生じる、例えば、治療性ポリペプチドの断片が含まれる。低分子量分解生成物は、通常、治療性単量体ポリペプチドより小なる分子量を有する複合体である。抗体、例えばIgG抗体の場合、このような分解生成物は約150kDより小さい。しかし、他の治療性ポリペプチド、例えば、通常25kDの分子量を有する一本鎖抗体の場合、このような分解生成物は約25kDより小なる分子量を有しよう。
用語「投与経路」には、例えば、非経口的、静脈内、筋肉内、皮下、頭蓋内または硬膜外などの、治療性ポリペプチドをデリバリーする当分野認知の投与経路が含まれる。神経変性疾患の治療のために、治療性ポリペプチドを投与するためには、静脈内、硬膜外または頭蓋内経路が所望経路となり得る。
用語「アミロイド形成性疾患」には、不溶性アミロイド原線維の形成または沈着を付随する(または、原因とする)任意の疾患が含まれる。例示的なアミロイド形成性疾患には、それだけに限らないが、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭骨痴呆、プリオン関連感染性海綿状脳症(それぞれ、人間におけるクールおよびクロイツフェルト・ヤコブ病、ならびにヒツジおよびウシにおけるスクレイピーおよびBSE)などが挙げられる。様々なアミロイド形成性疾患は、沈着原線維のポリペプチド成分の性質で規定されるか、またはその性質を特徴とする。例えば、アルツハイマー病の対象または患者では、β−アミロイドタンパク質(例えば、野生型、変異型または切断型のβ−アミロイドタンパク質)が、沈着アミロイドの特徴的ポリペプチド成分である。したがって、アルツハイマー病は、例えば、対象または患者の脳内にある「Aβの沈着物を特徴とする疾患」または「Aβの沈着物を付随する疾患」の一例である。
「β−アミロイドタンパク質」、「β−アミロイドペプチド」、「β−アミロイド」、「Aβ」および「Aβペプチド」の各用語は、本明細書では互換的に使用される。
本明細書で使用する場合の用語「治療」は、患者に対する治療剤の適用または投与、あるいは疾患、疾患症状または疾患素因を有する患者由来の分離組織または細胞系に対する治療剤の適用または投与と定義され、その目的は、その疾患、疾患症状または疾患素因を治癒し、治し、軽減し、遅らせ、緩和し、改変し、改善し、改良し、好転させまたはそれに影響を及ぼすことである。
用語「有効用量」または「有効投与量」は、所望の効果を実現する、または少なくとも部分的に実現するのに十分な量と定義される。用語「治療有効用量」は、既に疾患に罹っている患者において、疾患およびその合併症を治癒する、または少なくとも部分的にその進行を阻止するのに十分な量と定義される。この使用に有効な量は、感染症の重度および患者自身の免疫系の全般状態に左右されよう。
用語「患者」には、予防的治療、治癒的治療のいずれかを受ける人間および他の哺乳動物の対象が含まれる。
用語「投与単位形態」(または「単位剤形」)とは、本明細書で使用する場合、治療を受ける患者にとって単一投与量として適当な物理的に個別の単位であって、各単位が、必要な医薬用の担体、希釈剤または賦形剤と共同して所望の治療効果を生むと計算された、所定量の活性化合物を含む単位を指す。本発明の投与単位形態の規格は、該活性化合物の特異な特性および実現をめざす特定の治療効果、ならびに患者の治療のためにこのような活性化合物を調合することの当分野公知のパラメーターに影響され、直接左右される。
本発明の処方における該活性成分(例えば、Aβポリペプチド)の実投与量は、特定の患者、組成および投与方式に対して、患者に毒性を示さずに所望の治療反応を実現するのに有効な活性成分量を得るように変更してもよい。選定される該投与量は、使用する本発明の特定組成物の活性、投与経路、投与時間、使用する特定化合物の排泄速度、治療期間、使用する特定組成物と併用する他の薬物、化合物および/または物質、治療する患者の年齢、性別、体重、体調、全般的健康状態および過去の病歴、ならびに医療分野で周知の類似要因を含めた多様な薬物動態要因に左右されよう。
用語「希釈剤」とは、本明細書で使用する場合、本明細書に記載するような例示的または適当な1つまたは複数の濃度の変更または実現に適切な溶液を指す。
概説
本発明は、抗原結合性ポリペプチド、特に抗体ならびにその部分および/または断片のための処方を提供する。ある種の態様では、本発明は、治療用途に向けたポリペプチドの安定化液体処方を提供する。特に、本発明は、疾患および/または障害の治療に使用するために、抗原結合性ポリペプチド、例えば抗体およびその抗原結合性断片の安定化を提供する。特に、本発明は、活性な該治療用ポリペプチドが、長期間安定であり、多様な投与経路を介して投与できるように、安定化されている処方を提供する。このことは、ある種の疾患および/または障害、例えば神経性の疾患または障害の治療に使用する予定の抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体)にとって、特に肝要である。他の態様では、本発明は、例えば、凍結、凍結乾燥、熱および/または復元などの様々なストレスに安定である、特異に安定な抗体処方を提供する。更に、本発明の例示的処方は、長期間に亘り、不利な温度でも(例えば、該処方を保存する1年)抗体の安定性、生物活性、純度および品質を維持できる。その上、本発明の例示的処方は、対象または患者、例えば、神経性の疾患または障害、例えば、アミロイドAβポリペプチドが関わるアミロイド形成性疾患を有する、または有すると予測された人へ投与する(例えば、対象または患者へ静脈内投与をする)のに適している。
処方
一態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)と、処方を静脈内注射に適切とするのに十分な量で存在する等張化剤(例えば、マンニトール)と、生理的に適正なpHを維持するのに十分な量で存在するアミノ酸(例えば、ヒスチジン)またはその誘導体とを含む処方を提供する。例示的な実施形態では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗体またはその抗原結合性断片)、マンニトールおよびヒスチジンを含む処方を提供する。
別の態様では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチドを含む安定化処方を提供する。本発明の処方中での安定化に適切な抗原結合性ポリペプチドには、抗体およびその断片、特に、疾患または障害に関与する治療標的に結合できる抗体が含まれる。したがって、該治療用ポリペプチドは、副生物、通常は高分子量凝集体、低分子量分解断片またはそれらの組み合わせの形成を回避するために、このような副生物の形成を抑制するのに十分な量の酸化防止剤の添加によって、本発明に従って安定化される。酸化防止剤には、以下に考察するように、不要な副生物を所望通り抑制するのに十分な濃度のメチオニンおよびその類縁体が含まれる。所望により、本発明の該安定化ポリペプチド処方は、該処方を幾種かの投与経路、例えば静脈内注射に適切とするのに十分な量で存在する等張化剤(例えば、マンニトール)と、生理的に適正なpHを維持するのに十分な量で存在するアミノ酸(例えば、ヒスチジン)またはその誘導体とを更に含む。例示的な実施形態では、本発明は、治療活性な抗原結合性ポリペプチド、メチオニン、マンニトールおよびヒスチジンを含む処方を提供する。
本発明の処方に使用するためのポリペプチド
本明細書に記載するような本発明により処方すべきポリペプチドは、当分野で十分に確立されており、例えば合成的技法(組換え技法、ペプチド合成など、またはこうした技法の併用)を包含する技法を用いて調製される、あるいは該ポリペプチドの内因性供給源から単離してもよい。本発明のある種の実施形態では、精選されるポリペプチドは、抗原結合性ポリペプチド、より好ましくは抗体、特に抗Aβ抗体である。抗原結合性ポリペプチド、特に抗体の製造技法は、以下で説明する。
抗体
用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫活性部、即ち、抗原を特異的に結合する(認識する)抗原結合部位を含む分子を指す。免疫グロブリン分子の免疫活性部の例には、ペプシンなどの酵素による該抗体の処理で生成でき、または当分野認知の組換え操作技法により産生できるF(ab)、F(ab’)2断片などが挙げられる。本明細書の実施形態は、抗体、例えば、抗原、例えばAβなどの治療標的抗原に結合する、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の安定化に適切である。用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体処方」とは、本明細書で使用する場合、標的抗原の特定のエピトープ、例えばAβのエピトープ(複数も)を認識および結合できる抗原結合部位を1種だけ含んだ抗体分子の集団を指す。したがって、モノクローナル抗体処方は、免疫反応をする対象の特定の標的抗原に対して、単一の結合特異性および親和性を通常示す。
ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、適当な対象を免疫原で免疫することにより、上記のようにして調製できる。免疫された対象における抗体力価は、固定化標的抗原を用いた酵素免疫吸着法(ELISA)などの標準的技法によって、経時的にモニターすることができる。所望であれば、標的抗原に対する抗体分子をその哺乳動物(例えば、血液)から単離し、プロテインAセファロース(商標)クロマトグラフィーなどの周知の技法によって更に精製することにより、その抗体、例えばIgGの分画を得ることができる。免疫後の適当な時期、例えば抗抗原抗体力価が最高のときに、抗体産生細胞を対象から得て、使用することにより、標準的技法、例えばKohler and Milstein(1975)Nature 256:495−497により最初に記載されたハイブリドーマ法によってモノクローナル抗体を調製できる(Brown et al.(1981)J.Immunol.127:539−46;Brown et al.(1980)J.Biol.Chem.255:4980−83;Yeh et al.(1976)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76:2927−31;およびYeh et al.(1982)Int.J.Cancer 29:269−75も参照されたい)。キメラポリクローナル抗体の調製については、Buechler他の米国特許第6420113号を参照されたい。
モノクローナル抗体
リンパ球および不死化細胞系を融合するために用いる周知の多くの手順は、モノクローナル抗体を生成するためにいずれも適用できる(例えば、G.Galfre et al.(1977)Nature 266:55052;Gefter et al.Somatic Cell Genet.(前掲);Lerner,Yale J.Biol.Med.(前掲);Kenneth,Monoclonal Antibodies(前掲)を参照されたい)。更に、通常技術の研究者であれば、このような方法に、やはり有用と思われる多くの変法があることを認識されよう。不死細胞系(例えば、骨髄腫細胞系)は、通常、リンパ球と同じ哺乳動物種に由来する。例えば、マウスハイブリドーマは、本発明の免疫原調製物で免疫したマウスのリンパ球をマウス不死化細胞系と融合することにより、作製できる。好ましい不死細胞系は、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含有する培地(「HAT培地」)に感受性のマウス骨髄腫細胞系である。幾種もの骨髄腫細胞系のいずれも、例えばP3−NS1/1−Ag4−1、P3−x63−Ag8.653またはSp2/O−Ag14骨髄腫系は、標準的技法に従って融合パートナーとして使用できる。これらの骨髄腫系はATCCから入手できる。HAT感受性マウス骨髄腫細胞は、通常、ポリエチレングリコール(「PEG」)を用いてマウス脾細胞と融合する。融合から生じたハイブリドーマ細胞は、次いでHAT培地を用いて選択されるが、非融合および非生産的融合骨髄腫細胞はこの培地で死滅する(非融合脾細胞は、形質転換していないため数日後に死ぬ)。本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、標準的なELISA法を用いる標的抗原、例えばAβに結合する抗体について、ハイブリドーマ培地上清をスクリーニングすることにより検出される。
組換え抗体
モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマを調製する代わりに、組換えコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリー(例えば、抗体ファージディスプレーライブラリー)をスクリーニングすることにより、モノクローナル抗体を同定、単離し、それにより標的抗原に結合する免疫グロブリンライブラリー構成員を単離できる。ファージディスプレーライブラリーを産生し、スクリーニングするキットは、市販されている(例えば、Pharmacia Recombinant Phage Antibody System、カタログ番号27−9400−01、およびStratagene SurfZAP(商標)Phage Display Kit、カタログ番号240612)。その上、抗体ディスプレーライブラリーの生成およびスクリーニングに特に使用し易い方法および試薬の例を、例えばLadner他の米国特許第5223409号;Kang他のPCT国際公開第WO92/18619号; Dower他のPCT国際公開第WO91/17271号;Winter他のPCT国際公開第WO92/20791号;Markland他のPCT国際公開第WO92/15679号;Breitling他のPCT国際公開第WO93/01288号;McCafferty他のPCT国際公開第WO92/01047号;Garrard他のPCT国際公開第WO92/09690号;Ladner他のPCT国際公開第WO90/02809号;Fuchs et al.(1991)Bio/Technology 9:1370−1372;Hay et al.(1992)Hum.Antibod.Hybridomas 3:81−85;Huse et al.(1989)Science 246:1275−1281;Griffiths et al.(1993)EMBO J 12:725−734;Hawkins et al.(1992)J. Mol. Biol.226:889−896;Clarkson et al.(1991)Nature 352:624−628;Gram et al.(1992)Proc.Natl.Acad. Sci.USA 89:3576−3580;Garrad et al.(1991)Bio/Technology 9:1373−1377; Hoogenboom et al.(1991)Nuc.Acid Res.19:4133−4137;Barbas et al.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:7978−7982;およびMcCafferty et al.Nature(1990)348:552−554に見出すことができる。
キメラおよびヒト化抗体
その上、ヒト部、非ヒト部双方を含む、キメラ抗体およびヒト化モノクローナル抗体などの、標準的組換えDNA技法を用いて作製できる組換え抗体も本発明の範囲に入る。
用語「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」とは、ヒト化免疫グロブリン鎖または抗体鎖を少なくとも1個(即ち、ヒト化軽鎖または重鎖を少なくとも1個)含む、免疫グロブリンまたは抗体を指す。用語「ヒト化免疫グロブリン鎖」または「ヒト化抗体鎖」(即ち、ヒト化免疫グロブリン軽鎖またはヒト化免疫グロブリン重鎖)とは、ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する可変フレームワーク領域と、非ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する相補性決定領域(CDR)(例えば、少なくとも1個のCDR、好ましくは2個のCDR、より好ましくは3個のCDR)とを含む可変領域を有する、免疫グロブリン鎖または抗体鎖(即ち、それぞれ軽鎖または重鎖)を指し、更に定常領域(例えば、軽鎖の場合、少なくとも1個の定常領域またはその一部、および重鎖の場合、好ましくは3個の定常領域)を含む。用語「ヒト化可変領域」(例えば、「ヒト化軽鎖可変領域」または「ヒト化重鎖可変領域」)とは、ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する可変フレームワーク領域と、非ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する相補性決定領域(CDR)とを含む可変領域を指す。
「ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する」または「実質的にヒトの」という語句は、比較のためにヒト免疫グロブリンまたは抗体のアミノ酸配列と整列した際、その領域が、ヒトフレームワーク領域または定常領域の配列と少なくとも80〜90%、90〜95%または95〜99%の同一性(即ち、局部的配列同一性)を共有し、例えば保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、復帰突然変異などを可能とすることを意味している。保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、復帰突然変異などの導入は、ヒト化抗体またはヒト化連鎖の「最適化」としばしば呼称する。「非ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する」または「実質的に非ヒトの」という語句は、非ヒト生物、例えば非ヒト哺乳動物の対応配列と少なくとも80〜95%、好ましくは少なくとも90〜95%、より好ましくは96%、97%、98%または99%同一の免疫グロブリンまたは抗体を有することを意味している。
したがって、ヒト化免疫グロブリンもしくは抗体、またはヒト化免疫グロブリン鎖もしくは抗体鎖の全ての領域または残基は、CDRを別とすれば、1種または複数の自然のヒト免疫グロブリン配列の対応する領域または残基と実質的に同一である。用語「対応する領域」または「対応する残基」とは、第1および第2の配列を比較のために最適に整列したとき、アミノ酸またはヌクレオチドの第1の配列上の領域または残基と同じ(即ち、等価な)位置を占める、アミノ酸またはヌクレオチドの第2の配列上の領域または残基を指す。
用語「有意な同一性」とは、2種のポリペプチド配列が、デフォルトギャップ加重を用いるプログラム、GAPまたはBESTFITなどにより最適に整列したとき、少なくとも50〜60%の配列同一性、好ましくは少なくとも60〜70%の配列同一性、より好ましくは少なくとも70〜80%の配列同一性、より好ましくは少なくとも80〜90%の配列同一性、更により好ましくは少なくとも90〜95%の配列同一性、更により好ましくは少なくとも95%またはそれより高い配列同一性(例えば、99%以上の高い配列同一性)を共有することを意味している。用語「実質的な同一性」とは、2種のポリペプチド配列が、デフォルトギャップ加重を用いるプログラム、GAPまたはBESTFITなどにより最適に整列したとき、少なくとも80〜90%の配列同一性、好ましくは少なくとも90〜95%の配列同一性、より好ましくは少なくとも95%またはそれより高い配列同一性(例えば、99%以上の高い配列同一性)を共有することを意味している。配列比較については、通常1つの配列が基準配列として作用し、それに試験配列が比較される。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験および基準配列をコンピュータに入力し、必要であれば部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムのプログラムパラメーターを指定する。次いで、この配列比較アルゴリズムは、指定したプログラムパラメーターに基づいて、基準配列に対する試験配列(複数も)の配列一致率(%)を計算する。
比較配列の最適な整列は、例えば、Smith & Waterman,Adv.Appl.Math.2:482(1981)の局部相同性アルゴリズム、Needleman & Wunsch,J.Mol.Biol.48:443(1970)の相同性整列アルゴリズム、Pearson & Lipman,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 85:2444(1988)の類似性探索法、以上のアルゴリズムのコンピュータ計算実施(Wisconsin Genetics Software Package,Genetics Computer Group,575 Science Dr.,Madison,WIにおけるGAP、BESTFIT、FASTAおよびTFASTA)または視覚的検査(全般的にはAusubel et al.,Current Protocols in Molecular Biologyを参照されたい)によって行うことができる。配列一致率(%)および配列類似性の決定に適したアルゴリズムの一例は、BLASTアルゴリズムであり、それについてはAltschul et al.,J.Mol.Biol.215:403(1990)に記載されている。BLAST分析の実行用ソフトウェアは、National Center for Biotechnology Information(National Institutes of Health NCBIのインターネットサーバーから公的にアクセスできる)から公的に入手できる。通常、デフォルトプログラムパラメーターを用いて配列比較を実施できるが、特別設定のパラメーターも使用できる。アミノ酸配列に関しては、BLASTプログラムは、デフォルトとしてワード長(W)3、期待値(E)10およびBLOSUM62スコア行列を用いる(Henikoff & Henikoff,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915(1989)を参照されたい)。
好ましくは、同一でない残基位置は保存的アミノ酸置換によって異なる。アミノ酸置換を保存的または非保存的と分類するために、アミノ酸を以下のように群別する:I群(疎水性側鎖):leu、met、ala、val、leu、ile;II群(中性親水性側鎖):cys、ser、thr;III群(酸性側鎖):asp、glu;IV群(塩基性側鎖):asn、gln、his、lys、arg;V群(連鎖配向に影響する残基):gly、pro;およびVI群(芳香族側鎖):trp、tyr、phe。保存置換は、同じ部類中のアミノ酸間の置換を伴う。非保存置換は、このうちの1部類の構成員で別部類の構成員を交換することに相当する。
好ましくは、ヒト化免疫グロブリンまたは抗体は、対応する非ヒト化抗体の親和性の3倍、4倍または5倍内の親和性で抗原に結合する。例えば、非ヒト化抗体が10−1の結合親和性を有するならば、ヒト化抗体は少なくとも3×10−1、4×10−1または5×10−1の結合親和性を有することになろう。免疫グロブリン鎖または抗体鎖の結合特性を記す場合、その連鎖を、「抗原(例えば、Aβ)結合を指示する」能力に基づいて記すことができる。ある連鎖は、無傷の免疫グロブリンまたは抗体(あるいは、その抗原結合性断片)に特異的な結合性または親和性を賦与するとき、「抗原結合を指示する」と言われる。ある突然変異(例えば、復帰突然変異)は、重鎖または軽鎖を含む無傷の免疫グロブリンまたは抗体(あるいは、その抗原結合性断片)の結合親和性に、前記突然変異を欠いた等価な連鎖を含む抗体(または、その抗原結合性断片)の結合親和性と比較して、少なくとも1桁の影響を及ぼす(例えば、減少を生じる)場合、前記連鎖が抗原結合を指示する能力に実質的な影響を及ぼすと言われる。ある突然変異は、ある連鎖を含む無傷の免疫グロブリンまたは抗体(あるいは、その抗原結合性断片)の結合親和性に、前記突然変異を欠いた等価な連鎖を含む抗体(または、その抗原結合性断片)の結合親和性の2倍、3倍または4倍だけの影響を及ぼす(例えば、減少を生じる)場合、「前記連鎖が抗原結合を指示する能力に実質的な影響を及ぼさ(例えば、減少を生じ)ない」。
用語「キメラ免疫グロブリン」または抗体とは、その可変領域が第1の種に由来し、その定常領域が第2の種に由来する免疫グロブリンまたは抗体を指す。キメラ免疫グロブリンまたは抗体は、異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから、例えば遺伝子操作により構築できる。「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」という用語は、下記に定義するように、キメラ免疫グロブリンまたは抗体を包含することを意図していない。ヒト化免疫グロブリンまたは抗体は、構成上キメラである(即ち、複数種のタンパク質由来の各領域を含む)が、そこには、キメラ免疫グロブリンまたは抗体には見出されない、本明細書に定義するような追加の特徴(即ち、供与CDR残基および受容フレームワーク残基を含む可変領域)が含まれる。
このようなキメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、当分野で公知の組換えDNA技法によって産生できるが、そこで使用される方法は、例えば、Robinson他、国際出願第PCT/US86/02269号;Akira他、欧州特許出願第184187号;Taniguchi,M.他、欧州特許出願第171496号;Morrison他、欧州特許出願第173494号;Neuberger他、PCT国際公開第WO86/01533号;Cabilly他、米国特許第4816567号;Cabilly他、欧州特許出願第125023号;Better et al.(1988)Science 240:1041−1043;Liu et al.(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84:3439−3443;Liu et al.(1987)J.Immunol.139:3521−3526;Sun et al.(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84:214−218;Nishimura et al.(1987)Canc.Res.47:999−1005;Wood et al.(1985)Nature 314:446−449;およびShaw et al.(1988)J.Natl.Cancer Inst.80:1553−1559;Morrison,S.L.(1985)Science 229:1202−1207;Oi et al.(1986)BioTechniques 4:214;Winter、米国特許第5225539号;Jones et al.(1986)Nature 321:552−525;Verhoeyan et al.(1988)Science 239:1534;およびBeidler et al.(1988)J.Immunol.141:4053−4060に記載されている。
