PT2357006E - Conjugados de fármacos e sua utilização para tratamento do cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa - Google Patents

Conjugados de fármacos e sua utilização para tratamento do cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa Download PDF

Info

Publication number
PT2357006E
PT2357006E PT111652103T PT03165210T PT2357006E PT 2357006 E PT2357006 E PT 2357006E PT 111652103 T PT111652103 T PT 111652103T PT 03165210 T PT03165210 T PT 03165210T PT 2357006 E PT2357006 E PT 2357006E
Authority
PT
Portugal
Prior art keywords
compound
drug
antibody
ligand
reaction mixture
Prior art date
Application number
PT111652103T
Other languages
English (en)
Inventor
Peter D Senter
Svetlana Doronina
Brian E Toki
Original Assignee
Seattle Genetics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Seattle Genetics Inc filed Critical Seattle Genetics Inc
Publication of PT2357006E publication Critical patent/PT2357006E/pt

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/642—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a cytokine, e.g. IL2, chemokine, growth factors or interferons being the inactive part of the conjugate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof

Description

DESCRIÇÃO "Conjugados de fármacos e sua utilização para tratamento do cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa"
1. CAMPO DO INVENTO 0 presente invento é dirigido a Conjugados de Fármaco-Ligador-Ligando e a compostos de Fármaco-Ligador, a composições compreendendo um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando ou um Composto de Fármaco-Ligador, e à utilização dos mesmos para tratar cancro, um doença autoimune ou uma doença infeciosa.
2. ANTECEDENTES DO INVENTO Vários compostos peptidicos curtos têm sido isolados a partir de fontes naturais e constatou-se que têm atividade biológica. Foram também preparados análogos destes compostos, e constatou-se que alguns têm atividade biológica. Por exemplo, a auristatina E (Patente dos E.U.A. 5635483 de Pettit et al.) é um análogo sintético do produto marinho natural dolastatina 10, um agente que inibe a polimerização de tubulina por ligação ao mesmo local na tubulina que o fármaco anticanceroso vincristina (G. R. Pettit, Prog. Chem. Org. Nat. Prod., 70: 1-79 (1997)). Dolastatina 10, auristatina PE e auristatina E são péptidos lineares possuindo quatro aminoácidos, três dos quais são únicos da classe de compostos dolastatina. Tanto a dolastatina 10 como a auristatina PE estão atualmente a ser utilizadas em ensaios clínicos em humanos para tratar o cancro. As diferenças estruturais entre dolastatina 10 e auristatina E residem no resíduo C-terminal, no qual o grupo tiazolefenetilamina de dolastatina 10 está substituído por uma unidade norefedrina na auristatina E.
As referências seguintes divulgam compostos de dolastatina e auristatina e sues análogos, e sua utilização para tratamento do cancro:
Publicação Internacional N.2 WO 96/33212 Al de Teikoku Hormone
Mfg. Co ., Ltd.;
Publicação Internacional N.2 WO 96/14856 AI de Arizona Board of Regents;
Publicação de Patente Europeia N.2 EP 695757 A2 de Arizona Board of Regents;
Publicação de Patente Europeia N.2 EP 695758 A2 de Arizona Board of Regents;
Publicação de Patente Europeia N.2 EP 695759 A2 de Arizona Board of Regents;
Publicação Internacional N.2 WO 95/09864 Ai de Teikoku Hormone Mfg. Co ., Ltd.;
Publicação Internacional N.2 WO 93/03054 Ai te Teikoku Hormone Mfg. Co ., Ltd.;
Patente dos E.U.A. N.2 6323315 Bi de Pettit et al.; G.R. Pettit et al., Anti-Cancer Drug Des. 13(4) : 243-277 (1998); G.R. Pettit et al. , Anti-Cancer Drug Des. 10(7) : 529-544 (1995); e K. Miyazaki et al. , Chem. Pharm. Buli. 43(10) : 1706-18 (1995) .
Apesar de resultados in vitro para compostos da classe de dolastatina e seus análogos, toxicidades gerais significativas para as doses requeridas para se conseguir um efeito terapêutico comprometem a sua eficácia em estudos clínicos. Consequentemente, existe uma necessidade óbvia na especialidade para derivados de dolastatina possuindo toxicidade significativamente inferior, mas ainda assim com eficiência terapêutica útil, em comparação com as atuais terapias com fármaco dolastatina. A citação de qualquer referência na Secção 2 deste pedido de patente não é uma admissão de que a referência é especialidade anterior a este pedido de patente.
3. SUMÁRIO DO INVENTO
Num aspeto, o presente invento proporciona uma composição farmacêutica adaptada para administração intravenosa a seres humanos compreendendo compostos de Fórmula Ia:
ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitáveis onde, L- é um anticorpo monoclonal que se liga imunoespecificamente ao antigénio CD30; -A- é uma unidade de Extensor; a é 1; cada -W- é independentemente uma unidade de Aminoácido; w é um número inteiro que varia de 2 a 12; -Y- é uma unidade de Espaçador autodestrutivo; y é 1 ou 2; p varia de 1 a cerca de 20 e é o número médio de unidades —Aa—W„—Yy—D por anticorpo na composição; e -D é uma unidade de Fármaco, em que os compostos de Fórmula Ia têm a estrutura
ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitáveis.
Um composto de fórmula Ia ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitáveis (um "Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando") são úteis para tratamento ou prevenção de cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa num animal. São também divulgados compostos de fármaco-ligando com a fórmula lia:
e seus sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis onde, independentemente em cada localização: R1 é selecionado entre -H, -Ci-Cs alquilo e -C3-C8 carbociclo; e R2 é selecionado entre -H e -Ci-Cs alquilo; ou R1 e R2 em conjunto têm a fórmula -(CRaRb)n- onde Ra e Rb são selecionados independentemente entre -H, -Ci-Cs alquilo e -C3-Ce carbociclo e n é selecionado entre 2, 3, 4, 5 e 6, e formam um anel com o átomo de azoto ao qual estão ligados; R3 é selecionado entre -H, -Ci-Cs alquilo, -C3-C8 carbociclo, -0-(Ci-Cs alquilo), -arilo, -Ci-Cs alquil-arilo, -C1-C8 alquil-(C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo e -Ci-Cs alquil- (C3-C8 heterociclo); R4 é selecionado entre -H, -Ci-Cs alquilo, -C3-C8 carbociclo, -0-(Ci-Cs alquilo), -arilo, -Ci-Cs alquil-arilo, -C1-C8 alquil- (C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo e -Ci-Cs alquil- (C3-C8 heterociclo) onde R5 é selecionado entre -H e -metilo; ou R4 e R5 em conjunto têm a fórmula -(CRaRb)n- onde Ra e Rb são selecionados independentemente entre -H, -Ci-Cs alquilo e -C3-C8 carbociclo e n é selecionado entre 2, 3, 4, 5 e 6, e formam um anel com o átomo de carbono ao qual estão ligados; R6 é selecionado entre -H e -Ci-Cs alquilo; R7 é selecionado entre -H, -Ci-Cs alquilo, -C3-C8 carbociclo, -0-(Ci-Cs) alquilo), -arilo, -Ci-Cs alquil-arilo, -Ci-Ce alquil- (C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo e -Ci-Cs alquil-(C3-C8 heterociclo); cada R8 é selecionado independentemente entre -H, -OH, -Ci-Ce alquilo, -C3-C8 carbociclo e -0-(Ci-Cs alquilo); R9 é selecionado entre -H e -Ci-Cs alquilo; X é -0-, -S-, -NH- ou -N(R14)-; R11 é selecionado entre -H, -OH, -NH2, -NHR14, -N(R14)2, -Ci-C8 alquilo, -C3-C8 carbociclo, -0-(Ci-Cs alquilo), -arilo, -Ci-C8 alquil-arilo, -Ci-Cs alquil- (C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo e -Ci-Cs alquil- (C3-C8 heterociclo) ; ou R11 é um átomo de oxigénio que forma uma unidade carbonilo (C=0) com o átomo de carbono ao qual está ligado e um átomo de hidrogénio neste átomo de carbono está substituído por uma das ligações na ligação dupla (C=0); cada R12 é selecionado independentemente entre -arilo e -C3-C8 heterociclo; cada R14 é independentemente -H ou -Ci-Cs alquilo; e R16 é -Yy-Ww-A' onde cada -W- é independentemente uma unidade de Aminoácido; -Y- é uma unidade de Espaçador; w é um número inteiro que varia de 0 a 12; y é 0, 1 ou 2; e -A' é selecionado entre
onde G é selecionado entre -Cl, -Br, -I, -O-mesilo e -O-tosilo; J é selecionado entre -Cl, -Br, -I, -F, -OH, -0-N-succinimida, -0-(4-nitrofenilo), -0-pentafluorofenilo, -0-tetrafluorofenilo e -0-C (0) -OR18; R17 é selecionado entre -Ci-Cio alquileno-, -C3-C8 carbociclo-, -0-(Ci-Cs alquil)-, -arileno-, -C1-C10 alquileno-arileno-, -arileno-Ci-Cio alquileno-, -C1-C10 alquileno- (C3-C8 carbociclo)-, - (C3-C8 carbociclo)-C1-C10 alquileno-, -C3-C8 heterociclo-, -C1-C10 alquileno- (C3-C8 heterociclo)-, -(C3-C8 heterociclo)-C1-C10 alquileno-, - (CH2CH2O) r- e - (CH2CH2O) r-CH2-; r é um número inteiro que varia de 1-10; e R18 é -C1-C8 alquilo ou -arilo.
Um composto de fórmula lia ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitáveis (um "Composto de Fármaco-Ligador") são úteis para tratamento de cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa num animal ou úteis como intermediários para a síntese de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando. São também divulgadas composições compreendendo uma quantidade eficaz de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando e um transportador ou veículo farmaceuticamente aceitável. São também divulgadas composições compreendendo uma quantidade eficaz de um Composto de Fármaco-Ligador e um transportador ou veículo farmaceuticamente aceitável. São também divulgados métodos para matar ou inibir a multiplicação de uma célula de tumor ou célula de cancro, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando. São também divulgados métodos para tratamento de cancro, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Composto de Fármaco-Ligador. São também divulgados métodos para tratamento de cancro, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando. São também divulgados métodos para matar ou inibir a replicação de uma célula que expressa um anticorpo autoimune, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Composto de Fármaco-Ligador. São também divulgados métodos para matar ou inibir a replicação de uma célula que expressa um anticorpo autoimune, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando. São também divulgados métodos para tratamento de uma doença autoimune, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Composto de Fármaco-Ligador . São também divulgados métodos para tratamento de uma doença autoimune, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando . São também divulgados métodos para tratamento de uma doença infeciosa, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Composto de Fármaco-Ligador . São também divulgados métodos para tratamento de uma doença infeciosa, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando . São também divulgados métodos para prevenir a multiplicação de uma célula de tumor ou célula de cancro, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Composto de Fármaco-Ligador. São também divulgados métodos para prevenir a multiplicação de uma célula de tumor ou célula de cancro, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando. São também divulgados métodos para prevenir o cancro, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Composto de Fármaco-Ligador. São também divulgados métodos para prevenir o cancro, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando. São também divulgados métodos para prevenir a multiplicação de uma célula que expressa um anticorpo autoimune, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Composto de Fármaco-Ligador. São também divulgados métodos para prevenir a multiplicação de uma célula que expressa um anticorpo autoimune, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando . São também divulgados métodos para prevenir uma doença autoimune, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Composto de Fármaco-Ligador. São também divulgados métodos para prevenir uma doença autoimune, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando . São também divulgados métodos para prevenir uma doença infeciosa, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Composto de Fármaco-Ligador. São também divulgados métodos para prevenir uma doença infeciosa, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando . É também divulgado um Composto de Fármaco-Ligador que pode ser utilizado como um intermediário para a síntese de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando. 0 presente invento pode ser compreendido mais plenamente por referência à descrição detalhada seguinte, Figuras e exemplos ilustrativos, que pretendem exemplificar concretizações do invento.
4. BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A FIG. 1 mostra a citotoxicidade de Composto 49 e Composto 53 contra a linha de células H3396. A linha -D- representa o Composto 49 e a linha -o- representa o Composto 53. A FIG. 2 mostra a citotoxicidade de Compostos 64, 65, 68 e 69 contra a linha de células H3396. A linha representa o Composto 64, a linha - - representa o Compost65, a linha - representa o Compostc68 e a linha -X- representa o Composto 69. A FIG. 3 mostra a citotoxicidade de Compostos 64, 65, 68 e 69 contra a linha de células HCT-116. A linha representa o Composto 64, a linha - - representa o Compost65, a linha - representa o Compostc68 e a linha -X- representa o Composto 69. A FIG. 4 mostra a citotoxicidade de Compostos 66 e 68 contra a linha de células H3396. A linha - - representa o
Composto 66 e a linha representa o Composto 68. A FIG. 5 mostra a citotoxicidade de Compostos 66, 68 e 69 contra a linha de células colorretais de humano Karpas. A linha representa o Composto 66, a linha - - representa o
Composto 68 e a linha -X- representa o Composto 69. A FIG. 6 mostra a citotoxicidade de Compostos 66 e 67 contra a linha de células H3396 em função da duração de exposição. As células ou foram expostas aos conjugados durante toda a duração do ensaio sem lavagem (96 horas), ou foram expostas aos conjugados durante 2 horas, lavadas e depois incubadas durante 94 horas adicionais. No final do período de 96 horas, as células foram pulsadas com Azul de Alamar para determinar a viabilidade celular. A linha - - representa o
Composto 66 para 2 h de exposição, a linha representa o
Composto 67 para 2 h de exposição, a linha -·- representa o
Composto 66 para 96 h de exposição, e a linha -- representa
Composto 67 para 96 h de exposição. A FIG. 7 mostra o efeito de Compostos 66-69 no crescimento de tumores de xenoenxerto de adenocarcinoma do pulmão de humano L2987 que foram implantados em ratinhos nus. A linha -X-representa tumor não tratado, a linha - - representa o Composto 66, a linha representa o Composto 68, a linha -V- o
Composto 67, e a linha -0- representa o Composto 69. A FIG. 8 mostra os efeitos de Compostos 66-69 no crescimento de tumores de xenoenxerto de linfoma de células grandes anaplásico Karpas de humano que foram implementadas em ratinhos nus. A linha -X- representa tumor não tratado, a linha - representa o Compost67, a linha -·- representa o Composto 69, a linha - - representa o Composto66, e a linha -o- representa o Composto 68.
5. DESCRIÇÃO DETALHADA DO INVENTO
5.1 DEFINIÇÕES
Exemplos de um "animal" incluem, mas não estão limitados a, um humano, rato, ratinho, cobaia, macaco, porco, cabra, vaca, cavalo, cão, gato, pássaro e galinha. "Arilo" refere-se a um grupo aromático carbociclico Exemplos de grupos arilo incluem, mas não estão limitados a, fenilo, naftilo e antracenilo. Um grupo aromático carbociclico ou um grupo aromático heterociclico podem estar não substituídos ou substituídos com um ou mais grupos incluindo, mas não limitados a, -Ci-Cs alquilo, -0-(Ci-Cs alquilo), -arilo, -C (0) R ' , -0C (0) R ' , -C (0) OR ' , -C(0)NH2, -C(0)NHR', -C(0)N(R')2, -NHC (0) R' , -S(0)2R', -S(0)R', -OH, -halogéneo, -N3, -NH2, - NH (R') , -N (R' ) 2 e -CN; onde cada R' é selecionado independentemente entre -Ci-Cs alquilo e arilo. 0 termo "Ci-Cs alquilo" como aqui utilizado refere-se a um hidrocarboneto saturado ou insaturado, de cadeia linear ou ramificada, possuindo de 1 a 8 átomos de carbono. Grupos "Ci-Cs alquilo" representativos incluem, mas não estão limitados a, -metilo, -etilo, -n-propilo, -n-butilo, -n-pentilo, -n-hexilo, -n-heptilo, -n-octilo, -n-nonilo e -n-decilo; enquanto Ci-Cs alquilos ramificados incluem, mas não estão limitados a, isopropilo, -sec-butilo, -isobutilo, -terc-butilo, isopentilo, -2-metilbutilo, Ci-Cs alquilos insaturados incluem, mas não estão limitados a, -vinilo, -alilo, -1-butenilo, -2-butenilo, -isobutilenilo, -1-pentenilo, -2- pentenilo, -3-metil-l-butenilo, -2-metil-2-butenilo, -2,3-dimetil-2-butenilo, 1-hexilo, 2-hexilo, 3-hexilo, acetilenilo, -propinilo, -1-butinilo, -2-butinilo, -1- pentinilo, -2-pentinilo, -3-metil-l-butinilo. metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc- butilo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo, n-hexilo, iso-hexilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, 2,2-dimetilbutilo, 2.3- dimetilbutilo, 2,2-dimetilpentilo, 2,3-dimetilpentilo, 3.3- dimetilpentilo, 2,3,4-trimetilpentilo, 3-metil-hexilo, 2.2- dimetil-hexilo, 2,4-dimetil-hexilo, 2,5-dimetil-hexilo, 3,5-dimetil-hexilo, 2,4-dimetilpentilo, 2-metil-heptilo, 3- metil-heptilo, n-heptilo, iso-heptilo, n-octilo e iso-octilo. Um grupo Ci-Cs alquilo pode estar não substituído ou substituído com um ou mais grupos incluindo, mas não limitado a, —Ci—Ce alquilo, -0-(Ci-Cs alquilo), -arilo, -C(0)R', OC (0) R ' , -C (0) OR ' , -C(0)NH2, -C(0)NHR', -C(0)N(R')2, NHC (0) R' , -S(0)2R', -S(0)R', -OH, -halogéneo, -N3, -NH2, -NH (R') , -N (R' ) 2 e -CN; onde cada R' é selecionado independentemente entre -Ci-Cs alquilo e arilo.
Um "C3-C8 carbociclo" é um anel carbocíclico não aromático, saturado ou insaturado, de 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 membros. C3-C8 carbociclos representativos incluem, mas não estão limitados a, -ciclopropilo, -ciclobutilo, -ciclopentilo, -ciclopentadienilo, -ciclo-hexilo, - ciclohexenilo, -1,3-ciclo-hexadienilo, -1,4-ciclo-hexadienilo, - cicloheptilo, 1.3- ciclo-heptadienilo, -1,3,5-ciclo-heptatrienilo, ciclooctilo e -ciclooctadienilo. Um grupo C3-C8 carbociclo pode estar não substituído ou substituído com um ou mais grupos incluindo, mas não limitados a, -Ci-Cs alquilo, -0- (Ci-Cs alquilo), -arilo, -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0)NH2, - C (0) NHR' , -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0)2R', -S(0)R', -OH, - halogéneo, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 e -CN; onde cada R' é selecionado independentemente entre -Ci-Cs alquilo e arilo.
Um "C3-C8 carbociclilo" refere-se a um grupo C3-C8 carbociclo definido acima onde um dos átomos de hidrogénio dos grupos carbociclo está substituído por uma ligação.
Um "C1-C10 alquileno" é um grupo hidrocarboneto saturado de cadeia linear da fórmula -(CH2)i-io-. Exemplos de um C1-C10 alquileno incluem metileno, etileno, propileno, butileno, pentileno, hexileno, heptileno, octileno, nonileno e decaleno.
Um "arileno" é um grupo arilo que tem duas ligações covalentes e podem estar nas configurações orto, meta ou para como se mostra nas estruturas seguintes:
nas quais o grupo fenilo pode estar não substituído ou substituído com até quatro grupos incluindo, mas não limitados a, -C1-C8 alquilo, -0-(Ci-Cs alquilo), -arilo, -C(0)R', OC (0) R ' , -C (0) OR ' , -C(0)NH2, -C(0)NHR', -C(0)N(R')2, NHC (0) R' , -S(0)2R', -S(0)R', -OH, -halogéneo, -N3, -NH2, - NH (R') , -N (R' ) 2 e -CN; onde cada R' é selecionado independentemente entre -Ci-Cs alquilo e arilo.
Um "C3-C8 heterociclo" refere-se a um C3-C8 carbociclo aromático ou não aromático no qual um a quatro dos átomos de carbono de anel estão substituídos independentemente por um heteroátomo entre o grupo consistindo de 0, Se N. Exemplos representativos de um C3-C8 heterociclo incluem benzofuranilo, benzotiofeno, indolilo, benzopirazolilo, cumarinilo, isoquinolinilo, pirrolilo, tiofenilo, furanilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, quinolinilo, pirimidinilo, piridinilo, piridonilo, pirazinilo, piridazinilo, isotiazolilo, isoxazolilo e tetrazolilo. Um C3-C8 heterociclo pode estar não substituído ou substituído com até sete grupos incluindo, -Ci-Cs alquilo, -0- (Ci-Cs alquilo), - arilo, -C (0) R' , -0C(0)R\ -C(0)0R\ -C(0)NH2, -C(0)NHR', - C(0)N(R')2 -NHC(0)R', -S(0)2R', -S(0)R', -OH, -halogéneo, -N3, -NH2, -NH(R'), —N (R' ) 2 e -CN; onde cada R' é selecionado independentemente entre -Ci-Cs alquilo e arilo. "C3-C8 heterociclilo" refere-se a um grupo C3-C8 heterociclo definido onde um dos átomos de hidrogénio dos grupos heterociclo está substituído por uma ligação. Um C3-C8 heterociclilo pode estar não substituído ou substituído com até seis grupos incluindo -Ci-Cs alquilo, -0- (Ci-Cs alquilo), -arilo, -C (0) R' , -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0)NH2 , -C(0)NHR', -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0)2R', -S(0)R', -OH, -halogéneo, -N3, -NH2, -NH(R'), —N (R' ) 2 e -CN; onde cada R' é selecionado independentemente entre -Ci-Cs alquilo e arilo.
Um "Composto do Invento" é um Composto de Fármaco-Ligador ou um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando.
Numa concretização, os Compostos do Invento estão numa forma isolada ou purificada. Como aqui utilizado, "isolado" significa separado de outros componentes de (a) um fonte natural, tal como uma célula ou cultura de células de planta ou animal, ou (b) uma mistura reaccional de química orgânica de síntese. Como aqui utilizado, "purificado" significa que, quando isolado, o isolado contém pelo menos 95%, preferivelmente pelo menos 98%, de um Composto do Invento em peso do isolado.
Exemplos de um "grupo protetor de hidroxilo" incluem, metoximetiléter, 2-metoxietoximetiléter, tetra-hidropiraniléter, benziléter, p-metoxibenziléter, trimetilsililéter, tri-isopropilsililéter, t-butildimetilsililéter, trifenilmetilsililéter, éster de acetato, ésteres de acetato substituído, pivaloato, benzoato, metanossulfonato e p-toluenossulfonato. "Grupo rejeitável" refere-se a um grupo funcional que pode ser substituído por outro grupo funcional. Estes grupos rejeitáveis são bem conhecidos na especialidade, e exemplos incluem, um halogeneto (e.g., cloreto, brometo, iodeto), metanossulfonilo (mesilo), p-toluenossulfonilo (tosilo), trifluorometilsulfonilo (triflato) e trifluorometilsulfonato. 0 termo "anticorpo", como aqui utilizado, refere-se a uma molécula de imunoglobulina a todo o comprimento ou a uma porção imunologicamente ativa de uma molécula de imunoglobulina a todo o comprimento, i.e., uma molécula que contém um local de ligação de antigénio que se liga imunoespecificamente a um antigénio de um alvo de interesse ou sua parte, estes alvos incluindo, células de cancro ou células que produzem anticorpos autoimunes associados a uma doença autoimune. A imunoglobulina aqui divulgada pode ser de qualquer tipo (e.g., IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), classe (e.g., IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl e IgA2) ou subclasse de moléculas de imunoglobulina. As imunoglobulinas podem ser derivadas de qualquer espécie. Preferivelmente, porém, a imunoglobulina é de origem humana, murina ou coelho. Anticorpos úteis no invento são monoclonais, e incluem anticorpos, monoclonais, biespecificos, humanos, humanizados ou quiméricos, anticorpos de cadeia simples, Fv, fragmentos Fab, fragmentos F(ab')r fragmentos F(ab')2, fragmentos produzidos por uma biblioteca de expressão de Fab, anticorpos anti-idiotipicos (anti-Id) , CDR, e fragmentos de ligação a epítopos de qualquer dos anteriores que se ligam imunoespecificamente ao antigénio CD30. A expressão "sal farmaceuticamente aceitável", como aqui utilizada, refere-se a sais orgânicos ou inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis de um Composto do Invento. Os Compostos do Invento contêm pelo menos um grupo amino, e deste modo sais de adição de ácido podem ser formados com este grupo amino. Sais preferidos incluem sais de sulfato, citrato, acetato, oxalato, cloreto, brometo, iodeto, nitrato, bissulfato, fosfato, fosfato ácido, isonicotinato, lactato, salicilato, citrato ácido, tartarato, oleato, tanato, pantotenato, bitartarato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucaronato, sacarato, formato, benzoato, glutamato, metanossulfonato, etanossulfonato, benzenossulfonato, p-toluenossulfonato e pamoato (i.e., 1, 1'-metileno-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)) . Um sal farmaceuticamente aceitável pode envolver a inclusão de outra molécula tal como um ião acetato, um ião succinato ou outro contra-ião. 0 contra-ião pode ser qualquer porção orgânica ou inorgânica que estabiliza a carga no composto de origem. Adicionalmente, um sal farmaceuticamente aceitável pode ter mais do que um átomo carregado na sua estrutura. Casos onde múltiplos átomos carregados são parte do sal farmaceuticamente aceitável podem ter múltiplos contra-iões. Assim, um sal farmaceuticamente aceitável pode ter um ou mais átomos carregados e/ou um ou mais contra-iões. "Solvato farmaceuticamente aceitável" refere-se a uma associação de uma ou mais moléculas de solvente e um Composto do Invento. Exemplos de solventes que formam solvatos farmaceuticamente aceitáveis incluem água, isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, ácido acético e etanolamina.
No contexto do cancro, o termo "tratamento" inclui qualquer ou a totalidade de: prevenção do crescimento de células de tumor ou células de cancro, prevenção da replicação de células de tumor ou células de cancro, mitigação da carga tumoral global e melhoria de um ou mais sintomas associados à doença.
No contexto de uma doença autoimune, o termo "tratamento" inclui qualquer ou a totalidade de: prevenção da replicação de células associadas a um estado de doença autoimune incluindo, mas não limitadas a, células capazes de produzir um anticorpo autoimune, mitigação da carga de anticorpos autoimunes e melhoria de um ou mais sintomas de uma doença autoimune.
No contexto de uma doença infeciosa, o termo "tratamento" inclui qualquer ou a totalidade de: prevenção do crescimento, multiplicação ou replicação do patogénio que causa a doença infeciosa e melhoria de um ou mais sintomas de uma doença infeciosa.
As abreviaturas seguintes são aqui utilizadas e têm as definições indicadas: AE é auristatina E, Boc é N-(t-butoxicarbonilo), cit é citrulina, dap é dolaproina, DCC é 1,3-diciclo-hexilcarbodi-imida, DCM é diclorometano, DEA é dietilamina, DEAD é azodicarboxilato de dietilo, DEPC é dietilfosforilcianidato, DIAD é azodicarboxilato de di-isopropilo, DIEA é N, Ν'-di-isopropiletilamina, dil é dolaisoleuina, DMAP é 4-dimetilaminopiridina, DME é etilenoglicoldimetiléter (ou 1,2-dimetoxietano), DMF é N,N-dimetilformamida, DMSO é dimetilsulfóxido, doe é dolafenina, dov é N,N-dimetilvalina, DTNB é 5,5'-ditiobis(ácido 2-nitrobenzóico), DTPA é ácido dietilenotriaminapenta-acético, DTT é ditiotreitol, EDCI é cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida, EEDQ é 2-etoxi-l- etoxicarbonil-1,2-di-hidroquinolina, ES-MS é espectrometria de massa de electrospray, EtOAc é acetato de etilo, Fmoc é N-(9-fluorenilmetoxicarbonilo), gly é glicina, HATU é hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il) -N, N, Ν' , Ν' -tetrametilurónio, HOBt é 1-hidroxibenzotriazole, HPLC é cromatografia líguida de alta pressão, ile é isoleucina, lys é lisina, MeCN é acetonitrilo, MeOH é metanol, Mtr é 4-anisildifenilmetilo (ou 4-metoxitritilo), nor é (IS, 2R)-(+)-norefedrina, PAB é p-aminobenzilo, PBS é solução salina tamponada com fosfato (pH 7,4), PEG é polietilenoglicol, Ph é fenilo, Pnp é p-nitrofenilo, MC é 6-maleimidocaproilo, Ph é fenilo, phe é L-fenilalanina, PyBrop é hexafluorofosfato de bromo-tris-pirrolidinofosfónio, SEC é cromatografia de exclusão de tamanhos, Su é succinimida, TFA é ácido trifluoroacético, TLC é cromatografia de camada fina, UV é ultravioleta, vai é valina.
5.2 CONJUGADOS DE FÁRMACO-LIGADOR-LIGANDO
Como acima declarado, o invento proporciona uma composição farmacêutica adaptada para administração intravenosa a seres humanos compreendendo os compostos da Fórmula Ia:
ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitáveis onde, L- é um anticorpo monoclonal gue se liga imunoespecificamente ao antigénio CD30; -A- é uma unidade de Extensor; a é 1; cada -W- é independentemente uma unidade de Aminoácido; w é um número inteiro que varia de 2 a 12; -Y- é uma unidade de Espaçador autodestrutivo; y é 1 ou 2; p varia de 1 a cerca de 20 e é o número médio de unidades —Aa—W„—Yy—D por anticorpo na composição; e -D é uma unidade de Fármaco, em que os compostos de Fórmula Ia possuem a estrutura
ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitáveis.
Numa concretização, p varia de 1 a cerca de 8.
Noutra concretização, p varia de 1 a cerca de 3.
Noutra concretização, p varia de cerca de 3 a cerca de 5. Ainda noutra concretização, p varia de cerca de 7 a cerca de 9.
Noutra concretização, p é cerca de 8.
Noutra concretização, p é cerca de 4.
Numa concretização adicional, p é cerca de 2.
Um composto de fórmula Ia ilustrativo tem a estrutura:
e seus sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis, onde p varia de cerca de 7 a cerca de 9.
Numa concretização, p varia de 1 a cerca de 3.
Noutra concretização, p varia de cerca de 3 a cerca de 5.
Noutra concretização, p é cerca de 8.
Ainda noutra concretização, p é cerca de 4.
Numa concretização adicional, p é cerca de 2. É entendido que p é o número médio de unidades -Aa-Ww-Yy-D por ligando num Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando de fórmula Ia.
Numa concretização p varia de 1 a 15.
Noutra concretização p varia de 1 a 10.
Noutra concretização, p varia de 1 a cerca de 8.
Numa concretização adicional p varia de 1 a cerca de 5.
Noutra concretização p varia de 1 a cerca de 3.
Numa concretização p varia de cerca de 3 a cerca de 5.
Numa concretização p varia de cerca de 7 a cerca de 9.
Noutra concretização p é cerca de 8.
Ainda noutra concretização p é cerca de 4.
Ainda noutra concretização p é cerca de 2.
Os Conjugados de Fármaco-Ligador-Ligando de fórmula Ia podem existir como misturas, onde cada componente de uma mistura tem um valor de p diferente. Por exemplo, um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando pode existir como uma mistura de dois Conjugados separados, um componente Conjugado onde p é 7 e o outro componente Conjugado onde p é 8.
Numa concretização, um Conjugado de Fármaco-Ligador-
Ligando existe como uma mistura de três conjugados separados onde p para os três conjugados separados é 1, 2 e 3, respetivamente.
Noutra concretização, um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando existe como uma mistura de três conjugados separados onde p para os três conjugados separados é 3, 4 e 5, respetivamente.
Noutra concretização, um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando existe como uma mistura de três conjugados separados onde p para os três conjugados separados é 5, 6 e 7, respetivamente.
Ainda noutra concretização, um Conjugado de Fármaco-
Ligador-Ligando existe como uma mistura de três conjugados separados onde p para os três conjugados separados é 7, 8 e 9, respetivamente.
Ainda noutra concretização, um Conjugado de Fármaco-
Ligador-Ligando existe como uma mistura de três conjugados separados onde p para os três conjugados separados é 9, 10 e 11, respetivamente.
Ainda noutra concretização, um Conjugado de Fármaco-
Ligador-Ligando existe como uma mistura de três conjugados separados onde p para os três conjugados separados é 11, 12 e 13, respetivamente.
Noutra concretização, um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando existe como uma mistura de três conjugados separados onde p para os três conjugados separados é 13, 14 e 15, respetivamente.
5.3 COMPOSTOS FÁRMÃ.CO-LIGADOR São também divulgados compostos da fórmula Ili:
e seus sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis onde, independentemente em cada localização: R2 é selecionado entre -H e -Ci-Cs alquilo; R3 é selecionado entre -H, -Ci-Cs alquilo, -C3-C8 carbociclo, -0-(Ci-Cs alquilo), -arilo, -Ci-Cs alquil-arilo, -C1-C8 alquil- (C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo e -Ci-Cs alquil-(C3-C8 heterociclo); R4 é selecionado entre -H, -Ci-Cs alquilo, -C3-C8 carbociclo, -0-(Ci-Cs alquilo), -arilo, -Ci-Cs alquil-arilo, -C1-C8 alquil-(C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo e -Ci-Cs alquil- (C3-C8 heterociclo) onde R5 é selecionado entre -H e -metilo; ou R4 e R5 em conjunto têm a fórmula -(CRaRb)n- onde Ra e Rb são selecionados independentemente entre -H, -Ci-Cs alquilo e -C3-C8 carbociclo e n é selecionado entre 2, 3, 4, 5 e 6, e formam um anel com o átomo de carbono ao qual estão ligados; R6 é selecionado entre -H e -Ci-Cs alquilo; R7 é selecionado entre -H, -Ci-Cs alquilo, -C3-C8 carbociclo, -0-(Ci-Cs alquilo), -arilo, -Ci-Cs alquil-arilo, -C1-C8 alquil-(C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo e -Ci-Cs alquil-(C3-C8 heterociclo); cada R8 é selecionado independentemente entre -H, OH, -C1-C8 alquilo -C3-C8 carbociclo e -0-(Ci-Cs alquilo); R9 é selecionado entre -H e -Ci-Cs alquilo; R11 é selecionado entre -H, -OH, -NH2, -NHR14, -N(R14)2, -Ci-C8 alquilo, -C3-C8 carbociclo, -0-(Ci-Cs alquilo), -arilo, -Ci-C8 alquil-arilo, -Ci-Cs alquil- (C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo e -Ci-Cs alquil- (C3-C8 heterociclo) ; ou R11 é um átomo de oxigénio que forma uma unidade carbonilo (C=0) com o átomo de carbono ao qual está ligado e um átomo de hidrogénio neste átomo de carbono está substituído por uma das ligações na ligação dupla (C=0); cada R12 é selecionado independentemente entre -arilo e -C3-C8 heterociclo; R13 é selecionado entre hidrogénio, -OH, -NH2, -NHR14, -N (R14) 2, Ci-Ce alquilo, C3-C8 carbociclo, -0-(Ci-Cs alquilo), -arilo, -alquil-arilo, -alquil- (C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo e -alquil- (C3-C8 heterociclo); cada R14 é independentemente -H ou -Ci-Cs alquilo; R16 é -Yy-Ww-A' onde cada -W- é independentemente uma unidade de Aminoácido; -Y- é uma unidade de Espaçador; w é um número inteiro que varia de 0 a 12; y é 0, 1 ou 2; e -A' é selecionado entre onde
G é selecionado entre -Cl, -Br, -I, -0-mesilo e -0-tosilo; J é selecionado entre -Cl, -Br, -I, -F, -OH, -0-N- succinimida, -0-(4-nitrofenilo), -0-pentafluorofenilo, -0-tetrafluorofenilo e -0-C (0) -OR18; R17 é selecionado entre -C1-C10 alquileno-, -C3-C8 carbociclo-, -0- (Ci-Cs alquilo)-, -arileno-, -C1-C10 alquileno- arileno-, -arileno-Ci-Cio alquileno-, -C1-C10 alquileno- (C3-C8 carbociclo)- (C3-C8 carbociclo)-C1-C10 alquileno-, -C3-C8 heterociclo-, -C1-C10 alquileno- (C3-C8 heterociclo)-, -(C3-C8 heterociclo)-C1-C10 alquileno-, - (CR2CH2O) r- e - (CH2CHzO) r-CH2-; r é um número inteiro que varia de 1-10; e R18 é -C1-C8 alquilo ou -arilo. O composto de fórmula Ili possuindo a estrutura:
é um composto que pode ser utilizado para formar conjugados de fármaco-ligador-ligando para utilização no presente invento.
Os compostos de fórmulas Il-i são úteis para tratamento ou prevenção do cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa num animal.
5.4 A UNIDADE DE LIGADOR A unidade de Ligador do Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando liga a unidade de Fármaco e a unidade de Ligando e tem a fórmula:
onde: -A- é uma unidade de Extensor; a é 1; cada -W- é independentemente uma unidade de Aminoácido; w é independentemente um inteiro que varia de 2 a 12; -Y- é uma unidade de Espaçador autodestrutivo; e y é 1 ou 2.
5.4.1 A UNIDADE DE EXTENSOR A unidade de Extensor (-A-) liga uma unidade de Ligando a uma unidade de Aminoácido (-W-). Em relação a este aspeto, um Ligando (L) possui um grupo funcional que pode formar uma ligação com um grupo funcional de um Extensor. Grupos funcionais úteis que podem estar presentes num ligando, quer naturalmente quer através de manipulação química, incluem sulfidrilo (-SH), amino, hidroxilo, carboxi, o grupo hidroxilo anomérico de um carboidrato e carboxilo. Grupos funcionais de Ligando preferidos são sulfidrilo e amino. Podem ser gerados grupos sulfidrilo por redução de uma ligação dissulfureto intramolecular de um Ligando. Alternativamente, podem ser gerados grupos sulfidrilo por reação de um grupo amino de uma porção lisina de um Ligando utilizando 2-iminotiolano (reagente de Traut) ou outro reagente gerador de sulfidrilo.
Numa concretização, a unidade de Extensor forma uma ligação com um átomo de enxofre da unidade de Ligando. 0 átomo de enxofre pode ser derivado de um grupo sulfidrilo de um Ligando. A unidade de Extensor tem a fórmula:
5.4.2 A UNIDADE DE AMINOÁCIDO A unidade de Aminoácido (-W-) liga a unidade de Extensor à unidade de Espaçador se a unidade de espaçador -W„- tem a fórmula :
onde R20 é isopropilo e R21 é (CH2) 3NHCONH2.
5.4.3 A UNIDADE DE ESPAÇADOR A unidade de Espaçador (-Y-) liga uma unidade de Aminoácido à unidade de Fármaco. A unidade de Espaçador é autodestrutiva. -Yy- é uma unidade álcool p-aminobenzílico (PAB) (ver Esquemas 2) onde Qm não está presente, i.e. m é 0.
Um Composto do invento contendo uma unidade de Espaçador autodestrutivo pode libertar -D sem a necessidade de um passo de hidrólise separado. -Y- é um grupo PAB que está ligado a -Ww— através do átomo de azoto de amino do grupo PAB, e ligado diretamente a -D através de um grupo carbonato. Sem estar limitado pela teoria, o Esquema 2 ilustra um mecanismo possível de libertação de Fármaco de um grupo PAB que está ligado diretamente a -D através de um grupo carbamato.
Esquema 2
onde Qm não está presente, i.e. m é 0; e p varia de 1 a cerca de 2 0. A unidade de Espaçador (-Yy-) é representada pela Fórmula (X):
(X) onde Qm não está presente, i.e. m é 0;
5.5 A UNIDADE DE FÁRMACO -D é uma unidade de Fármaco possuindo um átomo de azoto que pode formar uma ligação com a unidade de Espaçador quando y = 1 ou 2.
5.6 A UNIDADE DE LIGANDO A unidade de Ligando (L-) é um anticorpo monoclonal que se liga imunoespecificamente ao antigénio CD30. O Ligando liga-se a, complexa com, ou reage com uma porção de uma população de células que se pretende que seja terapeut icamente ou de outro modo biologicamente modificada. A unidade de Ligando atua para entregar a unidade de Fármaco à particular população de células alvo com as quais a unidade de Ligando reage. Estes Ligandos incluem anticorpos a todo o comprimento, e fragmentos de anticorpos.
Uma unidade de Ligando forma uma ligação com uma Unidade de Extensor de um Ligador. Uma unidade de Ligando pode formar uma ligação com uma unidade de Ligador através de um heteroátomo do Ligando. Heteroátomos que podem estar presentes numa unidade de Ligando incluem enxofre (numa concretização, a partir de um grupo sulfidrilo de um Ligando), oxigénio (numa concretização, a partir de um grupo carbonilo, carboxilo ou hidroxilo de um Ligando) e azoto (numa concretização, a partir de um grupo amino primário ou secundário de um Ligando). Estes heteroátomos podem estar presentes no Ligando no estado natural do Ligando, por exemplo um anticorpo de ocorrência natural, ou podem ser introduzidos no Ligando através de modificação química.
Numa concretização preferida, um Ligando possui um grupo sulfidrilo e o Ligando liga-se à unidade de Ligador através do átomo de enxofre do grupo sulfidrilo.
Noutra concretização, o Ligando pode ter um ou mais carboidrato grupos que podem ser modificados quimicamente para terem um ou mais grupos sulfidrilo. A unidade de Ligando liga-se à unidade de Extensor através do átomo de enxofre do grupo sulfidrilo.
Ainda noutra concretização, o Ligando pode ter um ou mais grupos carboidrato que podem ser oxidados para proporcionar um grupo aldeído (-CHO) (ver Laguzza, et al., J. Med. Chem. 1989, 32 (3), 548-55) . 0 aldeído correspondente pode formar uma ligação com um local reativo num Extensor. Locais reativos num Extensor que podem reagir com um grupo carbonilo num Ligando incluem, mas não estão limitados a, hidrazina e hidroxilamina. São também divulgados Ligandos de proteína, polipéptido ou péptido não imunorreativos que incluem transferrina, fatores de crescimento epidérmico ("EGF"), bombesina, gastrina, péptido libertador de gastrina, fator de crescimento derivado de plaquetas, IL-2, IL-6, fatores de crescimento transf ormantes ("TGF"), tais como TGF- e TGF- , fator de crescimento de vacínia ("VGF"), insulina e fatores de crescimento de semelhantes a insulina I e II, lectinas e apoproteína de lipoproteína de baixa densidade.
Ligandos de anticorpo monoclonal úteis são populações homogéneas de anticorpos contra o antigénio CD30. Um anticorpo monoclonal (mAb) para o antigénio de interesse pode ser preparado utilizando qualquer técnica conhecida na especialidade que proporcione a produção de moléculas de anticorpo por linhas de células contínuas em cultura. Estas incluem, mas não estão limitados a, a técnica de hibridoma descrita originalmente por Kohler e Milstein (1975, Nature 256, 495-497), a técnica de hibridoma de células B humanas (Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4: 72), e a técnica de hibridoma de EBV (Cole et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., págs. 77-96) . Estes anticorpos podem ser de qualquer classe de imunoqlobulina incluindo IgG, IgM, IgE, IgA e IgD e qualquer sua subclasse. 0 hibridoma que produz os mAb de utilização neste invento pode ser cultivado in vitro ou in vivo.
Ligandos de anticorpo monoclonal úteis incluem, mas não estão limitados a, anticorpos monoclonais humanos ou anticorpos monoclonais quiméricos de humano-ratinho (ou outras espécies). Anticorpos monoclonais humanos podem ser produzidos por qualquer de numerosas técnicas conhecidas na especialidade (e.g., Teng et al. , 1983, Proc. Natl. Acad Sei. U.S.A. 80, 7308-7312; Kozbor et al. , 1983, Immunology Today 4, 72-79; e Olsson et al., 1982, Meth. Enzymol. 92, 3-16). O Ligando pode também ser um anticorpo biespecifico. São conhecidos na especialidade métodos para a produção de anticorpos biespecificos. A produção tradicional de anticorpos biespecificos a todo o comprimento é baseada na coexpressão de dois pares de cadeia pesada-cadeia leve de imunoglobulina, onde as duas cadeias têm especificidades diferentes (Milstein et al., 1983, Nature 305:537-539). Por causa da mescla aleatória de cadeias pesada e leve de imunoglobulina, estes hibridomas (quadromas) produzem uma mistura potencial de 10 moléculas de anticorpo diferentes, das quais apenas uma tem a estrutura biespecifica correta. A purificação da molécula correcta, que é usualmente realizada utilizando passos de cromatografia de afinidade, é bastante trabalhosa, e os rendimentos de produto são baixos. Procedimentos similares são divulgados na Publicação Internacional N.2 WO 93/08829 e em Traunecker et al., EMBO J. 1_0:3 655-3 65 9 (1991) .
De acordo com uma abordagem diferente e mais preferida, domínios variáveis de anticorpo com as especificidades de ligação (locais de combinação anticorpo-antigénio) desejadas são fundidos com sequências de domínio constante de imunoglobulina. A fusão é preferivelmente com um domínio constante de cadeia pesada de imunoglobulina, compreendendo pelo menos parte das regiões de charneira, CH2 e CH3. Prefere- se ter a primeira região constante de cadeia pesada (CHI), contendo o local necessário para ligação da cadeia leve, presente em pelo menos uma das fusões. Os ADN codificando as fusões de cadeia pesada de imunoglobulina e, se desejado, da cadeia leve de imunoglobulina, são inseridos em vetores de expressão separados e são cotransfetados num organismo hospedeiro adequado. Isto proporciona uma grande flexibilidade no ajustamento das proporções mútuas dos três fragmentos de polipéptido em concretizações onde proporções desiguais das três cadeias de polipéptido utilizadas na construção proporcionam os rendimentos ótimos. No entanto, é possível inserir as sequências de codificação para duas ou para todas as três cadeias de polipéptido num vetor expressão quando a expressão de pelo menos duas cadeias de polipéptido em proporções iguais resulta em rendimentos elevados ou quando as proporções não têm qualquer significado particular.
Numa concretização preferida desta abordagem, os anticorpos biespecíficos possuem uma cadeia pesada de imunoglobulina híbrida com uma primeira especificidade de ligação num ramo, e um par de cadeia pesada-cadeia leve de imunoglobulina híbrida (proporcionando uma segunda especificidade de ligação) no outro ramo. Esta estrutura assimétrica facilita a separação do composto biespecífico desejado de combinações de cadeias de imunoglobulina indesejadas, uma vez que a presença de uma cadeia leve de imunoglobulina em apenas uma metade da molécula biespecífica proporciona um modo de separação fácil (Publicação Internacional N.2 WO 94/04690).
Para detalhes adicionais para gerar anticorpos biespecíficos ver, por exemplo, Suresh et ai., Methods in Enzymology, 1986, 121:210. Utilizando estas técnicas, podem-se preparar Ligandos de anticorpo biespecíficos para utilização no tratamento ou prevenção de uma doença como aqui definido. São também descritos anticorpos bifuncionais na Publicação de Patente Europeia N.2 EPA 0 105 360. Como divulgado nesta referência, anticorpos híbridos ou bifuncionais podem ser obtidos ou biologicamente, i.e., por técnicas de fusão celular, ou quimicamente, especialmente com agentes de reticulação ou reagentes de formação de pontes de dissulfureto, e podem compreender anticorpos inteiros ou seus fragmentos. Métodos para obtenção destes anticorpos híbridos são divulgados por exemplo, na Publicação Internacional WO 83/03679, e na Publicação de Patente Europeia N.2 EPA 0 217 577. O Ligando pode ser um fragmento, derivado ou análogo funcionalmente ativos de um anticorpo que imunoespecificamente se liga ao antigénio CD30. Em relação a este aspeto, "funcionalmente ativo" significa que o fragmento, derivado ou análogo é capaz de induzir anticorpos anti-anti-idiotipo que reconhecem o mesmo antigénio que o anticorpo a partir do qual o fragmento, derivado ou análogo é derivado reconheceu. Especificamente, numa concretização preferida, a antigenicidade do idiotipo da molécula de imunoglobulina pode ser melhorada por deleção das sequências de estrutura e CDR que são C-terminais em relação à sequência de CDR que especificamente reconhece o antigénio. Para determinar que sequências de CDR se ligam ao antigénio, péptidos sintéticos contendo as sequências de CDR podem ser utilizadas em ensaios de ligação com o antigénio por qualquer método de ensaio de ligação conhecido na especialidade (e.g., o ensaio de núcleo BIA)
Outros Ligandos úteis incluem fragmentos de anticorpos tais como, mas não limitados a, fragmentos F(ab')2, que contêm a região variável, a região constante de cadeia leve e o domínio CHI da cadeia pesada, que podem ser produzidos por digestão com pepsina da molécula anticorpo, e fragmentos Fab, que podem ser gerados por redução das pontes dissulfureto dos fragmentos F(ab')2. Outros Ligandos úteis são dímeros de cadeia pesada e cadeia leve de anticorpos, ou qualquer seu fragmento mínimo tal como Fv ou anticorpos de cadeia simples (SCA) (e.g., como descrito na Patente dos E.U.A. 4946778; Bird, 1988, Science 242:423-42; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85:5879-5883; e Ward et al., 1989, Nature 334:544-54), ou qualquer outra molécula com a mesma especificidade como o anticorpo.
Adicionalmente, anticorpos recombinantes, tais como anticorpos monoclonais quiméricos e humanizados, compreendendo porções tanto humanas como não humanas, que podem ser produzidos utilizando técnicas padrão de ADN recombinante, são Ligandos úteis. Um anticorpo quimérico é uma molécula na qual diferentes porções são obtidas a partir de diferentes espécies animais, tais como aquelas possuindo uma região variável derivada de uma região constante de imunoglobulina humana e monoclonal murina (ver, e.g., Cabilly et al., Patente dos E.U.A. N.2 4816567; e Boss et al. , Patente dos E.U.A. N.2 4816397). Anticorpos humanizados são moléculas de anticorpo a partir de uma espécie não humana possuindo uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDR) a partir da espécie não humana e uma região de estrutura a partir de uma molécula de imunoglobulina humana (ver, e.g., Queen, Patente dos E.U.A. N.2 5585089) . Estes anticorpos monoclonais quiméricos e humanizados podem ser produzidos por técnicas de ADN recombinantes conhecidas na especialidade, por exemplo utilizando métodos descritos na Publicação Internacional N.2 WO 87/02671; Publicação de Patente Europeia N.2 184187; Publicação de Patente Europeia N.2 171496; Publicação de Patente Europeia N.2 173494; Publicação Internacional N.2 WO 86/01533; Patente dos E.U.A. N.2 4816567; Publicação de Patente Europeia N.2 125023; Berter et al. , 1988, Science 240:1041-1043; Liu et al. , 1987, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 84:3439-3443; Liu et al., 1987, J. Immunol. 139:3521-3526; Sun et al., 1987, Proc. Natl. Acad Sei. USA 84:214-218; Nishimura et al., 1987, Cane. Res. 47:999-1005; Wood et al., 1985, Nature 314:446-449; e Shaw et al., 1988, J. Natl. Cancer Inst. 80:1553-1559; Morrison, 1985, Science 229:1202-1207; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214; Patente dos E.U.A. 5225539; Jones et al., 1986, Nature 321:552-525; Verhoeyan et al. (1988) Science 239:1534; e Beidler et al., 1988, J. Immunol. 141:4053-4060 .
Anticorpos completamente humanos são particularmente desejáveis para Ligandos. Estes anticorpos podem ser produzidos utilizando ratinhos transgénicos que são incapazes de expressarem genes de imunoglobulina endógenos das cadeias pesada e leve, mas que podem expressar genes humanos das cadeias pesada e leve. Os ratinhos transgénicos são imunizados do modo normal com um antigénio selecionado, e.g., a totalidade ou uma porção de um polipéptido do invento. Anticorpos monoclonais dirigidos contra o antigénio podem ser obtidos utilizando tecnologia de hibridoma convencional. Os transgenes de imunoglobulina humana alojados pelos ratinhos transgénicos rearranjam-se durante a diferenciação de células B, e subsequentemente sofrem comutação de classe e mutação somática. Assim, utilizando uma tal técnica, é possível produzir anticorpos IgG, IgA, IgM e IgE terapeuticamente úteis. Para uma visão geral desta tecnologia para produção de anticorpos humanos, ver Lonberg e Huszar (1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93). Para uma discussão detalhada desta tecnologia para produção de anticorpos humanos e de anticorpos monoclonais humanos e protocolos para produção destes anticorpos, ver, e.g., Patente dos E.U.A. 5625126, Patente dos E.U.A. 5633425, Patente dos E.U.A. 5569825, Patente dos E.U.A. 5661016 e Patente dos E.U.A. 5545806. Outros anticorpos humanos podem ser obtidos comercialmente, por exemplo, na Abgenix, Inc. (Freemont, CA) e na Genphann (San Jose, CA) .
Anticorpos completamente humanos que reconhecem um epítopo selecionado podem ser gerados utilizando uma técnica referida como "seleção guiada". Nesta abordagem, um anticorpo monoclonal não humano selecionado, e.g., um anticorpo de ratinho, é utilizado para guiar a seleção de um anticorpo completamente humano que reconhece o mesmo epítopo (Jespers et al. (1994) Biotechnology 12:899-903).
Noutras concretizações, o Ligando é uma proteína de fusão de um anticorpo, ou um seu fragmento funcionalmente ativo, por exemplo no qual o anticorpo está fundido através de uma ligação covalente (e.g., uma ligação peptídica), quer no terminal N quer no terminal C, com uma sequência de aminoácidos de outra proteína (ou sua porção, preferivelmente uma porção da proteína de pelo menos 10, 20 ou 50 aminoácidos) que não é o anticorpo. Preferivelmente, o anticorpo ou seu fragmento está ligado covalentemente à outra proteína no terminal N do domínio constante.
Os anticorpos de Ligando incluem análogos e derivados que são modificados, i.e. pela ligação covalente de qualquer tipo de molécula desde que esta ligação covalente permita ao anticorpo manter a sua imunoespecificidade de ligação de antigénio. Por exemplo, mas não como limitação, os derivados e análogos dos anticorpos incluem aqueles que foram adicionalmente modificados, e.g., por glicosilação, acetilação, peguilação, fosforilação, amidação, derivatização por grupos protetores/bloqueadores conhecidos, clivagem proteolitica, ligação a uma unidade de Ligando celular ou outra proteína, etc. Pode ser realizada qualquer uma de numerosas modificações químicas por técnicas conhecidas, incluindo, mas não limitadas a clivagem química específica, acetilação, formilação, síntese metabólica de tunicamicina, etc. Adicionalmente, o análogo ou derivado pode conter um ou mais aminoácidos não naturais.
Os anticorpos de Ligando incluem anticorpos possuindo modificações (e.g., substituições, deleções ou adições) em resíduos aminoácido que interagem com recetores Fc. Em particular, os anticorpos de Ligando incluem anticorpos possuindo modificações em resíduos aminoácido identificados como envolvidos na interação entre o domínio Fc e o recetor FcRn (ver, e.g., Publicação Internacional N.2 WO 97/34631). Anticorpos imunoespecíficos para um antigénio de célula de cancro podem ser obtidos comercialmente, por exemplo, na Genentech (San Francisco, CA) ou produzidos por qualquer método conhecido de um perito na especialidade tal como, e.g., síntese química ou técnicas de expressão recombinante. A sequência de nucleótidos codificando anticorpos imunoespecíficos para um antigénio de célula de cancro pode ser obtida, e.g., na base de dados GenBank ou numa base de dados idêntica, nas publicações da literatura ou por clonagem e sequenciação de rotina.
Numa concretização específica, anticorpos anti-CD30 conhecidos para o tratamento ou prevenção de cancro são utilizados de acordo com as composições e métodos do invento. Anticorpos imunoespecíficos para o antigénio CD30 podem ser obtidos comercialmente ou produzidos por qualquer método conhecido de um perito na especialidade tal como, e.g., síntese química ou técnicas de expressão recombinante. A sequência de nucleótidos codificando anticorpos imunoespecíficos para o antigénio CD30 pode ser obtida, e.g., na base de dados GenBank ou numa base de dados idêntica, nas publicações da literatura ou por clonagem e sequenciação de rotina.
Os mAb contra o antigénio CD30 como o AC10 (Bowen, M. A., Olsen, K.J., Cheng, L., Avila, D., e Podack, E.R. "Functional effects of CD30 on a large granular linfoma cell line YT" J. Immunol., 151, 5896-5906, 1993) são úteis no invento. Muitos outros anticorpos de internalização que se ligam a antigénios associados a tumores são conhecidos, e foram revistos (Franke, A.E., Sievers, E.L., e Scheinberg, D.A., "Cell surface receptor-targeted therapy of acute myeloid leukemia: a review" Cancer Biother. Radiopharm. 2000, 15, 459-76; Murray, J.L., "Monoclonal antibody treatment of solid tumors: a coming of age" Semin. Oncol. 2000, 27, 64-70; Breitling, F., e Dubel, S., Recombinant Antibodies, John Wiley, and Sons, New York, 1998).
Os anticorpos adequados para utilização no invento podem ser produzidos por qualquer método conhecido na especialidade para a síntese de anticorpos, em particular, por síntese química ou por expressão recombinante, e são preferivelmente produzidos por técnicas de expressão recombinante.
5.6.1 PRODUÇÃO DE ANTICORPOS RECOMBINANTES
Anticorpos de Ligando do invento podem ser produzidos utilizando qualquer método conhecido na especialidade como útil para a síntese de anticorpos, em particular, por síntese química ou por expressão recombinante, e são produzidos preferivelmente por técnicas de expressão recombinante. A expressão recombinante dos anticorpos de Ligando, ou seu fragmento, derivado ou análogo, requer a construção de um ácido nucleico que codifica o anticorpo. Se a sequência de nucleótidos do anticorpo é conhecida, um ácido nucleico codificando o anticorpo pode ser montado a partir de oligonucleótidos sintetizados quimicamente (e.g., como descrito em Kutmeier et al. , 1994, BioTechniques 17:242), o que envolve a síntese de oligonucleótidos sobrepostos contendo porções da sequência codificando o anticorpo, hibridização e ligação desses oligonucleótidos, e depois amplificação dos oligonucleótidos ligados por PCR.
Alternativamente, uma molécula de ácido nucleico codificando um anticorpo pode ser gerada a partir de uma fonte adequada. Se não estiver disponível um clone contendo o ácido nucleico codificando o anticorpo particular, mas se a sequência do anticorpo é conhecida, um ácido nucleico codificando o anticorpo pode ser obtido a partir de uma fonte adequada (e.g., uma biblioteca de ADNc de anticorpo, ou biblioteca de ADNc gerada a partir de qualquer tecido ou células expressando a imunoglobulina) por amplificação de PCR utilizando iniciadores sintéticos hibridizáveis com as extremidades 3' e 5' da sequência ou por clonagem utilizando uma sonda de oligonucleótido específica para a sequência de génica particular.
Anticorpos específicos para o antigénio CD30 podem ser gerados por qualquer método conhecido na especialidade, por exemplo, por geração de anticorpos monoclonais, e.g., como descrito por Kohler e Milstein (1975, Nature 256:495-497) ou, como descrito por Kozbor et al. (1983, Immunology Today 4:72) ou Cole et al. (1985 em Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., págs. 77-96). Alternativamente, urn clone codificando pelo menos a porção Fab do anticorpo pode ser obtido por rastreio de bibliotecas de expressão de Fab (e.g., como descrito em Huse et al., 1989, Science 246:1275-1281) quanto a clones de fragmentos Fab que se ligam a um antigénio específico ou por rastreio de bibliotecas de anticorpo (ver, e.g., Clackson et al., 1991, Nature 352:624; Hane et al., 1997 Proc. Natl. Acad Sei. USA 94:4937).
Uma vez obtida uma sequência de ácido nucleico codificando pelo menos o domínio variável do anticorpo, esta pode ser introduzida num vetor contendo a sequência de nucleótidos codificando as regiões constantes do anticorpo (ver, e.g., Publicação Internacional N.2 WO 86/05807; Publicação Internacional N.2 WO 89/01036; e Patente dos E.U.A. N.2 5122464). Estão disponíveis vetores contendo a cadeia leve ou pesada completa que permitem a expressão de uma molécula de anticorpo completa. Depois, o ácido nucleico codificando o anticorpo pode ser utilizado para introduzir as substituições ou deleções de nucleótidos necessárias para substituir (ou eliminar) o um ou mais resíduos cisteína da região variável que participam numa ligação dissulfureto intracadeia com um resíduo aminoácido que não contém um grupo sulfidrilo. Estas modificações podem ser realizadas por qualquer método conhecido na especialidade para a introdução de mutações ou deleções especificas numa sequência de nucleótidos, por exemplo, mas não limitado a, mutagénese química e mutagénese dirigida in vitro (Hutchinson et al.r 1978, J. Biol. Chem. 253:6551).
