CZ118794A3 - Conjugate of a medicament and a ligand - Google Patents
Conjugate of a medicament and a ligand Download PDFInfo
- Publication number
- CZ118794A3 CZ118794A3 CZ941187A CZ118794A CZ118794A3 CZ 118794 A3 CZ118794 A3 CZ 118794A3 CZ 941187 A CZ941187 A CZ 941187A CZ 118794 A CZ118794 A CZ 118794A CZ 118794 A3 CZ118794 A3 CZ 118794A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- lys
- phe
- room temperature
- equiv
- caproyl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
- A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/021—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)n-C(=0)-, n being 5 or 6; for n > 6, classification in C07K5/06 - C07K5/10, according to the moiety having normal peptide bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Description
Vynález se týká kenjugátu léčiva a ligandu, kde ligand je s léčivovou složkou spojen peptidovým spojovníkem vytvořeným z proteinového peptidového specifikátoru, karboxyacylevé' jednotky a samoroizíčího mezerníku, a kterýžto konjugát je aktivován lysosomálními enzymy. \
Dosavadní stav techniky
Dvousložkové sloučeniny sestávající z nosiče nebo ze spojovací složky a z léčivové složky jsou známé. Tyto sloučeniny byly zvláště užitečné ve vytváření imunokonjugátů řízených proti antigenům asociovaným s nádory. Nicméně v některých případech mohou být dvousložkové sloučeniny nestabilní vlivem vlastní povahy vazby spojující protilátky s léčivem nebo vlivem elektronických nebo sférických vlastností léčivové složky, které mohou zamezit hydrolýzu vazby žádaným cílovým enzymem, viz Katzenellenbogen, J. Amer. Chem. Soc., (1981) 24: str.479-480.
Podstata vynálezu
Vynález vytváří konjugáty specifické pro nádory, složené z ligandu, léčiva a peptidového spojovníku, kteréžto konjugáty jsou selektivně aktivovatelné u místa nádoru.
Konjugáty léčiva a ligandu podle předloženého vynálezu
V» obsahují alespoň jednu molekulu léčiva, ligand schopny zacílit zvolenou populaci buněk, a peptidový spojovník, který obsahuje karboxyacyl a proteinový peptidový specifikátor. řeptidový spojovník může také obsahovat samomizící mezerník, který odděluje peptidovou sekvenci proteinu a léčivo.
Ligand je připojen ke karboxyacylevé jednotce přes raménko jednotky spojovníku obsahující thioéter, kterážto thioéterová vazba je vytvořena reakcí sulfhydrylové skupiny s ligandem.
V jednom přednostním provedení je cíl vyhledávající ligand připojen přímo k peptidovému spojovníku kovalentní tnioéterovou vazbou.
•Jedna myšlenka předloženého vynálezu vytváří konjugáty léxiv, které jsou selektivně aktivovatelné u místa nádoru.
Jiná myšlenka předloženého vynálezu vytváří konjugáty specifické pro nádory, ve kterých aktivující enzym je ten, který Je přítomný v nádoru v dostatečných množstvích pro vyvinutí cytotoxických hladin volného léčiva v blízkosti nádoru.
Jiná myšlenka předloženého vynálezu vytváří konju.gáty léčiva specifické pro nádory, které jsou stabilní vzhledem k neobvyk lýc proteázám v krvi.
Další myšlenka předloženého vynálezu vytváří konjugát léčiva soecipický pro nádor v souhlase se předešlými myšlenkami, který je pozoruhodné méně toxický než aktivované léčivo.
Podle jiné myšlenky vynález vytváří způsob přípravy konjugá tů léčiv a farmaceutických směsí a způsoby dodávání konjugátů cí lovým buňkám, ve kterých se žádá modifikace v biologickém procesu taková jako při léčení chorob jako je rakovina.
Předložený vynález také vytváří způsob dodávání aktivního protinádorového léčiva do místa nádorových buněk v teplokrevném živočichovi tím, že se zmíněnému teplokrevnému živočichovi podává konjugát léčiva a ligandu podle předloženého vynálezu.
V jednom provedení léčivová složka je antracyklínové antibiotikum, ligand je protilátka, A je p-aminobenzyl-karbamoyl,
Y je Phe, Z je Lys, a n je rovno 5«
V jednom přednostním provedení antracyklinová léčivcvá složka je doxorubicin, ligandová složka je chimérická protilátka, A je p-aminobenzyl-karbamoyl, Y je Phe, Z je Lys, a n=5.
V jiném přednostním provedení léčivová složka je taxol, ligand je protilátka, Y je Phe, Z je Lys a n je rovno 5.
V jiném přednostním provedení léčivová složka je mito»· mycin C, ligand je protilátka, Y je Phe, Z je L;>s a n=5·
Výše uvedené i jiné myšlenky předloženého vynálezu jsou realizovány der^vatizací protinádorové látky spojené s ligandem peptidovým spojovníkem vytvořeným z peptidové sekvence proteinu a samomizícího mezerníku, u reaktivního místa vhodného pro potlačení farmakologické aktivity protinádorové látky pro přeměnu protinádorové látky na farmakologicky neaktivní konjugát peptidylového derivátu. Feptidový spojovník má'specificky přizpůsobenou residuální sekvenci aminokyseliny aby poskytl peptidylovému derivátu selektivní substrát pro enzymové štěpení aktivující léčivo jednou nebo n‘-kolika lysosomálními proteázami, jako je katepsin B, C nebo D. Reakce enzymového štěpení
-3odstraní složku peptidového spojovníku z konjugátu léčiva a způsobí uvolnění protinádorové látky ve farmakologicky aktivní formě selektivně u místa nádoru. Ve srovnání se spojovníky ligandu a léčiva, které spočívají na jednoduché hydrolýze kyšeliny pro uvolnění léčiva tento nový způsob zajišťuje významně nižší systémovou toxicitu následkem předčasné hydrolýzy spojovníku v krvi, tudíž je vydáno větší množství léčiva do místa nádoru a způsob má za následek delší skladovací životnost a zjednodušené podmínky zacházení s konjugátem.
Konjugáty léčiva a ligandu podle předloženého vynálezu mají významně nižší systémovou toxicitu než dvousložkové konjugáty a volné léčivo. Konjugáty podle vynálezu mají specifičnost i terapeutickou aktivitu léčiva pro působení na zvolenou populaci cílových buněk. Tyto konjugáty mohou být používány ve farmaceutické směsi, jako je směs obsahující farmaceuticky účinné množství sloučeniny vzorce (I) uvedeného dále, složené s farmaceuticky přijatelným nosičem, ředidlem nebo vehikulem.
Přehled obrázků na výkresech
Obr.l znázorňuje expresi BR96 v linii plicních buněk L2987, linii buněk vaječníku A2780 a linii buněk tlustého střeva HCT116 a obr.2 znázorňuje potenci konjugátu ER96 a doxorubicinu a nekonjugovaného doxorubicinu.
Podrobný popis vynálezu
Předložený vynález vytváří nové konjugáty léčiva a ligandu složené z ligandu schopného zacílení zvolené populace buněk a z léčiva připojeného k ligandu peptidovým spojovníkem. Peptidový spojovník je vytvořen z karboxyacylové jednotky a z peptidové sekvence proteinů. Peptidový spojovník může také obsahovat samomizící mezerník, který odděluje léčivo a peptidovou sekvenci proteinů.
Molekula ligandu může být imunoreaktivní protein jako protilátka, nebo jeho fragment, neimunoreaktivní protein, nebo peptidový ligand jako bombesin, vazební ligand sledující receptor asociovaný s buňkou jako lektin, nebo nějaký protein či peptid, který obsahuje reaktivní sulfhydrylovou skupinu (-SH) nebo může být modifikován, aby takovou sulfhydrylovou skupinu obsahoval. Karboxyacylové jednotka je připojena k ligandu thioéterovou vazbou a léčivo je připojeno ke spojovníku ^unkční skupinou zvolenou z množiny zahrnující primární nebo sekundární amin, hydroxyl, sulfhydryl, karboxvl, aldehyd a keton.
Konjugát podle předloženého vynálezu odpovídá vzorci (I):
L-^A—Y—Zc—Xn—*nj—D ' (I’ ' ve kterém D je léčivová složka, L je ligand, A je karboxyacylová jednotka, Y je aminokyselina, Z je aminokyselina, X je samomizící mezerník, W je samomizící mezerník, m je celé číslo od 1 do 6 a n je nula nebo 1.
Za účelem přesnějšího vysvětlení vynálezu budou léčiva, ligandy, peptidy a mezerníky vysvětleny odděleně. Potom bude vysvětlena syntéza konjugátů.
Je zřejmé, že zkratky a názvosloví, které budou použity v následujícím podrobném popisu a v patentových nárocích jsou ty, které jsou normalizovány v chemii aminokyselin a peptidů, a že všechny uváděné aminokyseliny jsou v L-formě, pokud nebude uvedeno jinak.
Zkratky použité v této přihlášce vynálezu, pokud nebudou uvedeny jinak, jsou tyto:
AcCH: kyselina octová; Ala: L-alanin; Alloc: alyloxykarbonyl; Arg: L-arginin; Eoc: t-butyloxykarbonyl; Cit: L-citrulin;
DEU : diazobicykloundecen; DCC: dicyklohexylkarbodiimid; DCI: přímá chemická ionizace; DCU: dicyklohexylmočovina; DIEA: diizopropyletylamin; DMAP: 4-dinetylaminopyridin; DME: 1,2-dimetoxyetan; DOX: doxorubicin; DTT: dithiothreitol; EEEDQ: N-ethoxykarbonyl-2-etoxy-l,2-dihydrochinolin; EtOAc: etylacetát; FAB: bombardování rychlými atomy; Fmoc: fluorenylmetoxykarbonyl; GABA: -aminomáselná kyselina; Cly: glycin; KOBt: N-hydroxybenzotriazol; HRKS: vysoce rozlišující hmotová spektroskopie; LDL: lipoprotein nízké hustoty; Ile: L-izoleucin; Leu: L-leucin; Lys: L-lysin; YC: 6-maleimidokaproyl; MY A: mitomycin A; YYC: mitomycin C; Mtr: 4-metoxytrityl; NHS: N-hydroxysukcinimid; NYP: N-metvlpyrolidinon; PAEC: p-aminobenzyl-karbamoyl; PAE-OH: p-aminobenzylalkohol; Phe: L-fenylalanin; PNP: p-nitrofenol; TFA: kyselina trifluoroctová; THF: tetrahydrofuran; Trp: L-tryptofan; Val: L-valin; Z: benzyloxykarbonyl.
-5Feptidový spojovník
Peptidový spojovník podle předloženého vynálezu je vytvořen z karboxyacylcvé jednotky a z peptidové sekvence proteinů. Spojovník může také obsahovat samomizící mezerník, který odděluje léčivo a peptidovou sekvenci proteinů.
V konjugátu podle vzorce I je peptidový spojovník dán vzorcem A—Ύ—Z—X—W, ve kterém A je karboxyacyloVá jednotka, Ύ” a Z” jsou aminokyseliny a společně tvoří peptidovou sekvenci proteinů a X a ’’W jsou individuálně samomizící me- \ zerníky, které oddělují peptidovou sekvenci proteinů a léčivo.
Peptidové sekvence proteinů
V konjugátu vzorce I Y je alespoň jedna aminokyselina zvolená z množiny zahrnující alanin, valin, leucin, izoleucin, methionin, fenylalanin, tryptoťan a prolin, přednostně fenylalanin nebo valin; a Z je alespoň jedna aminokyselina zvolená z množiny zahrnující lysin, lysin chráněný acetylem nebo formylem, arginin, arginin chráněný tosylem nebo nitroskupinami, histidin, ornitin, ornitin chráněný acetylem nebo formylem, a citrulin, přednostně lysin nebo citrulin.
Sekvence zbytků aminokyselin je zvláštním způsobem upravena, takže může být selektivně enzymaticky odštěpena z výsledného peptidylového derivátu a léčiva tvořících konjugát jednou nebo několika proteázami asociovanými s nádorem.
Délka řetězce zbytků aminokyselin v peptidovém spojovníku má přednostně rozsah od dipeptidu až k tetrapeptidu. Je vsak třeba uvést, že také mohou být výhodně použity peptidové spojovníky mající délku osmi zbytků aminokyselin.
Za účelem dalšího vysvětlení konjugátů podle předloženého vynálezu jsou uvedeny následující příklady skupin peptidovýctv spojovníků:
Phe-Lys, Val-Lys, Fhe-Phe-Lys, D-Phe-Fhe-Lys, C-ly-Phe-Lys ,
Ala-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-Cit, Phe-Ala, q
Gly-Fhe-Leu-Gly, Ala-Leu-Ala-Leu, Phe-Γί -tosyl-Arg, a
Fh e -N^ -Ni t r o -Arg.
Zvláštní příklady přednostního provedení peptidových sekvencí jsou Phe-Lys, Val-Lys, Val-Cit· a D-Fhe-L-Fhe-Lys.
-6Četné molekuly specifických peptidových spojovníků mohou být nevrčen// a optimizoveny v jejich selektivitě pře enzymové štěpení zvláštní preteázou asociovanou s nádorem v rámci předloženého vynálezu. Přednostně- použité peptioové spojovníky v rámci předloženého vynálezu jsou ony, které jsou optimalizovány vzhledem ke proteázám katepsinu E, C a D. Eylo zjištěno, že katepsin E uvolňuje DOX z konjugátu při pE rovném 5,3, ;
při teplotě 27°C s t1/2 = 3,0 hodiny.
Mezerník
Konjugáty léčiva podle předloženého vynálezu mohou používat složku vloženého samonizícího cezerníku, která odděluje a kovalentně spolu váže léčivovou složku a složku peptidové sekvence proteinů. Samomizící mezerník může být definován jako dvoufunkoní chemická složka, která je schopná kovalentně navzájem spojit dvě oddělené chemické složky do normální trojsložkové molekuly, uvolnit jednu z oddělených chemických složek ze trojsložkové molekuly enzymovým štěpením a sledujíc enzymové štěpení spontánně odštěpit ze zbytku molekuly pro uvolnění druhé oddělené chemické složky. Fodle vynálezu je samomizící mezerník kovalentně připojen na jednom svém konci ke složce peptidové sekvence proteinů a na druhém konci kovalentně připojen k chemicky reaktivnímu místu léčivové složky jejíž derivatizace potlačuje farmakologickcu aktivitu, pro rozmístění a kovalentní vzájemné spojení složky peptidové sekvence proteinů a léčivové složky do trojsložkové molekuly, která je stabilní a farmakologicky neaktivní za nepřítomnosti cíl hledajícího enzymu, která je však enzymově ětěpitelná takovým cíl hledajícím enzymem u vazby kovalentně spojující složku mezerníku a složku peptidové sekvence proteinů za účelem uvolnění složky peptidové sekvence proteinů ze trojsložkové molekuly. Takové enzymové štěpení naopak způsobí aktivaci samomizící povahy složky mezerníku a započne spontánní štěpení vazby kovalentně spojující složku mezerníku a složku léčiva pro způsobení uvolnění léčiva ve farmakologicky aktivní firmě.
Ve vzorci I definujícím konjugát podle vynálezu X je mezerníková složka, která odděluje a kovalentně navzájem váže léčivovcu složku přes složku T, s která může být tvořena sloučeninami definovanými vzorci (III), (IV), (V) nebo (VI):
H | |||
T o | JIH) , | ||
kde T je atom kyslíku, dusíku nebo síry, | k \ |
-HN—Fj-COT CIV) kde T je atom kyslíku, dusíku nebo síry a R je alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku v řetězci, —HN'
COOR2 (V) (viz J. Med. Chem., 21’ 1447 (1984)), kde T je atom kyslíku, dusíku nebo síry a R je atom vodíku nebo alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku v řetězci, —NH// \
(VI) ; nebo
W je složka mezerníku definovaná vzorcem (VII)
kde' T je atom kyslíku, síry nebo dusíku.
c,
-8Zde použitý alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku v řetězci muže mít rozvětvený nebo přímý řetězec atomů uhlíku a je bez omezení zvolen z množiny zahrnující metyl, etyl, izopropyl, n-propyl, sek. butyl, izobutyl, n-butyl a pod.
Přednostní složka mezerníku vhodná pro použití ve předloženém vynálezu je PABC definovaný vzorcem (lila): '
(lila)
Jiná výhodná složka mezerníku vhodná k použití ve předloženém vynálezu je GABA definovaná vzorcem (iVa):
'COOH (IVa)
Další výhodná složka mezerníku vhodná k použití ve předloženém vynálezu je α,Λ-dinetyl GABA definovaná vzorcem (IVb):
—Hl
COOH (IVb)
Další výhodná ženám vynálezu je složka mezerníku f\p- dimetyl GABA vhodná k použití ve předlodefinovanái vzorcem (IVc) :
COOH (IVc)
-9Karboxyacylová jednotka
V konjugátu vzorce (I) je karboxyacylová jednotka A připojena k ligandu přes atom síry derivovaný z ligandu. Vzory konjugátu podle předloženého vynálezu jsou sloučeniny vzorců (IXa), (IXb), (IXc), (IXd) a (IXe), přičemž A je sloučenina v závorkách,
•Y—Z—Xn— (IXa)
A q je celé číslo od 1 do 10 a L, Y, Z, X, W, D, n a m mají význam definovaný výše
(IXb)
Sloučenina vzorce (IXb) je vytvořena ze sukcinim!dyl-4-(Nmaleimidometyl)-cyklohexan-1-kartoxylátu (SMCC) (viz Pierce Catalog p. R-15 (1992)), přičemž L, Y, Z, X, W, D, n a m mají význam definovaný výše;
-1C-
(IXc)
Sloučenina vzorce (IXc) je vytvořena z m-maleimidobenzoyl Nhydroxysukcinimidesteru (MBS) (viz Pierce Catalog ρ. E—16 (1992)), přičemž L, Y, Z, X, W, D, nam mají význam uvedený výše.
(CH2)3-COΎ— Z- Xn- Wn-D (IXd)
Sloučenina vzorce (IXd) je vytvořena ze sukcinimidyl-4-(p-maleimidofenyl)máslenanu (SMPB) (viz Fierce Catalog p. E-lS (1992)), přičemž L, Y, Z, X, W, D, n a m mají význam definovaný výše.
A
Sloučenina vzorce (IXe) je vytvořena z N-sukcinimidyl(4-jodoacetyl)aminobenzoanu (SIAB) (viz Pierce Catalog ρ. E-17 (1992)), přičemž L,Y, Z, X, W, D, n a m mají význam definovaný výše; nebo
-11A je sloučenina připojená k peptidů a je spojena s ligandem přes atom síry derivovaný z ligandu a atom síry derivovaný z karboxyacylové jednotky pro vytvoření dithio-vazby.
Vzory konjugátů podle předloženého vynálezu jsou sloučeniny definované vzorci (Xa), (Xb) a (Xc) :
-s—(CH2)2—co-Y-Z-Xn-Wn-D (Xa)
Sloučenina vzorce (Xa) je vytvořena z N-sukcinimidyl-3-(2pyridildithio)propionanu (SPDP) (viz Pierce Catalog p. E-13 (1992)), přičemž L, Y, Z, X, W, D, n a m mají význam definovaný
Sloučenina vzorce (Xb) je vytvořena ze 4-sukcinimidyloxykarbonyl- -metyl- -(2-pyridyldithio)-toluenu (SMPT) (viz Pierce Catalog p. E-12 (1992)), přičemž L, Y, Z, X, W, D, n a m mají význam definovaný výše.
H
-S—(CH2)2CON—(CH2)sCO-Y-Z-Xn-Wn(Xc)
Sloučenina vzorce (Xc) je vytvořena ze dlouhého řetězce SPDP (viz Pierce Catalog p. E-14 (1992)). přičemž L, Y, Z, X, W,
D, n a m mají význam definovaný výše.
-12LéČlvO
Kor.jugáty léčiva podle předloženého vynálezu jsou účinné pro obvyklé účely, pro které jsou účinná odpovídající léčiva, a maií vvšší účinnost z důvodu jejich schopnosti, která je vlastní ligandu, přenášet léčivo k žádané buňce, kde ma zvláště příznivý účinek. Dále, protože kor.jugáty podle předloženého vynálezu mohou být použity pro modifikaci dané biologické odezvy, léčivová složka nemusí být vytvořena při omezení na klasické chemické terapeutické látky. Tak například léčivová složka mů^e být protein nebo pclypeptid mající žádanou biologickou aktivitu. Takové proteiny mohou například obsahovat protein jako nádorový nekrotizující faktor.
Přednostně používaná léčiva ve předloženém vynálezu jsou cytotoxická léčiva, zvláště taková, která se používají pro terapii rakoviny. Taková léčiva obecně obsahují látky poškozující DNA, antimetabolity, přírodní produkty a jejich analogy. Přednostní třídy cytotoxických látek obsahují například inhibitory enzymů jako dihydrofolan, inhibitory reduktázy a inhibitory syntházy thymidilanu, interkalační činidla DNA, látky štěpící DNA, inhibitory topoizomerázy, antracyklinovou rodinu léčiv, vinca léčiva, mitomyciny, bleomyciny, cytotcxické nukleosidy, pteridinovou rodinu léčiv, diyneny, pcdofyltoxiny, induktory diferenciace a taxoly.Zvláště užitečné členy těchto tříd jsou například metotrexan, metopterin, dichlormetotrexan, 5-fluoruracil, ó-merkaptopurin, cytosin, arabinosid, melfalan, leurosin, leurosidein, aktincmycin, dauncrubicin, mitomycin C, mitomycin A, karminomycin, aminopterin, talysomycin, podofylotoxin a deriváty podoťylotoxinu jako etopcsid a etoposidfosfát, vinblastin, vinkristin, vindesin, taxol, kyselina taxotarretincová, p.
kyselina máselná, ΓΓ-acetylspermidin, kamptothecin,a jejich analogy.
-13Jak bylo uvedeno výře, odborník školený v oboru může provádět chemické modifikace se žádanou sloučeninou, aby reakce oné sloučeniny byly přizpůsobeny pro účely přípravy konjugátů podle předloženého vynálezu.
V konjugátu definovaném vzorcem (I) D je léčivová 'složka mající ke svému řetězci přepojenu chemicky reaktivní funkční skupinu, kterou je řetězec léčiva připojen ke proteinovému t
peptidovému spojovníku, přičemž ona funkční skupina je zvolena z množiny zahrnující primární a sekundární amin, hydroxyl, sulfhydryl, karboxyl, aldehyd a keton.
Vzory oněch léčiv obsahujících aminoskupiny jsou mitomvcin C, mitomycin A, daunorubicin, doxorubicin, aminopterin, p
aktinomycin, bleomycin, 9-sminokamptothecin, Ν'-acetylspermidin, l-(2-chloretyl)-l,2-dim,etansulfonylhydrazid, talysomycin, cytarafcin a jejich deriváty.
Vzory léčiv obsahujících alkoholovou skupinu jsou etoposid, kamptothecin, taxol, esperamicin, 1 ,S-dihydroxy-bicyklo[7.3.l]trideka-4-9dien-2,6-diyn-13-on (viz patentový spis Spojených států amerických číslo 5,198,560), podofylotoxin, anguidin, vinkristin, vinblastin, morfolindoxorubicin, n-(5,5-diacetoxypentyl)doxorubicin a jejich deriváty.
-14Vzory léčiv obsahujících sulfhydryl jsou esperamicin a 6-merkaptopurin a jejích deriváty.
Vzory léčiv obsahujících karboxyl jsou rcetotrexan, kamptothecin (forma laktonu s otevřeným kruhem), kyselina máselná, kyselina retinoová a jejich deriváty.
Vzory léčiv obsahujících aldehyd a keton jsou anguidm a antracykliny jako doxorubicin a jejich deriváty.
Vysoce přednostní skupina cytotoxických látek pro použití x jako léčiv ve předloženém vynálezu zahrnuje léčiva definovaná těmito vzorci;
Skupina mitomycinu vzorce (l):
(1) ve kterém
R2 is -NH2, -OCH3, -O(CH2)2OH, -NH(CH2)2SS(CH2)2NHAc, -NHCH-C=CH, -NH(CH2)2SS(C6H4)NO2,
-O ( ch2 ) 2SS ( ch2) 2oh , -n=ch-nhoch3 ,
-NH(C6HJOH,
-NH (CH2) 2SS (CH2) 2NHCO (CH2) 2CH (NH2) COOH nCH,C ,0 — —SH(Ca2)2SSCH2
x— I o E —OCK2
-15Skupina bleomycinu vzorce (2):
ve kterém
R1 je hydroxy, amino, alkylamino s 1 až 3 atomy uhlíku, dialkylamino s 1 až 3 atomy uhlíku, polymetylénamino se 4 až 6 atomy uhlíku, +
-NH(CH2)3S-CH3,
NH
I
-NH(CH2)4NH-C-NH2,
CH
-nh(ch2)3chch2cnh(ch2)3nh(ch2)4nh2, nebo nh2 o
-NH (CH2) 3NH (CH2) 4NH2 ς,.,γ
-16Skupina metotrexanu vzorce (3):
ve kterém
R4 je amino nebo hydroxy,
R2 je vodík nebo metyl,
R3 je vodík, fluór, chlór, bróm nebo jód, a r4 je hydroxy nebo složka, která doplňuje sůl karboxylové kyseliny. __
Melfalan vzorce (4):
HO2C-^H-CH2—γ y-N(CHjCH2CI)2 (4)
NH,
6-merkaptopurin vzorce (5):
HS
(5)
-17Cytosínarabinosid vzorce (6):
Podofylotoxiny vzorce (7):
(6)
(7) ve kterém je vodík, je vodík nebo
kde je NH2, OH, OCH^, NH-alkyl s 1 až 3 atomy uhlíku nebo jsr-(alkyl)2, kde alkyl má 1 až 3 atomy uhlíku,
R4 je OH nebo NH2,
-18je metyl nebo thienyl,
R^ je vodík nebo metyl, nebo jejich fosforečná súl.
Pokud je zde použit alkyl, tento má přímý nebo rozvětvený uhlíkový řetězec s 1 až 3 atomy uhlíku. Příklady jsou'·metyl, etyl, n-propyl a izopropyl.
Skupina vinca-alkaloidu léčiv vzorce (8) :
ve kterém
R1 je H, CH. nebo CHO;
o i 3 3 když R a Pr jsou samostatné, R je H a jedna ze skupin R4 a R2 je etyl a druhá je H nebo OH;
Když R2 a R^ jsou vzaty spolu s atomy uhlíku, ke kterým jsou připojeny, tvoří oxiranový kruh a v tomto 4 případě R je etyl;
R5 je vodík, alkyl-CO nebo chlorem substituovaný alkyl-CO, kde alkyl má 1 až 3 atomy uhlíku.
Pokud je zde použit alkyl, tento má přímý nebo rozvětvený uhlíkový řetězec s 1 až 3 atomy uhlíku. Příklady jsou metyl, etyl, n-propyl a izopropyl.
-19Difluoronukleosídy vzorce (9):
ve kterém R
R f
C H ?0 H f OH (9) je baze definované jedním ze vzorců:
ve kterých
R2 je vodík, metyl, brom, fluor, chlor nebo jod, R^ je -OH nebo -NH? a R je vodík, brom, chlor nebo jod.
-20Taxoly vzorce (10) :
ve kterém
R1 je hydroxy,
R je vodík nebo hydroxy,
R^* je vodík nebo fluor,
R^ je vodík, hydroxy nebo acetoxy,
R4 je aryl, substituovaný aryl, alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenyl se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynyl se 2 až 6 atomy uhlíku nebo t-butoxy,
R^ je alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenyl se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynyl se 2 až 6 atomy uhlíku nebo -Z-R6,
Z je přímá vazba, alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo alkenyl se 2 až 6 atomy uhlíku, a
R^ je aryl, substituovaný aryl, cykloalkyl se 3 až 6 atomy uhlíku, thienyl nebo furyl.
Pokud je zde použit alkyl, tento má přímý nebo rozvětvený uhlíkový řetězec s 1 až 6 atomy uhlíku. Příklady jsou metyl, etyl, n-propyl, izopropyl, n-butel, sek. butyl, izobutyl, t-butyl, n-pentyl, sek. pentyl, izopentyl a n-hexyl. Alkenyl znamená přímý nebo rozvětvený uhlíkový řetězec mající jednu dvojitou vazbu uhlík-uhlík a mající 2 až 6 atomů uhlíku. Příklady jsou etenyl, propenyl, izopropenyl, butenyl, izobutenyl, pentenyl a hexenyl. Alkynyl znamená přímý nebo rozvětvený (
-21uhlíkový řetězec mající alespoň jednu trojnou vazbu uhlík-uhlík a mající 2 až 6 atomů uhlíku. Příklady jsou etynyl, propynyl, butynyl, a hexynyl. Aryl znamená aromatický uhlovodík mající 6 až 10 atomů uhlíku. Příklady jsou fenyl a naftyl. Substituováný aryl znamená aryl substituovaný alespoň jednou skupinou zvolenou z množiny obsahující alkanoyloxy s 1 až 6 atomy uhlíku, hydroxy, halogen, alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, trifluormetyl, alkoxy s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenyl se 2 až 6 atomy uhlíku, alkanoyl s 1 až 6 atomy uhlíku, nitro, amino a amido.
Anguidiny vzorce (11):
(11) ve kterém
R1 je OH nebo 0 a R^ je H nebo 0.
Anguidin může být zacílen na polohu C-3, C-4, C-8 nebo C-15 jako ester nebo hydrazon.
i.
-22Antracykllnová antibiotika vzorce (12):
(12) ve kterém ' RVji -CH3, -CH2OH, -CH2OCO(CH2)3CH3 nebo -ch2ococh(oc2h5)2
R2 je -OCH^, -OH nebo H,
R^ je -NH2, -NHCOCF^, 4-morfolinyl, 3-kyano-4morfolinyl, 1-piperidinyl, 4-metoxy-l-piperidinyl, benzylamin, dibenzylamin, kyanometylamin, 1-kyano2-metoxyetylamin, nebo NH-(CH2)^-CH(OAc)2,
R4 je -OH, -OTHP nebo -H, a
R^ je -OH nebo -H, přičemž R^ není -OH když
R4 je -OH nebo -OTHP.
Odborníkovi školenému v oboru bude zřejmé, že vzorec (12) zahrnuje sloučeniny, které představují léčiva nebo deriváty léčiv, které v oboru dostaly rozličná generická nebo triviální jména. Následující tabulka I obsahuje řadu antracyklinových léčiv a jejich generická nebo triviální jména. Tato léčiva jsou zvláště výhodná a přednostně použitelná ve předloženém vynálezu.
Ze sloučenin uvedených v tabulce I je nejvýhodnější léčivo Doxorubicin. Doxorubicin, také označovaný jako DOX je antracyklin vzorce (1/, ve kterém R^ je -CH2OH, R^ je -OCH^,
R^ je -NH2, R^ je -OH a Rg je -H.
-23Oj c-1 O O
CO c
1—1 c
ω x, o
G'J
X
O
α I | ||||||
1 Ο | ||||||
C | ||||||
X | •Η | |||||
<9 | ο | r—< | ||||
c | C | α | ο | |||
•H C C | •Η | ι | 33 | |||
0 ·Η Ή | 0 C C | Γ* | ο | α | ||
-η υ υ | >1-Η -.-Ι | Ή | C | )-ι | ||
η -η ή | g 0 0 | Ο | •Η | ο | ||
3 Μ XJ | 0 -Η -rj | *rd | r—1 | ε | ||
Η 3 3 | c η χ! | η | Ο | I | ||
0 H Μ | -Η 3 3 | 3 | (Ν | 0 | ||
C 0 0 | ε u u | <Ό | Ο, | C | ||
3 X -Ρ | J-ι ΰ ·Ρ | Ο | a, | 1 | 5-ι | 3 |
ιΰ 0 0) | ίο 3 α | σι | V | α | Ο | |
QQQ | υ η w | W | £ | < | 2 | Ο |
DAPDox_CH?OH_OCH3 -NH(CH?) 4CH(OAc) aDaunomycin je alternativní název pro idaunorubldn
-24Mejvíce preferovaná léčiva jsou taxol, mitomycin C a antracyklinové antibiotícké látky vzorce (12) popsané výše.
Ligand
Ligand představuje jakoukoli molekulu, která specificky váže nebo reaktivně asociuje nebo vytváří komplexy s rečeptorem nebo jinou recepční složkou asociovanou s danou cílovou populací buněk. Tato molekula reaktivní s buňkami, ke které je \ léčívovs reagencie připojena spojovníkem v konjugátu může být jakákoli molekula, která se váže k, vytváří komplexy s nebo reaguje s populací buněk, která má být terapeuticky nebo jinak biologicky modifikována, a která má volnou reaktivní sulfhydrylovou skupinu (-SH) nebo může být modifikována, aby takovou sulfhydrylovou skupinu obsahovala. Molekula reaktivní s buňkami působí tak, že dodává terapeuticky aktivní léčivovou složku zvláštní cílové populaci buněk, se kterou ligand reaguje.
Takové molekuly jsou, avšak bez omezení, proteiny velké molekulární hmotnosti, například protilátky, proteiny menší molekulární hmotnosti, pclypeptidové nebo peptidové ligandy a nepeptidylové ligandy.
Neimunoreaktivní protein, polypeptid nebo peptidové ligandy, které mohou být použity k vytváření konjugátú podle předloženého vynálezu, avšak bez omezení, jsou transferin, epidermální růstové faktory,(FGF), bombesin, gastrin, peptid uvolňující gastrin, faktor růstu krevních destiček, IL-2, IL-6, faktory růstu nádoru (TC-F), jako TGF-tf a TGF-jS, faktor růstu vakcinie. (VGF), insulin a faktory růstu I a II podobné insulinu. Nepeptidylové ligandy mohou být například karbohydráty, lektiny, a apoorctein z lipoproteinu nízké hustoty.
Imunoreaktivní ligandy obsahují imunoglobulin rozpoznávající antigen (také označovaný jako protilátka), nebo jeho fragment rozpoznávající antigen. Zvláště výhodné jsou ony imunoglobuliny, které mohou rozpoznat antigen asociovaný s nádorem.
Výraz imunoglobulin, když je pcužit, může se vztahovat na nějakou uvalovanou třídu nebo podtřídu imunoglobulinů jako IgG,
IgA, IgM, IgP nebo IgS. Freferovaňé jsou ony imunoglobuliny, které náleží do t+ídy IgG imunoglobulinů. Imunoglobulin může být derivován z mnohých látek. Nicméně přednostně je imunoglofculin lidského, myšího nebo králičího původu. Dále může být
-25imunoglobulin polyklonální nebo monoklonální, přednostně monokl onál ní .
Jak bylo uvedeno, odborník školený v oboru ocení, že předložený vynález také zahrnuje použití fragmentů imunoglobulinu rozpoznávajících antigen. Takové fragmenty imunoglobulinu mohou být například fragmenty Fab , F(ab*)2, nebo Fab,vnebo jiné ^ragm.enty imunoglobulinu rozpoznávající antigen. Takové fragmenty imunoglobulinu mohou být například připraveny proteolytickým enzymovým štěpením, například pepsinovým nebo papainovým žtěpením, reduktivní alkylaci nebo technikami rekombinant. Materiály a metody pro přípravu takových fragmentů imunoglobulinu jsou odborníkům školemýir v oboru dobře známé. Viz obecně, Parham, J. Immunology, 131, 2895 (1983); Lamcyí a spol., J. Imirunological Methods, 56, 235; Parham, tamtéž, 53, 133 (1982); a Matthev a spol., tamtéž, 50, 239 (1982).
Imunoglobulin může být chimérická protilátka, což je výraz v oboru známý. Imunoglobulin může také být bifunkcionální nebo hybridní protilátka, to znamená protilátka, která může mít jedno rameno mající specificitu pro jedno místo antigenu, jako je antigen asociovaný s nádorem, zatímco druhé rameno rozpoznává odlišný cíl, například hapten, který je, nebo ke
X kterému je vázána látka smrtelná pro buňku nádoru obsahující antigen. Alternativně bifunkcionální protilátka může být takoví ve které každé rameno má specificitu pro odlišný epitop antigenu asociovaného s nádorem buňky, která má být terapeuticky nebo biologicky modifikována. V jakémkoli případě mají hybridní protilátky dvojí specificitu, přednostně s jedním nebo více vazebními místy specifickými pro hapten volby nebo jedno či více vazebních míst specifických pro cílový antigen, . například antigen asociovaný s nádorem., infikovaným organizmem nebo jiným chorobným: stavem.
Biologické bifunkcionální protilátky jsou například popsány v evropském patentovém, spisu EF-A-0 105 360. Takové hybridní nebo bifunkcionální protilátky mohou být derivovány, jak bylo
X uvedeno, bud biologicky, technikou fůze buněk, nebo chemicky, zejména činidly sesítování nebo réagencieri z disulfidu tvořícími můstek a mohou to být úplné protilátky a/nebo jejich fragmenty. Způsoby přípravy takových hybridních protilátek jsou popsány například ve přihlášce vynálezu FOT V.OS;/0;679 zveřejněné
-2627'. října 1985 a v evropské přihlášce vynálezu EF-A-C 217 57' zveře in-~né 8. dubne 1987. Zvláště výhodné bifunkcmonaln protilátky jsou ony, které jsou připraveny biologicky z některého polydoru nebo kvadromu, nebo které jsou připraveny synteticko se zesítovacímí činidly jako je bis-(maleimido)-metylV V Z K éter ( ENME ) , nebo s jinými zesítovacími činidly běžnými pro odborníky školené v oboru.
Kromě toho může ímunoglobin být protilátka s jediným řetězcem (SCA). Tyto protilátky mohou být fragmenty Fv s jediným řetězcem (scFv), ve kterých jsou proměnlivé lehké (V^) a oroměnlivé těžké (V,.) domén;/ soojene peptidovým můstkem nebo disul^idovými vazbami. ímunoglobin může také sestávat z jediné domény (dAbs), která má aktivitu vazby antigenu.
Viz například G. Wir.ter a C. Nilstein, Nátuře, 549, 295 (1991);
R. Glockshuber a spol., Eiochemistry 29, 1562 (1990); a Ξ. S. Ward a spol., Nátuře 541, 544 (1989).
Zvláště výhodné pro použití ve předloženém vynálezu jsou chimérické monoklcnální protilátky, přednostně ony chimérické protilátky, které mají specificitu k antigenu asociovanému s nádorem. Zde užitý výraz chimérická protilátka značí monoklonální protilátku obsahující proměnlivou oblast, to je vav zební oblast, z jednoho zdroje nebo látek a alespoň část stálé oblasti derivované z odlišného zdroje nebo látek, obvykle připravenou technikami rekcmbinant LNA. Chimérické protilátky obsahující myší proměnlivou oblast a lidskou stálou oblast jsou zvláště výhodné v některých využitích vynálezu, zvláště v terapii člověka, protože takové protilátky se snadno připravují a mohou být méně imunogenní než ryze myší monoklcnální protilátky. Takové mysíAidské chimérické protilátky' jsou produktem expresních imunoglobulinových genů obsahujících segmenty
Z
LNA kódující proměnlivé oblasti myšího jmunoglobulinu a segZ menty LNA kódující stálé oblasti lidského imunoglobulinu.
Jiné formy chimérických protilátek obsažené ve vynálezu jsou ony, ve kterých třída nebo podtřída byla modifikována nebo změněna ze třídy původní protilátky. Takové chimérické protilátky jsou také označovány jako protilátky s přesmykem tříd. Způsoby přípravy chimérických protilátek zahrnují obvyklé techniky rekcmbinant LNA a transfekce genů nyní v oboru dobře známé. Viz například Norrison, S.L. a spol., Froc. Nat #1 Acad. Sci.,
781, 6S51 (1584).
Výraz chimérická protilátka zahrnuje koncepci polidštěné protilátky, což jsou takové protilátky, ve kterých základní struktura nebo oblasti určující komplementaritu (CDR) byly modifikovány tak, že obsahují CDR imunoglcbulinu odlišné specificity ve srovnání s původním imunoglobulŤ.nem.
Ve přednostním provedení je myší CDR přenesen do oblasti základní struktury lidské protilátky pro přípravu polidštěné protilátky. Viz například L. Riechmann a spol., Kature 332,
323 (1588); V. S. Neuberger a spol., Nátuře 314, 268 (1585). Zvláště preferované CDR jsou ony, které představují sekvence rozpoznávající antigeny, zmíněné výše, pro chimérické a bifunkcionální protilátky. Čtenář se odkazuje na evropský patentový spis SP-A-0 235 400 zveřejněný 30. září 1587 a obsahující informace o protilátkách s modifikovanými CDR.
Odborník školený v oboru sezná, že může být připravena bifunkcionální chimérická protilátka, která by měla dobré vlastnosti nižší icunogenicity chimérické nebo polidštěné protilátky, jakož i přizpůsobivost, zvláště pro terapeutické používání, bifunkcionálních protilátek výše popsaných. Takové bifunkcionální chimérické protilátky mohou být syntetizovány, nav příklad chemickou syntézou užívající zesítovací činidla a/nebo metody rekcmbinant typu výše popsaného. V žádném případě by předložený vynález neměl týt chápán jako omezený v rozsahu nějakou zvláštní metodou nebo přípravou nějaké protilátky at bifunkcionální, chimérické, bifunkcionálně chimérické, polidštěné, nebo fragmentu rozpoznávajícího antigen nebo jeho derivátů.
Vynález přídavně zahrnuje v rámci své myšlenky imur.oglobulinv (jak byly definovány výše) nebo fragmenty imunoglcbulinu, ke kterým jsou fúzovány aktivní proteiny, například enzym onoho typu, který popisují Neuberger a spol. ve přihlášce vynálezu FOT 7/OS6/O1533 zveřejněné 13.března 1586.
Jak bylo uvedeno, bifunkcionální, fúzované, chimérické (také polidštěné) a bifunkcionální chimérické (také polidštěné) konstrukce protilátek také obsahují v rámci jejich jednotlivých uspořádání konstrukce' obsahující fragmenty rozpoznávající antigen. Jak sezná odborník školený v oboru, takové ^ragmenty by mohly být připraveny tradičním enzymovým štěpením
v. ·
-28nezměněných bifunkcionálních, chimérických, polidštěných nebo chimérických bifunkcionálních protilátek. Jestliže však nezměněné protilátky nejsou uzpůsobeny pro takové štěpení následkem povahy zavedené konstrukce, zmíněné konstrukce mohou být připraveny s fragmenty imunoglobulinu jako výchozími látkami; nebo jsou-li použity techniky rekombinant, mohou být samotné sekvence DNA přizpůsobeny pro kódování žádaného fragmentu, \ který po expresi může být kombinován in vivo nebo in vitro, chemickými nebo biologickými prostředky, pro přípravu výsledného žádaného nezměněného fragmentu imunoglobulinu. V tomto kontextu je používán výraz fragment.