トランスジェニック動物およびファージディスプレーからのヒト抗体
あるいは、免疫した際に、内因性免疫グロブリンを産生しない状態で全範囲のヒト抗体を産生できるトランスジェニック動物(例えば、マウス)を作製することが、現在では可能である。例えば、キメラおよび生殖細胞系突然変異のマウスにおける抗体重鎖結合領域(J)遺伝子をホモ接合的に欠失させると、内因性抗体産生が完全に抑制される。このような生殖細胞系突然変異マウス中に一連のヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子を移入すると、抗原接種時にヒト抗体が産生される。例えば、米国特許第6150584号、第6114598号および第5770429号を参照されたい。
完全なヒト抗体は、ファージディスプレーライブラリーからも誘導できる(Hoogenboom et al.,J.Mol.Biol.,227:381(1991);Marks et al.,J.Mol.Biol.,222:581−597(1991))。
二重特異性抗体、抗体融合ポリペプチドおよび一本鎖抗体
二重特異性抗体(BsAb)は、少なくとも2つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。このような抗体は、全長抗体または抗体断片(例えば、F(ab)’2 二重特異性抗体)から誘導できる。二重特異性抗体の作製法は当分野で公知である。二重特異性抗体の従来からの生成は、2本の連鎖が異なる特異性を有する、免疫グロブリン軽鎖−重鎖対2対の共発現に基づいている(Millstein et al.,Nature,305:537−539(1983))。免疫グロブリン軽鎖−重鎖の無作為な取り合わせのために、こうしたハイブリドーマ(四重ハイブリドーマ)は、異なる抗体分子からなる可能性のある組み合わせを生じる(国際公開第93/08829号、およびTraunecker et al.,EMBO J.,10:3655−3659(1991)の中を参照されたい)。
二重特異性抗体は、架橋または「ヘテロコンジュゲート」抗体も包含する。例えば、ヘテロコンジュゲート中の抗体の一方はアビジンに結合でき、他方はビオチンまたは他の搭載物質に結合できる。ヘテロコンジュゲート抗体は、都合良い任意の架橋法を用いて作製し得る。適当な架橋剤は、当分野で周知であり、幾種もの架橋法と共に米国特許第4676980号に開示されている。
更に別の実施形態では、該抗体を化学的または遺伝子操作的に、反応性、被検出性または機能性の部分、例えば抗毒素などの搭載物質ドメインに融合することにより、抗体融合ポリペプチドを生成できる。このような搭載物質には、例えば抗毒素、化学療法剤および放射性同位体が含まれ、それらは全て当分野で周知である。
一本鎖抗体も、本発明による安定化にとって適当である。その断片は、各可変領域の相互連結を可能とするリンカーで、軽鎖可変ドメイン(VL)に連結された重鎖可変ドメイン(VH)を含み、VLおよびVH領域の由来源である親抗体の抗原結合性ポケットを再生する。Gruber et al.,J.Immunol.,152:5368(1994)を参照されたい。
前出のポリペプチド分子のいずれでも、本発明による安定化処方として、単独または組み合わせて調製するために適切であることは理解される。
治療用抗原結合性ポリペプチド
幾つもの治療用抗原結合性ポリペプチドが、本発明の安定化条件により処方するのに適当である。通常、該抗原結合性ポリペプチドは、標的抗原または免疫系の分子、例えばFc受容体と相互作用できる、抗体可変領域および/または抗体Fc領域、あるいは免疫グロブリン、免疫グロブリンスーパーファミリータンパク質、または受容体もしくは受容体様ドメインの少なくとも一部を含む、抗体またはその断片(前記参照のこと)である。便宜上、本発明の方法および処方から受益できる抗原結合性ポリペプチドは、標的抗原クラスに従って以下に考察する。このような代表的抗原結合性ポリペプチドは、例えば癌抗原、自己免疫抗原、アレルゲンおよび病原体を包含する抗原クラスに結合する。
癌抗原に結合する治療用抗原結合性ポリペプチド
ある種の実施形態では、本発明の方法および組成物に従う抗原結合性ポリペプチドは、腫瘍細胞に特異的な分子、例えば腫瘍特異抗原に結合できる。このような腫瘍特異抗原には、例えば水疱性類天疱瘡抗原2、前立腺ムチン抗原(PMA)、腫瘍関連トムゼン・フリーデンライヒ抗原、前立腺特異抗原(PSA)、乳癌および膀胱移行上皮癌(TCC)の管腔上皮抗原(LEA135)、癌関連血清抗原(CASA)および癌抗原125(CA125)、上皮糖タンパク質40(EGP40)、へん平上皮癌抗原(SCC)、カテプシンE、メラノーマ内チロシナーゼ、脳海綿状血管腫(cavemomas)の細胞核抗原(PCNA)、DF3/MUC1乳癌抗原、癌胎児性抗原、腫瘍関連抗原CA19−9、ヒトメラノーマ抗原MART−I/Melan−A27−35およびgp100、TおよびTn膵癌(pancarcinoma)(CA)糖ペプチドエピトープ、甲状腺乳頭癌内35kD腫瘍関連自己抗原、KH−1腺癌抗原、A60マイコバクテリア抗原、熱ショックタンパク質(HSP)、変異腫瘍遺伝子産物、例えばp53、ras、HER−2/neuなどが挙げられる。
炎症および自己免疫疾患の分子に結合する治療用抗原結合性ポリペプチド
ある種の実施形態では、本発明の方法および組成物に従う抗原結合性ポリペプチドは、炎症または自己免疫疾患もしくは障害の原因分子に結合できる。このような抗原結合性ポリペプチドは、関節リウマチ、SLE、糖尿病、重症筋無力症、反応性関節炎、強直性脊椎炎、多発性硬化症、IBD、乾癬、膵炎および様々な免疫不全に関係する分子に結合できる。他の標的抗原には、2−GPI、50kDa糖タンパンク質、Ku(p70/p80)自己抗原またはその80kdサブユニットタンパク質、核自己抗原La(SS−B)およびRo(SS−A)、強皮症抗原Rpp30、Rpp38またはScl−70、セントロソーム自己抗原PCM−1、多発性筋炎・強皮症自己抗原(PM−Scl)、強皮症(および他の全身性自己免疫疾患)自己抗原CENP−A、U5、小核リボ核タンパク質(snRNP)、PM−Scl自己抗原の100kdタンパク質、核小体U3およびTh(7−2)リボ核タンパク質、リボソームタンパク質L7、核マトリックス抗原由来36kdタンパク質、インスリン、プロインスリン、GAD65およびGAD67、熱ショックタンパク質65(hsp65)、および膵島細胞抗原69(ICA69)、膵島細胞抗原関連タンパク質チロシンホスファターゼ(PTP)、GM2−1ガングリオシド、グルタミン酸デカルボキシラーゼ(GAD)、膵島細胞抗原69(ICA69)、Tep69、糖尿病患者由来T細胞が認識する単一T細胞エピトープ、ICA512、I型糖尿病自己抗原、膵島細胞タンパク質チロシンホスファターゼおよびそれ由来のI型糖尿病中37kDa自己抗原(IA−2、IA−2を含む)、In−111細胞またはヒト甲状腺濾胞細胞由来で、膵島細胞膜抗体(ICSA)を有する患者からの血清で免疫沈降する64kDaタンパク質が挙げられる。特に、関節リウマチ抗原には、45kDa DEK核抗原、発症若年性関節リウマチおよび虹彩毛様体炎、ヒト軟骨糖タンパク質39、関節リウマチ内自己抗原、関節リウマチ内68k自己抗原、コラーゲン、II型コラーゲン、軟骨結合タンパク質、エズリン、ラジキシンおよびモエシン、マイコバクテリア熱ショックタンパク質65、甲状腺ペルオキシダーゼおよび甲状腺刺激ホルモン受容体、ヒトグレーブス甲状腺組織由来の甲状腺ペルオキシダーゼ、甲状腺関連眼障害に関係する64kDa抗原、ヒトTSH受容体、ならびにIn−111細胞またはヒト甲状腺濾胞細胞由来で、膵島細胞膜抗体を有する患者からの血清で免疫沈降する64kDaタンパク質が挙げられる。
アレルゲンに結合する治療用抗原結合性ポリペプチド
ある種の実施形態では、本発明の方法および組成物に従う抗原結合性ポリペプチドは、アレルゲンまたはアレルギー疾患もしくは障害の原因分子に結合できる。このような抗原結合性ポリペプチドは、IgE、IgE受容体、T細胞受容体(TCR)、サイトカイン、またはアレルゲン、例えば、イエダニ、草本花粉、樺の木花粉、ブタクサ花粉、ハシバミ花粉、ゴキブリ、コメ、オリーブの木花粉、真菌、マスタード、ハチ毒、動物アレルゲン、例えばウマ、イヌもしくはネコなどからのアレルゲンに結合できる。アレルゲンにはラテックスアレルゲンも含まれる。
病原体および関連毒素に結合する治療用抗原結合性ポリペプチド
ある種の実施形態では、本発明の方法および組成物に従う抗原結合性ポリペプチドは、病原体、例えば、細菌、真菌もしくはウイルス性の病原体、またはその毒素に結合できる。このような抗原結合性ポリペプチドは、エルシニア、例えばペストの原因菌であるペスト菌、特にV抗原、炭疽病の原因菌である炭疽菌、特に炭疽菌防御抗原(PA)または致死因子(LF)、ブドウ球菌、例えば黄色ブドウ球菌および表皮ブドウ球菌と、連鎖球菌および/またはその関連毒素、大腸菌、例えば食物媒介病を起こすO−157:H7株;コレラ菌類、例えばコレラ菌、またはその内毒素;ヘリコバクター・ピロリ、例えば抗原CagAおよびVacA;クラミジア;淋菌および髄膜炎菌;百日咳菌;ウシ流産菌;髄膜炎菌抗原;肺炎球菌抗原;リステリア菌;サルモネラ;赤痢菌および結核菌;ウイルス病原体、例えばハンタウイルス、フラビウイルス、インフルエンザ;HIV、例えばGag、Pol、VifおよびNef抗原;ロタウイルス;単純疱疹ウイルスI/II型;肝炎A、B、CまたはG;狂犬病;パピローマウイルス;エプスタイン・バーウイルス(EBV);麻疹;CMV;ならびに寄生生物を包含する病原体(またはその毒素)に結合する。
抗Aβ抗体
一般に、本発明の処方は、アミロイド形成性疾患、特にアルツハイマー病を、Aβペプチドを標的とすることにより、治療するための多様な抗体を含んでいる。
「Aβ抗体」、「抗Aβ抗体」および「抗Aβ」という用語は、ヒトアミロイド前駆体タンパク質(APP)、Aβタンパク質またはその両方の1つまたは複数のエピトープまたは抗原決定基に結合する抗体を指すために、本明細書では互換的に使用される。例示的なエピトープまたは抗原決定基は、APP内に見出せるが、好ましくはAPPのAβペプチド内に見出される。APPには多種のアイソフォーム、例えばAPP695、APP751およびAPP770が存在する。APP内のアミノ酸には、アイソフォームAPP770の配列(例えば、GenBank受入番号P05067を参照されたい)に従って番号が割り当てられている。人間中に存在することが現在知られているAPPの特定のイソタイプの例は、Kang et al.(1987)Nature 325:733−736に記載され、「正常」APPと命名されている695アミノ酸ポリペプチド;Ponte et al.(1988)Nature 331:525−527(1988)およびTanzi et al.(1988)Nature 331:528−530に記載されている751アミノ酸ポリペプチド;ならびにKitaguchi et al.(1988)Nature 331:530−532に記載されている770アミノ酸ポリペプチドである。インビボまたはインシトゥでの異なるセクレターゼ酵素によるAPPのタンパク分解プロセシングの結果、Aβは、40アミノ酸長の「短鎖形」、42〜43アミノ酸長の範囲の「長鎖形」の双方で見出されている。短鎖形Aβ40は、APPの672〜711番残基からなる。長鎖形、例えばAβ42またはAβ43は、それぞれ672〜713番または672〜714番残基からなる。APPの疎水性ドメインの一部は、Aβのカルボキシ末端に見出され、特に長鎖形の場合にAβの凝集能を説明し得る。Aβペプチドは、健常個体、アミロイド形成性障害に罹っている個体の双方を含め、人間および他の哺乳類の体液、例えば脳脊髄液中に見出すことができ、またはそれから精製できる。
「βアミロイドタンパク質」、「βアミロイドペプチド」、「βアミロイド」、「Aβ」および「Aβペプチド」という用語は、本明細書では互換的に使用される。Aβペプチド(例えば、Aβ39、Aβ40、Aβ41、Aβ42およびAβ43)は、APPの39〜43アミノ酸からなる約4kDaの内部断片である。例えば、Aβ40はAPPの672〜711番残基からなり、Aβ42はAPPの672〜713番残基からなる。Aβペプチドには、APPのセクレターゼ開裂から生じるペプチド、およびその開裂生成物と同じまたは本質的に同じ配列を有する合成ペプチドが含まれる。Aβペプチドは、多様な源、例えば組織、細胞系または体液(例えば、血清もしくは脳脊髄液)から誘導できる。例えば、Aβは、例えばWalsh et al.(2002)Nature,416,pp535−539に記載のように、APP717V→Fで安定にトランスフェクトしたチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞などのAPP発現細胞から誘導できる。Aβ調製品は、前記の方法を用いて組織源から誘導できる(例えば、Johnson−Wood et al.,(1997),Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:1550を参照されたい)。あるいは、Aβペプチドは、当分野で周知の方法を用いて合成できる。例えば、Fields et al.,Synthetic Peptides:A User‘s Guide,ed.Grant,W.H.Freeman & Co.,New York,NY,1992,p77を参照されたい。したがって、αアミノ基をt−Boc基またはF−moc基で保護した側鎖保護アミノ酸を用いる、固相合成の自動メリフィールド法を用いて、例えばApplied Biosystems Peptide Synthesizerモデル430Aまたは431上で合成できる。長めのペプチド抗原は、周知の組換えDNA法を用いて合成できる。例えば、該ペプチドまたは融合ペプチドをコードするポリヌクレオチドを合成し、または分子的にクローニングし、適当な発現ベクター中に挿入し、適当な宿主細胞によるトランスフェクションおよび異種発現を行うことができる。Aβペプチドは、正常遺伝子のAβ領域における突然変異から生じる関連Aβ配列も指す。
