JP2019507126A - ツブリシン類似体およびこれらの調製のための方法 - Google Patents
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Abstract
本発明は、新規な細胞毒性ツブリシン類似体および誘導体、その抗体薬物コンジュゲート、ならびにがんを含めた医学的状態を処置するためにこれらを使用する方法を対象とする。
Description
本発明は、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）中のペイロードとして有用な新規な天然物に由来し、かつ／またはツブリシンをベースとする化合物、ならびにＡＤＣとの関連で有用なペイロードリンカー化合物を対象とする。本発明はさらに、上記のペイロード、ペイロードリンカーおよびＡＤＣを含む組成物、ならびにがんを含めた病的状態を処置するためのこれらのペイロード、ペイロードリンカーおよびＡＤＣを使用するための方法に関する。
直接であるか、またはリンカーを介した、抗体への薬物のコンジュゲーションは、薬物のコンジュゲーションのための化学基の種類および場所、薬物放出の機序、薬物放出を実現する構造要素、ならびに放出された遊離薬物に対する構造改変を含めた種々の要因を考慮することが必要である。さらに、薬物が抗体内部移行の後に放出される場合、薬物放出の機序はコンジュゲートの細胞内輸送と調和しなければならない。
抗体を介した送達のためにいくつもの異なる薬物クラスが試みられてきたが、適切な毒性プロファイルを有しながら、抗体薬物コンジュゲートとして効果的であると証明されている薬物クラスはほんのわずかである。
ツブリシンは、粘液細菌から単離した強力な抗有糸分裂剤のクラスである（Ｊ． Ａｎｔｉｂｉｏｔ． ２０００、５３、８７９）。ツブリシンは、微小管へのチューブリンの組み立てを妨げ、ＡＤＣとして送達するためのペイロードとして評価されてきた（ＵＳ２０１１／００２７２７４Ａ１、ＷＯ２０１５／１５７５９２Ａ１、ＷＯ１４０８０２５１）。しかし、特性が改善されたさらなるツブリシンが依然として必要とされている。
本発明は、化合物およびこれを含有する医薬組成物、これらの調製、ならびに化合物、これに限らないが、主に抗がん剤についての使用に関する。具体的には、本発明は、式（Ｉ）の１つまたは複数の化合物：
［式中、
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、水素、ＯＲ７、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ、およびＮ（Ｒ７）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＮまたはＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
ｄは、１〜５であり、
ｑは、１〜３であり、
各Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＮＲＲ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、および−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から独立に選択され、各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルである］、
ならびに関連するリンカーペイロードおよび抗体薬物コンジュゲートに関し、
ただし、Ｒ６が、−ＯＣ（Ｏ）Ｒまたは−ＯＲであり、Ｗが、
別の態様において、本発明は、式ＩＩＩの抗体薬物コンジュゲート化合物に関し、抗体ＡＢは、トラスツズマブ、トラスツズマブ変異体（例えば、本明細書または国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１２／０５６２３４号において開示されているトラスツズマブ変異体）、オレゴボマブ、エドレコロマブ、セツキシマブ、ビトロネクチン受容体（αｖβ３）に対するヒト化モノクローナル抗体、アレムツズマブ、非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体を含めた抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体、１３１Ｉ Ｌｙｍ−１、非ホジキンリンパ腫の処置のためのマウス抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体を含めた抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体、抗ｃｄ３３抗体、ホジキン病または非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＣＤ２２ｍＡｂを含めた抗ｃｄ２２抗体、ラベツズマブ、ベバシズマブ、イブリツモマブチウキセタン、オファツムマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、イピリムマブ、およびゲムツズマブから選択される。
別の態様において、本発明は、Ｌが、１個もしくは複数の独立に選択されたアミノ酸ジラジカル、好ましくは、バリン、シトルリン、フェニルアラニン、リシン、アラニンおよびグリシンからなる群から選択される１個もしくは複数の独立に選択されたアミノ酸ジラジカルを含む、式ＩＩまたはＩＩＩの１つまたは複数の化合物に関する。
別の態様によれば、Ｌが、細胞内プロテアーゼによって、Ｐ、またはＰを含むラジカルから切断することができる、式ＩＩまたはＩＩＩの１つまたは複数の化合物に関する。
さらなる態様によれば、本発明は、式ＩＩＩの１つまたは複数の化合物に関し、抗体は、硫黄もしくは硫黄−硫黄結合を介した抗体のシステイン残基、アミド結合を介した抗体のリシン残基、またはアミド結合を介したグルタミン残基を介してアミノ酸ジラジカルに付着している。好ましくは、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異的抗体または抗体フラグメントである。
また別の態様によれば、本発明は、有効量の化合物（複数可）または塩（複数可）および薬学的に許容できる賦形剤、担体または添加剤を含む、式ＩＩＩの１つまたは複数の化合物および／またはその１つまたは複数の塩の医薬組成物に関する。このような医薬組成物は、チューブリン形成阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、およびＤＮＡ結合剤からなる群から選択される、治療的有効量の化学療法剤をさらに含み得る。
別の態様によれば、本発明は、腫瘍細胞またはがん細胞を死滅させるか、またはこれらの増殖を阻害する方法であって、ある量の式ＩＩＩの化合物、および／またはその１つまたは複数の塩で患者における腫瘍細胞またはがん細胞を処置することを含み、前記量は、腫瘍細胞またはがん細胞を死滅させるか、またはこれらの増殖を阻害するのに有効である、方法に関する。
本発明の別の態様は、それを必要とする患者に有効量の前記化合物および／またはコンジュゲートを投与することによって、がんを処置するために有効量の上記の化合物のいずれかの１つおよび／または上記の抗体薬物コンジュゲートのいずれかの１つを使用する方法に関する。
本発明は、細胞毒性ツブリシン類似体、前記細胞毒性ツブリシン類似体を含む抗体薬物コンジュゲート、ならびにがんおよび他の病的状態を処置するためにこれらを使用する方法を対象とする。本発明はまた、哺乳動物細胞または関連する病的状態の検出、診断、または処置のための、このような化合物および／またはコンジュゲートのインビトロ、インサイチュ、およびインビボでの使用方法に関する。
定義および略語
特に断りのない限り、下記の用語および語句は、本明細書において使用する場合、下記の意味を有することが意図される。本明細書において商品名が使用されるとき、商品名は、文脈によって他の指示がない限り、生成物製剤、ジェネリック薬物、および商品名の製品の活性医薬成分（複数可）を含む。
特に断りのない限り、下記の用語および語句は、本明細書において使用する場合、下記の意味を有することが意図される。本明細書において商品名が使用されるとき、商品名は、文脈によって他の指示がない限り、生成物製剤、ジェネリック薬物、および商品名の製品の活性医薬成分（複数可）を含む。
「抗体」（または「Ａｂ」もしくは「ＡＢ」）という用語は、本明細書では最も広範な意味で使用され、具体的には、所望の生物活性を示す、無傷のモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体フラグメントを包含する。無傷の抗体は、主に２つの領域：可変領域および定常領域を有する。可変領域は、標的抗原に結合し、標的抗原と相互作用する。可変領域は、特定の抗原上の特異的結合部位を認識し、これに結合する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。定常領域は、免疫系によって認識され、免疫系と相互作用し得る（例えば、Ｊａｎｅｗａｙら、２００１、Ｉｍｍｕｎｏ．Ｂｉｏｌｏｇｙ、第５版、Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい）。抗体は、任意のタイプまたはクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＡ）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）のものでもよい。抗体は、任意の適切な種から得たものでもよい。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトまたはマウス起源である。抗体は、例えば、ヒト、ヒト化またはキメラでもよい。
トラスツズマブは、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨げるモノクローナル抗体、例えば、Ｈｅｒｃｌｏｎ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ、またはこれらの抗体の修飾された形態を指す。
「特異的に結合する」および「特異的結合」という用語は、所定の抗原に抗体が結合することを指す。抗体は、典型的には、少なくとも約１×１０７Ｍ−１の親和性で所定の抗原に結合し、さらに、所定の抗原またはそれと密接に関連する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）に結合する場合の親和性の少なくとも２倍大きな親和性で所定の抗原に結合する。
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書において使用する場合、実質的に均質な抗体の集団から得た抗体を指し、すなわち、この集団を含む個々の抗体は、少量で存在し得る考えられる天然の変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。「モノクローナル」という修飾語は、抗体の実質的に均質な集団から得たものとしての抗体の性質を示し、何らかの特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されない。「モノクローナル抗体」という用語は特に、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一かまたは相同であり、一方で、鎖（複数可）の残部が、別の種に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、およびこのような抗体のフラグメントの対応する配列と同一かまたは相同である「キメラ」抗体であって、ただし所望の生物活性を示すものを含む。
「無傷の抗体」は、抗体クラスごとに適宜、抗原結合性可変領域、ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）、ならびに重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４を含むものである。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。無傷の抗体は、抗体のＦｃ領域（例えば、天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に起因するこれらの生物活性を指す１つまたは複数の「エフェクター機能」を有し得る。抗体エフェクター機能の例は、補体依存性細胞毒性、抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）および抗体依存性細胞媒介食作用を含む。
「抗体フラグメント」は、好ましくは、抗原結合性領域またはその可変領域を含む、無傷の抗体の部分を含む。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント、二特異性抗体、三特異性抗体、四特異性抗体、線状抗体、単鎖抗体分子、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、抗体フラグメント（複数可）から形成される多特異性抗体フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生されるフラグメント（複数可）、または標的抗原（例えば、がん細胞抗原、ウイルス抗原または微生物抗原）に免疫特異的に結合する上記のいずれかのエピトープ結合フラグメントが含まれる。
「可変」という用語は、抗体との関連で、配列において広範に異なる抗体の可変ドメインの特定の部分を指し、その特定の抗原についてのそれぞれの特定の抗体の結合および特異性において使用される。この可変性は、軽鎖および重鎖可変ドメインにおける「超可変領域」と称される３つのセグメントにおいて濃縮している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。天然重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、３つの超可変領域によって接続した４つのＦＲを含む。
「超可変領域」という用語は、本明細書において使用されるとき、抗原結合性に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｌ３）；Ｋａｂａｔら（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１））からのアミノ酸残基、ならびに／または「超可変ループ」（例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（１４２）および９６〜１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、１９８７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７）からのこれらの残基を含む。ＦＲ残基は、本明細書において定義したような超可変領域残基以外のこれらの可変ドメイン残基である。
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、一本鎖ポリペプチド中に存在する。典型的には、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨおよびＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能とする。ｓｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２６９〜３１５頁（１９９４）を参照されたい。
「二特異性抗体」という用語は、２つの抗原結合性部位を有する小さな抗体フラグメントを指し、フラグメントは、同じポリペプチド鎖中の可変軽ドメイン（ＶＬ）に接続した可変重ドメイン（ＶＨ）を含む。短すぎて、同じ鎖上の２つのドメインの間の対合ができないリンカーを使用することによって、ドメインは別の鎖の相補的ドメインと対合させることを余儀なくされ、２つの抗原結合性部位を生じさせる。二特異性抗体は、例えば、ＥＰ０４０４０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４〜６４４８により詳細に記載されている。
非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有するキメラ抗体である。大部分は、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えば、マウス、ラット、ウサギまたはヒトではない霊長類の超可変領域からの残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によって、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基で置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体において見出されない残基を含み得る。これらの修飾を行って、抗体の能力をさらに改良する。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変ループの全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ヒト化抗体は場合によりまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２〜５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３〜３２９；およびＰｒｅｓｔａ、１９９２、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３〜５９６を参照されたい。
本明細書において使用する場合、「単離された」とは、（ａ）自然源、例えば、植物もしくは動物の細胞、または細胞培養物、または（ｂ）合成有機化学反応混合物の他の構成要素から分離していることを意味する。本明細書において使用する場合、「精製された」とは、単離されたとき、単離物が、単離物の重量によって、少なくとも９５％、および別の態様において、少なくとも９８％の化合物（例えば、コンジュゲート）を含有することを意味する。「単離された」抗体は、その自然環境の構成要素から同定および分離および／または回収された抗体である。その自然環境の汚染要素は、抗体についての診断用または治療上の使用を妨げる材料であり、このような要素としては、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が挙げられる。好ましい実施形態において、抗体は、（１）ローリー法によって決定した場合、抗体が９５重量％超、最も好ましくは９９重量％超になるまで、（２）スピニングカップ配列決定装置を使用することによって、Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クマシーブルー、もしくは好ましくは銀染色を使用して、還元条件もしくは非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均質になるまで精製される。抗体の自然環境の少なくとも１つの構成要素が存在しなくなることから、単離された抗体には、組換え細胞内の元の位置に存在する抗体も含まれる。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
「アポトーシスを誘発する」抗体は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化、および／または膜小胞（アポトーシス小体と称される）の形成によって決定されるような、プログラム細胞死を誘発する抗体である。細胞は、腫瘍細胞、例えば、乳房、卵巣、胃、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、結腸、甲状腺、膵臓または膀胱の細胞である。アポトーシスと関連する細胞事象を評価するために様々な方法が利用可能である。例えば、ホスファチジルセリン（ＰＳ）転座は、アネキシン結合によって測定することができ、ＤＮＡ断片化は、ＤＮＡラダリングによって評価することができ、ＤＮＡ断片化と共に核／クロマチン凝縮は、低二倍体細胞における増加によって評価することができる。
「治療有効量」という用語は、哺乳動物において疾患または障害を処置するのに有効な薬物の量を指す。がんの場合、治療有効量の薬物は、がん細胞の数を低減させ、腫瘍サイズを低減させ、末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅延および好ましくは停止させ）、腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅延および好ましくは停止させ）、腫瘍増殖をある程度阻害し、かつ／またはがんと関連する症状の１つもしくは複数をある程度緩和し得る。薬物が存在するがん細胞の増殖を阻害し、かつ／または存在するがん細胞を死滅し得る程度まで、薬物は細胞増殖抑制性および／または細胞毒性であり得る。がん療法のために、有効性は、例えば、疾患の進行までの時間（ＴＴＰ）をアセスメントすることによって、および／または奏効率（ＲＲ）を決定することによって測定することができる。
「実質的な量」という用語は、混合物または試料の集団の大部分、すなわち、５０％超を指す。
「細胞内代謝物」という用語は、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）上の細胞内の代謝過程または反応によって生じる化合物を指す。代謝過程または反応は、酵素的プロセス、例えば、ＡＤＣのペプチドリンカーのタンパク質分解的切断であり得る。細胞内代謝物には、これらに限定されないが、細胞中への侵入、拡散、取込みまたは輸送の後に、細胞内切断を受けた抗体および遊離薬物が含まれる。
「細胞内で切断された」および「細胞内切断」という用語は、ＡＤＣ上の細胞内の代謝過程または反応などを指し、これによって、共有結合的付着、例えば、薬物部分および抗体の間のリンカーが切断され、遊離薬物、または細胞内の抗体から解離したコンジュゲートの他の代謝物をもたらす。ＡＤＣの切断された部分は、このように細胞内代謝物である。
「バイオアベイラビリティー」という用語は、患者に投与された所与の量の薬物の全身性アベイラビリティー（すなわち、血液／血漿レベル）を指す。バイオアベイラビリティーは、投与された剤形から全身循環に達する薬物の時間（速度）および総量（程度）の両方の測定値を示す定数項である。
「細胞毒性活性」という用語は、ＡＤＣの細胞死滅性、細胞増殖抑制性もしくは抗増殖性の効果、または前記ＡＤＣの細胞内代謝物を指す。細胞毒性活性は、細胞の半分が残存する単位体積当たりの濃度（モルまたは質量）であるＩＣ５０値として表される場合もある。
「障害」は、薬物または抗体薬物コンジュゲートによる処置の利益を受けるあらゆる状態である。これには、哺乳動物を対象となる障害に罹患しやすくする病的状態を含めた慢性および急性の障害または疾患も含まれる。本明細書において処置される障害の非限定的な例としては、良性および悪性のがん；白血病およびリンパ性悪性腫瘍、ニューロン、グリア、アストロサイト、視床下部および他の腺、マクロファージ、上皮、間質および胞胚腔の障害；ならびに炎症性、血管形成および免疫の障害が挙げられる。
「がん」および「がんの」という用語は、調節不能な細胞増殖によって典型的には特徴付けられる哺乳動物における生理学的状態または障害を指すか、またはそれらを表す用語である。「腫瘍」は、１つまたは複数のがん細胞を含む。
「患者」の例には、これらに限定されないが、ヒト、ラット、マウス、モルモット、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、鳥および家禽が含まれる。例示的な実施形態において、患者は、ヒトである。
「処置する」または「処置」という用語は、文脈によって他の指示がない限り、治療的処置、および再発を予防するための予防的措置を指し、その目的は、望ましくない生理学的変化または障害、例えば、がんの発生または拡散を阻害または遅延させる（和らげる）ことである。本発明の目的のために、有益または所望の臨床結果には、これらに限定されないが、検出可能または検出不可能のいずれにせよ、症状の軽減、疾患の程度の低減、疾患の安定化した（すなわち、悪化しない）状態、疾患の進行の遅れまたは遅延、病態の寛解または緩和、および軽快（部分的または全体的のいずれにせよ）が含まれる。「処置」はまた、処置を受けない場合の予想される生存と比較して延長された生存を意味する場合がある。処置を必要としているものは、状態または障害を既に有するもの、および状態または障害を有する傾向があるものを含む。
がんとの関連において、「処置すること」という用語は、腫瘍細胞、がん細胞、または腫瘍の増殖を阻害すること、腫瘍細胞またはがん細胞の複製を阻害すること、全体的な腫瘍量を和らげること、またはがん細胞の数を減少させること、および疾患と関連する１つまたは複数の症状を寛解させることのいずれかまたは全てを含む。
自己免疫疾患との関連において、「処置すること」という用語は、これらに限定されないが、自己免疫性抗体を産生する細胞を含めた自己免疫性の病態と関連する細胞の複製を阻害すること、自己免疫性抗体負荷を和らげること、および自己免疫疾患の１つまたは複数の症状を寛解させることのいずれかまたは全てを含む。
感染症との関連において、「処置すること」という用語は、感染症をもたらす病原体の増殖、増殖作用または複製を阻害すること、および感染症の１つまたは複数の症状を寛解させることのいずれかまたは全てを含む。
「添付文書」という用語は、このような治療生成物の使用に関する適応症（複数可）、用法、投与量、投与、禁忌および／または警告についての情報を含有する、治療製品の市販のパッケージにおいて通例含まれる指示を指すために使用される。
本明細書において使用する場合、「細胞」、「細胞系」および「細胞培養物」という用語は互換的に使用され、このような名称は全て、子孫を含む。「形質転換体」および「形質転換細胞」という語は、移行の数にこだわらずに、初代対象細胞および培養物またはこれらに由来する子孫を含む。また意図的なまたは偶発性の変異によって、子孫全てがＤＮＡ量において必ずしも正確に同一であるとは限らないことも理解されよう。最初の形質転換細胞においてスクリーニングされたものと同じ機能または生物活性を有する変異体子孫が含まれる。異なる名称も意図されるが、そのような場合は文脈から明らかである。
他の指示がない限り、「アルキル」という用語は、それ自体で、または別の用語の部分として、示した数の炭素原子を有する直鎖または分岐状の飽和炭化水素を指す（例えば、「Ｃ１〜Ｃ８」アルキルは、１〜８個の炭素原子を有するアルキル基を指す；「Ｃ１〜Ｃ６」アルキルは、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基を指す、等）。炭素原子の数が示されていないとき、アルキル基は、１〜８個の炭素原子、好ましくは、１〜６個の炭素原子を有する。代表的な直鎖Ｃ１〜Ｃ８アルキルには、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチルおよびｎ−オクチルが含まれ、一方、分岐状Ｃ１〜Ｃ８アルキルには、これらに限定されないが、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、および−２−メチルブチルが含まれ、不飽和Ｃ２〜Ｃ８アルキルには、これらに限定されないが、ビニル、アリル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニルおよび３−メチル−１−ブチニルが含まれる。
他の指示がない限り、「アルキレン」は、それ自体で、または別の用語の部分として、述べた数の炭素原子、典型的には、１〜１８個の炭素原子の、親アルカンの同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することに由来する２つの一価ラジカル中心を有する、飽和の分岐鎖または直鎖または環状の炭化水素ラジカルを指す。典型的なアルキレンラジカルには、これらに限定されないが、メチレン（−ＣＨ２−）、１，２−エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）などが含まれる。「Ｃ１〜Ｃ１０」直鎖アルキレンは、式−（ＣＨ２）１〜１０−の直鎖飽和炭化水素基である。Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンの例には、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オシチレン、ノニレンおよびデカレンが含まれる。本発明の特定の実施形態において、アルキレンは、１〜９個、１〜８個、１〜７個、および１〜６個の炭素を有する。
「アルケニル」は、少なくとも２個の炭素原子および少なくとも１個の炭素−炭素二重結合からなる本明細書に定義されているようなアルキル基を指す。代表例には、これらに限定されないが、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−、２−、または３−ブテニルなどが含まれる。「アルケニレン」は、アルケニルの二価形態を指す。
他の指示がない限り、「ヘテロアルキル」という用語は、それ自体で、または別の用語と組み合わせて、特に明記しない限り、完全飽和であり、または１〜３度の不飽和を含有し、述べた数の炭素原子、ならびにＯ、Ｎ、Ｓｉ、Ｓおよび／またはＰからなる群から選択される１〜３個のヘテロ原子からなる、安定的な直鎖もしくは分岐鎖炭化水素、またはこれらの組合せを意味し、窒素および硫黄原子は、酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は、四級化されていてもよい。ヘテロ原子（複数可）であるＯ、ＮおよびＳは、ヘテロアルキル基の任意の内側の位置に配置されていてもよい。ヘテロ原子であるＳｉは、アルキル基が分子の残部に付着している位置を含めたヘテロアルキル基の任意の位置に配置されていてもよい。最大２個のヘテロ原子が連続していてもよい。
「ハロ」または「ハロゲン」とは、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを指す。
「ハロ（Ｃ１〜６−アルキル）」とは、１〜３個または１〜２個のハロ基で置換されているＣ１〜６−アルキル基を指し、Ｃ１〜６−アルキルおよびハロは、本明細書に定義されている通りである。この用語は、例えば、ＣＦ３を含む。
用語「エポキシ」、または「エポキシ基」または「エポキシ残基」は、下記のような単結合によって連結されている炭素原子および酸素原子を含む３員環を指すものとして当業者には公知である。
したがって、用語「エポキシド」は、本明細書において上記で定義したような少なくとも１個のエポキシ基を含む化合物を指す。
他の指示がない限り、「ヘテロアルキレン」という用語は、それ自体で、または別の置換基の部分として、ヘテロアルキル（上記で考察するような）に由来する二価基を意味する。ヘテロアルキレン基について、ヘテロ原子はまた、鎖末端のいずれかまたは両方を占めることができる。
他の指示がない限り、「アリール」は、それ自体で、または別の用語の部分として、親芳香族環系の単一の炭素原子からの１個の水素原子を除去して得られた、６〜２０個の炭素原子、好ましくは、６〜１４個の炭素原子の置換または非置換の一価芳香族炭化水素ラジカルを意味する。典型的なアリール基には、これらに限定されないが、ベンゼン、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニルなどに由来するラジカルが含まれる。置換芳香族基（例えば、アリール基）は、下記の基：Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮの１つまたは複数、好ましくは１〜５つで置換することができる。各Ｒ’は、−Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキルおよびアリール、好ましくは、非置換アリールから独立に選択される。いくつかの実施形態において、置換芳香族基は、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＣＯＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’および−ＳＲ’の１つまたは複数をさらに含むことができる。
用語「ヘテロアリール」は、本明細書において使用する場合、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を有し、少なくとも１個の炭素原子を含有する、５〜１４員、例えば、５〜６員の芳香族複素環式環を指す。ヘテロアリールは、単環式、二環式、または三環式環系であり得る。代表的なヘテロアリールは、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサジアゾリル、ピリジル、フリル、ベンゾフラニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、キノリニル、ピロリル、インドリル、オキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、ピリミジル、アゼピニル、オキセピニル、およびキノキサリニルである。ヘテロアリールは、置換されていてもよい。典型的な置換基には、これらに限定されないが、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ−、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３ −、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ３ ２−、ＰＯ３Ｈ２、−ＡｓＯ２Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２ −、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２、Ｃ１〜Ｃ２０ヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、保護基またはプロドラッグ部分が含まれ、各Ｘは、独立に、ハロゲン：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉであり、各Ｒは、独立に、−ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。
「アリーレン」、「ヘテロアリーレン」という用語は、それぞれ、「アリール」および「ヘテロアリール」の二価のバージョン、ならびに「アリール」および「ヘテロアリール」を組み込む他の用語を指す。
「ヒドロキシ」とは、基−ＯＨを指す。
「置換アルキル」とは、１個または複数個の水素原子が置換基でそれぞれ独立に置き換えられているアルキルを意味する。典型的な置換基には、これらに限定されないが、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ−、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３ −、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ３ ２−、ＰＯ３Ｈ２、−ＡｓＯ２Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２ −、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２、Ｃ１〜Ｃ２０ヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、保護基またはプロドラッグ部分が含まれ、各Ｘは、独立に、ハロゲンである−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉであり、各Ｒは、独立に、−ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。ハロゲンで置換されている置換アルキルは、本明細書においてハロアルキルと称されることがある。アリール、アルキレン、ヘテロアルキレン、および本明細書に記載のようなアルキルまたはアルキレン部分を含有する、もしくは含有しない他の基はまた、同様に置換し得る。
他の指示がない限り、「アラルキル」は、それ自体で、または別の用語の部分として、上記に定義されているようなアリール基で置換されている、上記に定義されているようなアルキル基を意味する。
他の指示がない限り、「Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル」は、それ自体で、または別の用語の部分として、３〜８個の炭素原子（また環員と称される）、およびＮ、Ｏ、ＰまたはＳから独立に選択される１〜４個のヘテロ原子環員を有し、かつ親環系の環原子からの１個の水素原子を除去して得られた、一価または二価の置換または非置換の芳香族または非芳香族の単環式または二環式環系を指す。同様に、他の指示がない限り、「Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリル」は、それ自体で、または別の用語の部分として、３〜１０個の炭素原子（また環員と称される）、およびＮ、Ｏ、ＰまたはＳから独立に選択される１〜４個のヘテロ原子環員を有し、かつ親環系の環原子からの１個の水素原子を除去して得られた、一価または二価の置換または非置換の芳香族または非芳香族の単環式または二環式環系を指す。ヘテロシクリルにおける１個または複数個のＮ、ＣまたはＳ原子は、酸化させることができる。ヘテロ原子を含む環は、芳香族または非芳香族でもよい。「ヘテロシクリル」という用語が、特定の数の炭素に関係なく用いられるとき、１０個超の炭素を有するヘテロシクリル基、例えば、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個または２０個の炭素を有する環または環系はまた、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルと共に可能であり、包含される。同様に、「ヘテロシクリル」という用語が、特定の数の炭素に関係なく用いられるとき、３個未満の炭素を有するヘテロシクリル基、例えば、１個または２個を有する環は、可能であり、包含される。「ヘテロシクロアルキル」という用語は、非芳香族ヘテロシクリル環または環系を指し、全ての炭素原子は飽和している（すなわち、水素または下記のような別の置換基に結合しており、二重結合または三重結合が存在しない）。特定の実施形態において、ヘテロシクロアルキル基は典型的には、３〜５員および１〜２個のヘテロ原子を有する。特定の実施形態において、ヘテロシクロアルキルは、エポキシでもよい。
