TW201542226A - 抗－ｉｌ－４／抗－ｉｌ－１３雙特異性抗體／聚麩胺酸配製物 - Google Patents

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Abstract

本發明係提供包括液體配製物和凍乾配製物之安定的醫藥抗體配製物，其係包括抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體、由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成的聚胺基酸及低溫保護劑，其中該配製物具有50mM或更低的鹽濃度。本發明亦提供包括液體配製物和凍乾配製物之安定的醫藥抗體配製物，而該配製物係包括抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體、由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成的聚胺基酸、低溫保護劑及緩衝系統，其中該配製物的pH為約pH 7，且其中該配製物具有50mM或更低的鹽濃度。此等配製物可視需要進一步包括界面活性劑或安定劑或二者。本發明係包括製造此等配製物之方法。此等配製物可用於治療各種疾病。

Description

抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體/聚麩胺酸配製物
本發明係提供包括液體配製物和凍乾配製物之安定的醫藥抗體配製物，而該配製物係包括抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體、由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成的聚胺基酸及低溫保護劑，其中該配製物具有50mM或更低的鹽濃度。本發明亦提供包括液體配製物和凍乾配製物之安定的醫藥抗體配製物，而該配製物係包括抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體、由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成的聚胺基酸、低溫保護劑及緩衝系統，其中該配製物的pH為約pH 7，且其中該配製物具有50mM或更低的鹽濃度。此等配製物可視需要進一步包括一界面活性劑或安定劑或二者。本發明係包括製造此等配製物之方法。此等配製物可用於治療各種疾病。
基於IL-4和IL-13的生物功能，其為治療上重要的細胞激素且在許多疾病上(包括氣喘)扮演著重要角色(Curr Opin Allergy Clin Immunol 2005,Vo.5,161-166)。IL-4已顯示能抑制自體免疫疾病，而IL-4和IL-13二者已顯示促進抗-腫瘤免疫反應之潛在性。因為此二種細胞激素涉及過敏性疾病之發病機制，這些細胞激素的抑制劑應能提供治療利益。
為了開發適合皮下給藥之含有抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體的醫藥配製物，此抗體必須濃縮至約100mg/mL或更高。然而，在此等高濃度下可能引起許多併發症，包括黏性增加、pH轉變、溶液顏色改變及形成可視性和次可視性(sub-visible)粒子。抗體之配製物因其在高濃度下容易聚集之事實而更複雜化。當典型的抗體正常係在5℃於4年的時間內形成低於5%高分子量聚集體時，而抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體則在25℃以每小時介於0.5-1%間的速率及在5℃以每小時0.1%速率形成HMW。實際上，此抗體具有強力的聚集傾向，其無法以目標濃度範圍調配於液體中。最後，抗-IL4/抗-IL13雙特異性抗體具有特別低的等電點，使其因溶解度問題而更難以調配。
包括標準醫藥賦形劑之先前的抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體配製物之即用藥品調配物，具有下列組成：抗體100mg/mL、磷酸鹽6.5mM/Tris 3.7mM、pH 7.0、PS80 0.2%(w/v)、蔗糖5%(w/v)以及脯胺酸或甘露醇3%(w/v)。這些先前的配製物為安定的，但抗體隨著時間仍具有聚集成高分子量可溶性聚集物之強烈的傾向。儘管廣泛的配製物試驗係針對降低抗體的聚集，但就標準配製物賦形劑仍未見到顯著的改善。抗體的不安定性對於製造過程(調配的藥物物質係以略低於1/3的最終藥物濃度來調配，其應冷凍乾燥，以便於在藥物/藥品製造期間管理安定性)以及對於使用中的安定性(由於在100mg/mL時抗體安定性低，所以即席復原和注射應於室溫下在不超過1小時內進行)相當不利。膠體聚集(形成微粒)及化學性降解使現有的配製物受限。主要的降解路徑為HMW形成，其與mAb濃度密切相關。例如，游離的藥物物質在35mg/mL時於6小時後具有+0.9%的HMW，及在室溫24小時後有+3.6%的HMW，而藥品在100mg/mL時1小時之後具有+0.6%的HMW且在室溫24小時之後為+15%的 HMW(HMW形成在5℃時慢10倍)。因此，此分子在液體狀態時的聚集速率為開發增加復原後及注射前的使用效期，及藉由降低對離開冷藏時間(TOR)的限制讓流程升級之商業配製物的主要障礙。
因此，對於可解決這些併發症之改良和安定的醫藥配製物存有需求。
本發明之目的係提供一配製物，其中抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體，相較於前先的抗體配製物，增加數小時的安定性。本發明另外的目的係提供其中聚集物(可溶性HMW聚集物)減低之配製物。
為了符合此等和其他需求，文中係提供包括液體配製物和凍乾配製物之高安定性醫藥抗體配製物，其係包括一抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體、由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成的聚胺基酸及一低溫保護劑，其中該配製物具有50mM或更低的鹽濃度。文中亦提供包括液體配製物和凍乾配製物之高安定性醫藥抗體配製物，而其係包括抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體、由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成的聚胺基酸、低溫保護劑及緩衝系統，其中該配製物的pH為約pH 7，且其中該配製物具有50mM或更低的鹽濃度。此等配製物可視需要進一步包括界面活性劑或安定劑或二者。這些配製物係就習用配製物加以改良，習用配製物其在配製物中在抗體濃度增加時常會導致抗體的分子聚集。特言之，本發明之配製物在有關高分子量蛋白上展現良好的安定性。
本發明一實施例係提供安定的抗體配製物，其包括：雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體或其抗原結合片段，而該抗體或其抗原結合片段係包括一式VL1-連接子-VL2之輕鏈和一式VH1-連接子-VH2之重鏈， 其中VL1為一可變輕鏈區及VH1為一可變重鏈區，其形成一第一抗原(例如IL-13)之抗原結合區，而VL2為一可變輕鏈區及VH2為一可變重鏈區，其形成一第二抗原(IL-4抗原)之抗原結合區；由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸具有介於25至200之平均聚合度，及隨機接枝1至13%的維生素E；及一低溫保護劑；其中抗體與麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸之莫耳比係介於1：0.25至1：2.5，及其中該配製物係含有50mM或更低的鹽類。
在其他的實施例中，此雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體或其抗原結合片段的輕鏈係包括化學式N-VL1-連接子-VL2-CL-C，其中CL為抗體的輕鏈恆定區，此雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體或其抗原結合片段的重鏈係包括化學式N-VH1-連接子-VH2-CH1-C，其中CH1為抗體的第一重鏈恆定區。在這些實施例中，VL1為外(N-端)可變輕鏈區。VL1係與VL2相連接。VL2為內(C-端)可變輕鏈區，其係與恆定輕鏈區(CL)相連接。在這些實施例中，VH1為外(N-端)可變重鏈區。VH1係與VH2相連接。VH2為內(C-端)可變重鏈區，其係與恆定可變重鏈區(CH1)相連接。在這些實施例中，VL2和VH2形成一外(N-端)抗原結合區，而VL1和VH1形成一內(C-端)抗原結合區。
又在其他的實施例中，此雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體的輕鏈係包括式N-VL1-連接子-VL2-CL-C，其中CL為抗體的輕鏈恆定區，及此雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體的重鏈係包括式N-VH1-連接子-VH2-CH1-CH2-CH3-C，其中CH1為抗體的第一重鏈恆定區，而CH2-CH3係相當於抗體的Fc區。在這些實施例中，VL1為外(N-端)可變輕鏈區。VL1係與VL2相連接。VL2為內(C-端)可變輕鏈區，其係與恆定輕鏈區(CL)相連接。在這些實施例中，VH1為外(N-端)可變重鏈區。VH1係與VH2 相連接。VH2為內(C-端)可變輕鏈區，其係與恆定重鏈區(CH1)相連接。在這些實施例中，VL2和VH2形成一外(N-端)抗原結合區，而VL1和VH1形成一內(C-端)抗原結合區。
在特定的實施例中，VL1係包括SEQ ID NO：1之胺基酸序列；VH1係包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；VL2係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及VH2係包括SEQ ID NO：4或5之胺基酸序列。
在特定的實施例中，VL1係包括SEQ ID NO：1之CDR序列；VH1係包括SEQ ID NO：2之CDR序列；VL2係包括SEQ ID NO：3之CDR序列；及VH2係包括SEQ ID NO：4或5之CDR序列。
在一實施例中，VL1係包括RASESVDSYGQSYMH(CDR1；SEQ ID NO：8)、LASNLES(CDR2；SEQ ID NO：9)和QQNAEDSRT(CDR3；SEQ ID NO：10)之CDR序列，VH1係包括GFSLTDSSIN(CDR1；SEQ ID NO：11)、DGRID(CDR2；SEQ ID NO：12)和DGYFPYAMDF(CDR3；SEQ ID NO：13)之CDR序列，及VL2係包括HASQNIDVWLS(CDR1；SEQ ID NO：14)、KASNLHTG(CDR2；SEQ ID NO：15)和QQAHSYPFT(CDR3；SEQ ID NO：16)之CDR序列，及VH2係包括GYSFTSYWIH(CDR1；SEQ ID NO：17)、IDPSDGETR(CDR2；SEQ ID NO：18)和LKEYGNYDSFYFDV(CDR3；SEQ ID NO：19)之CDR序列。
在另外的實施例中，VL1係包括RASESVDSYGQSYMH(CDR1；SEQ ID NO：8)、LASNLES(CDR2；SEQ ID NO：9)和QQNAEDSRT(CDR3；SEQ ID NO：10)之CDR序列，VH1係包括GFSLTDSSIN(CDR1；SEQ ID NO：11)、DGRID(CDR2；SEQ ID NO：12)和DGYFPYAMDF(CDR3；SEQ ID NO：13)之CDR序列，VL2係包括 HASQNIDVWLS(CDR1；SEQ ID NO：14)、KASNLHTG(CDR2；SEQ ID NO：15)和QQAHSYPFT(CDR3；SEQ ID NO：16)之CDR序列，及VH2係包括GYSFTSYWIH(SEQ ID NO：20)、IDASDGETR(SEQ ID NO：21)和LKEYGNYDSFYFDV(SEQ ID NO：22)之CDR序列。
在特定的實施例中，此連接子係包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列。
在特定的實施例中，此雙特異性抗體或其抗原結合片段進一步係包括一恆定區。在特定的實施例中，此恆定區係由CH1、CH2、CH3和CL組成之群中選出。
在特定的實施例中，此雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：23或其變異體之恆定區。在其他的實施例中，此雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：24或其變異體之恆定區。
在特定的實施例中，此雙特異性抗體或其抗原結合片段為一人源化IgG4雙特異性抗體或其抗原結合片段。
在特定的實施例中，此抗體或其抗原結合片段之濃度為約100mg/mL。
在特定的實施例中，由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸係具有介於40至120之標稱聚合度。
在特定的實施例中，由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸係隨機接枝5-13%的維生素E。在特定的實施例中，由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸係隨機接枝10%的維生素E。
在特定的實施例中，由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸，濃度為約5-約10mg/mL。
在特定的實施例中，此低溫保護劑濃度為約30-約120mg/g。在其他的實施例中，此低溫保護劑濃度為約40-約100mg/g。在另外的實施例中，此低溫保護劑濃度為約45-約90mg/g。
在特定的實施例中，此低溫保護劑為一雙糖。在特定的實施例中，此雙糖為蔗糖。在另外特定的實施例中，此蔗糖濃度係由50mg/g和90mg/g組成之群中選出。
在特定的實施例中，在液體形式中於室溫24小時後此聚集物的含量係不超過11%。
在特定的實施例中，此配製物係以含有介於75至125mg/ml抗體濃度之液體形式來使用。
在一特定的實施例中，此配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約10mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；及約50mg/g的蔗糖；其中該配製物含有低於50mM的鹽。
在一特定的實施例中，此配製物係包括約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約10mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚 合物的維生素E；及約90mg/g的蔗糖；其中該配製物含有低於50mM的鹽。
在一特定的實施例中，此配製物係包括約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約5mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有50之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；及約50mg/g的蔗糖；其中該配製物含有低於50mM的鹽。
在一特定的實施例中，此配製物係包括約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約5mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有50之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；及約90mg/g的蔗糖；其中該配製物含有低於50mM的鹽。
在特定的實施例中，本發明係包括抗體配製物，其包含：雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體或其抗原結合片段，其係包括式VL1-連接子-VL2之輕鏈及式VH1-連接子-VH2之重鏈，其中VL1為可變輕鏈區及VH1為可變重鏈區其形成第一抗原(例如IL-13)之抗原結合區，而VL2為可變輕鏈區及VH2為可變重鏈區，其形成第二抗原(例如IL-4)之抗原結合區；聚胺基酸，係由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成，具有介於25至200平均聚合度及隨機接枝上1至13%維生素E；低溫保護劑；及緩衝系 統；其中該配製物的pH為約pH 7，且其中該配製物係含有50mM或更低的鹽。
在其他的實施例中，此雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體或其抗原結合片段的輕鏈區係包括式N-VL1-連接子-VL2-CL-C，其中CL為抗體的輕鏈恆定區，及此雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體或其抗原結合片段的重鏈區係包括式N-VH1-連接子-VH2-CH1-C，其中CH1為抗體的第一重鏈恆定區。在這些實施例中，VL1為外(N-端)可變輕鏈區。VL1係與VL2相連接。VL2為內(C-端)可變輕鏈區，其係與恆定輕鏈區(CL)相連接。在這些實施例中，VH1為外(N-端)可變重鏈區。VH1係與VH2相連接。VH2為內(C-端)可變輕鏈區，其係與恆定重鏈區(CH1)相連接。在這些實施例中，VL2和VH2形成一外(N-端)抗原結合區，而VL1和VH1形成一內(C-端)抗原結合區。
又在其他的實施例中，此雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體之輕鏈區係包括式N-VL1-連接子-VL2-CL-C，其中CL為抗體的輕鏈恆定區，及此雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體之重鏈係包括式N-VH1-連接子-VH2-CH1-CH2-CH3-C，其中CH1為抗體的第一重鏈恆定區而CH2-CH3係相當抗體的Fc區。在這些實施例中，VL1為外(N-端)可變輕鏈區。VL1係與VL2相連接。VL2為內(C-端)可變輕鏈區，其係與恆定輕鏈區(CL)相連接。在這些實施例中，VH1為外(N-端)可變重鏈區。VH1係與VH2相連接。VH2為內(C-端)可變輕鏈區，其係與恆定重鏈區(CH1)相連接。在這些實施例中，VL2和VH2形成一外(N-端)抗原結合區，而VL1和VH1係形成一內(C-端)抗原結合區。
在特定的實施例中，VL1係包括SEQ ID NO：1之胺基酸序列；VH1係包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；VL2係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及VH2係包括SEQ ID NO：4或5之胺基酸序列。
在特定的實施例中，VL1係包括SEQ ID NO：1之CDR序列；VH1係包括SEQ ID NO：2之CDR序列；VL2係包括SEQ ID NO：3之CDR序列；及VH2係包括SEQ ID NO：4或5之CDR序列。
在一實施例中，VL1係包括SEQ ID NO：1之CDR序列；VH1係包括SEQ ID NO：2之CDR序列；VL2係包括SEQ ID NO：3之CDR序列；及VH2係包括SEQ ID NO：4或5之CDR序列。
在另外的實施例中，VL1係包括RASESVDSYGQSYMH(CDR1；SEQ ID NO：8)、LASNLES(CDR2；SEQ ID NO：9)和QQNAEDSRT(CDR3；SEQ ID NO：10)之CDR序列，VH1係包括GFSLTDSSIN(CDR1；SEQ ID NO：11)、DGRID(CDR2；SEQ ID NO：12)和DGYFPYAMDF(CDR3；SEQ ID NO：13)之CDR序列，VL2係包括HASQNIDVWLS(CDR1；SEQ ID NO：14)、KASNLHTG(CDR2；SEQ ID NO：15)和QQAHSYPFT(CDR3；SEQ ID NO：16)之CDR序列，及VH2係包括GYSFTSYWIH(CDR1；SEQ ID NO：17)、IDPSDGETR(CDR2；SEQ ID NO：18)和LKEYGNYDSFYFDV(CDR3；SEQ ID NO：19)之CDR序列。
在另外的實施例中，VL1係包括RASESVDSYGQSYMH(CDR1；SEQ ID NO：8)、LASNLES(CDR2；SEQ ID NO：9)和QQNAEDSRT(CDR3；SEQ ID NO：10)之CDR序列，VH1係包括GFSLTDSSIN(CDR1；SEQ ID NO：11)、DGRID(CDR2；SEQ ID NO：12)和DGYFPYAMDF(CDR3；SEQ ID NO：13)之CDR序列，VL2係包括 HASQNIDVWLS(CDR1；SEQ ID NO：14)、KASNLHTG(CDR2；SEQ ID NO：15)和QQAHSYPFT(CDR3；SEQ ID NO：16)之CDR序列，及VH2係包括GYSFTSYWIH(SEQ ID NO：20)、IDASDGETR(SEQ ID NO：21)和LKEYGNYDSFYFDV(SEQ ID NO：22)之CDR序列。
在特定的實施例中，此連接子係包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列。
在特定的實施例中，此雙特異性抗體或其抗原結合片段進一步係包括一恆定區。在特定的實施例中，此恆定區係由CH1、CH2、CH3和CL組成之群中選出。
在特定的實施例中，此雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：23或其變異體之恆定區。在其他的實施例中，此雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：24或其變異體之恆定區。
在特定的實施例中，此雙特異性抗體或其抗原結合片段為一人源化IgG4雙特異性抗體或其抗原結合片段。
在特定的實施例中，抗體或其抗原結合片段之濃度為約100mg/mL。
在特定的實施例中，由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸係具有介於40至120之標稱聚合度。在特定的實施例中，由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸係具有50之標稱聚合度。在其他特定的實施例中，由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸係具有100之標稱聚合度。
