KR102270107B1 - 피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트 - Google Patents

피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트 Download PDF

Info

Publication number
KR102270107B1
KR102270107B1 KR1020207003587A KR20207003587A KR102270107B1 KR 102270107 B1 KR102270107 B1 KR 102270107B1 KR 1020207003587 A KR1020207003587 A KR 1020207003587A KR 20207003587 A KR20207003587 A KR 20207003587A KR 102270107 B1 KR102270107 B1 KR 102270107B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
delete delete
group
conjugate
methyl
antibody
Prior art date
Application number
KR1020207003587A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20200024925A (ko
Inventor
나짜레노 디마시
필립 윌슨 하워드
루크 마스터슨
아르노드 찰스 티베르기앵
발라쿠마르 비하야크리쉬난
제이슨 화이트
Original Assignee
메디뮨 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 메디뮨 리미티드 filed Critical 메디뮨 리미티드
Priority to KR1020217007457A priority Critical patent/KR102312910B1/ko
Publication of KR20200024925A publication Critical patent/KR20200024925A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102270107B1 publication Critical patent/KR102270107B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation

Abstract

하기 화학식 (I)의 컨쥬게이트:
Figure 112020012559806-pct00151

[여기에서, Ab는 각 중쇄에서 적어도 1종의 자유 컨쥬게이트화 부위를 갖는 변형된 항체이다].

