JP7220203B2 - ピロロベンゾジアゼピン複合体 - Google Patents

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Description

本発明は、ピロロベンゾジアゼピン及び関連する二量体（ＰＢＤ）を含む複合体、ならびにこのような複合体を作製するのに使用される前駆体薬物リンカーに関する。
ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）の中には、ＤＮＡの特定配列を認識して結合する能力を有するものがあり、好適な配列はＰｕＧＰｕである。最初のＰＢＤ抗腫瘍抗生物質であるアントラマイシンは、１９６５に発見された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＡＭ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７，５７９３－５７９５（１９６５）、Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＡＭ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７，５７９１－５７９３（１９６５））。それ以来、天然に存在するＰＢＤがいくつか報告されており、多様な類似体を合成する１０を超える合成経路が開発されている（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３－４６５（１９９４））。このファミリ－に属するものとして、アベイマイシン（Ｈｏｃｈｌｏｗｓｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４０，１４５－１４８（１９８７））、チカマイシン（Ｋｏｎｉｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３７，２００－２０６（１９８４）），ＤＣ－８１（Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｐａｔｅｎｔ ５８－１８０ ４８７、Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔ．，２６，７６７－７７２（１９９０）、Ｂｏｓｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４８，７５１－７５８（１９９２））、マゼトラマイシン（Ｋｕｍｉｎｏｔｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３３，６６５－６６７（１９８０））、ネオトラマイシンＡ及びＢ（Ｔａｋｅｕｃｈｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，９３－９６（１９７６））、ポロトラマイシン（Ｔｓｕｎａｋａｗａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１３６６－１３７３（１９８８））、プロトラカルシン（Ｓｈｉｍｉｚｕ，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，２４９２－２５０３（１９８２）、Ｌａｎｇｌｅｙ ａｎｄ Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５２，９１－９７（１９８７））、シバノマイシン（ＤＣ－１０２）（Ｈａｒａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，７０２－７０４（１９８８）、Ｉｔｏｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１２８１－１２８４（１９８８））、シビロマイシン（Ｌｅｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＡＭ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１０，２９９２－２９９３（１９８８））、ならびにトママイシン（Ａｒｉｍａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２５，４３７－４４４（１９７２））が挙げられる。ＰＢＤは、以下の一般式のものである。
Figure 0007220203000001
ＰＢＤは、その芳香環Ａ及びピロロ環Ｃの両方で、置換基の個数、種類、及び位置が異なるとともに、環Ｃの飽和度も異なる。環Ｂでは、Ｎ１０－Ｃ１１の位置が、イミン（Ｎ＝Ｃ）、カルビノ－ルアミン（ＮＨ－ＣＨ（ＯＨ））、又はカルビノ－ルアミンメチルエ－テル（ＮＨ－ＣＨ（ＯＭｅ））のいずれかになっており、ここがＤＮＡアルキル化の原因となる求電子中心である。既知の天然産物は全て、キラルなＣ１１ａ位に（Ｓ）型配置を有し、このため、ＰＢＤを環Ｃから環Ａに向かって見たときに、これらは右巻きになっている。このことが、ＰＢＤに、Ｂ型ＤＮＡの副溝との螺旋性一致（ｉｓｏｈｅｌｉｃｉｔｙ）（イソらせん性）に適切な三次元形状を与え、その結果、結合部位でのぴったりとした一致をもたらす（Ｋｏｈｎ，Ｉｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３－１１（１９７５）、Ｈｕｒｌｅｙ ａｎｄ Ｎｅｅｄｈａｍ－ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９，２３０－２３７（１９８６））。副溝で付加体を形成するＰＢＤの能力により、ＰＢＤはＤＮＡプロセシングに干渉することができ、したがって、ＰＢＤを抗腫瘍剤として使用することが可能となる。
この分子の生物活性は、２つのＰＢＤ単位をこれらのＣ８／Ｃ’－ヒドロキシル官能基と一緒に、可撓性アルキレンリンカーを介して結合させることによって増強され得ることが以前に開示されている（Ｂｏｓｅ，Ｄ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１４，４９３９－４９４１（１９９２）、Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６１，８１４１－８１４７（１９９６））。ＰＢＤ二量体は、配列選択性ＤＮＡ損傷、例えば、生物活性の主な原因となると考えられている、回帰性の５’－Ｐｕ－ＧＡＴＣ－Ｐｙ－３’鎖間架橋を形成すると考えられている（Ｓｍｅｌｌｉｅ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４２，８２３２－８２３９（２００３）、Ｍａｒｔｉｎ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４４，４１３５－４１４７）。
ＰＢＤ二量体の一例は、ＳＧ２０００（ＳＪＧ－１３６）：
Figure 0007220203000002
 であり（Ｇｒｅｇｓｏｎ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４４，７３７－７４８（２００１）、Ａｌｌｅｙ，Ｍ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６４，６７００－６７０６（２００４）、Ｈａｒｔｌｅｙ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６４，６６９３－６６９９（２００４））、スタンドアロン薬剤、例えば、ＮＣＴ０２０３４２２７として臨床検査に関与しており、急性骨髄性白血病及び慢性リンパ性白血病を治療する際のその使用を調査している（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ０２０３４２２７を参照）。
Ｃ２アリ－ル置換基を有する二量体ＰＢＤ化合物、例えば、ＳＧ２２０２（ＺＣ－２０７）は、ＷＯ２００５／０８５２５１：
Figure 0007220203000003
 及びＷＯ２００６／１１１７５９に開示されており、このようなＰＢＤ化合物の亜硫酸水素塩は、例えば、ＳＧ２２８５（ＺＣ－４２３）：
Figure 0007220203000004
 である。
これらの化合物は、非常に有用な細胞毒性剤として示されている（Ｈｏｗａｒｄ，Ｐ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００９），ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｍｃｌ．２００９．０９．０１２）。
ＷＯ２００７／０８５９３０は、抗体などの細胞結合剤への接続のためのリンカー基を有する二量体ＰＢＤ化合物を記載している。当該リンカーは、二量体の単量体ＰＢＤ単位を連結する架橋において存在する。
抗体などの細胞結合剤への接続のためのリンカー基を有する二量体ＰＢＤ化合物は、ＷＯ２０１１／１３０５９８に記載されている。これらの化合物におけるリンカーは、利用可能なＮ１０位のうちの１つに結合されており、リンカー基における酵素の作用によって概して開裂される。非結合Ｎ１０位がキャッピング基によって保護されているとき、例示されているキャッピング基は、抗体へのリンカーと同じ開裂誘因を有している。
ＷＯ２０１４／０５７０７４には、１つの単量体においてＮ１０位を介して結合されていて、他方のＰＢＤ単量体がイミン形態である、２つの特定のＰＢＤ二量体複合体が記載されている。開示される薬物リンカーのうちの１つは、ＳＧ３２４９、テシリンである：
Figure 0007220203000005
 これは、抗ＤＬＬ３ロバルピツズマブに複合化されるときに、ロバルピツズマブ－テシリン（Ｒｏｖａ－Ｔ）として知られており、現在、小細胞肺癌の治療について評価中である（Ｔｉｂｅｒｇｈｉｅｎ，Ａ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，ＡＣＳ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２０１６，７（１１），９８３－９８７；ＤＯＩ：１０．１０２１／ａｃｓｍｅｄｃｈｅｍｌｅｔｔ．６ｂ０００６２）。さらに、トラツズマブ（ｔｒａｔｕｚｕｍａｂ）の設計されたバ－ジョン及びヒトＣＤ１９に対するヒト化抗体と、この薬物リンカーの複合体は、ＡＤＣ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ＳＡによって２０１７年早期に治験を開始した（Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ＃５１ ａｎｄ ＃５２ ｉｎ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅ ５８，Ａｐｒｉｌ ２０１７）。
ＷＯ２０１５／０５２３２２には、１つの単量体においてＮ１０位を介して結合されていて、他方のＰＢＤ単量体がイミン形態である、特定のＰＢＤ二量体複合体が記載されている。また、１つの単量体においてＮ１０位を介して結合されていて、他方のＰＢＤ単量体が、抗体へのリンカーと同じ開裂誘因を持つキャッピング基を有している、特定のＰＢＤ二量体複合体も記載されている。
Figure 0007220203000006
本発明は、ＰＢＤ及び関連するＰＢＤ二量体複合体を提供し、その中でＰＢＤは、少なくとも１つの遊離複合化部位を各重鎖上に含むように改変されている抗体に結合され、そこでの結合は、リンカーを経てＰＢＤの各Ｎ１０基を介する。
発明者らは、単一のＰＢＤ、又は関連した二量体を単一の抗体に２つのリンカーによって結合することが不可能であったということをよそに、驚くほど効果的であるこれらのような複合体を見出した。
本発明はまた、改変された抗体に複合化するのに好適な、ＰＢＤ及び関連する二量体薬物リンカーも提供した。ここで、Ｎ１０基の両方は、連結基を持つ。
本発明の第１の態様は、式Ｉの複合体：
Figure 0007220203000007
を提供する。
式中：
Ａｂは、少なくとも１つの遊離複合化部位を各重鎖上に有する改変された抗体であり；
Ｄは、基Ｄ１又はＤ２のいずれかを表し：
Figure 0007220203000008
 、
点線は、Ｃ２とＣ３との間の二重結合の任意選択的な存在を示し、
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するとき、Ｒ2は、
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エ－テル、カルボキシ、エステル、Ｃ1-7アルキル、Ｃ3-7ヘテロシクリル及びビス－オキシ－Ｃ1-3アルキレンを含む群より選択される１つ以上の置換基によって任意選択的に置換されているＣ5-10アリ－ル基、
（ｉｂ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル、
（ｉｃ）Ｃ3-6飽和シクロアルキル、
（ｉｄ）
Figure 0007220203000009
 （Ｒ11、Ｒ12及びＲ13は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、ここで、Ｒ2基における炭素原子の合計数が多くて５である）、
（ｉｅ）
Figure 0007220203000010
 （Ｒ15a及びＲ15bの一方がＨであり、他方が、ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される基である）、ならびに
（ｉｆ）
Figure 0007220203000011
 （Ｒ14は、Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニル；から選択される）、
からなる群より選択され、
Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在するとき、
Ｒ2は、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、ｄｉＦ及び
Figure 0007220203000012
 から選択され、Ｒ16a及びＲ16bは、Ｈ、Ｆ、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから独立して選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は、Ｃ1-4アルキルアミド及びＣ1-4アルキルエステルから選択される基によって任意選択的に置換されており；又はＲ16a及びＲ16bの一方がＨであるとき、他方はニトリル及びＣ1-4アルキルエステルから選択され；
Ｄ’は、基Ｄ’１又はＤ’２のいずれかを表し：
Figure 0007220203000013
 、
点線は、Ｃ２’とＣ３’との間の二重結合の任意選択的な存在を表し、
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するとき、Ｒ12は、
（ｉｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エ－テル、カルボキシ、エステル、Ｃ1-7アルキル、Ｃ3-7ヘテロシクリル及びビス－オキシ－Ｃ1-3アルキレンを含む群より選択される１つ以上の置換基によって任意選択的に置換されているＣ5-10アリ－ル基、
（ｉｉｂ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル、
（ｉｉｃ）Ｃ3-6飽和シクロアルキル、
（ｉｉｄ）
Figure 0007220203000014
 （Ｒ31、Ｒ32及びＲ33は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、Ｒ12基における炭素数の合計が多くて５である）、
（ｉｉｅ）
Figure 0007220203000015
 （Ｒ25a及びＲ25bの一方がＨであり、他方が、ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される）、ならびに
（ｉｉｆ）
Figure 0007220203000016
 （Ｒ24は：Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される）、
からなる群より選択され、
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在するとき、
Ｒ12は、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、ｄｉＦ及び
Figure 0007220203000017
 から選択され、Ｒ26a及びＲ26bは、Ｈ、Ｆ、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから独立して選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は、Ｃ1-4アルキルアミド及びＣ1-4アルキルエステルから選択される基によって任意選択的に置換されており、又は、Ｒ26a及びＲ26bの一方がＨであるとき、他方はニトリル及びＣ1-4アルキルエステルから選択され、
Ｒ6及びＲ9は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ2、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ3Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
ここでＲ及びＲ’は、任意選択的に置換されているＣ1-12アルキル、Ｃ3-20ヘテロシクリル及びＣ5-20アリ－ル基から独立して選択され、
Ｒ7は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ2、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ3Ｓｎ及びハロから選択され、
Ｒ”は、Ｃ3-12アルキレン基であり、かかる鎖は、１つ以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、ＮＲN2（ここで、ＲN2は、Ｈ若しくはＣ1-4アルキルである）、及び／又は芳香族環、例えば、ベンゼン若しくはピリジンによって中断されていてよく、
Ｙ及びＹ’は、Ｏ、Ｓ、又はＮＨから選択され、
Ｒ11aは、ＯＨ、ＯＲAから選択され、ここでＲAは、Ｃ1-4アルキルであり、
Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’及びＲ11a’は、それぞれ、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9及びＲ11aと同じ基から選択され、
ＲLL1及びＲLL2は、
（ｉｉｉａ）：
Figure 0007220203000018
 （Ｑは、
Figure 0007220203000019
 であり、ＱXは、Ｑがアミノ酸残基、ジペプチド残基又はトリペプチド残基であるようになっており、
Ｘは、
Figure 0007220203000020
 であり、ａ＝０～５、ｂ＝０～１６、ｃ＝０又は１、ｄ＝０～５であり、
ＧLLは、抗体に接続されるリンカーである）、ならびに
（ｉｉｉｂ）：
Figure 0007220203000021
 （ＲSL1及びＲSL2は、Ｈ及びメチルから独立して選択され、又は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロプロピレン若しくはシクロブチレン基を形成する）、
から独立して選択される異なる部位において抗体に接続されるリンカーである。
１の薬物抗体比（ＤＡＲ）を効率的に有する、これらのようなＡＤＣが、より高いＤＡＲを有する不均一な混合物からなるＡＤＣにわたる最小有効量要件を減少させることによって、低下したオフタ－ゲット毒性、及び増強された治療濃度域を有する著しい利点を提示することができると考えられている。
本発明の第２の態様は、式ＩＩの化合物：
Figure 0007220203000022
 、
及び、その塩、及びその溶媒和物を含み、
式中、Ｄ、Ｒ2、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ11a、Ｙ、Ｒ”、Ｙ’、Ｄ’、Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’、Ｒ11a’及びＲ12（Ｃ２とＣ３との間及びＣ２’とＣ３’との間のそれぞれの二重結合の存在又は非存在を含む）は、本発明の第１の態様に定義されている通りであり、
ＲLは、
（ｉｉｉａ）：
Figure 0007220203000023
 （Ｑ及びＸは、第１の態様に定義されている通りであり、ＧLは、抗体に接続するためのリンカーである）、ならびに
（ｉｉｉｂ）：
Figure 0007220203000024
 （ＲSL1及びＲSL2は、第１の態様に定義されている通りであり、ｅは、０又は１である）、
から選択される、細胞結合剤に接続するためのリンカーである。
本発明の第３の態様は、増殖性疾患を治療するための医薬の製造における、本発明の第１の態様の複合体の使用を提供する。第３の態様はまた、増殖性疾患の治療に用いるための、本発明の第１の態様の複合体も提供する。第３の態様はまた、増殖性疾患を治療する方法であって、これを必要とする患者に、治療上有効量の、本発明の第１の態様の複合体を投与することを含む、上記方法も提供する。
当業者なら、候補の複合体が任意の特定細胞型について増殖性症状を治療するかどうかを、容易に決定することができる。例えば、特定化合物により提供される活性を査定するのに都合良く用いることができるアッセイを、以下の実施例で記載する。
本発明の第４の態様は、本発明の第１の態様の複合体の合成であって、本発明の第２の態様の化合物（薬物リンカー）を、本発明の第１の態様に定義される通りの抗体によって複合化することを含む、上記合成を提供する。
図１は、ＮＣＩ－Ｎ８７の異種移植モデルにおける非治療と比較した、本発明の複合体の単一容量の効果を示す。 図２は、ＮＣＩ－Ｎ８７の異種移植モデルにおける非治療と比較した、本発明のより低い単一容量の同じ複合体の効果を示す。 図３は、（Ａ）本発明における使用に適している改変された抗体、（Ｂ）本発明のＰＢＤを含む抗体薬物複合体、を表す模式図を示す。 図４は、化合物１０への改変された抗体の結合を表す模式図を示す。 図５は、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂの重鎖配列及び軽鎖配列を示す。 図６は、本発明のものではない複合体と比較した、本発明の複合体の活性を示す。
定義
置換基
「任意選択的に置換されている」という句は、本明細書中で使用される場合、非置換であっても置換されていてもよい親基に関する。
他に特定されていない限り、「置換されている」という用語は、本明細書中で使用される場合、１つ以上の置換基を持つ親基に関する。「置換基」という用語は、本明細書において従来の意味で使用されており、親基に、共有結合的に結合している、場合により縮合している化学的部分を指す。多種多様の置換基が周知されており、また、種々の親基の形成及びこれらへの導入方法も周知されている。
置換基の例を、より詳細に以下に記載する。
Ｃ1-12アルキル：「Ｃ1-12アルキル」という用語は、本明細書中で使用される場合、脂肪族であっても脂環式であってもよく、また、飽和であっても不飽和（例えば、部分不飽和、完全不飽和）であってもよい、１～１２個の炭素原子を有する炭化水素化合物の１つの炭素原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分に関する。「Ｃ1-4アルキル」という用語は、本明細書中で使用される場合、脂肪族であっても脂環式であってもよく、また、飽和であっても不飽和（例えば、部分不飽和、完全不飽和）であってもよい、１～４個の炭素原子を有する炭化水素化合物の１つの炭素原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分に関する。ゆえに、「アルキル」という用語は、以下に考察されている、サブクラスのアルケニル、アルキニル、シクロアルキルなどを含む。
飽和アルキル基の例として、メチル（Ｃ1）、エチル（Ｃ2）、プロピル（Ｃ3）、ブチル（Ｃ4）、ペンチル（Ｃ5）、ヘキシル（Ｃ6）及びヘプチル（Ｃ7）が挙げられるが、これらに限定されない。
飽和直鎖アルキル基の例として、メチル（Ｃ1）、エチル（Ｃ2）、ｎ－プロピル（Ｃ3）、ｎ－ブチル（Ｃ4）、ｎ－ペンチル（アミル）（Ｃ5）、ｎ－ヘキシル（Ｃ6）及びｎ－ヘプチル（Ｃ7）が挙げられるが、これらに限定されない。
飽和分岐鎖アルキル基の例として、イソ－プロピル（Ｃ3）、イソ－ブチル（Ｃ4）、ｓｅｃ－ブチル（Ｃ4）、ｔｅｒｔ－ブチル（Ｃ4）、イソ－ペンチル（Ｃ5）、及びネオ－ペンチル（Ｃ5）が挙げられる。
Ｃ2-12アルケニル：「Ｃ2-12アルケニル」という用語は、本明細書中で使用される場合、１つ以上の炭素－炭素二重結合を有するアルキル基に関する。
不飽和アルケニル基の例として、エテニル（ビニル、－ＣＨ＝ＣＨ2）、１－プロペニル（－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ3）、２－プロペニル（アリル、－ＣＨ－ＣＨ＝ＣＨ2）、イソプロペニル（１－メチルビニル、－Ｃ（ＣＨ3）＝ＣＨ2）、ブテニル（Ｃ4）、ペンテニル（Ｃ5）、及びヘキセニル（Ｃ6）が挙げられるが、これらに限定されない。
Ｃ2-12アルキニル：「Ｃ2-12アルキニル」という用語は、本明細書中で使用される場合、１つ以上の炭素－炭素三重結合を有するアルキル基に関する。
不飽和アルキニル基の例として、エチニル（－Ｃ≡ＣＨ）及び２－プロピニル（プロパルギル、－ＣＨ2－Ｃ≡ＣＨ）が挙げられるが、これらに限定されない。
Ｃ3-12シクロアルキル：「Ｃ3-12シクロアルキル」という用語は、本明細書中で使用される場合、環式炭化水素（炭素環式）化合物の１つの脂環式環原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分であって、３～７個の環原子を含めた３～７個の炭素原子を有する、上記部分であり、シクリル基でもあるアルキル基に関する。
シクロアルキル基の例として、以下に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない：
飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロパン（Ｃ3）、シクロブタン（Ｃ4）、シクロペンタン（Ｃ5）、シクロヘキサン（Ｃ6）、シクロヘプタン（Ｃ7）、メチルシクロプロパン（Ｃ4）、ジメチルシクロプロパン（Ｃ5）、メチルシクロブタン（Ｃ5）、ジメチルシクロブタン（Ｃ6）、メチルシクロペンタン（Ｃ6）、ジメチルシクロペンタン（Ｃ7）及びメチルシクロヘキサン（Ｃ7）、
不飽和単環式炭化水素化合物：
シクロプロペン（Ｃ3）、シクロブテン（Ｃ4）、シクロペンテン（Ｃ5）、シクロヘキセン（Ｃ6）、メチルシクロプロペン（Ｃ4）、ジメチルシクロプロペン（Ｃ5）、メチルシクロブテン（Ｃ5）、ジメチルシクロブテン（Ｃ6）、メチルシクロペンテン（Ｃ6）、ジメチルシクロペンテン（Ｃ7）及びメチルシクロヘキセン（Ｃ7）、ならびに
飽和多環式炭化水素化合物：
ノルカラン（Ｃ7）、ノルピナン（Ｃ7）、ノルボルナン（Ｃ7）。
Ｃ3-20ヘテロシクリル：「Ｃ3-20ヘテロシクリル」という用語は、本明細書中で使用される場合、複素環式化合物の１つの環原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分であって、３～２０個の環原子を有し、このうち１～１０個が環ヘテロ原子である、上記部分に関する。好ましくは、各環が、３～７個の環原子を有し、このうち１～４個が環ヘテロ原子である。
この文脈において、接頭語（例えば、Ｃ3-20、Ｃ3-7、Ｃ5-6など）は、炭素原子又はヘテロ原子にかかわらず、環原子数又は環原子数の範囲を示す。例えば、「Ｃ5-6ヘテロシクリル」という用語は、本明細書中で使用される場合、５又は６個の環原子を有するヘテロシクリル基に関する。
単環式ヘテロシクリル基の例として、以下に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない：
Ｎ1：アジリジン（Ｃ3）、アゼチジン（Ｃ4）、ピロリジン（テトラヒドロピロ－ル）（Ｃ5）、ピロリン（例えば、３－ピロリン、２，５－ジヒドロピロ－ル）（Ｃ5）、２Ｈ－ピロ－ル又は３Ｈ－ピロ－ル（イソピロ－ル、イソアゾ－ル）（Ｃ5）、ピペリジン（Ｃ6）、ジヒドロピリジン（Ｃ6）、テトラヒドロピリジン（Ｃ6）、アゼピン（Ｃ7）、
Ｏ1：オキシラン（Ｃ3）、オキセタン（Ｃ4）、オキソラン（テトラヒドロフラン）（Ｃ5）、オキソ－ル（ジヒドロフラン）（Ｃ5）、オキサン（テトラヒドロピラン）（Ｃ6）、ジヒドロピラン（Ｃ6）、ピラン（Ｃ6）、オキセピン（Ｃ7）、
Ｓ1：チイラン（Ｃ3）、チエタン（Ｃ4）、チオラン（テトラヒドロチオフェン）（Ｃ5）、チアン（テトラヒドロチオピラン）（Ｃ6）、チエパン（Ｃ7）、
Ｏ2：ジオキソラン（Ｃ5）、ジオキサン（Ｃ6）、及びジオキセパン（Ｃ7）、
Ｏ3：トリオキサン（Ｃ6）、
Ｎ2：イミダゾリジン（Ｃ5）、ピラゾリシン（ジアゾリジン）（Ｃ5）、イミダゾリン（Ｃ5）、ピラゾリン（ジヒドロピラゾ－ル）（Ｃ5）、ピペラジン（Ｃ6）、
Ｎ1Ｏ1：テトラヒドロオキサゾ－ル（Ｃ5）、ジヒドロオキサゾ－ル（Ｃ5）、テトラヒドロイソオキサゾ－ル（Ｃ5）、ジヒドロイソオキサゾ－ル（Ｃ5）、モルホリン（Ｃ6）、テトラヒドロオキサジン（Ｃ6）、ジヒドロオキサジン（Ｃ6）、オキサジン（Ｃ6）、
Ｎ1Ｓ1：チアゾリン（Ｃ5）、チアゾリジン（Ｃ5）、チオモルホリン（Ｃ6）、
Ｎ2Ｏ1：オキサジアジン（Ｃ6）、
Ｏ1Ｓ1：オキサチオ－ル（Ｃ5）及びオキサチアン（チオキサン）（Ｃ6）、ならびに、
Ｎ1Ｏ1Ｓ1：オキサチアジン（Ｃ6）。
置換されている単環式ヘテロシクリル基の例として、環式形態の単糖類、例えば、フラノ－ス（Ｃ5）、例えば、アラビノフラノ－ス、リキソフラノ－ス、リボフラノ－ス、及びキシロフラノ－ス、ならびにピラノ－ス（Ｃ6）、例えば、アロピラノ－ス、アルトロピラノ－ス、グルコピラノ－ス、マンノピラノ－ス、グロピラノ－ス、イドピラノ－ス、ガラクトピラノ－ス及びタロピラノ－スに由来するものが挙げられる。
Ｃ5-20アリ－ル：「Ｃ5-20アリ－ル」という用語は、本明細書中で使用される場合、芳香族化合物の１つの芳香族環原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分であって、３～２０個の環原子を有する上記部分に関する。「Ｃ5-7アリ－ル」という用語は、本明細書中で使用される場合、芳香族化合物の１つの芳香族環原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分であって、５～７個の環原子を有する当該部分に関し、「Ｃ5-10アリ－ル」という用語は、本明細書中で使用される場合、芳香族化合物の１つの芳香族環原子から１つの水素原子を除去することによって得られる一価部分であって、５～１０個の環原子を有する上記部分に関する。好ましくは、各環は、５～７個の環原子を有する。
この文脈において、接頭語（例えば、Ｃ3-20、Ｃ5-7、Ｃ5-6、Ｃ5-10など）は、炭素原子又はヘテロ原子にかかわらず、環原子数又は環原子数の範囲を示す。例えば、「Ｃ5-6アリ－ル」という用語は、本明細書中で使用される場合、５又は６個の環原子を有するアリ－ル基に関する。
上記環原子は、「カルボアリ－ル基」におけるように全て炭素原子であってよい。
カルボアリ－ル基の例として、ベンゼン（すなわちフェニル）（Ｃ6）、ナフタレン（Ｃ10）、アズレン（Ｃ10）、アントラセン（Ｃ14）、フェナントレン（Ｃ14）、ナフタセン（Ｃ18）、及びピレン（Ｃ16）に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。
縮合環を含み、その少なくとも１つが芳香族環であるアリ－ル基の例として、インダン（例えば、２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン）（Ｃ9）、インデン（Ｃ9）、イソインデン（Ｃ9）、テトラリン（１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン）（Ｃ10）、アセナフテン（Ｃ12）、フルオレン（Ｃ13）、フェナレン（Ｃ13）、アセフェナントレン（Ｃ15）、及びアセアントレン（Ｃ16）に由来する基が挙げられるが、これらに限定されない。
代替的には、上記環原子は、「ヘテロアリ－ル基」におけるように１つ以上のヘテロ原子を含んでいてよい。単環式ヘテロアリ－ル基の例として、以下に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない：
Ｎ1：ピロ－ル（アゾ－ル）（Ｃ5）、ピリジン（アジン）（Ｃ6）、
Ｏ1：フラン（オキソ－ル）（Ｃ5）、
Ｓ1：チオフェン（チオ－ル）（Ｃ5）、
Ｎ1Ｏ1：オキサゾ－ル（Ｃ5）、イソオキサゾ－ル（Ｃ5）、イソキサジン（Ｃ6）、
Ｎ2Ｏ1：オキサジアゾ－ル（フラザン）（Ｃ5）、
Ｎ3Ｏ1：オキサトリアゾ－ル（Ｃ5）、
Ｎ1Ｓ1：チアゾ－ル（Ｃ5）、イソチアゾ－ル（Ｃ5）、
Ｎ2：イミダゾ－ル（１，３－ジアゾ－ル）（Ｃ5）、ピラゾ－ル（１，２－ジアゾ－ル）（Ｃ5）、ピリダジン（１，２－ジアジン）（Ｃ6）、ピリミジン（１，３－ジアジン）（Ｃ6）（例えば、シトシン、チミン、ウラシル）、ピラジン（１，４－ジアジン）（Ｃ6）、
Ｎ3：トリアゾ－ル（Ｃ5）、トリアジン（Ｃ6）、及び、
Ｎ4：テトラゾ－ル（Ｃ5）。
縮合環を含むヘテロアリ－ルの例として：
ベンゾフラン（Ｏ1）、イソベンゾフラン（Ｏ1）、インド－ル（Ｎ1）、イソインド－ル（Ｎ1）、インドリジン（Ｎ1）、インドリン（Ｎ1）、イソインドリン（Ｎ1）、プリン（Ｎ4）（例えば、アデニン、グアニン）、ベンズイミダゾ－ル（Ｎ2）、インダゾ－ル（Ｎ2）、ベンズオキサゾ－ル（Ｎ1Ｏ1）、ベンズイソオキサゾ－ル（Ｎ1Ｏ1）、ベンゾジオキソ－ル（Ｏ2）、ベンゾフラザン（Ｎ2Ｏ1）、ベンゾトリアゾ－ル（Ｎ3）、ベンゾチオフラン（Ｓ1）、ベンゾチアゾ－ル（Ｎ1Ｓ1）、ベンゾチアジアゾ－ル（Ｎ2Ｓ）に由来する（２つの縮合環を含む）Ｃ9、
クロメン（Ｏ1）、イソクロメン（Ｏ1）、クロマン（Ｏ1）、イソクロマン（Ｏ1）、ベンゾジオキサン（Ｏ2）、キノリン（Ｎ1）、イソキノリン（Ｎ1）、キノリジン（Ｎ1）、ベンゾキサジン（Ｎ1Ｏ1）、ベンゾジアジン（Ｎ2）、ピリドピリジン（Ｎ2）、キノキサリン（Ｎ2）、キナゾリン（Ｎ2）、シンノリン（Ｎ2）、フタラジン（Ｎ2）、ナフチリジン（Ｎ2）、プテリジン（Ｎ4）に由来する（２つの縮合環を含む）Ｃ10、
ベンゾジアゼピン（Ｎ2）に由来する（２つの縮合環を含む）Ｃ11、
カルバゾ－ル（Ｎ1）、ジベンゾフラン（Ｏ1）、ジベンゾチオフェン（Ｓ1）、カルボリン（Ｎ2）、ペリミジン（Ｎ2）、ピリドインド－ル（Ｎ2）に由来する（３つの縮合環を含む）Ｃ13、ならびに、
アクリジン（Ｎ1）、キサンテン（Ｏ1）、チオキサンテン（Ｓ1）、オキサントレン（Ｏ2）、フェノキサチイン（Ｏ1Ｓ1）、フェナジン（Ｎ2）、フェノキサジン（Ｎ1Ｏ1）、フェノチアジン（Ｎ1Ｓ1）、チアントレン（Ｓ2）、フェナントリジン（Ｎ1）、フェナントロリン（Ｎ2）、フェナジン（Ｎ2）に由来する（３つの縮合環を含む）Ｃ14
が挙げられるが、これらに限定されない。
単独であるか、又は、別の置換基の一部であるかにかかわらず、上記基は、それ自体が、それ自体及び以下に列挙するさらなる置換基から選択される１つ以上の基によって任意選択的に置換されていてよい。
ハロ：－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、及び－Ｉ。
ヒドロキシ：－ＯＨ。
エ－テル：－ＯＲ、ここで、Ｒは、エ－テル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基（Ｃ1-7アルコキシ基とも称される、以下に考察されている）、Ｃ3-20ヘテロシクリル基（Ｃ3-20ヘテロシクリルオキシ基とも称される）、又はＣ5-20アリ－ル基（Ｃ5-20アリ－ルオキシ基とも称される）、好ましくはＣ1-7アルキル基である。
アルコキシ：－ＯＲ、ここで、Ｒは、アルキル基、例えば、Ｃ1-7アルキル基である。Ｃ1-7アルコキシ基の例として、－ＯＭｅ（メトキシ）、－ＯＥｔ（エトキシ）、－Ｏ（ｎＰｒ）（ｎ－プロポキシ）、－Ｏ（ｉＰｒ）（イソプロポキシ）、－Ｏ（ｎＢｕ）（ｎ－ブトキシ）、－Ｏ（ｓＢｕ）（ｓｅｃ－ブトキシ）、－Ｏ（ｉＢｕ）（イソブトキシ）、及び－Ｏ（ｔＢｕ）（ｔｅｒｔ－ブトキシ）が挙げられるが、これらに限定されない。
アセタ－ル：－ＣＨ（ＯＲ1）（ＯＲ2）、ここで、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アセタ－ル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、若しくはＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基であり、又は、「環式」アセタ－ル基の場合、Ｒ1及びＲ2は、これらが結合している２つの酸素原子、及びこれらが結合している炭素原子と一緒になって、４～８個の環原子を有する複素環式環を形成している。アセタ－ル基の例として、－ＣＨ（ＯＭｅ）2、－ＣＨ（ＯＥｔ）2、及び－ＣＨ（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。
ヘミアセタ－ル：－ＣＨ（ＯＨ）（ＯＲ1）、ここで、Ｒ1は、ヘミアセタ－ル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。ヘミアセタ－ル基の例として、－ＣＨ（ＯＨ）（ＯＭｅ）及び－ＣＨ（ＯＨ）（ＯＥｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。
ケタ－ル：－ＣＲ（ＯＲ1）（ＯＲ2）、ここで、Ｒ1及びＲ2は、アセタ－ルについて定義されている通りであり、Ｒは、水素以外のケタ－ル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。ケタ－ル基の例として、－Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）2、－Ｃ（Ｍｅ）（ＯＥｔ）2、－Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）、－Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）2、－Ｃ（Ｅｔ）（ＯＥｔ）2、及び－Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。
ヘミケタ－ル：－ＣＲ（ＯＨ）（ＯＲ1）、ここで、Ｒ1は、ヘミアセタ－ルについて定義されている通りであり、Ｒは、水素以外のヘミケタ－ル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。ヘミアセタ－ル基の例として、－Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、－Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、－Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）、及び－Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。
オキソ（ケト、－オン）：＝Ｏ。
チオン（チオケトン）：＝Ｓ。
イミノ（イミン）：＝ＮＲ、ここで、Ｒは、イミノ置換基、例えば、水素、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくは水素又はＣ1-7アルキル基である。エステル基の例として、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ、＝ＮＥｔ、及び＝ＮＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。
ホルミル（カルボアルデヒド、カルボキシアルデヒド）：－Ｃ（＝Ｏ）Ｈ。
