CN114573703A - 一种t细胞衔接器治疗剂的开发和应用 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及一种T细胞衔接器治疗剂的开发和应用。该T细胞衔接器为一种T细胞双特异性抗体，该双特异性抗体包含结合到靶细胞表面上的BCMA的第一结合结构域和结合到T细胞表面上的CD3的第二结合结构域。该双特异性抗体耐受良好，可有效阻断BCMA与受体APRIL的结合，无体重减轻等不良反应。

Description

一种T细胞衔接器治疗剂的开发和应用
技术领域
本公开涉及一种T细胞衔接器治疗剂的开发和应用，特别是结合BCMA和CD3的双特异性抗体及其应用。
背景技术
B细胞成熟抗原(B-cell maturation antigen，BCMA)，是一种肿瘤坏死因子受体超家族成员，广泛表达于骨髓瘤细胞表面，正常组织中仅在浆细胞表达，而在初始B细胞、CD34+造血干细胞和其他正常组织中都不表达。BCMA缺陷小鼠具有正常的B细胞发育和体液免疫反应，多发性骨髓瘤患者样本中，配体APRIL(A Proliferation Inducing Ligand)与BCMA结合后，可刺激骨髓瘤细胞生长和增殖，同时阻止肿瘤细胞发生凋亡。由于恶性浆细胞上的表达量显著高于正常浆细胞，BCMA已成为一个重要的免疫治疗靶点。
在血液系统恶性肿瘤中，多发性骨髓瘤是第二大常见病种，多发于中老年人。患者骨髓中积聚恶性增殖的浆细胞，可导致骨髓衰竭和免疫功能缺失，同时常伴多发性溶骨性损害、高钙血症、贫血、肾脏损害。尽管近年来，新的药物包括蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和靶向抗体等，显著延长了患者的生存期，但几乎所有患者仍会复发。正在开发的新疗法如CAR-T细胞(chimeric antigen receptor T-cells)由于制备过程复杂，治疗费用高，且复发率较高；抗体药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)由于偶联毒素的安全原因，临床剂量仅局限于低剂量；在前研发的BCMA双特异抗体，尽管临床显示出相当好的疗效，但剂量升高也伴随副作用加大，可能引起强烈的细胞因子风暴综合征，并危及患者生命。因此，该领域仍需开发新的更加安全有效的药物。
T细胞双特异抗体(或称T细胞衔接器)，是一种人为构建的特殊抗体分子，可通过其一端识别靶细胞表面抗原(抗原臂)，通过另一端结合T细胞CD3受体(CD3臂)。利用靶向CD3ε链的抗体，以一种类似于TCR/肽/HLA的方式，使T细胞上的CD3发生聚集，从而活化T细胞并杀伤肿瘤。BCMA×CD3双特异性分子是靶向骨髓瘤细胞上表达的BCMA和T细胞上存在的CD3ε链(CD3e)的T细胞双特异性(TCB)抗体。BCMA×CD3双特异性分子的作用机制包含同时结合BCMA+骨髓瘤细胞和CD3+T细胞，引起T细胞活化和T细胞介导的细胞杀伤作用。
正常免疫应答过程中，TCR以低亲和力(约1-100μM)结合感染或突变细胞上的外源肽-人白细胞抗原复合物(HLA)，通过CD3将活化信号传导到核内，激活转录因子及其下游蛋白(细胞因子、颗粒酶、穿孔素等)的表达，其中TCR复合物产生的信号强度将决定T细胞的命运。信号传导复合物的ε、γ、δ以及ζ亚基彼此缔合以形成CD3ε-γ异源二聚体、CD3ε-δ异源二聚体以及CD3ζ-ζ同源二聚体。而早期开发的CD3双特异抗体，多基于OKT3、L2K、UCHT1和TR66等少数鼠源抗体，亲和力较高。在临床研究中发现，CD3抗体的亲和力过强将导致T细胞过度活化，并释放大量细胞因子，形成细胞因子风暴综合征；同时，高亲和力也会导致双特异抗体在二级淋巴器官的富集，减低在肿瘤组织的暴露。抗体Fc部分与Fcγ受体的结合能力是另一个对影响药物安全的重要因素，由于Fcγ受体在多种正常组织表达，双特异抗体通过Fc与细胞膜上的Fcγ受体结合后，可导致另一端结合的CD3受体因Fcγ受体聚集而交联活化，从而产生严重的脱靶毒性，例如：早期上市的catumaxomab由于Fc段与肝脏Kupffer细胞表达的Fcγ受体结合，引发了快速的细胞因子释放。通过使用Fcγ受体结合能力较弱的人IgG2亚型或IgG4亚型，或者进一步在CH2相应位点进行氨基酸替换，如：Armour等将IgG1和IgG4的第233-236位点(EU序列编号)替换成IgG2相应序列，减少了和Fcγ受体的结合(Eur.J.Immunol.1999)，Newman等在IgG4引入突变Ser228Pro和Leu235Glu，稳定IgG4结构同时减少与Fcγ受体的结合(Clin Immunol.2001)，Idusogie等发现将Asp270、Lys322、Pro329或Pro331分别替换成Ala，可减少IgG1与补体C1q的结合(J Immunol.2000)等。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本公开提供了一种新的与BCMA蛋白具有高亲和力的BCMA抗体。并且，本公开还提供了所述BCMA抗体与CD3抗体形成的新型BCMA-CD3κλ双特异抗体。所述BCMA-CD3κλ双特异抗体采用全长IgG构型，通过引入电荷及亲和力优化，使κλ双特异抗体优先定位到BCMA+肿瘤组织，低浓度下即可募集活化T细胞，对靶细胞产生有效杀伤，无靶细胞存在时不激活T细胞；同时，κλ双特异抗体不与FcγRI、FcγRIIA和FcγRIIIA等受体结合，减低了产生细胞因子风暴的风险。在免疫重建小鼠模型中证实，这种新型BCMA-CD3κλ双特异抗体可有效抑制肿瘤生长，疗效优于同类抗体。
在一方面，本公开提供了一种结合BCMA的抗体或其抗原结合部分。
在一方面，本公开提供了一种双特异性抗体或其抗原结合部分。
在一方面，本公开提供了编码如前述的双特异性抗体或其抗原结合部分的核酸。
在一方面，本公开提供了包含前述的核酸的载体。
在一方面，本公开提供了包含前述的核酸或载体的细胞。
根据前述的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分是人源化的。
在一方面，本公开提供了包含如前述的抗体或其抗原结合部分或其编码核酸和药学上可接受的载体的药物组合物或试剂盒。
在一方面，本公开提供了包含共价附着至治疗部分的前述所述的抗体或其抗原结合部分、双特异性或多特异性分子的抗体-药物偶联物。
在一方面，本公开提供了治疗与BCMA相关病症的方法，其包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的前述的抗体或其抗原结合片段、核酸、载体、细胞和/或药物组合物。
在一方面，本公开提供了前述的抗体或其抗原结合片段、核酸、载体、细胞和/或药物组合物在制备用于治疗哺乳动物中与BCMA相关病症的药物或试剂盒中的用途。
本公开的抗体可以用于多种应用，包括检测BCMA蛋白，诊断、治疗或预防与BCMA相关的疾病。
附图说明
图1示出了人、食蟹猴BCMA-mFc双价重组蛋白和BCMA-hFc kih单价重组蛋白的SDS-PAGE结果。
图2示出了流式细胞检测人和食蟹猴BCMA稳转细胞，人BCMA稳转细胞(CHO-hBCMA-2C2)和食蟹猴BCMA稳转细胞(CHO-cynoBCMA-1A2)均表达高水平的cynoBCMA。
图3示出了CD3εγ-Fc重组蛋白的SDS-PAGE结果。
图4示出了人源化CD3抗体与CD3εγ-Fc重组蛋白的结合。
图5示出了人源化CD3抗体与Jurkat细胞的结合。
图6示出了BCMA×CD3κλ双特异抗体与BCMA稳转细胞的结合。
图7示出了BCMA×CD3κλ双特异抗体高亲和力结合BCMA+肿瘤细胞。
图8示出了BCMA×CD3κλ双特异抗体与Jurkat细胞的结合。
图9示出了BCMA×CD3κλ双特异抗体与人外周血T细胞的结合
图10示出了BCMA×CD3κλ双特异抗体对NCI-H929细胞的杀伤和T细胞的活化，其中，图10A显示对NCI-H929细胞的杀伤，图10B显示对T细胞的活化。
图11示出了BCMA×CD3κλ双特异抗体对RPMI-8226细胞的杀伤和T细胞的活化，其中，图11A显示对RPMI-8226细胞的杀伤，图11B显示对T细胞的活化。
图12示出了BCMA×CD3κλ双特异抗体对T细胞信号通路的活化。
图13示出了BCMA×CD3κλ双特异抗体对外周血T细胞的活化。
图14示出了BCMA×CD3κλ双特异抗体与活化型FcγR受体的结合。
图15示出了BCMA×CD3κλ双特异抗体对BCMA与受体APRIL结合的阻断。
图16示出了BCMA×CD3κλ双特异抗体对免疫缺陷型小鼠皮下NCI-H929移植瘤模型的抑制作用。
具体实施方式
I.定义
在本公开中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的蛋白质和核酸化学、分子生物学、细胞和组织培养、微生物学、免疫学相关术语和实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的术语和常规步骤。同时，为了更好地理解本公开，下面提供相关术语的定义和解释。
如本文中使用的，术语“BCMA”可以指共同指代存在于动物中并且优选地存在于人体中的BCMA本身及其任何变体、同种型和旁系同源物的概念。
术语“人BCMA”是指人来源的BCMA，并且可以优选具有但不限于Genbank登录号AB052772.1的氨基酸序列。
术语“抗BCMA抗体”和“结合BCMA的抗体”指能够以足够亲和力结合BCMA，使得该抗体作为诊断剂和/或治疗剂在靶向BCMA中是有用的抗体。在一个实施方案中，抗BCMA抗体对无关非BCMA蛋白的结合程度小于该抗体对BCMA的结合的约10％，如通过例如放射免疫测定法(RIA)测量的。在某些实施方案中，结合BCMA的抗体具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM(例如10-8M或更低，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗BCMA抗体结合在来自不同物种的BCMA间保守的BCMA表位。
“CD3”指来自任何脊椎动物来源，包括哺乳动物，诸如灵长动物(例如人)，非人灵长动物(例如食蟹猴)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)的任何天然CD3，除非另外指明。该术语涵盖“全长”未加工的CD3以及源自细胞中加工的任何形式的CD3。该术语还涵盖CD3的天然发生变体，例如剪接变体或等位变体。在一个实施方案中，CD3是人CD3，特别是人CD3的厄普西隆亚基(CD3ε)。人CD3ε的氨基酸序列显示于UniProt(www.uniprot.org)登录号P07766(版本144)，或NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/)RefSeq NP_000724.1。食蟹猴[Macacafascicularis]CD3ε的氨基酸序列显示于NCBI GenBank no.BAB71849.1。
术语“细胞表面”的使用是根据其在本领域的正常含义，因此包括可通过与蛋白和其它分子结合而接近的细胞外部。
如本文使用的和除非另作说明，术语“约”或“大约”是指在给定值或范围的加或减10％之内。在需要整数的情况下，该术语是指在给定值或范围的加或减10％之内、向上或向下舍入到最接近的整数。
就抗体链多肽序列而言，短语“基本相同”可理解为表现出与参照多肽序列至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性的抗体链。就核酸序列而言，该术语可理解为表现出与参照核酸序列至少大于60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性的核苷酸序列。
序列“相同性”或“同一性”具有本领域公认的含义，并且可以利用公开的技术计算两个核酸或多肽分子或区域之间序列相同性的百分比。可以沿着多核苷酸或多肽的全长或者沿着该分子的区域测量序列相同性(参见，例如：Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.,ed.,Oxford University Pres,New York,1988；Biocomputing:Informaticsand Genome Projects,Smith,D.W.,ed.,Academic Press,New York,1993；ComputerAnalysis of Sequence Data,Part I,Griffin,A.M.,and Griffin,H.G.,eds.,HumanaPress,New Jersey,1994；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987；and Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.and Devereux,J.,eds.,M Stockton Press,New York,1991)。虽然存在许多测量两个多核苷酸或多肽之间的相同性的方法，但是术语“相同性”是技术人员公知的(Carrillo,H.&Lipman,D.,SIAM JApplied Math 48:1073(1988))。
“取代型”变体是天然序列中至少一个氨基酸残基被除去并被不同的氨基酸插入其相同位置的变体。所述取代可为单个的，其中该分子中仅有一个氨基酸被取代；或可为多个的，其中该相同分子有两个或更多的氨基酸被取代。多个取代可位于连续的位点。同样，一个氨基酸可被多个残基取代，其中这样的变体包括取代和插入二者。“插入型”变体是一个或多个氨基酸被插入到紧邻一段天然序列某个特定位置处的氨基酸的变体。紧邻氨基酸意指与该氨基酸的α-羧基或α-氨基官能团连接。“缺失型”变体是天然氨基酸序列中一个或多个氨基酸被除去的变体。通常情况下，缺失型变体在其分子的特定区域内有一个或两个氨基酸被缺失。
就抗体的可变结构域而言，术语“可变”系指抗体之间有广泛序列差异的相关分子的某些部分，且被用于针对其特异靶的特定抗体的特异识别和结合。但是，可变性在抗体的整个可变结构域内不是均匀分布的。可变性集中在被称为互补决定区域(CDRs；即CDR1、CDR2和CDR3)或超变区的三个区段，它们均位于轻链和重链的可变结构域内。可变结构域内保守程度更高的部分被称为构架(FR)区或构架序列。天然重链和轻链的每个可变结构域均包括四个FR区，其主要采用β-折叠构型，它们籍三个CDRs连接起来，CDRs形成环，所述环连接β-折叠结构并在某些情形下形成部分的β-折叠结构。每条链的CDRs通常被FR区在邻近连接起来，并且借助于来自其它链的CDR，有助于抗体靶结合位点(表位或决定簇)的形成(参看Kabat等人Sequences of Proteins of Immunological Interest,NationalInstituteof Health,Bethesda,MD(1987))。正如本文所使用，免疫球蛋白氨基酸残基的编号是依据Kabat等人的免疫球蛋白氨基酸残基编号系统而进行的，除非另有说明。一个CDR可具有特异结合关联表位的能力。
如本文所用，抗体的“抗体片段”或“抗原结合片段”指全长抗体的任何部分，其少于全长，但是至少包含结合抗原的所述抗体的部分可变区(例如一个或多个CDR和/或一个或多个抗体结合位点)，并且因此保留结合特异性以及所述全长抗体的至少部分特异性结合能力。因此，抗原结合片段指包含与衍生抗体片段的抗体结合相同抗原的抗原结合部分的抗体片段。抗体片段包括通过酶促处理全长抗体所产生的抗体衍生物，以及合成产生的衍生物，例如重组产生的衍生物。抗体包括抗体片段。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、单链Fv(scFv)、Fv、dsFv、双抗体、Fd和Fd'片段以及其他片段，包括修饰的片段(参见，例如，Methods in Molecular Biology，Vol 207:Recombinant Antibodies forCancer Therapy Methods and Protocols(2003)；Chapter 1；p 3-25,Kipriyanov)。所述片段可以包括连接在一起的多条链，例如通过二硫键和/或通过肽接头。抗体片段一般包含至少或约50个氨基酸，并且典型至少或约200个氨基酸。抗原结合片段包括任何抗体片段，其在被插入抗体框架(例如通过置换相应区域)时获得免疫特异性地结合(即表现出至少或至少约107-108M-1的Ka)抗原的抗体。“功能片段”或“抗BCMA抗体的类似物”是可防止或实质降低所述受体结合配体或启动信号转导的能力的片段或类似物。正如本文所使用，功能片段一般与“抗体片段″含义相同，且就抗体而论，可指能防止或实质降低所述受体结合配体或启动信号转导的能力的片段，例如Fv、Fab、F(ab')2等等。“Fv”片段由一条重链的可变结构域和一条轻链的可变结构域籍非共价结合方式而形成的二聚体(VH-VL二聚体)组成。在该构型中，每个可变结构域的三个CDRs相互作用，以确定VH-VL二聚体表面上的靶结合位点，与完整抗体的情况一样。所述六个CDRs共同赋予完整抗体的靶结合特异性。但是，即使是单个可变结构域(或仅包括3个靶特异的CDRs的Fv的一半)，仍可具有识别和结合靶的能力。
如本文中所用，术语“双特异性”(Bispecific antibody，BsAb)指抗体和/或抗原结合分子能够特异性结合两种不同的抗原性决定簇，通常，双特异性抗体和/或抗原结合分子包含两种抗原结合位点，其中每种特异于不同的抗原性决定簇。在某些实施方案中，所述双特异性抗体和/或抗原结合分子能够同时结合两种抗原决定簇，特别是在两种不同的细胞上表达的两种抗原性决定簇。
如本文所用，“单克隆抗体”指相同抗体的群体，表示单克隆抗体群体中的每个单独的抗体分子与其他抗体分子相同。这种特性与抗体的多克隆群体的特性相反，所述抗体的多克隆群体包含具有多种不同序列的抗体。单克隆抗体可以通过许多公知的方法来制备(Smith et al.(2004)J.Clin.Pathol.57,912-917；和Nelson et al.,J Clin Pathol(2000),53,111-117)。例如，单克隆抗体可以通过永生化B细胞来制备，例如通过与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤细胞系或者通过用诸如EBV的病毒感染B细胞。重组技术还可以用来在体外通过用携带编码抗体的核苷酸的人工序列的质粒转化宿主细胞来从宿主细胞的克隆群体制备抗体。
如本文中所用，术语“杂交瘤”或“杂交瘤细胞”指由融合产抗体的淋巴细胞和不产抗体的癌细胞而产生的细胞或细胞系(通常为骨髓瘤或淋巴瘤细胞)。如本领域普通技术人员所知的，杂交瘤可增殖并持续供应产生特定单克隆抗体。用于产生杂交瘤的方法为本领域已知的(见例如，Harlow&Lane，1988)。当提及术语“杂交瘤”或“杂交瘤细胞”时，其还包括杂交瘤的亚克隆和后代细胞。
如本文所用，全长抗体是具有两条全长重链(例如VH-CH1-CH2-CH3或VH-CH1-CH2-CH3-CH4)和两条全长轻链(VL-CL)和铰链区的抗体，例如通过抗体分泌B细胞天然产生的抗体以及合成产生的具有相同结构域的抗体。
术语“嵌合抗体”是指这样的抗体，其中可变区序列源自一个物种，恒定区序列源自另一物种，如其中可变区序列源自小鼠抗体及恒定区序列源自人抗体的抗体。
“人源化”抗体是指非人(例如小鼠)抗体形式，其是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白链或者其片段(如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或者抗体的其它抗原结合亚序列)，含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。优选地，人源化抗体是人免疫球蛋白(接受者抗体)，其中接受者抗体的互补决定区(CDR)的残基由来自具有希望的特异性、亲和性和能力的非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠或者兔的CDR残基置换。
此外，在人源化中，还可能对VH和/或VL的CDR1、CDR2和/或CDR3区内的氨基酸残基进行突变，由此改善抗体的一或多种结合特性(例如亲和性)。可进行例如PCR介导的突变引入突变，其对抗体结合或其它功能特性的影响可利用本文所述的体外或体内测试评估。通常，引入保守性突变。此类突变可为氨基酸取代、添加或缺失。另外，CDR内的突变通常不超过一个或两个。因此，本公开所述人源化抗体还涵盖CDR内包含1或2两个氨基酸突变的抗体。
如本文所用，术语“CDR”指互补决定区(complementarity-determining region)，已知抗体分子的每个重链和轻链具有3个CDR。CDR也称作高变区，且存在于抗体的每个重链和轻链的可变区中，在CDR的一级结构中具有非常高的变异性位点。本说明书中，重链的CDR由来自重链的氨基端序列的氨基端的CDR1、CDR2、CDR3表示，轻链的CDR由来自轻链的氨基端序列的氨基端的CDR1、CDR2、CDR3表示。这些位点在三级结构中彼此临近，并决定抗体所结合的抗原的特异性。
如本文所用，术语“表位”指抗体的互补位结合的抗原上的任何抗原决定簇。表位决定簇通常包含分子的化学活性表面分型，例如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。
如本文所用，关于抗体或其抗原结合片段的“特异性结合”或“免疫特异性地结合”在本文中可交换使用，并且指抗体或抗原结合片段通过抗体和抗原的抗体结合位点之间的非共价相互作用与同种抗原形成一个或多个非共价键的能力。所述抗原可以是分离的抗原或存在于肿瘤细胞。通常，免疫特异性地结合(或特异性结合)抗原的抗体是以约或1×107M-1或1×108M-1或更大的亲和常数Ka(或者1×10-7M或1×10-8M或更低的解离常数(Kd))结合所述抗原。亲和常数可以通过抗体反应的标准动力学方法来测定，例如，免疫测定、表面等离子共振(SPR)(Rich and Myszka(2000)Curr.Opin.Biotechnol 11:54；Englebienne(1998)Analyst.123:1599)、等温滴定量热法(ITC)或本领域已知的其他动力学相互作用测定(参见，例如，Paul,ed.,Fundamental Immunology,2nd ed.,Raven Press,New York,pages 332-336(1989)；还参见描述用于计算抗体的结合亲和力的示例性SPR和ITC方法的美国专利第7，229，619号)。用于实时检测和监测结合速率的仪器和方法是已知的，并且可商购(参见，BiaCore 2000,Biacore AB,Upsala,Sweden and GE Healthcare LifeSciences；Malmqvist(2000)Biochem.Soc.Trans.27:335)。
如本文所用，术语“多核苷酸”和“核酸分子”指包含至少两个连接的核苷酸或核苷酸衍生物的寡聚体或聚合物，包括通常通过磷酸二酯键连接在一起的脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。如本文所使用，术语“核酸分子”意欲包括DNA分子及RNA分子。核酸分子可为单链或双链，且可为cDNA。
如本文所用，分离的核酸分子是从存在于核酸分子的天然来源中的其他核酸分子分离的核酸分子。诸如cDNA分子的“分离的”核酸分子可以在通过重组技术制备时基本上不含其他细胞物质或培养基，或者在化学合成时基本上不含化学前体或其他化学成分。本文所提供的示例性分离的核酸分子包括编码所提供的抗体或抗原结合片段的分离的核酸分子。
如本文所用，关于核酸序列、区域、元件或结构域的“可操作地连接”表示核酸区域互相功能相关。例如，启动子可以可操作地连接至编码多肽的核酸，从而所述启动子调控或介导所述核酸的转录。
亦提供本文所述序列表中所述序列的“保守序列修饰”，即不消除由核苷酸序列编码或含有氨基酸序列的抗体与抗原的结合的核苷酸及氨基酸序列修饰。这些保守序列修饰包括保守核苷酸及氨基酸取代以及核苷酸及氨基酸添加及缺失。例如，可通过本领域已知的标准技术(例如定点诱变及PCR介导的诱变)将修饰引入本文所述的序列表中。保守序列修饰包括保守氨基酸取代，其中氨基酸残基被替换为具有类似侧链的氨基酸残基。具有类似侧链的氨基酸残基的家族是本领域中已有定义的。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电极性侧链的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、具有β分枝侧链的氨基酸(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)及具有芳香族侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，抗BCMA抗体中的预测的非必需氨基酸残基优选被来自同一侧链家族的另一氨基酸残基替代。鉴定不消除抗原结合的核苷酸及氨基酸保守取代的方法为本领域所熟知(例如，参见Brummell et al.,Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi et al.,Protein Eng.12(10):879-884(1999)；Burks et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:412-417(1997))。
作为另一选择，在另一实施方案中，可通过例如饱和诱变沿抗BCMA抗体编码序列的全部或一部分随机引入突变，且可针对改良的结合活性筛选所得经修饰抗BCMA抗体。
如本文所用，“表达”指通过多核苷酸的转录和翻译产生多肽的过程。多肽的表达水平可以利用本领域已知的任何方法来评价，包括例如测定从宿主细胞产生的多肽的量的方法。这类方法可以包括但不限于通过ELISA定量细胞裂解物中的多肽，凝胶电泳之后考马斯蓝染色，Lowry蛋白测定以及Bradford蛋白测定。
如本文所用，“宿主细胞”是用于接受、保持、复制和扩增载体的细胞。宿主细胞还可以用来表达载体所编码的多肽。当宿主细胞分裂时，载体中所含的核酸复制，从而扩增核酸。宿主细胞可以是真核细胞或原核细胞。合适的宿主细胞包括但不限于CHO细胞、各种COS细胞、HeLa细胞、HEK细胞例如HEK 293细胞。
如本文所用，“载体”是可复制的核酸，当载体转化入适当的宿主细胞时，可以从该载体表达一种或多种异源蛋白。关于载体包括那些通常通过限制酶切消化和连接可以将编码多肽或其片段的核酸引入其中的载体。关于载体还包括那些包含编码多肽的核酸的载体。载体用来将编码多肽的核酸引入宿主细胞，用于扩增核酸或者用于表达/展示核酸所编码的多肽。载体通常保持游离，但是可以设计为使基因或其部分整合入基因组的染色体。还考虑人工染色体的载体，例如酵母人工载体和哺乳动物人工染色体。这类媒介物的选择和用途是本领域技术人员公知的。
如本文所用，载体还包括“病毒载体”或“病毒的载体”。病毒的载体是工程化的病毒，其可操作地连接至外源基因以将外源基因转移(作为媒介物或穿梭(shuttle))入细胞。
如本文所用，“表达载体”包括能够表达DNA的载体，所述DNA与诸如启动子区的能够影响这类DNA片段表达的调控序列可操作地连接。这类额外的片段可以包括启动子和终止子序列，并且任选地可以包括一个或多个复制起点、一个或多个选择标记、增强子、多腺苷酸化信号等。表达载体一般来源于质粒或病毒DNA，或者可以包含这两者的元件。因此，表达载体指重组DNA或RNA构建体，例如质粒、噬菌体、重组病毒或其他载体，当引入适当的宿主细胞时，导致克隆DNA的表达。适当的表达载体是本领域技术人员公知的，并且包括在真核细胞和/或原核细胞中可复制的表达载体以及保持游离的表达载体或者整合入宿主细胞基因组的表达载体。
如本文所用，“治疗”患有疾病或疾病状况的个体表示所述个体的症状部分或全部缓解，或者在治疗后保持不变。因此，治疗包括预防、治疗和/或治愈。预防指防止潜在疾病和/或防止症状恶化或疾病发展。治疗还包括所提供的任何抗体或其抗原结合片段以及本文所提供的组合物的任何药学用途。
如本文所用，“疗效”表示由个体的治疗所导致的效果，其改变、通常改良或改善疾病或疾病状况的症状，或者治愈疾病或疾病状况。
如本文所用，“治疗有效量”或“治疗有效剂量”指施用于对象之后至少足以产生疗效的物质、化合物、材料或包含化合物的组合物的量。因此，其为防止、治愈、改善、阻滞或部分阻滞疾病或病症的症状所必需的量。
如本文所用，“预防有效量”或“预防有效剂量”指在施用于对象时会具有预期的预防效果的物质、化合物、材料或包含化合物的组合物的量，例如，防止或延迟疾病或症状的发生或复发，减少疾病或症状发生或复发的可能性。完全预防有效剂量不必通过施用一个剂量发生，并且可以仅在施用一系列剂量之后发生。因此，预防有效量可以在一次或多次施用中施用。
如本文中所使用的，术语“患者”是指哺乳动物，例如人。
II.具体实施方案详述
在一方面，本公开提供了一种双特异性抗体或其抗原结合部分，其包含：
(a)结合到靶细胞表面上的BCMA抗原的第一抗原结合部分或其抗原结合片段，所述第一抗原结合部分包含第一重链和第一轻链，所述第一抗原结合部分包含与第一抗原结合的第一结合结构域，其中，所述第一结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14、26、27、28、36、37、43、44、50、55、56、57、65、66、71、72、73、147或其任何变体的重链CDR，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO:17、18、19、22、23、31、32、33、40、47、60、61、62、76、77、78、83、84、87、88、89、92、144或任何变体的轻链CDR；和
(b)结合到T细胞表面上的CD3抗原的第二抗原结合部分或其抗原结合片段，所述第二抗原结合部分包含第二重链和第二轻链，所述第二抗原结合部分包含与第二抗原结合的第二结合结构域。
根据前一方面的抗体或其抗原结合部分，所述第一结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:12、26、55、65、71或其任何变体的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:13、27、36、43、50、56、66、72、147或其任何变体的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO:14、28、37、44、57、73或其任何变体的重链CDR3；和/或所述第一结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:17、22、31、47、60、76、83、87、92、144或其任何变体的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:18、23、32、40、61、77、84、88或其任何变体的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO:19、33、62、78、89或其任何变体的轻链CDR3。
根据前述任一方面的抗体或其抗原结合部分，所述第一结合结构域的重链CDR1、CDR2及CDR3序列选自：氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:26、27、28的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ IDNO:12、36、37的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:12、43、44的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:12、50、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:55、56、57的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ IDNO:65、66、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:71、72、73的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列；氨基酸序列SEQ ID NO:71、147、73的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列；和所述第一结合结构域的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列选自：氨基酸序列SEQ ID NO:17、18、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:22、23、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:31、32、33的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:17、40、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ IDNO:47、18、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:60、61、62的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:76、77、78的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:83、84、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ IDNO:87、88、89的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:92、23、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:144、77、78的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:17、18、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:22、23、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:26、27、28的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:31、32、33的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、36、37的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:17、40、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、43、44的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:47、18、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、50、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:17、40、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:55、56、57的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:60、61、62的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:17、40、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:65、66、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:17、40、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:71、72、73的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:76、77、78的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:83、84、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:87、88、89的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:92、23、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:71、147、73的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:144、77、78的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
根据前述任一方面的抗体或其抗原结合部分，所述第一结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:10、24、34、41、48、53、63、69、79、145、150、154、158、162、166、170或其任何变体的第一重链可变区，和/或包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:15、20、29、38、45、51、58、67、74、81、85、90、142、148、152、156、160、164、168或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:10或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:15或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:10或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:20或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:24或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:29或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:34或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:38或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:41或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:45或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:48或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:51或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:53或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:58或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:10或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:38或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:63或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:67或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:69或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:74或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:79或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:81或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:10或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:85或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:10或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:90或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:145或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:142或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:150或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:148或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:154或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:152或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:158或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:156或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:162或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:160或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:166或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:164或其任何变体的第一轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:170或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:168或其任何变体的第一轻链可变区。
根据前述任一方面的抗体或其抗原结合部分，所述第二结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:114、115、116、119、122、125、128、131、134、135或其任何变体的重链CDR；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO:95、96、97、102、103、108、111或其任何变体的轻链CDR。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:114、119、134或其任何变体的第二重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:115、135或其任何变体的第二重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO:116、122、125、128、131或其任何变体的第二重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO:95、102或其任何变体的第二轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:96、103、111或其任何变体的第二轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO:91、108或其任何变体的第二轻链CDR3。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域的重链CDR1、CDR2及CDR3序列选自：氨基酸序列SEQ ID NO:114、115、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:119、115、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:119、115、122的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:119、115、125的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:119、115、128的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:119、115、131的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:134、135、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列；和所述第二结合结构域的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列选自：氨基酸序列SEQ ID NO:95、96、97的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:102、103、97的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:95、96、108的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:95、111、108的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:114、115、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:95、96、97的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:114、115、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:102、103、97的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:114、115、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:95、96、108的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:114、115、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:95、111、108的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:112、117、120、123、126、129、132、136、138、140或其任何变体的第二重链可变区，和/或包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:93、98、100、104、106、109或其任何变体的第二轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:136或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:93或其任何变体的第二轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:93或其任何变体的第二轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:98或其任何变体的第二轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:100或其任何变体的第二轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:112或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:136或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区。
在一些实施方案中，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区。
根据前述任一方面的抗体或其抗原结合部分，所述第一抗原结合部分的所述第一轻链为κ型轻链，所述第二抗原结合部分的所述第二轻链为λ型轻链，
在一些实施方案中，所述第二抗原结合部分的第二轻链可变区具有Gln40Glu突变(VλCD3:Gln40Glu)；所述第二抗原结合部分的第二重链可变区具有Gln39Lys突变(VHCD3:Gln39Lys)。
在一些实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一轻链可变区具有Gln42Lys突变(VκBCMA:Gln42Lys)在一些实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区具有Gln39Glu突变(VHBCMA:Gln39Glu)。
在一些实施方案中，所述双特异抗体的第一抗原结合部分和第二抗原结合部分的Fc部分采用knob-into-hole结构。在一些优选的实施方案中，Fc部分采用人IgG4 knob-into-hole结构。
在一些实施方案中，所述第一重链包含选自SEQ ID NO:174、178或其任何变体的重链，所述第一轻链包含选自SEQ ID NO:172、176或其任何变体的轻链。
在一些优选的实施方案中，所述第一重链包含选自SEQ ID NO:174或其任何变体的重链，所述第一轻链包含选自SEQ ID NO:172或其任何变体的轻链。
在一些优选的实施方案中，所述第一重链包含选自SEQ ID NO:174或其任何变体的重链，所述第一轻链包含选自SEQ ID NO:176或其任何变体的轻链。
在一些优选的实施方案中，所述第一重链包含选自SEQ ID NO:178或其任何变体的重链，所述第一轻链包含选自SEQ ID NO:172或其任何变体的轻链。
在一些优选的实施方案中，所述第一重链包含选自SEQ ID NO:178或其任何变体的重链，所述第一轻链包含选自SEQ ID NO:176或其任何变体的轻链。
在一些实施方案中，所述第二重链包含SEQ ID NO:182或其任何变体的重链，所述第二轻链包含SEQ ID NO:180或其任何变体的轻链。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:145或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:142或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:150或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:148或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:154或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:152或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:158或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:156或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:162或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:160或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:166或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:164或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:170或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:168或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区；
在一个具体实施方案中，所述第一重链包含SEQ ID NO:174，所述双特异性抗体的第一轻链包含SEQ ID NO:172；所述第二重链包含SEQ ID NO:182，所述第二轻链包含SEQID NO:180。
在一个具体实施方案中，所述第一重链包含SEQ ID NO:174，所述双特异性抗体的第一轻链包含SEQ ID NO:176；所述第二重链包含SEQ ID NO:182，所述第二轻链包含SEQID NO:180。
在一个具体实施方案中，所述第一重链包含SEQ ID NO:178，所述双特异性抗体的第一轻链包含SEQ ID NO:172；所述第二重链包含SEQ ID NO:182，所述第二轻链包含SEQID NO:180。
在一个具体实施方案中，所述第一重链包含SEQ ID NO:178，所述双特异性抗体的第一轻链包含SEQ ID NO:176；所述第二重链包含SEQ ID NO:182，所述第二轻链包含SEQID NO:180。
在一方面，本公开提供了一种结合BCMA的抗体或其抗原结合部分，所述抗体包含前述第一抗原结合部分。
在一些实施方案中，结合BCMA的抗体或其抗原结合部分与前述任一方面的抗体或其抗原结合部分具有至少大于60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。
在一方面，本公开提供了编码如前述任一方面的抗体或其抗原结合部分的核酸，或与其具有至少大于60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性的核酸分子。
在一些实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸选自核苷酸序列SEQ ID NO:11、25、35、42、49、54、64、70、80、146、151、155、159、163、167、171或其任何变体；和/或所述第一抗原结合部分的第一轻链可变区的编码核酸选自核苷酸序列SEQID NO:16、21、30、39、46、52、59、68、75、82、86、91、143、149、153、157161、165、169或其任何变体。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:11；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:16。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:11；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:21。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:25；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:30。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:35；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:39。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:42；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:46。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:49；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:52。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:54；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:59。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:11；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:39。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:64；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:68。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:70；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:75。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:80；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:82。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:11；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:86。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:11；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:91。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:146；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:143。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:151；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:149。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:155；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:153。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:159；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:157。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:163；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:161。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:167；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:165。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:171；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:169。
在一些实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链的编码核酸选自核苷酸序列SEQ ID NO:175、179或其任何变体；和/或所述第一抗原结合部分的第一轻链的编码核酸选自核苷酸序列SEQ ID NO:173、177或其任何变体。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:175，和所述第一抗原结合部分的第一轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQID NO:173。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:175，和所述第一抗原结合部分的第一轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQID NO:177。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:179，和所述第一抗原结合部分的第一轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQID NO:173。
在一些优选的实施方案中，所述第一抗原结合部分的第一重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:179，和所述第一抗原结合部分的第一轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQID NO:177。
在一些实施方案中，所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸选自核苷酸序列SEQ ID NO:113、118、121、124、127、130、133、137、139、141或其任何变体；和/或所述第二抗原结合部分的第二轻链可变区的编码核酸选自核苷酸序列SEQ ID NO:94、99、101、105、107、110或其任何变体。
在一些优选的实施方案中，所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:137；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:94。
在一些优选的实施方案中，所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:139；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:94。
在一些优选的实施方案中，所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:139；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:99。
在一些优选的实施方案中，所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:139；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:101。
在一些优选的实施方案中，所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:113；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:107。
在一些优选的实施方案中，所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:137；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:107。
在一些优选的实施方案中，所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:139；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:107。
在一些实施方案中，所述第二抗原结合部分的第二重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:183或其任何变体；和/或所述第二抗原结合部分的第二轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:181或其任何变体。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:146；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:143；所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:139；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:107。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:151；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:149；所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:139；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:107。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:155；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:153；所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:139；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:107。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:159；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:157；所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:139；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:107。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:163；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:161；所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:139；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:107。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:167；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:165；所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:139；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:107。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:171；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:169；所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:139；和所述第二轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:107。
在一些优选的实施方案中，所述第二抗原结合部分的第二重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:183，和所述第二抗原结合部分的第二轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQID NO:181。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一抗原结合部分的第一重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:175，和所述第一抗原结合部分的第一轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:173，所述第二抗原结合部分的第二重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:183，和所述第二抗原结合部分的第二轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQID NO:181。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一抗原结合部分的第一重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:175，和所述第一抗原结合部分的第一轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:177，所述第二抗原结合部分的第二重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:183，和所述第二抗原结合部分的第二轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQID NO:181。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一抗原结合部分的第一重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:179，和所述第一抗原结合部分的第一轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:173，所述第二抗原结合部分的第二重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:183，和所述第二抗原结合部分的第二轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQID NO:181。
在一些优选的实施方案中，所述双特异性抗体的所述第一抗原结合部分的第一重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:179，和所述第一抗原结合部分的第一轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:177，所述第二抗原结合部分的第二重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:183，和所述第二抗原结合部分的第二轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQID NO:181。
在一方面，本公开提供了一种结合BCMA的抗体或其抗原结合部分，所述抗体包含前述第一抗原结合部分。
在一方面，本公开提供了包含前述核酸的载体。
在一方面，本公开提供了包含前述核酸或载体的细胞。
在一方面，本公开提供了包含前述双特异性抗体或其抗原结合部分、核酸、载体和/或细胞的组合物。
在一方面，本公开提供了包含共价附着至治疗部分的前述双特异性抗体或其抗原结合部分的抗体-药物偶联物。
优选地，所述治疗部分选自细胞毒性部分、化疗剂、细胞因子、免疫抑制剂、免疫刺激剂、裂解肽或放射性同位素。
本公开的抗体在各种BCMA被不利地表达或发现的疾病中可用作治疗或诊断工具。
在一个与BCMA相关的疾病实施方案中，BCMA在患病组织或器官的细胞中的表达与在健康组织或器官中的状态相比有所增加。增加是指增加至少10％、特别是至少20％、至少50％、至少100％、至少200％、至少500％、至少1000％、至少10000％或甚至更多。在一个实施方案中，表达仅在患病组织中发现，而在相应健康组织中的表达受阻抑。根据本公开，与BCMA相关的疾病包括B细胞疾病，例如B细胞障碍，如浆细胞障碍和/或自体免疫疾病。
在一些实施方案中，所述疾病状况是癌症。在一些实施方案中，所述癌症是B-细胞相关癌症，其选自多发性骨髓瘤、恶性浆细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、结节性淋巴细胞为主的霍奇金淋巴瘤、Kahler’s病和骨髓性白血病、浆细胞白血病、浆细胞瘤、B-细胞幼淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、B-细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性髓性白血病(CML)、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、前体B-淋巴细胞淋巴瘤、髓性白血病、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤、小细胞淋巴细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、血管内大B-细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、富含T细胞/组织细胞的大B-细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性皮肤弥漫性大B-细胞淋巴瘤(腿型)、老年人EBV阳性弥漫性大B-细胞淋巴瘤、炎症相关的弥漫性大B-细胞淋巴瘤、血管内大B-细胞淋巴瘤、ALK阳性大B-细胞淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、HHV8相关的多中心Castleman病中产生的大B-细胞淋巴瘤、未分类的具有弥漫性大B-细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤中间特征的B-细胞淋巴瘤、未分类的具有弥漫性大B-细胞淋巴瘤和经典霍奇金淋巴瘤中间特征的B-细胞淋巴瘤以及其他B-细胞相关淋巴瘤。
在浆细胞障碍中，一个浆细胞克隆不受控制地繁殖。结果，该克隆产生大量称为M-蛋白的单一(单克隆)抗体。在一些情况下，例如患有单克隆丙种球蛋白病，产生的抗体是不完整的，其仅由轻链或重链组成。这些异常浆细胞及其产生的抗体通常限于一种类型。优选地，浆细胞障碍选自：多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、浆细胞白血病、巨球蛋白血症、淀粉样变性、华氏巨球蛋白血症、孤立性骨浆细胞瘤、髓外浆细胞瘤、骨硬化性骨髓瘤、重链病、意义不明确的单克隆丙种球蛋白病以及郁积型多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，所述疾病状况是自身免疫性病症，如系统性红斑性狼疮或类风湿性关节炎。
在一些实施方案中，该治疗剂包含特异性结合活化性T细胞抗原的抗体。
在一个实施方案中，该治疗剂包含特异性结合CD3，特别是CD3ε的抗体。
用本公开的双特异性抗体治疗的疾病和症状方法包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的前述任一方面的抗体或其抗原结合片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物。
在一些实施方案中，本公开提供治疗或预防癌症疾病的方法，其包括向患者施用能够结合BCMA的抗体，其中施用所述抗体以提供至少40μg/ml的血清水平。在不同实施方案中，施用所述抗体以提供至少50μg/ml、至少150μg/ml、至少300μg/ml、至少400μg/ml或至少500μg/ml的血清水平。在不同实施方案中，施用所述抗体以提供不超过800μg/ml、700μg/ml、600μg/ml、550μg/ml或500μg/ml的血清水平。在一个实施方案中，所提供的血清水平为40μg/ml至700μg/ml，优选为40μg/ml至600μg/ml，优选为50μg/ml至500μg/ml，如150μg/ml至500μg/ml或者300μg/ml至500μg/ml。如本说明书中使用的术语“血清水平”，其意指所讨论的物质在血清中的浓度。在一个实施方案中，提供所述血清水平至少7天或至少14天。在一个实施方案中，所述方法包括施用至少300mg/m2的抗体剂量，如至少600mg/m2，且优选至多1500mg/m2，至多1200mg/m2或至多1000mg/m2。
在一些实施方案中，本公开提供治疗或预防癌症疾病的方法，其包括向患者施用能够结合BCMA的抗体，其中以至少300mg/m2，如至少600mg/m2，且优选至多1500mg/m2，至多1200mg/m2或至多1000mg/m2的剂量施用所述抗体。
在一些实施方案中，本公开提供治疗或预防癌症疾病的方法，其包括向患者施用能够结合BCMA的抗体，其中所述患者的至少50％，优选为60％、70％、80％或90％的癌细胞为BCMA阳性和/或所述患者的至少40％，优选为50％或60％的癌细胞为BCMA的表面表达阳性。在该方面，本公开还提供治疗或预防癌症疾病的方法，所述方法包括：a.鉴定显示至少50％，优选为60％、70％、80％或90％的BCMA阳性癌细胞和/或至少40％，优选为50％或60％的癌细胞的患者，所述癌细胞为BCMA的表面表达阳性；以及b.向所述患者施用能够结合BCMA的抗体。在一个实施方案中，所述患者的至少95％或至少98％的癌细胞为BCMA阳性的。在一个实施方案中，所述患者的至少70％、至少80％或至少90％的癌细胞为BCMA的表面表达阳性。
在本文所述的任何方面的方法的一个实施方案中，癌症疾病的治疗结果是实现病情稳定。在一个实施方案中，病情稳定实现至少2个月、至少3个月或至少6个月。
在一些实施方案中，本公开提供实现癌症患者的病情稳定的方法，其包括向所述患者施用能够结合BCMA的抗体。在一个实施方案中，病情稳定实现至少2个月、至少3个月或至少6个月。
在本文所述的任何方面的方法的一个实施方案中，以单剂量或多剂量施用抗体。
在一些实施方案中，本公开提供治疗或预防癌症疾病的方法，其包括向患者施用能够结合BCMA的抗体，其中以多剂量施用所述抗体。
如果根据本公开以多次剂量施用所述抗体，则优选以至少3次剂量、至少4次剂量、至少5次剂量、至少6次剂量、至少7次剂量、至少8次剂量、至少9次剂量或至少10次剂量且优选至多30次剂量、25次剂量、20次剂量、15次剂量或10次剂量施用所述抗体。优选以至少7天、至少10天、至少14天或至少20天的时间间隔施用所述抗体的剂量。优选以7至30天、10至20天且优选为约14天的时间间隔施用所述抗体的剂量。
在一个实施方案中，施用所述抗体以便提供至少40μg/ml的血清水平。在不同实施方案中，施用所述抗体以便提供至少50μg/ml、至少150μg/ml、至少300μg/ml、至少400μg/ml或至少500μg/ml的血清水平。在不同实施方案中，施用所述抗体以便提供不超过800μg/ml、700μg/ml、600μg/ml、550μg/ml或500μg/ml的血清水平。在一个实施方案中，所提供的血清水平为40μg/ml至700μg/ml，优选为40μg/ml至600μg/ml，优选为50μg/ml至500μg/ml，如150μg/ml至500μg/ml或300μg/ml至500μg/ml。在一个实施方案中，提供所述血清水平至少7天或至少14天。在一个实施方案中，所述方法包括施用至少300mg/m2，如至少600mg/m2且优选至多1500mg/m2、至多1200mg/m2或至多1000mg/m2的抗体的剂量。
前述任一方面的抗体或其抗原结合片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物在制备用于治疗哺乳动物中BCMA相关病症的药物中的用途。
根据前述任一方面，任选地，所述抗体偶联其他药物，例如带标记或具有细胞毒性的缀合物。
在一方面，本公开还包括试剂盒，例如所述试剂盒包括本公开的抗体、其片段、同源物、其衍生物等，例如带标记或具有细胞毒性的缀合物，以及抗体使用说明书、杀死特定类型细胞的缀合物等等。该说明书可包括在体外、体内或离体使用抗体、缀合物等的指导。抗体可以是液体形式或固体，通常是冻干的。该试剂盒可包含其它适宜的试剂，如缓冲液、重构溶液以及为了预定用途的其它必要成分。考虑了以预定量包装好的试剂组合与用于其用途的说明书，所述用途例如用于治疗用途或用于进行诊断测定。当抗体是带标记的时，例如用酶标记的，那么该试剂盒可包括底物和酶所需的辅因子(例如提供可检测生色团或荧光团的底物前体)。此外，其它添加剂，如稳定剂、缓冲液(例如封闭缓冲液或裂解缓冲液)等也可包括在内。多种试剂的相对量可以改变而提供试剂溶液的浓缩物，这就提供了用户灵活性、节省空间、节省试剂等。这些试剂也可以干粉形式提供，通常是冻干形式，包括赋形剂，它在溶解时可提供具有适当浓度的试剂溶液。
前述任一方面的抗体或其功能片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物或试剂盒在制备用于抑制BCMA结合的试剂中的用途。
此外，本公开的抗体还可用于免疫测定、纯化方法以及其它用到免疫球蛋白或其片段的方法。此类用途在本领域为人所熟知。
相应地，本公开还提供包含本公开的抗BCMA的抗体或其片段的组合物，所述抗体方便地和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂组合，这是本领域的常规做法。
本公开所使用的术语“药物组合物”系指多种制备物的制剂。含有治疗有效量的多价抗体的制剂为无菌液体溶液、液体悬浮剂或冻干形式，任选地包含稳定剂或赋形剂。
本公开的抗体可以作为单独施用的组合物使用，或可与其它活性剂联合使用。
在一些实施方案中，本公开的人源化抗体与治疗部分(即药物)偶联。治疗部分可以是例如细胞毒素、化疗剂、细胞因子、免疫抑制剂、免疫刺激剂、裂解肽或放射性同位素。此类偶联物在本文中称为“抗体-药物偶联物”或“ADC”。
在一些实施方案中，抗体与细胞毒性部分偶联。细胞毒性部分可以例如选自以下：紫杉醇；细胞松弛素B；短杆菌肽D；溴化乙锭；吐根碱；丝裂霉素；依托泊苷；替尼泊苷；长春新碱；长春碱；秋水仙碱；多柔比星；柔红霉素；二羟基蒽二酮；微管蛋白抑制剂如美登素或其类似物或衍生物；抗有丝分裂剂如单甲基奥瑞他汀E或F或其类似物或衍生物；海兔毒素10或15或其类似物；伊立替康或其类似物；米托蒽醌；光辉霉素；放线菌素D；1-脱氢睾酮；糖皮质激素；普鲁卡因；丁卡因；利多卡因；普萘洛尔；嘌呤霉素；卡奇霉素或其类似物或衍生物；抗代谢药，如甲氨喋呤、6巯基嘌呤、6硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、氟达拉滨、5氟尿嘧啶、癸二嗪、羟基脲、天冬酰胺酶、吉西他滨或克拉屈滨；烷化剂，如二氯甲基二乙胺、硫代嘌呤、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)、洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、达卡巴嗪(DTIC)、丙卡巴嗪、丝裂霉素C；铂类衍生物，如顺铂或卡铂；多卡霉素A、多卡霉素SA、雷切霉素(CC-1065)或其类似物或衍生物；抗生素，如放线菌素、博来霉素、柔红霉素、多柔比星、伊达比星、光霉素、丝裂霉素、米托蒽醌、普力霉素、安定霉素(AMC)；吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮杂卓(PDB)；白喉毒素及相关分子如白喉A链及其活性片段和杂合分子、蓖麻毒素如蓖麻毒素A或去糖基化蓖麻毒素A链毒素、霍乱毒素、志贺样毒素如SLT I、SLT II、SLT IIV、LT毒素、C3毒素、志贺毒素、百日咳毒素、破伤风毒素、大豆Bowman-Birk蛋白酶抑制剂、假单胞菌外毒素、阿罗林、皂草素、蒴莲根毒素、胶凝蛋白、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-sarcin、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白如PAPI、PAPII和PAP-S、苦瓜(momordica charantia)抑制剂、泻果素、巴豆毒素、肥阜草(sapaonaria officinalis)抑制剂、白树毒素、丝裂霉素、局限曲菌素、酚霉素和依诺霉素毒素；核糖核酸酶(RNase)；DNase I、葡萄球菌内毒素A；商陆抗病毒蛋白；白喉毒素和假单胞菌内毒素。
在一些实施方案中，抗体与奥瑞他汀或其肽类似物、衍生物或前药偶联。已经表明，奥瑞他汀干扰微管动力学、GTP水解以及核和细胞分裂并具有抗癌和抗真菌活性。例如，奥瑞他汀E可以与对乙酰基苯甲酸或苯甲酰基戊酸反应，分别产生AEB和AEVB。其他典型的奥瑞他汀衍生物包括AFP、MMAF(单甲基奥瑞他汀F)和MMAE(单甲基奥瑞他汀E)。合适的奥瑞他汀和奥瑞他汀的类似物、衍生物和前药，以及用于将奥瑞他汀与Ab偶联的合适接头描述于例如美国专利号5,635,483、5,780,588和6,214,345以及国际专利申请公开WO02088172、WO2004010957、WO2005081711、WO2005084390、WO2006132670、WO03026577、WO200700860、WO207011968和WO205082023。
在一些实施方案中，抗体与吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮杂卓(PDB)或其肽类似物、衍生物或前药偶联。合适的PDB以及PDB衍生物和相关技术描述于例如Hartley J.A.等,Cancer Res 2010；70(17):6849-6858；Antonow D.等,Cancer J 2008；14(3):154-169；Howard P.W.等,Bioorg Med Chem Lett 2009；19:6463-6466和Sagnou等,Bioorg MedChemLett2000；10(18):2083-2086。
在一些实施方案中，抗体与选自以下的细胞毒性部分偶联：蒽环类抗生素、美登素、卡奇霉素、多卡霉素、雷切霉素(CC-1065)、海兔毒素10、海兔毒素15、伊立替康、单甲基奥瑞他汀E、单甲基奥瑞他汀F、PDB，或它们任何的类似物、衍生物或前药。
在一些实施方案中，抗体与蒽环类抗生素或其类似物、衍生物或前药偶联。在一些实施方案中，抗体与美登素或其类似物、衍生物或前药偶联。在一些实施方案中，抗体与卡奇霉素或其类似物、衍生物或前药偶联。在一些实施方案中，抗体与多卡霉素或其类似物、衍生物或前药偶联。在一些实施方案中，抗体与雷切霉素(CC-1065)或其类似物、衍生物或前药偶联。在一些实施方案中，抗体与海兔霉素10或其类似物、衍生物或前药偶联。在一些实施方案中，抗体与海兔霉素15或其类似物、衍生物或前药偶联。在一些实施方案中，抗体与单甲基奥瑞他汀E或其类似物、衍生物或前药偶联。在一些实施方案中，抗体与单甲基奥瑞他汀F或其类似物、衍生物或前药偶联。在一些实施方案中，抗体与吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮杂卓或其类似物、衍生物或前药偶联。在一些实施方案中，抗体与伊立替康或其类似物、衍生物或前药偶联。
在一些实施方案中，抗体与细胞因子(例如IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-23、IL-24、IL-27、IL-28a、IL-28b、IL-29、KGF、IFNa、IFN3、IFNy、GM-CSF、CD40L、Flt3配体、干细胞因子、安西司亭和TNFa)偶联。
在一些实施方案中，抗体与放射性同位素或含放射性同位素的螯合物偶联。例如，抗体可以与允许抗体与放射性同位素络合的螯合剂接头(例如DOTA、DTPA或噻西坦)偶联。抗体还可以或可选地包含一个或多个放射性标记的氨基酸或其他放射性标记的分子或与之偶联。放射性同位素的非限制性实例包括3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、125I、131I、186Re、213Bi、225Ac和227Th。为了治疗目的，可以使用发射β或α颗粒辐射的放射性同位素，例如131I、90Y、211At、212Bi、67Cu、186Re、188Re和212Pb。
将分子与抗体偶联的技术是本领域熟知的。通常，核酸分子分别通过N-羟基琥珀酰亚胺酯或马来酰亚胺官能团与抗体上的赖氨酸或半胱氨酸共价连接。据报道，使用工程化半胱氨酸或整合非天然氨基酸的偶联方法可改进偶联物的同质性。特别地，本领域技术人员还可以预期用含酰基供体谷氨酰胺的标签(例如含有Gin肽的标签或Q-标签)或通过多肽工程(例如通过多肽上的氨基酸缺失、插入、取代或突变)产生反应性的内源性谷氨酰胺工程化的含Fc多肽。然后，转谷氨酰胺酶可与胺供体剂(例如，包含或连接于反应性胺的小分子)共价交联，以形成稳定且均质的工程化含Fc多肽偶联物群，其中胺供体剂通过含酰基供体谷氨酰胺标签或可接近/暴露/反应性的内源性谷氨酰胺位点特异性地与含Fc多肽偶联(WO2012059882)。
应当理解，根据所述实施方案的治疗剂将与合适的药学上可接受的载体、赋形剂、以及其它被掺入制剂中以提供改善的转移、递送、耐受性等的试剂一同施用。大量适当的制剂可见于所有药物化学工作者已知的药典中：Remington's Pharmaceutical Sciences(第15版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.(1975))，特别是其中Blaug、Seymour的第87章。这些制剂包括例如粉末、糊剂、膏剂、凝胶剂、蜡、油、脂质、含脂质(阳离子或阴离子)载体(例如LipofectinTM)、DNA缀合物、无水吸浆、水包油和油包水乳液、乳液聚乙二醇(各种分子量的聚乙二醇)、半固态凝胶以及含有聚乙二醇的半固态混合物。任何前述混合物均可适用于根据本公开的治疗或疗法，条件是制剂中的活性成分不被制剂灭活并且制剂在生理学上是相容的并耐受给药途径。
在一个实施方案中，可将所述抗体用作治疗剂。此类试剂将通常用于治疗、缓解和/或预防受试者的与异常BCMA表达、活性和/或信号传导相关的疾病或病理。可使用标准方法通过鉴定受试者，例如患有(或处于风险或发展)与异常BCMA表达、活性和/或信号传导相关的疾病或障碍，例如BCMA相关病症的人患者来实施治疗方案。将抗体制剂，优选对其靶抗原有高特异性和高亲和性的抗体制剂施用给受试者并且将通常因其与靶标结合而产生效应。施用的抗体可消除或抑制或妨碍靶标(例如BCMA)的表达、活性和/或信号传导功能。施用的抗体可消除或抑制或妨碍靶标(例如BCMA)与其所天然结合的内源性的配体结合。例如，抗体与靶标结合并调节、阻断、抑制、减少、拮抗、中和/或以其它方式妨碍BCMA表达、活性和/或信号传导。在一些实施方案中，为治疗与异常BCMA表达相关的疾病或障碍，可将具有重链和轻链CDR的抗体施用给受试者。
在另一个实施方案中，针对BCMA的抗体可用于本领域中已知的与BCMA定位和/或定量相关的方法(例如，用于测定适当生理样品中的BCMA和/或BCMA的水平，用于诊断方法，用于蛋白成像等等)。在一个给定实施方案中，对BCMA或其衍生物、片段、类似物或同系物具有特异性的、包含源于抗体的抗原结合结构域的抗体，被用作药物学活性化合物(下文称为“治疗剂”)。
在另一个实施方案中，可通过标准技术例如免疫亲和、色谱或免疫沉淀，使用对BCMA具有特异性的抗体来分离BCMA多肽。针对BCMA蛋白质的抗体(或其片段)可用于检测生物样品中的蛋白质。在一些实施方案中，在生物样品中可检测BCMA作为临床测试过程的一部分，例如，用于确定给定治疗方案的功效。将抗体偶联(即物理连接)到可检测物质可有利于检测。可检测物质的示例包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料、生物发光材料和放射性材料。合适的酶的示例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基复合物的示例包括链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素；合适的荧光材料的示例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪氨荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的一个示例包括鲁米诺；生物发光材料的示例包括荧光素酶、荧光素和水母蛋白，并且合适放射性材料的示例包括125I、131I、35S或3H。
在另一个实施方案中，根据本公开的抗体可用作检测样品中BCMA或其蛋白质片段存在的试剂。在一些实施方案中，抗体包含可检测标记。抗体为多克隆抗体，或更优选单克隆抗体。使用完整的抗体或其片段(例如Fab、scFv或F(ab')2)。关于抗体的术语“标记”旨在包括通过将可检测物质偶联(即物理连接)到该抗体来直接标记该抗体，以及通过与直接标记的另一种试剂反应来间接标记该抗体。间接标记的示例包括使用荧光标记的第二抗体检测第一抗体，以及用生物素进行末端标记抗体，以便能够用荧光标记的链霉亲和素进行检测。术语“生物样品”旨在包括从受试者分离的组织、细胞和生物学流体，以及受试者体内存在的组织、细胞和流体。因此，使用的术语“生物样品”包括血液和血液中的级分或组分，包括血清、血浆、或淋巴液。换言之，所述实施方案的检测方法可用于在体外及体内检测生物样品中的分析物mRNA、蛋白质或基因组DNA。例如，分析物mRNA体外检测技术包括Norhtern杂交和原位杂交。分析物蛋白质体外检测技术包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、Western印迹、免疫沉淀、以及免疫荧光。分析物基因组DNA体外检测技术包括Southern杂交。用于进行免疫测定的过程描述于例如“ELISA:Theory and Practice:Methods in MolecularBiology”，第42卷，J.R.Crowther(编辑)Human Press，Totowa，N.J.，1995；“Immunoassay”，E.Diamandis和T.Christopoulus，Academic Press，Inc.，San Diego，Calif.，1996；以及“Practice and Theory of Enzyme Immunoassays”，P.Tijssen，Elsevier SciencePublishers，Amsterdam，1985。此外，分析物蛋白质的体内检测技术包括向受试者体内导入标记的抗分析物蛋白抗体。例如，可以用放射性标记标记抗体，然后可以通过标准成像技术检测受试者体内该放射性标记物的存在和位置。
可将本文所述抗体和其衍生物、片段、类似物和同系物掺入适于施用的药物组合物中。制备此类组合物所涉及的原理和考虑事项以及选择组分的指南在本领域中是熟知的，例如参见Remington's Pharmaceutical Sciences:The Science And Practice OfPharmacy第19版(Alfonso R.Gennaro等人编辑)Mack Pub.Co.，Easton，Pa.:1995；DrugAbsorption Enhancement:Concepts，Possibilities，Limitations，And Trends，HarwoodAcademic Publishers，Langhorne，Pa.，1994；以及Peptide And Protein Drug Delivery(Advances In Parenteral Sciences，第4卷)，1991，M.Dekker，New York。
此类组合物通常包含抗体和药学上可接受的载体。当使用抗体片段时，与靶蛋白结合结构域特异性结合的最小抑制片段可为优选的。例如，基于抗体的可变区序列，可以设计保留结合靶蛋白质序列能力的肽分子。此类肽可化学合成和/或通过重组DNA技术产生(参见例如Marasco等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90:7889-7893(1993))。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”旨在包括与药物给药相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延缓剂等。合适的药学上可接受的载体描述于最新版的Remington's Pharmaceutical Sciences中，这是本领域的标准参考书目，其以引用方式并入本文。此类载体或稀释剂的优选示例包括但不限于水、盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和5％的人血清白蛋白。也可以使用脂质体和非水性载体，例如固定化油。将此类介质和试剂用于药物活性物质是本领域熟知的。除去任何常规的介质或试剂与抗体不相容之外，设想其在组合物中的用途。
将所述实施方案的药物组合物配制成与其预期施用途径相容。给药途径的示例包括肠胃外，例如静脉内、皮内、皮下、经口(例如吸入)、经皮(即局部的)、经粘膜和直肠给药。用于肠胃外、皮内或皮下施用的溶液或悬浮液可包括以下组分：注射用无菌稀释剂例如水、盐溶液、固定油、聚乙二醇类、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗细菌剂，例如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐、以及调节渗透压的试剂，例如氯化钠或右旋糖。pH可用酸或碱进行调节，例如盐酸或氢氧化钠。可将肠胃外制剂包装在安瓿、一次性注射器或玻璃或塑料制多剂量小瓶内。
适于注射用途的药物组合物包括无菌水性溶液(在此是水溶性的)或分散体以及用于即时制备无菌注射液或分散体的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的药学上可接受的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，组合物必须是无菌的并且应当为流动性达到易于注射的程度。其在制造和储存条件下必须是稳定的并且必须能防止微生物例如细菌和真菌的污染作用。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)的溶剂或分散介质，及其适宜的混合物。例如通过利用涂层例如卵磷脂，在分散体情况下维持所需颗粒尺寸，以及利用表面活性剂，可以保持适宜的流动性。对微生物作用的防止可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等来实现。在许多情况下，将优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(诸如甘露糖醇、山梨醇)、氯化钠。注射用组合物的延长吸收可通过在所述组合物中包含延缓吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来达到。
根据需要，可以通过将抗体以所需量掺入具有上文所列成分中的一种或组合(按需要)的合适溶剂中来制备无菌注射溶液，然后过滤消毒。一般来讲，通过将抗体掺入含有碱性分散介质和上文所列那些中的所需其它成分的无菌载体中来制备分散体。就用于制备无菌注射溶液的无菌粉末而言，制备方法是获得粉末的真空干燥和冷冻干燥，该粉末包含活性成分和任何另外的期望成分，它们来自前述的这些成分的无菌过滤溶液。
对于吸入给药，从包含合适推进剂如二氧化碳等气体的加压容器或分配器或者喷雾器以气溶胶喷雾形式递送化合物。
还可以通过经粘膜或透皮方式全身给药。对于经粘膜或透皮给药，在制剂中使用适于渗透屏障的渗透剂。此类渗透剂通常在本领域是通常所知的，并且包括如用于经粘膜给药的去污剂、胆盐和夫西地酸衍生物。经粘膜给药可以通过使用喷鼻剂或栓剂来实现。对于透皮给药，可将一种或多种所述抗体配制成如本领域通常所知的膏剂、软膏、凝胶、或霜膏。
还可将化合物以栓剂(例如，具有常规栓剂基质，如可可脂或其它甘油酯)或滞留性灌肠剂形式进行制备以用于经直肠递送。
在一个实施方案中，所述抗体可用防止其不被身体迅速消除的载体制备，例如缓释/控释制剂，包括植入体和微胶囊化递送体系。可使用可生物降解、可生物相容的聚合物，例如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的方法对于本领域技术人员而言是显而易见的。
尤其有利的是以剂量单位形式配制肠胃外组合物以易于施用和剂量的一致性。如本文所用，剂量单位形式是指用于待治疗的受试者，适合作为单位剂量的物理上可分离的单位；每个单位含有经计算与所需药物载体结合产生期望治疗效果的预定量的一种或多种所述抗体。所述实施方案的剂量单位形式的规格由以下指示并直接取决于：抗体的独特特征和待实现的具体治疗效果，和用于治疗个体的此类抗体的调配领域中固有的局限性。
所述药物组合物可与给药说明书一起放于容器、包装、或分配器中。
本文所述制剂还可根据要治疗的具体情况而包含多于一种所述抗体，优选具有互补活性但对彼此无负面影响的那些。另选地或除此之外，组合物可例如包含增强其功能的试剂，诸如细胞毒素试剂、细胞因子、化学治疗剂、或生长抑制剂。此类分子以对预期目的有效的量适当地联合存在。例如，可以在试剂盒中联合存在，也可以在使用中联合存在。
在一个实施方案中，一种或多种所述抗体可在联合治疗中施用，即与其它试剂例如治疗剂(其可用于治疗病理学病症或障碍，例如各种形式的癌症、自身免疫性障碍和炎性疾病)联合。术语“联合”在本文中是指将试剂基本上同步地，同时地或顺次地给予。如果顺次给予，则在开始施用第二种化合物时，两种化合物中的第一种仍优选在治疗位点处以有效浓度被检测到。在一种情况下，“联合”也可以是在试剂盒中同时包含本公开的抗体和其他治疗剂。
例如，联合治疗可包含本文所述一种或多种抗体与一种或多种附加治疗剂(例如一种或多种细胞因子和生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗炎剂、代谢抑制剂、酶抑制剂、和/或细胞毒素或细胞生长抑制剂，如下更详述的)共同配制和/或共同施用。此类联合治疗可有利地利用较低剂量的施用的治疗剂，因而避免了与各种单一疗法相关的可能毒性或并发症。
在一个实施方案中，抗BCMA抗体的施用和治疗剂的施用可以降低该受试者中的B细胞的数目。
在一个实施方案中，与相应的不施用抗BCMA抗体的治疗方案相比该治疗方案有效降低该受试者中与该T细胞活化性治疗剂的施用相关的细胞因子释放。
为了达到清楚和简洁描述的目的，本文中作为相同的或分开的一些实施方案的一部分来描述特征，然而，将要理解的是，本公开的范围可包括具有所描述的所有或一些特征的组合的一些实施方案。
实施例
实施例1抗原表达和稳转细胞的构建
分别以人BCMA(Sino biological，HG10620-M)和恒河猴BCMA(Sino biological，CG90103-G，与食蟹猴XP_005591343.1胞外区序列相同)为模板，扩增人BCMA(Met1-Asn53)或恒河猴BCMA(Met1-Asn52)，C端与小鼠IgG2a Fc融合，转染HEK293E细胞，表达得到人或食蟹猴BCMA-mFc双价重组蛋白(氨基酸序列如SEQ ID NO.1-2所示)；或与人IgG Fc(knob)融合，利用knob-into-hole技术，和人IgG Fc(hole)共转染HEK293E细胞，得到人或食蟹猴BCMA-hFc kih单价重组蛋白(氨基酸序列如SEQ ID NO.3-5所示)。图1示出了人、食蟹猴BCMA-mFc双价重组蛋白和BCMA-hFc kih单价重组蛋白的SDS-PAGE结果。
将含有人和食蟹猴BCMA全长序列的Lenti载体和包装质粒(Genecoepia)，共转染HEK293T细胞，转染48小时后收集含有假病毒的培养上清，取10μL感染1×106CHO细胞，加入不同浓度的嘌呤霉素(puromycin)进行抗性筛选，最终分离得到高表达人或食蟹猴BCMA的稳转细胞CHO-hBCMA(克隆2C2)和CHO-cynoBCMA(克隆1A2)。图2示出了流式细胞检测人和猴BCMA稳转细胞，人BCMA稳转细胞(CHO-hBCMA-2C2)和食蟹猴BCMA稳转细胞(CHO-cynoBCMA-1A2)均表达高水平的BCMA。
构建人或食蟹猴CD3εγ异源二聚体：合成人CD3γ(UniProt P09693，Gln23-Asn116)和CD3ε(UniProt P07766，Gln23-Asp126)胞外区核苷酸序列，C端分别与人IgG Fchole或Fc knob融合，表达形成人CD3εγ-Fc异源二聚体(人CD3γIgG Fc(hole)的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，人CD3εIgG Fc(knob)的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示)；同样合成食蟹猴CD3γ(UniProt Q95LI7，Gln23-Asn110)和CD3ε(UniProt Q95LI5，Gln22-Asp117)，C端与食蟹猴IgG Fc hole或Fc knob融合，表达形成食蟹猴CD3εγ-Fc异源二聚体(食蟹猴CD3γIgG Fc(hole)的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，食蟹猴CD3γIgG Fc(knob)的氨基酸序列如SEQ ID NO.9。将表达CD3γ-Fc和CD3ε-Fc的重组质粒与3mg/mL PEI(Polysciences，#24765-2)混合，共转染HEK293E细胞(培养基OPM-293 CD03 DPM)，37℃120rpm 5％CO2培养7天后，收集培养基上清液，经Protein A亲和层析纯化，得到人或食蟹猴CD3εγ-Fc重组蛋白，SDS-PAGE纯度高于95％(图3)。
实施例2、动物免疫和BCMA抗体的制备
以BCMA-mFc重组蛋白或CHO-BCMA稳转细胞为免疫原，分别与等体积免疫佐剂(Titermax，Sigma-Aldrich)混合，取6周龄雌性Balb/c小鼠(北京维通利华)进行足垫或皮下免疫。在初次免疫以后，每两周进行一次相同剂量的加强免疫，并交替进行人和猴的抗原免疫。四次免疫后，检测到小鼠血清中BCMA抗体滴度大于1:10000。进行抗原尾静脉冲击免疫3天后，收取小鼠脾脏和部分外周淋巴结，提取总RNA，通过IgG特异引物反转录得到抗体cDNA，分别扩增其中轻、重链可变区片段，构建噬菌体Fab文库，转化菌落数(库容量)约为1.2×1010。
噬菌体抗体文库的筛选
采用经典的淘选方式，将1mL BCMA免疫文库噬菌体与3.5mL 2％BSA/PBS溶液混合后，加入包被人或食蟹猴BCMA重组蛋白的Maxisorp Immunotube(Nunc)，结合1小时后，用PBS-吐温(0.5％v/v)和PBS进行多轮洗涤以除去非特异或低亲和力结合的噬菌体，用100mM三乙胺洗脱高亲和力结合的噬菌体，中和后感染TG1细胞。经二轮筛选后，挑取单克隆接种至96孔U型板，加入1mM IPTG诱导表达，取含有Fab的诱导上清进行ELISA检测筛选，初筛得到265个阳性克隆。
重新诱导表达后，将10μg/ml的生物素化标记的人BCMA重组蛋白固定在SA探针上，结合时间200s，解离时间300s，检测与Fab的亲和力(Octet，Fortebio)。选取其中59个亲和力较高的克隆，利用人、食蟹猴BCMA-CHO稳转细胞检测与细胞膜表面受体的结合，其中52个克隆可交叉识别人和食蟹猴BCMA-CHO稳转细胞。
Biacore测定抗体的亲和力
选择部分高亲和力抗体克隆，提取质粒并转化TG1细胞，0.1mM IPTG 30℃诱导表达过夜，从细菌的周质腔抽提重组表达的Fab，通过Ni-NTA亲和层析纯化得到Fab抗体。Biacore亲和力测定采用Protein A芯片(GE healthcare)，设定捕获人BCMA-hFc重组蛋白(0.5μg/mL)为200RU，基线平稳后，将梯度稀释的抗体Fab(从10μg/mL起，2倍稀释7个梯度)，以30μL/min的流速流过芯片，结合时间350秒，解离时间600秒。通过Biacore T200evaluation软件以Langmuir 1:1kinetics模型，拟合得到动力学常数。BCMA抗体亲和力测定结果见表1。
表1、BCMA抗体的亲和力
Figure BDA0002812848070000171
Figure BDA0002812848070000181
BCMA抗体可变区序列如下：
表2、BCMA鼠源抗体的可变区序列
Figure BDA0002812848070000182
3G11
3G11重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，其编码核酸如SEQ ID NO.11所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、13、14所示。
<------------FR1------------>CDR1<-----FR2----->CDR2<---------EIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYIFTNFGMNWVRQAPGKALKWMGWINTYTGEQIYADDFKGRFAFSLETSA-------FR3----------->CDR3<----FR4--->
STAYLQINNLKNEDTATYFCARGEIYYGYDVGFVYWGQGTLVTVSA
核酸序列
GAGATCCAGTTGGTGCAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATATCTTCACAAACTTTGGAATGAACTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGAAAGGCTTTAAAGTGGATGGGCTGGATAAACACCTACACTGGAGAACAAATATATGCTGATGACTTCAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCCTATTTGCAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACACGGCTACATATTTCTGTGCAAGAGGGGAGATCTACTATGGTTACGACGTGGGCTTTGTTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
3G11轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示，其编码核酸如SEQ ID NO.16所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.17、18、19所示。
<---------FR1--------->CDR1<-----FR2----->CDR2<---------------DIVLTQSPASLTVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASDLESGVSARFSGSGSGTDFT--FR3---------->CDR3<---FR4-->
LNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPWTFGGGTKLEIK
核酸序列
GATATTGTGCTAACTCAGTCTCCTGCTTCCTTAACTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATCTTGCATCCGACCTAGAATCTGGGGTCTCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAACACAGTAGGGAACTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATAAAA
6G5
6G5重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，其编码核酸如SEQ ID NO.11所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、13、14所示。
<------------FR1------------>CDR1<-----FR2----->CDR2<---------EIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYIFTNFGMNWVRQAPGKALKWMGWINTYTGEQIYADDFKGRFAFSLETSA-------FR3----------->CDR3<----FR4--->
STAYLQINNLKNEDTATYFCARGEIYYGYDVGFVYWGQGTLVTVSA
核酸序列
GAGATCCAGTTGGTGCAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATATCTTCACAAACTTTGGAATGAACTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGAAAGGCTTTAAAGTGGATGGGCTGGATAAACACCTACACTGGAGAACAAATATATGCTGATGACTTCAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCCTATTTGCAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACACGGCTACATATTTCTGTGCAAGAGGGGAGATCTACTATGGTTACGACGTGGGCTTTGTTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
6G5轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.20所示，其编码核酸如SEQ ID NO.21所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.22、23、19所示。
<---------FR1--------->CDR1<-----FR2----->CDR2<---------------DIVLTQSPASLAISLGQRATISCRASKSVTTSGYSYIHWYQQKPGQPPKLLIYLASDLEAGVPARFSGSGSGTDFT--FR3---------->CDR3<---FR4-->
LNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPWTFGGGTKLELK
核酸序列
GACATTGTGCTAACACAGTCTCCTGCTTCCTTAGCTATATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGCAAAAGTGTCACTACATCTGGCTATAGTTATATACACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATCTTGCATCCGACCTAGAAGCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAAGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAGCTGAAA
15G9
15G9重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.24所示，其编码核酸如SEQ ID NO.25所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.26、27、28所示。
<------------FR1------------>CDR1<-----FR2----->CDR2<---------QVQLQQSGPELVKPGASVNLSCKASGYTFTNYVIHWVKQKPGQGLEWIGYTIPYTDVTKYNEKFKAKATLTSDKSS-------FR3----------->CDR3<---FR4--->
STAFMELSSLTSEDSAVYYCARYDFDGYFDYWGQGTTLTVSS
核酸序列
CAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAATTTGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTAATTATGTTATACACTGGGTAAAGCAGAAGCCTGGGCAGGGCCTTGAGTGGATTGGATATACTATCCCTTACACTGATGTTACTAAGTACAATGAGAAATTCAAAGCCAAGGCCACACTGACTTCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTTCATGGAGCTCAGCAGCCTGACCTCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATATGATTTCGACGGCTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
15G9轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.29所示，其编码核酸如SEQ ID NO.30所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.31、32、33所示。
<---------FR1--------->CDR1<-----FR2----->CDR2<--------------DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSSSGSGTDF--FR3----------->CDR3<---FR4-->
TLRISRVEAEDVGVYYCAQNLELPWTFGGGTKLELK
核酸序列
GATATTGTGATGACTCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCTTGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGTAATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTAGCAGTGGGTCAGGAACTGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTGCTCAAAATCTAGAACTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAGCTGAAA
15H10
15H10重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.34所示，其编码核酸如SEQ ID NO.35所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、36、37所示。
<------------FR1------------>CDR1<-----FR2----->CDR2<---------EVQLQQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNFGMNWVRQTPGKALKWMGWINTYTGDLIYGDDFKGRFAFSLETSA-------FR3----------->CDR3<---FR4--->
STAYLQINNLKNEDTATYFCARGEIYYGYDVGFAYWGQGTLVTVSA
核酸序列
GAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATACCTTCACAAACTTTGGAATGAACTGGGTGAGGCAGACTCCAGGAAAGGCTTTAAAGTGGATGGGCTGGATAAACACCTACACTGGAGACTTAATATATGGTGATGACTTTAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCCTATTTACAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACACGGCTACATATTTCTGTGCAAGAGGGGAGATCTACTATGGTTACGACGTGGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
15H10轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.38所示，其编码核酸如SEQ ID NO.39所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.17、40、19所示。
<---------FR1--------->CDR1<-----FR2----->CDR2<---------------DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFT--FR3---------->CDR3<---FR4-->
LNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPWTFGGGTKLEIK
核酸序列
GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGCTTCCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGTAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA
16B9
16B9重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.41所示，其编码核酸如SEQ ID NO.42所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、43、44所示。
<------------FR1------------>CDR1<-----FR2----->CDR2<---------EIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYIFTNFGMNWVRQTPGKALKWMGWINTYTGETIYADDFKGLFAFSLEVPA-------FR3----------->CDR3<----FR4--->
STAYLQINNLKNEDTATYFCARGEIYYGFDVGFAYWGQGTLVTVSA
核酸序列
GAGATCCAGTTGGTGCAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATATTTTCACAAACTTTGGAATGAACTGGGTGAGGCAGACTCCAGGAAAGGCTTTAAAGTGGATGGGCTGGATAAACACCTACACTGGAGAAACAATATATGCTGATGACTTCAAGGGACTATTTGCCTTCTCTTTGGAAGTGCCTGCCAGCACTGCCTATTTGCAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACACGGCTACATATTTCTGTGCAAGAGGGGAGATCTACTATGGTTTCGACGTGGGATTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
16B9轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.45所示，其编码核酸如SEQ ID NO.46所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.47、18、19所示。
<---------FR1--------->CDR1<-----FR2----->CDR2<---------------DIVLTQSPASLTVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYIHWYQQKPGQPPKLLIYLASDLESGVPARFSGSGSGTDFT--FR3---------->CDR3<---FR4-->
LNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPWTFGGGTKLELK
核酸序列
GACATTGTGCTAACACAGTCTCCTGCTTCCTTAACTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATACACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATCTTGCATCCGACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAACACAGTAGGGAACTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAGCTGAAA
23F8
23F8重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.48所示，其编码核酸如SEQ ID NO.49所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、50、14所示。
<------------FR1------------>CDR1<-----FR2----->CDR2<---------EIQLVQSGPELKKPGETVKISCTASGYTFTNFGMNWVRQAPGKALRWMGWINTYTGDQIYADDFKGRFAFSLETSA-------FR3----------->CDR3<----FR4--->
STAYLQINNLKNEDTATYFCARGEIYYGYDVGFVYWGQGTLVTVSA
核酸序列
GAGATCCAGTTGGTGCAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCACGGCTTCTGGGTATACCTTCACAAACTTTGGAATGAACTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGAAAGGCTTTAAGGTGGATGGGCTGGATAAACACCTACACTGGAGACCAAATATATGCTGATGACTTCAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCCTATTTGCAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACACGGCTACATATTTCTGTGCAAGAGGGGAGATCTACTATGGTTACGACGTGGGCTTTGTTTATTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
23F8轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.51所示，其编码核酸如SEQ ID NO.52所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.17、40、19所示。
<---------FR1--------->CDR1<-----FR2----->CDR2<---------------DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFT--FR3---------->CDR3<---FR4-->
LNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPWTFGGGTKLEIK
核酸序列
GACATTGTGCTAACACAGTCTCCTGCTTCCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATAAAA
23G9
23G9重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.53所示，其编码核酸如SEQ ID NO.54所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.55、56、57所示。
<------------FR1------------>CDR1<-----FR2----->CDR2<---------EVQLQQSGTVLTRPGASVKLSCKASGYSFSSYWMHWLKQRPGQGLEWIGAIYPGNSRTTYNQKFKGEAKLTADTSA-----FR3----------->CDR3<---FR4--->
STAYMDLSSLTNADSAVYFCTREETYWGQGTLVTVSA
核酸序列
GAGGTTCAGCTCCAGCAGTCTGGGACTGTGCTGACAAGGCCTGGGGCTTCCGTGAAGTTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACAGCTTTTCCAGCTACTGGATGCACTGGCTAAAACAGAGGCCTGGACAGGGTCTAGAATGGATTGGTGCTATTTATCCTGGAAATAGTCGTACTACCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCGAGGCCAAACTGACTGCGGACACTTCCGCCAGCACTGCCTACATGGACCTCAGCAGCCTGACAAATGCCGACTCTGCGGTCTATTTCTGTACAAGAGAGGAGACTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
23G9轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.58所示，其编码核酸如SEQ ID NO.59所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.60、61、62所示。
<---------FR1--------->CDR1<-----FR2----->CDR2<--------------DVVMTQTPLSLSVTIGQPASISCKSSQGLLDSYGVTYLNWLFQRPGQPPKRLIYLVSELDSGVPDRFTGSGSGTDF---FR3---------->CDR3<---FR4-->
TLRISRVEAEDLGIYYCWQGSHFPLTFGAGTKLELK
核酸序列
GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCTCTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGGGCCTCTTAGATAGTTATGGAGTGACATATTTGAATTGGTTGTTTCAGAGGCCAGGCCAGCCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTAGTGTCTGAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAATTTATTATTGCTGGCAAGGTTCACATTTTCCTCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
29A11
29A11重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，其编码核酸如SEQ ID NO.11所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、13、14所示。
<------------FR1------------>CDR1<-----FR2----->CDR2<---------EIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYIFTNFGMNWVRQAPGKALKWMGWINTYTGEQIYADDFKGRFAFSLETSA-------FR3----------->CDR3<----FR4--->
STAYLQINNLKNEDTATYFCARGEIYYGYDVGFVYWGQGTLVTVSA
核酸序列
GAGATCCAGCTGGTGCAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATATCTTCACAAACTTTGGAATGAACTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGAAAGGCTTTAAAGTGGATGGGCTGGATAAACACCTACACTGGAGAACAAATATATGCTGATGACTTCAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCCTATTTGCAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACACGGCTACATATTTCTGTGCAAGAGGGGAGATCTACTATGGTTACGACGTGGGCTTTGTTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
29A11轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.38所示，其编码核酸如SEQ ID NO.39所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.17、40、19所示。
<---------FR1--------->CDR1<-----FR2----->CDR2<---------------DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFT--FR3---------->CDR3<---FR4-->
LNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPWTFGGGTKLEIK
核酸序列
GATATTGTGCTAACTCAGTCTCCTGCTTCCTTAGCCGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA
34G2
34G2重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.63所示，其编码核酸如SEQ ID NO.64所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.65、66、14所示。
<------------FR1------------>CDR1<-----FR2----->CDR2<---------EVQLQQSGPELRKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQTPGKGLKWMGWINTYTGERIYADDFKGRFAFSLETSA-------FR3----------->CDR3<----FR4--->
STAYLQINNLKNEDTATYFCARGEIYYGYDVGFVYWGQGTLVTVSA
核酸序列
GAGGTCCAGTTGCAGCAGTCTGGACCTGAGCTGAGGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATACCTTCACAAACTATGGAATGAACTGGGTGAAGCAGACTCCAGGAAAGGGTTTAAAGTGGATGGGCTGGATAAACACCTACACTGGAGAACGAATATATGCTGATGACTTCAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCCTATTTGCAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACACGGCTACATATTTCTGTGCAAGAGGGGAGATCTACTATGGTTACGACGTGGGCTTTGTTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
34G2轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.67所示，其编码核酸如SEQ ID NO.68所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.17、40、19所示。
<---------FR1--------->CDR1<-----FR2----->CDR2<---------------DIVLTQSPASLVVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFT--FR3---------->CDR3<---FR4-->
LNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPWTFGGGTRLEIK
核酸序列
GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGCTTCCTTAGTTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAGACTGGAAATAAAA
38E2
38E2重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.69所示，其编码核酸如SEQ ID NO.70所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.71、72、73所示。
<------------FR1------------>CDR1<-----FR2----->CDR2<---------QVQLQQSGAELVRPGTSVKMSCKAAGYTFTNYWIGWVKQRPGHGLEWIGDIYPGSGDTNYNGKFKGKATLAADISS-------FR3----------->CDR3<----FR4--->
NAAYMQLSSLTSEDSAIYYCARSYYRNDAASFAYWGQGTLVTVSA
核酸序列
CAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTAAGGCCTGGGACTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTGCTGGATACACCTTCACTAACTACTGGATAGGTTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACATGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTACCCTGGAAGTGGTGATACTAATTACAATGGGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGGCTGCAGACATTTCCTCCAACGCAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCATCTATTACTGTGCAAGAAGCTACTATAGGAACGACGCGGCCTCATTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
38E2轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.74所示，其编码核酸如SEQ ID NO.75所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.76、77、78所示。
<---------FR1--------->CDR1<-----FR2----->CDR2<-------------------DIVMTQSHKFMSTSVGDRVNITCKASQDVDTAVAWYQQKPSQSPKLLIYWTSTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISFR3-------->CDR3<---FR4-->
NVQSEDLADYFCQQFSSYPLTFGAGTKLELK
核酸序列
GACATTGTGATGACCCAGTCTCACAAATTCATGTCCACATCAGTAGGAGACAGGGTCAACATCACCTGCAAGGCCAGTCAGGATGTGGATACTGCTGTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAAGTCAATCTCCTAAACTACTGATTTACTGGACATCCACCCGGCACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATTAGCAATGTGCAGTCTGAAGACTTGGCAGATTATTTCTGTCAACAATTTAGTAGCTATCCTCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
38D9
38D9重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.79所示，其编码核酸如SEQ ID NO.80所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、13、14所示。
<------------FR1------------>CDR1<-----FR2----->CDR2<---------EVQLQQSGPELKKPGETVKISCKASGYIFTNFGMNWVRQAPGKALKWMGWINTYTGEQIYADDFKGRFAFSLETSA-------FR3----------->CDR3<----FR4--->
STAYLQINNLKNEDTATYFCARGEIYYGYDVGFVYWGQGTLVTVSA
核酸序列
GAGGTCCAGTTGCAGCAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATATCTTCACGAACTTTGGAATGAACTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGAAAGGCTTTAAAGTGGATGGGCTGGATAAACACCTACACTGGAGAACAAATATATGCTGATGACTTCAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCCTATTTGCAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACACGGCTACATATTTCTGTGCAAGAGGGGAGATCTACTATGGTTACGACGTGGGCTTTGTTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
38D9轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.81所示，其编码核酸如SEQ ID NO.82所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.83、84、19所示。
<---------FR1--------->CDR1<-----FR2----->CDR2<----------------DIVLTQSPASLTVSLGQRATISCGASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLGSDLESGVPARFSGSGSGTDFT--FR3---------->CDR3<---FR4-->
LNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPWTFGGGTKLEIK
核酸序列
GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGCTTCCTTAACTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCGGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATCTTGGATCCGACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAACACAGTAGGGAACTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA
38F9
38F9重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，其编码核酸如SEQ ID NO.11所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、13、14所示。
<------------FR1------------>CDR1<-----FR2----->CDR2<---------EIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYIFTNFGMNWVRQAPGKALKWMGWINTYTGEQIYADDFKGRFAFSLETSA-------FR3----------->CDR3<----FR4--->
STAYLQINNLKNEDTATYFCARGEIYYGYDVGFVYWGQGTLVTVSA
核酸序列
GAGATCCAGTTGGTGCAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATATCTTCACAAACTTTGGAATGAACTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGAAAGGCTTTAAAGTGGATGGGCTGGATAAACACCTACACTGGAGAACAAATATATGCTGATGACTTCAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCCTATTTGCAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACACGGCTACATATTTCTGTGCAAGAGGGGAGATCTACTATGGTTACGACGTGGGCTTTGTTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
38F9轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.85所示，其编码核酸如SEQ ID NO.86所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.87、88、89所示。
<---------FR1--------->CDR1<-----FR2----->CDR2<---------------NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSSGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYLESNLESGVPARFSGSGSRTDFTFR3------------>CDR3<---FR4-->
LTIEPVEADDAATYYCQQSNEDPWTFGGGTKLEIK
核酸序列
AACATTGTGCTGACCCAATCTCCAGCTTCTTTGGCTGTGTCTCTAGGGCAGAGGGCCACCATATCCTGCAGAGCCAGTGAAAGTGTTGATAGTTCTGGCAATAGTTTTATGCACTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATCTTGAATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTAGGACAGACTTCACCCTCACCATTGAACCTGTGGAGGCTGATGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCAAAGTAATGAGGATCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA
40C6
40C6重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，其编码核酸如SEQ ID NO.11所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、13、14所示。
<------------FR1------------>CDR1<-----FR2----->CDR2<---------EIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYIFTNFGMNWVRQAPGKALKWMGWINTYTGEQIYADDFKGRFAFSLETSA-------FR3----------->CDR3<----FR4--->
STAYLQINNLKNEDTATYFCARGEIYYGYDVGFVYWGQGTLVTVSA
核酸序列
GAGATCCAGTTGGTGCAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATATCTTCACAAACTTTGGAATGAACTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGAAAGGCTTTAAAGTGGATGGGCTGGATAAACACCTACACTGGAGAACAAATATATGCTGATGACTTCAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCCTATTTGCAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACACGGCTACATATTTCTGTGCAAGAGGGGAGATCTACTATGGTTACGACGTGGGCTTTGTTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
40C6轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.90所示，其编码核酸如SEQ ID NO.91所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.92、23、19所示。
<---------FR1--------->CDR1<-----FR2----->CDR2<---------------DIVLTQSPASLAISLGQRATISCRASRSVTTSGYSYIHWYQQKPGQPPKLLIYLASDLEAGVPARFSGSGSGTDFT--FR3---------->CDR3<---FR4-->
LNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPWTFGGGTKLEIK
核酸序列
GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGCTTCCTTAGCTATATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGCAGAAGTGTCACTACATCTGGCTATAGTTATATACACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCTATCTTGCATCCGACCTAGAAGCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAAGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATAAAA
实施例3、BCMA×CD3双特异抗体的构建
1、CD3人源化抗体
鼠源杂交瘤CD3抗体(EMBO J.1985.4(2):337-344；J.Immunol.1986,137(4):1097-100；J.Exp.Med.1991,174:319-326；J.Immunol.1991,147(9):3047-52)识别人和食蟹猴CD3受体，其序列如下：
抗CD3鼠单抗轻链氨基酸序列：
QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL
抗CD3鼠单抗重链氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
将抗CD3鼠单抗人源化，选择同源性最高的人胚系基因IMGT_hVL7-43进行轻链CDR移植，FM4选用人IGLJ3*02；选择人IMGT_hVH3-73进行重链CDR移植，FM4选用人IGHJ4*01。设计共得到不同的重链变体和轻链变体。
CD3人源化抗体轻链可变区的序列如下：
表3、CD3人源化抗体的轻链可变区序列
Figure BDA0002812848070000241
hVL1的氨基酸序列如SEQ ID NO.93所示，其编码核酸如SEQ ID NO.94所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.95、96、97所示。
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPWTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVL
hVL2的氨基酸序列如SEQ ID NO.98所示，其编码核酸如SEQ ID NO.99所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.95、96、97所示。
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPGQAPRGLIGGTNKRAPWTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVL
hVL3的氨基酸序列如SEQ ID NO.100所示，其编码核酸如SEQ ID NO.101所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.102、103、97所示。
EAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCESSDGAVTTSNYANWVQEKPGQAPRGLIGGTNKEAPWTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVL
hVL4的氨基酸序列如SEQ ID NO.104所示，其编码核酸如SEQ ID NO.105所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.102、103、97所示。
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCESSDGAVTTSNYANWVQEKPGQAPRGLIGGTNKEAPWTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVL
hVL5的氨基酸序列如SEQ ID NO.106所示，其编码核酸如SEQ ID NO.107所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.95、96、108所示。
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPGQAPRGLIGGTNKRAPWTPARFSGSLLGGKAALTITGAQAEDEAEYYCVLWYSNLWVFGGGTKLTVL
hVL6的氨基酸序列如SEQ ID NO.109所示，其编码核酸如SEQ ID NO.110所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.95、111、108所示。
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWFQEKPGQAPRGLIYGTNKRAPWTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQAEDEAEYYCVLWYSNLWVFGGGTKLTVL
CD3人源化抗体重链可变区的序列如下：
表4、CD3人源化抗体的重链可变区序列
Figure BDA0002812848070000251
hVH1的氨基酸序列如SEQ ID NO.112所示，其编码核酸如SEQ ID NO.113所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.114、115、116所示。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
hVH2的氨基酸序列如SEQ ID NO.117所示，其编码核酸如SEQ ID NO.118所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.119、115、116所示。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRKAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
hVH3的氨基酸序列如SEQ ID NO.120所示，其编码核酸如SEQ ID NO.121所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.119、115、122所示。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRKAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGESYVSWFAYWGQGTLVTVSS
hVH4的氨基酸序列如SEQ ID NO.123所示，其编码核酸如SEQ ID NO.124所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.119、115、125所示。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRKAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGQSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
hVH5的氨基酸序列如SEQ ID NO.126所示，其编码核酸如SEQ ID NO.127所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.119、115、128所示。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRKAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGDSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
hVH6的氨基酸序列如SEQ ID NO.129所示，其编码核酸如SEQ ID NO.130所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.119、115、131所示。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRKAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGTSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
hVH7的氨基酸序列如SEQ ID NO.132所示，其编码核酸如SEQ ID NO.133所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.134、135、116所示。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMNWVRKAPGKGLEWVSRIRSKYNNYATYYADSVEDRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
hVH8的氨基酸序列如SEQ ID NO.136所示，其编码核酸如SEQ ID NO.137所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.114、115、116所示。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRKAPGKGLEWVGRIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCARHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
hVH9的氨基酸序列如SEQ ID NO.138所示，其编码核酸如SEQ ID NO.139所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.114、115、116所示。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRKAPGKGLEWVGRIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
hVH10的氨基酸序列如SEQ ID NO.140所示，其编码核酸如SEQ ID NO.141所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.114、115、116所示。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRKAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
将轻、重链人源化变体分别进行全序列合成后，克隆到含有抗体lambda轻链恒定区或人IgG4重链恒定区CH1-CH3的真核表达载体，共转染HEK293E细胞，37℃120rpm 5％CO2培养5-6天后，收集培养基上清液，通过Protein A层析柱进行纯化。
2、ELISA亲和力测定
包被人CD3εγ蛋白，4℃过夜。2％脱脂牛奶封闭后，每孔加入不同稀释倍数的CD3抗体，孵育1小时；二抗加入HPR标记的山羊抗人IgG Fc，TMB溶液显色后，以浓硫酸终止反应并在450nm处读出吸光度(结果如图4所示)。
图4显示与人CD3εγ蛋白结合的抗CD3人源化抗体组合(包括aCD3-hVH8/VL1、aCD3-hVH9/VL1、aCD3-hVH9/VL2、aCD3-hVH9/VL3、aCD3-hVH1/VL5、aCD3-hVH8/VL5、aCD3-hVH9/VL5)，CD3人源化抗体高亲和力结合CD3εγ重组蛋白。
3、Jurkat T细胞亲和力测定
取对数生长期的Jurkat细胞，3％BSA封闭30分钟，以每孔5×104细胞加入96孔U型板，离心弃上清，每孔加入50μL梯度稀释的抗体(抗体浓度从30μg/mL起，3倍稀释5个梯度)，4℃孵育1小时。洗去一抗后，加入二抗1:300稀释的Alexa Fluro647标记的山羊抗人IgG Fc(Jackson ImmunoResearch，109-606-170)，4℃孵育45分钟，洗涤后每孔重悬于50μL PBS进行FACS(iQue，Intellicyt)检测(结果如图5所示)。
图5显示与Jurkat细胞结合的抗CD3人源化抗体组合，其中CD3人源化抗体hVH9/VL5(aCD3-hVH9/VL5)以中度亲和力结合Jurkat细胞。
4、BCMA抗体与CD3抗体的组合筛选
选择部分亲和力较高的BCMA克隆，分别与同源性最高的人胚系基因进行CDR移植，得到BCMA人源化抗体h38E2、h23F8、h40C6、h38D9、h29A11、h15H10和h34G2(表5)。参考Schaefer W等(PNAS,2011)，对人源化BCMA抗体与CD3抗体aCD3-hVH9/VL5(轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.106所示，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.138所示)的组合进行筛选：将人源化BCMA抗体的轻链可变区克隆到含有kappa轻链恒定区的真核表达载体，将重链可变区克隆到含有突变的人IgG4恒定区真核表达载体；将人源化CD3抗体的轻链可变区克隆到含有lambda轻链恒定区以及重链铰链区和恒定区CH2、CH3的真核表达载体，将CD3抗体的重链可变区克隆到含有人CH1恒定区的真核表达载体，将编码轻、重链基因的4种质粒按1：1：1：1比率混合，转染HEK293E细胞，表达5-6天后收取培养上清，Protein A一步纯化后，SEC-HPLC显示单体含量>55％，用于相对活性评价。将BCMA-50(按US201213678247合成)按上述方法，与CD3人源化抗体构建成BCMA50-CD3双特异抗体作为参照，或参考文献表达BCMA50×CD3(BiTE)。
表5、人源化BCMA抗体可变区序列
Figure BDA0002812848070000261
Figure BDA0002812848070000271
h38E2
h38E2轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.142所示，其编码核酸如SEQ ID NO.143所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.144、77、78所示。
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDVDTAVAWYQKKPGKAPKLLIYWTSTRHTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYFCQQFSSYPLTFGQGTKVEIK
核酸序列
GACATCCAGATGACACAGAGCCCTAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGAGACAGAGTGACCATCACCTGTCAGGCCAGCCAGGATGTGGATACAGCCGTGGCCTGGTATCAGAAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTACTGGACCAGCACCAGACACACAGGCGTGCCCTCTAGATTCAGCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTCACCTTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATATCGCTACCTACTTCTGCCAGCAGTTCAGCAGCTACCCTCTGACATTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAG
h38E2重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.145所示，其编码核酸如SEQ ID NO.146所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.71、147、73所示。
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTNYWIGWVREAPGQGLEWMGDIYPGSGDTNYNGKFQGRVTLTADISSNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSYYRNDAASFAYWGQGTLVTVSS
核酸序列
CAGGTTCAGCTGGTTCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCAGCAGCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTAGCGGCTACACATTCACCAACTACTGGATCGGCTGGGTCCGAGAGGCTCCTGGACAAGGACTTGAGTGGATGGGCGACATCTACCCTGGCAGCGGCGACACAAACTACAACGGCAAGTTCCAGGGCAGAGTGACCCTGACAGCCGACATCAGCAGCAACACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGAAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAAGCTACTACAGAAACGACGCCGCCAGCTTCGCTTACTGGGGACAGGGAACACTGGTCACCGTGTCTAGT
h23F8
h23F8轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.148所示，其编码核酸如SEQ ID NO.149所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.17、40、19所示。
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQKKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK
核酸序列
GACATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCTTCTCTGGCTGTGTCTCCTGGCCAGAGAGCCACCATCACCTGTAGAGCCAGCAAGAGCGTGTCCACCAGCGGCTACTCTTACATGCACTGGTATCAGAAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAAGCTGCTGATCTaCCTGGCTAGCAACCTCGaaAGCGGAGTGCCTGctAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAACCCCGTGGAAGCCAACGACACCGCCAACTACTACTGCCAGCACAGCAGAGAGCTGCCCTGGACATTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAG
h23F8重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.150所示，其编码核酸如SEQ ID NO.151所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、50、14所示。
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNFGMNWVREAPGQGLEWMGWINTYTGDQIYADDFKGRFAFSLDTSASTAYLQISSLKAEDTAVYFCARGEIYYGYDVGFVYWGQGTLVTVSS
核酸序列
CAGgTTCAGCTGGTGCagtCTGGCAGCGAGCTGAAGAAACCTGGCGCCTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTAGCGGCTACACATTCACCAACTTCGGCATGAACTGGGTCCGAGAGGCTCCTGGACAGGGACTCGAATGGATGGGCTGGATCAACACCTACACCGGCGACCaGATCTACGcCGACGACTTCAAGGGCAGATTCGCCTTCAGCCTGGACACCTCTGCCAGCACAGCTTACCTGCAGATCAGCAGCCTGAAGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTTCTGTGCCAGAGGCGAGATCTACTACGGCTACGATGTGGGCTTCGtCTACTGGGGACAGGGAACACTGGTCACCGTTAGCTCT
h40C6
h40C6轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.152所示，其编码核酸如SEQ ID NO.153所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.92、23、19所示。
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASRSVTTSGYSYIHWYQKKPGQPPKLLIYLASDLEAGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK
核酸序列
GACATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCTTCTCTGGCTGTGTCTCCTGGCCAGAGAGCCACCATCACCTGTAGAGCCAGCAGAAGCGTGACCACCAGCGGCTACTCTTACATCCACTGGTATCAGAAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAAGCTGCTGATCTACCTGGCCAGCGATCTGGAAGCTGGCGTGCCAGCTAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAACCCCGTGGAAGCCAACGACACCGCCAACTACTACTGCCAGCACAGCAGAGAGCTGCCCTGGACATTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAG
h40C6重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.154所示，其编码核酸如SEQ ID NO.155所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、13、14所示。
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYIFTNFGMNWVREAPGQGLEWMGWINTYTGEQIYADDFKGRFAFSLDTSASTAYLQISSLKAEDTAVYFCARGEIYYGYDVGFVYWGQGTLVTVSS
核酸序列
CAGgTTCAGCTGGTGCagtCTGGCAGCGAGCTGAAGAAACCTGGCGCCTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTAGCGGCTACATCTTCACCAACTTCGGCATGAACTGGGTCCGAGAGGCTCCTGGACAGGGACTCGAATGGATGGGCTGGATCAACACCTACACCGGCGAGCAGATCTACGCCGATGACTTCAAAGGCAGATTCGcGTTCAGCCTGGACACCAGCGCCAGCACAGCTTACCTGCAGATCAGCTCTCTGAAGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTTCTGTGCCAGAGGCGAGATCTACTACGGCTACGACGTGGGCTTTGTGTACTGGGGCCAGGGAACACTGGTCACCGTTAGCTCT
h38D9
h38D9轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.156所示，其编码核酸如SEQ ID NO.157所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.83、84、19所示。
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQKKPGQPPKLLIYLGSDLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK
核酸序列
GACATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCTTCTCTGGCTGTGTCTCCTGGCCAGAGAGCCACCATCACCTGTAGAGCCAGCAAGAGCGTGTCCACCAGCGGCTACTCTTACATGCACTGGTATCAGAAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAAGCTGCTGATCTaCCTGGgTAGCGACCTCGaaAGCGGAGTGCCTGctAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAACCCCGTGGAAGCCAACGACACCGCCAACTACTACTGCCAGCACAGCAGAGAGCTGCCCTGGACATTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAG
h38D9重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.158所示，其编码核酸如SEQ ID NO.159所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、13、14所示。
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYIFTNFGMNWVREAPGQGLEWMGWINTYTGEQIYADDFKGRFAFSLDTSASTAYLQISSLKAEDTAVYFCARGEIYYGYDVGFVYWGQGTLVTVSS
核酸序列
CAGgTTCAGCTGGTGCagtCTGGCAGCGAGCTGAAGAAACCTGGCGCCTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTAGCGGCTACATCTTCACCAACTTCGGCATGAACTGGGTCCGAGAGGCTCCTGGACAGGGACTCGAATGGATGGGCTGGATCAACACCTACACCGGCGAGCAGATCTACGCCGATGACTTCAAAGGCAGATTCGcGTTCAGCCTGGACACCAGCGCCAGCACAGCTTACCTGCAGATCAGCTCTCTGAAGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTTCTGTGCCAGAGGCGAGATCTACTACGGCTACGACGTGGGCTTTGTGTACTGGGGCCAGGGAACACTGGTCACCGTTAGCTCT
h29A11
h29A11轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.160所示，其编码核酸如SEQ ID NO.161所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.17、40、19所示。
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQKKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK
核酸序列
GACATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCTTCTCTGGCTGTGTCTCCTGGCCAGAGAGCCACCATCACCTGTAGAGCCAGCAAGAGCGTGTCCACCAGCGGCTACTCTTACATGCACTGGTATCAGAAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAAGCTGCTGATCTaCCTGGCTAGCAACCTCGaaAGCGGAGTGCCTGctAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAACCCCGTGGAAGCCAACGACACCGCCAACTACTACTGCCAGCACAGCAGAGAGCTGCCCTGGACATTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAG
h29A11重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.162所示，其编码核酸如SEQ ID NO.163所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、13、14所示。
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYIFTNFGMNWVREAPGQGLEWMGWINTYTGEQIYADDFKGRFAFSLDTSASTAYLQISSLKAEDTAVYFCARGEIYYGYDVGFVYWGQGTLVTVSS
核酸序列
CAGgTTCAGCTGGTGCagtCTGGCAGCGAGCTGAAGAAACCTGGCGCCTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTAGCGGCTACATCTTCACCAACTTCGGCATGAACTGGGTCCGAGAGGCTCCTGGACAGGGACTCGAATGGATGGGCTGGATCAACACCTACACCGGCGAGCAGATCTACGCCGATGACTTCAAAGGCAGATTCGcGTTCAGCCTGGACACCAGCGCCAGCACAGCTTACCTGCAGATCAGCTCTCTGAAGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTTCTGTGCCAGAGGCGAGATCTACTACGGCTACGACGTGGGCTTTGTGTACTGGGGCCAGGGAACACTGGTCACCGTTAGCTCT
h15H10
h15H10轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.164所示，其编码核酸如SEQ ID NO.165所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.17、40、19所示。
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQKKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK
核酸序列
GACATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCTTCTCTGGCTGTGTCTCCTGGCCAGAGAGCCACCATCACCTGTAGAGCCAGCAAGAGCGTGTCCACCAGCGGCTACTCTTACATGCACTGGTATCAGAAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAAGCTGCTGATCTaCCTGGCTAGCAACCTCGaaAGCGGAGTGCCTGctAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAACCCCGTGGAAGCCAACGACACCGCCAACTACTACTGCCAGCACAGCAGAGAGCTGCCCTGGACATTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAG
h15H10重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.166所示，其编码核酸如SEQ ID NO.167所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.12、36、37所示。
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNFGMNWVREAPGQGLEWMGWINTYTGDLIYGDDFKGRFAFSLDTSASTAYLQISSLKAEDTAVYFCARGEIYYGYDVGFAYWGQGTLVTVSS
核酸序列
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGCAGCGAGCTGAAGAAACCTGGCGCCTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTAGCGGCTACACATTCACCAACTTCGGCATGAACTGGGTCCGAGAGGCTCCTGGACAGGGACTCGAATGGATGGGCTGGATCAACACCTACACCGGCGACCTGATCTACGGCGACGACTTCAAGGGCAGATTCGCCTTCAGCCTGGACACCTCTGCCAGCACAGCTTACCTGCAGATCAGCAGCCTGAAGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTTCTGTGCCAGAGGCGAGATCTACTACGGCTACGATGTGGGCTTCGCCTACTGGGGACAGGGAACACTGGTCACCGTTAGCTCT
h34G2
h34G2轻链VK的氨基酸序列如SEQ ID NO.168所示，其编码核酸如SEQ ID NO.169所示，其LCDR1、LCDR2和LCDR3分别如SEQ ID NO.17、40、19所示。
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASKSVSTSGYSYMHWYQKKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK
核酸序列
GACATCGTGCTGACACAGAGCCCTGCTTCTCTGGCTGTGTCTCCTGGCCAGAGAGCCACCATCACCTGTAGAGCCAGCAAGAGCGTGTCCACCAGCGGCTACTCTTACATGCACTGGTATCAGAAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAAGCTGCTGATCTaCCTGGCTAGCAACCTCGaaAGCGGAGTGCCTGctAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAACCCCGTGGAAGCCAACGACACCGCCAACTACTACTGCCAGCACAGCAGAGAGCTGCCCTGGACATTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAG
h34G2重链VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.170所示，其编码核酸如SEQ ID NO.171所示，其HCDR1、HCDR2和HCDR3分别如SEQ ID NO.65、66、14所示。
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVREAPGQGLEWMGWINTYTGERIYADDFKGRFAFSLDTSASTAYLQISSLKAEDTAVYFCARGEIYYGYDVGFVYWGQGTLVTVSS
核酸序列
CAGgTTCAGCTGGTGCagtCTGGCAGCGAGCTGAAGAAACCTGGCGCCTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTAGCGGCTACACATTCACCAACTaCGGCATGAACTGGGTCCGAGAGGCTCCTGGACAGGGACTCGAATGGATGGGCTGGATCAACACCTACACCGGCGAaagGATCTACGcCGACGACTTCAAGGGCAGATTCGCCTTCAGCCTGGACACCTCTGCCAGCACAGCTTACCTGCAGATCAGCAGCCTGAAGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTTCTGTGCCAGAGGCGAGATCTACTACGGCTACGATGTGGGCTTCGtCTACTGGGGACAGGGAACACTGGTCACCGTTAGCTCT
5、T细胞依赖的细胞毒实验(TDCC)
取新鲜分离得到的PBMC和处于对数生长期的RPMI-8226细胞混合(效应/靶细胞＝10:1)，每孔加入50μL梯度稀释的抗体(起始浓度40μg/mL，10倍稀释，7个梯度)，5％CO2 37℃培养24小时。培养结束后，1000rmp离心3分钟，取上清检测LDH释放，将50μL上清转移至黑色酶标板，加入50μL/孔LDH检测底物，10分钟后终止反应并检测(Biotek Synergy HT)，按下述公式计算杀伤率；弃去上清后，将孔内剩余细胞用4％小牛血清洗2次后，加入100μg/mL人IgG封闭10分钟，加入T细胞早期活化标记CD69和后期标记CD25检测抗体(CD25-PE，CD4-APC，CD69-FITC和CD8-APC)，冰上孵育20分钟。孵育结束后，每孔加入200μL 4％小牛血清洗3次，弃上清，加入60μL/孔碘化丙啶(PI)溶液(1：200稀释)，置于冰上孵育5分钟，用流式细胞仪(BD FACS celesta)进行检测。杀伤率计算公式如下：
Figure BDA0002812848070000291
双特异抗体组合的杀伤活性见表6。
表6、双特异抗体的杀伤活性
Figure BDA0002812848070000292
Figure BDA0002812848070000301
6、构建BCMA×CD3κλ人源化双特异抗体
选择杀伤效率较高的克隆29A11及与之序列同源的克隆6G5进行人源化序列优化，其重链可变区来自鼠IGHV9-3，轻链可变区来自鼠IGKV3-12，将轻、重链CDR移植分别移植到人胚系基因IGHV7-4-1*02和IGVK_7_3，合成设计得到的人源化BCMA抗体序列。同时，在BCMA抗原臂和含λ轻链的人源化CD3抗体臂引入电荷变异体(VκBCMA:Gln42Lys；VHBCMA:Gln39Glu；VλCD3:Gln40Glu；VHCD3:Gln39Lys)，构建具有天然IgG构型的新型BCMA-CD3κλ人源化双特异抗体(表7)。双特异抗体的Fc部分采用人IgG4 knob-into-hole结构，以实现异源二聚体配对(Atwell等，1997)，并且通过突变Ser228Pro、Leu235Glu和Pro329Ala，保持铰链区稳定并减弱与Fcγ受体和C1q的相互作用。
将编码相应抗体片段的质粒，按κ轻链：λ轻链：重链1：重链2＝2:2:1:1的比率混合，与3mg/mL PEI混合后，共同转染CHO-S细胞，在500mL CD CHO AGT培养基(Gibco#12490-001)37℃5％CO2 150rpm培养，分别在瞬转第2、4和6天，加入4％CHO Feed C+补料(Gibco#A25031-05)。当细胞活率降至85％左右，收获发酵液，过滤后经Protein A亲和层析初步纯化，SEC-HPLC单体含量显示高于92％；经Capto S ImpAct离子交换层析，通过50-300mMNaCl/磷酸盐pH6.0梯度洗脱，合并洗脱峰，单体含量进一步提高至98-99％以上(表8)。
表7、BCMA×CD3κλ双特异抗体
Figure BDA0002812848070000302
Figure BDA0002812848070000311
Figure BDA0002812848070000321
表8 BCMA×CD3κλ双特异抗体的纯度
Figure BDA0002812848070000322
实施例4、BCMA×CD3κλ双特异抗体的结合活性
分别通过检测与BCMA重组蛋白、过表达稳转细胞或BCMA+肿瘤细胞的结合，确定双特异抗体BCMA抗原臂的亲和力，通过检测CD3重组抗原、Jurkat细胞或新鲜分离的外周血T细胞的结合，确定双特异抗体CD3臂的亲和力。
1、BCMA×CD3κλ双特异抗体与抗原的亲和力测定
将10μg/mL人或食蟹猴BCMA或CD3εγ重组抗原通过氨基偶联结合到CM5芯片(GEhealthcare)，控制抗原结合量约200RU。基线平稳后，将梯度稀释的抗体(从10μg/mL起，2倍稀释7个梯度)，以30μL/min的流速流过芯片，结合时间350秒，解离时间600秒。用BiacoreT200 evaluation软件以1:1结合模型，拟合得到动力学常数。亲和力测定结果见表9。
表9、BCMA×CD3κλ双特异性抗体与BCMA和CD3重组抗原的亲和力
KD(nM) 人BCMA 食蟹猴BCMA 人CD3εγ 食蟹猴CD3εγ
BCMA×CD3κλ003 1.3 0.16 31 43
BCMA×CD3κλ004 1.0 0.12 32 43
BCMA×CD3κλ005 1.1 0.09 28 20
BCMA×CD3κλ006 1.2 0.10 27 33
2、BCMA×CD3κλ双特异抗体与BCMA稳转细胞的结合
取对数生长期实施例1制备的CHO-人BCMA和CHO-食蟹猴BCMA稳转细胞，用4％小牛血清(Hyclone，SH30626.06)调整细胞至5×105个细胞/ml，加入100μl/孔细胞悬液至96孔U型板，300g离心5分钟，弃上清，每孔加入100μL梯度稀释的抗体(起始浓度1800nM，3倍稀释，10个梯度)，4℃孵育60分钟。二抗加入50μL/孔Alexa Fluro647标记的山羊抗人IgG Fc(1:300稀释)，冰上孵育20分钟，洗1次后加入50μL/孔PI溶液(1:300)，孵育5分钟，用流式细胞仪进行检测。图6和表10显示，BCMA×CD3κλ双特异抗体高亲和力结合人、食蟹猴BCMA稳转细胞。
表10、BCMA×CD3κλ双特异性抗体和BCMA稳转细胞的结合
EC<sup>50</sup>(nM) 人BCMA-CHO 食蟹猴BCMA-CHO
BCMA×CD3κλ003 16 3
BCMA×CD3κλ004 22 3
BCMA×CD3κλ005 24 3
BCMA×CD3κλ006 16 3
KLH×CD3 - -
3、BCMA×CD3κλ双特异抗体与BCMA+肿瘤细胞的结合
取对数生长期的NCI-H929和RPMI-8226细胞，加入200μg/mL鼠IgG(JacksonImmunoResearch，115-005-03)，冰浴封闭30分钟，用4％小牛血清调整细胞至5×105个细胞/mL，每孔100μL加入96孔U型板，300g离心5分钟，弃上清，每孔加入100μL梯度稀释的抗体(起始浓度1800nM，3倍稀释，10个梯度)，4℃孵育60分钟。洗去一抗，加入50μL/孔AlexaFluro647标记的山羊抗人IgG Fc(1:300稀释)，冰上孵育20分钟，洗1次后加入50μL/孔PI，孵育5分钟，用流式细胞仪进行检测。检测结果见图7和表11，BCMA×CD3κλ双特异抗体高亲和力结合BCMA+肿瘤细胞NCI-H929和RPMI-8226。
表11、BCMA×CD3κλ双特异性抗体和BCMA+肿瘤细胞的结合
EC<sub>50</sub>(nM) NCI-H929 RPMI-8226
BCMA×CD3κλ003 34 34
BCMA×CD3κλ004 36 39
BCMA×CD3κλ005 33 38
BCMA×CD3κλ006 32 19
KLH×CD3 - -
4、BCMA×CD3κλ双特异抗体与Jurkat细胞的结合
取对数生长期的Jurkat细胞，加入200μg/mL鼠IgG(Jackson ImmunoResearch，115-005-03)，冰浴30分钟。用4％小牛血清调整细胞至5×105个细胞/mL，每孔100μL加入96孔U型板，300g离心去上清，每孔加入100μL梯度稀释的抗体(起始浓度1800nM，3倍稀释，10个梯度)，4℃孵育60分钟。二抗加入50μL/孔Alexa Fluro647标记的山羊抗人IgG Fc(1:300稀释)，冰上孵育20分钟，洗1次后加入50μL/孔PI，孵育5分钟，用流式细胞仪(BD C6)进行检测。检测结果如图8和表12，BCMA×CD3κλ双特异抗体以中度亲和力结合人白血病T细胞系Jurkat细胞。
表12、BCMA×CD3κλ双特异抗体与Jurkat细胞的结合
EC<sub>50</sub>(nM) Jurkat
BCMA×CD3κλ003 66
BCMA×CD3κλ004 61
BCMA×CD3κλ005 51
BCMA×CD3κλ006 56
KLH×CD3 76
5、BCMA×CD3κλ双特异抗体与外周血T细胞的结合
取新鲜人或食蟹猴外周血，通过Ficoll.Paque Plu(GE，17-1440-03)分离得到PBMC。将PBMC用4％小牛血清(Hyclone，SH30626.06)调整细胞至5×105个细胞/mL，100μL/孔加入96孔U型板，离心弃上清，每孔加入100μL梯度稀释的抗体(起始浓度1800nM，3倍稀释，10个梯度)，4℃孵育60分钟。二抗加入50μL/孔Alexa Fluro647标记的山羊抗人IgG Fc(1:300稀释)，冰浴20分钟，洗1次后加入50μL/孔PI，孵育5分钟，用流式细胞仪(BD C6)进行检测。对照抗体REGN5458参照US20200024356合成并制备。
检测结果见图9和表13所示，BCMA×CD3κλ双特异抗体识别人外周血CD4+T和CD8+T细胞，与人T细胞亲和力约60-97nM，均弱于BCMA抗原臂与BCMA受体的结合力，有利于双特异抗体优先富集到肿瘤细胞。
表13、BCMA×CD3κλ双特异性抗体与外周血T细胞T细胞的结合
EC<sub>50</sub>(nM) CD4+T cell CD8+T cell
BCMA×CD3κλ003 87 97
BCMA×CD3κλ004 77 84
BCMA×CD3κλ005 66 60
BCMA×CD3κλ006 91 93
KLH×CD3 57 62
实施例5、BCMA×CD3κλ双特异抗体介导的TDCC
取新鲜分离得到的PBMC分别与处于对数生长期的靶细胞NCI-H929和RPMI-8226细胞混合，效应/靶细胞＝8:1，每孔加入50μL梯度稀释的抗体(抗体浓度从66.7nM起，10倍稀释，7个梯度)，5％CO2 37℃培养24小时。培养结束后，将50μL上清转移至新的黑色酶标板，加入50μL/孔LDH检测底物，10分钟后终止反应并检测LDH释放；孔内剩余细胞用4％小牛血清洗2次后，加入100μg/mL人IgG孵育10分钟，再加入T细胞活化检测抗体(CD25-PE，CD4-APC，CD69-FITC和CD8-APC)，冰上孵育20分钟。洗涤弃上清，加入60μL/孔PI，置于冰上孵育5分钟，用流式细胞仪进行检测。图10A、10B分别显示BCMA×CD3κλ双特异抗体对NCI-H929细胞的杀伤和对T细胞的活化。图11A、11B分别显示BCMA×CD3κλ双特异抗体对RPMI-8226细胞的杀伤和对T细胞的活化。对于BCMA表达水平不同的肿瘤细胞NCI-H929和RPMI-8226，BCMA×CD3κλ双特异抗体均可介导T细胞产生有效杀伤，杀伤活性与对照抗体相当。
实施例6、BCMA×CD3κλ双特异抗体对T细胞活化通路的激活
将荧光素酶报告质粒pGL4.30[luc2P/NFAT-RE/Hygro](Promega，E8481)转染Jurkat细胞，添加200μg/ml潮霉素B进行筛选，获得Jurkat-NFAT luc稳转报告细胞。取对数生长期的Jurkat-NFAT-luc报告细胞和靶细胞RPMI-8226，离心弃上清，重悬至2×106个细胞/ml。50μl/孔接种靶细胞至96孔板，300g离心5分钟弃上清，50μl/孔接种Jurkat-NFAT-luc报告细胞至96孔板，每孔加入50μL梯度稀释的BCMA×CD3κλ双特异抗体或对照抗体KLH×CD3(起始浓度20μg/ml，10倍稀释，10个梯度)，5％CO2，37℃培养6小时。培养结束后，按照ONE-Glo Luciferase Assay System说明书，每孔加入100μL检测试剂，室温放置3分钟，于酶标仪(Biotek Synergy HT)检测。检测结果见图12，BCMA×CD3κλ双特异抗体以RPMI-8226肿瘤细胞为靶细胞时，可激活T细胞的NFAT信号通路；无靶细胞时，不激活NFAT信号通路。
实施例7、BCMA×CD3κλ双特异抗体对PBMC的非特异激活
取新鲜分离得到的PBMC，每孔加入50μL梯度稀释的抗体(抗体浓度从66.7nM起，10倍稀释，7个梯度)，5％CO2 37℃培养24小时。培养结束后，将50μL上清转移至新的黑色酶标板，加入50μL/孔LDH检测底物，10分钟后终止反应并检测LDH释放；孔内剩余细胞用4％小牛血清洗2次后，加入100μg/mL人IgG孵育10分钟，再加入T细胞活化检测抗体(CD25-PE，CD4-APC，CD69-FITC和CD8-APC)，冰上孵育20分钟。洗涤弃上清，加入60μL/孔PI，置于冰上孵育5分钟，用流式细胞仪进行检测。检测结果见图13，在缺乏靶细胞的条件下，BCMA×CD3κλ双特异抗体对外周血T细胞无激活作用，与阴性对照KLH×CD3相当。
实施例8、BCMA×CD3κλ双特异抗体与Fc受体的结合
将50μg/ml His-Tag抗体通过氨基偶联到CM5芯片，分别捕获带有His6标签的FcγRI、FcγRIIAH131和FcγRIIIAV158重组蛋白，捕获时间40秒，流速10μL/min，基线平稳后，将梯度稀释的抗体(起始浓度37.5μg/mL，2倍稀释)以30μL/min的流速流过芯片，结合时间120秒，解离时间200秒，用Biacore evaluation软件拟合得到亲和力常数。检测结果见图14，BCMA×CD3κλ双特异抗体与活化受体FcγRI、FcγRIIAH131和FcγRIIIAV158均无结合；野生型IgG4和对照抗体分别与FcγRI、FcγRIIAH131或FcγRIIIAV158有结合。
实施例9、BCMA×CD3κλ双特异抗体对BCMA受体与配体结合的阻断
用pH9.6碳酸缓冲液配制1μg/mL人BCMA重组抗原，加入maxisorp96孔板，4℃包被过夜。5％脱脂牛奶/PBS室温封闭1小时后，每孔加入50μL抗体(从30μg/mL起4倍稀释，共稀释10个梯度)，室温孵育30分钟。加入50μL浓度240ng/mL的生物素标记人APRIL重组蛋白(Novoprotein，CU89)，继续孵育30分钟。0.05％PBST(PBS+0.05％Tween-20)和PBS各洗3遍后，每孔加入100μL SA-HRP(1:8000稀释)，室温孵育45分钟。再以0.05％PBST和PBS各洗3遍，每孔加入100μL TMB显色液，10分钟后每孔加入50μL浓硫酸终止反应，酶标仪读数OD450nm，使用Graphpad软件进行三参数拟合曲线。检测结果见图15，BCMA×CD3κλ双特异抗体可有效阻断BCMA与受体APRIL的结合。
实施例10、免疫重建小鼠皮下NCI-H929移植瘤模型
选择6～8周雌性B-NGD小鼠(百奥赛图生物科技有限公司)，皮下接种2×106NCI-H929细胞(与Matrigel 1:1混合)，待肿瘤长至60mm3时，随机分组，分别为给药组3.0mg/kg、给药组0.6mg/kg、给药组0.12mg/kg和阴性对照组KLH×CD3 3mg/kg。每只小鼠尾静脉注射1×107个PBMC细胞，3天后开始第一次小鼠给药，给药间隔为5天一次，共给药2次。每2天监测一次小鼠肿瘤体积及小鼠体重，实验结束后断颈处死小鼠，取瘤称重并记录。结果见图16，BCMA×CD3κλ双特异抗体的体内药效呈现剂量相关性，低剂量、中剂量和高剂量抑瘤率分别为55％、95％和108％(BCMA×CD3κλ005)以及46％、94％和108％(BCMA×CD3κλ006)，疗效显著优于对照抗体。荷瘤小鼠对以上剂量耐受良好，无体重减轻等不良反应。
SEQUENCE LISTING
<110> 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司
<120> 一种T细胞衔接器治疗剂的开发和应用
<130> MTI20180
<160> 183
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 290
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
20 25 30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser
35 40 45
Val Lys Gly Thr Asn Ala Ser Gly Ala Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile
50 55 60
Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly
65 70 75 80
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile
85 90 95
Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp
100 105 110
Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His
115 120 125
Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg
130 135 140
Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys
145 150 155 160
Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu
165 170 175
Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr
180 185 190
Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu
195 200 205
Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp
210 215 220
Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val
225 230 235 240
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu
245 250 255
Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His
260 265 270
Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro
275 280 285
Gly Lys
290
<210> 2
<211> 290
<212> PRT
<213> Macaca fascicularis
<400> 2
Met Leu Gln Met Ala Arg Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His Asp Cys Lys Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Thr Pro
20 25 30
Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Met Thr Asn Ser Val
35 40 45
Lys Gly Met Asn Ala Ala Ser Gly Ala Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile
50 55 60
Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly
65 70 75 80
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile
85 90 95
Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp
100 105 110
Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His
115 120 125
Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg
130 135 140
Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys
145 150 155 160
Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu
165 170 175
Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr
180 185 190
Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu
195 200 205
Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp
210 215 220
Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val
225 230 235 240
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu
245 250 255
Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His
260 265 270
Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro
275 280 285
Gly Lys
290
<210> 3
<211> 304
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
20 25 30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser
35 40 45
Val Lys Gly Thr Asn Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His
50 55 60
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
65 70 75 80
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
85 90 95
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
100 105 110
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
115 120 125
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
130 135 140
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
145 150 155 160
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile
165 170 175
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
180 185 190
Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu
195 200 205
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
210 215 220
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
225 230 235 240
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
245 250 255
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
260 265 270
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
275 280 285
Ser Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu
290 295 300
<210> 4
<211> 303
<212> PRT
<213> Macaca fascicularis
<400> 4
Met Leu Gln Met Ala Arg Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His Asp Cys Lys Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Thr Pro
20 25 30
Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Met Thr Asn Ser Val
35 40 45
Lys Gly Met Asn Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr
50 55 60
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
65 70 75 80
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
85 90 95
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
100 105 110
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
115 120 125
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
130 135 140
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
145 150 155 160
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
165 170 175
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
180 185 190
Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
195 200 205
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
210 215 220
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
225 230 235 240
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
245 250 255
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
260 265 270
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser
275 280 285
Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu
290 295 300
<210> 5
<211> 227
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 6
<211> 306
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 6
Gln Ser Ile Lys Gly Asn His Leu Val Lys Val Tyr Asp Tyr Gln Glu
1 5 10 15
Asp Gly Ser Val Leu Leu Thr Cys Asp Ala Glu Ala Lys Asn Ile Thr
20 25 30
Trp Phe Lys Asp Gly Lys Met Ile Gly Phe Leu Thr Glu Asp Lys Lys
35 40 45
Lys Trp Asn Leu Gly Ser Asn Ala Lys Asp Pro Arg Gly Met Tyr Gln
50 55 60
Cys Lys Gly Ser Gln Asn Lys Ser Lys Pro Leu Gln Val Tyr Tyr Arg
65 70 75 80
Met Cys Gln Asn Cys Ile Glu Leu Asn Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly
85 90 95
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
100 105 110
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
115 120 125
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
130 135 140
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
145 150 155 160
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
165 170 175
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu
180 185 190
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys
195 200 205
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
210 215 220
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
225 230 235 240
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
245 250 255
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
260 265 270
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
275 280 285
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
290 295 300
Gly Lys
305
<210> 7
<211> 306
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 7
Gln Ser Ile Lys Gly Asn His Leu Val Lys Val Tyr Asp Tyr Gln Glu
1 5 10 15
Asp Gly Ser Val Leu Leu Thr Cys Asp Ala Glu Ala Lys Asn Ile Thr
20 25 30
Trp Phe Lys Asp Gly Lys Met Ile Gly Phe Leu Thr Glu Asp Lys Lys
35 40 45
Lys Trp Asn Leu Gly Ser Asn Ala Lys Asp Pro Arg Gly Met Tyr Gln
50 55 60
Cys Lys Gly Ser Gln Asn Lys Ser Lys Pro Leu Gln Val Tyr Tyr Arg
65 70 75 80
Met Cys Gln Asn Cys Ile Glu Leu Asn Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly
85 90 95
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
100 105 110
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
115 120 125
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
130 135 140
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
145 150 155 160
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
165 170 175
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu
180 185 190
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys
195 200 205
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
210 215 220
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
225 230 235 240
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
245 250 255
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
260 265 270
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
275 280 285
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
290 295 300
Gly Lys
305
<210> 8
<211> 305
<212> PRT
<213> Macaca fascicularis
<400> 8
Gln Ser Phe Glu Glu Asn Arg Lys Leu Asn Val Tyr Asn Gln Glu Asp
1 5 10 15
Gly Ser Val Leu Leu Thr Cys His Val Lys Asn Thr Asn Ile Thr Trp
20 25 30
Phe Lys Glu Gly Lys Met Ile Asp Ile Leu Thr Ala His Lys Asn Lys
35 40 45
Trp Asn Leu Gly Ser Asn Thr Lys Asp Pro Arg Gly Val Tyr Gln Cys
50 55 60
Lys Gly Ser Lys Asp Lys Ser Lys Thr Leu Gln Val Tyr Tyr Arg Met
65 70 75 80
Cys Gln Asn Cys Ile Glu Leu Asn Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
85 90 95
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
100 105 110
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
115 120 125
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
130 135 140
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
145 150 155 160
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
165 170 175
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys
180 185 190
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
195 200 205
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
210 215 220
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
225 230 235 240
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
245 250 255
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
260 265 270
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
275 280 285
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
290 295 300
Lys
305
<210> 9
<211> 330
<212> PRT
<213> Macaca fascicularis
<400> 9
Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Ser Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Gln
1 5 10 15
Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys Ser Gln His Leu
20 25 30
Gly Ser Glu Ala Gln Trp Gln His Asn Gly Lys Asn Lys Glu Asp Ser
35 40 45
Gly Asp Arg Leu Phe Leu Pro Glu Phe Ser Glu Met Glu Gln Ser Gly
50 55 60
Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Asn Pro Glu Asp Ala Ser His
65 70 75 80
His Leu Tyr Leu Lys Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp
85 90 95
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
100 105 110
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
115 120 125
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
130 135 140
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
145 150 155 160
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
165 170 175
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
180 185 190
Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
195 200 205
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu
210 215 220
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
225 230 235 240
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
245 250 255
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
260 265 270
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
275 280 285
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
290 295 300
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser Gly Leu Asn Asp Ile
305 310 315 320
Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu
325 330
<210> 10
<211> 122
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ala Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Gln Ile Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Val Gly Phe Val Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 11
<211> 366
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 11
gagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60
tcctgcaagg cttctgggta tatcttcaca aactttggaa tgaactgggt gaggcaggct 120
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ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctacat atttctgtgc aagaggggag 300
atctactatg gttacgacgt gggctttgtt tactggggcc aagggactct ggtcactgtc 360
tctgca 366
<210> 12
<211> 6
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 12
Thr Asn Phe Gly Met Asn
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 13
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Gln Ile Tyr Ala Asp Asp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 14
<211> 13
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 14
Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Val Gly Phe Val Tyr
1 5 10
<210> 15
<211> 111
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 15
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asp Leu Glu Ser Gly Val Ser Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
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100 105 110
<210> 16
<211> 333
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 16
gatattgtgc taactcagtc tcctgcttcc ttaactgtat ctctggggca gagggccacc 60
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<211> 15
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 17
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 18
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 18
Leu Ala Ser Asp Leu Glu Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 19
Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 20
<211> 111
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 20
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Ile Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Thr Thr Ser
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Gly Tyr Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 21
gacattgtgc taacacagtc tcctgcttcc ttagctatat ctctggggca gagggccacc 60
atctcatgca gggccagcaa aagtgtcact acatctggct atagttatat acactggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc ttgcatccga cctagaagct 180
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<211> 15
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 22
Arg Ala Ser Lys Ser Val Thr Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Ile His
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<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 23
Leu Ala Ser Asp Leu Glu Ala
1 5
<210> 24
<211> 118
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 24
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
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Val Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Thr Ile Pro Tyr Thr Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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Ala Arg Tyr Asp Phe Asp Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 25
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<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 25
caggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaatttg 60
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<211> 6
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 26
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1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> Mus musculus
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Ala
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<213> Mus musculus
<400> 28
Tyr Asp Phe Asp Gly Tyr Phe Asp Tyr
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<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 29
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1 5 10 15
Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
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<211> 336
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 30
gatattgtga tgactcaggc tgcattctcc aatccagtca ctcttggaac atcagcttcc 60
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<211> 16
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 31
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr
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<210> 32
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<213> Mus musculus
<400> 32
Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 33
<211> 9
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 33
Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 34
<211> 122
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 34
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
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Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Asp Leu Ile Tyr Gly Asp Asp Phe
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65 70 75 80
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<210> 35
<211> 366
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 35
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<213> Mus musculus
<400> 36
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Gly
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<211> 13
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 37
Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Val Gly Phe Ala Tyr
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<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 38
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 39
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Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 41
<211> 122
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 41
Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
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Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Asp Asp Phe
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65 70 75 80
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Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Phe Asp Val Gly Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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<210> 42
<211> 366
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 42
gagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60
tcctgcaagg cttctgggta tattttcaca aactttggaa tgaactgggt gaggcagact 120
ccaggaaagg ctttaaagtg gatgggctgg ataaacacct acactggaga aacaatatat 180
gctgatgact tcaagggact atttgccttc tctttggaag tgcctgccag cactgcctat 240
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tctgca 366
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<211> 17
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<213> Mus musculus
<400> 43
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Asp Asp Phe Lys
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Gly
<210> 44
<211> 13
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<400> 44
Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Phe Asp Val Gly Phe Ala Tyr
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<210> 45
<211> 111
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<213> Mus musculus
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Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly
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Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
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<211> 333
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 46
gacattgtgc taacacagtc tcctgcttcc ttaactgtat ctctggggca gagggccacc 60
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cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcaac acagtaggga acttccgtgg 300
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<211> 15
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 47
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<210> 48
<211> 122
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 48
Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
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Thr Val Lys Ile Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ala Leu Arg Trp Met
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100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 49
<211> 366
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 49
gagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60
tcctgcacgg cttctgggta taccttcaca aactttggaa tgaactgggt gaggcaggct 120
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atctactatg gttacgacgt gggctttgtt tattggggcc aagggactct ggtcactgtc 360
tctgca 366
<210> 50
<211> 17
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 50
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Asp Gln Ile Tyr Ala Asp Asp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 51
<211> 111
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 51
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
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65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 52
<211> 333
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 52
gacattgtgc taacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60
atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct atagttatat gcactggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc ttgcatccaa cctagaatct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga gcttccgtgg 300
acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaata aaa 333
<210> 53
<211> 113
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 53
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Thr Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Arg Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Glu Ala Lys Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Asn Ala Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Glu Glu Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ala
<210> 54
<211> 339
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 54
gaggttcagc tccagcagtc tgggactgtg ctgacaaggc ctggggcttc cgtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta cagcttttcc agctactgga tgcactggct aaaacagagg 120
cctggacagg gtctagaatg gattggtgct atttatcctg gaaatagtcg tactacctac 180
aaccagaagt tcaagggcga ggccaaactg actgcggaca cttccgccag cactgcctac 240
atggacctca gcagcctgac aaatgccgac tctgcggtct atttctgtac aagagaggag 300
acttactggg gccaagggac tctggtcact gtctctgca 339
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<211> 6
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 55
Ser Ser Tyr Trp Met His
1 5
<210> 56
<211> 17
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 56
Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Arg Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 57
<211> 6
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 57
Thr Arg Glu Glu Thr Tyr
1 5
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<211> 112
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 58
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Gly Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Tyr Gly Val Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Phe Gln Arg Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Glu Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Ser His Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
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<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 59
gatgttgtga tgacccagac tccactctct ttgtcggtta ccattggaca accagcctcc 60
atctcttgca agtcaagtca gggcctctta gatagttatg gagtgacata tttgaattgg 120
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tctggagtcc ctgacaggtt cactggcagt ggatcaggga cagatttcac actgagaatc 240
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ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaa 336
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<211> 16
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 60
Lys Ser Ser Gln Gly Leu Leu Asp Ser Tyr Gly Val Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 61
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 61
Leu Val Ser Glu Leu Asp Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 62
Trp Gln Gly Ser His Phe Pro Leu Thr
1 5
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<211> 122
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 63
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Arg Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Arg Ile Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Val Gly Phe Val Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
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<211> 366
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 64
gaggtccagt tgcagcagtc tggacctgag ctgaggaagc ctggagagac agtcaagatc 60
tcctgcaagg cttctgggta taccttcaca aactatggaa tgaactgggt gaagcagact 120
ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacacct acactggaga acgaatatat 180
gctgatgact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgcctat 240
ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctacat atttctgtgc aagaggggag 300
atctactatg gttacgacgt gggctttgtt tactggggcc aagggactct ggtcactgtc 360
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Thr Asn Tyr Gly Met Asn
1 5
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<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 66
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Arg Ile Tyr Ala Asp Asp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
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<211> 111
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 67
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Val Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
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Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
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<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 68
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagttgtat ctctggggca gagggccacc 60
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caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc ttgcatccaa cctagaatct 180
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cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga gcttccgtgg 300
acgttcggtg gaggcaccag actggaaata aaa 333
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<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 69
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
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Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
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Ala Arg Ser Tyr Tyr Arg Asn Asp Ala Ala Ser Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
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<211> 363
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 70
caggtccagc tgcagcagtc tggagctgag ctggtaaggc ctgggacttc agtgaagatg 60
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cctggacatg gccttgagtg gattggagat atttaccctg gaagtggtga tactaattac 180
aatgggaagt tcaagggcaa ggccacactg gctgcagaca tttcctccaa cgcagcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgccatct attactgtgc aagaagctac 300
tataggaacg acgcggcctc atttgcttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360
gca 363
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<400> 71
Thr Asn Tyr Trp Ile Gly
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 72
Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 73
<211> 12
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 73
Ser Tyr Tyr Arg Asn Asp Ala Ala Ser Phe Ala Tyr
1 5 10
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<211> 107
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 74
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Asn Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ser Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Ser Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
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<212> DNA
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<400> 75
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcaac 60
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cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattagcaa tgtgcagtct 240
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<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 76
Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala Val Ala
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 77
Trp Thr Ser Thr Arg His Thr
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 78
Gln Gln Phe Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
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<211> 122
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 79
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ala Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Gln Ile Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
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Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Val Gly Phe Val Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
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<211> 366
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 80
gaggtccagt tgcagcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60
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atctactatg gttacgacgt gggctttgtt tactggggcc aagggactct ggtcactgtc 360
tctgca 366
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<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 81
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Gly Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asp Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
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<211> 333
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 82
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttaactgtat ctctggggca gagggccacc 60
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<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 83
Gly Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 84
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 84
Leu Gly Ser Asp Leu Glu Ser
1 5
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<211> 111
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 85
Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
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20 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Glu Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
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Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Glu
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Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
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<211> 333
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 86
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acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 333
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<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 87
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Ser Gly Asn Ser Phe Met His
1 5 10 15
<210> 88
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 88
Leu Glu Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 89
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Trp Thr
1 5
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<211> 111
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 90
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Gly Tyr Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asp Leu Glu Ala Gly Val Pro Ala
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Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
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Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 91
<211> 333
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 91
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acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaata aaa 333
<210> 92
<211> 15
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 92
Arg Ala Ser Arg Ser Val Thr Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Ile His
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<210> 93
<211> 109
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 93
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
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Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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<210> 94
<211> 327
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 94
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 95
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1 5 10
<210> 96
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 96
Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
1 5
<210> 97
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 97
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val
1 5
<210> 98
<211> 109
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 98
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 99
<211> 327
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 99
caggctgtgg tcacacaaga gcctagcctg acagtgtctc ctggcggcac agtgaccctg 60
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aagcccggcc aggctcctag aggactgatc ggcggaacaa acaagagagc cccttggaca 180
cccgccagat tctctggatc tctgctcggc ggaaaggccg ctctgacact ttctggtgct 240
cagcctgagg acgaggccga gtactattgt gccctgtggt acagcaacct gtgggtgttc 300
ggcggaggca ccaaactgac agttctg 327
<210> 100
<211> 109
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 100
Glu Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Glu Ser Ser Asp Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 101
<211> 327
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 101
gaggctgtgg tcacacaaga gcctagcctg acagtgtctc ctggcggcac agtgaccctg 60
acctgtgagt cttctgacgg cgccgtgacc accagcaact acgctaattg ggtgcaggag 120
aagcccggcc aggctcctag aggactgatc ggcggaacaa acaaggaggc cccttggaca 180
cccgccagat tctctggatc tctgctcggc ggaaaggccg ctctgacact ttctggtgct 240
cagcctgagg acgaggccga gtactattgt gccctgtggt acagcaacct gtgggtgttc 300
ggcggaggca ccaaactgac agttctg 327
<210> 102
<211> 13
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 102
Ser Ser Asp Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn
1 5 10
<210> 103
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 103
Gly Gly Thr Asn Lys Glu Ala Pro
1 5
<210> 104
<211> 109
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 104
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Glu Ser Ser Asp Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Glu Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
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Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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<210> 105
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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His Gly Asn Phe Gly Gln Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr
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<213> Homo sapiens
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<211> 375
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 127
gaggtgcagc tggttgaatc tggcggagga ctggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
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<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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<211> 375
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<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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1 5
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<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
<400> 142
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<210> 143
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 143
gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60
atcacctgtc aggccagcca ggatgtggat acagccgtgg cctggtatca gaagaagcct 120
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agattcagcg gctctggctc tggcaccgac ttcaccttca caatcagcag cctgcagcct 240
gaggatatcg ctacctactt ctgccagcag ttcagcagct accctctgac attcggccag 300
ggcaccaagg tggaaatcaa g 321
<210> 144
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 144
Gln Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 145
<211> 121
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 145
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Ile Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Tyr Arg Asn Asp Ala Ala Ser Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 146
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 146
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agt 363
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 147
Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 148
<211> 111
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 148
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
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100 105 110
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<211> 333
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 149
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<211> 122
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 150
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe
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Gly Met Asn Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Val Gly Phe Val Tyr Trp
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115 120
<210> 151
<211> 366
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 151
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<211> 111
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 152
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Ser Val Thr Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
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<211> 333
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 153
gacatcgtgc tgacacagag ccctgcttct ctggctgtgt ctcctggcca gagagccacc 60
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 154
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
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Gly Met Asn Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 155
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<213> Homo sapiens
<400> 156
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
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Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
<400> 158
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<211> 366
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 159
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<213> Homo sapiens
<400> 160
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
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<211> 333
<212> DNA
<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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115 120
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<211> 366
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 163
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<213> Homo sapiens
<400> 164
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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<210> 167
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 167
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<213> Homo sapiens
<400> 168
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1 5 10 15
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100 105 110
<210> 169
<211> 333
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 169
gacatcgtgc tgacacagag ccctgcttct ctggctgtgt ctcctggcca gagagccacc 60
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<400> 170
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<211> 366
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 171
caggttcagc tggtgcagtc tggcagcgag ctgaagaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60
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agctct 366
<210> 172
<211> 218
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 172
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
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<210> 173
<211> 654
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 173
gacatcgtgc tgacacagag ccctgcttct ctggctgtgt ctcctggcca gagagccacc 60
atcacctgta gagccagcaa gagcgtgtcc accagcggct actcttacat gcactggtat 120
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<211> 449
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 174
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Gln Ile Tyr Ala Asp Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Val Gly Phe Val Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr
210 215 220
Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Ala Ser Ser Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
Lys
<210> 175
<211> 1347
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 175
caggttcagc tggtgcagtc tggcagcgag ctgaagaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ctagcggcta catcttcacc aacttcggca tgaactgggt ccgagaggct 120
cctggacagg gactcgaatg gatgggctgg atcaacacct acaccggcga gcagatctac 180
gccgatggct tcacaggcag attcgtgttc agcctggaca ccagcgccag cacagcttac 240
ctgcagatca gctctctgaa ggccgaggat accgccgtgt acttctgtgc cagaggcgag 300
atctactacg gctacgacgt gggctttgtg tactggggcc agggaacact ggtcaccgtt 360
agctctgcta gcaccaaggg ccccagcgtg ttccccctgg ccccttgcag cagaagcacc 420
agcgagagca cagccgccct gggctgcctg gtgaaggact acttccccga gcccgtgacc 480
gtgtcctgga acagcggcgc tctgaccagc ggcgtgcata ccttccccgc cgtgctccag 540
agcagcggac tgtactccct gagcagcgtg gtgaccgtgc cttccagcag cctgggcacc 600
aagacctaca cctgcaacgt ggaccacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtg 660
gagagcaagt acggccctcc ctgcccccct tgccctgccc ccgagttcga gggcggacct 720
agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagcag aacccccgag 780
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccag gaggaccccg aggtccagtt taattggtac 840
gtggacggcg tggaagtgca taacgccaag accaagccca gagaggagca gttcaacagc 900
acctacagag tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggaa 960
tacaagtgca aggtctccaa caagggcctg gccagcagca tcgagaagac catcagcaag 1020
gccaagggcc agccacggga gccccaggtc tgcaccctgc cacctagcca agaggagatg 1080
accaagaacc aggtgtccct gagctgtgcc gtgaaaggct tctatcccag cgatatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1200
gacagcgacg gcagcttctt cctggtttcc aagctgaccg tggacaagtc cagatggcag 1260
gagggcaacg tcttcagctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
aagtccctga gcctgagcct gggcaag 1347
<210> 176
<211> 218
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 176
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Thr Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asp Leu Glu Ala Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Glu Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 177
<211> 654
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 177
gacatcgtgc tgacacagag ccctgcttct ctggctgtgt ctcctggcca gagagccacc 60
atcacctgta gagccagcaa gagcgtgacc accagcggct actcttacat ccactggtat 120
cagaagaagc ccggccagcc tcctaagctg ctgatctacc tggccagcga tctggaagct 180
ggcgtgccag ctagattttc tggcagcggc tctggcaccg acttcaccct gacaatcaac 240
cccgtggaag ccgaagacac cgccaactac tactgccagc acagcagaga gctgccctgg 300
acatttggcc agggcaccaa ggtggaaatc aagcgaactg tggctgcacc atctgtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654
<210> 178
<211> 449
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 178
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Gln Ile Tyr Ala Asp Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Val Gly Phe Val Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr
210 215 220
Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Ala Ser Ser Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
Lys
<210> 179
<211> 1347
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 179
caggttcagc tggtgcagtc tggcagcgag ctgaagaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ctagcggcta catcttcacc aacttcggca tgaactgggt ccgagaggct 120
cctggacagg gactcgaatg gatgggctgg atcaacacct acaccggcga gcagatctac 180
gccgatggct tcacaggcag attcgtgttc agcctggaca ccagcgtcag cacagcttac 240
ctgcagatca gctctctgaa ggccgaggat accgccgtgt acttctgtgc cagaggcgag 300
atctactacg gctacgacgt gggctttgtg tactggggcc agggaacact ggtcaccgtt 360
agctctgcta gcaccaaggg ccccagcgtg ttccccctgg ccccttgcag cagaagcacc 420
agcgagagca cagccgccct gggctgcctg gtgaaggact acttccccga gcccgtgacc 480
gtgtcctgga acagcggcgc tctgaccagc ggcgtgcata ccttccccgc cgtgctccag 540
agcagcggac tgtactccct gagcagcgtg gtgaccgtgc cttccagcag cctgggcacc 600
aagacctaca cctgcaacgt ggaccacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtg 660
gagagcaagt acggccctcc ctgcccccct tgccctgccc ccgagttcga gggcggacct 720
agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagcag aacccccgag 780
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccag gaggaccccg aggtccagtt taattggtac 840
gtggacggcg tggaagtgca taacgccaag accaagccca gagaggagca gttcaacagc 900
acctacagag tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggaa 960
tacaagtgca aggtctccaa caagggcctg gccagcagca tcgagaagac catcagcaag 1020
gccaagggcc agccacggga gccccaggtc tgcaccctgc cacctagcca agaggagatg 1080
accaagaacc aggtgtccct gagctgtgcc gtgaaaggct tctatcccag cgatatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1200
gacagcgacg gcagcttctt cctggtttcc aagctgaccg tggacaagtc cagatggcag 1260
gagggcaacg tcttcagctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
aagtccctga gcctgagcct gggcaag 1347
<210> 180
<211> 215
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 180
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105 110
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu
115 120 125
Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro
130 135 140
Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala
145 150 155 160
Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala
165 170 175
Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg
180 185 190
Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr
195 200 205
Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 181
<211> 645
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 181
caggctgtgg tcacacaaga gcctagcctg acagtgtctc ctggcggcac agtgaccctg 60
acctgtagat cttctacagg cgccgtgacc accagcaact acgctaattg ggtgcaggag 120
aagcccggcc aggctcctag aggactgatc ggcggaacaa acaagagagc cccttggaca 180
cccgccagat tctctggatc tctgctcggc ggaaaggccg ctctgacaat cactggtgct 240
caggctgagg acgaggccga gtactattgt gtgctgtggt acagcaacct gtgggtgttc 300
ggcggaggca ccaaactgac agttctgggt cagcccaagg cggcgccctc ggtcactctg 360
ttcccgccct cctctgagga gcttcaagcc aacaaggcca cactggtgtg tctcataagt 420
gacttctatc cgggagccgt gacagtggcc tggaaggcag atagcagccc cgtcaaggcg 480
ggagtggaga ccaccacacc ctccaaacaa agcaacaaca agtacgcggc cagcagctac 540
ctgagcctga cgcctgagca gtggaagtcc cacagaagct acagctgcca ggtcacgcat 600
gaagggagca ccgtggagaa gacagtggcc cctacagaat gttca 645
<210> 182
<211> 452
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 182
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
130 135 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195 200 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Ala Ser Ser
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Gly Lys
450
<210> 183
<211> 1356
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 183
gaggtgcagc tggttgaatc tggcggagga ctggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg ccagcggctt caccttcaac acctacgcta tgaactgggt ccgaaaggcc 120
cctggcaaag gactggaatg ggtgggaaga atcaggtcca agtacaacaa ctacgccacc 180
tactacgccg acagcgtgaa ggacagattc accatcagca gggacgacag caagaacagc 240
ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacaccg ccgtgtacta ctgtgtcaga 300
cacggcaact tcggcaacag ctatgtgtct tggtttgcct actggggcca gggcacactg 360
gtcacagtta gctctgctag caccaagggc cccagcgtgt tccccctggc cccttgcagc 420
agaagcacca gcgagagcac agccgccctg ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag 480
cccgtgaccg tgtcctggaa cagcggcgct ctgaccagcg gcgtgcatac cttccccgcc 540
gtgctccaga gcagcggact gtactccctg agcagcgtgg tgaccgtgcc ttccagcagc 600
ctgggcacca agacctacac ctgcaacgtg gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac 660
aagagagtgg agagcaagta cggccctccc tgcccccctt gccctgcccc cgagttcgag 720
ggcggaccta gcgtgttcct gttccccccc aagcccaagg acaccctgat gatcagcaga 780
acccccgagg tgacctgcgt ggtggtggac gtgtcccagg aggaccccga ggtccagttt 840
aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcat aacgccaaga ccaagcccag agaggagcag 900
ttcaacagca cctacagagt ggtgtccgtg ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac 960
ggcaaggaat acaagtgcaa ggtctccaac aagggcctgg ccagcagcat cgagaagacc 1020
atcagcaagg ccaagggcca gccacgggag ccccaggtct acaccctgcc accttgtcaa 1080
gaggagatga ccaagaacca ggtgtccctg tggtgtctgg tgaaaggctt ctatcccagc 1140
gatatcgccg tggagtggga gagcaacggc cagcccgaga acaactacaa gaccaccccc 1200
cctgtgctgg acagcgacgg cagcttcttc ctgtactcca agctgaccgt ggacaagtcc 1260
agatggcagg agggcaacgt cttcagctgc tccgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 1320
tacacccaga agtccctgag cctgagcctg ggcaag 1356

Claims (16)

1.一种双特异性抗体或其抗原结合部分，其包含：
(a)结合到靶细胞表面上的BCMA抗原的第一抗原结合部分或其抗原结合片段，所述第一抗原结合部分包含第一重链和第一轻链，所述第一抗原结合部分包含与第一抗原结合的第一结合结构域，其中，所述第一结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14、26、27、28、36、37、43、44、50、55、56、57、65、66、71、72、73、147或其任何变体的重链CDR，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO:17、18、19、22、23、31、32、33、40、47、60、61、62、76、77、78、83、84、87、88、89、92、144或任何变体的轻链CDR；和
(b)结合到T细胞表面上的CD3抗原的第二抗原结合部分或其抗原结合片段，所述第二抗原结合部分包含第二重链和第二轻链，所述第二抗原结合部分包含与第二抗原结合的第二结合结构域。
2.根据权利要求1的双特异性抗体或其抗原结合部分，其中，所述第一结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:12、26、55、65、71或其任何变体的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:13、27、36、43、50、56、66、72、147或其任何变体的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQID NO:14、28、37、44、57、73或其任何变体的重链CDR3；和/或所述第一结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:17、22、31、47、60、76、83、87、92、144或其任何变体的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:18、23、32、40、61、77、84、88或其任何变体的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO:19、33、62、78、89或其任何变体的轻链CDR3。
3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体或其抗原结合部分，其中，
所述第一结合结构域的重链CDR1、CDR2及CDR3序列选自：氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:26、27、28的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:12、36、37的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:12、43、44的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ IDNO:12、50、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:55、56、57的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:65、66、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:71、72、73的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列；氨基酸序列SEQ IDNO:71、147、73的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列；和所述第一结合结构域的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列选自：氨基酸序列SEQ ID NO:17、18、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:22、23、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:31、32、33的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:17、40、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:47、18、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:60、61、62的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ IDNO:76、77、78的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:83、84、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:87、88、89的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:92、23、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ IDNO:144、77、78的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:17、18、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:22、23、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:26、27、28的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:31、32、33的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、36、37的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:17、40、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、43、44的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:47、18、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、50、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:17、40、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:55、56、57的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:60、61、62的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:17、40、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:65、66、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:17、40、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:71、72、73的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:76、77、78的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:83、84、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:87、88、89的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:12、13、14的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:92、23、19的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:71、147、73的第一重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:144、77、78的第一轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。
4.根据权利要求1-3任一项所述的双特异性抗体或其抗原结合部分，其中，所述第一结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:10、24、34、41、48、53、63、69、79、145、150、154、158、162、166、170或其任何变体的第一重链可变区，和/或包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:15、20、29、38、45、51、58、67、74、81、85、90、142、148、152、156、160、164、168或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:10或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:15或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:10或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:20或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:24或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:29或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:34或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:38或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:41或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:45或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:48或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:51或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:53或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:58或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:10或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:38或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:63或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:67或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:69或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:74或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:79或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:81或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:10或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:85或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:10或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:90或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:145或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:142或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:150或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:148或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:154或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:152或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:158或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:156或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:162或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:160或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:166或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:164或其任何变体的第一轻链可变区；
优选地，所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:170或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:168或其任何变体的第一轻链可变区。
5.根据权利要求1-4任一项所述的双特异性抗体或其抗原结合部分，其中，所述第二结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:114、115、116、119、122、125、128、131、134、135或其任何变体的重链CDR；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO:95、96、97、102、103、108、111或其任何变体的轻链CDR；
优选地，所述第二结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:114、119、134或其任何变体的第二重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:115、135或其任何变体的第二重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO:116、122、125、128、131或其任何变体的第二重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO:95、102或其任何变体的第二轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ IDNO:96、103、111或其任何变体的第二轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO:91、108或其任何变体的第二轻链CDR3；
优选地，所述第二结合结构域的重链CDR1、CDR2及CDR3序列选自：氨基酸序列SEQ IDNO:114、115、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:119、115、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:119、115、122的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:119、115、125的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:119、115、128的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ IDNO:119、115、131的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:134、135、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列；和所述第二结合结构域的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列选自：氨基酸序列SEQ ID NO:95、96、97的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ IDNO:102、103、97的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:95、96、108的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列，氨基酸序列SEQ ID NO:95、111、108的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
更优选地，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:114、115、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:95、96、97的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
更优选地，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:114、115、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:102、103、97的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
更优选地，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:114、115、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:95、96、108的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
更优选地，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:114、115、116的第二重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:95、111、108的第二轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；
优选地，所述第二结合结构域包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:112、117、120、123、126、129、132、136、138、140或其任何变体的第二重链可变区，和/或包含选自氨基酸序列SEQ IDNO:93、98、100、104、106、109或其任何变体的第二轻链可变区；
更优选地，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:136或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:93或其任何变体的第二轻链可变区；
更优选地，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:93或其任何变体的第二轻链可变区；
更优选地，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:98或其任何变体的第二轻链可变区；
更优选地，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:100或其任何变体的第二轻链可变区；
更优选地，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:112或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区；
更优选地，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:136或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区；
更优选地，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区。
6.根据权利要求1-5任一项所述的双特异性抗体或其抗原结合部分，其中，所述第一抗原结合部分的所述第一轻链为κ型轻链，所述第二抗原结合部分的所述第二轻链为λ型轻链，
优选地，所述第二抗原结合部分的第二轻链可变区具有Gln40Glu突变(VλCD3:Gln40Glu)；所述第二抗原结合部分的第二重链可变区具有Gln39Lys突变(VHCD3:Gln39Lys)；
所述第一抗原结合部分的第一轻链可变区具有Gln42Lys突变(VκBCMA:Gln42Lys)；更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区具有Gln39Glu突变(VHBCMA:Gln39Glu)；
优选地，所述双特异抗体的第一抗原结合部分和第二抗原结合部分的Fc部分采用knob-into-hole结构；优选地，采用人IgG4 knob-into-hole结构。
7.根据权利要求1-6任一项所述的双特异性抗体或其抗原结合部分，其中，所述第一重链包含选自SEQ ID NO:174、178或其任何变体的重链，所述第一轻链包含选自SEQ ID NO:172、176或其任何变体的轻链；
优选地，所述第一重链包含选自SEQ ID NO:174或其任何变体的重链，所述第一轻链包含选自SEQ ID NO:172或其任何变体的轻链；
优选地，所述第一重链包含选自SEQ ID NO:174或其任何变体的重链，所述第一轻链包含选自SEQ ID NO:176或其任何变体的轻链；
优选地，所述第一重链包含选自SEQ ID NO:178或其任何变体的重链，所述第一轻链包含选自SEQ ID NO:172或其任何变体的轻链；
优选地，所述第一重链包含选自SEQ ID NO:178或其任何变体的重链，所述第一轻链包含选自SEQ ID NO:176或其任何变体的轻链。
8.根据权利要求1-7任一项所述的双特异性抗体或其抗原结合部分，其中，所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区；
优选地，所述第二重链包含SEQ ID NO:182或其任何变体的重链，所述第二轻链包含SEQ ID NO:180或其任何变体的轻链；
优选地，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:145或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:142或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区；
优选地，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:150或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:148或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区；
优选地，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:154或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:152或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区；
优选地，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:158或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:156或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区；
优选地，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:162或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:160或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区；
优选地，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:166或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:164或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区；
优选地，所述双特异性抗体的所述第一结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:170或其任何变体的第一重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:168或其任何变体的第一轻链可变区；所述第二结合结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:138或其任何变体的第二重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO:106或其任何变体的第二轻链可变区；
更优选地，所述双特异性抗体的所述第一重链包含SEQ ID NO:174或其任何变体的重链，第一轻链包含SEQ ID NO:172或其任何变体的轻链；所述第二重链包含SEQ ID NO:182或其任何变体的重链，所述第二轻链包含SEQ ID NO:180或其任何变体的轻链；
更优选地，所述双特异性抗体的所述第一重链包含SEQ ID NO:174或其任何变体的重链，第一轻链包含SEQ ID NO:176或其任何变体的轻链；所述第二重链包含SEQ ID NO:182或其任何变体的重链，所述第二轻链包含SEQ ID NO:180或其任何变体的轻链；
更优选地，所述双特异性抗体的所述第一重链包含SEQ ID NO:178或其任何变体的重链，第一轻链包含SEQ ID NO:172或其任何变体的轻链；所述第二重链包含SEQ ID NO:182或其任何变体的重链，所述第二轻链包含SEQ ID NO:180或其任何变体的轻链；
更优选地，所述双特异性抗体的所述第一重链包含SEQ ID NO:178或其任何变体的重链，第一轻链包含SEQ ID NO:176或其任何变体的轻链；所述第二重链包含SEQ ID NO:182或其任何变体的重链，所述第二轻链包含SEQ ID NO:180或其任何变体的轻链。
9.一种结合BCMA的抗体或其抗原结合部分，所述抗体包含权利要求1-8中任一项所述的第一抗原结合部分。
10.编码根据1-8任一项所述的双特异性抗体或其抗原结合部分或权利要求9所述的结合BCMA的抗体或其抗原结合部分的核酸；
优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸选自核苷酸序列SEQ IDNO:11、25、35、42、49、54、64、70、80、146、151、155、159、163、167、171或其任何变体；和/或所述第一抗原结合部分的第一轻链可变区的编码核酸选自核苷酸序列SEQ ID NO:16、21、30、39、46、52、59、68、75、82、86、91、143、149、153、157、161、165、169或其任何变体；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:11；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:16；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:11；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:21；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:25；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:30；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:35；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:39；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:42；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:46；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:49；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:52；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:54；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:59；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:11；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:39；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:64；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:68；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:70；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:75；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:80；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:82；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:11；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:86；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:11；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:91；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:146；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:143；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:151；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:149；
更优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ IDNO:155；和所述第一轻链可变区的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:153；
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优选地，所述第一抗原结合部分的第一重链的编码核酸选自核苷酸序列SEQ ID NO:175、179或其任何变体；和/或所述第一抗原结合部分的第一轻链的编码核酸选自核苷酸序列SEQ ID NO:173、177或其任何变体；
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优选地，所述第二抗原结合部分的第二重链可变区的编码核酸选自核苷酸序列SEQ IDNO:113、118、121、124、127、130、133、137、139、141或其任何变体；和/或所述第二抗原结合部分的第二轻链可变区的编码核酸选自核苷酸序列SEQ ID NO:94、99、101、105、107、110或其任何变体；
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更优选地，所述双特异性抗体的所述第一抗原结合部分的第一重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:179，和所述第一抗原结合部分的第一轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQID NO:177，所述第二抗原结合部分的第二重链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:183，和所述第二抗原结合部分的第二轻链的编码核酸为核苷酸序列SEQ ID NO:181。
11.含有权利要求10所述核酸的载体。
12.含有权利要求9所述的核酸或权利要求11所述载体的细胞。
13.一种组合物，其包含权利要求1-8任一项所述的双特异性抗体或其抗原结合部分、权利要求9所述的结合BCMA的抗体或其抗原结合部分、权利要求10所述的核酸、权利要求11所述的载体和/或权利要求12所述的细胞。
14.一种抗体-药物偶联物，其包含共价附着至治疗部分的权利要求1-8任一项所述的双特异性抗体或其抗原结合部分或权利要求9所述的结合BCMA的抗体或其抗原结合部分；
优选地，所述治疗部分选自细胞毒性部分、化疗剂、细胞因子、免疫抑制剂、免疫刺激剂、裂解肽或放射性同位素；
优选地，所述细胞毒性部分选自以下：紫杉醇；细胞松弛素B；短杆菌肽D；溴化乙锭；吐根碱；丝裂霉素；依托泊苷；替尼泊苷；长春新碱；长春碱；秋水仙碱；多柔比星；柔红霉素；二羟基蒽二酮；微管蛋白抑制剂如美登素或其类似物或衍生物；抗有丝分裂剂如单甲基奥瑞他汀E或F或其类似物或衍生物；海兔毒素10或15或其类似物；伊立替康或其类似物；米托蒽醌；光辉霉素；放线菌素D；1-脱氢睾酮；糖皮质激素；普鲁卡因；丁卡因；利多卡因；普萘洛尔；嘌呤霉素；卡奇霉素或其类似物或衍生物；抗代谢药，如甲氨喋呤、6巯基嘌呤、6硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、氟达拉滨、5氟尿嘧啶、癸二嗪、羟基脲、天冬酰胺酶、吉西他滨或克拉屈滨；烷化剂，如二氯甲基二乙胺、硫代嘌呤、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)、洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、达卡巴嗪(DTIC)、丙卡巴嗪、丝裂霉素C；铂类衍生物，如顺铂或卡铂；多卡霉素A、多卡霉素SA、雷切霉素(CC-1065)或其类似物或衍生物；抗生素，如放线菌素、博来霉素、柔红霉素、多柔比星、伊达比星、光霉素、丝裂霉素、米托蒽醌、普力霉素、安定霉素(AMC)；吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮杂卓(PDB)；白喉毒素及相关分子如白喉A链及其活性片段和杂合分子、蓖麻毒素如蓖麻毒素A或去糖基化蓖麻毒素A链毒素、霍乱毒素、志贺样毒素如SLT I、SLT II、SLT IIV、LT毒素、C3毒素、志贺毒素、百日咳毒素、破伤风毒素、大豆Bowman-Birk蛋白酶抑制剂、假单胞菌外毒素、阿罗林、皂草素、蒴莲根毒素、胶凝蛋白、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-sarcin、油桐(Aleuritesfordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白如PAPI、PAPII和PAP-S、苦瓜(momordicacharantia)抑制剂、泻果素、巴豆毒素、肥阜草(sapaonaria officinalis)抑制剂、白树毒素、丝裂霉素、局限曲菌素、酚霉素和依诺霉素毒素；核糖核酸酶(RNase)；DNase I、葡萄球菌内毒素A；商陆抗病毒蛋白；白喉毒素和假单胞菌内毒素；
优选地，所述细胞因子选自IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-23、IL-24、IL-27、IL-28a、IL-28b、IL-29、KGF、IFNa、IFN3、IFNy、GM-CSF、CD40L、Flt3配体、干细胞因子、安西司亭和TNFa；
优选地，所述放射性同位素选自3H、14C、15N、35S、67Cu、90Y、99Tc、125I、131I、186Re、188Re、211At、212Bi、212Pb、213Bi、225Ac和227Th。
15.一种试剂盒，其含权利要求1-8任一项所述的特异性抗体或其抗原结合部分、权利要求9所述的结合BCMA的抗体或其抗原结合部分、权利要求10所述的核酸分子、权利要求11所述的载体、权利要求12所述的细胞、权利要求13所述的组合物和/或权利要求14的抗体-药物偶联物。
16.含权利要求1-8任一项所述的特异性抗体或其抗原结合部分、权利要求9所述的结合BCMA的抗体或其抗原结合部分、权利要求10所述的核酸分子、权利要求11所述的载体、权利要求12所述的细胞、权利要求13所述的组合物和/或权利要求14的抗体-药物偶联物在制备用于诊断、治疗或预防与BCMA相关的疾病的药物或试剂盒中的用途；
优选地，与BCMA相关的疾病包括B细胞疾病；
优选地，所述疾病是癌症；更优选地，所述癌症是B-细胞相关癌症，其选自多发性骨髓瘤、恶性浆细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、结节性淋巴细胞为主的霍奇金淋巴瘤、Kahler’s病和骨髓性白血病、浆细胞白血病、浆细胞瘤、B-细胞幼淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、B-细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性髓性白血病(CML)、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、前体B-淋巴细胞淋巴瘤、髓性白血病、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤、小细胞淋巴细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、血管内大B-细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、富含T细胞/组织细胞的大B-细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性皮肤弥漫性大B-细胞淋巴瘤(腿型)、老年人EBV阳性弥漫性大B-细胞淋巴瘤、炎症相关的弥漫性大B-细胞淋巴瘤、血管内大B-细胞淋巴瘤、ALK阳性大B-细胞淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、HHV8相关的多中心Castleman病中产生的大B-细胞淋巴瘤、未分类的具有弥漫性大B-细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤中间特征的B-细胞淋巴瘤、未分类的具有弥漫性大B-细胞淋巴瘤和经典霍奇金淋巴瘤中间特征的B-细胞淋巴瘤以及其他B-细胞相关淋巴瘤；
更优选地，所述B细胞疾病是B细胞障碍；优选地，浆细胞障碍选自：多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、浆细胞白血病、巨球蛋白血症、淀粉样变性、华氏巨球蛋白血症、孤立性骨浆细胞瘤、髓外浆细胞瘤、骨硬化性骨髓瘤、重链病、意义不明确的单克隆丙种球蛋白病以及郁积型多发性骨髓瘤；
所述疾病是自身免疫性病症，如系统性红斑性狼疮或类风湿性关节炎。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US7229619B1 (en) 2000-11-28 2007-06-12 Medimmune, Inc. Methods of administering/dosing anti-RSV antibodies for prophylaxis and treatment
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
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PT2489364E (pt) 2003-11-06 2015-04-16 Seattle Genetics Inc Compostos de monometilvalina conjugados com anticorpos
AU2005218642B2 (en) 2004-03-02 2011-04-28 Seagen Inc. Partially loaded antibodies and methods of their conjugation
ES2715776T3 (es) 2004-11-12 2019-06-06 Seattle Genetics Inc Auristatinas que tienen una unidad de ácido aminobenzoico en el extremo N
JP4658125B2 (ja) 2005-06-28 2011-03-23 パイオニア株式会社 放送受信装置、妨害検出装置および妨害検出方法
WO2007042261A2 (en) * 2005-10-11 2007-04-19 Micromet Ag Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof
WO2012059882A2 (en) 2010-11-05 2012-05-10 Rinat Neuroscience Corporation Engineered polypeptide conjugates and methods for making thereof using transglutaminase
EA033677B1 (ru) * 2011-05-21 2019-11-15 Macrogenics Inc Cd3-связывающие молекулы, способные к связыванию с cd3 человека и cd3, не являющимся человеческим
TWI679212B (zh) * 2011-11-15 2019-12-11 美商安進股份有限公司 針對ｂｃｍａ之e3以及ｃｄ３的結合分子
KR20210034032A (ko) 2018-07-19 2021-03-29 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 이중특이적 항-BCMA x 항-CD3 항체 및 이의 용도

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