Description

피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트
본 발명은 피롤로벤조디아제핀 및 관련 이량체 (PBD)를 포함하는 컨쥬게이트, 및 이러한 컨쥬게이트를 제조하는데 사용되는 전구체 약물 링커에 관한 것이다.
일부의 피롤로벤조디아제핀 (PBD)은 DNA의 특이적 서열을 인식하고, 그에 결합하는 능력을 가지며; 바람직한 서열은 PuGPu이다. 최초의 PBD 항종양 항생제인 안트라마이신은 1965년에 발견되었다 [Lei㎎ruber 등, J. Am . Chem . Soc ., 87, 5793-5795 (1965); Lei㎎ruber 등, J. Am . Chem . Soc ., 87, 5791-5793 (1965)]. 그때 이후로, 다수의 천연적으로 존재하는 PBD가 보고되었으며, 10개 이상의 합성 경로는 다양한 유사체를 개발하였다 [Thurston 등, Chem . Rev . 1994, 433-465 (1994). 패밀리 구성원에는 아베이마이신 (abbeymycin) [Hochlowski 등, J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)], 치카마이신 (chicamycin) [Konishi 등, J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)], DC-81 [일본 특허 58-180 487; Thurston 등, Chem . Brit ., 26, 767-772 (1990); Bose 등, Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)], 마제트라마이신 (mazethramycin) [Kuminoto 등, J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)], 네오트라마이신 (neothramycins) A 및 B [Takeuchi 등, J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)], 포로트라마이신 (porothramycin) [Tsunakawa 등, J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)], 프로트라카르신 (prothracarcin) [Shimiz 등, J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley and Thurston, J. Org . Chem ., 52, 91-97 (1987)], 시바노마이신 (sibanomicin) (DC-102) [Hara 등, J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh 등, J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)], 시비로마이신 (sibiromycin) [Leber 등, J. Am . Chem . Soc ., 110, 2992-2993 (1988)] 및 토마마이신 (tomamycin) [Arima 등, J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)]이 포함된다. PBD는 하기의 일반 구조를 갖는다:
Figure 112020012559806-pct00001
이들은 치환체의 수, 종류 및 위치에서, 이들의 방향족 A 고리 및 피롤로 C 고리 둘 다에서, 및 C 고리의 포화도에 있어서 상이하다. B-고리에는 DNA를 알킬화하는데 책임이 있는 친전자성 중심인 N10-C11 위치에 이민 (N=C), 카비놀아민 (NH-CH(OH)), 또는 카비놀아민 메틸 에테르 (NH-CH(OMe))가 존재한다. 공지된 천연 생성물은 모두 C 고리로부터 A 고리 쪽으로 볼 때 우측으로의 트위스트를 갖는 생성물을 제공하는 것으로 키랄 C11a 위치에서 (S)-배열을 갖는다. 이것은 이들에게, 결합 부위에서 적합한 스너그 (snug)를 유도하도록 B-형태 DNA의 작은 그루브를 갖는 이소헬리시티 (isohelicity)를 위해서 적절한 삼차원 형상을 제공한다 [Kohn, In Antibiotics Ⅲ. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley and Needham-VanDevanter, Acc . Chem . Res ., 19, 230-237 (1986)]. 작은 그루브 내에 부가물을 형성하는 그들의 능력은 이들이 DNA 처리를 저해하고, 따라서 이들의 용도가 항종양제가 될 수 있도록 한다.
이러한 분자의 생물학적 활성이 가요성 알킬렌 링커를 통해 이의 C8/C'-하이드록실 작용기 전반에서 2개의 PBD 단위를 함께 결합함으로써 증가될 수 있다는 것은 이전에 개시된 바 있다 (문헌 [(Bose, D.S., 등, J. Am . Chem . Soc ., 114, 4939-4941 (1992); Thurston, D.E., 등, J. Org . Chem ., 61, 8141-8147 (1996))]). PBD 이량체는 서열-선택적 DNA 손상, 예컨대 회문구조 5'-Pu-GATC-Py-3' 가닥간 가교결합을 형성하는 것으로 여겨지고 (문헌 [Smellie, M. 등, Biochemistry, 42, 8232-8239 (2003); Martin, C. 등, Biochemistry, 44, 4135-4147]), 이는 이의 생물학적 활성과 주로 연관되는 것으로 여겨진다.
PBD 이량체의 일 예는 하기의 SG2000 (SJG-136):
Figure 112020012559806-pct00002
(Gregson, S. 등, J. Med . Chem ., 44, 737-748 (2001); Alley, M.C. 등, Cancer Research, 64, 6700-6706 (2004); Hartley, J.A. 등, Cancer Research, 64, 6693-6699 (2004))이며, 이는 급성 골수성 백혈병 및 만성 림프성 백혈병을 치료함에 있어서의 이의 용도를 조사하는 임상 실험에서 독립형 제제, 예를 들면, NCT02034227로서 수반되었다 (https://www.clinicaltrials.gov/ct2/show /NCT02034227를 참조한다).
하기의 SG2202 (ZC-207)와 같은 C2 아릴 치환기를 갖는 이량체 PBD 화합물은 WO 2005/085251에 개시되어 있고,
Figure 112020012559806-pct00003
그리고 WO2006/111759에서, 하기의 SG2285 (ZC-423)과 같은 이러한 PBD 화합물의 비스설피트가 개시되어 있다:
Figure 112020012559806-pct00004
이들 화합물은 매우 유용한 세포독성제인 것으로 나타났다 (문헌 [Howard, P.W. 등, Bioorg. Med. Chem. (2009), doi: 10.1016/j.bmcl.2009.09.012]).
WO 2007/085930은 세포 결합제, 예컨대 항체에 연결하기 위한 링커를 갖는 이량체 PBD 화합물의 제조에 관해 기재하고 있다. 링커는 이량체 내의 단량체 PBD 단위를 연결하는 브리지 내에 있다.
세포 결합제, 예컨대 항체에 연결하기 위한 링커기를 갖는 이량체 PBD 화합물은, WO 2011/130598에 기재되어 있다. 이들 화합물 중의 링커는 이용가능한 N10 위치 하나에 부착되고, 일반적으로 링커기에서 효소의 작용으로 절단된다. 비-결합 N10 위치가 캡핑기에 의해 보호되는 경우, 예로 든 캡핑기는 항체에 대한 링커와 동일한 절단 유발자를 갖는다.
WO2014/057074는 하나의 단량체 상의 N10 위치를 통하여 결합되고, 다른 PBD 단량체는 이민 형태인 2개의 특이적 PBD 이량체 컨쥬게이트를 기재한다. 개시된 약물-링커 중 하나는 SG3249, 테시린이고:
Figure 112020012559806-pct00005
이들은, 항-DLL3 로발피투주맙에 컨쥬게이트화된 경우, 소세포 폐암의 치료에 대하여 현재 평가 중인, 로발피투주맙-테시린 (Rova-T)로서 공지된다 (Tiberghien, A.C., 등, ACS Med. Chem. Lett., 2016, 7 (11), 983-987; DOI: 10.1021/acsmedchemlett.6b00062). 인간 CD19에 대한 인간화된 항체 및 트라투주맙의 조작된 버전과 이러한 약물-링커의 추가 컨쥬게이트는 또한 ADC Therapeutics SA에 의해 2017년 초에 시도하기 시작하였다 (Abstracts #51 and #52 in Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 58, April 2017).
WO 2015/052322는 하나의 단량체 상의 N10 위치를 통하여 결합되고, 또 다른 PBD 단량체는 이민 형태인 특이적 PBD 이량체 컨쥬게이트를 기재한다. 이는 또한 하나의 단량체 상의 N10 위치를 통하여 결합되고, 또 다른 PBD 단량체가 항체에 대한 링커와 동일한 절단 유발자를 갖는 캡핑기를 갖는 특이적 PBD 이량체 컨쥬게이트를 기재한다:
Figure 112020012559806-pct00006
본 발명의 개요
본 발명은, 각 중쇄에서 적어도 1종의 자유 컨쥬게이트화 부위를 갖기 위해 변형되는 항체에 PBD가 컨쥬게이트화되는, 그리고 상기 컨쥬게이트화가 링커를 통해 PBD의 각 N10 기를 통하는 PBD, 및 관련 PBD 이량체 컨쥬게이트를 제공한다.
본 발명가는, 단일 PBD 또는 관련 이량체를 단일 항체에 2개의 링커를 통해 결합하는 것이 불가능하였다는 예상에도 불구하고, 이와 같은 컨쥬게이트가 놀랍게도 효과적임을 알아내었다.
본 발명은 또한, N10 기 모두가 결합기를 보유하는, 변형된 항체에 컨쥬게이트화하기에 적합한, PBD 및 관련 이량체 약물 링커를 제공한다.
본 발명의 제1 측면은 화학식 I의 컨쥬게이트를 제공하는데:
Figure 112020012559806-pct00007
여기에서:
Ab는 각 중쇄에서 적어도 1종의 자유 컨쥬게이트화 부위를 갖는 변형된 항체이며;
D는 D1 또는 D2 기 중 어느 하나를 나타내며:
Figure 112020012559806-pct00008
;
점선은 C2와 C3 사이의 이중 결합의 선택적인 존재를 나타내고,
C2와 C3 사이에 존재하는 이중 결합이 있는 경우, R2는 이하의 것들로 이루어지는 군으로부터 선택되고:
(ia) 할로, 니트로, 시아노, 에테르, 카르복시, 에스테르, C1-7 알킬, C3-7 헤테로사이클릴 및 비스-옥시-C1-3 알킬렌을 포함하는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 선택적으로 치환된, C5-10 아릴기;
(ib) C1-5 포화 지방족 알킬;
(ic) C3-6 포화 사이클로알킬;
(id)
Figure 112020012559806-pct00009
(여기에서, R11, R12 및 R13의 각각은 H, C1-3 포화 알킬, C2-3 알케닐, C2-3 알키닐 및 사이클로프로필로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 R2 기 내의 탄소 원자의 총 수는 5개 이하임);
(ie)
Figure 112020012559806-pct00010
(여기에서, R15a 및 R15b 중 하나는 H이고, 다른 하나는 페닐로부터 선택되며, 이때 페닐은 할로, 메틸, 메톡시; 피리딜; 및 티오페닐로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환됨); 및
(if)
Figure 112020012559806-pct00011
(여기에서, R14는 H; C1-3 포화 알킬; C2-3 알케닐; C2-3 알키닐; 사이클로프로필; 페닐로부터 선택되고, 이때 페닐은 할로, 메틸, 메톡시; 피리딜; 및 티오페닐로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환됨);
C2와 C3 사이의 단일 결합이 있는 경우,
R2는 H, OH, F, 디F 및
Figure 112020012559806-pct00012
로부터 선택되고, 여기에서 R16a 및 R16b는 H, F, C1-4 포화 알킬, C2-3 알케닐로부터 독립적으로 선택되며, 이때 알킬 및 알케닐기는 C1-4 알킬 아미도 및 C1-4 알킬 에스테르로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환되거나; 또는 R16a 및 R16b 중 하나가 H인 경우, 다른 하나는 니트릴 및 C1-4 알킬 에스테르로부터 선택되고;
D'는 D'1 또는 D'2의 기 중 어느 하나를 나타내고:
Figure 112020012559806-pct00013
여기에서, 점선은 C2'와 C3' 사이의 이중 결합의 선택적인 존재를 나타내며;
C2'와 C3' 사이에 존재하는 이중 결합이 있는 경우, R12는 이하의 것들로 이루어진 군으로부터 선택되고:
(iia) 할로, 니트로, 시아노, 에테르, 카르복시, 에스테르, C1-7 알킬, C3-7 헤테로사이클릴 및 비스-옥시-C1-3 알킬렌을 포함하는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 선택적으로 치환된, C5-10 아릴기;
(iib) C1-5 포화 지방족 알킬;
(iic) C3-6 포화 사이클로알킬;
(iid)
Figure 112020012559806-pct00014
(여기에서, R31, R32 및 R33의 각각은 H, C1-3 포화 알킬, C2-3 알케닐, C2-3 알키닐 및 사이클로프로필로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 R12 기 내의 탄소 원자의 총 수는 5개 이하임);
(iie)
Figure 112020012559806-pct00015
(여기에서, R25a 및 R25b 중 하나는 H이고, 다른 하나는 페닐로부터 선택되며, 이때 페닐은 할로, 메틸, 메톡시; 피리딜; 및 티오페닐로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환됨); 및
(iif)
Figure 112020012559806-pct00016
(여기에서, R24는 H; C1-3 포화 알킬; C2-3 알케닐; C2-3 알키닐; 사이클로프로필; 페닐로부터 선택되고, 이때 페닐은 할로, 메틸, 메톡시; 피리딜; 및 티오페닐로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환됨);
C2'와 C3' 사이의 단일 결합이 있는 경우,
R12는 H, OH, F, 디F 및
Figure 112020012559806-pct00017
로부터 선택되고, 여기에서 R26a 및 R26b는 H, F, C1-4 포화 알킬, C2-3 알케닐로부터 독립적으로 선택되고, 이때 알킬 및 알케닐기는 C1-4 알킬 아미도 및 C1-4 알킬 에스테르로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환되거나; 또는 R26a 및 R26b 중 하나가 H인 경우, 다른 하나는 니트릴 및 C1-4 알킬 에스테르로부터 선택되고;
R6 및 R9는 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', 니트로, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
여기에서, R 및 R'는 선택적으로 치환된 C1-12 알킬, C3-20 헤테로사이클릴 및 C5-20 아릴기로부터 독립적으로 선택되고;
R7은 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', 니트로, Me3Sn 및 할로로부터 선택되고;
R"는 C3-12 알킬렌기인데, 이의 사슬은 하나 이상의 헤테로원자, 예를 들어, O, S, NRN2 (여기에서, RN2는 H 또는 C1-4 알킬임), 및/또는 방향족 고리, 예를 들어 벤젠 또는 피리딘에 의해 단절될 수 있고;
Y 및 Y'는 O, S, 또는 NH로부터 선택되고;
R11a는 OH, ORA로부터 선택되며, 여기에서 RA는 C1-4 알킬이고;
R6', R7', R9', 및 R11a'는 각각 R6, R7, R9, 및 R11a와 같은 기로부터 선택되며;
그리고
RLL1 및 RLL2는 이하의 것들로부터 독립적으로 선택되는 상이한 위치에서 항체에 연결을 위한 링커이고:
(iiia):
Figure 112020012559806-pct00018
여기에서
Q는
Figure 112020012559806-pct00019
이고, 여기에서, QX는 Q가 아미노-산 잔기, 디펩티드 잔기 또는 트리펩티드 잔기가 되게 하는 것이고;
X는
Figure 112020012559806-pct00020
이고:
여기에서, a = 0 내지 5, b = 0 내지 16, c = 0 또는 1, d = 0 내지 5;
GLL은 항체에 연결을 위한 링커이고; 그리고
(iiib):
Figure 112020012559806-pct00021
여기에서, RSL1 및 RSL2는 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 또는 사이클로부틸렌 기를 형성한다.
1의 약물 항체 비 (DAR)을 효과적으로 갖는 이와 같은 ADC가 더 높은 DAR을 가진 이종 혼합물로 이루어진 ADC에 대해 최소 효과적 용량 요건을 감소시킴으로써 향상된 치료 윈도우 및 감소된 오프-타겟 독성을 포함하는 상당한 이점을 제공할 수 있다는 것은 고려된다.
본 발명의 제2 측면은 화학식 II를 가진 화합물 및 이의 염 및 용매화물을 포함한다:
Figure 112020012559806-pct00022
여기에서 (C2와 C3 사이 그리고 C2'와 C3' 사이에서 각각 이중 결합의 존재 또는 부재를 포함하는) D, R2, R6, R7, R9, R11a, Y, R", Y', D', R6', R7', R9', R11a' 및 R12는 본 발명의 제1 측면에서 정의된 바와 같고;
RL은 이하의 것으로부터 선택된 세포 결합제에 연결하기 위한 링커이고:
(iiia):
Figure 112020012559806-pct00023
,
여기에서, Q 및 X는 상기 제1 측면에서 정의된 바와 같고, GL은 항체에 연결하기 위한 링커이고; 그리고
(iiib):
Figure 112020012559806-pct00024
,
여기에서, RSL1 및 RSL2는 상기 제1 측면에서 정의된 바와 같고;
그리고 e는 0 또는 1이다.
본 발명의 제3 측면은 본 발명의 제1 측면의 컨쥬게이트의, 증식성 질병 치료용 약제의 제조에서의 사용을 제공한다. 제3 측면은 또한 증식성 질병의 치료 용도를 위해 본 발명의 제1 측면의 컨쥬게이트를 제공한다. 제3 측면은 치료 유효량의 본 발명의 제1 측면의 컨쥬게이트를 이의 필요가 있는 환자에 투여하는 단계를 포함하는, 증식성 질병의 치료 방법도 제공한다.
당업자는 후보 컨쥬게이트가 어느 특정 세포 유형에 대해 증식성 질환을 치료할 것인지를 용이하게 결정할 수 있다. 예를 들어, 특정 화합물에 의해 제공되는 활성을 평가하는데 종래 사용될 수 있었던 검정 방법이 이하에서 예로서 기재된다.
본 발명의 제4 측면은 본 발명의 제2 측면의 화합물 (약물 링커)를 본 발명의 제1 측면에서 정의된 바와 같은 항체와 컨쥬게이트화시키는 단계를 포함하는, 본 발명의 제1 측면의 컨쥬게이트의 합성을 제공한다.
도 1은 NCI-N87 이종이식 모델에서 비-처리에 비교된 본 발명의 컨쥬게이트의 단일 용량의 효과를 도시한다.
도 2는 NCI-N87 이종이식 모델에서 비-처리에 비교된 본 발명의 동일한 컨쥬게이트의 더 낮은 단일 용량의 효과를 도시한다.
도 3은 (A) 본 발명에서 사용에 적합한 변형된 항체, (B) 본 발명의 PBD를 포함하는 항체 약물 컨쥬게이트의 약도를 도시한다.
도 4는 화합물 10에 변형된 항체의 컨쥬게이트화의 약도를 도시한다.
도 5는 헤르셉틴-플렉시맙의 중쇄 및 경쇄 서열을 도시한다.
도 6은 본 발명의 것이 아닌 컨쥬게이트에 비교된 본 발명의 컨쥬게이트의 활성을 도시한다.
정의
치환기
본원에서 사용된 어구 "선택적으로 치환된"은, 비치환 또는 치환될 수 있는 모 기(parent group)에 관한 것이다.
달리 특정된 바 없는 경우, 본원에서 사용된 용어 "치환된"은, 하나 이상의 치환기를 포함하는 모 기에 관한 것이다. 용어 "치환기"는 본원에서 종래의 의미로 사용되며, 모 기에 공유적으로 부착되거나, 적절한 경우 모 기에 융합된 화학적 모이어티를 지칭한다. 다양한 치환기가 잘 알려져 있는데, 이들의 형성 방법 및 다양한 모 기에 대한 도입 방법도 또한 잘 알려져 있다.
치환기의 예는 이하에서 더욱 상세하게 기재된다.
C1-12 알킬: 본원에서 사용된 용어 "C1-12 알킬"은, 1 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1가 모이어티에 관한 것으로, 이는 지방족 또는 지환족일 수 있고, 포화 또는 불포화 (예를 들어, 부분 불포화, 완전 불포화)될 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "C1-4 알킬"은, 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1가 모이어티에 관한 것으로, 이는 지방족 또는 지환족일 수 있고, 포화 또는 불포화 (예를 들어, 부분 불포화, 완전 불포화)될 수 있다. 따라서, 용어 "알킬"은 이하에서 논의되는 하위-부류 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 등을 포함한다.
포화 알킬기의 예는 메틸 (C1), 에틸 (C2), 프로필 (C3), 부틸 (C4), 펜틸 (C5), 헥실 (C6) 및 헵틸 (C7)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포화 선형 알킬기의 예는 메틸 (C1), 에틸 (C2), n-프로필 (C3), n-부틸 (C4), n-펜틸 (아밀) (C5), n-헥실 (C6) 및 n-헵틸 (C7)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포화 분지형 알킬기의 예는 이소-프로필 (C3), 이소-부틸 (C4), sec-부틸 (C4), tert-부틸 (C4), 이소-펜틸 (C5), 및 네오-펜틸　(C5)을 포함한다.
C2-12 알케닐: 본원에서 사용된 용어 "C2-12 알케닐"은, 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 알킬기에 관한 것이다.
불포화 알케닐기의 예는 에테닐 (비닐, -CH=CH2), 1-프로페닐 (-CH=CH-CH3), 2-프로페닐 (알릴, -CH-CH=CH2), 이소프로페닐 (1-메틸비닐, -C(CH3)=CH2), 부테닐 (C4), 펜테닐 (C5), 및 헥세닐 (C6)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
C2-12 알키닐: 본원에 사용된 용어 "C2-12 알키닐"은, 하나 이상의 탄소-탄소 3중 결합을 갖는 알킬기에 관한 것이다.
불포화 알키닐기의 예는 에티닐 (-C≡CH) 및 2-프로피닐 (프로파르길, -CH2-C≡CH)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
C3-12 사이클로알킬: 본원에서 사용된 용어 "C3-12 사이클로알킬"은, 또한 사이클릴 기이기도 한 알킬기에 관한 것으로; 즉, 사이클릭 탄화수소 (카르보사이클릭) 화합물의 지환족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1가 모이어티인데, 상기 모이어티는 3 내지 7개의 고리 원자를 포함하는 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖는다.
사이클로알킬기의 예는 이하로부터 유도된 것들을 포함하나, 이에 제한되지 않고:
포화 단환 탄화수소 화합물:
사이클로프로판 (C3), 사이클로부탄 (C4), 사이클로펜탄 (C5), 사이클로헥산 (C6), 사이클로헵탄 (C7), 메틸사이클로프로판 (C4), 디메틸사이클로프로판 (C5), 메틸사이클로부탄 (C5), 디메틸사이클로부탄　(C6), 메틸사이클로펜탄　(C6), 디메틸사이클로펜탄　(C7) 및 메틸사이클로헥산　(C7);
불포화 단환 탄화수소 화합물:
사이클로프로펜　(C3), 사이클로부텐　(C4), 사이클로펜텐　(C5), 사이클로헥센　(C6), 메틸사이클로프로펜　(C4), 디메틸사이클로프로펜 (C5), 메틸사이클로부텐 (C5), 디메틸사이클로부텐 (C6), 메틸사이클로펜텐 (C6), 디메틸사이클로펜텐　(C7) 및 메틸사이클로헥센 (C7); 및
포화 다환 탄화수소 화합물:
노르카란 (C7), 노르피난 (C7), 노르보르난 (C7).
C3-20 헤테로사이클릴: 본원에서 사용된 용어 "C3-20 헤테로사이클릴"은, 헤테로사이클릭 화합물의 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1가 모이어티에 관한 것인데, 상기 모이어티는 3 내지 20개의 고리 원자를 갖고, 이들 중 1 내지 10 개는 고리 헤테로원자이다. 바람직하게는, 각 고리는 3 내지 7개의 고리 원자를 갖고, 이들 중 1 내지 4개는 고리 헤테로원자이다.
이러한 맥락에서, 접두사 (예를 들어, C3-20, C3-7, C5-6 등)은 탄소 원자 또는 헤테로원자이든 간에, 고리 원자의 수, 또는 고리 원자의 수의 범위를 나타낸다. 예를 들어, 본원에서 사용된 용어 "C5-6 헤테로사이클릴"은, 5개 또는 6개의 고리 원자를 갖는 헤테로사이클릴기에 관한 것이다.
단환 헤테로사이클릴기의 예는 이하로부터 유도된 것들을 포함하나, 이에 제한되지 않는다:
N1: 아지리딘 (C3), 아제티딘 (C4), 피롤리딘 (테트라히드로피롤) (C5), 피롤린 (예를 들어, 3-피롤린, 2,5-디히드로피롤) (C5), 2H-피롤 또는 3H-피롤 (이소피롤, 이소아졸) (C5), 피페리딘 (C6), 디히드로피리딘 (C6), 테트라히드로피리딘 (C6), 아제핀　(C7);
O1: 옥시란 (C3), 옥세탄 (C4), 옥솔란 (테트라히드로푸란) (C5), 옥솔 (디히드로푸란) (C5), 옥산 (테트라히드로피란) (C6), 디히드로피란 (C6), 피란 (C6), 옥세핀 (C7);
S1: 티이란 (C3), 테에탄 (C4), 티오란 (테트라히드로티오펜) (C5), 티안 (테트라히드로티오피란) (C6), 티에판 (C7);
O2: 디옥소란 (C5), 디옥산 (C6), 및 디옥세판 (C7);
O3: 트리옥산 (C6);
N2: 이미다졸리딘 (C5), 피라졸리딘 (디아졸리딘) (C5), 이미다졸린 (C5), 피라졸린 (디히드로피라졸) (C5), 피페라진 (C6);
N1O1: 테트라히드로옥사졸 (C5), 디히드로옥사졸 (C5), 테트라히드로이속사졸 (C5), 디히드로이속사졸 (C5), 모르폴린 (C6), 테트라히드로옥사진 (C6), 디히드로옥사진 (C6), 옥사진 (C6);
N1S1: 티아졸린 (C5), 티아졸리딘 (C5), 티오모르폴린　(C6);
N2O1: 옥사디아진 (C6);
O1S1: 옥사티올 (C5) 및 옥사티안 (티옥산) (C6); 및
N1O1S1: 옥사티아진 (C6).
치환된 단환 헤테로사이클릴기의 예는 고리 형태의 다당류로부터 유도된 것들, 예를 들어, 푸라노오스 (C5), 예컨대 아리비노푸라노오스, 릭소푸라노오스, 리보푸라노오스 및 자일로푸라노오스; 및 피라노오스 (C6), 예컨대 알로피라노오스, 알트로피라노오스, 글루코피라노오스, 만노피라노오스, 굴로피라노오스, 이도피라노오스, 갈락토피라노오스, 및 탈로피라노오스를 포함한다.
C5-20 아릴: 본원에 사용된 용어 "C5-20 아릴"은, 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1가 모이어티에 관한 것으로, 상기 모이어티는 3 내지 20개의 고리 원자를 갖는다. 본원에 사용된 용어 "C5-7 아릴"은, 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1가 모이어티에 관한 것으로, 상기 모이어티는 5 내지 7개의 고리 원자를 갖고, 본원에 사용된 용어 "C5-10 아릴"은, 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1가 모이어티에 관한 것으로, 상기 모이어티는 5 내지 10개의 고리 원자를 갖는다. 바람직하게는, 각 고리는 5 내지 7개의 고리 원자를 갖는다.
이러한 맥락에서, 접두사 (예를 들어, C3-20, C5-7, C5-6, C5-10 등)은 탄소 원자 또는 헤테로원자이든 간에, 고리 원자의 수, 또는 고리 원자의 수의 범위를 나타낸다. 예를 들어, 본원에 사용된 용어 "C5-6 아릴"은, 5 또는 6개의 고리 원자를 갖는 아릴기에 관한 것이다.
고리 원자는 "카르보아릴기"에서와 같이 모든 탄소 원자일 수 있다.
카르보아릴기의 예는 벤젠 (즉, 페닐) (C6), 나프탈렌 (C10), 아줄렌 (C10), 안트라센 (C14), 페난트렌 (C14), 나프타센 (C18), 및 피렌 (C16)으로부터 유도된 것들을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
융합된 고리를 포함하며, 이들 중 적어도 하나는 방향족 고리인 아릴기의 예는, 인단 (예를 들어,　2,3-디히드로-1H-인덴) (C9), 인덴 (C9), 이소인덴 (C9), 테트랄린 (1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌 (C10), 아세나프텐 (C12), 플루오렌 (C13), 페날렌 (C13), 아세페난트렌 (C15), 및 아세안트렌 (C16)으로부터 유도된 것들을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
대안적으로, 고리 원자는 "헤테로아릴기"에서와 마찬가지로, 하나 이상의 헤테로원자를 포함할 수 있다. 단환 헤테로아릴기의 예는 이하로부터 유도된 것들을 포함하나, 이에 제한되지 않는다:
N1: 피롤 (아졸) (C5), 피리딘 (아진) (C6);
O1: 푸란 (옥솔) (C5);
S1: 티오펜 (티올) (C5);
N1O1: 옥사졸 (C5), 이속사졸 (C5), 이속사진 (C6);
N2O1: 옥사디아졸 (푸라잔) (C5);
N3O1: 옥사트리아졸 (C5);
N1S1: 티아졸 (C5), 이소티아졸 (C5);
N2: 이미다졸 (1,3-디아졸) (C5), 피라졸 (1,2-디아졸)　(C5), 피리다진 (1,2-디아진) (C6), 피리미딘 (1,3-디아진) (C6) (예를 들어, 시토신, 티민, 우라실), 피라진 (1,4-디아진) (C6);
N3: 트리아졸 (C5), 트리아진 (C6); 및
N4: 테트라졸 (C5).
융합된 고리를 포함하는 헤테로아릴의 예는, 이하의 것들을 포함하나, 이에 제한되지 않는다:
벤조푸란 (O1), 이소벤조푸란 (O1), 인돌 (N1), 이소인돌　(N1), 인돌리진 (N1), 인돌린 (N1), 이소인돌린 (N1), 푸린(N4) (예를 들어, 아데닌, 구아닌), 벤즈이미다졸 (N2), 인다졸 (N2), 벤족사졸 (N1O1), 벤즈이속사졸 (N1O1), 벤조디옥솔 (O2), 벤조푸라잔 (N2O1), 벤조트리아졸 (N3), 벤조티오푸란 (S1), 벤조티아졸 (N1S1), 벤조티아디아졸　(N2S)로부터 유도된 (2개의 융합된 고리를 갖는), C9;
크로멘 (O1), 이소크로멘 (O1), 크로만 (O1), 이소크로만 (O1), 벤조디옥산 (O2), 퀴놀린 (N1), 이소퀴놀린 (N1), 퀴놀리진 (N1), 벤족사진 (N1O1), 벤조디아진 (N2), 피리도피리딘 (N2), 퀴녹살린 (N2), 퀴나졸린 (N2), 신놀린 (N2), 프탈라진 (N2), 나프티리딘 (N2), 프페리딘 (N4)으로부터 유도된 (2개의 융합된 고리를 갖는), C10;
벤조디아제핀 (N2)으로부터 유도된 (2개의 융합된 고리를 갖는), C11;
카르바졸 (N1), 디벤조푸란 (O1), 디벤조티오펜 (S1), 카르볼린 (N2), 페리미딘 (N2), 피리도인돌 (N2)로부터 유도된 (3개의 융합된 고리를 갖는), C13; 및
아크리딘 (N1), 잔텐 (O1), 티오잔텐 (S1), 옥산트렌 (O2), 페녹사티인 (O1S1), 페나진 (N2), 페녹사진 (N1O1), 페노티아진 (N1S1), 티안트렌 (S2), 페난트리딘 (N1), 페난트롤린 (N2), 페나진 (N2)으로부터 유도된 (3개의 융합된 고리를 갖는), C14.
상기 기는, 다른 치환기 단독 또는 이의 일부이든 간에, 이들 자체 및 이하에 열거된 추가의 치환기로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 선택적으로 치환될 수 있다.
할로: -F, -Cl, -Br, 및 -I.
히드록시: -OH.
에테르: -OR [여기에서 R은 에테르 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기 (또한, 이하 C1-7 알콕시기라고도 지칭됨), C3-20 헤테로사이클릴기 (또한, C3-20 헤테로사이클릴옥시기라고도 지칭됨), 또는 C5-20 아릴기 (또한, C5-20 아릴옥시기라고도 지칭됨), 바람직하게는 C1-7 알킬기이다].
알콕시: -OR [여기에서 R은 알킬기, 예를 들어, C1-7 알킬기이다]. C1-7 알콕시기의 예는 -OMe (메톡시), -OEt (에톡시), -O(nPr) (n-프로폭시), -O(iPr) (이소프로폭시), -O(nBu) (n-부톡시), -O(sBu) (sec-부톡시), -O(iBu) (이소부톡시), 및 -O(tBu) (tert-부톡시)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
아세탈: -CH(OR1)(OR2) [여기에서 R1 및 R2는 독립적으로 아세탈 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이거나, 또는 "사이클릭" 아세탈 기의 경우, R1 및 R2는 이들이 부착된 2개의 산소 원자; 및 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 4 내지 8개의 고리 원자를 갖는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다]. 아세탈기의 예는, -CH(OMe)2, -CH(OEt)2, 및 -CH(OMe)(OEt)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
헤미아세탈: -CH(OH)(OR1) [여기에서 R1은 헤미아세탈 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 헤미아세탈기의 예는 -CH(OH)(OMe), 및 -CH(OH)(OEt)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
케탈: -CR(OR1)(OR2) [여기에서 R1 및 R2는 아세탈에 대해 정의된 바와 같고, R은 수소 이외의 케탈 치환기, 예를 들어 C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1 -7 알킬기이다]. 케탈기의 예는, -C(Me)(OMe)2, -C(Me)(OEt)2, -C(Me)(OMe)(OEt), -C(Et)(OMe)2, -C(Et)(OEt)2, 및 -C(Et)(OMe)(OEt)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
헤미케탈: -CR(OH)(OR1) [여기에서 R1은 헤미아세탈에 대해 정의된 바와 같고, R은 수소 이외의 헤미케탈 치환기, 예를 들어 C1-7 알킬기, C3 -20 헤테로사이클릴기, 또는 C5 -20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 헤미아세탈기의 예는, -C(Me)(OH)(OMe), -C(Et)(OH)(OMe), -C(Me)(OH)(OEt), 및 -C(Et)(OH)(OEt)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
옥소 (케토, -온): =O.
티온 (티오케톤): =S.
이미노 (이민): =NR [여기에서 R은 이미노 치환기, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 수소 또는 C1-7 알킬기이다]. 에스테르기의 예는 =NH, =NMe, =NEt, 및 =NPh를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포르밀 (카르브알데히드, 카르복알데히드): -C(=O)H.
아실 [케토]: -C(=O)R [여기에서 R은 아실 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기 (또한, C1-7 알킬아실 또는 C1-7 알카노일이라고도 지칭됨), C3-20 헤테로사이클릴기 (또한, C3-20 헤테로사이클릴아실이라고도 지칭됨), 또는 C5-20 아릴기 (또한, C5-20 아릴아실이라고도 지칭됨), 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 아실기의 예는, -C(=O)CH3 (아세틸), -C(=O)CH2CH3 (프로피오닐), -C(=O)C(CH3)3 (t-부티릴), 및 -C(=O)Ph (벤조일, 페논)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
카르복시 (카르복실산): -C(=O)OH.
티오카르복시 (티오카르복실산): -C(=S)SH.
티올로카르복시 (티올로카르복실산): -C(=O)SH.
티오노카르복시 (티오노카르복실산): -C(=S)OH.
이미드산: -C(=NH)OH.
히드록삼산: -C(=NOH)OH.
에스테르 (카르복실레이트, 카르복실산 에스테르, 옥시카르보닐): -C(=O)OR [여기에서 R은 에스테르 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 에스테르 기의 예는, -C(=O)OCH3, -C(=O)OCH2CH3, -C(=O)OC(CH3)3, 및 -C(=O)OPh를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
아실옥시 (리버스 에스테르): -OC(=O)R [여기에서 R은 아실옥시 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 아실옥시기의 예는 -OC(=O)CH3 (아세톡시), -OC(=O)CH2CH3, -OC(=O)C(CH3)3, -OC(=O)Ph, 및 -OC(=O)CH2Ph를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
옥시카르보일옥시: -OC(=O)OR [여기에서 R은 에스테르 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 에스테르기의 예는 -OC(=O)OCH3, -OC(=O)OCH2CH3, -OC(=O)OC(CH3)3, 및 -OC(=O)OPh를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
아미노: -NR1R2 [여기에서 R1 및 R2는 독립적으로 아미노 치환기, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬기 (또한, C1-7 알킬아미노 또는 디 C1-7 알킬아미노라고도 지칭함), C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 H 또는 C1-7 알킬기이거나, 또는 "사이클릭" 아미노기의 경우, R1 및 R2는 이들이 부착된 질소 원자와 함께, 4 내지 8개의 고리 원자를 갖는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다]. 아미노기는 1차 (-NH2), 2차 (-NHR1), 또는 3차 (-NHR1R2)일 수 있고, 양이온 형태로는 4차 (-+NR1R2R3)일 수 있다. 아미노기의 예는 -NH2, -NHCH3, -NHC(CH3)2, -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2, 및 -NHPh를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 사이클릭 아미노기의 예는 아지리디노, 아제티디노, 피롤리디노, 피페리디노, 피페라지노, 모르폴리노, 및 티오모르폴리노를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
아미도 (카르바모일, 카르바밀, 아미노카르보닐, 카르복사미드): -C(=O)NR1R2 [여기에서 R1 및 R2는 아미노기에서 정의된 바와 같이, 독립적으로 아미노 치환기이다]. 아미도기의 예는 -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)NHCH2CH3, 및 -C(=O)N(CH2CH3)2, 뿐만 아니라 R1 및 R2가 이들이 부착된 질소 원자와 함께 예를 들어, 피페리디노카르보닐, 모르폴리노카르보닐, 티오모르폴리노카르보닐, 및 피페라지노카르보닐에서와 같이 헤테로사이클릭 구조를 형성하는 아미도기를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
티오아미도 (티오카르바밀): -C(=S)NR1R2 [여기에서 R1 및 R2는 아미노기에서 정의된 바와 같이, 독립적으로 아미노 치환기이다]. 아미도기의 예는 -C(=S)NH2, -C(=S)NHCH3, -C(=S)N(CH3)2 및 -C(=S)NHCH2CH3을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
아실아미도 (아실아미노): -NR1C(=O)R2 [여기에서 R1은 아미드 치환기, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 수소 또는 C1-7 알킬기이고, R2는 아실 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 수소 또는 C1-7 알킬기이다]. 아실아미드기의 예는, -NHC(=O)CH3 , -NHC(=O)CH2CH3, 및 -NHC(=O)Ph를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. R1　및 R2는 함께 예를 들어, 석신이미딜, 말레이미딜, 및 프탈이미딜에서와 같이 사이클릭 구조를 형성할 수 있다:
Figure 112020012559806-pct00025
Figure 112020012559806-pct00026
Figure 112020012559806-pct00027
석신이미딜 말레이미딜 프탈이미딜
아미노카르보닐옥시: -OC(=O)NR1R2 [여기에서 R1 및 R2는 아미노기에 대해 정의된 바와 같이 독립적으로 아미노 치환기이다]. 아미노카르보닐옥시기의 예는, -OC(=O)NH2, -OC(=O)NHMe, -OC(=O)NMe2, 및 -OC(=O)NEt2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
우레이도: -N(R1)CONR2R3 [여기에서, R2 및 R3은 아미노기에 대해 정의된 바와 같이 독립적으로 아미노 치환기이고, R1은 우레이도 치환기, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 수소 또는 C1-7 알킬기이다]. 우레이도기의 예는, -NHCONH2, -NHCONHMe, -NHCONHEt, -NHCONMe2, -NHCONEt2, -NMeCONH2, -NMeCONHMe, -NMeCONHEt, -NMeCONMe2 및 -NMeCONEt2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
구아니디노: -NH-C(=NH)NH2.
테트라졸릴: 4개의 질소 원자 및 1개의 탄소 원자를 갖는 5원 방향족 고리,
Figure 112020012559806-pct00028
이미노: =NR [여기에서 R은 이미노 치환기, 예를 들어, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 H 또는 C1-7 알킬기이다]. 이미노기의 예는, =NH, =NMe, 및 =NEt를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
아미딘 (아미디노): -C(=NR)NR2 [여기에서 각각의 R은 아미딘 치환기, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 H 또는 C1-7 알킬기이다]. 아미딘기의 예는, -C(=NH)NH2, -C(=NH)NMe2, 및 -C(=NMe)NMe2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
니트로: -NO2.
니트로소: -NO.
아지도: -N3.
시아노 (니트릴, 카르보니트릴): -CN.
이소시아노: -NC.
시아나토: -OCN.
이소시아나토: -NCO.
티오시아노 (티오시아나토): -SCN.
이소티오시아노 (이소티오시아나토): -NCS.
설프히드릴 (티올, 머캅토): -SH.
티오에테르 (설파이드): -SR [여기에서 R은 티오에테르 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기 (또한, C1-7 알킬티오기라고도 지칭됨), C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. C1-7 알킬티오기의 예는, -SCH3 및 -SCH2CH3을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
디설파이드: -SS-R [여기에서, R은 디설파이드 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기 (또한, C1-7 알킬 디설파이드라고도 지칭됨)이다]. C1-7 알킬 디설파이드기의 예는, -SSCH3 및 -SSCH2CH3을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설핀 (설피닐, 설폭시드): -S(=O)R [여기에서 R은 설핀 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 설핀기의 예는, -S(=O)CH3 및 -S(=O)CH2CH3을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설폰 (설포닐): -S(=O)2R [여기에서 R은 설폰 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이고, 예를 들어, 플루오르화 또는 퍼플루오르화 C1-7 알킬기를 포함한다]. 설폰기의 예는, -S(=O)2CH3 (메탄설포닐, 메실), -S(=O)2CF3 (트리플릴), -S(=O)2CH2CH3 (에실), -S(=O)2C4F9 (노나플릴), -S(=O)2CH2CF3 (트레실), -S(=O)2CH2CH2NH2 (타우릴), -S(=O)2Ph (페닐설포닐, 베실), 4-메틸페닐설포닐 (토실), 4-클로로페닐설포닐 (클로실), 4-브로모페닐설포닐 (브로실), 4-니트로페닐 (노실), 2-나프탈렌설포네이트 (나프실), 및 5-디메틸아미노-나프탈렌-1-일 설포네이트 (단실)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설핀산 (설피노): -S(=O)OH, -SO2H.
설폰산 (설포): -S(=O)2OH, -SO3H.