アシル（ケト）：－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒは、アシル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基（Ｃ1-7アルキルアシル若しくはＣ1-7アルカノイルとも称される）、Ｃ3-20ヘテロシクリル基（Ｃ3-20ヘテロシクリルアシルとも称される）、又はＣ5-20アリ－ル基（Ｃ5-20アリ－ルアシルとも称される）、好ましくはＣ1-7アルキル基である。アシル基の例として、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ3（アセチル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2ＣＨ3（プロピオニル）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ3）3（ｔ－ブチリル）、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ（ベンゾイル、フェノン）が挙げられるが、これらに限定されない。
カルボキシ（カルボン酸）：－Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ。
チオカルボキシ（チオカルボン酸）：－Ｃ（＝Ｓ）ＳＨ。
チオロカルボキシ（チオロカルボン酸）：－Ｃ（＝Ｏ）ＳＨ。
チオノカルボキシ（チオノカルボン酸）：－Ｃ（＝Ｓ）ＯＨ。
イミド酸：－Ｃ（＝ＮＨ）ＯＨ。
ヒドロキサム酸：－Ｃ（＝ＮＯＨ）ＯＨ。
エステル（カルボキシラ－ト、カルボン酸エステル、オキシカルボニル）：－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ、ここで、Ｒは、エステル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。エステル基の例として、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ2ＣＨ3、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ3）3、及び－Ｃ（＝Ｏ）ＯＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。
アシルオキシ（逆エステル）：－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒは、アシルオキシ置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。アシルオキシ基の例として、－ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ3（アセトキシ）、－ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ2ＣＨ3、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ3）3、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｐｈ、及び－ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｐｈが挙げられるが、これらに限定されない。
オキシカルボイルオキシ：－ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ、ここで、Ｒは、エステル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。エステル基の例として、－ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、－ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ2ＣＨ3、－ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ3）3、及び－ＯＣ（＝Ｏ）ＯＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。
アミノ：－ＮＲ1Ｒ2、ここで、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アミノ置換基、例えば、水素、Ｃ1-7アルキル基（Ｃ1-7アルキルアミノ若しくはジ－Ｃ1-7アルキルアミノとも称される）、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＨ又はＣ1-7アルキル基であり、あるいは、「環式」アミノ基の場合、Ｒ1及びＲ2は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、４～８個の環原子を有する複素環式環を形成している。アミノ基は、第一級（－ＮＨ2）、第二級（－ＮＨＲ1）、又は第三級（－ＮＨＲ1Ｒ2）であってよく、カチオン形態では、第四級（－+ＮＲ1Ｒ2Ｒ3）であってよい。アミノ基の例として、－ＮＨ2、－ＮＨＣＨ3、－ＮＨＣ（ＣＨ3）2、－Ｎ（ＣＨ3）2、－Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2、及び－ＮＨＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。環式アミノ基の例として、アジリジノ、アゼチジノ、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ、及びチオモルホリノが挙げられるが、これらに限定されない。
アミド（カルバモイル、カルバミル、アミノカルボニル、カルボキサミド）：－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ1Ｒ2、ここで、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アミノ基について定義されているアミノ置換基である。アミド基の例として、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ3、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ2ＣＨ3、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2、ならびに、Ｒ1及びＲ2が、これらが結合している窒素原子と一緒になって、例えば、ピペリジノカルボニル、モルホリノカルボニル、チオモルホリノカルボニル、及びピペラジノカルボニルにおけるように複素環式構造を形成しているアミド基が挙げられるが、これらに限定されない。
チオアミド（チオカルバミル）：－Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ1Ｒ2、ここで、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アミノ基について定義されているアミノ置換基である。アミド基の例として、－Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ3、－Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（ＣＨ3）2、及び－Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ2ＣＨ3が挙げられるが、これらに限定されない。
アシルアミド（アシルアミノ）：－ＮＲ1Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、ここで、Ｒ1は、アミド置換基、例えば、水素、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくは水素又はＣ1-7アルキル基であり、Ｒ2は、アシル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくは水素又はＣ1-7アルキル基である。アシルアミド基の例として、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ3、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ2ＣＨ3、及び－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｐｈが挙げられるが、これらに限定されない。Ｒ1及びＲ2は、例えば、スクシンイミジル、マレイミジル、及びフタルイミジル：
Figure 0007220203000025
 におけるように、一緒になって環式構造を形成していてよい。
アミノカルボニルオキシ：－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ1Ｒ2、ここで、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アミノ基について定義されているアミノ置換基である。アミノカルボニルオキシ基の例として、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ2、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＭｅ、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＭｅ2、及び－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＥｔ2が挙げられるが、これらに限定されない。
ウレイド：－Ｎ（Ｒ1）ＣＯＮＲ2Ｒ3、ここで、Ｒ2及びＲ3は、独立して、アミノ基について定義されているアミノ置換基であり、Ｒ1は、ウレイド置換基、例えば、水素、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくは水素又はＣ1-7アルキル基である。ウレイド基の例として、－ＮＨＣＯＮＨ2、－ＮＨＣＯＮＨＭｅ、－ＮＨＣＯＮＨＥｔ、－ＮＨＣＯＮＭｅ2、－ＮＨＣＯＮＥｔ2、－ＮＭｅＣＯＮＨ2、－ＮＭｅＣＯＮＨＭｅ、－ＮＭｅＣＯＮＨＥｔ、－ＮＭｅＣＯＮＭｅ2、及び－ＮＭｅＣＯＮＥｔ2が挙げられるが、これらに限定されない。
グアニジノ：－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ2。
テトラゾリル：４個の窒素原子及び１個の炭素原子を有する５員の芳香族環：
Figure 0007220203000026
イミノ：＝ＮＲ、ここで、Ｒは、イミノ置換基、例えば、例えば、水素、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＨ又はＣ1-7アルキル基である。イミノ基の例として、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ、及び＝ＮＥｔが挙げられるが、これらに限定されない。
アミジン（アミジノ）：－Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ2、ここで、各Ｒは、アミジン置換基、例えば、水素、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＨ又はＣ1-7アルキル基である。アミジン基の例として、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ2、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＭｅ2、及び－Ｃ（＝ＮＭｅ）ＮＭｅ2が挙げられるが、これらに限定されない。
ニトロ：－ＮＯ2。
ニトロソ：－ＮＯ。
アジド：－Ｎ3。
シアノ（ニトリル、カルボニトリル）：－ＣＮ。
イソシアノ：－ＮＣ。
シアナト：－ＯＣＮ。
イソシアナト：－ＮＣＯ。
チオシアノ（チオシアナト）：－ＳＣＮ。
イソチオシアノ（イソチオシアナト）：－ＮＣＳ。
スルフヒドリル（チオ－ル、メルカプト）：－ＳＨ。
チオエ－テル（スルフィド）：－ＳＲ、ここで、Ｒは、チオエ－テル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基（Ｃ1-7アルキルチオ基とも称される）、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。Ｃ1-7アルキルチオ基の例として、－ＳＣＨ3及び－ＳＣＨ2ＣＨ3が挙げられるが、これらに限定されない。
ジスルフィド：－ＳＳ－Ｒ、ここで、Ｒは、ジスルフィド置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基（本明細書においてＣ1-7アルキルジスルフィドとも称される）である。Ｃ1-7アルキルジスルフィド基の例として、－ＳＳＣＨ3及び－ＳＳＣＨ2ＣＨ3が挙げられるが、これらに限定されない。
スルフィン（スルフィニル、スルホキシド）：－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒは、スルフィン置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルフィン基の例として、－Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ3及び－Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ2ＣＨ3が挙げられるが、これらに限定されない。
スルホン（スルホニル）：－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ、ここで、Ｒは、スルホン置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくは、例えば、フッ素化若しくは過フッ素化Ｃ1-7アルキル基を含めたＣ1-7アルキル基である。スルホン基の例として、－Ｓ（＝Ｏ）2ＣＨ3（メタンスルホニル、メシル）、－Ｓ（＝Ｏ）2ＣＦ3（トリフリル）、－Ｓ（＝Ｏ）2ＣＨ2ＣＨ3（エシル）、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｃ4Ｆ9（ノナフリル）、－Ｓ（＝Ｏ）2ＣＨ2ＣＦ3（トレシル）、－Ｓ（＝Ｏ）2ＣＨ2ＣＨ2ＮＨ2（タウリル）、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｐｈ（フェニルスルホニル、ベシル）、４－メチルフェニルスルホニル（トシル）、４－クロロフェニルスルホニル（クロシル）、４－ブロモフェニルスルホニル（ブロシル）、４－ニトロフェニル（ノシル）、２－ナフタレンスルホナ－ト（ナプシル）、及び５－ジメチルアミノ－ナフタレン－１－イルスルホナ－ト（ダンシル）が挙げられるが、これらに限定されない。
スルフィン酸（スルフィノ）：－Ｓ（＝Ｏ）ＯＨ、－ＳＯ2Ｈ。
スルホン酸（スルホ）：－Ｓ（＝Ｏ）2ＯＨ、－ＳＯ3Ｈ。
スルフィナ－ト（スルフィン酸エステル）：－Ｓ（＝Ｏ）ＯＲ；ここで、Ｒは、スルフィナ－ト置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルフィナ－ト基の例として、－Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ3（メトキシスルフィニル；メチルスルフィナ－ト）及び－Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ2ＣＨ3（エトキシスルフィニル；エチルスルフィナ－ト）が挙げられるが、これらに限定されない。
スルホナ－ト（スルホン酸エステル）：－Ｓ（＝Ｏ）2ＯＲ、ここで、Ｒは、スルホナ－ト置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルホナ－ト基の例として、－Ｓ（＝Ｏ）2ＯＣＨ3（メトキシスルホニル；メチルスルホナ－ト）及び－Ｓ（＝Ｏ）2ＯＣＨ2ＣＨ3（エトキシスルホニル；エチルスルホナ－ト）が挙げられるが、これらに限定されない。
スルフィニルオキシ：－ＯＳ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒは、スルフィニルオキシ置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルフィニルオキシ基の例として、－ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ3及び－ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ2ＣＨ3が挙げられるが、これらに限定されない。
スルホニルオキシ：－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｒ、ここで、Ｒは、スルホニルオキシ置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルホニルオキシ基の例として、－ＯＳ（＝Ｏ）2ＣＨ3（メシラ－ト）及び－ＯＳ（＝Ｏ）2ＣＨ2ＣＨ3（エシラ－ト）が挙げられるが、これらに限定されない。
サルフェ－ト：－ＯＳ（＝Ｏ）2ＯＲ、ここで、Ｒは、サルフェ－ト置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。サルフェ－ト基の例として、－ＯＳ（＝Ｏ）2ＯＣＨ3及び－ＳＯ（＝Ｏ）2ＯＣＨ2ＣＨ3が挙げられるが、これらに限定されない。
スルファミル（スルファモイル、スルフィン酸アミド、スルフィンアミド）：－Ｓ（＝Ｏ）ＮＲ1Ｒ2、ここで、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アミノ基について定義されているアミノ置換基である。スルファミル基の例として、－Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ3）、－Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ3）2、－Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ2ＣＨ3）、－Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2、及び－Ｓ（＝Ｏ）ＮＨＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。
スルホンアミド（スルフィナモイル、スルホン酸アミド、スルホンアミド）：－Ｓ（＝Ｏ）2ＮＲ1Ｒ2、ここで、Ｒ1及びＲ2は、独立して、アミノ基について定義されているアミノ置換基である。スルホンアミド基の例として、－Ｓ（＝Ｏ）2ＮＨ2、－Ｓ（＝Ｏ）2ＮＨ（ＣＨ3）、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（ＣＨ3）2、－Ｓ（＝Ｏ）2ＮＨ（ＣＨ2ＣＨ3）、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2、及び－Ｓ（＝Ｏ）2ＮＨＰｈが挙げられるが、これらに限定されない。
スルファミノ：－ＮＲ1Ｓ（＝Ｏ）2ＯＨ、ここで、Ｒ1は、アミノ基について定義されているアミノ置換基である。スルファミノ基の例として、－ＮＨＳ（＝Ｏ）2ＯＨ及び－Ｎ（ＣＨ3）Ｓ（＝Ｏ）2ＯＨが挙げられるが、これらに限定されない。
スルホンアミノ：－ＮＲ1Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ、ここで、Ｒ1は、アミノ基について定義されているアミノ置換基であり、Ｒは、スルホンアミノ置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルホンアミノ基の例として、－ＮＨＳ（＝Ｏ）2ＣＨ3及び－Ｎ（ＣＨ3）Ｓ（＝Ｏ）2Ｃ6Ｈ5が挙げられるが、これらに限定されない。
スルフィンアミノ：－ＮＲ1Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒ1は、アミノ基について定義されているアミノ置換基であり、Ｒは、スルフィンアミノ置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基である。スルフィンアミノ基の例として、－ＮＨＳ（＝Ｏ）ＣＨ3及び－Ｎ（ＣＨ3）Ｓ（＝Ｏ）Ｃ6Ｈ5が挙げられるが、これらに限定されない。
ホスフィノ（ホスフィン）：－ＰＲ2、ここで、Ｒは、ホスフィノ置換基、例えば、－Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくは－Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、又はＣ5-20アリ－ル基である。ホスフィノ基の例として、－ＰＨ2、－Ｐ（ＣＨ3）2、－Ｐ（ＣＨ2ＣＨ3）2、－Ｐ（ｔ－Ｂｕ）2、及び－Ｐ（Ｐｈ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
ホスホ：－Ｐ（＝Ｏ）2。
ホスフィニル（ホスフィンオキシド）：－Ｐ（＝Ｏ）Ｒ2、ここで、Ｒは、ホスフィニル置換基、例えば、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくはＣ1-7アルキル基又はＣ5-20アリ－ル基である。ホスフィニル基の例として、－Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ3）2、－Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ2ＣＨ3）2、－Ｐ（＝Ｏ）（ｔ－Ｂｕ）2、及び－Ｐ（＝Ｏ）（Ｐｈ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
ホスホン酸（ホスホノ）：－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）2。
ホスホナ－ト（ホスホノエステル）：－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）2、ここで、Ｒは、ホスホナ－ト置換基、例えば、－Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくは－Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、又はＣ5-20アリ－ル基である。ホスホナ－ト基の例として、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ3）2、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ2ＣＨ3）2、－Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ－ｔ－Ｂｕ）2、及び－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
リン酸（ホスホノオキシ）：－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）2。
ホスフェ－ト（ホスホノオキシエステル）：－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）2、ここで、Ｒは、ホスフェ－ト置換基、例えば、－Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくは－Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、又はＣ5-20アリ－ル基である。ホスフェ－ト基の例として、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ3）2、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ2ＣＨ3）2、－ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ－ｔ－Ｂｕ）2、及び－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
亜リン酸：－ＯＰ（ＯＨ）2。
ホスファイト：－ＯＰ（ＯＲ）2、ここで、Ｒは、ホスファイト置換基、例えば、－Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくは－Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、又はＣ5-20アリ－ル基である。ホスファイト基の例として、－ＯＰ（ＯＣＨ3）2、－ＯＰ（ＯＣＨ2ＣＨ3）2、－ＯＰ（Ｏ－ｔ－Ｂｕ）2、及び－ＯＰ（ＯＰｈ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
ホスホロアミダイト：－ＯＰ（ＯＲ1）－ＮＲ2 2、ここで、Ｒ1及びＲ2は、ホスホロアミダイト置換基、例えば、－Ｈ、（任意選択的に置換されている）Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくは－Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、又はＣ5-20アリ－ル基である。ホスホロアミダイト基の例として、－ＯＰ（ＯＣＨ2ＣＨ3）－Ｎ（ＣＨ3）2、－ＯＰ（ＯＣＨ2ＣＨ3）－Ｎ（ｉ－Ｐｒ）2、及び－ＯＰ（ＯＣＨ2ＣＨ2ＣＮ）－Ｎ（ｉ－Ｐｒ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
ホスホロアミダ－ト：－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ1）－ＮＲ2 2、ここで、Ｒ1及びＲ2は、ホスホロアミダ－ト置換基、例えば、－Ｈ、（任意選択的に置換されている）Ｃ1-7アルキル基、Ｃ3-20ヘテロシクリル基、又はＣ5-20アリ－ル基、好ましくは－Ｈ、Ｃ1-7アルキル基、又はＣ5-20アリ－ル基である。ホスホロアミダ－ト基の例として、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ2ＣＨ3）－Ｎ（ＣＨ3）2、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ2ＣＨ3）－Ｎ（ｉ－Ｐｒ）2、及び－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ2ＣＨ2ＣＮ）－Ｎ（ｉ－Ｐｒ）2が挙げられるが、これらに限定されない。
アルキレン
Ｃ3-12アルキレン：「Ｃ3-12アルキレン」という用語は、本明細書中で使用される場合、脂肪族であっても脂環式であってもよく、また、飽和、部分不飽和、又は完全不飽和であってよい、３～１２個の炭素原子（他に特定されない限り）を有する炭化水素化合物の２つの水素原子であって、両方が同じ炭素原子からであるか、２つの異なる炭素原子のそれぞれからのものであるかのいずれかである当該２つの水素原子を除去することによって得られる二座部分に関する。ゆえに、「アルキレン」という用語には、以下に考察されている、サブクラスのアルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンなどが含まれる。
直鎖飽和Ｃ3-12アルキレン基の例として、ｎが３～１２の整数である－（ＣＨ2）n－、例えば、－ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2－（プロピレン）、－ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2－（ブチレン）、－ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2－（ペンチレン）及び－ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ－2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2－（ヘプチレン）が挙げられるが、これらに限定されない。
分岐鎖飽和Ｃ3-12アルキレン基の例として、－ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2－、－ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2－、－ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2－、－ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2－、－ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2－、－ＣＨ（ＣＨ2ＣＨ3）－、－ＣＨ（ＣＨ2ＣＨ3）ＣＨ2－、及び－ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ2ＣＨ3）ＣＨ2－が挙げられるが、これらに限定されない。
直鎖部分不飽和Ｃ3-12アルキレン基（Ｃ3-12アルケニレン、及びアルキニレン基）として、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ2－、－ＣＨ2－ＣＨ＝ＣＨ2－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－ＣＨ2－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ2－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ2－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ2－ＣＨ2－ＣＨ＝ＣＨ－、及び－ＣＨ2－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ2－が挙げられるが、これらに限定されない。
分岐鎖部分不飽和Ｃ3-12アルキレン基（Ｃ3-12アルケニレン及びアルキニレン基）の例として、－Ｃ（ＣＨ3）＝ＣＨ－、－Ｃ（ＣＨ3）＝ＣＨ－ＣＨ2－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ（ＣＨ3）－及び－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ（ＣＨ3）－が挙げられるが、これらに限定されない。
脂環式飽和Ｃ3-12アルキレン基（Ｃ3-12シクロアルキレン）の例として、シクロペンチレン（例えば、シクロペンタ－１，３－イレン）、及びシクロヘキシレン（例えば、シクロヘキサ－１，４－イレン）が挙げられるが、これらに限定されない。
脂環式部分不飽和Ｃ3-12アルキレン基（Ｃ3-12シクロアルキレン）の例として、シクロペンテニレン（例えば、４－シクロペンテン－１，３－イレン）、シクロヘキセニレン（例えば、２－シクロヘキセン－１，４－イレン、３－シクロヘキセン－１，２－イレン、２，５－シクロヘキサジエン－１，４－イレン）が挙げられるが、これらに限定されない。
リガンド単位
本発明に使用するリガンド単位は、細胞結合剤、より具体的に、各重鎖上に少なくとも１つの複合化部位を含む、改変された抗体、又はその抗原結合フラグメントである。本発明に従う使用に適している特定の改変された抗体の例は、参照により本明細書に援用される、ＷＯ２０１２／０６４７３３（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０５９７７５として出願されている）に開示されている。
抗体
「抗体」という用語は、本明細書中、最も広義の意味で用いられ、具体的には、モノクロ－ナル抗体、ポリクロ－ナル抗体、二量体、多量体、多特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、及び抗体断片を包含するが、ただし、それらが所望の生物活性を示す限りにおいてである（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｊｏｕｒ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １７０：４８５４－４８６１）。抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、又は他の種由来抗体が可能である。抗体とは、免疫系により産生される、特定の抗原を認識してそれに結合することができるタンパク質である。（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。標的抗原は、一般に、複数の抗体のＣＤＲで認識される多数の結合部位（エピト－プとも呼ばれる）を有する。異なるエピト－プに特異的に結合する抗体は、それぞれ異なる構造を有する。したがって、１つの抗原は、１つより多い対応する抗体を有する可能性がある。抗体として、全長免疫グロブリン分子又は全長免疫グロブリン分子の免疫学的活性部分、すなわち、注目している標的の抗原に免疫学的に結合する抗原結合部位又はその一部分を有する分子が挙げられ、そのような標的として、癌細胞又は自己免疫疾患に関連した自己免疫抗体を産生する細胞が挙げられるが、これらに限定されない。免疫グロブリンは、任意の型（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）又はサブクラスの免疫グロブリン分子が可能である。免疫グロブリンは、任意の種由来のものが可能であり、ヒト、マウス、又はウサギ起原が挙げられる。
「抗体断片」は、全長抗体の一部分、一般には全長抗体の抗原結合領域又は可変領域を含む。抗体断片の例として、Ｆ（ａｂ’）2、及びｓｃＦｖ断片、及び上記のもののいずれかの、癌細胞抗原、ウイルス抗原、又は微生物抗原に免疫学的に結合する二量体のエピト－プ結合断片、単鎖抗体分子；ならびに、抗体断片から形成される多特異性抗体が挙げられる。
本発明における使用に適している改変された抗体は、天然鎖間システイン残基がチオ－ル基を欠くアミノ酸残基に置換されているものを含む。これらの抗体は、リンカーへの結合に適している反応基を含むアミノ酸残基の各重鎖において、少なくとも１つの追加の置換を有することができる。さらに置換されたアミノ酸は、システイン又は非天然アミノ酸であることができる。置換されている位置は、以下に記載されるものから選択されることができる：
Figure 0007220203000027
本発明の使用に適している改変された抗体の例は、本明細書に援用されている、ＷＯ２０１２／０６４７３３に開示されるＦｌｅｘｍａｂ構造体を含む。これらのようなＦｌｅｘｍａｂは、本発明のＰＢＤのＮ１０基を介して結合するための複合化部位として使用されることができる抗体のヒンジ領域中に遊離チオ－ル基を含有するシステインを含む。
本発明の使用に適している改変された抗体の他の例は、システインが抗体中の選択された部位に挿入されているものを含む。これらは、Ｄｉｍａｓｉ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２０１７，１４，１５０１－１５１６（ＤＯＩ：１０．１０２１／ａｃｓ．ｍｏｌｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．６ｂ００９９５）及びＷＯ２０１５／１５７５９５に記載されている。特に、Ｓ２３９位後の（すなわち、位置２３９と２４０との間の）システインの挿入によって改変されている抗体が有用である。
本明細書に援用される、ＷＯ／２０１２／０６４７３３の６０から６２頁に列挙されているものに参照を行う。いくつかの実施形態において、抗体は、腫瘍関連抗原、例えば：ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）；ＥＰＨＡ２（ＥＰＨ受容体Ａ２）；ＣＤ１９；ＩＬ２ＲＡ（インタ－ロイキン２受容体、アルファ）に対するものであることができる。
本発明の実施形態で使用される腫瘍関連抗原及び同族の抗体を、以下に列挙し、本明細書に援用されるＷＯ／２０１７／１８６８９４の１４から８６頁にさらに詳細に記述する。
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質タンパク質受容体ＩＢ型）
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通型上皮抗原）
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６）
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ－３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質輸送体ファミリ－３４（リン酸ナトリウム）、メンバ－２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）
（７）Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、ｓｅｍａドメイン、７回トロンボスポンジン反復配列（ｓｅｖｅｎ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｒｅｐｅａｔｓ）（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）、及び短細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）
（８）ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ－１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通型上皮抗原２、６回膜貫通型前立腺タンパク質）
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容器電位カチオン５チャンネル、サブファミリ－Ｍ、メンバ－４）
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形腫由来増殖因子）
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）又はＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタイン・バ－ウイルス受容体）又はＨｓ．７３７９２）
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連β）、Ｂ２９）
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファタ－ゼアンカ－タンパク質 ５ １ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）
（１７）ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）
（１８）ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６）
（１９）ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１）
（２０）ＩＬ２０Ｒ－α（ＩＬ２０Ｒａ、ＺＣＹＴＯＲ７）
（２１）ブレビカン（ＢＣＡＮ、ＢＥＨＡＢ）
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ、ＥＲＫ、Ｈｅｋ５、ＥＰＨＴ３、Ｔｙｒｏ５）
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｂ７ｈ）
（２４）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体）
（２５）ＧＥＤＡ
（２６）ＢＡＦＦ－Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２－Ｂアイソフォ－ム、ＢＬ－ＣＡＭ、Ｌｙｂ－８、Ｌｙｂ８、ＳＩＧＬＥＣ－２、ＦＬＪ２２８１４）
（２７ａ）ＣＤ２２（ＣＤ２２分子）