用語「エピトープ」または「抗原決定基」とは、免疫グロブリンまたは抗体(あるいは、その抗原結合性断片)が特異的に結合する抗原上の部位を指す。Aβ抗体が結合する例示的なエピトープまたは抗原決定基は、ヒトアミロイド前駆体タンパク質(APP)内に見出すことができ、好ましくはAPPのAβペプチド内に見出される。Aβ内の例示的なエピトープまたは抗原決定基は、AβのN末端、中央領域またはC末端内に配置されている。「N末端エピトープ」は、AβペプチドのN末端内に配置されているエピトープまたは抗原決定基である。例示的なN末端エピトープには、Aβのアミノ酸1〜10番または1〜12番内の残基、好ましくはAβ42の残基1〜3、1〜4、1〜5、1〜6、1〜7、2〜6、2〜7、3〜6または3〜7番が含まれる。他の例示的なN末端エピトープは、Aβの残基1〜3番に始まり、残基7〜11番に終わる。追加の例示的なN末端エピトープには、Aβの残基2〜4、5、6、7もしくは8、Aβの残基3〜5、6、7、8もしくは9、またはAβ42の残基4〜7、8、9もしくは10が含まれる。「中央部」エピトープは、Aβペプチドの中央部または中心部内に配置された残基を含むエピトープまたは抗原決定基である。例示的な中央部エピトープには、Aβのアミノ酸13〜28番内の残基、好ましくはAβの残基14〜27、15〜26、16〜25、17〜24、18〜23または19〜22番が含まれる。他の例示的な中央部エピトープには、Aβのアミノ酸16〜24、16〜23、16〜22、16〜21、18〜21、19〜21、19〜22、19〜23または19〜24番内の残基が含まれる。「C末端」エピトープまたは抗原決定基は、AβペプチドのC末端内に配置されており、それには、Aβのアミノ酸33〜40、33〜41または33〜42番内の残基が含まれる。追加の例示的なC末端エピトープまたは抗原決定基には、Aβの残基33〜40番が含まれる。
抗体がAβ3〜7番などの特定の残基内エピトープに結合すると言う場合、その意味は、該抗体が、特定残基(即ち、この例ではAβ3〜7番)を含むポリペプチドに特異的に結合することである。このような抗体は、Aβ3〜7番内の各残基に必ずしも接触するわけではない。Aβ3〜7番内の単一アミノ酸の各置換または欠失が、必ずしも結合親和性に相当に影響するわけでもない。多様な実施形態では、Aβ抗体は末端特異的である。本明細書で使用する場合、用語「末端特異的」とは、AβペプチドのN末端またはC末端残基に特異的に結合するが、該残基を含む長めのAβ種またはAPP中に存在する場合は、それらの同じ残基を認識しない抗体を指す。多様な実施形態では、Aβ抗体は「C末端特異的」である。本明細書で使用する場合、用語「C末端特異的」とは、抗体が、Aβペプチドの遊離C末端を特異的に認識することを意味する。C末端特異的Aβ抗体の例には、残基40番で終わるAβペプチドを認識するが、残基41、42および/または43番で終わるAβペプチドは認識しない抗体;残基42番で終わるAβペプチドを認識するが、残基40、41および/または43番で終わるAβペプチドは認識しない抗体などが含まれる。
一実施形態では、該Aβ抗体は、3D6抗体もしくはその変異体、または10D5抗体もしくはその変異体でもよく、その両者は、米国特許出願公開第20030165496A1号、米国特許出願公開第20040087777A1号、国際特許公開第WO02/46237A3号および国際特許公開第WO04/080419A2号に記載されている。3D6および10D5抗体の記述は、例えば国際特許公開第WO02/088306A2号および国際特許公開第WO02/088307A2号にも見出すことができる。追加の3D6抗体が、米国特許出願第11/303478号および国際出願第PCT/US05/45614号に記載されている。3D6は、ヒトβアミロイドペプチド中に配置されたN末端エピトープ、具体的には残基1〜5番に特異的に結合するモノクローナル抗体(mAb)である。それに対し、10D5は、ヒトβアミロイドペプチド中に配置されたN末端エピトープ、具体的には残基3〜6番に特異的に結合するmAbである。別の実施形態では、該抗体は、12B4抗体もしくはその変異体でもよく、それに関しては、米国特許出願公開第20040082762A1号および国際特許公開第WO03/077858A2号に記載されている。12B4は、ヒトβアミロイドペプチド中に配置されたN末端エピトープ、具体的には残基3〜7番に特異的に結合するmAbである。更に別の実施形態では、該抗体は、12A11抗体もしくはその変異体でもよく、それに関しては、米国特許出願公開第20050118651A1号および国際特許公開第WO04/10885A2号に記載されている。12A11は、ヒトβアミロイドペプチド中に配置されたN末端エピトープ、具体的には残基3〜7番に特異的に結合するmAbである。更に別の実施形態では、該抗体は、15C11抗体もしくはその変異体でもよく、それに関しては、「βアミロイドペプチドを認識するヒト化抗体」という名称の米国特許出願第11/304986号および国際特許出願第PCT/US05/45515号に記載されている。15C11は、ヒトβアミロイドペプチド中に配置された中央部エピトープ、具体的には残基19〜22番に特異的に結合するmAbである。更に別の実施形態では、該抗体は266抗体でもよく、それに関しては、米国特許出願公開第20050249725A1号および国際特許公開第WO01/62801A2号に記載されている。本発明に使用するための、ヒトβアミロイドペプチド中に配置されたC末端エピトープに特異的に結合するように設計された抗体には、米国特許第5786160号に記載されるような369.2Bが含まれるが、それだけに限らない。
本発明で使用するための抗体は、組換えまたは合成で作製し得る。例えば、該抗体をチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞の培養法により作製してもよい。その上、副次的な修飾を有し、Aβペプチドに結合する主要機能性を保持した抗体も、本発明により想定されている。特定の実施形態では、該抗体は、Aβペプチドに選択的に結合するヒト化抗Aβペプチド3D6抗体である。より具体的には、ヒト化抗Aβペプチド3D6抗体は、脳内の沈着斑中に(例えば、アルツハイマー病患者において)見出されるヒトβアミロイド1−40または1−42ペプチド中に配置される、NH末端エピトープに特異的に結合するように設計されている。
図1に、h3D6v2と称する例示的なヒト化抗Aβペプチド3D6抗体の予想構造を概略的に表示している。対応する発現ベクターのDNA配列から予測したh3D6v2軽鎖および重鎖の完全なアミノ酸配列は、図2に示される(図中の残基には、残基番号1としての軽鎖および重鎖のNH末端から始めた番号が付けられている)。重鎖DNA配列がコードする最後のアミノ酸残基Lys449は、h3D6v2の成熟分泌形には認められておらず、特定の理論には拘りたくないが、CHO細胞プロテアーゼによる細胞内プロセシング中に除去されると推定している。したがって、h3D6v2重鎖のCOOH末端は、所望によってはGly448である。COOH末端リジンのプロセシングは、組換えおよび血漿由来抗体で認められており、その抗体機能には影響しないようである(Harris(1995)J.Chromatogr.A.705:129−134)。精製h3D6v2は、N−グリコシル化コンセンサス部位を1個含むことが知られている、重鎖Fc部へのN連結グリカンの付加によって翻訳後に修飾されている。該N−グリコシル化部位は、哺乳類IgGタンパク質の類縁N−グリコシル化部位で普通に認められる3種の主要複合体二分岐中性オリゴ糖構造を示す。
別の例示的なヒト化抗Aβペプチド抗体は、軽鎖の1位のD→Y置換を別とすれば、図2に示された配列を有するヒト化3D6の変形1(hu3D6v1)である。
本発明の様々な実施形態では、該抗Aβ抗体(例えば、ヒト化抗Aβペプチド3D6抗体)は、約0.1mg/ml〜約100mg/ml、約0.1mg/ml〜約75mg/ml、約0.1mg/ml〜約50mg/ml、約0.1mg/ml〜約60mg/ml、約0.1mg/ml〜約40mg/ml、約0.1mg/ml〜約30mg/ml、約10mg/ml〜約20mg/ml、約20mg/ml〜30mg/mlで、またはそれより高く、例えば約100mg/mlまで、約200mg/mlまで、約500mg/mlまで、もしくは約1000mg/ml以上までで存在している。様々な実施形態では、該抗Aβ抗体は、約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24または25mg/mlで存在している。特定の実施形態では、該抗Aβ抗体(例えば、ヒト化抗Aβペプチド3D6抗体)は約17mg/mlで存在している。別の特定の実施形態では、該抗Aβ抗体(例えば、ヒト化抗Aβペプチド3D6抗体)は約20mg/mlで存在している。別の特定の実施形態では、該抗Aβ抗体(例えば、ヒト化抗Aβペプチド3D6抗体)は約30mg/mlで存在している。上記各濃度の中間的範囲、例えば約12mg/ml〜17mg/mlも、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および/または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。
賦形剤
様々な実施形態で、本発明は、それだけに限らないが、緩衝剤、酸化防止剤、等張化剤および安定剤を含めた多種の賦形剤を含み得る処方を提供する。その上、該処方は、pH調節剤(例えば、HCl)および希釈剤(例えば、水)を含んでもよい。該賦形剤は、安定性および抗体の生物活性を(例えば、そのタンパク質の適切なコンホメーションを維持することによって)部分的に維持し、および/またはpHを維持するのに部分的に機能する。
緩衝剤
本発明の様々な態様では、該処方は緩衝作用剤(緩衝剤)を含んでいる。緩衝剤は、該処方の等張性および化学安定性を高めるのに機能することができる。その上、緩衝剤は、生理的に適当なpH(例えば、約6.0のpH)を維持するのに機能する。一般に、該処方は生理的に適当なpHを示すべきである。本発明の様々な実施形態では、該処方は、約5〜約7または約5.5〜約6.5のpHを示すべきである。特定の実施形態では、該処方は約6のpHを示す。上記pHレベルの中間的な範囲、例えば約5.2〜約6.3(例えば、pH6.2)も、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および/または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。このpHは、必要な場合、当分野で公知の技法により調整し得る。例えば、必要な場合HClの添加により、pHを所望レベルに調整してもよく、または必要な場合異なる形態のヒスチジンの添加により、pHを所望レベルに調整してもよい。
該緩衝剤には、それだけに限らないが、コハク酸(ナトリウムまたはリン酸)、ヒスチジン、リン酸(ナトリウムまたはカリウム)、トリス(トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン)、ジエタノールアミン、クエン酸、他の有機酸およびそれらの組み合わせを挙げ得る。特定の実施形態では、該緩衝剤はヒスチジン(例えば、L−ヒスチジン)である。別の特定の実施形態では、該緩衝剤はコハク酸である。別の実施形態では、該処方は、その処方を生理的に適当なpHに維持するのに十分な量で存在する、ヒスチジンなどのアミノ酸を含む。ヒスチジンは、生理的pH範囲における緩衝能を有する例示的アミノ酸である。ヒスチジンは、そのイミダゾール基から緩衝能を引き出す。例示的一実施形態では、該緩衝剤はL−ヒスチジン(塩基)(例えば、C、FW:155.15)である。別の実施形態では、該緩衝剤はL−ヒスチジン一塩化物一水和物(例えば、C.HCl.HO、FW:209.63)である。別の例示的実施形態では、該緩衝剤は、L−ヒスチジン(塩基)およびL−ヒスチジン一塩化物一水和物の組み合わせである。
一実施形態では、該緩衝剤(例えば、L−ヒスチジンまたはコハク酸)は、約0.1mM〜約50mM、約0.1mM〜約40mM、約0.1mM〜約25mM、約0.1mM〜約30mM、約0.1mM〜約20mM、または約5mM〜約15mM、好ましくは約5mMまたは10mMで存在している。様々な実施形態では、該緩衝剤は、約5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、または15mMで存在してもよい。特定の実施形態では、該緩衝剤は約10mMで存在している。上記各濃度の中間的な範囲、例えば約12mM〜約17mMも、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および/または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。ある種の実施形態では、該緩衝剤は、生理的に適当なpHを維持するのに十分な量で存在する。
