EA045708B1 - Новые пептидные линкеры и конъюгаты на основе криптофицина, их получение и их терапевтическое применение - Google Patents
Новые пептидные линкеры и конъюгаты на основе криптофицина, их получение и их терапевтическое применение Download PDFInfo
- Publication number
- EA045708B1 EA045708B1 EA201992667 EA045708B1 EA 045708 B1 EA045708 B1 EA 045708B1 EA 201992667 EA201992667 EA 201992667 EA 045708 B1 EA045708 B1 EA 045708B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- alkyl
- group
- formula
- alkyl group
- antibody
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 15
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 2
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 743
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 338
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 212
- -1 homoselenocysteine Chemical compound 0.000 claims description 139
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 133
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 132
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 132
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 102
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 98
- PSNOPSMXOBPNNV-VVCTWANISA-N cryptophycin 1 Chemical compound C1=C(Cl)C(OC)=CC=C1C[C@@H]1C(=O)NC[C@@H](C)C(=O)O[C@@H](CC(C)C)C(=O)O[C@H]([C@H](C)[C@@H]2[C@H](O2)C=2C=CC=CC=2)C/C=C/C(=O)N1 PSNOPSMXOBPNNV-VVCTWANISA-N 0.000 claims description 70
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 60
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 60
- 229930188224 Cryptophycin Natural products 0.000 claims description 56
- 108010006226 cryptophycin Proteins 0.000 claims description 56
- PSNOPSMXOBPNNV-UHFFFAOYSA-N cryptophycin-327 Natural products C1=C(Cl)C(OC)=CC=C1CC1C(=O)NCC(C)C(=O)OC(CC(C)C)C(=O)OC(C(C)C2C(O2)C=2C=CC=CC=2)CC=CC(=O)N1 PSNOPSMXOBPNNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 56
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 48
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 claims description 41
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 38
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 38
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 34
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 claims description 34
- 229910006069 SO3H Inorganic materials 0.000 claims description 33
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 31
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 31
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 30
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 27
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical group 0.000 claims description 26
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 24
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 23
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 18
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 17
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 claims description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 16
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 15
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 14
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 claims description 13
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 claims description 11
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 11
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 125000004209 (C1-C8) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 10
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 claims description 10
- 125000005913 (C3-C6) cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 9
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 8
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 8
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 8
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 8
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 8
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- JFCBEFFZEOHJDG-MLWJPKLSSA-N (2s)-2,6-diamino-7-oxooctanoic acid Chemical compound CC(=O)C(N)CCC[C@H](N)C(O)=O JFCBEFFZEOHJDG-MLWJPKLSSA-N 0.000 claims description 7
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 7
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 claims description 7
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 claims description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 6
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 6
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 6
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 6
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 6
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 claims description 6
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 claims description 6
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 claims description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 5
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000006929 Pictet-Spengler synthesis reaction Methods 0.000 claims description 5
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 claims description 5
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 5
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 5
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 claims description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 5
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 4
- 125000000229 (C1-C4)alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000006272 (C3-C7) cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- WAMWSIDTKSNDCU-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-2-cyclohexylacetate Chemical compound OC(=O)C(N)C1CCCCC1 WAMWSIDTKSNDCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N L-alpha-phenylglycine zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 4
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 claims description 4
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 4
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 claims description 4
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 4
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 claims description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 claims description 3
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 3
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 3
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 claims description 3
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 125000004043 oxo group Chemical group O=* 0.000 claims description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 3
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000002576 ketones Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims 9
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 claims 8
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 claims 8
- BDEGNHSSXDSZRQ-UHFFFAOYSA-N 4-amino-3,3-dimethylbutanoic acid Chemical compound NCC(C)(C)CC(O)=O BDEGNHSSXDSZRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 125000000882 C2-C6 alkenyl group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000004191 (C1-C6) alkoxy group Chemical group 0.000 claims 1
- 241001168730 Simo Species 0.000 claims 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 291
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Substances OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 223
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 176
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 129
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 127
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 104
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 99
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 95
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 95
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 92
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 86
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 85
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 85
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 79
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 74
- 239000002585 base Substances 0.000 description 65
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 62
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 57
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 56
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 55
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 52
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 52
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 50
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 49
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 46
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 46
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 44
- NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N palladium;triphenylphosphane Chemical compound [Pd].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 42
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 42
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 40
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 40
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 33
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 33
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 33
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 32
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 30
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 29
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 29
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 28
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 28
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 27
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 26
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 25
- 239000002966 varnish Substances 0.000 description 25
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 24
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 23
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 description 22
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 21
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 21
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 20
- VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N glutaric anhydride Chemical compound O=C1CCCC(=O)O1 VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 19
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 18
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 17
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 17
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 17
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 17
- AXKGIPZJYUNAIW-UHFFFAOYSA-N (4-aminophenyl)methanol Chemical compound NC1=CC=C(CO)C=C1 AXKGIPZJYUNAIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 16
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 16
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 15
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 15
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 14
- VCUXVXLUOHDHKK-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminopyrimidin-4-yl)-4-(2-chloro-4-methoxyphenyl)-1,3-thiazole-5-carboxamide Chemical compound ClC1=CC(OC)=CC=C1C1=C(C(N)=O)SC(C=2N=C(N)N=CC=2)=N1 VCUXVXLUOHDHKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 14
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 13
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 13
- 125000004269 oxiran-2-yl group Chemical group [H]C1([H])OC1([H])* 0.000 description 13
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- VYFOAVADNIHPTR-UHFFFAOYSA-N isatoic anhydride Chemical compound NC1=CC=CC=C1CO VYFOAVADNIHPTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 12
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 11
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 11
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 11
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 10
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 10
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 10
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 10
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 10
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 10
- 125000003161 (C1-C6) alkylene group Chemical group 0.000 description 9
- JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 2-methyltetrahydrofuran Chemical compound CC1CCCO1 JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 9
- HSRXSKHRSXRCFC-WDSKDSINSA-N Val-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HSRXSKHRSXRCFC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 9
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 9
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 9
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 9
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 9
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 9
- HNCSVMNWPGRJKP-UHFFFAOYSA-N (3-aminopyridin-2-yl)methanol Chemical compound NC1=CC=CN=C1CO HNCSVMNWPGRJKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VXHFPFMVXWCZLH-UHFFFAOYSA-N (3-aminopyridin-4-yl)methanol Chemical compound NC1=CN=CC=C1CO VXHFPFMVXWCZLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- TXPRFSOGPYITOT-UHFFFAOYSA-N (6-aminopyridin-3-yl)methanol Chemical compound NC1=CC=C(CO)C=N1 TXPRFSOGPYITOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- JDEYBJHOTWGYFE-UHFFFAOYSA-N 1-(4-aminophenyl)ethanol Chemical compound CC(O)C1=CC=C(N)C=C1 JDEYBJHOTWGYFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- PAQZWJGSJMLPMG-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-tripropyl-1,3,5,2$l^{5},4$l^{5},6$l^{5}-trioxatriphosphinane 2,4,6-trioxide Chemical compound CCCP1(=O)OP(=O)(CCC)OP(=O)(CCC)O1 PAQZWJGSJMLPMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WNBVEYMTVDMSFZ-UHFFFAOYSA-N 4-aminopyridine-3-methanol Chemical compound NC1=CC=NC=C1CO WNBVEYMTVDMSFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- GKQLYSROISKDLL-UHFFFAOYSA-N EEDQ Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)OCC)C(OCC)C=CC2=C1 GKQLYSROISKDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 101150042711 adc2 gene Proteins 0.000 description 8
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 8
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 8
- ACBQROXDOHKANW-UHFFFAOYSA-N bis(4-nitrophenyl) carbonate Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1OC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 ACBQROXDOHKANW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 8
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 8
- 125000001971 neopentyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 8
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FEIACFYXEWBKHU-UHFFFAOYSA-N (2-aminopyridin-3-yl)methanol Chemical compound NC1=NC=CC=C1CO FEIACFYXEWBKHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 7
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 7
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 7
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 7
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 7
- VVSASNKOFCZVES-UHFFFAOYSA-N 1,3-dimethyl-1,3-diazinane-2,4,6-trione Chemical compound CN1C(=O)CC(=O)N(C)C1=O VVSASNKOFCZVES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 6
- 101100434411 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) ADH1 gene Proteins 0.000 description 6
- 101150102866 adc1 gene Proteins 0.000 description 6
- 229960004217 benzyl alcohol Drugs 0.000 description 6
- KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N benzyl n-[(2r)-1-[(2s,4r)-2-[[(2s)-6-amino-1-(1,3-benzoxazol-2-yl)-1,1-dihydroxyhexan-2-yl]carbamoyl]-4-[(4-methylphenyl)methoxy]pyrrolidin-1-yl]-1-oxo-4-phenylbutan-2-yl]carbamate Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CO[C@H]1CN(C(=O)[C@@H](CCC=2C=CC=CC=2)NC(=O)OCC=2C=CC=CC=2)[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)(O)C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C1 KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N 0.000 description 6
- 229940125833 compound 23 Drugs 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 6
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 6
- GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N (1s,2s,3r,4r)-3-[[5-chloro-2-[(1-ethyl-6-methoxy-2-oxo-4,5-dihydro-3h-1-benzazepin-7-yl)amino]pyrimidin-4-yl]amino]bicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2-carboxamide Chemical compound CCN1C(=O)CCCC2=C(OC)C(NC=3N=C(C(=CN=3)Cl)N[C@H]3[C@H]([C@@]4([H])C[C@@]3(C=C4)[H])C(N)=O)=CC=C21 GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N 0.000 description 5
- JPJMNCROLRPFHI-QFIPXVFZSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoate Chemical compound O=C([C@@H](NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(C)C)ON1C(=O)CCC1=O JPJMNCROLRPFHI-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 5
- UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N 0.000 description 5
- VGYCIPORVJQZDT-YXCXXXRFSA-N (3s,10r,13e,16s)-16-[(1s)-1-[(2r,3r)-3-[4-(aminomethyl)phenyl]oxiran-2-yl]ethyl]-10-[(3-chloro-4-methoxyphenyl)methyl]-6,6-dimethyl-3-(2-methylpropyl)-1,4-dioxa-8,11-diazacyclohexadec-13-ene-2,5,9,12-tetrone Chemical compound C1=C(Cl)C(OC)=CC=C1C[C@@H]1C(=O)NCC(C)(C)C(=O)O[C@@H](CC(C)C)C(=O)O[C@H]([C@H](C)[C@@H]2[C@H](O2)C=2C=CC(CN)=CC=2)C/C=C/C(=O)N1 VGYCIPORVJQZDT-YXCXXXRFSA-N 0.000 description 5
- NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) carbonochloridate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(OC(Cl)=O)C=C1 NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VVCMGAUPZIKYTH-VGHSCWAPSA-N 2-acetyloxybenzoic acid;[(2s,3r)-4-(dimethylamino)-3-methyl-1,2-diphenylbutan-2-yl] propanoate;1,3,7-trimethylpurine-2,6-dione Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O.CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C.C([C@](OC(=O)CC)([C@H](C)CN(C)C)C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VVCMGAUPZIKYTH-VGHSCWAPSA-N 0.000 description 5
- GDUANFXPOZTYKS-UHFFFAOYSA-N 6-bromo-8-[(2,6-difluoro-4-methoxybenzoyl)amino]-4-oxochromene-2-carboxylic acid Chemical compound FC1=CC(OC)=CC(F)=C1C(=O)NC1=CC(Br)=CC2=C1OC(C(O)=O)=CC2=O GDUANFXPOZTYKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JQUCWIWWWKZNCS-LESHARBVSA-N C(C1=CC=CC=C1)(=O)NC=1SC[C@H]2[C@@](N1)(CO[C@H](C2)C)C=2SC=C(N2)NC(=O)C2=NC=C(C=C2)OC(F)F Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)(=O)NC=1SC[C@H]2[C@@](N1)(CO[C@H](C2)C)C=2SC=C(N2)NC(=O)C2=NC=C(C=C2)OC(F)F JQUCWIWWWKZNCS-LESHARBVSA-N 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000116710 Ferula foetidissima Species 0.000 description 5
- QTQUJRIHTSIVOF-UHFFFAOYSA-N amino(phenyl)methanol Chemical group NC(O)C1=CC=CC=C1 QTQUJRIHTSIVOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940125758 compound 15 Drugs 0.000 description 5
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 5
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- ISXSCDLOGDJUNJ-UHFFFAOYSA-N tert-butyl prop-2-enoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)C=C ISXSCDLOGDJUNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium fluoride Chemical compound [F-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 5
- KQZMZNLKVKGMJS-XOBRGWDASA-N (2s)-2-[[(2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 KQZMZNLKVKGMJS-XOBRGWDASA-N 0.000 description 4
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 4
- HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N (3r,4r)-3-azaniumyl-5-[[(2s,3r)-1-[(2s)-2,3-dicarboxypyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-oxo-4-sulfanylpentane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC[C@@H](N)[C@@H](S)C(=O)N[C@@H]([C@H](C)CC)C(=O)N1CCC(C(O)=O)[C@H]1C(O)=O HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N 0.000 description 4
- MPDDTAJMJCESGV-CTUHWIOQSA-M (3r,5r)-7-[2-(4-fluorophenyl)-5-[methyl-[(1r)-1-phenylethyl]carbamoyl]-4-propan-2-ylpyrazol-3-yl]-3,5-dihydroxyheptanoate Chemical compound C1([C@@H](C)N(C)C(=O)C2=NN(C(CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)=C2C(C)C)C=2C=CC(F)=CC=2)=CC=CC=C1 MPDDTAJMJCESGV-CTUHWIOQSA-M 0.000 description 4
- YQOLEILXOBUDMU-KRWDZBQOSA-N (4R)-5-[(6-bromo-3-methyl-2-pyrrolidin-1-ylquinoline-4-carbonyl)amino]-4-(2-chlorophenyl)pentanoic acid Chemical compound CC1=C(C2=C(C=CC(=C2)Br)N=C1N3CCCC3)C(=O)NC[C@H](CCC(=O)O)C4=CC=CC=C4Cl YQOLEILXOBUDMU-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 4
- RKQMHEDPXLDUJA-UHFFFAOYSA-N (5-aminopyridin-3-yl)methanol Chemical compound NC1=CN=CC(CO)=C1 RKQMHEDPXLDUJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KKHFRAFPESRGGD-UHFFFAOYSA-N 1,3-dimethyl-7-[3-(n-methylanilino)propyl]purine-2,6-dione Chemical compound C1=NC=2N(C)C(=O)N(C)C(=O)C=2N1CCCN(C)C1=CC=CC=C1 KKHFRAFPESRGGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WBIYLDMSLIXZJK-UHFFFAOYSA-N 1-(2-aminophenyl)ethanol Chemical compound CC(O)C1=CC=CC=C1N WBIYLDMSLIXZJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SHHIJGHJYYFDQH-UHFFFAOYSA-N 1-(2-aminopyridin-3-yl)ethanol Chemical compound CC(O)C1=CC=CN=C1N SHHIJGHJYYFDQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QXOGPTXQGKQSJT-UHFFFAOYSA-N 1-amino-4-[4-(3,4-dimethylphenyl)sulfanylanilino]-9,10-dioxoanthracene-2-sulfonic acid Chemical compound Cc1ccc(Sc2ccc(Nc3cc(c(N)c4C(=O)c5ccccc5C(=O)c34)S(O)(=O)=O)cc2)cc1C QXOGPTXQGKQSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QMDUEBURHKSKDG-UHFFFAOYSA-N 1-pyridin-3-ylethanol Chemical compound CC(O)C1=CC=CN=C1 QMDUEBURHKSKDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 2-[[4-(2,2-difluoropropoxy)pyrimidin-5-yl]methylamino]-4-[[(1R,4S)-4-hydroxy-3,3-dimethylcyclohexyl]amino]pyrimidine-5-carbonitrile Chemical compound FC(COC1=NC=NC=C1CNC1=NC=C(C(=N1)N[C@H]1CC([C@H](CC1)O)(C)C)C#N)(C)F FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 0.000 description 4
- NPRYCHLHHVWLQZ-TURQNECASA-N 2-amino-9-[(2R,3S,4S,5R)-4-fluoro-3-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-7-prop-2-ynylpurin-8-one Chemical compound NC1=NC=C2N(C(N(C2=N1)[C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H]1O)F)CO)=O)CC#C NPRYCHLHHVWLQZ-TURQNECASA-N 0.000 description 4
- QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 3-[(1r)-1-[(2r,6s)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]ethyl]-n-[6-methyl-3-(1h-pyrazol-4-yl)imidazo[1,2-a]pyrazin-8-yl]-1,2-thiazol-5-amine Chemical compound N1([C@H](C)C2=NSC(NC=3C4=NC=C(N4C=C(C)N=3)C3=CNN=C3)=C2)C[C@H](C)O[C@H](C)C1 QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 0.000 description 4
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XASOHFCUIQARJT-UHFFFAOYSA-N 8-methoxy-6-[7-(2-morpholin-4-ylethoxy)imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl]-2-(2,2,2-trifluoroethyl)-3,4-dihydroisoquinolin-1-one Chemical compound C(N1C(=O)C2=C(OC)C=C(C=3N4C(=NC=3)C=C(C=C4)OCCN3CCOCC3)C=C2CC1)C(F)(F)F XASOHFCUIQARJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090000712 Cathepsin B Proteins 0.000 description 4
- 102000004225 Cathepsin B Human genes 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 108010055196 EphA2 Receptor Proteins 0.000 description 4
- 102000051096 EphA2 Receptor Human genes 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SPXSEZMVRJLHQG-XMMPIXPASA-N [(2R)-1-[[4-[(3-phenylmethoxyphenoxy)methyl]phenyl]methyl]pyrrolidin-2-yl]methanol Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)OC=1C=C(OCC2=CC=C(CN3[C@H](CCC3)CO)C=C2)C=CC=1 SPXSEZMVRJLHQG-XMMPIXPASA-N 0.000 description 4
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 4
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 4
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 229940125810 compound 20 Drugs 0.000 description 4
- 229940125846 compound 25 Drugs 0.000 description 4
- 229940125844 compound 46 Drugs 0.000 description 4
- 229940127271 compound 49 Drugs 0.000 description 4
- 229940127113 compound 57 Drugs 0.000 description 4
- ZPWOOKQUDFIEIX-UHFFFAOYSA-N cyclooctyne Chemical group C1CCCC#CCC1 ZPWOOKQUDFIEIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 4
- BJXYHBKEQFQVES-NWDGAFQWSA-N enpatoran Chemical compound N[C@H]1CN(C[C@H](C1)C(F)(F)F)C1=C2C=CC=NC2=C(C=C1)C#N BJXYHBKEQFQVES-NWDGAFQWSA-N 0.000 description 4
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- YGBMCLDVRUGXOV-UHFFFAOYSA-N n-[6-[6-chloro-5-[(4-fluorophenyl)sulfonylamino]pyridin-3-yl]-1,3-benzothiazol-2-yl]acetamide Chemical compound C1=C2SC(NC(=O)C)=NC2=CC=C1C(C=1)=CN=C(Cl)C=1NS(=O)(=O)C1=CC=C(F)C=C1 YGBMCLDVRUGXOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 125000000466 oxiranyl group Chemical group 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 4
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N (1R,3R)-3-[[3-bromo-1-[4-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)phenyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-6-yl]amino]-N,1-dimethylcyclopentane-1-carboxamide Chemical compound BrC1=NN(C2=NC(=NC=C21)N[C@H]1C[C@@](CC1)(C(=O)NC)C)C1=CC=C(C=C1)C=1SC(=NN=1)C ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N 0.000 description 3
- UAOUIVVJBYDFKD-XKCDOFEDSA-N (1R,9R,10S,11R,12R,15S,18S,21R)-10,11,21-trihydroxy-8,8-dimethyl-14-methylidene-4-(prop-2-enylamino)-20-oxa-5-thia-3-azahexacyclo[9.7.2.112,15.01,9.02,6.012,18]henicosa-2(6),3-dien-13-one Chemical compound C([C@@H]1[C@@H](O)[C@@]23C(C1=C)=O)C[C@H]2[C@]12C(N=C(NCC=C)S4)=C4CC(C)(C)[C@H]1[C@H](O)[C@]3(O)OC2 UAOUIVVJBYDFKD-XKCDOFEDSA-N 0.000 description 3
- AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N (1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-6-[(3-chlorophenyl)methyl]-12,19-difluoro-11-hydroxy-8-(2-hydroxyacetyl)-9,13-dimethyl-6-azapentacyclo[10.8.0.02,9.04,8.013,18]icosa-14,17-dien-16-one Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2[C@H]3[C@]([C@]4(C=CC(=O)C=C4[C@@H](F)C3)C)(F)[C@@H](O)C[C@@]2([C@@]1(C1)C(=O)CO)C)N1CC1=CC=CC(Cl)=C1 AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N 0.000 description 3
- ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N (1r,2r,4r)-2-(4-bromophenyl)-n-[(4-chlorophenyl)-(2-fluoropyridin-4-yl)methyl]-4-morpholin-4-ylcyclohexane-1-carboxamide Chemical compound C1=NC(F)=CC(C(NC(=O)[C@H]2[C@@H](C[C@@H](CC2)N2CCOCC2)C=2C=CC(Br)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1 ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N 0.000 description 3
- SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N (1s,2s,3s,5r)-1-(carboxymethyl)-3,5-bis[(4-phenoxyphenyl)methyl-propylcarbamoyl]cyclopentane-1,2-dicarboxylic acid Chemical compound O=C([C@@H]1[C@@H]([C@](CC(O)=O)([C@H](C(=O)N(CCC)CC=2C=CC(OC=3C=CC=CC=3)=CC=2)C1)C(O)=O)C(O)=O)N(CCC)CC(C=C1)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N 0.000 description 3
- OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N (2,4-dichlorophenyl) benzenesulfonate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GCTFTMWXZFLTRR-GFCCVEGCSA-N (2r)-2-amino-n-[3-(difluoromethoxy)-4-(1,3-oxazol-5-yl)phenyl]-4-methylpentanamide Chemical compound FC(F)OC1=CC(NC(=O)[C@H](N)CC(C)C)=CC=C1C1=CN=CO1 GCTFTMWXZFLTRR-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 3
- IUSARDYWEPUTPN-OZBXUNDUSA-N (2r)-n-[(2s,3r)-4-[[(4s)-6-(2,2-dimethylpropyl)spiro[3,4-dihydropyrano[2,3-b]pyridine-2,1'-cyclobutane]-4-yl]amino]-3-hydroxy-1-[3-(1,3-thiazol-2-yl)phenyl]butan-2-yl]-2-methoxypropanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](C)OC)[C@H](O)CN[C@@H]1C2=CC(CC(C)(C)C)=CN=C2OC2(CCC2)C1)C(C=1)=CC=CC=1C1=NC=CS1 IUSARDYWEPUTPN-OZBXUNDUSA-N 0.000 description 3
- YJLIKUSWRSEPSM-WGQQHEPDSA-N (2r,3r,4s,5r)-2-[6-amino-8-[(4-phenylphenyl)methylamino]purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical compound C=1C=C(C=2C=CC=CC=2)C=CC=1CNC1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O YJLIKUSWRSEPSM-WGQQHEPDSA-N 0.000 description 3
- VIJSPAIQWVPKQZ-BLECARSGSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4,4-dimethylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(C)=O VIJSPAIQWVPKQZ-BLECARSGSA-N 0.000 description 3
- AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-5-(carbamoylamino)pentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=O AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N (2s)-2-[[2-benzyl-3-[hydroxy-[(1r)-2-phenyl-1-(phenylmethoxycarbonylamino)ethyl]phosphoryl]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)C(=O)C(CP(O)(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N 0.000 description 3
- VVQIIIAZJXTLRE-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-amino-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCCC[C@H](N)C(O)=O VVQIIIAZJXTLRE-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- FNHHVPPSBFQMEL-KQHDFZBMSA-N (3S)-5-N-[(1S,5R)-3-hydroxy-6-bicyclo[3.1.0]hexanyl]-7-N,3-dimethyl-3-phenyl-2H-1-benzofuran-5,7-dicarboxamide Chemical compound CNC(=O)c1cc(cc2c1OC[C@@]2(C)c1ccccc1)C(=O)NC1[C@H]2CC(O)C[C@@H]12 FNHHVPPSBFQMEL-KQHDFZBMSA-N 0.000 description 3
- IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N (3S,8S,10R,13S,14S,17S)-17-isoquinolin-7-yl-N,N,10,13-tetramethyl-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-amine Chemical compound CN(C)[C@H]1CC[C@]2(C)C3CC[C@@]4(C)[C@@H](CC[C@@H]4c4ccc5ccncc5c4)[C@@H]3CC=C2C1 IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N 0.000 description 3
- UDQTXCHQKHIQMH-KYGLGHNPSA-N (3ar,5s,6s,7r,7ar)-5-(difluoromethyl)-2-(ethylamino)-5,6,7,7a-tetrahydro-3ah-pyrano[3,2-d][1,3]thiazole-6,7-diol Chemical compound S1C(NCC)=N[C@H]2[C@@H]1O[C@H](C(F)F)[C@@H](O)[C@@H]2O UDQTXCHQKHIQMH-KYGLGHNPSA-N 0.000 description 3
- OOKAZRDERJMRCJ-KOUAFAAESA-N (3r)-7-[(1s,2s,4ar,6s,8s)-2,6-dimethyl-8-[(2s)-2-methylbutanoyl]oxy-1,2,4a,5,6,7,8,8a-octahydronaphthalen-1-yl]-3-hydroxy-5-oxoheptanoic acid Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@H](CCC(=O)C[C@@H](O)CC(O)=O)C2[C@@H](OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H](C)C[C@@H]21 OOKAZRDERJMRCJ-KOUAFAAESA-N 0.000 description 3
- STPKWKPURVSAJF-LJEWAXOPSA-N (4r,5r)-5-[4-[[4-(1-aza-4-azoniabicyclo[2.2.2]octan-4-ylmethyl)phenyl]methoxy]phenyl]-3,3-dibutyl-7-(dimethylamino)-1,1-dioxo-4,5-dihydro-2h-1$l^{6}-benzothiepin-4-ol Chemical compound O[C@H]1C(CCCC)(CCCC)CS(=O)(=O)C2=CC=C(N(C)C)C=C2[C@H]1C(C=C1)=CC=C1OCC(C=C1)=CC=C1C[N+]1(CC2)CCN2CC1 STPKWKPURVSAJF-LJEWAXOPSA-N 0.000 description 3
- QVAQMUAKTNUNLN-LURJTMIESA-N (4s)-4-amino-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O QVAQMUAKTNUNLN-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N (z)-3-[3-[3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-1-yl]-n'-pyrazin-2-ylprop-2-enehydrazide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC(C(F)(F)F)=CC(C2=NN(\C=C/C(=O)NNC=3N=CC=NC=3)C=N2)=C1 DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N 0.000 description 3
- KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 1-[(1R)-1-(2,4-dichlorophenyl)ethyl]-6-[(4S,5R)-4-[(2S)-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl]-5-methylcyclohexen-1-yl]pyrazolo[3,4-b]pyrazine-3-carbonitrile Chemical compound ClC1=C(C=CC(=C1)Cl)[C@@H](C)N1N=C(C=2C1=NC(=CN=2)C1=CC[C@@H]([C@@H](C1)C)N1[C@@H](CCC1)CO)C#N KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 0.000 description 3
- WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 1-[(3s,4s)-4-[8-(2-chloro-4-pyrimidin-2-yloxyphenyl)-7-fluoro-2-methylimidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]-3-fluoropiperidin-1-yl]-2-hydroxyethanone Chemical compound CC1=NC2=CN=C3C=C(F)C(C=4C(=CC(OC=5N=CC=CN=5)=CC=4)Cl)=CC3=C2N1[C@H]1CCN(C(=O)CO)C[C@@H]1F WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 0.000 description 3
- ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 1-[2-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-4,6-dihydroxyphenyl]-3-(4-hydroxyphenyl)propan-1-one Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 0.000 description 3
- UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 1-[6-[2-[3-[3-[3-[2-[2-[3-[[2-[2-[[(2r)-1-[[2-[[(2r)-1-[3-[2-[2-[3-[[2-(2-amino-2-oxoethoxy)acetyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-[(2r)-2,3-di(hexadecanoyloxy)propyl]sulfanyl-1-oxopropan-2-yl Chemical compound O=C1C(SCCC(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(=O)N[C@@H](CSC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CO)C(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(N)=O)CC(=O)N1CCNC(=O)CCCCCN\1C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2CC/1=C/C=C/C=C/C1=[N+](CC)C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C1 UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 0.000 description 3
- WGFNXGPBPIJYLI-UHFFFAOYSA-N 2,6-difluoro-3-[(3-fluorophenyl)sulfonylamino]-n-(3-methoxy-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridin-5-yl)benzamide Chemical compound C1=C2C(OC)=NNC2=NC=C1NC(=O)C(C=1F)=C(F)C=CC=1NS(=O)(=O)C1=CC=CC(F)=C1 WGFNXGPBPIJYLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FQMZXMVHHKXGTM-UHFFFAOYSA-N 2-(1-adamantyl)-n-[2-[2-(2-hydroxyethylamino)ethylamino]quinolin-5-yl]acetamide Chemical compound C1C(C2)CC(C3)CC2CC13CC(=O)NC1=CC=CC2=NC(NCCNCCO)=CC=C21 FQMZXMVHHKXGTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QEBYEVQKHRUYPE-UHFFFAOYSA-N 2-(2-chlorophenyl)-5-[(1-methylpyrazol-3-yl)methyl]-4-[[methyl(pyridin-3-ylmethyl)amino]methyl]-1h-pyrazolo[4,3-c]pyridine-3,6-dione Chemical compound C1=CN(C)N=C1CN1C(=O)C=C2NN(C=3C(=CC=CC=3)Cl)C(=O)C2=C1CN(C)CC1=CC=CN=C1 QEBYEVQKHRUYPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PYRKKGOKRMZEIT-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(2-cyclopropylethoxy)-9-(2-hydroxy-2-methylpropyl)-1h-phenanthro[9,10-d]imidazol-2-yl]-5-fluorobenzene-1,3-dicarbonitrile Chemical compound C1=C2C3=CC(CC(C)(O)C)=CC=C3C=3NC(C=4C(=CC(F)=CC=4C#N)C#N)=NC=3C2=CC=C1OCCC1CC1 PYRKKGOKRMZEIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 2-amino-9-[(1S,6R,8R,9S,10R,15R,17R,18R)-8-(6-aminopurin-9-yl)-9,18-difluoro-3,12-dihydroxy-3,12-bis(sulfanylidene)-2,4,7,11,13,16-hexaoxa-3lambda5,12lambda5-diphosphatricyclo[13.2.1.06,10]octadecan-17-yl]-1H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC2=C(N=CN2[C@@H]2O[C@@H]3COP(S)(=O)O[C@@H]4[C@@H](COP(S)(=O)O[C@@H]2[C@@H]3F)O[C@H]([C@H]4F)N2C=NC3=C2N=CN=C3N)C(=O)N1 YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 0.000 description 3
- TVTJUIAKQFIXCE-HUKYDQBMSA-N 2-amino-9-[(2R,3S,4S,5R)-4-fluoro-3-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-7-prop-2-ynyl-1H-purine-6,8-dione Chemical compound NC=1NC(C=2N(C(N(C=2N=1)[C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H]1O)F)CO)=O)CC#C)=O TVTJUIAKQFIXCE-HUKYDQBMSA-N 0.000 description 3
- LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 2-methoxy-6-[6-methoxy-4-[(3-phenylmethoxyphenyl)methoxy]-1-benzofuran-2-yl]imidazo[2,1-b][1,3,4]thiadiazole Chemical compound N1=C2SC(OC)=NN2C=C1C(OC1=CC(OC)=C2)=CC1=C2OCC(C=1)=CC=CC=1OCC1=CC=CC=C1 LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DFRAKBCRUYUFNT-UHFFFAOYSA-N 3,8-dicyclohexyl-2,4,7,9-tetrahydro-[1,3]oxazino[5,6-h][1,3]benzoxazine Chemical compound C1CCCCC1N1CC(C=CC2=C3OCN(C2)C2CCCCC2)=C3OC1 DFRAKBCRUYUFNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WCFJUSRQHZPVKY-UHFFFAOYSA-N 3-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCC(O)=O WCFJUSRQHZPVKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 4-[[(1s)-2-[(e)-3-[3-chloro-2-fluoro-6-(tetrazol-1-yl)phenyl]prop-2-enoyl]-5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-3,4-dihydro-1h-isoquinoline-1-carbonyl]amino]benzoic acid Chemical compound O=C1CN(C)CCN1C1=CC=CC2=C1CCN(C(=O)\C=C\C=1C(=CC=C(Cl)C=1F)N1N=NN=C1)[C@@H]2C(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 0.000 description 3
- DQAZPZIYEOGZAF-UHFFFAOYSA-N 4-ethyl-n-[4-(3-ethynylanilino)-7-methoxyquinazolin-6-yl]piperazine-1-carboxamide Chemical compound C1CN(CC)CCN1C(=O)NC(C(=CC1=NC=N2)OC)=CC1=C2NC1=CC=CC(C#C)=C1 DQAZPZIYEOGZAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VKLKXFOZNHEBSW-UHFFFAOYSA-N 5-[[3-[(4-morpholin-4-ylbenzoyl)amino]phenyl]methoxy]pyridine-3-carboxamide Chemical compound O1CCN(CC1)C1=CC=C(C(=O)NC=2C=C(COC=3C=NC=C(C(=O)N)C=3)C=CC=2)C=C1 VKLKXFOZNHEBSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RSIWALKZYXPAGW-NSHDSACASA-N 6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-7-[(1s)-1-(7h-purin-6-ylamino)ethyl]-[1,3]thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one Chemical compound C=1([C@@H](NC=2C=3N=CNC=3N=CN=2)C)N=C2SC=C(C)N2C(=O)C=1C1=CC=CC(F)=C1 RSIWALKZYXPAGW-NSHDSACASA-N 0.000 description 3
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 3
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 3
- PKMUHQIDVVOXHQ-HXUWFJFHSA-N C[C@H](C1=CC(C2=CC=C(CNC3CCCC3)S2)=CC=C1)NC(C1=C(C)C=CC(NC2CNC2)=C1)=O Chemical compound C[C@H](C1=CC(C2=CC=C(CNC3CCCC3)S2)=CC=C1)NC(C1=C(C)C=CC(NC2CNC2)=C1)=O PKMUHQIDVVOXHQ-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 3
- 229940126657 Compound 17 Drugs 0.000 description 3
- 229940126639 Compound 33 Drugs 0.000 description 3
- 229940127007 Compound 39 Drugs 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 101100162020 Mesorhizobium japonicum (strain LMG 29417 / CECT 9101 / MAFF 303099) adc3 gene Proteins 0.000 description 3
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N N-[(2R,3S)-2-(4-chlorophenyl)-1-(1,4-dimethyl-2-oxoquinolin-7-yl)-6-oxopiperidin-3-yl]-2-methylpropane-1-sulfonamide Chemical compound CC(C)CS(=O)(=O)N[C@H]1CCC(=O)N([C@@H]1c1ccc(Cl)cc1)c1ccc2c(C)cc(=O)n(C)c2c1 LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N 0.000 description 3
- OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N N-{[3-(2-benzamido-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)-pyrazol-5-yl]carbonyl}-G-dR-G-dD-dD-dD-NH2 Chemical compound S1C(C=2NN=C(C=2)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(N)=O)=C(C)N=C1NC(=O)C1=CC=CC=C1 OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N 0.000 description 3
- QOVYHDHLFPKQQG-NDEPHWFRSA-N N[C@@H](CCC(=O)N1CCC(CC1)NC1=C2C=CC=CC2=NC(NCC2=CN(CCCNCCCNC3CCCCC3)N=N2)=N1)C(O)=O Chemical compound N[C@@H](CCC(=O)N1CCC(CC1)NC1=C2C=CC=CC2=NC(NCC2=CN(CCCNCCCNC3CCCCC3)N=N2)=N1)C(O)=O QOVYHDHLFPKQQG-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 3
- PNUZDKCDAWUEGK-CYZMBNFOSA-N Sitafloxacin Chemical compound C([C@H]1N)N(C=2C(=C3C(C(C(C(O)=O)=CN3[C@H]3[C@H](C3)F)=O)=CC=2F)Cl)CC11CC1 PNUZDKCDAWUEGK-CYZMBNFOSA-N 0.000 description 3
- LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N [(1s,3r,4ar,7s,8s,8as)-3-hydroxy-8-[2-[(4r)-4-hydroxy-6-oxooxan-2-yl]ethyl]-7-methyl-1,2,3,4,4a,7,8,8a-octahydronaphthalen-1-yl] (2s)-2-methylbutanoate Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=C[C@H]2C[C@@H](O)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)CC1C[C@@H](O)CC(=O)O1 LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N 0.000 description 3
- LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N [(2r,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[[(3s,5s,8r,9s,10s,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]-4,5-disulfo Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1C[C@@H]2CC[C@H]3[C@@H]4CC[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H]1O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]1OS(O)(=O)=O LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N 0.000 description 3
- PSLUFJFHTBIXMW-WYEYVKMPSA-N [(3r,4ar,5s,6s,6as,10s,10ar,10bs)-3-ethenyl-10,10b-dihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-1-oxo-6-(2-pyridin-2-ylethylcarbamoyloxy)-5,6,6a,8,9,10-hexahydro-2h-benzo[f]chromen-5-yl] acetate Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(O[C@](C)(CC(=O)[C@]2(O)[C@@]2(C)[C@@H](O)CCC(C)(C)[C@@H]21)C=C)C)OC(=O)C)C(=O)NCCC1=CC=CC=N1 PSLUFJFHTBIXMW-WYEYVKMPSA-N 0.000 description 3
- SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N [[(2R,3S,4R,5S)-5-(2,6-dioxo-3H-pyridin-3-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [[[(2R,3S,4S,5R,6R)-4-fluoro-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl] hydrogen phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@H]2O[C@H]([C@H](O)[C@@H]2O)C2C=CC(=O)NC2=O)[C@H](O)[C@@H](F)[C@@H]1O SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N asunaprevir Chemical compound O=C([C@@H]1C[C@H](CN1C(=O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(C)(C)C)OC1=NC=C(C2=CC=C(Cl)C=C21)OC)N[C@]1(C(=O)NS(=O)(=O)C2CC2)C[C@H]1C=C XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N 0.000 description 3
- PUJDIJCNWFYVJX-UHFFFAOYSA-N benzyl carbamate Chemical compound NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 PUJDIJCNWFYVJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 3
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 3
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 3
- 229940126543 compound 14 Drugs 0.000 description 3
- 229940126142 compound 16 Drugs 0.000 description 3
- 229940126086 compound 21 Drugs 0.000 description 3
- 229940126208 compound 22 Drugs 0.000 description 3
- 229940125961 compound 24 Drugs 0.000 description 3
- 229940125851 compound 27 Drugs 0.000 description 3
- 229940127204 compound 29 Drugs 0.000 description 3
- 229940125877 compound 31 Drugs 0.000 description 3
- 229940125807 compound 37 Drugs 0.000 description 3
- 229940126540 compound 41 Drugs 0.000 description 3
- 229940125936 compound 42 Drugs 0.000 description 3
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 3
- 229940126545 compound 53 Drugs 0.000 description 3
- 229940125900 compound 59 Drugs 0.000 description 3
- 229940126179 compound 72 Drugs 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- BADXJIPKFRBFOT-UHFFFAOYSA-N dimedone Chemical compound CC1(C)CC(=O)CC(=O)C1 BADXJIPKFRBFOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- GWNFQAKCJYEJEW-UHFFFAOYSA-N ethyl 3-[8-[[4-methyl-5-[(3-methyl-4-oxophthalazin-1-yl)methyl]-1,2,4-triazol-3-yl]sulfanyl]octanoylamino]benzoate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC(NC(=O)CCCCCCCSC2=NN=C(CC3=NN(C)C(=O)C4=CC=CC=C34)N2C)=CC=C1 GWNFQAKCJYEJEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N gtpl8555 Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)N[C@H](B1O[C@@]2(C)[C@H]3C[C@H](C3(C)C)C[C@H]2O1)CCC1=CC=C(F)C=C1 JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 3
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 3
- RENRQMCACQEWFC-UGKGYDQZSA-N lnp023 Chemical compound C1([C@H]2N(CC=3C=4C=CNC=4C(C)=CC=3OC)CC[C@@H](C2)OCC)=CC=C(C(O)=O)C=C1 RENRQMCACQEWFC-UGKGYDQZSA-N 0.000 description 3
- QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N methanesulfonyl chloride Chemical compound CS(Cl)(=O)=O QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YCJZWBZJSYLMPB-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloropyrimidin-4-yl)-2,5-dimethyl-1-phenylimidazole-4-carboxamide Chemical compound CC=1N(C=2C=CC=CC=2)C(C)=NC=1C(=O)NC1=CC=NC(Cl)=N1 YCJZWBZJSYLMPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N nazartinib Chemical compound C1N(C(=O)/C=C/CN(C)C)CCCC[C@H]1N1C2=C(Cl)C=CC=C2N=C1NC(=O)C1=CC=NC(C)=C1 IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N 0.000 description 3
- RCCYSVYHULFYHE-UHFFFAOYSA-N pentanediamide Chemical compound NC(=O)CCCC(N)=O RCCYSVYHULFYHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- YYULROINNKAMIB-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-azidobutanoate Chemical compound [N-]=[N+]=NCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O YYULROINNKAMIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMYPTAGGLIUEY-VIFPVBQESA-N (2S)-2-amino-7-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]heptanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCCCC[C@H](N)C(O)=O JKMYPTAGGLIUEY-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N (2S,3R)-N-[(2S)-3-(cyclopenten-1-yl)-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopropan-2-yl]-3-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-2-[[(2S)-2-[(2-morpholin-4-ylacetyl)amino]propanoyl]amino]propanamide Chemical compound C1(=CCCC1)C[C@@H](C(=O)[C@@]1(OC1)C)NC([C@H]([C@@H](C1=CC=C(C=C1)OC)O)NC([C@H](C)NC(CN1CCOCC1)=O)=O)=O GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N 0.000 description 2
- SDOFMBGMRVAJNF-SLPGGIOYSA-N (2r,3r,4r,5s)-6-aminohexane-1,2,3,4,5-pentol Chemical compound NC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO SDOFMBGMRVAJNF-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 2
- KQRHTCDQWJLLME-XUXIUFHCSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]propanoyl]amino]-4-methylpentanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)N KQRHTCDQWJLLME-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 2
- ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N (2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N 0.000 description 2
- STBLNCCBQMHSRC-BATDWUPUSA-N (2s)-n-[(3s,4s)-5-acetyl-7-cyano-4-methyl-1-[(2-methylnaphthalen-1-yl)methyl]-2-oxo-3,4-dihydro-1,5-benzodiazepin-3-yl]-2-(methylamino)propanamide Chemical compound O=C1[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC)[C@H](C)N(C(C)=O)C2=CC(C#N)=CC=C2N1CC1=C(C)C=CC2=CC=CC=C12 STBLNCCBQMHSRC-BATDWUPUSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-OYDXRQHMSA-N 1-[(2r,4s,5s)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H]([14CH2]O)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-OYDXRQHMSA-N 0.000 description 2
- WEZDRVHTDXTVLT-GJZGRUSLSA-N 2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 WEZDRVHTDXTVLT-GJZGRUSLSA-N 0.000 description 2
- JUQLUIFNNFIIKC-UHFFFAOYSA-N 2-aminopimelic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCCC(O)=O JUQLUIFNNFIIKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XFJBGINZIMNZBW-CRAIPNDOSA-N 5-chloro-2-[4-[(1r,2s)-2-[2-(5-methylsulfonylpyridin-2-yl)oxyethyl]cyclopropyl]piperidin-1-yl]pyrimidine Chemical compound N1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1OCC[C@H]1[C@@H](C2CCN(CC2)C=2N=CC(Cl)=CN=2)C1 XFJBGINZIMNZBW-CRAIPNDOSA-N 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N Ala-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- OMNVYXHOSHNURL-WPRPVWTQSA-N Ala-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMNVYXHOSHNURL-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 2
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MZZSCEANQDPJER-ONGXEEELSA-N Gly-Ala-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MZZSCEANQDPJER-ONGXEEELSA-N 0.000 description 2
- IGOYNRWLWHWAQO-JTQLQIEISA-N Gly-Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 IGOYNRWLWHWAQO-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- 108010009504 Gly-Phe-Leu-Gly Proteins 0.000 description 2
- YLEIWGJJBFBFHC-KBPBESRZSA-N Gly-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 YLEIWGJJBFBFHC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- 101000898449 Homo sapiens Cathepsin B Proteins 0.000 description 2
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- MIDZLCFIAINOQN-WPRPVWTQSA-N Phe-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 MIDZLCFIAINOQN-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 2
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N Phe-Phe-Lys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- LZDNBBYBDGBADK-KBPBESRZSA-N Val-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LZDNBBYBDGBADK-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- WIQIWPPQGWGVHD-JEDNCBNOSA-N [(2s)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-1-oxopropan-2-yl]azanium;chloride Chemical compound Cl.C[C@H](N)C(=O)OC(C)(C)C WIQIWPPQGWGVHD-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 108010054982 alanyl-leucyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 2
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 2
- BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N allyl bromide Chemical compound BrCC=C BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000006295 amino methylene group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 description 2
- HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N barbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=O)N1 HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 2
- 125000006630 butoxycarbonylamino group Chemical group 0.000 description 2
- 229910052792 caesium Inorganic materials 0.000 description 2
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical compound [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L caesium carbonate Chemical compound [Cs+].[Cs+].[O-]C([O-])=O FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000024 caesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 229940125797 compound 12 Drugs 0.000 description 2
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 2
- 229940125878 compound 36 Drugs 0.000 description 2
- 229940127573 compound 38 Drugs 0.000 description 2
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- OCCYFTDHSHTFER-UHFFFAOYSA-N dbco-amine Chemical compound NCCC(=O)N1CC2=CC=CC=C2C#CC2=CC=CC=C12 OCCYFTDHSHTFER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-L glutarate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCC([O-])=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010075431 glycyl-alanyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010077435 glycyl-phenylalanyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 102000053907 human CTSB Human genes 0.000 description 2
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- HYUUPJAZVLZSGD-YFKPBYRVSA-N methyl (3S)-3-amino-2,2-dimethylbutanoate Chemical compound N[C@H](C(C(=O)OC)(C)C)C HYUUPJAZVLZSGD-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N ombitasvir Chemical compound COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NC1=CC=C([C@H]2N([C@@H](CC2)C=2C=CC(NC(=O)[C@H]3N(CCC3)C(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)C)=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)C(C)(C)C)C=C1 PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 125000003548 sec-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JLGLQAWTXXGVEM-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol monomethyl ether Chemical compound COCCOCCOCCO JLGLQAWTXXGVEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 2
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 2
- JKMYPTAGGLIUEY-SECBINFHSA-N (2R)-2-amino-7-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]heptanoic acid Chemical compound N[C@@H](C(=O)O)CCCCCNC(=O)OC(C)(C)C JKMYPTAGGLIUEY-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- DITZTAYZVSZBCC-XUUWZHRGSA-N (2R,3S,4S,5R,6R)-2-(azidomethyl)-6-methoxyoxane-3,4,5-triol Chemical compound N(=[N+]=[N-])C[C@@H]1[C@H]([C@@H]([C@H]([C@H](OC)O1)O)O)O DITZTAYZVSZBCC-XUUWZHRGSA-N 0.000 description 1
- KRJLRVZLNABMAT-RXMQYKEDSA-N (2r)-3-azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C[NH3+])C([O-])=O KRJLRVZLNABMAT-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- MDCPCLPRWLKUIQ-ZCFIWIBFSA-N (2r)-4-azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C([O-])=O)CC[NH3+] MDCPCLPRWLKUIQ-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- AMPVNPYPOOQUJF-SSDOTTSWSA-N (2r)-5-azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CCCN AMPVNPYPOOQUJF-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- DQUHYEDEGRNAFO-MRVPVSSYSA-N (2r)-6-azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CCCCN DQUHYEDEGRNAFO-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- KRJLRVZLNABMAT-YFKPBYRVSA-N (2s)-3-amino-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](CN)C(O)=O KRJLRVZLNABMAT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- MDCPCLPRWLKUIQ-LURJTMIESA-N (2s)-4-azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC[NH3+] MDCPCLPRWLKUIQ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- AMPVNPYPOOQUJF-ZETCQYMHSA-N (2s)-5-azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN AMPVNPYPOOQUJF-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- DQUHYEDEGRNAFO-QMMMGPOBSA-N (2s)-6-amino-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN DQUHYEDEGRNAFO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- MAZXJZHWRBSRKM-XUUWZHRGSA-N (2s,3s,4s,5r,6r)-2-(iodomethyl)-6-methoxyoxane-3,4,5-triol Chemical compound CO[C@@H]1O[C@H](CI)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O MAZXJZHWRBSRKM-XUUWZHRGSA-N 0.000 description 1
- QTFUARNEMOLEHL-LDDFNRRWSA-N (3S,7S,10R,13E,16S)-16-[(1S)-1-[(2R,3R)-3-[4-(aminomethyl)phenyl]oxiran-2-yl]ethyl]-10-[(3-chloro-4-methoxyphenyl)methyl]-3-(2,2-dimethylpropyl)-6,6,7-trimethyl-1-oxa-4,8,11-triazacyclohexadec-13-ene-2,5,9,12-tetrone Chemical compound COc1ccc(C[C@H]2NC(=O)\C=C\C[C@H](OC(=O)[C@H](CC(C)(C)C)NC(=O)C(C)(C)[C@H](C)NC2=O)[C@H](C)[C@H]2O[C@@H]2c2ccc(CN)cc2)cc1Cl QTFUARNEMOLEHL-LDDFNRRWSA-N 0.000 description 1
- PUWCNJZIFKBDJQ-RXMQYKEDSA-N (3r)-3-azaniumyl-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)[C@H]([NH3+])CC([O-])=O PUWCNJZIFKBDJQ-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- PUWCNJZIFKBDJQ-YFKPBYRVSA-N (3s)-3-azaniumyl-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O PUWCNJZIFKBDJQ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 125000006273 (C1-C3) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TYCOIOVUVGIUCR-UHFFFAOYSA-N 1-fluorocyclooct-2-yne-1-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1(F)CCCCCC#C1 TYCOIOVUVGIUCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRZUPJILJVGUFF-UHFFFAOYSA-N 2,8-dibenzylcyclooctan-1-one Chemical compound C1CCCCC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)C1CC1=CC=CC=C1 QRZUPJILJVGUFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YCUAHUACNCMHFC-UHFFFAOYSA-N 2-[3-[2-[2-[2-(2-aminoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]propanoylamino]ethanesulfonic acid Chemical compound NCCOCCOCCOCCOCCC(=O)NCCS(O)(=O)=O YCUAHUACNCMHFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000143 2-carboxyethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- OUCMTIKCFRCBHK-UHFFFAOYSA-N 3,3-dibenzylcyclooctyne Chemical compound C1CCCCC#CC1(CC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 OUCMTIKCFRCBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BIKSKRPHKQWJCW-UHFFFAOYSA-N 3,4-dibromopyrrole-2,5-dione Chemical class BrC1=C(Br)C(=O)NC1=O BIKSKRPHKQWJCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMCJTXKSDDFJRG-UHFFFAOYSA-N 3-[2-[2-(2-methoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]propanoic acid Chemical compound COCCOCCOCCOCCC(O)=O ZMCJTXKSDDFJRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LGEVPLDBBPWJIC-UHFFFAOYSA-N 3-[2-[2-[2-(2-carboxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCOCCOCCOCCOCCC(O)=O LGEVPLDBBPWJIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YEIYIPDFZMLJQH-UHFFFAOYSA-N 3-[2-[2-[2-[2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCOCCOCCOCCOCCC(O)=O YEIYIPDFZMLJQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOPQIPMESCUIHH-UHFFFAOYSA-N 3-[2-[2-[2-[2-[2-(2-methoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]propanoic acid Chemical compound COCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCC(O)=O NOPQIPMESCUIHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholin-4-ium;chloride Chemical compound [Cl-].COC1=NC(OC)=NC([N+]2(C)CCOCC2)=N1 BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- LAOZSCRCYVBSJA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-1,3-diazinane-2,4,6-trione Chemical compound CC1(C)C(=O)NC(=O)NC1=O LAOZSCRCYVBSJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DLNMZLXNWFRWCX-UHFFFAOYSA-N 5-amino-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-6-oxohexanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)C(N)CCCC(O)=O DLNMZLXNWFRWCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JCOWPROFDPDXHM-UHFFFAOYSA-M C(=O)(O)CCOCCOCCOCCOCCC(NCCS(=O)(=O)[O-])=O.[Na+] Chemical compound C(=O)(O)CCOCCOCCOCCOCCC(NCCS(=O)(=O)[O-])=O.[Na+] JCOWPROFDPDXHM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LXUWHOYYFHGPQX-CIFDPXPGSA-N C1=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C(C1=2)COC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)O)CCC(=O)NC[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@@H](CO[Si](C1=CC=CC=C1)(C1=CC=CC=C1)C(C)(C)C)O)O)O)O)C(C)C Chemical compound C1=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C(C1=2)COC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)O)CCC(=O)NC[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@@H](CO[Si](C1=CC=CC=C1)(C1=CC=CC=C1)C(C)(C)C)O)O)O)O)C(C)C LXUWHOYYFHGPQX-CIFDPXPGSA-N 0.000 description 1
- RAMGSHIYQUIBIS-BDIJYGTDSA-N C1=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C(C1=2)COC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)O)CCC(NC[C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H]1O)O)O)OC)=O)C(C)C Chemical compound C1=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C(C1=2)COC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)O)CCC(NC[C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H]1O)O)O)OC)=O)C(C)C RAMGSHIYQUIBIS-BDIJYGTDSA-N 0.000 description 1
- KEOWBHLDLQKRPY-KTAKBEFKSA-N C1=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C(C1=2)COC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)O)CCCCNC(=O)[C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H]1O)O)O)OC)C(C)C Chemical compound C1=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C(C1=2)COC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)O)CCCCNC(=O)[C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H]1O)O)O)OC)C(C)C KEOWBHLDLQKRPY-KTAKBEFKSA-N 0.000 description 1
- MUXVCBDZSKXAGK-IDRVQKDASA-N C1=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C(C1=2)COC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)OC(C)(C)C)CCC(=O)NC[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@@H](CO[Si](C1=CC=CC=C1)(C1=CC=CC=C1)C(C)(C)C)O)O)O)O)C(C)C Chemical compound C1=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C(C1=2)COC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)OC(C)(C)C)CCC(=O)NC[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@@H](CO[Si](C1=CC=CC=C1)(C1=CC=CC=C1)C(C)(C)C)O)O)O)O)C(C)C MUXVCBDZSKXAGK-IDRVQKDASA-N 0.000 description 1
- ZDJIOGGJPZQNQV-AALZSVSZSA-N C1=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C(C1=2)COC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)OC(C)(C)C)CCC(NC[C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H]1O)O)O)OC)=O)C(C)C Chemical compound C1=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C(C1=2)COC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)OC(C)(C)C)CCC(NC[C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H]1O)O)O)OC)=O)C(C)C ZDJIOGGJPZQNQV-AALZSVSZSA-N 0.000 description 1
- BEMRKFMWPQHBBR-UHFFFAOYSA-N CC(C)(C)OC(=O)CCOCCOCCOCCOCCC(=O)OC(C)(C)C Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)CCOCCOCCOCCOCCC(=O)OC(C)(C)C BEMRKFMWPQHBBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTNSIWGFVFCZIK-DEOSSOPVSA-N CC(C)[C@](C(O)=O)(NC(OCC1C2=CC=CC=C2C2=C1C=CC=C2)=O)N(C(CC1)=O)C1=O Chemical compound CC(C)[C@](C(O)=O)(NC(OCC1C2=CC=CC=C2C2=C1C=CC=C2)=O)N(C(CC1)=O)C1=O RTNSIWGFVFCZIK-DEOSSOPVSA-N 0.000 description 1
- 101100240517 Caenorhabditis elegans nhr-11 gene Proteins 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N D-Ornithine Chemical compound NCCC[C@@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N D-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine group Chemical group N[C@H](CCCCN)C(=O)O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000050554 Eph Family Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008815 Eph receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100030340 Ephrin type-A receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004694 Eucalyptus leucoxylon Nutrition 0.000 description 1
- 244000166102 Eucalyptus leucoxylon Species 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101000938346 Homo sapiens Ephrin type-A receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001024703 Homo sapiens Nck-associated protein 5 Proteins 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010090665 Mannosyl-Glycoprotein Endo-beta-N-Acetylglucosaminidase Proteins 0.000 description 1
- 239000012359 Methanesulfonyl chloride Substances 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- YQUJLXIIVNVNBW-DOIPELPJSA-N NC[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@@H](CO[Si](C1=CC=CC=C1)(C1=CC=CC=C1)C(C)(C)C)O)O)O)O Chemical compound NC[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@@H](CO[Si](C1=CC=CC=C1)(C1=CC=CC=C1)C(C)(C)C)O)O)O)O YQUJLXIIVNVNBW-DOIPELPJSA-N 0.000 description 1
- 102100036946 Nck-associated protein 5 Human genes 0.000 description 1
- NSVCCHBUMXZEHM-UHFFFAOYSA-N OC(=O)CCCC(=O)NCCC(=O)N1CC2=CC=CC=C2C#CC2=CC=CC=C12 Chemical compound OC(=O)CCCC(=O)NCCC(=O)N1CC2=CC=CC=C2C#CC2=CC=CC=C12 NSVCCHBUMXZEHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium on carbon Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000000447 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Human genes 0.000 description 1
- 108010055817 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical class [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940100514 Syk tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 1
- XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N Trichloroethylene Chemical compound ClC=C(Cl)Cl XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- ZJHZWBDLYYJQAV-WYOOIXGGSA-N [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoyl]amino]propanoyl]amino]phenyl]methyl (4-nitrophenyl) carbonate Chemical compound CC([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)NC1=CC=C(C=C1)COC(=O)OC1=CC=C(C=C1)[N+](=O)[O-])C)NC(OCC1C2=CC=CC=C2C=2C=CC=CC12)=O)C ZJHZWBDLYYJQAV-WYOOIXGGSA-N 0.000 description 1
- CHKFLBOLYREYDO-SHYZEUOFSA-N [[(2s,4r,5r)-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)-4-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)C[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 CHKFLBOLYREYDO-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 1
- PDKXJKWLFFZPPF-UHFFFAOYSA-N [dimethylamino-(3-oxidotriazolo[4,5-b]pyridin-3-ium-1-yl)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(C(N(C)C)=[N+](C)C)N=[N+]([O-])C2=N1 PDKXJKWLFFZPPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N acetylacetone Chemical compound CC(=O)CC(C)=O YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001263 acyl chlorides Chemical class 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012382 advanced drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- MDFFNEOEWAXZRQ-UHFFFAOYSA-N aminyl Chemical compound [NH2] MDFFNEOEWAXZRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000012436 analytical size exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 125000002393 azetidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004069 aziridinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N benzyl bromide Chemical compound BrCC1=CC=CC=C1 AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000010364 biochemical engineering Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) carbonate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000006244 carboxylic acid protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 1
- 125000006165 cyclic alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000004222 ferrous gluconate Substances 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- FHHGCKHKTAJLOM-UHFFFAOYSA-N hexaethylene glycol monomethyl ether Chemical compound COCCOCCOCCOCCOCCOCCO FHHGCKHKTAJLOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004836 hexamethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:1] 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000007327 hydrogenolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005945 imidazopyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 1
- HOVAGTYPODGVJG-XUUWZHRGSA-N methyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HOVAGTYPODGVJG-XUUWZHRGSA-N 0.000 description 1
- 125000002757 morpholinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- DUWWHGPELOTTOE-UHFFFAOYSA-N n-(5-chloro-2,4-dimethoxyphenyl)-3-oxobutanamide Chemical compound COC1=CC(OC)=C(NC(=O)CC(C)=O)C=C1Cl DUWWHGPELOTTOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- HVFSJXUIRWUHRG-UHFFFAOYSA-N oic acid Natural products C1CC2C3CC=C4CC(OC5C(C(O)C(O)C(CO)O5)O)CC(O)C4(C)C3CCC2(C)C1C(C)C(O)CC(C)=C(C)C(=O)OC1OC(COC(C)=O)C(O)C(O)C1OC(C(C1O)O)OC(COC(C)=O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O HVFSJXUIRWUHRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229940127084 other anti-cancer agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 125000003566 oxetanyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 125000004193 piperazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003386 piperidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 125000001325 propanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004368 propenyl group Chemical group C(=CC)* 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000022558 protein metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 125000004309 pyranyl group Chemical group O1C(C=CC=C1)* 0.000 description 1
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000719 pyrrolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- MSQCUKVSFZTPPA-UDGZVUODSA-M sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-methoxyoxane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].CO[C@@H]1O[C@H](C([O-])=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O MSQCUKVSFZTPPA-UDGZVUODSA-M 0.000 description 1
- GWLWWNLFFNJPDP-UHFFFAOYSA-M sodium;2-aminoethanesulfonate Chemical compound [Na+].NCCS([O-])(=O)=O GWLWWNLFFNJPDP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- JUINYDFUOXIVCX-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 3-[2-[2-(2-methoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]propanoate Chemical compound COCCOCCOCCOCCC(=O)OC(C)(C)C JUINYDFUOXIVCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VRQOLQLYLAUIGV-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 3-[2-[2-[2-[2-[2-(2-methoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]propanoate Chemical compound COCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCC(=O)OC(C)(C)C VRQOLQLYLAUIGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHYGQXWCZAYSLJ-UHFFFAOYSA-N tert-butyl-chloro-diphenylsilane Chemical compound C=1C=CC=CC=1[Si](Cl)(C(C)(C)C)C1=CC=CC=C1 MHYGQXWCZAYSLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003718 tetrahydrofuranyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004568 thiomorpholinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 125000001425 triazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000005023 xylyl group Chemical group 0.000 description 1
Description
Настоящее изобретение относится к новым пептидным линкерам, к новым полезным нагрузкам с криптофицином, к новым конъюгатам на основе криптофицина, к композициям, содержащим их, и к их терапевтическому применению, такому как применение в качестве противораковых средств. Настоящее изобретение также относится к способу получения таких конъюгатов.