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α）、免疫グロブリン関連α、Ｂ細胞特異的タンパク質（Ｉｇβ（ＣＤ７９Ｂ）と共有結合で相互作用し、表面でＩｇＭ分子と複合体を形成し、Ｂ細胞分化に関与するシグナルを伝達する）、ｐＩ：４．８４、ＭＷ：２５０２８、ＴＭ：２［Ｐ］、遺伝子染色体：１９ｑ１３．２）。
（２９）ＣＸＣＲ５（バ－キットリンパ腫受容体１、ＣＸＣＬ１３ケモカインにより活性化されるＧタンパク質共役受容体、このＧタンパク質共役受容体は、リンパ球遊走及び体液性防御において機能し、ＨＩＶ－２感染、ならびに恐らくはＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫、及び白血病の発症において役割を果たす）。３７２ａａ、ｐｌ：８．５４、ＭＷ：４１９５９、ＴＭ：７［Ｐ］、遺伝子染色体：１１ｑ２３．３。
（３０）ＨＬＡ－ＤＯＢ（ペプチドに結合して、２０個のそのペプチドをＣＤ４＋Ｔリンパ球に提供するＭＨＣクラスＩＩ分子のβサブユニット（Ｉａ抗原））、２７３ａａ、ｐＩ：６．５６、ＭＷ：３０８２０、ＴＭ：１［Ｐ］、遺伝子染色体：６ｐ２１．３）
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン作動性受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャンネル５、細胞外ＡＴＰにより開口するイオンチャンネルであり、このチャンネルは、シナプス伝達及び神経新生に関与している可能性があり、この不全が突発性排尿筋不安定という病態生理の一因である可能性がある）、４２２ａａ）、ｐＩ：７．６３、ＭＷ：４７２０６、ＴＭ：１［Ｐ］、遺伝子染色体：１７ｐ１３．３）。
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ－２）；３５９ａａ、ｐＩ：８．６６、ＭＷ：４０２２５、ＴＭ：１５［Ｐ］、遺伝子染色体：９ｐ１３．３）。
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンに富む反復配列（ＬＲＲ）ファミリ－のＩ型膜タンパク質であり、Ｂ細胞活性化及びアポト－シスを制御し、この機能喪失は、全身性エリトマト－デスの患者で疾患活性の上昇を伴う）。６６１ａａ、ｐＩ：６．２０、ＭＷ：７４１４７、ＴＭ：１［Ｐ］、遺伝子染色体：５ｑ１２）。
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１、免疫グロブリンＦｃドメインの推定受容体であり、Ｃ２型Ｉｇ様ドメイン及びＩＴＡＭドメインを含有し、Ｂリンパ球分化において役割を果たす可能性がある）；４２９ａａ、ｐＩ：５．２８、ＭＷ：４６９２５ ＴＭ：１［Ｐ］、遺伝子染色体：１ｑ２１－１ｑ２２）
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンス－パ－ファミリ－受容体転座関連２、Ｂ細胞発達及びリンパ腫形成で役割を担っている可能性がある推定免疫受容体である。転位置による遺伝子の調節解除が、ある種のＢ細胞悪性腫瘍で生じる）。９７７ａａ、ｐＩ：６．８８、ＭＷ：１０６４６８、ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１）
（３６）ＴＥＮＢ２（ＴＭＥＦＦ２、トモレギュリン（ｔｏｍｏｒｅｇｕｌｉｎ）、ＴＰＥＦ、ＨＰＰ１、ＴＲ、推定膜貫通プロテオグリカン、増殖因子及びフォリスタチンのＥＧＦ／ヘレグリンファミリ－と関連）。３７４ａａ）
（３７）ＰＳＭＡ－ＦＯＬＨ１（葉酸ヒドロラ－ゼ（前立腺特異的膜抗原）１）
（３８）ＳＳＴ（ソマトスタチン受容体；注、５つのサブタイプが存在する）
（３８．１）ＳＳＴＲ２（ソマトスタチン受容体２）
（３８．２）ＳＳＴＲ５（ソマトスタチン受容体５）
（３８．３）ＳＳＴＲ１
（３８．４）ＳＳＴＲ３
（３８．５）ＳＳＴＲ４
ＡｖＢ６－両方のサブユニット（３９＋４０）
（３９）ＩＴＧＡＶ（インテグリン、αＶ）
（４０）ＩＴＧＢ６（インテグリン、β６）
（４１）ＣＥＡＣＡＭ５（癌胎児抗原関連細胞接着分子５）
（４２）ＭＥＴ（ｍｅｔ癌原遺伝子；肝細胞増殖因子受容体）
（４３）ＭＵＣ１（ムチン１、細胞表面関連）
（４４）ＣＡ９（炭酸脱水酵素ＩＸ）
（４５）ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、転写物変異型３）
（４６）ＣＤ３３（ＣＤ３３分子）
（４７）ＣＤ１９（ＣＤ１９分子）
（４８）ＩＬ２ＲＡ（インタ－ロイキン２受容体、α）、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０００４１７．２）
（４９）ＡＸＬ（ＡＸＬ受容体チロシンキナ－ゼ）
（５０）ＣＤ３０－ＴＮＦＲＳＦ８（腫瘍壊死因子受容体ス－パ－ファミリ－、メンバ－８）
（５１）ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）－ＴＮＦＲＳＦ１７（腫瘍壊死因子受容体ス－パ－ファミリ－、メンバ－１７）
（５２）ＣＴ Ａｇｓ－ＣＴＡ（癌精巣抗原）
（５３）ＣＤ１７４（ルイス式Ｙ）－ＦＵＴ３（フコシルトランスフェラ－ゼ３（ガラクトシド３（４）－Ｌ－フコシルトランスフェラ－ゼ、ルイス式血液型群）
（５４）ＣＬＥＣ１４Ａ（Ｃ型レクチンドメインファミリ－１４、メンバ－Ａ、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＭ１７５０６０）
（５５）ＧＲＰ７８－ＨＳＰＡ５（熱ショック７０ｋＤａタンパク質５（グルコ－ス制御タンパク質、７８ｋＤａ）
（５６）ＣＤ７０（ＣＤ７０分子）Ｌ０８０９６
（５７）幹細胞特異的抗原。例えば、以下：
・５Ｔ４（以下のエントリ－（６３）を参照）
・ＣＤ２５（上記エントリ－（４８）を参照）
・ＣＤ３２
・ＬＧＲ５／ＧＰＲ４９
・プロミニン（Ｐｒｏｍｉｎｉｎ）／ＣＤ１３３
（５８）ＡＳＧ－５
（５９）ＥＮＰＰ３（エクトヌクレオチドピロホスファタ－ゼ／ホスホジエステラ－ゼ３）
（６０）ＰＲＲ４（プロリンリッチ４（涙腺））
（６１）ＧＣＣ－ＧＵＣＹ２Ｃ（グアニル酸シクラ－ゼ２Ｃ（熱安定性エンテロトキシン受容体）
（６２）Ｌｉｖ－１－ＳＬＣ３９Ａ６（溶質担体ファミリ－３９（亜鉛輸送体）、メンバ－６）
（６３）５Ｔ４、トロホブラスト糖タンパク質、ＴＰＢＧ－ＴＰＢＧ（トロホブラスト糖タンパク質）
（６４）ＣＤ５６－ＮＣＭＡ１（神経細胞接着分子１）
（６５）ＣａｎＡｇ（腫瘍関連抗原ＣＡ２４２）
（６６）ＦＯＬＲ１（葉酸受容体１）
（６７）ＧＰＮＭＢ（糖タンパク質（膜貫通型）ｎｍｂ）
（６８）ＴＩＭ－１－ＨＡＶＣＲ１（Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１）
（６９）ＲＧ－１／前立腺腫瘍標的ミンディン－ミンディン／ＲＧ－１
（７０）Ｂ７－Ｈ４－ＶＴＣＮ１（Ｖ－ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化インヒビタ－１）
（７１）ＰＴＫ７（ＰＴＫ７タンパク質チロシンキナ－ゼ７）
（７２）ＣＤ３７（ＣＤ３７分子）
（７３）ＣＤ１３８－ＳＤＣ１（シンデカン１）
（７４）ＣＤ７４（ＣＤ７４分子、主要組織適合遺伝子複合体、クラスＩＩインバリアント鎖）
（７５）クロ－ディン－ＣＬ（クロ－ディン）
（７６）ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）
（７７）Ｈｅｒ３（ＥｒｂＢ３）－ＥＲＢＢ３（ｖ－ｅｒｂ－ｂ２赤芽球性白血病ウイルス性癌遺伝子ホモログ３（トリ））
（７８）ＲＯＮ－ＭＳＴ１Ｒ（マクロファ－ジ刺激１受容体（ｃ－ｍｅｔ関連チロシンキナ－ゼ））
（７９）ＥＰＨＡ２（ＥＰＨ受容体Ａ２）
（８０）ＣＤ２０－ＭＳ４Ａ１（膜貫通の４つのドメイン（ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｓｐａｎｎｉｎｇ ４－ｄｏｍａｉｎｓ）、サブファミリ－Ａ、メンバ－１）
（８１）テネイシンＣ－ＴＮＣ（テネイシンＣ）
（８２）ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質、α）
（８３）ＤＫＫ－１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ１ホモログ（アフリカツメガエル））
（８４）ＣＤ５２（ＣＤ５２分子）
（８５）ＣＳ１－ＳＬＡＭＦ７（ＳＬＡＭファミリ－メンバ－７）
（８６）エンドグリン－ＥＮＧ（エンドグリン）
（８７）アネキシンＡ１－ＡＮＸＡ１（アネキシンＡ１）
（８８）Ｖ－ＣＡＭ（ＣＤ１０６）－ＶＣＡＭ１（血管細胞接着分子１）
リガンド単位へのリンカー単位の接続
リガンド単位は、ジスルフィド結合を通してリンカー単位に接続されることができる。
１つの実施形態において、リガンド単位と薬物リンカーとの間の接続は、リガンド単位のシステイン残基のチオ－ル基と、薬物リンカー単位のマレイミド基との間で形成される。結合するための他の可能な基、及び得られる連結基を下記に示す。
リガンド単位のシステイン残基は、接続を形成するためのリンカー単位の官能基との反応に利用可能であり得る。他の実施形態において、例えば、リガンド単位が抗体であるとき、抗体のチオ－ル基は、鎖間ジスルフィド結合に関与し得る。これらの鎖間結合は、例えば、リンカー単位の官能基との反応の前に、ＤＴＴによる抗体の処理によって、遊離チオ－ル基に変換され得る。
いくつかの実施形態において、システイン残基が、抗体の重鎖又は軽鎖に導入される。抗体の重鎖又は軽鎖における、置換によるシステイン挿入の位置として、公開されている米国特許出願第２００７－００９２９４０号及び国際特許公開公報ＷＯ２００８／０７０５９３に記載されているものが挙げられ、これらの文献は、本明細書に援用される。
治療方法
本発明の化合物は、治療方法で使用することができる。治療方法も提供され、本方法は、治療を必要としている治療対象に、治療上有効量の式Ｉの複合体を投与することを含む。「治療上有効量」という用語は、患者で有益性を示すのに十分な量である。そのような有益性とは、少なくとも１種の症状の少なくとも改善であってもよい。実際に投与される量ならびに投与の速度及び時間経過は、治療されようとしているものの性質及び重篤度に依存するだろう。治療の処方（例えば、投薬量の決定）は、一般医及び他の医師の責任能力の範囲内である。
複合体は、治療しようとする症状に応じて、単独で投与することも、又は他の治療と、同時又は順次で併用投与することもできる。治療及び療法の例として、化学療法（例えば薬物をはじめとする活性作用剤の投与）、手術、及び放射線療法が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明による、及び本発明に従って使用するための、医薬組成物（薬学的組成物）は、活性成分、すなわち式Ｉの複合体の他に、当業者に周知である薬学的に許容可能な賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤、又は他の材料を含むことができる。そのような材料は、無毒でなければならず、かつ活性成分の効力に干渉してはならない。担体又は他の材料の詳細な性質は、投与経路に依存するだろう。投与経路は、経口であってもよいし、注射、例えば皮膚注射、皮下注射、又は静脈内注射によるものでもよい。
経口投与用の医薬組成物（薬学的組成物）は、錠剤、カプセル剤、粉剤、又は液状の形状が可能である。錠剤は、固形担体又はアジュバントを含むことができる。液状医薬組成物（液状薬学的組成物）は、一般に、液状担体、例えば、水、石油、動物油若しくは植物油、鉱物油、又は合成油を含む。生理食塩水、ブドウ糖若しくは他の糖溶液、又はグリコ－ル、例えばエチレングリコ－ル、プロピレングリコ－ル、又はポリエチレングリコ－ルも含めることができる。カプセル剤は、固形担体、例えばゼラチンを含むことができる。
静脈内注射、皮膚注射、又は皮下注射、あるいは患部への注射用として、活性成分は、非経口で許容可能な水溶液の形をとることができ、この水溶液は、発熱物質を含まず、かつ適切なｐＨ、等張力、及び安定性を有する。当業者なら、例えば、等張性ビヒクル（塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸リンゲル注射液など）を用いて適切な溶液を調製することが容易にできる。保存剤、安定剤、緩衝液、抗酸化剤、及び／又は他の添加剤も、必要に応じて、含ませることができる。
複合体は、増殖性疾患及び自己免疫疾患を治療するのに使用され得る。「増殖性疾患」という用語は、過剰細胞又は異常細胞の望ましくない又は制御不能の細胞増殖に関係し、そのような増殖は、ｉｎ ｖｉｔｒｏかｉｎ ｖｉｖｏにおける、望ましくない、例えば腫瘍形成又は過形成性の増殖である。
増殖性症状の例として、良性、前悪性、及び悪性の細胞増殖が挙げられるが、これらに限定されず、そのような細胞増殖として、新生物及び腫瘍（例えば、組織球腫、神経膠腫、星状細胞腫、骨腫）、がん（例えば、肺癌、小細胞肺癌、胃腸癌、腸癌、大腸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌、膵臓癌、脳癌、肉腫、骨肉腫、カポジ肉腫、黒色腫)、白血病、乾癬、骨疾患、線維増殖性障害（例えば、結合組織のもの）、及び粥状動脈硬化が挙げられるが、これらに限定されない。対象となる他のがんとして、血液系、悪性腫瘍、例えば、白血病及びリンパ腫、例えば、非ホジキンリンパ腫、ならびにサブタイプ、例えば、ＤＬＢＣＬ、辺縁帯、マントル層及び小胞、ホジキンリンパ腫、ＡＭＬ、ならびにＢ又はＴ細胞由来の他のがんが挙げられるが、これらに限定されない。
自己免疫疾患の例として以下が挙げられる：関節リウマチ、自己免疫脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、アレルギ－性脳脊髄炎）、乾癬性関節炎、内分泌性眼障害、ぶどう膜網膜炎、全身性紅斑性狼瘡、重症筋無力症、グレ－ブス病、糸球体腎炎、自己免疫肝臓障害、炎症性腸疾患（例えば、クロ－ン病）、アナフィラキシ－、アレルギ－反応、シェ－グレン症候群、Ｉ型糖尿病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナ－肉芽腫症、線維筋痛、多発性筋炎、皮膚筋炎、多発性内分泌腺不全、シュミット症候群、自己免疫性ブドウ膜炎、アジソン病、副腎炎、甲状腺炎、橋本甲状腺炎、自己免疫性甲状腺疾患、悪性貧血、胃の萎縮症、慢性肝炎、ルポイド肝炎、粥状動脈硬化、亜急性皮膚エリテマト－デス、副甲状腺機能低下症、ドレスラ－症候群、自己免疫性血小板減少症、突発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、尋常性天疱瘡、天疱瘡、疱疹状皮膚炎、円形脱毛症、類天疱瘡、強皮症、進行性全身性硬化症、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰沈着症、レイノ－現象、食道運動障害、手指硬化症、及び毛細血管拡張症）、男性及び女性の自己免疫性不妊症、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、混合性結合組織病、結節性多発動脈炎、全身性壊死性血管炎、アトピ－性皮膚炎、アトピ－性鼻炎、グッドパスチャ－症候群、シャ－ガス病、サルコイド－シス、リウマチ熱、喘息、再発性流産、抗リン脂質症候群、農夫肺、多形性紅斑、心術後症候群、クッシング症候群、自己免疫性慢性活動性肝炎、愛鳥家肺、中毒性表皮壊死症、アルポ－ト症候群、肺胞炎、アレルギ－性肺胞炎、線維化性肺胞炎、間質性肺疾患、結節性紅斑、壊疽性膿皮症、輸血反応、高安動脈炎、リウマチ性多発性筋痛、側頭動脈炎、住血吸虫症、巨細胞性動脈炎、回虫症、アスペルギルス症、サムタ－症候群、湿疹、リンパ腫様肉芽腫症、ベ－チェット病、キャプラン症候群、川崎病、デング熱、脳脊髄炎、心内膜炎、心内膜心筋線維症、眼内炎、持久性隆起性紅斑、乾癬、胎児赤芽球症、好酸球性筋膜炎、シュルマン症候群、フェルティ症候群、フィラリア症、毛様体炎、慢性毛様体炎、異慢性毛様体炎、フックス毛様体炎、ＩｇＡ腎症、ヘノッホ－シェ－ンライン紫斑病、移植片対宿主病、移植拒絶反応、心筋症、イ－トン－ランバ－ト症候群、再発性多発性軟骨炎、クリオグロブリン血症、ワルデンストレ－ムマクログロブリン血症、エバンス症候群、及び自己免疫性腺機能不全。
いくつかの実施形態において、自己免疫疾患は、Ｂリンパ球の障害（例えば、全身性紅斑性狼瘡、グッドパスチャ－症候群、関節リウマチ、及びＩ型糖尿病）、Ｔｈ１リンパ球の障害（例えば、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、シェ－グレン症候群、橋本甲状腺炎、グレ－ブス病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナ－肉芽腫症、結核、若しくは移植片対宿主病）、又はＴｈ２リンパ球の障害（例えば、アトピ－性皮膚炎、全身性紅斑性狼瘡、アトピ－性喘息、鼻結膜炎、アレルギ－性鼻炎、オ－メン症候群、全身性硬化症、若しくは慢性移植片対宿主病）である。一般に、樹状細胞が関与する障害は、Ｔｈ１リンパ球又はＴｈ２リンパ球の障害を含む。いくつかの実施形態において、自己免疫性疾患は、Ｔ細胞媒介免疫障害である。
いくつかの実施形態において、投与される複合体の量は、用量あたり約０．０１～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態において、投与される複合体の量は、用量あたり約０．０１～約５ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態において、投与される複合体の量は、用量あたり約０．０５～約５ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態において、投与される複合体の量は、用量あたり約０．１～約５ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態において、投与される複合体の量は、用量あたり約０．１～約４ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態において、投与される複合体の量は、用量あたり約０．０５～約３ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態において、投与される複合体の量は、用量あたり約０．１～約３ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態において、投与される複合体の量は、用量あたり約０．１～約２ｍｇ／ｋｇの範囲である。
薬物積載量
薬物積載量（ｐ）は、細胞結合剤（例えば抗体）あたりのＰＢＤ薬物の平均数である。本発明において、これは、常に１である。しかしながら、いずれかの組成物は、ＰＢＤを複合化する抗体、及びＰＢＤを複合化しない抗体を含むことができる。したがって組成物に対して、薬物積載量（又はＤＡＲ）は、１未満、例えば、０．７５以上、０．８０以上、０．８５以上、０．９０以上、又は０．９５以上であることができる。
一般的な合成経路
ＰＢＤ化合物の合成は、以下の参照文献において広く論じられており、これらの考察は、参照により本明細書に援用される：
ａ）ＷＯ００／１２５０８（頁１４～３０）、
ｂ）ＷＯ２００５／０２３８１４（頁３～１０）、
ｃ）ＷＯ２００４／０４３９６３（頁２８～２９）、及び
ｄ）ＷＯ２００５／０８５２５１（頁３０～３９）。
合成経路
式Ｉの本発明の化合物は：
Figure 0007220203000028
 式２の化合物から合成され得る：
Figure 0007220203000029
 式中、Ｒ2、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ11a、Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’、Ｒ11a’、Ｙ、Ｙ’及びＲ”は、式Ｉの化合物について定義されている通りであり、Ｒpre-L1は、ＲL1の前駆体であり、Ｒpre-L2は、ＲL2－の前駆体である。この方法は、ＲL1及びＲL2が式ＩＩＩａのものである式Ｉの化合物に特に適用可能である。これらの化合物について、Ｒpre-L1及びＲpre-L2は、典型的には、ＲL1及びＲL2の部分、例えば、式ＩＩＩａ’の基である：
Figure 0007220203000030
 かかる場合において、反応は、基ＧLを付加することを含む。
式２の化合物は、式３の化合物を脱保護することによって作製され得る：
Figure 0007220203000031
 式中、Ｒ2、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ11a、Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’、Ｒ11a’、Ｙ、Ｙ’及びＲ”は、式Ｉの化合物について定義されている通りであり、Ｒpre-L1Protは、Ｒpre-L1の保護されたバ－ジョンであり、Ｒpre-L2Protは、Ｒpre-L2の保護されたバ－ジョンであり、プロットは、適切なカルボキシ／ヒドロキシ保護基を表す。
式３の化合物は、式４の化合物の閉環によって作製され得る：
Figure 0007220203000032
 ここで、閉環は、例えばスワ－ンによる酸化によって行われる。
式４の化合物は、２つのアミノ保護基の付加によって式５の化合物から合成され得る：
Figure 0007220203000033
これらの基が異なる場合、段階的付加は、１つのアミノ基の単純な保護により（例えば、Ｆｍｏｃにより）、続いて、他のアミノ基における所望の保護基の導入により達成され得る。これは、簡単な保護基の除去、続いての他の所望のアミノ保護基の導入に従い得る。
ＲL1及びＲL2が式ＩＩＩｂのものである式Ｉの化合物は、同様にして合成されてよいが、完全なＲL1及び／又はＲL2基は、保護されている前駆体の使用によるよりもむしろ式５の化合物から開始して導入されてよい。
式５の化合物は、既知の方法、例えば、ＷＯ２０１１／１３０５９８に開示されている方法によって合成されてよい。
薬物複合体の合成
抗体は、一般的にＤｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００３，２１，７７８－７８４）に記載されているように薬物リンカー化合物に複合化され得る。簡潔には、ｐＨ７．４で５０ｍＭのホウ酸ナトリウムを含有するＰＢＳにおける抗体（４～５ｍｇ／ｍＬ）は、３７℃でトリス（カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）によって還元される。鎖間ジスルフィドを還元する反応の進行は、５，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）との反応によってモニタリングされ、所望のチオ－ル／ｍＡｂレベルが達成されるまで続行される。還元された抗体は、次いで、０℃まで冷却され、抗体ｌあたり３当量の薬物－リンカーによってアルキル化される。１時間後、反応は、５当量のＮ－アセチルシステインの添加によってクエンチされる。クエンチされた薬物－リンカーは、ＰＤ－１０カラム上でのゲル濾過によって除去される。ＡＤＣは、次いで、０．２２μｍシリンジフィルタを通して滅菌される。タンパク質濃度は、それぞれ２８０ｎｍ及び３２９ｎｍでのスペクトル分析により、２８０ｎｍでの薬物吸光度の寄与を補正して決定され得る。サイズ排除クロマトグラフィ－は、抗体凝集の程度を決定するのに使用され得、ＲＰ－ＨＰＬＣは、残存するＮＡＣクエンチ薬物－リンカーのレベルを決定するのに使用され得る。
さらなる優先事項
以下の優先事項は、上述の本発明の全ての態様に適用されてよく、又は、単一の態様に関していてよい。優先事項は、任意の組み合わせで一つに組み合わされてよい。
Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’、Ｒ11a’及びＹ’は、それぞれ、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ11a及びＹと同じ基から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’、Ｒ11a’及びＹ’は、それぞれ、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ11a及びＹと同じである。
いくつかの実施形態において、Ｒ12は、Ｒ2と同じである。
二量体連結
いくつかの実施形態において、Ｙ及びＹ’は、両方がＯである。
いくつかの実施形態において、Ｒ”は、置換基を有さないＣ3-7アルキレン基である。これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｒ”は、Ｃ3、Ｃ5又はＣ7アルキレンである。特に、Ｒ”は、Ｃ3又はＣ5アルキレンであってよい。
他の実施形態において、Ｒ”は、以下の式の基であり：
Figure 0007220203000034
 式中、ｒは、１又は２である。
Ｒ6～Ｒ9
いくつかの実施形態において、Ｒ9は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ6は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＮＨ2、ニトロ及びハロから選択され、Ｈ又はハロから選択され得る。これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｒ6は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ7は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ2、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、及びハロから選択される。これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｒ7は、Ｈ、ＯＨ及びＯＲから選択され、ここで、Ｒは、任意選択的に置換されているＣ1-7アルキル、Ｃ3-10ヘテロシクリル及びＣ5-10アリ－ル基から選択される。Ｒは、より好ましくはＣ1-4アルキル基であってよく、置換されていても置換されていなくてもよい。対象となる置換基は、Ｃ5-6アリ－ル基（例えば、フェニル）である。７位における特に好ましい置換基は、ＯＭｅ及びＯＣＨ2Ｐｈである。特定の対象となる他の置換基は、ジメチルアミノ（すなわち－ＮＭｅ2）、－（ＯＣ2Ｈ4）qＯＭｅ（ｑは、０～２である）、モルホリノ、ピペリジニル及びＮ－メチル－ピペラジニルを含めた窒素含有Ｃ6ヘテロシクリルである。
これらの実施形態及び優先事項は、それぞれＲ9’、Ｒ6’及びＲ7’に適用される。
Ｄ及びＤ’
いくつかの実施形態において、Ｄ及びＤ’は、それぞれＤ１及びＤ’１である。
いくつかの実施形態において、Ｄ及びＤ’は、それぞれＤ２及びＤ’２である。
Ｒ2
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するとき、Ｒ2は、以下から選択される：
（ａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エ－テル、Ｃ1-7アルキル、Ｃ3-7ヘテロシクリル及びビス－オキシ－Ｃ1-3アルキレンを含む群より選択される１つ以上の置換基によって任意選択的に置換されているＣ5-10アリ－ル基、
（ｂ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル、
（ｃ）Ｃ3-6飽和シクロアルキル、
（ｄ）
Figure 0007220203000035
 （Ｒ11、Ｒ12及びＲ13は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、ここで、Ｒ2基における炭素原子の合計数が多くて５である）、
（ｅ）
Figure 0007220203000036
 （Ｒ15a及びＲ15bの一方がＨであり、他方が：ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される基である）、ならびに
（ｆ）
Figure 0007220203000037
 （Ｒ14は：Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される）。
Ｒ2は、Ｃ5-10アリ－ル基であるとき、Ｃ5-7アリ－ル基であってよい。Ｃ5-7アリ－ル基は、フェニル基又はＣ5-7ヘテロアリ－ル基、例えばフラニル、チオフェニル及びピリジルであってよい。いくつかの実施形態において、Ｒ2は、好ましくはフェニルである。他の実施形態において、Ｒ2は、好ましくはチオフェニル、例えば、チオフェン－２－イル及びチオフェン－３－イルである。
Ｒ2は、Ｃ5-10アリ－ル基であるとき、Ｃ8-10アリ－ル、例えばキノリニル又はイソキノリニル基であってよい。キノリニル又はイソキノリニル基は、任意の利用可能な環位を通してＰＢＤコアに結合されていてよい。例えば、キノリニルは、キノリン－２－イル、キノリン－３－イル、キノリン－４イル、キノリン－５－イル、キノリン－６－イル、キノリン－７－イル及びキノリン－８－イルであってよい。これらのうち、キノリン－３－イル及びキノリン－６－イルが好ましい場合がある。イソキノリニルは、イソキノリン－１－イル、イソキノリン－３－イル、イソキノリン－４イル、イソキノリン－５－イル、イソキノリン－６－イル、イソキノリン－７－イル及びイソキノリン－８－イルであってよい。これらのうち、イソキノリン－３－イル及びイソキノリン－６－イルが好ましい場合がある。
Ｒ2は、Ｃ5-10アリ－ル基であるとき、任意の数の置換基を持っていてよい。１～３個の置換基を持つことが好ましく、１及び２がより好ましく、単独で置換されている基が最も好ましい。置換基は、任意の位置であってよい。
Ｒ2がＣ5-7アリ－ル基であるとき、単一の置換基が、化合物の残りへの結合に隣接しない環原子上にあることが好ましく、すなわち、化合物の残りへの結合に対してβ又はγであることが好ましい。そのため、Ｃ5-7アリ－ル基がフェニルであるとき、置換基は、好ましくはメタ又はパラ位にあり、より好ましくはパラ位にある。
Ｒ2は、Ｃ8-10アリ－ル基、例えばキノリニル又はイソキノリニルであるとき、キノリン又はイソキノリン環の任意の位置に任意の数の置換基を持っていてよい。いくつかの実施形態において、Ｒ2は、１、２又は３つの置換基を持ち、これらが、近位及び遠位環のいずれか、又は両方（１を超える置換基があるとき）にあってよい。
Ｒ2がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ2置換基
Ｒ2がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ2上の置換基がハロであるとき、該置換基は、好ましくはＦ又はＣｌ、より好ましくはＣｌである。
Ｒ2がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ2上の置換基がエ－テルであるとき、該置換基は、いくつかの実施形態において、アルコキシ基、例えば、Ｃ1-7アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ）であってよく、又は、いくつかの実施形態において、Ｃ5-7アリ－ルオキシ基（例えば、フェノキシ、ピリジルオキシ、フラニルオキシ）であってよい。アルコキシ基は、それ自体が、例えばアミノ基（例えば、ジメチルアミノ）によってさらに置換されていてよい。
Ｒ2がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ2上の置換基がＣ1-7アルキルであるとき、該置換基は、好ましくはＣ1-4アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル）であってよい。
Ｒ2がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ2上の置換基がＣ3-7ヘテロシクリルであるとき、該置換基は、いくつかの実施形態において、Ｃ6の窒素含有ヘテロシクリル基、例えば、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニルであってよい。これらの基は、窒素原子を介してＰＢＤ部分の残部に結合していてよい。これらの基は、例えばＣ1-4アルキル基によってさらに置換されていてよい。Ｃ6の窒素含有ヘテロシクリル基がピペラジニルであるとき、上記のさらなる置換基は、第２の窒素環原子上にあってよい。
Ｒ2がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ2上の置換基がビス－オキシ－Ｃ1-3アルキレンであるとき、該置換基は、好ましくはビス－オキシ－メチレン又はビス－オキシ－エチレンである。
Ｒ2がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ2上の置換基がエステルであるとき、該置換基は、好ましくはメチルエステル又はエチルエステルである。
Ｒ2がＣ5-10アリ－ル基であるとき特に好ましい置換基として、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス－オキシ－メチレン、メチル－ピペラジニル、モルホリノ及びメチル－チオフェニルが挙げられる。Ｒ2についての他の特に好ましい置換基は、ジメチルアミノプロピルオキシ及びカルボキシである。
Ｒ2がＣ5-10アリ－ル基であるとき特に好ましい置換されているＲ2基として、４－メトキシ－フェニル、３－メトキシフェニル、４－エトキシ－フェニル、３－エトキシ－フェニル、４－フルオロ－フェニル、４－クロロ－フェニル、３，４－ビスオキシメチレン－フェニル、４－メチルチオフェニル、４－シアノフェニル、４－フェノキシフェニル、キノリン－３－イル及びキノリン－６－イル、イソキノリン－３－イル及びイソキノリン－６－イル、２－チエニル、２－フラニル、メトキシナフチル、及びナフチルが挙げられるが、これらに限定されない。別の可能な置換されているＲ12基は、４－ニトロフェニルである。特定の対象となるＲ12基として、４－（４－メチルピペラジン－１－イル）フェニル及び３，４－ビスオキシメチレン－フェニルが挙げられる。
Ｒ2は、Ｃ1-5飽和脂肪族アルキルであるとき、メチル、エチル、プロピル、ブチル又はペンチルであってよい。いくつかの実施形態において、これは、メチル、エチル又はプロピル（ｎ－ペンチル若しくはイソプロピル）であってよい。これらの実施形態のいくつかにおいて、これは、メチルであってよい。他の実施形態において、これは、ブチル又はペンチルであってよく、これらは、直鎖又は分岐鎖であってよい。
Ｒ2は、Ｃ3-6飽和シクロアルキルであるとき、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル又はシクロヘキシルであってよい。いくつかの実施形態において、Ｒ2は、シクロプロピルであってよい。
Ｒ2が、
Figure 0007220203000038
 であるとき、Ｒ11、Ｒ12及びＲ13は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、ここで、Ｒ2基における炭素原子の合計数は、多くて５である。いくつかの実施形態において、Ｒ2基における炭素原子の合計数は、多くて４又は多くて３である。
いくつかの実施形態において、Ｒ11、Ｒ12及びＲ13のうちの１つがＨであり、他の２つの基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択される。
他の実施形態において、Ｒ11、Ｒ12及びＲ13のうちの２つがＨであり、他の基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択される。
いくつかの実施形態において、Ｈではない基は、メチル及びエチルから選択される。これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｈではない基は、メチルである。
いくつかの実施形態において、Ｒ11は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ12は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ13は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ11及びＲ12は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ11及びＲ13は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ12及びＲ13は、Ｈである。
特定の対象となるＲ2基は：
Figure 0007220203000039
 である。
Ｒ2が
Figure 0007220203000040
 であるとき、Ｒ15a及びＲ15bの一方がＨであり、他方が：ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される。いくつかの実施形態において、Ｈではない基は、任意選択的に置換されているフェニルである。フェニルの任意選択的な置換基がハロであるとき、該置換基は、好ましくはフルオロである。いくつかの実施形態において、フェニル基は、置換されていない。
Ｒ2が
Figure 0007220203000041
 であるとき、Ｒ14は：Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロメチル、メトキシから選択される基によって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される。フェニルの任意選択的な置換基がハロであるとき、該置換基は、好ましくはフルオロである。いくつかの実施形態において、フェニル基は、置換されていない。
いくつかの実施形態において、Ｒ14は、Ｈ、メチル、エチル、エテニル及びエチニルから選択される。これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｒ14は、Ｈ及びメチルから選択される。
Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在するとき、
Ｒ2は、Ｈ若しくは
Figure 0007220203000042
 であり、ここで、Ｒ16a及びＲ16bは、Ｈ、Ｆ、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから独立して選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は、Ｃ1-4アルキルアミド及びＣ1-4アルキルエステルから選択される基によって任意選択的に置換されており、又は、Ｒ16a及びＲ16bの一方がＨであるとき、他方は、ニトリル及びＣ1-4アルキルエステルから選択される。
いくつかの実施形態において、Ｒ2は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ2は
Figure 0007220203000043
 である。
いくつかの実施形態において、Ｒ16a及びＲ16bの両方がＨであることが好ましい。
他の実施形態において、Ｒ16a及びＲ16bの両方がメチルであることが好ましい。
さらなる実施形態において、Ｒ16a及びＲ16bのうちの１つがＨであり、他方が、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから選択され、かかるアルキル及びアルケニル基が、任意選択的に置換されていることが好ましい。これらのさらなる実施形態において、Ｈではない基は、メチル及びエチルから選択されることがさらに好ましい場合がある。
Ｒ22
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するとき、Ｒ22は、以下から選択される：
（ａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エ－テル、Ｃ1-7アルキル、Ｃ3-7ヘテロシクリル及びビス－オキシ－Ｃ1-3アルキレンを含む群より選択される１つ以上の置換基によって任意選択的に置換されているＣ5-10アリ－ル基、
