FI116038B - Menetelmä lysosomaalientsyymillä pilkottavissa olevien kasvaintenvastaisien lääkeainekonjugaattien valmistamiseksi - Google Patents

Menetelmä lysosomaalientsyymillä pilkottavissa olevien kasvaintenvastaisien lääkeainekonjugaattien valmistamiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI116038B
FI116038B FI942237A FI942237A FI116038B FI 116038 B FI116038 B FI 116038B FI 942237 A FI942237 A FI 942237A FI 942237 A FI942237 A FI 942237A FI 116038 B FI116038 B FI 116038B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
phe
lys
phenylalanyl
lysyl
methoxytrityl
Prior art date
Application number
FI942237A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI942237A (fi
FI942237A0 (fi
Inventor
Raymond Armand Firestone
Gene Michael Dubowchik
Original Assignee
Squibb Bristol Myers Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22042014&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI116038(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Squibb Bristol Myers Co filed Critical Squibb Bristol Myers Co
Publication of FI942237A0 publication Critical patent/FI942237A0/fi
Publication of FI942237A publication Critical patent/FI942237A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI116038B publication Critical patent/FI116038B/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/021—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)n-C(=0)-, n being 5 or 6; for n > 6, classification in C07K5/06 - C07K5/10, according to the moiety having normal peptide bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Description