等張化剤
本発明の様々な態様では、該処方は等張化剤を含んでいる。等張化剤は、該処方の等張性の維持およびタンパク質量の維持に部分的に寄与する。等張化剤は、該処方中に存在する治療活性なポリペプチドの量、比または割合の保持に部分的に寄与する。本明細書で使用する場合、用語「張度」とは、液体環境または溶液中での生物学的成分の挙動を指す。等張溶液は、血漿と同じ浸透圧を有し、したがって対象の血漿の浸透圧を変えることなく、その対象に静脈注入することができる。実際に、本発明による一実施形態では、等張化剤が、該処方を静脈注入に適正にするのに十分な量で存在する。該等張化剤は、増量剤として機能することも多い。したがって、該等張化剤により、タンパク質が、凍結、せん断などの多様なストレスを克服することが可能となる場合がある。
該等張化剤には、それだけに限らないが、CaCl、NaCl、MgCl、ラクトース、ソルビトール、スクロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、グリシンおよびそれらの組み合わせを挙げ得る。特定の実施形態では、該等張化剤はマンニトールである(例えばD−マンニトール、例えばC14、FW:182.17)。
一実施形態では、該等張化剤(例えば、マンニトール)は約2%〜約6%w/vまたは約3%〜約5%w/vで存在している。別の実施形態では、該等張化剤は約3.5%〜約4.5%w/vで存在している。別の実施形態では、該等張化剤は、約20mg/ml〜約60mg/ml、約30mg/ml〜約50mg/ml、または約35mg/ml〜約45mg/mlで存在している。特定の実施形態では、該等張化剤は、約4%w/vまたは約40mg/mlで存在している。別の特定の実施形態では、該等張化剤は約6%w/vで存在している。更に別の特定の実施形態では、該等張化剤は約10%w/vで存在している。
上記各濃度の中間的な範囲、例えば約3.2%〜約4.3%または約32mg/ml〜約43mg/mlも、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および/または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。該等張化剤は、該処方の張度を維持するような十分な量で存在すべきである。
酸化防止剤
本発明の様々な態様では、該処方は、その処方を部分的に保護するために(例えば、酸化を防止することにより)、酸化防止剤を含んでいる。
該酸化防止剤には、それだけに限らないが、GLA(γ−リノレン酸)−リポ酸、DHA(ドコサヘキサエン酸)−リポ酸、GLA−トコフェロール、ジGLA−3,3’−チオジプロピオン酸、および概して、化学的に連結できる任意の天然または合成の酸化防止剤と合わせた、例えばGLA、DGLA(ジホモ−γ−リノレン酸)、AA(アラキドン酸)、SA(サリチル酸)、EPA(エイコサペンタエン酸)またはDHA(ドコサヘキサエン酸)を挙げ得る。こうしたものには、フェノール性酸化防止剤(例えば、オイゲノール、カルノシン酸、カフェイン酸、BHT(ブチル化ヒドロキシアニソール)、トコフェロール、トコトリエノールおよびフラベノイド酸化防止剤(ミリセチン、フィセチンなど))、ポリエン(例えば、レチノイン酸)、不飽和ステロール(例えば、Δ−アベノステロール)、有機硫黄化合物(例えば、アリシン)、テルペン(例えば、ゲラニオール、アビエチン酸)、ならびにアミノ酸酸化防止剤(例えば、メチオニン、システイン、カルノシン)が含まれる。一実施形態では、該酸化防止剤はアスコルビン酸である。特定の実施形態では、該酸化防止剤は、メチオニン、またはその類縁体、例えばセレノメチオニン、ヒドロキシメチルブタン酸、エチオニンもしくはトリフルオロメチオニンである。
一実施形態では、該酸化防止剤(例えば、L−メチオニンなどのメチオニン、例えばCHSCHCHCH(NH)COH、FW=149.21)は、約0.1mM〜約50mM、約0.1mM〜約40mM、約0.1mM〜約30mM、約0.1mM〜約20mM、または約5mM〜約15mMで存在する。様々な実施形態では、該酸化防止剤は、約5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、または15mMで存在してもよい。特定の実施形態では、該酸化防止剤は約10mMで存在する。別の特定の実施形態では、該酸化防止剤は約15mMで存在する。上記各濃度の中間的な範囲、例えば約12mM〜約17mMも、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および/または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。ある種の実施形態では、該酸化防止剤は、部分的に酸化の防止によって、該処方を保護するのに十分な量で存在すべきである。
安定剤
本発明の様々な態様では、該処方は、界面活性物質としても知られている安定剤を含んでいる。安定剤は、処方中の生体分子および/または一般的な医薬用賦形剤と相互作用し、安定化させる特定の化合物である。ある種の実施形態では、安定剤は、より低温の保存と組み合わせて使用してもよい。一般に、安定剤は、しばしばタンパク質凝集を起こす空気/溶液界面誘発ストレスおよび溶液/表面誘発ストレスからタンパク質を保護する。
該安定剤には、それだけに限らないが、グリセリン、ポリソルベート80などのポリソルベート、ジカルボン酸、蓚酸、コハク酸、アジピン酸、フマール酸、フタール酸、およびそれらの組合せを挙げ得る。特定の実施形態では、安定剤はポリソルベート80である。
一実施形態では、該安定剤(例えば、ポリソルベート80)は、約0.001%w/v〜約0.01%w/v、約0.001%w/v〜約0.009%w/v、または約0.003%w/v〜約0.007%w/vの間で存在している。特定の実施形態では、該安定剤は処方の約0.005%w/vで存在している。別の特定の実施形態では、該安定剤は約0.01%w/vで存在している。上記各濃度の中間的な範囲、例えば約0.002%w/v〜約0.006%w/vも、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および/または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。該安定剤は、Aβ結合性ポリペプチド(例えば、抗Aβ抗体)を安定化するのに十分な量で存在すべきである。
Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)に記載されるような、医薬として許容可能な他の担体、賦形剤または安定剤は、該処方の所望特性に悪影響を及ぼさない限り、処方中に含めてもよい。特定の実施形態では、該処方は実質的に防腐剤を含まないが、代替的な実施形態では、必要な場合防腐剤を添加してもよい。例えば、該処方を凍結乾燥するのであれば、例えば凍結防止剤または溶解防止剤を含めてもよい。
本発明の様々な態様では、該処方は、前記の賦形剤各部類の一部または全部を所望により含む。一態様では、本発明の処方は、抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗Aβ抗体)、マンニトールおよびヒスチジンを含む。特定の実施形態では、該処方は、メチオニンなどの酸化防止剤および/またはポリソルベート80などの安定剤を含んでもよい。ある種の実施形態では、該処方は約6のpHを有する。別の態様では、該処方は、抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗Aβ抗体)、マンニトール、ヒスチジンおよびメチオニンを含む。更に別の態様では、該処方は、Aβ結合性ポリペプチド(例えば、抗Aβ抗体)、マンニトール、ヒスチジン、メチオニンおよびポリソルベート80を含む。本発明の特定の態様では、該処方は、約20mg/mlのAβ結合性ポリペプチド(例えば、抗Aβ抗体)、10mMのヒスチジン、10mMのメチオニン、4%のマンニトールを含み、約6のpHを有する。本発明の別の態様では、該処方は、約20mg/mlのAβ結合性ポリペプチド(例えば、抗Aβ抗体)、10mMのヒスチジン、10mMのメチオニン、4%w/vのマンニトール、0.01%w/vのポリソルベート80を含み、約6のpHを有する。本発明の別の態様では、該処方は、約20mg/mlのAβ結合性ポリペプチド(例えば、抗Aβ抗体)、10mMのヒスチジン、10mMのメチオニン、4%w/vのマンニトール、0.005%w/vのポリソルベート80を含み、約6のpHを有する。
本発明の例示的実施形態は、バルク医薬品としてしばしば有用である、抗原結合性ポリペプチド(例えば、抗Aβ抗体)の濃縮調製物を提供する。更に、本発明の例示的実施形態は、凍結、凍結乾燥および/または復元に安定である。更に、本発明の例示的実施形態は長期間に亘り安定である。例えば、本発明の処方は、少なくとも約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30ヶ月間安定である。特定の実施形態では、本発明の処方は、少なくとも約12ヶ月、少なくとも約18ヶ月、少なくとも約24ヶ月、または少なくとも約30ヶ月間安定である。
本発明によれば、該処方は、約−80℃〜約40℃、約0℃〜約25℃、約0℃〜約15℃、または約0℃〜約10℃、好ましくは約2℃〜約8℃の温度で保存してもよい。様々な実施形態では、該処方は、約0℃、1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃または10℃で保存してもよい。特定の実施形態では、該処方は約5℃で保存される。一般に、該処方はこのような範囲で安定であり、生物活性を保持している。上記各温度の中間的な範囲、例えば約2℃〜約17℃も本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および/または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。
本発明の処方は、多様な技法によるデリバリーに適当である。ある種の実施形態では、該処方は、静脈内や筋肉内などの非経口で投与される。更に、該処方のデリバリーは、脳(例えば、その抗体が血液脳関門を通過するように)または脊髄液を標的としてもよい。特定の実施形態では、該処方は静脈内に投与される。
本発明の処方の有効用量は、投与手段、標的部位、患者の生理状態、人間であるか動物であるかの患者種、投与される他の薬剤、および予防または治癒であるかの治療目的を含めた多数の異なる要因に応じて変化する。患者は普通人間であるが、トランスジェニック哺乳動物を含めた非ヒト哺乳動物も治療できる。治療投薬量は、安全性および有効性を最適化するために調節する必要がある。
抗体で受動免疫するためには、例示的用量は、宿主体重に対して約0.0001〜100mg/kg、より普通には約0.01〜約5mg/kg、約0.15mg/kg〜約3mg/kg、約0.5mg/kg〜約2mg/kg、好ましくは約1mg/kg〜約2mg/kgの範囲である。例えば、用量は、1mg/kg体重もしくは20mg/kg体重、または1〜20mg/kgの範囲内、好ましくは約1mg/kg、約2mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kgもしくは約15mg/kgとし得る。例示的な他の実施形態では、用量は、少なくとも0.5mg/kg(例えば、0.5、0.6、0.7、0.75、0.8、0.9、1.0、1.2、1.25、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.75、1.8、1.9、または2.0mg/kg)、少なくとも0.75mg/kg、少なくとも1.25mg/kg、少なくとも1.5mg/kg、少なくとも1.75mg/kg、または少なくとも2mg/kgとすることができる。このような用量を毎日、隔日、毎週、または実験的分析から決定した他の任意の日程に従って、対象に投与することができる。例示的な治療では、多回用量の投与を長期間、例えば少なくとも6ヶ月に亘り行う。追加の例示的な治療計画では、2週毎に1回または毎月1回または3〜6ヶ月毎に1回投与を行う。例示的な投薬量予定では、連日1〜10mg/kgもしくは15mg/kg、隔日30mg/kgまたは毎週60mg/kgが含まれる。幾つかの実施形態では、結合特異性が異なる2種以上のモノクローナル抗体を同時に投与するが、その場合、各抗体の投与量は指示された範囲内にする。
抗体は、普通多数の時機に投与する。個々の投薬間の間隔は、1週、1ヶ月または1年となることがある。患者中のAβに対する抗体の血液濃度を測定することにより指示されるように、間隔が不規則になることもある。幾つかの方法では、血漿抗体濃度が1〜1000μg/mlとなるように投薬量を調節し、幾つかの方法では、25〜300μg/mlとなるように調節する。あるいは、持続放出処方として抗体を投与することもでき、その場合は必要な投与頻度が減少する。投薬量および頻度は、患者中での抗体の半減期に応じて変化する。一般に、ヒト抗体の半減期が最も長く、その後ヒト化抗体、キメラ抗体および非ヒト抗体の半減期が続く。
投薬量および投与頻度は、予防または治癒であるかの治療目的に応じて変化し得る。予防用途では、本抗体またはその混合物を含有する処方が、未だ疾患状態にない患者へその患者の抵抗力を高めるために投与される。このような量は「予防有効用量」と定義される。この用途では、その厳密な量は、患者の健康状態および全般的免疫状態にやはり依存するが、一般的には1用量当たり0.1〜25mg、特に1用量当たり0.5〜2.5mgの範囲である。相対的に低用量が、長期間に亘り相対的に低頻度間隔で投与される。一部の患者は生涯治療を受け続ける。