（ｂ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル、
（ｃ）Ｃ3-6飽和シクロアルキル、
（ｄ）
Figure 0007220203000044
 （Ｒ31、Ｒ32及びＲ33は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、Ｒ22基における炭素数の合計が多くて５である）、
（ｅ）
Figure 0007220203000045
 （Ｒ25a及びＲ25bの一方がＨであり、他方が、ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される基である）、ならびに
（ｆ）
Figure 0007220203000046
 （Ｒ24は：Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニル）、
から選択される。
Ｒ22は、Ｃ5-10アリ－ル基であるとき、Ｃ5-7アリ－ル基であってよい。Ｃ5-7アリ－ル基は、フェニル基又はＣ5-7ヘテロアリ－ル基、例えばフラニル、チオフェニル及びピリジルであってよい。いくつかの実施形態において、Ｒ22は、好ましくはフェニルである。他の実施形態において、Ｒ22は、好ましくはチオフェニル、例えば、チオフェン－２－イル及びチオフェン－３－イルである。
Ｒ22は、Ｃ5-10アリ－ル基であるとき、Ｃ8-10アリ－ル、例えばキノリニル又はイソキノリニル基であってよい。キノリニル又はイソキノリニル基は、任意の利用可能な環位を通してＰＢＤコアに結合されていてよい。例えば、キノリニルは、キノリン－２－イル、キノリン－３－イル、キノリン－４－イル、キノリン－５－イル、キノリン－６－イル、キノリン－７－イル及びキノリン－８－イルであってよい。これらのうち、キノリン－３－イル及びキノリン－６－イルが好ましい場合がある。イソキノリニルは、イソキノリン－１－イル、イソキノリン－３－イル、イソキノリン－４イル、イソキノリン－５－イル、イソキノリン－６－イル、イソキノリン－７－イル及びイソキノリン－８－イルであってよい。これらのうち、イソキノリン－３－イル及びイソキノリン－６－イルが好ましい場合がある。
Ｒ22は、Ｃ5-10アリ－ル基であるとき、任意の数の置換基を持っていてよい。１～３個の置換基を持つことが好ましく、１及び２がより好ましく、単独で置換されている基が最も好ましい。置換基は、任意の位置であってよい。
Ｒ22がＣ5-7アリ－ル基であるとき、単一の置換基が、化合物の残りへの結合に隣接しない環原子上にあることが好ましく、すなわち、化合物の残りへの結合に対してβ又はγであることが好ましい。そのため、Ｃ5-7アリ－ル基がフェニルであるとき、置換基は、好ましくはメタ又はパラ位にあり、より好ましくはパラ位にある。
Ｒ22は、Ｃ8-10アリ－ル基、例えばキノリニル又はイソキノリニルであるとき、キノリン又はイソキノリン環の任意の位置に任意の数の置換基を持っていてよい。いくつかの実施形態において、これは、１、２又は３つの置換基を持ち、これらが、近位及び遠位環のいずれか、又は両方（１を超える置換基があるとき）にあってよい。
Ｒ22がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ22置換基
Ｒ22がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ22上の置換基がハロであるとき、該置換基は、好ましくはＦ又はＣｌ、より好ましくはＣｌである。
Ｒ22がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ22上の置換基がエ－テルであるとき、該置換基は、いくつかの実施形態において、アルコキシ基、例えば、Ｃ1-7アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ）であってよく、又は、いくつかの実施形態において、Ｃ5-7アリ－ルオキシ基（例えば、フェノキシ、ピリジルオキシ、フラニルオキシ）であってよい。アルコキシ基は、それ自体が、例えばアミノ基（例えば、ジメチルアミノ）によってさらに置換されていてよい。
Ｒ22がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ22上の置換基がＣ1-7アルキルであるとき、該置換基は、好ましくはＣ1-4アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル）であってよい。
Ｒ22がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ22上の置換基がＣ3-7ヘテロシクリルであるとき、該置換基は、いくつかの実施形態において、Ｃ6の窒素含有ヘテロシクリル基、例えば、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニルであってよい。これらの基は、窒素原子を介してＰＢＤ部分の残部に結合していてよい。これらの基は、例えばＣ1-4アルキル基によってさらに置換されていてよい。Ｃ6の窒素含有ヘテロシクリル基がピペラジニルであるとき、上記のさらなる置換基は、第２の窒素環原子上にあってよい。
Ｒ22がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ22上の置換基がビス－オキシ－Ｃ1-3アルキレンであるとき、該置換基は、好ましくはビス－オキシ－メチレン又はビス－オキシ－エチレンである。
Ｒ22がＣ5-10アリ－ル基であるときのＲ22上の置換基がエステルであるとき、該置換基は、好ましくはメチルエステル又はエチルエステルである。
Ｒ22がＣ5-10アリ－ル基であるとき特に好ましい置換基として、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス－オキシ－メチレン、メチル－ピペラジニル、モルホリノ及びメチル－チオフェニルが挙げられる。Ｒ22についての他の特に好ましい置換基は、ジメチルアミノプロピルオキシ及びカルボキシである。
Ｒ22がＣ5-10アリ－ル基であるとき特に好ましい置換されているＲ22基の例として、４－メトキシ－フェニル、３－メトキシフェニル、４－エトキシ－フェニル、３－エトキシ－フェニル、４－フルオロ－フェニル、４－クロロ－フェニル、３，４－ビスオキシメチレン－フェニル、４－メチルチオフェニル、４－シアノフェニル、４－フェノキシフェニル、キノリン－３－イル及びキノリン－６－イル、イソキノリン－３－イル及びイソキノリン－６－イル、２－チエニル、２－フラニル、メトキシナフチル、及びナフチルが挙げられるが、これらに限定されない。別の可能な置換されているＲ22基は、４－ニトロフェニルである。特定の対象となるＲ22基として、４－（４－メチルピペラジン－１－イル）フェニル及び３，４－ビスオキシメチレン－フェニルが挙げられる。
Ｒ22は、Ｃ1-5飽和脂肪族アルキルであるとき、メチル、エチル、プロピル、ブチル又はペンチルであってよい。いくつかの実施形態において、これは、メチル、エチル又はプロピル（ｎ－ペンチル若しくはイソプロピル）であってよい。これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｒ22は、メチルであってよい。他の実施形態において、Ｒ22は、ブチル又はペンチルであってよく、これらは、直鎖又は分岐鎖であってよい。
Ｒ22は、Ｃ3-6飽和シクロアルキルであるとき、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル又はシクロヘキシルであってよい。いくつかの実施形態において、Ｒ22は、シクロプロピルであってよい。
Ｒ22が、
Figure 0007220203000047
 であるとき、Ｒ31、Ｒ32及びＲ33は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、Ｒ22基における炭素数の合計が多くて５である。いくつかの実施形態において、Ｒ22基における炭素原子の合計数は、多くて４又は多くて３である。
いくつかの実施形態において、Ｒ31、Ｒ32及びＲ33のうちの１つがＨであり、他の２つの基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択される。
他の実施形態において、Ｒ31、Ｒ32及びＲ33のうちの２つがＨであり、他の基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択される。
いくつかの実施形態において、Ｈではない基は、メチル及びエチルから選択される。これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｈではない基は、メチルである。
いくつかの実施形態において、Ｒ31は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ32は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ33は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ31及びＲ32は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ31及びＲ33は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ32及びＲ33は、Ｈである。
特定の対象となるＲ22基は：
Figure 0007220203000048
 である。
Ｒ22が
Figure 0007220203000049
 であるとき、Ｒ25a及びＲ25bの一方がＨであり、他方が、ハロ、メチル、メトキシによって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される。いくつかの実施形態において、Ｈではない基は、任意選択的に置換されているフェニルである。フェニルの任意選択的な置換基がハロであるとき、該置換基は、好ましくはフルオロである。いくつかの実施形態において、フェニル基は、置換されていない。
Ｒ22が
Figure 0007220203000050
 であるとき、Ｒ24は、Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロメチル、メトキシから選択される基によって任意選択的に置換されているフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される。フェニルの任意選択的な置換基がハロであるとき、該置換基は、好ましくはフルオロである。いくつかの実施形態において、フェニル基は、置換されていない。いくつかの実施形態において、Ｒ24は、Ｈ、メチル、エチル、エテニル及びエチニルから選択される。これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｒ24は、Ｈ及びメチルから選択される。
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在するとき、
Ｒ22は、Ｈ若しくは
Figure 0007220203000051
 であり、ここで、Ｒ26a及びＲ26bは、Ｈ、Ｆ、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから独立して選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は、Ｃ1-4アルキルアミド及びＣ1-4アルキルエステルから選択される基によって任意選択的に置換されており、又は、Ｒ26a及びＲ26bの一方がＨであるとき、他方は、ニトリル及びＣ1-4アルキルエステルから選択される。
いくつかの実施形態において、Ｒ22は、Ｈである。
いくつかの実施形態において、Ｒ22は
Figure 0007220203000052
 である。
いくつかの実施形態において、Ｒ26a及びＲ26bの両方がＨであることが好ましい。
他の実施形態において、Ｒ26a及びＲ26bの両方がメチルであることが好ましい。
さらなる実施形態において、Ｒ26a及びＲ26bのうちの１つがＨであり、他方が、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから選択され、かかるアルキル及びアルケニル基が、任意選択的に置換されていることが好ましい。これらのさらなる実施形態において、Ｈではない基は、メチル及びエチルから選択されることがさらに好ましい場合がある。
Ｒ11
いくつかの実施形態において、Ｒ11aは、ＯＨである。
いくつかの実施形態において、Ｒ11aは、ＯＲAであり、ここでＲAは、Ｃ1-4アルキルである。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＲAは、メチルである。
本発明の第１の態様のいくつかの実施形態において、式Ｉａ－１、Ｉａ－２又はＩａ－３のものがあり：
Figure 0007220203000053
 、
式中、Ｒ2a及びＲ22aは同じであり、以下：
（ａ）
Figure 0007220203000054
 、
（ｂ）
Figure 0007220203000055
 、
（ｃ）
Figure 0007220203000056
 、
（ｄ）
Figure 0007220203000057
 、
（ｅ）
Figure 0007220203000058
 、
（ｆ）
Figure 0007220203000059
 、
（ｇ）
Figure 0007220203000060
 及び
（ｈ）
Figure 0007220203000061
 から選択され、
Ｒ1aは、メチル及びベンジルから選択され、
ＲLL1、ＲLL2及びＲ11aは、上記に定義されている通りである。
本発明のいくつかの実施形態において、Ｒ2及びＲ22は、両方が、多くて３個の炭素原子を含む。
ゆえに、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するこれらの実施形態において、Ｒ2は、以下から選択され得る：
（ｉ）メチル、
（ｉｉ）エチル、
（ｉｉｉ）プロピル、
（ｉｖ）シクロプロピル、
（ｖ）
Figure 0007220203000062
 、
（ｖｉ）
Figure 0007220203000063
 、及び
（ｖｉ）
Figure 0007220203000064
 。
ゆえに、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在しないこれらの実施形態において、Ｒ2は、以下から選択され得る：
（ｉ）Ｈ、
（ｉｉ）
Figure 0007220203000065
 、
（ｉｉｉ）
Figure 0007220203000066
 、及び
（ｉｖ）
Figure 0007220203000067
 。
ゆえに、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するこれらの実施形態において、Ｒ22は、以下から選択され得る：
（ｉ）メチル、
（ｉｉ）エチル、
（ｉｉｉ）プロピル、
（ｉｖ）シクロプロピル、
（ｖ）
Figure 0007220203000068
 、
（ｖｉ）
Figure 0007220203000069
 、及び
（ｖｉ）
Figure 0007220203000070
 。
ゆえに、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在しないこれらの実施形態において、Ｒ22は、以下から選択され得る：
（ｉ）Ｈ、
（ｉｉ）
Figure 0007220203000071
 、
（ｉｉｉ）
Figure 0007220203000072
 、
（ｉｖ）
Figure 0007220203000073
 。
これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｒ2及びＲ22は、両方が、多くて２個の炭素原子を含む。
ゆえに、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するこれらの実施形態において、Ｒ2は、以下から選択され得る：
（ｉ）メチル、
（ｉｉ）エチル、及び
（ｖｉ）
Figure 0007220203000074
 。
ゆえに、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在しないこれらの実施形態において、Ｒ2は、以下から選択され得る：
（ｉ）Ｈ、
（ｉｉ）
Figure 0007220203000075
 、及び
（ｉｉｉ）
Figure 0007220203000076
 。
ゆえに、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するこれらの実施形態において、Ｒ22は、以下から選択され得る：
（ｉ）メチル、
（ｉｉ）エチル、及び
（ｖｉ）
Figure 0007220203000077
 。
ゆえに、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在しないこれらの実施形態において、Ｒ22は、以下から選択され得る：
（ｉ）Ｈ、
（ｉｉ）
Figure 0007220203000078
 、
（ｉｉｉ）
Figure 0007220203000079
 。
これらの実施形態のさらなるものにおいて、Ｒ2及びＲ22は、両方が、多くて１個の炭素原子を含む。
ゆえに、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するこれらの実施形態において、Ｒ2は、メチルであってよい。ゆえに、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在しないこれらの実施形態において、Ｒ2は、以下から選択され得る：
（ｉ）Ｈ、及び
（ｉｉ）
Figure 0007220203000080
 。
ゆえに、Ｃ２‘とＣ３‘との間に二重結合が存在するこれらの実施形態において、Ｒ22は、メチルであってよい。ゆえに、Ｃ２‘とＣ３‘との間に二重結合が存在しないこれらの実施形態において、Ｒ22は、以下から選択され得る：
（ｉ）Ｈ、及び
（ｉｉ）
Figure 0007220203000081
 。
理論によって拘束されることを望まないが、ＰＢＤ二量体のＣ２位における置換基が小さいとき、これらの薬物リンカーにおけるグルクロニドキャッピング単位の使用は、薬物リンカーの親水性を有意に増加させて、薬物リンカーがリガンド単位に複合化することを容易にするため、特に有利であるとされている。
これらの実施形態及び優先事項は、本発明の第２の態様にも適用される。
リンカー（ＲL／ＲLL）
いくつかの実施形態において、ＲLL1及びＲLL2は、式ＩＩＩａ’のものである。
いくつかの実施形態において、ＲL1及びＲL2は、式ＩＩＩａのものである。
ＧL
ＧLは、以下から選択され得、式中、Ａｒは、Ｃ5-6アリ－レン基、例えば、フェニレンを表し、Ｘは、Ｃ1-4アルキルを表す。
Figure 0007220203000082
いくつかの実施形態において、ＧLは、ＧL1-1及びＧL1-2から選択される。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＧLは、ＧL1-1である。
ＧLL
ＧLLは、以下から選択され得、式中、Ａｒは、Ｃ5-6アリ－レン基、例えば、フェニレンを表し、Ｘは、Ｃ1-4アルキルを表す。
Figure 0007220203000083
いくつかの実施形態において、ＧLLは、ＧLL1-1及びＧLL1-2から選択される。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＧLLは、ＧLL1-1である。
Ｘ
Ｘは、
Figure 0007220203000084
 であり、
式中、ａ＝０～５、ｂ＝０～１６、ｃ＝０又は１、ｄ＝０～５である。
ａは、０、１、２、３、４又は５であってよい。いくつかの実施形態において、ａは、０～３である。これらの実施形態のいくつかにおいて、ａは、０又は１である。さらなる実施形態において、ａは、０である。
ｂは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６であってよい。いくつかの実施形態において、ｂは、０～１２である。これらの実施形態のいくつかにおいて、ｂは、０～８であり、０、２、４又は８であってよい。
ｃは、０又は１であってよい。
ｄは、０、１、２、３、４又は５であってよい。いくつかの実施形態において、ｄは、０～３である。これらの実施形態のいくつかにおいて、ｄは、１又は２である。さらなる実施形態において、ｄは、２である。
Ｘのいくつかの実施形態において、ａは、０であり、ｃは、１であり、ｄは、２であり、ｂは、０～８であってよい。これらの実施形態のいくつかにおいて、ｂは、０、４又は８である。
ＱX
１つの実施形態において、ＱXは、アミノ酸残基である。アミノ酸は、天然アミノ酸又は非天然アミノ酸であってよい。
１つの実施形態において、ＱXは：Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｃｉｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、及びＴｒｐから選択され、Ｃｉｔは、シトルリンである。
１つの実施形態において、ＱXは、ジペプチド残基を含む。ジペプチドにおけるアミノ酸は、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸の任意の組み合わせであってよい。いくつかの実施形態において、ジペプチドは、天然アミノ酸を含む。リンカーがカテプシン不安定リンカーであるとき、ジペプチドは、カテプシン媒介開裂の作用部位である。ジペプチドは、次いでカテプシンの認識部位となる。
１つの実施形態において、ＱXは、
CO－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－NH、
CO－Ｖａｌ－Ａｌａ－NH、
CO－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－NH、
CO－Ａｌａ－Ｌｙｓ－NH、
CO－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－NH、
CO－Ｐｈｅ－Ｃｉｔ－NH、
CO－Ｌｅｕ－Ｃｉｔ－NH、
CO－Ｉｌｅ－Ｃｉｔ－NH、
CO－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－NH、及び
CO－Ｔｒｐ－Ｃｉｔ－NH
から選択され、
Ｃｉｔはシトルリンである。
好ましくは、ＱXは、
CO－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－NH、
CO－Ｖａｌ－Ａｌａ－NH、
CO－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－NH、
CO－Ａｌａ－Ｌｙｓ－NH、
CO－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－NH
から選択される。
最も好ましくは、ＱXは、CO－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－NH、CO－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－NH及びCO－Ｖａｌ－Ａｌａ－NHから選択される。
対象となる他のジペプチド組み合わせとして、
CO－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－NH、
CO－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－NH、及び
CO－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－NH
が挙げられる。
参照により本明細書に援用される、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，１３，８５５－８６９に記載されているものを含めた他のジペプチド組み合わせが使用され得る。
いくつかの実施形態において、ＱXは、トリペプチド残基である。トリペプチドにおけるアミノ酸は、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸の任意の組み合わせであってよい。いくつかの実施形態において、トリペプチドは、天然アミノ酸を含む。リンカーがカテプシン不安定リンカーであるとき、トリペプチドは、カテプシン媒介開裂の作用部位である。トリペプチドは、次いでカテプシンの認識部位となる。
１つの実施形態において、適切な場合、アミノ酸側鎖が化学的に保護されている。側鎖保護基は、以下に考察されている基であってよい。保護されているアミノ酸配列は、酵素によって開裂可能である。例えば、Ｂｏｃ側鎖保護Ｌｙｓ残基を含むジペプチド配列は、カテプシンによって開裂可能である。
アミノ酸の側鎖のための保護基は、当該分野において周知であり、上記のように、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ Ｃａｔａｌｏｇに記載されている。
いくつかの実施形態において、ＲLL1及びＲLL2は、式ＩＩＩｂ’のものである。
いくつかの実施形態において、ＲL1及びＲL2は、式ＩＩＩｂのものである。
ＲSL1及びＲSL2は、Ｈ及びメチルから独立して選択され、又は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロプロピレン若しくはシクロブチレン基を形成している。
いくつかの実施形態において、ＲSL1及びＲSL2は、両方がＨである。
いくつかの実施形態において、ＲSL1が、Ｈであり、ＲSL2が、メチルである。
いくつかの実施形態において、ＲSL1及びＲSL2は、両方がメチルである。
いくつかの実施形態において、ＲSL1及びＲL2は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロプロピレン基を形成している。
いくつかの実施形態において、ＲSL1及びＲSL2は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロブチレン基を形成している。
基ＩＩＩｂでは、いくつかの実施形態において、ｅは、０である。他の実施形態において、ｅは、１であり、ニトロ基は、環の任意の利用可能な位置にあってよい。これらの実施形態のいくつかにおいて、オルト位にある。これらの実施形態の他のものにおいて、パラ位にある。
いくつかの実施形態において、ＲL1及びＲL2は、同じである。
いくつかの実施形態において、ＲLL1及びＲLL2は、同じである。
１つの特定の実施形態において、本発明の第１の態様は、式Ｉｄの複合体：
Figure 0007220203000085
 を含み、式中、ｍは、２～８の整数である。
１つの特定の実施形態において、本発明の第２の態様は、薬物リンカー（ＤL）が式（Ｉｄ’）のものであり：
Figure 0007220203000086
 式中、ｍは、２～８の整数である。
いくつかの実施形態において、ＲL1及びＲL2は、異なる。
いくつかの実施形態において、ＲLL1及びＲLL2は、異なる。
特に、連結基が異なる実施形態において、相違は、Ｇ基においてのみであることができるため、連結基の残りは、同じである（このため開裂トリガ－が同じである）。
本発明のいくつかの実施形態において、Ｃ１１置換基は、隣接する基に対して以下の立体化学的配置にあってよい。
Figure 0007220203000087
他の実施形態において、Ｃ１１置換基は、隣接する基に対して以下の立体化学的配置にあってよい。
Figure 0007220203000088
特定の対象となる化合物として、上記例のものが挙げられる。
フラッシュクロマトグラフィ－を、圧力下のシリカゲルを使用して実施した。画分は、純度について、Ｍｅｒｃｋ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０ Ｆ２５４シリカゲル（アルミニウムプレ－ト上に蛍光指示薬が付いている）を用いて薄層クロマトグラフィ－（ＴＬＣ）により確認した。他に特に記載がないかぎり、ＴＬＣの視覚化は、ＵＶ光又はヨウ素蒸気で行った。抽出及びクロマトグラフィ－の溶媒は、ＶＷＲ，Ｕ．Ｋ．から購入し、精製することなく使用した。他に特に記載がないかぎり、全ての純度の高い化合物は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。ＰＥＧ化試薬は、Ｓｔｒａｔｅｃｈ ＵＫを通してＱｕａｎｔａ ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ ＵＳから、又はＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒを通してＰｉｅｒｃｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから得た。
1Ｈ及び13Ｃ ＮＭＲスペクトルをＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ（登録商標）４００分光計において得た。カップリング定数を、ヘルツ（Ｈｚ）で引用する。化学シフトを、百万分率（ｐｐｍ）で、テトラメチルシランからのダウンフィ－ルドで記録する。スピン多重度を、ｓ（一重項）、ｂｓ（ブロ－ド一重項）、ｄ（二重項）、ｔ（三重項）及びｍ（多重項）として記載する。
（反応モニタリング及び純度決定のための）分析用のＬＣ／ＭＳ条件は以下の通りであった。ポジティブモ－ドエレクトロスプレ－質量分析は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ（登録商標）／Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ（登録商標）ＬＣＭＳ－２０２０を使用して実施した。使用した移動相は、溶媒Ａ（０．１％ギ酸を含むＨ2Ｏ）及び溶媒Ｂ（０．１％ギ酸を含むＣＨ3ＣＮ）であった。定期的な３分間実行のための勾配：初期組成の５％Ｂを２５秒間かけて保持し、次いで５％Ｂから１００％Ｂに１分３５秒の期間をかけて増加させた。組成を１００％Ｂで５０秒間保持し、次いで５％Ｂへと５秒で戻し、そこで５秒間保持した。勾配実行の合計継続時間は３．０分であった。１５分間実行のための勾配：初期組成の５％Ｂを１．２５分間かけて保持し、次いで５％Ｂから１００％Ｂに８．７５分の期間をかけて増加させた。組成を１００％Ｂで２．５分間保持し、次いで５％Ｂへと３０秒で戻し、そこで２分間保持した。勾配実行の合計継続時間は１５．０分であった。流速は０．８ｍＬ／分（３分間実行）及び０．５ｍＬ／分（１５分間実行）であった。検出は２５４ｎｍであった。カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８ ＶａｎＧｕａｒｄプレカラム、１３０Ａ、１．７μｍ、２．１ｍｍ×５ｍｍを装備した５０℃のＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８ １．７μｍ ２．１×５０ｍｍ（定期的な３分間実行）、及びＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８ ＶａｎＧｕａｒｄプレカラム、１３０Ａ、１．７μｍ、２．１ｍｍ×５ｍｍを装備したＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＣＳＨ Ｃ１８、１．７μ、２．１×１００ｍｍ（１５分間実行）。
分取ＨＰＬＣ条件は以下の通りであった。逆相超高速液体クロマトグラフィ－（ＵＦＬＣ）を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ ５μＣ１８カラム（５０℃）：１５０×２１．２ｍｍを使用したＳｈｉｍａｚｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ（登録商標）機において行った。使用した溶出液は、溶媒Ａ（０．０５％ギ酸を含むＨ2Ｏ）及び溶媒Ｂ（０．０５％ギ酸を含むＣＨ3ＣＮ）であった。全てのＵＦＬＣ実験を以下の勾配条件で実施した：初期組成の１３％Ｂ、この組成は、次いで合計１７分間かけて所望の分離を引き起こすのに適している勾配で、１００％Ｂに増加させた。組成を１００％Ｂで１分間保持し、次いで０．１分で１３％Ｂに戻し、そこで１．９分間保持した。勾配実行の合計継続時間は２０．０分であった。流速は２０．０ｍＬ／分であり、検出は２５４及び２８０ｎｍであった。
実施例１
Figure 0007220203000089
Figure 0007220203000090
Figure 0007220203000091
 （ａ）（Ｓ）－（２－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）－４－メチル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロ－ル－１－イル）（４－ヒドロキシ－５－メトキシ－２－ニトロフェニル）メタノン（２）
酢酸リチウム二水和物（３．５２ｇ、３４．５ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）を、ＤＭＦ／Ｈ2Ｏ（３００ｍＬ／４ｍＬ）中のＴＩＰＳエ－テル（１）（１９．９６ｇ、３４．５ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）の撹拌溶液に添加した。得られた赤色溶液を室温で３．５時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）で希釈し、１Ｍクエン酸溶液（２×２５０ｍＬ）、Ｈ2Ｏ（２×２５０ｍＬ）、飽和ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。この溶媒を減圧下で蒸発させ、黄色固体として生成物（１４．５７ｇ、１００％）を得た。この生成物をさらに精製することなく使用した。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ１．７４分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）４２３（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）；４４５（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、７５）。
（ｂ）（（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））ビス（５－メトキシ－２－ニトロ－４，１－フェニレン））ビス（（（Ｓ）－２－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）－４－メチル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロ－ル－１－イル）メタノン）（３）
炭酸カリウム（５．０３ｇ、３６．４４ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ．）を、ＤＭＦ（２５０ｍＬ）中のフェノ－ル（２）（１４ｇ、３３．１３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及び１，５ジヨ－ドペンタン（２１．４６ｇ、９．８６ｍＬ、６６．２６ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ．）の撹拌溶液に加えた。この溶液を７０℃で３．５時間加熱した。この溶液を氷／水の混合物（８００ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（４×２５０ｍＬ）によって抽出した。組み合わされた抽出物をＨ2Ｏ（２×２５０ｍＬ）、飽和ブライン（４００ｍＬ）によって洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させ、茶色油を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィ－［ｎ－ヘプタン／ＥｔＯＡｃ １０％きざみで４０％から８０％］による精製により、黄色発泡物として生成物（１２．７ｇ、８５％）を得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ２．１６分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）９１３（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）；９３５（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、１００）。
（ｃ）（（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））ビス（２－アミノ－５－メトキシ－４，１－フェニレン））ビス（（（Ｓ）－２－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）－４－メチル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロ－ル－１－イル）メタノン）（４）
亜鉛末（１９．９ｇ、３０４ｍｍｏｌ、４０ｅｑ．）を１ＭのＨＣｌ（１００ｍＬ）で処理し、室温で１０分間撹拌した。混合物を次いで１０分間超音波処理し、活性化亜鉛を真空濾過によって収集し、次いで、１ＭのＨＣｌ（５０ｍＬ）、Ｈ2Ｏ（ｐＨ６から７まで）、ＭｅＯＨで洗浄し、フィルタ－パッドにおいて真空乾燥した。活性化亜鉛を、ビスニトロ化合物（３）（６．９４ｇ、７．６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）をＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏ／ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ／４ｍＬ／６０ｍＬ）に溶解させた激しく撹拌された溶液に室温で添加した。反応混合物を５％ｖ／ｖ ＨＣＯ2ＨのＭｅＯＨ溶液（７６ｍＬ）で滴下処理した。緑色からメタリックグレ－への色の変化、及び４２℃への発熱が観察された。発熱が３０℃まで鎮静すると、ＬＣ／ＭＳは反応が完了しなかったことを示した。ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中に５％のｖ／ｖ ＨＣＯ2Ｈのさらなる部分を添加し、さらに発熱を観察した（３４℃）。反応混合物を室温まで冷却させ、この時点で、ＬＣ／ＭＳによる分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。混合物を、セライト（登録商標）を通して濾過し、パッドをＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（２×３００ｍＬ）、水（３００ｍＬ）、飽和ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過及び真空蒸発させて、ビス－アニリンを黄色発泡物（６．２２ｇ、９６％）として得た。この生成物をさらに精製することなく使用した。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ２．１２分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）８５３（［Ｍ＋Ｈ］+.、１５）。
（ｄ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド（ｐｒｏｐａｎａｍｉｄｏ））ベンジル） （（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））ビス（６－（（Ｓ）－２－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）－４－メチル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロ－ル－１－カルボニル）－４－メトキシ－３，１－フェニレン））ジカルバメ－ト（６)
トリエチルアミン（０．１７１ｇ、２３５μＬ、１．６９ｍｍｏｌ、４．４ｅｑ．）を、アルゴン雰囲気下で乾燥ＴＨＦ中のビスアニリン（４）（０．３３ｇ、０．３８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及びトリホスゲン（０．０８２ｇ、０．２８ｍｍｏｌ、０．７２ｅｑ．）の撹拌溶液にシリンジを通して添加した。得られた懸濁液を４０℃まで加温し、５分後にＭｅＯＨ中でＬＣ／ＭＳについてビスメチルカルバメ－ト（ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）９６９（［Ｍ＋Ｈ］+.、８０）；９９２（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、１００）としてサンプリングした。ジラウリン酸ジブチルスズ（０．０２４ｇ、２３μＬ、３８μｍｏｌ、０．１ｅｑ．）、次いで固体リンカー（５）（０．３１９ｇ、０．８５ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ．）及びトリメチルアミン（０．０８５ｇ、１１８μＬ、０．８５ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ．）を添加し、この混合物をアルゴン雰囲気下で５時間撹拌しながら４０℃で加温した。反応混合物を冷却させて濾過し、ＴＨＦを減圧下で蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィ－［ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ ０％、１％、１．５％、２％、勾配溶出］によって残留物を精製し、黄色発泡物として生成物（０．４２ｇ、６６％）を得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ２．１６分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１６６０（［Ｍ＋Ｈ］+.、６０）；１６８２（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、６５）。
（ｅ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）（（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））ビス（６－（（Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）－４－メチル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロ－ル－１－カルボニル）－４－メトキシ－３，１－フェニレン））ジカルバメ－ト（７）
ｐ－トルエンスルホン酸（０．２９６ｇ、１．７ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ．）を、ＴＨＦ中の１０％ ｖ／ｖ Ｈ2Ｏ中のビス－ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエ－テル（６）（１．２６ｇ、０．７６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）の撹拌溶液に添加した。この溶液を室温で１８時間撹拌した。この反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和したＮａＨＣＯ3溶液（２×１００ｍＬ）、Ｈ2Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィ－［ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ、１％増分で０％から５％］によって残留物を精製し、白色発泡物として生成物（０．８９６ｇ、９２％）を得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ１．６１分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１４３２（［Ｍ＋Ｈ］+.、５）；１４５４（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、５）。
（ｆ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）８，８’－（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－２－メチル－５－オキソ－１１，１１ａ－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，１－ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（８）
Ｄｅｓｓ－Ｍａｒｔｉｎペルヨ－ジナン（０．２４ｇ、０．５７ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ．）を、乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）中でビス－アルコ－ル（７）を撹拌した溶液に加えた。得られた白色懸濁液を室温で２４時間撹拌した。この反応混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（２×１００ｍＬ）、水（１００ｍＬ）、飽和ブライン（１００ｍＬ）で抽出し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィ－［ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ、０．５％増分で０％から３％］用いる精製により、生成物を白色発泡物（０．２８ｇ、６９％）として得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ１．５８分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１４２８（［Ｍ＋Ｈ］+.、２０）；１４５０（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、３０）。
（ｇ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アミノ－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）－８，８’－（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－２－メチル－５－オキソ－１１，１１ａ－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，１－ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（９）
Ｐｄ（ＰＰｈ3）4（８ｍｇ、７μｍｏｌ、０．０４ｅｑ．）を、乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のビス－Ａｌｌｏｃ誘導体（８）（０．２５ｇ、０．１７６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及びピロリジン（３１ｍｇ、３６μＬ、０．４４ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）に加える。この溶液を室温で２時間撹拌した。この反応混合物を飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液（５０ｍＬ）とＤＣＭ（５０ｍＬ）との間で分配した。ＤＣＭを分離し、飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。固体残留物をＥｔ2Ｏ（３×１５ｍＬ）で粉砕／超音波処理し、真空乾燥させ、白色固体として生成物（０．２０７ｇ、９３％）を得た。この生成物をさらなる精製なしで使用した。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ１．０６分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）６３０（［Ｍ＋２Ｈ］+.、１００）。
（ｈ）ビス（４－（（２Ｓ，５Ｓ）－３７－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロ－ル－１－イル）－５－イソプロピル－２－メチル－４，７，３５－トリオキソ－１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１－オクタオキサ－３，６，３４－トリアザヘプタトリアコンタンアミド）ベンジル）８，８’－（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－２－メチル－５－オキソ－１１，１１ａ－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，１－ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（１０）
ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（５６ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を、ＣＨＣｌ3（１５ｍＬ）中でビス－アミン（９）（０．１２３ｇ、９８μｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及びＭａｌｄＰＥＧ（登録商標）ＯＨ（０．１２８ｇ、０．２２ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ．）を撹拌した溶液に加えた。この反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、ＣＨＣｌ3（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ2Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。分取ＨＰＬＣによる精製後に凍結乾燥を伴ったことにより、白色発泡物として生成物（０．０４７ｇ、２０％）を得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ６．６１分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１２０５（［Ｍ＋２Ｈ］+.、５５）。
実施例２
Figure 0007220203000092
 ビス（４－（（２Ｓ，５Ｓ）－２５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロ－ル－１－イル）－５－イソプロピル－２－メチル－４，７，２３－トリオキソ－１０，１３，１６，１９－テトラオキサ－３，６，２２－トリアザペンタコサンアミド）ベンジル）８，８’－（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－２－メチル－５－オキソ－１１，１１ａ－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，１－ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（１１）
ＤＩＰＥＡ（３０ｍｇ、４２μＬ、０．２３ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を、ＣＨＣｌ3（１０ｍＬ）中でビス－アミン（９）（９８ｍｇ、７８μｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及びＭａｌＰＥＧ4ＯＳｕ（８８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ．）を撹拌した溶液に加えた。この反応混合物を室温で７２時間撹拌した後、ＣＨＣｌ3（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ2Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。分取ＨＰＬＣによる精製後に凍結乾燥を伴ったことにより、白色発泡物として生成物（０．０４３ｇ、２５％）を得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ６．１１分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１０２８（［Ｍ＋２Ｈ］+.、８０）。
実施例３
Figure 0007220203000093
 ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロ－ル－１－イル）ヘキサンアミド（ｈｅｘａｎａｍｉｄｏ））－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）８，８’－（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－２－メチル－５－オキソ－１１，１１ａ－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，１－ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（１２）
ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（５０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を、ＣＨＣｌ3（１０ｍＬ）中でビス－アミン（９）（０．１０９ｇ、８６．５μｍｏｌ、１．０ｅｑ．）及びＭＣＯＳｕ（４０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、２．２ ｅｑ．）を撹拌した溶液に加えた。この反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、ＣＨＣｌ3（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ2Ｏ（１００ｍＬ）、飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させた。分取ＨＰＬＣによる精製後に凍結乾燥を伴ったことにより、白色発泡物として生成物（０．０４５ｇ、３２％）を得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、ＲＴ６．８２分；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１６４６（［Ｍ＋Ｈ］+.、２０）；１６６７（［Ｍ＋Ｎａ］）+.、３０）。
実施例４
Figure 0007220203000094
Figure 0007220203000095
 （ａ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド（ｍｅｔｈｙｌｂｕｔａｎａｍｉｄｏ））プロパンアミド）ベンジル）（（プロパン－１，３－ジイルビス（オキシ））ビス（６－（（Ｓ）－２－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）ピロリジン－１－カルボニル）－４－メトキシ－３，１－フェニレン））ジカルバメ－ト（１４）
トリホスゲン（４７２ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ、０．７２ｅｑ）を一度に、ジクロロメタン（３．６ｍＬ）中で１３（１．７７ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．３５ｍＬ、９．６９ｍｍｏｌ、４．３８ｅｑ）の混合物に加えた。１０分後、５（１．８３ｇ、４．８５ｍｍｏｌ、２．１９ｅｑ）を一度に微粉末として、続いて、トリエチルアミン（０．６８ｍＬ、４．９ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ）及びジラウリン酸ジブチルスズ（１３２μＬ、０．２２１ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）を加えた。この反応混合物を３７℃で４時間撹拌し、その後室温で一晩撹拌した。有機相を水で洗浄し、濾過カ－トリッジにデカントした。蒸発させＤＣＭを取り除き、残留物をシリカゲルに乾燥充填し、その後５０ｇウルトラバイオタ－ジカ－トリッジを用いるクロマトグラフィ－を伴った（勾配ＤＣＭ／ＤＣＭ：ＭｅＯＨ ９０：１０、５％から３２％まで、３２％にて溶出）。純粋な画分を組み合わせ、生成物１４（２．３５ｇ、１．４６ｍｍｏｌ、６６．２％の収率）を得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間親油性メソッド、ＲＴ２．２４分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１６０８．９（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）。
（ｂ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）（（プロパン－１，３－ジイルビス（オキシ））ビス（６－（（Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）ピロリジン－１－カルボニル）－４－メトキシ－３，１－フェニレン））ジカルバメ－ト（１５）
パラトルエンスルホン酸水和物（２７７ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を一度に、テトラヒドロフラン（５３．０ｍＬ）中の１４（２．３４ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）、及び０℃の水（５．００ｍＬ）（氷／水浴）の混合物に加えた。この反応混合物を、ＬＣＭＳで監視しながら完了まで、２０℃で７時間撹拌した。この反応混合物を酢酸エチルと水との間で分配し、ＮａＨＣＯ3、次いでブラインで洗浄した。これらの有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。この残留物を、クロマトグラフィ－（５０ｇＵｌｔｒａ、サンプレット上に乾燥充填、ＤＣＭ対ＤＣＭ：ＭｅＯＨ ９０：１０、２０％から６４％の勾配、約６４％にて溶出）で精製した。純粋な画分を組み合わせ、真空下で濃縮し、生成物１５を白色固体（１．６０ｇ、１．１６ｍｍｏｌ、７９．７％収率）として得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間の親油性メソッド、ＲＴ １．５０分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１３８０．９（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）。
（ｃ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）８，８’－（プロパン－１，３－ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－５－オキソ－２，３，１１，１１ａ－テトラヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（１６）
５００ｍＬフラスコ中に、Ｓｔａｈｌ Ｔｅｍｐｏ ０．２Ｍ溶液（２．１０ｍＬ、０．４２０ｍｍｏｌ、０．４４ｅｑ）、その後テトラキスアセトニトリル銅（Ｉ）トリフレ－ト（１６０ｍｇ、０．４２５ｍｍｏｌ、０．４４ｅｑ）を、ＤＭＦ（４．００ｍＬ）中の１５（１．３２ｇ、０．９５７ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を迅速に撹拌し、４０℃で５時間、次いで３５℃で１８時間、エアバル－ン下で加熱し、この時点で、ＬＣＭＳで完了が観察された。これらの溶媒を蒸発させて除去した。微量のＤＭＦを、ブタノンを用いた２回目の蒸発後、強力な真空で除去した。アセトンを用いて残留物をサンプレット（１０ｇ）に乾燥充填した後、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａシステムで５０ｇＵｌｔｒａカラムによるクロマトグラフィ－を伴った。ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭに関する勾配は、８ＣＶで２０％から６３％までであった。溶出及び保持は、６０％前後であった。同じシステムを用いて２５ｇカラムで、不純なフロント画分を再精製した。全ての純粋な画分をプ－ルした。この残留物をアセトン中で溶解させた。ヘプタンの添加により、白色生成物の沈殿を引き起こした。揮発性物質を蒸発させ、強力な真空後、生成物１６を白色粉末として残した（８９２ｍｇ、０．６４８ｍｍｏｌ、６７．８％収率）。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間親油性メソッド、ＲＴ １．４２分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１３７６．６（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）。
（ｄ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アミノ－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）８，８’－（プロパン－１，３－ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－５－オキソ－２，３，１１，１１ａ－テトラヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（１７）
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１０．０ｍｇ、０．００８６５ｍｍｏｌ、０．０３４ｅｑ）を、ジクロロメタン（７．５０ｍＬ）及びメタノ－ル（０．５ｍＬ）中で１６（３５０ｍｇ、０．２５４ ｍｍｏｌ）及びピロリジン（６５．０μＬ、０．７８０ｍｍｏｌ、３．０７ｅｑ）の混合物に加えた。この反応混合物をアルゴン下、室温で１時間３０分撹拌し、ＬＣＭＳで完了したこととがわかった。水中に塩化アンモニウム（３０ｍＬ、３４．３ｍｍｏｌ、６質量％）を加え、混合物を激しく撹拌した。次いで、この混合物をＢｉｏｔａｇｅ相分離カ－トリッジにデカントした。ＤＣＭ層を真空下で蒸発乾固した。残留物をクロロホルム（２０ｍＬ）に溶解させ、溶媒を真空下、３５℃で蒸発させ除去した。このサイクルをもう一度繰り返した後、強力な真空（３ｍｂａｒ）下で乾燥させ、白色固体として粗生成物１７（３０７ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ、１００％）を得た。この粗生成物を、さらなる精製なしで、次のステップに直接用いた。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間親油性メソッド、２ピ－ク、ＲＴ ０．２２分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）６０４．９（［Ｍ＋２Ｈ］2+.、１００）；１２０８．２（［Ｍ＋Ｈ］+.、１０）。
（ｅ）ビス（４－（（２Ｓ，５Ｓ）－３７－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロ－ル－１－イル）－５－イソプロピル－２－メチル－４，７，３５－トリオキソ－１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１－オクタオキサ－３，６，３４－トリアザヘプタトリアコンタンアミド）ベンジル）８，８’－（プロパン－１，３－ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－５－オキソ－２，３，１１，１１ａ－テトラヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（１８）
クロロホルム（１０．００ｍＬ）及びメタノ－ル（０．４ｍＬ）を、粗１７（３０７ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）、次いでマレアミド酸ＰＥＧ８（ｍａｌ－ａｍｉｄｏ－ｐｅｇ８－ａｃｉｄ）（３３９ｍｇ、０．５６１ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ）及びＥＤＣＩ（１０７ｍｇ、０．５５８ｍｍｏｌ、２．１９ｅｑ）に加えた。ＬＣＭＳで完了が観察されたときに、この反応を室温で４５分間進行させた。水中の塩化アンモニウム（３０ｍＬ、６質量％）を加え、混合物を激しく撹拌した。この混合物をＢｉｏｔａｇｅ相分離カ－トリッジにデカントした。ＤＣＭ層を真空下で蒸発乾固した。揮発性物質を回転蒸発（ｒｏｔｏｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ）させ除去し、粗残留物をクロマトグラフィ－（５０ｇＵｌｔｒａ、Ｂｉｏｔａｇｅ、１０ＣＶにおいて、ＤＣＭ中の１６％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、勾配３０／７０から１００／０；１０％超のＭｅＯＨにて溶出）で精製した。全ての画分をＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）で分析した。純粋な画分をプ－ルした。溶媒を蒸発させて除去し、１８（２００ｍｇ）を得た。ＬＣＭＳ分析により、微量のマレアミド酸ＰＥＧ８（ｍａｌ－ｐｅｇ８－ａｃｉｄ）を示し、この材料を分取ＨＰＬＣでさらに精製し、凍結乾燥させ、ジクロロメタン中で分取し、高真空下で乾燥させ、１８を白色固体として得た。純度は、９９．４５％であった（Ｂ、１１０ｍｇ、０．０４６７ｍｍｏｌ、１８．３％収率）。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、１５分間メソット、ＲＴ ５．９０分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１１７９．５（［Ｍ＋２Ｈ］2+.、１００）；1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ９．９２（ｓ、２Ｈ）、８．１６（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．９９（ｔ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．８６（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．５５（ｓ、４Ｈ）、７．１８（ｓ、４Ｈ）、７．０７（ｓ、２Ｈ）、７．００（ｓ、４Ｈ）、６．７９（ｓ、２Ｈ）、６．５０（ｓ、２Ｈ）、５．４８（ｓ、２Ｈ）、５．２３－４．７７（ｍ、４Ｈ）、４．３９（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．２２（ｄｄ、Ｊ＝８．７、６．６Ｈｚ、２Ｈ）、４．１０（ｓ、４Ｈ）、３．７７（ｓ、６Ｈ）、３．６４－３．５５（ｍ、８Ｈ）、３．５５－３．４２（ｍ、５６Ｈ）、３．３７（ｔ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、６Ｈ）、３．２８（ｔ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．１５（ｑ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、４Ｈ）、２．４９－２．３７（ｍ、４Ｈ）、２．３７－２．３０（ｍ、４Ｈ）、２．１７（ｓ、２Ｈ）、２．０９－１．７３（ｍ、１０Ｈ）、１．３０（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、６Ｈ）、０．８５（ｄｄ、Ｊ＝１５．３、６．７Ｈｚ、１２Ｈ）。
実施例５
Figure 0007220203000096
Figure 0007220203000097
 （ａ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）（（プロパン－１，３－ジイルビス（オキシ））ビス（６－（（Ｓ）－２－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）－４－メチレンピロリジン－１－カルボニル）－４－メトキシ－３，１－フェニレン））ジカルバメ－ト（２０）
トリホスゲン（８１６ｍｇ、２．７５ｍｍｏｌ、０．７２ｅｑ）を一度に、０℃のジクロロメタン（７５ｍＬ）中で１９（３．１５ｇ、３．８２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２．３４ｍＬ、１６．８ｍｍｏｌ、４．４ｅｑ）の混合物に加えた。氷バッチを除去し、その１５分後に、アルコ－ル５（３．１７ｇ、８．４０ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ）を微粉末として一度に、続いてトリエチルアミン（１．１７ｍＬ、８．３９ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ）及びジラウリン酸ジブチルスズ（２２９μＬ、０．３８３ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）を加えた。この反応混合物を３７℃で１時間撹拌した後、室温で一晩撹拌した。有機相をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、水（２００ｍＬ）、飽和塩化アンモニウム（１００ｍＬ）、及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄した後、硫化マグネシウムで乾燥させた。揮発性物質を減圧下で蒸発させ除去した。粗生成物をシリカゲル上に乾燥充填し、７ＣＶにおいて２０％から１００％までの酢酸エチル－アセトンの勾配で、３４０ｇＵｌｔｒａ上で溶出させた。２ＣＶにおいて約３０％アセトンでの迅速な溶出により、純粋な画分を得て、真空下で乾燥させ、２０（４．００ｇ、２．４５ｍｍｏｌ、１００質量％、６４．２％収率）を得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間親油性メソッド、ＲＴ ２．３４分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１６６１．１（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）。
（ｂ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）（（プロパン－１，３－ジイルビス（オキシ））ビス（６－（（Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）－４－メチレンピロリジン－１－カルボニル）－４－メトキシ－３，１－フェニレン））ジカルバメ－ト（２１）
ビス－ＴＢＳエ－テル２０（４．００ｇ、２．４５ｍｍｏｌ）及びパラトルエンスルホン酸水和物（３００ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）を、２－メチルテトラヒドロフラン（２５．０ｍＬ、２４９ｍｍｏｌ、１００質量％）、酢酸（４．００ｍＬ、６９．８ｍｍｏｌ、１００質量％）及び水（４．００ｍＬ、２２２ｍｍｏｌ、１００質量％）の混合物中で溶解させた。この混合物を４０℃で加温した。２時間後、ＬＣＭＳで完了を観察した。この反応混合物を酢酸エチル（１５０ｍＬ）と水（２００ｍＬ）との間で分配し、次いで飽和ＮａＨＣＯ3（１５０ｍＬ）、及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。クロマトグラフィ－（１００ｇＵｌｔｒａ、１０ｇサンプレットに乾燥充填、酢酸エチル／アセトン、８５／１５から０／１００の勾配、約８０％アセトンにて溶出）で残留物を精製した。純粋な画分を組み合わせ、真空下で濃縮し、純粋な生成物２１（９６０ｍｇ、０．６８４ｍｍｏｌ、２７．９％収率）を白色固体として得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間親油性メソッド、ＲＴ １．５４分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１４０２．３（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）。
（ｃ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）８，８’－（プロパン－１，３－ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－２－メチレン－５－オキソ－２，３，１１，１１ａ－テトラヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（２２）
Ｓｔａｈｌ Ｔｅｍｐｏ ０．２Ｍ溶液（１．３４ｍＬ、０．２６８ｍｍｏｌ、０．４ ｅｑ）、次いでテトラキスアセトニトリル銅（Ｉ）トリフレ－ト（１９０ｍｇ、０．５０４ｍｍｏｌ、０．７５ｅｑ）を、５００ｍＬフラスコ内のＤＭＦ（３．００ｍＬ）及びＤＣＭ（１３．０ｍＬ）中のアルコ－ル２１（９４０ｍｇ、０．６７０ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を迅速に撹拌し、３７℃で５時間加温した（ほぼ完了）後、－２０℃で９６時間を伴い、この時点で、反応混合物をジクロロメタン（６０ｍＬ）及び水（６０ｍＬ）で希釈し、５分間撹拌した。この反応混合物を相分離器にデカントし、ＤＣＭ相を減圧下で乾燥させた。ＭＥＫ（６０ｍＬ）を加え、減圧下（２時間）でＭＥＫと共沸することで残留ＤＭＦを除去し、粗生成物を固体として得た。この生成物を、ＤＣＭ／イソプロパノ－ル８０／２０（５～１０ｍＬ）中に再溶解させ、Ｂｉｏｔａｇｅサンプレット（１０ｇ）に充填し、１００ｇＵｌｔｒａカラムで乾燥させて充填した。勾配は、１０ＣＶにおいて、８８／１２から７０／３０までのＤＣＭ／ＤＣＭ中の２０％ＭｅＯＨであった。純粋な画分を組み合わせ、純粋な２２（６０２ｍｇ、０．４３０ｍｍｏｌ、６４．２％収率）を白色生成物として得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間親油性メソッド、ＲＴ １．５１分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１４０１．５（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）。
（ｄ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アミノ－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）８，８’－（プロパン－１，３－ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－２－メチレン－５－オキソ－２，３，１１，１１ａ－テトラヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（２３）
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（８．２ｍｇ、０．００７１ｍｍｏｌ、１００質量％）を、ＤＣＭ（７．５０ｍＬ）及びメタノ－ル（０．５ｍＬ）中で２２（２５０ｍｇ、０．１７９ｍｍｏｌ）及びピロリジン（３７．０μＬ、０．４４４ｍｍｏｌ、２．４９ｅｑ）の混合物に加えた。反応混合物を、アルゴン下、室温で１時間３０分撹拌し、ＬＣＭＳで完了したことがわかった。水中に塩化アンモニウム（３０ｍＬ、６質量％）を加え、この混合物を激しく撹拌した。次いで、この混合物をＢｉｏｔａｇｅ相分離カ－トリッジにデカントした。ＤＣＭ層を真空下で蒸発乾固した。残留物をクロロホルム（２０ｍＬ）中で溶解させ、溶媒を真空下、３５℃で回転蒸発（ｒｏｔｏｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ）させ除去した。このサイクルをもう一度繰り返した後、高真空（３ｍｂａｒ、回転蒸発器を用いて）下で乾燥させ、粗生成物２３（２２０ｍｇ、０．１７９ｍｍｏｌ、１００％）を白色固体として得て、この生成物をさらなる精製なしで次のステップに直接使用した。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間メソッド、２ピ－ク、ＲＴ １．１５分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）６１６．９（［Ｍ＋２Ｈ］2+.、１００）；１２３２．１（［Ｍ＋Ｈ］+.、１０）。
（ｅ）ビス（４－（（２Ｓ，５Ｓ）－３７－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロ－ル－１－イル）－５－イソプロピル－２－メチル－４，７，３５－トリオキソ－１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１－オクタオキサ－３，６，３４－トリアザヘプタトリアコンタンアミド）ベンジル）８，８’－（プロパン－１，３－ジイルビス（オキシ））（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－２－メチレン－５－オキソ－２，３，１１，１１ａ－テトラヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（２４）
クロロホルム（４．１ｍＬ）及びメタノ－ル（０．２ｍＬ）、続いてマレアミド酸ＰＥＧ８（ｍａｌ－ａｍｉｄｏ－ｐｅｇ８－ａｃｉｄ）及びＥＤＣＩ（８５．０ｍｇ、０．４４３ｍｍｏｌ、２．４８ｅｑ）を２３に加えた。ＬＣＭＳで完了を観察したときに、この反応を室温で４５分間進行させた。この反応混合物を濃縮し（２ｍＬ）、３ｇＢｉｏｔａｇｅシリカサンプレット上に充填し、真空下で乾燥させた。サンプレットを２５ｇＵｌｔｒａ Ｂｉｏｔａｇｅカラムに充填し、溶出させた（１２ＣＶにおいて、ＤＣＭ中の２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの勾配１０／９０から５８／４２；２０％ＭｅＯＨの約５５％にて溶出）。ＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）で全ての画分を分析した。純粋な画分をプ－ルした。溶媒を蒸発させ除去し、２４（２５０ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ、５８．８％収率）を得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、１５分間メソッド、ＲＴ ６．２０分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１１９１．５（［Ｍ＋２Ｈ］2+.、１００）；1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ９．９２（ｓ、２Ｈ）、８．１６（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．９９（ｔ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．８６（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．６８－７．４２（ｍ、４Ｈ）、７．３９－７．１１（ｍ、４Ｈ）、７．０７（ｓ、２Ｈ）、７．００（ｓ、４Ｈ）、６．８１（ｓ、２Ｈ）、６．６０（ｓ、２Ｈ）、５．４６－５．３０（ｍ、２Ｈ）、５．２１－４．７９（ｍ、８Ｈ）、４．３９（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．２２（ｄｄ、Ｊ＝８．７、６．７Ｈｚ、２Ｈ）、４．１５－３．８８（ｍ、８Ｈ）、３．７７（ｓ、６Ｈ）、３．６５－３．５５（ｍ、８Ｈ）、３．５４－３．４０（ｍ、５８Ｈ）、３．３７（ｔ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、４Ｈ）、３．１５（ｑ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、４Ｈ）、２．９５－２．７９（ｍ、２Ｈ）、２．５７－２．５２（ｍ、２Ｈ）、２．４９－２．３７（ｍ、４Ｈ）、２．３７－２．２９（ｍ、４Ｈ）、２．２２－２．１０（ｍ、２Ｈ）、２．０３－１．８８（ｍ、２Ｈ）、１．３０（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、６Ｈ）、０．８５（ｄｄ、Ｊ＝１５．３、６．７Ｈｚ、１２Ｈ）。
実施例６
（ｉ）（Ｓ，Ｅ）－（２－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）－４－エチリデンピロリジン－１－イル）（５－メトキシ－２－ニトロ－４－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）メタノン（２９）の合成
Figure 0007220203000098
 化合物２５は、Ｔｉｂｅｒｇｈｉｅｎ ｅｔ ａｌ，ＡＣＳ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，２０１６，７（１１），ｐｐ９８３－９８７に記載されている。化合物２６は、Ｓｍｉｔｓ ａｎｄ Ｚｅｍｒｉｂｏ，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，２０１３，１５（１７），ｐｐ４４０６－４４０９に記載されている。
（ａ）メチル（Ｓ，Ｅ）－４－エチリデン－１－（５－メトキシ－２－ニトロ－４－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）ベンゾイル）ピロリジン－２－カルボキシレ－ト（２７）
２５（３２５ｇ、１．２ｅｑ）及び２６（１．０ｅｑ．）をＤＣＭ（３．２５Ｌ）中で溶解させ、－４０℃に冷却した。Ｔ３Ｐ（２ｅｑ）、続いてＤＩＥＡ（６．０ｅｑ）を－４０℃で徐々に加えた。この混合物を－４０℃で１時間撹拌した。反応完了をＬＣＭＳで観察した。酢酸水溶液（１０％、３．２５Ｌ）を０℃で加えた。有機相を分離し、酢酸水溶液（１０％、３．２５Ｌ）、続いてブライン（３．２５Ｌ）で２回洗浄した。揮発性物質を真空下で除去し、粗生成物２７を茶色の油として残し、これをシリカゲルクロマトグラフィ－（石油エ－テル／ＥｔＯＡｃ、１００／１から１０／１の勾配、２０／１から採取（５９１ｇ、ＬＣによる８７．６％、ＮＭＲによる７０％の純度、収率＝６０％）、ＲＴ：６．３７４分間））で精製した。
化合物２７に使用された分析方法
カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ ＥＣ－Ｃ１８ ４．６*１００ｍｍ、２．７ｕｍ
移動相Ａ：水中の０．０５％ＴＦＡ
移動相Ｂ：ＡＣＮ中の０．０５％ＴＦＡ
希釈液：ＡＣＮ
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
注入容量：１μＬ
カラム温度：４０℃
検出器：２２０ｎｍ
実行時間：８．１分間
ポスト時間：２分間
勾配表
Figure 0007220203000099
（ｂ）（Ｓ，Ｅ）－（４－エチリデン－２－（ヒドロキシメチル）ピロリジン－１－イル）（５－メトキシ－２－ニトロ－４－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）メタノン（２８）
２７（５９１ｇ、１ｅｑ）をＤＣＭに溶解させ、０℃に冷却した。リチウムボロハイドライド（２．０ｅｑ）を少量ずつ加えた。この反応混合物を０℃で６時間撹拌した。反応完了をＬＣＭＳで観察した。酢酸水溶液（１０％、５．９Ｌ）を０℃で加えた。有機相を分離し、酢酸水溶液（１０％、５．９Ｌ）、続いてブライン（５．９Ｌ）で２回洗浄した。揮発性物質を真空下で除去し、残留物を残し、この残留物をフラッシュクロマトグラフィ－（石油エ－テル／ＥｔＯＡｃ、勾配５０／１から１／１、５／１から採取）で精製し、２８（２５０ｇ、６４％収率）をオフホワイト固体として得た。ＲＴ：７．９２２分間。
（ｃ）（Ｓ，Ｅ）－（２－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）－４－エチリデンピロリジン－１－イル）（５－メトキシ－２－ニトロ－４－（（トリイソプロピルシリル）オキシ）フェニル）メタノン（２９）
２８（２５０ｇ、１ｅｑ）及びイミダゾ－ル（２ｅｑ）をＤＣＭ（１．５Ｌ、６Ｖ）中に室温で溶解させた。ＴＢＳＣｌ（１．５ｅｑ）を、温度を３０℃より下に保ちながら、少量ずつ加えた。出発物質の消失をＨＰＬＣで観察したときに、反応混合物を２５℃で１時間撹拌した。脱脂綿を通して混合物を濾過した。濾塊をＤＣＭ（５００ｍＬ）で洗浄した。濾液を１０℃の酢酸水溶液（１０％、２．５Ｌ）、続いてブライン（２．５Ｌ）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮し、生成物２９を黄色の油として得て、この生成物２９が次のステップ（２８５ｇ、９２．２％収率）に用いるのに十分に純粋であることがわかった。ＲＴ：１１．００２分間。ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）６６３．４（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）；
化合物２８及び２９に使用された分析方法
カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ ＥＣ－Ｃ１８ ４．６*１００ｍｍ、２．７ｕｍ
移動相Ａ：水中の０．０５％ＴＦＡ
移動相Ｂ：ＡＣＮ中の０．０５％ＴＦＡ
希釈液：ＡＣＮ
流速：１．０ｍＬ／分
注入容量：２μＬ
カラム温度：４０℃
検出器：２２０ｎｍ
実行時間：１２．１分間
ポスト時間：２分間
勾配表
Figure 0007220203000100
（ｉｉ）ビス（４－（（２Ｓ，５Ｓ）－３７－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロ－ル－１－イル）－５－イソプロピル－２－メチル－４，７，３５－トリオキソ－１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１－オクタオキサ－３，６，３４－トリアザヘプタトリアコンタンアミド）ベンジル）８，８’－（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））（２Ｅ，２’Ｅ，１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（２－エチリデン－１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－５－オキソ－２，３，１１，１１ａ－テトラヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（３７）の合成
Figure 0007220203000101
Figure 0007220203000102
（ａ）（Ｓ，Ｅ）－（２－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）－４－エチリデンピロリジン－１－イル）（４－ヒドロキシ－５－メトキシ－２－ニトロフェニル）メタノン（３０）
ＴＩＰＳ保護フェノ－ル２９（１０．０ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（２０．０ｍＬ）及びＤＭＦ（２０．０ｍＬ）の４０℃で混合物中に溶解させた。水（３．０ｍＬ）中に酢酸リチウム（０．６６８ｇ、１０．１ｍｍｏｌ、０．６ｅｑ）の溶液を加えた。この反応を４０℃で４時間進行させ、この時点で、ＬＣＭＳで完了を観察した。反応混合物を２－ＭｅＴＨＦ（２００ｍＬ）と水（２００ｍＬ）中の２％クエン酸との間で分配した。有機相をブライン（７０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。揮発性物質を真空下で除去した。固体残留物をジエチルエ－テル（５０ｍＬ）及びヘキサン（２００ｍＬ）の添加で沈殿させた。この生成物を濾過して採取し、わずかなジエチルエ－テルで洗浄し、一晩真空下で乾燥させ、淡黄色固体（５．８ｇ、１３ｍｍｏｌ、７９％収率）として得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間親油性メソッド、ＲＴ １．８２分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）４３７．８（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）。
（ｂ）（（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））ビス（５－メトキシ－２－ニトロ－４，１－フェニレン））ビス（（（Ｓ，Ｅ）－２－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）－４－エチリデンピロリジン－１－イル）メタノン）（３１）
１００ｍＬ丸底フラスコにおいて、１，５－ジブロモペンタン（０．９８６ｇ、４．２９ｍｍｏｌ、０．５ｅｑ）、続いて炭酸カリウム（１．３０ｇ、９．４１ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）を、アセトン（２０．０ｍＬ）中の３０（３．７４ｇ、８．５７ｍｍｏｌ）及びテトラブチルアンモニウムヨ－ジド（０．６３ｇ、１．７ｍｍｏｌ、０．２ｅｑ）の溶液に加えた。この反応混合物を、迅速に撹拌し、６０℃で２時間加温した後、４５℃で一晩撹拌した。ＬＣＭＳで反応が完了したことがわかった。この混合物を酢酸エチル（１５０ｍＬ）及び水（２００ｍＬ）中で分配し、続いてブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。揮発性物質を真空下で除去し、生成物３１（４．０４ｇ、４．２９ｍｍｏl、１００％収率）を得て、この生成物をさらなる精製なしで次のステップに用いた。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間親油性メソッド、ＲＴ ２．３９分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）９４２．３（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）。
（ｃ）（（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））ビス（２－アミノ－５－メトキシ－４，１－フェニレン））ビス（（（Ｓ，Ｅ）－２－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）－４－エチリデンピロリジン－１－イル）メタノン）（３２）
亜鉛（２０．６ｇ、３１５ｍｍｏｌ、７４ｅｑ）をエタノ－ル（６４．０ｍＬ）、水（４．００ｍＬ）、及びギ酸（４．００ｍＬ、１０６ｍｍｏｌ、２５ｅｑ）の１０℃（氷バス）の混合物に加え、激しく撹拌した。この混合物に、エタノ－ル（１６．０ｍＬ）中の３１（４．００ｇ、４．２５ｍｍｏｌ）の溶液を、３５℃より下に温度を保ちながら、ピペットで滴下した。亜鉛塊を時折手動で撹拌した。反応を、完了達成時にさらに３０分間室温で進行させた。この混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈した。これらの固体をセライトで濾過して除去した。焼結物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で濯いだ。濾液を水（３００ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム（１５０ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。揮発性物質を蒸発させ除去し、残留物を自動化フラッシュクロマトグラフィ－（１００ｇＵｌｔｒａ、Ｂｉｏｔａｇｅ、８ＣＶにおいて、酢酸エチル／ヘキサンの３０％から８０％までの勾配、１０ＣＶからの５８％から溶出）で精製し、３２（１．９４ｇ、２．２０ｍｍｏｌ、５１．８％収率）を淡黄色発泡物として得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間親油性メソッド、ＲＴ ２．２９分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）８８２．４（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）。
（ｄ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）（（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））ビス（６－（（Ｓ，Ｅ）－２－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）－４－エチリデンピロリジン－１－カルボニル）－４－メトキシ－３，１－フェニレン））ジカルバメ－ト（３３）
トリホスゲン（０．４６１ｇ、１．５５ｍｍｏｌ、０．７２ｅｑ）を一度に、ＤＣＭ （４５ｍＬ）中で３２（１．９０ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．３２ｇ、１３．０ｍｍｏｌ、６ｅｑ）を混合した０℃の混合物に加えた。氷バッチを除去し、１５分後、５（１．７９ｇ、４．７４ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ）を一度に微粉末として、続いて、トリエチルアミン（０．６６１ｇ、６．５３ｍｍｏｌ、３ｅｑ）及びジラウリン酸ジブチルスズ（０．１２９ｍＬ、０．２１５ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）を加えた。この反応混合物を３７℃で４時間撹拌し、続いて室温で一晩撹拌した。有機相をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、水（２００ｍＬ）、飽和塩化アンモニウム（１００ｍＬ）、及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥させた。揮発性物質を減圧下で蒸発させて除去し、３（３．００ｇ、１．７８ｍｍｏｌ、８２％収率）を得た。粗生成物を次のステップで直接反応させた。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間親油性メソッド、ＲＴ ２．３１分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１６８９．６（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）。
（ｅ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）（（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））ビス（６－（（Ｓ，Ｅ）－４－エチリデン－２－（ヒドロキシメチル）ピロリジン－１－カルボニル）－４－メトキシ－３，１－フェニレン））ジカルバメ－ト（３４）
ビス－ＴＢＳエ－テル３３（３．００ｇ、１．７８ｍｍｏｌ）を、２－メチルテトラヒドロフラン（９ｍＬ）、酢酸（９ｍＬ）及び水（１．５ｍＬ）の混合物中で溶解させた。この混合物を４０℃で２時間加温した。ＬＣＭＳ監視は、不十分な反応率（４０％）の完了を示した。パラトルエンスルホン酸水和物（２０３ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ、０．６ｅｑ）を加え、反応を促進させた。完了は、３０分内に観察された。この反応混合物を酢酸エチル（１５０ｍＬ）と水（２００ｍＬ）との間で分配し、次いで飽和ＮａＨＣＯ3（１５０ｍＬ）、及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。残留物をクロマトグラフィ－（５０ｇＵｌｔｒａ、緩いシリカゲル上に乾燥充填、８５／１５から０／１００の酢酸エチル／アセトンの勾配、約５５％アセトンにて溶出）で精製した。純粋な画分を組み合わせ、真空下で濃縮し、純粋な生成物３４（２．２０ｇ、１．５１ｍｍｏｌ、８４．８％収率）を白色固体として得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間親油性メソッド、ＲＴ １．６７分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１４６１．６（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）。
（ｆ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）８，８’－（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））（２Ｅ，２’Ｅ，１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（２－エチリデン－１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－５－オキソ－２，３，１１，１１ａ－テトラヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（３５）
Ｓｔａｈｌ Ｔｅｍｐｏ ０．２Ｍ溶液（３．５０ｍＬ、０．７００ｍｍｏｌ、０．４７ｅｑ）、続いてテトラキスアセトニトリル銅（Ｉ）トリフレ－ト（２９０ｍｇ、０．７７０ｍｍｏｌ、０．５２ｅｑ）を、５００ｍＬフラスコにおいて、ＤＭＦ（３．００ｍＬ）中の３４（２．１７ｇ、１．４９ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。この反応混合物を迅速に撹拌し、４０℃で５時間（完了）、続いてエアバル－ン下、３０℃で１８時間加温し、この時点で、反応混合物をジクロロメタン（６０ｍＬ）及び水（６０ｍＬ）で希釈し、５分間撹拌した。この反応混合物を相分離器にデカントし、ＤＣＭ相を減圧下で乾燥させた。ＭＥＫ（６０ｍＬ）を加え、残留ＤＭＦを減圧下で共沸させ（２時間）、除去し、粗生成物を固体として得た。これをＤＣＭ（５～１０ｍＬ）中に溶解させ、１００ｇＵｌｔｒａカラムに充填させた。７５／２５から４０／６０までのＤＣＭ／ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨの勾配（約５０／５０にて溶出）。純粋な画分を組み合わせ、３５（１．３５ｇ、０．９２７ｍｍｏｌ、６２．４％収率）を白色生成物として得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間親油性メソッド、ＲＴ １．６３分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１４５７．３（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）；１５分間メソッド、ＲＴ ７．５２分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１４５６．６（［Ｍ＋Ｈ］+.、１００）。
（ｇ）ビス（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アミノ－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）８，８’－（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））（２Ｅ，２’Ｅ，１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（２－エチリデン－１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－５－オキソ－２，３，１１，１１ａ－テトラヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（３６）
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１０．０ｍｇ、０．００８６ｍｍｏｌ、０．０１ｅｑ）を、ＤＣＭ（７．５０ｍＬ）及びメタノ－ル（０．５ｍＬ）中で３５（１．３３ｇ、０．９１４ｍｍｏｌ）及びピロリジン（１９０μＬ、２．２８ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）の混合物に加えた。この反応混合物をアルゴン下、室温で１時間３０分撹拌し、ＬＣＭＳで完了がわかった。水中の塩化アンモニウム（３０ｍＬ、６質量％）を加え、この混合物を激しく撹拌した。次いで、この混合物をＢｉｏｔａｇｅ相分離カ－トリッジにデカントした。ＤＣＭ層を真空下で蒸発乾固させた。この残留物をクロロホルム（２０ｍＬ）に溶解させ、溶媒を真空下、３５℃で回転蒸発（ｒｏｔｏｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ）させて除去した。このサイクルをもう一度繰り返した後、高真空（３ｍｂａｒ）下で乾燥させ、粗３６（１．１７ｇ、０．９１４ｍｍｏｌ、１００％収率）を白色固体として得た。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、３分間メソッド、ＲＴ １．２３分間、２ピ－ク；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）６４５．０（［Ｍ＋２Ｈ］2+.、１００）；１２８８．８（［Ｍ＋Ｈ］+.、１０）。
（ｈ）ビス（４－（（２Ｓ，５Ｓ）－３７－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ－１－イル）－５－イソプロピル－２－メチル－４，７，３５－トリオキソ－１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１－オクタオキサ－３，６，３４－トリアザヘプタトリアコンタンアミド）ベンジル）８，８’－（ペンタン－１，５－ジイルビス（オキシ））（２Ｅ，２’Ｅ，１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）－ビス（２－エチリデン－１１－ヒドロキシ－７－メトキシ－５－オキソ－２，３，１１，１１ａ－テトラヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアゼピン－１０（５Ｈ）－カルボキシレ－ト）（３７）
ＤＣＭ（１０．００ｍＬ）及びメタノ－ル（０．４ｍＬ）を、３６（３９３ｍｇ、０．３０５ｍｍｏｌ）に加え、その後マレアミド酸ＰＥＧ８（ｍａｌ－ａｍｉｄｏ－ｐｅｇ８－ａｃｉｄ）（３８０ｍｇ、０．６２８ｍｍｏｌ、２．０６ｅｑ）及びＥＤＣＩ（１２８ｍｇ、０．６６８ｍｍｏｌ、２．２ｅｑ）を加えた。ＬＣＭＳで完了を観察したときに、この反応を室温で４時間進行させた。水中の塩化アンモニウム（３０ｍＬ、６質量％）を加え、この混合物を激しく撹拌した。この混合物をＢｉｏｔａｇｅ相分離カ－トリッジにデカントした。ＤＣＭ層を真空下で蒸発乾固させ、粗残留物をクロマトグラフィ－（２５ｇＵｌｔｒａ、１２ＣＶにおいて、ＤＣＭ中の２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの１５／８５から１００／０の勾配；約４８％にて溶出を保持する）で精製した。これらの画分をＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）で分析した。純粋な画分をプ－ルした。溶媒を蒸発させて除去した。残留物を逆相分取ＨＰＬＣ（１５～７５％水／アセトニトリル＋０．０１％ギ酸の勾配）でさらに精製した後、凍結乾燥させ、ＤＣＭから分取し、３７（５１６ｍｇ、０．２１２ｍｍｏｌ、６９．４％収率）を白色発泡物として得た。純度は、９７．６５％であった。
分析デ－タ：ＬＣ／ＭＳ、１５分間メソッド、ＲＴ ６．６１分間；ＭＳ（ＥＳ+）ｍ／ｚ（相対強度）１２１９．７（［Ｍ＋２Ｈ］2+.、１００）；1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ９．９２（ｓ、２Ｈ）、８．１７（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、８．０１（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．８７（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．７２－７．４４（ｍ、４Ｈ）、７．３９－７．１０（ｍ、４Ｈ）、７．０５（ｓ、２Ｈ）、７．００（ｓ、４Ｈ）、６．７６（ｓ、２Ｈ）、６．６６－６．４６（ｍ、２Ｈ）、５．５６（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、５．３４（ｄｄ、Ｊ＝９．７、５．９Ｈｚ、２Ｈ）、５．２１－４．７０（ｍ、４Ｈ）、４．３９（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．２２（ｄｄ、Ｊ＝８．７、６．７Ｈｚ、２Ｈ）、４．１５－４．０１（ｍ、２Ｈ）、３．９４（ｄ、Ｊ＝１５．３Ｈｚ、４Ｈ）、３．８６－３．７２（ｍ、８Ｈ）、３．６０（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、８Ｈ）、３．５５－３．４２（ｍ、５８Ｈ）、３．３７（ｔ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、４Ｈ）、３．１５（ｑ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、４Ｈ）、２．７６－２．５６（ｍ、４Ｈ）、２．４６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．４０（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．３６－２．２９（ｍ、４Ｈ）、１．９６（ｑ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、１．７８（ｓ、４Ｈ）、１．６６（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．５７（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、１．３０（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、６Ｈ）、０．８５（ｄｄ、Ｊ＝１５．２、６．７Ｈｚ、１２Ｈ）。
Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ抗体産生
全般
細胞株ＳＫＢＲ－３（ＨＥＲ２+、１．５×１０6受容体／細胞）、ＭＤＡ－ＭＢ－４５３（ＨＥＲ２+、７．７×１０4受容体／細胞）、及びＭＣＦ－７（ＨＥＲ２-）をＡＴＣＣから得て、製造元の推奨培地（ＳＫＢＲ－３：ＭｃＣｏｙｓ５Ａ＋１０％ＦＢＳ、ＭＤＡ－ＭＢ－４５３：ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ、及びＭＣＦ－７：ＤＭＥＭ＋１０％ ＦＢＳ）を用いて、Ｔ１７５組織培養フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中で維持した。トランスフェクションに用いた２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、２９３Ｆ Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で維持した。ＳＫＢＲ－３、ＭＤＡ－ＭＢ－４５３、及びＭＣＦ－７細胞を、５％ＣＯ2を含む３７℃のインキュベ－タ中で培養した。２９３Ｆ細胞を、８％ＣＯ2を含み１２０ｒｐｍで回転した３７℃の振盪フラスコ（２Ｌ、Ｃｏｒｎｉｎｇ）中で培養した。別段に指定されない限り、全ての試薬をＳｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ＶＷＲ、又はＪＴ Ｂａｋｅｒから購入し、さらなる精製なしで用いた。
Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ抗体の設計及び構築
Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ野生型抗体を鋳型として用い、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂを操作した。Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂの軽鎖は、２つの変異、Ｆ１１８Ｃ及びＣ２１４Ｖからなるが、重鎖は、３つの変異、Ｌ１２４Ｃ、Ｃ２１６Ｖ、及びＣ２２５Ｖを含む（図３及び５を参照、図５において、Ｃは操作されたシステインを表し、Ｖはシステインからバリンへの変異を表し、Ｃは複合化／再架橋に用いるシステインを表す）。軽鎖中のＦ１１８Ｃ変異は、重鎖中のＬ１２４Ｃの変異とジスルフィド結合を形成する。この操作されたジスルフィドは、暴露された溶媒ではないが、軽鎖と重鎖との間で共有結合を保つように機能する。Ｃ２２２ヒンジシステインは、未修飾のままであり、ｐＢＤベ－スの薬物リンカーと部位特異的複合化のための位置として機能した。Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂについての軽鎖及び重鎖配列は、哺乳類発現についてコドン最適化され、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から調達された。最適化されたＨｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂコンストラクトは、ＢｓｓＨＩＩ／ＮｈｅＩ部位（軽鎖）及びＳａｌＩ／ＮｏｔＩ部位（重鎖）をＭｅｄＩｍｍｕｎｅ独自の哺乳類発現ベクタ－に用いる標準的な分子生物学技術でサブクロ－ニングされた。このＭｅｄＩｍｍｕｎｅ独自の哺乳類発現ベクタ－は、分泌用のＩｇＧ軽鎖シグナルペプチド、及び組換え発現用のサイトメガロウイルスプロモ－タ－を含む。完成した哺乳類発現プラスミド、ｐＯＥ－Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－ＦｌｅｘｍａｂをＤＮＡ配列決定で確認した。野生型ＮＩＰ２２８抗体（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ独自の）を鋳型として用い、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂについて記述される通りに、陰性対照ＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ抗体を産生した。
Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ抗体の発現及び精製
先に公開された方法（Ｄｉｍａｓｉ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００９，３９３，６７２－６９２；ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｊｍｂ．２００９．０８．０３２）に従い、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ抗体の発現及び精製を行った。一過性の２９３Ｆ発現及びプロテインＡ精製に続き、４℃でＳｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット（１０ｋＤａ ＭＷＣＯ、Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて、これらの抗体を複合化緩衝液（１×ＰＢＳ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．２）中で製剤化し、Ｖｉｖａｓｐｉｎ濃縮器（１０ｋＤａ ＭＷＣＯ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、８．０ｍｇ／ｍＬ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ）及び５．５２ｍｇ／ｍＬ（ＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ）に濃縮した。Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計（Ａ280、Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて、最終濃度を決定した。６日後の一過性発現収量は、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂに対して、それぞれ、５００ｍｇ／Ｌ及び１５０ｍｇ／Ｌであった。
実施例７－Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ ＡＤＣの構築
ＴＣＥＰ（３ｅｑ．、３００ｎｍｏｌ、Ｔｈｅｒｍｏ）を２時間室温で用いて、複合化緩衝液（１×ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．２、３ｍＬ）中のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ（１５ｍｇ、１００ｎｍｏｌ）を還元した。還元後、ＤＭＳＯ（１０％ｖ／ｖ、３００μＬ）を還元抗体に加え、続いて化合物１０（３ｅｑ．、３００ｎｍｏｌ）を加えた。複合化反応を室温で３時間進行させた。Ｎ－アセチルシステイン（５ｅｑ．化合物１０を用いる、１．５μｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて、過剰な化合物１０をクエンチし、Ｓｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット（１０ｋＤａ ＭＷＣＯ、Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて、４℃の複合化緩衝液の３回の緩衝液交換に対してＡＤＣを透析した。ＡＤＣをＤＩ－Ｈ2Ｏで１：５に希釈し、ＡＫＴＡ Ｐｕｒｅ ＦＰＬＣ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、タイプＩＩセラミックハイドロキシアパタイトカラム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）に５ｍＬ／分で充填し、２０カラム容量のＣＨＴ緩衝液Ａ（１０ｍＭ ＮａＰＯ3、ｐＨ７）でカラムを洗浄した。ＣＨＴ緩衝液Ｂ（１０ｍＭ ＮａＰＯ3中の０－２Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７）の線形勾配を用いて、２０分間ＡＤＣの溶出を実行した。Ｓｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット（１０ｋＤａ ＭＷＣＯ）を用いて、溶出したＡＤＣを一晩４℃、複合化緩衝液中で透析し、ＨＩＣ緩衝液Ａ（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１．５Ｍ（ＮＨ4）2 ＳＯ4、ｐＨ８）で１：５に希釈した。ＡＫＴＡ Ｐｕｒｅ ＦＰＬＣを用いて、ＡＤＣをセミ分取疎水性相互作用クロマトグラフィ－（ＨＩＣ）カラム（ＨｉＴｒａｐ Ｂｕｔｙｌ－Ｓ ＦＦ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に１ｍＬ／分で充填し、２０カラム容量のＨＩＣ緩衝液Ａで洗浄した。ＨＩＣ緩衝液Ｂ（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、５％イソプロピルアルコ－ル）の線形勾配を用いて、ＡＤＣを４５分間、１ｍＬ／分で溶出した。精製したＨｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０を複合化緩衝液中で一晩４℃で透析し、Ｖｉｖａｓｐｉｎ濃縮器（１０ｋＤａ ＭＷＣＯ）を用いて、２ｍｇ／ｍＬに濃縮し、０．２μｍシリンジフィルタ（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を通して滅菌濾過した。このプロセスを図４に模式的に示す。強調表示されたＶ’ｓは、バリン変異を表す。
Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０について記述される通りに、化合物１０のＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂへの部位特異的複合化後、精製を実行した。
実施例８－ＡＤＣの分析特性
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
ＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いて、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０、ＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ、及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０コンストラクトの分子量を確認した。試料（２μｇ、親又は複合化）をＬＤＳ Ｂｏｌｔ試料緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と１：４に、ＮｕＰＡＧＥ還元緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と１：１０で混合し、１０分間、７０℃まで加温した後、１０％Ｂｉｓ－ｔｒｉｓ Ｂｏｌｔゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に充填した。ゲルを１５０Ｖで電気泳動させ、Ｓｉｍｐｌｙ Ｂｌｕｅ染色試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて染色し、ＤＩ－Ｈ2Ｏを用いて脱染した。これらのゲルをＧｅｌ Ｄｏｃ ＥＺイメ－ジングシステム（Ｂｉｏ－ＲＡＤ）を用いて撮像した。
還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いて、精製したＨｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ－２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ抗体及びＡＤＣの分子量を確認した。これらの結果は、それぞれ、約２５ｋＤａ及び５０ｋＤａの分子量を有するＨｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂの軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）の分離を実証する。Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂへの二重マレイミド化合物１０ペイロ－ドの複合化は、１００ｋＤａバンドの存在によって重鎖の非常に効率的な架橋をもたらした。還元条件下で軽鎖及び重鎖の明確な同定によって、同様の結果をＮＩＰ－２２８－Ｆｌｅｘｍａｂに関して観察した。ＮＩＰ－２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ重鎖の化合物１０との非常に効率的なジスルフィド架橋を観察した。いずれの抗体又はＡＤＣについても凝集を観察しなかった。
疎水性相互作用クロマトグラフィ－
分析用の疎水性相互作用クロマトグラフィ－を使用して、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ抗体上への化合物１０の複合化効率を評価し、各ＡＤＣについて薬物抗体比（ＤＡＲ）を評価した。ＨＩＣ緩衝液Ａ（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１．５Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４、ｐＨ８）を用いて、ＡＤＣ（５０μＬ中の５００μｇ）をＰｒｏｔｅｏｍｉｘ ＨＩＣ Ｂｕｔｙｌ－ＮＰ５カラム（４．６ｍｍ Ｉ．Ｄ．×３．５ｃｍ×５μｍ、Ｓｅｐａｘ）に個別に充填し、ＨＩＣ緩衝液Ｂ（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、５％イソプロピルアルコ－ル、ｐＨ７．５－１００％）の線形勾配を用いて、１３分間、０．８ｍＬ／分でＡＤＣを溶出した。２８０ｎｍ及び３３０ｎｍで吸光度を測定し、溶出ピ－クを手動で積分し、各ＡＤＣの複合化効率を決定した。複合化効率及びＤＡＲを、それぞれ、式１及び式２に基づき計算した。
Figure 0007220203000103
Figure 0007220203000104
Figure 0007220203000105
サイズ排除クロマトグラフィ－
サイズ排除クロマトグラフィ－ＨＰＬＣ（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）を親抗体及びＡＤＣに行い、Ａｇｉｌｅｎｔ１２００シリ－ズＨＰＬＣを用いて、純度及び凝集を分析した。０．１Ｍ ＮａＰＯ4、０．１Ｍ ＮａＳＯ4、１０％イソプロパノ－ル、ｐＨ６．８を移動相として１ｍＬ／分の流速で用いて、試料（１００μＬ複合化緩衝液中の１００μｇ）をＴＳＫ Ｇｅｌカラム（Ｇ３０００ＳＷ、８ｍｍＩ．Ｄ．×３０ｃｍ×５μｍ、Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に注入した。溶出ピ－クの吸光度を２８０ｎｍで測定した後、手動で積分し、各試料の純度及び凝集率を決定した。
プロテインＡ精製に続き、各抗体は９８％を上回る高い単量体含量をもたらし、これらの特性を化合物１０ペイロ－ドの複合化後に維持し、ＤＡＲ＝１ＡＤＣを産生した。Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＨｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０は、それぞれ、８．６５分及び８．６６分、ならびに９．０１分の保持時間（ＴR）で溶出した。ＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０は、それぞれ、ＴR＝８．５２分及び８．５４分で溶出した。
還元逆相ＨＰＬＣ
抗体の重鎖上への化合物１０の部位特異的複合化を確認するために、還元逆相ＨＰＬＣ（ｒＲＰ－ＨＰＬＣ）を利用した。ＡＤＣをジチオトレイト－ル（ＤＴＴ、５０ｍＭ）によって３０分間室温で処理した。還元後、ＡＤＣをＰＬＲＰ－Ｓカラム（１０００Å、２．１ｍｍ×５０ｍｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ）に注入し、ＲＰ－ＨＰＬＣ溶媒Ａ（水中の０．１％トリフルオロ酢酸）、及び５％溶媒Ｂ～１００％溶媒ＢからなるＲＰ－ＨＰＬＣ溶媒Ｂ（アセトニトリル中の０．１％トリフルオロ酢酸）の勾配移動相を用いて、２５分間溶出した。１ｍＬ／分の流速を用いて、勾配溶出を８０℃で行った。吸光度を２８０ｎｍで測定した。
Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＨｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０ ＡＤＣのクロマトグラムを重ねた。両方の種の軽鎖を共溶出した（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０ ＴR＝１７．５７分；Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ ＴR＝１７．５４分）が、非複合化型Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ抗体（ＴR＝１９．７５分）と比較したとき、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０（ＴR＝２１．３１分）の重鎖についての保持時間に著しいシフトがあった。少量の非複合化重鎖は、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０クロマトグラム（ＴR＝１９．９７分）でも可視であった。
陰性対照、ＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０についても比較分析のためにクロマトグラムを重ねた。ＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０ＡＤＣの重鎖は、ＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ（ＴR＝２０．０９分）の重鎖と比較されたとき、保持時間（ＴR＝２１．５７分）中にシフトを示した。少量の非複合化重鎖は、ＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０（ＴR＝２０．３５分）について可視であった。
質量分析
インタクト及び還元型逆相液体クロマトグラフィ－質量分析法（ＬＣＭＳ）を利用して、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ抗体及びＡＤＣの分子量を確認した。約２μｇ（４μＬ）の抗体又はＡＤＣを、Ａｇｉｌｅｎｔ６５２０ Ａｃｃｕｒａｔｅ－Ｍａｓｓ Ｔｉｍｅ－ｏｆ－Ｆｌｉｇｈｔ（ＴＯＦ）ＬＣ－ＭＳへ直列に接続されたＡｇｉｌｅｎｔ１２００シリ－ズＨＰＬＣに注入した。抗体又はＡＤＣをＺｏｒｂａｘ３００ Ｄｉｐｈｅｎｙｌ Ｒａｐｉｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ＨＤカラム（２．１ｍｍ×５０ｍｍ×１．８μｍ）に充填し、１～８０％溶媒Ｂ（アセトニトリル中の０．１％ギ酸）、２分後（溶媒Ａ：水中の０．１％ギ酸）のステップグラジエントからなる０．５ｍＬ／分の流速を用いて溶出した。ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ）を用いて、デ－タを取得し、分析した。
精製したＨｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂは、１４７，９８５．３６Ｄａ（Ｇ０ｆ 計算：１４７，９８０．８Ｄａ）でピ－クを生じた。化合物１０ペイロ－ド（ＭＷ：２４０８．６７Ｄａ）の複合化に続き、ＬＣＭＳは、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ３－１０の分子量が１５０，３９６．７１Ｄａ（Ｇ０ｆ計算：１５０，３９４．０３Ｄａ）であったことを明らかにした。ＬＣＭＳによるＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂの分析は、ピ－クが１４６，７７０．３６Ｄａ（Ｇ０ｆ計算：１４６７４３．９８ Ｄａ）であったことを明らかにした。化合物１０ペイロ－ドの複合化は、１４９，１９９．７５Ｄａ（Ｇ０ｆ計算：１４９，１５２．６５Ｄａ）のＭＷでピ－クを生じた。
示差走査熱量計（ＤＳＣ）
抗体及びＡＤＣを４℃で２５ｍＭヒスチジン、ｐＨ６に広範に透析し、０．５ｍｇ／ｍＬで製剤化した。ＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰ－ＤＳＣ機器（Ｍａｌｖｅｒｎ）を用いて、ＤＳＣ実験を実行した。生デ－タを濃度及び走査速度（１℃／分）について正規化した。Ｏｒｉｇｉｎ７ソフトウェア（Ｍａｌｖｅｒｎ）を用いて、デ－タ分析及び逆畳み込みを実行した。非二状態モデルを用いて、逆畳み込み分析を行い、１０～１５回の反復サイクルを用いて、最も良い適合を得た。遷移ピ－クの最大値に対応する変性温度Ｔｍを各コンストラクトについて決定した。
ＤＳＣ実験からの結果は、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（ＣＨ２ Ｔm１＝６８．９５℃、Ｆａｂ Ｔm２＝８１．４３℃）、及びＮＩＰ２２８（ＣＨ２ Ｔm１＝６９．０９℃、Ｆａｂ Ｔm２＝７４．２２℃）野生型抗体のＣＨ２及びＦａｂドメインについてのＴmの遷移温度を明らかにした（Ｗａｋａｎｋａｒ，Ａ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１０，２１，１５８８－１５９５；ＤＯＩ：１０．１０２１／ｂｃ９００４３４ｃ）。ＮＩＰ２２８抗体は、ＣＨ３ドメインについて８１．９２℃で第三のＴm遷移温度を示した。これらの抗体へのＦｌｅｘｍａｂテクノロジ－の導入により、これらのＴｍ遷移温度を逆転させ、Ｆａｂドメインは、ＣＨ２ドメインと比較して、より低いＴm遷移温度を有した（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ Ｆａｂ Ｔm１＝６８．２１℃、ＣＨ２ Ｔm１＝８１．０５°Ｃ；ＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ Ｆａｂ Ｔm１＝６６．５８℃、ＣＨ２ Ｔm３＝８１．８５℃）。ＮＩＰ２２８野生型抗体に関してみられたように、発明者らは、ＣＨ３ドメインについて第三のＴm遷移温度（Ｔm２＝７６．２８℃）をＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ上で観察した。予想通りに、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ抗体への化合物１０の複合化に続き、Ｔm遷移温度において、ごくわずかな変化を観察した（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０ Ｆａｂ Ｔm１＝６７．８３℃、ＣＨ２ Ｔm１＝８１．１１℃；ＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０ Ｆａｂ Ｔm１＝６６．１１℃、ＣＨ２ Ｔm３＝８２．１９℃）。ＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０のＣＨ３ドメインについての第三のＴm遷移温度（Ｔm２＝７８．７８℃）は、ＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂと比較して、ごくわずかに変化した。
実施例９－Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ抗体及びＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ特性
フロ－サイトメトリ－による細胞結合
Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ ＡＤＣの結合親和性及び特異性は、フロ－サイトメトリ－を用いて確認された。本研究の当日、ＳＫＢＲ－３（ＨＥＲ２+）及びＭＣＦ－７（ＨＥＲ２-）細胞を、それらのフラスコからＴｒｙｐＬＥ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）トリプシンで解離させ、それらのそれぞれの増殖培地で再懸濁した。細胞をＶｉＣｅｌｌセルカウンタ－（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で計数し、１×１０6細胞／ｍＬの濃度を得た。これらの細胞を９６ウェルプレ－ト（Ｆａｌｃｏｎ）のウェル（５×１０4細胞／ウェル）に二度繰り返して移し、１２００ｒｐｍ、４℃で遠心分離した。ペレット状細胞を、１８０μＬのフロ－サイトメトリ－緩衝液（ＰＢＳ ｐＨ７．２、２％ＦＢＳ、氷上）の中で再懸濁し、抗体又はＡＤＣを細胞へ個別に加えた（２０μＬの段階希釈：２００μｇ／ｍ１～０．０１μｇ／ｍＬ；最終濃度２０μｇ／ｍＬ～０．００１μｇ／ｍＬ）。抗体及び細胞を４℃で１時間インキュベ－トした後、それらをフロ－サイトメトリ－緩衝液で洗浄し、遠心分離して（２×、１２００ｒｐｍ）ペレット状にした。最終スピン後、細胞ペレットをＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７、複合化した抗ヒト二次抗体（１５０μＬ、８μｇ／ｍＬ、ＰＢＳ ｐＨ７．２中の、２％ＦＢＳ）中で再懸濁し、４℃で１時間インキュベ－トした。細胞をフロ－サイトメトリ－緩衝液で洗浄し、遠心分離した（２×、１２００ｒｐｍ）後、１３５μＬのフロ－サイトメトリ－緩衝液中での再懸濁した。ＤＡＰＩ（１０Ｘ原液から１５μＬ、１μＭ最終、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を、生細胞／死細胞染色として働く各細胞懸濁液に加えた。ＬＳＲＩＩフロ－サイトメ－タ－（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｓｏｎ）を用いて、細胞から蛍光デ－タを収集し、ＦｌｏｗＪｏ分析ソフトウェア（Ｖｅｒｓｉｏｎ９、ＦｌｏｗＪｏ、ＬＬＣ）を用いて、デ－タを分析した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（Ｖｅｒｓｉｏｎ６、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．）を使用して、結合曲線を生成した。
Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０のＡＤＣは、ＳＫＢＲ－３細胞株に対して高い親和性（ＥＣ50＝０．２４μｇ／ｍＬ）及び選択性を示したが、結合は、ＭＣＦ－７細胞株に対して観察されなかった。
血清安定性研究
マウス血清（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ）を、０．２μｍシリンジフィルタ（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を通して滅菌ポリプロピレンチュ－ブ中に濾過し、氷上で保持した。ＡＤＣ（２００μｇ）を、２００μｇ／ｍＬの最終濃度までマウス血清に加え、試料を３７℃でインキュベ－トした。ＰＢＳを陰性対照として使用した。２００μＬのアリコ－トを各試料から、Ｔ＝０、２４、７２、及び１４８時間のインキュベ－ション時に取得した。Ｔ＝０の時点で、血清へのＡＤＣの添加後、最初の数分内にドライアイス上に置いた。これらの試料を－８０℃で保管し、ＬＣＭＳによるアフィニティ－キャプチャ及び分析を受けた。抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）アガロ－ス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて、ＡＤＣをマウス血清からアフィニティ－キャプチャした。各時点について、室温で３０分間、連続回転下で、５０μＬの抗ヒトＦｃアガロ－スビ－ズを３００μＬのＰＢＳ及び１００μＬの血清試料と混合させた。これらのビ－ズを３回、１×ＰＢＳで洗浄し、全ての未結合の血清タンパク質も除去し、１００μＬのＩｇＧ溶出緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてＡＤＣを溶出し、２０μＬの１Ｍ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８で中和した。上述される通りに個々の試料（２０μＬ）をＬＣＭＳで分析し、Ｍａｓｓｈｕｎｔｅｒソフトウェアを用いて生デ－タを分析した。
７日間のインキュベ－ション後、ＬＣＭＳにより、１％より少ない化合物１０のペイロ－ドがＨｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０から失われたことが明らかになった。iｎ ｖｉｔｒｏでのこのような良い安定性は、オフタ－ゲット毒性がiｎ ｖｉｖｏで低減した可能性があることを示唆する。
細胞毒性アッセイ
ＳＫＢＲ－３、ＭＤＡ－ＭＤ－４５３、及びＭＣＦ－７細胞を上述される通りに維持した。処置前の当日、細胞をそれらのフラスコからＴｒｙｐＬＥトリプシンで解離させ、増殖培地中で再懸濁した。ＶｉＣｅｌｌセルカウンタ－で細胞を計数し、それらのそれぞれの増殖培地中で１．０×１０5細胞／ｍＬの濃度を得た。細胞懸濁液（１００μＬ、１．０×１０4細胞／ウェル）を白色壁、透明な底の９６ウェルプレ－ト（Ｃｏｒｎｉｎｇ）のウェルに移した。これらの細胞を一晩、５％ＣＯ2を含む３７℃のインキュベ－タ中で付着させた。処置日に、ＡＤＣの段階希釈を３０μｇ／ｍＬ～１．５ｎｇ／ｍＬの範囲で調製し、各希釈液の５０μＬを三通りウェルに加えた（１０μｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの最終ＡＤＣ濃度、１５０μＬの総容量／ウェル）。適切な未処理ウェルも各プレ－トに加え、対照として役立った。５日目、プレ－トをインキュベ－タから取り除き、室温に平衡化させた。プレ－トを遠心分離し（１３００ｒｐｍ、５分間）、上澄みを吸引した。フェノ－ルレッド又はＦＢＳを含まない培地（ＳＫＢＲ－３：ＭｃＣｏｙの５Ａ、ＭＤＡ－ＭＢ－４５３及びＭＣＦ－７：ＤＭＥＭ）を各ウェル（５０μＬ）に加えた後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬（５０μＬ）を加えた。プレ－トを１時間暗所にて室温で振盪し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（商標）プレ－トリ－ダ－（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて発光を測定した。生存率を（不明／平均対照）*１００として計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いて実験デ－タをプロットし、ＩＣ50曲線を生成した。
ＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞（低いＨＥＲ２発現；７．７×１０4ＨＥＲ２受容体／細胞）でのインキュベ－ションの３日後、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０は、約９０％の細胞生存率でＩＣ50＝１．０８ｎＭを示した。５日後、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０は、約３５％の細胞生存率でＩＣ50＝０．０３７５ｎＭを有した。
ＳＫＢＲ－３細胞（高いＨＥＲ２発現；１．５×１０6ＨＥＲ２受容体／細胞）でのインキュベ－ションの３日後、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０は、約３０％の細胞生存率でＩＣ50＝０．２２９ｎＭを示した。５日後、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０は、約５％の細胞生存率でＩＣ50＝０．０３５５ｎＭを有した。
実施例１０－Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ及びＮＩＰ２２８－Ｆｌｅｘｍａｂ抗体及びＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ特性
動物の使用を伴う、全ての研究は、ＡＡＡＬＡＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌによって認可された施設においてＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたプロトコルの下で人道的に実行された。
異種移植
５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ中のＮＣＩ－Ｎ８７細胞（５×１０6）を、４～６週齢の雌性胸腺欠損ヌ－ドマウス（Ｈａｒｌａｎ）の皮下に接種した。腫瘍が２００ｍｍ3に達したときに、マウスを複数の群にランダムに割り当てた（１群あたり５匹）。ＡＤＣを静脈内に指示された用量で投与し、細胞接種後５日目に投与した。腫瘍体積をノギスで毎週２回測定した。腫瘍体積を式１／２×Ｌ×Ｗ2（Ｌ＝長さ；Ｗ＝幅）を用いて計算した。体重を測定し、処置耐容性を評価した。Ｐｒｉｓｍ５ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を用いて、腫瘍成長及び体重曲線をプロットした。腫瘍体積を平均±ＳＥＭとして表す。
図１は、未処置（●）と比較して、単一用量の効果を１．０ｍｇ／ｋｇ（◆）で示す。この投与は、腫瘍退縮、続いて５５日間の腫瘍停滞をもたらした。
図２は、未処置（●）と比較して、単一用量の効果を０．３ｍｇ／ｋｇ（◆）で示す。この投与も腫瘍退縮、続いて５５日間の腫瘍停滞をもたらした。
毒性
雄性Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（８～１２週齢、１群あたり５匹）に、０．７５、１．５、３、又は４ｍｇ／ｋｇのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｂ－１０の単回静脈内注入（１日目）を投与し、ラットを２１日間評価した。毒物動態学（ＴＫ）サテライト動物（１群あたり３匹）を各処置腕に含み、抗体及びＡＤＣ総計の血漿濃度を測定した。対照ラット（１群あたり５匹）にビヒクル対照の単回静脈内注入を１日目に投与した。全ての主な研究動物を臨床徴候、体重における変化、臨床病理、臓器重量による肉眼所見、及び顕微鏡観察について評価した。全てのＴＫサテライト動物を臨床徴候、体重における変化、及び薬物動態分析について評価した。８日目及び１５日目に、血液学的及び血清化学的試料を採取し、分析した。２２日目にのみ凝固分析用の追加の試料を採取し、分析した。投与前に、そして１、８、１５、２２日目の複数の時点で、薬物動態分析用の血液試料をＫ2ＥＤＴＡチュ－ブ中に採取した。全ての主な研究動物に肉眼的剖検を実行し、脳、肺、肝臓、腎臓、脾臓、胸腺、精巣、心臓、及び骨を含む臓器の標準リストをパラフィンに包埋し、薄片にし、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、そして委員会認定の獣医病理学者が顕微鏡的に検査した。
４ｍｇ／ｋｇに及ぶＨｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｎ－１０の投与量は、耐容性が良好であった。
治療指数
治療指数は、ラット中の非標的ＡＤＣの単回最大耐量（ＭＴＤ）を、標的ＡＤＣの単回最小有効用量（ＭＥＤ）で除算して、計算することができる。ＭＥＤは、（ＮＣＩ－Ｎ８７異種移植片では）ｉｎ ｖｉｖｏモデルにおいて２８日に腫瘍停滞を達成するために必要な単回用量である。したがって、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｆｌｅｘｍａｎ－１０について計算された治療指数は、少なくとも１３．３である。
実施例１１
Ｄｉｍａｓｉ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２０１７，１４，１５０１－１５１６（ＤＯＩ：１０．１０２１／ａｃｓ．ｍｏｌｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．６ｂ００９９５）に記述されている方法に続き、２３９位と２４０位との間に挿入されたシステインを含むように操作されたＨｅｒｃｅｐｔｉｎ及びＲ３４７抗体を産生した。
ＨｅｒＣ２３９ｉ－１０ＡＤＣ
ＤＴＴ（１００モル当量／抗体、２６．７マイクロモル）を、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｃ２３９ｉ抗体（４０ｍｇ、２６６．７ナノモル）の溶液に加え、最終容量を８ｍＬにした。この還元を室温で４時間、穏やかに振盪させながら実行し、その後Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌｌ ３０ｋＤａ ＭＷＣＯスピンフィルタを用いてＤＴＴをスピン濾過して除去した。（Ｌ）－デヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ、２０モル当量／抗体、５．３マイクロモル、ＤＭＳＯ中の５０ｍＭに１０６．７μＬ）を、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中の還元抗体（５ｍｇ／ｍＬ、８ｍＬ）に加え、再酸化を室温で一晩、穏やかに振盪させながら行った。１０％（ｖ／ｖ）最終ＤＭＳＯ濃度のために、ＤＨＡＡを０．２２μｍ膜フィルタに通す濾過で除去し、化合物１０をＤＭＳＯ溶液（３モル当量／抗体、０．８マイクロモル、０．９ｍＬ ＤＭＳＯ中）として、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中の８．１ｍＬの再酸化抗体（４０ｍｇ、２６６．７ナノモル）に加えた。この溶液を残し、室温で４時間、穏やかに振盪させながら反応させた。複合化を、Ｎ－アセチルシステイン（４マイクロモル、１００ｍＭに４０μＬ）の添加でクエンチし、１Ｍ（ＮＨ４）2ＳＯ4、２５ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．０、及び２５ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．０の勾配実行で、ＦＰＬＣ及びＨＰ－Ｂｕｔｙｌカラム（５ｍＬ）を用いて、疎水性相互作用クロマトグラフィ－で精製した。９５％を上回るＤＡＲ１を含む画分をプ－ルして濃縮し、１５ｍＬ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌｌ ５０ｋＤａ ＭＷＣＯスピンフィルタを用いるスピン濾過で緩衝液をＰＢＳ、ｐＨ７．４に交換し、滅菌濾過して分析した。
Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ ＨＩＣ Ｂｕｔｙｌ－ＮＰ５、５μｍ、非多孔性、４．６×３５ｍｍ（Ｓｅｐａｘ）カラムを用いて、２１４ｎｍでＨｅｒＣ２３９ｉ－１０ ＡＤＣの適切な試料上に、１．５Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４、及び２０％アセトニトリル（ｖ／ｖ）を含む２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４の勾配で溶出する、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析から、１抗体あたり１．００分子の化合物１０の薬物抗体比（ＤＡＲ）と一致している、単独で複合化した化合物１０のみを示す。
Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＴＳＫｇｅｌ ＳｕｐｅｒＳＷ ｍＡｂ ＨＴＰ ４μｍ ４．６×１５０ｍｍカラム（４μｍ ３．０×２０ｍｍガ－ドカラムを含む）を用いて、２００ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．９５、２５０ｍＭ塩化カリウム及び１０％イソプロパノ－ル（ｖ／ｖ）を２８０ｎｍでＨｅｒＣ２３９ｉ－１０ ＡＤＣの適切な試料上に含む、０．３ｍＬ／分、無菌濾過したＳＥＣ緩衝液で溶出する、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析から、９９％の単量体純度を示す。ＵＨＰＬＣ ＳＥＣ分析により、１１．１ｍＬ中の１．７１ｍｇ／ｍＬで最終ＨｅｒＣ２３９ｉ－１０ ＡＤＣの濃度を得て、ＨｅｒＣ２３９ｉ－１０ ＡＤＣの得られた質量は、１８．９ｍｇ（４７％収率）である。
Ｒ３４７Ｃ２３９ｉ－１０ ＡＤＣ
ＤＴＴ（１００モル当量／抗体、１３３．３マイクロモル）を、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中のＲ３４７－Ｍａｉａ抗体（２００ｍｇ、１．３３マイクロモル）の溶液に加え、最終容量を４０ｍＬにした。この還元を、室温で４時間穏やかに振盪させながら実行し、ＤＴＴをタンジェンシャルフロ－濾過（３０ｋＤａファイバ－フィルタ）によって除去した。（Ｌ）－デヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ、２０モル当量／抗体、２６．７マイクロモル、ＤＭＳＯ中の５０ｍＭに５３３．３μＬ）を、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中の還元抗体（４ｍｇ／ｍＬ、５０ｍＬ）に加え、再酸化を室温で一晩、穏やかに振盪させながら行った。ＤＨＡＡを０．２２μｍ膜フィルタに通す濾過によって除去し、１０％（ｖ／ｖ）最終ＤＭＳＯ濃度のために、化合物１０をＤＭＳＯ溶液（２モル当量／抗体、２．６７マイクロモル、５．６ｍＬ ＤＭＳＯ中）として、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中の５０．５ｍＬの再酸化抗体（２００ｍｇ、１．３３マイクロモル）に加えた。この溶液を残し、室温で４時間、穏やかに振盪させながら、反応させた。複合化をＮ－アセチルシステイン（６．７マイクロモル、１００ｍＭに６６．７μＬ）の添加によってクエンチし、１Ｍ（ＮＨ４）2ＳＯ4、２５ｍＭリン酸カリウムｐＨ ６．０、及び２５ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．０の勾配実行によって、ＦＰＬＣ及びＨＰ－Ｂｕｔｙｌカラム（５ｍＬ）を用いる疎水性相互作用クロマトグラフィ－で精製した。９５％を上回るＤＡＲ１を含む画分をプ－ルして濃縮し、１５ｍＬ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌｌ ５０ｋＤａ ＭＷＣＯスピンフィルタを用いるスピン濾過によって、緩衝液を２５ｍＭヒスチジン、２００ｍＭショ糖、ｐＨ６．０に交換し、滅菌濾過して分析した。
Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ ＨＩＣ Ｂｕｔｙｌ－ＮＰ５、５μｍ、非多孔性、４．６×３５ｍｍ（Ｓｅｐａｘ）カラムを用いて、２１４ｎｍでＲ３４７Ｃ２３９ｉ－１０ ＡＤＣの適切な試料上に、１．５Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４、及び２０％アセトニトリル（ｖ／ｖ）を含む２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４の勾配で溶出する、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析から、１抗体あたり１．００分子の化合物１０の薬物抗体比（ＤＡＲ）と一致している、単独で複合化した化合物１０のみを示す。
Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＴＳＫｇｅｌ ＳｕｐｅｒＳＷ ｍＡｂ ＨＴＰ ４μｍ ４．６×１５０ｍｍカラム（４μｍ ３．０×２０ｍｍガ－ドカラムを含む）を用いて、２８０ｎｍでＲ３４７Ｃ２３９ｉ－１０ ＡＤＣの適切な試料上に、２００ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．９５、２５０ｍＭ塩化カリウム及び１０％イソプロパノ－ル（ｖ／ｖ）を含む、０．３ｍＬ／分で滅菌濾過したＳＥＣ緩衝液によって溶出する、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析から、９９％の単量体純度を示す。ＵＨＰＬＣ ＳＥＣ分析により、Ｒ３４７Ｃ２３９ｉ－１０ ＡＤＣの最終濃度を５５ｍＬ中の１．７２ｍｇ／ｍＬで得て、Ｒ３４７Ｃ２３９ｉ－１０ ＡＤＣの得られた質量は、９４．５ｍｇ（４７％収率）である。
１Ｃ１Ｃ２３９ｉ－１０ ＡＤＣ
ＤＴＴ（１００モル当量／抗体、３．３マイクロモル）を、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中の１Ｃ１－Ｍａｉａ抗体（５ｍｇ、３３．３ナノモル）の溶液に加え、最終容量を２．５ｍＬにした。この還元を室温で５時間、穏やかに振盪させながら実行し、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌｌ ３０ｋＤａ ＭＷＣＯスピンフィルタを用いる、スピン濾過でＤＴＴを除去した。（Ｌ）－デヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ、２０モル当量／抗体、０．６７マイクロモル、ＤＭＳＯ中の５０ｍＭに１３．３μＬ）を、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中の還元抗体（２ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍＬ）に加え、再酸化を室温で一晩、穏やかに振盪させながら行った。ＤＨＡＡを０．２２μｍ膜フィルタに通す濾過によって除去し、１０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ最終濃度のために、化合物１０をＤＭＳＯ溶液（３モル当量／抗体、０．１マイクロモル、０．２７ｍＬ ＤＭＳＯ中）として、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中の再酸化抗体（５ｍｇ、３３．３ナノモル）の２．５ｍＬに加えた。この溶液を残し、室温で５時間、穏やかに振盪させながら反応させた。Ｎ－アセチルシステイン（２マイクロモル、１００ｍＭに３９．６μＬ）の添加によって、複合化をクエンチし、溶出緩衝液としてＰＢＳ ｐＨ７．４を含む、ＦＰＬＣ及びＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ ２６／６００カラムを用いる、分取サイズ排除クロマトグラフィ－によって精製した。９５％を上回る単量体を含む画分をプ－ルして濃縮し、１５ｍＬ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌｌ ５０ｋＤａ ＭＷＣＯスピン濾過を用いる、スピン濾過によって緩衝液を２５ｍＭヒスチジン、２００ｍＭショ糖、ｐＨ６．０に交換し、滅菌濾過して分析した。
Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ ＨＩＣ Ｂｕｔｙｌ－ＮＰ５、５μｍ、非多孔性、４．６×３５ｍｍ（Ｓｅｐａｘ）カラムを用いて、２１４ｎｍで１Ｃ１Ｃ２３９ｉ－１０ ＡＤＣの適切な試料上に、１．５Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４、及び２０％アセトニトリル（ｖ／ｖ）を含む２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４の勾配で溶出する、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析から、１抗体あたり１．０４分子の化合物１０の薬物抗体比（ＤＡＲ）と一致している、非複合化抗体、ならびに単独複合化型及び二重複合化型化合物１０の混合物を示す。
Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＴＳＫｇｅｌ ＳｕｐｅｒＳＷ ｍＡｂ ＨＴＰ ４μｍ ４．６×１５０ｍｍカラム（４μｍ ３．０×２０ｍｍガ－ドカラムを含む）を用いて、２８０ｎｍで１Ｃ１Ｃ２３９ｉ－１０ ＡＤＣの適切な試料上に、２００ｍＭリン酸カリウム ｐＨ６．９５、２５０ｍＭ塩化カリウム及び１０％イソプロパノ－ル（ｖ／ｖ）を含む、０．３ｍＬ／分で滅菌濾過したＳＥＣ緩衝液によって溶出する、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析から、１００％の単量体純度を示す。ＵＨＰＬＣ ＳＥＣ分析により、２．３ｍＬ中の１．４５ｍｇ／ｍＬで１Ｃ１Ｃ２３９ｉ－１０ ＡＤＣの最終濃度を得て、得られた１Ｃ１Ｃ２３９ｉ－１０ ＡＤＣの質量は、３．３４ｍｇである（６７％収率）。
ＨｅｒＣ２３９ｉ－１１ ＡＤＣ
ＤＴＴ（１００モル当量／抗体、３．３マイクロモル）を、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ－Ｍａｉａ抗体（５ｍｇ、３３．３ナノモル）の溶液に加え、最終容量を２．５ｍＬにした。この還元を室温で５時間、穏やかに振盪させながら実行し、その後ＤＴＴを、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌｌ ３０ｋＤａ ＭＷＣＯスピンフィルタを用いたスピン濾過によって除去した。（Ｌ）－デヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ、２０モル当量／抗体、０．６７マイクロモル、ＤＭＳＯ中の５０ｍＭに１３．３μＬ）を、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中の還元抗体（２ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍＬ）に加え、再酸化を室温で一晩、穏やかに振盪させながら行った。ＤＨＡＡを、０．２２μｍ膜フィルタに通す濾過によって除去し、１０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯの最終濃度のために、化合物１１をＤＭＳＯ溶液（１．５モル当量／抗体、０．０５マイクロモル、０．２７ｍＬ ＤＭＳＯ中）として、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中の再酸化抗体（５ｍｇ、３３．３ナノモル）の２．５ｍＬに加えた。この溶液を残し、室温で一晩、穏やかに振盪させながら反応させた。複合化を、Ｎ－アセチルシステイン（２マイクロモル、１００ｍＭに３９．６μＬ）の添加によってクエンチし、ＦＰＬＣ、及び溶出緩衝液としてＰＢＳ ｐＨ７．４を含むＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ２６／６００カラムを用いる分取サイズ排除クロマトグラフィ－によって精製した。９５％を上回る単量体を含む画分をプ－ルして濃縮し、１５ｍＬ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌｌ ５０ｋＤａ ＭＷＣＯスピンフィルタを用いるスピン濾過によって２５ｍＭヒスチジン、２００ｍＭショ糖、ｐＨ６．０に緩衝液を交換し、滅菌濾過して分析した。
Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ ＨＩＣ Ｂｕｔｙｌ－ＮＰ５、５μｍ、非多孔性、４．６×３５ｍｍ（Ｓｅｐａｘ）カラムを用いて、２１４ｎｍでＨｅｒＣ２３９ｉ－１１ ＡＤＣの適切な試料上に、１．５Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４、及び２０％アセトニトリル（ｖ／ｖ）を含む２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４の勾配で溶出する、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析から、１抗体あたり１．１０分子の化合物１１の薬物抗体比（ＤＡＲ）と一致している、非複合化抗体、ならびに単独複合化型及び二重複合化型化合物１１の混合物を示す。
Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＴＳＫｇｅｌ ＳｕｐｅｒＳＷ ｍＡｂ ＨＴＰ ４μｍ ４．６×１５０ｍｍカラム（４μｍ ３．０×２０ｍｍガ－ドカラムを含む）を用いて、２８０ｎｍでＨｅｒＣ２３９ｉ－１１ ＡＤＣの試料上に、２００ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．９５、２５０ｍＭ塩化カリウム及び１０％イソプロパノ－ル（ｖ／ｖ）を含む、０．３ｍＬ／分で滅菌濾過したＳＥＣ緩衝液によって溶出する、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析から、９９％の単量体純度を示す。ＵＨＰＬＣ ＳＥＣ分析により、４．０ｍＬ中の１．２９ｍｇ／ｍＬでＨｅｒＣ２３９ｉ－１１ ＡＤＣの最終濃度を得て、ＨｅｒＣ２３９ｉ－１１ ＡＤＣの得られた質量は、３．２３ｍｇ（６５％収率）である。
１Ｃ１Ｃ２３９ｉ－１１ ＡＤＣ
ＤＴＴ（１００モル当量／抗体、３．３マイクロモル）を、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中の１Ｃ１－Ｍａｉａ抗体（５ｍｇ、３３．３ナノモル）の溶液に加え、最終容量を２．５ｍＬにした。この還元を室温で５時間、穏やかに振盪させながら実行し、その後Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌｌ ３０ｋＤａ ＭＷＣＯスピンフィルタを用いるスピン濾過によってＤＴＴを除去した。（Ｌ）－デヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ、２０モル当量／抗体、０．６７マイクロモル、ＤＭＳＯ中の５０ｍＭに１３．３μＬ）を、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ ７．４中の還元抗体（２ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍＬ）に加え、再酸化を室温で一晩、穏やかに振盪させながら行った。０．２２μｍ膜フィルタに通す濾過によってＤＨＡＡを除去し、１０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯの最終濃度のために、化合物１１をＤＭＳＯ溶液（１．５モル当量／抗体、０．０５マイクロモル、０．２７ｍＬ ＤＭＳＯ中）として、ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中の再酸化抗体（５ｍｇ、３３．３ナノモル）の２．５ｍＬに加えた。この溶液を残し、室温で一晩、穏やかに振盪させながら反応させた。複合化を、Ｎ－アセチルシステイン（２マイクロモル、１００ｍＭに３９．６μＬ）の添加によってクエンチし、ＦＰＬＣ、及びＰＢＳ ｐＨ７．４を溶出緩衝液として含むＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ ２６／６００カラムを用いる分取サイズ排除クロマトグラフィ－によって精製した。９５％超の単量体を含む画分をプ－ルして濃縮し、１５ｍＬ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌｌ ５０ｋＤａ ＭＷＣＯスピンフィルタを用いるスピン濾過によって２５ｍＭヒスチジン、２００ｍＭショ糖、ｐＨ６．０に緩衝液を交換し、滅菌濾過して分析した。
Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ ＨＩＣ Ｂｕｔｙｌ－ＮＰ５、５μｍ、非多孔性、４．６×３５ｍｍ（Ｓｅｐａｘ）カラムを用いて、２１４ｎｍで１Ｃ１Ｃ２３９ｉ－１１ ＡＤＣの適切な試料上に、１．５Ｍ硫酸アンモニウム、２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４、及び２０％アセトニトリル（ｖ／ｖ）を含む２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７．４の勾配によって溶出する、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析から、１抗体あたり１．０５分子の化合物１１の薬物抗体比（ＤＡＲ）と一致している、非複合化抗体、ならびに単独複合化型及び二重複合化型化合物１１の混合物を示す。
Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＴＳＫｇｅｌ ＳｕｐｅｒＳＷ ｍＡｂ ＨＴＰ ４μｍ ４．６×１５０ｍｍカラム（４μｍ ３．０×２０ｍｍガ－ドカラムを含む）を用いて、２８０ｎｍで１Ｃ１Ｃ２３９ｉ－１１ ＡＤＣの試料上に、２００ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．９５、２５０ｍＭ塩化カリウム及び１０％イソプロパノ－ル（ｖ／ｖ）を含む、０．３ｍＬ／分で滅菌濾過したＳＥＣ緩衝液によって溶出する、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅシステムにおけるＵＨＰＬＣ分析から、９９％の単量体純度を示す。ＵＨＰＬＣ ＳＥＣ分析により、１Ｃ１Ｃ２３９ｉ－１１ ＡＤＣの最終濃度を２．２ｍＬ中の１．５０ｍｇ／ｍＬで得て、１Ｃ１Ｃ２３９ｉ－１１ ＡＤＣの得られた質量は、３．３ｍｇ（６６％収率）である。
追加の複合化を、化合物１０を含む次に示す抗体：ＲＳＶ－Ｃ２３９ｉ；Ｂ７Ｈ４－Ｅ０２－Ｃ２３９ｉ；ＰＳＭＡ－Ｃ２３９ｉ；及びＣＤＨ６－５０Ｂ－Ｃ２３９ｉに実行した。
実施例１２
Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＰＣ３ １Ｃ１アッセイ
Ｔ７５フラスコ中のサブ密集（８０～９０％の密集度）ＰＣ３細胞からの培地を吸引し、フラスコをＰＢＳ（約２０ｍｌ）で濯ぎ、空にした。トリプシン－ＥＤＴＡ（５ｍｌ）を添加し、フラスコを、３７℃の、ガスが供給されたインキュベ－タ－に最大約５分間戻し、次いで激しくたたいてプラスチックから細胞を取り除いて分離させた。細胞懸濁液を無菌の５０ｍｌのねじ口遠心管に移し、成長培地によって１５ｍｌの最終濃度まで希釈し、次いで遠心分離した（５分間で４００ｇ）。上清を吸引し、ペレットを１０ｍｌ培地に再懸濁した。単分散細胞懸濁液を生成するのに繰り返しのピペット操作が必要となる場合がある。トリパンブル－細胞染色細胞の細胞濃度及び生存度を、ＬＵＮＡＩＩを用いて測定する。細胞を１５００細胞／ウェルに希釈し、白色の９６ウェル平底プレ－トに分配し（５０μｌ／ウェル）、使用前に一晩インキュベ－トした。
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）（２０μｇ／ｍｌ）の原液（１ｍｌ）をフィルタ滅菌したＡＤＣの細胞培養液中での希釈によって作った。ＡＤＣ原液の８×１０倍希釈液セットを、９００μｌの細胞培養液上に１００μｌの連続移行によって２４ウェルプレ－トに作った。ＡＤＣ希釈液を、前日に播種した５０μｌ細胞懸濁液を含む９６ウェルプレ－トの４つの複製ウェル中に分配した（５０μｌ／ウェル）。対照ウェルに、５０μｌ細胞培養液を入れた。細胞及びＡＤＣを含む９６ウェルプレ－トを３７℃で６日間、ＣＯ2ガスを供給したインキュベ－タ中でインキュベ－トした。インキュベ－ション期間の終了時に、プレ－トを室温に３０分間平衡化した後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに分注した（１ウェルあたり１００μｌ）。プレ－トをオ－ビタルシェ－カ－上に２分間置き、その後、室温で１０分間安定化させた。ウェル発光を測定し、４つの対照未処理ウェル中の平均発光（１００％）と比較した、４つのＡＤＣ処理ウェル中の平均発光から細胞生存率を計算した。非線形曲線適合アルゴリズム：シグモイド型用量反応（Ｘはｌｏｇ（濃度）である）を用いる、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、ＩＣ50を用量反応デ－タから決定した。ＰＣ３用の細胞増殖培地は、グルタミンを含むＦ１２Ｋ、１０％（ｖ／ｖ）ＨｙＣｌｏｎｅ（商標）ウシ胎仔血清であった。
Figure 0007220203000106
Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＭＴＳアッセイ
Ｈｅｒ２発現細胞株ＮＣＩ－Ｎ８７及びＨｅｒ２陰性細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４６８において、ＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性を測定した。
サブ密集（８０～９０％の密集度）Ｔ７５フラスコからの細胞の濃度及び生存率をトリパンブル－染色によって測定し、ＬＵＮＡ－ＩＩ（商標）Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｅｒを用いて計数する。細胞を２×１０5／ｍｌに希釈し、９６ウェル平底プレ－トに分配した（１ウェルあたり５０μｌ）。
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）（２０μｇ／ｍｌ）の原液（１ｍｌ）を、フィルタ－滅菌ＡＤＣを細胞培養液中に希釈することによって作製した。ＡＤＣ原液の１０倍希釈液の８個のセットを、９００μｌの細胞培養液に１００μｌをシリアル転送することによって２４ウェルプレ－トにおいて作製した。ＡＤＣ希釈液を、先に播種した５０μｌの細胞懸濁液を含有する、９６ウェルプレ－トの４つの複製ウェル内に分配した（１ウェルあたり５０μｌ）。対照ウェルに５０μｌの細胞培養液を与えた。細胞及びＡＤＣを含有する９６ウェルプレ－トを、ＣＯ2ガスが供給されたインキュベ－タ－において３７℃で暴露時間インキュベ－トした。
インキュベ－ション期間の最後に、ＭＴＳアッセイで細胞生存度を測定した。ＭＴＳ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに分配し（１ウェルあたり２０μｌ）、ＣＯ2ガスが供給されたインキュベ－タ－において３７℃で４時間インキュベ－トした。ウェル吸光度を４９０ｎｍで測定した。生存細胞のパ－センテ－ジを、４つの対照の未処理のウェルにおける平均吸光度（１００％）と比較して、４つのＡＤＣ処理したウェルにおける平均吸光度から計算した。ＩＣ50は、非線形曲線適合アルゴリズム（勾配が可変のシグモイド型用量反応曲線）を用いたＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、用量反応デ－タから決定した。
ＡＤＣインキュベ－ション時間は、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８について４日、及びＮＣＩ－Ｎ８７について７日であった。ＭＤＡ－ＭＢ－４６８及びＮＣＩ－Ｎ８７をＧｌｕｔａｍａｘ＋１０％（ｖ／ｖ）ＨｙＣｌｏｎｅ（商標）ウシ胎仔血清を含むＲＰＭＩ １６４０中で培養した。
Figure 0007220203000107
実施例１３
マウス
雌性重症複合免疫不全マウス（Ｆｏｘ Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤ（登録商標）、ＣＢ１７／Ｉｃｒ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＩｃｒＩｃｏＣｒｌ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）は、研究の１日目で、体重（ＢＷ）範囲が１６．２～２１．９グラムで１０週齢であった。動物に自由飲水（逆浸透、１ｐｐｍ Ｃｌ）させ、１８．０％の粗タンパク質、５．０％の粗脂肪及び５．０％の粗繊維からなるＮＩＨ ３１Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ａｎｄ Ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ Ｌａｂ Ｄｉｅｔ（登録商標）を自由摂食させた。マウスを、静圧マイクロアイソレ－タ－における照射Ｅｎｒｉｃｈｏ’ｃｏｂｓ（商標）Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｂｅｄｄｉｎｇにおいて、１２時間の明サイクルにて２０～２２℃（６８～７２°Ｆ）及び４０～６０％の湿度で飼育した。ＣＲ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｅｒｖｉｃｅｓは、具体的には、拘束、畜産、外科手術、試料及び流体規制、ならびに獣医医療に関するＧｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓの勧告を遵守している。ＣＲ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｅｒｖｉｃｅｓの動物管理及び使用プログラムは、実験動物の管理及び使用に対する承認規格の遵守を保証する、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（ＡＡＡＬＡＣ）によって公認されている。
ＪＩＭＴ－１異種移植
腫瘍細胞培養
ＪＩＭＴ－１ヒト乳癌細胞を、１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭグルタミン、１００単位／ｍｌペニシリンＧナトリウム、１００μｇ／ｍＬ硫酸ストレプトマイシン、及び２５μｇ／ｍＬゲンタマイシンを含んだダルベッコ改変イ－グル培地（ＤＭＥＭ）中で培養した。細胞を、５％ＣＯ2及び９５％空気の雰囲気中の３７℃の加湿インキュベ－タ－で組織培養フラスコ中に培養した。
Ｉｎ Ｖｉｖｏ移植及び腫瘍成長
移植当日、ＪＩＭＴ－１細胞を対数期増殖の間に摘出し、５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中の１×１０8細胞／ｍｌの濃度でリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁した。各試験動物の右側腹部中に、１×１０7ＪＩＭＴ－１細胞（０．１ｍｌ懸濁液）を皮下移植することにより、異種移植を開始した。これらの腫瘍を、１００～１５０ｍｍ3の標的範囲に近づいたそれらの体積としてモニタリングし、ノギスを用いて２次元で測定した。腫瘍体積を式：
Figure 0007220203000108
 を用いて、計算した。式中、腫瘍のｍｍでのｗ＝幅、及びｌ＝長さである。腫瘍重量を、１ｍｇが腫瘍体積の１ｍｍ3と同等であると仮定して、推定してよい。
処置
本研究の１日目に指定した、腫瘍移植１４日後に、７５～１６２ｍｍ3の個々の腫瘍体積を有する群（ｎ＝１０）、及び１１５～１１７ｍｍ3の平均腫瘍体積を有する群に動物を分類した。
１日目に０．３ｍｇ／ｋｇの単一用量でＨｅｒＣ２３９ｉ－１０ ＡＤＣ及びＨｅｒＣ２３９ｉ－ＳＧ３２４９ ＡＤＣを静脈内投与した。ビヒクル処置群は、腫瘍増殖対照として機能した。腫瘍を１週間に２回測定した。
ＨｅｒＣ２３９ｉ－ＳＧ３２４９は、例えば、Ｄｉｍａｓｉ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２０１７，１４，１５０１－１５１６（ＤＯＩ：１０．１０２１／ａｃｓ．ｍｏｌｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．６ｂ００９９５）に記載される通りの、ＳＧ３２３４９から作製された複合体であり、？？？のＤＡＲを有する。
腫瘍体積における効果を図６に示す：
Figure 0007220203000109
ＨｅｒＣ２３９ｉ－１０ ＡＤＣは、多くのＰＢＤ二量体弾頭を半分のみ含むにもかかわらず、ＨｅｒＣ２３９ｉ－ＳＧ３２４９ ＡＤＣに相当する活性を実証する。
上に記載される文献及び他の参照は全て、本明細書中に参照として援用される。

Claims (28)

  1. 式Ｉの複合体：
    Figure 0007220203000110
     式中、Ａｂは、各重鎖上に少なくとも１つの遊離複合化部位を有する改変された抗体であり、
    Ｄは、基Ｄ１又はＤ２のいずれかを表し：
    Figure 0007220203000111
     、
    点線は、Ｃ２とＣ３との間の二重結合の任意の存在を示し、
    Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するとき、Ｒ2は：
    （ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ1-7アルキル、Ｃ3-7ヘテロシクリル及びビス－オキシ－Ｃ1-3アルキレン；を含む群より選択される１つ以上の置換基によって置換されていてよいＣ5-10アリール基、
    （ｉｂ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル、
    （ｉｃ）Ｃ3-6飽和シクロアルキル、
    （ｉｄ）
    Figure 0007220203000112
     （Ｒ11、Ｒ12及びＲ13は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、ここで、Ｒ2基における炭素原子の合計数が５以下である）、
    （ｉｅ）
    Figure 0007220203000113
     （Ｒ15a及びＲ15bの一方がＨであり、他方が、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって置換されていてよいフェニル；ピリジル；及びチオフェニルから選択される）ならびに
    （ｉｆ）
    Figure 0007220203000114
     （Ｒ14は、Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって置換されていてよいフェニル；ピリジル；及びチオフェニル；から選択される）
    からなる群より選択され、
    Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在するとき、
    Ｒ2は、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、ｄｉＦ及び
    Figure 0007220203000115
     から選択され、Ｒ16a及びＲ16bは、Ｈ、Ｆ、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから独立して選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は、Ｃ1-4アルキルアミド及びＣ1-4アルキルエステルから選択される基によって置換されていてよく、又はＲ16a及びＲ16bの一方がＨであるとき、他方はニトリル及びＣ1-4アルキルエステルから選択され、
    Ｄ’は、基Ｄ’１又はＤ’２のいずれかを表し：
    Figure 0007220203000116
     、
    点線は、Ｃ２’とＣ３’との間の二重結合の任意の存在を表し、
    Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するとき、Ｒ22は、
    （ｉｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ1-7アルキル、Ｃ3-7ヘテロシクリル及びビス－オキシ－Ｃ1-3アルキレン；を含む群より選択される１つ以上の置換基によって置換されていてよいＣ5-10アリール基、
    （ｉｉｂ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル、
    （ｉｉｃ）Ｃ3-6飽和シクロアルキル、
    （ｉｉｄ）
    Figure 0007220203000117
     （Ｒ31、Ｒ32及びＲ33は、それぞれが、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから独立して選択され、Ｒ22基における炭素数の合計が５以下である）、
    （ｉｉｅ）
    Figure 0007220203000118
     （Ｒ25a及びＲ25bの一方がＨであり、他方が、ハロ、メチル、メトキシによって置換されていてよいフェニル；ピリジル；及びチオフェニル；から選択される）、ならびに
    （ｉｉｆ）
    Figure 0007220203000119
     （Ｒ24は、Ｈ；Ｃ1-3飽和アルキル；Ｃ2-3アルケニル；Ｃ2-3アルキニル；シクロプロピル；ハロ、メチル、メトキシによって置換されていてよいフェニル；ピリジル；及びチオフェニル；から選択される）、
    からなる群より選択され、
    Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在するとき、
    Ｒ22は、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、ｄｉＦ及び
    Figure 0007220203000120
     から選択され、Ｒ26a及びＲ26bは、Ｈ、Ｆ、Ｃ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから独立して選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は、Ｃ1-4アルキルアミド及びＣ1-4アルキルエステルから選択される基によって置換されていてよく、又は、Ｒ26a及びＲ26bの一方がＨであり、他方はニトリル及びＣ1-4アルキルエステルから選択され、
    Ｒ6及びＲ9は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ2、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ3Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
    Ｒ及びＲ’は、置換されていてよいＣ1-12アルキル、Ｃ3-20ヘテロシクリル及びＣ5-20アリール基から独立して選択され、
    Ｒ7は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ2、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ3Ｓｎ及びハロから選択され、
    Ｒ”は、Ｃ3-12アルキレン基であり、かかる鎖は、Ｏ、Ｓ、ＮＲN2（ここで、ＲN2は、Ｈ若しくはＣ1-4アルキルである）から選択される１つ以上のヘテロ原子、及び／又はベンゼン若しくはピリジンから選択される芳香族環によって中断されていてよく、
    Ｙ及びＹ’は、Ｏ、Ｓ、又はＮＨから選択され、
    Ｒ11aは、ＯＨ、ＯＲAから選択され、ここでＲAは、Ｃ1-4アルキルであり、
    Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’及びＲ１１a’は、それぞれ、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9及びＲ11aと同じ群から選択され、
    ＲLL1及びＲLL2は：
    次式（ＩＩＩａ’）：
    Figure 0007220203000121
     から独立して選択される異なる部位において前記抗体に接続されるリンカーであり、
    （Ｑは、
    Figure 0007220203000122
     であり、ＱXは、Ｑが、アミノ酸残基、ジペプチド残基又はトリペプチド残基であるようになっており、
    Ｘは、
    Figure 0007220203000123
     であり、ａ＝０～５、ｂ＝０～１６、ｃ＝０又は１、ｄ＝０～５であり、
    ＧLLは
    Figure 0007220203000124
    （式中ＡｒはＣ5-6アリーレン基を表し、ＸはＣ1-4アルキルを表す）から選択され、）
    ＣＢＡは、変性抗体である細胞結合剤を表し、前記変性抗体はそれぞれの重鎖に少なくとも１個の遊離結合部位を有する。
  2. （ａ）Ｙ及びＹ’の両方がＯであり、及び／又は
    （ｂ）Ｒ”がＣ3-7アルキレン又は式：
    Figure 0007220203000125
     の基であり、式中、ｒは、１又は２であり、及び／又は
    （ｃ）Ｒ9が、Ｈであり、及び／又は
    （ｄ）Ｒ6が、Ｈであり、及び／又は
    （ｅ）Ｒ7が、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ又はＣ1-4アルキルオキシ基から選択される、請求項１に記載の複合体。
  3. ＤがＤ１であり、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ2が、
    （ａ）Ｃ5-7アリール基であり、この場合、Ｒ2はメトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス－オキシ－メチレン、メチル－ピペラジニル、モルホリノ及びメチル－チオフェニルから選択される１～３個の置換基を有していてよく、
    （ｂ）Ｃ8-10アリール基であり、この場合、Ｒ2はメトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス－オキシ－メチレン、メチル－ピペラジニル、モルホリノ及びメチル－チオフェニルから選択される１～３個の置換基を有していてよく、
    （ｃ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル基であり、この場合、Ｒ2はメチル、エチル又はプロピルであってよく、
    （ｄ）式：
    Figure 0007220203000126
     の基であり、この場合、
    （ｉ）前記Ｒ2基における炭素原子の合計数が４以下であり、
    （ｉｉ）Ｒ11、Ｒ12及びＲ13のうちの１つがＨであり、他の２つの基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択され、又は
    （ｉｉｉ）Ｒ11、Ｒ12及びＲ13のうちの２つがＨであり、他の基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択される、
    請求項１又は２に記載の複合体。
  4. Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ2が、Ｃ3-6飽和シクロアルキル基であり、任意に、Ｒ2がシクロプロピルである、請求項１又は２に記載の複合体。
  5. ＤがＤ１であり、Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ2が、
    （ａ）式：
    Figure 0007220203000127
     の基、又は
    （ｂ）式：
    Figure 0007220203000128
     の基、又は
    （ｃ）式：
    Figure 0007220203000129
     の基であり、Ｒ14は、Ｈ、メチル、エチル、エテニル及びエチニルから選択される、請求項１又は２に記載の複合体。
  6. ＤがＤ１であり、Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在し、Ｒ2が、
    （ａ）Ｈ、又は
    （ｂ）
    Figure 0007220203000130
     （ここで、Ｒ16a及びＲ16bの両方はＨである。）、又は
    （ｃ）
    Figure 0007220203000131
     （ここで、Ｒ16a及びＲ16bの両方はメチルである。）、又は
    （ｄ）
    Figure 0007220203000132
     （ここで、Ｒ16a及びＲ16bのうちの一方はＨであり、他方はＣ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は置換されていてよい。）である、請求項１又は２に記載の複合体。
  7. Ｄ’が、Ｄ’１であり、Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ22が、
    （ａ）Ｃ5-7アリール基であり、この場合、Ｒ22はメトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス－オキシ－メチレン、メチル－ピペラジニル、モルホリノ及びメチル－チオフェニルから選択される１～３個の置換基を有していてよく、又は
    （ｂ）Ｃ1-5飽和脂肪族アルキル基であり、又は
    （ｃ）Ｃ3-6飽和シクロアルキル基であり、又は
    （ｄ）式：
    Figure 0007220203000133
     の基であり、ここで、
    （ｉ）前記Ｒ22基における炭素原子の合計数は４以下であり、又は
    （ｉｉ）Ｒ31、Ｒ32及びＲ33の１つはＨであり、他の２つの基はＨ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択され、又は
    （ｉｉｉ）Ｒ31、Ｒ32及びＲ33のうちの２つがＨであり、他の基が、Ｈ、Ｃ1-3飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニル、Ｃ2-3アルキニル及びシクロプロピルから選択され、又は
    （ｅ）式：
    Figure 0007220203000134
     の基であり、又は
    （ｆ）式：
    Figure 0007220203000135
     の基であり、又は
    （ｇ）式：
    Figure 0007220203000136
     の基であり、ここで、Ｒ24はＨ、メチル、エチル、エテニル及びエチニルから選択される、請求項１～６のいずれか１項に記載の複合体。
  8. Ｄ’が、Ｄ’１であり、Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在し、Ｒ22が、
    （ａ）Ｈであり、又は
    （ｂ）
    Figure 0007220203000137
     であり、Ｒ26a及びＲ26bは、両方がＨであり、又は
    （ｃ）
    Figure 0007220203000138
     であり、Ｒ26a及びＲ26bは、両方がメチルであり、又は
    （ｄ）
    Figure 0007220203000139
     であり、Ｒ26a及びＲ26bの一方はＨであり、他方はＣ1-4飽和アルキル、Ｃ2-3アルケニルから選択され、かかるアルキル及びアルケニル基は置換されていてよい、請求項１～６のいずれか１項に記載の複合体。
  9. Ｒ11aが
    （ａ）ＯＨであり、又は
    （ｂ）ＯＲAであり、ここでＲAはＣ1-4アルキルである、請求項１～８のいずれか１項に記載の複合体。
  10. （ａ）Ｒ6’が、Ｒ6と同じ基から選択され、Ｒ7’が、Ｒ7と同じ基から選択され、Ｒ9’が、Ｒ9と同じ基から選択され、Ｒ11a’が、Ｒ11aと同じ基から選択され、Ｙ’が、Ｙと同じ基から選択され、及び／又は
    （ｂ）Ｒ6’が、Ｒ6と同じ基であり、Ｒ7’が、Ｒ7と同じ基であり、Ｒ9’が、Ｒ9と同じ基であり、Ｒ11a’が、Ｒ11aと同じ基であり、Ｙ’が、Ｙと同じ基であり、及び／又は
    （ｃ）Ｒ22が、Ｒ2と同じ基である、請求項１～９のいずれか１項に記載の複合体。
  11. 式Ｉａ－１、Ｉａ－２又はＩａ－３のものであり：
    Figure 0007220203000140
    Figure 0007220203000141
    Figure 0007220203000142
     式中、Ｒ2a及びＲ22aは同じであり、以下：
    （ａ）
    Figure 0007220203000143
     、
    （ｂ）
    Figure 0007220203000144
     、
    （ｃ）
    Figure 0007220203000145
     、
    （ｄ）
    Figure 0007220203000146
     、
    （ｅ）
    Figure 0007220203000147
     、
    （ｆ）
    Figure 0007220203000148
     、
    （ｇ）
    Figure 0007220203000149
     、
    及び
    （ｈ）
    Figure 0007220203000150
     から選択され、
    Ｒ1aは、メチル及びベンジルから選択され、
    ＲLL1、ＲLL2及びＲ11aは、請求項１に定義されている通りである、
    請求項１に記載の複合体。
  12. ＲLL1が、式ＩＩＩａ’のものであり、Ｑxが、
    （ａ）Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｃｉｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、及びＴｒｐから選択されるアミノ酸残基であり、又は
    （ｂ）
    CO－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－NH、
    CO－Ｖａｌ－Ａｌａ－NH、
    CO－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－NH、
    CO－Ａｌａ－Ｌｙｓ－NH、
    CO－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－NH、
    CO－Ｐｈｅ－Ｃｉｔ－NH、
    CO－Ｌｅｕ－Ｃｉｔ－NH、
    CO－Ｉｌｅ－Ｃｉｔ－NH、
    CO－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－NH、及び
    CO－Ｔｒｐ－Ｃｉｔ－NH
    から選択されるジペプチド残基であり、又は
    （ｃ）トリペプチド残基である、請求項１～１１のいずれか１項に記載の複合体。
  13. ＲLL1が、式ＩＩＩａ’のものであり、
    （ａ）ａが、０～３であり、及び／又は
    （ｂ）ｂが、０～１２であり、及び／又は
    （ｃ）ｄが、０～３である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の複合体。
  14. ＲLL1が、式ＩＩＩａ’のものであり、ａが、０であり、ｃが、１であり、ｄが、２であり、ｂが、０～８であり、任意に、ｂは０、４又は８である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の複合体。
  15. ＲLL2が、式ＩＩＩａ’のものであり、Ｑxが、
    （ａ）Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｃｉｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ、及びＴｒｐから選択されるアミノ酸残基であり、又は
    （ｂ）
    CO－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－NH、
    CO－Ｖａｌ－Ａｌａ－NH、
    CO－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－NH、
    CO－Ａｌａ－Ｌｙｓ－NH、
    CO－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－NH、
    CO－Ｐｈｅ－Ｃｉｔ－NH、
    CO－Ｌｅｕ－Ｃｉｔ－NH、
    CO－Ｉｌｅ－Ｃｉｔ－NH、
    CO－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－NH、及び
    CO－Ｔｒｐ－Ｃｉｔ－NH、
    から選択されるジペプチド残基であり、又は
    （ｃ）トリペプチド残基である、請求項１～１１のいずれか１項に記載の複合体。
  16. ＲLL2が、式ＩＩＩａ’のものであり、
    （ａ）ａが、０～３であり、及び／又は
    （ｂ）ｂが、０～１２であり、及び／又は
    （ｃ）ｄが、０～３である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の複合体。
  17. ＲLL2が、式ＩＩＩａ’のものであり、ａが、０であり、ｃが、１であり、ｄが２であり、ｂが、０～８である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の複合体。
  18. 式Ｉｄ：
    Figure 0007220203000151
     式中、ｍが２～８の整数である、請求項１に記載の複合体。
  19. 少なくとも１つの遊離複合化部位を各重鎖上に含む前記改変された抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４抗体である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の複合体。
  20. 少なくとも１つの遊離複合化部位を各重鎖上に含む前記改変された抗体が、ヒト抗体又はヒト化抗体である、請求項１９に記載の複合体。
  21. 天然鎖間システイン残基が、チオール基を欠くアミノ酸残基に対して置換されている、請求項１９又は２０に記載の複合体。
  22. リンカーへの結合に適している反応基を含むアミノ酸残基の各重鎖中に少なくとも１つの追加の置換を有し、任意に、前記追加の置換を有するアミノ酸がシステイン又は非天然アミノ酸である、請求項２１に記載の複合体。
  23. 置換される位置が、以下に記載されるものから選択される：
    Figure 0007220203000152
    請求項２１又は請求項２２に記載の複合体。
  24. 治療における使用のための、請求項１～２３のいずれか１項に記載の複合体。
  25. 請求項１～２３のいずれか１項に記載の複合体、及び薬学的に許容可能な希釈剤、担体又は賦形剤を含む、医薬組成物。
  26. 対象の増殖性疾患の治療に用いるための、請求項１～２３のいずれか１項に記載の複合体又は請求項２５に記載の医薬組成物であって、前記の治療すべき疾患が癌である、前記複合体又は医薬組成物。
  27. 式ＩＩ：
    Figure 0007220203000153
     の化合物及びその塩及びその溶媒和物であって、
    式中Ｄ、Ｒ2、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ9、Ｒ11a、Ｙ、Ｒ”、Ｙ’、Ｄ’、Ｒ6’、Ｒ7’、Ｒ9’、Ｒ11a’及びＲ12（Ｃ２とＣ３とＣ２’とＣ３’との間のそれぞれの二重結合の存在又は非存在を有する）が、請求項１～１１のいずれか１項に定義される通りのものである；
    ＲL1及びＲL2が、細胞結合剤に接続するためのリンカーであり、前記リンカーは、独立して次式ＩＩＩａのものである；
    Figure 0007220203000154
     （式中Ｑ及びＸが請求項１、１２～１７のいずれか１項に定義される通りのものであり、ＧLが以下から選択される、前記化合物及びその塩及びその溶媒和物：
    Figure 0007220203000155
    （式中ＡｒはＣ5-6アリーレン基を表し、ＸはＣ1-4アルキルを表す）。
  28. 前記化合物が、式Ｉｄ’：
    Figure 0007220203000156
     のものであり、
    式中ｍは２～８の整数である、
    請求項２７に記載の化合物。
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