Dále, jak bylo výše uvedeno, imunoglobulin (protilátka) jeto jeho fragment použitý ve předloženém vynálezu může být polyklonální nebo monoklonální povahy. Nicméně monoklonální protilátky jsou přednostně používané imunoglobuliny. Příprava takových polyklonálních nebo monoklonálních protilátek je nyní odborníkům školeným v oboru dobře známá a tito jsou dokonale schopni vyvíjet užitečné imur.oglobuliny, které mohou být využity ve předloženém vynálezu. Viz například G. Kohler a C. Nilstein, Nátuře 256, 495 (1975). Kromě toho hybridomy a/nebo monoklonální protilátky, které jsou takovými hybridomy vyvíjeny a které jsou užitečné při praktickém provádění předloženého vynálezu, jsou veřejně dostupné z pramenů, jako je American Type Culture Collection (ATCC) 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, nebo například komerčně dostupné od společnosti Soehringer-íéannheim Eiocnemicals, P.O. Eox 50816, Indianapclis, Indiana 46250.
Zvláště preferované monoklonální protilátky pro použití ve předloženém vynálezu jsou ony, které si zapamatovávají antigen asociovaný s nádorem. Takové monoklonální protilátky jsou jako příklady uvedeny v následujícím přehledném seznamu, který není omezující:
(
Φ σ
c φ
J-4
Φ u-i
CD
Pí Kr4 c —1 xO c o
Jxí
O a
o
CO
Φ
Pí
J-4
0) u
c (ti
O (tí|
J-Ί ωΙ
*- -e* | |
•«“I | CO |
Λί | σ |
J4 (ti | i—l |
> | K Γ—1 |
• | co |
X | LP |
z | ΤΓ |
z | r-Ί |
• | Q) O |
o | J-l |
(ti X | |
c -Γ-l r-1 | K |
(ti | J-4 |
>- c | Φ |
• 0 | O |
Γ—Il.—4 | c |
(ti| υ | (ti |
0 | o |
et on | Ό |
X | 3 |
*» | (ti |
(ti — | |
4-1 Ό | CO |
-|4 0) | 0) |
·»-i | -r-| |
1—1 uo
Λ χ
z o
c
H
Ό 44 44 O 3 jo n o σ’—i
-i-l 4J • 5-i C ín 5 <
co σ
1—1 u
(D
4d
Λ1
0)
Q
CO
O)
Pí u
Φ υ
c (ti
O <ti| Lf) CO jj| σι φ| ή
•r-| | K |
ε | xr |
0 | (-- |
tM | CM |
•«4 | ro |
0 | ·· |
>1 | in |
í2 | Tj* |
Φ υ
u | *» | c | • | ||
• | 0) | rH | (ti | 0 | |
co | o | • · | o | o | |
0) | c | cn | J-l | ||
Pí | (ti | iH | v | ||
o | • |
J4 | *» | 1—l| | • | |||
0) | • | (tií | rK | |||
o | • | J-4 | co | |||
c | r—il | Φ | 44 | σ | ||
(ti | (tí| | JO | Φ, | t—1 | ||
o | 4-> | |||||
> | -p| | O | •v | |||
in | <D| | C | ♦r-| | n | ||
• | co | 3 | 44 | CM | ||
ř—1 | σ | ε | (0 | Γ- | ||
(ti | t—1 | Ό | g | 3 | CM | |
C | Μ | Φ | ·· | |||
4-4 | (ti | • | <—i | r-J | ||
0) | o | r—1 | r—i | cu | ’ςΤ | |
co | 0 | Φ | ||||
Φ | σ« | o | c | 44 | ||
JO | 1—( | Pí | 3 | m | co | • |
(ti | .. | ε | co | CD | ||
44 | in | g | σ | • | ω | |
O | •V | o | H | i—l | N | tí |
- w • z
I—Il — rti|
44| · <D| -r-| o
• ω w
pí Ό (ti
- u (ti <
r—H · r—I r—4 O 4-> υ m < z o
co σ
m
MO
Lf) rr-
o | cti | |||||||||||
rH | ro | |||||||||||
cn | xř | 1 | ro | |||||||||
< | (ti | co | 1 | 1—| | ||||||||
»» | o | z | CZ) | 1 | P | |||||||
Λί | o | CM | 3 | ^3· | *. | Z | r* | O | ||||
4-> | vo | (ti | hO | r—| | ID | CM | r-4 | |||||
·*» | o | • | Lf) | CM | σ | ·. | lf) | |||||
r-* | co | 3 | *. | Lf) | • | 1 | 1 | (ti | ro | σ | ||
•f—I | tu | ro | CM | CO | Lf) | (ti | σ | CM | CM | |||
+-> | (ti | 1 | CN | cn | ro | t—l | Lf) | JO | O | |||
O | rH | K. | O | W | • | • | 1 | I | 1 | rf | H | |
Cl. | CO | co | tH | 3 | Pm | i-H | co | co | CZ) | O | U | |
Pí | Lf) | o | hO | H | t—1 | t“i | Z | Z | z | X | ES3 |
1 | V-( | V-( | |||||
C | c | ||||||
-P | Ví | O | r-1 | ||||
c | C | •f-i | X4 | ||||
CO | CJ | r~* | O | c | |||
>5 | -r-l | cx | JO | o | |||
'04 | P | l—1 | '04 | řo | |||
c o | o | Cl | *>> | +J | c | ||
CO -p | os | c | CO | JC | |||
ř> co | X0 | VI | >c | 3 | e | ||
XD V-t | c | c e | >C) ΗΞ | r-4 | <0 | ||
c e | tM O | c O | 4-> | o | (0 | ||
to | Ví | O c | 2 c | co | c | 04 | |
o v-i | c | £ -ί- | JO ·»—i | Cl | ρ- | -ri | CC |
o. c | CJ | α) o | o o | O | ω | O | 1— |
t>) c | -r-t | 3 P | Η p | ΤΟ- | >c | c | -P |
o o | t—1 | CT 3 | CO co | ΧΟ | -P | CC | c |
Pí to | C0 4C | >. 44 | Z, | co | C4 | CO |
-3 Οτι r-4 χ Q) — fa < cn co fa O Φ — PS
Rozpoznávané anti- Monoklonální genrií místo protilátky Reference
-a υ
• co
PS
T3 Ό c id m υ r—{ o · ε fa 3 P ra cd z tj o o • P
E~( fa
CN
CO cn fa cd
CN fa ·« cn r·
P fa
O
• | '—1 | |||||||||||||
0 | X | cd | • | |||||||||||
0 | P | O | 0 | |||||||||||
P | P | 0 | 0 | |||||||||||
κ fa | • | Oj | tu | • | 1—1 | r-4 | ||||||||
• C | r—i | fa | cn | o | ||||||||||
fai (ti | ΓΩ | o | o | X | r-4 | D- | o | X | ||||||
cti| | id | ID | • | ♦r-4 | cn | 0 | P | |||||||
cn | X | CN | X | CN | fa | & | O | fa | 0 | tu | ||||
PI <U | Oj | ε | CD | ε | <D | cti | CO | s | υ | |||||
Q)|fa | -'Ί | •H | sj< | D | • | * | C | |||||||
fa | • | 0) | 0) | P | tu | O | c | m | ||||||
«. 0 | -P | fa | z | fa | Z | OJ | CN | o | ||||||
ε n | fa | c | ** | H | c | X | fa | ♦ | fa | fa | ||||
0 fa | u | c | cD | c | CD | «* | -P | O | C | fa | τι | τι | ||
Ρ Ρ | cti | fa | X | cti | i—1 | τι | 0 | CO | cti | • | cti | c | ||
Ρ C | . | X | CO | tn | S | co | tn | r—1 | co | cn | m | tu | cti | |
ω < | υ | 1 | o | •r- | 1 | o | •r-4 | O | fa | P | o | fa | ||
ι—1 ι—1 | 0 | Ll | in | r“i | Li | ID | r—t | Qi · | tu | CN | cn | tn | ||
r—1 (ti | r—1 | ω | 0 | 0) | O | Ojfa | X | c | ε | 0) | ||||
0) c | cn | X | Oj | Cn | X | Oj | fa | (ti | v | c | (U | •e4 | ||
Κ 0 | c | 0 | cti | c | 0 | cti | Q | o | fa | tu | tu | i*S | τι | |
fa | Li | •»4 | D3 | C | •»~4 | ca | C | < | fa | o | 0 | |||
• υ | ω | Li | cti | o | cti | , . | CD | c | • | fa | ||||
W 0 | o | fa | • | fa | . | •r4 | O | r-*4 | • | tu | H | |||
c | c | tu | O Ό | 0) | O | fa | fa | ·· | z | •*4 | P | |||
• 0 | cti | 0 | • | c | 0 | . | O | . | cti | Γ' | • | CJ | • | c |
o | ca | Pm | fa | CQ | pLJ | fa | 5 | Z | r* | PS | co | fa |
cn v
Ó.
C •—4
Li
r- | tu | |||
CN | M-l | |||
. | ID | r~4 | •r-J | |
CN | o | P | xř | |
VO | rH | c | CN | |
cn | cn | H | < | PS |
Γ9 in fa fa fa
Z fa
X
E
O c
ω ω
Li tcn cx io vo
H c
<u
Cn fa
P c
c •rM fa fa
P
P
3J fa tí
O fa w
CO i—1 fa o
P o
ω fa ω
υ
P
P cd •r-|
Ό <D fa
UJ13A Goldman et al.
105:252, 1984.
Rozpoznávané anti- Y.onoklonální genní místo protilátky Reference c
-P tj | |
c | |
«· m | |
. | i—) |
r-(| cn | CO |
ml o | • |
•P | Λ |
2|O | |
ml o | • |
2 | |
*» | •r-J |
2 2 | 0 |
0) β | |
»—1 | • |
O | o |
JO P | 0 |
-P (ti | r—I |
P C | |
Ep O | K |
rp | Cl |
φ o | ω |
Ό 0 | 0 |
c | c |
• 0 | ni |
2 2 | u |
• ·»-4 r-JI O (til to
2|2 0ϊ| (ti o ε < o
P r-I 2 2 0) (ti >—I 2
I—i
Φ ·
K O O • P t—i (X
Η | |||||||||
o | Ό | □ | ιη | ||||||
• | σ | 0) | 2 | ΝΡ | |||||
cn | σι | σ | τ—i | Ρ | |||||
0 | ι—1 | P | •4 | 0 | ΓΟ | Ό | |||
2 | 4-> | Ο | β | ||||||
V. | (U | ιη | (ti | ||||||
• | VO | c | 2 | C0 | η | ||||
2 | 0 | νΡ | β | C0 | νο | ||||
(ti | JO | 2 | νΓ | 0) | ω | ||||
cu | 0 | CN | <—1 | ο | • | σ | ω | ||
Cl | Ό | (ΰ | ω | C0 | σ | ||||
• | (ti | 0) | co | > | ω | CN | Η | ||
w | 2 | 3 | CN | •Ρ | σ | ||||
• | ω | σ | 3 | β | ι—) | Γ'· | κ | ||
□ | 2 | ω | & | 0 | ο | (Ν | |||
0) | Ή | Γ- | 0) | ♦Η | CN | ||||
·*» | 3 | ο | 2 | ιη | • | ||||
ω | *. | (ti | ω | Ρ | |||||
vo | ω | ιη | • | νο | ο | >1 | 0 | Φ | |
ω | Ρ | σ | 0 | C0 | ·ι-4 | (ti | 2 | 2 | |
σ | ηΤ | 2 | σ | γΗ | 2 | ε | |||
Ρ | Ρ | J0 | > | φ | |||||
•— | CN | ιη | . | 3 | Ό | Ρ | Ο | ||
VO | m | Cl | *. | 2 | ω | ω | ω | ||
σ | in | σ | <υ | γ- | 2 | W | Q | ||
ιη | ·. | CO | CN | 2 | ω | ||||
O | VO | ’ν}* | « | C | •r4 | . | Ό | ||
r· | o | ο | . | « | Φ | γ—1 | W | 0) | |
·. | σ | Ό | σ | CO | 2 | 2 | 2 | »—1 | |
ml | %» | C | σ | • | ο | (ΰ | 3 | • | -»-4 |
co| | xf | (ti | *—ι | 2 | ο | 2 | Οι | 2 | Μ-4 |
το | ί | 2 | |
ω ι | Φ | ||
Γ—1 | W | r- | Γ—< |
-»*4 | CN | -.-Ι · | |
(ρ 0 | 2 Ρ | ||
2 | β | Φ | Φ |
V | 0 | β | - W |
VO 2 | •r-i | 3 | r- |
σ β | 2 | 2 | 'ti* · |
νο φ | (0 | σ co | |
*»> r-4 | Ο | 2 | |
η (ti | -Ρ | Φ | •ςρ . |
> | Ρ | 2 | r- 2 |
-Ρ | 2 | 0) | m |
Ρ. | 3 | •Ή | |
γ- σ | 2 | r~i | Γ' β |
Ο 0) | 2 | Ο (ti | |
2 | 3 | ||
« Κ. | β | Ρι | • *». |
0 σ | Φ | ω σ | |
2 ω | 2 | 0 ω | |
σ | (ti | CN | 2 σ |
• Ρ | 2 | VO | Ρ |
Ρ | ιη | . | |
Φ - | β | ρ ·. | |
w σ | (ti | ιη | Φ ο |
CN | Φ | Γ- | W Γ0 |
• | ΟιΓΟ · | ||
W · | 0 | Ο | • φ |
> | Ρ | ο σ | π β |
• Ο | 3 | σ | • 3 |
2 2 | W | *4 ρ | 2 2 |
o
CN | Ρ | ||
1—1 | νθ | Φ | |
Ο | 2 | ε | |
υ | ·»-4 | ||
·» | Ο | 2 | |
CN | •«4 | Ο | |
W | Ρ | ||
Ο | φ | ||
*» | ε | XJ· | νο νο |
Γ | •«-4 | νθ | σ σ |
2 νθ | 2 | 2 | 2 2 |
CQ 2 | Ο | 2 | 2 2 |
C | |||
Ί7 | <33 | ||
> | |||
W | Ο | ||
Ο | > Η | Ρ | |
Τ- | >5 ω | ||
ε | Ι—* | ω | CO -Η |
ο | no | -τ2 | ο ? |
•r-t | C | > | Ρ 0) |
α | ω | 3 2 | |
Ο | ο | 2 | 2 |
No. 07/544,246, filed June 26, 1990, equi-valent to PCT Patent Publication, WO 91/00295, published January 10, 1991.
-32co i—I <u υ
c
0) υ
ω ω
Ό
C (0 ο
ρ tn ω ^ρ • Ό
Ρ| Ο din ·»-4 ρ|ρ ω c
Ρ Ρ 0) d
Ό •r-i n
P
0) □
c d
P c
•r-t r—I ϋ
JC □
CN i—I • CN η co
P co σ>
P
G
Ρ Ό C - d p
dl n
in
CN ď
c o P 0) r—4 n
ε w
«. P
pl | P | Pl P | 0)1 | O | • | ||
d| | Pl | d| CO | n | -P | |||
0)1 | m | •r-| | |||||
Pl | P- | P| P | Cn P | υ | |||
Q)| | P | 0)1 | G | c | |||
P | in | ·· | -ρΊ | * | |||
«k. | ω | ». 00 | r-t | υ | |||
mcN | r—1 | .· | p CD | P | r—1 | o | |
c | CO | P | cD | tn | d | d | r—I |
0) | cn | P | O | d - | P | C | |
H | tH | X | m | 03 · | w | O | k. |
P | P | P | |||||
*» | • | k. | • tn | • | υ | ω | |
iH | ϋ· ω | *3 | 0 | υ | |||
O | Ό | > | c | c | |||
• | 0) | • c | • | 0 | d | ||
υ | T“4 | Λ | X | P P | G) | X | u |
Ή | |
c | |
P | P |
XD | P |
C | -U |
O | ΧΠ |
i—’ | P |
P | •P |
O | P |
c | o |
o | p |
ii | CL |
m •
CN
P*
CO
CN ω
ca p . CD
O cu
P
co | uo | Ό | - P | ||
*3* | ro | CN | P | tn | P CN |
1 | CN | CN 1 | |||
H | H | P | -P | P | • dl |
rH | P | P | tn p | ||
CTv | O | c | υ | 00 G | |
r· | o | d | o | Q H |
I
P
P
c a | |
xu | |
C O a ρ > a | G |
XO S-f | V) |
c e | P |
N O 'r-l | CL |
a. c | P |
N c | o |
o a | Ό |
(P tac | X0 |
Zi |
e
o P P o a S-i c c | D |
<D | |
taf) | e |
o | a |
a | P |
P | G |
a | a |
O | P |
O | |
P | Ζΐ |
S-l | P |
C | a |
>o | P |
o> | a |
Ό | o |
co | P |
Cl | |
t-. | P |
o | o |
T3 | Ό |
XO | |
Nádor ledvin A6H, D5D Ρ. H. Lange, et al. , Surqery
98:143, 1985.
-33V nejvýhodnčjším provedení je konjugst obsahující ligand derivován z chimérické protilátky BR96, ChiBR9ó, popsané ve přihlášce vynálezu Spojených států amerických U.S. Ser. No. 07/544,246 podané 26.června 1590 a odpovídající zveřejněné PCT přihlášce Ϊ.Ό 91/00295 dne 10.ledna 1991· ChiER96 je internalizač.ní my*í/lidská chimérická protilátka a je reaktivní, jak se uvádí, s •e,ukosvlováným antigenem Lewis Y expresivním lidskými nádorovými buňkami jako jsou ony derivované z nádorů prsu, plic, tlustého střeva a vaječníků. Kybridom expresivní pro chimérickou protilátku BR96 a identifikovaný jako ChiBR96 byl deponován 23.května 1990 pod výrazy budapešťské úmluvy v American Type Culture Collection (ATCC), 12301 Farklawn Drive, Rockville, Maryland 2OS52. Vzorky tohoto hybridovu jsou dostupné pod přístupovým číslem ATCC HB 10460. ChiSRSé je částečně derivován z jeho výchozího zdroje BR96. Hybridom expresivní pro BR96 byl 21. února 1989 deponován v ATCC pod výrazy budapešťské úmluvy, a je dostupný pod přístupovým číslem KB 10036. Žádaný hybridom se kultivuje a výsledné protilátky se izolují z kultury buněk supernatantu použitím standardních technik nyní v oboru dobře známých. Viz například Konoclonal Hybridoma Antibodies : Techniques and Applications, Kurell (ed.) (CRC Press, 1982).
Použité výrazy imunoglobulin nebo protilátka tudíž zahrnují v rámci jejich významu všechny formy imunoglobulinu/ protilátek nebo konstrukcí zmíněných výše.
Příprava konjugátú
Konjugáty podle předloženého vynálezu mohou být sestrojeny připojením léčivové složky ke protilátce spojovníkem vytvořeným z peptidové sekvence, která může být rozštěpena lysosomálními proteázami katepsinem E, C a D, a samcmizícím mezerníkem.
Způsob přípravy sloučeniny podle předloženého vynálezu je takový, ve kterém roztok protilátky v pufru z fosforečnanu nebo PBS byl zpracován s roztokem, dithiothreitolu (Σ5ΤΤ) při 25 až. 45°C po dobu 1 až 1C hodin pod dusíkem N£· Potom byl roztok diafiltrován proti fyziologickému rozteku pufrované.mU fosforečnanem (BBS) pc dobu 1/2 až. 12 h v závislosti na velikosti día-filtrační buňky a objemu roztoku pod dusíkem N?,
-Ί>4až je výtoková tekutina zbavena skupin SH, potem se reakční srn/s zpracuje s p-iměřeným množstvím reagencie peptid-PAECléčivo /na základě počtu skupin SH v ST.ab (určeno titrací podle Ellmana)/ v destilované vodě při teplotě 0 - 10 C po dobu od 15minut do S hodin. Roztok byl potom dialyzován proti PES asi po dobu 24 hodin při teplotě místnosti, potom filtrován a filtrát byl třepán po dobu od 15 minut do S hodin při teplotě místnosti se suspenzí Biobeads a potom provedena další filtrace.
Schémata 1 až 11 znázorňují syntézu modelových sloučenin, které byly testovány katepsir.em B za účelem určení optimálních charakteristik spojovníku obsahujícího peptidovou sekvenci, samomizící meserník a připojení k protilátce.
Schéma 12 znázorňuje syntézu sloučeniny spojovníku MC-FheLys-PAEC-DOX (50) která je konjugována k nosiči protilátky. Aktivní ester NHS sloučeniny Fmoc-Phe (49)byl připojen k N^-íětrLys (42) v ve směsi organického/vodného rozpouštědla pro vytvoření dipeptidu rmoc-Fhe-P -Jítr-Lys (44). Tato sloučenina byla potom připojena k p-aminobenzylalkoholu použitím EEDQ, výsledkem byl alkohol (45.). Skupina .Fmoc byla odstraněna dietylaminem a volný N-konccvý Phe byl připojen k MC-NKS, čímž byl získán maleimidopeptidalkohcl (47). Přidání bis-p-nitrofenyluhličitanu vytvořilo aktivovaný uhličitan (48) a skupina p-nitrofenyl byla nahrazena BOX v NM? při teplotě místnosti. Výsledný substrát MC-Phe-N^-Mtr-Lys-PABC-BCX (49) byl zbaven ochrany ve kvantitaz tivním výtěžku zpracováním s kyselinou dichloroctovou a anisolem v CHoCl2 P° dobu 1 hodiny, čímž byla získána sloučenina (50)»
Schéma 15 znázorňuje syntézu spojovníkové sloučeniny MC1 Phe-Lys-PAEC-MXC (52) obsahující MMC z aktivovaného uhličitanu (48.). Aziridinnitrogen skupiny MMC není dostatečně nukleofilní aby přímo přemístil p-nitrofenol sloučeniny (48), avšak za přítomnosti 10-násobr.ého přebytku HOEt, některé z odpovídajících oreir aktivního esteru HCEt, je dostatečně aktivní, aby reagoval s MMC. Pro zrušení ochrany (51)se místo kyseliny dichloroctové použije kyselina chloroctovs z důvodu citlivosti kMC na kyseliny.
Schéma 14 znázorňuje přípravu sloučeniny spojovníku McPhe-Lys-?AEC-7-taxcl (55) obsahující taxol. Maleimidopeptidalkohol (47) byl zpracován s 2 -rítr-taxo]-7-chloronravenčanem (připraveným ze sloučeniny 55). Byla získána sloučenina
-35MC-Fhe-N^-ytr-Lys-PABC-7-Taxol (54). Tato sloučenina byla zba* Z · véna ochrany kyselinou chloroctovcu, čímž vznikla sloucenmna (55).
Schéma 15 znázorňuje syntézu sloučeniny spojovníku MCVal-Cit-FABC-DOX (62.) obsahující citrulin. Syntéza byla v podstatě provedena způsobem popsaným pro syntézu sloučeniny (49) , který nevyžaduje zbavení ochrany bočního řetězce.
Schéma 16 znázorňuje přípravu sloučeniny spojovníku obsahující připojený aminokaproylový mezerník navržený tak, že oddělí z objemné protilátky místo enzymového štěpení. 5yla připravena sloučenina KC-NH-C-Phe-Lys-PABC-DCX (72)použitím posrupu v podstatě shodného s postupem použitým při syntéze sloučenin (50) a (55).
Schéma 17 znázorňuje syntézu sloučeniny spojovníku MC-FheLys-GABA—MKC (78)obsahující NNC a mající mezerník GABA. místo PABC. Tato sloučenina byla připravena v podstatě způsobem popsaným pro přípravu sloučeniny (52).
Schéma 1S znázorňuje syntézu možného prekurzcru kortizcnu,' Z-Fhe-Lvs-Kortizon-u (81). Tato sloučenina byla připravena v podstatě způsobem popsaným pro přípravu sloučeniny MC-PheLys-PAPC-LCX (50).
Schéma 15 znázorňuje syntézu sloučeniny spojovníku obsahující taxol-2Z-etyluhličitan, aktivní prekurzor taxolu.
··«»
NHj
H
OH
-36SCHEMA 1
OH pyridine
CH2Cl2
NaHCO3,
DME/voda
o
o
Η ó
-37SCHEMA 2 v O
ΗΝ^'Ο'^*'
S f nu NHS.DCC li 1 o /7
Sf -► Π 'N\
Q> H o THF M H °o<^
OH 0 3
-OH ° < H O
OH
NH,
EEDQ.THF
-NO,
NaHCO3,
DME, voda ji ! JJ jj o^n γ Zoh
CG° s o
Y
Ό' pyridine
O Z H O
o ^Y?“· „AOV
A°' o
DOX-HCI, Et3N, NMP íYoWA
U H
o HO y
OH
Ooz ^OH cr° 3
-38SCFTEMA 3
O / H °
o HO
7o/h°y -o
1. Pd(PPh)4, AcOH, Bi^SríH, THF
2. HCI/EtOEt
CT° 3 A
NHjHCl
OH
-39SCHEMA 4
V o
-40SCHEMA 5
1. Pd(PPh)4l AcOH, Bi^SnH, THF
2. HCI/EtOEt
NHjHCI
-41P
Η,// + —
O
S CHEM A 6·
NaHCO3,
DME/voda
->
o s NHS, DCC „ A A, OH —->
0 Pf THE
M O
-42S CHEM A 7 o
DOX-HCI,
Et3N,
NMP
1. Pd(PPh)4, AcOH,
Et3SiH,
CH2Cl2/CH3OH
2. HCI/EtOEt
V
'24
-43SCHEMA 5
NaHCO3,
DME/
OH
-44SCHEMA 9 <A o
o
Taxol,
DMAP,
CH2Cl2
cr
o
-45SCHEMA 10
f ..
-46SCHEMA 11
V o
řK,HCl
SCHÉMA 12
4. CH3OH
DME, voda NaHCO3
-48SCHEMA 12 POKRAČOVÁNÍ
OH
-49SCHÉMA 12 POKRAČOVÁNI
-50SCHEMA 12 POKRAČOVÁNÍ
ch2ci2 anisol.
-51SCHEMA 13 o
anis
-52SCHEMA 14
Taxol v
anisoí
CH2CÍ2
-53SCHEMA 15
OH
XnP°h NHS, DCC χ Η δ
-54SCHEMA 15 POKRAČOVÁNÍ
-55SCHÉMA 16
-57SCHEMA 17
GABA,
NaHCO3 v
DCC, HOBt, MMC
V o T Η;”-/
-58SCHEMA 17 POKRAČOVÁNI
MC-NHS,
CH2Cl2
-59SCHEMA 18
CICH2CO2H, anisol , CH2C!2
-60SCHEMA 19
anisol
CH2Cl2
-61Biologícké. aktivita
Vzorové konjugáty předloženého vynálezu tyly testovány v systémech in vitro a in vivo pro určení biologické aktivity.
V těchto testech byla určena potence konjugátů cytotoxických léčiv měřením cytotoxicity konjugátů proti buňkám pocházejí cín* z lidské rakoviny. Dále jsou popsány vzorové testy, které byly použity, a získané výsledky. Odborník školený v oboru sezná., že jakákoli linie nádoru vyjadřující žádaný antigen by mohla být \ použita náhradou za specifické linie nádoru použité v následujících analýzách.
Test I
Uvolnění volného DOX katepsinem B
300/Ul roztoku výše uvedeného konjugatu bylo zředěno na 1 ml octanovým pudrem majícím pH=5,0 (25 mí/ 1 ml/ LDTA), což dalo výsledné pE=5,3. Tento roztek byl inkubovén při teplotě asi 37°C zatímco ó^ul roztoku kstepsinu B (viz 2 dole) byle inkubovánc se 20/ul aktivačního roztoku (viz 2 dole) po dobu asi 15 minut při teplotě místnosti. Roztek enzymu byl potom zpracován s roztokem konjugatu majícím pH=5,3 a směs byla inkubována při teplotě asi 37°C. Periodicky bylo odebíráno 25/Ul alikvotú a rozředěno 50/Ul studeného metanolu pro sražení proteinu. Vzorky byly odstředěny a kapalina vstřikována do HPLC (kolona 0-18; 80:20 m.etanol/pH=2,8 trietylamoniummravenčanový pufr; 1 ml/min; detekční vlnová délka 495 mn). Vrcholové frakce byly kalibrovány vstřikem DOX známé koncentrace. Poločas uvolnění volného DOX byl určen asi na 3 h při 93¾ teoretického uvolnění DOX (nějaké množství volného DOX se asi vysráží s proteinem).
Test II
Stabilita lidské plazmy
3CQ,ul rozteku konjugatu bylo zředěno na 1 ml čerstvě odebranou ' o lidskou plazmou a st-’s byla inkubována při teplotě asi 37 C. Feriodicky bylo odebíráno 25/Ul alikvotú a ředěno 50zul studěného metanolu. Vzorky byly odstředěny a kapalina vstřikována do HPLC za podmínek stejných jako výše v testu I. Oddělené vzorky plazmy byly inkubovén;; 18 a 28 teoretického uvolnění volného DCX po několik minut a zpracovány stejně. Volný DOX byl úspěšně detekován a kvantifikován na těchto úrovních.
-62Žádný DOX nebyl detekován z konjugátu ve čas >375 h).
Test lil
Odkryti Z-Phelys-PABC-DQX katepsinem. B Katepsin 2 z hovězí sleziny (Sigma,
2l3změ pc 7,5 h (polomolekulární hmotnost asi 4CCOC) (10 jednotek) tyl rozpuštěn v 1 ml octanového pudru s pH=5,0 (25 mM octanu + ImM EDTA), čímž byl získán roztok asi 13,7 M. o^ul rozteku enzymu bylo inkubováno se 12/Ul aktivačního roztoku (30 mM dithiothreitolu a 15 mM EDTA) po dobu asi 15 minut při teplete místnosti. K teto· směsi tyly přidány 2 ml octanového pufru s pK=5,0 (25 mM octanu s 1 mil EDTA) a směs byla inkubována při teplotě asi 37°C, následně bylo přidáno S/Ul 10 mM-roztoku Z-Fhe-Lys-FABC-DCX v metanolu ( [Substrát] = 40/UÍů, [katepsin Ej = asi 41 nil). Směs byla inkubována p*i teplotě asi 37°C a alikvoty byly periodicky odebírány a vstřikovány do HPLC (kolona C-18; 80:20 metanol/pH=2,8 trietylamoniummravenčan (50mM) jako pufr; 1 ml/min; detekční vlnová délka 495 mn). Určený poločas uvolnění volného BOX byl 7 až 9 minut.
Test IV
Stabilita lidské plazmy
4/Ul lCmM-rcztoku sloučeniny Z-?he-Lys-?ABC-DOX tylo rozpuštěno v 1 ml čerstvě odebrané lidské plazmy. Periodicky tyly odebírány alikvoty (5C/ul) a rozředěny studeným metanolem (lCC/Ul). Vzorky byly odstředěny a kapalina vstřikována do HPLC (za podmínek uvedených výše). Dostatečné množství DOX bylo přidáno ke zvláštnímu vzorku plazmy, aby se zjistilo teoretické uvolnění 1°- ze substrátu. To bylo úspěšně detekováno použitím stejných metod. Žádný volný DOX nebyl detekován v plasmě ze Z-Fhe-Lys-PABC-DGX po 7 h (poločas >350 h).
Test V
Materiály a metody
Linie buněk lidského cinomu získaná od I.
nádoru. LI987 je linie plicníhc adenokarHellstroma (Bristol-Myers Squibb, Seattle,
UA). Linie kclorektálníhc nádoru ECTlló byla získána od
M.. Frattaina (Baylor Inst., TX). A278C je linie karcinomu vaječníků získaná od IC. Scanlona (National Cancer Institute).
-63Vazebr.é testy. Vazebné testy byly převedeny metodou nepřímé imur.oflucrescence. Stručně řečeno, cílové buňky byly sklizeny v logaritmické fázi použitím směsi trypsin/ELTA (CISCO, Grand Island, NY) v PES. Eunkv bvlv dvakrát v-pránv v PES obsahujícím
15.' hovězího sérového albuminu (ESA, Sigma Chemical Co., St. Louis, NO) a resuspendovány na 1 x 10 /ml v PES obsahujícím 15/ESA a 1 0,15/ NaN^. Euňky (0,1 ml) byly smíchány s rozličnými protilátkami (0,1 ml při 40,ug MAb/ml) a inkubovsny po dobu asi 45 minut
Q ' v při teplotě asi 4 C. Eunkv byly dvakrát vyprány a resuspendovány v 0,1 ml vhodné koncentrace králičího antilidského IgG (Cappel Laboratories, Cochranville, PA, Fab*2 fragment). Buňky byly inkubovány po dobu asi 30 minut při teplotě asi 4°C, dvakrát vyprány a uloženy na ledu a potom analyzovány na fluorescencí aktivovaném třídiči buněk Coulter FPICS 753. Lata jsou vyjádřena jako intenzita fluorescence (FI): průměrný průtokový počet buněk se specifickou protilátkou minus průměrný počet buněk s kontrolní protilátkou.
Testy cytotoxicity in vitro. Jednovrstvové kultury buněk lidského karcinomu byly sklizeny použitím směsi trypsin/EDTA (GIECC, Grand Island, NY), a buňky byly počítány a resuspendovány na lxlcG/ml v RPNI-164C obsahujícím 105/ tepelně aktivovaného fetálního telecího séra (RFí.*l-105-'PCS). Lo každé jamky 96-jamkové cikrotitrační destičky bylo vloženo 0,1 ml roztoku s buňkami a inkubováno přes noc při teplotě asi 37°C v navlhčeném ovzduší s 55/ oxidu uhličitého. Media byly odstraněna z destiček a ke stěnám byla přidána sériová ředění kenjugátů LCX nebo MAb-DOX. Všechna ředění byla provedena čtyřikrát.
Eunkv bvlv vvstavenv působení konzulátů LCX nebo MÁb-DOX oo dobu 2 h při teplotě asi 37°C v navlhčeném ovzduší s 5^ oxidu uhličitého. Potom byly destičky odstředěny (200 x g, 5 minut), léčivo nebo kenjugát odstraněny a buňky vyprány 3x RF&I-1C£FCS.
Euňky bvlv kultivovánv v RPM1-1C°'FCS (37°C, 5% C0o) pc dalších ' u , 3
4S h. Po téte době byly buňky pc dobu asi 2 h inkubovany Hthym.idinem v dávce l,C,uCi na jamku (New Fngland Nuclear, Eosskelné vaty (Skatron ton, YA) . Buňky byly sklizeny na 'filtr ze Instruments, lne., Sterling, VA), usušeny navázaná na filtr byla určena ( ?-deskový scintilnční měřič, Pharmacia LKE Eiotechnology, Piscataway, NJ). Potlačení a radioaktivita H
Cz-64Inkorporace ^H-thymidinu bylo určeno srovnáním střední CHí pro zpracované vzorky se střední OH·’ nezpracovaných kontrolních
Výsledky
Vazebné testy: Linie L29S7, A27oC a ECTU6 lidského karcinomu , byly vyhodnoceny prc expresi antigenu ER$6 použitím přímé imuno-luorescence. Jak je znázorněno v obr.l, plicní linie L29S7 vyjádřila největší hustotu antigenu BE96 (FI=172,S), linie vaječníků A 27BC vyjádřila 5R9o při nižší hustotě (F1=1O3,2) a linie tlustého střeva HCT116 nevyjádřila významná množství antigenu BR96 (FI=C).
Oytotoxicita peptidem spojeného konjugátu BR96-DOX: Potence in vitro BR9Ó-D0X peptidirnunokonjugátu byla vyhodnocena paralelně proti liniím L29S7, A27SO a HCT116 lidského karcinomu.
Jak bylo výše popsáno, tyto buňky vyjadřují různé hustoty antigenu SR96 (L29P7>A27cO»HCT116).
Také byl vyhodnocen nekcnjugovaný doxorubicin. Jak je znázorněno v obr.2, potence konjugátu 5R96-DCX byla ekvivalentní potenci nekonjugcvaného DOX proti plicní linii L29S7. Konjugát SR96-DOX byl asi 5C'-krát méně potentní než nekcnjugovaný DOX proti vaječníkové linii Α272Ό. Konjugát ER96-DOX nepůsobil proti linii KCTllo negativní na antigen. Nicméně, jak je ukázáno, tato linie byla citlivá na nekonjugovaný .DOX. Tyto údaje ukazují přímou závislost mezi potencí in vitro konjugátu BR96-DOX a hustotou epitcpu antigenu ER9ó. Souhrnně konjugát ER96-DCX ukazuje cytotoxicitu in vitro specifickou pro antigen a potence konjugátu je vztažena k hustotě antigenu ER9ó vyjádřené různými liniemi buněk.
Test VL
Konjugát BR96-PLP-DOX (YR=4,4l) byl vyhodnocen in vivo (tabulka 1) proti cizorodým štěpům lidského plicního karcinomu L29S7. Therapie byla započata 14 dnů po implantaci nádoru když nádory m'ly přibližnou velikost 75 ec 3.
Konjugát SR96-FE?-DCX byl aktivní a snášen, v dávkách 1,2.\ a* 20 mg/kg ekvivalentní injekce DOX. Vyšší dávky nebyly v tomto prvním pokusu vyhodnocovány. Jak ukazuje tabulka 1, konjugát BR96-?Sr-DOX byl významně aktivnější než optimizovuný DOX
I
-66v dávkách k 2,5 mg/kg ekvivalentní injekce POX. Aktivita konjugá tu BR96-PEP-BCX podávaného v dávkách 1,25 mg/kg byla podobná aktivitě nekcnjurovaného PCX podávaného v dávkách £ mg/kg. iato data ukazují, *e potence konjugátů ER9Ó-PPP-PCX in vivo je podobná potenci 3--8-152245. Konjugáty peptid-PCX budou vyhodnoceny pro protinádorovou aktivitu specifickou pro antigen jakmile bude rco^né p~ipravit nevázající se konjugát OgC—FPP-PCX.
Jako výsledek vý“e uvedených testů je možné seznat, že sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou vysoce učmne protinádcrové látky. osmroují nádorové buňky in vitro působením specifického cílovacího mechanismu, ve kterém připojený MAb BH96 je cílící složka, jak plyne ze skutečnosti, že buňky, které vyjadřují vysoké hladiny antigenu rozpoznaného MAo, jsou účinně usmrceny; buňky snižší hladinou antigenu jsou usmrcovány s menší účinností a buňky bez antigenu nejsou usmrcovány. Protože všechny tři typy buněk jsou citlivé na PCX, tyto výsledky musí v
pocházet z uvolnění PCX po diferenciální vazbě k buňkám, ne z diferenciální toxicity PCX k různým liniím buněk. Mechanismus podle předloženého vynálezu je podporován zjištěním, že katepsin E, lysosomální proteáza, uvolňuje volný DCX rychle z peptidového spojovníku a z úplného imunokonjugátu. Protože neobvyklé proteázy v lidské krvi neuvolňují PCX z peptidového spojovníku ani z úplného imurokonjugátu, je možné usuzovat, že imunokonjugát dosáhne nádorové buňky Člověka neporušené aniž cy cestou uvolňoval volný PCX. Nakonec pokusy in vivo s myšmi majícími nádory ukazují, že imunokonjugát podle předloženého vynálezu vytváří reemise nádoru pozitivních na antigen s větší potencí a nižší toxicitou k hostiteli než volný PCX.
V jednom provedení předloženého vynálezu je vytvořen způsob ošetřování nádorového onemocnění spočívající v tom, že se teplokrevnému živočichu podává terapeuticky účinné nebo biologické funkce modifikující množství konjugátu vzorce (I). Je zřejmé, že zvláštní použitý konjugát bude záviset na stavu nemoci, která- má být léčena nebo na biologickém systému, který má být modifikován. Odborník školený v oboru bude schopen zvolit zvláštní ligand a léčivo pro přípravu konjugátu vzorce (I), který má spec'citu pro ošetřování nemoci nebo má schopnost modifikovat žádanou biologickou funkci.
-67Zvlášt? výhodný konjugat pro tento účel je imunokonjugát, ve kterém léčivová složka je doxorubicin a ligand je zvolen ze skupiny zahrnující HR96, chimérický ES9ó a jejich fragmenty rozpoznává jí c:z antigen. Nejvýhodnější ligand pro toto provedení je chimérický 3R9č a jeho fragmenty rozpoznávající antigen.
V dalším provedení vynálezu jy vytvořen způsob přípravy sloučeniny vzorce (I) definované výše.
Konjugáty podle vynálezu se podávají pacientovi ve formě farmaceutické formulace, která obsahuje konjugat vzorce (1) a farmaceuticky přijatelný nosič, vehikulum nebo ředidlo.
Výraz farmaceuticky přijatelný se týká oněch látek, které jsou užitečné při léčení nebo diagnóze teplokrevných živočichů, například člověka, koní, vepřů, skotu, myší, psů, koček a jiných savců jakož i ptáků a jiných teplokrevných živočichů. Přednost* z · ní způsob podávání je parenterální, ze jména intravenózní, mtramuskulární, podkožní, intraperitonální nebo intralymfatickou cestou. Takové formulace mohou být připraveny použitím nosičů, ředidel nebo vehikulí, které jsou běžné, pro odborníka školeného v oboru. V tomto ohledu viz například Remington s Pharmaceutical Sciences, 16.vydání, 198C, fcíack Publishing Company, vyd. Osol a spol. Takové směsi mohou obsahovat proteiny, jako sérové proteiny, například lidský sérový albumin, pufry nebo pufrové látky jako fosforečnany, jiné soli nebo elektrolyty a podobně. Vhodná ředidla jsou například sterilní voda, izotonický fyziologický roztok, zředěná vodná dextroza, vícemocný alkohol nebo směsi takových alkoholů, například glycerin, polypropylenglykol, polyetylénglykol a podobně. Formulace mohou obsahovat ochranné látky jakc fenetylalkohol, metyl- a propylparabeny, thimerosal a podobně. Je-li to žádoucí, formulace může obsahovat 0,05 až C,2C % hmotnostních antioxidantu jako metasiřičitanu sodného nebo kyselého siřičitanu sodného.
Pro intravenózní podávání se formulace připraví s výhodou tak, že podávané množství je od 1 do 250 g žádaného konjugátu, přednostně od 4 g do 25 g konjugátu. Konjugáty podle vynálezu jsou účinné v širokém rozsahu lávkování v závislosti na faktorech jako je stav léčené nemoci nebo modifikovaného biologického účinku, způsobu podávání konjugátu, věku, hmotnosti a stavu pacienta a jiných faktorů určených ošetřujícím lékařem. Množství podávané každému pacientovi musí být určeno individuálně. Vynález je podrobně vysvětlen v následujících příkladech.