설피네이트 (설핀산 에스테르): -S(=O)OR [여기에서, R은 설피네이트 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 설피네이트기의 예는, -S(=O)OCH3 (메톡시설피닐; 메틸 설피네이트) 및 -S(=O)OCH2CH3 (에톡시설피닐; 에틸 설피네이트)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설포네이트 (설폰산 에스테르): -S(=O)2OR [여기에서, R은 설포네이트 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 설포네이트기의 예는, -S(=O)2OCH3 (메톡시설포닐; 메틸 설포네이트) 및 -S(=O)2OCH2CH3 (에톡시설포닐; 에틸 설포네이트)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설피닐옥시: -OS(=O)R [여기에서 R은 설피닐옥시 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 설피닐옥시기의 예는, -OS(=O)CH3 및 -OS(=O)CH2CH3을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설포닐옥시: -OS(=O)2R [여기에서, R은 설포닐옥시 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 설포닐옥시기의 예는, -OS(=O)2CH3 (메실레이트) 및 -OS(=O)2CH2CH3 (에실레이트)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설페이트: -OS(=O)2OR [여기에서, R은 설페이트 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 설페이트 기의 예는, -OS(=O)2OCH3 및 -SO(=O)2OCH2CH3을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설파밀 (설파모일; 설핀산 아미드; 설핀아미드): -S(=O)NR1R2 [여기에서, R1 및 R2는 아미노기에 대해 정의된 바와 같이 독립적으로 아미노 치환기이다]. 설파밀기의 예는 -S(=O)NH2, -S(=O)NH(CH3), -S(=O)N(CH3)2, -S(=O)NH(CH2CH3), -S(=O)N(CH2CH3)2 및 -S(=O)NHPh를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설폰아미도 (설핀아모일; 설폰산 아미드; 설폰아미드): -S(=O)2NR1R2 [여기에서, R1 및 R2은 아미노기에 대해 정의된 바와 같이 독립적으로 아미노 치환기이다]. 설폰아미도 기의 예는 -S(=O)2NH2, -S(=O)2NH(CH3), -S(=O)2N(CH3)2, -S(=O)2NH(CH2CH3), -S(=O)2N(CH2CH3)2 및 -S(=O)2NHPh를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설파미노: -NR1S(=O)2OH [여기에서, R1은 아미노기에서 정의된 바와 같은 아미노 치환기이다]. 설파미노기의 예는 -NHS(=O)2OH 및 -N(CH3)S(=O)2OH를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설폰아미노: -NR1S(=O)2R [여기에서, R1은 아미노기에서 정의된 바와 같은 아미노 치환기이고, R은 설폰아미노 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 설폰아미노기의 예는 -NHS(=O)2CH3 및 -N(CH3)S(=O)2C6H5를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설핀아미노: -NR1S(=O)R [여기에서, R1은 아미노기에서 정의된 바와 같은 아미노 치환기이고, R은 설핀아미노 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다]. 설핀아미노기의 예는 -NHS(=O)CH3 및 -N(CH3)S(=O)C6H5를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포스피노 (포스핀): -PR2 [여기에서, R은 포스피노 치환기, 예를 들어, -H, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬기, 또는 C5-20 아릴기이다]. 포스피노기의 예는, -PH2, -P(CH3)2, -P(CH2CH3)2, -P(t-Bu)2, 및 -P(Ph)2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포스포: -P(=O)2.
포스피닐 (포스핀 옥사이드): -P(=O)R2 [여기에서, R은 포스피닐 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기 또는 C5-20 아릴기이다]. 포스피닐기의 예는 -P(=O)(CH3)2, -P(=O)(CH2CH3)2, -P(=O)(t-Bu)2, 및 -P(=O)(Ph)2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포스폰산 (포스포노): -P(=O)(OH)2.
포스포네이트 (포스포노 에스테르): -P(=O)(OR)2 [여기에서, R은 포스포네이트 치환기, 예를 들어, -H, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬기, 또는 C5-20 아릴기이다]. 포스포네이트기의 예는, -P(=O)(OCH3)2, -P(=O)(OCH2CH3)2, -P(=O)(O-t-Bu)2, 및 -P(=O)(OPh)2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
인산 (포스포노옥시): -OP(=O)(OH)2.
포스페이트 (포스포노옥시 에스테르): -OP(=O)(OR)2 [여기에서, R은 포스페이트 치환기, 예를 들어, -H, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬기, 또는 C5-20 아릴기이다]. 포스페이트 기의 예는, -OP(=O)(OCH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)2, -OP(=O)(O-t-Bu)2, 및 -OP(=O)(OPh)2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
아인산: -OP(OH)2.
포스파이트: -OP(OR)2 [여기에서, R은 포스파이트 치환기, 예를 들어, -H, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬기, 또는 C5-20 아릴기이다]. 포스파이트 기의 예는, -OP(OCH3)2, -OP(OCH2CH3)2, -OP(O-t-Bu)2, 및 -OP(OPh)2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포스포르아미다이트: -OP(OR1)-NR2 2 [여기에서, R1 및 R2는 포스포르아미다이트 치환기, 예를 들어, -H, (선택적으로 치환된) C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬기, 또는 C5-20 아릴기이다]. 포스포르아미다이트 기의 예는, -OP(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(OCH2CH3)-N(i-Pr)2, 및 -OP(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포스포르아미데이트: -OP(=O)(OR1)-NR2 2 [여기에서, R1 및 R2는 포스포르아미데이트 치환기, 예를 들어, -H, (선택적으로 치환된) C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬기, 또는 C5-20 아릴기이다]. 포스포르아미데이트 기의 예는 -OP(=O)(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(i-Pr)2, 및 -OP(=O)(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
알킬렌
C3-12 알킬렌: 본원에 사용된 용어 "C3-12 알킬렌"은, (달리 특정된 바 없는 경우), 지방족 또는 지환족일 수 있고, 포화, 부분 불포화, 또는 완전 불포화될 수 있는 3 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 동일한 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 모두 제거하거나, 또는 2개의 상이한 탄소 원자 각각으로부터 하나의 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 2자리(bidentate) 모이어티에 관한 것이다. 따라서, 용어 "알킬렌"은 이하에서 논의될 하위-부류 알케닐렌, 알키닐렌, 사이클로알킬렌 등을 포함한다.
선형 포화 C3-12 알킬렌기의 예는, -(CH2)n- (여기에서, n은 3 내지 12의 정수임), 예를 들어, -CH2CH2CH2- (프로필렌), -CH2CH2CH2CH2- (부틸렌), -CH2CH2CH2CH2CH2- (펜틸렌) 및 -CH2CH2CH2CH-2CH2CH2CH2- (헵틸렌)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
분지형 포화 C3-12 알킬렌기의 예는, -CH(CH3)CH2-, -CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH3)CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2-, -CH2CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH2CH3)-, -CH(CH2CH3)CH2-, 및 -CH2CH(CH2CH3)CH2-를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
선형 부분 불포화 C3-12 알킬렌기 (C3-12 알케닐렌, 및 알키닐렌 기)의 예는, -CH=CH-CH2-, -CH2-CH=CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-CH2-, -CH=CH-CH=CH-, -CH=CH-CH=CH-CH2-, -CH=CH-CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH=CH-, -CH=CH-CH2-CH2-CH=CH-, 및 -CH2-C≡C-CH2-를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
분지형 부분 불포화 C3-12 알킬렌기 (C3-12 알케닐렌 및 알키닐렌 기)의 예는, -C(CH3)=CH-, -C(CH3)=CH-CH2-, -CH=CH-CH(CH3)- 및 -C≡C-CH(CH3)-를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
지환족 포화 C3-12 알킬렌기 (C3-12 사이클로알킬렌)의 예는, 사이클로펜틸렌 (예를 들어, 사이클로펜트-1,3-일렌), 및 사이클로헥실렌 (예를 들어,　사이클로헥스-1,4-일렌)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
지환족 부분 불포화 C3-12 알킬렌기 (C3-12 사이클로알킬렌)의 예는, 사이클로펜테닐렌 (예를 들어, 4-사이클로펜텐-1,3-일렌), 사이클로헥세닐렌 (예를 들어, 2-사이클로헥센-1,4-일렌; 3-사이클로헥센-1,2-일렌; 2,5-사이클로헥사디엔-1,4-일렌)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
리간드 단위
본 발명에서 사용을 위한 리간드 단위는, 각 중쇄에서 적어도 1종의 컨쥬게이트화 부위를 갖는, 세포 결합제, 더욱 구체적으로 변형된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편이다. 본 발명에 따라 사용에 적합한 특정 변형된 항체의 예는, 본원에 참고로 편입되는, (PCT/US2011/059775로서 출원된) WO 2012/064733에서 논의된다.
항체
본 명세서에서 용어 "항체"는 최광의 개념으로 사용되고, 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 구체적으로 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 이량체, 다량체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체) 및 항체 단편을 포함한다 (Miller 등 (2003) Jour . of Immunology 170:4854-4861). 항체들은 쥐 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체 또는 기타 종류로부터 유래된 항체일 수 있다. 항체는 특이적 항원을 인식 및 결합할 수 있는 면역계에 의해 생성된 단백질이다 (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology , 5판, Garland Publishing, New York). 표적 항원은 일반적으로 다중 항체에서 CDR에 의해 인식되는 많은 결합 위치 (이른바, 에피토프)를 갖는다. 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 각각의 항체는 상이한 구조를 갖는다. 따라서, 1종의 항원은 1종 이상의 상응하는 항체를 가질 수 있다. 항체는 전장의 면역글로불린 분자 또는 전장의 면역글로불린 분자의 면역 활성 부분, 즉 목적 표적 항원 또는 이의 일부에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 위치를 포함하는 분자를 포함하고, 상기 표적은, 이들로 제한하는 것은 아니나, 자가면역 질환과 관련된 자가면역 항체를 생산하는 암세포 또는 세포들을 포함한다. 면역글로불린은 임의의 종류 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA), 면역글로불린 분자의 부류 (예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위 부류일 수 있다. 상기 면역글로불린은 인간, 쥐 또는 토끼 기원을 비롯한 임의의 종류로부터 유래될 수 있다.
"항체 단편"은 일반적으로 이의 항원 결합 또는 가변 영역인 전장 항체의 일부분을 포함한다. 항체 단편의 예로는 F(ab')2, 및 scFv 단편, 그리고 암세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원에 면역특이적으로 결합하는 상기한 것 중의 어떤 것의 이량체성 에피토프-결합 단편, 단일-사슬 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체가 포함된다.
본 발명에서 사용에 적합한 변형된 항체는 티올기가 부족한 아미노산 잔기에 대해 천연 사슬간 시스테인 잔기가 치환된 것들을 포함한다. 항체는 링커에의 컨쥬게이트화에 적합한 반응기를 포함하는 아미노산 잔기의 각 중쇄에서 적어도 1종의 추가의 치환을 포함할 수 있다. 추가적으로 치환된 아미노산은 시스테인 또는 비-천연 아미노산일 수 있다. 치환되는 위치는 아래 제시된 것들로부터 선택될 수 있다.
Figure 112020012559806-pct00029
본 발명에서 사용에 적합한 변형된 항체의 예는, 본원에 편입되는, WO 2012/064733에서 논의된 플렉스맙 구조를 포함한다. 이와 같은 플렉스맙은 본 발명의 PBD의 N10 기를 통하여 결합을 위한 컨쥬게이트화 부위로서 사용될 수 있는 항체의 힌지 영역에서 자유 티올기를 가진 시스테인을 갖는다.
본 발명에서 사용에 적합한 변형된 항체의 다른 예는 시스테인이 항체내 선택된 위치에서 삽입된 것들을 포함한다. 이들은 문헌 [Dimasi, N., 등, Molecular Pharmaceutics, 2017, 14, 1501-1516 (DOI: 10.1021/acs.molpharmaceut.6b00995)] 및 WO2015/157595에서 기재된다. 특히, S239 위치 (즉 239와 240 사이 위치) 후 시스테인의 삽입에 의해 변형된 항체는 사용중이다.
본원에서 편입되는, WO 2012/064733의 페이지 60 내지 62에 열거된 것이 참조된다. 일부 구현예에서, 항체는 종양-관련 항원, 예를 들어: HER2 (ErbB2); EPHA2 (EPH 수용체 A2); CD19; IL2RA (인터루킨 2 수용체, 알파)에 대한 것일 수 있다.
본 발명의 구현예에서 사용하기 위한 종양-관련 항원 및 동족 항체는 아래 열거되고, 본원에서 편입되는, WO 2017/186894의 페이지 14 내지 86에서 더욱 상세히 기재된다.
(1) BMPR1B (뼈 형태 형성 단백질 수용체-유형 IB)
(2) E16 (LAT1, SLC7A5)
(3) STEAP1 (전립샘의 6개의 막투과성 상피 항원)
(4) 0772P (CA125, MUC16)
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거핵세포 효력 증가 인자, 메소텔린)
(6) Napi3b (NAPI-3B, NPTⅡb, SLC34A2, 용질 담체 패밀리 34 (소듐 포스페이트), 구성원 2, 유형 Ⅱ 나트륨-의존적 인산염 수송체 3b)
(7) 세마 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 25개의 세마 도메인, 7개의 트롬보스폰딘 반복체 (유형 1 및 유형 1-유사), 막투과성 도메인 (TM) 및 짧은 세포질 도메인, (세마포린) 5B)
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자)
(9) ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체)
(10) MSG783 (RNF124, 가상 단백질 FLJ20315)
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립샘 암 관련 유전자 1, 전립샘 암 관련 단백질 1, 전립샘 2의 6개의 막투과성 상피 항원, 6개의 막투과성 전립샘 단백질)
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일과성 수용체 전위 양이온 5 채널, 서브패밀리 M, 구성원 4)
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유래 성장 인자)
(14) CD21 (CR2 (보체 수용체 2) 또는 C3DR (C3d/앱스타인 바 바이러스 수용체) 또는 Hs.73792)
(15) CD79b (CD79B, CD79β IGb (면역글로불린 관련 베타), B29)
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (SH2 도메인 함유 포스파타아제 앵커 단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C)
(17) HER2 (ErbB2)
(18) NCA (CEACAM6)
(19) MDP (DPEP1)
(20) IL20R-알파 (IL20Ra, ZCYTOR7)
(21) 브레비칸 (BCAN, BEHAB)
(22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5)
(23) ASLG659 (B7h)
(24) PSCA (전립샘 줄기 세포 항원 전구체)
(25) GEDA
(26) BAFF-R (B 세포-활성 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3)
(27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 동형 단백질, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC-2, FLJ22814)
(27a) CD22 (CD22 분자)
(28) CD79a (CD79A, CD79알파), 면역글로불린-관련 알파, B 세포-특이적 단백질(Ig 베타 (CD79B)와 공유적으로 상호작용하고, 표면에서 Ig M 분자와 복합체를 형성하고, B-세포분화에 관여하는 신호를 전달함), pI: 4.84, MW: 25028 TM: 2[P] 유전자 염색체: 19q13.2).
(29) CXCR5 (버킷 림프종 수용체 1, G 단백질-결합 수용체 (CXCL13 케모카인에 의해 활성화, 림프구 이동 및 체액성 방어에서 기능, HIV-2 감염 및 아마도 AIDS, 림프종, 골수종, 및 백혈병의 진행에서 역할 수행); 372 aa, pI: 8.54 MW: 41959 TM: 7 [P] 유전자 염색체: 11q23.3,
(30) HLA-DOB (베타 서브유니트의 MHC 클래스 Ⅱ분자 (Ia 항원) (펩티드를 결합시키고, 20개는 이들을 CD4+ T 림프구에 제공); 273 aa, pI: 6.56, MW: 30820.TM: 1 [P] 유전자 염색체: 6p21.3)
(31) P2X5 (푸린 수용체 P2X 리간드-게이트 이온 채널 5, 세포 등 ATP에 의한 게이트 이온 채널은 시냅스 전달 및 신경 발생에 포함될 수 있고, 결함은 특발성 배뇨근 불안정을 초래할 수 있음); 422 aa), pI: 7.63, MW: 47206 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 17p13.3).
(32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2); 359 aa, pI: 8.66, MW: 40225, TM: 15 [P] 유전자 염색체: 9p13.3).
(33) LY64 (림프구 항원 64 (RP105), 류신 풍부 반복체 (LRR) 패밀리의 유형 I 막 단백질은 B-세포 활성 및 세포사멸을 조절하고, 기능의 손실은 전신 홍반성 낭창 환자에서 질환 활성의 증가와 관련됨); 661 aa, pI: 6.20, MW: 74147 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 5q12).
(34) FcRH1 (Fc 수용체-형 단백질 1, C2 유형 Ig-유사 및 ITAM 도메인을 포함하는 면역글로불린 Fc 도메인의 추정 수용체는 B-림프구 분화에서 역할을 가질 수 있음); 429 aa, pI: 5.28, MW: 46925 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 1q21-1q22)
(35) IRTA 2 (면역글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전좌 관련 2, B 세포 발달 및 림프종 발달에서 가능한 역할을 갖는 추정 면역수용체; 전좌에 의한 유전자의 규제완화가 일부 B 세포 악성종양에서 발생함); 977 aa, pI: 6.88, MW: 106468, TM: 1 [P] 유전자 염색체: 1q21)
(36) TENB2 (TMEFF2, 토모레귤린, TPEF, HPP1, TR, 추정 막투과성 프로테오글리칸, 폴리스타틴 및 성장 인자의 EGF/헤레굴린 패밀리 관련); 374 aa)
(37) PSMA - FOLH1 (엽산 가수분해효소 (전립샘-특이적 막 항원) 1)
(38) SST (소마토스타틴 수용체; 주의: 5 하위유형 존재)
(38.1) SSTR2 (소마토스타틴 수용체 2)
(38.2) SSTR5 (소마토스타틴 수용체　5)
(38.3) SSTR1
(38.4) SSTR3
(38.5) SSTR4
AvB6 - 양쪽 서브유니트 (39+40)
(39) ITGAV (인테그린, 알파 V)
(40) ITGB6 (인테그린, 베타 6)
(41) CEACAM5 (암태아성 항원-관련 세포 부착 분자 5)
(42) MET (met 원발암유전자; 간세포 성장 인자 수용체)
(43) MUC1 (뮤신 1, 세포 표면 관련)
(44) CA9 (탄산무수화효소 IX)
(45) EGFRvIII (상피 성장 인자 수용체 (EGFR), 전사 변이체 3,
(46) CD33 (CD33 분자)
(47) CD19 (CD19 분자)
(48) IL2RA (인터루킨 2 수용체, 알파); NCBI 참조 서열: NM_000417.2);
(49) AXL (AXL 수용체 티로신 키나아제)
(50) CD30 - TNFRSF8 (종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리, 구성원 8)
(51) BCMA (B-세포 성숙 항원) - TNFRSF17 (종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리, 구성원 17)
(52) CT Ags - CTA (암 고환 항원)
(53) CD174 (루이스 Y) - FUT3 (푸코실트랜스퍼라아제 3 (갈락토시드 3(4)-L-푸코실프랜스퍼라아제, 루이스 혈액형)
(54) CLEC14A (C-유형 렉틴 도메인 패밀리 14, 구성원 A; 유전자은행 수탁 번호 NM175060)
(55) GRP78 - HSPA5 (열 충격 70kDa 단백질 5 (당-조절 단백질, 78kDa)
(56) CD70 (CD70 분자) L08096
(57) 줄기 세포 특이적 항원. 예를 들어:
● 5T4 (엔트리 (63) 참조)
● CD25 (엔트리 (48) 참조)
● CD32
● LGR5/GPR49
● 프로미닌/CD133
(58) ASG-5
(59) ENPP3 (엑토뉴클레오티드 피로포스파타아제/포스포디에스테라아제 3)
(60) PRR4 (프롤린 풍부 4 (눈물샘))
(61) GCC - GUCY2C (구아닐레이트 시클라아제　2C (열 무변성 엔테로톡신 수용체)
(62) Liv-1 - SLC39A6 (용질 담체 패밀리 39 (아연 수송체), 구성원 6)
(63) 5T4, 영양아층 당단백질, TPBG - TPBG (영양아층 당단백질)
(64) CD56 - NCMA1 (신경 세포 부착 분자 1)
(65) CanAg (종양 관련 항원 CA242)
(66) FOLR1 (엽산 수용체 1)
(67) GPNMB (당단백질 (막투과성) nmb)
(68) TIM-1 - HAVCR1 (A형 간염 세포 수용체 1)
(69) RG-1/전립샘 종양 표적 민딘 - 민딘/RG-1
(70) B7-H4 - VTCN1 (V-세트 도메인 함유 T-세포 활성 억제제 1
(71) PTK7 (PTK7 단백질 티로신 키나아제 7)
(72) CD37 (CD37 분자)
(73) CD138 - SDC1 (신데칸 1)
(74) CD74 (CD74 분자, 주요 조직적합성 복합체, 클래스 Ⅱ 불변 사슬)
(75) 클라우딘 - CLs (클라우딘)
(76) EGFR (상피 성장 인자 수용체)
(77) Her3 (ErbB3) - ERBB3 (v-erb-b2 적아세포 백혈병 바이러스 암유발유전자 상동체 3 (조류))
(78) RON - MST1R (대식세포 자극 1 수용체 (c-met-관련 티로신 키나아제))
(79) EPHA2 (EPH 수용체 A2)
(80) CD20 - MS4A1 (막-폭 4-도메인, 서브패밀리 A, 구성원 1)
(81) 테나신 C - TNC (테나신 C)
(82) FAP (섬유아세포 활성 단백질, 알파)
(83) DKK-1 (딕코프 1 상동체 [제노푸스 래비스]
(84) CD52 (CD52 분자)
(85) CS1 - SLAMF7 (SLAM 패밀리 구성원 7)
(86) 엔도글린-ENG (엔도글린)
(87) 아넥신 A1-ANXA1 (아넥신 A1)
(88) V-CAM (CD106) - VCAM1 (혈관 세포 부착 분자 1)
리간드 단위에 대한 링커 단위의 연결
리간드 단위는 디설파이드 결합을 통해 링커 단위에 연결될 수 있다.
일 구현예에서, 리간드 단위와 약물 링커 사이의 연결은 리간드 단위 시스테인 잔기의 티올기와 약물 링커 단위의 말레이미드기 사이에 형성된다. 다른 가능한 연결용 기, 및 수득된 연결기는 아래 나타난다.
리간드 단위의 시스테인 잔기는 연결을 형성하기 위해 링커의 작용기와의 반응에 대해 이용가능할 수 있다. 다른 구현예에서, 예를 들면, 리간드 단위가 항체인 경우, 항체의 티올기는 사슬간 디설파이드 결합에 참여할 수 있다. 이들 사슬간 결합은 예를 들면 링커 단위의 작용기와의 반응 이전에 DTT로의 항체의 처리에 의해 유리 티올기로 변환될 수 있다.
일부 구현예에서, 시스테인 잔기는 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된다. 항체 중쇄 또는 경쇄에 의한 치환에 의한 시스테인 삽입을 위한 위치는 공개된 미국출원번호 제2007-0092940호 및 국제특허공보 WO2008/070593에 기재된 것을 포함하고, 이는 본원에 편입된다.
치료 방법
본 발명의 화합물은 요법의 방법에서 사용될 수 있다. 또한, 치료적 유효량의 화학식 I의 컨쥬게이트를 치료를 필요로 하는 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법이 제공된다. 용어 "치료적 유효량"은, 환자에 대한 장점을 나타내기에 충분한 양이다. 이와 같은 장점은 적어도 하나의 증상의 적어도 완화일 수 있다. 투여되는 실제 양 및 투여의 속도 및 시간-경과는 치료되는 대상의 특징 및 중증도에 좌우될 것이다. 치료의 처방, 예를 들면 복용량에 대한 결정은 일반 종사자 및 다른 의사의 책임 내에 있다.
컨쥬게이트는 치료되는 질병에 따라 동시에 또는 순차적으로 단독 또는 다른 치료와 병용하여 투여될 수 있다. 치료 및 요법의 예는, 화학요법 (활성제 예를 들면 약물의 투여); 수술; 및 방사선 요법을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 그리고 본 발명의 따라 사용하기 위한 약학적 조성물은 활성 성분 이외에, 즉, 화학식 I의 컨쥬게이트, 약제학적으로 허용가능한 부형제, 담체, 버퍼, 안정제 또는 당업자에게 알려진 다른 물질을 포함할 수 있다. 이러한 물질은 무독성이어야 하고, 활성 성분의 효능을 방해하지 않아야 한다. 담체 또는 다른 물질의 정확한 특징은 경구, 또는 주사, 예를 들면 피부, 피하, 또는 정맥내일 수 있는 투여 경로에 좌우될 것이다.
경구 투여를 위한 약학적 조성물은 정제, 캡슐, 분말 또는 액체 형태일 수 있다. 정제는 고형 담체 또는 아쥬반트를 포함할 수 있다. 액체 약학적 조성물은 일반적으로 액체 담체 예컨대 물, 석유, 동물 또는 식물성 오일, 광유 또는 합성 오일을 포함한다. 생리적 염수 용액, 덱스트로오스 또는 다른 당류 용액 또는 글리콜 예컨대 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜이 포함될 수 있다. 캡슐은 젤라틴과 같은 고형 담체를 포함할 수 있다.
정맥내, 피부 또는 피하 주사, 또는 고통의 부위에의 주사의 경우에, 활성 성분은 무발열원이고, 적합한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 비경구로 허용가능한 수용액의 형태일 것이다. 본 기술분야에서의 당업자는 예를 들면, 등장의 비히클 예컨대 염화나트륨 주사, 링거 주사, 락테이트화된 링거 주사를 사용하여 적합한 용액을 적절하게 제조할 수 있다. 보존제, 안정제, 버퍼, 산화방지제 및/또는 다른 첨가제는 요구되는 경우에 포함될 수 있다.
본 컨쥬게이트는 증식성 질환 및 자가면역 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 용어 "증식성 질환"은, 바람직하지 않은, 예컨대, 시험관내 또는 생체내와 무관하게 신생물성 또는 과형성 성장일 수 있는 과도한 또는 비정상 세포의 원치 않는 또는 조절되지 않는 세포 증식에 관한 것이다.
증식성 질병의 예는, 비제한적으로, 양성, 전암성, 및 악성 세포 증식을 포함하고, 이는 비제한적으로 신생물 및 종양 (예를 들면, 조직구종, 신경아교종, 성상 세포종, 골종), 암 (예를 들면 폐암, 소세포 폐암, 위장 암, 장암, 결장암, 유방 암종, 난소 암종, 전립선암, 고환암, 간암, 신장암, 방광암, 췌장암, 뇌암, 육종, 골육종, 카포시 육종, 흑색종), 백혈병, 건선, 뼈 질환, 섬유증식성 장애 (예를 들면 결합 조직의 것), 및 죽상경화증을 포함한다. 관심 대상의 다른 암은 혈액암; 악성종양 예컨대 백혈병 및 림프종, 예컨대 비-호지킨 림프종, 및 하위유형 예컨대 DLBCL, 변연부, 외투세포, 및 여포성, 호지킨 림프종, AML, 및 B 또는 T 세포 기원의 다른 암을 포함한다.
자가면역 질환의 예는 하기를 포함한다: 류마티스성 관절염, 자가면역 탈수초 질환 (예를 들면, 다발성 경화증, 알러지성 뇌척수염), 건선성 관절염, 내분비 눈병증, 포도막망막염, 전신 홍반성 낭창, 중증 근무력증, 그레이브스병, 사구체신염, 자가면역 간장 장애, 염증성 장 질환 (예를 들면, 크론병), 과민증, 알러지성 반응, 쇼그렌 증후군, I형 진성 당뇨병, 원발성 담도성 간경변증, 베게너 육아종증, 섬유근육통, 다발성근염, 피부근염, 다중 내분비 부전, 슈미트 증후군, 자가면역 포도막염, 애디슨병, 부신염, 갑상선염, 하시모토 갑상선염, 자가면역 갑상선 질환, 악성 빈혈, 위 위축증, 만성 간염, 유낭창 간염, 죽상경화증, 아급성 피부 홍반성 낭창, 부갑상선기능저하증, 드레슬러 증후군, 자가면역 혈소판감소증, 특발성 혈소판감소성 자반병, 용혈성 빈혈, 심상성 천포창, 천포창, 포진성 피부염, 원형 탈모증, 유사천포창, 경피증, 진행성 전신 경화증, CREST 증후군 (석회증, 레이노 증후군 현상, 식도 운동성장애, 가락피부경화증, 및 모세혈관확장증), 남성 및 여성 자가면역 불임, 강직성 척추염, 궤양성 대장염, 혼합된 결합 조직 질환, 결절 다발 동맥염, 전신 괴사성 혈관염, 아토피 피부염, 아토피성 비염, 굿파스투어 증후군, 샤가스 질환, 유육종증, 류마티스성 열, 천식, 재발성 낙태, 항-인지질 증후군, 농부폐병, 홍반 다형성, 심장수술후 증후군, 쿠싱 증후군, 자가면역 만성 활동 간염, 새-사육가 폐, 독성 표피 괴사성용해, 알포트 증후군, 폐포염, 알러지성 폐포염, 섬유성 폐포염, 사이질 폐 질환, 결절 홍반, 괴저성 농피증, 수혈 반응, 다카야수 동맥염, 류마티스성 다발근육통, 일시적 동맥염, 주혈협충병, 거대세포 동맥염, 회충증, 아스페르길루스증, 샘프터 증후군, 습진, 림프종모양 육아종증, 베체트병, 카플란 증후군, 가와사키병, 뎅기열, 뇌척수염, 심내막염, 심내막심근 섬유증, 내안구염, 지속시간 융기 홍반, 건선, 태아 적모구증, 호산구 근막염, 슐만 증후군, 펠티 증후군, 사상충증, 모양체염, 만성 모양체염, 헤테로만성 모양체염, 푸치스 모양체염, IgA 신병증, 헨노흐-숀라인 자반병, 이식편대 숙주 질환, 이식 거부, 심근병증, 이튼-람베르트 증후군, 재발 다연골염, 한성글로불린혈증, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 이반 증후군, 및 자가면역 성선부전증.
일부 구현예에서, 자가면역 질환은 B 림프구의 장애 (예를 들면, 전신 홍반성 낭창, 굿파스투어 증후군, 류마티스성 관절염, 및 I형 당뇨병), Th1-림프구 (예를 들면, 류마티스성 관절염, 다발성 경화증, 건선, 쇼그렌 증후군, 하시모토 갑상선염, 그레이브스병, 원발성 담도성 간경변증, 베게너 육아종증, 결핵, 또는 이식편대 숙주 질환), 또는 Th2-림프구 (예를 들면, 아토피 피부염, 전신 홍반성 낭창, 아토피성 천식, 비결막염 알러지성 비염, 오멘 증후군, 전신 경화증, 또는 만성 이식편 대 숙주 질환)이다. 일반적으로, 수지상 세포와 관련된 장애는 Th1-림프구 또는 Th2-림프구의 장애와 관련된다. 일부 구현예에서, 자가면역 장애는 T 세포-매개된 면역학적 장애이다.
일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 용량당 약 0.01 내지 약 10 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 용량당 약 0.01 내지 약 5 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 용량당 약 0.05 내지 약 5 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 용량당 약 0.1 내지 약 5 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 용량당 약 0.1 내지 약 4 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 용량당 약 0.05 내지 약 3 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 용량당 약 0.1 내지 약 3 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 용량당 약 0.1 내지 약 2 mg/kg의 범위이다.
약물 부하
약물 부하(p)는 항체와 같은 세포결합제 당 PBD 약물의 평균 개수이다. 본 발명에서, 이것은 항상 1이다. 그러나, 임의의 조성물은 PBD가 컨쥬게이트화되는 항체 그리고 PBD가 컨쥬게이트화되지 않는 항체를 포함할 수 있다. 따라서 조성물에 대해, 약물 부하 (또는 DAR)은 1 미만, 예를 들어 0.75 이상, 0.80 이상, 0.85 이상, 0.90 이상 또는 0.95 이상일 수 있다.
일반 합성 경로
PBD 화합물의 합성은 하기와 같은 참조문헌에 넓게 논의되어 있고, 이는 본원에 참조로 포함되어 있다:
a) WO 00/12508 (페이지 14 내지 30);
b) WO 2005/023814 (페이지 3 내지 10);
c) WO 2004/043963 (페이지 28 내지 29); 및
d) WO 2005/085251 (페이지 30 내지 39).
합성 경로
하기 화학식 Ⅰ의 본 발명의 화합물은:
Figure 112020012559806-pct00030
화학식 2의 화합물로부터 합성될 수 있다:
Figure 112020012559806-pct00031
화학식 2
여기에서, R2, R6, R7, R9, R11a, R6', R7', R9', R11a', Y, Y' 및 R"는 화학식 I의 화합물에서 정의된 바와 같고, Rpre-L1은 RL1의 전구체이고 Rpre-L2는 RL2의 전구체이다 - 이 방법은 화학식 I의 화합물 (여기에서, RL1 및 RL2는 화학식 IIIa이다)에 특히 적용될 수 있다. 이들 화합물에 대해서는, Rpre-L1 및 Rpre-L2는 통상 RL1 및 RL2의 일부분, 예컨대 화학식 IIIa'의 기일 것이다:
Figure 112020012559806-pct00032
. 상기 경우에, 반응은 GL 기 첨가를 포함한다.
화학식 2의 화합물은 화학식 3의 화합물을 탈보호함으로써 제조될 수 있다:
Figure 112020012559806-pct00033
화학식 3
여기에서, R2, R6, R7, R9, R11, R6', R7', R9', R11a', Y, Y' 및 R"는 화학식 I의 화합물에 대해 정의된 바와 같고, Rpre-L1Prot는 Rpre-L1의 보호된 버전이고, Rpre-L2Prot는 Rpre-L2의 보호된 버전이고, Prot은 적절한 카르복시/히드록시 보호기를 나타낸다.
화학식 3의 화합물은 화학식 4의 화합물을 폐환시킴으로써 제조될 수 있고:
Figure 112020012559806-pct00034
화학식 4
여기에서, 폐환은 산화, 예를 들어 스원 산화에 의해 실시된다.
화학식 4의 화합물은, 화학식 5의 화합물로부터 2개의 아미노 보호기를 첨가함으로써 합성될 수 있다:
Figure 112020012559806-pct00035
화학식 5
기가 상이하면, 단계별 첨가는 하나의 아미노기의 (예를 들어, Fmoc에 의한 단순 보호), 및 그 후 또 다른 아미노기에 원하는 보호기를 배치함으로써 달성될 수 있다. 이는 그 후 단순히 보호기를 제거한 후, 또 다른 원하는 아미노 보호기를 배치하는 과정이 뒤따른다.
화학식 I의 화합물 (여기에서, RL1 및 RL2는 화학식 IIIb의 화합물임)은, 완전한 RL1 및/또는 RL2 기가 화학식 5의 화합물로부터 시작하여 배치될 수 있기는 하지만, 보호된 전구체를 사용하기보다는 유사한 방식으로 합성될 수 있다.
화학식 5의 화합물은 공지의 방법, 예컨대 WO 2011/130598에 기재된 방법에 의해 합성될 수 있다.
약물 컨쥬게이트의 합성
항체는 일반적으로 문헌 [Doronina 등, Nature Biotechnology, 2003, 21, 778-784]에 기재된 바와 같은 약물 링커 화합물에 컨쥬게이트화될 수 있다. 간단하게는, pH 7.4에서 50 mM 나트륨 보레이트를 함유하는 PBS 중의 항체 (4-5 mg/mL)는 37℃에서 트리스(카르복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드 (TCEP)로 환원된다. 사슬간 디설파이드를 환원시키는 반응의 진행은 5,5'-디티오비스(2-니트로벤조산)과의 반응으로 모니터링되고, 티올/mAb의 원하는 수준이 달성될 때까지 진행될 수 있게 한다. 환원된 항체는 이후 0℃로 냉각되고, 항체 당 3 당량의 약물-링커로 알킬화된다. 1 시간 후, 반응은 5 당량의 N-아세틸 시스테인의 첨가에 의해 켄칭된다. 켄칭된 약물 링커는 PD-10 칼럼에 걸쳐 겔 여과에 의해 제거된다. ADC는 이후 0.22㎛ 시린지 필터를 통해 멸균-여과된다. 단백질 농도는 각각 280nm 및 329nm에서의 스펙트럼 분석, 및 280nm에서의 약물 흡광도의 기여도에 대한 보정에 의해 결정될 수 있다. 크기 배제 크로마토그래피는 항체 응집의 정도를 결정하기 위해 사용될 수 있고, RP-HPLC는 NAC-켄칭된 약물-링커의 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
추가의 선호사항
하기의 선호사항은 상기 기재된 바와 같은 본 발명의 모든 측면에 적용될 수 있거나, 또는 단일 측면과 관련될 수 있다. 선호사항은 임의의 조합으로 함께 조합될 수 있다.
R6', R7', R9', R11a' 및 Y'는 각각 R6, R7, R9, R11a 및 Y와 동일한 기들로부터 선택된다. 일부 구현예에서, R6', R7', R9', R11a' 및 Y'는 각각 R6, R7, R9, R11a 및 Y와 동일하다.
일부 구현예에서, R12는 R2와 동일하다.
이량체 링크
일부 구현예에서, Y 및 Y'은 모두 O이다.
일부 구현예에서, R"는 치환기가 없는 C3-7 알킬렌기이다. 일부 구현예에서, R"는 C3, C5 또는 C7 알킬렌이다. 특히, R"는 C3 또는 C5 알킬렌일 수 있다.
다른 구현예에서, R"은 이하의 화학식의 기이다:
Figure 112020012559806-pct00036
(여기에서, r은 1 또는 2이다).
R 6 내지 R 9
일부 구현예에서, R9는 H이다.
일부 구현예에서, R6은 H, OH, OR, SH, NH2, 니트로 및 할로로부터 선택되고, H 또는 할로로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, R6은 H이다.
일부 구현예에서, R7은 H, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', 및 할로로부터 선택된다. 일부 구현예에서, R7은 H, OH 및 OR로부터 선택되고, 여기에서 R은 선택적으로 치환된 C1-7 알킬, C3-10 헤테로사이클릴 및 C5-10 아릴기로부터 선택된다. R은 더욱 바람직하게는 치환 또는 비치환될 수 있는 C1-4 알킬기일 수 있다. 관심 치환기는 C5-6 아릴기 (예를 들어, 페닐)이다. 7-위치에서 특히 바람직한 치환기는 OMe 및 OCH2Ph이다. 특히 관심있는 다른 치환기는 디메틸아미노 (즉, -NMe2); -(OC2H4)qOMe (여기에서, q는 0 내지 2임); 질소-함유 C6 헤테로사이클릴 (모르폴리노, 피페리디닐 및 N-메틸-피페라지닐을 포함)이다.
이들 구현예 및 선호 사항은 R9', R6' 및 R7' 각각에 적용된다.
D 및 D'
일부 구현예에서, D 및 D'은 각각 D1 및 D'1이다.
일부 구현예에서, D 및 D'은 각각 D2 및 D'2이다.
R 2
C2와 C3 사이에 존재하는 이중 결합이 있는 경우, R2는 이하의 것들로부터 선택되고:
(a) 할로, 니트로, 시아노, 에테르, C1-7 알킬, C3-7 헤테로사이클릴 및 비스-옥시-C1-3 알킬렌을 포함하는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 선택적으로 치환된, C5-10 아릴기;
(b) C1-5 포화 지방족 알킬;
(c) C3-6 포화 사이클로알킬;
(d)
Figure 112020012559806-pct00037
(여기에서, R11, R12 및 R13은 각각 H, C1-3 포화 알킬, C2-3 알케닐, C2-3 알키닐 및 사이클로프로필로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 R2 기 내의 탄소 원자의 총 수는 5개 이하이다);
(e)
Figure 112020012559806-pct00038
(여기에서, R15a 및 R15b 중 하나는 H이고, 다른 하나는 페닐로부터 선택되고, 이때 페닐은 할로 메틸, 메톡시; 피리딜; 및 티오페닐로부터 선택된 기에 의해 선택적으로는 치환되고); 및
(f)
Figure 112020012559806-pct00039
(여기에서, R14는 H; C1-3 포화 알킬; C2-3 알케닐; C2-3 알키닐; 사이클로프로필; 페닐로부터 선택되고, 이때 페닐은 할로 메틸, 메톡시; 피리딜; 및 티오페닐로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환된다).
R2가 C5-10 아릴기인 경우, 이는 C5-7 아릴기일 수 있다. C5-7 아릴기는 페닐기 또는 C5-7 헤테로아릴기, 예를 들어 푸라닐, 티오페닐 및 피리딜일 수 있다. 일부 구현예에서, R2는 바람직하게는 페닐이다. 다른 구현예에서, R2는 바람직하게는 티오페닐, 예를 들어, 티오펜-2-일 및 티오펜-3-일이다.
R2가 C5-10 아릴기인 경우, 이는 C8-10 아릴, 예를 들어 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐기일 수 있다. 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐기는 어느 이용가능한 고리 위치를 통해 PBD 코어에 결합할 수 있다. 예를 들어, 퀴놀리닐은 퀴놀린-2-일, 퀴놀린-3-일, 퀴놀린-4-일, 퀴놀린-5-일, 퀴놀린-6-일, 퀴놀린-7-일 및 퀴놀린-8-일일 수 있다. 물론, 퀴놀린-3-일 및 퀴놀린-6-일이 바람직할 수 있다. 이소퀴놀리닐은 이소퀴놀린-1-일, 이소퀴놀린-3-일, 이소퀴놀린-4-일, 이소퀴놀린-5-일, 이소퀴놀린-6-일, 이소퀴놀린-7-일 및 이소퀴놀린-8-일일 수 있다. 물론, 이소퀴놀린-3-일 및 이소퀴놀린-6-일이 바람직할 수 있다.
R2가 C5-10 아릴기인 경우, 임의의 수의 치환기를 가질 수 있다. 이는 바람직하게는 1 내지 3개의 치환기를 포함하고, 1 및 2가 더욱 바람직하고, 단일 치환된 기가 가장 바람직하다. 치환기는 임의의 위치에 있을 수 있다.
R2가 C5-7 아릴기인 경우, 단일 치환기는 바람직하게는 화합물의 나머지에 대한 결합에 인접하지 않는데, 즉, 이는 바람직하게는 화합물의 나머지에 대한 결합에 β 또는 γ가 되는 고리 원자 상에 있다. 따라서, C5-7 아릴기가 페닐인 경우, 치환기는 바람직하게는 메타- 또는 파라-위치에 있고, 더욱 바람직하게는 파라-위치에 있다.
R2가 C8-10 아릴기, 예를 들어 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐인 경우, 이는 퀴놀린 또는 이소퀴놀린 고리의 임의의 위치에 임의의 수의 치환기를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 1, 2 또는 3개의 치환기를 포함할 수 있으며, 이들은 가까운 고리 및 먼 고리, 또는 (하나 이상의 치환기가 있는 경우) 이들 모두 중 어느 것일 수 있다.
R 2 가 C 5-10 아릴기인 경우, R 2 치환기
R2가 C5-10 아릴기일 때 R2 상의 치환기가 할로인 경우, 이는 바람직하게는 F 또는 Cl, 더욱 바람직하게는 Cl이다
R2가 C5-10 아릴기일 때 R2 상의 치환기가 에테르인 경우, 이는 일부 구현예에서 알콕시기, 예를 들어, C1-7 알콕시기 (예를 들어, 메톡시, 에톡시)일 수 있거나, 또는 일부 구현예에서는 C5-7 아릴옥시기 (예를 들어 페녹시, 피리딜옥시, 푸라닐옥시)일 수 있다. 알콕시기는 그 자체로, 예를 들어 아미노기 (예를 들어, 디메틸아미노)에 의해 추가로 치환될 수 있다.
R2가 C5-10 아릴기일 때 R2 상의 치환기가 C1-7 알킬인 경우, 이는 바람직하게는 C1-4 알킬기 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로프릴, 부틸)일 수 있다.
R2가 C5-10 아릴기일 때 R2 상의 치환기가 C3-7 헤테로사이클릴인 경우, 이는 일부 구현예에서 C6 질소 함유 헤테로사이클릴기, 예를 들어, 모르폴리노, 티오모르폴리노, 피페리디닐, 피페라지닐일 수 있다. 이들 기는 질소 원자를 통해 PBD 모이어티의 나머지에 결합될 수 있다. 이들 기는 예를 들어, C1-4 알킬기에 의해 추가로 치환될 수 있다. C6 질소 함유 헤테로사이클릴기가 피페라지닐인 경우, 상기 추가의 치환기는 제2 질소 고리 원자 상에 있을 수 있다.
R2가 C5-10 아릴기일 때 R2 상의 치환기가 비스-옥시-C1-3 알킬렌인 경우, 이것은 바람직하게는 비스-옥시-메틸렌 또는 비스-옥시-에틸렌이다.
R2가 C5-10 아릴기일 때 R2 상의 치환기가 에스테르인 경우, 이것은 바람직하게는 메틸 에스테르 또는 에틸 에스테르이다.
R2가 C5-10 아릴기인 경우 특히 바람직한 치환기는, 메톡시, 에톡시, 플루오로, 클로로, 시아노, 비스-옥시-메틸렌, 메틸-피페라지닐, 모르폴리노 및 메틸-티오페닐를 포함한다. R2에 대한 특히 바람직한 다른 치환기는 디메틸아미노프로필옥시 및 카르복시이다.
R2가 C5-10 아릴기인 경우 특히 바람직한 치환된 R2 기는, 4-메톡시-페닐, 3-메톡시페닐, 4-에톡시-페닐, 3-에톡시-페닐, 4-플루오로-페닐, 4-클로로-페닐, 3,4-비스옥시메틸렌-페닐, 4-메틸티오페닐, 4-시아노페닐, 4-페녹시페닐, 퀴놀린-3-일 및 퀴놀린-6-일, 이소퀴놀린-3-일 및 이소퀴놀린-6-일, 2-티에닐, 2-푸라닐, 메톡시나프틸, 및 나프틸을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 또 다른 가능한 치환된 R12 기는 4-니트로페닐이다. 관심있는 특정 R12 기는 4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐 및 3,4-비스옥시메틸렌-페닐를 포함한다.
R2가 C1-5 포화 지방족 알킬인 경우, 이는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 또는 펜틸일 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 메틸, 에틸 또는 프로필 (n-펜틸 또는 이소프로필)일 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 메틸일 수 있다. 다른 구현예에서, 이는 부틸 또는 펜틸일 수 있으며, 선형 또는 분기형일 수 있다.