在特定的實施例中，由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸係隨機接枝5-13%的維生素E。在特定的實施例中，由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸係隨機接枝10%的維生素E。
在特定的實施例中，由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸濃度為約5-約10mg/mL。在特定的實施例中，由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸濃度為約5mg/mL。在其他特定的實施例中，由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸濃度為約10mg/mL。
在特定的實施例中，此低溫保護劑濃度為約5%(w/v)。
在特定的實施例中，此低溫保護劑濃度為一雙糖。在特定的實施例中，此雙糖為蔗糖。在特定的實施例中，此蔗糖濃度為約5%(w/v)。
在特定的實施例中，此緩衝系統係包括至少二種緩衝劑。在特定的實施例中，此緩衝系統濃度為約10mM。在特定的實施例中，此緩衝系統係包括Tris緩稱劑和磷酸鹽緩衝劑。在特定的實施例中，此Tris緩衝劑濃度為約3.7mM。在其他特定的實施例中，此磷酸鹽緩衝劑濃度為約6.3mM。在另外特定的實施例中，此Tris緩衝劑濃度為約3.7mM及此磷酸鹽緩衝劑濃度為約6.3mM。
在特定的實施例中，此配製物進一步係包括界面活性劑。在特定的實施例中，此界面活性劑濃度為約0.2%(w/v)。在特定的實施例中，此界面活性劑為聚山梨醇酯。在特定的實施例中，此聚山梨醇酯為聚山梨醇酯80。在特定的實施例中，聚山梨醇酯80濃度為約0.2%(w/v)。在特定的實施例中，聚山梨醇酯80濃度為約0.2%(w/v)。
在特定的實施例中，此配製物進一步係包括一安定劑。在特定的實施例中，此安定劑濃度為約2.5%-約3%(w/v)。在特定的實施例中，此安定劑為胺基酸或糖。在特定的實施例中，此胺基酸為脯胺酸。在其他特定的實施例中，此糖為甘露醇。在特定的實施例中，脯胺酸濃度為約3%(w/v)。在特定的實施例中，脯胺酸濃度為約3%(w/v)。在特定的實施例中，甘露醇濃度為約3%(w/v)。
在一特定的實施例中，此配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約10mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括一約3.7mM的Tris緩衝劑濃度和一約6.3mM的磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；及約3%(w/v)脯胺酸；其中該配製物的pH為約pH 7；及其中該配製物含有低於50mM的鹽。
在一特定的實施例中，此配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約5mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有50之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括一約3.7mM的Tris緩衝劑濃度和一約6.3mM的磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚 山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；及約3%(w/v)脯胺酸；其中該配製物的pH為約pH 7；及其中該配製物含有低於50mM的鹽。
在一特定的實施例中，此配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約10mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括一約3.7mM的Tris緩衝劑濃度和一約6.3mM的磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；及約3%(w/v)甘露醇；其中該配製物的pH為約pH 7；及其中該配製物含有低於50mM的鹽。
在一特定的實施例中，此配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約5mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有50之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括一約3.7mM的Tris緩衝劑濃度和一約6.3mM的磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；及約3%(w/v)甘露醇；其中該配製物的pH為約pH 7；及其中該配製物含有低於50mM的鹽。
在特定的實施例中，此配製物為一液體配製物。
在其他特定的實施例中，此配製物為一凍乾配製物。
在特定的實施例中，此配製物具有有關高分子量蛋白之良好安定性。
本發明一實施例係提供一套組，該套組係包括一包含本發明配製物之容器，以及供投予和使用此配製物之說明書。
本發明一實施例係包括用於治療過敏疾病、癌症、氣喘、與異常產生IL-4或IL-13或二者有關的疾病，或與TH-2媒介的反應升高有關的疾病之方法，其係包括將本發明之配製物投予有此需要的患者。
本發明一實施例係包括用於製造安定的100mg/mL抗體配製物之方法，其係包括：將約10mg由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸溶液，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E，加到約100mg凍乾的抗體中，形成一配製物；並攪拌配製物。
本發明一實施例係包括用於製造安定的100mg/mL抗體配製物之方法，其係包括：a)將抗體溶液加到由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸溶液中，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；b)攪拌此組合溶液；c)將組合溶液凍乾；及d)以水復原此凍乾粉末以達到100mg/mL的抗體濃度。在特定的實施例中，此方法進一步係包括：將蔗糖加到步驟a)之組合溶液中的步驟。
圖1為代表包括二條輕鏈和二條重鏈之雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體分子的示意圖。此二條輕鏈係包括N-VLhB-B13-連接子-VLh8D4-8-CL-C1部份，及此二條重鏈係包括N-VHhB-B13-連接子-VHh8D4-8-CH1-CH2-CH3-C部份。此連接子序列係包括(G4S)2或 GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)。在此表示圖中，VLhB-B13和VHhB-B13係形成外(N-端)IL-13抗原結合區，而VLh8D4-8和VHh8D4-8係形成內(C-端)IL-4抗原結合區。
圖2係說明一示例抗體的胺基酸序列，亦即B-B13抗-IL-13抗體之人源化可變區(SEQ ID NOS：1和2)和8D4-8抗-IL-4抗體之人源化可變區(SEQ ID NOS：3、4和5)。加底線係表示胺基酸已作改變。粗體係表示CDR序列。
圖3為隨機接枝R或鈉作為相對離子之離子化狀態的聚麩胺酸之示意結構代表圖。
相當於α-生育酚之接枝基團R係顯示於圖4中。
圖5為顯示直接復原法之圖式，其中係將PGA聚合物溶液加到凍乾的藥品中並在室溫於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。此圖係對應實例1-8。
圖6為顯示液體-液體調配和凍乾程序之圖式，其中係將抗體溶液緩慢地加到PGA聚合物溶液中，冷凍乾燥及然後復原。此圖係對應實例9和10。
圖7為顯示如何使用圖6的程序來製造含P2聚合物及無添加鹽之抗體配製物的圖式。此圖係對應實例14、15、17和19。
圖8為顯示單獨的100mg/ml抗體(菱形)與以1：1莫耳比結合P5聚合物之100mg/ml抗體(正方形)的聚集速率圖形。此圖係對應實例14。
圖9為顯示單獨抗體與抗體/無添加鹽之P2聚合物配製物，以不同實體所測量之聚集速率圖形。菱形(實例18)代表由實體B所得來之無添加鹽、單獨的抗體配製物數據。正方形代表由實體A所得來之無添 加鹽的抗體/P2聚合物配製物數據。三角形(實例19)代表由實體B所得來之無添加鹽的抗體/P2聚合物配製物數據。
本發明不限於文中所述之特定的方法、方案、細胞株、載體或試劑，因為在不悖離本發明之精神和範圍下其可改變。再者，文中所用的術語僅為以特定實施例作為例證之目的且不希望限制本發明之範圍。任何類似或相當於文中所述之方法和物質皆可用於施行本發明，而文中僅描述示例性方法、裝置和物質。
文中所提及之所有的專利和公開案係以全文引用的方式併入本文中，作為描述和揭示可能與本發明一起使用或於本發明中使用之文中所提出的蛋白、酵素、載體、宿主細胞及方法之目的。然而，其在文中不應解釋為承認本發明無權藉由先前發明而先於此揭示。
A. 定義
除非另有定義，否則所有文中所用的技術和科學術語係具有如本項技術之一般技術者所正常理解之相同意義。
請注意，除非內容中明確地指出，否則如本說明書和所附的申請專利範圍中所用，單數形式「一」、「此」亦包括複數參照物。
術語「約」或「大約」係指所給予的值或範圍之10%內，及更佳地5%(或1%或更低)之內。
術語「投予」或「給藥」係指注射或另外物理上遞送一存在體外之物質(例如本發明之配製物)至一病患中，例如藉由黏膜、皮內、靜脈內、皮下、肌肉內遞送及/或任何其他文中所述或本項技術中已知的物理性遞送方法。當欲治療一疾病或其癥狀時，物質之投予典型地係在疾 病或其癥狀發作之後。當欲預防一疾病或其癥狀時進行，物質之投予典型地係在疾病或其癥狀發作之前進行。
就多肽的情況下，術語「類似物」係指一多肽，其具有與抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽之片段、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性表位或抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體相似或相同功能，但不一定包括相似或相同的抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽片段、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性表位或抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體之胺基酸序列，或具有相同或類似的抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽片段、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性表位或抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體之結構。具有相似胺基酸序列之多肽係指一多肽其滿足至少下列之一：(a)具有與文中所述的抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽(例如SEQ ID NO：1-5)、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽片段、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性表位或抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體之胺基酸序列為至少30%，至少35%，至少40%，至少45%，至少50%，至少55%，至少60%，至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少95%，或至少99%相同度之胺基酸序列的多肽；(b)由在嚴格的條件下與編碼至少5個胺基酸殘基，至少10個胺基酸殘基，至少15個胺基酸殘基，至少20個胺基酸殘基，至少25個胺基酸殘基，至少40個胺基酸殘基，至少50個胺基酸殘基，至少60個胺基酸殘基，至少70個胺基酸殘基，至少80個胺基酸殘基，至少90個胺基酸殘基，至少100個胺基酸殘基，至少125個胺基酸殘基或至少150個胺基酸殘基之如文中所述的抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽片段、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性表位或抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體(或其VH或VL區)的核苷酸序列雜交的核苷酸所編 碼的多肽(參見，例如Sambrook等人(2001)Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；Maniatis et al.(1982)Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,N.Y.)；及(c)由與編碼文中所述的抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽片段、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性表位活抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體(或其VH或VL區)的核苷酸序列具至少30%，至少35%，至少40%，至少45%，至少50%，至少55%，至少60%，至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少95%或至少99%相同度的核苷酸所編碼的多肽。具有與抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體多肽、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽片段、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性表位或抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體類似結構之多肽係指一多肽，其具有抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體多肽、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性多肽片段、抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性表位或抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體之類似的二級、三級或四級結構。多肽之結構可藉由熟習本項技術者已知的方法來測定，包括(但不限於)X-光結晶學、核磁共振和結晶學電子顯微技術。
就測定二個胺基酸序列或二個核苷酸序列之相同度百分比，係將序列以最佳化比較目的對齊(例如，可將缺位導入第一胺基酸序列或核苷酸序列用於與第二胺基酸或和苷酸序列最佳化聯配)。然後比較在對應胺基酸位置或核苷酸位置的胺基酸殘基或核苷酸。當在第一序列中的一個位置和第二序列中對應位置被相同的胺基酸殘基或核苷酸佔據時，則此分子在該位置為一致的。二個序列間之相同度百分比為此等序列所共享的相同位置之數目(亦即，相同度%=相同的重疊位置數目/位置的總數X100%)。在一實施例中，此二種序列具有相同的長度。
測定二個序列間的相同度百分比(例如胺基酸序列或核酸序列)亦可使用數學運算來進行。用於比較二個序列之數學運算的較佳非限定實例為Karlin和Altschul之運算1990,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87：2264 2268，於Karlin和Altschul,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：5873 5877修改。此一運算係併入NBLAST和XBLAST程式中，Altschul等人，1990,J.Mol.Biol.215：403。BLAST核苷酸搜尋可用NBLAST核苷酸程式參數組來進行，例如得分=100，字長=12得到類似所指核酸分子之核苷酸序列。BLAST蛋白搜尋可用XBLAST程式參數組來進行，例如得分=50，字長=3得到類似所指蛋白分子之胺基酸序列。為了得到就比較目的之缺位比對，可如Altschul等人.,1997,Nucleic Acids Res.25：3389 3402中所描述，使用Gapped BLAST。另一種選擇，可使用PSI BLAST來進行刪除分子間距離關係之迭代搜尋(Id.)。當利用BLAST、Gapped BLAST和PSI Blast程式時，可使用個別程式的內鍵參數(例如XBLAST和NBLAST)(參見，例如National Center for Biotechnology Information(NCBI)於全球資訊網ncbi.nlm.nih.gov上)。另外用於序列比較之數學運算的非限定實例為Myers和Miller之運算法，1988,CABIOS 4：11 17。此一運算係併入ALIGN程式中(version 2.0)，其為GCG序列比對套裝軟體之部分。當利用ALIGN程式比較胺基酸序列時，可使用PAM120重量殘基表，12之缺位長度罰值和4之缺位罰值。
二個序列間的相同度百分比可使用類似上述之技術，在有或無允許缺位下來測定。在計算相同度分比上，典型地僅計算確切的配對數。
「拮抗劑」或「抑制劑」係指能抑制目標分子之一或多項生物活性的分子，例如IL-4或IL-13或二者之訊號傳遞。藉由使被配體活 化的細胞失能或將其殺死，或藉由干擾受體或配體活化(例如酪胺酸激酶活化)或配體與受體結合後之訊號傳導，拮抗劑可干擾受體與配體之結合且反之亦然。拮抗劑可完全阻斷受體-配體相互作用或可實質上降低此相互作用。在本發明特定的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體為人源化、拮抗性抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體，例如人源化、單株、拮抗性抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體。
術語「抗體」、「免疫球蛋白」或「Ig」在文中可交換使用。術語抗體係包括(但不限於)合成抗體、單株抗體、重組產生的抗體、多特異性抗體(包括雙特異性抗體)、人類抗體、人源化抗體、嵌合抗體、內抗體、單鏈Fvs(scFv)(例如包括單特異性、雙特異性等)、駱駝化抗體、Fab片段、F(ab')、二硫化物-連接Fvs(sdFv)、抗-個體基因型(抗-Id)抗體及任何上述之表位結合片段。特言之，抗體係包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫學上活性部分，亦即含有專一與IL-4或IL-13抗原結合之抗原-結合位置的抗原結合區或分子(例如抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體之一或多個互補決定區(CDR))。抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體可為任何型式(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)，任何種類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)，或任何亞類(例如IgG2a和IgG2b)之免疫球蛋白分子。在某些實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體為人源化，例如人源化單株抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體。在特定的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體為IgG抗體，人類IgG4抗體。
術語「抗原」係指能與本發明抗體結合之分子或分子的一部分。一抗原可具有一或一個以上的表位。本發明抗體所辨識之抗原的實例包括(但不限於)血清蛋白，例如細胞激素，如IL-4、IL5、IL9和IL-13、 生物活性胜肽、細胞表面分子例如受體、轉運子、離子通道、病毒和細菌蛋白。
術語「抗原結合位置」係指包括專一與部份或所有抗原結合或互補的區域之抗體部分。當抗原較大時，抗體可能僅與抗原的特定部分結合，此部分稱為表位。抗原結合區可藉由一或多個抗體可變區來提供。在某些實施例中，抗原結合區係由抗體輕鏈可變區(VL)和抗體重鏈可變區(VH)結合所構成。
術語「結合抗原」係指與IL-4及/或IL-13或二者結合或特異結合之任何分子，例如一抗體、siRNA、核酸、適體、蛋白或小分子有機化合物，或其變異體或片段。
術語「雙特異性抗體」或「雙特異性抗體(BsAb)」係指組合單一分子內二個抗體之抗原結合位置的分子。因此，雙特異性抗體能同時與二個不同的抗原結合。除了診斷目的之應用外，BsAb藉由將有效的效應子系統重新導向疾病區域或藉由增加中和或刺激抗體活性，為新的治療應用鋪路。雙特異性抗體可為單株的，及在某些實施例中為人類或人源化的。製造雙特異性抗體之方法已為本項技術所熟知。
術語「副產物」包括減損或減少治療性/預防性結合抗原之比例的不欲的產物，例如在一給予的配製物中之抗體。例如，典型的副產物包括抗體之聚集物、抗體片段例如由去醯胺化或水解之蛋白降解所產生，或其混合物。典型地，聚集物為具有大於單體抗體之分子量的複合物。抗體降解產物可包括，例如抗體片段，例如由去醯胺化或水解所產生的。典型地，降解產物為具有小於單體抗體之分子量的複合物。在IgG抗體的情況下，此等降解產物係低於約150kD。
術語「組成物」和「配製物」希望係涵蓋含有特定成份(例如抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體)，視需要特定量之產品，以及任何直接或間接由特定成份，視需要以特定量組合所產生的產品。