治癒用途では、相対的に短い間隔での相対的に高い投薬量(例えば、1用量当たりの抗体が約0.5または1から約200mg/kg(例えば、0.5、1、1.5、2、5、10、20、25、50もしくは100mg/kg)であり、より一般的に使用する投薬量は5〜25mg/kg)が、疾患の進行が低下または停止するまで、好ましくは患者に疾患症候の部分的または完全な改善が見られるまで時々必要とされる。その後は、予防的な治療計画量を患者に投与することができる。
投与の簡便性および投薬量の均一性のために、本発明の処方を単位剤形で提供することは有用となり得る。本発明の処方は、カプセルもしくはアンプルで、または多回用量容器で提供してもよい。該単位剤形は、懸濁剤、安定剤および/または分散剤などの処方剤を共用した有効成分の懸濁液、溶液または乳濁液を含めた、本明細書に記載の任意の処方を含んでもよい。例示的な実施形態では、該医薬単位剤形を静脈点滴バッグ(例えば、50ml、100ml、または250ml、または500mlの点滴バッグ)に添加するか、または適当な希釈剤、例えば滅菌した発熱物質非含有の水もしくは塩水によりそのバッグ中で復元した後、例えば静脈注射により患者に投与してもよい。幾種かの医薬単位剤形、特に凍結乾燥剤形では、静脈点滴バッグに添加する前に、適当な希釈剤による復元が必要となる場合がある。例示的な実施形態では、該医薬単位剤形は、本明細書に記載の処方を含んだ容器である。用語「容器」とは、対象物または液体を例えば保存のために入れる、または収容することができる物、例えば入れ物、受器または器を指す。例えば、該容器は10mLのガラス製I型チュービングバイアルであってもよい。一般に、該容器は処方の無菌性および安定性を維持すべきである。例えば、該バイアルは血清用止め栓で密閉し得るものである。更に、様々な実施形態で、該容器は、処方または有効成分の100mg(例えば、単回使用のため)を抜き取れるような設計とすべきである。あるいは、該容器は、より多量の処方または有効成分に適したもの、その量が、例えば約10mg〜約5000mg、約100mg〜約1000mg、および約100mg〜約500mg、約40mg〜約250mg、約60mg〜約80mg、約80mg〜約120mg、約120mg〜約160mg、またはその範囲もしくは間隔、例えば約100mg〜約200mgであってもよい。上記各量の中間的な範囲、例えば約25mg〜約195mgも、本発明の一部であることを意図している。例えば、上記各値のいずれかの組合せを上限および/または下限として用いた値の範囲は、包含されることを意図している。特定の実施形態では、該処方は単位剤形の液体として供給されることも多い。
別の態様では、本発明は、医薬単位剤形(例えば、本明細書に開示した処方を含む容器)および使用説明を含んだキットを提供する。したがって、該容器および該キットは、多回使用向けに十分な処方を提供するような設計としてもよい。様々な実施形態では、該キットは更に希釈剤を含んでもよい。該希釈剤は、別個に、または合わせた形で賦形剤を含み得る。例えば、該希釈剤は、マンニトールなどの張度改良剤、ヒスチジンなどの緩衝剤、ポリソルベート80などの安定剤、メチオニンなどの酸化防止剤、および/またはそれらの組合せを含んでもよい。該希釈剤は、当業者により必要と見なされる場合、他の賦形剤、例えば溶解防止剤を含んでもよい。
本発明の追加の有用な実施形態は、「本発明の概要」と題する本出願の項に記載されている。
本発明は、以下の実施例により更に例示されるが、そうした実施例を限定的なものと見なすべきではない。本願全体を通して引用した参考文献、特許および特許出願公開全ての内容、ならびにその図は、参照により本明細書に組み込まれている。
実施例を通して、別途明記しない限り以下の材料および方法を使用した。
材料および方法
全般的に本発明の実施では、別途指示しない限り、化学、分子生物学、組換えDNA法、免疫学(特に、例えば抗体法)の従来技法、およびポリペプチド調製の標準的技法を採用している。例えば、Sambrook,Fritsch and Maniatis,Molecular Cloning:Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989);Antibody Engineering Protocols(Methods in Molecular Biology),510,Paul,S.,Humana Pr(1996);Antibody Engineering:A Practical Approach(Practical Approach Series,169),McCafferty,Ed.,Irl Pr(1996);Antibodies:A Laboratory Manual,Harlow et al.,C.S.H.L.Press,Pub.(1999);およびCurrent Protocols in Molecular Biology,eds.Ausubel et al.,John Wiley&Sons(1992)を参照されたい。
実施例1
治療用ポリペプチドのクローニングおよび発現
この実施例では、治療用ポリペプチド、特に抗原結合性ポリペプチド、即ちAβに結合できる抗体のクローニングおよび発現を記述する。
本発明の方法による処方のための例示的抗体は3D6である。この3D6 mAbは、AβのN末端に特異的であり、アミロイド斑の食作用を媒介する(例えば、食作用を誘発する)ことが示された。3D6は、分泌APPまたは全長APPを認識せずに、アミノ末端アスパラギン酸を有するAβ種だけを検出する。したがって、3D6は末端特異的な抗体である。該抗体3D6を産生するRB96 3D6.32.2.4と命名された細胞系は、ATTC受入番号PTA−5130を有し、2003年4月8日に寄託された。3D6抗体のクローニング、特性決定およびヒト化は、米国特許出願公開第20030165496A1号に記載されている。
手短に説明すると、抗Aβペプチドマウスモノクローナル抗体(m3D6と命名)のヒト化は、m3D6軽鎖および重鎖可変領域(VおよびV)に対するDNA配列を逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT−PCR)により単離することによって、実行された。m3D6の決定したVおよびV DNA配列に基づいて、相同性のヒトフレームワーク領域を同定した。ヒト化抗体がAβペプチド抗原との相互作用能を保持することを保証するために、肝要なマウスVおよびVフレームワーク残基をヒト化3D6配列中に保持することにより、ヒトのκ軽鎖およびIgG1重鎖配列に関する定常ドメイン領域(CDR)の全体構造を維持した。このプロセスにより同定した、ヒト化3D6のVおよびV配列をコードするDNA配列(5‘シグナルペプチド配列および3‘イントロンスプライス−ドナー配列を含む)は、合成したオーバーラップDNAオリゴヌクレオチドをアニーリング後、DNAポリメラーゼ補充反応をすることにより生成した。ヒト化可変領域配列の各々の完全性は、DNA配列決定により実証された。図1は、h3D6v2と名付けた例示的なヒト化抗Aβペプチド3D6抗体の予測構造の概略的描写を示す。図2では、h3D6v2軽鎖および重鎖の完全なアミノ酸配列を同定している。
ヒト化3D6抗体は、抗Aβ抗体軽鎖および重鎖遺伝子をコードする発現プラスミドによる、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)宿主細胞系のトランスフェクションにより発現した。該抗体を発現するCHO細胞は、標準的なメトトレキセート系薬物選択/遺伝子増幅操作を用いて分離した。所望の繁殖性および増殖表現型を示すクローンCHO細胞系を選択し、使用することにより、動物またはヒト由来成分を含まない化学組成の明確な培地を用いて抗体産生細胞系を樹立した。
実施例2
大規模バイオリアクターを用いた治療用ポリペプチドの調製
この実施例では、治療用ポリペプチド、特に抗Aβ抗体の調製を記述する。
抗Aβ抗体を安定に発現するクローン細胞の開始培養物の融解で、このポリペプチド製造プロセスを開始した。細胞は、動物またはヒト由来タンパク質を含まない化学組成の明確な培地を用いて培養した。次いで培養物を増殖させ、シード用バイオリアクターに接種するために使用し、更にそれを使用して生産用バイオリアクターの多重サイクルに接種した。該生産用バイオリアクターは、フェドバッチ(fed−batch)方式で運転した。生産サイクル終了時に、収穫ならし培地を精密ろ過により清澄化し、更なる下流処理に備えた。
精製プロセスは、標準的なクロマトグラフィー工程とその後のろ過から構成された。精製済み抗体は、限外ろ過により濃縮し、更にポリソルベート80を含まない処方用緩衝液中にダイアフィルトレーションを行った。所望により、ポリソルベート80(植物性)を限外ろ過/ダイアフィルトレーション残留液プールに添加した後、細菌残留ろ過を行ってもよい。該薬物は、−80℃に凍結保存し、本明細書に記載の安定化液体処方を含めた医薬品を更に製造するために、保持した。
実施例3
安定化液体ポリペプチド処方の調製
この実施例では、安定化液体ポリペプチド処方の典型的な組成物について記述する。
抗体医薬品を2バッチ製造した。最初のバッチは、薬物を調合して、1mL当たり20mgの抗Aβ抗体活性物質、10mMのヒスチジン、10mMのメチオニン、4%のマンニトール、0.005%のポリソルベート80を含み、pH6の動物・ヒトタンパク質非含有処方とすることにより、製造した。該医薬品は、抗Aβ抗体活性物質100mg/バイアルでバイアル中に無菌的に充填した。最終医薬品バイアルは、防腐剤を含んでおらず、単回使用だけを意図していた。
医薬品の第2バッチは、ポリソルベート80を含まない処方用緩衝液を用いて、類似の方法により製造した。
実施例4
安定化液体ポリペプチド処方の分析
この実施例では、様々な安定化液体ポリペプチド処方の分析について記述する。
該処方の安定性、および特に物理化学的完全性(凝集、脱アミド化など)が、当分野で周知の以下の方法:外観;pH;タンパク質濃度(A280);生物活性試験を一目的としたELISA;凝集試験を一目的としたドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS−PAGE);凝集および安定性一般の試験を一目的とした、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー(SEC−HPLC);アミノ化および安定性一般の試験を一目的とした、陽イオン交換高速液体クロマトグラフィー(CEX−HPLC);およびペプチドマッピングにより評価した。これらの方法では、様々な温度の試験条件下でタンパク質の回収率および完全性を評価した。
様々な時点での該処方の品質を決定するために、処方の外観分析を行った。分析は、透明性、色合いおよび微粒子の有無について視覚的検査に基づいて行った。例えば、乳白色度を基準懸濁液から見て分析した。本発明に従って作製したポリソルベート80入りおよびなしの処方の外観分析で、各々−80℃、5℃、25℃および40℃で、各々以下の時点:開始時、1ヶ月、2ヶ月、3ヶ月、6ヶ月、9ヶ月および12ヶ月で保存したとき、両処方とも許容し得ることが判明した。
pH分析では、処方pHの約5.5〜約6.5の許容範囲内での維持を確定しようとした。本発明に従って作製したポリソルベート80入りおよびなしの処方のpH分析で、各々−80℃、5℃、25℃および40℃で、各々以下の時点:開始時、1ヶ月、2ヶ月、3ヶ月、6ヶ月、9ヶ月および12ヶ月で保存したとき、両処方とも許容し得ることが判明した。全般的に、pHが5.8未満または6.2超の範囲になることはなかった。
A280測定によるタンパク質濃度分析は、処方タンパク質濃度の約17mg/ml〜約23mg/mlの許容範囲内での維持を確定するために行った。本発明に従って作製したポリソルベート80入りおよびなしの処方のタンパク質濃度分析で、各々−80℃、5℃、25℃および40℃で、各々以下の時点:開始時、1ヶ月、2ヶ月、3ヶ月、6ヶ月、9ヶ月および12ヶ月で保存したとき、両処方とも概ね許容し得ることが判明した。5℃、25℃および40℃で、3ヶ月の時点で保存したとき、ポリソルベート80なしの処方に23mg/mlをわずかに超える範囲のタンパク質濃度があったことを別とすれば、その他の場合のタンパク質濃度は許容範囲内にあった。したがって、タンパク質濃度分析により、特にポリソルベート80入り処方では、加速条件においてもタンパク質の検知可能な損失は生じないことが判明した。その上、タンパク質濃度は、全般的に、開始時点後に有意な時間または温度依存性の変化を示すことはなかった。
生物活性の維持は、部分的にELISA法により試験された。生物活性は、許容活性を≧2500BU/mgまたは50%(即ち、5000BU/mgが100%に等しい)とする、BU/mgとして分析した。本発明に従って作製したポリソルベート80入りおよびなしの処方のELISA分析で、各々−80℃、5℃、25℃および40℃で、各々以下の時点:開始時、1ヶ月、2ヶ月、3ヶ月、6ヶ月、9ヶ月および12ヶ月で保存したとき、両処方とも概ね許容し得ることが判明した。40℃で保存したとき、両処方の12ヶ月時点で生物活性が50%よりわずかに低かったことを別とすれば、その他の場合の生物活性は許容範囲内にあった。