R2가 C3-6 포화 사이클로알킬인 경우, 이는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실일 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 사이클로프로필일 수 있다.
R2가
Figure 112020012559806-pct00040
인 경우, R11, R12 및 R13 각각은 H, C1-3 포화 알킬, C2-3 알케닐, C2-3 알키닐 및 사이클로프로필로부터 독립적으로 선택되고, 이 때 R2 기 상의 탄소 원자의 총 수는 5개 이하이다. 일부 구현예에서, R2 기 상의 탄소 원자의 총 수는 4개 이하, 또는 3개 이하이다.
일부 구현예에서, R11, R12 및 R13 중 하나는 H이고, 다른 2개의 기는 H, C1-3 포화 알킬, C2-3 알케닐, C2-3 알키닐 및 사이클로프로필로부터 선택된다.
다른 구현예에서, R11, R12 및 R13 중 둘은 H이고, 다른 하나의 기는 H, C1-3 포화 알킬, C2-3 알케닐, C2-3 알키닐 및 사이클로프로필로부터 선택된다.
일부 구현예에서, H가 아닌 기는 메틸 및 에틸로부터 선택된다. 일부 구현예에서, H가 아닌 기는 메틸이다.
일부 구현예에서, R11은 H이다.
일부 구현예에서, R12는 H이다.
일부 구현예에서, R13은 H이다.
일부 구현예에서, R11 및 R12는 H이다.
일부 구현예에서, R11 및 R13은 H이다.
일부 구현예에서, R12 및 R13은 H이다.
특정 관심 R2 기는
Figure 112020012559806-pct00041
이다.
R2가
Figure 112020012559806-pct00042
인 경우, R15a 및 R15b 중 하나는 H이고, 다른 하나는 페닐로부터 선택되며, 이때 페닐은 할로, 메틸, 메톡시; 피리딜; 및 티오페닐로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환된다. 일부 구현예에서, H가 아닌 기는 선택적으로 치환된 페닐이다. 페닐 선택적인 치환기가 할로인 경우, 이는 바람직하게는 플루오로이다. 일부 구현예에서, 페닐기는 비치환된다.
R2가
Figure 112020012559806-pct00043
인 경우, R14는 H; C1-3 포화 알킬; C2-3 알케닐; C2-3 알키닐; 사이클로프로필; 페닐로부터 선택되고, 이때 페닐은 할로 메틸, 메톡시; 피리딜; 및 티오페닐로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환된다. 페닐 선택적인 치환기가 할로인 경우, 이는 바람직하게는 플루오로이다. 일부 구현예에서, 페닐기는 비치환된다.
일부 구현예에서, R14는 H, 메틸, 에틸, 에테닐 및 에티닐로부터 선택된다. 일부 구현예에서, R14는 H 및 메틸로부터 선택된다.
C2와 C3 사이의 단일 결합이 있는 경우,
R2는 H 또는
Figure 112020012559806-pct00044
인데, 여기에서 R16a 및 R16b는 H, F, C1-4 포화 알킬, C2-3 알케닐로부터 독립적으로 선택되며, 이때 알킬 및 알케닐기는 C1-4 알킬 아미도 및 C1-4 알킬 에스테르로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환되거나; 또는 R16a 및 R16b 중 하나가 H일 때, 다른 하나는 니트릴 및 C1-4 알킬 에스테르로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R2는 H이다.
일부 구현예에서, R2는
Figure 112020012559806-pct00045
이다.
일부 구현예에서, R16a 및 R16b는 모두 H인 것이 바람직하다.
다른 구현예에서, R16a 및 R16b는 모두 메틸인 것이 바람직하다.
추가 구현예에서, R16a 및 R16b 중 하나는 H이고, 다른 하나는 C1-4 포화 알킬, C2-3 알케닐로부터 선택되며, 이때 알킬 및 알케닐기는 선택적으로 치환된 것이 바람직하다. 이들 추가 구현예에서, H가 아닌 기가 메틸 및 에틸로부터 선택되는 것이 더욱 바람직할 수 있다.
R 22
C2'와 C3' 사이에 존재하는 이중 결합이 있는 경우, R22는 이하의 것들로부터 선택되고:
(a) 할로, 니트로, 시아노, 에테르, C1-7 알킬, C3-7 헤테로사이클릴 및 비스-옥시-C1-3 알킬렌을 포함하는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 선택적으로 치환된, C5-10 아릴기;
(b) C1-5 포화 지방족 알킬;
(c) C3-6 포화 사이클로알킬;
(d)
Figure 112020012559806-pct00046
(여기에서 R31, R32 및 R33은 각각 H, C1-3 포화 알킬, C2-3 알케닐, C2-3 알키닐 및 사이클로프로필로부터 독립적으로 선택되며, 여기에서 R22 기 내의 탄소 원자의 총 수는 5개 이하이다);
(e)
Figure 112020012559806-pct00047
(여기에서, R25a 및 R25b 중 하나가 H이고, 다른 하나는 페닐로부터 선택되며, 이때 페닐은 할로 메틸, 메톡시; 피리딜; 및 티오페닐로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환된다); 및
(f)
Figure 112020012559806-pct00048
(여기에서, R24는 H; C1-3 포화 알킬; C2-3 알케닐; C2-3 알키닐; 사이클로프로필; 페닐로부터 선택되며, 이때 페닐은 할로 메틸, 메톡시; 피리딜; 및 티오페닐로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환된다).
R22가 C5-10 아릴기인 경우, 이는 C5-7 아릴기이다. C5-7 아릴기는 페닐기 또는 C5-7 헤테로아릴기, 예를 들어 푸라닐, 티오페닐 및 피리딜일 수 있다. 일부 구현예에서, R22는 바람직하게는 페닐이다. 다른 구현예에서, R22는 바람직하게는 티오페닐, 예를 들어, 티오펜-2-일 및 티오펜-3-일이다.
R22가 C5-10 아릴기인 경우, 이는 C8-10 아릴, 예를 들어 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐기이다. 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐기는 어느 이용가능한 고리 위치를 통해 PBD 코어에 결합할 수 있다. 예를 들어, 퀴놀리닐은 퀴놀린-2-일, 퀴놀린-3-일, 퀴놀린-4-일, 퀴놀린-5-일, 퀴놀린-6-일, 퀴놀린-7-일 및 퀴놀린-8-일일 수 있다. 물론, 퀴놀린-3-일 및 퀴놀린-6-일이 바람직할 수 있다. 이소퀴놀리닐은 이소퀴놀린-1-일, 이소퀴놀린-3-일, 이소퀴놀린-4-일, 이소퀴놀린-5-일, 이소퀴놀린-6-일, 이소퀴놀린-7-일 및 이소퀴놀린-8-일일 수 있다. 물론, 이소퀴놀린-3-일 및 이소퀴놀린-6-일이 바람직할 수 있다.
R22가 C5-10 아릴기인 경우, 이는 임의의 수의 치환기를 포함할 수 있다. 이는 바람직하게는 1 내지 3개의 치환기를 포함하며, 1 및 2 개가 더욱 바람직하고, 단일 치환된 기가 가장 바람직하다. 치환기는 임의의 위치에 있을 수 있다.
R22가 C5-7 아릴기인 경우, 단일 치환기는 바람직하게는 화합물의 나머지에 대한 결합에 인접하지 않는, 즉, 바람직하게는 화합물의 나머지에 대한 결합에 β 또는 γ인 고리 원자 상에 있다. 따라서, C5-7 아릴기가 페닐인 경우, 상기 치환기는 바람직하게는 메타- 또는 파라-위치, 더욱 바람직하게는 파라-위치에 있다.
R22가 C8-10 아릴기, 예를 들어 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐인 경우, 이는 퀴놀린 또는 이소퀴놀린 고리의 임의의 위치에 있는 임의의 수의 치환기를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 하나, 둘 또는 세 개의 치환기를 포함하며, 이들은 가까운 고리 및 먼 고리 또는 이들 모두 (하나 이상의 치환기가 있는 경우) 중 어느 것일 수 있다.
R 22 가 C 5-10 아릴기인 경우, R 22 치환기
R22가 C5-10 아릴기일 때 R22 상의 치환기가 할로인 경우, 이는 바람직하게는 F 또는 Cl, 더욱 바람직하게는 Cl이다.
R22가 C5-10 아릴기일 때 R22 상의 치환기가 에테르인 경우, 이는 일부 구현예에서 알콕시기, 예를 들어, C1-7 알콕시기 (예를 들어, 메톡시, 에톡시)일 수 있거나, 또는 일부 구현예에서는 C5-7 아릴옥시기 (예를 들어, 페녹시, 피리딜옥시, 푸라닐옥시)일 수 있다. 알콕시기는 자체로 예를 들어 아미노기 (예를 들어, 디메틸아미노)에 의해 추가로 치환될 수 있다.
R22가 C5-10 아릴기일 때 R22 상의 치환기가 C1-7 알킬인 경우, 이는 바람직하게는 C1-4 알킬기 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로프릴, 부틸)일 수 있다.
R22가 C5-10 아릴기일 때 R22 상의 치환기가 C3-7 헤테로사이클릴인 경우, 일부 구현예에서 C6 질소 함유 헤테로사이클릴기, 예를 들어, 모르폴리노, 티오모르폴리노, 피페리디닐, 피페라지닐일 수 있다. 이들 기는 질소 원자를 통해 PBD 모이어티의 나머지에 결합될 수 있다. 이들 기는 예를 들어, C1-4 알킬기에 의해 추가로 치환될 수 있다. C6 질소 함유 헤테로사이클릴기가 피페라지닐인 경우, 상기 추가의 치환기 제2 질소 고리 원자 상에 있을 수 있다.
R22가 C5-10 아릴기일 때 R22 상의 치환기가 비스-옥시-C1-3 알킬렌인 경우, 이것은 바람직하게는 비스-옥시-메틸렌 또는 비스-옥시-에틸렌이다.
R22가 C5-10 아릴기일 때 R22 상의 치환기가 에스테르인 경우, 이것은 바람직하게는 메틸 에스테르 또는 에틸 에스테르이다.
R22가 C5-10 아릴기인 경우 특히 바람직한 치환기는 메톡시, 에톡시, 플루오로, 클로로, 시아노, 비스-옥시-메틸렌, 메틸-피페라지닐, 모르폴리노 및 메틸-티오페닐을 포함한다. R22에 대한 특히 바람직한 다른 치환기는 디메틸아미노프로필옥시 및 카르복시이다.
R22가 C5-10 아릴기인 경우 특히 바람직한 치환된 R22 기는, 4-메톡시-페닐, 3-메톡시페닐, 4-에톡시-페닐, 3-에톡시-페닐, 4-플루오로-페닐, 4-클로로-페닐, 3,4-비스옥시메틸렌-페닐, 4-메틸티오페닐, 4-시아노페닐, 4-페녹시페닐, 퀴놀린-3-일 및 퀴놀린-6-일, 이소퀴놀린-3-일 및 이소퀴놀린-6-일, 2-티에닐, 2-푸라닐, 메톡시나프틸, 및 나프틸을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 다른 가능한 치환된 R22 기는 4-니트로페닐이다. 특정 관심 R22 기는 4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐 및 3,4-비스옥시메틸렌-페닐를 포함한다.
R22가 C1-5 포화 지방족 알킬인 경우, 이는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 또는 펜틸일 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 메틸, 에틸 또는 프로필 (n-펜틸 또는 이소프로필)일 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 메틸일 수 있다. 다른 구현예에서, 이는 부틸 또는 펜틸일 수 있으며, 선형 또는 분기형일 수 있다.
R22가 C3-6 포화 사이클로알킬인 경우, 이는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실일 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 사이클로프로필일 수 있다.
R22가
Figure 112020012559806-pct00049
인 경우, R31, R32 및 R33은 각각 H, C1-3 포화 알킬, C2-3 알케닐, C2-3 알키닐 및 사이클로프로필로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 R22 기 내의 탄소 원자의 총 수는 5개 이하이다. 일부 구현예에서, R22 내의 탄소 원자의 총 수는 4개 이하 또는 3개 이하이다.
일부 구현예에서, R31, R32 및 R33 중 하나는 H이고, 다른 2개의 기는 H, C1-3 포화 알킬, C2-3 알케닐, C2-3 알키닐 및 사이클로프로필로부터 선택된다.
다른 구현예에서, R31, R32 및 R33 중 둘은 H이고, 다른 하나의 기는 H, C1-3 포화 알킬, C2-3 알케닐, C2-3 알키닐 및 사이클로프로필로부터 선택된다.
일부 구현예에서, H가 아닌 기는 메틸 및 에틸로부터 선택된다. 일부 구현예에서, H가 아닌 기는 메틸이다.
일부 구현예에서, R31은 H이다.
일부 구현예에서, R32는 H이다.
일부 구현예에서, R33은 H이다.
일부 구현예에서, R31 및 R32는 H이다.
일부 구현예에서, R31 및 R33은 H이다.
일부 구현예에서, R32 및 R33은 H이다.
특정 관심 대상의 R22 기는
Figure 112020012559806-pct00050
이고:
R22가
Figure 112020012559806-pct00051
인 경우, R25a 및 R25b 중 하나는 H이고, 다른 하나는 페닐로부터 선택되며, 이때 페닐은 할로, 메틸, 메톡시; 피리딜; 및 티오페닐로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환된다. 일부 구현예에서, H가 아닌 기는 선택적으로 치환된 페닐이다. 페닐 선택적인 치환기가 할로인 경우, 이는 바람직하게는 플루오로이다. 일부 구현예에서, 페닐기는 비치환된다.
R22가
Figure 112020012559806-pct00052
인 경우, R24는 H; C1-3 포화 알킬; C2-3 알케닐; C2-3 알키닐; 사이클로프로필; 페닐로부터 선택되고, 이때 페닐은 할로 메틸, 메톡시; 피리딜; 및 티오페닐로부터 선택된 기에 의해 선택적으로 치환된다. 페닐 선택적인 치환기가 할로인 경우, 이는 바람직하게는 플루오로이다. 일부 구현예에서, 페닐기는 비치환된다.
일부 구현예에서, R24는 H, 메틸, 에틸, 에테닐 및 에티닐로부터 선택된다. 일부 구현예에서, R24는 H 및 메틸로부터 선택된다.
C2'와 C3' 사이의 단일 결합이 있는 경우,
R22는 H 또는
Figure 112020012559806-pct00053
이고, 여기에서 R26a 및 R26b는 H, F, C1-4 포화 알킬, C2-3 알케닐로부터 독립적으로 선택되며, 이때 알킬 및 알케닐기는 C1-4 알킬 아미도 및 C1-4 알킬 에스테르로부터 선택된 군에 의해 선택적으로 치환되거나; 또는 R26a 및 R26b 중 하나가 H인 경우, 다른 하나는 니트릴 및 C1-4 알킬 에스테르로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R22는 H이다.
일부 구현예에서, R22는
Figure 112020012559806-pct00054
이다.
일부 구현예에서, R26a 및 R26b 모두가 H인 것이 바람직하다.
다른 구현예에서, R26a 및 R26b 모두가 메틸인 것이 바람직하다.
추가 구현예에서, R26a 및 R26b 중 하나가 H이고, 다른 하나가 C1-4 포화 알킬, C2-3 알케닐로부터 선택되며, 이때 알킬 및 알케닐기는 선택적으로 치환된 것이 바람직하다. 이들 추가 구현예에서, H가 아닌 기는 메틸 및 에틸로부터 선택되는 것이 더욱 바람직할 수 있다.
R 11
일부 구현예에서, R11a는 OH이다.
일부 구현예에서, R11a는 ORA이고, 여기에서 RA는 C1-4 알킬이다. 일부 구현예에서, RA는 메틸이다.
본 발명의 제1 측면의 일부 구현예는, 화학식 Ia-1, Ia-2 또는 Ia-3의 화합물이다:
Figure 112020012559806-pct00055
Figure 112020012559806-pct00056
Figure 112020012559806-pct00057
여기에서, R2a 및 R22a는 동일하고, 이하의 것들로부터 선택되고:
Figure 112020012559806-pct00058
Figure 112020012559806-pct00059
및
Figure 112020012559806-pct00060
R1a는 메틸 및 벤질로부터 선택되고;
RLL1, RLL2 및 R11a는 상기에서 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 구현예에서, R2 및 R22는 모두 3개 이하의 탄소 원자를 포함한다.
따라서, C2와 C3 사이에 존재하는 이중 결합이 있는 이들 구현예에서, R2는 이하의 것들로부터 선택된다.
(i) 메틸;
(ii) 에틸;
(iii) 프로필;
(iv) 사이클로프로필;
Figure 112020012559806-pct00061
Figure 112020012559806-pct00062
및
Figure 112020012559806-pct00063
따라서, C2와 C3 사이에 존재하는 이중 결합이 없는 이들 구현예에서, R2는 이하의 것들로부터 선택된다:
Figure 112020012559806-pct00064
따라서, C2'와 C3' 사이에 존재하는 이중 결합이 있는 이들 구현예에서, R22는 이하의 것들로부터 선택된다:
(i) 메틸;
(ii) 에틸;
(iii) 프로필;
(iv) 사이클로프로필;
Figure 112020012559806-pct00065
Figure 112020012559806-pct00066
및
Figure 112020012559806-pct00067
.
따라서, C2'와 C3' 사이에 존재하는 이중 결합이 없는 이들 구현예에서, R22는 이하의 것들로부터 선택된다:
Figure 112020012559806-pct00068
일부 구현예에서, R2 및 R22 모두는 2개 이하의 탄소 원자를 포함한다.
따라서 C2와 C3 사이에 존재하는 이중 결합이 있는 이들 구현예에서, R2는 이하의 것들로부터 선택된다:
(i) 메틸;
(ii) 에틸; 및
Figure 112020012559806-pct00069
.
따라서, C2와 C3 사이에 존재하는 이중 결합이 없는 이들 구현예에서, R2는 이하의 것들로부터 선택될 수 있다.:
Figure 112020012559806-pct00070
따라서, C2'와 C3' 사이에 존재하는 이중 결합이 있는 이들 구현예에서, R22는 이하의 것들로부터 선택될 수 있다:
(i) 메틸;
(ii) 에틸; 및
Figure 112020012559806-pct00071
.
따라서, C2'와 C3' 사이에 존재하는 이중 결합이 없는 이들 구현예에서, R22는 이하의 것들로부터 선택될 수 있다:
Figure 112020012559806-pct00072
추가 구현예에서, R2 및 R22는 모두 1개 이하의 탄소 원자를 포함한다.
따라서, C2와 C3 사이에 존재하는 이중 결합이 있는 이들 구현예에서, R2는 메틸일 수 있다. 따라서, C2와 C3 사이에 존재하는 이중 결합이 없는 경우, R2는 이하의 것들로부터 선택될 수 있다:
(i) H; 및
(ii)
Figure 112020012559806-pct00073
.
따라서, C2'와 C3' 사이에 존재하는 이중 결합이 있는 이들 구현예에서, R22는 메틸일 수 있다. 따라서, C2'와 C3' 사이에 존재하는 이중 결합이 없는 이들 구현예에서, R22는 이하의 것들로부터 선택될 수 있다:
(i) H; 및
(ii)
Figure 112020012559806-pct00074
.
이론에 구속되지 않고, PBD 이량체의 C2 위치에서의 치환기가 작은 경우, 이들 약물 링커 내에 글루쿠로니드 캡핑 단위를 사용하는 것이 특히 유리하다고 여겨지는데, 이는 약물 링커의 친수성을 상당히 증가시켜 약물 링커가 리간드 단위에 더욱 용이하게 컨쥬게이트화되게 하기 때문이다.
이들 구현예 및 선호 사항은 또한 본 발명의 제2 측면에도 적용되게 하기 때문이다.
링커 ( R L /R LL )
일부 구현예에서, RLL1 및 RLL2는 화학식 IIIa'를 갖는다.
일부 구현예에서, RL1 및 RL2는 화학식 IIIa를 갖는다.
G L
GL은 이하의 것들로부터 선택될 수 있다:
Figure 112020012559806-pct00075
Figure 112020012559806-pct00076
여기에서, Ar은 C5-6 아릴렌기, 예를 들어, 페닐렌을 나타내고, X는 C1-4 알킬을 나타낸다.
일부 구현예에서, GL은 GL1-1 및 GL1-2로부터 선택된다. 일부 구현예에서, GL은 GL1-1이다.
G LL
GLL은 이하의 것들로부터 선택될 수 있다:
Figure 112020012559806-pct00077
여기에서, Ar은 C5-6 아릴렌기, 예를 들어, 페닐렌을 나타내고, X는 C1-4 알킬을 나타낸다.
일부 구현예에서, GLL은 GLL1 -1 및 GLL1 -2로부터 선택된다. 일부 구현예에서, GLL은 GLL1-1이다.
X
X는
Figure 112020012559806-pct00078
이다:
여기에서, a = 0 내지 5, b = 0 내지 16, c = 0 또는 1, d = 0 내지 5.
a는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5일 수 있다. 일부 구현예에서, a는 0 내지 3이다. 일부 구현예에서, a는 0 또는 1이다. 추가 구현예에서, a는 0이다.
b는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16일 수 있다. 일부 구현예에서, b는 0 내지 12이다. 일부 구현예에서, b는 0 내지 8이고, 0, 2, 4 또는 8일 수 있다.
c는 0 또는 1일 수 있다.
d는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5일 수 있다. 일부 구현예에서, d는 0 내지 3이다. 일부 구현예에서, d는 1 또는 2이다. 추가 구현예에서, d는 2이다.
X의 일부 구현예에서, a는 0이고, c는 1이고, d는 2이고, b는 0 내지 8일 수 있다. 일부 구현예에서, b는 0, 4 또는 8이다.
Q X
하나의 구현예에서, QX는 아미노산 잔기이다. 아미노산은 천연 아미노산 또는 비-천연 아미노산일 수 있다.
하나의 구현예에서, QX는 Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg, 및 Trp로부터 선택되며, 여기에서 Cit은 시트룰린이다.
하나의 구현예에서, QX는 디펩티드 잔기를 포함한다. 디펩티드 내의 아미노산은 천연 아미노산과 비-천연 아미노산의 어느 조합일 수 있다. 일부 구현예에서, 디펩티드는 천연 아미노산을 포함한다. 링커가 카텝신 불안정 링커인 경우, 디펩티드는 카텝신-매개 절단을 위한 작용 부위이다. 디펩티드는 이후 카텝신에 대한 인식 부위이다.
하나의 구현예에서, QX는 이하의 것들로부터 선택되는데:
CO-Phe-Lys-NH,
CO-Val-Ala-NH,
CO-Val-Lys-NH,
CO-Ala-Lys-NH,
CO-Val-Cit-NH,
CO-Phe-Cit-NH,
CO-Leu-Cit-NH,
CO-Ile-Cit-NH,
CO-Phe-Arg-NH, 및
CO-Trp-Cit-NH;
여기에서, Cit는 시트룰린이다.
바람직하게는, QX는 이하의 것들로부터 선택된다:
CO-Phe-Lys-NH,
CO-Val-Ala-NH,
CO-Val-Lys-NH,
CO-Ala-Lys-NH,
CO-Val-Cit-NH.
가장 바람직하게는, QX는 CO-Phe-Lys-NH, CO-Val-Cit-NH 및 CO-Val-Ala-NH로부터 선택된다.
다른 관심 디펩티드 조합은 이하의 것들을 포함한다:
CO-Gly-Gly-NH,
CO-Pro-Pro-NH, 및
CO-Val-Glu-NH.
본원에 참고로 포함된 문헌 [Dubowchik 등, Bioconjugate Chemistry, 2002, 13, 855-869]에 기술된 것들을 포함하는, 다른 디펩티드 조합이 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, QX는 트리펩티드 잔기이다. 트리펩티드 내의 아미노산은 천연 아미노산과 비-천연 아미노산의 어느 조합일 수 있다. 일부 구현예에서, 트리펩티드는 천연 아미노산을 포함한다. 링커가 카텝신 불안정 링커인 경우, 트리펩티드는 카텝신-매개 절단을 위한 작용 부위이다. 트리펩티드는 이후 카텝신에 대한 인식 부위이다.
하나의 구현예에서, 아미노산 측쇄는 적절한 경우 화학적으로 보호된다. 측쇄 보호기는 이하에서 논의될 기일 수 있다. 보호된 아미노산 서열은 효소에 의해 절단가능하다. 예를 들어, Boc 측쇄-보호된 Lys 잔기를 포함하는 디펩티드 서열은 카텝신에 의해 절단가능하다.
아미노산 측쇄를 위한 보호기는 당업계에 잘 알려져 있고, Novabiochem Catalog에 기재되며, 상기에서 기술되었다.
일부 구현예에서, RLL1 및 RLL2는 화학식 IIIb'를 갖는다.
일부 구현예에서, RL1 및 RL2는 화학식 IIIb를 갖는다.
RSL1 및 RSL2는 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 또는 사이클로부틸렌기를 형성한다.
일부 구현예에서, RSL1 및 RSL2는 모두 H이다.
일부 구현예에서, RSL1은 H이고, RSL2는 메틸이다.
일부 구현예에서, RSL1 및 RSL2는 모두 메틸이다.
일부 구현예에서, RSL1 및 RL2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 기를 형성한다.
일부 구현예에서, RSL1 및 RSL2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로부틸렌기를 형성한다.
IIIb 기에서는, 일부 구현예에서, e는 0이다. 다른 구현예에서, e는 1이고, 니트로기는 고리의 이용가능한 어느 위치에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 오쏘 위치에 있다. 다른 추가 구현예에서, 이는 파라 위치에 있다.
일부 구현에에서, RL1 및 RL2는 동일한 것이다.
일부 구현예에서, RLL1 및 RLL2는 동일한 것이다.
하나의 특정 구현예에서, 본 발명의 제1 측면은 화학식 Id의 컨쥬게이트를 포함하는데:
Figure 112020113476806-pct00216
여기에서, m은 2 내지 8 정수이다.
본 발명의 제2 측면의 하나의 특정 구현예에서, 약물 링커 (DL)는 화학식 (Id')을 갖는데:
Figure 112020113476806-pct00217
여기에서, m은 2 내지 8 정수이다.
일부 구현에에서, RL1 및 RL2는 상이하다.
일부 구현예에서, RLL1 및 RLL2는 상이하다.
특히, 결합기가 상이한 구현예에서, 차이는 단지 G 기에서일 수 있어서, 결합기의 나머지는 (절단 유발자가 동일한 것이도록) 동일한 것이다.
본 발명의 일부 구현예에서, C11 치환기는 이웃하는 기에 대해 이하의 입체적 배열을 할 수 있다:
Figure 112020012559806-pct00081
다른 구현예에서, C11 치환기는 이웃하는 기에 대해 이하의 입체적 배열을 할 수 있다:
Figure 112020012559806-pct00082
특정 관심 화합물은 실시예의 것들을 포함한다.
실시예
플래쉬 크로마토그래피는 가압 하에서 실리카겔을 사용하여 수행하였다. UV 활성 물질의 실질적인 용출이 관찰될 때마다 구배를 수동으로 유지시켰다. 알루미늄 플레이트 상의 형광 표지를 갖는, Merck Kieselgel 60 F254 실리카겔을 사용하는 박층 크로마토그래피 (TLC)를 사용하여, 분획을 순도에 대해 체크하였다. TLC의 시각화는 달리 기재된 바 없는 경우, UV 광 또는 요오드 증기로 달성하였다. 추출 및 크로마토그래피 용매를 VWR, U.K.로부터 구입하여, 추가의 정제 없이 사용하였다. 모든 정밀 화학물질은 달리 기재된 바 없는 경우, Sigma-Aldrich 사로부터 구입하였다. 페길화 시약은 Stratech UK를 통해 Quanta biodesign 사로부터 또는 Thermo Fisher를 통해 Pierce Scientific 사로부터 입수하였다.
1H 및 13C NMR 스펙트럼은 Bruker Avance® 400 스펙트로미터로 수득하였다. 커플링 상수는 헤르츠 (Hz)로 제시되었다. 화학적 이동은 테트라메틸실란으로부터 하류에서 백만분율(ppm)로 기록되었다. 스핀 다중성은 s (단일선), bs (넓은 단일선), d (이중선), t (삼중선), 및 m (다중선)으로 기재되었다.
(반응 모니터링 및 순도 결정을 위한) 분석 LC/MS 조건은 이하와 같다: 양성 모드 전기분무 질량 스펙트로스코피는 Shimadzu Nexera®/Prominence® LCMS-2020를 사용하여 수행하였다. 사용된 이동상은 용매 A (0.1% 포름산을 포함하는 H2O) 및 용매 B (0.1% 포름산을 포함하는 CH3CN)이다. 통상의 3-분 전개를 위한 구배: 초기 조성물은 5% B에서 25초 동안 유지한 후, 1분 35초의 시기에 걸쳐 5% B에서 100% B로 증가되었다. 조성물은 100% B에서 50초 동안 유지한 후, 5초 내에 5% B로 돌아오고, 거기에서 5초 동안 유지되었다. 구배 전개의 총 지속시간은 3.0분이었다. 15-분 전개를 위한 구배: 초기 조성물 5% B가 1.25분에 걸쳐 유지된 후, 5% B로부터 100% B로 8.75분 시기에 걸쳐 증가되었다. 조성물은 100% B에서 2.5분간 유지된 후, 30초 내에 5% B로 돌아오고, 거기에서 2분 동안 유지되었다. 구배 전개의 총 지속시간은 15.0분이다. 유속은 0.8㎖/분 (3-분 전개시) 및 0.5㎖/분 (15-분 전개시)이다. 254nm에서 탐지하였다. 컬럼: Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 VanGuard 예비-컬럼, 130A, 1.7㎛, 2.1mm×5mm이 장착된 Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 1.7㎛ 2.1×50mm (50℃에서)(통상의 3-분 전개); 및 Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 VanGuard 예비-컬럼 (130A, 1.7㎛, 2.1mm×5mm)이 장착된 Waters Acquity UPLC CSH C18 (1.7μ, 2.1×100mm) (15-분 전개).
분취형 HPLC 조건은 이하와 같다: 역상의 매우 신속한 고성능 액체 크로마토그래피(UFLC)는 Phenomenex® Gemini NX 5μ C18 컬럼 (50℃에서) 150×21.2 mm을 사용하는 Shimazdzu Prominence® 기계를 사용하여 수행되었다. 사용된 용출제는 용매 A (0.05% 포름산을 포함하는 H2O) 및 용매 B (0.05% 포름산을 포함하는 CH3CN)이다. 모든 UFLC 실험은 이하의 구배 조건에서 수행되었다: 초기 조성물 13%, 상기 조성물은 그 다음 원하는 분리를 유효화시키기에 적당한 구배에서 총 17 분에 걸쳐 100% B로 증가되었고, 그 다음, 100% B에서 1분간 유지된 후, 0.1분 내에 13% B로 돌아오고, 거기에서 1.9분 동안 유지되었다. 구배 전개의 총 지속시간은 20.0분이었다. 유속은 20.0㎖/분이었고, 254 및 280 nm에서 탐지되었다.
실시예 1
Figure 112020012559806-pct00083
Figure 112020012559806-pct00084
Figure 112020012559806-pct00085
(a) (S)-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-메틸-2,3-디히드로-1H-피롤-1-일)(4-히드록시-5-메톡시-2-니트로페닐)메타논 ( 2 )
리튬 아세테이트 2수화물 (3.52 g, 34.5 mmol, 1.0 eq.)을 DMF/H2O (300 mL/4 mL)내 TIPS 에테르 (1) (19.96 g, 34.5 mmol, 1.0 eq.)의 교반된 용액에 첨가하였다. 수득된 적색 용액을 실온에서 3.5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (600 mL)로 희석시켰고 1M 시트르산 용액 (2 x 250 mL), H2O (2 x 250 mL), 포화 염수 (300 mL)로 세척하였고 건조시켰다 (MgSO4). 용매를 감압 하에서 증발시켜 생성물을 황색 고체 (14.57 g, 100%)로서 제공하였다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다. 분석 데이터: LC/MS, RT 1.74 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 423 ([M + H]+., 100); 445 ([M + Na])+., 75).
(b) ((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(5-메톡시-2-니트로-4,1-페닐렌))비스(((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-메틸-2,3-디히드로-1H-피롤-1-일)메타논) ( 3 )
탄산칼륨 (5.03 g, 36.44 mmol, 1.1 eq.)을 DMF (250 mL)내 1,5 디아이오도펜탄 (21.46 g, 9.86 mL, 66.26 mmol, 2.0 eq.) 및 페놀 (2) (14 g, 33.13 mmol, 1.0 eq.)의 교반된 용액에 첨가하였다. 용액을 70℃에서 3.5시간 동안 가열시켰다. 용액을 얼음/물의 혼합물 (800 mL) 속에 부었고 EtOAc (4 x 500 mL)로 추출시켰다. 조합된 추출물을 H2O (2 x 250 mL), 포화 염수 (400 mL)로 세척하였고, 건조시켰고 (MgSO4) 감압 하에서 증발시켜 갈색 오일을 제공하였다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 [n-헵탄/EtOAc 40% 내지 80% 10% 증분]으로 정제는 생성물을 황색 발포체 (12.7 g, 85%)로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, RT 2.16 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 913 ([M + H]+., 100); 935 ([M + Na])+., 100).
(c) ((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(2-아미노-5-메톡시-4,1-페닐렌))비스(((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-메틸-2,3-디히드로-1H-피롤-1-일)메타논) ( 4 )
아연 더스트 (19.9g, 304 mmol, 40 eq.)을 1M HCl (100mL)로 처리하였고, 10분 동안 실온에서 교반시켰다. 이후, 혼합물을 10분 동안 초음파 처리하고, 활성화 아연을 진공 여과로 수집한 후, 1M HCl (50mL), H2O (pH 6 내지 7로), MeOH로 세척하였고, 필터 패드 상에서 진공 건조시켰다. 활성화 아연을 실온에서 EtOH/H2O/EtOAc (60 mL/4 mL/60 mL)내 비스 니트로 화합물 (3) (6.94g, 7.6 mmol, 1.0eq.)의 격렬하게 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 MeOH (76mL)내 5% v/v HCO2H의 용액으로 적가식으로 처리하였다. 녹색에서 광택이 나는 회색으로의 색상 변화, 및 42℃로의 발열을 관찰하였다. 일단 발열이 30℃로 내려가면 LC/MS는 반응이 완료되지 않은 것을 나타냈다. MeOH (20mL)내 5% v/v HCO2H의 추가 부분을 첨가하였고 추가 발열을 관찰하였다 (34℃). 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 그 지점에서 LC/MS에 의한 분석으로 원하는 생성물로 완전히 변환되었음을 밝혔다. 혼합물을 celite®을 통해 여과시켰고, 패드는 EtOAc로 세척하였다. 여과물을 포화 수성 NaHCO3 (2×300mL), 물 (300mL), 포화 염수 (300mL)로 세척하였고, 건조시켰고 (MgSO4), 여과시켰고 진공 증발시켜 황색 발포체 (6.22g, 96%)로서 비스-아닐린을 제공하였다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다. 분석 데이터: LC/MS, RT 2.12 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 853 ([M + H]+., 15).
(d) 비스(4-(( S )-2-(( S )-2-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) ((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(6-(( S )-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-메틸-2,3-디히드로-1H-피롤-1-카르보닐)-4-메톡시-3,1-페닐렌))디카바메이트 ( 6 )
트리에틸아민 (0.171 g, 235 μL, 1.69 mmol, 4.4 eq.)을 아르곤 대기 하에서 건조 THF 내 트리포스겐 (0.082 g, 0.28 mmol, 0.72 eq.) 및 비스 아닐린 (4) (0.33 g, 0.38 mmol, 1.0 eq.)의 교반된 용액에 흡입기를 통해 첨가하였다. 수득된 현탁액을 40℃로 가열시켰고 5분 후 MeOH에서 LC/MS로 비스 메틸 카르바메이트 (MS (ES+) m/z (상대 강도) 969 ([M + H]+., 80); 992 ([M + Na])+., 100)으로서 샘플화하였다. 디부틸틴 디라우레이트 (0.024 g, 23 μL, 38 μmol, 0.1 eq.) 그 다음 고체 링커 (5) (0.319 g, 0.85 mmol, 2.2 eq.) 및 트리메틸아민 (0.085 g, 118 μL, 0.85 mmol, 2.2 eq.)을 첨가하였고 혼합물을 아르곤 대기 하에서 5시간 동안 교반하면서 40℃에서 가열시켰다. 반응 혼합물을 냉각시켰고, 여과시켰고 THF를 감압 하에서 증발시켰다. 잔류물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 [CHCl3/MeOH 0%, 1%, 1.5%, 2%, 구배 용출]로 정제시켜 생성물을 황색 발포체 (0.42 g, 66%)로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, RT 2.16 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1660 ([M + H]+., 60); 1682 ([M + Na])+., 65).
(e) 비스(4-(( S )-2-(( S )-2-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) ((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(6-(( S )-2-(히드록시메틸)-4-메틸-2,3-디히드로-1H-피롤-1-카르보닐)-4-메톡시-3,1-페닐렌))디카바메이트 ( 7 )
p-톨루엔설폰산 (0.296 g, 1.7 mmol, 2.2 eq.)을 THF내 10% v/v H2O의 비스-tert-부틸디메틸실릴 에테르 (6) (1.26 g, 0.76 mmol, 1.0 eq.)의 교반된 용액에 첨가하였다. 용액을 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (100 mL)로 희석시켰고 포화 NaHCO3 용액 (2 x 100 mL), H2O (100 mL), 포화 염수 (100 mL)로 세척하였고, 건조시켰고 (MgSO4) 감압 하에서 증발시켰다. 잔류물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 [CHCl3/MeOH 0% 내지 5% 1% 증분]으로 정제시켜 생성물을 백색 발포체 (0.896 g, 92%)로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, RT 1.61 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1432 ([M + H]+., 5); 1454 ([M + Na])+., 5).
(f) 비스(4-(( S )-2-(( S )-2-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) 8,8'-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))(11 S ,11a S ,11' S ,11a' S )-비스(11-히드록시-7-메톡시-2-메틸-5-옥소-11,11a-디히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 8 )
데스-마틴 (Dess-Martin) 페리오디난 (0.24 g, 0.57 mmol, 2.0 eq.)을 건조 DCM (20 mL)내 비스-알코올 (7)의 교반된 용액에 첨가하였다. 수득된 백색 현탁액을 실온에서 24시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (100 mL)로 희석시켰고 포화 NaHCO3 용액 (2 x 100 mL), 물 (100 mL), 포화 염수 (100 mL)로 추출시켰고, 건조시켰고 (MgSO4) 감압 하에서 증발시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 [CHCl3/MeOH 0% 내지 3% 0.5% 증분]으로 정제는 생성물을 백색 발포체 (0.28 g, 69%)로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, RT 1.58 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1428 ([M + H]+., 20); 1450 ([M + Na])+., 30).
(g) 비스(4-(( S )-2-(( S )-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) 8,8'-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))(11 S ,11a S ,11' S ,11a' S )-비스(11-히드록시-7-메톡시-2-메틸-5-옥소-11,11a-디히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 9 )
Pd(PPh3)4 (8 mg,7 μmol, 0.04 eq.)을 건조 DCM (10 mL)내 피롤리딘 (31 mg, 36 μL 0.44 mmol, 2.5 eq.) 및 비스-Alloc 유도체 (8) (0.25 g, 0.176 mmol 1.0 eq.)의 교반된 용액에 첨가하였다. 용액을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액 (50 mL)와 DCM (50 mL) 사이 분할시켰다. DCM을 분리시켰고 포화 염수 (100 mL)로 세척하였고, 건조시켰고 (MgSO4) 감압 하에서 증발시켰다. 고체 잔류물을 Et2O (3 x 15 mL)로 분말화/초음파 처리시켰고 진공 하에서 건조시켜 생성물을 백색 고체 (0.207 g, 93%)로서 제공하였다. 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다. 분석 데이터: LC/MS, RT 1.06 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 630 ([M + 2H]+., 100).
(h) 비스(4-((2 S ,5 S )-37-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,35-트리옥소-10,13,16,19,22,25,28,31-옥타옥사-3,6,34-트리아자헵타트리아콘탄아미도)벤질) 8,8'-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))(11 S ,11a S ,11' S ,11a' S )-비스(11-히드록시-7-메톡시-2-메틸-5-옥소-11,11a-디히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 10 )
EDCI.HCl (56 mg, 0.29 mmol, 3 eq.)을 CHCl3 (15 mL)내 MaldPEG®OH (0.128 g, 0.22 mmol, 2.2 eq.) 및 비스-아민 (9) (0.123 g, 98 μmol, 1.0 eq.)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시킨 다음 CHCl3 (50 mL)로 희석시켰고 H2O (100 mL), 포화 염수 (100 mL)로 세척하였고, 건조시켰고 (MgSO4) 감압 하에서 증발시켰다. 분취형 HPLC로 정제 그 다음 동결건조는 생성물을 백색 발포체 (0.047 g, 20%)로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, RT 6.61 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1205 ([M + 2H]+., 55).
실시예 2
Figure 112020012559806-pct00086
비스(4-((2 S ,5 S )-25-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,23-트리옥소-10,13,16,19-테트라옥사-3,6,22-트리아자펜타코산아미도)벤질) 8,8'-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))(11 S ,11a S ,11' S ,11a' S )-비스(11-히드록시-7-메톡시-2-메틸-5-옥소-11,11a-디히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 11 )
DIPEA (30 mg, 42 μL, 0.23 mmol, 3 eq.)을 CHCl3 (10 mL)내 MalPEG4OSu (88 mg, 0.17 mmol, 2.2 eq.) 및 비스-아민 (9) (98 mg, 78 μmol, 1.0 eq.)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 72시간 동안 교반시킨 다음 CHCl3 (50 mL)로 희석시켰고, H2O (100 mL), 포화 염수 (100 mL)로 세척하였고, 건조시켰고 (MgSO4) 감압 하에서 증발시켰다. 분취형 HPLC로 정제 그 다음 동결건조는 생성물을 백색 발포체 (0.043 g, 25%)로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, RT 6.11 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1028 ([M + 2H]+., 80).
실시예 3
Figure 112020012559806-pct00087
비스(4-(( S )-2-(( S )-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) 8,8'-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(11-히드록시-7-메톡시-2-메틸-5-옥소-11,11a-디히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 12 )
EDCI.HCl (50 mg, 0.26 mmol, 3 eq.)을 CHCl3 (10 mL)내 MCOSu (40 mg, 0.19 mmol, 2.2 eq.) 및 비스-아민 (9) (0.109 g, 86.5 μmol, 1.0 eq.)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시킨 다음 CHCl3 (50 mL)로 희석시켰고 H2O (100 mL), 포화 염수 (100 mL)로 세척하였고, 건조시켰고 (MgSO4) 감압 하에서 증발시켰다. 분취형 HPLC로 정제 이어서 동결건조는 생성물을 백색 발포체 (0.045 g, 32%)로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, RT 6.82 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1646 ([M + H]+., 20); 1667 ([M + Na])+., 30).
실시예 4
Figure 112020012559806-pct00088
Figure 112020012559806-pct00089
(a) 비스(4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) ((프로판-1,3-디일비스(옥시))비스(6-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-카르보닐)-4-메톡시-3,1-페닐렌))디카르바메이트 ( 14 )