特に断りのない限り、ヘテロシクリルは、任意のヘテロ原子または炭素原子においてそのペンダント基に付着しており、これによって安定的が構造をもたらされる。Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルの代表例には、これらに限定されないが、テトラヒドロフラニル、オキセタニル、ピラニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、ピロリル、チオフェニル（チオペン）、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリルおよびテトラゾリルが含まれる。Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、またはＣ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルは、これらに限定されないが、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、−ＯＲ’、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮを含めた７つまでの基で置換することができ、各Ｒ’は、−Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキルおよびアリールから独立に選択される。いくつかの実施形態において、置換ヘテロシクリルはまた、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＮＨＣＯＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’および−ＳＲ’の１つまたは複数を含むことができる。
他の指示がない限り、「ヘテロアラルキル」は、それ自体で、または別の用語の部分として、上記に定義されているような芳香族ヘテロシクリル基で置換されている上記に定義されているようなアルキル基を意味する。
他の指示がない限り、「Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル」は、それ自体で、または別の用語の部分として、親環系の環原子からの１個の水素原子または２個の水素原子を除去して得られた、３員、４員、５員、６員、７員または８員の一価または二価の置換または非置換の飽和または不飽和の非芳香族単環式または二環式の炭素環式環である。同様に、他の指示がない限り、「Ｃ３〜Ｃ１０カルボシクリル」は、それ自体で、または別の用語の部分として、親環系の環原子からの１個の水素原子を除去して得られた、３員、４員、５員、６員、７員、８員、９員または１０員の一価または二価の置換または非置換の飽和または不飽和の非芳香族単環式または二環式の炭素環式環である。代表的なＣ３〜Ｃ８カルボシクリルには、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンタジエニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、１，３−シクロヘキサジエニル、１，４−シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、１，３−シクロヘプタジエニル、１，３，５−シクロヘプタトリエニル、シクロオクチル、シクロオクタジエニル、ビシクロ（１１１）ペンタン、およびビシクロ（２２２）オクタンが含まれる。Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル基、またはＣ３〜Ｃ１０カルボシクリル基は、非置換であるか、またはこれらに限定されないが、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキル、−ＯＲ’、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮを含めた７つまでの基で置換されていてもよく、各Ｒ’は、−Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ヘテロアルキルおよびアリールから独立に選択される。「カルボシクリル」という用語が、炭素の特定の数に関係なく用いられるとき、１０個超の炭素を有するカルボシクリル基、例えば、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個または２０個の炭素を有する環系は、Ｃ３〜Ｃ１０カルボシクリルと共にまた可能であり、包含される。「シクロアルキル」という用語は、カルボシクリル環または環系を指し、全ての炭素原子は、飽和している（すなわち、水素または下記のような別の置換基に結合しており、二重結合または三重結合が存在しない）。
「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ねることができない特性を有する分子を指し、一方、「アキラル」という用語は、これらの鏡像パートナー上に重ねることができる分子を指す。
「立体異性体」という用語は、同一の化学構造を有するが、空間中の原子または基の配置に関して異なる化合物を指す。
「ジアステレオマー」とは、２つ以上のキラル中心を有し、その分子が互いの鏡像でない立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理的特性、例えば、融点、沸点、分光特性、および反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、高分解能分析手順、例えば、電気泳動およびクロマトグラフィーで分離が可能である。
本明細書において使用される立体化学の定義および規則は、一般にＳ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；およびＥｌｉｅｌおよびＷｉｌｅｎ、Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９４）に従う。多くの有機化合物は光学活性な形態で存在し、すなわち、これらは平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性な化合物を記載することにおいて、接頭辞ＤおよびＬ、またはＲおよびＳを使用して、そのキラル中心（複数可）の周りの分子の絶対配置を表す。接頭辞ｄおよびｌまたは（＋）および（−）を用いて、化合物による平面偏光の回転のサインを示し、（−）またはｌは、化合物は左旋性であることを意味する。（＋）またはｄという接頭辞を伴う化合物は、右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、これらが互いの鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体はまた、エナンチオマーと称してもよく、このような異性体の混合物は、エナンチオマー混合物と称されることが多い。エナンチオマーの５０：５０混合物はラセミ混合物またはラセミ化合物と称され、これは化学反応またはプロセスにおいて立体選択または立体特異性がない場合に起こり得る。「ラセミ混合物」および「ラセミ化合物」という用語は、光学活性を欠いている２つのエナンチオマー種の等モル混合物を指す。
アミノ酸「誘導体」は、親アミノ酸の共有結合的付着による、例えば、アルキル化、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などによる置換または修飾を有するアミノ酸を含む。「誘導体」の定義内にさらに含まれるものは、例えば、置換された連結、および当技術分野において公知の他の修飾を有するアミノ酸の１種または複数種の類似体である。
「天然アミノ酸」とは、文脈によって他の指示がない限り、アルギニン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、リシン、グリシン、アラニン、ヒスチジン、セリン、プロリン、グルタミン酸、アスパラギン酸、トレオニン、システイン、メチオニン、ロイシン、アスパラギン、イソロイシン、およびバリンを指す。
「薬学的に許容できる塩」という語句は、本明細書において使用する場合、化合物の薬学的に許容できる有機または無機塩を指す。化合物は典型的には、少なくとも１個のアミノ基を含有し、したがってこのアミノ基と酸付加塩を形成することができる。例示的な塩には、これらに限定されないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート））が含まれる。薬学的に許容できる塩は、別の分子、例えば、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオンを含むことが関与し得る。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化させる任意の有機または無機部分であり得る。さらに、薬学的に許容できる塩は、その構造中に複数個の電荷を帯びた原子を有し得る。複数の電荷を帯びた原子が薬学的に許容できる塩の部分である例は、複数の対イオンを有することができる。したがって、薬学的に許容できる塩は、１個もしくは複数個の電荷を帯びた原子および／または１つもしくは複数の対イオンを有することができる。
「添加量」または「薬物添加量」または「ペイロード添加量」という用語は、ＡＤＣ分子中の抗体毎の平均ペイロード数を表するか、またはそのような数を指す（「ペイロード」（複数可）は、本明細書において「薬物」（複数可）と互換的に使用される）。薬物添加量は、抗体１つ当たり薬物１〜２０の範囲であり得る。これは、ＤＡＲ、または薬物対抗体比と称されることがある。本明細書に記載されているＡＤＣの組成物は典型的には、１〜２０、および特定の実施形態において、１〜８、２〜８、２〜６、２〜５および２〜４のＤＡＲを有する。典型的なＤＡＲ値は、２、４、６および８である。抗体１つ当たりの平均薬物数、またはＤＡＲ値は、通常の手段、例えば、ＵＶ／可視分光法、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、およびＨＰＬＣによって特性決定し得る。定量的ＤＡＲ値をまた決定し得る。場合によって、特定のＤＡＲ値を有する均質なＡＤＣの分離、精製、および特性決定は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって達成し得る。ＤＡＲは、抗体上の付着部位の数によって制限し得る。例えば、付着がシステインチオールである場合、抗体は、１つのみもしくはいくつかのシステインチオール基を有してもよく、またはそれを通してリンカー単位が付着し得る、１つのみもしくはいくつかの十分に反応性のチオール基を有してもよい。いくつかの実施形態において、システインチオールは、鎖間のジスルフィド結合を形成するシステイン残基のチオール基である。いくつかの実施形態において、システインチオールは、鎖間のジスルフィド結合を形成しないシステイン残基のチオール基である。典型的には、理論的最大未満の薬物部分が、コンジュゲーション反応の間に、抗体にコンジュゲートする。抗体は、例えば、リンカーまたはリンカー中間体と反応しない多くのリシン残基を含有し得る。最も反応性のリシン基のみが、反応性リンカー試薬と反応し得る。
一般に、抗体は、リンカーを介して薬物に連結する可能性がある遊離および反応性のシステインチオール基を多く含有することはなく、含有したとしてもわずかである。抗体における大部分のシステインチオール残基はジスルフィド架橋として存在し、還元剤、例えば、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で還元しなくてはならない。抗体は、変性条件に供されて、反応性求核基、例えば、リシンまたはシステインを曝露し得る。ＡＤＣの添加量（薬物／抗体比）は、（ｉ）抗体に対して過剰なモル濃度の薬物−リンカーを制限すること、（ｉｉ）コンジュゲーションの反応時間または温度を制限すること、および（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分的または制限的な還元的条件を含めて、いくつかの異なる様式で制御し得る。１つより多くの求核基が薬物−リンカーと反応する場合、このように得られた産物は、抗体毎の１つまたは複数の薬物部分の分布を伴うＡＤＣの混合物である。抗体毎の薬物の平均数は、例えば、抗体に対して特異的な、および薬物に対して特異的な、二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から計算し得る。個々のＡＤＣは、質量分析法によって混合物において同定し得、ＨＰＬＣ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって分離し得る。
下記は、本出願において他に定義または記載し得ない略語および定義の一覧である。ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシドを指す）、ＨＲＭＳ（高分解能質量分析法を指す）、ＤＡＤ（ダイオードアレイ検出を指す）、ＴＦＡ（２，２，２−トリフルオロ酢酸またはトリフルオロ酢酸を指す）、ＴＦＦ（接線流濾過を指す）、ＥｔＯＨ（エタノールを指す）、ＭＷ（分子量を指す）、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィーを指す）、分取ＨＰＬＣ（分取高速液体クロマトグラフィーを指す）、ｅｔｃ．（その他を指す）、トリチル（１，１’，１’’−エタン−１，１，１−トリイルトリベンゼンを指す）、ＴＨＦ（テトラヒドロフランを指す）、ＮＨＳ（１−ヒドロキシ−２，５−ピロリジンジオンを指す）、Ｃｂｚ（カルボキシベンジルを指す）、ｅｑ．（当量を指す）、ｎ−ＢｕＬｉ（ｎ−ブチルリチウムを指す）、ＯＡｃ（アセテートを指す）、ＭｅＯＨ（メタノールを指す）、ｉ−Ｐｒ（イソプロピルまたはプロパン−２−イルを指す）、ＮＭＭ（４−メチルモルホリンを指す）、および「−」（表において、この時点でデータが利用可能でないことを指す）。
本明細書において使用する場合、「−ＰＡＢＣ−」または「ＰＡＢＣ」とは、構造：
本明細書において使用する場合、「−ＰＡＢＡ−」または「ＰＡＢＡ」とは、構造：
化合物およびその抗体薬物コンジュゲート
一態様によれば、本発明は、式（Ｉ）の１つまたは複数の化合物：
一態様によれば、本発明は、式（Ｉ）の１つまたは複数の化合物：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、水素、ＯＲ７、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ、およびＮ（Ｒ７）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＮまたはＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
ｄは、１〜５であり、
ｑは、１〜３であり、
各Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＮＲＲ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、および−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から独立に選択され、各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
ただし、Ｒ６が、−ＯＣ（Ｏ）Ｒまたは−ＯＲであり、Ｗが、
に関する。
本発明のさらなる態様は、式（ＩＩ）の１つまたは複数の化合物：
Ｌ−Ｐ
（ＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ６を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｌ−Ｐ
（ＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ６を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（＊）Ｒ７、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−Ｎ（＊）ＳＯ２Ｒおよび−Ｎ（＊）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、＊は、Ｌへの結合であり、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＮまたはＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
ｄは、１〜５であり、
ｑは、１〜３であり、
各Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＮＲＲ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、および−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から独立に選択され、各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｌ１は、−ハロゲン、−ＮＲ２、
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−ＣＲ２ＮＲ−であるか、またはＬ３は、存在しない］
を含む。
本発明のさらなる態様は、式（ＩＩ）の１つまたは複数の化合物：
Ｌ−Ｐ
（ＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ１１を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｌ−Ｐ
（ＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ１１を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、水素、ＯＲ７、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ、およびＮ（Ｒ７）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＮまたはＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
Ｒ１１は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮ（Ｒ）−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮＲ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ（Ｒ）Ｃ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）Ｏ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（＊）ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２−Ｎ（＊）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（＊）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９（式中、＊は、Ｌへの結合である）から選択されるか、またはＲ１１が、Ｎに直接に結合している場合、Ｒ１１は、結合であり、
各Ｒ１２は、水素、−ＯＨ、−ＣＮおよびＣＦ３から独立に選択され、
各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｌ１は、−ハロゲン、−ＮＲ２、
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−ＣＯ−、−ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−および−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲ−の１つもしくは複数から選択されるか、またはＬ３は、存在せず、
ただし、Ｒ５が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ６が、−ＯＣ（Ｏ）Ｒであり、Ｗが、
を含む。
本発明のまたさらなる態様は、式（ＩＩ）の１つまたは複数の化合物：
Ｌ−Ｐ
（ＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｘを介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｌ−Ｐ
（ＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｘを介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、水素、ＯＲ７、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ、およびＮ（Ｒ７）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
ｄは、１〜５であり、
ｑは、１〜３であり、
各Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＮＲＲ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、および−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から独立に選択され、各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）ＳＯ２Ｒ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）ＣＯＮＲ８Ｒ９、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキルＮ（＊）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から選択され、＊は、Ｌへの結合であり、
Ｌ１は、−ハロゲン、−ＮＲ２、
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−および−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−および−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−の１つもしくは複数から選択されるか、またはＬ３は、存在しない］
を含む。
本発明のさらなる態様は、式（ＩＩＩ）の１つまたは複数の化合物：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ６を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ６を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（＊）Ｒ７、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−Ｎ（＊）ＳＯ２Ｒおよび−Ｎ（＊）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、＊は、Ｌへの結合であり、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＮまたはＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
ｄは、１〜５であり、
ｑは、１〜３であり、
各Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＮＲＲ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、および−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から独立に選択され、各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｌ１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ２−（ＡＢへの結合）および
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−ＣＲ２ＮＲ−であるか、またはＬ３は、存在せず、
ｂは、１〜２０である］
を含む。
本発明のさらなる態様は、式（ＩＩＩ）の１つまたは複数の化合物：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ１１を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ１１を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、水素、ＯＲ７、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ、およびＮ（Ｒ７）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＮまたはＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
Ｒ１１は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮ（Ｒ）−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮＲ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ（Ｒ）Ｃ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）Ｏ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（＊）ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２−Ｎ（＊）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（＊）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９（式中、＊は、Ｌへの結合である）から選択されるか、またはＲ１１が、Ｎに直接に結合している場合、Ｒ１１は、結合であり、
各Ｒ１２は、水素、−ＯＨ、−ＣＮおよびＣＦ３から独立に選択され、
各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｌ１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ２−（ＡＢへの結合）および
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−ＣＯ−、−ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−および−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲ−の１つもしくは複数から選択されるか、またはＬ３は、存在せず、
ｂは、１〜２０であり、
ただし、Ｒ５が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ６が、−ＯＣ（Ｏ）Ｒであり、Ｗが、
を含む。
本発明のまたさらなる態様は、式（ＩＩＩ）の１つまたは複数の化合物：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｘを介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｘを介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、水素、ＯＲ７、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ、およびＮ（Ｒ７）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
ｄは、１〜５であり、
ｑは、１〜３であり、
各Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＮＲＲ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、および−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から独立に選択され、各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）ＳＯ２Ｒ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）ＣＯＮＲ８Ｒ９、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキルＮ（＊）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から選択され、＊は、Ｌへの結合であり、
Ｌ１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ２−（ＡＢへの結合）および
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−および−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−および−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−の１つもしくは複数から選択されるか、またはＬ３は、存在せず、
ｂは、１〜２０である］
を含む。
上記に記載した二価の可変部分は、適切な場合には、分子内の複数の配向におけるこのようなラジカルの位置付けを示すことを意味することに留意すべきである。このように、例えば、ほんの単一の例について言及すると、Ｌ１およびＬ３の間のＬ２部分「−ＰＡＢＣ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル−」は、Ｌ１−ＰＡＢＣ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル−Ｌ３として、またはＬ１−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−Ｌ３として位置付けすることができる。同様に、Ｌ２は、本明細書においてＬ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ｃを含むと定義され、この構築体は、同様に複数の配向で位置付けし得る。
このように、特定の実施形態では、下記の配列の構成要素を有する式ＩＩＩ’のＡＤＣを提供する。
ＡＢ−Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３−Ｐ、
ＡＢ−Ｌ１−Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ｃ−Ｌ３−Ｐ、または
ＡＢ−Ｌ１−Ｌ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａ−Ｌ３−Ｐ。
ＡＢ−Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３−Ｐ、
ＡＢ−Ｌ１−Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ｃ−Ｌ３−Ｐ、または
ＡＢ−Ｌ１−Ｌ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａ−Ｌ３−Ｐ。
上記において、Ｌ３は、典型的にはペイロードＰへの結合として示されるが、Ｌ３および／またはＬ２は存在しなくてもよく、その結果として、Ｐは、Ｌ２またはＬ１に直接に結合し得ることが留意される。
状況によって、本明細書に記載されている特定の化学基および部分が好ましい。このように、本明細書において記載および特許請求されている様々なペイロード、リンカーペイロードおよびＡＤＣに関することを含めて本発明の特定の実施形態では、下記の１つもしくは複数（または全て、もしくは無し）を適用し得る。
本発明の特定の実施形態では、Ｒ１は好ましくは、メチルである。
本発明の特定の実施形態では、Ｒ２は好ましくは、メチルである。
本発明の特定の実施形態では、Ｒ３Ａは好ましくは、メチルである。
本発明の特定の実施形態では、Ｒ３Ｂは好ましくは、メチルである。
本発明の特定の実施形態では、Ｒ５は好ましくは、メチルである。
本発明の特定の実施形態では、Ｒ６は好ましくは、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９（Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立に、水素またはＣ１〜Ｃ８アルキルである）、ならびに−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９（Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立に、水素またはＣ１〜Ｃ８アルキルである）である。
本発明の特定の実施形態では、Ｗは好ましくは、
式Ｉの本発明の特定の実施形態では、Ｘは、水素、−Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ６〜Ｃ１４アリールである。
式Ｉの本発明の特定の実施形態では、Ｘは、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、−ＣＯＲおよび−ＯＨの１つもしくは複数で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルである。
本発明の特定の実施形態では、Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルである。
本発明の特定の実施形態では、Ｙは、アリール、好ましくは、フェニルである。
本発明の特定の実施形態では、Ｙは、−ＮＲＲで置換されているアリール、好ましくは、−ＮＨ２で置換されているフェニルである。
化合物がＲ１１を介して抗体に連結していない本発明の特定の実施形態では、Ｒ１１は好ましくは、水素またはＮＨ２である。化合物がＲ１１を介して抗体に連結している本発明の特定の実施形態では、Ｒ１１は好ましくは、−ＮＨ−である。
本発明の特定の実施形態では、Ｚは、−ＣＨ２であるか、またはＺは、−Ｎである。
本発明の特定の実施形態では、ｍは、１であるか、ｍは、２であるか、またはｍは、３である。
本発明の特定の実施形態では、ｎは、１であるか、またはｎは、２である。
本発明の特定の実施形態では、ｐは、１であるか、ｐは、２であるか、ｐは、３であるか、またはｐは、４である。
本発明の特定の実施形態では、ｑは、１であるか、ｑは、２であるか、またはｑは、３である。
本発明の特定の実施形態では、ｑ’は、１であるか、ｑ’は、２であるか、ｑ’は、３であるか、ｑ’は、４であるか、またはｑ’は、５である。
特定の実施形態では、本発明は、上記の抗体薬物コンジュゲートおよび付随する定義のいずれかに関し、抗体薬物コンジュゲートは、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種または１０種の本発明の化合物を含む。
特定の実施形態では、本発明は、上記の抗体薬物コンジュゲートおよび付随する定義のいずれかに関し、抗体薬物コンジュゲートは、３種または４種の本発明の化合物を含む。
本発明の第４級アミン含有化合物は、全身循環から非常により速く排除され、このようにあらゆる有害事象を軽減することができるという点で明確な利点を有する。また、部位特異的コンジュゲートの使用は、インビトロおよびインビボでのアセテート（Ｒ６＝−ＯＣ（Ｏ）Ｒ）の不安定性を軽減し、インビボでの有効性の改善を助ける。さらに、本発明の化合物（式中、Ｒ６＝ＯＣ（Ｏ）ＮＲＲ、−ＮＲＣ（Ｏ））は、不活性代謝物の生成の軽減を助ける。本発明のまた別の利点は、複数のポイントを介して抗体に連結するこれらの能力にあり、これは、ペイロード（Ｐ）がアミン、アルコールおよび他の基を担持する適切に修飾されたリンカー分子と反応し、ペイロードリンカーを得ることができるからである。
抗体単位（ＡｂまたはＡＢ）
上で述べたように、「抗体」（または「Ａｂ」もしくは「ＡＢ」）という用語は、本明細書において最も広い意味で使用され、具体的には、無傷のモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および所望の生物活性を示す抗体フラグメントを包含する。さらに、本明細書に記載されている本発明の特定の態様は、抗体薬物コンジュゲートを指す一方で、コンジュゲートの抗体部分は、所与の標的細胞集団と関連する受容体、抗原または他の受容性部分と特異的に結合または反応的に会合もしくは複合体化するものと置き換え得ることがさらに想定される。例えば、抗体を含有する代わりに、本発明のコンジュゲートは、治療的にまたはその他の点で生物学的に修飾されることを求められる細胞集団の受容体、抗原または他の受容性部分に結合、複合体化、または反応するターゲティング分子を含有することができる。このような分子の例は、より小さな分子量のタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド、レクチン、糖タンパク質、非ペプチド、ビタミン、栄養素輸送分子（これらに限定されないが、トランスフェリンなど）、または任意の他の細胞結合分子もしくは物質を含む。特定の態様において、抗体または他のこのようなターゲティング分子は、それと共に抗体または他のターゲティング分子が相互作用する特定の標的細胞集団に対して薬物を送達するように作用する。
上で述べたように、「抗体」（または「Ａｂ」もしくは「ＡＢ」）という用語は、本明細書において最も広い意味で使用され、具体的には、無傷のモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および所望の生物活性を示す抗体フラグメントを包含する。さらに、本明細書に記載されている本発明の特定の態様は、抗体薬物コンジュゲートを指す一方で、コンジュゲートの抗体部分は、所与の標的細胞集団と関連する受容体、抗原または他の受容性部分と特異的に結合または反応的に会合もしくは複合体化するものと置き換え得ることがさらに想定される。例えば、抗体を含有する代わりに、本発明のコンジュゲートは、治療的にまたはその他の点で生物学的に修飾されることを求められる細胞集団の受容体、抗原または他の受容性部分に結合、複合体化、または反応するターゲティング分子を含有することができる。このような分子の例は、より小さな分子量のタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド、レクチン、糖タンパク質、非ペプチド、ビタミン、栄養素輸送分子（これらに限定されないが、トランスフェリンなど）、または任意の他の細胞結合分子もしくは物質を含む。特定の態様において、抗体または他のこのようなターゲティング分子は、それと共に抗体または他のターゲティング分子が相互作用する特定の標的細胞集団に対して薬物を送達するように作用する。