SEC−HPLC分析は、凝集、純度および安定性一般の試験として行った。二塩基性リン酸ナトリウムを緩衝剤とする移動相クロマトグラフィーを用いた条件下でのSEC−HPLC実験では、高分子量生成物および低分子量生成物の比率(%)と比較して、SEC−HPLC分析で≧90%のIgG単量体が同定された場合、その処方が許容し得ることを示した。本発明に従って作製したポリソルベート80入りおよびなしの処方のSEC−HPLC分析で、各々−80℃、5℃、25℃および40℃で、各々以下の時点:開始時、1ヶ月、2ヶ月、3ヶ月、6ヶ月、9ヶ月および12ヶ月で保存したとき、両処方とも概ね許容し得ることが判明した。40℃で6ヶ月以後の各時点で保存したとき、両処方の単量体比率(%)が90%未満の範囲にあった(その場合、各時点の両処方に少なくとも10%より高い低分子量生成物が、分析により同定された)ことを別とすれば、その他の場合の単量体比率(%)は許容範囲内にあった。SEC−HPLC分析により、高分子量および低分子量のプロファイルは、ポリソルベート入りおよびなしの試料において経時的に異なっていたが、抗体の単量体は、例えば処方を5℃で保存したときの12ヶ月時点で、概ね一定に留まっていることが全般的に判明した。
CEX−HPLC分析は、アミノ化および安定性一般の試験として行った。NaClを緩衝剤とする移動相クロマトグラフィーを用いた条件下でのCEX−HPLC実験では、参照標準プロファイルと同じ程度または異なる程度と分析される、主要ピークの溶出プロファイルおよび保持時間が得られた。本発明に従って作製したポリソルベート80入りおよびなしの処方のCEX−HPLC分析で、各々−80℃、5℃、25℃および40℃で、各々以下の時点:開始時、1ヶ月、2ヶ月、3ヶ月、6ヶ月、9ヶ月および12ヶ月で保存したとき、両処方とも概ね許容し得ることが判明した。40℃で3ヶ月以後の各時点で保存したとき、主要ピークの溶出プロファイルおよび保持時間が、両処方について異なる程度であったことを別とすれば、その他の場合の主要ピークは基準ピークと同じ程度であった。
一般的に、5℃で保存したポリソルベート80入り処方の分析では、以下の特に重要な結論が得られる:1)乳白度、pH、ELISA、CEX−HPLC、SEC−HPLCおよびSDS PAGEの分析は全て、該処方の変化が9ヶ月に亘り最小限であることを示した;2)5℃で保存した処方は、その加速試料より9ヶ月経過基準試料に類似しているようであった;3)ペプチドマッピングは5℃で変化を示した;ならびに4)5℃でのSEC−HPLC傾向データから、少なくとも17.2ヶ月の安定性が予測された(図6を参照)が、カラム、機器および緩衝液の変動性を除外すると、そのデータから30ヶ月超の安定性が予測された(図7を参照)。その上、25℃で保存したポリソルベート80入り加速試料は、9ヶ月での全規格に合格した(図4を参照)。
更に、5℃で保存したポリソルベート80なしの処方の分析では、以下の特に重要な結論が得られる:1)乳白度、pHおよびELISAの分析は全て、該処方の変化が9ヶ月に亘り最小限であることを示した;2)CEX−HPLCおよびSDS PAGEの結果は、9ヶ月での基準試料または−80℃の対照と同等程度の知見を示した;3)SEC−HPLC分析は9ヶ月に亘って小さな変化を示したが、加速温度では変化がより顕著であった;ならびに4)SEC−HPLC傾向データから、測定に変動性の問題があっても、少なくとも18ヶ月の安定性が予測された(図8を参照)。
図3〜5は、本発明に従って作製し、それぞれ5℃、25℃および40℃で保存した処方(ポリソルベート80入りおよびなし)に対する保存寿命予測のグラフ表示である。一般的に、図3〜5は、本発明の処方の保存温度が高いほど、予測される保存寿命は減少することを示している。特に図3は、処方を5℃で保存するとき、その処方の予測保存寿命は少なくとも18ヶ月であることを示している。図4は、室温(25℃)で処方を保存すると、予測保存寿命が約12ヶ月に減少するような影響を受ける恐れがあることを示している。更に図5は、40℃で処方を保存すると、予測保存寿命が約4ヶ月に減少するような影響を受ける恐れがあることを明示している。その上更に、図9は、例えば5℃、12ヶ月では、PS80により高分子量副成物、例えばポリペプチド凝集体の存在量が減少することを示している。
実施例5
酸化防止剤としてメチオニンを使用した際の安定性試験
この実施例では、酸化防止剤、特にメチオニンで安定化した各種の液体ポリペプチド処方の分析について記述する。
治療用抗体処方における抗体の安定性の維持に対するメチオニンの効果を決定するために、試験を行った。4種の抗体(抗CD22 IgG抗体)試料:20mMのコハク酸を含み、pH6.0の抗体処方;20mMのコハク酸および10mMのメチオニンを含む抗体処方;20mMのコハク酸および0.01%のPS80を含む抗体処方;ならびに20mMのコハク酸、10mMのメチオニンおよび0.01%のPS80を含む抗体処方、に関して6ヶ月に亘り様々な温度でSEC−HPLC分析を行った。その結果、一般に、メチオニンは、高分子量(HMW)形成、例えば凝集体の形成を所望通りに減少させることが示された。更に、メチオニンはHMWの比率(%)の温度依存性増加を減少させる(図10を参照)。
更に、以下の4種の抗体(抗B7.2 IgG抗体)試料:(1)抗体、10mMのヒスチジンおよび150mMのNaClを含む試料;(2)抗体、10mMのヒスチジン、150mMのNaClおよび0.01%のPS80を含む試料;(3)抗体、10mMのヒスチジン、150mMのNaClおよび10mMのメチオニンを含む試料;ならびに(4)抗体、10mMのヒスチジン、150mMのNaCl、10mMのメチオニンおよび0.01%のPS80を含む試料、に関して6週間に亘り様々な温度(5℃および40℃)でpH安定性試験(pH5.8、6.0および6.2で)を行った。SEC−HPLC分析を行った。その結果、メチオニンは、示したpH範囲に亘る副生物(例えば、HMW副生物)形成比率(%)の温度依存性増加を減少させることが実証された(図11を参照)。図11に示すように、メチオニンを含んだ試料は、40℃、6週間維持したとき少量の凝集を示したが、それは、5℃、6週間維持した試料の場合と同様であった。
実施例6
示差走査熱量測定法を用いた、ポリペプチドの安定化液体処方に関する賦形剤分析
この実施例では、示差走査熱量測定法を用いた、ポリペプチドの様々な液体処方に関する賦形剤分析について記述する。
タンパク質薬物処方の第一目標は、タンパク質を元のままの生物活性な形態で安定化させることである。通常これは、各種賦形剤を基本処方中でスクリーニングし、その分子の分子量および活性に対する効果をモニターすることによって実現できる。このようなパラメーターは安定性の指標となる。安定性の別の測定項目は、多様な生物物理的技法を用いてモニターできる熱変性である。一般に、タンパク質安定度の増加は、融解、変性または分解の高い温度によるものとされてきた。したがって、例示的な抗原結合性ポリペプチド、特にIgG1モノクローナル抗体の熱特性を、VPキャピラリー示差走査熱量計を用いて各種賦形剤の存在下でモニターした。具体的には、各種賦形剤と共に10mMのヒスチジン(pH6.0)を含有する処方について、見掛けTを決定した。幾種かの賦形剤は、熱安定性を増減させることが示された。タンパク質安定度の増加は高い融解温度によるものとされてきたので、対照のT2/T3値(各々74.9℃および83.4℃)と比較して高いT2またはT3をもたらす試料中の賦形剤は、特に望ましい賦形剤と見なされた(下記の表1を参照)。
したがって、グルコース(4%および10%の濃度で処方)、スクロース(4%および10%の濃度で処方)、ソルビトール(4%および10%の濃度で処方)およびマンニトール(4%および10%の濃度で処方)などの賦形剤は、液体ポリペプチド処方、特に抗体IgG処方の安定化に特に良好に機能すると結論を下した。
Figure 2008528638
*対照(10mMヒスチジン、pH6.0)では、2点の遷移、T2およびT3が認められた。もっと早期の遷移(T1)は幾つかの賦形剤の存在下で見られた。
同等の実施形態
当業者であれば、本明細書に記載した本発明の特定の実施形態と同等な多数の実施形態を認識され、または単に日常的な実験の実施でそうした形態を確認できよう。そのような同等な形態は、前記の特許請求の範囲によって包含されることを意図している。
IgG抗体の予測構造と、連鎖内および連鎖間ジスルフィド結合、糖鎖付加部位(六角形記号)、相補性決定領域(CDR)、フレームワーク領域(網掛け)ならびに定常領域の概略的描写を示す図である。 ヒト化3D6第2型(hu3D6.v2)抗Aβ抗体の軽鎖および重鎖、配列番号1および配列番号2それぞれの完全なアミノ酸配列の特定を示す図である。軽鎖相補性決定領域(CDR)、即ちCDR1、CDR2およびCDR3は、各々残基位置24〜39番、55〜61番、および94〜102番にある(上図)。重鎖相補性決定領域(CDR)、即ちCDR1、CDR2およびCDR3は、各々残基位置40〜44番、50〜65番、および99〜108番にある(下図)。予測される分子内ジスルフィド結合は、当該システイン残基の連結で示されている。分子間ジスルフィド結合を形成すると予想されるシステインは、下線で示され、連結の存在が示されている。抗体重鎖のN連結糖鎖付加コンセンサス部位は、残基位置299〜301番に太字イタリック体で示されている(下図)。予測される重鎖C末端リジンは括弧で示されている。 本発明により作製し、5℃で保存した抗体処方(ポリソルベート80(PS80)含有および非含有)の予測保存寿命をグラフに示す図である。 本発明により作製し、25℃で保存した抗体処方(PS80含有および非含有)の予測保存寿命をグラフに示す図である。 本発明により作製し、40℃で保存した抗体処方(PS80含有および非含有)の予測保存寿命をグラフに示す図である。 本発明により作製し、5℃で保存したPS80含有処方の予測分解度をグラフに示す図である。 本発明により作製し、5℃で保存したPS80含有処方のサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)分析を、試験のばらつきを最小化するように再処理したグラフを示す図である。 本発明により作製し、5℃で保存したPS80非含有処方の予測分解度をグラフに示す図である。 PS80が存在すると単量体抗体プロファイルが変化しないまま、安定化ポリペプチド処方内に認められる副生物が、高分子量種から低分子量種へ変化することを示したクロマトグラムを示す図である。 遊離メチオニンなどの酸化防止剤を添加すると、IgG4含有ポリペプチド処方中での不要な副生物、特に高分子量ポリペプチド凝集体の形成が抑制されることをグラフに示す図である。 遊離メチオニンなどの酸化防止剤を添加すると、IgG2含有ポリペプチド処方中での不要な副生物、特に高分子量ポリペプチド凝集体の形成が抑制されることをグラフに示す図である。

Claims (99)

  1. 貯蔵の間に副生成物の形成を示す、治療活性な抗原結合性ポリペプチドと、
    処方を貯蔵する間のポリペプチドの副生成物の形成を減少させるのに十分な量にて存在する、酸化防止剤とを含む、液体処方。
  2. 治療活性な抗原結合性ポリペプチド成分が、抗体、抗体Fv断片、抗体Fab断片、抗体Fab’(2)断片、抗体Fd断片、一本鎖抗体(scFv)、単一ドメイン抗体断片(Dab)、少なくとも1個の抗体相補性決定領域(CDR)を含むβ−プリーツシートポリペプチド、および少なくとも1個の抗体相補性決定領域を含む非球状ポリペプチドからなる群より選択される、ところの請求項1記載の処方。
  3. 治療活性な抗原結合性ポリペプチドが抗体である、ところの請求項1記載の処方。
  4. 抗体がIgG1、IgG2、IgG3およびIgG4からなる群より選択される亜型のものである、ところの請求項3記載の処方。
  5. 副生成物が高分子量ポリペプチド凝集体、低分子量ポリペプチド分解生成物およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、ところの請求項1記載の処方。
  6. 高分子量凝集体が、抗体:抗体の複合体、抗体:抗体フラグメントの複合体、抗体フラグメント:抗体フラグメントの複合体、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、ところの請求項5記載の処方。
  7. 低分子量ポリペプチド分解生成物が抗体軽鎖、抗体重鎖、抗体軽鎖と重鎖の複合体、抗体断片およびそれらの組み合わせから選択される、ところの請求項5記載の処方。
  8. 酸化防止剤がメチオニンおよびその類縁体からなる群より選択される、ところの請求項1記載の処方。
  9. メチオニンが約0.1mMないし約25mMの量にて存在する、ところの請求項8記載の処方。
  10. メチオニンが約10mMの量にて存在する、ところの請求項8記載の処方。
  11. 処方が非経口的、静脈内、筋肉内、皮下、頭蓋内または硬膜外に投与するのに適する、ところの請求項1記載の処方。
  12. 処方が血液−脳−関門の横断能を有する、ところの請求項1記載の処方。
  13. 処方がさらに等張化剤を含む、ところの請求項1記載の処方。
  14. 等張化剤がマンニトールである、ところの請求項13記載の処方。
  15. 静脈内投与に適する、ところの請求項13記載の処方。
  16. さらにヒスチジンを含む、ところの請求項1記載の処方。
  17. 抗原結合性ポリペプチド、メチオニン、ヒスチジンおよびマンニトールを含む、液体処方。
  18. 静脈内投与に適しているところの、請求項17記載の処方。