術語「恆定區」係指輕鏈和重鏈之羧基端部分，其不會直接涉及抗體與抗原之結合，但具有各種效應子功能，例如與Fc受體相互作用。此術語係指，相對於其他疫球蛋白分子之部分(含有抗原結合位置之可變區)，具有更保守胺基酸序列之免疫球蛋白分子的部分。恆定區係含有重鏈之CH1、CH2和CH3區以及輕鏈之CHL區。
術語「病症」係指能受益於本發明配製物之治療的任何症狀。此項係包括慢性和急性病症或疾病，其包括該等使哺乳動物及特別是人類，易罹患該所指病症之病理症狀。文中所欲治療之病症的非限定實例包括癌症、發炎、自體免疫疾病、感染、心血管疾病、呼吸疾病、神經疾病和代謝疾病。
術語「表位」係指抗原表面上之局部區域，例如IL-4或IL-13多肽或IL-4或IL-13多肽片段，其能與結合劑，例如抗體之一或多個抗原結合區結合，且其在動物，例如哺乳動物，如人類中具有抗原性或致免疫活性，而能引發免疫反應。具有致免疫活性之表位為在動物中引起抗體反應之多肽的一部份。具有致免疫活性之表位為與抗體特異結合之多肽的一部份，如藉由本項技術中熟知的方法，例如免疫分析所測定。抗原表位不一定需要具有致免疫性。表位通常係由化學活性表面聚合之分子所組成，例如胺基酸或糖側鏈，且具有特定的三維結構特性，以及特定的帶電性特性。形成表位之多肽區可為多肽之鄰接的胺基酸，或此表位可共同來自多肽之二或多個非鄰接區。此表位可為或不可為三-維表面特徵之抗原。在特定的實施例中，IL-4或IL-13表位為三-維表面特徵之IL-4或IL-13 多肽。在其他的實施例中，IL-4或IL-13表位為一線性特徵之IL-4或IL-13多肽。抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體可專一與變性形式之IL-4或IL-13的表位、天然形式之IL-4或IL-13表位，或變性和天然形式之IL-4或IL-13二者的表位相結合。
術語「賦形劑」係指通常用於藥物作為稀釋劑、媒劑、防腐劑、結著劑、安定劑等之惰性物質，並包括(但不限於)蛋白(例如，血清白蛋白等)，胺基酸(例如，天門冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、精胺酸、甘胺酸、組胺酸等)、脂肪酸和磷脂質(例如，烷基磺酸酯、辛酸酯等)、界面活性劑(例如，SDS、聚三梨醇酯、非離子界面活性劑等)、糖類(例如，蔗糖、麥芽糖、海藻糖等)及多醇類(例如，甘露醇、山梨醇等)。亦參見Remington's Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.,Easton,Pa.，其特此係以全文引用的方式併入。
在胜肽或多肽之情況，術語「片段」係指包括少於全長胺基酸序列之胜肽或多肽。此一片段可能係由，例如截去胺基端、截去羧基端，及/或刪除胺基酸序列中間的殘基所產生。片段可，例如由替代的RNA剪接或由活體內蛋白酶活性所產生。在特定的實施例中，IL-4或IL-13片段係包括包含與IL-4或IL-13多肽特異結合之IL-4或IL-13多肽或抗體之至少5個鄰接的胺基酸殘基、至少10個鄰接的胺基酸殘基、至少15個鄰接的胺基酸殘基、至少20個鄰接的胺基酸殘基、至少25個鄰接的胺基酸殘基、至少40個鄰接的胺基酸殘基、至少50個鄰接的胺基酸殘基、至少60個鄰接的胺基酸殘、至少70個鄰接的胺基酸殘、至少80個鄰接的胺基酸殘、至少90個鄰接的胺基酸殘、至少100個鄰接的胺基酸殘基及，至少125個鄰接的相鄰胺基酸殘基，至少150個鄰接的相鄰的胺基酸殘基， 至少175個鄰接的相鄰胺基酸殘基，至少200個鄰接的胺基酸殘基，或至少250個鄰接的胺基酸殘基之胺基酸序列的多肽。
除非內容中另有陳述，否則術語「配製物」係指本發明之無鹽配製物和低鹽配製物二者。
抗體或抗原之「功能性片段、變異體、衍生物或類似物」等詞語和術語，以及其形式，為具有與所指之全長抗體或抗原共通的質性上生物活性之化合物或分子。例如，抗-IL-4抗體之功能性片段或類似物為一可與IL-4分子結合或可防止或實質上降低配體能力者，或與IL-4結合之促效性或拮抗性抗體。
術語「重鏈」當用於有關抗體時係指五種不同的類型，以重鏈恆定區的胺基酸序列為基準，稱為阿爾法(α)、德爾塔(△)、艾蒲賽龍(ε)、伽瑪(γ)和繆(μ)。這些不同類型的重鏈已為本項技術所熟知並分別產生五種抗體IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，包括IgG的四種亞類，亦即IgG1、IgG1、IgG3和IgG4。在某些實施例中，此重鏈為人類重鏈。在特定的實施例中，抗體的重鏈係包括一「外部」或N-端可變重鏈區與一「內部」或C-端可變重鏈區相連接，其係與一恆定重鏈區(CH1)相連接。
術語「輕鏈」當用於有關抗體時係指二種不同的類型，以恆定區的胺基酸序列為基準，稱為拉姆達(κ)，拉姆達(λ)。輕鏈胺基酸序列已為本項技術所熟知。在某些實施例中，此輕鏈為一人類輕鏈。在特定的實施例中，抗體的輕鏈係包括一「外部」或N-端可變輕鏈區與一「內部」或C-端可變輕鏈區相連接，其係與一恆定輕鏈區(CL)相連接。
術語「絞鏈」或「絞鏈區」係指包括抗體之第一和第二恆定區間的胺基酸之柔韌多肽。一組適合修飾作用之胺基酸包括在絞鏈區域中的胺基酸，其影響含有重鏈分子之結合與Fc受體結合以及結合抗體之 內化。此等胺基酸，包括，在IgG1分子中，從約233至約237殘基(Glu-Leu-Leu-Gly-Gly)；(SEQ ID NO：25)從約252至約256(Met-Ile-Ser-Arg-Thr)(SEQ ID NO：26)及從約318(Glu)至約331(Pro)，包括，例如Lys320、Lys322及Pro329。
非人類(例如鼠科)抗體之「人源化」形式為嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其部份(例如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗體之其他標靶-結合的子序列)，相較於人類抗體，其含有衍生自非人類免疫球蛋白之序列。一般而言，人源化抗體將包括實質上全部一個，及典型地二個可變區，其中全部或質實上全部CDR區係相當該等非人類免疫球蛋白，及全部或實質上全部FR區為該等人類免疫球蛋白模板序列。人源化抗體亦可包括至少一部份的免疫球蛋白恆定區(Fc)，典型地所選的人類免疫球蛋白模板之恆定區。一般而言，目的係使抗體分子在人類中具有輕微致免疫性。因此，其可能在無實質上減少一或多個CDR與IL-4及/或IL-13或二者之特異結合功能下，可將一或多個CDR中的一或多個胺基酸改變成對人類宿主較低致免疫性的胺基酸。另一種選擇，FR可為非人類的，但該等大部份致免疫性的胺基酸係以較低致免疫性的胺基酸置換。然而，CDR接枝，如上所論述，並非唯一得到人源化抗體之方法。例如，只修改CDR區可能不夠，因為對於框架殘基參與決定CDR環之三-維結構和抗體對其配體之整體親和力為常見的。因此，可施用任何方法，以便於將非人類親代抗體分子修改成對人類致免性較低，而與人類抗體全局序列一致性並非一定必要。所以，人源化亦可，例如僅藉由一些殘基之取代來進行，特別是該等暴露在抗體分子上而非隱藏在分子內，且因此不易影響宿主免疫系統的殘基。文中教導的此一方法有關在抗體分子上取代「移動」或「柔性」殘基，目標為在無包括抗體對其表位或決定位之特異性下，降低或衰減此生 成分子之致免疫性。參見，例如Studnicka等人.,Prot Eng 7(6)805-814,1994；Mol Imm 44：1986-1988,2007；Sims等人，J Immunol 151：2296(1993)；Chothia et al.,J Mol Biol 196：901(1987)；Carter等人，Proc Natl Acad Sci USA 89：4285(1992)；Presta等人，J Immunol 151：2623(1993),WO 2006/042333及美國專利第5,869,619號。
所指的人源化方法係以在免疫辨識期間及免疫辨識時，影響抗體之分子柔性為基礎。蛋白柔性係關於蛋白分子之分子運動。蛋白柔性為整個蛋白、一部份的蛋白或單一胺基酸殘基接納彼此明顯不同之整體構形的能力。有關蛋白柔性之資訊可藉由進行蛋白X-光晶體學實驗(參見，例如Kundu等人2002,Biophys J 83：723-732.)、核磁共振實驗(參見，例如Freedberg等人，J Am Chem Soc 1998,120(31)：7916-7923)或藉由進行分子動力學(MD)模擬來獲得。蛋白之MD模擬係於電腦上進行並得以藉由計算彼此原子間的物理相互作用於一段時間內決定所有蛋白原子之運動。MD模擬的輸出為研究蛋白於模擬時間內的軌道。該軌道為整體蛋白之構形，亦稱為快照(snapshot)，其係於模擬期間週期性取樣，例如每1微微秒(ps)。其藉由分析整體的快照，可定量蛋白胺基酸殘基的柔性。因此，柔性殘基為在其中存有殘基之多肽的情況下，其接納整體不同構形之殘基。MD方法已為本項技術所知，參見，例如Brooks等人"Proteins：A Theoretical Perspective of Dynamics,Structure and Thermodynamics"(Wiley,New York,1988)。有數種軟體能做MD模擬，例如Amber(參見Case等人(2005)J Comp Chem 26：1668-1688)，Charmm(參見Brooks等人(1983)J Comp Chem 4：187-217；及MacKerell等人(1998)之"The Encyclopedia of Computational Chemistry" vol.1：271-177中，Schleyer等人，eds.Chichester：John Wiley & Sons)或Impact(參見Rizzo等人J Am Chem Soc；2000；122(51)：12898-12900.)。
大部分的蛋白複合物享有相當大及平坦的隱藏表面且其已顯示結合夥伴之柔性係提供其可塑性之來源，使其在構形上能彼此調整(Structure(2000)8,R137-R142)。同樣地，「誘導-契合」之實例已顯示在蛋白-蛋白介面中扮演一個主要角色。此外，有一穩定增加的數據顯示，蛋白實際上係與各種形狀大小及組成的配體結合(Protein Science(2002)11：184-187)且構形的多樣性似乎為辨識不同夥伴之能力的必要組份(Science(2003)299,1362-1367)。柔性殘基係涉及蛋白-蛋白夥伴的結合(Structure(2006)14,683-693)。
柔性殘基可採用各種構形，提供整個相互作用區，其可能藉由記憶B細胞來辨識並觸發致免疫反應。因此，抗體可藉由修飾許多來自框架的殘基加以人源化，使得整個構形和辨識區藉由盡可能與該等被人類抗體採用者相似之修飾的抗體來呈現。
此項可藉由修飾一有限數目的殘基來進行：(1)建構一親代mAb之同源模型及進行一MD模擬；(2)分析柔性殘基並鑑別非人類抗體分子之最柔性的殘劑，以及鑑別可能為異質性或降解反應之來源的殘基或模體；(3)鑑別展現與親代抗體最類似的整個識別區之人類抗體；(4)決定欲突變的柔性殘基，可能為異質性或降解來源的殘基或模體亦產生變異；及(5)檢查已知的T細胞或B細胞表位之反應。使用如文中所教導的MD計算，使用內隱溶劑模型(其係說明水溶劑與蛋白原子於模擬的期間之相互作用)，可發現柔性殘基。一旦鑑別出可變輕鏈和重鏈內的一組柔性殘基，則可鑑別出與所指抗體十分相似的一組人類重鏈和輕鏈可變區框架。此項可，例如，於一組柔性殘基上針對抗體人類生殖系序列之資料庫使用 blast搜尋來進行。其亦可藉由比較親代mAb之動力學與生殖系典型結構庫之動力學來進行。從搜尋中排除CDR殘基和鄰近殘基，以確定保存對抗原的高親和力。
然後置換柔性殘基。當數種人類殘基顯示類似的同源性時，選擇亦藉由可能影響人源化抗體之溶液行為的殘基性質來驅動。例如，極性殘基在暴露的柔性環中基優於疏水性殘基。可能的不安定性和異源性來源之殘基亦為變異的，即使在CDR中發現。此項將包括暴露的甲硫胺酸因為可能由於氧基使亞碸形成、酸-不安定鍵之溶蛋白性裂解例如Asp-Pro二肽(Drug Dev Res(2004)61：137-154)，發現帶有暴露的天門冬醯胺酸殘基接著一個小胺基酸，例如Gly、Ser、Ala、His、Asn或Cys之去醯胺位置(J Chromatog(2006)837：35-43)，及N-糖基化位置，例如Asn-X-Ser/Thr位置。典型地，暴露的甲硫胺酸可被Leu取代，暴露的天門冬醯胺酸可被麩醯胺酸或被天門冬胺酸取代，或改變後續的殘基。就糖基化位置(Asn-X-Ser/Thr)，可改變Asn或Ser/Thr殘基。
就存在的已知B細胞或線性T-細胞表位檢查所生成的組成序列。以例如公開可取得的IEDB進行搜尋。若在組成序列內發現已知的表位，則可回復和取代另一組人列序列。
不同於美國專利第5,639,641號之表面重塑法，B-細胞媒介和T-細胞媒介的致免疫反應二者係藉由此方法來處理。此方法亦避免了有時候在CDR接枝所觀察到的喪失活性之問題(美國專利第5,530,101號)。此外，在工程化和選擇過程中亦考慮安定性和溶解性問題，產生對致免疫性、高抗原親和力和改良的生物物理性質最適化之抗體。
用於表面重塑抗體之策略和方法，及用於降低抗體在不同宿主內的致免疫力之其他方法係揭示於，例如美國專利第5,639,641號中。 簡言之，在一方法中，(1)產生抗體重鏈和輕鏈可變區池之位置比對，以獲得重鏈和輕鏈可變區框架表面暴露位置，其中所有可變區之比對位置微致少約98%相同度；(2)就非人類，例如嚙齒類抗體(或其片段)定義一組重鏈和輕鏈可變區框架表面暴露的胺基酸殘基；(3)鑑別出一組與嚙齒類表面暴露胺基酸殘基組最相似的重鏈和輕鏈可變區框架表面暴露的胺基酸殘基；及(4)將步驟(2)中所定義的重鏈和輕鏈可變區框架表面暴露的胺基酸殘基組以步驟(3)中所鑑別出的重鏈和輕鏈可變區框架表面暴露的胺基酸殘基組取代，但是該等在5Å內的嚙齒類抗體之CDR的任何殘基之任何原子的胺基酸殘基除外，得到一人源化，例如保留結合特異性之嚙齒類抗體。
抗體可藉由各種其他技術加以人源化，包括CDR接枝(EPO 0 239 400；WO 91/09967；及美國專利第5,530,101和5,585,089號)、鑲飾或表面重塑(EPO 0 592 106；EPO 0 519 596；Padlan,1991,Molec Imm 28(4/5)：489-498；Studnicka等人，1994,Prot Eng 7(6)：805-814；及Roguska等人，1994,PNAS 91：969-973)及鏈置換(美國專利第5,565,332號)。人類抗體可藉由各種本項技術中已知的方法來製造，包括(但不限於)噬菌體表現方法，參見美國專利第4,444,887、4,716,111、5,545,806和5,814,318號；及WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741，使用基因轉殖動物，例如嚙齒類，使用嵌合細胞等等。
「介白素-4」(IL-4)係關於天然生成或內源性哺乳動物IL-4蛋白及具有與天然生成或內源性對應哺乳動物IL-4蛋白相同的胺基酸序列之蛋白{例如，重組蛋白、合成蛋白(亦即使用合成有機化學法所製造)}。因此，如文中所定義，此術語包括成熟的IL-4蛋白、多形態或等位基因變異體，及其他IL-4同型和前述之修飾或非修飾型(例如脂質化，糖基化)。 天然生成的或內源性IL-4包括野生型蛋白例如成熟的IL-4、多形態或等位基因變異體，及其他同型和哺乳動物(例如人類、非人類靈長類)中天然生成的突變型。此等蛋白，例如可從天然產生的IL-4來源中回收或分離。這些蛋白和具有與天然生成或內源性對等IL-4相同基酸序列的蛋白，係以對應的哺乳動物之名稱來命名。例如，當對應的哺乳動物為人類時，此蛋白係稱為人類IL-4。數種突變的IL-4蛋白已為本項技術所知，例如該等揭示於WO 03/038041中之蛋白。
「介白素-13」(IL-13)係指天然生成或內源性哺乳動物IL-13蛋白及具有與天然生成或內源性對應哺乳動物IL-13蛋白相同胺基酸序列之蛋白(例如重組蛋白、合成蛋白(亦即使用合成有機化學法所製造))。因此，如文中所定義，此術語包括成熟的IL-13蛋白、多形態或等位基因變異體，及其他IL-13同型(例如藉由替代的剪接或其他細胞處理所製造)和前述之修飾或非修飾型(例如脂質化，糖基化)。天然生成的或內源性IL-13包括野生型蛋白例如成熟的IL-13、多形態或等位基因變異體，及其他同型和哺乳動物(例如人類、非人類靈長類)中天然生成的突變型。例如，如文中所用IL-13係涵蓋人類IL-13變異體，其中成熟的人類IL-13之110位置的Arg係被Gin取代(成熟的IL-13之110位置相當於前驅蛋白的130位置)，其係與氣喘有關(異位性和非異味性氣喘)，以及其他IL-13之變異體(Heinzmann等人，Hum MoI Genet.9：549-559(2000))。此等蛋白，例如可從天然產生的IL-13來源中回收或分離。這些蛋白和具有與天然生成或內源性對等IL-13相同基酸序列的蛋白，係以對應的哺乳動物之名稱來命名。例如，當對應的哺乳動物為人類時，此蛋白係稱為人類IL-13。數種突變的IL-13蛋白已為本項技術所知，例如該等揭示於WO 03/035847中之蛋白。
「分離的」或「純化的」結合抗原，例如抗體，為實質上無細胞物質或其他來自衍生此結合抗原之細胞或組織來源的汙染蛋白，或當由化學合成時，其實質上無化學前驅物或其他化學物質。例如，「實質上無細胞物質」一詞係包括抗體之製備物，其中該抗體係由從其分離或重組製造之細胞的細胞組份所分離。因此，實質上無細胞物質之抗體係包括具有低於約30%、20%、10%或5%(以乾重計)之異源蛋白(文中亦稱為「汙染蛋白」)的抗體製備物。當此抗體係重組產生時，其實質上亦無培養基，亦即培養基係低於約20%、10%或5%之蛋白製備物的容量。當此抗體係由化學合成所製造時，其實質上係無化學前驅物或其他化學物，亦即其與涉及此蛋白合成的化學前驅物或其他化學物分開。因此，此等抗體製備物係具有低於約30%、20%、10%、5%(乾重比)之化學前驅物或相關抗體以外的化合物。在一實施例中，抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體係經分離或純化。
術語「Kabat編號」及類似術語已為本項技術所承認並係指比抗體或其抗原結合蛋白之重鏈和氫鏈可變區的其他胺基酸殘基更可變(亦即高可變)的胺基酸殘基之編號系統(Kabat等人(1971)Ann.NY Acad.Sci.190：382-391及Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242)。就重鏈可變區，此高變區典型地範圍係從CDR1之31至35的胺基酸位置，CDR2之50至65的胺基酸位置，CDR3之95至102的胺基酸位置。就輕鏈可變區，此高變區典型地範圍係從CDR1之24至34的胺基酸位置，CDR2之50至56的胺基酸位置，CDR3之89至97的胺基酸位置。
術語「連接子」係指連接抗體之抗原結合區的分子。此連接子可為任何種類的連接子分子。在某些實施例中，此連接子為一多肽。在重鏈多肽和輕鏈多肽之間和之內的連接子彼此可相同或不同。再者，此連接子可具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸之長度。如用於輕鏈區，用於重鏈之較佳的胜肽連接子單位為(G4S)2，亦即GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)。重鏈和輕鏈之連接子單位的數目可相同(對稱的順序)或彼此不同(不對稱順序)。胜肽連接子係具足夠的長度以提供適當的柔性使抗原結合基團免於彼此活性的干擾，例如藉由位阻現象，以允許適當的蛋白摺疊，且若需要，讓抗體分子，可能地寬距，與一或多個在相同細胞上的受體相互作用；又其係夠短而得以讓抗體基團在細胞中仍為安定的。
術語「低鹽」和「低鹽濃度」係指約50mM或更低之相對低的鹽濃度，包括0之鹽濃度或無鹽。鹽濃度係以配製物中添加的鹽類或緩衝劑之量來決定，排除不算鹽類之PGA聚合物和抗體。較佳的，此緩衝系統係以低濃度，亦即約50mM或更低，較佳地約25mM或更低及更佳地約10mM或更低，存在於配製物中。另一種選擇，某些較佳的實施例不含有添加鹽和無添加緩衝劑。亦較佳的，無添加另外的鹽類，例如NaCl至配製物中。
術語「管理」係指患者由治療(例如，預防或治療劑)所衍生的有利效用，其不會使得罹病痊癒。在特定的實施例中，係將一或多種治療(例如，預防或治療劑，例如本發明配製物)投予一患者，用以「管理」IL-4或IL-13-媒介的疾病(例如癌症、發炎、自體免疫疾病、感染、心血管疾病、呼吸疾病、神經疾病和代謝疾病)或其一或多種癥狀，而得以阻止此疾病的進展或惡化。
術語「單株抗體」係指得自同源或實質上同源抗體之族群的抗體，且各單株抗體典型地將辨認此抗原上的單一表位。在某些實施例中，「單株抗體」為由單一雜交瘤或其他細胞所產生的抗體。術語「單株」不限於任何用於製造此抗體之特定方法。例如，單株抗體可藉由如Kohler等人；Nature,256：495(1975)中所述之雜交瘤方法來製造，或可從噬菌體庫分離。其他製備選殖細胞株和藉此表現的單株抗體之方法已為本項技術所熟知(參見，例如第11章中：Short Protocols in Molecular Biology,(2002)第五版；Ausube等人，eds.,John Wiley and Sons,New York)。
術語「醫藥組成物」如本發明中所用係指各種製備物之配製物。含有治療上有效量之抗體的配製物為無菌液體溶液、液體懸浮液或凍乾物且視需要含有安定劑或賦形劑。
術語「醫藥上可接受」係指經聯邦或州政府管理當局核准，或列於美國藥典、歐洲藥典或其他一般所知道之藥典中供用於動物，更特言之用於人類。
「醫藥上可接受賦形劑」係指與活性分子例如單株抗體組合，供製備一適合或方便劑型之任何惰性物質。「醫藥上可接受賦形劑」為一在所用的劑量和濃度時對接受者無毒性，且係與包括單株抗體之配製物的其他成份相容之賦形劑。
術語「防止」係指因給予文中所提供的治療或治療組合(例如，預防或治療劑之組合，例如本發明配製物)所導致之完全或部份抑制IL-4或IL-13-媒介的疾病及/或其相關癥狀的發展、再發生、發作或擴散。
術語「預防藥劑」係指可於一患者中完全或部份抑制IL-4或IL-13-媒介的疾病及/或其相關癥狀的發展、再發生、發作或擴散之任何藥劑。在特定的實施例中，術語「預防藥劑」係指本發明配製物。在特定 的其他實施例中，術語「預防藥劑」係指本發明配製物以外的藥劑。預防藥劑為已知用於或已用於或目前正用於防止IL-4或IL-13-媒介的疾病及/或其相關癥狀，或阻止IL-4或IL-13-媒介的疾病及/或其相關癥狀之發作、發展、進程及/或嚴重度之藥劑。在特定的實施例中，此預防藥劑為人源化抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體。