Данные линкеры ферментативно расщепляются в лизосомах клеток такими ферментами, как, например, катепсин В. Катепсин В представляет собой цистеиновую протеиназу, которая принадлежит к папаиновому семейству и является одной из основных лизосомальных протеиназ у млекопитающих. Он участвует в белковом обмене и в поддержании клеточного метаболизма, а также в нескольких других физиологических или патологических процессах, таких как, например, прогрессирование опухолей. Его сверхэкспрессия, как на генетическом, так и на белковом уровнях, была продемонстрирована в опухолях, при этом увеличение количества белка также приводит к увеличению ферментативной активности. Это служило основой для нескольких подходов, заключающихся в применении пролекарств химиотерапевтических средств (Int J Oncology 2013, 42, 373-383), а также концепции применения расщепляемых линкеров для получения конъюгатов антитело-лекарственное средство (ADC) (Bioconj Chem 2002, 13, 855869). Что касается ADC, один общепринятый пептидный линкер состоит из последовательности валинцитруллин (ValCit), соединенной с самоотщепляемым фрагментом, представляющим собой nаминобензиловый спирт (J Org Chem 2002, 67, 1866-1872), как проиллюстрировано на примере 23 в WO2011/001052. Конструкция, полученная в результате связывания с цитотоксическим лекарственным средством, является довольно гидрофобной, что может быть затруднительным для достижения определенных соотношения лекарственного средства и антитела (DAR), мономерной чистоты и стабильности ADC. В действительности, несмотря на значительную оптимизацию конъюгации, пример 23 из WO 2011/00152 не может быть успешно конъюгирован с получением ADC с удовлетворительными DAR и мономерной чистотой, а именно DAR > 2 и > 95% мономеров.
Поскольку лекарственные средства, применяемые для ADC, такие как тубулин или ДНКсвязывающие средства, являются по существу гидрофобными, существует потребность в более гидрофильных пептидных линкерах для улучшения растворимости полезной нагрузки, где полезная нагрузка представляет собой соединение, содержащее цитотоксическое лекарственное средство, конъюгированное с линкером, и, таким образом, потенциально его реакционной способности в отношении конъюгации с антителом и стабильности получаемого в результате ADC. Увеличение растворимости полезной нагрузки должно позволить увеличить DAR, мономерную чистоту и стабильность ADC, особенно с точки зрения склонности к агрегации.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится к новым пептидным соединениям, выбранным из соединений формулы (I):
где
RCG1 представляет собой реакционноспособную химическую группу, которая является реакционноспособной в отношении химической группы, присутствующей на полипептиде, таком как антитело;
Р представляет собой атом водорода, -ОН или активированный О, где активированный О определен ниже.
L представляет собой линкер формулы (II):
О ^L2^(AA)w-L1^ (πχ где
L1 представлен формулой (III):
где если Р представляет собой атом водорода, то х=0 или 1, и у=1, и z=0;
если Р представляет собой -ОН, то x=y=z=0;
если Р представляет собой активированный О, то х=1, и y=z=0, или x=y=z=1;
Jb J2, J3 и J4 выбраны независимо друг от друга из CA1 и N;
ALK представляет собой (С1-С12)алкиленовую группу, например (С1-С6)алкилен, например, в форме -(СН2)п-, при этом n представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, и, например, находящееся в диапазоне от 1 до 6;
- 1 045708
A1, A2, A3, А4, А5 и А6 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу.
(AA)w представляет собой последовательность из w замещенных AAs или незамещенных аминокислот AAns, соединенных вместе посредством пептидных связей, где замещенная AAs или незамещенная AAns определены ниже;
w представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, например, от 1 до 6, такое как 2 или 3;
если (AA)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, то L2 представляет собой одинарную связь, (С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-(OCH2CH2)i, (С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i-О(С1-С6)алкильную группу, (Cн2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, CH(SO3H)-(C1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-СН(SO3H), (С1-С6)алкилциклогексильную группу, C(=O)-(CiС6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-(oСН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-(0cН2СН2)1-0(c1С6)алкильную группу, C(=0)-(СН2СН20)i(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-CH(SO3H)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-CH(SO3H), C(=O)-(С1-С6)алкилциклогексильную группу, NA8-(C1С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-(0cН2СН2)i-О(С1С6)алкильную группу, NA8-(СН2СН2О)i(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-СН(SO3H), C(=O)-NA8-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-NA8-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-NA8-(C1С6)алкил-(ОСН2СН2)i-О(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-СН(SO3H), NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(СН2СН2О)i(С1-С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (С1С6)алкил-NA7C(=О)-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=О)-(С1-С6)алкил-(0cН2СН2)i, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил(0СН2СН2)i, (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=0)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7, C(=0)-NA7-(СН2СН20)i(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7арильную группу, C(=O)-NA7-гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-C(=0)NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-(C1С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(C1С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкилNA7-(С1-С6)алкил-(OCH2CH2)i, NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1С6)алкильную группу, группу C(=o)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=0)NA7-(С1-С6)алкил-(oСн2СН2)b C(=O)-NA8(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил(0СН2СН2)i или C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу;
если (AA)w представляет собой последовательность из w незамещенных аминокислот AAns, то L2 представляет собой NA7-(С1-С6)алкильную группу, (С1-С6)алкил-NA7-группу, NA7-(СН2СН2О)i(С1С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкильную группу, (С1-С6)алкил-NA7C(=0)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-группу, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкильную группу, (С1-С6)алкил-C(=0)NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i-группу, (С1-С6)алкил-NA7(С1-С6)алкильную группу, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-группу, (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)iNA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-группу, C(=O)-NA7-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-арильную группу, C(=O)-NA7гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкилNA7C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i-группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(C1-С6)алкильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=0)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2Сн2)i-группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(oСн2СН2)i-группу, C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)iNA7-(С1-С6)алкильную группу, NA8-(С1-С6)алкил-NA7-группу, NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкильную группу, NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-группу, NA8-(С1-С6)алкилC(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, NA8-(С1-С6)αлкил-C(=O)NA7-(С1-С6)αлкuл-(ОСН2Сн2)i-групnу, NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2Сн2)iгруппу, NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7группу, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкилNA7C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i-группу, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-С(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(oСн2СН2)i-группу, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-группу или C(=O)NA8-(С1-С6)алкил-(OCH2Cн2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу;
А7 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязатель
- 2 045708 но замещенную С1-С160углеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NHC(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -CH(OH)-, -CH(SO3H)-, -О-, -C(=O)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, -SO2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)-,
-O-P(=O)(OH)-O- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и -N(алкил)2;
при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na);
A8 представляет собой атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу;
i представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, в таком диапазоне как от 1 до 35.
Настоящее изобретение дополнительно относится к полезным нагрузкам с криптофицином формулы (IV):
где
R1 представляет собой (С1-С6)алкильную группу;
R2 и R3 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1-С6)алкильную группу;
или в качестве альтернативы R2 и R3 образуют вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, (С3-С6)циклоалкил или (С3-С6)гетероциклоалкильную группу;
R4 и R5 представляют собой независимо друг от друга атом водорода, или (С1-С6)алкильную группу, или группу (С1-С6)aлкил-NH(R12), или группу (С1-С6)алкил-ОН, или группу (С1-С6)алкил-SH, или группу (С1-С6)алкил-СО2Н;
или в качестве альтернативы R4 и R5 образуют вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, (С3-С6)циклоалкил или (С3-С6)гетероциклоалкильную группу;
X представляет собой О или N(R6);
R6 представляет собой атом водорода или (С1-С6)алкильную группу;
R7 и R8 представляют собой независимо друг от друга атом водорода, или (С1-С6)алкильную группу, или группу (С1-С6)алкил-СО2Н, или группу (С1-С6)aлкил-N(С1-С6)aлкилг;
или в качестве альтернативы R7 и R8 образуют вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, (С3-С6)циклоалкильную группу или (С3-С6)гетероциклоалкильную группу;
R9 представляет собой по меньшей мере один заместитель при фенильном ядре, выбранный независимо от других из атома водорода, -ОН, (С1-С4)алкокси, атома галогена, -NH2, -NH(С1-С6)алкилα, -N(C1С6)алкил2, -NH(С1-С6)циклоaлкилa или (С3-С6)гетероциклоалкила;
R10 представляет собой по меньшей мере один заместитель при фенильном ядре, выбранный из атома водорода и (С1-С4)алкильной группы;
Y представляет собой -NR11-(С1-С6)алкил-, например -NR11-(CH2)n-, такой как
RCG^O-j
-O-(С1-С6)алкил-, например -О-(СН2)п-, такой как
-S-(С1-С6)αлкил-, например -S-(CH2)n-, такой как при этом Y расположен в орто- (о), мета- (m) или пара- (р) положении фенильного ядра;
R11 и R12 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1-С6)алкил, например, атом водорода или метильную группу;
n представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 6;
- 3 045708
L определен в формуле (I) и представляет собой линкер формулы (II);
RCG1 представляет собой реакционноспособную химическую группу, присутствующую на конце линкера, при этом RCG1 является реакционноспособным в отношении химической группы, присутствующей на полипептиде, таком как антитело.
Настоящее изобретение дополнительно относится к конъюгатам формулы (V):
где
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 и Rn определены в формуле (IV);
X, Y и L определены в формуле (IV);
G представляет собой продукт реакции между RCG1, реакционноспособной химической группой, присутствующей на конце линкера, и RCG2, ортогональной реакционноспособной химической группой, присутствующей на антителе (Ab);
Ab представляет собой антитело.
Каждый из заместителей R1-R12 может также принимать одну из пространственных конфигураций (например, R или S или в качестве альтернативы Z или Е), как описано в примерах.
Соединения формулы (I), (II), (III), (IV) и (V) могут содержать по меньшей мере один асимметричный атом углерода. Поэтому они могут существовать в форме энантиомеров или диастереоизомеров. Данные энантиомеры и диастереоизомеры, а также их смеси, включая рацемические смеси, составляют часть настоящего изобретения.
Соединения формулы (I), (II), (IV), включая проиллюстрированные соединения, могут существовать в форме оснований или солей присоединения кислот, например, фармацевтически приемлемых кислот. Например, если данные соединения содержат функциональную группу SO3H, то они могут существовать в форме солей, содержащих SO3- и щелочной металл, таких как соли, содержащие SO3- и натрий (SO3-+Na).
Определения.
В контексте настоящего изобретения некоторые термины имеют следующие определения.
Алкенильная группа: углеводородная группа, полученная путем удаления одного атома водорода от алкена. Алкенильная группа может быть линейной или разветвленной. Примеры, которые могут быть упомянуты, включают этенил (-СН=СН2, который также называют винилом) и пропенил (-СН2-СН=СН2, который также называют аллилом).
Алкоксигруппа: группа -О-алкил, в которой алкильная группа определена ниже.
Алкильная группа: линейная или разветвленная насыщенная алифатическая углеводородная группа, полученная путем удаления атома водорода от алкана. Примеры, которые могут быть упомянуты, включают метильную, этильную, пропильную, изопропильную, бутильную, изобутильную, трет-бутильную, пентильную, неопентильную, 2,2-диметилпропильную и гексильную группы.
Алкиленовая группа: насыщенная двухвалентная группа с эмпирической формулой -CnH2n-, полученная путем удаления двух атомов водорода от алкана. Алкиленовая группа может быть линейной или разветвленной. Примеры, которые могут быть упомянуты, включают метиленовую (-СН2-), этиленовую (-СН2СН2-), пропиленовую (-СН2СН2СН2-), бутиленовую (-СН2СН2СН2СН2-) и гексиленовую (-СН2СН2СН2СН2СН2СН2-) группы или следующие разветвленные группы
’ ’ ’ например, алкиленовую группу, представленную формулой -(СН2)П-, при этом n представляет собой целое число; в диапазоны значений включены пределы (например, диапазон типа n, находящийся в диапазоне от 1 до 6 или который находится в диапазоне от 1 до 6 включает пределы 1 и 6).
Антитело: антитело с аффинностью в отношении биологической мишени, например моноклональное антитело. Функцией антитела является направление биологически активного соединения в качестве цитотоксического соединения к биологической мишени. Антитело может быть моноклональным, поликлональным или полиспецифическим; оно также может представлять собой фрагмент антитела; оно также может представлять собой мышиное, химерное, гуманизированное или человеческое антитело. Антитело может представлять собой природное или традиционное антитело, в котором две тяжелые цепи связаны друг с другом с помощью дисульфидных связей и каждая тяжелая цепь связана с легкой цепью с помощью дисульфидной связи (также называется полноразмерным антителом). Термины традицион
- 4 045708 ное (или полноразмерное) антитело относятся как к антителу, содержащему сигнальный пептид (или пропептид, при наличии такового), так и к зрелой форме, полученной при секреции и протеолитической обработке цепи(цепей). Существует два типа легких цепей, лямбда (l) и каппа (k). Существуют пять основных классов (или изотипов) тяжелых цепей, определяющих функциональную активность молекулы антитела: IgM, IgD, IgG, IgA и IgE. Каждая цепь содержит домены с отличающейся последовательностью. Легкая цепь содержит два домена или области, вариабельный домен (VL) и константный домен (CL). Тяжелая цепь содержит четыре домена, вариабельный домен (VH) и три константных домена (CH1, CH2 и СН3, совместно именуемых CH). Вариабельные области как легких (VL), так и тяжелых (VH) цепей определяют распознавание при связывании и специфичность к антигену. Домены константных областей легких (CL) и тяжелых (CH) цепей придают важные биологические свойства, такие как объединение цепей антитела, секреция, перемещение через плаценту, связывание комплемента и связывание с Fcрецепторами (FcR). Fv-фрагмент представляет собой N-концевую часть Fab-фрагмента иммуноглобулина и состоит из вариабельных частей одной легкой цепи и одной тяжелой цепи. Специфичность антитела заключается в структурной комплементарности между паратопом антитела и антигенной детерминантой. Паратопы антител образованы остатками главным образом из гипервариабельных или определяющих комплементарность областей (CDR). Остатки из негипервариабельных или каркасных областей (FR) иногда влияют на общую структуру домена и, следовательно, паратоп. CDR относятся к аминокислотным последовательностям, которые вместе определяют аффинность и специфичность связывания природной Fv-области нативного связывающего участка иммуноглобулина. Каждая из легких и тяжелых цепей иммуноглобулина имеет три CDR, обозначенные как CDR1-L, CDR2-L, CDR3-L и CDR1-H, CDR2H, CDR3-H соответственно. Следовательно, антигенсвязывающий участок традиционного антитела содержит шесть CDR, которые включают набор CDR из каждой из V-областей тяжелой и легкой цепей.
Используемый в данном документе термин антитело обозначает как традиционные (полноразмерные) антитела и их фрагменты, так и однодоменные антитела и их фрагменты, такие как вариабельная область тяжелой цепи однодоменных антител. Фрагменты (традиционных) антител, как правило, содержат часть интактного антитела, такую как антигенсвязывающая область или вариабельная область интактного антитела, и сохраняют биологическую функцию традиционного антитела. Примеры таких фрагментов включают Fv, Fab, F(ab')2, Fab', dsFv, (dsFv)2, scFv, sc(Fv)2, нанотела и диатела.
Функцией антитела является направление биологически активного соединения в качестве цитотоксического соединения к биологической мишени.
Арильная группа: циклическая ароматическая группа, содержащая от 5 до 10 атомов углерода. Примеры арильных групп включают фенил, толил, ксилил, нафтил.
Биологическая мишень: антиген (или группа антигенов), например, расположенный на поверхности раковых клеток или стромальных клеток, ассоциированных с данной опухолью; такие антигены могут представлять собой, например, рецептор фактора роста, продукт онкогена или продукт гена, представляющего собой мутированный супрессор опухоли, молекулу, связанную с ангиогенезом, или адгезивную молекулу.
Конъюгат: конъюгат антитело-лекарственное средство или ADC, т.е. полипептид, такой как антитело, к которому ковалентно присоединена посредством линкера по меньшей мере одна молекула цитотоксического соединения.
Циклоалкильная группа: циклическая алкильная группа, содержащая от 3 до 6 атомов углерода, включенных в циклическую структуру. Примеры, которые могут быть упомянуты, включают циклопропильную, циклобутильную, циклопентильную и циклогексильныую группы.
DAR (соотношение лекарственного средства и антитела): среднее число цитотоксических молекул, присоединенных посредством линкера к антителу.
Галоген: любой из четырех элементов, представляющих собой фтор, хлор, бром и йод.
Гетероарильная группа: арильная группа, содержащая от 2 до 10 атомов углерода и от 1 до 5 гетероатомов, таких как азот, кислород или сера, включенных в кольцо и присоединенных к атомам углерода с образованием кольца. Примеры гетероарильных групп включают пиридил, пиримидил, тиенил, имидазолил, триазолил, индолил, имидазопиридил, пиразолил.
Гетероциклоалкильная группа: циклоалкильная группа, содержащая от 2 до 8 атомов углерода и от 1 до 3 гетероатомов, таких как азот, кислород или сера, включенных в кольцо и присоединенных к атомам углерода с образованием кольца. Примеры включают азиридинил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофуранил, тетрагидропиранил, азетидинил, оксетанил и пиранил.
Линкер: группа атомов или одинарная связь, с помощью которых можно ковалентно присоединять цитотоксическое соединение к полипептиду, такому как антитело, чтобы образовать конъюгат.
Полезная нагрузка: цитотоксическое соединение, к которому ковалентно присоединен линкер.
Реакционноспособная химическая группа: группа атомов, которая может способствовать химической реакции или вступать в нее.
Кроме того, как указано во всем настоящем изобретении, функциональная группа SO3H может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
- 5 045708
Сокращения.
ADC: конъюгат антитело-лекарственное средство; ALK: (С1-С12)алкиленовая группа, например (Ср С6)алкилен, например, в форме -(СН2)п-, при этом n представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, и, например, находящееся в диапазоне от 1 до 6; водн.: водный; Ar: аргон; AUC: площадь под кривой; BCN: (1а,8а,9в)-бицикло[6.1.0]нон-4-ин-9-метанол; CHCl3: хлороформ; CH3CN: ацетонитрил; СО2: диоксид углерода; CR: полный ответ; крипто обозначает единицу формулы
при этом крипто обозначает, например, соединение криптофицина из примера, одно из соединений криптофицина D1-D8, описанных в WO2011/001052, или одно из представленных ниже соединений криптофицина D1-D19, описанных в РСТ/ЕР2016/076603:
- 6 045708
- 7 045708 где W представляет собой (С1-С6)алкил-NH(R11), например (CH2)nNHR11;
(С1-С6)алкил-OH, например (CH2)nOH;
(С1-С6)алкил-SH, например (CH2)nSH;
СО2Н или C(=O)NH2;
(С1-С6)алкил-СО2Н или (С1-С6)алкил-C(=O)NH2 или (С1-С6)алкuл-N3.
W расположен в орто- (о), мета- (m) или пара- (р) положении фенильного ядра;
R11 представляет собой независимо друг от друга атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу;
n представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 6;
d: день; DAR: соотношение лекарственного средства и антитела (D1 относится к ADC с DAR, составляющим 1, D2 относится к ADC с DAR, составляющим 2, и т. д.); DBCO: дибензилциклооктин; DCC: N, N'-дициклогексилкарбодиимид; DCM: дихлорметан; DIEA: N, N-диизопропилэтиламин; DMA: диметилацетамид; DMAP: 4-(диметиламино)пиридин; DMEM: модифицированная по способу Дульбекко среда Игла; DMEM/F12: модифицированная по способу Дульбекко среда и питательная смесь F-12; DMF: диметилформамид; DMSO: диметилсульфоксид; DPBS: фосфатно-солевой буферный раствор Дульбекко; DSC: N, N'-дисукцинимидилкарбонат; EDC: 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид; EDTA: этилендиаминтетрауксусная кислота; EEDQ: N-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидрохинолин; ELSD: испарительный детектор светорассеяния; экв.: эквивалент; ES: электрораспыление; AtOAc: этилацетат; Et2O: простой диэтиловый эфир; прим.: пример; FCS: эмбриональная бычья сыворотка; Fmoc: 9флуоренилметоксикарбонил; GI: электроиндукционная группа; ч: час; H2O: вода; Hal: галоген; HATU: 1[бис-(диметиламино)метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридиний-3-оксида гексафторфосфат; HCl: хлористоводородная кислота; HEPES: 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота; HIC: хроматография гидрофобного взаимодействия; HOAt: 1-гидрокси-7-азабензотриазол; HOBt: 1гидроксибензотриазол; HPLC: высокоэффективная жидкостная хроматография; HRMS: массспектрометрия с высоким разрешением; IC50: средняя ингибирующая концентрация; т.е.: id est, что означает то есть; IEC: ионообменная хроматография; iPrOH: 2-пропанол; iPr2O: простой диизопропиловый эфир; i.v.: внутривенно; MeCN: ацетонитрил; МеОН: метанол; MeTHF: 2-метилтетрагидрофуран; MFCO: 1-фтор-2-циклооктин-1-карбоновая кислота; MgSO4: сульфат магния; мин: минута; MsCl: метансульфонилхлорид; МТВЕ: простой метил-трет-бутиловый эфир; MTD: максимальная переносимая доза; NaH: гидрид натрия; NaCl: хлорид натрия; NaHCO3: гидрокарбонат натриа; н.о.: не определено; NHS: Nгидроксисукцинимид; NMP: 1-метил-2-пирролидон; ЯМР: ядерный магнитный резонанс; РАВА: парааминобензиловый спирт; PBS: фосфатно-солевой буферный раствор; PEG: полиэтиленгликоль; PNG-аза F: пептид-N-гликозидаза F; ppm: части на миллион; PR: частичный ответ; QS: quantum satis, что означает требуемое количество; Q-Tof: квадрупольная времяпролетная; колич.: количественный выход; RCG: реакционноспособная химическая группа; к.т.: комнатная температура; насыщ.: насыщенный; s.c: подкожно; SCID: тяжелый комбинированный иммунодефицит; SEC: эксклюзионная хроматография; Т3Р: пропилфосфоновый ангидрид; TBAF: фторид тетрабутиламмония; TFA: трифторуксусная кислота; TFS: выживший без опухоли; THF: тетрагидрофуран; TLC: тонкослойная хроматография; t1/2: период полужизни; tR: время удерживания; UPLC: сверхэффективная жидкостная хроматография; УФ: ультрафиолетовое излучение.
Фигуры
Фиг. 1 - эффективность in vivo прим. 6 в отношении ксенотрансплантата MDA-MB-231 у SCIDмышей.
Фиг. 2 - эффективность in vivo прим. 16, прим. 19, прим. 23 и прим. 32 в отношении ксенотрансплантата MDA-MB-231 у SCID-мышей при 2,5 мг/кг.
Фиг. 3 - эффективность in vivo прим. 16, прим. 19, прим. 23 и прим. 32 в отношении ксенотрансплантата MDA-MB-231 у SCID-мышей при 1,25 мг/кг.
Фиг. 4 - эффективность in vivo прим. 26 в отношении ксенотрансплантата MDA-MB-231 у SCIDмышей.
Фиг. 5 - эффективность in vivo прим. 29 в отношении ксенотрансплантата MDA-MB-231 у SCIDмышей.
Фиг. 6 - эффективность in vivo прим. 35 в отношении ксенотрансплантата MDA-MB-231 у SCIDмышей.
Фиг. 7 - эффективность in vivo прим. 41 в отношении ксенотрансплантата MDA-MB-231 у SCIDмышей.
- 8 045708
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к новым пептидным соединениям, выбранным из соединений формулы (I):
где
RCG1 представляет собой реакционноспособную химическую группу, которая является реакционноспособной в отношении химической группы, присутствующей на полипептиде, таком как антитело;
L представляет собой линкер формулы (II), определенной ниже;
Р представляет собой атом водорода, -ОН или активированный О.
Примеры активированного О, которые могут быть упомянуты, включают
где катион представляет собой, например, натрий, калий или цезий;
или
группу
в которой GI представляет собой по меньшей мере одну электроиндукционную группу, такую как NO2 или атом галогена (-Hal), например атом фтора (-F). Они могут представлять собой, например, следующие группы:
или
Линкер L, который присутствует в формуле (I), представлен формулой (II):
О
L2 (AA)W LI ί (П) где
L1 представлен формулой (III):
где если Р представляет собой атом водорода, то х=0 или 1, и у=1, и z=0;
если Р представляет собой -ОН, то x=y=z=0;
если Р представляет собой активированный О, то х=1, и y=z=0, или x=y=z=1;
J1, J2, J3 и J4 выбраны независимо друг от друга из CA1 и N;
ALK представляет собой (С1-С12)алкиленовую группу, например (С1-С6)алкилен, например, в форме -(СН2)п-, при этом n представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, и, например, находящееся в диапазоне от 1 до 6;
A1, A2, A3, А4, А5 и А6 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу.
- 9 045708 (AA)w представляет собой последовательность из w замещенных AAs или незамещенных аминокислот AAns, соединенных вместе посредством пептидных связей, где замещенная AAs или незамещенная AAns определены ниже;
w представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, например, от 1 до 6, такое как 2 или 3;
если (AA)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, то L2 представляет собой одинарную связь, (С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i-О(С1-С6)алкильную группу, (Cн2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, CH(SO3H)-(C1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-СН(SO3H), (С1-С6)алкилциклогексильную группу, C(=O)-(CiС6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-(0cН2СН2)i-0(c1С6)алкильную группу, C(=0)-(СН2СН20)i(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-CH(SO3H)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-СН(SO3H), C(=O)-(С1-С6)алкилциклогексильную группу, NA8-(C1С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-(0cН2СН2)i-О(С1С6)алкильную группу, NA8-(СН2СН2О)i(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-CH(SO3H), C(=O)-NA8-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-NA8-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-NA8-(C1С6)алкил-(ОСН2СН2)i-О(С1-С6)алкильную группу, C(=0)-NA8-(СН2СН20)i(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-CH(SO3H), NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(СН2СН2О)i(С1-С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (С1С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(0cН2СН2)i, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил(OCH2CH2)b (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=0)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA7-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7арильную группу, C(=O)-NA7-гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-C(=0)NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-(C1С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(C1С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкилNA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-(OCH2CH2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1С6)алкильную группу, группу C(=o)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=0)NA7-(С1-С6)алкил-(oСн2СН2)b C(=O)-NA8(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил(0СН2СН2)i или C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу;
если (AA)w представляет собой последовательность из w незамещенных аминокислот AAns, то L2 представляет собой
NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=0)-(C1-С6)алкил-(0СН2Сн2)i, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=0)NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(0cН2СН2)i, (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)NA7-(СН2СН2О)i(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-арильную группу, C(=O)-NA7-гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=0)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=0)(С1-С6)алкил-(0CH2CH2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(CiС6)алкил-C(=0)NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкилNA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(C1С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкил-(OCH2CH2)i, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(oСн2СН2)i, C(=O)-NA8-(C1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i или C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил(0cН2Сн2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу;
А7 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С16оуглеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое зве
- 10 045708 но независимо заменено -NHCO-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -CH(OH)-, -CH(SO3H)-, -O-, -C(=O)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=O)2-, -S(=O)2NH-, -S(=O)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)-, -O-P(=O)(OH)-O- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и -N(алкил)2; при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3-+Na).
A8 представляет собой атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу;
i представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, в таком диапазоне как от 1 до 35.
В соответствии с конкретным вариантом осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I):
RCG1-L-P(I) где
RCG1 представляет собой реакционноспособную химическую группу, которая является реакционноспособной в отношении химической группы, присутствующей на полипептиде, таком как антитело;
Р представляет собой атом водорода, -ОН или активированный О;
L представляет собой линкер формулы (II):
О д L2 (AA)w L1 (πχ где
L1 представлен формулой (III):
где если Р представляет собой атом водорода, то х=0 или 1, и у=1, и z=0;
если Р представляет собой -ОН, то x=y=z=0;
если Р представляет собой активированный О, то х=1, и y=z=0, или x=y=z=1;
Jb J2, J3 и J4 выбраны независимо друг от друга из CA1 и N;
ALK представляет собой (С1-С12)алкиленовую группу, например (С1-С6)алкилен, например, в форме -(СН2)п-, при этом n представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, и, например, находящееся в диапазоне от 1 до 6;
A1, A2, A3, А4, А5 и А6 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу.
(AA)w представляет собой последовательность из w замещенных AAs или незамещенных аминокислот AAns, соединенных вместе посредством пептидных связей;
w представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, например, от 1 до 6, такое как 2 или 3;
если (AA)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, то L2 представляет собой одинарную связь, (С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алkил-(OCH2CH2)i, (С1-С6)алкил(OСН2СН2)i-O(С1-С6)алκильную группу, (CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, CH(SO3H)-(C1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-CH(SO3H), (С1-С6)алкилциклогексильную группу, C(=O)-(C1С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-(OСН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-(OСH2СH2)i-O(С1С6)алкильную группу, C(=O)-(СН2СН2O)i(С1-С6)алkильную группу, C(=O)-CH(SO3H)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-CH(SO3H), C(=O)-(С1-С6)алкилциклогексильную группу, NA8-(C1С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алkил-(OСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-(OСH2СH2)i-O(С1С6)алкильную группу, NA8-(СН2СН2O)i(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-CH(SO3H), C(=O)-NA8-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алκил-(OСН2СН2)i, C(=O)-NA8-(CiС6)алкил-(OСН2СН2)i-O(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-CH(SO3H), NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(СН2СН2O)i(С1-С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (С1С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алkильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(0cН2СН2)i, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил(OCH2CH2)i, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил
- 11 045708 (ОСН2СН2)ь (C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1-NA7-(C1-C6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(C|-C6)αлкильную группу, группу C(=O)-(C1-C6)алкил-NA7, C(=0)-NA7-(CН2CН20)1(C1-C6)алкильную группу, C(=O)-NA7арильную группу, C(=O)-NA7-гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(C1-C6)алкил-NA7C(=0)-(C1-C6)алкил-(0CН2CН2)1, C(=O)-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-(C1C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1, C(=0)-(C1-C6)алкил-(0CН2CН2)1-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-NA7, NA8-(C1C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкил(ОСН2СН2)1, NA8-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7(С1-Сб)алкил-(ОСН2СН2)1, NA8-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкилNA7-(C1-C6)алкил-(OCH2CH2)1, NA8-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)αлкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)i, C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1С6)алкильную группу, группу C(=o)-NA8-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкил-(oCн2CН2)1, C(=O)-NA8(C1-C6)алкuл-NA7-(C1-C6)алкuльную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкил(оСН2СН2)1 или C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1-NA7-(C1-C6)алкильную группу;
если (AA)w представляет собой последовательность из w незамещенных аминокислот AAns, то L2 представляет собой NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу (C1-C6)алкил-NA7, NA7-(CН2CН2О)1(C1С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1С6)алкильную группу, группу (C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкuл-(0Cн2CН2)i, (C1-C6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкильную группу, группу (C1-C6)алкил-C(=0)NA7-(C1-C6)алкил-(0CН2CН2)1, (C1-C6)алкил-NA7(С1-С6)алкильную группу, группу (C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкил-(OCH2CH2)1, (C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1NA7-(C1-C6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-(C1-C6)алкил-NA7, C(=O)-NA7-(CH2CH2O)1(C1-C6)алкильную группу, C(=O)-NA7-арильную группу, C(=O)-NA7гетероарильную группу, C(=O)-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-(C1-C6)αлкилNA7C(=0)-(C1-C6)алкил-(0Cн2CН2)i, C(=O)-(C1-C6)αлкил-C(=O)NA7-(C1-C6)αлкильную группу, группу C(=O)(C1-C6)алkил-C(=0)NA7-(C1-C6)алкил-(0CН2CН2)1, C(=O)-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1, c(=O)-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-NA7, NA8-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1, NA8-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1, NA8-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1, NA8-(C1-C6)алкил-(OCH2CH2)1-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкил-(oCн2CН2)1, C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкил-(0cН2Cн2)1, C(=O)-NA8-(C1C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1 или C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1-NA7-(C1-C6)алкильную группу;
А7 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С16оуглеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NHC(=O)-, -N(алкuл)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(aлкил)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -СН(ОН)-, -CH(SO3H)-, -О-, -C(=O)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкил)-, -Р(=О)(ОН)-, -Р(=О)(ОН)О-, -О-Р(=О)(ОН)-, -О-Р(=О)(ОН)-О- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и -М(алкил)2, при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na);
A8 представляет собой атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу;
I представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, в таком диапазоне как от 1 до 35;
незамещенная аминокислота AAns обозначает природную или неприродную аминокислоту D- или L-конфигурации, идентичную аланину (Ala), β-аланину, γ-аминомасляной кислоте, 2-амино-2циклогексилуксусной кислоте, 2-амино-2-фенилуксусной кислоте, аргинину (Arg), аспарагину (Asn), аспарагиновой кислоте (Asp), цитруллину (Cit), цистеину (Cys), α,α-диметил-γ-аминомасляной кислоте, β,β-диметил-γ-аминомасляной кислоте, глутамину (Gln), глутаминовой кислоте (Glu), глицину (Gly), гомоцистеину, селеноцистеину, гомоселеноцистеину, гистидину (His), изолейцину (Ile), лейцину (Leu), лизину (Lys), ε-ацетиллизину (AcLys), метионину (Met), орнитину (Orn), фенилаланину (Phe), пролину (Pro), серину (Ser), треонину (Thr), триптофану (Trp), тирозину (Tyr) и валину (Val) или являющуюся их производным.
В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления настоящее изобретение относится
- 12 045708 к соединениям формулы (I):
где
RCG1 представляет собой реакционноспособную химическую группу, которая является реакционноспособной в отношении химической группы, присутствующей на полипептиде, таком как антитело;
Р представляет собой атом водорода, -ОН или активированный О;
L представляет собой линкер формулы (II):
О ^L2^(AA)W-L1+ (πχ где
L1 представлен формулой (III):
где если Р представляет собой атом водорода, то х=0 или 1, и у=1, и z=0;
если Р представляет собой -ОН, то x=y=z=0;
если Р представляет собой активированный О, то х=1, и y=z=0, или x=y=z=1;
J1, J2, J3 и J4 выбраны независимо друг от друга из CA1 и N;
ALK представляет собой (С1-С12)алкиленовую группу, например (С1-С6)алкилен, например, в форме -(СН2)П-, при этом n представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, и, например, находящееся в диапазоне от 1 до 6;
A1, A2, A3, А4, А5 и А6 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1С6)алкильную группу, например, атом водорода или метальную группу.
(AA)w представляет собой последовательность из w замещенных AAs или незамещенных аминокислот AAns, соединенных вместе посредством пептидных связей;
w представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, например, от 1 до 6, такое как 2 или 3;
если (AA)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, то L2 представляет собой одинарную связь, (С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1-О(С1-С6)алкильную группу, (СН2СН2О)1(С1-С6)алкильную группу, СН(SO3H)-(С1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-СН(SO3H), (С1-С6)алкилциклогексильную группу, С(=О)-(С1С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, С(=О)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-О(С1С6)алкильную группу, С(=О)-(СН2СН2О)1(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-СН(8О3Н)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-СН(SO3H), С(=О)-(С1-С6)алкилциклогексильную группу, NA8-(С1С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-О(С1С6)алкильную группу, NA8-(СН2СН2О)1(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-CH(SO3H), C(=O)-NA8-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-NA8-(С1С6)алкил-(ОСН2СН2)1-О(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(CH2CH2O)1(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-СН(SO3H), NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(СН2СН2О)1(-С1С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (С1С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-NA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA77, C(=O)-NA7-(СН2СН2О)1(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7арильную группу, C(=O)-NA7-гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-Сб)алкИл-NA7C(=O)-(С1-Сб)алkил-(ОСН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкильную группу, группу С(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, С(=О)-(С1С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(С1С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1, NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкилNA7-(С1-С6)алкил-(OCH2CH2)1, NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу
- 13 045708
C(=O)-NA8-(С1-С6)αлкuл-NA7C(=O)-(С1-С6)αлкил-(ОСН2СН2)i, С(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-NA8(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил(OCH2CH2)i или C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-NA7-(С1-С6)алкильную группу;
если (AA)w представляет собой последовательность из w незамещенных аминокислот AAns, то L2 представляет собой NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(CH2CH2O)1(C1С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)1, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=0)NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)1, (С1-С6)алкил-NA7(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(OCH2CH2)1, (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1NA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA7-(CH2CH2O)1(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-арильную группу, C(=O)-NA7гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(C1С6)алкил-NA7C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)1, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)αлkuл-C(=O)NA7-(С1-С6)αлкuл-(ОСН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)1, C(=O)-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, NA8-(C1С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1, NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1С6)алкил-(ОСН2СН2)1, NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкилNA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1С6)алкил-C(=0)NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)1, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-8-NA(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1 или C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1-NA7-(С1-С6)алкильную группу;
А7 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NHC(=O)-, -N(αлкuл)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -CH(OH)-, -CH(SO3H)-, -О-, -C(=O)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)-, -O-P(=O)(OH)-O- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -О-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и -N(алкил)2, при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na);
А8 представляет собой атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу;
представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, в таком диапазоне как от 1 до 35, где указанные замещенные аминокислоты AAs характеризуются формулой (VI):
где
Т представляет собой насыщенную или ненасыщенную, линейную или разветвленную тривалентную (С1-С8)алкильную группу, предпочтительно Т представляет собой
или
группа U представляет собой одинарную связь, -NHC(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-,
- 14 045708
-C(=O)N(αлкил)-, -NHC(=O)NH-, -NHC(=NH)NH-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -S-, -Se-, -О-, -NH-, -N(алкил)-, -C(=O)-, -ОР(=О)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, ^(=ОЖалкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)- или -O-P(=O)(OH)-O, например, группа U представляет собой -NH-C(=O)- или -C(=O)NH-;
А9 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NH-C(=O)-, -N(αлкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -NHC(=O)NH-, -NHC(=NH)NH-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -CH(OH)-, -CH(SO3H)-, -СН(O-алкил)-, -CHF-, -CF2-, -S-, -Se-, -O-, -NH-, -N(алкил)-, -N+Н(алкил)-, -N+(алкил)2-, -C(=O)-, -ОР(=О)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=O)2-, -S(=O)2NH-, -S(=O)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH) , -O-P(=O)(OH)-O- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и -N(алкил)2, например, А9
ΗΟ^γ^ΟΗ он представляет собой -[(СН2)2-О]4-СН3, -[(СН2)2-О]24-СНз, ’
О Λ °н он он о γ ,ОН Он , Он или -[(CH2)2-O)]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А9, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I):
RCG1-L-P(I) где
RCG1 представляет собой реакционноспособную химическую группу, которая является реакционноспособной в отношении химической группы, присутствующей на полипептиде, таком как антитело;
Р представляет собой атом водорода, -ОН или активированный О;
L представляет собой линкер формулы (II):
О
L2 Н (AA)w (πχ где
L1 представлен формулой (III):
где если Р представляет собой атом водорода, то х=0 или 1, и у=1, и z=0;
если Р представляет собой -ОН, то x=y=z=0;
если Р представляет собой активированный О, то х=1, и y=z=0, или x=y=z=1;
J1, J2, J3 и J4 выбраны независимо друг от друга из CA1 и N;
ALK представляет собой (С1-С12)алкиленовую группу, например (С1-С6)алкилен, например, в форме -(СН2)п-, при этом n представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, и, например, находящееся в диапазоне от 1 до 6;
Ab A2, A3, А4, А5 и А6 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу.
(AA)w представляет собой последовательность из w замещенных AAs или незамещенных амино
- 15 045708 кислот AAns, соединенных вместе посредством пептидных связей;
w представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, например, от 1 до 6, такое как 2 или 3;
если (AA)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, то L2 представляет собой одинарную связь, (С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-(OCH2CH2)i, (С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i-О(С1-С6)алкильную группу, (Cн2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, CH(SO3H)-(C1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-CH(SO3H), (С1-С6)алкилциклогексильную группу, C(=O)-(CiС6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-(0cН2СН2)i-0(c1С6)алкильную группу, C(=0)-(СН2СН20)i(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-CH(SO3H)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-СН(SO3H), C(=O)-(С1-С6)алкилциклогексильную группу, NA8-(C1С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-(0cН2СН2)i-О(С1С6)алкильную группу, NA8-(СН2СН2О)i(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-CH(SO3H), C(=O)-NA8-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-NA8-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-NA8-(C1С6)алкил-(ОСН2СН2)i-О(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-CH(SO3H), NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(СН2СН2О)i(С1-С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (Ср С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(0cН2СН2)i, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил(0СН2СН2)i, (С1-С6)алкил-(OCH2CH2)i-NA7-(C1-С6)алкильную группу, C(=0)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7, C(=0)-NA7-(СН2СН20)i(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7арильную группу, C(=O)-NA7-гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкильную группу, группу С(=0)-(С1-С6)алкил-C(=0)NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-(CiС6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(C1С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкилNA7-(С1-С6)алкил-(OCH2CH2)i, NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, С(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1С6)алкильную группу, группу C(=o)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(oСн2СН2)i, (=OC)-NA8(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил(0СН2СН2)i или C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу;
если (AA)w представляет собой последовательность из w незамещенных аминокислот AAns, то L2 представляет собой NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(CH2CH2O)i(C1С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(0Сн2СН2)i, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=0)NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, (С1-С6)алкил-NA7(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(OCH2CH2)i, (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)iNA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA7-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-арильную группу, C(=O)-NA7гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(C1С6)алкил-NA7C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=o)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(oСн2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(C1С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-(oСн2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1С6)алкил-NA7C(=O)-(c1-С6)алкил-(oСн2СН2)i, C(=0)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(oСн2СН2)i, c(=O)-NA8-(С1-С6)алкилNA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i или C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу;
А7 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С16оуглеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NHC(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -CH(OH)-, -CHCSOjH)-, -о-, -C(=O)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)-, -O-P(=O)(OH)-O- или гетеро- 16 045708 циклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и -N(алкил)2, при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3-+Na);
A8 представляет собой атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу;
i представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, в таком диапазоне как от 1 до 35, где указанные замещенные аминокислоты AAs характеризуются формулой (VI):
где
Т представляет собой насыщенную или ненасыщенную, линейную или разветвленную тривалентную (С1-С8)алкильную группу, предпочтительно Т представляет собой “ ’ или ’ группа U представляет собой одинарную связь, -NHC(=O)-, -N(αлкил)C(=O)-, -C(=O)NH-C(=O)N(алкил)-, -NHC(=O)NH-, -NHC(=NH)NH-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -S-, -Se-, -О-, -NH-, -N(алкил)-, -C(=O)-, -ОР(=О)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкuл)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)- или -O-P(=O)(OH)-O, например, группа U представляет собой -NH-C(=O)- или -C(=O)NH-;
А9 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NH-C(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -NHC(=NH)NH-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -CH(OH)-, -CH(SO3H)-, -СН(O-алкил)-, -CHF-, -CF2-, -S-, -Se-, -О-, -NH-, -N(αлкил)-, -N+Н(алкил)-, -N+(алкил)2-, -C(=O)-, -ОР(=О)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, N(алкил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)-, -ОP(=O)(OH)-O- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, NH2, -NH-алкила и
-N(алкил)2, например, А9 представляет собой -[(СН2)2-О]4-СН3, -[(СН2)2-О]24-СН3, ' к θ θ Jk ОН т Т ОН ОН О у
НО^у^ОН лу^он он он он он или -[(CH2)2-O)]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H; ’ при этом следует понимать, что каждый А9, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I):
RCG1-L-P(I) где
RCG1 представляет собой реакционноспособную химическую группу, которая является реакционноспособной в отношении химической группы, присутствующей на полипептиде, таком как антитело;
Р представляет собой атом водорода, -ОН или активированный О;
L представляет собой линкер формулы (II):
О (M)w LI
- 17 045708 где
L1 представлен формулой (III):
где если Р представляет собой атом водорода, то х=0 или 1, и у=1, и z=0;
если Р представляет собой -ОН, то x=y=z=0;
если Р представляет собой активированный О, то х=1, и y=z=0, или x=y=z=1;
J1, J2, J3 и J4 выбраны независимо друг от друга из CA1 и N;
ALK представляет собой (С1-С12)алкиленовую группу, например (С1-С6)алкилен, например, в форме -(СН2)п-, при этом n представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, и, например, находящееся в диапазоне от 1 до 6;
A1, A2, A3, А4, А5 и А6 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1С6)алкильную группу, например, атом водорода или метальную группу.
(AA)w представляет собой последовательность из w замещенных AAs или незамещенных аминокислот AAns, соединенных вместе посредством пептидных связей;
w представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, например, от 1 до 6, такое как 2 или 3;
если (AA)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, то L2 представляет собой одинарную связь, (С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-(OCH2CH2)1, (С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1-О(С1-С6)алкильную группу, (CH2CH2O)1(С1-С6)алкильную группу, CH(SO3H)-(C1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-СН(SO3H), (С1-С6)алкилциклогексильную группу, C(=O)-(C1С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-О(С1С6)алкильную группу, C(=O)-(СН2СН2О)1(С1-С6)алkильную группу, C(=O)-CH(SO3H)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алkил-СН(SO3H), C(=O)-(С1-С6)алкилциклогексильную группу, NA8-(C1С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алkил-(ОСН2СН2)1, NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-О(С1С6)алкильную группу, NA8-(СН2СН2О)1(С1-С6)алkильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-СН(SO3H), C(=O)-NA8-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-NA8-(C1С6)алкил-(ОСН2СН2)1-О(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(CH2CH2O)1(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-СН(SO3H), NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алkил-NA7, NA7-(СН2СН2О)1(С1-С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (С1С6)алκил-NA7C(=O)-(С1-С6)алκильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алkил-(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алκил-(OCH2CH2)1-NA7-(C1-С6)алκильную группу, C(=O)-NA7-(С1-С6)алkильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA7-(СН2СН2О)1(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7арильную группу, C(=O)-NA7-гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкильную группу, группу С(=O)-(С1-С6)алkил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-(C1С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-NA7-(С1-С6)алkильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(C1С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алkил(ОСН2СН2)1, NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алkил-(ОСН2СН2)1, NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкилNA7-(С1-С6)алкил-(OCH2CH2)1, NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)αлkил-NA7C(=O)-(С1-С6)αлkил-(ОСН2СН2)i, С(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-NA8(С1-С6)алkил-NA7-(C1-С6)алkильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1 или C(=O)-NA8-(С1-С6)алκил-(ОСН2СН2)1-NA7-(С1-С6)алκильную группу;
если (AA)w представляет собой последовательность из w незамещенных аминокислот AAns, то L2 представляет собой NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(CH2CH2O)1(C1С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (С1-С6)алkил-NA7C(=O)-(С1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алkил-(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алкил-NA7(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алkил-NA7-(С1-С6)алкил-(OCH2CH2)1, (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1NA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7,
- 18 045708
C(=O)-NA7-(CH2CH2O)1(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-арильную группу, C(=O)-NA7гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1C6)алкил-NA7C(=0)-(C1-C6)алкил-(0CН2CН2)1, C(=O)-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=0)-(C1-C6)алkил-C(=0)NA7-(C1-C6)алкил-(0CН2CН2)1, C(=O)-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алkильную группу, группу C(=O)-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1, C(=0)-(C1-C6)алкил-(0CН2CН2)1NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-NA7, NA8-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1С6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1, NA8-(C1-C6)алкилC(=O)NA7-(C1-C6)алkильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1, NA8(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1, NA8-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)алкилNA7C(=O)-(C1-C6)αлкил-(ОCН2CН2)1, C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1, C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7-(C1С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1 или C(=O)-NA8(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)1-NA7-(C1-C6)алкильную группу;
А7 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NHC(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -СН(ОН)-, -CH(SO3H)-, -О-, -C(=O)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)-, -O-P(=O)(OH)-O- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и -N(алкил)2, при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na);
A8 представляет собой атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу;
I представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, в таком диапазоне как от 1 до 35, где указанные замещенные аминокислоты AAs характеризуются формулой (VI):
где
Т представляет собой насыщенную или ненасыщенную, линейную или разветвленную тривалентную (С1-С8)алкильную группу, предпочтительно Т представляет собой или ’ группа U представляет собой одинарную связь, -NHC(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-C(=O)N(αлkил)-, -NHC(=O)NH-, -NHC(=NH)NH-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -S-, -Se-, -О-, -NH-, -N(алкил)-, -C(=O)-, -ОР(=О)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алκил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)- или -O-P(=O)(OH)-O, например, группа U представляет собой -NH-C(=O)- или -C(=O)NH-;
А9 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NH-C(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -NHC(=NH)NH-OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -СН(ОН)-, -CH(SO3H)-, -СН(О-алкил)-, -CHF-, -CF2-, -S-, -Se-, -О-, -N(алкил)-, -N+Н(алкил)-, -N+(алкил)2-, -ОР(=О)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алkил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)-, -O-P(=O)(OH)-O- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и -N(алкил)2, например, А9 представляет собой -[(СН2)2-О]4-СН3, -[(СН2)2-О]24-СН3,
- 19 045708
или -[(CH2)2-O)]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А9, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I):
где
RCG1 представляет собой реакционноспособную химическую группу, которая является реакционноспособной в отношении химической группы, присутствующей на полипептиде, таком как антитело;
Р представляет собой атом водорода, -ОН или активированный О;
L представляет собой линкер формулы (II):
О
L2 Н (AA)w L1 (πχ где
L1 представлен формулой (III):
где если Р представляет собой атом водорода, то х=0 или 1, и у=1, и z=0;
если Р представляет собой -ОН, то x=y=z=0;
если Р представляет собой активированный О, то х=1, и y=z=0, или x=y=z=1;
J1, J2, J3 и J4 выбраны независимо друг от друга из CA1 и N;
ALK представляет собой (С1-С12)алкиленовую группу, например (С1-С6)алкилен, например, в форме -(СН2)п-, при этом n представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, и, например, находящееся в диапазоне от 1 до 6;
Ab A2, A3, А4, А5 и А6 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу.