Adicionalmente, podem-se utilizar técnicas desenvolvidas para a produção de "anticorpos quiméricos" (Morrison et ai., 1984, Proc. Natl. Acad Sei. 81:851-85.5; Neuberger et ai., 1984, Nature 312:604-608; Takeda et ai., 1985, Nature 314:452-454) por montagem (splicing) de genes de uma molécula de anticorpo de ratinho de especificidade por um antigénio apropriado em conjunto com genes de uma molécula de anticorpo humano de atividade biológica apropriada. Um anticorpo quimérico é uma molécula na qual diferentes porções são derivadas de espécies animais diferentes, tais como aquelas possuindo uma região variável derivada de um anticorpo monoclonal murino e uma região constante de imunoglobulina humana, e.g., anticorpos humanizados.
Alternativamente, técnicas descritas para a produção de anticorpos de cadeia simples (Patente dos E.U.A. 4694778; Bird, 1988, Science 242:423-42; Huston et ai., 1988, Proc. Natl. Acad Sei. USA 8 5:587 9-58 83; e Ward et ai., 1989, Nature 334:544-54) podem ser adaptadas para produzir anticorpos de cadeia simples. Anticorpos de cadeia simples são formados por ligação de fragmentos de cadeia pesada e leve da região Fv através de uma ponte de aminoácidos, resultando num polipéptido de cadeia de simples. Podem também ser utilizadas técnicas para a montagem de fragmentos Fv funcionais em E. coli (Skerra et ai., 1988, Science 242:1038-1041).
Fragmentos de anticorpo que reconhecem epítopos específicos podem ser gerados por técnicas conhecidas. Por exemplo, estes fragmentos incluem, mas não estão limitados a, os fragmentos F(ab')2 que podem ser produzidos por digestão da molécula de anticorpo com pepsina e os fragmentos Fab que podem ser gerados por redução das pontes de dissulfureto dos fragmentos F(ab')2.
Uma vez obtida uma sequência de ácido nucleico codificando um anticorpo de Ligando, o vetor para a produção do anticorpo pode ser produzido por tecnologia de ADN recombinante utilizando técnicas bem conhecidas na especialidade. Métodos que são bem conhecidos dos peritos na especialidade podem ser utilizados para construir vetores de expressão contendo as sequências de codificação de anticorpo e sinais de controlo de transcrição e tradução apropriados. Estes métodos incluem, por exemplo, técnicas de ADN recombinante in vitro, técnicas de síntese, e recombinação genética in vivo. Ver, por exemplo, as técnicas descritas em Sambrook et ai. (1990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2·“ Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY) e Ausubel et al. (eds., 1998, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY).
Um vetor de expressão compreendendo a sequência de nucleótidos de um anticorpo ou a sequência de nucleótidos de um anticorpo pode ser transferido para uma célula hospedeira por técnicas convencionais (e.g., electroporação, transfecção lipossómica e precipitação com fosfato de cálcio), e as células transfectadas são depois cultivadas por técnicas convencionais para produzir o anticorpo. Em concretizações específicas, a expressão do anticorpo é regulada por um promotor constitutivo, induzível ou específico de tecido.
As células hospedeiras utilizadas para expressar o anticorpo de Ligando recombinante podem ser ou células bacterianas tais como Escherichia coli, ou, preferivelmente, células eucarióticas, especialmente para a expressão de moléculas de imunoglobulina recombinante inteiras. Em particular, células de mamífero, tais como células de ovário de hamster chinês (CHO), em conjunto com um vetor tal como o elemento promotor de gene precoce intermédio principal de citomegalovírus de humano, são um sistema de expressão eficaz para imunoglobulinas (Foecking et al. , 198, Gene 45:101; Cockett et al., 1990, BioTechnology 8:2).
Uma variedade de sistemas de vetor de expressão em hospedeiro pode ser utilizada para expressar os Ligandos de imunoglobulina. Estes sistemas de expressão em hospedeiro representam veículos pelos quais as sequências de codificação do anticorpo podem ser produzidas e subsequentemente purificadas, mas representam também células que, quando transformadas ou transfectadas com as sequências de codificação de nucleótidos apropriadas, podem expressar uma molécula de imunoglobulina de Ligando in situ. Estas incluem, mas não estão limitados a, microrganismos tais como bactérias (e.g.f E. coli e B. subtilis) transformadas com vetores de expressão recombinantes de ADN de bacteriófago, ADN de plasmideo ou ADN de cosmideo contendo sequências de codificação de imunoglobulina; levedura (e.g., Saccharomyces, Pichia) transformada com vetores expressão de levedura recombinantes contendo sequências de codificação de imunoglobulina; sistemas de células de inseto com vetores de expressão de virus recombinantes (e.g., baculovirus) contendo as sequências de codificação de imunoglobulina; sistemas de células de planta infetadas com vetores de expressão de virus recombinantes (e.g., virus do mosaico da couve-flor (CaMV) e virus do mosaico do tabaco (TMV)) ou transformadas com vetores de expressão de plasmideo recombinantes (e.g., plasmideo Ti) contendo sequências de codificação de imunoglobulina; ou sistemas de células de mamífero (e.g., células COS, CHO, BH, 293, 293T, 3T3) alojando construções de expressão recombinantes contendo promotores obtidos a partir do genoma de células de mamífero (e.g., promotor de metalotioneina) ou a partir de vírus de mamífero (e.g., o promotor tardio de adenovirus; o promotor 7.5K de vírus vacínia).
Em sistemas bacterianos, podem ser selecionados vantajosamente vários vetores de expressão dependendo da utilização pretendida para o anticorpo que está a ser expresso. Por exemplo, quando se pretende produzir uma grande quantidade de uma tal proteína, poderão ser desejáveis vetores que dirigem a expressão de níveis elevados de produtos de proteína de fusão que são facilmente purificados. Estes vetores incluem, mas não estão limitados a, o vetor de expressão de E. coli pUR278 (Ruther et ai., 1983, EMBO J. 2:1791), no qual a sequência de codificação de anticorpo pode ser ligada individualmente no vetor em moldura (in frame) com a região de codificação lac Z de modo a produzir uma proteína de fusão; vetores pIN (Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109; Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:550 5509); e outros. Podem também ser utilizados vetores pGEX para expressar polipéptidos estranhos como proteínas de fusão com glutationa-S-transferase (GST). Em geral, estas proteínas de fusão são solúveis e podem ser facilmente purificadas a partir de células lisadas por adsorção e ligação a uma matriz de glutationa-pérolas de agarose seguindo-se eluição na presença de glutationa livre. Os vetores pGEX são desenhados para incluir locais de clivagem de protease de fator Xa ou trombina tal gue o produto génico alvo clonado possa ser libertado a partir da porção GST.
Num sistema de inseto, o vírus de poliedrose nuclear de Autographa californica (AcNPV) ou o vírus análogo de Drosophila melanogaster é utilizado como um vetor para expressar genes estranhos. 0 vírus desenvolve-se em células de Spodoptera frugiperda. A seguência de codificação de anticorpo pode ser clonada individualmente em regiões não essenciais (por exemplo o gene de poliedrina) do vírus e colocada sob controlo de um promotor de AcNPV (por exemplo o promotor de poliedrina).
Em células hospedeiras de mamífero, podem ser utilizados vários sistemas de expressão de base virai. Em casos onde se utiliza adenovirus como um vetor de expressão, a sequência de codificação de anticorpo de interesse pode ser ligada a um complexo de controlo de transcrição/tradução de adenovirus, e.g., o promotor tardio e a sequência líder tripartida. Este gene quimérico pode depois ser inserido no genoma de adenovirus por recombinação in vitro ou in vivo. A inserção numa região não essencial do genoma virai (e.g., região El ou E3) resulta num vírus recombinante que é viável e capaz de expressar a molécula de imunoglobulina em hospedeiros infetados (e.g., ver Logan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 81:355-359). Podem também ser requeridos sinais de iniciação específicos para tradução eficiente de sequências de codificação de anticorpo inseridas. Estes sinais incluem o codão de iniciação ATG e sequências adjacentes. Adicionalmente, o codão de iniciação tem de estar em fase com a moldura de leitura da sequência de codificação desejada para assegurar a tradução de toda a inserção. Estes sinais de controlo de tradução e codões de iniciação exógenos podem ser de várias origens, tanto naturais como sintéticas. A eficiência de expressão pode ser melhorada pela inclusão de elementos apropriados de intensificador de transcrição, terminadores de transcrição, etc. (ver Bittner et ai., 1987, Methods in Enzymol. 153:51-544) .
Adicionalmente, uma estirpe de células hospedeiras pode ser escolhida para modular a expressão das sequências inseridas, ou modificar e processar o produto génico do modo especifico desejado. Estas modificações (e.g., glicosilação) e processamento (e.g., clivagem) de produtos de proteína podem ser importantes para a função da proteína. Diferentes células hospedeiras têm mecanismos característicos e específicos para o processamento pós-tradução e modificação de proteínas e produtos génicos. Linhas de células ou sistemas de hospedeiro apropriados podem ser escolhidos para assegurar a modificação e processamento corretos da proteína estranha expressa. Para este propósito, podem-se utilizar células hospedeiras eucarióticas que possuem a maquinaria celular para o processamento apropriado do transcrito primário, glicosilação e fosforilação do produto de gene. Estas células hospedeiras de mamífero incluem, mas não estão limitadas a, CHO, VERY, BH, Hela, COS, MDCK, 293, 293T, 3T3, WI38, BT483, Hs578T, HTB2, BT20 e T47D, CRL7030 e Hs578Bst.
Para produção de longo prazo de proteínas recombinantes com um elevado rendimento, prefere-se a expressão estável. Por exemplo, podem-se produzir por engenharia linhas de células que expressam estavelmente um anticorpo. Em vez de se utilizarem vetores de expressão que contêm origens de replicação virais, células hospedeiras podem ser transformadas com ADN controlado por elementos de controlo de expressão apropriados (e.g., promotor, intensificador, sequências, terminadores de transcrição, locais de poliadenilação, etc.), e um marcador seleccionável. Após a introdução do ADN estranho, as células produzidas por engenharia podem ser deixadas crescer durante 1-2 dias num meio enriquecido, e depois são mudadas para um meio seletivo. 0 marcador seleccionável no plasmídeo recombinante confere resistência à seleção e permite às células integrarem estavelmente o plasmídeo nos seus cromossomas e crescerem para formar foci que por sua vez podem ser clonados e expandidos em linhas de células. Este método pode ser vantajosamente utilizado para produzir por engenharia linhas de células que expressam o anticorpo. Estas linhas de células produzidas por engenharia podem ser particularmente úteis no rastreio e avaliação de antigénios de tumor que interagem diretamente ou indiretamente com o Ligando de anticorpo.
Podem-se utilizar vários sistemas de seleção, incluindo mas não limitados aos genes de virus herpes simplex de timidina-quinase (Wigler et al., 1977, Cell 11:223), hipoxantina-guanina-fosforribosiltransferase (Szybalska & Szybalski, 192, Proc. Natl. Acad Sei. USA 48:202) e adenina-fosforribosiltransferase (Lowy et al., 1980, Cell 22:817) que podem ser utilizados em células tk-, hgprt- ou aprt-, respetivamente. Também, a resistência antimetabolito pode ser utilizada como a base de seleção para os genes seguintes: dhfr, que confere resistência a metotrexato (Wigler et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 77:357; O'Hare et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 78:1527); gpt, que confere resistência a ácido micofenólico (Mulligan & Berg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072); neo, que confere resistência ao aminoglicósido G-418 (Clinical Pharmacy 12:488-505; Wu e Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95; Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596; Mulligan, 1993, Science 260:926-932; e Morgan e Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217; Maio, 1993, TIB TECH 11 (5):155-215) e hygro, que confere resistência a higromicina (Santerre et al., 1984, Gene 30:147) . Métodos habitualmente conhecidos na especialidade da tecnologia de ADN recombinante que podem ser utilizados são descritos em Ausubel et al. (eds., 1993, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY; Kriegler, 1990, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY; e nos Capítulos 12 e 13, Dracopoli et al. (eds), 1994, Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY; Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol. 150:1).
Os níveis de expressão de um anticorpo podem ser aumentados por amplificação de vetor (para uma revisão, ver Bebbington e Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3. (Academic Press, New York, 1987)). Quando um marcador no sistema de vetor que expressa urn anticorpo é amplificável, um aumento no nivel de inibidor presente na cultura de células hospedeiras aumentará o número de cópias do gene marcador. Uma vez que a região amplificada está associada à sequência de nucleótidos do anticorpo, a produção do anticorpo também aumentará (Crouse et al., 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257) . A célula hospedeira pode ser cotransfetada com dois vetores de expressão do invento, o primeiro vetor codificando um polipéptido derivado da cadeia pesada e o segundo vetor codificando um polipéptido derivado da cadeia leve. Os dois vetores podem conter marcadores selecionáveis idênticos que permitem a expressão igual de polipéptidos de cadeia pesada e cadeia leve. Alternativamente, um único vetor pode ser utilizado para codificar ambos os polipéptidos de cadeia pesada e leve. Nestas situações, a cadeia leve deverá ser colocada antes da cadeia pesada para evitar um excesso de cadeia pesada livre tóxica (Proudfoot, 1986, Nature 322:52; Kohler, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:2197) . As sequências de codificação para as cadeias pesada e leve podem compreender ADNc ou ADN genómico.
Após o anticorpo ter sido expresso recombinantemente, pode ser purificado utilizando qualquer método conhecido na especialidade para purificação de um anticorpo, por exemplo, por cromatografia (e.g., permuta iónica, afinidade, particularmente por afinidade para o antigénio específico após Proteína A, e cromatografia de coluna de tamanhos), centrifugação, solubilidade diferencial ou por qualquer outra técnica padrão para a purificação de proteínas.
5.7 SÍNTESE DOS COMPOSTOS DO INVENTO
Esta secção contém informação geral sobre a síntese de conjugados ligando-fármaco e seus intermediários. A sua divulgação é mais ampla que o âmbito do presente invento conforme definido nas reivindicações e inclui informação sobre compostos análogos a compostos úteis no presente invento.
Como descrito com mais detalhes abaixo, os Compostos do invento são convenientemente preparados utilizando um Ligador possuindo dois ou mais locais reativos para ligação ao Fármaco e Ligando. Num aspeto do invento, um Ligador possui um Local Reativo que possui um grupo electrófilo que é reativo em relação a um grupo nucleófilo presente num Ligando. Grupos nucleófilos úteis num Ligando incluem mas não estão limitados a, grupos sulfidrilo, hidroxilo a amino. O heteroátomo do grupo nucleófilo de um Ligando é reativo em relação a um grupo electrófilo num Ligador e forma uma ligação covalente com uma unidade de Ligador. 0 grupo electrófilo é um grupo maleimida. 0 grupo electrófilo proporciona um local conveniente para ligação ao Ligando. É também útil como local reativo um grupo funcional carbonato num Ligador que pode reagir com um grupo amino de um Fármaco para formar uma ligação carbamato.
Tipicamente, Fármacos de base peptídica podem ser preparados por formação de uma ligação de péptido entre dois ou mais aminoácidos e/ou fragmentos de péptido. Estas ligações peptídicas podem ser preparadas, por exemplo, de acordo com o método de síntese de fase líquida (ver E. Schroder e K. Lúbke, "The Peptides", volume 1, págs. 76-136, 1965, Academic Press) que é bem conhecido no campo da química de péptidos.
Numa concretização, um Fármaco é preparado por combinação de um equivalente quase estequiométrico de um dipéptido e um tripéptido, preferivelmente numa reação num único vaso sob condições de condensação adequadas. Esta abordagem é ilustrada nos Esquemas 5-7 seguintes. Assim, o tripéptido 6 pode ser preparado como se mostra no Esquema 5, e o dipéptido 9 pode ser preparado como se mostra no Esquema 6. Os dois fragmentos 6 e 9 podem ser condensados para proporcionar um Fármaco 10 como se mostra no Esquema 7. A síntese de um Extensor ilustrativo possuindo um grupo maleimida electrófilo é ilustrada nos Esquemas 8-9. Métodos de síntese gerais úteis para a síntese de um Ligador estão descritos no Esquema 10. O Esquema 11 mostra a construção de uma unidade de Ligador possuindo um grupo val-cit, um grupo maleimida electrófilo e um grupo de Espaçador autodestrutivo PAB. 0 Esquema 12 ilustra a síntese de um Ligador possuindo um grupo phe-lys, um grupo maleimida electrófilo, com e sem o grupo Espaçador autodestrutivo PAB. O Esquema 13 apresenta um esboço geral para a síntese de um Composto de Fármaco-Ligador, enquanto o Esquema 14 apresenta uma via alternativa para a preparação de um Composto de Fármaco-Ligador. 0 Esquema 15 ilustra a síntese de um ligador ramificado contendo um grupo BHMS. 0 Esquema 16 descreve a ligação de um Ligando a um Composto de Fármaco-Ligador para formar um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando, e o Esquema 17 ilustra a síntese de Conjugados de Fármaco-Ligador-Ligando possuindo 2 ou 4 fármacos por Ligando.
Esquema 5
Como ilustrado no Esquema 5, um aminoácido protegido 1 (onde PG representa um grupo protetor de amina, R4 é selecionado entre hidrogénio, -Ci-Cs alquilo, -C3-C8 carbociclo, -0- (Ci-Cs alquilo) , -arilo, -alquil-arilo, -alquil-(C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo, -alquil-(C3-C8 heterociclo) onde R5 é selecionado entre H e metilo; ou R4 e R5 em conjunto têm a fórmula -(CRaRb)n- onde Ra e Rb são selecionados independentemente entre hidrogénio, -Ci-Cs alquilo e -C3-C8 carbociclo e n é selecionado entre 2, 3, 4, 5 e 6, e formam um anel com o átomo de carbono ao qual estão ligados) é acoplado a éster de t-butilo 2 (onde R6 é selecionado entre -H e -Ci-Cs alquilo; e R7 é selecionado entre hidrogénio, -C1-C8 alquilo, -C3-C8 carbociclo, -0- (Ci-Cs alquilo), -arilo, -alquil-arilo, -alquil-(C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo e -alquil-(C3-C8 heterociclo)) sob condições de acoplamento adequadas, e.g., na presença de PyBrop e di- isopropiletilamina, ou utilizando DCC (ver, por exemplo, Miyazaki, K. et. al. Chem. Pharm. Buli. 1995, 43(10), 1706-1718) .
Grupos protetores PG adequados e métodos de síntese adequados para proteger um grupo amino com um grupo protetor são bem conhecidos na especialidade. Ver, e.g., Greene, T.W. e Wuts, P.G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, 2.a Edição, 1991, John Wiley & Sons. Aminoácidos protegidos preferidos 1 são PG-Ile e, particularmente, PG-Val, enquanto outros aminoácidos protegidos adequados incluem, sem limitação: PG-ciclo-hexilglicina, PG-ciclo-hexilalanina, ácido PG-aminociclopropano-l-carboxílico, ácido PG-aminoisobutírico, PG-fenilalanina, PG-fenilglicina e PG-terc-butilglicina. Z é um grupo protetor preferido. Fmoc é outro grupo protetor preferido. Um éster de t-butilo preferido 2 é o éster de t-butilo de dolaisoleucina. 0 dipéptido 3 pode ser purificado, e.g., utilizando cromatografia, e subsequentemente desprotegido, e.g., utilizando Sb e 10% de Pd-C em etanol quando o PG é benziloxicarbonilo, ou utilizando dietilamina para remoção de um grupo protetor Fmoc. A amina resultante 4 forma rapidamente uma ligação peptídica com um aminoácido 5 (onde R1 é selecionado entre -H, -Ci-Cs alquilo e -C3-C8 carbociclo; e R2 é selecionado entre -H e -Ci-Cs alquilo; ou R1 e R2 em conjunto têm a fórmula -(CRaRb)n- onde Ra e Rb são selecionados independentemente entre -H, -Ci-Cs alquilo e -C3-C8 carbociclo e n é selecionado entre 2, 3, 4, 5 e 6, e formam um anel com o átomo de azoto ao qual estão ligados; e R3 é selecionado entre hidrogénio, -Ci-Cs alquilo, -C3-C8 carbociclo, -O- (Ci-Cs alquilo), -arilo, -alquil-arilo, -alquil- (C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo e -alquil-(C3-C8 heterociclo) ) . N,N-Dialquilaminoácidos são aminoácidos 5 preferidos, tais como N,N- dimetilvalina disponível comercialmente. Outros N,N-dialquilaminoácidos podem ser preparados por bis-alquilação redutiva utilizando procedimentos conhecidos (ver, e.g., Bowman, R.E, Stroud, H.H J. Chem. Soc., 1950, 1342-1340) . Fmoc-Me-L-Val e Fmoc-Me-L-glicina são dois aminoácidos 5 preferidos úteis para a síntese de derivados de iV-monoalquilo. A amina 4 e o aminoácido 5 reagem para proporcionar o tripéptido 6 utilizando reagente de acoplamento DEPC com trietilamina como a base. A metodologia de acoplamento com DEPC e a metodologia de acoplamento com PyBrop ilustrativas mostradas no Esquema 5 são apresentadas no Procedimento Geral A e no Procedimento Geral B, respetivamente. A metodologia ilustrativa para a desproteção de uma amina protegida com Z através de hidrogenação catalítica é apresentada abaixo no Procedimento Geral C.
Procedimento Geral A: Sintese peptídica utilizando DEPC.
Diluem-se aminoácido ou péptido 4 (1,0 eq.) iV-protegido ou N, iV-dis substituído e uma amina 5 (1,1 eq.) com um solvente orgânico aprótico, tal como diclorometano (0,1 a 0,5 M) . Adiciona-se depois uma base orgânica tal como trietilamina ou di-isopropiletilamina (1,5 eq.), seguindo-se DEPC (1,1 eq.). Agita-se a solução resultante, preferivelmente sob árgon, durante até 12 horas ao mesmo tempo que se monitoriza por HPLC ou TLC. Remove-se o solvente in vacuo à temperatura ambiente, e purifica-se o produto em bruto utilizando, por exemplo, HPLC ou cromatografia de coluna "flash" (coluna de sílica gel) . Combinam-se as frações relevantes e concentram-se in vacuo para proporcionar o tripéptido 6 que é seco sob vácuo de um dia para o outro.
Procedimento Geral B: Sintese peptidica utilizando PyBrop. Dilui-se aminoácido 2 (1,0 eq.), opcionalmente possuindo um grupo protetor de carboxilo, com um solvente orgânico aprótico tal como diclorometano ou DME para proporcionar uma solução com uma concentração entre 0,5 e 1,0 mM, e depois adiciona-se di-isopropiletilamina (1,5 eq.) . Adiciona-se aminoácido 1 (1,1 eq.) protegido com Fmoc ou Z como um sólido numa porção, e depois adiciona-se PyBrop (1,2 eq.) à mistura resultante. A reação é monitorizada por TLC ou HPLC, seguindo-se um procedimento de processamento similar ao descrito no Procedimento Geral A.
Procedimento Geral C: Remoção de Z através de hidrogenação catalítica. Dilui-se aminoácido ou péptido 3 protegido com Z com etanol para proporcionar uma solução com uma concentração entre 0,5 e 1,0 mM num vaso adequado, tal como um balão de fundo redondo de parede espessa. Adiciona-se 10% de paládio sobre carbono (5-10% p/p) e coloca-se a mistura reaccional sob uma atmosfera de hidrogénio. O progresso da reação é monitorizado utilizando HPLC e está geralmente completo em 1-2 h. Filtra-se a mistura reaccional através de um leito de celite pré-lavado e, após filtração, lava-se outra vez a celite com um solvente orgânico polar, tal como metanol. Concentra-se a solução de eluente in vacuo para proporcionar um resíduo que é diluído com um solvente orgânico, preferivelmente tolueno. 0 solvente orgânico é depois removido in vacuo para proporcionar a amina desprotegida 4. A Tabela 1 lista exemplos representativos de tripéptidos intermediários (compostos 39-43) que foram preparados de acordo com o Esquema 5.
Tabela 1
Composto X1 X2 39 Fmoc-iV-Me-L-val L-val 40 Fmoc-iV-Me-L-val L-ile 41 Fmoc-iV-Me-gly L-ile 42 dov L-val 43 dov L-ile adov = N, N-dimetil-L-valina 0 dipéptido 9 pode ser facilmente preparado por condensação do aminoácido modificado Boc-dolaproina 7 (ver, por exemplo, Pettit, G.R., et ai. Synthesis, 1996, 719-725), com (IS,2R)-norefedrina, L- ou D-fenilalaninol, ou com p-acetilfenetilamina sintética 8 (Patente dos E.U.A. 3445518 de Shavel et ai.) utilizando agentes de condensação bem conhecidos da química dos péptidos, tais como, por exemplo, DEPC na presença de trietilamina, como se mostra no Esquema 6. 0
Composto 7 pode também ser condensado deste modo com compostos disponíveis comercialmente para formar dipéptidos de fórmula 9. Exemplos de compostos disponíveis comercialmente úteis para este propósito incluem, mas não estão limitados a, norefedrina, efedrina, e seus estereoisómeros (Sigma-Aldrich), L- ou D-fenilalaninol (Sigma-Aldrich), 2-feniletilamina (Sigma-
Aldrich) , 2-(4-aminofenil)etilamina (Sigma-Aldrich), 1,2- etanodiamina-1,2-difenilo (Sigma-Aldrich), ou 4-(2- aminoetil)fenol (Sigma-Aldrich), ou com p-acetilfenetilamina, aril- e heterociclo-amidas de L-fenilalanina preparadas sinteticamente, l-azidometil-2-feniletilamina (preparada a partir de fenilalaninol de acordo com o procedimento geral descrito em J. Chem. Research (S) , 1992, 391), e l—(4 — hidroxifenil)-2-feniletilamina (Publicação de Patente Europeia N.2 0356035 A2) entre outras.
Esquema 6
onde R8 é selecionado independentemente entre -H, -OH, -Ci-Cs alquilo, -C3-C8 carbociclo e -O-(Ci-Cs alquilo); R9 é selecionado entre -H e -Ci-Cs alquilo; e R10 é selecionado entre:
onde Z é -O-, -S-, -NH- ou -N (R14) -; R11 é selecionado entre -H, -OH, -NH2, -NHR14, -N (R14) 2, -Ci-Cs alquilo, -C3-C8 carbociclo, -O- (C1-C8 alquilo), -arilo, -Ci-Cs alquil-arilo, -Ci-Cs alquil-(C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo e -Ci-Cs alquil-(C3-C8 heterociclo) ; ou R11 é um átomo de oxigénio que forma uma unidade carbonilo (C=0) com o átomo de carbono ao qual está ligado e um átomo de hidrogénio neste átomo de carbono está substituído por uma das ligações na ligação dupla (C=0); cada R12 é selecionado independentemente entre -arilo e -C3-C8 heterociclo; R13 é selecionado entre -H, -OH, -NH2, -NHR14, - N (R14) 2, -C1-C8 alquilo, -C3-C8 carbociclo, -O-(Ci-Cs alquilo), -arilo, -C1-C8 alquil-arilo, -Ci-Cs alquil- (C3-C8 carbociclo), -C3-C8 heterociclo e -Ci-Cs alquil- (C3-C8 heterociclo); e cada R14 é independentemente -H ou -Ci-Cs alquilo. A Tabela 2 lista exemplos representativos de dipéptidos (Compostos 44-48) que foram preparados de acordo com o Esquema 6.
0 Esquema 7 ilustra um procedimento útil para acoplamento de tripéptido 6 e de dipéptido 9 para formar Fármaco 10. 0 acoplamento de 6 e 9 pode ser efetuado utilizando um ácido forte, e.g. TFA, para facilitar a clivagem de Boc e do éster de t-butilo, do dipéptido 9 e do tripéptido 6, respetivamente, seguindo-se condições de condensação, e.g., utilizando DEPC, ou reagente de acoplamento similar, na presença de excesso de base (trietilamina ou equivalente) para proporcionar Fármaco 10.
Esquema 7
Um procedimento ilustrativo para a síntese de Fármaco 10 como ilustrado no Esquema 7 é apresentado abaixo no Procedimento Geral D. 0 grupo R10 de um Fármaco de fórmula geral 10 pode ser modificado adicionalmente, se desejado, para incluir um grupo funcional que permita que o fármaco seja ligado a um Ligador. Exemplos de modificações úteis para o grupo R10 de um Fármaco 10 incluem mas não estão limitados às transformações químicas descritas abaixo.
Quando R10 é
o grupo hidroxilo de R10 pode ser feito reagir com ácidos carboxílicos ou derivados de ácido carboxílico disponíveis comercialmente ou obtidos sinteticamente, incluindo mas não limitados a ésteres carboxílicos, cloretos de ácido, anidridos e carbonatos para proporcionar os correspondentes ésteres de acordo com métodos bem conhecidos na especialidade. Reagentes de acoplamento, incluindo, mas não limitados a DCC/DMAP e EDCl/HOBt, podem ser úteis naquelas reações de acoplamento entre álcoois e ácidos carboxílicos ou derivados de ácido carboxílico. Numa concretização preferida os ácidos carboxílicos são ácidos arilcarboxílicos substituídos ou não substituídos, por exemplo, ácido 4-aminobenzóico. Assim, a condensação de um grupo hidroxilo do grupo R10 que se mostra acima com ácidos carboxílicos proporciona fármacos da estrutura geral 10 onde R10 é
ou
e onde R11, R12, R14 e R15 são como aqui anteriormente descrito e X é selecionado entre -OH, -NH2 e -NHR14.
Quando R10 é
o grupo azido do fármaco pode ser reduzido (para um exemplo ver J. Chem. Research (S) , 1992, 391) para proporcionar o derivado de amino correspondente onde R10 é
cujo grupo amino pode ser feito reagir com o grupo carboxilo de um ácido carboxílico sob condições gerais de acoplamento de péptido para proporcionar fármacos de estrutura geral 10, onde R10 é
ou
e onde R11, R12, R14 e R15 são como aqui anteriormente descrito e X é selecionado entre -OH, -NH2 e -NHR14. Ácidos carboxílicos úteis no que se refere ao anterior incluem, mas não estão limitados a, ácido 4-aminobenzóico, ácido p-acetilbenzóico e ácido 2-amino-4-tiazolocarboxílico (Tyger Scientific, Inc., Ewing, NJ).
Um grupo amino protegido com Fmoc pode estar presente num grupo R10 contendo amina do Fármaco 10 (e.g., como ilustrado na Tabela 2) . 0 grupo Fmoc é removível da amina protegida utilizando dietilamina (ver Procedimento Geral E como um exemplo ilustrativo abaixo descrito).
Procedimento Geral D: Sintese de fármaco. Dilui-se uma mistura de dipéptido 9 (1,0 eq.) e tripéptido 6 (1 eq.) com um solvente orqânico aprótico, tal como diclorometano, para formar uma solução 1,0 M, depois adiciona-se um ácido forte, tal como ácido trifluoroacético (1/2 v/v) e agita-se a mistura resultante sob uma atmosfera de azoto durante horas a 0°C. A reação pode ser monitorizada utilizando TLC ou, preferivelmente, HPLC. Remove-se o solvente in vacuo e seca-se o resíduo resultante azeotropicamente duas vezes, preferivelmente utilizando tolueno. Seca-se o resíduo resultante sob vácuo elevado durante 12 h e depois dilui-se com um solvente orgânico aprótico, tal como diclorometano. Adiciona-se depois uma base orgânica tal como trietilamina ou di-isopropiletilamina (1,5 eq.), seguindo-se quer PyBrop (1,2 eq.) quer DEPC (1,2 eq.) dependendo da funcionalidade química no resíduo. Monitoriza-se a reação quer por TLC quer HPLC e após estar completa, submete-se a mistura reaccional a um procedimento de processamento similar ou idêntico ao descrito no Procedimento Geral A.
Procedimento Geral E: Remoção de Fmoc utilizando dietilamina. Dilui-se um Fármaco 10 protegido com Fmoc com um solvente orgânico aprótico tal como diclorometano e adiciona-se dietilamina (½ v/v) à solução resultante. Monitoriza-se o progresso da reação por TLC ou HPLC e tipicamente esta está completa em 2 h. Concentra-se a mistura reaccional in vacuo e seca-se o resíduo resultante azeotropicamente, preferivelmente utilizando tolueno, e depois seca-se sob vácuo elevado para proporcionar Fármaco 10 possuindo um grupo amino desprotegido.
Assim, os métodos acima são úteis para a preparação de Fármacos que podem ser utilizados no presente invento.
Para preparar um Composto de Fármaco-Ligador do presente invento, faz-se reagir o Fármaco com um local reativo no Ligador. Em geral, o Ligador pode ter a estrutura:
quando estão presentes tanto uma unidade de Espaçador (-Y-) como uma Unidade de Extensor (-A-).
Em geral, um Ligador adequado tem uma unidade de Aminoácido ligada a uma Unidade de Extensor e a uma Unidade de Espaçador. 0 Local Reativo 1 está presente na extremidade do Espaçador e o Local Reativo 2 está presente na extremidade do Extensor.
Numa concretização do invento, o Local Reativo N.2 1 é reativo com um átomo de azoto do Fármaco, e o Local Reativo N.2 2 é reativo com um grupo sulfidrilo no Ligando. Os Locais Reativos 1 e 2 podem ser reativos com diferentes grupos funcionais.
Num aspeto do invento, o Local Reativo N.2 1 é
Noutro aspeto do invento, o Local Reativo N.2 1 é
onde R é -Br, -Cl, -O-Su ou -0-(4-nitrofenilo) .
Ligadores possuindo
no Local Reativo N.2 1 onde R é -Br ou -Cl podem ser preparados a partir de Ligadores possuindo
no Local Reativo N.2 1 fazendo reagir o grupo -C00H com PX3 ou PX5, onde X é -Br ou -Cl. Alternativamente, ligadores possuindo
' no Local Reativo N.2 1 podem ser preparados a partir de Ligadores possuindo
no Local
Reativo N.2 1 fazendo reagir o grupo -C00H com cloreto de tionilo. Para uma discussão geral da conversão de ácidos carboxilicos em halogenetos de acilo, ver March, Advanced Organic Chemistry - Reactions, Mechanisms and Structure, 4.â Ed., 1992, John Wiley and Sons, New York, págs. 437-438.
Noutro aspeto do invento, o Local Reativo N.2 1 é
Ainda noutro aspeto do invento, o Local Reativo N.2 1 é
onde R é -Cl, -O-CH(Cl)CCI3 ou -0-(4-nitrofenilo).
Ligadores possuindo
no Local Reativo N.2 1 podem ser preparados a partir de Ligadores possuindo
no Local
Reativo N. 2 1 fazendo reagir o grupo -OH com fosgénio ou trifosgénio para formar o cloroformato correspondente.
Ligadores possuindo
no Local Reativo N.2 1 onde R é -O-CH (Cl)CCI3 ou -0-(4-nitrofenilo) podem ser preparados a partir de Ligadores possuindo
no Local Reativo N.2 1 fazendo reagir o grupo -0C(0)Cl com HO-CH (Cl)CCI3 ou HO-(4-nitrofenilo), respetivamente. Para uma discussão sobre esta química, ver March, Advanced Organic Chemistry - Reactions, Mechanisms and Structure, 4·“ Ed., 1992, John Wiley and Sons, New York, pág. 392.
Num aspeto adicional do invento, o Local Reativo N.2 1 é
onde X é -F, -Cl, -Br, -I, ou um grupo rejeitável tal como -0-mesilo, -0-tosilo ou -0-triflato.
Ligadores possuindo
no Local Reativo N.2 1 onde X é -0-mesilo, -0-tosilo e 0-triflato podem ser preparados a partir de Ligadores possuindo
no Local Reativo N.2 1 fazendo reagir o grupo -OH com vários reagentes, incluindo HC1, SOCI2, PCls, PC13 e POCI3 (onde X é Cl) ; HBr, PBr3, PBr5 e S0Br2 (onde X é Br) ; Hl (onde X é I); e CH3CH2NSF3 (DAST) , SF4, SeF4 e fluoreto de p-toluenossulfonilo (onde X é F). Para uma discussão geral sobre a conversão de álcoois em halogenetos de alquilo, ver March, Advanced Organic Chemistry - Reactions, Mechanisms and Structure, 4·“ Ed., 1992, John Wiley and Sons, New York, págs. 431-433.
Ligadores possuindo
no Local Reativo N.2 1 onde X é -O-mesilo, -O-tosilo e -O-triflato, podem ser preparados a partir de Ligadores possuindo
no Local Reativo N.2 1 fazendo reagir o grupo -OH com vários reagentes de adição de mesilo, tosilo e triflato, respetivamente. Estes reagentes e métodos para a sua utilização serão bem conhecidos de um técnico competente na especialidade da síntese orgânica. Para uma discussão geral de mesilo, tosilo e triflatos como grupos rejeitáveis, ver March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure, 4·“ Ed., 1992, John Wiley and Sons, New York, págs. 353-354.
Numa concretização, quando está presente uma unidade de Espaçador (-Y-), o Local Reativo N.2 1 é
onde R é -Cl, -O-CH (Cl)CCI3 ou -0-(4-nitrofenilo) e X é -F, -Cl, -Br, -I, ou um grupo rejeitável tal como -O-mesilo, -O-tosilo ou -O-triflato.
Noutro aspeto do invento, o Local Reativo N.2 1 é
Ainda noutro aspeto do invento, o Local Reativo N.2 1 é um carbonato de p-nitrofenilo possuindo a fórmula
Num aspeto do invento, o Local Reativo N.2 2 é um grupo aceitador de tiol que é um grupo maleimida possuindo a fórmula
Ligadores úteis podem ser obtidos através de fontes comerciais, tais como Molecular Biosciences Inc. (Boulder, CO), ou sintetizados de acordo com procedimentos descritos na Patente dos E.U.A. N.2 6214345 de Firestone et al. , que se resumem nos Esquemas 8-10 seguintes.
Esquema 8
onde X é -CH2- ou -CH2OCH2-; e n é um inteiro que ou varia de 0-10 quando X é -CH2- ; ou de 1-10 quando X é -CH2OCH2-. O método que se mostra no Esquema 9 combina maleimida com um glicol sob condições de Mitsunobu para preparar um Extensor de polietilenoglicol-maleimida (ver, por exemplo, Walker, M.A. J. Org. Chem. 1995, 60, 5352-5), seguindo-se instalação de um grupo de Local Reativo de p-nitrofenil-carbonato.
Esquema 9
onde E é -CH2- ou -CH2OCH2-; e é um inteiro que varia de 0-8;
Alternativamente, extensores de PEG-maleimida e PEG-haloacetamida podem ser preparados como descrito por Frisch, et al., Bioconjugate Chem. 1996, 7, 180-186. O Esquema 10 ilustra uma síntese geral de uma unidade de Ligador ilustrativa contendo um grupo de Extensor maleimida e opcionalmente um Espaçador autodestrutivo de p-aminobenziléter.
Esquema 10
onde Q é -Ci-Cs alquilo, -O- (Ci-Cs alquilo), -halogéneo, -nitro ou -ciano; m é um inteiro que varia de 0-4; e n é um inteiro que varia de 0-10.
Extensores úteis podem ser incorporados num Ligador utilizando os intermediários disponíveis comercialmente na Molecular Biosciences (Boulder, CO) descritos abaixo por utilização de técnicas conhecidas de síntese orgânica.
Extensores de fórmula (Ilia) podem ser introduzidos num Ligador fazendo reagir os intermediários seguintes com o terminal N de uma unidade de Aminoácido como ilustrado nos Esquemas 11 e 12:
onde n é um inteiro que varia de 1-10 e T é -H ou -SCbNa;
onde n é um inteiro que varia de 0-3;
Unidades de Extensor de fórmula (Illb) podem ser introduzidas num Ligador fazendo reagir os intermediários seguintes com o terminal N de uma unidade de Aminoácido:
onde X é -Br ou -I; e
Unidades de Extensor de fórmula (IV) podem ser introduzidas num Ligador fazendo reagir os intermediários seguintes com o terminal N de uma unidade de Aminoácido:
Unidades de Extensor de fórmula (Va) podem ser introduzidas num Ligador fazendo reagir os intermediários seguintes com o terminal N de uma unidade de Aminoácido:
Outros Extensores úteis no invento podem ser sintetizados de acordo com procedimentos conhecidos. Extensores de amino-oxi da fórmula a seguir apresentada podem ser preparados por tratamento de halogenetos de alquilo com N-Boc-hidroxilamina de acordo com procedimentos descritos em Jones, D.S. et ai., Tetrahedron Letters, 2000, 41(10), 1531-1533; e Gilon, C. et al., Tetrahedron, 1967, 23(11), 4441-4447.
onde -R17- é selecionado entre -Ci-Cio alquileno-, -C3-C8 carbociclil-, -O-(Ci-Csalquil)-, -arileno-, -C1-C10 alquileno-arileno-, -arileno-Ci-Cio alquileno-, -C1-C10 alquileno- (C3-C8 carbociclil)-, - (C3-C8 carbociclil) -C1-C10 alquileno-, -C3-C8 heterociclil-, -C1-C10 alquileno-(C3-C8 heterociclil)-, - (C3-C8 heterociclil)-C1-C10 alquileno-, - (CH2CH2O) r~, - (CH2CH2O) r-CH2-; e r é um inteiro que varia de 1-10;
Extensores de isotiocianato da fórmula a seguir apresentada podem ser preparados a partir de cloretos de ácido isotiocianatocarboxílico como descrito em Angew. Chem., 1975, 87(14), 517.
onde -R17- é como aqui descrito. O Esquema 11 mostra um método para a obtenção de um Ligador de dipéptido val-cit possuindo um Extensor de maleimida e opcionalmente um Espaçador autodestrutivo de p-aminobenzilo.
Esquema 11
onde Q é -Ci-Cs alquilo, -0-(Ci-Cs alquilo), -halogéneo, -nitro ou -ciano; e m é um inteiro que varia de 0-4. 0 Esquema 12 ilustra a síntese de uma unidade de Ligador de dipéptido phe-lys(Mtr) possuindo uma Unidade de Extensor maleimida e uma unidade de Espaçador autodestrutivo p-aminobenzilo. 0 material de partida 23 (lys(Mtr)) está disponível comercialmente (Bachem, Torrance, CA) ou pode ser preparado de acordo com Dubowchik, et al. Tetrahedrom Letters 1997, 3_8, 5257-60.
Esquema 12
onde Q é -Ci-Cs alquilo, -0- (Ci-Cs alquilo), -haloqéneo, -nitro ou -ciano; e m é um inteiro que varia de 0-4.
Como se mostra no Esquema 13, pode-se fazer reagir um Ligador com um grupo amino de um Fármaco 10 para formar um Composto de Fármaco-Ligador que contém um grupo amida ou carbamato, ligando a unidade de Fármaco à unidade de Ligador. Quando o Local Reativo N.2 1 é um grupo ácido carboxílico, como no Ligador 29, a reação de acoplamento pode ser realizada utilizando HATU ou PyBrop e uma base de amina apropriada, resultando num Composto de Fármaco-Ligador 30, contendo uma ligação amida entre a unidade de Fármaco e a unidade de Ligador. Quando o Local Reativo N.2 1 é um carbonato, como no Ligador 31, o Ligador pode ser acoplado ao Fármaco utilizando HOBt numa mistura de DMF/piridina para proporcionar um Composto de Fármaco-Ligador 32, contendo uma ligação carbamato entre a unidade de Fármaco e a unidade de Ligador.
Quando o Local Reativo N.2 1 é um grupo hidroxilo, tal como no Ligador 33, o Ligador pode ser acoplado com um grupo fenol de um Fármaco utilizando química de Mitsunobu para proporcionar um Composto de Fármaco-Ligador 34 possuindo uma ligação éter entre a unidade de Fármaco e a unidade de Ligador.
Alternativamente, quando o Local Reativo N.2 1 é um bom grupo rejeitável, tal como no Ligador 70, o Ligador pode ser acoplado com um grupo hidroxilo ou um grupo amina de um Fármaco através de um processo de substituição nucleófila para proporcionar um Composto de Fármaco-Ligador possuindo uma ligação éter (34) ou uma ligação amina (71) entre a unidade de Fármaco e a unidade de Ligador. Métodos ilustrativos úteis para ligar um Fármaco a um Ligando para formar um Composto de Fármaco-Ligador são ilustrados no Esquema 13 e são delineados nos Procedimentos Gerais G-J.
Esquema 13
Procedimento Geral G: Formação de amida utilizando HATU.
Diluem-se um Fármaco 10 (1,0 eq.) e um Ligador de N protegido contendo um Local Reativo de ácido carboxílico (1,0 eq.) com um solvente orgânico adequado, tal como diclorometano, e trata-se a solução resultante com HATU (1,5 eq.) e uma base orgânica, preferivelmente piridina (1,5 eq.). Deixa-se a mistura reaccional agitar sob uma atmosfera inerte, preferivelmente árgon, durante 6 h, período durante o qual a mistura reaccional é monitorizada utilizando HPLC. Concentra-se a mistura reaccional e purifica-se o resíduo resultante utilizando HPLC para proporcionar a amida 30.
Procedimento Geral H: Formação de carbamato utilizando HOBt. Dilui-se uma mistura de um Ligador 31 possuindo um Local Reativo de carbonato de p-nitrofenilo (1,1 eq.) e Fármaco 10 (1,0 eq.) com um solvente orgânico aprótico, tal como DMF, para proporcionar uma solução com uma concentração de 50-100 mM, e trata-se a solução resultante com HOBt (2,0 eq.) e coloca-se sob uma atmosfera inerte, preferivelmente árgon. Deixa-se a mistura reaccional agitar durante 15 min, e depois adiciona-se uma base orgânica, tal como piridina (1/4 v/v), e monitoriza-se o progresso da reação utilizando HPLC. O Ligador é tipicamente consumido em 16 h. Concentra-se depois a mistura reaccional in vacuo e purifica-se o resíduo resultante utilizando, por exemplo, HPLC para proporcionar o carbamato 32.
Procedimento Geral I: Formação de éter utilizando química de Mitsunobu. Dilui-se um Fármaco de fórmula geral 10, que contém um grupo hidroxilo livre, com THF para preparar uma solução 1,0 Me a esta solução adiciona-se um Ligador (1,0 eq) contendo um grupo hidroxi no Local Reativo N.2l (33), seguido de trifenilfosfina (1,5 eq.). Coloca-se a mistura reaccional sob uma atmosfera de árgon e arrefece-se até 0°C. Adiciona-se depois DEAD (1,5 eq.) gota a gota através de seringa e deixa-se a mistura reaccional agitar à temperatura ambiente enquanto se monitoriza utilizando HPLC. A reação está tipicamente completa em 0,5-12 h, dependendo dos substratos. Dilui-se a mistura reaccional com água (em volume igual ao do THF) e extrai-se a mistura reaccional para EtOAc. Lava-se a fase de EtOAc sequencialmente com água e salmoura, depois seca-se sobre MgSCb e concentra-se. Purifica-se o resíduo resultante através de cromatografia de coluna "flash" utilizando u eluente adequado para proporcionar o éter 34.
Procedimento Geral J: Formação de éter/amina através de substituição nucleófila. Dilui-se um Fármaco de fórmula geral 10, que contém um grupo hidroxilo livre ou um grupo amina livre, com um solvente aprótico polar, tal como THF, DMF ou DMSO, para preparar uma solução 1,0 M e a esta solução adiciona-se uma base não nucleófila (cerca de 1,5 eq.) , tal como piridina, di-isopropiletilamina ou trietilamina. Deixa-se a mistura reaccional a agitar durante cerca de 1 hora, e à solução resultante adiciona-se uma solução aproximadamente 1,0 M de Ligador 70 num solvente aprótico polar, tal como THF, DMF ou DMSO. Agita-se a mistura reaccional resultante sob uma atmosfera inerte enquanto é monitorizada utilizando TLC ou HPLC. A reação está tipicamente completa em 0,5-12 h, dependendo dos substratos. Dilui-se a mistura reaccional com água (em volume igual ao volume da mistura reaccional) e extrai-se para EtOAc. Lava-se a fase de EtOAc sequencialmente com água, HC1 1 N, água, e salmoura, depois seca-se sobre MgS04 e concentra-se. Purifica-se o resíduo resultante através de cromatografia de coluna "flash" utilizando um eluente adequado para proporcionar um éter de fórmula 34 ou uma amina de fórmula 71, dependendo de se o fármaco 10 continha um grupo hidroxilo livre ou um grupo amina livre.
Um método alternativo para preparar Compostos de Fármaco-Ligador do invento é delineado no Esquema 14. Utilizando o método do Esquema 14, o Fármaco é ligado a uma unidade parcial de Ligador (19a, por exemplo), que não possui uma Unidade de Extensor ligada. Isto proporciona o intermediário 35, que tem uma unidade de Aminoácido possuindo um terminal N protegido com Fmoc. Remove-se então o grupo Fmoc e liga-se depois o intermediário de amina resultante 36 a uma Unidade de Extensor através de uma reação de acoplamento catalisada utilizando PyBrop ou DEPC. No Esquema 14 ilustra-se a construção de Compostos de Fármaco-Ligador contendo quer um Extensor de bromoacetamida 39 quer um Extensor de PEG-maleimida 38.
Esquema 14
onde Q é -Ci-Cs alquilo, -0- (Ci-Cs alquilo), -halogéneo, -nitro ou -ciano; e m é um inteiro que varia de 0-4.
No Esquema 15 mostra-se uma metodologia útil para a preparação de uma unidade de Ligador contendo um espaçador ramificado.
Esquema 15
0 Esquema 15 ilustra a síntese de um ligador de dipéptido val-cit possuindo uma Unidade de Extensor maleimida e uma unidade bis(4-hidroximetil)estireno (BHMS). A síntese do intermediário de BHMS (75) foi melhorada a partir de procedimentos anteriores da literatura (ver Publicação Internacional N.2 WO 9813059 a Firestone et al. , e Crozet, M.P.; Archaimbault, G.; Vanelle, P.; Nouguier, R. Tetrahedron Lett. 1985, 26, 5133-5134) e utiliza como materiais de partida (4-nitrobenzil)fosfonato de dietilo (72) disponível comercialmente e 2,2-dimetil-1,3-dioxan-5-ona (73) disponível comercialmente. Os Ligadores 77 e 79 podem ser preparados a partir do intermediário 75 utilizando a metodologia descrita no Esquema 11. 0 Esquema 16 ilustra a metodologia útil para a preparação de conjugados de Fármaco-Ligador-Ligando do invento possuindo cerca de 2 a cerca de 4 fármacos por anticorpo.
Esquema 16
Procedimento Geral K: Preparação de Conjugados possuindo cerca de 2 a cerca de 4 fármacos por anticorpo.
Redução Parcial do Anticorpo
Em geral, para preparar conjugados possuindo 2 fármacos por anticorpo, o anticorpo relevante é reduzido utilizando um agente de redução tal como ditiotreitol (DTT) ou tricarboniletilfosfina (TCEP) (cerca de 1,8 equivalentes) em PBS com DTPA 1 mM, ajustado a pH 8 com borato 50 mM. Incuba-se a solução a 37°C durante 1 hora, purifica-se utilizando uma coluna de dessalinização G25 de 50 ml equilibrada em PBS/DTPA 1 mM a 4°C. A concentração de tiol pode ser determinada de acordo com o Procedimento Geral M, a concentração de proteína pode ser determinada dividindo o valor de A280 pelo coeficiente de extinção de 1,58 (mg/ml) , e a proporção de tiol para anticorpo pode ser determinada de acordo com o Procedimento Geral N.
Conjugados possuindo 4 fármacos por anticorpo podem ser preparados utilizando a mesma metodologia, utilizando cerca de 4,2 equivalentes de um agente de redução adequado para reduzir parcialmente o anticorpo.
Conjugação de Fármaco-Ligador a Anticorpo Parcialmente Reduzido
As amostras de anticorpo parcialmente reduzido podem ser conjugadas com um composto de Fármaco-Ligador correspondente utilizando cerca de 2,4 e cerca de 4,6 equivalentes molares de composto de Fármaco-Ligador por anticorpo para preparar os conjugados de 2 e 4 fármacos por anticorpo, respetivamente. As misturas reaccionais de conjugação são incubadas em gelo durante 1 hora, extinguem-se com um excesso de cerca de 20 vezes de cisteina para fármaco, e purificam-se por eluição sobre uma coluna de dessalinização G25 a cerca de 4°C. Os conjugados de Fármaco-Ligador-Ligando resultantes são concentrados até cerca de 3 mg/ml, esterilizados por filtração, divididos em alíquotas e armazenados congelados. O Esquema 17 ilustra a construção de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando por reação do grupo sulfidrilo de um Ligando com um grupo aceitador de tiol no grupo de Ligador de um Composto de Fármaco-Ligador.
Esquema 17
Métodos ilustrativos para ligação de um anticorpo de Ligando a um Composto de Fármaco-Ligador são delineados a seguir nos Procedimentos Gerais L-R.
Procedimento Geral L: Ligação de um Ligando de Anticorpo a um Composto de Fármaco-Ligador. Todos os passos de reação são realizados tipicamente a 4°C. Quando o Ligando é um anticorpo monoclonal possuindo uma ou mais ligações dissulfureto, soluções do anticorpo monoclonal (5-20 mg/mL) em solução salina tamponada com fosfato, pH 7,2, são reduzidas com ditiotreitol (10 mM final) a 37°C durante 30 minutos (ver Procedimento Geral M) e a separação de agentes de peso molecular baixo é conseguida por cromatografia de exclusão de tamanhos em colunas Sephadex G25 em PBS contendo ácido dietilenotriaminapenta-acético 1 mM. O teor em sulfidrilo no Ligando pode ser determinado utilizando 5,5'-ditiobis(ácido 2-nitrobenzóico) (DTNB) como descrito no Procedimento Geral M (ver Riddles, P. W., Blakeley, R. L., e Zemer, B. (1979) Anal. Biochem. 94, 75-81) . A uma solução em PBS do Ligando reduzido de acordo com o Procedimento Geral L, adiciona-se um Composto de Fármaco-Ligador em MeCN tal que a solução é 20% de MeCN/PBS (vol/vol). A quantidade de Composto de Fármaco-Ligador é aproximadamente 10% mais do que o número total de grupos sulfidrilo num Ligando. Após 60 min a 4°C, adiciona-se cisteina (excesso de 20 vezes em relação à concentração do Composto de Fármaco-Ligador), concentra-se a solução por ultrafiltração, e removem-se por filtração em gel quaisquer agentes de peso molecular baixo. O número de Compostos de Fármaco-Ligador por anticorpo é determinado por espectroscopia de uv/vis utilizando fórmulas derivadas a partir dos coeficientes de extinção relativos dos Ligandos e Compostos de Fármaco-Ligador como descrito no Procedimento Geral O. A quantidade de Composto de Fármaco-Ligador extinto é depois determinada como descrito no Procedimento Geral P utilizando HPLC de fase reversa. O estado de agregação dos Anticorpos de Ligando dos Conjugados de Fármaco-Ligador-Ligando pode ser determinado HPLC de exclusão de tamanhos como descrito no Procedimento Geral R. Os Conjugados de Fármaco-Ligador-Ligando podem ser utilizados sem qualquer purificação adicional.
Procedimento Geral M: Redução das ligações dissulfureto intercadeia de um anticorpo. A uma solução de 2 4 mg de um anticorpo (2,4 mL de uma solução 10 mg/mL) num tampão adequado adicionam-se 300 pL de tampão de borato (borato de sódio 500 mM/cloreto de sódio 500 mM, pH 8,0) seguindo-se 300 pL de ditiotreitol (DTT, solução de 100 mM em H2O) . Agita-se a mistura reaccional utilizando um equipamento de vórtice e incuba-se a 37°C durante 30 min. Equilibram-se três colunas PD10 com PBS contendo DTPA 1 mM (em PBS) e elui-se o anticorpo reduzido através das três colunas PD10 e recolhe-se em 4,2 mL de solução PBS/DTPA (1,4 mL por coluna). O anticorpo reduzido é depois armazenado em gelo. O número de tióis por anticorpo e a concentração de anticorpo são determinados de acordo com o Procedimento Geral N.
Procedimento Geral N: Determinação do número de tióis por
Ligando.
Uma amostra de referência de um Ligando ou uma amostra de um anticorpo reduzido de acordo com o Procedimento Geral L é diluída a cerca de 1:40 (p/p) em PBS, e mede-se a absorvância uv da solução a 280 nm utilizando métodos padrão de espectroscopia uv. Preferivelmente, a proporção de Ligando:PBS na solução é tal gue a absorvância uv varia de cerca de 0,13 - 0,2 AU (unidades de absorvância).
Uma amostra de teste de um Ligando ou uma amostra de teste de um anticorpo reduzido de acordo com o Procedimento Geral L é diluída a cerca de 1:20 com uma solução de PBS contendo cerca de 15 pL de solução de reserva de DTNB/mL de PBS. Prepara-se depois uma amostra de branco contendo DTNB na mesma concentração gue a solução de teste (i.e., 15 pL de reserva de DTNB/mL de PBS) . O espectrofotómetro é acertado no valor de referência de zero nm com a amostra de branco, e depois mede-se a absorvância da amostra de teste a 412 nm.
Determina-se depois a concentração molar do anticorpo utilizando a fórmula: [Ligando] = (OD280/2,24e5) χ fator de diluição.
Determina-se depois a concentração molar de tiol utilizando a fórmula: [ — SH] = (OD412/I, 415e4) x fator de diluição.
Calcula-se depois a relação [SH]/[Ligando]. Um Ligando de anticorpo monoclonal reduzido pode ter de 1 a cerca de 20 grupos sulfidrilo, mas tipicamente tem entre cerca de 6 e cerca de 9 grupos sulfidrilo. Numa concretização preferida, a relação [SH]/[Ligando] é de cerca de 7 a cerca de 9. É entendido gue a relação [SH]/[Ligando] é o número médio de unidades -Aa-Ww-Yy-D por unidade de Ligando.
Procedimento Geral O: Determinação do número de moléculas de Fármaco por Anticorpo num Conjugado de Fármaco-Ligador-Anticorpo. A proporção de Fármaco:Anticorpo para um Conjugado de Fármaco-Ligador-Anticorpo é determinada por medição do número de tióis reduzíveis por ditiotreitol (DTT) que restam após conjugação, utilizando o método seguinte: Trata-se uma amostra de 200 mL de um conjugado de Fármaco-Ligador-Anticorpo com DTT (solução 100 mM em água) para ajustar a concentração a 10 mM em DTT. Incuba-se a solução resultante a 37°C durante 30 min, e depois elui-se através de uma coluna PD10 utilizando PBS/DTPA como o eluente. Mede-se depois a OD280 do conjugado reduzido e mede-se a concentração molar de acordo com o Procedimento Geral Q. A molar concentração de tiol é determinada utilizando DTNB como descrito no Procedimento Geral M. Calcula-se depois a proporção da concentração de tiol para concentração de anticorpo e a proporção de Fármaco:Ligando é a diferença entre a proporção de Tiol:Anticorpo (determinada utilizando o Procedimento Geral N) e a proporção de Fármaco:Anticorpo conforme determinada no parágrafo anterior.
Procedimento Geral P: Determinação da quantidade de composto de Fármaco-Ligador extinto num Conjugado de Fármaco-Ligador-Anticorpo. Este ensaio proporciona uma determinação quantitativa do Fármaco-Ligador no conjugado de Fármaco-Ligador-Ant icorpo que não está ligado covalentemente ao Anticorpo. Assumindo que todos os grupos maleimida de Fármaco-Ligador na mistura reaccional foram extintos com cisteína, o fármaco não ligado é o aduto extinto com cisteína do Composto de Fármaco-Ligador, i.e. Fármaco-Ligador-Cys. O Conjugado proteico de Fármaco-Ligador-Anticorpo é desnaturado, precipitado e isolado por centrifugação sob condições nas quais o Fármaco-Ligador-Cys é solúvel. O Fármaco-Ligador-Cys não ligado é detetado quantitativamente por HPLC, e o cromatograma resultante é comparado com uma curva de calibração para determinar a concentração de Fármaco-Ligador-Cys não ligado na amostra. Esta concentração é dividida pela concentração total de Fármaco no conjugado conforme determinada utilizando o Procedimento Geral O e o Procedimento Geral Q.
Especificamente, preparam-se 100 mL de uma "solução de trabalho" de aduto Fármaco-Ligador-Cys 100 μΜ por adição de 1 pL de cisteína 100 mM em PBS/DTPA e de um volume apropriado de solução de reserva de um composto de Fármaco-Ligador a 98 pL de 50% de metanol/PBS. O "volume apropriado" em litros é calculado utilizando a fórmula: V = le-8/[Fármaco-Ligador]. São depois rotulados seis tubos como se segue: "0", "0,5", "1", "2", "3" e "5", e colocam-se as quantidades apropriadas de solução de trabalho em cada tubo e diluem-se com 50% de metanol/PBS para dar um volume total de 100 mL em cada tubo. Os rótulos indicam a concentração μΜ dos padrões.
Recolhem-se uma solução de 50 pL de um Conjugado de Fármaco-Ligador-Anticorpo e uma solução de 50 pL da mistura reaccional extinta ("qrm") com cisteina em tubos de ensaio separados e dilui-se cada uma com 50 pL de metanol que tinha sido arrefecido até -20°C. Arrefecem-se depois as amostras a -20°C durante 10 min.
Centrifugam-se depois as amostras a 13000 rpm numa centrifugadora de bancada durante 10 min. Transferem-se os sobrenadantes para frascos de HPLC, e analisam-se separadamente alíquotas de 90 pL de cada amostra utilizando HPLC (coluna C12 RP (Phenomenex); monitoriza-se ao máximo de absorvância do Composto de Fármaco-Ligador utilizando um caudal de 1,0 mL/min; o eluente utilizado é um gradiente linear de MeCN variando de 10 a 90% em fosfato de amónio 5 mM aquoso, pH 7,4, durante 10 min; depois MeCN a 90% durante 5 min.; e depois retorno às condições iniciais). O aduto de Fármaco-Ligador-Cys é eluido tipicamente entre cerca de 7 e cerca de 10 minutos.
Prepara-se depois uma curva de calibração representando graficamente a área de pico dos padrões em função da sua concentração (em pM). Realiza-se uma análise de regressão linear para determinar a equação e o coeficiente de correlação da curva de calibração. Os valores de R2 são tipicamente >0,99. A partir da equação de regressão determina-se a concentração do aduto de Fármaco-Ligador-Cys na amostra de HPLC e no conjugado, utilizando as fórmulas: [Fármaco-Ligador-Cys] (hplc spi) = (Área de pico-ordenada na origem)/declive; [Fármaco-Ligador-Cys] (conjugado) = 2x [Fármaco-Ligador-Cys] (hplc sPd A percentagem de aduto Fármaco-Ligador-Cys presente pode ser determinada utilizando a fórmula: % de Fármaco-Ligador-Cys = 100x[Fármaco-Ligador-Cys] (conjugado) /[fármaco] onde [fármaco] = [Conjugado] χ fármaco/Ab, [Conjugado] é determinada utilizando o ensaio de concentração de conjugado, e a proporção de Fármaco:Anticorpo é determinada utilizando o ensaio da proporção de Fármaco:Anticorpo.
Procedimento Geral Q: Determinação da concentração de
Conjugado de Fármaco-Ligador-Anticorpo para ligadores de fármaco com absorvância uv minima a 280 nm. A concentração de conjugado de Fármaco-Ligador-Anticorpo pode ser determinada do mesmo modo que para a concentração do anticorpo de origem, por medição da absorvância a 280 nm de uma diluição apropriada, utilizando a fórmula seguinte: [Conjugado](mg/mL) = (OD28oxfactor de diluição/1,4)x0,9
Determinação da concentração de Conjugado de Fármaco-Ligador-Anticorpo para ligadores de fármaco com absorvância uv substancial a 280 nm (e.g. Compostos 68 e 69). Porque as absorvâncias dos Compostos 68 e 69 se sobrepõem com as absorvâncias de um anticorpo, a determinação espectrofotométrica da concentração de conjugado é muito útil quando a medição é realizada utilizando ambas as absorvâncias a 270 nm e 280 nm. Utilizando estes dados, a concentração molar de conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando é dada pela fórmula seguinte: [Conjugado] = (OD28oxl, 23e_5-OD27ox9,35e-6) x fator de diluição onde os valores l,23e~5 e 9,35e~6 são calculados a partir dos coeficientes de extinção molar do fármaco e do anticorpo, que são estimados como: e27o Fármaco = 2,06e4 e27o Anticorpo = l,87e5 e28o Fármaco = l,57e4 e28o Anticorpo = 2,24e5
Procedimento Geral R: Determinação do estado de agregação do Anticorpo num Conjugado de Fármaco-Ligador-Anticorpo. Uma quantidade adequada ( 10 pg) de um Conjugado de Fármaco-
Ligador-Anticorpo é eluída através de uma coluna de cromatografia de exclusão de tamanhos (SEC) (Tosoh Biosep SW3000 4,6 mm χ 30 cm eluída a 0,35 mL/min com PBS) sob condições padrão. Os cromatogramas são obtidos para 220 nm e 280 nm e calcula-se a relação OD280/OD220. Tipicamente, o agregado correspondente tem um tempo de retenção entre cerca de 5,5 e cerca de 7 min, e tem aproximadamente a mesma relação OD280/OD220 que o Conjugado de Fármaco-Ligador-Ant icorpo monomérico.
5.8 COMPOSIÇÕES
Noutros aspetos, o presente invento proporciona uma composição farmacêutica adaptada para administração intravenosa preferivelmente compreendendo uma quantidade eficaz de um Composto de Fórmula Ia e um transportador ou veículo farmaceuticamente aceitáveis. Para conveniência, os compostos de Fórmula Ia úteis no invento podem simplesmente ser referidos como compostos do invento. As composições são adequadas para administração humana.
As composições do presente invento podem estar em qualquer forma que permita que a composição seja administrada intravenosamente a seres humanos. Por exemplo, a composição pode estar na forma de um sólido ou um líquido. Outras vias de administração aqui divulgadas incluem, oral, tópica, parentérica, sublingual, retal, vaginal, ocular e intranasal. A administração parentérica inclui injeções subcutâneas, intramusculares, injeção intraesternal ou técnicas de infusão. As composições farmacêuticas do invento podem ser formuladas de modo a permitir que um Composto do Invento fique biodisponível após administração da composição a um animal. As composições podem tomar a forma de uma ou mais unidades de dosagem.
Materiais utilizados na preparação das composições farmacêuticas podem ser não tóxicos nas quantidades utilizadas. Será evidente para os técnicos competentes na especialidade que a dosagem ótima do(s) ingrediente(s) ativo(s) na composição farmacêutica dependerá de uma variedade de fatores. Fatores relevantes incluem, sem limitação, o tipo de animal (e.g., humano), a forma particular do Composto do
Invento, o modo de administração, e a composição utilizada. 0 transportador ou veiculo farmaceuticamente aceitáveis podem ser part iculados, tal que as composições estão, por exemplo, em forma de pó. 0(s) transportador (es) pode(m) ser liquido(s), sendo as composições, por exemplo, um liquido injetável. A composição pode estar na forma de um liquido, e.g., uma solução, emulsão ou suspensão. 0 liquido pode ser útil para entrega por injeção. Numa composição para administração por injeção, podem também ser incluídos um ou mais de um tensioativo, conservante, agente molhante, agente dispersante, agente de suspensão, tampão, estabilizador e agente isotónico.
As composições líquidas do invento, sejam estas soluções, suspensões ou outra forma similar, podem também incluir um ou mais dos seguintes: diluentes estéreis tais como água para injeção, solução salina, preferivelmente solução salina fisiológica, solução de Ringer, cloreto de sódio isotónico, óleos fixos tais como mono- ou diglicéridos sintéticos que podem servir como o solvente ou meio de suspensão, polietilenoglicóis, glicerina, ciclodextrina, propilenoglicol ou outros solventes; agentes antibacterianos tais como álcool benzílico ou metilparabeno; antioxidantes tais como ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; agentes quelantes tais como ácido etilenodiaminatetra-acético; tampões tais como acetatos, citratos ou fosfatos e agentes para o ajustamento da tonicidade tais como cloreto de sódio ou dextrose. Uma composição parentérica pode ser incluída numa ampola, uma seringa descartável ou um frasco para múltiplas doses de vidro, plástico ou outro material. A solução salina fisiológica é um adjuvante preferido. Uma composição injetável é preferivelmente estéril. A quantidade do Composto do Invento que é eficaz no tratamento de uma perturbação ou condição particular dependerá da natureza da perturbação ou condição, e pode ser determinada por técnicas clínicas padrão. Adicionalmente, podem-se utilizar opcionalmente ensaios in vitro ou in vivo para auxiliar a identificar os intervalos de dosagem ótimos. A dose exata a utilizar nas composições dependerá também da via de administração, e da gravidade da doença ou perturbação, e deverá ser decidida de acordo com o julgamento do médico assistente e as circunstâncias de cada paciente.
As composições compreendem uma quantidade eficaz de um Composto do Invento de modo a obter uma dosagem adequada. Tipicamente, esta quantidade é pelo menos cerca de 0,01% de um Composto do Invento em peso da composição. Composições preferidas do presente invento são preparadas tal que uma unidade de dosagem parentérica contém de cerca de 0,01% a cerca de 2% em peso do Composto do Invento.
Para administração intravenosa, a composição pode compreendes de cerca de 1 a cerca de 250 mg de um Composto do Invento por kg de peso corporal do animal. Preferivelmente, a quantidade administrada estará no intervalo de cerca de 4 a cerca de 25 mg/kg de peso corporal do Composto do Invento.
Geralmente, a dosagem de Composto do Invento administrada a um animal é tipicamente cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 250 mg/kg de peso corporal do animal. Preferivelmente, a dosagem administrada a um animal está entre cerca de 0,1 mg/kg e cerca de 20 mg/kg de peso corporal do animal, mais preferivelmente cerca de 1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg de peso corporal do animal.
Os Compostos do Invento ou composições podem ser administrados intravenosamente por qualquer via conveniente, por exemplo por infusão ou injeção São conhecidos vários sistemas de entrega, e.g., encapsulação em lipossomas, microparticulas, microcápsulas, cápsulas, etc., e podem ser utilizados para administrar um Composto do Invento ou composição. Em certas concretizações, é administrado mais do que um Composto do invento ou composição a um animal. O modo de administração preferido é deixado à discrição do médico assistente, e dependerá em parte do local da condição médica (tal como o local do cancro ou doença autoimune). O termo "transportador" refere-se a um diluente, adjuvante ou excipiente, com o qual um Composto do Invento é administrado. Estes transportadores farmacêuticos podem ser líquidos, tais como água e óleos, incluindo aquelas com origem no petróleo, animal, vegetal ou sintética, tais como óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de sésamo e outros, os transportadores podem ser solução salina saline, goma-arábica, gelatina, pasta de amido, talco, queratina, sílica coloidal, ureia, e outros. Adicionalmente, podem-se utilizar agentes auxiliares, estabilizantes, espessantes, lubrificantes e corantes. Numa concretização, quando administrados a um animal, os Compostos do invento ou composições e transportadores farmaceuticamente aceitáveis são estéreis. A água é um transportador preferido quando os Compostos do Invento são administrados intravenosamente. Soluções salinas e soluções aquosas de dextrose e glicerol podem também ser utilizadas como transportadores líquidos para soluções injetáveis. As presentes composições, se desejado, podem também conter quantidades menores de agentes molhantes ou emulsionantes, ou agentes de tamponamento do pH.
As presentes composições podem tomar a forma de soluções, suspensões, emulsão, comprimidos, cápsulas, cápsulas contendo líquidos, pós, ou qualquer outra forma adaptada para utilização intravenosa. Transportadores farmacêuticos adequados são descritos em "Remington's Pharmaceutical Sciences" por E.W. Martin.
Os Compostos do Invento são formulados de acordo com procedimentos de rotina como uma composição farmacêutica adaptada para administração intravenosa a seres humanos. Tipicamente, os transportadores ou veículos para administração intravenosa são soluções tampão aquosas isotónicas estéreis. Quando necessário, as composições podem também incluir um agente de solubilização. Composições para administração intravenosa podem compreender opcionalmente um anestésico local tal como lignocaína para aliviar a dor no local da injeção. Geralmente, os ingredientes são fornecidos quer separadamente quer misturados em conjunto na forma de dosagem unitária, por exemplo, como um pó liofilizado seco ou concentrado isento de água num recipiente vedado hermeticamente tal como uma ampola ou saqueta indicando a quantidade de agente ativo. Quando se pretende administrar um Composto do Invento por perfusão, este pode ser dispensado, por exemplo, com um frasco de perfusão contendo água ou solução salina de grau farmacêutico estéril. Quando o Composto do invento é administrado por injeção, pode ser fornecida uma ampola de água estéril para injeção ou solução salina tal que os ingredientes podem ser misturados antes da administração.
As composições farmacêuticas podem ser preparadas utilizando metodologia bem conhecida na especialidade farmacêutica. Por exemplo, uma composição destinada a ser administrada por injeção pode ser preparada por combinação de um Composto do Invento com água de modo a formar uma solução. Pode-se adicionar um tensioativo para facilitar a formação de uma solução ou suspensão homogénea. Os tensioativos são compostos que interagem não covalentemente com um Composto do Invento de modo a facilitar a dissolução ou suspensão homogénea do composto ativo no sistema de entrega aquoso.
5.9 UTILIZAÇÕES TERAPÊUTICAS DOS COMPOSTOS DO INVENTO
Os Compostos do Invento são úteis para tratamento de cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa num animal.
5.10 TRATAMENTO DE CANCRO
Os Compostos do Invento são úteis para inibir a multiplicação de células de tumor ou células de cancro, ou para tratamento de cancro num animal. Os Compostos do Invento podem ser utilizados de modo adequado numa variedade de cenários para o tratamento de cancros em animais. Os Conjugados de Fármaco-Ligador-Ligando podem ser utilizados para entregar um Fármaco ou unidade de Fármaco a uma célula de tumor ou célula de cancro. Sem querer estar limitado pela teoria, numa concretização, a unidade de Ligando de um Composto do Invento liga-se ou associa-se a um antigénio associado a uma célula de cancro ou uma célula de tumor, e o Composto do Invento pode ser absorvido para o interior de uma célula de tumor ou célula de cancro através de endocitose mediada por recetor. 0 antigénio pode estar ligado a uma célula de tumor ou célula de cancro ou pode ser uma proteína de matriz extracelular associada à célula de tumor ou célula de cancro. Uma vez no interior da célula, uma ou mais sequências peptídicas específicas dentro da unidade de Ligador são clivadas hidroliticamente por uma ou mais proteases associadas à célula de tumor ou célula de cancro, resultando na libertação de um Fármaco ou de um de Composto de Fármaco-Ligador. 0 Fármaco ou o Composto de Fármaco-Ligador libertados estão depois livres para migrar no citosol e induzir atividades citotóxicas. Numa concretização alternativa, o Fármaco ou unidade de Fármaco é clivado do Composto do Invento fora da célula de tumor ou célula de cancro, e o Fármaco ou Composto de Fármaco-Ligador penetra subsequentemente na célula.
Numa concretização, a unidade de Ligando liga-se à célula de tumor ou célula de cancro.
Noutra concretização, a unidade de Ligando liga-se a um antigénio da célula de tumor ou célula de cancro que está sobre a superfície da célula de tumor ou célula de cancro.
Noutra concretização, a unidade de Ligando liga-se a um antigénio de célula de tumor ou célula de cancro que é uma proteína de matriz extracelular associada à célula de tumor ou célula de cancro.
Numa concretização, a célula de tumor ou célula de cancro é do tipo de tumor ou cancro de que o animal necessita de tratamento ou prevenção. A especificidade da unidade de Ligando por uma célula de tumor ou célula de cancro particular pode ser importante para determinar aqueles tumores ou cancros que são tratados muito eficazmente. Por exemplo, Compostos do Invento possuindo uma unidade de Ligando BR96 podem ser úteis para tratamento de carcinomas positivos em antigénio incluindo de pulmão, mama, cólon, ovários e pâncreas. Compostos do Invento possuindo uma unidade de Ligando anti-CD30 ou anti-CD40 podem ser úteis para tratamento de doenças malignas hematológicas.
Outros tipos particulares de cancros que podem ser tratados com Compostos do Invento incluem mas não estão limitados aos divulgados na Tabela 3. TABELA 3
Tumores sólidos, incluindo mas não limitados a: fibrossarcoma mixossarcoma lipossarcoma condrossarcoma sarcoma osteogénico cordoma angiossarcoma endoteliossarcoma linfangiossarcoma linfangioendoteliossarcoma sinovioma mesotelioma tumor de Ewing leiomiossarcoma rabdomiossarcoma cancro do cólon cancro coloretal cancro do rim cancro pancreático cancro ósseo cancro da mama cancro de ovário cancro da próstata cancro esofágico cancro do estômago cancro oral cancro nasal cancro da garganta carcinoma de células escamosas carcinoma de células basais adenocarcinoma carcinoma de glândulas sudoríparas carcinoma de glândulas sebáceas carcinoma papilar adenocarcinomas papilares cistoadenocarcinoma carcinoma medular carcinoma broncogénico carcinoma de células renais hepatoma carcinoma do dueto biliar coriocarcinoma seminoma carcinoma embrionário tumor de Wilms cancro cervical cancro uterino cancro testicular carcinoma do pulmão de células pequenas carcinoma da bexiga cancro do pulmão carcinoma epitelial glioma glioblastoma multiforme astrocitoma meduloblastorna craniofaringioma ependimoma pinealoma hemangioblastoma neuroma acústico oligodendroglioma meningioma cancro da pele melanoma neuroblastoma retinoblastoma cancros sanguíneos, incluindo mas não limitados a: leucemia linfoblástica aguda "ALL" leucemia linfoblástica aguda de células B leucemia linfoblástica aguda de células T leucemia mieloblástica aguda "AML" leucemia promielocítica aguda "APL" leucemia monoblástica aguda leucemia eritroleucémica aguda leucemia megacarioblástica aguda leucemia mielomonocitica aguda leucemia não linfocítica aguda leucemia indiferenciada aguda leucemia mielocítica crónica "CML" leucemia linfocítica crónica "CLL" leucemia de células pilosas mieloma múltiplo leucemias aguda e crónica: linfoblástica mielógena linfocíticas leucemias mielocíticas Linfornas: doença de Hodgkin linfoma não Hodgkin mieloma múltiplo macroglobulinemia de Waldenstrom doença de cadeia pesada policitemia vera
Os Compostos do Invento podem também ser utilizados como agentes quimioterapêuticos na forma não direcionada. Por exemplo, os próprios Fármacos, ou os Compostos de Fármaco-Ligador são úteis para tratamento de cancros ou tumores de ovário, SNC, renal, pulmão, cólon, melanoma ou hematológicos.
Os Compostos do Invento proporcionam direcionamento ao tumor ou cancro específico da Conjugação, reduzindo assim a toxicidade geral destes compostos. As unidades de Ligador estabilizam os Compostos do Invento no sangue, mas no entanto são cliváveis por proteases específicas de tumor no interior da célula, libertando um Fármaco.
5.10.1 TERAPIA MULTI—MODALIDALIDADE PARA O CANCRO 0 cancro, incluindo, mas não limitado a, um tumor, metástase ou qualquer doença ou perturbação caracterizada por crescimento celular descontrolado, pode ser tratado ou prevenido por administração de um Composto do Invento.
Noutras concretizações, o invento proporciona utilizações de compostos do invento para tratar ou prevenir o cancro, compreendendo administrar a um animal necessitado uma quantidade eficaz de um Composto do Invento e de um agente quimioterapêutico. Numa concretização o agente quimioterapêutico é aquele para o qual se constatou que o que o tratamento do cancro não é refratário. Noutra concretização, o agente quimioterapêutico é aquele para o qual se constatou que o que o tratamento do cancro é refratário. Os Compostos do Invento podem ser administrados a um animal que foi submetido a cirurgia como tratamento para o cancro.
Numa concretização, o método adicional de tratamento é terapia de radiação.
Numa concretização específica, o Composto do Invento é administrado concorrentemente com o agente quimioterapêutico ou com terapia de radiação. Noutra concretização específica, o agente quimioterapêutico ou terapia de radiação é administrado antes ou subsequentemente à administração de um Composto do Invento, preferivelmente pelo menos uma hora, cinco horas, 12 horas, um dia, uma semana, um mês, mais preferivelmente vários meses (e.g., até três meses), antes ou subsequentemente à administração de um Composto do Invento.
Um agente quimioterapêutico pode ser administrado durante uma série de sessões, e podem ser administrados qualquer um ou uma combinação dos agentes quimioterapêuticos listados na Tabela 4. No que se refere à radiação, pode-se utilizar qualquer protocolo de terapia de radiação dependendo do tipo de cancro a ser tratado. Por exemplo, mas não como limitação, pode-se administrar terapia de radiação de raios x; em particular, pode-se utilizar megavoltagem de alta energia (radiação de energia superior a 1 MeV) para tumores profundos, e pode-se utilizar feixe de eletrões e radiação de raios x de ortovoltagem para cancros de pele. Podem-se também administrar radioisótopos que emitem raios gama, tais como isótopos radioativos de rádio, cobalto e outros elementos.
Adicionalmente, o invento proporciona utilizações para tratamento de cancro com um Composto do Invento como uma alternativa a quimioterapia ou terapia de radiação onde quimioterapia ou terapia de radiação têm demonstrado ou podem vir a demonstrar ser demasiado tóxicas, e.g., resultam em efeitos secundários inaceitáveis ou insuportáveis, para o sujeito que está a ser tratado. Opcionalmente, o animal a ser tratado pode ser tratado com outro tratamento do cancro tal como cirurgia, terapia de radiação ou quimioterapia, dependendo de qual o tratamento que se constata ser aceitável ou suportável.
Os Compostos do Invento podem também ser utilizados de um modo in vitro ou ex vivo, tal como para o tratamento de certos, incluindo, mas não limitados a, leucemias e linfomas, um tal tratamento envolvendo transplantes de células estaminais autólogas. Isto pode envolver um processo em múltiplos passos no qual são colhidas células estaminais hematopoiéticas autólogas do animal e expurgadas de todas as células de cancro, a população de células de medula óssea restantes do paciente é depois erradicada através da administração de uma dose elevada de um Composto do Invento com ou sem acompanhamento de terapia de radiação de dose elevada, e o enxerto de células estaminais é perfundido de volta ao animal. São proporcionados cuidados de apoio enquanto a função da medula óssea é restaurada e o animal recupera.
5.10.2 TERAPIA MULTI-FARMACO PARA CANCRO O presente invento inclui utilizações para tratamento de cancros, por administração a um animal necessitado de uma quantidade eficaz de um Composto do Invento e de outro agente terapêutico que é um agente anticanceroso. Agentes anticancerosos adequados incluem, mas não estão limitados a, metotrexato, taxol, L-asparaginase, mercaptopurina, tioguanina, hidroxiureia, citarabina, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosoureias, cisplatina, carboplatina, mitomicina, dacarbazina, procarbazina, topotecano, mostardas de azoto, citoxano, etoposido, 5-fluorouracilo, BCNU, irinotecano, camptotecinas, bleomicina, doxorrubicina, idarrubicina, daunorrubicina, dactinomicina, plicamicina, mitoxantrona, asparaginase, vinblastina, vincristina, vinorrelbina, paclitaxel e docetaxel. Numa concretização preferida, o agente anticanceroso inclui, mas não está limitado a, um fármaco listado na Tabela 4. TABELA 4
Agentes alquilantes
Mostardas de azoto: ciclofosfamida ifosfamida trofosfamida clorambucilo
Nitrosoureias: carmustina (BCNU) lomustina (CCNU)
Alquilsulfonatos : bussulfano treossulfano
Triazenos: dacarbazina
Compostos contendo platina: cisplatina carboplatina
Alcaloides de planta
Alcaloides vinca: vincristina vinblastina vindesina vinorrelbina
Taxóides: paclitaxel docetaxol
Inibidores de ADN-topoisomerase
Epipodofilinas: etoposido teniposido topotecano 9-aminocamptotecina camptotecina crisnatol
Mitomicinas: mitomicina C
Antimetabolitos Antifolatos:
Inibidores de DHFR: metotrexato trimetrexato
Inibidores de WIMP ácido micofenólico desidrogenase:
tiazofurina ribavirina EI CAR
Inibidores de ribonuclótido- hidroxiureia redutase: deferoxamina
Análogos de pirimidina:
Análogos de uracilo: 5-fluorouracilo floxuridina doxifluridina raltitrexed
Análogos de citosina citarabina (ara C) arabinósido de citosina fludarabina
Análogos de purina: mercaptopurina tioguanina
Terapias hormonais:
Antagonistas de recetor:
Antiestrogénio tamoxifeno raloxifeno megestrol
Agonistas de LHRH: goserelina acetato de leuprolida
Antiandrogénios: flutamida bicalutamida
Retinóides/Deltoides
Análogos de Vitamina D3 EB 1089 CB 1093 KH 1060
Terapias fotodinâmicas: verteporfina (BPD-MA) ftalocianina fotossensibilizador Pc4 desmetoxi-hipocrelina A (2BA-2-DMHA)
Citoquinas: interferão- interferão- fator de necrose de tumor
Outros:
Inibidores de isoprenilação: lovastatina
Neurotoxinas dopaminérgicas: ião l-metil-4- fenilpiridínio
Inibidores do ciclo celular: estaurosporina
Actinomicinas: actinomicina D dactinomicina
Bleomicinas: bleomicina A2 bleomicina B2 peplomicina
Antraciclinas: daunorrubicina
Doxorrubicina (adriamicina) idarrubicina epirrubicina pirarrubicina zorrubicina mitoxantrona
Inibidores de MDR: verapamil
Inibidores de Ca2+ATPase: thapsigargin
5.11 TRATAMENTO DE DOENÇAS AUTOIMUNES
Os Compostos do Invento são úteis para matar ou inibir a replicação de uma célula que produz uma doença autoimune ou para tratamento de uma doença autoimune. Os Compostos do Invento podem ser utilizados de modo adequado numa variedade de cenários para o tratamento de uma doença autoimune num animal. Os Conjugados de Fármaco-Ligador-Ligando podem ser utilizados para entregar um Fármaco a uma célula alvo. Sem querer estar limitado pela teoria, numa concretização, o Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando associa-se a um antigénio na superfície de uma célula alvo, e o Composto do Invento é depois absorvido para o interior de uma célula alvo através de endocitose mediada por recetor. Uma vez no interior da célula, uma ou mais sequências peptídicas específicas dentro da unidade de Ligador são clivadas enzimaticamente ou hidroliticamente resultando na libertação de um Fármaco. 0 Fármaco libertado está depois livre para migrar no citosol e induzir atividades citotóxicas. Numa concretização alternativa, o Fármaco é clivado do Composto do Invento fora da célula alvo, e o Fármaco penetra subsequentemente na célula.
Numa concretização, a unidade de Ligando liga-se a um antigénio autoimune.
Noutra concretização, a unidade de Ligando liga-se a um antigénio autoimune que está sobre a superfície de uma célula.
Noutra concretização, a célula alvo é do tipo de células que produz o antigénio autoimune que causa a doença de que o animal necessita tratamento ou prevenção.
Numa concretização preferida, o Ligando liga-se a linfócitos ativados que estão associados ao estado de doença autoimune.
Numa concretização adicional, os Compostos do Invento matam ou inibem a multiplicação de células que produzem um anticorpo autoimune associado a uma doença autoimune particular.
Tipos particulares de doenças autoimunes que podem ser tratados com os Compostos do Invento incluem, mas não estão limitados a, perturbações relacionadas com linfócitos Th2 (e.g., dermatite atópica, asma atópica, rinoconjuntivite, rinite alérgica, síndrome de Omenn, esclerose sistémica e doença de enxerto versus hospedeiro); perturbações relacionadas com linfócitos Thl (e.g., artrite reumatóide, esclerose múltipla, psoríase, síndrome de Sjorgren, tiroidite de Hashimoto, doença de Grave, cirrose biliar primária, granulomatose de Wegener e tuberculose); perturbações relacionadas com linfócito B ativados (e.g., lúpus eritematoso sistémico, síndrome de Goodpasture, artrite reumatóide e diabetes de tipo I); e as divulgadas na Tabela 5. TABELA 5
Hepatite Crónica Ativa Doença de Addison Alveolite Alérgica Reação Alérgica Rinite Alérgica Sindrome de Alport Anafilaxia
Espondilite Anquilosante
Sindrome Antifosfolipida
Artrite
Ascariase
Aspergilose
Alergia Atópica
Dermatite Atrófica
Rinite Atrófica
Doença de Behcet
Pulmão de Bird-Fancier
Asma Brônquica
Sindrome de Caplan
Cardiomiopatia
Doença Celíaca
Doença de Chagas
Glomerulonefrite Crónica
Sindrome de Cogan
Doença de Aglutinina Fria
Infeção de Rubéola Congénita
Sindrome CREST
Doença de Crohn
Crioglobulinemia
Sindrome de Cushing
Dermatomiosite Lúpus Discoide Síndrome de Dressier Síndrome de Eaton-Lambert
Infeção por Ecovírus
Encefalomielite
Oftalmopatia Endócrina
Infeção por Vírus Epstein-Barr
Pulmoeira Equina
Eritematose Síndrome de Evan Síndrome de Felty
Fibromialgia
Ciclite de Fuchs
Atrofia Gástrica
Alergia Gastrointestinal
Artrite de Células Gigantes
Glomerulonefrite Síndrome Goodpasture
Doença de Enxerto v. Hospedeiro
Doença de Graves
Doença de Guillain-Barre
Tiroidite de Hashimoto
Anemia Hemolítica Púrpura de Henõch-Schonlein
Atrofia Adrenal Idiopática
Fibrite Pulmonar Idiopática
Nefropatia de IgA
Doenças Inflamatórias do Intestino Diabetes Mellitus dependente de Insulina Artrite Juvenil
Diabetes Mellitus Juvenil (Tipo I) Síndrome de Lambert-Eaton Laminite Líquen Plano
Hepatite Lupoide Lúpus
Lintopenia Doença de Meniere
Doença de Tecido Conjuntivo Misto Esclerose Múltipla Miastenia Grave Anemia Perniciosa Sindromes Poliglandulares Demência Pré-senil Agamaglobulinemia Primária Cirrose Biliar Primária Psoriase
Artrite Psoriática Fenómeno de Raynaud Aborto Recorrente Sindrome de Reiter Febre Reumática Artrite Reumatóide Sindrome de Sampter Esquistosomiase Sindrome de Schmidt Escleroderma Sindrome de Shulman Sindrome de Sjorgen Sindrome de Stiff-Man Oftalmia Simpática Lúpus Eritematoso Sistémico Arterite de Takayasu Arterite Temporal Tiroidite Trombocitopenia Tirotoxicose
Necrólise Epidérmica Tóxica
Resistência à Insulina Tipo B
Diabetes Mellitus Tipo I
Colite Ulcerosa
Uveite
Vitiligo
Macroglobulemia de Waldenstrom Granulomatose de Wegener
5.11.1 TERAPIA MULTI-FARMACO DE DOENÇAS AUTOIMUNES 0 presente invento inclui também utilizações para tratamento de uma doença autoimune, por administração a um animal necessitado de uma quantidade eficaz de um Composto do invento de outro agente terapêutico que é conhecido para o tratamento de uma doença autoimune. Numa concretização, o agente anti-doença autoimune inclui, mas não está limitado a, os agentes listados na Tabela 6. TABELA 6 ciclosporina
ciclosporina A micofenolato de mofetil sirolimo tacrolimo enanercept prednisona azatioprina metotrexato ciclofosfamida prednisona ácido aminocapróico cloroquina hidroxicloroquina hidrocortisona dexametasona clorambucilo
DHEA danazol bromocriptina meloxicam infliximab
5.12 TRATAMENTO DE DOENÇAS INFECIOSAS
Os Compostos do Invento são úteis para matar ou inibir a multiplicação de uma célula que produz uma doença infeciosa ou para tratamento de uma doença infeciosa. Os Compostos do Invento podem ser utilizados de modo adequado numa variedade de cenários para o tratamento de uma doença infeciosa num animal. Os Conjugados de Fármaco-Ligador-Ligando podem ser utilizados para entregar um Fármaco a uma célula alvo. Sem querer estar limitado pela teoria, numa concretização, o Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando associa-se a um antigénio na superfície de uma célula alvo, e o Composto do Invento é depois absorvido para o interior de uma célula alvo através de endocitose mediada por recetor. Uma vez no interior da célula, uma ou mais sequências peptídicas específicas dentro da unidade de Ligador são clivadas enzimaticamente ou hidroliticamente resultando na libertação de um Fármaco. 0 Fármaco libertado está depois livre para migrar no citosol e induzir atividades citotóxicas. Numa concretização alternativa, o Fármaco é clivado do Composto do Invento fora da célula alvo, e o Fármaco penetra subsequentemente na célula.
Numa concretização, a unidade de Ligando liga-se à célula da doença infeciosa.
Numa concretização, a célula da doença infeciosa é do tipo de doença infeciosa de que o animal necessita tratamento ou prevenção.
Numa concretização, os Compostos do Invento matam ou inibem a multiplicação de células que produzem uma doença infeciosa particular.
Tipos particulares de doenças infeciosas que podem ser tratadas com os Compostos do Invento incluem, mas não estão limitados a, os divulgados na Tabela 7. TABELA 7
Doenças Bacterianas:
Difteria
Pertussia
Bacteremia Oculta
Infeção do Trato Urinário
Gastroenterite
Celulite
Epiglotite
Traqueite
Hipertrofia Adenoide
Abcesso Retrofaringeo
Impetigo
Ectima
Pneumonia
Endocardite
Artrite Séptica
Pneumocócica
Peritonite
Bactermia
Meningite
Meningite Purulenta Aguda
Uretrite
Cervicite
Proctite
Faringite
Salpingite
Epididimite
Gonorreia Sífilis
Listeriose
Antraz
Nocardiose
Salmonela
Febre Tifoide
Disenteria
Conjuntivite
Sinusite
Brucelose
Tularemia Cólera
Peste Bubónica Tétano
Enterite Necrotizante Actinomicose
Infeções Anaeróbias Mistas Sífilis
Febre Remitente
Leptospirose
Doença de Lyme
Febre da Mordedura de Rato
Tuberculose
Linfadenite
Lepra
Clamídia
Pneumonia por Clamídica Tracoma
Conjuntivite de Inclusão
Doenças Fúngicas Sistémicas: Histoplamose Coccidioidomicose Blastomicose Esporotricose Criptococose Candidiase Sistémica Aspergilose Mucormicose Micetoma Cromomicose
Doenças por Riquétsias:
Tifo
Febre Maculosa das Montanhas Rochosas E r 1 i qu i o s e
Riquetsiose do Carrapato Oriental Rickettsialpox Febre Q Bartonelose Doenças Parasitárias:
Malária
Babesiose
Doença do Sono Africana
Doença de Chagas
Leishmaniose
Febre Dum-Dum
Toxoplasmose
Meningoencefalite
Queratite
Entamebiase
Giardiase
Criptosporidiase
Isosporiase
Ciclosporíase Microsporidiose Ascaríase
Infeção por tricurídeos Infeção por ancilóstomos Infeção por nematodes Larva Migrans Ocular Triquinose Verme da Guiné Filariase Linfática Loiase
Cegueira do Rio Dirofilariose Canina Esquistossomiase Pé-de-atleta
Fasciolose Pulmonar Oriental Fasciolose Hepática Oriental Fascioliase Fasciolopsiase Opistorquiase Infeções por Ténia Hidatidose Hidatidose Alveolar Doenças Virais:
Sarampo
Panencefalite Esclerosante Subaguda
Constipação Comum
Papeira
Rubéola
Roséola
Quinta Doença
Varicela
Infeção por Virus Sincicial Respiratório
Infeções da Garganta
Bronquiolite
Mononucleose Infeciosa
Poliomielite
Herpangina
Febre Aftosa
Doença de Bornholm
Herpes Genital
Verrugas Genitais
Meningite Asséptica
Miocardite
Pericardite
Gastroenterite Síndrome de Imunodeficiência Adquirida (SIDA) Síndrome de Reye Síndrome de Kawasaki
Influenza
Bronquite
Pneumonia "Andante" Virai Doença Respiratória Febril Aguda Febre Faringoconjuntival Aguda Queratoconjuntivite Epidémica Vírus Herpes Simplex 1 (HSV-1) Vírus Herpes Simplex 2 (HSV-2)
Zona
Doença de Inclusão Citomegálica Raiva
Leucoencefalopatia Multifocal Progressiva Kuru
Insónia Familiar Fatal Doença Creutzfeldt-Jakob Doença Gerstmann-Straussler-Scheinker Paraparésia Espástica Tropical
Encefalite Equina Ocidental Encefalite da Califórnia Encefalite de St. Louis Febre-amarela Dengue
Coriomeningite Linfocitica
Febre de Lassa
Febre Hemorrágica
Sindrome Pulmonar de Hantavirus
Infeções por Virus de Marburg
Infeções por Virus Ébola
Variola
5.12.1 TERAPIA MULTI-FÁRMACO DE DOENÇAS INFECIOSAS 0 presente invento inclui também utilizações para tratamento de uma doença infeciosa, por administração a um animal necessitado de um Composto do Invento e outro agente terapêutico que é um agente anti-doença infeciosa. Numa concretização, o agente anti-doença infeciosa é, mas não está limitado a, os agentes listados na Tabela 8. TABELA 8 Agentes Antibacterianos:
Antibióticos de -Lactama:
Penicilina G Penicilina V Cloxacilina Dicloxacilina Meticilina Nafcilina Oxacilina Ampicilina Amoxicilina
Bacampicilina Azlocilina Carbenicilina Mezlocilina Piperacillin Ticarcilina Aminoglicósidos: Amicacina Gentamicina Canamicina Neomicina Netilmicina Estreptomicina Tobramicina Macrblidos:
Az itromicina Claritromicina Eritromicina Lincomicina Clindamicina Tetraciclinas:
Demeclociclina Doxiciclina Minociclina Oxitetraciclina Tetraciclina Quinolonas: Cinoxacina Ácido Nalidixico Fluoroquinolonas: Ciprofloxacina Enoxacina Grepafloxacina
Levofloxacina Lomefloxacina Norfloxacina Ofloxacina Esparfloxacina Trovafloxicina
Polipéptidos :
Bacitracina Colistina Polimixina B Sulfonamidas:
Sulfisoxazole Sulfametoxazole Sulfadiazina Sulfametizole Sulfacetamida
Agentes Antibacterianos Diversos: Trimetoprim Sulfametazole Cloranfenicol Vancomicina Metronidazole Quinupristina Dalfopristina Rifampin Espectinomicina Nitrofurantolna Agentes Antivirais:
Agentes Antivirais Gerais: Idoxuradina Vidarabina Trifluridina Aciclovir
Famciciclovir
Penciciclovir
Valaciclovir
Ganciciclovir
Foscarnet
Ribavirina
Amantadina
Rimantadina
Cidofovir
Oligonucleótidos Anti-sentido
Imunoglobulinas
Interferões Fármacos para infeção por HIV:
Zidovudina
Didanosina
Zalcitabina
Estavudina
Lamivudina
Nevirapina
Delavirdina
Saquinavir
Ritonavir
Indinavir
Nelfinavir
5.13 OUTROS AGENTES TERAPÊUTICOS
As presentes utilizações podem ainda compreender um Composto do Invento e um agente terapêutico adicional ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis. 0 Composto do Invento e o outro agente terapêutico podem atuar aditivamente ou, mais preferivelmente, sinergicamente. Numa concretização preferida, uma composição compreendendo um Composto do Invento é administrada concorrentemente com a administração de um ou mais agentes terapêuticos adicionais, que pode ser parte da mesma composição ou estar numa composição diferente da que compreende o Composto do Invento. Noutra concretização, um Composto do Invento é administrado antes ou subsequentemente à administração de outro(s) agente(s) terapêutico(s).
For tratamento de cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa, o outro agente terapêutico pode ser um agente antiemético. Agentes antieméticos adequados incluem, mas não estão limitados a, metoclopromida, domperidona, proclorperazina, prometazina, clorpromazina, trimetobenzamida, ondansetron, granisetron, hidroxizina, acetil-leucina monoetanolamina, alizaprida, azasetron, benzquinamida, bietanautina, bromoprida, buclizina, cleboprida, ciclizina, dimenidrinato, diphenidol, dolasetron, meclizina, metalatal, metopimazina, nabilona, oxiperndilo, pipamazina, escopolamina, sulpirida, tetra-hidrocanabinóis, tietilperazina, tioproperazina e tropisetron.
Noutra concretização, o outro agente terapêutico pode ser um fator de estimulação de colónias hematopoiético. Fatores de estimulação de colónias hematopoiéticos adequados incluem, mas não estão limitados a, filgrastim, sargramostim, molgramostim e eritropoietina alfa.
Ainda noutra concretização, o outro agente terapêutico pode ser um agente analgésico opioide ou não opioide. Agentes analgésicos opioides adequados incluem, mas não estão limitados a, morfina, heroina, hidromorfona, hidrocodona, oximorfona, oxicodona, metopon, apomorfina, normorfina, etorfina, buprenorfina, meperidina, loperamida, anileridina.
Os Exemplos que se seguem ilustram os conjugados ligando-fármaco. A sua divulgação é mais ampla do que o âmbito do presente invento conforme definido nas reivindicações e incluem informação sobre compostos análogos aos compostos úteis no presente invento. EXEMPLO 1: Preparação de composto 21
Diluiu-se Fmoc-(L)-vai-(L)-cit-PAB-OH (19) (14,61 g, 24,3 mmol, 1,0 eq., Patente dos E.U.A. N.2 6214345 de Firestone et al.) com DMF (120 mL, 0,2 M) e a esta solução adicionou-se dietilamina (60 mL). Monitorizou-se a reação por HPLC e verificou-se que ficou completa em 2 h. Concentrou-se a mistura reaccional e precipitou-se o resíduo resultante utilizando acetato de etilo (cerca de 100 mL) sob sonicação durante 10 min. Adicionou-se éter (200 mL) e sonicou-se adicionalmente o precipitado durante 5 min. Deixou-se a solução repousar durante 30 min sem agitação e depois filtrou-se e secou-se sob vácuo elevado para proporcionar Val-cit-PAB-OH, que foi utilizado no passo seguinte sem qualquer purificação adicional. Rendimento: 8,84 g (96%) . Diluiu-se Val-cit-PAB-OH (8,0 g, 21 mmol) com DMF (110 mL) e tratou-se a solução resultante com MC-OSu (Willner et al., Bioconjugate Chem. 4, 521, 1993, 6,5 g, 21 mmol, 1,0 eq.) . A reação ficou completa de acordo com HPLC após 2 h. Concentrou-se a mistura reaccional e precipitou-se o óleo resultante utilizando acetato de etilo (50 mL) . Após sonicação durante 15 min, adicionou-se éter (400 mL) e sonicou-se adicionalmente a mistura até todas as partículas grandes estarem quebradas. Filtrou-se depois a solução e secou-se o sólido para proporcionar Composto 20 como um sólido esbranquiçado. Rendimento: 11,63 g (96%); ES-MS m/z 757,9 [ΜΗ]-.
Diluiu-se Composto 20 (8,0 g, 14,0 mmol) com DMF (120 mL, 0,12 M) e à solução resultante adicionou-se bis (4-nitrofenil)carbonato (8,5 g, 28,0 mmol, 2,0 eq.) e di-isopropiletilamina (3,66 mL, 21,0 mmol, 1,5 eq.) . A reação ficou completa em 1 h de acordo com HPLC. Concentrou-se a mistura reaccional para proporcionar um óleo que foi precipitado com EtOAc, e depois triturado utilizando EtOAc (cerca de 25 mL) . Purificou-se adicionalmente o soluto com éter (cerca de 200 mL) e triturou-se durante 15 min. Filtrou-se o sólido e secou-se sob vácuo elevado para proporcionar Composto 21 que era 93% puro de acordo com HPLC e utilizou-se no passo seguinte sem qualquer purificação adicional. Rendimento: 9,7 g (94%) . EXEMPLO 2 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 27
Diluiu-se Composto 26 (2,0 g, 2,31 mmol, 1,0 eq.) com diclorometano (30 mL) e à solução resultante adicionou-se bis(4-nitrofenil)carbonato (2,72 g, 8,94 mmol, 3,8 eq.) seguindo-se di-isopropiletilamina (1,04 mL, 5,97 mmol, 2,6 eq.) . A reação ficou completa em 3 d, de acordo com HPLC. Concentrou-se a mistura reaccional e triturou-se o resíduo resultante utilizando éter, depois filtrou-se e secou-se sob vácuo elevado para proporcionar Composto 27 como um sólido amarelo (2,37 g, 97%) . EXEMPLO 3 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 28
Diluiu-se Fmoc-phe-lys(Mtr)-OH (24) (0,5 g, 0,63 mmol,
Patente dos E.U.A. N.2 6214345 de Firestone et al.) com diclorometano até uma concentração de 0,5 M e a esta solução adicionou-se dietilamina numa quantidade que foi aproximadamente do volume da solução de Composto 24/diclorometano. Deixou-se a mistura reaccional agitar e monitorizou-se utilizando HPLC. Verificou-se por HPLC que a reação ficou completa em 3 h. Concentrou-se a mistura reaccional in vacuo, e diluiu-se a resíduo resultante com acetato de etilo e depois reconcentrou-se. Triturou-se o resíduo resultante utilizando éter e filtrou-se. Diluiu-se o sólido residual com diclorometano até uma concentração de 0,2 M, e à solução resultante adicionou-se MC-OSu (0,20 g, 0,63 mmol, 1,0 eq.) e di-isopropiletilamina (0,12 mL, 0,70 mmol, 1,1 eq.). Deixou-se a mistura reaccional agitar sob uma atmosfera de azoto durante 16 h, período após o qual a HPLC mostrou muito pouco material de partida. Concentrou-se depois a mistura reaccional e triturou-se o resíduo resultante utilizando éter para proporcionar Composto 28 como um sólido colorido. Rendimento: 100 mg (21 %); ES-MS m/z 757,9 [M-H]-. EXEMPLO 4
PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 19A
Diluiu-se Composto 19 (1,0 g, 1,66 mmol) com DMF (10 mL) e à solução resultante adicionou-se bis(4-nitrofenil)carbonato (1,0 g, 3,3 mmol, 2,0 eq.).
Tratou-se imediatamente a mistura reaccional com di-isopropiletilamina (0,43 mL, 2,5 mmol, 1,5 eq.) e deixou-se a mistura reaccional agitar sob uma atmosfera de árgon. A reação ficou completa em 2,5 h de acordo com HPLC. Concentrou-se a mistura reaccional para proporcionar um óleo castanho-claro que foi precipitado utilizando acetato de etilo (5 mL) , e depois precipitado outra vez utilizando éter (cerca de 100 mL). Deixou-se o precipitado resultante em repouso durante 30 min, e depois filtrou-se e secou-se sob vácuo elevado para proporcionar Composto 19a como um pó esbranquiçado. Rendimento: 1,05 g (83%); ES-MS m/z 767,2 [M+H]+; UV max 215, 256 nm. EXEMPLO 5 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 49
O Composto 49 foi preparado de acordo com o Procedimento Geral D utilizando Fmoc-Me-val-val-dil-O-t-Bu 39 (0,40 g, 0,57 mmol) como o tripéptido e Boc-dap-nor 44 (0,26 g, 0,62 mmol, 1,1 eq.) como o dipéptido. Purificou-se a mistura reaccional utilizando cromatografia de coluna "flash" (coluna de sílica gel, eluente - EtOAc a 100%) . Foram eluídos dois produtos contendo Fmoc: o derivado de Fmoc de Composto 49 (Rf 0,17 em EtOAc a 100%) e o que se crê ser o derivado de Fmoc do acetato de TFA do Composto 49 (Rf 0,37) . Combinaram-se os produtos para proporcionar uma espuma branca que foi submetida ao Procedimento Geral E. A reação ficou completa após 2 h. Removeram-se os solventes para proporcionar um óleo que foi purificado utilizando cromatografia de coluna "flash" (eluente - diclorometano-metanol 9:1) para proporcionar Composto 49. EXEMPLO 6 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 50
O Composto 50 foi preparado fazendo reagir o tripéptido 42 e o dipéptido 48 de acordo com o Procedimento Geral D utilizando trietilamina (5,0 eq.) como a base. Após concentração da mistura reaccional, o resíduo resultante foi injetado diretamente numa coluna de HPLC preparativa de fase reversa (coluna Varian Dynamax 21,4 mm χ 25 cm, 5 pm, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e TEA 0,1 M/CO2 a 20 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min) . Reuniram-se as frações relevantes e concentrou-se, e diluiu-se o resíduo resultante com 10 mL de diclorometano-éter (1:1) . Arrefeceu-se a solução até 0°C e adicionou-se gota a gota HC1 etéreo 1,0 M (aprox. 10 eq.) . Filtrou-se o precipitado, Composto 50, e secou-se e verificou-se por HPLC que estava substancialmente puro. Rendimento: 71 mg (43%); ES-MS m/z 731,6 [M+H]+; UV max 215, 238, 290 nm.
Anal. Cale. C4oH7oN506,4H20 · 2HC1: C, 54,84; H, 9,20; N, 9,59.
Encontrada: C, 55:12; H, 9,41; N, 9,82. EXEMPLO 7 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 51
O Composto 51 foi preparado fazendo reagir Fmoc-tripéptido 41 e dipéptido 46 de acordo com o Procedimento Geral D utilizando trietilamina como a base. Após concentração da mistura reaccional, o resíduo foi injetado diretamente numa coluna de HPLC preparativa de fase reversa (coluna Varian Dynamax 21,4 mm χ 25 cm, 5 pm, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e TEA 0,1 M/CO2 a 20 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% for 20 min). Reuniram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar um intermediário sólido branco que foi utilizado no passo seguinte sem qualquer purificação adicional. ES-MS m/z 882, 9 [M+N]HU]+, 8 9 9, 9 [M+Na]+; UV max 215, 256 nm. A desproteção do intermediário sólido branco foi realizada de acordo com o Procedimento Geral E. Purificou-se o produto em bruto utilizando HPLC preparativa (coluna Varian Dynamax 21,4 mm χ 25 cm, 5 pm, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e TEA 0,1 M/CO2 a 20 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min) . Reuniram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar Composto 51 como um sólido pegajoso. ES-MS m/z 660, 1 [M+H]+, 682,5 [M+Na]+; UV max 215 nm. EXEMPLO δ PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 52
Diluíram-se Boc-dolaproina (0,33 g, 1,14 mmol) e (1S,2S)~ (-)-1,2-difeniletilenodiamina (0,5 g, 2,28 mmol, 2,0 eq.) com diclorometano, (10 mL) e à solução resultante adicionou-se trietilamina (0,32 mL, 2,28 mmol, 2,0 eq.)/· e depois DEPC (0,39 mL, 2,28 mmol, 2,0 eq.). Após 4 h, adicionou-se mais DEPC (0,39 mL) e deixou-se a mistura reaccional agitar de um dia para o outro. Concentrou-se a mistura reaccional e purificou-se o resíduo resultante utilizando HPLC preparativa (coluna Varian Dynamax Cis 21,4 mm χ 25 cm, 5 pm, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e água a 20 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min) . Reuniram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar um intermediário de péptido sólido pegajoso amarelo que foi utilizado sem qualquer purificação adicional. Rf 0,15 (EtOAc a 100%); ES-MS m/z 482,4 [M+H]+; UV max 215, 256 nm.
Diluiu-se o intermediário de péptido pegajoso amarelo (0,24 g, 0,50 mmol) com diclorometano, e à solução resultante adicionaram-se di-isopropiletilamina (0,18 mL, 1,0 mmol, 2,0 eq.) e Fmoc-Cl (0,15 g, 0,55 mmol, 1,1 eq.) . Deixou-se a mistura reaccional agitar durante 3 h, tempo após o qual a HPLC mostrou uma reação completa. Concentrou-se a mistura reaccional até se obter um óleo, e diluiu-se o óleo com EtOAc e extraiu-se sucessivamente com ácido cítrico aquoso a 10%, água, bicarbonato de sódio aquoso saturado e salmoura. Secou-se a fase de EtOAc, filtrou-se e concentrou-se, e purificou-se o resíduo resultante utilizando cromatografia de coluna "flash" (sílica gel 230-400 mesh; eluente gradiente hexanos-EtOAc 4:1 a hexanos-EtOAc 1:1) para proporcionar Composto 45 como um sólido branco. Rendimento: 0,37 g (46% global); Rf 0,47
(hexanos-EtOAc 1:1); ES-MS m/z 704,5 [M+H]+, 721,4 [M+NH4]+; UV max 215, 25 6 nm. O Composto 52 foi preparado fazendo reagir tripéptido 42 (94 mg, 0,13 mmol) e composto de dipéptido 45 (65 mg, 0,13 mmol) de acordo com o Procedimento Geral D (utilizando 3,6 eq. de di-isopropiletilamina como a base). Após concentração da mistura reaccional, diluiu-se o resíduo resultante com EtOAc e lavou-se sucessivamente com ácido cítrico aquoso a 10%, água, bicarbonato de sódio aquoso saturado e salmoura. Secou-se a fase orgânica, filtrou-se e concentrou-se para proporcionar um resíduo sólido branco que foi diluído com diclorometano e desprotegido de acordo com o Procedimento Geral E. De acordo com HPLC, a reação ficou completa após 2 h. Concentrou-se a mistura reaccional até se obter um óleo. Diluiu-se o óleo com DMSO, e purificou-se a solução resultante utilizando uma HPLC preparativa de fase reversa (coluna Varian Dynamax 21,4 mm χ 25 cm, 5 pm, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e TFA a 0,1% a 20 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min) . Isolaram-se dois produtos possuindo espectros de UV similares. O produto principal, Composto 52, foi obtido como um sólido esbranquiçado. Rendimento global: 24 mg (23%); ES-MS m/z 793,5 [M+H]+; UV max 215 nm. EXEMPLO 9 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 53
Adicionou-se Boc-fenilalanina (1,0 g, 3,8 mmol) a uma suspensão de 1,4-diaminobenzeno-HCl (3,5 g, 19,0 mmol, 5,0 eq.) em trietilamina (10,7 mL, 76,0 mmol, 20 eq.) e diclorometano (50 mL). À solução resultante adicionou-se DEPC (3,2 mL, 19,0 mmol, 5,0 eq.) através de seringa. A HPLC não mostrou qualquer Boc-phe restante após 24 h. Filtrou-se a mistura reaccional e concentrou-se o filtrado para proporcionar um sólido escuro. Repartiu-se o resíduo sólido escuro entre EtOAc-águal:1, e lavou-se a fase de EtOAc sequencialmente com água 3 salmoura. Secou-se a fase de EtOAc e concentrou-se para proporcionar um resíduo castanho-escuro/ avermelhado que foi purificado utilizando HPLC (coluna Varian Dynamax 41,4 mm χ 25 cm, 5 pm, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e água a 45 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min) . Combinaram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar um intermediário sólido castanho-avermelhado. Rendimento: 1,4 g (100%); ES-MS m/z 355, 9 [M+H]+; UV max 215, 265 nm; RMN (CDCI3) 7,48 (1H, s largo), 7,22-7,37 (5 H, m) , 7,12 (2 H, d, J= 8,7 Hz), 7,61 (2 H, d, J= 8,7 Hz), 5,19 (1H, s largo), 4,39-4,48 (1H, m), 3,49 (2 H, s), 3,13 (2 H, d, J= 5,7 Hz), 1,43 (9 H, s) .
Diluíram-se o intermediário sólido castanho-avermelhado (0,5 g, 1,41 mmol) e di-isopropiletilamina (0,37 mL, 2,11 mmol, 1,5 eq.) com diclorometano (10 mL) , e à solução resultante adicionou-se Fmoc-Cl (0,38 g, 1,41 mmol). Deixou-se a mistura reaccional agitar, e formou-se um precipitado sólido branco após alguns minutos. A reação ficou completa de acordo com HPLC após 1 h. Filtrou-se a mistura reaccional, e concentrou-se o filtrado para proporcionar um óleo. Precipitou-se o óleo com EtOAc, resultando num produto intermediário branco-avermelhado, que foi recolhido por filtração e seco sob vácuo. Rendimento: 0,75 g (93%); ES-MS m/z 578,1 [M+H]+, 595,6 [M+NH4] + .
Diluiu-se o intermediário branco-avermelhado (0,49 g, 0,85 mmol) com 10 mL de diclorometano, e depois tratou-se com 5 mL de ácido trifluoroacético. A reação ficou completa em 30 min de acordo com HPLC de fase reversa. Concentrou-se a mistura reaccional e precipitou-se o resíduo resultante com éter para proporcionar um sólido esbranquiçado. Filtrou-se o sólido esbranquiçado e secou-se para proporcionar um pó amorfo, que foi adicionado a uma solução de Boc-dap (0,24 g, 0,85 mmol) em diclorometano (10 mL). A esta solução adicionou-se trietilamina (0,36 mL, 2,5 mmol, 3,0 eq.) e PyBrop (0,59 g, 1,3 mmol, 1,5 eq.). Monitorizou-se a mistura reaccional utilizando HPLC de fase reversa. Após a reação estar completa, concentrou-se a mistura reaccional, e diluiu-se o resíduo resultante com EtOAc, e lavou-se sequencialmente com ácido cítrico aquoso a 10%, água, bicarbonato de sódio aquoso saturado, água e salmoura. Secou-se a fase de EtOAc (MgS04) , filtrou-se e concentrou-se. O resíduo resultante foi purificado utilizando cromatografia de coluna "flash" (sílica gel) para proporcionar Composto 47 como um pó esbranquiçado. Rendimento: 0,57 g (88%); ES-MS m/z 764,7 [M+NH4]+; UV max 215, 265 nm; RMN ΤΗ (DMSO-de) 10,0-10,15 (1H, m) , 9,63 (1H, s largo), 8,42 (1/2 H, d, J= 8,4 Hz), 8,22 (1/2 H, d, J = 8,4
Hz), 7,89 (2H, d, J= 7,2 Hz), 7,73 (2H, d, J= 7,6 Hz), 7,11- 7,55 (13H, m) , 4, 69-4,75 (1H, m) , 4,46 (2H, d, J = 6,8 Hz), 4,29 (1H, t, J = 6,4 Hz), 3,29 (3H, s), 2,77-3,47 (7H, m) , 2,48-2,50 (3 H, m), 2,25 (2/3 H, dd, J= 9,6, 7,2 Hz), 1,41-1,96 (4H, m), 1,36 (9H, s), 1,07 (1H, d, J = 6,4 Hz, isómero rotacional), 1,00 (1H, d, J = 6,4 Hz, isómero rotacional).
Fizeram-se reagir composto de tripéptido 42 (55 mg, 0,11 mmol) e composto de dipéptido 47 (85 mg, 0,11 mmol) de acordo com o Procedimento Geral D (utilizando 3,0 eq. de di-isopropiletilamina). Após concentração da mistura reaccional, diluiu-se o resíduo resultante com EtOAc, e lavou-se sequencialmente com ácido cítrico aquoso a 10%, água, bicarbonato de sódio aquoso saturado e salmoura. Secou-se a fase de EtOAc, filtrou-se e concentrou-se para proporcionar um óleo amarelo. Diluiu-se o óleo amarelo com diclorometano (10 mL) e desprotegeu-se de acordo com o Procedimento Geral E. De acordo com HPLC, a reação ficou completa após 2 h. Concentrou-se a mistura reaccional para proporcionar um óleo. Diluiu-se o óleo com DMSO e purificou-se a solução de DMSO utilizando HPLC preparativa de fase reversa (coluna Varian Dynamax 21,4 mm x 25 cm, 5 pm, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e TFA a 0,1% a 20 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min) . Combinaram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar Composto 53 como um sólido esbranquiçado. Rendimento global: 42 mg (44% global); ES-MS m/z 837,8 [M+H]+, 858,5 [M+Na]+; UV max 215, 248 nm. EXEMPLO 10 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 54
O Composto 54 foi preparado de acordo com K. Miyazaki, et al. Chem. Pharm. Buli. 1995, 43(10), 1706-18. EXEMPLO 11 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 55
O Composto 55 foi sintetizado do mesmo modo que o Composto 54, mas utilizando FmocMeVal-IIe-Dil-tBu (40) em substituição de FmocMeVal-Val-Dil-tBu (39) como o material de partida. EXEMPLO 12 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 56
Diluiu-se éster de [(IS)-1-(azidometil)-2-feniletil]-1,1-dimetiletilo de ácido carbâmico (0,56 g, 2 mmol, preparado como descrito em J. Chem. Research (S), 1992, 391), com uma solução 4 M de HC1 em dioxano (10 mL) e deixou-se a solução resultante agitar durante 2 h à temperatura ambiente. Adicionou-se depois tolueno (10 mL) à mistura reaccional, concentrou-se a mistura reaccional e secou-se azeotropicamente o resíduo resultante sob vácuo utilizando tolueno (3 χ 15 mL) para proporcionar um sólido branco intermediário. ES-MS m/ z 177,1 [M+H]+.
Diluiu-se o sólido branco intermediário com diclorometano (5 mL) e à solução resultante adicionou-se sequencialmente N-Boc-dolaproina (0,58 g, 1 eq.), trietilamina (780 pL, 3 eq.) e DEPC (406 pL, 1,2 eq.), e deixou-se a mistura reaccional agitar durante 2 h à temperatura ambiente. Monitorizou-se o progresso da reação utilizando HPLC de fase reversa. Após a reação estar completa como determinado por HPLC, diluiu-se a mistura reaccional com diclorometano (30 mL), lavou-se a fase de diclorometano sucessivamente com ácido cítrico aquoso a 10% (20 mL) , NaHCCb aquoso saturado (20 mL) e água (20 mL) . Concentrou-se a fase de diclorometano e purificou-se o resíduo resultante através de cromatografia de coluna "flash" utilizando um gradiente em degrau de 0-5% metanol em diclorometano. Combinaram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar um intermediário sólido, 0,78 g (88%). ES-MS m/z 446,1 [M+H]+, 468,3 [M+Na]+.
Diluíram-se o intermediário sólido (450 mg, 1 mmol) e tripéptido 42 (534 mg, 1,1 eq.) com uma solução a 50% de TFA em diclorometano (10 mL), e deixou-se a mistura reaccional resultante agitar durante 2 h à temperatura ambiente. Adicionou-se tolueno (10 mL) à mistura reaccional e concentrou-se a mistura reaccional. Secou-se azeotropicamente o intermediário de amina resultante utilizando tolueno (3 χ 20 mL) e secou-se sob vácuo de um dia para o outro.
Diluiu-se o intermediário de amina resultante com diclorometano (2 mL) e à solução resultante adicionou-se trietilamina (557 pL, 4 eq.), seguindo-se DEPC (203 pL, 1,4 eq.) . Deixou-se a mistura reaccional agitar durante 4 h à temperatura ambiente e monitorizou-se o progresso da reação utilizando HPLC. Após a reação estar completa, diluiu-se a mistura reaccional com diclorometano (30 mL) e lavou-se a fase de diclorometano sequencialmente utilizando NaHCCb aquoso saturado (20 mL) e NaCl aquoso saturado (20 mL). Concentrou-se a fase de diclorometano e purificou-se o resíduo resultante utilizando cromatografia de coluna "flash" num gradiente em degrau de 0-5% metanol em diclorometano. Combinaram-se as frações relevantes e concentrou-se e secou-se o resíduo resultante utilizando diclorometano:hexano (1:1) para proporcionar um intermediário sólido branco, 0,64 g (84%) . ES-MS m/z 757,5 [M+H]+.
Diluiu-se o intermediário sólido branco (536 mg, 0,73 mmol) com metanol e à solução resultante adicionou-se 10% Pd/C (100 mg). Colocou-se a mistura reaccional sob uma atmosfera de hidrogénio e deixou-se agitar à pressão atmosférica e temperatura ambiente durante 2 h. Monitorizou-se o progresso da reação por HPLC e estava completa em 2 h. Purgou-se o balão reaccional com árgon e filtrou-se a mistura reaccional através de um leito de Celite. Lavou-se o leito de Celite subsequentemente com metanol (30 mL) e concentraram-se os filtrados combinados para proporcionar um intermediário sólido cinzento que foi utilizado sem qualquer purificação adicional. Rendimento = 490 mg (91 %) . ES-MS m/z 731,6 [M+H]+, 366,6 [M+2H]2+/2 .
Diluíram-se o intermediário sólido cinzento (100 mg, 0,136, mmol) , ácido iV-Boc-4-aminobenzóico (39 mg, 1,2 eq.) e trietilamina (90 pL, 4 eq.) com diclorometano (2 mL) e à solução resultante adicionou-se DEPC (28 pL, 1,2 eq.). Deixou-se a mistura reaccional agitar à temperatura ambiente durante 2 h, e depois diluiu-se a mistura reaccional com diclorometano (30 mL) . Lavou-se a fase de diclorometano sequencialmente com NaHCCb aquoso saturado (20 mL) e NaCl aquoso saturado (20 mL). Concentrou-se depois a fase diclorometano e purificou-se o resíduo resultante através de cromatografia de coluna "flash" utilizando um gradiente em degrau de 0-5% em diclorometano. Combinaram-se as frações relevantes e concentrou-se e secou-se o resíduo resultante utilizando diclorometano:hexano (1:1) para proporcionar um intermediário sólido branco: ES-MS m/ z 950,7 [M+H] +.
Diluiu-se o intermediário sólido branco com uma solução a 50% de TFA em diclorometano e deixou-se agitar durante 2 h à temperatura ambiente. Adicionou-se tolueno (10 mL) à mistura reaccional e concentrou-se a mistura reaccional. Secou-se azeotropicamente o resíduo resultante utilizando tolueno (3 χ 15 mL), para proporcionar um óleo amarelo que foi purificado
utilizando HPLC preparativa (coluna Cis-RP Varian Dynamax, 5 pm, 100 À, gradiente linear de MeCN de 10 a 95% em tampão de carbonato de trietilamónio 0,05 M, pH 7,0, em 30 min com um caudal de 10 mL/min). Combinaram-se as frações relevantes e concentrou-se e secou-se azeotropicamente o resíduo resultante utilizando MeCN (3 x 20 mL), para proporcionar o Composto 56 como um sólido branco: 101 mg (87% em dois 2 passos) . ES-MS m/z 850, 6 [M+H] +, 872, 6 [M+Na] + . EXEMPLO 13 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 57
Diluíram-se Composto 49 (100 mg, 0,14 mmol), Composto 27 (160 mg, 0,15 mmol, 1,1 eq.) e HOBt (19 mg, 0,14 mmol, 1,0 eq.) com DMF (2 mL) . Após 2 min, adicionou-se piridina (0,5 mL) e monitorizou-se a mistura reaccional utilizando HPLC de fase reversa. Após 24 h não foram detetados nem Composto 49 nem Composto 27. Concentrou-se a mistura reaccional, e purificou-se o resíduo resultante utilizando HPLC preparativa de fase reversa (coluna Varian Dynamax 21,4 min χ 25 cm, 5 pm, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e Et3N-C02 (pH 7) a 20 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min). Reuniram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar um sólido esbranquiçado intermediário. ES-MS m/z 1608,7 [M+H]+.
Diluiu-se o sólido esbranquiçado intermediário com MeCN/água/TFA numa proporção de 85:5:10, respetivamente. Monitorizou-se a mistura reaccional utilizando HPLC e a reação ficou completa em 3 h. Concentrou-se diretamente a mistura reaccional e purificou-se o resíduo resultante utilizando HPLC preparativa de fase reversa (coluna Varian Dynamax 21,4 mm χ 25 cm, 5 pm, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e 0,1% TFA a 20 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min) . Combinaram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar Composto 57 como um pó esbranquiçado. Rendimento: 46 mg (32% global); ES-MS m/z 1334,8 [M+H]+; UV max 215, 256 nm. EXEMPLO 14 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 58
Diluíram-se Composto 49 (1,69 g, 2,35 mmol), Composto 21 (2,6 g, 3,52 mmol, 1,5 eq.) e HOBt (64 mg, 0,45 mmol, 0,2 eq.) com DMF (25 mL) . Após 2 min, adicionou-se piridina (5 mL) e monitorizou-se a reação utilizando HPLC de fase reversa. Verificou-se que a reação estava completa em 24 h. Concentrou-se a mistura reaccional para proporcionar um óleo escuro, que foi diluído com 3 mL de DMF. Purificou-se a solução de DMF utilizando cromatografia de coluna "flash" (sílica gel, eluente gradiente: 100% diclorometano até diclorometano- metanol 4:1) . Combinaram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar um óleo que solidificou sob vácuo elevado para proporcionar uma mistura de Composto 58 e de Composto 49 não reagido como um sólido amarelo sujo (Rf 0,40 em diclorometano-metanol 9:1). Diluiu-se o sólido amarelo sujo com DMF e purificou-se utilizando HPLC de fase reversa preparativa (coluna Cis Varian Dynamax 41,4 mm χ 25 cm, 8 m, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e TFA aquoso a 0,1% a 45 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min) para proporcionar Composto 58 como um pó branco amorfo (Rf 0,40 em diclorometano-metanol 9:1) que era >95% puro por HPLC e que continha menos de 1% de
Composto 49. Rendimento: 1,78 g (57%); ES-MS m/z 1316,7 [M+H]+; UV max 215, 248 nm. EXEMPLO 15 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 59
Diluíram-se o sal de cloridrato de Composto 51 (11 mg, 15,2 mmol) e Composto 21 (11 mg, 15,2 mmol) com l-metil-2- pirrolidinona (1 mL) e à solução resultante adicionou-se di-isopropiletilamina (5,3 mL, 30,3 mmol, 2,0 eq.). Deixou-se a mistura agitar sob atmosfera de árgon durante 3 d enquanto se monitorizou utilizando HPLC. Após este tempo, permanecia ainda muito material de partida não reagido, adicionou-se HOBt (1,0 eq.) e deixou-se a mistura reaccional agitar durante 24 h, tempo após o qual não restou qualquer material de partida de acordo com HPLC. Concentrou-se a mistura reaccional e purificou-se o resíduo resultante utilizando HPLC preparativa (coluna Varian Dynamax Cis 21,4 mm χ 25 cm, 5 m, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e água a 20 mL/min de 10% a 100% durante 30 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min). Combinaram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar Composto 59 como um sólido branco. Rendimento: 13 mg (67%); ES-MS m/z 1287,2 [M+H]+, 1304,3 [M+NH4]+; UV max 215, 248 nm. EXEMPLO 16 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 60
Diluíram-se Composto 53 (9 mg, 10,8 pmol) e Composto 28 (5,2 mg, 10,8 pmol) com diclorometano (1 mL) e à solução resultante adicionou-se HATU (6,3 mg, 16,1 pmol, 1,5 eq.), seguindo-se piridina (1,3 pL, 16,1 pmol, 1,5 eq.). Deixou-se a mistura reaccional agitar sob atmosfera de árgon enquanto se monitorizou utilizando HPLC. A reação ficou completa após 6 h. Concentrou-se a mistura reaccional e diluiu-se o resíduo resultante com DMSO. Purificou-se a solução de DMSO utilizando HPLC preparativa de fase reversa (coluna Varian Dynamax 21,4 mm x 25 cm, 5 pm, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e TFA a 0,1% a 20 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min) e combinaram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar um sólido esbranquiçado intermediário que era >95% puro de acordo com HPLC.
Diluiu-se o sólido esbranquiçado intermediário com diclorometano (2 mL) e tratou-se a solução resultante com TFA (0,5 mL) . Monitorizou-se a reação utilizando HPLC, e estava completa em 2 h. Concentrou-se a mistura reaccional, e diluiu-se o resíduo resultante com DMSO e purificou-se sob as mesmas condições como descrito em Exemplo 13, Combinaram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar Composto 60 como um pó esbranquiçado. Rendimento: 14,9 mg (90%); ES-MS m/ z 1304,6 [M+H]+; UV max 215, 275 nm. EXEMPLO 17 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 61
Diluíram-se sal de trifluoroacetato de Composto 53 (0,37 g, 0,39 mmol, 1,0 eq.) e Composto 18 (0,30 g, 0,58 mmol, 1,5 eq.) com DMF (5 mL, 0,1 M), e à solução resultante adicionou-se piridina (95 pL, 1,2 mmol, 3,0 eq.) . Adicionou-se então HATU (0,23 g, 0,58 mmol, 1,5 eq.) como um sólido e deixou-se a mistura reaccional agitar sob atmosfera de árgon enquanto se monitorizou utilizando HPLC. A reação progrediu lentamente, e 4 h mais tarde, adicionou-se 1,0 eq. de di-isopropiletilamina. A reação ficou completa em 1 h. Concentrou-se a mistura reaccional in vacuo e purificou-se o resíduo resultante utilizando HPLC preparativa (coluna Varian Dynamax C18 41,4 mm x 25 cm, 5 pm, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e TFA aquoso a 0,1% a 45 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min) para proporcionar um intermediário sólido cor-de-rosa desmaiado. O intermediário sólido cor-de-rosa foi diluído com DMF (30 mL) e à solução resultante adicionou-se dietilamina (15 mL) . Reação ficou completa por HPLC em 2 h. Concentrou-se a mistura reaccional e lavou-se o resíduo resultante duas vezes com éter. Secou-se o intermediário sólido sob vácuo elevado e depois utilizou-se diretamente no passo seguinte.
Diluiu-se o intermediário sólido com DMF (20 mL) e à solução resultante adicionou-se MC-OSu (0,12 g, 0,39 mmol, 1,0 eq.) . Após 4 d, concentrou-se a mistura reaccional para proporcionar um óleo que foi purificado utilizando HPLC preparativa (coluna Varian Dynamax C18 41,4 mm χ 25 cm, 5 pm, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e TFA aquoso a 0,1% a 45 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min). O Composto 61 foi isolado como um sólido em flocos brancos. Rendimento: 0,21 g (38% global); ES-MS m/z 1285, 9 [M+H]+; 1307,8 [M+Na]+; UV max 215, 266 nm. EXEMPLO 18 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 62
Diluíram-se Fmoc-val-cit-PAB-OCO-Pnp (19a) (0,65 g, 0,85 mmol, 1,1 eq.), Composto 49 (0,55 g, 0,77 mmol, 1,0 eq.) e HOBt (21 mg, 0,15 mmol, 2,0 eq.) com DMF (2,0 mL) e dissolveram utilizando sonicação. À solução resultante adicionou-se piridina (0,5 mL) e monitorizou-se a reação utilizando HPLC. Após 24 h, adicionou-se di-isopropiletilamina (1,0 eq.) e deixou-se a mistura reaccional em repouso sem agitação durante 24 h. Concentrou-se a mistura reaccional para proporcionar um óleo resíduo. O resíduo de óleo foi purificado utilizando HPLC preparativa de fase reversa (coluna Varian Dynamax 41,4 mm χ 25 cm, 5 pm, 100 À, utilizando uma operação em gradiente de
MeCN e TFA a 0,1% a 45 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min.). Reuniram-se as frações desejadas e concentrou-se para dar um óleo que foi precipitado com éter para proporcionar um sólido esbranquiçado intermediário. Rendimento: 0,77 g (74%); ES-MS m/z 1345,7 [M+H]+; UV max 215, 254 nm.
Desprotegeu-se o sólido esbranquiçado intermediário (cerca de 85 mg) utilizando dietilamina (1 mL) em DMF (3 mL). Após 1 h, a reação ficou complete. Concentrou-se a mistura reaccional, e precipitou-se o resíduo resultante em 1 mL de EtOAc seguindo-se a adição de éter em excesso (cerca de 20 mL). Filtrou-se o intermediário de amina e secou-se sob vácuo elevado e utilizou-se no passo seguinte sem qualquer purificação adicional.
Retomou-se o intermediário de amina (70 mg, 61 pmol, 1,0 eq.) em DMF (10 mL) e à solução resultante adicionaram-se sequencialmente ácido bromoacetamidocapróico (17 mg, 67 pmol, 1,1 eq.), PyBrop (32 mg, 67 pmol, 1,1 eq.) e di-isopropiletilamina (16 pL, 92 pmol, 1,5 eq.) . Após 24 h, adicionaram-se mais 1,0 eq. de ácido bromoacetamidocapróico. Parou-se a reação após 30 h. Concentrou-se a mistura reaccional até se obter um óleo e purificou-se o óleo utilizando HPLC preparativa de fase reversa (coluna Synergi MaxRP C12 21,4 mm x 25 cm, 5 pm, 80 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e TFA a 0,1% a 20 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min.) . Combinaram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar Composto 62 como um sólido branco. Rendimento: 23 mg (27%); ES-MS m/z 1356,7 [M+H]+; UV max 215, 247 nm. EXEMPLO 19 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 63
Submeteu-se Fmoc-val-cit-PAB-OC(O)-Me-val-val-dil-dap-nor (cerca de 48 mg, obtido de acordo com Exemplo 18) a remoção de Fmoc por tratamento com dietilamina (1 mL) em DMF (3 mL). Após 1 h, a reação ficou completa. Concentrou-se a mistura reaccional e precipitou-se o resíduo resultante utilizando 1 mL de EtOAc seguindo-se adição de éter em excesso (cerca de 20 mL). Filtrou-se o intermediário de amina e secou-se sob vácuo elevado e utilizou-se no passo seguinte sem qualquer purificação adicional.
Diluiu-se o intermediário de amina (35 pmol, 1,1 eq.) com DMF (2 mL) e à solução resultante adicionou-se sequencialmente maleimido-PEG ácido (Frisch, B.; Boeckler, C.; Schuber, F. Biocon jugate Chem. 1996, 7, 180-6; 7,8 mg, 32 pmol, 1,0 eq.), DEPC (10,7 pL, 64 pmol, 2,0 eq.) e di-isopropiletilamina (11,3 pL, 64 pmol, 2,0 eq.) . A reação ficou completa em 15 min de acordo com HPLC. Concentrou-se a mistura reaccional para proporcionar um óleo. Diluiu-se o óleo com 1 mL de DMSO e purificou-se utilizando HPLC preparativa de fase reversa (coluna Synergi MaxRP C12 21,4 mm x 25 cm, 5 pm, 80 À, utilizando uma operação em gradiente de MeCN e TFA a 0,1% a 20 mL/min de 10% a 100% durante 40 min seguindo-se MeCN a 100% durante 20 min). Combinaram-se as frações relevantes e concentrou-se para proporcionar Composto 63 como um sólido branco.
Rendimento: 16,2 mg (34%); ES-MS m/z 1348, 6 [M+H]+; UV max 215, 247 nm.
Os Exemplos 20-25 descrevem a conjugação dos anticorpos monoclonais cBR96 e cAClO a um Composto de Fármaco-Ligador. Estes anticorpos foram obtidos como descrito em Bowen, et al., J. Immunol. 1993, 151, 5896; e Trail, et al., Science 1993, 261, 212, respetivamente. O número de porções de Fármaco-Ligador por Ligando num Conjugado de Fármaco-Ligador-Ligando varia de reação de conjugação para reação de conjugação, mas varia tipicamente de cerca de 7 a cerca de 9, particularmente quando o Ligando é cBR96 ou cACl0. EXEMPLO 20 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 64
O anticorpo cBR96 (24 mg) foi reduzido utilizando DTT como descrito no Procedimento Geral L, e depois determinaram-se o número de tióis por anticorpo e a concentração de anticorpo como descrito no Procedimento Geral M e Procedimento Geral N, respetivamente.
Resultado: [Ab] =4,7 mg/mL = 29,4 μΜ; [tiol] = 265, μΜ; SH/Ab =9,0 (O intervalo de SH/Ab típico é de cerca de 7,8 a cerca de 9,5).
Conjugação:
Adicionou-se uma solução de PBS/DTPA (2,2 mL), como aqui definido acima, a 4,2 mL de anticorpo reduzido e arrefeceu-se a solução resultante até 0°C utilizando um banho de gelo. Num balão separado, diluíram-se 130,5 pL de uma solução de reserva de Composto 57 (8,4 mM em DMSO, 8,5 mol de Composto 57 por mol de anticorpo reduzido) com MeCN (1,48 mL, pré-arrefecido a 0°C num banho de gelo) . Adicionou-se rapidamente a solução de Composto 57 em MeCN à solução de anticorpo e agitou-se a mistura reaccional utilizando um equipamento de vórtice durante 5-10 s, depois retornou ao banho de gelo e deixou-se agitar a 0°C durante 1 h, tempo após o qual se adicionaram depois 218 pL de uma solução de cisteína (100 mM em PBS/DTPA) para extinguir a reação. Guardaram-se 60 pL da mistura reaccional extinta como uma amostra "qrm".
Enquanto a reação prosseguia, colocaram-se três colunas PD10 (Sephadex G25, disponíveis na Sigma-Aldrich, St. Louis,
Mo.) numa sala arrefecida e equilibraram-se com PBS (que tinha sido pré-arrefecido a 0°C utilizando um banho de gelo). A mistura reaccional extinta, que continha Composto 64, foi concentrada até <3 mL por ultracentrifugação utilizando dois dispositivos de filtração centrífugos Ultrafree 4 (membrana de corte de peso molecular 30K; Millipore Corp.; Bedford, MA; utilizados de acordo com as instruções do fabricante) que foram pré-arrefecidos até 4°C num frigorífico e eluiu-se a mistura reaccional concentrada através das três colunas PD10 pré-arrefecidas utilizando PBS como eluente (1 mL para cada coluna). Recolheu-se o conjugado eluído num volume de 1,4 mL por coluna, para um volume eluído total de 4,2 mL. Filtrou-se depois a solução de Conjugado eluído utilizando um filtro de 0,2 micron na extremidade de uma seringa, retiraram-se 250 pL de solução de Conjugado para análise, e congelou-se o restante da solução de Conjugado em frascos esterilizados.
Determinaram-se a concentração de Composto 64, o número de moléculas de Fármaco por Anticorpo, a quantidade de Fármaco-Ligador extinto e a percentagem de agregados utilizando os Procedimentos Gerais P, N, O e Q, respetivamente.
Resultados de Ensaio:
[Composto 64] =3,8 mg/mL % de Agregado = vestígios
Titulação de Tiol Residual: Tióis Residuais = 1,7/Ab. Fármaco/Ab ~ 9,0 - 1,7 = 7,3 Fármaco-Ligador Extinto: não detetável
Rendimento: 4,2 mL, 16 mg, 66%. EXEMPLO 21 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 65
0 anticorpo cAClO (24 mg) foi reduzido utilizando DTT como descrito no Procedimento Geral L, e depois determinaram-se o número de tióis por anticorpo e a concentração de anticorpo como descrito no Procedimento Geral M e Procedimento Geral N, respetivamente.
Resultados: [Ab] =4,9 mg/mL = 30,7 μΜ; [tiol] = 283 μΜ; 9,2 SH/Ab
Conjugação:
Adicionou-se uma solução de PBS/DTPA (2,2 mL) como agui definido acima, a 4,2 mL de anticorpo reduzido e arrefeceu-se a solução resultante até 0°C utilizando um banho de gelo. Num balão separado, diluiram-se 125 pL de uma solução de reserva de Composto 57 (8,4 mM em DMSO, 8,5 mol de Composto 57 por mol de anticorpo reduzido) com MeCN (1,48 mL, pré-arrefecido a 0°C num banho de gelo) . Adicionou-se rapidamente a solução de Composto 57 em MeCN à solução de anticorpo e agitou-se a mistura reaccional utilizando um eguipamento de vórtice durante 5-10 s, retornou ao banho de gelo e deixou-se agitar a 0°C durante 1 h, tempo após o gual se adicionaram depois 218 pL de uma solução de cisteina (100 mM em PBS/DTPA) para extinguir a reação. Guardaram-se 60 pL da mistura reaccional extinta como uma amostra "qrm".
Enquanto a reação prosseguia, colocaram-se quatro Colunas PD10 (Sephadex G25, disponíveis na Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo.) numa sala arrefecida e equilibraram-se com PBS (que tinha sido pré-arrefecido a 0°C utilizando um banho de gelo). A mistura reaccional extinta, que continha Composto 65, foi concentrada até <3 mL por ultracentrifugação utilizando dois dispositivos de filtração centrífugos Ultrafree 4 (membrana de corte de peso molecular 30K; Millipore Corp.; Bedford, MA; utilizados de acordo com as instruções do fabricante) que foram pré-arrefecidos até 4°C num frigorifico e eluiu-se a mistura reaccional concentrada através das quatro colunas PD10 pré-arrefecidas utilizando PBS como eluente (1 mL para cada coluna). Recolheu-se o conjugado eluído num volume de 1,4 mL por coluna, para um volume eluído total de 5,6 mL. Filtrou-se depois a solução de Conjugado eluído utilizando um filtro de 0,2 micron na extremidade de uma seringa, retiraram-se 250 pL de solução de Conjugado para análise, e congelou-se o restante da solução de Conjugado em frascos esterilizados.
Determinaram-se depois a concentração de Composto 65, o número de moléculas de Fármaco por Anticorpo, a quantidade de Fármaco-Ligador extinto e a percentagem de agregados utilizando os Procedimentos Gerais P, N, O e Q, respetivamente.
Resultados de Ensaio:
[Composto 65] =2,8 mg/mL % de Agregado = vestígios
Titulação de Tiol Residual: Tióis Residuais = 1,6/Ab. Fármaco/Ab ~ 9,2 - 1,6 = 7,6 Fármaco-Ligador não ligado covalentemente: não detetável
Rendimento: 5,6 mL, 15,7 mg, 65%. EXEMPLO 22 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 66
0 anticorpo cBR96 (24 mg) foi reduzido utilizando DTT como descrito no Procedimento Geral L, e depois determinaram-se o número de tióis por anticorpo e a concentração de anticorpo como descrito no Procedimento Geral M e Procedimento Geral N, respetivamente.
Resultado: [Ab] =3,7 mg/mL = 23,1 μΜ; [tiol] = 218 μΜ; 9,4 SH/Ab
Conjugação:
Adicionou-se uma solução de PBS/DTPA (2,2 mL) como aqui definido acima, a 4,2 mL de anticorpo reduzido e arrefeceu-se a solução resultante até 0°C utilizando um banho de gelo. Num balão separado, diluiram-se 145,5 pL de uma solução de reserva de Composto 58 (8,3 mM em DMSO, 9,0 mol de Composto 58 por mol de anticorpo reduzido) com MeCN (1,48 mL, pré-arrefecido a 0°C num banho de gelo) . Adicionou-se rapidamente a solução de Composto 58 em MeCN à solução de anticorpo e agitou-se a mistura reaccional utilizando um equipamento de vórtice durante 5-10 s, depois retornou ao banho de gelo e deixou-se agitar a 0°C durante 1 h, tempo após o qual se adicionaram depois 249 pL de uma solução de cisteina (100 mM em PBS/DTPA) para extinguir a reação. Guardaram-se 60 pL da mistura reaccional extinta como uma amostra "qrm".
Enquanto a reação prosseguia, colocaram-se três colunas PD10 (Sephadex G25, disponíveis na Sigma-Aldrich, St. Louis,
Mo.) numa sala arrefecida e equilibraram-se com PBS (que tinha sido pré-arrefecido a 0°C utilizando um banho de gelo). A mistura reaccional extinta, que continha Composto 66, foi concentrada até <3 mL por ultracentrifugação utilizando dois dispositivos de filtração centrífugos Ultrafree 4 (membrana de corte de peso molecular 30K; Millipore Corp.; Bedford, MA; utilizados de acordo com as instruções do fabricante) que foram pré-arrefecidos até 4°C num frigorífico e eluiu-se a mistura reaccional concentrada através das três colunas PD10 pré-arrefecidas utilizando PBS como eluente (1 mL para cada coluna). Recolheu-se o conjugado eluído num volume de 1,4 mL por coluna, para um volume eluído total de 4,2 mL. Filtrou-se depois a solução de Conjugado eluído utilizando um filtro de 0,2 micron na extremidade de uma seringa, retiraram-se 250 pL de solução de Conjugado para análise, e congelou-se o restante da solução de Conjugado em frascos esterilizados.
Determinaram-se a concentração de Composto 66, o número de moléculas de Fármaco por Anticorpo, a quantidade de Fármaco-Ligador extinto e a percentagem de agregados utilizando os Procedimentos Gerais P, N, O e Q, respetivamente.
Resultados de Ensaio:
[Composto 66] =3,0 mg/mL % de Agregado = vestígios
Titulação de Tiol Residual: Tióis Residuais = 0,4/Ab. Fármaco/Ab ~ 9,5 - 0,4 = 9,1 Fármaco-Ligador não ligado covalentemente: 0,3% de aduto 57-Cys
Rendimento: 5,3 mL, 15,9 mg, 66%. EXEMPLO 23 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 67
0 anticorpo cAClO (24 mg) foi reduzido utilizando DTT como descrito no Procedimento Geral L, e depois determinaram-se o número de tióis por anticorpo e a concentração de anticorpo como descrito no Procedimento Geral M e Procedimento Geral N, respetivamente.
Resultado: [Ab] =3,9 mg/mL = 24,5 μΜ; [tiol] = 227 μΜ; 9,3 SH/Ab
Conjugação
Adicionou-se uma solução de PBS/DTPA (2,2 mL) como aqui definido acima, a 4,2 mL de anticorpo reduzido e arrefeceu-se a solução resultante até 0°C utilizando um banho de gelo. Num balão separado, diluiram-se 154,4 pL de uma solução de reserva de Composto 58 (8,3 mM em DMSO, 9,0 mol de Composto 58 por mol de anticorpo reduzido) com MeCN (1,46 mL, pré-arrefecido a 0°C num banho de gelo) . Adicionou-se rapidamente a solução de Composto 58 em MeCN à solução de anticorpo e agitou-se a mistura reaccional utilizando um equipamento de vórtice durante 5-10 s, depois retornou ao banho de gelo e deixou-se agitar a 0°C durante 1 h, tempo após o qual se adicionaram depois 249 pL de uma solução de cisteina (100 mM in PBS/DTPA) para extinguir a reação. Guardaram-se 60 pL da mistura reaccional extinta como uma amostra "qrm".
Enquanto a reação prosseguia, colocaram-se quatro colunas PD10 (Sephadex G25, disponíveis na Sigma-Aldrich, St. Louis,
Mo.) numa sala arrefecida e equilibraram-se com PBS (que tinha sido pré-arrefecido a 0°C utilizando um banho de gelo). A mistura reaccional extinta, que continha Composto 67, foi concentrada até <3 mL por ultracentrifugação utilizando dois dispositivos de filtração centrífugos Ultrafree 4 (membrana de corte de peso molecular 30K; Millipore Corp; Bedford, MA; utilizados de acordo com as instruções do fabricante) que foram pré-arrefecidos até 4°C num frigorífico e eluiu-se a mistura reaccional concentrada através das quatro colunas PD10 pré-arrefecidas utilizando PBS como eluente (1 mL para cada coluna). Recolheu-se o conjugado eluído num volume de 1,4 mL por coluna, para um volume eluído total de 5,6 mL. Filtrou-se depois a solução de Conjugado eluído utilizando um filtro de 0,2 micron na extremidade de uma seringa, retiraram-se 250 pL de solução de Conjugado para análise, e congelou-se o restante da solução de Conjugado em frascos esterilizados.
Determinaram-se a concentração de Composto 67, o número de moléculas de Fármaco por Anticorpo, a quantidade de Fármaco-Ligador extinto e a percentagem de agregados utilizando os Procedimentos Gerais P, N, O e Q, respetivamente.
Resultados de Ensaio:
[Composto 67] =3,0 mg/mL % de Agregado = vestígios
Titulação de Tiol Residual: Tióis Residuais = 0,5/Ab. Fármaco/Ab ~ 9,5 - 0,5 = 9,0 Fármaco-Ligador extinto: 1,1% de aduto 58-Cys
Rendimento: 5,3 mL, 15,9 mg, 66 %. EXEMPLO 24 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 68
0 anticorpo cBR96 (24 mg) foi reduzido utilizando DTT como descrito no Procedimento Geral L, e depois determinaram-se o número de tióis por anticorpo e a concentração de anticorpo como descrito no Procedimento Geral M e no Procedimento Geral N, respetivamente.
Resultado: [Ab] =4,4 mg/mL = 27,2 μΜ; [tiol] = 277 μΜ; 10,2 SH/Ab
Conjugação:
Diluiu-se o anticorpo reduzido com DMSO (1,47 mL, pré-arrefecido a 0°C num banho de gelo) tal que a solução resultante tinha 20% em DMSO. Deixou-se a solução agitar durante 10 min a 0°C, depois adicionaram-se rapidamente 127,8 pL de uma solução de reserva de Composto 60 (solução 7,6 mM em DMSO; 9 mol de Composto 60 por mol de anticorpo) . Agitou-se rapidamente a mistura reaccional utilizando um equipamento de vórtice e retornou-se ao banho de gelo e deixou-se agitar a 0 °C durante 1 h, tempo após o qual se adicionaram depois 213 pL de uma solução de cisteina (100 mM em PBS/DTPA) para extinguir a reação. Guardaram-se 60 pL da mistura reaccional extinta como uma amostra "qrm".
Enquanto a reação prosseguia, colocaram-se quatro colunas PD10 (Sephadex G25, disponíveis na Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo.) numa sala arrefecida e equilibraram-se com PBS (que tinha sido pré-arrefecido a 0°C utilizando um banho de gelo) . A mistura reaccional extinta, que continha Composto 68, foi concentrada até <3 mL por ultracentrifugação utilizando dois dispositivos de filtração centrífugos Ultrafree 4 (membrana de corte de peso molecular 30K; Millipore Corp.; Bedford, MA; utilizados de acordo com as instruções do fabricante) que foram pré-arrefecidos até 4°C num frigorífico e eluiu-se a mistura reaccional concentrada através das quatro colunas PD10 pré-arrefecidas utilizando PBS como eluente (1 mL para cada coluna). Recolheu-se o conjugado eluído num volume de 1,4 mL por coluna, para um volume eluído total de 5,6 mL. Filtrou-se depois a solução de Conjugado eluído utilizando um filtro de 0,2 micron na extremidade de uma seringa, retiraram-se 250 pL de solução de Conjugado para análise, e congelou-se o restante da solução de Conjugado em frascos esterilizados.
Determinaram-se a concentração de Composto 68, o número de moléculas de Fármaco por Anticorpo, a quantidade de Fármaco-Ligador extinto e a percentagem de agregados utilizando os Procedimentos Gerais P, N, O e Q, respetivamente.
Porque as absorvâncias de Composto 60 e anticorpo se sobrepõem grandemente, a determinação espectrofotométrica da concentração de conjugado requer a medição da absorvância a 270 e 280 nm. A concentração molar de conjugado é dada pela fórmula seguinte: [Conjugado] = (OD28oxl, 0 8e_5-OD27ox 8,20e-6) xfator de diluição, onde os valores l,08e~5 e 8,20e~6 são calculados a partir dos coeficientes de extinção molar do fármaco e do anticorpo, que são estimados como: e27o Composto 60 = 2,06e4 e27o cBR96 = l,87e5 e28o Composto 60 = l,57e4 e28o cBR96 = 2,24e5
Resultados de Ensaio:
[Composto 68] =3,2 mg/mL % de Agregado = vestígios
Titulação de Tiol Residual: Tióis Residuais = 1,0/Ab. Fármaco/Ab ~ 10,2 - 1,0= 9,2 Fármaco-Ligador extinto: vestígios
Rendimento: 5,6 mL, 17,9 mg, 75%. EXEMPLO 25 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 69
0 anticorpo cAClO (24 mg) foi reduzido utilizando DTT como descrito no Procedimento Geral L, e depois determinaram-se o número de tióis por anticorpo e a concentração de anticorpo como descrito no Procedimento Geral M e no Procedimento Geral N, respetivamente.
Resultado: [Ab] =4,8 mg/mL = 29,8 μΜ; [tiol] = 281 μΜ; 9,4 SH/Ab
Conjugação:
Diluiu-se o anticorpo reduzido com DMSO (1,47 mL, pré-arrefecido a 0°C num banho de gelo) tal que a solução resultante tinha 20% em DMSO. Deixou-se a solução agitar durante 10 min a 0°C, e depois adicionaram-se rapidamente 140 pL de uma solução de reserva de Composto 60 (solução 7,6 mM em DMSO; 8,5 mol de Composto 60 por mol de anticorpo). Agitou-se rapidamente a mistura reaccional utilizando um equipamento de vórtice e retornou-se ao banho de gelo e deixou-se agitar durante lha 0°C, tempo após o qual se adicionaram depois 213 pL de uma solução de cisteína (100 mM em PBS/DTPA) para extinguir a reação. Guardaram-se 60 pL da mistura reaccional extinta como uma amostra "qrm".
Enquanto a reação prosseguia, colocaram-se quatro colunas PD10 (Sephadex G25, disponíveis na Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo.) numa sala arrefecida e equilibraram-se com PBS (que tinha sido pré-arrefecido a 0°C utilizando um banho de gelo) . A mistura reaccional extinta, que continha Composto 69, foi concentrada até <3 mL por ultracentrifugação utilizando dois dispositivos de filtração centrífugos Ultrafree 4 (membrana de corte de peso molecular 30K; Millipore Corp.; Bedford, MA; utilizados de acordo com as instruções do fabricante) que foram pré-arrefecidos até 4°C num frigorifico e eluiu-se a mistura reaccional concentrada através das quatro colunas PD10 pré-arrefecidas utilizando PBS como eluente (1 mL para cada coluna) . Recolheu-se o conjugado eluído num volume de 1,4 mL por coluna, para um volume eluído total de 5,6 mL. Filtrou-se depois a solução de Conjugado eluído utilizando um filtro de 0,2 micron na extremidade de uma seringa, retiraram-se 250 pL de solução de Conjugado para análise, e congelou-se o restante da solução de Conjugado em frascos esterilizados.
Determinaram-se a concentração de Composto 69, o número de moléculas de Fármaco por Anticorpo, a quantidade de Fármaco-Ligador extinto e a percentagem de agregados utilizando os Procedimentos Gerais P, N, O e Q, respetivamente.
Porque as absorvâncias de Composto 60 e anticorpo se sobrepõem grandemente, a determinação espectrofotométrica da concentração de conjugado requer a medição da absorvância a 270 e 280 nm. A concentração molar de conjugado é dada pela fórmula seguinte: [Conjugado] = (Οϋ28οχ1, 0 8e~5-OD27ox 8,20e~6) xfator de diluição, onde os valores l,08e~5 e 8,20e~6 são calculados a partir dos coeficientes de extinção molar do fármaco e do anticorpo, que são estimados como: e27o Composto 60 = 2,06e4 e27o cAClO = 2,10e5 e28o Composto 60 = l,57e4 e28o cAClO = 2,53e5
Resultados de Ensaio: [Composto 69] =3,0 mg/mL % de Agregado = vestígios
Titulação de Tiol Residual: Tióis Residuais = 0,7/Ab. Fármaco/Ab ~ 9,4 - 0,7 = 8,7 Fármaco-Ligador extinto: vestígios
Rendimento: 5,6 mL, 16,8 mg, 70%. EXEMPLO 26 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 75
Diluiu-se (4-nitrobenzil)fosfonato de dietilo (1,1 g, 4,02 mmol) em THF anidro (4 mL) e arrefeceu-se a mistura resultante até 0°C. Adicionou-se hidreto de sódio (0,17 g, 4,22 mmol, 1,05 eq., dispersão a 60% em óleo mineral) e deixou-se a mistura reaccional resultante agitar durante 5 min. Neste momento, a libertação de gás a partir da mistura reaccional tinha cessado. Adicionou-se depois 2,2-dimetil-l,3-dioxan-5-ona (0,52 g, 4,02 mmol) em 1 mL de THF anidro à mistura reaccional através de seringa e depois deixou-se a mistura reaccional aquecer até à temperatura ambiente com agitação. Após 30 min, adicionou-se mais THF (1 mL) para ajudar a diluir o precipitado resultante e agitou-se a mistura resultante durante 30 min, e foi transferido para uma ampola de decantação contendo EtOAc (10 mL) e água (10 mL) . Recolheu-se a fase orgânica, lavou-se com salmoura e lavaram-se os extratos aquosos combinados com acetato de etilo (2x) . Secaram-se os extratos orgânicos combinados sobre MgSCh, filtrou-se e concentrou-se para proporcionar um óleo em bruto vermelho-escuro que foi purificado utilizando cromatografia "flash" numa coluna de sílica gel (300 χ 25 mm) e eluição com hexanos-EtOAc 9:1 para proporcionar um intermediário sólido amarelado. Rendimento: 0,57 g (57%); Rf 0,24 (hexanos-EtOAc 9:1); UV max 225, 320 nm. RMN 3H (CDC13) 8,19 (2H, d*T = 8,4 Hz), 7,24 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,33 (1H, s) , 4,62 (2H, s), 4,42 (2H, s), 1,45 (6H, s) . RMN 13C (CDC13) 146, 6, 142,7, 141,3, 129,4, 123, 9, 121,1, 99, 9, 64,4, 60, 8, 24,1.
Diluiu-se o intermediário sólido amarelado (0,25 g, 1,0 mmol) utilizando THF (20 mL), tratou-se a mistura resultante com 1 N HC1 (10 mL) e deixou-se agitar durante 5 min. À mistura reaccional, adicionaram-se dietiléter (150 mL) e água e transferiu-se a mistura resultante para uma ampola de decantação. Secou-se a fase orgânica (MgSCg) filtrou-se e concentrou-se para dar um óleo. Retomou-se depois o diol resultante em THF-metanol (1:1, 4 mL cada, 0,3 M) seguindo-se a adição de Níquel de Raney (100 pL, 100 pL/mmol de grupo nitro, suspensão a 50% em água) e hidrazina (74 pL, 1,5 eq.) A libertação de gás ocorreu enquanto se aqueceu a mistura reaccional a 50-60°C. Após 30 min e 1 h, adicionaram-se de cada vez 1,5 eq. de hidrazina. Filtrou-se a mistura amarela através de celite e lavou-se com metanol. Concentrou-se o filtrado para proporcionar o Composto 75 como um óleo que mais tarde cristalizou como um sólido amarelo. Rendimento: 0,14 g (78%); UV max 215, 260 nm. RMN 3Η (DMSO) 7,00 (2H, d *7 = 8.4 Hz), 6,51 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,33 (1H, s) , 5,20 (2H, s largo), 4,64 (2 H, d largo), 4,04 (2H, s) . RMN 13C (DMSO) 147,2, 138,1, 129, 6, 126, 1, 124, 6, 113,7, 63, 6, 57,5. EXEMPLO 27 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 79
A uma mistura de Composto 75 (BHMS, 0,12 g, 0,67 mmol) em metanol-diclorometano (1:2,4,5 mL total) adicionou-se Fmoc-Val-Cit (0,33 g, 0,67 mmol) seguindo-se EEDQ (0,25 g, 1,0 mmol, 1.5 eq.) e deixou-se a mistura reaccional resultante agitar durante 15 horas sob atmosfera inerte. Adicionaram-se depois mais EEDQ (1,5 eq.) e Fmoc-Val-Cit (1,0 eq.) devido à presença de BHMS não reagido e deixou-se a mistura reaccional resultante agitar durante 2 dias e concentrou-se. Triturou-se o resíduo resultante utilizando éter para proporcionar um intermediário sólido castanho. ES-MS m/z 659 [M+H]+, 681 [M+Na]+; UV max 215, 270 nm. RMN ϊΗ (DMSO) 10,04 (1H, s), 8,10 (1H, dJ = 7,2
Hz), 7,87 (2H, d, J = 7,6 Hz), 7,72 (2H, t, J = 7,6 Hz), 7,55 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,37-7,43 (3H, m), 7,30 (2H, t, J = 7,2
Hz), 7,24 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,47 (1H, s), 5,96 (1H, t, J= 5,2 Hz), 5,39 (1H, s), 4,83 (1H, t, J= 5,2 Hz), 4,78 (1H, t, J = 5,2 Hz), 4,40 (1H, dd, J = 5,2, 8,0 Hz), 4,20-4,30 (3H, m) , 4,11 (2H, d, J = 4,4 Hz), 4,04 (2H, d, J = 5,2 Hz), 3,91 (1H, t, J = 7,2 Hz), 2,84-3, 06 (2H, m) , 1,91-2,03 (1H, m) , 1,29-1,74 (4H, m), 0,86 (3H, d, J = 6,8 Hz), 0,84 (3H, d, J = 6,8 Hz) .
Diluiu-se o intermediário sólido castanho com DMF (10 mL) e tratou-se a mistura resultante com dietilamina (5 mL) , deixou-se agitar durante 1 hora e concentrou-se para proporcionar um sólido castanho que foi seco sob vácuo elevado durante 3 dias. Triturou-se o sólido castanho utilizando EtOAc (10 mL) e precipitou-se outra vez utilizando éter (80 mL) para proporcionar um resíduo em bruto que foi filtrado através de um funil de vidro sinterizado e seco in vacuo para proporcionar um intermediário castanho-claro. ES-MS m/z 436 [M+H]+, 458 [M+Na]+; UV max 215, 270 nm.
Diluiu-se o intermediário castanho-claro com DMF (10 mL) e tratou-se com éster de hidroxi-succinimida de ácido 6-maleimidocapróico (0,16 g, 0,53 mmol, 1 eq.). Deixou-se a mistura reaccional agitar durante 18 h, adicionou-se mais di-isopropiletilamina (1,0 eq) seguindo-se éster de hidroxi-succinimida de ácido 6-maleimidocapróico adicional (0,5 eq.). Deixou-se a mistura reaccional resultante agitar durante 4 horas, tempo após o qual, a HPLC indicou que o material de partida tinha sido consumido. Concentrou-se a mistura reaccional para proporcionar um resíduo em bruto que foi triturado utilizando EtOAc (10 mL) e depois outra vez precipitado utilizando éter (75 mL) . Recolheu-se o precipitado e secou-se de um dia para o outro para proporcionar um intermediário em pó castanho/alaranjado. Rendimento global: 0,42 g (quant.) . ES-MS m/z 629 [M+H]+, 651 [M+Na]+; UV max 215, 270 nm.
Dissolveu-se parcialmente o intermediário em pó castanho/alaranjado (0,40 g, 0,64 mmol) em DMF (20 mL) e à mistura resultante adicionaram-se bis (4-nitrofenil)carbonato (0,98 g, 3,2 mmol, 5,0 eq.) e di-isopropiletilamina (0,45 mL, 2,5 mmol, 4,0 eq.). Deixou-se a mistura reaccional resultante agitar durante cerca de 4 horas, tempo após o qual A monitorização por HPLC mostrou que não restava qualquer material de partida e que a mistura reaccional continha 2 produtos numa proporção de 3:2 (o bis-carbonato desejado e a 1,3-dioxan-2-ona, respetivamente). Concentrou-se a mistura reaccional e triturou-se o resíduo resultante utilizando EtOAc (10 mL) , depois precipitou-se outra vez utilizando éter (80 mL) num único vaso. Filtrou-se a mistura EtOAc-éter e secou-se o sólido para proporcionar Composto 79 como um pó castanho que foi utilizado sem qualquer purificação adicional. EXEMPLO 28 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 80
Suspenderam-se Composto 49 (202 mg, 0,22 mmol, 2,0 eq., 80% puro) e Composto 79 (180 mg, 0,11 mmol, 1,0 eq, 60% puro) em DMF seca (2 mL, 0,1 M) e à mistura resultante adicionou-se HOBt (3 mg, 22 pmol, 0,2 eq.) seguindo-se piridina (400 pL, V4 da DMF v/v). Deixou-se a mistura reaccional resultante agitar durante 16 h, diluiu-se com DMSO (2 mL) e purificou-se a mistura resultante utilizando HPLC preparativa (coluna Cis-RP, 5 pm, 100 À, gradiente linear de MeCN em água 10 a 100% em 40 min seguindo-se 20 min a 100%, com um caudal de 50 mL/min) para proporcionar Composto 80 como um sólido branco.
Rendimento: 70 mg (18%). MALDI-TOF MS m/z 2138,9 [M+Na]+, 2154,9 [M+K]+. EXEMPLO 29 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 81
O Composto 81 foi preparado utilizando o método descrito no Exemplo 1 e utilizando Fmoc-(D)-vai-(L)-cit-PAB-OH em substituição do Composto 19. EXEMPLO 30 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 82
Composto 82 foi preparado utilizando o método descrito no Exemplo 1 e utilizando Fmoc- (L)-vai-(D)-cit-PAB-OH em substituição do Composto 19. EXEMPLO 31 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 83
0 Composto 83 foi preparado utilizando o método descrito no Exemplo 1 e utilizando Fmoc-(D)-vai-(D)-cit-PAB-OH em substituição do Composto 19. EXEMPLO 32 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 84
0 Composto 84 foi preparado utilizando o método descrito no Exemplo 14 e utilizando Composto 81 em substituição do Composto 21. EXEMPLO 33 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 85
0 Composto 85 foi preparado utilizando o método descrito no Exemplo 14 e utilizando Composto 82 em substituição do Composto 21. EXEMPLO 34 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 86
0 Composto 86 foi preparado utilizando o método descrito no Exemplo 14 e utilizando Composto 83 em substituição do Composto 21. EXEMPLO 35 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 87
Diluiu-se uma mistura de ácido 6-maleimidocapróico (1,00 g, 4,52 mmol, 1,0 eq.), álcool p-aminobenzílico (1,11 g, 9,04 mmol, 2,0 eq.) e EEDQ (2,24 g, 9,04 mmol, 2,0 eq.) em diclorometano (13 mL) . Agitou-se a mistura reaccional resultante durante cerca 16 h, depois concentrou-se e purificou-se utilizando cromatografia de coluna "flash" num gradiente em degrau de 25-100% de EtOAc em hexanos para proporcionar um intermediário sólido. Rendimento: 1,38 g (96 %) ; ES-MS m/z 317,22 [M+H]+, 339, 13 [M+Na]+; UV max 215, 246 nm.
Diluíram-se o intermediário sólido (0,85 g, 2,69 mmol, 1,0 eq.) e bis (4-nitrofenil)carbonato (2,45g, 8,06 mmol, 3,0 eq.) em DMF (10 mL) e à mistura resultante adicionou-se di-isopropiletilamina (0,94 mL, 5,37 mmol, 2,0 eq.). Agitou-se a mistura reaccional resultante durante cerca de 1 h, tempo após o qual a RP-HPLC indicou que a reação estava completa. Concentrou-se a mistura reaccional in vacuo, e triturou-se o resíduo em bruto resultante utilizando dietiléter (cerca de 250 mL) para proporcionar um intermediário sólido branco após filtração. Rendimento: 1,25 g (96 %) ; UV max 215, 252 nm.
Diluíram-se o intermediário sólido branco (259 mg, 0,0538 mmol, 1,0 eq.), MMAE (464 mg, 0, 646 mmol, 1,2 eq.), e HOBt (14,5 mg, 0,108 mmol, 0,2 eq.) em piridina/DMF (1:5, 6 mL) e agitou-se a mistura reaccional resultante durante cerca de 10 h, tempo após o qual a RP-HPLC mostrou que a reação estava incompleta. Concentrou-se a mistura reaccional, diluiu-se o resíduo em bruto resultante utilizando DMF (3 mL), e à mistura resultante adicionou-se di-isopropiletilamina (0,469 mL, 0,538 mmol, 1,0 eq.) e deixou-se a mistura reaccional resultante agitar durante cerca de 16 h. Purificou-se a mistura reaccional diretamente utilizando Chromatotron® (cromatografia de camada fina radial) com um gradiente em degrau (0-5% metanol em diclorometano), para proporcionar o Composto 87 como um sólido branco. Rendimento: 217 mg (38 %); ES-MS m/z 1082,64 [M+Na]+; UV max 215, 248 nm. EXEMPLO 36 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 88
Suspendeu-se Fmoc-val-cit (Patente dos E.U.A. N.2 6214345 de Firestone et al.) em diclorometano (50 mL) e tratou-se a mistura resultante com HBr a 33% em HOAc (20 mL) , que foi adicionado através de pipeta durante cerca de 5 minutos. Após agitação durante cerca de 10 minutes, constatou-se que a reação estava completa utilizando HPLC. Diluiu-se a mistura reaccional com gelo (cerca de 500 mL) e adicionou-se lentamente bicarbonato de sódio aquoso saturado enquanto se agitava até a libertação de gás cessar. Filtrou-se a massa gelatinosa resultante e lavou-se com água destilada para proporcionar um sólido que foi seco sob vácuo elevado na presença de P2O5 durante 24 h. O intermediário em pó castanho resultante (Fmoc-val-cit-PAB-Br) estava cerca de 70% puro por HPLC e foi utilizado sem qualquer purificação adicional.
Dissolveram-se o intermediário em pó castanho (30 mg, 40,6 pmol) e Composto 53 (34 mg, 40,6 pmol) em DMF (1 mL) e à mistura resultante adicionou-se di-isopropiletilamina (21 pL, 0,12 mmol, 3,0 eq.) . Deixou-se a mistura reaccional resultante agitar durante 6 h, diluiu-se com DMSO (1 mL) e purificou-se de imediato utilizando HPLC preparativa (coluna C12-RP, 5 pm, 100 À, gradiente linear de MeCN em água (contendo 0,1% de ácido fórmico) de 10 a 100% em 40 min seguindo-se 20 min a 100 %, com um caudal de 25 mL/min) para proporcionar como um intermediário em pó castanho ligeiro. Rendimento: 5 mg (8%); ES-MS m/z 1420 [M+H]+, 1443 [M+Na]+; UV max 205, 258 nm.
Diluiu-se o intermediário em pó castanho ligeiro (4 mg, 9,5 pmol) utilizando DMF (1 mL) e tratou-se a mistura resultante com dietilamina (0,5 mL) . A reação resultante estava completa em 1 h de acordo com HPLC. Concentrou-se a mistura reaccional para proporcionar um resíduo sólido oleoso que foi triturado com éter (3x) para proporcionar um resíduo em bruto. Diluiu-se o resíduo em bruto com DMF (1 mL) e à mistura resultante adicionou-se éster de hidroxi-succinimida de ácido 6-maleimidocapróico (3 mg, 9,5 pmol). Deixou-se a mistura reaccional resultante agitar à temperatura ambiente durante cerca de 16 h. Purificou-se a mistura reaccional diretamente utilizando HPLC preparativa (coluna C12-RP, 5 pm, 100 À, gradiente linear de MeCN em água (contendo 0,1% de ácido fórmico) de 10 a 100% em 40 min seguindo-se 20 min a 100%, com um caudal de 25 mL/min) para proporcionar Composto 88 como um sólido castanho ligeiro. Rendimento: 3,9 mg (quant.); ES-MS m/z 1391 [M+H]+; UV max 205, 250 nm. EXEMPLO 37 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 89
Preparação de Composto 89A
0 Composto 89A foi preparado utilizando o método descrito no Exemplo 9 e utilizando o tripéptido Composto 43 em substituição do tripéptido Composto 42, intermediário.
Preparação de Composto 89
Suspenderam-se Composto 89A (0,13 g, 0,15 pmol, 1,0 mmol), Composto 21 (0,12 g, 0,17 mmol, 1,1 eq.) e HOBt (4 mg, 31 pmol, 0,2 eq.) em DMF/piridina (2 mL/0,5 mL, respetivamente). Deixou-se a mistura reaccional resultante agitar durante cerca de 4h, depois adicionou-se di-isopropiletilamina (27 pL, 0,15 mmol, 1,0 eq.) e deixou-se a mistura reaccional resultante agitar durante cerca de 54 h e concentrou-se in vacuo. Diluiu-se o óleo em bruto resultante com DMSO e purificou-se utilizando HPLC preparativa (coluna C12-RP, 5 pm, 100 À, gradiente linear de MeCN em água (contendo 0,1% de TFA) de 10 a 100% em 40 min seguindo-se 20 min a 100%, com um caudal de 25 mL/min) para proporcionar um óleo amarelo que foi retomado numa quantidade mínima de diclorometano e precipitando com éter em excesso para proporcionar Composto 89 como um pó castanho. Rendimento: 0,15 mg (68%). ES-MS m/z 1449, 14 [M+H]+; UV max 215, 258 nm. EXEMPLO 38 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 90
Diluíram-se dicloridrato de 1,4-fenilenodiamina (3,06 g, 17 mmol) e dicarbonato de di-t-butilo (3, 69 g, 17 mmol) com 30 mL de diclorometano. À mistura resultante adicionou-se di-isopropiletilamina (8,83 ml, 50,7 mmol, 3,0 eq.) e deixou-se a mistura reaccional resultante agitar durante 1 h. Transferiu-se a mistura reaccional para uma ampola de separação e lavou-se a fase orgânica com água (3 χ 10 ml). Armazenou-se a fase orgânica a 4°C durante cerca de 15 h e ocorreu a cristalização do produto. Recolheram-se os cristais por filtração e lavaram-se com diclorometano frio para proporcionar Composto 90 como um sólido cristalino. (1,2 g, 34%) . UV max 215, 250 nm. RMN ΤΗ (DMSO) 8,78 (1H, s largo), 7,04 (2H, d largo>J = 7,2 Hz), 6,43 (2H, d, J = 7,2 Hz), 4,72 (2H, s), 1,41 (9H, s). EXEMPLO 39 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 91
Ajustou-se uma solução de cAClO (10 mg/mL em citrato de sódio 25 mM, cloreto de sódio 250 mM, 0,02% de Tween 80, pH 6,5) a pH 7,5 por adição de fosfato de sódio dibásico 0,3 M. A esta solução de cAClO de pH ajustado, adicionou-se EDTA até uma concentração final de 5 mM. Pré-aqueceu-se depois a solução de cAClO até 37 °C por incubação numa estufa de temperatura controlada. Após a temperatura da solução de cAClO ter sido equilibrada a 37°C, adicionou-se DTT (a partir de uma solução de reserva 10 mM) até atingir uma proporção molar final de DTT-para-cACl0 de cerca de 3,0 na reação de redução (utilizou-se um peso molecular de 148500 Da para cAClO). Deixou-se depois a reação de redução prosseguir durante 2 horas a 37°C.
No final da incubação, arrefeceu-se a mistura reaccional de redução até uma temperatura interna de 2 a 8°C num banho de água-gelo. Manteve-se a temperatura da solução a 2 a 8°C ao longo dos passos de conjugação restantes. Submeteu-se a mistura reaccional de redução arrefecida a diafiltração de volume constante para remover o DTT em excesso utilizando uma membrana de 30 kDa e mudou-se o tampão para solução salina tamponada com fosfato, pH 7,4 (PBS). Após diafiltração, determinou-se a concentração de tiol livre no cAClO reduzido e diafiltrado utilizando o Procedimento Geral Μ. A conjugação é depois realizada por adição de um excesso molar de 15% de Composto 58 (a partir de uma solução de reserva de 13 mg/mL em DMSO) em relação aos tióis totais determinados utilizando o Procedimento Geral M. Adicionou-se mais DMSO à mistura reaccional de conjugação até atingir uma concentração em DMSO final de 15% (v/v) . Deixou-se a reação de conjugação prosseguir durante um total de 30 min.
No final da reação de conjugação, extinguiu-se qualquer composto de Fármaco-Ligador em excesso não reagido por adição de cisteina em excesso (excesso molar de 2X em relação aos tióis totais determinados utilizando o Procedimento Geral M, realizado no cAClO reduzido e diafiltrado) para produzir a mistura reaccional extinta. Purifica-se depois a mistura reaccional extinta para ficar livre de contaminantes de moléculas pequenas através de diafiltração de volume constante utilizando uma membrana de 30 kDa e mudou-se o tampão para PBS, pH 7,4. Após diafiltração, esterilizou-se o conjugado por filtração utilizando um filtro de 0,22 micron para proporcionar Composto 91 numa solução límpida incolor. EXEMPLO 40 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 92
O Composto 92 foi preparado utilizando o método descrito no Exemplo 39 utilizando uma quantidade de DTT (a partir de uma solução de reserva de 10 mM) que proporciona uma proporção molar final de DTT-para-cACl 0 de cerca de 1,5 na reação de redução.
6.2 EXPERIÊNCIAS DE CITOTOXICIDADE IN VITRO
As linhas de células utilizadas foram carcinoma da mama humano H3396 (positivas em antigénio cBR96, negativas em antigénio cAClO), carcinoma colorretal humano HCT-116 (negativas em antigénios cBR96 e cAClO) e linfoma de células grandes anaplásicas de humano Karpas (ALCL) (negativas em antigénio cBR96, positivas em antigénio cAClO). Estas linhas de células estão disponíveis na ATCC. A linha de células L540 de Doença de Hodgkin (HD) CD30-positiva e a linha de células de ALCL Karpas 299 foram obtidas na Deutsche Sammlung von Mikroorganism und Zellkulturen GmbH (Braunschweig, Alemanha). A L540cy, um derivado da linha de HD L540 adaptado para crescimento de xenoenxerto, foi fornecida pelo Dr. Phil Thorpe (U of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX). As linhas de células foram cultivadas em meios RPMI-1640 (Life Technologies Inc., Gaithersburg, MD) suplementados com 10% de soro fetal de bovino. Células H3396 em RPMI contendo 10% de soro fetal de bovino (referido como meio) foram plaqueadas em placas de 96 poços com aproximadamente 3000-10 000 células/poço e deixaram-se aderir de um dia para o outro. A linha de células Karpas não aderentes foi plaqueada com aproximadamente 10 000 células/poço no início do ensaio. Adicionaram-se em triplicado várias concentrações de compostos ilustrativos do invento em meio e, após os tempos indicados nas FIGS. 1-7, removeu-se o meio, e lavaram-se as células três vezes com meio fresco. Após um período de incubação de 96 horas a 37°C, adicionou-se Azul de Alamar e determinou-se a viabilidade celular 4 horas mais tarde como descrito por Ahmed S.A., Gogal R.M. Jr., Walsh J.E., J. Immunol. Methods, 170, 211-224, 1994.
Utilizaram-se ratinhos CB-17 SCID (Harlan, Indianapolis, IN) para as experiências in vivo. EXEMPLO 41
DADOS DE CITOTOXICIDADE IN VITRO
Na FIG. 1 mostram-se os efeitos citotóxicos do Composto 49 e do Composto 53 em células de carcinoma da mama humano H3396. Os dados mostram que, após exposição durante 1 hora, o Composto 53 é mais citotóxico do que o Composto 49 para concentrações de até 0,01 mM. Os compostos mostram citotoxicidade substancialmente igual para concentrações entre 0,01 mM e 1,0 mM. EXEMPLO 42
DADOS DE CITOTOXICIDADE IN VITRO A FIG. 2 mostra os efeitos citotóxicos dos Compostos 64, 65, 68 e 69 em células de carcinoma da mama humano H3396 (positivas em antigénio cBR96, negativas em antigénio cAClO). Os dados mostram que os Compostos 64 e 68 demonstram citotoxicidade similar e significativa, enquanto os Compostos 65 e 69 são menos eficazes, mas no entanto citotóxicos contra células H3396 neste ensaio particular. EXEMPLO 43
DADOS DE CITOTOXICIDADE IN VITRO A FIG. 3 mostra os efeitos citotóxicos dos Compostos 64, 65, 68 e 69 em células de carcinoma colorretal humano HCT-116 (negativas em antigénio cBR96, negativas em antigénio cAClO).
Os dados ilustram que nenhum dos Compostos 64, 65, 68 e 69 é citotóxico em relação às células HCT-116 negativas em antigénio neste ensaio. EXEMPLO 44
DADOS DE CITOTOXICIDADE IN VITRO A FIG. 4 ilustra a citotoxicidade dos Compostos 66 e 68 em células de carcinoma da mama humano H3396 (positivas em antigénio cBR96). Os dados mostram que ambos os Compostos são altamente citotóxicos para concentrações superiores a 0,1 mM e que o Composto 68 demonstra maior citotoxicidade do que o Composto 66 para concentrações entre 0,01 mg/mL e 0,4 mg/mL. EXEMPLO 45
DADOS DE CITOTOXICIDADE IN VITRO A FIG. 5 ilustra a citotoxicidade dos Compostos 66, 68 e 69 em linfoma de células grandes anaplásicas de humano Karpas (negativas em antigénio cBR96, positivas em antigénio cAClO). Os dados mostram que o Composto 69 foi mais citotóxico em relação a células Karpas quando comparado com os Compostos 68 e 66 neste ensaio. O Composto 69 demonstrou uma citotoxicidade significativa para concentrações superiores 0,001 mM, enquanto o Composto 66 e o Composto 68 não foram citotóxicos para concentrações inferiores a 1,0 mg/mL. EXEMPLO 46
DADOS DE CITOTOXICIDADE IN VITRO A FIG. 6 ilustra a citotoxicidade de Composto 66 e 67 às 2 h e 96 h em células de carcinoma da mama humano H3396 (positivas em antigénio cBR96, negativas em antigénio cAClO). Os dados mostram que o Composto 66 é altamente citotóxico para concentrações superiores a 100 mg/mL na exposição de curto prazo (2 h) , e para concentrações superiores a 100 mg/mL durante a exposição de longo prazo (96 h). O Composto 67 não demonstrou citotoxicidade contra células H3396 neste ensaio para concentrações até 1000 mg/mL.
Procedimento Geral S: Ensaio in vivo de Conjugados de Fármaco-Ligador-Anticorpo selecionados. Para a linha de células de adenocarcinoma humano L2987, implantaram-se ratinhos nus atímicos (8-10 semanas de idade) com células de tumor ou tumores de xenoenxerto. Para o modelo de linfoma de células grandes anaplásicas de humano Karpas, implantaram-se ratinhos CB-17 SCID subcutaneamente com 5 χ 106 células. Em ambos os modelos de tumor, iniciou-se a terapia após os tumores terem atingido um volume médio de 100 mm3. Injetaram-se grupos de ratinhos com um dos Compostos 66-69 em solução salina tamponada com fosfato intravenosamente de 4 em 4 dias para um total de 6 injeções para animais de L2987 e 2 injeções para animais de Karpas. Calculou-se o volume de tumor volume utilizando a fórmula: 0,5 (dimensão mais longa χ dimensão perpendicular2) . Retiraram-se os ratinhos do estudo quando os seus tumores tinham aproximadamente 1000 mm3, ponto a partir do qual os tamanhos médios de tumor para o grupo particular deixaram de ser representados no gráfico. EXEMPLO 47 EFICÁCIA TERAPÊUTICA IN VIVO EM TUMORES L2987 A FIG. 7 mostra os efeitos terapêuticos dos Compostos 66-69 em tumores de xenoenxerto de adenocarcinoma do pulmão de humano L2987 (positivas em antigénio cBR96, negativas em antigénio cAClO) implantados em ratinhos nus atímicos. Seguiu-se o Procedimento Geral S utilizando tumores de pulmão humano L2987 subcutâneos (a partir de uma passagem in vivo) . Administraram-se aos ratinhos injeções com um dos Compostos 66, 67, 68 ou 69 com intervalos de quatro dias para um total de 6 injeções. A primeira injeção foi dada aos 15 dias após implante do tumor. Os dados ilustram que a administração de Composto 66 e de Composto 68 reduziu nitidamente o volume de tumor e não se verificou qualquer crescimento adicional em ratinhos tratados durante aproximadamente 25 dias após a última injeção. O Composto 67 e o Composto 69 foram menos eficazes mas no entanto inibiram a multiplicação de células de tumor nos ratinhos tratados. O ensaio foi interrompido em animais que receberam os Compostos 67 e 69 quando o volume de tumor excedeu os 1000 mm3. EXEMPLO 48
EFICÁCIA TERAPÊUTICA IN VIVO EM TUMORES KARPAS A Fig. 8 mostra os efeitos terapêuticos de Compostos 66-69 em tumores de xenoenxerto de linfoma de células grandes anaplásicas de humano Karpas (positivas em antigénio cAClO, negativas em antigénio cBR96) implantados em ratinhos nus. Seguiu-se o Procedimento Geral S utilizando o modelo de linfoma de células grandes anaplásicas de humano Karpas. Ratinhos CB-17 SCID foram implantados subcutaneamente com 5 χ 106 células. Os ratinhos foram doseados intravenosamente com um dos Compostos 66, 67, 68 ou 69 com intervalos de quatro dias para um total de 2 injeções com inicio no dia 8. Os dados ilustram que os Compostos 67 e 69 induziram regressões completas, e que os tumores progrediram em animais que receberam substancialmente quantidades equivalentes de Compostos 66 e 68. EXEMPLO 49
DETERMINAÇÃO DA CITOTOXICIDADE DE COMPOSTOS SELECIONADOS EM CÉLULAS CD30“ E CD30+
Após a sua caracterização física, avaliou-se a citotoxicidade in vitro dos Compostos 67, 91 e 92 em células Karpas 299 CD30+ e Raji CD3CC utilizando o ensaio de Azul de Alamar como descrito acima. Representou-se graficamente a percentagem de células viáveis em função da concentração para cada molécula para determinar a IC50 (definida como a concentração de mAb que deu 50% de morte celular). O Composto 67 demonstrou atividade contra células Karpas 299 com uma IC50 de 4 ng/mL. A IC50 era inversamente proporcional à carga de fármaco uma vez que aumentou de 4 ng/mL para o Composto 67 até 7 ng/mL para o Composto 91, até 40 ng/mL para o Composto 92. Avaliou-se a seletividade dos compostos testados utilizando a linha de células Raji negativas em antigénio que eram insensíveis a todos os Compostos contendo cAClO com valores de IC50 > 1000 ng/ml para os Compostos 67, 91 e 92. EXEMPLO 50
CITOTOXICIDADE DE COMPOSTOS SELECIONADOS EM MODELOS DE XENOTRANSPLANTE DE HD E ALCL
Avaliou-se a citotoxicidade de Compostos 67, 91 e 92 em modelos de xenotransplante subcutâneos de linfoma de células grandes anaplásicas de humano Karpas 299 e Doença de Hodgkin L540cy em ratinhos CB-17 SCID. Iniciaram-se as avaliações quando os volumes de tumor tinham em média 50-100 mm3. Grupos de ratinhos portadores de Karpas-299 foram injetados q4dx4 com Composto 92, Composto 91 ou Composto 67 quer com 0,25 mg/kg quer com 0,5 mg/kg. Nenhum dos animais tratados com 0,25 mg/kg teve uma regressão, ainda que existisse um atraso no crescimento do tumor em comparação com controlos não tratados para os animais tratados com Composto 91 e Composto 67. O tratamento de tumores Karpas com Composto 91 e Composto 67 com 0,5 mg/kg dados q4dx4 conseguiu 5/5 regressões completas e 4/5 regressões completas, respetivamente. Observou-se um atraso no crescimento de tumor em comparação com animais não tratados para o Composto 92 com 0,5 mg/kg dados q4dx4, mas não se obtiveram quaisquer regressões completas.
Testou-se também a eficácia num modelo de Karpas subcutâneo com compostos selecionados administrados como uma única dose. O Composto 91 e o Composto 67 foram injetados com doses simples de 0,25, 0,5 e 2,0 mg/kg. Para a dose de 0,25 mg/kg não se observou qualquer atividade antitumoral em qualquer dos grupos e o volume de tumor médio não se afastou do dos controlos não tratados. Foi demonstrado um atraso no crescimento de tumor por ambas as moléculas para 0,5 mg/kg, mas não se obtiveram quaisquer regressões completas. O tratamento dos ratinhos com Composto 91 e Composto 67 com 2 mg/kg conseguiu 100% de regressões completas em ambos os grupos.
Compararam-se também o Composto 91 e o Composto 67 em ratinhos portadores de tumores subcutâneos de HD humano L540cy tratados q4dx4 com Composto 91 e Composto 67 com 1 e 3 mg/kg. Para 1 mg/kg, os ratinhos tratados com Composto 91 e Composto 67 tiveram atrasos significativos no crescimento de tumor em comparação com os animais não tratados. Observaram-se regressões completas em ratinhos aos quais se administraram tanto o Composto 91 com o Composto 67 com 3 mg/kg.
Lisboa, 2015-12-14

Claims (9)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Composição farmacêutica adaptada para administração intravenosa a seres humanos compreendendo compostos de Fórmula Ia:
    ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável onde, L- é um anticorpo monoclonal que se liga imunoespecificamente ao antigénio CD30; -A- é uma unidade de Extensor; a é 1; cada -W- é independentemente uma unidade de Aminoácido; w é um número inteiro que varia de 2 a 12; -Y- é uma unidade de Espaçador autodestrutivo; y é 1 ou 2; p varia de 1 a cerca de 20 e é o número médio de unidades —Aa—W„—Yy—D por anticorpo na composição; e -D é uma unidade de Fármaco em que os compostos de Fórmula Ia têm a estrutura
    ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitáveis.
  2. 2. Composição farmacêutica da reivindicação 1 onde o anticorpo é um anticorpo AC10 quimérico.
  3. 3. Composição farmacêutica da reivindicação 2 onde p varia de 1 a cerca de 5.
  4. 4. Composição farmacêutica da reivindicação 2 onde p varia de cerca de 3 a cerca de 5.
  5. 5. Composição farmacêutica de qualquer uma das reivindicações 1 a 4 onde a composição farmacêutica é um pós liofilizado seco.
  6. 6. Composição farmacêutica de qualquer uma das reivindicações 1 a 4 onde a composição farmacêutica está na forma de um liquido.
  7. 7. Composição farmacêutica de qualquer uma das reivindicações 1 a 6 para utilização no tratamento de cancro.
  8. 8. Composição farmacêutica da ou uma composição da reivindicação 7 que se destina a utilização no tratamento de um cancro hematológico.
  9. 9. Composição farmacêutica da reivindicação 8 onde o cancro hematológico é Linfoma de Hodgkin. Lisboa, 2015-12-14
PT111652103T 2002-07-31 2003-07-31 Conjugados de fármacos e sua utilização para tratamento do cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa PT2357006E (pt)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US40040302P 2002-07-31 2002-07-31

Publications (1)

Publication Number Publication Date
PT2357006E true PT2357006E (pt) 2016-01-22

Family

ID=31188683

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PT03772186T PT1545613E (pt) 2002-07-31 2003-07-31 Conjugados de auristatina e sua utilização para tratamento do cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infecciosa
PT111652103T PT2357006E (pt) 2002-07-31 2003-07-31 Conjugados de fármacos e sua utilização para tratamento do cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PT03772186T PT1545613E (pt) 2002-07-31 2003-07-31 Conjugados de auristatina e sua utilização para tratamento do cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infecciosa

Country Status (17)

Country Link
US (5) US7659241B2 (pt)
EP (3) EP1545613B9 (pt)
JP (1) JP4741838B2 (pt)
AT (1) ATE516818T1 (pt)
AU (2) AU2003263964C1 (pt)
BE (1) BE2012C047I2 (pt)
CA (2) CA2494105C (pt)
CY (2) CY1111894T1 (pt)
DK (2) DK1545613T3 (pt)
ES (3) ES2544527T3 (pt)
FR (1) FR12C0066I2 (pt)
HK (1) HK1157180A1 (pt)
HU (2) HUE027549T2 (pt)
LU (1) LU92133I2 (pt)
PT (2) PT1545613E (pt)
SI (2) SI1545613T1 (pt)
WO (1) WO2004010957A2 (pt)

Families Citing this family (678)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040141983A1 (en) 1999-03-15 2004-07-22 Protein Design Labs, Inc. Compositions against cancer antigen LIV-1 and uses thereof
US7244827B2 (en) 2000-04-12 2007-07-17 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled 24P4C12 useful in treatment and detection of cancer
US6946129B1 (en) 1999-06-08 2005-09-20 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD40 antibody and uses thereof
US20040018194A1 (en) * 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US7256257B2 (en) 2001-04-30 2007-08-14 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
ES2552281T3 (es) 2001-05-11 2015-11-26 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Proteínas de unión específica y usos de las mismas
US20110313230A1 (en) 2001-05-11 2011-12-22 Terrance Grant Johns Specific binding proteins and uses thereof
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
AU2002356844C1 (en) * 2001-10-23 2010-03-04 Amgen Fremont Inc. PSMA antibodies and protein multimers
US20050215472A1 (en) 2001-10-23 2005-09-29 Psma Development Company, Llc PSMA formulations and uses thereof
EP1545613B9 (en) 2002-07-31 2012-01-25 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
US20040081653A1 (en) * 2002-08-16 2004-04-29 Raitano Arthur B. Nucleic acids and corresponding proteins entitled 251P5G2 useful in treatment and detection of cancer
WO2004067564A2 (en) * 2003-01-29 2004-08-12 Protein Design Labs, Inc. Compositions against cancer antigen liv-1 and uses thereof
JP5356648B2 (ja) 2003-02-20 2013-12-04 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 抗ｃｄ７０抗体−医薬結合体、ならびに癌および免疫障害の処置のためのそれらの使用
US20080025989A1 (en) 2003-02-20 2008-01-31 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
WO2006113909A2 (en) 2005-04-19 2006-10-26 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-cd70 binding agents and uses thereof
EP1628992A4 (en) 2003-05-13 2008-04-16 Novartis Vaccines & Diagnostic METHODS FOR MODULATING METASTASIS AND SKELETAL RELATED EVENTS RESULTING FROM METASTASES
KR101520209B1 (ko) * 2003-11-06 2015-05-13 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
US20050175619A1 (en) * 2004-02-05 2005-08-11 Robert Duffy Methods of producing antibody conjugates
EP1718667B1 (en) * 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
WO2005084390A2 (en) * 2004-03-02 2005-09-15 Seattle Genetics, Inc. Partially loaded antibodies and methods of their conjugation
WO2006012527A1 (en) 2004-07-23 2006-02-02 Endocyte, Inc. Bivalent linkers and conjugates thereof
US7641903B2 (en) * 2004-10-15 2010-01-05 Seattle Genetics, Inc. Anti-CD70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
US8337838B2 (en) * 2004-10-15 2012-12-25 Seattle Genetics, Inc. Anti-CD70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
AU2005295595C1 (en) * 2004-10-15 2012-06-21 Seattle Genetics, Inc. Anti-CD70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
US8288352B2 (en) 2004-11-12 2012-10-16 Seattle Genetics, Inc. Auristatins having an aminobenzoic acid unit at the N terminus
CA2589374C (en) 2004-11-30 2016-05-03 Curagen Corporation Antibodies directed to gpnmb and uses thereof
WO2006078776A2 (en) 2005-01-19 2006-07-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Inhibitors and methods of treatment of cardiovascular diseases, and methods for identifying inhibitors
AU2006262231B2 (en) * 2005-06-20 2013-01-24 Psma Development Company, Llc PSMA antibody-drug conjugates
USRE47223E1 (en) 2005-06-20 2019-02-05 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
CA2614436C (en) * 2005-07-07 2016-05-17 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the c-terminus
WO2007008848A2 (en) 2005-07-07 2007-01-18 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the c-terminus
US8268935B2 (en) * 2005-07-08 2012-09-18 Elan Pharmaceuticals, Inc. Preparation of polymer conjugates of therapeutic, agricultural, and food additive compounds
AU2006269940C1 (en) 2005-07-18 2013-11-07 Seagen Inc. Beta-glucuronide-linker drug conjugates
EP1934261B1 (en) 2005-09-26 2014-10-29 Medarex, L.L.C. Human monoclonal antibodies to cd70
AR059900A1 (es) 2006-03-17 2008-05-07 Genentech Inc Anticuerpos anti-tat226 e inmunoconjugados
JP2009538338A (ja) * 2006-05-22 2009-11-05 イーラン ファーマスーティカルズ、インコーポレイテッド 治療用、農業用及び食品添加用化合物のポリマー複合体の調製
AR060978A1 (es) 2006-05-30 2008-07-23 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados y sus usos
WO2008025020A2 (en) * 2006-08-25 2008-02-28 Seattle Genetics, Inc. Cd30 binding agents and uses thereof
SI2502938T1 (sl) 2006-10-27 2015-05-29 Genentech, Inc. Protitelesa in imunokonjugati in njihove uporabe
US8455622B2 (en) 2006-12-01 2013-06-04 Seattle Genetics, Inc. Variant target binding agents and uses thereof
WO2008074004A2 (en) * 2006-12-14 2008-06-19 Medarex, Inc. Human antibodies that bind cd70 and uses thereof
US9090693B2 (en) * 2007-01-25 2015-07-28 Dana-Farber Cancer Institute Use of anti-EGFR antibodies in treatment of EGFR mutant mediated disease
CA2676766A1 (en) 2007-02-09 2008-08-21 Genentech, Inc. Anti-robo4 antibodies and uses therefor
MX2009009782A (es) * 2007-03-15 2010-09-10 Ludwig Inst Cancer Res Metodo de tratamiento que utiliza anticuerpos egfr e inhibidores de src y formulaciones relacionadas.
JP5779350B2 (ja) 2007-03-27 2015-09-16 シー レーン バイオテクノロジーズ， エルエルシー 抗体代替軽鎖配列を含む構築物およびライブラリー
GB0707034D0 (en) 2007-04-12 2007-05-23 St Andrews The Compounds
CA2683568A1 (en) 2007-05-08 2008-11-20 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-muc16 antibodies and antibody drug conjugates
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
RU2523909C2 (ru) 2007-06-25 2014-07-27 Эндосайт, Инк. Конъюгаты, содержащие гидрофильные спейсеры линкеров
JP5469600B2 (ja) 2007-07-16 2014-04-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＣＤ７９ｂ抗体及びイムノコンジュゲートとその使用方法
TW200918089A (en) 2007-07-16 2009-05-01 Genentech Inc Humanized anti-CD79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
US20090035848A1 (en) * 2007-08-03 2009-02-05 Robert Hickey Moving bed biofilm reactor (mbbr) system for conversion of syngas components to liquid products
WO2009023265A1 (en) 2007-08-14 2009-02-19 Ludwig Institute For Cancer Research Monoclonal antibody 175 targeting the egf receptor and derivatives and uses thereof
JP2010536790A (ja) 2007-08-17 2010-12-02 パーデュー・リサーチ・ファウンデーション Ｐｓｍａ結合性リガンド−リンカー結合体及び使用方法
WO2009046407A2 (en) 2007-10-04 2009-04-09 Zymogenetics, Inc. B7 FAMILY MEMBER zB7H6 AND RELATED COMPOSITIONS AND METHODS
EP2211885B1 (en) * 2007-10-12 2015-07-29 Seattle Genetics, Inc. Combination therapy with antibody-drug conjugates
HUE031533T2 (hu) * 2007-10-19 2017-07-28 Seattle Genetics Inc CD19-kötõszerek valamint alkalmazásuk
JP5580205B2 (ja) 2007-11-19 2014-08-27 セレラ コーポレーション 肺癌マーカーとその使用
EP2078492A1 (de) * 2008-01-11 2009-07-15 Roche Diagnostics GmbH Bandkassette für ein medizinisches Handgerät und Blutzuckermesssystem
AU2009205995B2 (en) 2008-01-18 2014-04-03 Medimmune, Llc Cysteine engineered antibodies for site-specific conjugation
SI2657253T1 (sl) 2008-01-31 2017-10-30 Genentech, Inc. Protitelesa proti CD79b in imunokonjugati in postopki za uporabo
NO2842575T3 (pt) 2008-03-18 2018-02-24
DK2276509T3 (en) 2008-04-11 2016-09-19 Seattle Genetics Inc DETECTION AND TREATMENT OF CANCER IN PANCREAS, ovarian and other cancers
US8236319B2 (en) 2008-04-30 2012-08-07 Immunogen, Inc. Cross-linkers and their uses
ES2458541T3 (es) 2008-05-02 2014-05-06 Seattle Genetics, Inc. Métodos y composiciones para elaborar anticuerpos y derivados de anticuerpos con fucosilación del núcleo reducida
WO2009148623A2 (en) 2008-06-05 2009-12-10 Stc.Unm Methods and related compositions for the treatment of cancer
EP2727606A3 (en) 2008-09-08 2015-09-23 Psma Development Company, L.L.C. Compounds for killing psma-expressing, taxane-resistant cancer cells
GB0819287D0 (en) 2008-10-22 2008-11-26 Univ Bradford Compounds
UA109633C2 (uk) 2008-12-09 2015-09-25 Антитіло людини проти тканинного фактора
CA3150199A1 (en) 2009-01-09 2010-07-15 Seagen Inc. Weekly dosing regimens for anti-cd30 vc-pab-mmae antibody drug-conjugates
US9238878B2 (en) 2009-02-17 2016-01-19 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
CA2754531A1 (en) * 2009-03-06 2010-09-30 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to 24p4c12 proteins
US20120128671A1 (en) 2009-05-13 2012-05-24 Lawrence Horowitz Neutralizing molecules to influenza viruses
ES2726945T3 (es) 2009-06-03 2019-10-10 Immunogen Inc Métodos de conjugación
WO2011005481A1 (en) 2009-06-22 2011-01-13 Medimmune, Llc ENGINEERED Fc REGIONS FOR SITE-SPECIFIC CONJUGATION
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
CA2775350A1 (en) * 2009-09-24 2011-03-31 Seattle Genetics, Inc. Dr5 ligand drug conjugates
US20110076232A1 (en) * 2009-09-29 2011-03-31 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof
EP2486023A4 (en) 2009-10-06 2014-05-07 Immunogen Inc EFFICIENT CONJUGATES AND HYDROPHILIC BINDER
IN2012DN02604A (pt) 2009-10-23 2015-09-04 Millennium Pharm Inc
AR079217A1 (es) 2009-11-30 2012-01-04 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y el tratamiento de tumores
MX2012006443A (es) 2009-12-09 2012-06-28 Inst Nat Sante Rech Med Anticuerpos monoclonales que se enlazan a b7h6 y usos de los mismos.
US8765432B2 (en) 2009-12-18 2014-07-01 Oligasis, Llc Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates
KR101510413B1 (ko) 2010-02-08 2015-04-08 어젠시스 인코포레이티드 １６１ｐ２ｆ１０ｂ 단백질에 결합하는 항체 약물 컨쥬게이트
MX2012009215A (es) 2010-02-23 2012-11-23 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento de tumores.
US9951324B2 (en) 2010-02-25 2018-04-24 Purdue Research Foundation PSMA binding ligand-linker conjugates and methods for using
US9725500B2 (en) * 2010-03-02 2017-08-08 Seattle Genetics, Inc. Methods for screening antibodies
AU2011239522B2 (en) 2010-04-15 2014-10-23 Medimmune Limited Targeted pyrrolobenzodiazapine conjugates
AU2011239434B2 (en) 2010-04-15 2015-04-30 Kodiak Sciences Inc. High molecular weight zwitterion-containing polymers
AU2011239525B2 (en) 2010-04-15 2015-04-09 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
BR112012029866A2 (pt) 2010-06-03 2017-03-07 Genentech Inc método para a determinação da presença de uma proteína steap-1
CA3220104A1 (en) 2010-06-08 2011-12-15 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
DK2580243T3 (da) 2010-06-09 2020-01-13 Genmab As Antibodies against human cd38
ES2528956T3 (es) 2010-06-10 2015-02-13 Seattle Genetics, Inc. Nuevos derivados de auristatina y su uso
JP6055404B2 (ja) 2010-06-15 2016-12-27 ゲンマブ エー／エス 組織因子に対するヒト抗体薬物結合体
JP5953303B2 (ja) 2010-07-29 2016-07-20 ゼンコア インコーポレイテッド 改変された等電点を有する抗体
PT2621526T (pt) 2010-09-29 2018-08-02 Seattle Genetics Inc Conjugados de anticorpo com fármaco (adc) que se ligam a proteínas 191pad12
WO2012041805A1 (de) 2010-09-29 2012-04-05 Bayer Pharma Aktiengesellschaft N-carboxyalkyl-auristatine und ihre verwendung
US9228023B2 (en) 2010-10-01 2016-01-05 Oxford Biotherapeutics Ltd. Anti-ROR1 antibodies and methods of use for treatment of cancer
JP6121906B2 (ja) 2010-10-22 2017-04-26 シアトル ジェネティクス，インコーポレーテッド アウリスタチン系抗体薬物複合体とＰＩ３Ｋ−ＡＫＴｍＴＯＲ経路インヒビターの間の相乗効果
SG190938A1 (en) 2010-12-06 2013-07-31 Seattle Genetics Inc Humanized antibodies to liv-1 and use of same to treat cancer
MX345519B (es) 2010-12-20 2017-02-01 Genentech Inc Anticuerpos anti-mesotelina e inmunoconjugados.
JOP20210044A1 (ar) 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
RU2606016C2 (ru) 2011-01-14 2017-01-10 Редвуд Байосайнс, Инк. Меченые альдегидом полипептиды иммуноглобулина и способы их применения
CN103764667B (zh) 2011-03-16 2017-06-20 西雅图基因公司 N‑羧烷基耳他汀类及其应用
CN103561771B (zh) 2011-03-17 2019-01-04 伯明翰大学 重新定向的免疫治疗
US9044518B2 (en) 2011-03-30 2015-06-02 Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Of The State Of Arizona Acting For And On Behalf Of Arizona State University Auristatin tyramine phosphate salts and auristatin aminoquinoline derivatives and prodrugs thereof
CN103796678B (zh) 2011-04-20 2018-02-27 健玛保 针对her2的双特异性抗体
WO2012143499A2 (de) 2011-04-21 2012-10-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Neue binder-wirkstoff konjugate (adcs) und ihre verwendung
JP5987053B2 (ja) 2011-05-12 2016-09-06 ジェネンテック， インコーポレイテッド フレームワークシグネチャーペプチドを用いて動物サンプルにおける治療抗体を検出するための多重反応モニタリングｌｃ−ｍｓ／ｍｓ法
US9127065B2 (en) 2011-05-19 2015-09-08 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Anti-human HER3 antibodies and uses thereof
EP2710024A4 (en) 2011-05-19 2015-04-29 Harvard College OSW-1 CONJUGATES AND ANALOGUES, AND USES THEREOF
MX371526B (es) * 2011-05-27 2020-01-31 Ambrx Inc Composiciones que contienen, metodos que incluyen, y usos de derivados de dolastatina enlazados a aminoacidos no naturales.
UA112434C2 (uk) 2011-05-27 2016-09-12 Ґлаксо Ґруп Лімітед Антигензв'язувальний білок, який специфічно зв'язується з всма
PT3415531T (pt) 2011-05-27 2023-09-12 Glaxo Group Ltd Proteínas de ligação a bcma (cd269/tnfrsf17
MX359217B (es) * 2011-05-27 2018-09-19 Ambrx Inc Composiciones que contienen, métodos que involucran, y usos de derivados de dolastatina unidos a aminoácidos no naturales.
US8815226B2 (en) 2011-06-10 2014-08-26 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
ES2622578T3 (es) 2011-06-10 2017-07-06 Mersana Therapeutics, Inc. Conjugados de proteína-polímero-fármaco
WO2012177837A2 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Immunogen, Inc. Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof
EP2723376B1 (en) 2011-06-22 2018-12-05 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-axl antibodies and uses thereof
CN103747803B (zh) 2011-06-22 2016-10-12 国家医疗保健研究所 抗axl抗体及其用途
UA117901C2 (uk) 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
US9120858B2 (en) 2011-07-22 2015-09-01 The Research Foundation Of State University Of New York Antibodies to the B12-transcobalamin receptor
WO2013015821A1 (en) 2011-07-22 2013-01-31 The Research Foundation Of State University Of New York Antibodies to the b12-transcobalamin receptor
EP2736928B1 (en) 2011-07-28 2019-01-09 i2 Pharmaceuticals, Inc. Sur-binding proteins against erbb3
WO2013022855A1 (en) 2011-08-05 2013-02-14 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points and immunofiltering
AU2012311505B2 (en) 2011-09-20 2016-09-29 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric PBD compounds for inclusion in targeted conjugates
CA2848520C (en) 2011-09-29 2019-11-26 Seattle Genetics, Inc. Intact mass determination of protein conjugated agent compounds
JP6310394B2 (ja) 2011-10-10 2018-04-11 ゼンコア インコーポレイテッド 抗体を精製する方法
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
JP6117801B2 (ja) 2011-10-14 2017-04-19 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピン
US9526798B2 (en) 2011-10-14 2016-12-27 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
EA036202B1 (ru) 2011-10-14 2020-10-14 Сиэтл Дженетикс, Инк. Пирролбензодиазепины и конъюгаты направленного действия
KR101891859B1 (ko) 2011-10-14 2018-08-24 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀
SI2780039T1 (en) 2011-11-17 2018-06-29 Pfizer Inc. Cytotoxic peptides and their conjugates between the antibody and the drug
BR112014013526A8 (pt) * 2011-12-05 2017-06-13 Igenica Biotherapeutics Inc conjugados de anticorpo-fármaco e compostos, composições e métodos relacionados
EP2793940B1 (en) 2011-12-22 2018-11-14 i2 Pharmaceuticals, Inc. Surrogate binding proteins
JP2015502397A (ja) 2011-12-23 2015-01-22 ファイザー・インク 部位特異的コンジュゲーションのための操作された抗体定常領域、ならびにそのための方法および使用
WO2013092983A2 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
CN104169850B (zh) 2012-01-12 2017-06-06 辛纳普蒂克斯公司 单层电容性成像传感器
WO2013109994A1 (en) 2012-01-20 2013-07-25 Sea Lane Biotechnologies, Llc Surrobody cojugates
WO2013119990A2 (en) 2012-02-10 2013-08-15 Seattle Genetics, Inc. Detection and treatment of cd30+ cancers
US10080805B2 (en) 2012-02-24 2018-09-25 Purdue Research Foundation Cholecystokinin B receptor targeting for imaging and therapy
GB201203442D0 (en) 2012-02-28 2012-04-11 Univ Birmingham Immunotherapeutic molecules and uses
WO2013130093A1 (en) 2012-03-02 2013-09-06 Genentech, Inc. Biomarkers for treatment with anti-tubulin chemotherapeutic compounds
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
US9156915B2 (en) 2012-04-26 2015-10-13 Thomas Jefferson University Anti-GCC antibody molecules
RU2014148162A (ru) 2012-05-01 2016-06-20 Дженентек, Инк. Анти-pmel17 антитела и их иммуноконъюгаты
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
US9981046B2 (en) 2012-05-15 2018-05-29 Concortis Biosystems, Corp., a wholly owned Subsidiary of Sorrento Therapeutics, Inc. Drug-conjugates, conjugation methods, and uses thereof
KR102433686B1 (ko) 2012-05-15 2022-08-19 씨젠 인크. 자가-안정화 링커 접합체
US8822423B2 (en) * 2012-05-17 2014-09-02 Janssen Biotech, Inc. Affinity peptides toward infliximab
US20130309223A1 (en) 2012-05-18 2013-11-21 Seattle Genetics, Inc. CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer
CA2872327A1 (en) 2012-05-21 2013-11-28 Genentech, Inc. Anti-ly6e antibodies and immunoconjugates and methods of use
US9522940B2 (en) 2012-05-23 2016-12-20 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Lipocalin muteins with binding-affinity for glypican-3 (GPC-3) and use of lipocalin muteins for target-specific delivery to cells expressing GPC-3
JP2015521589A (ja) 2012-06-08 2015-07-30 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドＢｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ． プロコアグラント化合物
AU2013270683A1 (en) 2012-06-08 2014-12-11 Biogen Ma Inc. Chimeric clotting factors
AU2013270684B2 (en) 2012-06-08 2018-04-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
DK2863955T3 (en) 2012-06-26 2017-01-23 Sutro Biopharma Inc MODIFIED FC PROTEINS, INCLUDING LOCATION-SPECIFIC NON-NATURAL AMINO ACID RESIDUES, CONJUGATES THEREOF, METHODS OF PRODUCING ITS AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
US11180572B2 (en) 2012-07-06 2021-11-23 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
EP3632462A1 (en) 2012-07-06 2020-04-08 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
WO2014009426A2 (en) 2012-07-13 2014-01-16 Innate Pharma Screening of conjugated antibodies
CN112587658A (zh) 2012-07-18 2021-04-02 博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
DK2692865T3 (en) 2012-07-30 2015-02-16 Nbe Therapeutics Llc Transponeringsmedieret identification of specific binding proteins, or functional
EP2879711A4 (en) 2012-08-02 2016-03-16 Genentech Inc ANTI-ETBR ANTIBODIES AND IMMUNOCONJUGATES
WO2014022679A2 (en) 2012-08-02 2014-02-06 Genentech, Inc. Anti-etbr antibodies and immunoconjugates
SG10201701424QA (en) 2012-08-23 2017-04-27 Agensys Inc Antibody drug conjugates (adc) that bind to 158p1d7 proteins
ES2907763T3 (es) 2012-08-31 2022-04-26 Sutro Biopharma Inc Aminoácidos modificados que comprenden un grupo azido
AU2013328673B2 (en) 2012-10-12 2017-07-13 Medimmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
WO2014057120A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
BR112015008238A2 (pt) 2012-10-12 2017-11-28 Adc Therapeutics Sarl conjugados de pirrolbenzodiazepina-anticorpo anti-cd22
ES2680153T3 (es) 2012-10-12 2018-09-04 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos anti-PSMA-pirrolobenzodiazepinas
AU2013328625B2 (en) 2012-10-12 2016-12-15 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP2906248B1 (en) 2012-10-12 2018-12-05 MedImmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
SI2906253T1 (sl) 2012-10-12 2018-11-30 Adc Therapeutics Sa Konjugati pirolobenzodiazepin-protitelo proti PSMA
HUE042731T2 (hu) 2012-10-12 2019-07-29 Adc Therapeutics Sa Pirrolobenzodiazepin-antitest konjugátumok
HUE045435T2 (hu) 2012-10-12 2019-12-30 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinek és konjugátumaik
EA201590622A1 (ru) * 2012-10-16 2015-10-30 Эндосайт, Инк. Конъюгаты для доставки лекарственного средства, содержащие не встречающиеся в природе аминокислоты, и способы применения
CN104755482B (zh) 2012-10-30 2017-04-26 内尔维阿诺医学科学有限公司 官能化的9‑溴‑喜树碱衍生物
US10189906B2 (en) 2012-11-01 2019-01-29 Max-Delrück-Centrum Für Molekulare Medizin Antibody that binds CD269 (BCMA) suitable for use in the treatment of plasma cell diseases such as multiple myeloma and autoimmune diseases
PT2917195T (pt) 2012-11-05 2018-02-09 Pfizer Análogos de spliceostatina
EP3564259A3 (en) 2012-11-09 2020-02-12 Innate Pharma Recognition tags for tgase-mediated conjugation
BR112015011118B1 (pt) 2012-11-15 2022-12-13 Endocyte, Inc Conjugado; composição farmacêutica; e uso de um conjugado
US10131682B2 (en) 2012-11-24 2018-11-20 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to a cell binding molecules
US9353150B2 (en) 2012-12-04 2016-05-31 Massachusetts Institute Of Technology Substituted pyrazino[1′,2′:1 ,5]pyrrolo[2,3-b]-indole-1,4-diones for cancer treatment
JP6334553B2 (ja) 2012-12-10 2018-05-30 メルサナ セラピューティクス，インコーポレイティド タンパク質−高分子−薬剤コンジュゲート
US10226535B2 (en) 2012-12-10 2019-03-12 Mersana Therapeutics, Inc. Auristatin compounds and conjugates thereof
SG11201504520XA (en) * 2012-12-12 2015-07-30 Promega Corp Compositions and methods for capture of cellular targets of bioactive agents
US9872918B2 (en) 2012-12-12 2018-01-23 Mersana Therapeutics, Inc. Hydroxyl-polymer-drug-protein conjugates
WO2014100740A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Seattle Genetics, Inc. Anti-ntb-a antibodies and related compositions and methods
WO2014096551A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Glykos Finland Oy Linker-payload molecule conjugates
JP6482471B2 (ja) 2012-12-21 2019-03-13 バイオアライアンス コマンディテール フェンノートシャップ 親水性の自壊性リンカー及びそのコンジュゲート
EP2943506B1 (en) 2013-01-10 2024-03-13 Genmab B.V. Human igg1 fc region variants and uses thereof
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
AU2014205086B2 (en) 2013-01-14 2019-04-18 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
EP2945969A1 (en) 2013-01-15 2015-11-25 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
JP6423804B2 (ja) 2013-02-28 2018-11-14 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤を含む複合体
JP6494533B2 (ja) 2013-02-28 2019-04-03 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤としてのマイタンシノイドを含む複合体
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
WO2014159835A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
EP2968582B1 (en) 2013-03-15 2020-07-01 Innate Pharma Solid phase tgase-mediated conjugation of antibodies
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10168323B2 (en) 2013-03-15 2019-01-01 Promega Corporation Compositions and methods for capture of cellular targets of bioactive agents
EP3421495A3 (en) 2013-03-15 2019-05-15 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
JP2016519070A (ja) 2013-03-15 2016-06-30 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗体薬物複合体（ａｄｃ）の精製
SI2968588T1 (sl) 2013-03-15 2019-05-31 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Formulacije konjugatov protitelo proti-EGFR zdravilo
MY174813A (en) 2013-03-15 2020-05-16 Zymeworks Inc Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
CN111138543A (zh) 2013-03-15 2020-05-12 Xencor股份有限公司 异二聚体蛋白
US11072811B2 (en) 2013-03-15 2021-07-27 Promega Corporation Substrates for covalent tethering of proteins to functional groups or solid surfaces
ES2759503T3 (es) 2013-05-02 2020-05-11 Glykos Finland Oy Conjugados de una glicoproteína o un glicano con una carga útil tóxica
RU2687044C2 (ru) 2013-05-31 2019-05-06 Дженентек, Инк. Антитела против стеночной тейхоевой кислоты и их конъюгаты
GB201309807D0 (en) 2013-05-31 2013-07-17 Pharma Mar Sau Antibody drug conjugates
MX369022B (es) 2013-05-31 2019-10-25 Genentech Inc Anticuerpos anti-ácido teicoico de la pared celular y conjugados.
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
US9517276B2 (en) 2013-06-04 2016-12-13 Cytomx Therapeutics, Inc. Compositions and methods for conjugating activatable antibodies
US10071169B2 (en) 2013-06-20 2018-09-11 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
JP6744212B2 (ja) 2013-06-21 2020-08-19 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． ポリペプチドの酵素的結合
ES2658039T3 (es) 2013-07-10 2018-03-08 Sutro Biopharma, Inc. Anticuerpos que comprenden múltiples residuos de aminoácidos no naturales sitio-específicos, métodos para su preparación y métodos de uso
US10208125B2 (en) 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
JP6510518B2 (ja) 2013-08-01 2019-05-08 アジェンシス，インコーポレイテッド Ｃｄ３７タンパク質に結合する抗体薬物結合体（ａｄｃ）
GB2516882A (en) 2013-08-02 2015-02-11 Univ Bradford Tumour-targeted theranostic
US9542023B2 (en) 2013-08-07 2017-01-10 Synaptics Incorporated Capacitive sensing using matrix electrodes driven by routing traces disposed in a source line layer
MX2016001862A (es) 2013-08-12 2016-08-03 Genentech Inc Compuestos de conjugado anticuerpo-farmaco dimerico de 1-(clorometil)-2,3-dihidro-1h-benzo[e]indol, y metodos de uso y tratamiento.
EP3892294A1 (en) 2013-08-28 2021-10-13 AbbVie Stemcentrx LLC Site-specific antibody conjugation methods and compositions
MX2016003256A (es) 2013-09-12 2016-06-07 Halozyme Inc Anticuerpos modificados del receptor de factor de crecimiento anti-epidermico y metodos de uso de los mismos.
CN105518027A (zh) 2013-09-17 2016-04-20 豪夫迈·罗氏有限公司 使用抗lgr5抗体的方法
US10042489B2 (en) 2013-09-30 2018-08-07 Synaptics Incorporated Matrix sensor for image touch sensing
US20150091842A1 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Synaptics Incorporated Matrix sensor for image touch sensing
US9298325B2 (en) 2013-09-30 2016-03-29 Synaptics Incorporated Processing system for a capacitive sensing device
US9459367B2 (en) 2013-10-02 2016-10-04 Synaptics Incorporated Capacitive sensor driving technique that enables hybrid sensing or equalization
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
US9956299B2 (en) 2013-10-11 2018-05-01 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine—antibody conjugates
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
MX2016003744A (es) 2013-10-11 2016-08-11 Us Health Anticuerpos tem8 y su uso.
CN105813655B (zh) 2013-10-11 2022-03-15 阿萨纳生物科技有限责任公司 蛋白-聚合物-药物缀合物
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
PT3055331T (pt) 2013-10-11 2021-04-05 Oxford Bio Therapeutics Ltd Anticorpos conjugados contra ly75 para o tratamento de cancro
AU2014331714B2 (en) 2013-10-11 2019-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
WO2015052534A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
AU2014337317A1 (en) 2013-10-15 2016-09-15 Sorrento Therapeutics Inc. Drug-conjugates with a targeting molecule and two different drugs
US11103593B2 (en) * 2013-10-15 2021-08-31 Seagen Inc. Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
TN2016000137A1 (en) 2013-10-18 2017-10-06 Deutsches Krebsforsch Labeled inhibitors of prostate specific membrane antigen (psma), their use as imaging agents and pharmaceutical agents for the treatment of prostate cancer.
US9274662B2 (en) 2013-10-18 2016-03-01 Synaptics Incorporated Sensor matrix pad for performing multiple capacitive sensing techniques
WO2015061209A1 (en) 2013-10-21 2015-04-30 Genentech, Inc. ANTI-Ly6E ANTIBODIES AND METHODS OF USE
US9495046B2 (en) 2013-10-23 2016-11-15 Synaptics Incorporated Parasitic capacitance filter for single-layer capacitive imaging sensors
US9081457B2 (en) 2013-10-30 2015-07-14 Synaptics Incorporated Single-layer muti-touch capacitive imaging sensor
US20160280798A1 (en) 2013-11-06 2016-09-29 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Service Alk antibodies, conjugates, and chimeric antigen receptors, and their use
CN105849125B (zh) 2013-11-07 2020-05-15 国家医疗保健研究所 神经调节蛋白变构抗her3抗体
WO2015077605A1 (en) 2013-11-25 2015-05-28 Seattle Genetics, Inc. Preparing antibodies from cho cell cultures for conjugation
JP6525474B2 (ja) 2013-12-06 2019-06-05 ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． オーロラキナーゼ阻害剤と抗ｃｄ３０抗体の併用
MA39095A1 (fr) 2013-12-13 2018-08-31 Genentech Inc Anticorps et immunoconjugués anti-cd33
JP6980384B2 (ja) 2013-12-16 2021-12-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド １−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール二量体抗体−薬物コンジュゲート化合物、並びに使用及び処置の方法
FI3082878T3 (fi) 2013-12-19 2022-12-15 Metyleenikarbamaatin linkkerit käytettäviksi kohdennettujen lääkeaineiden konjugaattien kanssa
CN105813653B (zh) 2013-12-19 2020-06-26 西雅图基因公司 与目标-药物偶联物并用的亚甲基氨基甲酸酯连接物
US10675355B2 (en) 2013-12-27 2020-06-09 Var2 Pharmaceuticals Aps VAR2CSA-drug conjugates
CA2935077C (en) 2013-12-27 2022-03-15 Geoffrey C. Winters Sulfonamide-containing linkage systems for drug conjugates
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
US10548985B2 (en) 2014-01-10 2020-02-04 Birdie Biopharmaceuticals, Inc. Compounds and compositions for treating EGFR expressing tumors
EP3659624B1 (en) 2014-01-15 2022-11-16 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Cartilage targeting agents and their use
WO2015112909A1 (en) 2014-01-24 2015-07-30 Genentech, Inc. Methods of using anti-steap1 antibodies and immunoconjugates
US10562977B2 (en) 2014-01-29 2020-02-18 Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd. Ligand-cytotoxic drug conjugate, preparation method thereof, and uses thereof
FR3017298B1 (fr) 2014-02-07 2016-03-04 Centre Nat Rech Scient Conjugues et pro-drogues pour le traitement du cancer et de maladies inflammatoires
JP6713931B2 (ja) 2014-02-11 2020-06-24 シアトル ジェネティクス，インコーポレイティド タンパク質の選択的還元
MX2016009862A (es) * 2014-02-17 2016-10-31 Seattle Genetics Inc Conjugados de anticuerpo-farmaco hidrofilicos.
JP2017514143A (ja) 2014-02-21 2017-06-01 アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー メラノーマに使用するための抗ｄｌｌ３抗体および薬物コンジュゲート
US9798429B2 (en) 2014-02-28 2017-10-24 Synaptics Incorporated Guard electrodes in a sensing stack
US10464955B2 (en) 2014-02-28 2019-11-05 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Charged linkers and their uses for conjugation
TW202214691A (zh) 2014-03-21 2022-04-16 美商艾伯維有限公司 抗-egfr抗體及抗體藥物結合物
EP3954713A3 (en) 2014-03-28 2022-03-30 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind to cd38 and cd3
US10133421B2 (en) 2014-04-02 2018-11-20 Synaptics Incorporated Display stackups for matrix sensor
US9260478B2 (en) 2014-04-04 2016-02-16 Shanghui Hu Potent and efficient cytotoxic peptides and antibody-drug conjugates thereof and their synthesis
FR3020063A1 (fr) 2014-04-16 2015-10-23 Gamamabs Pharma Anticorps humain anti-her4
US9927832B2 (en) 2014-04-25 2018-03-27 Synaptics Incorporated Input device having a reduced border region
US9690397B2 (en) 2014-05-20 2017-06-27 Synaptics Incorporated System and method for detecting an active pen with a matrix sensor
US20170189549A1 (en) 2014-06-13 2017-07-06 Glykos Finland Oy Payload-Polymer-Protein Conjugates
JP5924795B2 (ja) 2014-06-13 2016-05-25 テンボロン オイ 複合体
US9950077B2 (en) 2014-06-20 2018-04-24 Bioalliance C.V. Anti-folate receptor alpha (FRA) antibody-drug conjugates and methods of using thereof
WO2015197919A1 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Glykos Finland Oy Antibody drug conjugates binding to high-mannose n-glycan
EP3160513B1 (en) 2014-06-30 2020-02-12 Glykos Finland Oy Saccharide derivative of a toxic payload and antibody conjugates thereof
AU2015286569B2 (en) 2014-07-11 2021-04-15 Genmab A/S Antibodies binding AXL
WO2016008112A1 (en) 2014-07-16 2016-01-21 Medshine Discovery Inc. Linkers and application towards adc thereof
EP3194449A1 (en) 2014-07-24 2017-07-26 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
AU2015294389B2 (en) 2014-07-24 2021-04-29 Genentech, Inc. Methods of conjugating an agent to a thiol moiety in a protein that contains at least one trisulfide bond
AU2015308818B2 (en) 2014-08-28 2021-02-25 Bioatla Llc Conditionally active chimeric antigen receptors for modified T-cells
CN112587672A (zh) 2014-09-01 2021-04-02 博笛生物科技有限公司 用于治疗肿瘤的抗-pd-l1结合物
PL3191502T3 (pl) 2014-09-11 2021-11-08 Seagen Inc. Ukierunkowane dostarczanie substancji leczniczych zawierających aminę trzeciorzędową
US9751946B2 (en) 2014-09-12 2017-09-05 Genentech, Inc. Anti-CLL-1 antibodies and immunoconjugates
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CA2957354A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
EA201790545A1 (ru) 2014-09-12 2017-07-31 Дженентек, Инк. Антитела и иммуноконъюгаты против her2
EP3191518B1 (en) 2014-09-12 2020-01-15 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
DK3194421T3 (da) 2014-09-17 2022-02-14 Zymeworks Inc Cytotoksiske og antimitotiske forbindelser samt fremgangsmåder til anvendelse heraf
PL3262071T3 (pl) 2014-09-23 2020-08-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Sposób stosowania immunokoniugatów anty-CD79b
GB201416960D0 (en) 2014-09-25 2014-11-12 Antikor Biopharma Ltd Biological materials and uses thereof
GB201419108D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Glythera Ltd Materials and methods relating to linkers for use in antibody drug conjugates
SG11201703446RA (en) 2014-10-31 2017-05-30 Abbvie Biotherapeutics Inc Anti-cs1 antibodies and antibody drug conjugates
JP6785780B2 (ja) 2014-11-05 2020-11-18 ネルビアーノ・メデイカル・サイエンシーズ・エツセ・エルレ・エルレ 官能基化モルホリニルアントラサイクリン誘導体
EP3786182A1 (en) 2014-11-19 2021-03-03 Axon Neuroscience SE Humanized tau antibodies in alzheimer's disease
CN104609464B (zh) * 2014-11-21 2017-01-04 中国科学院电工研究所 一种PbS纳米片的制备方法
CN107148285B (zh) 2014-11-25 2022-01-04 Adc治疗股份有限公司 吡咯并苯并二氮杂䓬-抗体缀合物
BR112017011166A2 (pt) 2014-11-26 2018-02-27 Xencor, Inc. anticorpos heterodiméricos que se ligam a cd3 e cd38
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
CA2967426A1 (en) 2014-11-26 2016-06-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and tumor antigens
JP6751393B2 (ja) 2014-12-03 2020-09-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ抗体リファマイシン抱合体及びその使用
KR20170086536A (ko) 2014-12-03 2017-07-26 제넨테크, 인크. 항-스타필로코커스 아우레우스 항체 리파마이신 접합체 및 이의 용도
ES2764299T3 (es) 2014-12-09 2020-06-02 Inst Nat Sante Rech Med Anticuerpos monoclonales humanos contra AXL
BR112017012377A2 (pt) 2014-12-09 2018-04-24 Abbvie Inc conjugados anticorpo-fármaco com inibidores de bcl-xl permeáveis à célula
CA2970155A1 (en) 2014-12-09 2016-06-16 Abbvie Inc. Bcl-xl inhibitory compounds having low cell permeability and antibody drug conjugates including the same
WO2016105450A2 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
US10175827B2 (en) 2014-12-23 2019-01-08 Synaptics Incorporated Detecting an active pen using a capacitive sensing device
US10795471B2 (en) 2015-01-05 2020-10-06 Synaptics Incorporated Modulating a reference voltage to perform capacitive sensing
US10188759B2 (en) 2015-01-07 2019-01-29 Endocyte, Inc. Conjugates for imaging
BR112017014599A2 (pt) 2015-01-14 2018-01-16 Bristol-Myers Squibb Company dímeros de benzodiazepina, conjugados dos mesmos, e métodos de preparação e uso
WO2016115201A1 (en) 2015-01-14 2016-07-21 Bristol-Myers Squibb Company Heteroarylene-bridged benzodiazepine dimers, conjugates thereof, and methods of making and using
GB201501004D0 (en) 2015-01-21 2015-03-04 Cancer Rec Tech Ltd Inhibitors
JP6871858B2 (ja) * 2015-01-28 2021-05-19 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． 抗体薬物コンジュゲート
AU2016215604B2 (en) 2015-02-02 2020-08-13 The University Of Birmingham Targeting moiety peptide epitope complexes having a plurality of T-cell epitopes
US10227411B2 (en) 2015-03-05 2019-03-12 Xencor, Inc. Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions
US10472395B2 (en) 2015-03-05 2019-11-12 Sirenas Llc Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
RU2739617C2 (ru) 2015-03-09 2020-12-28 Эдженсис, Инк. Конъюгаты антитело-лекарственное средство (adc), которые связываются с белками flt3
EP3662933A1 (en) 2015-03-18 2020-06-10 Seattle Genetics, Inc. Cd48 antibodies and conjugates thereof
US9939972B2 (en) 2015-04-06 2018-04-10 Synaptics Incorporated Matrix sensor with via routing
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
CN106188293A (zh) 2015-04-17 2016-12-07 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗c-Met抗体和抗c-Met抗体-细胞毒性药物偶联物及其医药用途
EP3091033A1 (en) 2015-05-06 2016-11-09 Gamamabs Pharma Anti-human-her3 antibodies and uses thereof
EP3295171A1 (en) 2015-05-12 2018-03-21 INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and kits for labeling, detection and isolation of foxp3+ regulatory t cells, isolated population of foxp3+ regulatory t cells thus obtained and uses thereof
WO2016188911A1 (en) 2015-05-22 2016-12-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Human monoclonal antibodies fragments inhibiting both the cath-d catalytic activity and its binding to the lrp1 receptor
WO2016189091A1 (en) 2015-05-26 2016-12-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions (ntsr1 inhibitors) for the treatment of hepatocellular carcinomas
WO2016189118A1 (en) 2015-05-28 2016-12-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of prognosis and treatment of patients suffering from acute myeloid leukemia
AU2016277121C1 (en) 2015-06-12 2022-07-14 Lentigen Technology, Inc. Method to treat cancer with engineered T-cells
KR20180019592A (ko) 2015-06-23 2018-02-26 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 마크로시클릭 벤조디아제핀 이량체, 그의 접합체, 제조법 및 용도
US9720541B2 (en) 2015-06-30 2017-08-01 Synaptics Incorporated Arrangement of sensor pads and display driver pads for input device
US10095948B2 (en) 2015-06-30 2018-10-09 Synaptics Incorporated Modulation scheme for fingerprint sensing
US9715304B2 (en) 2015-06-30 2017-07-25 Synaptics Incorporated Regular via pattern for sensor-based input device
IL303690A (en) 2015-06-30 2023-08-01 Seagen Inc Anti–NTB–A antibodies and related preparations and methods
JP6892431B2 (ja) 2015-07-10 2021-06-23 ゲンマブ エー／エス 癌治療用のａｘｌ特異的抗体−薬物コンジュゲート
CN113350518A (zh) 2015-07-12 2021-09-07 杭州多禧生物科技有限公司 与细胞结合分子的共轭偶联的桥连接体
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
BR112018000650A2 (pt) 2015-07-22 2018-09-18 Inatherys anticorpos anti-tfr e sua utilização no tratamento de trastornos proliferativos e inflamatórios
CN205028263U (zh) 2015-09-07 2016-02-10 辛纳普蒂克斯公司 一种电容传感器
US10037112B2 (en) 2015-09-30 2018-07-31 Synaptics Incorporated Sensing an active device'S transmission using timing interleaved with display updates
US10722593B2 (en) 2015-10-02 2020-07-28 Sirenas Llc Anti-cancer compounds and conjugates thereof
CA2997809A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Il-7r-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
US10421810B2 (en) 2015-10-09 2019-09-24 Lentigen Technology, Inc. Chimeric antigen receptors and methods of use
WO2017060397A1 (en) 2015-10-09 2017-04-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the survival time of subjects suffering from melanoma metastases
EP3362088B1 (en) 2015-10-12 2020-11-25 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) An agent capable of depleting cd8 t cells for the treatment of myocardial infarction or acute myocardial infarction
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
WO2017067944A1 (en) 2015-10-19 2017-04-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the survival time of subjects suffering from triple negative breast cancer
US10618935B2 (en) 2015-11-03 2020-04-14 Industrial Technology Research Institute Antibody-drug conjugate (ADC) and method for forming the same
EP3377103B1 (en) 2015-11-19 2021-03-17 Revitope Limited Functional antibody fragment complementation for a two-components system for redirected killing of unwanted cells
WO2017095808A1 (en) 2015-11-30 2017-06-08 Abbvie Inc. ANTI-huLRRC15 ANTIBODY DRUG CONJUGATES AND METHODS FOR THEIR USE
JP2019500327A (ja) 2015-11-30 2019-01-10 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体薬物コンジュゲート及びその使用方法
AU2016363013B2 (en) 2015-12-04 2022-03-10 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
EP3387013B1 (en) 2015-12-07 2022-06-08 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and psma
US10067587B2 (en) 2015-12-29 2018-09-04 Synaptics Incorporated Routing conductors in an integrated display device and sensing device
CN106933400B (zh) 2015-12-31 2021-10-29 辛纳普蒂克斯公司 单层传感器图案和感测方法
US10472422B2 (en) 2016-01-08 2019-11-12 Abgenomics International Inc. Tetravalent anti-PSGL-1 antibodies and uses thereof
JP2019505520A (ja) 2016-01-13 2019-02-28 ゲンマブ エー／エス 抗体およびその薬物コンジュゲートの製剤
SG11201806120WA (en) 2016-01-20 2018-08-30 Scripps Research Inst Ror1 antibody compositions and related methods
CN114478801A (zh) * 2016-01-25 2022-05-13 里珍纳龙药品有限公司 美登素类化合物衍生物、其偶联物和使用方法
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
KR20180104106A (ko) 2016-01-27 2018-09-19 서트로 바이오파마, 인크. anti-CD74 항체 접합체, anti-CD74 항체 접합체를 포함하는 조성물 및 anti-CD74 항체 접합체의 이용 방법
KR20180105155A (ko) 2016-02-05 2018-09-27 릭스하스피탈렛 uPARAP을 표적으로 하는 항체-약물 접합체
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
CN108778329B (zh) 2016-02-17 2022-09-16 西雅图基因公司 Bcma抗体和其用以治疗癌症和免疫病症的用途
WO2017147597A1 (en) 2016-02-27 2017-08-31 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Peptide vaccines comprising self-assembling polymer nanoparticles
WO2017151425A1 (en) 2016-02-29 2017-09-08 Madrigal Pharmaceuticals, Inc. Hsp90 inhibitor drug conjugates
LT3423105T (lt) * 2016-03-02 2021-09-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Antikūno-vaisto konjugatai eribulino pagrindu ir jų panaudojimo būdai
MX2018010491A (es) 2016-03-04 2018-11-09 Genentech Inc Proceso para la preparacion de un conjugado anticuerpo-rifamicina.
MA45324A (fr) 2016-03-15 2019-01-23 Seattle Genetics Inc Polythérapie utilisant un adc-liv1 et un agent chimiothérapeutique
WO2017161206A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Halozyme, Inc. Conjugates containing conditionally active antibodies or antigen-binding fragments thereof, and methods of use
KR102640157B1 (ko) 2016-03-22 2024-02-27 인쎄름 (엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔) 인간화 항-클라우딘-1 항체 및 이의 용도
CN109311910B (zh) 2016-03-24 2022-02-01 杜兰教育基金委员会 他克莫司偶联物、其组合物、及其用途
AU2017237186A1 (en) 2016-03-25 2018-11-01 Seagen Inc. Process for the preparation of PEGylated drug-linkers and intermediates thereof
US10792365B2 (en) 2016-03-29 2020-10-06 Toray Industries, Inc. Peptide derivative and use thereof
CA3019398A1 (en) 2016-04-26 2017-11-02 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
US10918627B2 (en) 2016-05-11 2021-02-16 Massachusetts Institute Of Technology Convergent and enantioselective total synthesis of Communesin analogs
SI3455261T1 (sl) 2016-05-13 2023-01-31 Bioatla, Inc. Protitelesa proti ROR2, fragmenti protitelesa, njihovi imunokonjugati in uporabe le-teh
KR20230028574A (ko) 2016-05-17 2023-02-28 애브비 바이오테라퓨틱스 인크. 항-cMet 항체 약물 컨쥬게이트 및 그들의 이용 방법
JP7022080B2 (ja) 2016-05-27 2022-02-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 部位特異的抗体－薬物複合体の特徴付けのための生化学分析的方法
EP3464294B1 (en) 2016-05-30 2022-07-13 Toxinvent Oü Antibody-drug-conjugates comprising novel anthracycline-derivatives for cancer treatment
EP3464280B1 (en) 2016-06-06 2021-10-06 F. Hoffmann-La Roche AG Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use
CN109562170B (zh) 2016-06-08 2023-01-13 艾伯维公司 抗cd98抗体及抗体药物偶联物
EP4104865A1 (en) 2016-06-08 2022-12-21 AbbVie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
MX2018015280A (es) 2016-06-08 2019-08-12 Abbvie Inc Conjugados de anticuerpo y farmaco anti-egfr.
AU2017277422A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-EGFR antibody drug conjugates
WO2017214335A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
CN109563167A (zh) 2016-06-08 2019-04-02 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
WO2017214456A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
EP3468599A2 (en) 2016-06-08 2019-04-17 AbbVie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
CA3027103A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
MX2018015592A (es) 2016-06-14 2019-04-24 Xencor Inc Anticuerpos inhibidores de puntos de control biespecificos.
US11617799B2 (en) 2016-06-27 2023-04-04 Tagworks Pharmaceuticals B.V. Cleavable tetrazine used in bio-orthogonal drug activation
CA3029328A1 (en) 2016-06-28 2018-01-04 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
MA45945A (fr) 2016-08-09 2019-06-19 Seattle Genetics Inc Conjugués de médicaments avec des lieurs auto-stabilisants, aux propriétés physiochimiques améliorées
CN106674347B (zh) * 2016-08-16 2019-12-13 滨州医学院 一种新型耳抑素抗体
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
WO2018045245A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Sirenas Llc Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
JP7160482B2 (ja) 2016-09-02 2022-10-25 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッド Ｄｕｏｃａｒを用いてがんを処置するための組成物および方法
US10517958B2 (en) 2016-10-04 2019-12-31 Zymeworks Inc. Compositions and methods for the treatment of platinum-drug resistant cancer
AU2017342559B2 (en) 2016-10-14 2022-03-24 Xencor, Inc. Bispecific heterodimeric fusion proteins containing IL-15/IL-15Ralpha Fc-fusion proteins and PD-1 antibody fragments
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
IL291810A (en) 2016-10-18 2022-06-01 Seagen Inc Targeted administration of nicotinamide adenine dinucleotide reductase pathway inhibitors
KR102617264B1 (ko) 2016-10-19 2023-12-29 인벤라 인코포레이티드 항체 구조물
WO2018077926A1 (en) 2016-10-25 2018-05-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Monoclonal antibodies binding to the cd160 transmembrane isoform
EP3533466A4 (en) 2016-10-28 2020-06-10 Toray Industries, Inc. PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR CANCER TREATMENT AND / OR PREVENTION
MA46700A (fr) 2016-11-01 2021-05-19 Genmab Bv Variants polypeptidiques et ses utilisations
WO2018089373A2 (en) 2016-11-08 2018-05-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Steroids and protein-conjugates thereof
NZ752394A (en) 2016-11-14 2021-07-30 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Conjugation linkers, cell binding molecule-drug conjugates containing the likers, methods of making and uses such conjugates with the linkers
JP2019533711A (ja) 2016-11-14 2019-11-21 ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 非成人のヒトに対する抗ｃｄ３０抗体−薬物コンジュゲートの投与
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
JP7244987B2 (ja) 2016-12-14 2023-03-23 シージェン インコーポレイテッド 多剤抗体薬物コンジュゲート
US10864279B2 (en) 2016-12-16 2020-12-15 Industrial Technology Research Institute Linker-drug and antibody-drug conjugate (ADC) employing the same
EA201991204A1 (ru) 2016-12-22 2019-12-30 Университа Дельи Студи Манья Греча Катандзаро Моноклональное антитело против уникального сиалогликозилированного опухолеассоциированного эпитопа cd43
KR102015524B1 (ko) * 2016-12-26 2019-08-29 인터올리고 주식회사 압타머-약물 콘쥬게이트 및 그 용도
CN106854245A (zh) * 2016-12-28 2017-06-16 无锡傲锐东源生物科技有限公司 抗cd30蛋白单克隆抗体及其用途
EP4183798A1 (en) 2017-01-09 2023-05-24 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-mesothelin immunotherapy
JP6671555B2 (ja) 2017-02-08 2020-03-25 アーデーセー セラピューティクス ソシエテ アノニム ピロロベンゾジアゼピン抗体複合体
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US11471538B2 (en) 2017-02-10 2022-10-18 INSERM (Institut National de la Santéet de la Recherche Medicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of cancers associated with activation of the MAPK pathway
WO2018151868A2 (en) 2017-02-16 2018-08-23 Sonnet Bio Therapeutics Albumin binding domain fusion proteins
WO2018158716A1 (en) 2017-03-02 2018-09-07 Cadila Healthcare Limited Novel protein drug conjugate formulation
GB201703876D0 (en) 2017-03-10 2017-04-26 Berlin-Chemie Ag Pharmaceutical combinations
JP7137896B2 (ja) 2017-03-24 2022-09-15 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッド 抗ｃｄ３３免疫療法によりがんを処置するための組成物および方法
US11730822B2 (en) 2017-03-24 2023-08-22 Seagen Inc. Process for the preparation of glucuronide drug-linkers and intermediates thereof
BR112019018767A2 (pt) 2017-04-03 2020-05-05 Hoffmann La Roche anticorpos, molécula de ligação ao antígeno biespecífica, um ou mais polinucleotídeos isolados, um ou mais vetores, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, composição farmacêutica, usos, método para tratar uma doença em um indivíduo e invenção
WO2018187791A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Juno Therapeutics, Inc Engineered cells expressing prostate-specific membrane antigen (psma) or a modified form thereof and related methods
AU2018255876B2 (en) 2017-04-18 2020-04-30 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
US11932694B2 (en) 2017-04-19 2024-03-19 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-VTCN1 antibodies and antibody drug conjugates
AU2018253948A1 (en) 2017-04-20 2019-09-19 Adc Therapeutics Sa Combination therapy with an anti-AXL Antibody-Drug Conjugate
SG11201909563VA (en) 2017-04-27 2019-11-28 Seattle Genetics Inc Quaternized nicotinamide adenine dinucleotide salvage pathway inhibitor conjugates
JOP20190254A1 (ar) 2017-04-27 2019-10-27 Pharma Mar Sa مركبات مضادة للأورام
AU2018259856A1 (en) 2017-04-28 2019-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Compound having substance that has affinity for soluble protein, cleavable moiety, and reactive group, or salt thereof
US11932650B2 (en) 2017-05-11 2024-03-19 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
US11666657B2 (en) 2017-05-16 2023-06-06 Universite De Strasbourg Protein-drug conjugates and their use in the treatment of cancers
MX2019013690A (es) 2017-05-18 2020-01-27 Regeneron Pharma Conjugados de farmaco-proteina con ciclodextrina.
MX2019015042A (es) 2017-06-14 2020-08-06 Adc Therapeutics Sa Regimen de dosificacion.
DE112018007259T5 (de) * 2017-06-19 2020-12-24 Sichuan Baili Pharm Co.Ltd Antikörper-Wirkstoff-Konjugat mit einer säurebildenden Selbststabilisierungs-Anbindung
WO2018234843A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) METHODS AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF FIBROSIS WITH AGENTS CAPABLE OF INHIBITING THE ACTIVATION OF MOSES-ASSOCIATED INVARIANT T CELLS (MAIT)
CA3066754A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Mersana Therapeutics, Inc. Methods of producing drug-carrying polymer scaffolds and protein-polymer-drug conjugates
CN111587124B (zh) 2017-06-23 2024-01-12 维洛斯生物股份有限公司 Ror1抗体免疫缀合物
CA3068672A1 (en) 2017-06-28 2019-01-03 The Rockefeller University Anti-mertk agonistic antibody-drug conjugates and uses thereof
JP2020529832A (ja) 2017-06-30 2020-10-15 ゼンコア インコーポレイテッド ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαおよび抗原結合ドメインを含む標的化ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質
WO2019023316A1 (en) 2017-07-26 2019-01-31 Sutro Biopharma, Inc. METHODS OF USING ANTI-CD74 ANTIBODIES AND ANTIBODY CONJUGATES IN THE TREATMENT OF A T CELL LYMPHOMA
AU2018309735A1 (en) 2017-07-31 2020-02-20 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD19/CD20 immunotherapy
KR102270107B1 (ko) 2017-08-18 2021-06-30 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트
ES2960419T3 (es) 2017-09-15 2024-03-04 Lentigen Tech Inc Composiciones y métodos de tratamiento de cáncer con inmunoterapia anti-CD19
US20200353076A1 (en) 2017-09-18 2020-11-12 Sutro Biopharma, Inc. Anti-folate receptor alpha antibody conjugates and their uses
AU2018347406A1 (en) 2017-10-11 2020-04-23 Seagen Inc. Methods of reducing side effects of anti-CD30 antibody drug conjugate therapy
JP7356727B2 (ja) 2017-10-12 2023-10-05 慶應義塾 アクアポリン３（ａｑｐ３）の細胞外ドメインに特異的に結合する抗ａｑｐ３モノクローナル抗体、及びその使用
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
ES2958849T3 (es) 2017-10-16 2024-02-15 Lentigen Tech Inc Composiciones y métodos para tratar el cáncer con inmunoterapia anti-CD22
CN107759699A (zh) * 2017-10-18 2018-03-06 银丰生物工程集团有限公司 靶向cd30抗原的转基因t细胞及其制备方法与应用
JP2021501800A (ja) 2017-11-01 2021-01-21 シアトル ジェネティクス，インコーポレイティド 抗ｃｄ３０抗体薬物複合体療法の副作用を軽減する方法
EP3706793A1 (en) 2017-11-08 2020-09-16 Xencor, Inc. Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-pd-1 sequences
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
KR20200090195A (ko) * 2017-11-22 2020-07-28 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드-약물 컨쥬게이트의 분석을 위한 산 매개 검정
WO2019102435A1 (en) 2017-11-27 2019-05-31 Euro-Celtique S.A. Humanized antibodies targeting human tissue factor
MX2020004806A (es) * 2017-11-29 2020-10-07 Magenta Therapeutics Inc Composiciones y métodos para el agotamiento de células cd2+.
CA3084495A1 (en) 2017-12-01 2019-06-06 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-liv1 antibodies for the treatment of breast cancer
AU2018375375A1 (en) 2017-12-01 2020-05-28 Seagen Inc. CD47 antibodies and uses thereof for treating cancer
EP3498293A1 (en) 2017-12-15 2019-06-19 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Treatment of monogenic diseases with an anti-cd45rc antibody
WO2019125732A1 (en) 2017-12-19 2019-06-27 Xencor, Inc. Engineered il-2 fc fusion proteins
AU2018388997A1 (en) 2017-12-20 2020-07-09 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating HIV/AIDS with immunotherapy
EP3755707A1 (en) * 2018-02-20 2020-12-30 Seagen Inc. Hydrophobic auristatin f compounds and conjugates thereof
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
CA3092286A1 (en) 2018-03-07 2019-09-12 Forschungsverbund Berlin E.V. Chemoselective thiol-conjugation with alkene or alkyne-phosphonothiolates and -phosphonates
SG11202008770QA (en) 2018-03-13 2020-10-29 Zymeworks Inc Anti-her2 biparatopic antibody-drug conjugates and methods of use
MA52135A (fr) 2018-03-23 2021-01-27 Seagen Inc Utilisation de conjugués anticorps-médicament comprenant des agents de rupture de tubuline pour traiter une tumeur solide
AU2019247415A1 (en) 2018-04-04 2020-10-22 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
EP3552631A1 (en) 2018-04-10 2019-10-16 Inatherys Antibody-drug conjugates and their uses for the treatment of cancer
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CA3097593A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Xencor, Inc. Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof
AU2019256529A1 (en) 2018-04-18 2020-11-26 Xencor, Inc. TIM-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing IL-15/IL-15Ra Fc-fusion proteins and TIM-3 antigen binding domains
WO2019213386A1 (en) * 2018-05-04 2019-11-07 New Mexico Tech University Research Park Corporation Proteasome inhibitors
CA3099419A1 (en) 2018-05-04 2019-11-07 Tagworks Pharmaceuticals B.V. Tetrazines for high click conjugation yield in vivo and high click release yield
DK3788032T3 (da) 2018-05-04 2024-04-15 Tagworks Pharmaceuticals B V Forbindelser omfattende en linker til øgning af transcyklooctenstabilitet
TW202010755A (zh) 2018-05-07 2020-03-16 丹麥商珍美寶股份有限公司 使用抗ｐｄ－１抗體與抗組織因子抗體－藥物共軛體之組合以治療癌症之方法
CN112368020A (zh) 2018-05-07 2021-02-12 展马博联合股份有限公司 抗pd-1抗体和抗组织因子抗体-药物偶联物组合治疗癌症的方法
CA3098453A1 (en) 2018-05-09 2019-11-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-msr1 antibodies and methods of use thereof
AU2019277029C1 (en) 2018-06-01 2024-01-04 Novartis Ag Binding molecules against BCMA and uses thereof
EP3802580A1 (en) 2018-06-05 2021-04-14 King's College London Btnl3/8 targeting constructs for delivery of payloads to the gastrointestinal system
JP7413999B2 (ja) 2018-06-14 2024-01-16 味の素株式会社 抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩
CN112261954A (zh) 2018-06-14 2021-01-22 味之素株式会社 具有针对抗体的亲和性物质和生物正交性官能团的化合物或其盐
GB201809746D0 (en) 2018-06-14 2018-08-01 Berlin Chemie Ag Pharmaceutical combinations
WO2020010079A2 (en) 2018-07-02 2020-01-09 Amgen Inc. Anti-steap1 antigen-binding protein
EP3829648A1 (en) 2018-07-27 2021-06-09 Promega Corporation Quinone-containing conjugates
FI3849614T3 (fi) 2018-09-11 2024-02-08 Ambrx Inc Interleukiini-2-polypeptidikonjugaatteja ja niiden käyttöjä
US20220047716A1 (en) 2018-09-17 2022-02-17 Sutro Biopharma, Inc. Combination therapies with anti-folate receptor antibody conjugates
WO2020058372A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of cancers resistant to immune checkpoint therapy
CA3113058A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd123 immunotherapy
EP3626265A1 (en) 2018-09-21 2020-03-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-human cd45rc antibodies and uses thereof
CN113286607A (zh) 2018-09-26 2021-08-20 莱蒂恩技术公司 用于用抗cd19/cd22免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
MX2021003382A (es) 2018-09-26 2021-05-27 Jiangsu Hengrui Medicine Co Conjugado de ligando y farmaco analogo de exatecan, metodo de preparacion del mismo y aplicacion del mismo.
MX2021003734A (es) 2018-10-01 2021-07-16 Seagen Inc Métodos de tratamiento del linfoma de linfocitos t periférico mediante terapia con conjugado fármaco-anticuerpo anti-cd30.
JP2022503959A (ja) 2018-10-03 2022-01-12 ゼンコア インコーポレイテッド Ｉｌ－１２ヘテロ二量体ｆｃ－融合タンパク質
JP2022512746A (ja) 2018-10-19 2022-02-07 アンブルックス，インコーポレイテッド インターロイキン－１０ポリペプチド複合体、その二量体、およびそれらの使用
TWI824043B (zh) 2018-10-25 2023-12-01 西班牙商瑪製藥股份有限公司 藥物抗體共軛物
CN113365664A (zh) 2018-10-29 2021-09-07 梅尔莎纳医疗公司 具有含肽接头的半胱氨酸工程化的抗体-药物缀合物
TW202034958A (zh) 2018-10-30 2020-10-01 丹麥商珍美寶股份有限公司 使用抗血管內皮生長因子（ｖｅｇｆ）抗體與抗組織因子（ｔｆ）抗體－藥物共軛體之組合以治療癌症之方法
CN113227124A (zh) 2018-10-31 2021-08-06 味之素株式会社 具有针对抗体的亲和性物质、切割性部分及反应性基团的化合物或其盐
EP3647419A1 (en) 2018-11-02 2020-05-06 NBE Therapeutics AG Sortase f and its use in methods for conjugation
EP3877413A1 (en) 2018-11-06 2021-09-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of acute myeloid leukemia by eradicating leukemic stem cells
EP3883610A4 (en) 2018-11-20 2022-11-02 Cornell University MACROCYCLIC COMPLEXES OF RADIONUCLIDES AND THEIR USE IN CANCER RADIATION THERAPY
AU2019387377A1 (en) 2018-11-30 2021-06-17 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD38 immunotherapy
MX2021006573A (es) 2018-12-06 2021-07-15 Genentech Inc Tratamiento conjunto de linfoma difuso de linfocitos b grandes que comprende un inmunoconjugado anti-cd79b, un agente alquilante y un anticuerpo anti-cd20.
CN113227119A (zh) 2018-12-10 2021-08-06 基因泰克公司 用于与含Fc的蛋白质进行位点特异性缀合的光交联肽
JP2022516408A (ja) 2018-12-14 2022-02-28 インセルム（インスティチュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ リシェルシェ メディカル） 単離されたＭＨＣ由来ヒトペプチドおよびＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＣｌｏｗＴｒｅｇの抑制機能を刺激し、かつ活性化するためのその使用
EP3898699A1 (en) 2018-12-19 2021-10-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating cancers by immuno-modulation using antibodies against cathespin-d
WO2020127968A1 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Marino Stephen F Protein-drug conjugate comprising a monomeric form of proteinase 3
GB201820864D0 (en) * 2018-12-20 2019-02-06 J A Kemp Antibody-drug conjugates
IL297818A (en) 2018-12-21 2023-01-01 Avidity Biosciences Inc Anti-transferrin receptor antibodies and uses thereof
EP3918323A4 (en) 2019-01-30 2022-12-28 TrueBinding, Inc. ANTI-GAL3 ANTIBODIES AND THEIR USES
WO2020163225A1 (en) 2019-02-05 2020-08-13 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd228 antibodies and antibody-drug conjugates
JP7232925B2 (ja) 2019-02-15 2023-03-03 ウーシー バイオロジクス アイルランド リミテッド 改善された均一性を有する抗体薬物コンジュゲートの調製するプロセス
CN109652384B (zh) * 2019-02-21 2021-10-26 昆明理工大学 一种体外培养戊型肝炎病毒的方法
MA55080A (fr) 2019-02-26 2022-01-05 Inspirna Inc Anticorps anti-mertk à affinité élevée et utilisations associées
WO2020180726A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind enpp3 and cd3
EP3934668A1 (en) 2019-03-06 2022-01-12 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with self-driving chimeric antigen receptors
CA3133155A1 (en) 2019-03-19 2020-09-24 Fundacio Privada Institut D'investigacio Oncologica De Vall Hebron Combination therapy for the treatment for cancer
WO2020191342A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 The Regents Of The University Of California Claudin-6 antibodies and drug conjugates
WO2020213084A1 (en) 2019-04-17 2020-10-22 Keio University Anti aqp3 monoclonal antibody specifically binding to extracellular domain of aquaporin 3 (aqp3) and use thereof
EP3962951A1 (en) 2019-05-03 2022-03-09 Sutro Biopharma, Inc. Anti-bcma antibody conjugates
EP3965893A1 (en) 2019-05-06 2022-03-16 Seekyo New therapeutic vectors and prodrugs for treating cancers
JP2022536602A (ja) 2019-05-14 2022-08-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド 濾胞性リンパ腫を処置するための抗ｃｄ７９ｂ免疫複合体の使用方法
US20230071196A1 (en) 2019-05-21 2023-03-09 Novartis Ag Variant cd58 domains and uses thereof
TW202100559A (zh) 2019-05-21 2021-01-01 瑞士商諾華公司 Cd19 結合分子及其用途
WO2020243546A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-bcma immunotherapy
WO2020247054A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
TW202112354A (zh) 2019-06-05 2021-04-01 美商西雅圖遺傳學公司 遮蔽抗體調配物
US20220306727A1 (en) 2019-06-05 2022-09-29 Seagen Inc. Methods of Purifying Masked Antibodies
EP3983363B1 (en) 2019-06-17 2024-04-10 Tagworks Pharmaceuticals B.V. Compounds for fast and efficient click release
IL289094A (en) 2019-06-17 2022-02-01 Tagworks Pharmaceuticals B V Tetrazines for increasing the speed and yield of the "click release" reaction
MX2022000174A (es) 2019-07-02 2022-05-20 Us Health Anticuerpos monoclonales que se enlazan a egfrviii y sus usos.
US20210030885A1 (en) 2019-07-22 2021-02-04 Seagen Inc. Humanized anti-liv1 antibodies for the treatment of cancer
CN114502593A (zh) 2019-08-06 2022-05-13 葛兰素史密斯克莱知识产权发展有限公司 生物药物组合物和相关方法
MX2022001682A (es) 2019-08-08 2022-05-13 Regeneron Pharma Nuevos formatos de moleculas de union a antigenos.
EP4013788A1 (en) 2019-08-12 2022-06-22 Purinomia Biotech, Inc. Methods and compositions for promoting and potentiating t-cell mediated immune responses through adcc targeting of cd39 expressing cells
JP2022548530A (ja) 2019-09-05 2022-11-21 ファルマ、マール、ソシエダード、アノニマ 薬物抗体コンジュゲート
CN112125915A (zh) 2019-09-18 2020-12-25 四川百利药业有限责任公司 一种喜树碱衍生物及其偶联物
BR112022004863A2 (pt) 2019-09-19 2022-06-07 Seagen Inc Composição conjugado de ligante fármaco, compostos conjugado de ligante-fármaco e conector de fármaco, e, formulação farmaceuticamente aceitável
MX2022003357A (es) 2019-09-25 2022-05-03 Seagen Inc Combinación de anticuerpo anti-cd30 conjugado con un farmaco, anti-pd-1 y quimioterapia para el tratamiento de cánceres hematopoyéticos.
JPWO2021060439A1 (pt) 2019-09-26 2021-04-01
EP4037710A1 (en) 2019-10-04 2022-08-10 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of ovarian cancer, breast cancer or pancreatic cancer
CN115151564A (zh) 2019-10-04 2022-10-04 思进股份有限公司 抗pd-l1抗体和抗体-药物缀合物
CA3154710A1 (en) 2019-10-04 2021-04-08 TAE Life Sciences Antibody compositions comprising fc mutations and site-specific conjugation properties
CA3157509A1 (en) 2019-10-10 2021-04-15 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder
JP7413519B2 (ja) 2019-10-18 2024-01-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド びまん性大細胞型ｂ細胞リンパ腫を処置するための抗ｃｄ７９ｂ免疫抱合体の使用方法
EP3812008A1 (en) 2019-10-23 2021-04-28 Gamamabs Pharma Amh-competitive antagonist antibody
US20240123081A1 (en) 2019-10-25 2024-04-18 Medimmune, Llc Branched moiety for use in conjugates
KR20220093363A (ko) 2019-11-05 2022-07-05 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. N-말단 scFv 다중특이적 결합 분자
TW202131954A (zh) 2019-11-07 2021-09-01 丹麥商珍美寶股份有限公司 利用鉑類劑與抗組織因子抗體－藥物共軛體之組合來治療癌症之方法
CA3155754A1 (en) 2019-11-07 2021-05-14 Reshma Abdulla RANGWALA Methods of treating cancer with a combination of an anti-pd-1 antibody and an anti-tissue factor antibody-drug conjugate
EP4247957A1 (en) 2019-11-22 2023-09-27 MedImmune Limited Fusion proteins comprising an e2 ubiquitin or ubiquitin-like conjugating domain and a targeting domain for specific protein degradation
TW202138388A (zh) 2019-12-30 2021-10-16 美商西根公司 以非海藻糖苷化抗－ｃｄ７０抗體治療癌症之方法
US20230090552A1 (en) 2020-01-08 2023-03-23 Synthis Therapeutics, Inc. Alk5 inhibitor conjugates and uses thereof
JP2023511163A (ja) 2020-01-22 2023-03-16 上海森輝医薬有限公司 エリブリン誘導体の薬物複合体、その調製方法及びその医薬的応用
EP4114852A1 (en) 2020-03-03 2023-01-11 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific glutamine tags, methods of their preparation and methods of their use
CN115315446A (zh) 2020-03-06 2022-11-08 Go医疗股份有限公司 抗糖-cd44抗体及其用途
AU2021233909A1 (en) 2020-03-11 2022-09-29 Ambrx, Inc. Interleukin-2 polypeptide conjugates and methods of use thereof
JP2023537798A (ja) 2020-03-19 2023-09-06 アビディティー バイオサイエンシーズ，インク． 顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーを処置するための組成物および方法
BR112022019073A2 (pt) 2020-03-25 2022-11-08 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co Ltd Composição farmacêutica que compreende conjugado anticorpo-fármaco e uso da mesma
CN115103858A (zh) 2020-03-25 2022-09-23 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种抗体药物偶联物的制备方法
WO2021195513A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 Novartis Ag Bispecific combination therapy for treating proliferative diseases and autoimmune disorders
WO2021195469A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating muscle dystrophy
IL297167A (en) 2020-04-10 2022-12-01 Seagen Inc Charging variant connectors
AR121894A1 (es) 2020-04-21 2022-07-20 Pharma Mar Sa Conjugados de anticuerpos de fármacos
TW202206111A (zh) 2020-04-24 2022-02-16 美商建南德克公司 使用抗ｃｄ７９ｂ免疫結合物之方法
WO2021221927A1 (en) 2020-04-27 2021-11-04 Parsons Corporation Narrowband iq signal obfuscation
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
CA3182333A1 (en) 2020-05-20 2021-11-25 Institut Curie Single domain antibodies and their use in cancer therapies
CA3180613A1 (en) 2020-06-05 2021-12-09 Aung MYO Treatment of cd30-positive cancer
EP4163294A1 (en) 2020-06-09 2023-04-12 Ajinomoto Co., Inc. Modified ferritin and method for producing same
AU2021296423A1 (en) 2020-06-22 2023-02-02 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with TSLPR-CD19 or TSLPR-CD22 immunotherapy
JP2023533937A (ja) 2020-06-29 2023-08-07 ジェンマブ エー／エス 抗組織因子抗体－薬物コンジュゲートおよびがん治療におけるその使用
US20230323299A1 (en) 2020-08-03 2023-10-12 Inserm (Institut National De La Santé Et De La Recherch Médicale) Population of treg cells functionally committed to exert a regulatory activity and their use for adoptive therapy
AU2021320739A1 (en) 2020-08-04 2023-02-23 Seagen Inc. Anti-CD228 antibodies and antibody-drug conjugates
AU2021329378A1 (en) 2020-08-19 2023-03-23 Xencor, Inc. Anti-CD28 compositions
CN112062855A (zh) 2020-08-26 2020-12-11 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种含有衔接器的药物治疗剂的开发和应用
WO2022060905A1 (en) 2020-09-15 2022-03-24 The University Of Montana Compositions and methods targeting filamentous bacteriophage
EP3970752A1 (en) 2020-09-17 2022-03-23 Merck Patent GmbH Molecules with solubility tag and related methods
EP4217395A1 (en) 2020-09-28 2023-08-02 Seagen Inc. Humanized anti-liv1 antibodies for the treatment of cancer
WO2022079270A1 (en) 2020-10-16 2022-04-21 Université D'aix-Marseille Anti-gpc4 single domain antibodies
EP4240397A1 (en) 2020-11-05 2023-09-13 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19/cd22 immunotherapy
TW202233248A (zh) 2020-11-08 2022-09-01 美商西健公司 組合療法
CN114524878A (zh) 2020-11-23 2022-05-24 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种双特异性抗体及其用途
CN114573702A (zh) 2020-12-02 2022-06-03 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种新型肿瘤衔接器治疗药物的开发和应用
CN114573703A (zh) 2020-12-02 2022-06-03 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种t细胞衔接器治疗剂的开发和应用
JP2023553157A (ja) 2020-12-10 2023-12-20 ユーティレックス カンパニー リミテッド 抗－ｐｄ－１抗体およびその用途
CN117642185A (zh) 2020-12-23 2024-03-01 路德维希-马克西米利安慕尼黑大学 改进的cd30靶向抗体药物偶联物及其用途
CN114685657A (zh) 2020-12-31 2022-07-01 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种功能增强型抗体阻断剂的开发及其应用
CN114716548A (zh) 2021-01-05 2022-07-08 (株)爱恩德生物 抗-fgfr3抗体及其用途
IL304031A (en) 2021-01-14 2023-08-01 Inst Curie Variants of single-domain HER2 antibodies and their chimeric antigenic receptors
AU2022207278A1 (en) 2021-01-18 2023-08-03 Ajinomoto Co., Inc. Compound or salt thereof, and antibody obtained therefrom
CA3208296A1 (en) 2021-01-18 2022-07-21 Ajinomoto Co., Inc. Compound or salt thereof, and antibody obtained by using the same
UY39610A (es) 2021-01-20 2022-08-31 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
WO2022165260A1 (en) 2021-01-29 2022-08-04 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods of making modified tumor infiltrating lymphocytes and their use in adoptive cell therapy
WO2022180242A2 (en) 2021-02-26 2022-09-01 Forschungsverbund Berlin E.V. Cellular uptake of large biomolecules enabled by cell-surface-reactive cell-penetrating peptide additives
EP4301782A1 (en) 2021-03-05 2024-01-10 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cd44 antibodies and their uses
EP4305067A1 (en) 2021-03-09 2024-01-17 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
WO2022192586A1 (en) 2021-03-10 2022-09-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and gpc3
EP4306535A1 (en) 2021-03-11 2024-01-17 Ajinomoto Co., Inc. Compound or salt thereof, and antibody obtained using same
EP4310096A1 (en) 2021-03-16 2024-01-24 Ajinomoto Co., Inc. Complex or salt thereof, and method for manufacturing same
AU2022238571A1 (en) 2021-03-18 2023-09-14 Seagen Inc. Selective drug release from internalized conjugates of biologically active compounds
TW202300179A (zh) 2021-03-18 2023-01-01 美商西根公司 內化的生物活性化合物偶聯物選擇性釋放藥物
WO2022200303A1 (en) 2021-03-23 2022-09-29 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the diagnosis and treatment of t cell-lymphomas
JPWO2022211075A1 (pt) 2021-03-31 2022-10-06
EP4320153A1 (en) 2021-04-09 2024-02-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of anaplastic large cell lymphoma
TW202304524A (zh) 2021-04-10 2023-02-01 美商普方生物製藥美國公司 Folr1結合劑、其結合物及使用方法
CN117915927A (zh) 2021-04-21 2024-04-19 因达普塔治疗公司 自然杀伤细胞组合物的治疗和给药方法
CN117545511A (zh) 2021-04-23 2024-02-09 柏林合作研究学会 与不饱和磷(v)化合物的硫醇偶联
EP4326768A1 (en) 2021-04-23 2024-02-28 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
CN117529551A (zh) 2021-04-27 2024-02-06 贝勒医学院 表达嵌合抗原受体的病毒特异性免疫细胞
US11931420B2 (en) 2021-04-30 2024-03-19 Celgene Corporation Combination therapies using an anti-BCMA antibody drug conjugate (ADC) in combination with a gamma secretase inhibitor (GSI)
IL308351A (en) 2021-05-12 2024-01-01 Genentech Inc Methods for using anti-CD79B immunoconjugates to treat diffuse large B-cell lymphoma
IL308545A (en) 2021-05-26 2024-01-01 Oxford Biotherapeutics Ltd A medical preparation that includes an anti-CD205 antibody and an immune checkpoint inhibitor
TW202320857A (zh) 2021-07-06 2023-06-01 美商普方生物製藥美國公司 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法
WO2023288236A1 (en) 2021-07-14 2023-01-19 Seagen Inc. Antibody masking domains
KR20240040786A (ko) 2021-08-03 2024-03-28 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 생물제약 조성물 및 안정한 동위원소 표지 펩티드 맵핑 방법
WO2023014863A1 (en) 2021-08-05 2023-02-09 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-muc4 antibodies and their uses
WO2023019092A1 (en) 2021-08-07 2023-02-16 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
CA3230737A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for cancer treatment and/or prevention
CA3230934A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cmet antibodies and their uses
TW202325733A (zh) 2021-09-03 2023-07-01 美商Ｇｏ治療公司 抗醣化-lamp1抗體及其用途
CA3230774A1 (en) 2021-09-06 2023-03-09 Veraxa Biotech Gmbh Novel aminoacyl-trna synthetase variants for genetic code expansion in eukaryotes
FR3126982B1 (fr) 2021-09-14 2023-09-15 Centre Nat Rech Scient Vecteurs ciblant la beta-d-n-acetylglucosaminidase
AU2022345098A1 (en) 2021-09-16 2024-04-04 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
WO2023041717A1 (en) 2021-09-16 2023-03-23 Aboleris Pharma Anti-human cd45rc binding domains and uses thereof
WO2023049825A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Seagen Inc. Improved antibody masking domains
CA3234689A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Ajinomoto Co., Inc. Regioselective conjugate of antibody and functional substance or salt thereof, and antibody derivative and compound used in production of the same or salts thereof
CN115975030B (zh) 2021-09-30 2023-09-26 杭州邦顺制药有限公司 抗cd39抗体-药物偶联物及其用途
AU2022357933A1 (en) 2021-09-30 2024-04-11 Ajinomoto Co., Inc. Conjugate of antibody and functional substance or salt thereof, and antibody derivative and compound or salts thereof to be used in producing conjugate or salt thereof
TW202321443A (zh) 2021-10-26 2023-06-01 新加坡商泰莎治療有限公司 用於生產編碼car之反轉錄病毒載體的細胞株
WO2023083919A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 Tubulis Gmbh Conjugates comprising a phosphorus (v) and a camptothecin moiety
WO2023083900A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 Tubulis Gmbh Conjugates comprising a phosphorus (v) and a drug moiety
WO2023089314A1 (en) 2021-11-18 2023-05-25 Oxford Biotherapeutics Limited Pharmaceutical combinations
WO2023092099A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
EP4186529A1 (en) 2021-11-25 2023-05-31 Veraxa Biotech GmbH Improved antibody-payload conjugates (apcs) prepared by site-specific conjugation utilizing genetic code expansion
WO2023094525A1 (en) 2021-11-25 2023-06-01 Veraxa Biotech Gmbh Improved antibody-payload conjugates (apcs) prepared by site-specific conjugation utilizing genetic code expansion
WO2023104941A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 European Molecular Biology Laboratory Hydrophilic tetrazine-functionalized payloads for preparation of targeting conjugates
WO2023104910A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Tessa Therapeutics Ltd. Treatment of lymphoma
WO2023110937A1 (en) 2021-12-14 2023-06-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Depletion of nk cells for the treatment of adverse post-ischemic cardiac remodeling
WO2023147488A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cytokine associated tumor infiltrating lymphocytes compositions and methods
WO2023144303A1 (en) 2022-01-31 2023-08-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Cd38 as a biomarker and biotarget in t-cell lymphomas
WO2023158305A1 (en) 2022-02-15 2023-08-24 Tagworks Pharmaceuticals B.V. Masked il12 protein
US20230338424A1 (en) 2022-03-02 2023-10-26 Lentigen Technology, Inc. Compositions and Methods for Treating Cancer with Anti-CD123 Immunotherapy
US11590169B1 (en) 2022-03-02 2023-02-28 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD123 immunotherapy
WO2023198648A1 (en) 2022-04-11 2023-10-19 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of t-cell malignancies
WO2023198744A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Tessa Therapeutics Ltd. Therapeutic t cell product
WO2023198874A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of t cell-lymphomas
WO2023213960A1 (en) 2022-05-06 2023-11-09 Genmab A/S Methods of treating cancer with anti-tissue factor antibody-drug conjugates
US20240058465A1 (en) 2022-06-30 2024-02-22 Sutro Biopharma, Inc. Anti-ror1 antibody conjugates, compositions comprising anti ror1 antibody conjugates, and methods of making and using anti-ror1 antibody conjugates
WO2024003310A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of acute lymphoblastic leukemia
WO2024013723A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Pheon Therapeutics Ltd Antibody drug conjugates that bind cdcp1 and uses thereof
WO2024018046A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Garp as a biomarker and biotarget in t-cell malignancies
WO2024026107A2 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Lentigen Technology, Inc. Chimeric antigen receptor therapies for treating solid tumors
WO2024023283A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Lrrc33 as a biomarker and biotarget in cutaneous t-cell lymphomas
WO2024041543A1 (en) * 2022-08-22 2024-02-29 Suzhou Bioreinno Biotechnology Limited Company A method of preparing an antibody with thiol group site-specific modifications and use of tcep
WO2024041544A1 (en) * 2022-08-22 2024-02-29 Suzhou Bioreinno Biotechnology Limited Company A method of preparing an antibody with site-specific modifications
US20240075142A1 (en) 2022-08-26 2024-03-07 Lentigen Technology, Inc. Compositions and Methods for Treating Cancer with Fully Human Anti-CD20/CD19 Immunotherapy
WO2024049931A1 (en) 2022-09-02 2024-03-07 Merck Sharp & Dohme Llc Exatecan-derived topoisomerase-1 inhibitors pharmaceutical compositions, and uses thereof
WO2024064714A2 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Seagen Inc. Antibodies that bind cd228
WO2024079192A1 (en) 2022-10-12 2024-04-18 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Cd81 as a biomarker and biotarget in t-cell malignancies
WO2024080872A1 (en) 2022-10-12 2024-04-18 Tagworks Pharmaceuticals B.V. Strained bicyclononenes
CN116239513B (zh) * 2023-05-05 2023-08-18 天津凯莱英制药有限公司 Mmae关键中间体的制备方法、mmae的制备方法和抗体偶联药物

Family Cites Families (124)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3445518A (en) 1966-05-06 1969-05-20 Warner Lambert Pharmaceutical P-acylphenylethylamines
US4414205A (en) 1981-08-28 1983-11-08 University Patents, Inc. Cell growth inhibitory substances
ES8504461A1 (es) 1982-04-12 1985-04-16 Hybritech Inc Un procedimiento para obtener un polidoma.
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5169774A (en) 1984-02-08 1992-12-08 Cetus Oncology Corporation Monoclonal anti-human breast cancer antibodies
US6054561A (en) 1984-02-08 2000-04-25 Chiron Corporation Antigen-binding sites of antibody molecules specific for cancer antigens
US4753894A (en) 1984-02-08 1988-06-28 Cetus Corporation Monoclonal anti-human breast cancer antibodies
US4694778A (en) 1984-05-04 1987-09-22 Anicon, Inc. Chemical vapor deposition wafer boat
JPS6147500A (ja) 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
US4764368A (en) * 1984-08-29 1988-08-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Acid-cleavable compound
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
JPS61134325A (ja) 1984-12-04 1986-06-21 Teijin Ltd ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法
WO1986005807A1 (en) 1985-04-01 1986-10-09 Celltech Limited Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
CA1282069C (en) 1985-09-12 1991-03-26 Damon L. Meyer Antibody complexes of hapten-modified diagnostic or therapeutic agents
AU606320B2 (en) 1985-11-01 1991-02-07 International Genetic Engineering, Inc. Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US4816444A (en) 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
JPH01202700A (ja) 1988-02-09 1989-08-15 Mitsubishi Electric Corp Ｘ線ミラー及びその製造方法
IL106992A (en) 1988-02-11 1994-06-24 Bristol Myers Squibb Co Noble hydrazonic history of anthracycline and methods for their preparation
US4943628A (en) 1988-06-13 1990-07-24 Ortho Pharmaceutical Corporation HIV peptide-inducted T cell stimulation
SG52662A1 (en) 1988-08-12 1998-09-28 Astra Ab Arylkalkyl-amines and -amides having anticonvulsant and neuroprotective properties
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US4978744A (en) 1989-01-27 1990-12-18 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 10
US4879278A (en) 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
US5286637A (en) 1989-08-07 1994-02-15 Debiopharm, S.A. Biologically active drug polymer derivatives and method for preparing same
US5165923A (en) 1989-11-20 1992-11-24 Imperial Cancer Research Technology Methods and compositions for the treatment of hodgkin's disease
US5767236A (en) 1990-05-09 1998-06-16 Biomeasure, Inc. Linear therapeutic peptides
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ES2246502T3 (es) 1990-08-29 2006-02-16 Genpharm International, Inc. Animales no humanos transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5698155A (en) 1991-05-31 1997-12-16 Gs Technologies, Inc. Method for the manufacture of pharmaceutical cellulose capsules
ES2206447T3 (es) 1991-06-14 2004-05-16 Genentech, Inc. Anticuerpo humanizado para heregulina.
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
DE69230824T2 (de) 1991-08-09 2000-07-27 Teikoku Hormone Mfg Co Ltd Neue tetrapeptidderivate
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
ATE149570T1 (de) 1992-08-17 1997-03-15 Genentech Inc Bispezifische immunoadhesine
CA2142453A1 (en) 1992-09-09 1994-03-17 Tomio Morino Novel physiologically active substance nk175203, process for production thereof and pharmaceutical use thereof
US6569834B1 (en) 1992-12-03 2003-05-27 George R. Pettit Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide w-aminoalkyl-amides
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US6034065A (en) 1992-12-03 2000-03-07 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide phenethylamides of dolastatin 10
US5410024A (en) 1993-01-21 1995-04-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
JPH06234790A (ja) 1993-02-09 1994-08-23 Teikoku Hormone Mfg Co Ltd 新規テトラペプチドアミド誘導体
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
FR2710536B1 (fr) 1993-09-29 1995-12-22 Transgene Sa Usage anti-cancéreux d'un vecteur viral comportant un gène modulateur de la réponse immunitaire et/ou inflammatoire.
DE69434136T2 (de) 1993-10-01 2005-12-01 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Dolastatin-derivate
US5504191A (en) 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5530097A (en) 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5521284A (en) 1994-08-01 1996-05-28 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides and esters
US5554725A (en) 1994-09-14 1996-09-10 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Synthesis of dolastatin 15
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
US6033876A (en) 1995-01-18 2000-03-07 Boehringer Mannheim Gmbh Anti-CD30 antibodies preventing proteolytic cleavage and release of membrane-bound CD30 antigen
DK0831100T3 (da) 1995-04-21 2001-01-02 Teikoku Hormone Mfg Co Ltd Nye peptidderivater
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
JPH0977791A (ja) 1995-09-08 1997-03-25 Nippon Kayaku Co Ltd ペプチド誘導体及びその用途
SE9503380D0 (sv) 1995-09-29 1995-09-29 Pharmacia Ab Protein derivatives
DE69731289D1 (de) 1996-03-18 2004-11-25 Univ Texas Immunglobulinähnliche domäne mit erhöhten halbwertszeiten
US5741892A (en) 1996-07-30 1998-04-21 Basf Aktiengesellschaft Pentapeptides as antitumor agents
AU739028B2 (en) 1996-09-27 2001-10-04 Bristol-Myers Squibb Company Hydrolyzable prodrugs for delivery of anticancer drugs to metastatic cells
CA2282504A1 (en) 1997-02-25 1998-08-27 Jun-Ping Xu Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear and cyclo-depsipeptides dolastatin 16, dolastatin 17, and dolastatin 18
US5965537A (en) 1997-03-10 1999-10-12 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives with carbonyl and heterocyclic functionalities at the C-terminus
US6143721A (en) 1997-07-18 2000-11-07 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
CA2315230C (en) 1998-01-09 2004-06-29 Arizona Board Of Regents, A Body Corporate, Acting On Behalf Of Arizona State University Anti-cryptococcal peptides
US6162930A (en) 1998-03-06 2000-12-19 Baylor University Anti-mitotic agents which inhibit tubulin polymerization
JP2000009062A (ja) 1998-06-18 2000-01-11 Sanden Corp スクロール型圧縮機
US5985837A (en) * 1998-07-08 1999-11-16 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
US7425541B2 (en) 1998-12-11 2008-09-16 Medarex, Inc. Enzyme-cleavable prodrug compounds
SK287357B6 (sk) * 1999-02-12 2010-08-09 The Scripps Research Institute Použitie antagonistu alfa v beta 3 na prípravu farmaceutickej kompozície na liečbu tumorových buniek a terapeutická kompozícia a súprava na liečenie tumoru alebo tumorových metastáz
US20040141983A1 (en) 1999-03-15 2004-07-22 Protein Design Labs, Inc. Compositions against cancer antigen LIV-1 and uses thereof
WO2000064946A2 (en) 1999-04-28 2000-11-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for cancer treatment by selectively inhibiting vegf
JP2003528805A (ja) * 1999-07-12 2003-09-30 ジェネンテック・インコーポレーテッド Ｃｄ２０に結合するアンタゴニストを用いた異種抗原に対する免疫応答のブロッキング
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
US7097840B2 (en) 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
ES2528794T3 (es) * 2000-04-11 2015-02-12 Genentech, Inc. Anticuerpos multivalentes y usos de los mismos
US7090843B1 (en) * 2000-11-28 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
US20070258987A1 (en) 2000-11-28 2007-11-08 Seattle Genetics, Inc. Recombinant Anti-Cd30 Antibodies and Uses Thereof
US20040018194A1 (en) 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US20030083263A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Svetlana Doronina Pentapeptide compounds and uses related thereto
US20050107595A1 (en) 2001-06-20 2005-05-19 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US7803915B2 (en) 2001-06-20 2010-09-28 Genentech, Inc. Antibody compositions for the diagnosis and treatment of tumor
US6737409B2 (en) 2001-07-19 2004-05-18 Hoffmann-La Roche Inc. Dolastatin 10 derivatives
US20040235068A1 (en) 2001-09-05 2004-11-25 Levinson Arthur D. Methods for the identification of polypeptide antigens associated with disorders involving aberrant cell proliferation and compositions useful for the treatment of such disorders
US7098305B2 (en) 2001-09-06 2006-08-29 Ardana Bioscience Limited Sustained release of microcrystalline peptide suspensions
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
US20050238650A1 (en) 2002-04-17 2005-10-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
AU2002356844C1 (en) 2001-10-23 2010-03-04 Amgen Fremont Inc. PSMA antibodies and protein multimers
WO2003043583A2 (en) 2001-11-20 2003-05-30 Seattle Genetics, Inc. Treatment of immunological disorders using anti-cd30 antibodies
ES2339934T3 (es) 2002-03-01 2010-05-27 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Conjugados de agentes citotoxicos y peptidos biologicamente activos.
EP1572087B1 (en) 2002-03-08 2008-05-14 PDL BioPharma, Inc. Antibodies against cancer antigen tmeff2 and uses thereof
WO2003080856A2 (en) 2002-03-19 2003-10-02 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
US20050180972A1 (en) 2002-07-31 2005-08-18 Wahl Alan F. Anti-CD20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
EP1545613B9 (en) 2002-07-31 2012-01-25 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
EP1542723B1 (en) 2002-08-16 2011-02-23 ImmunoGen, Inc. Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs
WO2004058171A2 (en) 2002-12-20 2004-07-15 Protein Design Labs, Inc. Antibodies against gpr64 and uses thereof
JP5356648B2 (ja) 2003-02-20 2013-12-04 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 抗ｃｄ７０抗体−医薬結合体、ならびに癌および免疫障害の処置のためのそれらの使用
AU2004224390A1 (en) 2003-03-19 2004-10-07 Abgenix, Inc. Antibodies against T cell immunoglobulin domain and mucin domain 1 (TIM-1) antigen and uses thereof
KR101520209B1 (ko) 2003-11-06 2015-05-13 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
EP1718667B1 (en) 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
WO2005084390A2 (en) 2004-03-02 2005-09-15 Seattle Genetics, Inc. Partially loaded antibodies and methods of their conjugation
US7399469B2 (en) 2004-03-26 2008-07-15 Pdl Biopharma, Inc. Anti-LFL2 antibodies for the diagnosis, prognosis and treatment of cancer
US7442332B2 (en) * 2004-05-04 2008-10-28 Clopay Plastic Products Company, Inc. Method and apparatus for uniformly stretching thermoplastic film and products produced thereby
WO2005118525A1 (en) 2004-06-02 2005-12-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Synthesis of amino-alkoxy-heptanoic alkyl ester
EP1791565B1 (en) 2004-09-23 2016-04-20 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
WO2006041641A2 (en) 2004-10-05 2006-04-20 Genentech, Inc. Therapeutic agents with decreased toxicity
CA2589374C (en) 2004-11-30 2016-05-03 Curagen Corporation Antibodies directed to gpnmb and uses thereof
CN101076515A (zh) 2004-12-13 2007-11-21 霍夫曼-拉罗奇有限公司 制备3－吡咯烷－2－基－丙酸衍生物的新方法
JP2008537673A (ja) 2005-01-31 2008-09-25 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗ｅｐｈｂ２抗体とその使用方法
WO2006104978A2 (en) 2005-03-25 2006-10-05 Curagen Corporation Antibodies against the tenascin major antigens
AU2006262231B2 (en) 2005-06-20 2013-01-24 Psma Development Company, Llc PSMA antibody-drug conjugates
AU2006287416A1 (en) 2005-09-07 2007-03-15 Medimmune, Llc Toxin conjugated Eph receptor antibodies
JP2009515897A (ja) 2005-11-10 2009-04-16 キュラジェン コーポレイション Ｔ細胞の免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン１（ｔｉｍ−１）抗原に対する抗体を用いて卵巣癌および腎臓癌を処置する方法
WO2007062138A2 (en) 2005-11-23 2007-05-31 Applera Corporation Methods and compositions for treating diseases targeting human prominin-1(cd133)
DOP2006000277A (es) 2005-12-12 2007-08-31 Bayer Pharmaceuticals Corp Anticuerpos anti mn y métodos para su utilización
AR059900A1 (es) 2006-03-17 2008-05-07 Genentech Inc Anticuerpos anti-tat226 e inmunoconjugados

Also Published As

Publication number Publication date
JP4741838B2 (ja) 2011-08-10
EP2353611A3 (en) 2011-10-19
CY2013004I2 (el) 2017-09-13
EP2353611A2 (en) 2011-08-10
DK2357006T3 (en) 2015-12-21
US20090324621A1 (en) 2009-12-31
US20060074008A1 (en) 2006-04-06
AU2003263964A1 (en) 2004-02-16
CA2802205A1 (en) 2004-02-05
WO2004010957B1 (en) 2004-08-19
CA2802205C (en) 2016-01-19
US7829531B2 (en) 2010-11-09
AU2003263964B2 (en) 2010-01-14
LU92133I2 (fr) 2013-03-18
HK1157180A1 (en) 2012-06-29
SI2357006T1 (sl) 2016-01-29
EP1545613B1 (en) 2011-07-20
AU2003263964C1 (en) 2010-08-19
EP1545613B9 (en) 2012-01-25
BE2012C047I2 (pt) 2022-08-09
CA2494105A1 (en) 2004-02-05
EP2357006A2 (en) 2011-08-17
US8906376B2 (en) 2014-12-09
EP1545613A4 (en) 2008-10-15
US20080213289A1 (en) 2008-09-04
ES2544527T3 (es) 2015-09-01
AU2010201459A1 (en) 2010-05-06
ES2369542T3 (es) 2011-12-01
DK1545613T3 (da) 2011-11-14
PT1545613E (pt) 2011-09-27
AU2010201459B2 (en) 2012-12-06
WO2004010957A2 (en) 2004-02-05
US7851437B2 (en) 2010-12-14
FR12C0066I2 (fr) 2013-08-16
SI1545613T1 (sl) 2011-11-30
CA2494105C (en) 2013-04-02
CY2013004I1 (el) 2015-11-04
EP2353611B1 (en) 2015-05-13
WO2004010957A3 (en) 2004-06-10
US20110064753A1 (en) 2011-03-17
LU92133I9 (pt) 2019-01-04
HUE027549T2 (hu) 2016-10-28
ES2556641T3 (es) 2016-01-19
US20100062008A1 (en) 2010-03-11
ATE516818T1 (de) 2011-08-15
JP2006500333A (ja) 2006-01-05
FR12C0066I1 (pt) 2012-12-14
HUS1300002I1 (hu) 2016-08-29
CY1111894T1 (el) 2015-11-04
EP1545613A2 (en) 2005-06-29
US7659241B2 (en) 2010-02-09
EP2357006B1 (en) 2015-09-16
EP2357006A3 (en) 2011-10-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PT2357006E (pt) Conjugados de fármacos e sua utilização para tratamento do cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa
ES2708763T3 (es) Compuestos de monometilvalina que tienen modificaciones de la cadena lateral de fenilalanina en el extremo C
AU2023203005A1 (en) Self-stabilizing linker conjugates
JP4095444B2 (ja) ペンタペプチド化合物及びそれに関する使用
TWI709412B (zh) 自行穩定之接合劑共軛物
ES2715776T3 (es) Auristatinas que tienen una unidad de ácido aminobenzoico en el extremo N
RU2723651C2 (ru) Цитотоксические и антимитотические соединения и способы их применения
TW202412762A (zh) 奧瑞他汀衍生物及其結合物