  19. 抗原結合性ポリペプチドが癌抗原、自己免疫抗原、アレルゲンおよび病原体からなる群より選択される抗原種の抗原に結合するところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  20. 抗原結合性ポリペプチドが約0.1mg/mlないし約200mg/mlにて存在するところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  21. 抗原結合性ポリペプチドが約17mg/mlにて存在するところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  22. 抗原結合性ポリペプチドが約20mg/mlにて存在するところの、請求項1ないし20のいずれか一項に記載の処方。
  23. 抗原結合性ポリペプチドが約30mg/mlにて存在するところの、請求項1ないし20のいずれか一項に記載の処方。
  24. マンニトールが処方の等張性を維持するのに十分な量で存在するところの、請求項14および17ないし23のいずれか一項に記載の処方。
  25. マンニトールが約2%w/vないし約10%w/vにて存在するところの、請求項14および17ないし24のいずれか一項に記載の処方。
  26. マンニトールが約4%w/vにて存在するところの、請求項14および17ないし24のいずれか一項に記載の処方。
  27. マンニトールが約6%w/vにて存在するところの、請求項14および17ないし24のいずれか一項に記載の処方。
  28. マンニトールが約10%w/vにて存在するところの、請求項14および17ないし24のいずれか一項に記載の処方。
  29. ヒスチジンが生理的に適当なpHを維持するのに十分な量にて存在するところの、請求項16ないし28のいずれか一項に記載の処方。
  30. ヒスチジンが約0.1mMないし約25mMにて存在するところの、請求項16ないし29のいずれか一項に記載の処方。
  31. ヒスチジンが約10mMにて存在するところの、請求項16ないし29のいずれか一項に記載の処方。
  32. さらに安定剤を含む、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  33. 安定剤がポリソルベート80を含むところの、請求項32記載の処方。
  34. ポリソルベート80が約0.001%w/vないし約0.01%w/vにて存在するところの、請求項33記載の処方。
  35. ポリソルベート80が約0.005%w/vにて存在するところの、請求項33記載の処方。
  36. ポリソルベート80が約0.01%w/vにて存在するところの、請求項33記載の処方。
  37. 約4ないし約9のpHを有するところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  38. 約6ないし約7のpHを有するところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  39. 凍結に対して安定的であるところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  40. 少なくとも約12ヶ月の間、安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  41. 少なくとも約18ヶ月の間、安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  42. 少なくとも約24ヶ月の間、安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  43. 少なくとも約30ヶ月の間、安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  44. 約−80℃ないし約40℃で安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  45. 約0℃ないし約25℃で安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  46. 約2℃ないし約8℃で安定しているところの、上記した請求項のいずれか一項に記載の処方。
  47. 患者への投与を介して該患者における疾患を治療するための、上記した請求項のいずれか一項に記載の有効量の処方を含む、医薬単位剤形
  48. 処方を含有する容器である、請求項47記載の医薬単位剤形。
  49. 約1mgないし約2000mgのAβ結合性ポリペプチドを含有するバイアルである、請求項47記載の容器。
  50. 約50mgないし約1500mgのAβ結合性ポリペプチドを含有するバイアルである、請求項47記載の容器。
  51. 約5mgないし約50mgのAβ結合性ポリペプチドを含有するバイアルである、請求項47記載の容器。
  52. バイアルが約2ないし約100mlの容量を有するところの、請求項47記載の医薬単位剤形。
  53. バイアルが約2ないし約10mlの容量を有するところの、請求項47記載の医薬単位剤形。
  54. 患者への静脈内注射に適する、請求項47ないし53のいずれか一項に記載の医薬単位剤形。
  55. a)請求項47ないし54のいずれか一項に記載の医薬単位剤形;および
    b)使用説明書
    を含む、キット。
  56. 使用のためのラベルが付されている容器である、請求項47に記載の医薬単位剤形を含む容器。
  57. 予防的使用のためにラベルが付されている、請求項56記載の容器。
  58. 治療的使用のためにラベルが付されている、請求項56記載の容器。
  59. 貯蔵の間に液体処方中にて副生成物の形成を示す抗原結合性ポリペプチドの、液体医薬処方中でのその安定性を向上させる方法であって、酸化防止剤を該ポリペプチドの副生成物を形成する量を減少させるのに十分な量にて該処方に配合することを含む、方法。
  60. 抗原結合性ポリペプチド成分が、抗体、抗体Fv断片、抗体Fab断片、抗体Fab’(2)断片、抗体Fd断片、一本鎖抗体(scFv)、単一ドメイン抗体断片(Dab)、少なくとも1個の抗体相補性決定領域(CDR)を含むβ−プリーツシートポリペプチド、および少なくとも1個の抗体相補性決定領域を含む非球状ポリペプチドからなる群より選択される、ところの請求項59記載の方法。
  61. 副生成物が高分子量ポリペプチド凝集体、低分子量ポリペプチド分解生成物およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、ところの請求項59記載の方法。
  62. 酸化防止剤がメチオニンおよびその類縁体からなる群より選択される、ところの請求項59記載の方法。
  63. 処方の賦形剤を合して含む、請求項1ないし46のいずれか一項に記載の処方の製法。
  64. 抗原結合性ポリペプチドと1種または複数の希釈剤とを合し、ここで該1種または複数の希釈剤が処方の賦形剤を含む、請求項1ないし46のいずれか一項に記載の処方の製法。
  65. 請求項1ないし46のいずれか一項に記載の処方を適当な容器中にて合して含む、医薬単位剤形の製法。
  66. 抗原結合性ポリペプチドと、少なくとも一部の賦形剤とを含む溶液を、残りの賦形剤を含む希釈剤と合して含む、請求項1ないし46のいずれか一項に記載の処方の製法。
  67. 凍結する前の温度から約10℃で少なくとも約12ヶ月間安定しており、約5.5ないし約6.5のpHを有する処方であって、
    i.約1mg/mlないし約30mg/mlの濃度の最低限の抗原結合性ポリペプチドと、
    ii.約4%w/vの濃度のマンニトールまたは約150mMの濃度のNaClと、
    iii.約5mMないし約10mMのヒスチジンまたはスクシナートと、および
    iv.10mMのメチオニンと
    を含む、処方。
  68. 約2℃ないし8℃の温度で少なくとも約24ヶ月間安定しており、約0.001%w/vないし約0.01%w/vの濃度のポリソルベート80を含む、請求項67記載の処方。
  69. 約6.0ないし約6.5のpHを有し、約10mg/mlの抗原結合性ポリペプチド、約10mMのヒスチジンおよび約4%w/vのマンニトールおよび約0.005%w/vのポリソルベート80を含む、請求項67記載の処方。
  70. 約6.0ないし約6.2のpHを有し、約20mg/mlの抗原結合性ポリペプチド、約10mMのヒスチジン、約4%w/vのマンニトールおよび約0.005%w/vのポリソルベート80を含む、請求項67記載の処方。
  71. 約6.0ないし約6.2のpHを有し、約30mg/mlの抗原結合性ポリペプチド、約10mMのヒスチジン、約4%w/vのマンニトールおよび約0.005%w/vのポリソルベート80を含む、請求項67記載の処方。
  72. さらに約4%w/vのマンニトールを含む、請求項71記載の処方。
  73. さらに約0.001%w/vないし約0.01%w/vの濃度のポリソルベート80を含む、請求項71記載の処方。
  74. 約0.005%w/vのポリソルベート80を含む、請求項73記載の処方。
  75. 抗原結合性ポリペプチドが約17mg/mlないし約23mg/mlの濃度にて存在するところの、請求項71記載の処方。
  76. 約2℃ないし約8℃の温度で少なくとも約24ヶ月間安定しており、約5.5ないし約6.5のpHを有する処方であって、約2mg/mlないし約23mg/mlの抗原結合性ポリペプチドと、約10mMのスクシナートと、約10mMのメチオニンと、約4%w/vのマンニトールと、約0.005%w/vのポリソルベート80とを含む、処方。
  77. 約−50℃ないし約−80℃で融解させた場合に安定しており、約40ないし約60mg/mlの抗原結合性ポリペプチドと、約1.0mg/mlないし約2.0mg/mlのヒスチジンと、約1.0mg/mlないし2.0mg/mlのメチオニンと、約0.005%w/vのポリソルベート80とを含み、約6.0のpHを有する、処方。
  78. マンニトールが除外されているところの、請求項77記載の処方。
  79. 約20mg/mlの抗原結合性ポリペプチド、約10mMのL−ヒスチジン、約10mMのメチオニン、約4%のマンニトールを含み、約6のpHを有する、処方。
  80. 約30mg/mlの抗原結合性ポリペプチド、約10mMのスクシナート、約10mMのメチオニン、約6%のマンニトールを含み、約6.2のpHを有する、処方。
  81. 約20mg/mlの抗原結合性ポリペプチド、約10mMのL−ヒスチジン、約10mMのメチオニン、約4%のマンニトール、約0.005%のポリソルベート80を含み、約6のpHを有する、処方。
  82. 約10mg/mlの抗原結合性ポリペプチド、約10mMのスクシナート、約10mMのメチオニン、約10%のマンニトール、約0.005%のポリソルベート80を含み、約6.5のpHを有する、処方。
  83. 約5mg/mlないし約20mg/mlの抗原結合性ポリペプチド、約5mMないし約10mMのL−ヒスチジン、約10mMのメチオニン、約4%のマンニトール、約0.005%のポリソルベート80を含み、約6.0ないし約6.5のpHを有する、処方。
  84. 約5mg/mlないし約20mg/mlの抗原結合性ポリペプチド、約5mMないし約10mMのL−ヒスチジン、約10mMのメチオニン、約150mMのNaCl、約0.005%のポリソルベート80を含み、約6.0ないし約6.5のpHを有する、処方。
  85. a.約10mgないし約250mgの抗原結合性ポリペプチド;
    b.約4%マンニトールまたは約150mMのNaCl;
    c.約5mMないし約10mMのヒスチジンまたはスクシナート;および
    d.約10mMのメチオニン
    を含む処方からなる、医薬単位剤形。
  86. 約0.001%ないし約0.1%のポリソルベート80を含む、請求項85記載の医薬単位剤形。
  87. 約40mgないし約60mgの抗原結合性ポリペプチドを含む、請求項86記載の医薬単位剤形。
  88. 約60mgないし約80mgの抗原結合性ポリペプチドを含む、請求項86記載の医薬単位剤形。
  89. 約80mgないし約120mgの抗原結合性ポリペプチドを含む、請求項86記載の医薬単位剤形。
  90. 約120mgないし約160mgの抗原結合性ポリペプチドを含む、請求項86記載の医薬単位剤形。
  91. 約160mgないし約240mgの抗原結合性ポリペプチドを含む、請求項86記載の医薬単位剤形。
  92. a.
    i.約10mgないし約250mgの抗原結合性ポリペプチド、
    ii.約4%マンニトールまたは約150mMのNaCl、
    iii.約5mMないし約10mMのヒスチジン、および
    iv.約10mMのメチオニン
    を含むガラスバイアルと、
    b.約0.15mg/kgないし約5mg/kgの用量を得るのに必要な適当容量を用いるための説明書を含む、使用のためのラベルと
    を含む、治療製品。
  93. 用量が約0.5mg/kgないし約3mg/kgであるところの、請求項92記載の治療製品。
  94. 用量が約1mg/kgないし約2mg/kgであるところの、請求項92記載の治療製品。
  95. 抗原結合性ポリペプチドの濃度が約10mg/mlないし約60mg/mlであるところの、請求項92記載の治療製品。
  96. 抗原結合性ポリペプチドの濃度が約20mg/mlであるところの、請求項92記載の治療製品。
  97. さらに約0.005%w/vのポリソルベート80を含む、請求項92記載の治療製品。
  98. 皮下投与にて用いるところの、請求項92記載の治療製品。
  99. 静脈内投与にて用いるところの、請求項92記載の治療製品。
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