(AA)w представляет собой последовательность из w замещенных AAs или незамещенных аминокислот AAns, соединенных вместе посредством пептидных связей;
w представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, например, от 1 до 6, такое как 2 или 3;
если (AA)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, то L2 представляет собой одинарную связь, (С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-(OCH2CH2)1, (С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1-О(С1-С6)алкильную группу, (CH2CH2O)1(С1-С6)алкильную группу, CH(SO3H)-(C1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-СН(SO3H), (С1-С6)алкилциклогексильную группу, C(=O)-(C1С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-О(С1С6)алкильную группу, C(=O)-(СН2СН2О)1(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-CH(SO3H)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-СН(SO3H), C(=O)-(С1-С6)алкилциклогексильную группу, NA8-(C1С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-О(С1С6)алкильную группу, NA8-(СН2СН2О)1(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-СН(SO3H), C(=O)-NA8-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-NA8-(C1С6)алкил-(ОСН2СН2)1-О(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(CH2CH2O)1(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-СН(SO3H), NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(СН2СН2О)1(С1-С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (С1С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алкил-(OCH2CH2)1-NA7-(C1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(С1-С6)алкильную
- 20 045708 группу, группу C(=O)-(C1-C6)алкил-NA7, C(=O)-NA7-(СН2СН2О)i(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7арильную группу, C(=O)-NA7-гетероарильную группу, C(=O)-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=0)-(C1-C6)алкил-NA7C(=0)-(C1-C6)алкил-(0CН2CН2)i, C(=O)-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкильную группу, группу С(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, C(=O)-(C1C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкuльную группу, группу C(=0)-(C1-C6)алкuл-NA7-(C1-C6)алкил-(0CН2CН2)i, C(=0)-(C1-C6)алкил-(0CН2CН2)i-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-NA7, NA8-(C1С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкил(OCH2CH2)i,NA8-( С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкилNA7-(С1-С6)алкил-(OCH2CH2)i, NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, C(=O)-NA8-(C1-C6)алкuл-C(=O)NA7-(C1С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i,C(= O)-NA8(С1-С6)алкил-NA7-(C1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкил(OCH2CH2)i или C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)i-NA7-(C1-C6)алкильную группу;
если (AA)w представляет собой последовательность из w незамещенных аминокислот AAns, то L2 представляет собой NA7-(C1-C6)алкuльную группу, группу (C1-C6)алкил-NA7, NA7-(CН2CН2О)i(C1С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1С6)алкильную группу, группу (C1-C6)алкuл-NA7C(=0)-(C1-C6)алкuл-(0CН2CН2)i, (C1-C6)алкил-C(=O)NA7(С1-С6)алкильную группу, группу (C1-C6)алкил-C(=0)NA7-(C1-C6)алкил-(0CН2CН2)i, (C1-C6)алкил-NA7(С1-С6)алкильную группу, группу (C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкил-(OCH2CH2)i, (C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)iNA7-(C1-C6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-(C1-C6)алкил-NA7, C(=O)-NA7-(CH2CH2O)i(C1-C6)алкuльную группу, C(=O)-NA7-арильную группу, C(=O)-NA7гетероарильную группу, C(=O)-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-(C1C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкuл-(ОCН2CН2)i, C(=O)-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)i, C(=O)-(C1-C6)алкuл-NA7-(C1С6)алкильную группу, группу C(=O)-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)i, C(=O)-(C1-C6)алкил(ОCН2CН2)i-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-NA7, NA8-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)i, NA8-(C1C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкил(ОCН2CН2)i, NA8-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу NA8-(C1-C6)алкил-NA7-(C1C6)алкил-(ОCН2CН2)i, NA8-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)i-NA7-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8(C1-C6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1C6)алкил-NA7C(=O)-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)i, C(=O)-NA8-(CrC6)алкил-C(=O)NA7-(CrC6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-C(=O)NA7-(C1-C6)алкuл-(ОCН2CН2)i, C(=O)-NA8-(C1-C6)алкилNA7-(C1-C6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-NA7-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)i или C(=O)-NA8-(C1-C6)алкил-(ОCН2CН2)i-NA7-(C1-C6)алкильную группу;
А7 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NHC(=O)-, -N(αлкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкuл)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -CH(OH)-, -CH(SO3H)-, -О-, -C(=O)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-, S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)-, -O-P(=O)(OH)-O- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и N(алкил)2, при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na);
A8 представляет собой атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу;
i представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, в таком диапазоне как от 1 до 35, где указанные замещенные аминокислоты AAs характеризуются формулой (VI):
где
Т представляет собой насыщенную или ненасыщенную, линейную или разветвленную тривалент- 21 045708 ную (С1-С8)алкильную группу, предпочтительно Т представляет собой
или
группа U представляет собой одинарную связь, -NHC(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(αлкил)-, -NHC(=O)NH-, -NHC(=NH)NH-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -S-, -Se-, -О-, -NH-, -N(алкил)-, -C(=O)-, -ОР(=О)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)- или -O-P(=O)(OH)-O, например, группа U представляет собой -NH-C(=O)- или -C(=O)NH-;
А9 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NH-C(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -CH(OH)-, -CH(SO3H)-, -СН(O-алкил)-, -CHF-, -CF2-, -Se-, -О-, -N(αлкил)-, -N+Н(алкил)-, -N+(алкил)2-, -ОР(=О)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2--S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)-, -O-P(=O)(OH)-O- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и -N(алкил)2, например, А9 пред-
ставляет собой -[(СН2)2-О]4-СН3, -[(СН2)2-О]24-СН3,
или -[(CH2)2-O)]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А9, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I):
RCG1-L-P(I) где
RCG1 представляет собой реакционноспособную химическую группу, которая является реакционноспособной в отношении химической группы, присутствующей на полипептиде, таком как антитело;
Р представляет собой атом водорода, -ОН или активированный О;
L представляет собой линкер формулы (II):
О
-L2 (AA)wL1~ (П), где
L1 представлен формулой (III):
где если Р представляет собой атом водорода, то х=0 или 1, и у=1, и z=0;
если Р представляет собой -ОН, то x=y=z=0;
если Р представляет собой активированный О, то х=1, и y=z=0, или x=y=z=1;
J1, J2, J3 и J4 выбраны независимо друг от друга из CA1 и N;
ALK представляет собой (С1-С12)алкиленовую группу, например (С1-С6)алкилен, например, в форме
- 22 045708
-(СН2)П-, при этом n представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, и, например, находящееся в диапазоне от 1 до 6;
A1, A2, A3, А4, А5 и А6 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (Ср С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу.
(AA)w представляет собой последовательность из w замещенных AAs или незамещенных аминокислот AAns, соединенных вместе посредством пептидных связей;
w представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, например, от 1 до 6, такое как 2 или 3;
(AA)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs и/или w незамещенных аминокислот AAns, и L2 представляет собой (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу;
А7 определен выше.
В соответствии с по меньшей мере одним вариантом осуществления (AA)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, и L2 представляет собой (С1-С6)алкильную группу, например группу (СН2)3;
С(=O)-(С1-С6)алкильную группу, например группу С(=О)-(СН2)3; или (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, например группу (CH2)2-NA7-(CH2)2, в которой А7 определен выше.
В соответствии с по меньшей мере одним вариантом осуществления (AA)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, и L2 представляет собой (С1-С6)алкильную группу, например группу (СН2)3;
C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, например группу С(=О)-(СН2)3; или (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, например группу -(CH2)2-NA7-(CH2)2-, в которой А7 представляет собой группу -C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-(Ch2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
В соответствии с другим вариантом осуществления (AA)w содержит w незамещенных аминокислот AAns, и L2 представляет собой (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, например группу (CH2)2-NA7-(CH2)2, в которой А7 определен выше.
В соответствии с другим вариантом осуществления (AA)w содержит w незамещенных аминокислот AAns, и L2 представляет собой (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, например группу (CH2)2-NA7-(CH2)2, в которой А7 представляет собой группу C(=O)-[(СН2)2-О]а-СН3, где а представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, например, находящееся в диапазоне от 1 до 24, такое как 4, 7 и 24, например, А7 представляет собой группу С(=О)-[(СН2)2-О]4-СН3, группу С(=О)-[(СН2)2_О]7-СН3 или группу С(=О)-[(СН2)2-О]24-СН3;
группу -C(=O)-(Ch2)2-C(=O)-NH-(Ch2)2_SO3H или группу C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-[(CH2)2-O]a-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H, где а представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, в таком диапазоне как от 1 до 24, например 4, например, А7 представляет собой группу -C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-[(CH2)2.O]4-(CH2)2.C(=O)-NH-(CH2)2SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na);
В соответствии с по меньшей мере одним вариантом осуществления (AA)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs и/или w незамещенных аминокислот AAns, и L2 представляет собой NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, NA7-арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (C1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-NA7-(С1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)iNA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=O)-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA7-(СН2СН2О)i(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-арильную группу, C(=O)-NA7гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(CiС6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(OCH2CH2)i, C(=o)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(oСн2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(C1С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(C1С6)алкил-C(=O)NA7-(C1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-(oСн2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(C1- 23 045708
С6)алкил-NA7C(=O)-(Сl-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(Сl-С6)алкил-C(=O)NA7-(Сl-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, С(=О)-МЛ8-(С1-С6)алкилКЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i или C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу; где i, Л7 и Л8 определены выше.
В соответствии с другим вариантом осуществления (ЛЛ)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту ЛЛ, и/или w незамещенных аминокислот ЛЛП8, и L2 представляет собой NA7-(С1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, NΛ7арильную группу, КЛ7-гетероарильную группу, (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, (С1-С6)-Салкил(=О)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1-NA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7, С(=О)-КЛ7(СН2СН2О)i(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-КЛ7-арильную группу, C(=O)-NA7-гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкил-(OCH2CH2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(С1-С6)алкилNA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, NA8-(С1С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкилNA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу или C(=O)-Na8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу; где i, А7 и Л8 определены выше.
В соответствии с другим вариантом осуществления (ΛΛ)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту ЛЛ, и/или w незамещенных аминокислот ЛЛ|К, и L2 представляет собой NA7-(С1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, (С1-С6)алкилNA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, (С1С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2cН2)i, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(OCH2CH2)i, (С1С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA7-(Cн2CH2O)1(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-(С1-С6)алкилNA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу c(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=OHCl-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1С6)алкил-(ОСН2СН2);, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1-С6)алкилNA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2Сн2)1, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкильную группу, NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, NA8-(С1-С6)алкил-NA7(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу или C(=O)-NA8-(С1С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу; где i, А7 и Л8 определены выше.
В соответствии с другим вариантом осуществления (ΛΛ)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту ЛЛ, и/или w незамещенных аминокислот ЛЛ|К, и L2 представляет собой NA7-(С1С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, (С1С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-КЛ7(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-(С1-С6)алкилNA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкильную группу, NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, NA8-(С1-С6)алкил-NA7(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу или C(=O)-NA8-(С1С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу; где А7 и Л8 определены выше.
В соответствии с по меньшей мере другим вариантом осуществления (ЛЛ^ содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту ЛЛ, и/или w незамещенных аминокислот ЛЛП,, и L2 содержит А7, представляющий собой группу С(=О)-[(СН2)2-О]4-СН3; группу С(=О)-[(СН2)2-О]7-СН3; группу С(=О)[(СН2)2-О]24-СН3; группу C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H; группу С(=О)-(СН2)2-С(=О)-ИН-[(СН2)2O]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 +Na).
- 24 045708
В соответствии с по меньшей мере другим вариантом осуществления (AA)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs и/или w незамещенных аминокислот AAns, и L2 представляет собой
L1 может представлять собой одно из следующих (III1-5):
| Р | Примеры L1 |
| —NAg-ALKNA,— (НИ) | |
| н | j^A 9 1 ,Д J1 ^ O NyALK ΝΑ,, (|||2) NA^jf1’ |
| он | (1113) |
| ι ·2 X A J1 Ио·^ (ПИ) -NA/Jp | |
| активированный О | A A Ji O N^ ALK NA5 (1115) |
- 25 045708 где
J1, J2, J3 и J4 выбраны независимо друг от друга из CA1 и N;
ALK представляет собой (С1-С12)алкиленовую группу, например (С1-С6)алкилен, например, в форме -(СН2)п-, при этом n представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 12, и, например, находящееся в диапазоне от 1 до 6;
A1, A2, A3, А4, А5 и А6 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1С6)алкильную группу, например, атом водорода или метильную группу.
АА обозначает аминокислоту. Аминокислота представляет собой соединение формулы NH2CHA10-COOH, где А10 представляет собой боковую цепь АА. АА может представлять собой замещенную AAs или незамещенную AAns аминокислоту.
Незамещенная аминокислота AAns обозначает природную или неприродную аминокислоту D- или L-конфигурации, идентичную аланину (Ala), β-аланину, γ-аминомасляной кислоте, 2-амино-2циклогексилуксусной кислоте, 2-амино-2-фенилуксусной кислоте, аргинину (Arg), аспарагину (Asn), аспарагиновой кислоте (Asp), цитруллину (Cit), цистеину (Cys), α,α-диметил-γ-аминомасляной кислоте, β,β-диметил-γ-аминомасляной кислоте, глутамину (Gln), глутаминовой кислоте (Glu), глицину (Gly), гомоцистеину, селеноцистеину, гомоселеноцистеину, гистидину (His), изолейцину (Ile), лейцину (Leu), лизину (Lys), ε-ацетиллизину (AcLys), метионину (Met), орнитину (Orn), фенилаланину (Phe), пролину (Pro), серину (Ser), треонину (Thr), триптофану (Trp), тирозину (Tyr) и валину (Val) или являющуюся их производным.
Например, AAns представляет собой аланин (Ala), цитруллин (Cit), глицин (Gly), изолейцин (Ile), лейцин (Leu), лизин (Lys), s-ацетиллизин (AcLys), фенилаланин (Phe), триптофан (Trp) и валин (Val).
Замещенные аминокислоты AAs характеризуются формулой (VI):
где
Т представляет собой насыщенную или ненасыщенную, линейную или разветвленную тривалентную (С1-С8)алкильную группу, например, Т представляет собой или ’ группа U представляет собой одинарную связь, -NHC(=O)-, -N(алkил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(αлкил)-, -NHC(=O)NH-, -NHC(=NH)NH-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -S-, -Se-, -О-, -NH-, -N(алkил)-, -C(=O)-, -ОР(=О)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=O)2-, -S(=O)2NH-, -S(=O)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)- или -O-P(=O)(OH)-O, например, группа U представляет собой -NH-C(=O)- или -C(=O)NH-;
А9 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NH-C(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -NHC(=O)NH-, -NHC(=NH)NH-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -CH(OH)-, -CH(SO3H)-, -СН(O-алкил)-, -CHF-, -CF2-, -S-, -Se-, -O-, -NH-, -N(алkил)-, -N+Н(алкил)-, -N+(алкил)2-, -C(=O)-, -OP(=O)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)-, -O-P(=O)(OH)-O- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и -N(алкил)2, например, А9 представляет собой [(СН2)2-О]4-СН3, [(СН2)2-О]24-СН3,
или [(CH2)2-O)]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А9, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
- 26 045708
В соответствии с конкретным вариантом осуществления замещенные аминокислоты AAs характеризуются формулой (VI):
где
Т представляет собой насыщенную или ненасыщенную, линейную или разветвленную тривалентную (С1-С8)алкильную группу, например, Т представляет собой или ; группа U представляет собой одинарную связь, -NHC(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(αлкил)-, -NHC(=O)NH-, -NHC(=NH)NH-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -S-, -Se-, -O-, -NH-, -N(алкил)-, -C(=O)-, -OP(=O)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=O)2-, -S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)- или -O-P(=O)(OH)-O, например, группа U представляет собой -NH-C(=O)- или -C(=O)NH-;
A9 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NH-C(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -NHC(=NH)NH-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -CH(OH)-, -CH(SO3H)-, -СН(С-алкил)-, -CHF-, -CF2-, -S-, -Se-, -О-, -NH-, -N(αлкил)-, -N+Н(алкил)-, -N+(алкил)2-, -C(=O)-, -ОР(=О)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)-, -O-P(=O)(OH)-O- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и -N(алкил)2, например, А9 представляет собой [(СН2)2-О]4-СН3, [(СН2)2-О]24-СН3,
или [(CH2)2-O)]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А9, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления замещенные аминокислоты AAs характеризуются формулой (VI):
где
Т представляет собой насыщенную или ненасыщенную, линейную или разветвленную тривалент+1 ную (С1-С8)алкильную группу, например, Т представляет собой “Т· или ’ группа U представляет собой одинарную связь, -NHC(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(αлкил)-, -NHC(=O)NH-, -NHC(=NH)NH-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -S-, -Se-, -О-, -NH-, -N(алкил)-, -C(=O)-, -ОР(=О)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, -S(=О)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)- или -O-P(=O)(OH)-O, например, группа U представляет собой -NH-C(=O)- или -C(=O)NH-;
А9 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NH-C(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -NHC(=NH)NH-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -CH(OH)-, -CH(SO3H)-, -СН(O-алкил)-, -CHF-, -CF2-, -S-, -Se-, -О-,
- 27 045708
-N(алкил)-, -N+Н(алкил)-, -К+(алкил)2-, -ОР(=О)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=О)2-, -S(=O)2NH-, -S(=O)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)-, -O-P(=O)(OH)-O- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и N(алкил)2, например, А9 представляет собой [(СН2)2-О]4-СН3, [(СН2)2-О]24-СН3,
или [(CH2)2-O)]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А9, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления замещенные аминокислоты AAs характеризуются формулой (VI):
где
Т представляет собой насыщенную или ненасыщенную, линейную или разветвленную тривалент ную (С1-С8)алкильную группу, например, Т представляет собой или
группа U представляет собой одинарную связь, -NHC(=O)-, -N(αлkил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -NHC(=O)NH-, -NHC(=NH)NH-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -S-, -Se-, -O-, -NH-, -N(алкил)-, -C(=O)-, -OP(=O)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=O)2-, -S(=O)2NH-, -S(=O)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)- или -O-P(=O)(OH)-O, например, группа U представляет собой -NH-C(=O)- или -C(=O)NH-;
А9 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NH-C(=O)-, -N(алкил)C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)N(алкил)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -CH(OH)-, -CH(SO3H)-, -СН(С-алкил)-, -CHF-, -CF2-, -Se-, -O-, -N(αлkил)-, -N+Н(алкил)-, -N+(αлкил)2-, -ОР(=О)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NHS(=O)2-, -N(алкил)S(=O)2-,-S(=O)2NH-, -S(=O)2N(алкил)-, -P(=O)(OH)-, -P(=O)(OH)O-, -O-P(=O)(OH)-, -O-P(=O)(OH)-O- или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, атома галогена, -NH2, -NH-алкила и -N(алкил)2, например, А9 представляет собой [(СН2)2-О]4-СНз, [(СН2)2-О]24-СНз,
или [(CH2)2-O)]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А9, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
- 28 045708
Примеры Т, которые могут быть упомянуты, включают
В соответствии с по меньшей мере одним вариантом осуществления замещенные аминокислоты AAs характеризуются формулой (VI), где Т представляет собой насыщенную или ненасыщенную, линейную или разветвленную тривалентную (С1-С8)алкильную группу, такую как
или
группа U представляет собой -NH-C(=O)- или -C(=O)NH-;
А9 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, где необязательно по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -C(=O)NH-, -СН(ОН)-, -CH(SO3H)-, -О-, -NH-, или -C(=O)-, или гетероциклоалкильной группой, необязательно замещенной по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН, -O-алкила, -алкила, например, А9 представляет собой [(СН2)2-О]4СНз, [(СН2)2-О)]24-СНз,
или [(CH2)2-O]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А9, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
В соответствии с другим вариантом осуществления замещенные аминокислоты AAs характеризу ются формулой (VI), где Т представляет собой
или группа U представляет собой -NH-C(=O)- или -C(=O)NH-; А9 представляет собой [(СН2)2-О]4-СН3, [(СН2)2-О]24-СНз,
или [(CH2)2-O]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А9, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
- 29 045708
В соответствии с еще одним вариантом осуществления замещенные аминокислоты AAs характеризуются формулой (VI), где или
Т представляет собой
группа U представляет собой -NH-C(=O)- или -C(=O)NH-;
А9 представляет собой -[(СН2)2-О]Ь-СН3, где b представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, например, находящееся в диапазоне от 1 до 24, такое как 4, 7 и 24, например 4 или 24.
Последовательность (AA)W характеризуется формулой:
в которой А10 представляет собой боковую цепь одной из замещенных AAs или незамещенных AAns аминокислот, описанных выше.
Примеры последовательностей из незамещенных аминокислот (AAns)w являются следующими: GlyGly, Phe-Lys, Val-Lys, Val-AcLys, Val-Cit, Phe-Phe-Lys, D-Phe-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Ala-Lys, Val-Ala, Phe-Cit, Phe-Gly, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-Cit, Phe-Ala, Ala-Phe, Gly-Gly-Gly, Gly-Ala-Phe, Gly-Phe-Gly, GlyVal-Cit, Gly-Phe-Leu-Cit (SEQ ID No. 3), Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID No. 4), Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID No. 5).
В соответствии с по меньшей мере одним вариантом осуществления последовательность (AAns)w из незамещенных аминокислот AAns выбрана из следующего перечня: Gly-Gly, Phe-Lys, Val-Lys, Val-AcLys, Val-Cit, Phe-Phe-Lys, D-Phe-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Ala-Lys, Val-Ala, Phe-Cit, Phe-Gly, Leu-Cit, Ile-Cit, TrpCit, Phe-Ala, Ala-Phe, Gly-Gly-Gly, Gly-Ala-Phe, Gly-Phe-Gly, Gly-Val-Cit, Gly-Phe-Leu-Cit (SEQ ID No. 3), Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID No. 4), и Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID No. 5), например, Val-Ala и Val-Cit, например, Val-Ala.
В соответствии с по меньшей мере другим вариантом осуществления последовательность (AAs)w, содержащая по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, выбрана из перечня:
- 30 045708
- 31 045708
Среди линкеров L формулы (II), которые являются объектом настоящего изобретения, можно отметить, например, следующие соединения:
- 32 045708
- 33 045708
- 34 045708
- 35 045708
Примеры RCG1, которые могут быть упомянуты, включают:
(i) реакционноспособную группу RaZa-C(=O)-, в которой
Za представляет собой одинарную связь, -О- или -NH, например -О-, и
Ra представляет собой атом водорода, (С1-С6)алкил, (С3-С7)циклоалкил, алкенил, арил, гетероарил или (С3-С7)гетероциклоалкильную группу. Арильная группа, гетероарильная группа и/или (С3С7)гетероциклоалкильная группа могут быть замещены 1-5 атомами/группами, выбранными из атома галогена, такого как атом фтора, алкильной группы, алкоксигруппы, гидроксильной группы, оксогруппы, нитрогруппы и цианогруппы;
О
[Γ^Ν^
.. 0 · (ii) одну из следующих реакционноспособных групп: малеимидогруппа ’ галогенацетами- ^21
Cl, Вг или I Π догруппа θ ’ при этом R21 представляет собой атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например Me; Cl-; N3-; НО-; HS-; активированный дисульфид, такой как
- 36 045708
NH
О-алкилгидроксиламин или субстрат реакции Пикте-Шпенглера, такой как ’ описанный в Agarwal P., et al., Bioconjugate Chem 2013, 24, 846-851.
В соответствии с конкретным вариантом осуществления RCG1 может представлять собой:
(i) реакционноспособную группу RaZa-C(=O)-, в которой
Za представляет собой одинарную связь, -О- или -NH, например -О-, и
Ra представляет собой атом водорода, (С1-С6)алкил, (С3-С7)циклоалкил, алкенил, арил, гетероарил или (С3-С7)гетероциклоалкильную группу. Арильная группа, гетероарильная группа и/или (С3С7)гетероциклоалкильная группа могут быть замещены 1-5 атомами/группами, выбранными из атома галогена, такого как атом фтора, алкильной группы, алкоксигруппы, гидроксильной группы, оксогруппы, нитрогруппы и цианогруппы;
(ii) одну из следующих реакционноспособных групп: галогенацетамидогруппа %
С1, Вг или I у г0 ’ при этом R21 представляет собой атом водорода или (C1-С6)алкильную группу,
например Me; Cl-; N3-; НО-; HS-; активированный дисульфид, такой как ’ H2N-;
НС^С- или активированный С=С, например, циклооктиновый фрагмент, например DBCO-амин
’ или BCN ’ или MFCO
О-алкилгидроксиламин или субстрат реакции Пикте-Шпенглера, такой как
Chem 2013, 24, 846-851.
NH /
описанный в Agarwal P., et al., Bioconjugate
Например, RaZa- может представлять собой НО-, СН3О-, СН2=СН-СН2О-,
М=Н или (O-NHS),
О SO3M
О где катион представляет собой, например, натрий, калий или цезий, или
GI группу
, в которой GI представляет собой по меньшей мере одну электроиндукционную группу, такую как -NO2 или атом галогена, например атом фтора (F). Они могут представлять собой, например, следующие группы:
- 37 045708
Например, RCG1 может быть выбран из одного из описанных в примерах, то есть выбран из следующих групп:
COOH,
Настоящее изобретение дополнительно относится к полезным нагрузкам с криптофицином формулы (IV):
где
R1 представляет собой (С1-С6)алкильную группу,
R2 и R3 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1-С6)алкильную группу;
или в качестве альтернативы R2 и R3 образуют вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, (С3-С6)циклоалкил или (С3-С6)гетероциклоалкильную группу;
R4 и R5 представляют собой независимо друг от друга атом водорода, или (С1-С6)алкильную группу, или группу (С1-С6)алкил-NH(R12), или группу (С1-С6)алкил-ОН, или группу (С1-С6)алкил-SH, или группу (С1-С6)алкил-C(=O)2Н;
или в качестве альтернативы R4 и R5 образуют вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, (С3-С6)циклоалкил или (С3-С6)гетероциклоалкильную группу;
X представляет собой О или N(R6);
R6 представляет собой атом водорода или (С1-С6)алкильную группу;
R7 и R8 представляют собой независимо друг от друга атом водорода, или (С1-С6)алкильную группу, или группу (С1-С6)алкил-C(=O)2Н, или группу (С1-С6)алкил-N(С1-С6)алкил2;
или в качестве альтернативы R7 и R8 образуют вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, (С3-С6)циклоалкильную группу или (С3-С6)гетероциклоалкильную группу;
R9 представляет собой по меньшей мере один заместитель при фенильном ядре, выбранный независимо от других из атома водорода, -ОН, (С1-С4)алкокси, атома галогена, -NH2, -NH(С1-С6)алкила, или N(С1-С6)алкил2, или -NH(С1-С6)циклоалкила, или (С3-С6)гетероциклоалкильной группы;
R10 представляет собой по меньшей мере один заместитель при фенильном ядре, выбранный из атома водорода и (С1-С4)алкильной группы;
Y представляет собой
-NR11-(С1-С6)алкил-, например -NR11-(CH2)n-, такой как
RCG^LNR^^CH^n
ю
-О-(С1-С6)алкил-, например -О-(СН2)П-, такой как
RCG^-O-fCH^n
- 38 045708
-8-(С1-С6)алкил-, например -S-(CH2)n-, такой как
при этом Y расположен в орто- (о), мета- (m) или пара- (р) положении фенильного ядра;
R11 и R12 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1-С6)алкил, например, атом водорода или метильную группу;
n представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 6;
L определен в формуле (I) и представляет собой линкер формулы (II), как определено в настоящем изобретении;
RCG1 представляет собой реакционноспособную химическую группу, присутствующую на конце линкера L, при этом RCG1 является реакционноспособным в отношении химической группы, присутствующей на полипептиде, таком как антитело. RCG1 определен выше.
Каждый из заместителей R1-R12 может также принимать одну из пространственных конфигураций (например, R или S или в качестве альтернативы Z или Е), как описано в примерах. Соединения формулы (IV) могут содержать по меньшей мере один асимметричный атом углерода. Поэтому они могут существовать в форме энантиомеров или диастереоизомеров. Данные энантиомеры и диастереоизомеры, а также их смеси, включая рацемические смеси, составляют часть настоящего изобретения.
В качестве примера, соединение криптофицина формулы (IV) может представлять собой одно из соединений криптофицина формулы (I), описанных в WO2011/001052 (например, одно из D1-D8) или в РСТ/ЕР2016/076603 (например, одно из D1-D19), как упоминалось выше.
Или соединение криптофицина может представлять собой эквивалентную единицу, описанную в одном из примеров.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых R1 представляет собой (С1-С6)алкил, например метильную группу.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых каждый из R2 и R3 представляет собой атом водорода.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых один из R2 и R3 представляет собой (С1-С6)алкил, например метильную группу, а другой представляет собой атом водорода.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых R2 и R3 образуют вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, (С3-С6)циклоалкильную группу, например циклопропильную группу.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых каждый из R4 и R5 представляет собой (С1-С6)алкил, например метильную группу.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых X представляет собой атом кислорода, то есть О.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых X представляет собой NH.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых R7 и R8 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например изобутильную группу или неопентильную группу.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых R9 представляет собой два заместителя, выбранные из метоксигруппы и атома хлора, например, два заместителя R9 представляют собой 3-Cl и 4-метокси. Например, фенильное ядро содержит два заместителя в положениях 3 и 4 фенильного ядра.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых R10 представляет собой атом водорода.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых Y расположен в пара-положении фенильного ядра.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых Y представляет собой NR11-(С1-С6)алкил, такой как NR11(С1-С3)алкил, например NH-CH2.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs в последовательности из w аминокислот (AA)w, L1 и L2 определены в формуле (II).
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых L формулы (II) содержит последовательность из w незамещенных аминокислот AAns, L1 и L2 определены в формуле (II).
- 39 045708
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, и L2 представляет собой (С1-С6)алкильную группу, например группу (СН2)3;
С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, например группу С(=О)-(СН2)3; или (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, например группу (CH2)2-NA7-(CH2)2, в которой А7 определен выше.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, и L2 представляет собой (С1-Сб)алкильную группу, например группу (СН2)3;
C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, например группу С(=О)-(СН2)3; или (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, например группу -(CH2)2-NA7-(CH2)2-, в которой А7 представляет собой группу -C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-(Ch2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит w незамещенных аминокислот AAns, и L2 представляет собой (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, например группу (CH2)2-NA7-(CH2)2, в которой А7 определен выше.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит w незамещенных аминокислот AAns, и L2 представляет собой (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, например группу (CH2)2-NA7-(CH2)2, в которой А7 представляет собой группу C(=O)-[(СН2)2-О]а-СН3, где а представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, например, находящееся в диапазоне от 1 до 24, такое как 4, 7 и 24, например, А7 представляет собой группу С(=О)-[(СН2)2-О]4-СН3, группу С(=О)-[(СН2)2-О]7-СН3 или группу С(=О)-[(СН2)2-О]24-СН3;
группу -C(=O)-(Ch2)2-C(=O)-NH-(Ch2)2-sO3H или группу C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-[(CH2)2-O]a-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H, где а представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, в таком диапазоне как от 1 до 24, например 4, например, А7 представляет собой группу -C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-[(CH2)2.O]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na);
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs и/или w незамещенных аминокислот AAns, и L2 представляет собой NA7(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, NA7арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОcН2СН2)i, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-(OCH2CH2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA7(СН2СН2ОЦС1-Сб)алкильную группу, C(=O)-NA7-арильную группу, C(=O)-NA7-гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7C(=0)-(С1С6)алкил-(OCH2CH2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(CiС6)алкил-C(=0)NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=0)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i, C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкилNA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(C1С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-Na8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкил-(OCH2CH2)i, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(oСн2СН2)i, C(=O)-NA8-(C1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i или C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу; где i, А7 и A8 определены выше.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, предпочтительная группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs и/или w незамещенных аминокислот AAns, и L2 представляет собой
- 40 045708
КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-МЛ7, NЛ7-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, КЛ7-арильную группу, КЛ7-гетероарильную группу, (С1-С6)алкил-КЛ7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NΛ7C(=0)-(С1-С6)алкил-(0СН2Сн2)i, (С1-С6)алкил-С(=О)кЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NΛ7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NΛ7-(С1-С6)алкил-(0cН2СН2)i, (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NΛ7-(С1С6)алкильную группу, С(=О)-КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1-С6)алкил-КЛ7, С(=О)NЛ7-(СН2СН2О)i(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-КЛ7-арильную группу, С(=О)-КЛ7-гетероарильную группу, С(=О)-(С1-С6)алкил-КЛ7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1-С6)алкил-МЛ7С(=О)(С1-С6)алкил-(0CH2CH2)i, С(=О)-(С1-С6)алкил-С(=О)КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1С6)алкил-C(=O)NΛ7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, С(=О)-(С1-С6)алкил-КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NΛ7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, группу КЛ8-(С1-С6)алкил-КЛ7, NA8-(С|-С6)αлкилКЛ7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, КЛ8-(С1-С6)алкил-С(=О)КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, NA8-(С1С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-КЛ8-(С1-С6)алкил-КЛ7, С(=О)-МЛ8-(С1-С6)алкилКЛ7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу или С(=О)-МЛ8-(С1-С6)алкил-КЛ7-(С1-С6)алкильную группу; где i, А7 и Л8 определены выше.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, более предпочтительная группа соединений состоит из соединений, в которых (ЛЛ)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту ЛAs и/или w незамещенных аминокислот ЛЛП8, и L2 представляет собой
КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-МЛ7, NЛ7-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, (С1-С6)алкил-КЛ7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-КЛ7С(=О)-(С1-С6)алкил(0СН2СН2)i, (С1-С6)алкил-С(=О)КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-С(=О)КЛ7-(С1С6)алкил-(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-КЛ7-(С1С6)алкил-(0CH2CH2)i, (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NΛ7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(C1С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1-С6)алкил-КЛ7, C(=O)-NЛ7-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1-С6)алкил-КЛ7С(=ОНС1С6)алкил-(ОСН2СН2)i, С(=О)-(С1-С6)алкил-С(=О)КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1С6)алкил-C(=O)NЛ7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, С(=О)-(С1-С6)алкил-КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NЛ7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, группу КЛ8-(С1-С6)алкил-КЛ7, NA8-(С|-С6)αлкилКЛ7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, КЛ8-(С1-С6)алкил-С(=О)КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, NA8-(С1С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-КЛ8-(С1-С6)алкил-КЛ7, С(=О)-МЛ8-(С1-С6)алкилКЛ7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-КЛ8-(С1-С6)алкил-С(=О)КЛ7-(С1-С6)алкильную группу или С(=О)-МЛ8-(С1-С6)алкил-КЛ7-(С1-С6)алкильную группу; где i, А7 и Л8 определены выше.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, еще более предпочтительная группа соединений состоит из соединений, в которых (ЛЛ)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту ЛЛ8 и/или w незамещенных аминокислот AAl,s, и L2 представляет собой КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-МЛ7, (С1-С6)алкил-КЛ7С(=О)(С1-С6)алкильную группу, (С1-С6)алкил-С(=О)КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, (С1-С6)алкил-КЛ7-(С1С6)алкильную группу, С(=О)-МЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1-С6)алкил-КЛ7, С(=О)-(С1С6)алкил-МЛ7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-(С1-С6)алкил-С(=О)КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-(С1-С6)алкил-КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, группу КЛ8-(С1-С6)алкил-КЛ7, NA8-(С|-С6)αлкилКЛ7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, КЛ8-(С1-С6)алкил-С(=О)КЛ7-(С1-С6)алкильную группу, NA8-(С1С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-КЛ8-(С1-С6)алкил-КЛ7, С(=О)-МЛ8-(С1-С6)алкилКЛ7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу или С(=О)-МЛ8-(С1-С6)алкил-КЛ7-(С1-С6)алкильную группу; где А7 и Л8 определены выше.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, наиболее предпочтительная группа соединений состоит из соединений, в которых (ЛЛ)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту ЛЛ8 и/или w незамещенных аминокислот ЛЛП8, и L2 представляет собой (С1-С6)алкил-КЛ7-(С1-С6)алкильную группу; где А7 определен выше.
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (ЛЛ)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту ЛЛ8 и/или w незамещенных аминокислот ЛЛП8, и L2 содержит А7, представляющий собой группу С(=О)-[(СН2)2-О]4-СН3; группу С(=О)-[(СН2)2-О]7-СН3; группу С(=О)-[(СН2)2-О]24СН3; группу C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SOзH; группу С(=О)-(СН2)2-С(=О)-КН-[(СН2)2-О]4-(СН2)2C(=O)-NH-(CH2)2-SOзH;
при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3’+Na).
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (ЛЛ)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту ЛЛ8 и/или w незамещенных аминокислот ЛЛП8, и L2 представляет собой
- 41 045708
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, содержащих в L последовательность (AAs)w, содержащую по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, при этом (AAs)w выбрана из перечня:
- 42 045708
или
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений со следующей структурой (бета-эпоксидная конфигурация):
где
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, n, RCG1 X, Y и L определены в формуле (IV).
Все данные подгруппы, взятые отдельно или в комбинации, являются частью настоящего изобретения.
- 43 045708
В соответствии с по меньшей мере одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (IV), где
RCG1 представляет собой СООН,
L представляет собой одно из нижеприведенных соединений формулы (II):
- 44 045708
- 45 045708
- 46 045708
- 47 045708
Y представляет собой NR11-(C1-C6)алкил, в котором R11 представляет собой атом водорода, например, Y представляет собой NH-CH2;
R1 представляет собой (С1-С6)алкильную группу, например метильную группу;
R2 и R3 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (СгС6)алкильную группу, например метильную группу;
R4 и R5 представляют собой независимо друг от друга (С1-С6)алкильную группу, например метильную группу;
R7 и R8 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например изобутильную группу или неопентильную группу, например, один из R7 и R8 представляет собой (СгС6)алкильную группу, например изобутильную группу или неопентильную группу, а другой из R7 и R8 представляет собой атом водорода;
X представляет собой атом кислорода или NH;
R9 представляет собой два заместителя, выбранные из (СгС4)алкоксигруппы, например метоксигруппы, и атома галогена, например атома хлора, например, R9 представляет собой 3-Cl и 4-метокси; и
R10 представляет собой атом водорода.
- 48 045708
Среди соединений формулы (IV), которые являются объектом настоящего изобретения, можно отметить, в частности, следующие соединения:
- 49 045708
- 50 045708
- 51 045708
- 52 045708
- 53 045708
- 54 045708
Настоящее изобретение дополнительно относится к конъюгатам формулы (V):
где
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 и R12 определены в формуле (IV);
X, Y и L определены в формуле (IV);
- 55 045708
G представляет собой продукт реакции между RCG1, реакционноспособной химической группой, присутствующей на конце линкера L формулы (II), и RCG2, ортогональной реакционноспособной химической группой, присутствующей на полипептиде, таком как антитело (Ab);
Ab представляет собой антитело.
Присоединение полезной нагрузки с криптофицином формулы (IV) к антителу для получения конъюгата формулы (V) обеспечивается посредством реакции между реакционноспособной химической группой RCG1, присутствующей на полезной нагрузке, как определено выше, которая является реакционноспособной в отношении реакционноспособной группы RCG2, присутствующей на полипептиде, таком как антитело. Реакция между RCG1 и RCG2 обеспечивает присоединение соединения формулы (IV) к антителу посредством образования ковалентной связи. В конъюгате формулы (V) части RCG1 и RCG2 могут оставаться с обеспечением присоединения линкера к антителу.
Примеры RCG2, которые могут быть упомянуты, включают (Garnett M.C., et al., Advanced Drug Delivery Reviews 2001, 53, 171-216):
(i) ε-аминогруппы лизинов, находящиеся на боковых цепях лизиновых остатков, которые присутствуют на поверхности антитела;
(ii) α-аминогруппы N-концевых аминокислот тяжелых и легких цепей антитела;
(iii) группы сахаридов шарнирной области;
(iv) тиолы цистеинов, образованные посредством восстановления внутрицепочечных дисульфидных связей, или тиолы сконструированных цистеинов;
(v) амидные группы, находящиеся на боковых цепях некоторых глутаминовых остатков, которые присутствуют на поверхности антитела;
(vi) альдегидные группы, введенные с применением формилглицин-образующего фермента.
Недавно были рассмотрены другие подходы к конъюгации, например, введение цистеинов посредством мутации (Junutula J.R., et al., Nature Biotechnology 2008, 26, 925-932), введение неприродных аминокислот, что позволяет применять другие типы химических структур (Axup J.Y., et al., PNAS 2012, 109, 40, 16101-16106), ИЛИ конъюгация с применением гликанов антител (Zhou Q., et al., Bioconjugate Chem. 2014, 25, 510-520). Также было описано применение диброммалеимидов с цистеиновым мостиком (Behrens C.R., et al., Mol. Pharmaceutics 2015 3986-3998) и бис-сульфоновых реагентов (Bryant P., et al., Mol. Pharmaceutics 2015 1872-1879) для поперечного сшивания антител, и оно может использоваться в настоящем изобретении.
Другой подход к сайт-специфическим модификациям антител основан на ферментативной конъюгации с применением, например, бактериальной трансглутаминазы (Jeger S., et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 9995-9997; Strop P., et al., Chem. Biol. 2013, 20, 161-167) или формилглицин-образующего фермента (Hudak J.E., et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2012, 51, 4161-4165). Для обзора стратегий сайтспецифической конъюгации см. Agarwal P. and Bertozzi C.R., Bioconjugate Chem 2015, 26, 176-192. Данные технологии конъюгации также можно применять в отношении полезных нагрузок с криптофицином, описанных в настоящем изобретении.
Полипептид, такой как антитело, также можно химически модифицировать таким образом, чтобы ввести новые реакционноспособные химические группы RCG2. Таким образом, специалистам в данной области техники хорошо известно то, как модифицировать антитело с помощью введения модифицирующего средства, например, активированного дисульфида, тиола, мелеимило-, галогенацетамидо-, азидо-, алкиновых или циклоалкиновых групп (см., в частности, WO2005/077090, страница 14 и WO2011/001052). Модификация позволяет улучшить реакцию конъюгации и применять более широкое разнообразие групп RCG1.
Например, в случае, если RCG1 относится к типу (ii), указанному выше, то антитело можно химически модифицировать с применением соответствующего модифицирующего средства или вводить в него одну или несколько неприродных аминокислот таким образом, чтобы обеспечить введение соответствующих функциональных групп RCG2. Например:
если RCG1 представляет собой сложный N-гидроксисукцинимидильный эфир, RCG2 представляет собой группу -NH2;
если RCG1 представляет собой функциональную малеимидогруппу, функциональную галогенацетамидогруппу, атом хлора или активированный дисульфид, RCG2 может представлять собой группу SH;
если RCG1 представляет собой группу N3, RCG2 может представлять собой функциональную группу С^СН или активированную функциональную группу САС, например циклооктиновый фрагмент;
если RCG1 представляет собой группу ОН или группу NH2, RCG2 может представлять собой функциональную группу карбоновой кислоты или функциональную амидную группу;
если RCG1 представляет собой группу SH, RCG2 может представлять собой функциональную малеимидогруппу, функциональную галогенацетамидогруппу или функциональную группу, представляющую собой активированный дисульфид;
если RCG1 представляет собой функциональную группу С^СН или активированную функциональную группу САС, RCG2 может представлять собой группу N3;
- 56 045708 если RCG1 представляет собой функциональную группу, представляющую собой О-алкилгидроксиламин, или субстрат реакции Пикте-Шпенглера, RCG2 может представлять собой функциональную альдегидную или кетонную группу.
Примеры G, которые могут быть упомянуты, включают
Например, G представляет собой следующие группы:
или , например
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых R1 представляет собой (С1-С6)алкил, например метильную группу.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых каждый из R2 и R3 представляет собой атом водорода.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых один из R2 и R3 представляет собой (С1-С6)алкильную группу, например метильную группу, а другой представляет собой атом водорода.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых R2 и R3 образуют вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, (С3-С6)циклоалкильную группу, например циклопропильную группу.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых каждый из R4 и R5 представляет собой (С1-С6)алкильную группу, в частности метильную группу.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых X представляет собой атом кислорода, то есть О.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых X представляет собой NH.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых R7 и R8 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например изобутильную группу или неопентильную группу.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых R9 представляет собой два заместителя, выбранных из метоксигруппы и атома хлора. Например, фенильное ядро содержит два заместителя в положениях 3 и 4 фенильного ядра. Например, 3-Cl и 4-метокси.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых R10 представляет собой атом водорода.
Среди соединений формулы (v), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых Y расположен в пара положении фенильного ядра.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых Y представляет собой NR11-(С1-С6)алкил, такой как NR11-(С1-С3)алкил, например NH-CH2.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещен
- 57 045708 ную аминокислоту AAs в последовательности из w аминокислот (AA)w, L1 и L2 определены в формуле (II).
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых L формулы (II) содержит последовательность из w незамещенных аминокислот AAns, L1 и L2 определены в формуле (II).
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, и L2 представляет собой (С1-Сб)алкильную группу, например группу (СН2)3;
C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, например группу С(=О)-(СН2)3; или (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, например группу (CH2)2-NA7-(CH2)2, в которой А7 определен выше.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, и L2 представляет собой (С1-С6)алкильную группу, например группу (СН2)3;
C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, например группу С(=О)-(СН2)3; или (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, например группу -(CH2)2-NA7-(CH2)2-, в которой А7 представляет собой группу -C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-(Ch2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит w незамещенных аминокислот AAns, и L2 представляет собой (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, например группу (CH2)2-NA7-(CH2)2, в которой А7 определен выше.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит w незамещенных аминокислот AAns, и L2 представляет собой (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, например группу (CH2)2-NA7-(CH2)2, в которой А7 представляет собой группу C(=O)-[(СН2)2-О]а-СН3, где а представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, например, находящееся в диапазоне от 1 до 24, такое как 4, 7 и 24, например, А7 представляет собой группу С(=О)-[(СН2)2-О]4-СН3, группу С(=О)-[(СН2)2-О]7-СН3 или группу C(=O)[(СН2)2-О]24-СН3; группу -C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H или группу C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-[(CH2)2-O]a-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H, где а представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50, в таком диапазоне как от 1 до 24, например 4, например, А7 представляет собой группу -C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-[(CH2)2-O]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs и/или w незамещенных аминокислот AAns, и L2 представляет собой NA7(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7, NA7-(CH2CH2O)i(С1-С6)алкильную группу, NA7арильную группу, NA7-гетероарильную группу, (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(0cН2СН2)i, (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-(OCH2cH2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA7(СН2СН2О)i(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NA7-арильную группу, C(=O)-NA7-гетероарильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкил-(OCH2CH2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу c(=o)-(c1С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7, NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(С1-С6)алкилNA7-(С1-С6)алкильную группу, группу NA8-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, NA8-(C1С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-NA7, C(=O)-NA8(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-Na8-(С1-С6)алкил-NA7C(=O)-(С1С6)алкил-(OCH2CH2)i, C(=O)-NA8-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8
- 58 045708 (Сl-С6)алкил-C(=O)NЛ7-(Сl-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, С(=О)-КА8-(С1-С6)алкил-МА7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-NA8-(Сl-С6)алкил-NΛ7-(Сl-С6)алкил-(ОСН2СН2)i или С(=О)-ИА8-(С1-Сб)алкил(ОСН2СН2)1-МА7-(С1-С6)алкильную группу; где i, А7 и А8 определены выше.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, предпочтительная группа соединений состоит из соединений, в которых (ΛΛ)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту ЛЛs и/или w незамещенных аминокислот ААП8, и L2 представляет собой КА7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-НА7, NЛ7-(CH2CH2O)i(СlС6)алкильную группу, КА7-арильную группу, КА7-гетероарильную группу, (С1-С6)алкил-НА7С(=О)-(С1С6)алкильную группу, группу (С1-Сб)алкил-МА7С(=О)-(С1-Сб)алкил-(ОСН2СН2)Ь (С1-С6)алкил-С(=О)КА7(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-Сб)алкил-С(=О)КА7-(С1-Сб)алкил-(ОСН2СН2у (С1-Сб)алкил-МА7(С1-С6)алкильную группу, группу (Сl-С6)алкил-NA7-(Сl-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, (С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1КА7-(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-КА7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1-С6)алкил-КА7, C(=O)-NA7-(СН2СН2О)i(Сl-С6)алкильную группу, С(=О)-КА7-арильную группу, С(=О)-МА7гетероарильную группу, С(=О)-(С1-С6)алкил-КА7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1С6)алкил-NA7C(=O)-(С1-С6)алкил-(OCH2CH2)i, С(=о)-(С1-С6)алкил-С(=О)КА7-(С1-С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-C(=O)NA7-(С1-С6)алкил-(oСн2СН2)i, С(=О)-(С1-С6)алкил-КА7-(С1С6)алкильную группу, группу C(=O)-(С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)i, группу NΛ8-(С1С6)алкил-МА7, КА8-(С1-С6)алкил-МА7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, КА8-(С1-С6)алкил-С(=О)КА7-(С1С6)алкильную группу, NЛ8-(Сl-С6)алкил-NЛ7-(Сl-С6)алкильную группу, группу С(=О)-КА8-(С1-С6)алкилКА7, С(=О)-КА8-(С1-С6)алкил-КА7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-КА8-(С1-С6)алкил-С(=О)КА7(С1-С6)алкильную группу или С(=О)-КА8-(С1-С6)алкил-КА7-(С1-С6)алкильную группу; где i, А7 и А8 определены выше.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, более предпочтительная группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту АА8 и/или w незамещенных аминокислот ААП8, и L2 представляет собой
КА7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-КА7, КА7-(СН2СН2О)1(С1-С6)алкильную группу, (Сl-С6)алкил-NΛ7C(=O)-(Сl-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-КА7С(=О)-(С1-С6)алкил(ОСН2СН2)1, (С1-С6)алкил-С(=О)КА7-(С1- С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-С(=О)КА7-(С1С6)алкил-(ОСН2СН2)1, (С1- С6)алкил-NΛ7-(Сl-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-КА7-(С1С6)алкил-(ОСН2СН2)1, (Сl-С6)алкил-(ОСН2СН2)i-NΛ7-(Сl-С6)алкильную группу, C(=O)-NΛ7-(С1С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1-С6)алкил-КА7, С(=О)-МА7-(СН2СН2О)1(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-(С1-С6)алкил-МА7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1-С6)алкил-КА7С(=О)-(С1С6)алкил-(ОСН2СН2)1, С(=О)-(С1-С6)алкил- С(=О)КА7-(С1-С6)алкильную группу, группу с(=о)-(Сг С6)алкил-С(=О)КА7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, С(=О)-(С1-С6)алкил-КА7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1-С6)алкил-МА7-(С1-С6)алкил-(ОСН2СН2)1, группу КА8-(С1-С6)алкил-КА7, КА8-(С1-С6)алкилКА7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, КА8-(С1-С6)алкил-С(=О)КА7-(С1-С6)алкильную группу, NЛ8-(С1С6)алкил-NЛ7-(Сl-С6)алкильную группу, группу С(=О)-КА8-(С1-С6)алкил-КА7, С(=О)-КА8-(С1-С6)алкилКА7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, C(=O)-NΛ8-(Сl-С6)алкил-C(=O)NΛ7-(Сl-С6)алкильную группу или С(=О)-МА8-(С1-С6)алкил-КА7-(С1-С6)алкильную группу; где ί, А7 и А8 определены выше.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, еще более предпочтительная группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту АА8 и/или w незамещенных аминокислот ΛΛl,s, и L2 представляет собой
КА7-(С1-С6)алкильную группу, группу (С1-С6)алкил-КА7, (С1-С6)алкил-КА7С(=О)-(С1-С6)алкильную группу, (С1-С6)алкил-С(=О)КА7-(С1-С6)алкильную группу, (С1-С6)алкил-КА7-(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-КА7-(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-(С1-С6)алкил-МА7, С(=О)-(С1-С6)алкил-КА7С(=О)(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-(С1-С6)алкил-С(=О)КА7-(С1-С6)алкильную группу, С(=О)-(С1-С6)алкилКА7-(С1-С6)алкильную группу, группу КА8-(С1-С6)алкил-КА7, КА8-(С1-С6)алкил-МА7С(=О)-(С1С6)алкильную группу, КА8-(С1-С6)алкил-С(=О)КА7-(С1-С6)алкильную группу, КА8-(С1-С6)алкил-МА7(С1-С6)алкильную группу, группу С(=О)-КА8-(С1-С6)алкил-КА7, С(=О)-МА8-(С1-С6)алкил-КА7С(=О)-(С1С6)алкильную группу, С(=О)-КА8-(С1-С6)алкил-С(=О)КА7-(С1-С6)алкильную группу или С(=О)-КА8-(С1С6)алкил-КА7-(С1-С6)алкильную группу; где А7 и А8 определены выше.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, наиболее предпочтительная группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту АА8 и/или w незамещенных аминокислот ЛЛl,s, и L2 представляет собой (С1-С6)алкил-КА7-(С1-С6)алкильную группу; где А7 определен выше.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту АА8 и/или w незамещенных аминокислот ЛЛl,s, и L2 содержит А7, представляющий собой группу С(=О)-[(СН2)2-О]4-СН3; группу С(=О)-[(СН2)2-ОЬ-СН3; группу С(=О)-[(СН2)2-О]24-СН3;
- 59 045708 группу C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H; группу C(=O)-(CН2)2-C(=O)-NH-[(CH2)2-O]4-(CH2)2-C(=O)NH-(CH2)2-SO3H;
при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей, таких как соли щелочных металлов, например натриевые соли (SO3 -+Na).
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых (AA)w в L формулы (II) содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs и/или w незамещенных аминокислот AAns, и L2 представляет собой
- 60 045708
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, содержащих в L последовательность (AAs)w, содержащую по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, при этом (AAs)w выбрана из перечня:
- 61 045708
О ОН или
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений, в которых Ab представляет собой антитело к Epha2, например антитело hu2H11_R35R74, представленное под SEQ ID NO: 1 (легкая цепь антитела hu2H11_R35R74) и под SEQ ID NO: 2 (тяжелая цепь антитела hu2H11_R35R74), которые соответствуют SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO:18 соответственно, представленным в WO2011039724 А1.
В соответствии с по меньшей мере одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (V), где
Ab представляет собой антитело;
G представляет собой
или .
Y представляет собой NR11-(С1-6)алкильную группу, в которой RB представляет собой атом водорода, например, Y представляет собой группу NH-CH2;
- 62 045708
L представляет собой
- 63 045708
R1 представляет собой (С1-С6)алкильную группу, например метильную группу;
R2 и R3 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например метильную группу;
R4 и R5 представляют собой независимо друг от друга (С1-С6)алкильную группу, например метильную группу;
R7 и R8 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1-С6)алкильную группу, например изобутильную группу или неопентильную группу, например, один из R7 и R8 представляет собой (С1-С6)алкильную группу, например изобутильную группу или неопентильную группу, а другой из R7 и R8 представляет собой атом водорода;
X представляет собой атом кислорода или NH;
R9 представляет собой два заместителя, выбранные из (С1-С4)алкоксигруппы, например метоксигруппы, и атома галогена, например атома хлора, например, R9 представляет собой 3-Cl и 4-метокси; и
R10 представляет собой атом водорода.
- 64 045708
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, группа соединений состоит из соединений со следующей структурой (бета-эпоксидная конфигурация):
где
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, n, RCG1, X, Y и L определены в формуле (IV).
Все данные подгруппы, взятые отдельно или в комбинации, являются частью настоящего изобретения.
Среди соединений формулы (V), которые являются объектом настоящего изобретения, можно отметить следующие соединения:
- 65 045708
-66045708
где Ab определен в формуле (V) по настоящему изобретению.
В соответствии с настоящим изобретением соединения общей формулы (I), (II), (III), (IV) и (V) можно получать с помощью следующих способов.
- 67 045708
Получение линкеров формулы (II).
Получение спейсеров с улучшенной гидрофильностью.
Схема 1
Стадия (i): введение защитной группы для карбоновой кислоты с применением аллилбромида и основания, такого как, например, карбонат цезия, с получением сложного аллилового эфира.
Стадия (ii): удаление защитной Вос-группы с амина с применением раствора HCl (например, раствора в диоксане) или TFA.
Стадия (iii): добавление амина к трет-бутилакрилату в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (iv): сочетание амина с активированной карбоновой кислотой, например сложным NHSэфиром или ацилхлоридом, в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (v): удаление защитной группы со сложного трет-бутилового эфира с применением раствора HCl (например, раствора в диоксане) или TFA.
Стадия (vi): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (vii): сочетание с янтарным ангидридом.
Стадия (viii): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA, и сочетание с амином.
На схеме 1 изображен синтез исходя из Вос-β-Ala-ОН (номер CAS [3303-84-2]), однако также можно применять другие Вос-защищенные алкиламинокислоты, которые являются коммерчески доступными, для случаев, если n находится в диапазоне от 3 до 10. На ней изображен синтез с применением янтарного ангидрида, однако также можно применять глутаровый ангидрид или алкильные дикислоты, которые являются коммерчески доступными, для случаев, если n находится в диапазоне от 3 до 10.
Комбинация спейсеров с улучшенной гидрофильностью и классических дипептидов.
- 68 045708
Схема 2
линкер 2
Стадия (i): пептидное сочетание с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt, и удаление защитной Fmoc-группы с амина в присутствии основания, такого как, например, пи перидин.
Стадия (ii): для спейсера 3, активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA, и сочетание спейсеров 3 и 4 с дипептидом.
Стадия (iii): удаление защитной группы со сложного трет-бутилового эфира с применением раствора HCl (например, раствора в диоксане) или TFA.
Стадия (iv): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA, и сочетание с амином.
Стадия (v): удаление защитной Вос-группы с амина с применением раствора HCl (например, раствора в диоксане) или TFA.
На схеме 2 изображен синтез линкеров с применением дипептида Val-Ala, однако также можно применять другие дипептиды; на ней изображен синтез с применением спейсеров 3 или 4, однако также можно применять спейсеры 1 или 2; на ней изображен синтез с применением Вос-монозащищенного этилендиамина, однако также можно применять другие Вос-монозащищенные диамины, которые являются коммерчески доступными, для случаев, если n находится в диапазоне от 3 до 10.
Получение дипептидов с улучшенной гидрофильностью.
Получение дипептидов с улучшенной гидрофильностью на основании аминокислот, содержащих группу карбоновой кислоты на их боковой цепи
Схема 3
дипептид 1
- 69 045708
Схема 4
Стадия (i): пептидное сочетание между карбоновой кислотой и амином с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt.
Стадия (ii): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (iii): пептидное сочетание между сложным NHS-эфиром и амином в присутствии основания, такого как, например, бикарбонат натрия или DIEA.