트리포스겐 (472 mg, 1.59 mmol, 0.72 eq)을 디클로로메탄 (3.6 mL)내 트리에틸아민 (1.35 mL, 9.69 mmol, 4.38 eq) 및 13 (1.77 g, 2.21 mmol)의 혼합물에 일 부분으로 첨가하였다. 10 분후, 5 (1.83 g, 4.85 mmol, 2.19 eq)을 일 부분으로 미세 분말로서 첨가하였고, 이어서 트리에틸아민 (0.68 mL, 4.9 mmol, 2.2 eq) 및 디부틸틴 디라우레이트 (132 μL, 0.221 mmol, 0.1 eq)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 37℃에서 4시간 동안 교반하게 되고, 이어서 실온에서 밤새 교반시켰다. 유기상을 물로 세척하였고 여과 카트리지에서 디캔팅시켰다. DCM은 증발로 제거하였고, 잔류물을 실리카겔에 건식 부하하였고, 이어서 50g 울트라 바이오테이지 카트리지 (구배 DCM/DCM:MeOH 90:10, 5% 최대 32%, 32%에서 용출)을 가진 크로마토그래피로 처리하였다. 순수한 분획을 조합시켜 생성물 14 (2.35 g, 1.46 mmol, 66.2% 수율)을 수득하였다. 분석 데이터: LC/MS, 3 분 친유성 방법, RT 2.24 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1608.9 ([M + H]+., 100);
(b) 비스(4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) ((프로판-1,3-디일비스(옥시))비스(6-((S)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카르보닐)-4-메톡시-3,1-페닐렌))디카르바메이트 ( 15 )
파라톨루엔설폰산 수화물 (277 mg, 1.46 mmol, 1 eq)을 일 부분으로 테트라히드로푸란 (53.0 mL)내 14 (2.34 g, 1.46 mmol) 및 물 (5.00 mL)의 혼합물에 0 ℃ (얼음/물 중탕)에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 LCMS로 모니터링 경우 완료까지 7시간 동안 20℃에서 교반시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이 분할시켰고, NaHCO3, 그 다음 염수로 세척하였다. 유기물을 황산마그네슘으로 건조시켰고 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피 ((50 g 울트라, 소형샘플 상에 건식 부하됨, DCM 대 DCM:MeOH 90:10, 구배 20% 내지 64%, 64% 부근 용출로 정제시켰다. 순수한 분획을 조합하였고 진공 하에서 농축시켜 생성물 15 (1.60 g, 1.16 mmol, 79.7% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, 3 분 친유성 방법, RT 1.50 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1380.9 ([M + H]+., 100);
(c) 비스(4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) 8,8'-(프로판-1,3-디일비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 16 )
스탈 템포 (Stahl Tempo) 0.2M 용액 (2.10 mL, 0.420 mmol, 0.44 eq) 이어서 테트라키스아세토니트릴 구리(I) 트리플레이트 (160 mg, 0.425 mmol, 0.44 eq)을 500 mL 플라스크에서 DMF (4.00 mL)내 15 (1.32 g, 0.957 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 신속하게 교반시켰고 40 ℃에서 5시간 동안, 그 다음 35 ℃에서 18시간 동안 고무 풍선 하에서 가열시켰고, 이 지점에서 완료를 LCMS로 관찰하였다. 용매를 증발로 제거하였다. 미량의 DMF를 부타논으로 제2 증발, 이어서 고진공으로 제거하였다. 잔류물을 아세톤으로 소형샘플 (10g)상에 건식 부하하였고, 이어서 바이오테이지 이솔레라 시스템 상의 50g 울트라 컬럼으로 크로마토그래피 처리하였다. DCM/DCM내 10% MeOH가 있는 구배, 8 CV로 20% 내지 최대 63%. 용출 및 60% 부근 유지. 불순 전방 분획을 25g 컬럼 상의 동일 시스템을 사용하여 재정화시켰다. 모든 순수한 분획을 풀링하였다. 잔류물을 아세톤에서 용해시켰다. 헵탄을 첨가하여 백색 생성물을 침전시켰다. 휘발물을 증발시켜 고진공후 백색 분말로서 생성물 16을 남겨두었다. (892 mg, 0.648 mmol, 67.8% 수율) 분석 데이터: LC/MS, 3 분 친유성 방법, RT 1.42 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1376.6 ([M + H]+., 100);
(d) 비스(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) 8,8'-(프로판-1,3-디일비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 17 )
테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (10.0 mg, 0.00865 mmol, 0.034 eq)을 디클로로메탄 (7.50 mL)내 피롤리딘 (65.0 μL, 0.780 mmol, 3.07 eq) 및 16 (350 mg, 0.254 mmol) 그리고 메탄올 (0.5 mL)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 실온에서 1시간 30 분 동안 교반시켰고 LCMS로 완료를 알아내었다
물내 염화암모늄 (30 mL, 34.3 mmol, 6 질량%)를 첨가하였고 혼합물을 격렬히 교반시켰다. 혼합물을 그 다음 바이오테이지상 분리 카트리지에서 디캔팅시켰다. DCM 층을 감압 하에서 증발 건조시켰다. 잔류물을 클로로포름 (20 mL)에 용해시켰고 용매를 35℃에서 진공 하에 증발로 제거하였다. 이 사이클을 2회 반복하였고, 이어서 고진공 (3 mbar) 하에 건조시켜 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용되었던 백색 고체로서 미정제 생성물 17 (307 mg, 0.254 mmol, 100%)를 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, 3 분 친유성 방법, 2 피크, RT 0.22 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 604.9 ([M + 2H]2+., 100); 1208.2 ([M + H]+., 10);
(e) 비스(4-((2S,5S)-37-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,35-트리옥소-10,13,16,19,22,25,28,31-옥타옥사-3,6,34-트리아자헵타트리아콘탄아미도)벤질) 8,8'-(프로판-1,3-디일비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 18 )
클로로포름 (10.00 mL) 및 메탄올 (0.4 mL)를 미정제 17 (307 mg, 0.254 mmol)에 첨가하였고 이어서 말-아미도-peg8-산 (339 mg, 0.561 mmol, 2.2 eq) 및 EDCI (107 mg, 0.558 mmol, 2.19 eq)을 첨가하였다. LCMS로 완료를 관찰한 경우 반응을 실온에서 45 분 동안 진행시켰다. 물내 염화암모늄 (30 mL, 6 질량%)를 첨가하였고 혼합물을 격렬히 교반시켰다. 혼합물을 바이오테이지상 분리 카트리지에서 디캔팅시켰다. DCM 층을 진공 하에서 증발 건조시켰다.
휘발물을 회전증발로 제거하였고 미정제 잔류물을 크로마토그래피 (50g 울트라, 바이오테이지, 10CV로 DCM/DCM내 16% MeOH의 구배 30/70 내지 100/0; MeOH의 10% 초과에서 용출)로 정제시켰다. 모든 분획을 TLC (DCM내 10% MeOH)로 분석하였다. 순수한 분획을 풀링하였다. 용매를 증발로 제거하여 18 (200 mg)을 제공하였다. LCMS 분석은 미량의 말-peg8-산을 보여주었고, 상기 물질을 분취형 HPLC로 추가 정제하였고, 냉동-건조시켰고, 디클로로메탄에서 분취하였고, 고 진공 하에서 건조시켜 18을 백색 고체로서 제공하였다. 순도는 99.45%이었다. (B, 110 mg, 0.0467 mmol, 18.3% 수율). 분석 데이터: LC/MS, 15 분 방법, RT 5.90 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1179.5 ([M + 2H]2+., 100); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.92 (s, 2H), 8.16 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.99 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 7.86 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.55 (s, 4H), 7.18 (s, 4H), 7.07 (s, 2H), 7.00 (s, 4H), 6.79 (s, 2H), 6.50 (s, 2H), 5.48 (s, 2H), 5.23 - 4.77 (m, 4H), 4.39 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 4.22 (dd, J = 8.7, 6.6 Hz, 2H), 4.10 (s, 4H), 3.77 (s, 6H), 3.64 - 3.55 (m, 8H), 3.55 - 3.42 (m, 56H), 3.37 (t, J = 5.9 Hz, 6H), 3.28 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 3.15 (q, J = 5.8 Hz, 4H), 2.49 - 2.37 (m, 4H), 2.37 - 2.30 (m, 4H), 2.17 (s, 2H), 2.09 - 1.73 (m, 10H), 1.30 (d, J = 7.0 Hz, 6H), 0.85 (dd, J = 15.3, 6.7 Hz, 12H).
실시예 5
Figure 112020012559806-pct00090
Figure 112020012559806-pct00091
(a) 비스(4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) ((프로판-1,3-디일비스(옥시))비스(6-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-4-메톡시-3,1-페닐렌))디카르바메이트 ( 20 )
트리포스겐 (816 mg, 2.75 mmol, 0.72 eq)을 0℃에서 디클로로메탄 (75 mL)내 트리에틸아민 (2.34 mL, 16.8 mmol, 4.4 eq) 및 19 (3.15 g, 3.82 mmol)의 혼합물에 일 부분으로 첨가하였다. 얼음 중탕을 제거하였고, 15 분후, 알코올 5 (3.17 g, 8.40 mmol, 2.2 eq)을 일 부분으로 미세 분말로서 첨가하였고, 이어서 트리에틸아민 (1.17 mL, 8.39 mmol, 2.2 eq) 및 디부틸틴 디라우레이트 (229 μL, 0.383 mmol, 0.1 eq)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 37 ℃에서 1시간 동안 교반시켰고, 이어서 실온에서 밤새 교반시켰다. 유기상을 DCM (100 mL)로 희석시켰고 물 (200 mL), 포화 염화암모늄 (100 mL), 및 염수 (50 mL)로 세척하였고, 이어서 황산마그네슘으로 건조시켰다. 휘발물을 증발로 감압 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 실리카겔 상에서 건식-부하하였고 340g 울트라 상에서, 에틸 아세테이트 - 아세톤의 구배로, 7CV로 20% 내지 최대 100% 용출시켰다. 대략 30% 아세톤에서 2CV로 신속한 용출은 진공 하에서 건조되었던 순수한 분획을 제공하면서 20 (4.00 g, 2.45 mmol, 100 질량%, 64.2% 수율)을 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, 3 분 친유성 방법, RT 2.34 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1661.1 ([M + H]+., 100);
(b) 비스(4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) ((프로판-1,3-디일비스(옥시))비스(6-((S)-2-(히드록시메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-4-메톡시-3,1-페닐렌))디카르바메이트 ( 21 )
비스-TBS 에테르 20 (4.00 g, 2.45 mmol) 및 파라톨루엔설폰산 수화물 (300 mg, 1.58 mmol)을 2-메틸테트라히드로푸란 (25.0 mL, 249 mmol, 100 질량%), 아세트산 (4.00 mL, 69.8 mmol, 100 질량%) 및 물 (4.00 mL, 222 mmol, 100 질량%)의 혼합물에서 용해시켰다. 혼합물을 40℃에서 가열시켰다. 2시간 후, 완료를 LCMS로 관찰하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (150 mL)와 물 (200 mL) 사이 분할시켰고, 그 다음 포화 NaHCO3 (150 mL), 및 염수 (100 mL)로 세척하였다. 유기물을 황산마그네슘으로 건조시켰고 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피 (100 g 울트라, 10g 소형샘플상에서 건식 부하됨, 에틸 아세테이트/아세톤, 구배 85/15 내지 0/100, 80% 아세톤 부근 용출로 정제시켰다. 순수한 분획을 조합하였고 진공 하에서 농축시켜 순수한 생성물 21 (960 mg, 0.684 mmol, 27.9% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, 3 분 친유성 방법, RT 1.54 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1402.3 ([M + H]+., 100);
(c) 비스(4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) 8,8'-(프로판-1,3-디일비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(11-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 22 )
스탈 템포 0.2M 용액 (1.34 mL, 0.268 mmol, 0.4 eq) 이어서 테트라키스아세토니트릴 구리(I) 트리플레이트 (190 mg, 0.504 mmol, 0.75 eq)을 500 mL 플라스크에서 DCM (13.0 mL) 및 DMF (3.00 mL)내 알코올 21 (940 mg, 0.670 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 신속하게 교반시켰고 37 ℃에서 5시간 (거의 완료), 이어서 -20 ℃에서 96시간 동안 가열시켰고, 이 지점에서 반응 혼합물을 디클로로메탄 (60 mL) 및 물 (60 mL)로 희석시켰고 5 분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 상 분리기에서 디캔팅하였고 DCM 상을 감압 하에서 건조시켰다. MEK (60 mL)를 첨가하였고 잔류 DMF를 감압 하에서 MEK와 공비혼합 (2 회)에 의해 제거하여 미정제 생성물을 고체로서 제공하였다. 이것을 DCM/이소프로판올 80/20 (5 내지 10 mL)에서 재용해시켰고 바이오테이지 소형샘플 (10g)상에 부하하였고, 건조시켰고 100g 울트라 컬럼상에서 부하하였다. 10 CV로 최대 70/30 구배 88/12 DCM/DCM내 20% MeOH. 순수한 분획을 조합하여 순수한 22 (602 mg, 0.430 mmol, 64.2% 수율)을 백색 생성물로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, 3 분 친유성 방법, RT 1.51 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1401.5 ([M + H]+., 100);
(d) 비스(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) 8,8'-(프로판-1,3-디일비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(11-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 23 )
테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (8.2 mg, 0.0071 mmol, 100 질량%)를 DCM (7.50 mL)내 22 (250 mg, 0.179 mmol) 및 피롤리딘 (37.0 μL, 0.444 mmol, 2.49 eq) 그리고 메탄올 (0.5 mL)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 실온에서 1시간 30 분 동안 교반하였고 LCMS로 완료를 알아내었다.
물내 염화암모늄 (30 mL, 6 질량%)를 첨가하였고 혼합물을 격렬히 교반하였다. 혼합물을 그 다음 바이오테이지상 분리 카트리지에서 디캔팅하였다. DCM 층을 진공 하에서 증발 건조시켰다. 잔류물을 클로로포름 (20 mL)에서 용해시켰고 용매를 35℃에 진공 하에서 회전증발로 제거하였다. 이 사이클을 2회 반복하였고, 이어서 고진공 하에 (3 mbar, 회전증발기에서) 건조시켜 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용되었던 백색 고체로서 미정제 생성물 23 (220 mg, 0.179 mmol, 100%)를 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, 3 분 방법, 2 피크, RT 1.15 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 616.9 ([M + 2H]2+., 100); 1232.1 ([M + H]+., 10).
(e) 비스(4-((2S,5S)-37-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,35-트리옥소-10,13,16,19,22,25,28,31-옥타옥사-3,6,34-트리아자헵타트리아콘탄아미도)벤질) 8,8'-(프로판-1,3-디일비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(11-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 24 )
클로로포름 (4.1 mL) 및 메탄올 (0.2 mL)를 23에 첨가하였고, 이어서 말-아미도-peg8-산 (238 mg, 0.394 mmol, 2.2 eq) 및 EDCI (85.0 mg, 0.443 mmol, 2.48 eq)을 첨가하였다. LCMS로 완료를 관찰하였던 경우 반응을 실온에서 45 분 동안 진행시켰다. 반응 혼합물을 농축시켰고 (2 mL), 3g 바이오테이지 실리카 소형샘플상에서 부하하였고 진공 하에서 건조시켰다. 소형샘플을 25g 울트라 바이오테이지 컬럼상에서 부하하였고, 용출하였다 (12CV로 DCM/DCM내 20% MeOH의 구배 10/90 내지 58/42; 20% MeOH의 55% 부근에서 용출). 모든 분획을 TLC (DCM내 10% MeOH)로 분석하였다. 순수한 분획을 풀링하였다. 용매를 증발로 제거하여 24 (250 mg, 0.105 mmol, 58.8% 수율)을 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, 15 분 방법, RT 6.20 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1191.5 ([M + 2H]2+., 100); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.92 (s, 2H), 8.16 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.99 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 7.86 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.68 - 7.42 (m, 4H), 7.39 - 7.11 (m, 4H), 7.07 (s, 2H), 7.00 (s, 4H), 6.81 (s, 2H), 6.60 (s, 2H), 5.46 - 5.30 (m, 2H), 5.21 - 4.79 (m, 8H), 4.39 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 4.22 (dd, J = 8.7, 6.7 Hz, 2H), 4.15 - 3.88 (m, 8H), 3.77 (s, 6H), 3.65 - 3.55 (m, 8H), 3.54 - 3.40 (m, 58H), 3.37 (t, J = 5.9 Hz, 4H), 3.15 (q, J = 5.8 Hz, 4H), 2.95 - 2.79 (m, 2H), 2.57 - 2.52 (m, 2H), 2.49 - 2.37 (m, 4H), 2.37 - 2.29 (m, 4H), 2.22 - 2.10 (m, 2H), 2.03 - 1.88 (m, 2H), 1.30 (d, J = 7.0 Hz, 6H), 0.85 (dd, J = 15.3, 6.7 Hz, 12H).
실시예 6
(i) (S,E)-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-에틸리덴피롤리딘-1-일)(5-메톡시-2-니트로-4-((트리이소프로필실릴)옥시)페닐)메타논 ( 29 )의 합성
Figure 112020012559806-pct00092
화합물 25는 문헌 [Tiberghien 등, ACS Med. Chem. Lett., 2016, 7 (11), pp 983-987]에 기재된다. 화합물 26은 문헌 [Smits and Zemribo, Org. Lett., 2013, 15 (17), pp 4406-4409]에 기재된다.
(a) 메틸(S,E)-4-에틸리덴-1-(5-메톡시-2-니트로-4-((트리이소프로필실릴)옥시)벤조일)피롤리딘-2-카르복실레이트 ( 27 )
25 (325g, 1.2 eq) 및 26 (1.0 eq.)을 DCM (3.25 L)에 용해시켰고 -40℃로 냉각시켰다. T3P (2 eq)을 -40℃에서 부분적으로 첨가하였고, 이어서 DIEA (6.0eq)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 -40℃에서 교반시켰다. 반응 완료를 LCMS로 관찰하였다. 수성 아세트산 (10%, 3.25 L)를 0℃에서 첨가하였다. 유기상을 분리시켰고 수성 수성 아세트산 (10%, 3.25 L)로 2회 세척하였고, 이어서 염수 (3.25 L)로 세척하였다. 휘발물을 진공 하에서 제거하여 미정제 생성물 27을 갈색 오일로서 남겨두었고, 이것을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하였다 (석유 에테르/EtOAc, 구배 100/1 내지 10/1, 수집 20/1. (591 g, LC에 의한 순도 87.6%, NMR에 의한 70%, 수율 = 60%). RT: 6.374 분.
화합물 27에 대하여 사용된 분석 방법
컬럼: Agilent Poroshell 120 EC- C18 4.6*100mm, 2.7um
이동상 A: 물내 0.05% TFA
이동상 B: ACN내 0.05% TFA
희석제: ACN
유동 속도: 1.0 mL/분
주입 부피: 1 μL
컬럼 온도: 40 ℃
검출기: 220 nm
운영 시간: 8.1 분
지연 시간: 2 분
Figure 112020012559806-pct00093
(b) ( S,E )-(4- 에틸리덴 -2-( 히드록시메틸 ) 피롤리딘 -1-일)(5- 메톡시 -2-니트로-4-((트리이소프로필실릴)옥시)페닐)메타논 ( 28 )
27 (591g, 1 eq)을 DCM에 용해시켰고 0℃로 냉각시켰다. 리튬 보로히드리드 (2.0 eq)을 부분적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 6시간 동안 교반시켰다. 반응 완료를 LCMS로 관찰하였다. 수성 아세트산 (10%, 5.9 L)를 0℃에서 첨가하였다. 유기상을 분리시켰고 수성 아세트산 (10%, 5.9 L)로 2회, 이어서 염수 (5.9 L)로 세척하였다. 휘발물을 진공 하에서 제거하여 플래쉬 크로마토그래피 (석유 에테르/EtOAc, 구배 50/1 내지 1/1. 5/1로부터 수집)로 정제되었던 잔류물을 남겨두어 28을 회백색 고체 (250 g, 64% 수율)로서 제공하였다. RT: 7.922 분.
(c) (S,E)-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-에틸리덴피롤리딘-1-일)(5-메톡시-2-니트로-4-((트리이소프로필실릴)옥시)페닐)메타논 ( 29 )
28 (250g, 1 eq) 및 이미다졸 (2 eq)을 실온에서 DCM (1.5 L, 6 V)에 용해시켰다. TBSCl (1.5 eq)을 부분적으로 첨가하면서 온도를 30℃ 아래로 유지하였다. 출발 물질의 사라짐을 HPLC로 관찰하였던 경우, 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 탈지면을 통해 여과시켰다. 필터 케이크를 DCM (500 mL)로 세척하였다. 여과물을 10℃에서 수성 아세트산 (10%, 2.5 L)로, 이어서 염수 (2.5 L)로 세척하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시켰고 진공 하에서 농축시켜 다음 단계에서 사용되도록 충분히 순수한 것으로 발견된 황색 오일로서 생성물 29 (285 g, 92.2% 수율)를 제공하였다. RT: 11.002 분. MS (ES+) m/z (상대 강도) 663.4 ([M + H]+., 100);
화합물 28 및 29에 대하여 사용된 분석 방법
컬럼: Agilent Poroshell 120 EC- C18 4.6*100mm, 2.7um
이동상 A: 물내 0.05% TFA
이동상 B: ACN내 0.05% TFA
희석제: ACN
유동 속도: 1.0 mL/분
주입 부피: 2 μL
컬럼 온도: 40 ℃
검출기: 220 nm
운영 시간: 12.1 분
지연 시간: 2 분
Figure 112020012559806-pct00094
(ii) 비스(4-((2S,5S)-37-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,35-트리옥소-10,13,16,19,22,25,28,31-옥타옥사-3,6,34-트리아자헵타트리아콘탄아미도)벤질) 8,8'-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))(2E,2'E,11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(2-에틸리덴-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) (37)의 합성
Figure 112020012559806-pct00095
Figure 112020012559806-pct00096
(a)(S,E)-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-에틸리덴피롤리딘-1-일)(4-히드록시-5-메톡시-2-니트로페닐)메타논 (30)
TIPS 보호된 페놀 29 (10.0 g, 16.9 mmol)을 40℃에서 에틸 아세테이트 (20.0 mL) 및 DMF (20.0 mL)의 혼합물에 용해시켰다. 물 (3.0 mL)내 아세트산리튬 (0.668 g, 10.1 mmol, 0.6 eq)의 용액을 첨가하였다. 반응을 40℃에서 4시간 동안 진행시켜 이 지점에서 완료를 LCMS로 관찰하였다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)내 2% 시트르산과 2-MeTHF (200 mL) 사이 분할시켰다. 유기상을 염수 (70 mL)로 세척하였고 황산마그네슘으로 건조시켰다. 휘발물을 진공 하에서 제거하였다. 고체 잔류물을 디에틸 에테르 (50 mL) 및 헥산 (200 mL)의 첨가로 침전시켰다. 생성물을 여과로 수집하였고, 작은 디에틸 에테르로 세척하였고 밤새 진공 하에서 건조시켜 30을 담황색 고체로서 제공하였다. (5.8 g, 13 mmol, 79% 수율). 분석 데이터: LC/MS, 3 분 친유성 방법, RT 1.82 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 437.8 ([M + H]+., 100);
(b) ((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(5-메톡시-2-니트로-4,1-페닐렌))비스(((S,E)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-에틸리덴피롤리딘-1-일)메타논) ( 31 )
1,5-디브로모펜탄 (0.986 g, 4.29 mmol, 0.5 eq) 이어서 탄산칼륨 (1.30 g, 9.41 mmol, 1.1 eq)을 100 mL 둥근 바닥 플라스크에서 아세톤 (20.0 mL)내 테트라부틸암모늄 아이오다이드 (0.63 g, 1.7 mmol, 0.2 eq) 및 30 (3.74 g, 8.57 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 신속하게 교반시켰고 60 ℃에서 2시간 동안 가열시켰고, 그 다음 45 ℃에서 밤새 교반시켰다. 반응이 LCMS로 완료됨을 알아내었다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (150 mL) 및 물 (200 mL로 분할시켰고, 염수 (100 mL)로 세척하였고, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 휘발물을 진공 하에서 제거하여 생성물 31 (4.04 g, 4.29 mmol, 100% 수율)을 제공하였고, 이것을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. 분석 데이터: LC/MS, 3 분 친유성 방법, RT 2.39 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 942.3 ([M + H]+., 100);
(c) ((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(2-아미노-5-메톡시-4,1-페닐렌))비스(((S,E)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-에틸리덴피롤리딘-1-일)메타논) ( 32 )
아연 (20.6 g, 315 mmol, 74 eq)을 10 ℃ (얼음 중탕)에서 에탄올 (64.0 mL), 물 (4.00 mL), 및 포름산 (4.00 mL, 106 mmol, 25 eq)의 혼합물에 첨가하였고, 격렬히 교반시켰다. 이 혼합물에, 에탄올 (16.0 mL)내 31 (4.00 g, 4.25 mmol)의 용액을 피펫으로 적가식으로 첨가하면서, 온도를 35 ℃ 아래로 유지하였다. 아연 덩어리를 때때로 수동으로 교반시켰다. 완료가 달성되었던 경우, 반응을 30 분 동안 실온에서 추가로 진행시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석시켰다. 고체를 셀라이트 상의 여과로 제거하였다. 소결물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 린스처리하였다. 여과물을 물 (300 mL), 포화 중탄산나트륨 (150 mL), 염수 (100 mL)로 세척하였고, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 휘발물을 증발로 제거하였고 잔류물을 자동화된 플래쉬 크로마토그래피 (100 g 울트라, 바이오테이지, 에틸 아세테이트/헥산 8 CV로 구배 30% 내지 최대 80%, 10 CV로부터 58%로부터 용출로 정제시켜, 32 (1.94 g, 2.20 mmol, 51.8% 수율)을 담황색 발포체로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, 3 분 친유성 방법, RT 2.29 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 882.4 ([M + H]+., 100);
(d) 비스(4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) ((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(6-((S,E)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-에틸리덴피롤리딘-1-카르보닐)-4-메톡시-3,1-페닐렌))디카르바메이트 ( 33 )
트리포스겐 (0.461 g, 1.55 mmol, 0.72 eq)을 0℃에서 DCM (45 mL)내 트리에틸아민 (1.32 g, 13.0 mmol, 6 eq) 및 32 (1.90 g, 2.16 mmol)의 혼합물에 일 부분으로 첨가하였다. 얼음 중탕을 제거하였고, 15 분후, 5 (1.79 g, 4.74 mmol, 2.2 eq)을 일 부분으로 미세 분말로서, 이어서 트리에틸아민 (0.661 g, 6.53 mmol, 3 eq) 및 디부틸틴 디라우레이트 (0.129 mL, 0.215 mmol, 0.1 eq)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 37 ℃에서 4시간 동안 교반시켰고, 이어서 실온에서 밤새 교반시켰다. 유기상을 DCM (100 mL)로 희석시켰고 물 (200 mL), 포화 염화암모늄 (100 mL), 및 염수 (50 mL)로 세척하였고, 이어서 황산마그네슘으로 건조시켰다. 휘발물을 감압 하에서 증발로 제거하여 3 (3.00 g, 1.78 mmol, 82% 수율)을 제공하였다. 미정제 생성물을 다음 단계에서 직접 반응시켰다.
분석 데이터: LC/MS, 3 분 친유성 방법, RT 2.31 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1689.6 ([M + H]+., 100);
(e) 비스(4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) ((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(6-((S,E)-4-에틸리덴-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카르보닐)-4-메톡시-3,1-페닐렌))디카르바메이트 ( 34 )
비스-TBS 에테르 33 (3.00 g, 1.78 mmol)을 2-메틸테트라히드로푸란 (9 mL), 아세트산 (9 mL) 및 물 (1.5 mL)의 혼합물에 용해시켰다. 혼합물을 40 ℃에서 2시간 동안 가열시켰다. LCMS 모니터링은 반응 (40 %) 완료의 불만족스런 비율을 나타냈다. 파라톨루엔설폰산 수화물 (203 mg, 1.07 mmol, 0.6 eq)을 첨가하였고, 이것이 반응을 촉진시켰다. 완료를 30 분 지나서 관찰하였다.
반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (150 mL)와 물 (200 mL) 사이 분할시켰고, 그 다음 포화 NaHCO3 (150 mL), 및 염수 (100 mL)로 세척하였다. 유기물을 황산마그네슘으로 건조시켰고 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피 (50 g 울트라, 느슨한 실리카겔상에서 건식 부하됨, 에틸 아세테이트/아세톤, 구배 85/15 내지 0/100, 55% 아세톤 부근에서 용출로 정제하였다. 순수한 분획을 조합하였고 진공 하에서 농축시켜 순수한 생성물 34 (2.20 g, 1.51 mmol, 84.8% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, 3 분 친유성 방법, RT 1.67 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1461.6 ([M + H]+., 100);
(f) 비스(4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) 8,8'-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))(2E,2'E,11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(2-에틸리덴-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 35 )
스탈 템포 0.2M 용액 (3.50 mL, 0.700 mmol, 0.47 eq) 이어서 테트라키스아세토니트릴 구리(I) 트리플레이트 (290 mg, 0.770 mmol, 0.52 eq)을 500 mL 플라스크에서 DMF (3.00 mL)내 34 (2.17 g, 1.49 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 격렬히 교반시켰고 40 ℃에서 5시간 (완료), 이어서 고무 풍선 하에서 30 ℃에서 18시간 동안 가열시켰고, 이 지점에서 반응 혼합물을 디클로로메탄 (60 mL) 및 물 (60 mL)로 희석시켰고 5 분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 상 분리기에서 디캔팅시켰고 DCM 상을 감압 하에서 건조시켰다. MEK (60 mL)를 첨가하였고 잔류물 DMF를 감압 하에서 (2 회) 공비혼합에 의해 제거하여 미정제 생성물을 고체로서 제공하였다. 이것을 DCM (5 내지 10 mL)에 재용해시켰고 100g 울트라 컬럼상에 부하하였다. 구배 75/25 DCM/DCM내 10% MeOH 내지 최대 40/60 (50/50 부근 용출). 순수한 분획을 조합하여 35 (1.35 g, 0.927 mmol, 62.4% 수율)을 백색 생성물로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, 3 분 친유성 방법, RT 1.63 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1457.3 ([M + H]+., 100); 15 분 방법, RT 7.52 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1456.6 ([M + H]+., 100);
(g) 비스(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질) 8,8'-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))(2E,2'E,11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(2-에틸리덴-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 36 )
테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (10.0 mg, 0.0086 mmol, 0.01 eq)을 DCM (7.50 mL)내 피롤리딘 (190 μL, 2.28 mmol, 2.5 eq) 및 35 (1.33 g, 0.914 mmol) 그리고 메탄올 (0.5 mL)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 실온에서 1시간 30 분 동안 교반시켰고 LCMS로 완료됨을 알아내었다. 물내 염화암모늄 (30 mL, 6 질량%)를 첨가하였고 혼합물을 격렬히 교반시켰다. 혼합물을 그 다음 바이오테이지상 분리 카트리지에서 디캔팅시켰다. DCM 층을 진공 하에서 증발 건조시켰다. 잔류물을 클로로포름 (20 mL)에 용해시켰고 용매를 35℃에 진공 하에서 증발로 제거하였다. 이 사이클을 2회 반복하였고, 이어서 고진공 (3 mbar) 하에서 건조시켜 미정제 36 (1.17 g, 0.914 mmol, 100% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. 분석 데이터: LC/MS, 3 분 방법, RT 1.23 분, 2 피크; MS (ES+) m/z (상대 강도) 645.0 ([M + 2H]2+., 100); 1288.8 ([M + H]+., 10).
(h) 비스(4-((2S,5S)-37-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,35-트리옥소-10,13,16,19,22,25,28,31-옥타옥사-3,6,34-트리아자헵타트리아콘탄아미도)벤질) 8,8'-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))(2E,2'E,11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(2-에틸리덴-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트) ( 37 )
DCM (10.00 mL) 및 메탄올 (0.4 mL)를 36 (393 mg, 0.305 mmol)에, 이어서 말-아미도-peg8-산 (380 mg, 0.628 mmol, 2.06 eq) 및 EDCI (128 mg, 0.668 mmol, 2.2 eq)을 첨가하였다. LCMS로 완료를 관찰하였던 경우 반응을 실온에서 4시간 동안 진행시켰다. 물내 염화암모늄 (30 mL, 6 질량%)를 첨가하였고 혼합물을 격렬히 교반시켰다. 혼합물을 바이오테이지상 분리 카트리지에서 디캔팅시켰다. DCM 층을 진공 하에서 증발 건조시켰고 미정제 잔류물을 크로마토그래피 (25g 울트라 12CV로 DCM/DCM내 20% MeOH의 구배 15/85 내지 100/0; 48% 부근 용출에서 유지)로 정제시켰다. 분획을 TLC (DCM내 10% MeOH)로 분석하였다. 순수한 분획을 풀링하였다. 용매를 증발로 제거하였다. 잔류물을 역상 분취형 HPLC (구배 15 내지 75% 물/아세토니트릴 + 0.01% 포름산)으로 추가 정제시켰고 이어서 냉동-건조시켰고 DCM으로부터 분취시켜 37 (516 mg, 0.212 mmol, 69.4% 수율)을 백색 발포체로서 제공하였다. 순도는 97.65%이었다. 분석 데이터: LC/MS, 15 분 방법, RT 6.61 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1219.7 ([M + 2H]2+., 100); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.92 (s, 2H), 8.17 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 8.01 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 7.87 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.72 - 7.44 (m, 4H), 7.39 - 7.10 (m, 4H), 7.05 (s, 2H), 7.00 (s, 4H), 6.76 (s, 2H), 6.66 - 6.46 (m, 2H), 5.56 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 5.34 (dd, J = 9.7, 5.9 Hz, 2H), 5.21 - 4.70 (m, 4H), 4.39 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 4.22 (dd, J = 8.7, 6.7 Hz, 2H), 4.15 - 4.01 (m, 2H), 3.94 (d, J = 15.3 Hz, 4H), 3.86 - 3.72 (m, 8H), 3.60 (t, J = 7.3 Hz, 8H), 3.55 - 3.42 (m, 58H), 3.37 (t, J = 5.9 Hz, 4H), 3.15 (q, J = 5.8 Hz, 4H), 2.76 - 2.56 (m, 4H), 2.46 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.40 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.36 - 2.29 (m, 4H), 1.96 (q, J = 6.7 Hz, 2H), 1.78 (s, 4H), 1.66 (d, J = 6.6 Hz, 6H), 1.57 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 1.30 (d, J = 7.0 Hz, 6H), 0.85 (dd, J = 15.2, 6.7 Hz, 12H).
헤르셉틴-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙 항체의 생산
일반
세포주 SKBR-3 (HER2+, 1.5x106 수용체/세포), MDA-MB-453 (HER2+, 7.7Х104 수용체/세포), 및 MCF-7 (HER2-)는 ATCC로부터 수득되었고 제조자의 권장된 배지 (SKBR-3: McCoys 5A + 10% FBS, MDA-MB-453: DMEM + 10% FBS, 및 MCF-7: DMEM + 10% FBS)를 사용하는 T175 조직 배양 플라스크 (Corning)에서 유지되었다. 형질감염을 위하여 사용된 293F 세포 (Invitrogen)은 293F 프리스타일 배지 (Invitrogen)에서 유지되었다. SKBR-3, MDA-MB-453, 및 MCF-7 세포는 5% CO2가 있는 37℃ 인큐베이터에서 배양되었다. 293F 세포는 37℃에서 8% CO2 및 120 rpm에서 회전이 있는 진탕 플라스크 (2 L, Corning)에서 배양되었다. 모든 시약은 달리 특정되지 않은 경우 Sigma Aldrich, VWR, 또는 JT Baker 사로부터 구매되었고 추가의 정제 없이 사용되었다.
헤르셉틴-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙 항체의 설계 및 작제
헤르셉틴 야생형 항체는 헤르셉틴-플렉스맙을 조작하기 위해 템플레이트로서 사용되었다. 헤르셉틴-플렉스맙의 경쇄는 2개의 돌연변이, F118C 및 C214V로 이루어지고, 이에 반해 중쇄는 3개의 돌연변이, L124C, C216V, 및 C225V를 함유한다 (참고 도 3 및 5 - 도 5에서, C는 조작된 시스테인을 나타내고, V는 발린 돌연변이에 대한 시스테인을 나타내고 C는 컨쥬게이트화/재브리지화를 위하여 사용된 시스테인을 나타낸다). 경쇄에서 F118C 돌연변이는 중쇄에서 L124C 돌연변이와 디설파이드 결합을 형성한다. 이러한 조작된 디설파이드는 용매 노출되지 않지만, 경쇄와 중쇄 사이 공유 결합을 보존하는 작용을 한다. C222 힌지 시스테인은 미변형된 채 남아있었고 pBD-기반 약물 링커와 부위-특이적 컨쥬게이트화용 위치로서 작용하였다. 헤르셉틴-플렉스맙용 경쇄 및 중쇄 서열은 포유동물 발현을 위하여 코돈-최적화되었고 GeneArt (Life Technologies) 사로부터 구해졌다. 최적화된 헤르셉틴-플렉스맙 작제물은 분비용 IgG 경쇄 신호 펩티드 및 재조합 발현용 사이토메갈로바이러스 프로모터를 함유하는 MedImmune 소유 포유동물 발현 벡터 속에 BssHII/NheI 부위 (경쇄) 및 SalI/NotI 부위 (중쇄)를 이용하는 표준 분자 생물학 기술로 서브클로닝되었다. 완료된 포유동물 발현 플라스미드, pOE-헤르셉틴-플렉스맙은 DNA 서열분석에 의해 확인되었다. 음성 대조군 NIP228-플렉스맙 항체는 템플레이트로서 (MedImmune 소유) 야생형 NIP228 항체를 사용하는 동안 헤르셉틴-플렉스맙에 대하여 기재된 바와 같이 생성되었다.
헤르셉틴-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙 항체의 발현 및 정제
헤르셉틴-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙 항체의 발현 및 정제는 이미 공개된 방법 (Dimasi, N., 등, Journal of Molecular Biology, 2009, 393, 672-692; DOI:　10.1016/j.jmb.2009.08.032)에 따라 수행되었다. 일과성 293F 발현 및 단백질-A 정제 이후, 항체는 4℃에서 Slide-A-Lyzer 투석 카셋트 (10 kDa MWCO, Thermo)를 사용하여 컨쥬게이트화 버퍼 (1X PBS, 0.1 mM EDTA, pH 7.2)에 배합되었고 Vivaspin 농축기 (10 kDa MWCO, GE Healthcare)를 사용하여 8.0 mg/mL (헤르셉틴-플렉스맙) 및 5.52 mg/mL (NIP228-플렉스맙)으로 농축되었다. 최종 농도는 Nanodrop 분광광도계 (A280, Thermo)를 사용하여 결정되었다. 6 일후 일과성 발현 수율은 헤르셉틴-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙, 각각에 대하여 500 mg/L 및 150 mg/L이었다.