-6SPříklady provedení vynálezu
Příklad 1
Příprava alyl-c-nitrofenyluhličitanu (1) v
Alylalkohol (0,5 ml, 7,35 molů) v CK'2C12 (3 ml) byl při teplotě místnosti zpracován p-nitrofenylchlcromravenčanem (1,482 g, lekviv.). K výsledné látce byl po kapkách během 1C minut přidán pyridin (C,č mm, 1 ekviv.) v CH^.Clp (2 ml). Asi po 5 h při teplotě místnosti tyla směs procyta 15%-ní kyselinou citronovcu, vodou a solankou, usušena a odpařena. Byl získán hustý bledčžlutý olej. Tento byl chromatografován na oxidu křemičitém, eluovón 10-50%'-ní směsí EtOAc a hexanu. Byl získán výsledný produkt jako špinavě bílá krystalická pevná látka (1,542 g, 9450). IH-NN'R (CDClq): 8 4,78 (2H, d, CH2-C), 5,40 (2H, c, vinyl 0Eo), 5,95 (1H^ m, vinyl CH), (4H, 2 x d, Fh);~MS (PCI): 224 (MH)+;
Analýza kalkulace pro C^qH^NO^:
C-53,82, H-4,06, H-6,2S;
Stanoveno: C-53,73, H-4,03, N-6,23.
7,37 a S,26
Fříklad 2
Přiorava N^-Boc-N^-alloc-Lys (2)
Roztok Boc-Lys (8,4414 g, 34,27 mmolů) a NaHCO^ (2,S8 g,
I ekviv.) ve vodě (50 ml) byl přidán k alyl-p-nitrofenyluhličitanu (1) (7,c49 g, 1 ekviv.) v ΕΜΈ (50 ml) při teplotě místnosti. Směs byla přes noc míchána při teplotě místnosti. Fotom byla přidána voda (SOml) a směs byla extrahována éterem (3 x 50 ml). Vodná vrstva byla okyselena na pH=2. 105i-ní kyselinou citroncvou a potom extrahována EtOAc (3 x 80 ml). Složené oř-, ganické složky· byly promyty vodou a solankou, usušeny a odpařeny, čímž byla získána bílá pevná látka. Tato byla zpracována éterem (100 ml) a výsledná směs byla zpracována zvukem po dobu asi 15 minut, aby se rozpustil p-nitrofenol a potom byla pevná látka (10,303 g, 9151) složena filtrací a opakovaně promyta éterem. ^E-NMR (COClq/CDqOD): 5 1,41 (9H,*s, t-Eu), 1,49 a 1,7<
G LČn., y<· (2H, d, alyl O-CHO, 5,24 (2K, q, vinyl GH2), 5,S7 (1H, m, vinyl CH); MS (DCI): 331 (MH+), 275 (MH+-C,H^).
1 4 C m, Lys CH?), 3,13 (2H, m, Lys N-CHj, 4,25 (1K, m, CH), (
-69Příklad 3
Příprava Nť-Alice-Lys-TFA (3)
N^-Hoc-N^-alloc-Lys 2 (9,94 g, 30 mmolů) v CE-C1O (50 ml) byl zpracován s TFA (19 ml) při teplotě místnosti. Směs byla krátce zpracována zvukem a octem míchána asi 1 h. Rozpouštědla · byla odpařena při teplotě asi 40°C a výsledná žlutá klovatina byla rozetřena s éterem (75 ml). Byle získána bílá pevná látka (8,58 g, 83%). ΊΗ-ΝΜΕ (D2C):3l,46 a 1,87 (4H resp. 2H, m, Lys CH2), 3,11 (2H, m, N-CH2), 3,80 (1H, t, Lys CH), 4,51 (2E br s, alyl 0-CH2, 5,22 (2H, o, vinyl CH2), 5,90 (IE, m, vinyl CE)j MS (ECI): 231 (MH) + ;
Analýza kalkulsce pro
0-41,86, H-5,56, N-8,14;
Stanoveno: C-42,30, H-5,52, H-8,29.
Přiklad 4
Příprava Z-Phe-NHS (4)
Z-Phe (11,03 g, 36,85 mmolů), a NKS (4,45 g, 1,1 ekviv.) v THF (50 ml) bylo při teplete asi C°C zpracováno s ECO (7,98 g, 1,05 ekviv.). Po několika minutách se objevila silně žlutá sraženina. Směs byla ponechána zahřát na teplotu místnosti a potom byla po 16 hodin míchána. Fevný vedlejší produkt ECU byl odfiltrován a filtrát byl odpařen. Výsledný hustý bezbarvý olej byl rozpuštěn v CHOC1? (80 ml). Směs byla ponechána stát asi po dobu 1 h a potom byla filtrována pro odstranění více ECÍÍ. Filtrát byl odpařen a výsledné bezbarvé sklo bylo usušeno ve vakuu po dobu asi 3 h. Byla získána pěnovitá pevná látka (14,023 g, 96%), která byla použita bez dalšího čistění. ^Η-ΜΜΕ (CECl^/CE^OB): á 2,88 (4H, s, NHS CH?), 3,27 (2H, m, Phe CH2), 4,70 (IE, m,
Phe CH), 5,13 (2H, s, Ž CH?), 7,27 (10H, m, Ph).
Příklad 5
Příprava Z—Phe-N^-allcc-Lys (5)
Z-Phe-NHS (4) (2,783 g, 7,021 molů) v ΒΜΞ (30 ml) bylo zpracováno při teplete místnosti s roztokem N^-alloc-Lys-TFA (2,54 g, 1,05 ekviv.) a NaHCO^ (1,24 g, 2,1 ekviv.) ve vodě ✓ (30 ml). Směs byla živě míchána při teplotě místnosti po 2 dny. Malé množství ECU bylo odstraněno filtrací a filtrát byl zředěn vodou (50 ml) a potom, okyselen na pK=3 15%-ní kyselinou
-70citronovou. Výsledná směs byla extrahována EtOAc (3 x £0 ml) a složené organické vrstvy byly promyty vodou a solankou, usušeny a odpařeny. Byle získána sklovitá pevná latka. Tato látka byla zpracována éterem (130 ml), zpracována zvukem, a zahřáta ve vodní lázni (5C°C). Po ochlazení byl bílý pevný produkt (2\79 g, 78%) složen filtrací a promyt éterem. (CDCl^/CD^OD) : & 1,25,
1,43, 1,74 a 1,81 (6H, m, Lys CH2), 3,00 (2H, m, Fhe CH^ , 3,OS \ (2H, m, N-CHJ, 4,43 (2H, m, CC-CH), 4,4S (2H, d., alylický O-CH2), 5,02 (2H, m,~Z CH2), 5,20 (2E, o, vinyl CEO), 5,84 (IE, m, vinyl CH), 7,22 (10H, m, Ph); MS (FAE) : 512 (MHJ , 534 (M+Na)+, 556 (M+K)+;
Analýza kalkulace pro (^γΚ^Ν^Ογ·.
0-63,39, H-6,50, N-S,21;
Stanoveno: C-62,98, H-6,48, N-c,21.
Příklad 6
Příprava Z-Phe-N^-alIoc-Lys-?AB-OH (6)
Z-Fhe-Ne-?lloc-Lys (5) (524,7 mg, 1,026 mmolů) a p-aminofcenzylalkohol (133 Eg, 1,05 ekviv.) v THF (10 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s F-EDQ (266,3 mg, 1,05 ekviv.). Směs byla míchána při teplete místnosti po dobu 16 hodin. Směs byla odpařena do sucha při teplotě 30°C a zbytek byl rozetřen s éterem (15 ml). Výsledný bílý pevný produkt byl složen filtrací (591,6 mg, 94%) a promyt éterem. ^Η-ΒΦ (CDClq/CD^CD): & 1,25,
1,42, 1,59 a 1,77 (6H, m, Lys CH2> 2,97 (2H, m, Fhe CXj , 3,06 (2H, m, N-CE2), 4,37 (2H, m, Phe a Lys CH), 4,46 (2H, d, alyl 0-CH2), 4,55<(2H, s, Ph-CH2-OH), 4,98 (2H, m, Z CHJ, 5,1S (2H, o, vinyl CHJ), 5,81 (1H, m, vinyl CH), 7,08 a 7,43 (4H, 2 x d,
PAE Ph), 7,11 a 7,23 (10H, m, Z a Phe Ph); MS (FAE): 617 (ME) + ,
639 (M+Na)+, 655 (M+K) + ;
Analýza kalkulace pro Ο^Η^θΝ^Ογ :
C-66,22, H-6,54, N-9,0S,
Stanoveno: C-65,72, H-6,43, N-8,92.
Příklad 7
Příprava Z-Phe-N€-alloc-Lys-?ABC-?NP (7)
Z-Phe-fte-allcc-Lys-?AE-OH (ój (269,6 mg, 437,2/Umolů) v suchém THF (8 ml) byl při teplotě místnosti zpracován
-ΤΙβ p-nitroťenylcťloromravenčanem (106 mg, 1,2 ekviv.) a pyridinem (42,5/Ul, 1,2 ekviv.). Asi po 6 h TLC (oxid křemičitý;
25:1 CH2Cl9/CHoCK) oznámila dokončení. Eyly přidány EtOAc (25 ml) a ICT-ní kyselina citrónová (25 ml). Organická vrstva byla promyta vodou a solankou, usušena a odpařena. Byla získána člutá pevná látka, která byla chromatografcvána na oxidu křemičitém, elucvána se 50:1 CH2C1o/CH30H. Jako produkt tyla získána špinavě bílá pevná látka (297,4 mg, 872). (CDCl^/CD^CD) : á
1,24, 1,42, 1,55 a 1,78 (6H, m, Lys CH2), 2,97 (2H, m, N-CHp), 3,04 (2H, m, Phe CKJ, 4,38 (2H, m, Fhe a Lys CH), 4,46 (2H~ d, alyl O-CH2), 5,01 (2H, s, Z CHT), 5,17 (2H, o, vinjl CHLJ, 5,21 2H, s, PAB CH,-O), 5,37 a 5,80 (každý 1H, m, Phe a Lys NH), 5,83 (1H, m, vinyl^CK), 7,11 a 7,56 (4H, 2 x d, FAB Ph), 7,13 a 7,25 (ICH, m, Phe a Z Ph), 7,35 a 8,10 (každý 2H, d, FN? Fh), 9,23 (1H, br s, PAB NH); MS (FAB): 782 (MH+), 804 (Ma) + , 820 (M+K)+;
Analýza kalkulace pro C^H^N^O-^ :
C-62,95, H-5,54, N-8,96;
Stanoveno: 0-62,75, K-5,45, N-8,86.
Přiklad 8
Příprava Z-Phe-N^-alloc-Lys-PABC-COX (8)
Z-Fhe-N^-alloc-Lys-PABC-FNP (7) (337,2 mg, 431,3/Umolů a P0X-HC1 (275,2 mg, 1,1 ekviv.) v NMF (8 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s trietylaminem (óó^ul, 1,1 ekviv.). Směs byla nechána stát v temnu asi 2 dny. Potom byla směs zředěna 10®-ním i-Fr-CH/EtCAc (ICC ml) a promyta vodou (3 x 10C ml) a solankou, usušena a odpařena. Produkt byla oranžová pevná látka. Tento produkt byl chromatcgrafován na oxidu křemičitém, eluován 1) 25:1 a 2) 15:1 CH^Cl^/CH^OH. Byl získán produkt jako oranžová pevná látka (496,3 mg, 97T-). ^H-NMR (CDClo/CD^OD) : 8
1,18 (3H, d, cukr CH?), 1,22, 1,38, 1,56 a 1,77 (6H, m, Lys CH?), 1,74 (2H, m, D-kruh-CH2), 2,23 (2H, m, D-kruh-CH2), 2,95 (2H, m, cukr CH )), 3,02 (2H, m, N-CHj, 3,53 (1H, s, cukr HOCH), 3,80 (1H, m, cukr HN-CH), 3,55 (3H, s, OCH^), 4,06 (1H, m, cukr CHLj-CH), 4,39 (2H, m, Fhe a Lys CH), 4,43 (2H, d, alyl 0CK2), 4,70 (2H, s, FAB CH^-O), 4,89 (2H, m, Z CK2), 4,92 (1H, m, anomerní CH), 4,96 (2H, d, CO-CFT-OH), 5,15 (2H, o, vinyl CH2), 5,11, 5,39 (koždý 1H, s, OH), 5,41 (1H, br, DCX Fh-CH), 5,60 a
-71s p-nitrofenylchloromravenčanem (106 mg, 1,2 ekviv.) a pyridinem (42,5/Ul, 1,2 ekviv.). Asi po 6 h TLC (oxid křemičitý;
25:1 CHoClo/CHqCH) oznámila dokončení. Byly přidány EtOAc (25 ml) a ICK-ní kyselina citrónová (25 ml). Organická vrstva bjla promyta vodou a solankou, usušena a odpařena. Byla získána žlutá pevná látka, která byla chromatografcvána na oxidu křemičitém, elucvána se 50:1 CH^Cl^/CH^OH. Jako produkt tyla získána špinavě bílá pevná látka (297,4 mg, 87Ά . (CDCl^/CD^OD) : 5
1,24, 1,42, 1,59 a 1,78 (6H, m, Lys CH^, 2,97 (2H, m, N-CH?), 5,04 (2H, m, Phe CK A , 4,58 (2H, m, Fhe a Lys CK), 4,46 (2H, d, slyl O-CH2), 5,01 (2H, s, Z CEA , 5,17 (2H, q, vinyl Ch\), 5,21 2H, s, PAB CK9-C), 5,57 a 5,8C~(kažáý 1H, m, Phe a Lys NH), 5,85 (1H, m, vinyl CH) , 7,11 a 7,56 (4K, 2 x d, FAB rh.i, 7,15 a 7,25 (ICH, m, Phe a Z Ph), 7,55 a £,10 (každý 2H, d, FN? Ph), 9,25 (1H, br s, PAB NH); MS (FAB): 782 (MH+), 804 (M-Na)+, 820 (M+K)+;
Analýza kalkulace pro :
C-62,99, H-5,54, N-8,96;
Stanoveno: C-62,75, H-5,49, N-8,8ó.
Příklad 8
Příprava Z-Phe-N^-alloc-Lys-PABC-LOX (8)
Z-Fhe-N^-alloc-Lys-PABC-PNF (7) (557,2 mg, 451,3/Umolú a D0X-HC1 (275,2 mg, 1,1 ekviv.) v WF (8 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s trietvlaminem (66/Ul, 1,1 ekviv.). Směs byla nechána stát v temnu asi 2 dny. Potom byla směs zředěna IC^-ním i-Pr-CH/StCAc (ICC ml' a promyta vodou (5 x 10C ml) a solankou, usušena a odpařena. Produkt byla oranžová pevná látka. Tento produkt byl chromatografován na oxidu křemičitém, eluován 1) 25:1 a 2) 15:1 CHpClACH^OK. Byl získán produkt jako oranžová pevná látka (496,5 mg, 97®'). LH-NMR (CDCl^/CD^OD) : &
1,18 | (5H, d, cuk: |
ch9) | , 1,74 (2H, i |
(2H, | m, cukr CH9 |
CH^ , | 5,80 (IE, m |
cukr | CH^-CH), 4 |
(2H, m, Fhe a Lys CH), 4,45 (2H, d, alyl 0CH9), 4,70 (2H, s, FAB CP^-O), 4,89 (2H, m, Z CHA , 4,92 (1K, m, anomerní CH), 4,96 (2H, d, CO-CH2-OH), 5,15 (2H, o, vinyl CH2), 5,11, 5,59 (knždý 1H, s, OH), 5,41 (1H, br, DCX ?h-CH), 5,60 a
-725,92 (každý 1H, m, amid NH), 5,79 (1H, (10H, m, Fhe a Z Fh), 7,13 a 7,4C (4H, a 7,90 (každý 1H, m, DOX Fh), 9,15 (1H 1209 (N+Ma)+, 1224 (M+K)*; HRříS (FAB):
m, vinyl CH), 7,05 a 7,2;
x d, FAB Fh), 7,50, 7,68 br s, FAB NH); MS (FAB):
Fřesná kalkulace hmot pro C-?H-r,N^OyG: 1186,4509,' stanoveno 1186,44-6
Příklad 9
Příprava Z-Phe-Lys-PABC-DOX-KOl (9)
Z-Fhe-NC-alloc-Lys-FABC-DOX (80 (34,9 mg, 29,4/Umolů a (FPh.).PdCl7 (O,6 mg, 3¾) v suchém THF (1 ml) byly pod argonem při teplotě místností zpracovány s kyselinou octovou (3,5/Ul, ekviv.) a potom s BuoSnH (10,ul, 1,2 ekviv.). rceaxčm směs y f byla míchána při teplotě místnosti asi 1,5 h a potom zpracována s IN HC1 v éteru (60/U}. 2 ekviv.). Směs byla uložena v rrooaznici po dobu asi lha potom byla hrubá oranžová pevná látka složena filtrací a opakovaně promyta éterem. Pevná látka byla promyta skrze skleněnou fritu 5:1 CF^C^/CH^OH a potom byl filtrát odpařen. Zbytek byl zpracován zvukem v metanolu (5 ml) za účelem rozpuštění co nejvíce látky a potom filtrován k odstranění nerozpustného červeného vedlejšího produktu. Filtrát byl odpařen. Byl získán produkt jako oranžově červená pevná látka (25,1 mg, 752). ΤΗ-ΝΜΒ (CDCl^/OD^OD): <S 1,12 (2H, d, cukr CH.), 1,34, 1,65 a 1,73 (6H, m, Lys 0H7), 2,14 (2H, ra, cukr CH2), 2,81 (2K, ra, CH^-NH ), 3,76 (1H, ra, cukr HO-OH), 3,98 (3H, s, OCH^), 4,05 (1H, m, HN-CH), 4,38 a 4,45 (každý 1H, m, Fhe a Lys CH), 4,67 (2H, s, C0-CH7-0H), 4,85 (1H, m, anomerní CE), 7,04 a 7,20 (10H, ra, Z a Fhe Ph), 7,14 a 7,43 (4H, m, FAB Fh), 7,30, 7,59 a 7,92 (každý 1H, m, LOX Fh); HPLC (0-13, sloupec 15 cm, 8:2 yeCH/5C raK Et^N-HC0oH pufr (pH=2,S), 1 ml/min., 495 nm: jeden vrchol, doba retence 7,1 až 7,2 min.; MS (FAB): 1102 (fcH’),
1124 (K+Na)+; HRhlS (FAB): Fřesná kalkulace hmoty pro C58H64?r5C17: 1102,4297, stanoveno 1102,4260.
Příklad 10
Příprava Z-Val-NHS (10)
Z-Val (699,4 mg, 2,78 mmolu)*a NHS· (352,4 mg, 1,1 ekviv.) v THF (2C ml) byly při asi 0°0 zpracovány s LCC (632 mg,'1.1 ekviv.). Reakční směs byla zpracována způsobem výše popsaným pro Z-Fhe-NHS (4). Byl získán produkt jako skelná pevná látka,
-73která byla v následujícím kroku použita bez vyčistění. ^H-NNE
1,03 (6K, 2 x d, Val CH^, 2,31 (1H, m, Val CH^-CH), 2,32 (4H, s, NHS CKQ), 4,65 (1H, AE Ó, Val CC-CH), 5,12 (2K, s,
Z CHL,), 5,30 (ΪΗ, d, NH), 7,34 (5H, ro, Ph).
Příklad 11
Příprava Z-Val-N^-alloc-Lys (11)
Z-Val-NHS (10)(asi 2,72 molů) v ΕΜΞ (30 ml) bylo přidáno k roztoku N^-alloc-Lys-TFA (3)(953,3 mg, 1 ekviv. a NaHCC.
(463 mg, 2 ekviv.) ve vodě (20 ml). Reakce byla provedena tak, jak bylo popsáno výše pro Z-?he-N -alloc-Lr,s (j?) Produkt byl bílá pevná látka (l,2S55g, kvant.). 1H-?ií.'.R (CDCl^/CD^OD) : & 0,29 (6H, 2 x d, Val CH?), 1,30, 1,42, 1,62 a 1,31 (6H, m, Lys CH.), 2,03 (1H, ro, Val CH„-CH), 3,07 (2K, m, Lys N-CH-), 3,92 (1H, AS q, Lys CH), 4,42 (1H, ro, Val CC-CH), 4,49 (2H, d, alyl O-CHj, 5,06 (2H, s, Z CH2), 5,19 (2H, q, vinyl CH2), 5,32 (1H, ro, vinyl CH),
7,23 (5H, m, Fh); MS (FAE): 949 (MH~), 971 (M+Na) + , 937 (M«) + ;
Analýza kalkulace pro C29fí^^N^0^:
C-59,60, H-7,13, N-9,07;
Stanoveno: C-59,94, H-7,31, N-S,90.
Příklad 12
Příprava Z-Val-?/-alloc-Lys-PAS-OH (12)
Z-Val-N^-alloc-Lys (11) (537,9 mg, 1,27 mmolu) a p-aminobenzylalkohol (172 mg, 1,1 ekviv.) v THF (20 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány sEEDQ (345 mg, 1,1 ekviv.). Směs byla míchána při teplotě místnosti po 16 h. Zpracováním popsaným výše pro Z-Phe-N^-alloc-Lys-PAB-OH (6) byl získán produkt jako bílá pevná látka .(591,0 mg, 82%). 1H-NÍ,'.R (COC13/CLq0D) : δ 0,36 (6K, m, Val CH.), 1,24-1,67 (6H, ro, Lys CH.) , 2,C3(1H, m, Val CH^-CH), 3,03 (2H, m, Lys N-CHp), 4,CC (1H, m, Lys CH), 4,47 (3H, m, Val CC-CH a alyl 0-0¾), 4,57 (2H, s, ?AE-CH2-QK), 5,05 (2H, s, Z CH9), 5,19 (2H, q vinyl 0¾) , 5,31 (1H, ro, vinyl CH) , 7,26 a 7,43 (4H, ro, PAE Ph), 7,30 (5H, s, Z Ph) ; MS (FAE): 569 (MH)+, 591 (K+Na) + , 607 (M+K) + :
Analýza kalkulace pro ΟοθΚ^θΝ^Ογ-Ι/Ζ H20:
C-62,33, H-7,15, N-9,70;
Stanoveno: C-62,40, H-7,22, N-9,79.
-74Příklad 13
Příprava Z-VaI-N£-alloc-Lys-PABC-PNP (13)
Z-Val-N^-alloc-Lys-PAE-OH (12) (297,4 mg, 523/umolů) a p-nitroťenylchloromravenčan (264 mg, 2,5 ekviv.) v CH-^C^ (15 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s pyridinem (106/Ul, 2,5 ekviv.). Směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu asi lb h. Zpracováním popsaným výše pro Z-rhe-NT-allocLys-PABC-PNP (7)byl získán produkt jako bílá pevná látka (271,0 mg,\ 712). τΗ-ΝΜΗ (CDCiyCPoCD) : & 0,91 (6H, m, Val CH^), 1,33-1,67 (6H, Lys, CH2), 2,02 '(IH, n, Val CEqCH), 3,OS (2H, m, Lys N-CH2), 5,95 (1H, m, Lys CH), 4,41 (IH, m, Val CC-CH), 4,4S (2H, d, alyl O-CH,,),. 5,06 (2K, s, Z CH2), 5,17 (2H, q, vinyl CH^, 5,20 (2H, s, PAB CH9), 5,82 (IH, m, vinyl CH), 7,23 a 7,58 (4H, m, PAE Ph), 7,30 (5H, m, Z Ph), 7,38 a 8,31 (4H, m, PN? Ph); MS (PAS): 734 (MH)
756 (M+Na)+, 772 (M+K) + ; Přesný výpočet hmoty pro £37^44^5°]^: 734,3037; stanoveno: 734,3036.
Příklad 14
Příprava Z-ValY-aUcc-Lys-PABC-DOX (14)
Z-Val-Ne-alloc-Lys-PAEC-?N? (13) (260,0 mg, 354/umolů) a
L0X-HC1 (216 mg, 1,05 ekviv.) v NMP (12 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s trietylaminem (52/Ul). Směs byla ponechána stát v temnu po dva dny. Zpracováním popsaným výše pro Z-Fhe-N -alIoc-Lys-PAEC-DOX (8) byl získán produkt jako oranžová pevná látka (078,0 mg, 692). 1H-M (CDCl^/CD^OD) : 6 0,83 (6H, m, Val CHn), 1,18 (3H, d, cukr CH ), 1,29, 1,41, 1,53 a
1.79 (6H, m, Lys CH2), 1,72 (2H, m, D-kruh CH J , 1,98 (IH, m,
Val CH^-CH), 2,14 (2H, D-kruh CE,), 3,03 (2H,% cukr CH2), yC2 (2H, m, Lys N-CH,), 3,52 (1K, m, cukr HO-CH), 3,76 (IH, m, cukr N-CH), 3,94 (lH,m, Lys CH), 3,99 (3H, s, O-CH^), 4,39
IH, m, Val CC-CH), 4,42 (2H, d, alyl O-CH9), 4,69 (2H, s, FAB CH2), 4,88 (2H, m, Z CH2), 5,01 (2H, d, CC-CH2-0H), 5,14 (2H, q, vinyl CH?), 5,18 (IH, m, anomerní CH), 5,41 (1K, br, DOX Ph-CH),
5.80 (IH? m, vinyl CH), 7,13 a 7,40 (4H, PAE Ph), 7,26 (5H, s,
Z Ph), 7,32, 7,70 a 7,92 (každý IH, m, DOX Ph), 9,25 (IH, br,
PAE· NE); MS (PAB) 1160 (M+Na)+, 1176 (M+K) + ; Přesná kalkulace hmoty pro C^pH^N^C·^: 1160,4328; stanoveno 1160,4358.
-75Přiklad 15
Příprava Z-Val-Lys-PAEC-DOX-HCl (15)
Z-Val-N -alloc-Lys-PABC-DOX (14) (84,3 mg, 74,06/Umolú) v THF (2 ml) byl při teplotě místnosti pod argonem zpracován s PdCPPh^)^ (220/Ul roztoku Pd^ba^ ^4,7 mg, 5,13/Umolú) a PPh^ (13,5 mg, 10 elcviv.) v THF (1 ml) pod argonem) / s kyselinou octovou (llyul, 2,5 ekviv.) a tributyl cínhydridem (30/Ul, 1,5 ekviv.). Směs byla míchána při teplotě místností v temnu asi 1 hodinu. Eěhem této doby se začala vytvářet oranžová pevná látka. Směs byla zředěna éterem (2 ml), potom 1BÍ HCl v éteru (1 ml) a potom větším množstvím éteru (25 ml). Výsledná suspenze byla krátce zpracována ultrazvukem a potom přefiltrována. Získaná oranžová pevná látka byla opakovaně promyta éterem a potom rozpuštěna ve 5:1 CH^Clg/CH^OH.
K této směsi byl přidán celit (asi 2 g) a potom byla odpařena rozpouštědla. Výsledná pevná látka byla za sucha uložena na vrchol sloupce celitu (ze suspenze ve 100:1 C^C^/CH^OH). Sloupec byl eluován 1) 100:1 a 2) 10:1 C^Cl^CH^OH. Byl získán produkt jako oranžová pevná látka (58,5 mg, 72,4%).^R-NMR (vybraná maxima) (CDCl^/CD^CD): Ó (ztráta maxim alylu) 0,83 (6ff, m, Val CH^), 1,20 (3H, d, cukr CH^), 2,02 (1H, m, Val
CH3-CH), 4,01 (3H, s, O-CH?), 7,10-7,57 (9H, m, Ph), 7,32,
7,72 a 7,91 (každý 1H, m, DOX Ph); HPLC (C-1S, sloupec 15 cm, 8:2 MeOH/50 mM Et^N-HCO^ pufr (pH=2,8), 1 ml/min, 495 nm): jedno maximum, doba re tence 6,1 až 6,4 min; MS (FAB) 1054 (MH)+; Přesný výpočet hmoty pro : 1054,4297;
stanoveno: 1054,4283.
Přiklad 16
Příprava Alloc-D-Phe (16)
D-Phe (2,0203 g, 12,29 mmolú) a NaHCO^ (1,08 g, 1,05 ekviv.) ve vodě (30 ml) byly zpracovány s dialyldiuhličitanem (2,13 ml, 1,05 ekviv.) v DME (30 ml). Směs byla míchána při teplotě místnosti pc dobu asi 16 h a potom vlita do 15%-ní kyseliny citrónové. Výsledná suspenze byla extrahována EtOAc (2 x ICO ml). Složené organické yrstvy byly promyty vodou (3 x 100 ml) a solankou, usušeny a odpařeny. Byla získána bezbarvá pěna, která byla dostatečně čistá pro zpracování v dalším kroku, (3,002 g, 98%). 1H-NMR (CDCl^/CD^OD): ó 3,13 i
-76(2H, AB q, Phe CH ), 4,52 (2H, d, CHg-O), 4,64 (IH, q, Phe CH),
5,20 (2H, q, vinyl CH2), 5,85 (IH, m, vinyl CH), 7,21 (5H, m, Ph); MS (DCI): 250 (MH)+, 152 (M-C3H5O)+;
Analýza kalkulace pro C^^H^^NO^-H^O:
C-58,42, H-6,40, N-5,24;
Stanoveno: C-58,81, H-5,87, N-5,36. '
Příklad 17
Příprava Alloc-D-Phe-NHS (17)
Alloc-D-Fhe (16) (3,002 g, 12,04 molů) a NHS (1,525 g, 1,1 ekviv.) v CH20l2 Při teplotě asi 0°C byly zpracovány s DCC (2,733 g, 1,1 ekviv.). Ledová lázeň byla ponechána ohřát na teplotu místnosti a směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu asi 16 h. Zpracováním popsaným výše pro Z-Phe-RHS (4) byl získán produkt jako bezbarvá pěna, která byla použita bez dalšího čistění (4,045 g, 97%).
Přiklad 18
Příprava Alloc-D-Phe-Phe (1S)
Alloc-B-Phe-NHS (W (1,7654 g, 5,10 mmolů) v DME (30 ml) byl při teplotě místnosti zpracován s roztokem Phe (1,263 g, l, 5 ekviv.) a NaHCO^ (642,3 mg, 1,5 ekviv.) ve vodě (20ml).
Směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu asi 16 h. Potom byla směs vlita do 15%-ní kyseliny citrónové (ICO ml) a výsledná suspenze byla extrahována EtOAc (2 x ICO ml). Složené organické vrstvy byly promyty 3-krát vodou a solankou a potom usušeny. Eylo získáno bezbarvé sklo. K němu byl přidán éter (30 ml) a směs byla zpracována ultrazvukem při teplotě místnosti po dobu asi 15 minut a potom uložena v mraznici asi po dobu 1 h. Pevný produkt byl složen filtrací a promyt áterem (1,6973 g, 84%). ^-NKR (CDCl^/CD^OD): $ 2,83-3,16 (4H, m, Ph-CH2), 4,45 (2H, d, CH2-O), 4,63 a 4,89 (každý IH, m, N-Cff), 5,21 (2H, q, vinyl CH2), 5,81 (IH, m, vinyl CH), 6,93-7,34 (10H, m, Ph); MS (DCI): 397 (MH)+;
Analýza kalkulace pro C22524N2°5:
C-66,65, H-6,10, N-7,07;
Stanoveno: C-66.42, K-6,19, N-7,09·
-77Přiklad 19
Příprava Alloc-P-Fhe-Phe-NHS (19)
Alloc-B-Fhe-Fhe (18)(1,0151 g, 2,60 mmolů) a NHS (324,2 mg,
1,1 ekviv.) v CH2C12 (25 ml) bylo při 0°C zpracováno s LCC (555 mg, 1,05 ekviv.). Ledová lázeň byla ponechána ohřát na teplotu místnosti a směs byla míchána po dobu asi 18 h. Pevný DCU byl oddělen filtrací a rozpouštědlo bylo odpařeno. Zbytek byl rozpuštěn v EtOAc a roztok byl dvakrát promyt vodou a solankou, usušen a odpařen. Byla získána bílá pevná látka, která byla použita bez dalšího čistění (1,2897 g, 100%).
Příklad 20
Příprava Alloc-D-Phe-Phe-N^-alloc-Lys (20)
Alloc-D-Fhe-Phe-NHS (19)(1,2897 g, 2,61 mmolů) v DME (40 ml) byl přidán k roztoku N^-alloc-Lys-TFA (945 mg, l, 05 ekviv.) a NaHCO^ (461 mg, 2,1 ekviv.) ve vodě (20 ml).
Směs byla živě míchána při teplotě místnosti po dobu asi 16 h. Zpracováním popsaným výše pro Alloc-D-Phe-Fhe (18) byla získána surová bílá pevná látka. Tato byla suspendována v éteru a střídavě zpracována ultrazvukem a zahřívána po několik minut při teplotě asi 40°C. Potom byla směs uložena při teplotě asi 4°C po dobu asi 2 h a přefiltrována k oddělení pevného bílého produktu, který byl promyt studeným éterem (1,2046 g, 76%). 1H-NI£R (CDCl^/CD^OD): 6 1,21-1,94 (6H, 4 x m, Lys CH2), 2,79 a 2,91 (každý 2H, m, Phe CH2), 3,08 (2H, m, N-CH2), 4,29 (IH, m, Lys CH), 4,38 a 4,59 (každý IH, m, Phe CH), 4,45 a 4,53 (každý 2H, d, alyl 0-CR2), 5,20 (4H, m, vinyl 0Η£), 5,85 (2H, m, vinyl CH), 7,06-7,27 (ÍCH, m, Ph); MS (FAB): 609 (MH)+,
631 (M+Na)+, 647 (M+K)+;
Analýza kalkulace pro C32^4ON4^8:
C-63,14, H-6,62, N-9,20;
Stanoveno: C-63,05, H-6,78, N-9,25.
Přiklad 21
Příprava Alloc-D-Phe-Phe-Ng-alloc-Lys-PAB-OH (21)
Alloc-D-Phe-Phe-N^-alloc-Lys (20) (616,8 mg, 1,013 mmolů) a p-aminobenzylalkohol (137,3 mg, 1,1 ekviv.) v THF (12 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s EEDQ (2,76 mg, 1,1 ekviv.). Směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 18 h.
(
-78Zpracováním popsaným výše pro Z-Fhe-N^-alloc-Lys-PAB-OH (6) byl získán produkt jako bílá pevná látka (685,7 mg, 95%).
^H-NMR (CDCl^/CD^OL) : £ 1,20-1,98 (6H, 4 x m, Lys CHg), 2,95 (4H, m, Phe Cl·^), 3,08 (2H, m, N-CH2), 4,25 (2H, AB q, alyl 0-CH2), 4,49 (2H, d, alyl O-CH^, 4,57 (2H, s, PABCH^, 5,15 (4H, m, vinyl CH2), 5,62 a 5,87 (každý IH, m, vinyl CH), 6,96 a 7,54 (každý 2H, m, PAB Ph), 7,06-7,31 (10H, m, Ph); MS (FAB): 714 (MH)+, 736 (M+Na) + , 752 (M+K) + ; Přesná kalkulace hmoty pro C39H48N5°8; 714>3503; stanoveno: 714,3494;
Analýza kalkulace pro C39H47N5°8H2O:
C-64,01, H-6,75, N-9,57;
Stanoveno: C-64,39, H-6,63, N-9,54.
Přiklad 22
Příprava Alloc-D-Phe-Phe-N^-alloc-Lys-PABC-PNP (22)
Alloc-D-Phe-Phe-Ne-alloc-Lys-PAB-OH (21) (330,8 mg, 463,4/umolů a p-nitrofenylchloromraveněan (140,1 mg, 1,5 ekviv.) v CH2C12 (20 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány se suchým pyridinem (56,2/Ul, 1,5 ekviv.). Zpracováním popsaným výše pro Z-Phe-Ne-alloc-Lys-PABC-PNP (£) byl získán produkt jako bílá pevná látka (379,0 mg, 93%). ^H-NMR (CTCiyCD^OD): £ l, 20-2,00 (6ff, 4 x m, Lys CH2), 2,97 (4H, m, Phe CH2), 3,10 (2H, m, N-CH2), 4,21 (2H, AB q, alyl 0-0¾), 4,30, 4,52 a 4,67 (každý IH, m,' N-CH), 4,49 (2H, d, alyl 0-CH2), 5,10 (2H, m, vinyl CHL>), 5,22 (2H, s, PAB CH2), 5,58 a 5,87 (každý IH, m, vinyl CH), 6,93 a 7,66 (každý 2H, m, PAB Ph), 7,04-7,25 (10H, m, Ph), 7,32 a 8,04 (každý 2H, m, PNP Ph); MS (FAB): 879 (MH)*, 901 (M+Na) + , 917 (M+K) + ; Přesná kalkulace hmoty pro C^H^N^O^: 879,3565; stanoveno: 879,3533.
Příklad 23
Příprava Alloc-D-Phe-Phe-N^-alloc-Lys-PABC-DOX (23)
Alloc-D-Phe-Fhe-Ne-alloc-Lys-PABC-PNP (22) (379,0 mg,
431,2 mmolů) a D0X-HC1 (262,6 mg, 1,05 ekviv.) v NMP (10 ml) bylo při teplotě místnosti zpracováno s trietylaminem (63 ml, 1,05 ekviv.). Směs byla uložena v temnu při teplotě místnosti po dva dny a potom zředěna 10%-ním i-propylalkohol/EtOAc (150 ml). Výsledný roztok byl 4x promyt vodou a solankou, přefiltrován pro oddělení malého množství oranžového pevného vedlejšího produktu a potom byl odpařen, čímž byla získána oranžová pevná
-79látka. Tato byla chromatografována na oxidu křemičitém, eluována 1) 50:1 a 2) 15:1 CH2C12/CH3OH. Byl získán produkt jako oranžová pevná látka (418,8 mg, 76$) 3h-NMR (CDCl^/CD^OD):
& 1,21 (5H, d, cukr CH?), 1,28-1,96 (6H, 4xm, Lys C^), 1,76 (2H, m, D-kruh CH2), 2,18 (D-kruh CH^, 2,87 (2H, m, cukr Cí^), 5,05 (2H, m, N-CH2), 3,55 (1H, s, cukr HO-CH), 3,78 (1Ř, m, cukr N-CH), 3,99 (3H, a, CH^-0), 4,10 (lH, m, cukr CH^-CH), 4,26 (2H, m, alyl 0-0¾), 4,40 (5H, m, CO-CH), 4,45 (2H, d, alyl O-CH2), 4,70 (2H, s, CO-CH2-OH), 4,89 (2H, m, PAB CH2), 5,16 (4H, m, vinyl CíL,), 5,20 (IE, s, anomerní CH), 5,41 (1H, a,
DOX Ph-CH), 5,52 a 5,80 (každý 1H, m, vinyl CH), 6,85-7,52 (14H, m, Ph), 7,32, 7,72 a 7,97 (každý 1H, m, DOX Ph); MS (FAB ): 1282,4 (MH) ; Přeaná kalkulace hmoty pro Ο^γΗγ^Ν^ 02QNa: 1305,4856; stanoveno: 1505,4877.
Přiklad 24
Příprava D-Phe-Phe-Lys-PABC-D0X-2HCl (24)
Alloc-D-Phe-Phe-N^-alloc-Lys-PAEC-POX (23) (164,0 mg,127,8 /Umolú·)'v odplyněném 2:1 CH2C12/CH^OH (4 ml) při teplotě místnosti pod argonem byl zpracován s kyselinou octovou (57/ul, 5 ekviv.) a potom 460/Ul roztoku Pd(PPh^)^ (Pd^ba^ (6,4 mg) a PPh^ (18 mg) v odplyněném 2:1 CH2C12/CH^OH (1 ml)).
Ke směsi byl přidán trietylsilan (61yUl, 5 ekviv.) a směs byla míchána v temnu po dobu asi 16 h při teplotě místnosti. Rozpouštědla byla odstraněna na rotovapu (40°C) a oranžový skelný zbytek byl zpracován s éterem (2 ml) a 1M HCI v éteru (1 ml). Směs byla zpracována ultrazvukem po několik minut. Výsledná oranžová pevná látka byla složena filtrací a potom uložena co možno dlouhou dobu ve vodě. Nerozpustný materiál byl odfiltrován a filtrát byl odpařen do sucha. Zbytek byl chromatografován na celitu, eluován 1) 50:1, 2) 12:1 a 5) 5:1 CH2C12/CH3OH. První systém rozpouštědla eluoval nějaký nenabitý materiál, druhý eluoval jednou nabitý materiál (jednou zbavený ochrany) a produkt eluoval ve třetím systému (100,4 cg, 66¾).
1H-NMR (CDCl^/CD^OD): 6 1,12 (5H, d, cukr CH^), 1,00-1,90 (8H, m, Lys CH? a D-kruh CH2), 2,Ό7 (2H, m, D-kruh CH^, 2,55 -5,16 (8H, m, *Η3Ν-ΟΗ2 cukr CH2, Phe CH ), 5,45 (1H, s, cukr HO-CH), 5,70 (1H, m, cukr N-CH), 5,90 (5H, s, O-CH^), 4,21,
4,53 a 4,43 (každý 1H, m, CO-CH), 4,61, (2H, s, CO-CH2-OH),
-so4,80 (2H, m, PAB CH2), 5.12 (1H, brs, anomerní CH), 5,33 (1H, brs, DOX Ri-CH), 6,80-7,90 (17H, m, Ph); HPLC: (C-18, cm sloupec, 8:2 MeOH/50 mM Et^N-HCO^ pufr (pH=2,8), ml/min, 495 nm) : jedno maximum, doba retence 5,5-5,8 min;
MS (FAB ): 1114,6 (MH) .
Přiklad 25
Příprava Z-Val-Clt (26)
K roztoku Z-Val-NHS (10) (2,98 g, 8,586 mmolů) v DME (25 ml) byl při teplotě místnosti přidán roztok citrulinu (2,25 g, 1,5 ekviv.) a NaHCO^ (1,08 g, 1,5 ekviv.) ve vodě (25 ml). Směs byla živě míchána po dva dny. Ke směsi byla přidána voda (20 ml) obsahující 2 ml nas. NaHCO^ a směs byla promyta EtOAc a okyselena na pH=3 10%-ní HC1. Výsledná suspenze byla extrahována 10%-ním Bu-OH/EtOAc (3x). Složené organické vrstvy byly usušeny a odpařeny. Byla získána bílá pevná látka (3,39 g, 97%). (CDCl^/CD-jOD) : Ó Q,13 (6H, q, Val CH?),
1,31, 1,46 a 1,63 (4H, m, Cit CH2), 1,87 (1H, m, Val CH^-CH),
2,88 (2H, m, N-CH2), 3,72 (1H, AB q, Cit CH), 4,17 (1H, m,
Val COCH), 4,86 (2H, s, Z CH2), 7,10 (5H, m, Z Ph); MS (FAB): 409 (MH)+, 431 (M+Na)+, 447 (M+K)+; Přesná kalkulace hmoty pro ci9H29N4°6; 409,2087; stanoveno: 409,2086.