別の態様において、本発明は、式ＩＩＩまたはＩＩＩ’の抗体薬物コンジュゲート化合物に関し、抗体ＡＢは、トラスツズマブ、トラスツズマブ変異体（例えば、本明細書または国際特許出願第ＰＣＴ／ＩＢ２０１２／０５６２３４号において開示されているトラスツズマブ変異体）、オレゴボマブ、エドレコロマブ、セツキシマブ、ビトロネクチン受容体（αｖβ３）に対するヒト化モノクローナル抗体、アレムツズマブ、非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体を含めた抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体、１３１Ｉ Ｌｙｍ−１、非ホジキンリンパ腫の処置のためのマウス抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体を含めた抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体、抗ｃｄ３３抗体、ホジキン病または非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＣＤ２２ｍＡｂを含めた抗ｃｄ２２抗体、ラベツズマブ、ベバシズマブ、イブリツモマブチウキセタン、オファツムマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、イピリムマブ、およびゲムツズマブから選択される抗体である。
抗体単位上に存在し得るヘテロ原子は、硫黄（一実施形態において、抗体のスルフヒドリル基から）、酸素（一実施形態において、抗体のカルボニル、カルボキシルまたはヒドロキシル基から）、および窒素（一実施形態において、抗体の第一級または第二級アミノ基から）を含む。これらのヘテロ原子は、抗体の天然状態における抗体、例えば、天然の抗体上に存在することができ、または化学修飾によって抗体中に導入することができる。
一実施形態において、抗体単位はスルフヒドリル基を有し、抗体単位はスルフヒドリル基の硫黄原子を介して結合する。
別の実施形態において、抗体は、活性化したエステル（このようなエステルには、これらに限定されないが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ペンタフルオロフェニル、およびｐ−ニトロフェニルエステルが含まれる）と反応することができるリシン残基を有し、このように、抗体単位の窒素原子、およびカルボニルからなるアミド結合を形成する。
さらに別の態様では、抗体単位は、化学修飾されて１つまたは複数のスルフヒドリル基を導入することができる１つまたは複数のリシン残基を有する。リシンを修飾するために使用することができる試薬には、これらに限定されないが、Ｎ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）および２−イミノチオラン塩酸塩（トラウト試薬）が含まれる。
別の実施形態において、抗体単位は、化学修飾されて１つまたは複数のスルフヒドリル基を有することができる１つまたは複数の炭水化物基を有することができる。
さらに別の態様では、抗体単位は、１個もしくは複数の炭水化物基を有することができ、これは酸化されて、アルデヒド基を提供することができる（例えば、Ｌａｇｕｚｚａら、１９８９、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．、３２（３）：５４８〜５５を参照されたい）。対応するアルデヒドは、反応部位、例えば、ヒドラジンおよびヒドロキシルアミンとの結合を形成することができる。薬物の付着または会合のためのタンパク質の修飾のための他のプロトコルは、Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（２００２）（参照により本明細書中に組み込まれている）に記載されている。
コンジュゲートが、抗体の代わりに非免疫反応性タンパク質、ポリペプチド、またはペプチド単位を含むとき、有用な非免疫反応性タンパク質、ポリペプチド、またはペプチド単位には、これらに限定されないが、トランスフェリン、上皮増殖因子（「ＥＧＦ」）、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、血小板由来増殖因子、ＩＬ−２、ＩＬ−６、トランスフォーミング増殖因子（「ＴＯＰ」）、例えば、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β、ワクチニア増殖因子（「ＶＧＦ」）、インスリンおよびインスリン様増殖因子ＩおよびＩＩ、ソマトスタチン、レクチンならびに低密度リポタンパク質からのアポタンパク質が含まれる。
有用なポリクローナル抗体は、免疫化された動物の血清に由来する抗体分子の不均質な集団である。有用なモノクローナル抗体は、特定の抗原決定基（例えば、がん細胞抗原、ウイルス抗原、微生物抗原、タンパク質、ペプチド、炭水化物、化学物質、核酸、またはそのフラグメント）に対する抗体の均質な集団である。対象の抗原に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、当技術分野において公知の任意の技術を使用することによって調製することができ、培養物中の連続細胞系による抗体分子の産生を実現する。
有用なモノクローナル抗体には、これらに限定されないが、ヒトモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、抗体フラグメント、またはキメラモノクローナル抗体が含まれる。ヒトモノクローナル抗体は、多数の当技術分野で公知の技術のいずれかによって作製し得る（例えば、Ｔｅｎｇら、１９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８０：７３０８〜７３１２；Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２〜７９；およびＯｌｓｓｏｎら、１９８２、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：３〜１６）。
抗体はまた、二重特異性抗体でもよい。二重特異性抗体を作製する方法は当技術分野において公知であり、下で考察する。
抗体は、標的細胞（例えば、がん細胞抗原、ウイルス抗原、もしくは微生物抗原）に免疫特異的に結合する抗体、または腫瘍細胞もしくはマトリックスに結合する他の抗体の機能的活性フラグメント、誘導体もしくは類似体でもよい。これに関しては、「機能的活性」とは、フラグメント、誘導体または類似体が、このフラグメント、誘導体または類似体が由来する抗体が認識したものと同じ抗原を認識する抗抗イディオタイプ抗体を誘発することができることを意味する。具体的には、例示的な実施形態において、免疫グロブリン分子のイディオタイプの抗原性は、抗原を特異的に認識するＣＤＲ配列に対してＣ末端にあるフレームワークおよびＣＤＲ配列の欠失によって増強することができる。どのＣＤＲ配列が抗原に結合するかを決定するために、ＣＤＲ配列を含有する合成ペプチドは、当技術分野において公知の任意の結合アッセイ方法（例えば、ＢＩＡコアアッセイ）によって、抗原による結合アッセイにおいて使用することができる（ＣＤＲ配列の場所については、例えば、Ｋａｂａｔら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．；Ｋａｂａｔ Ｅら、１９８０、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２５（３）：９６１〜９６９を参照されたい）。
他の有用な抗体には、これらに限定されないが、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆｖｓ、単鎖抗体、二特異性抗体、三特異性抗体、四特異性抗体、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＦＶ、または抗体と同じ特異性を有する任意の他の分子などの抗体のフラグメントが含まれる。
さらに、組換え抗体、例えば、標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して作製することができる、ヒトおよび非ヒト部分の両方を含む、キメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、有用な抗体である。キメラ抗体は、異なる部分が、異なる動物種に由来する分子、例えば、マウスモノクローナルに由来する可変領域、およびヒト免疫グロブリン定常領域を有するものである。（例えば、全内容が参照により本明細書中に組み込まれている、米国特許第４，８１６，５６７号；および米国特許第４，８１６，３９７号を参照されたい）。ヒト化抗体は、非ヒト種からの１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する、非ヒト種からの抗体分子である。（例えば、参照により本明細書中にその全体が組み込まれている米国特許第５，５８５，０８９号を参照されたい）。このようなキメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、当技術分野で公知の組換えＤＮＡ技術によって、例えば、それらの各々が参照により本明細書中にその全体が組み込まれている、国際公開第ＷＯ８７／０２６７１号；欧州特許第０１８４１８７号；欧州特許出願公開第０１７１４９６号；欧州特許出願公開第０１７３４９４号；国際公開第ＷＯ８６／０１５３３号；米国特許第４，８１６，５６７号；欧州特許出願公開第０１２０２３号；Ｂｅｒｔｅｒら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１〜１０４３；Ｌｉｕら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３４３９〜３４４３；Ｌｉｕら、１９８７、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１〜３５２６；Ｓｕｎら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：２１４〜２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、１９８７、Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．４７：９９９〜１００５；Ｗｏｏｄら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６〜４４９；およびＳｈａｗら、１９８８、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３〜１５５９；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、１９８５、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２〜１２０７；Ｏｉら、１９８６、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４；米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓら、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２〜５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４；およびＢｅｉｄｌｅｒら、１９８８、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３〜４０６０に記載されている方法を使用して産生することができる。
完全ヒト抗体が特に望ましく、内因性免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができないが、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用して産生することができる。トランスジェニックマウスを、通常の様式で、選択された抗原、例えば、本発明のポリペプチドの全部または一部で免疫化する。抗原に対するモノクローナル抗体は、通常のハイブリドーマ技術を使用して得ることができる。トランスジェニックマウスが持つヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化の間に再配置され、それに続いてクラススイッチおよび体細胞変異を受ける。このように、このような技術を使用して、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要について、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、１９９５、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５〜９３を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術、ならびにこのような抗体を産生するためのプロトコルの詳細な考察について、例えば、これらの各々が参照により本明細書中にその全体が組み込まれている、米国特許第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，５４５，８０６号を参照されたい。他のヒト抗体は、例えば、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（現在は、Ａｍｇｅｎ、Ｆｒｅｅｍｏｎｔ、Ｃａｌｉｆ．）およびＭｅｄａｒｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）から商業的に得ることができる。
選択されたエピトープを認識する完全ヒト抗体は、「誘導選択」と称される技術を使用して生じさせることができる。このアプローチにおいて、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス抗体を使用して、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選択を誘導する。（例えば、Ｊｅｓｐｅｒｓら、１９９４、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１２：８９９〜９０３を参照されたい）。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーを含めた当技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる（例えば、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、１９９１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１；Ｍａｒｋｓら、１９９１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１；ＱｕａｎおよびＣａｒｔｅｒ、２００２、Ｔｈｅ ｒｉｓｅ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎ Ａｎｔｉ−ＩｇＥ ａｎｄ Ａｌｌｅｒｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅ、ＪａｒｄｉｅｕおよびＦｉｃｋ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、第２０章、４２７〜４６９頁を参照されたい）。
他の実施形態において、抗体は、抗体の融合タンパク質、またはその機能的活性フラグメントであり、例えば、抗体は、抗体からではない別のタンパク質（またはタンパク質のその一部、好ましくは少なくとも１０、２０もしくは５０のアミノ酸部分）のアミノ酸配列のＮ末端またはＣ末端において共有結合（例えば、ペプチド結合）を介して融合している。好ましくは、抗体またはそのフラグメントは、定常ドメインのＮ末端における他のタンパク質に共有結合で連結している。
すなわち、抗体は、このような共有結合的付着によって、抗体がその抗原結合性免疫特異性を保持することが可能となる限り、任意のタイプの分子の共有結合的付着によって修飾されている類似体および誘導体を含む。これらに限定されないが、例えば、抗体の誘導体および類似体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解的切断、細胞抗体単位または他のタンパク質への連結などによってさらに修飾されたものを含む。多数の化学修飾のいずれかを、これらに限定されないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンなどの存在下での代謝合成を含めた公知の技術によって行うことができる。さらに、類似体または誘導体は、１種または複数種の非天然のアミノ酸を含有することができる。
抗体は、Ｆｃ受容体と相互作用する、アミノ酸残基における修飾（例えば、置換、欠失または付加）を有することができる。特に、抗体は、抗ＦｃドメインおよびＦｃＲｎ受容体の間の相互作用において関与していると同定されるアミノ酸残基における修飾を有することができる（例えば、参照により本明細書中にその全体が組み込まれている国際公開第ＷＯ９７／３４６３１号を参照されたい）。
がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体は、商業的に得ることができ、または当業者には公知の任意の方法、例えば、化学合成もしくは組換え発現技術によって産生することができる。がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースもしくは同様のデータベース、文献から、または通例のクローニングおよび配列決定によって得ることができる。
特定の実施形態において、がんの処置のために公知の抗体を使用することができる。がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体は、商業的に得ることができ、または当業者に公知の任意の方法、例えば、組換え発現技術によって産生することができる。がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースもしくは同様のデータベース、文献から、または通例のクローニングおよび配列決定によって得ることができる。がんの処置のために利用可能な抗体の例には、これらに限定されないが、卵巣がんの処置のためのマウス抗体であるＯＶＡＲＥＸ；結腸直腸がんの処置のためのマウスＩｇＧ２ａ抗体であるＰＡＮＯＲＥＸ（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ、ＮＣ）；上皮増殖因子陽性がん、例えば、頭頸部がんの処置のための抗ＥＧＦＲ ＩｇＧキメラ抗体であるセツキシマブＥＲＢＩＴＵＸ（Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．、ＮＹ）；肉腫の処置のためのヒト化抗体であるＶｉｔａｘｉｎ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、Ｉｎｃ．、ＭＤ）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）の処置のためのヒト化ＩｇＧ１抗体であるＣＡＭＰＡＴＨ Ｉ／Ｈ（Ｌｅｕｋｏｓｉｔｅ、ＭＡ）；非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体であるＳＭＡＲＴ ＩＤ１０（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．、ＣＡ）；非ホジキンリンパ腫の処置のための放射性標識したマウス抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体であるＯＮＣＯＬＹＭ（Ｔｅｃｈｎｉｃｌｏｎｅ，Ｉｎｃ．、ＣＡ）；ホジキン病または非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＣＤ２ｍＡｂであるＡＬＬＯＭＵＮＥ（ＢｉｏＴｒａｎｓｐｌａｎｔ、ＣＡ）；ならびに結腸直腸がんの処置のためのヒト化抗ＣＥＡ抗体であるＣＥＡＣＩＤＥ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ、ＮＪ）が含まれる。
がん診断および治療のための有効な細胞標的を発見する試みにおいて、研究者は、１種または複数種の正常な非がん細胞（複数可）上と比較して、１種または複数種の特定のタイプ（複数可）のがん細胞の表面上に特異的に発現している膜貫通ポリペプチドまたはその他の点で腫瘍に関連するポリペプチドを同定することを探究してきた。しばしば、このような腫瘍に関連するポリペプチドは、非がん細胞の表面上と比較して、がん細胞の表面上により豊富に発現している。このような腫瘍に関連する細胞表面抗原ポリペプチドの同定は、抗体をベースとする治療によって破壊するために、がん細胞を特異的に標的とする能力を生じさせてきた。
リンカー単位（Ｌ）
リンカー（本明細書において「［リンカー］」と称されることがある）は、薬物および抗体を連結して、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成するために使用することができる二官能性化合物である。このようなコンジュゲートは、例えば、腫瘍に関連する抗原に対するイムノコンジュゲートの形成において有用である。このようなコンジュゲートは、腫瘍細胞への細胞毒性薬の選択的送達を可能とする。
リンカー（本明細書において「［リンカー］」と称されることがある）は、薬物および抗体を連結して、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成するために使用することができる二官能性化合物である。このようなコンジュゲートは、例えば、腫瘍に関連する抗原に対するイムノコンジュゲートの形成において有用である。このようなコンジュゲートは、腫瘍細胞への細胞毒性薬の選択的送達を可能とする。
ＡＤＣにおいて、リンカーは、ペイロードを抗体に付着させる役割を果たす。
一態様において、第２の反応部位、例えば、抗体単位（例えば、抗体）上に存在する求核基に反応性である求電子基を有する、リンカー単位の第２のセクションが導入される。抗体上の有用な求核基には、これらに限定されないが、スルフヒドリル、ヒドロキシルおよびアミノ基が含まれる。抗体の求核基のヘテロ原子は、リンカー単位上の求電子基に反応性であり、リンカー単位への共有結合を形成する。有用な求電子基には、これらに限定されないが、マレイミドおよびハロアセトアミド基が含まれる。求電子基は、抗体付着のための好都合な部位を提供する。
別の実施形態では、リンカー単位は、抗体上に存在する求電子基と反応性である求核基を有する反応部位を有する。抗体上の有用な求電子基には、これらに限定されないが、アルデヒドおよびケトンカルボニル基が含まれる。リンカー単位の求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、抗体への共有結合を形成することができる。リンカー単位上の有用な求核基には、これらに限定されないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが含まれる。抗体上の求電子基は、リンカー単位への付着のための好都合な部位を提供する。
アミノ官能基はまた、化合物のカルボン酸、または活性化したエステルと反応し、アミド連結を形成することができるため、リンカー単位についての有用な反応部位である。典型的には、本発明のペプチドをベースとする化合物は、２つ以上のアミノ酸および／またはペプチドフラグメントの間にペプチド結合を形成させることによって調製することができる。このようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野において周知である液相合成方法によって調製することができる（例えば、ＳｃｈｒｏｄｅｒおよびＬｕｂｋｅ、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、第１巻、ｐｐ７６〜１３６、１９６５、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。
本発明との関連において、特に、リンカー構成要素、例えば、Ｌ１、Ｌ２（Ｌ２Ａ、Ｌ２ＢおよびＬ２Ｃを含めた）ならびにＬ３に限定されないが、言い回し「の１つもしくは複数から選択」または「の１つもしくは複数」は、同じまたは異なり得る複数の構成要素が、逐次的に配置されるか、または配置し得ることを示す。このように、例えば、Ｌ３は、−Ｃ１〜６アルキル−、−ＮＲ−または他の個々に列挙した構成要素、また、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＲ−、または２つ以上の列挙した構成要素の任意の他の組合せであり得る。
化合物およびその抗体薬物コンジュゲートの合成
本発明の化合物およびコンジュゲートは、例示において下記で概要を述べた合成手順を使用して作製することができる。下でより詳細に記載するように、本発明の化合物およびコンジュゲートは、化合物への結合のための反応部位を有するリンカー単位のセクションを使用して調製することができる。一態様において、第２の反応部位、例えば、抗体単位（例えば、抗体）上に存在する求核基に反応性である求電子基を有する、リンカー単位の第２のセクションが導入される。抗体上の有用な求核基には、これらに限定されないが、スルフヒドリル、ヒドロキシルおよびアミノ基が含まれる。抗体の求核基のヘテロ原子は、リンカー単位上の求電子基に反応性であり、リンカー単位への共有結合を形成する。有用な求電子基には、これらに限定されないが、マレイミドおよびハロアセトアミド基が含まれる。求電子基は、抗体付着のための好都合な部位を提供する。
本発明の化合物およびコンジュゲートは、例示において下記で概要を述べた合成手順を使用して作製することができる。下でより詳細に記載するように、本発明の化合物およびコンジュゲートは、化合物への結合のための反応部位を有するリンカー単位のセクションを使用して調製することができる。一態様において、第２の反応部位、例えば、抗体単位（例えば、抗体）上に存在する求核基に反応性である求電子基を有する、リンカー単位の第２のセクションが導入される。抗体上の有用な求核基には、これらに限定されないが、スルフヒドリル、ヒドロキシルおよびアミノ基が含まれる。抗体の求核基のヘテロ原子は、リンカー単位上の求電子基に反応性であり、リンカー単位への共有結合を形成する。有用な求電子基には、これらに限定されないが、マレイミドおよびハロアセトアミド基が含まれる。求電子基は、抗体付着のための好都合な部位を提供する。
別の実施形態では、リンカー単位は、抗体上に存在する求電子基と反応性である求核基を有する反応部位を有する。抗体上の有用な求電子基には、これらに限定されないが、アルデヒドおよびケトンカルボニル基が含まれる。リンカー単位の求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、抗体への共有結合を形成することができる。リンカー単位上の有用な求核基には、これらに限定されないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが含まれる。抗体上の求電子基は、リンカー単位への付着のための好都合な部位を提供する。
アミノ官能基はまた、化合物のカルボン酸、または活性化したエステルと反応し、アミド連結を形成することができるため、リンカー単位についての有用な反応部位である。典型的には、本発明のペプチドをベースとする化合物は、２つ以上のアミノ酸および／またはペプチドフラグメントの間にペプチド結合を形成させることによって調製することができる。このようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野において周知である液相合成方法によって調製することができる（例えば、ＳｃｈｒｏｄｅｒおよびＬｕｂｋｅ、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、第１巻、ｐｐ７６〜１３６、１９６５、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。
下でより詳細に記載するように、コンジュゲートは、本発明の化合物への結合のための反応部位を有するリンカーのセクションを使用し、抗体に対する反応部位を有するリンカー単位の別のセクションを導入して調製することができる。一態様において、リンカー単位は、抗体単位、例えば、抗体上に存在する求核基に反応性である求電子基を有する反応部位を有する。求電子基は、抗体付着のための好都合な部位を提供する。抗体上の有用な求核基には、これらに限定されないが、スルフヒドリル、ヒドロキシルおよびアミノ基が含まれる。抗体の求核基のヘテロ原子は、リンカー単位上の求電子基に反応性であり、リンカー単位への共有結合を形成する。有用な求電子基には、これらに限定されないが、マレイミドおよびハロアセトアミド基が含まれる。
別の実施形態では、リンカー単位は、抗体単位上に存在する求電子基と反応性である求核基を有する反応部位を有する。抗体上の求電子基は、リンカー単位への付着のための好都合な部位を提供する。抗体上の有用な求電子基には、これらに限定されないが、アルデヒドおよびケトンカルボニル基が含まれる。リンカー単位の求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、抗体への共有結合を形成することができる。リンカー単位上の有用な求核基には、これらに限定されないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが含まれる。
トランスグルタミナーゼによるコンジュゲーション
特定の実施形態では、本発明の化合物は、トランスグルタミナーゼの存在下でポリペプチド工学（例えば、ポリペプチド上のアミノ酸の欠失、挿入、置換、変異、または任意のこれらの組合せを介した）によって反応性（すなわち、アミンおよびトランスグルタミナーゼの存在下でアシルドナーとして共有結合を形成する能力）とされたアシルドナーグルタミン含有タグ（例えば、Ｇｌｎ含有ペプチドタグもしくはＱ−タグ）または内因性グルタミンで操作されたＦｃ含有またはＦａｂ含有ポリペプチドに共有結合的に架橋し得るが、ただし、本発明の化合物は、アミンドナー剤（例えば、反応性アミンを含むか、またはこれに付着している低分子）を含み、それによって、操作されたＦｃ含有ポリペプチドコンジュゲートの安定的および均質な集団を形成させ、アミンドナー剤は、Ｆｃ含有またはＦａｂ含有ポリペプチドにアシルドナーグルタミン含有タグまたは曝露された／到達可能な／反応性の内因性グルタミンを介して部位特異的にコンジュゲートしている。例えば、本発明の化合物は、これらの出願の全内容が参照により本明細書中に組み込まれている国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１１／０５４８９９号（ＷＯ２０１２／０５９８８２として公表されている）、および国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１４／０６３５６６号（ＷＯ２０１５／０１５４４８として公表されている）に記載されているようにコンジュゲートし得る。特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼの存在下でポリペプチド工学によって反応性とされたアシルドナーグルタミン含有タグまたは内因性グルタミンで操作されたＦｃ含有またはＦａｂ含有ポリペプチドへの本発明の化合物のコンジュゲーションを促進するために、Ｌ１は、ＮＨ２である。
特定の実施形態では、本発明の化合物は、トランスグルタミナーゼの存在下でポリペプチド工学（例えば、ポリペプチド上のアミノ酸の欠失、挿入、置換、変異、または任意のこれらの組合せを介した）によって反応性（すなわち、アミンおよびトランスグルタミナーゼの存在下でアシルドナーとして共有結合を形成する能力）とされたアシルドナーグルタミン含有タグ（例えば、Ｇｌｎ含有ペプチドタグもしくはＱ−タグ）または内因性グルタミンで操作されたＦｃ含有またはＦａｂ含有ポリペプチドに共有結合的に架橋し得るが、ただし、本発明の化合物は、アミンドナー剤（例えば、反応性アミンを含むか、またはこれに付着している低分子）を含み、それによって、操作されたＦｃ含有ポリペプチドコンジュゲートの安定的および均質な集団を形成させ、アミンドナー剤は、Ｆｃ含有またはＦａｂ含有ポリペプチドにアシルドナーグルタミン含有タグまたは曝露された／到達可能な／反応性の内因性グルタミンを介して部位特異的にコンジュゲートしている。例えば、本発明の化合物は、これらの出願の全内容が参照により本明細書中に組み込まれている国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１１／０５４８９９号（ＷＯ２０１２／０５９８８２として公表されている）、および国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１４／０６３５６６号（ＷＯ２０１５／０１５４４８として公表されている）に記載されているようにコンジュゲートし得る。特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼの存在下でポリペプチド工学によって反応性とされたアシルドナーグルタミン含有タグまたは内因性グルタミンで操作されたＦｃ含有またはＦａｂ含有ポリペプチドへの本発明の化合物のコンジュゲーションを促進するために、Ｌ１は、ＮＨ２である。
ヒト軽鎖カッパドメイン定常領域へのコンジュゲーション
特定の実施形態では、本発明の化合物は、ヒト軽鎖カッパドメイン定常領域（ＣＬκ）のＫ１８８（Ｋａｂａｔによる完全軽鎖のナンバリング）の側鎖に共有結合的に付着し得る。例えば、本発明の化合物は、その全内容が参照により本明細書中に組み込まれている米国特許出願第１３／１８０，２０４号に記載されているようにコンジュゲートし得る。特定の実施形態では、Ｋ１８８ＣＬκへのコンジュゲーションを促進するために、Ｌ１は、
特定の実施形態では、本発明の化合物は、ヒト軽鎖カッパドメイン定常領域（ＣＬκ）のＫ１８８（Ｋａｂａｔによる完全軽鎖のナンバリング）の側鎖に共有結合的に付着し得る。例えば、本発明の化合物は、その全内容が参照により本明細書中に組み込まれている米国特許出願第１３／１８０，２０４号に記載されているようにコンジュゲートし得る。特定の実施形態では、Ｋ１８８ＣＬκへのコンジュゲーションを促進するために、Ｌ１は、
特定の実施形態では、本発明は、抗体（またはその抗原結合部分）に共有結合的にコンジュゲートしている本発明の化合物を含む組成物であって、組成物中の本発明の化合物の少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％が、Ｋ１８８ＣＬκにおいて抗体またはその抗原結合部分にコンジュゲートしている、組成物を提供する。
特定の実施形態では、本発明の化合物は、触媒抗体、例えば、アルドラーゼ抗体、またはその抗原結合部分の結合部位にコンジュゲートし得る。アルドラーゼ抗体は、妨げがなくされたとき（例えば、コンジュゲーションによって）、脂肪族ケトンドナーおよびアルデヒドアクセプターの間のアルドール付加反応を触媒する結合部位部分を含有する。米国特許出願公開第２００６／２０５６７０号の内容、特に、リンカーについて記載している７８〜１１８頁、ならびに抗体、その有用なフラグメント、バリアントおよび修飾、ｈ３８Ｃ２、結合部位および相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに関連する抗体技術について記載しているパラグラフ［０１５３］〜［０２３３］は、参照により本明細書中に組み込まれている。用語「結合部位」は、抗原結合に関与しているＣＤＲおよび隣接するフレームワーク残基を含む。
組成物および投与方法
他の実施形態において、本発明の別の態様は、有効量の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲート、ならびに薬学的に許容できる担体またはビヒクルを含む医薬組成物に関する。特定の実施形態において、組成物は、動物またはヒトへの投与に適している。
他の実施形態において、本発明の別の態様は、有効量の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲート、ならびに薬学的に許容できる担体またはビヒクルを含む医薬組成物に関する。特定の実施形態において、組成物は、動物またはヒトへの投与に適している。
本医薬組成物は、組成物が患者に投与されることが可能となる任意の形態でもよい。例えば、組成物は、固体または液体の形態でもよい。典型的な投与経路には、これらに限定されないが、非経口、目および腫瘍内が含まれる。非経口投与は、皮下注射、静脈内、筋内または胸骨内の注射または注入技術を含む。一態様において、組成物は、非経口的に投与される。特定の実施形態において、組成物は、静脈内に投与される。
医薬組成物は、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートが患者への組成物の投与によって生物が利用可能となることが可能となるように製剤することができる。組成物は、１つまたは複数の投与量単位の形態を取ることができ、例えば、錠剤は、単一の投与量単位でよく、液体形態の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの容器は、複数の投与量単位を保持することができる。
医薬組成物の調製において使用される材料は、使用される量で無毒性のものであってもよい。医薬組成物中の活性成分（複数可）の最適な投与量は、種々の要因によって決まることは当業者には明らかである。関連要因には、これらに限定されないが、動物のタイプ（例えば、ヒト）、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの特定の形態、投与の様式、ならびに用いる組成物が含まれる。
組成物が、例えば、錠剤または散剤形態であるように、薬学的に許容できる担体またはビヒクルは、固体または微粒子でもよい。担体（複数可）は、液体でもよい。さらに、担体（複数可）は、微粒子でもよい。
組成物は、液体の形態、例えば、溶液剤、乳剤または懸濁剤でもよい。注射による投与のための組成物において、界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散化剤、懸濁化剤、緩衝液、安定剤および等張剤の１つまたは複数をまた含むことができる。
液体組成物はまた、これらが溶液剤、懸濁剤かまたは他の同様の形態かに関わらず、下記の１つまたは複数を含むことができる。無菌賦形剤、例えば、注射用水、食塩水、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム、不揮発性油、例えば、溶媒または懸濁媒としての役割を果たすことができる合成モノまたはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、シクロデキストリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝液、例えば、酢酸、クエン酸、リン酸またはアミノ酸、および浸透圧の調節のための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース。非経口組成物は、ガラス、プラスチックまたは他の材料でできた、アンプル、使い捨て注射器または複数回用量バイアル中に封入することができる。生理食塩水は、例示的なアジュバントである。注射可能な組成物は好ましくは、無菌である。
特定の障害または状態の処置において有効である本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの量は、障害または状態の性質によって決まり、標準的な臨床技術によって決定することができる。さらに、インビトロまたはインビボでのアッセイを場合によって用い、最適な投与量範囲の同定を助けることができる。組成物中に用いられる正確な用量はまた、投与経路、および疾患または障害の重症度によって決まり、医師の判断および各患者の状況によって決定すべきである。
組成物は、適切な投与量が得られるように、有効量の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを含む。典型的には、この量は、組成物の重量によって少なくとも約０．０１％の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートである。例示的な実施形態において、非経口投与量単位が、約０．０１％〜約２重量％の量の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを含有するように、医薬組成物を調製する。
静脈内投与のために、組成物は、患者の体重１ｋｇ当たり約０．０１〜約１００ｍｇの本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを含むことができる。一態様において、組成物は、患者の体重１ｋｇ当たり約１〜約１００ｍｇの本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを含むことができる。別の態様において、投与される量は、約０．１〜約２５ｍｇ／ｋｇ体重の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの範囲である。
一般に、患者に投与される本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの投与量は典型的には、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。一態様において、患者に投与される投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。別の態様において、患者に投与される投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。さらに別の態様において、患者に投与される投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。また別の態様において、投与される投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。さらに別の態様において、投与される投与量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。
本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、任意の好都合な経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって投与することができる。投与は、全身性または局所でもよい。様々な送達系、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、カプセルなどにおけるカプセル化は公知であり、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを投与するために使用することができる。特定の実施形態において、複数種の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを、患者に投与する。
特定の実施形態において、１種または複数種の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートを、処置を必要とする領域において局所的に投与することが望ましくてもよい。限定としてではなく、例えば、手術の間の局所注入；例えば、手術後の創傷被覆材と併せた局所適用；注射による；カテーテルを用いた；またはインプラントを用いた（インプラントは、膜、例えば、シラスティック膜、もしくは繊維を含めた多孔性、非多孔性、もしくはゼラチン質材料のものである）によって、これは達成することができる。一実施形態において、投与は、がん、腫瘍または新生物または前新生物組織の部位（または以前の部位）における直接の注射によってなされてもよい。別の実施形態において、投与は、自己免疫疾患の徴候の部位（または以前の部位）における直接の注射によってなされてもよい。
さらに別の実施形態において、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、これらに限定されないがポンプなどの制御放出系で送達することができ、または様々なポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態において、制御放出系は、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの標的、例えば、肝臓の近くに配置することができ、それによって、全身性用量の１画分のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、前掲、第２巻、１１５〜１３８頁（１９８４）を参照されたい）。Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７〜１５３３（１９９０））による概説において考察されている他の制御放出系を、使用することができる。
「担体」という用語は、賦形剤、アジュバントまたは添加剤を指し、これと共に化合物またはその抗体薬物コンジュゲートが投与される。このような医薬担体は、液体、例えば、水、および石油、動物、野菜または合成起源のものを含めた油でもよい。担体は、食塩水などでもよい。さらに、助剤、安定化剤および他の薬剤を使用することができる。一実施形態において、患者に投与するとき、化合物またはコンジュゲートおよび薬学的に許容できる担体は、無菌である。化合物またはコンジュゲートが静脈内に投与されるとき、水は例示的な担体である。食塩溶液および水性デキストロースおよびグリセロール溶液はまた、特に、注射可能な溶液のための液体担体として用いることができる。本組成物はまた、必要に応じて、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含有することができる。
本組成物は、溶液剤、ペレット、散剤、持続放出製剤の形態、または使用に適した任意の他の形態を取ることができる。適切な医薬担体の他の例は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに記載されている。
一実施形態において、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、動物、特に、人間への静脈内投与のために適合された医薬組成物としての通例の手順によって製剤される。典型的には、静脈内投与のための担体またはビヒクルは、無菌の等張緩衝水溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤を含むことができる。静脈内投与のための組成物は、局所麻酔剤、例えば、注射の部位における疼痛を緩和するリグノカインを場合により含むことができる。一般に、成分は、別々に、または単位剤形、例えば、密封された容器、例えば、活性剤の量を示すアンプルもしくはサッシェ中の、凍結乾燥した粉末もしくは水を含有しない濃縮物として、一緒に混合して供給される。本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートが注入によって投与される場合、例えば、無菌の医薬品グレードの水または食塩水を含有する注入ボトルで分注することができる。本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートが注射によって投与される場合、投与の前に成分を混合することができるように、注射用滅菌水、または食塩水のアンプルを提供することができる。
組成物は、固体または液体の投与量単位の物理的形態を変更する様々な材料を含むことができる。例えば、組成物は、活性成分の周りのコーティングシェルを形成する材料を含むことができる。コーティングシェルを形成する材料は典型的には不活性であり、例えば、糖、セラック、および他の腸溶性コーティング剤から選択することができる。代わりに、活性成分をゼラチンカプセル中に入れてもよい。
固体または液体形態であろうと、本組成物は、がんの処置において使用される薬理学的薬剤を含むことができる。
化合物およびその抗体薬物コンジュゲートの治療上の使用
本発明の別の態様は、がんを処置するための、本発明の化合物およびその抗体薬物コンジュゲートを使用する方法に関する。
本発明の別の態様は、がんを処置するための、本発明の化合物およびその抗体薬物コンジュゲートを使用する方法に関する。
本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、腫瘍細胞もしくはがん細胞の増殖を阻害し、腫瘍もしくはがん細胞においてアポトーシスをもたらし、または患者におけるがんを処置するために有用である。本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、したがって、動物のがんの処置のための種々の状況において使用することができる。前記コンジュゲートを使用して、腫瘍細胞またはがん細胞へ本発明の化合物を送達することができる。理論に束縛されるものではないが、一実施形態において、コンジュゲートの抗体は、がん細胞または腫瘍細胞と関連する抗原に結合し、または会合し、コンジュゲートは、受容体仲介エンドサイトーシスまたは他の内部移行機序によって、腫瘍細胞またはがん細胞内に取り込まれる（内部移行する）ことができる。抗原は腫瘍細胞もしくはがん細胞に付着することができ、または腫瘍細胞もしくはがん細胞と関連する細胞外マトリックスタンパク質でもよい。特定の実施形態において、いったん細胞内にあれば、１つまたは複数の特異的ペプチド配列は、１つまたは複数の腫瘍細胞またはがん細胞に関連するプロテアーゼによって酵素的にまたは加水分解的に切断され、コンジュゲートからの本発明の化合物の放出がもたらされる。次いで、放出された本発明の化合物は、細胞内で自由に移動し、細胞毒性または細胞増殖抑制活性を誘発する。コンジュゲートはまた細胞内プロテアーゼによって切断され、本発明の化合物を放出することができる。代わりの実施形態において、本発明の化合物は、腫瘍細胞またはがん細胞の外側のコンジュゲートから切断され、本発明の化合物はそれに続いて細胞に侵入する。
特定の実施形態において、コンジュゲートは、コンジュゲーション特異的な腫瘍またはがん薬物ターゲティングを提供し、このように、本発明の化合物の一般毒性を低減させる。
別の実施形態において、抗体単位は、腫瘍細胞またはがん細胞に結合する。
別の実施形態において、抗体単位は、腫瘍細胞またはがん細胞の表面上にある腫瘍細胞またはがん細胞抗原に結合する。
別の実施形態において、抗体単位は、腫瘍細胞またはがん細胞と関連する細胞外マトリックスタンパク質である、腫瘍細胞またはがん細胞抗原に結合する。
特定の腫瘍細胞またはがん細胞についての抗体単位の特異性は、最も効果的に処置される腫瘍またはがんを決定するために重要であり得る。
本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートで処置することができる特定のタイプのがんには、これらに限定されないが、膀胱、乳房、子宮頸部、結腸、子宮内膜、腎臓、肺、食道、卵巣、前立腺、膵臓、皮膚、胃、および精巣の癌腫；ならびにこれらに限定されないが、白血病およびリンパ腫を含めた血液由来のがんが含まれる。
がんのための多様式治療。これらに限定されないが、腫瘍、転移、または制御されない細胞増殖によって特徴付けられる他の疾患もしくは障害を含めたがんは、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの投与によって処置または阻害することができる。
他の実施形態において、それを必要としている患者に、有効量の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲート、ならびに化学療法剤を投与することを含む、がんを処置する方法を提供する。一実施形態において、化学療法剤は、それによってがんの処置が不応性であると見出されてこなかったものである。別の実施形態において、化学療法剤は、それによってがんの処置が不応性であると見出されてきたものである。本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、がんのための処置として手術をまた受けた患者に投与することができる。
いくつかの実施形態において、患者はまた、さらなる処置、例えば、放射線療法を受ける。特定の実施形態において、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートは、化学療法剤または放射線療法と同時に投与される。別の特定の実施形態において、化学療法剤または放射線療法は、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの投与の前に、または投与に続けて投与する。
化学療法剤は、一連のセッションに亘り投与することができる。化学療法剤のいずれかの１つまたは組合せ、このような標準的な化学療法剤（複数可）を投与することができる。
さらに、本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートによるがんの処置の方法は、化学療法または放射線療法に代わるものとして提供されるが、化学療法または放射線療法は、毒性がありすぎると証明されてきており、または証明することができ、例えば、処置される対象にとって許容されないまたは耐えられない副作用をもたらす。処置される患者は、場合によって、どのような処置が許容されまたは耐えられると見出されるかによって、別のがん処置、例えば、手術、放射線療法または化学療法で処置することができる。
本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートはまた、インビトロまたはエキソビボの様式で、例えば、これらに限定されないが、白血病およびリンパ腫を含めた特定のがんの処置のために使用することができ、このような処置は、自己幹細胞移植が関与する。これは、動物の自己造血幹細胞を収集し、ここから全てのがん細胞を一掃し、次いで、動物の残存する骨髄細胞集団を、付随的な高線量の放射線療法を伴いもしくは伴わずに、高用量の本発明の化合物および／またはその抗体薬物コンジュゲートの投与によって根絶し、幹細胞移植片を動物中に再注入する複数ステップのプロセスを含み得る。次いで、骨髄機能が元に戻る間に支持療法を提供し、患者を回復させる。
本発明を下記の実施例においてさらに記載するが、これは本発明の範囲を制限することを意図するものではない。
放出された種
本発明のさらなる実施形態は、１つもしくは複数のがん細胞または腫瘍細胞に関連するプロテアーゼによる酵素的切断および／または加水切断と考えられるものによって、がん細胞もしくは腫瘍細胞内で、またはその近傍で放出された化学種を含む。このような化合物は、本明細書に記載されている種を含み、また、化合物、例えば、下記で記載したものを含む。
本発明のさらなる実施形態は、１つもしくは複数のがん細胞または腫瘍細胞に関連するプロテアーゼによる酵素的切断および／または加水切断と考えられるものによって、がん細胞もしくは腫瘍細胞内で、またはその近傍で放出された化学種を含む。このような化合物は、本明細書に記載されている種を含み、また、化合物、例えば、下記で記載したものを含む。
式（ＩＩＩ）の化合物：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ６を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ６を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（＊）Ｒ７、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−Ｎ（＊）ＳＯ２Ｒおよび−Ｎ（＊）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、＊は、Ｌへの結合であり、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＮまたはＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
ｄは、１〜５であり、
ｑは、１〜３であり、
各Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＮＲＲ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、および−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から独立に選択され、各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｌ１は、−酸、−ＮＲ−酸および
酸は、−ＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）、−ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）から選択されるアミノ酸残基であり、
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−ＣＲ２ＮＲ−であるか、またはＬ３は、存在せず、
ｂは、１〜２０である］。
式（ＩＩＩ）の化合物：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ１１を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ１１を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、水素、ＯＲ７、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ、およびＮ（Ｒ７）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＮまたはＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
Ｒ１１は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮ（Ｒ）−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮＲ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ（Ｒ）Ｃ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）Ｏ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（＊）ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２−Ｎ（＊）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（＊）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９（式中、＊は、Ｌへの結合である）から選択されるか、またはＲ１１が、Ｎに直接に結合している場合、Ｒ１１は、結合であり、
各Ｒ１２は、水素、−ＯＨ、−ＣＮおよびＣＦ３から独立に選択され、
各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｌ１は、−酸、−ＮＲ−酸および
酸は、−ＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）、−ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）から選択されるアミノ酸残基であり、
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−ＣＯ−、−ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−および−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲ−の１つもしくは複数から選択されるか、またはＬ３は、存在せず、
ｂは、１〜２０である。
ただし、Ｒ５が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ６が、−ＯＣ（Ｏ）Ｒであり、Ｗが、
式（ＩＩＩ）の化合物：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｘを介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｘを介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、水素、ＯＲ７、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ、およびＮ（Ｒ７）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
ｄは、１〜５であり、
ｑは、１〜３であり、
各Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＮＲＲ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、および−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から独立に選択され、各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）ＳＯ２Ｒ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）ＣＯＮＲ８Ｒ９、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキルＮ（＊）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から選択され、＊は、Ｌへの結合であり、
Ｌ１は、−酸、−ＮＲ−酸および
酸は、−ＳＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）、−ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＮＨ２）から選択されるアミノ酸残基であり、
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−および−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−および−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−の１つもしくは複数から選択されるか、またはＬ３は、存在せず、
ｂは、１〜２０である］。
一般的方法
合成の実験手順：
実験を一般に、酸素感受性もしくは水分感受性試薬または中間体を用いた場合は特に、不活性雰囲気（窒素またはアルゴン）下で行った。適切な場合、無水溶媒を含めて市販の溶媒および試薬は一般に、それ以上精製することなく使用した（一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷｉｓｃｏｎｓｉｎからのＳｕｒｅ−Ｓｅａｌ（商標）製品）。質量分析データは、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）または大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）から報告する。核磁気共鳴（ＮＭＲ）データについての化学シフトは、用いた重水素化溶媒からの残留ピークを参照した百万分率（ｐｐｍ、δ）で表す。
合成の実験手順：
実験を一般に、酸素感受性もしくは水分感受性試薬または中間体を用いた場合は特に、不活性雰囲気（窒素またはアルゴン）下で行った。適切な場合、無水溶媒を含めて市販の溶媒および試薬は一般に、それ以上精製することなく使用した（一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷｉｓｃｏｎｓｉｎからのＳｕｒｅ−Ｓｅａｌ（商標）製品）。質量分析データは、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）または大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）から報告する。核磁気共鳴（ＮＭＲ）データについての化学シフトは、用いた重水素化溶媒からの残留ピークを参照した百万分率（ｐｐｍ、δ）で表す。
他の実施例または方法における手順を参照する合成について、反応プロトコル（反応の長さおよび温度）は変化し得る。一般に、反応に続いて、薄層クロマトグラフィー、ＬＣ−ＭＳまたはＨＰＬＣを行い、適当な場合、後処理に供した。精製は、実験毎に変化し得る。一般に、溶離液／勾配のために使用する溶媒および溶媒比は、適当な保持時間を実現するために選択した。他に特定しない限り、凍結乾燥／フリーズドライによって逆相ＨＰＬＣ画分を濃縮した。中間体および最終化合物は、閉じられたバイアルまたはフラスコにおいて窒素下で（０℃）または室温にて貯蔵した。化合物名はＡＣＤ Ｌａｂｓソフトウェアで作成した。
溶媒および／または試薬についての略語は米国化学会のガイドラインに基づき、下記で強調する。
Ａｃ＝アセチル
Ｂｏｃ＝Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＣＤＩ＝Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール
ＤＣＣ＝１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＥ＝ジクロロエタン
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジエチルアミン
ＤＥＡＤ＝アゾジカルボン酸ジエチル
ＤＩＡＤ＝アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＩＢＡＬ−Ｈ＝ジイソブチルアルミニウムヒドリド
ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ＝ジメチルアセトアミド
ＤＭＡＰ＝４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥ＝ジメトキシエタン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
ＤＰＰＡ＝ジフェニルホスホリルアジド
ＥＤＣＩ＝１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
Ｆｍｏｃ＝フルオレニルメチルオキシカルボニル
ｈ＝時間
ＨＡＴＵ＝ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＴＵ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＡｃ＝酢酸
ＨＯＡｔ＝１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物
ＬＤＡ＝リチウムジイソプロピルアミド
Ｍｅ＝メチル
ＭＳ＝分子篩
ＭＴＢＥ＝メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ｎ−ＢｕＬｉ＝ｎ−ブチルリチウム
ＮＢＳ＝Ｎ−ブロモスクシンイミド
ＮＭＭ＝Ｎ−メチルモルホリン
Ｐｈ＝フェニル
ＰＰＴＳ＝ピリジニウムｐ−トルエンスルホネート
ｐ−ＴｓＯＨ＝ｐ−トルエンスルホン酸
ｒｔ＝室温
ＴＢＡＩ＝ヨウ化テトラブチルアンモニウム
ＴＥＡ＝トリエチルアミン
Ｔｆ＝トリフルオロメタンスルホネート
ＴＦＡ＝ＴＦＡ
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＰＴＵ＝Ｏ−（２−オキソ−１（２Ｈ）ピリジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ，’Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
Ａｃ＝アセチル
Ｂｏｃ＝Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＣＤＩ＝Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール
ＤＣＣ＝１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＥ＝ジクロロエタン
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジエチルアミン
ＤＥＡＤ＝アゾジカルボン酸ジエチル
ＤＩＡＤ＝アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＩＢＡＬ−Ｈ＝ジイソブチルアルミニウムヒドリド
ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ＝ジメチルアセトアミド
ＤＭＡＰ＝４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥ＝ジメトキシエタン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
ＤＰＰＡ＝ジフェニルホスホリルアジド
ＥＤＣＩ＝１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
Ｆｍｏｃ＝フルオレニルメチルオキシカルボニル
ｈ＝時間
ＨＡＴＵ＝ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＴＵ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＡｃ＝酢酸
ＨＯＡｔ＝１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物
ＬＤＡ＝リチウムジイソプロピルアミド
Ｍｅ＝メチル
ＭＳ＝分子篩
ＭＴＢＥ＝メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ｎ−ＢｕＬｉ＝ｎ−ブチルリチウム
ＮＢＳ＝Ｎ−ブロモスクシンイミド
ＮＭＭ＝Ｎ−メチルモルホリン
Ｐｈ＝フェニル
ＰＰＴＳ＝ピリジニウムｐ−トルエンスルホネート
ｐ−ＴｓＯＨ＝ｐ−トルエンスルホン酸
ｒｔ＝室温
ＴＢＡＩ＝ヨウ化テトラブチルアンモニウム
ＴＥＡ＝トリエチルアミン
Ｔｆ＝トリフルオロメタンスルホネート
ＴＦＡ＝ＴＦＡ
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＰＴＵ＝Ｏ−（２−オキソ−１（２Ｈ）ピリジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ，’Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
精製方法：
方法Ａ：カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ、Ｃ１８、１９×１００ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；勾配：不定、１０〜２０分に亘りＡ中のＢの増加する勾配。流量２５ｍＬ／分。検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、ＭＳ（＋）範囲１６０〜１０００ダルトン；機器：Ｗａｔｅｒｓ ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘ。
方法Ａ：カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ、Ｃ１８、１９×１００ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；勾配：不定、１０〜２０分に亘りＡ中のＢの増加する勾配。流量２５ｍＬ／分。検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、ＭＳ（＋）範囲１６０〜１０００ダルトン；機器：Ｗａｔｅｒｓ ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘ。
方法Ｂ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、１５０×２１．２ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配：不定、１０〜２０分に亘りＡ中のＢの増加する勾配。流量：２７ｍＬ／分。温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、２５４ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１５０〜２０００ダルトン；機器：Ｗａｔｅｒｓ ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘ。
方法Ｃ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ、Ｎ ｘＣ１８、１５０×２１．２ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０２％水酸化アンモニウム（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％水酸化アンモニウム（ｖ／ｖ）；勾配：不定、１０〜２０分に亘りＡ中のＢの増加する勾配。流量：２７ｍＬ／分。温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、２５４ｎｍ；注入量：不定；機器：Ｗａｔｅｒｓ ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘ。
方法Ｄ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、１５０×２１．２ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０２％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；勾配：不定、１０〜２０分に亘りＡ中のＢの増加する勾配。流量：２７ｍＬ／分。温度：４５℃；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、２５４ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１５０〜２０００ダルトン；機器：Ｗａｔｅｒｓ ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘ。
方法Ｅ：カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ、Ｃ１８、１９×１００ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；流量２５ｍＬ／分。検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１６０〜１０００ダルトン；機器：Ｗａｔｅｒｓ ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘ。
方法Ｆ：カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘ Ｂｒｉｄｇｅ Ｎ ｘＣ１８、１００×１９ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０３％水酸化アンモニウム（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％水酸化アンモニウム（ｖ／ｖ）；勾配：不定、１０〜２０分に亘りＡ中のＢの増加する勾配。流量：２５ｍＬ／分。温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、２５４ｎｍ；注入量：不定；機器：Ｗａｔｅｒｓ ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘ。
方法Ｇ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ、Ｃ１８、３０×１００ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％酢酸（ｖ／ｖ）；勾配：２０分に亘り０％〜９５％Ｂ；流量：２０ｍＬ／分。温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、２５４ｎｍ；注入量：不定；機器：Ｇｉｌｓｏｎ。
方法Ｈ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ、Ｃ１８、３０×１００ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０２％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；勾配：２０分に亘り０％〜９５％Ｂ；流量：２０ｍＬ／分。温度：制御せず；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、２５４ｎｍ；注入量：不定；機器：Ｇｉｌｓｏｎ。
分析のプロトコル：
プロトコルＡ：カラム：Ａｔｌａｎｔｉｓ ｄＣ１８、５０×４．６ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；勾配：４．０分に亘り５％〜９５％Ｂ、直線状；次いで、１分に亘り９５％Ｂで保持。流量：２ｍＬ／分。温度：室温；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１６０〜１０００ダルトン；注入量３ｕＬ；機器：Ｗａｔｅｒｓ９９６ＰＤＡ。
プロトコルＡ：カラム：Ａｔｌａｎｔｉｓ ｄＣ１８、５０×４．６ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；勾配：４．０分に亘り５％〜９５％Ｂ、直線状；次いで、１分に亘り９５％Ｂで保持。流量：２ｍＬ／分。温度：室温；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１６０〜１０００ダルトン；注入量３ｕＬ；機器：Ｗａｔｅｒｓ９９６ＰＤＡ。
プロトコルＢ：カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３、Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、１．７μｍ；移動相Ａ：水中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配：０．１分に亘り５％Ｂ、２．５分に亘り５％〜９５％Ｂ、０．３５分に亘り９５％Ｂ；流量：１．２５ｍＬ／分。温度：６０℃；検出：２００〜４５０ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１００〜２０００ダルトン；注入量：５μＬ；機器：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ。
プロトコルＣ：カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３、Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、１．７μｍ；移動相Ａ：水中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配：０．１分に亘り５％Ｂ、１．５分に亘り５％〜９５％Ｂ、０．３５分に亘り９５％Ｂ；流量：１．２５ｍＬ／分。温度：６０℃；検出：２００〜４５０ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１００〜２０００ダルトン；注入量：５μＬ；機器：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ。
プロトコルＤ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、１５０×３．０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配：１．５分に亘り５％Ｂ、８．５分に亘り５％〜１００％Ｂ、次いで、１分間１００％Ｂ；流量：０．７５ｍＬ／分。温度：４５℃；検出：ＤＡＤ、２１５ｎｍ、２５４ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１５０〜２０００ダルトン；注入量：１０μＬ；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１２００ＬＣＭＳ。
プロトコルＥ：カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、４．６×５０、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：水中の０．０３％水酸化アンモニウム（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０３％水酸化アンモニウム（ｖ／ｖ）；勾配：９５．０％Ａ／５．０％Ｂ、４．０分に亘り５％Ａ／９５％Ｂへと直線状、次いで、１分間５％Ａ／９５％Ｂ；流量：２ｍＬ／分。検出：ＰＤＡ２１５ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１５０〜２０００ダルトン；注入量：４μＬ；機器：Ｗａｔｅｒｓ２７９５／Ｈ−クラス／Ａｃｑｕｉｔｙ。
プロトコルＦ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ−ＮＸ、Ｃ１８、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、１１０Ａ、３μｍ、移動相Ａ：水中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）；勾配５％；０．０〜４．１０分に亘り１００％Ｂに；１００％Ｂで４．１０〜４．５０分保持；流量：１．２５ｍＬ／分。温度：６０℃；検出：２００〜４５０ｎｍ；ＭＳ（＋）範囲１００〜２０００ダルトン；注入量：５μＬ；機器：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ。
中間体の合成
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（＃Ａ１）の調製：
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（＃Ａ１）の調製：
ジエトキシアセトニトリル（１、１２０ｇ、９３０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５００ｍＬ）中溶液に、（ＮＨ４）２ＳのＨ２Ｏ（４４０ｍＬ）中溶液（１７％）を室温にて加えた。混合物を室温にて一晩撹拌した。混合物を概ね１００ｍＬ容量まで真空中で蒸発させ、濾過した。固体を冷却した水で洗浄し、真空中で乾燥させ、表題化合物２（９２ｇ、６１％）を白色固体として得て、これを次のステップにおいてそのままで使用した。
ステップ２：エチル２−（ジエトキシメチル）−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（４）の調製：
乾燥ＥｔＯＨ（１．５Ｌ）中の２，２−ジエトキシエタンチオアミド（２、９０ｇ、５５２ｍｍｏｌ）、エチル３−ブロモ−２−オキソプロパノエート（３，１７０ｇ、８７２ｍｍｏｌ）および４Å ＭＳ（１８０ｇ）の混合物を、一晩還流させた。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中の３０：１〜４：１ヘキサン）によって精製し、表題化合物４（１００ｇ、７０％）を黄色油状物として得た。
乾燥ＥｔＯＨ（１．５Ｌ）中の２，２−ジエトキシエタンチオアミド（２、９０ｇ、５５２ｍｍｏｌ）、エチル３−ブロモ−２−オキソプロパノエート（３，１７０ｇ、８７２ｍｍｏｌ）および４Å ＭＳ（１８０ｇ）の混合物を、一晩還流させた。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中の３０：１〜４：１ヘキサン）によって精製し、表題化合物４（１００ｇ、７０％）を黄色油状物として得た。
ステップ３：エチル２−ホルミルチアゾール−４−カルボキシレート（５）の調製：
２−（ジエトキシメチル）−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（４、７０ｇ、２７０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（７０ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（７０ｍＬ）を室温にて加えた。混合物を室温にて一晩撹拌し、次いで、濃縮乾燥させた。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮し、表題化合物５（４１ｇ、８２％）を黄色固体として得た。
２−（ジエトキシメチル）−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（４、７０ｇ、２７０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（７０ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（７０ｍＬ）を室温にて加えた。混合物を室温にて一晩撹拌し、次いで、濃縮乾燥させた。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮し、表題化合物５（４１ｇ、８２％）を黄色固体として得た。
ステップ４：（Ｓ，Ｅ）−２−メチル−Ｎ−（３−メチルブタン−２−イリデン）プロパン−２−スルフィンアミド（８）の調製：
３−メチルブタン−２−オン（７、１１０．９ｇ、１．２９ｍｏｌ）、（Ｓ）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（６、１３０ｇ、１．０７ｍｏｌ）およびＴｉ（ＯＥｔ）４（４１５ｇ、１．８２ｍｏｌ）の混合物を、一晩還流させた。混合物を室温へと冷却し、氷冷水（１００ｍＬ）でクエンチした。混合物はセライトを通して濾過し、濾過ケークをＥｔＯＡｃで洗浄し、濾液を真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（３：１のヘキサン：ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物８（１６３ｇ、８０．３％）を僅かに黄色の液体として得た。
３−メチルブタン−２−オン（７、１１０．９ｇ、１．２９ｍｏｌ）、（Ｓ）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（６、１３０ｇ、１．０７ｍｏｌ）およびＴｉ（ＯＥｔ）４（４１５ｇ、１．８２ｍｏｌ）の混合物を、一晩還流させた。混合物を室温へと冷却し、氷冷水（１００ｍＬ）でクエンチした。混合物はセライトを通して濾過し、濾過ケークをＥｔＯＡｃで洗浄し、濾液を真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（３：１のヘキサン：ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物８（１６３ｇ、８０．３％）を僅かに黄色の液体として得た。
ステップ５：エチル２−［（１Ｒ，３Ｅ）−３−｛［（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル］イミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（９）の調製：
（Ｓ，Ｅ）−２−メチル−Ｎ−（３−メチルブタン−２−イリデン）プロパン−２−スルフィンアミド（８、６２．８ｇ、３３２ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１．２Ｌ）中溶液に、ＬＤＡ（１８６．２ｍＬ、３７２．４ｍｍｏｌ）を−６５℃にて加え、混合物を−７０℃にて１時間撹拌した。ＴｉＣｌ（Ｏ−ｉ−Ｐｒ）３のヘキサン（５５４ｍＬ、５５４ｍｍｏｌ）中溶液（１Ｍ）を加え、混合物を−７０℃にて１時間撹拌した。エチル２−ホルミルチアゾール−４−カルボキシレート（５、４１ｇ、２２１．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）中溶液を加え、混合物を−７０℃にて５時間撹拌した。ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の酢酸（４１ｍＬ）、それに続いて水（１００ｍＬ）を加えることによって反応物をクエンチした。混合物はセライトのパッドを通して濾過し、濾過ケークをＥｔＯＡｃで洗浄し、濾液を蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（３０：１〜３：１のヘキサン：ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物９（４１ｇ、４９．５％）を黄色油状物として得た。
（Ｓ，Ｅ）−２−メチル−Ｎ−（３−メチルブタン−２−イリデン）プロパン−２−スルフィンアミド（８、６２．８ｇ、３３２ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１．２Ｌ）中溶液に、ＬＤＡ（１８６．２ｍＬ、３７２．４ｍｍｏｌ）を−６５℃にて加え、混合物を−７０℃にて１時間撹拌した。ＴｉＣｌ（Ｏ−ｉ−Ｐｒ）３のヘキサン（５５４ｍＬ、５５４ｍｍｏｌ）中溶液（１Ｍ）を加え、混合物を−７０℃にて１時間撹拌した。エチル２−ホルミルチアゾール−４−カルボキシレート（５、４１ｇ、２２１．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）中溶液を加え、混合物を−７０℃にて５時間撹拌した。ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の酢酸（４１ｍＬ）、それに続いて水（１００ｍＬ）を加えることによって反応物をクエンチした。混合物はセライトのパッドを通して濾過し、濾過ケークをＥｔＯＡｃで洗浄し、濾液を蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（３０：１〜３：１のヘキサン：ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物９（４１ｇ、４９．５％）を黄色油状物として得た。
ステップ６：エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル］アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１０）の調製：
エチル２−［（１Ｒ，３Ｅ）−３−｛［（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル］イミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（９、５８ｇ、１５５ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１Ｌ）中溶液に、Ｔｉ（ＯＥｔ）４（７０．７ｇ、３１０ｍｍｏｌ）を−６５℃にて加え、混合物を−７０℃にて２０分間撹拌した。固体ＮａＢＨ４（１１．８ｇ、３１０ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、反応物を−７０℃にて撹拌した。３時間後、反応物をＭｅＯＨ（１５ｍＬ）で−７０℃にてクエンチし、−２０℃に温め、水（２０ｍＬ）を加えた。混合物はセライトのパッドを通して濾過し、濾過ケークをＥｔＯＡｃで洗浄し、濾液を真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（３０：１〜１：１、ＥｔＯＡｃ中のヘキサン）によって精製し、表題化合物１０（５．５ｇ、９．１％）を僅かに黄色の固体として得た。
1H NMR
(400Hz, CDCl3): δ 8.10 (s, 1H), 5.48 (m, 1H), 5.20 (m, 1H), 4.44 (m, 2H), 3.46 (m,
1H), 3.32 (d, 1H), 2.29 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.71 (m, 1H), 1.44 (m, 3H), 1.28
(s, 9H), 0.94 (m, 6H); m/z: 377.1 [M+H]+; 94.15% ee, カラム: Chiralpak AD-H 250 x 4.6 mm I.D., 5 μm, 移動相: メタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%;
波長: 220 nm; 保持時間 = 4.97分。
エチル２−［（１Ｒ，３Ｅ）−３−｛［（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル］イミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（９、５８ｇ、１５５ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１Ｌ）中溶液に、Ｔｉ（ＯＥｔ）４（７０．７ｇ、３１０ｍｍｏｌ）を−６５℃にて加え、混合物を−７０℃にて２０分間撹拌した。固体ＮａＢＨ４（１１．８ｇ、３１０ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、反応物を−７０℃にて撹拌した。３時間後、反応物をＭｅＯＨ（１５ｍＬ）で−７０℃にてクエンチし、−２０℃に温め、水（２０ｍＬ）を加えた。混合物はセライトのパッドを通して濾過し、濾過ケークをＥｔＯＡｃで洗浄し、濾液を真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（３０：１〜１：１、ＥｔＯＡｃ中のヘキサン）によって精製し、表題化合物１０（５．５ｇ、９．１％）を僅かに黄色の固体として得た。
1H NMR
(400Hz, CDCl3): δ 8.10 (s, 1H), 5.48 (m, 1H), 5.20 (m, 1H), 4.44 (m, 2H), 3.46 (m,
1H), 3.32 (d, 1H), 2.29 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.71 (m, 1H), 1.44 (m, 3H), 1.28
(s, 9H), 0.94 (m, 6H); m/z: 377.1 [M+H]+; 94.15% ee, カラム: Chiralpak AD-H 250 x 4.6 mm I.D., 5 μm, 移動相: メタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%;
波長: 220 nm; 保持時間 = 4.97分。
ステップ７：エチル２−［（１Ｒ，３Ｅ）−３−｛［（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル］イミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１１）の調製：
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル］アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１０、２５ｇ、６６．５ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（４１．６ｇ、１．３ｍｏｌ）およびＰＰＴＳ（０．１７ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）のトルエン（５００ｍＬ）中懸濁液を、８０℃にて一晩撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を真空下で濃縮した。残渣をシリカカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中の５０％ヘキサン）によって精製し、表題化合物１１（１１．８ｇ、５３％）を油状物として得た。
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル］アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１０、２５ｇ、６６．５ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（４１．６ｇ、１．３ｍｏｌ）およびＰＰＴＳ（０．１７ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）のトルエン（５００ｍＬ）中懸濁液を、８０℃にて一晩撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を真空下で濃縮した。残渣をシリカカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中の５０％ヘキサン）によって精製し、表題化合物１１（１１．８ｇ、５３％）を油状物として得た。
ステップ８：エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−４−メチル−３−（メチルアミノ）ペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１２）の調製：
エチル２−［（１Ｒ，３Ｅ）−３−｛［（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル］イミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１１、９ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（１．８ｇ、２７．８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル／エタノール（１０８ｍＬ／１２ｍＬ）中溶液に０℃にて、ジオキサン中の４．０ＮのＨＣｌ（３０ｍＬ、０．１２ｍｍｏｌ）を滴下で添加し、溶液を室温にて２時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）に溶解し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。固体ＮａＨＣＯ３の添加によって水相をｐＨ＝８に調節し、濃縮乾燥させた。残渣をＤＣＭ（５０ｍＬ）と共に撹拌し、濾過した。濾液を真空下で濃縮し、表題化合物１２（７．３ｇ、定量的収率）を黄色油状物として得た。
エチル２−［（１Ｒ，３Ｅ）−３−｛［（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル］イミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１１、９ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（１．８ｇ、２７．８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル／エタノール（１０８ｍＬ／１２ｍＬ）中溶液に０℃にて、ジオキサン中の４．０ＮのＨＣｌ（３０ｍＬ、０．１２ｍｍｏｌ）を滴下で添加し、溶液を室温にて２時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）に溶解し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。固体ＮａＨＣＯ３の添加によって水相をｐＨ＝８に調節し、濃縮乾燥させた。残渣をＤＣＭ（５０ｍＬ）と共に撹拌し、濾過した。濾液を真空下で濃縮し、表題化合物１２（７．３ｇ、定量的収率）を黄色油状物として得た。
ステップ９：（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチル−３−（メチルアミノ）ペンチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ− イソロイシネート（１４）の調製：
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−４−メチル−３−（メチルアミノ）ペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１２、７．３ｇ、２５．５２ｍｍｏｌ）、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシン（１３、６．５ｇ、２８．０７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（５．４ｇ、２８．０７ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（３．８ｇ、２８．０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５０ｍＬ）中溶液を、室温にて一晩撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、有機相を真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の１１％ＭｅＯＨ）によって精製し、残渣を得て、これをＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮し、表題化合物１４（６．８ｇ、５４％）を黄色油状物として得た。
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−４−メチル−３−（メチルアミノ）ペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１２、７．３ｇ、２５．５２ｍｍｏｌ）、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシン（１３、６．５ｇ、２８．０７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（５．４ｇ、２８．０７ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（３．８ｇ、２８．０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５０ｍＬ）中溶液を、室温にて一晩撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、有機相を真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の１１％ＭｅＯＨ）によって精製し、残渣を得て、これをＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮し、表題化合物１４（６．８ｇ、５４％）を黄色油状物として得た。
ステップ１０：エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（＃Ａ１）の調製：
（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチル−３−（メチルアミノ）ペンチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシネート（１４、８ｇ、１６．０３ｍｍｏｌ）のトルエン（８３ｍＬ）中溶液を、９０℃にて一晩撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をシリカカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中の５０％ヘキサン）によって精製し、表題化合物＃Ａ１（６ｇ、７５％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, CD3OD): δ
8.31 (s, 1H), 6.53 (d, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.41 (m, 4H), 3.16 (s, 3H), 2.25 (m,
1H), 1.96 (m, 4H), 1.42 (m, 15H), 1.38 (m, 2H), 1.00 (m, 12H); m/z: 522.3 [M+Na]+;
100% ee; カラム: Chiralcel AD-H
150 x 4.6mm I.D., 5μm, 移動相: エタノール (0.05% DEA)、CO2
5%〜40%; 波長: 220 nm; 保持時間 = 5.62分。
（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチル−３−（メチルアミノ）ペンチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシネート（１４、８ｇ、１６．０３ｍｍｏｌ）のトルエン（８３ｍＬ）中溶液を、９０℃にて一晩撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をシリカカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中の５０％ヘキサン）によって精製し、表題化合物＃Ａ１（６ｇ、７５％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, CD3OD): δ
8.31 (s, 1H), 6.53 (d, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.41 (m, 4H), 3.16 (s, 3H), 2.25 (m,
1H), 1.96 (m, 4H), 1.42 (m, 15H), 1.38 (m, 2H), 1.00 (m, 12H); m/z: 522.3 [M+Na]+;
100% ee; カラム: Chiralcel AD-H
150 x 4.6mm I.D., 5μm, 移動相: エタノール (0.05% DEA)、CO2
5%〜40%; 波長: 220 nm; 保持時間 = 5.62分。
メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（｛２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−イル｝カルボニル）アミノ］−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（＃Ａ２）の調製：
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（＃Ａ１、２ｇ、４ｍｍｏｌ）のジオキサン（５０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＬｉＯＨ一水和物（８３９ｍｇ、２０ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（５０ｍＬ）中溶液を滴下で添加し、溶液を室温にて２時間撹拌した。反応混合物をｐＨ＝１に酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮し、表題化合物１５（２．１ｇ、定量的収率）を白色固体として得た。
ステップ２：メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（｛２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−イル｝カルボニル）アミノ］−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（１６）の調製：
２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（１５、８９５ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３８４ｍｇ、３．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＨＯＡｔ（２５８ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（７２２ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）を加えた。０℃にて１０分間撹拌した後、メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−フェニルペンタノエート塩酸塩（Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１３、１１、２２７３〜２２８７）（４９０ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）を加え、このように得られた溶液を室温にて３時間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の７％ＭｅＯＨ）によって精製し、化合物１３（１．１ｇ、８５％）を黄色油状物として得た。
２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（１５、８９５ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３８４ｍｇ、３．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＨＯＡｔ（２５８ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（７２２ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）を加えた。０℃にて１０分間撹拌した後、メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−フェニルペンタノエート塩酸塩（Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１３、１１、２２７３〜２２８７）（４９０ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）を加え、このように得られた溶液を室温にて３時間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の７％ＭｅＯＨ）によって精製し、化合物１３（１．１ｇ、８５％）を黄色油状物として得た。
ステップ３：メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（｛２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−イル｝カルボニル）アミノ］−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（＃Ａ２）の調製：
メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（｛２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−イル｝カルボニル）アミノ］−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（１６、１．４ｇ、２．１ｍｍｏｌ）のＡｃ２Ｏ（２ｍＬ）およびピリジン（１０ｍＬ）中溶液を、室温にて一晩撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中の３０％ヘキサン）によって精製し、表題化合物＃Ａ２（１．２ｇ、８０％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400Hz, CDCl3): δ
8.01 (s, 1H), 7.30 (m, 1H), 7.23 (m, 3H), 7.09 (d, 1H), 5.64 (d, 1H), 5.10 (d,
2H), 4.54 (m, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.00 (m, 5H), 2.53 (m, 1H), 2.31 (m, 1H), 2.16
(s, 3H), 2.04 (m, 2H), 1.61 (m, 6H), 1.41 (m, 9H), 1.02 (m, 4H), 0.91 (m, 12H);
m/z 739.3 [M+Na]+; 98.5% ee; カラム: Chiralcel AS-H 150 x 4.6mm I.D., 5μm, 移動相: メタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%; 流速: 2.35 mL/分; 波長: 220 nm; 保持時間 = 4.65分。
メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（｛２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−イル｝カルボニル）アミノ］−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（１６、１．４ｇ、２．１ｍｍｏｌ）のＡｃ２Ｏ（２ｍＬ）およびピリジン（１０ｍＬ）中溶液を、室温にて一晩撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中の３０％ヘキサン）によって精製し、表題化合物＃Ａ２（１．２ｇ、８０％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400Hz, CDCl3): δ
8.01 (s, 1H), 7.30 (m, 1H), 7.23 (m, 3H), 7.09 (d, 1H), 5.64 (d, 1H), 5.10 (d,
2H), 4.54 (m, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.00 (m, 5H), 2.53 (m, 1H), 2.31 (m, 1H), 2.16
(s, 3H), 2.04 (m, 2H), 1.61 (m, 6H), 1.41 (m, 9H), 1.02 (m, 4H), 0.91 (m, 12H);
m/z 739.3 [M+Na]+; 98.5% ee; カラム: Chiralcel AS-H 150 x 4.6mm I.D., 5μm, 移動相: メタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%; 流速: 2.35 mL/分; 波長: 220 nm; 保持時間 = 4.65分。
２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（＃Ａ３）の調製：
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（＃Ａ１、５ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）中溶液に０℃にて、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を滴下で添加し、溶液を室温にて２時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）で塩基性化した。有機相をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮し、表題化合物１７（３．９ｇ、１００％）をゴム状物として得て、これを次のステップにおいて直接に使用した。
ステップ２：エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１８）の調製：
エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１７、５１４．８ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．２ｇ、９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＴＰＴＵ（１．１ｇ、３．６ｍｍｏｌ）を加えた。０℃にて１５分間撹拌した後、（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−カルボン酸（ＣＡＳ＃４１４４７−１７−０）（１．２ｇ、３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液を加えた。このように得られた溶液を室温にて一晩撹拌し、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮し、表題化合物１８（１．４ｇ、８５％）を黄色油状物として得た。
エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１７、５１４．８ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．２ｇ、９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＴＰＴＵ（１．１ｇ、３．６ｍｍｏｌ）を加えた。０℃にて１５分間撹拌した後、（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−カルボン酸（ＣＡＳ＃４１４４７−１７−０）（１．２ｇ、３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液を加えた。このように得られた溶液を室温にて一晩撹拌し、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮し、表題化合物１８（１．４ｇ、８５％）を黄色油状物として得た。
ステップ３：２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（１９）の調製：
エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１８、２．６ｇ、４．９６ｍｍｏｌ）のジオキサン（５０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＬｉＯＨ一水和物（０．８３ｇ、１９．８４ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（５０ｍＬ）中溶液を加えた。反応物を室温にて２時間撹拌し、真空下で濃縮し、表題化合物１９を得て、これを次のステップにおいて精製をせずに使用した。
エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１８、２．６ｇ、４．９６ｍｍｏｌ）のジオキサン（５０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＬｉＯＨ一水和物（０．８３ｇ、１９．８４ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（５０ｍＬ）中溶液を加えた。反応物を室温にて２時間撹拌し、真空下で濃縮し、表題化合物１９を得て、これを次のステップにおいて精製をせずに使用した。
ステップ４：２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（＃Ａ３）の調製：
２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（１９、２．５ｇ、４．９６ｍｍｏｌ）のＡｃ２Ｏ（４ｍＬ）およびピリジン（２０ｍＬ）中溶液を、室温にて一晩撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をさらなるピリジン（２０ｍＬ）およびＡｃ２Ｏ（４ｍＬ）で処理し、室温にて２時間撹拌し、その後、真空濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ［（カラム：Ｇｅｍｉｎｉ、５０×２５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏ中の１０％アセトニトリル（Ｈ２Ｏ中の０．１％ＮＨ３）からＨ２Ｏ中の４０％アセトニトリル（Ｈ２Ｏ中の０．１％ＮＨ３）］によって精製し、表題化合物＃Ａ３（１．５ｇ、５６％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 8.40 (s,
1H), 7.75 (d, 1H), 5.51 (d, 1H), 4.70 (m, 1H), 4.30 (br, 1H), 2.97 (s, 3 H),
2.80 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.13 (m, 9 H), 1.75 (m, 2H), 1.60 (m, 6H), 1.25 (m,
2 H), 0.80 (m, 9 H), 0.60 (d, 3 H); m/z: 539.1 [M+H]+; 100% ee; カラム: Chiralcel OD-H 150×4.6mm I.D., 5μm, 移動相: エタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%; 波長: 220 nm; 保持時間 =
7.29分。
２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（１９、２．５ｇ、４．９６ｍｍｏｌ）のＡｃ２Ｏ（４ｍＬ）およびピリジン（２０ｍＬ）中溶液を、室温にて一晩撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をさらなるピリジン（２０ｍＬ）およびＡｃ２Ｏ（４ｍＬ）で処理し、室温にて２時間撹拌し、その後、真空濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ［（カラム：Ｇｅｍｉｎｉ、５０×２５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏ中の１０％アセトニトリル（Ｈ２Ｏ中の０．１％ＮＨ３）からＨ２Ｏ中の４０％アセトニトリル（Ｈ２Ｏ中の０．１％ＮＨ３）］によって精製し、表題化合物＃Ａ３（１．５ｇ、５６％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 8.40 (s,
1H), 7.75 (d, 1H), 5.51 (d, 1H), 4.70 (m, 1H), 4.30 (br, 1H), 2.97 (s, 3 H),
2.80 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.13 (m, 9 H), 1.75 (m, 2H), 1.60 (m, 6H), 1.25 (m,
2 H), 0.80 (m, 9 H), 0.60 (d, 3 H); m/z: 539.1 [M+H]+; 100% ee; カラム: Chiralcel OD-H 150×4.6mm I.D., 5μm, 移動相: エタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%; 波長: 220 nm; 保持時間 =
7.29分。
ステップ４：２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（＃Ａ３）の調製：
２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（１９、２．５ｇ、４．９６ｍｍｏｌ）のＡｃ２Ｏ（４ｍＬ）およびピリジン（２０ｍＬ）中溶液を、室温にて一晩撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をさらなるピリジン（２０ｍＬ）およびＡｃ２Ｏ（４ｍＬ）で処理し、室温にて２時間撹拌し、その後、真空濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ［カラム：Ｇｅｍｉｎｉ、５０×２５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ、１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏ（Ｈ２Ｏ中の０．１％ＮＨ３）中の１０％からＨ２Ｏ（Ｈ２Ｏ中の０．１％ＮＨ３）中の４０％アセトニトリル］によって精製し、表題化合物＃Ａ３（１．５ｇ、５６％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 8.40 (s,
1H), 7.75 (d, 1H), 5.51 (d, 1H), 4.70 (m, 1H), 4.30 (br, 1H), 2.97 (s, 3 H),
2.80 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.13 (m, 9 H), 1.75 (m, 2H), 1.60 (m, 6H), 1.25 (m,
2 H), 0.80 (m, 9 H), 0.60 (d, 3 H); m/z: 539.1 [M+H]+; 100% ee; カラム: Chiralcel OD-H 150 x 4.6 mm I.D., 5μm, 移動相: エタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%;
波長: 220 nm; 保持時間 = 7.29分。
２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（１９、２．５ｇ、４．９６ｍｍｏｌ）のＡｃ２Ｏ（４ｍＬ）およびピリジン（２０ｍＬ）中溶液を、室温にて一晩撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をさらなるピリジン（２０ｍＬ）およびＡｃ２Ｏ（４ｍＬ）で処理し、室温にて２時間撹拌し、その後、真空濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ［カラム：Ｇｅｍｉｎｉ、５０×２５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ、１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏ（Ｈ２Ｏ中の０．１％ＮＨ３）中の１０％からＨ２Ｏ（Ｈ２Ｏ中の０．１％ＮＨ３）中の４０％アセトニトリル］によって精製し、表題化合物＃Ａ３（１．５ｇ、５６％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 8.40 (s,
1H), 7.75 (d, 1H), 5.51 (d, 1H), 4.70 (m, 1H), 4.30 (br, 1H), 2.97 (s, 3 H),
2.80 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.13 (m, 9 H), 1.75 (m, 2H), 1.60 (m, 6H), 1.25 (m,
2 H), 0.80 (m, 9 H), 0.60 (d, 3 H); m/z: 539.1 [M+H]+; 100% ee; カラム: Chiralcel OD-H 150 x 4.6 mm I.D., 5μm, 移動相: エタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%;
波長: 220 nm; 保持時間 = 7.29分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ４）の調製：
エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１７、１．２ｇ、３ｍｍｏｌ）、１，２−ジメチル−Ｄ−プロリン（Ｄｏｒｏｓｋｉら、米国特許第８８２８４０１Ｂ２号）（４２９ｍｇ、３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１．３ｇ、３．３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．２ｇ、９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中
溶液を、室温にて一晩撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の１５％ＭｅＯＨ）によって精製し、表題化合物＃Ａ４（０．９ｇ、６０％）を黄色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, MeOD): δ 8.32 (s,
1H), 4.71 (m, 2 H), 4.42 (m, 2 H), 3.20 (s, 3 H), 2.74 (br, 2H), 2.25 (m, 2 H),
1.98 (m, 3 H), 1.56 (m, 3 H), 1.38 (m, 2 H), 1.03 (m, 1 H), 1.00 (m, 9H); m/z:
525.1 (M+H)+; 97.4 % ee; カラム: Chiralcel AD-RH 150 x 4.6mm I.D., 5μm; B、A 10%〜80%、移動相A: 0.07% TFAを含む水、移動相B:
0.07% TFAを含むアセトニトリル; 波長: 220 nm、保持時間 = 24.6分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ５）の調製：
（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−５−（４−アミノフェニル）−２−メチルペンタン酸塩酸塩（＃Ａ６）
（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−フェニルペンタン酸塩酸塩（＃Ａ７）
メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−フェニルペンタノエート塩酸塩（＃Ａ８）および
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−フェニルペンタノエート塩酸塩（＃Ａ９）の調製
（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−フェニルペンタン酸塩酸塩（＃Ａ７）
メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−フェニルペンタノエート塩酸塩（＃Ａ８）および
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−フェニルペンタノエート塩酸塩（＃Ａ９）の調製
表題化合物＃Ａ７、＃Ａ８、および＃Ａ９は、Ｓｈａｎｋａｒら、Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１３、１１、２２７３〜２２８７に記載されているように調製した。
メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−｛［（２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−イル）カルボニル］アミノ｝−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（＃Ａ１０）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ１１）の調製：
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（＃Ａ１、７００ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）、４−ニトロ安息香酸（２５８ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（１．４７ｇ、５．６０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、ＤＩＡＤ（９７６ｍｇ、５．６０ｍｍｏｌ）を０℃にて滴下で添加し、溶液を室温にて２時間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の４０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物２１（７００ｍｇ、７７％）を油状物として得た。ｍ／ｚ６７１．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
ステップ２：エチル２−［（１Ｓ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２２）の調製：
エチル２−｛（１Ｓ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチル−１−［（４−ニトロベンゾイル）オキシ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２１、１．５ｇ、２．３１２ｍｍｏｌ）およびアジ化ナトリウム（７５２ｍｇ、１１．６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中溶液を、３０℃にて一晩撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の４０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物２２（２００ｍｇ、１７％）を油状物として得た。
1H NMR
(400 MHz, CDCl3): δ
8.12 (s, 1H), 5.42-5.02 (m, 3H), 4.43-4.34 (m, 3H), 4.17 (m, 1H), 2.95 (m, 2H),
2.79 (m, 1H), 2.50-2.46 (m, 1H), 1.88-1.65 (m, 3H), 1.65-1.37 (m, 3H), 1.13 (m,
13 H), 1.07-0.90 (m, 6H), 0.89-0.84 (m, 10); m/z: 522.1 [M+Na]+;
95.2% ee; カラム: AS-H 250 mm x
4.6mm I.D; 移動相: メタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%;波長: 220 nm; 保持時間 =
2.94分。
エチル２−｛（１Ｓ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチル−１−［（４−ニトロベンゾイル）オキシ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２１、１．５ｇ、２．３１２ｍｍｏｌ）およびアジ化ナトリウム（７５２ｍｇ、１１．６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中溶液を、３０℃にて一晩撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の４０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物２２（２００ｍｇ、１７％）を油状物として得た。
1H NMR
(400 MHz, CDCl3): δ
8.12 (s, 1H), 5.42-5.02 (m, 3H), 4.43-4.34 (m, 3H), 4.17 (m, 1H), 2.95 (m, 2H),
2.79 (m, 1H), 2.50-2.46 (m, 1H), 1.88-1.65 (m, 3H), 1.65-1.37 (m, 3H), 1.13 (m,
13 H), 1.07-0.90 (m, 6H), 0.89-0.84 (m, 10); m/z: 522.1 [M+Na]+;
95.2% ee; カラム: AS-H 250 mm x
4.6mm I.D; 移動相: メタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%;波長: 220 nm; 保持時間 =
2.94分。
ステップ３：エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−アジド−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２３）の調製：
エチル２−［（１Ｓ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２２、９００ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（１．４２ｇ、５．４０ｍｍｏｌ）、およびジフェニルホスホリルアジド（１．２４ｇ、４．５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ジエチルアゾジカルボキシレート（１．５７ｇ、１ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温にて３０分間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。有機相を真空下で濃縮し、残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の３０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物２３（８００ｍｇ、８４．７％）を油状物として得た。ｍ／ｚ５４７．３［Ｍ＋Ｎａ］＋。
エチル２−［（１Ｓ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２２、９００ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（１．４２ｇ、５．４０ｍｍｏｌ）、およびジフェニルホスホリルアジド（１．２４ｇ、４．５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ジエチルアゾジカルボキシレート（１．５７ｇ、１ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温にて３０分間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。有機相を真空下で濃縮し、残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の３０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物２３（８００ｍｇ、８４．７％）を油状物として得た。ｍ／ｚ５４７．３［Ｍ＋Ｎａ］＋。
ステップ４：エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−アミノ−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２４）の調製：
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−アジド−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２３、５４０ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ−Ｃ（３００ｍｇ）のエタノール（２０ｍＬ）中懸濁液を、４０ｐｓｉのＨ２下で２時間室温にて撹拌した。反応混合物はセライトのパッドを通して濾過し、濾過ケークをＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を真空下で濃縮し、表題化合物２４（３７０ｍｇ、７２．１％）を油状物として得て、これを更には精製せずに使用した。
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−アジド−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２３、５４０ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ−Ｃ（３００ｍｇ）のエタノール（２０ｍＬ）中懸濁液を、４０ｐｓｉのＨ２下で２時間室温にて撹拌した。反応混合物はセライトのパッドを通して濾過し、濾過ケークをＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を真空下で濃縮し、表題化合物２４（３７０ｍｇ、７２．１％）を油状物として得て、これを更には精製せずに使用した。
ステップ５：エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２５）の調製：
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−アミノ−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２４、３７０ｍｇ、０．７４２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１５０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に０℃にて、塩化アセチルを滴下で添加し（２９１ｍｇ、３．７１ｍｍｏｌ）、混合物を室温にて１０分間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中９０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物２５（３００ｍｇ、７４．８％）を油状物として得た。ｍ／ｚ５６３．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−アミノ−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２４、３７０ｍｇ、０．７４２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１５０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に０℃にて、塩化アセチルを滴下で添加し（２９１ｍｇ、３．７１ｍｍｏｌ）、混合物を室温にて１０分間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中９０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物２５（３００ｍｇ、７４．８％）を油状物として得た。ｍ／ｚ５６３．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。
ステップ６：エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２６）の調製：
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２５、３００ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に０℃にて、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を滴下で添加し、混合物を室温にて２時間撹拌した。さらなるトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、溶液を室温にて０．５時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、粗化合物２６を得て、これを次のステップにおいて直接使用した。
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２５、３００ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に０℃にて、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を滴下で添加し、混合物を室温にて２時間撹拌した。さらなるトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、溶液を室温にて０．５時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、粗化合物２６を得て、これを次のステップにおいて直接使用した。
ステップ７：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（２７）の調製：
エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２６、２１６ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）、１，２−ジメチル−Ｄ−プロリン（Ｄｏｒｏｓｋｉら、米国特許第８８２８４０１Ｂ２号）（８８．２ｍｇ、０．６１６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２１７ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＨＡＴＵ（２３４ｍｇ、０．６１６ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温にて２時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、粗製表題化合物２７を得て、これを次のステップにおいて直接使用した。
エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２６、２１６ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）、１，２−ジメチル−Ｄ−プロリン（Ｄｏｒｏｓｋｉら、米国特許第８８２８４０１Ｂ２号）（８８．２ｍｇ、０．６１６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２１７ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＨＡＴＵ（２３４ｍｇ、０．６１６ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温にて２時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、粗製表題化合物２７を得て、これを次のステップにおいて直接使用した。
ステップ８：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ１１）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（２７、３１６．４ｍｇ、０．６０３０ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（１４４ｍｇ、４．２９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２ｍＬ）中溶液を、室温にて一晩撹拌した。さらなるＬｉＯＨ（１４４ｍｇ、４．２９ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を室温にてさらに２４時間続けた。反応混合物を１．０ＮのＨＣｌ水溶液の添加によってｐＨ＝５．０に酸性化し、溶液を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相：水（０．１％ＴＦＡ）中の１３％アセトニトリルから水（０．１％ＴＦＡ）中の３３％アセトニトリル；波長：２２０ｎｍ）によって直接精製し、表題化合物＃Ａ１１（１６０ｍｇ、４９％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.74 (br,
1H), 8.73-8.70 (m, 2 H), 8.31 (s, 1H), 4.74 (m, 1H), 4.63-4.58 (m, 1H), 3.53
(m, 2H), 3.18-3.13 (m, 1H), 3.00 (s, 3H),2.70-2.68 (m, 3H), 2.29-2.28 (m, 1H),
2.09-1.81 (m, 9H), 1.48 (m, 4 H), 0.94-0.92 (m, 1H), 0.86 (m, 3H), 0.84-0.81
(m, 6H), 0.73 (m, 3H); m/z: 538.1 [M+H]+; 99% ee; カラム: Chiralpak AD-H 250 x 4.6 mm I.D., 5μm, 移動相: エタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%;
波長: 220 nm; 保持時間 = 5.04分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（２７、３１６．４ｍｇ、０．６０３０ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（１４４ｍｇ、４．２９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２ｍＬ）中溶液を、室温にて一晩撹拌した。さらなるＬｉＯＨ（１４４ｍｇ、４．２９ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を室温にてさらに２４時間続けた。反応混合物を１．０ＮのＨＣｌ水溶液の添加によってｐＨ＝５．０に酸性化し、溶液を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相：水（０．１％ＴＦＡ）中の１３％アセトニトリルから水（０．１％ＴＦＡ）中の３３％アセトニトリル；波長：２２０ｎｍ）によって直接精製し、表題化合物＃Ａ１１（１６０ｍｇ、４９％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.74 (br,
1H), 8.73-8.70 (m, 2 H), 8.31 (s, 1H), 4.74 (m, 1H), 4.63-4.58 (m, 1H), 3.53
(m, 2H), 3.18-3.13 (m, 1H), 3.00 (s, 3H),2.70-2.68 (m, 3H), 2.29-2.28 (m, 1H),
2.09-1.81 (m, 9H), 1.48 (m, 4 H), 0.94-0.92 (m, 1H), 0.86 (m, 3H), 0.84-0.81
(m, 6H), 0.73 (m, 3H); m/z: 538.1 [M+H]+; 99% ee; カラム: Chiralpak AD-H 250 x 4.6 mm I.D., 5μm, 移動相: エタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%;
波長: 220 nm; 保持時間 = 5.04分。
２−［（６Ｒ，８Ｒ，１１Ｓ）−１１−［（２Ｓ）−ブタン−２−イル］−９−メチル−１３−（７−メチル−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−１−イル）−４，１０，１３−トリオキソ−８−（プロパン−２−イル）−５−オキサ−３，９，１２−トリアザトリデカン−６−イル］−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（＃Ａ１２）の調製：
ｔｅｒｔ−ブチル７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−１−カルボキシレート（Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ．１９９９、１、１８２５）（２８、１２ｇ、６０．８２７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６０ｍＬ）中溶液に、ホルムアルデヒド（１８．２６ｍＬ、６０８．２７３ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ−Ｃ（３ｇ、５０％水分）を加え、このように得られた反応混合物を５０ｐｓｉで１６時間水素化した。混合物はセライトを通して濾過し、濾液を濃縮し、粗化合物を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の４０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物２９（１０．８ｇ、８４％）を無色液体として得た。ｍ／ｚ：２１１．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップ２：７−メチル−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−１−カルボン酸（３０）の調製：
ｔｅｒｔ−ブチル７−メチル−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−１−カルボキシレート（２９、１０．８ｇ、５１．２ｍｍｏｌ）のジオキサン（１００ｍＬ）中溶液に、ジオキサン（１００ｍＬ）中の４．０ＮのＨＣｌを加え、このように得られた反応混合物を室温にて３６時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、エーテルで粉砕し、表題化合物３０（８．５ｇ、８７％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, CD3OD): δ
4.12 (m, 1H), 2.91 (s, 3H), 2.1-2.4 (m, 6H), 1.88-1.98 (m, 3H).
ｔｅｒｔ−ブチル７−メチル−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−１−カルボキシレート（２９、１０．８ｇ、５１．２ｍｍｏｌ）のジオキサン（１００ｍＬ）中溶液に、ジオキサン（１００ｍＬ）中の４．０ＮのＨＣｌを加え、このように得られた反応混合物を室温にて３６時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、エーテルで粉砕し、表題化合物３０（８．５ｇ、８７％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, CD3OD): δ
4.12 (m, 1H), 2.91 (s, 3H), 2.1-2.4 (m, 6H), 1.88-1.98 (m, 3H).
ステップ３：エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（３１）の調製：
撹拌したエチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（＃Ａ１、１．０２ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（４９９ｍｇ、４．０８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（１７．４ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＤＩＰＥＡ（２．６４ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）およびイソシアン酸エチル（３．６３ｇ、５１．１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて４２時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ、（１００ｍＬ）中に注ぎ、層を分離した。水相をＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ×３）で抽出し、合わせた有機層をＨ２Ｏ（５０ｍＬ×２）およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｍａｘ−ＲＰ、２５０×８０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、１０μＭ；移動相Ａ：０．１％ＴＦＡを有するＨ２Ｏ、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡを有するアセトニトリル；２０分に亘り５０％〜８０％Ｂ、１００％Ｂで２分間保持；流量：８０ｍＬ／分）によって精製し、表題化合物３１（７５０ｍｇ、６４％）を白色固体として得た。ｍ／ｚ：５９３．３［Ｍ＋Ｎａ］＋。
撹拌したエチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（＃Ａ１、１．０２ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（４９９ｍｇ、４．０８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（１７．４ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＤＩＰＥＡ（２．６４ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）およびイソシアン酸エチル（３．６３ｇ、５１．１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて４２時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ、（１００ｍＬ）中に注ぎ、層を分離した。水相をＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ×３）で抽出し、合わせた有機層をＨ２Ｏ（５０ｍＬ×２）およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｍａｘ−ＲＰ、２５０×８０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、１０μＭ；移動相Ａ：０．１％ＴＦＡを有するＨ２Ｏ、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡを有するアセトニトリル；２０分に亘り５０％〜８０％Ｂ、１００％Ｂで２分間保持；流量：８０ｍＬ／分）によって精製し、表題化合物３１（７５０ｍｇ、６４％）を白色固体として得た。ｍ／ｚ：５９３．３［Ｍ＋Ｎａ］＋。
ステップ４：エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（３２）の調製：
撹拌したエチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（３１、７５０ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＴＦＡ（４ｍＬ）を加えた。反応混合物を０℃にて２時間撹拌し、真空下で濃縮し、表題化合物３２（１．０４ｇ、９７％）を黄色のゴム状物として得て、これを更には精製せずに次のステップで使用した。
撹拌したエチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（３１、７５０ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＴＦＡ（４ｍＬ）を加えた。反応混合物を０℃にて２時間撹拌し、真空下で濃縮し、表題化合物３２（１．０４ｇ、９７％）を黄色のゴム状物として得て、これを更には精製せずに次のステップで使用した。
ステップ５：エチル２−［（６Ｒ，８Ｒ，１１Ｓ）−１１−［（２Ｓ）−ブタン−２−イル］−９−メチル−１３−（７−メチル−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−１−イル）−４，１０，１３−トリオキソ−８−（プロパン−２−イル）−５−オキサ−３，９，１２−トリアザトリデカン−６−イル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（３３）の調製：
撹拌した白色の７−メチル−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−１−カルボン酸（３０、１２２ｍｇ、０．６３５ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（７ｍＬ）中懸濁液に０℃にて、ＥＤＣＩ（１１７ｍｇ、０．６０９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（８５．８ｍｇ、０．６３５ｍｍｏｌ）、およびＮ−メチルモルホリン（４２８ｍｇ、４．２３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて１時間撹拌した。エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（３２、４３０ｍｇ、０．５２９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温にて２４時間撹拌した。Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）を加え、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１００％／０％から８９％／１１％のＤＣＭ／ＭｅＯＨ）によって精製し、表題化合物３３（２７０ｍｇ、８４％）を黄色油状物として得た。
撹拌した白色の７−メチル−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−１−カルボン酸（３０、１２２ｍｇ、０．６３５ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（７ｍＬ）中懸濁液に０℃にて、ＥＤＣＩ（１１７ｍｇ、０．６０９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（８５．８ｍｇ、０．６３５ｍｍｏｌ）、およびＮ−メチルモルホリン（４２８ｍｇ、４．２３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて１時間撹拌した。エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（３２、４３０ｍｇ、０．５２９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温にて２４時間撹拌した。Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）を加え、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１００％／０％から８９％／１１％のＤＣＭ／ＭｅＯＨ）によって精製し、表題化合物３３（２７０ｍｇ、８４％）を黄色油状物として得た。
ステップ６：２−［（６Ｒ，８Ｒ，１１Ｓ）−１１−［（２Ｓ）−ブタン−２−イル］−９−メチル−１３−（７−メチル−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−１−イル）−４，１０，１３−トリオキソ−８−（プロパン−２−イル）−５−オキサ−３，９，１２−トリアザトリデカン−６−イル］−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（＃Ａ１２）：
エチル２−［（６Ｒ，８Ｒ，１１Ｓ）−１１−［（２Ｓ）−ブタン−２−イル］−９−メチル−１３−（７−メチル−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−１−イル）−４，１０，１３−トリオキソ−８−（プロパン−２−イル）−５−オキサ−３，９，１２−トリアザトリデカン−６−イル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（３３、２７０ｍｇ、０．４４４ｍｍｏｌ）のジオキサン（５ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＬｉＯＨ一水和物（５５．９ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（２．５ｍＬ）中溶液を加えた。反応混合物を室温にて１時間撹拌した。反応混合物を１ＮのＨＣｌ水溶液でｐＨ＝５〜６に調節し、真空下で濃縮し、ジオキサンを除去した。このように得られた水層を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：０．１％ＴＦＡを有するＨ２Ｏ、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡを有するアセトニトリル、１１分に亘り２０％〜４０％Ｂ、１００％Ｂで２分間保持；流量：３０ｍＬ／分）によって精製し、表題化合物＃Ａ１２（２００ｍｇ、７８％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, CDCl3): δ 8.43-8.41
(d, 1H), 8.17 (s, 1H), 5.74-5.61 (m, 1H), 5.15 (d, 1H), 4.75-4.71 (m, 1H), 4.60
(m, 1H), 4.14-4.11 (m, 1H), 3.30 (s, 2H), 3.13 (s, 3H), 2.90 (s, 2H), 2.77 (s,
1H), 2.65-2.50 (m, 1H), 2.50-2.30 (m, 3H), 2.25-1.94 (m, 5H), 1.94-1.50 (m,
5H), 1.14-0.99 (m, 5H), 0.98-0.85 (m, 13H). m/z 580.1 [M+H]+; 100%
ee; カラム: Chiralcel OD-3 100 x
4.6 mm I.D., 3μm, 移動相: A: CO2 B:エタノール (0.05%ジエチルアミン), 勾配: 5%〜40% Bを4.5分、保持40%を2.5分、次いで5% Bを1分; 流速: 2.8mL/分; カラム温度: 40oC.
エチル２−［（６Ｒ，８Ｒ，１１Ｓ）−１１−［（２Ｓ）−ブタン−２−イル］−９−メチル−１３−（７−メチル−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−１−イル）−４，１０，１３−トリオキソ−８−（プロパン−２−イル）−５−オキサ−３，９，１２−トリアザトリデカン−６−イル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（３３、２７０ｍｇ、０．４４４ｍｍｏｌ）のジオキサン（５ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＬｉＯＨ一水和物（５５．９ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（２．５ｍＬ）中溶液を加えた。反応混合物を室温にて１時間撹拌した。反応混合物を１ＮのＨＣｌ水溶液でｐＨ＝５〜６に調節し、真空下で濃縮し、ジオキサンを除去した。このように得られた水層を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：０．１％ＴＦＡを有するＨ２Ｏ、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡを有するアセトニトリル、１１分に亘り２０％〜４０％Ｂ、１００％Ｂで２分間保持；流量：３０ｍＬ／分）によって精製し、表題化合物＃Ａ１２（２００ｍｇ、７８％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, CDCl3): δ 8.43-8.41
(d, 1H), 8.17 (s, 1H), 5.74-5.61 (m, 1H), 5.15 (d, 1H), 4.75-4.71 (m, 1H), 4.60
(m, 1H), 4.14-4.11 (m, 1H), 3.30 (s, 2H), 3.13 (s, 3H), 2.90 (s, 2H), 2.77 (s,
1H), 2.65-2.50 (m, 1H), 2.50-2.30 (m, 3H), 2.25-1.94 (m, 5H), 1.94-1.50 (m,
5H), 1.14-0.99 (m, 5H), 0.98-0.85 (m, 13H). m/z 580.1 [M+H]+; 100%
ee; カラム: Chiralcel OD-3 100 x
4.6 mm I.D., 3μm, 移動相: A: CO2 B:エタノール (0.05%ジエチルアミン), 勾配: 5%〜40% Bを4.5分、保持40%を2.5分、次いで5% Bを1分; 流速: 2.8mL/分; カラム温度: 40oC.
２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチル−３−（メチル｛Ｎ−［（９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナ−１−イル）カルボニル］−Ｌ−イソロイシル｝アミノ）ペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（＃Ａ１３）の調製：
撹拌した９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−１−カルボン酸（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００９、７４、５５４１）（３４、５ｇ、２９．５４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０ｍｌ）中溶液に、ホルムアルデヒド（５ｍｌ）を加え、反応混合物を室温にて３時間撹拌した。Ｐｄ−Ｃ（１ｇ、５０％水分）を加え、黒色の懸濁液を３０ｐｓｉ下で１６時間水素化した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、粗表題化合物３５を得た。５．４ｇの粗３５をＭｅＯＨ（２．１ｍＬ）に懸濁し、懸濁液を６０℃に加熱した。このように得られた溶液を１６時間冷蔵し、次いで、沈殿物を濾過によって除去し、冷たいＭｅＯＨ（２ｍＬ）で洗浄した。固体を減圧下乾燥させ、表題化合物３５（３．３ｇ、６１％）をオフホワイト固体として得た。
ステップ２：（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシメチル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチル−３−（メチル｛Ｎ−［（９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナ−１−イル）カルボニル］−Ｌ−イソロイシル｝アミノ）ペンチルエチルカルバメート（３６）の調製：
撹拌した白色の９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−１−カルボン酸（３５、１０３ｍｇ、０．５６１ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（６ｍＬ）中懸濁液に０℃にて、ＥＤＣＩ（１０３ｍｇ、０．５３８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（７５．８ｍｇ、０．５６１ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（３７８ｍｇ、３．７４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて１時間撹拌した。エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（３２、３８０ｍｇ、０．４６８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液を加え、反応混合物を室温にて２４時間撹拌した。Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）を加え、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。このように得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１００％ＤＣＭから８８％ＤＣＭ／１２％ＭｅＯＨ）によって精製し、表題化合物３６（３００ｍｇ、定量的収率）を黄色油状物として得た。
撹拌した白色の９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−１−カルボン酸（３５、１０３ｍｇ、０．５６１ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（６ｍＬ）中懸濁液に０℃にて、ＥＤＣＩ（１０３ｍｇ、０．５３８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（７５．８ｍｇ、０．５６１ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（３７８ｍｇ、３．７４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて１時間撹拌した。エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（３２、３８０ｍｇ、０．４６８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液を加え、反応混合物を室温にて２４時間撹拌した。Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）を加え、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。このように得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１００％ＤＣＭから８８％ＤＣＭ／１２％ＭｅＯＨ）によって精製し、表題化合物３６（３００ｍｇ、定量的収率）を黄色油状物として得た。
ステップ３：２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチル−３−（メチル｛Ｎ−［（９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナ−１−イル）カルボニル］−Ｌ−イソロイシル｝アミノ）ペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（＃Ａ１３）：
撹拌した（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシメチル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチル−３−（メチル｛Ｎ−［（９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナ−１−イル）カルボニル］−Ｌ−イソロイシル｝アミノ）ペンチルエチルカルバメート（３６、３００ｍｇ、０．４７２ｍｍｏｌ）のジオキサン（６ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＬｉＯＨ一水和物（５９．４ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（３ｍＬ）中溶液を加えた。反応混合物を室温にて１時間撹拌し、混合物を１ＮのＨＣｌ水溶液でｐＨ＝５〜６に調節し、真空下で濃縮し、ジオキサンを除去した。このように得られた水層を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：０．１％ＴＦＡを有するＨ２Ｏ、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡを有するアセトニトリル、１１分に亘り２２％〜４２％Ｂ、１００％Ｂで２分間保持；流量：３０ｍＬ／分）によって精製し、表題化合物＃Ａ１３（１９５ｍｇ、６８％）を得た。
1H NMR
(400 MHz, CDCl3): δ
8.35-8.33 (d, 1H), 8.19 (s, 1H), 5.67-5.58 (m, 1H), 5.16 (d, 1H), 4.69-4.52 (m,
1H), 3.77 (s, 2H), 3.19 (s, 4H), 3.10 (s, 3H), 2.94 (s, 2H), 2.85 (s, 1H),
2.65-2.40 (m, 2H), 2.22-2.08 (m, 7H), 1.91-1.1.50 (m, 7H), 1.25-1.00 (m, 4H),
0.98-0.80 (m, 13H); m/z 608.2 [M+H]+; 100% ee; カラム: Chiralcel OD-3 100 x 4.6 mm I.D., 3μm, 移動相: A: CO2 B: エタノール (0.05%ジエチルアミン), 勾配: 5%〜40% Bを4.5分間、40%で2.5分保持、次いで5% Bを1分; 流速: 2.8mL/分; カラム温度: 40℃.
撹拌した（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシメチル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチル−３−（メチル｛Ｎ−［（９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナ−１−イル）カルボニル］−Ｌ−イソロイシル｝アミノ）ペンチルエチルカルバメート（３６、３００ｍｇ、０．４７２ｍｍｏｌ）のジオキサン（６ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＬｉＯＨ一水和物（５９．４ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（３ｍＬ）中溶液を加えた。反応混合物を室温にて１時間撹拌し、混合物を１ＮのＨＣｌ水溶液でｐＨ＝５〜６に調節し、真空下で濃縮し、ジオキサンを除去した。このように得られた水層を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：０．１％ＴＦＡを有するＨ２Ｏ、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡを有するアセトニトリル、１１分に亘り２２％〜４２％Ｂ、１００％Ｂで２分間保持；流量：３０ｍＬ／分）によって精製し、表題化合物＃Ａ１３（１９５ｍｇ、６８％）を得た。
1H NMR
(400 MHz, CDCl3): δ
8.35-8.33 (d, 1H), 8.19 (s, 1H), 5.67-5.58 (m, 1H), 5.16 (d, 1H), 4.69-4.52 (m,
1H), 3.77 (s, 2H), 3.19 (s, 4H), 3.10 (s, 3H), 2.94 (s, 2H), 2.85 (s, 1H),
2.65-2.40 (m, 2H), 2.22-2.08 (m, 7H), 1.91-1.1.50 (m, 7H), 1.25-1.00 (m, 4H),
0.98-0.80 (m, 13H); m/z 608.2 [M+H]+; 100% ee; カラム: Chiralcel OD-3 100 x 4.6 mm I.D., 3μm, 移動相: A: CO2 B: エタノール (0.05%ジエチルアミン), 勾配: 5%〜40% Bを4.5分間、40%で2.5分保持、次いで5% Bを1分; 流速: 2.8mL/分; カラム温度: 40℃.
［（４Ｓ）−４−アミノ−５−フェニルペンタン−２−イル］ホスホン酸（＃Ａ１４）の調製：
撹拌したジイソプロピルアミン（１．６９ｍＬ、１２．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍＬ）中溶液に−７８℃にて、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ、４．８１ｍＬ、１２．０ｍｍｏｌ）を加え、溶液を−７８℃にて１５分間撹拌した。反応混合物を０℃に温め、１５分間撹拌し、その後、このＬＤＡ反応混合物の２分の１（６．０ｍｍｏｌ）を撹拌したジエチルエチルホスホネート（３７、０．６８ｇ、４．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）中溶液に−７８℃にて滴下で添加した。反応混合物を−７８℃にて１時間撹拌し、ジエチルホスホロクロリデート（０．６９２ｇ、４．０１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を−７８℃にて４５分間撹拌し、この時間の後で、残りのＬＤＡ溶液（６．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を−７８℃にて０．５時間、０℃にて０．５時間、および室温にて０．５時間撹拌し、その後、−７８℃に再冷却した。ｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル］カルバメート（３９、１．０ｇ、４．０１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）中溶液を滴下で添加した。反応混合物を室温にゆっくりと温め、１２時間撹拌し、水（１００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘプタン中の０％〜８０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物４０（０．１４ｇ、９％）を黄色のゴム状物として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＦ）：ｍ／ｚ３９８．１［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝３．１８分。
ステップ２：ジエチル｛（４Ｓ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−フェニルペンタン−２−イル｝ホスホネート（４１）の調製：
ＭｅＯＨ（１４０ｍＬ）中のジエチル｛（２Ｅ，４Ｓ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−フェニルペンタ−２−エン−２−イル｝ホスホネート（４０、１．４０ｇ、０．３５３ｍｍｏｌ）、ギ酸アンモニウム（６．６６ｇ、１０６ｍｍｏｌ）、およびＰｄ（ＯＨ）２（１．４０ｇ）の混合物を、１時間加熱還流させた。混合物を室温へと冷却し、セライトを通して濾過し、濾液を真空下で濃縮した。このように得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の２０％〜１００％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物４１（１．３０ｇ、９２％）を白色固体を得て、これを更には特性決定をせずに使用した。
ＭｅＯＨ（１４０ｍＬ）中のジエチル｛（２Ｅ，４Ｓ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−フェニルペンタ−２−エン−２−イル｝ホスホネート（４０、１．４０ｇ、０．３５３ｍｍｏｌ）、ギ酸アンモニウム（６．６６ｇ、１０６ｍｍｏｌ）、およびＰｄ（ＯＨ）２（１．４０ｇ）の混合物を、１時間加熱還流させた。混合物を室温へと冷却し、セライトを通して濾過し、濾液を真空下で濃縮した。このように得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の２０％〜１００％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物４１（１．３０ｇ、９２％）を白色固体を得て、これを更には特性決定をせずに使用した。
ステップ３：［（４Ｓ）−４−アミノ−５−フェニルペンタン−２−イル］ホスホン酸（＃Ａ１４）の調製：
ジエチル｛（４Ｓ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−フェニルペンタン−２−イル｝ホスホネート（４１、９００ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）の濃ＨＣｌ（５０ｍＬ）中懸濁液を、５時間加熱還流させ、この時間の後で、反応混合物を真空下で濃縮し、表題化合物＃Ａ１４（５４２ｍｇ、８６％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400Hz, CD3OD): δ
7.41 (m, 2H), 7.33 (m, 3H), 3.76 (m, 1H), 3.04-2.92 (m, 2H), 2.09-1.95 (m, 2H),
1.78-1.70 (m, 1H), 1.22 (m, 3H); m/z 244.10 [M+H]+.
ジエチル｛（４Ｓ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−フェニルペンタン−２−イル｝ホスホネート（４１、９００ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）の濃ＨＣｌ（５０ｍＬ）中懸濁液を、５時間加熱還流させ、この時間の後で、反応混合物を真空下で濃縮し、表題化合物＃Ａ１４（５４２ｍｇ、８６％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400Hz, CD3OD): δ
7.41 (m, 2H), 7.33 (m, 3H), 3.76 (m, 1H), 3.04-2.92 (m, 2H), 2.09-1.95 (m, 2H),
1.78-1.70 (m, 1H), 1.22 (m, 3H); m/z 244.10 [M+H]+.
ジエチル［（２Ｒ，４Ｓ）−４−アミノ−５−（４−アミノフェニル）ペンタン−２−イル］ホスホネート（＃Ａ１５）およびジエチル［（２Ｓ，４Ｓ）−４−アミノ−５−（４−アミノフェニル）ペンタン−２−イル］ホスホネート（＃Ａ１６）の調製：
メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニネート（４２、２９ｇ、８９．０ｍｍｏｌ）の無水トルエン（６００ｍＬ）中溶液に、ＤＩＢＡＬ−Ｈ（１Ｍ、１７８ｍＬ、１７８ｍｍｏｌ）を−７０℃にてＮ２下で滴下で添加した。添加の後、反応物を−７０℃にて３０分間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で−７０℃にてクエンチし、次いで、室温に温め、濾過した。濾液をＥｔＯＡｃおよびＨ２Ｏに分配し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、表題化合物４３（２５ｇ、９５％）を黄色固体として得て、これを次のステップにおいて直ちに使用した。
ステップ２：ジエチル［（２Ｅ，４Ｓ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（４−ニトロフェニル）ペンタ−２−エン−２−イル］ホスホネート（４４）の調製：
表題化合物は、化合物４０の合成について上記で記載した方法を使用して、エチルホスホネート（３７、２８．９ｍｍｏｌ）、ジエチルホスホロクロリデート（２８．９ｍｍｏｌ）、ＬＤＡ（８６．７ｍｍｏｌ）、およびｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（１−（４−ニトロフェニル）−３−オキソプロパン−２−イル）カルバメート（４３、２８．９ｍｍｏｌ）から出発して２８％収率で調製した。
表題化合物は、化合物４０の合成について上記で記載した方法を使用して、エチルホスホネート（３７、２８．９ｍｍｏｌ）、ジエチルホスホロクロリデート（２８．９ｍｍｏｌ）、ＬＤＡ（８６．７ｍｍｏｌ）、およびｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（１−（４−ニトロフェニル）−３−オキソプロパン−２−イル）カルバメート（４３、２８．９ｍｍｏｌ）から出発して２８％収率で調製した。
ステップ３：ジエチル｛（２Ｒ，４Ｓ）−５−（４−アミノフェニル）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ペンタン−２−イル｝ホスホネート（４６）およびジエチル｛（２Ｓ，４Ｓ）−５−（４−アミノフェニル）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ペンタン−２−イル｝ホスホネート（４７）の調製：
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ，Ｅ）−（４−（ジエトキシホスホリル）−１−（４−ニトロフェニル）ペンタ−３−エン−２−イル）カルバメート（４４、９．６２ｇ、２１．７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５００ｍＬ）中溶液に、１０％Ｐｄ−Ｃ（３．０ｇ）をＮ２下で加えた。このように得られた混合物は、３０ｐｓｉのＨ２下で一晩撹拌しながら３０℃にて加熱した。反応物を濾過し、濾液を濃縮し、このように得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）によって精製し、４５を異性体の混合物（４．３ｇ）として得て、これをキラルＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ、３００×５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．１０μｍ、移動相、Ａ中の３０％Ｂ（ＩＰＡ中の０．１％水酸化アンモニウム）：ＣＯ２、流量２４０ｍＬ／分、温度：３８℃）によってさらに分離し、表題化合物４６（１．５ｇ）（保持時間：６．０４分）および表題化合物４７（７７０ｍｇ）（保持時間：７．０８分）を黄色油状物として得て、これを次のステップにおいて直接使用した（注：リン置換を含有する炭素中心における立体化学の帰属は任意である）。
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ，Ｅ）−（４−（ジエトキシホスホリル）−１−（４−ニトロフェニル）ペンタ−３−エン−２−イル）カルバメート（４４、９．６２ｇ、２１．７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５００ｍＬ）中溶液に、１０％Ｐｄ−Ｃ（３．０ｇ）をＮ２下で加えた。このように得られた混合物は、３０ｐｓｉのＨ２下で一晩撹拌しながら３０℃にて加熱した。反応物を濾過し、濾液を濃縮し、このように得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）によって精製し、４５を異性体の混合物（４．３ｇ）として得て、これをキラルＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ、３００×５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．１０μｍ、移動相、Ａ中の３０％Ｂ（ＩＰＡ中の０．１％水酸化アンモニウム）：ＣＯ２、流量２４０ｍＬ／分、温度：３８℃）によってさらに分離し、表題化合物４６（１．５ｇ）（保持時間：６．０４分）および表題化合物４７（７７０ｍｇ）（保持時間：７．０８分）を黄色油状物として得て、これを次のステップにおいて直接使用した（注：リン置換を含有する炭素中心における立体化学の帰属は任意である）。
ステップ４：ジエチル［（２Ｒ，４Ｓ）−４−アミノ−５−（４−アミノフェニル）ペンタン−２−イル］ホスホネート（＃Ａ１５）の調製：
ジエチル｛（２Ｒ，４Ｓ）−５−（４−アミノフェニル）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ペンタン−２−イル｝ホスホネート（４６、１．５ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５ｍＬ）中溶液に０℃にて、トリフルオロ酢酸（９ｍＬ）を滴下で添加した。反応混合物を室温にて３時間撹拌し、真空下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ、５０×２５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏ中の０％アセトニトリル（０．２２５％ＴＦＡ）からＨ２Ｏ中の２０％アセトニトリル（０．２２５％ＴＦＡ）；波長：２２０ｎｍ）によって精製し、表題化合物＃Ａ１５（１．４５ｇ、定量的収率）を黄色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 7.88 (br,
3H), 7.14 (m, 2H), 6.93 (m, 2H), 3.96 (m, 4H), 3.52 (m, 1H), 2.85 (m, 1H), 2.72
(m, 1H), 2.08 (m, 1H), 1.82 (m, 1H), 1.56 (m, 1H) 1.20 (m, 6H), 1.02 (m, 3H).