; i 116038 ! i
Menetelmä lysosomaalientsyymillä pilkottavissa olevien kasvaintenvastaisien lääkeainekonjugaattien valmistamiseksi 5 Keksinnön tausta 1. Keksinnön taso Tämän keksinnön kohteena on menetelmä lääke-ligandikonjugaattien valmistamiseksi, joissa ligandi on liittynyt lääkeosaan peptidisidososan kautta, joka koostuu 10 proteiinipeptidistä, karboksyylihappoasyyliyksiköstä ja itsetuhoutuvasta väliyhdisteestä, jotka konjugaatit aktivoidaan lysosomaalisilla entsyymeillä.
2. Alan kuvaus
Kaksiosaiset yhdisteet, jotka koostuvat kantoai-15 neesta tai sidososasta ja lääkeosasta, ovat tunnettuja.
: Nämä yhdisteet ovat erityisen hyödyllisiä muodostettaessa immunokonjugaatteja antigeeneihin liittyviä kasvaimia vastaan. Kuitenkin tietyissä tapauksissa kaksiosaiset yhdis-I teet voivat olla epästabiileja johtuen sidoksen, joka si- 20 too vasta-aineet lääkkeeseen, luonteesta, tai johtuen lää-keosan elektronisista tai steerisistä ominaisuuksista, •\# jotka voivat estää sidoksen hydrolyysin halutulla kohde- entsyymillä. Katzenellenbogen, J. Amer. Chem. Soc., (1981) • « 24: 479-480.
25 Keksinnön yhteenveto • * · ‘Tämän keksinnön kohteena on menetelmä kasvain-* · · spesifisten lääke-ligandikonj ugaattien valmistamiseksi, t * « ’* * jotka konjugaatit koostuvat ligandista, lääkkeestä ja peptidisidososasta, ja joka on selektiivisesti aktivoi- * t · 30 tavissa kasvainkohdassa.
: Tämän keksinnön mukaisella menetelmällä valmistet- * » » ;>] tavat lääke-ligandikonjugaatit sisältävät vähintään yhden lääkemolekyylin, ligandin, joka pystyy kohdistumaan välit-
♦ I
tuun solupopulaatioon, ja peptidisidososan, joka sisältää ; 35 karboksyylihappoasyylin, ja proteiinipeptidin. Peptidi- 2 116038 sidososa voi myös sisältää itsetuhoutuvan väliyhdisteen, joka erottaa proteiinipeptidisekvenssin ja lääkkeen.
Ligandi on sitoutunut karboksyylihappoasyyliyksik-köön tioeetteriä sisältävän sidoksen kautta, joka tioeet-5 terisidos on muodostunut sulfhydryyliryhmän reaktiosta li-gandin kanssa. Edullisessa suoritusmuodossa kohdeligandi liitetään suoraan peptidisidokseen kovalenttisen tioeet-terisidoksen kautta.
Tämän keksinnön kohteena on menetelmä lääkekonju-10 gaattien valmistamiseksi, jotka voidaan selektiivisesti aktivoida kasvainkohdassa.
Tämän keksinnön toisena kohteena on menetelmä kasvainspesifisten lääkekonjugaattien valmistamiseksi, jotka ovat erittäin selektiivisiä substraatteja lääkkeen 15 aktivoivalle entsymaattiselle lohkaisulle, jotka entsyymit liittyvät yhteen tai useampaan kasvaimeen.
Tämän keksinnön lisäkohteena on menetelmä sellaisten kasvainspesifisten lääkekonjugaattien valmistamiseksi, joissa aktivoiva entsyymi on sellainen, jota on läsnä kas-20 vaimessa riittävinä määrinä aikaansaamaan vapaan lääkkeen solumyrkkytason kasvaimen läheisyydessä.
Keksinnön lisäkohteena on menetelmä kasvain-.·, ; spesifisten lääkekonjugaattien valmistamiseksi, joissa .* kasvainspesifisyys johtuu pelkästään ligandista.
25 Keksinnön lisäkohteena on menetelmä kasvain- ;;; spesifisten lääkekonjugaattien valmistamiseksi, jotka ovat ’·' ' stabiileja proteaaseja vastaan veressä.
Edelleen tämän keksinnön kohteena on menetelmä • » ; kasvainspesifisen lääkekonjugaatin valmistamiseksi, joka • · * ·,_ 30 on yhdenmukainen edeltävien näkökantojen kanssa ja joka on huomattavasti vähemmän myrkyllinen kuin aktivoitava lääke.
• «I
\.. Eräässä suoritusmuodossa lääkeosa on antrasykliini antibioottinen aine, ligandi on vasta-aine, A on p-amino-• ’.· bentsyyli-karbamoyyli, Y on Phe, Z on Lys ja n on 5.
3 116038
Edullisissa suoritusmuodoissa antrasykliinilääkeosa on doksorubisiini, ligandiosa on kimeerinen vasta-aine, A on p-aminobentsyyli-karbamoyyli, Y on Phe, Z on Lys ja n on 5.
5 Toisessa edullisessa suoritusmuodossa lääkeosa on taksoli, ligandi on vasta-aine, Y on Phe, Z on Lys ja n on 5.
Toisessa edullisessa suoritusmuodossa lääkeosa on mitomysiini C, ligandi on vasta-aine, Y on Phe, Z on Lys 10 ja n on 5.
Tämän keksinnön edeltävät ja muut kohteet saavutetaan menetelmällä valmistaa kasvaimia vastustava aine, joka on sitoutunut ligandiin peptidisidososan kautta, joka koostuu proteiinipeptidisekvenssistä ja itsetuhoutuvasta 15 väliyhdisteestä reaktiivisessa kohdassa ja joka on tarkoituksenmukainen kasvaimia vastustavan farmakologisen aktiivisuuden inhiboimiseksi muuttaen täten kasvaimia vastustavan aineen farmakologisesti inaktiiviseksi peptidyylikon-jugaattijohdannaiseksi. Peptidisidososassa on aminohappo-20 jäännössekvenssi, joka on spesifisesti räätälöity niin, että : se tekee peptidyylijohdannaisesta selektiivisen substraatin ·'·*. lääkkeen aktivoivalle entsymaattiselle lohkaisulle yhden .·, : tai useamman lysosomaalisen proteaasin, kuten katepsiinien .·, ; B, C tai D toimesta. Entsymaattinen lohkaisureaktio pois- ’ 25 taa peptidisidososan lääkekonjugaatista ja aikaansaa kas- vaimia vastustavan aineen vapautumisen farmakologisesti ** ’ vaikuttavaan muotoon selektiivisesti kasvainkohdassa. Ver rattuna ligandi-lääkesidososiin, jotka turvautuvat yksin-: kertaiseen happohydrolyysiin lääkkeen vapauttamiseksi, tä- 30 mä uusi menetelmä mahdollistaa huomattavasti pienemmän ;·. systeemisen toksisuuden (joka systeeminen toksisuus johtuu .···, ennenaikaisesta sidososan hydrolyysistä veressä), koska suurempi määrä lääkkeestä kulkeutuu kasvainkohtaan, ja me-: netelmällä aikaansaadaan pidempi säilytysaika ja yksinker- ,;·'·· 35 taisemmat käsittelyolosuhteet konjugaatille.
4 116038 Tämän keksinnön mukaisesti valmistettavilla lääke-ligandikonjugaateilla on huomattavasti pienempi systeeminen toksisuus kuin kaksiosaisilla konjugaateilla ja vapaalla lääkkeellä. Keksinnön mukaisella menetelmällä val-5 niistettävillä konjugaateilla on sekä spesifistä että terapeuttista lääkeaktiivisuutta valitun kohdesolupopulaation hoidossa. Niitä voidaan käyttää farmaseuttisissa koostumuksissa, kuten sellaisissa, jotka sisältävät farmaseuttisesti vaikuttavan määrän seuraavaa kaavan I yhdistettä yh-10 dessä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantoaineen, laimen-timen tai täyteaineen kanssa.
Piirustusten kuvaus
Kuvio 1 kuvaa BR96:n vaikutusta L2987 keuhkolin-jaan, A2780 munasarjalinjaan ja HCT116 paksusuolilinjaan.
15 Kuviossa 2 nähdään BR96-doksorubisiinikonjugaatin ja konjugoimattoman doksorubisiinin tehokkuus.
Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus
Seuraavan yksityiskohtaisen kuvauksen tarkoituksena on keksinnön tekeminen helpommin ymmärrettäväksi.
20 Tämän keksinnön kohteena on menetelmä uusien lää- ke-ligandikonjugaattien valmistamiseksi, joilla on jäljem-pänä mainittu kaava ja jotka koostuvat ligandista, joka : pystyy kohdistumaan tiettyyn solupopulaatioon, ja lääk- • « · t.’4 keestä, joka on liittynyt ligandiin peptidisidososan kaut- 25 ta, jolloin menetelmälle on tunnusomaista, että kiinnite-*;;; tään ligandi peptidisidososaan antamalla ligandissa olevan '·’ ‘ sulfhydryyliryhmän reagoida mainitun linkkerin karboksyy- liasyyliryhmän kanssa. Peptidisidososa koostuu karboksyy-i.i * lihappoyksiköstä ja proteiinipeptidisekvenssistä. Pepti- 30 disidos voi myös sisältää itsetuhoutuvan väliyhdisteen, joka erottaa lääkkeen ja proteiinipeptidisekvenssin.
* · · .... Ligandimolekyyli voi olla immunoreaktiivinen pro teiini kuten vasta-aine tai sen fragmentti, ei-immunoreak-: '.· tiivinen proteiini tai peptidiligandi, kuten bombesiini t 35 tai sidosligandi, joka tunnistaa soluun liittyvän resepto- 5 116038 rin, kuten lektiini, tai mikä tahansa proteiini tai peptidi, jossa on reaktiivinen sulfhydryyliryhmä (-SH) tai joka voidaan modifioida sisältämään tällaisen sulfhydryylliryh-män. Karboksyyliasyyliyksikkö on sitoutunut ligandiin tio-5 eetterisidoksen kautta ja lääke on sitoutunut sidososaan funktionaalisen ryhmän kautta, joka on valittu ryhmästä primaarinen tai sekundaarinen amiini, hydroksyyli, sulf-hydryyli, karboksyyli, aldehydi tai ketoni.
Tämän keksinnön mukaisella menetelmällä valmistet-10 tavalla konjugaatilla on yleinen kaava (I): r
L--A-Ym-Zm—Wn--D
Kaava (I) jossa i D on lääkeosa; ' L on ligandi; 15 A on karboksyylihappoasyyliyksikkö; Y on aminohappo; Z on aminohappo; ;·. X on itsetuhoutuva väliyhdiste; • ·« ;-f. W on itsetuhoutuva väliyhdiste; \ 20 m on kokonaisluku 1, 2, 3, 4, 5 tai 6; • · · • » · ; ; n on kokonaisluku 0 tai 1, sillä edellytyksellä, * « * '* että n ei voi olla kokonaisluku 0 molemmille Xn:lle ja
Wn: lie.
i * » ·.· · Jotta keksintö olisi paremmin ymmärrettävissä, 25 lääkkeet, ligandit, peptidit ja väliyhdisteet käydään läpi : erikseen. Sitten kuvataan konjugaattien synteesiä.
* » t I
On ymmärrettävä, että seuraavassa kuvauksessa ja * * * liitetyissä vaatimuksissa käytetyt lyhennykset ja sanasto ovat niitä, jotka ovat standardeja aminohappo- ja peptidi- * · *·..* 30 kemiassa, ja että kaikki aminohapot, joihin on viitattu, *’',· ovat L-muodossa jollei toisin ole ilmoitettu.
i 6 116038 Tässä keksinnössä käytetyt lyhenteet, jollei toisin mainita, ovat seuraavat:
AcOH: etikkahappo; Ala: L-alaniini; alloc: allyylioksikar-bonyyli; Arg: L-arginiini; Boc: t-butyylioksikarbonyyli; 5 Cit: L-sitrulliini; DBU: diatsobisykloundekeeni; DCC: di- sykloheksyylikarbodi-imidi; DCI: suora kemiallinen ioni- saatio; DCU: disykloheksyyliurea; DIEA: di-isopropyy- lietyyliamiini; DMAP: 4-dimetyyliaminopyridiini; DME: 1,2-dimetoksietaani; DOX: doksorubisiini/ DTT: ditiotrei- 10 toli; EEDQ: N-etoksikarbonyyli-2-etoksi-l,2-dihydrokino- liini; EtOAc: etyyliasetaatti; FAB: nopea atomipommitus;
Fmoc: fluorenyylimetoksikarbonyyli; GABA: gamma-aminovoi- happo; Gly: glysiini; HOBt: N-hydroksibentsotriatsoli; HRMS: korkean erotuskyvyn massaspektroskopia; LDL: al- 15 haisen tiheyden lipoproteiini; Ile: L-isoleusiini; Leu: L-leusiini; Lys: L-lysiini; MC: 6-maleimidokaproyyli; MMA: mitomysiini A, MMC: mitomysiini C; Mtr: 4-metoksitrityyli; NHS: N-hydroksisukkiini-imidi; NMP: N-metyylipyrrolidino- ni; PABC: p-aminobentsyyli-karbamoyyli; PAB-OH: p-amino- 20 bentsyyli alkoholi; Phe: L-fenyylialaniini; PNP: p-nitro- •'•t> fenoli; TFA: trifluorietikkahappo; THF: tetrahydrofuraani;
Trp: L-tryptofaani; Vai: L-valiini; Z: bentsyylioksikarbo-.·. : nyyli.
Peptidisidososa 25 Tämän keksinnön mukaisessa valmistusmenetelmässä *;;; peptidisidososa koostuu karboksyylihappoasyyliyksiköstä ja i t « ’·* ‘ proteiinipeptidisekvenssistä. Sidos voi myös sisältää itsetuhoutuvan väliyhdisteen, joka erottaa lääkkeen ja · proteiinipeptidisekvenssin.
30 Kaavan I konjugaatissa peptidisidosta kuvaa "A—Y—Z—X—W", jossa "A" on karboksyyliasyyliyksikkö, "Y" ja "Z" ovat kumpikin aminohappoja ja muodostavat yh-dessä proteiinipeptidisekvenssin, ja "X" ja "W" ovat yk- sittäisesti itsetuhoutuvia väliyhdisteitä, jotka erottavat 35 proteiinipeptidin ja lääkkeen.
7 116038
Proteiinipeptidisekvenssi kaavan I konjugaatissa: Y koostuu vähintään yhdestä aminohaposta valittuna ryhmästä alaniini, väliini, leusiini, isoleusiini, meti-5 oniini, fenyylialaniini, tryptofaani ja proliini, edullisesti fenyylialaniini tai väliini; ja Z koostuu vähintään yhdestä aminohaposta valittuna ryhmästä lysiini, lysiini, joka on suojattu asetyylillä tai formyylillä, arginiini, arginiini, joka on suojattu 10 tosyylillä tai nitroryhmillä, histidiini, ornitiini, orni-tiini, joka on suojattu asetyylillä tai formyylillä ja sitrulliini, edullisesti lysiini tai sitrulliini.
Aminohappojäännössekvenssi on spesifisesti räätälöity niin, että se on selektiivisesti entsymaattisesti 15 lohkaistu saadusta peptidyylijohdannaislääke-konjugaatista yhden tai useamman kasvaimeen liittyvän proteaasin toimesta .
Peptidisidoksen aminohappojäännösketjun pituus vaihtelee dipeptidistä tetrapeptidiin. On kuitenkin ymmär-20 rettävä, että peptidisidososia, jotka ovat kahdeksan ami-nohappojäännöksen pituisia, voidaan myös sopivasti käyt-tää.
.·. ; Seuraava ryhmä esimerkinomaisia peptidisidosryhmiä ,· on nimetty kuvaamaan edelleen tämän keksinnön mukaisella 25 menetelmällä valmistettavia konjugaatteja;
Phe-Lys, Val-Lys, Phe-Phe-Lys, D-Phe-Phe-Lys, Gly-’* * Phe-Lys, Ala-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-
Cit, Phe-Ala, Gly-Phe-Leu-Gly, Ala-Leu-Ala-Leu, Phe-Ng-to-* syyli-Arg ja Phe-Ng-nitro-Arg.
30 Spesifisiä esimerkkejä peptidisekvenssin edulli- ;·, sesta suoritusmuodosta ovat Phe-Lys, Val-Lys, Val-Cit ja D-Phe-L-Phe-Lys.
Monia spesifisiä peptidisidososamolekyylejä, jotka ; , *’ sopivat käytettäviksi tämän keksinnön mukaisessa menetel- 35 mässä, voidaan suunnitella ja optimoida niiden selektiivi- 8 116038 syyden suhteen entsymaattiselle lohkaisulle tietyn kas-I vaimeen liittyvän proteaasin toimesta. Edullisia pepti- disidososia käytettäviksi tässä keksinnössä ovat ne, jotka on optimoitu proteaaseja, katepsiineja B, C ja D kohtaan.
5 Katepsiinin B on osoitettu vapauttavan yhdistettä DOX kon-jugaatista pH:ssa 5,3 (37 °C) (ti/2 = 3,0 tuntia).
Väliyhdiste Tämän keksinnön mukaisen menetelmän lääkekonjugaa-teissa voidaan käyttää välimuotoista itsetuhoutuvaa väli-10 yhdistettä, joka erottaa ja kovalenttisesti sitoo yhteen lääkeosan ja proteiinipeptidiosan. Itsetuhoutuva väliyhdiste voidaan määrittää bifunktionaaliseksi kemialliseksi osaksi, joka pystyy kovalenttisesti sitomaan yhteen kaksi erillistä kemiallista osaa normaaliksi stabiiliksi kolme-15 osaiseksi molekyyliksi, vapauttaen toisen mainituista erotetuista kemiallisista osista kolmeosaisesta molekyylistä entsymaattisen lohkaisun avulla ja mainitun entsymaattisen lohkaisun jälkeen lohkaisee spontaanisti molekyylijäännöksestä toisen erotetuista kemiallisista osista. Tämän kek-20 sinnön mukaisesti valmistettava itsetuhoutuva väliyhdiste on jommasta kummasta päästään kovalenttisesti sitoutunut prote-iinipeptidiosaan ja on kovalenttisesti sitoutunut toisesta • » .·. ; päästään lääkeosan kemiallisesti reaktiiviseen kohtaan, joka rakenne inhiboi farmakologista aktiivisuutta niin, että ero-25 tetaan ja kovalenttisesti sidotaan yhteen proteiinipepti- *;;; diosa ja lääkeosa kolmeosaiseksi molekyyliksi, joka on sta- • » · '·1 ’ biili ja farmakologisesti inaktiivinen kohde-entsyymin pois saollessa, mutta joka on entsymaattisesti lohkaistavissa • $ ; tällaisella kohde-entsyymillä sidoksen kohdalla, joka kova-
* « I
30 lenttisesti sitoo väliyhdisteosan ja proteiinipeptidiosan ;·, aikaansaaden täten proteiinipeptidiosan vapautumisen kolme- * · t "... osaisesta molekyylistä. Tällainen entsymaattinen lohkaisu aktivoi vuorostaan väliyhdisteosan itsetuhoutuvan luonteen
• » I
,· ja käynnistää sidoksen spontaanisen lohkaisun, joka kova- ‘t’: 35 lenttisesti sitoo väliyhdisteosan lääkeosaan, aikaansaaden 116058 9 täten lääkkeen vapautumisen farmakologisesti aktiivisessa muodossa.
I Kaavan I konjugaatissa X on väliyhdisteosa, joka erottaa ja kovalenttisesti sitoo yhteen lääkeosan ja ami-5 nohapon, jossa väliyhdiste on sitoutunut lääkeosaan T-osan kautta ja jota voidaan kuvata kaavojen (III), (IV), (V) tai (VI) yhdisteillä: Χΐγ,
O
Kaava (III) 15 jossa T on O, N tai S,
-HN—R1—COT
20 Kaava (IV) « · : ·· jossa T on O, N tai S ja R1 on C^-Cs-alkyyli; • · · V-j t ; 25 l — HN^XiOOR2
Kaava (V) i »
* f I
\\V 30 (J. Med. Chem.. 27: 1447 [1984]) *;·' jossa T on 0, N tai S ja R2 on H tai Ci-Cg-alkyyli, 1 rt» t > 10 116038 -NH—/ \-^ \—r-/ ο'/Χνοτ 5
Kaava (VI) tai, W on väliyhdisteosa, jota kuvaa kaava (VII) 10
✓COT
—OCO f 15 (VII)
Jossa T on 0, S tai N.
Tässä käytettynä "C^-Cg-alkyyli" on haarautunut tai haarautumaton hiilivetyketju, jossa on, jollei toisin mai-20 nita, 1-5 hiiliatomia, mukaan lukien, mutta näihin rajoittumatta, metyyli, etyyli, isopropyyli, n-propyyli, • « * “ sek-butyyli, isobutyyli, n-butyyli ja vastaavat.
* » > : , * Edullinen väliyhdisteosa, joka on sopiva käytettä- väksi tässä keksinnössä on PABC, jolla on kaava (lila): 25 ? »
H
Vs! h so l • ’·· Kaava (Ula) j » 11 116038
Toinen edullinen väliyhdisteosa, joka on sopiva käytettäväksi tässä keksinnössä, on GABA, jolla on kaava (IVa):
5 -HN"^Vx'^^COOH
Kaava (IVa) 10 Vielä toinen edullinen väliyhdisteosa, joka on so piva käytettäväksi tässä keksinnössä, on a,a-dimetyyli GABA, jolla on kaava (iVb): 15 —
Kaava (IVb)
Toinen edullinen väliyhdisteosa, joka on sopiva 20 käytettäväksi tässä keksinnössä, on β,β-dimetyyli GABA, jolla on kaava (IVc):
. —HN^X^COOH
25
Karboksyylihappoasyyliyksikkö
Kaavan (I) konjugaatissa karboksyyliasyyliyksikkö : "A" on sitoutunut ligandiin rikkiatomin kautta, joka on .·*·.' 30 johdettu ligandista. Tämän keksinnön edustavia konjugaat- teja ovat yhdisteet, joilla on kaavat (IXa), (IXb), (IXc), ’ (IXd) ja (IXe), joissa "A" on yhdiste suluissa.
12 116038
O
L (CH2)qCO- -Y—Z-Xn-Wn—D
O
A
10 Kaava (iXa) jossa q on 1 - 10 ja L, Y, Zr X, W, D, n ja m ovat kuten aikaisemmin on määritetty; 15 °
L ~CH2—( ^—CO--Y—z—xn—wn—D
O
20 A
A
Kaava (IXb) • 1 # • t '·,'· valmistettu sukkiini-imidyyli-4- (N-maleimidometyyli )syklo- 25 heksaani-l-karboksylaatista (SMCC) (Pierce Catalog s, E-15 :· (1992)), jossa L, Y, Z, X, W, D, n ja m ovat kuten aikai- semmin on määritetty? 1 » 1 13 116038
O CO-Y-Z—Xn-Wn-D
~rf~ö 0
A
10 Kaava (IXc) valmistettu m-maleimidobentsoyyli-N-hydroksisukkiini-imi-diesterlstä (MBS) (Pierce Catalog s. E-16 (1992)), jossa L. Y, Z, X, W, D, n ja m ovat kuten aikaisemmin on määri-15 tetty;
O
[Λ—^ ^—(CH2)3—CO--Υ—Ζ—Χη—Wn D
Ο Α
Kaava (ixd) 25 * » :· valmistettu sukkiini-imidyyli-4-(p-maleimidofenyyli)buty- raatista (SMPB) (Pierce Catalog s. E-18 (1992)), jossa L, Y, Ζ, X, W, D, n ja m ovat kuten aikaisemmin on määritet-: ty;
♦ i I
14 116038
L--CH2—CON—^ ^—CO- -Y—Z—Xn—Wn—D
5 L
A
Kaava (IXe) 10 valmistettu N-sukkiini-imidyyli(4-jodiasetyyli)aminobent-soaatista (SIAB) (Pierce Catalog s. E-17 (1992)), jossa L, Y, Z, X, W, D, n ja m ovat kuten aikaisemmin on määritetty; tai A on yhdiste, joka sitoutuu peptidiin ja on sitou- 15 tunut ligandiin rikkiatomin kautta, joka on johdettu 11-gandista, ja rikkiatomin kautta, joka on johdettu karbok-syylihappoasyyliyksiköstä, muodostaen ditiosidoksen. Tämän keksinnön edustavia konjugaatteja ovat kaavojen (Xa), (Xb) ja (Xc) yhdisteet.
20
lv' L s—(C H2)2—CO—Y— z—Xn—Wn— D
A
Oi 25 • Kaava (Xa) valmistettu N-sukkiini-imidyyli-3-(2-pyridyyliditio)pro-: .·. pionaatista (SPDP) (Pierce Catalog s. E-13 (1992)), jossa ,·**, 30 L, Y, Z, X, w, D, n ja m ovat kuten aikaisemmin on määri tetty; 15 116038 ch3
L--CO- -Y—Z-Xn-Wn—D
A
Kaava (Xb) 5 valmistettu 4-sukkiini-imidyylioksikarbonyyli-a-metyyli-a-(2-pyridyyliditio)-tolueenista (SMPT) (Pierce Catalog s. E-12 (1992)), jossa L, Y, Z, X, W, D, n ja m ovat kuten aikaisemmin on määritetty; ja 10
H
L— -S—(C H2)2CON—(C H2)5CO- -Y—z—xn—wn—D A
• * jV. Kaava (Xc) ,* valmistettu pitkäketjuisesta SPDPrstä (Pierce Catalog 15 s. E-14 (1992)), jossa L, Y, Z, X, W, D, n ja m ovat kuten ·;;· aikaisemmin on määritetty.
‘ ‘ ' Lääke Tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä käyttökel-I poiset lääkekonjugaatit ovat tehokkaita tavallisia tarkoi- 20 tuksia varten, joissa vastaavat lääkkeet ovat tehokkaita, :*. ja niillä on erinomainen tehokkuus johtuen niiden kyvystä, joka on luonteenomainen ligandille, kuljettaa lääke halut-'l‘ tuun soluun, jossa se on erityisen hyödyllinen. Lisäksi, : koska keksinnön konjugaatteja voidaan käyttää tietyn bio- 25 logisen reaktion modifioinnissa, lääkeosan ei tulisi kat- 16 116038 soa rajoittuvan klassisiin kemiallisiin terapeuttisiin aineisiin. Esimerkiksi lääkeosa voi olla proteiini tai poly-peptidi, joilla on haluttua biologista aktiivisuutta. Tällaisia proteiineja voivat olla esimerkiksi proteiini, ku-5 ten kasvain-necrosistekijä (tumor necrosis factor).
Edullisia lääkkeitä käytettäviksi tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä ovat solumyrkkylääkkeet, erityisesti ne, joita käytetään syövän hoidossa. Tällaisia lääkkeitä ovat, yleisesti, DNA:ta vaurioittavat aineet, aineen-10 vaihduntaa vastustavat aineet, luonnon tuotteet ja niiden analogit. Solumyrkkyjen edullisia luokkia ovat esimerkiksi entsyymi-inhibiittorit, kuten dihydrofolaatti-reduktaasi-inhibiittorit ja tymidylaatti-syntaasi-inhibiittorit, DNA-interkalaattorit, DNA-lohkaisijät, topoisomeraasi inhi-15 biittorit, antrasykliiniperheen lääkkeet, vinkalääkkeet, mitomysiinit, bleomysiinit, solumyrkkynukleosidit, pteri-diiniperheen lääkkeet, diyneenit, podofyllotoksiinit, dif-ferentiaation indusoijat ja taksolit. Erityisen hyödyllisiä ovat ryhmät, jotka kuuluvat esimerkiksi luokkiin me-20 totreksaatti, metopteriini, dikloorimetotreksaatti, 5-f luorourasiili, 6-merkaptopuriini, sytosiini arabinosidi, :v. melfalaani, leurosiini, leurosideiini, aktinomysiini, dau- .·, ; norubisiini, doksorubisiini, mitomysiini C, mitomysiini A, ♦ t · karminomysiini, aminopteriini, tallysomysiini, podofyllo- • » , * 25 toksiini ja podofyllotoksiinijohdannaiset, kuten etoposidi ·”*’ tai etoposidifosfaatti, vinblastiini, vinkristiini, vinde- ’·* ’ siini, taksoli, taksoteeri retinoiinihappo, voihappo, N -asetyylispermidiini, kamtotesiini ja niiden analogit.
; Kuten aikaisemmin on mainittu, alaan perehtynyt •*t ·' 30 voi tehdä kemiallisia modifiointeja haluttuun yhdisteeseen tämän yhdisteen reaktioiden tekemiseksi tarkoituksenmukai-... semmiksi keksinnön konjugaattien valmistamiseksi.
Kaavan I konjugaatissa: : V D on lääkeosa, jossa on kemiallisesti reaktiivinen ’· '; 35 funktionaalinen ryhmä, jonka avulla lääke sitoutuu pro- 17 116038 teiinipeptidisidososaan ja mainittu funktionaalinen ryhmä valitaan ryhmästä primaarinen tai sekundaarinen amiini, hydroksyyli, sulfhydryyli, karboksyyli, aldehydi tai ketoni .
5 Edustavia mainittua aminoa sisältäviä lääkkeitä ovat mitomysiini C, mitomysiini A, daunorubisiini, dokso-rubisiini, aminopteriini, bleomysiini, 9-amino-kamptote-siini, N8-asetyylispermidiini, 1-(2-kloorietyyli)-1,2-di-metaanisulfonyylihydratsidi, tallysomysiini, sytarabiini 10 ja niiden johdannaiset.
Edustavia mainittua alkoholiryhmää sisältäviä lääkkeitä ovat etoposidi, kamptotesiini, taksoli, esperamisii-ni, 1, 8-dihydroksi-bisyklo[7.3.1]trideka-4,9-dieeni-2,6- diyyni-13-oni (US-patenttijulkaisu 5 198 560), podofyllo-15 toksiini, anguidiini, vinkristiini, vinblastiini, morfo-liini-doksorubisiini, n-(5,5-diasetoksipentyyli)doksorubi-siini ja niiden johdannaiset.
Edustavia mainittua sulfhydryyliä sisältäviä lääkkeitä ovat esperamisiini ja 6-merkaptopuriini ja niiden 20 johdannaiset.
• Edustavia mainittua karboksyyliä sisältäviä lääk-keitä ovat metotreksaatti, kamptotesiini (laktonin avoin .·, : rengasmuoto) , voihappo, retinoiinihappo ja niiden johdan- • » · ! naiset.
• · I
• · I
* ,* 25 Edustavia mainittua aldehydiä ja ketonia sisältäviä ··*·’ läkkeitä ovat anguidiini ja antrasykliinit, kuten doksoru- « · » ’·' ’ bisiini ja niiden johdannaiset.
Hyvin edullinen ryhmä solumyrkkyaineita käytettä- ;,· - viksi lääkkeinä tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä : _ : 30 ovat lääkkeet, joilla on seuraava kaava: » · * » * » i « » | » | • * » » t
Kaavan (1) mitomyslinlryhmä 18 116038 j:h;0cqnh; 5 Tl lT Ldch 3
HjC'[f (i) 10 jossa R1 on vety tai metyyli; R2 on -NH2, -OCHj, -0(CH2)20H, -NH(CH2)2SS(CH2)2NHAc, 15 -NHCH-CSCH, -NH(CH2)2SS(C6H4)N02, -O (CH2) 2ss (ch2) 2oh, -n=ch-nhoch3 , -NH(C6H4)OH,
-NH (CH2) 2S S (CH2) 2NHCO ( CH2) 2CH (NH2) COOH
20 -HHCHzC7 HH(CH2)2SSCH2 g Γ
H
CH3 —och2— V ΐ 25
Bleomysiiniryhmä, jolla on kaava (2): 19 116038 conh2 N H 2 Λ p. 1 111' .,VV iTuti/’
cH3 HO^CHj^S
10 0 11-M
H0—r°^ K'
0H Vo'^/OH
y^v^0H
in OH °\ 13 C 0 N H 2 (2) 20 jossa R1 on hydroksl, amino, C1-C3-alkyyliamino, * ” di(C^-Cj-alkyyli)amino, C4-C6-polymetyleeniamino, i . ,
*. \ NH
;·’··· + Il 25 -NH(CH2)3S-CH3, -NH(CH2)4NH-C-NH2, CH3 -NH (CH2) 3CHCH2CNH (CH2) 3NH (CH2) ^NH2, tai : Il
NH, O
30 2 -NHCCHjJjNHiCHjJ^N^
Metotreksaattiryhmä, jolla on kaava (3) 20 116038 ΥΪ1 >=\ r
5 /)-CO»HCHCH,CH,COOH
»’ { Γ (3) 10 jossa R1 on amino tai hydroksi; R2 on vety tai metyyli; R3 on vety, fluori, kloori, bromi tai jodi; R4 on hydroksi tai ryhmä, joka muodostaa karboksyy-15 lihapon suolan.
Kaavan (4) melfalaani ho 2 c - qn - ch2—V η—n(ch2ch2cij2 20 NHP \ — / (4) * t • i ·,*· Kaavan (5) 6-merkaptopurlini 25 * »
HS
I h ;T.
kV
* fr s 3o (5)
Kaavan (6) sytosiini arabinosidi 21 1 1 6038 NH, H0H2C—i^0^
10 0H 0H
(6)
Kaavan (7) podofyllotoksiinlt 15 OR1 OGtt) 20 1^1 :* , CH30'/|/AX0ch3 OR2 : 25 jossa R2 on vety, R1 on vety tai i;: : 30 : *; 35 22 116038 jossa R3 on NH2, OH, OCH3, NH( CVCa-alkyyli) tai N(ci-C3-alkyyli)2, R4 on OH tai NH2, 5 R5 on metyyli tai tienyyli, R6 on vety tai metyyli, tai niiden fosfaattisuola.
Tässä käytettynä "Cj-Cj-alkyyli" on haarautunut tai haarautumaton hiiliketju, jossa on 1-3 hiiliatomia; esi-10 merkkejä ovat metyyli, etyyli, n-propyyli ja isopropyyli.
Vinka-alkaloidiryhmän lääkkeet, joilla on kaava (8) [— 20 11 1 = R COOCH, j (8) jossa 25 R1 on H, CH3 tai CHO; f· kun R2 ja R3 ovat erikseen, R3 on H ja toinen R4:sta ja R2;sta on etyyli ja toinen on H tai OH; kun R2 ja R3 ovat yhdessä hiilien kanssa, joihin ne . . ovat sitoutuneet, ne muodostavat oksiraanirenkaan, jolloin \‘.V 30 R4 on etyyli; I* R5 on vety, (C^-C^-alkyyliJ-CO tai kloorisubstituoi- • ’*· tu (Ci-^-alkyyli)-CO.
: Tässä käytettynä "Cj-Cj-alkyyli" on haarautunut tai ;·'· haarautumaton hiiliketju, jossa on 1 - 3 hiiliatomia; esi- 35 merkkejä ovat metyyli, etyyli, n-propyyli ja isopropyyli.
Kaavan (9) difluorinukleosidit 23 116038 F —-
5 F OH
(9) jossa R1 on emäs, jolla on joku kaavoista: ΗΝ''^''Λ—R! HN^Ti^V ch = CHH1 0·^ N H?N N l 15 1«! f! tr rt 20 joissa R2 on vety, metyyli, bromi, fluori, kloori tai jodi; : ’·· R3 on -OH tai -NH2; • ,·’ R4 on vety, bromi, kloori tai jodi.
Taksolit, joilla on kaava (10) 25 \ 0 Rl R4CONH ^ o \ ^ ' ** K cO^' • '· H0 ÖCOPh ; (10) * 35 24 116038 jossa R1 on hydroksi; R2 on vety tai hydroksi; R2 on vety tai fluori; 5 R3 on vety, hydroksi tai asetoksi; R4 on aryyli, substituoitu aryyli, C^-alkyyli, C2.6-alkenyyli, C2_6-alkynyyli tai t-butoksi; R5 on C^-alkyyli, C2.6-alkenyyli, C2_6-alkynyyli tai -Z-R6; 10 Z on suora sidos, C^-alkyyli tai C2_6-alkenyyli; R6 on aryyli, substituoitu aryyli, C3_6-sykloalkyyli, tienyyli tai furyyli.
Tässä käytettynä "alkyyli" on haarautunut tai haa-rautumaton tyydyttynyt hiilivetyketju, jossa on 1 - 6 hii-15 liatomia; esimerkkejä ovat metyyli, etyyli, n-propyyli, isopropyyli, n-butyyli, sek-butyyli, isobutyyli, t-butyy-li, n-pentyyli, sek-pentyyli, isopentyyli ja n-heksyyli. "Alkenyyli" on haarautunut tai haarautumaton hiilivetyketju, jossa on vähintäin yksi hiili-hiili kaksoissidos ja 20 jossa on 2 - 6 hiiliatomia; esimerkkejä ovat etenyyli, propenyyli, isopropenyyli, butenyyli, isobutenyyli, pen-• " tenyyli ja heksenyyli. "Alkynyyli" on haarautunut tai haa- ·* .* rautumaton hiilivetyketju, jossa on vähintäin yksi hiili- *. * hiili kolmoissidos ja 2 - 6 hiiliatomia; esimerkkejä ovat 25 etynyyli, propynyyli, butynyyli ja heksynyyli. "Aryyli" on ·;· aromaattinen hiilivety, jossa on 6 - 10 hiiliatomia; esi- merkkejä ovat fenyyli ja naftyyli. "Substituoitu aryyli" on aryyli, joka on substituoitu vähintäin yhdellä ryhmällä : valittuna ryhmästä Cj^.g-alkanoyylioksi, hydroksi, halogeeni, ,··_ 30 C^g-alkyyli, trifluorimetyyli, C^.g-alkoksi, aryyli, C2.6- alkenyyli, ^.g-alkanoyyli, nitro, amino ja amido.
Anguidinit, joilla on kaava (11) 25 116038 OAc (11) 10 jossa R1 on OH tai O, R2 on H tai O.
Anguidiini voidaan kohdistaa asemiin C-3, C-4, C-8 15 tai C-15, esterinä tai hydratsonina.
Antrasykliiniset antibiootit, joilla on kaava (12) 20 0 °H Jj t:! r5/T r1 • * R< 25 :· (12) jossa R1 on -CH3, -CH2OH, -CH2OCO(CH2)3CH3 tai \‘.V 30 -CH2OCOCH(OC2H5)2
R2 on -0CH3, -OH tai -H
: *·· R3 on -NH2, -NHCOCF3, 4-morfolinyyli, 3-syaani-4- morfolinyyli, 1-piperidinyyli, 4-metoksi-l-piperidinyyli, ;v. bentsyyliamiini, dibentsyyliamiini, syaanimetyyliamiini, ’ 35 l-syaani-2-metoksietyyliamiini tai NH-(CH2)4-CH(OAc(2; 26 116038 R4 on -OH, -OTHP tai -H; ja R5 on -OH tai -H, edellyttäen, että R5 ei ole -OH, kun R4 on -OH tai -OTHP.
Alaan perehtynyt ymmärtää, että rakennekaava (12) 5 käsittää yhdisteet, jotka ovat lääkkeitä tai lääkkeiden johdannaisia, joilla yhdisteillä on alalla erilaisia yleisiä tai triviaalinimiä. Seuraavassa taulukossa I on esitetty monia antrasykliinilääkkeitä ja niiden yleisiä ja triviaalinimiä, jotka ovat erityisen edullisia käytettä-10 viksi tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä.
Taulukossa I esitetyistä yhdisteistä edullisin lääke on doksorubisiini. Doksorubisiini (johon viitataan myös "DOX":ina) on kaavan (I) antrasykliini, jossa Ri on -CH2OH, R3 on -OCH3, R4 on -NH2, Rs on -OH ja R6 on -H.
15 • » · • , i 27 116038 ^ a a a a a g a a a a a a Λ tr, kkxxxmmKk a a a (^OOOOO^^EhO o o o o
Cv o' c m . o o>^ w
K
IM N N N N N N nU I I I f) •^affiKKWWKWol J 1 1 %.
“ zzSzzzaSo - S I | “ g
W
»
<D
kj f—I
M >—I
Oro Μ K> Μ Μ Μ Μ K> ΚΪ K H
,ο a a a a - w a a a a a a g -a aouooKooou u a 0-3 ”3 ooo oooo o o o s
pj *H
g §
_ (¾ U
cc H cm 2 : *, ^ / n= aM 2 • .. o a f) ,2 V" u~ " i’v / \ a 5* ? ,·, ; ( y"lo—WO g * * )-( '?} O O _ ö .·, : 3- /^A _ o/ ao aaao a a a ^ ·. ·· Λ_o , OO OOOO O O 0.2 * ^\\ // 1-3 / \ nfMfMKinojojrvj(M cm oj _γ\ vv \ aaaaaaaaa a a a ° ,,,: )—< '^A_« uuuuouuou u o u £ d3 εξ: o = - o
',· * \ / o tr +J
/ \ ^ nj : > V // 0 : ; \-/ a d .... I o ... o * d =
*, 1 -K -r-l -H
, -Η -H X -H d
,. d -H -H d 0 r-l -H
* I -H d d Ή -H -H -H Q 0 -r-1 • · -H -r-l -rH -H d d ΰ I 4-1 tn ' ID -H -H ID -H -r( -rl O d >i
, ’ -Γ-l W ω >1 -H -H -H d O S
r ,Q -rl -H G (I) (II t/l -r-l £; kj O
• · · a) d Λ Λ ο -η -.π -h -r-i I 5 c . +j μρρ££1Λ.ργμ >-4 -r4 0 d >.* uiOds-i-rHPddriO d p
; ’ ; -HdOoBMddi4-i nj n, Q
XI PX4-IM(0-HOC4' U (¾ 75 =
, Λ rO 0 ¢) (dT3 ft (II ϊ 0 O >1 S
· . NQQQOHWWE-irtJ S W P * 28 116038
Edullisimpia lääkkeitä ovat taksoli, mitomysiini C ja kaavan (12) antrasykliini antibioottiset aineet, joita edellä on kuvattu.
Ligandi 5 "Ligandi" käsittää piirissään kaikki molekyylit, jotka spesifisesti sitovat tai ovat reaktiivisesti liittyneet tai muodostavat komplekseja reseptorin tai muun vastaanottavan osan kanssa, joka liittyy kyseiseen kohde-solupopulaatioon. Tämä solureaktiivinen molekyyli, johon 10 lääkereagenssi on sitoutunut sidososan kautta konjugaatis-sa, voi olla mikä tahansa molekyyli, joka sitoutuu kompleksien kanssa tai reagoi solupopulaation kanssa, jota halutaan terapeuttisesti tai muulla tavalla biologisesti modifioida ja jossa on vapaa reaktiivinen sulfhydryyli 15 (-SH) ryhmä, tai joka voidaan modifioida sisältämään täl laisen sulfhydryyliryhmän. Solureaktiivinen molekyyli toimii terapeuttisesti vaikuttavan lääkeosan kuljettajana kyseiseen kohdesolupopulaatioon, jonka kanssa ligandi reagoi. Tällaisia molekyylejä ovat, näihin rajoittumatta, 20 suuren molekyylipainon proteiinit, kuten esimerkiksi vas-.ta-aineet, pienen molekyylipainon proteiinit, polypeptidi-tai peptidiligandit ja ei-peptidyyliligandit.
Ei-immunoreaktiivisia proteiini-, polypeptidi- tai ’ peptidiligandeja, joita voidaan käyttää muodostamaan tässä ♦ » 1 · 25 keksinnössä käyttökelpoisia konjugaatteja, voivat olla, • > » ··'> näihin rajoittumatta, transferriini, epidermaaliset kasvu- V1 tekijät ("EGF"), bombesiini, gastriini, gastriinia vapaut tava peptidi, verihiutalekasvutekijä, IL-2, IL-6, kasvain-;f| J kasvutekijät ("TGF"), kuten TGF-α ja TGF-β, rokote-kasvu- ; 30 tekijä ("VGF"), insuliini ja insuliinin tapaiset kasvu- > » 1 ./ tekijät I ja II. Ei-peptidyyliligandeja voivat olla esi- < t # merkiksi hiilihydraatit, lektiinit ja apoproteiini alhaisen tiheyden lipoproteiinista.
’ ; Immunoreaktiiviset ligandit sisältävät antigeenin 35 tunnistavan immunoglobuliinin (johon viitataan myös "vas- 1 1 6038 29 ta-aineena") tai sen antigeeniä tunnistavan fragmentin. Erityisen edullisia immunoglobuliineja ovat ne immunoglo-buliinit, jotka voivat tunnistaa kasvaimeen liittyvän antigeenin. Tässä käytettynä "immunoglobuliini" voi viitata 5 mihin tahansa tunnettuun immunoglobuliinialaluokkien tunnistettuun luokkaan, kuten IgG, IgA, IgM, IgD tai IgE. Edullisia ovat ne immunoglobuliinit, jotka kuuluvat immu-noglobuliinien IgG-luokkaan. Immunoglobuliini voidaan johtaa mistä tahansa lajista. Edullisesti immunoglobuliini on 10 kuitenkin ihmisen, jyrsijän tai kanin immunoglobuliini. Lisäksi immunoglobuliini voi olla polyklonaalinen tai mo-noklonaalinen, edullisesti monoklonaalinen.
Kuten on esitetty, alaan perehtynyt ymmärtää, että keksinnön mukainen menetelmä käsittää myös antigeenin tun-15 nistavan immunoglobuliinifragmenttien käytön. Tällaisia immunoglobuliinifragmentteja voivat olla esimerkiksi Fab'-, F(ab')2~, Fv- tai Fab-fragmentit tai muut antigeenin tunnistavat immunoglobuliinifragmentit. Tällaisia immunoglobuliinifragmentteja voidaan valmistaa esimerkiksi proteo-20 lyyttisellä entsyymidigestiolla, esimerkiksi pepsiini- tai ;·. papaiinidigestiolla, pelkistävällä alkyloinnilla tai re- kombinanttimenetelmillä. Aineet ja menetelmät tällaisten • | \(\ immunoglobuliinifragmenttien valmistamiseksi ovat hyvin • t » ’ ; tunnettuja alaan perehtyneille. Katso yleisesti Parham, » ♦ i ’· ‘ 25 J. Immunology, 131, 2895 (1983); Lamoyi et ai., * · · J. Immunological Methods, 56, 235 (1983); Parham, id., 53, V ' 133 (1982); ja Matthew et ai., id., 5_0, 239 (1982).
Immunoglobuliini voi olla "kimeerinen vasta-aine", : kuten termi tunnetaan alalla. Immunoglobuliini voi myös 30 olla "bifunktionaalinen" tai "hybridi" vasta-aine, siis vasta-aine, jolla voi olla yksi käsivarsi, jolla on spesi-fisyyttä yhtä antigeenistä kohtaa kohtaan, kuten kasvai-meen liittyvää antigeeniä kohtaan, kun taas toinen käsi- ' i Ϊ ’ ; varsi tunnistaa toisen kohteen, esimerkiksi hapteenin, jo- , Ϊ 35 ka on sitoutunut tai johon on sitoutunut aine, joka on 30 116038 tappava antigeeniä sisältävälle kasvainsolulle. Vaihtoehtoisesti bifunktionaalinen vasta-aine voi olla sellainen, jossa jokaisella käsivarrella on spesifisyyttä kasvaimeen liittyvän antigeenin eri epitooppeja kohtaan solussa, jota 5 halutaan terapeuttisesti tai biologisesti modifioida. Joka tapauksessa hybridi vasta-aineilla on kaksoisspesif isyyttä, edullisesti yhden tai useamman sidoskohdan ollessa spesifinen valittua hapteenia kohtaan tai yhden tai useamman sidoskohdan ollessa spesifinen kohdeantigeenille, esimer-10 kiksi antigeenille, joka liittyy kasvaimeen, infektio-organismiin tai muuhun tautitilaan.
Biologisia bifunktionaalisia vasta-aineita on kuvattu esimerkiksi EP-hakemusjulkaisussa 105 360, johon viitataan alaan perehtyneitä varten. Tällaisia hybridi-15 tai bifunktionaalisia vasta-aineita voidaan johtaa, kuten on esitetty, joko biologisesti solufuusiomenetelmillä tai kemiallisesti, erityisesti ristisitoutuvien aineiden tai disulfidi siltaa muodostavien aineiden kanssa ja ne voivat koostua kokonaisista vasta-aineista ja/tai niiden fragmen-20 teista. Menetelmiä tällaisten hybridivasta-aineiden saamiseksi on kuvattu esimerkiksi PCT-hakemuksessa W083/03 679, julkaistu 27. lokakuuta 1983 ja EP-hakemusjulkaisussa 217 577, julkaistu 8. huhtikuuta 1987, jotka molemmat on ,'·· liitetty tähän viitteenä. Erityisen edullisia bifunktio- 25 naalisia vasta-aineita ovat ne, jotka on biologisesti val- ;· mistettu "polydomasta" tai "quadromasta" tai jotka on syn- teettisesti valmistettu ristisitoutuvista aineista, kuten bis-(maleimido)-metyylieetteristä ("BMME") tai muiden ris-: tisitoutuvien aineiden kanssa, jotka ovat tunnettuja alaan 30 perehtyneille.
Lisäksi immunoglobuliini voi olla yksiketj uinen • *· vasta-aine ("SCA"). Nämä voivat koostua yksiketjuisista : : Fv-fragmenteista ("scFv"), joissa muuttuja kevyt ("VL") ja ; muuttuja raskas ("VH") voi olla liittynyt peptidisiltaan 35 tai disulfidisidoksiin. Immunoglobuliini voi myös koostua 31 116038 yhdestä Vn-ketjuosasta (dAbs), jolla on antigeeniä sitovaa aktiivisuutta. Katso esim. G. Winter ja C. Milstein, Nature, 349, 295 (1991); R. Glockshuber et ai., Biochemistry 29, 1362 (1990); ja E.S. Ward et ai. Nature 341, 544 5 (1989).
Erityisen edullisia käytettäviksi tässä keksinnössä ovat kimeeriset monoklonaaliset vasta-aineet, edullisesti ne kimeeriset vasta-aineet, joilla on spesifisyyttä kasvaimeen liittyvää antigeeniä kohtaan. Tässä käytettynä 10 termi "kimeerinen vasta-aine" viittaa monoklonaaliseen vasta-aineeseen, jolla on vaihteleva osa, ts. sidosalue yhdestä lähteestä tai lajista ja vähintään yhdestä vakio-osasta, joka on johdettu eri lajista tai lähteestä, tavallisesti valmistettuna rekombinantti-DNA-menetelmillä. Ki-15 meeriset vasta-aineet, jotka sisältävät hiiri-muuttuvan alueen ja ihmisvakioalueen, ovat erityisen edullisia tietyissä sovellutuksissa, erityisesti ihmisen hoidossa, koska tällaiset vasta-aineet ovat helposti valmistettavissa ja ne voivat olla vähemmän immunogeenisiä kuin puhtaasti 20 hiiri-monoklonaaliset vasta-aineet. Tällaiset hiiri/ihmis-kimeeriset vasta-aineet ovat ekspressoitujen immunoglobu- • ·, liinigeenien tuote, jotka vasta-aineet sisältävät DNA- segmenttejä, jotka koodaavat hiiren immunoglobuliini vaih- ‘ * * ) televia alueita ja DNA-segmenttejä, jotka koodaavat ihmi- ’ · 25 sen immunoglobuliinivakioalueita. Muita kimeeristen vasta- ··> aineiden muotoja, jotka kuuluvat keksinnön mukaisen mene- ν' * telmän piiriin, ovat ne, joissa luokka tai alaluokka on modifioitu tai muutettu alkuperäisen vasta-aineen vastaani : vasta. Tällaisiin "kimeerisiin" vasta-aineisiin on myös 30 viitattu "luokkaa vaihtaneina vasta-aineina". Menetelmät kimeeristen vasta-aineiden valmistamiseksi käsittävät tavalliset rekombinantti-DNA- ja geenitransfektiomenetelmät, jotka ovat nykyään hyvin tunnettuja alalla. Katso esim.
: Morrison, S.L. et ai., Proc. Nat' 1 Acad. Sei., 81, 6851 ·;*·· 35 (1984).
32 116038
Termi "kimeerinen vasta-aine" käsittää "ihmistetyn vasta-aineen", siis sellaiset vasta-aineet, joissa runko tai "komplementaarisuuden määrittävät alueet" ("CDR") on modifioitu sisältämään erilaisen spesifisyyden immunoglo-5 buliinia CDR verrattuna lähtöimmunoglobuliiniin. Edullisessa suoritusmuodossa hiiren CDR siirretään ihmisvasta-aineen runko-alueeseen "ihmisvasta-aineen" valmistamiseksi. Katso esim. L. Riechmann et ai., Nature, 332, 323 (1988); M.S. Neuberger et ai., Nature 314, 268 (1985).
10 Erityisen edullisia CDR-alueita ovat ne, joiden sekvenssit tunnistavat edellä esitetyt antigeenit kimeerisille ja bifunktionaalisille vasta-aineille. Lukijaa kehotetaan tutustumaan EP-hakemusjulkaisuun 239 400 (julkaistu 30. syyskuuta 1987), joka on liitetty tähän viitteenä, koska 15 siinä käsitellään CDR-modifioituja vasta-aineita.
Alaan perehtynyt ymmärtää, että voidaan valmistaa bifunktionaalinen kimeerinen vasta-aine, jolla olisi ki-meerisen tai ihmistetyn vasta-aineen alhaisemman immuno-geenisyyden edut, kuten myös edellä kuvattujen bifunktio-20 naalisten vasta-aineiden joustavuus, erityisesti terapeut-tisessa hoidossa. Tällaisia bifunktionaalisia kimeerisiä vasta-aineita voidaan valmistaa esimerkiksi kemiallisella ; synteesillä käyttäen edellä kuvattuja risti-sitoutuvia aineita ja/tai rekombinanttimenetelmiä. Joka tapauksessa / 25 tämän keksinnön piiriä ei tulisi rajoittaa millään tietyl- ·*··' lä vasta-aineen valmistusmenetelmällä, riippumatta siitä t i < * onko tämä bifunktionaalinen, kimeerinen, bifunktionaali- nen-kimeerinen, ihmistetty tai antigeeni-tunnistava frag-
* I
·,· ; mentti tai sen johdannainen.
30 Lisäksi tämän keksinnön kohteena olevassa menetel- mässä immunoglobuliinit (kuten edellä on määritetty) tai immunoglobuliinifragmentit, joihin on liitetty aktiivisia proteiineja, ovat esimerkiksi entsyymityyppiä, jota Neu-: berger et ai. ovat kuvanneet PCT-hakemuksessa WO86/01 533, 33 116038 julkaistu 13. maaliskuuta 1986. Tällaisten tuotteiden kuvaus on liitetty tähän viitteenä.
Tässä esitettynä "bifunktionaalinen", "yhdistetty", "kimeerinen" (mukaan lukien ihmistetty) ja "bifunktionaa-5 linen-kimeerinen" (mukaan lukien ihmistetty) vasta-ainera-kenne käsittää myös yksittäisessä yhteydessään rakenteen, joka sisältää antigeenin tunnistavia fragmentteja. Alaan perehtynyt ymmärtää, että tällaiset fragmentit tulisi valmistaa tavallisella entsymaattisella lohkaisulla koskemat-10 tornista bifunktionaalisista, kimeerisistä, ihmistetyistä tai kimeeris-bifunktionaalisista vasta-aineista. Kuitenkin, mikäli tällaiset vasta-aineet eivät ole alttiita tällaiselle lohkaisulle, johtuen rakenteen luonteesta, kyseiset rakenteet voidaan valmistaa immunoglobuliinifragment-15 tien avulla, joita käytetään lähtöaineina; tai, mikäli rekombinanttimenetelmiä käytetään, DNA-sekvenssit sinänsä voidaan räätälöidä koodaamaan haluttu "fragmentti", joka, ekspressoituna, voidaan yhdistää in vivo tai in vitro kemiallisesti tai biologisesti lopullisen koskemattoman ha-20 lutun immunoglobuliini "fragmentin" valmistamiseksi. Täten tässä yhteydessä käytetään termiä "fragmentti".
Lisäksi, kuten edellä on esitetty, tässä keksin- *. nössä käytetty immunoglobuliini (vasta-aine) tai sen frag- * * * * * mentti voi olla luonteeltaan polyklonaalinen tai monoklo- ’· ’·’ 25 naalinen. Kuitenkin monoklonaaliset vasta-aineet ovat ··.: edullisia immunoglobuliineja. Tällaisten polyklonaalisten » · t ' tai monoklonaalisten vasta-aineiden valmistus on nykyään hyvin tunnettua alaan perehtyneille, jotka ovat tietenkin : täysin kykeneviä valmistamaan hyödyllisiä immunoglobulii- 30 neja, joita voidaan käyttää keksinnössä. Katso esim.
• · * G. Kohler ja C. Milstein, Nature 256, 495 (1975) . Lisäksi 'iti hybridomia ja/tai monoklonaalisia vasta-aineita, jotka on ’’·* valmistettu tällaisista hybridoomista ja jotka ovat hyödyl- ; ·’: lisiä tämän keksinnön menetelmässä, on kaupallisesti saata- ·;·*[ 35 villa lähteistä kuten American Type Culture Collection 34 116038 ("ATCC") 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, tai kaupallisesti saatavilla esimerkiksi Boehringer-Mannheim Biochemicalsilta, P.O. Box 50816, Indianapolis, Indiana 46250.
5 Erityisen edullisia monoklonaalisia vasta-aineita käytettäviksi tässä keksinnössä ovat ne, jotka tunnistavat kasvaimeen liittyviä antigeenejä. Tällaisia monoklonaalisia vasta-aineita ei tulisi kuitenkaan näin rajoittaa ja voivat olla esimerkiksi seuraavia: 10
Tunnistettu Monoklonaaliset antigeenikohta vasta-aineet Viite
Keuhkokasvaimet KS1/4 N. M. Varki, et ai., Cancer Rea.
44:681, 1984 534,F8;604A9 F. Cuttitta, et ai., in: G. L.
15 Wright (ed) Monoclonal
Antibodiea and Cancer, Marcel Dekker, Inc., NY., p. 161, 1984.
Suomuinen keuhko Gl, LuCa2, Kyoizumi et ai., Cancer Res..
LuCa3, LuCa4 45:3274, 1985.
Piensolu- TFS-2 Okabe et ai., Cancer Res.
2q keuhkosyöpä 45:1930, 1985.
Paksunsuolen 11.285.14 G. Rowland, et ai., Cancer syöpä 14.95.55 Immunol.Immunother., 19:1, 1985 ;·,· NS-3a-22,NS-10 Z. Steplewski, et ai., Cancer I NS-19-9,NS-33a Res., 41:2723, 1981.
.·. j NS-52a, 17-1A
.’ Sikiökasvain MoAb 35 tai Acolla, R.S. et ai., Proc.
: 25 ZCE025 Natl.Acad. Sei.. fUSAl.
’ .* 77:563, 1980.
Melanoma 9.2.27 T. F. Bumol ja R. A. Reisfeld, ' Proc.Natl. Acad. Sei.. (USA), 79:1245, 1982.
p97 96.5 K. E. Hellström, et ai.» ; ;'* MonoclonalAntibodies ja *·· ’ 30 Cancer, loc. cit. p. 31.
• t
Antigeeni T65 T101 Boehringer-Mannheim, P.O. Box 50816, ’* , Indianapolis, IN 46250
Ferritiini Antiferriini Boehringer-Mannheim, *··’ P.O. Box 50816,
Indianapolis, IN 46250 ’ ·' 35 R24 W. G. Dippold, et ai., Proc.
Natl.Acad. Sei. (USA) .
77: 6114, 1980 35 116038
Tunnistettu Monoklonaaliset antigeeni-kohta vasta-aineet MA*· te
Neuroblastoma P1 153/3 R.H. Kennet ja F. Gxlbert, 5 Science. 203:1120, 1979.
MIN 1 J. T. Kemshead in Monoclonal
Antibodies ja Cancer, loc. cit.
p. 49.
UJ13A Goldman et ai., Pediatrics, 105:252, 1984.
10 Hermon tukisolu- BF7,OE2,CG12 N. de Tribolet, et ai., in kasvain Ηοηο_ο_1οη^1 Antifrodie| ja
Cancer# loc. cit. p.81
Gangliosidi L6 I. Hellström et el.
Proc. Natl Acad. Sei. (USA) 83: 7059 (1986); US-patenttiJulkaisut nrot 4 906 562, julkaistu 6. maaliskuuta 1990, ja 4 935 495, julkaistu 19. kesäkuuta 1990 15
Kimeerinen L6 US-pat.julkaisu sarjanro 07/923 244, rekisteröity 27. lokakuuta 1986, vastaa PCT-patenttiJulkaisua W0 88/03 145, julkaistu 5. toukokuuta 1988.
Lewis Y BR64 US-pat.julkaisut sarjanrot 07/289 635, rekisteröity 22. joulukuuta 1988, Ja 07/443 696, rekisteröity 29. marraskuuta 1989; vastaa EP-patenttlhakemus- 20 julkaisua 375 562, julkaistu 27. kesä kuuta 1990.
I * ·' “ Fukosyloitu BR96, US-pat.julkaisut sarjanrot 07/374 947,
Lewis Y kimeerinen rekisteröity 30. kesäkuuta 1989, ja l t· 07/544 246, rekisteröity 26. kesäkuuta , ", BRyb 1990; vastaa PCT-patenttlJulkalsua ; WO 91/00 295, julkaistu 10. tammikuuta • · 1991.
25 *· · Rintasyöpä B6.2, B72.3 D. Colcher, et ai., in <* Monoclonal Antibodies and *·* Cancer, loc. cit.
P· 121·
Osteogeeninen 791T/48, M. J. Embleton, ibid, p. 181
Sarcoma 791T/36 ; : _ Leukemia CALL 2 c. T. Teng, et ai·, Lancet.
30 1:01, 1982 antl-idiotype R. A. Miller, et ai·, N. Ena. J. Med.. 306: 517, 1982
Munasarjasyöpä DC 125 R. c. Bast, et fil·, J. Clin.
: ; Invest.. 68: 1331, 1981.
Eturauhassyöpä D83.21, P6.2, J. J. Starling, et al., in ; ‘ > Turp-27 Monoclonal Antibodies ja 35 cancer, loc. cit.. p.263
Munuaissyöpä A6H, D5D P. H. Lange, et ai., Surgery, 98:143, 1985.
36 116038
Edullisimmassa suoritusmuodossa ligandia sisältävä konjugaatti on johdettu kimeerisestä vasta-aineesta BR96, "ChiBR96", joka on esitetty US-patenttijulkaisussa sarjanumero 07/544 246, rekisteröity 26. kesäkuuta 1990 ja joka 5 vastaa PCT-hakemusta WO 91/00295, julkaistu 10. tammikuuta 1991. ChiBR96 on hiiri/ihmis-kimeerinen vasta-aine ja on reaktiivinen, kuten on esitetty, fukosyloidun Lewis Y antigeenin kanssa, jota ekspressoi ihmisen karsinomasolut, kuten ne, joita muodostuu rinta-, keuhko-, paksusuoli- ja 10 munasarjasyövässä. Hybridoomaa ekspressoiva kimeerinen BR96 on merkitty ChiBR96:ksi ja on talletettu 23. toukokuuta 1990 Budapest-sopimuksen ehtojen mukaisesti American Type Culture Collectionin ("ATCC”), 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, toimesta. Näytteitä tästä hyb-15 ridoomasta on saatavissa tunnusnumerolla ATCC HB 10460. ChiBR96 on osittain johdettu sen lähtöaineesta BR91. Hybridoomaa ekspressoiva BR96 taltioitiin 21. helmikuuta 1989 ATCC:n toimesta Budapest-sopimuksen ehtojen mukaisesti ja on saatavissa tunnusluvulla HB 10036. Haluttua hybridoomaa 20 viljeltiin ja saadut vasta-aineet eristettiin soluviljelmän ylimmästä kerroksesta käyttäen standardimenetelmiä, • ” jotka ovat hyvin tunnettuja alalla. Katso esim. "Mono- : clonal Hybridoma Antipodies: Techniques and Applications",
Hurell (julk.) (CRC Press, 1982).
25 Täten tässä käytettynä "immunoglobuliini" tai "vas- ;· ta-aine" käsittävät kaikki edellä kuvatut immunoglobulii- ni/vasta-ainemuodot tai rakenteet.
Konjugaattien valmistus ; ,*t Tämän keksinnön konjugaatit voidaan valmistaa liit- «tl 30 tämällä lääkeosa vasta-aineeseen sidososan kautta, joka • » ‘ voidaan valmistaa peptidisekvenssistä, jonka lysosomaali- ; set proteaasit katepsiini B, C ja D voivat lohkaista, ja / : itsetuhoutuvasta väliyhdisteestä.
Menetelmässä tämän keksinnön yhdisteiden valmista-’ \ 35 miseksi vasta-aineliuosta fosfaattipuskurissa tai PBS:ssä käsiteltiin liuoksella, jossa oli ditiotreitolia (DTT) 37 116038 25 - 45 °C:ssa n. 1-10 tuntia typen paineessa. Sitten liuosta diasuodatettiin fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS) vastaan 0,5 - 12 tuntia riippuen diasuodatussolun koosta ja liuoksen tilavuudesta, typen paineessa, kunnes 5 ulosvirtaus oli vapaa SH-ryhmistä, käsiteltiin sitten tarkoituksenmukaisella määrällä peptidi-PABC-lääkettä [perustuen SH-ryhmien lukumäärään Mab:ssa (määritetty Ellman titrauksella)] tislatussa vedessä 0+10 °C:ssa 15 minuuttia - 8 tuntia. Sitten liuosta dialysoitiin PBS:ää vastaan 10 n. 24 tuntia huoneenlämpötilassa, suodatettiin sitten ja suodosta ravisteltiin 15 minuuttia - 8 tuntia huoneenlämpötilassa biopallojen kanssa, mitä seurasi toinen suodattaminen .
Kaavioista 1-11 nähdään malliyhdisteiden valmis-15 tus, joita testattiin katepsiinilla B sidososan, mukaan lukien peptidisekvenssi, itsetuhoutuva väliyhdiste ja liitos vasta-aineeseen, optimi-ominaisuuksien määrittämiseksi.
Kaaviosta 12 nähdään sidososayhdisteen MC-Phe-Lys-20 PABC-Dox (50) valmistus, joka on konjugoitu vasta-ainekan-toaineeseen. Fmoc-Phe:n NHS-aktiivinen esteri (43) kytket- * : '* tiin Ne-Mtr-Lys:iin (42) orgaanisessa/vesipitoisessa liuo- • · < j tinseoksessa antamaan dipeptidi Fmoc-Phe-NE-Mtr-Lys (44).
* > Tämä kytkettiin vuorostaan p-aminobentsyylialkoholiin 25 käyttäen EEDQrta antamaan alkoholi 45. Fmoc ryhmä poistet- ·*· tiin dietyyliamiinilla ja vapaa N-päätteinen Phe kytket- , tiin MC-NHS:ään antamaan maleimidopeptidialkoholi 47. Bis- p-nitrofenyylikarbonaatin lisääminen antoi aktivoidun kar-. . bonaatin 48 ja p-nitrofenyyliryhmä korvattiin D0X:lla 30 NMP:ssä huoneenlämpötilassa. Saadusta substraatista MC-
Phe-Ne-Mtr-Lys-PABC-DOX (49) poistettiin suojaus kvantita-• ' tiivisena saantona käsittelemällä dikloorietikkahappo/ : ; anisolilla CH2Cl2:ssa yksi tunti antamaan yhdiste 50.
Kaaviosta 13 nähdään MMC:tä sisältävän sidososayh-35 disteen MC-Phe-Lys-PABC-MMC (52) valmistus aktiivihiilestä 38 116038 48. MMC:n atsiridiinityppi ei ole tarpeeksi nukleofiilinen korvatakseen suoraan p-nitrofenoliyhdisteen 48, mutta kymmenkertaisen HOBt-ylimäärän läsnä ollessa osa vastaavista HOBt-aktiivisista esterimuodoista ovat riittävän aktiivi-5 siä reagoimaan MMC:n kanssa. Kloorietikkahappoa käytetään dikloorietikkahapon asemesta yhdisteen 51 suojauksen poistamiseksi johtuen MMC:n happoherkkyydestä.
Kaaviosta 14 nähdään taksolin, joka sisältää sidos-yhdistettä MC-Phe-Lys-PABC-7-taksolia (55), valmistus.
10 Maleimidopeptidialkoholia 47 käsiteltiin 2'-Mtr-taksoli-7-kloroformiaatilla (valmistettu yhdisteestä 53) antamaan MC-Phe-Ne-Mtr~Lys-PABC-7-taksoli (54). Tästä poistettiin suojaus kloorietikkahapolla antamaan yhdiste 55.
Kaaviosta 15 nähdään sitrulliinia sisältävän sidos-15 osayhdisteen MC-Val-Cit-PABC-Dox (62) valmistus, joka toteutetaan pääosin, kuten edellä on kuvattu yhdisteelle 49, eikä vaadi sivuketjun suojauksen poistoa.
Kaavio 16 kuvaa sidososayhdisteen, joka sisältää lisättyä aminokaproyyliväliyhdistettä, joka on suunniteltu 20 siirtämään entsymaattinen lohkaisukohta pois vasta-aine-rungosta, valmistus. MC-NH-C-Phe-Lys-PABC-DOX (72) valmis- '* tettiin käyttäen menetelmiä, jotka ovat pääosin identtisiä valmistuksissa 50 ja 55 käytettyjen kanssa.
, ; Kaaviossa 17 nähdään MMC:tä sisältävän sidososayh- i 25 disteen MC-Phe-Lys-GABA-MMC (78), joka sisältää GABA vä-liyhdistettä PABCrn asemesta, valmistus. Tämä valmistettiin pääosin kuten edeltävälle yhdisteelle 52 on kuvattu.
Kaaviosta 18 nähdään potentiaalisen proteaasi-ak- : tiivisen kortisoniesilääkkeen Z-Phe-Lys-kortisoni (81) « * a i .···, 30 valmistus. Tämä valmistettiin pääosin kuten on kuvattu *!’ yhdisteelle MC-Phe-Lys-PABC-DOX (50).
i Kaaviosta 19 nähdään sidososayhdisteen valmistus, joka sisältää taksoli-21-etyylikarbonaattia, joka on taksolin aktiivinen esilääke.
39 116038
Kaavio 1 o pyridiini o I r So'^ j . O / ^0Ä0XT1 }
ϊ"1 NaHCOa, >^A»V°H
DME/vesi H ° 2 TFA/CH2CI2
yt O
T HN^O—^ • *|t Q^| ;. , CFj COOHHj N'^jj"' :***: o ;·: 3 «»* » 40 116038
Kaavio 2 O p "sx°^ cr-Vr ^ crpfe ♦ /1 4 . -
NaHCO,, DME, OH ' ’ vesi
ΡΛ oh jfS
O fu O O 4U o
Kj H g = H EEDQ( THF tp HK
6 S 5 S
NO, jjy pyridiini
O
· o / h o ^NUu
.·;·.: KJ H fi 5H
1 hny°·^ • : v DOX-HCI,
\Et3N,NMP J
^ O HO Ά
. . f~\ o^-«N "yV
:·:: o h\ ^ fw : u h * sH x
s «L°^. °M
41
Kaavio 3 116038 o HO j)
{Λ O^X/ W
t$c H O ί H 1^1 \ r°
i 8 OH
1- Pd(PPh)4,
AcOH, BU}SnH,
THF
2. HCI/EtOEt £) 0¾ 00 11«» fr* rir° •‘.'•f ίΓΧ^°^Ν ^°''Xn^oh
U H S : H M
*;;; n^hq oh 9 * · * * 42 116038
Kaavio 4 o A ^ ^ ?, V nhs, dcc ?. Y o r (T° sV" -st- (T° «Xi5 + 1 O o j ιο ί NaHC03t DME, oh 11 vesi
?H O
I ^_0To^^tV^oh 12 V- 11
ACT
pyridiini ,... * xcr ä. :: ·'.' '-'
•'.‘•f H o L H
— "“γ0—V
' · o NDOX-HCI,
Et3N, NMP A ..
4 o HO | (J
: 0K\) °YXf : |Yh o fj χ χτ*° ;· ’ kY H O H S> ; '·· I H0'Y.o
14 S C
°H
: Λ o 43 116038
Kaavio 5 o HO T|| <Α»λ/ °γΥ oV».^ tfVf” 0Γ°Α?ίΝ^« °v Ί H° V-o
14 °H
1. Pd(PPh)4,
AcOH,
Bu3SnH,
THF
2. HCl/EtOEt * 0 Vi
0^y °yP
;'· oy,. (V tf’Vl» γ·> cr^rdr’ "V “ :·' i Ί ho'V0
’· '·' NHjHCI OH
·:· is 44 116038
Kaavio 6
P D
«.»V1 „ A-W NaHC°3’ >- ^ X (Z, NHS^CC^ 2 « DME/vesi fifT THp H o 16 .
. P Π . £>.
^o-^nK'O'hA NaHCQ3. > ^οΛ,ν^ΟΗ NHS.DCC^
H ^Λτ0" DM^/vesi H ° Sf*) THF
o 18 ^ 17 « ÄV> . /?.
^°ΛΗ^ΝγΛ°^ + J NaHC03l ^o^nV'AAt0"
(Q Η,Ν-Sr0» ϋΜξ/vesi fQ
: ’· ^oh S
jf HN-^'O'^^' f v o P. ·'.’ 5 jqt”· ·. ·; EEDQ.THF H o = h 0 pyridiini ..:! .;·. 21 ‘ ‘ o :,. P / f "o 22 45 1 1 6038
Kaavio 7 o u__~ p ? ΰ* °~°ΑΧ, 22 DOX-HCl,
Et3N,
NMP
Y
o-^nX/ °Y^| H i I” S jfV ^ n° ^°γΝΛν^^ ^ο,λαοη
O k» O A, H LJ
{TS 1 HO'V0
°H
;·,. 23 I " .’·.*: 1. Pd(PPh)4, : : AcOH, ·· : Et3SiH,
CH2CI2/CH3OH
2. HCI/EtOEt f) 0¾ °γ0 c · ? /Vo fv^o ; *· ( h S i h , : l. »^o
: ·, NHjHCI OH
1 : 24 1 16038 46
Kaavio 8 ΟγΝΗ* 0-¾- 0-¾} -J~ 25 ®
NaHC03, oh DME^vesi ο^?9Λ^ — crol?T"s“ ^ 07 ^ EEDQ.THF 1 ~ ^NH 26 Sh O^NH, 0<^™2 ο «ΑΛΤ pyridiini T oA0Jjl '. : 28 ^nh
.: o^NH, \ DOX-HCI, I
\Et3N,NMP Oho ‘V'i)
** . °^nΉ °rV
: lYHlfV xoHOir° : : * \ 29 tjh < : — J oh O^'NHj 47 116038
Kaavio 9 o ^V0· 0 .AA*
H S = H 7 I
- ΗΝγ°^.
O
Taksoli, DMAP, CH2CI2
’ qQ
X >"'N °
V % O^Onf H
0 1H O r<^Y O / ^oAnWnu h yo 0-jJ H O H ΟηΟΛ 7γ° \ C^ojf0 ;·.;: —°r“' ·’.·; 30 V;i Pd(PPh3)4,
Bu3SnH, :V; AcOH,
I™ qQ
l ' l O ' \ .Xo
' Il )"'N
’ M fH 9 f^T O / v : · . r~L V°
Kj? H O ^ H ?.Ηθ1Λγ° \ : . 31
; O O
48 1 16 0 3 8
Kaavio 10 __ o O Ό ^v^oh
, V\ NHS.DCC J n O
^0xiw-► + / Q
"y 32 ° Ύ^Ο
NaHC03, DME/ vesi r oh Γ'Ι OH A.
^XU-W , X sl ίΜ ! i H Jj H "<--- Λ-Νγν^ΟΗ
"f EEDQ.THF H M
34 Ύ^Ό 33 "Y°"^0 o o o Ao o o^a ΟΛ” i? VtAJI ^ Fmoc-NHS, CH^ pyridiini iTYS^SjrX ^V° ^ Taksoli u L -O*
„ a O
: X A Q
j’·:: oy o A^Nn*oJc
0¾ J V o**'™ 1.1% DBU/THF
;'·.: o^° V 1) \2. HCI/EtOEt fV? ^ o o /**> *:;: ^Th o /? ®A°Yi on o .
:·:: υ 36 ^^ολ-°υ : ... 0«°'’ mJ''γ° dm O 3Z Ο 49 116038
Kaavio 11 o Q ,OH Q ?Aci ^°^γΛo* cbcococi
r>A / pyridiini f Γ/J
34 r /Λ 38 r r~( Ύ^Ο “,Ύ^Ο /M MC, pyridiini ,o
«M
P j&F
I 0 0 Ö
H ö = H
* > ·
:'·.: 1. 1% DBU/THF
,·. : 2. HCI/EtOEt 1 » » , H o
::: »vK
v r° o : ... 0 οΑφΧΧ c·
• H & = H
: 40 N
; ' ’; nHjHci 50 11 6038
Kaavio 12 T2
o f 1. TMS-CI o X
C VoA"VOH 2.DIEA ^ /=\ A AI OH
MJ h S h X
Ö , o$o^ ;
4· CH3OH Et2NH
CH2CI2
T
_ · o-.
o\ O Η^γΧ" cXXx5 * 43 42 nhs, y ° :·. DCO/ DME, vesi, ;· ;· / NaHC03 ·' : o\ u
.·..· /•V'o'^V T
** * H 0 o ’!* uj o\ u o H /' \ ;,: ;
M 0Q
o'' I - » I : s si 1 1 6038
Kaavio 12 jatkuu f) °h
H O ; ->» » ö J H
XJ EEDQ, CH2CI2 \3 Xr^ ~ ' o- / ^ ^o-
Et2NH, / o 7
Cl f OH
° O '"j H n ir~Yj5* o o [ jg> 46
ch2ci2, Q Q
DIE A
H
, .
OH
v1 ff° SMiV
‘. ; O H ö i H
::; 47 r fl : : ; hn^^ss/ : ,·, ^ ^o'' 52 ^ 1 6038
Kaavio 12 jatkuu
Ly OH
° H ö J' H
47 r Λ HN /k/ o/ XX1 fV”' dea· ^OAo-V CHjCt
0 oVU
/""f O /0f o r—α,υϊααΧ
H O J H
48 rf)
• *.· x * « I
’·' : DOX-HCI, :· DIEA, NMP \ V bY^ o ''·'· 1 O / jf o Hl H O J H S< ; ‘ · f' Ho'Vo
; 49 rO oH
:
Kaavio 12 jatkuu 53 116038
o HO
A ? Η^·»ν°Ύ 0 f-f O (H Ϊ ^0.,ΛΓ0Η o H O J H H<?S=0 I /(Λ °“ 49
C1 I
οΛ<ΟΗ 8 CH2CI2 anisoli w \ _ Y °-fl o HO O-aA^ {J^JOÄJLO' O H 8 S H HC?S=0 : · ‘ J ''oh .·. : f Cl ’· " NH3+ Λ^σ .·. : 50 CK]f ’. ·: o 54 116038
Kaavio 13 o fV"6·
O oK+J
r?° ir«s rY
O H ö = H
48 ΗΝΝ^λ5=/ DIE A *θΟ 0 MMC °H h2N^q o J w”1 <pc—ί,νΛΟ·^
O H & = H
;'·.. 51 Hö^
\i! cOrOH
...: ° CH2CI2 o «2^
. anisoli O
o : “ o h g i h : :·. 52 »{. aV’ 55 116038
Kaavio 14 Π o o o Λ_*° ?H o o^a (V* o -y^O di£os' /V«h o Jy]
Mtr-CI "LaA VV - 8 L ΕΛΑ pyridiini U 0,< Γ pyridiini, Qj >*° Q-VVi 0 0^ DIE A ° V~)/ o- o- 53 * s-λ
- Y 4 OH
o H ö = H
47 rf~}> CH2CI2' / mx'/
pyridiini,,/ (^\F^S
DlEA / V0 ° ° r Γβ o -^V*0 r^^Y5*] 5? «S π °y\ *H 9 VY-Li H 1 ö H o 0?A *ν V° \ yx q^HJ> 0 ^ 54 «m " kloorietikkahappo, ·’/·· anisoli, CH2Cl2 • * · o 0 (^j) *;;; 0 Ϋ°/ γ^Ύ^Ι « "S ?, °ΤΛ
\sJ 9 LI H 1 ä H O
:.·. 0^° "-Tr0 S A.C, ; 0 55 56 116038
Kaavio 15 ΟγΝΗ2 °V uY ,? ΝΗΒ,ρς^ς^^γγ + r ysA. H ° (S öo<*^/ ^ 50 ‘ ft
NaHC03, 1 rt„ DME/vesi
X V
OH A
r~\ U H U iV Sf o 'γ' h o /Γ\_^„ α,,-ΧλΑ» ay _ NH, n .il»i X=/\ Γί Π = χί 2- <f Yy^o^'n'V^^oh
° S EEDQ.THF 'fK H o A
^ SI V 57 V
"S — oA,
Et2NH,
NMP
^ ' OH OH
0 nmp - ^C^aXAO^ *v hTv : .. 59 \M o o 60 ™ X ·. O^NH, O^SlHj 57 1 16038
Kaavio 15 jatkuu
OH
<pc^ixaNxy
O H ö = H
I 60 Ϊ O^NHj O ί^Ύ^2 pyridiini .NO, * xo (OXutf
Ö H ö = H
61 ^NH
O^NHj : .· DOX-HCI, :**: 'Pr2NEt,NMP £ : w o ho I l]
V: ▼ o^uJ)j °rV
3 fC^ysvC1' V?"
*» : ; o h o H
\ HO>0 62 y oh : ; ; ο^νη2 1 16038 58
Kaavio 16
NaHC03 1 o DCC
63
O O
vOU^M> -'P!ie» ^j^^xCL nhs >
-1 ϊ I NaHC03 TT St DCC
64 65 Υϊ','^Λ^-β N..Fmoc.Lys, 0 \NaHC03 fj — H ii r« i?
v°ym^^A"1vnJ1'oH
I O h o 5.
— \ Ö r^\ s'' ζΚ XNj>H>f^PAB-OH1 ®
*;:· EEDQ
m ö \:; Ύ^χ) V ; 1.TFA X £*)} on 2.MC-NHS^o H V\ M o s »Vk i·:. Ύ~Ό
Kaavio 16 jatkuu 59 116038
Γ/j OH
PNP-C0CI-► o f r=^\ pyridiini J Vl - o vi%/ o ^
Q .°AoXJ
, o H o j h DEA
1 25 ' rl Ύ^Ο o HO Yli °H^y °Xjl
?. h fiS h o fY Y “Yt® 1.1% DBU/THF
A-wyN^MiV^HAJ1 \>..ΑΑΟΗ -;-► V-4. S h g = h IJ 2. HCy eetteri
n f O. “Y
OH
* ' M HO Vi] ’·.' · /A Ajy °yy t h n » ? iV voHOxr°
/ H H^O
. , — NHjHd OH
% 4
Kaavio 17 11 6038 i Y) H o °<5>"Λ.
I 44 " h o J ö I dcc Tl) j i o" ' gaba, I NaHC03
0^1 ^ Q
Qg°'z\yLz'^y0H
o' * ! ,\ ! DCC, HOBt,
IMMC
f O
. HjN—^ & Qgt# ·' ' * Iftlv Λ Z5 öb ; *; o·' 61 116038
Kaavio 17 jatkuu 75
Et2NH, ^ch2ci2 0 oH o ° 76 MC-NHS, CH2CI2 w o «m E" pCJ5yUw^ : ,· OH H o ° ’ ’ — :T; ^ CICH2C02H,
; ; anisoli O
7;· ycH:.:ci, <v> « o
I'··· fT° ft «S
o H ö J H ö o : 78 ^ crY° — o
Kaavio 18 62 116038 o p o ^0„
0Γ°αΛ°]5 * \ O
ö VNaHCOs,
O 6 ' DME/ vesi OH
σ:\ρ'# qU-°- dccAnhs
DMAP.V
CH2CI2 ^ VJ? 0 H z ° ' '· °γ^ο\%ΛΛο^γ^
;· ·. °^r^LX,OH l o h U^J
° 80 ^CfS
CICH2C02H, . , anisoli, i.i : CH2CI2 K p 0 H - 0
VoVy^W
nh3+ 0.Jl^a 81
Kaavio 19 63 116038
o O O
o ^-O_ΰ OH O ° O^CI
S ~fS<oOv difosgeeni S ~T“cJV' o^° CH2CI2 J=° > u s ; u 82 +
OH
6 H q Ξ H
47 r0 CH2Cl2, X {jlT**) pyridiini / '^'o'
o o / Q
o Λον<0. s YS s °r\ :/; OX :/r” S n
K } ö M W
;·.,; CICH2C02H, ,;. anisoli ···’:’ CH2CI2 :T: Y ^ o O r\ . . o ^ν/τΙ^°Ύΐ u - u °Ή>
S
UJ ö J5 Y° k : · · >=o °Λ-ν L o : . -f o οΛ.« / 85 1 1 6038 64
Biologinen aktiivisuus Tämän keksinnön edustavia konjugaatteja testattiin sekä in vitro että in vivo biologisen aktiivisuuden määrittämiseksi. Näissä kokeissa sytotoksisten lääkkeiden 5 konjugaattien tehokkuus määritettiin mittaamalla konju-gaattien sytotoksisuus soluja vastaan, jotka olivat peräisin ihmisen syövästä. Seuraavassa kuvataan käytettyjä edustavia kokeita ja saatuja tuloksia. Alaan perehtynyt ymmärtää, että mitä tahansa solulinjaa, joka ekspressoi 10 haluttua antigeeniä, voidaan käyttää spesifisten solulin-jojen korvaamiseksi seuraavissa analyyseissä.
Koe 1
Vapaan D0X:n vapautuminen katepsiinista B
300 μΐ edeltävää konjugaattiliuosta laimennettiin 15 1 ml:ksi pH 5,0 asetaattipuskurilla (25 mM + 1 mM EDTA) antamaan lupullinen pH 5,3. Tätä liuosta inkuboitiin n. 37 °C:ssa samalla kun 6 μΐ katepsiini B liuosta (katso 2 seuraavassa) inkuboitiin 20 pl:lla aktivoitua liuosta (katso 2 seuraavassa) n. 15 minuuttia huoneenlämpötilassa. 20 Sitten entsyymiliuosta käsiteltiin pH 5,3 konjugaatti-liuoksella ja seosta inkuboitiin n. 37 °C:ssa. 25 μ1:η i · näyte poistettiin jaksottaisesti ja laimennettiin * 50 plrlla kylmää metanolia proteiinin saostamiseksi. Näyt- : · teet sentrifugoitiin ja neste injektoitiin HPLCrhen (C-18- 25 pylväs; 80:20 metanoli/pH 2,8 trietyyliammoniumformiaatti-puskuri; 1 ml/min.; 495 nm aallonpituus). Huippualueet . kalibroitiin injektoimalla tunnettu pitoisuus D0X:ia. Va paan D0X:n vapautumisen puoliintumisaika määritettiin n.
. . kolmeksi tunniksi ja DOX oli vapautunut 93 % teoreettisesti, ' 30 ta (osa vapaasta DOXrstä saostuu luultavasti proteiinin kanssa).
Koe II
Ihmisplasman stabiilisuus 300 μΐ konjugaattiliuosta laimennettiin 1 ml:ksi 35 tuoreella ihmisplasmalla ja seosta inkuboitiin noin 65 116038 37 °C:ssa. 25 μ1:η näyte poistettiin jaksottain ja laimennettiin 50 piillä kylmää metanolia. Näytteet sentrifugoi-tiin ja neste injektoitiin HPLC:hen (olosuhteet kuten edellä). Erillisiä plasmanäytteitä inkuboitiin 1 %:n ja 5 2 %:n vapaan DOX:n teoreettisella vapautumisella vapaata DOX:ia useita minuutteja ja käsiteltiin samalla tavalla. Vapaa DOX havaittiin ja määritettiin kvantitatiivisesti onnistuneesti näillä tasoilla. Ei lainkaan DOX:ia havaittu konjugaaatista plasmassa 7,5 tunnin aikana (puoliintumis-10 aika > 3,75 tuntia).
Koe 111
Katepsiini B Z-Phe-Lys-PÄBC-DOX:n paljastaminen
Sarvikarjan pernan katepsiinia B (Sigma, EC 3.4.22.1, molekyylipaino n. 40 000) (10 yksikköä) liuotet-15 tiin 1 ml:aan pH 5,0 asetaattipuskuria (25 mM asetaatti + 1 mM EDTA) antamaan likimäärin 13,7 M liuos. 6 μΐ entsyy-miliuosta inkuboitiin 12 μ1:η kanssa aktivoivaa liuosta (30 mM ditiotreitolia ja 15 mM EDTA) n. 15 minuuttia huoneenlämpötilassa. Tähän lisättiin 2 ml pH 5,0 asetaatti-20 puskuria (25 mM asetaattia 1 mM EDTA:n kanssa), jota oli inkuboitu n. 37 °C:ssa, mitä seurasi 8 μΐ 10 mM liuosta, jossa oli Z-Phe-Lys-PABC-DOX:ia metanolissa ([substraatti] * V = 40 μΜ, [katepsiini B] = n. 41 nM). Seosta inkuboitiin n.
!,’··’ 37 °C:ssa, ja näytteet poistettiin jaksottain ja injektoi- ; \ 25 tiin HPLC:hen (C-18-pylväs; 80:20 metanoli/pH 2,8 trietyy- ·· liammoniumformiaatti (50 mM) puskuri; 1 ml/min.; 495 nm aallonpituus). Vapaan D0X:n vapautumisen puoliintumisaika määritettiin 7-9 minuutiksi.
Koe IV
30 Ihmisplasmastabiilisuus 4 μΐ 10 mM liuosta, jossa oli Z-Phe-Lys-PABC-'*· DOX:ia, liuotettiin 1 ml:aan tuoretta ihmisplasmaa. Näyt teitä (50 μΐ) poistettiin jaksottain ja laimennettiin kylmällä metanolilla (100 μΐ). Näytteitä sentrifugoitiin ja 35 saatu neste injektoitiin HPLC:hen (katso edeltävät olo- 66 116038 suhteet). Tarpeeksi DOX:ia lisättiin plasman erilliseen näytteeseen antamaan 1 %:n teoreettinen vapautuminen substraatista. Tämä havaittiin onnistuneesti käyttäen samoja menetelmiä. Mitään vapaata DOXria ei havaittu Z-Phe-Lys-5 PABC-DOX:sta plasmassa seitsemän tunnin aikana (puoliintumisaika > 3,50 tuntia).
Koe V
Menetelmät ja aineet
Ihmisen kasvainsolulinjat. L2987 on keuhkon adeno-10 carsinomalinja, joka on saatu I. Hellströmilta (Bristol-Myers Squibb, Seattle, WA). HCT116-paksu-peräsuolikasvain-linja saatiin M. Brattainilta (Baylor Inst., TX). A2780 on munasarjacarsinomalinja, joka saatiin K. Scanlonilta (National Cancer Institute).
15 Sidoskokeet. Sidoskokeet toteutettiin epäsuoralla immunofluoresenssillä. Lyhyesti, kohdesolut otettiin talteen logaritmisesti käyttäen trypsiini/EDTA (GIBCO, Grand Island, NY) PBSissä. Solut pestiin kahdesti PBS:llä, joka sisälsi l-%:ista sarvikarjaseerumialbumiinia (BSA, Sigma 20 Chemical Co., St. Louis, MO) ja suspendoitiin uudestaan 1 x 107/ml PBS:ssä, joka sisälsi l-%:ista BSA ja 0,l-%:ista NaN3 soluja (0,1 ml), sekoitettiin eri vasta-aineiden (0,1 ml 40 pg MAb/ml) kanssa ja inkuboitiin n. 45 minuut-tia n. 4 °C:ssa. Solut pestiin kaksi kertaa ja suspendoi- « * !/·* 25 tiin uudestaan 0,1 ml:aan tarkoituksenmukaisen pitoisuu- ;· den omaavaa kanin anti-ihmis IgG (Cappel Laboratories,
Cochranville PA, Fab'2 fragmentti). Soluja inkuboitiin n. 35 minuuttia n. 4 °C:ssa, pestiin kaksi kertaa ja pidet-: tiin jäissä kunnes analysoitiin Coulter EPICS 753 fluor- 30 esenssi-aktivoidulla solulajittelijalla. Tulokset on il- moitettu fluoresenssi-intensiivisyytenä (FI): spesifisten ; miinus kontrollivasta-aineen keskimääräinen kanavalukumää- rä.
In vitro -sytotoksisuuskokeet. Ihmisen syöpäsolujen 35 yksikerrosviljelmät viljeltiin käyttäen trypsiini-EDTA
67 116038 (GIBCO. Grand Island, NY) ja solut laskettiin ja suspen-doitiin uudestaan 1 x 105/ml RPMI-1640:aan, joka sisälsi 10-%:ista kuumaa inaktivoitua vasikan sikiöseerumia (RPMI-10-%:inen FCS). Soluja (0,1 ml/kuoppa) lisättiin jokaiseen 5 kuoppaan 96 kuoppaisessa mikrotiitterilevyssä ja inkuboi-tiin yön yli n. 37 eC:ssa kosteassa 5 %:n C02 ilmakehässä. Väliaine poistettiin levyistä ja DOX- ja MAb-DOX-konju-gaattien sarjalaimennukset lisättiin kuoppiin. Kaikki laimennukset toteutettiin neljänä kappaleena. Solut altistet-10 tiin DOX:Ile tai MAb-DOX-konjugaateille n. kahdeksi tunniksi 37 °C:ssa kosteassa 5-%:isen C02:n ilmakehässä. Sitten levyjä sentrifugoitiin (200 x g, viisi minuuttia), lääke tai konjugaatti poistettiin ja solut pestiin kolme kertaa RPMI-10-%:isella FCSrllä. Soluja viljeltiin RPMI-15 10-%:isessa FCSrssä (37 °C, 5 % C02) 48 lisätuntia. Tällöin soluja säteilytettiin n. kaksi tuntia 1,0 pCi/kuoppa 3H-ty-midiinillä (New England Nuclear, Boston MA). Soluja viljeltiin lasikuitumatoilla (Skatron Instruments, Inc., Sterling, VA), kuivattiin ja suodattimeen sitoutunut 3H 20 radioaktiivisuus määritettiin (β-levy tuikelaskin, Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, NJ). 3H-tymidiinin tal-teenottoinhibitio määritettiin vertaamalla käsiteltyjen näytteiden CPM-keskiarvoa käsittelemättömän kontrollin *, ’ i CPM-keskiarvoon.
‘ 25 Tulokset
I I
Sidoskokeet: L2987-, A2780- ja HCTllö-ihmiskarsi-nomalinjat arvioitiin BR96-antigeeniekspression suhteen käyttäen suoraa immunofluoresenssiä. Kuten kaaviosta 1 ; ,·, nähdään, L2987-keuhkolinjalla oli suurin BR96-antigeenin 30 tiheys (FI = 172,8), A2780-munasarjalinjalla oli BR96 al-haisemmalla tiheydellä (FI = 103,2) ja HCT116 paksusuoli- # * ** linjalla ei ollut merkittäviä määriä BR96-antigeeniä J (FI = 0).
BR96-DOX-peptidisitoutuneen konjugaatin sytotoksi- 35 suus: BR96-DOX-peptidi immunokonjugaatin in vitro tehokkuus arvioitiin L2987, A2780 ja HCT116 ihmiskarsinomalin- 68 116038 joja vastaan. Kuten edellä on kuvattu, näillä soluilla on eri BR96-antigeenitiheydet (L2987>A2780>>HCT116). Konju-goimaton doksorubisiini arvioitiin myös. Kuten kaaviosta 2 nähdään, BR96-DOX-konjugaatin tehokkuus vastasi konjugoi-5 mattoman DOX:n tehokkuutta L2987-keuhkolinjaa vastaan. BR96-DOX-konjugaatilla oli n. 50 kertaa pienempi tehokkuus kuin konjugoimattomalla D0X:llä A2780 munasarjalinjaa vastaan. BR96-DOX-konjugaatti ei ollut aktiivinen antigeeni-negatiivista HCT116-linjaa vastaan. Kuitenkin tämä linja 10 oli herkkä konjugoimatonta DOX:ia kohtaan. Nämä tulokset osoittavat suoran yhteyden BR96-DOX-konjugaatin in vitro tehokkuuden ja BR96-antigeenin epitooppitiheyden välillä. Yhteenvetona voidaan todeta, että BR96-DOX-konjugaatilla on antigeeni-spesifistä sytotoksisuutta in vitro, ja kon-15 jugaatin tehokkuus on suhteessa BR96-antigeenin tiheyteen ekspressoituna eri solulinjoilla.
Koe vi BR96-PEP-DOX-konjugaatti (MR = 4,41) arvioitiin in vivo (taulukko 1) L2987-ihmisen keuhkokarsinoma kudossiir-20 rettä vastaan. Hoito aloitettiin 14 päivää kasvaimen istutuksen jälkeen, kun kasvaimet olivat kooltaan 75 mm 3.
·* '* BR96-PEP-DOX-konjugaatti oli aktiivinen ja siedetty : annoksilla 1,25 - 20 mg/kg ekvivalenttia DOX/injektio.
/ : Korkeampia annoksia ei arvioitu ensimmäisessä kokeessa.
;’\i 25 Kuten taulukossa 1 on esitetty, BR96-PEP-DOX-konjugaatti j· oli huomattavasti aktiivisempi kuin optimoitu DOX annok- silla 2,5 mg/kg ekvivalenttia DOX/injektio. BR96-PEP-DOX-konjugaatin aktiivisuus annettuna 1,25 mg/kg oli sama . . kuin konjugoimattoman DOX:n annettuna 8 mg/kg. Nämä tulok- 30 set viittaavat siihen, että BR96-PEP-DOX-konjugaattien in vivo tehokkuus on sama kuin BMS-182248. Peptidi-DOX-konju-:', gaateista arvioitiin antigeeni-spesifinen kasvaimia vas tustava aktiivisuus niin pian kuin ei-sitoutunut (IgG-PEP-DOX) konjugaatti voitiin valmistaa.
69 116038
Taulukko 1 BR96-DOX peptidikonjugaattien kasvaimia vastustava aktiivisuus vakiintunutta L297 ihmiskasvainkudossiirrettä vastaan 5
Annos/injektio % parantuminen (mg/kg)
Dox-hoito BR96 Solu- Täydel- Osittai- luku- kuolema linen nen määrä DOX 8 - 2.4 10 0 10 6 1.5 0 0 10 10 BR96-DOX 20 1250 > 7 100 0 9 10 625 >7 89 11 10 5 312 > 7 100 0 10 2.5 156 > 7 90 10 10 1.25 78 2.4 10 10 10 0.63 39 0.3 0 0 10 0.31 20 0.2 0 0 10
Edeltävien kokeiden tuloksista voidaan nähdä, että tämän keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettavat yh-10 disteet ovat hyvin tehokkaita kasvaimia vastustavia ainei-ta. Ne tappavat kasvainsoluja in vitro spesifisellä koh-·/. distusmekanismilla, jossa liittynyt MAb BR96 on kohdistava I I osa, kuten havaitaan siitä tosiasiasta, että solut, joilla ‘ / on korkeammat tasot antigeeniä, jota MAb tunnistaa, on te- ·**·* 15 hokkaasti tapettu; solut, joissa on vähemmän antigeenejä, '·' ‘ on vähemmän tehokkaasti tapettu; soluja ilman antigeenejä ei ole tapettu lainkaan. Koska esiintyy kolme solutyyppiä, • j : jotka ovat herkkiä DOX:lie, näiden tulosten on johduttava D0X:n vapautumisesta eri sitoutumisten jälkeen soluihin, 20 eikä D0X:n eri myrkyllisyydestä eri solulinjoja kohtaan. Tämän keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettavien yhdisteiden mekanismia tukee havainto, että katepsiini B, j ' : lysosomaalinen proteaasi vapauttaa vapaata DOX: ia nopeasti ;··; sekä peptidi sidososasta että koko immunokonjugaatista.
70 116038
Koska proteaasit ihmisen veressä eivät vapauta DOXrää peptidin sidososasta eikä koko immunokonjugaatista, voidaan päätellä, että immunokonjugaatti saavuttaa kasvainsolut ihmisessä koskemattomina vapauttamatta DOXria matkalla.
5 Lopuksi in vivo kokeet kasvaimia sisältävissä hiirissä ovat osoittaneet, että tämän keksinnön immunokonjugaatti saa aikaan antigeeni-positiivisten kasvainten parantumista tehokkaammin ja vähemmän myrkyllisenä isännälle kuin vapaa DOX.
10 Lisäsuoritusmuotona on menetelmä kaavan (I) yhdis teen valmistamiseksi, kuten edellä on määritetty.
Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettavia konjugaatteja annetaan potilaalle farmaseuttisen valmiste-muodon muodossa, joka sisältää kaavan (I) konjugaatin ja 15 farmaseuttisesti hyväksyttävää kantoainetta, täyteainetta tai laimenninta sitä varten. Tässä käytettynä "farmaseuttisesti hyväksyttävä" viittaa aineisiin, jotka ovat hyödyllisiä lämminverisen eläimen, mukaan lukien esimerkiksi ihminen, hevonen, sika, nauta, hiiri, kani, kissa tai muu 20 nisäkäs, samoin kuin lintu tai muu lämminverinen eläin, taudin määritystä tai hoitoa varten. Edullinen antomuoto on ruoansulatuskanavan ulkopuolinen, erityisesti laskimon- * ( ,·. : sisäinen, lihaksensisäinen, ihonalainen, vatsakalvon si- ! ! säinen tai imukudoksen sisäinen. Tällaisia valmistemuotoja / 25 voidaan valmistaa käyttäen kantoaineita, laimentimia tai ·;* täyteaineita, jotka ovat tunnettuja alaan perehtyneelle.
'·' ‘ Tämän suhteen katso esim. Remington's Pharmaceutical Sci ences, 16. painos, 1980, Mack Publishing Company, jul-·,* | kaisijana Osol et ai. Tällaiset koostumukset voivat olla : : 30 proteiineja, kuten seerumiproteiineja, esimerkiksi ihmisen seerumialbumiinia, puskureita tai puskuroituja aineita, « * * kuten fosfaatteja ja muita suoloja tai elektrolyyttejä ja vastaavia. Sopivia laimentimia voivat olla esimerkiksi • steriili vesi, isotoninen suolaliuos, laimea vesipitoinen ;··· 35 dekstroosi, polyhydrinen alkoholi tai tällaisten alkoholi- 71 116038 en seokset, esimerkiksi glyseriini, propyleeniglykoli, po-lyetyleeniglykoli ja vastaavat. Valmistemudot voivat sisältää säilöntäaineita, kuten fenetyylialkoholia, metyyli-ja propyyliparabeenejä, timerosalia ja vastaavia. Halutta-5 essa valmistemuoto voi sisältää 0,5 - n. 0,20 paino-% an-tioksidanttia, kuten natriummetabisulfiittia tai natrium-bisulfiittia.
Laskimonsisäistä antomuotoa varten valmistemuoto valmistetaan edullisesti niin, että potilaalle annettava 10 määrä on n. 1 - n. 250 g haluttua konjugaattia. Edullisesti annettava määrä on alueella n. 4 g - n. 25 g konjugaattia. Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettavat kon-jugaatit ovat tehokkaita laajalla annosalueella riippuen tekijöistä, kuten hoidettavasta sairauden tilasta tai mo-15 difioitavasta biologisesta vaikutuksesta, tavasta, jolla konjugaatti annetaan, potilaan iästä, painosta ja kunnosta, kuten myös muista tekijöistä, jotka hoitava läääkäri ottaa huomioon. Täten annettava määrä mille tahansa poti-laale on määritettävä yksilökohtaisesti.
20 Tässä hakemuksessa kaikki viitatut julkaisut osoittavat alaan perehtyneiden taitoa, joita tämä hakemus koskee. Jokainen julkaisu on yksittäin liitetty tähän * * ; viitteenä viittauskohdassa.
! ! Alaan perehtynyt ymmärtää, että vaikka spesifisiä 1 25 reagensseja ja reaktio-olosuhteita on esitetty seuraavissa ;;· valmistusmenetelmissä ja esimerkeissä, modifiointeja, jot- ’·' ‘ ka kuuluvat keksinnön henkeen ja piiriin, voidaan tehdä.
Täten seuraaavat valmistusmenetelmät ja esimerkit kuvaavat ·,· * enemmän tätä keksintöä.
30
• I
72 116038
Esimerkki 1
Allyyli-p-nitrofenyylikarbonaatin valmistus (1)
Allyylialkoholia (0,5 ml, 7,35 mmol) CH2Cl2:ssa (3 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin p-nitrofenyyli-5 kloroformiaatilla (1,482 g, 1 ekv.)· Tähän lisättiin pyri-diiniä (0,6 ml, 1 ekv.) CH2Cl2:ssa (2 ml) tipoittain 10 minuutin aikana. Noin viiden tunnin kuluttua huoneenlämpö-tilassa seos pestiin 15-%:isella sitruunahapolla, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin antamaan 10 paksu vaaleankeltainen öljy. Tämä kromatografoitiin piidioksidilla eluoiden 10 - 50-%:isella EtOAc:heksaanilla antamaan tuote vaikeahkona kiteisenä aineena (1,542 g, 94 %). 1H-NMR (CDC13) : δ 4,78 (2H, d, CH2-0) , 5,40 (2H, q, vinyyli CH2) , 5,99 (1H, m, vinyyli CH) , 7,37 ja 8,26 (4H, 15 2 x d, Ph); MS (DCI): 224 (MH)+;
Anal, laskettu C10H9NO5: lie: C-53, 82, H-4,06, N-6,28;
Havaittu: C-53,73, H-4,03, N-6,23.
Esimerkki 2 N“-Boc-Ne-alloc-Lys:in valmistus (2) 20 Liuos, jossa oli Boc-Lys:iä (8,4414 g, 34,27 mmol) ^ ja NaHCCbtia (2,88 g, 1 ekv.) vedessä (50 ml), lisättiin allyyli-p-nitrofenyylikarbonaattiin (jL) (7,649 g, 1 ekv.) .·. : DMErssä (50 ml) huoneenlämpötilassa. Seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämpötilassa ja sitten lisättiin vettä ‘ ,* 25 (80 ml) ja seos uutettiin eetterillä (3 x 50 ml). Vesipi- ·;;; toinen kerros tehtiin happamaksi pH-arvoon 2 10-%:isella *·* 1 sitruunahapolla ja uutettiin sitten EtOAc: llä (3 x 80 ml).
Yhdistetyt orgaaniset aineosat pestiin vedellä ja suola-·,· · liuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin antamaan valkoinen : 30 kiinteä aine. Tätä käsiteltiin eetterillä (100 ml) ja saa- ;·’ tua seosta sonikoitiin n. 15 minuuttia p-nitrofenolin liu- ottamiseksi ja sitten kiinteä aine (10,303 g, 91 %) kerät-;* tiin suodattamalla ja pestiin toistuvasti eetterillä. 1H- i'V NMR (CDCI3/CD3OD) : δ 1,41 (9H, s, t-Bu) , 1,49 ja 1,70 (6H, ;··: 35 m, Lys CH2) , 3,13 (2H, m, Lys N-CH2) , 4,25 (1H, m, CH) , 73 116038 4,52 (2H, d, allyyli O-CH2) , 5,24 (2H, q, vinyyli CH2) , 5,87 (1H, m, vinyyli CH) ; MS (DCI) : 331 (MH+) , 275 (MH+-C-jHe) .
Esimerkki 3 5 Ne-alloc-Lys-TFA:n valmistus (3)
Na-Boc-NE-alloc-Lys: iä (2) (9,94 g, 30 mmol) CH2Cl2:ssa (50 ml) käsiteltiin TFA:lla (19 ml) huoneenlämpötilassa. Seosta sonikoitiin hetki ja sekoitettiin sitten n. yksi tunti. Liuottimet haihdutettiin n. 40 °C:ssa ja 10 saatu keltainen kumi trituroitiin eetterissä (75 ml) antamaan valkoinen kiinteä aine (8,58 g, 83 %). 1H-NMR (D2O): δ 1,46 ja 1,87 (4H ja 2H, vastaavasti, m, Lys CH2) , 3,11 (2H, m, N-CH2), 3,80 (1H, t, Lys CH) , 4,51 (2H, br s, allyyli O-CH2) , 5,22 (2H, q, vinyyli CH2) , 5,90 (1H, m, vi-15 nyyli CH); MS (DCI): 231 (MH)+;
Anal, laskettu C12H19N2O6F3: lie: C-41,86, H-5,56, N-8,14; Havaittu: C-42,30, H-5,52, N-8,29.
Esimerkki 4 Z-Phe-NHS:n valmistus (4) 20 Yhdistettä Z-Phe (11,03 g, 36,85 mmol) ja yhdis- tettä NHS (4,45 g, 1,1 ekv.) THF:ssä (50 ml) n. 0 °C:ssa käsiteltiin DCC:llä (7,98 g, 1,0 ekv.). Muutaman minuutin . \ kuluttua muodostui paksu valkoinen sakka. Seoksen annet- ! tiin lämmetä huoneenlämpötilaan ja sekoitettiin n. 16 tun- * _· 25 tia. Kiinteä DCU sivutuote suodatettiin erilleen ja suo- dos haihdutettiin. Saatu paksu väritön öljy liuotettiin v ' CH2Cl2:een (80 ml). Seoksen annettiin seistä yksi tunti ja suodatettiin sitten DCU:n edelleen poistamiseksi. Suodos j < j haihdutettiin ja saatua väritöntä lasimaista ainetta kui-
30 vattiin tyhjössä n. kolme tuntia antamaan vaahtomainen kiinteä aine (14,023 g, 96 %) , jota käytettiin ilman jat-kopuhdistusta. ^-NMR (CDCI3/CD3OD) : δ 2,88 (4H, s, NHS
CH2), 3,27 (2H, m, Phe CH2) , 4,70 (1H, m, Phe CH) , 5,13 I (2H, s, Z CH2), 7,27 (10H, m, Phe).
•il 35 74 116038
Esimerkki 5 Z-Phe-Ne-alloc-Lys: in valmistus (5)
Yhdistettä Z-Phe-NHS (4_) (2,783 g, 7,021 mmol) DME:ssä (30 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin liuoksel-5 la, jossa oli N£-alloc-Lys-TFA: ta (2,54 g, 1,05 ekv.) ja NaHCC>3:ia (1,24 g, 2,1 ekv.) vedessä (30 ml). Seosta sekoitettiin voimakkaasti huoneenlämpötilassa kaksi päivää. Pieni määrä DCU:ta poistettiin suodattamalla ja suodos laimennettiin vedellä (50 ml) ja tehtiin sitten happamaksi 10 pH-arvoon 3 15-%:isella sitruunahapolla. Saatu seos uutettiin EtOAc:llä (3 x 80 ml) ja yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin antamaan lasimainen kiinteä aine. Tätä ainetta käsiteltiin eetterillä (150 ml), sonikoitiin ja kuu-15 mennettiin vesihauteessa (50 °C) . Jäähdyttämisen aikana valkoinen kiinteä tuote (2,79 g, 78 %) kerättiin suodattamalla ja pestiin eetterillä. 1H-NMR (CDCI3/CD3OD) : δ 1,25, 1,43, 1,74 ja 1,81 (6H, m, Lys CH2) , 3,00 (2H, m, Phe CH2), 3,08 (2H, m, N-CH2) , 4,43 (2H, m, CO-CH) , 4,48 (2H, 20 d, allyyli 0-CH2) , 5,02 (2H, m, Z CH2) , 5,20 (2H, q, vi- ># nyyli CH2) , 5,84 (1H, m, vinyyli CH) , 7,22 (10H, m, Phe) ; :> ·. MS (FAB) : 512 (MH)+, 534 (M+Na)+, 556 (M+K)+; : Anal, laskettu C27H33N307: lie: C-63, 39, H-6,50, N-8,21; ! ! Havaittu: C-62,98, H-6,48, N-8,21.
* 25 Esimerkki 6 Z-Phe-Ne-alloc-Lys-PAB-OH:n valmistus (6) V ‘ Yhdistettä Z-Phe-N£-alloc-Lys (_5) (524,7 mg, 1,026 mmol) ja p-aminobentsyylialkoholia (133 mg, 1,05 ekv.) • (j j THF:ssä (10 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin EEDQ: 11a 30 (266,3 mg, 1,05 ekv.). Seosta sekoitettiin huoneenlämpöti- ./ lassa n. 16 tuntia. Seos haihdutettiin kuiviin noin 30 °C:ssa ja jäännös trituroitiin eetterissä (15 ml). Saa-tu valkoinen kiinteä tuote (591,6 mg, 94 %) kerättiin suo-\ dattamalla ja pestiin eetterillä. 1H-NMR (CDCI3/CD3OD) : ·;··: 35 δ 1,25, 1,42, 1,59 ja 1,77 (6H, m, Lys CH2) , 2,97 (2H, m, 75 1 1 6 0 3 8
Phe CH2) , 3,06 (2H, m, N-CH2) , 4,37 (2H, m, Phe ja Lys CH), 4,46 (2H, d, allyyli 0-CH2) , 4,55 (2H, s, Ph-CH2-OH), 4,98 (2H, m, Z CH2) , 5,18 (2H, q, vinyyli CH2) , 5,81 (1H, m, vinyyli CH), 7,08 ja 7,43 (4H, 2 x d, PAB Ph), 7,11 ja 5 7,23 (10H, m, Z ja Phe Ph) ; MS (FAB): 617 (MH)+, 639 (M+Na)\ 655 (M+K)+;
Anal, laskettu C34H40N4O7: lie: C-66,22, H-6,54, N-9,08; Havaittu: C-65,72, H-6,43, N-8,92.
Esimerkki 7 10 Z - Phe-N8-alloc-Ly s-PABC-PNP:n valmistus (7)
Yhdistettä Z-Phe-Ne-alloc-Lys-PAB-OH (_6) (269, 6 mg, 437,2 nmol) kuivassa THF:ssä (8 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin p-nitrofenyylikloroformiaatilla (106 mg, 1,2 ekv.) ja pyridiinillä (42,5 μΐ, 1,2 ekv.). Noin kuuden 15 tunnin kuluttua ohutkerroskromatografia (piidioksidi; 25:1 CH2C12/CH30H) osoitti, että reaktio oli täydellinen. EtOAc:tä (25 ml) ja 10-%:ista sitruunahappoa (25 ml) lisättiin. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin antamaan keltainen 20 kiinteä aine, joka kromatografoitiin piidioksidilla, elu- ;·. oiden 30:1 CH2CI2/CH3OH: 11a antamaan tuote vaikeahkona kiinteänä aineena (297, 4 mg, 87 %) . 1H-NMR (CDCI3/CD3OD) : *./! δ 1,24, 1,42, 1,59 ja 1,78 (6H, m, Lys CH2) , 2,97 (2H, m, ; N-CH2), 3,04 (2H, m, Phe CH2) , 4,38 (2H, m, Phe ja Lys / 25 CH) , 4,46 (2H, d, allyyli 0-CH2) , 5,01 (2H, s, Z CH2) , · 5,17 (2H, q, vinyyli CH2) , 5,21 (2H, s, PAB CH2-0) , 5,37 * ja 5,80 (kumpikin 1H, m, Phe ja Lys NH) , 5,83 (1H, m, vi
nyyli CH), 7,11 ja 7,56 (4H, 2 x d, PAB Ph), 7,13 ja 7,25 ; I (10H, m, Phe ja Z Ph), 7,35 ja 8,10 (kumpikin 2H, d, PNP
30 Ph), 9,23 (1H, br s, PAB NH) ; MS (FAB) : 782 (MH+) , 804 » » » ./ (M+Na)+, 820 (M+K)+;
Anal, laskettu C41H43N5O11: lie: C-62,99, H-5,54, N-8,96; Havaittu: C-62,75, H-5,49, N-8,86.
76 116038
Esimerkki 8 Z-Phe-Ne-alloc-Lys-PABC-DOX: in valmistus (8)
Yhdisteitä Z-Phe-Ne-alloc-Lys-PABC~PNP Q) (337,2 mg, 431,3 μιηοΐ) ja DOX-HC1 (275,2 mg, 1,1 ekv. ) NMP:ssä 5 (8 ml) käsiteltiin huoneenlämpötilassa trietyyliamiinilla (66 μΐ, 1,1 ekv.). Seoksen annettiin seistä pimeässä n. kaksi päivää. Sitten seos laimennettiin 10-%:isella i-Pr-OH/EtOAc:llä (100 ml) ja pestiin vedellä (3 x 100 ml) ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin antamaan 10 oranssinen kiinteä aine. Tämä kromatografoitiin piidioksidilla eluoiden 1) 25:1 ja 2) 15:1 CH2CI2/CH3OH:11a antamaan tuote oranssisena kiinteänä aineena (496, 3 mg, 97 %) . 1H-NMR (CDCI3/CD3OD) : δ 1,18 (3H, d, sokeri CH3) , 1,22, l, 38, 1,56 ja 1,77 (6H, m, Lys CH2) , 1,74 (2H, m, D-rengas- 15 CH2) , 2,23 (2H, m, D-rengas CH2) , 2,95 (2H, m, sokeri CH2) ) , 3,02 (2H, m, N-CH2) , 3,53 (1H, s, sokeri HO-CH), 3,80 (1H, m, sokeri HN-CH), 3,99 (3H, s, OCH3) , 4,06 (1H, m, sokeri CH3-CH), 4,39 (2H, m, Phe ja Lys CH), 4,43 (2H, d, allyyli O-CH2), 4,70 (2H, s, PAB CH2-0) , 4,89 (2H, m, Z CH2) , 4,92 20 (1H, m, anomeerinen CH) , 4,96 (2H, d, CO-CH2-OH) , 5,15 .' _ (2H, q, vinyyli CH2) , 5,11, 5,39 (kumpikin 1H, s, OH), 5,41 (1H, br, DOX Ph-CH) , 5,60 ja 5,92 (kumpikin 1H, m, * » amidi NH) , 5,79 (1H, m, vinyyli CH) , 7,08 ja 7,23 (10H, m, : : Phe ja Z Ph), 7,13 ja 7,40 (4H, 2 x d, PAB Ph), 7,50, 7,68
** / 25 ja 7,90 (kukin 1H, m, DOX Ph), 9,15 (1H, br s, PAB NH) ; MS
(FAB) : 1209 (M+Na)+, 1224 (M+K)+; HRMS (FAB) : tarkka massa '·’ 1 laskettu C62H67N5O19: lie: 1186,4509; havaittu: 1186,4463.
• 1 I
• · ! · · I » 77 116038
Esimerkki 9 Z-Phe-Lys-PABC-DOX-HCl:n valmistus (9)
Yhdisteitä Z-Phe-N£-alloc-Lys-PABC-DOX (8) (34,9 mg, 29,4 pmol) ja (PPh3)2PdCl2 (0,6 mg, 3 %) kuivassa THFrssä 5 (1 ml) käsiteltiin argonin paineessa ja huoneenlämpötilas sa etikkahapolla (3,5 μΐ, 2 ekv.) ja sitten Bu3SnH:lla (10 μΐ, 1,2 ekv.)· Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. 1,5 tuntia ja käsiteltiin sitten 1 M HCl:llä eetterissä (60 μΐ, 2 ekv.). Seos pidettiin pakastimessa n. 10 yksi tunti ja sitten raaka oranssinen kiinteä aine kerättiin suodattamalla ja pestiin toistuvasti eetterillä. Kiinteä aine pestiin huokoslasisuodattimen läpi 5:1 CH2C12/CH30H:11a ja sitten suodos haihdutettiin. Jäännös sonikoitiin metanolissa (5 ml) liuottamaan niin paljon 15 kuin mahdollista ja suodatettiin sitten liukenemattoman punaisen sivutuotteen poistamiseksi. Suodos haihdutettiin antamaan oranssinpunainen kiinteä aine (25,1 mg, 75 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D): δ 1,18 (2H, d, sokeri CH3), 1,34, 1,65 ja 1,73 (6H, m, Lys CH2), 2,14 (2H, m, sokeri CH2), 2,81 20 (2H, m, CH2NH3+, 3,76 (1H, m, sokeri HO-CH), 3,98 (3H, s, 0CH3), 4,05 (1H, m, HN-CH), 4,38 ja 4,45 (kumpikin 1H, m, ; “ Phe ja Lys CH), 4,67 (2H, s, C0-CH2-0H), 4,85 (1H, m, ano-
meerinen CH), 7,04 ja 7,20 (10H, m, Z ja Phe Ph), 7,14 ja \'Ί 7,43 (4H, m, PAB Ph), 7,30, 7,69 ja 7,92 (kukin 1H, m, DOX
25 Ph); HPLC (C-18, 15 cm:n pylväs, 8:2 MeOH/50 mM Et3N-HC02H ·;· puskuri (pH 2,8), 1 ml/min., 495 nm): yksittäinen huippu, retentioaika 7,1 - 7,2 min.; MS (FAB): 1102 (MH+), 1124 (M+Na)*; HRMS (FAB): tarkka massa laskettu C58H64N5017:lie: : .·. 1102,4297; havaittu: 1102,4260.
• * t 30 Esimerkki 10 Z-Val-NHS:n valmistus (10)
Yhdisteitä Z-Val (699,4 mg, 2,78 mmol) ja NHS (352,4 mg, 1,1 ekv.) THF:ssä (20 ml) käsiteltiin n. 0 °C:ssa DCC:lla (632 mg, 1,1 ekv.). Reaktioseosta käsi-35 teltiin kuten edellä on kuvattu yhdisteelle Z-Phe-NHS (4) 78 116038 antamaan tuote lasimaisena kiinteänä aineena, jota käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman jatkopuhdistusta. 1H-NMR 6 1,03 (6H, 2 x d, Vai CH3), 2,31 (1H, m, Vai CH3-CH), 2,82 (4H, s, NHS CH2), 4,65 (1H, AB Q, Vai CO-CH), 5,12 (2H, s, 5 Z CH2), 5,30 (1H, d, NH), 7,34 (5H, m, Ph).
Esimerkki 11 Z-Val-NE-alloc-Lys:in valmistus (11)
Yhdiste Z-Val-NHS (3Ό) (n. 2,78 mmol) DME:ssä (30 ml) lisättiin liuokseen, jossa oli Ne-alloc-Lys-TFA:ta 10 (3) (958,3 mg, 1 ekv. ) ja NaHC03:ia (468 mg, 2 ekv. ) vedes sä (20 ml). Reaktiseosta käsiteltiin kuten edellä on kuvattu yhdisteelle Z-Phe-N€-alloc-Lys (5) antamaan tuote valkoisena kiintenä aineena (1,2855 g, kvantitatiivinen). XH-NMR (CDC13/CD30D): δ 0,89 (6H, 2 x d, Vai CH3), 1,30, 15 1,42, 1,62 ja 1,81 (6H, m, Lys CH2), 2,03 (1H, m, Vai CH3- CH), 3,07 (2H, m, Lys N-CH2), 3,92 (1H, AB q, Lys CH), 4,42 (1H, m, Vai CO-CH), 4,49 (2H, d, allyyli 0-CH2), 5,06 (2H, s, Z CH2), 5,19 (2H, q, vinyyli CH2), 5,82 (1H, m, vinyyli CH), 7,28 (5H, m, Ph); MS (FAB): 949 (MH+), 971 (M+Na) + , 20 987 (M+K) + ;
Anal, laskettu C23H33N307:lie; C-59,60, H-7,18, N-9,07; ’‘ Havaittu: C-59,94, H-7,31, N-8,90.
Esimerkki 12 > Z-Val-Ne-alloc-Lys-PAB-OH:n valmistus (12) 25 Yhdistettä Z-Val-N£-alloc-Lys (11) (587,9 mg, 1,27 -·· mmol) ja p-aminobentsyylialkoholia (172 mg, 1,1 ekv.) * * * t . THF:ssä (20 ml) käsiteltiin huoneenlämpötilassa EEDQrlla (345 mg, 1,1 ekv.). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilas-. sa 16 tuntia. Käsittely kuten edellä on kuvattu yhdisteel- 30 le Z-Phe-N£-alloc-Lys-PAB-OH (6) antoi tuotteen valkoisena ;* kiinteänä aineena (591,0 mg, 82 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D): 6 0,86 (6H, m, Vai CH3), 1,24 - 1,67 (6H, m, Lys CH2), 2,03 (m, 1H, Vai CH3-CH), 3,08 (2H, m, Lys N-CH2), 4,00 (1H, m,
> > I
,Λ Lys CH), 4,47 (3H, m, Vai CO-CH ja allyyli 0-CH2), 4,57 ‘ \ 35 (2H, s, PAB-CH2-0H), 5,05 (2H, s, Z CH2), 5,19 (2H, q 79 116038 vinyyli CH2), 5,81 (1H, m, vinyyli CH), 7,26 ja 7,43 (4H, m, PAB Ph), 7,30 (5H, s, Z Ph); MS (FAB): 569 (MH) + , 591 (M+Na)\ 607 (M+K)\·
Anal, laskettu C30H40N4O7-l/2 H20:lle: 5 C-62,38, H-7,15, N-9,70;
Havaittu: C-62,40, H-7,22, N-9,79.
Esimerkki 13 Z-Val-NE-alloc-Lys-PÄBC-PNP:n valmistus (13) Yhdistettä Z-Val-N£-Val-Lys-PAB-OH (12) (297,4 mg, 10 523 μπιοί) ja p-nitrofenyylikloroformiaattia (264 mg, 2,5 ekv. ) CH2Cl2:ssa (15 ml) käsiteltiin huoneenlämpötilassa pyridiinillä (106 μΐ, 2,5 ekv.). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. 16 tuntia. Käsittely kuten edellä on kuvattu yhdisteelle Z-Phe-Ne-alloc-Lys-PABC-PNP (7) antoi 15 tuotteen valkoisena kiinteänä aineena (271,0 mg, 71 %). 1H-NMR (CDCI3/CD3OD): δ 0,91 (6H, m, Vai CH3), 1,33 - 1,87 (6H, Lys CH2), 2,02 (1H, m, Vai CH3-CH), 3,08 (2H, m, Lys N-CH2), 3,95 (1H, m, Lys CH), 4,41 (1H, m, Vai CO-CH), 4,48 (2H, d, allyyli 0-CH2), 5,06 (2H, s, Z CH2), 5,17 (2H, q, 20 vinyyli CH2), 5,20 (2H, s, PAB CH2), 5,82 (1H, m, vinyyli CH), 7,23 ja 7,58 (4H, m, PAB Ph), 7,30 (5H, m, Z Ph), 7,38 ja 8,31 (4H, m, PNP Ph); MS (FAB): 734 (MH*), 756 .· (M+Na)*, 772 (M+K)*; tarkka massa laskettu ¢37^^50^:116: >, ! 734,3037; havaittu: 734,3036.
: 25 Esimerkki 14 Z-Val-NE-alloc-Lys-PÄBC-DOX: in valmistus (14) . Yhdisteitä Z-Val-Ne-alloc-Lys-PABC-PNP (13) (260,0 mg, 354 μπιοί) ja D0X-HC1 (216 mg, 1,05 ekv.) NMP:ssä ; (12 ml) käsiteltiin huoneenlämpötilassa trietyyliamiinilla 30 (52 μΐ). Seoksen annettiin seistä pimeässä kaksi päivää.
Käsittely kuten edellä on kuvattu yhdisteelle Z-Phe-N£-al- loc-Lys-PABC-DOX (8) antoi tuotteen oranssisena kiinteänä aineena (278,0 mg, 69 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D): 6 0,83 (6H, m, Vai CH3), 1,18 (3H, d, sokeri CH3), 1,29, 1,41, 1,63 ja 35 1,79 (6H, m, Lys CH2), 1,72 (2H, m, D-rengas CH2), 1,98 80 116038 (1H, m, Vai CH3-CH), 2,14 (2H, D-rengas CH2), 3,03 (2H, q, sokeri CH2), 3,02 (2H, m, Lys N-CH2), 3,52 (1H, m, sokeri HO-CH), 3,76 (1H, m, sokeri N-CH), 3,94 (1H, m, Lys CH), 3,99 (3H, s, O-CH3), 4,39 (1H, m, Vai CO-CH), 4,42 (2H, d, 5 allyyli 0-CH2), 4,69 (2H, s, PAB CH2), 4,88 (2H, m, Z CH2), 5,01 (2H, d, C0-CH2-0H), 5,14 (2H, q, vinyyli CH2), 5,18 (lH,m, anomeerinen CH), 5,41 (1H, Br, DOX Ph-CH), 5,80 (1H, m, vinyyli CH), 7,13 ja 7,40 (4H, PAB Ph), 7,26 (5H, s, Z Ph), 7,32, 7,70 ja 7,93 (kukin 1H, m, DOX Ph), 9,25 10 (1H, br, PAB NH); MS (FAB): 1160 (M+Na) + , 1176 (M+K)*; tarkka massa laskettu C58H67N5Oig:lie: 1160,4328; havaittu: 1160,4358.
Esimerkki 15 Z-Val-Lys-PABC-DOX-HCl:n valmistus (15) 15 Yhdistettä Z-Val-NE-alloc-Lys-PABC-DOX (Γ4) (84,3 mg, 74,06 μπιοί) THF:ssä (2 ml) argonin paineessa huoneenlämpötilassa käsiteltiin Pd(PPh3)4:llä (220 μΐ liuosta, jossa oli yhdisteitä Pd2dba3 (4,7 mg, 5,13 μπιοί) ja PPh3 (13,5 mg, 10 ekv.) THF:ssä (1 ml) argonin paineessa), 20 etikkahapolla (11 μΐ, 2,5 ekv.) ja tributyylitinahydridil-. lä (30 μΐ, 1,5 ekv.). Seosta sekoitettiin huoneenlämpöti lassa n. yksi tunti pimeässä, jona aikana alkoi muodostua oranssinen kiinteä aine. Seos laimennettiin eetterillä (2 ml), mitä seurasi 1 M HC1 eetterissä (1 ml) ja sitten • > 25 lisää eetteriä (25 ml). Saatua suspensiota sonikoitiin /1' hetki ja suodatettiin sitten. Oranssinen kiinteä aine pes- : : : tiin useita kertoja eetterillä ja liuotettiin sitten 5:1 CH2C12/CH30H: iin. Tähän lisättiin piimaata (n. 2 g) ja : liuottimet haihdutettiin. Saatu kiinteä aine lisättiin • * « > < * » .··, 30 kuivana piimaapylvääseen (lietteestä, jossa oli 100:1 CH2C12/CH30H). Pylväs eluoitiin 1) 100:1 ja 2) 10:1 : ·“ CH2C12/CH30H: 11a antamaan tuote oranssisena kiinteänä aineena (58,5 mg, 72,4 %). 1H-NMR (valitut huiput) (CDCI3/CD3OD): δ (allyylihuippujen häviäminen) 0,83 (6H, 35 m, Vai CH3), 1,20 (3H, d, sokeri CH3), 2,02 (1H, m. Vai 81 116038 CH3-CH), 4,01 (3H, s, 0-CH3), 7,10 - 7,57 (9H, m, Ph), 7,32 - 7,72 ja 7,91 (kukin 1H, m, DOX Ph); HPLC (C-18, 15 cm:n pylväs, 8:2 MeOH/50 mM Et3N-HC02H puskuri (pH 2,8), 1 ml/min., 495 nm): yksi huippu, retentioaika 6,1 - 6,4 5 min.; MS (FAB) 1054 (MH) + ; tarkka massa laskettu C54H64N5017: 1054,4297; havaittu: 1054,4283.
Esimerkki 16
Alloc-D-Phe:n valmistus (16)
Yhdisteitä D-Phe (2,0203 g, 12,29 mmol) ja NaHC03 10 (1,08 g, 1,05 ekv.) vedessä (30 ml) käsiteltiin diallyyli- dikarbonaatilla (2,13 ml, 1,05 ekv.) DME:ssä (30 ml). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. 16 tuntia ja kaadettiin sitten 15-%:iseen sitruunahappoon. Saatu suspensio uutettiin EtOAc:llä (2 x 100 ml). Yhdistetyt orgaa-15 niset kerrokset pestiin vedellä (3 x 100 ml) ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin antamaan väritön vaahto, jota puhdistettiin tarpeeksi seuraavaa vaihetta varten (3,002 g, 98 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D): δ 3,13 (2H, AB q, Phe CH2), 4,52 (2H, d, CH2-0), 4,64 (1H, q, Phe CH), 20 5,20 (2H, q, vinyyli CH2), 5,85 (1H, m, vinyyli CH), 7,21 (5H, m, Phe); MS (DCI): 250 (MH) + , 192 (M-C3H50) + ; " Anal, laskettu C13H15N04-H20: lie: C-58,42, H-6,40, N-5,24; : ·' Havaittu: C-58,81, H-5,87, N-5,36.
Esimerkki 17 ·.'·· 25 Alloc-D-Phe-NHS:n valmistus (17)
Yhdisteitä alloc-D-Phe (16) (3,002 g, 12,04 mmol) : : : ja NHS (1,525 g, 1,1 ekv.) CH2Cl2:ssa käsiteltiin noin 0 °C:ssa DCC:llä (2,733 g, 1,1 ekv.). Jäähauteen annettiin : lämmetä huoneenlämpötilaan ja seosta sekoitettiin huoneen- ,·*·, 30 lämpötilassa n. 16 tuntia. Käsittely, kuten edellä on ku- ·* vattu yhdisteelle Z-Phe-NHS (4), antoi tuotteen värittömä- > “ nä vaahtona, jota käytettiin ilman jatkopuhdistusta J (4,045 g, 97 %).
82 116038
Esimerkki 18
Alloc-D-Phe-Phe:n valmistus (18)
Yhdistettä alloc-D-Phe-NHS (17) (1,7654 g, 5,10 mmol) DME:ssä (30 ml) käsiteltiin huoneenlämpötilassa liu-5 oksella, jossa oli Phe (1,263 g, 1,5 ekv.) ja NaHC03 (642,3 mg, 1,5 ekv.) vedessä (20 ml). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. 16 tuntia. Sitten seos kaadettiin 15-%:iseen sitruunahappoon (100 ml) ja saatu suspensio uutettiin EtOAc:ssä (2 x 100 ml). Yhdistetyt orgaaniset 10 kerrokset pestiin vedellä (3x) ja suolaliuoksella ja kuivattiin ja haihdutettiin sitten antamaan väritön lasimai-nen aine. Tähän lisättiin eetteriä (30 ml) ja seosta soni-koitiin huoneenlämpötilassa n. 15 minuuttia ja pidettiin sitten pakastimessa n. yksi tunti. Kiinteä tuote kerättiin 15 suodattamalla ja pestiin eetterillä (1,6973 g, 84 %). ^-NMR (CDCI3/CD3OD): δ 2,83 - 3,16 (4H, m, Ph-CH2), 4,45 (2H, d, CH2-0), 4,63 ja 4,89 (kumpikin 1H, m, N-CH), 5,21 (2H, q, vinyyli CH2), 5,81 (1H, m, vinyyli CH), 6,93-7,34 (10H, m, Ph); MS (DCI): 397 (MH) + ; 20 Anal, laskettu C22H24N205:lie: C-66,65, H-6,10, N-7,07; Havaittu: C-66,42, H-6,19, N-7,09.
Esimerkki 19
Alloc-D-Phe-Phe-NHS:n valmistus (19) , i Yhdisteitä alloc-D-Phe-Phe (18) (1,0151 g, 2,60 ·, · 25 mmol) ja NHS (324,2 mg, 1,1 ekv.) CH2Cl2:ssa (25 ml) "[y 0 °C:ssa käsiteltiin DCC:lla (555 mg, 1,05 ekv.). Jäähau- :T: teen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan ja seosta sekoi tettiin n. 18 tuntia. Kiinteä DCU poistettiin suodattamal-j la ja liuotin haihdutettiin. Jäännös liuotettiin EtOAc:hen ,··, 30 ja liuos pestiin vedellä (2x) ja suolaliuoksella, kuivat- • * • tiin ja haihdutettiin antamaan valkoinen kiinteä aine, jota käytettiin ilman jatkopuhdistusta (1,2897 g, 100 %).
83 116038
Esimerkki 20
Alloc-D-Phe-Phe-Ne-alloc-Lys:in valmistus (20)
Yhdistettä alloc-D-Phe-Phe-NHS (19) (1,2897 g, 2,61 mmol) DME:ssä (40 ml) lisättiin liuokseen, jossa oli yh-5 disteitä Ne-alloc-Lys-TFA (945 mg, 1,05 ekv.) ja NaHC03 (461 mg, 2,1 ekv.) vedessä (20 ml). Seosta sekoitettiin voimakkaasti huoneenlämpötilassa n. 16 tuntia. Käsittely, kuten edellä on kuvattu yhdisteelle alloc-D-Phe-Phe (18), antoi raa'an valkoisen kiinteän aineen. Tämä suspendoitiin 10 eetteriin ja vaihtoehtoisesti sonikoitiin ja kuumennettiin n. 40 °C:ssa useita minuutteja. Sitten seos pidettiin n. 4 °C:ssa n. kaksi tuntia ja suodatettiin valkoisen kiinteän tuotteen poistamiseksi, joka pestiin kylmällä eetterillä (1,2046 g, 76 %). "H-NMR (CDC13/CD30D): δ 1,21 - 1,94 15 (6H, 4 x m, Lys CH2), 2,79 ja 2,91 (kumpikin 2H, m, Phe CH2), 3,08 (2H, m, N-CH2), 4,29 (1H, m, Lys CH), 4,38 ja 4,59 (kumpikin 1H, m, Phe CH), 4,45 ja 4,53 (kumpikin 2H, d, allyyli 0-CH2), 5,20 (4H, m, vinyyli CH2), 5,85 (2H, m, vinyyli CH), 7,06 - 7,27 (10 H, m, Ph); MS (FAB): 609 20 (MH)+, 631 (M+Na) + , 647 (M+K) + ;
Anal, laskettu C32H40N4O8: lie: C-63,14, H-6,62, N-9,20; Havaittu: C-63,05, H-6,78, N-9,25.
Esimerkki 21
Alloc-D-Phe-Phe-Ne-alloc-Lys-PAB-OH:n valmistus (21) : 25 Yhdistettä alloc-D-Phe-Phe-N€-alloc-Lys (20) (616,8 ·.·· mg, 1,013 mmol) ja p-aminobentsyylialkoholia (137,3 mg, * » » > ;'j'; 1,1 ekv.) THF:ssä (12 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin EEDQ:lla (276 mg, 1,1 ekv.). Seosta sekoitettiin huoneen-: lämpötilassa n. 18 tuntia. Käsittely kuten edellä yhdis- i » « ‘1!.’ 30 teelle Z-Phe-N€-alloc-Lys-PAB-OH (6) antoi tuotteen val-
; koisena kiinteänä aineena (685,7 mg, 95 %). 1H-NMR
(CDC13/CD30D): 6 1,20 - 1,98 (6H, 4 x m, Lys CH2), 2,95 (4H, m, Phe CH2), 3,08 (2H, m, N-CH2), 4,25 (2H, AB q, allyyli 0-CH2), 4,49 (2H, d, allyyli 0-CH2), 4,57 (2H, s, PAB CH2), 35 5,15 (4H, m, vinyyli CH2), 5,62 ja 5,87 (kumpikin 1H, m, 84 116038 vinyyli CH), 6,96 ja 7,54 (kumpikin 2H, m, PAB Ph), 7,06 -7,31 (10H, m, Ph); MS (FAB): 714 (MH) + , 736 (M+Na) + , 752 (M+K) + ; tarkka massa laskettuna C39H48N508: lie: 714,3503; havaittu: 714,3494; 5 Anal, laskettu C39H47N508-H20: lie: C-64,01, H-6,75, N-9,57; Havaittu: C-64,39, H-6,63, N-9,54.
Esimerkki 22
Alloc-D-Phe-Phe-Ne-alloc-Lys-PABC-PNP: n valmistus (22) 10 Yhdistettä alloc-D-Phe-Phe-Ne-alloc-Lys-PAB-OH (21) (330,8 mg, 463,4 μπιοί) ja p-nitrofenyylikloroformiaattia (140,1 mg, 1,5 ekv.) CH2Cl2:ssa (20 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin kuivalla pyridiinillä (56,2 μΐ, 1,5 ekv.). Käsittely, kuten edellä on kuvattu yhdisteelle Z-Phe-Ne-15 alloc-Lys-PABC-PNP (7), antoi tuotteen valkoisena kiinteänä aineena (379,0 mg, 93 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D): δ 1,20 -2,00 (6H, 4 x m, Lys CH2), 2,97 (4H, m, Phe CH2), 3,10 (2H, m, N-CH2), 4,21 (2H, AB q, allyyli 0-CH2), 4,30, 4,52 ja 4,67 (kukin 1H, m, N-CH), 4,49 (2H, d, allyyli 0-CH2), 5,10 20 (2H, m, vinyyli CH2), 5,22 (2H, s, PAB CH2), 5,58 ja 5,87 (kumpikin 1H, m, vinyyli CH), 6,93 ja 7,66 (kumpikin 2H, m, PAB Ph), 7,04 - 7,25 (10H, m. Ph), 7,32 ja 8,04 (kumpi-: kin 2H, m, PNP Ph); MS (FAB): 879 (MH)\ 901 (M+Na)% 917 ·/ (M+K) + ; tarkka massa laskettuna C46H51N6012:lle: 879,3565; : : 25 havaittu: 879, 3533.
- Esimerkki 23
Alloc-D-Phe-Phe-H€-alloc-Lys-PABC-DOX:in valmistus (23)
: Yhdisteitä alloc-D-Phe-Phe-Ne-alloc-Lys-PABC-PNP
30 (22) (379,0 mg, 431,2 mmol) ja D0X-HC1 (262,6 mg, 1,05 ekv.) NMP:ssä (10 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin tri-• ’·· etyyliamiinilla (63 ml, 1,05 ekv.). Seos pidettiin huo- : : neenlämpötilassa pimeässä kaksi päivää ja laimennettiin > sitten 10-%:isella i-propyylialkoholi/EtOAc:llä (150 ml).
35 Saatu liuos pestiin vedellä (4x) ja suolaliuoksella, suo- 85 116038 elätettiin pienen määrän oranssista kiinteää sivutuotetta poistamiseksi ja haihdutettiin sitten antaman oranssinen kiinteä aine. Tämä kromatografoitiin piidioksidilla eluoi-den 1) 30:1 ja 2) 15:1 CH2C12/CH30H: 11a antamaan tuote 5 oranssisena kiinteänä aineena (418,8 mg, 76 %). 1H-NMR (CDCI3/CD3OD): δ 1,21 (3H, d, sokeri CH3), 1,28 - 1,96 (6H, 4 x m, Lys CH2), 1,76 (2H, m, D-rengas CH2), 2,18 (D-rengas CH2), 2,87 (2H, m, sokeri CH2), 3,05 (2H, m, N-CH2), 3,55 (1H, s, sokeri HO-CH), 3,78 (1H, m, sokeri N-CH), 3,99 10 (3H, s, CH3-O), 4,10 (1H, m, sokeri CH3-CH), 4,26 (2H, m, allyyli 0-CH2), 4,40 (3H, m, CO-CH), 4,45 (2H, d, allyyli 0-CH2), 4,70 (2H, s, CO-CH2-OH), 4,89 (2H, m, PABCH2), 5,16 (4H, m, vinyyli CH2), 5,20 (1H, s, anomeerinen CH), 5,41 (1H, s, DOX Ph-CH), 5,52 ja 5,80 (kumpikin 1H, m, vinyyli 15 CH), 6,85 - 7,52 (14H, m, Ph), 7,32, 7,72 ja 7,97 (kukin 1H, m, DOX Ph); MS (FAB_): 1282,4 (MH)'; tarkka massa laskettuna C67H74N602Na: lie: 1305,4856; havaittu: 1305,4877.
Esimerkki 24 D-Phe-Phe-Lys-PABC-D0X-2-HCl:n valmistus (24) 20 Yhdistettä alloc-D-Phe-N6-alloc-Lys-PABC-DOX (23) (164,0 mg, 127,8 pmol) 2:1 CH2C12/CH30H:ssa (4 ml), josta * '· kaasu oli poistettu, käsiteltiin huoneenlämpötilassa ja : · : argonin paineessa etikkahapolla (37 μΐ, 5 ekv.) ja sitten 460 pl:lla liuosta, jossa oli Pd(PPh3)4 (Pd2dba3 (6,4 mg) ja f. : 25 PPh3 (18 mg) 2:1 CH2Cl2/CH3OH:ssä (1 ml), josta kaasu oli poistettu). Tähän lisättiin trietyylisilaania (61 μΐ, 3 ekv.) ja seosta sekoitettiin pimeässä n. 16 tuntia huoneenlämpötilassa. Liuottimet poistettiin rotavaporissa , (40 °C) ja oranssista lasimaista jäännöstä käsiteltiin · 30 eetterillä (2 ml) ja 1 M HCl:llä eetterissä (1 ml). Tätä '··* seosta sonikoitiin useita minuutteja. Saatu oranssinen kiinteä aine kerättiin suodattamalla ja otettiin sitten talteen veteen niin hyvin kuin mahdollista. Liukenematon aines suodatettiin pois ja suodos haihdutettiin kuiviin. 35 Jäännös kromatografoitiin piimaalla, eluoiden 1) 5:1, 86 116038 2) 12:1 ja 3) 5:1 CH2C12/CH30H: 11a. Ensimmäisellä liuotin-järjestelmällä eluoitiin reagoimattomat aineet, toisessa eluoinnissa aine (mono-suojauksenpoisto) ja tuote eluoitiin kolmannessa (100,4 mg, 66 %). 1H-NMR (CDCl3/CD3OD): 5 δ 1,12 (3H, d, sokeri CH3), 1,00 - 1,90 (8H, m, Lys CH2 ja D-rengas CH2), 2,07 (2H, m, D-rengas CH2), 2,55 - 3,16 (8H, m, +H3N-CH2 sokeri CH2, Phe CH2), 3,45 (1H, s, sokeri H0-CH), 3,70 (1H, m, sokeri N-CH), 3,90 (3H, s, 0-CH3), 4,21, 4,33 ja 4,43 (kukin 1H, m, CO-CH), 4,61 (2H, s, C0-CH2-0H), 10 4,80 (2H, m, PAB CH2), 5,12 (1H, brs, anomeerinen CH), 5,33 (1H, brs, DOX Ph-CH), 6,80 - 7,90 (17H, m, Ph); HPLC: (C-18, 15 cm:n pylväs, 8:2 Me0H/50 mM Et3N-HC02H puskuri, pH 2,8), 1 ml/min., 495 nm): yksi huippu, retentioaika 5,5 - 5,8 min.; MS (FAB'): 1114,6 (MH)'.
15 Esimerkki 25 Z-Val-Cit:n valmistus (26)
Liuokseen, jossa oli Z-Val-NHS (10) (2,98 g, 8,566 mmol) DME:ssä (25 ml) huoneenlämpötilassa, lisättiin liuos, jossa oli sitrulliinia (2,25 g, 1,5 ekv.) ja NaHC03 20 (1,08 g, 1,5 ekv.) vedessä (25ml). Seosta sekoitettiin voimakkaasti kaksi päivää. Vettä (20 ml), joka sisälsi ’· 2 ml kyllästettyä NaHC03 lisättiin ja seos pestiin : ' : EtOAc:llä ja tehtiin happamaksi pH-arvoon 3 - 10-%:isella HCl:llä. Saatu suspensio uutettiin 10-%:isella Bu-OH/ 25 EtOAc:llä (3x). Yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivattiin ja haihdutettiin antamaan valkoinen kiinteä aine (3,39 g, 97 %). ^-NMR (CDC13/CD30D): 6 0,73 (6H, q. Vai CH3), 1,31, 1,46 ja 1,63 (4H, m, Cit CH2), 1,87 (1H, m, Vai CH3-CH), . . 2,88 (2H, m, N-CH2), 3,72 (1H, AB q, Cit CH), 4,17 (1H, m,
30 Vai COCH), 4,86 (2H, s, Z CH2), 7,10 (5H, m, Z Ph); MS
'··’ (FAB): 409 (MH)+, 431 (M+Na)*, 447 (M+K)*; tarkka massa las- kettuna C19H29N406:lie: 409,2087; havaittu: 409,2086.
87 116038
Esimerkki 26 Z-Val-Cit-PAB-OH:n valmistus (27)
Yhdistettä Z-Val-Cit (26) (1,0397 g, 2,545 mmol) ja p-aminobentsyylialkoholia (470,2 mg, 1,5 ekv.) THFissä 5 (10 ml) käsiteltiin huoneenlämpötilassa yhdisteellä EEDQ
(944,2 mg, 1,5 ekv.)· Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. 16 tuntia ja laimennettiin sitten 10-%:isella i-Pr-OH/EtOAc:llä (100 ml). Tähän lisättiin 10-%:ista sitruunahappoa, vettä ja suolaliuosta, kuivattiin ja haihdu-10 tettiin. Vaaleankeltaista kiinteää jäännöstä sonikoitiin eetterissä 15 minuuttia ja raaka kiinteä tuote kerättiin suodattamalla (954,2 mg, 73 %). ^-NMR (CDC13/CD30D): δ 0,79 (6H, q, Vai CH3), 1,37, 1,53 ja 1,72 (4H, m, Cit CH2), 1,92 (1H, m, Vai CH3-CH), 3,00 (2H, m, N-CH2), 3,85 (1H, m, Cit 15 CH), 4,41 (1H, m, Vai COCH), 4,45 (2H, s, PAB CH2), 4,95 (2H, m, Z CH2), 7,08 - 7,40 (9H, m, Ph); MS (FAB): 514 (MH)+, 536 (M+Na) + , 552 (M+K) + ;
Anal, laskettu C26H35N506-H20:lie; C-58,74, H-7,01, N-13,17; Havaittu; C-59,01, H-6,62, N-13,17.
20 Esimerkki 27 Z-Val-Cit-PABC-PNP:n valmistus (28)
Yhdistettä Z-Val-Cit-PAB-OH (27) (383,0 mg, 745,7 ; pmol) ja p-nitrofenyylikloroformiaattia (225,5 mg, 1,5 >*/.: ekv.) THF:ssä (10 ml) ja CH2C12 (5 ml) käsiteltiin huoneen- 25 lämpötilassa pyridiinillä (91 μΐ, 1,5 ekv.). Käsittely *;· kuten edellä yhdisteelle Z-Phe-NE-alloc-Lys-PABC-PNP (7) antoi raa'an vaaleankeltaisen kiinteän aineen, joka kroma-tografoitiin piidioksidilla eluoiden 1) 30:1 ja 2) 12:1 . CH2C12/CH30H: 11a antamaan tuote vaikeahkona kiinteänä ainee- \\\: 30 na (440,3 mg, 87 %). ^-NMR (CDC13/CD30D); δ 0,88 (6H, m, ' ; ' Vai CH3), 1,42, 1,61 ja 1,80 (4H, m, Cit CH2), 2,02 (1H, f·,. m, Vai CH3-CH), 3,08 (2H, m, N-CH2), 3,99 (1H, m, Cit CH), 4,51 (1H, m, Vai COCH), 5,00 (2H, m, Z CH2), 7,20 - 7,57 (9H, m, Ph), 7,30 ja 8,20 (kumpikin 2H, m, PNP Ph); MS 35 (FAB): 679 (MH) + , 701 (M+Na) + , 717 (M+K) + ; tarkka massa laskettuna C33H39N6O10:lie: 679,2728; havaittu: 679, 2720.
88 116038
Esimerkki 28 Z-Val-Cit-PABC-DOX:in valmistus (29)
Yhdistettä Z-Val-Cit-PABC-PNP (28) (126,9 mg, 187 μιηοΐ) ja DOX-HC1 (119,3 mg, 1,1 ekv. ) NMP:ssä (5 ml) käsi-5 teltiin huoneenlämpötilassa trietyyliamiinilla (29 μΐ, 1,1 ekv.). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa pimeässä kaksi päivää. Käsittely, kuten edellä on kuvattu yhdisteelle alloc-D-Phe-Phe-Ne-alloc-Lys-PABC-DOX (23), antoi raa'an oranssisen kiinteän aineen. Tämä kromatografoi-10 tiin piidioksidilla eluoiden 1) 12:1, 2) 8:1 ja 3) 5:1 CH2C12/CH30H:11a antamaan tuote punaoranssisena kiinteänä aineena (158,0 mg, 78 %). ^-NMR (CDC13/CD30D): δ 0,74 (6H, m. Vai CH3), 1,07 (3H, d, sokeri CH3), 1,28 - 1,88 (4H, m, Cit CH2), 1,64 ja 2,08 (kumpikin 2H, m, D-rengas CH2), 1,88 15 (1H, m, Vai CH3-CH), 2,87 (2H, m, sokeri CH2), 3,42 (1H, brs, sokeri HO-CH), 3,95 (1H, m, sokeri N-CH), 4,11 (3H, s, 0-CH3), 4,38 (2H, m, CO-CH), 4,58 (2H, s, CO-CH2-OH), 4,78 (2H, s, PAB CH2), 4,90 (2H, s, Z CH2), 5,04 (1H, brs, anomeerinen CH), 5,30 (1H, brs, DOX Ph-CH), 7,00 - 7,86 20 (12H, m. Ph), 9,31 (1H, brs, PAB NH); HPLC: (C-18, 15 cm:n pylväs, 8:2 Me0H/50 mM Et3N-HC02H puskuri, pH 2,8), : ’*· 1 ml/min., 495 nm): yksittäinen huippu, retentioaika • 3,65 - 3,75 min.; MS (FAB_): 182,8 (M_); tarkka massa las- • /.·’ kettuna C54H63N6018:lle: 1083,4199; havaittu: 1083,4161.
:*·.· 25 Esimerkki 29 Z-Phe-Nc-alloc-Lys-PABC-2 ’-taksolin valmistus (30)
Taksolia (15,8 mg, 18,5 pmol) ja yhdistettä Z-Phe-Ne-alloc-Lys-PABC-PNP (7) (14,5 mg, 1 ekv.) CH2Cl2:ssa . , (2 ml) käsiteltiin huoneenlämpötilassa DMAP:lla (2,5 mg, 30 1,1 ekv.). Kahden päivän kuluttua huoneenlämpötilassa • | ohutkerroskromatografia (piidioksidi; 25:1 CH2C12/CH30H) I * . osoitti, että reaktio oli täydellinen. Et0Ac:tä (25 ml) lisättiin ja seos pestiin 10-%:isella sitruunahapolla, vedellä, suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin an-35 tamaan vaaleankeltainen lasimainen aine. Tämä kromatogra- 89 116038 foitiin piidioksidilla eluoiden 30:1 CH2C12/CH30H: 11a antamaan tuote värittömänä lasimaisena aineena (26,1 mg, 94 %). ^-NMR (valitut huiput): δ 1,13, 1,23, 1,68 ja 1,81 (kukin 3H, s, taksoli CH3), 2,20 ja 2,46 (kumpikin 3H, s, 5 Ac CH3), 3,13 (2H, m, CON-CH2), 4,25 (2H, Ab q, C-20 CH2), 4,47 (1H, m, C-7 CH), 4,52 (2H, d, alloc 0-CH2), 4,97 (2H, m, Z CH2), 5,05 (2H, s, PAB CH2), 5,12 (2H, m, vinyyli CH2), 5,45 (1H, d, C-2' CH), 5,88 (1H, m, vinyyli CH), 7,10 -8,17 (29H, m, Ph), 8,59 (1H, s, PABC NH); MS (ionisuihku): 10 1496,8 (MH) + ; 1519,6 (M+Na) + ; tarkka massa laskettuna C82H89N5022:He: 1496,6078; havaittu: 1496,6082.
Esimerkki 30 Z-Phe-Lys-PABC-2*-taksoli-HCl:n valmisstus (31) Z-Phe-Ne-alloc-lys-PABC-2'-taksolia (30) (18,1 mg, 15 12,09 pmol) kuivassa THF:ssä (1 ml) huneenlämpötilassa argonin paineessa käsiteltiin AcOH:lla (1,7 μΐ, 2,5 ekv.), Pd(PPh3)4:llä (45 μΐ liuosta, jossa oli yhdisteitä Pd2dba3 (6,2 mg, 6,77 μπιοί) ja PPh3 (17,8 mg, 10 ekv.) kuivassa THF:ssä (1 ml)) ja Bu3SNH:llä (5 μΐ, 1,5 ekv.). Noin 30 20 minuutin kuluttua lisää Bu3SnH (5 μΐ) lisättiin. Noin 30 minuutin kuluttua eetteriä (5 ml) ja sitten 1 M HC1 eette- '·· rissä (1 ml) lisättiin. Saatua suspensiota sonikoitiin : ’ : useita minuutteja ja sitten valkoinen kiinteä aine kerät- tiin suodattamalla ja pestiin toistuvasti eetterillä 25 (14,37 mg, 82 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D) (valitut huiput): • » 6 (allyylihuippujen katoaminen) 2,98 (2H, m, +H3N-CH2), 4,27 /!·, (2H, AB q, C-20 CH2), 4,39 (1H, m, C-7 CH), 5,02 (2H, m, Z CH2), 5,09 (2H, m, PAB CH2), 7,06 - 8,20 (29H, m, Ph); , , HPLC: (C-18, 15 cm:n pylväs, 8:2 MeOH/50 mM Et3N-HC02H pus- * 30 kuri (pH 2,8), 1 ml/min. 230 nm): yksittäinen huippu, re-
tentioaika 4,8 min. (6:4 MeCN/50 mM Et3N-HC02H puskuri ··, (pH 2,8)): yksittäinen huippu, retentioaika: 9,6 min; MS
(ionisuihku): 1213,2 (MH) + ; tarkka massa laskettuna C78H86N5°2o:He: 1412,5866; havaittu: 1412,5883.
90 116038
Esimerkki 31
Boc-Phe-NHS:n valmistus (32)
Yhdisteitä Boc-Phe (5,4257 g, 20,45 mmol) ja NHS (2,354 g, 1 ekv.) THF:ssä (55 ml) käsiteltiin n. 0 °C:ssa 5 DCC:llä (4,22 g, 1 ekv.)· Jäähauteen annettiin sulaa ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. 16 tuntia. Kiinteä DCU suodatettiin pois ja suodos haihdutettiin antamaan valkoinen kiinteä aine, jota käytettiin ilman jat-kopuhdistusta (7,2624 g, 98 %). 1H-NMR: δ 1,39 (9H, s, 10 t-Bu), 2,85 (4H, br s, NHS CH2), 3,22 (2H, m, Phe CH2), 4,94 (1H, m, CH), 7,29 (5H, m, Phe).
Esimerkki 32
Boc-Phe-Ne-Fmoc-Lys:in valmistus (33)
Yhdisteitä Ne-Fmoc-Lys (3,0651 g, 8,32 mmol) ja 15 NaHC03 ( 7 69 mg, 1,1 ekv.) vedessä (50 ml) ja DME: ssä (20 ml) käsiteltiin huoneenlämpötilassa liuoksella, jossa oli Boc-Phe-NHS (32) (3,015 g, 1 ekv.) DME:ssä (40 ml). Seosta sekoitettiin voimakkaasti huoneenlämpötilassa n. 18 tuntia ja laimennettiin sitten EtOAc:llä (100 ml) ja 20 10-%:isella sitruunahapolla. Vesipitoinen kerros uutettiin uudestaan EtOAc:llä (50 ml). Yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestiin vedellä (2x) ja suolaliuoksella, kuivattiin ja 1 ·'; haihdutettiin antamaan vaaleankeltainen kiinteä aine. Tämä liuotettiin eetteriin ja pieni määrä liukenematonta ainet- » t : 25 ta poistettiin suodattamalla. Suodos haihdutettiin kuiviin • » ja vaaleankeltainen vaahtomainen jäännös kuivattiin tyh-jössä (5,0881 g, 99 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D): 6 1,30, 1,48, 1,67 ja 1,85 (6H, m, Lys CH2), 1,35 (9H, s, t-Bu), 3,01 (2H, m, Phe CH2), 3,12 (2H, m, N-CH2), 4,18 (1H, t, Fmoc * · c : ; 30 CH), 4,36 (2H, d, Fmoc CH2), 4,41 ja 4,50 (kumpikin 1H, m, C0-CH), 7,12 - 7,77 (13H, m, Phe); MS (FAB): 616 (MH) + , 638 ;'· . (M+Na) + , 654 (M+K) + ; . Anal, laskettu C35H41N307:lie: C-68,27, H-6,71, N-6,82; , ‘ Havaittu: C-68,13, H-6,84, N-6,44.
91 116038
Esimerkki 33
Boc-Phe-Nc-Fmoc-Lys-PAB-OH:n valmistus (34)
Yhdistettä Boc-Phe-N£-Fmoc-Lys (33) (4,8207 g, 7,83 mmol) ja p-aminobentsyylialkoholia (1,061 g, 1,1 ekv. )
5 THF:ssä (50 ml) käsiteltiin huoneenlämpötilassa EEDQjlla (2,13 g, 1,1 ekv.)· Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. 16 tuntia. Käsittely, kuten edellä on kuvattu yhdisteelle Z-Phe-N£-alloc-Lys-PAB-OH (6), antoi tuotteen vaikeahkona kiinteänä aineena (4,4579 g, 79 %). ^-NMR
10 (CDCI3/CD3OD): δ 1,28, 1,48, 1,63 ja 1,84 (6H, m, Lys CH2), 1,33 (9H, s, t-Bu), 3,00 (2H, m, Phe CH2), 3,11 (2H, m, N-CH2), 4,15 (1H, t, Fmoc CH), 4,31 (2H, d, Fmoc CH2), 4,38 (2H, m, CO-CH), 4,57 (2H, s, PAB CH2), 7,08 - 7,75 (17H, m. Ph); MS (FAB): 721 (MH)\ 743 (M+Na) + , 759 (M+K) + ; 15 Anal, laskettu C42H48N407-l/2 H20:lle: C-69,12, H-6,77, N-7,68;
Havaittu: C-68,96, H-6,87, N-7,64.
Esimerkki 34 2'-Fmoc-taksolin valmistus (35) 20 Taksolia (134,6 mg, 157,6 ymol) ja yhdistettä Fmoc- NHS (58,5 mg, 1,1 ekv.) CH2Cl2:ssa (3 ml) käsiteltiin huo-neenlämpötilassa DMAPrllä (19,3 mg, 1 ekv.). Noin viiden V päivän kuluttua huoneenlämpötilassa TLC (piidioksidi; 25:1 CH2C12/CH30H) osoitti, että reaktio oli täydellinen. 25 EtOAc:tä (50 ml) lisättiin ja seos pestiin 10-%:isella sitruunahapolla, vedellä, suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin. Jäännös kromatografoitiin piidioksidilla eluoiden 35:1 CH2C12/CH30H: 11a antamaan tuote värittömänä . , lasimaisena aineena (165,6 mg, 98 %). 1H-NMR: 6 1,13, 1,24 30 ja 1,67 (kukin 3H, s, C-16, C-17 ja C-19 CH3), 1,92 (3H, s, C-18 CH3), 1,87 ja 2,52 (2H, m, C-6 CH2), 2,22 ja 2,44 :*·.. (kumpikin 3H, s, Ac CH3), 2,41 (2H, m, C-14 CH2), 2,50 (1H, d, C-7 OH), 3,82 (1H, d, C-3 CH), 4,28 - 4,51 (6H, m, C-20 CH2, C-7 CH, Fmoc CH ja CHZ), 4,98 (1H, d, C-5 CH), 5,47 : 35 (1H, d, C-2’ CH), 5,69 (1H, d, C-2 CH), 6,03 (1H, m, C-3' 92 116038 CH), 6,30 (1H, s, C-10 CH), 6,32 (1H, t, C-13 CH), 6,99 (1H, d, NH), 7,22 - 8,20 (23H, m, Ph); MS (FAB): 1076 (MH) + , 1098 (M+Na)*, 1114 (M+K) + ; tarkka massa laskettuna C26H62NOi6:lie: 1076,4069; havaittu: 1076,4031.
5 Esimerkki 35
Boc-Phe-NE-Fmoc-Lys-PABC-7-taksoli-2' -Fmoc: in valmistus (36) 2'-Fmoc-taksolia (35) (112,1 mg, 90,3 μιηοΐ) kuivassa CH2Cl2:ssa (1 ml) argonin paineessa n. 0 °C:ssa käsi-10 teltiin pyridiinillä (8 μΐ, 1,1 ekv.) ja difosgeenilla (6,5 μΐ, 0,6 ekv.). Noin 40 minuutin kuluttua Boc-Phe-NE-Fmoc-Lys-PAB-OH:ta (65,1 mg, 1 ekv.) ja DMAP:tä (0,5 mg) CH2C12 (1 ml)/pyridiinissä (0,2 ml) lisättiin. Seosta sekoitettiin n. 0 °C:ssa n. 30 minuuttia ja sitten huoneen-15 lämpötilassa n. neljä tuntia. EtOAc:tä (30 ml) lisättiin sitten ja liuos pestiin 10-%:isella sitruunahapolla (2x), vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin sitten antamaan valkoinen kiinteä aine. Tämä kromatogra-foitiin piidioksidilla eluoiden 30:1 CH2C12/CH30H: 11a anta-20 maan tuote värittömänä lasimaisena aineena (81,7 mg, 50 %, kaksi kolmesta tuotetta sisältävästä jakeesta oli kon- • ♦ • ” taminoitunut 2'-Fmoc-taksolilla). ^-NMR (CDC13/CD30D): : δ 1,19, 1,22 ja 1,80 (kukin 3H, s, C-16, C-17 ja C-19 CH3), ,· ·; 1,10 - 1,90 (6H, m, Lys CH2), 1,38 (9H, s, t-Bu), 1,82 ja 25 2,54 (kumpikin 1H, m, C-6 CH2), 2,05 (3H, s, C-18 CH3), ;· 2,23 ja 2,42 (kumpikin 1H, m, C-14 CH2), 2,18 ja 2,47 (kum- pikin 3H, s, Ac CH3), 3,09 (2H, m, Phe CH2), 3,19 (2H, m, Lys N-CH2), 3,98 (1H, d, C-3 CH), 4,15 - 4,52 (7H, m, Phe ja Lys CO-CH, Fmoc CH2 ja CH, C-20 CH2), 4,98 (1H, m, C-5 30 CH), 5,14 (2H, m, PAB CH2), 5,48 (1H, d, C-2' CH), 5,55 (1H, m, C-7 CH), 5,69 (1H, m, C-2 CH), 6,02 (1H, m, C-3* ; ’·· CH), 6,29 (1H, m, C-13 CH), 6,41 (1H, s, C-10 CH), 6,96 - 8,18 (40H, m, Ph); MS (FAB): 1823 (MH) + , 1846 (M+Na) + , 1862 (M+K) + .
93 116038
Esimerkki 36
Boc-Phe-Lys-PABC-7-taksoli-HCl:n valmistus (37) Yhdistettä Boc-Phe-N€-Fmoc-Lys-PABC-7-taksoli-2' -Fraoc (36) (74,6 mg, 40,95 μπιοί) THF:ssä (2 ml) käsiteltiin 5 huoneenlämpötilassa 2-%:isella DBU:lla THF:ssä (2 ml). Noin kuuden minuutin kuluttua huoneenlämpötilassa lisättiin eetteriä (25 ml) ja saatu valkoinen kiinteä aine kerättiin suodattamalla ja pestiin eetterillä. Kiinteä aine suspendoitiin eetteriin (5 ml) ja käsiteltiin 1 M HCl:llä 10 eetterissä (2 ml). Nppon kahden minuutin kuluttua kiinteä aine suodatettiin pois ja pestiin huolellisesti eetterillä. Kiinteä aine kromatografoitiin LH-20 lipofiilisellä sephadexillä eluoiden 1:1 CH2C12/CH30H: 11a antamaan tuote värittömänä lasimaisena aineena (35,6 mg, 90 %). XH-NMR 15 (CDCI3/CD3OD): δ 1,13, 1,19 ja 1,78 (kukin 3H, s, C-16, C-17 ja C-19 CH3), 1,37 (9H, s, t-Bu), 1,10 - 1,90 (6H, m, Lys CH2), 1,86 ja 2,54 (kumpikin 1H, m, C-6 CH2), 2,05 (3H, s, C-18 CH3), 2,16 ja 2,38 (kumpikin 3H, s, Ac CH3), 2,97 (2H, m, +H3N-CH2), 3,12 (2H, m, Phe CH2), 3,90 (1H, d, C-3 20 CH), 4,24 (2H, m, C-20 CH2), 4,45 ja 4,68 (kumpikin 1H, m, Phe ja Lys CO-CH), 4,83 (1H, brs, C-2' CH), 4,91 (1H, d, C-5 CH), 5,12 (2H, m, PAB CH2), 5,48 (1H, m, C-7 CH), 5,67 (1H, d, C-2 CH), 5,78 (1H, d, C-3’ CH), 6,12 (1H, m, C-13 CH), 6,33 (1H, s, C-10 CH), 7,08 - 8,12 (24H, m, Ph); : 25 HPLC: (C-18, 15 cm:n pylväs, 8:2 Me0H/50 mM Et3N-HC02H pus- ·· kuri (pH 2,8), 1 ml/min. 230 nm): yksi huippu, retentio- aika: 7,1 - 7,3 min.; MS (ionisuihku): 1379,2 (MH) + ; tarkka massa laskettuna C75H88N5O20: lie: 1378,6023; havaittu: 1378,6043.
30 Esimerkki 37
Boc-Phe-N€-Fmoc-Lys-PABC-Cl:n valmistus (38) i ’·« Yhdisteitä Boc-Phe-N£-Fmoc-Lys-PAB-OH (34) (211,2 ; : mg, 293 ymol) pyridiinissä (0,5 ml) ja CH2C12 (2 ml) ;· -42 °C:ssa (hiilihappojää-MeCN) argonin paineessa käsitel- 35 tiin difosgeenilla (21,2 μΐ, 0,6 ekv.). Seosta sekoitet- 94 116038 tiin n. -42 °C:ssa n. 20 minuuttia, jona aikana kiinteä pyridiini hydrokloridi oli saostunut liuoksesta. Tätä liuosta käytettiin välittömästi.
Esimerkki 38 5 Boc-Phe-Ne-Fmoc-Lys-PABC-MMC:n valmistus (39)
Edeltävään liuokseen, jossa oli yhdistettä Boc-Phe-Ne-Fmoc-Lys-PABC-Cl (38) n. -42 °C:ssa, lisättiin MMC:tä (118,0 mg, 1,2 ekv.) NMP:ssä (1 ml). Kylmähauteen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan asteittain ja seosta se-10 koitettiin pimeässä n. 12 tuntia huoneenlämpötilassa. Seos laimennettiin 10-%:isella i-Pr-OH/EtOAc:llä (50 ml) ja 10-%:isella sitruunahapolla (50 ml). Orgaaninen kerros pestiin vedellä (3x) ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin antamaan ruskeahko purppuranpunainen jään-15 nös. Tämä kromatografoitiin 1 mm: n piidioksidilevyllä eluoiden 12:1 CH2C12/CH30H: 11a antamaan tuote vaaleana purppuranvärisenä kiinteänä aineena (108,0 mg, 34 %).
1H-NMR (CDCI3/CD3OD): δ 1,21, 1,43, 1,61 ja 1,81 (6H, m, Lys CH2), 1,32 (9H, s, t-Bu), 2,10 (3H, s, MMC CH3), 2,99 (2H, 20 m, Phe CH2), 3,11 (2H, m, Lys N-CH2), 3,14 (3H, s, 0-CH3), 3,20 - 3,50 (3H, m, C-l ja C-2 CH ja CH-3 CH), 3,62 (1H, AB q, C-9 CH), 4,18 (1H, t, Fmoc CH), 4,22 ja 4,89 (kumpikin 1H, AB q, C-10 CH2), 4,32 (2H, d, Fmoc CH2), 4,41 (1H, '.*·: d, C-3 CH), 4,45 (2H, m, Phe ja Lys C0-CH), 5,01 (2H, m, •V·· 25 PAB CH2), 7,05 - 7,90 (17H, m, Ph); MS (FAB): 1082 (MH) + , : 1103 (M+Na) + , 1119 (M+K) + ; tarkka massa laskettu : C58H64N8013Na:lie: 1103,4491; havaittu: 1103,4451.
Esimerkki 39
Boc-Phe-Lys-PÄBC-MMC-HCl:n valmistus (40) i * 1 ... 30 Yhdistettä Boc - Phe - Νε - Fmoc-Lys-PABC-MMC (39) (11,2 *!* mg, 10,36 pmol) THF:ssä (1 ml) huoneenlämpötilassa käsi- • ** teltiin 2-%:isella DBU:lla THF:ssä (1 ml). Muodostui hi- 1, 1 taasti hienojakoinen purppuranvärinen kiinteä aine. Noin viiden minuutin kuluttua tilavuus pienennettiin noin . 35 1 ml:ksi rotavaporissa (haudelämpötila 30 °C) ja eetteriä Ί16038 95 (10 ml) lisättiin. Saatu kiinteä aine kerättiin suodattamalla ja pestiin eetterillä. Kiinteä aine suspendoitiin eetteriin (2 ml) ja käsiteltiin 1 M HClrllä eetterissä (3 ml). Noin kahden minuutin kuluttua kiinteä aine suoda-5 tettiin pois, pestiin huolellisesti eetterillä ja tritu-roitiin sitten CH2Cl2:lla (2 ml). Saatu kiinteä aine kerättiin suodattamalla ja pestiin CH2Cl2:lla (9,1 mg, 98 %). ^-NMR (CDCI3/CD3OD): 6 1,30 (9H, s, t-Bu), 1,20 - 1,90 (6H, m, Lys CH2), 1,94 (3H, s, MMC CH3), 2,83 (2H, m, +H3N-CH2), 10 2,98 (2H, m, Phe CH2), 3,13 (3H, s, 0-CH3), 3,20 - 3,70 (4H, m, C-l ja C-2 CH, C-3 CH ja AB q, C-9 CH), 4,14 ja 4,82 (kumpikin 1H, ABq, C-10 CH), 4,25 - 4,52 (3H, m, Phe ja Lys C0-CH ja C-3 CH), 4,97 (2H, m, PAB CH2), 7,12 (5H, brs, Phe Ph), 7,23 ja 7,50 (kumpikin 2H, m, PAB Ph); HPLC; 15 (C-18, 15 cm:n pylväs, 65:35 Me0H/50 mM Et3N-HC02H puskuri [pH 2,8], 1 ml/min., 365 nm): yksi huippu, retentioaika: 4,1 - 4,3 min.; MS (FAB): 859 (MH) + , 881 (M+Na)*, 897 (M+K) + ; tarkka massa laskettuna C43H55N8011:lie: 859,3990; havaittu: 859,3980.
20 Esimerkki 40
Na-Fmoc-Ne-Mtr-Lys:in valmistus (41) h^-Fmoc-Lys (14,840 g, 40,28 mmol) suspendoitiin kuivaan CH2Cl2:een (200 ml) huoneenlämpötilassa argonin ·,' paineessa. Trimetyylisilyylikloridia (10,9 ml, 2 ekv.) : 25 lisättiin voimakkaasti sekoittaen ja seosta kuumennettiin ;· palautusjäähdyttäen n. yksi tunti ja jäähdytettiin sitten :‘j‘; n. 0 °C:seen. DIEA (14,0 ml, 2 ekv.) lisättiin, mitä seu rasi p-anisyylidifenyylimetyylikloridi (13,061 g, 1,05 : ,·, ekv.) CH2Cl2:ssa (50 ml). Jäähaude poistettiin ja seosta 30 sekoitettiin n. kaksi tuntia huoneenlämpötilassa. Metano-lia (8,2 ml, 5 ekv.) lisättiin ja sekoittamista jatkettiin : ** yksi tunti ja sitten liuottimet haihdutettiin. Jäännös ·, jaettiin etyyliasetaatin ja pH 5-puskurin (biftalaatti) kesken. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuok-' 35 sella, kuivattiin ja haihdutettiin antamaan vaaleanorans- 96 116038 sinen kumimainen aine. Tämä huuhdeltiin CH2Cl2:lla ja kuivattiin tyhjössä antamaan vaahto, jota käytettiin ilman jatkopuhdistusta (25,693 g, 99 %). ^-NMR (CDC13) 6 1,26 ja 1,68 (2H ja 4 H, m, Lys CH2), 2,45 (2H, m, N-CH2), 3,71 5 (3H, s, OCH3), 4,05 - 4,40 (4H, m, Fmoc CH2 ja CH, CO-CH), 6,81 (2H, d, MeOPh o-CH), 7,15 - 7,77 (20H, m, Ph); MS (FAB) 641 (MH)*, 663 (M+Na)\ 679 (M+K)\
Esimerkki 41 N€-Mtr-Lys:in valmistus (42) 10 Yhdistettä Na-Fmoc-Ne-Mtr-Lys (41) (10,006 g, 15,615 mmol) CH2Cl2:ssa (50 ml) käsiteltiin huoneenlämpötilassa dietyyliamiinilla (40 ml). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. 24 tuntia ja sitten liuottimet haihdutettiin ja jäännös huuhdeltiin CH2Cl2:lla (3 x 100 ml). Vaaleankel-15 täinen jäännös trituroitiin eetterillä. Saatua suspensiota sonikoitiin useita minuutteja ja kiinteä aine kerättiin suodattamalla, pestiin eetterillä ja kuivattiin tyhjössä useita tunteja (6,191 g, 95 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D) δ 1,34, 1,57 ja 1,72 (6H, m, Lys CH2), 2,05 (2H, m, N-CH2), 3,38 20 (1H, m, CO-CH), 3,68 (3H, s, 0CH3), 3,71 (2H, d, MeOPh o-CH), 7,03 - 7,40 (12H, m, Ph); MS (FAB) 419,2 (MH) + , ; " 441,4 (M+Na)\ 457,4 (M+K)\
Esimerkki 42
Fmoc-Phe-NHS:n valmistus (43)
:.'*J 25 Yhdisteitä Fmoc-Phe (5,1043 g, 13,17 mmol) ja NHS
:· (1,592 g, 1,05 ekv. ) CH2Cl2:ssa (100 ml) 0 °C:ssa käsitel- ;’:tiin DCCrllä (2,854 g, 1,05 ekv.). Jäähauteen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan ja seosta sekoitettiin n. 14 : tuntia. DCU sivutuote poistettiin suodattamalla ja suodos .···. 30 haihdutettiin. Saatua raakaa tuotetta, väritöntä lasimais- ta ainetta käytettiin ilman jatkopuhdistusta.
Esimerkki 43
Fmoc-Phe-Ne-Mtr-Lys: in valmistus (44)
Suspensiota, jossa oli yhdistettä Ne-Mtr-Lys (42) 35 (4,686 g, 11,20 mmol) ja NaHC03 (941,0 mg, 1 ekv.) vedessä 97 116038 (100 ml) ja DME (50 ml), käsiteltiin liuoksella, jossa oli yhdistettä Fmoc-Phe-NHS (43) (11,20 mmol) DME:ssä (5 ml). Sitten lisättiin THF (25 ml) liukenemisen helpottamiseksi. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa kaksi päivää ja 5 sitten DME:tä poistettiin rotavaporissa niin paljon kuin mahdollista (haude n. 30 eC). Saatu kumimainen suspensio jaettiin etyyliasetaatin ja pH 5-puskurin kesken. Orgaaninen faasi pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin antamaan vaaleankeltainen vaahto. Tämä 10 huuhdeltiin CH2Cl2:lla (100 ml). Ohutkerroskromatografia osoitti, että tuote oli melko puhdas ja sitä käytettiin ilman jatkopuhdistusta (8,559 g, 97 %). ^H-NMR (CDC13/CD30D) 6 1,10 - 1,93 (6H, m, Lys CH2), 2,31 (2H, t, N-CH2), 3,00 (2H, m, Phe CHZ), 3,71 (3H, s, 0-CH3), 4,02 - 4,48 (5H, m, 15 Fmoc CH2 ja CH, CO-CH), 6,79 (2H, d, MeOPh o-CH), 7,00 -7,75 (25H, m, Ph), MS (FAB) 788,2 (MH) + , 810,4 (M+Na)\ 826 (M+K) + ;
Anal, laskettu C50H49N3O6-H2O:lie: C-74,51, H-6,38, N-5,21
Havaittu: C-74,17, H-6,57, N-5,41.
20 Esimerkki 44
Fmoc-Phe-Nc-Mtr-Lys-PAB-OH:n valmistus (45) ; " Yhdistettä Fmoc-Phe-Ne-Mtr-Lys (44) (7,728 g, 9,808 ·* ·' mmol) ja p-aminobentsyylialkoholia (1,450 g, 1,2 ekv. ) CH2Cl2:ssa (100 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin yhdis- :/·· 25 teellä EEDQ (3,640 g, 1,5 ekv.). Seosta sekoitettiin huo- ;· neenlämpötilassa n. 20 tuntia ja sitten liuotin haihdutet- tiin (vesihaude n. 30 °C). Kiinteä jäännös trituroitiin eetterissä (200 ml) ja saatua suspensiota sonikoitiin n.
: 15 minuuttia ja annettiin seistä huoneenlämpötilassa n.
,···, 30 kaksi tuntia. Saatu kiinteä aine kerättiin suodattamalla, • » pestiin hyvin eetterillä ja kuivattiin tyhjössä (7,6140 g, I ’·· 87 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D) δ 0,98 - 1,91 (6H, m, Lys CH2), \*J 2,06 (2H, t, N-CH2), 2,97 (2H, m, Phe CH2), 3,71 (3H, s, 0-CH3), 4,12 (1H, t, Fmoc-CH), 4,20 - 4,41 (4H, m, Fmoc CH2 ' 35 ja CO-CH), 4,59 (2H, s, PAB CH2), 6,72 (2H, d, MeOPh o-CH), 98 116038 7,00 - 7,73 (29H, m, Phe); MS (FAB) 891,4 (MH)% 916,7 (M+Na) + , 931 (M+K) + ;
Anal, laskettu C57H56N406-H20:lie: C-75,14, H-6,42, N-6,15; Havaittu: C-75,25, H-6,02, N-6,49.
5 Esimerkki 45
Phe-Nc-Mtr-Lys-PÄB-OH:n valmistus (46)
Yhdistettä Fmoc-Phe-NE-Mr-Lys-PAB-OH (45) (4,2857 g, 4,80 mmol) CH2Cl2:ssa (35 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin dietyyliamiinilla (50 ml). Seosta sonikoitiin lyhyt 10 aika ja sekoitettiin huoneenlämpötilassa neljä tuntia, minkä jälkeen lähtöainetta ei havaittu lainkaan ohutker-roskromatografisesti. Liuottimet haihdutettiin ja jäännös huuhdeltiin CH2Cl2:lla ja kromatografoitiin piidioksidilla eluoiden 1) 2-%:isella metanoli/CH2Cl2:11a, 2) 3-%:isella 15 metanoli/CH2Cl2:11a ja 3) 4-%:isella metanoli/CH2Cl2:11a antamaan tuote värittömänä vaahtona (2,230 g, 69 %). ^-NMR (CDC13) δ 1,26 - 2,00 (6H, m, Lys CH2), 2,12 (2H, t, N-CH2), 2,75 ja 3,21 (kumpikin 1H, AB q, Phe CH2), 3,68 (1H, AB q, Phe CO-CH), 3,76 (3H, s, 0-CH3), 4,42 (1H, q, Lys CO-CH), 20 4,66 (2H, brs, PAB CH2), 6,79 (2H, d, MeOPh o-CH), 7,10 - 7,42 (21H, ra, Phe), 7,81 (1H, d, amidi NH), 8,71 (1H, s, : ' PAB NH); MS (FAB) 693,4 (M+Na)*, 709 (M+K) + ; : Anal, laskettu C42H46N404-l/2 H20:lle: ‘.'•I C-74,20, H-6,97, N-8,24; 25 Havaittu: C-74,28, H-7,00, N-8,34.
Esimerkki 46 MC-Phe-Nc-Mtr-Lys-PAB-OH:n valmistus (47)
Yhdisteitä Phe-Ns-Mtr-Lys-PAB-OH (46) (448,1 mg, ; ( > 0,668 mmol) ja DIEA (0,128 ml, 1,1 ekv. ) CH2Cl2:ssa (5 ml) » · * '!!.* 30 huoneenlämpötilassa käsiteltiin MC-NHS:lla (230,4 mg, 1,12 ;* ekv.) CH2Cl2:ssa (2 ml). Seosta sekoitettiin huoneenlämpö- • ’·· tilassa kolme päivää. Etyyliasetaattia (60 ml) lisättiin ja seos pestiin pH 5-puskurilla (2x), vedellä ja suola-; ’· liuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin. Jäännös tritu- , 35 roitiin eetterissä (60 ml) ja saatu kiinteä aine kerät- 99 116038 tiin suodattamalla ja pestiin eetterillä (563,8 mg, 98 %). 1H-NMR (CDC13) 6 1,05 - 1,96 (12H, m, Lys ja kaproyyli CH2), 2,07 (2H, t, Lys N-CH2), 2,18 (2H, t, C0-CH2), 3,02 (2H, m, Phe CH2), 3,39 (2H, t, M-CH2), 3,71 (3H, s, 0-CH3), 4,64 5 (3H, s ja m, PAB CH2) ja Lys CO-CH), 4,99 (1H, q, Phe CO- CH), 6,61 (2H, s, M CH), 6,71 (2H, d, MeOPh o-CH), 6,89 (1H, m, amidi NH), 7,00 - 7,55 (21H, m, Ph), 8,97 (1H, brs, PAB NH); MS (FAB) 864 (MH) + , 886 (M+Na) + , 902,4 (M+K) + . Esimerkki 47 10 MC-Phe-Nc-Mtr-Lys-PABC-PNP :n valmistus (48)
Yhdiste MC-Phe-Ne-Mtr-Lys-PAB-OH (47) (679,3 mg, 0,786 mmol) ja bis-p-nitrofenyylikarbonaattia (1,196 g, 5 ekv.) argonin paineessa huoneenlämpötilassa liuotettiin CH2Cl2:een (25 ml) ja käsiteltiin DIEArlla (0,411 ml, 15 3 ekv.)· Kolmen päivän kuluttua ohutkerroskromatografia osoitti, että reaktio oli täydellinen. Tilavuus pienennettiin n. 5 ml:ksi rotavaporissa ja jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla (80 ml) ja pestiin pH 5-puskurilla, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin. 20 Saatu kiinteä aine trituroitiin eetterissä (80 ml) ja kiinteä aine kerättiin suodattamalla, pestiin eetterillä : ·* ja kromatografoitiin piidioksidilla eluoiden 1) 1:1 ja 2) • 8:1 etyyliasetaatti/heksaanilla (näytettä käsiteltiin pyl- : väässä minimimäärällä 8:1 etyyliasetaatti/heksaania) an- 25 tamaan tuote vaaleankeltaisena kiinteänä lasimaisena ai- « · neena (670,7 mg, 83 %). 1H-NMR (CDC13) δ 1,10 - 1,95 (12H, . m, Lys ja kaproyyli CH2), 2,04 (2H, t, Lys N-CH2), 2,13 (2H, t, C0-CH2), 3,04 (2H, m, Phe CH2), 3,39 (2H, t, M-CH2), . % 3,72 (3H, s, 0-CH3), 4,58 (1H, q, Lys CO-CH), 4,86 (1H, q, 30 Phe CO-CH), 5,27 (2H, s, PAB CH2), 6,58 (1H, d, amidi NH), * 1 6,61 (2H, s, M CH), 6,72 (2H, d, MeOPh o-CH), 7,03 - 7,62 f·.. (27H, m, Ph ja NH), 8,22 (2H, d, PNP CH), 8,86 (1H, brs, "·. PAB NH); MS (FAB) 1029 (MH) + , 1051,5 (M+Na) + , 1069,4 (M+K)\ 100 116038
Esimerkki 48 MC-Phe-Nc-Mtr-Lys-PABC-DOX:in valmistus (49) Yhdisteitä MC-Phe-Ne-Mtr-Lys-PABC-PNP (48) (126,6
mg, 0,123 mmol) ja DOX.HC1 (71,3 mg, 1 ekv.) NMP:ssä 5 (5 ml) käsiteltiin huoneenlämpötilassa yhdisteellä DIEA
(21,4 μΐ, 1 ekv.)· Kahden päivän seisomisen jälkeen huoneenlämpötilassa pimeässä seos laimennettiin etyyliasetaatilla (60 ml) ja pestiin vedellä (4x) ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin. Jäännös kromatografoltiin 10 piidioksidilla eluoiden 1) 25:1 ja 2) 20:1 CH2Cl2/metano-lilla antamaan tuote oranssisena lasimaisena aineena (149,0 mg, 85 %). 1H-NMR (CDC13) δ 1,1 - 1,95 (14H, m, Lys ja kaproyyli CH2, D-rengas CH2), 1,27 (3H, d, sokeri CH3), 2,10 (4H, m, Lys N-CH2 ja kaproyyli C0-CH2), 2,23 (2H, m, 15 D-rengas CH2), 3,03 (2H, m, Phe CH2), 3,20 (2H, m, sokeri CH2), 3,41 (2H, t, M-CH2), 3,67 (1H, brs, sokeri HO-CH), 3,77 (3H, s, Mtr 0-CH3), 4,08 (3H, s, DOX 0-CH3), 4,13 (sokeri N-CH), 4,40 (1H, m, Phe CO-CH), 4,56 (2H, m, Lys CO-CH ja sokeri CH3-CH), 4,76 (2H, brs, CO-CH2-OH), 4,99 20 (2H, m, PAB CH2), 5,29 (1H, brs, anomeerinen CH), 5,71 (1H, brs, DOX Ph-CH), 5,18, 6,02 ja 6,38 (kukin 1H, m, NH), ; '·· 6,62 (2H, s, M CH), 6,77 (2H, d, MeOPh o-CH), 7,00 - 7,60 j V (22H, m, Ph), 7,78 ja 8,03 (kumpikin 1H, m, DOX Ph CH), : ·,· 8,22 (1H, brs, PAB NH); MS (FAB) 1433,8 (MH) + , 1456,0 :*·.· 25 (M+Na) + , 1471,8 (M+K)\ . . Esimerkki 49 MC-Phe-Lys-PABC-DOX . Cl^HCO^n valmistus (50) Sekoituksenalaista liuosta, jossa oli yhdistettä , , MC-Phe-Ne-Mtr-Lys-PABC-DOX (49) (1,1520 g, 0,804 mmol) * i * 30 CH2Cl2:ssa (50 ml) ja anisolia (8,73 ml, 100 ekv.), käsi-*·;* teltiin dikloorietikkahapolla (0,663 ml, 10 ekv.). Noin : yhden tunnin kuluttua lisättiin etyyliasetaattia (80 ml) ja saatu suspensio pidettiin pakastimessa n. 1,5 tuntia. Kiinteä aine kerättiin suodattamalla, pestiin etyyliase-35 taatilla ja kuivattiin tyhjössä. Suodos väkevöitiin n. 30 101 116038 ml:ksi rotavaporissa (haude n. 27 °C) ja sitten lisättiin eetteriä (50 ml). Saatua suspensiota pidettiin pakastimessa n. yksi tunti ja suodatettiin sitten. Oranssinvärinen kiinteä aine trituroitiin toistuvasti CH2Cl2:lla ja kuivat-5 tiin sitten tyhjössä (1,0092 g, 97 %). XH-NMR (CDC13/CD30D) 6 1,10 - 1,90 (14H, m, Lys ja kaproyyli CH2, D-rengas CH2), 1,21 (3H, d, sokeri CH3), 2,10 (2H, t, kaproyyli C0-CH2), 2,20 (2H, m, D-rengas CH2), 2,88 (2H, m, Lys N-CH2), 3,02 (2H, m, Phe CH2), 3,12 (2H, m, sokeri CH2), 3,38 (2H, t, 10 M-CH2), 3,52 (1H, brs, sokeri HO-CH), 3,79 (1H, m, sokeri HN-CH), 4,02 (3H, s, DOX 0-CH3), 4,10 (1H, m, sokeri CH3-CH), 4,43 ja 4,54 (kumpikin 1H, m, Phe ja Lys CO-CH), 4,72 (2H, s, DOX C0-CH2-0H), 4,92 (2H, m, PAB CH2), 5,24 (1H, br s, anomeerinen CH), 5,44 (1H, br s, DOX Ph-CH-O-sokeri), 15 5,84 (1H, s, C12CH), 6,67 (2H, s, M CH), 7,10 (5H, brs, Phe
Ph), 7,21 ja 7,48 (kumpikin 2H, d, PAB Ph), 7,38, 7,77 ja 7,99 (kukin 1H, d, t ja d, vastaavasti, DOX Ph), 7,38, 7,77 ja 7,99 (kukin 1H, d, t ja d, vastaavasti, DOX Ph); HPLC: (C-18, 15 cm:n pylväs, 8:2 metanoli/50 mM trietyy-20 liammoniumformiaattipuskuri (pH 2,8), 1 ml/min., 495 nm): yksittäinen huippu, retentioaika: 4,4 - 4,5 min.; : ’·’ MS (FAB"): 1159 (M-H)‘; tarkka massa laskettuna * V C60H68N6O18Na:lie: 1183,4488; Havaittu: 1183,4457.
: M Esimerkki 50 25 MC-Phe-Ne-Mtr-Lys-PABC-MMC:n valmistus (51) • *
Sekoituksenalaista seosta, jossa oli yhdisteitä MC - Phe - Ne -Mt r - Lys - PABC - PNP (48) (160,4 mg, 0,1559 mmol), HOBt (211,0 mg, 10 ekv. ) ja MMC (57,3 mg, 1,1 ekv. ) . . NMP:ssä (5 ml) huoneenlämpötilassa, käsiteltiin yhdisteel- 30 lä DIEA (0,271 ml, 10 ekv.). Noin 14 tunnin kuluttua huo-neenlämpötilassa lisättiin etyyliasetaattia (100 ml) ja j seos pestiin pH 5-puskurilla, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin. Jäännös kromatografoitiin piidioksidilla eluoiden 1) 25:1 ja 2) 20:1 CH2Cl2/metano-‘ 35 lilla antamaan tuote purppuranvärisenä lasimaisena aineena 102 116038 (136,2 mg, 71 %). ^-NMR (CDC13) δ 1,08 - 1,90 (12H, m, CH2), 1,73 (3H, s, MMC CH3), 2,10 (4H, m, Lys N-CH2 ja CO-CH2), 3,05 (2H, m, Phe CH2), 3,18 (3H, s, MMC 0-CH3), 3,23 -3,50 (5H, m, C-l, C-2 ja C-3 CH ja M-CH2), 3,63 (1H, ABq, 5 C-9 CH), 3,74 (3H, s, Mtr 0-CH3), 4,28 ja 4,90 (kumpikin 1H, t ja ABq, C-10 CH2), 4,41 (2H, d ja m, C-3 CH ja Phe CO-CH), 4,71 (1H, m, Lys CO-CH), 5,01 (2H, m, PAB CH2), 5,09 (1H, brs, amidi NH), 5,30 (4H, brs, NH2), 6,31 ja 6,88 (kumpikin 1H, d, amidi NH), 6,63 (2H, s, M CH), 6,76 (2H, 10 d, MeOPh o-CH), 7,06 - 7,57 (21H, m, Ph), 8,81 (1H, brs, PAB NH); MS (FAB) 1246,5 (M+Na) + , 1262,3 (M+K) + .
Esimerkki 51 MC-Phe-Lys-PABC-MMC . ClGH^CO^H:n valmistus (52)
Sekoituksenalaista liuosta, jossa oli yhdistettä 15 MC-Phe-Ne-Mtr-Lys-PABC-MMC (51) (68,1 mg, 55,6 pmol) CH2-
Cl2:ssa (3 ml) ja anisolia (0,604 ml, 100 ekv.), käsitel
tiin kloorietikkahapolla (1 M CH2Cl2:ssa, 0,56 ml, 10 ekv.)· Vähitellen muodostui purppuranpunainen sakka. Kolmen tunnin kuluttua lisättiin eetteriä (5 ml). Saatu kiin-20 teä aine kerättiin suodattamalla ja pestiin eetterillä ja CH2Cl2:lla ja liuotettiin sitten metanoliin. HPLC osoitti ; ’** sen olevan > 95-%:isesti puhdas (44,7 mg, 74 %). 1H-NMR
(CDC13/CD30D) 6 1,11, 1,40, 1,63 ja 1,77 (12H, m, CH2), 2,09 ;\i (2H, t, C0-CH2), 3,02 (2H, m, Phe CH2), 3,13 (3H, s, MMC
25 0-CH3), 3,23 - 3,50 (5H, m, C-l, C-2 ja C-3 CH ja M-CH2), t 1 3,56 (1H, ABq, C-9 CH), 3,92 (2H, brs, C1CH2), 4,13 ja 4,82 (kumpikin 1H, t ja ABq, C-10 CH2), 4,30 (1H, d, C-3 CH), 4,41 (1H, m, Phe CO-CH), 4,65 (1H, m, Lys CO-CH), 4,99 . . (2H, q, PAB CH2), 6,63 (2H,s, M CH), 7,10 (5H, brs, Phe 30 Ph), 7,22 ja 7,48 (kumpikin 2H, d, PAB Ph); MS (FAB) 952,3 '·;· (MH)+, 974 (M+Na)\ 990,3 (M+K) + ; HPLC: (C-18, 15 cm:n pyl- väs, 63:35 metanoli/50-%:inen trietyyliammoniumformiaat-;tipuskuri (pH 2,8), 1 ml/min., 360 nm): yksittäinen huippu, retentioaika: 2,84 min.
» « »
; » * I
» 103 116038
Esimerkki 52 2'-metoksitrityyli-taksolin valmistus (53)
Sekoituksenalaista taksolia (0,51 g, 0,597 nunol) ja p-metoksitrityylikloridia (4,63 g, 25 ekv.) CH2Cl2:ssa 5 (14 ml) typen paineessa huoneenlämpötilassa käsiteltiin pyridiinillä (1,23 ml, 25 ekv.). Noin 16 tunnin kuluttua huoneenlämpötilassa liuotin haihdutettiin ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Liuos pestiin kylmällä pH 5 -puskurilla (2 x 100 ml), vedellä ja suolaliuoksella, kui-10 vattiin ja haihdutettiin. Jäännös kromatografoitiin piidioksidilla eluoiden 3-%:isella metanoli/CH2Cl2:11a antamaan tuote valkoisena kiinteänä aineena (482 mg, 72 %). ^-NMR (CDC13) δ 1,11, 1,17 ja 1,55 (kukin 3H, s, C-16, C-17 ja C-19 CH3), 1,67 (3H, s, C-18 CH3), 1,90 ja 2,54 15 (2H, m, C-6 CH2), 2,26 ja 2,51 (kumpikin 3H, s, Aq CH3), 2,54 (2H, m, C-14 CH2), 3,66 (1H, d, C-3 CH), 3,78 (3H, s, O-CH3), 4,21 (2H, ABq, C-20 CH2), 4,41 (1H, m, C-7 CH), 4,63 (1H, d, C-2' CH), 4,92 (1H, d, C-5 CH), 5,62 (1H, d, C-2 CH), 5,70 (2H, m, C-13 ja C-3' CH), 6,22 (1H, s, C-10 20 CH), 6,74 (2H, d, MeOPh o-CH), 7,09 - 7,60 (23H, m, Ph), 7,80 ja 8,09 (kumpikin 2H, d, Bz o-CH); MS (FAB) 1148 (M+Na)\ 1164 (M+K) + .
·': Esimerkki 53 i i MC-Phe-Ne-Mtr-Lys-PABC-7-taksoli-2 ’ -Mtr:n valmistus : 25 (54) 2'-metoksitrityyli-taksolia (53) (218,8 mg, 0,194 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (3 ml) argonin paineessa noin t 1 t 0 °C:ssa käsiteltiin DIEA:lla (34 μΐ, 1 ekv.), pyridiinil-, , lä (15,7 μΐ, 1 ekv.) ja sitten difosgeenilla (12 μΐ, 0,5 • ; * 30 ekv.). Jäähaude poistettiin ja seosta sekoitettiin huo- ' · ’ neenlämpötilassa n. yksi tunti ja jäähdytettiin sitten ;’ uudestaan n. 0 °C:seen. MC-Phe-Ne-Mtr-Lys-PAB-OH (47) ; “ ; (167,9 mg, 1 ekv.) huuhdeltiin kuivalla CH2Cl2:lla (6 ml), kuivattiin tyhjössä ja liuotettiin sitten kuivaan 35 CH2Cl2:een (2 ml) ja yhdisteeseen DIEA (34 μΐ, 1 ekv.).
104 116038 Tämä liuos lisättiin käsipumpulla raakaan kloroformiaat-tiin n. 0 °C:ssa. Noin 10 minuutin kuluttua jäähaude poistettiin ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. 18 tuntia. Seos laimennettiin etyyliasetaatilla ja pestiin 5 pH 5 -puskurilla, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin. Jäännös kromatografoitiin piidioksidilla eluoiden 1) 2:1 CH2Cl2/etyyliasetaatilla, 2) 1:1 etyyliase-taatti/CH2Cl2:11a, 3) 4:1 etyyliasetaatti/CH2Cl2:11a ja 4) etyyliasetaatilla antamaan tuote värittömänä lasimaisena 10 aineena (237,9 mg, 61 %), yhdessä reagoimattomien lähtöaineiden kanssa. ^-NMR (CDC13) δ 1,13, 1,16 ja 1,57 (kukin 3H, s, C-16, C-17 ja C-19 (CH3), 1,10 - 1,80 (12H, m, Lys ja kaproyyli CH2), 1,88 ja 2,61 (kumpikin 1H, m, C-6 CH2), l, 78 (3H, s, C-18 CH3), 2,10 (4H, m, Lys N-CH2 ja kaproyyli 15 CO-CH2), 2,17 ja 2,29 (kumpikin 3H, s, Ac CH3), 3,06 (2H, m, Phe CH2), 3,42 (2H, t, kaproyyli N-CH2), 3,75 ja 3,78 (kumpikin 3H, s, 0-CH3), 3,82 (1H, m, C-3 CH), 4,21 (2H, ABq, C-20 CH2), 4,42 ja 4,70 (kumpikin 1H, q, Phe ja Lys CO-CH), 4,62 (1H, d, C-2' CH), 4,93 (1H, d, C-5 CH), 5,19 20 (2H, q, PAB CH2), 5,59 (1H, m, C-7 CH), 5,62 (1H, d, C-2 CH), 5,72 (2H, m, C-3' CH ja C-13 CH), 6,17 ja 6,60 (kumpikin 1H, brd, amidi NH), 6,32 (1H, s, C-10 CH), 6,64 (2H,s, M CH), 6,77 (4H, m, MeOPh o-CH), 7,05 - 7,62 (44H, * m, Ph), 7,80 ja 8,06 (kumpikin 2H, d, Bz o-CH), 8,37 (1H, 25 brs, PAB NH).
Esimerkki 54 MC-Phe-Lys-PABC-7-taksoli ♦ ClCH^O^n valmistus (55) ; Sekoituksenalaista liuosta, jossa oli yhdistettä M/ 30 MC-Phe-N£-Mtr-Lys-PABC-7-taksoli-2'-Mtr 54 (194,8 mg, 0,097 mmol) CH2Cl2:ssa (4,5 ml) ja anisolia (1,05 ml, 100 ekv.), • '>· käsiteltiin kloorietikkahapolla (IM CH2Cl2:ssa, 0,97 ml, i : 10 ekv.). Noin neljän tunnin kuluttua lisättiin eetteriä ·. (25 ml). Saatu kiinteä aine kerättiin suodattamalla ja 35 pestiin eetterillä (142,0 mg, 94 %). XH NMR (CDC13) δ 1,13, 105 116038 1,20 ja 1,72 (kukin 3H, s, C-16, C-17 ja C-19 CH3), 1,10 -1,90 (12H, m, Lys ja kaproyyli CH2), 2,13 ja 2,33 (kumpikin 3H, s, Ac CH3), 2,96 (2H, m, ^N-CHj), 3,05 (2H, m, Phe CH2), 3,38 (2H, m, kaproyyli N-CH2), 3,86 (1H, d, C-3 CH), 5 4,21 (2H, m, C-20 CH2), 4,50 ja 4,61 (kumpikin 1H, m, Phe ja Lys CO-CH), 4,77 (1H, brs, C-2' CH), 4,91 (1H, d, C-5 CH), 5,10 (2H, m, PAB CH2), 5,42 (1H, m, C-7 CH), 5,64 (1H, d, C-2 CH), 5,71 (1H, m, C-3' CH), 6,11 (1H, m, C-13 CH), 6,30 (1H, s, C-13 CH), 6,73 (2H, s, M CH), 7,00 - 8,20 10 (24H, m, Ph); HPLC (C-18, 15 cm:n pylväs, 7:3 asetonit- riili/50 mM trietyyliammoniumformiaattipuskuri (pH 2,8), 1 ml/min., 250 nm): yksittäinen huippu, retentioaika 2,91 min.; MS (FAB) 1471,6 (MH*), 1509,5 (M+Na)*, 1511,8 (M+K)\ Esimerkki 55 15 Fmoc-Val-NHS:n valmistus (56)
Yhdisteitä Fmoc-Val (5,060 g, 14,91 mmol) ja NHS (1,72 g, 1 ekv.) THF:ssä (50 ml) n. 0 °C:ssa käsiteltiin DCC:llä (3,080 g, 1 ekv.). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. 16 tuntia ja sitten kiinteä DCU-sivutuote 20 suodatettiin pois ja pestiin THF:lla. Liuotin poistettiin rotavaporissa ja saatua väritöntä lasimaista kiinteää ainetta käytettiin ilman puhdistusta seuraavassa vaiheessa. Esimerkki 56
Fmoc-Val-Cit:in valmistus (57) */·· 25 Yhdiste Fmoc-Val-NHS (56) (14,91 mmol) DME:ssä :· (40 ml) lisättiin liuokseen, jossa oli L-sitrulliinia (2,743 g, 1,05 ekv.) ja NaHC03 (1,315 g, 1,05 ekv.) vedessä (40 ml). THF (20 ml) lisättiin liukenemisen helpottamisek-: si ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. 16 tun- 30 tia. Vesipitoista sitruunahappoa (15 %, 75 ml) lisättiin ja seos uutettiin 10-%:isella isopropanoli/etyyliasetaa-tiliä (2 x 100 ml). Kiinteä tuote alkoi saostua mutta pysyi orgaanisessa kerroksessa. Suspensio pestiin vedellä (2 x 150 ml) ja liuottimet haihdutettiin. Saatua valkoista 35 kiinteää ainetta kuivattiin tyhjössä n. viisi tuntia ja 106 116038 käsiteltiin sitten eetterillä (80 ml). Sonikoinnin ja tri-turoinnin jälkeen valkoinen kiinteä tuote kerättiin suodattamalla (5,8007 g, 78 %). 1H-NMR (DMS0-d6) 6 0,87 (6H, q, Vai CH3), 1,40, 1,59 ja 1,69 (4H, m, Cit CH2), 1,97 (1H, 5 m, Vai CH3-CH), 2,94 (2H, q, Cit N-CH2), 3,92 (1H, t, Fmoc CH), 4,10 - 4,35 (2H, m, Vai ja Cit CO-CH), 4,23 (2H, t, Fmoc CH2), 5,37 (2H, brs, Cit NH2), 5,92 (1H, t, Cit NH), 7,28 - 7,90 (8H, m, Ph), 8,15 (1H, d, amidi NH); MS (FAB) 497 (MH)+, 519 (M+Na) + , 535 (M+K)*; tarkka massa laskettuna 10 C26H33N406:lie: 497,2400; havaittu: 497,2394;
Anal, laskettu C26H32N406: lie: C-62,89, H-6,50, N-11,28; Havaittu: C-62,92, H-6,67, N-11,07.
Esimerkki 57
Fmoc-Val-Cit-PAB-OH:n valmistus (58) 15 Yhdistettä Fmoc-Val-Cit (57) (1,0443 g, 2,103 mmol) ja p-aminobentsyylialkoholia (518,0 mg, 2 ekv.) 2:1 CH2Cl2/metanolissa (35 ml) käsiteltiin EEDQ:11a (1,0402 g, 2 ekv.). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa pimeässä l, 5 päivää. Liuottimet poistettiin rotavaporissa (haude-20 lämpötila n. 40 °C) ja valkoinen kiinteä jäännös trituroi- tiin eetterissä (75 ml). Saatua suspensiota sonikoitiin n.
• " viisi minuuttia ja jätettiin sitten seisomaan n. 30 minuu- : *' tiksi. Kiinteä aine kerättiin suodattamalla ja pestiin ·.': toistuvasti eetterillä (1,0070 g, 80 %). Hi-NMR (DMS0-d6) ; 25 δ 0,88 (6H, t, Vai CH3), 1,41 ja 1,65 (4H, m, Cit CH2), ;:· 2,00 (1H, m, Vai CH3-CH), 2,99 (2H, m, Cit N-CH2), 3,92 (1H, t, Fmoc CH), 4,24 (2H, d, Fmoc CH2), 4,19 - 4,50 (2H, m, Vai ja Cit CO-CH), 4,43 (2H, d, PAB CH2), 5,11 (1H, t, PAB OH), 5,42 (2H, brs, Cit NH2), 5,98 (1H, t, Cit NH), * * * 30 7,15 - 7,92 (12H, m, Ph), 8,12 (2H, d, amidi NH), 9,99 (1H, brs, PAB NH); MS (FAB) 602 (MH) + , 624 (M+Na) + , 640 ; ’ · (M+K) + ; tarkka massa laskettuna C33H40N5O6:lie: 602,2979; havaittu: 602,2977; ,·, Anal, laskettu C33H39N506:lie: C-65,87, H-6,53, N-11,64; 35 Havaittu: C-65,61, H-6,49, N-11,73.
107 1 1 6 0 3 8
Esimerkki 58
Val-Cit-PÄB-OH:n valmistus (59)
Yhdistettä Fmoc-Val-Cit-PAB-OH (58) (245,2 mg, 407,5 μπιοί) NMP:ssä (4 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin 5 dietyyliamiinilla (0,8 ml). Seos jätettiin seisomaan huoneenlämpötilaan n. 16 tunniksi ja sitten liuottimet poistettiin rotavaporissa (haudelämpötila n. 40 °C). Paksua öljymäistä jäännöstä käsiteltiin CH2Cl2:lla (15 ml). Ensin muodostunut kumimainen aine muuttui kiinteäksi raaputta-10 maila ja sonikoimalla ja kerättiin suodattamalla ja pestiin CH2C12:11a (141,6 mg, 92 %). XH-NMR (DMS0-d6) δ 0,82 (6H, 2 x d, Vai CH3), 1,39, 1,59 ja 1,66 (4H, m, Cit CH2), 1,92 (1H, m, Vai CH3-CH), 2,98 (1H, m, Vai CO-CH), 3,03 (2H, d, Vai NH2), 4,45 (2H, d, PAB CH2), 4,48 (1H, m, Cit 15 CO-CH), 5,10 (1H, brt, PAB OH), 5,41 (2H, brs, Cit NH2), 5,99 (1H, brt, Cit NH), 7,21 ja 7,52 (kumpikin 2H, d, PAB Ph), 8,12 (1H, brd, amidi NH), 10,03 (1H, brs, PAB NH); MS (FAB) 380 (MH)+, 402 (M+Na) + , 418 (M+K)\
Esimerkki 59 20 MC-Val-Cit-PAB-OH:n valmistus (60)
Yhdisteet Val-Cit-PAB-OH (59) (136,8 mg, 360,5 : “ pmol) ja MC-NHS (122,3 mg, 1,1 ekv.) NMP:ssä (5 ml) huo-
; *.* neenlämpötilassa jätettiin seisomaan n. 16 tunniksi. NMP
poistettiin rotavaporissa (haudelämpötila n. 40 °C) ja : ·.: 25 paksu öljymäinen jäännös trituroitiin eetterissä (20 ml).
·· Kiinteä tuote kerättiin suodattamalla ja pestiin toistu- vasti eetterillä (205,7 mg, 99,6 %). 1H-NMR (DMS0-d6) 6 0,82 (6H, ABq, Vai CH3), 1,10 - 1,90 (10H, m, Cit ja kap- ; ... royyli CH2), 1,92 (1H, m, Vai CH3-CH), 2,16 (2H, t, kapro- 30 yyli C0-CH2), 2,98 (2H, m, Cit N-CH2), 3,33 (2H, t, M-CH2), 4,19 (1H, t, Vai CO-CH), 4,38 (1H, m, Cit CO-CH), 4,42 ;’*· (2H, brd, PAB CH2), 5,10 (1H, brt, PAB OH), 5,42 (2H, brs, : Cit NH2), 5,97 (1H, brt, Cit NH), 6,99 (2H, s, M CH), 7,21 ja 7,52 (kumpikin 2H, d, PAB Ph), 7,82 ja 8,07 (kumpikin 35 1H, d, amidi NH), 9,90 (1H, brs, PAB NH); MS (FAB) 573 ΧΟβ 1 1 6038 (MH)*, 595 (M+Na)*, 611 (M+K)*; tarkka massa laskettuna C28H4iN6°7:lle: 573,3037; havaittu: 573,3016.
Esimerkki 60 MC-Val-Cit-PABC-PNP:n valmistus (61) 5 Yhdiste MC-Val-Cit-PAB-OH (60) (112,4 mg, 196,3 μπιοί) argonin paineessa huoneenlämpötilassa liuotettiin kuivaan pyridiiniin (3 ml). Liuos jäähdytettiin n.
0 °C:seksi ja p-nitrofenyylikloroformiaattia (119 mg, 3 ekv.) CH2Cl2:ssa (2 ml) lisättiin kaikki yhdellä kertaa. 10 Noin 10 minuutin kuluttua 0 °C:ssa jäähaude poistettiin ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. kaksi tuntia. Etyyliasetaattia (50 ml) ja 15-%:ista sitruunahappoa (75 ml) lisättiin. Orgaaninen faasi pestiin lisämäärällä sitruunahappoa, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja 15 haihdutettiin antamaan vaaleankeltainen kumi. Tämä kroma-tografoitiin piidioksidilla eluoiden 1) 20:1 ja 2) 15:1 CH2Cl2/metanolilla antamaan tuote valkoisena kiinteänä aineena (21,5 mg, 15 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D) 6 0,90 (6H, d, Vai CH3), 1,16 - 1,95 (10H, m, Cit ja kaproyyli CH2), 2,12 20 (1H, m, Vai CH3-CH), 2,23 (2H, t, kaproyyli C0-CH2), 3,17 (2H, m, Cit N-CH2), 3,48 (2H, t, M-CH2), 4,20 (1H, m, Vai CO-CH), 4,59 (1H, m, Cit CO-CH), 5,22 (2H, s, PAB CH2), ·' 6,66 (2H, s, M CH), 6,91 ja 7,79 (kumpikin 1H, d, amidi :.' ί NH), 7,34 ja 7,60 (kumpikin 2H, d, PAB Ph), 7,34 ja 8,23 25 (kumpikin 2H, d, PNP Ph), 9,49 (1H, brs, PAB NH); MS (FAB) 738 (MH)*, 760 (M+Na)*, 776 (M+K)*.
: i ‘: Esimerkki 61 MC-Val-Cit-PABC-DOX:in valmistus (62) : Yhdisteitä MC-Val-Cit-PABC-PNP (61) (21,2 mg, 28,7 .···, 30 pmol) ja DOX · HC1 (18,3 mg, 1,1 ekv.) NMP:ssä (1,5 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin di-isopropyylietyyliamii-: " nilla (5,5 μΐ, 1,1 ekv.). Seos jätettiin seisomaan pimeään ' huoneenlämpötilassa kahdeksi päiväksi ja sitten lisättiin CH2C12 (25 ml). Muodostui hieno sakka. Suspensio pidettiin 35 pakastimessa yön yli ja sitten oranssinvärinen kiinteä 109 116038 aine kerättiin suodattamalla ja pestiin CH2Cl2:lla. Ohut-kerroskromatografia osoitti, että osa tuotteesta jäi emä-liuoksiin yhdessä suurimman osan kanssa hitaasti liikkuvia epäpuhtauksia. Raaka kiinteä aine kromatografoitiin 5 piidioksidilla eluoiden 1) 15:1, 2) 10:1 ja 3) 5:1 CH2Cl2/metanolilla (näytteeseen käytettiin minimimäärä 2:1 CH2Cl2/metanolia) antamaan tuote oranssinvärisenä kiinteänä aineena (22,4 mg, 68 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D) δ 0,83 (6H, d, Vai CH3), 1,18 (3H, d, sokeri CH3), 1,20 - 1,86 (12H, m, 10 Cit ja kaproyyli CH2, D-rengas CH2), 1,93 (1H, m, Vai CH3-CH), 2,12 (2H, m, D-rengas CH2), 2,17 (2H, t, kaproyyli CO-CH2), 2,90 - 3,20 (4H, q ja m, sokeri CH2 ja Cit N-CH2), 3,39 (2H, t, M-CH2), 3,50 (1H, brs, HO-CH), 3,98 (3H, s, 0-CH3), 4,02 (1H, m, Vai CO-CH), 4,05 (1H, m, sokeri CH3-15 CH), 4,46 (1H, m, Cit CO-CH), 4,68 (2H, s, C0-CH2-0H), 4,88 (2H, q, PAB CH2), 5,16 (1H, brs, anomeerinen CH), 5,39 (1H, brs, DOX Ph-CH), 6,62 (2H, s, M CH), 7,13 ja 7,42 (kumpikin 2H, d, PAB Ph), 7,32, 7,71 ja 7,92 (kukin 1H; d, t ja d; DOX Ph); MS (FAB) 1141 (M) + , 1164,6 (M+Na) + , 1180 (M+K) + ; 20 tarkka massa laskettuna C56H67N7019Na:lie: 1164,4389; havaittu: 1164,4363.
Esimerkki 62 N-Boc-aminokaproiinihapon valmistus (63) · 6-aminokaproiinihappoa (5,2331 g, 39,89 mmol) ja ·*/·· 25 NaHC03 (3,3514 g, 1 ekv. ) vedessä (50 ml) käsiteltiin ·;· d-t-butyylidikarbonaatilla (9,58 g, 1,1 ekv.). Seosta se- koitettiin huoneenlämpötilassa yön yli ja sitten lisättiin vettä (150 mg) ja kyllästettyä NaHC03 (5 ml). Liuos uutet-; ,·, tiin eetterillä (100 ml) ja sitten lisättiin kiinteää sit- 30 ruunahappoa (10 g) antamaan öljymäinen suspensio. Tämä uutettiin etyyliasetaatilla (3x). Yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin antamaan väritön öljy, joka jähmettyi tyhjössä (9,23 g, kvantitatiivinen). ^-NMR (DMSO-d6) 6 1,10 -; 35 1,55 (6H, m, kaproyyli CH2), 1,33 (9H, s, CH3), 2,28 (2H, 110 116038 m, CO-CH2), 2,88 (2H, m, N-CH2), 6,77 (1H, m, NH); MS (DCI) 232 (MH)*, 176 (MH-C4H9) + ;
Anal, laskettu CuH21N04:lie: C-57,12, H-9,15, N-6,06; Havaittu: C-57,11, H-9-22, N-6,09.
5 Esimerkki 63
Boc-NH-C-NHS:n valmistus (64) N-Boc-aminokaproiinihappoa (63) (9,23 g, 39,9 mmol) ja NHS (5,05 g, 1,1 ekv.) THF:ssä (75 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin DCC:llä (9,05 g, 1,1 ekv.). Seosta se-10 koitettiin huoneenlämpötilassa n. 16 tuntia ja sitten kiinteä DCU sivutuote suodatettiin pois. Suodos haihdutettiin antamaan paksu öljy, joka liuotettiin CH2Cl2:een (150 ml). Noin yhden tunnin seisomisen jälkeen lisää DCU:ta suodatettiin pois. Suodos haihdutettiin uudestaan 15 ja paksu öljymäinen jäännös kuivattiin tyhjössä, jolloin se asteittain kiinteytyi. Tuotetta käytettiin ilman jatko-puhdistusta (13,052 g, 99,6 %).
Esimerkki 64
Boc-NH-C-Phe:n valmistus (65) 20 Liuos, jossa oli Boc-NH-C-NHS (64) (12,52 g, 38,13 mmol) DME:ssä (100 ml), lisättiin liuokseen, jossa oli L-Phe (6,930 g, 1,1 ekv.) ja NaHC03 ( 3,524 g, 1,1 ekv.) ve-: dessä (100 ml) huoneenlämpötilassa. THF (30 ml) lisättiin /·: liukoisuuden parantamiseksi. Seosta sekoitettiin huoneen- ·/.; 25 lämpötilassa n. 16 tuntia ja sitten lisättiin 15 -:ista *:· sitruunahappoa (100 ml). Suspensio uutettiin 10-%:isella
Ml» isopropanoli/etyyliasetaatilla (3 x 80 ml) ja yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kui-; vattiin ja haihdutettiin antamaan valkoinen kiinteä aine.
[ ’ 30 Tämä trituroitiin eetterissä ja saatu valkoinen kiinteä T aine kerättiin suodattamalla ja pestiin eetterillä (12,122 : g, 84 %). 1H-NMR (DMS0-d6) δ 1,09 ja 1,30 (6H, m, kaproyyli CH2), 1,38 (9H, s, CH3), 1,80 - 2,25 (2H, m, C0-CH2), 2,82 (4H, m, Phe CH2 ja N-CH2), 4,52 (1H, m, CO-CH), 6,73 (1H, 111 116038 ra, NH), 7,20 (5H, m, Ph); MS (DCI) 379 (MH) + , 323 (MH-C4H9)\ 279 (MH-C5H902)*;
Anal, laskettu C20H3ON2O5:Ile: C-63,47, H-7,99, N-7,40; Havaittu: C-63,37, H-8,05, N-7,76.
5 Esimerkki 65
Boc-NH-C-Phe-NHS:n valmistus (66)
Yhdistettä Boc-NH-C-Phe (65i) (11,527 g, 30,46 mmol) ja NHS (3,86 g, 1,1 ekv. ) THF:ssä (100 ml) n. 0 °C:ssa käsiteltiin DCC:llä (6,913 g, 1,1 ekv.). Seosta sekoitet-10 tiin huoneenlämpötilassa n. 16 tuntia ja käsiteltiin, kuten edellä on kuvattu yhdisteelle Boc-NH-C-NHS (64) antamaan tuote värittömänä lasimaisena aineena, jota käytettiin ilman jatkopuhdistusta (14,369 g, 99,2 %).
Esimerkki 66 15 Boc-NH-C-Phe-Ne-Fmoc-Lys: in valmistus (67)
Yhdiste Boc-NH-C-Phe-NHS (66) (14,369 g, 30,22 mmol) DME:ssä (100 ml) lisättiin liuokseen, jossa oli Ne-Fmoc-Lys:iä (11,222 g, 1 ekv.) ja NaHC03 (2,560 g, 1 ekv.) vedessä (50 ml) ja DME:ssä (50 ml). Seosta sekoi-20 tettiin voimakkaasti huoneenlämpötilassa n. 16 tuntia ja sitten lisättiin 15-%:ista sitruunahappoa (150 ml) ja : '* 10-%:ista isopropanoli/etyyliasetaattia (250 ml). Vesipi- : .* toinen faasi uutettiin lisämäärällä 10-%:ista isopropa- ·.*·· noli/etyyliasetaattia (2 x 100 ml). Yhdistetyt orgaaniset 25 faasit pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja *;* haihdutettiin antamaan vaikeahko kiinteä aine. Tämä tritu- roitiin eetterissä ja valkoinen kiinteä tuote kerättiin suodattamalla ja pestiin eetterillä (17,842 g, 81 %).
: ^-NMR (CDC13/CD30D) 6 1,00 - 1,92 (12H, m, Lys ja kaproyyli 4 » * * 30 CH2), 1,42 (9H, s, CH3), 2,09 (2H, m, C0-CH2), 2,96 (2H, m, ’! Phe CH2), 3,10 (2H, m, kaproyyli N-CH2), 3,31 (2H, m, Lys : ’ ' N-CH2), 4,18 (1H, t, Fmoc CH), 4,37 (2H, d, Fmoc CH2), 4,46 ja 4,71 (kumpikin 1H, m, Phe ja Lys CO-CH), 7,10 - 7,80 (13H, m, Ph); MS (FAB) 729 (MH)*, 751 (M+Na)\ 767 (M+K)*; 112 116038
Anal, laskettu C41H52N408-H20: lie: C-65,93, H-7,32, N-7,66; Havaittu: C-66,07, H-7,32, N-7,66.
Esimerkki 67
Boc-NH-C-Phe-Ne-Fmoc-Lys-PAB-OH:n valmistus (68) 5 Yhdistettä Boc-NH-C-Phe-N€-Fmoc-Lys (67) (15,716 g, 21,56 mmol) ja p-aminobentsyylialkoholia (3,983 g, 1,5 ekv. ) THF:ssä (100 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin EEDQ:lla (8,000 g, 1,5 ekv.). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. 16 tuntia ja haihdutettiin sitten kuiviin 10 (vesihauteen lämpötila 30 °C). Jäännös trituroitiin eetterissä (100 ml) ja valkoinen kiinteä tuote kerättiin suodattamalla ja pestiin eetterillä (16,453 g, 92 %). 1H-NMR (DMS0-d6) 6 0,90 - 1,80 (12H, m, Lys ja kaproyyli CH2), 1,35 (9H, s, CH3), 2,00 (2H, t, C0-CH2), 2,66 - 3,07 (6H, 15 m, N-CH2 ja Phe CH2), 4,19 (1H, m, Fmoc CH), 4,23 (2H, d, Fmoc CH2), 4,36 ja 4,58 (kumpikin 1H, m, Phe ja Lys CO-CH), 4,41 (2H, S, PAB CH2), 7,10 - 8,22 (17H, m, Ph), 9,94 (1H, brs, PAB NH); MS (FAB) 834 (MH)*, 856 (M+Na) + , 872 (M+K) + ; Anal, laskettu C48H59N508-l/2 H20:lle: 20 C-68,39, H-7,17, N-8,31;
Havaittu: C-68,18, H-7,12, N-8,42.
Esimerkki 68 MC-NH-C-Phe-Nc-Fmoc-Lys-PAB-OH:n valmistus (69)
Yhdiste Boc-NH-C-Phe-NE-Fmoc-Lys-PAB-0H (60) (2,1323 25 g, 2,860 mmol) liuotettiin 2:1 CH2C12/TFA:iin (30 ml).
-j. Seosta sonikoitiin huoneenlämpötilassa n. 15 minuuttia ja jätettiin sitten seisomaan n. yhdeksi tunniksi. Liuottimet haihdutettiin ja jäljelle jäänyttä ruskeaa öljyä kuivat- . , tiin tyhjössä n. yksi tunti. Eetteriä (75 ml) lisättiin ja » » · ’)*.* 30 öljyä sekoitettiin kunnes se muuttui kiinteäksi. Kiinteä f * ';·* aine kerättiin suodattamalla, pestiin eetterillä ja kui- : ·.. vattiin tyhjössä useita tunteja. Sitten se liuotettiin 3:1 DME/veteen (40 ml) ja käsiteltiin liuoksella, jossa oli MC-NHS (788,2 mg, 1 ekv.) DME:ssä (20 ml) ja kiinteää * 35 NaHC03 (540 mg, 2,5 ekv.). Seosta sekoitettiin huoneenläm- 113 116038 pötilassa n. 16 tuntia. Niin paljon DME kuin mahdollista poistettiin rotavaporissa (vesihaudelämpötila n. 30 °C) jättämään kumimainen kiinteä aine (joka lopulta kiinteytyi) vedessä. Kiinteä aine suodatettiin, pestiin vedellä 5 ja kuivattiin tyhjössä. Sitten se trituroitiin eetterissä (25 ml) ja kiinteä tuote kerättiin suodattamalla ja pestiin eetterillä (1,4283 g, 60 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D) δ 1,00 - 1,90 (18H, m, Lys ja kaproyyli CH2), 2,07 (4H, m, Phe CH2CO-CH2), 2,22 (2H, t, C0-CH2), 3,05 (4H, m, Lys N-CH2 10 ja kaproyyli N-CH2), 3,41 (2H, m, M-CH2), 4,11 (1H, t, Fmoc CH), 4,28 (2H, d, Fmoc CH2), 4,38 ja 4,63 (kumpikin 1H, m, Phe ja Lys CO-CH), 4,52 (2H, s, PAB CH2), 5,61 (2H, s, M CH), 6,96 - 7,71 (17H, m, Ph); MS (FAB) 927,5 (MH)\ 949,3 (M+Na)*, 965,3 (M+K)*; tarkka massa laskettuna C53H63N609;lie: 15 927,4657; havaittu: 927,4642.
Esimerkki 69 MC-NH-C-Phe-Ne-Fmoc-Lys-PABC-PNP:n valmistus (70)
Yhdistettä MC-NH-C-Phe-Ne-Fmoc-Lys-PAB-OH (69) (1,3783 g, 1,487 mmol) ja p-nitrofenyylikloroformiaattia 20 (449,5 mg, 1,5 ekv.) CH2Cl2:ssa (50 ml) huoneenlämpötilas sa käsiteltiin pyridiinillä (0,18 ml, 1,5 ekv.). Suspen-: ” siota sonikoitiin huoneenlämpötilassa n. 30 minuuttia ja : sekoitettiin sitten n. 16 tuntia. Lisää p-nitrofenyyliklo- • » *.**: roformiaattia (150 mg, 0,5 ekv.) ja pyridiiniä (0,06 ml, • » ·*/·· 25 0,5 ekv.) lisättiin ja seosta sonikoitiin taas n. 30 mi- *;· nuuttia ja sekoitettiin n. neljä tuntia. Käsiteltiin kuten edellä on kuvattu yhdisteelle MC-Val-Cit-PABC-PNP (61) antamaan raaka tuote kumimaisena kiinteänä aineena. Tämä ; kromatografoitiin piidioksidilla eluoiden 1) 35:1, 2) 25:1 ... 30 ja 3) 20:1 CH2Cl2/metanolilla antamaan tuote vaaleankeltai- i’ sena kumimaisena kiinteänä aineena (593,1 mg, 0,543 mmol).
: ’ 1H-NMR (CDC13/CD30D) 6 1,10 - 1,95 (18H, m, Lys ja kaproyyli CH2), 2,12 (4H, m, kaproyyli C0-CH2), 3,00 (2H, m, Phe CH2), 3,11 (4H, m, Lys ja kaproyyli N-CH2), 3,44 (2H, t, M-CH2), 35 4,13 (1H, t, Fmoc CH), 4,32 (2H, d, Fmoc CH2), 4,39 ja 4,63 1 1 6038 114 (kumpikin 1H, m, Phe ja Lys CO-CH), 5,18 (2H, s, PAB CH2), 6,63 (2H, s, M CH), 7,00 - 8,25 (21H, m, Ph); MS (FAB): 1114 (M+Na) + , 1130 (M+K) + ; tarkka massa laskettuna C50H66N7O13:lie; 1092,4719; havaittu: 1092,4680.
5 Esimerkki 70 MC-NH-C-Phe-Ne-Fmoc-Lys-PABC-DOX: in valmistus (71) Yhdisteitä MC-NH-C-Phe-NE-Fmoc-Lys-PABC-PNP (70) (382,8 mg, 0,350 mmol) ja DOX . HC1 (213 mg, 1,05 ekv. ) NMP:ssä (16 ml) käsiteltiin di-isopropyylietyyliamiinilla 10 (61 μΐ, 1 ekv.). Seoksen annettiin seistä pimeässä kaksi päivää. Käsittely kuten edellä on kuvattu yhdisteelle MC-Val-Cit-PABC-Dox (62) antoi tuotteen oranssisena lasimai-sena aineena (293,1 mg, 56 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D) δ 1,00 -1,85 (20H, m, Lys ja kaproyyli CH2, D-rengas CH2), 1,21 15 (3H, d, sokeri CH3), 2,09 (4H, m, kaproyyli CO-CH2), 2,17 (2H, m, D-rengas CH2), 2,80 - 3,27 (8H, m, Lys ja kaproyyli N-CH2, sokeri CH2, Phe CH2), 3,40 (2H, t, M-CH2), 3,53 (1H, brs, HO-CH), 3,78 (1H, m, sokeri N-CH), 3,99 (3H, s, 0-CH3), 4,11 (2H, t, Fmoc CH ja sokeri CH3-CH), 4,29 (2H, 20 d, Fmoc CH2), 4,33 ja 4,57 (kumpikin 1H, m, Phe ja Lys CO-CH), 4,71 (2H, s, CO-CH2-OH), 4,89 (2H, q, PAB CH2), 5,20 (1H, brs, anomeerinen CH), 5,42 (1H, brs, DOX Ph-CH), 6,60 ;' ·’·· (2H, s, M CH), 6,90 - 8,00 (20H, m. Ph); MS (FAB) 1519 (M+Na) + , 1534 (M+K)*; tarkka massa laskettuna 25 C81HegN7021Na:lie: 1518,6009; havaittu: 1518,5962.
.:· Esimerkki 71 MC-NH-C-Phe-Lys-PABC-DOX . HCl:n valmistus (72) Yhdiste MC-NH-C-Phe-Ne-Fmoc-Lys-PABC-Dox (71) (95,2 mg, 63,6 pmol) NMP:ssä (0,3 ml) laimennettiin THF:llä 30 (10 ml) ja käsiteltiin sitten sekoittaen 2-%:isella DBU:lla THF:ssä (10 ml). Noin 45 sekunnin kuluttua lisät-.. tiin eetteriä (40 ml) ja saatu punainen kiinteä aine ke- rättiin suodattamalla ja pestiin eetterillä. Kiinteä aine suspendoitiin uudestaan eetteriin (10 ml) ja käsiteltiin ‘ , 35 IM HCl:llä eetterissä (10 ml). Useiden minuuttien kulut- 115 116038 tua oranssinen kiinteä aine suodatettiin erilleen, pestiin useita kertoja eetterillä ja trituroitiin CH2Cl2:ssa (25 ml). Saatu oranssinpunainen kiinteä aine kerättiin suodattamalla ja kromatografoitiin LH-20 lipofiilisellä 5 sephadexillä eluoiden 1:1 CH2Cl2/metanolilla. Tuotetta sisältävät jakeet yhdistettiin ja kromatografoitiin uudestaan LH-20:llä eluoiden metanolilla antamaan tuote orans-sisena lasimaisena aineena, jossa oli pieniä määriä epäpuhtauksia, kuten HPLC:llä osoitettiin (40,2 mg, 48,2 %). 10 1H-NMR (CDCI3/CD3OD) 6 (valitut huiput) 1,00 - 1,95 (23H, m, sokeri CH3, Lys ja kaproyyli CH2, D-rengs CH2), 2,00 - 2,40 (6H, m, kaproyyli C0-CH2 ja D-rengas CH2), 2,96 (2H, m, +H3N-CH2), 4,05 (3H, s, 0-CH3), 4,72 (2H, s, C0-CH2-0H), 4,93 (2H, brs, PAB CH2), 5,17 (1H, brs, anomeerinen CH), 15 5,42 (1H, brs, DOX Ph-CH), 6,63 (2H, brs, M CH), 6,90 - 8,20 (12H, m, Ph).
Esimerkki 72
Fmoc-Phe-Ne-Mtr-Lys-NHS:n valmistus (73)
Sekoituksenalaista seosta, jossa oli yhdisteitä 20 Fmoc-Phe-Ne-Mtr-Lys (44) (1,8873 g, 2,40 mmol) ja NHS
(303,2 mg, 1,1 ekv.) CH2Cl2:ssa (40 ml) n. 0 °C:ssa, käsi-; ’* teltiin DCC:llä (543,6 mg, 1,1 ekv.). Noin 24 tunnin ku- • luttua huoneenlämpötilassa DCU suodatettiin erilleen ja ϊ suodos haihdutettiin ja jäännös otettiin talteen etyyli- : 25 asetaattiin. Tämä pestiin vedellä (2x) ja suolaliuoksella, ·;· kuivattiin ja haihdutettiin. Jäännös kromatografoitiin piidioksidilla eluoiden 1:1 etyyliasetaatti/heksaanilla. Suurin osa tuotteesta hajosi pylväässä (472,5 mg, 22 %).
; 1H-NMR (CDC13) 6 1,00 - 1,98 (6H, m, CH2), 2,01 (2H, t, 30 N-CH2), 2,77 (4H, brs, NHS CH2), 3,09 (2H, m, Phe CH2), 3,76 (3H, s, 0-CH3), 4,10 - 4,51 (4H, m, Fmoc CH2 ja CH, Phe * '·* CO-CH), 4,83 (1H, m, Lys CO-CH), 5,48 ja 6,41 (kumpikin 1H, m, NH), 6,79 (2H, d, MeOPh o-CH), 7,06 - 7,80 (25H, .Λ m, Ph).
116 116038
Esimerkki 73
Fmoc-Phe-Nc-Mtr-Lys-GABA:n valmistus (74)
Liuos, jossa oli yhdistettä Fmoc-Phe-N€-Mtr-Lys-NHS (73) (472,5 mg, 0,534 mmol) DME:ssä (25 ml), lisättiin 5 sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli yhdisteitä GABA (83 mg, 1,5 ekv.) ja NaHC03 (67 mg, 1,5 ekv. ) vedessä (15 ml) huoneenlämpötilassa. 16 tunnin kuluttua huoneenlämpötilassa poistettiin niin paljon DME:tä kuin mahdollista rotavaporissa ja saatu suspensio jaettiin etyyli-10 asetaatin ja pH 5 -puskurin kesken. Orgaaninen faasi pestiin vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin. Jäännös trituroitiin eetterissä ja saatu valkoinen kiinteä aine kerättiin suodattamalla (387,0 mg, 83 %). XH NMR (CDC13) 6 0,96 - 1,99 (8H, m, CH2), 2,10 - 2,42 (4H, 15 m, Lys N-CH2 ja CO-CH2), 3,03 (2H, m, Phe CH2), 3,22 (2H, m, GABA N-CH2), 4,03 - 4,66 (5H, m, Fmoc CH2 ja CH, CO-CH), 6,78 (2H, d, MeOPh o-CH), 7,00 - 7,77 (25H, m, Ph); MS (FAB) 895 (M+Na)\ 911 (M+K)\
Esimerkki 74 20 Fmoc-Phe-Nc-Mtr-Lys-GABA-MMC:n valmistus (75)
Sekoituksenalaista seosta, jossa oli yhdisteitä Fmoc-Phe-NE-Mtr-Lys-GABA (74) (296,9 mg, 0,340 mmol), HOBt I (46 mg, 1 ekv.) ja MMC (119,4 mg, 1,05 ekv.) NMP:ssä
f I
·'/ : (3 ml) ja CH2Cl2:ssa (3 ml) huoneenlämpötilassa, käsitel- 25 tiin DCC:llä (77,2 mg, 1,1 ekv.). Noin 14 tunnin kuluttua • · ·;· huoneenlämpötilassa lisättiin etyyliasetaattia ja liuos . pestiin vedellä (3x) ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin. Jäännös kromatografoitiin piidioksidilla ;it eluoiden 25:1 CH2Cl2/metanolilla antamaan tuote purppuran-
I l I
30 värisenä lasimaisena aineena (303,1 mg, 75 %). 1H-NMR
» » ’;·' (CDCI3) 6 0,97 - 1,90 (8H, m, CH2), 1,71 (3H, s, MMC CH3), ;'*·· 2,08 (2H, m, Lys N-CH2), 2,46 (2H, m, C0-CH2), 2,99 (2H, m, ,* I Phe CH2), 3,12 (2H, m, GABA N-CH2), 3,20 (3H, s, MMC 0-CH3), 3,28 - 3,55 (3H, m, C-l, C-2 ja C-3 CH), 3,68 (1H, ABq, 35 C-9 CH), 3,73 (3H, s, Mtr 0-CH3), 4,04 - 4,51 ja 4,64 (7H, 117 116038 m, Fmoc CH2 ja CH, C-10 CH2, CO-CH), 5,14 (2H, br, NH2), 5,38, 5,49, 5,70 ja 6,67 (kukin 1H, br, NH), 6,79 (2H, d, MeOPh o-CH), 7,03 - 7,78 (25H, m, Ph); MS (FAB) 1189,8 (MH)\ 1211 (M+Na) + , 1227,5 (M+K)\ 5 Esimerkki 75
Phe-Ne-Mtr-Lys-GABA-MMC:n valmistus (76)
Yhdistettä Fmoc-Phe-Ne-Mtr-Lys-GABA-MMC (75) (236,1 mg, 0,198 mmol) CH2Cl2:ssa (2 ml) huoneenlämpötilassa käsiteltiin dietyyliamiinilla (2 ml). Noin kolmen tunnin ku-10 luttua liuottimet haihdutettiin ja jäännös huuhdeltiin CH2Cl2:lla (10 ml). Jäännös kromatografoitiin piidioksidilla eluoiden 1) 25:1 ja 2) 15:1 CH2Cl2/metanolilla antamaan tuote purppuranvärisenä lasimaisena aineena (157,4 mg, 82 %). 1H-NMR (CDC13) δ 1,15 - 1,83 (8H, m, CH2), 1,77 (3H, 15 s, MMC CH3), 2,10 (2H, t, Lys N-CH2), 2,46 (2H, m, C0-CH2), 2,69 ja 3,21 (kumpikin 1H, ABq, Phe CH2), 3,19 (3H, s, MMC O-CHj), 3,20 - 3,53 (5H, m, GABA N-CH2, C-l, C-2 ja C-3 CH), 3,48 (2H, brs, NH2), 3,68 (2H, m, C-9 CH ja Phe CO-CH), 3,76 (3H, s, Mtr 0-CH3), 4,09 ja 4,82 (kumpikin 1H, t 20 ja ABq, C-10 CH2), 4,29 (1H, m, Lys CO-CH), 4,41 (1H, d, C-3 CH), 5,29 (2H, brs, NH2), 6,60 (1H, brt, GABA NH), 6,79 : '·· (2H, d, MeOPh o-CH), 7,10 - 7,48 (17H, m, Ph), 7,72 (1H, • V d, amidi NH); MS (FAB) 967,4 (MH)+, 989,2 (M+Na) + , 1005,3 (M+K)\ 25 Esimerkki 76 MC-Phe-Nc-Mtr-Lys-GABA-MMC:n valmistus (77) * » « *
Liuos, jossa oli yhdistettä Phe-Ne-Mtr-Lys-GABA-MMC (76) (108,9 mg, 0,113 mmol) CH2Cl2:ssa (15 ml), lisättiin . . MC-NHS:ään (0,124 mmol). Seosta sekoitettiin huoneenlämpö- 30 tilassa kolme päivää ja sitten liuotin haihdutettiin.
» * ’*;·* Jäännös kromatografoitiin piidioksidilla eluoiden 1) 20:1 : ja 2) 15:1 CH2Cl2/metanolilla antamaan tuote purppuranväri- i ; senä lasimaisena aineena (75,8 mg, 58 %). 1H-NMR (CDC13)
6 1,05 - 1,90 (14H, m, CH2), 1,76 (3H, s, MMC CH3), 2,07 35 (4H, m, Lys N-CH2 ja kaproyyli C0-CH2), 2,49 (2H, m, GABA
118 116038 CO-CH2), 2,98 jaa 3,20 (kumpikin 1H, ABq, Phe CH2), 3,19 (2H, m, GABA N-CH2), 3,23 (3H, s, MMC 0-CH3), 3,33 (2H, t, M-CH2), 3,20 - 3,53 (3H, m, C-l, C-2 ja C-3 CH), 3,68 (1H, ABq, C-9 CH), 3,78 (3H, s, Mtr 0-CH3), 4,11 ja 4,62 (kumpi-5 kin 1H, t jaABq, C-10 CH2), 4,24 (1H, m, Lys CO-CH), 4,49 (1H, d, C-3 CH), 5,19 (2H, br, NH2), 6,27 (1H, d, NH), 6,67 (2H, s, M CH), 6,72 (1H, brt, NH), 6,80 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,10 - 7,47 (17H, m, Ph), 7,19 (1H, d, NH).
Esimerkki 77 10 MC-Phe-Lys-GABA-MMC · ClCHjCO^tn valmistus (78)
Yhdistettä MC-Phe-N€-Mtr-Lys-GABA-MMC (77) (43,2 mg, 37,2 pmol) CH2Cl2:ssa (2 ml) käsiteltiin anisolilla (0,405 ml, 100 ekv.) ja kloorietikkahapolla (1 M CH2Cl2:ssa, 0,40 ml, 11 ekv.). Noin kolmen tunnin kuluttua 15 lisättiin eetteriä (5 ml) ja seosta pidettiin pakastimessa n. yksi tunti. Saatu kiinteä aine kerättiin suodattamalla, pestiin eetterillä ja trituroitiin CH2Cl2:ssa (36,1 mg, 99 %). 1H-NMR (CDC13/CD30D) δ 1,03 - 1,82 (8H, m, CH2), 1,71 (3H, s, MMC CH3), 2,08 (2H, t, kaproyyli CO-CH2), 2,40 (2H, 20 brt, GABA C0-CH2), 2,83 (4H, m, GABA N-CH2 ja N*-CH2), 3,39 (2H, t, M-CH2), 3,59 (1H, ABq, C-9 CH), 3,95 (1H, t, C-10 CH2), 4,18 (1H, m, Lys CO-CH), 4,42 (1H, d, C-3 CH), 4,67 V (2H, m, Phe CO-CH ja C-10 CH2), 6,63 (2H, s, M CH), 7,17 (5H, m, Ph); HPLC; (C-18, 15 cm:n pylväs, 65:35 metano-: 25 li/50 mM trietyyliammoniiumformiaatti puskuri (pH 2,8), ·· 1 ml/min., 360 nm): yksittäinen huippu, retentioaika: . 2,19 min.
Esimerkki 78
Taksoli-2'-etyylikarbonaatti-7-kloroformiaatinval-30 mistus (83)
Sekoituksenalaista liuosta, jossa oli taksoli-2 : ‘ · etyylikarbonaattia (82) (154,2 mg, 0,1665 mmol) CH2Cl2:ssa : (3 ml) 0 °C:ssa argonin paineessa, käsiteltiin pyridiinil- *, lä (13,5 μΐ, 1 ekv.) ja sitten difosgeenilla (10,0 ml, 35 0,5 ekv.). Jäähaude poistettiin ja seosta sekoitettiin 119 116038 huoneenlämpötilassa yksi tunti ja jäähdytettiin uudestaan 0 °C:seen ja käytettiin välittömästi.
Esimerkki 79 MC-Phe-Nc-Mtr-Lys-PABC-7-taksoli-2' -etyylikarbonaa-5 tin valmistus (84)
Liuos, jossa oli yhdistettä MC-Phe-Ne-Mtr-Lys-PAB-OH (47) (143,9 mg, 0,1665 mmol) CH2Cl2:ssa (4 ml), lisättiin edeltävään taksoli-2' -etyylikarbonaatti-7-kloroformi-aatin (83) (0,1665 mmol) liuokseen n. 0 °C:ssa. Jäähaude 10 poistettiin ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa n. kolme tuntia. Sitten lisättiin etyyliasetaattia ja liuos pestiin pH 5-puskurilla, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin antamaan väritön lasimainen aine, joka kromatografoitiin piidioksidilla eluoiden 1) 2:1 ja 15 2) 1:1 CH2Cl2/etyyliasetaatilla antamaan tuote värittömänä lasimaisena aineena (251,0 mg, 83 %). XH-NMR (CDC13) δ 1,16, 1,21 ja 1,78 (kukin 3H, s, C-16, C-17 ja C-19 CH3), 1,10 - 1,90 (12H, m, Lys ja kaproyyli CH2), 1,31 (3H, t, etyyli CH3), 1,91 ja 2,60 (kumpikin 1H, m, C-6 CH2), 2,04 20 (3H, s, C-18 CH3), 2,12 (4H, t, Lys N-CH2 ja kaproyyli C0-CH2), 2,18 ja 2,48 (kumpikin 3H, s, Ac CH3), 2,22 ja ” 2,40 (kumpikin 1H, ra, C-14 CH2), 3,03 (2H, m, Phe CH2), ; 3,42 (2H, t, kaproyyli N-CH2), 3,97 (1H, d, C-3 CH), 4,29 ' I (2H, m, C-20 CH2), 4,21 (2H, q, etyyli CH2), 4,46 ja 4,72 25 (kumpikin 1H, m, Phe ja Lys CO-CH), 4,96 (1H, d, C-5 CH), ··· 5,16 (2H, q, PAB CH2), 5,44 (1H, d, C-2' CH), 5,56 (1H, m, C-7 CH), 5,70 (1H, d, C-2 CH), 5,97 (1H, m, C-3' CH), 6,26 (1H, m, C-13 CH), 6,40 (1H, s, C-10 CH), 6,65 (2H, s, M ; CH), 6,78 (2H, d, MeOPh o-CH), 6,98 ja 7,60 (kumpikin 1H, 30 d, NH), 7,04 - 8,20 (31H, m, Ph), 8,38 (1H, brs, PAB NH); ’·;** MS (FAB) 1837,2 (M+Na)% 1853,5 (M+K)\ 120 116038
Esimerkki 80 MC-Phe-Lys-PABC-7-taksoli-21-etyylikarbonaatti · CICHjCOjHcn valmistus (85)
Sekoituksenalaista liuosta, jossa oli MC-Phe-Ne-Mtr-5 Lys-PABC-7-taksoli-2'-etyylikarbonaattia (84) (80,2 mg, 44,2 pmol) CH2Cl2:ssa (3,5 ml) huoneenlämpötilassa, käsiteltiin anisolilla (0,48 ml, 100 ekv.) ja kloorietikkaha-polla (1 M CH2Cl2:ssa, 0,442 ml, 10 ekv.)· Noin kolmen tunnin kuluttua lisättiin eetteriä (15 ml) ja seos pidettiin 10 pakastimessa n. kaksi tuntia. Saatu valkoinen kiinteä aine kerättiin suodattamalla ja pestiin eetterillä (72,2 mg, 99 %). ^-NMR (CDC13) 6 1,16, 1,20 ja 1,80 (kukin 3H, s, C-16, C-17 ja C-19 CH3), 1,10 - 1,90 (12H, m, Lys ja kaproyyli CH2), 1,30 (3H, t, etyyli CH3), 1,91 ja 2,58 15 (kumpikin 1H, m, C-6 CH2), 2,02 (3H, s, C-18 CH3), 2,13 (2H, m, kaproyyli C0-CH2), 2,17 ja 2,45 (kumpikin 3H, s, Ac CH3), 2,20 ja 2,39 (kumpikin 1H, m, C-14 CH2), 2,97 (2H, m, Lys N-CH2), 3,01 (2H, m, Phe CH2), 3,42 (2H, t, kaproyyli N-CH2), 3,97 (1H, d, C-3 CH), 4,29 (4H, m, C-20 CH2 ja 20 etyyli CH2), 4,56 ja 4,83 (kumpikin 1H, m, Phe ja Lys CO-CH), 4,95 (1H, d, C-5 CH), 5,17 (2H, q, PAB CH2), 5,42 (1H, d, C-2’ CH), 5,54 (1H, m, C-7 CH), 5,69 (1H, d, C-2 • : CH), 5,97 (1H, m, C-3' CH), 6,29 (1H, m, C-13 CH), 6,41 : (1H, s, C-10 CH), 6,66 (2H, s, M CH), 6,98 ja 8,39 (kumpi- . . ; 25 kin 1H, d, NH), 7,08 - 8,14 (19H, m, Ph), 9,25 (1H, brs, PAB NH).
Esimerkki 81 ’ Konjugaatin valmistus
Liuosta (10 ml), jossa oli yhdistettä mAb BR96 ·'- 30 (10,46 mg/ml, 6,54 x 10*5M; väkevyys määritettynä UV ab- *,,,· sorptiolla 280 nmrssä, 1 mg/ml yhdistettä mAb vastaa 1,4 abs. yksikköä) 0,125 M kaliumfosfaattipuskurissa, käsiteltiin vastavalmistetulla liuoksella (0,523 ml), jossa oli 10 mM ditiotreitolia (DTT) n. 37 °C:ssa n. kolme tuntia 35 typen paineessa. Liuos siirrettiin Anicon kennoon ja dia- 121 116038 suodatettiin fosfaattipuskurisuolaliuosta (PBS) vastaan, kunnes ulosvirtaus oli vapaa HS-ryhmistä (Ellman-reagens-si). mAb- ja SH-ryhmän pitoisuus määritettiin (10,11 mg/ml (6,32 x 10'5 M) ja 4,48 x 10-4 M vastaavasti, edustaen 5 SH/mAb moolisuhdetta 7,01). Tätä liuosta käsiteltiin MC-Phe - Ly s - PABC - DOX liuoksella (5 mg/ml, 4,77 x 10-3 M) tislatussa vedessä (1,2 ml) ja jätettiin sitten seisomaan yön yli n. 4 °C:seen. Liuos siirrettiin dialyysiputkeen ja dialysoitiin kolme kertaa 1 1 PPS vastaan n. 24 tuntia n. 10 4 °C:ssa. Konjugaattiliuos suodatettiin Millex-GV 0,22 pm suodatinyksikön (Millipore Corp.) läpi ja suodosta ravisteltiin varovasti useita tunteja Bio-palloilla (Bio-Rad Laboratories), mitä seurasi toinen suodattaminen Millivex-GV-yksikön läpi. DOX:n pitoisuus määritettiin UV-absor-15 banssista 495 nm:ssä (€ = 8030, 283 pm, 164 pg/ml) ja mAb:n 280 nmcssä korjauksella DOX absorbanssille 280 nm:ssä seuraavan kaavan mukaisesti: mAb (mg/ml) = A280 - (0,724 x A495) 20 1,4 jossa A on havaittu absorbanssi kyseisellä aallonpituudella*: la.
Esimerkki 82 .·, : 25 Liuosta, jossa oli yhdistettä Phe-(Ne-MTR)Lys-PABC-
Dox tarkoituksenmukaisessa liuottimessa, käsiteltiin ekvi-*’;* valentilla määrälläN-sukkiini-imidyyli-p-(jodiasetamido)- bentsoaattia. Liuosta pidettiin n. 30 °C:ssa n. yksi tunti ja sitten liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa.
: 30 Suojaryhmä MTR poistettiin peptidistä tavalliseen tapaan ja jodiasetyloitu peptidi liuotettiin veteen tai orgaani-seen veteen sekoittuvaan liuottimeen tunnetuksi pitoisuu-• , deksi. Tarkoituksenmukainen määrä tätä liuosta lisättiin / tioloidun mAb BR96:n liuokseen PBS:ssä sen saattamiseksi ’.* 35 reagoimaan kaikkien tioliryhmien kanssa, joita mAb:ssa oli 122 116038 muodostunut. Liuosta pidettiin n. 4 °C:ssa n. yksi tunti ja sitten kromatografoitiin ekskluusiokromatografisesti eliminoiden alhaisen molekyylipainon yhdisteet konjugaa-tista. Lopuksi konjugaattiliuosta ravisteltiin pienen mää-5 rän kanssa biopalloja muutama tunti ja suodatettiin sitten 0,22 mikronin suodattimen läpi. mAb:n ja D0X:in pitoisuudet määritettiin niiden absorptiosta 280 ja 495 nmzssä, vastaavasti ja lääkkeen MR suhteessa mAb:aan laskettiin.
Esimerkki 83 10 Liuosta, jossa oli yhdistettä Phe-(Ne-MTR)Lys-PABC-
Dox tarkoituksenmukaisessa liuottimessa, käsiteltiin ekvivalenttia määrällä N-sukkiini-imidyyli-3-(2-pyridynyyli-ditio)propionaattia (SPDP). Suojaryhmä MTR poistettiin peptidistä tavalliseen tapaan ja jodiasetyloitu peptidi 15 liuotettiin veteen tai orgaaniseen veteen sekoittuvaan liuottimeen tunnetuksi pitoisuudeksi. Tarkoituksenmukainen määrä tätä liuosta lisättiin tioloidun mAb BR96:n liuokseen PBSzssä sen saattamiseksi reagoimaan kaikkien tioli-ryhmien kanssa, joita mAbzssa oli muodostunut. Liuosta 20 pidettiin n. 4 eC:ssa n. yksi tunti ja sitten kromatografoitiin ekskluusiokromatografisesti eliminoiden alhaisen molekyylipainon yhdisteet konjugaatista. Lopuksi konjugaattiliuosta ravisteltiin pienen määrän kanssa biopalloja ·. i muutama tunti ja suodatettiin sitten 0,22 mikronin suodat- : 25 timen läpi. mAb:n ja DOXrin pitoisuudet määritettiin nii- ··· den absorptiosta 280 ja 495 nm:ssä, vastaavasti ja lääk- keen MR suhteessa mAb:aan laskettiin.
Keksintöä on kuvattu viitaten spesifisiin esimerk-; , . keihin, aineisiin ja tuloksiin. Kuten alaan perehtynyt t t * 30 huomaa, vaihtoehtoisia menetelmiä voidaan käyttää keksinnön tavoitteiden aikaansaamiseksi. Tällaiset vaihtoehtoa-; '·· set menetelmät kuuluvat tämän keksinnön henkeen, kuten : : seuraavissa patenttivaatimuksissa on määritetty.

Claims (26)

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen yhdis teen valmistamiseksi, jolla on kaava (I) L-(I-A - Ym - Zm - X„ - W„-3-D (I) jossa L on ligandi; 10. on karboksyylihappoyksikkö; Y on aminohappo; Z on aminohappo; X ja W ovat kumpikin itsetuhoutuvia väliyhdisteitä; D on lääkeosa, jonka päärungossa on kemiallisesti 1. reaktiivinen funktionaalinen ryhmä, joka mainittu funktio naalinen ryhmä valitaan ryhmästä primaarinen tai sekundaarinen amiini, hydroksyyli, sulfhydryyli, karboksyyli, alde-hydi tai ketoni; n on kokonaisluku 0 tai 1, sillä edellytyksellä, 20 että n ei voi olla kokonaisluku 0 molemmille Xn:lle ja Wn: lie; ja h m on kokonaisluku 1, 2, 3, 4, 5 tai 6, I I I : ·’ tunnettu siitä, että kiinnitetään ligandi ·. peptidisidososaan antamalla ligandissa olevan sulfhydryyli- ·.'·· 25 ryhmän reagoida mainitun linkkerin karboksyyliasyyliryhmän kanssa.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Y on alaniini, väliini, leu- : .·, siini, isoleusiini, metioniini, fenyylialaniini, tryptofaa- i t · 30 ni tai proliini.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, ; tunnettu siitä, että Z on lysiini, lysiini, joka on • · suojattu asetyylillä tai formyylillä, arginiini, arginiini, joka on suojattu tosyylillä tai nitroryhmillä, histidiini, ’ 35 ornitiini, ornitiini, joka on suojattu asetyylillä tai for myylillä, tai sitrulliini. 116038
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Y-Z on fenyylialaniini-lysii-ni, valiini-sitrulliini tai valiini-lysiini.
5. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-4 mukainen 5 menetelmä, tunnettu siitä, että D on sytotoksinen lääke.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että D on aminoa sisältävä sytotoksinen osa mitomysiini C, mitomysiini A, daunorubisiini, 10 doksorubisiini, N-(5,5-diasetoksipentyyli)doksorubisiini, aminopteriini, aktinomysiini, bleomysiini, 9-aminokamptote-siini, N8-asetyylispermidiini, 1-(2-kloorietyyli-l,2-dime-taanisulfonyylihydratsidi, tallysomysiini tai niiden johdannaisia . i 15
7. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että D on hydroksyyliä sisältävä sytotoksinen lääkeaineosa etoposidi, kamptotesiini, takso-li, esteramisiini, 1,8-dihydroksi-bisyklo[7.3.1]trideka-4-eeni-2,6-diyyli-13-oni, angidiini, doksorubisiini, morfo-20 liini-doksorubisiini, N-(5,5-diasetoksipentyyli)doksorubisiini, vinkristiini, vinblastiini tai niiden johdannaisia.
8. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, » » · ·*·' tunnettu siitä, että D on sulfhydryyliä sisältävä \sytotoksinen lääkeosa esperamisiini ja 6-merkaptopuriini 25 tai niiden johdannaisia. h’
9. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että D on karboksyyliä sisältävä lääkeosa metotreksaatti, kamptotesiini (laktonin : .·. avoin rengasmuoto), voihappo, retinoiinihappo tai niiden t » » If* ft ,·*·, 30 johdannaisia. * » 7‘
10. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, ; ’·· tunnettu siitä, että D on aldehydiä ja ketonia si- : _ί sältävä lääkeosa, joka on antrasykliini.
11. Patenttivaatimuksen 1-10 mukainen menetelmä, ’ \ 35 tunnettu siitä, että L on immunoglobuliini tai sen » antigeeniä sitova fragmentti. 116038
12. Patenttivaatimuksen 11 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että L on BR96, BR64, L6, relaksoi-tu BR96, relaksoitu BR64, relaksoitu L6, kimeerinen BR96, kimeerinen BR64, kimeerinen L6, relaksoitu kimeerinen BR96, 5 relaksoitu kimeerinen BR64, relaksoitu kimeerinen L6 tai niiden antigeeniä sitovia fragmentteja.
13. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-10 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että L on epider-maalinen kasvutekijä, bombesiini, transferriini, gastriini, 10 gastriinia vapauttava peptidi, verihiutale kasvutekijä, IL-2, IL-6, TGF-α, VGF, insuliini tai insuliininkaltainen kas-j vutekijä I tai II.
14. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-10 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että L on hiilihyd- 15 raatti, lektiini tai tarkoituksenmukainen alhaisen tiheyden lipoproteiini.
15. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-14 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että X on yhdiste, jolla on kaava (III) 20 * j --—(IXI) k ΤΧγ-- : : o 25 itG* jossa T on O, N tai S.
16. Patenttivaatimuksen 15 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että X on p-aminobentsyylikarba- : .·. moyyli. » t t ,···, 30
17. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-14 mukai- > » nen menetelmä, tunnettu siitä, että X on yhdiste, : ’·· jolla on kaava -HN-R'-COT t * > ' 35 jossa R' on Ci-C5-alkyyli ja T on O, N tai S. 1 1 6038
18. Patenttivaatimuksen 16 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että X on γ-aminovoihappo, α,α-dime-tyyli-Y-aminovoihappo tai β,β-dimetyyli-Y-aminovoihappo.
19. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-14 mukai-5 nen menetelmä, tunnettu siitä, että X on yhdiste, jolla on kaava (V) T .A, 2 (v) -HN COOR 10 jossa T on O, N tai S ja R2 on H tai Ci-C5-alkyyli.
20. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-19 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että W on yhdiste, 15 jolla on kaava (VII) -oco (VII) , jossa T on 0, S tai N.
: ·' 21. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-20 mukai- » » nen menetelmä, tunnettu siitä, että A on yhdiste, ·.**: 25 jolla on kaava o 'v A N—(CH2)qCO- iii Λ ..... 30 O • > i ’·· jossa q on kokonaisluku 1-10. * * *
22. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-20 mukai-nen menetelmä, tunnettu siitä, että A on 4-(N- • » 35 sukkiini-imidometyyli) sykloheksaani-l-karbonyyli, m-sukkiini-imidobentsyyli, 4-(p-sukkiini-imidofenyyli)butyryyli, 4-(2- 116038 asetamido)bentsoyyli, 3-tio-propionyyli, 4-(1-tioetyyli) -bentsoyyli tax 6-(3-tiopropionyyliamido)heksanoyyli.
23. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, I tunnettu siitä, että se on BR96-sukkiini-imidokapro- j 5 yyli-valiini-lysiini-p-aminobentsyyli-karbamoyyli-dok- I sorubisiini, BR96-sukkiini-imidokaproyyli-valiini-sitrul- liini-p-aminobentsyyli-karbamoyyli-doksorubisiini, BR96-sukkiini-imidokaproyyli-fenyylialaniini-lysiini-p-ami-nobentsyyli-karbamoyyli-2'-taksoli, BR96-sukkiini-imidokap-10 royyli-fenyylialaniini-lysiini-p-aminobentsyyli-karbamo-yyi-7-taksoli, BR96-sukkiini-imidokaproyyli-fenyylialanii- ni-lysiini-p-aminobentsyyli-karbamoyyli-mitomysiini C tai BR96-sukkiini-imidokaproyyli-fenyylialaniini-lysiini-gamma-aminovoihappo-mitomysiini C. 15
24. Välituote, joka valitaan seuraavista; maleimi- dokaproyyli-fenyylialanyyli-lysyyli-p-aminobentsyylikarba- moyylidoksorubisiini dikloorietikkahappo; maleimidokaproyy- li-valinyyli-sitrullyyli-p-aminobentsyylikarbamoyyli- doksorubisiini; maleimidokaproyyli-fenyylialanyyli-lysyyli- 20 p-aminobentsyyli-karbamoyyli-7-taksoli kloorietikkahappo; >-; maleimidokaproyyli-fenyylialanyyli-lysyyli-p-aminobentsyyli- » * · k , karbamoyyli-7-taksoli-2'etyylikarbonaatti kloorietikkahappo; i * » \ maleimidokaproyyli-fenyylialanyyli-lysyyli-p-aminobentsyy- • « * ’likarbamoyyli-mitomysiini C kloorietikkahappo; maleimido-\ *: 25 kaproyyli-fenyylialanyyli-lysyyli-y-aminobutyryyli-mitomy- siini C kloorietikkahappo; fenyylialanyyli-N^-p-metoksi- * i * : : ,* trityyli-lysyyli-p-aminobentsyylialkoholi; maleimidokapro yyli-f enyylialanyyli-NE-p-metoks it r it yyli-lysyyli-p-amino-: bentsyylialkoholi; maleimidokaproyyli-fenyylialanyyli-NE-p- ,*·>, 30 metoksitrityyli-lysyyli-p-aminobentsyyli-p-nitrof enyyl ikar- * » ’ i * bonaatti; maleimidokaproyyli-fenyylialanyyli-N£-p-metoksitri- ; tyyli-lysyyli-p-aminobentsyylikarbamoyyli-doksorubisiini; 9-f luorenyyl imet oksi karbamoyyli-f enyyl ialanyyli-NE-p-metok-: - sitrityyli-lysyyli-p-aminobentsyylialkoholi; valinyyli-sit- » t ’ \ 35 rullyyli-p-aminobentsyylialkoholi; maleimidokaproyyli-vali- nyyli-sitrullyyli-p-aminobentsyylialkoholi; maleimidokapro- 116038 yyli-valinyyli-sitrullyyli-p-aminobentsyyli-p-nitro-fenyylikarbonaatti; maleimidokaproyyli-fenyylialanyyli-N^- p-metoksitrityyli-lysyyli-p-aminobentsyylikarbamoyyli-7-taksoli-2'-p-metoksitrityylieetteri; maleimidokaproyyli-5 f enyylialanyyli-Ns-p-metoksitrityyli-lysyyli-p-aminobents-yylikarbamoyyli-7-taksoli-2'-etyyli-karbonaatti; maleimido-kaproyyli-f enyylialanyyli-Ne-p-metoksit r i tyyli-ly syy li-p-aminobentsyylikarbamoyyli-mitomysiini C; 9-fluorenyyli-metoksikarbamoyyli-fenyylialanyyli-NE-p-metoksitrityyli-10 lysyyli-y-aminovoihappo; 9-fluorenyylimetoksikarbamoyyli-fenyylialanyyli-NE-p-metoksitrityyli-lysyyli- y-aminobutyryyli-mitomysiini C; fenyylialanyyli-NE-p-metoksitrityyli-lysyy-li-y-aminobutyryyli-mitomysiini C ja maleimidokaproyyli-fenyylialanyyli-ISk-p-met oksit r it yyli-lysyyli-y-aminobu-15 tyryyli-mitomysiini C.
25. Menetelmä maleimidokaproyyli-fenyylialanyyli-lysiini-p-aminobentsyyli-karbamoyyli-doksorubisiinin valmistamiseksi , tunnettu siitä, että: (a) saatetaan N“-9-fluorenyylimetoksikarbamoyyli-20 lysiini reagoimaan p-anisyylidifenyylimetyylikloridin kanssa antamaan Na-9-fluorenyylimetoksikarbamoyyli-Ne-p-metok- " sitrityylilysiini; » « * • ·’ (b) poistetaan suojaryhmä N“-9-fluorenyylimetoksi- *.* karbamoyyli-NE-p-metoksitrityyli-lysiinistä käsittelemällä • · ·.’·· 25 emäksellä antamaan Ne-p-metoksitrityylilysiini; |j* (c) valmistetaan 9-fluorenyylimetoksikarbamoyyli- fenyylialanyyli-N-hydroksisukkiini-imidi käsittelemällä 9-fluorenyylimetoksikarbamoyyli-fenyylialaniinia N-hydroksi-: sukkiini-imidillä kondensointiaineen läsnä ollessa; i » * 30 (d) kytketään Ne-p-metoksitrityyli-lysiini ja 9- t · ’ 1' fluorenyylimetoksikarbamoyyli-fenyylialanyyli-N-hydroksi- ; ’* sukkiini-imidi antamaan 9-fluorenyylimetoksikarbamoyyli- :iti: f enyylialanyyli-N£-p-metoksitrityylilysiini; (e) valmistetaan 9-f luorenyylimetoksikarbamoyyli-35 fenyylialanyyli-Ns-p-metoksitrityyli-lysyyli-p-aminobentsyy-lialkoholi käsittelemällä 9-fluorenyylimetoksikarbamoyyli- 116038 fenyylialanyyli-N^-p-metoksitrityylilysiiniä p-aminobentsyyli-alkoholilla; (f) poistetaan suojaryhmä 9-fluorenyylimetoksi-karbamoyyli-fenyylialanyyl i-NE-p-met oksit rityyli-lysyyl i-p- 5 aminobentsyylialkoholista käsittelemällä emäksellä anta maan fenyylialanyyli-NE-p-metoksitrityyli-lysyyli-p-amino-bentsyylialkoholi; (g) valmistetaan maleimidokaproyyli-fenyylialanyyli-Ne-p-metoksitrityyli-lysyyli-p-aminobentsyylialkoholi käsit- 10 telemällä fenyylialanyyli-NE-p-metoksitrityyli-lysyyli-p- aminobentsyylialkoholia maleimidokaproyyli-N-hydroksisuk-kiini-imidillä emäksen läsnä ollessa; (h) käsitellään maleimidokaproyyli-fenyylialanyyli-NE-p-metoksitrityyli-lysyyli-p-aminobentsyylialkoholia yli- 15 määrällä bis-p-nitrofenyylikarbonaattia antamaan maleimido-kaproyyli-fenyylialanyyli-NE-p-metoksitrityyli-lysyyli-p-aminobentsyyli-p-nitrofenyylikarbonaatti; (i) kytketään maleimidokaproyyli-fenyylialanyyli-NE-p-metoksitrityyli-lysyyli-p-aminobentsyyli-p-nitrofenyy- 20 likarbonaatti doksorubisiiniin antamaan maleimidokaproyyli- , f enyylialanyyli-NE-p-met oksi t rityyli-lysyyl i-p-aminobentsyy- , likarbamoyyli-doksorubisiini; ja * » *_ ·* (j) poistetaan lysiinisuojaryhmä käsittelemällä ha- 1 * » polla kationinpoistajan läsnä ollessa antamaan maleimidoka-25 proyyli-fenyylialanyyli-lysyyli-p-aminobentsyylikarbamoyyli- doksorubisiini dikloorietikkahappo. : ί
: 26. Patenttivaatimuksen 25 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että maleimidokaproyylifenyyliala-: .*. niini-NE-p-metoksitrityyli-lysyyli-p-aminobentsyylikarbamo- • 4 » * ,··*, 30 yyli-doksorubisiinin suo j auksenpoisto käsittää käsittelyn • * 10 ekvivalentilla dikloorietikkahappoa ja 100 ekvivalentil- » * : " la anisolia metyleenikloridissa 1-3 tuntia, mitä seuraa tuotteen, maleimidokaproyyli-fenyylialaniini-lysyyli-p- ; . ’, aminobentsyylikarbamoyyli-doksorubisiini dikloorietikkaha- . 35 pon saostaminen etyyliasetaatilla. 116038
FI942237A 1993-05-14 1994-05-13 Menetelmä lysosomaalientsyymillä pilkottavissa olevien kasvaintenvastaisien lääkeainekonjugaattien valmistamiseksi FI116038B (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/062,366 US6214345B1 (en) 1993-05-14 1993-05-14 Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US6236693 1993-05-14

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI942237A0 FI942237A0 (fi) 1994-05-13
FI942237A FI942237A (fi) 1994-11-15
FI116038B true FI116038B (fi) 2005-09-15

Family

ID=22042014

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI942237A FI116038B (fi) 1993-05-14 1994-05-13 Menetelmä lysosomaalientsyymillä pilkottavissa olevien kasvaintenvastaisien lääkeainekonjugaattien valmistamiseksi

Country Status (18)

Country Link
US (1) US6214345B1 (fi)
EP (1) EP0624377B1 (fi)
JP (1) JP3645283B2 (fi)
CN (1) CN1117760C (fi)
AT (1) ATE212236T1 (fi)
AU (1) AU687795B2 (fi)
CA (1) CA2123363C (fi)
CZ (1) CZ118794A3 (fi)
DE (1) DE69429689T2 (fi)
DK (1) DK0624377T3 (fi)
ES (1) ES2170755T3 (fi)
FI (1) FI116038B (fi)
HU (1) HU224351B1 (fi)
MX (1) MX9403570A (fi)
NO (1) NO315162B1 (fi)
NZ (1) NZ260512A (fi)
PT (1) PT624377E (fi)
RU (1) RU94016384A (fi)

Families Citing this family (664)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU1140495A (en) * 1994-01-27 1995-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Method for preparing thioether conjugates
EP0712635B1 (en) * 1994-05-13 2003-05-02 Kuraray Co., Ltd. Medical polymer gel
US5677470A (en) * 1994-06-28 1997-10-14 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Baccatin derivatives and processes for preparing the same
CA2162759A1 (en) * 1994-11-17 1996-05-18 Kenji Tsujihara Baccatin derivatives and processes for preparing the same
US5843903A (en) * 1995-11-27 1998-12-01 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Targeted cytotoxic anthracycline analogs
EP0871490B1 (en) * 1995-12-22 2003-03-19 Bristol-Myers Squibb Company Branched hydrazone linkers
EP0895784B1 (en) 1996-04-15 2005-11-23 Asahi Kasei Kabushiki Kaisha Drug complexes comprising taxane compounds or steroids
US6368598B1 (en) * 1996-09-16 2002-04-09 Jcrt Radiation Oncology Support Services, Inc. Drug complex for treatment of metastatic prostate cancer
AU739028B2 (en) * 1996-09-27 2001-10-04 Bristol-Myers Squibb Company Hydrolyzable prodrugs for delivery of anticancer drugs to metastatic cells
ES2169429T3 (es) * 1996-09-30 2002-07-01 Bayer Ag Glicoconjugados de derivados modificados de la camptotecina (enlace en 20-o).
DE19640207A1 (de) * 1996-09-30 1998-04-02 Bayer Ag Glycokonjugate von modifizierten Camptothecin-Derivaten (A- oder B-Ring-Verknüpfung)
US5980883A (en) * 1996-10-02 1999-11-09 Kuraray Co., Ltd. Polymer gel for medical use
AU5159798A (en) 1996-11-05 1998-05-29 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
ID23424A (id) * 1997-05-14 2000-04-20 Bayer Ag Glikokonjugat dari 20(s)-kamptotesin
EP1033372A4 (en) * 1997-11-18 2000-10-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd COMPOSITIONS WITH ANTI-TUMOR ACTIVITY
GB9724838D0 (en) * 1997-11-26 1998-01-21 Franks Christopher R Compositions
AU2337599A (en) * 1998-01-23 1999-08-09 Microcide Pharmaceuticals, Inc. Efflux pump inhibitors
US6204279B1 (en) * 1998-06-03 2001-03-20 Microcide Pharmaceuticals, Inc. Peptidomimetic efflux pump inhibitors
CN1250293C (zh) * 1998-05-22 2006-04-12 第一制药株式会社 药物复合物
BR9915198A (pt) 1998-10-30 2001-08-14 Daiichi Seiyaku Co Composto dds e método para medição do mesmo
WO2000050059A1 (en) * 1999-02-24 2000-08-31 The Uab Research Foundation Taxane derivatives for targeted therapy of cancer
US6613879B1 (en) 1999-05-14 2003-09-02 Boehringer Ingelheim Pharma Kg FAP-activated anti-tumour compounds
MXPA01011502A (es) 1999-05-14 2003-08-20 Boehringer Ingelheim Pharma Compuestos de tipo profarmaco anti-tumorigenos, activados por enzimas.
DE19926475A1 (de) * 1999-06-10 2000-12-14 Ktb Tumorforschungs Gmbh Träger-Pharmaka-Konjugate
AU765588C (en) 1999-11-24 2004-12-16 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising taxanes and their therapeutic use
DE10012120A1 (de) * 2000-03-13 2001-09-27 Ktb Tumorforschungs Gmbh Therapeutische und diagnostische Ligandensysteme mit Transportmolekülbindenden Eigenschaften und diese enthaltende Arzneimittel
AU2001253919B2 (en) 2000-04-26 2006-12-14 Government Of The United States, D/B/A Department Of Veterans Affairs Administration of a thiol-based chemoprotectant compound
JP2004501143A (ja) 2000-06-22 2004-01-15 ニトロメド　インコーポレーテッド ニトロソ化およびニトロシル化タキサン、組成物および使用方法
CA2420897A1 (en) * 2000-08-30 2002-03-07 Oregon Health And Science University Chemoprotectant for gastric toxicity
US20040018194A1 (en) * 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
US20070258987A1 (en) * 2000-11-28 2007-11-08 Seattle Genetics, Inc. Recombinant Anti-Cd30 Antibodies and Uses Thereof
AU2002254400B2 (en) 2001-03-23 2007-08-09 Napro Biotherapeutics, Inc. Molecular conjugates for use in treatment of cancer
EP1243276A1 (en) * 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
WO2002078597A2 (en) * 2001-04-01 2002-10-10 Yeda Research And Development Co. Ltd. Weizmann Institute Of Science Oral absorbed drugs
US20110313230A1 (en) 2001-05-11 2011-12-22 Terrance Grant Johns Specific binding proteins and uses thereof
ATE446317T1 (de) 2001-05-11 2009-11-15 Ludwig Inst For Cancer Res Ltd Spezifische bindungsproteine und ihre verwendung
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
IL154183A0 (en) * 2001-05-31 2003-07-31 Medarex Inc Cytotoxins, prodrugs, linkers and stabilizers useful therefor
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
US20050215472A1 (en) * 2001-10-23 2005-09-29 Psma Development Company, Llc PSMA formulations and uses thereof
EP3184539A3 (en) 2001-10-23 2017-09-13 PSMA Development Company L.L.C. Psma antibodies
US8877901B2 (en) 2002-12-13 2014-11-04 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US8435529B2 (en) 2002-06-14 2013-05-07 Immunomedics, Inc. Combining radioimmunotherapy and antibody-drug conjugates for improved cancer therapy
US7591994B2 (en) 2002-12-13 2009-09-22 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
CA2478093A1 (en) * 2002-02-28 2003-09-12 A & D Bioscience, Inc. Glycuronamides, glycosides and orthoester glycosides of fluoxetine, analogs and uses thereof
US8361464B2 (en) 2002-03-01 2013-01-29 Immunomedics, Inc. Anthracycline-Antibody Conjugates for Cancer Therapy
US9770517B2 (en) 2002-03-01 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
SG108837A1 (en) * 2002-03-11 2005-02-28 Pi Eta Consulting Co Pte Ltd An enterprise knowledge and information acquisition, management and communications system with intelligent user interfaces
US20050107310A1 (en) * 2002-03-19 2005-05-19 Holick Michael F. Carboxylic acid glycuronides, glycosamides and glycosides of quinolones, penicillins, analogs, and uses thereof
WO2003086475A1 (en) * 2002-04-12 2003-10-23 A & D Bioscience, Inc. Conjugates comprising cancer cell specific ligands, a sugar and diagnostic agents, and uses thereof
US20050233949A1 (en) * 2002-04-12 2005-10-20 Holick Michael F Conjugates comprising cancer cell specific ligands, a sugar and cancer chemotherapeutic agents/boron neutron capture therapy agents, and uses thereof
EP1549323A2 (en) * 2002-05-07 2005-07-06 A &amp; D Bioscience, Inc. Conjugates comprising central nervous system active drug
US20050215487A1 (en) * 2002-06-27 2005-09-29 Holick Michael F Conjugates comprising an nsaid and a sugar and uses thereof
ES2556641T3 (es) 2002-07-31 2016-01-19 Seattle Genetics, Inc. Conjugados de fármacos y su uso para tratar cáncer, una enfermedad autoinmune o una enfermedad infecciosa
CN100522955C (zh) 2002-08-02 2009-08-05 伊缪诺金公司 含有新型强效紫杉烷的细胞毒性剂及其治疗用途
US7390898B2 (en) 2002-08-02 2008-06-24 Immunogen Inc. Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
WO2004054622A1 (en) 2002-12-13 2004-07-01 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
US8420086B2 (en) 2002-12-13 2013-04-16 Immunomedics, Inc. Camptothecin conjugates of anti-CD22 antibodies for treatment of B cell diseases
DE602004027888D1 (de) 2003-02-20 2010-08-12 Seattle Genetics Inc Anti-cd70 antikörper-arzneimittelkonjugate und ihr
US20080025989A1 (en) * 2003-02-20 2008-01-31 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
SG173223A1 (en) * 2003-04-22 2011-08-29 Ipsen Pharma Sas Peptide vectors
US20040219104A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Methods for treatment of tumors
US20040220121A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Methods for drug delivery
US20040219100A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Composition useful for the treatment of tumors
US20040220084A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Methods for nucleic acid delivery
US20040219101A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Composition useful for treatment of tumors
US20040220390A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Composition useful for the treatment of tumors
US20040219103A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Methods useful for the diagnosis, imaging and treatment of tumors
US20040219102A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Compositions for drug delivery
US20040219097A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Composition useful for the diagnosis, imaging and treatment of tumors
US20040220085A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Compositions for nucleic acid delivery
US20040219099A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Method for the treatment of tumors
US7232805B2 (en) * 2003-09-10 2007-06-19 Inflabloc Pharmaceuticals, Inc. Cobalamin conjugates for anti-tumor therapy
KR101438983B1 (ko) * 2003-11-06 2014-09-05 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
US7375078B2 (en) * 2004-02-23 2008-05-20 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
CN1997402B (zh) * 2004-05-19 2014-04-02 梅达雷克斯有限责任公司 化学连接基团及其缀合物
US7517903B2 (en) * 2004-05-19 2009-04-14 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates
US7691962B2 (en) * 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
AU2005249490B2 (en) 2004-06-01 2010-07-29 Genentech, Inc. Antibody drug conjugates and methods
US7541330B2 (en) * 2004-06-15 2009-06-02 Kosan Biosciences Incorporated Conjugates with reduced adverse systemic effects
PL1791565T3 (pl) 2004-09-23 2016-10-31 Modyfikowane cysteiną przeciwciała i koniugaty
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
US7641903B2 (en) * 2004-10-15 2010-01-05 Seattle Genetics, Inc. Anti-CD70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
WO2006044643A2 (en) * 2004-10-15 2006-04-27 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
US8337838B2 (en) * 2004-10-15 2012-12-25 Seattle Genetics, Inc. Anti-CD70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
WO2006132670A2 (en) 2004-11-12 2006-12-14 Seattle Genetics, Inc. Auristatins having an aminobenzoic acid unit at the n terminus
ATE476994T1 (de) 2004-11-30 2010-08-15 Curagen Corp Antikörper gegen gpnmb und ihre verwendungen
US20120269886A1 (en) 2004-12-22 2012-10-25 Nitto Denko Corporation Therapeutic agent for pulmonary fibrosis
SI2727583T1 (sl) 2004-12-22 2022-01-31 Nitto Denko Corporation Nosilec učinkovine in komplet nosilca učinkovine za zaviranje fibroze
WO2006089230A2 (en) * 2005-02-18 2006-08-24 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to prostate specific membrane antigen (psma)
US10058621B2 (en) 2015-06-25 2018-08-28 Immunomedics, Inc. Combination therapy with anti-HLA-DR antibodies and kinase inhibitors in hematopoietic cancers
US9707302B2 (en) 2013-07-23 2017-07-18 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
US7714016B2 (en) * 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
CA2605507C (en) 2005-04-19 2016-06-28 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-cd70 binding agents and uses thereof
WO2006135371A1 (en) * 2005-06-09 2006-12-21 Kosan Biosciences Incorporated Conjugates with reduced adverse systemic effects
CA2612762C (en) * 2005-06-20 2013-12-10 Psma Development Company, Llc Psma antibody-drug conjugates
EP3498289A1 (en) 2005-07-07 2019-06-19 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the c-terminus
WO2007008848A2 (en) * 2005-07-07 2007-01-18 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the c-terminus
WO2007031734A1 (en) * 2005-09-14 2007-03-22 Ucb Pharma S.A. Comb polymers
CA2623236A1 (en) * 2005-09-26 2007-04-05 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to cd70
AU2006294554B2 (en) 2005-09-26 2013-03-21 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Antibody-drug conjugates and methods of use
WO2007051081A1 (en) 2005-10-26 2007-05-03 Medarex, Inc. Methods and compounds for preparing cc-1065 analogs
US8404650B2 (en) * 2005-10-28 2013-03-26 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Methods of treating cancer with doxazolidine and prodrugs thereof
WO2007059404A2 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
US9572886B2 (en) 2005-12-22 2017-02-21 Nitto Denko Corporation Agent for treating myelofibrosis
CA2643075A1 (en) * 2006-01-27 2007-08-09 The University Of Mississippi Medical Center Thermally-targeted delivery of medicaments, including doxorubicin
US7750116B1 (en) * 2006-02-18 2010-07-06 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugate metabolites
MX2008015132A (es) 2006-05-30 2008-12-10 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados y sus usos.
GB0619291D0 (en) 2006-09-29 2006-11-08 Ucb Sa Altered antibodies
SG177168A1 (en) 2006-12-01 2012-01-30 Medarex Inc Human antibodies that bind cd22 and uses thereof
EP2609932B1 (en) 2006-12-01 2022-02-02 Seagen Inc. Variant target binding agents and uses thereof
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
NZ578354A (en) * 2006-12-14 2012-01-12 Medarex Inc Antibody-partner molecule conjugates that bind cd70 and uses thereof
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
WO2008091701A2 (en) * 2007-01-25 2008-07-31 Dana-Farber Cancer Institute Use of anti-egfr antibodies in treatment of egfr mutant mediated disease
JP2010519310A (ja) 2007-02-21 2010-06-03 メダレックス インコーポレイテッド 単一のアミノ酸を有する化学リンカーおよびその複合体
JP5618549B2 (ja) * 2007-03-15 2014-11-05 ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサーリサーチ リミテッド Ｅｇｆｒ抗体及びｓｒｃ阻害剤を用いる治療方法及び関連製剤
TWI407971B (zh) 2007-03-30 2013-09-11 Nitto Denko Corp Cancer cells and tumor-related fibroblasts
JP5634862B2 (ja) 2007-05-16 2014-12-03 カーテーベー トゥモーアフォルシュングス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 低粘度アントラサイクリン製剤
PT2176296E (pt) 2007-07-16 2012-05-14 Genentech Inc Anticorpos e imunoconjugados anti-cd79b e métodos de utilização
JP2010533495A (ja) 2007-07-16 2010-10-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド ヒト化ＣＤ７９ｂ抗体およびイムノコンジュゲートならびにそれらの使用
JP5532486B2 (ja) 2007-08-14 2014-06-25 ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサー リサーチ Ｅｇｆ受容体を標的とするモノクローナル抗体１７５ならびにその誘導体および用途
WO2009026274A1 (en) 2007-08-22 2009-02-26 Medarex, Inc. Site-specific attachment of drugs or other agents to engineered antibodies with c-terminal extensions
AU2008298592A1 (en) 2007-09-14 2009-03-19 Nitto Denko Corporation Drug carriers
EP2195017B1 (en) 2007-10-01 2014-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Human antibodies that bind mesothelin, and uses thereof
ES2629440T5 (es) 2007-10-04 2020-11-20 Zymogenetics Inc zB7H6 miembro de la familia B7 y composiciones y métodos relacionados
BRPI0818780A2 (pt) * 2007-10-19 2015-04-22 Genentech Inc Anticorpo anti-tenb2 planejados por cisteína e conjugados de medicamento com anticorpos
JP5727786B2 (ja) 2007-10-19 2015-06-03 シアトル ジェネティクス，インコーポレーテッド Ｃｄ１９結合性物質およびその使用
EP3115469B1 (en) 2007-11-19 2020-04-29 Celera Corporation Lung cancer markers and uses thereof
TW200930407A (en) * 2007-11-30 2009-07-16 Medarex Inc Conjugates of anti-RG-1 antibodies
US20110033378A1 (en) 2008-01-18 2011-02-10 Medlmmune, Llc. Cysteine Engineered Antibodies For Site-Specific Conjugation
MY157403A (en) 2008-01-31 2016-06-15 Genentech Inc Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
PL2842575T3 (pl) 2008-03-18 2018-02-28 Seattle Genetics, Inc. Koniugaty aurystatyny lek łącznik
SG189811A1 (en) * 2008-04-30 2013-05-31 Immunogen Inc Cross-linkers and their uses
CA2975228C (en) 2008-05-02 2020-07-21 Seattle Genetics, Inc. Methods and compositions for making antibodies and antibody derivatives with reduced core fucosylation
EP2727606A3 (en) 2008-09-08 2015-09-23 Psma Development Company, L.L.C. Compounds for killing psma-expressing, taxane-resistant cancer cells
UA109633C2 (uk) 2008-12-09 2015-09-25 Антитіло людини проти тканинного фактора
DK3903829T3 (da) 2009-02-13 2023-06-26 Immunomedics Inc Immunkonjugater med en intracellulær spaltelig binding
MX2011009220A (es) 2009-03-05 2011-09-28 Medarex Inc Anticuerpos completamente humanos especificos para la molecula de adhesion celular 1.
JP6132548B2 (ja) 2009-04-01 2017-05-24 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＦｃＲＨ５抗体および免疫接合体および使用方法
TR201907573T4 (tr) 2009-06-03 2019-06-21 Immunogen Inc Konjugasyon yöntemleri̇
EP2445520A4 (en) 2009-06-22 2013-03-06 Medimmune Llc MANIPULATED FC REGIONS FOR LOCAL SPECIFIC CONJUGATION
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
US20110076232A1 (en) 2009-09-29 2011-03-31 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof
WO2011047083A1 (en) 2009-10-13 2011-04-21 Oxford Biotherapeutics Ltd. Antibodies against epha10
NZ623607A (en) 2009-10-23 2016-07-29 Millennium Pharm Inc Anti-gcc antibody molecules and related compositions and methods
CA2781682A1 (en) 2009-12-04 2011-06-09 Genentech, Inc. Multispecific antibodies, antibody analogs, compositions, and methods
ES2523472T3 (es) 2009-12-09 2014-11-26 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Anticuerpos monoclonales que se unen a B7H6 y usos de los mismos
EA201201120A1 (ru) 2010-02-08 2013-03-29 Эдженсис, Инк. Конъюгаты антитело-лекарственное средство (adc), которые связываются с белками 161p2f10b
KR20130004579A (ko) * 2010-02-23 2013-01-11 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료를 위한 조성물 및 방법
WO2011130598A1 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
NZ602933A (en) 2010-04-15 2014-09-26 Seattle Genetics Inc Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
MX336540B (es) 2010-06-08 2016-01-22 Genentech Inc Conjugados y anticuerpos manipulados geneticamente con cisteina.
WO2011154453A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Genmab A/S Antibodies against human cd38
EP3281956A3 (en) 2010-06-15 2018-04-18 Genmab A/S Human antibody drug conjugates against tissue factor
WO2012016227A2 (en) 2010-07-29 2012-02-02 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
PL2621526T3 (pl) 2010-09-29 2018-11-30 Agensys, Inc. Koniugaty leków i przeciwciał (adc), które wiążą białka 191p4d12
EP3828205A1 (en) 2010-10-01 2021-06-02 Oxford BioTherapeutics Ltd Anti-ror1 antibodies
EP3581206A1 (en) 2010-10-22 2019-12-18 Seattle Genetics, Inc. Synergistic effects between auristatin-based antibody drug conjugates and inhibitors of the p13k-akt mtor pathway
HUE031726T2 (en) 2010-12-06 2017-07-28 Seattle Genetics Inc Humanized antibodies and anti-cancer antibodies against LIV-1 antibodies
BR112013016761B1 (pt) * 2010-12-29 2021-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Uso de um composto, composto e composição farmacêutica
AU2011352204B2 (en) * 2010-12-29 2015-05-21 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. In vivo polynucleotide delivery conjugates having enzyme sensitive linkages
JOP20210044A1 (ar) 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
PL2678037T3 (pl) 2011-02-25 2015-05-29 Lonza Ag Rozgałęziony łącznik do koniugatów białko-lek.
CN103384534B (zh) * 2011-02-25 2015-09-30 隆萨有限公司 用于蛋白质药物偶联物的支链联接体
US9044518B2 (en) 2011-03-30 2015-06-02 Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Of The State Of Arizona Acting For And On Behalf Of Arizona State University Auristatin tyramine phosphate salts and auristatin aminoquinoline derivatives and prodrugs thereof
WO2012143523A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Genmab A/S Bispecifc antibodies against her2
UA112434C2 (uk) 2011-05-27 2016-09-12 Ґлаксо Ґруп Лімітед Антигензв'язувальний білок, який специфічно зв'язується з всма
KR101972446B1 (ko) 2011-05-27 2019-04-25 글락소 그룹 리미티드 Ｂｃｍａ（ｃｄ２６９／ｔｎｆｒｓｆ１７）­결합 단백질
BR112013032928A2 (pt) 2011-06-21 2017-01-24 Immunogen Inc "derivados de maitansinoide com ligante de peptídeo e conjugados dos mesmos, composição farmacêutica que os compreende e uso dos mesmos"
AU2015224535B2 (en) * 2011-06-21 2017-07-20 Immunogen, Inc. Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof
KR102058185B1 (ko) 2011-06-28 2019-12-20 옥스포드 바이오테라퓨틱스 리미티드 Adp-리보실 시클라제 2에 대한 항체
UA117901C2 (uk) 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
WO2013022855A1 (en) 2011-08-05 2013-02-14 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points and immunofiltering
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
CA2849039C (en) 2011-09-20 2018-09-18 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric pbd compounds for inclusion in targeted conjugates
EP2766392B1 (en) 2011-10-10 2019-07-17 Xencor, Inc. A method for purifying antibodies
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
US11135303B2 (en) 2011-10-14 2021-10-05 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
AU2012322613B2 (en) 2011-10-14 2016-04-21 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
WO2013055990A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
EA028457B1 (ru) 2011-10-14 2017-11-30 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины
CA2850264C (en) 2011-10-14 2019-11-05 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines
RS62689B1 (sr) 2011-11-04 2021-12-31 Zymeworks Inc Dizajn stabilnog heterodimernog antitela sa mutacijama u fc domenu
RU2586885C2 (ru) 2011-11-17 2016-06-10 Пфайзер Инк. Цитотоксические пептиды и их конъюгаты антитело-лекарственное средство
WO2013093809A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
WO2013109675A2 (en) * 2012-01-18 2013-07-25 FIRESTONE, Raymond, A Compositions and methods for treating cancer and inflammation-related diseases and conditions
AU2013209512B2 (en) 2012-01-20 2017-08-03 I2 Pharmaceuticals, Inc. Surrobody cojugates
TW201336851A (zh) 2012-02-13 2013-09-16 必治妥美雅史谷比公司 烯二炔化合物，其共軛物及彼等之用途與方法
US20150335761A1 (en) * 2012-02-16 2015-11-26 Raymond Firestone Compositions and methods for contraception
US9814782B2 (en) 2012-02-24 2017-11-14 Alteogen Inc. Modified antibody in which motif comprising cysteine residue is bound, modified antibody-drug conjugate comprising the modified antibody, and production method for same
PE20190658A1 (es) 2012-02-24 2019-05-08 Abbvie Stemcentrx Llc Moduladores y metodos de empleo novedosos
JP6401060B2 (ja) 2012-02-24 2018-10-03 アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー 抗ｓｅｚ６抗体及び使用方法
WO2013130093A1 (en) 2012-03-02 2013-09-06 Genentech, Inc. Biomarkers for treatment with anti-tubulin chemotherapeutic compounds
CN104379602B (zh) 2012-03-08 2017-05-03 哈洛齐梅公司 具有条件活性的抗表皮生长因子受体抗体及其使用方法
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
US20140079636A1 (en) 2012-04-16 2014-03-20 Dinesh U. Chimmanamada Targeted therapeutics
CN104470544B (zh) 2012-05-01 2018-01-12 基因泰克公司 抗pmel17抗体和免疫缀合物
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
WO2013173393A1 (en) 2012-05-15 2013-11-21 Concortis Biosystems, Corp Drug-conjugates, conjugation methods, and uses thereof
CN108465112B (zh) 2012-05-15 2022-04-29 西雅图基因公司 自稳定接头偶联物
JP6192022B2 (ja) 2012-05-21 2017-09-06 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗Ｌｙ６Ｅ抗体及びイムノコンジュゲート並びに使用方法
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
CN104736174B (zh) 2012-07-06 2019-06-14 根马布私人有限公司 具有三重突变的二聚体蛋白质
EP3632462A1 (en) 2012-07-06 2020-04-08 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
AR091700A1 (es) 2012-07-09 2015-02-25 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd79b
EP2869847B1 (en) 2012-07-09 2017-12-06 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-cd79b antibodies
SG11201500087VA (en) 2012-07-09 2015-02-27 Genentech Inc Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
CA2874904A1 (en) 2012-07-09 2014-01-16 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
CN112587671A (zh) 2012-07-18 2021-04-02 博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
KR20150032886A (ko) 2012-08-02 2015-03-30 제넨테크, 인크. 항-etbr 항체 및 면역접합체
CA2879665A1 (en) 2012-08-02 2014-02-06 Genentech, Inc. Anti-etbr antibodies and immunoconjugates
US9382329B2 (en) 2012-08-14 2016-07-05 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells
TR201900694T4 (tr) 2012-08-23 2019-02-21 Agensys Inc 158p1d7 proteinlerine bağlanan antikor ilaç konjugatları (adc).
DK2907824T3 (en) 2012-10-11 2018-07-23 Daiichi Sankyo Co Ltd ANTIBODY-drug conjugate
CN105102003B (zh) 2012-10-12 2019-03-05 Adc疗法责任有限公司 吡咯并苯并二氮杂卓-抗psma抗体结合物
CA2885305C (en) 2012-10-12 2019-11-12 Spirogen Sarl Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
SI3470086T1 (sl) 2012-10-12 2021-03-31 Medimmune Limited Pirolobenzodiazepini in njihovi konjugati
MX364328B (es) 2012-10-12 2019-04-23 Medimmune Ltd Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina.
CA2887895C (en) 2012-10-12 2019-10-29 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd19 antibody conjugates
EP2839860B1 (en) 2012-10-12 2019-05-01 MedImmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP6392765B2 (ja) 2012-10-12 2018-09-19 エイディーシー・セラピューティクス・エス・アーＡｄｃ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｓａ ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体
WO2014057114A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
EP2906297B1 (en) 2012-10-12 2017-12-06 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
ES2782248T3 (es) 2012-10-19 2020-09-11 Daiichi Sankyo Co Ltd Conjugado de anticuerpo y fármaco producido por la unión a través de un enlazador que tiene estructura hidrófila
CN104755482B (zh) 2012-10-30 2017-04-26 内尔维阿诺医学科学有限公司 官能化的9‑溴‑喜树碱衍生物
AU2013340449B2 (en) 2012-11-05 2017-11-30 Pfizer Inc. Spliceostatin analogs
EP2922818B1 (en) 2012-11-24 2018-09-05 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules
US9353150B2 (en) 2012-12-04 2016-05-31 Massachusetts Institute Of Technology Substituted pyrazino[1′,2′:1 ,5]pyrrolo[2,3-b]-indole-1,4-diones for cancer treatment
WO2014093379A1 (en) 2012-12-10 2014-06-19 Mersana Therapeutics, Inc. Auristatin compounds and conjugates thereof
US10206918B2 (en) 2012-12-13 2019-02-19 Immunomedics, Inc. Efficacy of anti-HLA-DR antiboddy drug conjugate IMMU-140 (hL243-CL2A-SN-38) in HLA-DR positive cancers
US10744129B2 (en) 2012-12-13 2020-08-18 Immunomedics, Inc. Therapy of small-cell lung cancer (SCLC) with a topoisomerase-I inhibiting antibody-drug conjugate (ADC) targeting Trop-2
US10413539B2 (en) 2012-12-13 2019-09-17 Immunomedics, Inc. Therapy for metastatic urothelial cancer with the antibody-drug conjugate, sacituzumab govitecan (IMMU-132)
US10137196B2 (en) 2012-12-13 2018-11-27 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US9492566B2 (en) 2012-12-13 2016-11-15 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
CA3177936A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and sn-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US9107960B2 (en) 2012-12-13 2015-08-18 Immunimedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
US9931417B2 (en) 2012-12-13 2018-04-03 Immunomedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
AU2013366493B2 (en) 2012-12-21 2017-08-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN105102455B (zh) 2012-12-21 2018-05-25 荷商台医(有限合伙)公司 亲水性自消耗连接子及其缀合物
WO2014096365A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Spirogen Sàrl Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases
CN105051032B (zh) 2013-01-03 2017-08-15 赛特瑞恩股份有限公司 抗体‑连接子‑药物偶联物、其制法及包含其的抗癌药物组合物
KR101597110B1 (ko) * 2013-01-03 2016-02-25 (주)셀트리온 항체-링커-약물 결합체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 항암제 조성물
KR101597101B1 (ko) * 2013-01-03 2016-02-25 (주)셀트리온 항체-링커-약물 결합체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 항암제 조성물
KR101597105B1 (ko) * 2013-01-03 2016-02-25 (주)셀트리온 항체-링커-약물 결합체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 항암제 조성물
KR101597100B1 (ko) * 2013-01-03 2016-02-25 (주)셀트리온 항체-링커-약물 결합체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 항암제 조성물
KR20220156667A (ko) 2013-01-10 2022-11-25 젠맵 비. 브이 인간 IgG1 Fc 영역 변이체 및 그의 용도
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
EP2943511B1 (en) 2013-01-14 2019-08-07 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
WO2014113510A1 (en) 2013-01-15 2014-07-24 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
CA2895284A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 Immunomedics, Inc. Pro-drug form (p2pdox) of the highly potent 2-pyrrolinodoxorubicin conjugated to antibodies for targeted therapy of cancer
MX356698B (es) 2013-02-14 2018-06-11 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de tubulisina, metodos para obtenerlos y uso.
ITUD20130024A1 (it) 2013-02-22 2014-08-23 Carlo Galli Aptameri per la realizzazione di dispositivi biomedicali impiantabili in tessuto e relativo metodo
JP6462591B2 (ja) 2013-02-22 2019-01-30 アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー 新規抗体コンジュゲートおよびその使用
BR112015021965B1 (pt) 2013-03-13 2022-05-03 Medimmune Limited Conjugados e compostos de pirrolobenzodiazepinas, composição farmacêutica, uso dos mesmos para o tratamento de uma doença proliferativa e método de síntese dos ditos compostos
KR102057755B1 (ko) 2013-03-13 2019-12-19 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨쥬게이트
JP6444902B2 (ja) 2013-03-13 2018-12-26 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピン及びその結合体
BR112015022019A2 (pt) 2013-03-14 2017-08-29 Genentech Inc Anticorpos isolados, ácido nucleico, célula hospedeira, método de produção de anticorpos, imunoconjugado, formulação farmacêutica, métodos de tratamento de indivíduos, de inibição da proliferação de células, de detecção de b7-h4 humano e de detecção de câncer
US9789209B2 (en) 2013-03-14 2017-10-17 The Regents Of The University Of California, Berke Activatable membrane-interacting peptides and methods of use
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
EP3590922A1 (en) 2013-03-15 2020-01-08 Zymeworks Inc. Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
WO2014145907A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Xencor, Inc. Targeting t cells with heterodimeric proteins
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
SG10201800313UA (en) 2013-03-15 2018-02-27 Abbvie Inc Antibody drug conjugate (adc) purification
TW201945032A (zh) 2013-03-15 2019-12-01 德商艾伯維德國有限及兩合公司 抗-egfr抗體藥物結合物調配物
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
ES2885696T3 (es) 2013-03-15 2021-12-15 Xencor Inc Proteínas heterodiméricas
CA2910945A1 (en) 2013-05-08 2014-11-13 Zymeworks Inc. Bispecific her2 and her3 antigen binding constructs
KR20160015286A (ko) 2013-05-31 2016-02-12 제넨테크, 인크. 항-세포벽 테이코산 항체 및 접합체
KR20160015227A (ko) 2013-05-31 2016-02-12 제넨테크, 인크. 항-세포벽 테이코산 항체 및 접합체
CN116063479A (zh) 2013-06-04 2023-05-05 西托姆克斯治疗公司 用于缀合可活化抗体的组合物和方法
US11253606B2 (en) 2013-07-23 2022-02-22 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
TWI646108B (zh) 2013-08-01 2019-01-01 艾澤西公司 結合至ｃｄ３７蛋白質之抗體藥物結合物（ａｄｃ）
EA201690195A1 (ru) 2013-08-12 2016-05-31 Дженентек, Инк. Конъюгатные соединения антитело-лекарство на основе димера 1-(хлорметил)-2,3-дигидро-1h-бензо[e]индола и способы применения и лечения
BR112016004242A8 (pt) 2013-08-28 2018-06-12 Stemcentrx Inc Métodos para conjugação sítio-específica de anticorpos e composições
JP2016538318A (ja) 2013-08-28 2016-12-08 ステムセントリックス， インコーポレイテッド 新規ｓｅｚ６モジュレーターおよび使用方法
WO2015038649A1 (en) 2013-09-10 2015-03-19 Synta Pharmaceuticals Corp. Targeted therapeutics
SG11201601770YA (en) 2013-09-12 2016-04-28 Halozyme Inc Modified anti-epidermal growth factor receptor antibodies and methods of use thereof
WO2015038426A1 (en) * 2013-09-13 2015-03-19 Asana Biosciences, Llc Self-immolative linkers containing mandelic acid derivatives, drug-ligand conjugates for targeted therapies and uses thereof
AR097685A1 (es) 2013-09-17 2016-04-06 Genentech Inc Métodos de uso de anticuerpos anti-lgr5
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US10081682B2 (en) 2013-10-11 2018-09-25 Oxford Bio Therapeutics Ltd. Conjugated antibodies against LY75 for the treatment of cancer
JP6502931B2 (ja) 2013-10-11 2019-04-17 アメリカ合衆国 Ｔｅｍ８抗体およびその使用
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054985B1 (en) 2013-10-11 2018-12-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US9956299B2 (en) 2013-10-11 2018-05-01 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine—antibody conjugates
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN106132431A (zh) 2013-10-15 2016-11-16 索伦托治疗有限公司 具有靶向分子和两种不同药物的药物偶联物
WO2015057699A2 (en) 2013-10-15 2015-04-23 Seattle Genetics, Inc. Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
US20150110814A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Psma Development Company, Llc Combination therapies with psma ligand conjugates
JP6908964B2 (ja) 2013-10-18 2021-07-28 ピーエスエムエー ディベロップメント カンパニー，エルエルシー Ｐｓｍａリガンドコンジュゲートによる併用療法
CN105658237B (zh) 2013-10-21 2021-03-09 基因泰克公司 抗Ly6E抗体及使用方法
WO2015066053A2 (en) 2013-10-28 2015-05-07 Synta Pharmaceuticals Corp. Targeted therapeutics
WO2015069922A2 (en) 2013-11-06 2015-05-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Alk antibodies, conjugates, and chimeric antigen receptors, and their use
EP3068892A4 (en) 2013-11-13 2017-05-31 Zymeworks Inc. Monovalent antigen binding constructs targeting egfr and/or her2 and uses thereof
KR102372245B1 (ko) 2013-11-21 2022-03-08 젠맵 에이/에스 항체-약물 접합체 동결건조 제제
ES2753269T3 (es) 2013-11-25 2020-04-07 Seattle Genetics Inc Preparación de anticuerpos a partir del cultivo de células CHO para conjugación
KR20160098328A (ko) 2013-12-13 2016-08-18 제넨테크, 인크. 항-cd33 항체 및 면역접합체
CN105828840B (zh) 2013-12-16 2020-08-04 基因泰克公司 1-(氯甲基)-2,3-二氢-1H-苯并[e]吲哚二聚体抗体-药物缀合物化合物及使用和治疗方法
RU2689388C1 (ru) 2013-12-16 2019-05-28 Дженентек, Инк. Пептидомиметические соединения и их конъюгаты антител с лекарственными средствами
CA2933557A1 (en) 2013-12-16 2015-06-25 Genentech, Inc. Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof
CN105848685B (zh) 2013-12-16 2020-09-22 健泰科生物技术公司 拟肽化合物及其抗体药物偶联物
SI3088419T1 (sl) 2013-12-25 2019-01-31 Daiichi Sankyo Company Zdravilni konjugat anti trop2 protitelesa
ES2916722T3 (es) 2013-12-27 2022-07-05 Zymeworks Inc Sistemas de enlace que contienen sulfonamida para conjugados de fármacos
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
JP2017503803A (ja) 2014-01-10 2017-02-02 シャンハイ バーディー バイオテック インコーポレイテッド Ｅｇｆｒ発現腫瘍を処置するための化合物及び組成物
JP2017505305A (ja) 2014-01-24 2017-02-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｓｔｅａｐ１抗体及びイムノコンジュゲートを使用する方法
WO2015116774A1 (en) 2014-01-29 2015-08-06 Synta Pharmaceuticals Corp. Targeted therapeutics
DK3466976T3 (da) 2014-01-31 2021-12-13 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-her2-antistof-lægemiddelkonjugat
US10308721B2 (en) 2014-02-21 2019-06-04 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-DLL3 antibodies and drug conjugates for use in melanoma
ES2960619T3 (es) 2014-02-28 2024-03-05 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Enlazadores cargados y sus usos para la conjugación
WO2015134464A2 (en) 2014-03-03 2015-09-11 Synta Pharmaceuticals Corp. Targeted therapeutics
EP3131586A4 (en) 2014-03-18 2017-10-25 Madrigal Pharmaceuticals, Inc. Targeted therapeutics
KR20220025946A (ko) 2014-03-21 2022-03-03 애브비 인코포레이티드 항-ｅｇｆｒ 항체 및 항체 약물 접합체
JP6775422B2 (ja) 2014-03-28 2020-10-28 ゼンコー・インコーポレイテッドＸｅｎｃｏｒ、 Ｉｎｃ． Ｃｄ３８及びｃｄ３に結合する二重特異性抗体
US10550190B2 (en) 2014-04-04 2020-02-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphate based linkers for intracellular delivery of drug conjugates
KR102351755B1 (ko) 2014-04-10 2022-01-14 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항her3 항체-약물 콘주게이트
ES2754348T3 (es) 2014-04-10 2020-04-17 Daiichi Sankyo Co Ltd Conjugado de (anticuerpo anti-HER2)-fármaco
GB201406767D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
AU2015253422B2 (en) 2014-04-30 2020-09-03 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-PTK7 antibody-drug conjugates
BR112016027222A2 (pt) 2014-05-22 2018-01-30 Genentech Inc anticorpos isolados, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, métodos de tratamento de um indivíduo com um câncer, de inibição da proliferação de uma célula, de detecção de gpc3 humano e de detecção de um câncer
JP6453706B2 (ja) * 2014-05-23 2019-01-16 日本化薬株式会社 新規なグルタミン酸誘導体およびその用途
CN106456799B (zh) 2014-06-03 2020-05-22 江苏佳瑞生物技术有限公司 肽-药物偶联物
TWI695011B (zh) 2014-06-18 2020-06-01 美商梅爾莎納醫療公司 抗ｈｅｒ２表位之單株抗體及其使用之方法
US9950077B2 (en) 2014-06-20 2018-04-24 Bioalliance C.V. Anti-folate receptor alpha (FRA) antibody-drug conjugates and methods of using thereof
ES2785551T3 (es) 2014-06-30 2020-10-07 Glykos Finland Oy Derivado de sacárido de una carga útil tóxica y sus conjugados con anticuerpos
KR102586656B1 (ko) 2014-07-11 2023-10-11 젠맵 에이/에스 Ａｘｌ에 결합하는 항체
WO2016014984A1 (en) 2014-07-24 2016-01-28 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
CA2955007C (en) 2014-07-24 2023-04-11 Genentech, Inc. Methods of conjugating an agent to a thiol moiety in a protein that contains at least one trisulfide bond
CA2959141A1 (en) 2014-08-28 2016-03-03 Bioatla, Llc Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells
RU2680238C2 (ru) 2014-08-28 2019-02-18 Пфайзер Инк. Модулирующие стабильность линкеры для использования с конъюгатами антитело-лекарственное средство
CN112546238A (zh) 2014-09-01 2021-03-26 博笛生物科技有限公司 用于治疗肿瘤的抗-pd-l1结合物
US10188746B2 (en) 2014-09-10 2019-01-29 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
AU2015315007C1 (en) 2014-09-11 2021-06-03 Seagen Inc. Targeted delivery of tertiary amine-containing drug substances
SI3191135T1 (sl) 2014-09-12 2021-01-29 Genentech, Inc. Anti-HER2 protitelesa in imunokonjugati
CN113698488A (zh) 2014-09-12 2021-11-26 基因泰克公司 抗-b7-h4抗体及免疫缀合物
EP3191521A2 (en) 2014-09-12 2017-07-19 F. Hoffmann-La Roche AG Cysteine engineered antibodies and conjugates
CA2958479A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN113416229A (zh) 2014-09-17 2021-09-21 酵活有限公司 细胞毒性和抗有丝分裂化合物、及其使用方法
BR112017004953A2 (pt) 2014-09-17 2017-12-05 Genentech Inc imunoconjugado, formulação farmacêutica, método de tratamento e método de inibição da proliferação de uma célula
CA3069221C (en) 2014-09-23 2023-04-04 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates
CN107001384A (zh) 2014-11-05 2017-08-01 内尔维阿诺医学科学有限公司 官能化的吗啉基蒽环类衍生物
US10077287B2 (en) 2014-11-10 2018-09-18 Bristol-Myers Squibb Company Tubulysin analogs and methods of making and use
CA2966964A1 (en) 2014-11-19 2016-05-26 Michal Novak Humanized tau antibodies in alzheimer's disease
KR101759261B1 (ko) * 2014-11-20 2017-07-19 파로스젠 주식회사 유도형질로 활성화되는 다기능성 항암제 전구체, 이의 제조방법 및 이의 용도
CA2968447A1 (en) 2014-11-25 2016-06-02 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates and their use to treat neoplasms
MA41019A (fr) 2014-11-26 2021-05-05 Xencor Inc Anticorps hétérodimériques se liant aux antigènes cd3 et cd38
EP3223845B1 (en) 2014-11-26 2021-05-19 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd20
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
CN107206101B (zh) * 2014-12-03 2021-06-25 基因泰克公司 季铵化合物及其抗体-药物缀合物
BR112017011325A2 (pt) 2014-12-03 2020-07-21 Genentech, Inc. ?composto de conjugado anticorpo?antibiótico, composição, método de tratamento de uma infecção, método para matar staph aureus, processo para produzir o conjugado, kit para o tratamento de uma infecção, intermediários antibiótico-ligante e ligante-droga?
MX2017007231A (es) 2014-12-03 2017-11-08 Genentech Inc Conjugados de rifamicina y anticuerpos contra el staphylococcuss aureus y usos de estos.
EP3229836B1 (en) 2014-12-09 2019-11-13 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Human monoclonal antibodies against axl
EP3237449A2 (en) 2014-12-22 2017-11-01 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
CA2973355A1 (en) 2015-01-14 2016-07-21 Bristol-Myers Squibb Company Heteroarylene-bridged benzodiazepine dimers, conjugates thereof, and methods of making and using
JP6871858B2 (ja) 2015-01-28 2021-05-19 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． 抗体薬物コンジュゲート
TW201702260A (zh) 2015-03-05 2017-01-16 賽倫斯有限責任公司 環肽類似物及其共軛物
US10227411B2 (en) 2015-03-05 2019-03-12 Xencor, Inc. Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions
CN107614010A (zh) 2015-03-09 2018-01-19 艾更斯司股份有限公司 结合至flt3蛋白的抗体药物偶联物(adc)
US10842882B2 (en) 2015-03-09 2020-11-24 Heidelberg Pharma Gmbh Amatoxin-antibody conjugates
EP3069734A1 (en) 2015-03-17 2016-09-21 Exiris S.r.l. Cryptophycin-based antibody-drug conjugates with novel self-immolative linkers
CN113876962A (zh) 2015-04-07 2022-01-04 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 纳米粒子免疫偶联物
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
GB201506389D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
EP3286224A4 (en) 2015-04-22 2018-11-14 Immunomedics, Inc. Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating trop-2-positive cancer cells
EP3091033A1 (en) 2015-05-06 2016-11-09 Gamamabs Pharma Anti-human-her3 antibodies and uses thereof
CN107614002B (zh) * 2015-05-29 2022-01-04 箭头药业股份有限公司 生物学可切割四肽连接剂
EP3307877B1 (en) 2015-06-12 2020-11-18 Lentigen Technology, Inc. Method to treat cancer with engineered t-cells
TW201709934A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 建南德克公司 抗體及免疫結合物
US10195175B2 (en) 2015-06-25 2019-02-05 Immunomedics, Inc. Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors
AU2016286898B2 (en) 2015-06-29 2022-12-08 Daiichi Sankyo Company, Limited Method for selectively manufacturing antibody-drug conjugate
SI3316885T1 (sl) 2015-07-01 2021-09-30 Immunomedics, Inc. Imunokonjugati protitelo-SN-38 z linkerjem CL2A
EP3319993B1 (en) 2015-07-10 2020-01-15 Genmab A/S Axl-specific antibody-drug conjugates for cancer treatment
AU2015242213A1 (en) 2015-07-12 2018-03-08 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Bridge linkers for conjugation of cell-binding molecules
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
AU2016297786A1 (en) 2015-07-24 2018-02-08 Noeleen Melody Quinstatin compounds
WO2017044803A1 (en) 2015-09-09 2017-03-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Service Expression vector delivery system and use thereof for inducing an immune response
WO2017062334A1 (en) 2015-10-05 2017-04-13 Merck Sharp & Dohme Corp. Antibody peptide conjugates that have agonist activity at both the glucagon and glucagon-like peptide 1 receptors
EP3359194A4 (en) 2015-10-06 2019-04-24 Merck Sharp & Dohme Corp. ANTIBODY-ACTIVE CONJUGATE FOR ANTI-INFLAMMATORY APPLICATIONS
AU2016335750B2 (en) 2015-10-07 2023-05-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services IL-7R-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
WO2017060397A1 (en) 2015-10-09 2017-04-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the survival time of subjects suffering from melanoma metastases
WO2017062820A1 (en) 2015-10-09 2017-04-13 Miltenyi Biotec Technology, Inc. Chimeric antigen receptors and methods of use
WO2017067944A1 (en) 2015-10-19 2017-04-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the survival time of subjects suffering from triple negative breast cancer
CA3006000A1 (en) 2015-12-04 2017-06-08 Seattle Genetics, Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
CA3007030A1 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and psma
BR112018013912A2 (pt) 2016-01-08 2018-12-18 Bioalliance C.V. anticorpos tetravalentes anti-psgl-1 e usos dos mesmos
KR20180101479A (ko) 2016-01-13 2018-09-12 젠맵 에이/에스 항체 및 그의 약물 접합체를 위한 제제
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
US10869929B2 (en) 2016-01-29 2020-12-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphonate linkers and their use to facilitate cellular retention of compounds
US10723727B2 (en) 2016-02-01 2020-07-28 Pfizer Inc. Tubulysin analogs and methods for their preparation
CN108601841A (zh) 2016-02-10 2018-09-28 免疫医疗公司 Abcg2抑制剂与sacituzumab govitecan(immu-132)的组合克服表达trop-2的癌中对sn-38的抗性
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
US11191821B2 (en) 2016-02-27 2021-12-07 The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Peptide vaccine formulations and use thereof for inducing an immune response
WO2017151425A1 (en) * 2016-02-29 2017-09-08 Madrigal Pharmaceuticals, Inc. Hsp90 inhibitor drug conjugates
US11098052B2 (en) 2016-03-02 2021-08-24 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University 4-azapodophylotoxins compounds
US10548986B2 (en) 2016-03-02 2020-02-04 Eisai R&D Management Co., Ltd. Eribulin-based antibody-drug conjugates and methods of use
EP3222292A1 (en) 2016-03-03 2017-09-27 Heidelberg Pharma GmbH Amanitin conjugates
CN109310885B (zh) 2016-03-15 2022-05-31 梅尔莎纳医疗公司 NaPi2b靶向抗体-药物缀合物及其使用方法
MA45324A (fr) 2016-03-15 2019-01-23 Seattle Genetics Inc Polythérapie utilisant un adc-liv1 et un agent chimiothérapeutique
WO2017161206A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Halozyme, Inc. Conjugates containing conditionally active antibodies or antigen-binding fragments thereof, and methods of use
CN107216392A (zh) * 2016-03-17 2017-09-29 华东师范大学 蟾蜍毒素衍生物的抗体药物偶联物及其制备方法和应用
WO2017162678A1 (en) 2016-03-22 2017-09-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Humanized anti-claudin-1 antibodies and uses thereof
MA43835A (fr) 2016-03-25 2018-11-28 Seattle Genetics Inc Procédé de préparation de lieurs de médicaments pégylés et leurs intermédiaires
EP3442574A4 (en) 2016-04-15 2019-12-11 MacroGenics, Inc. NOVEL B7-H3 BINDING MOLECULES, THEIR ANTIBODY-MEDICINAL CONJUGATES AND METHODS OF USE
CA3021086C (en) 2016-04-15 2023-10-17 Bioatla, Llc Anti-axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates and uses thereof
US10934359B2 (en) 2016-04-21 2021-03-02 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-BMPR1B antibodies and methods of use
WO2017189483A1 (en) 2016-04-25 2017-11-02 The Johns Hopkins University Znt8 assays for drug development and pharmaceutical compositions
RU2725292C2 (ru) 2016-04-27 2020-06-30 Иммьюномедикс, Инк. Эффективность конъюгатов антитела против trop-2 с лекарственным средством sn-38 для терапии рецидивирующих/рефрактерных к ингибиторам контрольной точки опухолей
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
US10918627B2 (en) 2016-05-11 2021-02-16 Massachusetts Institute Of Technology Convergent and enantioselective total synthesis of Communesin analogs
TW202208441A (zh) 2016-05-13 2022-03-01 美商拜奧亞特拉公司 抗-ror2抗體、抗體片段、其免疫結合物及其用途
PL3458101T3 (pl) 2016-05-20 2021-05-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Koniugaty PROTAC-przeciwciało i sposoby ich stosowania
JP7043425B2 (ja) 2016-06-06 2022-03-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド シルベストロール抗体－薬物コンジュゲート及び使用方法
EP3468993A1 (en) 2016-06-08 2019-04-17 AbbVie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
EP3458479B1 (en) 2016-06-08 2020-11-04 AbbVie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
BR112018075630A2 (pt) 2016-06-08 2019-03-19 Abbvie Inc. anticorpos anti-cd98 e conjugados de fármaco de anticorpo
BR112018075644A2 (pt) 2016-06-08 2019-04-09 Abbvie Inc. anticorpos anti-cd98 e conjugados de anticorpo e fármaco
US20200338209A1 (en) 2016-06-08 2020-10-29 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
RU2022104399A (ru) 2016-06-14 2022-05-05 Ксенкор, Инк. Биспецифические антитела-ингибиторы контрольных точек
JP2019522050A (ja) 2016-06-17 2019-08-08 マジェンタ セラピューティクス インコーポレイテッドＭａｇｅｎｔａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． 細胞の枯渇のための組成物および方法
CN116063545A (zh) 2016-06-28 2023-05-05 Xencor股份有限公司 结合生长抑素受体2的异源二聚抗体
IL263793B2 (en) 2016-06-29 2023-11-01 Univ California Compounds and preparations for the treatment of cancer
WO2018005697A1 (en) 2016-06-29 2018-01-04 The Regents Of The University Of California Antibodies specific to sonic hedgehog and method of use thereof
US11712480B2 (en) 2016-08-03 2023-08-01 Pfizer Inc. Heteroaryl sulfone-based conjugation handles, methods for their preparation, and their use in synthesizing antibody drug conjugates
BR112019001945A2 (pt) 2016-08-09 2019-05-07 Seattle Genetics, Inc. composição de conjugado de fármaco aglutinante, formulação farmaceuticamente aceitável, métodos para tratar uma doença ou afecção hiperproliferativa, para inibir a multiplicação de uma célula tumoral ou célula cancerígena e para preparar uma composição de conjugado de fármaco aglutinado, e, composto
EP3500574B1 (en) 2016-08-19 2021-11-24 Bristol-Myers Squibb Company Seco-cyclopropapyrroloindole compounds, antibody-drug conjugates thereof, and methods of making and use
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
US11254705B2 (en) 2016-09-02 2022-02-22 Sirenas Llc Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
US11453712B2 (en) 2016-09-02 2022-09-27 Lentigen Technology Inc. Compositions and methods for treating cancer with DuoCARs
CN110139674B (zh) 2016-10-05 2023-05-16 豪夫迈·罗氏有限公司 制备抗体药物缀合物的方法
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
KR102649972B1 (ko) 2016-10-14 2024-03-22 젠코어 인코포레이티드 IL15/IL15Rα 이종이량체 Fc-융합 단백질
KR20190074292A (ko) 2016-10-18 2019-06-27 시애틀 지네틱스, 인크. 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드의 구제 경로 저해제의 표적화된 전달
US10398783B2 (en) 2016-10-20 2019-09-03 Bristol-Myers Squibb Company Antiproliferative compounds and conjugates made therefrom
US11186635B2 (en) 2016-10-25 2021-11-30 Institut National De La Santé Et De La Recherché Médical (Inserm) Monoclonal antibodies binding to the CD160 transmembrane isoform
SG11201903693QA (en) 2016-11-01 2019-05-30 Genmab Bv Polypeptide variants and uses thereof
CN110099682B (zh) 2016-11-14 2023-03-31 杭州多禧生物科技有限公司 偶联连接体，含有此连接体的细胞结合分子-药物偶联物及其制备和应用
EP4015532A1 (en) 2016-11-21 2022-06-22 cureab GmbH Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates
WO2018110515A1 (ja) 2016-12-12 2018-06-21 第一三共株式会社 抗体－薬物コンジュゲートと免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせ
AU2017380099A1 (en) 2016-12-23 2019-06-13 Heidelberg Pharma Research Gmbh Amanitin antibody conjugates
AU2018205372B2 (en) 2017-01-09 2020-08-06 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-mesothelin immunotherapy
KR102537651B1 (ko) 2017-01-17 2023-05-26 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항 gpr20 항체 및 항 gpr20 항체-약물 콘쥬게이트
IL268058B2 (en) 2017-01-20 2023-09-01 Magenta Therapeutics Inc Compositions and methods for depleting cd137 plus cells
CA3050085A1 (en) 2017-01-20 2018-07-26 Juno Therapeutics Gmbh Cell surface conjugates and related cell compositions and methods
CN110461860A (zh) 2017-01-24 2019-11-15 辉瑞公司 卡奇霉素衍生物及其抗体药物缀合物
EP3574016A2 (en) 2017-01-24 2019-12-04 Innate Pharma NKp46 BINDING AGENTS
EP3577138A1 (en) 2017-02-06 2019-12-11 Innate Pharma Immunomodulatory antibody drug conjugates binding to a human mica polypeptide
JP6671555B2 (ja) 2017-02-08 2020-03-25 アーデーセー セラピューティクス ソシエテ アノニム ピロロベンゾジアゼピン抗体複合体
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2018146253A1 (en) 2017-02-10 2018-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of cancers associated with activation of the mapk pathway
WO2018160538A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Mersana Therapeutics, Inc. Combination therapies of her2-targeted antibody-drug conjugates
CA3053749A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Kinki University Method for treating egfr-tki-resistant non-small cell lung cancer by administration of anti-her3 antibody-drug conjugate
EP3589654A1 (en) 2017-03-02 2020-01-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies having specificity to nectin-4 and uses thereof
GB201703876D0 (en) 2017-03-10 2017-04-26 Berlin-Chemie Ag Pharmaceutical combinations
CN112695050A (zh) 2017-03-24 2021-04-23 莱蒂恩技术公司 用于用抗cd33免疫疗法治疗癌症的组合物和方法
AU2018237683A1 (en) 2017-03-24 2019-10-31 Seagen Inc. Process for the preparation of glucuronide drug-linkers and intermediates thereof
JP2020512314A (ja) 2017-03-27 2020-04-23 イミューノメディクス、インコーポレイテッドＩｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ， Ｉｎｃ． サシツズマブゴビテカンとＲＡＤ５１阻害剤を用いたＴｒｏｐ−２発現トリプルネガティブ乳癌の治療
EP3606964A4 (en) 2017-04-03 2020-12-09 Immunomedics, Inc. SUBCUTANE ADMINISTRATION OF ANTIBODY DRUG CONJUGATES FOR CANCER THERAPY
JP2020515629A (ja) 2017-04-04 2020-05-28 アヴィディア テクノロジーズ， インコーポレイテッド 免疫応答を誘導するためのペプチドベースのワクチン、それらの製造方法および使用
AU2018250336A1 (en) 2017-04-07 2019-09-26 Juno Therapeutics, Inc. Engineered cells expressing prostate-specific membrane antigen (PSMA) or a modified form thereof and related methods
JP2020517609A (ja) 2017-04-18 2020-06-18 メディミューン リミテッド ピロロベンゾジアゼピン複合体
WO2018195302A1 (en) 2017-04-19 2018-10-25 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-vtcn1 antibodies and antibody drug conjugates
CA3057748A1 (en) 2017-04-20 2018-10-25 Adc Therapeutics Sa Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate
BR112019022445A2 (pt) 2017-04-27 2020-05-12 Seattle Genetics, Inc. Composição de conjugado ligante-fármaco, formulação, método para inibir a multiplicação de uma célula tumoral ou célula cancerosa ou causar apoptose em uma célula tumoral ou cancerosa, e, composto de conector de fármaco
KR20200002858A (ko) 2017-04-28 2020-01-08 아지노모토 가부시키가이샤 가용성 단백질에 대한 친화성 물질, 절단성 부분 및 반응성기를 갖는 화합물 또는 이의 염
US11932650B2 (en) 2017-05-11 2024-03-19 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
TWI794230B (zh) 2017-05-15 2023-03-01 日商第一三共股份有限公司 抗ｃｄｈ６抗體及抗ｃｄｈ６抗體-藥物結合物、以及其製造方法
WO2018229222A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 Adc Therapeutics Sa Dosage regimes for the administration of an anti-cd19 adc
JP2020524156A (ja) 2017-06-20 2020-08-13 マドリガル ファーマシューティカルズ インコーポレイテッドＭａｄｒｉｇａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 標的治療薬を含む併用療法
EP3641647A4 (en) 2017-06-20 2021-05-05 Madrigal Pharmaceuticals, Inc. TARGETED THERAPEUTICS
WO2018234843A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) METHODS AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF FIBROSIS WITH AGENTS CAPABLE OF INHIBITING THE ACTIVATION OF MOSES-ASSOCIATED INVARIANT T CELLS (MAIT)
CA3067603A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric fc fusion proteins containing il-15/il-15ra and antigen binding domains
WO2019014044A1 (en) 2017-07-12 2019-01-17 The Johns Hopkins University ZNT8 AUTO-ANTIGEN BASED ON PROTEOLIPOSOMES FOR THE DIAGNOSIS OF TYPE 1 DIABETES
CN111183156A (zh) 2017-07-31 2020-05-19 莱蒂恩技术公司 用于用抗cd19/cd20免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
US10494370B2 (en) 2017-08-16 2019-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a pyridine or pyrazine moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10472361B2 (en) 2017-08-16 2019-11-12 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a benzotriazole moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10508115B2 (en) 2017-08-16 2019-12-17 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having heteroatom-linked aromatic moieties, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10457681B2 (en) 2017-08-16 2019-10-29 Bristol_Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a tricyclic moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10487084B2 (en) 2017-08-16 2019-11-26 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a heterobiaryl moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
WO2019034764A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Medimmune Limited CONJUGATES OF PYRROLOBENZODIAZEPINE
CA3073924C (en) 2017-08-31 2023-10-17 Daiichi Sankyo Company, Limited Improved method for producing antibody-drug conjugate
BR112020003466B1 (pt) 2017-08-31 2023-12-12 Daiichi Sankyo Company, Limited Métodos de produção de composto, e, composto
EP4279086A3 (en) 2017-09-15 2024-02-28 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19 immunotherapy
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
EP4279584A3 (en) 2017-10-16 2024-03-06 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd22 immunotherapy
AU2018366199A1 (en) 2017-11-08 2020-05-28 Xencor, Inc. Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-PD-1 sequences
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
CN111417408B (zh) 2017-11-30 2024-04-23 思进公司 药物接头化合物的制备方法
EP3498293A1 (en) 2017-12-15 2019-06-19 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Treatment of monogenic diseases with an anti-cd45rc antibody
CN112204048A (zh) 2017-12-15 2021-01-08 朱诺治疗学股份有限公司 抗cct5结合分子及其使用方法
CA3086199A1 (en) 2017-12-19 2019-06-27 Xencor, Inc. Engineered il-2 fc fusion proteins
CN111954677A (zh) 2017-12-20 2020-11-17 莱蒂恩技术公司 用于用免疫治疗来治疗hiv/aids的组合物和方法
US20210107988A1 (en) 2018-01-24 2021-04-15 Genmab B.V. Polypeptide variants and uses thereof
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
CN112020519A (zh) 2018-03-13 2020-12-01 酵活有限公司 抗her2双互补位抗体-药物偶联物及使用方法
US20210024628A1 (en) 2018-03-22 2021-01-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for modulating innate lymphoid cell activity, antibody drug conjugates and uses in therapy
AU2019240403A1 (en) 2018-03-23 2020-10-08 Seagen Inc. Use of antibody drug conjugates comprising tubulin disrupting agents to treat solid tumor
MX2020009991A (es) 2018-03-28 2020-10-14 Axon Neuroscience Se Metodos basados en anticuerpos para detectar y tratar la enfermedad de alzheimer.
US10982006B2 (en) 2018-04-04 2021-04-20 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
EP3552631A1 (en) 2018-04-10 2019-10-16 Inatherys Antibody-drug conjugates and their uses for the treatment of cancer
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3773740A1 (en) 2018-04-13 2021-02-17 Heidelberg Pharma Research GmbH Targeted amatoxin conjugate for the treatment of solid tumors
CA3097741A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Xencor, Inc. Tim-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and tim-3 antigen binding domains
EP3781599A1 (en) 2018-04-18 2021-02-24 Xencor, Inc. Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof
WO2019209811A1 (en) 2018-04-24 2019-10-31 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic toll-like receptor 7 (tlr7) agonists
EP3814379A4 (en) 2018-05-07 2022-03-30 Genmab A/S METHOD OF TREATMENT OF CANCER WITH A COMBINATION OF AN ANTI-PD-1 ANTIBODY AND AN ANTI-TISSUE FACTOR ANTIBODY-DRUG CONJUGATE
IL307925A (en) 2018-05-07 2023-12-01 Genmab As Combination of an antibody against 1-PD and conjugation of a drug with an antibody against TF for use in the treatment of cancer
JP2021524740A (ja) 2018-05-18 2021-09-16 グリコトープ ゲーエムベーハー 抗ｍｕｃ１抗体
CA3104729A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Avidea Technologies, Inc. Improved methods of manufacturing peptide-based vaccines
AU2019277094A1 (en) 2018-05-29 2021-01-21 Bristol-Myers Squibb Company Modified self-immolating moieties for use in prodrugs and conjugates and methods of using and making
WO2019232449A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Eisai R&D Management Co., Ltd. Splicing modulator antibody-drug conjugates and methods of use
EP3811978A4 (en) 2018-06-14 2022-03-16 Ajinomoto Co., Inc. SUBSTANCE HAVING AFFINITY FOR AN ANTIBODY, AND COMPOUND OR SALT THEREOF HAVING A BIOORTHOGONAL FUNCTIONAL GROUP
GB201809746D0 (en) 2018-06-14 2018-08-01 Berlin Chemie Ag Pharmaceutical combinations
WO2019240287A1 (ja) 2018-06-14 2019-12-19 味の素株式会社 抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩
WO2020010079A2 (en) 2018-07-02 2020-01-09 Amgen Inc. Anti-steap1 antigen-binding protein
CN112739340A (zh) 2018-07-23 2021-04-30 美真达治疗公司 抗cd5抗体药物缀合物(adc)在同种异体细胞疗法中的用途
CA3108289A1 (en) 2018-08-02 2020-02-06 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11911484B2 (en) 2018-08-02 2024-02-27 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
US11168141B2 (en) 2018-08-02 2021-11-09 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
KR20210081322A (ko) 2018-08-02 2021-07-01 다인 세라퓨틱스, 인크. 근육 표적화 복합체 및 디스트로핀병증을 치료하기 위한 그의 용도
US11554120B2 (en) 2018-08-03 2023-01-17 Bristol-Myers Squibb Company 1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine compounds as toll-like receptor 7 (TLR7) agonists and methods and uses therefor
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
WO2020058372A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of cancers resistant to immune checkpoint therapy
CA3113058A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd123 immunotherapy
BR112021005246A2 (pt) 2018-09-20 2021-06-15 Daiichi Sankyo Company, Limited agente terapêutico, e, método de tratamento para câncer
EP3626265A1 (en) 2018-09-21 2020-03-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-human cd45rc antibodies and uses thereof
EP3856235A2 (en) 2018-09-26 2021-08-04 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19/cd22 immunotherapy
WO2020072681A1 (en) 2018-10-03 2020-04-09 Avidea Technologies, Inc. Aromatic ring substituted amphiphilic polymers as drug delivery systems
WO2020072821A2 (en) 2018-10-03 2020-04-09 Xencor, Inc. Il-12 heterodimeric fc-fusion proteins
WO2020086858A1 (en) 2018-10-24 2020-04-30 Genentech, Inc. Conjugated chemical inducers of degradation and methods of use
KR20210086671A (ko) 2018-10-30 2021-07-08 젠맵 에이/에스 항-vegf 항체 및 항-조직 인자 항체-약물 접합체의 조합을 사용하여 암을 치료하는 방법
WO2020090979A1 (ja) 2018-10-31 2020-05-07 味の素株式会社 抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩
US20220025058A1 (en) 2018-11-06 2022-01-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of acute myeloid leukemia by eradicating leukemic stem cells
JP2022513682A (ja) 2018-11-30 2022-02-09 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッド 抗ｃｄ３８免疫療法によりがんを処置するための組成物および方法
AU2018451747A1 (en) 2018-12-06 2021-06-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of diffuse large B-cell lymphoma comprising an anti-CD79b immunoconjugates, an alkylating agent and an anti-CD20 antibody
EP3893937A2 (en) 2018-12-13 2021-10-20 Eisai R&D Management Co., Ltd. Herboxidiene antibody-drug conjugates and methods of use
JP2022516408A (ja) 2018-12-14 2022-02-28 インセルム（インスティチュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ リシェルシェ メディカル） 単離されたＭＨＣ由来ヒトペプチドおよびＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＣｌｏｗＴｒｅｇの抑制機能を刺激し、かつ活性化するためのその使用
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
EP3920968A1 (en) 2019-02-05 2021-12-15 Seagen Inc. Anti-cd228 antibodies and antibody-drug conjugates
MX2021010390A (es) 2019-03-01 2021-11-17 Xencor Inc Anticuerpos heterodimericos que se unen a enpp3 y cd3.
CA3132660A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with self-driving chimeric antigen receptors
SG11202109066RA (en) 2019-03-19 2021-09-29 Fundacio Privada Inst Dinvestigacio Oncològica De Vall Hebron Combination therapy with omomyc and an antibody binding pd-1 or ctla-4 for the treatment of cancer
WO2020191342A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 The Regents Of The University Of California Claudin-6 antibodies and drug conjugates
CN114206934A (zh) 2019-03-20 2022-03-18 加利福尼亚大学董事会 密封蛋白-6双特异性抗体
AU2020260131A1 (en) 2019-04-17 2021-11-18 Barinthus Biotherapeutics North America, Inc. Compositions and methods of manufacturing star polymers for ligand display and/or drug delivery
US20230135930A1 (en) 2019-04-24 2023-05-04 Heidelberg Pharma Research Gmbh Amatoxin antibody-drug conjugates and uses thereof
KR20220007136A (ko) 2019-05-14 2022-01-18 제넨테크, 인크. 소포 림프종을 치료하기 위한 항-CD79b 면역접합체의 사용 방법
EP3976653A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-bcma immunotherapy
WO2020247054A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
GB201908128D0 (en) 2019-06-07 2019-07-24 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CN114269783B (zh) 2019-07-02 2024-03-26 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 结合egfrviii的单克隆抗体及其应用
CN110339181A (zh) * 2019-07-02 2019-10-18 中国药科大学 一种基于点击反应的pH响应型纳米制剂及其制法和应用
BR112022002406A2 (pt) 2019-08-12 2022-07-19 Purinomia Biotech Inc Métodos e composições para promover e potencializar respostas imunes mediadas por célula t através do alvejamento de adcc de células que expressam cd39
BR112022005114A2 (pt) 2019-10-04 2022-06-21 Seagen Inc Anticorpo, composição farmacêutica, métodos para tratar câncer e para produzir um conjugado anticorpo-fármaco e um anticorpo, ácido nucleico, vetor, célula hospedeira, e, conjugado anticorpo-fármaco
US20220363776A1 (en) 2019-10-04 2022-11-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of ovarian cancer, breast cancer or pancreatic cancer
EP4045090A1 (en) 2019-10-18 2022-08-24 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
EP3812008A1 (en) 2019-10-23 2021-04-28 Gamamabs Pharma Amh-competitive antagonist antibody
TW202131954A (zh) 2019-11-07 2021-09-01 丹麥商珍美寶股份有限公司 利用鉑類劑與抗組織因子抗體－藥物共軛體之組合來治療癌症之方法
CN115052890A (zh) 2019-11-07 2022-09-13 展马博联合股份有限公司 使用抗pd-1抗体与抗组织因子抗体-药物偶联物的组合以治疗癌症的方法
EP4072682A1 (en) 2019-12-09 2022-10-19 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Antibodies having specificity to her4 and uses thereof
TW202138388A (zh) 2019-12-30 2021-10-16 美商西根公司 以非海藻糖苷化抗－ｃｄ７０抗體治療癌症之方法
AU2021205893A1 (en) 2020-01-08 2022-06-23 Synthis Therapeutics, Inc. ALK5 inhibitor conjugates and uses thereof
EP4096717A1 (en) 2020-01-31 2022-12-07 Innate Pharma Treatment of cancer
JP2023522930A (ja) 2020-04-24 2023-06-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＣＤ７９ｂ免疫抱合体の使用方法
KR20230008751A (ko) 2020-05-12 2023-01-16 인쎄름 (엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔) 피부 t-세포 림프종 및 tfh 유래된 림프종을 치료하는 신규한 방법
EP3909612A1 (en) 2020-05-12 2021-11-17 Life Science Inkubator Betriebs GmbH & Co. KG Composition of nanoparticles
US11919956B2 (en) 2020-05-14 2024-03-05 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3
WO2021234110A1 (en) 2020-05-20 2021-11-25 Institut Curie Single domain antibodies and their use in cancer therapies
BR112022024833A2 (pt) 2020-06-05 2023-02-14 Eisai R&D Man Co Ltd Conjugados anticorpo anti-bcma-fármaco e métodos de uso
WO2021251358A1 (ja) 2020-06-09 2021-12-16 味の素株式会社 修飾フェリチンおよびその製造方法
WO2021262723A1 (en) 2020-06-22 2021-12-30 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with tslpr-cd19 or tslpr-cd22 immunotherapy
AU2021299947A1 (en) 2020-06-29 2022-12-22 Genmab A/S Anti-tissue factor antibody-drug conjugates and their use in the treatment of cancer
TW202216212A (zh) 2020-07-17 2022-05-01 日商第一三共股份有限公司 抗體-藥物結合物之製造方法
JP2023535409A (ja) 2020-07-21 2023-08-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｂｒｍ分解の抗体コンジュゲート化化学的誘導物質及びｂｒｍ分解の方法
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
US20230323299A1 (en) 2020-08-03 2023-10-12 Inserm (Institut National De La Santé Et De La Recherch Médicale) Population of treg cells functionally committed to exert a regulatory activity and their use for adoptive therapy
EP4192871A1 (en) 2020-08-04 2023-06-14 Seagen Inc. Anti-cd228 antibodies and antibody-drug conjugates
WO2022043256A1 (en) 2020-08-23 2022-03-03 Cobiores Nv Synergistic combinations of anticancer drugs linked to a tetrapeptidic moiety and immunotherapeutic agents
CN112062855A (zh) 2020-08-26 2020-12-11 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种含有衔接器的药物治疗剂的开发和应用
CA3193273A1 (en) 2020-08-27 2022-03-03 Enosi Therapeutics Corporation Methods and compositions to treat autoimmune diseases and cancer
EP3970752A1 (en) 2020-09-17 2022-03-23 Merck Patent GmbH Molecules with solubility tag and related methods
CA3193244A1 (en) 2020-09-22 2022-03-31 Geoffrey Martin Lynn Compositions and methods of manufacturing amphiphilic block copolymers that form nanoparticles in situ
EP4229090A1 (en) 2020-10-16 2023-08-23 Université d'Aix-Marseille Anti-gpc4 single domain antibodies
US20230390406A1 (en) 2020-10-19 2023-12-07 Vaccitech North America, Inc. Star Polymer Drug Conjugates
ES2963150T3 (es) 2020-10-27 2024-03-25 Elucida Oncology Inc Procedimientos para funcionalizar nanopartículas
CA3171093A1 (en) 2020-11-05 2022-05-12 Dina SCHNEIDER Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19/cd22 immunotherapy
CN114524878A (zh) 2020-11-23 2022-05-24 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种双特异性抗体及其用途
EP4251207A1 (en) 2020-11-25 2023-10-04 Innate Pharma Treatment of cancer
CN114573702A (zh) 2020-12-02 2022-06-03 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种新型肿瘤衔接器治疗药物的开发和应用
CN114573703A (zh) 2020-12-02 2022-06-03 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种t细胞衔接器治疗剂的开发和应用
EP4015004A1 (en) 2020-12-18 2022-06-22 Phi Pharma SA Proteoglycan specific branched peptides
CA3203072A1 (en) 2020-12-22 2022-06-30 Andrea CASAZZA Compounds comprising a tetrapeptidic moiety
CN114685657A (zh) 2020-12-31 2022-07-01 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种功能增强型抗体阻断剂的开发及其应用
CN117916271A (zh) 2021-01-14 2024-04-19 居里研究所 Her2单域抗体变体及其car
AU2022208654A1 (en) 2021-01-18 2023-08-03 Ajinomoto Co., Inc. Compound or salt thereof, and antibody produced using same
EP4279502A1 (en) 2021-01-18 2023-11-22 Ajinomoto Co., Inc. Compound or salt thereof, and antibody obtained therefrom
UY39610A (es) 2021-01-20 2022-08-31 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
WO2022167664A1 (en) 2021-02-07 2022-08-11 Cobiores Nv Compounds comprising a tetrapeptidic moiety
MX2023009417A (es) 2021-02-16 2023-12-01 Vaccitech North America Inc Nanopartículas de autoensamblaje basadas en péptidos anfifílicos.
AU2022232375A1 (en) 2021-03-09 2023-09-21 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
US11859012B2 (en) 2021-03-10 2024-01-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and GPC3
CN116964076A (zh) 2021-03-11 2023-10-27 味之素株式会社 化合物或其盐、以及由它们得到的抗体
WO2022196675A1 (ja) 2021-03-16 2022-09-22 味の素株式会社 複合体またはその塩、およびその製造方法
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
US20240175873A1 (en) 2021-03-23 2024-05-30 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of t cell-lymphomas
MX2023011507A (es) 2021-03-30 2023-10-04 Legochem Biosciences Inc Conjugado anticuerpo- farmaco que incluye un anticuerpo contra la cldn18.2 humana y uso del mismo.
WO2022214681A1 (en) 2021-04-09 2022-10-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of anaplastic large cell lymphoma
AU2022253902A1 (en) 2021-04-10 2023-11-02 Profoundbio Us Co. Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
EP4079327A1 (en) * 2021-04-22 2022-10-26 Centaurus Polytherapeutics Payloads for drug-conjugates and their use for treating cancer
CA3216459A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
IL308351A (en) 2021-05-12 2024-01-01 Genentech Inc Methods for using anti-CD79B immunoconjugates to treat diffuse large B-cell lymphoma
JP2024521667A (ja) 2021-05-26 2024-06-04 オックスフォード バイオセラピューティックス リミテッド 抗－ｃｄ２０５抗体及び免疫チェックポイント・インヒビターを含む組み合わせ医薬
TW202320857A (zh) 2021-07-06 2023-06-01 美商普方生物製藥美國公司 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法
US11969475B2 (en) 2021-07-09 2024-04-30 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11648318B2 (en) 2021-07-09 2023-05-16 Dyne Therapeutics, Inc. Anti-transferrin receptor (TFR) antibody and uses thereof
US11638761B2 (en) 2021-07-09 2023-05-02 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11771776B2 (en) 2021-07-09 2023-10-03 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US11633498B2 (en) 2021-07-09 2023-04-25 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
KR20240046524A (ko) 2021-08-07 2024-04-09 제넨테크, 인크. 미만성 거대 b-세포 림프종을 치료하기 위해 항-cd79b 면역접합체를 사용하는 방법
AU2022338463A1 (en) 2021-09-03 2024-03-21 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for cancer treatment and/or prevention
WO2023041717A1 (en) 2021-09-16 2023-03-23 Aboleris Pharma Anti-human cd45rc binding domains and uses thereof
WO2023056069A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Angiex, Inc. Degrader-antibody conjugates and methods of using same
KR20240073035A (ko) 2021-09-30 2024-05-24 아지노모토 가부시키가이샤 항체 및 기능성 물질의 컨쥬게이트 또는 그 염, 및 그 제조에 사용되는 항체 유도체 및 화합물 또는 그 염
AU2022356491A1 (en) 2021-10-01 2024-03-14 Unichem Laboratories Limited Recombinant glycan binding proteins and its use
WO2023089314A1 (en) 2021-11-18 2023-05-25 Oxford Biotherapeutics Limited Pharmaceutical combinations
WO2023092099A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2023110937A1 (en) 2021-12-14 2023-06-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Depletion of nk cells for the treatment of adverse post-ischemic cardiac remodeling
WO2023111350A2 (en) 2021-12-17 2023-06-22 3B Pharmaceuticals Gmbh Carbonic anhydrase ix ligands
AR128331A1 (es) 2022-01-26 2024-04-17 Genentech Inc Inductores químicos de degradación conjugados con anticuerpos y métodos de estos
WO2023144303A1 (en) 2022-01-31 2023-08-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Cd38 as a biomarker and biotarget in t-cell lymphomas
US20230338424A1 (en) 2022-03-02 2023-10-26 Lentigen Technology, Inc. Compositions and Methods for Treating Cancer with Anti-CD123 Immunotherapy
US11590169B1 (en) 2022-03-02 2023-02-28 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD123 immunotherapy
US20230355792A1 (en) 2022-04-07 2023-11-09 Heidelberg Pharma Research Gmbh Methods of improving the therapeutic index
WO2023198648A1 (en) 2022-04-11 2023-10-19 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of t-cell malignancies
US11931421B2 (en) 2022-04-15 2024-03-19 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and formulations for treating myotonic dystrophy
WO2023198874A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of t cell-lymphomas
TW202406934A (zh) 2022-05-03 2024-02-16 美商建南德克公司 抗Ｌｙ６Ｅ抗體、免疫結合物及其用途
WO2023213960A1 (en) 2022-05-06 2023-11-09 Genmab A/S Methods of treating cancer with anti-tissue factor antibody-drug conjugates
WO2023227660A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Innate Pharma Nectin-4 binding agents
WO2024003310A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of acute lymphoblastic leukemia
WO2024018046A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Garp as a biomarker and biotarget in t-cell malignancies
WO2024026107A2 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Lentigen Technology, Inc. Chimeric antigen receptor therapies for treating solid tumors
WO2024023283A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Lrrc33 as a biomarker and biotarget in cutaneous t-cell lymphomas
US20240075142A1 (en) 2022-08-26 2024-03-07 Lentigen Technology, Inc. Compositions and Methods for Treating Cancer with Fully Human Anti-CD20/CD19 Immunotherapy
WO2024052503A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to ltbp2 and uses thereof
WO2024079192A1 (en) 2022-10-12 2024-04-18 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Cd81 as a biomarker and biotarget in t-cell malignancies
WO2024092028A2 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Vaccitech North America, Inc. Combination treatment regimes for treating cancer
WO2024092030A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Vaccitech North America, Inc. Self-assembling nanoparticles
WO2024089013A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Peptomyc, S.L. Combination therapy for the treatment of cancer
WO2024097816A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 Seagen Inc. Anti-avb6 antibodies and antibody-drug conjugates and their use in the treatment of cancer
WO2024108178A1 (en) 2022-11-18 2024-05-23 Genentech, Inc. Signal amplification and multiplexing using mass tags for ia-lc-ms/ms based assays
EP4382120A1 (en) 2022-12-05 2024-06-12 Institut Regional du Cancer de Montpellier Anti-slc1a4 monoclonal antibodies and uses thereof
WO2024121632A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Crispr Therapeutics Ag Use of anti-cd117 antibody drug conjugate (adc)

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1981001145A1 (en) 1979-10-18 1981-04-30 Univ Illinois Hydrolytic enzyme-activatible pro-drugs
US4867973A (en) 1984-08-31 1989-09-19 Cytogen Corporation Antibody-therapeutic agent conjugates
US4671958A (en) * 1982-03-09 1987-06-09 Cytogen Corporation Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites
JPS59116232A (ja) * 1982-12-24 1984-07-05 Teijin Ltd 細胞毒性複合体及びその製造法
US5057313A (en) 1986-02-25 1991-10-15 The Center For Molecular Medicine And Immunology Diagnostic and therapeutic antibody conjugates
IN165717B (fi) 1986-08-07 1989-12-23 Battelle Memorial Institute
EP0329184A3 (en) * 1988-02-19 1990-05-23 Neorx Corporation Antimers and antimeric conjugation
US5057301A (en) 1988-04-06 1991-10-15 Neorx Corporation Modified cellular substrates used as linkers for increased cell retention of diagnostic and therapeutic agents
US5144012A (en) 1988-08-08 1992-09-01 Eli Lilly And Company Cytotoxic drug conjugates
US5094849A (en) 1988-08-08 1992-03-10 Eli Lilly And Company Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized vinca analogs via simple organic linkers
US5169933A (en) 1988-08-15 1992-12-08 Neorx Corporation Covalently-linked complexes and methods for enhanced cytotoxicity and imaging
DE68919366T2 (de) 1988-09-30 1995-05-18 Neorx Corp Spaltbare linker zur reduzierung der akkumulierung von immunokonjugaten in nicht-zielorganen.
DE68924783T2 (de) 1988-09-30 1996-03-28 Neorx Corp Wässrige additivsysteme, verfahren und polymerteilchen.
US5045451A (en) * 1988-10-26 1991-09-03 Board Of Regents Methods for screening antibodies for use as immunotoxins
US5013547A (en) * 1989-02-07 1991-05-07 Erbamont, Inc. Anticancer drug - antibody conjugates and method for preparing same
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5198560A (en) 1990-04-27 1993-03-30 Bristol-Myers Squibb Company Cytotoxic bicyclo[7.3.1]tridec-4-ene-2,6-diyne compounds and process for the preparation thereof
US5155210A (en) 1990-09-11 1992-10-13 Brunswick Corporation Methods of conjugating actinomycin d
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates

Also Published As

Publication number Publication date
HU224351B1 (hu) 2005-08-29
MX9403570A (es) 1995-01-31
HU9401507D0 (en) 1994-09-28
CZ118794A3 (en) 1994-11-16
EP0624377B1 (en) 2002-01-23
CA2123363C (en) 2005-04-12
AU6302694A (en) 1994-11-17
PT624377E (pt) 2002-07-31
ES2170755T3 (es) 2002-08-16
NO941819D0 (no) 1994-05-13
JPH0770175A (ja) 1995-03-14
FI942237A (fi) 1994-11-15
ATE212236T1 (de) 2002-02-15
AU687795B2 (en) 1998-03-05
DE69429689D1 (de) 2002-03-14
NO315162B1 (no) 2003-07-21
CA2123363A1 (en) 1994-11-15
EP0624377A2 (en) 1994-11-17
HUT66485A (en) 1994-11-28
DE69429689T2 (de) 2002-10-17
JP3645283B2 (ja) 2005-05-11
DK0624377T3 (da) 2002-05-06
NO941819L (no) 1994-11-15
EP0624377A3 (en) 1995-11-15
FI942237A0 (fi) 1994-05-13
NZ260512A (en) 1996-09-25
RU94016384A (ru) 1996-11-10
CN1100426A (zh) 1995-03-22
US6214345B1 (en) 2001-04-10
CN1117760C (zh) 2003-08-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI116038B (fi) Menetelmä lysosomaalientsyymillä pilkottavissa olevien kasvaintenvastaisien lääkeainekonjugaattien valmistamiseksi
US6759509B1 (en) Branched peptide linkers
JP6784790B2 (ja) 標的化薬物結合体と使用するためのメチレンカルバメートリンカー
JP6267304B2 (ja) クロスリンカーおよびそれらの使用
CA1303524C (en) Drug-monoclonal antibody conjugates
KR100359005B1 (ko) 중합체결합된캠프토테신유도체,이의제조방법및이를함유하는약제학적조성물
KR960015398B1 (ko) 신규의 링커를 갖는 안트라사이클린 면역결합체 및 그의 제조방법
US6512101B1 (en) Branched hydrazone linkers
WO1998019705A1 (en) Branched peptide linkers
WO2015106599A1 (en) Conjugates and compositions for drug delivery
AU2013331440A1 (en) Drug delivery conjugates containing unnatural amino acids and methods for using
CA2902872A1 (en) Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses
TW202106340A (zh) 自行穩定之接合劑共軛物
AU619614B2 (en) Antibody-drug conjugates
AU2022204711A1 (en) Peptidic linkers and cryptophycin conjugates, useful in therapy, and their preparation
KR20170046141A (ko) 폴리옥사졸린 항체 약물 컨쥬게이트
CA3099421A1 (en) Compounds comprising a linker for increasing transcyclooctene stability
ES2735375T3 (es) Derivados funcionalizados de morfolinil antraciclina
JP2019515025A (ja) トポイソメラーゼ毒
WO2023208168A1 (zh) 一种包含亲水性糖结构的配体-药物偶联物
JP2004501106A (ja) アミノ薬物の複合体
CA3210473A1 (en) Branched linkers for antibody-drug conjugates and methods of use thereof
AU2024203793A1 (en) Compounds comprising a linker for increasing transcyclooctene stability
TWI839287B (zh) 自行穩定之接合劑共軛物
EA045708B1 (ru) Новые пептидные линкеры и конъюгаты на основе криптофицина, их получение и их терапевтическое применение

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Ref document number: 116038

Country of ref document: FI

MA Patent expired