실시예 7 - 헤르셉틴-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙 ADCs의 작제
컨쥬게이트화 버퍼 (1X PBS, 1 mM EDTA, pH 7.2, 3 mL)내 헤르셉틴-플렉스맙 (15 mg, 100 nmoles)은 실온에서 2 시간 동안 TCEP (3 eq., 300 nmoles, Thermo)를 사용하여 환원되었다. 환원 이후, DMSO (10% v/v, 300 μL)는 환원된 항체에 첨가되었고, 이어서 화합물 10 (3 eq., 300 nmoles)을 첨가하였다. 컨쥬게이트화 반응은 실온에서 3 시간 동안 진행하게 되었다. 과잉 화합물 10은 N-아세틸 시스테인 (화합물 10에 대해 5 eq., 1.5 μmoles, Sigma Aldrich)을 이용하여 켄칭되었고 ADC는 Slide-A-Lyzer 투석 카셋트 (10 kDa MWCO, Thermo)를 사용하여 4℃에서 컨쥬게이트화 버퍼의 3 버퍼 교환에 대해 투석되었다. ADC는 DI-H2O로 1:5 희석되었고 AKTA Pure FPLC (GE Healthcare)를 사용하여 5 mL/분으로 유형 II 세라믹 히드록시아파타이트 컬럼 (Bio-Rad)상에 부하되었고 컬럼은 CHT 버퍼 A (10 mM NaPO3, pH 7)의 20 컬럼 부피로 세척되었다. ADC의 용출은 20 분 동안 CHT 버퍼 B (10 mM NaPO3내 0-2 M NaCl, pH 7)의 선형 구배를 사용하여 수행되었다. 용출된 ADC는 Slide-A-Lyzer 투석 카셋트 (10 kDa MWCO)를 사용하여 컨쥬게이트화 버퍼 속에 4 ℃에서 밤새 투석되었고 HIC 버퍼 A (25 mM Tris-HCl, 1.5M (NH4)2 SO4, pH 8)로 1:5 희석되었다. ADC는 AKTA Pure FPLC를 사용하여 1 mL/분으로 반-분취형 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC) 컬럼 (HiTrap Butyl-S FF, GE Healthcare)상에 부하되었고 HIC 버퍼 A의 20 컬럼 부피로 세척되었다. ADC는 1 mL/분으로 45 분 동안 HIC 버퍼 B (25 mM Tris-HCl, 5% 이소프로필 알코올)의 선형 구배를 사용하여 용출되었다. 정제된 헤르셉틴-플렉스맙-10은 4℃에서 밤새 컨쥬게이트화 버퍼 속에 투석되었고, Vivaspin 농축기 (10 kDa MWCO)를 사용하여 2 mg/mL로 농축되었고, 0.2 μm 시린지 필터 (Pall Corporation)를 통해 멸균 여과되었다. 공정은 도 4에서 도식적으로 도시된다. 강조된 V들은 발린 돌연변이를 나타낸다.
화합물 10의 NIP228-플렉스맙으로의 부위-특이적 컨쥬게이트화 및 후속 정제는 헤르셉틴-플렉스맙-10에 대하여 기재된 바와 같이 수행되었다.
실시예 8 - ADC의 분석적 특성규명
SDS-PAGE
SDS-PAGE는 헤르셉틴-플렉스맙, 헤르셉틴-플렉스맙-10, NIP228-플렉스맙, 및 NIP228-플렉스맙-10 작제물의 분자량을 확인하기 위해 사용되었다. (2 μg, 친계 또는 컨쥬게이트화된) 샘플은 LDS 볼트 샘플 버퍼 (Invitrogen)와 1:4, NuPAGE 환원 버퍼 (Invitrogen)와 1:10 혼합되었고, 70℃로 10 분 동안 가열되었고 이어서 10% 비스-트리스 볼트 겔 (Invitrogen) 속에 부하되었다. 겔은 150 V에서 전기영동되었고 심플 블루 염색 시약 (Invitrogen)을 사용하여 염색되었고 DI-H2O를 사용하여 탈염되었다. 겔은 Gel Doc EZ 이미징 시스템 (Bio-RAD)을 사용하여 이미지화되었다.
환원된 SDS-PAGE는 정제된 헤르셉틴-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙 항체 그리고 ADC의 중량을 확인하게 위해 사용되었다. 결과는 ~25 kDa 및 50 kDa, 각각의 분자량을 가진 헤르셉틴-플렉스맙의 경쇄 (LC) 및 중쇄 (HC)의 분리를 증명한다. 헤르셉틴-플렉스맙에 이중-말레이미드 화합물 10 페이로드의 컨쥬게이트화는 100 kDa 밴드의 존재로만 중쇄의 매우 유능한 브리징을 초래하였다. 유사한 결과는, 감압 조건 하에서 경쇄 및 중쇄의 명확한 확인으로, NIP228-플렉스맙으로 관찰되었다. NIP228-플렉스맙 중쇄의 화합물 10과의 고도로 유능한 디설파이드 브리징은 관찰되었다. 응집은 항체 또는 ADC 어느 한쪽에 대하여 관찰되지 않았다.
소수성 상호작용 크로마토그래피
분석적 소수성 상호작용 크로마토그래피는 헤르셉틴-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙 항체 상에 화합물 10의 컨쥬게이트화 효율을 사정하기 위해 그리고 각 ADC에 대하여 약물-대-항체 비 (DAR)을 평가하기 위해 사용되었다. ADC (50 μL내 500 μg)은 HIC 버퍼 A (25 mM Tris-HCl, 1.5M (NH4)2 SO4, pH 8)을 사용하여 Proteomix HIC Butyl-NP5 컬럼 (4.6 mm I.D. Х 3.5 cm Х 5 μm, Sepax)상에 개별적으로 부하되었고 ADC는 0.8 mL/분으로 13 분 동안 HIC 버퍼 B (25 mM Tris-HCl, 5% 이소프로필 알코올, pH 7, 5-100%)의 선형 구배를 사용하여 용출되었다. 흡광도는 280nm 및 330nm에서 측정되었고 용출된 피크는 각 ADC의 컨쥬게이트화 효율을 결정하기 위해 수동으로 통합되었다. 컨쥬게이트화 효능 및 DAR은 방정식 1 및 방정식 2, 각각에 기반하여 계산되었다.
Figure 112020012559806-pct00097
Figure 112020012559806-pct00098
크기-배제 크로마토그래피
크기-배제 크로마토그래피 HPLC (SEC-HPLC)는 친계 항체 및 ADC 상에서 수행되어 Agilent 1200 시리즈 HPLC를 사용하여 순도 및 응집을 분석하였다. 샘플 (100 μL 컨쥬게이트화 버퍼내 100 μg)은 1 mL/분의 유동 속도로 이동상으로서 0.1 M NaPO4, 0.1M NaSO4, 10% 이소프로판올, pH 6.8을 사용하여 TSK Gel 컬럼 (G3000SW, 8 mm I.D. Х 30 cm Х 5 μm, Tosoh Bioscience)상에 주입되었다. 용출된 피크의 흡광도는 280nm에서 측정된 다음 수동 통합하여 각 샘플의 순도 및 퍼센트 응집을 결정하였다.
단백질 A 정제 이후, 각 항체는 98%의 과잉으로 고 단량체성 함량을 수득하였고, 이들 특징은 화합물 10 페이로드의 컨쥬게이트화에 따라 유지되어 DAR=1 ADC를 생성하였다. 헤르셉틴-플렉스맙 및 헤르셉틴-플렉스맙-10은 8.65 분 및 8.66 분, 그리고 9.01 분, 각각의 체류 시간 (TR)로 용출되었다. NIP228-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙-10은 TR=8.52 분 8.54 분 각각으로 용출되었다.
환원된 역상 HPLC
항체의 중쇄상에 화합물 10의 부위-특이적 컨쥬게이트화를 확인하기 위해, 환원된 역상 HPLC (rRP-HPLC)는 이용되었다. ADC는 30 분 동안 실온에서 디티오트레이톨 (DTT, 50 mM)로 처리되었다. 환원 이후, ADC는 PLRP-S 컬럼 (1000Å, 2.1 mm Х 50 mm, Agilent)상에 주입되었고 25 분 동안 5% 용매 B - 100% 용매 B로 이루어지는 RP-HPLC 용매 A (물내 0.1% 트리플루오로아세트산) 및 RP-HPLC 용매 B (아세토니트릴내 0.1% 트리플루오로아세트산)의 구배 이동상을 사용하여 용출되었다. 구배 용출은 1 mL/분의 유동 속도를 사용하여 80℃에서 수행되었다. 흡광도는 280nm에서 측정되었다.
헤르셉틴-플렉스맙 및 헤르셉틴-플렉스맙-10 ADC의 크로마토그램은 중첩되었다. 두 종의 경쇄는 공-용출되었지만 (헤르셉틴-플렉스맙-10 TR = 17.57 분; 헤르셉틴-플렉스맙 TR = 17.54 분), 비컨쥬게이트화된 헤르셉틴-플렉스맙 항체 (TR = 19.75 분)에 비교된 경우 헤르셉틴-플렉스맙-10의 중쇄에 대한 체류 시간에서 현저한 이동이 있었다 (TR = 21.31 분). 비컨쥬게이트화된 중쇄의 소량은 헤르셉틴-플렉스맙-10 크로마토그램 (TR = 19.97 분)상에서 가시적이었다.
음성 대조군 NIP228-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙-10에 대한 크로마토그램은 또한 비교 분석을 위하여 중첩되었다. NIP228-플렉스맙-10 ADC의 중쇄는 NIP228-플렉스맙 (TR=20.09 분)의 중쇄에 비교된 경우 체류 시간 (TR=21.57 분)에서 이동을 보여주었다. 비컨쥬게이트화된 중쇄의 소량은 NIP228-플렉스맙-10 (TR=20.35 분)에 대하여 가시적이었다.
질량분석법
온전한 및 환원된 역상 액체 크로마토그래피 질량분석법 (LCMS)는 헤르셉틴-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙 항체 그리고 ADC의 분자량을 확인하기 위해 이용되었다. 대략 2 μg (4 μL)의 항체 또는 ADC는 Agilent 6520 Accurate-Mass Time-of-Flight (TOF) LC-MS에 시리즈로 연결된 Agilent 1200 시리즈 HPLC상에 주입되었다. 항체 또는 ADC는 Zorbax 300 Diphenyl Rapid Resolution HD 컬럼 (2.1 mm Х 50 mm Х 1.8 μm)상에 부하되었고 2 분 (용매 A: 물내 0.1 포름산) 후 1-80% 용매 B (아세토니트릴내 0.1% 포름산)의 단계 구배로 이루어진 0.5 mL/분의 유동 속도를 사용하여 용출되었다. 데이터는 획득되었고 MassHunter 소프트웨어 (Agilent)를 사용하여 분석되었다.
정제된 헤르셉틴-플렉스맙은 147,985.36 Da (G0f 계산: 147,980.8 Da)에서 피크를 생산하였다. 화합물 10 페이로드 (MW: 2408.67 Da)의 컨쥬게이트화 이후, LCMS는 헤르셉틴-플렉스맙3-10의 분자량을 150,396.71 Da (G0f 계산: 150,394.03 Da)로서 드러냈다. LCMS에 의한 NIP228-플렉스맙의 분석은 146,770.36 Da (G0f 계산: 146743.98 Da)에서 피크를 밝혔다. 화합물 10 페이로드의 컨쥬게이트화는 149,199.75 Da (G0f 계산: 149,152.65 Da)의 MW를 가진 피크를 생산하였다.
시차 주사 열량측정법 (DSC)
항체 및 ADC는 4℃에서 25 mM 히스티딘 pH 6 속에 광범위하게 투석되었고 0.5 mg/mL에서 배합되었다. DSC 실험은 MicroCal VP-DSC 계기 (Malvern)를 사용하여 실시되었다. 미가공 데이터는 농도 및 주사 속도 (1℃/분)에 대하여 정규화되었다. 데이터 분석 및 디콘볼루션은 Origin 7 소프트웨어 (Malvern)을 사용하여 실시되었다. 디콘볼루션 분석은 비-2-상태 모델을 사용하여 수행되었고 최고 핏팅은 10-15 반복 사이클을 사용하여 수득되었다. 전이 피크의 최대에 상응하는, 변성 온도, Tm은 각 작제물에 대하여 결정되었다.
DSC 실험으로부터 결과는 헤르셉틴 (CH2 Tm1=68.95℃, Fab Tm2=81.43℃) 및 NIP228 (CH2 Tm1=69.09℃, Fab Tm2=74.22℃) 야생형 항체의 CH2 및 Fab 도메인에 대한 Tm 전이 온도를 밝혔다 (Wakankar, A.A., 등, Bioconjugate Chemistry, 2010, 21, 1588-1595; DOI: 10.1021/bc900434c). NIP228 항체는 81.92℃에서 CH3 도메인에 대하여 제3 Tm 전이 온도를 표시하였다. 이들 항체에 플렉스맙 기술의 도입은 이들 Tm 전이 온도를, CH2 도메인 (헤르셉틴-플렉스맙 Fab Tm1=68.21℃, CH2 Tm1=81.05℃; NIP228-플렉스맙 Fab Tm1=66.58℃, CH2 Tm3=81.85℃)에 비교된 더 낮은 Tm 전이 온도를 갖는 Fab 도메인으로, 역행시켰다. NIP228 야생형 항체로 보이는 바와 같이, 우리는 CH3 도메인에 대하여 NIP228-플렉스맙상의 제3 Tm 전이 온도 (Tm2=76.28℃)를 관찰하였다. 예상된 바와 같이, 화합물 10의 헤르셉틴-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙 항체로의 컨쥬게이트화 이후, 매우 작은 변화는 Tm 전이 온도에서 관찰되었다. (헤르셉틴-플렉스맙-10 Fab Tm1=67.83℃, CH2 Tm1=81.11℃; NIP228-플렉스맙-10 Fab Tm1=66.11℃, CH2 Tm3=82.19℃). NIP228-플렉스맙-10의 CH3 도메인에 대한 제3 Tm 전이 온도 (Tm2=78.78℃)는 NIP228-플렉스맙에 비교하여 최소로 변화되었다.
실시예 9 - 헤르셉틴-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙 항체 그리고 ADC의 시험관내 특성규명
유동세포분석법에 의한 세포 결합
헤르셉틴-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙 ADC의 결합 친화성 및 특이성은 유동세포분석법을 사용하여 확인되었다. 연구 일에, SKBR-3 (HER2+) 및 MCF-7 (HER2-) 세포는 TrypLE (Life Technologies) 트립신을 가진 이들의 플라스크로부터 해리되었고, 이들의 각각의 성장 배지에서 재현탁되었다. 세포는 ViCell 세포 계수기 (Beckman Coulter)상에서 계수되었고 1x106 세포/mL의 농도가 되었다. 세포는 96-웰 플레이트 (Falcon)의 웰 (5x104 세포/웰)에 2중으로 이동되었고 4℃에서 1200 rpm으로 원심분리되었다. 펠렛화된 세포는 유동세포분석법 버퍼 (PBS pH 7.2, 2% FBS, 빙상)의 180 μL에서 재현탁되었고 항체 또는 ADC는 세포 (20 μL의 시리얼 희석액: 200 μg/ml-0.01 μg/mL; 최종 농도 20 μg/mL-0.001 μg/mL)에 개별적으로 첨가되었다.　항체 및 세포는 4℃에서 1 시간 동안 인큐베이션되었고, 그 후 이들은 유동세포분석법 버퍼로 세척되었고 원심분리 (2x, 1200 rpm)로 펠렛화되었다. 최종 회전 후, 세포 펠렛은 AlexaFluor 647-컨쥬게이트화된 항-인간 2차 항체 (150 μL, 8 μg/mL, PBS pH 7.2내, 2% FBS)에서 재현탁되었고 4℃에서 1 시간 동안 인큐베이션되었다. 세포는 유동세포분석법 버퍼로 세척되었고 원심분리되었고 (2x, 1200 rpm), 이어서 135 μL의 유동세포분석법 버퍼에서 재현탁되었다. DAPI는 각 세포 현탁액에 첨가되어 (10X 스톡으로부터 15 μL, 1 μM 최종, Sigma Aldrich) 생/사 염색으로서 작용하였다. 세포로부터 형광 데이터는 LSRII 유동세포분석기 (Beckton Dickson)를 사용하여 수집되었고 데이터는 FlowJo 분석 소프트웨어 (Version 9, FlowJo, LLC)를 사용하여 분석되었다. 결합 곡선은 GraphPad Prism (Version 6, GraphPad Software, Inc.)를 사용하여 생성되었다.
헤르셉틴-플렉스맙-10 ADC는 SKBR-3 세포주에 대한 고 친화성 (EC50=0.24 μg/mL) 및 선택성을 보여주었고 이에 반해 결합은 MCF-7 세포주에 대해 관찰되지 않았다.
혈청 안정성 연구
마우스 혈청 (Jackson Immunoresearch Labs)는 0.2 μm 시린지 필터 (Pall Corporation)을 통해 멸균 폴리프로필렌 튜브 속에 여과되었고 빙상에 유지되었다. ADC (200 μg)은 마우스 혈청에 200 μg/mL의 농도로 첨가되었고 샘플은 37℃에서 인큐베이션되었다. PBS는 음성 대조군으로서 사용되었다. 200 μL의 분취량은 인큐베이션의 T=0, 24, 72, 및 148 시간에서 각 샘플로부터 취득되었다. T=0 시점은 혈청에 ADC의 첨가 후 제1 분 이내 드라이 아이스상에 배치되었다. 샘플은 친화도 포착 및 LCMS에 의한 분석 처리 때까지 -80℃에서 저장되었다. 항-인간 IgG (Fc-특이적) 아가로오스 (Sigma Aldrich)는 마우스 혈청으로부터 ADC를 친화도 포착하기 위해 사용되었다. 각 시점에 대하여, 50 μL의 항-인간 Fc 아가로오스 비드는 연속 회전 하에 실온에서 30 분 동안 300 μL의 PBS 및 100 μL의 혈청 샘플과 혼합되었다. 비드는 1Х PBS로 3회 세척되어 임의의 미결합된 혈청 단백질을 제거하였고 ADC는 100 μL IgG 용출 버퍼 (Thermo Scientific)을 사용하여 용출되었고 20 μL 1 M Tris pH 8로 중화되었다. 개별 샘플 (20 μL)는 상기 기재된 바와 같이 LCMS로 분석되었고 미가공 데이터는 Masshunter 소프트웨어를 사용하여 분석되었다.
7 일의 인큐베이션 후, LCMS는 화합물 10 페이로드의 1% 미만이 헤르셉틴-플렉스맙-10으로부터 손실되었음을 밝혔다. 시험관내 이와 같은 양호한 안정성은 오프-타겟 독성이 생체내 감소될 수 있음을 시사한다.
세포독성 검정
SKBR-3, MDA-MD-453, 및 MCF-7 세포는 상기 기재된 바와 같이 유지되었다. 처리에 앞선 날에, 세포는 TrypLE 트립신을 가진 이들의 플라스크로부터 해리되었고, 성장 배지에서 재현탁되었다. 세포는 ViCell　세포 계수기에서 계수되었고 이들의 각각 성장 배지에서 1.0Х105 세포/mL의 농도가 되었다. 세포 현탁액 (100 μL, 1.0Х104 세포/웰)은 백색 벽, 깨끗한 바닥 96-웰 플레이트 (Corning)의 웰로 이동되었다. 세포는 5% CO2를 가진 37℃ 인큐베이터에서 밤새 부착하게 되었다. 처리 당일에, ADC의 시리얼 희석액은 30 μg/mL- 1.5 ng/mL의 범위로 제조되었고 50 μL의 각 희석액은 웰에 3중으로 첨가되었다 (10 μg/mL-0.5 ng/mL 최종 ADC 농도, 150 μL 총 부피/웰). 적절한 미처리된 웰은 또한 각 플레이트에 첨가되어 대조군으로서 작용하였다. 5 일째에, 플레이트는 인큐베이터로부터 제거되었고 실온으로 평형화하게 되었다. 플레이트는 원심분리되었고 (1300 rpm, 5 분) 상청액은 흡입되었다. 페놀 레드 또는 FBS가 없는 배지 (SKBR-3: McCoy's 5A, MDA-MB-453 및 MCF-7: DMEM)은 각 웰 (50 μL)에 첨가되었고, 이어서 CellTiter-Glo® 시약 (50 μL)가 첨가되었다. 플레이트는 1 시간 동안 어둠 속에 실온에서 진탕되었고 발광은 Envision™ 플레이트 판독기 (PerkinElmer)를 사용하여 측정되었다. 퍼센트 생존성은 하기와 같이 계산되었다: (미공지/평균 대조군)*100. 실험적 데이터는 GraphPad Prism을 사용하여 작도되어 IC50 곡선을 생성하였다.
MDA-MB-453 세포 (저 HER2 발현; 7.7Х104 HER2 수용체/세포)상에서 3일의 인큐베이션 후, 헤르셉틴-플렉스맙-10은 ~90% 세포 생존성과 IC50 = 1.08 nM을 보여주었다. 5 일후, 헤르셉틴-플렉스맙-10은 ~35% 세포 생존성과 IC50 = 0.0375 nM을 가졌다.
SKBR-3 세포 (고 HER2 발현; 1.5Х106 HER2 수용체/세포)상에서 3 일의 인큐베이션 후 헤르셉틴-플렉스맙-10은 ~30% 세포 생존성과 IC50 = 0.229 nM을 보여주었다. 5 일후, 헤르셉틴-플렉스맙-10은 ~5% 세포 생존성과 IC50 = 0.0355를 가졌다.
실시예 10 - 헤르셉틴-플렉스맙 및 NIP228-플렉스맙 항체 그리고 ADC의 시험관내 특성규명
동물의 사용을 포함한 모든 연구는 AAALAC International에 의해 인가받은 시설에서 MedImmune Institutional Animal Care and Use Committee에 의해 승인된 초안 하에서 인도적으로 수행되었다.
이종이식물
50% Matrigel 내 NCI-N87 세포 (5Х106)은 4-6 주령 암컷 무흉선 누드 마우스 (Harlan) 속에 피하 접종되었다. 종양이 200 mm3에 이르는 경우, 마우스는 그룹당 5 마우스의 그룹으로 무작위 배정되었다. ADC는 지시된 용량으로 IV 투여되었고 세포 접종 후 5 일째에 복용되었다. 종양 부피는 캘리퍼로 매주 2회 측정되었다. 종양 부피는 식 ½ x L x W2 (L = 길이; W = 폭)을 사용하여 계산되었다. 체중은 치료의 인내력을 사정하기 위해 측정되었다. 종양 성장 및 체중 곡선은 Prism5 소프트웨어 (GraphPad, La Jolla, CA)를 사용하여 작도되었다. 종양 부피는 평균 ± SEM으로서 표현된다.
도 1은 비-처리 (●)에 비교된 1.0 mg/kg (◆)으로 단일 용량의 효과를 도시한다 - 상기 용량은 55 일 동안 종양 퇴화 이어서 종양 지체를 야기하였다.
도 2는 비-처리 (●)에 비교된 0.3 mg/kg (◆)으로 단일 용량의 효과를 도시한다 - 상기 용량은 또한 55 일 동안 종양 퇴화 이어서 종양 지체를 야기하였다.
독성
숫컷 Sprague Dawley 랫트 (8-12 주령, 5 / 그룹)은 헤르셉틴-플렉스맙-10의 0.75, 1.5, 3, 또는 4 mg/kg의 단일 IV 주사 (일 1) 투여되었고 랫트는 21 일 동안 평가되었다. 독성동태학 (TK) 위성 동물 (3 / 그룹)은 각 치료 아암에서 인큐베이션되어 총 항체 및 ADC의 혈장 농도를 측정하였다. 대조 랫트 (5 / 그룹)은 1 일째 비히클 대조군의 단일 IV 주사 투여되었다. 모든 주요 연구 동물은 임상 징후, 체중의 변화, 임상 병리학, 기관 중량으로 육안 소견, 및 현미경 관찰에 대하여 평가되었다. 모든 TK 위성 동물은 임상 징후, 체중의 변화, 및 약동학적 분석에 대하여 평가되었다. 혈액학 및 혈청 화학 샘플은 8 일째 및 15 일째 수집 및 분석되었다. 응고 분석용 추가의 샘플은 22 일째만 수집 및 분석되었다. 약동학적 분석용 혈액 샘플은 복용에 앞서 K2 EDTA 튜브에서 그리고 1, 8, 15, 22 일째 다중 시점에서 수집되었다. 육안 부검은 모든 주요 연구 동물에서 수행되었고, 뇌, 폐, 간, 신장, 비장, 흉선, 고환, 심장, 및 뼈를 포함하는, 기관의 표준 목록은 파라핀에 내장되었고, 절단되었고, 헤마톡실린 및 에오신으로 염색되었고, 면허가 있는 수의 병리학자에 의해 현미경으로 조사되었다.
헤르셉틴-플렉스맙-10의 4 mg/kg만큼 많은 용량은 양호하게 인내되었다.
치료 지수
치료 지수는, 랫트에서 비-표적화 ADC의 최대 내성 단일 용량 (MTD)를, 표적화 ADC의 최소 유효 단일 용량 (MED)로 나눔으로써 계산될 수 있다. MED는 (NCI-N87 이종이식에 대하여) 28 일에 생체내 모델에서 종양 지체를 달성하는데 필요한 단일 용량이다. 따라서, 헤르셉틴-플렉스맙-10에 대하여, 계산된 치료 지수는 적어도 13.3이다.
실시예 11
239와 240 위치 사이 삽입된 시스테인을 갖도록 조작된 헤르셉틴 및 R347 항체는 문헌 [Dimasi, N., 등, Molecular Pharmaceutics, 2017, 14, 1501-1516 (DOI: 10.1021/acs.molpharmaceut.6b00995)]에 기재된 방법에 따라 생산되었다.
HerC239i- 10 ADC
DTT (100 몰 당량/항체, 26.7 마이크로몰)을 PBS, 1 mM EDTA, pH 7.4 내 헤르셉틴-C239i 항체 (40 mg, 266.7 나노몰)의 용액에 첨가하였고 최종 부피를 8 mL로 만들었다. 부드럽게 진탕하면서 4 시간 동안 실온에서 환원을 실시하였고, 그 다음 DTT를 Amicon Ultracell 30 kDa MWCO 스핀 필터를 사용하여 스핀 여과로 제거하였다. (L)-데히드로아스코르브산 (DHAA, 20 몰 당량/항체, 5.3 마이크로몰, DMSO내 50 mM로 106.7 μL)를 PBS, 1mM EDTA, pH 7.4 내 환원된 항체 (5 mg/mL, 8 mL)에 첨가하였고, 재산화를 부드럽게 진탕하면서 밤새 동안 실온에서 발생시켰다. DHAA를 0.22 μm 막 필터를 통해 여과로 제거하였고, 화합물 10을, 10% (v/v) 최종 DMSO 농도에 대하여, PBS, 1mM EDTA, pH 7.4 내 8.1 mL의 재산화된 항체 (40 mg, 266.7 나노몰)에 대한 DMSO 용액 (3 몰 당량/항체, 0.8 마이크로몰, DMSO 내 0.9 mL)로서 첨가하였다. 용액을 부드럽게 진탕하면서 4 시간 동안 실온에서 반응하게 두었다. 컨쥬게이트화를 N-아세틸 시스테인 (100 mM에서 4 마이크로몰, 40 μL)의 첨가로 켄칭시켰고, 1 M (NH4)2SO4, 25 mM 인산칼륨 pH 6.0, 및 25 mM 인산칼륨 pH 6.0의 구배 실행하면서 FPLC 및 HP-Butyl 컬럼 (5mL)을 사용하여 소수성 상호작용 크로마토그래피로 정제시켰다. 95% 초과 DAR1을 함유하는 분획을 풀링하였고, 농축시켰고, 15 mL Amicon Ultracell 50 kDa MWCO 스핀 필터를 사용하여 스핀 여과에 의해, PBS, pH 7.4로 버퍼 교환시켰고, 멸균 여과시켰고 분석하였다.
214 nm에서 HerC239i-10 ADC의 순 샘플상에서 1.5M 황산암모늄, 25 mM 아세트산나트륨, pH 7.4 및 20% 아세토니트릴 (v/v)를 가진 25 mM 아세트산나트륨, pH 7.4의 구배로 용출하는 Proteomix HIC Butyl-NP5, 5 μm, 비-다공성, 4.6x35 mm (Sepax) 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서 UHPLC 분석은, 항체 당 화합물 10의 1.00 분자의 약물-당-항체 비 (DAR)과 일치하는, 단독으로 컨쥬게이트화된 화합물 10만을 보여준다.
280　nm에서 HerC239i-10 ADC의 순 샘플상에서 200 mM 인산칼륨 pH 6.95, 250 mM 염화칼륨 및 10% 이소프로판올 (v/v)를 함유하는 0.3 mL/분 멸균-여과된 SEC 버퍼로 용출하는 Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 μm 4.6 x 150 mm 컬럼을 (4 μm 3.0 x 20 mm 가드 컬럼과) 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서 UHPLC 분석은 99%의 단량체 순도를 보여준다. UHPLC SEC 분석은 11.1 mL내 1.71 mg/mL에서 최종 HerC239i-10 ADC의 농도를 제공하고, HerC239i-10 ADC의 수득된 질량은 18.9 mg (47% 수율)이다.
R347C239i- 10 ADC
DTT (100 몰 당량/항체, 133.3 마이크로몰)을 PBS, 1 mM EDTA, pH 7.4 내 R347-Maia 항체 (200 mg, 1.33 마이크로몰)의 용액에 첨가하였고 최종 부피를 40 mL로 만들었다. 환원을 부드럽게 진탕하면서 4 시간 동안 실온에서 실시하였고, 그 다음 DTT를 접선식 유동 여과 (30kDa 섬유 필터)로 제거하였다. (L)-데히드로아스코르브산 (DHAA, 20 몰 당량/항체, 26.7 마이크로몰, DMSO내 50 mM에서 533.3 μL)를 PBS, 1mM EDTA, pH 7.4 내 환원된 항체 (4 mg/mL, 50 mL)에 첨가하였고, 재산화를 부드럽게 진탕하면서 실온에서 실시하였다. DHAA를 0.22 μm 막 필터를 통해 여과로 제거하였고, 화합물 10을, 10% (v/v) 최종 DMSO 농도에 대하여, PBS, 1mM EDTA, pH 7.4 내 재산화된 항체 (200 mg, 1.33 마이크로몰)의 50.5 mL에 DMSO 용액 (2 몰 당량/항체, 2.67 마이크로몰, DMSO내 5.6 mL)로서 첨가하였다. 용액을 부드럽게 진탕하면서 4 시간 동안 실온에서 반응하도록 두었다. 컨쥬게이트화를 N-아세틸 시스테인 (100 mM에서 6.7 마이크로몰, 66.7 μL)의 첨가로 켄칭하였고, 1 M (NH4)2SO4, 25 mM 인산칼륨 pH 6.0, 및 25 mM 인산칼륨 pH 6.0의 구배 실행과 FPLC 및 HP-Butyl 컬럼 (5mL)를 사용하여 소수성 상호작용 크로마토그래피로 정제시켰다. 95% 초과 DAR1을 함유하는 분획을 풀링하였고, 농축시켰고, 15 mL Amicon Ultracell 50 kDa MWCO 스핀 필터를 사용하는 스핀 여과로, 25 mM 히스티딘, 200 mM 수크로오스, pH 6.0으로 버퍼 교환시켰고, 멸균 여과시켰고 분석하였다.
214 nm에서 R347C239i-10 ADC의 순 샘플상에서 1.5M 황산암모늄, 25 mM 아세트산나트륨, pH 7.4 및 20% 아세토니트릴 (v/v)를 가진 25 mM 아세트산나트륨, pH 7.4의 구배로 용출하는 Proteomix HIC Butyl-NP5, 5 μm, 비-다공성, 4.6x35 mm (Sepax) 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서 UHPLC 분석은, 항체 당 화합물 10의 1.00 분자의 약물-당-항체 비 (DAR)과 일치하는, 단독으로 컨쥬게이트화된 화합물 10만을 보여준다.
280　nm에서 R347C239i-10 ADC의 순 샘플상에서 200 mM 인산칼륨 pH 6.95, 250 mM 염화칼륨 및 10% 이소프로판올 (v/v)를 함유하는 0.3 mL/분 멸균-여과된 SEC 버퍼로 용출하는 Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 μm 4.6 x 150 mm 컬럼을 (4 μm 3.0 x 20 mm 가드 컬럼과) 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서 UHPLC 분석은 99%의 단량체 순도를 보여준다. UHPLC SEC 분석은 55 mL내 1.72 mg/mL에서 최종 R347C239i-10 ADC의 농도를 제공하고, R347C239i-10 ADC의 수득된 질량은 94.5 mg (47% 수율)이다.
1C1C239i- 10 ADC
DTT (100 몰 당량/항체, 3.3 마이크로몰)을 PBS, 1 mM EDTA, pH 7.4 내 1C1-Maia 항체 (5 mg, 33.3 나노몰)의 용액에 첨가하였고 최종 부피를 2.5 mL로 만들었다. 환원을 부드럽게 진탕하면서 5 시간 동안 실온에서 실시하였고, 그 다음 DTT를 Amicon Ultracell 30 kDa MWCO 스핀 필터를 사용하여 스핀 여과로 제거하였다. (L)-데히드로아스코르브산 (DHAA, 20 몰 당량/항체, 0.67 마이크로몰, DMSO내 50 mM에서 13.3 μL)를 PBS, 1mM EDTA, pH 7.4 내 환원된 항체 (2 mg/mL, 2.5 mL)에 첨가하였고, 재산화를 부드럽게 진탕하면서 밤새 실온에서 실시하였다. DHAA를 0.22 μm 막 필터를 통해 여과로 제거하였고, 화합물 10을, 10% (v/v) 최종 DMSO 농도에 대하여, PBS, 1mM EDTA, pH 7.4 내 재산화된 항체 (5 mg, 33.3 나노몰)의 2.5 mL에 DMSO 용액 (3 몰 당량/항체, 0.1 마이크로몰, DMSO내 0.27 mL)로서 첨가하였다. 용액을 부드럽게 진탕하면서 5 시간 동안 실온에서 반응하도록 두었다. 컨쥬게이트화를 N-아세틸 시스테인 (100 mM에서 2 마이크로몰, 39.6 μL)의 첨가로 켄칭하였고, 용출 버퍼로서 PBS pH 7.4와 FPLC 및 Superdex 200 26/600 컬럼을 사용하여 분취형 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 95% 초과 단량체를 함유하는 분획을 풀링하였고, 농축시켰고, 15 mL Amicon Ultracell 50 kDa MWCO 스핀 필터를 사용하는 스핀 여과로, 25 mM 히스티딘, 200 mM 수크로오스, pH 6.0으로 버퍼 교환시켰고, 멸균 여과시켰고 분석하였다.
214 nm에서 1C1C239i-10 ADC의 순 샘플상에서 1.5M 황산암모늄, 25 mM 아세트산나트륨, pH 7.4 및 20% 아세토니트릴 (v/v)를 가진 25 mM 아세트산나트륨, pH 7.4의 구배로 용출하는 Proteomix HIC Butyl-NP5, 5 μm, 비-다공성, 4.6x35 mm (Sepax) 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서 UHPLC 분석은, 항체 당 화합물 10의 1.04 분자의 약물-당-항체 비 (DAR)과 일치하는, 비컨쥬게이트화된 항체 그리고 단독으로 컨쥬게이트화된 및 이중으로 컨쥬게이트화된 화합물 10의 혼합물을 보여준다.
280　nm에서 1C1C239i-10 ADC의 순 샘플상에서 200 mM 인산칼륨 pH 6.95, 250 mM 염화칼륨 및 10% 이소프로판올 (v/v)를 함유하는 0.3 mL/분 멸균-여과된 SEC 버퍼로 용출하는 Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 μm 4.6 x 150 mm 컬럼을 (4 μm 3.0 x 20 mm 가드 컬럼과) 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서 UHPLC 분석은 100%의 단량체 순도를 보여준다. UHPLC SEC 분석은 2.3 mL내 1.45 mg/mL에서 최종 1C1C239i-10 ADC의 농도를 제공하고, 1C1C239i-10 ADC의 수득된 질량은 3.34 mg (67% 수율)이다.
HerC239i- 11 ADC
DTT (100 몰 당량/항체, 3.3 마이크로몰)을 PBS, 1 mM EDTA, pH 7.4 내 헤르셉틴-Maia 항체 (5 mg, 33.3 나노몰)의 용액에 첨가하였고 최종 부피를 2.5 mL로 만들었다. 환원을 부드럽게 진탕하면서 5 시간 동안 실온에서 실시하였고, 그 다음 DTT를 Amicon Ultracell 30 kDa MWCO 스핀 필터를 사용하여 스핀 여과로 제거하였다. (L)-데히드로아스코르브산 (DHAA, 20 몰 당량/항체, 0.67 마이크로몰, DMSO내 50 mM에서 13.3 μL)를 PBS, 1mM EDTA, pH 7.4 내 환원된 항체 (2 mg/mL, 2.5 mL)에 첨가하였고, 재산화를 부드럽게 진탕하면서 밤새 실온에서 발생시켰다. DHAA를 0.22 μm 막 필터를 통해 여과로 제거하였고, 화합물 11을, 10% (v/v) 최종 DMSO 농도에 대하여, PBS, 1mM EDTA, pH 7.4 내 재산화된 항체 (5 mg, 33.3 나노몰)의 2.5 mL에 DMSO 용액 (1.5 몰 당량/항체, 0.05 마이크로몰, DMSO내 0.27 mL)로서 첨가하였다. 용액을 부드럽게 진탕하면서 밤새 실온에서 반응하도록 두었다. 컨쥬게이트화를 N-아세틸 시스테인 (100 mM에서 2 마이크로몰, 39.6 μL)의 첨가로 켄칭하였고, 용출 버퍼로서 PBS pH 7.4와 FPLC 및 Superdex 200 26/600 컬럼을 사용하여 분취형 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 95% 초과 단량체를 함유하는 분획을 풀링하였고, 농축시켰고, 15 mL Amicon Ultracell 50 kDa MWCO 스핀 필터를 사용하는 스핀 여과로, 25 mM 히스티딘, 200 mM 수크로오스, pH 6.0으로 버퍼 교환시켰고, 멸균 여과시켰고 분석하였다.
214 nm에서 HerC239i-11 ADC의 순 샘플상에서 1.5M 황산암모늄, 25 mM 아세트산나트륨, pH 7.4 및 20% 아세토니트릴 (v/v)를 가진 25 mM 아세트산나트륨, pH 7.4의 구배로 용출하는 Proteomix HIC Butyl-NP5, 5 μm, 비-다공성, 4.6x35 mm (Sepax) 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서 UHPLC 분석은, 항체 당 화합물 11의 1.10 분자의 약물-당-항체 비 (DAR)과 일치하는, 비컨쥬게이트화된 항체 그리고 단독으로 컨쥬게이트화된 및 이중으로 컨쥬게이트화된 화합물 11의 혼합물을 보여준다.
280　nm에서 HerC239i-11 ADC의 샘플상에서 200 mM 인산칼륨 pH 6.95, 250 mM 염화칼륨 및 10% 이소프로판올 (v/v)를 함유하는 0.3 mL/분 멸균-여과된 SEC 버퍼로 용출하는 Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 μm 4.6 x 150 mm 컬럼을 (4 μm 3.0 x 20 mm 가드 컬럼과) 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서 UHPLC 분석은 99%의 단량체 순도를 보여준다. UHPLC SEC 분석은 4.0 mL내 1.29 mg/mL에서 최종 HerC239i-11 ADC의 농도를 제공하고, HerC239i-11 ADC의 수득된 질량은 3.23 mg (65% 수율)이다.
1C1C239i- 11 ADC
DTT (100 몰 당량/항체, 3.3 마이크로몰)을 PBS, 1 mM EDTA, pH 7.4 내 1C1-Maia 항체 (5 mg, 33.3 나노몰)의 용액에 첨가하였고 최종 부피를 2.5 mL로 만들었다. 환원을 부드럽게 진탕하면서 5 시간 동안 실온에서 실시하였고, 그 다음 DTT를 Amicon Ultracell 30 kDa MWCO 스핀 필터를 사용하는 스핀 여과로 제거하였다. (L)-데히드로아스코르브산 (DHAA, 20 몰 당량/항체, 0.67 마이크로몰, DMSO내 50 mM에서 13.3 μL)를 PBS, 1mM EDTA, pH 7.4 내 환원된 항체 (2 mg/mL, 2.5 mL)에 첨가하였고, 재산화를 부드럽게 진탕하면서 밤새 실온에서 발생시켰다. DHAA를 0.22 μm 막 필터를 통해 여과로 제거하였고, 화합물 11을, 10% (v/v) 최종 DMSO 농도에 대하여, PBS, 1mM EDTA, pH 7.4 내 재산화된 항체 (5 mg, 33.3 나노몰)의 2.5 mL에 DMSO 용액 (1.5 몰 당량/항체, 0.05 마이크로몰, 0.27 mL DMSO내)로서 첨가하였다. 용액을 부드럽게 진탕하면서 밤새 실온에서 반응하도록 두었다. 컨쥬게이트화를 N-아세틸 시스테인 (100 mM에서 2 마이크로몰, 39.6 μL)의 첨가로 켄칭하였고, 용출 버퍼로서 PBS pH 7.4와 FPLC 및 Superdex 200 26/600 컬럼을 사용하여 분취형 크기 배제 크로마토그래피로 정제시켰다. 95% 초과 단량체를 함유하는 분획을 풀링하였고, 농축시켰고, 15 mL Amicon Ultracell 50 kDa MWCO 스핀 필터를 사용하는 스핀 여과로, 25 mM 히스티딘, 200 mM 수크로오스, pH 6.0으로 버퍼 교환시켰고, 멸균 여과시켰고 분석하였다.
214 nm에서 1C1C239i-11 ADC의 순 샘플상에서 1.5M 황산암모늄, 25 mM 아세트산나트륨, pH 7.4 및 20% 아세토니트릴 (v/v)를 가진 25 mM 아세트산나트륨, pH 7.4의 구배로 용출하는 Proteomix HIC Butyl-NP5, 5 μm, 비-다공성, 4.6x35 mm (Sepax) 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서 UHPLC 분석은, 항체 당 화합물 11의 1.05 분자의 약물-당-항체 비 (DAR)과 일치하는, 비컨쥬게이트화된 항체 그리고 단독으로 컨쥬게이트화된 및 이중으로 컨쥬게이트화된 화합물 11의 혼합물을 보여준다.
280　nm에서 1C1C239i-11 ADC의 샘플상에서 200 mM 인산칼륨 pH 6.95, 250 mM 염화칼륨 및 10% 이소프로판올 (v/v)를 함유하는 0.3 mL/분 멸균-여과된 SEC 버퍼로 용출하는 Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 μm 4.6 x 150 mm 컬럼을 (4 μm 3.0 x 20 mm 가드 컬럼과) 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서 UHPLC 분석은 99%의 단량체 순도를 보여준다. UHPLC SEC 분석은 2.2 mL내 1.50 mg/mL에서 최종 1C1C239i-11 ADC의 농도를 제공하고, 1C1C239i-11 ADC의 수득된 질량은 3.3 mg (66% 수율)이다.
추가의 컨쥬게이트화를 화합물 10을 가진 하기 항체로 실시하였다: RSV- C239i; B7H4-E02- C239i; PSMA- C239i; and CDH6-50B- C239i.
실시예 12
시험관내 PC3 1C1 검정
T75 플라스크 내의 반-밀집성 (80-90% 밀집도) PC3 세포로부터의 배지를 흡입시켰고, 플라스크를 PBS (약 20 ml)로 린스처리하고, 비웠다. 트립신-EDTA (5ml)를 첨가하였고, 플라스크를 최대 약 5분 동안 37℃의 기체충전된 인큐베이터로 복귀시켰고, 그 다음 플라스틱으로부터 세포를 제거하고 분리하기 위해 빠르게 두드렸다. 세포 현탁액을 멸균 50 ml 상단 마개형 원심분리 튜브로 옮기고, 성장 배지로 15 ml의 최종 부피까지 희석시킨 후, 원심분리시켰다 (5분 동안 400g). 상청액을 흡입시키고, 펠렛을 10ml 배양 배지에 재현탁시켰다. 반복된 피펫팅은 단분산 세포 현탁액을 생성하기 위해 필요할 수 있다. 세포 농도 및 생존성은 LUNA-Ⅱ를 사용하여 트립판 블루 세포 염색된 세포를 측정하여 얻었다. 세포를 1500 세포/웰로 희석시켰고, 백색 96 웰 평면 바닥 플레이트에 분배하였으며 (50μl/웰), 사용 전에 밤새 인큐베이션하였다.
항체 약물 컨쥬게이트 (ADC) (20μg/ml)의 원액 (1 ml)를 세포 배양 배지 속에 필터-여과된 ADC의 희석으로 만들었다. 스톡 ADC의 8x 10-배 희석액의 세트를 세포 배양 배지의 900 μl에 100 μl의 순차적 이동에 의해 24 웰 플레이트에서 만들었다. ADC 희석액을, 전날 씨딩된 50 μl 세포 현탁액을 함유하는, 96-웰 플레이트의 4 복제 웰에 분배하였다 (50 μl/웰). 대조군 웰은 50 μl 세포 배양 배지를 받았다. 세포 및 ADC를 함유하는 96-웰 플레이트를 6 일 동안 CO2-기체충전된 인큐베이터에서 37 ℃에 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 기간의 마지막에, 플레이트를 30분 동안 실온으로 평형화시켰고 그 다음 CellTiter-Glo (Promega)를 각 웰에 분배시켰다 (100 μl/웰). 플레이트를 2 분 동안 궤도 진탕기에 배치시켰고 그 다음 실온에서 10 분 동안 안정화시켰다. 웰 발광을 측정하였고 백분율 세포 생존을 4 대조군 미처리 웰에서 평균 발광 (100%)에 비교하여 4 ADC-처리 웰에서 평균 발광으로부터 계산하였다. IC50을 비-선형 곡선 핏팅 알고리즘: 에스자형 용량 반응을 사용하는 GraphPad Prism을 사용하여 용량-반응 데이터로부터 결정하였고, X는 로그(농도)이다. PC3용 세포 성장 배지는 하기이었다: 글루타민을 가진 F12K, 10% (v/v) HyClone™ Fetal Bovine Serum.
Figure 112020012559806-pct00099
시험관내 MTS 검정
ADC의 시험관내 활성을 Her2-발현 세포주 NCI-N87 및 Her2 음성 세포주 MDA-MB-468에서 측정하였다.
반-밀집성 (80-90% 밀집도) T75 플라스크로부터 세포의 농도 및 생존성을 트립판 블루 염색으로 측정하고, LUNA-II™ 자동화 세포 계수기를 사용하여 계수한다. 세포를 2x105/ml로 희석시켰고, 96-웰 평면 바닥 플레이트에 분배하였다 (50 μl/웰).
항체 약물 컨쥬게이트 (ADC) (20μg/ml)의 원액 (1 ml)를 세포 배양 배지 속에 필터-멸균된 ADC의 희석으로 만들었다. 스톡 ADC의 8x 10-배 희석액의 세트를 세포 배양 배지의 900μl에 100μl의 순차적 이동에 의해 24-웰 플레이트에서 만들었다. ADC 희석액을, 이전 씨딩된 50 μl 세포 현탁액을 함유하는, 96-웰 플레이트의 4 복제 웰에 분배하였다 (50 μl/웰). 대조군 웰은 50 μl 세포 배양 배지를 받았다. 세포 및 ADC를 함유하는 96-웰 플레이트를 노출시간을 위해 CO2-기체충전된 배양기에서 37℃에서 인큐베이션시켰다.
인큐베이션 기간의 마지막에, 세포 생존성을 MTS 검정으로 측정하였다. MTS (Promega)를 각각의 웰에 분배하였고 (20 μl/웰), CO2-기체충전된 배양기에서 37C에서 4시간 동안 인큐베이션시켰다. 웰 흡광도를 490nm에서 측정하였다. 백분율 세포 생존을 4 대조군 미처리 웰에서 평균 흡광도 (100%)와 비교하여 4 ADC-처리 웰에서 평균 흡광도로부터 계산하였다. IC50을 비-선형 곡선 핏팅 알고리즘: 가변 기울기를 가진 에스자형 용량-반응 곡선을 사용하는 GraphPad Prism을 사용하여 용량-반응 데이터로부터 결정하였다.
ADC 접종 시간은 MDA-MB-468로 4 일 그리고 NCI-N87에 대하여 7 일이었다. MDA-MB-468 및 NCI-N87을 Glutamax + 10% (v/v) HyClone™ Fetal Bovine Serum으로 RPMI 1640에서 배양시켰다.
Figure 112020012559806-pct00100
실시예 13
마우스
암컷 중증 복합성 면역-결핍 마우스 (Fox Chase SCID®, C.B-17/Icr-Prkdcscid, Charles River)는 10주령이었고, 연구 1 일째 체중 (BW) 범위가 16.2 내지 21.9 그램이었다. 동물은 자유롭게 물 (역삼투, 1 ppm Cl) 및 18.0% 미정제 단백질, 5.0% 미정제 지방, 및 5.0% 미정제 섬유질로 이루어진 NIH 31 변형 및 조사된 Lab Diet®을 공급받았다. 마우스를 20-22℃ (68-72℉) 및 40-60% 습도에서 12-시간 광주기로, 고정된 마이크로-아이솔레이터에서의 조사된 Enricho'cobs™ 실험실 동물 우리에서 사육하였다. CR 디스커버리 서비스는 구체적으로 제한, 사육, 수술 과정, 사료 및 유체 규제, 및 수의학적 관리에 관해 실험동물의 관리 및 사용을 위한 지침의 권고에 따른다. CR 디스커버리 서비스에서의 동물 관리 및 사용은 국제 실험동물 관리평가 인증협회 (AAALAC)에 의해 승인된 것이고, 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 허용된 표준의 준수를 보장한다.
JIMT-1 이종이식
종양 세포 배양
JIMT-1 인간 유방 암종 세포는 10% 소태아 혈청, 2 mM 글루타민, 100 단위/ml 페니실린 G 나트륨, 100 ㎍/mL 스트렙토마이신 설페이트 및 25 μg/mL 겐타마이신을 함유하는 둘베코 변형된 이글 배지 (DMEM)에서 배양하였다. 세포를 5% CO2 및 95% 공기의 분위기 하에, 37℃에서, 습윤 인큐베이터 내의 조직 배양 플라스크에서 배양시켰다.
생체내 이식 및 종양 성장
이식 당일에, JIMT-1 세포를 대수 성장기 동안 수집하였고 50% MatrigelTM (BD Biosciences)내 1 x 108 세포/ml의 농도로 인산 완충 식염수(PBS)에 재현탁시켰다. 이식물을 각 시험 동물의 우측 옆구리에 1×107 JIMT-1 세포 (0.1 ml 현탁액)을 피하로 이식함으로써 개시하였다. 종양을 100 내지 150㎣의 표적 범위에 근접된 이들의 부피로서 모니터링하였고 캘리퍼를 사용하여 2개 치수로 측정하였다. 종양 부피를 이하의 식을 사용하여 계산하였다:
종양 부피 (mm3) =
Figure 112020012559806-pct00101
[여기에서, w = 종양의 너비, 및 l = 종양의 길이(mm)임]. 종양 중량은 1 mg이 1 mm3의 종양 부피와 동일하다는 가정 하에 평가될 수 있다.
처리
연구의 1 일째로 지정된, 종양 이식 14 일후, 동물을 75 내지 162 mm3의 개별 종양 부피 및 115 내지 117 mm3의 그룹 평균 종양 부피를 가진 그룹 (n=10)으로 분류하였다.
HerC239i-10 ADC 및 HerC239i-SG3249 ADC를 1 일째 0.3 mg/kg의 단일 용량으로 정맥내 투여하였다. 비히클-처리 그룹은 종양 성장 대조군으로서 작용하였다. 종양을 주당 2회 측정하였다.
HerC239i-SG3249는, 예를 들어, 문헌 [Dimasi, N., et al., Molecular Pharmaceutics, 2017, 14, 1501-1516 (DOI: 10.1021/acs.molpharmaceut.6b00995)]에서 기재된 바와 같이, SG32349로부터 만들어진 컨쥬게이트이고, ???의 DAR을 갖는다.
종양 부피에 관한 효과는 하기인 도 6에서 도시된다:
Figure 112020012559806-pct00102
HerC239i-10 ADC는, 다수 PBD 이량체 탄두로서 절반을 가질 뿐임에도 불구하고, HerC239i-SG3249 ADC와 동등한 활성을 증명한다.
상기 언급된 모든 문서 및 다른 참고 문헌은 참고로서 본원에 편입된다.