Стадия (iv): удаление защитной группы со сложного трет-бутилового эфира с применением раствора HCl (например, раствора в диоксане) или TFA.
Стадия (v): пептидное сочетание дипептида с Вос-монозащищенным этилендиамином с применением реагента для сочетания, такого как, например, Т3Р.
Стадия (vi): удаление защитной Вос-группы с амина с применением раствора HCl (например, раствора в диоксане) или TFA.
Стадия (vii): пептидное сочетание дипептида с п-аминобензиловым спиртом с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EEDQ.
Стадия (viii): активация бензилового спирта в виде п-нитрофенилкарбоната посредством обработки с помощью п-нитрофенилхлорформиата в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (ix): образование карбамата между активированным спиртом и амином в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схеме 3 изображен синтез дипептидов, исходя из Val, однако можно применять другие аминокислоты, перечисленные выше; на ней изображен синтез с применением сложного трет-бутилового эфира L-Glu (номер CAS [45120-30-7]), однако также можно применять другие аминокислоты, содержащие группу карбоновой кислоты на их боковой цепи, как, например, сложный трет-бутиловый эфир L-Asp (номер CAS [4125-93-3]), сложный трет-бутиловый эфир D-Asp (номер CAS [148823-36-3]), сложный mpem-бутиловый эфир D-Glu (номер CAS [25456-76-2]), сложный 1-трет-бутиловый эфир 2аминогександиовой кислоты (номер CAS [1245806-58-9]) или сложный 1-mpem-бутиловый эфир 2аминогептандиовой кислоты (номер CAS [1888498-03-0]). На схеме 4 изображен синтез дипептидов с применением п-аминобензилового спирта (номер CAS [623-04-1]), однако также можно применять другие соединения аминобензилового спирта, которые являются коммерчески доступными, такие как, например, 4-(1-гидроксиэтил)-анилин (рацемический (номер CAS [14572-89-5]) или энантиомерно чистый (R) (номер CAS [210754-25-9]) или (S) (номер CAS [500229-84-5])), 4-амино-а,а-диметилбензолметанол (номер CAS [23243-04-1]), 4-амино-а-метокси-а-метилбензолметанол (номер CAS [1379318-81-6]), 4амино-а-метил-а-трифторметилбензолметанол (номер CAS [851652-56-7]), 2-аминобензолметанол (но
- 70 045708 мер CAS [5344-90-1]), 2-амино-а-метилбензолметанол (рацемический (номер CAS [10517-50-7]) или энантиомерно чистый (R) (номер CAS [3205-21-8]) или (S) (номер CAS [3205-21-8])), 6-амино-3пиридинметанол (номер CAS [113293-71-3]), 6-амино-а-метил-3-пиридинметанол (номер CAS [133505483-5]), 6-амино-а-этил-3-пиридинметанол (номер CAS [1355225-85-2]), 6-амино-а,а-диметил-3пиридинметанол (номер CAS [843646-03-8]), 5-амино-3-пиридинметанол (номер CAS [873651-92-4]), 2амино-3-пиридинметанол (номер CAS [23612-57-9]), 2-амино-а-метил-3-пиридинметанол (рацемический (номер CAS [869567-91-9]) или энантиомерно чистый (R) (номер CAS [936718-01-3]) или (S) (номер CAS [936718-00-2])), 2-амино-а-этил-3-пиридинметанол (номер CAS [914223-90-8]), 2-амино-а,а-диметил-3пиридинметанол (номер CAS [213666-96-7]), 3-амино-4-пиридинметанол (номер CAS [152398-05-5]), 3амино-а-метил-4-пиридинметанол (номер CAS [1242470-88-7]), 3-амино-а,а-метил-4-пиридинметанол (номер CAS [13357-81-8]), 4-амино-3-пиридинметанол (номер CAS [138116-34-4]), 4-амино-а-метил-3пиридинметанол (номер CAS [741223-49-4]), 4-амино-а,а-метил-3-пиридинметанол (номер CAS [1339013-26-1]), 3-амино-2-пиридинметанол (номер CAS [52378-63-9]), 3-амино-а-метил-2пиридинметанол (номер CAS [954240-54-1]), 3-амино-а,а-метил-2-пиридинметанол (номер CAS [89943857-4]); на ней изображен синтез с применением Вос-монозащищенного этилендиамина, однако также можно применять другие Вос-монозащищенные диамины, которые являются коммерчески доступными, для случаев, если n находится в диапазоне от 3 до 10.
Получение дипептидов с улучшенной гидрофильностью на основе аминокислот, содержащих аминогруппу на их боковой цепи.
Схема 5
Или, в качестве альтернативы, дипептид 5 может быть получен в соответствии с синтезом, описанным на схеме 6.
- 71 045708
Схема 7
Схема 6
NHBoc
NH2
CIH
О
Стадия (i): пептидное сочетание между карбоновой кислотой и амином с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt.
- 72 045708
Стадия (ii): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (iii): пептидное сочетание между сложным NHS-эфиром и амином в присутствии основания, такого как, например, бикарбонат натрия или DIEA.
Стадия (iv): удаление защитной Вос-группы с амина с применением раствора HCl (например, раствора в диоксане) или TFA.
Стадия (v): пептидное сочетание дипептида с Вос-монозащищенным этилендиамином с применением реагента для сочетания, такого как, например, Т3Р.
Стадия (vi): пептидное сочетание дипептида с п-аминобензиловым спиртом с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EEDQ.
Стадия (vii): активация бензилового спирта в виде п-нитрофенилкарбоната посредством обработки с помощью п-нитрофенилхлорформиата в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (viii): образование карбамата между активированным спиртом и амином в присутствии ос нования, такого как, например, DIEA.
На схемах 5 и 6 изображен синтез дипептидов, исходя из Val, однако можно применять другие ами нокислоты, перечисленные выше. На схеме 5 изображен синтез с применением Вос-защищенного на бо ковой цепи L-Lys (номер CAS [2418-95-3]), однако также можно применять другие аминокислоты, содержащие аминогруппу на их боковой бутоксикарбониламино)пропановая кислота бутоксикарбониламино)пропановая кислота бутоксикарбониламино)бутановая кислота (S)-3-амино-2-(трет(S)-3-амино-2-(трет(S)-4-амино-2-(трет(R)-4-амино-2-(третцепи, такие как, например, (номер CAS [73259-81-1]), (номер CAS [76387-70-7]), (номер CAS [25691-37-6]), бутоксикарбониламино)бутановая кислота (номер CAS [80445-78-9]), Вос-защищенный на боковой цепи L-орнитин (номер CAS [21887-64-9]), Вос-защищенный на боковой цепи D-орнитин (номер CAS [159877-12-0]), Вос-защищенный на боковой цепи D-Lys (номер CAS [106719-44-2]), (2S)-2-амино-7[[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино]гептановая кислота (номер CAS [1142814-17-2]) или (2R)-2-амино7-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино]гептановая кислота (номер CAS [117833-90-6]). На схеме 7 изображен синтез дипептидов с применением п-аминобензилового спирта (номер CAS [623-04-1]), однако также можно применять другие соединения аминобензилового спирта, которые являются коммерчески доступными, такие как, например, 4-(1-гидроксиэтил)-анилин (рацемический (номер CAS [14572-89-5]) или энантиомерно чистый (R) (номер CAS [210754-25-9]) или (S) (номер CAS [500229-84-5])), 4-аминоα,α-диметилбензолметанол (номер CAS [23243-04-1]), 4-амино-а-метокси-а-метилбензолметанол (номер CAS [1379318-81-6]), 4-амино-а-метил-а-трифторметилбензолметанол (номер CAS [851652-56-7]), 2аминобензолметанол (номер CAS [5344-90-1]), 2-амино-а-метилбензолметанол (рацемический (номер CAS [10517-50-7]) или энантиомерно чистый (R) (номер CAS [3205-21-8]) или (S) (номер CAS [3205-218])), 6-амино-3-пиридинметанол (номер CAS [113293-71-3]), 6-амино-а-метил-3-пиридинметанол (номер CAS [1335054-83-5]), 6-амино-а-этил-3-пиридинметанол (номер CAS [1355225-85-2]), 6-амино-а,адиметил-3-пиридинметанол (номер CAS [843646-03-8]), 5-амино-3-пиридинметанол (номер CAS
[873651-92-4]), 2-амино-3-пиридинметанол (номер CAS [23612-57-9]), 2-амино-а-метил-3пиридинметанол (рацемический (номер CAS [869567-91-9]) или энантиомерно чистый (R) (номер CAS [936718-01-3]) или (S) (номер CAS [936718-00-2])), 2-амино-а-этил-3-пиридинметанол (номер CAS [914223-90-8]), 2-амино-а,а-диметил-3-пиридинметанол (номер CAS [213666-96-7]), 3-амино-4пиридинметанол (номер CAS [152398-05-5]), 3-амино-а-метил-4-пиридинметанол (номер CAS [124247088-7]), 3-амино-а,а-метил-4-пиридинметанол (номер CAS [13357-81-8]), 4-амино-3-пиридинметанол (номер CAS [138116-34-4]), 4-амино-а-метил-3-пиридинметанол (номер CAS [741223-49-4]), 4-аминоа,а-метил-3-пиридинметанол (номер CAS [1339013-26-1]), 3-амино-2-пиридинметанол (номер CAS [52378-63-9]), 3-амино-а-метил-2-пиридинметанол (номер CAS [954240-54-1]), 3-амино-а,а-метил-2пиридинметанол (номер CAS [899438-57-4]); на ней изображен синтез с применением Восмонозащищенного этилендиамина, однако также можно применять другие Вос-монозащищенные диамины, которые являются коммерчески доступными, для случаев, если n находится в диапазоне от 3 до 10.
Получение соединений криптофицина.
Соединения криптофицина можно получать, как описано в WO2011/001052 для случаев, если Х=О, и в РСТ/ЕР2016/076603 для случаев, если X=NH.
Получение новых полезных нагрузок с криптофицином формулы (IV) для случаев, если Y=NH-CH2.
Получение новых полезных нагрузок с криптофицином, содержащих спейсер с улучшенной гидрофильностью.
Без РАВА-фрагмента.
- 73 045708
Схема 8
Стадия (i): пептидное сочетание между производным криптофицина и дипептидом с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt.
Стадия (ii): удаление защитной Fmoc-группы с амина в присутствии основания, такого как, напри мер, пиперидин.
Стадия (iii): пептидное сочетание со спейсером 1 с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt, или сочетание со спейсером 2 в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (iv): удаление защитной группы со сложного аллилового эфира в присутствии катализатора, такого как, например, тетракис-(трифенилфосфин)палладий.
Стадия (v): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
В качестве альтернативы, новые полезные нагрузки с криптофицином, содержащие спейсер с улучшенной гидрофильностью, также можно получать, как изображено на схеме 9.
- 74 045708
Схема 9
Стадия (i): активация карбоновой кислоты линкера 1 в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA, и сочетание с криптофицинамином.
Стадия (ii): удаление защитной группы со сложного аллилового эфира в присутствии катализатора, такого как, например, тетракис-(трифенилфосфин)палладий.
Стадия (iii): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схемах 8 и 9 изображен синтез полезных нагрузок с применением п-бензиламина С52, однако также можно применять другие соединения криптофицина; на них изображен синтез с применением дипептидов Val-Ala, однако также можно применять другие дипептиды; на них изображен синтез с применением спейсеров 1 или 2, однако также можно применять спейсеры 3 или 4.
С РАВА-фрагментом.
- 75 045708
Схема 10
Стадия (i): пептидное сочетание между Fmoc-Val-Ala-OH и 4-аминобензиловым спиртом в присутствии реагента для сочетания, такого как, например, EEDQ.
Стадия (ii): активация бензилового спирта в виде п-нитрофенилкарбоната посредством обработки с помощью п-нитрофенилхлорформиата в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (iii): образование карбамата между активированным спиртом и криптофицинамином в присутствии основания, такого как, например, DIEA, и удаление защитной Fmoc-группы с амина в присут ствии основания, такого как, например, пиперидин.
Стадия (iv): пептидное сочетание со спейсером 1 с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt, или сочетание со спейсером 2 в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (v): удаление защитной группы со сложного аллилового эфира в присутствии катализатора, такого как, например, тетракис-(трифенилфосфин)палладий.
Стадия (vi): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схеме 10 изображен синтез полезных нагрузок с применением дипептидов Val-Ala, однако также можно применять другие дипептиды; на ней изображен синтез с применением п-аминобензилового спирта (номер CAS [623-04-1]), однако также можно применять другие соединения аминобензилового спирта, которые являются коммерчески доступными, такие как, например, 4-(1-гидроксиэтил)-анилин (рацемический (номер CAS [14572-89-5]) или энантиомерно чистый (R) (номер CAS [210754-25-9]) или (S) (номер CAS [500229-84-5])), 4-амино-а,а-диметилбензолметанол (номер CAS [23243-04-1]), 4-амино-аметокси-а-метилбензолметанол (номер CAS [1379318-81-6]), 4-амино-а-метил-а-трифторметилбензолметанол (номер CAS [851652-56-7]), 2-аминобензолметанол (номер CAS [5344-90-1]), 2-амино-аметилбензолметанол (рацемический (номер CAS [10517-50-7]) или энантиомерно чистый (R) (номер CAS [3205-21-8]) или (S) (номер CAS [3205-21-8])), 6-амино-3-пиридинметанол (номер CAS [113293-71-3]), 6амино-а-метил-3-пиридинметанол (номер CAS [1335054-83-5]), 6-амино-а-этил-3-пиридинметанол (номер CAS [1355225-85-2]), 6-амино-а,а-диметил-3-пиридинметанол (номер CAS [843646-03-8]), 5-амино3-пиридинметанол (номер CAS [873651-92-4]), 2-амино-3-пиридинметанол (номер CAS [23612-57-9]), 2амино-а-метил-3-пиридинметанол (рацемический (номер CAS [869567-91-9]) или энантиомерно чистый
- 76 045708 (R) (номер CAS [936718-01-3]) или (S) (номер CAS [936718-00-2])), 2-амино-а-этил-3-пиридинметанол (номер CAS [914223-90-8]), 2-амино-а,а-диметил-3-пиридинметанол (номер CAS [213666-96-7]), 3амино-4-пиридинметанол (номер CAS [152398-05-5]), 3-амино-а-метил-4-пиридинметанол (номер CAS [1242470-88-7]), 3-амино-а,а-метил-4-пиридинметанол (номер CAS [13357-81-8]), 4-амино-3пиридинметанол (номер CAS [138116-34-4]), 4-амино-а-метил-3-пиридинметанол (номер CAS [74122349-4]), 4-амино-а,а-метил-3-пиридинметанол (номер CAS [1339013-26-1]), 3-амино-2-пиридинметанол (номер CAS [52378-63-9]), 3-амино-а-метил-2-пиридинметанол (номер CAS [954240-54-1]), 3-амино-а,аметил-2-пиридинметанол (номер CAS [899438-57-4]); на ней изображен синтез с применением пбензиламина С52, однако также можно применять другие соединения криптофицина; на ней изображен синтез с применением спейсеров 1 или 2, однако также можно применять спейсеры 3 или 4.
Получение новых полезных нагрузок с криптофицином формулы (IV), содержащих дипептиды с улучшенной гидрофильностью.
Без РАВА-фрагмента.
Схема 11
Стадия (i): пептидное сочетание между производным криптофицина и дипептидом с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt, и удаление защитной Fmoc-группы с амина в присутствии основания, такого как, например, пиперидин.
Стадия (ii): сочетание с глутаровым ангидридом; перед стадией (iii) может быть необходима одна дополнительная стадия удаления защитной группы с боковой цепи замещенной аминокислоты.
Стадия (iii): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схеме 11 изображен синтез полезных нагрузок с применением п-бензиламина С52, однако также можно применять другие соединения криптофицина; на ней изображен синтез с применением дипептида 1, однако также можно применять дипептид 5; на ней изображен синтез с применением глутарового ангидрида, однако также можно применять янтарный ангидрид или алкильные дикислоты, которые являются коммерчески доступными, для случаев, если n находится в диапазоне от 3 до 10.
С РАВА-фрагментом.
- 77 045708
Схема 12
Стадия (i): образование карбамата между активированным спиртом и криптофицинамином в присутствии основания, такого как, например, DIEA, и удаление защитной Fmoc-группы с амина в присутствии основания, такого как, например, пиперидин.
Стадия (ii): сочетание с глутаровым ангидридом; перед стадией (iii) может быть необходима одна дополнительная стадия удаления защитной группы с боковой цепи замещенной аминокислоты.
Стадия (iii): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схеме 12 изображен синтез полезных нагрузок с применением п-бензиламина С52, однако также можно применять другие соединения криптофицина; на ней изображен синтез с применением дипептида 6, однако также можно применять дипептид 2.
Получение новых полезных нагрузок с криптофицином формулы (IV), содержащих как спенсер, так и дипептид с улучшенной гидрофильностью.
Без РАВА-фрагмента.
- 78 045708
Схема 13
Стадия (i): пептидное сочетание между производным криптофицина и дипептидом с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt, и удаление защитной Fmoc-группы с амина в присутствии основания, такого как, например, пиперидин.
Стадия (ii): пептидное сочетание со спейсером 3 с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt, или сочетание со спейсером 4 в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (iii): удаление защитной группы со сложного аллилового эфира в присутствии катализатора, такого как, например, тетракис-(трифенилфосфин)палладий; перед стадией (iv) может быть необходима одна дополнительная стадия удаления защитной группы с боковой цепи замещенной аминокислоты.
Стадия (iv): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схеме 13 изображен синтез полезных нагрузок с применением п-бензиламина С52, однако также можно применять другие соединения криптофицина; на ней изображен синтез с применением дипептида 5, однако также можно применять дипептид 1; на ней изображен синтез с применением спейсеров 3 или 4, однако также можно применять спейсеры 1 или 2.
С РАВА-фрагментом.
- 79 045708
Схема 14
Стадия (i): образование карбамата между активированным спиртом и криптофицинамином в присутствии основания, такого как, например, DIEA, и удаление защитной Fmoc-группы с амина в присутствии основания, такого как, например, пиперидин.
Стадия (ii): пептидное сочетание со спейсером 3 с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt, или сочетание со спейсером 4 в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (iii): удаление защитной группы со сложного аллилового эфира в присутствии катализатора, такого как, например, тетракис-(трифенилфосфин)палладий; перед стадией (iv) может быть необходима одна дополнительная стадия удаления защитной группы с боковой цепи замещенной аминокислоты.
Стадия (iv): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схеме 14 изображен синтез полезных нагрузок с применением п-бензиламина С52, однако также можно применять другие соединения криптофицина; на ней изображен синтез с применением дипептида 6, однако также можно применять дипептид 2; на ней изображен синтез с применением спейсеров 3 или 4, однако также можно применять спейсеры 1 или 2.
Получение новых полезных нагрузок с криптофицином формулы (IV) для случаев, если Y=O-CH2 или S-CH2.
Получение новых полезных нагрузок с криптофицином, содержащих спейсер с улучшенной гидрофильностью.
Без РАВА-фрагмента.
- 80 045708
Схема 15
Стадия (i): образование карбамата между криптофицином с активированным спиртом и амином в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (ii): удаление защитной Fmoc-группы с амина в присутствии основания, такого как, напри мер, пиперидин.
Стадия (iii): пептидное сочетание со спейсером 1 с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt, или сочетание со спейсером 2 в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (iv): удаление защитной группы со сложного аллилового эфира в присутствии катализатора, такого как, например, тетракис-(трифенилфосфин)палладий.
Стадия (v): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схеме 15 изображен синтез полезных нагрузок с применением активированного п-бензилового спирта С52, однако также можно применять другие соединения криптофицина; на ней изображен синтез с применением дипептидов Val-Ala, однако также можно применять другие дипептиды; на ней изображен синтез с применением Вос-монозащищенного этилендиамина, однако также можно применять другие Вос-монозащищенные диамины, которые являются коммерчески доступными, для случаев, если n находится в диапазоне от 3 до 10; на ней изображен синтез с применением спейсеров 1 или 2, однако также можно применять спейсеры 3 или 4.
В качестве альтернативы, новые полезные нагрузки с криптофицином формулы (IV), содержащие спейсер с улучшенной гидрофильностью, также можно получать, как изображено на схеме 16.
- 81 045708
Схема 16
Стадия (i): образование карбамата между криптофицином с активированным спиртом и линкером 2 в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (ii): удаление защитной группы со сложного аллилового эфира в присутствии катализатора, такого как, например, тетракис-(трифенилфосфин)палладий.
Стадия (iii): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схеме 16 изображен синтез полезных нагрузок с применением активированного п-бензилового спирта С52, однако также можно применять другие соединения криптофицина.
С РАВА-фрагментом.
- 82 045708
Схема 17
Стадия (i): пептидное сочетание между Fmoc-Val-Ala-OH и 4-аминобензиловым спиртом в присутствии реагента для сочетания, такого как, например, EEDQ.
Стадия (ii): активация бензилового спирта в виде п-нитрофенилкарбоната посредством обработки с помощью п-нитрофенилхлорформиата в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (iii): образование карбамата между активированным спиртом и Вос-монозащищенным этилендиамином в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (iv): удаление защитной Вос-группы с амина с применением раствора HCl (например, раствора в диоксане) или TFA.
Стадия (v): образование карбамата между криптофицином с активированным спиртом и амином в присутствии основания, такого как, например, DIEA, и удаление защитной Fmoc-группы с амина в при сутствии основания, такого как, например, пиперидин.
Стадия (vi): пептидное сочетание со спейсером 1 с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt, или сочетание со спейсером 2 в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (vii): удаление защитной группы со сложного аллилового эфира в присутствии катализатора, такого как, например, тетракис-(трифенилфосфин)палладий.
Стадия (viii): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схеме 17 изображен синтез полезных нагрузок с применением дипептидов Val-Ala, однако также можно применять другие дипептиды; на ней изображен синтез с применением п-аминобензилового спирта (номер CAS [623-04-1]), однако также можно применять другие соединения аминобензилового спирта, которые являются коммерчески доступными, такие как, например, 4-(1-гидроксиэтил)-анилин (рацемический (номер CAS [14572-89-5]) или энантиомерно чистый (R) (номер CAS [210754-25-9]) или (S) (номер CAS [500229-84-5])), 4-амино-а,а-диметилбензолметанол (номер CAS [23243-04-1]), 4-амино-аметокси-а-метилбензолметанол (номер CAS [1379318-81-6]), 4-амино-а-метил-а-трифторметил
- 83 045708 бензолметанол (номер CAS [851652-56-7]), 2-аминобензолметанол (номер CAS [5344-90-1]), 2-амино-аметилбензолметанол (рацемический (номер CAS [10517-50-7]) или энантиомерно чистый (R) (номер CAS [3205-21-8]) или (S) (номер CAS [3205-21-8])), 6-амино-3-пиридинметанол (номер CAS [113293-71-3]), 6амино-а-метил-3-пиридинметанол (номер CAS [1335054-83-5]), 6-амино-а-этил-3-пиридинметанол (номер CAS [1355225-85-2]), 6-амино-а,а-диметил-3-пиридинметанол (номер CAS [843646-03-8]), 5-амино3-пиридинметанол (номер CAS [873651-92-4]), 2-амино-3-пиридинметанол (номер CAS [23612-57-9]), 2амино-а-метил-3-пиридинметанол (рацемический (номер CAS [869567-91-9]) или энантиомерно чистый (R) (номер CAS [936718-01-3]) или (S) (номер CAS [936718-00-2])), 2-амино-а-этил-3-пиридинметанол (номер CAS [914223-90-8]), 2-амино-а,а-диметил-3-пиридинметанол (номер CAS [213666-96-7]), 3амино-4-пиридинметанол (номер CAS [152398-05-5]), 3-амино-а-метил-4-пиридинметанол (номер CAS [1242470-88-7]), 3-амино-а,а-метил-4-пиридинметанол (номер CAS [13357-81-8]), 4-амино-3пиридинметанол (номер CAS [138116-34-4]), 4-амино-а-метил-3-пиридинметанол (номер CAS [74122349-4]), 4-амино-а,а-метил-3-пиридинметанол (номер CAS [1339013-26-1]), 3-амино-2-пиридинметанол (номер CAS [52378-63-9]), 3-амино-а-метил-2-пиридинметанол (номер CAS [954240-54-1]), 3-амино-а,аметил-2-пиридинметанол (номер CAS [899438-57-4]); на ней изображен синтез с применением Восмонозащищенного этилендиамина, однако также можно применять другие Вос-монозащищенные диамины, которые являются коммерчески доступными, для случаев, если n находится в диапазоне от 3 до 10; на ней изображен синтез с применением активированного п-бензилового спирта С52, однако также можно применять другие соединения криптофицина; на ней изображен синтез с применением спейсеров 1 или 2, однако также можно применять спейсеры 3 или 4.
Получение новых полезных нагрузок с криптофицином формулы (IV), содержащих дипептиды с улучшенной гидрофильностью.
Без РАВА-фрагмента.
Схема 18
Стадия (i): образование карбамата между криптофицином с активированным спиртом и дипептидом в присутствии основания, такого как, например, DIEA, и удаление защитной Fmoc-группы с амина в присутствии основания, такого как, например, пиперидин.
Стадия (ii): сочетание с глутаровым ангидридом; перед стадией (iii) может быть необходима одна дополнительная стадия удаления защитной группы с боковой цепи замещенной аминокислоты.
Стадия (iii): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схеме 18 изображен синтез полезных нагрузок с применением активированного п-бензилового
- 84 045708 спирта С52, однако также можно применять другие соединения криптофицина; на ней изображен синтез с применением дипептида 7, однако также можно применять дипептид 3; на ней изображен синтез с применением глутарового ангидрида, однако также можно применять янтарный ангидрид или алкильные дикислоты, которые являются коммерчески доступными, для случаев, если n находится в диапазоне от 3 до 10. С РАВА-фрагментом
Схема 19
дипептид 8 I®
HNyR26 о
Стадия (i): образование карбамата между криптофицином с активированным спиртом и дипептидом в присутствии основания, такого как, например, DIEA, и удаление защитной Fmoc-группы с амина в присутствии основания, такого как, например, пиперидин.
Стадия (ii): сочетание с глутаровым ангидридом; перед стадией (iii) может быть необходима одна дополнительная стадия удаления защитной группы с боковой цепи замещенной аминокислоты.
Стадия (iii): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схеме 19 изображен синтез полезных нагрузок с применением активированного п-бензилового спирта С52, однако также можно применять другие соединения криптофицина; на ней изображен синтез с применением дипептида 8, однако также можно применять дипептид 4; на ней изображен синтез с применением глутарового ангидрида, однако также можно применять янтарный ангидрид или алкильные дикислоты, которые являются коммерчески доступными, для случаев, если n находится в диапазоне от 3 до 10.
Получение новых полезных нагрузок с криптофицином формулы (IV), содержащих как спенсер, так и дипептид с улучшенной гидрофильностью.
Без РАВА-фрагмента.
- 85 045708
Схема 20
Стадия (i): образование карбамата между криптофицином с активированным спиртом и дипептидом в присутствии основания, такого как, например, DIEA, и удаление защитной Fmoc-группы с амина в присутствии основания, такого как, например, пиперидин.
Стадия (ii): пептидное сочетание со спейсером 3 с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt, или сочетание со спейсером 4 в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (iii): удаление защитной группы со сложного аллилового эфира в присутствии катализатора, такого как, например, тетракис-(трифенилфосфин)палладий; перед стадией (iv) может быть необходима одна дополнительная стадия удаления защитной группы с боковой цепи замещенной аминокислоты.
Стадия (iv): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схеме 20 изображен синтез полезных нагрузок с применением п-бензиламина С52, однако также можно применять другие соединения криптофицина; на ней изображен синтез с применением дипептида 7, однако также можно применять дипептид 3; на ней изображен синтез с применением спейсеров 3 или 4, однако также можно применять спейсеры 1 или 2.
С РАВА-фрагментом.
- 86 045708
Схема 21
Стадия (i): образование карбамата между криптофицином с активированным спиртом и дипептидом в присутствии основания, такого как, например, DIEA, и удаление защитной Fmoc-группы с амина в присутствии основания, такого как, например, пиперидин.
Стадия (ii): пептидное сочетание со спейсером 3 с применением реагентов для сочетания, таких как, например, EDC и HOBt, или сочетание со спейсером 4 в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
Стадия (iii): удаление защитной группы со сложного аллилового эфира в присутствии катализатора, такого как, например, тетракис-(трифенилфосфин)палладий; перед стадией (iv) может быть необходима одна дополнительная стадия удаления защитной группы с боковой цепи замещенной аминокислоты.
Стадия (iv): активация карбоновой кислоты в виде сложного NHS-эфира посредством обработки с помощью DSC в присутствии основания, такого как, например, DIEA.
На схеме 21 изображен синтез полезных нагрузок с применением п-бензиламина С52, однако также можно применять другие соединения криптофицина; на ней изображен синтез с применением дипептида 8, однако также можно применять дипептид 4; на ней изображен синтез с применением спейсеров 3 или 4, однако также можно применять спейсеры 1 или 2.
Получение конъюгатов формулы (V).
Конъюгаты формулы (V) по настоящему изобретению можно получать посредством способа, включающего по меньшей мере стадии:
(i) приведения в контакт и обеспечения проведения реакции:
необязательно забуференного водного раствора антитела, необязательно модифицированного с помощью модифицирующего средства, и раствора полезной нагрузки с криптофицином формулы (IV), как определено в настоящем изобретении, при этом химическая группа RCG1 в полезной нагрузке с криптофицином формулы (IV) является реакционноспособной в отношении химической группы RCG2, присутствующей на полипептиде, таком как антитело, особенно в отношении аминогрупп, присутствующих на антителах, при этом указанные химические группы RCG2 были введены, если необходимо, с помощью модифицирующего средства, так, чтобы присоединить полезную нагрузку с криптофицином формулы (IV) к антителу посредст
- 87 045708 вом образования ковалентной связи;
(ii) и затем необязательно отделения конъюгата формулы (V), образованного на стадии (i), от полезной нагрузки с криптофицином формулы (IV), и/или от непрореагировавшего антитела, и/или от любых агрегатов, которые могли образоваться.
В соответствии с одним вариантом, например, на стадии (ii) конъюгат формулы (V) из стадии (i) отделяют только от непрореагировавшей полезной нагрузки с криптофицином формулы (IV) и от любых образовавшихся агрегатов, а любое непрореагировавшее антитело остается в растворе.
Целью приведения в контакт является обеспечение проведения реакции между химическими группами RCG1 и RCG2 для обеспечения присоединения полезной нагрузки с криптофицином формулы (IV) к полипептиду, такому как антитело, посредством образования ковалентной связи; например, если RCG1 представляет собой RaZa-C(=O), то реакция предпочтительно происходит на функциональных аминогруппах антитела, таких как ε-аминогруппы, находящиеся на боковых цепях лизиновых (Lys) остатков антитела, и α-аминогруппы N-концевых аминокислот тяжелых и легких цепей антитела. В данном случае получают конъюгат следующей формулы: mAb-[NH-C(=O)-L*-Y-Crypto]d, при этом L* представляет собой фрагмент линкера L, содержащий в качестве RCG1 группу RaZa-C(=O), и d представляет собой соотношение лекарственного средства и антитела, или DAR;
если RCG1 представляет собой атом хлора или малеимидо- или галогенацетамидогруппу, антитело может содержать тиольные химические группы;
если RCG1 представляет собой азидогруппу, антитело может содержать С^СН-фрагмент или активированную тройную связь, например, циклооктиновую группу;
если RCG1 представляет собой группу NH2, реакция может происходить на амидной функциональной группе антитела с применением ферментативного катализа, такой как амидные группы, находящиеся на боковых цепях глутаминовых (Gln) остатков антитела. В данном случае получают конъюгат следующей формулы: mAb-[C(=O)-NH-L*-Crypto]d, при этом L* представляет собой фрагмент линкера L, который содержит в качестве RCG1 группу NH2, и, таким образом, L представляет собой группу L*NH2, и d представляет собой соотношение лекарственного средства и антитела, или DAR;
если RCG1 представляет собой группу С^СН или активированную группу С^С, такую как циклооктиновый фрагмент, антитело может содержать азидогруппы.
Термин агрегаты означает ассоциаты, которые могут образовываться между двумя или более антителами, при этом антитела возможно были модифицированы с помощью конъюгирования. Агрегаты могут образовываться под воздействием широкого разнообразия параметров, таких как высокая концентрация антитела в растворе, рН раствора, высокие усилия сдвига, количество привитых лекарственных средств и их гидрофобная природа, температура (см. ссылки, приведенные во введении J. Membrane Sci. 2008, 318, 311-316), однако, влияние некоторых из них не было четко установлено. В случае белков или антител можно ссылаться на AAPS Journal, Protein Aggregation and Bioprocessing 2006, 8(3), E572-E579. Содержание агрегата может быть определено с помощью известных методик, таких как SEC (см. в данном отношении Analytical Biochemistry 1993, 212 (2), 469-480).
Водный раствор антитела можно буферизовать с помощью буферов, например, фосфата калия, или HEPES, или смеси буферов, такой как буфер А, описанный ниже. Буфер зависит от природы антитела. Полезная нагрузка с криптофицином формулы (IV) растворяется в полярном органическом растворителе, таком как DMSO или DMA.
Реакция происходит при температуре, которая находится, как правило, в диапазоне от 20°С до 40°С. Значение времени реакции может находиться в диапазоне от 1 до 24 ч. Реакцию между антителом и полезной нагрузкой с криптофицином формулы (IV) можно контролировать посредством SEC при помощи рефрактометрического и/или ультрафиолетового детектора и/или HRMS для определения степени ее протекания. Если степень замещения является недостаточной, можно обеспечить более продолжительное проведение реакции и/или можно добавить соединение криптофицина. Для получения дополнительной информации в отношении конкретных условий можно ссылаться на раздел Примеры. Конкретные варианты осуществления описаны в примерах 3, 6, 16,19, 23, 26, 29, 32, 35 и 41.
Специалист в данной области техники имеет в своем распоряжении различные хроматографические методики для разделения на стадии (ii): конъюгат может быть очищен, например, посредством пространственно-эксклюзионной хроматографии (SEC), посредством адсорбционной хроматографии (например, ионообменной, IEC), посредством хроматографии гидрофобного взаимодействия (HIC), посредством аффинной хроматографии, посредством хроматографии на смешанных носителях, таких как керамический гидроксиаппатит, или посредством HPLC. Также можно применять очистку посредством диализа или диафильтрации.
После стадии (i) или (ii) раствор конъюгата можно подвергать стадии (iii) ультрафильтрации и/или диафильтрации. Таким образом, после этих стадий получают конъюгат в водном растворе.
Антитело.
Антитело может представлять собой моноклональное антитело, выбранное из группы, состоящей из мышиного, химерного, гуманизированного и человеческого антитела.
- 88 045708
В одном варианте осуществления антитело представляет собой моноспецифическое антитело, т.е. антитело специфически связывается только с одной мишенью. В качестве альтернативы, оно может представлять собой полиспецифическое антитело.
В одном варианте осуществления антитело представляет собой антитело IgG, например, антитело IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.
Антитело в соответствии с настоящим изобретением специфически связывается с мишенью, тем самым направляя биологически активное соединение в виде цитотоксического соединения по отношению к указанной мишени. Используемые в данном документе выражения специфически связывает, или специфически связывается с, или связывается с или т.п. означают, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образуют комплекс с антигеном, который является относительно устойчивым в физиологических условиях. Специфическое связывание может быть охарактеризовано с помощью равновесной константы диссоциации (KD), составляющей по меньшей мере приблизительно 1х10-8 М или меньше (например, меньшее значение KD означает более сильное связывание). Способы определения наличия специфического связывания двух молекул хорошо известны в данной области техники и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс и т.п. Как описано в данном документе, антитела характеризовали, например, по их специфическому связыванию с мишенью и/или целевым антигеном с помощью поверхностного плазмонного резонанса, например BIACORE™.
Мишень, как правило, соответствует белку, который экспрессируется на поверхности клеток, например, белку, который экспрессируется на поверхности опухолевых клеток.
В одном варианте осуществления мишень представляет собой рецептор EphA2. Рецептор EphA2 представляет собой рецептор эфрина и его также называют Eph-рецептор А2 или рецепторная тирозиновая протеинкиназа эпителиальных клеток. Антитело, которое специфически связывается с рецептором EphA2, например, может соответствовать одному из антител, описанных в WO2008/010101 или WO2011/039724.
Антитело необязательно может быть модифицировано с помощью модифицирующего средства таким образом, чтобы способствовать присоединению полезной нагрузки с криптофицином, как описано ранее. В частности, антитело может быть моноклональным, поликлональным или полиспецифическим. Оно также может представлять собой фрагмент антитела. Оно также может представлять собой мышиное, человеческое, гуманизированное или химерное антитело. Антитело, применяемое в примерах по настоящему изобретению, представляет собой hu2H11_R3574, антитело-антагонист к рецептору EphA2. Последовательность hu2H11R3574 представлена под SEQ ID NO: 1 (легкая цепь антитела hu2H11_R35R74) и под SEQ ID NO:2 (тяжелая цепь антитела hu2H11_R35R74), которые соответствуют SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO:18 соответственно, представленным в WO2011039724 А1.
Конъюгат.
Конъюгат, как правило, содержит от приблизительно 1 до 10 соединений криптофицина, ковалентно присоединенных к антителу (это представляет собой степень прививания, или соотношение лекарственного средства и антитела, или DAR). Данное число изменяется в зависимости от природы антитела и соединения криптофицина, а также рабочих условий, применяемых в процессе конъюгации (например, число эквивалентов соединения криптофицина относительно антитела, времени реакции, природы растворителя и любого сорастворителя). Приведение антитела и соединения криптофицина в контакт обеспечивает получение смеси, содержащей несколько конъюгатов, которые характерно отличаются друг от друга различными значениями DAR; необязательно непрореагировавшее антитело; необязательно агрегаты. Значение DAR, которое определяется в конечном растворе, таким образом, соответствует среднему значению DAR. Значение DAR можно рассчитать на основе деконволюции спектра SEC-HRMS конъюгата. Значение DAR (HRMS), например, превышает 0,5, например, находится в диапазоне от 1 до 10, таком диапазоне как от 2 до 7.
Конъюгат можно применять в качестве противоракового средства. Благодаря наличию антитела получают конъюгат, который является высоко селективным в отношении опухолевых клеток, а не в отношении здоровых клеток. Это дает возможность направлять соединение криптофицина в среду, подобную им или непосредственно к ним. Можно осуществлять лечение видов солидного рака или гемобластоза. Конъюгат может применяться сам по себе или в комбинации с по меньшей мере одним другим противораковым средством.
Конъюгат составляют в форме забуференного водного раствора при концентрации, как правило, находящейся в диапазоне от 1 до 10 мг/мл. Данный раствор можно вводить в виде перфузии сам по себе или можно повторно разводить с образованием раствора для перфузии.
Примеры
В следующих примерах описывается получение некоторых соединений в соответствии с настоящим изобретением. Такие примеры не являются ограничивающими и лишь иллюстрируют настоящее изобретение.
Используемые аналитические способы.
Жидкостная хроматография высокого давления - масс-спектрометрия (LCMS).
- 89 045708
Способ А.
Спектры получали на системе Waters UPLC-SQD в положительном и/или отрицательном режиме электрораспыления (ES+/-). Хроматографические условия были следующими:
колонка: ACQUITY ВЕН С18-1,7 мкм - 2,1x50 мм; растворители: А: Н2О (0,1% муравьиная кислота), В: CH3CN (0,1% муравьиная кислота); температура колонки: 50°С; скорость потока: 0,8 мл/мин.; градиент (2,5 мин.): от 5 до 100% В за 1,8 мин.; 2,4 мин: 100% В; 2,45 мин: от 100 до 5% В за 0,05 мин.
Способ В.
Спектры получали на системе Waters UPLC-SQD в положительном и/или отрицательном режиме электрораспыления (ES+/-). Хроматографические условия были следующими:
колонка: ACQUITY ВЕН С18-1,7 мкм - 2,1x50 мм; растворители: А: Н2О (0,1% муравьиная кислота), В: CH3CN (0,1% муравьиная кислота); температура колонки: 50°С; скорость потока: 0,6 мл/мин.; градиент (2 мин.): от 5 до 50% В за 1 мин.; от 50 до 100% В за 0,3 мин.; 100% В в течение 0,15 мин.; от 100 до 5% В за 0,3 мин и 5% В в течение 0,25 мин.
Способ С.
Спектры получали на системе Waters UPLC-SQD в положительном и/или отрицательном режиме электрораспыления (ES+/-). Хроматографические условия были следующими:
колонка: ACQUITY ВЕН С18-1,7 мкм - 2,1x50 мм; растворители: А: Н2О (0,1% муравьиная кислота), В: CH3CN (0,1% муравьиная кислота); температура колонки: 50°С; скорость потока: 0,8 мл/мин.; градиент (5 мин.): от 5 до 100% В за 4,2 мин.; 4,6 мин: 100% В; 4,8 мин: 5% В.
Способ D.
Спектры получали на системе Waters XeVo - Qtof в положительном режиме электрораспыления (ES+). Хроматографические условия были следующими:
колонка: ACQUITY ВЕН С18-1,7 мкм - 2,1x100 мм; растворители: А: Н2О (0,1% муравьиная кислота), В: CH3CN (0,1% муравьиная кислота); температура колонки: 45°С; скорость потока: 0,6 мл/мин.; градиент (5,3 мин.): 5% В от 0 до 0,3 мин, 4 мин: 100% В; 4,6 мин: 100% В; 5,3 мин: 5% В.
Способ Е
Спектры получали на системе Waters UPLC-SQD в положительном и/или отрицательном режиме электрораспыления (ES+/-). Хроматографические условия были следующими:
колонка: ACQUITY ВЕН С18-1,7 мкм - 2,1x50 мм; растворители: А: Н2О (0,1% муравьиная кислота), В: CH3CN (0,1% муравьиная кислота); температура колонки: 45°С; скорость потока: 0,8 мл/мин.; градиент (10 мин.): от 5 до 100% В за 8,6 мин.; 9,6 мин: 100% В; 9,8 мин: 5% В.
1Н ядерный магнитный резонанс (ЯМР).
1Н ЯМР -спектры получали на спектрометре Bruker Avance, либо на модели DRX-300, DRX-400 или DRX-500. Химические сдвиги (δ) приведены в ppm.
Эксклюзионная хроматография - масс-спектрометрия высокого разрешения (SEC-HRMS).
Хроматографический анализ проводили на приборе Agilent НР1100 и колонке Waters ВЕН SEC 200 1,7 мкм (2,1x150 мм) при 30°С со скоростью потока 0,5 мл/мин, и изократическим элюированием (А) 25 мМ формиата аммония+1% муравьиная кислота/(В) CH3CN+0,1% муравьиная кислота 70/30 в течение 15 мин. Масс-спектрометрию проводили на приборе Waters QTOF-II с ионизацией электрораспылением в положительном режиме (ES+). Для масс-спектров проводили деконволюцию, используя программное обеспечение Waters MaxEntl.
Аналитическая эксклюзионная хроматография (SEC).
Анализ проводили на системе Waters Alliance HPLC или на системе Hitachi Lachrom HPLC, оснащенной детектором с фотодиодной матрицей и колонкой Tosoh Bioscience TSKgel G3000 SWXL 5 мкм (7,8x300 мм) со скоростью потока 0,5 мл/мин, и изократическим элюированием в течение 30 мин буфером с рН 7, содержащим 0,2 М KCl, 0,052 M KH2PO4, 0,107 M K2HPO4 и 20% от объема изопропанола.
Буферы.
Буфер А (рН 6,5): NaCl (50 мМ), калий-фосфатный буфер (50 мМ), EDTA (2 мМ).
Буфер В (рН 6,5): NaCl (140 мМ), фосфат калия и натрия (9,6 мМ).
DPBS (рН 7,2): KCl (2,7 мМ), NaCl (137 мМ), KH2PO4 (1,47 мМ), Na2HPO4 (8,10 мМ).
PBS (рН 7,4): KH2PO4 (1,06 мМ), NaCl (155,17 мМ), Na2HPO4-7H2O (2,97 мМ).
Общий способ, используемый для получения конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC).
Раствор антитела в водном буфере, состоящем из смеси буфера А и 1н. HEPES в соотношении 96:4, обрабатывали избытком (5-10 экв.) раствора с приблизительно 10 мМ полезной нагрузки криптофицина в DMA так, чтобы конечная концентрация антитела составляла 3 мг/мл, а процентная доля DMA в водном буфере составляла 20%. После перемешивания в течение 1-4 ч смесь анализировали с помощью SECHRMS для определения DAR в популяции мономерных антител. Если DAR оказывалось недостаточным (< 3,5-4), смесь обрабатывали дополнительным избытком (1-5 экв.) раствора криптофицина в DMA в течение 2-4 дополнительных часов при к.т. при перемешивании. Смесь очищали с помощью гельфильтрации с применением матрицы Superdex 200 pg (обессоливающая колонка HiLoad 16/60 или 26/60, GEHealthcare), предварительно уравновешенной в водном буфере с рН 6,5 (буфер В или DPBS), содер
- 90 045708 жащем 10-20% NMP, или матрицы Sephadex™ G25 (обессоливающая колонка Hiprep 26/10, GEHealthcare), предварительно уравновешенной в водном буфере с рН 6,5 (буфер В или DPBS), содержащем 5-10% NMP. Фракции, содержащие мономерное конъюгированное антитело, объединяли и концентрировали на Amicon Ultra-15 (мембрана Ultracel 10k или 50k, Millipore) до концентрации от 2 до 5 мг/мл. Затем проводили замену буфера или разбавление в подходящем буфере для составления конъюгата в конечном буфере. В случае замены буфера это осуществляли путем гель-фильтрации с применением матрицы Sephadex G25 (обессоливающие колонки NAP-5, NAP-10, NAP-25/PD-10 или Hiprep 26/10, GEHealthcare), предварительно уравновешенной конечным водным буфером, состав и рН которого соответствуют каждому конъюгату. Наконец, конъюгат фильтровали через фильтровальный блок Steriflip® (PVDF-мембрана Durapore® 0,22 мкм, Millipore). Конечный конъюгат анализировали с помощью УФспектрометрии или SEC-HPLC, чтобы измерить концентрацию конъюгата, с помощью SEC-HPLC, чтобы определить мономерную чистоту, и с помощью SEC-HRMS, чтобы определить DAR на основе деконво люции масс-спектра конъюгата.
Синтез примеров 1-3: PEG4-Val-Ala-С52-бензиламин, NHS-сложный эфир PEG4-Val-Ala-С52бензиламина и соответствующий ADC
- 91 045708
Соединение 1: аллил-3-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропаноат.
К раствору Вос-в—Ala-OH (номер CAS [3303-84-2], 2 г, 10,04 ммоль) в DMF (50 мл) добавляли карбонат цезия (6,88 г, 21,09 ммоль) и аллилбромид (965,52 мкл, 11,05 ммоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи. В это же время реакционную среду концентрировали in vacuo, затем разбавляли толуолом и концентрировали in vacuo несколько раз. Неочищенный продукт разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали с помощью AtOAc (3x300 мл). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 90 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 1,5 г соединения 1 (65%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 1,3V (s, 9H); 2,45 (t, J=6,9 Гц, 2H); 3,17 (q, J=6,9 Гц, 2H); 4,54 (m, 2H); 5,20 (qd, J=1,5 и 10,6 Гц, 1H); 5,29 (qd, J=1,9 и 17,3 Гц, 1H); 5,91 (m, 1H); 6,85 (широкий t, J=6,9 Гц, 1H).
Соединение 2: аллил-3-аминопропаноат-2,2,2-трифторацетат.
К раствору соединения 1 (1,5 г, 6,54 ммоль) в DCM (30 мл) добавляли TFA (5,09 мл, 65,42 ммоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи. В это же время реакционную среду концентрировали in vacuo, затем разбавляли толуолом и концентрировали in vacuo дважды с получением 1,6 г соединения 2 (колич.).
- 92 045708
Соединение 3: аллил-3-((3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)амино)пропаноат.
К раствору соединения 3 (1,6 г, 6,58 ммоль) в DMSO (15 мл) добавляли DIEA (2,30 мл, 13,16 ммоль) и трет-бутилакрилат (973,49 мкл, 6,58 ммоль). Реакционную среду нагревали 1 ч при 60°С с применением микроволн. В это же время реакционную среду разбавляли с помощью H2O (10 мл) и экстрагировали с помощью AtOAc. Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 80 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 678 мг соединения 3 (40%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 1,39 (s, 9H); 1,73 (широкий m, 1H); 2,29 (t, J=6,9 Гц, 2H); 2,44 (t, J=6,9 Гц, 2H); 2,68 (t, J=6,9 Гц, 2H); 2,73 (t, J=6,9 Гц, 2H); 4,53 (m, 2H); 5,20 (qd, J=1,5 и 10,6 Гц, 1H); 5,30 (qd, J=1,9 и 17,3 Гц, 1H); 5,91 (m, 1H).
Соединение 4: трет-бутил-2,5,8,11-тетраоксатетрадекан-14-оат.
В атмосфере аргона смесь монометилового эфира триэтиленгликоля (номер CAS [112-35-6], 3 г, 17,36 ммоль) и натрия (3,99 мг, 173,57 мкмоль) в THF (9 мл) перемешивали в течение 2 ч при 50°С, затем в течение ночи при к.т. В это же время добавляли трет-бутилакрилат (3,08 мл, 20,83 ммоль), перемешивали в течение 2 ч при 40°С, затем в течение ночи при к.т. После этого реакционную среду концентрировали in vacuo, затем разбавляли с помощью H2O и экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 90 г силикагеля (градиентное элюирование гептан/EtOAc) с получением 3,3 г соединения 4 (65%).
Соединение 5: 2,5,8,11-тетраоксатетрадекан-14-овая кислота.
К раствору соединения 4 (2,5 г, 8,55 ммоль) в DCM (30 мл) добавляли TFA (6,65 мл, 85,51 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение ночи при к.т. В это же время реакционную среду концентрировали in vacuo, затем разбавляли толуолом и концентрировали in vacuo три раза с получением 3 г соединения 5 (колич.).
Соединение 6: 2,5,8,11-тетраоксатетрадекан-14-оилхлорид.
К соединению 5 (800 мг, 3,39 ммоль) добавляли тионилхлорид (3,68 мл, 50,79 ммоль). Реакционную среду нагревали 3 ч при 60°С. После охлаждения реакционную среду концентрировали in vacuo, разбавляли с помощью DCM и концентрировали in vacuo дважды с получением 870 мг соединения 6 (колич.).
Соединение 7: аллил-15-(3 -(трет-бутокси)-3 -оксопропил)- 14-оксо-2,5,8,11 -тетраокса-15азаоктадекан-18-оат.
При 0°С в атмосфере аргона к раствору соединения 3 (678 мг, 2,63 ммоль) и DIEA (533,21 мкл, 3,16 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли раствор соединения 6 (738,21 мг, 2,90 ммоль) в DCM (3 мл). Через 2 ч реакционную среду промывали с помощью H2O (10 мл), затем солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 40 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 410 мг соединения 7 (33%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 50/50; 1,39 (s, 4,5 H); 1,40 (s, 4,5 H); 2,39 (t, J=7,2 Гц, 1H); 2,47 до 2,60 (частично скрытый m, 4H); 2,66 (t, J=7,2 Гц, 1H); 3,23 (s, 1,5 H); 3,24 (s, 1,5 H); 3,38 до 3,65 (m, 18 H); 4,54 (m, 2H); 5,19 до 5,34 (m, 2H); 5,85 до 5,97 (m, 1H).
Соединение 8: 15-(3-(аллилокси)-3-оксопропил)-14-оксо-2,5,8,11-тетраокса-15-азаоктадекан-18-овая кислота.
Раствор соединения 7 (150 мг, 315,41 мкмоль) в DCM (3 мл) и TFA (236,66 мкл, 3,15 ммоль) перемешивали при к.т. в течение ночи. В это же время реакционную среду концентрировали in vacuo, разбавляли толуолом и концентрировали in vacuo три раза с получением 130 мг соединения 8 (98%).
Соединение 9: аллил-15-(3-((2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси)-3-оксопропил)-14-оксо-2,5,8,11тетраокса- 15-азаоктадекан-18-оат.
К раствору соединения 8 (130 мг, 309,92 мкмоль) в THF (5 мл) добавляли DIEA (104,53 мкл, 619,83 мкмоль) и DSC (97,21 мг, 371,90 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи. В это же время реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH) с получением 107 мг соединения 9 (67%).
Соединение 10: (9Н-флуорен-9-ил)метил-((2S)-1 -(((2S)-1 -((4-((2R,3 S)-3-(1 -((3 S,10R,16S,E)-10-(3 хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)карбамат.
К раствору (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(аминометил)фенил)оксиран-2-ил)этил)-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраона (синтез которого описан в WO2011001052, соединение 77, 150 мг, 214,82 мкмоль) в DCM добавляли HOBt (31,93 мг, 236,31 мкмоль), EDC (41,83 мкл, 236,31 мкмоль) и Fmoc-Val-Ala-OH (номер CAS [150114-97-9], 79,36 мг, 193,34 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 3 ч при к.т. Затем добавляли H2O (20 мл) и смесь экстрагировали с помощью DCM (2x15 мл). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 5 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с
- 93 045708 получением 200 мг соединения 10 (85%).
Соединение 11: (2S)-2-αмино-N-((2S)-1-((4-((2R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,Е)-10-(3-хлор-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)амино)-1-оксопропан-2-ил)-3-метилбутанамид.
Смесь соединения 10 (200 мг, 183,37 мкмоль) в DCM (10 мл) и пиперидине (183,39 мкл, 1,83 ммоль) перемешивали в течение 2 ч при к.т. Реакционную среду концентрировали in vacuo, солюбилизировали в DCM перед добавлением Et2O. Осадок фильтровали, промывали с помощью Et2O и высушивали с получением 180 мг неочищенного вещества, которое очищали посредством флеш-хроматографии на 10 г модифицированного аминопропилом силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 136 мг соединения 11 (85%).
Соединение 12: αллuл-15-(3-(((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2R,3S)-3-(1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3оксопропил)-14-оксо -2,5,8,11 -тетраокса-15 -азаоктадекан-18-оат.
К раствору соединения 11 (60 мг, 69,09 мкмоль) в THF (5 мл) добавляли соединение 9 (42,82 мг, 82,91 мкмоль) и DIEA (17,48 мкл, 103,63 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 3 ч при к.т. В это же время ее концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 10 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 60 мг соединения 12 (68%).
1H ЯМР (МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 60/40; 0,78 (d, J=7,0 Гц, 6H); 0,80 до 0,87 (m, 6H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,24 (разделенный d, J=7,0 Гц, 3H); 1,30 (m, 1H); 1,51 до 1,63 (m, 2H); 1,75 до 1,83 (m, 1H); 1,95 (m, 1H); 2,26 (m, 1H); 2,30 до 2,73 (m, 8 H); 2,95 до 3,05 (m, 3H); 3,23 (s, 3H); 3,31 (скрытый m, 1H); 3,40 до 3,64 (m, 18H); 3,81 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,1 Гц, 1H); 4,12 до 4,33 (m, 5H); 4,53 (m, 1,2H); 4,55 (m, 0,8H); 4,91 (m, 1H); 5,11 (m, 1H); 5,21 (m, 1H); 5,28 (qd, J=1,9 и 17,3 Гц, 0,6 H); 5,31 (qd, J=1,9 и 17,3 Гц, 0,4H); 5,78 (разделенный d, J=15,7 Гц, 1H); 5,85 до 5,95 (m, 1H); 6,47 (ddd, J=4,2, 11,5 и 15,7 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,7 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=2,3 и 8,7 Гц, 1H); 7,19 до 7,26 (m, 5 H); 7,28 (d, J=2,3 Гц, 1H); 7,94 (d, J=9,2 Гц, 0,4H); 8,04 (m, 1H); 8,10 (d, J=7,6 Гц, 0,6 H); 8,32 (m, 1H); 8,35 (d, J=8,2 Гц, 1H).
Пример 1: 15-(3-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3 хлор-4-метоксибензил)-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран2-ил)бензил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-оксопропил)-14-оксо2,5,8,11-тетраокса-15-азаоктадекан-18-овая кислота.