Přiklad 26
Příprava Z-Val-Cit-PAB-OH (27)
Z-Val-Cit (26) (1,0397 g, 2,545 molů) a p-aminobenzylalkohol (470,2 mg, 1,5 ekviv.) v THF (10 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s EEDQ (944,2 mg, 1,5 ekviv.). Směs byla míchána při teplotě místnosti asi 16 h a potom zředěna 10%-ním i-Pr-CH/EtOAc (ICO ml). Tato směs byla promyta 10%-ní kyselinou citrónovou, vodou a solankou, usušena a odpařena. Eleděžlutý pevný zbytek byl pc dobu 15 minut zpracován ultrazvukem v éteru a surový pevný produkt byl složen filtrací (954,2 mg, 73%). 1H-NMR (CDCl^/CD^OD) : 6 0,79 (6H, q, Val CH^), 1,37, 1,53 a l, 72 C4H, m, Cit Cff2), 1,92 (1H, m, Val, CH^-CH), 3,00 (2Ξ, m, N-CH2), 3,85 (1H, m, Cit CH)K 4,41 (1H, m, Val COCH), 4,45 (2H, s, PAB CH2), 4,95 (2ff, m, Z C^), 7,08-7,40 (9H, m,.Ph);
MS (FAE): 514 (MH) + , 536 (M+Na) + , 552 (M+K) + ;
Analýza kalkulace pro O2gH33rr3O^-H'2O:
C-58,74, H-7,01, N-13,17;
-βίε táno véno: C-59,01, H-6,62, N-13,17.
Příklad 27
Příprava Z-Val-Cit-PABC-PNP (28)
Z-Val-Cit-PAB-OH (27) (383,0 mg, 745,7/Umolú) a p-nitrofenylchloromravenčan (225,5 mg, 1,5 ekviv.) v THF (10 ml) a CH2C12 (5 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s pyridinem (91/Ul, 1,5 ekviv.). Zpracování bylo provedeno postupem popsaným výše pro přípravu Z-Phe-Ne-alloc-Lys-PABC-PNP (]). Produkt byl surová bleděžlutá pevná látka, která byla chromatografována na oxidu křemičitém, eluována 1)30:1 a 2) 12:1 CE2012/CH^OH. Produkt byl špinavě bílá pevná látka (440,3 mg, 87%). (CBCl^/CD^OD): 6 0,88 (6H, m, Val CH^), 1,42,
1,61 a 1,80 (4H, m, Cit CH2), 2,02 (IH, m, Val CH^-CH), 3,08 (2H, m, N-CEr2), 3,99 (IH, m, Cit CH), 4,51 (1K, m, Val COCH), 5,00 (2H, m, Z 0¾), 7,20-7,57 (9H, m, Ph), 7,30 a 8,20 (každý 2H, m, PNP Ph), MS (FAB): 679 (MH)*, 701 (M+Na)+, 717 (M+K)+; Přesná kalkulace hmoty pro Ο^Η-^^δθκΧ 679,2728; stanoveno: 679,2720.
Přiklad 28
Příprava Z-Val-Cit-PABC-BOX (29)
Z-Val-Cit-PAEC-PNP (28) (126,9 mg, 187/Umolú) a B0X-HC1 (119,3 mg, 1,1 ekviv.) v NMP (5 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s trietylaminem (29/Ul, 1,1 ekviv.). Směs byla míchána v temnu při teplotě místnosti po dva dny. Zpracování bylo provedeno postupem popsaným výše pro přípravu Alloc-BPhe-N -alloc-Lys-PAEC-BOX (23). Produkt byl surová oranžová pevná látka. Tato byla chromatografovéna na oxidu křemičitém, eluována s 1) 12:1, 2) 8:1 a 3) 5:1 CH2C12/CH^OH, čímž byl získán produkt jako červeno-oranžová pevná látka (158,0 mg,
78%). TH-NMR (CBCl^/CB^OD): <5 0,74 (6H, m, Val CH^), 1,07 (3H, d, cukr CH^), 1,28-1,88 (4H, m, Cit CH^, 1,64 a 2,08 (každý 2K, m, B-kruh CH^, 1,88 (1K, Val CH^-CH), 2,87 (2H, m, cukr CH ), 3,42 (IH, brs, cukr HO-CH), 3,95 (IH, m, cukr N-CK),
4,11 (3H, s, O-CH^), 4,38 (2H, m, CO-CH), 4,58 (2H, s, CO-CH2CH), 4,78 (2H, s, PAB CH2), 4,90 (2H, s, Z CH2), 5,04 (IE, brs, anomerní CH), 5,30 (IH, brs, BOX Ph-CH), 7,00-7,86 (12H, m, Ph), 9,31, (IH, brs, PAB NH); HPLC: (C-1S, 15 cm sloupec, 8:2
-82MeOH/50 mM Et^N-KCC^H pufr (pH=2,8), 1 ml/min, 495 nm) :
jedno maximum, doba retence 3,65-3,75 min; MS, (FAB ): 1082,8 (M ); Přesná kalkulace hmoty pro C^H^NgO^g: 1083,4199; stanoveno: 1053,4161.
Příklad 29
Příprava Z-Phe-N^-alloc-Lys-PABC-2 ^-Taxol (30) *
Taxol (15,8 mg, 18,5/Umolú) a Z-Phe-Nč-alloc-Lys-PABCPNP (7) (14,5 mg, 1 ekviv.) v CH2C12 (2 ml) byly při teplotě V místnosti zpracovány s DMAP (2,5 mg, 1,1 ekviv.). Po 2 dnech při teplotě místnosti TLC (oxid křemičitý; 25:1 Cí^CD^/CH^OH) oznámila dokončení. Byl přidán EtOAc (25 ml) a směs byla promyta lC%-ní kyselinou citrónovou, vodou a solankou, usušena a odpařena. Produkt byl bleděžluté sklo. To bylo chromatografováno na oxidu křemičitém, eluováno 30:1 CHoCl,/CH90H, produkt 1 4 k p bylo bezbarvé sklo (26,1 mg, 94%). H-NMR (vybraná maxima):<&
1,13, 1,23, 1,68 a 1,81 (každý 3H, s, Taxol CE^), 2>20 a 2,46 (každý 3H, s, Ac CH^), 3,13 (2H, m, C0N-CH2), 4,25 (2H, AB q,
C-20 CH2), 4,47 C1H, m, C-7 CH), 4,52 (2H, d, alloc 0-0¾),
4,97 (2H, m, Z CHp, 5,05 (2H, s, PAB CH^, 5,12 (2H, m, vinyl CH2), 5,45 (IE, d, C-2* CH), 5,88 (IH, m, vinyl CH), 7,10-8,17 (29H, m, Ph), 8,59 (IH, s, PAEC NH); MS (iontová sprcha):
1496,8 (MH)+, 1519,6 (M+Na)+; Přesná kalkulace hmoty pro C82^9ír5°22: 14-96,6087; stanoveno: 1496,6082.
Přiklad 30
Příprava Z-Phe-Lys-PABC-2'-Taxol-HCl (31)
Z-Phe-N6-alloc—Lys-PABC-2 '-Taxol (30) (18,1 mg, 12,09 /umolů) v suchém THF (1 ml) byl zpracován při teplotě místnosti pod argonem s AcOH (1,7/Ul, 2,5 ekviv.), PDÍPPh^)^ (45/Ul roztoku Pd2dba3 (6,2 mg, 6,77/Umolú) a PPh^ (17,8 mg, ekviv.) v suchém THF (1 ml)), a Bu^SnH (5/Ul, 1,5 ekviv.).
Asi po 30 minutách bylo přidáno více Bu^SnH (5/Ul). Asi po dalších 30 minutách byl přidán éter (5ml) a potom IM HCl v éteru (1 ml). Výsledná suspenze byla zpracována po několik minut ultrazvukem a bílá pevná látka byla složena filtrací a opakovaně promyta éterem (14,37 mg, 82%). ^H-NMP (CDClo/CD^OD) (ztráta maxim alylu) 2,98 (2H, m, H^NCH ), 4,27 (2H, AB q, C-20 CH2), 4,39 (IH, m, C-7 CH), 5,02
-83(2H, m, Z CHj, 5,09 (2H, m, PAB CH,,), 7,06-8,20 (29H, m, Ph);
HPLC: (C-18, 15 cm sloupec, 8:2 Me0H/50 mM Et^N-HCO^ pufr (pH=2,8), 1 ml/min, 230 nm) : jedno maximum, doba retence 4,8 min, (6:4 MeCN/50 mM Et^N-ECO^ pufr (pH=2,8)): jedno maximum, doba retence: 9,6 min; MS (iontová sprcha): 1413,2 (MH) ;
Přesná kalkulace hmoty pro ^θΗ^Ν^θ: 1412>5866; stanoveno: 1412,5883. \
Příklad 31
Příprava Boc-Phe-NHS (32)
Boc-Phe (5,4257 g, 20,45 mmolu) a NES (2,354 g, 1 ekviv.) v THF (55 ml) byly při teplotě asi 0°C zpracovány s DOC (4,22 g, 1 ekviv.). Ledová lázeň byla ponechána roztát a směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu asi 16 h. Pevný LCU byl odfiltrován- a filtrát byl odpařen, čímž byla získána bílá pevná látka, která byla použita bez dalšího čistění (7,2624 g, 98%). τΗ-ΝΜΚ: <f 1,39, a, t-Bu), 2,85 (4H, br s, NES CS^ , 3,22 (2H, m, Phe CH,), 3,22 (2H, m, Phe CH^, 4,94 (1H, m, CH),
7,29 (5h, m, Ph).
Přiklad 32
Příprava Boc-Phe-N^-Fmoc-Lys (33)
N^-Fmoc-Lys (3,0651 g, 8,32 nrnolů) a NaHCO^ (769 mg,
1,1 ekviv.) ve vodě (50 ml) a DME (20 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s roztokem Boc-Phe-NHS (32) (3,015 g, ekviv.) v DME (40 ml). Směs byla živě míchána při teplotě místnosti asi po 18 h a potom zředěna EtOAc (100 ml) a 10%-ní kyselinou citrónovou. Vodná vrstva byla opakovaně extrahována EtOAc (50 ml). Složené organické vrstvy byly promyty vodou (2x) a solankou, usušeny a odpařeny, čímž byla získána bleděžlutá pevná látka. Tato byla rozpuštěna v éteru a malé množství nerozpuštěné pevné látky bylo odstraněno filtrací. Filtrát byl odpařen do sucha a bleděžlutý pěnový zbytek byl usušen ve vakuu (5,0881 g, 99%). bl-NMR (CDCl^/CD^OD) : <5 1,30,
1,48, 1,67 a 1,85 (6H, m, Lys CH^, 1,35 (9H, s, t-Bu), 3,01 (2H, m, Phe CH2), 3,12 (2H, m, N-CS), 4,18 (1H, t, Fmoc CH),
4,36 (2H, d, Fmoc CH ), 4,41 a 4,50 (každý 1H, m, CO-CH),
7,12-7,77 (13H, m, Ph); MS (FAB): 616 (MH)+, 638 (M+Na)+, 654 (M+K) + ;
(
-84Analýza kalkulace pro C^H^N^O?:
C-68,27, H-6,71, N-6,8?:
Stanoveno: C-68,13, H-6,84, N-6,44.
Příklad 33
Příprava Boc-Phe-N^-Fmoc-Lys-PAB-CH (34) v
Boc-Phe-N^-Fmoc-Lys (23.)(4,8207 g, 7,83 mmolů) a p-aminobenzylalkohol (1,061 g, 1,1 ekviv.) v THF (50 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s EELQ (2,13 g, 1,1 ekviv.). Směs byla míchána při teplotě místnosti asi po 16 h. Zpracování bylo provedeno postupem popsaným výše pro Z-Phe-N -alloc-Lys-PAB-OH (63 Produkt byla špinavě bílá pevná látka (4,4579 g, 79%).
^R-NMR (CLCI3/CL3OD): 6 1,28, 1,48, 1,63 a 1,84 (6H, m, Lys CH2), 1,33 (9K, s, t-Bu), 3,00 (2H, m, Phe CH^, 3,11 (2H, m, N-CH2), 4,15 (1H, t, Fmoc CH), 4,31 (2H, d, Fmoc 0Η£), 4,38 (2H, m, CO-CH), 4,57 (2H, s, PAB CH2), 7,08-7,75 (17H, m, Ph);
MS (FAB): 721 (MH) + , 743 (M+Na)+, 759 (M+K)+;
Analýza kalkulace pro 0^^^^0^-1/2 H20:
C-69,12, H-6,77, N-7,68;
Stanoveno: C-68,96, H-6,87, N-7,64.
Přiklad 34
Příprava 2 -Fmoc-Taxol (35)
Taxol (134,6 mg, 157,6/umolů) a Fmoc-NHS (58,5 mg,
1,1 ekviv.) v CH2C12 (3 ml) byly zpracovány při teplotě místnosti s DMAP (19,3 mg, 1 ekviv.). Asi po 5 dnech při teplotě místnosti TLC (oxid křemičitý; 25:1 CH2C12/CH^OH) indikováno dokončení. Byl přidán EtOAc (50 ml) a směs byla promyta 10%-ní kyselinou citrónovou, vodou a solankou, usušena a odpařena. Zbytek byl chromatografován na oxidu křemičitém, eluován 35:1 C^Clp/CH^OH. Produkt byl bezbarvé sklo (165,6 mg,
98%). T-H-NMR: 6 1,13, 1,24 a 1,67 (každý 3H, s, C-16, C-17 a C-19 CH^), 1,92 (3H, s, C-18 CH^), 1,87 a 2,52 (2H, m, C-6 CH2), 2,22 a 2,44 (každý 3H, s, Ac CH^), 2,41 (2H, m, C-14 CH2), 2,50 (1H, d, C-7 OH), 3,82 (1H, d, 0-3 CH), 4,28-4,51 (6H, m, C-20 CH2, C-7 CH, Fmoc CH a CH?), 4,98 (1H, d, C-5 CH), 5,47 (1H, d, C-2 'CH), 5,69 (1H, d, C-2 CH), 6,03 (1H, m,
C-3' CH), 6,30 (1H, s, C-10 CH), 6,32 (1H, t, C-13 CH), 6,99
t.·
-85(1H, d, NH), 7,22-8,20 (23H, m, Ph); MS (FAB): 107c (MH)+,
1098 (M+Na)+, 1114 (M+K) + ; Přesná kalkulace hmoty pro c26ff62NOl6: 14069; stanoveno: 1076,4031.
Příklad 35
Příprava Eoc-Phe-Ng-Fmoc-Ly3-PABC-7-Taxol-2'-Fmoc (36)K
2* -Fmoc-taxol (£=>) (112,1 mg, 90,3/umolů) v suchém CH2C12 (1 ml) byl při teplotě asi 0°C zpracován pod argonem s pyridinem (8/Ul, 1,1 ekviv.) a s difosgenem (6,5/Ul, 0,6 ekv.). Asi po 40 minutách byl přidán Boc-Phe-N -Fmoc-Lys-PAB-OH (65,1 mg, 1 ekviv.) a EMAP (0,5: mg) v (1 ml)/pyridin (0,2 ml). Směs byla míchána při teplotě asi 0°C po 30 minut a potom při teplotě místnosti asi 4 h. Potom byl přidán EtOAc (30 ml) a směs byla promyta 10%-ní kyselinou citrónovou (2x), vodou a solankou, potom usušena a odpařena. Produkt byla bílá pevná látka. Ta byla chromatografována na oxidu křemičitém, eluována 30:1 CH2C12/CH^OH, produkt bylo bezbarvé sklo (81,7 mg, 50%, dvě ze tří frakcí obsahujících produkt byly znečistěný 2 -Fmoctaxolem)). TH-NMR (CECl^/CE-jOE): ó 1,19,1,22 a 1,80 (každý 3H, s, C-16, C-17 a C-19 CH^), 1,10-1,90 (6H, m, Lys CH^, 1,38 (9H, s, t-Bu), 1,82 a 2,54 (každý 1H, m, C-6 0¾), 2,05 (3H, s, C-18 CH^), 2,23 a 2,42 (každý 1H, m, C-14 CH2), 2,18 a 2,47 (každý 3H, s, Ac CH^), 3,09 (2H, m, Phe CH^, 3,19 (2H, m, Lys N-CH2), 3,98 (1H, d, C-3 CH), 4,15-4,52 (7H, m, Phe a Lys CO-CH, Fmoc CH2 a CH, C-20 CH2), 4,98 (1H, m, C-5 CH), 5,14 (2H, m, PAB CH2), 5,48 (1H, d, C-2' CH), 5,55 (1H, m, C-7 CH), 5,69 (1H, m, C-2 CH), 6,02 (1H, m, C-3* CH), 6,29 (1H, m,
C-13 CH), 6,41 (1H, s, C-10 CH), 6,96-8,18 (40H, m, Ph); MS (FAB) 1823 (MH)+, 1846 (M+Na)+, 1862 (M+K)+.
Přiklad 36
Příprava Boc-Phe-L,ys-PABC-7-Taxol-HCl (37)
Boc-Phe-Hř-Fmac-Lys-PABC-7-Taxol-2'-Fmoc (£6.) (74,6 mg,
40,95/Umolů) v THF (2 ml) bylo při teplotě místnosti zpracováno s 2%-ní DHJ v THF (2 ml). Asi po 6 minutách při teplotě místnosti byl přidán éter (25 ml) a získaná bílá pevná látka byla složena filtrací a promyta éterem. Pevná látka byla suspendována v éteru (5 ml) a zpracována s IM HC1 v éteru (2 ml).
Asi po 2 minutách byla pevná látka odfiltrována a důkladně
-86promyta éterem. Pevná látka byla chromatografovéna na lipofilním sephadexu LH-2O, eluována 1:1 CH2C12/CH^OH. Produkt byl bezbarvé sklo (35,6 mg, 90%). ^H-NMR (CDCiyCD^OL) : J 1,13, l, 19 a 1,78 (každý 3H, s, C-16, C-17 a C-19 CH^), 1,37 (93, s, t-3u), 1,10-1,90 (6H, m, Lys CH2), 1,86 a 2,54 (každý 1H, m, C-6 CH2), 2,05 (3H, s, C-18 CÍL), 2,16 a 2,38 (každý )H, s, Ac CH?), 2,97 (2H, m, +H3N-CH2), 3,12 (2H, m, Phe CH2),
3,90 (1H, d, C-3 CH), 4,24 (2H, m, C-20 CH2), 4,45 a 4,68 (každýv 1H, m, Phe a Lys CO-CH), 4,83 (1H, brs, C-2' CH), 4,91 (1H, d,
C-5 CH), 5,12 (2H, m, PAB CH^, 5,48 (1H, m, C-7 CH), 5,87 (1H, d, C-2 CH), 5,78 (1H, d, C-3* CH), 6,12 (1H, m, C-13 CH), 6,33 (1H, s, C-10 CH), 7,08-8,12 (24H, m, Ph); HPLC: (C-18, cm sloupec, 8:2 MeOH/50 mM Et^N-HCO2H pufr (pH=2,8), 1 ml/min, 230 nm): jedna maximum, doba retence: 7,1-7,3 min, MS (iontová sprcha): 1379,2 (MH)+; Přesná kalkulace hmoty pro C75%8rr5°2O: 1378,6023; stanoveno: 1378,6043.
Příklad 37
Příprava Boc-Phe-N^-Fmoc-Lya-PABC-Cl (38)
Boc-Phe-řč-Fmoc-Lys-PAB-OH (24) (211,2 mg, 293/umolů) v pyridinu (0,5 ml) a CH2C12 (2 ml) byly při teplotě -42°C (suchý led-MeCN) pod argonem zpracovány s difosgenem (21, 2/Ul,
0,6 ekviv.). Směs byla míchána při teplotě asi -42 C asi po 20 minut. Během této doby se z roztoku vysrážel pevný pyridiniumhydrochlorid. Tento roztok byl užit ihned.
Přiklad 38
Příprava Boc-Phe-N^-Fmoc-Lys-PABC-MMC (39)
K výše uvedenému roztoku Boc-Phe-N^-Pmoc-Lys-PABC-Cl (38) byl při teplotě asi -42°C přidán MMC (118,0 mg, 1,2 ekviv.) v NMP (1 ml). Chladicí lázeň byla ponechána ohřát na teplotu místnosti a směs byla míchána v temnu asi po 12 hodin při teplotě místnosti. Směs byla zředěna 10%-ní i-Pr-OH/EtOAc (50 ml) a 10%-ní kyselinou citrónovou (50 ml). Organická vrstva byla promyta vodou (3x) a solankou, usušena a odpařena.
Byl získán purpurově hnědý zbyteic. Tento byl chromatografován na 1 mm preparované desce oxidu křemičitého, eluován 12:1 CH2C12/CH^0H, čímž byl získán produkt jako lehce purpurová pevná látka (108,0 mg, 34%). 1H-NMR (CDCl^/CD^OD): ď 1,21, f
-371,43, 1,61 a 1,81 (6H, m, Lys CH^, 1,32 (SH, s, t-Bu), 2,10 (3H, s, MMC CH^), 2,99 (2H, m, Phe CH2), 3,11 (2H, m, Lya N-CH2), 3,14 (3H, s, 0-CH3), 3,20-3,50 (3H, m, C-l a C-2 CH, a C-3 CH), 3,62 (1H, ABq, C-9 CH), 4,18 '1H, t, Fmoc CH) , 4,22 a 4,89 (každý 1H, ABq, C-10 CH2), 4,32 (2H, d, Fmoc CH^, 4,41 (1H, d, C-3 CH), 4,45 (2H, m, Phe a Lys CO-CH), 5,01 (2H, m,
PAB CH2), 7,05-7,90 (17H, m, Ph); MS (FAB): 1082 (MH)+, 1103 (M+Na) , 1119 (M+K)+; Přesná kalkulace hmoty pro Ο^θΗ^ΝθΟ^Νβ: 1103,4491; stanoveno: 1103,4451.
Příklad 39
Příprava Boc-Phe-Lys-PABC-MMC-HCl (40)
Boc-Phe-N^-Fmoc-Lys-PABC-MMC (39) (11,2 mg, 10,36/Umolů) v THF (1 ml) byl při teplotě místnosti zpracován s 2%-ním DBU v THF (1 ml). Pomalu se vytvářela jemná purpurová pevná látka. Asi po 5 minutách byl objem zmenšen asi na 1 ml na rotovapu (teplota lázně 30°C) a byl přidán éter (10 ml). Výsledná pevná látka byla složena filtrací a promyta éterem. Pevná látka byla suspendována v éteru (2 ml) a zpracována s 1M HC1 v éteru (3 ml). Asi po 2 minutách byla pevná látka odfiltrována, důkladně promyta éterem a potom rozetřena s CH2C12 (2 ml). Výsledná pevná látka byla složena filtrací a promyta 0Η·2012 (9,1 mg, 98%). 1H-NMH (CDClj/CI^OD): 7 1,30 (9H, s, t-Eu), 1,20-1,90 (6H, m, Lys CH2), 1,94 (3H, s, MMC CH^), 2,83 (2H, m, +H3N-CH2), 2,98 (2H, m, Phe CHG, 3,13 (3H, s, O-CH^), 3,20-3,70 (4H, m, C-l a C-2 CH, C-3 CH a ABq, C-9 CH), 4,14 a 4,82 (každý 1H, ABq, C-10 CH), 4,25-4-52 (3H, m, Phe a Lys CO-CH a C-3 CH), 4,97 (2H, m, PAB CH2),
7,12 (5H, brs, Phe Ph), 7,23 a 7,50 (každý 2H, m, PAB Ph);
HPLC: (C-18, 15 cm sloupec, 65:35 MeOH/50 wM Et^N-HCO^ pufr s pH=2,8 , 1 ml/min, 365 nm): jedno maximum, doba retence:
4,1-4,3 min; MS (FAB): 859 (MH)+, 381 (M+Na)+, 897 (M+K)+; Přesná kalkulace hmoty pro Ο^Η^ΝθΟ^: 859, 3990; stanoveno: 859,3980.
Přiklad 40
Příprava N^-Fmoc-N^-Mtr-Lys (41)
N^-Fmoc-Lys (14,340 g, 40,28 mmolů) byl suspendován v suchém CH2C12 (200 ml) při teplotě místnosti pod argonem.
f
-88Při živém míchání byl přidán trimetylsilylchlorid (10,9 ml, ekviv.) a směs byla zahřívána pod refluxem asi 1 hodinu a potom ochlazena asi na 0°C. Byl přidán DIEA (14,0 ml, 2 ekviv.) a potom p-anisyldifenylmetylchlorid (13,061 g, 1,05 ekviv.) v CH2Cl2 (50 ml). Ledová lázeň byla odstraněna a směs byla míchána asi 2 hodiny při teplotě místnosti. Byl přidán metanol (8,2 ml, 5 ekviv.) a míchání pokračovalo 1 hodinu a potom byla odpařena rozpouštědla. Zbytek byl rozdělen mezi \ etylacetát a pufr s pK=5 (biftalát). Organická vrstva byla promyta vodou a solankou, usušena a odpařena. Produkt byla bleděoranžová klovatina. Tato byla zaplavena CH2Cl2 a usušena ve vakuu. Produkt byla pěna, která byla použita bez dalšího čistění (25,693 g, 99%). 1H-T3uCR (CDCl^) $ 1,26 a 1,68 (2H a 4H, m, Lys CI^), 2,45 (2H, m, N-Cff2), 3,71 (3H, s, OCH^),
4,05-4,40 (4H, m, Fmoc CH2 a CH, CO-CH), 6,81 (2Ξ, d, MeOPh O-CH), 7,15-7,77 (20H, m, Ph); MS (FAB) 641 (MH)*, 663 (M+Na)+,
679 (M+K)+.
Přiklad 41
Příprava N^-Mtr-Lys (42)
N^-Fmoc-N^-Mtr-Lys (41) (10,006 g, 15,615 mmolů) v CH2C12 (50 ml) byl při teplotě místnosti zpracován s dietylaminem (40 ml). Směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu asi 24 hodin a potom byla rozpouštědla odpařena a zbytek zaplaven CH2CI2 (3x100 ml). Bleděžlutý zbytek byl rozetřen s éterem. Výsledná suspenze byla zpracována ultrazvukem po několik minut a pevná látka byla složena filtrací, promyta éterem a usušena ve vakuu po několik hodin (6,191 g, 95%). ^H-NMR (CDCl^/CD^OD) S 1,34, 1,57 a 1,72 (6H, m, Lys CH^ , 2,05 (2H, m, N-CH2), 3,38 (IH, m, CO-CH), 3,68 (3H, s, OCH ), 3,71 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,03-7,40 (12H, m, Ph); MS (FAB) 419,2 (MH) + ,
441,4 (M+Na)+, 457,4 (M+K)+.
Příklad 42
Příprava Fmoc-Fhe-NHS (43)
Fmoc-Phe (5,1043 g, 13,17 mmolů) a NHS (1,552 g, 1,05 ekviv.) v CH2C12 (100 ml) při teplota asi 0°C byly zpracovány s DCC (2,854 g, 1,05 ekviv.). Ledová lázeň byla ponechána ohřát na teplotu místnosti a směs byla míchána po dobu asi 14 hodin.
-89Vedlejší produkt DCU byl odstraněn filtrací a filtrát byl odpařen. Výsledný surový produkt, bezbarvé skic, byl použit bez dalšího čistění.
Příklad 43
Příprava Fmoc-Phe-N^-Mtr-Lys (44)
Suspenze N^-Mtr-Lys (42) (4,686 g, 11,20 mmolů) a NaHCO^ (941,0 mg, 1 ekviv.) ve vodě (100 ml) a DME (50 ml) byla zpra- \ cována s roztokem Fmoc-Phe-NHS (43) (11,20 mmolů) v DME (50 ml). Potom byl pro podporu rozpustnosti přidán THF (25 ml). Směs byla míchána při teplotě místnosti po dva dny a potom bylo co možno největší množství DME odebráno na rotovapu (teplota lázně asi 30°C. Výsledná klovetinovitá suspenze byla rozdělena mezi etylacetát a pufr s pH=5. Organická fáze byla promyta vodou a solankou, usušena a odpařena. Produkt byla bleděžlutá pěna. Tato byla zaplavena CH2C12 (100 ml). TLC ukázala, že produkt mé dobrou čistotu a byl použit bez dalšího čistění (8,559 g, 97%). IH-NMR (CDC1?/CD?OD) 6 1,10-1,93 (6H, m, Lys CHJ, 2,31 (2H, t, N-CH2), 3,00 (2H, m, Phe CH2), 3,71 (3H, s, O-CH?), 4,024,48 (5H, m, Fmoc CR2 a CH, CO-CH), 6,79 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,00-7,75 (25H, m, Ph); MS (FAB) 789,2 (MH)+, 810,4 (M+Na)+,
826 (M+K) + ;
Analýza kalkulace pro
C-74,51, H-6,38, N-5,21;
Stanoveno: C-74,17, H-6,57, N-5,41.
Přiklad 44
Příprava Fmoc-Phe-N^-Mtr-Lys-PAB-OH (45)
Fmoc-Phe-Nď-Mtr-Lys (44) (7,728 g, 9,808 mmolů) a p-aminobenzylalkohol (1,450 g, 1,2 ekviv.) v CH2C12 (100 ml) byly zpracovány při teplotě místnosti s EEDQ (3,640 g, 1,5 ekviv.). Směs byla míchána při teplotě místnosti asi 20 hodin a potom bylo rozpouštědlo odpařeno (vodní lázeň o teplotě asi 30°C). Pevný zbytek byl rozetřen s éterem (200 ml) a výsledná suspenze byla zpracována ultrazvukem asi po 15 minut a ponechána stát při teplotě místnosti*asi po 2 hodiny. Výsledná pevná látka byla složena filtrací, dobře promyta éterem a usušena ve vakuu (7,6140 g, 87%). TH-NMR (CDC1?/CD?OD) $ 0,98-1,91 (6H, m, Lys CH2), 2,06 (2H, t, N-CH2), 2,97 (2H, m, Phe CH2),
-903,71 (3H, s, C-CH^), 4,12 (1H, t, Fmoc-CH), 4,20-4,41 UH, m, Fmoc CH2 a CO-CH), 4,59 (2H, s, PAB CH^, 6,72 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,00-7,73 (29H, m, Ph); MS (FAB) 891,4 (MH) + , 916,7 (M+Na)+, 931 (M+K)+;
Analýza kalkulace pro Ο^γΗ^^Ν^Ο^-Η^Ο:
C-75,14, H-6,42, N-6,15;
Stanoveno: 0-75,25, H-6,02, N-6,49·
Příklad 45
Příprava Phe-N^-Mtr-L.ys-PAB-OH (46)
Fmoc-Phe-Ne-Mtr-Lys-PAB-OH (4j>) (4,2857 g, 4,S0 mmolů) v CH2C12 (35 ml) byl při teplotě místnosti zpracován s dietylaminem (50 ml). Směs byla krátce zpracována ultrazvukem a míchána při teplotě místnosti po 4 hodiny. Po této době nebyl TLC pozorován žádný výchozí materiál. Rozpouštědla byla odpařena a zbytek byl zaplaven CH2C12 a chromatografován na oxidu křemičitém, eluován 1) 2%-ní směsí metanol/CH2Cl?, 2) 3%-ní směsí metanol/CH2C12 a 3) 4%-ní směsí metanol/CH2Cl2* Produkt byla bezbarvá pěna (2,230 g, 69%). ^H-NMR (CDCl^) <£ 1,262,00 (6H, m, Lys CH2), 2,12 (2H, t, N-CH2), 2,75 a 3,21 (každý 1H, ABq, Phe CH2), 3,68 (1H, ABq, Phe CO-CH), 3,76 (3H, s, C-CH3), 4,42 (1H, q, Lys CO-CH), 4,66 (2H, brs, PAB CH^,
6,79 (2H, d, MeCPh O-CH), 7,10-7,42 (21H, m, Ph), 7,81 (1H, d, amid NH), 8,71 (1H, s, PAB NH); MS (FAB) 693,4 (M+Na) + , 709 (M+K) + ;
Analýza kalkulace pro C^.H^N^O^-l/TH^O:
C-74,20, H-6,97, N-8,24;
Stanoveno: C-74,28, H-7,00, N-8,34.
Příklad 46
Příprava MC-Phe-Ne-Mtr-Lys-PAB-QH (47)
Phe-N^-Mtr-Lys-PAE-OH (46) (448,1 mg, 0,668 mmolů) a
DIEA (0,128 ml, 1,1 ekviv.) v CH2C12 (5 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s MC-NHS (230,4 mg, 1,12 ekviv) v CH2C12 (2 ml). Směs byla míchána při teplotě místnosti po 3 dny.
Byl přidán etylacetát (60 ml) a směs byla dvakrát promyta pufrem s pH=5, vodou a solankou, usušena a odpařena. Zbytek byl rozetřen s éterem (60 ml) a výsledná pevná látka byla c;/.
-91složena filtrací a promyta éterem (563,8 mg, 98%). ^H-NMR (CDClzj) 6 1,05-1,96 (12H, m, Lys a kaproyl CH2) , 2,07 (2H, t, Lys N-CH2), 2,18 (2H, t, C0-CH2), 3,02 (2H, m, Phe CH2),
3,39 (2H, t, M-CH2), 3,71 (3H, s, O-CH?), 4,64 (3H, s a m,
PAE CH2 a Lys CO-CH), 4,99 (IH, q, Phe CO-CH), 6,61 (2H, s,
M CH), 6,71 (2H, d, MeOPh O-CH), 6,89 (IH, m, amid NH), 7,007,55 (21H, m, Ph), 8,97 (IH, brs, PAB NH); MS (FAB) 864 (MH) + , 886 (M+Na)+, 902,4 (M+K) + .
Příklad 47
Příprava MC-Phe-Ng-Mtr-Lys-PABC-PNP (48)
MC-Phe-Nč-Mtr-Lys-PAB-CH (41) (679,3 mg, 0,786 mmolů) a bis-p-nitrofenyluhličitan (1,196 g, 5 ekviv.) byly při teplotě místnosti pod argonem rozpuštěny v CH2C12 (25 ml) a zpracovány s DIEA (0,411 ml, 3 ekviv.). Po třech dnech TLC ukázalo dokončení. Objem byl zmenšen asi na 5 ml na rotovapu a zbytek byl zředěn etylacetátem (80 ml) a promyt pufrem s pH=5, vodou a solankou, usušen a odpařen. Výsledná pevná látka byla rozetřena s éterem (80 ml) a pevná látka byla složena filtrací, promyta éterem a chromatografována na oxidu křemičitém, eluována 1) 1:1 a 2) 8:1 etylacetát/hexan (vzorek byl zaveden do sloupce v minimálním množství 8:1 etylacetát/hexan), byl získán produkt jako bleděžluté sklo (670,7 mg, 83%). ^H-NMR (CDC1?) <5 1,10-1,95 (12H, m, Lys a kaproyl CH^, 2,04 (2H, t, Lys N-CH2), 2,13 (2H, t, CO-CH.), 3,04 (2H, m, Phe CE2),
3,39 (2H, t, M-CH2), 3,72 (3H, s, O-CH ), 4,58 (IH, q, Lys COCH), 4,86 (IH, q, Phe CO-CH), 5,27 (2H, s, PAE CH^, 6,58 (IH, d, amid NH), 6,61 (2H, s, M CH), 6,72 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,03-7,62 (27H, m, Ph a NH) , 8,22 (2H, d, PNP CH), 8,86 (IH, brs, PAB NH); MS (FAB) 1029 (MH)+, 1051,5 (M+Na)+, 1069,4 (M+K)+.
Přiklad 48
Příprava MC-Phe-N^-Mtr-Lys-PABC-DOX (49)
MC-Phe-N^-Mtr-Lys-PABC-PNP (48) (126,6 mg, 0,123 molu) a D0X.HC1 (71,3 mg; 1 ekviv.) v NMP (5 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s DIEA (21,*4/Ul, 1 ekviv.). Fo dvou dnech stání v temnu při teplotě místnosti byla směs zředěna etylacetátem (60 ml) a promyta vodou (4x) a solankou a usušena a odpařena. Zbytek byl chromatografován na oxidu křemičitém,
-92eluován 1) 25:1 a 2) 20:1 CH2Cl2/metanol. Produkt byl oranžové sklo (149,0 mg, 85%). 1H-NMR (CDCl^) 0*1,10-1,95 (14H, m, Lys a kaproyl CH2), D-kruh CH^), 1,27 (3H, d, cukr CH^),
2.10 (4H, m, Lys N-CH2 a kaproyl CO-CH2), 2,23 (2H, m, D-kruh ~ CH2), 3,03 (2H, m, Phe CH2), 3,20 (2H, m, cukr CH2), 3,41, (2H, t, M-CH2), 3,67 (1H, brs, cukr HO-CH), 3,77 (3H,, s, Mtr
0-CH^), 4,08 (3H, s, DOX O-CH^), 4,13 (cukr N-CH), 4,40 (1H, m, Phe CO-CH), 4,56 (2H, m, Lys CC-CH a cukr CH^-CH), 4,76 (2H, brs, C0-CH2-0H), 4,99 (2H, m, PAB CH2), 5,29 (1H, brs, anomerní CH), 5,51 (1H, brs, DOX Ph-CH), 5,18, 6,02 a 6,38 (každý 1H, m, NH), 6,62 (2H, s, M CH), 6,77 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,00-7,60 (22H, m, Ph), 7,78 a 8,03 (každý 1H, m, DOX Ph CH), 8,22 (1H, brs, PAB NH); MS (PAB) 1433,8 (MH)+, 1456,0 (M+Na)+, 1471,8 (M+K) + .
Přiklad 49
Příprava MC-Phe-Lys-PABC-DOX . CIqCHCOqH (50)
Míchaný roztok MC-Phe-N -Mtr-lys-PAEC-DOX (4£) (1,1520 g,
0,804 mmolu) v CH2C12 (50 ml) a anisol (8,73 ml, 100 ekviv.) byl zpracován s kyselinou dichloroctovou (0,663 ml, 10 ekviv.).
Asi pro 1 hodině byl přidán etylacetát (80 ml) a výsledná suspenze byla uležena v mraznici po dobu asi 1,5 hodin. Pevná látka byla složena filtrací, promyta etylacetátem a usušena ve vakuu. Filtrát byl zkoncentrován asi na 30 ml na rotovapu (teplota lázně asi 27°C) a potom byl přidán éter (50 ml). Výsledná suspenze byla uložena v mraznici asi 1 hodinu a potom filtrována. Oranžová pevná látka byla opakovaně rozetřena s CI^C^ a potom usušena ve vakuu. (1,0092 g, 97%). ^H-NMR (CDCl^/CD^OD) 5
1,10-1,90 (14H, m, Lys a kaproyl CH2, D-kruh CH2) , 1,21 (3H, d, cukr CH^), 2,10 (2H, t, kaproyl CO-CH2), 2,20 (2H, m,
D-kruh CH2), 2,88 2H, m, Lys N-CH2), 3,02 (2H, m, Phe CH2),
3,12 (2H, m, cukr CH2), 3,38 (2H, t, M-CH2, 3,52 (1H, brs, cukr HO-CH), 3,79 (1H, m, cukr HN-CH), 4,02 (3H, s, DOX O-CH.,),
4.10 (1H, m, cukr CH^-CH), 4,43 a 4,54 (každý 1H, m, Phe a Lys CO-CH), 4,72 (2H, s, DOX 00-0¾-OH), 4,92 (2H, m, PAB CH2),
5,24 (1H, brs, anomerní CH) , 5,44 (1H, brs, DOX Ph-CH-O-cukr),
5,84 (1H, s, C12CH), 6,67 (2H, s, M CH), 7,10 (5H, brs, Phe Ph),
7,21 a 7,48 (každý 2H, d, PAE Ph), 7,38, 7,77 a 7,89 (každý
1H, d, t, a d, popř., DOX Ph); HPLC: (C-18, 15 cm sloupec,
-93S:2 metanol/50 mM mravenčan trietylamonný, pufr s pH=2,8, ml/min, 495 nn): jedno maximum, době retence: 4,4-4,5 min;
MS (FAB ) : 1159 (M-H) ; Přesná kalkulace hmoty pro C6OH6SN6°1S: 11,83,4488; stanoveno: 1183,4457.
Příklad 50
Příprava MC-Phe-N^-fětr-Lys-PABC-ivTMC (51)
Míchaná směs MC-Phe-Nč-íčtr-Lys-PABC-?NP (48) (160,4 mg,
0,1559 mmolu), HOBt (211,0 mg, 10 ekviv.) a MMC (57,3 mg,
1,1 ekviv.) v NMP (5 ml) byla při teplotě místnosti zpracována s DISA (0,271 ml, 10 ekviv.). Fo asi 14 hodinách při teplotě místnosti byl přidán etylacetát (100 ml) a směs byla promyta pufrem s pH=5, vodou a solankou, usušena a odpařena. Zbytek byl chromatografován na oxidu křemičitém, eluován l) 25:1 a 2) 20:1 CH2Cl2/metanol. Produkt bylo purpurové sklo (136,2 mg, 71?). TH-NMB (CLCl^) & 1,08-1,90 (12H, m, CH2), 1,73 (3H, s,
MMC CH^), 2,10 (4H, m, Lys N-CH2 a C0-CH2), 3,05 (2H, m, Phe CH2), 3,13 (3H, s, MMC O-CH^), 3,23-3,50 (5H, m, C-l, C-2 a C-3 CH aM-CH2), 3,63 (1H, ABq, C-9 CH), 3,74 (3H, s, Mtr O-CH^) , 4,28 a 4,90 (každý 1H, t a ABq, C-10 (3^), 4,41 (2H, dam,
C-3 CH a Phe CO-CH), 4,71 (1H, m, Lys CO-CH), 5,01 (2H, m,
PAB CH2), 5,09 (1H, brs, amid NH), 5,30 (4H, brs, NH^, 6,31 a 6,88 (každý 1H, d, amid NH), 6,63 (2H, s, M CH), 6,76 (2H, d, MeOPh O-CÍT), 7,06-7,57 (21H, m, Ph), 8,81 (1H, brs, PAB NH);
MS (FAB) 1246,8 (M+Na)+, 1262,3 (M+K)+.
Příklad 51
Příprava MO-Fhe-Lys-PABC-MMC . CICH^OqH (52)
Míchaná směs MC-Phe-Nč-Mtr-Lys-PABC-MMC (^l) (68,1 mg,
55,6/Umolú v CH9C12 (3 ml) a anisolu (0,604 ml, 100 ekviv.) byla zpracována s kyselinou chlorooctovou (1M v CH2C12,
0,56 ml, 10 ekviv.). Postupně se vytvářela purpurová sraženina. Po třech hodinách byl přidán éter (5 ml). Výsledná pevná látka byla složena filtrecí a promyta éterem a CH2C12 a potom rozpuštěna v metanolu. HPLC ukázala, že má čistotu vyšší než 95? (44,7 mg, 74?). 1H-NMH (ODCl^/CO^OD) S 1,11, 1,40,
1,63 a 1,77 (12H, m, CH2), 2,09 (2H, t, CO-CH2), 3,02 (2H,‘ m,
Phe CH2), 3,13 (3H, s, MMC O-OH^, 3,23-3,50 (5H, m, C-l, C-2 a C-3 CH a M-CH2), 3,56 (1H, ABq, C-9 CH), 3,92 (2H, brs,
-94C1CH2), 4,13 a 4,32 (každý 1H, t a ABq, C-10 CH2), 4,30 (1H, d, C-3 CH), 4,41 (1H, m, Phe CO-CH), 4,65 (1H, m, Lys CO-CH), 4,99 (2H, q, PAB CH2), 6,63 (2H, s, M CH), 7,10 (5H, brs, Phe Ph), 7,22 a 7,48 (každý 2H, d, PAB Ph); MS (FAB) 952,3 (MH) + , 974 (M+Na)+, 990,3 (M+K) + ; HPLC: (C-18, 15 cm sloupec, 65:35 metanol/50 mM mravenčen trietylamonný pufr s pH=2,8, 1 ml/min, 360 nm): jedno maximum, doba retence: 2,84 min.
Příklad 52
Příprava 2 -Metoxytrityl-Taxol (53)
Míchaný roztok taxolu (0,51 g, 0,597 mmolu) a p-metoxytritylchloridu (4,63 g, 25 ekviv.) v CH2C12 (14 ml) byl pod dusíkem při teplotě místnosti zpracován s pyridinem (1,23 ml, 25 ekviv.). Asi po 16 hodinách při teplotě místnosti bylo odpařeno rozpouštědlo a zbytek rozpuštěn v etylacetátu. Roztok byl promyt studeným pufrem s pH=5 (2x100 ml), vodou a solankou, usušen a odpařen. Zbytek byl chromatografován na oxidu křemičitém, eluován 3%-ním metanol/CH2Cl2, čímž byl získán produkt jako bílá pevná látka (482 mg, 72%). 1H-NMR (CDCl^) δ 1,11, 1,17 a 1,55 (každý 3H, s, C-16, C-17 a C-19 CH^), 1,67 (3H, s, C-18 CH3), 1,90 a 2,54 (2H, m, C-6 2,26 a 2,51 (každý 3H, s,
Ac CH?), 2,54 (2H, m, C-14 CH^, 3,66 (1H, d, C-3 CH), 3,78 (3H, s, O-CHzj), 4,21 2H, ABq, C-20 CH^, 4,41 (1H, m, C-7 CH), 4,63 (1H, d, C-2* CH), 4,92 (1H, d, C-5 CH), 5,62 (1H, d, C-2 CH), 5,70 (2H, m, C-13 a C-3' CH), 6,22 (1H, s, C-10 CH), 6,74 (2H, d, MeOPh 0-CH), 7,09-7,60 (23H, m, Ph), 7,80 a 3,09 (každý 2H, d, Bz 0-CH); MS (FAB) 1148 (M+Na) + , 1164 (M+K) + .
Příklad 53
Příprava MC-Phe-N^-Mtr-Lys-PABC-7-Taxol-2 -Mtr (54) *-metoxytrityl-taxol (53) (218,8 mg, 0,194 mmolu) v suchém CH2C12 (3 ml) byl pod argonem při teplotě asi 0°C zpracován s DIEA (34/Ul, 1 ekviv.), pyridinem (15,7/Ul, 1 ekviv.) a potom s difosgenem (12yUl, 0,5 ekviv.). Ledová lázeň byla odstraněna a směs byla míchána při teplotě místnosti asi 1 hodinu a potom znovu ochlazena na-0°C. MC-Phe-N^-Mtr-Lys-PAE-OK (47) (167,9 mg, 1 ekviv.) byl zaplaven suchým CH2C12 (6 ml), usušen ve vakuu a potom rozpuštěn v suchém CH2C12 (2 ml) a DIEA (34/Ul, 1 ekviv.). Tento roztok byl přidán stříkačkou
-95k surovému chloromravenčanu při teplotě asi O°C. Asi po 10 minutách byla ledová lázeň odstraněna a směs byla míchána při teplotě místnosti asi 18 hodin. Směs byla zředěna etylacetátem a promyta pufrem s pH=5, vodou a solankou, usušena a odpařena. Zbytek byl chromatografován na oxidu křemičitém, eluovén 1)
2:1 CH2Cl2/etylacetát, 2) 1:1 etylacetát/CH2Cl2 , 3) 4:1 etylacetát/CH2Cl2 a 4) etylacetátem. Produkt bylo bezbarvé sklo (237,9 mg, 61%) spolu s nezreagovanými výchozími materiály. TH-NMH (CDCl^) ó 1,13, 1,16 a 1,57 (každý 3H, s, C-16, C-17 a C-19 CH^), 1,10-1,80 (12H, m, Lys a kaproyL CH2), 1,88 a 2,61 (každý 1H, m, C-6 CH^ , 1,78 (3H, s, C-18 CH^), 2,10 (4H, m,
Lys N-CH2 a kaproyl CO-CH2), 2,17 a 2,29 (každý 3H, s, Ac CH^), 3,06 (2H, m, Phe CH2), 3,42 (2H, t, kaproyl N-CH^, 3,75 a 3,78 (každý 3H, s, O-CH?), 3,82 (1H, m, C-3 CH), 4,21 (2H, ABq, C-20 CH2), 4,42 a 4,70 (každý 1H, q, Phe a Lys CO-CH), 4,62 (1H, d, C-2* CH), 4,93 (1H, d, C-5 CH), 5,19 (2H, q, PAB Ci^), 5,59 (1H, m, C-7 CH), 5,62 (1H, d, C-2 CH), 5,72 (2H, m, C-3* CH a C-13 CH), 6,17 a 6,60 (každý 1H, brd, amid NH), 6,32 (1H, s, C-10 CH), 6,64 (2H, s, M CH), 6,77 (4H, m, MeOPh O-CH), 7,057,62 (44H, m, Ph), 7,80 a 8,06 (každý 2H, d, Bz O-CH), 8,37 (1H, brs, PAB NH).
Přiklad 54
Příprava MC-Phe-Lys-PABC-7-Taxol . CICH^COqH (55)
Míchaný roztok MC-Phe-N^-Mtr-Lys-PAEC-7-Taxol-2 -Mtr (54) (194,8 mg, 0,097 mmolu) v CH2C12 (4,5 ml) a anisol (1,05 ml,
100 ekviv.) byly zpracovány s kyselinou chlorooctovou (115 ve CH9C12, 0,97 ml, 10 ekviv.). Asi po 4 hodinách byl přidán éter (25 ml). Výsledná pevná látka byla složena filtrací a promyta éterem <142,0 mg, 94%). 1H-NMR (COCI3) £ 1,13, 1,20 a 1,72 (každý 3H, s, C-16, C-17 a C-19 CH?), 1,10-1,90 (12H, m, Lys a kaproyl CH2), 2,13 a 2,33 (každý 3H, s, Ac CH?),
2,96 (2H, m, +H?N-CH2), 3,05 (2H, m, Phe CH2), 3,38 (2H, m, kaproyl N-CHO), 3,86 (1H, d, C-3 CH), 4,21 (2H, m, C-20 CH2), 4,50 a 4,61 (každý 1H, m, Phe a Lys CO-CH), 4,77 (1H, brs,
C-2' CH), 4,91 (1K, d, C-5 CH), 5,10 (2H, m, PAB CH2), 5,42 (1H, m, C-7 CH), 5,64 (1H, d, C-2 CH), 5,71 (1H, m, C-3' CH) ,
6,11 (1H, m, C-13 CH), 6,30 (1H, s, C-13 CH), 6,73 (2H, s, M CH), 7,00-8,20 (24H, m, Ph); HPLC (C-18, 15 cm sloupec, 7:3
-96acetonitril/50 mM mravenčan trietylamonný pufr s pH=2,8, ml/min, 250 nm) : jedno maximum, doba retence 2,91 min; MS (FAE) 1471,6 (MH)+, 1509,5 (M+Na)+, 1511,8 (M+K)+.
Přiklad 55
Příprava Fmoc-Val-NHS (56) \
Fmoc-Val (5,060 g, 14,91 mmolů) a NHS (1,72 g, 1 ekviv.) v THF (50 ml) byly asi při 0°C zpracovány s DCC (3,080 g, 1 ekviv.). Směs byla míchána při teplotě místnosti asi 16 hodin a potom byl odfiltrován pevný vedlejší produkt DCU a promyt THF. Rozpouštědlo bylo odstraněno na rotovapu a výsledná bezbarvá sklovitá pevná látka byla bez čistění použita v následujícím kroku.
Přiklad 56
Příprava Fmoc-Val-Cit (57)
Fmoc-Val-NHS (£6) (14,91 mmolů) v DME (40 ml) byl přidán k roztoku L-citrulinu (2,743 g, 1,05 ekviv.) a NaHCO^ (1,315 g, 1,05 ekviv.) ve vodě (40 ml). K podpoře rozpustnosti byl přidán THF (20 ml) a směs byla míchána při teplotě místnosti asi 16 hodin. Byla přidána vodná kyselina citrónová (15%-ní, 75 ml) a směs byla extrahována 10%-ním izopropanol/etylacetétem (2x 100 ml). Začalo srážení pevného produktu avšak zůstávajícího s organickou vrstvou. Suspenze byla promyta vodou (2 x 150 ml) a rozpouštědla byla odpařena. Výsledná bílá pevná látka byla usušena ve vakuu asi po 5 hodin a potem zpracována éterem (80 ml). Po zpracování ultrazvukem a rozetření byl produkt jako bílá pevná látka složen filtrací (5,8007 g, 78%).
TH-NMR (DMSO-dg) S 0,87 (6H, a, Val CH^), 1,40, 1,59 a 1,69 (4H, m, Cit CH2), 1,97 (1H, m, Val CH^-CH), 2,94, q, Cit NCF2), 3,92 (1H, t,' Fmoc CH), 4,10-4,35 (2H, m, Val a Cit COCH), 4,23 (2H, t, Fmoc CH2), 5,37 (2H, brs, Cit NH’2), 5,92 (1H, t, Cit NH), 7,28-7,90 (8H, m, Ph), 8,15 (IE, d, amid NH); MS (FAB) 497 (MH)+, 519 (M+Na)+, 535 (M+K)+; Přesná kalkulace hmoty pro C2gH33N40g: 497,2400- stanoveno: 497,2394;
Analýza . kalkulace pro C^gH^N^O^:
C-62,89, H-6,50, N-11,28;
Stanoveno: C-62,92, H-6,67, N-11,C7.
-97Fřiklad 57
Příprava Fmoc-Val-Cit-PAB-CH (58)
Fmoc-Val-Cit (57) (1,0445 g, 2,105 mmolu) a p-aminobenzylalkohol (518,0 mg, 2 ekviv.) ve 2:1 CH2Cl2/metanol (35 ml) byly zpracovány s EELQ (1,0402 g, 2 ekviv.). Směs byla míchána v temnu při teplotě místnosti po dobu 1,5 dne. Rozpouštědla byla odstraněna v rotovapu (teplota lázně asi 40°C) a zbytek jako bílá pevná látka byl rozetřen s éterem (75 ml). Výsledná suspenze byla zpracována ultrazvukem asi 5 minut a potom nechána stát asi 30 minut. Pevná látka byla složena filtrací a opakovaně promyta éterem (1,0070 g, 80%). ^H-NMR (EMSO-d^) δ 0,88 (6H, t, Val CH.), 1,41 a 1,65 (4H, m, Cit CH^, 2,00 (1H, m.
Val CH3-CH), 2^99 (2H, m, Cit N-CH2), 3,92 (1H, t, Fmoc CH), 4,24 (2H, d, Fmoc CH ), 4,19-4,50 (2K, m, Val a Cit CO-CH), 4,43 (2H, d, PAB CH2), 5,11 (1K, t, PAB OK), 5,42 (2H, trs, Cit NH2), 5,98 (1H, t, Cit NH), 7,15-7,92 (12H, m, Ph), 8,12 (1H, d, amid NH), 9,99 (1H, brs, PAB NH); MS (FAE) 602 (MH)+, 624 (M+Na)+,
64C (M+K)+; Přesná kalkulace hmoty pro C^H^qN^O^: 602,2979; stanoveno: 602,2977;
Analýza kalkulace pro C^H^N^O^:
C-65,87, H-6,53, N-11,64;
Stanoveno: C-65,61, H-6,49, N-11,73.
Příklad 58
Příprava Val-Cit-PAB-QH (59)
Fmoc-Val-Cit-PAB-CH (^8) (245,2 mg, 407,5/Umolů) v NMP (4 ml) byl. při teplotě místnosti zpracován s dietylaminem (0,8 ml). Směs byla ponechána stát při teplotě místnosti asi 16 hodin a potom byla rozpouštědla odstraněna na rotovapu (teplota lázně asi 40°C). Hustý olejovitý zbytek byl zpracován s CE3,Cl2 (15 ml). Škrábáním a zpracováním ultrazvukem se z prvotně vytvořené klovatiny stala pevná látka, která byla složena filtrací a promyta CH2C12 (141,6 mg, 92%). ^H-NKR (IMSO-dg) S 0,82 (6H, 2 x d, Val CH ), 1,39, 1,59 a 1,86 (4H, m, Cit CH2), 1,92 (1H, m, Val CH^-CH), 2,98 (1H, m, Val CO-CH), 3,03 (2H, d, Val NH.), -4,45 (2H, d, PAB CH.), 4,48 (1H, m, Cit CO-CH), 5,10 (1H, brt, PAB OH), 5,41 (2H, brs, Cit NH2), 5,99 (1H, brt, Cit NH), 7,21 a 7,52 (každý 2H, d, PAB Ph),
8,12 (1H, brd, amid NH), 10,03 (1H, brs, PAB NH); MS (FAE) 380 (MH)+, 402 ÍM+Na)+, 418 (M+K)+.
-98Příklad 59
Příprava MC-Val-Cit-PAB-OH (60)
Val-Cit-FAE-OH (^9) (136,8 mg, 360,5/Umolů) a MC-NHS (122,3 mg, 1,1 ekviv.) v NMP (5 ml) byly ponechány stát při teplotě místnosti asi 16 hodin. NM? byl odstraněn na rotovepu (teplota lázně asi 40°C) a hustý olejovitý zbytek byl rozetřen s éterem (20 ml). Pevný produkt byl složen filtrací a opakovaně promyt éterem (205,7 mg, 95,651). ^H-NMR (DMSO-d^) £ 0,82 (6ri, ABq, Val CH^J, 1,10-1,90 (10H, m, Cit a kaproyl CH2), 1,92 (lff, m, Val CH^-CH), 2,16 (2H, t, kaproyl CO-CK2), 2,98 (2H, m, Cit N-CH2), 3,33 (2H, t, M-CH2), 4,19 (1K, t, Val CO-CH), 4,38 (IH, m, Cit CO-CH), 4,42 (2H, brd, PAB CH2), 5,10 (IH, brt, PAB OH), 5,42 (2H, brs, Cit NH2), 5,97 (IH, brt, Cit NH), 6,99 (2H, s, M CH), 7,21 a 7,52 (každý 2H, d, PAB Ph), 7,82 a 8,07 (každý IH, d, amid NH), 9,90 (IH, brs, PAB NH); MS (FAB) 573 (MH)+,
595 (M+Na)+, 611 (M+K) + ; Přesná kalkulace hmoty pro C^H^E^O : 573,303?; stanoveno: 573,3016.
Přiklad 60
Příprava MC-Val-Cit-PABC-PNP (61)
MC-Val-Cit-PAB-OH (6Ό) (112,4 mg, 196,3/umolů) byl pod argonem při teplotě místnosti rozpuštěn v suchém pyridinu (3 ml). Roztok byl ochlazen asi na 0°C a byl najednou přidán p-nitrofenylchloromravenčan (119 mg, 3 ekviv.) v CH2C12 (2 ml). Asi po 10 minutách při asi 0°C byla ledová lázeň odstraněna a směs byla míchána při teplotě místnosti asi 2 hodiny. Byl přidán etylacetát (50 ml) a 15%-ní kyselina citrónová (75 ml). Organická fáze byla promyta větším množstvím kyseliny citrónové, vodou a solanku, usušena a odpařena. Produkt byla světležlutá klovatina. Tato byla chromatograf o vána na oxidu křemičitém, eluována 1) 20:1 a 2) 15:1 CHoClo/metanol. Frodukt byla
(6H, d, Val CH?), 1,16-1,95 (ÍCH, m, Cit a kaproyl CH2), 2,12 (IH, m, Val CH^-Cff), 2,23 (2H, t, kaproyl CO-CH^, 3,17 (2H,
M CH), 6,91 a 7,79 (každý IH, d, amid NH), 7,34 a 7,60 (každý
brs, PAB NH); MS (FAB) 738 (MH) + , 760 (M+Na) + , 776 (M+K)+.
_QO_
Příklad 61
Příprava MC-Val-Cit-PABC-DOX (62)
MC-Val-Cit-PABC-PNP (61) (21,2 mg, 28,7/umolů) a DOX.HCI (18,5 mg, 1,1 ekviv.) v NMP (1,5 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s diizopropyletylaminem (5,5/Ul, 1,1 ekviv).
Směs byla ponechána stát v temnu při teplotě místnosti 2 dny a potom byl přidán CH2C12 (25 ml). Vytvořila se jemná sraženina. Suspenze byla přes noc uložena v mraznici a potom byla oranžová pevná látka složena filtrací a promyta CH2C12· TLC ukázala určité množství produktu zbývající v mateřském louhu spolu s většinou přidružených nečistot. Surový produkt byl chromatografován na oxidu křemičitém, eluován 1) 15:1, 2) 10:1 a 5) 5:1 CH?Cl9/metanol (vzorek byl uložen v minimálním mnužství 2:1 CH2Cl2/metanol. Produkt byl oranžová pevná látka (22,4 mg, 68%). TH-NMR (CDCl^/CD^L) & 0,85 (6H, d, Val CH?), l, 18 (5H, d, cukr CH^), 1,20-1,86 (12H, m, Cit a kaproyl CH2, D-kruh CH2, 1,93 (1H, m, Val CH^-CH), 2,12 (2H, m, D-kruh CH2), 2,17 (2H, t, kaproyl CO-CH2), 2,90-3,20 (4H, q a m, cukr CH2 a Cit N-CH2, 3,39 (2H, t, M-CH2), 3,50 (1H, brs, HO-CH), 3,98 (3H, s, O-CH), 4,02 (1H, m, Val CO-CH), 4,05 (1H, m, cukr CH3-CH), 4,46 (1H, m, Cit CO-CH), 4,68 (2H, s, CO-CÍ^-OH),
4,88 (2H, q, PAECH^, 5,16 (1H, brs, anomerní CH), 5,39 (1H, brs, DOX Ph-CH), 6,62 (2H, s, M CH), 7,13 a 7,42 (každý 2H, d, PAB Ph), 7,32, 7,71 a 7,92 (každý 1H, d, t a d, DOX Ph) ; MS (FAB) 1141 (MH)+, 1164,6 (M+Na) + , 1180 (M+K)+; Přesná kalkulace hmoty pro Ο^Η^γΗγΟ-^: 1164,4389; stanoveno: 1164,4363. Přiklad 62
Příprava N-Boc-amlnokapronová kyselina (63)
6-aminokapronová kyselina (5,2331 g, 39,89 mmolů) a
NaHCO^ (3,3514 g, 1 ekviv.) ve vodě (50 ml) byly zpracovány s d-t-butyldikarbonátem (9,58 g, 1,1 ekviv.). Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti a potom byla přidána voda (150 ml) a nas. NaHCO^ (5 ml). Roztok byl extrahován éterem (100 ml) a potom byla přidána pevná kyselina citrónová (10 g). Vznikla olejovitá suspenze. Tato*byla extrahována etylacetátem (3 x). Složené organické fáze byly promyty vodou a solankou, usušeny a odpařeny. Produkt byl bezbarvý olej, který ztuhl pod vakuem (9,23 g, kvant.). ^H-NMR (DMSO-dg) S 1,10-1,55 (6H, m, kaproyl CH2), 1,33 (9H, s, Cí^), 1,33 (9H, s, CHJ, 2,28
-100(2H, m, C0-CH2), 2,88 (2H, m, N-CH2), 6,77 (IH, m, NH); MS (DCI) 232 (MH)+, 176 (MH-C4Hg) + ;
Analýza kalkulace pro C11H21NO4:
C-57,12, H-9,15, N-6,06;
Stanoveno: C-57,11, H-9,22, N-6,09.
v
Přiklad 63
Příprava Boc-NH-C-NHS (64)
N-Boc-amirokapronová kyselina (63) (9,23 g, 39,9 mmolů) a NHS (5,05 g, 1,1 ekviv.) v THF (75 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s DCC (9,05 g, 1,1 ekviv.). Směs byla míchána při teplotě místnosti asi 16 hodin a potom byl odfiltrován pevný vedlejší produkt DCU. Filtrát byl odpařen, čímž byl získán hustý olej, který byl rozpuštěn v CH2C12 (150 ml).
Po stání asi po dobu 1 hodiny bylo odfiltrováno více DC2E. Filtrát byl opět odpařen a hustý olejovitý zbytek byl sušen ve vakuu, načež postupně ztuhl. Produkt byl použit bez dalšího čistění (13,052 g, 99,6 %).
Přiklad 64
Příprava Boc-NH-C-Phe (65)
Roztok Eoc-NH-C-NHS (64) (12,52 g, 38,13 mmolů) v DME (100 ml) byl přidán k roztoku L-Phe (6,930 g, 1,1 ekviv.) a NaHCOg (3,524 g, 1,1 ekviv.) ve vodě (100 ml) při teplotě místnosti a byl přidán THF (30 ml) pro zvýšení rozpustnosti. Směs byla mir.hána při teplotě místnosti asi 16 hodin a potom byla přidána 15%-ní kyselina citrónová (100 ml). Suspenze byla extrahována 10%-ním izopropanol/etylacetát (3 x 80 ml) a složené organické fáze byly promyty vodou a solankou, usušeny a odpařeny. Byla získána bílá pevná látka. Tato byla rozetřena s éterem a výsledná bílá pevná látka byla eložena filtrací a promyta éterem (12,122 g, 84%). ^H-NNÍR: (DMSO-d^) 8 1,09 a l, 30 (6H, m, kaproyl CH2), 1,38 (9H, s, 0¾). 1,80-2,25 (2H, m, 00-0¾), 2,82 (4H, m, Phe 0¾ a N-CH2), 4,52 (IH, m, CO-CH), 6.,73 (IH, m, NH), 7,20 (5ff, m, Ph) ,· MS (DCI) 379 (MH) + , 323 (MH-C4Hg)+, 279 (MH-C5HgO2)+ ;
Analýza kalkulace pro '
C-63,47, H-7,99, N-7,40;
Stanoveno: C-63,37, H-8,05, N-7,76.
-101Příklad 65
Příprava Boc-NH-C-Phe-NHS (66)
Eoc-NH-C-Phe (65) (11,527 g, 30,46 mmolů) a NHS (3,86 g,
1,1 ekviv.) v THF (100 ml) byly při teplotě asi 0°C zpracovány s DCC (6,913 g, 1,1 ekviv.). Směs byla míchána při teplotě místnosti asi 16 hodin a zpracována způsobem popsaným výše pro Boc-NH-C-NHS (64). Produkt byl bezbarvé sklo, které bylo použito bez dalšího čistění (14,369 g, 99,2%).
Příklad 66
Příprava Boc-NH-C-Phe-N -Fmoc-L.ys (67)
Eoc-NH-C-Phe-NHS (66) (14,369 g, 30,22 molů) v DME (100 ml) byl přidán k roztoku N -Fmoc-Lys (11,222 g, 1 ekviv.) a NaHCO? (2,560 g, 1 ekviv.) ve vodě (50 ml) a DME (50 ml). Směs byla živě míchána při teplotě místnosti asi 16 hodin a potom byla přidána 15%-ní kyselina citrónová (150 ml) a 10%-ní izopropanol/etylacetát (250 ml). Vodná fáze byla extrahována větším množstvím 10%-ního izopropanol/etylacetátu (2 x 100 ml). Složené organické fáze byly promyty vodou a solankou, usušeny a odpařeny. Byla získána špinavě bílá pavná látka. Tato byla rozetřena s éterem a bílý pevný produkt byl složen filtrací a promyt éterem (17,842 g, 81%). TH-NMR (CDCl/CD?OD) & 1,00-1,92 (12H, m, Lys a kaproyl CHg), 1,42 (9H, s, CH?), 2,09 (2H, m, CO-CHg), 2,96 (2H, m, Phe CH2), 3,10 (2H, m, kaproyl N-CBg),
3,31 (2H, m, Lys N-CHg), 4,18 (1H, t, Fmoc CH), 4,37 (2H, d,
Fmoc CHg), 4,46 a 4,71 (každý 1H, m, Phe a Lys CO-CH), 7,107,80 (13H, m, Ph); MS (FAB) 729 (MH) + , 751 (M+Na) + , 767 (M+K) + ;
Analýza kalkulace pro Ο^Η^Ν^Οθ-^Ο:
C-65,93, H-7,32, N-7,66;
Stanoveno: C-66,07, H-7,32, N-7,66.
Příklad 67
Příprava Boc-NH-C-Phe-N^-Fmoc-Lys-?AB-OH (68)
Boc-NH-C-Phe-N£-Fmoc-Lys (67) (15,716 g, 21,56 mmolů) a p-amino benzyl alkohol (3,983 g,* 1,5 ekviv.) v THF (100 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány s EEDQ (8,000 g, 1,5 ekviv.). Směs byla míchána při teplotě místnosti asi 16 hodin a potom odpařena do sucha (teplota vodní lázně 30°C).
-102Zbytek byl rozetřen s éterem (100 ml) a bílý pevný produkt byl složen filtrací a promyt éterem (16,453 g, 922). ^H-NMR <$ 0,90-1,80 (12H, m, Lys a kaproyl CH2), 1,35 (9H, s, CH^),
2,00 (2H, t, C0-CH2), 2,66-3,07 (6H, m, N-CH2 a Phe CH^, 4,19 (IH, m, Fmoc CH), 4,23 (2H, d, Fmoc CH2), 4,36 a 4,58 (každý IH, m, Phe a Lys CO-CH), 4,41 (2H, s, PAB CH2), 7,10-3,22 (17H, m, Ph), 9,94 (IH, brs, PAB NH); MS (FAB) 834 (MH) + , 856 (M+Na)+, 872 (M+K)+;
Analýza kalkulace pro Ο^θΗ^Ν^Οθ-Ι/Τ^Ο:
C-66,39, H-7,17, N-8,31;
Stanoveno: C-68,18, H-7,12, N-8,42.
Příklad 68
Příprava MC-NH-C-Phe-N^-Fmoc-Lys-PAB-QH (69)
Boc-NH-C-Phe-N^-Fmoc-Lys-PAB-OH (60) (2,1323 g, 2,860 mmolů) byl rozpuštěn ve 2:1 CH2C12/TFA (30 ml). Směs byla zpracována ultrazvukem při teplotě místnosti asi 15 minut a potom ponechána stát asi 1 hodinu. Rozpouštědla byla odpařena a zbytek jako hnědý olej byl sušen ve vakuu asi 1 hodinu.
Potom byl přidán éter (75 ml) a olej byl škrábán až do ztuhnutí. Pevná látka byla složena filtrací, promyta éterem a sušena několik hodin ve vakuu. Potom byla rozpuštěna ve 3:1
DME/voda (40 ml) a zpracována s roztokem MC-NHS (788,2 mg, ekviv.) v IMF (20 ml) a pevným NaHCO^ (540 mg, 2,5 ekviv.).
Směs byla míchána při teplotě místnosti asi 16 hodin. Co možno největší množství DME bylo odstraněno na rotovapu (teplota vodní lázně asi 30°C), produkt byla klovatinovité pevná látka (která případně tuhla) ve vodě. Pevná látka byla odfiltrová- a na, promyta vodou a usušena ve vakuu. Potom byla rozetřena s éterem (25 ml) a pevný produkt byl složen filtrací a promyt éterem (1,4283 g, 602). TH-NMR (CDCl^/CD^OD) £ 1,00-1,90 (18H, m, Lys a kaproyl CH2), 2,07 (4H, m, Phe CH2 a CO-CH2),
2,22 (2H, t, CO-CH2), 3,05 (4H, m, Lys N-CH2 a kaproyl N-CH2),
3,41 (2H, m, M-CH2), 4,11 (IH, t, Fmoc CH), 4,28 (2H, d, Fmoc
CH2), 4,38 a 4,63 (každý IH, m, Phe a Lys CO-CH), 4,52 (2H, s,
PAB CH2), 5,61 (2H, s, M CH) , 6,9*6-7,71 (17H, m, Fh) ; MS (FAB)
927,5 (MH)+, 949,3 (M+Na)+, 965,3 (M+K) + ; Přesná kalkulace hmoty pro C^^Hg^NgOG: 927,4657; stanoveno: 927,4642.
-103Přiklad 69
Příprava MC-NH-C-Phe-N^-Fmoc-Lys-PABC-PNP (70)
MC-NK-C-Fhe-N^-Fmoc-Lys-PAB-CH (69) (1,3753 g, 1,487 mcolů) a p-nitrofenylchloromravenčan (449,5 mg, 1,5 ekviv.) v CH2C12 (50 ml) byly při teplotě místnosti zpracovány,s pyridinem (0,18 ml, 1,5 ekviv.). Suspenze byla při teplotě místnosti zpracována ultrazvukem asi 30 minut a potom míchána asi 16 hodin. Eylo přidáno větší množství p-nitrofenylchlóromravenčanu (150 mg, 0,5 ekviv.) a pyridinu (0,06 ml, 0,5 ekviv.) a směs byla opět zpracována ultrazvukem asi 30 minut a míchaná asi 4 hodiny. Zpracováním popsaným výše pro MC-Val-Cit-PABC-FNP (61) byl získán surový produkt jako klcvatinovitá pevná látka. Tato byla chromatografovéna na oxidu křemičitém, eluována 1) 35:1,
2) 25:1 a 3) 20:1 CHnCl0/metanol. Produkt byla bleděžluté klovatinovitá pevná látka (593,1 mg, 0,543 mcolň). K-NMP (CPCl^/CB^OP) ó 1,10-1,95 (18K, m, Lys a kaproyl CH2), 2,12 (4H, m, Kaproyl CO-CH?), 3,00 (2H, m, Phe CK2), 3,11 (4H, m,
Lys a kaproyl N-CH2), 3,44 (2H, t, M-CH2), 4,13 (1H, t, Fmoc CH), 4,32 (2H, d, Fmoc CH2), 4,39 a 4,63 (každý 1H, m, Phe a Lys CO-CH), 5,18 (2H, s, FAB CH2), 6,6.3 (2H, s, M CH), 7,002,25 (21H, m, Fh);MS (FAB): 1114 (M+Na) + , 1130 (M+K) + ;
Přesná kalkulace hmoty pro CgQHggMyO-^: 1092,4719; stanoveno: 1092,4680.
Přiklad 70
Příprava MC-NH-C-Phe-N^-Fmoc-L.ys-PABC-POX (71)
MC-NH-C-Phe-N^-Fmoc-Lys-PAEC-PNP (70) (382,8 mg, 0,350 mmolu) a POX.HC1 (213 mg, 1,05 ekviv.) v NMP (16 ml) byly zpracovány s diizopropyletylaminem (61/Ul, 1 ekviv.). Směs byla ponechána stát v temnu 2 dny. Zpracováním popsaným výše pro MC-Val-Cit-PAEC-POX (62) byl získán produkt jako oranžové sklo (293,1 mg, 56%). Gí-NME (CPCO^/CP^OP) <5 1,00-1,85 (20H, m, Lys a kaproyl CH.?, P-kruh CH2), 1,21 (3H, d, cukr Cfí^) , 2,09 (4H, m, kaproyl C0-CH2), 2,17 (2H, m, P-kruh CH,?), 2,80-3,27 (SH, m, Lys a kaproyl N-CH2, cukr CH2), 3,40 (2H, t, M-CH2),
3,53 (1H, brs, KO-CH), 3,78 (1H, m, cukr N-CH), 3,99 (3H, s,· O-CH3), 4,11 (2H, t, Fmoc CH a cukr CH^-CK), 4,29 (2H, d, Fmoc CH?), 4,33 a 4,57 (každý 1H, m, Fhe a Lys CC-CH), 4,71 (2H, s, C0-CH2-0H) , 4,89 (2H, q, FAB 0Η?), 5,20 (1H, brs anomerní CH) , (
-1045,42 (IE, brs, BOX Ph CH), 6,60 (2H, s, ld CH) , 6,90-8,00 (20H, m, Ph); MS (FAB) 1519 (M+Na)+, 1534 (M+K)+; Přesná kalkulace hmoty pro úg-^Hg^NyO2yNa: 1518,6009; stanoveno: 1518,5962. Přiklad 71
Příprava MC-NH-C-Phe-Lys-PABC-BOX.HCl (72) v
MC-NH-C-Fhe-N^-Fmoc-Lys-PABC-BOX (71) (95,2 mg, 63,6/umolů) v NMP (0,3 ml) byl zředěn THF (10 ml) a potom při míchání zpracován se 2%-ní BBU v THF (10 ml). Asi po 45 sekundách byl přidán éter (40 ml) a výsledná modrá pevná látka byla složena filtraci a promyta éterem. Pevná látka byla resuspendována v éteru (10 ml) a zpracována s ÍM HC1 v éteru (1C ml).
Po několika minutách byla odfiltrována oranžová pevná látka, opakovaně promyta éterem a rozetřena s CHgClg (25 ml). Výsledná oranžovočervená pevná látka bylo sležena filtrací a chromatografována na lipofilním sephadexu LH-20, eluována 1:1 CHgCT^/· metanol. Frakce obsahující produkt byly složeny a opět chromatograf ovány na LH-20, eluovány metanolem. Produkt byl oranžové sklo s malým množstvím nečistot, jak bylo zjištěno HPLC (40,2 mg, 48,2%). 1H-NMR (CBC^/CB^OB) <5 (vybraná maxima) 1,00-1,95 (23H, m, cukr GH^, Lys a kaproyl CH2, B-kruh CH2), 2,00-2,40 (6H, m, kaproyl CO-CH2 a B-kruh CH2), 2,96 (2H, m, +H^N-CH2),
4,05 (3H, s, O-CH3), 4,72 (2H, s, CO-CH2-CE), 4,93 (2H, brs,
PAB CH2), 5,17 (IH, brs, anomerní CH), 5,42 (IH, brs, BOX Ph-CH), 6,63 (2H, brs, M CH), 6,90-8,20 (12H, m, Ph).
Přiklad 72
Příprava Fmoc-Phe-N^-Mtr-Lys-NES (73)
Míchaná směs Fmoc-Phe-N^-Mtr-Lys (44) (1,8873 g, 2,40 mmolú) a NHS (303,2 mg, 1,1 ekviv.) v CH2C12 (40 ml) při asi 0°C byla zpracována s BCC (543,6 mg, 1,1 ekviv.). Asi po 24 hodinách při teplotě místnosti byl BCU odfiltrován a filtrát odpařen a zbytek vložen do etylacetátu. Směs byla promyta vodou (2x) a solankou, usušena a odpařena. Zbytek byl chrcmatografován na oxidu křemičitém, eluován 1:1 etylacetát/hexan.
Mnoho produktu rozloženo na sloupci (472,5 mg, 22%) .· ^H-NMR (CBCl^) S 1,00-1,98 (6H, m, CH2), 2,01 (2H, t, N-CHg), 2,77 (4H, brs, NHS CHg), 3,09 (2H, m, Phe CHg) , 3,76 (3H, s, O-CH^),
4,10-4,51 (4H, m, Fmoc CH2 a CH, Phe CO-CH), 4,83 (IH, m, Lys
-105C0-CH) , 5,48 a 6,41 (každý 1H, m, NH), 6,79 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,06-7,80 (25H, m, Ph).
Příklad 73
Příprava Fmoc-Phe-N£-Mtr-Lys-GABA (74)
Roztok Fmoc-Phe-N<*-Mtr-Lys-NHS (73) (472,5 mg, 0,534 mmolu) v EME (25 ml) byl přidán do míchaného roztoku GABA (83 mg, 1,5 ekviv.) a NaHCO^ (67 mg, 1,5 ekvivJ ve vodě (15 ml) při teplotě místnosti. Po 16 hodinách při teplotě místnosti bylo co možné nejvíce EME odstraněno na rotovapu a výsledná suspenze byla rozdělena mezi etylacetát a pufr s pH=5. Organická fáze byla promyta vodou a solankou, usušena a odpařena. Zbytek byl rozetřen s éterem a výsledné bílá pevná látka byla složena filtrací (387 r0 mg, 83%). 1H-NMR (CLCl^) 6 0,96-1,99 (8H, m, 0¾),
2,10-2,42 (4H, m, Lys N-CH2 a CO-CH2), 3,03 (2H, m, Phe 0¾),
3,22 (2H, m, GABA N-CH2), 4,03-4,66 (5H, m, Fmoc CH2 a CH, CO-CH), 6,78 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,00-7,77 (25H, m, Ph); MS (FAB) 895 (M+Na)+, 911 (M+K) + .
Přiklad 74
Příprava Fmoc-Phe-N^-Mtr-Lys-GABA-MMC (T5)
Míchaná směs Fmoc-Phe-N^-Mtr-Lys-GABA (74) (296,9 mg,
0,340 mmolu), EOBt (46 mg, 1 ekviv.) a MKC (119,4 mg, 1,05 ekviv.) v NMP (3 ml) a CH2C12 (3 ml) byle při teplotě místnosti zpracována s DCC (77,2 mg, 1,1 ekviv.). Asi po 14 hodinách při teplotě místnosti byl přidán etylacetát a roztok byl promyt vodou (3x) a solankou, usušen a odpařen. Zbytek byl » chromatografován na oxidu křemičitém, eluován 25:1 CH2C12/metanol. Produkt byl purpurové sklo (303,1 mg, 75%). H-NMR (CDCI3) δ 0,97-1,90 (8H, m, CH2), 1,71 (3H, s, MMC CH?), 2,08 (2H, m, Lys N-CH2), 2,46· (2H, m, CO-CH2), 2,99 (2H, m, Phe CH2),
3,12 (2H, m, GABA N-CH2) , 3,20 (3H, s, MMC O-CHj), 3,28-3,55 (3H, m, C-l, C-2 a C-3 CH), 3,68 (1H, ABq, C-9 CH), 3,73 (3H, s, Mtr O-CH^), 4,04-4,51 a 4,64 (7H, m, Fmoc CH2 a CH, C-10 CH2, CO-CH), 5,14 (2H, br, NH2), 5,38, 5,49, 5,70 a 6,67' (každý 1H, br, NH), 6,79 (2H, d,, MeOPh O-CH, 7,03-7,78 (25H, m, Ph); MS (FAB) 1189,8 (MH)+, 1211 (M+Na)+, 1227,5 (M+K)+.
(.·
-106Přiklad 75
Příprava Phe-N^-Mtr-Lys-GABA-MMC (76)
Fmoc-Phe-Ne-Mtr-Lys-GABA-MMC (£5) (236,1 mg, 0,198 mmolu) v CH2C12 (2 ml) byl při teplotě místnosti zpracován s dietylaminem (2 ml). Asi po 3 hodinách byla odpařena rozpouštědla a zbytek byl zaplaven CH2C12 (10 ml). Zbytek byl chromatografován na oxidu křemičitém, eluován 1) 25:1 a 2) 15:1 CH2C12/metanol. Produkt bylo purpurové sklo (157,4 mg, 82%). ^H-NMR (CDCl?) S 1,15-1,83 (8H, m, CH2), 1,77 (3H, s, MMC CH^), 2,10 (2H, t, Lys N-CH ), 2,46 (2H, m, 00-0¾) , 2,69 a 3,21 (každý IH, AEq, Phe CH2), 3,19 (3H, s, MMC 0-0¾), 3,20-3,53 (5H, m, GAEA N-CH2, C-l, C-2 a C-3 CH), 3,48 (2H, brs, 11¾), 3,68 (2H, m, C-9 CH a Phe CC-CH), 3,76 (3H, s, Mtr 0-0¾), 4,09 a 4,82 (každý IH, t a ABq, C-10 0¾), 4,29 (IH, m, Lys CO-CH) ,
4,41 (IH, d, C-3 CH), 5,29 (2H, brs, 11¾), 6,60 (IH, brt, GABA NH), 6,79 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,10-7,48 (17H, m, Ph), 7,72 (IH, d, amid NH) ,· MS (FAB) 967,4 (MH) + , 989,2 (M+Na) + , 1005,3 (M+K) + .
Přiklad 76
Příprava MC-Phe-N^-Mtr-Lys-GABA-MMC (77)
Roztok Phe-N^-Mtr-Lys-GABA-MMC (£6) (108,9 mg, 0,113 mmolu) v CH2C12 (15 ml) byl přidán k MC-NHS (0,124 mmolu). Směs byla míchána při teplotě místnosti 3 dny a potom bylo rozpouštědlo odpařeno. Zbytek byl chromátografován na oxidu křemičitém, eluován 1) 20:1 a 2) 15:1 0¾Cl2/metanol. Produkt bylo purpurové sklo (75,8 mg, 58%). ^H-NMR (CDCl^) <5 1,05-1,90 (14H, m, 0¾) 1,76 (3H, s, WC CH^), 2,07 (4H, m, Lys ^0¾ a kaproyl 00-5¾) , 2,49 (2H, m, GABA 00-0¾), 2,98 a 3,20 (každý IH, ABq, Phe 0¾),
3.19 (2H, ro, GABA ^-0¾), 3,23 (3H, s, MMC 0-0¾), 3,33 (2H, t, M-CH2), 3,20-3,53 (3H, m, C-l, C-2 a C-3 CH), 3,68 (IH, ABq, C-9 CH), 3,78 (3H, s, Mtr 0-0¾), 4,11 a 4,62 (každý IH, t a ABq, C-10 CH2), 4,24 (IH, ro, Lys CO-CH), 4,49 (IH, d, C-3 CH), 5,19 (2H, br, NH2), 6,27 (IH, d, NH), 6,67 (2H, s, M CH), 6,72 (IH, brt, NH), 6,80 (2H, d, MeOFh O-CH), 7,10-7,47 (17H, m, Ph),
7.19 (IH, d, NH).
Příklad 77
Příprava MC-Phe-Lys-GABA-WC.CÍCHgCOgH (78)
-107MC-Phe-N^-tftr-Lys-GAEA-MMC (77) (43,2 mg, 37,2/umolů ) v CH2C12 (2 ml) byl zpracován s anisolem (0,405 ml, 100 ekviv.) a s kyselinou chloroctovou (1M v CH2C12, 0,40 ml, 11 ekviv.).