Claims (147)

  1. 이하의 화학식 I의 컨쥬게이트:
    Figure 112021028887707-pct00158

    [여기에서,
    Ab는 각 중쇄 상에 적어도 하나의 자유 컨쥬게이트화 부위를 갖는 변형된 항체이며, 여기서 변형된 항체는 천연 사슬간 시스테인 잔기가 티올기가 결핍된 아미노산 기로 치환되도록 변형된 것이며, 변형된 항체는 링커로의 컨쥬게이트화에 적합한 반응성 기를 포함하는 아미노산 잔기를 각 중쇄에 적어도 하나 포함하고;
    D는 D1 기를 나타내고:
    Figure 112021028887707-pct00213
    ;
    점선은 C2와 C3 사이의 이중 결합의 선택적인 존재를 나타내며,
    C2와 C3 사이에 이중 결합이 있는 경우, R2는 메틸로부터 선택되고;
    C2와 C3 사이에 단일 결합이 있는 경우,
    R2는 H 및
    Figure 112021028887707-pct00163
    로부터 선택되고, 여기에서 R16a 및 R16b는 독립적으로 H 또는 메틸로부터 선택되고, 단 R16a 및 R16b가 둘 다 메틸은 아니며;
    D'는 D'1 기를 나타내고:
    Figure 112021028887707-pct00215

    점선은 C2'와 C3' 사이의 이중 결합의 선택적인 존재를 나타내며;
    C2'와 C3' 사이에 이중 결합이 있는 경우, R22는 메틸로부터 선택되고;
    C2'와 C3' 사이에 단일 결합이 있는 경우,
    R22는 H 및
    Figure 112021028887707-pct00168
    로부터 선택되고, 여기에서 R26a 및 R26b는 독립적으로 H 또는 메틸로부터 선택되고, 단 R26a 및 R26b가 둘 다 메틸은 아니며;
    R6 및 R9는 모두 H이고;
    R7은 OMe이고;
    R"는 C3-5 알킬렌 기이고;
    Y 및 Y'은 모두 O이고;
    R11a는 OH이고;
    R6', R7', R9' 및 R11a'는 각각 R6, R7, R9 및 R11a와 동일한 기로부터 선택되고;
    그리고
    RLL1 및 RLL2는 상이한 위치에서 항체에 연결되는 링커로서, 독립적으로 화학식 IIIa'의 링커이고:
    Figure 112021028887707-pct00169
    ,
    여기에서,
    Q는
    Figure 112021028887707-pct00170
    이고, 이때 QX는 Q가 아미노산 잔기, 디펩티드 잔기 또는 트리펩티드 잔기가 되게 하는 것이고;
    X는
    Figure 112021028887707-pct00171
    이고,
    여기에서, a = 0 내지 5, b = 0 내지 16, c = 0 또는 1, d = 0 내지 5;
    GLL은 하기로부터 선택되고;
    Figure 112021028887707-pct00220

    여기에서, Ar은 페닐렌으로부터 선택되는 C5-6 아릴렌 기를 나타내고, X는 C1-4 알킬을 나타내며;
    CBA는 각 중쇄 상에 적어도 하나의 자유 컨쥬게이트화 부위를 갖는 변형된 항체인 세포 결합제를 나타내고, 여기서 변형된 항체는 천연 사슬간 시스테인 잔기가 티올기가 결핍된 아미노산 기로 치환되도록 변형된 것이며, 변형된 항체는 링커로의 컨쥬게이트화에 적합한 반응성 기를 포함하는 아미노산 잔기를 각 중쇄에 적어도 하나 포함한다.
  2. 제1항에 있어서, D는 D1이고, C2와 C3 사이에 이중 결합이 있고, R2는 메틸인, 컨쥬게이트.
  3. 제1항에 있어서, D는 D1이고, C2와 C3 사이에 단일 결합이 있고, R2는:
    a) H이거나; 또는,
    b)
    Figure 112020113476806-pct00203
    이고, R16a 및 R16b는 모두 H이거나; 또는
    c)
    Figure 112020113476806-pct00205
    이고, R16a 및 R16b 중 하나는 H이고, 다른 하나는 메틸로부터 선택되는;
    컨쥬게이트.
  4. 제1항에 있어서, D'는 D'1이고, C2'와 C3' 사이에 이중 결합이 있고, R22는 메틸인, 컨쥬게이트.
  5. 제1항에 있어서, D'는 D'1이고, C2'와 C3' 사이에 단일 결합이 있고, R22는:
    a) H이거나; 또는
    b)
    Figure 112020113476806-pct00210
    이고, R26a 및 R26b는 모두 H이거나; 또는
    c)
    Figure 112020113476806-pct00212
    이고, R26a 및 R26b 중 하나는 H이고, 다른 하나는 메틸로부터 선택되는;
    컨쥬게이트.
  6. 제1항에 있어서, R22는 R2와 동일한 기인, 컨쥬게이트.
  7. 제1항에 있어서, RLL1은 화학식 IIIa'를 갖고, QX는:
    a) Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg, 및 Trp로부터 선택되는 아미노산 잔기; 또는
    b) 이하의 것들로부터 선택된 디펩티드 잔기:
    CO-Phe-Lys-NH,
    CO-Val-Ala-NH,
    CO-Val-Lys-NH,
    CO-Ala-Lys-NH,
    CO-Val-Cit-NH,
    CO-Phe-Cit-NH,
    CO-Leu-Cit-NH,
    CO-Ile-Cit-NH,
    CO-Phe-Arg-NH, 및
    CO-Trp-Cit-NH; 또는
    c) 트리펩티드 잔기;
    인, 컨쥬게이트.
  8. 제1항에 있어서, RLL1은 화학식 IIIa'를 가지며;
    a) a는 0 내지 3; 또는
    b) b는 0 내지 12; 또는
    c) d는 0 내지 3;
    인, 컨쥬게이트.
  9. 제1항에 있어서, RLL1은 화학식 IIIa'를 갖고, a는 0이고, c는 1이고, d는 2이고, b는 0 내지 8이며, 여기에서 선택적으로 b는 0, 4 또는 8인, 컨쥬게이트.
  10. 제1항에 있어서, RLL2는 화학식 IIIa'를 갖고, QX는:
    a) Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg, 및 Trp로부터 선택되는 아미노산 잔기; 또는
    b) 이하의 것들로부터 선택된 디펩티드 잔기:
    CO-Phe-Lys-NH,
    CO-Val-Ala-NH,
    CO-Val-Lys-NH,
    CO-Ala-Lys-NH,
    CO-Val-Cit-NH,
    CO-Phe-Cit-NH,
    CO-Leu-Cit-NH,
    CO-Ile-Cit-NH,
    CO-Phe-Arg-NH, 및
    CO-Trp-Cit-NH; 또는
    c) 트리펩티드 잔기;
    인, 컨쥬게이트.
  11. 제1항에 있어서, RLL2는 화학식 IIIa'를 가지며;
    a) a는 0 내지 3; 또는
    b) b는 0 내지 12; 또는
    c) d는 0 내지 3;
    인, 컨쥬게이트.
  12. 제1항에 있어서, RLL2는 화학식 IIIa'를 갖고, a는 0이고, c는 1이고, d는 2이고, b는 0 내지 8인, 컨쥬게이트.
  13. 제1항에 있어서, 화학식 Id를 갖는, 컨쥬게이트:
    [화학식 Id]
    Figure 112020113476806-pct00218

    [여기에서, m은 2 내지 8의 정수이다].
  14. 제1항에 있어서, 변형된 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체인, 컨쥬게이트.
  15. 제14항에 있어서, 변형된 항체는 인간 항체 또는 인간화된 항체인, 컨쥬게이트.
  16. 제1항에 있어서, 변형된 항체는 링커로의 컨쥬게이트화에 적합한 반응성 기를 포함하는 아미노산 잔기의 적어도 하나의 추가적인 치환을 각 중쇄에 포함하고, 추가적으로 치환된 아미노산은 시스테인 또는 비-천연 아미노산인, 컨쥬게이트.
  17. 제16항에 있어서, 치환되는 위치는 아래 제시된 것으로부터 선택되는, 컨쥬게이트:
    Figure 112020113476806-pct00193
    .
  18. 제1항에 있어서, 치료에 사용하기 위한, 컨쥬게이트.
  19. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 컨쥬게이트, 및 약제학적으로 허용가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는, 암의 치료에 사용하기 위한 약학적 조성물.
  20. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료에 사용하기 위한, 컨쥬게이트.
  21. 이하의 화학식 II의 화합물 및 이의 염 및 용매화물:
    Figure 112020113476806-pct00194

    [여기에서, (C2와 C3 사이 그리고 C2'와 C3' 사이에서 각각 이중 결합의 존재 또는 부재를 포함하는) D, R2, R6, R7, R9, R11a, Y, R", Y', D', R6', R7', R9', R11a' 및 R12는 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같고;
    RL1 및 RL2는 세포 결합제와의 연결을 위한 링커로서, 독립적으로 화학식 IIIa의 링커이고:
    Figure 112020113476806-pct00195

    (여기에서, Q 및 X는 제1항, 제7항 및 제10항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같음); 그리고
    GL은 이하의 것들로부터 선택된다:
    Figure 112020113476806-pct00196

    Figure 112020113476806-pct00197

    (여기에서, Ar은 페닐렌으로부터 선택되는 C5-6 아릴렌 기를 나타내고, X는 C1-4 알킬을 나타낸다).
  22. 제21항에 있어서, 상기 화합물은 화학식 IId의 것인, 화합물:
    [화학식 IId]
    Figure 112020113476806-pct00219

    [여기에서, m은 2 내지 8의 정수이다].
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
  37. 삭제
  38. 삭제
  39. 삭제
  40. 삭제
  41. 삭제
  42. 삭제
  43. 삭제
  44. 삭제
  45. 삭제
  46. 삭제
  47. 삭제
  48. 삭제
  49. 삭제
  50. 삭제
  51. 삭제
  52. 삭제
  53. 삭제
  54. 삭제
  55. 삭제
  56. 삭제
  57. 삭제
  58. 삭제
  59. 삭제
  60. 삭제
  61. 삭제
  62. 삭제
  63. 삭제
  64. 삭제
  65. 삭제
  66. 삭제
  67. 삭제
  68. 삭제
  69. 삭제
  70. 삭제
  71. 삭제
  72. 삭제
  73. 삭제
  74. 삭제
  75. 삭제
  76. 삭제
  77. 삭제
  78. 삭제
  79. 삭제
  80. 삭제
  81. 삭제
  82. 삭제
  83. 삭제
  84. 삭제
  85. 삭제
  86. 삭제
  87. 삭제
  88. 삭제
  89. 삭제
  90. 삭제
  91. 삭제
  92. 삭제
  93. 삭제
  94. 삭제
  95. 삭제
  96. 삭제
  97. 삭제
  98. 삭제
  99. 삭제
  100. 삭제
  101. 삭제
  102. 삭제
  103. 삭제
  104. 삭제
  105. 삭제
  106. 삭제
  107. 삭제
  108. 삭제
  109. 삭제
  110. 삭제
  111. 삭제
  112. 삭제
  113. 삭제
  114. 삭제
  115. 삭제
  116. 삭제
  117. 삭제
  118. 삭제
  119. 삭제
  120. 삭제
  121. 삭제
  122. 삭제
  123. 삭제
  124. 삭제
  125. 삭제
  126. 삭제
  127. 삭제
  128. 삭제
  129. 삭제
  130. 삭제
  131. 삭제
  132. 삭제
  133. 삭제
  134. 삭제
  135. 삭제
  136. 삭제
  137. 삭제
  138. 삭제
  139. 삭제
  140. 삭제
  141. 삭제
  142. 삭제
  143. 삭제
  144. 삭제
  145. 삭제
  146. 삭제
  147. 삭제
KR1020207003587A 2017-08-18 2018-08-17 피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트 KR102270107B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020217007457A KR102312910B1 (ko) 2017-08-18 2018-08-17 피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762547303P 2017-08-18 2017-08-18
US62/547,303 2017-08-18
PCT/EP2018/072298 WO2019034764A1 (en) 2017-08-18 2018-08-17 CONJUGATES OF PYRROLOBENZODIAZEPINE

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217007457A Division KR102312910B1 (ko) 2017-08-18 2018-08-17 피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20200024925A KR20200024925A (ko) 2020-03-09
KR102270107B1 true KR102270107B1 (ko) 2021-06-30

Family

ID=63294219

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217007457A KR102312910B1 (ko) 2017-08-18 2018-08-17 피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트
KR1020207003587A KR102270107B1 (ko) 2017-08-18 2018-08-17 피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217007457A KR102312910B1 (ko) 2017-08-18 2018-08-17 피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트

Country Status (26)

Country Link
US (1) US11649250B2 (ko)
EP (1) EP3668874B1 (ko)
JP (1) JP7220203B2 (ko)
KR (2) KR102312910B1 (ko)
CN (1) CN111065638B (ko)
AU (1) AU2018316532B2 (ko)
BR (1) BR112020003003A2 (ko)
CA (1) CA3070765A1 (ko)
CL (1) CL2020000395A1 (ko)
CO (1) CO2020001751A2 (ko)
CY (1) CY1125053T1 (ko)
DK (1) DK3668874T3 (ko)
EA (1) EA039276B1 (ko)
ES (1) ES2906965T3 (ko)
HR (1) HRP20220311T1 (ko)
IL (1) IL272625B2 (ko)
LT (1) LT3668874T (ko)
MX (1) MX2020001880A (ko)
MY (1) MY194477A (ko)
PL (1) PL3668874T3 (ko)
PT (1) PT3668874T (ko)
RS (1) RS62928B1 (ko)
SG (1) SG11202000358YA (ko)
SI (1) SI3668874T1 (ko)
WO (1) WO2019034764A1 (ko)
ZA (1) ZA202000397B (ko)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021144313A1 (en) 2020-01-13 2021-07-22 Synaffix B.V. Via cycloaddition bilaterally functionalized antibodies
WO2021144314A1 (en) 2020-01-13 2021-07-22 Synaffix B.V. Via cycloaddition bilaterally functionalized antibodies
EP4090377A1 (en) 2020-01-13 2022-11-23 Synaffix B.V. Conjugates of antibodies an immune cell engagers
JP2024506022A (ja) 2021-02-08 2024-02-08 シンアフィックス ビー．ブイ． 多機能性抗体
GB202105186D0 (en) 2021-04-12 2021-05-26 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
US20230201366A1 (en) 2021-11-19 2023-06-29 Adc Therapeutics Sa Anti-psma conjugates
WO2023088963A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Adc Therapeutics Sa Anti-il-13ralpha2 conjugates
WO2024038065A1 (en) 2022-08-15 2024-02-22 Synaffix B.V. Anthracyclins and conjugates thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016166300A1 (en) 2015-04-15 2016-10-20 Van Berkel Patricius Hendrikus Cornelis Site-specific antibody-drug conjugates
WO2017137553A1 (en) 2016-02-10 2017-08-17 Medimmume Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates

Family Cites Families (421)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3361742A (en) 1964-12-07 1968-01-02 Hoffmann La Roche 5-oxo-1h-pyrrolo-[2, 1-c][1, 4]-benzodiazepin-2-crylamides
US3523941A (en) 1967-03-06 1970-08-11 Hoffmann La Roche Benzodiazepine compounds and process for their preparation
US3524849A (en) 1967-10-27 1970-08-18 Hoffmann La Roche Process for the preparation of pyrrolo-benzodiazepine acrylamides and intermediates useful therein
JPS4843755B1 (ko) 1969-06-26 1973-12-20
IL33558A (en) 1968-12-30 1973-10-25 Fujisawa Pharmaceutical Co Antibiotic pyrrolo-benzodiazepine compound,its derivatives and processes for their production
FR2027356A1 (en) 1968-12-30 1970-09-25 Fujisawa Pharmaceutical Co Benzodiazepinone antibiotics
JPS585916B2 (ja) 1977-12-27 1983-02-02 株式会社ミドリ十字 新規ベンゾジアゼピン系化合物
JPS5615289A (en) 1979-07-17 1981-02-14 Green Cross Corp:The Novel benzodiazepinnbased compound 3
JPS57131791A (en) 1980-12-31 1982-08-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd Benzodiazepine derivative and its preparation
CA1184175A (en) 1981-02-27 1985-03-19 Walter Hunkeler Imidazodiazepines
CA1185602A (en) 1981-02-27 1985-04-16 Emilio Kyburz Imidazodiazepines
CA1173441A (en) 1981-02-27 1984-08-28 Hoffmann-La Roche Limited Imidazodiazepines
JPS58180487A (ja) 1982-04-16 1983-10-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 抗生物質ｄｃ−８１およびその製造法
US4427588A (en) 1982-11-08 1984-01-24 Bristol-Myers Company Process for conversion of oxotomaymycin to tomaymycin
US4427587A (en) 1982-11-10 1984-01-24 Bristol-Myers Company Total synthesis of antitumor antibiotics BBM-2040A and BBM-2040B
JPS59152329A (ja) 1983-02-17 1984-08-31 Green Cross Corp:The 局所障害抑制剤
FR2586683B1 (fr) 1985-08-29 1988-07-01 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de neothramycine, leur procede de preparation et leur application en tant que medicaments
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
JP2660201B2 (ja) 1988-08-05 1997-10-08 塩野義製薬株式会社 新規ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン誘導体および老人性痴呆薬
WO1991002536A1 (en) 1989-08-23 1991-03-07 Scripps Clinic And Research Foundation Compositions and methods for detection and treatment of epstein-barr virus infection and immune disorders
JPH053790A (ja) 1990-04-19 1993-01-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd デヒドロペプチダーゼ−ｉ
US5256643A (en) 1990-05-29 1993-10-26 The Government Of The United States Human cripto protein
AU9016591A (en) 1990-10-25 1992-05-26 Tanox Biosystems, Inc. Glycoproteins associated with membrane-bound immunoglobulins as antibody targets on B cells
JP4156662B2 (ja) 1991-03-29 2008-09-24 ジェネンテック・インコーポレーテッド ヒトｐｆ４ａ受容体とその使用
US5440021A (en) 1991-03-29 1995-08-08 Chuntharapai; Anan Antibodies to human IL-8 type B receptor
US5543503A (en) 1991-03-29 1996-08-06 Genentech Inc. Antibodies to human IL-8 type A receptor
FR2676058B1 (fr) 1991-04-30 1994-02-25 Hoechst Lab Prodrogues glycosylees, leur procede de preparation et leur utilisation dans le traitement des cancers.
FR2676230B1 (fr) 1991-05-07 1993-08-27 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de pyrrolo [1,4]-benzodiazepines, leur procede de preparation et medicaments les contenant.
JP3050424B2 (ja) 1991-07-12 2000-06-12 塩野義製薬株式会社 ヒトエンドセリンリセプター
US5264557A (en) 1991-08-23 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3
US5362852A (en) 1991-09-27 1994-11-08 Pfizer Inc. Modified peptide derivatives conjugated at 2-hydroxyethylamine moieties
US6011146A (en) 1991-11-15 2000-01-04 Institut Pasteur Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
US6153408A (en) 1991-11-15 2000-11-28 Institut Pasteur And Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
GB9205051D0 (en) 1992-03-09 1992-04-22 Cancer Res Campaign Tech Pyrrolobenzodiazepine derivatives,their preparation,and compositions containing them
FR2696176B1 (fr) 1992-09-28 1994-11-10 Synthelabo Dérivés de pipéridine, leur préparation et leur application en thérapeutique.
IL107366A (en) 1992-10-23 2003-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Genes coding for megakaryocyte potentiator
US5644033A (en) 1992-12-22 1997-07-01 Health Research, Inc. Monoclonal antibodies that define a unique antigen of human B cell antigen receptor complex and methods of using same for diagnosis and treatment
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
US5869445A (en) 1993-03-17 1999-02-09 University Of Washington Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
GB9316162D0 (en) 1993-08-04 1993-09-22 Zeneca Ltd Fungicides
US5773223A (en) 1993-09-02 1998-06-30 Chiron Corporation Endothelin B1, (ETB1) receptor polypeptide and its encoding nucleic acid methods, and uses thereof
EP0647450A1 (en) 1993-09-09 1995-04-12 BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft Improved prodrugs for enzyme mediated activation
US5750370A (en) 1995-06-06 1998-05-12 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acid encoding human endothlein-bombesin receptor and method of producing the receptor
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US5707829A (en) 1995-08-11 1998-01-13 Genetics Institute, Inc. DNA sequences and secreted proteins encoded thereby
US20020193567A1 (en) 1995-08-11 2002-12-19 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
JP3646191B2 (ja) 1996-03-19 2005-05-11 大塚製薬株式会社 ヒト遺伝子
US6218519B1 (en) 1996-04-12 2001-04-17 Pro-Neuron, Inc. Compounds and methods for the selective treatment of cancer and bacterial infections
CA2254843A1 (en) 1996-05-17 1997-11-27 Schering Corporation Human b-cell antigens, related reagents
AU739028B2 (en) 1996-09-27 2001-10-04 Bristol-Myers Squibb Company Hydrolyzable prodrugs for delivery of anticancer drugs to metastatic cells
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
US5945511A (en) 1997-02-20 1999-08-31 Zymogenetics, Inc. Class II cytokine receptor
US20030185830A1 (en) 1997-02-25 2003-10-02 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
US7033827B2 (en) 1997-02-25 2006-04-25 Corixa Corporation Prostate-specific polynucleotide compositions
US6261791B1 (en) 1997-03-10 2001-07-17 The Regents Of The University Of California Method for diagnosing cancer using specific PSCA antibodies
US6541212B2 (en) 1997-03-10 2003-04-01 The Regents Of The University Of California Methods for detecting prostate stem cell antigen protein
DE69824287T2 (de) 1997-03-10 2005-06-16 The Regents Of The University Of California, Oakland Prostata stammzell-antigen (psca)
US6555339B1 (en) 1997-04-14 2003-04-29 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated human protein-coupled receptors
US6319688B1 (en) 1997-04-28 2001-11-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotide encoding human sodium dependent phosphate transporter (IPT-1)
US6890749B2 (en) 1997-05-15 2005-05-10 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
WO1998051824A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting disease of the urinary tract
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
US20030060612A1 (en) 1997-10-28 2003-03-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20020034749A1 (en) 1997-11-18 2002-03-21 Billing-Medel Patricia A. Reagents and methods useful for detecting diseases of the breast
US6110695A (en) 1997-12-02 2000-08-29 The Regents Of The University Of California Modulating the interaction of the chemokine, B Lymphocyte Hemoattractant, and its Receptor, BLR1
WO2004031238A2 (en) 2002-10-03 2004-04-15 Mcgill Univeristy Antibodies and cyclic peptides which bind cea (carcinoembryonic antigen) and their use as cancer therapeutics
JP4603157B2 (ja) 1998-03-13 2010-12-22 ザ バーナム インスティチュート 種々の選択された器官または組織にホーミングする分子
AU4078599A (en) 1998-05-13 1999-11-29 Epimmune, Inc. Expression vectors for stimulating an immune response and methods of using the same
US20030064397A1 (en) 1998-05-22 2003-04-03 Incyte Genomics, Inc. Transmembrane protein differentially expressed in prostate and lung tumors
US20020187472A1 (en) 2001-03-09 2002-12-12 Preeti Lal Steap-related protein
US6835807B1 (en) 1998-05-22 2004-12-28 Daiichi Pharmaceuticals Co., Ltd. Drug complex and drug delivery system
ATE349722T1 (de) 1998-07-08 2007-01-15 E Ink Corp Verbesserte farbige mikroverkapselte elektrophoretische anzeige
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
GB9818732D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Collection of compounds
PT1193270E (pt) 1998-08-27 2003-10-31 Spirogen Ltd Pirrolobenzodiazepinas
GB9818730D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Collections of compounds
WO2000012130A1 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Smithkline Beecham Corporation Rp105 agonists and antagonists
JP4689781B2 (ja) 1998-09-03 2011-05-25 独立行政法人科学技術振興機構 アミノ酸輸送蛋白及びその遺伝子
AU5963699A (en) 1998-10-02 2000-04-26 Mcmaster University Spliced form of (erb)b-2/neu oncogene
US6858710B2 (en) 1998-12-17 2005-02-22 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6962980B2 (en) 1999-09-24 2005-11-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6468546B1 (en) 1998-12-17 2002-10-22 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030091580A1 (en) 2001-06-18 2003-05-15 Mitcham Jennifer L. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20020119158A1 (en) 1998-12-17 2002-08-29 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
EP1141017B1 (en) 1998-12-30 2008-09-10 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Characterization of the soc/crac calcium channel protein family
NZ513062A (en) 1999-01-29 2003-10-31 Smithkline Beecham HER-2/neu fusion proteins
GB9905124D0 (en) 1999-03-05 1999-04-28 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
US7232889B2 (en) 1999-03-08 2007-06-19 Genentech, Inc. PRO300 antibodies
AU3395900A (en) 1999-03-12 2000-10-04 Human Genome Sciences, Inc. Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides
US7304126B2 (en) 1999-05-11 2007-12-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6268488B1 (en) 1999-05-25 2001-07-31 Barbas, Iii Carlos F. Prodrug activation using catalytic antibodies
AU4952600A (en) 1999-06-03 2000-12-28 Takeda Chemical Industries Ltd. Screening method with the use of cd100
EP1191944A2 (en) 1999-06-25 2002-04-03 Genentech, Inc. METHODS OF TREATMENT USING ANTI-ErbB ANTIBODY-MAYTANSINOID CONJUGATES
US6302318B1 (en) 1999-06-29 2001-10-16 General Electric Company Method of providing wear-resistant coatings, and related articles
US7589172B2 (en) 1999-07-20 2009-09-15 Genentech, Inc. PRO256 polypeptides
US7297770B2 (en) 1999-08-10 2007-11-20 Genentech, Inc. PRO6496 polypeptides
US7294696B2 (en) 1999-08-17 2007-11-13 Genentech Inc. PRO7168 polypeptides
US6909006B1 (en) 1999-08-27 2005-06-21 Spirogen Limited Cyclopropylindole derivatives
JP3951035B2 (ja) 1999-09-01 2007-08-01 ジェネンテック・インコーポレーテッド 分泌及び膜貫通ポリペプチドとそれをコードしている核酸
US20030206918A1 (en) 1999-09-10 2003-11-06 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030232056A1 (en) 1999-09-10 2003-12-18 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030129192A1 (en) 1999-09-10 2003-07-10 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
DE60039448D1 (de) 1999-10-29 2008-08-21 Genentech Inc Gegen das prostata-stammzellantigen (psca) gerichtete antikörper und deren verwendung
EP1235847B1 (en) 1999-11-29 2016-01-20 The Trustees of Columbia University in the City of New York ISOLATION OF FIVE NOVEL GENES CODING FOR NEW Fc RECEPTORS-TYPE MELANOMA INVOLVED IN THE PATHOGENESIS OF LYMPHOMA/MELANOMA
WO2001040269A2 (en) 1999-11-30 2001-06-07 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of breast cancer
WO2001041787A1 (en) 1999-12-10 2001-06-14 Epimmune Inc. INDUCING CELLULAR IMMUNE RESPONSES TO HER2/neu USING PEPTIDE AND NUCLEIC ACID COMPOSITIONS
UA84830C2 (uk) 1999-12-23 2008-12-10 Займодженетікс, Інк. Розчинний рецептор інтерлейкіну-20
US6610286B2 (en) 1999-12-23 2003-08-26 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation using soluble receptors to interleukin-20
AU2458001A (en) 1999-12-23 2001-07-03 Zymogenetics Inc. Method for treating inflammation
NZ502058A (en) 1999-12-23 2003-11-28 Ovita Ltd Isolated mutated nucleic acid molecule for regulation of ovulation rate
US20040001827A1 (en) 2002-06-28 2004-01-01 Dennis Mark S. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
DE60041564D1 (de) 1999-12-24 2009-03-26 Genentech Inc Verfahren und Zusammensetzungen zur Verlängerung der Entsorgungshalbwertszeit von biowirksamen Verbindungen
US7294695B2 (en) 2000-01-20 2007-11-13 Genentech, Inc. PRO10268 polypeptides
US20030224379A1 (en) 2000-01-21 2003-12-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
US20020039573A1 (en) 2000-01-21 2002-04-04 Cheever Martin A. Compounds and methods for prevention and treatment of HER-2/neu associated malignancies
AU2001243142A1 (en) 2000-02-03 2001-08-14 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20030219806A1 (en) 2000-02-22 2003-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18607, 15603, 69318, 12303, 48000, 52920, 5433, 38554, 57301, 58324, 55063, 52991, 59914, 59921 and 33751 molecules and uses therefor
WO2001062794A2 (en) 2000-02-22 2001-08-30 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 18607, a human calcium channel
US20040052793A1 (en) 2001-02-22 2004-03-18 Carter Paul J. Caspase activivated prodrugs therapy
US20040005561A1 (en) 2000-03-01 2004-01-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
CA2402293A1 (en) 2000-03-07 2001-09-13 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
CA2403637A1 (en) 2000-03-24 2001-10-04 Fahri Saatcioglu Novel prostate-specific or testis-specific nucleic acid molecules, polypeptides, and diagnostic and therapeutic methods
WO2001072830A2 (de) 2000-03-31 2001-10-04 Ipf Pharmaceuticals Gmbh Diagnostik- und arzneimittel zur untersuchung des zelloberflächenproteoms von tumor- und entzündungszellen sowie zur behandlung von tumorerkrankungen und entzündlichen erkrankungen vorzugsweise mit hilfe einer spezifischen chemokinrezeptor-analyse und der chemokinrezeptor-ligand-interaktion
AU2001253140A1 (en) 2000-04-03 2001-10-15 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Tumor markers in ovarian cancer
IL152136A0 (en) 2000-04-07 2003-05-29 Arena Pharm Inc Non-endogenous, constitutively activated known g protein-coupled receptors
US20030119115A1 (en) 2000-05-17 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2001088133A2 (en) 2000-05-18 2001-11-22 Lexicon Genetics Incorporated Human semaphorin homologs and polynucleotides encoding the same
AU2001274888A1 (en) 2000-05-19 2001-12-03 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
WO2001094641A2 (en) 2000-06-09 2001-12-13 Idec Pharmaceuticals Corporation Gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of ovarian carcinomas
WO2001098351A2 (en) 2000-06-16 2001-12-27 Incyte Genomics, Inc. G-protein coupled receptors
CA2413262A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Amgen, Inc. B7-like molecules and uses thereof
CA2406649A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Human Genome Sciences, Inc. B7-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies
EP1383892A2 (en) 2000-06-30 2004-01-28 Incyte Genomics, Inc. Human extracellular matrix and cell adhesion polypeptides
WO2002006339A2 (en) 2000-07-03 2002-01-24 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US20040044179A1 (en) 2000-07-25 2004-03-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU2001283507A1 (en) 2000-07-27 2002-02-13 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h3 and b7-h4, novel immunoregulatory molecules
US7205108B2 (en) 2000-07-28 2007-04-17 Ulrich Wissenbach Trp8, Trp9 and Trp10, novel markers for cancer
US7229623B1 (en) 2000-08-03 2007-06-12 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
KR20030048009A (ko) 2000-08-14 2003-06-18 코릭사 코포레이션 Ｈｅｒ-2/ｎｅｕ 관련 악성 종양의 치료 및 진단용 조성물및 방법
AU2001283360A1 (en) 2000-08-14 2002-02-25 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
GB0020953D0 (en) 2000-08-24 2000-10-11 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
KR20030029847A (ko) 2000-08-24 2003-04-16 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료를 위한 조성물 및 방법
CA2421949A1 (en) 2000-09-11 2002-03-21 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US7491797B2 (en) 2000-09-15 2009-02-17 Genentech, Inc. PRO6308 polypeptide
US6613567B1 (en) 2000-09-15 2003-09-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of Her-2 expression
US7855269B2 (en) 2000-09-15 2010-12-21 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation
UA83458C2 (uk) 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Виділений поліпептид baff-r (рецептор фактора активації в-клітин сімейства tnf)
AU2001292724B2 (en) 2000-09-18 2005-05-26 Biogen Idec Ma Inc. CRIPTO mutant and uses thereof
ES2254492T3 (es) 2000-09-19 2006-06-16 Moses Lee Composiciones y procedimientos de uso de analogos aquirales de cc-1065 y de duocarmicinas.
AU2002215345A1 (en) 2000-10-13 2002-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of prostate cancer, compositions and methods of screening for modulators of prostate cancer
AU2002230659A1 (en) 2000-11-07 2002-05-21 Zymogenetics Inc. Human tumor necrosis factor receptor
US20020150573A1 (en) 2000-11-10 2002-10-17 The Rockefeller University Anti-Igalpha-Igbeta antibody for lymphoma therapy
US20040018194A1 (en) 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
WO2002061087A2 (en) 2000-12-19 2002-08-08 Lifespan Biosciences, Inc. Antigenic peptides, such as for g protein-coupled receptors (gpcrs), antibodies thereto, and systems for identifying such antigenic peptides
AU2002243495A1 (en) 2001-01-12 2002-07-24 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone morphogenetic protein-2 in the treatment and diagnosis of cancer
US20030119119A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030119133A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
AU2002245317A1 (en) 2001-01-24 2002-08-06 Protein Design Labs Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer
AU2002251841A1 (en) 2001-01-30 2002-08-12 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of pancreatic cancer
WO2002064798A1 (en) 2001-02-12 2002-08-22 Bionomics Limited Dna sequences differentially expressed in tumour cell lines
US20030087250A1 (en) 2001-03-14 2003-05-08 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
EP1243276A1 (en) 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
AU2002311787A1 (en) 2001-03-28 2002-10-15 Zycos Inc. Translational profiling
US6362331B1 (en) 2001-03-30 2002-03-26 Council Of Scientific And Industrial Research Process for the preparation of antitumor agents
WO2003008537A2 (en) 2001-04-06 2003-01-30 Mannkind Corporation Epitope sequences
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
WO2002083866A2 (en) 2001-04-17 2002-10-24 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Repeat sequences of the ca125 gene and their use for diagnostic and therapeutic interventions
EP1463928A2 (en) 2001-04-18 2004-10-06 Protein Design Labs Methods of diagnosis of lung cancer, compositions and methods of screening for modulators of lung cancer
RS20110024A (en) 2001-04-26 2011-08-31 Biogen Idec Ma Inc. ANTIBODIES THAT BLOCK CRIPTO AND USE IT
WO2003083041A2 (en) 2002-03-22 2003-10-09 Biogen, Inc. Cripto-specific antibodies
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
EP1515982A4 (en) 2001-05-09 2005-10-26 Corixa Corp METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE THERAPY AND DIAGNOSIS OF PROSTATE CANCER
US20030078399A1 (en) 2001-05-11 2003-04-24 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acid sequence encoding ovarian antigen, CA125, and uses thereof
CN1612750B (zh) 2001-05-24 2012-10-31 津莫吉尼蒂克斯公司 Taci-免疫球蛋白融合蛋白质
US7157558B2 (en) 2001-06-01 2007-01-02 Genentech, Inc. Polypeptide encoded by a polynucleotide overexpresses in tumors
WO2003000842A2 (en) 2001-06-04 2003-01-03 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
AU2002314901A1 (en) 2001-06-04 2002-12-16 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis and treatment of androgen-dependent prostate cancer, prostate cancer undergoing androgen-withdrawal, and androgen-independent prostate cancer
AU2002310256A1 (en) 2001-06-05 2002-12-16 Exelixis Inc. Ppp2cs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
ATE483976T1 (de) 2001-06-05 2010-10-15 Exelixis Inc Gfats als modifikatoren des p53-wegs und verwendungsverfahren
US7235358B2 (en) 2001-06-08 2007-06-26 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
WO2002101075A2 (en) 2001-06-13 2002-12-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cervical cancer
WO2002102235A2 (en) 2001-06-18 2002-12-27 Eos Biotechnology Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US7189507B2 (en) 2001-06-18 2007-03-13 Pdl Biopharma, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US7705120B2 (en) 2001-06-21 2010-04-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
WO2003002717A2 (en) 2001-06-28 2003-01-09 Schering Corporation Biological activity of ak155
AU2002314433A1 (en) 2001-07-02 2003-01-21 Licentia Ltd. Ephrin-tie receptor materials and methods
US20040076955A1 (en) 2001-07-03 2004-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of bladder cancer, compositions and methods of screening for modulators of bladder cancer
WO2003003984A2 (en) 2001-07-05 2003-01-16 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
WO2003055439A2 (en) 2001-07-18 2003-07-10 The Regents Of The University Of California Her2/neu target antigen and use of same to stimulate an immune response
WO2003009814A2 (en) 2001-07-25 2003-02-06 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of prostate cancer
CA2453995A1 (en) 2001-08-03 2003-02-20 Genentech, Inc. Tacis and br3 polypeptides and uses thereof
WO2003016475A2 (en) 2001-08-14 2003-02-27 The General Hospital Corporation Nucleic acid and amino acid sequences involved in pain
US20030092013A1 (en) 2001-08-16 2003-05-15 Vitivity, Inc. Diagnosis and treatment of vascular disease
WO2003018621A2 (en) 2001-08-23 2003-03-06 Oxford Biomedica (Uk) Limited Genes
US6902930B2 (en) 2001-08-29 2005-06-07 Vanderbilt University Human Mob-5 (IL-24) receptors and uses thereof
US20030124579A1 (en) 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
WO2003022995A2 (en) 2001-09-06 2003-03-20 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled steap-1 useful in treatment and detection of cancer
EP1434881A4 (en) 2001-09-17 2005-10-26 Protein Design Labs Inc METHOD FOR DIAGNOSIS OF CANCER COMPOSITIONS AND METHOD FOR SCREENING ON CANCER MODULATORS
US20050004017A1 (en) 2001-09-18 2005-01-06 Yuval Reiss Methods and compositions for treating hcap associated diseases
KR101008758B1 (ko) 2001-09-18 2011-01-14 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료를 위한 방법 및 이를 위한 조성물
CA2460621A1 (en) 2001-09-19 2003-03-27 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
WO2003026493A2 (en) 2001-09-28 2003-04-03 Bing Yang Diagnosis and treatment of diseases caused by mutations in cd72
US20050130117A1 (en) 2001-10-03 2005-06-16 Davis Cong L. Modulators of lymphocyte activation and migration
AU2002362454A1 (en) 2001-10-03 2003-04-14 Origene Technologies, Inc. Regulated breast cancer genes
US20050123925A1 (en) 2002-11-15 2005-06-09 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
EP1578385A4 (en) 2001-10-19 2011-11-09 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE DIAGNOSIS AND TREATMENT OF INFLAMMATORY INTESTINAL DISEASES
US20040241703A1 (en) 2002-08-19 2004-12-02 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US7825089B2 (en) 2001-10-24 2010-11-02 National Jewish Health Three-dimensional structures of TALL-1 and its cognate receptors and modified proteins and methods related thereto
DE60217152T2 (de) 2001-10-31 2007-10-31 Alcon Inc. Knochen-morphogene proteine (bmp), bmp-rezeptoren und bmp-bindungsproteine und ihre verwendung bei der diagnose und behandlung des glaukoms
US20030232350A1 (en) 2001-11-13 2003-12-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
WO2003042661A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
AU2002363939A1 (en) 2001-11-20 2003-06-10 Seattle Genetics, Inc. Treatment of immunological disorders using anti-cd30 antibodies
US7344843B2 (en) 2001-11-29 2008-03-18 Serono Genetics Institute S.A. Agonists and antagonists of prolixin for the treatment of metabolic disorders
AU2002349784A1 (en) 2001-12-03 2003-06-17 Asahi Kasei Pharma Corporation Nf-kappab activating genes
CA2468744C (en) 2001-12-03 2013-05-14 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Hybrid antibodies
AU2002366951A1 (en) 2001-12-10 2003-07-09 Nuvelo,Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
EP1463759B8 (en) 2002-01-07 2013-07-10 Euroscreen S.A. Ligand for g-protein coupled receptor gpr43 and uses thereof
US20030134790A1 (en) 2002-01-11 2003-07-17 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone Morphogenetic Protein-2 And Bone Morphogenetic Protein-4 In The Treatment And Diagnosis Of Cancer
EP1467263A4 (en) 2002-01-16 2009-12-16 Japan Science & Tech Agency HOLOGRAPHIC REPRODUCTION DEVICE FOR MOBILE IMAGES AND HOLOGRAPHIC REPRODUCTION DEVICE FOR COLOR MOBILE IMAGES
US7452675B2 (en) 2002-01-25 2008-11-18 The Queen's Medical Center Methods of screening for TRPM4b modulators
AU2003224624B2 (en) 2002-02-21 2008-08-28 Duke University Reagents and treatment methods for autoimmune diseases
EP1575480A4 (en) 2002-02-22 2008-08-06 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING DISEASES RELATED TO THE IMMUNE SYSTEM
WO2003083047A2 (en) 2002-03-01 2003-10-09 Exelixis, Inc. MP53s AS MODIFIERS OF THE p53 PATHWAY AND METHODS OF USE
WO2003104399A2 (en) 2002-06-07 2003-12-18 Avalon Pharmaceuticals, Inc Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US6660856B2 (en) 2002-03-08 2003-12-09 Kaohsiung Medical University Synthesis of pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine analogues
EP2258712A3 (en) 2002-03-15 2011-05-04 Multicell Immunotherapeutics, Inc. Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs
WO2004000997A2 (en) 2002-03-19 2003-12-31 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
US7202033B2 (en) 2002-03-21 2007-04-10 Sunesis Pharmaceuticals, Inc. Identification of kinase inhibitors
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
AU2003245239A1 (en) 2002-03-25 2003-11-03 Uab Research Foundation FC receptor homolog, reagents, and uses thereof
AU2003222103A1 (en) 2002-03-28 2003-10-13 Idec Pharmaceuticals Corporation Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of colon carcinomas
US20030194704A1 (en) 2002-04-03 2003-10-16 Penn Sharron Gaynor Human genome-derived single exon nucleic acid probes useful for gene expression analysis two
BR0308953A (pt) 2002-04-05 2006-03-14 Agensys Inc composições, proteìna, polinucleotìdeo, método de geração de uma resposta imune, método de detecção, composição farmacêutica, anticorpo ou seu fragmento, animal transgênico, hibridoma, método de fornecimento de um agente citotóxico ou agente de diagnóstico e método de inibição do crescimento de células cancerosas
WO2003087768A2 (en) 2002-04-12 2003-10-23 Mitokor Targets for therapeutic intervention identified in the mitochondrial proteome
JP2005536190A (ja) 2002-04-16 2005-12-02 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍の診断と治療のための組成物と方法
WO2003089904A2 (en) 2002-04-17 2003-10-30 Baylor College Of Medicine Aib1 as a prognostic marker and predictor of resistance to encocrine therapy
WO2003093444A2 (en) 2002-05-03 2003-11-13 Incyte Corporation Transporters and ion channels
AU2003229294A1 (en) 2002-05-15 2003-12-02 Avalon Pharmaceuticals Cancer-linked gene as target for chemotherapy
AU2003232453A1 (en) 2002-05-30 2003-12-19 David K. Bol Human solute carrier family 7 member 11 (hslc7a11)
WO2003101283A2 (en) 2002-06-04 2003-12-11 Incyte Corporation Diagnostics markers for lung cancer
CA2488284A1 (en) 2002-06-04 2003-12-11 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
BRPI0311822B8 (pt) 2002-06-06 2021-05-25 Oncotherapy Science Inc composição farmacêutica para o tratamento de câncer
AU2003242633A1 (en) 2002-06-06 2003-12-22 Molecular Engines Laboratories Dudulin genes, non-human animal model: uses in human hematological disease
WO2003105758A2 (en) 2002-06-12 2003-12-24 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US20040249130A1 (en) 2002-06-18 2004-12-09 Martin Stanton Aptamer-toxin molecules and methods for using same
EP1552002A4 (en) 2002-06-18 2006-02-08 Archemix Corp APTAMER TOXIN MOLECULES AND METHOD FOR THEIR USE
AU2003245615A1 (en) 2002-06-20 2004-01-06 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for modulating lymphocyte activity
EP1534331B1 (en) 2002-06-21 2014-10-29 Johns Hopkins University School of Medicine Membrane associated tumor endothelium markers
DE10229834A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Zinser Textilmaschinen Gmbh Streckwerk für Spinnmaschinen mit nachgeordneter Verdichtungsvorrichtung
AU2003281515A1 (en) 2002-07-19 2004-02-09 Cellzome Ag Protein complexes of cellular networks underlying the development of cancer and other diseases
WO2004011611A2 (en) 2002-07-25 2004-02-05 Genentech, Inc. Taci antibodies and uses thereof
WO2004032828A2 (en) 2002-07-31 2004-04-22 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
EP1545613B9 (en) 2002-07-31 2012-01-25 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
WO2004015426A1 (en) 2002-08-06 2004-02-19 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human cxc chemokine receptor 5(cxcr5)
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
EP1572957A4 (en) 2002-08-27 2007-10-10 Bristol Myers Squibb Pharma Co IDENTIFICATION OF POLYNUCLEOTIDES FOR PREDICTING THE ACTIVITY OF COMPOUNDS INTERACTING WITH AND / OR MODULATING TYROSINE KINASE PROTEINS AND / OR TYROSINE KINASE PROTEIN PATHWAYS IN MAMMARY CELLS
WO2004020595A2 (en) 2002-08-29 2004-03-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Novel human polypeptides encoded by polynucleotides
US20050271615A1 (en) 2002-08-30 2005-12-08 Doron Shabat Self-immolative dendrimers releasing many active moieties upon a single activating event
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
MXPA05002455A (es) 2002-09-06 2005-06-03 Mannkind Corp Secuencias de epitopes.
AU2003300776A1 (en) 2002-09-09 2004-05-25 Omeros Corporation G protein coupled receptors and uses thereof
JP2004113151A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Sankyo Co Ltd 癌遺伝子及びその用途
US20060183120A1 (en) 2002-10-04 2006-08-17 Teh Bin T Molecular sub-classification of kidney tumors and the discovery of new diagnostic markers
US20040138269A1 (en) 2002-10-11 2004-07-15 Sugen, Inc. Substituted pyrroles as kinase inhibitors
CA2503748A1 (en) 2002-11-08 2004-05-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of natural killer cell related diseases
CA2503621A1 (en) 2002-11-13 2004-05-27 Genentech, Inc. Methods and compositions for diagnosing dysplasia
US7705045B2 (en) 2002-11-14 2010-04-27 Syntarga, B.V. Prodrugs built as multiple self-elimination-release spacers
GB0226593D0 (en) 2002-11-14 2002-12-24 Consultants Ltd Compounds
EP1569685B8 (en) 2002-11-15 2012-12-05 MUSC Foundation For Research Development Complement receptor 2 targeted complement modulators
EP1578372A4 (en) 2002-11-15 2007-10-17 Univ Arkansas CA125 GENE AND ITS USE IN DIAGNOSTIC AND THERAPEUTIC INTERVENTIONS
US20080213166A1 (en) 2002-11-20 2008-09-04 Biogen Idec Inc. Novel Gene Targets and Ligands that Bind Thereto for Treatment and Diagnosis of Colon Carcinomas
CA2507044A1 (en) 2002-11-21 2004-06-10 Mary Lucero Purinergic modulation of smell
US20040253606A1 (en) 2002-11-26 2004-12-16 Protein Design Labs, Inc. Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators
WO2004053079A2 (en) 2002-12-06 2004-06-24 Diadexus, Inc. Compositions, splice variants and methods relating to ovarian specific genes and proteins
JP2004198419A (ja) 2002-12-13 2004-07-15 Bayer Healthcare Llc Ｔｉｍｐ１を用いた検出方法
ES2388280T3 (es) 2002-12-20 2012-10-11 Abbott Biotherapeutics Corp. Anticuerpos que reaccionan frente a GPR64 y utilización de los mismos
AU2003299819A1 (en) 2002-12-23 2004-07-22 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha conjugate, neutrokine-alpha complex, and uses thereof
WO2004063709A2 (en) 2003-01-08 2004-07-29 Bristol-Myers Squibb Company Biomarkers and methods for determining sensitivity to epidermal growth factor receptor modulators
US20050227301A1 (en) 2003-01-10 2005-10-13 Polgen Cell cycle progression proteins
US20050181375A1 (en) 2003-01-10 2005-08-18 Natasha Aziz Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of metastatic cancer
EP1583820A4 (en) 2003-01-14 2007-07-18 Bristol Myers Squibb Co ASSOCIATED POLYNUCLEOTIDES AND POLYPEPTIDES ASSOCIATED WITH THE NF-KB WAY
JP2007520996A (ja) 2003-01-15 2007-08-02 ミレニアム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ４４３９０、５４１８１、２１１、５６８７、８８４、１４０５、６３６、４４２１、５４１０、３０９０５、２０４５、１６４０５、１８５６０、２０４７、３３７５１、５２８７２、１４０６３、２０７３９、３２５４４、４３２３９、４４３７３、５１１６４、５３０１０、１６８５２、１５８７、２２０７、２２２４５、２３８７、５２９０８、６９１１２、１４９９０、１８５４７、１１５、５７９、１５９８５、１５６２５、７６０、１８６０３、２３９５、２５５４、８６７５、３２７２０、４８０９、１４３０３、１６８１６、１７８２７、３２６２０、５７７、６１９、１４２３、２１５８、８２６３、１５４０２、１６２０９、１６３８６、２１１６５、３０９１１、４１８９７、１６４３、２５４３、９６２６、１３２３１、３２４０９、８４２６０、２８８２、８２０３、３２６７８または５５０５３を用いて泌尿器科障害を処置するための方法および組成物
CA2516128A1 (en) 2003-02-14 2004-09-02 Sagres Discovery, Inc. Therapeutic targets in cancer
US20030224411A1 (en) 2003-03-13 2003-12-04 Stanton Lawrence W. Genes that are up- or down-regulated during differentiation of human embryonic stem cells
CA2520898C (en) 2003-03-31 2009-10-20 Council Of Scientific And Industrial Research Non-cross-linking pyrrolo(2,1-c)(1,4)benzodiazepines as potential antitumour agents and process thereof
GB0321295D0 (en) 2003-09-11 2003-10-15 Spirogen Ltd Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines
GB0416511D0 (en) 2003-10-22 2004-08-25 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
US7511032B2 (en) 2003-10-22 2009-03-31 The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Pyrrolobenzodiazepine derivatives, compositions comprising the same and methods related thereto
SG195524A1 (en) 2003-11-06 2013-12-30 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
AU2005214988A1 (en) 2004-02-17 2005-09-01 Absalus, Inc. Super-humanized antibodies against respiratory syncytial virus
WO2005082023A2 (en) 2004-02-23 2005-09-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
GB0404577D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0404574D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Amino acids
GB0404578D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
PL1720881T3 (pl) 2004-03-01 2013-05-31 Medimmune Ltd Pochodne 11-hydroksy-5h-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-onu jako kluczowe związki pośrednie do otrzymywania C2 podstawionych pirolobenzodiazepin
DE102004010943A1 (de) 2004-03-03 2005-09-29 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von N-geschützten 4-Ketprolinderivaten
WO2005085260A1 (en) 2004-03-09 2005-09-15 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines
FR2869231B1 (fr) 2004-04-27 2008-03-14 Sod Conseils Rech Applic Composition therapeutique contenant au moins un derive de la pyrrolobenzodiazepine et la fludarabine
US7833452B2 (en) 2004-05-11 2010-11-16 The General Hospital Corporation Method for making oxidation resistant polymeric material
GB0410725D0 (en) 2004-05-13 2004-06-16 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepine therapeutic agents
SI1791565T1 (sl) 2004-09-23 2016-08-31 Genentech, Inc. Cisteinsko konstruirana protitelesa in konjugati
JP2008521828A (ja) 2004-11-29 2008-06-26 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 操作された抗体およびイムノコンジュゲート
EP1831418A2 (en) 2004-12-24 2007-09-12 Showa Denko Kabushiki Kaisha Production method of thermoelectric semiconductor alloy, thermoelectric conversion module and thermoelectric power generating device
DK1844074T3 (da) 2005-02-03 2013-07-15 Antitope Ltd Humane antistoffer og proteiner
CA2605507C (en) 2005-04-19 2016-06-28 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-cd70 binding agents and uses thereof
GB0508084D0 (en) 2005-04-21 2005-06-01 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
PT1879901E (pt) 2005-04-21 2010-03-29 Spirogen Ltd Pirrolobenzodiazepinas
US20070154906A1 (en) 2005-10-05 2007-07-05 Spirogen Ltd. Methods to identify therapeutic candidates
ATE427949T1 (de) 2005-10-05 2009-04-15 Spirogen Ltd 4-a4-(5-oxo-2,3,5,11a-tetrahydro-5h-pyrrolo a2, 1-cua1,4ubenzodiazepin-8-yloxy)-butyrylaminou-1 - pyrrol-2-carbonsaurealkylesterderivate und verwandte verbindung zur behandlung einer proliferativen erkrankung
AU2006302415B2 (en) 2005-10-07 2012-09-13 Exelixis, Inc. Azetidines as MEK inhibitors for the treatment of proliferative diseases
PL1813614T3 (pl) 2006-01-25 2012-03-30 Sanofi Sa Środki cytotoksyczne zawierające nowe pochodne tomaymycyny
JP5622390B2 (ja) 2006-07-18 2014-11-12 サノフイ 癌治療用対ｅｐｈａ２アンタゴニスト抗体
EP2059536B1 (en) 2006-08-14 2014-01-08 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target cd19
US20080112961A1 (en) 2006-10-09 2008-05-15 Macrogenics, Inc. Identification and Engineering of Antibodies with Variant Fc Regions and Methods of Using Same
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
WO2008050140A2 (en) 2006-10-27 2008-05-02 Spirogen Limited Compounds for treatment of parasitic infection
ES2523915T5 (es) 2006-12-01 2022-05-26 Seagen Inc Agentes de unión a la diana variantes y usos de los mismos
CA2683568A1 (en) 2007-05-08 2008-11-20 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-muc16 antibodies and antibody drug conjugates
SI2019104T1 (sl) 2007-07-19 2013-12-31 Sanofi Citotoksična sredstva, ki obsegajo nove tomaimicinske derivate, in njihova terapevtska uporaba
US8937161B2 (en) 2007-10-19 2015-01-20 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-TENB2 antibodies and antibody drug conjugates
GB0722088D0 (en) 2007-11-09 2007-12-19 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0722087D0 (en) 2007-11-09 2007-12-19 Spirogen Ltd Polyamides
NO2842575T3 (ko) 2008-03-18 2018-02-24
EP2109244A1 (de) 2008-04-09 2009-10-14 Siemens Aktiengesellschaft Verfahren zur sicherheitsgerichteten Übertragung Sicherheitsschaltgerät und Kontrolleinheit
MY157165A (en) 2008-04-30 2016-05-13 Immunogen Inc Cross-linkers and their uses
KR20110028450A (ko) 2008-06-16 2011-03-18 이뮤노젠 아이엔씨 새로운 상승 효과
GB0813432D0 (en) 2008-07-22 2008-08-27 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819097D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
RU2683325C2 (ru) 2009-02-05 2019-03-28 Иммьюноджен, Инк. Новые производные бензодиазепина
WO2010095031A2 (en) 2009-02-23 2010-08-26 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Humanized antibodies that bind to cd19 and their uses
JP5382792B2 (ja) 2009-08-14 2014-01-08 独立行政法人理化学研究所 光２次非線形薄膜における１次及び２次光感受率異方性同時測定方法、当該方法を実行する装置及び当該方法をコンピュータに実行させるプログラム
FR2949469A1 (fr) 2009-08-25 2011-03-04 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique
WO2011028811A2 (en) 2009-09-01 2011-03-10 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US20110070227A1 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Anna-Marie Novotney-Barry Treatment of Autoimmune and Inflammatory Diseases
CA2775350A1 (en) 2009-09-24 2011-03-31 Seattle Genetics, Inc. Dr5 ligand drug conjugates
EP2534158B1 (en) 2010-02-09 2014-01-08 Bristol-Myers Squibb Company Benzylpyrrolidinone derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US9175086B2 (en) 2010-02-10 2015-11-03 Immunogen, Inc. CD20 antibodies and uses thereof
CN105001334A (zh) 2010-02-10 2015-10-28 伊缪诺金公司 Cd20抗体及其用途
JP5972864B2 (ja) 2010-04-15 2016-08-17 メディミューン リミテッド ピロロベンゾジアゼピン及びそれらのコンジュゲート
NZ602933A (en) 2010-04-15 2014-09-26 Seattle Genetics Inc Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
KR101671360B1 (ko) 2010-04-15 2016-11-01 시애틀 지네틱스, 인크. 표적화된 피롤로벤조디아제핀 접합체
GB201006340D0 (en) 2010-04-15 2010-06-02 Spirogen Ltd Synthesis method and intermediates
WO2011130615A2 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Dr. Reddy's Laboratories Ltd. Preparation of lacosamide
PT3108886T (pt) 2010-04-21 2020-08-27 Syntarga Bv Conjugados de analógicos cc-1065 e ligantes bifuncionais
FR2963007B1 (fr) 2010-07-26 2013-04-05 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application therapeutique
WO2012064733A2 (en) 2010-11-09 2012-05-18 Medimmune, Llc Antibody scaffold for homogenous conjugation
ES2717657T3 (es) 2011-02-15 2019-06-24 Immunogen Inc Métodos para la preparación de conjugados
US9135118B2 (en) 2011-03-07 2015-09-15 Aptare, Inc. System to catalog and search point-in-time instances of a file system
BR112014006703A8 (pt) 2011-09-20 2018-01-09 Spirogen Sarl "pirrolobenzodiazepinas
ES2945932T3 (es) 2011-10-14 2023-07-10 Seagen Inc Pirrolobenzodiazepinas y conjugados dirigidos
EA026643B1 (ru) 2011-10-14 2017-04-28 Сиэтл Дженетикс, Инк. Пирролбензодиазепины и конъюгаты направленного действия
AU2012322933B2 (en) 2011-10-14 2017-02-02 Medimmune Limited Synthesis method and intermediates useful in the preparation of pyrrolobenzodiazepines
EP2750713B1 (en) 2011-10-14 2015-09-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EA027386B1 (ru) 2011-10-14 2017-07-31 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины
JP6170497B2 (ja) 2011-10-14 2017-07-26 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピン
JP2013194140A (ja) 2012-03-19 2013-09-30 Fuji Xerox Co Ltd トナー用ポリエステル樹脂、静電荷像現像用トナー、静電荷像現像剤、トナーカートリッジ、プロセスカートリッジ、画像形成装置及び画像形成方法
IN2014MN02092A (ko) 2012-04-30 2015-09-04 Spirogen Sarl
JP6125614B2 (ja) 2012-04-30 2017-05-10 ユーシーエル ビジネス ピーエルシー ピロロベンゾジアゼピン
US9062577B2 (en) 2012-05-14 2015-06-23 Southwest Research Institute Diesel engine operation for fast transient response and low emissions
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
MX2015000357A (es) 2012-07-09 2015-05-12 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd22.
MX2015000359A (es) 2012-07-09 2015-04-14 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd79b.
CN104717979A (zh) 2012-08-02 2015-06-17 基因泰克公司 抗etbr抗体和免疫偶联物
EP2887965A1 (en) 2012-08-22 2015-07-01 ImmunoGen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
SI2839860T1 (sl) 2012-10-12 2019-07-31 MedImmune Limited, Pirolobenzodiazepini in njihovi konjugati
JP6392763B2 (ja) 2012-10-12 2018-09-19 エイディーシー・セラピューティクス・エス・アーＡｄｃ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｓａ ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体
EP2906250B1 (en) 2012-10-12 2018-05-30 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
BR112015008173A2 (pt) * 2012-10-12 2017-11-28 Adc Therapeutics Sarl conjugados de pirrolobenzodiazepina-anticorpo anti-psma
US9745303B2 (en) 2012-10-12 2017-08-29 Medimmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
US9919056B2 (en) 2012-10-12 2018-03-20 Adc Therapeutics S.A. Pyrrolobenzodiazepine-anti-CD22 antibody conjugates
SI2906296T1 (en) 2012-10-12 2018-06-29 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP2906297B1 (en) 2012-10-12 2017-12-06 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2014057118A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
TR201902494T4 (tr) 2012-10-12 2019-03-21 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinler ve onların konjugatları.
EP2906252B1 (en) * 2012-10-12 2017-06-14 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-anti-her2 antibody conjugates
US20140121126A1 (en) 2012-10-25 2014-05-01 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Methods of detecting axl and gas6 in cancer patients
CN105849086B (zh) 2012-11-24 2018-07-31 杭州多禧生物科技有限公司 亲水性链接体及其在药物分子和细胞结合分子共轭反应上的应用
EP2935268B2 (en) 2012-12-21 2021-02-17 MedImmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
AU2013366490B9 (en) 2012-12-21 2018-02-01 Medimmune Limited Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases
ME03394B (me) 2013-02-22 2020-01-20 Medimmune Ltd Antidllз-antitelo-pbd konjugati i nihovа upotreba
MX364330B (es) 2013-03-13 2019-04-23 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas.
SG11201507214SA (en) 2013-03-13 2015-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
AU2014230735B2 (en) 2013-03-13 2018-03-15 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US20160106861A1 (en) 2013-04-26 2016-04-21 Spirogen Sarl Axl antibody-drug conjugate and its use for the treatment of cancer
KR20160047567A (ko) 2013-08-28 2016-05-02 스템센트알엑스 인코포레이티드 조작된 항-dll3 접합체 및 사용 방법
NL2011583C2 (en) 2013-10-10 2015-04-13 Wwinn B V Module, system and method for detecting acoustical failure of a sound source.
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2015052532A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2015052535A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US9950078B2 (en) 2013-10-11 2018-04-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US20160256561A1 (en) 2013-10-11 2016-09-08 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
AU2014333776B2 (en) 2013-10-11 2021-01-28 Cellectis Methods and kits for detecting nucleic acid sequences of interest using DNA-binding protein domain
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
DE102013220528B4 (de) 2013-10-11 2015-05-07 Continental Automotive Gmbh Einspritzventil und Verfahren zum Betreiben eines Einspritzventils
GB201318069D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Maersk Olie & Gas Seismic data processing method and apparatus
JP6681838B2 (ja) 2013-12-16 2020-04-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド ペプチド模倣薬化合物及びその抗体−薬剤複合体
WO2015112822A1 (en) 2014-01-24 2015-07-30 Kolltan Pharmaceuticals, Inc. Antibody-drug conjugates targeting kit receptor and uses thereof
RU2711485C2 (ru) 2014-04-11 2020-01-17 МЕДИММЬЮН, ЭлЭлСи Конъюгированные соединения, содержащие сконструированные с цистеином антитела
GB201406767D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
EP3193940A1 (en) 2014-09-10 2017-07-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
MA40579A (fr) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech Inc Anticorps anti-cll-1 et immunoconjugués
CA2959689A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and antibody disulfide conjugates thereof
CN107106701B (zh) 2014-10-03 2020-11-06 西纳福克斯股份有限公司 磺酰胺接头、其缀合物及制备方法
GB201506399D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506409D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Williams David G And Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Humanized anti-axl antibodies and their conjugates
GB201506393D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506407D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506388D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Cancer Res Technology Ltd And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
TW201709932A (zh) 2015-06-12 2017-03-16 西雅圖遺傳學公司 Ｃｄ１２３抗體及其共軛物
CN108473588A (zh) * 2015-12-04 2018-08-31 艾伯维施特姆森特克斯有限责任公司 新颖抗密封蛋白抗体及使用方法
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
CN109689111B (zh) * 2016-08-11 2024-04-05 基因泰克公司 吡咯并苯并二氮杂䓬前药及其抗体缀合物
NZ772400A (en) 2018-07-05 2024-02-23 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Cross-linked pyrrolobenzodiazepine dimer (pbd) derivative and its conjugates

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016166300A1 (en) 2015-04-15 2016-10-20 Van Berkel Patricius Hendrikus Cornelis Site-specific antibody-drug conjugates
WO2017137553A1 (en) 2016-02-10 2017-08-17 Medimmume Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates

Also Published As

Publication number Publication date
KR102312910B1 (ko) 2021-10-15
EA202090148A1 (ru) 2020-05-08
HRP20220311T1 (hr) 2022-05-13
KR20200024925A (ko) 2020-03-09
AU2018316532B2 (en) 2022-11-24
PT3668874T (pt) 2022-02-24
ES2906965T3 (es) 2022-04-21
CN111065638A (zh) 2020-04-24
KR20210035905A (ko) 2021-04-01
CY1125053T1 (el) 2023-06-09
IL272625B2 (en) 2023-08-01
SI3668874T1 (sl) 2022-04-29
DK3668874T3 (da) 2022-02-14
LT3668874T (lt) 2022-03-25
US20200247823A1 (en) 2020-08-06
CO2020001751A2 (es) 2020-04-01
CA3070765A1 (en) 2019-02-21
JP2020531471A (ja) 2020-11-05
WO2019034764A1 (en) 2019-02-21
CL2020000395A1 (es) 2020-08-28
EA039276B1 (ru) 2021-12-27
BR112020003003A2 (pt) 2020-08-11
EP3668874B1 (en) 2021-12-22
IL272625B1 (en) 2023-04-01
RS62928B1 (sr) 2022-03-31
ZA202000397B (en) 2022-06-29
MX2020001880A (es) 2021-07-06
EP3668874A1 (en) 2020-06-24
IL272625A (en) 2020-03-31
US11649250B2 (en) 2023-05-16
JP7220203B2 (ja) 2023-02-09
MY194477A (en) 2022-11-30
SG11202000358YA (en) 2020-02-27
PL3668874T3 (pl) 2022-03-28
CN111065638B (zh) 2021-04-09
AU2018316532A1 (en) 2020-02-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102270107B1 (ko) 피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트
KR102253480B1 (ko) 피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트
WO2019224340A1 (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
KR20210081350A (ko) 피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트
JP7259024B2 (ja) ピロロベンゾジアゼピン複合体
WO2022218973A2 (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
WO2022218970A2 (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
JP2022524880A (ja) がんの治療における使用のための、アゼチドベンゾジアゼピン二量体及びこれを含む複合体
EP3710066A1 (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
EA045942B1 (ru) Азетидобензодиазепиновые димеры и конъюгаты, содержащие их, для применения для лечения рака

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
A302 Request for accelerated examination
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
X091 Application refused [patent]
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant