TW202412762A - 奧瑞他汀衍生物及其結合物 - Google Patents

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為 李
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香港商祐方有限公司
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Abstract

本發明提供奧瑞他汀衍生物、奧瑞他汀有效負載及奧瑞他汀結合物(例如，單藥物結合物及/或雙藥物結合物)、製備及使用之方法，以及適用於其製備中之中間物。本發明亦提供用本文所描述之奧瑞他汀結合物治療癌症及自體免疫疾病之方法。

Description

奧瑞他汀衍生物及其結合物
抗體藥物結合物（ADC）作為一類新的治療藥物引起了極大興趣。舉例而言，ADC可利用單株抗體（MAb）將細胞毒性劑靶向遞送至腫瘤細胞，從而允許使用習知非靶向模式無法使用的高細胞毒性藥物。ADC（其通常以細胞毒性劑與抗體之連接為特徵，通常經由連接子）之設計涉及考慮多種因素，包括藥物上用於連接至連接子之結合柄的存在及以條件穩定方式將藥物連接至抗體之連接技術。
本文描述包含奧瑞他汀衍生物之新細胞毒性劑，該等衍生物為微管抑制劑且可與肽連接子組合以形成有效負載。有效負載適用於在與細胞結合劑組合時製備單藥結合物及/或雙藥結合物。本文所述之ADC適用於治療細胞增殖性疾病，諸如癌症。
本文描述根據 式（ I ）之新細胞毒性劑。此等細胞毒性劑可與肽連接子組合以形成根據 式（ II ）之有效負載。所得有效負載可隨後用於製備具有細胞結合劑之單藥結合物 式（ III ），及/或用於在與具有不同式之另一有效負載組合時製備具有細胞結合劑之雙藥結合物 式（ IV ）。 式（ III ）及 式（ IV ）化合物包括適用於治療細胞增殖性疾病，諸如癌症之ADC。另外，在ADC中併入兩類有效負載[例如，兩類具有不同作用機制（MOA）之有效負載]可增加藥物之功效且擴展藥物之治療窗。
因此，在一個態樣中，本發明之特徵在於一種 式（ I ）化合物， D—Q （ I ）， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： D由以下結構式表示： ，其中 R 1 為-H或-OH； R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基； 各 R 3 及 R 4 獨立地為-H、或C 1-C 3烷基； n為1至6之整數；且 Q為-H或-CH 3。
在實施例中， R 1 為-H。
在實施例中， R 1 為-OH。
在實施例中， R 2 為-CH 3。
在實施例中， R 2 為-C(=O)OH。
在實施例中， R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
在實施例中， R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-OH且 R 2 為-CH 3。
在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-H。
在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-CH 3。
在實施例中， n為1。
在實施例中， Q為-H。
在實施例中， Q為-CH 3。
在實施例中， D由以下結構中之一者表示： 、 、 ，或 。
在實施例中，化合物具有以下結構中之一者， D1、 D2、 D3、 D4、 D5、 D6、 D7，或 D8， 或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種 式（ II ）化合物， D—CH 2—NH—E—Z （ II ）， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： D由以下結構式表示： ，其中 R 1 為-H或-OH； R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基； 各 R 3 及 R 4 獨立地為-H、或C 1-C 3烷基； n為1至6之整數； E為包含2至10個胺基酸之肽；其中 E視情況經一或多個多元醇取代；且其中肽之N端共價連接至 Z； Z為-C(=O)-L-Y、 或 ；其中 m表示1至10之整數； L為-(C 1-C 10伸烷基)-*、-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-、-(OCH 2CH 2) j-、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*；其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y之位點； L 1 為-(C 1-C 10伸烷基)-； R 5 為-H或-CH 3；且 Y為親電子基團或親核性基團。
在實施例中， R 1 為-H。
在實施例中， R 1 為-OH。
在實施例中， R 2 為-CH 3。
在實施例中， R 2 為-C(=O)OH。
在實施例中， R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
在實施例中， R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-OH且 R 2 為-CH 3。
在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-H。
在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-CH 3。
在實施例中， n為1。
在實施例中， E為2、3或4個胺基酸之肽。該肽中之各胺基酸為L胺基酸，或該肽中之至少一個胺基酸為D胺基酸。
在實施例中， E包含一或多個選自甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸及白胺酸之胺基酸，且其中該麩醯胺酸或麩胺酸視情況經多元醇取代。
在實施例中， E包含具有以下結構之胺基酸， ， 其中 R 6 為-H或C 1-C 6烷基。
在實施例中， E包含具有以下結構之胺基酸， 。
在實施例中， E係選自由以下組成之群： -Ala-Val-*、-Val-Ala-*、-Gly-Gly-*、-Val-Cit-*、-Cit-Val-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、 -Leu-Cit-*、-Cit-Leu-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、-Lys-Lys-*、-Ala-Lys-*、-Lys-Ala-*、-Val-Lys-*、 -Lys-Val-*、-Tyr-Arg-*、-Arg-Tyr-*、-Arg-Arg-*、-Ala-Ala-*、-Phe-Lys-*、 -Lys-Phe-*、-Thr-Thr-*、-Thr-Met-*、-Met-Thr-*、-Met-Tyr-*、-Tyr-Met-*、-Phe-Gln-*、 -Gln-Phe-*、-Gly-Ser-*、-Leu-Gln-*、-Gln-Leu-*、-Ser-Ala-*、-Ser-Gly-*、-Val-Thr-*、-Thr-Val-*、 -Val-Gln-*、-Ser-Val-*、-Val-Ser-*、-Ala-Met-*、-Met-Ala-*、-Val-Arg-*、-Arg-Val-*、-Phe-Ala-*、 -Ala-Phe-*、-Cit-Val-*、-Gln-Val-*、-Phe-Arg-*、-Arg-Phe-*、-Ala-Ala-Ala- *、 -Gly-Gly-Gly- *、-Ala-Val-Ala- *、-Gly-Val-Gly- *、-Ala-Val-Gly- *、-Gly-Phe-Lys-*、-Lys-Phe-Gly-*、 -Leu-Ala-Leu-*、-Val-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Val-*、-Val-Ala-Val-*、-Ala-Val-Ala-Gly- *、 -Gly-Phe-Gly-Gly- *、-Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Ala-Val-Gly-Gly-*、-Ala-Ala-Ala-Ala- *、-Ala-Val-Ala-Ala- *、-Ala-Leu-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Leu-Ala-*、-Gly-Phe-Leu-Gly-*及-Gly-Leu-Phe-Gly-*， 其中*指示共價連接至 Z之該等肽之N端。
在實施例中， E係選自由以下組成之群：-L-Ala-L-Val-*、-L-Val-L-Ala-*、-L-Val-L-Lys-*、-L-Val-L-Arg-*、-L-Val-L-Cit-*、-L-Ala-L-Val-L-Glu-*、-L-Ala-L-Ala-L-Ala-*、-L-Ala-L-Val-L-Ala-*、-L-Ala-L-Ala-Gly-*、-L-Ala-L-Val-Gly-*、-Gly-Gly-L-Glu-*、-Gly-L-Phe-Gly-Gly-*、-Gly-L-Glu-Gly-Gly-*；其中*指示共價連接至 Z之該等肽之N端。
在實施例中， Z為-C(=O)-L-Y。
在實施例中， Z為 ；其中 m表示1至10之整數。
在實施例中， Z為 ；其中 m表示1至10之整數。
在實施例中， L為-(C 1-C 10伸烷基)-。
在實施例中， L為-CH 2(OCH 2Ch 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-或-(OCH 2CH 2) j-，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y之位點。
在實施例中， L為-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或 -CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y之位點。
在實施例中， L 1 為-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH 2-、-CH 2-、 -CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*或-CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*，其中*指示共價連接至 Y之位點。
在實施例中， Y為邁克爾受體基團（Michael acceptor group）、丁二醯亞胺、環氧化物或鹵素。
在實施例中， Y為 、 、 、 或 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為H或C 1-C 3烷基。
在實施例中， Z為 、 、 、 、 或 。
在實施例中， -E-NH-CH 2- 具有以下結構中之一者，其中*指示共價連接至 Z之該等肽之N端： 、 、 、 或 。
在實施例中， Z-E-NH-CH 2- 具有以下結構中之一者， 、 、 、 或 。
在實施例中， D由以下結構中之一者表示： 、 、 或 。
在實施例中，化合物具有以下結構中之一者， （PL1）， （PL2）， （PL3）， （PL4）， （PL5）， （PL6）， （PL7）， （PL8）， （PL9），或 （PL10）； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種 式 （ III ）化合物， {D—CH 2—NH—E—Z'} p—C （ III ）， 其中： D由以下結構式表示： ，其中 R 1 為-H或-OH； R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基； R 3 及 R 4 獨立地為-H、或C 1-C 3烷基； n為1至6之整數； E為包含2至10個胺基酸之肽；其中 E視情況經一或多個多元醇取代；且其中肽之N端共價連接至 Z '； Z '為-C(=O)-L-Y'-、 或 ；其中 m表示1至10之整數且*指示共價連接至該 C之位點； L為-(C 1-C 10伸烷基)-*、-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-、-(OCH 2CH 2) j-、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*；其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點； L 1 為-(C 1-C 10伸烷基)-； R 5 為-H或-CH 3；且 C表示細胞結合劑； Y '為藉由親電子基團與存在於該細胞結合劑上之反應性親核性基團反應而形成的基團； p具有在1至18之間的值。
在實施例中， R 1 為-H。
在實施例中， R 1 為-OH。
在實施例中， R 2 為-CH 3。
在實施例中， R 2 為-C(=O)OH。
在實施例中， R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
在實施例中， R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-OH且 R 2 為-CH 3。
在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-H。
在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-CH 3。
在實施例中， n為1。
在實施例中， E為2、3或4個胺基酸之肽。該肽中之各胺基酸為L胺基酸，或該肽中之至少一個胺基酸為D胺基酸。
在實施例中， E包含一或多個選自甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸及白胺酸之胺基酸，且其中該麩醯胺酸或麩胺酸視情況經多元醇取代。
在實施例中， E包含具有以下結構之胺基酸， ， 其中 R 6 為-H或C 1-C 6烷基。
在實施例中， E包含具有以下結構之胺基酸， 。
在實施例中， E係選自由以下組成之群： -Ala-Val-*、-Val-Ala-*、-Gly-Gly-*、-Val-Cit-*、-Cit-Val-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、 -Leu-Cit-*、-Cit-Leu-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、-Lys-Lys-*、-Ala-Lys-*、-Lys-Ala-*、-Val-Lys-*、 -Lys-Val-*、-Tyr-Arg-*、-Arg-Tyr-*、-Arg-Arg-*、-Ala-Ala-*、-Phe-Lys-*、 -Lys-Phe-*、-Thr-Thr-*、-Thr-Met-*、-Met-Thr-*、-Met-Tyr-*、-Tyr-Met-*、-Phe-Gln-*、 -Gln-Phe-*、-Gly-Ser-*、-Leu-Gln-*、-Gln-Leu-*、-Ser-Ala-*、-Ser-Gly-*、-Val-Thr-*、-Thr-Val-*、 -Val-Gln-*、-Ser-Val-*、-Val-Ser-*、-Ala-Met-*、-Met-Ala-*、-Val-Arg-*、-Arg-Val-*、-Phe-Ala-*、 -Ala-Phe-*、-Cit-Val-*、-Gln-Val-*、-Phe-Arg-*、-Arg-Phe-*、-Ala-Ala-Ala- *、 -Gly-Gly-Gly- *、-Ala-Val-Ala- *、-Gly-Val-Gly- *、-Ala-Val-Gly- *、-Gly-Phe-Lys-*、-Lys-Phe-Gly-*、 -Leu-Ala-Leu-*、-Val-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Val-*、-Val-Ala-Val-*、-Ala-Val-Ala-Gly- *、 -Gly-Phe-Gly-Gly- *、-Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Ala-Val-Gly-Gly-*、-Ala-Ala-Ala-Ala- *、-Ala-Val-Ala-Ala- *、-Ala-Leu-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Leu-Ala-*、-Gly-Phe-Leu-Gly-*及-Gly-Leu-Phe-Gly-*， 其中*指示共價連接至 Z '之該等肽之N端。
在實施例中， E係選自由以下組成之群：-L-Ala-L-Val-*、-L-Val-L-Ala-*、-L-Val-L-Lys-*、-L-Val-L-Arg-*、-L-Val-L-Cit-*、-L-Ala-L-Val-L-Glu-*、-L-Ala-L-Ala-L-Ala-*、-L-Ala-L-Val-L-Ala-*、-L-Ala-L-Ala-Gly-*、-L-Ala-L-Val-Gly-*、-Gly-Gly-L-Glu-*、-Gly-L-Phe-Gly-Gly-*、-Gly-L-Glu-Gly-Gly-*；其中*指示共價連接至 Z '之該等肽之N端。
在實施例中， Z '為-C(=O)-L-Y'-。
在實施例中， Z '為 ，其中 m表示1至10之整數，且*指示共價連接至該 C之位點。
在實施例中， Z '為 ，其中 m表示1至10之整數，且*指示共價連接至該 C之位點。
在實施例中， L為-(C 1-C 10伸烷基)-。
在實施例中， L為-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-或-(OCH 2CH 2) j-，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點。
在實施例中， L為-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點。
在實施例中， L 1 為-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH 2-、-CH 2-、 -CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*或-CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*，其中*指示共價連接至 Y '之位點。
在實施例中， Y '為藉由親電子基團與存在於該細胞結合劑上之反應性親核性基團反應而形成的基團。
在實施例中， Y '由以下各者形成： 、 、 、 或 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為-H或C 1-C 3烷基。
在實施例中， Y '為 、 、 、 或 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為-H或C 1-C 3烷基且*指示共價連接至該 C之位點。
在實施例中， Z '由以下各者形成： 、 、 、 、 或 。
在實施例中， Z '為： 、 、 、 、 或 ； 其中*指示共價連接至 C之位點。
在實施例中， -E-NH-CH 2- 具有以下結構中之一者，其中*指示共價連接至 Z '之肽的N端： 、 、 、 或 。
在實施例中，- Z ' -E-NH-CH 2 -由以下結構中之一者形成： 、 、 、 或 。
在實施例中，- Z ' -E-NH-CH 2 -為以下結構中之一者，其中*指示與 C之連接點： 、 、 、 或 。
在實施例中， D由以下結構中之一者表示： 、 、 或 。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—由以下結構中之一者形成： （PL1）， （PL2）， （PL3）， （PL4）， （PL5）， （PL6）， （PL7）， （PL8）， （PL9），或 （PL10）。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p—C為以下結構中之一者，其中 C為單株抗體且 p為藥物與抗體比（DAR），且 p為約2至8、4至8或7至8範圍內的平均數， （PL1'）， （PL2'）， （PL3'）， （PL4'）， （PL5'）， （PL6'）， （PL7'）， （PL8'）， （PL9'），或 （PL10'）。
在實施例中， p為在約3至8 (例如，3.2至8.0)或4至8之範圍內的平均數。
在實施例中， p為平均數約4。
在實施例中， p為4。
在實施例中， p為平均數約7.5。
在實施例中， p為平均數約8。
在實施例中， p為8。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種 式（ IV ）化合物， {D—CH 2—NH—E—Z'} p '—C—{W} t （ IV ）， 其中： D由以下結構式表示： ，其中 R 1 為-H或-OH； R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基； R 3 及 R 4 獨立地為-H、或C 1-C 3烷基； n為1至6之整數； E為包含2至10個胺基酸之肽；其中 E視情況經一或多個多元醇取代；且其中肽之N端共價連接至 Z '； Z '為-C(=O)-L-Y'-、 或 ；其中 m表示1至10之整數且*指示共價連接至該 C之位點； L為-(C 1-C 10伸烷基)-*、-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-、-(OCH 2CH 2) j-、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*；其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點； L 1 為-(C 1-C 10伸烷基)-； R 5 為-H或-CH 3；且 C表示細胞結合劑； Y '為藉由親電子基團與存在於該細胞結合劑上之反應性親核性基團反應而形成的基團； W為藉由化合物 W '與存在於 C上之反應性親核性基團反應而形成的基團；其中 W '為與連接子連接以使得 W '可與 C結合之細胞殺滅劑； p '及 t具有在1至10之間的值；其中 p '及 t可為相同或不同數且 p ': t為約1:1、約1:2或約2:1，且其中 p ': t為1:1或1:2、或2:1。
在實施例中， R 1 為-H。
在實施例中， R 1 為-OH。
在實施例中， R 2 為-CH 3。
在實施例中， R 2 為-C(=O)OH。
在實施例中， R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
在實施例中， R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-OH且 R 2 為-CH 3。
在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-H。
在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-CH 3。
在實施例中， n為1。
在實施例中， E為2、3或4個胺基酸之肽。該肽中之各胺基酸為L胺基酸，或該肽中之至少一個胺基酸為D胺基酸。
在實施例中， E包含一或多個選自甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸及白胺酸之胺基酸，且其中該麩醯胺酸或麩胺酸視情況經多元醇取代。
在實施例中， E包含具有以下結構之胺基酸， ， 其中 R 6 為-H或C 1-C 6烷基。
在實施例中， E包含具有以下結構之胺基酸， 。
在實施例中， E係選自由以下組成之群： -Ala-Val-*、-Val-Ala-*、-Gly-Gly-*、-Val-Cit-*、-Cit-Val-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、 -Leu-Cit-*、- Cit-Leu-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、-Lys-Lys-*、-Ala-Lys-*、-Lys-Ala-*、-Val-Lys-*、 -Lys-Val-*、-Tyr-Arg-*、-Arg-Tyr-*、-Arg-Arg-*、-Ala-Ala-*、-Phe-Lys-*、 -Lys-Phe-*、-Thr-Thr-*、-Thr-Met-*、-Met-Thr-*、-Met-Tyr-*、-Tyr-Met-*、-Phe-Gln-*、 -Gln-Phe-*、-Gly-Ser-*、-Leu-Gln-*、-Gln-Leu-*、-Ser-Ala-*、-Ser-Gly-*、-Val-Thr-*、-Thr-Val-*、 -Val-Gln-*、-Ser-Val-*、-Val-Ser-*、-Ala-Met-*、-Met-Ala-*、-Val-Arg-*、-Arg-Val-*、-Phe-Ala-*、 -Ala-Phe-*、-Cit-Val-*、-Gln-Val-*、-Phe-Arg-*、-Arg-Phe-*、-Ala-Ala-Ala- *、 -Gly-Gly-Gly- *、-Ala-Val-Ala- *、-Gly-Val-Gly- *、-Ala-Val-Gly- *、-Gly-Phe-Lys-*、-Lys-Phe-Gly-*、 -Leu-Ala-Leu-*、-Val-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Val-*、-Val-Ala-Val-*、-Ala-Val-Ala-Gly- *、 -Gly-Phe-Gly-Gly- *、-Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Ala-Val-Gly-Gly-*、-Ala-Ala-Ala-Ala- *、-Ala-Val-Ala-Ala- *、-Ala-Leu-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Leu-Ala-*、-Gly-Phe-Leu-Gly-*及-Gly-Leu-Phe-Gly-*， 其中*指示共價連接至 Z '之肽之N端。
在實施例中， E係選自由以下組成之群：-L-Ala-L-Val-*、-L-Val-L-Ala-*、-L-Val-L-Lys-*、-L-Val-L-Arg-*、-L-Val-L-Cit-*、-L-Ala-L-Val-L-Glu-*、-L-Ala-L-Ala-L-Ala-*、-L-Ala-L-Val-L-Ala-*、-L-Ala-L-Ala-Gly-*、-L-Ala-L-Val-Gly-*、-Gly-Gly-L-Glu-*、-Gly-L-Phe-Gly-Gly-*、-Gly-L-Glu-Gly-Gly-*；其中*指示共價連接至 Z '之肽之N端。
在實施例中， Z '為-C(=O)-L-Y'-。
在實施例中， Z '為 ，其中 m表示1至10之整數，且*指示共價連接至該 C之位點。
在實施例中， Z '為 ，其中 m表示1至10之整數，且*指示共價連接至該 C之位點。
在實施例中， L為-(C 1-C 10伸烷基)-。
在實施例中， L為-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-或-(OCH 2CH 2) j-，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點。
在實施例中， L為-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y'之位點。
在實施例中， L 1 為-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH 2-、-CH 2-、 -CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*或-CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*，其中*指示共價連接至 Y '之位點。
在實施例中， Y '為藉由親電子基團與存在於該細胞結合劑上之反應性親核性基團反應而形成的基團。
在實施例中， Y '由以下各者形成： 、 、 、 或 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為-H或C 1-C 3烷基。
在實施例中， Y '為 、 、 、 或 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為-H或C 1-C 3烷基且*指示共價連接至該 C之位點。
在實施例中， Z '由以下各者形成： 、 、 、 、 或 。
在實施例中， Z '為： 、 、 、 、 或 ； 其中*指示共價連接至 C之位點。
在實施例中， -E-NH-CH 2- 具有以下結構中之一者，其中*指示共價連接至 Z '之肽的N端： 、 、 、 或 。
在實施例中，- Z ' -E-NH-CH 2 -由以下結構中之一者形成： 、 、 、 或 。
在實施例中，- Z ' -E-NH-CH 2 -為以下結構中之一者，其中*指示與 C之連接點： 、 、 、 或 。
在實施例中， D由以下結構中之一者表示： 、 、 或 。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—由以下結構中之一者形成： （PL1）， （PL2）， （PL3）， （PL4）， （PL5）， （PL6）， （PL7）， （PL8）， （PL9），或 （PL10）。
在實施例中， W係藉由將化合物 W'共價連接至 C而形成。
在實施例中， W '為可共價連接至 C之任何分子。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由 PL1形成且 W係由 PL2形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由 PL3形成且 W係由 PL4形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由 PL5形成且 W係由 PL6形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由 PL7形成且 W係由 PL8形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由 PL9形成且 W係由 PL10形成。
在實施例中， W'為專利 WO2021/173773 A1中描述之任何化合物，其可共價連接至 C。
在實施例中， W'為專利 US2021/0283125 A1中描述之任何化合物，其可共價連接至 C。
在實施例中 W '為專利 WO2021/173773 A1描述之美迪替康（meditecan）。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p '—C—{W} t為以下結構中之一者，其中 C為單株抗體， p '及 t為藥物與抗體比（DAR），且 p ': t為1:1或約1:1，且 p '及 t為分別在約1至7之範圍內的平均數，或為平均數約2、約3、約4、約5或約6： （ PL1 ''）， 或 （ PL2 ''）
在實施例中， p '及 t兩者均為4，或4之平均數，或約4。
在實施例中， p ': t為約1:1、約1:2或約2:1。
在實施例中， p ': t為1:1、1:2或2:1。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種製備包含細胞結合劑及藥物的 式（ III ）之結合物的方法，且該方法包含使細胞結合劑與 式（ II ）化合物接觸，使得在該細胞結合劑與該 式（ II ）化合物之間形成共價鍵。
在又一態樣中，本發明之特徵在於一種製備包含細胞結合劑及兩種不同藥物的 式（ IV ）之雙藥物結合物的方法，且該方法包含使細胞結合劑與 式（ II ）化合物及另一不同式化合物接觸，使得在該細胞結合劑與該 式（ II ）化合物及另一與 式（ II ）不同的式化合物之間形成共價鍵。
在又一態樣中，本發明之特徵在於一種結合物，其包含細胞結合劑及藥物。在實施例中，結合物根據本文所描述之任何方法來製備。
在實施例中，結合物包含為抗體或其抗原結合片段之細胞結合劑。
在實施例中，結合物包含為單株抗體或其抗原結合片段之細胞結合劑。
在實施例中，細胞結合劑為抗體或其抗原結合片段； p為藥物與抗體比（DAR）且具有在1至18之間的值。在實施例中， p為在約2至10、4至8或7至8（例如，3.2至8.0）範圍內的平均數。
在實施例中，細胞結合劑為單株抗體或其抗原結合片段； p為藥物與抗體比（DAR）且具有在1至18之間的值。在實施例中， p為約2至10、4至8或7至8（例如3.2至8.0）範圍內的平均數。
在實施例中，細胞結合劑為抗體或其抗原結合片段； p '及 t為藥物與抗體比（DAR）且具有在1至10之間的值。在實施例中， p '為在約2至6之範圍內的平均數。在實施例中， t為在約2至6之範圍內的平均數。在實施例中， p ': t為約1:1。在實施例中， p ': t為約1:2。在實施例中， p ': t為約2:1。在實施例中， p ': t為1:1。在實施例中， p ': t為1:2。在實施例中， p ': t為2:1。
在實施例中，細胞結合劑為單株抗體或其抗原結合片段； p '及 t為藥物與抗體比（DAR）且具有在1至10之間的值。在實施例中， p '為在約2至6之範圍內的平均數。在實施例中， t為在約2至6之範圍內的平均數。在實施例中， p ': t為約1:1。在實施例中， p ': t為約1:2。在實施例中， p ': t為約2:1。在實施例中， p ': t為1:1。在實施例中， p ': t為1:2。在實施例中， p ': t為2:1。
在實施例中，式（IV）化合物為曲妥珠單抗-MB0324， 。
在實施例中，式（IV）化合物為曲妥珠單抗-MB0326，
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種醫藥組合物，其包含本文所描述之任何結合物。
在又一態樣中，本發明之特徵在於一種治療細胞增殖性疾病或病症或抑制異常細胞生長的方法，其中該方法包含投與本文所描述之任何結合物或包含本文所描述之任何結合物的醫藥組合物。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種醫藥組合物，其包含如本文所描述的任何 式（ III ）化合物。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種治療細胞增殖性疾病或病症或抑制異常細胞生長的方法，該方法包含投與如本文所描述的任何 式（ III ）化合物或包含如本文所描述的任何 式（ III ）化合物之醫藥組合物。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種醫藥組合物，其包含如本文所描述之任何 式（ IV ）化合物。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種治療細胞增殖性疾病或病症或抑制異常細胞生長之方法，該方法包含投與如本文所描述的任何 式（ IV ）化合物或包含如本文所描述的任何 式（ IV ）化合物之醫藥組合物。
在實施例中，該方法用於治療癌症。
在實施例中，癌症為腺癌、腦癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、絨毛膜癌、CNS腫瘤、大腸或大腸直腸癌、瀰漫型內因性腦橋神經膠質瘤（DIPG）、子宮內膜癌、食道癌、尤文氏肉瘤（Ewing's sarcoma）、輸卵管癌、膽囊癌、胃癌、神經膠質母細胞瘤、頭頸癌、血液癌、霍奇金氏淋巴瘤（Hodgkin's lymphoma）、腎癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、梅克爾細胞癌（Merkel cell carcinoma）、間皮瘤、多發性骨髓瘤、骨髓發育不良症候群（MDS）、神經母細胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、骨肉瘤、胰臟癌、腹膜癌、前列腺癌、卵巢癌、腎癌、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、皮膚癌、小腸癌、鱗狀細胞癌、睪丸癌、甲狀腺癌、子宮癌或威爾姆氏瘤（Wilms tumor）。
在實施例中，癌症為乳癌。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張2022年7月27日申請之美國臨時專利申請案第63/392,806號之權益，其在此以全文引用之方式明確地併入本文中。 定義
除非另外說明，否則如本文所用之以下術語及短語意欲具有以下含義。當本文中使用商標名時，除非上下文另外指示，否則商標名包括商標名產品之產品調配物、通用藥物及一或多種活性醫藥成分。
如本文所用，術語「 抗體」係指特異性結合至特定抗原之藥劑。在一些實施例中，術語涵蓋包括足以賦予特異性結合之免疫球蛋白結構元件的任何多肽或多肽複合物。例示性抗體包括但不限於單株抗體或多株抗體。在一些實施例中，抗體可包括小鼠、兔、靈長類動物或人類抗體所特有之一或多個恆定區序列。在一些實施例中，抗體可包括如此項技術中已知的一或多種人源化、靈長類化、嵌合等序列元件。在許多實施例中，術語「抗體」用於指此項技術已知或研發的用於在替代性呈現中利用抗體結構及功能特徵之構築體或形式中之一或多者。舉例而言，實施例，根據本發明使用之抗體係呈選自但不限於以下之形式：完整IgA、IgG、IgE或IgM抗體；雙特異性或多特異性抗體(例如，Zybodies ®等)；抗體片段，諸如Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fd'片段、Fd片段，及分離CDR或其集合；單鏈Fvs；多肽-Fc融合物；單域抗體(例如，鯊魚單域抗體，諸如IgNAR或其片段)；駱駝抗體；遮蔽抗體(例如，Probodies ®)；小型模塊化免疫藥物（「SMIP TM 」）；單鏈或串聯雙功能抗體（TandAb ®）；VHH；Anticalins ®；Nanobodies ®微型抗體；BiTE ®；錨蛋白重複蛋白或DARPINs ®；Avimers ®；DART；TCR樣抗體；Adnectins ®；Affilins ®；Trans-bodies ®；Affibodies ®；TrimerX ®；微型蛋白質；Fynomers ®、Centyrins ®；及KALBITOR ®。在一些實施例中，抗體可能缺乏它在天然產生時可能具有的共價修飾(例如，連接聚醣)。在一些實施例中，抗體可包含共價修飾(例如，連接聚醣、有效負載[例如可偵測部分、治療部分、催化部分等]、或其他側接基[例如聚乙二醇等])。在許多實施例中，抗體為或包含胺基酸序列包括一或多個由本領域中熟習此項技術者識別為互補決定區（CDR）之結構元件的多肽；在一些實施例中，抗體為或包含胺基酸序列包括與參考抗體中所發現之CDR實質上相同之至少一個CDR（例如至少一個重鏈CDR及/或至少一個輕鏈CDR）的多肽。在一些實施例中，抗體藥劑為或包含胺基酸序列包括由本領域中熟習此項技術者識別為免疫球蛋白可變域之結構元件的多肽。在一些實施例中，抗體藥劑為具有與免疫球蛋白結合域同源或基本上同源之結合域的多肽蛋白質。
如本文所用，術語「 單株抗體」係指自實質上均質之抗體群體獲得之抗體，亦即構成該群體之個別抗體除可少量存在之可能天然產生之突變外係相同的。單株抗體針對單一抗原位點具高度特異性。修飾語「單株」指示抗體之特徵係獲自基本上同質之抗體群，且不應理解為需要藉由任何特定方法來產生該抗體。
如本文所用，術語「 人類抗體」意欲包括具有由人類免疫球蛋白序列產生（或組裝）之可變及恆定區的抗體。在一些實施例中，抗體（或抗體組分）可視為「人類」，即使其胺基酸序列例如在一或多個CDR及尤其CDR3中包括並非由人類生殖系免疫球蛋白序列編碼之殘基或元件（例如包括例如可（最初）藉由 活體外隨機或位點特異性突變誘發或藉由 活體內體細胞突變引入之序列變異體）。
如此項技術中已知，術語「 人源化」常用以指胺基酸序列包括來自在非人類物種(例如小鼠)中產生之參考抗體之V H及V L區序列的抗體（或抗體組分），且亦包括彼等序列中相對於參考抗體之意欲使其更「像人類」，亦即更類似於人類生殖系序列的修飾。在一些實施例中，「人源化 」抗體（或抗體組分）為免疫特異性地結合至相關抗原且具有基本上具有如人類抗體之胺基酸序列的構架(FR)區，及基本上具有如非人類抗體之胺基酸序列的互補決定區（CDR）的抗體。人源化抗體包含至少一個且通常兩個可變域中之基本上全部（Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv），其中所有或基本上所有CDR區對應於非人類免疫球蛋白（亦即，供體免疫球蛋白）之CDR區且所有或基本上所有構架區為具有人類免疫球蛋白共同序列之構架區。在一些實施例中，人源化抗體亦包含至少一部分免疫球蛋白恆定區（Fc），通常至少一部分人類免疫球蛋白恆定區。在一些實施例中，人源化抗體含有輕鏈以及至少重鏈之可變域兩者。抗體亦可包括重鏈恆定區之CH 1、鉸鏈、CH 2、CH 3及視情況存在之CH 4區。在一些實施例中，人源化抗體僅含有人源化V L區。在一些實施例中，人源化抗體僅含有人源化V H區。在一些特定實施例中，人源化抗體含有人源化V H及V L區。
「 完整抗體」為包含適於抗體類別之抗原結合可變區以及輕鏈恆定域（C L ）及重鏈恆定域C H 1、C H 2、C H 3及C H 4的抗體。恆定域可為天然序列恆定域（例如人類天然序列恆定域）或其胺基酸序列變異體。
「 抗體片段」包含完整抗體之一部分，包含其抗原結合區或可變區。抗體片段之實例包括與目標抗原（例如癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原）免疫特異性結合之Fab、Fab'、F(ab') 2及Fv片段、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、線性抗體、單鏈抗體分子、scFv、scFv-Fc、由抗體片段形成之多特異性抗體片段、由Fab表現庫產生之片段或以上中之任一者之抗原決定基結合片段。
「 抗原」為與抗體特異性結合之實體。
應理解，如本文所用，術語「 結合」通常係指在兩個或更多個實體之間或之中的非共價締合。「直接」結合涉及實體或部分之間的物理接觸；間接結合涉及藉由與一或多個中間實體進行物理接觸的物理交互作用。兩個或更多個實體之間的結合通常可在多種背景中之任一者下評估：包括在相互作用之實體或部分以分離形式研究或在更複雜系統之情況下（例如在與載體實體共價或以其他方式締合及/或在生物系統或細胞中時）。在一些實施例中，「結合」係指在免疫球蛋白分子與該免疫球蛋白對其具有特異性之抗原之間發生的類型之非共價相互作用。免疫結合相互作用之強度或親和力可以相互作用之解離常數(K d)表示，其中較小K d表示較大親和力。所選多肽之免疫結合特性可使用此項技術中熟知之方法定量。一種此類方法需要量測抗原結合位點/抗原複合物形成及解離之速率，其中彼等速率視複合搭配物之濃度、相互作用之親和力及同等影響兩個方向上之速率的幾何參數而定。因此，「締合速率常數」（K on）及「解離速率常數」（K off）均可藉由計算濃度及締合與解離之實際速率來確定。（ 參見Nature 361:186-87 (1993)）。K off/K on之比能夠抵消與親和力無關之所有參數，且等於解離常數K d。（ 總體上參見Davies等人(1990) Annual Rev Biochem 59:439-473）。
術語「 特異性結合」及「 特異性地結合」意謂抗體或抗體衍生物將以高選擇性方式與目標抗原之其對應抗原決定基結合且不與眾多其他抗原結合。通常，抗體或抗體衍生物以至少約1 × 10 -7M，且較佳10 -8M至10 -9M、10 -10M、10 -11M或10 -12M之親和力結合，且以比其結合至除預定抗原或緊密相關抗原之外的非特異性抗原（例如BSA、酪蛋白）之親和力高至少兩倍的親和力結合至預定抗原。術語「 特異性」係指細胞結合劑（例如如本文所述，諸如抗體或其片段）特異性結合給定目標抗原，例如人類目標抗原（例如與其免疫反應）的能力。
一般而言，「 蛋白質」為多肽（亦即，藉由肽鍵彼此連接之至少兩個胺基酸之串）。蛋白質可包括除胺基酸以外的部分（例如可為醣蛋白）及/或可以其他方式加工或修飾。一般熟習此項技術者應瞭解，「蛋白質」可為如藉由細胞（含具有或不具有信號序列）產生之完整多肽鏈，或可為其功能部分。一般技術者應進一步瞭解，蛋白質有時可包括超過一個多肽鏈，其例如藉由一或多個二硫鍵連接或藉由其他方式締合。
術語「抑制（ inhibit/ inhibition of）」意謂降低可量測之量或完全防止。
術語「 實質性」或「 實質上」係指群體、混合物或樣品之大部分，亦即＞50%，較佳為群體之超過50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。
術語「 細胞毒性活性」係指藥物或奧瑞他汀結合物或奧瑞他汀結合物之細胞內代謝物之細胞殺滅作用。細胞毒性活性可表示為IC 50值，其為一半細胞存活之每單位體積濃度（莫耳或質量）。
術語「 細胞抑制活性」係指藥物或奧瑞他汀結合物或奧瑞他汀結合物之細胞內代謝物之抗增殖作用。
如本文所用，術語「 細胞毒性劑」係指具有細胞毒性活性且導致細胞破壞之物質。該術語意欲包括化學治療劑及毒素，諸如小分子毒素或源自細菌、真菌、植物或動物之酶活性毒素，包括其合成類似物及衍生物。
如本文所用，術語「 細胞抑制劑」係指抑制細胞功能，包括細胞生長或增殖之物質。細胞抑制劑包括抑制劑，諸如蛋白抑制劑，例如酶抑制劑。細胞抑制劑具有細胞抑制活性。
如本文中所使用，術語「 有效負載」係指可連接至細胞結合劑之物質。有效負載由細胞毒性劑及連接子組成。
如本文所定義之「 連接子」、「 連接部分」或「 連接基團」係指將諸如細胞結合劑及細胞毒性化合物之兩個基團連接在一起之部分。通常，連接子在將其所連接之兩個基團進行連接的條件下實質上為惰性的。雙官能交聯劑可包含兩個反應性基團，在連接部分之各末端一個，使得一個反應性基團可首先與細胞毒性化合物反應以提供攜帶連接部分及第二反應性基團之化合物，其接著可與細胞結合劑反應。或者，雙官能交聯劑之一個末端可首先與細胞結合劑反應以提供攜帶連接部分及第二反應性基團之細胞結合劑，其接著可與細胞毒性化合物反應。連接部分可含有允許細胞毒性部分在特定位點釋放之化學鍵。適合之化學鍵為此項技術中熟知的，且包括二硫鍵、硫醚鍵、酸不穩定鍵、光不穩定鍵、肽酶不穩定鍵及酯酶不穩定鍵（參見例如美國專利第5,208,020號；第5,475,092號；第6,441,163號；第6,716,821號；第6,913,748號；第7,276,497號；第7,276,499號；第7,368,565號；第7,388,026號及第7,414,073號）。較佳為二硫鍵、硫醚及肽酶不穩定鍵。可用於本發明中之其他連接子包括不可裂解連接子，諸如描述於美國公開案第20050169933號中之彼等連接子，或帶電連接子或親水性連接子，且描述於US 2009/0274713、US 2010/01293140及WO 2009/134976中，其各自明確地以引用之方式併入本文中，其各自明確地以引用之方式併入本文中。
術語「 異常細胞生長」及「 增殖性病症」在本申請案中可互換使用。除非另外規定，否則如本文所用，「 異常細胞生長」係指獨立於正常調節機制 （例如失去接觸抑制）之細胞生長。此包括例如以下異常生長：(1)藉由表現突變酪胺酸激酶或過度表現受體酪胺酸激酶而增殖的腫瘤細胞（腫瘤）；(2)發生異常酪胺酸激酶活化之其他增殖性疾病之良性及惡性細胞；(3)藉由受體酪胺酸激酶增殖的任何腫瘤；(4)藉由異常絲胺酸/蘇胺酸激酶活化而增殖的任何腫瘤；及(5)發生異常絲胺酸/蘇胺酸激酶活化之其他增殖性疾病之良性及惡性細胞。
術語「 癌症」及「 癌性」係指或描述哺乳動物中通常以不受調控之細胞生長為特徵的生理病狀或病症。「 腫瘤」包含一或多個癌細胞，及/或良性或癌前細胞。
如本文中所使用，「 自體免疫疾病」係指由個體自身組織或蛋白質引起且針對其之疾病或病症。
如本文所用，術語「 患者」或「 個體」係指例如出於實驗、診斷、預防及/或治療目的而根據本發明向其投與所提供化合物或本文所述之化合物的任何生物體。典型個體包括動物。術語「 動物」係指動物界之任何成員。在一些實施例中，「動物」係指處於發育之任何階段之人類。在一些實施例中，「動物」係指處於發育之任何階段之非人類動物。在某些實施例中，該非人類動物為哺乳動物(例如嚙齒動物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、貓、綿羊、牛、靈長類動物及/或豬)。在一些實施例中，動物包括但不限於哺乳動物、鳥、爬蟲類、兩棲動物、魚、昆蟲及/或蟲。在一些實施例中，動物可為基因轉殖動物、經基因工程改造之動物及/或純系。在實施例中，動物為哺乳動物，諸如小鼠、大鼠、兔、非人類靈長類動物及人類；昆蟲；蠕蟲；等。在實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體可能罹患及/或易患疾病、病症及/或病狀（例如癌症）。如本文所用，「患者群體」或「個體群體」係指複數名患者或個體。
如本文所用，術語「 正常」在用於修飾術語「個體（individual）」或「個體（subject）」時係指未患特定疾病或病狀且亦非疾病或病狀之攜帶者的個體或個體群組。術語「正常」亦在本文中用於限定自正常或野生型個體或個體分離之生物樣本或樣品，例如「正常生物樣品」。
「 罹患」疾病、病症及/或病狀（例如本文所述之任何癌症）之個體已診斷患有或顯示疾病、病症及/或病狀之一或多種症狀。
「 易患」疾病、病症及/或病狀之個體尚未診斷患有及/或可能未展現疾病、病症及/或病狀之症狀。在一些實施例中，易患疾病、病症及/或病狀（例如癌症）之個體的特徵可在於以下中之一或多者：(1)與患上該疾病、病症及/或病狀相關之基因突變；(2)與患上該疾病、病症及/或病狀相關之基因多形現象；(3)與該疾病、病症及/或病狀相關之蛋白質之表現及/或活性增加及/或減少；(4)與患上該疾病、病症及/或病狀相關之習慣及/或生活方式；(5)該疾病、病症及/或病狀之家族病史；(6)對某些細菌或病毒之反應；(7)暴露於某些化學品。在一些實施例中，易患疾病、病症及/或病狀之個體將患上該疾病、病症及/或病狀。在一些實施例中，易患疾病、病症及/或病狀之個體不會患上該疾病、病症及/或病狀。
除非上下文另外規定，否則術語「 治療（ treat ）或「 治療（ treatment ）」係指部分或完全緩解、改善、減輕、抑制特定疾病、病症及/或病狀（例如癌症）之一或多種症狀或特徵，延遲其發作，延遲其進展，降低其嚴重程度，及/或降低其發生率之治療分子（例如本文所述之任何化合物）的任何投與。該治療可屬於不展現相關疾病、病症及/或病狀之徵象之受試者及/或僅展現疾病、病症及/或病狀之早期徵象之受試者。可替代地或另外，該治療可屬於展現相關疾病、病症及/或病狀之一或多種已確立徵象之受試者。或者，藥理學及/或生理學作用可為 預防性的，亦即完全或部分預防疾病或其症狀（例如延遲疾病或其症狀發作或減緩進展）的作用。就此而言，本發明方法包含投與「預防有效量」之結合劑。「預防有效量」係指以必需劑量及時段有效達成所需預防結果之量。因此，治療（包括預防性治療）之目的為抑制或減緩（減輕）不希望的生理變化或病症，例如癌症之發展或擴散。出於本發明之目的，有益或所期望的臨床結果包括但不限於症狀緩解、疾病程度減輕、疾病病狀穩定（亦即不惡化）、疾病進展延緩或減緩、疾病病狀改善或緩和及緩解（部分或完全），該等結果為可偵測或不可偵測的。治療亦可包括若不接受治療則相比於預期存活期會延長存活期。需要治療之彼等患者包括已患有病狀或病症之彼等患者以及易於患上病狀或病症之彼等患者。
在癌症之情況下，術語「 治療」包括以下中之任一者或所有：殺死腫瘤細胞；抑制腫瘤細胞、癌細胞或腫瘤之生長；抑制腫瘤細胞或癌細胞之複製；減輕總腫瘤負荷或減少癌細胞之數目；及改善與疾病相關之一或多種症狀。
在自體免疫疾病之情況下，術語「 治療」包括以下中之任一者或所有：抑制與自體免疫疾病病狀相關之細胞（包括但不限於產生自體免疫抗體之細胞）的複製、減輕自體免疫抗體負荷及改善自體免疫疾病之一或多種症狀。
術語「 治療有效量」或「 有效量」係指有效治療或預防哺乳動物（例如如本文所述）之疾病或病症之結合物的量。在癌症之情況下，治療有效量之結合物可減少癌細胞數目；減小腫瘤尺寸；抑制（亦即，在一定程度上減緩及較佳停止）癌細胞浸潤至周圍器官中；抑制（亦即，在一定程度上減緩及較佳停止）腫瘤轉移；在一定程度上抑制腫瘤生長；及/或在一定程度上緩解與癌症相關之一或多種症狀。為達到藥物可抑制所存在之癌細胞生長及/或殺滅所存在之癌細胞的程度，該藥物可具有細胞生長抑制性及/或細胞毒性。關於癌症療法，可例如藉由評定疾病進展（TTP）及/或測定反應率（RR）來量測功效。
如本文所用之術語「 醫藥學上可接受之形式」係指所揭示化合物之形式，包括但不限於其醫藥學上可接受之鹽、酯、水合物、溶劑合物、多晶型物、異構體、前藥及同位素標記之衍生物。在一個實施例中，「醫藥學上可接受之形式」包括但不限於其醫藥學上可接受之鹽、酯、前藥及同位素標記之衍生物。在實施例中，「醫藥學上可接受之形式」包括但不限於其醫藥學上可接受之異構體及立體異構體、前藥及同位素標記之衍生物。
在實施例中，醫藥學上可接受之形式為醫藥學上可接受之鹽。如本文所用，術語「 醫藥學上可接受之鹽」係指化合物（例如奧瑞他汀、奧瑞他汀有效負載或奧瑞他汀結合物）之醫藥學上可接受之有機或無機鹽。在一些態樣中，化合物可含有至少一個胺基，且因此可與該胺基形成酸加成鹽。例示性鹽包括但不限於硫酸鹽、三氟乙酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、丹寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、丁二酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、葡糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸酯苯甲酸根、麩胺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽（亦即，1,1'-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽)）。醫藥學上可接受之鹽可涉及包括另一分子，諸如乙酸根離子、丁二酸根離子或其他相對離子。相對離子可為使母化合物上之電荷穩定之任何有機或無機部分。此外，醫藥學上可接受之鹽在其結構中可具有超過一個帶電原子。多個帶電原子係醫藥學上可接受之鹽之一部分的情況可具有多個相對離子。因此，醫藥學上可接受之鹽可具有一或多個帶電原子及/或一或多個相對離子。
如本文所用，術語「 醫藥組合物」係指其中活性劑（例如根據如本文所述之式(I)-(III)中之任一者的化合物）與一或多種醫藥學上可接受之載劑一起調配之組合物。在一些實施例中，活性劑以適合於投與之單位給藥量存在於治療方案中，該治療方案在向相關群體投與時顯示統計學上顯著的達成預定治療效果之概率。在一些實施例中，醫藥組合物可專門調配為用於以固體或液體形式投與，包括適宜於以下之彼等醫藥組合物：經口投與，例如頓服藥（水性或非水性溶液或懸浮液）、錠劑（例如靶向經頰、舌下及全身吸收之彼等錠劑）、大丸劑、散劑、顆粒、用於向舌施用之糊劑；非經腸投與，例如藉由皮下、肌肉內、靜脈內或硬膜外注射以例如無菌溶液或懸浮液或持續釋放調配物形式投與；局部施用，例如以施用至皮膚、肺或口腔之乳膏、軟膏或控制釋放貼劑或噴霧形式施用；陰道內或直腸內，例如以子宮托、乳膏或泡沫形式；舌下；經眼；經皮；或經鼻、經肺及向其他黏膜表面。
如本文所用，「 載劑」或「 醫藥學上可接受之載劑」係指與組合物一起投與之稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒劑。在一些例示性實施例中，載劑可包括無菌液體，諸如(例如)水及油，包括石油、動物、植物或合成來源之油，諸如(例如)花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及類似物。在一些實施例中，載劑為或包括一或多種固體成分。在一些實施例中，載劑可為溶劑或分散介質，其含有例如水、乙醇、多元醇（例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及其類似物）及其適合之混合物。適當流動性可例如藉由使用諸如卵磷脂之包衣、藉由在分散液之情況下維持所需粒度及藉由使用界面活性劑來維持。微生物作用之預防可藉由各種抗細菌劑及抗真菌劑來達成，例如對羥苯甲酸酯、氯丁醇、酚、抗壞血酸、硫柳汞及其類似物。在一些情況下，可能期望組合物中包括等張劑，例如糖、多元醇（諸如甘露糖醇、山梨糖醇）、氯化鈉。可藉由在組合物中包括延遲吸收之試劑（例如，單硬脂酸鋁及明膠）實現可注射組合物之延長吸收。
如本文所用，術語「 套組」係指用於遞送物質之任何遞送系統。此類遞送系統可包括允許多種診斷或治療劑（例如在適當容器中之寡核苷酸、酶等）及/或支援物質（例如緩衝劑、用於執行分析之書面說明書等）自一個地點儲存、運輸或遞送至另一地點的系統。舉例而言，套組包括含有相關反應試劑及/或支援物質之一或多個殼體（例如盒、筒、瓶、安瓿等）。如本文所用，術語「分段套組」係指包含兩個或更多個各自含有總套組組分之子部分之分開容器的遞送系統。容器可一起或分別遞送至預期接受者。舉例而言，第一容器可含有用於分析之酶，而第二容器含有寡核苷酸。術語「分段套組」意欲涵蓋含有受聯邦食品、藥品及化妝品法案(Federal Food, Drug, and Cosmetic Act)第520(e)部分監管之分析物特異性試劑(ASR)的套組，但不限於此。實際上，包含兩個或更多個各含有總套組組件之子部分之獨立容器的任何遞送系統均包括於術語「分段套組」中。相比之下，「組合套組」係指在單一容器中(例如在容納各所需組件之單一盒中)含有所有組件之遞送系統。術語「套組」包括分段與組合套組兩者。
如本文所用，術語「 投與」通常係指向個體或系統投與組合物以達成為該組合物或包括於該組合物中之藥劑的遞送。一般熟習此項技術者將瞭解可在合適環境中用於向個體（例如人類）投與之多種途徑。投與途徑之實例包括非經腸，例如靜脈內、皮內、皮下、經口（例如吸入）經皮（亦即局部）、經黏膜及經直腸投與。舉例而言，在一些實施例中，投與可為經眼、經口、非經腸、局部等。在實施例中，投與為非經腸（例如靜脈內投與）。在實施例中，靜脈內投與為靜脈內輸注。在一些特定實施例中，投與可為支氣管（例如，藉由支氣管滴入）、頰、皮膚（其可為或包含例如真皮局部、真皮內、真皮間、穿皮等之一或多者）、腸內、動脈內、真皮內、胃內、髓內、肌肉內、鼻內、腹膜內、鞘內、靜脈內、心室內、特定器官內（例如肝內）、黏膜、鼻、口服、直腸、皮下、舌下、局部、氣管（例如，經由氣管內滴入）、陰道、玻璃體等。
如本文所用，術語「 親核」係指富含電子、具有充當反應性位點之非共用電子對且與帶正電或缺電子位點反應的反應性基團。適用於本發明之親核基團之實例包括但不限於胺基（例如一級胺、二級胺、羥胺及/或肼）、硫醇、酚及醇。 在實施例中，親核官能基包含：胺基、肼基、羥胺基、羥基或硫基。在實施例中，親核官能基為甲醯胺、N-羥基甲醯胺、羧基醯肼或胍基。在實施例中，親核基團為硫醇基或包含硫醇基。某些親核性基團必須用鹼活化，以便能夠與親電子基團反應。舉例而言，當多官能化合物中存在親核硫醇基及羥基時，化合物必須與水性鹼摻合以便移除質子且提供硫醇鹽或羥基化陰離子以使得能夠與親電子基團反應。除非需要使鹼參與反應，否則非 - 親核鹼較佳。在一些實施例中，鹼可以緩衝溶液之組分形式存在。
如本文所用，術語「 親電子」係指易受親核攻擊影響之反應性基團；亦即，易與進入之親核基團發生反應。可進行親電子基團之選擇以使得可能與配對反應物之親核基團反應。舉例而言，當親核反應性基團為胺基時，可選擇親電子基團以便與胺基反應。類似地，當親核反應性基團為硫醇部分時，對應親電子基團可為硫醇反應性基團及其類似基團。適用於本發明之親電子基團之實例包括但不限於羧酸酯、醯氯基團、酸酐、異氰酸基、硫異氰酸基、環氧化物、活化羥基、丁二醯亞胺基酯、磺基丁二醯亞胺基酯、順丁烯二醯亞胺基及乙烯磺醯基。在實施例中，親電子基團為醛、α-鹵基酮、順丁烯二醯亞胺、丁二醯亞胺、羥基丁二醯亞胺、異硫氰酸酯、異氰酸酯、醯基疊氮、磺醯氯、甲苯磺酸酯、乙二醛、環氧化物、環氧乙烷、碳酸酯、亞胺酯、酸酐、氟苯基酯、羥甲基膦衍生物、碳酸酯、鹵乙醯基、氯三 、鹵乙醯基、烷基鹵、氮丙啶、丙烯醯基衍生物、酮、羧酸、酯、乙醯氯或乙酸酐。在實施例中，親電子基團為或包含順丁烯二醯亞胺或丁二醯亞胺基團。羧酸基可經活化以便與親核試劑反應，包括在諸如二環己基碳化二亞胺（DCC）或二環已基脲（DHU）之脫水劑存在下與適合之含羥基化合物反應。舉例而言，羧酸可在DCC存在下與經烷氧基取代之N-羥基丁二醯亞胺或N-羥基磺基丁二醯亞胺反應以分別形成反應性親電子基團N-羥基丁二醯亞胺酯及N-羥基磺基丁二醯亞胺酯。羧酸亦可藉由與醯基鹵，諸如醯氯（例如乙醯氯）反應而活化，以提供反應性酸酐基團。在另一實例中，羧酸可使用例如能夠進行交換反應的亞硫醯氯或醯氯轉化為醯氯基團。
除非另外規定，否則術語「 烷基」本身或作為另一術語之一部分係指具有所指示數目之碳原子之經取代或未經取代之直鏈或分支鏈飽和或不飽和烴（例如「—C 1-C 8烷基」或「—C 1-C 10」烷基分別係指具有1至8個或1至10個碳原子之烷基）。當未指定碳原子數目時，烷基具有1至8個碳原子。代表性直鏈「—C 1-C 8烷基」包括但不限於-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基、-正己基、-正庚基及-正辛基；而分支鏈—C 3-C 8烷基包括但不限於-異丙基、-二級丁基、-異丁基、-三級丁基、-異戊基及-2-甲基丁基；不飽和—C 2-C 8烷基包括但不限於-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-異丁烯基、-1戊烯基、-2戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2甲基-2-丁烯基、-2,3二甲基-2-丁烯基、-1-己基、2-己基、-3-己基、-乙炔基、-丙炔基、-1丁炔基、-2丁炔基、-1戊炔基、-2戊炔基及-3甲基1丁炔基。有時烷基未經取代。烷基可經一或多個基團取代。在其他態樣中，烷基將為飽和的。
除非另外指示，否則「 伸烷基」本身或作為另一術語之一部分係指具有所述數目之碳原子（通常1-10個碳原子）且具有藉由自母體烷烴之相同或兩個不同碳原子移除兩個氫原子而得到的兩個單價基團中心之經取代或未經取代之飽和、分支鏈或直鏈或環烴基團。典型伸烷基包括但不限於：亞甲基（—CH 2—）、1,2-伸乙基（—CH 2CH 2—）、1,3-伸丙基（—CH 2CH 2CH 2—）、1,4-伸丁基（—CH 2CH 2CH 2CH 2—）及其類似基團。在較佳態樣中，伸烷基為分支鏈或直鏈烴（亦即其不為環烴）。
除非另外規定，否則「 芳基」本身或作為另一術語之一部分意謂所規定述數目之碳原子（通常為6-20個碳原子）之經取代或未經取代之單價碳環芳烴基團，其係藉由自母體芳環系統之單個碳原子移除一個氫原子而衍生。一些芳基係以如「Ar」之例示性結構表示。典型芳基包括但不限於衍生自苯、經取代之苯、萘、蒽、聯二苯及其類似者之基團。例示性芳基為苯基。
除非另外規定，否則「 伸芳基」本身或作為另一術語之一部分為如上文所定義之芳基，其具有兩個共價鍵（亦即，其為二價的）且可呈鄰位、間位或對位取向。
除非另外規定，否則「 C 3-C 8 雜環」本身或作為另一術語之一部分係指單價經取代或未經取代之芳族或非芳族單環或雙環系統，其具有3至8個碳原子（亦稱為環成員）及一至四個獨立地選自N、O、P或S之雜原子環成員，且係藉由自母體環系統之環原子移除一個氫原子而衍生。雜環中之一或多個N、C或S原子可經氧化。包括雜原子之環可為芳族或非芳族的。其中所有環原子與芳族性有關之雜環被稱為雜芳基且另外被稱為雜碳環。除非另外指出，否則雜環在產生穩定結構之任何雜原子或碳原子處與其側基連接。因而，雜芳基可經由其芳環系統之芳族碳鍵結，稱為C鍵聯雜芳基，或經由其芳環系統中之非雙鍵結N原子（亦即，非=N—）鍵結，稱為N鍵聯雜芳基。因此，含氮雜環可為C鍵聯或N鍵聯的且包括吡咯部分，諸如吡咯-1-基（N鍵聯）及吡咯-3-基（C鍵聯）；及咪唑部分，諸如咪唑-1-基及咪唑-3-基（兩者均為N鍵聯），及咪唑-2-基、咪唑-4-基及咪唑-5-基部分（其均為C鍵聯）。
如本文所用之術語「 雜芳基」係指單環、雙環或三環碳環環系，總共具有六至十四個環成員，其中該等環系具有與分子的其餘部分的單一連接點，其中在系統中的至少一個環係芳族的，其中在系統中的每個環含有4至7個環成員，且其中至少一個環原子為雜原子，諸如(但不限於)氮及氧。
除非另外規定，否則「 C 3-C 8 雜芳基」為芳族C 3-C 8雜環，其中下標指示雜環之環狀環系統之碳總數或雜芳基之芳環系統之芳族碳總數且不暗示環系統之大小或環稠合之存在或不存在。C 3-C 8雜環之代表性實例包括但不限於吡咯啶基、氮雜環丁烷基、哌啶基、嗎啉基、四氫呋喃基、四氫哌喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩、吲哚基、苯并吡唑基、吡咯基、噻吩基（噻吩）、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、嘧啶基、吡啶基、吡 基、嗒 基、異噻唑基及異噁唑基。當明確給出時，雜環或雜芳基之環系統之大小係藉由環中之原子總數指示。舉例而言，指定為5員或6員雜芳基指示雜芳基之雜芳環系統中之芳族原子總數（亦即5或6），但不暗示在彼環系統中之芳族雜原子或芳族碳之數目。稠合雜芳基係由上下文按此明確規定或暗示，且通常藉由稠合在一起以構成稠合雜芳環系統之各芳環中之芳族原子數目指示。舉例而言，5,6-員雜芳基為稠合至芳族6員環之芳族5員環，其中該等環中之一者或兩者具有一或多個芳族雜原子或其中該兩個環之間共用一個雜原子。
稠合至芳基或雜芳基以使得雜環仍為非芳族且經由與稠環系統之非芳族部分附接而為較大結構之部分的雜環為視情況經取代的雜環之一實例，其中該雜環藉由與芳基或雜芳基進行環稠合而取代。同樣，稠合至雜環或碳環之經由與稠環系統之芳族部分連接而為較大結構之一部分的芳基或雜芳基為視情況經取代的芳基或雜環之一實例，其中該芳基或雜環藉由與雜環或碳環進行環稠合而取代。
除非另外規定，否則「 C 3-C 8 雜環」本身或作為另一術語之一部分係指如上文所定義之C 3-C 8雜環，其中雜環之氫原子中之一者經一鍵置換(亦即其為二價的)。除非另外規定，否則「C 3-C 8伸雜芳基」本身或作為另一術語之一部分係指如上文所定義之C 3-C 8雜芳基，其中雜芳基之氫原子中之一者經一鍵置換(亦即其為二價的)。
除非另外規定，否則「 C 3-C 8 碳環」單獨或作為另一術語之一部分為藉由自母體環系統之環原子移除一個氫原子而衍生之3員、4員、5員、6員、7員或8員單價、經取代或未經取代之飽和或不飽和非芳族單環或雙環碳環。代表性—C 3-C 8碳環包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環戊二烯基、環己基、環己烯基、1,3-環己二烯基、1,4-環己二烯基、環庚基、1,3-環庚二烯基、1,3,5-環庚三烯基、環辛基及環辛二烯基。
除非另外規定，否則「 C 3-C 8 碳環」本身或作為另一術語之一部分係指如上文所定義之C 3-C 8碳環基，其中另一碳環基之氫原子經一鍵置換(亦即其為二價的)。
除非另外規定，否則術語「 雜烷基」本身或與另一術語組合，除非另外規定，否則意謂完全飽和或含有1至3不飽和度且由規定數目個碳原子及一至十個、較佳一至三個選自由O、N、Si及S組成之群的雜原子組成之穩定直鏈或分支鏈烴或其組合，且其中氮及硫原子可視情況經氧化且氮雜原子可視情況經四級銨化。雜原子O、N及S可位於雜烷基之任何內部位置處或烷基與分子之其餘部分連接之位置處。雜原子Si可位於雜烷基之任何位置處，包括烷基與分子之其餘部分連接之位置。實例包括—CH 2— CH 2—O—CH 3、—CH 2—CH 2—NH—CH 3、—CH 2—CH 2—N(CH 3)—CH 3、—CH 2—S—CH 2—CH 3、—CH 2—CH 2—S(O)—CH 3—NH—CH 2—CH 2—NH—C(O)—CH 2—CH 3、—CH 2—CH 2—S(O) 2—CH 3、—CH=CH—O—CH 3、—Si(CH 3) 3、—CH 2—CH=N—O—CH 3及—CH=CH—N(CH 3)—CH 3。至多兩個雜原子可為連續的，諸如—CH 2—NH—OCH 3及—CH 2—O—Si(CH 3) 3。通常，C 1至C 4雜烷基或伸雜烷基具有1至4個碳原子及1或2個雜原子且C 1至C 3雜烷基或伸雜烷基具有1至3個碳原子及1或2個雜原子。在一些態樣中，雜烷基伸雜烷基為飽和的。
除非另外規定，否則術語「 伸雜烷基」本身或與另一術語組合意謂衍生自雜烷基之二價基團（如上文所論述），如由—CH 2—CH 2—S—CH 2—CH 2—及—CH 2—S—CH 2—CH 2—NH—CH 2—所例示。對於伸雜烷基，雜原子亦可佔據任一或兩個鏈末端。另外，對於伸烷基及伸雜烷基鍵聯基團，未暗示鍵聯基團之定向。
除非另外規定，否則「 胺基烷基」本身或與另一術語組合意謂雜烷基，其中如本文所定義之烷基部分經胺基、烷胺基、二烷胺基或環烷胺基取代。例示性非限制性胺基烷基為—CH 2NH 2、—CH 2CH 2NH 2、—CH 2CH 2NHCH 3及—CH 2CH 2N(CH 3) 2，且進一步包括支鏈物種，諸如呈(R)-或(S)-組態之—CH (CH 3)NH 2及—C(CH 3)CH 2NH 2。或者，胺基烷基為如本文所定義之烷基部分、基團或取代基，其中除基團碳以外的sp 3碳已經胺基或烷基胺基部分置換，其中其sp 3氮置換烷基之sp 3碳，其限制條件為至少一個sp 3碳保留。當將胺基烷基部分指代為較大結構或另一部分之取代基時，胺基烷基係經由胺基烷基之烷基部分的碳基團共價連接至該結構或部分。
除非另外規定，否則「 烷基胺基」及「 環烷胺基」本身或與另一術語組合意謂如本文所述之烷基或環烷基，其中該烷基或環烷基之基團碳已經氮基團置換，其條件為至少一個sp 3碳保留。在烷基胺基係在其氮處經另一烷基部分取代之彼等情況下，所得經取代基團有時稱為二烷胺基部分、基團或取代基，其中取代氮之烷基部分獨立地經選擇。例示性及非限制性胺基、烷胺基及二烷胺基取代基包括具有—N(R') 2結構之彼等取代基，其中此等實例中之R'獨立地選自氫或C 1- 6烷基，通常為氫或甲基，而在包括於雜環烷基中之環烷基胺中，兩個R'與其所連接之氮一起定義雜環。當兩個R'均為氫或烷基時，該部分有時分別描述為一級胺基及三級胺基。當一個R'為氫且另一個為烷基時，則該部分有時描述為二級胺基。一級及二級烷基胺基部分作為針對含羰基親電子中心之親核試劑反應性較大，而三級胺更具鹼性。
「 經取代之烷基」及「 經取代之芳基」分別意謂烷基及芳基，其中一或多個氫原子（通常為一個）各自獨立地經取代基置換。典型取代基包括但不限於—X、—R'、—OH、—OR'、—SR'、—N(R') 2、—N(R') 3、=NR'、—CX 3、—CN、—NO 2、—NR'C(=O)R'、—C(=O)R'、—C(=O)N(R') 2、—S(=O) 2R'、—S(=O) 2NR、—S(=O)R'、—OP(=O)(OR') 2、—P(=O)(OR') 2、-PO 3=、PO 3H 2、—C(=O)R'、—C(=S)R'、—CO 2R'、—CO 2-、—C(=S)OR'、—C(=O)SR'、—C(=S)SR'、—C(=O)N(R') 2、—C(=S)N(R) 2及—C(=NR)N(R') 2，其中各X獨立地選自由以下鹵素組成之群：—F、—CI、—Br及—I；且其中各R'獨立地選自由以下組成之群：—H、—C 1 -C 20烷基、—C 6-C 20芳基、—C 3-C 14雜環、保護基及前藥部分。
更通常，取代基選自由以下組成之群：—X、—R'、—OH、—OR'、—SR'、—N(R') 2、—N(R') 3、=NR'、—NR'C(=O)R、—C(=O)R'、—C(=O)N(R') 2、—S(=O) 2R'、—S(=O) 2NR'、—S(=O) R'、—C(=O)R'、—C(=S)R、—C(=O)N(R') 2、—C(=S)N (R') 2及—C(=NR)N(R') 2，其中各X獨立地選自由—F和—CI組成之群，或選自由以下組成之群：—X、—R、—OH、—OR'、—N(R') 2、—N(R') 3、—NR' C(=O)R'、—C(=O)N(R') 2、—S(=O) 2R'、—S(=O) 2NR'、—S(=O)R'、—C(=O)R'、—C(=O)N(R') 2、—C(=NR)N(R') 2、保護基及前藥部分，其中各X為—F；且其中各R'獨立地選自由以下組成之群：氫、—C 1-C 20烷基、—C 6-C 20芳基、—C 3-C 14雜環、保護基及前藥部分。在一些態樣中，烷基取代基選自由以下組成之群：—N(R') 2、—N(R') 3和—C(=NR)N(R') 2，其中R選自由氫及—C 1-C 20烷基組成之群。在其他態樣中，烷基經一系列伸乙基氧基部分取代以定義PEG單元。如上文所述之伸烷基、碳環、碳環基、伸芳基、雜烷基、伸雜烷基、雜環、雜環基、雜芳基及伸雜芳基亦可類似地經取代。
如本文所用，「 保護基」意謂阻止或降低其所連接之原子或官能基參與非所需反應之能力的部分。原子或官能基之典型保護基在Greene (1999), 「Protective Groups In Organic Synthesis, 第3版」, Wiley Interscience中給出。諸如氧、硫及氮之雜原子的保護基在一些情況下用於最小化或避免其與親電子化合物之非所需反應。在其他情況下，保護基係用於減小或消除未受保護雜原子之親核性及/或鹼度。受保護氧之非限制性實例係藉由—OR PR 給出，其中R PR 為羥基之保護基，其中羥基通常作為酯（例如乙酸酯、丙酸酯或苯甲酸酯）受保護。羥基之其他保護基避免干擾有機金屬試劑或其他高鹼性試劑之親核性，其中羥基通常以醚之形式受保護，包括烷基或雜環烷基醚（例如，甲基或四氫哌喃基醚）、烷氧基甲基醚（例如，甲氧基甲基或乙氧基甲基醚）、視情況經取代之芳基醚，及矽基醚（例如，三甲基矽基（TMS）、三乙基矽基（TES）、三級丁基二苯基矽基（TBDPS）、三級丁基二甲基矽基（TBS/TBDMS）、三異丙基矽基（TIPS）及[2-(三甲基矽基)乙氧基]-甲基矽基（SEM））。氮保護基包括一級或二級胺之彼等保護基，如在—NHR PR 或—N(R PR ) 2—中，其中R PR 中之至少一者為氮原子保護基，或兩個R PR 一起包含保護基。
當保護基能夠在實現分子中別處之期望化學轉化所需的反應條件下及在期望時純化新形成之分子期間防止或避免非所需副反應或保護基之過早喪失，且可在不會不利地影響新形成分子之結構或立體化學完整性的條件下移除時，該保護基為適合之保護基。藉助於實例而非限制，適合之保護基可包括先前對於保護官能基所描述之彼等保護基。適合之保護基有時為用於肽偶合反應之保護基。
「 芳族醇」本身或作為較大結構之一部分係指經羥基官能基—OH取代之芳環系統。因此，芳族醇係指如本文所描述之任何芳基、雜芳基、伸芳基及伸雜芳基部分，其具有結合至其芳環系統之芳族碳之羥基官能基。芳族醇可為較大部分之一部分，如當其芳環系統為此部分之取代基時，或可藉由環稠合嵌入該較大部分中，且可視情況經如本文所描述之包括一或多個其他羥基取代基之部分取代。酚醇為具有酚基團作為芳環之芳族醇。
「 脂族醇」本身或作為較大結構之一部分係指具有結合至羥基官能基—OH之非芳族碳之部分。攜有羥基之碳可未經取代（亦即，甲醇）或可具有一個、兩個或三個視情況經取代之分支鏈或非分支鏈烷基取代基以界定直鏈或環狀結構內之一級醇或二級或三級脂族醇。當為較大結構之一部分時，醇可藉由經由含羥基碳、經由如本文所描述之烷基或其他部分之碳結合至此含羥基碳或經由此烷基或其他部分之取代基而為此結構之取代基。脂族醇涵蓋非芳族環狀結構(亦即碳環及雜碳環，其視情況經取代)，其中羥基官能基結合至其環狀環系統之非芳族碳。
如本文所用之「 芳基烷基」或「 雜芳基烷基」意謂取代基、部分或基團，其中芳基部分鍵結至烷基部分，亦即芳基-烷基-，其中烷基及芳基如上文所述，例如C 6H 5—CH 2—或C 6H 5—CH(CH 3)CH 2—。芳基烷基或雜芳基烷基經由其烷基部分之sp 3碳與較大結構或部分相關。
如本文中所使用，「 丁二醯亞胺部分」係指由丁二醯亞胺環系統構成之有機部分，該丁二醯亞胺環系統存在於式（III）化合物中之一種類型 Y '中，該式（III）化合物通常進一步由結合至該環系統之醯亞胺氮的含伸烷基部分構成。丁二醯亞胺部分通常由細胞結合劑之硫醇基與奧瑞他汀有效負載化合物（式II）之順丁烯二醯亞胺環系統的邁克爾加成反應（Michael addition）產生。因此，丁二醯亞胺部分由經硫基取代之丁二醯亞胺環系統構成，且當存在於奧瑞他汀結合物中時，其醯亞胺氮經奧瑞他汀結合物之細胞結合劑之其餘部分取代且視情況經存在於式II化合物之順丁烯二醯亞胺環系統上之一或多個取代基取代。
如本文所用，「 酸 - 醯胺部分」係指丁二酸，其具有由丁二醯亞胺部分之經硫基取代丁二醯亞胺環系統產生之醯胺取代基，該丁二醯亞胺部分已藉由水解經歷其羰基-氮鍵中之一者之斷裂。產生丁二酸-醯胺部分之水解經由消除抗體-硫基取代基提供不大可能遭受其所結合之連接子之過早損失的連接子。預期經硫基取代之丁二醯亞胺部分之丁二醯亞胺環系統的水解提供酸-醯胺部分之區域化學異構體，該等異構體係因丁二醯亞胺環系統之兩個羰基碳之反應性差異所致，其可至少部分歸因於存在於式II化合物之順丁烯二醯亞胺環系統中之任何取代基且歸因於藉由靶向配位體引入之硫基取代基。
如本文所用，術語「 前藥」係指更低生物活性或非活性化合物，其在體內經由化學或生物過程（亦即化學反應或酶促生物轉化）轉化成更具生物活性化合物。通常，生物活性化合物藉由用前藥部分化學修飾該化合物而呈現更低生物活性（亦即，轉化成前藥）。在一些態樣中，前藥為第II型前藥，其在細胞外（例如在消化流體中）或在身體循環系統中（例如在血液中）生物活化。例示性前藥為酯及(β-D-葡萄哌喃糖苷。
在許多情況中，本文所述之結合物、連接子及組分之組件將指反應性基團。「 反應性基團」或RG為含有能夠與奧瑞他汀有效負載或奧瑞他汀結合物之連接子之組分；或奧瑞他汀形成鍵之的反應位點（RS）的基團。RS為反應性基團（RG）內之反應性位點。反應性基團包括用以形成二硫鍵或硫醚鍵之硫醇基；用以形成腙鍵之醛、酮或肼基；用以形成肽鍵之羧基或胺基；用以形成酯鍵之羧基或羥基；用以形成磺醯胺鍵之磺酸；用以形成胺基甲酸酯鍵之醇；及用以形成磺醯胺鍵或胺基甲酸酯鍵之胺。下表說明反應性基團、反應性位點及在反應性位點反應之後可形成之例示性官能基。該表不具限制性。熟習此項技術者應瞭解，該表中所提到之R'及R"部分有效地為與在使RG轉化為示例性官能基中之一者中所提供之鍵形成相容的任何有機部分（例如烷基、芳基、雜芳基；或經取代之烷基、芳基或雜芳基）。亦應瞭解，適用於本發明之實施例，R'可表示自穩定連接子或視情況選用之次要連接子的一或多種組分（視具體情況而定），且R"可表示視情況選用之次要連接子、奧瑞他汀、穩定化單元或偵測單元之一或多種組分（視具體情況而定）。
RG RS 例示性官能基
1)  R'-SH -S- R'-S-R'' R'-S-S-R''
2) R'-C(=O)OH -C(=O)- R'-C(=O)NH-R''
3) R'-C(=O)ONHS -C(=O)- R'-C(=O)NH-R''
4) R'S(=O) 2-OH -S(=O) 2- R'S(=O) 2NH-R''
5) R-=CH 2-X (X is Br, I, Cl) -CH 2- R'-CH 2-S-R''
6) R'-NH 2 -N- R'-NHC(=O)R''
由本發明所預想之取代基及變數之組合僅為使得形成穩定化合物之彼等組合。如本文所用，術語「 穩定」係指具有足以允許製造之穩定性且在適用於本文中詳述之目的（例如向個體治療或預防性投藥）之足夠時段內維持化合物完整性的化合物。
本發明化合物在其製備之後較佳經分離及純化，以獲得含有按重量計等於或大於95%（「基本上純」）之量的組合物，其接著如本文所述地使用或調配。
如本文所用之術語「 結合物」係指連接至細胞結合劑之本文所述之化合物或其衍生物。
如本文所用之術語「 可連接至細胞結合劑」係指本文所述之化合物或其衍生物，其包含至少一個適合於將此等化合物或其衍生物鍵結至細胞結合劑的連接基團或其前驅體。
給定基團之術語「 前驅體」係指可藉由任何去保護、化學修飾或偶合反應產生該基團之任何基團。
術語「 連接至細胞結合劑」係指包含本文所述之化合物或其衍生物中之至少一者的結合物分子，該結合物分子經由適合之連接基團或其前驅體與細胞結合劑鍵結。
「 治療劑」涵蓋生物劑，諸如抗體、肽、蛋白質、酶或化學治療劑。
「 化學治療劑」為適用於治療癌症之化合物。
「 代謝物」為經由指定化合物、其衍生物、或其結合物、或其鹽在體內代謝產生之產物。化合物、其衍生物或其結合物之代謝物可使用此項技術中已知之常規技術鑑定，且其活性使用諸如本文所述之彼等測試來測定。此類產物可例如由所投與化合物之氧化、羥基化、還原、水解、醯胺化、去醯胺化、酯化、去酯化、酶促裂解及其類似者產生。因此，本發明包括本發明之化合物、其衍生物或其結合物之代謝物，包括由包含使本發明之化合物、其衍生物或其結合物與哺乳動物在足以產生其代謝產物之時段內接觸之方法產生的化合物、其衍生物或其結合物。
術語「 胺基酸」係指天然存在及合成之胺基酸，以及以類似於天然存在之胺基酸的方式起作用的胺基酸類似物及胺基酸模擬物。天然存在之胺基酸為由遺傳密碼編碼之胺基酸以及隨後經修飾之彼等胺基酸， 例如羥基脯胺酸、γ-羧基麩胺酸、硒半胱胺酸及O-磷絲胺酸。胺基酸類似物係指具有與天然存在之胺基酸相同的基本化學結構（ 亦即與氫、羧基、胺基及R基團鍵結之碳）的化合物， 例如高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。此等類似物具有經修飾之R基團 （例如例如正白胺酸）或經修飾之肽主鏈，但保持與天然存在之胺基酸相同之基本化學結構。一種可特定使用之胺基酸為瓜胺酸，其為精胺酸之衍生物且參與肝臟中尿素的形成。胺基酸模擬物係指具有與胺基酸之一般化學結構不同之結構，然而以與天然存在之胺基酸類似之方式起作用的化合物。術語「非天然胺基酸」意欲表示上文所述之二十種天然存在之胺基酸之「D」立體化學形式。應進一步瞭解，術語非天然胺基酸包括天然胺基酸之同源物或其D異構體，及天然胺基酸之合成修飾形式。合成修飾形式包括但不限於具有縮短或延長至多兩個碳原子之側鏈的胺基酸、包含視情況經取代之芳基之胺基酸及包含鹵化基團、較佳鹵化烷基及芳基之胺基酸以及N經取代之胺基酸， 例如N-甲基-丙胺酸。胺基酸或肽可經由胺基酸或肽之末端胺或末端羧酸連接至連接子/間隔子或細胞結合劑。胺基酸亦可經由側鏈反應性基團連接至連接子/間隔子或細胞結合劑，該側鏈反應性基團諸如但不限於半胱胺酸之硫醇基、離胺酸之ε胺或絲胺酸或蘇胺酸之側鏈羥基。
在實施例中，胺基酸由NH 2-C(R aa'R aaa)-C(=O)OH表示，其中R aa及R aa'各自獨立地為H、具有1至10個碳原子之視情況經取代之直鏈、分支鏈或環狀烷基、烯基或炔基、芳基、雜芳基或雜環基，或R及N末端氮原子可一起形成雜環 （例如如在脯胺酸中）。術語「 胺基酸殘基」係指當自胺移除一個氫原子及/或自胺基酸之羧基端移除羥基時之對應殘基，諸如-NH-C(R aa'R aa)- C(=O)O-。
如本文所用，胺基酸可為L或D異構體。除非另外規定，否則當提及胺基酸時，其可為L或D異構體或其混合物。在實施例中，除非另外規定，否則當肽由其胺基酸序列提及時，胺基酸中之每一者可為L或D異構體。除非另外指定，否則若肽中之胺基酸中之一者指定為D異構物，則其他胺基酸為L異構物。舉例而言，肽D-Ala-Ala意謂D-Ala-L-Ala。
胺基酸及肽可經阻斷基團保護。阻斷基團為保護胺基酸或肽之N端免與進行非所需反應之原子或化學部分且可在藥物-配位體結合物合成期間使用。其應在整個合成中保持連接至N端，且可在完成藥物結合物合成後藉由選擇性達成移除之化學或其他條件移除。適合於N端保護之阻斷基團在肽化學技術中已熟知。例示性阻斷基團包括但不限於甲酯、三級丁酯、9-茀基甲基胺基甲酸酯（Fmoc）及苄氧羰基（Cbz）。
術語「 可藉由蛋白酶裂解之肽」係指含有蛋白酶之裂解識別序列的肽。如本文所用，蛋白酶為可裂解肽鍵之酶。蛋白酶之裂解識別序列為在蛋白水解裂解期間由蛋白酶識別之特異性胺基酸序列。許多蛋白酶裂解位點為此項技術中已知的，且此等及其他裂解位點可包括於連接部分中。參見 例如Matayoshi 等人 Science 247: 954 (1990)；Dunn 等人 Meth. Enzymol. 241: 254 (1994)；Seidah 等人 Meth. Enzymol. 244: 175 (1994)；Thornberry, Meth. Enzymol. 244: 615 (1994)；Weber 等人 Meth. Enzymol. 244: 595 (1994)；Smith 等人 Meth. Enzymol. 244: 412 (1994)；Bouvier 等人 Meth. Enzymol. 248: 614 (1995)，Hardy 等人 ,AMYLOID PROTEIN PRECURSOR IN DEVELOPMENT, AGING, AND ALZHEIMER'S DISEASE, Masters 等人編, 第190-198頁(1994)。
肽序列基於其藉由蛋白酶裂解之能力來選擇，該蛋白酶之非限制性實例包括組織蛋白酶B、C、D、H、L及S及弗林蛋白酶。較佳地，肽序列能夠藉由適當經分離蛋白酶 活體外裂解，其可使用此項技術中已知之 活體外蛋白酶裂解分析進行測試。
在另一實施例中，肽序列係基於其藉由溶酶體蛋白酶裂解之能力來選擇。溶酶體蛋白酶為主要位於溶酶體中之蛋白酶，但亦可位於內體中。溶酶體蛋白酶之實例包括但不限於組織蛋白酶B、C、D、H、L及S及弗林蛋白酶。
在另一實施例中，肽序列之選擇係基於其藉由腫瘤相關蛋白酶裂解之能力，例如在癌細胞表面上或在腫瘤細胞附近細胞外發現之蛋白酶，此類蛋白酶之非限制性實例包括甲拌磷（thimet）寡肽酶（TOP）、CD10（腦啡肽酶）、基質金屬蛋白酶（諸如MMP2或MMP9）、II型跨膜絲胺酸蛋白酶（諸如肝絲酶（Hepsin）、睾蛋白（testisin）、TMPRSS4或間質蛋白酶/MT-SPl)、豆莢蛋白及以下參考文獻中所述之酶（Current Topics in Developmental Biology: Cell Surface Proteases,第54卷 Zucker S. 2003, Boston, MA）。肽藉由腫瘤相關蛋白酶裂解之能力可使用此項技術中已知之 活體外蛋白酶裂解分析來測試。
術語「 陽離子」係指帶正電荷之離子。陽離子可為單價 （例如Na +、K + ）、雙價 （例如Ca 2+、Mg 2+ 等）或多價 （例如Al 3+ 等）。在實施例中，陽離子為單價的。 式(I)化合物
在一些態樣中，本發明之特徵在於包含奧瑞他汀衍生物之化合物（例如細胞毒性劑）。此類化合物可展現所需細胞毒性特性且可由如本文所描述之結合物在連接子裂解之後產生。
在一態樣中，本文提供具有根據式(I)結構之化合物： D—Q （ I ）， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： D由以下結構式表示： ，其中 R 1 為-H或-OH； R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基； 各 R 3 及 R 4 獨立地為-H、或C 1-C 3烷基； n為1至6之整數；且 Q為-H或-CH 3。
在實施例中， R 1 為-H。
在實施例中， R 1 為-OH。
在實施例中， R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基。
在實施例中， R 2 為C 1-C 3烷基。在實施例中， R 2 為-CH 3。
在實施例中， R 2 為-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH或-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。在實施例中， R 2 為 -C(=O)OH。
在實施例中， R 2 為雜芳基（例如，C 3-C 8雜芳基）。在實施例中， R 2 為含N及/或含S雜芳基。在實施例中， R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-OH且 R 2 為-CH 3。
在實施例中，各 R 3 及 R 4 獨立地為-H或C 1-C 3烷基。
在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-H。在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為C 1-C 3烷基。在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-CH 3。
在實施例中， n為1至6之整數。在實施例中， n為1。在實施例中， n為2。在實施例中， n為3。在實施例中， n為4。在實施例中， n為5。在實施例中， n為6。在實施例中， n為1。
在實施例中， Q為-H。
在實施例中， Q為-CH 3。
在實施例中， D由以下結構中之一者表示： （D-I）、 （D-II）、 （D-III）或 （D-IV）。
在實施例中， D為（D-I）。
在實施例中， D為（D-II）。
在實施例中， D為（D-III）。
在實施例中， D為（D-IV）。
在實施例中，化合物具有以下結構中之一者，
D1； D2；
D3； D4；
D5； D6；
D7；或 D8；
或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為化合物D1，或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為化合物D2，或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為化合物D3，或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為化合物D4，或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為化合物D5，或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為化合物D6，或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為化合物D7，或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為化合物D8，或其醫藥學上可接受之鹽。 式（II）化合物
在一些態樣中，包含奧瑞他汀衍生物之化合物可包括肽連接子以形成有效負載：此類化合物可適用於製備包含如本文所描述之細胞結合劑的結合物。
在實施例中，此類化合物由根據如本文所描述之 式（ I ）之任何實施例的結構形成或包含該結構。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種 式（ II ）化合物， D—CH 2—NH—E—Z （ II ）， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： D由以下結構式表示： ，其中 R 1 為-H或-OH； R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基； 各 R 3 及 R 4 獨立地為-H、或C 1-C 3烷基； n為1至6之整數； E為包含2至10個胺基酸之肽；其中 E視情況經一或多個多元醇取代；且其中肽之N端共價連接至 Z； Z為-C(=O)-L-Y、 或 ；其中 m表示1至10之整數； L為-(C 1-C 10伸烷基)-*、-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-、-(OCH 2CH 2) j-、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*；其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y之位點； L 1 為-(C 1-C 10伸烷基)-； R 5 為-H或-CH 3；且 Y為親電子基團或親核性基團。
在實施例中， R 1 為-H。
在實施例中， R 1 為-OH。
在實施例中， R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基。
在實施例中， R 2 為C 1-C 3烷基。在實施例中， R 2 為-CH 3。
在實施例中， R 2 為-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH或-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。在實施例中， R 2 為 -C(=O)OH。
在實施例中， R 2 為雜芳基（例如，C 3-C 8雜芳基）。在實施例中， R 2 為含N及/或含S雜芳基。在實施例中， R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-OH且 R 2 為-CH 3。
在實施例中，各 R 3 及 R 4 獨立地為-H或C 1-C 3烷基。
在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-H。在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為C 1-C 3烷基。在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-CH 3。
在實施例中， n為1至6之整數。在實施例中， n為1。在實施例中， n為2。在實施例中， n為3。在實施例中， n為4。在實施例中， n為5。在實施例中， n為6。在實施例中， n為1。
在實施例中， E為2、3或4個胺基酸之肽。該肽中之各胺基酸為L胺基酸，或該肽中之至少一個胺基酸為D胺基酸。
在實施例中， E包含一或多個選自甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸及白胺酸之胺基酸，且其中該麩醯胺酸或麩胺酸視情況經多元醇取代。
在實施例中， E包含具有以下結構之胺基酸， ， 其中 R 6 為-H或C 1-C 6烷基。
在實施例中， E包含具有以下結構之胺基酸， 。
在實施例中， E係選自由以下組成之群：-Ala-Val-*、-Val-Ala-*、-Gly-Gly-*、-Val-Cit-*、-Cit-Val-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、-Leu-Cit-*、-Cit-Leu-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、 -Lys-Lys-*、-Ala-Lys-*、-Lys-Ala-*、-Val-Lys-*、-Lys-Val-*、-Tyr-Arg-*、-Arg-Tyr-*、-Arg-Arg-*、 -Ala-Ala-*、-Phe-Lys-*、-Lys-Phe-*、-Thr-Thr-*、-Thr-Met-*、-Met-Thr-*、-Met-Tyr-*、-Tyr-Met-*、 -Phe-Gln-*、-Gln-Phe-*、-Gly-Ser-*、-Leu-Gln-*、-Gln-Leu-*、-Ser-Ala-*、-Ser-Gly-*、-Val-Thr-*、 -Thr-Val-*、-Val-Gln-*、-Ser-Val-*、-Val-Ser-*、-Ala-Met-*、-Met-Ala-*、-Val-Arg-*、 -Arg-Val-*、-Phe-Ala-*、-Ala-Phe-*、-Cit-Val-*、-Gln-Val-*、-Phe-Arg-*、-Arg-Phe-*、-Ala-Ala-Ala- *、 -Gly-Gly-Gly- *、-Ala-Val-Ala- *、-Gly-Val-Gly- *、-Ala-Val-Gly- *、 -Gly-Phe-Lys-*、-Lys-Phe-Gly-*、-Leu-Ala-Leu-*、-Val-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Val-*、-Val-Ala-Val-*、 -Ala-Val-Ala-Gly- *、-Gly-Phe-Gly-Gly- *、-Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Ala-Val-Gly-Gly-*、-Ala-Ala-Ala-Ala- *、-Ala-Val-Ala-Ala- *、-Ala-Leu-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Leu-Ala-*、-Gly-Phe-Leu-Gly-*及 -Gly-Leu-Phe-Gly-*，其中*指示共價連接至 Z之肽之N端。
在實施例中， E係選自由以下組成之群：-L-Ala-L-Val-*、-L-Val-L-Ala-*、-L-Val-L-Lys-*、-L-Val-L-Arg-*、-L-Val-L-Cit-*、-L-Ala-L-Val-L-Glu-*、-L-Ala-L-Ala-L-Ala-*、-L-Ala-L-Val-L-Ala-*、-L-Ala-L-Ala-Gly-*、-L-Ala-L-Val-Gly-*、-Gly-Gly-L-Glu-*、-Gly-L-Phe-Gly-Gly-*、-Gly-L-Glu-Gly-Gly-*；其中*指示共價連接至 Z之肽之N端。
在實施例中， Z為-C(=O)-L-Y。
在實施例中， Z為 。在實施例中， m表示1至10之整數。在實施例中， m為1。在實施例中， m為2。在實施例中， m為3。在實施例中， m為4。在實施例中， m為5。在實施例中， m為6。在實施例中， m為7。在實施例中， m為8。在實施例中， m為9。在實施例中， m為10。
在實施例中， Z為 。在實施例中， m表示1至10之整數。在實施例中， m為1。在實施例中， m為2。在實施例中， m為3。在實施例中， m為4。在實施例中， m為5。在實施例中， m為6。在實施例中， m為7。在實施例中， m為8。在實施例中， m為9。在實施例中， m為10。
在實施例中， L為-(C 1-C 10伸烷基)-。
在實施例中， L為-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-或-(OCH 2CH 2) j-，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y之位點。
在實施例中， L為-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或 -CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y之位點。
在實施例中， L 1 為-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH 2-、-CH 2-、 -CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*或-CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*，其中*指示共價連接至 Y之位點。
在實施例中， Y為邁克爾受體基團、丁二醯亞胺、環氧化物或鹵素。
在實施例中， Y為 、 、 、 或 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為H或C 1-C 3烷基。
在實施例中， Z為 、 、 、 、 或 。
在實施例中， -E-NH-CH 2- 具有以下結構中之一者，其中*指示共價連接至 Z之肽之N端： 、 、 、 或 。
在實施例中， Z-E-NH-CH 2- 具有以下結構中之一者， 、 、 、 或 。
在實施例中， D由以下結構中之一者表示： （D-I）、 （D-II）、 （D-III）或 （D-IV）。
在實施例中， D為（D-I）。
在實施例中， D為（D-II）。
在實施例中， D為（D-III）。
在實施例中， D為（D-IV）。
在實施例中，化合物具有以下結構中之一者， （PL1）， （PL2）， （PL3）， （PL4）， （PL5）， （PL6）， （PL7）， （PL8）， （PL9），或 （PL10）； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為（PL1），或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為（PL2），或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為（PL3），或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為（PL4），或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為（PL5），或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為（PL6），或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為（PL7），或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為（PL8），或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為（PL9），或其醫藥學上可接受之鹽。
在實施例中，化合物為（PL10），或其醫藥學上可接受之鹽。 式（III）及式（IV）之化合物  式（III）化合物
在一些態樣中，本發明之特徵在於一種包含細胞結合劑及有效負載（例如包含奧瑞他汀衍生物及連接子之有效負載）的結合物（例如單藥物結合物）。在實施例中，包含奧瑞他汀衍生物之結合物之部分由根據如本文所描述之 式（ II ）之任何實施例的結構形成。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種 式（ III ）化合物， {D—CH 2—NH—E—Z'} p—C （ III ）， 其中： D由以下結構式表示： ，其中 R 1 為-H或-OH； R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基； R 3 及 R 4 獨立地為-H、或C 1-C 3烷基； n為1至6之整數； E為包含2至10個胺基酸之肽；其中 E視情況經一或多個多元醇取代；且其中肽之N端共價連接至 Z '； Z '為-C(=O)-L-Y'-、 或 ；其中 m表示1至10之整數且*指示共價連接至該 C之位點； L為-(C 1-C 10伸烷基)-*、-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-、-(OCH 2CH 2) j-、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*；其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點； L 1 為-(C 1-C 10伸烷基)-； R 5 為-H或-CH 3；且 C表示細胞結合劑； Y '為藉由親電子基團與存在於該細胞結合劑上之反應性親核性基團反應而形成的基團； p具有在1至18之間的值。
在實施例中， R 1 為-H。
在實施例中， R 1 為-OH。
在實施例中， R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基。
在實施例中， R 2 為C 1-C 3烷基。在實施例中， R 2 為-CH 3。
在實施例中， R 2 為-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH或-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。在實施例中， R 2 為 -C(=O)OH。
在實施例中， R 2 為雜芳基（例如，C 3-C 8雜芳基）。在實施例中， R 2 為含N及/或含S雜芳基。在實施例中， R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-OH且 R 2 為-CH 3。
在實施例中，各 R 3 及 R 4 獨立地為-H或C 1-C 3烷基。
在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-H。在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為C 1-C 3烷基。在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-CH 3。
在實施例中， n為1至6之整數。在實施例中， n為1。在實施例中， n為2。在實施例中， n為3。在實施例中， n為4。在實施例中， n為5。在實施例中， n為6。在實施例中， n為1。
在實施例中， E為2、3或4個胺基酸之肽。該肽中之各胺基酸為L胺基酸，或該肽中之至少一個胺基酸為D胺基酸。
在實施例中， E包含一或多個選自甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸及白胺酸之胺基酸，且其中該麩醯胺酸或麩胺酸視情況經多元醇取代。
在實施例中， E包含具有以下結構之胺基酸， ， 其中 R 6 為-H或C 1-C 6烷基。
在實施例中， E包含具有以下結構之胺基酸， 。
在實施例中， E係選自由以下組成之群：-Ala-Val-*、-Val-Ala-*、 -Gly-Gly-*、-Val-Cit-*、-Cit-Val-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、-Leu-Cit-*、-Cit-Leu-*、-Leu-Ala-*、 -Ala-Leu-*、-Lys-Lys-*、-Ala-Lys-*、-Lys-Ala-*、-Val-Lys-*、-Lys-Val-*、-Tyr-Arg-*、-Arg-Tyr-*、 -Arg-Arg-*、-Ala-Ala-*、-Phe-Lys-*、-Lys-Phe-*、-Thr-Thr-*、-Thr-Met-*、-Met-Thr-*、-Met-Tyr-*、 -Tyr-Met-*、-Phe-Gln-*、-Gln-Phe-*、-Gly-Ser-*、-Leu-Gln-*、-Gln-Leu-*、-Ser-Ala-*、-Ser-Gly-*、 -Val-Thr-*、-Thr-Val-*、-Val-Gln-*、-Ser-Val-*、-Val-Ser-*、-Ala-Met-*、-Met-Ala-*、-Val-Arg-*、 -Arg-Val-*、-Phe-Ala-*、-Ala-Phe-*、-Cit-Val-*、-Gln-Val-*、-Phe-Arg-*、-Arg-Phe-*、-Ala-Ala-Ala- *、 -Gly-Gly-Gly- *、-Ala-Val-Ala- *、-Gly-Val-Gly- *、-Ala-Val-Gly- *、-Gly-Phe-Lys-*、-Lys-Phe-Gly-*、 -Leu-Ala-Leu-*、-Val-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Val-*、-Val-Ala-Val-*、-Ala-Val-Ala-Gly- *、 -Gly-Phe-Gly-Gly- *、-Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Ala-Val-Gly-Gly-*、-Ala-Ala-Ala-Ala- *、-Ala-Val-Ala-Ala- *、-Ala-Leu-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Leu-Ala-*、-Gly-Phe-Leu-Gly-*及-Gly-Leu-Phe-Gly-*， 其中*指示共價連接至 Z '之肽之N端。
在實施例中， E係選自由以下組成之群：-L-Ala-L-Val-*、-L-Val-L-Ala-*、-L-Val-L-Lys-*、-L-Val-L-Arg-*、-L-Val-L-Cit-*、-L-Ala-L-Val-L-Glu-*、-L-Ala-L-Ala-L-Ala-*、-L-Ala-L-Val-L-Ala-*、-L-Ala-L-Ala-Gly-*、-L-Ala-L-Val-Gly-*、-Gly-Gly-L-Glu-*、-Gly-L-Phe-Gly-Gly-*、-Gly-L-Glu-Gly-Gly-*；其中*指示共價連接至 Z '之肽之N端。
在實施例中， Z '為-C(=O)-L-Y'-。
在實施例中， Z '為 ，且*指示共價連接至該 C之位點。在實施例中， m表示1至10之整數。在實施例中， m為1。在實施例中，m為2。在實施例中， m為3。在實施例中， m為4。在實施例中， m為5。在實施例中， m為6。在實施例中， m為7。在實施例中， m為8。在實施例中， m為9。在實施例中， m為10。
在實施例中， Z '為 ，且*指示共價連接至該 C之位點。在實施例中， m表示1至10之整數。在實施例中， m為1。在實施例中， m為2。在實施例中， m為3。在實施例中， m為4。在實施例中， m為5。在實施例中， m為6。在實施例中， m為7。在實施例中， m為8。在實施例中， m為9。在實施例中， m為10。
在實施例中， L-(C 1-C 10伸烷基)-。
在實施例中， L為-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-或-(OCH 2CH 2) j-，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點。
在實施例中， L為-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或 -CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點。
在實施例中， L 1 為-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH 2-、-CH 2-、 -CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*或-CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*，其中*指示共價連接至 Y '之位點。
在實施例中， Y '為藉由親電子基團與存在於該細胞結合劑上之反應性親核性基團反應而形成的基團。
在實施例中， Y '由以下各者形成： 、 、 、 、 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為-H或C 1-C 3烷基。
在實施例中， Y '為 、 、 、 或 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為-H或C 1-C 3烷基且*指示共價連接至該 C之位點。
在實施例中， Z '由以下各者形成： 、 、 、 、 或 。
在實施例中， Z '為： 、 、 、 、 或 ； 其中*指示共價連接至 C之位點。
在實施例中， -E-NH-CH 2- 具有以下結構中之一者，其中*指示共價連接至 Z '之肽的N端： 、 、 、 或 。
在實施例中，- Z ' -E-NH-CH 2 -由以下結構中之一者形成： 、 、 、 或 。
在實施例中， Z ' -E-NH-CH 2 -為以下結構中之一者，其中*指示與 C之連接點： 、 、 、 或 。
在實施例中， D由以下結構中之一者表示： （D-I）、 （D-II）、 （D-III）或 （D-IV）。
在實施例中， D為（D-I）。
在實施例中， D為（D-II）。
在實施例中， D為（D-III）。
在實施例中， D為（D-IV）。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—由以下結構中之一者形成： （PL1）， （PL2）， （PL3）， （PL4）， （PL5）， （PL6）， （PL7）， （PL8）， （PL9），或 （PL10）。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL1）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL2）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL3）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL4）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL5）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL6）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL7）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL8）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL9）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL10）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p—C為以下結構中之一者，其中 C為單株抗體且 p為藥物與抗體比（DAR），且 p為介於約2至8、4至8或7至8範圍內之平均數， （PL1'）， （PL2'）， （PL3'）， （PL4'）， （PL5'）， （PL6'）， （PL7'）， （PL8'）， （PL9'），或 （PL10'）。
在實施例中， p之值為1至18。
在實施例中， p為在約3至8 (例如，3.2至8.0)或4至8之範圍內的平均數。
在實施例中， p為平均數約4。
在實施例中， p為4。
在實施例中， p為平均數約7.5。
在實施例中， p為平均數約8。
在實施例中， p為8。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p—C為( PL1 ')，其中 C為單株抗體且 p為藥物與抗體比（DAR），且 p為介於約2至8、4至8或7至8（例如3.2至8.0）範圍內之平均數。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p—C為( PL2 ')，其中 C為單株抗體且 p為藥物與抗體比（DAR），且 p為介於約2至8、4至8或7至8（例如3.2至8.0）範圍內之平均數。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p—C為( PL3 ')，其中 C為單株抗體且 p為藥物與抗體比（DAR），且 p為介於約2至8、4至8或7至8（例如3.2至8.0）範圍內之平均數。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p—C為( PL4 ')，其中 C為單株抗體且 p為藥物與抗體比（DAR），且 p為介於約2至8、4至8或7至8（例如3.2至8.0）範圍內之平均數。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p—C為( PL5 ')，其中 C為單株抗體且 p為藥物與抗體比（DAR），且 p為介於約2至8、4至8或7至8（例如3.2至8.0）範圍內之平均數。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p—C為( PL6 ')，其中 C為單株抗體且 p為藥物與抗體比（DAR），且 p為介於約2至8、4至8或7至8（例如3.2至8.0）範圍內之平均數。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p—C為( PL7 ')，其中 C為單株抗體且 p為藥物與抗體比（DAR），且 p為介於約2至8、4至8或7至8（例如3.2至8.0）範圍內之平均數。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p—C為( PL8 ')，其中 C為單株抗體且 p為藥物與抗體比（DAR），且 p為介於約2至8、4至8或7至8（例如3.2至8.0）範圍內之平均數。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p—C為( PL9 ')，其中 C為單株抗體且 p為藥物與抗體比（DAR），且 p為介於約2至8、4至8或7至8（例如3.2至8.0）範圍內之平均數。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p—C為( PL10 ')，其中 C為單株抗體且 p為藥物與抗體比（DAR），且 p為介於約2至8、4至8或7至8（例如3.2至8.0）範圍內之平均數。 式（I）化合物
在一些態樣中，本發明之特徵在於一種包含細胞結合劑、有效負載（例如包含奧瑞他汀衍生物及連接子之有效負載）及另一有效負載（例如包含不同式之化合物的另一有效負載）的結合物（例如雙藥物結合物）。在實施例中，包含奧瑞他汀衍生物之結合物之部分由如本文所描述之 式（ II ）形成。
另外，考慮癌細胞種類較多，在ADC中併入兩個類別之具有不同作用機制（MOA）的有效負載可增強功效且擴展藥物之治療窗。舉例而言，在異種移植小鼠模型中，抗Her2雙藥物ADC比對應的單藥物ADC及兩種單藥物變異體之共投與更有效[參見例如Yamazaki, C.M. & Tsuchikama, K. 等人 ., Antibody-drug conjugates with dual payloads for combating breast tumor heterogeneity and drug resistance. Nat Commun 12,3528 (2021). https://doi.org/10.1038/s41467-021-23793-7]。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種 式 （ IV ）化合物， {D—CH 2—NH—E—Z'} p '—C—{W} t （ IV ）， 其中： D由以下結構式表示： ，其中 R 1 為-H或-OH； R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基； R 3 及 R 4 獨立地為-H、或C 1-C 3烷基； n為1至6之整數； E為包含2至10個胺基酸之肽；其中 E視情況經一或多個多元醇取代；且其中肽之N端共價連接至 Z '； Z '為-C(=O)-L-Y'-、 或 ；其中 m表示1至10之整數且*指示共價連接至該 C之位點； L為-(C 1-C 10伸烷基)-*、-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-、-(OCH 2CH 2) j-、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*；其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點； L 1 為-(C 1-C 10伸烷基)-； R 5 為-H或-CH 3；且 C表示細胞結合劑； Y '為藉由親電子基團與存在於該細胞結合劑上之反應性親核性基團反應而形成的基團； W為藉由化合物 W '與存在於 C上之反應性親核性基團反應而形成的基團；其中 W '為與連接子連接以使得 W '可與 C結合之細胞殺滅劑； p '及 t具有在1至10之間的值；其中 p '及 t可為相同或不同數且 p ': t為約1:1、約1:2或約2:1，且其中 p ': t為1:1或1:2、或2:1。
在實施例中， R 1 為-H。
在實施例中， R 1 為-OH。
在實施例中， R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基。
在實施例中， R 2 為C 1-C 3烷基。在實施例中， R 2 為-CH 3。
在實施例中， R 2 為-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH或-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。在實施例中， R 2 為 -C(=O)OH。
在實施例中， R 2 為雜芳基（例如，C 3-C 8雜芳基）。在實施例中， R 2 為含N及/或含S雜芳基。在實施例中， R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
在實施例中， R 1 為-H且 R 2 為 。
在實施例中， R 1 為-OH且 R 2 為-CH 3。
在實施例中，各 R 3 及 R 4 獨立地為-H或C 1-C 3烷基。
在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-H。在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為C 1-C 3烷基。在實施例中， R 3 及 R 4 兩者均為-CH 3。
在實施例中， n為1至6之整數。在實施例中， n為1。在實施例中， n為2。在實施例中， n為3。在實施例中， n為4。在實施例中， n為5。在實施例中， n為6。在實施例中， n為1。
在實施例中， E為2、3或4個胺基酸之肽。該肽中之各胺基酸為L胺基酸，或該肽中之至少一個胺基酸為D胺基酸。
在實施例中， E包含一或多個選自甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸及白胺酸之胺基酸，且其中該麩醯胺酸或麩胺酸視情況經多元醇取代。
在實施例中， E包含具有以下結構之胺基酸， ， 其中 R 6 為-H或C 1-C 6烷基。
在實施例中， E包含具有以下結構之胺基酸， 。
在實施例中， E係選自由以下組成之群：-Ala-Val-*、-Val-Ala-*、 -Gly-Gly-*、-Val-Cit-*、-Cit-Val-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、-Leu-Cit-*、-Cit-Leu-*、-Leu-Ala-*、 -Ala-Leu-*、-Lys-Lys-*、-Ala-Lys-*、-Lys-Ala-*、-Val-Lys-*、-Lys-Val-*、-Tyr-Arg-*、-Arg-Tyr-*、 -Arg-Arg-*、-Ala-Ala-*、-Phe-Lys-*、-Lys-Phe-*、-Thr-Thr-*、-Thr-Met-*、-Met-Thr-*、-Met-Tyr-*、 -Tyr-Met-*、-Phe-Gln-*、-Gln-Phe-*、-Gly-Ser-*、-Leu-Gln-*、-Gln-Leu-*、-Ser-Ala-*、-Ser-Gly-*、 -Val-Thr-*、-Thr-Val-*、-Val-Gln-*、-Ser-Val-*、-Val-Ser-*、-Ala-Met-*、-Met-Ala-*、-Val-Arg-*、 -Arg-Val-*、-Phe-Ala-*、-Ala-Phe-*、-Cit-Val-*、-Gln-Val-*、-Phe-Arg-*、-Arg-Phe-*、-Ala-Ala-Ala- *、 -Gly-Gly-Gly- *、-Ala-Val-Ala- *、-Gly-Val-Gly- *、-Ala-Val-Gly- *、-Gly-Phe-Lys-*、-Lys-Phe-Gly-*、 -Leu-Ala-Leu-*、-Val-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Val-*、-Val-Ala-Val-*、-Ala-Val-Ala-Gly- *、 -Gly-Phe-Gly-Gly- *、-Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Ala-Val-Gly-Gly-*、-Ala-Ala-Ala-Ala- *、-Ala-Val-Ala-Ala- *、-Ala-Leu-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Leu-Ala-*、-Gly-Phe-Leu-Gly-*及-Gly-Leu-Phe-Gly-*， 其中*指示共價連接至 Z '之肽之N端。
在實施例中， E係選自由以下組成之群：-L-Ala-L-Val-*、-L-Val-L-Ala-*、-L-Val-L-Lys-*、-L-Val-L-Arg-*、-L-Val-L-Cit-*、-L-Ala-L-Val-L-Glu-*、-L-Ala-L-Ala-L-Ala-*、-L-Ala-L-Val-L-Ala-*、-L-Ala-L-Ala-Gly-*、-L-Ala-L-Val-Gly-*、-Gly-Gly-L-Glu-*、-Gly-L-Phe-Gly-Gly-*、-Gly-L-Glu-Gly-Gly-*；其中*指示共價連接至 Z'之肽之N端。
在實施例中， Z '為-C(=O)-L-Y'-。
在實施例中， Z '為 ，且*指示共價連接至該 C之位點。在實施例中， m表示1至10之整數。在實施例中， m為1。在實施例中， m為2。在實施例中， m為3。在實施例中， m為4。在實施例中， m為5。在實施例中， m為6。在實施例中， m為7。在實施例中， m為8。在實施例中， m為9。在實施例中， m為10。
在實施例中， Z '為 ，且*指示共價連接至該 C之位點。在實施例中， m表示1至10之整數。在實施例中， m為1。在實施例中， m為2。在實施例中， m為3。在實施例中， m為4。在實施例中， m為5。在實施例中， m為6。在實施例中， m為7。在實施例中， m為8。在實施例中， m為9。在實施例中， m為10。
在實施例中， L為-(C 1-C 10伸烷基)-。
在實施例中， L為-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-或-(OCH 2CH 2) j-，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點。
在實施例中， L為-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或 -CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點。
在實施例中， L 1 為-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH 2-、-CH 2-、 -CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*或-CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*，其中*指示共價連接至 Y '之位點。
在實施例中， Y '為藉由親電子基團與存在於該細胞結合劑上之反應性親核性基團反應而形成的基團。
在實施例中， Y '由以下各者形成： 、 、 、 、 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為-H或C 1-C 3烷基。
在實施例中， Y '為 、 、 、 或 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為-H或C 1-C 3烷基且*指示共價連接至該 C之位點。
在實施例中， Z '由以下各者形成： 、 、 、 、 或 。
在實施例中， Z '為： 、 、 、 、 或 ； 其中*指示共價連接至 C之位點。
在實施例中， -E-NH-CH 2- 具有以下結構中之一者，其中*指示共價連接至 Z '之肽的N端： 、 、 、 或 。
在實施例中，- Z ' -E-NH-CH 2 -由以下結構中之一者形成： 、 、 、 或 。
在實施例中，- Z ' -E-NH-CH 2 -為以下結構中之一者，其中*指示與 C之連接點： 、 、 、 或 。
在實施例中， D由以下結構中之一者表示： （D-I）、 （D-II）、 （D-III）或 （D-IV）。
在實施例中， D為（D-I）。
在實施例中， D為（D-II）。
在實施例中， D為（D-III）。
在實施例中， D為（D-IV）。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—由以下結構中之一者形成： （PL1）， （PL2）， （PL3）， （PL4）， （PL5）， （PL6）， （PL7）， （PL8）， （PL9），或 （PL10）。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL1）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL2）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL3）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL4）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL5）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL6）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL7）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL8）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL9）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL10）或其醫藥學上可接受之鹽形成。
在一些實施例中， W係由化合物 W '形成。 在一些實施例中， W係藉由將化合物 W '共價連接至 C而形成。
在實施例中， W '為可共價連接至 C的化合物。在實施例中， W '為國際專利公開案第WO2021/173773 A1號中所述之化合物（例如，可共價連接至 C之化合物）。在實施例中， W '為國際專利公開案第WO2021/173773 A1號中所述之化合物美迪替康。在實施例中， W '為美國專利公開案第US2021/0283125 A1號中所述之化合物（例如，可共價連接至 C之化合物）。
在實施例中， W '為根據式（ A）之化合物 D w—L w—Q w'—CH 2—NH—E w—Z w （ A ）， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： D w 由以下結構式表示： ，其中 R 1w 為-H、-OH或-OMe； R 2w 為C 1-C 5烷基； R 3w 及 R 4w 獨立地為-H、C 1-C 3烷基或C 3-C 6環烷基； nw為1至6之整數； L w 不存在、為-(C 1-C 5伸烷基)-、-CH 2OCH 2CH 2-或-OCH 2CH 2OCH 2CH 2-； Q w '為-O-或-S-； E w 為包含2至10個胺基酸之肽；其中 E w 視情況經一或多個多元醇取代；且其中肽之N端共價連接至 Z w ； Z w 為-C(=O)-L 1w-Y、 或 ；其中 mw表示1至10之整數； L 1w 為-(C 1-C 10伸烷基)-*、-CH 2(OCH 2CH 2) jw-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jw-、-(OCH 2CH 2) jw-、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jwN(R 5w)C(=O)-L 2w-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jwN(R 5w)C(=O)-L 2w-*；其中 jw表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y w 之位點； L 2w 為-(C 1-C 10伸烷基)-； R 5w 為-H或-CH 3；且 Y w 為親電子基團或親核性基團。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL1）形成且W係由（PL2）形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL3）形成且W係由（PL4）形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL5）形成且 W係由（PL6）形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL7 ）形成且W係由（PL8）形成。
在實施例中，D—CH 2—NH—E—Z'—係由（PL9）形成且W係由（PL10）形成。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p '—C—{W} t為以下結構中之一者，其中 C為單株抗體， p '及 t為藥物與抗體比（DAR），且 p ': t為1:1或約1:1，且 p '及 t為分別在約1至7範圍內之平均數，或為平均數約2、約3、約4、約5或約6： （PL1''）， 或 （PL2''）。
在實施例中， p '及 t兩者均為4，或4之平均數，或約4。
在實施例中， p ': t為約1:1、約1:2或約2:1。
在實施例中， p ': t為1:1、1:2或2:1。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p '—C—{W} t為（ PL1 ''），其中 C為單株抗體， p '及 t為藥物與抗體比（DAR），且 p ': t為1:1 （或約1:1），且 p '及 t為介於約1至7範圍內之平均數（例如，平均數約2、約3、約4、約5或約6）。
在實施例中，{D—CH 2—NH—E—Z'} p '—C—{W} t為（ PL2 ''），其中 C為單株抗體， p '及 t為藥物與抗體比（DAR），且 p ': t為1:1 （或約1:1），且 p '及 t為介於約1至7範圍內之平均數（例如，平均數約2、約3、約4、約5或約6）。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種製備包含細胞結合劑及藥物的 式（ III ）之結合物的方法，且該方法包含使細胞結合劑與 式（ II ）化合物接觸，使得在該細胞結合劑與該 式（ II ）化合物之間形成共價鍵。
在又一態樣中，本發明之特徵在於一種製備包含細胞結合劑及兩種不同藥物的 式（ IV ）之雙藥物結合物的方法，且該方法包含使細胞結合劑與 式（ II ）化合物及另一不同式化合物接觸，使得在該細胞結合劑與該 式（ II ）化合物及另一與 式（ II ）不同的式化合物之間形成共價鍵。
在又一態樣中，本發明之特徵在於一種結合物，其包含細胞結合劑及藥物。在實施例中，結合物根據本文所描述之任何方法來製備。
在實施例中，結合物包含為抗體或其抗原結合片段之細胞結合劑。
在實施例中，結合物包含為單株抗體或其抗原結合片段之細胞結合劑。
在實施例中，細胞結合劑為抗體或其抗原結合片段； p為藥物與抗體比（DAR）且具有在1至18之間的值。在實施例中， p為在約2至10、4至8或7至8（例如，3.2至8.0）範圍內的平均數。
在實施例中，細胞結合劑為單株抗體或其抗原結合片段； p為藥物與抗體比（DAR）且具有在1至18之間的值。在實施例中， p為約2至10、4至8或7至8（例如，3.2至8.0）範圍內的平均數。
在實施例中，細胞結合劑為抗體或其抗原結合片段； p '及 t為藥物與抗體比（DAR）且具有在1至10之間的值。在實施例中， p '為在約2至6之範圍內的平均數。在實施例中， t為在約2至6之範圍內的平均數。在實施例中， p ': t為約1:1。在實施例中， p ': t為約1:2。在實施例中， p ': t為約2:1。在實施例中， p ': t為1:1。在實施例中， p ': t為1:2。在實施例中， p ': t為2:1。
在實施例中，細胞結合劑為單株抗體或其抗原結合片段； p '及 t為藥物與抗體比（DAR）且具有在1至10之間的值。在實施例中， p '為在約2至6之範圍內的平均數。在實施例中， t為在約2至6之範圍內的平均數。在實施例中， p ': t為約1:1。在實施例中， p ': t為約1:2。在實施例中， p ': t為約2:1。在實施例中， p ': t為1:1。在實施例中， p ': t為1:2。在實施例中， p ': t為2:1。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種醫藥組合物，其包含本文所描述之任何結合物。
在又一態樣中，本發明之特徵在於一種治療細胞增殖性疾病或病症或抑制異常細胞生長的方法，其中該方法包含投與本文所描述之任何結合物或包含本文所描述之任何結合物的醫藥組合物。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種醫藥組合物，其包含如本文所描述的任何 式（ III ）化合物。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種治療細胞增殖性疾病或病症或抑制異常細胞生長的方法，該方法包含投與如本文所描述的任何 式（ III ）化合物或包含如本文所描述的任何 式（ III ）化合物之醫藥組合物。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種醫藥組合物，其包含如本文所描述之任何 式（ IV ）化合物。
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種治療細胞增殖性疾病或病症或抑制異常細胞生長之方法，該方法包含投與如本文所描述的任何 式（ IV ）化合物或包含如本文所描述的任何 式（ IV ）化合物之醫藥組合物。
在實施例中，該方法用於治療癌症。
在實施例中，癌症為腺癌、腦癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、絨毛膜癌、CNS腫瘤、大腸或大腸直腸癌、瀰漫型內因性腦橋神經膠質瘤（DIPG）、子宮內膜癌、食道癌、尤文氏肉瘤、輸卵管癌、膽囊癌、胃癌、膠質母細胞瘤、頭頸癌、血液癌、霍奇金氏淋巴瘤、腎癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、梅克爾細胞癌、間皮瘤、多發性骨髓瘤、骨髓發育不良症候群（MDS）、神經母細胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、骨肉瘤、胰臟癌、腹膜癌、前列腺癌、卵巢癌、腎癌、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、皮膚癌、小腸癌、鱗狀細胞癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌或威爾姆氏腫瘤。
在實施例中，癌症為乳癌。 下標「p」、「p'」」及「t」
本文所描述之結合物[例如，根據 式 （ III ）或 式 （ IV ）之任何化合物]可包含共價連接奧瑞他汀衍生物（例如，如本文所描述之根據 式 （ II ）之任何化合物，諸如由如本文所描述之根據 式 （ I ）之任何化合物形成的彼等化合物）。
在實施例中，下標 p（或 P'）表示細胞結合劑上之奧瑞他汀有效負載部分[例如，如由根據 式 （ II ）形成之化合物]之數目且具有1至18、1至12、1至10或1至8之值。個別奧瑞他汀結合物亦可稱作奧瑞他汀結合化合物。在本文中之實施例中，可存在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18個與個別奧瑞他汀結合物之細胞結合劑結合的奧瑞他汀有效負載部分。
在實施例中，下標 t表示其他有效負載部分（例如 W有效負載部分）之數目。在本文中之實施例中，可存在1至10個（例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10）個結合個別奧瑞他汀結合物之細胞結合劑的 W有效負載部分。
在實施例中，除與各細胞結合劑（亦即，奧瑞他汀結合物組合物）結合之奧瑞他汀有效負載部分之數目（及/或 W有效負載部分之數目）以外，個別奧瑞他汀結合物群在實質上一致。在實施例中， p及/或 p '表示結合至奧瑞他汀結合物組合物之細胞結合劑的奧瑞他汀有效負載部分之平均數目。在實施例之群組中， p（或 p '）為在1至約18、1至約10、1至約8或1至約7、2至約6、3至約5或6至約8之範圍內的平均數。在實施例中， p（或 p '）為介於約2至10、2至8、4至8或7至8（例如3.2至8.0）範圍內的平均數。在實施例中， p（或 p '）為約2。在實施例中， p（或 p '）為約4。在實施例中， p（或 p '）為約6。在實施例中， p（或 p '）為約8。在實施例中， p（或 p '）為約10。在實施例中， p（或 p '）為約12。在實施例中， p（或 p '）為2。在實施例中， p（或 p '）為4。在實施例中， p（或 p '）為8。在實施例中， p（或 p '）具有3至4之值。在實施例中， p（或 p '）具有4至5之值。在實施例中， p（或 p '）具有5至6之值。在實施例中， p（或 p '）具有6至7之值。在實施例中， p（或 p '）具有7至8之值。在實施例中， p（或 p '）具有7.4至8之值。在實施例中， p（或 p '）值係指平均藥物負載以及組合物中之主要ADC之藥物負載。
在實施例中，除與各細胞結合劑（亦即，奧瑞他汀結合物組合物）結合之 W有效負載部分之數目（及/或奧瑞他汀有效負載部分之數目）以外，個別奧瑞他汀結合物群在實質上一致。在實施例中， t表示結合至奧瑞他汀結合物組合物之細胞結合劑的 W有效負載部分之平均數目。在實施例之群組中， t為在1至約10、1至約8或1至約7、2至約6、3至約5或6至約8之範圍內的平均數。在實施例中， t為在約1至10或1至7之範圍內的平均數。在實施例中， t為約2。在實施例中， t為約3。在實施例中， t為約4。在實施例中， t為約5。在實施例中， t為約6。在實施例中， t為2。在實施例中， t為3。在實施例中， t為4。在實施例中， t為5。在實施例中， t為6。在實施例中， t為4。在實施例中， t值係指平均藥物負載以及組合物中之主要ADC之藥物負載。
在實施例中, p '及 t獨立地具有在1至10之間或在1至7之間的值（例如約2、3、4、5、6或7）。在實施例中，值為平均數。在實施例中， p '與 t相同。在實施例中， p '與 t不同。在實施例中 p ': t為約1:1、約1:2或約2:1。在實施例中， p ': t為約1:1。在實施例中， p '及 t均為約4。
在實施例中，結合[（例如，如在如本文所描述之根據 式（ III ）之任何化合物中發現]將經由還原之鏈間二硫鍵進行且可為約1至18、1至12、1至10、1至8、2至8、4至8或7至8個與細胞結合劑結合的奧瑞他汀有效負載化合物（例如，本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成)。
在實施例中，結合（例如，如在如本文所描述之根據 式（ IV ）之任何化合物中發現）將經由還原之鏈間二硫鍵進行且可為約1至10或1至7個奧瑞他汀有效負載化合物[例如，本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成)]，以及約1至10或1至7個與細胞結合劑結合的 W '有效負載化合物。
在實施例中，結合[例如，如在如本文所描述之根據 式（ III ）之任何化合物中發現]將經由引入之半胱胺酸殘基以及還原之鏈間二硫鍵進行且可存在約1至18、1至12、1至10、1至8、2至8、4至8或7至8個與細胞結合劑結合的奧瑞他汀有效負載化合物[例如，本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成]。
在實施例中，結合[例如，如在如本文所描述之根據 式（ IV ）之任何化合物中發現]將經由引入之半胱胺酸殘基以及還原之鏈間二硫鍵進行且可存在約1至10或1至7個奧瑞他汀有效負載化合物[例如，本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成)]，以及約1至10或1至7個與細胞結合劑結合的 W '有效負載化合物。
在實施例中，結合[例如，如在如本文所描述之根據 式（ III ）之任何化合物中發現]將經由引入之半胱胺酸殘基進行且可存在約1至18、1至12、1至10、1至8、2至8、4至8或7至8個與細胞結合劑結合的奧瑞他汀有效負載化合物[例如，本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成]。
在實施例中，結合[例如，如在如本文所描述之根據 式（ IV ）之任何化合物中發現]將經由引入之半胱胺酸殘基進行且可存在約1至10或1至7個奧瑞他汀有效負載化合物[例如，本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成)]，以及約1至10或1至7個與細胞結合劑結合的 W '有效負載化合物。
在實施例中，結合[例如，如在如本文所描述之根據 式（ III ）之任何化合物中發現]將經由離胺酸殘基進行且可存在約1至18、1至12、1至10、1至8、2至8、4至8或7至8個與細胞結合劑結合的奧瑞他汀有效負載化合物[例如，本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成]。
在實施例中，結合[例如，如在如本文所描述之根據 式（ IV ）之任何化合物中發現]將經由離胺酸殘基進行且可存在約1至10或1至7個奧瑞他汀有效負載化合物[例如，本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成)]，以及約1至10或1至7個與細胞結合劑結合的 W '有效負載化合物。 用於共價連接之細胞結合劑上之反應性基團
在實施例中，細胞結合劑結合至 式（ II ）化合物中之肽可釋放連接子以形成結合物，諸如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之彼等結合物。如上文所提及， 式（ II ）中之又其他連接組分可存在於本文所描述之結合物中以達至提供奧瑞他汀化合物與細胞結合劑之間的額外空間的目的。在實施例中，細胞結合劑經由細胞結合劑之雜原子結合至 式（ II ）中之連接單元。
可存在於用於該鍵結之細胞結合劑上之雜原子包括硫（在一個實施例中，來自靶向靶向配位體之硫醇基）、氧（在一個實施例中，來自靶向配位體之羧基或羥基）及視情況經取代之氮(在一個實施例中，來自靶向配位體之一級或二級胺官能基，或在另一實施例中，來自視情況經取代之醯胺氮)。彼等雜原子可以細胞結合劑之天然狀態存在於靶向配位體上，例如在天然存在之抗體中，或可經由化學修飾或生物工程改造引入至靶向配位體中。
在一個實施例中，細胞結合劑具有硫醇官能基，使得細胞結合劑經由硫醇官能基之硫原子結合至奧瑞他汀有效負載化合物[例如，本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成]。
在另一實施例中，細胞結合劑具有一或多個能夠與奧瑞他汀有效負載化合物[例如，本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成]之活化酯（此類酯包括但不限於N-羥基丁二醯亞胺、五氟苯基及對硝苯基酯）反應之離胺酸殘基，且因此提供由細胞結合劑之氮原子及 式（ II ）化合物之C=O基團組成的醯胺鍵。
在另一態樣中，細胞結合劑具有一或多個能夠化學修飾以引入一或多個硫醇基之離胺酸殘基。在彼等實施例中，細胞結合劑經由硫醇官能基之硫原子共價連接至奧瑞他汀有效負載化合物（例如，本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成）。可用於以彼方式修飾離胺酸之試劑包括但不限於S-乙醯基硫基乙酸N-丁二醯亞胺酯（SATA）及2-亞胺基硫雜環戊烷鹽酸鹽（妥特氏試劑（Traut's Reagent））。
在另一實施例中，細胞結合劑具有一或多個能夠進行修飾以提供一或多個硫醇官能基之碳水化合物基團。奧瑞他汀結合物中之經化學修飾之細胞結合劑經由硫醇官能基之硫原子結合至奧瑞他汀有效負載化合物[例如，本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成]。
在又另一實施例中，細胞結合劑具有一或多個可經氧化以提供醛（-CHO）官能基之碳水化合物基團[參見例如Laguzza等人, 1989, J. Med. Chem.32(3):548-55]。在此等實施例中，對應醛與奧瑞他汀有效負載化合物[例如，在本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物中或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成]上之反應位點相互作用以在奧瑞他汀有效負載化合物[例如，在本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物中或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成]與細胞結合劑之間形成鍵。奧瑞他汀有效負載化合物[例如，在本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物中或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成]上之能夠與靶向配位體上之反應性含羰基官能基相互作用的反應性位點包括但不限於肼及羥胺。
在一些態樣中，細胞結合劑能夠藉由與奧瑞他汀有效負載化合物[例如，在根據 式（ II ）之任何化合物中]上之反應性官能基 Y相互作用以在 式（ III ）或 式（ IV ）中之 Y '與對應於靶向配位體之細胞結合劑之間形成共價鍵來形成鍵。具有與靶向配位體相互作用之能力的官能基 Y將取決於細胞結合劑之性質。在實施例中，反應性基團為在連接以形成細胞結合劑之前存在於奧瑞他汀有效負載化合物上的順丁烯二醯亞胺。細胞結合劑與奧瑞他汀有效負載化合物之共價連接經由細胞結合劑之與有效負載化合物[例如，在本文所描述之根據 式（ II ）之任何化合物中或由如本文所描述之 式（ I ）化合物形成]之順丁烯二醯亞胺官能基 Y相互作用以形成經硫基取代之丁二醯亞胺的硫醇官能基來實現。硫醇官能基可以細胞結合劑之天然狀態存在於細胞結合劑上，例如在天然存在之殘基中，或可經由化學修飾或藉由生物工程改造引入至細胞結合劑中。
在另一實施例中，細胞結合劑為抗體且硫醇基係藉由還原抗體之鏈間二硫鍵產生。因此，在實施例中，奧瑞他汀有效負載化合物與來自經還原鏈間二硫鍵的半胱胺酸殘基結合。
在另一實施例中，細胞結合劑為抗體，且硫醇官能基係以化學方式引入至抗體中，例如藉由引入半胱胺酸殘基。因此，在實施例中，奧瑞他汀有效負載化合物經由細胞結合劑之引入之半胱胺酸殘基結合至細胞結合劑。
對於生物結合物已觀察到藥物結合位點可影響多個參數，包括結合容易性、藥物-連接子穩定性、對所得生物結合物之生物物理學特性的影響及活體外細胞毒性。關於藥物-連接子穩定性，藥物-連接子部分與細胞結合劑之結合位點可影響所結合藥物-連接子部分在一些情況下經受消除反應以引起游離藥物過早釋放的能力。靶向配位體上之結合位點包括例如經還原鏈間二硫鍵以及在工程改造位點處之所選半胱胺酸殘基。在實施例中，與使用來自經還原二硫鍵之硫醇殘基的結合方法相比，用以形成如本文所描述之奧瑞他汀結合物的結合方法使用不易發生消除反應的經基因工程改造之位點處（例如根據如Kabat中所列之EU索引的位置239）的硫醇殘基。在其他實施例中，用以形成如本文所描述之奧瑞他汀結合物的結合方法使用更易發生消除反應（例如，由產鏈間二硫鍵還原生）之位點處的硫醇殘基。 細胞結合劑（C）
在本發明之實施例中，存在細胞結合劑。細胞結合劑用以將奧瑞他汀或含有奧瑞他汀之藥物組分靶向及呈遞至特定目標細胞群，藉此細胞結合劑由於呈遞其靶向組分或分子而相互作用且引起游離藥物在目標細胞內（亦即，胞內）或在目標細胞附近那（亦即，胞外）之後續釋放。
在實施例中，細胞結合劑可為與目標細胞上之部分（諸如細胞表面受體）結合之配位體。在實施例中，配位體可為結合至生長因子受體之生長因子或其片段。在實施例中，配位體可為結合至細胞介素受體之細胞介素或其片段。在實施例中，生長因子受體或細胞介素受體為細胞表面受體。
因此，奧瑞他汀結合物[例如，如本文所描述之根據 式（ III ）或 式（ IV ）之化合物]之治療用途可藉由細胞結合劑之適當選擇來跟蹤。
細胞結合劑包括但不限於蛋白質、多肽及肽。適合之細胞結合劑包括例如抗體（例如全長抗體及其抗原結合片段，包括多株抗體及單株抗體）、干擾素、淋巴介質、激素、生長因子、群落刺激因子、維生素（例如葉酸）、營養轉運分子（諸如但不限於運鐵蛋白）或任何其他細胞結合分子或物質。在實施例中，細胞結合劑為抗體或非抗體蛋白質靶向劑。 細胞結合劑靶向之抗原
在實施例中，例示性抗原或配位體包括腎素；生長激素（ 例如，人類生長激素及牛生長激素）；生長激素釋放因子；副甲狀腺激素；或促甲狀腺激素，或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括脂蛋白；α-1-抗胰蛋白酶；胰島素A鏈；胰島素B鏈；胰島素原；促卵泡激素；降血鈣素；促黃體生成激素；或升糖素，或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括凝血因子（ 例如，因子vmc、因子IX、組織因子及von威里氏因子）；抗凝血因子（ 例如，蛋白質C）；心房利尿鈉因子；肺界面活性劑；纖維蛋白溶酶原活化蛋白（ 例如，尿激酶、人類尿液或組織型纖維蛋白溶酶原活化蛋白）；鈴蟾素；凝血酶；或造血生長因子，或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括腫瘤壞死因子-α及腫瘤壞死因子-β，或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括腦啡肽酶；RANTES（ 亦即表現及分泌之活化調節的正常T細胞）；人類巨噬細胞發炎蛋白-1-α；血清白蛋白（人類血清白蛋白）；繆勒管激素抑制物質；鬆弛素A鏈；鬆弛素B鏈；鬆弛素原；小鼠促性腺激素相關肽；微生物蛋白質（β-內醯胺酶）；去氧核糖核酸酶；IgE；抑制素；或活化素；或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括細胞毒性T淋巴球相關抗原 （例如CTLA-4）或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括血管內皮生長因子或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括激素或生長因子之受體；蛋白質A或D；類風濕性因子；神經營養因子（ 例如，骨骼衍生之神經營養因子、神經滋養素-3、神經滋養素-4、神經滋養素-5或神經滋養素-6）、神經生長因子（ 例如，NGF -b）；血小板衍生之生長因子；纖維母細胞生長因子 （例如aFGF及bFGF）；纖維母細胞生長因子受體2；表皮生長因子；轉型生長因子（ 例如，TGF-α、TGF-bI、TGF-p2、TGF-p3、TGF-p4及TGF-p5）；類胰島素生長因子-I及類胰島素生長因子-II；des(L-3)-IGF-I（腦IGF-I）；或類胰島素生長因子結合蛋白，或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括黑色素轉鐵蛋白；CA6、CAK1、CALLA、CAECAM5、GD3；FLT3；PSMA；PSCA；MUC1；STEAP；CEA；TENB2；EphA受體；EphB受體；葉酸受體；FOLR1；間皮素；畸胎瘤衍化生長因子；α vβ 6；或整合素，或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括VEGF或VEGFR，或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括EGFR，或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括FGFR3；LAMP1、p-鈣黏蛋白或運鐵蛋白受體，或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括IRTA1；IRTA2；IRTA3；IRTA4；IRTA5，或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括酪胺酸-蛋白激酶跨膜受體（ 例如，ROR1及ROR2），或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括CD蛋白質（ 例如，CD2、CD3、CD4、CD6、CD8、CD11、CD14、CD19、CD20、CD21、CD22、CD26、CD28、CD30、CD33、CD36、CD37、CD38、CD40、CD44、CD52、CD55、CD56、CD59、CD70、CD79、CD80、CD81、CD103、CD105、CD123、CD134、CD137、CD138、CD152及CD276），或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括一或多個腫瘤相關抗原或細胞表面受體（參見美國公開案第2008/0171040號或美國公開案第2008/0305044號，其均以全文引用的方式併入），或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括紅血球生成素或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括骨誘導因子或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括免疫毒素或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括骨形態生成蛋白或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括干擾素（ 例如干擾素-α、干擾素-β及干擾素-γ）。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括群落刺激因子（ 例如M-CSF、GM-CSF及G-CSF）或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括介白素（ 例如，IL-1至IL-10）或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括過氧化物突變酶或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括T細胞受體或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括表面膜蛋白或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括衰減加速因子或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括病毒抗原（ 例如，HIV套膜之一部分）或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括運輸蛋白或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括歸巢受體或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括位址素或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括調節蛋白或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括整合素（ 例如CDlla、CDllb、CDllc、CD18、ICAM、VLA-4及VCAM）或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括腫瘤相關抗原（ 例如HER2、HER3及HER4受體）或其片段。
在實施例中，例示性抗原或配位體包括內皮因子；c-Met；c-kit；1GF1R；PSGR；NGEP；PSMA；PSCA；TMEFF2；LGR5；B7H4；TROP-2、DLL-3、CDH6、AXL、SLITRK6、ENPP3、BCMA、組織因子或CD352，或其片段。
在實施例中，細胞結合劑靶向Apo2、BAFF-R、骨形態生成蛋白受體、IGF-IR、CA125、CanAg、E16、ErbB2、MUC1、MUC16、Napi3b、TF、EpCAM、FcRH2、C242、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD26、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD72、CD79、CD90、CD138、CRIPTO、CXCR5、LY64、TDGF1、內皮素B受體、EphA受體、EphB受體、內皮素、FCRH1、HER2、HER2/neu、HER3、II類MHC分子Ia抗原、整合素、IRTA2、LIV-1、MPF、NaPi2b、PDL1、FLJ10372、KIAA1445、Mm42015、SEMA5B、SEMAG、前列腺之六跨膜上皮抗原1、IPCA-1、PCANP1、STMP、前列腺抗原；胰島素生長因子受體或葉酸受體。
在實施例中，細胞結合劑靶向GPNMB、NCAM（CD56）、TACSTD2（TROP-2）、葉酸受體α、組織因子、ENPP3、CD70、P-鈣黏蛋白、間皮素、STEA1、CEACAM5、黏蛋白1、連接蛋白4、鳥苷酸環化酶C、SLC44A4、PSMA、LIV1（ZIP6）、SLITRK6、5T4或SC-16。
在實施例中，細胞結合劑靶向HER2或EGFR。
在實施例中，細胞結合劑靶向纖維連接蛋白外域B （EDB）、內皮受體ETB、PSMA、VEGFR2 （CD309）、組織因子或ROBO4。
在實施例中，細胞結合劑靶向膠原蛋白IV、骨膜蛋白或肌腱蛋白c。
在實施例中，細胞結合劑靶向CD30、CD22、CD79b、CD19、CD138、CD74、CD37、CD33、CD19或CD98。
在實施例中，細胞結合劑靶向HER2。
在實施例中，細胞結合劑靶向EGFR。
在實施例中，細胞結合劑靶向CD70。
在實施例中，細胞結合劑靶向CD33。
在實施例中，細胞結合劑靶向CD30。
在實施例中，細胞結合劑靶向CD22。
在實施例中，細胞結合劑靶向CD19。
在實施例中，細胞結合劑靶向Mucl。
在實施例中，細胞結合劑靶向CD37。
在實施例中，細胞結合劑靶向CD123。 非蛋白細胞結合劑
在實施例中，細胞結合劑不為蛋白質。舉例而言，在實施例中，細胞結合劑可為結合至維生素受體（諸如細胞表面受體）之維生素。就此而言，維生素A與視黃醇結合蛋白（RBP）結合以形成複合物，其複合物又以高親和力結合STRA6受體且增加吸收維生素A。在另一實例中，葉酸/葉酸/維生素B 9以高親和力結合細胞表面葉酸受體（FR），例如FRa。結合於FRa之葉酸或抗體可用於靶向在卵巢及其他腫瘤上表現之葉酸受體。此外，維生素D及其類似物與維生素D受體結合。 蛋白質及多肽細胞結合劑
在其他實施例中，細胞結合劑為蛋白質或多肽，或包含蛋白質或多肽（包括抗體、非抗體蛋白質或多肽）之化合物。
在實施例中，細胞結合劑可為淋巴介質、激素、生長因子、群落刺激因子或營養轉運分子。
在實施例中，GM-CSF（結合至骨髓細胞之配位體/生長因子）可用作來自急性骨髓白血病之病變細胞的細胞結合劑。
在實施例中，結合至活化T細胞之IL-2可用於預防移植物移植排斥、用於治療及預防移植物抗宿主病，及用於治療急性T細胞白血病。
在實施例中，結合至黑色素細胞之MSH可用於治療黑色素瘤，如針對黑色素瘤之抗體。
在實施例中，表皮生長因子可用於靶向鱗狀癌，諸如肺癌及頭頸癌及齒齦鱗狀細胞癌。
在實施例中，生長抑制素可用於靶向神經母細胞瘤及其他腫瘤類型。
在實施例中，雌激素（或雌激素類似物）可用於靶向乳癌。
在實施例中，雄激素（或雄激素類似物）可用於靶向睪丸。
在實施例中，細胞結合劑為抗體模擬物，諸如錨蛋白重複蛋白質、生替林（Centyrin）或纖連蛋白/單功能抗體。
在實施例中，奧瑞他汀結合物包含非免疫反應性蛋白質、多肽或肽作為其細胞結合劑。因此，在實施例中，細胞結合劑為非免疫反應性蛋白質、多肽或肽。實例包括但不限於運鐵蛋白、表皮生長因子(「EGF」)、鈴蟾素、胃泌素、釋放胃泌素之肽、血小板衍生生長因子、IL-2、IL-6、轉型生長因子(「TGF」) (諸如TGF-α及TGF-β)、痘瘡生長因子(「VGF」)、胰島素及胰島素樣生長因子I及II、生長抑制素、凝集素及來自低密度脂蛋白之缺輔基蛋白。 抗體及相關細胞結合劑
在實施例中，細胞結合劑為抗體或其抗原結合片段。在本文所描述之實施例中之任一者中，細胞結合劑可為抗體。
在細胞結合劑為抗體或其抗原結合部分（包括抗體衍生物）或某些抗體模擬物之實施例中，細胞結合劑可結合至目標細胞上之配位體，諸如細胞表面配位體，包括細胞表面受體。
合適的抗體亦包括但不限於人類抗體、靈長類抗體、嵌合抗體、雙特異性抗體、人源化抗體、共軛抗體（ 亦即結合或融合至其他蛋白質的抗體、放射性標記、細胞毒素）、小模塊免疫藥物（「SMIPs TM」）及抗體片段。
舉例而言，抗體包括對指定蛋白質或肽或其片段起特異性反應之免疫球蛋白（Ig）及其片段。在實施例中，抗體包括完整單株抗體、多株抗體、單域抗體（例如鯊魚單域抗體（例如IgNAR或其片段））及抗體片段，只要其展現所需生物活性即可。在實施例中，抗體為IgG、IgA、IgE、IgD或IgM。在實施例中，抗體具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在實施例中，抗體為IgAl或IgA2。
在實施例中，細胞結合劑為重新出現的抗體、重新出現的單鏈抗體、重新出現的抗體片段（或「抗原結合部分」）或雙特異性抗體。
在實施例中，細胞結合劑為微型抗體、阿維體（avibody）、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、奈米抗體、前抗體、域抗體或單功能抗體。
抗體片段可包括完整抗體之一部分，諸如抗體之抗原結合區或可變區。抗體片段之實例包括Fab、Fab'、F(ab')2及Fv片段；三功能抗體；四功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子。抗體片段亦可為藉由結合至特定抗原以形成複合物而如抗體起作用的任何合成或經基因工程改造的蛋白質。舉例而言，抗體片段可包括經分離片段、由重鏈及輕鏈之可變區組成的「Fv」片、其中輕鏈可變區及重鏈可變區由肽連接子（「ScFv蛋白質」）連接的重組單鏈多肽分子，及由模擬高變區之胺基酸殘基組成的最小識別單位。
適用的多株抗體為衍生自經免疫動物之血清的抗體分子之異質群體。適用的單株抗體為針對特定抗原決定子(例如癌細胞抗原、病毒抗原、微生物抗原、蛋白質、肽、碳水化合物、化學物質、核酸或其片段)之抗體的均質群體。針對所關注抗原之單株抗體（mAb）可藉由使用此項技術中已知的藉由培養物中之連續細胞株而提供抗體分子之產生的任何技術來製備。
在實施例中，細胞結合劑為單株抗體或其抗原結合片段。
適用的單株抗體包括(但不限於)人類單株抗體、人源化單株抗體或嵌合人類-小鼠（或其他物種）單株抗體。抗體包括全長抗體及其抗原結合片段。人類單株抗體可藉由此項技術中已知多種技術中之任一者（例如Teng等人，1983， Proc. Natl. Acad. Sci. USA.80:7308-7312；Kozbor等人, 1983, Immunology Today4:72-79；及Olsson 等人, 1982, Meth. Enzymol.92:3-16）。
在實施例中，適用於本發明之抗體可包括人源化或人類抗體。非人類抗體之人源化形式為含有衍生自非人類Ig之最小序列的嵌合Ig、Ig鏈或片段[諸如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或Ab之其他抗原結合子序列]。一般而言，人源化抗體具有一或多個自非人類來源引入的胺基酸殘基。此等非人類胺基酸殘基通常稱為「輸入」殘基，其典型地獲自「輸入」可變域。人源化係藉由將嚙齒類動物互補決定區（CDR）或CDR序列取代為人類抗體之對應序列來實現[Riechmann 等人, Nature332(6162):323-7, 1988；Verhoeyen 等人, Science. 239(4847):1534-6, 1988]。因此，此類「人源化」抗體為嵌合抗體(美國專利第4,816,567號，1989)，其中實質上小於完整人類可變域已經來自非人類物種之對應序列取代。在實施例中，靶向人類抗原之非人類抗體（例如，小鼠）的CDR經移植至人類Ig之可變域的構架區上。此項技術中已知之各種技術適合於CDR移植，包括例如定點突變誘發。在實施例中，人源化抗體通常為其中一些CDR殘基及可能的一些FR殘基經來自嚙齒動物Ab中之類似位點的殘基取代的人類抗體。人源化抗體包括其中來自接受者CDR之殘基由來自非人類物種(諸如小鼠、大鼠或兔) (供體抗體）CDR之殘基替換的人類Ig（接受者抗體），其具有所期望特異性、親和力及能力。在實施例中，本文所描述之單特異性及雙特異性抗體與非人類靈長類共同抗原具有交叉反應性。在一些情況下，對應非人類殘基替換人類Ig之Fv構架殘基。人源化抗體可包含在接受者抗體中及在所引入之CDR或構架序列中均不存在之殘基。一般而言，人源化抗體包含實質上所有、或至少一個且通常兩個可變域，其中若大部分並非所有CDR區對應於非人類Ig之彼等區且大部分並非所有FR區域為人類Ig共有序列之彼等區。人源化抗體最佳亦包含Ig恆定區（Fc）之至少一部分，通常人類Ig之恆定區[Riechmann 等人， Nature332 (6162):323-7, 1988；Verhoeyen 等人， Science. 239(4847):1534-6, 1988]。
人類抗體亦可使用多種技術產生，包括噬菌體呈現庫[Hoogenboom 等人， Mol Immunol.(1991) 28(9):1027-37；Marks 等人, J Mol Biol.(1991) 222(3):581-97]及人類單株抗體之製備[Reisfeld及Sell, 1985, Cancer Surv.4(1):271-90]。類似地，可利用將人類Ig基因引入其中內源性Ig基因已部分或完全不活化之轉殖基因動物中以合成人類抗體。在刺激後，觀測到人類抗體產生，其在所有態樣中與人類中所見極其類似，包括基因重排、組裝及抗體譜系[Fishwild 等人，High-avidity human IgG kappa monoclonal antibodies from a novel strain of minilocus transgenic mice, Nat Biotechnol.1996年7月；14(7):845-51；Lonberg 等人, Antigen-specific human antibodies from mice comprising four distinct genetic modifications, Nature1994年4月28日;368(6474):856-9；Lonberg及Huszar, Human antibodies from transgenic mice, Int. Rev. Immunol.1995;13(1):65-93；Marks 等人, By-passing immunization: building high affinity human antibodies by chain shuffling. Biotechnology(N Y). 1992年7月; 10(7):779-83]。
抗體可為與目標細胞（例如癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原）免疫特異性結合之抗體或與腫瘤細胞或基質結合之其他抗體之功能活性片段、衍生物或類似物。就此而言，「功能活性」意謂片段、衍生物或類似物能夠免疫特異性結合至目標細胞。為確定那個CDR序列結合抗原，含有CDR序列之合成肽可藉由此項技術中已知的任何結合分析方法（例如BIAcore分析法）用於抗原之結合分析中[參見例如Kabat等人，1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版, National Institute of Health, Bethesda, Md.；Kabat E等人, 1980, J. Immunology125(3):961-969]。
其他適用的抗體包括抗體之片段，諸如但不限於F(ab') 2片段、Fab片段、Fv、單鏈抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、scFv、scFv-FV或與抗體具有相同特異性之任何其他分子。
抗體片段之另一形式為編碼單CDR之肽。CDR肽（「最小識別單位」）可藉由構築編碼所關注抗體之CDR的基因來獲得。此類基因係例如藉由使用聚合酶鏈反應以合成來自抗體生成細胞之RNA的可變區來製備。參見例如Larrick等人， Methods:  A Companion to Methods in Enzymology 2:106 (1991); Courtenay-Luck, 「Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies」, in Monoclonal Antibodies: Production, Engineering And Clinical Application, Ritter等人（編），第166-179頁 (Cambridge University Press 1995)；及Ward等人, 「Genetic Manipulation and Expression of Antibodies」, in Monoclonal Antibodies: Principles And Applications, Birch等人（編）第137-185頁 (Wiley-Liss, Inc. 1995)。
另外，可使用標準重組DNA技術製備之包含人類與非人類部分之重組抗體（諸如嵌合及人源化單株抗體）為適用抗體。嵌合抗體係其中不同部分係衍生自不同動物物種之分子，諸如具有衍生自鼠類單株之可變區及人類免疫球蛋白恆定區之彼等分子。（參見例如美國專利第4,816,567號；及第4,816,397號，其均以全文引用之方式併入本文中。） 人源化抗體為來自非人類物種之抗體分子，其具有來自非人類物種之一或多個互補決定區（CDR）及來自人類免疫球蛋白分子之構架區。（參見例如美國專利第5,585,089號，其以全文引用的方式併入本文中。） 此類嵌合及人源化單株抗體可藉由此項技術中已知的重組DNA技術產生，例如使用以下各者中所描述之方法：國際公開案第WO 87/02671號；歐洲專利公開案第0 184 187號；歐洲專利公開案第0 171 496號；歐洲專利公開案第0 173 494號；國際公開案第WO 86/01533號；美國專利 第4,816,567號；歐洲專利公開案第012 023號；Berter等人，1988、 Science240:1041-1043； Liu 等人, 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA84:3439-3443；Liu等人, 1987, J. Immunol.139:3521-3526；Sun等人, 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA84:214-218；Nishimura等人, 1987, Cancer. Res.47:999-1005；Wood等人, 1985, Nature314:446-449；及Shaw等人, 1988, J. Natl. Cancer Inst.80:1553-1559；Morrison, 1985, Science229:1202-1207；Oi等人, 1986, BioTechniques4:214；美國專利 第5,225,539號；Jones等人, 1986, Nature321:552-525；Verhoeyan等人, 1988, Science239: 1534；及Beidler等人, 1988, J. Immunol.141:4053-4060；其中之每一者均以全文引用之方式併入本文中。
在一些情況下（例如，當針對非人類或嵌合抗體之免疫原性可發生時），完全人類抗體較為合乎需要且可使用不能表現內源性免疫球蛋白重鏈及輕鏈基因但可表現人類重鏈及輕鏈基因之轉殖基因小鼠產生。
抗體包括經修飾之類似物及衍生物，亦即藉由共價連接任何類型之分子經修飾，只要此類共價連接准許抗體保留其抗原結合免疫特異性即可。舉例而言，但非藉助於限制，抗體之衍生物及類似物包括已經進一步修飾之彼等衍生物及類似物，例如藉由醣基化、乙醯化、PEG基化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護/阻斷基團衍生化、蛋白水解裂解、連接至細胞抗體單元或其他蛋白質等。許多化學修飾中之任一者可藉由已知技術進行，包括但不限於特定化學裂解、乙醯化、甲醯基化、在存在衣黴素之情況下代謝合成等。另外，類似物或衍生物可含有一或多個非天然胺基酸。
抗體可在與Fc受體相互作用之胺基酸殘基中具有修飾（例如取代、缺失或添加）。特定言之，抗體可在鑑別為參與抗Fc域與FcRn受體之間的相互作用之胺基酸殘基中具有修飾（參見例如國際公開案第WO 97/34631號，其以全文引用之方式併入本文中）。
抗體可使用此項技術中熟知之方法產生。舉例而言，抗體產生之方案描述於Harlow及Lane， Antibodies ： A Laboratory Manual ，(1988)。通常，抗體可在小鼠、大鼠、天竺鼠、倉鼠、駱駝、美洲駝、鯊魚或其他適當宿主中產生。替代地，抗體可在雞中製備，產生IgY分子[Schade 等人, (1996) ALTEX13(5):80-85]。在實施例中，適用於本發明之抗體為亞人類靈長類抗體。舉例而言，用於在狒狒中產生治療適用抗體之通用技術可發現於例如Goldenberg 等人, 國際專利公開案第WO 91/11465 (1991)號，及Losman 等人, Int. J. Cancer46: 310 (1990)。在實施例中，單株抗體可使用融合瘤方法製備[Milstein及Cuello, (1983) Nature305 (5934):537-40]。在實施例中，單株抗體亦可藉由重組方法製備（美國專利第4,166,452號，1979）。
許多與藉由B細胞永生化產生單株抗體相關之困難可藉由在大腸桿菌中使用噬菌體呈現工程改造及表現抗體片段來克服。為了確保回收高親和力單株抗體，組合免疫球蛋白庫必須通常含有較大譜系尺寸。典型策略利用獲自經免疫小鼠之淋巴球或脾細胞之mRNA，以使用逆轉錄酶合成cDNA。重鏈及輕鏈基因單獨地藉由PCR擴增且接合至噬菌體選殖載體中。產生兩個不同庫，一個含有重鏈基因且一個含有輕鏈基因。自各庫分離噬菌體DNA，且將重鏈及輕鏈序列接合在一起且封裝以形成組合庫。各噬菌體含有一對隨機重鏈及輕鏈cDNA且在感染大腸桿菌後導引感染細胞中抗體鏈之表現。為了鑑別出識別所關注抗原之抗體，接種噬菌體庫，且將斑塊中存在之抗體分子轉移至過濾器。將過濾器與經放射性標記之抗原一起培育且接著洗滌以移除過量的未結合之配位體。自動放射攝影上之放射性斑點鑑定含有結合抗原之抗體的斑塊。可自例如STRATAGENE Cloning Systems（La Jolla，Calif.）獲得適用於產生人類免疫球蛋白噬菌體庫之選殖及表現載體。
類似策略可用於獲得高親和力scFv。參見例如Vaughn等人， Nat. Biotechnol., 14: 309 314 (1996)。具有大譜系之scFv庫可藉由使用對應於所有已知V H、V k及V λ基因家族之PCR引子自未經免疫之人類供體分離V基因來構築。在擴增之後，將V k及V λ池合併以形成一個池。此等片段接合至噬菌體載體中。接著將scFv連接子（Gly 4，Ser） 3接合至V L片段上游之噬菌體中。V H及連接子-V L片段在JH區上擴增及組裝。所得V H-連接子-V L片段接合至噬菌體載體中。噬菌體庫可使用如上所述之過濾器或使用免疫管（Nunc； Maxisorp ™）淘選。類似結果可藉由自經免疫接種之兔子之淋巴球或脾臟細胞構築組合免疫球蛋白庫且藉由在畢赤酵母（P. pastoris）中表現scFv構築體來達成。參見例如Ridder等人， Biotechnology， 13：255 260 (1995)。另外，在分離適當scFv之後，具有較高結合親和力及較慢解離速率之抗體片段可經由親和力成熟製程，諸如CDR3突變誘發及鏈混排獲得。參見例如Jackson等人， Br. J. Cancer， 78:  181 188 (1998)；Osbourn等人, Immunotechnology, 2:  181 196 (1996)。
在實施例中，本文所描述之結合物[例如，根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物]包含細胞結合劑，其為靶向在癌細胞中過度表現之抗原的抗體。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含細胞結合劑，其為識別特定腫瘤相關抗原（TAA）之抗體。
針對癌細胞抗原之抗體免疫特異性可以商業方式獲得或可藉由熟習此項技術者已知的任何方法（諸如重組表現技術）產生。編碼對癌細胞抗原具免疫特異性之抗體的核苷酸序列可例如自基因庫（GenBank）資料庫或與其類似之資料庫、文獻出版物或藉由常規選殖及定序獲得。
在一特定實施例中，可使用已知用於治療癌症之抗體。
在另一特定實施例中，根據本發明之組合物及方法使用用於治療自體免疫疾病之抗體。
在實施例中，適用的抗體可與表現於活化淋巴球上之受體或受體複合物結合。該受體或受體複合物可包含免疫球蛋白基因超家族成員、TNF受體超家族成員、整合素、細胞介素受體、趨化介素受體、主要組織相容蛋白、凝集素或補體控制蛋白。
在實施例中，本文所描述之結合物[例如，根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物]包含靶向以下各者之細胞結合劑（例如抗體或其片段）：Apo2、BAFF-R、骨形態生成蛋白受體、IGF-IR、CA125、CanAg、E16、ErbB2、MUC1、MUC16、Napi3b、TF、EpCAM、FcRH2、C242、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD26、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD70、CD72、CD79、CD90、CD138、CRIPTO、CXCR5、LY64、TDGF1、內皮素B受體、EphA受體、EphB受體、內皮素、FCRH1、HER2、HER2/neu、HER3、II類MHC分子Ia抗原、整合素、IRTA2、LIV-1、MPF、NaPi2b、PDL1、FLJ10372、KIAA1445、Mm42015、SEMA5B、SEMAG、前列腺之跨膜六跨膜上皮抗原1、IPCA-1、PCANP1、STMP、前列腺抗原；胰島素生長因子受體或葉酸受體。
在實施例中，本文所描述之結合物[例如，根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物]包含靶向以下各者的細胞結合劑（例如抗體或其片段）：GPNMB、NCAM（CD56）、TACSTD2（TROP-2）、葉酸受體α、組織因子、ENPP3、CD70、P-鈣黏素、間皮素、STEA1、CEACAM5、黏蛋白1、連接蛋白4、鳥苷酸環化酶C、SLC44A4、PSMA、LIV1（ZIP6）、SLITRK6、5T4或SC-16。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向HER2或EGFR之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向以下各者的細胞結合劑（例如抗體或其片段）：纖維連接蛋白外域B（EDB）、內皮受體ETB、PSMA、VEGFR2（CD309）、組織因子或ROBO4。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向膠原蛋白IV、骨膜蛋白或肌腱蛋白c之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向以下各者的細胞結合劑（例如抗體或其片段）：CD30、CD22、CD79b、CD19、CD138、CD74、CD37、CD33、CD19或CD98。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向HER2之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向ROR1或ROR2之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向FOLR1之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向連接蛋白-4之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向Trop2之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向EGFR之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向CD70之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向CD33之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向CD30之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向CD22之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向CD19之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向Mucl之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向CD37之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。
在實施例中，本文所描述之結合物（例如根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物）包含靶向CD123之細胞結合劑（例如抗體或其片段）。 合成方法
本文所描述之化合物[例如，根據 式（ I ）、 式（ II ）、 式（ III ）或 式（ IV ）中之任一者的化合物]可根據此項技術中已知之方法製備。
在實施例中， 流程 1提供所描述之化合物 D1 （ MB-25 ）)之例示性合成方法。 流程 1
在實施例中， 流程 2提供所描述之化合物 D2 （ MB-23 ）之例示性合成方法。 流程 2
在實施例中， 流程 3提供所描述之化合物 PL1 （ MB-26 ）之例示性合成方法。 流程 3
在實施例中， 流程 4提供所描述之化合物 D5之例示性合成方法。 流程 4
在實施例中， 流程 5提供所描述之化合物 D6之例示性合成方法。 流程 5
在實施例中， 流程 6提供所描述之化合物 PL2 （ MB-24 ）之例示性合成方法。 流程 6
在實施例中， 流程 7提供製備結合物 （ PL ' ）之例示性通用方法： 流程 7
在實施例中， 流程 8提供製備雙藥物結合物 （ PL '' ）之例示性通用方法： 流程 8
在實施例中，製備藥物與抗體比（DAR）在7至8之間或為8之結合物( PL ')之例示性實驗程序：
抗體 C在25℃下用8當量（2當量/二硫鍵）的含參(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽（TCEP）之50 mM pH7.4磷酸鹽緩衝液（結合物緩衝液）及10 mM DTPA（二伸乙三胺五乙酸）處理2小時，接著添加12當量的含有效負載（ PL）之DMSO（DMSO體積為磷酸鹽緩衝液體積的約12%至15%）。在25℃將所得反應溶液在管旋轉器上旋轉1小時。反應混合物緊接著使用超過濾管（30 KD）用調配物緩衝液純化幾個循環。所得結合物（ PL '）通常具有在7至8之間或為8的藥物與抗體比（DAR）且藉由尺寸排阻層析法量測為＞95%單體。
在實施例中，製備藥物與抗體比（DAR）為約4主結合物（ PL '）的例示性實驗程序： 抗體 C在25℃下用含有2當量之ZnCl 2的4當量的參(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽（TCEP）之50 mM pH7.4磷酸鹽緩衝液（結合物緩衝液）處理3小時（參考文獻：JI, Ao; Sun, Chuchu; He, Wenxu, 「Process for preparing antibody-drug conjugates with improved homogeneity」, WO2020164561），接著添加6當量的含有效負載 PL之DMSO（DMSO體積為磷酸鹽緩衝液體積的約12%至15%）。將所得反應溶液在25℃下在管旋轉器上旋轉1小時。反應物用4當量之半胱胺酸終止，接著添加10 mM DTPA（4當量）及10 mM DHAA（8當量）。使用超過濾管（30 KD）用調配物緩衝液將其純化幾個循環。所得結合物通常具有約4之藥物與抗體比（DAR）且藉由尺寸排阻層析法量測為＞95%單體。
在實施例中，抗體-藥物結合物為 曲妥珠單抗 -MB24。在實施例中， 流程 9提供所描述之抗體-藥物結合物 曲妥珠單抗 -MB24的例示性合成方法： 流程 9
在實施例中，抗體-藥物結合物為 曲妥珠單抗 -MB26。在實施例中， 流程 10提供所描述之抗體-藥物結合物 曲妥珠單抗 -MB26的例示性合成方法： 流程 10
在實施例中，製備雙藥物結合物（ PL ''）之例示性實驗程序：
抗體 C在25℃下用含有2當量之ZnCl 2的4當量的含參(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽（TCEP）之50 mM pH7.4磷酸鹽緩衝液（結合物緩衝液）處理3小時（參考文獻：JI, Ao; Sun, Chuchu; He, Wenxu, 「Process for preparing antibody-drug conjugates with improved homogeneity」, WO2020164561），接著添加6當量的含第一有效負載 PL之DMSO（DMSO體積為磷酸鹽緩衝液體積的約12%至15%）。將所得反應溶液在25℃下在管旋轉器上旋轉1小時。反應物用4當量之半胱胺酸終止，接著添加10 mM DTPA（4當量）及10 mM DHAA（8當量）。使用超過濾管（30 KD）用結合緩衝液將其純化幾個循環。所得結合物通常具有約4之藥物於抗體比（DAR），該結合物在25℃下用5當量的含TCEP之50 mM pH7.4磷酸鹽緩衝液及10 mM DTPA處理2小時，接著添加6當量的含第二有效負載 W '之DMSO（DMSO體積為磷酸鹽緩衝液體積的約12%至15%）。將所得反應溶液在25℃下在管旋轉器上旋轉1小時。反應混合物緊接著使用超過濾管（30 KD）用調配物緩衝液純化幾個循環，得到雙藥物結合物（ PL ''）。對應於兩種有效負載之 PL ''之DAR比率通常為約1:1，且雙藥物結合物藉由尺寸排阻層析法量測為＞95%單體。
在實施例中，抗體雙藥物結合物為 曲妥珠單抗 -MB0324。在實施例中， 流程 11提供所描述之抗體雙藥物結合物 曲妥珠單抗 -MB0324的例示性合成方法： 流程 11
在實施例中，抗體雙藥物結合物為 曲妥珠單抗 -MB0326。在實施例中， 流程 12提供所描述之抗體雙藥物結合物 曲妥珠單抗 -MB0326的例示性合成方法。 流程 12 奧瑞他汀結合物混合物及組合物
本發明提供包含本文所描述之結合物（ 式 III 、或 式 IV）中之任一者的結合物混合物及醫藥組合物。混合物及醫藥組合物包含複數種結合物。在一些態樣中，混合物或組合物中結合物中之每一者相同或實質上相同；然而，混合物或組合物中之細胞結合劑上藥物-連接子之分佈可如同藥物負載一樣會改變。舉例而言，用於將藥物-連接子結合至作為靶向配位體之抗體的結合技術可產生組合物或混合物，就混合物及/或組合物內之抗體（細胞結合劑）上的有效負載化合物之分佈而言為非均質的。在一些態樣中，有效負載化合物在此類分子之混合物或組合物中的各抗體分子上之負載為在1至18範圍內的整數。
在彼等態樣中，當作為整體提及組合物時，藥物-連接子之負載為在1至約18範圍內之數值。在組合物或混合物內，亦可存在少量百分比之未結合抗體。混合物或組合物中每細胞結合劑之藥物-連接子之平均數目（亦即，平均藥物負載）為重要屬性，因為其確定可遞送至目標細胞之藥物的最大量。平均藥物負載可為約1、2或約2、3或約3、4或約4、5或約5、6或約6、7或約7、8或約8、9或約9、10或約10、11或約11、12或約12、13或約13、14或約14、15或約15、16或約16、17或約17、18或約18。
在一些態樣中，混合物及醫藥組合物包含複數種結合物（亦即，群）；然而，結合物為相同或實質上相同的，且就混合物及/或組合物內之配位體分子上之藥物-連接子之分佈而言及就混合物及/或組合物內之細胞結合劑分子上之藥物-連接子之負載而言，實質上為均質的。在一些此類態樣中，抗體上之藥物-連接子之負載為2、或3、或4、或5、或6、或7、或8。在組合物或混合物內，亦可存在少量百分比之未結合抗體。在此類實施例中，平均藥物負載為約2、或約3、或約4、或約5、或約6、或約7、或約7.5、或約8。通常，此類組合物及混合物由使用位點特異性結合技術產生且結合係歸因於引入之半胱胺酸殘基。
來自結合反應之製劑中每細胞結合劑之有效負載化合物之平均數目可藉由習知的方式（諸如HIC、UV、LC-MS、ELISA分析法）表徵。亦可測定結合物在 p或 p '或 t方面之定量分佈。在一些情況下，均質結合物之分離、純化及表徵可藉由諸如逆相HPLC或電泳之方式達成。
在一些態樣中，組合物為包含本文所描述之結合物及醫藥學上可接受之載劑之醫藥組合物。在一些態樣中，醫藥組合物係呈液體形式。在一些態樣中，醫藥組合物為固體。在一些態樣中，醫藥組合物為凍乾粉末。
組合物（包括醫藥組合物）可以純化形式提供。如本文中所使用，「純化」意謂在分離時，按分離物之重量計，分離物含有至少95%，且在另一態樣中至少98%之結合物。 使用方法  組合物及投與方法
在另一態樣中，本發明之特徵在於一種醫藥組合物，其包含本文所描述之任何化合物[例如， 式（ I ）、 式（ II ）、 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物 ]或如本文所描述之其醫藥學上可接受之鹽。在實施例中，醫藥組合物包含醫藥學上可接受之載劑。
在實施例中，醫藥組合物包含根據 式 （ III ）之結合物。
在實施例中，醫藥組合物包含根據 式 （ IV ）之結合物。
在實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含有本文所描述之奧瑞他汀結合物及醫藥學上可接受之載劑。奧瑞他汀結合物可呈允許將化合物投與患者以治療與細胞結合劑結合之抗原之表現相關的病症的任何形式。舉例而言，結合物可呈液體或固體形式。較佳投與途徑為非經腸。非經腸投與包括皮下注射、靜脈內、肌內、胸骨內注射或輸注技術。在一個態樣中，組合物係非經腸投與。在一個態樣中，結合物係靜脈內投與。投與可藉由任何適宜途徑，例如藉由輸注或彈丸注射。
醫藥組合物可經調配以使得在向患者投與組合物之後化合物為生物可用的。組合物可呈一或多個劑量單位之形式。
用於製備醫藥組合物之材料在所用量下可為無毒的。一般熟習此項技術者將顯而易見，醫藥組合物中之一或多種活性成分之最佳劑量將取決於多種因素。相關因素包括但不限於動物之類型（例如人類）、化合物之特定形式、投與方式及所用組合物。
組合物可例如呈液體形式。液體可適用於藉由注射遞送。在用於藉由注射投與之組合物中，亦可包括界面活性劑、防腐劑、濕潤劑、分散劑、懸浮劑、緩衝液、穩定劑及等張劑中之一或多者。
液體組合物（無論其為溶液、懸浮液或其他類似形式）亦可包括以下中之一或多者：無菌稀釋劑，諸如注射用水、鹽水溶液（較佳為生理鹽水）、林格氏溶液（Ringer's solution）、等張氯化鈉、不揮發性油（諸如可充當溶劑或懸浮介質的合成甘油單酯或甘油二酯）、聚乙二醇、甘油、環糊精、丙二醇或其他溶劑；抗細菌劑，諸如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸；緩衝劑，諸如胺基酸、乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；清潔劑，諸如非離子界面活性劑、多元醇；及用於調節張力之試劑，諸如氯化鈉或右旋糖。非經腸組合物可封閉於由玻璃、塑膠或其他材料製成之安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。生理鹽水為例示性佐劑。可注射組合物較佳為無菌的。
有效治療特定病症或病狀之結合物之量將視該病症或病狀之性質而定，且可藉由標準臨床技術來確定。另外，可視情況採用活體外或活體內分析來幫助鑑別最佳劑量範圍。待用於組合物之精確劑量亦將視投與途徑及疾病或病症之嚴重性而定，且應根據醫師之判斷及各患者之情況來決定。
組合物包含有效量之化合物，從而將獲得適合之劑量。通常，此量為按組合物之重量計至少約0.01%之化合物。
對於靜脈內投與，組合物可包含每公斤動物體重約0.01至約100毫克奧瑞他汀結合物。在一個態樣中，組合物可包括每公斤動物體重約1至約100毫克奧瑞他汀結合物。在另一態樣中，投與量將在每公斤體重約0.1至約25毫克化合物範圍內。視所用之藥物而定，劑量可甚至更低，例如1.0 µg/kg至5.0 mg/kg、4.0 mg/kg、3.0 mg/kg、2.0 mg/kg或1.0 µg/kg或1.0 µg/kg至500.0 µg/kg個體體重。
一般而言，向患者投與之結合物之劑量通常為約0.01 mg/kg至約100 mg/kg個體體重或1.0 µg/kg至5.0 mg/kg個體體重。在實施例中，向患者投與之劑量在約0.01 mg/kg至約15 mg/kg個體體重之間。在實施例中，向患者投與之劑量在約0.1 mg/kg與約15 mg/kg個體體重之間。在實施例中，向患者投與之劑量在約0.1 mg/kg與約20 mg/kg個體體重之間。在實施例中，投與劑量在約0.1 mg/kg至約5 mg/kg或約0.1 mg/kg至約10 mg/kg個體體重之間。在實施例中，投與劑量在約1 mg/kg至約15 mg/kg個體體重之間。在實施例中，投與劑量在約1 mg/kg至約10 mg/kg個體體重之間。在實施例中，在治療週期內所投與之劑量在約0.1至4 mg/kg、甚至更佳0.1至3.2 mg/kg或甚至更佳0.1至2.7 mg/kg個體體重之間。
術語「 載劑」係指與化合物一起投與之稀釋劑、佐劑或賦形劑。此類醫藥載劑可為液體，諸如水及油，包括石油、動物、植物或合成來源之彼等油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油。載劑可為鹽水、阿拉伯膠（gum acacia）、明膠、澱粉糊、滑石、角蛋白、膠態二氧化矽、尿素。另外，可使用助劑、穩定劑、增稠劑、潤滑劑及著色劑。在一個實施例中，當向患者投與時，化合物或組合物及醫藥學上可接受之載劑為無菌的。
當靜脈內投與化合物時，水為例示性載劑。亦可採用鹽水溶液以及右旋糖及甘油水溶液作為液體載劑，尤其用於可注射溶液。適合之醫藥載劑亦包括賦形劑，諸如澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻穀、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石、氯化鈉、乾燥脫脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇。必要時，本發明組合物亦可含有少量濕潤劑或乳化劑或pH緩衝劑。
在一實施例中，根據常規程序將結合物調配成適合於向動物、尤其人類靜脈內投與之醫藥組合物。通常，用於靜脈內投與之載劑或媒劑為無菌等張緩衝水溶液。必要時，組合物亦可包括增溶劑。用於靜脈內投與之組合物可視情況包含局部麻醉劑，諸如利多卡因（lignocaine）以減輕注射部位之疼痛。通常，該等成分係單獨地或以單位劑型混合在一起提供，例如呈於指示活性劑量之氣密密封容器（諸如安瓿或藥囊）中之乾燥凍乾粉末或無水濃縮物形式。當藉由輸注投與結合物時，其可例如用含有無菌醫藥級水或鹽水之輸注瓶來施配。當藉由注射投與結合物時，可提供注射用無菌水或鹽水之安瓿，使得該等成分可於投與前混合。
醫藥組合物一般經調配為無菌、實質上等張的，且完全符合美國食品藥物管理局之所有良好製造規範（GMP）法規。 癌症之治療
本文所描述之化合物[例如，根據 式（ I ）、 式（ II ）、 式（ III）或 式（ IV ）中任一者之任何化合物]可有效於選擇性地誘導某些群體中之細胞死亡（例如過度表現某些抗原（包括本文所描述之彼等抗原，諸如腫瘤相關抗原）之細胞）。
活體外細胞毒性分析： 使用細胞計數套組-8（CCK-8）分析（Shanghai Life Lab Biotech Co., Ltd.）在平底96孔細胞培養盤（Corning Costar）中評估化合物之細胞毒性效價。簡言之，將人類腫瘤細胞（1,000至10,000個細胞/孔，視細胞株而定）在適當培養基中在37℃，5% CO 2下在存在或不存在過量之對應未結合抗體下與化合物或與結合物一起培育120小時。
舉例而言，對於根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物，適當選擇細胞結合劑可提供癌細胞之有效、高選擇性靶向，其將適用於治療癌症。
本文所描述之奧瑞他汀結合物[例如，根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物]適用於抑制異常細胞增殖（例如腫瘤細胞或癌細胞，引起腫瘤或癌細胞中之細胞凋亡）或治療患者之癌症。因此，本文提供治療有需要之個體之癌症的方法，該方法包括向該個體投與一或多種本文所描述之奧瑞他汀結合物。
在實施例中，本發明之特徵在於一種治療細胞增殖性疾病或病症或抑制異常細胞生長的方法，該方法包含投與如本文所描述的 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物或其醫藥學上可接受之鹽，或包含如本文所描述之 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物或其醫藥學上可接受之鹽的醫藥組合物。
因此，本文所描述之化合物[例如，根據 式（ III ）或 式（ IV ）之任何化合物]可因此用於治療多種癌症。在實施例中，奧瑞他汀結合物可用於將藥物遞送至腫瘤細胞或癌細胞。不受理論束縛，在一個實施例中，奧瑞他汀結合物之細胞結合劑與癌細胞或腫瘤細胞相關之抗原結合或締合，且奧瑞他汀結合物可經由受體介導之胞吞作用或其他內化機制在腫瘤細胞或癌細胞內吸收（內化）。抗原可附接至腫瘤細胞或癌細胞，或可為與腫瘤細胞或癌細胞相關之細胞外基質蛋白。一旦在細胞內，藥物經由細胞內之肽裂解釋放。在一替代實施例中，游離藥物係自腫瘤細胞或癌細胞外之奧瑞他汀結合物釋放，且游離藥物隨後穿透細胞。
在一個實施例中，細胞結合劑結合至腫瘤細胞或癌細胞。
在另一實施例中，細胞結合劑結合至腫瘤細胞或癌細胞表面上之腫瘤細胞或癌細胞抗原。
在另一實施例中，細胞結合劑結合至腫瘤細胞或癌細胞抗原，該腫瘤細胞或癌細胞抗原為與腫瘤細胞或癌細胞相關之細胞外基質蛋白。
細胞結合劑對特定腫瘤細胞或癌細胞之特異性對於確定最有效治療之腫瘤或癌症而言可為重要的。
可用奧瑞他汀結合物治療之癌症包括但不限於造血癌症，諸如淋巴瘤（霍奇金氏淋巴瘤（Hodgkin Lymphoma）及非霍奇金氏淋巴瘤（Non-Hodgkin Lymphomas））及白血病及實體腫瘤。造血癌症之實例包括濾泡性淋巴瘤、退行性大細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、急性骨髓母細胞白血病、慢性骨髓細胞性白血病、慢性淋巴球性白血病、瀰漫性大B細胞淋巴瘤及多發性骨髓瘤。實體腫瘤之實例包括纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、成骨性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴內皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤文氏腫瘤(Ewing's tumor)、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、大腸癌、大腸直腸癌、腎臟癌、胰臟癌、骨癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、食道癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、咽喉癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓性癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝腫瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細胞瘤、胚胎性癌、威爾姆斯氏腫瘤(Wilms'tumor)、宮頸癌、子宮癌、睪丸癌、小細胞肺癌、膀胱癌、肺癌、上皮癌、神經膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經管胚細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽神經瘤、寡樹突神經膠質瘤、脊膜瘤、皮膚癌、黑色素瘤、神經母細胞瘤及視網膜母細胞瘤。
在實施例中，癌症為腺癌、腦癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、絨毛膜癌、CNS腫瘤、大腸或大腸直腸癌、瀰漫型內因性腦橋神經膠質瘤（DIPG）、子宮內膜癌、食道癌、尤文氏肉瘤、輸卵管癌、膽囊癌、胃癌、膠質母細胞瘤、頭頸癌、血液癌、霍奇金氏淋巴瘤、腎癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、梅克爾細胞癌、間皮瘤、多發性骨髓瘤、骨髓發育不良症候群（MDS）、神經母細胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、骨肉瘤、胰臟癌、腹膜癌、前列腺癌、卵巢癌、腎癌、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、皮膚癌、小腸癌、鱗狀細胞癌、睪丸癌、甲狀腺癌、子宮癌或威爾姆氏腫瘤。
在實施例中，癌症為乳癌。 癌症之多模態療法
癌症，包括但不限於腫瘤、轉移或以不受控細胞生長為特徵之其他疾病或病症可藉由投與奧瑞他汀結合物來治療或抑制。
在其他實施例中，提供治療癌症之方法，其包括向有需要之患者投與有效量的奧瑞他汀結合物及化學治療劑。在一個實施例中，化學治療劑為尚未發現難以用於治療癌症之彼治療劑。在另一實施例中，化學治療劑為已發現難以用於治療癌症之彼治療劑。可向亦已進行手術作為癌症治療之患者投與奧瑞他汀結合物。
在實施例中，患者亦接受額外治療，諸如放射線療法。在一特定實施例中，奧瑞他汀結合物與化學治療劑或與放射線療法同時投與。在另一特定實施例中，化學治療劑或放射線療法在投與奧瑞他汀結合物之前或之後投與。
化學治療劑可經一系列階段投與。可投與任何一種化學治療劑或其組合，諸如一或多種標準照護化學治療劑。
另外，提供用奧瑞他汀結合物治療癌症之方法來作為化學療法或放射療法之替代，其中已證實或可證實化學療法或放射線療法對於所治療之個體而言毒性過大，例如產生不可接受或不堪忍受的副作用。所治療之患者可視情況用另一癌症療法治療，諸如手術、放射線療法或化學療法，視發現何種治療可接受或可忍受而定。 自體免疫疾病之治療
奧瑞他汀結合物適用於殺死或抑制產生自體免疫疾病之細胞之不期望複製或用於治療自體免疫疾病。
奧瑞他汀結合物可相應地在多種情況下用於治療患者之自體免疫疾病。奧瑞他汀結合物可用於將藥物遞送至目標細胞。不受理論束縛，在一個實施例中，奧瑞他汀結合物與促發炎性或不適當刺激之免疫細胞表面上的抗原締合，且隨後經由受體介導之胞吞作用將奧瑞他汀結合物溶解於靶向細胞內。一旦在細胞內，細胞結合劑經裂解，導致奧瑞他汀釋放。隨後釋放之奧瑞他汀在胞溶質中自由遷移且誘導細胞毒性或細胞抑制活性。在一替代實施例中，該藥物係自目標細胞外之奧瑞他汀結合物裂解，且該奧瑞他汀隨後穿透細胞。
在一個實施例中，細胞結合劑結合於自體免疫抗原。在一個態樣中，抗原在涉及自體免疫性病況之細胞表面上。
在一個實施例中，細胞結合劑結合於與自體免疫疾病狀態相關之經活化淋巴球。
在另一實施例中，奧瑞他汀結合物殺死或抑制產生與特定自體免疫疾病相關之自體免疫抗體的細胞之倍增。
可用奧瑞他汀結合物治療的特定類型之自體免疫疾病包括但不限於Th2淋巴球相關病症（例如異位性皮膚炎、異位性哮喘、鼻結膜炎、過敏性鼻炎、歐門氏症候群（Omenn's syndrome）、全身性硬化症及移植物抗宿主疾病）；Th1淋巴球相關病症（例如類風濕性關節炎、多發性硬化症、牛皮癬、休格連氏症候群（Sjorgren's syndrome）、橋本氏甲狀腺炎（Hashimoto's thyroiditis）、格雷夫氏病（Grave's disease）、原發性膽汁性肝硬化、韋格納氏肉芽腫病（Wegener's granulomatosis）及結核病）；及活化B淋巴球相關病症（例如全身性紅斑性狼瘡症、古巴士德氏症候群（Goodpasture's syndrome）、類風濕性關節炎及I型糖尿病）。 製備奧瑞他汀結合物之方法
本文所描述之奧瑞他汀結合物可以抗體、連接子及藥物單元之連續構築形式製備，或以藉由組裝部分接著完整組裝步驟之聚集方式製備。
在一組實施例中，如本文所提供之奧瑞他汀有效負載化合物與適合之細胞結合劑組合以促進奧瑞他汀有效負載化合物與細胞結合劑之共價附接。在實施例中，細胞結合劑為由於還原鏈間二硫鍵而具有至少2、至少4、至少6或8個可用於連接奧瑞他汀有效負載化合物之硫醇的抗體。在實施例中，奧瑞他汀有效負載化合物係經由抗體上引入的半胱胺酸部分附接至細胞結合劑。 用於醫療用途之套組
在一些態樣中，提供用於癌症治療及自體免疫疾病治療之套組。此類套組可包括包含本文所述之奧瑞他汀結合物的醫藥組合物。
在實施例中，套組可包括用於本文所述之治療方法中之任一者的說明書。所包括之說明書可提供將醫藥組合物投與至個體以在個體中達成預期效力，例如治療疾病或病狀（諸如癌症）的描述。在實施例中，與本文所述之醫藥組合物之用途相關的說明書可包括關於預期治療之劑量、給藥時程及投與途徑的資訊。容器可為單位劑量、散裝（例如多劑量包裝）或次單位劑量。本發明之套組中提供之說明書通常為標籤或包裝插頁上之書面說明書。標籤或包裝插頁指示醫藥組合物用於治療、延遲發病及/或緩解個體之疾病或病症。
在實施例中，本文提供之套組在適合之包裝中。適合之包裝包括但不限於小瓶、瓶子、廣口瓶、可撓性包裝及其類似物。同樣涵蓋用於與特定裝置組合之包裝，該特定裝置諸如吸入器、經鼻投藥裝置或輸注裝置。在實施例中，套組可具有無菌進入孔（例如，容器可為靜脈內溶液袋或具有可藉由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶）。
在實施例中，本文所提供之套組包括適用於治療如本文所述之自體免疫疾病之癌症的額外治療劑。 實例
儘管已根據某些實施例具體描述本發明所描述之某些化合物、組合物及方法，但以下實例僅用於說明本發明之化合物且不意欲限制該等化合物。
熟習此技藝者可由進行的說明而容易確認本發明之必須特性，且在不偏離其精神與範圍下，可施行本發明之各種改變與修飾以使其適合各種用途與條件。
所有於本申請案中所提及之美國或外國參考文獻、專利或專利申請案係如同在本文寫入般以全文引用方式併入本文中。若出現任何不一致之處，以本文字面意義上揭示的資料為準。
以下縮寫用於以下術語： ADCs         抗體-藥物結合物 ACN           乙腈 DAR           藥物與抗體比 DCC           N,N'-二環己基碳化二亞胺 DCM          二氯甲烷 DHAA        去氫抗壞血酸 DIPA          二異丙胺 DIPEA       二異丙基乙胺 DMF           N,N-二甲基甲醯胺 DMSO        二甲亞碸 DMTMM    氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三 -2-基)-4-甲基 啉鎓 DMTMMT 四氟硼酸4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三 -2-基)-4-甲基 啉鎓 DTPA         二伸乙三胺五乙酸 EDCI          1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺 HATU         3-氧化六氟磷酸1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓 HIC            疏水性相互作用層析 HOBt          羥基苯并三唑 HOPO        2-羥基吡啶-N-氧化物 i.v.               靜脈內 LC-MS       液相層析-質譜法 M               莫耳 nM              奈莫耳 NMM         N-甲基 啉 PPTS 對-甲苯磺酸吡錠 PTSA         4-甲基苯磺酸 PyBOP       六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三吡咯啶基鏻 SEC            尺寸排阻層析法 TBAF         氟化四丁銨 TBS            三級丁基二甲基矽基 TBSCl        三級丁基二甲基矽基氯 TCEP          3,3',3''-膦三基三丙酸鹽酸鹽 TEA           三乙胺 TFA            三氟乙酸 THF            四氫呋喃 TLC            薄層層析 TrOH          三苯基甲醇 Tr                三苯基甲基 p-TsOH      對甲苯磺酸 實例1. 化合物MB-25（D1）之例示性合成
用於製備2-(三苯甲基硫基)乙醛之通用程序（ 2）
向三苯基甲醇（29.0 g，111 mmol）於二氯甲烷（170 mL）中之溶液中連續添加1,4-二噻 -2,5-二醇（化合物 1，17.0 g，111 mmol）及三氟乙酸（12.3 g，108 mmol，8.02 mL）。將反應物在25℃下攪拌2小時。TLC (石油醚/乙酸乙酯=10/1，Rf=0.3）展示反應完成。反應混合物藉由添加NaHCO 3溶液（100 mL）淬滅，且用二氯甲烷（3 × 300 mL）萃取。合併之有機層用H 2O（2 × 300 mL）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由管柱層析（SiO 2，石油醚/乙酸乙酯，自1/0至15/1）進行純化，得到呈白色固體狀之化合物 2（8.5 g，8.0 mmol，7.2%產率）。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6),δ ppm 3.15 (d, J= 2.25 Hz, 2H), 7.14 - 7.39 (m, 15 H), 8.90 (t, J= 2.38 Hz, 1H)。
用於製備(S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)吡咯啶-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基)-N,3-二甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基(2-(三苯甲基硫基)乙基)胺基)丁醯胺基)丁醯胺（ 3）之通用程序
向 MMAE（5.0 g，6.95 mmol）及化合物 2（9.25 g，13.9 mmol）於甲醇（100 mL）中之混合物中添加乙酸（2.09 g，34.8 mmol）。在25℃下在氮氣保護下攪拌30 min之後，將氰基硼氫化鈉（2.18 g，34.8 mmol）一次性添加至反應混合物中。將反應物在25℃下攪拌12小時。LCMS顯示反應完成。反應混合物藉由製備型HPLC[管柱：Welch Xtimate C18（250×100 mm×10 µm）；移動相，A：水（NH 4HCO 3），B：乙腈；B%：75%-99%，20 min]純化，得到呈白色固體狀之化合物 3（4.0 g，56.2%產率）。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4), δ ppm 0.79 - 0.91 (m, 6 H), 0.92 - 1.07 (m, 13 H), 1.16 (br t, J=7.52 Hz, 3 H), 1.21 (br d, J=5.87 Hz, 3 H), 1.30 - 1.52 (m, 2 H), 1.54 - 1.67 (m, 1 H), 1.68 - 2.10 (m, 6 H), 2.14 (br d, J=10.76 Hz, 3 H), 2.21 - 2.47 (m, 4 H), 2.48 - 2.56 (m, 2 H), 2.57 - 2.69 (m, 2 H), 3.14 (s, 1 H), 3.23 (dt, J=11.62, 7.21 Hz, 1 H), 3.33 (br d, J=4.28 Hz, 5 H), 3.38 (s, 4 H), 3.40 - 3.49 (m, 1 H), 3.66 - 3.81 (m, 1 H), 4.18 - 4.32 (m, 2 H), 4.50 - 4.67 (m, 3 H), 4.71 (br d, J=8.19 Hz, 1 H), 4.80 (br s, 1 H), 7.20 - 7.46 (m, 20 H)。
用於製備(S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)吡咯啶-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基)-2-((S)-2-((2-巰基乙基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-N,3-二甲基丁醯胺（ MB-25)（ D1）之通用程序。
向化合物 3（150 mg，147 µmol）於三氟乙酸（2.23 g，19.5 mmol）中之溶液中添加氯三異丙基矽烷（384 mg，2.43 mmol）及H 2O（402 mg，22.3 mmol）。將反應混合物在25℃下攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。其用乙腈（0.20 mL）稀釋且過濾。濾液藉由製備型HPLC[管柱：C18（150 ×30 mm×5 µm）；移動相，A：水（NH 4HCO 3），B：乙腈；B%：60%-90%，10分鐘]純化，得到呈白色固體狀之化合物 MB-25（ D1）（23.0 mg,20.1%產率）。MS(ESI+)：m/z計算值778.52(M+H) +，實驗值778.56。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4), δ ppm 0.77 - 0.91 (m, 6 H), 0.93 - 1.09 (m, 13 H), 1.09 - 1.16 (m, 3 H), 1.18 (br d, J=6.44 Hz, 3 H), 1.31 - 1.64 (m, 3 H), 1.65 - 2.27 (m, 7 H), 2.32 (br d, J=11.92 Hz, 3 H), 2.45 - 2.85 (m, 7 H), 3.11 - 3.24 (m, 2 H), 3.34 - 3.46 (m, 6 H), 3.52 - 3.92 (m, 2 H), 4.05 - 4.31 (m, 2 H), 4.45 - 4.81 (m, 5 H), 7.18 - 7.44 (m, 5 H)。 實例2. 化合物MB-23（D2）之例示性合成
用於製備(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((6S,9S,12S,13R)-12-((S)-二級丁基)-6、9-二異丙基-13-甲氧基-5,11-二甲基-7,10-二側氧基-1,1,1-三苯基-2-硫雜-5,8,11-三氮雜十五烷-15-醯基)吡咯啶-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯胺基)-3-苯丙酸（ 4）之通用程序。
向 MMAF（5.0 g，6.85 mmol）及化合物 2（10.0 g，20.5 mmol）於甲醇（100 mL）中之懸浮液中添加4Å分子篩（5.0 g）及乙酸（2.05g，34.1 mmol）。在25℃下攪拌30 min之後，將氰基硼氫化鈉（2.15 g，34.1 mmol）一次性添加至反應混合物中。將反應物在25℃下攪拌12小時。LCMS顯示反應完成。將其用水（500 mL）淬滅且用乙酸乙酯（3 × 500 mL）萃取。有機相經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮濾液，得到殘餘物，其藉由製備型HPLC[管柱：Welch Xtimate C18（250×70 mm×10 µm）；移動相，A：水（NH 4HCO 3），B：乙腈；B%：45%-75%，16 min]純化，得到呈白色固體狀之化合物 4（4.0 g，56.6%產率）。MS(ESI+)m/z，計算值1034.60(M+H) +，實驗值1034.70。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4),δ ppm 0.74 - 0.88 (m, 6H), 0.90 - 1.09 (m, 13H), 1.18 (br dd, J= 18.30, 5.54 Hz, 3H), 1.27 - 1.69 (m, 4H), 1.71 - 1.98 (m, 4H), 2.10 (br d, J= 3.34 Hz, 3H), 2.15 - 2.52 (m, 6H), 2.59 (br dd, J= 9.54, 4.77 Hz, 2H), 2.89 - 3.04 (m, 1H), 3.08 - 3.28 (m, 5H), 3.35 (br d, J= 7.15 Hz, 3H), 3.38 - 3.45 (m, 1H), 3.46 - 3.58 (m, 1H), 3.62 - 3.76 (m, 1H), 3.84 (br d, J= 3.58 Hz, 1H), 4.17 (br s, 1H), 4.59 (br d, J= 8.70 Hz, 1H), 4.73 (br d, J= 7.75 Hz, 1H), 7.16 - 7.32 (m, 14H), 7.35 -7.45 (m, 6H)。
用於製備(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((2-巰基乙基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-N,3-二甲丁醯胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚醯基)吡咯啶-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯胺基)-3-苯基丙酸（ MB-23）（ D2）之通用程序。
向化合物 4（2.0 g，1.93 mmol，1.0 當量）於三氟乙酸（29.2 g，256 mmol，19.0 mL）中之懸浮液中添加氯三異丙基矽烷（5.05 g，31.9 mmol，6.55 mL）及H 2O（5.29 g，293 mmol）。將反應混合物在25℃下在N 2保護下攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物在真空中濃縮，得到殘餘物，其藉由製備型HPLC[管柱：Phenomenex Luna C18（80×30 mm×3 µm）；移動相，A：水，B：乙腈；B%：15%-45%，8 min]純化，得到呈白色固體狀之產物 MB-23（ D2）（1.50 g，77.0%產率）。HRMS(ESI+，m/z計算值792.49(M+H) +，實驗值792.4944。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4), δ ppm 0.75 - 0.91 (m, 6 H), 0.93 - 1.07 (m, 11 H), 1.07 - 1.22 (m, 5 H), 1.26 - 1.47 (m, 2 H), 1.50 - 1.67 (m, 1 H), 1.70 - 1.94 (m, 3 H), 1.98 - 2.18 (m, 2 H), 2.19 - 2.53 (m, 6 H), 2.75 - 3.03 (m, 5 H), 3.14 (s, 1 H), 3.18 - 3.29 (m, 4 H), 3.33 - 3.45 (m, 6 H), 3.46 - 3.56 (m, 1 H), 3.62 - 3.76 (m, 1 H), 3.85 (dd, J=8.50, 1.65 Hz, 1 H), 4.02 - 4.18 (m, 1 H), 4.63 - 4.76 (m, 4 H), 7.13 - 7.31 (m, 5 H)。 實例3. 化合物MB-26（PL1）之例示性合成
用於製備(9H-茀-9-基)甲基((3R,4S,7S,10S,18S,21S)-4-((S)-二級丁基)-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)-7,10-二異丙基-5,11,18,22-四甲基-6,9,17,20-四側氧基-2-氧雜-14-硫雜-5,8,11,16,19-五氮雜二十三烷-21-基)胺基甲酸酯（ 6）之通用程序。
向化合物 MB-25（1.95 g，2.15 mmol）及化合物 5（2.48 g，3.87 mmol）於N,N-二甲基甲醯胺（19.5 mL）中之溶液中添加HCl/二乙醚（6.40 M，1.32 mL）。將反應物在25℃下攪拌12小時。LCMS顯示反應完成。將其在減壓下濃縮以移除HCl/二乙醚。殘餘物藉由製備型HPLC[管柱：Phenomenex luna C18（250×50 mm×10 µm）；移動相，A：水（TFA），B：乙腈；B%：30%-70%，10 min]純化，得到呈白色固體狀之化合物 6（1.65 g，52.3%產率）。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d 4), δ ppm 0.82 - 1.21 (m, 17 H), 1.31 - 1.49 (m, 3 H), 1.52 - 2.25 (m, 4 H), 2.33 - 2.58 (m, 2 H), 2.78 - 3.06 (m, 3 H), 3.09 - 3.14 (m, 1 H), 3.20 (dt, J=11.63, 7.25 Hz, 1 H), 3.33 - 3.38 (m, 2 H), 3.38 - 3.50 (m, 1 H), 3.50 - 3.58 (m, 1 H), 3.64 - 3.94 (m, 2 H), 4.02 - 4.11 (m, 1 H), 4.14 - 4.33 (m, 3 H), 4.34 - 4.42 (m, 1 H), 4.46 - 4.58 (m, 1 H), 4.59 - 4.64 (m, 1 H), 4.66 - 4.72 (m, 1 H), 4.73 - 4.80 (m, 1 H), 7.17 - 7.45 (m, 5 H), 7.67 (br d, J=7.50 Hz, 1 H), 7.81 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 7.95 - 8.03 (m, 1 H), 8.20 - 8.28 (m, 1 H), 8.50 - 8.62 (m, 1 H)。
用於製備(S)-2-((2S,10S,13S)-13-胺基-2-異丙基-3,10,14-三甲基-9,12-二側氧基-6-硫雜-3,8,11-三氮雜十五烷醯胺基)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)吡咯啶-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基)-N,3-二甲基丁醯胺（ 7）之通用程序。
向化合物 6（1.65 g，1.38 mmol）於N,N-二甲基甲醯胺（15.0 mL）中之溶液中添加 啉（599 mg，6.88 mmol，605 µL）。將反應混合物在25℃下在N 2保護下攪拌12小時。LCMS顯示反應完成。將其在減壓下濃縮，得到殘餘物，其藉由製備型HPLC[管柱：C18（250×50 mm×10 µm）；移動相，A：水（NH 4HCO 3），B：乙腈；B%：35%-65%，10 min）純化，得到呈白色固體狀之化合物 7（880 mg，65.4%產率）。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4), δ ppm 0.74 - 1.04 (m, 24 H), 1.05 - 1.17 (m, 6 H), 1.27 - 1.45 (m, 4 H), 1.48 - 1.60 (m, 1 H), 1.61 - 2.23 (m, 8 H), 2.29 (br d, J=12.35 Hz, 3 H), 2.38 - 2.55 (m, 2 H), 2.59 - 2.89 (m, 5 H), 3.06 - 3.18 (m, 3 H), 3.27 (br d, J=1.22 Hz, 7 H), 3.39 (br d, J=9.29 Hz, 1 H), 3.47 - 3.74 (m, 2 H), 3.75 - 3.91 (m, 1 H), 3.96 - 4.41 (m, 5 H), 4.45 - 4.64 (m, 3 H), 4.71 (br dd, J=18.28, 8.99 Hz, 2 H), 7.07 - 7.45 (m, 5 H)。
用於製備(S)-N1-((3R,4S,7S,10S,18S,21S)-4-((S)-二級丁基)-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)-7,10-二異丙基-5,11,18,22-四甲基-6,9,17,20-四側氧基-2-氧雜-14-硫雜-5,8,11,16,19-五氮雜二十三烷-21-基)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-N5-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羥基己基)戊二醯胺（ MB-26）（ PL1）之通用程序。
向化合物 8（245 mg，0.487 mmol）及二環己基碳二亞胺（201 mg，0.974 mmol）於N,N-二甲基甲醯胺（4.0 mL）中之溶液中添加N-羥基丁二醯亞胺（112 mg，0.974 mmol）。在25℃下攪拌6小時之後，過濾反應混合物以移除沈澱物。將濾液添加至化合物 7（500 mg，0.511 mmol）於N,N-二甲基甲醯胺（7.50 mL）中之溶液中。將所得反應混合物在25℃再攪拌12小時。LCMS顯示反應完成。將其過濾，且將濾液直接裝載於製備型HPLC上以進行純化（管柱：Phenomenex C18（75×30 mm×3 µm）；移動相，A：水，B：乙腈；B%：30%-65%，8min），得到呈白色固體狀之產物 MB-26（ PL1）（85.0 mg，11.6%產率）。HRMS(ESI+)：m/z計算值1462.85(M+H) +，實驗值1462.8763。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d 4), δ ppm 0.80 - 0.91 (m, 6 H), 0.92 - 1.08 (m, 18 H), 1.09 - 1.20 (m, 6 H), 1.22 - 1.49 (m, 10 H), 1.61 (ddd, J=14.87, 11.77, 7.45 Hz, 5 H), 2.15 (br d, J=3.81 Hz, 10 H), 2.20 - 2.36 (m, 7 H), 2.45 - 2.55 (m, 2 H), 2.66 - 2.85 (m, 5 H), 3.11 - 3.17 (m, 2 H), 3.35 (s, 5 H), 3.43 (br dd, J=9.83, 4.11 Hz, 3 H), 3.47 - 3.51 (m, 3 H), 3.60 - 3.81 (m, 7 H), 3.88 (br dd, J=7.81, 4.35 Hz, 1 H), 4.15 - 4.29 (m, 3 H), 4.31 - 4.37 (m, 3 H), 4.51 - 4.57 (m, 1 H), 4.60 - 4.67 (m, 1 H), 4.74 (br d, J=8.46 Hz, 1 H), 6.74 - 6.84 (m, 2 H), 7.13 - 7.43 (m, 5 H)。 實例4. 化合物MB-24（PL2）之例示性合成
用於製備(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((5S,8S,16S,19S,22S,23R)-22-((S)-二級丁基)-1-(9H-茀-9-基)-5,16,19-三異丙基-23-甲氧基-8,15,21-三甲基-3,6,9,17,20-五側氧基-2-氧雜-12-硫雜-4,7,10,15,18,21-六氮雜二十五烷-25-醯基)吡咯啶-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯胺基)-3-苯基丙酸（ 9）之通用程序。
向化合物 MB-23（900 mg，1.13 mmo）及化合物 5（1.09 g，1.70 mmol）於N,N-二甲基甲醯胺（3 mL）中之混合物中添加HCl/二乙醚（6.40 M，236 µL）。將反應混合物在25℃下攪拌12小時。LCMS顯示反應完成。將其在減壓下濃縮以移除二乙醚。殘餘物藉由製備型HPLC[管柱：Phenomenex luna C18（250×50 mm×10 µm）；移動相，A：水（TFA），B：乙腈；B%：30%-60%，10 min]純化，得到呈白色固體狀之化合物 9（450 mg，32.6%產率）。LCMS(ESI+)：m/z計算值1213.7(M+H) +，實驗值1213.8。 1H NMR: (400 MHz, 甲醇- d 4), δ ppm, 0.81 - 0.89 (m, 3 H), 0.90 - 1.05 (m, 18 H), 1.06 - 1.17 (m, 6 H), 1.20 (d, J=6.72 Hz, 2 H), 1.24 - 1.47 (m, 6 H), 1.49 - 1.65 (m, 1 H), 1.69 - 1.94 (m, 3 H), 1.99 - 2.14 (m, 2 H), 2.15 - 2.28 (m, 1 H), 2.29 - 2.40 (m, 1 H), 2.45 (br s, 2 H), 2.89 (br s, 6 H), 3.09 - 3.14 (m, 1 H), 3.16 - 3.29 (m, 4 H), 3.34 (d, J=4.40 Hz, 4 H), 3.37 - 3.52 (m, 3 H), 3.62 - 3.74 (m, 1 H), 3.88 (br d, J=7.09 Hz, 3 H), 4.03 - 4.18 (m, 1 H), 4.24 (br d, J=6.24 Hz, 3 H), 4.32 - 4.46 (m, 2 H), 4.51 (s, 2 H), 4.67 - 4.78 (m, 2 H), 7.14 - 7.35 (m, 7 H), 7.36 - 7.43 (m, 2 H), 7.67 (br d, J=7.09 Hz, 2 H), 7.77 - 7.85 (m, 2 H)。
用於製備(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,6S,14S,17S,20S,21R)-3-胺基-20-((S)-二級丁基)-14,17-二異丙基-21-甲氧基-2,6,13,19-四甲基-4,7,15,18-四側氧基-10-硫雜-5,8,13,16,19-五氮雜二十三烷-23-醯基)吡咯啶-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯胺基)-3-苯基丙酸（ 10）之通用程序。
向化合物 9（800 mg，0.659 mmol）於N,N-二甲基甲醯胺（20.0 mL）中之溶液中添加 啉（373 mg，4.28 mmol）。將反應混合物在25℃下攪拌12小時。LCMS顯示反應完成。將其在真空中濃縮，得到殘餘物，其藉由製備型HPLC[管柱：C18（250×50 mm×10 µm）；移動相，A：水（NH 4HCO 3），B：乙腈；B%：20%-50%，10 min]純化，得到呈黃色固體狀之產物 10（625 mg，87.0%產率）。LCMS(ESI+)：m/z計算值991.6(M+H) +，實驗值991.7。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4 ), δ ppm 0.77 - 0.91 (m, 5H), 0.93 - 1.10 (m, 18H), 1.16 (br s, 1H), 1.19 (br d, J= 6.60 Hz, 2H), 1.24 - 1.33 (m, 1H), 1.39 (br d, J= 7.70 Hz, 1H), 1.42 (br d, J= 7.09 Hz, 2H), 1.46 - 1.68 (m, 2H), 1.72 - 1.94 (m, 3H), 2.00 - 2.13 (m, 2H), 2.15 - 2.27 (m, 2H), 2.31 (br s, 1H), 2.33 (s, 2H), 2.38 - 2.53 (m, 2H), 2.65 - 2.77 (m, 3H), 2.79 (br d, J= 9.78 Hz, 1H), 2.83 - 3.02 (m, 2H), 3.25 (br s, 4H), 3.33 - 3.38 (m, 5H), 3.38 - 3.54 (m, 2H), 3.69 (br d, J= 5.87 Hz, 2H), 3.74 - 3.89 (m, 1H), 4.07 - 4.21 (m, 1H), 4.25 - 4.33 (m, 1H), 4.38 (br s, 2H), 4.52 - 4.73 (m, 3H), 4.79 (br d, J= 8.19 Hz, 3H), 7.09 - 7.30 (m, 5H)。
用於製備(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,7S,10S,18S,21S,24S,30S,31R,32R,33R)-4-((S)-二級丁基)-24-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-30,31,32,33,34-五羥基-7,10,21-三異丙基-3-甲氧基-5,11,18-三甲基-6,9,17,20,23,27-六側氧基-14-硫雜-5,8,11,16,19,22,28-七氮雜三十四烷-1-醯基)吡咯啶-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯胺基)-3-苯基丙酸（ MB-24)（ PL2）之通用程序。
向化合物 8（50.0 mg，99.3 µmol）及二環己基碳二亞胺（40.9 mg，198 µmol）於DCM（0.40 mL）中之溶液中添加N-羥基丁二醯亞胺（22.8 mg，198 µmol）。在25℃下攪拌6小時之後，將化合物 10（103 mg，104 µmol）於DCM（0.40 mL）中之溶液添加至以上反應混合物中且將其在25℃再繼續攪拌12小時。LCMS顯示反應完成。將其過濾且將濾液直接裝載於製備型HPLC[管柱：Phenomenex Luna C18（80×30 mm×3 µm）；移動相，A：水，B：乙腈；B%：15%-45%，8 min]上進行純化，得到呈白色固體狀之產物 MB-24（ PL2）（200.6 mg，13.9% 產率）。HRMS（ESI+），m/z，計算值1476.83(M+H) +，實驗值1476.8430。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4), δ ppm 0.82 - 0.91 (m, 6H), 0.93 - 1.06 (m, 17H), 1.13 (dd, J= 16.03, 6.74 Hz, 3H), 1.20 (d, J= 6.79 Hz, 2H), 1.23 - 1.48 (m, 8H), 1.49 - 1.69 (m, 5H),,1.70 - 2.00 (m, 4H), 2.01 - 2.18 (m, 4H), 2.19 - 2.36 (m, 5H), 2.37 - 2.54 (m, 5H), 2.61 - 3.08 (m, 7H), 3.14 (s, 1H), 3.27 (br d, J= 14.90 Hz, 4H), 3.33 - 3.56 (m, 9H), 3.59 - 3.91 (m, 8H), 4.03 - 4.22 (m, 2H), 4.25 - 4.44 (m, 4H), 4.64 - 4.71 (m, 1H), 4.75 - 4.82 (m, 2H), 6.80 (d, J= 1.19 Hz, 2H), 7.13 - 7.20 (m, 1H), 7.21 - 7.30 (m, 4H)。 實例5. 化合物D5之例示性合成
用於製備2-(甲硫基)乙醛之通用程序。
將1,1-二甲氧基-2-甲基硫基-乙烷（2.00 g，14.7 mmol，1.96 mL）於HCl水溶液（0.32 M，5.70 mL）中之溶液在50℃攪拌0.5小時。將混合物在減壓下濃縮，得到淺黃色油狀物，將其在60℃下蒸餾，得到呈淡黃色油狀之2-甲基硫基乙醛（550 mg，6.10 mmol，41.5%產率）。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 2.03 (s, 3 H), 3.15 (d, J=3.50 Hz, 2 H), 9.46 (t, J=3.56 Hz, 1 H)。
用於製備(S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)吡咯啶-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基)-N,3-二甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基(2-(甲硫基)乙基)胺基)丁醯胺基)丁醯胺（ D5）之通用程序。
將(2S)-N-[(1S)-1-[[(1S,2R)-4-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1R,2S)-2-羥基-1-甲基-2-苯基-乙基]胺基]-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-丙基]吡咯啶-1-基]-2-甲氧基-1-[(1S)-1-甲基丙基]-4-側氧基-丁基]-甲基-胺甲醯基]-2-甲基-丙基]-3-甲基-2-(甲胺基)丁醯胺（MMAE，100 mg，139 μmol）、2-甲基硫基乙醛（25.1 mg，279 μmol）及乙酸（41.8 mg，696μmol）之混合物在25℃攪拌20分鐘，接著一次性添加氰基硼氫化鈉（43.8 mg，696 μmol）。將反應混合物在25℃下攪拌12小時。 LCMS顯示反應完成。將反應混合物過濾且濾液藉由製備型HPLC（管柱：Waters Xbridge BEH C18 100×30 mm×10 um；移動相：H 2O（10 mM NH 4HCO 3)-乙腈]；梯度：40%-75%B，經歷8.0 min）純化，得到呈白色固體狀之化合物 D5（21.9 mg，19.9%產率）。LCMS (ESI +): m/z 792.3 [M+H] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 0.67 - 0.80 (m, 6 H), 0.80 - 0.95 (m, 13 H), 0.96 - 1.09 (m, 6 H), 1.20 - 1.38 (m, 1 H), 1.42 - 1.61 (m, 2 H), 1.61 - 1.86 (m, 3 H), 1.86 - 2.01 (m, 2 H), 2.02 - 2.08 (m, 3 H), 2.08 - 2.18 (m, 1 H), 2.19 - 2.34 (m, 4 H), 2.36 - 2.46 (m, 1 H), 2.52 - 2.79 (m, 5 H), 2.95 - 3.11 (m, 2 H), 3.13 - 3.28 (m, 8 H), 3.32 - 3.39 (m, 1 H), 3.41 - 3.63 (m, 1 H), 3.78 (dd, J=9.38, 1.75 Hz, 1 H), 3.88 - 4.11 (m, 2 H), 4.38 - 4.61 (m, 2 H), 4.61 - 4.83 (m, 1 H), 5.27 - 5.48 (m, 1 H), 7.08 - 7.21 (m, 1 H), 7.23 - 7.39 (m, 4 H), 7.53 - 7.99 (m, 1 H), 8.07 - 8.26 (m, 1 H)。 實例6. 化合物D6之例示性合成
用於製備((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-二甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基(2-(甲硫基)乙基)胺基)丁醯胺基)丁醯胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚醯基)吡咯啶-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯基)-L-苯基丙胺酸（ D6）之通用程序。
向((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-二甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲胺基)丁醯胺基)丁醯胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚醯基)吡咯啶-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯基)-L-苯基丙胺酸（MMAF，110 mg，150美女μmol）於甲醇（2.00 mL）中之混合物中添加乙酸（45.2 mg，751 μmol）及2-甲基硫基乙醛（27.1 mg，301 μmol，2.00當量），接著一次性添加四氫硼酸鈉（47.2 mg，751 μmol）。將反應混合物在25℃下攪拌12小時。LCMS顯示反應完成。將反應混合物過濾且濾液藉由製備型HPLC（管柱：Waters Xbridge BEH C18 100×30 mm×10 um；移動相：[H 2O（10 mM NH 4HCO 3)-乙腈]；梯度：40%-75%B，歷經8.0 min）純化，得到呈白色固體狀之化合物 D6（57.4 mg，46.9%產率）。LCMS (ESI +): m/z 806.4 [M+H] +。 1H NMR (400 MHz, METHANOL-d4) δ 0.81 - 0.92 (m, 6 H), 0.95 - 1.06 (m, 11 H), 1.08 - 1.23 (m, 4 H), 1.12 - 1.14 (m, 1 H), 1.26 - 1.47 (m, 2 H), 1.49 - 1.67 (m, 1 H), 1.70 - 1.94 (m, 3 H), 1.99 - 2.18 (m, 5 H), 2.21 - 2.34 (m, 1 H), 2.31 - 2.33 (m, 1 H), 2.35 - 2.53 (m, 5 H), 2.59 - 2.79 (m, 3 H), 2.80 - 2.98 (m, 3 H), 3.14 (s, 1 H), 3.19 (dt, J=11.91, 7.30 Hz, 1 H), 3.24 - 3.28 (m, 2 H), 3.29 (s, 1 H), 3.32 - 3.45 (m, 7 H), 3.47 - 3.56 (m, 1 H), 3.61 - 3.78 (m, 1 H), 3.85 (dd, J=8.50, 2.13 Hz, 1 H), 4.01 - 4.21 (m, 1 H), 4.60 - 4.71 (m, 1 H), 4.72 - 4.84 (m, 2 H), 7.13 - 7.31 (m, 5 H)。 實例7. 抗體-藥物結合物曲妥珠單抗-MB24之例示性合成
50 mM結合緩衝液（pH 7.4）：1L含有6.86 g之Na 2HPO 4·2H 2O及1.58 g之NaH 2PO 4·H 2O的溶液。
10 mM DTPA水溶液：1L含有3.90 g之DTPA及1.20 g之NaOH的溶液。
10 mM TCEP水溶液：1L含有2.866 g之TCEP的溶液。
調配物緩衝液（pH 6.0）（10mM His/His-HCl）：1L含有0.73 g之His及1.12 g之His-HCl的溶液。
抗體製備：將627 mg凍乾曲妥珠單抗粉末溶解於22 mL純化水中。所得抗體溶液使用超過濾管（30KD）用50 mM結合緩衝液滲析4個循環，得到11.97 mg/ml之抗體濃度（使用曲妥珠單抗之消光係數ε 280=213380 M -1cm -1）。
曲妥珠單抗之還原：向含有2.5 mL（30 mg，0.000207 mmol之曲妥珠單抗）以上製備之曲妥珠單抗溶液的管中添加3.4 mL之50 mM結合緩衝液，接著添加87 μl之10 mM TCEP（0.00087 mmol，4.2當量）及41.4 µL之10 mM ZnCl 2溶液（0.000414 mmol，2當量）。將管放入恆溫混勻儀（Thermomixer）中且在25℃下運行還原反應3小時。
抗體與有效負載之間的結合：將5.68 mg（0.00385 mmol）之有效負載 MB-24（ PL2）溶解於769 µL之DMSO中，得到5 mM溶液。向以上曲妥珠單抗還原溶液中添加331 µL（0.00166 mmol，8當量）的含5 mM MB-24之DMSO溶液。將管放入恆溫混勻儀中且在25℃下運行結合反應1小時，接著添加5 mM半胱胺酸溶液（166 µL）。接著，添加10 mM DTPA溶液（83 µL）及10 mM DHAA溶液（166 µL）以移除鋅離子。
純化：使用超過濾管（30KD）用10 mM His/His-HCl調配物緩衝液對以上結合反應溶液進行純化持續8個循環，得到2.6 mL（8.2 mg/mL）之含 曲妥珠單抗 -MB24（21.3 mg，產率=68%，DAR = 4.3）之調配物緩衝液。
曲妥珠單抗 -MB24之物理化學表徵（有效負載 MB-24之消光係數：ε 280=764.4 M -1cm -1且ε 260=1280.1 M -1cm -1）。將額外表徵資料提供於表1中。 表 1
分析項目 方法 結果
單體含量 SEC-HPLC 99.5 %
DAR HIC-HPLC DAR=4.3 D0=0.27% D2=8.84% D4=72.25% D6=12.89% D8=5.76%
濃度 UV-Vis 質量濃度 8.2 mg/ml
莫耳濃度 抗體 56.6μmol/L
有效負載 237.5μmol/L
殘餘有效負載 RP-HPLC ＜LOD
內毒素 動態濁度法 0.7 EU/mg
實例8. 抗體-藥物結合物曲妥珠單抗-MB26之例示性合成
曲妥珠單抗之還原：向含有2.9 mL（35 mg，0.000240 mmol之曲妥珠單抗）之曲妥珠單抗溶液（11.97 mg/mL）的管中添加4 mL之50 mM結合緩衝液，接著添加92 μl之10 mM TCEP（0.00092 mmol，3.8當量）及48 µL之10 mM ZnCl 2溶液（0.00048 mmol，2當量）。將管放入恆溫混勻儀中且在25℃下運行還原反應3小時。
抗體與有效負載之間的結合：將8.43 mg（0.00576 mmol）之有效負載 MB-26（ PL1）溶解於1153 µL之DMSO中，得到5 mM溶液。向以上曲妥珠單抗還原溶液中添加384 µL（0.00192 mmol，8當量）的含5 mM MB-24之DMSO溶液。將管放入恆溫混勻儀中且在25℃下運行結合反應1小時，接著添加5 mM半胱胺酸溶液（192 µL）。接著，添加10 mM DTPA溶液（96 µL）及10 mM DHAA溶液（192 µL）以移除鋅離子。
純化：使用超過濾管（30KD）用10 mM His/His-HCl調配物緩衝液對以上結合反應溶液進行純化持續8個循環，得到3.7 mL(5.7 mg/mL）的含 曲妥珠單抗 -MB26（21.1 mg，產率=58%，DAR=4.3）之調配物緩衝液。
曲妥珠單抗 -MB26之物理化學表徵（有效負載 MB-26之消光係數：ε 280=639.5 M -1cm -1且 260=1006.3 M -1cm -1）。額外表徵資料提供於 表 2中。 表 2
分析項目 方法 結果
單體含量 SEC-HPLC 99.4 %
DAR HIC-HPLC DAR=4.3 D0 = 0.85% D2 = 10.63% D4 = 70.91% D6 = 10.83% D8 = 6.78%
濃度 UV-Vis 質量濃度 5.7 mg/ml
莫耳濃度 抗體 39.3 μmol/L
有效負載 165.1 μmol/L
殘餘有效負載 RP-HPLC ＜LOD
內毒素 動態濁度法 0.1 EU/mg
實例9. 雙藥物結合物曲妥珠單抗-MB0324之例示性合成
曲妥珠單抗之還原：向含有4.1 mL（9.83 mg/mL，40.3 mg之曲妥珠單抗）的含曲妥珠單抗之結合緩衝溶液的管中添加3.7 mL之50 mM結合緩衝液，接著添加116 μl之10 mM TCEP（0.00116 mmol，4.2當量）及55 μl之10 mM ZnCl 2（2當量）。將管放入恆溫混勻儀中且在25℃下運行還原反應3小時。
抗體與第一有效負載之間的結合：將4.02 mg（0.00272 mmol）之有效負載 MB-24溶解於544 μl之DMSO中，得到5 mM溶液。向以上曲妥珠單抗還原溶液中添加442 µL的含5 mM MB-24（0.00221 mmol，8當量/抗體分子）之DMSO溶液。將管放入恆溫混勻儀中且在25℃下運行結合反應1小時，接著添加221 μl之半胱胺酸溶液（5 mM）、110 μl之DTPA溶液（10 mM）及221 μl DHAA溶液（10 mM）。
純化：使用超過濾管（30KD）用結合緩衝液（含有10%之10 mM DTPA）對以上結合反應溶液進行純化持續4個循環，得到3.8 mL（8.48 mg/mL）的含 曲妥珠單抗 -MB24（32.2 mg）之結合緩衝液。基於HIC-HPLC，DAR值為4.2。
曲妥珠單抗 -MB24之還原：向含有以上 曲妥珠單抗 -MB24之結合緩衝液（3.8 mL，8.48 mg/mL）的管添加4.1 mL之50 mM結合緩衝液（含有10%之10 mM DTPA溶液）及110 μl之10 mM TCEP溶液（5當量）。將管放入恆溫混勻儀中且在25℃下運行還原反應2小時。
與第二有效負載之結合：將4.33 mg（0.0081 mmol）之有效負載 美迪替康（ MB -3）溶解於761 µL之DMSO中，得到5 mM溶液。向以上 曲妥珠單抗 -MB24還原溶液中添加264 µL（0.00132 mmol，6當量）的5 mM美迪替康之DMSO溶液。將管放入恆溫混勻儀中且在25℃下運行結合反應1小時。
純化：使用超過濾管（30KD）用10 mM His/His-HCl調配物緩衝液對以上結合反應溶液進行純化持續8個循環，得到1.6 mL（15.5 mg/mL）的含 曲妥珠單抗 -MB0324（24.8 mg，產率=62%，有效負載美迪替康之DAR=3.9，有效負載 MB-24之DAR=4.1）之調配物緩衝液。
曲妥珠單抗 -MB0324之物理化學表徵（美迪替康之消光係數：ε 280= 4546 M -1cm -1且ε 360= 17513 M -1cm -1； MB-24之消光係數：ε 280= 764.4 M -1cm -1且ε 260= 1280.1 M -1cm -1），且其他表徵資料提供於 表 3中。 表 3
分析項目 方法 結果
單體含量 SEC-HPLC 99.3 %
DAR HIC-HPLC DAR-MB3 = 3.9 DAR-MB24 = 4.1   
濃度 UV-Vis 質量濃度 15.5 mg/ml
莫耳濃度 抗體 106.9μmol/L
有效負載-MB24 416.9μmol/L
有效負載-MB3 438.3μmol/L
殘餘有效負載 RP-HPLC ＜LOD
內毒素 動態濁度法 0.3 EU/mg
實例10. 雙藥物結合物曲妥珠單抗-MB0326之例示性合成
曲妥珠單抗之還原：向含有3.2 mL（結合緩衝液中曲妥珠單抗之濃度為15.6 mg/mL）的含曲妥珠單抗之結合緩衝溶液的管中添加3.7 mL之50 mM結合緩衝液，接著添加131 μl（3.8當量）之10 mM TCEP及69 μl（2當量）之10 mM ZnCl 2。將管放入恆溫混勻儀中且在25℃下運行還原反應3小時。
抗體與第一有效負載之間的結合：將40.8mg（0.0279 mmol）有效負載 MB-26溶解於5.6 mL之DMSO中，得到5 mM溶液。向以上曲妥珠單抗還原溶液中添加552 µL的含5 mM MB-26（0.00276 mmol，8當量/抗體分子）之DMSO溶液。將管放入恆溫混勻儀中且在25℃下運行結合反應1小時，接著添加276 μl之半胱胺酸溶液（5 mM）、138 μl之DTPA溶液（10 mM）及276 μl DHAA溶液（10 mM）。
純化：使用超過濾管（30KD）用結合緩衝液（含有10%之10 mM DTPA）對以上結合反應溶液進行純化持續4個循環，得到7.8 mL（6 mg/mL）的含 曲妥珠單抗 -MB26（46.8 mg）之結合緩衝液。基於HIC-HPLC，DAR值為4.4。
曲妥珠單抗 -MB26之還原：向含有以上 曲妥珠單抗 -MB26之結合緩衝液（7.8 mL，6 mg/mL）的管中添加1.4 mL之50 mM結合緩衝液（含有10%之10 mM DTPA溶液）及129 μl之10 mM TCEP溶液（4當量）。將管放入恆溫混勻儀中且在25℃下運行還原反應2小時。
與第二有效負載之結合：將15.6mg（0.0137 mmol）之有效負載 美迪替康（ MB-3）溶解於2740 µL之DMSO中，得到5 mM溶液。向以上 曲妥珠單抗 -MB26（0.000309 mmol）還原溶液中添加371 µL（0.00185 mmol，6當量）的含5 mM美迪替康之DMSO溶液。將管放入恆溫混勻儀中且在25℃下運行結合反應1小時。
純化：使用超過濾管（30KD）用10 mM His/His-HCl調配物緩衝液對以上結合反應溶液進行純化持續8個循環，得到4 mL（10.1 mg/mL）的含 曲妥珠單抗 -MB0326（40.4 mg，產率=75%，有效負載美迪替康之DAR=3.6，有效負載 MB-26之DAR=4.4）之調配物緩衝液中。將80μL之1%聚山梨醇酯80添加至溶液中以用於最終儲存。
曲妥珠單抗 -MB0326之物理化學表徵（美迪替康之消光係數：ε 280= 4546 M -1cm -1且ε 360= 17513 M -1cm -1； MB-26之消光係數：ε 280= 639.5 M -1cm -1且ε 260= 1006.3 M -1cm -1），且其他表徵資料提供於 表 4中。 表 4
分析項目 方法 結果
單體含量 SEC-HPLC 98.5 %
DAR HIC-HPLC DAR-MB3 = 3.6 DAR-MB24 = 4.4
濃度 UV-Vis 10.1 mg/ml
殘餘有效負載 RP-HPLC ＜LOD
內毒素 動態濁度法 0.8 EU/mg
實例 11. 毒素及 ADC 之活體外分析
以1500個細胞/孔將175 µL細胞懸浮液施配於96孔盤中且在含濕氣培育箱（37℃，5%CO 2）中培育24小時。以5×溶液形式將25 µL不同濃度之化合物添加至盤中之細胞培養基（胎牛血清，Invitrogen）中，且在培育箱中培育120小時。在工作台上或在37℃水浴中解凍CCK-8，將10 µL CCK-8添加至培育盤之各孔中（注意不要將氣泡引入孔中，因為其將干擾O.D.讀數），且接著在培育箱中進一步培育1至4小時。使用SpectraMax i3x微量盤讀取器量測450 nm處之吸光度且計算細胞抑制率。藉由使用GraphPad Prism軟體生成IC 50曲線以及IC 50值。
毒素（ADC之預期代謝物）及ADC之 活體外細胞毒性描述於 表 5中。 表 5
化合物 細胞株（IC 50，nM）
SK-OV-3 NCI-H2110 HCC 827 OVCAR-3 SK-Br-3 NCI-N87 BT 474 JIMT-1
0.36 0.85 0.78 0.10 0.014 2.6 ＞ 1000 14
3.6 4.1 1.8 0.20            
7.7 10       1.7 4.8 5.1 2.1
38 12 108.1 67.6            
            0.41 0.94    0.49
            13.6 32.3    36.1
曲妥珠單抗-MB24-DAR4             0.008 0.05 0.13 0.24
曲妥珠單抗-MB26-DAR4             0.82 3.11 7.4 53
曲妥珠單抗-貝多汀（vedotin）-DAR4             0.0067 0.08 0.055 0.15
曲妥珠單抗美迪替康（DAR8）             0.14 2.5 ＞ 1000 1250
曲妥珠單抗-MB0324             0.0045 0.048 0.055 0.042
曲妥珠單抗-MB0326             0.69 2.2    15
實例 12. ADC 在 NCI-N87 CDX 模型中之 活體內功效
向各小鼠（雌性Balb/c-Nude，來自Vital Rivers）之右側腹皮下接種NCI-N87腫瘤細胞（5×10 6），該等細胞在0.2 mL PBS中與Matrigel（50:50）混合，用於腫瘤發育。動物在腫瘤接種後第6天，當平均腫瘤體積達到約160 mm 3時隨機分組，接著開始治療以進行功效研究。每組含有8隻小鼠。經由尾部靜脈以5 mL/kg之體積向腫瘤攜帶小鼠投與測試及對照物品。
使用卡尺在兩個維度中一週兩次量測腫瘤大小，且體積係使用下式以mm 3表示：V = 0.5 a × b 2，其中a及b分別為腫瘤之長及短維度。結果由平均值及標準誤差（平均值±SEM）表示。
統計分析：進行雙因素變異數分析以比較兩組之間的腫瘤體積。所有資料均使用GraphPad Prism 6.0分析且P＜0.05被視為統計顯著。統計分析及生物學觀測均被考慮在內。
腫瘤生長抑制：使用腫瘤大小來計算T/C值。使用下式計算相對腫瘤增殖率之T/C (%)：T/C (%) = (Ti/T0) / (Vi/V0) × 100%。藉由下式計算相對腫瘤生長抑制：TGI (%) = [1 - (Ti/T0) / (Vi/V0)] × 100%。Ti係指在治療之後的各指示時間點時量測之治療組之平均腫瘤體積；T0係指在分組時治療組之腫瘤體積；Vi係指在治療之後的各指示時間點時量測之媒劑對照組之平均腫瘤體積；V0係指在分組時媒劑對照組之腫瘤體積。若T/C＞40%，則無功效；若T/C=＜40%且p值＜0.05，則有腫瘤抑制。
ADC在NCI-N87 CDX模型中之抗腫瘤作用說明於 圖 1 及圖 2以及 表 6 及表 7中。如 圖 1中所說明，所有三種ADC（曲妥珠單抗-MB24-DAR4、曲妥珠單抗-MB3-DAR8及曲妥珠單抗-MB0324）展現劑量依賴性抗腫瘤活性（0.3、1及/或3 mg/kg）。類似地，曲妥珠單抗-MB26-DAR4、曲妥珠單抗-MB3-DAR4及曲妥珠單抗-MB0326展現劑量依賴性抗腫瘤活性（1及3 mg/kg），其中3 mg/kg劑量誘導＞90% TGI，如 圖 2中所示。雙藥物ADC（曲妥珠單抗-MB0326）展現與單藥物ADC（曲妥珠單抗-MB03-DAR4及曲妥珠單抗-MB26-DAR4）相當的活性。 表 6
模型 ADC 劑量 （mg/Kg ，單次靜脈注射） TGI （% ） （第30 天） 評述
            NCI-N87       媒劑 N/A --- ---
曲妥珠單抗-MB24-DAR4 0.3 40.2 活性
曲妥珠單抗-MB24-DAR4 1 80.0 活性
曲妥珠單抗-MB24-DAR4 3 96.2 高度活性
曲妥珠單抗-MB3-DAR8 0.3 37.1 無活性
曲妥珠單抗-MB3-DAR8 1 82.9 活性
曲妥珠單抗-MB0324 0.3 40.5 活性
曲妥珠單抗-MB0324 1 73.2 活性
表 7
模型 ADC 劑量 （mg/Kg ，單次靜脈注射） TGI （% ） （第44 天） 評述
            NCI-N87       媒劑 N/A --- ---
曲妥珠單抗-MB3-DAR4 1 68.6 活性
曲妥珠單抗-MB3-DAR4 3 92.0 高度活性
曲妥珠單抗-MB26-DAR4 1 64.7 活性
曲妥珠單抗-MB26-DAR4 3 90.6 高度活性
曲妥珠單抗-MB0326 1 58.1 活性
曲妥珠單抗-MB0326 3 93.2 高度活性
實例 13. ADC 在 JIMT-1 CDX 模型中之 活體內功效
向各小鼠（Scid-Beige，來自Shanghai Lingchang Biotech）之右側腹皮下接種JIMT-1腫瘤細胞（1×10 7），該等細胞在0.2 mL PBS中與Matrigel（50:50）混合，用於腫瘤發育。動物在腫瘤接種後第6天，當平均腫瘤體積達到約175 mm 3時隨機分組，接著開始治療以進行功效研究。每組含有8隻小鼠。經由尾部靜脈以5 mL/kg之體積向腫瘤攜帶小鼠投與測試及對照物品。
使用卡尺在兩個維度中一週兩次量測腫瘤大小，且體積係使用下式以mm 3表示：V = 0.5 a × b 2，其中a及b分別為腫瘤之長及短維度。結果由平均值及標準誤差（平均值±SEM）表示。
統計分析：進行雙因素變異數分析以比較兩組之間的腫瘤體積。所有資料均使用GraphPad Prism 6.0分析且P＜0.05被視為統計顯著。統計分析及生物學觀測均被考慮在內。
腫瘤生長抑制：使用腫瘤大小來計算T/C值。使用下式計算相對腫瘤增殖率之T/C (%)：T/C (%) = (Ti/T0) / (Vi/V0) × 100%。藉由下式計算相對腫瘤生長抑制：TGI (%) = [1 - (Ti/T0) / (Vi/V0)] × 100%。Ti係指在治療之後的各指示時間點時量測之治療組之平均腫瘤體積；T0係指在分組時治療組之腫瘤體積；Vi係指在治療之後的各指示時間點時量測之媒劑對照組之平均腫瘤體積；V0係指在分組時媒劑對照組之腫瘤體積。若T/C＞40%，則無功效；若T/C=＜40%且p值＜0.05，則有腫瘤抑制。
ADC在JIMT-1 CDX模型中之抗腫瘤作用說明於 圖 3 及圖 4以及 表 8 及表 9中。如 圖 3中所說明，所有三種ADC（曲妥珠單抗-MB24-DAR4、曲妥珠單抗-MB3-DAR8及曲妥珠單抗-MB0324）展現劑量依賴性抗腫瘤活性（0.3、1及/或3 mg/kg），其中3 mg/kg之曲妥珠單抗-MB0324展示與曲妥珠單抗-MB24-DAR4相當的活性。同樣地，曲妥珠單抗-MB26-DAR4、曲妥珠單抗-MB3-DAR4及曲妥珠單抗-MB0326展現劑量依賴性抗腫瘤活性（1及3 mg/kg），如 圖 4中所示。在此研究中，在1或3 mg/kg下，雙藥物ADC（曲妥珠單抗-MB0326）顯示相較於單藥物ADC（曲妥珠單抗-MB3-DAR4及曲妥珠單抗-MB26-DAR4）略微優良的腫瘤生長抑制作用。 表 8
模型 ADC 劑量 （mg/Kg ，單次靜脈注射） TGI （% ） （第28 天） 評述
            JIMT-1       媒劑 N/A --- ---
曲妥珠單抗-MB24-DAR4 0.3 40.1 活性
曲妥珠單抗-MB24-DAR4 1 79.6 活性
曲妥珠單抗-MB24-DAR4 3 99.4 高度活性
曲妥珠單抗-MB3-DAR8 0.3 20.8 無活性
曲妥珠單抗-MB3-DAR8 1 56.8 活性
曲妥珠單抗-MB0324 0.3 23.7 無活性
曲妥珠單抗-MB0324 1 68.9 活性
曲妥珠單抗-MB0324 3 96.6 高度活性
表 9
模型 ADC 劑量 （mg/Kg，單次靜脈注射） TGI（%） （第28天） 評述
            JIMT-1       媒劑 N/A --- ---
曲妥珠單抗-MB3-DAR4 1 19.4 無活性
曲妥珠單抗-MB3-DAR4 3 30.0 無活性
曲妥珠單抗-MB26-DAR4 1 25.7 無活性
曲妥珠單抗-MB26-DAR4 3 47.9 活性
曲妥珠單抗-MB03-DAR4 + 曲妥珠單抗-MB26-DAR4 各自3 42.6 活性
曲妥珠單抗-MB0326 1 38 無活性
曲妥珠單抗-MB0326 3 49.4 活性
•    等效物
熟悉本技藝者將認識到或者能夠僅使用常規實驗即可確定本文所描述之本發明特定實施例之許多等效方案。本發明之範疇並不意欲受限於以上描述，而實際上係如隨附申請專利範圍中所記載。
圖 1示出所有三種ADC（曲妥珠單抗-MB24-DAR4、曲妥珠單抗-MB3-DAR8及曲妥珠單抗-MB0324）展現劑量依賴性抗腫瘤活性（0.3、1及/或3 mg/kg）。
圖 2示出曲妥珠單抗-MB26-DAR4、曲妥珠單抗-MB3-DAR4及曲妥珠單抗-MB0326在3 mg/kg劑量誘導＞90% TGI下展現劑量依賴性抗腫瘤活性（1及3 mg/kg）。
圖 3示出所有三種ADC（曲妥珠單抗-MB24-DAR4、曲妥珠單抗-MB3-DAR8及曲妥珠單抗-MB0324）展現劑量依賴性抗腫瘤活性（0.3、1及/或3 mg/kg）。其中3 mg/kg之曲妥珠單抗-MB0324顯示與曲妥珠單抗-MB24-DAR4相當之活性。
圖 4示出曲妥珠單抗-MB26-DAR4、曲妥珠單抗-MB3-DAR4及曲妥珠單抗-MB0326展現劑量依賴性抗腫瘤活性（1及3 mg/kg）。

Claims (149)

  1. 一種 式（ I ）化合物， D—Q （ I ）， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： D由以下結構式表示： ，其中 R 1 為-H或-OH； R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基； 各 R 3 及 R 4 獨立地為-H、或C 1-C 3烷基； n為1至6之整數；且 Q為-H或-CH 3。
  2. 如請求項1之化合物，其中 R 1 為-H。
  3. 如請求項1之化合物，其中 R 1 為-OH。
  4. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中 R 2 為-CH 3。
  5. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中 R 2 為-C(=O)OH。
  6. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
  7. 如請求項1至3中任一項之化合物，其中 R 2 為 。
  8. 如請求項1之化合物，其中 R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)OH。
  9. 如請求項1之化合物，其中 R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
  10. 如請求項1之化合物，其中 R 1 為-H且 R 2 為 。
  11. 如請求項1之化合物，其中 R 1 為-OH且 R 2 為-CH 3。
  12. 如請求項1至11中任一項之化合物，其中 R 3 及 R 4 兩者均為-H。
  13. 如請求項1至11中任一項之化合物，其中 R 3 及 R 4 兩者均為-CH 3。
  14. 如請求項1至13中任一項之化合物，其中 n為1。
  15. 如請求項1至14中任一項之化合物，其中 Q為-H。
  16. 如請求項1至14中任一項之化合物，其中 Q為-CH 3。
  17. 如請求項1之化合物，其中 D由以下結構中之一者表示： 、 、 ，或 。
  18. 如請求項1之化合物，其中該化合物具有以下結構中之一者： D1、 D2、 D3、 D4、 D5、 D6、 D7，或 D8， 或其醫藥學上可接受之鹽。
  19. 一種 式（ II ）化合物 D—CH 2—NH—E—Z （ II ）， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： D由以下結構式表示： ，其中 R 1 為-H或-OH； R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基； 各 R 3 及 R 4 獨立地為-H、或C 1-C 3烷基； n為1至6之整數； E為包含2至10個胺基酸之肽；其中 E視情況經一或多個多元醇取代；且其中該肽之N端共價連接至 Z； Z為-C(=O)-L-Y、 或 ；其中 m表示1至10之整數； L為-(C 1-C 10伸烷基)-*、-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-、-(OCH 2CH 2) j-、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*；其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y之位點； L 1 為-(C 1-C 10伸烷基)-； R 5 為-H或-CH 3；且 Y為親電子基團或親核性基團。
  20. 如請求項19之化合物，其中 R 1 為-H。
  21. 如請求項19之化合物，其中 R 1 為-OH。
  22. 如請求項19至21中任一項之化合物，其中 R 2 為-CH 3。
  23. 如請求項19至21中任一項之化合物，其中 R 2 為-C(=O)OH。
  24. 如請求項19至21中任一項之化合物，其中 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
  25. 如請求項19至21中任一項之化合物，其中 R 2 為 。
  26. 如請求項19之化合物， R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)OH。
  27. 如請求項19之化合物，其中 R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
  28. 如請求項19之化合物，其中 R 1 為-H且 R 2 為 。
  29. 如請求項19之化合物，其中 R 1 為-OH且 R 2 為-CH 3。
  30. 如請求項19至29中任一項之化合物，其中 R 3 及 R 4 兩者均為-H。
  31. 如請求項19至29中任一項之化合物，其中 R 3 及 R 4 兩者均為-CH 3。
  32. 如請求項19至31中任一項之化合物，其中 n為1。
  33. 如請求項19至32中任一項之化合物，其中 E為2、3或4個胺基酸之肽。該肽中之各胺基酸為L胺基酸，或該肽中之至少一個胺基酸為D胺基酸。
  34. 如請求項19至33中任一項之化合物，其中 E包含一或多個選自甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸及白胺酸之胺基酸，且其中該麩醯胺酸或麩胺酸視情況經多元醇取代。
  35. 如請求項19至34中任一項之化合物，其中 E包含具有以下結構之胺基酸， ， 其中 R 6 為-H或C 1-C 6烷基。
  36. 如請求項35之化合物，其中 E包含具有以下結構之胺基酸， 。
  37. 如請求項19至33中任一項之化合物，其中 E係選自由以下組成之群： -Ala-Val-*、-Val-Ala-*、-Gly-Gly-*、-Val-Cit-*、-Cit-Val-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、 -Leu-Cit-*、- Cit-Leu-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、-Lys-Lys-*、-Ala-Lys-*、-Lys-Ala-*、-Val-Lys-*、 -Lys-Val-*、-Tyr-Arg-*、-Arg-Tyr-*、-Arg-Arg-*、-Ala-Ala-*、-Phe-Lys-*、 -Lys-Phe-*、-Thr-Thr-*、-Thr-Met-*、-Met-Thr-*、-Met-Tyr-*、-Tyr-Met-*、-Phe-Gln-*、 -Gln-Phe-*、-Gly-Ser-*、-Leu-Gln-*、-Gln-Leu-*、-Ser-Ala-*、-Ser-Gly-*、-Val-Thr-*、-Thr-Val-*、 -Val-Gln-*、-Ser-Val-*、-Val-Ser-*、-Ala-Met-*、-Met-Ala-*、-Val-Arg-*、-Arg-Val-*、-Phe-Ala-*、 -Ala-Phe-*、-Cit-Val-*、-Gln-Val-*、-Phe-Arg-*、-Arg-Phe-*、-Ala-Ala-Ala- *、 -Gly-Gly-Gly- *、-Ala-Val-Ala- *、-Gly-Val-Gly- *、-Ala-Val-Gly- *、-Gly-Phe-Lys-*、-Lys-Phe-Gly-*、 -Leu-Ala-Leu-*、-Val-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Val-*、-Val-Ala-Val-*、-Ala-Val-Ala-Gly- *、 -Gly-Phe-Gly-Gly- *、-Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Ala-Val-Gly-Gly-*、-Ala-Ala-Ala-Ala- *、-Ala-Val-Ala-Ala- *、-Ala-Leu-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Leu-Ala-*、-Gly-Phe-Leu-Gly-*及-Gly-Leu-Phe-Gly-*， 其中*指示共價連接至 Z之該等肽之N端。
  38. 如請求項37之化合物，其中 E係選自由以下組成之群：-L-Ala-L-Val-*、-L-Val-L-Ala-*、-L-Val-L-Lys-*、-L-Val-L-Arg-*、-L-Val-L-Cit-*、-L-Ala-L-Val-L-Glu-*、-L-Ala-L-Ala-L-Ala-*、-L-Ala-L-Val-L-Ala-*、-L-Ala-L-Ala-Gly-*、-L-Ala-L-Val-Gly-*、-Gly-Gly-L-Glu-*、-Gly-L-Phe-Gly-Gly-*、-Gly-L-Glu-Gly-Gly-*；其中*指示共價連接至 Z之該等肽之N端。
  39. 如請求項19至38中任一項之化合物，其中 Z為-C(=O)-L-Y。
  40. 如請求項19至38中任一項之化合物，其中 Z為 ；其中 m表示1至10之整數。
  41. 如請求項19至38中任一項之化合物，其中 Z為 ；其中 m表示1至10之整數。
  42. 如請求項19至39中任一項之化合物，其中 L為-(C 1-C 10伸烷基)-。
  43. 如請求項19至39中任一項之化合物，其中 L為-CH 2(OCH 2Ch 2) j-*、 -CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-或-(OCH 2CH 2) j-，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y之位點。
  44. 如請求項19至39中任一項之化合物，其中 L為-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y之位點。
  45. 如請求項19至39及44中任一項之化合物，其中 L 1 為-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH 2-、-CH 2-、-CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*或 -CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*，其中*指示共價連接至 Y之位點。
  46. 如請求項19至39中任一項之化合物，其中 Y為邁克爾受體基團（Michael acceptor group）、丁二醯亞胺、環氧化物或鹵素。
  47. 如請求項46之化合物，其中 Y為 、 、 、 或 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為H或C 1-C 3烷基。
  48. 如請求項19至38中任一項之化合物，其中 Z為 、 、 、 、 或 。
  49. 如請求項19至32中任一項之化合物，其中 -E-NH-CH 2- 具有以下結構中之一者，其中*指示共價連接至 Z之該等肽之N端： 、 、 、 或 。
  50. 如請求項19至32中任一項之化合物，其中 Z-E-NH-CH 2- 具有以下結構中之一者： 、 、 、 或 。
  51. 如請求項19之化合物，其中 D由以下結構中之一者表示： 、 、 或 。
  52. 如請求項19之化合物，其中該化合物具有以下結構中之一者， （PL1）， （PL2）， （PL3）， （PL4）， （PL5）， （PL6）， （PL7）， （PL8）， （PL9），或 （PL10）； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  53. 一種 式 （ III ）化合物， {D—CH 2—NH—E—Z'} p—C （ III ）， 其中： D由以下結構式表示： ，其中 R 1 為-H或-OH； R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基； R 3 及 R 4 獨立地為-H、或C 1-C 3烷基； n為1至6之整數； E為包含2至10個胺基酸之肽；其中 E視情況經一或多個多元醇取代；且其中該肽之N端共價連接至 Z '； Z '為-C(=O)-L-Y'-、 或 ；其中 m表示1至10之整數且*指示共價連接至該 C之位點； L為-(C 1-C 10伸烷基)-*、-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-、-(OCH 2CH 2) j-、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*；其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點； L 1 為-(C 1-C 10伸烷基)-； R 5 為-H或-CH 3；且 C表示細胞結合劑； Y '為藉由親電子基團與存在於該細胞結合劑上之反應性親核性基團反應而形成的基團； p具有在1至18之間的值。
  54. 如請求項53之化合物，其中 R 1 為-H。
  55. 如請求項53之化合物，其中 R 1 為-OH。
  56. 如請求項53至55中任一項之化合物，其中 R 2 為-CH 3。
  57. 如請求項53至55中任一項之化合物，其中 R 2 為-C(=O)OH。
  58. 如請求項53至55中任一項之化合物，其中 R 2 -C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
  59. 如請求項53至55中任一項之化合物，其中 R 2 為 。
  60. 如請求項53之化合物，其中 R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)OH。
  61. 如請求項53之化合物，其中 R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
  62. 如請求項53之化合物，其中 R 1 為-H且 R 2 為 。
  63. 如請求項53之化合物，其中 R 1 為-OH且 R 2 為-CH 3。
  64. 如請求項53至63中任一項之化合物，其中 R 3 及 R 4 兩者均為-H。
  65. 如請求項53至63中任一項之化合物，其中 R 3 及 R 4 兩者均為-CH 3。
  66. 如請求項53至65中任一項之化合物，其中 n為1。
  67. 如請求項53至66中任一項之化合物，其中 E為2、3或4個胺基酸之肽。該肽中之各胺基酸為L胺基酸，或該肽中之至少一個胺基酸為D胺基酸。
  68. 如請求項53至67中任一項之化合物，其中 E包含一或多個選自甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸及白胺酸之胺基酸，且其中該麩醯胺酸或麩胺酸視情況經多元醇取代。
  69. 如請求項53至67中任一項之化合物，其中 E包含具有以下結構之胺基酸， ， 其中 R 6 為-H或C 1-C 6烷基。
  70. 如請求項69之化合物，其中 E包含具有以下結構之胺基酸， 。
  71. 如請求項53至67中任一項之化合物，其中 E係選自由以下組成之群： -Ala-Val-*、-Val-Ala-*、-Gly-Gly-*、-Val-Cit-*、-Cit-Val-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、 -Leu-Cit-*、-Cit-Leu-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、-Lys-Lys-*、-Ala-Lys-*、-Lys-Ala-*、-Val-Lys-*、 -Lys-Val-*、-Tyr-Arg-*、-Arg-Tyr-*、-Arg-Arg-*、-Ala-Ala-*、-Phe-Lys-*、 -Lys-Phe-*、-Thr-Thr-*、-Thr-Met-*、-Met-Thr-*、-Met-Tyr-*、-Tyr-Met-*、-Phe-Gln-*、 -Gln-Phe-*、-Gly-Ser-*、-Leu-Gln-*、-Gln-Leu-*、-Ser-Ala-*、-Ser-Gly-*、-Val-Thr-*、-Thr-Val-*、 -Val-Gln-*、-Ser-Val-*、-Val-Ser-*、-Ala-Met-*、-Met-Ala-*、-Val-Arg-*、-Arg-Val-*、-Phe-Ala-*、 -Ala-Phe-*、-Cit-Val-*、-Gln-Val-*、-Phe-Arg-*、-Arg-Phe-*、-Ala-Ala-Ala- *、 -Gly-Gly-Gly- *、-Ala-Val-Ala- *、-Gly-Val-Gly- *、-Ala-Val-Gly- *、-Gly-Phe-Lys-*、-Lys-Phe-Gly-*、 -Leu-Ala-Leu-*、-Val-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Val-*、-Val-Ala-Val-*、-Ala-Val-Ala-Gly- *、 -Gly-Phe-Gly-Gly- *、-Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Ala-Val-Gly-Gly-*、-Ala-Ala-Ala-Ala- *、-Ala-Val-Ala-Ala- *、-Ala-Leu-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Leu-Ala-*、-Gly-Phe-Leu-Gly-*及-Gly-Leu-Phe-Gly-*， 其中*指示共價連接至 Z '之該等肽之N端。
  72. 如請求項71之化合物，其中 E係選自由以下組成之群：-L-Ala-L-Val-*、-L-Val-L-Ala-*、-L-Val-L-Lys-*、-L-Val-L-Arg-*、-L-Val-L-Cit-*、-L-Ala-L-Val-L-Glu-*、-L-Ala-L-Ala-L-Ala-*、-L-Ala-L-Val-L-Ala-*、-L-Ala-L-Ala-Gly-*、-L-Ala-L-Val-Gly-*、-Gly-Gly-L-Glu-*、-Gly-L-Phe-Gly-Gly-*、-Gly-L-Glu-Gly-Gly-*；其中*指示共價連接至 Z '之該等肽之N端。
  73. 如請求項53至72中任一項之化合物，其中 Z '為-C(=O)-L-Y'-。
  74. 如請求項53至72中任一項之化合物，其中 Z '為 ，其中 m表示1至10之整數，且*指示共價連接至該 C之位點。
  75. 如請求項53至72中任一項之化合物，其中 Z '為 ，其中 m表示1至10之整數，且*指示共價連接至該 C之位點。
  76. 如請求項53至73中任一項之化合物，其中 L為-(C 1-C 10伸烷基)-。
  77. 如請求項53至73中任一項之化合物，其中 L為-CH 2(OCH 2Ch 2) j-*、 -CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-或-(OCH 2CH 2) j-，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點。
  78. 如請求項53至73中任一項之化合物，其中 L為-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點。
  79. 如請求項53至73及78中任一項之化合物，其中 L 1 為-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH 2-、-CH 2-、-CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*或 -CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*，其中*指示共價連接至 Y '之位點。
  80. 如請求項53至79中任一項之化合物，其中 Y '為藉由親電子基團與存在於該細胞結合劑上之反應性親核性基團反應而形成的基團。
  81. 如請求項80之化合物，其中 Y '由以下各者形成 、 、 、 或 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為H或C 1-C 3烷基。
  82. 如請求項80之化合物，其中 Y '為 、 、 、 或 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為-H或C 1-C 3烷基且*指示共價連接至該 C之位點。
  83. 如請求項53至72中任一項之化合物，其中 Z '由以下各者形成： 、 、 、 、 或 。
  84. 如請求項53至72中任一項之化合物，其中 Z '為： 、 、 、 、 或 ； 其中*指示共價連接至 C之位點。
  85. 如請求項53至66中任一項之化合物，其中 -E-NH-CH 2- 具有以下結構中之一者，其中*指示共價連接至 Z '之該等肽之N端： 、 、 、 或 。
  86. 如請求項53至66中任一項之化合物，其中- Z ' -E-NH-CH 2- 由以下結構中之一者形成： 、 、 、 或 。
  87. 如請求項53至66中任一項之化合物，其中- Z ' -E-NH-CH 2 -為以下結構中之一者，其中*指示與該 C之連接點： 、 、 、 或 。
  88. 如請求項53之化合物，其中 D由以下結構中之一者表示： 、 、 或 。
  89. 如請求項53之化合物，其中D-CH 2-NH-E-Z'-由以下結構中之一者形成： （PL1）， （PL2）， （PL3）， （PL4）， （PL5）， （PL6）， （PL7）， （PL8）， （PL9），或 （PL10）。
  90. 如請求項53之化合物，其中{D-CH 2-NH-E-Z'} p-C為以下結構中之一者，其中 C為單株抗體且 p為藥物與抗體比（DAR）且 p為在約2至8、4至8或7至8之範圍內的平均數， （PL1'）， （PL2'）， （PL3'）， （PL4'）， （PL5'）， （PL6'）， （PL7'）， （PL8'）， （PL9'），或 （PL10'）。
  91. 如請求項53至90中任一項之化合物，其中 p為在約3至8或4至8之範圍內的平均數。
  92. 如請求項53至90中任一項之化合物，其中 p為8或平均數約4、約7.5或約8。
  93. 一種 式（ IV ）化合物， {D—CH 2—NH—E—Z'} p '—C—{W} t （ IV ）， 其中： D由以下結構式表示： ，其中 R 1 為-H或-OH； R 2 為C 1-C 3烷基、-C(=O)OH、-C(=O)OCH 3、-C(=O)OCH 2CH 2OH、-C(=O)OCH 2CH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2OH、-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH或雜芳基； R 3 及 R 4 獨立地為-H、或C 1-C 3烷基； n為1至6之整數； E為包含2至10個胺基酸之肽；其中 E視情況經一或多個多元醇取代；且其中該肽之N端共價連接至 Z '； Z '為-C(=O)-L-Y'-、 或 ；其中 m表示1至10之整數且*指示共價連接至該 C之位點； L為-(C 1-C 10伸烷基)-*、-CH 2(OCH 2CH 2) j-*、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-、-(OCH 2CH 2) j-、-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*；其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點； L 1 為-(C 1-C 10伸烷基)-； R 5 為-H或-CH 3；且 C表示細胞結合劑； Y '為藉由親電子基團與存在於該細胞結合劑上之反應性親核性基團反應而形成的基團； W為藉由化合物 W '與存在於 C上之反應性親核性基團反應而形成的基團；其中 W '為與連接子連接以使得 W '可與 C結合之細胞殺滅劑； p '及 t具有在1至10之間的值；其中 p '及 t可為相同或不同數且 p ': t為約1:1、約1:2或約2:1，且其中 p ': t為1:1或1:2、或2:1。
  94. 如請求項93之化合物，其中 R 1 為-H。
  95. 如請求項93之化合物，其中 R 1 為-OH。
  96. 如請求項93至95中任一項之化合物，其中 R 2 為-CH 3。
  97. 如請求項93至95中任一項之化合物，其中 R 2 為-C(=O)OH。
  98. 如請求項93至95中任一項之化合物，其中 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
  99. 如請求項93至95中任一項之化合物，其中 R 2 為 。
  100. 如請求項93之化合物，其中 R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)OH。
  101. 如請求項93之化合物，其中 R 1 為-H且 R 2 為-C(=O)NHCH 2CH 2CH 2OH。
  102. 如請求項93之化合物，其中 R 1 為-H且 R 2 為 。
  103. 如請求項93之化合物，其中 R 1 為-OH且 R 2 為-CH 3。
  104. 如請求項93至103中任一項之化合物，其中 R 3 及 R 4 兩者均為-H。
  105. 如請求項93至103中任一項之化合物，其中 R 3 及 R 4 兩者均為-CH 3。
  106. 如請求項93至105中任一項之化合物，其中 n為1。
  107. 如請求項93至106中任一項之化合物，其中 E為2、3或4個胺基酸之肽。該肽中之各胺基酸為L胺基酸，或該肽中之至少一個胺基酸為D胺基酸。
  108. 如請求項93至107中任一項之化合物，其中 E包含一或多個選自甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸及白胺酸之胺基酸，且其中該麩醯胺酸或麩胺酸視情況經多元醇取代。
  109. 如請求項93至107中任一項之化合物，其中 E包含具有以下結構之胺基酸， ， 其中 R 6 為-H或C 1-C 6烷基。
  110. 如請求項109之化合物，其中 E包含具有以下結構之胺基酸， 。
  111. 如請求項93至107中任一項之化合物，其中 E係選自由以下組成之群： -Ala-Val-*、-Val-Ala-*、-Gly-Gly-*、-Val-Cit-*、-Cit-Val-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、 -Leu-Cit-*、- Cit-Leu-*、-Leu-Ala-*、-Ala-Leu-*、-Lys-Lys-*、-Ala-Lys-*、-Lys-Ala-*、-Val-Lys-*、 -Lys-Val-*、-Tyr-Arg-*、-Arg-Tyr-*、-Arg-Arg-*、-Ala-Ala-*、-Phe-Lys-*、 -Lys-Phe-*、-Thr-Thr-*、-Thr-Met-*、-Met-Thr-*、-Met-Tyr-*、-Tyr-Met-*、-Phe-Gln-*、 -Gln-Phe-*、-Gly-Ser-*、-Leu-Gln-*、-Gln-Leu-*、-Ser-Ala-*、-Ser-Gly-*、-Val-Thr-*、-Thr-Val-*、 -Val-Gln-*、-Ser-Val-*、-Val-Ser-*、-Ala-Met-*、-Met-Ala-*、-Val-Arg-*、-Arg-Val-*、-Phe-Ala-*、 -Ala-Phe-*、-Cit-Val-*、-Gln-Val-*、-Phe-Arg-*、-Arg-Phe-*、-Ala-Ala-Ala- *、 -Gly-Gly-Gly- *、-Ala-Val-Ala- *、-Gly-Val-Gly- *、-Ala-Val-Gly- *、-Gly-Phe-Lys-*、-Lys-Phe-Gly-*、 -Leu-Ala-Leu-*、-Val-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Val-*、-Val-Ala-Val-*、-Ala-Val-Ala-Gly- *、 -Gly-Phe-Gly-Gly- *、-Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Ala-Val-Gly-Gly-*、-Ala-Ala-Ala-Ala- *、-Ala-Val-Ala-Ala- *、-Ala-Leu-Ala-Leu-*、-Leu-Ala-Leu-Ala-*、-Gly-Phe-Leu-Gly-*及-Gly-Leu-Phe-Gly-*， 其中*指示共價連接至 Z '之該等肽之N端。
  112. 如請求項111之化合物，其中 E係選自由以下組成之群：-L-Ala-L-Val-*、-L-Val-L-Ala-*、-L-Val-L-Lys-*、-L-Val-L-Arg-*、-L-Val-L-Cit-*、-L-Ala-L-Val-L-Glu-*、-L-Ala-L-Ala-L-Ala-*、-L-Ala-L-Val-L-Ala-*、-L-Ala-L-Ala-Gly-*、-L-Ala-L-Val-Gly-*、-Gly-Gly-L-Glu-*、-Gly-L-Phe-Gly-Gly-*、-Gly-L-Glu-Gly-Gly-*；其中*指示共價連接至 Z '之該等肽之N端。
  113. 如請求項93至112中任一項之化合物，其中 Z '為-C(=O)-L-Y'-。
  114. 如請求項93至112中任一項之化合物，其中 Z '為 ，其中 m表示1至10之整數，且*指示共價連接至該 C之位點。
  115. 如請求項93至112中任一項之化合物，其中 Z '為 ，其中 m表示1至10之整數，且*指示共價連接至該 C之位點。如請求項53至72中任一項之化合物，其中 Z為-C(=O)-L-Y。
  116. 如請求項93至113中任一項之化合物，其中 L為-(C 1-C 10伸烷基)-。
  117. 如請求項93至113中任一項之化合物，其中 L為-CH 2(OCH 2Ch 2) j-*、 -CH 2CH 2(OCH 2CH 2) j-或-(OCH 2CH 2) j-，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點。
  118. 如請求項93至113中任一項之化合物，其中 L為-CH 2CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*或-CH 2(OCH 2CH 2) jN(R 5)C(=O)-L 1-*，其中 j表示1至10之整數；且其中*指示共價連接至 Y '之位點。
  119. 如請求項93至113及118中任一項之化合物，其中 L 1 為-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 2-、 -CH 2CH 2-、-CH 2-、-CH 2CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*或 -CH 2OCH 2CH 2OCH 2CH 2NHC(=O)CH 2CH 2-*，其中*指示共價連接至 Y '之位點。
  120. 如請求項93至119中任一項之化合物，其中 Y '為藉由親電子基團與存在於該細胞結合劑上之反應性親核性基團反應而形成的基團。
  121. 如請求項120之化合物，其中 Y '係由以下形成 、 、 、 或 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為H或C 1-C 3烷基。
  122. 如請求項120之化合物，其中 Y '為 、 、 、 或 ； 其中 R 7 及 R 8 各自獨立地為-H或C 1-C 3烷基且*指示共價連接至該 C之位點。
  123. 如請求項93至112中任一項之化合物，其中 Z '由以下各者形成： 、 、 、 、 或 。
  124. 如請求項93至112中任一項之化合物，其中 Z '為： 、 、 、 、 或 ； 其中*指示共價連接至 C之位點。
  125. 如請求項93至106中任一項之化合物，其中 -E-NH-CH 2- 具有以下結構中之一者，其中*指示共價連接至 Z '之該等肽之N端： 、 、 、 或 。
  126. 如請求項93至106中任一項之化合物，其中- Z ' -E-NH-CH 2- 由以下結構中之一者形成： 、 、 、 或 。
  127. 如請求項93至106中任一項之化合物，其中- Z ' -E-NH-CH 2 -為以下結構中之一者，其中*指示與該 C之連接點： 、 、 、 或 。
  128. 如請求項93之化合物，其中 D由以下結構中之一者表示： 、 、 或 。
  129. 如請求項93之化合物，其中D—CH 2—NH—E—Z'—由以下結構中之一者形成： （PL1）， （PL2）， （PL3）， （PL4）， （PL5）， （PL6）， （PL7）， （PL8）， （PL9），或 （PL10）。
  130. 如請求項93至129中任一項之化合物，其中 W係藉由將化合物 W'共價連接至 C而形成。
  131. 如請求項93至129中任一項之化合物，其中 W'為可共價連接至 C之任何分子。
  132. 如請求項93之化合物，其中D—CH 2—NH—E—Z'—係由 PL1形成，且 W係由 PL2形成。
  133. 如請求項93之化合物，其中D—CH 2—NH—E—Z'—係由 PL3形成，且 W係由 PL4形成。
  134. 如請求項93之化合物，其中D—CH 2—NH—E—Z'—係由 PL5形成，且 W係由 PL6形成。
  135. 如請求項93之化合物，其中D—CH 2—NH—E—Z'—係由 PL7形成，且 W係由 PL8形成。
  136. 如請求項93之化合物，其中D—CH 2—NH—E—Z'—係由 PL9形成，且 W係由 PL10形成。
  137. 如請求項93之化合物，其中{D—CH 2—NH—E—Z'} p '—C—{W} t為以下結構中之一者，其中 C為單株抗體， p '及 t為藥物與抗體比（DAR），且 p ': t為1:1或約1:1，且 p '及 t為分別在約1至7之範圍內的平均數，或為平均數約2、約3、約4、約5或約6： （PL1''），或 （PL2''）。
  138. 如請求項93至139中任一項之化合物，其中 p '及 t兩者均為4之平均數。
  139. 如請求項93至139中任一項之化合物，其中 p ': t為約1:1、約1:2或約2:1。
  140. 如請求項93至139中任一項之化合物，其中 p ': t為1:1、或1:2、或2:1。
  141. 如請求項53至140中任一項之化合物，其中該細胞結合劑為抗體或其抗原結合片段。
  142. 如請求項141之化合物，其中該細胞結合劑為單株抗體或其抗原結合片段。
  143. 如請求項93之化合物，其中該化合物為曲妥珠單抗-MB0324， 。
  144. 如請求項93之化合物，其中該化合物為曲妥珠單抗-MB0326， 。
  145. 一種醫藥組合物，其包含如請求項53至144中任一項之化合物。
  146. 一種治療細胞增殖性疾病或病症或抑制異常細胞生長之方法，該方法包含向有需要之個體投與如請求項53至144中任一項之化合物或如請求項145之醫藥組合物。
  147. 如請求項146之方法，其中該方法用於治療癌症。
  148. 如請求項147之方法，其中該癌症為腺癌、腦癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、絨毛膜癌、CNS腫瘤、大腸或大腸直腸癌、瀰漫型內因性腦橋神經膠質瘤（DIPG）、子宮內膜癌、食道癌、尤文氏肉瘤（Ewing's sarcoma）、輸卵管癌、膽囊癌、胃癌、神經膠質母細胞瘤、頭頸癌、血液癌、霍奇金氏淋巴瘤（Hodgkin's lymphoma）、腎癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、梅克爾細胞癌（Merkel cell carcinoma）、間皮瘤、多發性骨髓瘤、骨髓發育不良症候群（MDS）、神經母細胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、骨肉瘤、胰臟癌、腹膜癌、前列腺癌、卵巢癌、腎癌、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、皮膚癌、小腸癌、鱗狀細胞癌、睪丸癌、甲狀腺癌、子宮癌或威爾姆氏瘤（Wilms tumor）。
  149. 如請求項148之方法，其中該癌症為乳癌。
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