「重組抗體」一詞包括藉由重組方法所製備、表現、創造或分離之抗體，例如使用重組表現載體轉染至宿主細胞所表現的抗體，或由重組的、組合的人類抗體庫所分離的抗體，由人類免疫球蛋白基因之基因轉殖及/或轉染色體的動物(例如小鼠或牛)所分離的抗體(參見，例如，Taylor,L.D.等人(1992)Nucl.Acids Res.20：6287-6295)或藉由任何涉及人類免疫球蛋白基因與其他DNA序列剪接之其他方法所製備、表現、創造或分離之抗體。此等重組的人類抗體可具有衍生自免疫球蛋白序列的可變區和恆定區(參見Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242)。在特定的實施例中，然而，此等重組的人類抗體係於活體外進行突變(或當使用人類Ig序列之動物基因轉殖時，為活體內體細胞突變)且因此當係由人類生殖系VH和VL序列所衍生或與其相關時，重組抗體之VH和VL區的胺基酸序列可能為非天然存在於活體內人類生殖系儲庫之序列。
術語「糖類」係指一種分子其為多元醇之衍生物。糖類通常係稱為碳水化合物且可含有不同量的糖單元，例如單糖、雙糖和多糖。
術語「特異結合」係指與抗原或其片段特異結合且不會與其他的抗原特異結合。例如，專一與抗原結合之抗體可以較低的親和力與其他多肽結合，如以例如，放射免疫分析(RIA)、酵素連結免疫吸附 分析(ELISA)、BIACORE或其他本項技術中已知的分析所測定。專一與抗原結合之抗體或其變異體或片段可與相關的抗原交叉反應。在某些實施例中，專一與抗原結合之抗體或其變異體或片段不會與其他抗原交叉反應。專一與IL-4及/或IL-13抗原結合之抗體或其變異體或片段可藉由，例如免疫分析、BIAcore或其他熟習本項技術者已知的技術來鑑別。典型地，專一或選擇性反應將為至少二倍背景訊號或雜音，且更典型地為大於10倍背景。參見，例如，Paul,ed.,1989,Fundamental Immunology Second Edition,Raven Press,New York於第332-336頁有關抗體特異性之論述。
「安定」或「安定化」配製物為其中結合劑，例如抗體，於儲存時在其中必須保留其物理安定性、特性、完整性及/或化學安定性、特性、完整性，及/或生物活性。各種用於測量蛋白安定性之分析技術在本項技術中為可取得的並例如審閱Peptide and Protein Drug Delivery,247-301,Vincent Lee Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,Pubs.(1991)and Jones,A.Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90(1993)。安定性可在選擇的溫度及其他儲存條件下歷經一段選擇的時間來測量。安定性可藉由至少一種由下列組成之群中選出的方法來測定：目測檢查、SDS-PAGE、IEF、HPSEC、RFFIT及κ/λ ELISA。例如，若在目測檢查顏色及/或澄清度，或以UV光分散、SDS-PAGE或以(高壓)粒徑篩析層析(HPSEC)測量時，其顯示無聚集之現象，則抗體在醫藥配製物中係「保留其物理安定性」。當使用本發明配製物時，如由HPSEC或任何用於測量聚集形成之適合的方法於室溫24小時後所測量，係有11%或更低，典型地10%或更低，典型地9%或更低，典型地8%或更低，典型地5%或更低，典型地4%或更低， 典型地3%或更低，典型地2%或更低，及典型地1%或更低的抗體形成聚集物。例如，在特定配製物中於特定的儲存條件下經過一段特定的預定時間後，若抗體單體含量為約90%，約95%，或約98%，則抗體在一特定的配製物中係視為安定的。化學安定性可藉由偵測和定量化學上改變的蛋白形式來評估。化學改變可能涉及大小修改(例如剪裁)，其可使用，例如(HP)SEC、SDS-PAGE及/或介質輔助雷射脫附離子化/飛行時間質譜(MALDI/TOF MS)來評估。其他類型的化學改變包括電荷改變(例如，因去醯胺化所產生)，其例如可藉由離子交換層析來評估。若在一給予的時間抗體之生物活性，例如如抗原分析或病毒中和分析中所測定，為至少約90%(在分析的誤差內)之醫藥配製物在製備時所展現的生物活性，則抗體在一給予的時間於醫藥配製物中係「保留其生物活性」。
術語「患者(subject)」和「病患(patient)」係交換使用。如中所述，一患者，在某些實施例中，為一哺乳動物，例如非靈長類(例如，牛、豬、馬、貓、狗、大鼠等)或靈長類(例如，猴子和人類)，例如人類。在一實施例中，此患者為患有IL-4或IL-13-媒介疾病或二者之哺乳動物，例如人類。在另外的實施例中，此患者為處於發生IL-4或IL-13-媒介疾病或二者之風險的哺乳動物，例如人類。
有關抗體鏈多肽序列之「實質上相同」一詞可解釋為與參照多肽序列具有至少70%、80%、90%、95%或更高序列相同度之抗體鏈。有關核酸序列之術語可解釋為與參照核酸序列具有至少85%、90%、95%或97%或更高序列相同度之核苷酸序列。
「取代的」變異體為該等在天然的序列中具有至少一胺基酸殘基移除或被不同的胺基酸置換，插入其相同的位置。取代可為單一的，其中在分子中僅有一個胺基酸被取代，或可為多重的，其中在相同分子中 的二或多個胺基酸係經取代。多數個取代可在連續的位置。又，一個胺基酸可經多數個殘基取代，在該情況下此一變異體係包括取代和插入二者。「插入的」變異體為該等一或多個胺基酸係緊鄰一胺基酸插入至天然序列中的特定位置。緊鄰一胺基酸係指與胺基酸之α-羧基或α-胺基功能基相連接。「刪除的」變異體為該等在天然胺基酸序列中移除一或多個胺基酸者。一般，刪除的變異體將在分子的特定區域具有一或多個胺基酸刪除。
術語「治療上有效量」係指治療(例如本發明配製物)之量其係足以降低及/或改善一特定疾病或其相關癥狀之嚴重性及/或持續時間。此術語亦涵蓋用於降低或改善特定疾病之進展或進程，降低或改善特定疾病之發生、進展或發作，或改善或增進另外的治療(例如本發明調配以外的治療)之預防性或治療性效用所需的量。在某些實施例中，本發明抗體之治療上有效量係提供介於約5至20ng/ml，或介於約10至20ng/ml之局部濃度。在某些實施例中，「治療上有效量」如文中所用亦指用於達到特定結果(例如抑制IL-4及/或IL-13細胞激素或二者)之本發明抗體的量。
術語「治療劑」係指可用於治療、管理或改善IL-4及/或IL-13-媒介疾病及/或其相關癥狀之任何藥劑。在特定的實施例中，術語「治療劑」係指本發明配製物。在特定的其他實施例中，術語「治療劑」係指本發明配製物以外的藥劑。治療劑為一已知可用於，或已用於或目前正用於治療管理或改善IL-4及/或IL-13-媒介疾病或二者或一或多種其相關癥狀之藥劑。
術語「治療(therapy)」係指任何可用預防、管理、治療及/或改善IL-4或IL-13-媒介疾病或二者(例如癌症、發炎、自體免疫疾病、感染、心血管疾病、呼吸疾病、神經疾病和代謝疾病)之方案、方法或藥劑。在特定的實施例中，術語「治療」係指可用預防、管理、治療或改善 熟習本項技術者(例如醫療人員)已知的IL-4或IL-13-媒介疾病或二者之生物性治療、支持性治療或其他治療。
術語「治療(treat)」係指由給予一或多種治療(包括，但不限於給予一或多種預防性或治療性藥劑，例如本發明配製物)所產生之減低或改善IL-4或IL-13-媒介疾病或二者(例如癌症、發炎、自體免疫疾病、感染、心血管疾病、呼吸疾病、神經疾病和代謝疾病)的進程、嚴重性或持續期間。
術語「可變區」係指輕鏈和重鏈之一部份，典型地在重鏈中大約胺基端120至130個胺基酸及在輕鏈中約100至110個胺基酸，其在抗體中的序列大不相同且係用於結合及各特定抗體對其特定抗原之特異性。序列的可變性係集中在該等稱為互補決定區(CDR)之區域，而可變區中更高度保守區域係稱為架構區(FR)。輕鏈和重鏈的CDR主要係負責抗體與抗原之相互作用。胺基酸位置的編號係根據EU索引，如Kabat等人(1991)Sequences of proteins of immunological interest.(U.S.Department of Health and Human Services,Washington,D.C.)第五版("Kabat等人")。在某些實施例中，此可變區為一人類可變區。
B. 配製物和配製物組份
如前面所述，本發明配製物係包括液體配製物和凍乾配製物之安定的醫藥抗體配製物，而該配製物係包括一抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體、由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成的聚胺基酸及一低溫保護劑，其中該配製物具有50mM或更低的鹽濃度。本發明配製物亦包括液體配製物和凍乾配製物之安定的醫藥抗體配製物，而該配製物係包括一抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體、由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成的聚胺基酸、一低溫保護劑及一緩衝系統， 其中該配製物的pH為約pH 7，且其中該配製物具有50mM或更低的鹽濃度。此等配製物可視需要進一步包括一界面活性劑或安定劑或二者。本發明包括製造此等配製物之方法。此等配製物可用於治療各種疾病。已發現本發明配製物係提供優於先前抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體配製物之顯著改良，其中先前的配製物其在配製物中抗體濃度增加時常導致抗體之分子聚集，及形成可視性和次可視性粒子。特言之，本發明之配製物，當含有低量的PGA聚合物時，就有關聚集物形成上展現良好的安定性。
i.抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體及其變異體和片段
在特定的實施例中，本發明配製物係包括一抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體。此雙特異性抗體係與IL-4或IL-13或二者或其變異體或片段結合或特異結合。此IL-4或IL-13或二種分子可來自任何物種。在某些實施例中，此IL-4或IL-13或二種分子係來自人類。IL-4和IL-13之胺基酸序列和蛋白結構已為本項技術所熟知。
在特定的示例性實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體為人源化抗體、全人類抗體或其變異體或其抗原結合片段。某些抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體係防止IL-4和IL-13與其受體結合，及抑制IL-4和IL-13生物活性。
在特定的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段為如美國專利第8,388,965號中所述或根據美國專利第8,388,965號所製造之抗體，該專利特此係以全文引用的方式併入。非限定實例包括美國專利第8,388,965號之表6中所揭示的抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或抗原結合片段。
在一特定的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括與IL-13結合之輕鏈可變區(VL)，其係包括SEQ ID NO：1之胺基酸序列(加底線係表示胺基酸作改變，粗體字係表示CDR)。在此實施例中，與IL-13結合之VL為外可變輕鏈區，並包括胺基酸序列RASESVDSYGQSYMH(CDR1；SEQ ID NO：8)、LASNLES(CDR2；SEQ ID NO：9)和QQNAEDSRT(CDR3；SEQ ID NO：10)。
抗-IL 13 hB-B13 VL3(SEQ ID NO：1)：
在一特定的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括與IL-13相結合之重鏈可變區(VH)，其係包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列(加底線係表示胺基酸作改變，粗體字係表示CDR)。 在此實施例中，與IL-13結合之VH為內可變輕鏈區，並包括胺基酸序列HASQNIDVWLS(CDR1；SEQ ID NO：14)、KASNLHTG(CDR2；SEQ ID NO：15)和QQAHSYPFT(CDR3；SEQ ID NO：16)。
抗-IL13 hB-B13 VH2(SEQ ID NO：2)：
在一特定的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括與IL-4結合之輕鏈可變區(VL)，其係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列(加底線係表示胺基酸作改變，粗體字係表示CDR)。在此實施例中，與IL-4結合之VL為外可變重鏈區，並包括胺基酸序列GFSLTDSSIN(CDR1；SEQ ID NO：11)、DGRID(CDR2；SEQ ID NO：12)和DGYFPYAMDF(CDR3；SEQ ID NO：13)。
抗-IL4 h8D4-8 VL1(SEQ ID NO：3)：
在一特定的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括與IL-4相結合之重鏈可變區(VH)，其係包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列(加底線係表示胺基酸作改變，粗體字係表示CDR)。在此實施例中，與IL-4結合之VH為內可變重鏈區，並包括胺基酸序列GYSFTSYWIH(CDR1；SEQ ID NO：17)、IDPSDGETR(CDR2；SEQ ID NO：18)和LKEYGNYDSFYFDV(CDR3；SEQ ID NO：19)。
抗-IL4 h8D4-8 VH1(SEQ ID NO：4)：
在另外特定的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括與IL-4結合之重鏈可變區(VH)，其係包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列(加底線係表示胺基酸作改變，粗體字係表示CDR)。在此實施例中，與IL-4結合之VH為內可變重鏈區，並包括胺基酸序列GYSFTSYWIH(CDR1；SEQ ID NO：20)、IDASDGETR(CDR2；SEQ ID NO：21)和LKEYGNYDSFYFDV(CDR3；SEQ ID NO：22)。
抗-IL4 h8D4-8 VH2(SEQ ID NO：5)：
在某些特定的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括與IL-13結合之重鏈可變區，其係包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；及與IL-13結合之輕鏈可變區，其係包括SEQ ID NO：1之胺基酸序列。
在其他特定的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括與IL-4結合之重鏈可變區，其係包括SEQ ID NO： 4之胺基酸序列；及與IL-4結合之輕鏈可變區，其係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列。
又在其他特定的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括與IL-4結合之重鏈可變區，其係包括SEQ ID NO：5之胺基酸序列；及與IL-4結合之輕鏈可變區，其係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列。
在更特定的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括與IL-13和IL-4二者結合的重鏈可變區，其係包括SEQ ID NO：2和4，或2和5之胺基酸序列；以及與IL-13和IL-4二者結合的輕鏈可變區，其係包括SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列。
在最特定的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體係包括與IL-13和IL-4二者結合的重鏈可變區，其係包括SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列；以及與IL-13和IL-4二者結合的輕鏈可變區，其係包括SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列(抗體)。抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體之實施例的示意圖係如圖1中所示，且示例的重鏈可變區係如圖2中所示。抗體之分子量如質譜所測定為198kDa(未糖基化)或200kDa(包括糖基化)。抗體之等電點，如等電點聚焦所測，範圍係介於5.8至6.2。
在替代的實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段係包括式VL1-連接子-VL2之輕鏈和式VH1-連接子-VH2之重鏈，其中VL1和VH1係形成IL-4抗原結合區而VL2和VH2係形成IL-13抗原結合區。在這些實施例中，VL2和VH2形成一外(N-端)抗原結合區，而VL1和VH1形成一內(C-端)抗原結合區。
在其他的實施例中，此雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體或其抗原結合片段之輕鏈係包括式N-VL1-連接子-VL2-CL-C，其中CL為抗體 之輕鏈恆定區，而此雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體或其抗原結合片段之重鏈係包括式N-VH1-連接子-VH2-CH1-C，其中CH1為抗體的第一重鏈恆定區。在這些實施例中，VL1為外(N-端)可變輕鏈區。VL1係與VL2相連接。VL2為內(C-端)可變輕鏈區，其係與恆定輕鏈區(CL)相連接。在這些實施例中，VH1為外(N-端)可變重鏈區。VH1係與VH2相連接。VH2為內(C-端)可變輕鏈區，其係與恆定重鏈區(CH1)相連接。在這些實施例中，VL2和VH2形成一外(N-端)抗原結合區，而VL1和VH1形成一內(C-端)抗原結合區。
又在其他的實施例中，此雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體之輕鏈係包括式N-VL1-連接子-VL2-CL-C，其中CL為抗體之輕鏈恆定區，而此雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體之重鏈係包括式N-VH1-連接子-VH2-CH1-CH2-CH3-C，其中CH1為抗體的第一重鏈恆定區而CH2-CH3相當於抗體的Fc區。在這些實施例中，VL1為外(N-端)可變輕鏈區。VL1係與VL2相連接。VL2為內(C-端)可變輕鏈區，其係與恆定輕鏈區(CL)相連接。在這些實施例中，VH1為外(N-端)可變重鏈區。VH1係與VH2相連接。VH2為內(C-端)可變輕鏈區，其係與恆定重鏈區(CH1)相連接。在這些實施例中，VL2和VH2形成一外(N-端)抗原結合區，而VL1和VH1形成一內(C-端)抗原結合區。
在特定的實施例中，VL1係包括SEQ ID NO：1之胺基酸序列；VH1係包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；VL2係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及VH2係包括SEQ ID NO：4或5之胺基酸序列。在其他的實施例中，VL2係包括SEQ ID NO：1之胺基酸序列；VH2係包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；VL1係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及VH1係包括SEQ ID NO：4或5之胺基酸序列。
在特定的實施例中，VL1係包括SEQ ID NO：1之CDR序列；VH1係包括SEQ ID NO：2之CDR序列；VL2係包括SEQ ID NO：3之CDR序列；及VH2係包括SEQ ID NO：4或5之CDR序列。在其他的實施例中，VL2係包括SEQ ID NO：1之CDR序列；VH2係包括SEQ ID NO：2之CDR序列；VL1係包括SEQ ID NO：3之CDR序列；及VH1係包括SEQ ID NO：4或5之CDR序列。
在某些實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段係在抗體之抗原結合區之間包括一連接子。此連接子可為任何種類的連接子分子。在某些實施例中，此連接子為一多肽。在重鏈多肽和輕鏈多肽之間和之內的連接子彼此可相同或不同。再者，此連接子可具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸之長度。如用於輕鏈區，用於重鏈之較佳的胜肽連接子單位為(G4S)2，亦即GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：6)。在特定的實施例中，SEQ ID NO：2和4係藉由一第一胜肽連接子連結一起，而SEQ ID NO：1和3係藉由一第二胜肽連結一起，其中該第一和第二胜肽連接子各自包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列。重鏈和輕鏈之連接子單元的數目可相同(兩邊對稱的順序)或彼此不同(不對稱順序)。胜肽連接子較佳地係具足夠的長度以提供適當的柔韌度來使抗原結合基團免於彼此活性的干擾，例如藉由位阻現象，以允許適當的蛋白摺疊，且若需要，讓抗體分子，可能地寬距，與一或多個在相同細胞上的受體相互作用；又其係夠短而得以讓抗體基團在細胞中保持安定。因此，連結雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體或其抗原結合片段之串聯可變區的連接子之長度、組成或構形可由熟習本項技術者容易地選擇，以便使多價抗體之所欲的性質最適化。
在本發明一實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段為一人源化抗體。人源化抗體同型之實例包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。在某些實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體為一IgG抗體。有四種形式的IgG。在某些實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體為一IgG4抗體。在本發明某些實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體為人源化IgG4抗體。
在某些實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段進一步係包括一恆定區，例如CH1、CH2、CH3和CL。
本發明配製物之特定的實施例亦包括抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其抗原結合片段之變異體。抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體之變異體基於其高度相似性可具有類似的物理化學性質，且因此亦包括在本發明範圍內。變異體係定義為帶有與抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體至少95%，較佳地至少97%，例如至少98%或99%同源之胺基酸序列，且能競爭與IL-4或IL-13多肽或二者、IL-4或IL-13多肽片段或二者，或IL-4或IL-13表位或二者結合之抗體。在某些實施例中，此等變異體將改善、中和或另外抑制IL-4或IL-13生物活性或二者。測定與目標結合之競爭可藉由熟習本項技術者已知的例行方法來進行。在某些實施例中，此等變異體為人類或人源化抗體，及較佳地為IgG4分子。在某些實施例中，變異體在胺基酸序列上與結合IL-13和IL-4及包含SEQ ID NO：2、4和5之胺基酸序列的重鏈可變區；及結合IL-13和IL-4及包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區，有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%相同度。術語「變異體」係指包括一胺基酸序列之抗體，其中此胺基酸序列，相較於抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體之胺基酸序列，係具有一或多 個胺基酸改變。此變異體可具有保守性序列修飾，包括胺基酸取代、修飾、添加和刪除。
修飾之實例包括(但不限於)糖基化、乙醯基化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、以已知的保護/阻斷基團衍生化、蛋白分解性裂解以及連結細胞配體或其他蛋白。胺基酸修飾可藉由本項技術中已知的標準技術來導入，例如定點突變、分子選殖、寡核苷酸定向突變以及編碼抗體之核酸中雜亂PCR-媒介的突變。保守性胺基酸取代包括其中胺基酸殘基係經具有類似結構或化學性質之胺基酸殘基所置換。具有類似側鏈之胺基酸殘基家族在本項技術中已有定義。這些家族包括帶有鹼性側鏈(例如，離胺酸、精胺酸、組胺酸)，酸性側鏈(例如，天門冬胺酸、麩胺酸)、不帶電的極性側鏈(例如，天門冬醯胺酸、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)，非極性側鏈(例如，甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫銨酸)，β-支鏈側鏈(例如，蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳香側鏈(例如，酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸)之胺基酸。熟習技術者應明瞭，亦可使用上述所用以外的胺基酸殘基家族種類。再者，一變異體可能具有非保守性胺基酸取代，例如，以具有不同結構或化學性質之胺基酸殘基取代一胺基酸。類似的小變異亦可包括胺基酸刪除或插入或二者。測定哪一個胺基酸殘基可能被取代、修飾、插入或刪除而不會消除免疫活性之指南，可使用本項技術中熟知的電腦程式來尋找。電腦運算法例如，其中包括，Gap或Bestfit，其已為熟習本項技術者所知，可用於最佳化對齊胺基酸序列進行比較及定義類似或相同的胺基酸殘基。相較於抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體，變異體可具有相同或不同，更高或更低的結合親和力，但仍能專一與IL-4或IL-13或二者結合，且可具有與抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體相同、更高或更低的生物活性。
本發明之實施例亦包括抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體之抗原結合片段。術語「抗原結合區」、「抗原結合片段」及類似術語係指包括與抗原相互作用及授予結合劑其對抗原的特異性和親和力之胺基酸殘基的抗體部份(例如，互補決定區(CDR))。抗原結合區可衍生自任何動物物種，例如嚙齒類(例如，兔、大鼠或倉鼠)和人類。在某些實施例中，此抗原結合區為人類來源。抗原結合片段之非限定實例包括：Fab片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、單鏈Fv(scFv)分子、dAb片段及由模擬抗體之高可變區之胺基酸殘基所組成的最小識別單位。
在本發明某些實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體(或其變異體或其抗原結合片段)將能改善、中和或其他抑制活體內IL-4及/或IL-13生物活性。
在本發明某些實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體(或其變異體或其抗原結合片段)為改善、中和或其他抑制活體內IL-4及/或IL-13生物活性之拮抗劑抗體。
鑑別、分離、製備和定性與IL-13和IL-4結合之抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體或其變異體或片段，包括包含一重鏈可變區和一輕鏈可變區之抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體，其中該重鏈可變區係包括SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列，而該輕鏈可變區係包括SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列，已詳述描述於PCT公開案WO 2009/052081中，其係以引用的方式併入本文中。
在某些實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體(或其變異體或其抗原結合片段)係以從約5mg/mL至約200mg/mL，例如約50mg/mL至約150mg/mL，約75mg/mL至約125mg/mL和約100mg/mL之量存在配製物中。另一種選擇，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體(或其 變異體或其抗原結合片段)係以從約5mg/mL至約65mg/mL，約66mg/mL至約130mg/mL，約131mg/mL至約200mg/mL之量存在配製物中。例如，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體可以約5mg/mL，約10mg/mL，約15mg/mL，約20mg/mL，約25mg/mL，約30mg/mL，約35mg/mL，約40mg/mL，約45mg/mL，約50mg/mL，約55mg/mL，約60mg/mL，約65mg/mL，約70mg/mL，約75mg/mL，約80mg/mL，約85mg/mL，約90mg/mL，約95mg/mL，約100mg/mL，約105mg/mL，約110mg/mL，約115mg/mL，約120mg/mL，約125mg/mL，約130mg/mL，約135mg/mL，約140mg/mL，約145mg/mL，約150mg/mL，約155mg/mL，約160mg/mL，約165mg/mL，約170mg/mL，約175mg/mL，約180mg/mL，約185mg/mL，約190mg/mL，約195mg/mL或約200mg/mL之量存在配製物中。
在特定的示例實施例中，此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體係以約100mg/mL之量存在配製物中。在另外的示例實施例中，人源化IgG4抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體，其包括一包含SEQ ID NO：2和4，或2和5胺基酸序列之與IL-13和IL-4結合的重鏈可變區；及一包含SEQ ID NO：1和3胺基酸序列之與IL-13和IL-4結合的輕鏈可變區，係以約100mg/mL之量存在配製物中。
ii.接枝維生素E之聚(麩胺酸或天門冬胺酸或二者)聚合物(PGA)
本發明配製物包括隨機接枝維生素E之直鏈聚(麩胺酸或天門冬胺酸或二者)聚合物。亦即，此PGA聚合物具有一聚(麩胺酸或天門冬胺酸或二者)骨架，及維生素E基團係與麩胺酸或天門冬胺酸側鏈之羧酸基團經由一共價鍵相連接(參見圖3 & 4)。這些聚合物於下文中係稱為PGA聚合物。
在一實施例中，此PGA聚合物具有一聚(α-麩胺酸或α-天門冬胺酸或二者)骨架。本發明中之PGA聚合物可為L、D或外消旋(D,L)組態。在另外的實施例中，此PGA聚合物骨架係由麩胺酸單元所組成。
術語「維生素E」之後亦稱為VE，係指具有在位置2連接一16-碳側鏈之色原醇頭之化合物家族。有8種天然生成的維生素E形式，包括四種生育酚(tocopherol)和四種生育三烯酚(tocotrienol)。生育酚含有三個對掌中心，產生8種立體異構物的可能性。生育三烯酚，在另一方面，僅具有一個對掌中心而有二種立體異構物。然而，法尼基(farnesyl)尾部的雙鍵使每個生育三烯酚得以有額外四種順式/反式異構物存在，得到總計8種異構物的可能性。參見，例如GRAS Notification and Exemption Claim for DeltaGold®,a tocotrienol rich extract,GRAS Notice(GRN)No.471第5-6頁。
用於本發明中的維生素E可為天然或合成來源的維生素E。在本發明一實施例中，此維生素E係由(+/-)α-生育酚所組成。
不同的PGA聚合物可藉由聚合物鏈中各種數目的麩胺酸或天門冬胺酸單元，亦即標稱聚合度，及與聚合物接枝的維生素E之mol/mol所形成。
聚合物鏈中麩胺酸單元的數目範圍可從約1至約225。在某些實施例中，此PGA聚合物具有約220個麩胺酸單元。在其他的實施例中，此PGA聚合物具有約100個麩胺酸單元。又在其他的實施例中，此PGA聚合物具有約50個麩胺酸單元。
與聚合物接枝的維生素E之mol/mol範圍可從約5-約15%。在某些實施例中，與聚合物接枝的維生素E之mol/mol為約5%。在其他的實施例中，與聚合物接枝的維生素E之mol/mol為約10%。又在其他的 實施例中，與聚合物接枝的維生素E之mol/mol為約15%。聚(麩胺酸)與維生素E之平均莫耳接枝率為接枝維生素E之單體的平均數目和總單體數目之間的比率。
依照pH，此PGA聚合物含有可為中性(COOH形式)或離子化之羧基功能基。用於本發明的PGA聚合物具有一主要部份的離子化狀態之其游離羧基功能基。在該狀態及無論配製物的pH係介於4.5至12之間，其可藉由添加例如鹽酸或氫氧化鈉來調整，此PGA聚合物在水性媒劑中自我組合，形成奈米大小粒子(約100nm或更低)之安定的膠體溶液。
在pH低於4.5之酸性媒劑中，其相當於級別低於0.05之COOH基團的離子化功能，此PGA聚合物仍為不可溶的。較佳地，此聚合物係於合成結束在pH<2時，在其不溶性形式下分離出。然後藉由於水中在極性溶劑(例如乙醇)的存在下，與強鹼(例如氫氧化鈉)反應，中和此PGA聚合物，使用1kDa膜藉由超過濾加以純化，並濃縮至30mg/ml以上，得到安定的膠體溶液。將此溶液於0.22μm膜上過濾並在使用前儲存於5℃。
離子化的羧基功能基之相對離子可為金屬陽離子，例如鈉、鉀、鈣或鎂或有機陽離子，例如四甲基銨或四丁基銨或三乙醇銨，或聚銨例如乙烯亞銨。
PGA聚合物及本發明配製物可根據美國專利第6,630,171和7,683,024號中的方法來製造和使用，各專利係以全文引用的方式併入本文中。
本發明之配製物可藉由直接復原來製造，亦即，將PGA聚合物溶液加到凍乾的藥品中，用以產生可立即用於注射之目標濃度的本發明配製物。參見圖5。
另一種選擇，本發明配製物可藉由稱為液體-液體調配、凍乾和復原之另外的方法來製造。在此方法中，係將藥品之溶液加到PGA聚合物之溶液中。然後將組合的溶液凍乾，及然後以注射用液體復原至所欲注射的目標濃度。參見圖6。
在較佳的實施例中，本發明配製物係含有包括介於約1：0.25至約1：2.5，較佳地約1：0.5至約1：2及更佳地約1：1莫耳比之雙特異性抗體及PGA聚合物。
iii.低溫保護劑
本發明配製物進一步係包括一低溫保護劑。典型地，此低溫保護可為，例如糖、聚乙烯吡咯酮或聚乙二醇。「糖」係指簡單的糖類(例如由一或二個碳水化合物單元所組成的小分子)或複合的糖類(例如長鏈的碳水化合物單元)，但一般亦為多醇類。糖類的實例包括，但不限於單糖類、雙糖類和多糖類。糖類之實例包括乳糖、麥芽糖、右旋糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇、木糖醇、山梨醇、海藻糖及其混合物。
在某些實施例中，低溫保護劑係以從約1%至約10%(w/v)之濃度存在配製物中。例如，低溫保護劑可以約1%(w/v)，約2%(w/v)，約3%(w/v)，約4%(w/v)，約5%(w/v)，約6%(w/v)，約7%(w/v)，約8%(w/v)，約9%(w/v)或約10%(w/v)之濃度存在配製物中。
在某些實施例中，係使用糖類作為低溫保護劑。
在某些實施例中，此糖係以從約1%至約10%(w/v)，例如約2%至約8%(w/v)，約3%至約7%(w/v)，約4%至約6%(w/v)或約5%(w/v)之濃度存在配製物中。另一種選擇，此糖係以從約1%至約3%(w/v)，約3%至約6%(w/v)或約6%至約10%(w/v)之濃度存在配製物中。例如，此糖可以約1%(w/v)，約2%(w/v)，約3%(w/v)，約4%(w/v)，約5%(w/v)， 約6%(w/v)，約7%(w/v)，約8%(w/v)，約9%(w/v)或約10%(w/v)之量存在配製物中。在特別的實施例中，此糖存在配製物中約3%至約7%(w/v)及在某些實施例中，約5%。
另一種選擇，此糖係以約80至約120mg/ml之濃度存在配製物中。另一種選擇，此糖係以約40至約60mg/ml之濃度存在配製物中。
熟習本項技術者應了解可使用其他糖類，只要其為醫藥上可接受的，亦即適合投予患者。在特定的實施例中，此糖為蔗糖。
在特定的實施例中，蔗糖係以約1%至約10%(w/v)之量存在配製物中。例如，蔗糖可以約1%(w/v)，約2%(w/v)，約3%(w/v)，約4%(w/v)，約5%(w/v)，約6%(w/v)，約7%(w/v)，約8%(w/v)，約9%(w/v)或約10%(w/v)之量存在配製物中。在某些實施例中，蔗糖可以約3%至約7%(w/v)或約4%至約6%(w/v)之量存在配製物中。在特定的實施例中，蔗糖係以約5%(w/v)之量存在配製物中。
另一種選擇，蔗糖係以約80至約120mg/ml之濃度，或約10-約20mg/ml之濃度存在配製物中。另一種選擇，蔗糖係以約40至約60mg/ml之濃度存在配製物中。
iv.緩衝劑、緩衝系統、離子強度和pH
緩衝劑係幫助將配製物之pH維持在大約生理條件的範圍內。緩衝劑，若存在，係以範圍從約1mM至約50mM之濃度存在配製物中。適合用於本發明之緩衝劑包括有機和無機酸及其鹽類，例如檸檬酸鹽緩衝劑(例如，檸檬酸單鈉鹽-檸檬酸二鈉鹽混合物，檸檬酸-檸檬酸三鈉鹽混合物，檸檬酸-檸檬酸單鈉鹽混合物等)，琥珀酸鹽緩衝劑(例如，琥珀酸-琥珀酸單鈉鹽混合物，琥珀酸-氫氧化鈉混合物，琥珀酸-琥珀酸二鈉鹽 混合物等)，酒石酸鹽緩衝劑(例如，酒石酸-酒石酸鈉鹽混合物，酒石酸-酒石酸鉀鹽混合物，酒石酸-氫氧化鈉混合物等)，延胡索酸鹽緩衝劑(例如，延胡索酸-延胡索酸單鈉鹽混合物，延胡索酸-延胡索酸二鈉鹽混合物，延胡索酸單鈉鹽-延胡索酸二鈉鹽混合物等)，葡萄糖酸鹽緩衝劑(例如，葡萄糖酸-葡萄糖酸鈉混合物，葡萄糖酸-氫氧化鈉混合物，葡萄糖酸-葡萄糖酸鉀混合物等)，草酸鹽緩衝劑(例如，草酸-草酸鈉混合物，草酸-氫氧化鈉混合物，草酸-草酸鉀混合物等)，乳酸鹽緩衝劑(例如，乳酸-乳酸鈉混合物，乳酸-氫氧化鈉混合物，乳酸-乳酸鉀混合物)及乙酸鹽緩衝劑(例如，乙酸-乙酸鈉混合物，乙酸-氫氧化鈉混合物等)。磷酸鹽緩衝劑、碳酸鹽緩衝劑、組胺酸緩衝劑、三甲胺鹽例如Tris、HEPES和其他此等已知的緩衝劑亦適合並可使用。在某些實施例中，於本發明配製物中係使用緩衝劑之組合物，亦即二或多種緩衝劑。二或多種緩衝劑之組合物在文中係指一緩衝系統。
本發明之配製物可視需要包括一緩衝系統，而某些本發明之實施例則不含任何緩衝劑。緩衝系統係維持生理上適合的pH。此外，緩衝系統增進配製物之等張性和化學安定性。由於開發雙特異性抗體之安定的抗體配製物困難，有利的係使用一緩衝系統以便於利用二或多種緩衝劑之優勢。藉由組合二或多種緩衝劑之利益，能開發出更安定的抗體配製物。
在某些實施例中，此緩衝系統係以從約1mM至約50mM，例如約5mM至約25mM，約5mM至約15mM，約8mM或約10mM之濃度存在配製物中。另一種選擇，此緩衝系統係以從約1mM至約15mM，約16至約30mM，約31至約45mM或約46mM至約50mM之濃度存在配製物中。例如，此緩衝系統可以約1mM，約2mM，約3mM，約4 mM，約5mM，約6mM，約7mM，約8mM，約9mM，約10mM，約11mM，約12mM，約13mM，約14mM，約15mM，約16mM，約17mM，約18mM，約19mM，約20mM，約21mM，約22mM，約23mM，約24mM，約25mM，約26mM，約27mM，約28mM，約29mM，約30mM，約31mM，約32mM，約33mM，約34mM，約35mM，約36mM，約37mM，約38mM，約39mM，約40mM，約41mM，約42mM，約43mM，約44mM，約45mM，約46mM，約47mM，約48mM，約49mM及約50mM之濃度存在配製物中。在某些實施例中，此緩衝系統係以從約5mM至約15mM之濃度存在配製物中，及在某些實施例中，從約8mM至約12mM。在一實施例中，此緩衝系統係以約10mM之濃度存在。在另外的實施例中，此緩衝系統係以約8mM之濃度存在。
在某些實施例中，此緩衝系統係包括一Tris緩衝劑和一磷酸鹽緩衝劑。在某些實施例中，此Tris緩衝劑係以從約1至約5mM之濃度存在配製物中。例如，此Tris緩衝劑可以從約1mM，約2mM，約3mM，約4mM或約5mM之濃度存在配製物中。在某些實施例中，此Tris緩衝劑係以從約2mM至約4mM之濃度存在配製物中，及在某些實施例中從約3mM至約4mM。在一實施例中，此Tris緩衝系統係以約3.7mM之濃度存在。在另外的實施例中，此Tris緩衝系統係以約3mM之濃度存在。
在某些實施例中，磷酸鹽緩衝液係以從約1至約10mM之濃度存在配製物中。例如，磷酸鹽緩衝劑係以約1mM，約2mM，約3mM，約4mM，約5mM，約6mM，約7mM，約8mM，約9mM或約10mM之濃度存在配製物中。在某些實施例中，此磷酸鹽緩衝劑係以從約3mM至約8mM之濃度存在配製物中，及在某些實施例中從約5mM至約7mM。 在一實施例中，此磷酸鹽緩衝劑係以約6.3mM之濃度存在。在另外的實施例中，此磷酸鹽緩衝劑係以約5mM之濃度存在。
在本發明一實施例中，此緩衝系統係包括濃度約3.7mM之Tris緩衝劑和濃度約6.3mM之磷酸鹽緩衝劑。在本發明另外的實施例中，此緩衝系統係包括濃度約3mM之Tris緩衝劑和濃度約5mM之磷酸鹽緩衝劑。此緩衝系統中Tris緩衝劑和磷酸鹽緩衝劑之組合為非比尋常的且不為本項技術所知。
在某些實施例中，此緩衝系統係以低濃度，亦即約15mM或更低，包括0mM(無鹽)存在配製物中。
在特定的實施例中，本發明配製物具有約pH 7之pH。在某些實施例中，配製物的pH範圍係從約5.0至約8.0。例如，配製物的pH可為約5.0，約5.1，約5.2，約5.3，約5.4，約5.5，約5.6，約5.7，約5.8，約5.9，約6.0，約6.1，約6.2，約6.3，約6.4，約6.5，約6.6，約6.7，約6.8，約6.9，約7.0，約7.1，約7.2，約7.3，約7.4，約7.5，約7.6，約7.7，約7.8，約7.9及約8.0。在某些實施例中，配製物的pH範圍可從約6.5至約7.5。在一實施例中，pH為約7.0。當配製物的pH為約pH 7時，此配製物展現有關高分子量蛋白之良好的安定性。配製物的pH可藉由任何熟習本項技術者已知的方法來測量。一測量pH之方法係使用帶有微電極之pH測量計。配製物的pH可使用任何本項技術中已知的方法來調整。用於改變配製物pH之較佳的化學物質為鹽酸(HCl)和氫氧化鈉(NaOH)。
在特定的實施例中，本發明配製物具有抗體等電點(pI)以上的pH。等電點為特定分子或表面載體無淨電荷時之pH。雙特異性抗體之pI可藉由任何熟習本項技術者已知的方法來測定。在某些實施例中， 雙特異性抗體之PI係以變性等電聚焦來測量。此抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體之PI，其中該抗體係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈和一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈，為5.8-6.2。
v.界面活性劑
本發明配製物可視需要進一步包括一界面活性劑，而某些本發明之實施例不含有任何界面活性劑。界面活性劑為與配製物中之生物分子或一般的醫藥賦形劑相互作用及安定彼等之化學化合物。界面活性劑一般係保護分子和賦形劑免於空氣/溶液介面引發的應力及溶液/表面引發的應力，其另外可能造成分子聚集。界面活性劑亦防止可視性和次可視性粒子形成。
在某些實施例中，此界面活性劑係以從約0.01%至約0.5%(w/v)，例如約0.01%至約0.3%或約0.01%至約0.2%之濃度存在配製物中。另一種選擇，此非離子界面活性劑係以從約0.01%至約0.05%(w/v)，約0.06%至約0.10%(w/v)，約0.11%至約0.15%(w/v)，約0.16%至約0.20%(w/v)，約0.20%至約0.30%(w/v)，約0.30%至約0.40%(w/v)或約0.40%至約0.50%(w/v)之濃度存在配製物中。例如，此界面活性劑可以約0.01%(w/v)，約0.02%(w/v)，約0.03%(w/v)，約0.04%(w/v)，約0.05%(w/v)，約0.06%(w/v)，約0.07%(w/v)，約0.08%(w/v)，約0.09%(w/v)，約0.1%(w/v)，約0.2%(w/v)，約0.3%(w/v)，約0.4%(w/v)及約0.5%(w/v)之量存在配製物中。在特別的實施例中，此非離子界面活性劑係以從約0.03%至約0.2%(w/v)存在配製物中。
界面活性劑之實例包括(但不限於)聚山梨醇酯、甘油、二羧酸、草酸、琥珀酸、延胡索酸、酞酸及其組合物。熟習本項技術者已了解可使用其他界面活性劑，只要其為醫藥上可接受的，亦即適合投予患者。 在某些實施例中，此界面活性劑較佳地為聚山梨醇酯。聚山梨醇酯之實例包括聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65和聚山梨醇酯80。在特定的實施例中，此界面活性劑為聚山梨醇酯80。
在示例的實施例中，聚山梨醇酯80係以從約0.01%至約1%(w/v)之量存在配製物中。例如，聚山梨醇酯80可以從約0.01%(w/v)，約0.02%(w/v)，約0.03%(w/v)，約0.04%(w/v)，約0.05%(w/v)，約0.06%(w/v)，約0.07%(w/v)，約0.08%(w/v)，約0.09%(w/v)，約0.1%(w/v)，約0.2%(w/v)，約0.3%(w/v)，約0.4%(w/v)，約0.5%(w/v)，約0.6%(w/v)，約0.7%(w/v)，約0.8%(w/v)，約0.9%(w/v)及約1%(w/v)之量存在配製物中。在特定的實施例中，聚山梨醇酯80係以從約0.03%至約0.2%(w/v)存在配製物中。例如，聚山梨醇酯80可以從約0.01%至約1%(w/v)，約0.02%至約0.5%(w/v)及約0.03%至約0.2%(w/v)之量存在配製物中。在本發明某些實施例中，聚山梨醇酯80係以0.2%(w/v)之量存在配製物中。
vi.安定劑
本發明配製物可視需要進一步包括一安定劑，而某些本發明之實施例不含有任何安定劑。安定劑係指廣泛類別之賦形劑，其功能範圍可從填充劑至使治療劑安定或幫助防止變性或黏附於容器壁之添加劑。安定劑亦使高分子量蛋白形成降至最小。
在某些實施例中，此安定劑係以從約1%至約10%(w/v),e.g.，約2%至約8%(w/v)，約2%至約5%(w/v)，約2%至約4%(w/v)或約3%(w/v)之濃度存在配製物中。另一種選擇，此安定劑係以從約1%至約2%(w/v)，約2%至約4%(w/v)，約4%至約6%(w/v)，約6%至約8%(w/v)或約8%至約10%(w/v)之濃度存在配製物中。例如，此安定劑可以約1%(w/v)，約2%(w/v)，約3%(w/v)，約4%(w/v)，約5%(w/v)，約6%(w/v)， 約7%(w/v)，約8%(w/v)，約9%(w/v)或約10%(w/v)之量存在配製物中。在特別的實施例中，此安定劑係以從約1%至約5%(w/v)，或從約1%至約3%(w/v)，或約3%(w/v)存在配製物中。
安定劑之實例包括(但不限於)多元糖醇類；胺基酸，例如脯胺酸、精胺酸、離胺酸、甘胺酸、麩醯胺酸、天門冬醯胺酸、組胺酸、丙胺酸、鳥胺酸、L-白胺酸、2-苯丙胺酸、麩胺酸、蘇胺酸等；有機糖類或糖醇，例如乳糖、海藻糖、木蘇糖、阿拉伯糖醇、赤藻糖醇、甘露醇、山梨醇、木糖醇、核糖醇、肌糖醇、半乳糖醇、甘油及其類似物，包括環醇，例如肌醇；聚乙二醇；胺基酸聚合物；含硫還原劑，例如尿素、麩胱甘肽、硫辛酸、硫乙醇酸鈉、硫代甘油、α-單硫代甘油和硫代硫酸鈉；低分子量多肽(亦即<10個殘基)；蛋白，例如人類血清白蛋白、牛血清白蛋白、明膠、免疫球蛋白；親水性聚合物，例如聚乙烯吡咯酮、糖類、單糖類，例如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；雙糖類，例如乳糖、麥芽糖和蔗糖；三糖類例如棉子糖；多糖類例如葡聚糖等等。熟習本項技術者已了解可使用其他安定劑，只要其為醫藥上可接受，亦即適合投予患者。在某些實施例中，此安定劑為胺基酸。在某些實施例中，此安定劑為脯胺酸或甘胺酸。在某些實施例中，此安定劑為脯胺酸。另一種選擇，此安定劑為甘露醇。
在特定的實施例中，脯胺酸係以從約1%至約10%(w/v)之量存在配製物中。例如，脯胺酸可以約1%(w/v)，約2%(w/v)，約3%(w/v)，約4%(w/v)，約5%(w/v)，約6%(w/v)，約7%(w/v)，約8%(w/v)，約9%(w/v)或約10%(w/v)之量存在配製物中。在某些實施例中，脯胺酸可以約1%至約5%(w/v)或約1%至約3%(w/v)之量存在。在特定的實施例中，脯胺酸係以約3%(w/v)之量存在配製物中。
在特定替代的實施例中，甘露醇係以從約1%至約10%(w/v)之量存在配製物中。例如，甘露醇可以約1%(w/v)，約2%(w/v)，約3%(w/v)，約4%(w/v)，約5%(w/v)，約6%(w/v)，約7%(w/v)，約8%(w/v)，約9%(w/v)或約10%(w/v)之量存在配製物中。在某些實施例中，甘露醇可以約1%至約5%(w/v)或約1%至約3%(w/v)之量存在。在特定的實施例中，甘露醇係以約3%(w/v)之量存在配製物中。
vii.其他賦形劑
再者，本發明配製物可視需要進一步包括其他的賦形劑，其包括(但不限於)注射用水、稀釋劑、增溶劑、安撫劑、另外的緩衝劑、無機或有機鹽類、界面活性劑、安定劑、胺基酸、糖類、抗氧化劑、防腐劑、填充劑、螯合劑、張度劑及其類似物。在某些實施例中，然而，本發明配製物除了上述之外，並無包括其他賦形劑。其他的醫藥上可接受載劑、賦形劑或安定劑，例如該等描述於Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)中者，可包括在配製物中，其限制條件為不能對配製物的所欲特性有不利的影響。在一特別的實施例中，此配製物實質上無防腐劑，雖然，在替代的實施例中，添加防腐劑可能為需要的。例如，低溫保護劑或凍乾保護劑可包括在凍乾配製物中。
viii.液體或凍乾配製物
本發明之配製物可為液體配製物或凍乾配製物。在某些實施例中，此配製物為液體配製物。在某些實施例中，此液體配製物係立即可供注射用。另一種選擇，此配製物可為凍乾粉末。在某些實施例中，此凍乾粉末為即用的可在投予之前即刻與溶劑組合。
ix.例示的配製物
在本發明一例示的實施例中，本發明係提供一安定的液體抗體配製物，其包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區和一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約10mg/mL隨機接枝維生素E之聚麩胺酸聚合物，其中該聚麩胺酸聚合物具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約50mg/g的蔗糖；及約10mM之鹽類，係由一約6.3mM的磷酸鹽緩衝劑和約3.7mM的Tris緩衝劑所組成。
在本發明一例示的實施例中，本發明係提供一安定的液體抗體配製物，其包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區和一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約10mg/mL隨機接枝維生素E之聚麩胺酸聚合物，其中該聚麩胺酸聚合物具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約90mg/g的蔗糖；及其中此配製物不含有添加鹽。
在本發明一例示的實施例中，本發明係提供一安定的液體抗體配製物，其包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區和一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區； 約5mg/mL隨機接枝維生素E之聚麩胺酸聚合物，其中該聚麩胺酸聚合物具有50之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約50mg/g的蔗糖；及約10mM的鹽類，係由一約6.3mM的磷酸鹽緩衝劑和約3.7mM的Tris緩衝劑所組成。
在本發明一例示的實施例中，本發明係提供一安定的液體抗體配製物，其包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區和一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約5mg/mL隨機接枝維生素E之聚麩胺酸聚合物，其中該聚麩胺酸聚合物具有50之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約90mg/g的蔗糖；及其中此配製物不含有添加鹽。
在本發明一例示的實施例中，本發明係提供一安定的液體抗體配製物，其包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區和一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約10mg/mL隨機接枝維生素E之聚麩胺酸聚合物，其中該聚麩胺酸聚合物具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括一約3.7mM之Tris緩衝劑濃度和一約6.3mM之磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80； 約5%(w/v)蔗糖；約3%(w/v)脯胺酸；及其中該配製物的pH為約pH 7。
在本發明一例示的實施例中，本發明係提供一安定的液體抗體配製物，其包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區和一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約5mg/mL隨機接枝維生素E之聚麩胺酸聚合物，其中該聚麩胺酸聚合物具有50之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括一約3.7mM之Tris緩衝劑濃度和一約6.3mM之磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；約3%(w/v)脯胺酸；及其中該配製物的pH為約pH 7。
在本發明另外例示的實施例中，本發明係提供一安定的液體抗體配製物，其包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區和一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約10mg/mL隨機接枝維生素E之聚麩胺酸聚合物，其中該聚麩胺酸聚合物具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括一約3.7mM之Tris緩衝劑 濃度和一約6.3mM之磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；約3%(w/v)甘露醇；及其中該配製物的pH為約pH 7。
在本發明一替代的示例實施例中，本發明係提供一適合皮下給藥之安定的凍乾抗體配製物，該配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區和一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約10mg/mL隨機接枝維生素E之聚麩胺酸聚合物，其中該聚麩胺酸聚合物具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括一約3.7mM之Tris緩衝劑濃度和一約6.3mM之磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；約3%(w/v)脯胺酸；及其中該配製物的pH為約pH 7。
在本發明一替代的例示實施例中，本發明係提供一安定的凍乾抗體配製物，其包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區和一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約5mg/mL隨機接枝維生素E之聚麩胺酸聚合物，其中該聚麩胺酸聚合 物具有50之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括一約3.7mM之Tris緩衝劑濃度和一約6.3mM之磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；約3%(w/v)脯胺酸；及其中該配製物的pH為約pH 7。
在本發明之另外的替代性例示實施例中，本發明係提供一適合皮下給藥之安定的凍乾抗體配製物，該配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區和一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約10mg/mL隨機接枝維生素E之聚麩胺酸聚合物，其中該聚麩胺酸聚合物具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括一約3.7mM之Tris緩衝劑濃度和一約6.3mM之磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；約3%(w/v)甘露醇；及其中該配製物的pH為約pH 7。
在本發明之另外的替代性例示實施例中，本發明係提供一安定的凍乾抗體配製物，其包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區和一 包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約5mg/mL隨機接枝維生素E之聚麩胺酸聚合物，其中該聚麩胺酸聚合物具有50之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括一約3.7mM之Tris緩衝劑濃度和一約6.3mM之磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；約3%(w/v)甘露醇；及其中該配製物的pH為約pH 7。
x.安定性
本發明配製物在2-8℃係持續安定至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24個月或更久。在示例的實施例中，其在2-8℃係持續安定至少約6個月或更久。在其他示例的實施例中，其在2-8℃係持續安定至少約9個月。在另外示例的實施例中，其在2-8℃係持續安定至少約1年或更久，例如約2年。
本發明之配製物在室溫下係持續安定至少約24小時。
C.給藥模式
在本發明特定的實施例中，此等配製物係適合非經腸、靜脈內、肌肉內、皮內、皮下給藥或其組合。本發明之配製物適合以各種技術來遞送。在本發明某些實施例中，此配製物係以皮下給藥。例如，某些含有100mg/mL之抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體的配製物係以皮下給藥。因此，此等配製物為無菌的。製造無菌配製物之方法已為本項技術所熟知 並包括，例如，經由無菌過濾膜過濾或配製物成份(抗體除外)之高壓蒸氣滅菌於約120℃進行約30分鐘。
D.劑量和劑型
本發明配製物之有效劑量係依照許多不同的因素而變，包括給藥方法、目標位置、患者的生理狀態、患者是否為人類或動物、給予的其他藥物，及治療是否為預防性或治療性。通常，患者為人類，但亦可治療非人類哺乳動物，包括基因轉殖哺乳動物。治療劑量可能需要定出效價以使安全性和效力最佳化。較佳地，劑量範圍係從100-200mg/小瓶。
本發明之配製物可於多重時機來給藥。單一劑量間的間隔可為每天、每週、每二週、每月或每年。間隔亦可為非規律性的。在某些方法中，係調整劑量以達到特定的血漿結合劑(例如抗體)濃度。劑量和頻率將依照抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體在患者中的半衰期而變。一般而言，人類抗體顯現最長的半衰期，接著為人源化抗體、嵌合抗體和非人類抗體。
在另外的實施例中，本發明係提供包括一治療上有效量之本發明配製物的醫藥單位劑型，經由將此劑型投予患者用於治療患者中一或多種疾病。在一實施例中，此患者為人類。此人類可為成人或可為嬰兒。術語「醫藥單位劑型」係指適用於所欲治療之患者作為單一劑量之物理上離散單位，各單位含有一經計算產生所欲治療/預防效用之預定量的活性化合物結合所需的緩衝劑和pH。
單位劑型可為包括此配製物之容器。適合的容器包括(但不限於)密封的安瓶、小瓶、瓶子、注射器和試管。此等容器可由各種材料來製成，例如玻璃或塑膠，且可具有無菌的出入口(例如，此容器可為一 小瓶，其具有一可被皮下注射針穿透的塞子)。在一實施例中，此容器為一小瓶。一般，此容器應維持配製物之無菌及安定性。
在特定的實施例中，此配製物係包裝在7或15mL小瓶中，其係由透明、無色第I型玻璃所製作，並以塞子關閉(塗覆氟聚合物之溴丁基)以凸緣(聚乙烯)之彈壓蓋密封。
在特定的實施例中，此配製物係二次包裝於一容器中，例如使小瓶避開光線之紙板盒。
用於活體內給藥之配製物必須為無菌的。此項可藉由，例如經由無菌過濾膜過濾來進行。例如，本發明之液體配製物可使用0.2μm或0.22μm過濾器藉由過濾來殺菌。
E.治療方法
文中進一步係提供治療IL-4或IL-13或二者-媒介的疾病或病症之方法，該方法包括將本發明配製物投予一病患。在特定的實施例中，該IL-4或IL-13或二者-媒介的疾病為癌症、發炎、自體免疫疾病、感染、心血管疾病、呼吸疾病、神經疾病和代謝疾病。
本發明之配製物可用於治療、抑制或預防疾病，例如過敏疾病、Th2-媒介的疾病、IL-13-媒介的疾病、IL-4-媒介的疾病或IL-4/IL-13-媒介的疾病。此等疾病之實例包括何傑金氏症、氣喘、過敏性氣喘、異位性皮膚炎、異位性過敏、潰瘍性結腸炎、硬皮症、過敏性鼻炎、COPD3特發性肺纖維化、慢性移植排斥、博來黴素引發的肺纖維化、放射線引發的肺纖維化、肺肉芽腫、進行性全身性硬化症、血吸蟲病、肝纖維化、腎癌、勃奇氏淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、何傑金氏症、非何傑金氏症、塞扎里症候群(Sezary syndrome)、氣喘、敗血性關節炎、皰疹樣皮膚炎、慢性自體性蕁蔴疹、潰瘍性結腸炎、硬皮症、肥厚性疤痕、惠普爾病(Whipple's Disease)、良性攝護腺肥大、其中涉及IL-4受體參與之肺病症、其中涉及IL-4受體-媒介的上皮障礙破壞之症狀、其中涉及IL-4受體之消化系統病症、對藥物之過敏性反應、川崎氏症、鐮刀型紅血球疾病、過敏性肉芽腫(Churg-Strauss syndrome)、葛瑞夫茲病(Grave's disease)、子癲前症、修格連氏症候群(Sjogren's syndrome)、自體免疫淋巴細胞增生症候群、自體免疫溶血性貧血、巴瑞特氏食道症(Barrett's esophagus)、自體免疫葡萄膜炎、結核病、囊狀纖維化、過敏性支氣管肺黴菌病、慢性阻塞性肺疾病、博來黴素引發的肺病變和纖維化、肺泡蛋白質沉積症、成人呼吸窘迫症候群、類肉瘤病、高IgE症候群、特發性嗜酸性粒細胞增多症、自身免疫性水疱病、尋常型天疱瘡、大疱性類天疱瘡、重症肌無力、慢性疲勞症候群、腎病變。
術語「過敏性疾病」係指一種病理症狀，其中病患係對一正常無致免疫性之物質高度敏感或增大對其之免疫反應。過敏疾病一般其特徵為肥大細胞被IgE活化，導致一發炎反應(例如，局部反應、全身性反應)，其可能導致良性如打噴嚏至威脅生命之過敏性休克和死亡。過敏性疾病之實例包括(但不限於)過敏性鼻炎(例如花粉熱)、氣喘(例如，過敏性氣喘)、過敏性皮膚炎(例如濕疹)、接觸性皮膚炎、食物過敏和蕁麻疹(麻疹)。
術語「Th2-媒介的疾病」係指其中病變係(全部或部份)的免疫反應(Th2-型免疫反應)所產生之疾病，其中該免疫反應係由特徵為產生IL-4、IL-5、IL-9和IL-13之CD4+ Th2 T淋巴細胞所調節。Th2-型免疫反應係與特定細胞激素(例如，IL-4,IL-13)和特定種類的抗體(例如IgE)之產生有關，且與體液免疫相關。Th2-媒介的疾病其特徵為出現升高量的Th2細胞激素(例如，IL-4,IL-13)及/或特定種類的抗體(例如IgE)並包括， 例如過敏性疾病(例如，過敏性鼻炎、異位性皮膚炎、氣喘(例如，異位性氣喘)、過敏性氣管疾病(AAD)、過敏性休克、結膜炎)，與升高量之IL-4或IL-13或二者有關的自體免疫病症(例如，類風濕性關節炎、宿主-抗-移植物疾病、腎疾病(例如，腎炎症候群、狼瘡腎炎))，及與升高量之IL-4或IL-13或二者有關的感染(例如，病毒、寄生蟲、真菌(例如，白色念珠菌(C.albicans))感染)。特定癌症係與升高量之IL-4或IL-13或二者有關或與IL-4-引發或IL-13-引發或二者所引發的癌細胞增生有關(例如，B細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、多發性骨髓瘤、頭和頸癌、乳癌和卵巢癌)。這些癌症可使用本發明配製物來治療、抑制或預防。
術語「癌症」係指或描述哺乳動物，特別是人類的生理狀況，其典型地特徵為細胞生長失調。癌症的實例包括(但不限於)惡性腫瘤、淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤和白血病。
術語「自體免疫疾病」係指由個體自身組織所產生或針對個體自身組織之非惡性疾病或病症。自體免疫疾病或病症之實例包括(但不限於)發炎反應，例如發炎性皮膚疾病，包括乾癬和皮膚炎；過敏性症狀例如濕疹和氣喘；其他涉及T細胞浸潤和慢性發炎反應之症狀；動脈硬化；糖尿病(例如，第I型糖尿病或胰島素依賴糖尿病)；多發性硬化症和中樞神經系統(CNS)發炎性病症。
在特定的實施例中，本發明配製物係與一或多種治療(例如，非本發明配製物之治療，其目前正投予供預防、治療、管理或改善IL-4或IL-13或二者-媒介的疾病)組合給藥。使用的術語「組合」並非限制其中治療投予患者之順序。第一治療可在投予第二治療之前(例如，1分鐘，45分鐘，30分鐘，45分鐘，1小時，2小時，4小時，6小時，12小時，24小時，48小時，72小時，96小時，1週，2週，3週，4週，5週，6 週，8週，或12週)，同時或之後(例如，1分鐘，45分鐘，30分鐘，45分鐘，1小時，2小時，4小時，6小時，12小時，24小時，48小時，72小時，96小時，1週，2週，3週，4週，5週，6週，8週或12週)，投予一曾經患有、已患有或易罹患IL-4或IL-13或二者-媒介疾病之患者。任何另外的治療可以任何順序與其他另外的治療一起投予。可與本發明抗體組合投予之治療的非限定實例包括列於美國藥典(U.S.Pharmacopoeia)或醫師參考手冊(Physician's Desk Reference)中之核准的抗-發炎劑。
本發明特定的實施例係包括文中所述的配製物用於治療醫藥品供治療、抑制或預防文中所述之疾病或病症之用途。
在其他的實施例中，本發明係包括一組成物，其包括一文中所述的配製物供治療、抑制或預防文中所述之疾病或病症。
F.套組
本發明之特定的實施例係包括一包含本發明配製物之套組。此套組可進一步包括一或多個容器，該容器係包括醫藥上可接受賦形劑，及包括其他商業和使用者立場所希望的物質，其包括過濾器、針和注射器。與套組結合的可為包括在治療、預防或診斷產品之商業包裝中的習用說明書，其含有有關，例如適應症、使用、劑量、製造商、給藥、禁忌症或關於使用此治療、預防或診斷產品之警告的資訊。
實例
提供下列實例，用以幫助說明本發明。並不希望此等實例在任何方面限制本發明之範圍。一般而言，除非另有指出，否則本發明之施行係應用醫藥配製物之習用技術、化學、分子生物、重組DNA技術、免疫學例如抗體技術和多肽製備之標準技術，如，例如Sambrook,Fritsch和Maniatis,Molecular Cloning：Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)； Antibody Engineering Protocols(Methods in Molecular Biology),volume 51,Ed.：Paul S.,Humana Press(1996)；Antibody Engineering：A Practical Approach(Practical Approach Series,169),Eds.：McCafferty J.等人，Humana Press(1996)；Antibodies：A Laboratory Manual,Harlow and Lane,Cold Spring Harbor Laboratory Press(1999)；及Current Protocols in Molecular Biology,Eds.Ausubel等人，John Wiley & Sons(1992)中所描述。
在下列實例中係使用人源化IgG4抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體，其包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列、與IL-13和IL-4結合之重鏈可變區，及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列、與IL-13和IL-4結合之輕鏈可變區(抗體)，用以測定最佳配製物條件。有關例示的人源化IgG4抗-IL-4/抗-IL-13雙特異性抗體之額外的詳情可參見美國專利第8,388,965號，其係以全文引用的方式併入本文中。
在這些實施例中，PGA聚合物中麩胺酸單元的數目，亦即標稱聚合度，以及接枝此聚合物之維生素E的mol/mol各不相同。下表係彙整用於實例中之不同PGA聚合物的結構。
抗體的濃度為100mg/mL，並以二種不同莫耳比之抗體與PGA聚合物進行試驗(1/1和1/3)。
SEC法
高分子量含量之測定，如配製物中面積百分比所示，係使用粒徑篩析層析法(SEC)，以螢光偵測來進行。在無解離抗體聚合物或高分子量類(HMW)下，於SEC分析之前必須將抗體與聚合物解離。此項係藉由以含有5%(w/v)Tween 20之16mM磷酸鈉緩衝液(pH 7.3)將樣本稀釋至2.5g/mL來進行。另外將0.1%(w/v)的Tween 20加入移動相中。
分析條件以及樣本製備係彙整於下表中。
實例1-製備1：1莫耳比之P1聚合物和抗體的即用溶液 第1階段：製備P1溶液
將0.106g的注射用水加到0.030g之45.03mg/g的P1聚合物溶液中：P1聚合物濃度為9.99mg/g。將溶液於室溫下持續適度攪拌(15rpm)15分鐘。
第2階段：製備即用的液體配製物
可用的抗體為凍乾物形式，以下稱為藥品，係具有下列組成：
- 抗體：100mg/ml
- 磷酸鹽緩衝劑：6.34mM
- Tris緩衝劑pH7.2：3.66mM
- 蔗糖：5% w/v
- 脯胺酸：3% w/v
- Tween 80：0.2% w/v
稱取27.8mg的藥品於小瓶中。將0.136g所製備的P1溶液緩慢地加到藥品中。將小瓶在室溫於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。得到的澄清液體每mL含有90.51mg的抗體和8.30mg的P1聚合物。
第3階段：分析抗體/P1聚合物液體配製物
於室溫24小時之後，以SEC測量抗體回收率(實測的抗體濃度x 100/理論的抗體濃度)，以及HMW的含量。計算聚集速率(% HMW/h) (定義為)。亦以相同的條件進行單獨的抗體研究，作為比 較。結果係提出於下表中。
使用1：1莫耳比之P1聚合物與抗體，在為期24小時的時間防止了抗體聚集。
實例2-製備1：1莫耳比之P2聚合物和抗體的即用溶液
藉由以水稀釋含有49.6mg/g P2聚合物之初級溶液，製備10.95mg/g P2聚合物溶液。使用如實例1中所述之相同方法將0.143g所製備的P2溶液加到29.1mg的藥品中。得到的澄清溶液每mL含有90.44mg的抗體和9.10mg的P2聚合物。
分析結果係提出於下表中。
使用1：1莫耳比之P2聚合物與抗體，防止了抗體聚集。
實例3-製備1：1莫耳比之P3聚合物和抗體的即用溶液
藉由以水稀釋含有54.99mg/g P3聚合物之初級溶液，製備12.59mg/g P3聚合物溶液。使用如實例1中所述之方法將0.138g所製備的P3溶液加到27.9mg的藥品中。得到的澄清溶液每mL含有89.52mg的抗體和10.48mg的P3聚合物。
分析結果係提出於下表中。
使用1：1莫耳比之P3聚合物與抗體，並未防止抗體聚集。
實例4-製備1：1莫耳比之P4聚合物和抗體的即用溶液
藉由以水稀釋含有24.99mg/g P4聚合物之初級溶液，製備5.70mg/g P4聚合物溶液。使用如實例1中所述之方法將0.142g所製備的P4溶液加到28.3mg的藥品中。得到的澄清溶液每mL含有88.46mg的抗體和4.76mg的P4聚合物。
分析結果係提出於下表中。
使用1：1莫耳比之P4聚合物與抗體，在為期24小時的時間防止了抗體聚集。
實例5-製備1：1莫耳比之P5聚合物和抗體的即用溶液
藉由以水稀釋含有25.05mg/g P5聚合物之初級溶液，製備5.59mg/g P5聚合物溶液。使用如實例1中所述之方法將0.171g所製備的P5溶液加到34.5mg的藥品中。得到的澄清溶液每mL含有89.67mg的抗體和4.65mg的P5聚合物。
分析結果係提出於下表中。
使用1：1莫耳比之P5聚合物與抗體，防止了抗體聚集。
實例6-製備1：1莫耳比之P6聚合物和抗體的即用溶液
藉由以水稀釋含有61.5mg/g P6聚合物之初級溶液，製備26.12mg/g P6聚合物溶液。使用如實例1中所述之方法將0.258g所製備的P6溶液加到31.4mg的藥品中。得到的澄清溶液每mL含有99.05mg的抗體和21.27mg的P6聚合物。
分析結果係提出於下表中。
使用1：1莫耳比之P6聚合物與抗體，並未防止抗體聚集。
實例7-製備1：3莫耳比之P2聚合物和抗體的即用溶液
藉由以水稀釋含有49.6mg/g P2聚合物之初級溶液，製備34.94mg/g P2聚合物溶液。使用如實例1中所述之方法將0.137g所製備的P2溶液加到28.1mg的藥品中。得到的澄清溶液每mL含有90.82mg的抗體和28.99mg的P2聚合物。
分析結果係提出於下表中。
1：3莫耳比之抗體和P2聚合物的組合，並未防止抗體聚集。
實例8-製備1：3莫耳比之抗體和P5聚合物的即用溶液
藉由以水稀釋含有25.05mg/g P5聚合物之初級溶液，製備16.985mg/g P5聚合物溶液。使用如實例1中所述之方法將0.1565g所製備的P5溶液加到31.2mg的藥品中。得到的澄清溶液每mL含有88.70mg的抗體和14.16mg的P5聚合物。
分析結果係提出於下表中。
1：3莫耳比之抗體和P5聚合物的組合，並未防止抗體聚集。
實例9-製備1：1莫耳比之抗體和P2聚合物的冷凍乾燥組合物並進一步以注射用水即席復原 第1階段：製備P2溶液
將0.398g的注射用水加到0.103g含有50.15mg/g P2聚合物之初級的溶液中：P2聚合物濃度為10.28mg/g。將溶液於室溫持續適度攪拌(15rpm)10分鐘。
第2階段：製備抗體溶液
以小瓶稱取0.215g的藥品。將0.935g的注射用水加至藥品上，並將小瓶在室溫於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。抗體濃度為100.03mg/g。將小瓶於4℃保存5分鐘。
第3階段：製備1：1莫耳比之抗體和P2聚合物的液體組合物
將0.356g所製備的抗體溶液緩慢地加到0.356g所製備的P2溶液中。將小瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌5分鐘。此溶液含有50.04mg/g的抗體和5.13mg/g的P2聚合物。
第4階段：抗體/聚合物P2溶液之冷凍乾燥
將抗體/P2聚合物溶液置於USIFROID冷凍乾燥機中冷凍乾燥76小時，以得到固體組成物。
第5階段：復原抗體/P2聚合物之即用溶液
將0.287g的注射用水緩慢地加到冷凍乾燥的抗體/P2聚合物配製物中。將小瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。復原的澄清溶液每mL含有100.00mg的抗體和10.26mg的P2聚合物。
第6階段：分析該復原的抗體/P2聚合物溶液
分析結果係提出於下表中。
1：1莫耳比之抗體與P2聚合物的組合，防止了抗體聚集。
實例10-製備1：1莫耳比之抗體藥品和P5聚合物的冷凍乾燥組合物並進一步以注射用水即席復原
藉由以水稀釋含有25.05mg/g P5聚合物之初級溶液，製備5.08mg/g P5聚合物溶液。將0.365g的100.03mg/g抗體藥品溶液(係根據實例9步驟2中描述的方法所製備)，加到0.354g所製備的P5溶液中。將含有50.78mg/g的抗體和2.50mg/g的P5聚合物之溶液冷凍乾燥。
藉由加入0.2955g的注射用水並於4℃以滾筒攪拌10分鐘，得到復原的即用溶液。
此復原的即用溶液每mL含有99.92mg的抗體和4.92mg的P5聚合物。
分析結果係提出於下表中。
1：1莫耳比之抗體與P5聚合物的組合，防止了抗體聚集。
實例11-製備1：1莫耳比之抗體藥品和P2聚合物的冷凍乾燥組合物並進一步以注射用水即席復原 第1階段：製備P2溶液
將0.544g的注射用水加到0.060g的50.15mg/g之P2聚合物溶液中：P2聚合物濃度為5.00mg/g。將溶液於室溫持續適度攪拌(15rpm)10分鐘。
第2階段：製備抗體溶液
以小瓶稱取0.1165g的藥品。將1.121的注射用水加至藥品上。將小瓶在室溫下於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。抗體濃度為50.22mg/g。將小瓶於4℃保存5分鐘。
第3階段：製備1：1莫耳比之抗體和P2聚合物的液體組合物
將0.409g所製備的抗體溶液緩慢地加到0.402g所製備的P2溶液中。將小瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌5分鐘。此組成物含有25.30mg/g的抗體和2.48mg/g的聚合物。
第4階段：抗體/P2聚合物溶液組合物之冷凍乾燥
將液體組合物置於USIFROID冷凍乾燥機中凍乾76小時。
第5階段：復原抗體//P2聚合物之即用溶液
將0.165g的注射用水緩慢地加到抗體/P2聚合物的冷凍乾燥組合物中。將小瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。
第6階段：分析溶液的抗體和P2聚合物之即用溶液
得到的澄清溶液每mL含有100.19mg的抗體和9.81mg的P2聚合物。
結果係提出於下表中。
1：1莫耳比之抗體與P2聚合物的組合，防止了抗體聚集。
實例12-製備1：1莫耳比之抗體藥品和P5聚合物的冷凍乾燥組合物並進一步以注射用水即席復原
藉由以水稀釋含有25.05mg/g P5聚合物之初級溶液，製備2.51mg/g P5聚合物溶液。將0.403g的50.22mg/g抗體藥品溶液(來自實例11步驟2)，加到0.402g所製備的P5溶液中。將含有25.12mg/g的抗體和1.25mg/g的P5聚合物之溶液冷凍乾燥。
藉由加入0.163g的注射用水並於4℃以滾筒攪拌10分鐘，得到復原的即用溶液。
所得到的澄清溶液每mL含有100.47mg的抗體和5.01mg的P5聚合物。
結果係提出於下表中。
相較於實例5，其中該抗體藥品係以1/1莫耳比用100mg/ml的P5聚合物溶液直接復原，在冷凍乾燥較低濃度之抗體/P5聚合物 時，調配方法的改變並未導致抗體對抗聚集作用之安定性效率的改善。1：1莫耳比之抗體和P5聚合物的組合防止了抗體聚集。
實例13-在蔗糖的存在下製備冷凍乾燥抗體並進一步以注射用水即席復原作為參照
使用具有下列組成之抗體初級配製物：
- 抗體：42mg/ml
- 蔗糖：2.1% w/v
- Tween 80：0.021% w/v
第1階段：製備抗體溶液
將冷凍的抗體初級配製物溶液於周圍溫度下解凍。
第2階段：製備含蔗糖之液體溶液抗體
將0.580g的抗體溶液緩慢地加到0.586g的注射用水中。將小瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。抗體濃度為20.80mg/g。加入11.8mg的蔗糖，並將小瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。最終的蔗糖為20.95mg/g。
第3階段：冷凍乾燥在蔗糖存在下之抗體
將第2階段所製備的溶液於USIFROID冷凍乾燥機中凍乾76小時。
第4階段：復原即用的抗體溶液
將0.181g的注射用水緩慢地加到第3階段凍乾的抗體中。將小瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。所得到的澄清溶液每ml含有106.02mg的抗體和107.42mg的蔗糖。
結果係提出於下表中。
實例14-製備1：1莫耳比之抗體和P2聚合物的冷凍乾燥組合物並進一步以注射用水即席復原
此方法係類似實例9中所述之方法，但第2階段係以實例15中所述之抗體拆解物質(DS)來進行。參見圖7。
第1階段：製備P2溶液
將1.3858g的注射用水加到0.142g的50.15mg/g之P2聚合物初級溶液：P2聚合物濃度為3.90mg/g。將溶液於室溫持續適度攪拌(15rpm)5分鐘。
第2階段：製備抗體溶液
將冷凍的實例13之抗體初級配製物溶液於周圍溫度下解凍。
第3階段：製備1：1莫耳比之抗體與P2聚合物的液體組合物
將0.577g的第2階段抗體溶液緩慢地加到0.612g所製備的P2溶液中。將小瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。所得到的溶液含有20.39mg/g的抗體和2.01mg/g的P2聚合物。加入9.2mg的蔗糖並將小瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。最終的蔗糖濃度為18.27mg/g。
第4階段：冷凍乾燥在蔗糖存在下的抗體/P2聚合物配製物
將第3階段的溶液於USIFROID冷凍乾燥機中凍乾76小時。
第5階段：復原抗體/P2聚合物之即用溶液
將0.181g的注射用水緩慢地加到抗體/P2聚合物冷凍乾燥的組合物中。將小瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。所得到的澄清 溶液每mL含有99.34mg的抗體、9.77mg的聚合物P2和89.71mg的蔗糖。
結果係提出於下表中(參見圖8)。
1：1莫耳比之P2聚合物和抗體的組合防止了抗體聚集。
實例15-製備1：1莫耳比之抗體和P5聚合物的冷凍乾燥組合物並進一步以注射用水即席復原
藉由以水稀釋含有25.05mg/g P5聚合物之初級溶液，製備1.94mg/g P5聚合物溶液。將0.581g來自實例13的42mg/g抗體溶液加到0.5815g所製備的P5溶液中，然後加入10.8mg的蔗糖。將所得到含有20.79mg/g的抗體、0.96mg/g的P5聚合物和20.12mg/g的蔗糖之溶液冷凍乾燥。藉由將0.1815g的注射用水加到冷凍乾燥的組合物中並於4℃滾筒攪拌10分鐘，得到即用溶液。
所得到的澄清溶液每ml含有99.55mg的抗體、4.60mg的P5聚合物和96.34mg的蔗糖。
結果係提出於下表中。
1：1莫耳比之P5聚合物和抗體的組合防止了抗體聚集。
實例16-在蔗糖的存在下製備抗體的冷凍乾燥組合物並進一步以注射用水即席復原作為參照
將0.269g實例13的抗體初級溶液以20.04mg/g用水稀釋。加入8.1mg的蔗糖。最終的蔗糖濃度為24.54mg/g。冷凍乾燥後，藉由加入0.0805g的注射用水，得到澄清的復原溶液，且mL每含有99.49mg的抗體和123.62mg的蔗糖。
結果係提出於下表中。
實例17-製備1：1莫耳比之抗體和P5聚合物的冷凍乾燥組合物並進一步以注射用水即席復原
藉由以水稀釋含有25.05mg/g P5聚合物的初級溶液，製備1.95mg/g P5聚合物溶液。將0.268g實例13之42mg/g的抗體溶液加到0.296g所製備的P5溶液中，然後加入7.8mg的蔗糖。將所得到含有19.66mg/g的抗體、1.01mg/g的聚合物P5和24.01mg/g的蔗糖之溶液冷凍乾燥。
。藉由加入0.081g的注射用水並於4℃滾筒攪拌10分鐘，得到即用溶液。
所得到的澄清溶液每ml含有98.28mg的抗體、5.03mg的聚合物P5和119.99mg的蔗糖。
結果係提出於下表中。
1：1莫耳比之P5聚合物和抗體的組合防止了抗體聚集。
實例18-在蔗糖的存在下製備抗體的冷凍乾燥配製物並進一步以注射用水即席復原
以相同的方法由另外的實體(B)，再製造實例13。
第1階段：製備抗體溶液
將冷凍的42mg/ml抗體溶液於周圍溫度解凍。
第2階段：製備含蔗糖的抗體液體溶液
將6.736g的抗體溶液緩慢地加到7.290g的注射用水中。將燒瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。抗體濃度為20.17mg/g。加入117.2mg的蔗糖並將燒瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。最終的蔗糖濃度為18.29mg/g。
第3階段：冷凍乾燥含蔗糖的抗體溶液
將此溶液分配於10支小瓶，含有約1.2ml。然後將小瓶凍乾76小時。
第4階段：復原抗體溶液
將大約0.197g的注射用水緩慢地加到各凍乾的抗體小瓶中。將各小瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。所得到的澄清溶液每mL含有大約100.0mg的抗體和91.4mg的蔗糖。
結果係提出於下表中(參見圖9)。
實例19-製備1：1莫耳比之抗體和P2聚合物的冷凍乾燥組合物並進一步以注射用水即席復原
以相同的方法由另外的實體(B)，再製造實例14。
第1階段：製備P2溶液
將7.564g的注射用水加到0.438g之71.0mg/g的P2聚合物溶液：P2聚合物濃度為3.88mg/g。將溶液於室溫持續適度攪拌(15rpm)5分鐘。
第2階段：製備抗體溶液
將冷凍的實例13之42mg/ml抗體初級溶液於周圍環境下解凍。
第3階段：製備1：1莫耳比之抗體和P2聚合物的液體組合物
將6.730g的抗體溶液緩慢地加到7.292g所製備的P2溶液中。將燒瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。然後，加入106.8mg的蔗糖並將燒瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。所得到的溶液含有20.01mg/g的抗體、2.00mg/g的聚合物P2和17.56mg/g的蔗糖。
第4階段：冷凍乾燥在蔗糖存在下的抗體/聚合物P2組合物
將第3階段的溶液分配於10支小瓶，含有約1.2ml，並凍乾76小時。
第5階段：復原抗體/聚合物P2配製物
將大約0.197g的注射用水緩慢地加到各抗體/P2聚合物冷凍乾燥配製物中。將各小瓶在4℃於滾筒攪拌器上攪拌10分鐘。所得到的澄清溶液每ml含有大約100.0mg的抗體、10.0mg的P2聚合物和87.8mg的蔗糖。參見圖9。
1：1莫耳比之P2聚合物和抗體的組合防止了抗體聚集。
所揭示的其他序列：
<110> Sanofi Flamel Technologies Huille,Sylvain Carayon,Sophie Vialas,Corine Bonnet-Gonnet,Cecile Chang,You-Ping
<120> 抗-IL-4/抗-IL-13雙專一性抗體/聚麩胺酸調配物
<130> 14-304-PRO
<140>
<141>
<160> 26
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化小鼠/小鼠VL3區
<400> 1
<210> 2
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化小鼠/小鼠VH2區
<400> 2
<210> 3
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化小鼠/小鼠VL1區
<400> 3
<210> 4
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化小鼠/小鼠VH1區
<400> 4
<210> 5
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化小鼠/小鼠VH2區
<400> 5
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子
<400> 6
<210> 7
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 7
<210> 8
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hB-B13 VL3 CDR
<400> 8
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hB-B13 VL3 CDR
<400> 9
<210> 10
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hB-B13 VL3 CDR
<400> 10
<210> 11
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hB-B13 VH2 CDR
<400> 11
<210> 12
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hB-B13 VH2 CDR
<400> 12
<210> 13
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hB-B13 VH2 CDR
<400> 13
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h8D4-8 VL1 CDR
<400> 14
<210> 15
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h8D4-8 VL1 CDR
<400> 15
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h8D4-8 VL1 CDR
<400> 16
<210> 17
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h8D4-8 VH1 CDR
<400> 17
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h8D4-8 VH1 CDR
<400> 18
<210> 19
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h8D4-8 VH1 CDR
<400> 19
<210> 20
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h8D4-8 VH2 CDR
<400> 20
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h8D4-8 VH2 CDR
<400> 21
<210> 22
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h8D4-8 VH2 CDR
<400> 22
<210> 23
<211> 469
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 23
<210> 24
<211> 236
<212> PRT
<213> 智人
<400> 24
<210> 25
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 絞鏈IgG1 1
<400> 25
<210> 26
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 絞鏈IgG1 2
<400> 26

Claims (78)

  1. 一種安定的抗體配製物，係包括：雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體或其抗原結合片段，其係包括式N-VL1-連接子-VL2-CL-C之輕鏈，其中CL為抗體的輕鏈恆定區，及式N-VH1-連接子-VH2-CH1-C之重鏈，其中CH1為抗體的輕鏈恆定區，其中VL1和VH1係形成一外(N-端)IL-13抗原結合區，而VL2和VH2係形成一內(C-端)IL-4抗原結合區；聚胺基酸，係由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成，具有介於25至200平均聚合度並隨機接枝上1至13%維生素E；及低溫保護劑；其中抗體與由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸之莫耳比係介於約1：0.25至1：2.5，及其中該配製物含有50mM或更低的鹽。
  2. 如申請專利範圍第1項之配製物，其中VL1係包括SEQ ID NO：1之CDR序列；VH1係包括SEQ ID NO：2之CDR序列；VL2係包括SEQ ID NO：3之CDR序列；及VH2係包括SEQ ID NO：4或5之CDR序列。
  3. 如申請專利範圍第1項之配製物，其中VL1係包括SEQ ID NO：1之胺基酸序列；VH1係包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；VL2係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及VH2係包括SEQ ID NO：4或5之胺基酸序列。
  4. 如申請專利範圍第1項之配製物，其中該輕鏈係包括式N-VL1-連接子 -VL2-CL-C，其中CL為抗體的輕鏈恆定區，及其中該重鏈係包括式N-VH1-連接子-VH2-CH1-CH2-CH3-C，其中CH1為一抗體的輕鏈恆定區，及其中CH2-CH3係相當於抗體的Fc區。
  5. 如前述申請專利範圍任一項中之配製物，其中該連接子係包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列。
  6. 如前述申請專利範圍任一項中之配製物，其中該抗體或其抗原結合片段進一步係包括一恆定區。
  7. 如申請專利範圍第6項之配製物，其中該恆定區係由CH1、CH2、CH3和CL組成之群中選出。
  8. 如申請專利範圍第1項之配製物，其中該雙特異性抗體或其抗原結合片段為一人源化IgG4雙特異性抗體或其抗原結合片段。
  9. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中抗體或其抗原結合片段的濃度為約100mg/mL或更低。
  10. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸係具有介於40至120之標稱聚合度。
  11. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸係隨機接枝5-13%的維生素E。
  12. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸係隨機接枝10%的維生素E。
  13. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸濃度為約5-約10mg/mL。
  14. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中該低溫保護劑濃度為約30-約120mg/g。
  15. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中該低溫保護劑濃度為約 40-約100mg/g。
  16. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中該低溫保護劑濃度為約45-約90mg/g。
  17. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中該低溫保護劑為雙糖。
  18. 如申請專利範圍第17項之配製物，其中該雙糖為蔗糖。
  19. 如申請專利範圍第18項之配製物，其中該蔗糖濃度係由50mg/g和90mg/g組成之群中選出。
  20. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中在液體中於室溫下24小時之後，聚集物含量係不超過11%。
  21. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中該配製物係以具有介於75至125mg/ml之抗體濃度的液體形式來使用。
  22. 如申請專利範圍第1項之配製物，其中該配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約10mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；及約50mg/g的蔗糖；其中該配製物含有低於50mM的鹽。
  23. 如申請專利範圍第1項之配製物，其中該配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區； 約10mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；及約90mg/g的蔗糖；其中該配製物含有低於50mM的鹽。
  24. 如申請專利範圍第1項之配製物，其中該配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約5mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有50之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；及約50mg/g的蔗糖；其中該配製物含有低於50mM的鹽。
  25. 如申請專利範圍第1項之配製物，其中該配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約5mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有50之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；及約90mg/g的蔗糖；其中該配製物含有低於50mM的鹽。
  26. 一種安定的抗體配製物，係包括： 一雙特異性抗-IL-4/抗-IL-13抗體或其抗原結合片段，其係包括一式N-VL1-連接子-VL2-CL-C之輕鏈及一式N-VH1-連接子-VH2-CH1-C之重鏈，其中VL1和VH1係形成一外IL-13抗原結合區，而VL2和VH2係形成一內IL-4抗原結合區；一聚胺基酸，係由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成，具有介於25至200的平均聚合度及隨機接枝上1至13%維生素E；一低溫保護劑；及一緩衝系統；其中該配製物的pH為約pH 7，及其中該配製物含有50mM或更低的鹽。
  27. 如申請專利範圍第26項之配製物，其中VL1係包括SEQ ID NO：1之CDR序列；VH1係包括SEQ ID NO：2之CDR序列；VL2係包括SEQ ID NO：3之CDR序列；及VH2係包括SEQ ID NO：4或5之CDR序列。
  28. 如申請專利範圍第26項之配製物，其中VL1係包括SEQ ID NO：1之胺基酸序列；VH1係包括SEQ ID NO：2之胺基酸序列；VL2係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及VH2係包括SEQ ID NO：4或5之胺基酸序列。
  29. 如申請專利範圍第26項之配製物，其中該輕鏈係包括式N-VL1-連接子-VL2-CL-C，其中CL為抗體之輕鏈恆定區，及其中該重鏈係包括式N-VH1-連接子-VH2-CH1-CH2-CH3-C，其中CH2-CH3相當於抗體的Fc區。
  30. 如申請專利範圍第26-29項中任一項之配製物，其中該連接子係包括SEQ ID NO：6之胺基酸序列。
  31. 如申請專利範圍第26-30項中任一項之配製物，其中該抗體或其抗原結合片段進一步係包括一恆定區。
  32. 如申請專利範圍第31項之配製物，其中該恆定區係由CH1、CH2、CH3和CL組成之群中選出。
  33. 如申請專利範圍第26項之配製物，其中該雙特異性抗體或其抗原結合片段為一人源化IgG4雙特異性抗體或其抗原結合片段。
  34. 如申請專利範圍第26-33項中任一項之配製物，其中該抗體或其抗原結合片段的濃度約100mg/mL或更低。
  35. 如申請專利範圍第26-34項中任一項之配製物，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸係具有介於40至120之標稱聚合度。
  36. 如申請專利範圍第35項之配製物，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸係具有50之標稱聚合度。
  37. 如申請專利範圍第35項之配製物，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸係具有100之標稱聚合度。
  38. 如申請專利範圍第26-37項中任一項之配製物，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸係隨機接枝5-13%的維生素E。
  39. 如申請專利範圍第26-38項中任一項之配製物，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸係隨機接枝10%的維生素E。
  40. 如申請專利範圍第26-39項中任一項之配製物，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸濃度為約5-約10mg/mL。
  41. 如申請專利範圍第40項之配製物，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二 者所組成的聚胺基酸濃度為約5mg/mL。
  42. 如申請專利範圍第40項之配製物，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成的聚胺基酸濃度為約10mg/mL。
  43. 如申請專利範圍第26-42項中任一項之配製物，其中該低溫保護劑濃度為約5%(w/v)。
  44. 如申請專利範圍第26-43項中任一項之配製物，其中該低溫保護劑為雙糖。
  45. 如申請專利範圍第44項之配製物，其中該雙糖為蔗糖。
  46. 如申請專利範圍第45項之配製物，其中該蔗糖濃度為約5%(w/v)。
  47. 如申請專利範圍第26-46項中任一項之配製物，其中該緩衝系統係包括至少二種緩衝劑。
  48. 如申請專利範圍第26-47項中任一項之配製物，其中該緩衝系統濃度為約10mM。
  49. 如申請專利範圍第26-48項中任一項之配製物，其中該緩衝系統係包括Tris緩衝劑和磷酸鹽緩衝劑。
  50. 如申請專利範圍第49項之配製物，其中Tris緩衝劑濃度為約3.7mM。
  51. 如申請專利範圍第49項之配製物，其中磷酸鹽緩衝劑濃度為約6.3mM。
  52. 如申請專利範圍第49項之配製物，其中該Tris緩衝劑濃度為約3.7mM及該磷酸鹽緩衝劑濃度為約6.3mM。
  53. 如申請專利範圍第26-52項中任一項之配製物，其中該配製物進一步係包括界面活性劑。
  54. 如申請專利範圍第26-53項中任一項之配製物，其中該界面活性劑濃度為約0.2%(w/v).
  55. 如申請專利範圍第53-54項中任一項之配製物，其中該界面活性劑為聚山梨醇酯。
  56. 如申請專利範圍第55項之配製物，其中該聚山梨醇酯為聚山梨醇酯80。
  57. 如申請專利範圍第56項之配製物，其中該聚山梨醇酯80濃度為約0.2%(w/v)。
  58. 如申請專利範圍第26-57項中任一項之配製物，其中該配製物進一步係包括一安定劑。
  59. 如申請專利範圍第58項之配製物，其中該安定劑濃度為約3%(w/v)。
  60. 如申請專利範圍第58-59項中任一項之配製物，其中該安定劑為胺基酸或糖。
  61. 如申請專利範圍第60項之配製物，其中該胺基酸為脯胺酸。
  62. 如申請專利範圍第60項之配製物，其中該糖為甘露醇。
  63. 如申請專利範圍第61項之配製物，其中該脯胺酸濃度為約3%(w/v)。
  64. 如申請專利範圍第62項之配製物，其中該甘露醇濃度為約3%(w/v)。
  65. 如申請專利範圍第26項之配製物，其中該配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約10mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括約3.7mM之Tris緩衝劑濃度及約6.3mM之磷酸鹽緩衝劑濃度； 約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；及約3%(w/v)脯胺酸；其中該配製物的pH為約pH 7；及其中該配製物含有低於50mM的鹽。
  66. 如申請專利範圍第26項之配製物，其中該配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約5mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有50之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括約3.7mM之Tris緩衝劑濃度及約6.3mM之磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；及約3%(w/v)脯胺酸；其中該配製物的pH為約pH 7；及其中該配製物含有低於50mM的鹽。
  67. 如申請專利範圍第26項之配製物，其中該配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約10mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之 聚胺基酸，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括約3.7mM之Tris緩衝劑濃度及約6.3mM之磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；及約3%(w/v)甘露醇；其中該配製物的pH為約pH 7；及其中該配製物含有低於50mM的鹽。
  68. 如申請專利範圍第26項之配製物，其中該配製物係包括：約100mg/mL的雙特異性抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2和4之胺基酸序列的重鏈可變區及一包含SEQ ID NO：1和3之胺基酸序列的輕鏈可變區；約5mg/mL由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有50之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；約10mM的緩衝系統，其中該緩衝系統係包括約3.7mM之Tris緩衝劑濃度及約6.3mM之磷酸鹽緩衝劑濃度；約0.2%(w/v)聚山梨醇酯80；約5%(w/v)蔗糖；及約3%(w/v)甘露醇；其中該配製物的pH為約pH 7；及其中該配製物含有低於50mM的鹽。
  69. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中該配製物為液體配製 物。
  70. 如申請專利範圍第1-69項中任一項之配製物，其中該配製物為凍乾配製物。
  71. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中該配製物具有有關高分子量蛋白之良好的安定性。
  72. 一種套組，係包括一包含如前述申請專利範圍中任一項之配製物的容器，以及供投予和使用該配製物之說明書。
  73. 一種治療過敏性疾病、癌症、氣喘、與IL-4及/或IL-13產生異常有關之疾病或與TH-2媒介的反應升高有關的疾病之方法，其係包括將如申請專利範圍第1-71項中任一項之配製物投予有此需要的患者。
  74. 一種製造安定的100mg/mL抗體配製物之方法，係包括：將約10mg由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸溶液，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E，加到約100mg凍乾的抗體中，形成一配製物；及攪拌該配製物。
  75. 一種製造安定的100mg/mL抗體配製物之方法，係包括a)將抗體溶液加到由麩胺酸或天門冬胺酸或二者隨機接枝維生素E所組成之聚胺基酸溶液中，其中該由麩胺酸或天門冬胺酸或二者所組成之聚胺基酸具有100之標稱聚合度及10% mol/mol接枝此聚合物的維生素E；b)加入一低溫保護劑；c)攪拌該組合溶液；d)將組合溶液凍乾；及 e)以水復原此凍乾粉末以達到100mg/mL的抗體濃度。
  76. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中：VL1係包括RASESVDSYGQSYMH(CDR1；SEQ ID NO：8)、LASNLES(CDR2；SEQ ID NO：9)和QQNAEDSRT(CDR3；SEQ ID NO：10)之CDR序列，VH1係包括GFSLTDSSIN(CDR1；SEQ ID NO：11)、DGRID(CDR2；SEQ ID NO：12)和DGYFPYAMDF(CDR3；SEQ ID NO：13)之CDR序列，VL2係包括HASQNIDVWLS(CDR1；SEQ ID NO：14)、KASNLHTG(CDR2；SEQ ID NO：15)和QQAHSYPFT(CDR3；SEQ ID NO：16)之CDR序列，及VH2係包括GYSFTSYWIH(CDR1；SEQ ID NO：17)、IDPSDGETR(CDR2；SEQ ID NO：18)和LKEYGNYDSFYFDV(CDR3；SEQ ID NO：19)之CDR序列。
  77. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中：VL1係包括RASESVDSYGQSYMH(CDR1；SEQ ID NO：8)、LASNLES(CDR2；SEQ ID NO：9)和QQNAEDSRT(CDR3；SEQ ID NO：10)之CDR序列，VH1係包括GFSLTDSSIN(CDR1；SEQ ID NO：11)、DGRID(CDR2；SEQ ID NO：12)和DGYFPYAMDF(CDR3；SEQ ID NO：13)之CDR序列，VL2係包括HASQNIDVWLS(CDR1；SEQ ID NO：14)、KASNLHTG(CDR2；SEQ ID NO：15)和QQAHSYPFT(CDR3；SEQ ID NO：16)之CDR序列，及 VH2係包括GYSFTSYWIH(SEQ ID NO：20)、IDASDGETR(SEQ ID NO：21)和LKEYGNYDSFYFDV(SEQ ID NO：22)之CDR序列。
  78. 如前述申請專利範圍中任一項之配製物，其中該抗體或其抗原結合片段進一步係包括一恆定區，其中該恆定區係包括SEQ ID NO：23及/或SEQ ID NO：24。
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