Asi po 3 hodinách byl přidán éter (5 ml) a směs byla uložena ve mraznici asi 1 hodinu. Výsledná pevná látka byla složena filtrací, promyta éterem a rozetřena s CH2CI2 (36,1 mg, 99%). 1H-NK<R (CLCl^/CD^OD) 5 1,03-1,82 (8H, m, CH2), 1,71 (3H, s,
MMC CÍLj), 2,08 (2H, t, kaproyl CO-CH?), 2,40 (2H, brt, GAEA CO-CH2), 2,83 (4H, m, GABA N-CH2 a N -CH2), 3,39 (2H, t, M-CH2), 3,59 (1H, ABq, C-9 CH), 3,95 (1H, t, C-10 CH2), 4,18 (1H, m, Lys CO-CH), 4,42 (1H, d, C-3 CH), 4,67 (2H, m, Phe CO-CH a C-10 CH2), 6,63 (2H, s, M CH), 7,17 (5H, m, Ph); HPLC: (C-18, cm sloupec, 65:35 metanol/50 mM mravenČan trietylamonný pufr a pH=2,8, 1 ml/min, 360 nm): jedno maximum, doba retence:
2,19 min.
Přiklad 78
Příprava Taxol-2'-etyluhličitan-T—chloromravenčanu (83)
Míchaný roztok taxol-2 -etyluhličitanu (82) (154,2 mg, 0,1665 mmolů) v CH2C12 (3 ml) byl při 0°C pod argonem zpracován s pyridinem (13,5/ul, 1 ekviv.) a potom s difosgenem (10,0/ul, 0,5 ekviv.). Ledová lázeň byla odstraněna a směs byla míchána při teplotě místnosti 1 hodinu a potom znovu ochlazena na 0°C a ihned použita.
Přiklad 79
Příprava MC-Phe-N^-Mtr-Lys-PABC-7-Taxol-2'-etyluhličitanu (84)
Roztok MC-Phe-Ne-Mtr-Lys-PAB-OH (47) (143,9 mg, C,1ČC5 mmolu) v 0Η?012 (4 ml) byl přidán k výše uvedenému roztoku taxol-2*-etyluhlíčitan-7-chloromravenčanu (33) (0,1665 mmolu) při teplotě asi 0°C. Ledová lázeň byla odstraněna a směs byla míchána při teplotě místnosti asi 3 hodiny. Potom byl přidán etylacetát a roztok byl promyt pufrem s pH=5, vodou a solankou, usušen a odpařen, čímž' bylo získáno bezbarvé sklo, které bylo chromatografováno na oxidu křemičitém, eluováno 1) 2:1 a 2) 1:1 CH2Cl2/etylacetát. Produkt bylo bezbarvé sklo (251 mg, 83%). TH-NMR (CDCl^) £ l,l6, 1,21 a 1,78 (každý 3H, s, C-l6, C-l7 a C-l9 CH3), 1,10-1,90 (12H, m, Lys a kaproyl CH2), 1,31 (3H, t, etyl CH ), 1,91 a 2,60 (každý 1H, m, C-6
-108CH2), 2,04 (3H, s, C-19 CH?), 2,12 (4H, t, Lys N-CH2 a kaproyl C0-CH2), 2,18 a 2,48 (každý 3H, s, Ac CH?), 2,22 a 2,40 (každý 1H, m, C-14 CH2), 3,03 (2H, m, Phe CH^, 3,42 (2H, t, kaproyl N-CH2), 3,97 (1H, d, C-3 CH), 4,29 (2H, m, C-20 CH2), 4,21 (2H, q, etyl CH2), 4,46 a 4,72 (každý 1H, m, Phe a Lys CO-CH), 4,96 (1H, d, C-5 CH), 5,16 (2H, q, PAB C^), 5,44 (1H,( d, C-2,' CH), 5,56 (1H, m, C-7 CH), 5,70 (1H, d, C-2 CH), 5,97 (1H, m,
C-3' CH), 6,26 (1H, m, C-13 CH), 6,40 (1H, s, C-10 CH), 6,65 (2H, s, M CH), 6,78 (2H, d, MeOPh O-CH), 6,98 a 7,60 (každý 1H, d, NH), 7,04-8,20 (31H, m, Ph), 8,38 (1H, brs, PAB NH);
MS (FAB) 1837,2 (M+Na)+, 1853,5 (M+K)+.
Přiklad 80
Příprava MC-Phe-Lys-PABC-7-Taxol-2 -etyl·uhličitan.ClCHqCOqH (85)
Míchaný roztok MC-Phe-N^-Mtr-Lys-PABC-7-Taxol-2*-etyluhličitanu (84) (80,2 mg, 44,2/Umolů)v CH2C12 (3,5 ml) byl při teplotě místnosti zpracován s anisolem (0,48 ml',100 ekviv.) a s kyselinou chlo*rooctovou (IM v CH2C12, 0,442 ml, 10 ekviv.).
Asi po 3 hodinách byl přidán éter (15 ml) a směs byla uložena ve mraznici asi 2 hodiny. Výsledná bílá pevná látka byla složena filtrací a promyta éterem (72,2 mg, 99%). ^H-NMR (CDC1?) £ 1,16, 1,20 a 1,80 (každý 3H, s, C-16, C-17 a C-19 CH?),
1,10-1,90 (12H, m, Lys a kaproyl CH2), 1,30 (3H, t, etyl CH?) ,
1,91 a 2,58 (každý 1H, m, C-6 CH2), 2,02 (3H, s, C-18 CH?),
2,13 (2H, m, kaproyl CO-CH2) 2,17 a 2,45 (každý 3H, s, Ac CH?),
2,20 a 2,39 (každý 1H, m, C-14 CH2), 2,97 (2H, m, Lys N-CH2),
3,01 (2H, m, Phe CH2), 3,42 (2H, t, kaproyl N-CH2), 3,97 (1H, d, C-3 CH), 4,29 (4H, m, C-20 CH2 a etyl CH2), 4,56 a 4,83 (každý 1H, m, Phe a Lys CO-CH), 4,95 (1H, d, C-5 CH), 5,17 (2H, q, PAE CH2), 5,42 (1H, d, C-2' CH), 5,54 (1H, m, C-7 CH),
5,69 (1H, d, C-2 CH), 5,97 (1H, m, C-3' CH), 6,29 (1H, m, C-13 CH), 6,41 (1H, s, C-10 CH) , 6,66 (2H,s, M CH), 6,98 a 8,39(každý 1H, d, NH), 7,08-8,14 (19H, m, Ph), 9,25 (1H, brs, FAB NH)O
Přiklad 81
Syntéza konjugátu
Roztok (10 ml) mAb ER96 (10,46 mg/ml, 6,54 x 10-¾} koncentrace určena absorpcí UV na 280 nm, 1 mg/ml mAb se rovná ¢,-1091,4 abs. jednotek) v O,125M pufru fosforečnanu draselného byl zpracován s čerstvě připraveným roztokem (0,523 ml) 10mM dithiothreitolu (DTT) při teplotě asi 37°C po dobu asi 3 hodin . pod dusíkem. Roztok byl přenesen na buňku Amicon a byl diafiltrován proti fyziologickému roztoku s fosforečnanovým pufrem (PBS) , až byla odtoková tekutina prostá skupin SH (Ellmanova reagencie). Byla určena koncentrace skupin mAb a SH (10,11 mg/ml (6,32 x 10^) a 4,48 x 10^ M, což představuje molární poměr (MR) SH ku mAb rovný 7.01). Tento roztok byl zpracován s MC-Phe-Lys-PAEC-DOX (5 mg/ml, 4,77 x 10-¾) v destilované vodě (1,2 ml), potom byl ponechán stát přes noc při teplotě asi 4°C. Tento roztok byl přenesen do dialyzační trubice a dialyzován třikrát proti 1 L PKS asi po 24 hodiny při teplotě asi 4°C. Roztok konjugátu byl filtrován přes filtrační jednotku Millex-GV 0,22/Um (Millipore Corp.) a filtrát byl mírně třepán po několik hodin s Bio-beads (Bio-Rad Laboratories), načež následovala další filtrace přes jednotku Millivexx-GV. Koncentrace DOX byla určena z pohlcování UV na 455 nm ( 6 =
8030, 283/um, 164/Ug/ml) a z pohlcování mAb při 280 nm s korekcí na pohlcování DOX na 280 nm podle vzorce:
mAb (mg/ml) = ^80 ~ * Á^·· kde A je pozorované pohlcování na zaznamenané vlnové délce.
Přiklad 82
Roztok Phe-(N^-MTR)Lys-PABC-DOX ve vhodném rozpouštědle £
se zpracuje s ekvivalentním množstvím N-Sukcinimidyl p-(jodoacetamido)benzoanu. Roztok se udržuje asi po 1 hodinu na teplotě asi 3O°C a potom se rozpouštědlo odpaří při sníženém tlaku. Ochranná skupina MTR se odstraní z peptidu obvyklým způsobem a jodoacetylovaný peptid se rozpustí ve vodě nebo v organickém rozpouštědle mísitelném s vodou na známou koncentraci.
Vhodné množství tohoto roztoku se přidá k roztoku thiolovaného mAb ER96 v PBS pro zreagování všech thiolových skupin vyvinutých v mAb. Roztok se udržuje na teplotě asi 4°C asi po 1 hodinu a potom se chromatografuje na sloupci rozlišujícím velikost pro vyloučení sloučenin s nízkou molekulární hmotností z konjugátu. Nakonec se roztok konjugátu vytřepe s malým množstvím Bio-Beads po několik hodin a potom se přefiltruje pres filtr 0,22/um. Koncentrace mAb a DOX se určí z jejich absorpce (
-110na 280 nm popřípadě na 495 nm a vypočítá se MR léčiva pro mAb.
Přiklad 83
Roztok Phe-ÍN^-MTRÍLys-PABC-DOX ve vhodném rozpouštědle se zpracuje s ekvivalentním množstvím Ff-Sukc ini mi dy 1-3-( 2-pyridynyldithiol)-propionátu (SPDP). Roztok se udržuje asi 1 hodinu na teplotě asi 30° a potom se rozpouštědlo odpaří při sníženém tlaku. Ochranná skupina MTR se odstraní z peptidu obvyklým způsobem a peptid se rozpustí ve vodě nebo v organickém rozpouštědle mísitelném s vodou na známou koncentraci. Vhodné množství tohoto roztoku se přidá k roztoku thiolovaného mAb ER96 v PBS pro zreagování všech thiolových skupin vyvinutých v mAb. Roztok se udržuje na teplotě asi 4°C asi po 1 hodinu a potom se chromatografuje na sloupci rozlišujícím velikost pro vyloučení sloučenin s nízkou molekulární hmotností z konjugátu. Nakonec se roztok konjugátu vytrepe s malým množstvím Eio-Eeads po několik hodin a potom se přefiltruje přes filtr O,22/Um. Koncentrace mAb a BOX se určí z jejich absorpce na 280 nm popřípadě na 495 nm a vypočítá se MR léčiva pro mAb.
Předložený vynález byl popsán s odkazem na zvláštní příklady, materiály a data. Odborník školený v oboru pozná, že pro užití nebo přípravu rozličných objektů vynálezu je možné zvolit alternativní prostředky. Takové alternativní prostředky mohou být vykonstruovány v rámci myšlenky předloženého vynálezu definované připojenými patentovými nároky.
Claims (16)
1. Sloučenina vzorce
Lrv v- * ve kterém L je ligand, A je karboxyacylová jednotka, Y jM Ϊ t aminokyselina, Z je aminokyselina, X a W jsou mezerníký 4 je léčivová složka mající ke svému řetězci připojenu chemicky— reaktivní funkční skupinu, kterážto funkční skupina je zvolena z množiny zahrnující primární nebo sekundární amin, hydroxyl, sulfhydryl, karboxyl, aldehyd a keton, n je celé číslo rovné nule nebo jedné a m je celé číslo od 1 do 6.
2. Sloučenina podle nároku 1, vyznačující se tím, že Y je alanin, valin, leucin, izoleucin, methionin, fenylalanin, tryptofan nebo prolin.
3. Sloučenina podle nároku 1, vyznačující se tím, že Z je lysin, lysin chráněný acetylem nebo formylem, arginin, arginin chráněný tosylem nebo nitroskupinami, histidin, ornitin, ornitin chráněný ecetylem nebo formylem nebo citrulin.
4. Sloučenina podle nároku 1, vyznačující se tím, že Y-Z je fenylalanin-lysin, valin-citrulin nebo valin-lysin.
5. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že D je cytotoxické léčivo.
6. Sloučenina podle nároku 5, vyznačující se tím, že D je cytotoxická složka mitomycin C, mitomycin A, daunorubicin, doxorubicin, N-(5,5-diacetoxypentyl)doxorubicin, aminopterin, aktinomycin, bleomycin, 9-sminokamptothecin, N^-acetylspermidin, l-(2-chloretyl-l,2-dimetalnesulfonylhydrazid, tallysomycin nebo jejich deriváty, obsahující aminoskupinu.
7. Sloučenina podle nároku 5, vyznačující se tím, že D je cytotoxická léčivá složka etoposid, kamptotecin, taxol, esparamicin 1,8-dihydroxy-bicyklo |~7.3.lj trideka-4-en-2,č-diyn-13-on, anguidin, doxorubicin, morfolin-doxorubicin, N-(5,5-diacetoxypentyl) doxorubicin, vinkristin, vinblastin nebo jejich deriváty, obsahující hydroxyl.
8. Sloučenina podle nároku 5, vyznačující se tím, že D je cytotoxická léčivá složka esperamicin* a 6-merkaptopurin nebo jejich deriváty, obsahující sulfhydryl.
-1129. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že D je léčivá složka metotrexan, kamptotecin (forma laktonu s otevřeným kruhem), kyselina máselná, kyselina retionová nebo jejich deriváty, obsahující karboxyl.
10. Sloučenina podle nároku 5, vyznačující se tím, že D je léčivá složka antracyklin obsahující aldehyd a keton. \
11. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 10, vyznačující se tím, že L je imunoglobulin nebo jeho fragment vázající antigen.
12. Sloučenina podle nároku 11, vyznačující se tím, že L je BR96, ER64, L6, relaxovaný ER96, relaxovaný BR64, relaxovaný L6, chimérický SR96, chimérický ER64, chimérický L6, relaxovaný chimérický ER96, relaxovaný chimérický ER64, relaxovaný chimérický L6 nebo jejich fragmenty vázající antigen.
13. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 10, vyznačující se tím, že L je epidermální růstový faktor, bombezin, transferin, gastrin, peptid uvolňující gastrin, faktor růstu krevních destiček, IL-2, IL-6, TGF-#, VGF, inzulín nebo inzulínu podobný faktor růstu I nebo II.
14. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 10, vyznačující se tím, že L je karbohydrát, lektin nebo apoprotein lipoproteinu nízké hustoty.
15. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 14, vyznačující se tím, že X je sloučenina vzorce ve kterém T je 0, N nebo S.
16. Sloučenina podle nároku 15, vyznačující se tím, že X je p-aminobenzylkarbamoyl.
17. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 14, vyznačující se tím, že má vzorec
-HN--CCT ve kterém R je alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku a T je 0, N nebo S.
13. Sloučenina podle nároku 16, vyznačující se tím, že X je kyselina ^-aminomáselná, kyselina -dimetyl-$-aminonáselná nebo kyselina ρ,β-dimetyl-^-aminomáselná.
I
-COOR2 je C, N nebo s a ν0£-£^ nebo alkyl s 1 až 5
i.
.na podle kteréhokoli z nároků 1 až 19, vyznačující i je sloučenina mající vzorec :na podle kteréhokoli z nároků 1 až 20, vyznačující ΐ je sloučenina mající vzorec i je celé číslo rovné 1 až 10«,
'.na podle kteréhokoli z nároků 1 až 20, vyznačující , je 4-(N'-sukcinimidometyl) cyklohexan-1-karbonyl, :obenzoyl, 4-(p-sukcinimidofenyl)butyryl, do)benzoyl, 3-thiopropionyl, 4-(l-thioetyl)benzoyl iopropionylara-ido)-hexanoyl.
- -s ukc inimi do kaproyl-val in-cirruiin-p-acino oenzyxoxorubicin, BR96-sukcinimidokaproyl-fenylalaninnobenzyl-kar bamoyl-2 '-taxol, BR96-sukcinimidokaproyl.-lysin-p-aminobenzyl-karbamoyl-7-taxol, BR96-sukcinΊ-fenylalanin-1vsin-p-aminobenzyl-karbamoyl-mi tornyi . BE96-sukcinimidokaproyl-fenylalanin-lysin-gamma-ami'yselina-mitomycin C.
eutická směs, vyznačující se tím, že obsahuje sloučekteréhokoli z nároků 1 a 23 a farmaceuticky přijatelný pří pravý maleimi dokaproyl-fenylalanin-lys in-p-aminobamoyl-doxorubičinu vyznačující se tím, že zahrnuje: ování suspenze Na-9-fluorenylmetoxykarbamoyl-lysinu oloridu pod argonem při teplotě místnosti s trimetylióem, zahřívání směsi při refluxu jednu hodinu, ochla3 a přidání diizopropyletylénaminu a p-anisyl-difenylidu, aby se získal N -9-fluorenylmetoxykarbamoyl-N -pyl-lysin po vodném zpracování, extrakci etylacetátem rozpouštědla, .oění ochranné skupiny z N -9-fluorenyl-metoxykarbamo^oxytrityl-lysinu zpracováním s dimetylaminem v metyu při teplotě místnosti po dobu 4 až 24 hodin, naslepařením rozpouštědla a rozetřením s éterem, aby se p-metoxytrityl-lysin, vu 9-fluorenylmetoxykarbamoyl-fenylalanin-N-hydroxyo zpracováním 9-fluorenylmetoxykarbamoyl-fenylalaninu exylkarbodiiraidem a N-hydroxysukcinimidem v metylénři teplotě místnosti po dobu 12 až 24 hodin, odstraklohexylmočoviny jako vedlejšího produktu filtrací a rozpouštědla, ím N^-p-metoxytrityl-lysinu a 9-fluorenylmetoxy-115karbamoyl-fenylalanyl-N-hydroxysukcinimidu ve směsi 1,2-dimetoxy etanu a vody za přítomnosti jednoho ekvivalentu zásady při teplo tě místnosti po dobu 12 hodin až 2 dnů, a následujícím okyselením směsi a extrakcí produktu, 9-fluorenylmetoxykarbamoyl-fenylalanyl-N^-p-metoxytrityl-lysinu s etylacetátem, v (e) přípravu 9-íTuorenylmetoxykarbamoyl-fenylalanyl-N'-p-metoxytrityl-lysyl-p-aminobenzylalkoholu zpracováním 9-fluorenylmetoxy karbarooyl-fenylalanyl-N^-p-metoxytri tyl-lysinu s p—aminobenzylalkoholem a 2-etoxy-l-etoxykarbonyl-l,2-dihydrochinolinem v metyléncnloridu při teplotě místnosti po dobu 12 až 24- hodin a následujícím odpařením rozpouštědla a rozetřením s éterem, (f) odstranění ochranné skupiny z 9-fluorenylmetoxykarbamoylf enyl alanyl-N^-p-met oxy trit yl-lysyl-p-amino benzylalkohol u zpracováním s dimetylaminem v metylénchloridu při teplotě místnosti po dobu 4 až 16 hodin s následujícím odpařením rozpouštědla a mžikovou chromatografií zbytku na oxidu křemičitém, eluci 2až 4%-ním metanol/metylénchloridem, aby se získal fenylalanylN^-p-metoxytrityl-lysyl-p-aminobenzylalkohol, (g) přípravu maleimidokaproyl-fenylalanyl-Ne-p-metoxytrityl£ lysyl-p-aminobenzylalkoholu zpracováním fenylalanyl-N -p-metoxytrityl-lysyl-p-aminobenzylalkoholu s maleimidokaproyl-Nhydroxysukcinimidem za přítomnosti jednoho ekvivalentu zásady v metylénchloridu, tetrahydrofuranu nebo 1,2-dimetoxyetanu po dobu 1 až 3 dnů, s následujícím vodným zpracováním a rozetřením s éterem, (h) zpracování maleimidokaproyl-fenylalanyl-N^-p-metoxytrityllysyl-p-aminohenzylalkoholu se třemi až pěti ekvivalenty bis-pnitrofenyluhličitanu a diizopropyletylaminu v metyléncjloridu při teplotě místnosti po dobu 2 až 5 dnů, s následujícím vodným zpracováním a mžikovou chromatografií na silikagelu eluci směsí etylacetétu a hexanu v poměru od 1:1 do 8:1, aby se získal maleimidokaproyl-fenylalanyl-N -p-metoxytrityl-lysil-p-aminobenzyl-p-nitrofenyluhličitan, (i) spojení maleimidokaproyl-fenylalanyl-N^-p-metoxytrityl-lysyl p-aminobenzyl-p-nitrofenyluhličitanu s doxorubicinem v N-metylpyrolidinonu při teplotě místnosti po dobu 2 až 4 dnů s následujícím vodným zpracováním a mžikovou chromatografií na silikagelu eluci směsí metylénchloridu a metanolu v poměru od 25:1
-1162'· I > cc ·—' I o s cj -1 Xf 1 Ξ $ | □ o
cn· o
o czx do 20:1, aby se získal maleimidokaproyl1-fenyl-alanyl-N^.-p=___ metoxytrityl-lysyl-p-aminobenzylkarbamoyl -doxorubicin, (j) odstranění ochranné skupiny lysinu zpracováním s kyselinou (HA) v metylénchloridu za přítomnosti akceptoru kationtů při teplotě místnosti po dobu 1 až 6 hodin, s následujícím srážením produktu, maleimidokaproyl-fenylalanyl-lysyl-p-aminobenzylkarbamoyl-doxorubicin-dichloroctové kyseliny přidáním etylacetátu nebo éteru a složením filtrací.
26. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že zrušení ochrany maleimidokaproyl-fenylalanin-N^-p-metoxytrityl-lysylp-aminobenzylkarbamoyl-doxorubicinu zahrnuje zpracování s deseti ekvivalenty kyseliny dichloroctové a 100 ekvivalenty anisolu v metylénchloridu po dobu 1 až 3 hodin s následujícím srážením produktu, maleimidokaproyl-fenylalanin-lysyl-p-aminobenzylkarbampyl-doxorubicin-dichloroctové kyseliny etylacetátem.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/062,366 US6214345B1 (en) | 1993-05-14 | 1993-05-14 | Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ118794A3 true CZ118794A3 (en) | 1994-11-16 |
Family
ID=22042014
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ941187A CZ118794A3 (en) | 1993-05-14 | 1994-05-13 | Conjugate of a medicament and a ligand |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6214345B1 (cs) |
EP (1) | EP0624377B1 (cs) |
JP (1) | JP3645283B2 (cs) |
CN (1) | CN1117760C (cs) |
AT (1) | ATE212236T1 (cs) |
AU (1) | AU687795B2 (cs) |
CA (1) | CA2123363C (cs) |
CZ (1) | CZ118794A3 (cs) |
DE (1) | DE69429689T2 (cs) |
DK (1) | DK0624377T3 (cs) |
ES (1) | ES2170755T3 (cs) |
FI (1) | FI116038B (cs) |
HU (1) | HU224351B1 (cs) |
MX (1) | MX9403570A (cs) |
NO (1) | NO315162B1 (cs) |
NZ (1) | NZ260512A (cs) |
PT (1) | PT624377E (cs) |
RU (1) | RU94016384A (cs) |
Families Citing this family (653)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU1140495A (en) * | 1994-01-27 | 1995-08-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Method for preparing thioether conjugates |
DE69530553T2 (de) * | 1994-05-13 | 2004-03-25 | KURARAY CO., LTD, Kurashiki | Medizinisches polymergel |
US5677470A (en) * | 1994-06-28 | 1997-10-14 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Baccatin derivatives and processes for preparing the same |
CA2162759A1 (en) * | 1994-11-17 | 1996-05-18 | Kenji Tsujihara | Baccatin derivatives and processes for preparing the same |
US5843903A (en) * | 1995-11-27 | 1998-12-01 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Targeted cytotoxic anthracycline analogs |
ES2195036T3 (es) * | 1995-12-22 | 2003-12-01 | Bristol Myers Squibb Co | Conectores de hidrazona ramificados. |
EP0895784B1 (en) | 1996-04-15 | 2005-11-23 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Drug complexes comprising taxane compounds or steroids |
US6368598B1 (en) | 1996-09-16 | 2002-04-09 | Jcrt Radiation Oncology Support Services, Inc. | Drug complex for treatment of metastatic prostate cancer |
AU739028B2 (en) * | 1996-09-27 | 2001-10-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Hydrolyzable prodrugs for delivery of anticancer drugs to metastatic cells |
DE19640207A1 (de) * | 1996-09-30 | 1998-04-02 | Bayer Ag | Glycokonjugate von modifizierten Camptothecin-Derivaten (A- oder B-Ring-Verknüpfung) |
ATE210673T1 (de) * | 1996-09-30 | 2001-12-15 | Bayer Ag | Glycokonjugate von modifizierten camptothecin- derivaten (20-o-verknüpfung) |
US5980883A (en) * | 1996-10-02 | 1999-11-09 | Kuraray Co., Ltd. | Polymer gel for medical use |
JP2001505194A (ja) | 1996-11-05 | 2001-04-17 | ブリストル―マイヤーズ・スクイブ・カンパニー | 分枝ペプチド・リンカー |
ID23424A (id) * | 1997-05-14 | 2000-04-20 | Bayer Ag | Glikokonjugat dari 20(s)-kamptotesin |
US6545125B1 (en) * | 1997-11-18 | 2003-04-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Compounds with antitumor activity |
GB9724838D0 (en) * | 1997-11-26 | 1998-01-21 | Franks Christopher R | Compositions |
WO1999037667A1 (en) * | 1998-01-23 | 1999-07-29 | Microcide Pharmaceuticals, Inc. | Efflux pump inhibitors |
US6204279B1 (en) * | 1998-06-03 | 2001-03-20 | Microcide Pharmaceuticals, Inc. | Peptidomimetic efflux pump inhibitors |
JP4560210B2 (ja) * | 1998-05-22 | 2010-10-13 | 第一三共株式会社 | 薬物複合体 |
EP1619210A1 (en) * | 1998-10-30 | 2006-01-25 | Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. | DDS compounds and method for assaying the same |
MXPA01008699A (es) * | 1999-02-24 | 2002-06-21 | Uab Research Foundation | Derivados de taxano para terapia de cancer dirigida. . |
US6613879B1 (en) * | 1999-05-14 | 2003-09-02 | Boehringer Ingelheim Pharma Kg | FAP-activated anti-tumour compounds |
MXPA01011502A (es) | 1999-05-14 | 2003-08-20 | Boehringer Ingelheim Pharma | Compuestos de tipo profarmaco anti-tumorigenos, activados por enzimas. |
DE19926475A1 (de) * | 1999-06-10 | 2000-12-14 | Ktb Tumorforschungs Gmbh | Träger-Pharmaka-Konjugate |
DE60032633T2 (de) | 1999-11-24 | 2007-10-04 | Immunogen Inc., Cambridge | Zytotoxische mittel, die taxane enthalten und ihre therapeutische anwendung |
DE10012120A1 (de) * | 2000-03-13 | 2001-09-27 | Ktb Tumorforschungs Gmbh | Therapeutische und diagnostische Ligandensysteme mit Transportmolekülbindenden Eigenschaften und diese enthaltende Arzneimittel |
IL152433A0 (en) | 2000-04-26 | 2003-05-29 | Univ Oregon Health Sciences | Administration of a thiol-based chemoprotectant compound |
JP2004501143A (ja) | 2000-06-22 | 2004-01-15 | ニトロメド インコーポレーテッド | ニトロソ化およびニトロシル化タキサン、組成物および使用方法 |
AU2001287021A1 (en) * | 2000-08-30 | 2002-03-13 | Oregon Health And Science University | Chemoprotectant for gastric toxicity |
US20070258987A1 (en) * | 2000-11-28 | 2007-11-08 | Seattle Genetics, Inc. | Recombinant Anti-Cd30 Antibodies and Uses Thereof |
US20040018194A1 (en) * | 2000-11-28 | 2004-01-29 | Francisco Joseph A. | Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof |
AU2002254400B2 (en) | 2001-03-23 | 2007-08-09 | Napro Biotherapeutics, Inc. | Molecular conjugates for use in treatment of cancer |
EP1243276A1 (en) | 2001-03-23 | 2002-09-25 | Franciscus Marinus Hendrikus De Groot | Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs |
AU2002251448A1 (en) * | 2001-04-01 | 2002-10-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. Weizmann Institute Of Science | Oral absorbed drugs |
US20110313230A1 (en) | 2001-05-11 | 2011-12-22 | Terrance Grant Johns | Specific binding proteins and uses thereof |
WO2002092771A2 (en) | 2001-05-11 | 2002-11-21 | Ludwig Institute For Cancer Research | Specific binding proteins and uses thereof |
US20100056762A1 (en) | 2001-05-11 | 2010-03-04 | Old Lloyd J | Specific binding proteins and uses thereof |
CN101671335A (zh) * | 2001-05-31 | 2010-03-17 | 梅达莱克斯公司 | 细胞毒素、其有用的前体药物、连接基团和稳定剂 |
US7091186B2 (en) * | 2001-09-24 | 2006-08-15 | Seattle Genetics, Inc. | p-Amidobenzylethers in drug delivery agents |
EP2360169B1 (en) | 2001-10-23 | 2015-10-14 | Psma Development Company, L.L.C. | PSMA antibodies |
US20050215472A1 (en) * | 2001-10-23 | 2005-09-29 | Psma Development Company, Llc | PSMA formulations and uses thereof |
US8877901B2 (en) | 2002-12-13 | 2014-11-04 | Immunomedics, Inc. | Camptothecin-binding moiety conjugates |
US8435529B2 (en) | 2002-06-14 | 2013-05-07 | Immunomedics, Inc. | Combining radioimmunotherapy and antibody-drug conjugates for improved cancer therapy |
US7591994B2 (en) | 2002-12-13 | 2009-09-22 | Immunomedics, Inc. | Camptothecin-binding moiety conjugates |
US7217696B2 (en) * | 2002-02-28 | 2007-05-15 | A & D Bioscience, Inc. | Glycuronamides, glycosides and orthoester glycosides of fluoxetine, analogs and uses thereof |
US8361464B2 (en) | 2002-03-01 | 2013-01-29 | Immunomedics, Inc. | Anthracycline-Antibody Conjugates for Cancer Therapy |
US9770517B2 (en) | 2002-03-01 | 2017-09-26 | Immunomedics, Inc. | Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof |
SG108837A1 (en) * | 2002-03-11 | 2005-02-28 | Pi Eta Consulting Co Pte Ltd | An enterprise knowledge and information acquisition, management and communications system with intelligent user interfaces |
WO2003079980A2 (en) * | 2002-03-19 | 2003-10-02 | A & D Bioscience, Inc. | Caboxylic acid glycuronides, glycosamides and glycosides of quinolones, penicillins, analogs, and uses thereof |
US20050255038A1 (en) * | 2002-04-12 | 2005-11-17 | A And D Bioscience, Inc. | Conjugates comprising cancer cell specific ligands, a sugar and diagnostic agents and uses thereof |
WO2003086312A2 (en) * | 2002-04-12 | 2003-10-23 | A & D Bioscience, Inc. | Conjugates comprising cancer cell specific ligands, a sugar and cancer chemotherapeutic agents/boron neutron capture therapy agents, and uses thereof |
WO2003094842A2 (en) * | 2002-05-07 | 2003-11-20 | A & D Bioscience, Inc. | Conjugates comprising central nervous system active drug |
US20050215487A1 (en) * | 2002-06-27 | 2005-09-29 | Holick Michael F | Conjugates comprising an nsaid and a sugar and uses thereof |
ES2544527T3 (es) | 2002-07-31 | 2015-09-01 | Seattle Genetics, Inc. | Conjugados de fármacos y su uso para tratar el cáncer, una enfermedad autoinmune o una enfermedad infecciosa |
EP1534674A4 (en) | 2002-08-02 | 2007-11-28 | Immunogen Inc | CYTOTOXIC AGENTS CONTAINING NEW, EFFECTIVE TAXANES AND THEIR THERAPEUTIC USE |
US7390898B2 (en) | 2002-08-02 | 2008-06-24 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use |
US8420086B2 (en) | 2002-12-13 | 2013-04-16 | Immunomedics, Inc. | Camptothecin conjugates of anti-CD22 antibodies for treatment of B cell diseases |
AU2003288467A1 (en) | 2002-12-13 | 2004-07-09 | Immunomedics, Inc. | Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage |
ES2347959T3 (es) | 2003-02-20 | 2010-11-26 | Seattle Genetics, Inc. | Conjugados de anticuerpos anti-cd70-farmaco y su uso para el tratamiento del cancer. |
US20080025989A1 (en) * | 2003-02-20 | 2008-01-31 | Seattle Genetics, Inc. | Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders |
SG173223A1 (en) | 2003-04-22 | 2011-08-29 | Ipsen Pharma Sas | Peptide vectors |
US20040219102A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Jasbir Sandhu | Compositions for drug delivery |
US20040219103A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Jasbir Sandhu | Methods useful for the diagnosis, imaging and treatment of tumors |
US20040219097A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Jasbir Sandhu | Composition useful for the diagnosis, imaging and treatment of tumors |
US20040219100A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Jasbir Sandhu | Composition useful for the treatment of tumors |
US20040219101A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Jasbir Sandhu | Composition useful for treatment of tumors |
US20040219104A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Jasbir Sandhu | Methods for treatment of tumors |
US20040220084A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Jasbir Sandhu | Methods for nucleic acid delivery |
US20040220085A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Jasbir Sandhu | Compositions for nucleic acid delivery |
US20040220390A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Jasbir Sandhu | Composition useful for the treatment of tumors |
US20040220121A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Jasbir Sandhu | Methods for drug delivery |
US20040219099A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Jasbir Sandhu | Method for the treatment of tumors |
US7232805B2 (en) * | 2003-09-10 | 2007-06-19 | Inflabloc Pharmaceuticals, Inc. | Cobalamin conjugates for anti-tumor therapy |
SG149815A1 (en) | 2003-11-06 | 2009-02-27 | Seattle Genetics Inc | Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands |
EP1718667B1 (en) * | 2004-02-23 | 2013-01-09 | Genentech, Inc. | Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates |
BRPI0510909A2 (pt) * | 2004-05-19 | 2008-12-16 | Medarex Inc | composto de ligaÇço fÁrmaco-ligante citotàxico, formulaÇço farmacÊutica, mÉtodo para matar uma cÉlula e mÉtodo para retardar ou interromper o crescimento de tumor |
US7691962B2 (en) * | 2004-05-19 | 2010-04-06 | Medarex, Inc. | Chemical linkers and conjugates thereof |
CN1997402B (zh) * | 2004-05-19 | 2014-04-02 | 梅达雷克斯有限责任公司 | 化学连接基团及其缀合物 |
MXPA06014065A (es) | 2004-06-01 | 2007-01-31 | Genentech Inc | Conjugados de droga-anticuerpo y metodos. |
US7541330B2 (en) * | 2004-06-15 | 2009-06-02 | Kosan Biosciences Incorporated | Conjugates with reduced adverse systemic effects |
CN101065151B (zh) | 2004-09-23 | 2014-12-10 | 健泰科生物技术公司 | 半胱氨酸改造的抗体和偶联物 |
US20100111856A1 (en) | 2004-09-23 | 2010-05-06 | Herman Gill | Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates |
US7641903B2 (en) * | 2004-10-15 | 2010-01-05 | Seattle Genetics, Inc. | Anti-CD70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders |
US8337838B2 (en) * | 2004-10-15 | 2012-12-25 | Seattle Genetics, Inc. | Anti-CD70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders |
EP1799262A4 (en) * | 2004-10-15 | 2009-10-21 | Seattle Genetics Inc | ANTI-CD70 ANTIBODIES AND ITS USE FOR THE TREATMENT AND PREVENTION OF CANCER DISORDERS AND IMMUNE DISORDERS |
WO2006132670A2 (en) | 2004-11-12 | 2006-12-14 | Seattle Genetics, Inc. | Auristatins having an aminobenzoic acid unit at the n terminus |
DE602005022928D1 (de) | 2004-11-30 | 2010-09-23 | Abgenix Inc | Antikörper gegen gpnmb und ihre verwendungen |
US20120269886A1 (en) | 2004-12-22 | 2012-10-25 | Nitto Denko Corporation | Therapeutic agent for pulmonary fibrosis |
HUE048419T2 (hu) | 2004-12-22 | 2020-08-28 | Nitto Denko Corp | Gyógyszerhordozó és kit gyógyszerhordozó kit fibrózis gátlására |
CN101124249B (zh) * | 2005-02-18 | 2011-06-29 | 米德列斯公司 | 抗前列腺特异性膜抗原(psma)的人单克隆抗体 |
US10058621B2 (en) | 2015-06-25 | 2018-08-28 | Immunomedics, Inc. | Combination therapy with anti-HLA-DR antibodies and kinase inhibitors in hematopoietic cancers |
US9707302B2 (en) | 2013-07-23 | 2017-07-18 | Immunomedics, Inc. | Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer |
US7714016B2 (en) * | 2005-04-08 | 2010-05-11 | Medarex, Inc. | Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates |
DK1871418T3 (da) | 2005-04-19 | 2014-06-10 | Seattle Genetics Inc | Humaniserede anti-cd70-bindende midler og anvendelser deraf |
WO2006135371A1 (en) * | 2005-06-09 | 2006-12-21 | Kosan Biosciences Incorporated | Conjugates with reduced adverse systemic effects |
KR20140084242A (ko) * | 2005-06-20 | 2014-07-04 | 피에스엠에이 디벨롭먼트 캄파니, 엘엘씨 | Psma 항체-약물 접합체 |
CA2614436C (en) | 2005-07-07 | 2016-05-17 | Seattle Genetics, Inc. | Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the c-terminus |
WO2007008848A2 (en) | 2005-07-07 | 2007-01-18 | Seattle Genetics, Inc. | Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the c-terminus |
ATE546160T1 (de) * | 2005-09-14 | 2012-03-15 | Ucb Pharma Sa | Antikörper-kammpolymer-konjugat |
CA2623236A1 (en) * | 2005-09-26 | 2007-04-05 | Medarex, Inc. | Human monoclonal antibodies to cd70 |
AU2006294554B2 (en) | 2005-09-26 | 2013-03-21 | E. R. Squibb & Sons, L.L.C. | Antibody-drug conjugates and methods of use |
ES2375843T3 (es) | 2005-10-26 | 2012-03-06 | Medarex, Inc. | Procedimientos y compuestos para la preparación de an�?logos de cc-1065. |
US8404650B2 (en) * | 2005-10-28 | 2013-03-26 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Methods of treating cancer with doxazolidine and prodrugs thereof |
WO2007059404A2 (en) | 2005-11-10 | 2007-05-24 | Medarex, Inc. | Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates |
US9572886B2 (en) | 2005-12-22 | 2017-02-21 | Nitto Denko Corporation | Agent for treating myelofibrosis |
JP2009528984A (ja) * | 2006-01-27 | 2009-08-13 | ザ・ユニバーシティ・オブ・ミシシッピ・メディカル・センター | ドキソルビシンを含む医薬の熱標的化送達 |
US7750116B1 (en) * | 2006-02-18 | 2010-07-06 | Seattle Genetics, Inc. | Antibody drug conjugate metabolites |
WO2007140371A2 (en) | 2006-05-30 | 2007-12-06 | Genentech, Inc. | Antibodies and immunoconjugates and uses therefor |
GB0619291D0 (en) | 2006-09-29 | 2006-11-08 | Ucb Sa | Altered antibodies |
KR20150067395A (ko) | 2006-12-01 | 2015-06-17 | 메다렉스, 엘.엘.시. | 씨디22에 결합하는 인간 항체 및 이의 용도 |
PT2099823E (pt) | 2006-12-01 | 2014-12-22 | Seattle Genetics Inc | Agentes de ligação ao alvo variantes e suas utilizações |
CL2007003622A1 (es) | 2006-12-13 | 2009-08-07 | Medarex Inc | Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales. |
NZ578354A (en) * | 2006-12-14 | 2012-01-12 | Medarex Inc | Antibody-partner molecule conjugates that bind cd70 and uses thereof |
TWI412367B (zh) | 2006-12-28 | 2013-10-21 | Medarex Llc | 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物 |
EP2126127B1 (en) * | 2007-01-25 | 2016-09-28 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Use of anti-egfr antibodies in treatment of egfr mutant mediated disease |
AR065404A1 (es) | 2007-02-21 | 2009-06-03 | Medarex Inc | Conjugados farmaco-ligando, los que se unen a citotoxinas potentes, composicion farmaceutica que los contienen y su uso para retardar o detener el crecimiento de un tumor en un mamifero |
AU2008227123B2 (en) * | 2007-03-15 | 2014-03-27 | Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. | Treatment method using EGFR antibodies and src inhibitors and related formulations |
TWI407971B (zh) | 2007-03-30 | 2013-09-11 | Nitto Denko Corp | Cancer cells and tumor-related fibroblasts |
CA2687291A1 (en) | 2007-05-16 | 2008-11-20 | Ktb Tumorforschungsgesellschaft Mbh | Low-viscous anthracycline formulation |
EP2641618A3 (en) | 2007-07-16 | 2013-10-23 | Genentech, Inc. | Humanized anti-CD79B antibodies and immunoconjugates and methods of use |
SG183023A1 (en) | 2007-07-16 | 2012-08-30 | Genentech Inc | Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use |
EP2188311B1 (en) | 2007-08-14 | 2016-10-05 | Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. | Monoclonal antibody 175 targeting the egf receptor and derivatives and uses thereof |
WO2009026274A1 (en) | 2007-08-22 | 2009-02-26 | Medarex, Inc. | Site-specific attachment of drugs or other agents to engineered antibodies with c-terminal extensions |
EP2207570A2 (en) | 2007-09-14 | 2010-07-21 | Nitto Denko Corporation | Drug carriers |
EP2195017B1 (en) | 2007-10-01 | 2014-10-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Human antibodies that bind mesothelin, and uses thereof |
EP3241846B1 (en) | 2007-10-04 | 2022-02-23 | ZymoGenetics, Inc. | B7 family member zb7h6 and related compositions and methods |
RU2505544C2 (ru) * | 2007-10-19 | 2014-01-27 | Дженентек, Инк. | Антитела против tenb2, сконструированные с цистеином, и конъюгаты антитело - лекарственное средство |
CA2702555A1 (en) | 2007-10-19 | 2009-04-23 | Seattle Genetics, Inc. | Cd19 binding agents and uses thereof |
JP5580205B2 (ja) | 2007-11-19 | 2014-08-27 | セレラ コーポレーション | 肺癌マーカーとその使用 |
AR069746A1 (es) * | 2007-11-30 | 2010-02-17 | Medarex Inc | Conjugados de anticuerpos anti- rg-1 |
WO2009092011A1 (en) | 2008-01-18 | 2009-07-23 | Medimmune, Llc | Cysteine engineered antibodies for site-specific conjugation |
IL295449A (en) | 2008-01-31 | 2022-10-01 | Genentech Inc | and fusion antibody-drug-cd79b engineered antibodies cysteine- |
NO2842575T3 (cs) | 2008-03-18 | 2018-02-24 | ||
JP5769616B2 (ja) | 2008-04-30 | 2015-08-26 | イミュノジェン・インコーポレーテッド | クロスリンカーおよびそれらの使用 |
CA2723197C (en) | 2008-05-02 | 2017-09-19 | Seattle Genetics, Inc. | Methods and compositions for making antibodies and antibody derivatives with reduced core fucosylation |
ES2438495T3 (es) | 2008-09-08 | 2014-01-17 | Psma Development Company, L.L.C. | Compuestos para exterminar células cancerosas que expresan PSMA, resistentes a taxano |
UA109633C2 (uk) | 2008-12-09 | 2015-09-25 | Антитіло людини проти тканинного фактора | |
DK3912643T3 (da) | 2009-02-13 | 2022-10-17 | Immunomedics Inc | Immunokonjugater med en intracellulært-spaltelig binding |
PT2403878T (pt) | 2009-03-05 | 2017-09-01 | Squibb & Sons Llc | Anticorpos completamente humanos específicos a cadm1 |
PE20120878A1 (es) | 2009-04-01 | 2012-08-06 | Genentech Inc | ANTICUERPOS ANTI-FcRH5 E INMUNOCONJUGADOS |
LT2437790T (lt) | 2009-06-03 | 2019-06-10 | Immunogen, Inc. | Konjugavimo būdai |
US20120213705A1 (en) | 2009-06-22 | 2012-08-23 | Medimmune, Llc | ENGINEERED Fc REGIONS FOR SITE-SPECIFIC CONJUGATION |
US8394922B2 (en) | 2009-08-03 | 2013-03-12 | Medarex, Inc. | Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof |
WO2011028952A1 (en) | 2009-09-02 | 2011-03-10 | Xencor, Inc. | Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens |
US20110076232A1 (en) | 2009-09-29 | 2011-03-31 | Ludwig Institute For Cancer Research | Specific binding proteins and uses thereof |
EP2470569A1 (en) | 2009-10-13 | 2012-07-04 | Oxford Biotherapeutics Ltd. | Antibodies against epha10 |
CN110054692A (zh) | 2009-10-23 | 2019-07-26 | 米伦纽姆医药公司 | 抗gcc抗体分子及其相关组合物和方法 |
KR20120123299A (ko) | 2009-12-04 | 2012-11-08 | 제넨테크, 인크. | 다중특이적 항체, 항체 유사체, 조성물 및 방법 |
EA024629B1 (ru) | 2009-12-09 | 2016-10-31 | Институт Насьональ Де Ла Сант Де Ла Решерше Медикаль | Моноклональные антитела, связывающие b7h6, и их применение |
JP6046494B2 (ja) | 2010-02-08 | 2016-12-14 | アジェンシス,インコーポレイテッド | 161p2f10bタンパク質に結合する抗体薬物コンジュゲート(adc) |
AR080243A1 (es) * | 2010-02-23 | 2012-03-21 | Genentech Inc | Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento de tumores |
EA024730B1 (ru) | 2010-04-15 | 2016-10-31 | Медимьюн Лимитед | Пирролбензодиазепиновые соединения, их конъюгаты, фармацевтические композиции, содержащие указанные конъюгаты, и применение указанных конъюгатов |
CN102971329B (zh) | 2010-04-15 | 2016-06-29 | 麦迪穆有限责任公司 | 用于治疗增殖性疾病的吡咯并苯并二氮杂卓 |
KR101839163B1 (ko) | 2010-06-08 | 2018-03-15 | 제넨테크, 인크. | 시스테인 조작된 항체 및 접합체 |
EP3613774A1 (en) | 2010-06-09 | 2020-02-26 | Genmab A/S | Antibodies against human cd38 |
RS56599B1 (sr) | 2010-06-15 | 2018-02-28 | Genmab As | Konjugati humanog antitela sa lekom protiv tkivnog faktora |
DK3029066T3 (da) | 2010-07-29 | 2019-05-20 | Xencor Inc | Antistoffer med modificerede isoelektriske punkter |
KR102504750B1 (ko) | 2010-09-29 | 2023-03-02 | 어젠시스 인코포레이티드 | 191p4d12 단백질에 결합하는 항체 약물 컨쥬게이트(adc) |
EP2621954A1 (en) | 2010-10-01 | 2013-08-07 | Oxford Biotherapeutics Ltd. | Anti-rori antibodies |
CN106563128B (zh) | 2010-10-22 | 2020-05-22 | 西雅图遗传学公司 | 以奥里斯他汀为主的抗体药物结合物和结合mTOR的抑制剂在制备治疗癌症药物中的用途 |
CA2819038C (en) | 2010-12-06 | 2023-10-17 | Seattle Genetics, Inc. | Humanized antibodies to liv-1 and use of same to treat cancer |
CN103491982B (zh) * | 2010-12-29 | 2017-09-12 | 箭头研究公司 | 具有酶敏感性连接的多核苷酸体内递送偶联物 |
EP2658981B1 (en) * | 2010-12-29 | 2016-09-28 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Small molecule conjugates for intracellular delivery of nucleic acids |
JOP20210044A1 (ar) | 2010-12-30 | 2017-06-16 | Takeda Pharmaceuticals Co | الأجسام المضادة لـ cd38 |
CN104906592B (zh) * | 2011-02-25 | 2017-11-03 | 广州南沙龙沙有限公司 | 用于蛋白质药物偶联物的支链联接体 |
ES2531471T3 (es) | 2011-02-25 | 2015-03-16 | Lonza Ltd | Enlazador ramificado para conjugados de proteínas-fármacos |
US9044518B2 (en) | 2011-03-30 | 2015-06-02 | Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Of The State Of Arizona Acting For And On Behalf Of Arizona State University | Auristatin tyramine phosphate salts and auristatin aminoquinoline derivatives and prodrugs thereof |
CN103796678B (zh) | 2011-04-20 | 2018-02-27 | 健玛保 | 针对her2的双特异性抗体 |
EP4338754A2 (en) | 2011-05-27 | 2024-03-20 | Glaxo Group Limited | Antigen binding proteins |
UA112434C2 (uk) | 2011-05-27 | 2016-09-12 | Ґлаксо Ґруп Лімітед | Антигензв'язувальний білок, який специфічно зв'язується з всма |
AU2015224535B2 (en) * | 2011-06-21 | 2017-07-20 | Immunogen, Inc. | Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof |
KR20140037208A (ko) * | 2011-06-21 | 2014-03-26 | 이뮤노젠 아이엔씨 | 펩타이드 링커를 갖는 신규한 메이탄시노이드 유도체 및 이의 접합체 |
CA2840537C (en) | 2011-06-28 | 2021-12-14 | Oxford Biotherapeutics Ltd. | Antibodies to adp-ribosyl cyclase 2 |
UA117901C2 (uk) | 2011-07-06 | 2018-10-25 | Ґенмаб Б.В. | Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування |
WO2013022855A1 (en) | 2011-08-05 | 2013-02-14 | Xencor, Inc. | Antibodies with modified isoelectric points and immunofiltering |
US20130058947A1 (en) | 2011-09-02 | 2013-03-07 | Stem Centrx, Inc | Novel Modulators and Methods of Use |
AU2012311505B2 (en) | 2011-09-20 | 2016-09-29 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric PBD compounds for inclusion in targeted conjugates |
AU2012323287B2 (en) | 2011-10-10 | 2018-02-01 | Xencor, Inc. | A method for purifying antibodies |
US10851178B2 (en) | 2011-10-10 | 2020-12-01 | Xencor, Inc. | Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications |
KR101877598B1 (ko) | 2011-10-14 | 2018-07-11 | 메디뮨 리미티드 | 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트 |
CN110183470A (zh) | 2011-10-14 | 2019-08-30 | 麦迪穆有限责任公司 | 吡咯并苯并二氮杂卓 |
KR101961976B1 (ko) | 2011-10-14 | 2019-03-25 | 시애틀 지네틱스, 인크. | 피롤로벤조디아제핀 및 표적 접합체 |
CA2850373C (en) | 2011-10-14 | 2019-07-16 | Seattle Genetics, Inc. | Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates |
MX341523B (es) | 2011-10-14 | 2016-08-24 | Medimmune Ltd | Pirrolobenzodiazepinas. |
DK2773671T3 (da) | 2011-11-04 | 2021-11-15 | Zymeworks Inc | Udformning af stabilt heterodimert antistof med mutationer i fc-domænet |
AR088694A1 (es) | 2011-11-17 | 2014-06-25 | Pfizer | Peptidos citotoxicos y conjugados de anticuerpo-farmaco de los mismos |
US11147852B2 (en) | 2011-12-23 | 2021-10-19 | Pfizer Inc. | Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor |
CA2861502A1 (en) * | 2012-01-18 | 2013-07-25 | Raymond A. Firestone | Compositions and methods for treating cancer and inflammation-related diseases and conditions |
EP2804631B1 (en) | 2012-01-20 | 2021-03-17 | i2 Pharmaceuticals, Inc. | Surrobody conjugates |
DK2814829T3 (en) | 2012-02-13 | 2017-03-20 | Bristol Myers Squibb Co | RELATIONSHIPS, CONJUGATES THEREOF AND USES AND RELATED PROCEDURES |
US20150335761A1 (en) * | 2012-02-16 | 2015-11-26 | Raymond Firestone | Compositions and methods for contraception |
CN104334580B (zh) | 2012-02-24 | 2018-03-30 | 艾伯维施特姆森特克斯有限责任公司 | 抗sez6抗体及使用方法 |
BR112014020826A8 (pt) | 2012-02-24 | 2017-09-19 | Stem Centrx Inc | Anticorpo que se liga especificamente a um epítopo, ácido nucleico, vetor ou célula hospedeira, conjugado de fármaco anticorpo, composição farmacêutica compreendendo o referido anticorpo, uso do mesmo, kit e método de preparação do conjugado |
MX353608B (es) | 2012-02-24 | 2018-01-19 | Alteogen Inc | Anticuerpo modificado en el que el tema que comprende residuos de cisteina esta ligado, conjugado de farmaco de anticuerpo modificado que comprende el anticuerpo modificado y metodo de produccion para el mismo. |
WO2013130093A1 (en) | 2012-03-02 | 2013-09-06 | Genentech, Inc. | Biomarkers for treatment with anti-tubulin chemotherapeutic compounds |
SG11201405553YA (en) | 2012-03-08 | 2014-11-27 | Halozyme Inc | Conditionally active anti-epidermal growth factor receptor antibodies and methods of use thereof |
AR090549A1 (es) | 2012-03-30 | 2014-11-19 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados |
US20140079636A1 (en) | 2012-04-16 | 2014-03-20 | Dinesh U. Chimmanamada | Targeted therapeutics |
AR090903A1 (es) | 2012-05-01 | 2014-12-17 | Genentech Inc | Anticuerpos e inmunoconjugados anti-pmel17 |
NZ724892A (en) | 2012-05-15 | 2018-04-27 | Seattle Genetics Inc | Self-stabilizing linker conjugates |
US9504756B2 (en) | 2012-05-15 | 2016-11-29 | Seattle Genetics, Inc. | Self-stabilizing linker conjugates |
CN104662000B (zh) | 2012-05-15 | 2018-08-17 | 索伦托医疗有限公司 | 药物偶联物及其偶联方法和用途 |
CN104540519B (zh) | 2012-05-21 | 2018-06-01 | 基因泰克公司 | 抗Ly6E抗体和免疫缀合物及使用方法 |
WO2013177481A1 (en) | 2012-05-25 | 2013-11-28 | Immunogen, Inc. | Benzodiazepines and conjugates thereof |
EP3632462A1 (en) | 2012-07-06 | 2020-04-08 | Genmab B.V. | Dimeric protein with triple mutations |
WO2014006217A1 (en) | 2012-07-06 | 2014-01-09 | Genmab B.V. | Dimeric protein with triple mutations |
EP2869851A1 (en) | 2012-07-09 | 2015-05-13 | Genentech, Inc. | Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies |
SG11201500096YA (en) | 2012-07-09 | 2015-02-27 | Genentech Inc | Immunoconjugates comprising anti - cd79b antibodies |
TW201406785A (zh) | 2012-07-09 | 2014-02-16 | Genentech Inc | 抗cd22抗體及免疫結合物 |
SG11201500093TA (en) | 2012-07-09 | 2015-02-27 | Genentech Inc | Immunoconjugates comprising anti-cd79b antibodies |
CN112587658A (zh) | 2012-07-18 | 2021-04-02 | 博笛生物科技有限公司 | 癌症的靶向免疫治疗 |
EP2879708A4 (en) | 2012-08-02 | 2016-03-16 | Genentech Inc | ANTIBODY AND ANTI-ETBR IMMUNOCONJUGATES |
RU2015106946A (ru) | 2012-08-02 | 2016-09-27 | Дженентек, Инк. | Антитела к рецептору эндотелина типа в (etbr) и их иммуноконъюгаты |
US9382329B2 (en) | 2012-08-14 | 2016-07-05 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells |
SG11201501286PA (en) | 2012-08-23 | 2015-05-28 | Agensys Inc | Antibody drug conjugates (adc) that bind to 158p1d7 proteins |
KR20230142808A (ko) | 2012-10-11 | 2023-10-11 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 글리신아미드 화합물의 제조 방법 |
TR201815418T4 (tr) | 2012-10-12 | 2018-11-21 | Adc Therapeutics Sa | Pirrolobenzodiazepin -anti-psma antikor konjugatları. |
AU2013328674B2 (en) | 2012-10-12 | 2017-06-22 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
LT2839860T (lt) | 2012-10-12 | 2019-07-10 | Medimmune Limited | Pirolobenzodiazepinai ir jų konjugatai |
HUE042731T2 (hu) | 2012-10-12 | 2019-07-29 | Adc Therapeutics Sa | Pirrolobenzodiazepin-antitest konjugátumok |
US10695433B2 (en) | 2012-10-12 | 2020-06-30 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
EP2906251B1 (en) | 2012-10-12 | 2017-09-27 | ADC Therapeutics SA | Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates |
US9745303B2 (en) | 2012-10-12 | 2017-08-29 | Medimmune Limited | Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation |
EP2906296B1 (en) | 2012-10-12 | 2018-03-21 | ADC Therapeutics SA | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
ES2680153T3 (es) | 2012-10-12 | 2018-09-04 | Adc Therapeutics Sa | Conjugados de anticuerpos anti-PSMA-pirrolobenzodiazepinas |
ES2782248T3 (es) | 2012-10-19 | 2020-09-11 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Conjugado de anticuerpo y fármaco producido por la unión a través de un enlazador que tiene estructura hidrófila |
US9556192B2 (en) | 2012-10-30 | 2017-01-31 | Nerviano Medical Sciences S.R.L. | Functionalized 9-bromo-camptothecin derivatives |
PL2917195T3 (pl) | 2012-11-05 | 2018-04-30 | Pfizer Inc. | Analogi spliceostatyny |
CA2891280C (en) | 2012-11-24 | 2018-03-20 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules |
US9353150B2 (en) | 2012-12-04 | 2016-05-31 | Massachusetts Institute Of Technology | Substituted pyrazino[1′,2′:1 ,5]pyrrolo[2,3-b]-indole-1,4-diones for cancer treatment |
US10226535B2 (en) | 2012-12-10 | 2019-03-12 | Mersana Therapeutics, Inc. | Auristatin compounds and conjugates thereof |
US10413539B2 (en) | 2012-12-13 | 2019-09-17 | Immunomedics, Inc. | Therapy for metastatic urothelial cancer with the antibody-drug conjugate, sacituzumab govitecan (IMMU-132) |
US10206918B2 (en) | 2012-12-13 | 2019-02-19 | Immunomedics, Inc. | Efficacy of anti-HLA-DR antiboddy drug conjugate IMMU-140 (hL243-CL2A-SN-38) in HLA-DR positive cancers |
US9492566B2 (en) | 2012-12-13 | 2016-11-15 | Immunomedics, Inc. | Antibody-drug conjugates and uses thereof |
ES2819573T3 (es) | 2012-12-13 | 2021-04-16 | Immunomedics Inc | Método para producir inmunoconjugados de anticuerpo-SN-38 con un enlazador CL2A |
US10137196B2 (en) | 2012-12-13 | 2018-11-27 | Immunomedics, Inc. | Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity |
US10744129B2 (en) | 2012-12-13 | 2020-08-18 | Immunomedics, Inc. | Therapy of small-cell lung cancer (SCLC) with a topoisomerase-I inhibiting antibody-drug conjugate (ADC) targeting Trop-2 |
US9931417B2 (en) | 2012-12-13 | 2018-04-03 | Immunomedics, Inc. | Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker |
PT2900277T (pt) | 2012-12-13 | 2022-05-25 | Immunomedics Inc | Doses de imunoconjugados de anticorpos e sn-38 para melhorar a eficácia e diminuir a toxicidade |
SG11201504887TA (en) | 2012-12-21 | 2015-07-30 | Bioalliance Cv | Hydrophilic self-immolative linkers and conjugates thereof |
EP2935268B2 (en) | 2012-12-21 | 2021-02-17 | MedImmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
US9567340B2 (en) | 2012-12-21 | 2017-02-14 | Medimmune Limited | Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases |
CN105051032B (zh) | 2013-01-03 | 2017-08-15 | 赛特瑞恩股份有限公司 | 抗体‑连接子‑药物偶联物、其制法及包含其的抗癌药物组合物 |
KR101597101B1 (ko) * | 2013-01-03 | 2016-02-25 | (주)셀트리온 | 항체-링커-약물 결합체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 항암제 조성물 |
KR101597105B1 (ko) * | 2013-01-03 | 2016-02-25 | (주)셀트리온 | 항체-링커-약물 결합체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 항암제 조성물 |
KR101597100B1 (ko) * | 2013-01-03 | 2016-02-25 | (주)셀트리온 | 항체-링커-약물 결합체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 항암제 조성물 |
KR101597110B1 (ko) * | 2013-01-03 | 2016-02-25 | (주)셀트리온 | 항체-링커-약물 결합체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 항암제 조성물 |
KR20200134340A (ko) | 2013-01-10 | 2020-12-01 | 젠맵 비. 브이 | 인간 IgG1 Fc 영역 변이체 및 그의 용도 |
US9701759B2 (en) | 2013-01-14 | 2017-07-11 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
US11053316B2 (en) | 2013-01-14 | 2021-07-06 | Xencor, Inc. | Optimized antibody variable regions |
US9605084B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-03-28 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
US10487155B2 (en) | 2013-01-14 | 2019-11-26 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
US10968276B2 (en) | 2013-03-12 | 2021-04-06 | Xencor, Inc. | Optimized anti-CD3 variable regions |
US10131710B2 (en) | 2013-01-14 | 2018-11-20 | Xencor, Inc. | Optimized antibody variable regions |
WO2014110601A1 (en) | 2013-01-14 | 2014-07-17 | Xencor, Inc. | Novel heterodimeric proteins |
US9738722B2 (en) | 2013-01-15 | 2017-08-22 | Xencor, Inc. | Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies |
WO2014124227A1 (en) | 2013-02-07 | 2014-08-14 | Immunomedics, Inc. | Pro-drug form (p2pdox) of the highly potent 2-pyrrolinodoxorubicin conjugated to antibodies for targeted therapy of cancer |
LT2956173T (lt) | 2013-02-14 | 2017-06-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Tubulizino junginiai, gavimo ir panaudojimo būdai |
RS58873B1 (sr) | 2013-02-22 | 2019-08-30 | Abbvie Stemcentrx Llc | Antidll3-antitelo-pbd konjugati i njihova upotreba |
ITUD20130024A1 (it) | 2013-02-22 | 2014-08-23 | Carlo Galli | Aptameri per la realizzazione di dispositivi biomedicali impiantabili in tessuto e relativo metodo |
US9821074B2 (en) | 2013-03-13 | 2017-11-21 | Genentech, Inc. | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
KR102066318B1 (ko) | 2013-03-13 | 2020-01-14 | 메디뮨 리미티드 | 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨쥬게이트 |
CA2905181C (en) | 2013-03-13 | 2020-06-02 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof for providing targeted therapy |
CN105189552B (zh) | 2013-03-14 | 2019-08-02 | 基因泰克公司 | 抗b7-h4抗体和免疫缀合物 |
US9562099B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-02-07 | Genentech, Inc. | Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates |
WO2014160037A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | The Regents Of The University Of California | Activatable membrane-interacting peptides and methods of use |
EP3421495A3 (en) | 2013-03-15 | 2019-05-15 | Xencor, Inc. | Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions |
US10519242B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-12-31 | Xencor, Inc. | Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins |
SG11201507432XA (en) | 2013-03-15 | 2015-10-29 | Abbvie Inc | Antibody drug conjugate (adc) purification |
US10106624B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-10-23 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
US10858417B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-12-08 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
PT2968588T (pt) | 2013-03-15 | 2019-05-08 | Abbvie Inc | Formulações de conjugado de fármaco-anticorpo anti-egfr |
EP3587448B1 (en) | 2013-03-15 | 2021-05-19 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
CA2906784C (en) | 2013-03-15 | 2023-02-28 | The Centre For Drug Research And Development | Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same |
CA2910945A1 (en) | 2013-05-08 | 2014-11-13 | Zymeworks Inc. | Bispecific her2 and her3 antigen binding constructs |
CA2913011A1 (en) | 2013-05-31 | 2014-12-04 | Genentech, Inc. | Anti-wall teichoic antibodies and conjugates |
SG11201509839TA (en) | 2013-05-31 | 2016-01-28 | Genentech Inc | Anti-wall teichoic antibodies and conjugates |
BR112015030514A2 (pt) | 2013-06-04 | 2017-08-29 | Cytomx Therapeutics Inc | Composições e métodos para conjugação de anticorpos ativáveis |
US11253606B2 (en) | 2013-07-23 | 2022-02-22 | Immunomedics, Inc. | Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer |
JP6510518B2 (ja) | 2013-08-01 | 2019-05-08 | アジェンシス,インコーポレイテッド | Cd37タンパク質に結合する抗体薬物結合体(adc) |
TWI636792B (zh) | 2013-08-12 | 2018-10-01 | 建南德克公司 | 1-(氯甲基)-2,3-二氫-1h-苯并[e]吲哚二聚體抗體-藥物結合物化合物及使用與治療方法 |
ES2871418T3 (es) | 2013-08-28 | 2021-10-28 | Abbvie Stemcentrx Llc | Composiciones y métodos de conjugación de anticuerpos específicos de sitio |
EP3338793A1 (en) | 2013-08-28 | 2018-06-27 | AbbVie Stemcentrx LLC | Novel sez6 modulators and methods of use |
EP3035938B1 (en) | 2013-09-10 | 2020-08-19 | Madrigal Pharmaceuticals, Inc. | Targeted therapeutics |
CN105764924A (zh) | 2013-09-12 | 2016-07-13 | 哈洛齐梅公司 | 修饰的抗表皮生长因子受体抗体及其使用方法 |
WO2015038426A1 (en) * | 2013-09-13 | 2015-03-19 | Asana Biosciences, Llc | Self-immolative linkers containing mandelic acid derivatives, drug-ligand conjugates for targeted therapies and uses thereof |
JP2016537399A (ja) | 2013-09-17 | 2016-12-01 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗lgr5抗体を使用する方法 |
GB201317982D0 (en) | 2013-10-11 | 2013-11-27 | Spirogen Sarl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
CA2925393C (en) | 2013-10-11 | 2023-03-07 | Dimiter Dimitrov | Tem8 antibodies and their use |
WO2015052535A1 (en) | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Spirogen Sàrl | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
WO2015052534A1 (en) | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Spirogen Sàrl | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
WO2015052532A1 (en) | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Spirogen Sàrl | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
GB201317981D0 (en) | 2013-10-11 | 2013-11-27 | Spirogen Sarl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
EP3055331B1 (en) | 2013-10-11 | 2021-02-17 | Oxford Bio Therapeutics Limited | Conjugated antibodies against ly75 for the treatment of cancer |
CN106132431A (zh) | 2013-10-15 | 2016-11-16 | 索伦托治疗有限公司 | 具有靶向分子和两种不同药物的药物偶联物 |
NZ758049A (en) | 2013-10-15 | 2024-03-22 | Seagen Inc | Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics |
US20150110814A1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-23 | Psma Development Company, Llc | Combination therapies with psma ligand conjugates |
JP6908964B2 (ja) | 2013-10-18 | 2021-07-28 | ピーエスエムエー ディベロップメント カンパニー,エルエルシー | Psmaリガンドコンジュゲートによる併用療法 |
US9290578B2 (en) | 2013-10-21 | 2016-03-22 | Genentech, Inc. | Anti-Ly6E antibodies and methods of use |
WO2015066053A2 (en) | 2013-10-28 | 2015-05-07 | Synta Pharmaceuticals Corp. | Targeted therapeutics |
EP3066118B1 (en) | 2013-11-06 | 2020-01-08 | The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Alk antibodies, conjugates, and chimeric antigen receptors, and their use |
MX2016006301A (es) | 2013-11-13 | 2016-12-16 | Zymeworks Inc | Construcciones de unión a antígeno monovalente que se dirigen a egfr y/o her2, y sus usos. |
CN113521016A (zh) | 2013-11-21 | 2021-10-22 | 根马布股份公司 | 抗体-药物缀合物冻干制剂 |
CN105979963B (zh) | 2013-11-25 | 2020-03-03 | 西雅图基因公司 | 从cho细胞培养物中制备抗体用于偶联 |
TW201533060A (zh) | 2013-12-13 | 2015-09-01 | Genentech Inc | 抗cd33抗體及免疫結合物 |
CN107106700B (zh) | 2013-12-16 | 2020-10-30 | 基因泰克公司 | 肽模拟化合物及其抗体-药物缀合物 |
JP6671292B2 (ja) | 2013-12-16 | 2020-03-25 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | ペプチド模倣化合物及びその抗体−薬物コンジュゲート |
EA033456B1 (ru) | 2013-12-16 | 2019-10-31 | Genentech Inc | Конъюгаты антитело-лекарственное средство, содержащие пептидомиметические линкеры |
CN105828840B (zh) | 2013-12-16 | 2020-08-04 | 基因泰克公司 | 1-(氯甲基)-2,3-二氢-1H-苯并[e]吲哚二聚体抗体-药物缀合物化合物及使用和治疗方法 |
KR102535900B1 (ko) | 2013-12-25 | 2023-05-26 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 항 trop2 항체-약물 컨쥬게이트 |
KR102384740B1 (ko) | 2013-12-27 | 2022-04-07 | 자임워크스 인코포레이티드 | 약물 접합체를 위한 설폰아마이드-함유 연결 시스템 |
WO2015103549A1 (en) | 2014-01-03 | 2015-07-09 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use |
CN105899537A (zh) | 2014-01-10 | 2016-08-24 | 博笛生物科技(北京)有限公司 | 靶向表达egfr的肿瘤的化合物和组合物 |
RU2016130349A (ru) | 2014-01-24 | 2018-03-01 | Дженентек, Инк. | Способы применения антител против steap1 и иммуноконъюгатов |
JP2017505777A (ja) | 2014-01-29 | 2017-02-23 | シンタ ファーマスーティカルズ コーポレーション | 標的化治療薬 |
SI3101032T1 (sl) | 2014-01-31 | 2019-02-28 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Konjugat zdravila s protitelesci ANTI-HER2 |
AU2015218633A1 (en) | 2014-02-21 | 2016-09-01 | Abbvie Stemcentrx Llc | Anti-DLL3 antibodies and drug conjugates for use in melanoma |
EP3122757B1 (en) | 2014-02-28 | 2023-09-06 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd | Charged linkers and their uses for conjugation |
MA39481A (fr) | 2014-03-03 | 2015-09-11 | Synta Pharmaceuticals Corp | Thérapies ciblées |
WO2015143004A1 (en) | 2014-03-18 | 2015-09-24 | Synta Pharmaceuticals Corp. | Targeted therapeutics |
KR20220025946A (ko) | 2014-03-21 | 2022-03-03 | 애브비 인코포레이티드 | 항-egfr 항체 및 항체 약물 접합체 |
CR20160506A (es) | 2014-03-28 | 2017-03-10 | Xencor Inc | Anticuerpos biespecíficos que se unen a cd38 y cd3 |
EP3125943A4 (en) | 2014-04-04 | 2017-12-06 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Phosphate based linkers for intracellular delivery of drug conjugates |
MY195180A (en) | 2014-04-10 | 2023-01-11 | U3 Pharma Gmbh | Anti-HER3 Antibody-Drug Conjugate |
WO2015155976A1 (ja) | 2014-04-10 | 2015-10-15 | 第一三共株式会社 | 抗her2抗体-薬物コンジュゲート |
GB201406767D0 (en) | 2014-04-15 | 2014-05-28 | Cancer Rec Tech Ltd | Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates |
RS61516B1 (sr) | 2014-04-30 | 2021-03-31 | Pfizer | Konjugati anti-ptk7 antitelo-lek |
CN106414499A (zh) | 2014-05-22 | 2017-02-15 | 基因泰克公司 | 抗gpc3抗体和免疫偶联物 |
JP6453706B2 (ja) * | 2014-05-23 | 2019-01-16 | 日本化薬株式会社 | 新規なグルタミン酸誘導体およびその用途 |
US9579317B2 (en) | 2014-06-03 | 2017-02-28 | Jiarui Biopharmaceuticals, Ltd. | Peptide-drug conjugates |
TWI695011B (zh) | 2014-06-18 | 2020-06-01 | 美商梅爾莎納醫療公司 | 抗her2表位之單株抗體及其使用之方法 |
CA2952876A1 (en) | 2014-06-20 | 2015-12-23 | Bioalliance C.V. | Anti-folate receptor alpha (fra) antibody-drug conjugates and methods of using thereof |
AU2015282627B2 (en) | 2014-06-30 | 2020-04-02 | Glykos Finland Oy | Saccharide derivative of a toxic payload and antibody conjugates thereof |
CN105440135A (zh) | 2014-09-01 | 2016-03-30 | 博笛生物科技有限公司 | 用于治疗肿瘤的抗-pd-l1结合物 |
NZ728019A (en) | 2014-07-11 | 2022-09-30 | Genmab As | Antibodies binding axl |
AU2015292326A1 (en) | 2014-07-24 | 2017-02-23 | Xencor, Inc. | Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies |
SG11201700365TA (en) | 2014-07-24 | 2017-02-27 | Genentech Inc | Methods of conjugating an agent to a thiol moiety in a protein that contains at least one trisulfide bond |
CN107074975A (zh) | 2014-08-28 | 2017-08-18 | 生物蛋白有限公司 | 用于修饰的t细胞的条件活性嵌合抗原受体 |
WO2016030791A1 (en) | 2014-08-28 | 2016-03-03 | Pfizer Inc. | Stability-modulating linkers for use with antibody drug conjugates |
WO2016037644A1 (en) | 2014-09-10 | 2016-03-17 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
CN114732916B (zh) | 2014-09-11 | 2023-12-19 | 西雅图基因公司 | 含叔胺药物物质的靶向递送 |
ES2830385T3 (es) | 2014-09-12 | 2021-06-03 | Genentech Inc | Anticuerpos e inmunoconjugados anti-HER2 |
EP3191521A2 (en) | 2014-09-12 | 2017-07-19 | F. Hoffmann-La Roche AG | Cysteine engineered antibodies and conjugates |
GB201416112D0 (en) | 2014-09-12 | 2014-10-29 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
TW201625690A (zh) | 2014-09-12 | 2016-07-16 | 建南德克公司 | 抗-cll-1抗體及免疫結合物 |
CN113698488A (zh) | 2014-09-12 | 2021-11-26 | 基因泰克公司 | 抗-b7-h4抗体及免疫缀合物 |
BR112017004953A2 (pt) | 2014-09-17 | 2017-12-05 | Genentech Inc | imunoconjugado, formulação farmacêutica, método de tratamento e método de inibição da proliferação de uma célula |
US9879086B2 (en) | 2014-09-17 | 2018-01-30 | Zymeworks Inc. | Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same |
ES2796903T3 (es) | 2014-09-23 | 2020-11-30 | Hoffmann La Roche | Procedimiento de uso de inmunoconjugados anti-CD79b |
EP3215513B1 (en) | 2014-11-05 | 2019-05-08 | Nerviano Medical Sciences S.r.l. | Functionalized morpholinyl anthracycline derivatives |
US10077287B2 (en) | 2014-11-10 | 2018-09-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Tubulysin analogs and methods of making and use |
EP3221349B1 (en) | 2014-11-19 | 2020-11-04 | Axon Neuroscience SE | Humanized tau antibodies in alzheimer's disease |
KR101759261B1 (ko) * | 2014-11-20 | 2017-07-19 | 파로스젠 주식회사 | 유도형질로 활성화되는 다기능성 항암제 전구체, 이의 제조방법 및 이의 용도 |
AU2015352545B2 (en) | 2014-11-25 | 2020-10-15 | Adc Therapeutics Sa | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
US10259887B2 (en) | 2014-11-26 | 2019-04-16 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens |
DK3223845T3 (da) | 2014-11-26 | 2021-08-16 | Xencor Inc | Heterodimere antistoffer, der binder cd3 og cd20 |
CA2968878A1 (en) | 2014-11-26 | 2016-06-02 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd38 |
MX2017007231A (es) | 2014-12-03 | 2017-11-08 | Genentech Inc | Conjugados de rifamicina y anticuerpos contra el staphylococcuss aureus y usos de estos. |
WO2016090050A1 (en) | 2014-12-03 | 2016-06-09 | Genentech, Inc. | Quaternary amine compounds and antibody-drug conjugates thereof |
WO2016090038A1 (en) | 2014-12-03 | 2016-06-09 | Genentech, Inc. | Anti-staphylococcus aureus antibody rifamycin conjugates and uses thereof |
JP6864953B2 (ja) | 2014-12-09 | 2021-04-28 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | Axlに対するヒトモノクローナル抗体 |
EP3237449A2 (en) | 2014-12-22 | 2017-11-01 | Xencor, Inc. | Trispecific antibodies |
ES2747386T3 (es) | 2015-01-14 | 2020-03-10 | Bristol Myers Squibb Co | Dímeros de benzodiacepina unidos por heteroarileno, conjugados de los mismos y métodos de preparación y uso |
US10590165B2 (en) | 2015-01-28 | 2020-03-17 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antibody drug conjugates |
WO2016141230A1 (en) | 2015-03-05 | 2016-09-09 | Sirenas Llc | Cyclic peptide analogs and conjugates thereof |
US10227411B2 (en) | 2015-03-05 | 2019-03-12 | Xencor, Inc. | Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions |
WO2016145099A1 (en) | 2015-03-09 | 2016-09-15 | Agensys, Inc. | Antibody drug conjugates (adc) that bind to flt3 proteins |
US10842882B2 (en) | 2015-03-09 | 2020-11-24 | Heidelberg Pharma Gmbh | Amatoxin-antibody conjugates |
EP3069734A1 (en) | 2015-03-17 | 2016-09-21 | Exiris S.r.l. | Cryptophycin-based antibody-drug conjugates with novel self-immolative linkers |
WO2016164578A1 (en) | 2015-04-07 | 2016-10-13 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Nanoparticle immunoconjugates |
GB201506389D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W | Site-specific antibody-drug conjugates |
GB201506402D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W | Site-specific antibody-drug conjugates |
GB201506411D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Bergenbio As | Humanized anti-axl antibodies |
CA2981543A1 (en) | 2015-04-22 | 2016-10-27 | Immunomedics, Inc. | Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating trop-2-positive cancer cells |
EP3091033A1 (en) | 2015-05-06 | 2016-11-09 | Gamamabs Pharma | Anti-human-her3 antibodies and uses thereof |
MX2017014638A (es) * | 2015-05-29 | 2018-01-23 | Arrowhead Pharmaceuticals Inc | Agentes enlazantes tetrapeptidicos escindibles biologicamente. |
ES2961346T3 (es) | 2015-06-12 | 2024-03-11 | Lentigen Tech Inc | Procedimiento para tratar cáncer con células T modificadas genéticamente |
WO2016205176A1 (en) | 2015-06-15 | 2016-12-22 | Genentech, Inc. | Antibodies and immunoconjugates |
US10195175B2 (en) | 2015-06-25 | 2019-02-05 | Immunomedics, Inc. | Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors |
WO2017002776A1 (ja) | 2015-06-29 | 2017-01-05 | 第一三共株式会社 | 抗体-薬物コンジュゲートの選択的製造方法 |
EP3316885B1 (en) | 2015-07-01 | 2021-06-23 | Immunomedics, Inc. | Antibody-sn-38 immunoconjugates with a cl2a linker |
RS60141B1 (sr) | 2015-07-10 | 2020-05-29 | Genmab As | Konjugati antitela specifičnog za axl i lekova za lečenje kancera |
CN113350518A (zh) | 2015-07-12 | 2021-09-07 | 杭州多禧生物科技有限公司 | 与细胞结合分子的共轭偶联的桥连接体 |
US9839687B2 (en) | 2015-07-15 | 2017-12-12 | Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. | Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule |
AU2016297786A1 (en) | 2015-07-24 | 2018-02-08 | Noeleen Melody | Quinstatin compounds |
US10799580B2 (en) | 2015-09-09 | 2020-10-13 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Expression vector delivery system and use thereof for inducing an immune response |
WO2017062334A1 (en) | 2015-10-05 | 2017-04-13 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Antibody peptide conjugates that have agonist activity at both the glucagon and glucagon-like peptide 1 receptors |
WO2017062271A2 (en) | 2015-10-06 | 2017-04-13 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Antibody drug conjugate for anti-inflammatory applications |
CA2997809A1 (en) | 2015-10-07 | 2017-04-13 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Il-7r-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia |
AU2016335848B2 (en) | 2015-10-09 | 2020-12-17 | Miltenyi Biotec Technology, Inc. | Chimeric antigen receptors and methods of use |
WO2017060397A1 (en) | 2015-10-09 | 2017-04-13 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for predicting the survival time of subjects suffering from melanoma metastases |
WO2017067944A1 (en) | 2015-10-19 | 2017-04-27 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for predicting the survival time of subjects suffering from triple negative breast cancer |
US11793880B2 (en) | 2015-12-04 | 2023-10-24 | Seagen Inc. | Conjugates of quaternized tubulysin compounds |
AU2016363013B2 (en) | 2015-12-04 | 2022-03-10 | Seagen Inc. | Conjugates of quaternized tubulysin compounds |
CN108699136B (zh) | 2015-12-07 | 2022-03-18 | Xencor股份有限公司 | 结合cd3和psma的异二聚抗体 |
CN108713026B (zh) | 2016-01-08 | 2023-01-06 | 美国全心医药生技股份有限公司 | 四价抗psgl-1抗体及其用途 |
MX2018008300A (es) | 2016-01-13 | 2018-09-21 | Genmab As | Formulacion para anticuerpo y conjugado de farmaco del mismo. |
GB201601431D0 (en) | 2016-01-26 | 2016-03-09 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
WO2017132103A2 (en) | 2016-01-29 | 2017-08-03 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Phosphonate linkers and their use to facilitate cellular retention of compounds |
JP2019507126A (ja) | 2016-02-01 | 2019-03-14 | ファイザー・インク | ツブリシン類似体およびこれらの調製のための方法 |
GB201602356D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
GB201602359D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
CA3011372A1 (en) | 2016-02-10 | 2017-08-17 | Immunomedics, Inc. | Combination of abcg2 inhibitors with sacituzumab govitecan (immu-132) overcomes resistance to sn-38 in trop-2 expressing cancers |
EP3419655A1 (en) | 2016-02-27 | 2019-01-02 | The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Peptide vaccines comprising self-assembling polymer nanoparticles |
EP3423112A4 (en) * | 2016-02-29 | 2020-02-26 | Madrigal Pharmaceuticals, Inc. | HSP9 INHIBITOR-ACTIVE CONJUGATES |
WO2017151947A1 (en) | 2016-03-02 | 2017-09-08 | George Robert Pettit | 4-azapodophylotoxins compounds |
LT3423105T (lt) | 2016-03-02 | 2021-09-10 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Antikūno-vaisto konjugatai eribulino pagrindu ir jų panaudojimo būdai |
EP3222292A1 (en) | 2016-03-03 | 2017-09-27 | Heidelberg Pharma GmbH | Amanitin conjugates |
MA45324A (fr) | 2016-03-15 | 2019-01-23 | Seattle Genetics Inc | Polythérapie utilisant un adc-liv1 et un agent chimiothérapeutique |
AU2017234163B2 (en) | 2016-03-15 | 2023-01-19 | Mersana Therapeutics, Inc. | NaPi2b-targeted antibody-drug conjugates and methods of use thereof |
WO2017161206A1 (en) | 2016-03-16 | 2017-09-21 | Halozyme, Inc. | Conjugates containing conditionally active antibodies or antigen-binding fragments thereof, and methods of use |
CN107216392A (zh) * | 2016-03-17 | 2017-09-29 | 华东师范大学 | 蟾蜍毒素衍生物的抗体药物偶联物及其制备方法和应用 |
WO2017162678A1 (en) | 2016-03-22 | 2017-09-28 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Humanized anti-claudin-1 antibodies and uses thereof |
KR20180134351A (ko) | 2016-03-25 | 2018-12-18 | 시애틀 지네틱스, 인크. | 페길화된 약물-링커 및 그의 중간체의 제조를 위한 공정 |
AU2017248644B2 (en) | 2016-04-15 | 2019-10-31 | Bioatla, Llc | Anti-Axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates and uses thereof |
IL262396B2 (en) | 2016-04-15 | 2023-09-01 | Macrogenics Inc | New b7-h3 binding molecules, drug-antibody conjugates and their uses |
JP2019522960A (ja) | 2016-04-21 | 2019-08-22 | アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー | 新規の抗bmpr1b抗体及び使用方法 |
WO2017189483A1 (en) | 2016-04-25 | 2017-11-02 | The Johns Hopkins University | Znt8 assays for drug development and pharmaceutical compositions |
CN109310385A (zh) | 2016-04-27 | 2019-02-05 | 免疫医疗公司 | 抗trop-2-sn-38抗体药物缀合物用于检查点抑制剂复发/难治的肿瘤的疗法的功效 |
GB201607478D0 (en) | 2016-04-29 | 2016-06-15 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
WO2017197045A1 (en) | 2016-05-11 | 2017-11-16 | Movassaghi Mohammad | Convergent and enantioselective total synthesis of communesin analogs |
IL262404B2 (en) | 2016-05-13 | 2024-04-01 | Bioatla Llc | Antibodies, Antibody Fragments and Their Immunomodules Against ROR2 and Their Uses |
PL3458101T3 (pl) | 2016-05-20 | 2021-05-31 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Koniugaty PROTAC-przeciwciało i sposoby ich stosowania |
JP7043425B2 (ja) | 2016-06-06 | 2022-03-29 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | シルベストロール抗体-薬物コンジュゲート及び使用方法 |
CN109641962A (zh) | 2016-06-08 | 2019-04-16 | 艾伯维公司 | 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物 |
PE20190177A1 (es) | 2016-06-08 | 2019-02-01 | Abbvie Inc | Anticuerpos anti-b7-h3 y conjugados de anticuerpo y farmaco |
US20200147235A1 (en) | 2016-06-08 | 2020-05-14 | Abbvie Inc. | Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates |
JP2019526529A (ja) | 2016-06-08 | 2019-09-19 | アッヴィ・インコーポレイテッド | 抗b7−h3抗体及び抗体薬物コンジュゲート |
CN109562169A (zh) | 2016-06-08 | 2019-04-02 | 艾伯维公司 | 抗cd98抗体及抗体药物偶联物 |
WO2017218707A2 (en) | 2016-06-14 | 2017-12-21 | Xencor, Inc. | Bispecific checkpoint inhibitor antibodies |
SG11201811292RA (en) | 2016-06-17 | 2019-01-30 | Magenta Therapeutics Inc | Compositions and methods for the depletion of cells |
CN116063545A (zh) | 2016-06-28 | 2023-05-05 | Xencor股份有限公司 | 结合生长抑素受体2的异源二聚抗体 |
EP4339192A2 (en) | 2016-06-29 | 2024-03-20 | The Regents of the University of California | Compounds and compositions for the treatment of cancer |
WO2018005697A1 (en) | 2016-06-29 | 2018-01-04 | The Regents Of The University Of California | Antibodies specific to sonic hedgehog and method of use thereof |
US11712480B2 (en) | 2016-08-03 | 2023-08-01 | Pfizer Inc. | Heteroaryl sulfone-based conjugation handles, methods for their preparation, and their use in synthesizing antibody drug conjugates |
EA201990470A1 (ru) | 2016-08-09 | 2019-09-30 | Сиэтл Дженетикс, Инк. | Конъюгаты лекарственного средства с самостабилизирующимися линкерами, имеющие улучшенные физико-химические свойства |
KR102493853B1 (ko) | 2016-08-19 | 2023-01-30 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 세코-시클로프로파피롤로인돌 화합물, 그의 항체-약물 접합체, 및 제조 및 사용 방법 |
US10793632B2 (en) | 2016-08-30 | 2020-10-06 | Xencor, Inc. | Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors |
WO2018045245A1 (en) | 2016-09-02 | 2018-03-08 | Sirenas Llc | Cyclic peptide analogs and conjugates thereof |
EP3507304B1 (en) | 2016-09-02 | 2024-04-03 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with duocars |
JP7050770B2 (ja) | 2016-10-05 | 2022-04-08 | エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | 抗体薬物コンジュゲートの調製方法 |
EP3526241A1 (en) | 2016-10-14 | 2019-08-21 | Xencor, Inc. | Il15/il15r heterodimeric fc-fusion proteins |
GB201617466D0 (en) | 2016-10-14 | 2016-11-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
US11638762B2 (en) | 2016-10-18 | 2023-05-02 | Seagen Inc. | Targeted delivery of nicotinamide adenine dinucleotide salvage pathway inhibitors |
WO2018075842A1 (en) | 2016-10-20 | 2018-04-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Condensed benzodiazepine derivatives and conjugates made therefrom |
CN110121508A (zh) | 2016-10-25 | 2019-08-13 | 法国国家健康和医学研究院 | 与cd160跨膜同种型结合的单克隆抗体 |
JP7277363B2 (ja) | 2016-11-01 | 2023-05-18 | ジェンマブ ビー.ブイ. | ポリペプチド変異体およびその使用 |
JP7138350B2 (ja) | 2016-11-14 | 2022-09-16 | ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー.,エルティディ. | 共役連結体、該連結体を含有する細胞結合分子-薬物共役体、並びに該共役体及び連結体の使用及び製造方法 |
KR102221364B1 (ko) | 2016-11-21 | 2021-03-04 | 쿠레아브 게엠베하 | 항-gp73 항체 및 면역접합체 |
KR20190095280A (ko) | 2016-12-12 | 2019-08-14 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 항체-약물 콘주게이트와 면역 체크 포인트 저해제의 조합 |
AU2017380099A1 (en) | 2016-12-23 | 2019-06-13 | Heidelberg Pharma Research Gmbh | Amanitin antibody conjugates |
EP4183798A1 (en) | 2017-01-09 | 2023-05-24 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with anti-mesothelin immunotherapy |
EP3572428A4 (en) | 2017-01-17 | 2020-12-30 | Daiichi Sankyo Company, Limited | ANTI-GPR20 ANTIBODY AND ANTI-GPR20 ANTIBODY MEDICINAL CONJUGATE |
US11517627B2 (en) | 2017-01-20 | 2022-12-06 | Juno Therapeutics Gmbh | Cell surface conjugates and related cell compositions and methods |
WO2018134787A2 (en) | 2017-01-20 | 2018-07-26 | Magenta Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the depletion of cd137+ cells |
AU2018211561B2 (en) | 2017-01-24 | 2020-04-30 | Pfizer Inc. | Calicheamicin derivatives and antibody drug conjugates thereof |
JP7246321B2 (ja) | 2017-01-24 | 2023-03-27 | インネイト ファーマ | NKp46結合物質 |
WO2018141959A1 (en) | 2017-02-06 | 2018-08-09 | Innate Pharma | Immunomodulatory antibody drug conjugates binding to a human mica polypeptide |
GB201702031D0 (en) | 2017-02-08 | 2017-03-22 | Medlmmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
LT3544636T (lt) | 2017-02-08 | 2021-06-25 | Adc Therapeutics Sa | Pirolobenzodiazepino-antikūno konjugatai |
WO2018146253A1 (en) | 2017-02-10 | 2018-08-16 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of cancers associated with activation of the mapk pathway |
SG11201907050PA (en) | 2017-02-28 | 2019-09-27 | Univ Kinki | Method for treating egfr-tki-resistant non-small cell lung cancer by administration of anti-her3 antibody-drug conjugate |
US20180271996A1 (en) | 2017-02-28 | 2018-09-27 | Mersana Therapeutics, Inc. | Combination therapies of her2-targeted antibody-drug conjugates |
CN110392697A (zh) | 2017-03-02 | 2019-10-29 | 国家医疗保健研究所 | 对nectin-4具有特异性的抗体及其用途 |
GB201703876D0 (en) | 2017-03-10 | 2017-04-26 | Berlin-Chemie Ag | Pharmaceutical combinations |
EP3601356A1 (en) | 2017-03-24 | 2020-02-05 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with anti-cd33 immunotherapy |
JP2020512312A (ja) | 2017-03-24 | 2020-04-23 | シアトル ジェネティックス, インコーポレイテッド | グルクロニド薬物−リンカーの調製のためのプロセスおよびその中間体 |
EP3600283A4 (en) | 2017-03-27 | 2020-12-16 | Immunomedics, Inc. | TREATMENT OF TROP-2 EXPRESSIVE TRIPLE NEGATIVE BREAST CANCER WITH SACITUZUMAB GOVITECAN AND A RAD51 INHIBITOR |
CN110352201A (zh) | 2017-04-03 | 2019-10-18 | 免疫医疗公司 | 用于癌症疗法的抗体药物缀合物的皮下施用 |
CN110650750A (zh) | 2017-04-04 | 2020-01-03 | 阿维迪科技公司 | 基于肽的疫苗、其制造方法及其用于诱导免疫应答的用途 |
JP7284707B2 (ja) | 2017-04-07 | 2023-05-31 | ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド | 前立腺特異的膜抗原(psma)またはその改変型を発現する操作された細胞および関連方法 |
EP3612537B1 (en) | 2017-04-18 | 2022-07-13 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
US11932694B2 (en) | 2017-04-19 | 2024-03-19 | Bluefin Biomedicine, Inc. | Anti-VTCN1 antibodies and antibody drug conjugates |
WO2018193102A1 (en) | 2017-04-20 | 2018-10-25 | Adc Therapeutics Sa | Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate |
SG11201909563VA (en) | 2017-04-27 | 2019-11-28 | Seattle Genetics Inc | Quaternized nicotinamide adenine dinucleotide salvage pathway inhibitor conjugates |
CN110637036A (zh) | 2017-04-28 | 2019-12-31 | 味之素株式会社 | 具有针对可溶性蛋白质的亲和性物质、切割性部分及反应性基团的化合物或其盐 |
WO2018209239A1 (en) | 2017-05-11 | 2018-11-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis |
TWI794230B (zh) | 2017-05-15 | 2023-03-01 | 日商第一三共股份有限公司 | 抗cdh6抗體及抗cdh6抗體-藥物結合物、以及其製造方法 |
UA127900C2 (uk) | 2017-06-14 | 2024-02-07 | Ейдісі Терапьютікс Са | Схема дозування для введення adc до cd19 |
CN110799194A (zh) | 2017-06-20 | 2020-02-14 | 马德里加尔制药公司 | 包含靶向治疗剂的联合疗法 |
IL299893A (en) | 2017-06-20 | 2023-03-01 | Madrigal Pharmaceuticals Inc | prescribed medications |
EP3641802A1 (en) | 2017-06-22 | 2020-04-29 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of fibrosis with agents capable of inhibiting the activation of mucosal-associated invariant t (mait) cells |
CN111132733A (zh) | 2017-06-30 | 2020-05-08 | Xencor股份有限公司 | 含有IL-15/IL-15Rα和抗原结合结构域的靶向异源二聚体Fc融合蛋白 |
CN111316099A (zh) | 2017-07-12 | 2020-06-19 | 约翰霍普金斯大学 | 用于1型糖尿病诊断的基于脂蛋白体的znt8自身抗原 |
EP3661964A1 (en) | 2017-07-31 | 2020-06-10 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19/cd20 immunotherapy |
US10487084B2 (en) | 2017-08-16 | 2019-11-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a heterobiaryl moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor |
US10472361B2 (en) | 2017-08-16 | 2019-11-12 | Bristol-Myers Squibb Company | Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a benzotriazole moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor |
US10457681B2 (en) | 2017-08-16 | 2019-10-29 | Bristol_Myers Squibb Company | Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a tricyclic moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor |
US10494370B2 (en) | 2017-08-16 | 2019-12-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a pyridine or pyrazine moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor |
US10508115B2 (en) | 2017-08-16 | 2019-12-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having heteroatom-linked aromatic moieties, conjugates thereof, and methods and uses therefor |
MX2020001880A (es) | 2017-08-18 | 2021-07-06 | Medimmune Ltd | Conjugados de pirrolobenzodiazepina. |
JP7248578B2 (ja) | 2017-08-31 | 2023-03-29 | 第一三共株式会社 | 抗体-薬物コンジュゲートの新規製造方法 |
EP3677589A4 (en) | 2017-08-31 | 2021-04-21 | Daiichi Sankyo Company, Limited | IMPROVED PROCESS FOR PREPARING ANTIBODY-ACTIVE CONJUGATE |
CA3075915A1 (en) | 2017-09-15 | 2019-03-21 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19 immunotherapy |
US10640508B2 (en) | 2017-10-13 | 2020-05-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers |
AU2018352245A1 (en) | 2017-10-16 | 2020-04-30 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with anti-CD22 immunotherapy |
US11312770B2 (en) | 2017-11-08 | 2022-04-26 | Xencor, Inc. | Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-PD-1 sequences |
US10981992B2 (en) | 2017-11-08 | 2021-04-20 | Xencor, Inc. | Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors |
US11612666B2 (en) * | 2017-11-30 | 2023-03-28 | Seagen Inc. | Process for the preparation of drug linker compounds |
MA51184A (fr) | 2017-12-15 | 2020-10-21 | Juno Therapeutics Inc | Molécules de liaison à l'anti-cct5 et procédés d'utilisation associés |
EP3498293A1 (en) | 2017-12-15 | 2019-06-19 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Treatment of monogenic diseases with an anti-cd45rc antibody |
CA3086199A1 (en) | 2017-12-19 | 2019-06-27 | Xencor, Inc. | Engineered il-2 fc fusion proteins |
EP3728307A4 (en) | 2017-12-20 | 2021-05-19 | Lentigen Technology, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT OF HIV / AIDS WITH IMMUNOTHERAPY |
EP3743440A1 (en) | 2018-01-24 | 2020-12-02 | Genmab B.V. | Polypeptide variants and uses thereof |
GB201803342D0 (en) | 2018-03-01 | 2018-04-18 | Medimmune Ltd | Methods |
HUE063489T2 (hu) | 2018-03-13 | 2024-01-28 | Zymeworks Bc Inc | Anti-HER2 biparatopikus antitest-gyógyszer konjugátumok és alkalmazási módszereik |
EP3768324A1 (en) | 2018-03-22 | 2021-01-27 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for modulating innate lymphoid cell activity, antibody drug conjugates and uses in therapy |
AU2019240403A1 (en) | 2018-03-23 | 2020-10-08 | Seagen Inc. | Use of antibody drug conjugates comprising tubulin disrupting agents to treat solid tumor |
CA3095443A1 (en) | 2018-03-28 | 2019-10-03 | Axon Neuroscience Se | Antibody-based methods of detecting and treating alzheimer's disease |
US10982006B2 (en) | 2018-04-04 | 2021-04-20 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein |
EP3552631A1 (en) | 2018-04-10 | 2019-10-16 | Inatherys | Antibody-drug conjugates and their uses for the treatment of cancer |
GB201806022D0 (en) | 2018-04-12 | 2018-05-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
US20210077571A1 (en) | 2018-04-13 | 2021-03-18 | Heidelberg Pharma Research Gmbh | Targeted amatoxin conjugate for the treatment of solid tumors |
KR20210010862A (ko) | 2018-04-18 | 2021-01-28 | 젠코어 인코포레이티드 | IL-15/IL-15Rα Fc-융합 단백질 및 PD-1 항원 결합 도메인을 함유하는 PD-1 표적화 이종이량체 융합 단백질 및 이의 용도 |
WO2019204655A1 (en) | 2018-04-18 | 2019-10-24 | Xencor, Inc. | Tim-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and tim-3 antigen binding domains |
US11485741B2 (en) | 2018-04-24 | 2022-11-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Macrocyclic toll-like receptor 7 (TLR7) agonists |
AU2019266205A1 (en) | 2018-05-07 | 2020-10-22 | Genmab A/S | Methods of treating cancer with a combination of an anti-PD-1 antibody and an anti-tissue factor antibody-drug conjugate |
JP7460608B2 (ja) | 2018-05-07 | 2024-04-02 | ジェンマブ エー/エス | 抗pd-1抗体と抗組織因子抗体-薬物コンジュゲートとの組み合わせを用いるがんの治療方法 |
EP4249002A3 (en) | 2018-05-18 | 2023-11-22 | Daiichi Sankyo Co., Ltd. | Anti-muc1- exatecan antibody-drug conjugate |
US20210113705A1 (en) | 2018-05-22 | 2021-04-22 | Avidea Technologies, Inc. | Improved methods of manufacturing peptide-based vaccines |
EA202092747A1 (ru) | 2018-05-29 | 2021-03-16 | Бристол-Маерс Сквибб Компани | Модифицированные саморазрушающиеся фрагменты для применения в пролекарствах и конъюгатах и способы применения и изготовления |
TW202015739A (zh) | 2018-06-01 | 2020-05-01 | 日商衛材R&D企管股份有限公司 | 剪接調節抗體-藥物結合物及其使用方法 |
GB201809746D0 (en) | 2018-06-14 | 2018-08-01 | Berlin Chemie Ag | Pharmaceutical combinations |
CA3103151A1 (en) | 2018-06-14 | 2019-12-19 | Ajinomoto Co., Inc. | Compound having affinity substance to antibody and bioorthogonal functional group, or salt thereof |
JP7413999B2 (ja) | 2018-06-14 | 2024-01-16 | 味の素株式会社 | 抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩 |
TW202019473A (zh) | 2018-07-02 | 2020-06-01 | 美商安進公司 | 抗steap1抗原結合蛋白 |
US11168141B2 (en) | 2018-08-02 | 2021-11-09 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies |
KR20210081322A (ko) | 2018-08-02 | 2021-07-01 | 다인 세라퓨틱스, 인크. | 근육 표적화 복합체 및 디스트로핀병증을 치료하기 위한 그의 용도 |
US11911484B2 (en) | 2018-08-02 | 2024-02-27 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy |
JP2021533200A (ja) | 2018-08-02 | 2021-12-02 | ダイン セラピューティクス, インコーポレーテッドDyne Therapeutics, Inc. | 顔面・肩甲・上腕筋ジストロフィーを処置するための筋標的化複合体およびそれらの使用 |
US11554120B2 (en) | 2018-08-03 | 2023-01-17 | Bristol-Myers Squibb Company | 1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine compounds as toll-like receptor 7 (TLR7) agonists and methods and uses therefor |
GB201814281D0 (en) | 2018-09-03 | 2018-10-17 | Femtogenix Ltd | Cytotoxic agents |
WO2020058372A1 (en) | 2018-09-19 | 2020-03-26 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical composition for the treatment of cancers resistant to immune checkpoint therapy |
US20220072144A1 (en) | 2018-09-20 | 2022-03-10 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Treatment of her3-mutated cancer by administration of anti-her3 antibody-drug conjugate |
CA3113058A1 (en) | 2018-09-20 | 2020-03-26 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with anti-cd123 immunotherapy |
EP3626265A1 (en) | 2018-09-21 | 2020-03-25 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Anti-human cd45rc antibodies and uses thereof |
CA3114349A1 (en) | 2018-09-26 | 2020-04-02 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19/cd22 immunotherapy |
JP2022503959A (ja) | 2018-10-03 | 2022-01-12 | ゼンコア インコーポレイテッド | Il-12ヘテロ二量体fc-融合タンパク質 |
CA3113782A1 (en) | 2018-10-03 | 2020-04-09 | Avidea Technologies, Inc. | Aromatic ring substituted amphiphilic polymers as drug delivery systems |
EP3870235A1 (en) | 2018-10-24 | 2021-09-01 | F. Hoffmann-La Roche AG | Conjugated chemical inducers of degradation and methods of use |
TW202034958A (zh) | 2018-10-30 | 2020-10-01 | 丹麥商珍美寶股份有限公司 | 使用抗血管內皮生長因子(vegf)抗體與抗組織因子(tf)抗體-藥物共軛體之組合以治療癌症之方法 |
WO2020090979A1 (ja) | 2018-10-31 | 2020-05-07 | 味の素株式会社 | 抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩 |
JP2022512860A (ja) | 2018-11-06 | 2022-02-07 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | 白血病幹細胞を根絶することによる急性骨髄性白血病の治療のための方法および医薬組成物 |
WO2020113108A1 (en) | 2018-11-30 | 2020-06-04 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with anti-cd38 immunotherapy |
WO2020117257A1 (en) | 2018-12-06 | 2020-06-11 | Genentech, Inc. | Combination therapy of diffuse large b-cell lymphoma comprising an anti-cd79b immunoconjugates, an alkylating agent and an anti-cd20 antibody |
PE20211473A1 (es) | 2018-12-13 | 2021-08-05 | Eisai Randd Man Co Ltd | Conjugados de anticuerpo-farmaco de herboxidieno y metodos de uso |
WO2020120786A1 (en) | 2018-12-14 | 2020-06-18 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Isolated mhc-derived human peptides and uses thereof for stimulating and activating the suppressive function of cd8+cd45rclow tregs |
GB201901197D0 (en) | 2019-01-29 | 2019-03-20 | Femtogenix Ltd | G-A Crosslinking cytotoxic agents |
JP2022519273A (ja) | 2019-02-05 | 2022-03-22 | シージェン インコーポレイテッド | 抗cd228抗体及び抗体薬物コンジュゲート |
EP3930850A1 (en) | 2019-03-01 | 2022-01-05 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind enpp3 and cd3 |
CN113924103A (zh) | 2019-03-06 | 2022-01-11 | 莱蒂恩技术公司 | 用于用自驱动的嵌合抗原受体来治疗癌症的组合物和方法 |
WO2020187998A1 (en) | 2019-03-19 | 2020-09-24 | Fundació Privada Institut D'investigació Oncològica De Vall Hebron | Combination therapy with omomyc and an antibody binding pd-1 or ctla-4 for the treatment of cancer |
CN114174340A (zh) | 2019-03-20 | 2022-03-11 | 加利福尼亚大学董事会 | 密封蛋白-6抗体和药物缀合物 |
KR20220025705A (ko) | 2019-04-17 | 2022-03-03 | 아비디아 테크놀로지스, 인크. | 리간드 디스플레이 및/또는 약물 전달을 위한 성상 중합체의 조성물 및 제조 방법 |
BR112021021165A2 (pt) | 2019-04-24 | 2022-01-04 | Heidelberg Pharma Res Gmbh | Conjugados anticorpo-fármaco de amatoxina e uso dos mesmos |
CN114206340A (zh) | 2019-05-14 | 2022-03-18 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 使用抗cd79b免疫缀合物治疗滤泡性淋巴瘤的方法 |
CA3140102A1 (en) | 2019-05-30 | 2020-12-03 | Dina SCHNEIDER | Compositions and methods for treating cancer with anti-bcma immunotherapy |
US11535634B2 (en) | 2019-06-05 | 2022-12-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof |
GB201908128D0 (en) | 2019-06-07 | 2019-07-24 | Adc Therapeutics Sa | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
CN110339181A (zh) * | 2019-07-02 | 2019-10-18 | 中国药科大学 | 一种基于点击反应的pH响应型纳米制剂及其制法和应用 |
CN114269783B (zh) | 2019-07-02 | 2024-03-26 | 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) | 结合egfrviii的单克隆抗体及其应用 |
CA3149494A1 (en) | 2019-08-12 | 2021-02-18 | Purinomia Biotech, Inc. | Methods and compositions for promoting and potentiating t-cell mediated immune responses through adcc targeting of cd39 expressing cells |
CA3155634A1 (en) | 2019-10-04 | 2021-04-08 | Seagen Inc. | Anti-pd-l1 antibodies and antibody-drug conjugates |
US20220363776A1 (en) | 2019-10-04 | 2022-11-17 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical composition for the treatment of ovarian cancer, breast cancer or pancreatic cancer |
PE20221039A1 (es) | 2019-10-18 | 2022-06-17 | Genentech Inc | METODOS PARA USAR INMUNOCONJUGADOS ANTI-CD79b PARA TRATAR LINFOMA DIFUSO DE LINFOCITOS B GRANDES |
EP3812008A1 (en) | 2019-10-23 | 2021-04-28 | Gamamabs Pharma | Amh-competitive antagonist antibody |
TW202131954A (zh) | 2019-11-07 | 2021-09-01 | 丹麥商珍美寶股份有限公司 | 利用鉑類劑與抗組織因子抗體-藥物共軛體之組合來治療癌症之方法 |
JP2023500888A (ja) | 2019-11-07 | 2023-01-11 | ジェンマブ エー/エス | 抗pd-1抗体と抗組織因子抗体-薬物コンジュゲートとの組み合わせを用いるがんの治療方法 |
WO2021116119A1 (en) | 2019-12-09 | 2021-06-17 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antibodies having specificity to her4 and uses thereof |
TW202138388A (zh) | 2019-12-30 | 2021-10-16 | 美商西根公司 | 以非海藻糖苷化抗-cd70抗體治療癌症之方法 |
AU2021205893A1 (en) | 2020-01-08 | 2022-06-23 | Synthis Therapeutics, Inc. | ALK5 inhibitor conjugates and uses thereof |
JP2023512036A (ja) | 2020-01-31 | 2023-03-23 | イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニム | 癌の処置 |
IL297541A (en) | 2020-04-24 | 2022-12-01 | Genentech Inc | Methods for using anti-cd79b immunoconjugates |
EP3909612A1 (en) | 2020-05-12 | 2021-11-17 | Life Science Inkubator Betriebs GmbH & Co. KG | Composition of nanoparticles |
JP2023525053A (ja) | 2020-05-12 | 2023-06-14 | インサーム(インスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル) | 皮膚t細胞リンパ腫及びtfh由来リンパ腫を処置する新しい方法 |
US11919956B2 (en) | 2020-05-14 | 2024-03-05 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3 |
CA3182333A1 (en) | 2020-05-20 | 2021-11-25 | Institut Curie | Single domain antibodies and their use in cancer therapies |
AR122546A1 (es) | 2020-06-05 | 2022-09-21 | Eisai R&D Man Co Ltd | Conjugados de anticuerpo anti bcma-fármaco y métodos de uso |
EP4163294A1 (en) | 2020-06-09 | 2023-04-12 | Ajinomoto Co., Inc. | Modified ferritin and method for producing same |
US11497770B2 (en) | 2020-06-22 | 2022-11-15 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with TSLPR-CD19 or TSLPR-CD22 immunotherapy |
BR112022025105A2 (pt) | 2020-06-29 | 2023-01-17 | Genmab As | Método para o tratamento de câncer cervical em um indivíduo, conjugado anticorpo-fármaco, e, uso de um conjugado anticorpo-fármaco |
JPWO2022014698A1 (cs) | 2020-07-17 | 2022-01-20 | ||
CN116249556A (zh) | 2020-07-21 | 2023-06-09 | 基因泰克公司 | 降解brm的抗体缀合化学诱导剂及其方法 |
GB2597532A (en) | 2020-07-28 | 2022-02-02 | Femtogenix Ltd | Cytotoxic compounds |
US20230323299A1 (en) | 2020-08-03 | 2023-10-12 | Inserm (Institut National De La Santé Et De La Recherch Médicale) | Population of treg cells functionally committed to exert a regulatory activity and their use for adoptive therapy |
US20230295330A1 (en) | 2020-08-04 | 2023-09-21 | Seagen Inc. | Anti-cd228 antibodies and antibody-drug conjugates |
WO2022043256A1 (en) | 2020-08-23 | 2022-03-03 | Cobiores Nv | Synergistic combinations of anticancer drugs linked to a tetrapeptidic moiety and immunotherapeutic agents |
CN112062855A (zh) | 2020-08-26 | 2020-12-11 | 康诺亚生物医药科技(成都)有限公司 | 一种含有衔接器的药物治疗剂的开发和应用 |
IL300930A (en) | 2020-08-27 | 2023-04-01 | Enosi Therapeutics Corp | Methods and compositions for the treatment of autoimmune diseases and cancer |
EP3970752A1 (en) | 2020-09-17 | 2022-03-23 | Merck Patent GmbH | Molecules with solubility tag and related methods |
US20230381112A1 (en) | 2020-09-22 | 2023-11-30 | Vaccitech North America, Inc. | Compositions and Methods of Manufacturing Amphiphilic Block Copolymers that Form Nanoparticles in Situ |
EP4229090A1 (en) | 2020-10-16 | 2023-08-23 | Université d'Aix-Marseille | Anti-gpc4 single domain antibodies |
AU2021364709A1 (en) | 2020-10-19 | 2023-06-01 | Barinthus Biotherapeutics North America, Inc. | Star polymer drug conjugates |
CA3195153A1 (en) | 2020-10-27 | 2022-05-05 | Elucida Oncology, Inc. | Folate receptor targeted nanoparticle drug conjugates and uses thereof |
CN116801898A (zh) | 2020-11-05 | 2023-09-22 | 莱蒂恩技术公司 | 用于用抗cd19/cd22免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法 |
CN114524878A (zh) | 2020-11-23 | 2022-05-24 | 康诺亚生物医药科技(成都)有限公司 | 一种双特异性抗体及其用途 |
CA3196198A1 (en) | 2020-11-25 | 2022-06-02 | Manel KRAIEM | Treatment of cancer |
CN114573703A (zh) | 2020-12-02 | 2022-06-03 | 康诺亚生物医药科技(成都)有限公司 | 一种t细胞衔接器治疗剂的开发和应用 |
CN114573702A (zh) | 2020-12-02 | 2022-06-03 | 康诺亚生物医药科技(成都)有限公司 | 一种新型肿瘤衔接器治疗药物的开发和应用 |
EP4015004A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-22 | Phi Pharma SA | Proteoglycan specific branched peptides |
AU2021405744A1 (en) | 2020-12-22 | 2023-08-03 | Cobiores Nv | Compounds comprising a tetrapeptidic moiety |
CN114685657A (zh) | 2020-12-31 | 2022-07-01 | 康诺亚生物医药科技(成都)有限公司 | 一种功能增强型抗体阻断剂的开发及其应用 |
JP2024505428A (ja) | 2021-01-14 | 2024-02-06 | アンスティテュ キュリー | Her2単一ドメイン抗体バリアントおよびそのcar |
WO2022154127A1 (ja) | 2021-01-18 | 2022-07-21 | 味の素株式会社 | 化合物またはその塩、およびそれらにより得られる抗体 |
JPWO2022154116A1 (cs) | 2021-01-18 | 2022-07-21 | ||
AR124681A1 (es) | 2021-01-20 | 2023-04-26 | Abbvie Inc | Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr |
WO2022167664A1 (en) | 2021-02-07 | 2022-08-11 | Cobiores Nv | Compounds comprising a tetrapeptidic moiety |
CN117157319A (zh) | 2021-03-09 | 2023-12-01 | Xencor股份有限公司 | 结合cd3和cldn6的异二聚抗体 |
WO2022192586A1 (en) | 2021-03-10 | 2022-09-15 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind cd3 and gpc3 |
CN116964076A (zh) | 2021-03-11 | 2023-10-27 | 味之素株式会社 | 化合物或其盐、以及由它们得到的抗体 |
JPWO2022196675A1 (cs) | 2021-03-16 | 2022-09-22 | ||
WO2022197877A1 (en) | 2021-03-19 | 2022-09-22 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents |
JP2024512567A (ja) | 2021-03-23 | 2024-03-19 | インサーム(インスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル) | T細胞リンパ腫の診断および治療方法 |
JP2024515934A (ja) | 2021-03-30 | 2024-04-11 | レゴケム バイオサイエンシズ, インク. | ヒトcldn18.2に対する抗体を含む抗体-薬物コンジュゲートおよびその使用 |
WO2022214681A1 (en) | 2021-04-09 | 2022-10-13 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for the treatment of anaplastic large cell lymphoma |
EP4319820A1 (en) | 2021-04-10 | 2024-02-14 | Profoundbio Us Co. | Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same |
EP4079327A1 (en) * | 2021-04-22 | 2022-10-26 | Centaurus Polytherapeutics | Payloads for drug-conjugates and their use for treating cancer |
CA3216459A1 (en) | 2021-04-23 | 2022-10-27 | Profoundbio Us Co. | Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same |
EP4337266A1 (en) | 2021-05-12 | 2024-03-20 | Genentech, Inc. | Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma |
WO2022248835A1 (en) | 2021-05-26 | 2022-12-01 | Oxford Biotherapeutics Ltd | Pharmaceutical combination comprising an anti-cd205 antibody and an immune checkpoint inhibitor |
TW202320857A (zh) | 2021-07-06 | 2023-06-01 | 美商普方生物製藥美國公司 | 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法 |
US11633498B2 (en) | 2021-07-09 | 2023-04-25 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy |
US11638761B2 (en) | 2021-07-09 | 2023-05-02 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy |
US11771776B2 (en) | 2021-07-09 | 2023-10-03 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies |
US11672872B2 (en) | 2021-07-09 | 2023-06-13 | Dyne Therapeutics, Inc. | Anti-transferrin receptor antibody and uses thereof |
US20230099756A1 (en) | 2021-08-07 | 2023-03-30 | Genentech, Inc. | Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma |
AU2022338463A1 (en) | 2021-09-03 | 2024-03-21 | Toray Industries, Inc. | Pharmaceutical composition for cancer treatment and/or prevention |
WO2023041717A1 (en) | 2021-09-16 | 2023-03-23 | Aboleris Pharma | Anti-human cd45rc binding domains and uses thereof |
WO2023056069A1 (en) | 2021-09-30 | 2023-04-06 | Angiex, Inc. | Degrader-antibody conjugates and methods of using same |
CA3234692A1 (en) | 2021-09-30 | 2023-04-06 | Ajinomoto Co., Inc. | Conjugate of antibody and functional substance or salt thereof, and antibody derivative and compound used in production of the same or salts thereof |
WO2023053083A1 (en) | 2021-10-01 | 2023-04-06 | Unichem Laboratories Limited | Recombinant glycan binding proteins and its use |
WO2023089314A1 (en) | 2021-11-18 | 2023-05-25 | Oxford Biotherapeutics Limited | Pharmaceutical combinations |
WO2023092099A1 (en) | 2021-11-19 | 2023-05-25 | Ardeagen Corporation | Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same |
WO2023110937A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-22 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Depletion of nk cells for the treatment of adverse post-ischemic cardiac remodeling |
WO2023111350A2 (en) | 2021-12-17 | 2023-06-22 | 3B Pharmaceuticals Gmbh | Carbonic anhydrase ix ligands |
WO2023147329A1 (en) | 2022-01-26 | 2023-08-03 | Genentech, Inc. | Antibody-conjugated chemical inducers of degradation and methods thereof |
WO2023144303A1 (en) | 2022-01-31 | 2023-08-03 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Cd38 as a biomarker and biotarget in t-cell lymphomas |
US11590169B1 (en) | 2022-03-02 | 2023-02-28 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with anti-CD123 immunotherapy |
US20230338424A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-10-26 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and Methods for Treating Cancer with Anti-CD123 Immunotherapy |
WO2023194539A1 (en) | 2022-04-07 | 2023-10-12 | Heidelberg Pharma Research Gmbh | Methods of improving the therapeutic index of amatoxin-antibody conjugates |
WO2023198648A1 (en) | 2022-04-11 | 2023-10-19 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Methods for the diagnosis and treatment of t-cell malignancies |
US11931421B2 (en) | 2022-04-15 | 2024-03-19 | Dyne Therapeutics, Inc. | Muscle targeting complexes and formulations for treating myotonic dystrophy |
WO2023198874A1 (en) | 2022-04-15 | 2023-10-19 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Methods for the diagnosis and treatment of t cell-lymphomas |
WO2023215737A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Genentech, Inc. | Anti-ly6e antibodies, immunoconjugates, and uses thereof |
WO2023213960A1 (en) | 2022-05-06 | 2023-11-09 | Genmab A/S | Methods of treating cancer with anti-tissue factor antibody-drug conjugates |
WO2023227660A1 (en) | 2022-05-25 | 2023-11-30 | Innate Pharma | Nectin-4 binding agents |
WO2024003310A1 (en) | 2022-06-30 | 2024-01-04 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Methods for the diagnosis and treatment of acute lymphoblastic leukemia |
WO2024018046A1 (en) | 2022-07-22 | 2024-01-25 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Garp as a biomarker and biotarget in t-cell malignancies |
WO2024026107A2 (en) | 2022-07-28 | 2024-02-01 | Lentigen Technology, Inc. | Chimeric antigen receptor therapies for treating solid tumors |
WO2024023283A1 (en) | 2022-07-29 | 2024-02-01 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Lrrc33 as a biomarker and biotarget in cutaneous t-cell lymphomas |
US20240075142A1 (en) | 2022-08-26 | 2024-03-07 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and Methods for Treating Cancer with Fully Human Anti-CD20/CD19 Immunotherapy |
WO2024052503A1 (en) | 2022-09-08 | 2024-03-14 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Antibodies having specificity to ltbp2 and uses thereof |
WO2024079192A1 (en) | 2022-10-12 | 2024-04-18 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Cd81 as a biomarker and biotarget in t-cell malignancies |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1981001145A1 (en) | 1979-10-18 | 1981-04-30 | Univ Illinois | Hydrolytic enzyme-activatible pro-drugs |
US4867973A (en) | 1984-08-31 | 1989-09-19 | Cytogen Corporation | Antibody-therapeutic agent conjugates |
US4671958A (en) * | 1982-03-09 | 1987-06-09 | Cytogen Corporation | Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites |
JPS59116232A (ja) * | 1982-12-24 | 1984-07-05 | Teijin Ltd | 細胞毒性複合体及びその製造法 |
US5057313A (en) | 1986-02-25 | 1991-10-15 | The Center For Molecular Medicine And Immunology | Diagnostic and therapeutic antibody conjugates |
IN165717B (cs) | 1986-08-07 | 1989-12-23 | Battelle Memorial Institute | |
EP0329184A3 (en) * | 1988-02-19 | 1990-05-23 | Neorx Corporation | Antimers and antimeric conjugation |
US5057301A (en) | 1988-04-06 | 1991-10-15 | Neorx Corporation | Modified cellular substrates used as linkers for increased cell retention of diagnostic and therapeutic agents |
US5094849A (en) | 1988-08-08 | 1992-03-10 | Eli Lilly And Company | Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized vinca analogs via simple organic linkers |
US5144012A (en) | 1988-08-08 | 1992-09-01 | Eli Lilly And Company | Cytotoxic drug conjugates |
US5169933A (en) | 1988-08-15 | 1992-12-08 | Neorx Corporation | Covalently-linked complexes and methods for enhanced cytotoxicity and imaging |
DE68924783T2 (de) | 1988-09-30 | 1996-03-28 | Neorx Corp | Wässrige additivsysteme, verfahren und polymerteilchen. |
DE68919366T2 (de) | 1988-09-30 | 1995-05-18 | Neorx Corp | Spaltbare linker zur reduzierung der akkumulierung von immunokonjugaten in nicht-zielorganen. |
US5045451A (en) * | 1988-10-26 | 1991-09-03 | Board Of Regents | Methods for screening antibodies for use as immunotoxins |
US5013547A (en) * | 1989-02-07 | 1991-05-07 | Erbamont, Inc. | Anticancer drug - antibody conjugates and method for preparing same |
US5208020A (en) | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
US5198560A (en) | 1990-04-27 | 1993-03-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Cytotoxic bicyclo[7.3.1]tridec-4-ene-2,6-diyne compounds and process for the preparation thereof |
US5155210A (en) | 1990-09-11 | 1992-10-13 | Brunswick Corporation | Methods of conjugating actinomycin d |
US5622929A (en) | 1992-01-23 | 1997-04-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Thioether conjugates |
-
1993
- 1993-05-14 US US08/062,366 patent/US6214345B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-05-11 CA CA002123363A patent/CA2123363C/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-12 AU AU63026/94A patent/AU687795B2/en not_active Expired
- 1994-05-12 NZ NZ260512A patent/NZ260512A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-05-13 HU HU9401507A patent/HU224351B1/hu active IP Right Grant
- 1994-05-13 NO NO19941819A patent/NO315162B1/no not_active IP Right Cessation
- 1994-05-13 CZ CZ941187A patent/CZ118794A3/cs unknown
- 1994-05-13 EP EP94107501A patent/EP0624377B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-13 MX MX9403570A patent/MX9403570A/es unknown
- 1994-05-13 PT PT94107501T patent/PT624377E/pt unknown
- 1994-05-13 ES ES94107501T patent/ES2170755T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-13 CN CN94107589A patent/CN1117760C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-13 DK DK94107501T patent/DK0624377T3/da active
- 1994-05-13 DE DE69429689T patent/DE69429689T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-13 RU RU94016384/14A patent/RU94016384A/ru unknown
- 1994-05-13 AT AT94107501T patent/ATE212236T1/de active
- 1994-05-13 FI FI942237A patent/FI116038B/fi not_active IP Right Cessation
- 1994-05-16 JP JP10138994A patent/JP3645283B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0624377A3 (en) | 1995-11-15 |
EP0624377B1 (en) | 2002-01-23 |
RU94016384A (ru) | 1996-11-10 |
FI116038B (fi) | 2005-09-15 |
CN1100426A (zh) | 1995-03-22 |
MX9403570A (es) | 1995-01-31 |
NO941819L (no) | 1994-11-15 |
HU224351B1 (hu) | 2005-08-29 |
JP3645283B2 (ja) | 2005-05-11 |
FI942237A0 (fi) | 1994-05-13 |
HU9401507D0 (en) | 1994-09-28 |
CN1117760C (zh) | 2003-08-13 |
ATE212236T1 (de) | 2002-02-15 |
EP0624377A2 (en) | 1994-11-17 |
ES2170755T3 (es) | 2002-08-16 |
CA2123363A1 (en) | 1994-11-15 |
NZ260512A (en) | 1996-09-25 |
HUT66485A (en) | 1994-11-28 |
JPH0770175A (ja) | 1995-03-14 |
DK0624377T3 (da) | 2002-05-06 |
NO941819D0 (no) | 1994-05-13 |
AU687795B2 (en) | 1998-03-05 |
NO315162B1 (no) | 2003-07-21 |
CA2123363C (en) | 2005-04-12 |
AU6302694A (en) | 1994-11-17 |
FI942237A (fi) | 1994-11-15 |
DE69429689T2 (de) | 2002-10-17 |
US6214345B1 (en) | 2001-04-10 |
DE69429689D1 (de) | 2002-03-14 |
PT624377E (pt) | 2002-07-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CZ118794A3 (en) | Conjugate of a medicament and a ligand | |
US6759509B1 (en) | Branched peptide linkers | |
AU2020239744B2 (en) | Hydrophilic antibody-drug conjugates | |
CA1303524C (en) | Drug-monoclonal antibody conjugates | |
US6512101B1 (en) | Branched hydrazone linkers | |
EP0941120A1 (en) | Branched peptide linkers | |
JPH0625012A (ja) | チオエーテルコンジュゲート | |
PT2357006E (pt) | Conjugados de fármacos e sua utilização para tratamento do cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa | |
CA2119733A1 (en) | Antibody-drug conjugates | |
JP7239558B2 (ja) | テトラマレイミドリンカー及びその使用 | |
AU619614B2 (en) | Antibody-drug conjugates | |
JP2022548306A (ja) | 内部移行した生物学的に活性な化合物の結合体からの選択的な薬物放出 | |
CA3062977A1 (en) | Peptidic linkers and cryptophycin conjugates, useful in therapy, and their preparation | |
US20230277676A1 (en) | Camptothecine antibody-drug conjugates and methods of use thereof | |
CA3210473A1 (en) | Branched linkers for antibody-drug conjugates and methods of use thereof | |
JP2004501106A (ja) | アミノ薬物の複合体 | |
EA045708B1 (ru) | Новые пептидные линкеры и конъюгаты на основе криптофицина, их получение и их терапевтическое применение | |
NZ761642B2 (en) | Hydrophilic antibody-drug conjugates | |
NZ722252B2 (en) | Hydrophilic antibody-drug conjugates |