В атмосфере аргона к раствору соединения 12 (60 мг, 47,25 мкмоль) в DCM (5 мл) добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (2,76 мг, 2,36 мкмоль) и 1,3-диметилбарбитуровую кислоту (22,58 мг, 141,74 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т. и концентрировали in vacuo. Неочищенный продукт очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 31 мг соединения из примера 1 (53%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,79 (d, J=7,0 Гц, 6H); 0,80 до 0,88 (m, 6H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,23 (m, 3H); 1,31 (m, 1H); 1,51 до 1,62 (m, 2H); 1,80 (m, 1H); 1,95 (m, 1H); 2,27 (m, 1H); 2,35 до 2,60 (частично скрытый m, 6H); 2,62 до 2,73 (m, 2H); 2,93 до 3,06 (m, 3H); 3,23 (s, 3H); 3,28 до 3,35 (скрытый m, 1H); 3,36 до 3,65 (m, 18 H); 3,81 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,0 Гц, 1H); 4,11 до 4,34 (m, 5H); 4,91 (m, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=15,5 Гц, 1H); 6,48 (ddd, J=3,8, 11,3 и 15,5 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,7 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=2,0 и 8,7 Гц, 1H); 7,24 (m, 5 H); 7,29 (d, J=2,0 Гц, 1H); 7,95 до 8,18 (m, 2H); 8,30 до 8,46 (m, 2H); 12,27 (широкий m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=615 [М+2Н]2+; масса/заряд=1227 [МН]-; масса/заряд=1229 [М+Н]+; Rt=1,26 мин.
Пример 2: 2,5-диоксопирролидин-1-ил-15-(3-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2ил)амино)-3-оксопропил)-14-оксо-2,5,8,11-тетраокса-15-азаоктадекан-18-оат.
К раствору соединения из примера 1 (30 мг, 24,39 мкмоль) в THF (5 мл) добавляли DSC (7,65 мг, 29,27 мкмоль) и DIEA (9,88 мкл, 58,54 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, затем концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 5 г модифицированного диолом силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH) с получением 17 мг соединения из примера 2 (53%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 70/30; 0,79 (d, J=7,0 Гц, 6H); 0,80 до 0,87 (m, 6H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,21 до 1,34 (m, 4H); 1,51 до 1,62 (m, 2H); 1,80 (m, 1h); 1,93 (m, 1h); 2,27 (m, 1H); 2,35 до 2,72 (частично скрытый m, 6H); 2,81 (широкий s, 4h); 2,88 до 3,06 (m, 5H); 3,23 (s, 3H); 3,28 до 3,37 (скрытый m, 1H); 3,40 до 3,79 (m, 18H); 3,81 (s, 3H); 3,88 (s, 1H); 4,13 до 4,33 (m, 5H); 4,90 (m, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=15,5 Гц, 1H); 6,46 (ddd, J=3,8,11,5 и 15,5 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,7 Гц, 1H); 7,17 (широкий s, 1H); 7,24 (m, 5 H); 7,29 (широкий s, 1H); 7,94 (d, J=8,8 Гц, 0,3 H); 8,06 (m, 1H); 8,12 (d, J=8,1 Гц, 0,7 H); 8,32 (m, 1H); 8,36 (d, J=8,1 Гц, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=663,5 [М+2Н]2+; масса/заряд=1324 [М-Н]-; масса/заряд=1326 [М+Н]+; масса/заряд=1374 [М-Н+НСО2Н]-; Rt=1,3 мин.
- 94 045708
Пример 3: hu2Hl l_R35-74-Ex2.
Общий способ, описанный ранее, использовали для получения соединения из примера 3. 15 мг hu2Hl l_R35-74 вводили в реакцию с 55,2 мкл 9,1 мМ раствора соединения из примера 2 в DMA (10 экв.) в течение 3 ч 30 мин. После очистки на Superdex 200 pg в буфере В с pH 6,5+10% NMP, концентрирования на Amicon Ultra-15, замены буфера на Nap-10 в буфере В с pH 6,5+5% NMP и фильтрации на PVDFфильтре с размером пор 0,22 мкм получали 3,36 мг соединения из примера 3 в виде бесцветного прозрачного раствора при концентрации 2,24 мг/мл с DAR 3,4 (HRMS), мономерной чистотой 99,8% и общим выходом 22%.
SEC-HRMS: масса/заряд=149354 (неконъюгированное шАЬ); масса/заряд=150563 (D1); масса/заряд=151774 (D2); масса/заряд=152966 (D3); масса/заряд=154169 (D4); масса/заряд=155410 (D5); масса/заряд= 156623 (D6); масса/заряд= 157835 (D7); масса/заряд= 159051 (D8).
Синтез примеров 4-6: сульфо-Уа1-А1а-С52-бензиламин, NHS-сложный эфир сульфо-Уа1-А1а-С52бензиламина и соответствующий ADC
Соединение 13: 4-((3-(аллилокси)-3-оксопропил)(3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)амино)-4оксобутановая кислота.
Раствор соединения 3 (958 мг, 3,72 ммоль) в DCM (5 мл) и янтарный ангидрид (752,65 мг, 7,45 ммоль) перемешивали в течение 3 ч при к.т. Реакционную среду концентрировали in vacuo и очища
-95045708 ли с помощью флеш-хроматографии на 24 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 1,3 г соединения 13 (98%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 50/50; 1,39 (s, 4,5 H); 1,40 (s, 4,5 H); 2,33 до 2,43 (m, 3H); 2,45 до 2,55 (частично скрытый m, 4H); 2,69 (t, J=7,5 Гц, 1H); 3,40 (t, J=7,5 Гц, 1h); 3,45 (t, J=7,5 Гц, 1H); 3,53 (t, J=7,5 Гц, 1H); 3,59 (t, J=7,5 Гц, 1H); 4,53 (m, 1H); 4,59 (m, 1H); 5,19 до 5,35 (m, 2H); 5,91 (m, 1H); 12,06 (широкий m, 1H).
Соединение 14: 2-(4-((3 -(аллилокси)-3 -оксопропил)(3 -(трет-бутокси)-3 -оксопропил)амино)-4оксобутанамидо)этансульфоновая кислота.
Смесь соединения 13 (1,3 г, 3,64 ммоль) в THF (12 мл) и DSC (1,14 г, 4,36 ммоль) и DIEA (1,84 мл, 10,91 ммоль) перемешивали в течение 5 ч при к.т. По истечении этого времени добавляли раствор таурина (718,75 мг, 5,46 ммоль) в воде (9 мл) и среду перемешивали при к.т. в течение ночи. В это же время добавляли DSC (1,14 г, 4,36 ммоль) и DIEA (1,84 мл, 10,91 ммоль) и среду перемешивали при к.т. в течение ночи. В это же время добавляли таурин (2,4 г, 18,2 ммоль) в воде (5 мл) и реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т., затем концентрировали и очищали с помощью флеш-хроматографии на 70 г С18-привитого силикагеля (градиентное элюирование CH3CN/H2O) с получением 1,28 г соединения 14 (76%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 50/50; 1,39 (s, 4,5 H); 1,40 (s, 4,5 H); 2,26 (t, J=7,2 Гц, 2H); 2,38 (t, J=7,5 Гц, 1H); 2,47 до 2,55 (частично скрытый т, 6H); 2,69 (t, J=7,5 Гц, 1h); 3,28 (m, 2H); 3,40 (t, J=7,5 Гц, 1H); 3,44 (t, J=7,5 Гц, 1H); 3,52 (t, J=7,5 Гц, 1H); 3,58 (t, J=7,5 Гц, 1H); 4,53 (m, 1h); 4,58 (m, 1H); 5,19 до 5,35 (m, 2H); 5,91 (m, 1H); 7,70 (широкий t, J=6,5 Гц, 1H).
Соединение 15: 3-(N-(3-(аллилокси)-3-оксопропил)-4-оксо-4-((2-сульфоэтил)амино)бутанамидо)пропановая кислота.
Раствор соединения 14 (300 мг, 645,81 мкмоль) в DCM (5 мл) и TFA (484,57 мкл, 6,46 ммоль) перемешивали при к.т. в течение ночи. В это же время добавляли TFA (250 мкл). Реакционную среду перемешивали несколько часов и концентрировали in vacuo, затем разбавляли толуолом и концентрировали in vacuo дважды с получением 260 мг соединения 15 (99%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 50/50; 2,27 (t, J=7,2 Гц, 2H); 2,40 (t, J=7,6 Гц, 1H); 2,48 до 2,56 (частично скрытый m, 6H); 2,68 (t, J=7,6 Гц, 1H); 3,28 (m, 2H); 3,40 (t, J=7,6 Гц, 1H); 3,46 (t, J=7,6 Гц, 1H); 3,50 (t, J=7,6 Гц, 1H); 3,59 (t, J=7,6 Гц, 1H); 4,54 (m, 1H); 4,57 (m, 1H); 5,18 до 5,35 (m, 2H); 5,91 (m, 1H); 7,65 (широкий t, J=6,5 Гц, 1H). LCMS (D): ES масса/заряд=409 [М+Н]+; Rt=1,49 мин.
Соединение 16: (4S,7S)-12-(3-(αллилоксu)-3-оксоnроnил)-1-(4-((2R,3R)-3-((S)-l-((3S,10R,16S,E)-10(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)фенил)-7-изопропил-4-метил-3,6,9,13,16-пентаоксо-2,5,8,12,17-пентаазанонадекан-19-сульфоновая кислота.
В атмосфере аргона к раствору соединения 15 (28,22 мг, 69,09 мкмоль) в DMF (3 мл) добавляли DIEA (23,30 мкл, 138,18 мкмоль), HOBt (9,72 мг, 69,09 мкмоль), EDC (12,49 мкл, 69,09 мкмоль) и раствор соединения 11 (60 мг, 69,09 мкмоль) в DMF (2 мл). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи. Для завершения реакции добавляли соединение 15 (28,22 мг, 69,09 мкмоль), DIEA (23,30 мкл, 138,18 мкмоль), HOBt (9,72 мг, 69,09 мкмоль), EDC (12,49 мкл, 69,09 мкмоль) и реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 1 дня. В это же время реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 70 г С18-привитого силикагеля (градиентное элюирование CH3CN/H2O) с получением 24 мг соединения 16 (24%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 60/40; 0,79 (d, J=7,0 Гц, 6H); 0,80 до 0,87 (m, 6H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,23 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,30 (m, 1H); 1,52 до 1,63 (m, 2H); 1,80 (m, 1H); 1,95 (m, 1H); 2,27 (m, 3H); 2,34 до 2,58 (частично скрытый m, 6H); 2,63 до 2,73 (m, 2h); 2,93 до 3,03 (m, 3H); 3,25 до 3,59 (частично скрытый m, 9H); 3,81 (s, 3H); 3,88 (d, J=1,4 Гц, 1H); 4,10 до 4,33 (m, 5 H); 4,53 (m, 1,2H); 4,56 (m, 0,8 H); 4,91 (m, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,20 (m, 1H); 5,29 (qd, J=1,8 и 17,3 Гц, 0,6 H); 5,31 (qd, J=1,8 и 17,3 Гц, 0,4H); 5,79 (dd, J=1,8 и 15,4 Гц, 1H); 5,90 (m, 1H); 6,47 (ddd, J=3,8, 11,8 и 15,4 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,7 Гц, 1H); 7,18 (dd, J=2,4 и 8,7 Гц, 1H); 7,24 (m, 5 H); 7,29 (d, J=2,4 Гц, 1H); 7,69 (t, J=5,8 Гц, 1H); 7,97 (d, J=8,8 Гц, 0,4H); 8,04 (d, J=7,7 Гц, 0,4H); 8,07 (d, J=8,8 Гц, 0,6 H); 8,11 (d, J=7,7 Гц, 0,6 H); 8,31 (t, J=6,3 Гц, 1H); 8,38 (d, J=8,3 Гц, 1H); 11,83 (широкий m, 1H). LCMS (D): ES масса/заряд=1256 [М-Н]-; Rt=2,58 мин.
Пример 4: (4S,7S)-1-(4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)фенил)-7-изопропил-4-метил-3,6,9-триоксо-12-(4-оксо-4-((2-сульфоэтил)амино)бутаноил)-2,5,8,12-тетраазапентадекан-15-овая кислота.
В атмосфере аргона к раствору соединения 16 (24 мг, 19,06 мкмоль) в CH3CN (2 мл) добавляли DMF (0,5 мл), 1,3-диметилбарбитуровую кислоту (9,11 мг, 57,19 мкмоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (1,11 мг, 0,953 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т., затем концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 10 г
- 96 045708
С18-привитого силикагеля (градиентное элюирование CH3CN/H2O) с получением 16 мг соединения из примера 4 (70%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 60/40; 0,79 (d, J=7,0 Гц, 6H); 0,80 до 0,86 (m, 6H); 0,99 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,24 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,31 (m, 1H); 1,52 до 1,62 (m, 2h); 1,80 (m, 1H); 1,95 (m, 1H); 2,21 до 2,31 (m, 3H); 2,34 до 2,59 (частично скрытый m, 8 H); 2,62 до 2,75 (m, 2H); 2,94 до 3,05 (m, 3H);
3,25 до 3,58 (частично скрытый m, 7H); 3,81 (s, 3H); 3,88 (d, J=1,9 Гц, 1H); 4,09 до 4,33 (m, 5 H); 4,90 (m, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=15,5 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=4,0, 11,4 и 15,5 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,7 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=2,2 и 8,7 Гц, 1H); 7,21 до 7,26 (m, 5 H); 7,29 (d, J=2,2 Гц, 1H); 7,69 (m, 1H); 7,97 (d, J=9,0 Гц, 0,4H); 8,04 (d, J=7,7 Гц, 0,4H); 8,08 (d, J=9,0 Гц, 0,6 H); 8,12 (d, J=7,7 Гц, 0,6 H); 8,31 (t, J=6,5 Гц, 1H); 8,38 (d, J=8,2 Гц, 1H); 12,2 (широкий m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=609,5 [М+2Н]2+; масса/заряд=1216 [М-Н]-; масса/заряд=1218 [М+Н]+; Rt=1,72 мин.
Пример 5: (4S,7S)-1-(4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)фенил)-12-(3 -((2,5-диоксопирролидин-1 -ил)окси)-3-оксопропил)-7-изопропил-4-метил-3,6,9,13,16-пентаоксо-2,5,8,12,17-пентаазанонадекан-19-сульфоновая кислота.
В атмосфере аргона смесь соединения из примера 4 (16 мг, 13,13 мкмоль) в DMF (1 мл), DSC (4,12 мг, 15,75 мкмоль) и DIEA (2,66 мкл, 15,75 мкмоль) перемешивали при к.т. в течение ночи. В это же время реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 5 г С18привитого силикагеля (градиентное элюирование CH3CN/H2O) с получением 12,5 мг соединения из примера 5 (73%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 60/40; 0,79 (d, J=7,0 Гц, 6H); 0,80 до 0,86 (m, 6H); 0,99 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,23 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,31 (m, 1H); 1,51 до 1,62 (m, 2H); 1,80 (m, 1H); 1,93 (m, 1H); 2,21 до 2,31 (m, 3H); 2,35 до 2,59 (частично скрытый m, 6H); 2,62 до 2,74 (m, 2H); 2,81 (широкий s, 4H); 2,85 до 3,05 (m, 4H); 3,20 до 3,68 (частично скрытый m, 8H); 3,81 (s, 3H); 3,88 (d, J=1,9 Гц, 1H); 4,10 до 4,33 (m, 5H); 4,90 (m, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=15,5 Гц, 1H); 6,46 (ddd, J=4,0, 11,4 и 15,5 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,7 Гц, 1H); 7,18 (dd, J=2,2 и 8,7 Гц, 1H); 7,21 до 7,26 (m, 5 H); 7,29 (d, J=2,2 Гц, 1H); 7,69 (m, 1H); 7,97 (d, J=9,0 Гц, 0,4H); 8,05 (d, J=7,7 Гц, 0,4H); 8,08 (d, J=9,0 Гц, 0,6 H); 8,12 (d, J=7,7 Гц, 0,6 H); 8,31 (t, J=6,5 Гц, 1H); 8,38 (d, J=8,2 Гц, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=658 [М+2Н]2+; масса/заряд=1313 [М-Н]-; масса/заряд=1315 [М+Н]+; Rt=1,82 мин.
Пример 6: hu2H11_R35-74-Ex5.
Общий способ, описанный ранее, использовали для получения соединения из примера 6. 15 мг hu2H11_R35-74 вводили в реакцию с 42 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 5 в DMA (4 экв.) в течение 1 ч 20 мин, затем последовательно добавляли 42 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 5 в DMA (4 экв.) в течение 1 ч 20 мин, 53 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 5 в DMA (5 экв.) в течение 1 ч 30 мин и наконец 42 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 5 в DMA (4 экв.) в течение 1 ч. После очистки на Superdex 200 pg в буфере В с рН 6,5+20% NMP, концентрирования на Amicon Ultra-15, замены буфера на PD-10 в буфере В с рН 6,5+5% NMP и фильтрации на PVDF-фильтре с размером пор 0,22 мкм получали 3,33 мг соединения из примера 6 в виде бесцветного прозрачного раствора при концентрации 1,33 мг/мл с DAR 4,05 (HRMS), мономерной чистотой 99% и общим выходом 22%.
SEC-HRMS: масса/заряд=150568 (D1); масса/заряд=151768 (D2); масса/заряд=152971 (D3); масса/заряд=154172 (D4); масса/заряд=155375 (D5); масса/заряд=156574 (D6); масса/заряд= 157944 (D7); масса/заряд=158984 (D8).
- 97 045708
Синтез примера 7: сульфо-Va1-A1a-азакриnтобензиламин
Соединение 17: трет-бутил-L-валил-L-аланинат.
К раствору Fmoc-Val-OH (номер CAS [68858-20-8], 3 г, 8,66 ммоль) в DCM (60 мл) в атмосфере Ar добавляли EDC (2,02 г, 12,99 ммоль), HOBt (1,46 г, 10,40 ммоль) и гидрохлорид сложного третбутилового эфира L-аланина (номер CAS [13404-22-3], 1,61 г, 8,66 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 дня при к.т., гасили с помощью H2O (30 мл) и экстрагировали с помощью DCM (3x30 мл). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo с получением 5 г Fmoc-защищенного дипептида в виде белого твердого вещества (колич.). К раствору данного промежуточного соединения (5 г, 8,66 ммоль) в DCM (50 мл) добавляли пиперидин (8,64 мл, 86,63 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т. и концентрировали in vacuo. Неочищенный продукт разбавляли с помощью Et2O и фильтровали с получением 1,77 г твердого вещества, которое дополнительно очищали посредством двух последовательных операций флеш-хроматографии на 120 г и 50 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 500 мг соединения 17 в виде белого твердого вещества (24%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,79 (d, J=6,9 Гц, 3H); 0,89 (d, J=6,9 Гц, 3H); 1,24 (d, J=7,3 Гц, 3H); 1,40 (s, 9H); 1,62 (широкий s, 2H); 1,86 (m, 1H); 2,95 (d, J=5,2 Гц, 1H); 4,15 (m, 1H); 8,09 (широкий d, J=7,3 Гц, 1H).
Соединение 18: (5S,8S)-13-(3-(аллилокси)-3-оксопропил)-8-изопропил-2,2,5-триметил-4,7,10,14,17пентаоксо-3-окса-6,9,13,18-тетраазаикозан-20-сульфоновая кислота.
К раствору соединения 15 (250 мг, 612,1 мкмоль) в DMF (6 мл) в атмосфере Ar добавляли DIEA (309,7 мкл, 1,84 ммоль) и DSC (163,34 мг, 612,1 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т., затем добавляли раствор соединения 17 (149,56 мг, 612,1 мкл) в DMF (1 мл). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т. и очищали с помощью хроматографии с обращенной фазой на колонке С18 5 мкм, 30x100 мм (градиентное элюирование MeCN+0,07% TFA/H2O+0,07% TFA) с получением 215 мг соединения 18 в виде белой пены (55%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 60/40; 0,84 (d, J=6,9 Гц 3 H); 0,87 (d, J=6,9 Гц, 3H); 1,12 (d, J=7,3 Гц, 3H); 1,39 (s, 9H); 1,92 (m, 1H); 2,20 до 2,70 (частично скрытый m, 10H); 3,28 (m, 2H); 3,34 до 3,60 (m, 4H); 4,10 (m, 1H); 4,20 (m, 1H); 4,53 (td, J=1,6 и 5,5 Гц, 1,2H); 4,57 (td, J=1,6 и 5,5 Гц, 0,8 H); 5,20 (m, 1H); 5,30 (m, 1H); 5,90 (m, 1H); 7,69 (широкий t, J=6,4 Гц, 1H); 7,91 (d, J=9,6 Гц, 0,4H); 8,04 (d, J=9,6 Гц, 0,6 H); 8,23 (d, J=7,2 Гц, 0,4H); 8,30 (d, J=7,2 Гц, 0,6 H).
- 98 045708
Соединение 19: (3 -(N-(3-(аллилокси)-3-оксопропил)-4-оксо-4-((2-сульфоэтил)амино)бутанамидо)пропаноил)-L-валил-L-аланин.
К раствору соединения 18 (215 мг, 338,72 мкмоль) в DCM (5 мл) добавляли TFA (508,3 мкл, 6,77 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 дня при к.т., концентрировали in vacuo и выпаривали совместно с толуолом (3х) с получением 200 мг соединения 19 в виде белой пены (колич.).
Соединение 20: (4S,7S)-12-(3-(αллилокси)-3-оксопропил)-1-(4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S,10R,16S,Е)-10-(3хлор-4-метоксибензил)-6,6,7 -триметил-3 -неопентил-2,5,9,12-тетраоксо-1 -окса-4,8,11 -триазациклогексадец-13 -ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)фенил)-7-изопропил-4-метил-3,6,9,13,16-пентаоксо-2,5,8,12,17-пентаазанонадекан-19сульфоновая кислота.
К раствору соединения 19 (200 мг, 345,6 мкмоль) в DMF (9 мл) добавляли DSC (108 мг, 413,2 мкмоль) и DIEA (200 мкл, 1,185 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 6 ч при к.т., затем добавляли DSC (108 мг, 413,2 мкмоль) и DIEA (200 мкл, 1,185 ммоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, затем добавляли DSC (50 мг, 191,3 мкмоль) и DIEA (100 мкл, 592,5 мкмоль) и проводили перемешивание в течение 1 ч при к.т. К 3 мл раствора активированного сложного эфира добавляли (3S,7S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(аминометил)фенил)оксиран-2ил)этил)-10-(3 -хлор-4-метоксибензил)-6,6,7-триметил-3 -неопентил-1 -окса-4,8,11 -триазациклогексадец13-ен-2,5,9,12-тетраон (который может быть синтезирован как описано в РСТ/ЕР2016/076603 исходя из метил-(3S)-3-амино-2,2-диметилбутаноата, [MFCD09256689], 70 мг, 96,51 мкмоль), EDC (17 мкл, 77,8 мкмоль) и HOBt (19 мг, 124 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 10 г С18-модифицированного силикагеля (градиентное элюирование MeCN/H2O) с получением 30 мг соединения 20 в виде белого лака (24%).
1H ЯМР (600 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,79 до 0,90 (m, 15 H); 0,98 (m, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,03 (d, J=7,3 Гц, 3H); 1,19 (s, 3H); 1,24 (разделенный d, J=7,0 Гц, 3H); 1,34 (d, J=14,1 Гц, 1H); 1,81 (m, 1H); 1,91 (m, 1H); 1,98 (dd, J=9,3 и 14,1 Гц, 1H); 2,25 (m, 3H); 2,38 (m, 1H); 2,50 (частично скрытый m, 5H); 2,60 (m, 1H); 2,68 (m, 1H); 2,91 (m, 1H); 2,96 (m, 2H); 3,25 до 3,58 (частично скрытый m, 9H); 3,80 (s, 3H); 3,91 (m, 1H); 4,00 до 4,35 (m, 6H); 4,53 (m, 2H); 5,03 (m, 1H); 5,20 (m, 1H); 5,30 (m, 1H); 5,89 (d, J=16,1 Гц, 1H); 5,91 (m, 1H); 6,44 (ddd, J=5,0, 10,5 и 16,1 Гц, 1H); 7,03 (d, J=8,7 Гц, 1H); 7,19 до 7,28 (m, 5 H); 7,31 (s, 1H); 7,69 (m, 1H); 7,86 (d, J=8,2 Гц, 1H); 7,91 (m, 1H); 7,95 до 8,17 (m, 2H); 8,32 (m, 1H); 8,39 (m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=1283 [М-Н]-; масса/заряд=1285 [М+Н]+; масса/заряд=1307 [M+Na]+; Rt=1,93 мин.
Пример 7: (4S,7S)-1-(4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-6,6,7триметил-3 -неопентил-2,5,9,12-тетраоксо-1 -окса-4,8,11 -триазациклогексадец-13 -ен-16-ил)этил)оксиран2-ил)фенил)-7-изопропил-4-метил-3,6,9-триоксо-12-(4-оксо-4-((2-сульфоэтил)амино)бутаноил)-2,5,8,12тетраазапентадекан-15-овая кислота.
К раствору соединения 20 (30 мг, 23,33 мкмоль) в DCM (2 мл) и DMF (0,3 мл) в атмосфере Ar добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (1,38 мг, 1,17 мкмоль) и 1,3-диметилбарбитуровую кислоту (11,15 мг, 69,99 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т. и очищали с помощью хроматографии с обращенной фазой на 1 г С18-модифицированного силикагеля (градиентное элюирование MeCN/H2O) с получением 15 мг белого порошка, который дополнительно очищали на силикагеле (градиентное элюирование DCM/MeOH/H2O) с получением 7 мг соединения из примера 7 в виде белого лака (24%).
- 99 045708
Синтез примеров 8 и 9: PEG4-Val-Ala-РАВА-С52-бензиламин и NHS-сложный эфир PEG4-Val-AlaРАВА-С52-бензиламина
Соединение 21: (9Н-флуорен-9-ил)метил-(^)-1 -(((S)-1 -((4-(гидроксиметил)фенил)амино)-1 оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)карбамат.
К раствору Fmoc-Val-Ala-OH (номер CAS [150114-97-9], 1 г, 2,44 ммоль) в DCM (30 мл) и МеОН (15 мл) добавляли 4-аминобензиловый спирт (612 мг, 4,87 ммоль) и EEDQ (1,22 г, 4,87 ммоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 24 ч, затем добавляли дополнительное количество 4аминобензилового спирта (612 мг, 4,87 ммоль) и EEDQ (1,22 г, 4,87 ммоль) и проводили перемешивание в течение 2 ч. Реакционную среду затем концентрировали in vacuo; добавляли Et2O к неочищенному продукту, смесь перемешивали и фильтровали с получением коричневого твердого вещества, которое разбавляли в Et2O и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Затем смесь фильтровали и осадок высушивали с получением 1,3 г соединения 21 в виде коричневого твердого вещества (колич.).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,86 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,89 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,30 (d, J=7,0 Гц, 3H); 2,00 (m, 1H); 3,91 (m, 1H); 4,19 до 4,34 (m, 4H); 4,43 (d, J=5,7 Гц, 2H); 5,08 (t, J=5,7 Гц, 1H); 7,23 (d, J=7,9 Гц, 2H); 7,31 (t, J=7,9 Гц, 2H); 7,40 (m, 3H); 7,53 (d, J=9,1 Гц, 2H); 7,73 (t, J=8,6 Гц, 2H); 7,89 (d, J=7,9 Гц, 2H); 8,16 (d, J=7,3 Гц, 1H); 9,91 (s, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=292; масса/заряд=393; масса/заряд=516 [М+Н]+; Rt=1,21 мин.
Соединение 22: (9Н-флуорен-9-ил)метил-((S)-3-метил-1 -(((S)-1 -((4-((((4-нитрофенокси)карбонил)окси)метил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-1-оксобутан-2-ил)карбамат.
К раствору соединения 21 (1,3 г, 2,52 ммоль) в DMF (10 мл) в атмосфере Ar добавляли DIEA (2,55 мл, 15,13 ммоль), раствор охлаждали при 0°С перед добавлением 4-нитрофенилхлорформиата (1,57 г, 7,56 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т. Добавляли 20 мл H2O и среду экстрагировали дважды с помощью EtOAc (10 мл). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 120 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 600 мг
- 100 045708 соединения 22 в виде твердого вещества (35%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,86 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,89 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,31 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,99 (m, 1H); 3,91 (m, 1H); 4,18 до 4,35 (m, 3H); 4,43 (m, 1H); 5,24 (s, 2H); 7,31 (t, J=7,9 Гц, 2H); 7,35 до 7,44 (m, 5 H); 7,56 (d, J=9,1 Гц, 2H); 7,63 (d, J=8,6 Гц, 2H); 7,74 (m, 2H); 7,88 (d, J=7,9 Гц, 2H); 8,19 (d, J=7,3 Гц, 1H); 8,31 (d, J=9,1 Гц, 2H); 10,07 (s, 1H).
Соединение 23: 4-((S)-2-((S)-2-амино-3-метилбутанамидо)пропанамидо)бензил-4-((2R,3R)-3-((S)-1((3S, 10R, 16S,E)-10-(3 -хлор-4-метоксибензил)-3 -изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса8,11 -диазациклогексадец-13 -ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензилкарбамат/
К раствору (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-(2R,3R)-3-(4-(аминометил)фенил)оксиран-2-ил)этил)-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраона (синтез которого описан в WO2011001052, соединение 77, 100 мг, 143,2 мкмоль) в THF (5 мл) в атмосфере аргона добавляли соединение 22 (117 мг, 171,9 мкмоль) и DIEA (60,4 мкл, 358 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в атмосфере Ar в течение ночи. Затем добавляли пиперидин (142,9 мкл, 1,43 ммоль) и реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т. После концентрирования in vacuo неочищенную среду очищали посредством флеш-хроматографии на 5 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 100 мг соединения 23 в виде белого твердого вещества (73%).
Соединение 24: аллил-15-(3-(((S)-1-(((S)-1-((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)окси)-метил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1 -оксобутан-2-ил)амино)-3-оксопропил)- 14-оксо-2,5,8,11 -тетраокса- 15-азаоктадекан-18-оат.
К раствору соединения 23 (100 мг, 98,3 мкмоль) в THF (5 мл) в атмосфере Ar добавляли соединение 9 (50,8 мг, 98,3 мкмоль) и DIEA (24,9 мкл, 147,4 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 5 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 128 мг соединения 24 в виде белого твердого вещества (91%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 60:40; 0,78 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,82 (d, J=7,0 Гц, 1,8 H); 0,84 (d, J=7,0 Гц, 1,2H); 0,86 (d, J=7,0 Гц, 1,8 H); 0,88 (d, J=7,0 Гц, 1,2H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,30 (m, 4H); 1,57 (m, 2H); 1,80 (m, 1H); 1,95 (m, 1H); 2,26 (m, 1H); 2,40 (m, 2H); 2,52 до 2,72 (m, 6H); 2,95 до 3,04 (m, 3H); 3,22 (s, 3H); 3,30 (m, 1H); 3,38 до 3,63 (m, 18 H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,15 до 4,28 (m, 4H); 4,40 (m, 1H); 4,51 до 4,57 (m, 2H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 4,98 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,20 (m, 1H); 5,30 (m, 1H); 5,80 (d, J=16,0 Гц, 1H); 5,91 (m, 1H); 6,47 (ddd, J=4,7, 10,5 и 16,0 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,16 (dd, J=2,5 и 8,6 Гц, 1H); 7,29 до 7,32 (m, 8 H); 7,58 (m, 2H); 7,76 (t, J=6,5 Гц, 1H); 7,92 (d, J=9,0 Гц, 0,4H); 8,04 (d, J=9,0 Гц, 0,6 H); 8,15 (d, J=7,0 Гц, 0,4H); 8,21 (d, J=7,0 Гц, 0,6 H); 8,32 (d, J=8,0 Гц, 1H); 9,88 (s, 0,4H); 9,93 (s, 0,6 H). LCMS (A): ES масса/заряд=677; масса/заряд=1418 [М+Н]+; масса/заряд=1462 [М-Н+НСО2Н]’; Rt=1,21 мин.
Пример 8: 15-(3-(((S)-1-(((S)-1-((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец- 13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)окси)метил)фенил)амино)-1 -оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1 -оксобутан-2-ил)амино)-3 -оксопропил)-14-оксо-2,5,8,11-тетраокса-15-азаоктадекан-18-овая кислота.
К раствору соединения 24 (58 мг, 40,9 мкмоль) в DCM (20 мл) в атмосфере Ar добавляли 1,3диметилпиримидин-2,4,6(1Н, 3Н, 5H)-трион (19,5 мг, 122,6 мкмоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (2,4 мг, 2,0 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 3 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 5 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 53 мг соединения из примера 8 в виде белого твердого вещества (94%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров; 0,78 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,86 (m, 6H); 0,99 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,30 (m, 1H); 1,38 (m, 3H); 1,57 (m, 2H); 1,79 (m, 1H); 2,04 (m, 1h); 2,10 до 2,59 (частично скрытый m, 7H); 2,69 (m, 2H); 2,93 до 3,03 (m, 3H); 3,22 (s, 3H); 3,30 (скрытый m, 1H); 3,40 до 3,64 (m, 18 H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,05 до 4,27 (m, 4H); 4,36 (m, 1H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 4,97 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,80 (d, J=16,0 Гц, 1H); 5,90 (ddd, J=4,7, 10,5 и 16,0 Гц, 1H); 6,46 (ddd, J=4,7, 10,5 и 16,0 Гц, 1Н); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1Н); 7,16 (dd, J=2,5 и 8,6 Гц, 1Н); 7,20 до 7,32 (m, 8 Н); 7,68 (m, 2Н); 7,82 (m, 1Н); 8,40 до 8,65 (m, 2Н); 9,21 (m, 1Н); 10,20 (s, 1Н). LCMS (A): ES масса/заряд=637; масса/заряд=1376 [М-Н]-; масса/заряд=1378 [М+Н]+; Rt=1,3 мин.
Пример 9: 2,5-диоксопирролидин-1-ил-15-(3-(((S)-1-(((S)-1-((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3 S, 10R, 16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11диазациклогексадец-13 -ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)окси)метил)фенил)амино)-1 оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-оксопропил)-14-оксо-2,5,8,11-тетраокса-15азаоктадекан-18-оат
К раствору соединения из примера 8 (49 мг, 35,5 мкмоль) в DMF (2 мл) в атмосфере Ar добавляли DSC (13,9 мг, 53,3 мкмоль) и DIEA (9,0 мкл, 53,3 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в
- 101 045708 течение ночи. Добавляли дополнительное количество DSC (13,9 мг, 53,3 мкмоль) и DIEA (9,0 мкл, 53,3 мкмоль) и проводили перемешивание в течение 8 ч. Реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 10 г диол-модифицированного силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH) с получением 20 мг соединения из примера 9 в виде белого твердого вещества (38%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 70:30 смесь конформеров; 0,78 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0.,82 (d, J=7,0 Гц, 2,1H); 0,84 (d, J=7,0 Гц, 0,9H); 0,86 (d, J=7,0 Гц, 2,1H); 0,88 (d, J=7,0 Гц, 0,9H); 1,00 (s, 3H); 1,05 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,27 (m, 1H); 1,30 (m, 3H); 1,57 (m, 2H); 1,80 (m, 1H); 1,95 (m, 1H); 2,25 (m, 1H); 2,40 (m, 1H); 2,52 до 2,75 (m, 7 H); 2,80 (s, 4H); 2,87 до 3,08 (m, 3H); 3,22 (s, 3H); 3,32 (скрытый m, 1H); 3,40 до 3,68 (m, 18 H); 3,80 (s, 3H); 3,88 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,16 до 4,28 (m, 4H); 4,38 (m, 1H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 4,97 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=16,0 Гц, 1H); 6,46 (ddd, J=4,7, 10,5 и 16,0 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,16 (dd, J=2,5 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,31 (m, 8 H); 7,58 (m, 2H); 7,78 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,94 (d, J=9,0 Гц, 0,3 H); 8,08 (d, J=9,0 Гц, 0,7 H); 8,19 (d, J=7,0 Гц, 0,3 H); 8,25 (d, J=7,0 Гц, 0,7 H); 8,35 (d, J=8,0 Гц, 1H); 9,90 (s, 0,3 H); 9,95 (s, 0,7 H). LCMS (A): ES масса/заряд=698; масса/заряд=1475 [М+Н]+; Rt=1,35 мин.
Синтез примера 10: РЕС7-Val-Ala-РАВА-С52-бензиламин
Соединение 25: трет-бутил-2,5,8,11,14,17,20-гептаоксатрикозан-23-оат.
К раствору монометилового эфира гексаэтиленгликоля (926,0 мкл, 3,24 ммоль) в THF (3 мл) в атмосфере Ar добавляли Na (0,7 мг, 32,4 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т. до завершения растворения Na, затем добавляли трет-бутилакрилат (570 мкл, 3,89 ммоль) и проводили перемешивание при к.т. в течение ночи. Реакционную среду затем концентрировали in vacuo, разбавляли с помощью H2O и экстрагировали с помощью EtOAc (3х). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением 1,04 г соединения 25 в виде бесцветного масла (76%).
- 102 045708 1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 1,40 (s, 9H); 2,40 (t, J=6,4 Гц, 2H); 3,23 (s, 3H); 3,43 (m, 2H); 3,47 до 3,54 (m, 22H); 3;59 (t, J=6,4 Гц, 2H).
Соединение 26: 2,5,8,11,14,17,20-гептаоксатрикозан-23-овая кислота.
К раствору соединения 25 (1,04 г, 2,45 ммоль) в DCM (15 мл) добавляли TFA (1,84 мл, 24,5 ммоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, концентрировали in vacuo, разбавляли с помощью DCM и выпаривали совместно с толуолом (3х) с получением 1 г соединения 26 в виде бесцветного масла (колич.).
Соединение 27: 2,5,8,11,14,17,20-гептаоксатрикозан-23-оилхлорид.
К соединению 26 (400 мг, 1,09 ммоль) добавляли MsCl (1,27 мл, 16,3 ммоль); реакционную среду нагревали 3 ч при 60°С, концентрировали in vacuo, разбавляли с помощью DCM и концентрировали in vacuo (3 х) с получением 420 мг соединения 27 в виде бесцветного масла (колич.).
Соединение 28: аллил-24-(3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)-23-оксо-2,5,8,11,14,17,20-гептаокса-24азагептакозан-27-оат.
К раствору соединения 3 (200 мг, 777,2 мкмоль) в DCM (5 мл) добавляли DIEA (262 мкл, 1,55 ммоль). Реакционную среду охлаждали при 0°С и раствор соединения 27 (360,8 мг, 932,7 мкмоль) в DCM (2 мл) добавляли по каплям при 0°С. Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т. и концентрировали in vacuo. Неочищенный продукт очищали с помощью двух последовательных операций флешхроматографии на 12 г и 10 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 72 мг соединения 28 (15%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 50:50; 1,39 (s, 4,5 H); 1,40 (s, 4,5 H); 2,22 до 2,75 (частично скрытый m, 6H); 3,23 (s, 3H); 3,38 до 3,63 (m, 30H); 4,55 (m, 2H); 5,19 до 5,36 (m, 2H); 5,90 (m, 1H).
Соединение 29: 24-(3-(аллилокси)-3-оксопропил)-23-оксо-2,5,8,11,14,17,20-гептаокса-24азагептакозан-27-овая кислота.
К раствору соединения 28 (72 мг, 118,5 мкмоль) в DCM (3 мл) добавляли TFA (100 мкл, 1,33 ммоль); реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, затем добавляли дополнительное количество TFA (100 мкл, 1,33 ммоль) и проводили перемешивание в течение 1 дня. Реакционную среду концентрировали in vacuo, разбавляли с помощью DCM и выпаривали совместно с толуолом (3х) с получением 66 мг соединения 29 (колич).
Соединение 30: аллил-24-(3 -((2,5-диоксопирролидин-1 -ил)окси)-3-оксопропил)-23-оксо2,5,8,11,14,17,20-гептаокса-24-азагептакозан-27-оат.
К раствору соединения 29 (66 мг, 119,7 мкмоль) в THF (2 мл) в атмосфере Ar добавляли DIEA (20,2 мкл, 119,9 мкмоль) и DSC (34,4 мг, 131,6 мкмоль); реакционную среду перемешивали в течение 4 дней при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 900 мг диол-модифицированного силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH) с получением 35 мг соединения 30 (45%).
Соединение 31: аллил-24-(3-(((S)-1-(((S)-1-((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)окси)-метил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1 -оксобутан-2-ил)амино)-3-оксопропил)-23-оксо-2,5,8,11,14,17,20-гептаокса-24-азагептакозан-27-оат.
К раствору соединения 23 (45 мг, 44,2 мкмоль) в THF (5 мл) добавляли соединение 30 (28,7 мг, 44,2 мкмоль) и DIEA (11,2 мкл, 66,3 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, разбавляли с помощью H2O (10 мл) и экстрагировали с помощью AtOAc (3х 10 мл). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 5 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 35 мг соединения 31 в виде белого твердого вещества (51%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 60:40; 0,80 (разделенный d, J=6,8 Гц, 6H); 0,82 (d, J=7,0 Гц, 1,8 H); 0,84 (d, J=7,0 Гц, 1,2H); 0,86 (d, J=7,0 Гц, 1,8 H); 0,88 (d, J=7,0 Гц, 1;2H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,28 (m, 1H); 1,30 (m, 3H); 1,56 (m, 2H); 1,79 (m, 1H); 1,95 (m, 1H); 2,27 (m, 1H); 2,35 до 2,60 (частично скрытый m, 6H); 2,62 до 2,73 (m, 2H); 2,93 до 3,05 (m, 3H); 3,23 (s, 3H); 3,33 (скрытый m, 1H); 3,38 до 3,64 (m, 30H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,15 до 4,27 (m, 4H); 4,38 (m, 1H); 4,52 до 4,58 (m, 2H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 4,97 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,50 (m, 1H); 5,30 (m, 1H); 5,80 (d, J=16,0 Гц, 1H); 5,90 (m, 1H); 6,47 (ddd, J=4,7, 10,5 и 16,0 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,15 (dd, J=2,5 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,32 (m, 8 H); 7,59 (m, 2H); 7,78 (t, J=6,5 Гц, 1H); 7,95 (d, J=9,0 Гц, 0,4H); 8,07 (d, J=9,0 Гц, 0,6 H); 8,18 (d, J=7,0 Гц, 0,4H); 8,27 (d, J=7,0 Гц, 0,6 H); 8,36 (d, J=8,0 Гц, 1H); 9,90 (s, 0,4H); 9,95 (s, 0,6 H). LCMS (A): ES масса/заряд=698; масса/заряд=1552 [М+Н]+; масса/заряд=1595 [М-Н+НСО2Н]-; Rt=1,39 мин.
- 103 045708
Пример 10: 24-(3-(((S)-1 -(((S)-1 -((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1 -((3S, 10R, 16S,E)-10-(3-хлор-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)окси)метил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-оксопропил)-23-оксо-2,5,8,11,14,17,20-гептаокса-24-азагептакозан-27 овая кислота.
К раствору соединения 31 (30 мг, 19,3 мкмоль) в DCM (5 мл) в атмосфере Ar добавляли диметилбарбитуровую кислоту (9,24 мг, 58,0 мкмоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (1,13 мг, 0,97 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 3 ч при к.т., затем концентрировали in vacuo и очищали с помощью двух последовательных операций флеш-хроматографии на 5 г и 0,9 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 14 мг соединения из примера 10 в виде белого твердого вещества (50%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 50:50 смесь конформеров; 0,78 (разделенный d, J=6,8 Гц, 6H); 0,81 до 0,89 (m, 6H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,28 (m, 1H); 1,30 (d, J=7,0 Гц, 1,5 H); 1,32 (d, J=7,0 Гц, 1,5 H); 1,51 до 1,62 (m, 2H); 1,79 (m, 1H); 1,96 (m, 1H); 2,26 (m, 1H); 2,33 до 2,60 (частично скрытый m, 6H); 2,61 до 2,73 (m, 2H); 2,93 до 3,03 (m, 3H); 3,22 (s, 3H); 3,30 (скрытый m, 1H); 3,38 до 3,62 (m, 30H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,12 до 4,29 (m, 4H); 4,39 (m, 1H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 4,96 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,78 (d, J=16,0 Гц, 1H); 6,46 (ddd, J=4,7, 10,5 и 16,0 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,16 (dd, J=2,5 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,32 (m, 8 H); 7,59 (m, 2H); 7,79 (m, 1H); 8,04 (m, 0,5 H); 8,10 (d, J=9,0 Гц, 0,5 H); 8,25 до 8,41 (m, 2H); 9,95 (s, 0,5 H); 9,98 (s, 0,5 H); 12,20 (m, 1H). LCMS (D): ES масса/заряд=769; масса/заряд=1511 [М+Н]+; Rt=3,16 мин.
Синтез примеров 11 и 12: PEG24-Val-Ala-РАВА-С52-бензиламин и NHS-сложный эфир PEG24-ValAla-РАВА-С52-бензиламина
- 104 045708
Соединение 32: аллил-75-(3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)-74-оксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35, 38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75-азаоктагептаконтан-78-оат.
К раствору соединения 3 (45 мг, 174,9 мкмоль) в THF (5 мл) в атмосфере Ar добавляли MEODPEG(24)-NHS (212,4 мг, 174,9 мкмоль) и DIEA (44,2 мкл, 262,3 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, затем концентрировали in vacuo и очищали с помощью флешхроматографии на 20 г силикагеля (градиентное элюирование DMC/MeOH) с получением 125 мг смеси соединения 32 (60%) и MEO-DPEG(24)-NHS (40%). Данную смесь разбавляли в THF (3 мл), добавляли 15 мг соединения 3 и 20 мкл DIEA; реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, затем концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 12 г силикагеля с получением 105 мг соединения 32 (44%).
Ή ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 1,40 (s, 9H); 2,25 до 2,78 (m, 6H); 3,22 (s, 3H); 3,32 до 3,70 (m, 98 H); 4,52 (m, 2H); 5,20 (m, 1H); 5,30 (m, 1H); 5,90 (m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=679 [М+2Н]2+; масса/заряд=1356 [М+Н]+; масса/заряд=1400 [М-Н+НСО2Н]-; Rt=1,15 мин.
Соединение 33: 75-(3-(аллилокси)-3-оксопропил)-74-оксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,
44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75-азаоктагептаконтан-78-овая кислота.
К раствору соединения 32 (105 мг, 77,4 мкмоль) в DCM (2 мл) добавляли TFA (116,2 мкл, 1,55 ммоль); реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, затем добавляли 150 мкл TFA и проводили реакцию еще один день. Реакционную среду затем концентрировали in vacuo, разбавляли с помощью DCM, выпаривали совместно с толуолом (3x) с получением 110 мг неочищенного продукта, который очищали с помощью RP-HPLC на колонке С18 SunFire 5 мкм (Waters, 30x100 мм, градиентное элюирование MeCN+0,07% TFA/H2O+0,07% TFA) с получением 60 мг соединения 33 (60%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 50:50; 2,37 до 2,60 (частично скрытый m, 6H); 3,23 (s, 3H); 3,32 до 3,44 (частично скрытый m, 38 H); 3,47 до 3,52 (m, 58 H); 3,60 (m, 2H); 4,54 (m,
- 105 045708
2H); 5,22 (dm, J=10,5 Гц, 1H); 5,30 (dm, J=17,3 Гц, 1H); 5,84 до 5,98 (m, 1H); 12,32 (широкий m, 1H).
Соединение 34: аллил-75-(3-(((S)-1-(((S)-1-((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)окси)-метил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-3-ме тил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-оксопропил)-74-оксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53, 56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75-азаоктагептаконтан-78-оат.
К раствору соединения 33 (30 мг, 23,1 мкмоль) в THF (5 мл) в атмосфере Ar добавляли, DIEA (11,7 мкл, 69,2 мкмоль) и DSC (6,03 мг, 23,1 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 3 ч при к.т., затем добавляли соединение 23 (23,5 мг, 23,1 мкмоль) и проводили перемешивание в течение 1 ч. Реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 5 г силикагеля с получением 23 мг соединения 34 (40%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 60:40: 0,80 (разделенный d, J=6,8 Гц, 6H); 0,82 (d, J=7,0 Гц, 1,8 H); 0,84 (d, J=7,0 Гц, 1,2H); 0,86 (d, J=7,0 Гц, 1,8 H); 0,88 (d, J=7,0 Гц, 1,2H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,28 (m, 1 H); 1,30 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,51 до 1,62 (m, 2H); 1,80 (m, 1H); 1,96 (m, 1H); 2,26 (m, 1H); 2,38 (m, 1H); 2,45 до 2,61 (частично скрытый m, 5 H); 2,61 до 2,72 (m, 2H); 2,93 до 3,05 (m, 3H); 3,23 (s, 3H); 3,32 (скрытый m, 1H); 3,40 до 3,77 (m, 98 H); 3,80 (s. 3 H); 3,88 (d, J=2,3 Гц, 1Н; 4,14 до 4,27 (m, 4H); 4,39 (m, 1H); 4,51 до 4,60 (m, 2H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 4,97 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,18 до 5,33 (m, 2H); 5,78 (d, J=16,0 Гц, 1H); 5,90 (m, 1H); 6,45 (m, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,16 (dd, J=2,5 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,32 (m, 8 H); 7,59 (m, 2H); 7,77 (t, J=6,5 Гц, 1H); 7,95 (d, J=9,0 Гц, 0,4H); 8,07 (d, J=9,0 Гц, 0,6 H); 8,19 (d, J=7,0 Гц, 0,4H); 8,25 (d, J=7,0 Гц, 0,6 H); 8,36 (d, J=8,0 Гц, 1H); 9,90 (s, 0,4H); 9,96 (s, 0,6 H).
Пример 11: 75-(3-(((S)-1-(((S)-1-((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)окси)метил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-оксопропил)-74-оксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53, 56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75-азаоктагептаконтан-78-овая кислота.
К раствору соединения 34 (37 мг, 161 мкмоль) в DCM в атмосфере Ar добавляли 1,3диметилбарбитуровую кислоту (5,13 мг, 32,2 мкмоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,94 мг, 0,80 мкмоль); реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 2 ч, затем концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 5 г диол-модифицированного силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 16 мг соединения из примера 11 (44%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,77 (d, J=7,0 Гц, 6H); 0,80 до 0,90 (m, 6H); 0,99 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,28 (m, 1H); 1,30 (d, J=7,0 Гц, 1,5 H); 1,32 (d, J=7,0 Гц, 1,5 H); 1,52 до 1,61 (m, 2H); 1,79 (m, 1H); 1,98 (m, 1H); 2,22 до 2,58 (частично скрытый m, 7 H); 2,68 (m, 2H); 2,92 до 3,04 (m, 3H); 3,21 (s, 3H); 3,30 (частично скрытый m, 1H); 3,37 до 3,67 (m, 98 H); 3,81 (s, 3H); 3,88 (s, 1H); 4,08 до 4,28 (m, 4H); 4,39 (m, 1H); 4,90 (m, 1H); 4,98 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,80 (d, J=16,0 Гц, 1H); 6,48 (ddd, J=4,7, 10,5 и 16,0 Гц, 1H); 7,04 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,16 (широкий d, J=8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,32 (m, 8 H); 7,57 до 7,67 (m, 2H); 7,80 (m, 1H); 8,20 (m, 1H); 8,35 до 8,70 (m, 2H); 10,08 (m, 1H); 12,30 (широкий m, 1H). LCMS (D): ES масса/заряд=698; масса/заряд=2259 [М+Н]+; Rt=3,14 мин.
Пример 12: 2,5-диоксопирролидин-1-ил-75-(3-(((S)-1-(((S)-1-((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)-карбамоил)окси)метил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-оксопропил)-74-оксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26, 29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75-азаоктагептаконтан-78-оат.
К раствору соединения из примера 11 (16 мг, 7,1 мкмоль) в DCM добавляли DIEA (1,2 мкл, 7,1 мкмоль) и DSC (1,8 мг, 7,1 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 3 ч при к.т., затем концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 1,3 г диол-модифицированного силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH) с получением 5 мг смеси соединения из примера 12 (30%) и соединения из примера 11 (70%).
LCMS (D): ES масса/заряд=698; масса/заряд=2356 [М+Н]+; tR=3,2 мин.
- 106 045708
Синтез примера 13: сульфо-PEG4-Val-Ala-РАВА-С52-бензиламин
Соединение 3 5: 4-((3 -(аллилокси)-З -оксопропил)(3 -(трет-бутокси)-З -оксопропил)амино)-4оксобутановая кислота.
К раствору соединения 3 (100 мг, 388,6 мкмоль) в DCM (5 мл) добавляли янтарный ангидрид (78,6 мг, 777,2 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, затем концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 102 мг соединения 35 в виде бесцветного масла (73%).
Соединение 36: 1-аммонио-15-оксо-3,6,9,12-тетраокса-16-азаоктадекан-18-сульфонат.
К раствору 15-(Вос-амино)-4,7,10,13-тетраоксапентадекановой кислоты (500 мг, 1,3 ммоль) в THF (5 мл) в атмосфере Ar добавляли DIEA (438,4 мкл, 2,6 ммоль) и DSC (381,6 мг, 1,43 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 6 ч при к.т., затем добавляли 50 мг DSC и перемешивание проводили
- 107 045708 при к.т. в течение ночи. В это время таурин (821,6 мг, 6,5 ммоль) и H2O (1 мл) добавляли к реакционной среде. Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, концентрировали in vacuo и очищали с помощью препаративной LCMS на колонке С18 SunFire 5 мкм (Waters, 30x100 мм, градиентное элюирование MeCN+0,07% TFA/H2O+0,07% TFA) с получением 341 мг соединения 36 (70%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 2,28 (t, J=6,5 Гц, 2H); 2,60 (m, 2H); 2,99 (m, 2H); 3,32 (m, 2H); 3,45 до 3,65 (m, 16 H); 7,77 (широкий m, 4H).ИК-спектр в случае таблетки с KBr; основные полосы поглощения в обратных сантиметрах: 3000; 1780; 1648; 1556; 1200-1170; 1200; 1100; 1040.
Соединение 37: 24-(3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)-4,20,23,27-тетраоксо-7,10,13,16,28-пентаокса3,19,24-триазагентриаконт-30-ен-1 -сульфонат.
К раствору соединения 35 (100 мг, 279,8 мкмоль) в THF добавляли DIEA (141,6 мкл, 839,4 мкмоль) и DSC (73,1 мг, 279,8 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при к.т., затем добавляли раствор соединения 36 (104,2 мг, 279,8 мкмоль) в DMF и DIEA (141,6 мкл, 839,4 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью препаративной LCMS на колонке С18 SunFire 5 мкм (Waters, 30x100 мм, градиентное элюирование MeCN+0,07% TFA/H2O+0,07% TFA) с получением 118 мг соединения 37 (60%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 50:50 смесь конформеров; 1,39 (s, 4,5 H); 1,40 (s, 4,5 H); 2,27 (t, J=6,5 Гц, 2H); 2,31 (t, J=7,0 Гц, 2H); 2,38 (t, J=7,0 Гц, 1H); 2,45 до 2,56 (скрытый m, 6H); 2,68 (m, 1H); 3,18 (q, J=6,0 Гц, 2H); 3,29 (m, 2H); 3,36 до 3,60 (m, 20H); 4,51 до 4,59 (m, 2H); 5,17 до 5,25 (m, 2H); 5,85 до 5,95 (m, 1H); 7,75 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,88 (t, J=6,0 Гц, 1H).
Соединение 3 8: 24-(2-карбоксиэтил)-4,20,23,27-тетраоксо-7,10,13,16,28-пентаокса-3,19,24триазагентриаконт-30-ен-1 -сульфонат.
К раствору соединения 37 (118 мг, 166,0 мкмоль) в DCM (5 мл) добавляли TFA (249 мкл, 3,32 ммоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, концентрировали in vacuo, разбавляли с помощью DCM и выпаривали совместно с толуолом (3x) с получением 100 мг соединения 38 в виде бесцветного масла (92%).
Соединение 39: (2S,5S)-10-(3-(аллилокси)-3 -оксопропил)-1 -((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1 -((3 S, 10R,
16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)окси)метил)фенил)амино)-5-изопропил-2-метил-1,4,7,11,14,30-гексаоксо-18,21,24,27-тетраокса-3,6,10,15,31-пентаазатритриаконтан-33-сульфоновая кислота
К раствору соединения 38 (100 мг, 152,7 мкмоль) в THF (3 мл) и DMF (1 мл) добавляли DIEA (77 мкл, 458,2 мкмоль) и DSC (39,9 мг, 152,7 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т. перед добавлением раствора соединения 23 (124 мг, 121,9 мкмоль) в THF (1 мл) и DMF (0,5 мл) и DIEA (100 мкл). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии с обращенной фазой на 75 г С18-модифицированного силикагеля (градиентное элюирование H2O/MeCN) с получением 60 мг соединения 39 в виде белого твердого вещества (24%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 60:40; 0,78 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,82 (d, J=7,0 Гц, 1,8 H); 0,84 (d, J=7,0 Гц, 1,2H); 0,86 (d, J=7,0 Гц, 1,8 H); 0,88 (d, J=7,0 Гц, 1,2H); 0,99 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,28 (m, 1H); 1,30 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,50 до 1,62 (m, 2H); 1,80 (m, 1H); 1,96 (m, 1H); 2,20 до 2,55 (частично скрытый m, 11H); 2,61 до 2,75 (m, 2H); 2,94 до 3,05 (m, 3H); 3,10 до 3,65 (частично скрытый, 27 H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,13 до 4,28 (m, 4H); 4,38 (m, 1H); 4,53 (m, 1,2H); 4,56 (m, 0,8 H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 4,97 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,18 до 5,33 (m, 2H); 5,80 (d, J=16,0 Гц, 1H); 5,90 (m, 1H); 6,47 (ddd, J=4,7, 10,5 и 16,0 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,16 (dd, J=2,5 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,32 (m, 8 H); 7,59 (m, 2H); 7,72 (t, J=6,5 Гц, 1H); 7,79 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,89 (t, J=6,5 Гц, 1H); 7,95 (d, J=9,0 Гц, 0,4H); 8,08 (d, J=9,0 Гц, 0,6 H); 8,19 (d, J=7,0 Гц, 0,4H); 8,25 (d, J=7,0 Гц, 0,6 H); 8,36 (d, J=8,0 Гц, 1H); 9,90 (s, 0,4H); 9,95 (s, 0,6 H). LCMS (D): ES масса/заряд=913; масса/заряд=1654 [М+Н]+; Rt=3,87 мин.
Пример 13: 24-(3-(((S)-1-(((S)-1-((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)окси)метил)фенил)амино)-1-оксопропан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-оксопропил)-4,20,23-триоксо-1-сульфо-7,10,13,16-тетраокса-3,19,24-триазагептакозан-27-овая кислота
К раствору соединения 39 (60 мг, 36,3 мкмоль) в DMF (5 мл) добавляли 1,3-диметилбарбитуровую кислоту (17,3 мг, 108,8 мкмоль) и тетракис-(трифенилфосфин)палладий(0) (2,1 мг, 1,8 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, концентрировали in vacuo и очищали с помощью двух операций флеш-хроматографии на 30 г и 20 г С18-модифицированного силикагеля с получением двух партий 6 мг соединения из примера 13 в виде белого твердого вещества (общий выход 20%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 60:40; 0,78 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,81 до 0,89 (m, 6H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,28 (m, 1H); 1,30 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,58 (m, 2H); 1,80 (m, 1H); 1,96 (m, 1H); 2,21 до 2,58 (частично скрытый m, 11H); 2,69 (m, 2H); 2,93 до 3,68 (частично
- 108 045708 скрытый m, 28 H); 3,80 (s, 3H); 3,88 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,11 до 4,28 (m, 4H); 4,38 (m, 1H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 4,98 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=16,0 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=4,7, 10,5 и 16,0 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=2,5 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,32 (m, 8 H); 7,59 (m, 2H); 7,72 (t, J=6,5 Гц, 1h); 7,79 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,89 (t, J=6,5 Гц, 1H); 7,97 (d, J=9,0 Гц, 0,4H); 8,08 (d, J=9,0 Гц, 0,6 H); 8,19 (d, J=7,0 Гц, 0,4H); 8,25 (d, J=7,0 Гц, 0,6 H); 8,36 (d, J=8,0 Гц, 1H); 9,90 (s, 0,4H); 9,94 (s, 0,6 H); 12,15 (широкий m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=807,5 [М+2Н]2+; масса/заряд=1612 [М-Н]-; масса/заряд=1614 [М+Н]+; Rt=1,72 мин.
Синтез примеров 14-16: глутарил-Val-PEG4Gln-С52-бензиламин, NHS-сложный эфир глутарил-ValPEG4Gln-С52-бензиламина и соответствующий ADC
пример 16
- 109 045708
Соединение 40: (S)-4-((S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)-5(трет-бутокси)-5-оксопентановая кислота.
К раствору H-Glu-OtBu (номер CAS [45120-30-7], 959 мг, 4,7 ммоль) и NaHCO3 (400 мг, 4,77 ммоль) в H2O (80 мл) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли по каплям раствор (S)-2,5диоксопирролидин-1-ил-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)-карбонил)амино)-3-метилбутаноата (2 г, 4,6 ммоль) в THF (80 мл). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи. Среду концентрировали in vacuo, затем добавляли насыщенный водный NaHCO3 (1 л) с последующей экстракцией с помощью Et2O (2x250 мл), органические фазы исключали. Водную фазу подкисляли с помощью QS 1н. водного раствора HCl до достижения рН 2 и экстрагировали с помощью DCM (3x250 мл), объединенные органические фазы высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением 2,05 г соединения 40 (85%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,87 (d, J=6,9 Гц, 3H); 0,90 (d, J=6,9 Гц, 3H); 1,38 (s, 9H); 1,73 до 2,02 (m, 3H); 2,24 до 2,30 (m, 2H); 3,90 (dd, J=7,3 и 9,0 Гц, 1H); 4,14 (m, 1H); 4,19 до 4,32 (m, 3H); 7,27 до 7,45 (m, 5H); 7,75 (t, J=7,6 Гц, 2H); 7,89 (d, J=7,6 Гц, 2H); 8,22 (широкий d, J=7,0 Гц, 1H); 12,05 (широкий s, 1H).
Соединение 41: (S)-mpem-бутил-18-((S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3 метилбутанамидо)- 15-оксо-2,5,8,11 -тетраокса-14-азанонадекан-19-оат.
К раствору соединения 40 (200 мг, 381 мкмоль) в DCM (6 мл) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли PEG4-NH2 (номер CAS [85030-56-4], 115 мг, 554,9 мкмоль), HOBt (82 мг, 606,8 мкмоль) и EDC (100 мкл, 565 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи. Неочищенную среду очищали дважды с помощью флеш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 190 мг соединения 41 (70%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,87 (d, J=6,8 Гц, 3H); 0,90 (d, J=6,8 Гц, 3H); 1,38 (s, 9H); 1,72 до 1,93 (m, 2H); 1,99 (m, 1H); 2,14 (t, J=7,8 Гц, 2H); 3,18 (m, 2H); 3,23 (s, 3H); 3,37 (t, J=6,0 Гц, 2H); 3,41 (m, 2H); 3,46 до 3,53 (m, 10H); 3,92 (dd, J=7,l и 8,8 Гц, 1H); 4,09 (m, 1H); 4,17 до 4,34 (m, 3H); 7,32 (m, 3H); 7,41 (t, J=7,6 Гц, 2H); 7,70 до 7,81 (m, 3H); 7,88 (d, J=7,6 Гц, 2H); 8,18 (d, J=7,3 Гц, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=714 [М+Н]+; масса/заряд=758 [М-Н+НСО2Н]-; Rt=1,41 мин.
Соединение 42: (S)-18-((S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)15-оксо-2,5,8,11-тетраокса-14-азанонадекан-19-овая кислота.
К соединению 41 (190 мг, 266 мкмоль) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли 4 М раствор HCl в 1,4-диоксане (5 мл). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 4 ч. В это же время реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 15 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH/NH4OH) с получением 70 мг соединения 42 (40%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,84 (d, J=6,6 Гц, 3H); 0,86 (d, J=6,6 Гц, 3H); 1,70 до 1,90 (m, 2H); 2,01 до 2,15 (m, 3H); 3,15 (m, 2H); 3,23 (s, 3H); 3,36 (t, J=6,4 Гц, 2H); 3,42 (m, 2H); 3,45 до 3,53 (m, 10H); 3,80 (широкий m, 1H); 3,83 (dd, J=6,8 и 8,7 Гц, 1H); 4,19 до 4,34 (m, 3H); 7,33 (m, 2H); 7,41 (t, J=7,6 Гц, 2H); 7,59 (широкий m, 2H); 7,73 (d, J=7,6 Гц, 1H); 7,76 (d, J=7,6 Гц, 1H); 7,89 (d, J=7,6 Гц, 2H); 8,00 (широкий m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=656 [М-Н]-; масса/заряд=658 [М+Н]+; RT=1,19 мин.
Соединение 43: (S)-2-((S)-2-амино-3-метилбутанамидо)-N 1 -(4-((2R,3R)-3-((S)-1 -((3S,10R, 16S,E)-10(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13 -ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)-N5-(2,5,8,11 -тетраоксатридекан-13 -ил)пентандиамид.
К раствору (E)-(3 S, 10R, 16S)-16-(S)-1 -[(2R,3R)-3 -(4-аминометилфенил)оксиранил] -этил} -10-(3 -хлор-4метоксибензил)-3 -изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен-2,5,9,12-тетраона (синтез которого описан в WO2011001052, соединение 77, 58 мг, 83 мкмоль) в DMF (5 мл) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли соединение 42 (70 мг, 106 мкмоль), HOBt (20 мг, 148 мкмоль) и EDC (23 мкл, 130 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 24 ч. В это же время пиперидин (80 мкл, 810 мкмоль) добавляли к среде и перемешивание поддерживали в течение 1 ч. Затем реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 20 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 60 мг соединения 43 (65%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,77 (d, J=6,9 Гц, 3H); 0,79 (d, J=6,3 Гц, 6H); 0,87 (d, J=6,9 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=6,4 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,31 (m, 1H); 1,52 до 1,63 (m, 2H); 1,72 до 1,98 (m, 4H); 2,05 до 2,15 (m, 2H); 2,26 (m, 1H); 2,62 до 2,73 (m, 2H); 2,94 до 3,04 (m, 4H); 3,18 (q, J=5,9 Гц, 2H); 3,23 (s, 3H); 3,33 (частично скрытый m, 1H); 3,39 (t, J=5,9 Гц, 2H); 3,42 (m, 2H); 3,47 до 3,52 (m, 10H); 3,81 (s, 3H); 3,87 (d, J=1,4 Гц, 1H); 4,21 до 4,36 (m, 4H); 4,91 (dd, J=3,6 и 9,6 Гц, 1H); 5,10 (dd, J=5,5 и 11,8 Гц, 1H); 5,79 (d, J=15,3 Гц, 1H); 6,46 (ddd, J=3,8, 11,6 и 15,3 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,5 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=1,9 и 8,5 Гц, 1H); 7,21 до 7,25 (m, 5 H); 7,28 (d, J=1,9 Гц, 1H); 7,89 (t, J=5,5 Гц, 1H); 8,07 (широкий m, 1H); 8,37 (d, J=8,0 Гц, 1H); 8,45 (t, J=5,9 Гц, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=558 [М+2Н]2+; масса/заряд=1115 [М+Н]+; масса/заряд=1159 [М-Н+НСО2Н]-; Rt=0,96 мин.
Пример 14: (18S,21S)-18-((4-((2R,3R)-3-((S)-1 -((3 S,10R,16S,E)-10-(3 -хлор-4-метоксибензил)-3 изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран
- 110 045708
2-ил)бензил)карбамоил)-21-изопропил-15,20,23-триоксо-2,5,8,11-тетраокса-14,19,22-триазагептакозан27-овая кислота.
К раствору соединения 43 (55 мг, 49,3 мкмоль) в DMF (3 мл) добавляли глутаровый ангидрид (9 мг, 79 мкмоль), реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 2 ч. В это же время среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 10 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 38 мг соединения из примера 14 (62%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,81 (разделенный d, J=6,6 Гц, 6H); 0,85 (d, J=6,3 Гц, 3H); 0,87 (d, J=6,3 Гц, 3H); 0,98 (s, 3H); 1,03 (d, J=6,6 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,35 (m, 1H); 1,52 до 2,34 (m, 15 H); 2,71 (m, 2H); 2,89 до 3,02 (m, 3H); 3,09 до 3,21 (m, 2h); 3,23 (s, 3H); 3,30 до 3,40 (частично скрытый m, 3H); 3,42 (m, 2H); 3,46 до 3,51 (m, 10H); 3,81 (s, 3H); 3,87 (s, 1H); 4,03 до 4,24 (m, 4H); 4,37 (m, 1H); 4,96 (m, 1H); 5,11 (m, 1H); 5,81 (d, J=15,3 Гц, 1 H); 6,46 (ddd, J=3,3, 11,4 и 15,3 Гц, 1 H); 7,04 (d, J=8,5 Гц, 1 H); 7,19 (dd, J=1,9 и 8,5 Гц, 1H); 7,22 (d, J=8,3 Гц, 2H); 7,27 (d, J=8,3 Гц, 2H); 7,30 (d, J=1,9 Гц, 1H); 7,32 (m, 1H); 7,85 до 8,99 (широкий m, 5 H); 12,12 (широкий m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=615 [М+2Н]2+; масса/заряд=1227 [М-Н]-; масса/заряд=1229 [М+Н]+; Rt=1,26 мин.
Пример 15: (18S,21S)-2,5-диоксоnирролидин-1-ил-18-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)-21 -изопропил- 15,20,23-триоксо-2,5,8,11 -тетраокса14,19,22-триазагептакозан-27-оат.
К раствору соединения из примера 14 (32 мг, 26 мкмоль) в DMF (3 мл) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли DSC (8 мг, 31,2 мкмоль) и DIEA (8,6 мкл, 52 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи. Затем добавляли 4 мг DSC и перемешивание при к.т. поддерживали в течение 1 ч. В это же время реакционную среду разбавляли с помощью MeTHF (10 мл), промывали с помощью H2O (5 мл). Водную фазу экстрагировали с помощью MeTHF (3x5 мл). Объединенные органические фазы высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo. Среду очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH) с получением 28 мг соединения из примера 15 (81%).
% ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J=6,6 Гц, 6H); 0,83 (d, J=6,9 Гц, 3H); 0,85 (d, J=6,9 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=6,4 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,30 (m, 1H); 1,52 до 1,64 (m, 2H); 1,75 до 1,93 (m, 5 H); 1,98 (m, 1H); 2,12 (m, 2H); 2,22 до 2,34 (m, 3H); 2,62 до 2,72 (m, 4H); 2,81 (s, 4H); 2,93 до 3,04 (m, 3H); 3,18 (q, J=6,0 Гц, 2H); 3,23 (s, 3H); 3,33 (частично скрытый m, 1H); 3,39 (t, J=6,0 Гц, 2H); 3,42 (m, 2H); 3,47 до 3,52 (m, 10H); 3,81 (s, 3H); 3,87 (d, J=1,6 Гц, 1H); 4,15 (dd, J=6,6 и 8,2 Гц, 1H); 4,19 до 4,32 (m, 4H); 4,91 (dd, J=3,6 и 9,6 Гц, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=15,3 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=3,7, 11,3 и 15,3 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,5 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=2,2 и 8,5 Гц, 1H); 7,21 до 7,26 (m, 5 H); 7,28 (d, J=2,2 Гц, 1H); 7,85 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,92 (d, J=8,2 Гц, 1H); 8,08 (d, J=7,7 Гц, 1H); 8,32 (t, J=6,0 Гц, 1H); 8,37 (d, J=8,0 Гц, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=1326 [М+Н]+; масса/заряд=1348 [M+Na]+; масса/заряд=1370 [М-Н+НСО2Н]-; Rt=1,31 мин.
Пример 16: hu2H11_R35-74-Ex15.
Общий способ, описанный ранее, использовали для получения соединения из примера 16. 28,8 мг hu2H11_R35-74 вводили в реакцию с 115,2 мкл 10,05 мМ раствора соединения из примера 15 в DMA (6 экв.) в течение 2 ч 30 мин. После очистки на Superdex 200 pg в буфере В с рН 6,5+10% NMP, концентрирования на Amicon Ultra-15, разбавления в буфере В с рН 6,5 до конечной концентрации NMP при 5% и фильтрации на PVDF-фильтре с размером пор 0,22 мкм получали 16,12 мг ADC, который содержал 2,2% остаточного соединения из примера 14. Данную партию концентрировали на Amicon Ultra-15 и очищали на Sephadex G25 с получением 13,16 мг соединения из примера 16 в виде бесцветного прозрачного раствора при концентрации 1,4 мг/мл с DAR 2,8 (HRMS), мономерной чистотой 99,7% и общим выходом 43%.
SEC-HRMS: масса/заряд=149398 (неконъюгированное mAb); масса/заряд=150610 (D1); масса/заряд=151822 (D2); масса/заряд=153035 (D3); масса/заряд=154248 (D4); масса/заряд=155458 (D5); масса/заряд= 156672 (D6); масса/заряд=1578881 (D7).
- 111 045708
Синтез примеров 17-19: глутарил-Val-глюкоза-Gln-С52-бензиламин, NHS-сложный эфир глутарилVal-глюкоза-Gln-C52-бензиламина и соответствующий ADC
- 112 045708
Соединение 44: (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(йодметuл)-6-метокситетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триол.
К раствору полугидрата метил-β-D-глюкопиранозида (номер CAS [7000-27-3], 1 г, 4,67 ммоль), имидазола (642 мг, 9,34 ммоль) и трифенилфосфина (2,47 г, 9,33 ммоль) в THF (50 мг), который перемешивали при нагревании с обратным холодильником, добавляли по каплям раствор йода (2,37 г, 9,33 ммоль) в THF (10 мл). Нагревание с обратным холодильником поддерживали в течение 3 ч. После охлаждения при 0°С реакционную среду фильтровали, фильтрат концентрировали in vacuo. Смесь очищали с помощью флеш-хроматографии на 150 г силикагеля (градиент DCM/MeOH) с получением 1 г соединения 44 (63%).
Соединение 45: (2R,3S,4S,5R,6R)-2-(азидометил)-6-метокситетрагидро-2Н-пиран-3,4,5-триол.
К раствору соединения 44 (1 г, 3,29 ммоль) в DMF (10 мг) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли NaN3 (322 мг, 4,93 ммоль). Реакционную среду нагревали при 50°С в течение 16 ч. В это же время после охлаждения при к.т. среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 80 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 550 мг соединения 45 (76%).
Соединение 46: триолгидрохлорид.
(2R,3S,4S,5R,6R)-2-(аминометил)-6-метокситетрагидро-2Н-пиран-3,4,5Раствор соединения 45 (550 мг, 2,51 ммоль) и трифенилфосфина (1,33 г, 5,02 ммоль) в 1,4-диоксане (12 мл) и МеОН (3 мл) перемешивали при к.т. в течение 30 мин. В это же время к реакционной среде добавляли воду (1,5 мл) и перемешивание при к.т. поддерживали в течение ночи. Неочищенную среду кон
- 113 045708 центрировали in vacuo, затем разбавляли с помощью DCM (10 мл) и 1н. водного раствора HCl (5 мл), водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x10 мл). Водную фазу концентрировали in vacuo, затем разбавляли с помощью МеОН и концентрировали in vacuo с получением 560 мг соединения 46 (97%).
Соединение 47: (S)-1-трет-бутил-5-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)-2-((S)-2-((((9Н-флуорен-9ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)пентандиоат.
К раствору соединения 40 (2 г, 3,81 ммоль) в THF (100 мл) последовательно добавляли при перемешивании с помощью магнитной мешалки DIEA (1,29 мл, 7,62 ммоль), DSC (1,95 г, 7,62 ммоль) и DMF (20 мл). Реакционную среду перемешивали при к.т. в атмосфере Ar в течение ночи. После концентрирования in vacuo смесь очищали посредством флеш-хроматографии на 150 г силикагеля (элюирование DCM/EtOAc) с получением 1,67 г соединения 47 (71%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,89 (d, J=6,8 Гц, 3H); 0,91 (d, J=6,8 Гц, 3H); 1,39 (s, 9H); 1,84 до 2,10 (m, 3H); 2,65 до 2,77 (m, 2H); 2,80 (s, 4H); 3,88 (dd, J=7,2 и 8,7 Гц, 1H); 4,18 до 4,31 (m, 4H); 7,32 (m, 2H); 7,41 (m, 3H); 7,73 (d, J=7,6 Гц, 1H); 7,75 (d, J=7,6 Гц, 1H); 7,88 (d, J=7,6 Гц, 2H); 8,31 (широкий d, J=7,1 Гц, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=566; масса/заряд=622 [М+Н]+; масса/заряд=666 [М-Н+НСО2Н]’; Rt=1,49 мин.
Соединение 48: (S)-трет-бутил-2-((S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3метилбутанамидо)-5-оксо-5-((((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-метокситетрагидро-2Н-пиран-2ил)метил)амино)пентаноат.
К раствору соединения 47 (500 мг, 804 мкмоль) в DMF (10 мл) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли соединение 46 (185 мг, 805 мкмоль) и DIEA (165 мкл, 978 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 4 ч. В это же время 37 мг соединения 46 и 35 мкл DIEA добавляли к реакционной среде, перемешивание поддерживали в течение 1 ч. Затем среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 50 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 480 мг соединения 48 (85%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,87 (d, J=6,7 Гц, 3H); 0,89 (d, J=6,7 Гц, 3H); 1,38 (s, 9H); 1,70 до 2,04 (m, 3H); 2,19 (t, J=7,9 Гц, 2H); 2,86 до 2,98 (m, 2H); 3,01 до 3,16 (m, 3H); 3,35 (s, 3H); 3,52 (m, 1H); 3,92 (dd, J=7,2 и 8,4 Гц, 1H); 3,99 (d, J=7,6 Гц, 1h); 4,09 (m, 1H); 4,16 до 4,36 (m, 3H); 4,95 (широкий d, J=4,6 Гц, 1H); 4,99 (d, J=5,1 Гц, 1H); 5,03 (d, J=4,9 Гц, 1H); 7,27 до 7,37 (m, 3H); 7,41 (t, J=7,6 Гц, 2H); 7,75 (разделенный d, J=7,0 Гц, 2H); 7,85 (широкий m, 1H); 7,89 (d, J=7,6 Гц, 2H); 8,23 (широкий d, J=7,1 Гц, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=700 [М+Н]+; масса/заряд=744 [М-Н+НСО2Н]-; Rt=1,22 мин.
Соединение 49: (S)-2-((S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)-5-оксо-5((((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-метокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)метил)амино)пентановая кислота.
К соединению 48 (480 мг, 686 мкмоль) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли 4 М раствор HCl в 1,4-диоксане (30 мл). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 4 ч. В это же время среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 30 г силикагеля (элюирование DCM/MeOH/H2O) с получением 260 мг соединения 49 (59%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,83 (d, J=6,6 Гц, 3H); 0,85 (d, J=6,6 Гц, 3H); 1,69 до 1,90 (m, 2H); 2,01 до 2,15 (m, 3H); 2,86 до 2,97 (m, 2H); 2,99 до 3,16 (m, 3H); 3,35 (s, 3H); 3,51 (m, 1H); 3,82 (m, 2H); 3,99 (d, J=7,8 Гц, 1H); 4,20 до 4,33 (m, 3H); 4,95 (широкий d, J=3,7 Гц, 1H); 5,03 (d, J=4,9 Гц, 1H); 5,06 (широкий d, J=4,6 Гц, 1H); 7,33 (m, 2H); 7,40 (t, J=7,6 Гц, 2H); 7,52 (широкий d, J=6,4 Гц, 1H); 7,61 (широкий d, J=9,3 Гц, 1H); 7,73 (d, J=7,6 Гц, 1H); 7,76 (d, J=7,6 Гц, 1H); 7,89 (d, J=7,6 Гц, 2H); 8,10 (широкий m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=642 [М-Н]-; масса/заряд=644 [М+Н]+; Rt=1,01 мин.
Соединение 50: (S)-2-((S)-2-амино-3-метилбутанамидо)-N 1 -(4-((2R,3R)-3-((S)-1 -((3S,10R, 16S,E)-10(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)-N5-(((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-метокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)метил)пентандиамид.
К раствору (E)-(3S,10R,16S)-16-(S)-1-[(2R,3R)-3-(4-аминометилфенил)оксиранил]-этил}-10-(3-хлор4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраона (синтез которого описан в WO2011001052, соединение 77, 110 мг, 157 мкмоль) в DMF (6 мл) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли соединение 49 (122 мг, 189 мкмоль), HOBt (34 мг, 252 мкмоль) и EDC (43 мкл, 236 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи. Затем 25 мг соединения 49 и 25 мкл EDC добавляли к среде, перемешивание поддерживали в течение 1 ч. В это же время пиперидин (160 мкл, 1,58 ммоль) добавляли к среде. Через 2 ч среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 20 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 78 мг соединения 50 (45%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,76 (d, J=6,9 Гц, 3H); 0,79 (d, J=6,3 Гц, 6H); 0,87 (d, J=6,9 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=6,6 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,30 (m, 1H); 1,50 до 1,98 (m, 8 H); 2,12 (m, 2H); 2,26 (m, 1H); 2,68 (m, 2H); 2,86 до 3,14 (m, 9H); 3,32 (частично скрытый m, 1H); 3,38 (s, 3H); 3,52 (m, 1H); 3,81 (s, 3H); 3,87 (s, 1H); 4,01 (d, J=7,4 Гц, 1H); 4,20 до 4,36 (m, 4h); 4,90 (m, 1H); 4,98 (широкий d, J=3,6 Гц, 1H); 5,02 (d, J=4,9 Гц, 1H); 5,06 (d, J=4,7 Гц, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=15,6 Гц, 1H); 6,47 (m, 1H); 7,05 (d, J=8,5 Гц, 1H); 7,17 (широкий d, J=8,5 Гц, 1H); 7,21 до 7,26 (m, 5 H); 7,29 (широкий s, 1H); 7,90 (m, 1H);
- 114 045708
8,08 (широкий m, 1H); 8,37 (d, J=8,0 Гц, 1H); 8,48 (m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=551 [М+2Н]2+; масса/заряд=1099 [М-Н]-; масса/заряд=1101 [М+Н]+; масса/заряд=1145 [М-Н+НСО2Н]-; Rt=0,9 мин.
Пример 17: 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран2-ил)бензил)амино)-1,5-диоксо-5-((((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-метокситетрагидро-2Н-пиран2-ил)метил)амино)пентан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-5-оксопентановая кислота.
К раствору соединения 50 (77 мг, 69,9 мкмоль) в DMF (4 мл) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли глутаровый ангидрид (14 мг, 125,8 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Затем реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 10 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 54 мг соединения из примера 17 (64%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,80 (d, J=6,0 Гц, 6H); 0,86 (d, J=6,6 Гц, 3H); 0,88 (d, J=6,6 Гц, 3H); 0,99 (s, 3H); 1,03 (d, J=6,6 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,34 (m, 1H); 1,53 до 1,85 (m, 6H); 1,90 до 2,33 (m, 9h); 2,65 до 2,76 (m, 2H); 2,87 до 3,14 (m, 8 H); 3,32 (частично скрытый m, 1H); 3,35 (s, 3H); 3,53 (m, 1H); 3,81 (s, 3H); 3,87 (d, J=1,9 Гц, 1H); 4,00 (d, J=7,9 Гц, 1H); 4,03 до 4,26 (m, 4H); 4,33 (m, 1H); 4,93 (m, 1H); 5,02 (широкий m, 3H); 5,10 (m, 1H); 5,80 (d, J=15,3 Гц, 1H); 6,46 (ddd, J=3,5, 11,0 и 15,3 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,5 Гц, 1H); 7,18 (dd, J=2,2 и 8,5 Гц, 1H); 7,22 (d, J=8,2 Гц, 2H); 7,26 (d, J=8,2 Гц, 2H); 7,30 (m, 2H); 7,98 до 8,65 (широкий m, 5 H). LCMS (A): ES масса/заряд=608 [М+2Н]2+; масса/заряд=1213 [М-Н]-; масса/заряд=1215 [М+Н]+; Rt= 1,15 мин.
Пример 18: 2,5-диоксопирролидин-1-ил-5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)амино)-1,5-диоксо-5-((((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-метокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)метил)амино)пентан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-5оксопентаноат.
Пример 17 (45 мг, 37 мкмоль) разбавляли в толуоле и концентрировали in vacuo. Затем к раствору соединения из примера 17 в THF (5 мл), DCM (2 мл) и DMF (1 мл) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли DSC (11,4 мг, 44,4 мкмоль) и DIEA (19 мкл, 112,6 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в атмосфере Ar в течение 3 ч. Затем к среде добавляли DMF и DSC до завершения реакции. Через 3 ч среду разбавляли водой (5 мл) и экстрагировали с помощью MeTHF (3x10 мл). Объединенные органические фазы высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo. Смесь очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH) с получением 21 мг соединения из примера 18 (43%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J=6,0 Гц, 6H); 0,83 (d, J=6,9 Гц, 3H); 0,85 (d, J=6,9 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=6,3 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,30 (m, 1H); 1,52 до 1,63 (m, 2H); 1,75 до 2,02 (m, 6H); 2,09 до 2,34 (m, 5 H); 2,68 (m, 4H); 2,81 (s, 4H); 2,88 до 3,18 (m, 7 H); 3,32 (частично скрытый m, 1H); 3,38 (s, 3H); 3,51 (m, 1H); 3,81 (s, 3H); 3,88 (s, 1H); 4,01 (d, J=7,7 Гц, 1H); 4,16 (dd, J=7,1 и 7,7 Гц, 1H); 4,19 до 4,35 (m, 5 H); 4,90 (m, 1H); 4,97 (d, J=4,l Гц, 1H); 5,01 (d, J=4,9 Гц, 1H); 5,06 (d, J=4,9 Гц, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=15,3 Гц, 1H); 6,47 (m, 1H); 7,05 (d, J=8,5 Гц, 1H); 7,17 (широкий d, J=8,5 Гц, 1H); 7,20 до 7,26 (m, 5 H); 7,28 (широкий s, 1H); 7,86 (широкий t, J=5,6 Гц, 1H); 7,91 (d, J=7,9 Гц, 1H); 8,08 (d, J=7,4 Гц, 1H); 8,33 (t, J=5,8 Гц, 1H); 8,38 (d, J=8,2 Гц, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=1310 [M-H]-; масса/заряд=1356 [М-Н+НСО2Н]-; масса/заряд=1312 [М+Н]+; масса/заряд=656,5 [М+2Н]2+; Rt=1,2 мин.
Пример 19: hu2H11_R35-74-Ex18.
Общий способ, описанный ранее, использовали для получения соединения из примера 19. 29,02 мг hu2H11_R35-74 вводили в реакцию с 116,6 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 18 в DMA (6 экв.) в течение 2 ч 30 мин. После очистки на Superdex 200 pg в буфере В с рН 6,5+10% NMP, концентрирования на Amicon Ultra-15, разбавления в буфере В с рН 6,5 до конечной концентрации NMP при 5% и фильтрации на PVDF-фильтре с размером пор 0,22 мкм получали 23,1 мг соединения из примера 19 в виде бесцветного прозрачного раствора при концентрации 2,2 мг/мл с DAR 2,8 (HRMS), мономерной чистотой 99,9% и общим выходом 78%. Уровень лекарственного средства, не связанного с белками плазмы крови, превышал пороговое значение 1%: ADC концентрировали на Amicon Ultra-15, очищали на Sephadex G25 в буфере В с рН 6,5+5% NMP и фильтровали на PVDF-фильтре с размером пор 0,22 мкм с получением 17,25 мг соединения из примера 19 в виде бесцветного прозрачного раствора при концентрации 1,50 мг/мл с DAR 2,55 (HRMS), мономерной чистотой 99,7% и общим выходом 59%.
SEC-HRMS: масса/заряд=149405 (неконъюгированное mAb); масса/заряд=150602 (D1); масса/заряд=151800 (D2); масса/заряд=152997 (D3); масса/заряд=154196 (D4);
масса/заряд=155393 (D5); масса/заряд=156589 (D6); масса/заряд=157791 (D7). Синтез примера 20: глутарил-Val-глюкамин-Gln-С52-бензиламин
- 115 045708
ОН он
Соединение 51: (S)-2,5-диоксопирролидин-1-ил-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3метилбутаноат.
К раствору Fmoc-Val-OH (номер CAS [68858-20-8], 5 г, 14,44 ммоль) в THF (40 мл) добавляли NHS (1,71 г, 14,44 ммоль) и DCC (2,98 г, 14,44 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 5 ч при к.т., затем добавляли 0,2 эквивалента NHS и DCC и перемешивание проводили в течение 4 ч при к.т.
- 116 045708
Среду фильтровали, твердое вещество промывали дважды с помощью THF (2x25 мл) и фильтрат концентрировали in vacuo с получением 6,5 г соединения 51 в виде белой меренги (колич.).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 1,03 (d, J=6,9 Гц, 6H); 2,20 (m, 1H); 2,81 (s, 4H); 4,18 до 4,39 (m, 4H); 7,32 (m, 2H); 7,42 (m, 2H); 7,74 (m, 2H); 7,90 (d, J=7,6 Гц, 2H); 8,12(d,J=8,5Гц, 1H).
Соединение 52: (S)-4-((S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)-5(трет-бутокси)-5-оксопентановая кислота.
К раствору H-Glu-OtBu (номер CAS [45120-30-7], 3,14 г, 15,16 ммоль) и бикарбоната натрия (1,40 г, 16,46 ммоль) в H2O (60 мл) добавляли раствор соединения 51 (6,3 г, 14,43 ммоль) в THF (240 мл). Реакционную среду перемешивали в течение 16 ч при к.т. и концентрировали in vacuo. Неочищенный продукт разбавляли в H2O (700 мл) с образованием геля, который перемешивали в течение 15 мин, затем экстрагировали дважды с помощью Et2O (200 мл). Водную суспензию подкисляли до рН 3 с помощью 5 н. HCl и экстрагировали с помощью DCM (4x200 мл). Объединенные органические фазы высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением 7,98 г соединения 52 в виде белой меренги (колич.).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,87 (d, J=6,9 Гц, 3H); 0,90 (d, J=6,9 Гц, 3H); 1,38 (s, 9H); 1,77 (m, 1H); 1,91 (m, 1H); 1,98 (m, 1H); 2,28 (m, 2H); 3,90 (dd, J=7,1 и 9,1 Гц, 1H); 4,10 до 4,37 (m, 4H); 7,32 (m, 2H); 7,38 (d, J=9,1 Гц, 1H); 7,41 (m, 2H); 7,73 (m, 2H); 7. 89 (d, J=7,6 Гц, 2H); 8,20 (d, J=7,5 Гц, 1H); 12,21 (широкий m, 1H).
Соединение 53: (S)-1-трет-бутил-5-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)-2-((S)-2-((((9Н-флуорен-9ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)пентандиоат.
К раствору соединения 52 (500 мг, 953,1 мкмоль) в THF (30 мл) добавляли DIEA (320 мкл, 1,9 ммоль), DSC (498,3 мг, 1,91 ммоль) и DMF (6 мл). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, затем к среде добавляли 30 мг DSC и перемешивание проводили в течение 24 ч. Реакционную среду концентрировали in vacuo, дважды выпаривали совместно с толуолом и очищали с помощью флешхроматографии на 50 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH) с получением 506 мг соединение 53 в виде белого масла (85%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,89 (d, J=6,9 Гц, 3H); 0,91 (d, J=6,9 Гц, 3H); 1,39 (s, 9H); 1,75 до 2,11 (m, 3H); 2,73 (m, 2H); 2,80 (s, 4H); 3,89 (dd, J=7,3 и 9,1 Гц, 1H); 4,20 до 4,38 (m, 4H); 7,32 (m, 2H); 7,42 (m, 3H); 7,75 (m, 2H); 7,80 (m, 2H); 8,31 (d, J=7,5 Гц, 1H).
Соединение 54: (2S,3R,4R,5R)-1-амино-6-((трет-бутилдифенилсилил)окси)гексан-2,3,4,5-тетраол
Суспензию D-глюкамина (номер CAS [488-43-7], 200 мг, 1,10 ммоль) в DMF (2 мл) охлаждали при 0°С, затем добавляли имидазол (82,0 мг, 1,19 ммоль) и трет-бутилхлордифенилсилан (334,4 мг, 1,19 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при 0°С, гасили с помощью H2O (20 мл) и проводили перемешивание в течение 10 мин. Среду экстрагировали с помощью AtOAc (3x50 мл), объединенные органические фазы высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo, дважды выпаривали совместно с толуолом и очищали с помощью флеш-хроматографии с обращенной фазой на 31 г С18-модифицированного силикагеля (градиентное элюирование H2O/MeCN) с получением 218 мг соединения 54 в виде белой пены (47%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 1,00 (s, 9H); 2,62 (dd, J=6,3 и 12,7 Гц, 1H); 2,74 (dd, J=4,5 и 12,7 Гц, 1H); 3,40 (частично скрытый m, 1H); 3,49 (m, 1H); 3,55 до 3,72 (m, 3H); 3,88 (m, 1H); 4,48 (широкий m, 4H); 7,42 (m, 6H); 7,69 (m, 4H).
Соединение 55: (S)-трет-бутил-2-((S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3 метилбутанамидо)-5-(((2S,3R,4R,5R)-6-((трет-бутилдифенилсилил)окси)-2,3,4,5-тетрагидроксигексил)амино)-5оксопентаноат.
К раствору соединения 53 (300 мг, 482,6 мкмоль) в DMF (2 мл) добавляли раствор соединения 54 (214,6 мг, 511,5 мкмоль) в DMF (3 мл). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т., концентрировали in vacuo, выпаривали совместно с толуолом (3x) и очищали с помощью флеш-хроматографии на 25 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH/H2O) с получением 270 мг соединения 55 в виде белой пены (60%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,87 (d, J=6,9 Гц, 3H); 0,90 (d, J=6,9 Гц, 3H); 0,99 (s, 9H); 1,38 (s, 9H); 1,80 (m, 1H); 1,90 (m, 1H); 1,98 (m, 1H); 2,17 (t, J=7,7 Гц, 2H); 3,03 (m, 1H); 3,26 (m, 1H); 3,49 (m, 1H); 3,52 до 3,60 (m, 4H); 3,83 (m, 1H); 3,92 (dd, J=7,3 и 9,2 Гц, 1H); 4,08 (m, 1H); 4,18 до 4,31 (m, 4H); 4,33 (d, J=6,4 Гц, 1H); 4,63 (d, J=5,8 Гц, 1H); 4,78 (d, J=4,7 Гц, 1H); 7,31 (m, 2H); 7,36 (d, J=9,2 Гц, 1H); 7,41 (m, 8 H); 7,67 (m, 4H); 7,69 до 7,76 (m, 3H); 7,89 (m, 2H); 8,23 (d, J=7,5 Гц, 1H).
Соединение 56: (S)-2-((S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)-5(((2S,3R,4R,5R)-6-((трет-бутилдифенилсилил)окси)-2,3,4,5-тетрагидроксигексил)амино)-5-оксопентановая кислота.
Соединение 55 разбавляли в DCM с образованием геля, который охлаждали при 0°С, затем медленно добавляли смесь DCM/TFA 1:1 при 0°С. Реакционную среду перемешивали в течение 30 мин. при 0°С, затем в течение 5 ч при к.т., концентрировали in vacuo и выпаривали совместно с толуолом (3x) с получением белого твердого вещества, которое размалывали в iPr2O, фильтровали, промывали дважды с
- 117 045708 помощью Et2O (5 мл), высушивали и, наконец, очищали с помощью флеш-хроматографии на 15 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/МеОН/H2O) с получением 149 мг соединения 56 в виде белого твердого вещества (59%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,84 (d, J=6,8 Гц, 3H); 0,86 (d, J=6,8 Гц, 3H); 0,99 (s, 9H); 1,82 (m, 1H); 1,90 (m, 1H); 2,03 до 2,14 (m, 3H); 3,00 (m, 1H); 3,25 (m, 1H); 3,48 (m, 1H); 3,65 (m, 4H); 3,82 до 3,92 (m, 3H); 4,20 до 4,37 (m, 3H); 4,40 (d, J=6,0 Гц, 1H); 4,45 (d, J=6,0 Гц, 1H); 4,80 (m, 1H); 5,12 (m, 1H); 7,32 (m, 2H); 7,41 (m, 8 H); 7,55 (m, 2H); 7,65 до 7,82 (m, 7H); 7,89 (d, J=8,0 Гц, 2H). LCMS (А): масса/заряд=868 [М-Н]-; масса/заряд=870 [М+Н]+; Rt=1,55 мин.
Соединение 57: (S)-2-((S)-2-амино-3-метилбутанамидо)-N5-((2S,3R,4R,5R)-6-((третбутилдифенилсилил)окси)-2,3,4,5-тетрагидроксигексил)-N1-(4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)пентандиамид.
К раствору соединения 56 (67,3 мг, 77,3 мкмоль) и (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4(аминометил)фенил)оксиран-2-ил)этил)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраона (синтез которого описан в WO2011001052, соединение 77, 45 мг, 64,5 мкмоль) в DMF и DCM (10 мл) добавляли HOBt (11,5 мг, 85,1 мкмоль) и EDC (11,4 мг, 70,9 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 3 ч при к.т., затем гасили с помощью H2O (15 мл) и перемешивание проводили в течение 10 мин. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (3x20 мл), объединенные органические фазы высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 5 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 64 мг Fmoc-защищенного промежуточного соединения дипептидкриптофицин в виде белого твердого вещества (64%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,76 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,82 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,86 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,99 (s, 12H); 1,04 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,10 (s, 3H); 1,30 (m, 1H); 1,55 (m, 2H); 1,80 (m, 2H); 1,90 (m, 1H); 2,00 (m, 1H); 2,14 (m, 2H); 2,26 (m, 1H); 2,68 (m, 2H); 2,92 до 3,08 (m, 4H); 3,22 до 3,38 (частично скрытый m, 2H); 3,49 (m, 1H); 3,58 до 3,69 (m, 4H); 3,81 (s, 3H); 3,82 (m, 1H); 3,87 (d, J=2,0 Гц, 1H); 3,91 (m, 1H); 4,18 до 4,38 (m, 9H); 4,68 (m, 1H); 4,82 (m, 1H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (широкий d, J=16,0 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=4,7, 10,5 и 16,0 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,0 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=2,5 и 8,0 Гц, 1H); 7,20 до 7,27 (m, 5 H); 7,29 (d, J=2,3 Гц, 1H); 7,31 (t, J=7,8 Гц, 2H); 7,34 до 7,48 (m, 7H); 7,65 до 7,79 (m, 9H); 7,90 (d, J=7,8 Гц, 2H); 8,10 (d, J=8,3 Гц, 1H); 8,38 (d, J=8,0 Гц, 1H); 8,41 (t, J=6,5 Гц, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=775 [М+2Н]2+; масса/заряд=1549 [М+Н]+; масса/заряд=1549 [М+Н]2Н]-; Rt=1,78 мин.
К раствору данного промежуточного соединения (62 мг, 40,0 мкмоль) в DCM (8 мл) добавляли пиперидин (59,8 мкл, 600,0 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 4 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 5 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH/H2O) с получением 49 мг соединения 57 в виде белого лака (92%).
Соединение 58: (6R,7R,8R,9S,15S,18S)-15-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)-6,7,8,9-тетрагидрокси-18-изопропил-2,2-диметил-12,17,20триоксо-3,3-дифенил-4-окса-11,16,19-триаза-3-силатетракозан-24-овая кислота.
К раствору соединения 57 (23 мг, 17,3 мкмоль) в DCM (3 мл) добавляли раствор глутарового ангидрида (2,22 мг, 19,1 мкмоль) в DCM (2 мл). Реакционную среду перемешивали в течение 3 ч при к.т., частично концентрировали in vacuo (до 2 мл) и очищали с помощью флеш-хроматографии на 5 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH/H2O) с получением 17 мг соединения 58 в виде белого лака (68%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,80 (разделенный d, J=6,8 Гц, 6H); 0,6 (разделенный d, J=7,0 Гц, 6H); 0,99 (s, 12H); 1,04 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,32 (m, 1H); 1,52 до 1,60 (m, 2H); 1,72 до 2,00 (m, 7H); 2,08 (m, 1H); 2,13 (m, 1H); 2,20 до 2,37 (m, 3 H); 2,69 (m, 2H); 2,92 до 3,07 (m, 4H); 3,20 (m, 1H); 3,30 (скрытый m, 1H); 3,45 (m, 1H); 3,55 до 3,70 (m, 4H); 3,80 (s, 3H); 3,83 (m, 1H); 3,87 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,07 до 5,00 (m, 11H); 5,10 (m, 1H); 5,80 (dd, J=2,0 и 15,8 Гц, 1H); 6,47 (m, 1H); 7,04 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,18 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,28 (m, 5 H); 7,29 (d, J=2,3 Гц, 1H); 7,41 (m, 6H); 7,68 (m,4H); 8,05 (d, J=7,9 Гц, 1Н; 8,23 (t, J=6,5 Гц, 1H); 8,30 до 8,60 (m, 3H). LCMS (A): ES масса/заряд=721 [М+2Н]2+; масса/заряд=1439 [М-Н]-; масса/заряд=1441 [М+Н]+; Rt=1,52 мин.
Пример 20: 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран2-ил)бензил)амино)-1,5-диоксо-5-(((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-пентагидроксигексил)амино)пентан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-5-оксопентановая кислота.
Раствор соединения 57 (46 мг, 31,9 мкмоль) в THF (3 мл) охлаждали при 0°С, затем добавляли по каплям при 0°С 1 М раствор TBAF в THF (35,1 мкл, 35,1 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при 0°С, гасили с помощью H2O (100 мкл), перемешивали в течение 10 мин и экстрагировали с помощью DCM (5 мл). Органическую фазу высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo: LCMS-анализ указывал на наличие остаточного исходного материала. Неочищенный продукт рас
- 118 045708 творяли в DCM (3 мл), раствор охлаждали при 0°С, затем добавляли по каплям 1 М раствор TBAF в THF (35,1 мкл, 35,1 мкмоль) при 0°С. Реакционную среду перемешивали в течение 3 ч при 0°С, гасили с помощью H2O (100 мкл), перемешивали в течение 10 мин и экстрагировали с помощью DCM (20 мл). Органическую фазу высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 5 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/МеОН/H2O до MeOH), затем с помощью флеш-хроматографии с обращенной фазой на 3 г С18-модифицированного силикагеля (градиентное элюирование H2O/MeCN) с получением 17 мг соединения из примера 20 в виде белого лака (44%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,80 (разделенный d, J=6,8 Гц, 6H); 0,6 (разделенный d, J=7,0 Гц, 6H); 0,99 (s, 12H); 1,04 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,32 (m, 1H); 1,52 до 1,60 (m, 2H); 1,72 до 2,00 (m, 7H); 2,08 (m, 1H); 2,13 (m, 1H); 2,20 до 2,37 (m, 3H); 2,69 (m, 2H); 2,92 до 3,07 (m, 4H); 3,20 (m, 1H); 3,30 (скрытый m, 1H); 3,45 (m, 1H); 3,55 до 3,70 (m, 4H); 3,80 (s, 3H); 3,83 (m, 1H); 3,87 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,07 до 5,00 (m, 11H); 5,10 (m, 1H); 5,80 (dd, J=2,0 и 15,8 Гц, 1H); 6,47 (m, 1H); 7,04 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,18 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,28 (m, 5 H); 7,29 (d, J=2,3 Гц, 1H); 7,41 (m, 6H); 7,68 (m, 4H); 8,05 (d, J=7,9 Гц, 1H); 8,23 (t, J=6,5 Гц, 1H); 8,30 до 8,60 (m, 3H). LCMS (A): ES масса/заряд=602 [М+2Н]2+; масса/заряд=1201 [М-Н]-; масса/заряд=1203 [М+Н]+; Rt=1,1 мин.
Синтез примеров 21-23: глутарил-Val-PEG4Lys-С52-бензиламин, NHS-сложный эфир глутарил-ValPEG4Lys-C52-бензuламина и соответствующий ADC
- 119 045708
Соединение 59: (S)-20-((трет-бутоксикарбонил)амино)-14-оксо-2,5,8,11 -тетраокса-15-азагеникозан21 -овая кислота.
К раствору (S)-6-амино-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)гексановой кислоты (номер CAS [1373428-6], 73,9 мг, 300 мкмоль) в THF (300 мкл) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли 2,5-диоксопирролидин-1-ил-2,5,8,11-тетраоксатетрадекан-14-оат (номер CAS [622405-78-1], 100 мг, 300 мкмоль), DIEA (53,3 мкл, 300 мкмоль) и H2O (100 мкл). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, затем концентрировали in vacuo. Неочищенную среду очищали с помощью флешхроматографии на 5 г С18-привитого силикагеля (градиентное элюирование H2O/CH3CN) с получением 81 мг соединения 59 (58%). LCMS (В): ES масса/заряд=463 [М-Н]-; масса/заряд=465 [М+Н]+; tR=0,86 мин.
Соединение 60: гидрохлорид (S)-20-амино-14-оксо-2,5,8,11-тетраокса-15-азагеникозан-21-овой ки слоты.
К соединению 59 (150,6 мг, 324,2 мкмоль) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли 4 М раствор HCl в 1,4-диоксане (1 мл). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, затем концентрировали in vacuo. Добавляли AtOAc и смесь концентрировали in vacuo с получением 156 мг соединения 60 (колич.).
LCMS (В): ES масса/заряд=508 [М-Н]-; масса/заряд=510 [М+Н]+; tR=l,23 мин.
Соединение 61: (S)-20-((S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)14-оксо-2,5,8,11-тетраокса-15-азагеникозан-21-овая кислота.
К раствору соединения 60 (130 мг, 275 мкмоль) в воде (0,5 мл) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли NaHCO3 (55,6 мг, 661 мкмоль), затем добавляли (S)-2,5-диоксопирролидин-1ил-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутаноат (номер CAS [130878-68-1], 144,4
- 120 045708 мг, 330,8 мкмоль) в THF (1,5 мл). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи. Затем к реакционной среде добавляли NaHCO3 (30 мг), THF (500 мкл), H2O (200 мкл) и (S)-2,5-диоксопирролидин1-ил-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутаноат (28 мг). Через 3 ч среду концентрировали in vacuo, затем разбавляли с помощью H2O (20 мл) и ~2-3 мл водного насыщенного Na2CO3. Водную фазу экстрагировали дважды с помощью EtOAc (20 мл). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором (20 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo. Смесь очищали с помощью флеш-хроматографии на 15 г силикагеля (элюирование EtOAc/МеОН/H2O 85:1:0,5 об./об.). После концентрирования неочищенный продукт разбавляли толуолом и концентрировали in vacuo с получением 75,6 мг соединения 61 (40%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,85 (d, J=7,1 Гц, 3H); 0,87 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,21 до 1,40 (m, 4H); 1,50 до 1,73 (m, 2H); 2,01 (m, 1H); 2,27 (t, J=6,6 Гц, 2H); 2,98 (m, 2H); 3,23 (s, 3H); 3,41 (m, 2H); 3,43 до 3,52 (m, 10H); 3,57 (t, J=6,6 Гц, 2H); 3,88 (m, 1H); 4,01(m, 1H); 4,19 до 4,34 (m, 3H); 7,31 (m, 2H); 7,38 до 7,46 (m, 3H); 7,70 до 7,91 (m, 6H); 12,51 (m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=684 [М-Н]-; масса/заряд=686 [М+Н]+; Rt=1,2 мин.
Соединение 62: N-((S)-5-((S)-2-амино-3-метилбутанамидо)-6-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13 -ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)амино)-6-оксогексил)-2,5,8,11 -тетраоксатетрадекан-14амид.
К соединению 61 (70 мг, 102,1 мкмоль) при перемешивании с помощью магнитной мешалки и в атмосфере Ar добавляли раствор (E)-(3S,10R,16S)-16-{(S)-1-[(2R,3R)-3-(4-аминометилфенил)оксиранил]этил} -10-(3 -хлор-4-метоксибензил)-3 -изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен2,5,9,12-тетраона (синтез которого описан в WO2011001052, соединение 77, 76,2 мг, 109,1 мкмоль) в THF (3 мл) с последующим добавлением HOBt (17,7 мг, 131 мкмоль) и EDC (23 мкл, 131 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи. Затем добавляли к среде пиперидин (32,8 мкл, 327,4 мкмоль) и перемешивание поддерживали в течение 4 ч 30 мин. В это же время среду концентрировали in vacuo, разбавляли с помощью DMA и очищали с помощью флеш-хроматографии на 15 г С18привитого силикагеля (градиентное элюирование H2O/CH3CN) с получением 66 мг соединения 62(53%).
LCMS (В): ES масса/заряд=572; масса/заряд=1187 [М-Н+НСО2Н]-; tR =1,18 мин.
Пример 21: (20S,23 S)-20-((4-((2R,3R)-3-((S)-1 -((3 S,10R,16S,E)-10-(3 -хлор-4-метоксибензил)-3 изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран2-ил)бензил)карбамоил)-23-изопропил-14,22,25-триоксо-2,5,8,11-тетраокса-15,21,24-триазанонакозан-29овая кислота.
К раствору соединения 62 (66 мг, 57,7 мкмоль) в DMF (4 мл) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли глутаровый ангидрид (11,85 мг, 103,8 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 2 ч. В это же время среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 10 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 48,6 мг соединения из примера 21 (80%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,81 (m, 6H); 0,85 (d, J=7,5 Гц, 3H); 0,87 (d, J=7,5 Гц, 3H); 0,98 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,10 (s, 3H); 1,16 до 1,44 (m, 5 H); 1,55 до 1,79 (m, 7H); 1,90 до 2,10 (m, 3H); 2,14 до 2,29 (m, 3H); 2,31 (t, J=6,7 Гц, 2H); 2,66 до 2,78 (m, 2H); 2,85 до 2,99 (m, 4H); 3,05 (m, 1H); 3,23 (s, 3H); 3,32 (частично скрытый m, 1H); 3,42 (m, 2H); 3,44 до 3,51 (m, 10H); 3,57 (m, 2H); 3,81 (s, 3H); 3,88 (d, J=1,6 Гц, 1H); 4,04 до 4,25 (m, 4H); 4,35 (m, 1H); 4,94 (m, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,80 (d, J=15,0 Гц, 1H); 6,45 (ddd, J=4,0, 11,2 и 15,0 Гц, 1H); 7,04 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,19 (dd, J=1,7 и 8,6 Гц, 1H); 7,22 (d, J=8,4 Гц, 2H); 7,28 (d, J=8,4 Гц, 2H); 7,30 (d, J=1,7 Гц, 1H); 7,32 (широкий m, 1H); 7,75 до 9,42 (широкий m, 5 H); 12,06 (широкий m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=629 [М+2Н]2+; масса/заряд=1255 [М-Н]-; масса/заряд=1257 [М+Н]+; Rt=1,26 мин.
Пример 22: (20S,23S)-2,5-диоксопирролидин-1-ил-20-((4-(2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)-23-изопропил-14,22,25-триоксо-2,5,8,11-тетраокса-15, 21,24-триазанонакозан-29-оат.
Толуол (10 мл) добавляли к соединению из примера 21 (46 мг, 36,6 мкмоль) и концентрировали in vacuo с последующим разбавлением с помощью THF (5 мл), DCM (2 мл) и DMF (200 мкл). Затем добавляли DSC (11,5 мг, 43,9 мкмоль) с последующим добавлением DIEA (18,5 мкл, 109,7 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 4 ч. В это же время добавляли MeTHF (7 мл) и Н2О (3 мл), водную фазу экстрагировали дважды с помощью MeTHF (5 мл). Объединенные органические фазы промывали с помощью Н2О (3 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo. Неочищенную среду очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH) с получением 33,3 мг соединения из примера 22 (67%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J=6,6 Гц, 6H); 0,83 (d, J=7,1 Гц, 3H); 0,84 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=6,9 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,20 до 1,43 (m, 5 H); 1,50 до 1,69 (m, 4H); 1,76 до 1,87 (m, 3H); 1,98 (m, 1H); 2,21 до 2,35 (m, 5 H); 2,62 до 2,73 (m, 4H); 2,81 (s, 4H); 2,94 до 3,04 (m, 5 H); 3,23 (s,
- 121 045708
3H); 3,32 (частично скрытый m, 1H); 3,42 (m, 2H); 3,44 до 3,51 (m, 10H); 3,58 (t, J=6,4 Гц, 2H); 3,81 (s, 3H); 3,87 (d, J=1,1 Гц, 1H); 4,17 (dd, J=7,3 и 7,8 Гц, 1H); 4,21 до 4,31 (m, 4H); 4,90 (m, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=15,1 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=3,5, 11,5 и 15,1 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,5 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=1,6 и 8,5 Гц, 1H); 7,20 до 7,25 (m, 5 H); 7,28 (d, J=1,6 Гц, 1H); 7,79 (t, J=5,7 Гц, 1H); 7,91 (d, J=8,5 Гц, 1H); 7,95 (d, J=8,3 Гц, 1H); 8,37 (m, 2H). LCMS (С): ES масса/заряд=677,5 [М+2Н]2+; масса/заряд=1354 [М+Н]+; масса/заряд=1399 [М-Н+НСО2Н]-; Rt=4,41 мин.
Пример 23: hu2H11_R35-74-Ex22.
Общий способ, описанный ранее, использовали для получения соединения из примера 23. 44,64 мг hu2H11_R35-74 вводили в реакцию с 209,2 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 22 в DMA (7 экв.) в течение 3 ч 30 мин. После очистки на Sephadex G25 в буфере В с рН 6,5+5% NMP и концентрирования на Amicon Ultra-15, получали 36,6 мг соединения из примера 23 в виде бесцветного прозрачного раствора при концентрации 1,83 мг/мл с DAR 3,6 (HRMS), мономерной чистотой 98,8% и общим выходом 82%. Уровень лекарственного средства, не связанного с белками плазмы крови, превышал пороговое значение 1%: ADC концентрировали на Amicon Ultra-15, очищали на Sephadex G25 в буфере В с рН 6,5+5% NMP и фильтровали на PVDF-фильтре с размером пор 0,22 мкм с получением 32,6 мг соединения из примера 23 в виде бесцветного прозрачного раствора при концентрации 1,63 мг/мл с DAR 3,3 (HRMS), мономерной чистотой 98,3% и общим выходом 73%.
SEC-HRMS: масса/заряд=149411 (неконъюгированное mAb); масса/заряд=150649 (D1); масса/заряд=151889 (D2); масса/заряд=153129 (D3); масса/заряд=154369 (D4); масса/заряд=155608 (D5); масса/заряд=156850 (D6); масса/заряд=158091 (D7); масса/заряд=159331 (D8); масса/заряд=160583 (D9).
Синтез примеров 24-26: глутарил-Val-PEG24Lys-С52-бензиламин, NHS-сложный эфир глутарилVal-PEG24Lys-C52-бензиламина и соответствующий ADC
- 122 045708
Соединение 63: (S)-2-((S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)-6((трет-бутоксикарбонил)амино)гексановая кислота.
К раствору H-Lys(Boc)-OH (номер CAS [2418-95-3], 310 мг, 1,26 ммоль) и NaHCO3 (105 мг, 1,25 ммоль) в воде (5 мл) и THF (5 мл) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли по каплям раствор (S)-2,5-диоксопирролидин-1-ил-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3метилбутаноата (номер CAS [68858-20-8], 310 мг, 1,15 ммоль) в THF (15 мл). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 3 ч. В это же время реакционную среду концентрировали in vacuo, затем разбавляли водой (200 мл), подкисляли с помощью QS 5 н. водного раствора HCl и экстрагировали с помощью DCM (2x200 мл). Объединенные органические фазы высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением 510 мг соединения 63 (53%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,85 (d, J=6,8 Гц, 3H); 0,87 (d J=6,8 Гц, 3H); 1,20 до 1,39 (m, 4H); 1,34 (s, 9H); 1,48 до 1,73 (m, 2H); 1,99 (m, 1H); 2,86 (m, 2H); 3,89 (dd, J=7,7 и 8,4 Гц, 1H); 4,08 (m, 1H); 4,17 до 4,32 (m, 3H); 6,72 (широкий m, 1H); 7,32 (m, 2H); 7,38 до 7,46 (m, 3H); 7,74 (m, 2H); 7,89 (d, J=7,6 Гц, 2H); 8,00 (широкий m, 1H); 12,54 (широкий s, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=344; мас
- 123 045708 са/заряд=468; масса/заряд=566 [М-Н]-; масса/заряд=568 [М+Н]+; Rt=1,41 мин.
Соединение 64: гидрохлорид (S)-2-((S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3метилбутанамидо)-6-аминогексановой кислоты.
К соединению 63 (340 мг, 599 мкмоль) добавляли раствор 4 М HCl в 1,4-диоксане, реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 1 ч. В это же время реакционную среду концентрировали in vacuo с последующим добавлением Et2O и фильтрацией. Полученное белое твердое вещество очищали с помощью флеш-хроматографии на 15 г силикагеля (элюирование DCM/MeOH/NH4OH 12:3:0,5 об./об./об.) с получением 190 мг соединения 64 (63%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,83 (d, J=6,6 Гц, 3H); 0,85 (d, J=6,6 Гц, 3H); 1,21 до 1,70 (m, 6H); 2,04 (m, 1H); 2,71 (t, J=7,1 Гц, 2H); 3,84 (dd, J=6,7 и 8,7 Гц, 1H); 3,91 (m, 1H); 4,18 до 4,35 (m, 3H); 7,22 (широкий m, 3H); 7,33 (m, 2H); 7,42 (t, J=7,6 Гц, 2H); 7,54 (d, J=9,0 Гц, 1H); 7,69 (широкий m, 1H); 7,74 (m, 2H); 7,89 (d, J=7,6 Гц, 2H). LCMS (A): ES масса/заряд=244; масса/заряд=466 [М-Н]-; масса/заряд=468 [М+Н]+; Rt=0,81 мин.
Соединение 65: (S)-80-((S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)74-оксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75-азагеноктаконтан-81-овая кислота.
К раствору соединения 64 (130 мг, 258,0 мкмоль) в THF (20 мл) добавляли раствор бикарбоната натрия (50 мг, 589,2 мкмоль) в Н2О (8 мл) и MEO-DPeG(24)-NHS (номер CAS [756525-94-7], 40θ мг, 329,4 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 20 ч при к.т., частично концентрировали in vacuo, затем разбавляли с помощью H2O (10 мл), подкисляли до рН 3 с помощью ионообменной смолы Amberlite IR-120 (H) (номер CAS [78922-04-0]), фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью трех последовательных операций флеш-хроматографии на 40 г, 25 г и 12 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/МеОН/H2O) с получением 214 мг соединения 65 в виде белого лака (53%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,86 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,89 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,22 до 1,40 (m, 4H); 1,58 (m, 1H); 1,67 (m, 1H); 1,99 (m, 1H); 2,28 (t, J=6,6 Гц, 2H); 2,99 (m, 2H); 3,23 (s, 3H); 3,40 до 3,70 (m, 92H); 3,56 (t, J=6,6 Гц, 2H); 3,90 (m, 1H); 4,08 (широкий m, 1H); 4,19 до 4,31 (m, 3H); 7,31 (широкий t, J=7,8 Гц, 2H); 7,41 (широкий t, J=7,8 Гц, 3H); 7,73 (t, J=7,8 Гц, 2H); 7,76 (m, 1H); 7,89 (d, J=7,8 Гц, 2H); 8,00 (m, 1H); 12,53 (m, 1H). LCMS (D): ES масса/заряд=794 [M+H+Na]2+; масса/заряд=1567 [М+Н]+; Rt=2,9 мин.
Соединение 66: N-((S)-5-((S)-2-амино-3-метилбутанамидо)-6-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S, 10R, 16S,E)10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)амино)-6-оксогексил)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41, 44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаоксатетрагептаконтан-74-амид.
К раствору (E)-(3S,10R,16S)-16-{(S)-1-[(2R,3R)-3-(4-аминометилфенил)оксиранил]-этил}-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраона (синтез которого описан в WO2011001052, соединение 77, 71 мг, 101,7 мкмоль) в DMF (5 мл) добавляли раствор соединения 65 (214 мг, 136,6 мкмоль) в DMF (5 мл), HOBt (22 мг, 156,3 мкмоль) и EDC (27 мкл, 152,5 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 3 ч при к.т. перед добавлением пиперидина (91 мкл, 915,3 мкмоль). Перемешивание проводили в течение 1 ч 30 мин. при к.т., затем реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью двух последовательных операций флеш-хроматографии на 25 г и 12 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 58 мг соединения 66 в виде бесцветного лака (28%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,76 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,78 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,88 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,99 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,25 до 1,41 (m, 5 H); 1,51 до 1,70 (m, 4H); 1,80 (m, 1H); 1,93 (m, 1H); 2,25 (m, 1H); 2,28 (t, J=6,7 Гц, 2H); 2,55 (широкий m, 2H); 2,68 (m, 2H); 2,99 (m, 5 H); 3,23 (s, 3H); 3,32 (скрытый m, 1H); 3,40 до 3,55 (m, 92H); 3,58 (t, J=6,7 Гц, 2H); 3,80 (s, 3H); 3,88 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,20 до 4,35 (m, 4H); 4,91 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,80 (dd, J=2,0 и 15,8 Гц, 1H); 6,46 (ddd, J=4,7, 10,5 и 15,8 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,22 (m, 5 H); 7,29 (d, J=2,4 Гц, 1H); 7,79 (t, J=6,7 Гц, 1H); 8,00 (d, J=8,8 Гц, 1H); 8,36 (d, J=8,0 Гц, 1H); 8,47 (t, J=6,2 Гц, 1H). LCMS (D): ES масса/заряд=1013 [М+2Н]2+; масса/заряд=2025 [М+Н]+; Rt=2,64/2,62 мин (смесь изомеров 85/15).
Пример 24: (80S,83S)-80-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран2-ил)бензил)карбамоил)-83-изопропил-74,82,85-триоксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50, 53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75,81,84-триазанонаоктаконтан-89-овая кислота.
К раствору соединения 66 (58 мг, 28,7 мкмоль) в DCM (7 мл) добавляли глутаровый ангидрид (5,85 мг, 48,7 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH/H2O) с получением 35 мг соединения из примера 24 в виде белого лака (57%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,82 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,84 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,18 до 1,41 (m, 5 H); 1,50 до 1,75 (m, 6H); 1,80 (m,
- 124 045708
1H); 1,98 (m, 1H); 2,15 до 2,27 (m, 5 H); 2,30 (t, J=6,7 Гц, 2H); 2,69 (m, 2H); 2,98 (m, 5 H); 3,23 (s, 3H); 3,32 (скрытый m, 1h); 3,40 до 3,65 (m, 94H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,14 (m, 1H); 4,20 до 4,33 (m, 4H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=15,8 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=4,7, 10,5 и 15,8 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,16 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,24 (m, 5 H); 7,29 (d, J=2,4 Гц, 1H); 7,80 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,86 (d, J=8,8 Гц, 1H); 7,92 (d, J=8,0 Гц, 1H); 8,37 (m, 2H); 12,10 (широкий m, 1H). LCMS (D): ES масса/заряд=1069,5 [М+2Н]2+; масса/заряд=2138 [М+Н]+; Rt=2,96/2,93 мин (смесь изомеров 85/15).
Пример 25: (80S,83S)-2,5-диоксопирролидин-1 -ил-80-((4-((2R,3R)-3-((S)-1 -((3 S,10R, 16S,E)-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)-83-изопропил-74,82,85-триоксо-2,5,8,11,14,17,20,23, 26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75,81,84-триазанонаоктаконтан-89-оат.
К раствору соединения из примера 24 (35 мг, 16,4 мкмоль) в THF (3 мл) добавляли DSC (4,28 мг, 16,4 мкмоль) и DIEA (2,7 мкл, 16,4 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 20 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH) с получением 12,0 мг соединения из примера 25 в виде белого лака (33%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,82 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,84 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,15 до 1,40 (m, 5H); 1,50 до 1,71 (m, 4H); 1,75 до 1,86 (m, 3H); 1,97 (m, 1H); 2,18 до 2,32 (m, 5H); 2,67 (m, 4H); 2,80 (s, 4H); 2,98 (m, 5 H); 3,22 (s, 3H); 3,32 (скрытый m, 1H); 3,40 до 3,77 (m, 94H); 3,80 (s, 3H); 3,88 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,16 (m, 1H); 4,20 до 4,32 (m, 4H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,78 (dd, J=2,0 и 15,8 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=4,7, 10,5 и 15,8 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,16 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,24 (m, 5 H); 7,29 (d, J=2,4 Гц, 1H); 7,79 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,90 (d, J=8,8 Гц, 1H); 7,94 (d, J=8,0 Гц, 1H); 8,36 (m, 2H). LCMS (D): ES масса/заряд=746; масса/заряд=2235 [М+Н]+; Rt=3,08/3,06 мин (смесь изомеров 89/11).
Пример 26: hu2H11_R35-74-Ex25.
Общий способ, описанный ранее, использовали для получения соединения из примера 26. 55,8 мг hu2H11_R35-74 вводили в реакцию с 261,6 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 25 в DMA (7 экв.) в течение 3 ч 15 мин, затем добавляли 131 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 25 в DMA (3,5 экв.) в течение 5 ч 30 мин. После хранения в течение ночи при 4°С, очистки на Superdex 200 pg в буфере В с рН 6,5+20% NMP, концентрирования на Amicon Ultra-15, замены буфера на Sephadex G25 в буфере В с рН 6,5+5% NMP, концентрирования на Amicon Ultra-15 и фильтрации на PVDF-фильтре с размером пор 0,22 мкм получали 33,35 мг соединения из примера 26 в виде бесцветного прозрачного раствора при концентрации 2,9 мг/мл с DAR 3,9 (HRMS), мономерной чистотой 100% и общим выходом 60%.
SEC-HRMS: масса/заряд=151487 (D1); масса/заряд=153615 (D2); масса/заряд=155740 (D3); масса/заряд=157863 (D4); масса/заряд=159981 (D5); масса/заряд=162112 (D6); масса/заряд= 164240 (D7); масса/заряд=166356 (D8).
- 125 045708
Синтез примеров 27-29: глутарил-Val-PEG24Lys-азакриптобензиламин, NHS-сложный эфир глутарил-Val-PEG24Lys-азакриптобензиламина и соответствующий ADC
Соединение 67: N-((S)-5-((S)-2-амино-3-метилбутанамидо)-6-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S, 10R, 16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-6,6,7-триметил-3-неопентил-2,5,9,12-тетраоксо-1-окса-4,8,11-триазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)амино)-6-оксогексил)-2,5,8,11,14,17,20,23,26, 29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаоксатетрагептаконтан-74-амид.
К раствору (3 S,7S,10R, 16S,E)-16-((S)-1 -((2R,3R)-3-(4-(аминометил)фенил)оксиран-2-ил)этил)-10-(3хлор-4-метоксибензил)-6,6,7-триметил-3-неопентил-1-окса-4,8,11-триазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12тетраона (который может быть синтезирован как описано в РСТ/ЕР2016/076603, исходя из метил-(3S)-3амино-2,2-диметилбутаноата, [MFCD09256689], 75 мг, 103,4 мкмоль) в DMF (5 мл) добавляли раствор соединения 65 (211 мг, 134,7 мкмоль) в DMF (5 мл), HOBt (21 мг, 155,4 мкмоль) и EDC (20 мкл, 123,0 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 4 ч при к.т. перед добавлением пиперидина (95 мкл, 961,9 мкмоль); перемешивание проводили в течение 2 ч при к.т., затем реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 25 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 132 мг соединения 67 в виде бесцветного масла (62%).
- 126 045708 1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,76 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,87 (m, 15 H); 1,00 (s, 3H); 1,03 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,15 до 1,40 (m, 5 H); 1,18 (s, 3H); 1,46 до 2,00 (m, 8H); 2,25 (m, 1H); 2,28 (t, J=6,7 Гц, 2H); 2,60 (m, 1H); 2,69 (dd, J=11,2 и 14,5 Гц, 1H); 2,91 (dd, J=2,3 и 7;5 Гц, 1H); 2,92 до 3,04 (m, 4H); 3,23 (s, 3H); 3,34 до 3,77 (m, 95 H); 3,80 (s, 3H); 3,88 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,08 (m, 2H); 4,20 до 4,34 (m, 3H); 5,04 (m, 1H); 5,78 (dd, J=2,0 и 15,8 Гц, 1H); 6,44 (ddd, J=4,7, 10,5 и 15,8 Гц, 1H); 7,02 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,17 до 7,25 (m, 5 H); 7,32 (d, J=2,4 Гц, 1H); 7,78 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,85 (d, J=8,0 Гц, 1H); 7,92 (d, J=7,0 Гц, 1H); 8,00 (d, J=8,8 Гц, 1H); 8,40 (t, J=7,5 Гц, 1H); 8,46 (t, J=6,0 Гц, 1H). LCMS (D): ES масса/заряд=2051 [М+Н]+; Rt=2,57/2,55 мин (смесь изомеров 95/5).
Пример 27: (80S,83S)-80-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)6,6,7-триметил-3 -неопентил-2,5,9,12-тетраоксо-1-окса-4,8,11 -триазациклогексадец- 13-ен-16-ил)этил)окси ран-2-ил)бензил)карбамоил)-83-изопропил-74,82,85-триоксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47, 50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75,81,84-триазанонаоктаконтан-89-овая кислота.
К раствору соединения 67 (132 мг, 64,3 мкмоль) в DCM (10 мл) добавляли глутаровый ангидрид (9 мг, 78,9 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью двух последовательных операций флеш-хроматографии на 4 г и 12 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH/H2O) с получением 71 мг соединения из примера 27 в виде белого лака (51%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,80 до 0,90 (m, 18 H); 1,00 (s, 3H); 1,03 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,15 до 1,42 (m, 5 H); 1,18 (s, 3H); 1,51 до 1,74 (m, 4H); 1,80 (m, 1H); 1,98 (m, 2H); 2,15 до 2,32 (m, 7H); 2,60 (m, 1H); 2,70 (dd, J=11,2 и 14,5 Гц, 1H); 2,91 (dd, J=2,3 и 7,5 Гц, 1H); 2,95 (dd, J=3,4 и 14,5 Гц, 1H); 3,00 (m, 2H); 3,24 (s, 3H); 3,40 до 3,67 (m, 95 H); 3,80 (s, 3H); 3,90 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,00 до 4,34 (m, 6H); 5,04 (m, 1H); 5,80 (dd, J=2,0 и 15,8 Гц, 1H); 6,44 (ddd, J=4,7, 10,5 и 15,8 Гц, 1H); 7,02 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,17 до 7,25 (m, 5 H); 7,32 (d, J=2,4 Гц, 1H); 7,80 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,86 (d, J=8,6 Гц, 2H); 7,92 (t, J=6,5 Гц, 2H); 8,37 (t, J=6,0 Гц, 1H); 8,41 (t, J=7,5 Гц, 1H); 12,00 (m, 1H). LCMS (D): ES масса/заряд=722; масса/заряд=2165 [М+Н]+; Rt=2,95/2,92 мин (смесь изомеров 95/5).
Пример 28: 2,5-диоксопирролидин-1-ил-(80S,83S)-80-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S, 10R, 16S,E)-10(3-хлор-4-метоксибензил)-6,6,7-триметил-3-неопентил-2,5,9,12-тетраоксо-1-окса-4,8,11-триазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)-83-изопропил-74,82,85-триоксо-2,5,8,11,14,17, 20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75,81,84-триазанонаоктаконтан-89оат.
К раствору соединения из примера 27 (33 мг, 15,2 мкмоль) в THF (3 мл) добавляли DSC (4 мг, 15,6 мкмоль) и DIEA (2,55 мкл, 15,4 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 20 ч при к.т., затем добавляли DSC (1 мг, 3,9 мкмоль) и DIEA (1 мкл, 6,0 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH/MeCN) с получением 11 мг соединения из примера 28 в виде белого лака (32%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,80 до 0,90 (m, 18 H); 1,00 (s, 3H); 1,03 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,12 до 1,42 (m, 5H); 1,19 (s, 3H); 1,55 (m, 1H); 1,65 (m, 1H); 1,82 (m, 3H); 1,96 (m, 2H); 2,28 (m, 3H); 2,67 (m, 4H); 2,80 (s, 4H); 2,91 (dd, J=2,3 и Гц, 1H); 2,95 (dd, J=3,4 и 14,5 Гц, 1H); 3,00 (m, 2H); 3,23 (s, 3H); 3,35 до 3,67 (m, 95 H); 3,80 (s, 3H); 3,90 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,03 до 4,32 (m, 6H); 5,03 (m, 1H); 5,90 (dd, J=2,0 и 15,8 Гц, 1H); 6,44 (ddd, J=4,7, 10,5 и 15,8 Гц, 1H); 7,03 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,17 до 7,25 (m, 5 H); 7,32 (d, J=2,4 Гц, 1H); 7,79 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,85 (d, J=8,7 Гц, 1H); 7,90 (d, J=8,7 Гц, 1H); 7,93 (m, 2H); 8,35 (t, J=6,5 Гц, 1H); 8,40 (d, J=7,1 Гц, 1H).
Пример 29: hu2H11_R35-74-Ex28.
Общий способ, описанный ранее, использовали для получения соединения из примера 29. 44,64 мг hu2H11_R35-74 вводили в реакцию с 210 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 28 в DMA (7 экв.) в течение 2 ч, затем последовательно добавляли 210 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 28 в DMA (7 экв.) в течение 2 ч 30 мин и 90 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 28 в DMA (3 экв.) в течение 2 ч. После хранения в течение ночи при 4°С, очистки на Superdex 200 pg в буфере В с рН 6,5+20% NMP, концентрирования на Amicon Ultra-15, замены буфера на Sephadex G25 в буфере В с рН 6,5+5% NMP и фильтрации на PVDF-фильтре с размером пор 0,22 мкм, получали 30,1 мг соединения из примера 29 в виде бесцветного прозрачного раствора при концентрации 2,51 мг/мл с DAR 4 (HRMS), мономерной чистотой 98,4% и общим выходом 67%.
SEC-HRMS: масса/заряд=151502 (D1); масса/заряд=153649 (D2); масса/заряд=155798 (D3); масса/заряд=157939 (D4); масса/заряд=160100 (D5); масса/заряд=162262 (D6).
- 127 045708
Синтез примеров 30-32: глутарил-Va1-глюкуроновый Lys-С52-бензиламин, NHS-сложный эфир глутарил-Va1-глюкуроновый Lys-C52-бензиламина и соответствующий ADC
Соединение 68: (S)-2-((S)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-метилбутанамидо)-6((2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-метокситетрагидро-2Н-пиран-2-карбоксамидо)гексановая кислота.
В круглодонную колбу при перемешивании с помощью магнитной мешалки вводили натриевую
- 128 045708 соль 1-О-метил-в-О-глюкуроновой кислоты (номер CAS [58189-74-5], 100 мг, 434 мкмоль) с последующим введением воды (5 мл) и QS Amberlite (номер CAS [9037-24-5]) до достижения рН2, среду фильтровали.
В круглодонной колбе при перемешивании с помощью магнитной мешалки NaHCO3 (43 мг, 511 мкмоль) в воде (5 мл) добавляли к раствору соединения 64 (50 мг, 99 мкмоль) в THF (4 мл); реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 5 мин. Затем раствор глюкуроновой кислоты, описанный выше, добавляли к реакционной среде с последующим добавлением 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2ил)-4-метилморфолиний хлорида N-гидрата (номер CAS [3945-69-5], 67 мг, 242 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, затем концентрировали in vacuo. Неочищенную среду очищали с помощью флеш-хроматографии на 5 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/МеОН/H2O) с получением 23 мг соединения 68 (35%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,84 (d, J=6,7 Гц, 3H); 0,86 (d, J=6,7 Гц, 3H); 1,13 до 1,42 (m, 4H); 1,52 до 1,72 (m, 2H); 2,05 (m, 1H); 2,96 до 3,08 (m, 2H); 3,14 (m, 1H); 3,30 (частично скрытый m, 1H); 3,38 (s, 3H); 3,53 (m, 1H); 3,78 до 3,97 (m, 2H); 4,09 (dd, J=2,3 и 7,8 Гц, 1H); 4,19 до 4,34 (m, 3H); 5,01 до 5,08 (широкий m, 1H); 5,13 (широкий m, 1H); 5,27 (m, 1H); 7,33 (m, 2H); 7,42 (t, J=7,6 Гц, 2H); 7,52 до 7,62 (широкий m, 2H); 7,75 (m, 2H); 7,89 (d, J=7,6 Гц, 2H); 7,93 (широкий m, 1H); 12,00 (m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=656 [М-Н]-; масса/заряд=658 [М+Н]+; Rt=1,05 мин.
Соединение 69: (2S,3S,4S,5R,6R)-N-((S)-5-((S)-2-амино-3-метилбутанамидо)-6-((4-((2R,3R)-3-((S)-1((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)амино)-6-оксогексил)-3,4,5-тригидрокси-6метокситетрагидро-2Н-пиран-2-карбоксамид.
К раствору (E)-(3S,10R,16S)-16-{(S)-1-[(2R,3R)-3-(4-аминометилфенил)оксиранил]-этил}-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраона (синтез которого описан в WO2011001052, соединение 77, 90 мг, 129 мкмоль) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли раствор соединения 68 (135 мг, 205 мкмоль) в DMF (5 мл) с последующим добавлением HOBt (30 мг, 222 мкмоль) и EDC (36 мкл, 203 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 1 ч. В это же время добавляли DMA (1 мл) и перемешивание поддерживали в течение ночи. Затем добавляли EDC (20 мкл) и реакционную среду перемешивали в течение еще 2 ч. Затем к среде добавляли пиперидин (12,9 мкл, 129 мкмоль). После 1 ч 30 мин. перемешивания реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью 3 последовательных операций флешхроматографии на силикагеле (изократическое элюирование DCM/МеОН/H2O 40:5:0,5 об./об./об. и DCM/MeOH/NH4OH 12:3:0,5 об./об./об.) с получением 47 мг соединения 69 (33%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,77 до 0,81 (m, 9H); 0,88 (d, J=6,6 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=6,6 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,20 до 1,71 (m, 9H); 1,80 (m, 1H); 1,93 (m, 1H); 2,28 (m, 1H); 2,62 до 2,73 (m, 2H); 2,93 до 3,14 (m, 9H); 3,28 до 3,36 (частично скрытый m, 2H); 3,39 (s, 3H); 3,53 (d, J=9,5 Гц, 1H); 3,81 (s, 3H); 3,87 (d, J=1,7 Гц, 1H); 4,09 (m, 1H); 4,19 до 4,36 (m, 4H); 4,91 (m, 1H); 5,00 до 5,15 (m, 4H); 5,79 (d, J=15,9 Гц, 1H); 6,48 (m, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=2,1 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,25 (m, 5 H); 7,28 (d, J=2,1 Гц, 1H); 7,92 (широкий t, J=5,9 Гц, 1H); 8,02 (широкий m, 1H); 8,35 (d, J=7,8 Гц, 1H); 8,46 (широкий t, J=6,2 Гц, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=558 [М+2Н]2+; масса/заряд=1113 [М-Н]-; масса/заряд=1115 [М+Н]+; масса/заряд=1159 [М-Н+НСО2Н]-; Rt=0,9 мин.
Пример 30: 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран2-ил)бензил)амино)-1-оксо-6-((2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-метокситетрагидро-2Н-пиран-2-карбоксамидо)гексан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-5-оксопентановая кислота.
К соединению 69 (47 мг, 42,1 мкмоль) добавляли DMF (4 мл) и при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли глутаровый ангидрид (8,5 мг, 74,5 мкмоль); реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 2 ч. В это же время неочищенную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью 2 последовательных операций флеш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование DCM/MeOH/H2O и DCMMeOH/NH4OH) с получением 17 мг соединения из примера 30 (33%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,81 (разделенный d, J=6,4 Гц, 6H); 0,84 (d, J=6,6 Гц, 3H); 0,86 (d, J=6,6 Гц, 3H); 0,98 (s, 3H); 1,04 (d, J=6,6 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,17 до 2,32 (широкий m, 18 H); 2,66 до 2,74 (m, 2H); 2,91 до 3,03 (m, 5 H); 3,10 (широкий m, 1H); 3,18 (t, J=8,8 Гц, 1H); 3,28 до 3,36 (частично скрытый m, 2H); 3,37 (s, 3H); 3,60 (m, 1H); 3,81 (s, 3H); 3,87 (d, J=1,6 Гц, 1H); 4,07 (m, 2H); 4,14 до 4,26 (m, 3H); 4,31 (m, 1H); 4,92 (m, 1H); 5,06 до 5,13 (m, 2H); 5,35 (m, 2H); 5,80 (d, J=15,3 Гц, 1H); 6,45 (ddd, J=3,6, 11,1 и 15,3 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,5 Гц, 1H); 7,18 (dd, J=2,1 и 8,5 Гц, 1H); 7,22 (d, J=8,4 Гц, 2H); 7,25 (d, J=8,4 Гц, 2H); 7,29 (d, J=2,1 Гц, 1H); 7,31 (m, 1H); 7,77 до 8,81 (m, 5 H). LCMS (A): ES масса/заряд=1227 [М-Н]-; масса/заряд=1229 [М+Н]+; масса/заряд=615; Rt=1,16 мин.
- 129 045708
Пример 31: 2,5-диоксопирролидин-1-ил-5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1 -((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлоp-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец- 13-ен-16uл)этuл)оксupан-2-uл)бензuл)амuно)-1-оксо-6-((2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-тpuгuдpокси-6-метокситетpагuдpо-2Н-пиран-2-карбоксамидо)гексан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-5-оксопентаноат.
К соединению из примера 30 (14 мг, 11,4 мкмоль) при перемешивании с помощью магнитной мешалки добавляли DMF (3 мл), DSC (4,2 мг, 15,6 мкмоль) и DIEA (6 мкл, 34,5 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 4 ч. В это же время среду разбавляли с помощью MeTHF (10 мл) и промывали с помощью H2O (5 мл). Водную фазу экстрагировали с помощью MeTHF (10 мл), объединенные органические фазы высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH) с получением 3,5 мг соединения из примера 31 (23%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J=6,6 Гц, 6H); 0,82 (d, J=7,1 Гц, 3H); 0,84 (d, J=7,1 Гц, 3H); 0,99 (s, 3H); 1,04 (d, J=6,6 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,17 до 1,70 (m, 9H); 1,77 до 1,87 (m, 3H); 1,98 (m, 1H); 2,23 до 2,32 (m, 3H); 2,65 до 2,70 (m, 4H); 2,81 (s, 4H); 2,93 до 3,07 (m, 6H); 3,15 (m, 1H); 3,28 до 3,38 (частично скрытый m, 2H); 3,40 (s, 3h); 3,53 (d, J=9,6 Гц, 1H); 3,81 (s, 3H); 3,87 (d, J=1,4 Гц, 1H); 4,09 (d, J=7,7 Гц, 1H); 4,17 (dd, J=6,9 и 8,2 Гц, 1H); 4,20 до 4,33 (m, 4H); 4,90 (dd, J=3,4 и 9,5 Гц, 1H); 5,04 (m, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,14 (d, J=5,2 Гц, 1H); 5,79 (dd, J=0,8 и 15,3 Гц, 1H); 6,47 (m, 1H); 7,05 (d, J=8,8 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=1,6 и 8,8 Гц, 1H); 7,20 до 7,25 (m, 5 H); 7,28 (d, J=1,6 Гц, 1H); 7,86 до 7,99 (m, 3H); 8,37 (m, 2H). LCMS (A): ES масса/заряд=1370 [М-Н+НСО2Н]-; ES масса/заряд=1326 [М+Н]+; масса/заряд=663,5; Rt =1,21 мин.
Пример 32: hu2H11_R35-74-Ex31.
Общий способ, описанный ранее, использовали для получения соединения из примера 32. 27,9 мг hu2H11_R35-74 вводили в реакцию с 107 мкл 10,5 мМ раствора соединения из примера 31 в DMA (6 экв.) в течение 2 ч 30 мин, затем добавляли 107 мкл 10,5 мМ раствора соединения из примера 31 в DMA (6 экв.) в течение 4 ч 30 мин. После очистки на Superdex 200 pg в буфере В с рН 6,5+10% NMP, концентрирования на Amicon Ultra-15, разбавления в буфере В с рН 6,5 до конечной концентрации NMP 5% и фильтрации на PVDF-фильтре с размером пор 0,22 мкм получали 16,7 мг соединения из примера 32 в виде бесцветного прозрачного раствора при концентрации 2,23 мг/мл с DAR 3 (HRMS), мономерной чистотой 100% и общим выходом 60%.
SEC-HRMS: масса/заряд=149407 (неконъюгированное mAb); масса/заряд=150619 (D1); масса/заряд=151831 (D2); масса/заряд=153044 (D3); масса/заряд=154256 (D4); масса/заряд=155468 (D5); масса/заряд=156685 (D6); масса/заряд=157899 (D7); масса/заряд=159014 (D8).
- 130 045708
Синтез примеров 33-35: глутарил-Val-сульфо-PEG4Lys-С52-бензиламин, NHS-сложный эфир глутарил-Val-сульфо-PEG4Lys-С52-бензиламина и соответствующий ADC
- 131 045708
Соединение 70: ди-трет-бутил-4,7,10,13-тетраоксагексадекан-1,16-диоат.
К раствору триэтиленгликоля (5 мл, 37,5 ммоль) в THF (15 мл) добавляли натрий (18 мг, 783,0 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., затем добавляли по каплям в течение 5 мин. трет-бутилакрилат (14 мл, 95,58 ммоль).
Реакционную среду перемешивали в течение 20 ч при к.т., затем гасили с помощью солевого раствора (300 мл) и экстрагировали дважды с помощью AtOAc (300 мл). Объединенные органические фазы высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флешхроматографии на 200 г силикагеля (градиентное элюирование гептан/EtOAc) с получением 8,05 г соединения 70 в виде бесцветного масла (53%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 1,40 (s, 18 H); 2,40 (t, J=6,5 Гц, 4H); 3,48 (m, 12H); 3,58 (t, J=6,5 Гц, 4H). LCMS (A): ES масса/заряд=407 [М+Н]+; масса/заряд=429 [M+Na]+; Rt=1,32 мин.
Соединение 71: 4,7,10,13-тетраоксагексадекан-1,16-диовая кислота.
К соединению 70 (8,05 г, 19,8 ммоль) добавляли муравьиную кислоту (40 мл, 1,04 моль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 дня при к.т., концентрировали in vacuo и выпаривали совместно с AtOAc (20 мл) с получением 5,9 г соединения 71 в виде бесцветного масла (колич.).
1H ЯМР (300 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 2,44 (t, J=6,5 Гц, 4H); 3,48 (s, 8H); 3,50 (s, 4H); 3,59 (d, J=6,5 Гц, 4 H); 12,25 (широкий m, 2H).
Соединение 72: 3-оксо-1-фенил-2,6,9,12,15-пентаоксаоктадекан-18-овая кислота.
К раствору соединения 71 (5,9 г, 20,05 ммоль) в DMF (50 мл) добавляли DIEA (3,6 мл, 20,67 ммоль) и добавляли по каплям в течение 10 мин. раствор бензилбромида (2,43 мл, 20,05 ммоль) в DMF (50 мл). Реакционную среду перемешивали в течение 20 ч при к.т., гасили с помощью 1н. HCl (500 мл) и экстра
- 132 045708 гировали дважды с помощью EtOAc (200 мл). Объединенные органические фазы высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью двух последовательных операций флеш-хроматографии на 400 г и 100 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 2,7 г соединения 72 в виде бледно-зеленого масла (35%).
1Н ЯМР (300 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 2,42 (m, 2H); 2,60 (t, J=6,5 Гц, 2H); 3,47 (s, 6H); 3,49 (s, 6H); 3,59 (m, 2H); 3,66 (d, J=6,5 Гц, 2H); 5,10 (s, 2H); 7,29 до 7,41 (m, 5 H).
Соединение 73: 2-аминоэтансульфонат натрия.
К раствору таурина (2 г, 15,98 ммоль) в H2O (30 мл) добавляли гидрокарбонат натрия (1,34 г, 15,98 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., затем концентрировали in vacuo. Неочищенный продукт растворяли в H2O (100 мл) и лиофилизировали с получением 2,5 г соединения 73 в виде белого порошка (колич.).
ИК-спектр в случае таблетки с KBr; основные полосы поглощения в обратных сантиметрах: 1458; 1344; 1212; 1184; 1046; 1037; 742; 737; 598; 576; 533 и 523.
Соединение 74: 3,18-диоксо-1-фенил-2,6,9,12,15-пентаокса-19-азагеникозан-21-сульфонат натрия
К раствору соединения 72 (1 г, 2,69 ммоль) в DMF (40 мл) добавляли NHS (367 мг, 3,13 ммоль) и EDC (565 мкл, 3,12 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 20 ч при к.т., затем добавляли раствор соединения 73 (1,9 г, 12,91 ммоль) в H2O (20 мл) и бикарбонат натрия (219 мг, 2,61 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., затем подкисляли до рН 3 с помощью Amberlite IR120 (H) (номер CAS [78922-04-0], фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флешхроматографии на 150 г силикагеля (DCM/МеОН/H2O) с получением 824 мг соединения 74 в виде бесцветного твердого вещества 61%).
LCMS (A): ES масса/заряд=490 [М-Н]-; масса/заряд=492 [М+Н]+; tR=1,1 мин.
Соединение 75: 1-карбокси-15-оксо-3,6,9,12-тетраокса-16-азаоктадекан-18-сульфонат натрия.
Раствор соединения 74 (820 мг, 1,60 ммоль) в МеОН/Н2О 8:2 (30 мл) фильтровали через 0,22 мкм и подвергали гидрогенолизу на картридже 10% Pd/C с применением системы H-cube при 20°С. Реакционную среду концентрировали in vacuo с получением 530 мг соединения 75 в виде желтой камеди (78%).
1Н ЯМР (300 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 2,27 (t, J=6,6 Гц, 2H); 2,40 (t, J=6,6 Гц, 2H); 2,52 (частично скрытый m, 2H); 3,28 (частично скрытый m, 2H); 3,49 (m, 12H); 3,59 (m, 4H); 7,72 (широкий t, J=6,4 Гц, 1H); 12,08 (широкий m, 1H).
Соединение 76: (5S,8 S)-8-карбокси-1 -(9Н-флуорен-9-ил)-5-изопропил-3,6,14,29-тетраоксо2,17,20,23,26-пентаокса-4,7,13,30-тетраазадотриаконтан-32-сульфонат натрия.
К раствору соединения 75 (300 мг, 708,5 мкмоль) в DMF (15 мл) добавляли NHS (98 мг, 851,5 мкмоль) и EDC (150 мкл, 855,1 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 20 ч при к.т., затем добавляли раствор соединения 64 (416 мг, 825,4 мкмоль) в DMF (15 мл) и раствор бикарбоната натрия (180 мг, 2,13 ммоль) в H2O (10 мл). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т., подкисляли до рН 3 с помощью Amberlit IR-120 (H) (номер CAS [78922-04-0]), фильтровали, промывали с помощью DMF (5 мл), концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 100 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH/уксусная кислота) с получением 447 мг бесцветного лака. Данный лак растворяли в THF/H2O 2:1 (120 мл), подкисляли до рН 3,3 с помощью 0,1н. HCl (приблизительно 4 мл) и концентрировали in vacuo с получением 354 мг соединения 76 в виде белого полупрозрачного твердого вещества (57%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,86 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,89 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,20 до 1,41 (m, 4H); 1,50 до 1,74 (m, 2H); 1,98 (m, 1H); 2,26 (t, J=6,8 Гц, 2H); 2,28 (t, J=6,8 Гц, 2H); 2,52 (скрытый m, 2H); 3,00 (m, 2H); 3,28 (частично скрытый m, 2H); 3,45 (m, 12H); 3,58 (t, J=6,8 Гц, 4H); 3,91 (dd, J=7,0 и 9,2 Гц, 1H); 4,14 (m, 1H); 4,19 до 4,31 (m, 3H); 7,32 (m, 2H); 7,37 (d, J=9,2 Гц, 1H); 7,41 (dt, J=1,0 и 7,8 Гц, 2H); 7,75 (m, 3H); 7,80 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,89 (d, J=7,8 Гц, 2H); 8,07 (d, J=8,0 Гц, 1H); 12,49 (m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=849 [М-Н]-; масса/заряд=851 [М+Н]+; Rt=1,44 мин.
Соединение 77: (25S,28S)-28-амино-25-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)-29-метил-4,19,27-триоксо-7,10,13,16-тетраокса-3,20,26-триазатриаконтан-1-сульфонат натрия.
К раствору (E)-(3S,10R,16S)-16-{(S)-1-[(2R,3R)-3-(4-аминометилфенил)оксиранил]-этил}-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраона (синтез которого описан в WO2011001052, соединение 77, 106 мг, 151,8 мкмоль) в DMF (5 мл) добавляли раствор соединения 76 (225 мг, 257,7 мкмоль) в DMF (5 мл), HOBt (30 мг, 213,1 мкмоль) и EDC (40 мкл, 226,0 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., затем добавляли пиперидин (134 мкл, 1,36 ммоль) и перемешивание проводили в течение 2 ч. Реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью двух последовательных операций флеш-хроматографии на 50 г и 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH/H2O) с получением 73 мг соединения 77 в виде белого твердого вещества (36%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,91 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,93 (d, J=7,0 Гц,
- 133 045708
3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,18 до 1,45 (m, 5 H); 1,51 до 1,72 (m, 4H); 1,80 (m, 1H); 2,05 (m, 1H); 2,23 до 2,35 (m, 5 H); 2,56 (m, 2H); 2,68 (m, 2H); 2,95 до 3,04 (m, 5 H); 3,32 (m, 3H); 3,48 (m, 12H); 3,57 (t, J=6,7 Гц, 2H); 3,59 (t, J=6,7 Гц, 2H); 3,66 (d, J=6,0 Гц, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,3 Гц, 1H); 4,20 до 4,36 (m, 4H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 5,12 (m, 1H); 5,80 (dd, J=2,0 и 15,2 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=3,8, 11,3 и 15,2 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,16 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,24 (m, 5 H); 7,29 (d, J=2,4 Гц, 1H); 7,76 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,86 (t, J=8,0 Гц, 1H); 7,93 (широкий m, 3H); 8,38 (d, J=8,0 Гц, 1H); 8,49 (d, J=8,0 Гц, 1H); 8,59 (t, J=6,0 Гц, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=655 [М+2Н]2+; масса/заряд=1306 [М-Н]-; масса/заряд=1308 [М+Н]+; Rt=1,07 мин.
Пример 33: (25S,28S)-33-карбокси-25-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)-28-изопропил-4,19,27,30-тетраоксо-7,10,13,16-тетраокса3,20,26,29-тетраазатритриаконтан-1-сульфонат натрия.
К раствору соединения 77 (73 мг, 54,9 мкмоль) в DMF добавляли глутаровый ангидрид (11 мг, 96,4 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 20 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (DCM/МеОН/H2O) с получением 40 мг соединения из примера 33 в виде белого лака (50%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,81 (s, 9H); 1,04 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,38 (s, 9H); 1,50 (dd, J=3,0 и 14,5 Гц, 1H); 1,58 (dd, J=9,1 и 14,5 Гц, 1H); 2,38 до 2,48 (частично скрытый m, 3H); 4,04 (m, 1H); 4,19 (m, 2H); 4,30 (m, 1H); 4,49 (s, 2H); 4,91 (m, 1H); 5,80 (d, J=16,0 Гц, 1H); 6,17 (dd, J=8,4 и 16,0 Гц, 1H); 6,43 (d, J=16,0 Гц, 1H); 6,70 (m, 1H); 7,23 до 7,44 (m, 8 H); 7,68 (m, 2H); 7,79 (d, J=8,3 Гц, 1H); 7,88 (d, J=7,8 Гц, 2H). LCMS (A): ES масса/заряд=712 [М+2Н]2+; масса/заряд=1420 [М-Н]-; масса/заряд=1422 [М+Н]+; Rt=1,57 мин.
Пример 34: (25S,28S)-25-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран2-ил)бензил)карбамоил)-34-((2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси)-28-изопропил-4,19,27,30,34-пентаоксо7,10,13,16-тетраокса-3,20,26,29-тетраазатетратриаконтан-1 -сульфонат натрия.
К раствору соединения из примера 33 (3,57 мг, 2,47 мкмоль) в DMA (93 мкл) добавляли NHS (27,2 мкл, 2,72 мкмоль) и EDC (111 мкл, 2,22 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 48 ч при к.т.: LCMS-анализ указывал на наличие ожидаемого соединения из примера 34 при концентрации 95% с содержанием 5% остаточного соединения из примера 33. Данный раствор использовали, например, для конъюгации и получения соединения из примера 35.
Пример 35: hu2H11_R35-74-Ex34.
Общий способ, описанный ранее, использовали для получения соединения из примера 35. 11,16 мг hu2H11_R35-74 вводили в реакцию с 53 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 34 в DMA (7 экв.) в течение 2 ч 30 мин, затем добавляли 15 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 34 в DMA (2 экв.) в течение 2 ч 30 мин. После очистки на колонках PD-10 и Nap-10 в буфере В с рН 6,5+5% NMP получали 9,5 мг соединения из примера 34 в виде бесцветного прозрачного раствора в концентрации 1,9 мг/мл с DAR 3,8 (HRMS), мономерной чистотой 97,5% и общим выходом 82%.
SEC-HRMS: масса/заряд=149330 (неконъюгированное mAb); масса/заряд=150744 (D1); масса/заряд=152147 (D2); масса/заряд=153554 (D3); масса/заряд=154959 (D4); масса/заряд=156366 (D5); масса/заряд=157771 (D6); масса/заряд=159172 (D7); масса/заряд=160578 (D8).
Синтез примеров 36 и 37: глутарил-Val-PEG4Lys-РАВА-С52-бензиламин и NHS-сложный эфир глутарил-Val-PEG4Lys-РАВА-С52-бензиламина
0 78 0
- 134 045708
Соединение 78: (9Н-флуорен-9-ил)метил-((208,23S )-20-((4-(гидроксиметил)фенил)карбамоил)-24метил-14,22-диоксо-2,5,8,11-тетраокса-15,21-диазапентакозан-23-ил)карбамат.
К раствору соединения 61 (180 мг, 257,2 мкмоль) в MeCN (35 мл) в атмосфере Ar добавляли DIEA (130 мкл, 771,7 мкмоль), 4-аминобензиловый спирт (48 мг, 385,8 мкмоль), HOAt (41 мг, 295,8 мкмоль), HATU (147 мг, 385,8 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 17 ч при к.т., затем добавляли МеОН (30 мл) и диоксид кремния, смесь концентрировали in vacuo и очищали с помощью флешхроматографии на 30 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 94 мг соединения 78 в виде бежевого твердого вещества (46%).
1Н ЯМР (300 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,85 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,88 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,18 до 1,45 (m, 4H); 1,52 до 1,70 (m, 2H); 1,99 (m, 1H); 2,27 (m, 2H); 3,00 (m, 2H); 3,22 (s, 3H); 3,35 до 3,51 (m, 12H); 3,55 (t, J=6,8 Гц, 2H); 3,90 (dd, J=7,2 и 9,1 Гц, 1H); 4,18 до 4,56 (m, 4H); 4,42 (d, J=5,9 Гц, 2H); 5,07 (t, J=5,9 Гц, 1H); 7,22 (d, J=8,9 Гц, 2H); 7,31 (dt, J=1,8 и 7,8 Гц, 2H); 7,40 (m, 3H); 7,53 (d, J=8,9 Гц, 2H); 7,73 (m, 3H); 7,88 (d, J=7,8 Гц, 2H); 8,02 (d, J=8,2 Гц, 1H); 9,92 (s, 1H).
Соединение 79: (9Н-флуорен-9-ил)метил-((20S,23S)-24-метил-2O-((4-((((4-нитрофенокси)карбонил)окси)метил)фенил)карбамоил)-14,22-диоксо-2,5,8,11-тетраокса-15,21-диазапентакозан-23ил)карбамат.
К раствору соединения 78 (94 мг, 118,9 мкмоль) в DMF добавляли бис-(4-нитрофенил)карбонат (112 мг, 357,1 мкмоль) и DIEA (40 мкл, 237,2 мкмоль). Реакционную среду перемешивали 20 ч при к.т., концентрировали in vacuo, разбавляли с помощью DCM (10 мл) и промывали с помощью H2O (10 мл). Органическую фазу высушивали над MgSO4, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 12 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 55 мг соединения 79 в виде коричневого твердого вещества (48%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,86 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,88 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,18 до 1,45 (m, 4H); 1,55 до 1,77 (m, 2H); 1,99 (m, 1H); 2,27 (t, J=6,8 Гц, 2H); 3,00 (m, 2H); 3,21 (s, 3H); 3,40 до 3,52 (m, 12H); 3,57 (t, J=6,8 Гц, 2H); 3,91 (m, 1H); 4,20 до 4,41 (m, 4H); 5,24 (s, 2H); 7,31 (t, J=7,8 Гц, 2H); 7,35 до 7,48 (m, 5 H); 7,58 (d, J=9,2 Гц, 2H); 7,63 (d, J=8,8 Гц, 2H); 7,74 (m, 2H); 7,80 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,90 (d, J=7,8 Гц, 2H); 8,10 (d, J=8,0 Гц, 1H); 8,32 (d, J=9,2 Гц, 2H); 10,12 (s, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=956 [М+Н]+; масса/заряд=978 [M+Na]+; масса/заряд=1000 [М-Н+НСО2Н]-; Rt=1,45 мин.
Соединение 80: 4-((S)-20-((S)-2-амино-3-метилбутанамидо)-14-оксо-2,5,8,11-тетраокса-15азагеникозанамидо)бензил-4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S, 10R, 16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензилкарбамат.
К раствору (E)-(3S,10R,16S)-16-{(S)-1-[(2R,3R)-3-(4-аминометилфенил)оксиранил]-этил}-1O-(3
- 135 045708 хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12тетраона (синтез которого описан в WO2011001052, соединение 77, 19 мг, 27,2 мкмоль) в DCM (2,5 мл) добавляли раствор соединения 79 (58 мг, 60,7 мкмоль) в DCM (2,5 мл) и DIEA (15 мкл, 86,6 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 20 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 38 мг Fmoc-защищенного промежуточного соединения в виде бесцветного лака (92%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,79 (d, J=6,7 Гц, 6H); 0,86 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,88 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,03 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,20 до 1,45 (m, 5 H); 1,50 до 1,75 (m, 4H); 1,80 (m, 1H); 2,00 (m, 1H); 2,27 (m, 3H); 2,69 (m, 2H); 2,92 до 3,04 (m, 5 H); 3,21 (s, 3H); 3,32 (скрытый m, 1H); 3,35 до 3,51 (m, 12H); 3,56 (t, J=6,6 Гц, 2H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,2 Гц, 1H); 3,91 (dd, J=7,1 и 9,1 Гц, 1H); 4,15 до 4,42 (m, 7H); 4,90 (dd, J=3,7 и 9,8 Гц, 1H); 4,97 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (dd, J=2,0 и 15,2 Гц, 1H); 6,48 (ddd, J=3,8, 11,1 и 15,2 Гц, 1H); 7,04 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,34 (m, 10H); 7,41 (m, 3H); 7,58 (d, J=8,6 Гц, 2H); 7,70 до 7,80 (m, 4H); 7,89 (d, J=7,8 Гц, 2H); 8,06 (d, J=7,6 Гц, 1H); 8,35 (d, J=8,3 Гц, 1H); 10,03 (s, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=698; масса/заряд=1514 [М+Н]+; масса/заряд=1558 [М-Н+НСО2Н]-; Rt=1,56 мин.
К раствору данного промежуточного соединения (35 мг, 23,1 мкмоль) в DCM (5 мл) добавляли пиперидин (20 мкл, 201,5 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч 30 мин. при к.т., затем добавляли DMF (1 мл) и перемешивание проводили в течение 1 ч 30 мин. Затем добавляли пиперидин (2 мкл); реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 25 мг соединения 80 в виде бесцветного лака (83%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J=6,7 Гц, 6H); 0,82 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,89 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,22 до 1,48 (m, 5 H); 1,51 до 1,75 (m, 6H); 1,80 (m, 1H); 1,98 (m, 1H); 2,28 (m, 3H); 2,69 (m, 2H); 2,92 до 3,05 (m, 7H); 3,15 (m, 1H); 3,21 (s, 3H); 3,32 (скрытый m, 1H); 3,35 до 3,51 (m, 12H); 3,57 (t, J=6,7 Гц, 2H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,2 Гц, 1H); 4,19 (d, J=6,4 Гц, 2H); 4,23 (ddd, J=3,9, 8,3 и 11,8 Гц, 1H); 4,43 (m, 2H); 4,90 (dd, J=3,7 и 9,8 Гц, 1H); 4,98 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,80 (dd, J=2,0 и 15,2 Гц, 1H); 6,48 (ddd, J=3,9, 11,3 и 15,2 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,18 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,32 (m, 8H); 7,59 (d, J=8,6 Гц, 2H); 7,79 (t, J=6,0 Гц, 1H); 7,82 (t, J=6,4 Гц, 1H); 8,21 (m, 1H); 8,39 (d, J=8,3 Гц, 1H); 10,13 (s, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=646,5; масса/заряд=1292 [М+Н]+; Rt=1,05 мин.
Пример 36: (20S,23S)-20-((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран2-ил)бензил)карбамоил)окси)метил)фенил)карбамоил)-23-изопропил-14,22,25-триоксо-2,5,8,11-тетраокса-15,21,24-триазанонакозан-29-овая кислота.
К раствору соединения 80 (25 мг, 19,3 мкмоль) в DCM (5 мл) добавляли глутаровый ангидрид (4 мг, 19,3 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч 30 мин. при к.т., затем добавляли глутаровый ангидрид (4 мг, 19,3 мкмоль) и DMF (0,5 мл) и перемешивание проводили в течение 26 ч. Реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 10 мг соединения из примера 36 в виде белого лака (37%).
Пример 37: (20S,23S)-2,5-диоксопирролидин-1-ил-20-((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)-карбамоил)окси)метил)фенил)-карбамоил)-23-изопропил-14, 22,25-триоксо-2,5,8,11-тетраокса-15,21,24-триазанонакозан-29-оат
К раствору соединения из примера 36 (10 мг, 7,11 мкмоль) в THF (2 мл) добавляли DSC (2 мг, 7,65 мкмоль) и DIEA (1,2 мкл, 7,26 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 20 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью двух последовательных операций флеш-хроматографии на 0,6 г и 2 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH) с получением 3,3 мг соединения из примера 37 в виде белого лака (31%).
- 136 045708
Синтез примеров 38 и 39: глутарил-Val-PEG24Lys-РАВА-С52-бензиламин и NHS-сложный эфир глутарил-Val-PEG24Lys-РАВА-С52-бензиламuна
- 137 045708
Соединение 81: (9Н-флуорен-9-uл)метил-((80S,83S)-80-((4-(гuдроксuметuл)фенuл)карбамоuл)-84метил-74,82-диоксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса75,81-диазапентаоктаконтан-83-ил)карбамат.
К раствору соединения 65 (360 мг, 229,8 мкмоль) в MeCN (70 мл) добавляли DIEA (77 мкл, 456,6 мкмоль), 4-аминобензиловый спирт (43 мг, 342,2 мкмоль), HOAt (36 мг, 264,5 мкмоль) и HATU (109 мг, 278,1 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 25 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/МеОН/H2O) с получением 307 мг соединения 81 в виде белого твердого вещества (80%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,85 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,88 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,21 до 1,42 (m, 4H); 1,54 до 1,78 (m, 2H); 1,99 (m, 1H); 2,27 (t, J=6,8 Гц, 2H); 3,00 (m, 2H); 3,22 (s, 3H); 3,40 до 3,52 (m, 92H); 3,54 (t, J=6,8 Гц, 2H); 3,91 (dd, J=6,9 и 9,0 Гц, 1H); 4,18 до 4,32 (m, 3H); 4,39 (m, 1H); 4,42 (d, J=5,9 Гц, 2H); 5,08 (t, J=5,9 Гц, 1H); 7,22 (d, J=8,9 Гц, 2H); 7,32 (dt, J=1,2 и 7,8 Гц, 2H); 7,41 (m, 3H); 7,53 (d, J=8,9 Гц, 2H); 7,75 (m, 3H); 7,89 (d, J=7,8 Гц, 2H); 8,02 (d, J=8,2 Гц, 1H); 9,92 (s, 1H). LCMS (d): ES масса/заряд=827; масса/заряд=1671 [М+Н]+; Rt=2,94 мин.
- 138 045708
Соединение 82: (9Н-флуорен-9-ил)метил-((80S,83S)-84-метил-80-((4-((((4-нитрофенокси)карбонил)окси)метил)фенил)карбамоил)-74,82-диоксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53, 56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75,81-диазапентаоктаконтан-83-ил)карбамат.
К раствору соединения 81 (300 мг, 179,4 мкмоль) в DCM (10 мл) добавляли бис-(4нитрофенил)карбонат (450 мг, 1,48 ммоль) и DIEA (60 мкл, 361,2 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, затем добавляли бис-(4-нитрофенил)карбонат (80 мг, 263,1 мкмоль) и перемешивание проводили в течение 4 ч. В это время добавляли бис-(4-нитрофенил)карбонат (80 мг, 263,1 мкмоль) и перемешивание проводили в течение ночи. Реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 80 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/МеОН/H2O) с получением 325 мг соединения 82 в виде белого лака (98%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,86 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,89 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,20 до 1,45 (m, 4H); 1,58 до 1,76 (m, 2H); 1,99 (m, 1H); 2,27 (t, J=6,8 Гц, 2H); 3,00 (m, 2H); 3,22 (s, 3H); 3,40 до 3,70 (m, 94H); 3,91 (dd, J=7,2 и 9,1 Гц, 1H); 4,19 до 4,32 (m, 3H); 4,39 (m, 1H); 5,24 (s, 2H); 7,31 (dt, J=1,2 и 7,8 Гц, 2H); 7,40 (m, 4H); 7,57 (d, J=9,2 Гц, 2H); 7,62 (d, J=8,6 Гц, 2H); 7,73 (m, 3H); 7,89 (d, J=7,8 Гц, 2H); 8,07 (d, J=7,8 Гц, 1H); 8,31 (d, J=9,2 Гц, 2H); 10,10 (s, 1H). LCMS (d): ES масса/заряд=827; масса/заряд=1836 [М+Н]+; Rt=3,38 мин.
Соединение 83: 4-((S)-80-((S)-2-амино-3-метилбутанамидо)-74-оксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35, 38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75-азагеноктаконтанамидо)-бензил-4-((2R,3R)-3-((S)-1((3S,10R, 16S,E)-10-(3 -хлор-4-метоксибензил)-3 -изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса8,11 -диазациклогексадец-13 -ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензилкарбамат.
К раствору (E)-(3S,10R,16S)-16-{(S)-1-[(2R,3R)-3-(4-аминометилфенил)оксиранил]-этил}-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен-2,5,9,12-тетраона (синтез которого описан в WO2011001052, соединение 77, 79 мг, 113,1 мкмоль) в DCM (5 мл) добавляли раствор соединения 82 (325 мг, 177,5 мкмоль) в DCM (5 мл) и DIEA (63 мкл, 365,6 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 20 ч при к.т., затем добавляли соединение 82 (34 мг, 18,6 мкмоль) и перемешивание проводили в течение 4 ч. Реакционную среду концентрировали in vacuo и очищали с помощью двух последовательных операций флеш-хроматографии на 25 г силикагеля и 15 г диол-модифицированного силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 152 мг неочищенного продукта, который очищали с помощью хроматографии с обращенной фазой на колонке С18 10 мкм, 250x40 мм (градиентное элюирование MeCN/H2O) с получением 78 мг Fmoc-защищенного промежуточного соединения, содержащего 16% соединения 83 в виде белого порошка (29%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,85 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,88 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,20 до 1,43 (m, 5 H); 1,50 до 1,74 (m, 4H); 1,79 (m, 1H); 1,99 (m, 1H); 2,25 (m, 3H); 2,68 (m, 2H); 2,93 до 3,04 (m, 5 H); 3,22 (s, 3H); 3,32 (скрытый m, 2H); 3,40 до 3,76 (m, 94H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,0 Гц, 1H); 3,90 (dd, J=7,5 и 9,1 Гц, 1H); 4,19 (d, J=6,5 Гц, 2H); 4,20 до 4,33 (m, 4H); 4,39 (m, 1H); 4,90 (dd, J=3,9 и 9,9 Гц, 1H); 4,93 (s, 2H); 5,11 (m, 1H); 5,79 (dd, J=1,8 и 15,2 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=3,8, 11,4 и 15,2 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,36 (m, 10H); 7,41 (m, 3H); 7,48 (d, J=8,6 Гц, 2H); 7,70 до 7,80 (m, 5 H); 7,89 (d, J=7,8 Гц, 2H); 8,08 (d, J=8,0 Гц, 1H); 8,35 (d, J=8,0 Гц, 1H); 10,04 (s, 1H).
К раствору данного промежуточного соединения (75 мг, 31,3 мкмоль) в DMF (5 мл) добавляли пиперидин (25 мкл, 253,2 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч 30 мин при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/МеОН/H2O) с получением 58 мг соединения 83 в виде белого лака (85%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J=6,9 Гц, 9 H); 0,88 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,05 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,15 до 1,50 (m, 7H); 1,52 до 1,73 (m, 4H); 1,80 (m, 1H); 1,93 (m, 1H); 2,27 (m, 3H); 2,69 (m, 2H); 2,95 до 3,04 (m, 6H); 3,23 (s, 3H); 3,32 (m, 1H); 3,40 до 3,55 (m, 92H); 3,57 (t, J=6,8 Гц, 2H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,2 Гц, 1H); 4,20 (d, J=6,5 Гц, 2H); 4,24 (ddd, J=3,9, 8,2 и 12,0 Гц, 1H); 4,42 (m, 1H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 4,98 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=15,8 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=3,8, 6,0 и 11,5 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,16 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,31 (m, 8 H); 7,58 (d, J=8,6 Гц, 2H); 7,78 (m, 2H); 8,10 (d, J=8,6 Гц, 1H); 8,36 (d, J=8,1 Гц, 1H); 10,10 (s, 1H). LCMS (d): ES масса/заряд=725; масса/заряд=1087 [М+2Н]2+; Rt=1,07 мин.
Пример 38: (80S,83S)-80-((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран2-ил)бензил)карбамоил)окси)метил)фенил)карбамоил)-83-изопропил-74,82,85-триоксо-2,5,8,11,14,17,20, 23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75,81,84-триазанонаоктаконтан-89-овая кислота.
К раствору соединения 83 (58 мг, 26,7 мкмоль) в DCM (2 мл) добавляли глутаровый ангидрид (5,5 мг, 48,2 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 3 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью двух последовательных операций флеш-хроматографии на 4 г и 12 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/МеОН/H2O) с получением 37 мг соединения из примера 38 в виде белого лака (61%).
- 139 045708
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,79 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,93 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,97 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,20 до 1,45 (m, 5 H); 1,51 до 1,75 (m, 6H); 1,80 (m, 1H); 2,00 (m, 1H); 2,13 до 2,33 (m, 7H); 2,69 (m, 2H); 2,95 до 3,05 (m, 5 H); 3,23 (s, 3H); 3,32 (m, 1H); 3,40 до 3,58 (m, 94H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,2 Гц, 1H); 4,15 до 4,38 (m, 4H); 4,32 (m, 1H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 4,98 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=15,2 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=3,8, 11,4 и 15,2 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,16 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,32 (m, 8 H); 7,60 (d, J=8,6 Гц, 2H); 7,78 (t, J=6,5 Гц, 1H); 7,90 (широкий d, J=8,6 Гц, 2H); 8,20 (m, 1H); 8,38 (d, J=8,6 Гц, 2H); 10,08 (m, 1H); 12,10 (m, 1H). LCMS (d): ES масса/заряд=698; масса/заряд=2287 [M+H]+;Rt=3,13 мин.
Пример 39: (8OS,83S)-2,5-диоксопирролидин-1-ил-8O-((4-((((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-1O(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)окси)метил)фенил)карбамоил)-83-изопропил-74, 82,85-триоксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса-75,81,84триазанонаоктаконтан-89-оат.
К раствору соединения из примера 38 (29 мг, 12,7 мкмоль) в THF (3 мл) добавляли DSC (3,6 мг, 13,8 мкмоль) и DIEA (2,1 мкл, 12,9 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 20 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/iPrOH) с получением 6,9 мг соединения из примера 39 в виде бесцветного лака (23%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,79 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,93 (d, J=7,0 Гц, 3H); 0,97 (d, J=7,0 Гц, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,13 до 1,42 (m, 5H); 1,52 до 1,88 (m, 7H); 1,98 (m, 1H); 2,28 (m, 5 H); 2,53 до 2,72 (m, 4H); 2,80 (s, 4H); 2,96 до 3,05 (m, 5 H); 3,23 (s, 3H); 3,32 (m, 1H); 3,60 до 3,65 (m, 94H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d, J=2,2 Гц, 1H); 4,15 до 4,28 (m, 4H); 4,33 (m, 1H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 4,98 (s, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,79 (d, J=15,8 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=3,8, 11,4 и 15,2 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,32 (m, 8 H); 7,60 (d, J=8,6 Гц, 2H); 7,78 (m, 2H); 7,90 (d, J=8,5 Гц, 1H); 8,07 (m, 2H); 8,37 (d, J=8,5 Гц, 2H); 9,95 (s, 1H). LCMS (D): ES масса/заряд=698; масса/заряд=2384 [М+Н]+; Rt=3,19 мин.
Синтез примеров 40 и 41: DBCO-глутарил-Val-PEG24Lvs-PABA-C52-бензиламин и соответствующий ADC ________________________
Соединение 84: 5-[[3-(11,12-дидегидродибенз[b,f]азоцин-5(6H)-ил)-3-оксопропил]амино]-5оксопентановая кислота.
К раствору DBCO-амина (50 мг, 180,9 мкмоль) в DCM (2 мл) добавляли глутаровый ангидрид (21,1 мг, 180,9 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH) с получением 32,6 мг соединения 84 (45%).
1H ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 1,59 (m, 2H); 1,81 (m, 1H); 1,94 (t, J=7,4 Гц, 2H); 2,11 (t, J=7,4 Гц, 2H); 2,40 (m, 1H); 2,91 (m, 1H); 3,09 (m, 1H); 3,62 (d, J=14,2 Гц, 1H); 5,13 (d, J=14,2 Гц, 1H); 7,38 до 7,53 (m, 6H); 7,56 до 7,67 (m, 3H); 12,05 (широкий m, 1H).
Пример 40: DBCO-глугарил-Val-РЕО24Lys-РАВА-С52-бензиламин.
К раствору соединения 83 (22 мг, 10,1 мкмоль) в DCM (2 мл) добавляли соединение 84 (5,14 мг, 13,2 мкмоль), EDC (1,8 мкл, 10,1 мкмоль) и HOBt (1,4 мг, 10,1 мкмоль). Реакционную среду перемешива
- 140 045708 ли при к.т. в течение ночи, концентрировали in vacuo и очищали с помощью хроматографии с обращен ной фазой на С18-модифицированной колонке 5 мкм, 150 мм х 30 мм (градиентное элюирование MeCN/0,2 н. ацетат аммония с рН 5,6) с получением 9,2 мг соединения из примера 40 в виде белого порошка (36%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,80 до 0,90 (m, 6H); 1,00 (s, 3H); 1,05 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,20 до 1,41 (m, 5 H); 1,52 до 1,72 (m, 6H); 1,75 до 2,00 (m, 5 H); 2,09 (m, 2H); 2,27 (m, 3H); 2,40 (m, 1H); 2,68 (m, 2H); 2,88 до 3,12 (m, 7H); 3,23 (s, 3H); 3,28 до 3,58 (частично скрытый m, 95 H); 3,60 (d, J=11,0 Гц, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,88 (d, J=2,0 Гц, 1H); 4,11 до 4,28 (m, 4H); 4,33 (m, 1H); 4,90 (dd, J=3,8 и 9,8 Гц, 1H); 4,97 (s, 2H); 5,04 (d, J=11,0 Гц, 1H); 5,11 (m, 1H); 5,80 (d, J=15,2 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=3,8, 11,4 и 15,2 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,17 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,31 (m, 6H); 7,32 до 7,50 (m, 6H); 7,53 до 7,70 (m, 4H); 7,80 (m, 3H); 8,08 (d, J=8,9 Гц, 1H); 8,36 (d, J=8,4 Гц, 1H); 9,95 (s, 1H). LCMS (D): ES масса/заряд=849 [М+3Н]3+; масса/заряд=1273 [М+2Н]2+; Rt=5,29 мин.
Пример 41: hu2H11_R35-74-Ex40.
194 мг hu2H11_R35-74 в буфере А вводили в реакцию с 627 мкл раствора 2,5-диоксопирролидин-1ил-4-азидобутаноата (номер CAS [943858-70-6]) при 22,0 мМ в DMA (10 экв.) так, чтобы конечная концентрация антитела составляла 10,5 мг/мл, а процентная доля DMA в буфере А составляла 5%. После перемешивания в течение 2 ч при к.т. смесь очищали с помощью гель-фильтрации с применением матрицы Sephadex™ G25 (обессоливающая колонка Hiprep 26/10, GEHealthcare), предварительно уравновешенной в буфере А. Фракции, содержащие мономерное модифицированное антитело, объединяли и фильтровали через фильтровальный блок Steriflip® (PVDF-мембрана Durapore® 0,22 мкм, Millipore) с получением 173 мг модифицированного антитела при концентрации 5,75 мг/мл с соотношением линкера и антитела 5,2 (HRMS), мономерной чистотой 97% и общим выходом 89%.
Общий способ, описанный ранее, использовали для получения соединения из примера 41. 45 мг модифицированного hu2H11_R35-74 вводили в реакцию с 604 мкл 6,89 мМ раствора соединения из примера 40 в DMA (14 экв.) в течение 4 ч 30 мин, затем добавляли 604 мкл 10 мМ раствора соединения из примера 40 в DMA (14 экв.) и перемешивание проводили в течение ночи при к.т. После очистки на Superdex 200 pg в буфере В с рН 6,5+20% NMP, концентрирования на Amicon Ultra-15, гель-фильтрации на PD-10 в буфере В с рН 6,5+5% NMP и фильтрации на PVDF-фильтре с размером пор 0,22 мкм получали 28 мг соединения из примера 41 в виде бесцветного прозрачного раствора при концентрации 1,6 мг/мл с DAR 3,44 (HRMS), мономерной чистотой 99,6% и выходом 62%.
SEC-HRMS: масса/заряд=152041 (D1); масса/заряд=154678 (D2); масса/заряд= 157332 (D3); масса/заряд=159992 (D4); масса/заряд=162648 (D5); масса/заряд=165303 (D6); масса/заряд=168004 (D7).
Синтез примера 42: сульфо-Val-PEG4Lys-С52-бензиламин
Соединение 85: 2-(4-((3-(аллилокси)-3-оксопропил)(3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)амино)-4оксобутанамидо)этан-1-сульфонат натрия.
К раствору соединения 13 (0,958 г, 2,68 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли NHS (390,3 мг, 3,32 ммоль) и EDC (604,2 мкл, 3,4 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., затем хранили 2 дня при -20°С. После возвращения до к.т. реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., затем добавляли EDC (60 мкл, 340 мкмоль) и раствор NHS (20 мг, 170,3 мкмоль) в DMF (3 мл). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, затем добавляли раствор соединения 73 (1,96 г, 13,3 ммоль)
- 141 045708 в H2O (10 мл) и гидрокарбонат натрия (225,2 мг, 2,68 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т., разбавляли с помощью H2O (6 мл), подкисляли до рН 3 с помощью Amberlite IR-120 (H) (номер CAS [78922-04-4]), фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флешхроматографии на силикагеле (градиентное элюирование DCM/МеОН/H2O) с получением 270 мг соединения 85 в виде бесцветной пены (21%).
1Н ЯМР (400 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 50:50 смесь конформеров; 1,39 (s, 4,5 H); 1,40 (s, 4,5 H); 2,27 (t, J=7,0 Гц, 4H); 2,38 (t, J=7,0 Гц, 2H); 3,53 (m, 3H); 2,68 (t, J=7,0 Гц, 1H); 3,25 до 3,61 (m, 6H); 4,55 до 4,58 (m, 2H); 5,18 до 5,36 (m, 2H); 5,90 (m, 1H); 7,70 (t, J=6,8 Гц, 1H); 10,53 (широкий m, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=409; масса/заряд=463 [М-Н]-; масса/заряд=465 [М+Н]+; Rt=1,13 мин.
Соединение 86: 2-(4-((3-(аллилокси)-3-оксопропил)(2-карбоксиэтил)амино)-4-оксобутанамидо)этан-1-сульфонат натрия.
К раствору соединения 85 (60 мг, 123,3 мкмоль) в DCM (4 мл) добавляли TFA (100 мкл, 1,25 ммоль). Реакционную среду перемешивали в течение 2 ч при к.т., затем добавляли TFA (100 мкл, 1,25 ммоль) и перемешивание проводили в течение 2 дней при к.т. Затем добавляли TFA (50 мкл, 0,625 ммоль), реакционную среду перемешивали при к.т., концентрировали in vacuo и выпаривали совместно с толуолом (3х) с получением 60 мг соединения 86 в виде бесцветного лака (колич.).
Соединение 87: 2-(4-((3-(аллилокси)-3-оксопропил)(3-((2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси)-3оксопропил)амино)-4-оксобутанамидо)этан-1-сульфонат натрия
К раствору соединения 86 (52,94 мг, 123 мкмоль) в DCM (5 мл) добавляли EDAC (26,0 мкл, 147,6 мкмоль), NHS (14,75 мг, 123 мкмоль) и DMF (0,5 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при к.т., затем добавляли EDC (10 мкл, 45,7 мкмоль) и перемешивание проводили при к.т. в течение ночи. Реакционную среду хранили при -20°С и использовали, например, для синтеза соединения 88.
Соединение 88: (20S,2зS)-28-(2-аллилокси-2-карбоксиэтил)-20-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,
16S,E)-10-(3-хлор-4-метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен-16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)-23-изопропил-14,22,25,29,32-пентаоксо-2,5,8,11-тетраокса-15,21,24,28,33-пентаазапентатриаконтан-35-сульфонат натрия.
К раствору соединения 62 (50 мг, 43,7 мкмоль) в DCM (4 мл) в атмосфере Ar добавляли по каплям реакционную среду, содержащую соединение 87 (23,06 мг, 43,7 мкмоль). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение 15 мин, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 15 г силикагеля (градиентное элюирование DMC/MeOH/H2O) с получением 26 мг соединения 88 в виде белого лака (38%).
Пример 42: (20S,23S)-28-(2-карбоксиэтил)-20-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-хлор-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11-диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)-23-изопропил-14,22,25,29,32-пентаоксо-2,5,8,11-тетраокса15,21,24,28,33-пентаазапентатриаконтан-35-сульфонат натрия.
К раствору соединения 88 (14 мг, 9 мкмоль) в THF добавляли димедон (2,57 мг, 18,0 мкмоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (5,3 мг, 4,5 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 1 ч при к.т., затем добавляли димедон (2,57 мг, 18,0 мкмоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (5,3 мг, 4,5 мкмоль) и перемешивание проводили при к.т. в течение ночи. В это время добавляли димедон (2,57 мг, 18,0 мкмоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (5,3 мг, 4,5 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 4 ч при к.т., фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью флеш-хроматографии на 4 г силикагеля (градиентное элюирование DCM/MeOH/H2O) с получением 7 мг соединения из примера 42 в виде белого лака (51%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 50:50 смесь конформеров; 0,78 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,81 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,86 (m, 6H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,15 до 1,41 (m, 5H); 1,53 до 1,70 (m, 4H); 1,80 (m, 1H); 2,00 (m, 1H); 2,11 до 2,58 (частично скрытый m, 13 H); 2,70 (m, 2h); 2,92 до 3,05 (m, 5 H); 3,23 (s, 3h); 3,25 до 3,58 (частично скрытый m, 23 H); 3,81 (s, 3H); 3,88 (d, J=2,0 Гц, 1H); 4,10 до 4,32 (m, 5 H); 4,91 (dd, J=3,8 и 9,9 Гц, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,80 (d, J=15,2 Гц, 1H); 6,47 (ddd, J=3,8, 11,4 и 15,2 Гц, 1H); 7,06 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,18 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,20 до 7,32 (m, 6H); 7,67 до 7,93 (m, 3H); 8,18 до 8,60 (m, 4H). LCMS (E): ES масса/заряд=747,5 [М+2Н]2+; масса/заряд=1491 [М-Н]-; масса/заряд=1493 [М+Н]+; Rt=4,74 мин.
- 142 045708
Синтез примера 43: сульфо-Val-глюкоза-Gln-С52-бензиламин
пример 43
Соединение 89: (6S,9S)-14-(3-(аллилокси)-3-оксопропил)-6-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R, 16S,E)-10-(3хлор-4-метоксибензил)-3 -изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13 -ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)-9-изопропил-3,8,11,15,18-пентаоксо-1 -((2R,3 S,4S,5R,6R)-3,4,5-tpuгидрокси-6-метокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-2,7,10,14,19-пентаазагеникозан-21 -сульфонат натрия.
К раствору соединения 50 (55 мг, 49,9 мкмоль) в DMF (3 мл) добавляли раствор соединения 87 в DMF (1,66 мл при 30 мМ, 49,9 мкмоль). Реакционную среду перемешивали в течение 18 ч при к.т., фильтровали через 0,45 мкм, промывали дважды с помощью DMF (0,8 мл) и очищали с помощью хроматографии с обращенной фазой на колонке С18 5 мкм, 30x150 мм (градиентное элюирование MeCN/0,2 н. ацетат аммония с рН 5,6) с получением 19,8 мг соединения 89 в виде белого твердого вещества (26%).
1H ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): смесь конформеров 60:40; 0,78 (d, J=6,8 Гц, 6H); 0,81 (d,
J=6,8 Гц, 6H); 0,81 до 0,87 (m, 6H); 0,99 (s, 3H); 1,03 (d, J=7,1 Гц, 3H); 1,12 (s, 3H); 1,30 (m, 1H); 1,52 до
1,62 (m, 2H); 1,80 (m, 3H); 1,85 до 2,00 (m, 3H); 2,10 до 2,30 (m, 5 H); 2,35 до 2,48 (m, 2H); 2,53 (m, 6H);
2,68 (m, 2H); 2,88 до 3,15 (m, 9H); 3,28 (m, 3H); 3,38 (m, 3H); 3,40 до 3,58 (m, 5 H); 3,80 (s, 3H); 3,87 (d,
J=2,3 Гц, 1H); 4,01 (d, J=8,0 Гц, 1H); 4,10 до 4,24 (m, 6H); 4,55 (m, 1,2H); 4,57 (0,8 H); 4,91 (dd, J=3,8 и 9,9 Гц, 1H); 4,95 (d, J=5,0 Гц, 1H); 5,01 (d, J=5,0 Гц, 1H); 5,06 (d, J=5,0 Гц, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,18 до 5,35 (m, 2H); 5,80 (dd, J=2,0 и 15,2 Гц, 1H); 5,92 (m, 1H); 6,47 (ddd, J=3,8, 11,4 и 15,2 Гц, 1H); 7,06 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,18 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,23 (m, 5 H); 7,29 (d, J=2,4 Гц, 1H); 7,69 (t, J=6,8 Гц, 1H); 7,88 (t, J=6,8 Гц, 1H); 7,98 (d, J=9,0 Гц, 0,4H); 8,04 (d, J=7,0 Гц, 0,4H); 8,08 (d, J=9,0 Гц, 0,6 H); 8,14 (d, J=7,0 Гц, 0,6 H); 8,32 (t, J=7,0 Гц, 1H); 8,38 (d, J=8,0 Гц, 1H). LCMS (A): ES масса/заряд=746,5 [М+2Н]2+; масса/заряд=1490 [МН]-; масса/заряд=1492 [М+Н]+; Rt=1,4 мин.
Пример 43: (6S,9S)-14-(2-карбоксиэтил)-6-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,1OR,16S,E)-10-(3-хлор-4метоксибензил)-3-изобутил-6,6-диметил-2,5,9,12-тетраоксо-1,4-диокса-8,11 -диазациклогексадец-13-ен16-ил)этил)оксиран-2-ил)бензил)карбамоил)-9-изопропил-3,8,11,15,18-пентаоксо-1 -((2R,3S,4S,5R,6R)3,4,5-тригидрокси-6-метокситетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-2,7,10,14,19-пентаазагеникозан-21 -сульфонат натрия.
К раствору соединения 89 (19 мг, 12,6 мкмоль) в DMF (1 мл) добавляли барбитуровую кислоту (5,94 мг, 37,7 мкмоль) и раствор тетракис-(трифенилфосфин)палладия(0) (0,74 мг, 0,63 мкмоль) в DMF (0,5 мл). Реакционную среду перемешивали в течение 3 ч при к.т., затем добавляли барбитуровую кисло
- 143 045708 ту (5,94 мг, 37,7 мкмоль) и раствор тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,74 мг, 0,63 мкмоль) в DMF (0,5 мл). Реакционную среду перемешивали при к.т. в течение ночи, разбавляли с помощью DMF, фильтровали через 0,45 мкм и очищали с помощью двух последовательных операций хроматографии с обращенной фазой на колонке С18 5 мкм, 30x150 мм (градиентное элюирование MeCN/0,2н. ацетат аммония с рН 5,6) с получением 4,7 мг соединения из примера 43 в виде белого твердого вещества (25%).
1Н ЯМР (500 МГц, δ в ppm, DMSO-d6): 0,80 (m, 6H); 0,85 (m, 6H); 0,99 (s, 3H); 1,03 (d, J=7,3 Гц, 3H); 1,11 (s, 3H); 1,33 (m, 1H); 1,58 (m, 2H); 1,78 (m, 2H); 1,90 (m, 2H); 2,03 до 2,55 (частично скрытый m, 11H); 2,70 (m, 2H); 2,90 до 3,58 (частично скрытый m, 19H); 3,18 (s, 3H); 3,81 (s, 3H); 3,88 (s, 1H); 4,00 до 4,40 (m, 8 H); 4,90 (m, 1H); 4,99 (m, I H); 5,80 (d, J=15,2 Гц, 1H); 6,46 (ddd, J=3,8, 11,4 и 15,2 Гц, 1H); 7,05 (d, J=8,6 Гц, 1H); 7,18 (dd, J=2,4 и 8,6 Гц, 1H); 7,22 (m, 4H); 7,29 (d, J=2,4 Гц, 1H); 7,31 (m, 1H); 8,30 до 8,70 (m, 5H). LCMS (A): ES масса/заряд=1448 [М-Н]-; масса/заряд=1450 [М+Н]+; Rt=1,58 мин.
Для иллюстративных целей также тестировали два конъюгата, полученных из WO2011/001052, ADC1 и ADC2, изображенных ниже, и один конъюгат, описанный в РСТ/ЕР2016/076603, ADC3, изображенный ниже.
Физико-химические результаты.
Конъюгаты формулы (V) подвергали исследованиям стабильности, оценивающим агрегацию (судя по мономерной чистоте) и потерю DAR при удалении органического сорастворителя, применяемого в составе, и при условиях ускоренного стресса (нагревание в течение 10 дней при 40°С).
Стабильность в отсутствие NMP.
ADC, который хранили в 10 мМ фосфате, 140 мМ NaCl с рН 6,5, 5% NMP, фильтровали на колонке SEC для удаления NMP, составляли в 10 мМ фосфата, 70 мМ NaCl, 5% сахарозы с рН 6,5 и анализировали с помощью HRMS и SEC HPLC для определения DAR и мономерной чистоты.
- 144 045708
| Таблица I | 5% NMP | без NMP | ADAR (%) | А%мономера (%) | извлечение белка | ||
| DAR | %мономера | DAR | %мономера | ||||
| ADC1 | 4,1 | 99 | 3,25 | 88,7 | -21% | -10% | колич. |
| ADC3 | 3,5 | 99,7 | 3,5 | 99,5 | 0% | -0,2% | и. о. |
| Прим. 3 | 3,4 | 99,8 | 3,2 | 99,7 | -6% | -0,1% | 88% |
| Прим. 6 | 4,05 | 99 | 3,4 | 99 | -16% | 0% | 75% |
| Прим. 16* | 2,5 | 99,8 | 2,3 | 99,8 | -8% | 0% | 73% |
| Прим. 19 | 2,8 | 97,9 | 2,4 | 97,8 | -14% | -0,1% | 72% |
| Прим. 23* | 2,9 | 100 | 2,4 | 100 | -17% | 0% | 76% |
| Прим. 26 | 3,9 | 100 | 3,9 | 100 | 0% | 0% | и. о. |
| Прим. 29 | 4 | 98,4 | 3,9 | 100 | -2,5% | 0% | 76% |
| Прим. 32 | 2,8 | 95,1 | 2,9 | 94,1 | 0 | -11% | 82% |
* Через 10 месяцев при 4°С наблюдали значительную агрегацию для прим. 16 и прим. 23 (-22% и -19% соответственно в отношении мономерной чистоты), поэтому обе партии очищали посредством гель-фильтрации на Superdex 200 pg перед проведением исследования стабильности.
Стабильность через 10 дней при 40°С в фосфатном буфере.
ADC в 10 мМ фосфате, 70 мМ NaCl, 5% сахарозе с рН 6,5 нагревали при 40°С в течение 10 дней и анализировали с помощью HRMS и SEC HPLC для определения DAR и мономерной чистоты.
| Таблица II | в to | Через 10 дней при 40°С | ADAR (%) | А%мономера (%) | извлечение белка | ||
| DAR | %мономера | DAR | %мономера | ||||
| ADC1 | 3,25 | 88,7 | 3,0 | 85,7% | -8% | -3% | 56% |
| ADC3 | 3,5 | 99,5 | 3 | 85 | -14% | -15% | 46% |
| Прим. 3 | 3,2 | 99,7 | 2,9 | 92 | -9% | -8% | 96% |
| Прим. 6 | 3,4 | 99 | 3,3 | 97 | -3% | -2% | 91% |
| Прим. 16 | 2,3 | 99,8 | 1,8 | 93,8 | -22% | -6% | 89% |
| Прим. 19 | 2,4 | 97,8 | 1,8 | 92,9 | -25% | -5% | колич. |
| Прим. 23 | 2,4 | 100 | 2,4 | 91,6 | 0% | -8% | 91% |
| Прим. 26 | 3,9 | 100 | 3,6 | 100 | -8% | 0% | и. о. |
| Прим. 29 | 3,9 | 100 | 3,9 | 98,7 | 0% | -1% | 97% |
| Прим. 32 | 2,9 | 94,1 | 2,7 | 89,8 | -7% | -5% | 95% |
| Прим. 41 | 3,3 | 97,9 | 3,05 | 75,3 | -7,5% | -23% | колич. |
Оценка высвобождения лекарственного средства после обработки конъюгатов формулы (V) катеп сином В.
Высвобождение лекарственного средства катепсином В оценивали in vitro с помощью инкубирования ADC (1,5 мкг/мл) в присутствии катепсина В человека (Calbiochem № 219362, 40 мкг/мл) в ацетатном буфере с рН 5 при 37°С в течение 24 ч и выявления лекарственного средства с помощью UPLC-MSSIR-DAD-ELSD. Угол наклона определяли на основе кинетических показателей в течение 1 ч, период полужизни определяли на основе кинетических показателей за 24 ч.
- 145 045708
Таблица III угол наклона ti/2 (ч.)
| ADC1 | 34,3 | 2 |
| ADC2 | 14,1 | 15 |
| Прим. 16 | 12,8 | >24 |
| Прим. 19 | 22,3 | 3,5 |
| Прим. 23 | 19,3 | 6 |
| Прим. 32 | 33,5 | 2 |
Конъюгаты формулы (V) на основе криптофицина расщепляли с помощью катепсина В человека с кинетическими показателями, подобными кинетическим показателям контрольных ADC.
Фармакологические результаты.
Конъюгаты формулы (V) подвергали фармакологическим тестам для определения их противоопухолевого эффекта.
Оценка ингибирования пролиферации клеточной линии MDA-MB-231 конъюгатами формулы (V).
Клетки MDA-MB-231 в их экспоненциальной фазе роста трипсинизировали и ресуспендировали в их культуральной среде (DMEM/F12 Gibco № 21331, 10% FCS Gibco № 10500-056, 2 нМ глутамин Gibco № 25030). Суспензию клеток высевали в 96-луночные культуральные планшеты Cytostar (GE Healthcare Europe, № RPNQ0163) по всей культуральной среде, содержащей сыворотку с плотностью 5000 клеток/лунка. После инкубации в течение 4 ч в лунки добавляли последовательные разбавления ADC в концентрациях, уменьшающихся от 10-7 до 10-7 М (в трех повторностях для каждой концентрации). Клетки культивировали при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2, в присутствии ADC в течение 3 дней. На 4 день в каждую лунку добавляли 10 мкл раствора 14С-тимидина (0,1 мкКи/лунка, Perkin Elmer №NEC56825000). Включение 14С-тимидина измеряли через 96 ч после начала эксперимента с помощью счетчика радиоактивности Microbeta (Perkin Elmer). Данные выражали в виде процентной доли выживания с помощью определения соотношения уменьшенного количества, полученного для клеток, обработанных ADC, и количества, полученного для клеток контрольной лунки (обработанных только культуральной средой). В некоторых экспериментах неконъюгированное антитело добавляли в лунки при концентрации 1 мкМ в начале эксперимента и ингибирование пролиферации измеряли как описано ранее.
| Таблица IV | 1С50 (пМ), MDA-MB-231 | Коэффициент селективности | |
| только ADC | в присутствии неконъюгированного антитела | ||
| ADC1 | 42 | 4571 | 109 |
| ADC2 | 46 | 9377 | 204 |
| Прим. 3 | 19 | 5602 | 295 |
| Прим. 6 | 22 | 7417 | 337 |
| Прим. 16 | 39 | 13908 | 357 |
| Прим. 19 | 29 | 18243 | 629 |
| Прим. 23 | 37 | 9022 | 243 |
| Прим. 26 | 27 | 33689 | 1248 |
| Прим. 29 | 67 | > 100000 | > 1493 |
| Прим. 32 | 25 | 7953 | 318 |
| Прим. 35 | 25 | 11272 | 451 |
| Прим. 41 | 34 | 5043 | 148 |
Было обнаружено, что конъюгаты формулы (V) на основе криптофицина, а также ADC1 и ADC2, ингибируют пролиферацию клеточной линии MDA-MB-231 с IC50 в диапазоне от 19 пМ до 67 пМ и соотношением селективности только ADC и ADC+неконъюгированное антитело от 109 до > 1493.
Определение MTD конъюгатов формулы (V) после однократного внутривенного введения у SCID мышей.
MTD определяли как максимальную дозу, которая не вызывает потерю 15% веса тела в течение 3
- 146 045708 дней подряд для отдельной мыши или потерю 20% веса тела в течение 1 дня или смерти. Ее оценивали после однократной внутривенной (i.v.) болюсной инъекции 3 самкам SCID-мышей и в течение периода, составляющего 28 дней после обработки.
Протестированные конъюгаты формулы (V) на основе криптофицина демонстрировали MTD у SCID-мышей, находящуюся в диапазоне от 30 мг/кг до > 40 мг/кг.
Оценка противоопухолевой активности in vivo конъюгатов формулы (V) по отношению к MDAMB-231 у SCID-мышей после однократного внутривенного введения.
Противоопухолевую активность in vivo оценивали при 3 уровнях доз по отношению к поддающимся измерению ксенотрансплантатам MDA-MB-231 молочной железы, имплантированным подкожно самкам SCID-мышей. Контрольные группы оставляли необработанными. Конъюгаты вводили посредством однократной внутривенной болюсной инъекции, день обработки обозначали на каждом графике стрелкой (▼).
Для оценки противоопухолевой активности конъюгатов животных взвешивали дважды в неделю и опухоли измеряли штангенциркулем дважды в неделю. Масса тела животных включала массу опухолей. Объем опухоли рассчитывали с применением формулы: масса (мм3) = [длина (мм) х ширина (мм)2]/2. Первичными конечными точками эффективности были ΔT/ΔС, средний процент регрессии, частичная и полная регрессии (PR и CR). Изменения объема опухоли для каждой группы обработки (Т) и контрольной группы (С) рассчитывали для каждой опухоли путем вычитания объема опухоли в день первой обработки (день определения стадии) из объема опухоли в указанный день наблюдения. Среднее значение ΔΤ рассчитывали для группы обработки, а среднее значение ΔС рассчитывали для контрольной группы. Затем рассчитывали соотношение ΔΤ/ΔΟ и выражали как процентную долю: ΔT/ΔС=(дельта Т/дельта С)х100.
Процентную долю регрессии опухоли определяли как % снижения объема опухоли в группе обработки в обозначенный день наблюдения (t) по сравнению с ее объемом в первый день первой обработки (t0). В конкретный момент времени и для каждого животного рассчитывали % регрессии. Затем рассчитывали средний % регрессии для группы. % регрессии (в момент t) = ((объем t0 - объем t)/объем t0)x100. Регрессии определяли как частичную (PR), если объем опухоли уменьшался до 50% от объема опухоли в начале обработки, и как полную (CR), когда объем опухоли не мог быть измерен (0 мм3). Выживших без опухоли (TFS) определяли как животных с неопределяемыми опухолями в конце исследования (>100 дней после последней обработки).
Оценка противоопухолевой активности in vivo прим. 6 по отношению к MDA-MB-231 у SCIDмышей после однократного внутривенного введения.
- 147 045708 нию к
Оценка противоопухолевой активности in vivo прим. 16, прим. 19, прим. 23 и прим. 32 по отношению к MDA-MB-231 у SCID-мышей после однократного внутривенного введения в дозе 2,5 мг/кг.
| Таблица VII | Доза (мг/кг) | Среднее значение АТ/АС в % (D59) | Средний % регрессии | Регрессии | ||
| PR | CR | TFS | ||||
| Контроль | - | - | - | - | - | - |
| ADC2 | 2,5 | <0 | 14% | - | - | - |
| Прим. 16 | 2,5 | <0 | 92% | 6 | 3 | - |
| Прим. 19 | 2,5 | <0 | 100% | 6 | 5 | 2 |
| Прим. 23 | 2,5 | <0 | 100% | 6 | 6 | 1 |
| Прим. 32 | 2,5 | <0 | 100% | 6 | 6 | 2 |
| а противоопухолевой активности in vivo прим. 16, прим. 19, прим. 23 и прим. 32 -MB-231 у SCID-мышей после однократного внутривенного введения в дозе 1,25 | ||||||
| Таблица VIII | Доза (мг/кг) | Среднее значение АТ/АС в % (D50) | Средний % регрессии | Регрессии | ||
| PR | CR | TFS | ||||
| Контроль | - | - | - | - | - | - |
| ADC2 | 1,25 | 14 | - | - | - | - |
| Прим. 16 | 1,25 | 7 | - | - | - | - |
| Прим. 19 | 1,25 | 1 | - | 1 | 1 | - |
| Прим. 23 | 1,25 | 0 | - | 1 | - | - |
| Прим. 32 | 1,25 | 9 | - | 2 | 1 | - |
по отношеОценка противоопухолевой активности in vivo прим. 26 по отношению к MDA-MB-231 у SCID-
| мышей после однократного внутривенного введения. | |||||||
| Доза (мг/кг) | Среднее значение АТ/АС в % (D36) | Средний % регрессии | Регрессии | ||||
| Таблица IX | PR | CR | TFS | ||||
| Контроль | - | - | - | - | - | - | |
| ADC2 | 2,5 | 8 | - | 1 | - | 1 | |
| Прим. 26 | 5 | <0 | 100% | 6 | 6 | 2 | |
| 2,5 | <0 | 100% | 6 | 4 | 1 | ||
| 1,25 | 10 | - | 1 | - | - |
Оценка противоопухолевой активности in vivo прим. 29 по отношению к MDA-MB-231 у SCIDмышей после однократного внутривенного введения.
| Таблица X | Доза (мг/кг) | Среднее значение АТ/АС в % (D27) | Средний % регрессии | Регрессии | ||
| PR | CR | TFS | ||||
| Контроль | - | - | - | - | - | - |
| 4 | <0 | 100% | 6 | 6 | 6 | |
| Прим. 29 | 2 | <0 | 100% | 6 | 6 | 4 |
| 1 | 0 | — | — | — | — |
- 148 045708
Оценка противоопухолевой активности in vivo прим. 35 по отношению к MDA-MB-231 у SCIDмышей после однократного внутривенного введения.
| Таблица XI | Доза (мг/кг) | Среднее значение АТ/АС в % (D27) | Средний % регрессии | Регрессии | ||
| PR | CR | TFS | ||||
| Контроль | - | - | - | - | - | - |
| 4 | <0 | 100% | 6 | 6 | 4 | |
| Прим. 35 | 2 | <0 | 100% | 6 | 4 | 1 |
| 1 | 3 | — | — | — | — |
Оценка противоопухолевой активности in vivo прим. 41 по отношению к MDA-MB-231 v SCIDмышей после однократного внутривенного введения.
Все исследуемые ADC криптофицина по настоящему изобретению, а также ADC2 проявляли противоопухолевую активность в дозах, находящихся в диапазоне от 1 мг/кг до 5 мг/кг.
Следовательно, является очевидным, что соединения (V) по настоящему изобретению обладают противораковой активностью.
Соответственно, в других своих аспектах настоящее изобретение также относится к применению конъюгатов формулы (V) на основе криптофицина в качестве противораковых средств.
Соответственно, в других своих аспектах настоящее изобретение также относится к применению конъюгатов формулы (V) на основе криптофицина для получения лекарственного препарата для лечения рака, например, рака молочной железы.
Согласно другим своим аспектам в настоящем изобретении также предусмотрены конъюгаты формулы (V) в соответствии с настоящим изобретением для применения в лечении рака.
Согласно другим своим аспектам в настоящем изобретении также предусмотрены лекарственные препараты, которые содержат по меньшей мере один конъюгат формулы (V).
Эти лекарственные препараты используются терапевтически, особенно в лечении рака, например, рака молочной железы.
Согласно другим своим аспектам настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим в качестве активного вещества конъюгат формулы (V) в соответствии с настоящим изобретением. Эти фармацевтические композиции содержат эффективную дозу по меньшей мере одного конъюгата формулы (V) в соответствии с настоящим изобретением и также по меньшей мере одно фар мацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
Таким образом, в соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере один конъюгат формулы (V) в соответствии с настоящим изобретением, а также по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
Указанные вспомогательные вещества выбирают в соответствии с фармацевтической формой и требуемым способом введения из обычных вспомогательных веществ, которые известны специалисту в данной области.
Согласно другим своим аспектам в настоящем изобретении также предусмотрен способ лечения указанных выше патологий, таких как рак, например, рак молочной железы, который включает введение пациенту эффективной дозы конъюгата формулы (V) в соответствии с настоящим изобретением.
Claims (22)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Соединение формулы (I)RCG1-L-P(IX где RCG1 представляет собой реакционноспособную химическую группу, которая является реакционноспособной в отношении химической группы, присутствующей на антителе;Р представляет собой -ОН или активированный О, который выбирают из группы, состоящей изгде каждый Gl независимо выбирают из группы, состоящей из галогена и нитро; и М представляет собой Na+, K+ или Cs+;L представляет собой линкер формулы (II)О ; А : L2 (AA)W L1 nn где L1 представлен формулой (III)у представляет собой 0;z представляет собой 0;J1 представляет собой CA1 или N;J2 представляет собой CA1 или N;J3 представляет собой CA1 или N;J4 представляет собой CA1 или N;A1 представляет собой водород или (С1-С6)алкил;А2 представляет собой водород или (С1-С6)алкил;А3 представляет собой водород или (С1-С6)алкил;А4 представляет собой водород или (С1-С6)алкил иALK представляет собой (С1-С12)алкиленовую группу, (AA)w представляет собой последовательность w аминокислот, связанных друг с другом через пептидные связи, где аминокислоты, (AA)w, независимо выбирают из группы, состоящей из незамещенной аминокислоты, (AAns), и замещенной аминокислоты, (AA)s;w представляет собой 2;каждая (AAns) представляет собой природную или неприродную аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из аланина, γ-аминомасляной кислоты, 2-амино-2-циклогексилуксусной кислоты, 2амино-2-фенилуксусной кислоты, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цитруллина, цистеина, α,α-диметил-γ-аминомасляной кислоты, 3,3-диметил-γ-аминомасляной кислоты, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гомоцистеина, селеноцистеина, гомоселеноцистеина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, ε-ацетиллизина, метионина, орнитина, фенилаланина, пролина, серина, треонина, триптофана, тирозина и валина;каждый (AAs) независимо представлен формулой (VI) их (VI) где Т представляет собой тривалентный (С1-С8)алкил;U представляет собой -С(О)-, -C(O)NH-, -C(O)N(алкил)-, -C(O)O-, -NH-, -N(алкил)-, -NHC(O)-, -N(алкил)С(О)-, -NHC(NH)NH-, -NHC(O)NH-, -NHS(O)2-, -N(алкил)S(О)2-, -О-, -ОС(О)-, -ОС(О)О-, -ОР(О)-, -P(O)(OH)-, -P(O)(OH)O-, -OP(O)(OH)O-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NH-, -S(О)2N(алкил)- или -Se-; иА9 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, причем по меньшей мере одно метиленовое звено незави- 150 045708 симо заменено -NH-C(=O)-, -C(=O)NH-, -СН(OH)-, -CH(SO3H)-, -СН(О-алкил)- или -C(=O)-, или гетероциклоалкильной группой, содержащей от одного до трех гетероатомов, выбранных из атома азота, атома серы и атома кислорода, и от 2 до 8 атомов углерода, где гетероциклоалкильная группа замещена по меньшей мере одним заместителем, идентичным или отличающимся, выбранным из -ОН и -O-алкила, при этом следует понимать, что каждый А9, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей; иL2 представляет собой (С1-С6)алкильную группу, C(=O)-(С1-С6)алкильную группу, (С1-С6)алкилNA7-(С1-С6)алкильную группу;А7 представляет собой прямую или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную С1-С160углеводородную цепь, причем по меньшей мере одно метиленовое звено независимо заменено -NHC(=O)-, -C(=O)NH-, -CH(SO3H)-, -О- или -C(=O)-, при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей; иRCG1 выбран из следующего перечня:(i) реакционноспособная группа RaZa-C(=O), для которой Za представляет собой одинарную связь, -О- или -NH и Ra представляет собой атом водорода, (С1-С6)алкильную группу, (С3-С7)циклоалкильную группу, (С2-С6)алкенильную группу, арильную группу, содержащую от 6 до 10 атомов углерода, гетероарильную группу, содержащую от одного до пяти гетероатомов, выбранных из атома азота, атома серы и атома кислорода, и от 2 до 10 атомов углерода или (С3-С7)гетероциклоалкильную группу, содержащую от одного до трех гетероатомов, выбранных из атома азота, атома серы и атома кислорода, где арильная группа, гетероарильная группа и/или (С3-С7)гетероциклоалкильная группа необязательно замещена 1-5 атомами/группами, выбранными из атома галогена, (С1-С6)алкильной группы, (С1-С6)алкоксигруппы, гидроксильной группы, оксогруппы, нитрогруппы и цианогруппы;ф (ii) одна из следующих реакционноспособных групп: малеимидогруппа , галогенацетамидо- ^21С1, Вг или I g группа 0 , при этом R21 представляет собой атом водорода или (С1-С6)алкильную группу; Cl-; N3-; HO-; HS-; активированный дисульфид; H2N-; IICW- группа или активированная группа С=С; О-алкилгидроксиламин или субстрат реакции Пикте-Шпенглера; при условии что:(1 ) если Р представляет собой -ОН, то х представляет собой 0, у представляет собой 0 и z представляет собой 0; и (2 ) если Р представляет собой активированную группу О, то х представляет собой 1, у представляет собой 0 и z представляет собой 0;(3 ) по меньшей мере одна аминокислота (AA)W представляет собой замещенную аминокислоту (AA)s формулы (VI); и (4 ) замещенную аминокислоту (AA)s формулы (VI) не выбирают из группы, состоящей из аланина, γ-аминомасляной кислоты, 2-амино-2-циклогексилуксусной кислоты, 2-амино-2-фенилуксусной кисло ты, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цитруллина, цистеина, α,α-диметил-γ-аминомасляной кислоты, 3,3-диметил-γ-аминомасляной кислоты, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гомоцистеина, селеноцистеина, гомоселеноцистеина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, ε-ацетиллизина, метионина, орнитина, фенилаланина, пролина, серина, треонина, триптофана, тирозина и валина.
- 2. Соединение формулы (I) по п.1, где замещенные аминокислоты AAs характеризуются формулой (VI), определенной в п.1, в которойТ представляет собой 'г или группа U представляет собой -NH-C(=O)- или -C(=O)NH-;А9 представляет собой -[(СН2)2-О]Ь-СН3, где b представляет собой целое число, находящееся в диапазоне от 1 до 50.- 151 045708
- 3. Соединение формулы (I) по п.1, где последовательность (AAs)w, содержащая по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, выбрана из перечня- 152 045708
- 4. Соединение формулы (I) по п.1, где (AA)w содержит по меньшей мере одну замещенную аминокислоту AAs, и L2 представляет собой (С1-С6)алкильную группу;C(=O)-(С1-С6)алкильную группу или (С1-С6)алкил-NA7-(С1-С6)алкильную группу, в которой А7 представляет собой группу -C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H;при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей.
- 5. Соединение формулы (I) по п.1, где А7 представляет собой группу -С(=О)-[(СН2)2-О]4-СН3; группу -С(=О)-[(СН2)2-О]7-СНз; группу -С(=О)-[(СН2)2-О]24-СНз; группу -C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2SO3H; группу -C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-[(CH2)2-O-]4-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H;при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей.- 153 045708
- 6. Соединение формулы (I) по п.1, где L2 представляет собой
- 7. Соединение формулы (I) по п.1, где L2 содержит А7, представляющую собой группу С(=О)-[(СН2)2-О]4-СНз; группу С(=О)-[(СН2)2-О]7-СНз; группу С(=О)-[(СН2)2-О]24-СНз; группу C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-(CH2)2-SO3H; группу C(=O)-(CH2)2-C(=O)-NH-[(CH2)2-O]4-(CH2)2-C(=O)-NH(CH2)2-SO3H; при этом следует понимать, что каждый А7, содержащий функциональную группу SO3H, может находиться в формах солей.
- 8. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-7, где указанный линкер L выбран из следующего перечня:- 154 045708- 155 045708- 156 045708ОН
- 9. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-8, где RCG1 выбран из следующего перечня:(i) группа RaZa-C(=O), в которой Za представляет собой -О-, и Ra представляет собой водород, (С1-С6)алкил, (С2-С6)алкенил, (С3-С7)циклоалкил, (С3-С7)гетероциклоалкил, содержащий от одного до трех гетероатомов, выбранных из атомов азота, атома серы и атома кислорода, арил, содержащий от 6 до 10 атомов углерода, или гетероарил, содержащий от одного до пяти гетероатомов, выбранных из атома азота, атома серы и атома кислорода, и от 2 до 10 атомов углерода, где (С3-С7)гетероциклоалкил, арил или гетероарил являются незамещенными или замещенными 1, 2, 3, 4 или 5 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, CN, NO2, алкила, ОН, О(алкила) и =O;- 157 045708 (ii) одна из следующих групп:COOH,
- 10. Полезная нагрузка с криптофицином формулы (IV)где R1 представляет собой (С1-С6)алкильную группу;R2 и R3 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или (С1-С6)алкильную группу;или в качестве альтернативы R2 и R3 образуют вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, (С3-С6)циклоалкил или (С3-С6)гетероциклоалкильную группу, содержащую от одного до трех гетероатомов, выбранных из атома азота, атома серы и атома кислорода;R4 и R5 представляют собой независимо друг от друга атом водорода, (С1-С6)алкильную группу, группу -(С1-С6)алкил-NH(R12), группу -(С1-С6)алкил-ОН, группу -(С1-С6)алкил-SH или группу -(С1С6)алкил-СО2Н;или в качестве альтернативы R4 и R5 образуют вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, -(С3-С6)циклоалкил или -(С3-С6)гетероциклоалкильную группу, содержащую от одного до трех гетероатомов, выбранных из атома азота, атома серы и атома кислорода;X представляет собой О или N(R6);R6 представляет собой атом водорода или -(С1-С6)алкильную группу;R7 и R8 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или -(С1-С6)алкильную группу, группу -(С1-С6)алкил-СО2Н или группу -(С1-С6)алкил-N(С1-С6)алкил2;или в качестве альтернативы R7 и R8 образуют вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, -(С3-С6)циклоалкильную группу или -(С3-С6)гетероциклоалкильную группу, содержащую от одного до трех гетероатомов, выбранных из атома азота, атома серы и атома кислорода;каждая R9 представляет собой независимо от других атом водорода, -ОН, (C1-С4)алкокси, атом галогена, -NH2, -NH(С1-С6)алкил, -N(С1-С6)алкил2, -NH(С1-С6)циклоалкил или (С3-С6)гетероциклоалкильную группу, содержащую от одного до трех гетероатомов, выбранных из атома азота, атома серы и атома кислорода;каждый R10 представляет собой независимо атом водорода и (С1-С4)алкильную группу;Y представляет собой -NR11-(С1-С6)алкилен-, где -(С1-С6)алкилен- связан с фенильным кольцом, и -NR11- связан непосредственно с L1 формулы (II);при этом Y расположен в орто- (о), мета- (m) или пара- (р) положении фенильного ядра;R11 и R12 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или -(С1-С6)алкил;L определен в формуле (I), как указано в п.1, и представляет собой линкер формулы (II), как определено в любом из пп.1-9;RCG1 представляет собой реакционноспособную химическую группу, как определена в п.1, присутствующую на конце линкера L, при этом RCG1 является реакционноспособным в отношении химической группы, присутствующей на антителе.
- 11. Полезные нагрузки с криптофицином формулы (IV) по п.10, характеризующиеся следующей структурой:где R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, RCG1, X, Y и L определены в формуле (IV), как указано в п.10.- 158 045708
- 12. Полезная нагрузка с криптофицином формулы (IV) по п.10, которые выбраны из следующего перечня:ОН он- 159 045708- 160 045708- 161 045708- 162 045708где R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, X, Y и L определены в формуле (IV), как указано в п.10 или 11;
- 13. Конъюгат формулы (V)- 163 045708G представляет собой продукт реакции между RCG1 и RCG2;где RCG2 представляет собой ортогональную реакционноспособную химическую группу, присутствующую на антителе, Ab, иAb представляет собой антитело.
- 14. Конъюгат формулы (V) по п.13, характеризующийся следующей структурой:где Rb R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, Rn, R12, X, Y, L, G, RCG1, RCG2 и Ab являются такими, как в формуле (V), указанной в п.13.
- 15. Конъюгат формулы (V) по п.13 или 14, где RCG2 выбран из:(I) ε-аминогрупп, находящихся на боковых цепях лизиновых остатков, которые присутствуют на поверхности антитела;(ii) α-аминогрупп N-концевых аминокислот тяжелых и легких цепей антитела;(iii) групп сахаридов шарнирной области антитела;(iv) тиолов цистеинов, образованных посредством восстановления внутрицепочечных дисульфидных связей антитела, или тиолов сконструированных цистеинов антитела;(v) амидных групп, находящихся на боковых цепях глутаминовых остатков, которые присутствуют на поверхности антитела; и (vi) альдегидных групп, введенных в антитело с применением формилглицин-образующего фермента.
- 16. Конъюгат формулы (V) по п.13 или 14, где если RCG1 представляет собой сложный N-гидроксисукцинимидильный эфир, RCG2 представляет собой группу NH2;если RCG1 представляет собой функциональную малеимидогруппу, функциональную галогенацетамидогруппу, атом хлора или активированный дисульфид, RCG2 представляет собой группу -SH;если RCG1 представляет собой группу N3, RCG2 представляет собой группу С=СН или активированную группу С=С;если RCG1 представляет собой группу ОН или NH2, RCG2 представляет собой функциональную группу карбоновой кислоты или функциональную амидную группу;если RCG1 представляет собой группу SH, RCG2 представляет собой функциональную малеимидогруппу, функциональную галогенацетамидогруппу или функциональную группу, представляющую собой активированный дисульфид;если RCG1 представляет собой группу С=СН или активированную группу С=С, RCG2 представляет собой группу N3;если RCG1 представляет собой функциональную группу, представляющую собой О-алкилгидроксиламин, или субстрат реакции Пикте-Шпенглера, RCG2 представляет собой функциональную альдегидную или кетонную группу.
- 17. Конъюгат формулы (V) по любому из пп.13-16, где G выбран из группы, состоящей из- 164 045708
- 18. Конъюгат формулы (V) по п.13, который выбран из следующего перечня:- 165045708где Ab представляет собой антитело.
- 19. Способ получения конъюгата формулы (V), определенного в любом из пп.13-18, включающий по меньшей мере стадии:(i) приведения в контакт и обеспечения проведения реакции забуференного или незабуференного водного раствора антитела, немодифицированного или модифицированного с помощью модифицирующего средства, и раствора полезной нагрузки с криптофицином формулы (IV) по любому из пп.10-12, при этом химическая группа RCG1 в полезной нагрузке с криптофицином формулы (IV) является реакционноспособной в отношении химических групп RCG2, присутствующих на антителе, при этом указанные химические группы RCG2 были введены или не введены с помощью модифицирующего средства, так чтобы присоединить полезную нагрузку с криптофицином формулы (IV) к антителу посредством образования ковалентной связи; и затем (ii) отделения или не отделения конъюгата, образованного на стадии (i), от полезной нагрузки с криптофицином формулы (IV), и/или от непрореагировавшего антитела, и/или от любых агрегатов, которые могли образоваться.
- 20. Лекарственный препарат, где он содержит по меньшей мере один конъюгат формулы (V) по любому из пп.13-18.
- 21. Фармацевтическая композиция, где она содержит по меньшей мере один конъюгат формулы (V) по любому из пп.13-18, а также по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
- 22. Применение конъюгатов формулы (V) по любому из пп.13-18 в качестве противораковых средств.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP17305531.0 | 2017-05-10 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA045708B1 true EA045708B1 (ru) | 2023-12-19 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7446993B2 (ja) | 生物活性分子コンジュゲート、その調製法及び使用 | |
| AU2018265333B2 (en) | Peptidic linkers and cryptophycin conjugates, useful in therapy, and their preparation | |
| US9249186B2 (en) | Cytotoxic peptides and antibody drug conjugates thereof | |
| US20210163458A1 (en) | Novel cryptophycin compounds and conjugates, their preparation and their therapeutic use | |
| CA3215279A1 (en) | Enzyme-triggered self-reacting linker having improved physicochemical and pharmacological properties | |
| EA045708B1 (ru) | Новые пептидные линкеры и конъюгаты на основе криптофицина, их получение и их терапевтическое применение | |
| US20240216525A1 (en) | Enzyme-triggered self-reacting linker having improved physicochemical and pharmacological properties | |
| BR112018008490B1 (pt) | Compostos e conjugados de criptoficina, processos para a preparação dos mesmos, medicamento e composição farmacêutica |