m/z 315.2 [M+H]+; 100% ee; カラム: Chiralpak AD-3 150 x 4.6mm I.D., 3μm, 移動相: メタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%; 波長: 220 nm、保持時間 = 4.83分。
ジエチル｛（２Ｒ，４Ｓ）−５−（４−アミノフェニル）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ペンタン−２−イル｝ホスホネート（４６、１．５ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５ｍＬ）中溶液に０℃にて、トリフルオロ酢酸（９ｍＬ）を滴下で添加した。反応混合物を室温にて３時間撹拌し、真空下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ、５０×２５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏ中の０％アセトニトリル（０．２２５％ＴＦＡ）からＨ２Ｏ中の２０％アセトニトリル（０．２２５％ＴＦＡ）；波長：２２０ｎｍ）によって精製し、表題化合物＃Ａ１５（１．４５ｇ、定量的収率）を黄色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 7.88 (br,
3H), 7.14 (m, 2H), 6.93 (m, 2H), 3.96 (m, 4H), 3.52 (m, 1H), 2.85 (m, 1H), 2.72
(m, 1H), 2.08 (m, 1H), 1.82 (m, 1H), 1.56 (m, 1H) 1.20 (m, 6H), 1.02 (m, 3H).
m/z 315.2 [M+H]+; 100% ee; カラム: Chiralpak AD-3 150 x 4.6mm I.D., 3μm, 移動相: メタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%; 波長: 220 nm、保持時間 = 4.83分。
ステップ５：ジエチル［（２Ｓ，４Ｓ）−４−アミノ−５−（４−アミノフェニル）ペンタン−２−イル］ホスホネート（＃Ａ１６）の調製：
ジエチル｛（２Ｓ，４Ｓ）−５−（４−アミノフェニル）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ペンタン−２−イル｝ホスホネート（４７、０．７７ｇ、１．８６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＴＦＡ（４．５ｍＬ）を滴下で添加した。反応混合物を室温にて３時間撹拌し、真空下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ、５０×２５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏ中の０％アセトニトリル（０．２２５％ＴＦＡ）からＨ２Ｏ中の３０％アセトニトリル（０．２２５％ＴＦＡ）；波長：２２０ｎｍ）によって精製し、表題化合物＃Ａ１６（０．６７ｇ、１００％）を黄色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 7.93 (br,
3H), 7.13 (br, 2H), 6.95 (br, 2H), 3.99 (m, 4H), 3.48 (m, 1H), 2.87 (m, 1H),
2.71 (m, 1H), 2.15 (m, 1H), 1.79 (m, 1H), 1.35 (m, 1H) 1.21 (m, 6H), 0.94 (m,
3H); m/z: 315.2 [M+H]+; 97% ee; カラム: Chiralpak AD-3 150 x 4.6 mm I.D., 3 μm; 移動相: メタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%; 波長: 220 nm; 保持時間 =
5.23分。
ジエチル｛（２Ｓ，４Ｓ）−５−（４−アミノフェニル）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ペンタン−２−イル｝ホスホネート（４７、０．７７ｇ、１．８６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＴＦＡ（４．５ｍＬ）を滴下で添加した。反応混合物を室温にて３時間撹拌し、真空下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ、５０×２５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、１０μｍ；移動相：Ｈ２Ｏ中の０％アセトニトリル（０．２２５％ＴＦＡ）からＨ２Ｏ中の３０％アセトニトリル（０．２２５％ＴＦＡ）；波長：２２０ｎｍ）によって精製し、表題化合物＃Ａ１６（０．６７ｇ、１００％）を黄色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 7.93 (br,
3H), 7.13 (br, 2H), 6.95 (br, 2H), 3.99 (m, 4H), 3.48 (m, 1H), 2.87 (m, 1H),
2.71 (m, 1H), 2.15 (m, 1H), 1.79 (m, 1H), 1.35 (m, 1H) 1.21 (m, 6H), 0.94 (m,
3H); m/z: 315.2 [M+H]+; 97% ee; カラム: Chiralpak AD-3 150 x 4.6 mm I.D., 3 μm; 移動相: メタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%; 波長: 220 nm; 保持時間 =
5.23分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−１−［（エチルカルバモイル）アミノ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ１７）の調製：
撹拌したエチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−アミノ−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（２４、０．７ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３４３ｍｇ、２．８１ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＤＩＰＥＡ（１．８１ｇ、２．４５ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）およびイソシアン酸エチル（２．４９ｇ、３５．１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２０℃にて３時間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）によって精製し、表題化合物４８（１．０ｇ、１２５％）を黄色油状物として得た。ｍ／ｚ５７０．１［Ｍ＋Ｈ］＋および５９２［Ｍ＋Ｎａ］＋。
ステップ２：エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（エチルカルバモイル）アミノ］−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（４９）の調製：
エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−［（エチルカルバモイル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（４８、１．０ｇ、１．７５５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＴＦＡ（４ｍＬ）を滴下で添加し、溶液を１５℃にて３時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、表題化合物４９（１．１ｇ、定量的収率）を黄色油状物として得て、これを次のステップにおいて未精製で使用した。ｍ／ｚ４７０．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−［（エチルカルバモイル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（４８、１．０ｇ、１．７５５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＴＦＡ（４ｍＬ）を滴下で添加し、溶液を１５℃にて３時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、表題化合物４９（１．１ｇ、定量的収率）を黄色油状物として得て、これを次のステップにおいて未精製で使用した。ｍ／ｚ４７０．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップ３：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−［（エチルカルバモイル）アミノ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（５０）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリン（Ｄｏｒｏｓｋｉら、米国特許第８８２８４０１Ｂ２号）（１８３ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（６８８ｍｇ、０．９２７ｍＬ、５．３２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＨＡＴＵ（４８６ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５℃にて２時間撹拌した。エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（エチルカルバモイル）アミノ］−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（４９、５００ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を加え、溶液を１５℃にて１５時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、粗表題化合物５０（２．０ｇ、定量的収率）を得た。ｍ／ｚ５９５．４［Ｍ＋Ｈ］＋および６１６．４［Ｍ＋Ｎａ］＋。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリン（Ｄｏｒｏｓｋｉら、米国特許第８８２８４０１Ｂ２号）（１８３ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（６８８ｍｇ、０．９２７ｍＬ、５．３２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＨＡＴＵ（４８６ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５℃にて２時間撹拌した。エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（エチルカルバモイル）アミノ］−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（４９、５００ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を加え、溶液を１５℃にて１５時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、粗表題化合物５０（２．０ｇ、定量的収率）を得た。ｍ／ｚ５９５．４［Ｍ＋Ｈ］＋および６１６．４［Ｍ＋Ｎａ］＋。
ステップ４：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−１−［（エチルカルバモイル）アミノ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ１７）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−［（エチルカルバモイル）アミノ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（５０、８３０ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（３３４ｍｇ、１２．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１６ｍＬ）およびＨ２Ｏ（４ｍＬ）中溶液を、１７℃にて３時間撹拌した。１．０ＮのＨＣｌの添加によって溶液をｐＨ＝７に酸性化し、反応混合物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）、移動相Ｂ：アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）、１１分に亘り５％Ｂ〜５５％Ｂ、１００％Ｂで２．０分間保持）によって直接精製し、表題化合物＃Ａ１７（２９６ｍｇ、３７％）を固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6) δ 9.73 (br.
s., 1H), 8.78 - 8.60 (m, 1H), 8.36 - 8.18 (m, 1H), 6.78 (br. s., 1H), 5.97 (br.
s., 1H), 4.72 - 4.51 (m, 2H), 3.55 (br. s., 2H), 3.24 - 3.09 (m, 1H), 3.08 -
2.91 (m, 5H), 2.75 - 2.65 (m, 3H), 2.36 - 2.20 (m, 2H), 2.12 - 1.75 (m, 6H),
1.57 - 1.38 (m, 4H), 1.17 - 1.02 (m, 1H), 0.98 (t, J=7.2 Hz, 3H), 0.91 (d,
J=6.5 Hz, 3H), 0.88 - 0.80 (m, 6H), 0.76 (br. s., 2H); 100% ee; カラム: Chiralpak AS-H 250 x 4.6 mm I.D., 5μm; 移動相: A: CO2 B: エタノール (0.05% ジエチルアミン); 5%〜40% Bを5分間、保持40%を3分、次いで5% Bを1.5分; 流速: 2.5mL/分; カラム温度: 35℃; 保持時間 = 4.18分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−［（エチルカルバモイル）アミノ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（５０、８３０ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（３３４ｍｇ、１２．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１６ｍＬ）およびＨ２Ｏ（４ｍＬ）中溶液を、１７℃にて３時間撹拌した。１．０ＮのＨＣｌの添加によって溶液をｐＨ＝７に酸性化し、反応混合物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、１５０×３０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）、移動相Ｂ：アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）、１１分に亘り５％Ｂ〜５５％Ｂ、１００％Ｂで２．０分間保持）によって直接精製し、表題化合物＃Ａ１７（２９６ｍｇ、３７％）を固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6) δ 9.73 (br.
s., 1H), 8.78 - 8.60 (m, 1H), 8.36 - 8.18 (m, 1H), 6.78 (br. s., 1H), 5.97 (br.
s., 1H), 4.72 - 4.51 (m, 2H), 3.55 (br. s., 2H), 3.24 - 3.09 (m, 1H), 3.08 -
2.91 (m, 5H), 2.75 - 2.65 (m, 3H), 2.36 - 2.20 (m, 2H), 2.12 - 1.75 (m, 6H),
1.57 - 1.38 (m, 4H), 1.17 - 1.02 (m, 1H), 0.98 (t, J=7.2 Hz, 3H), 0.91 (d,
J=6.5 Hz, 3H), 0.88 - 0.80 (m, 6H), 0.76 (br. s., 2H); 100% ee; カラム: Chiralpak AS-H 250 x 4.6 mm I.D., 5μm; 移動相: A: CO2 B: エタノール (0.05% ジエチルアミン); 5%〜40% Bを5分間、保持40%を3分、次いで5% Bを1.5分; 流速: 2.5mL/分; カラム温度: 35℃; 保持時間 = 4.18分。
２−メチル−２−アザビシクロ［３．１．１］ヘプタン−１−カルボン酸（５２）の調製：
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 3.31 (t,
2H), 2.65 (s, 3H), 2.35-2.39 (m, 1H), 2.27-2.34 (m, 2H), 1.95-1.99 (m, 2H),
1.79-1.84 (m, 2H).
２−メチル−２−アザビシクロ［２．１．１］ヘキサン−１−カルボン酸（５４）の調製：
1H NMR
(400 MHz, CD3OD): δ
3.78 (d, 1H), 3.13 (d, 1H), 2.99 (s, 3H), 2.81 (br.s, 1H), 2.36 (br.s, 2H),
1.94 (m, 1H), 1.81 (m, 1H).
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｒ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ１８）の調製：
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ
9.80 (br, 1H), 8.75 (d, 1H), 8.38 (br, 1H), 4.67-4.54 (m, 2H), 4.20 (m, 1H),
3.56 (m, 2H), 3.16 (m, 1H), 2.98 (m, 3H), 2.68 (s, 3H), 2.30-1.81 (m, 8 H),
1.48 (m, 4 H), 1.11-0.68 (m, 12 H); m/z 497.2 [M+H]+; 100% ee; カラム: Chiralpak AD-3 150 x 4.6 mm I.D., 3μm; 移動相: エタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%,
波長: 230 nm; 保持時間 = 5.54分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ１９）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ４、８５ｍｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３６ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＭＦ（１．２ｍＬ）およびイソシアン酸エチル（５８０μＬ、７．２５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を密封したバイアルにおいて室温にて２２．５時間撹拌し、次いで、反応物を濃縮し、残渣を中圧逆相Ｃ１８クロマトグラフィー（２５分に亘りＨ２Ｏ中の１０％〜９５％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製し、表題化合物５５（６９ｍｇ、８４％）をガラス状の黄色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５９６．７［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間＝０．７２分。
ステップ２：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ１９）の調製：
１，４−ジオキサン（５．５ｍＬ）中の１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（５５、６６ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、水（３３０μＬ）中の１ＭのＬｉＯＨを加え、反応物を室温にて６時間撹拌し、次いで、ＨＯＡｃ（６０μＬ）でクエンチし、濃縮した。粗残渣を中圧逆相Ｃ１８クロマトグラフィー（２５分に亘りＨ２Ｏ中の１０％〜９５％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製し、表題化合物＃Ａ１９（５３ｍｇ、８４％収率）をガラス状の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５６８．６［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．６３分。
１，４−ジオキサン（５．５ｍＬ）中の１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（５５、６６ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、水（３３０μＬ）中の１ＭのＬｉＯＨを加え、反応物を室温にて６時間撹拌し、次いで、ＨＯＡｃ（６０μＬ）でクエンチし、濃縮した。粗残渣を中圧逆相Ｃ１８クロマトグラフィー（２５分に亘りＨ２Ｏ中の１０％〜９５％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製し、表題化合物＃Ａ１９（５３ｍｇ、８４％収率）をガラス状の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５６８．６［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．６３分。
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ２０）の調製：
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリン（１．２ｇ、５．１１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．６ｇ、１２．７８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＴＰＴＵ（１．５ｇ、５．１１ｍｍｏｌ）を加えた。０℃にて１５分間撹拌した後、ＤＭＦ（５ｍＬ）中のエチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−ヒドロキシ−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（１７、１．７ｇ、４．２６ｍｍｏｌ）を滴下で添加し、このように得られた溶液を室温にて一晩撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）中に注ぎ、溶液をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×２）で抽出した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮し、粗表題化合物５９（２．８ｇ、定量的収率）を黄色油状物として得て、これを更には精製せずに使用した。
ステップ２：Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（６０）の調製：
表題化合物は、化合物１９について上記で記載した手順を使用して、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（５９、７．４ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ一水和物（２９．６ｍｍｏｌ）から９３％収率で調製した。
表題化合物は、化合物１９について上記で記載した手順を使用して、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（エトキシカルボニル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（５９、７．４ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ一水和物（２９．６ｍｍｏｌ）から９３％収率で調製した。
ステップ３：Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ２０）の調製：
表題化合物は、化合物＃Ａ３について上記で記載した手順を使用して、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（６０、６．８４ｍｍｏｌ）および無水酢酸（８ｍＬ）およびピリジン（４０ｍＬ）から６０％収率で調製した。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 8.34 (d,
1H), 7.99 (d, 1H), 5.52 (d, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.40 (m, 1H), 4.26 (m, 1 H), 4.04
(m, 1H), 2.97 (m, 3 H), 2.69 (m, 3 H), 2.19 (m, 6 H), 1.87 (m, 1H), 1.71 (m, 1
H), 1.47 (m, 10 H), 1.10 (m, 1 H), 0.91 (m, 16 H), 0.62 (m, 3 H); m/z 649.1
[M+Na]+; カラム:
Chiralcel AD-H 150 x 4.6 mm I.D., 5 μm; 移動相: エタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%, 波長: 220 nm; 保持時間 =
2.71分。
表題化合物は、化合物＃Ａ３について上記で記載した手順を使用して、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（６０、６．８４ｍｍｏｌ）および無水酢酸（８ｍＬ）およびピリジン（４０ｍＬ）から６０％収率で調製した。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 8.34 (d,
1H), 7.99 (d, 1H), 5.52 (d, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.40 (m, 1H), 4.26 (m, 1 H), 4.04
(m, 1H), 2.97 (m, 3 H), 2.69 (m, 3 H), 2.19 (m, 6 H), 1.87 (m, 1H), 1.71 (m, 1
H), 1.47 (m, 10 H), 1.10 (m, 1 H), 0.91 (m, 16 H), 0.62 (m, 3 H); m/z 649.1
[M+Na]+; カラム:
Chiralcel AD-H 150 x 4.6 mm I.D., 5 μm; 移動相: エタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%, 波長: 220 nm; 保持時間 =
2.71分。
エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−［（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１，２−ジメチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）（メチル）アミノ］−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（＃Ａ２１）およびエチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−［（Ｎ−｛［（２Ｓ）−１，２−ジメチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）（メチル）アミノ］−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（＃Ａ２２）の調製：
表題化合物＃Ａ２１（Ｒ−ピペリジンジアステレオマーとして任意で割り当てられる）：
９５．６％ｅｅ；Ｃｈｉｒａｌ ＳＦＣカラム：Ｃｈｉｒａｌ Ｔｅｃｈ ＡＤ−Ｈ、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、５μｍ、移動相Ａ：ＣＯ２、移動相Ｂ：０．２％ＮＨ４ＯＨを含有するエタノール；１．０分に亘り５％Ｂ、次いで、８．５分に亘り６０％Ｂ、および１．５分に亘り５％Ｂ；保持時間＝４．４９分。
ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５３９．５［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．６５分。
表題化合物＃Ａ２２（Ｓ−ピペリジンジアステレオマーとして任意で割り当てられる）：
９７．６％ｅｅ：Ｃｈｉｒａｌ ＳＦＣ：カラム：Ｃｈｉｒａｌ Ｔｅｃｈ ＡＤ−Ｈ、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、５μｍ、
移動相Ａ：ＣＯ２、移動相Ｂ：０．２％ＮＨ４ＯＨを含有するエタノール；１．０分に亘り５％Ｂ、８分に亘り６０％Ｂおよび１．５分に亘り５％Ｂへ；保持時間＝４．７１分。
ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５３９．５［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．６７分。
２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−３−［（Ｎ−｛［（２Ｓ）−１，２−ジメチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（＃Ａ２３）の調製：
２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−［（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１，２−ジメチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）（メチル）アミノ］−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（＃Ａ２４）および２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−［（Ｎ−｛［（２Ｓ）−１，２−ジメチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）（メチル）アミノ］−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（＃Ａ２５）の調製：
＃Ａ２４：ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５８２．３［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．６６分。
＃Ａ２５：ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５８２．５［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．６２分。
１−［５−（４−アセチルフェノキシ）ペンチル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（＃Ａ２６）の調製：
無水トルエン（５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（５−ヒドロキシペンチル）カルバメート（５ｇ、２４．６ｍｍｏｌ）および１−（４−ヒドロキシフェニル）エタノン（３．３５ｇ、２４．６ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（７．２４ｇ、２７．１ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＩＡＤ（５．４８ｇ、２７．１ｍｍｏｌ）を０〜１０℃にてＮ２下で滴下で添加した。添加の後、溶液を室温にて１時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の５％〜１５％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物６１（４．５５ｇ、５８％）を無色油状物として得た。
ステップ２：１−｛４−［（５−アミノペンチル）オキシ］フェニル｝エタノン塩酸塩（６２）の調製：
ｔｅｒｔ−ブチル［５−（４−アセチルフェノキシ）ペンチル］カルバメート（６１、４．５５ｇ、１４．１７ｍｏｌ）のジオキサン（５０ｍＬ）中溶液に、ジオキサン（５０ｍＬ）中の４ＭのＨＣｌを０〜１０℃にて加え、反応物を室温にて３時間撹拌した。沈殿した固体を濾過によって集め、ＤＣＭで洗浄した。固体を減圧下で乾燥させ、表題化合物６２（２．５７ｇ、７０％）を白色固体として得た。
ｔｅｒｔ−ブチル［５−（４−アセチルフェノキシ）ペンチル］カルバメート（６１、４．５５ｇ、１４．１７ｍｏｌ）のジオキサン（５０ｍＬ）中溶液に、ジオキサン（５０ｍＬ）中の４ＭのＨＣｌを０〜１０℃にて加え、反応物を室温にて３時間撹拌した。沈殿した固体を濾過によって集め、ＤＣＭで洗浄した。固体を減圧下で乾燥させ、表題化合物６２（２．５７ｇ、７０％）を白色固体として得た。
ステップ３：１−［５−（４−アセチルフェノキシ）ペンチル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（＃Ａ２６）の調製：
１−｛４−［（５−アミノペンチル）オキシ］フェニル｝エタノン塩酸塩（６２、２．５７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７０ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３水溶液（４０ｍＬ）を０〜１０℃にて加えた。メチル２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボキシレート（１．８６ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて１時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の５％〜１０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、目標化合物＃Ａ２６（２．５１ｇ、８４％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, CDCl3): δ 7.92
(d, 2H), 6.91 (d, 2H), 6.70 (s, 2H), 4.01 (m, 2H), 3.56 (m, 2H), 2.54 (s, 3H),
1.84 (m, 2H), 1.69 (m, 2H), 1.48 (m, 2H); m/z 302.1 [M+H]+.
１−｛４−［（５−アミノペンチル）オキシ］フェニル｝エタノン塩酸塩（６２、２．５７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７０ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３水溶液（４０ｍＬ）を０〜１０℃にて加えた。メチル２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボキシレート（１．８６ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温にて１時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の５％〜１０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、目標化合物＃Ａ２６（２．５１ｇ、８４％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, CDCl3): δ 7.92
(d, 2H), 6.91 (d, 2H), 6.70 (s, 2H), 4.01 (m, 2H), 3.56 (m, 2H), 2.54 (s, 3H),
1.84 (m, 2H), 1.69 (m, 2H), 1.48 (m, 2H); m/z 302.1 [M+H]+.
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチル−１−［（メチルカルバモイル）オキシ］ペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ２７）の調製：
エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（＃Ａ１、６０ｍｇ、０．１２０ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＭＡＰ（４４ｍｇ、０．３６０ｍｇ）およびＣＤＩ（４０ｍｇ、０．２４０ｍｍｏｌ）、それに続いてＤＣＭ（２ｍＬ）を加えた。Ｅｔ３Ｎ（８４μＬ、０．６００ｍｍｏｌ）を加え、反応物をＮ２下で室温にて２０時間撹拌した。メチルアミン（０．９ｍＬ、ＴＨＦ中２Ｍ）を加え、反応物を室温にて３０時間撹拌し、濃縮し、残渣を逆相クロマトグラフィー（２５分に亘りＨ２Ｏ中の１０％〜９５％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製し、表題化合物６３（６４ｍｇ、９５％）を無色ゴム状物として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５７９．３［Ｍ＋Ｎａ］＋；保持時間＝１．０分。
ステップ２：エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチル−１−［（メチルカルバモイル）オキシ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（６４）の調製：
エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチル−１−［（メチルカルバモイル）オキシ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（６３、６４ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（７ｍＬ）およびＴＦＡ（０．４ｍＬ）中溶液に、反応物を室温にてＮ２下で撹拌した。３時間後、反応物を真空中で濃縮し、ＭｅＯＨ／アセトニトリル（１／１）で共沸混合し、表題化合物を無色ゴム状物（定量的収率）として得て、これを次のステップにおいて未精製で使用した。
ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ４５７．３［Ｍ＋Ｎａ］＋；保持時間＝０．６０分。
エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチル−１−［（メチルカルバモイル）オキシ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（６３、６４ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（７ｍＬ）およびＴＦＡ（０．４ｍＬ）中溶液に、反応物を室温にてＮ２下で撹拌した。３時間後、反応物を真空中で濃縮し、ＭｅＯＨ／アセトニトリル（１／１）で共沸混合し、表題化合物を無色ゴム状物（定量的収率）として得て、これを次のステップにおいて未精製で使用した。
ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ４５７．３［Ｍ＋Ｎａ］＋；保持時間＝０．６０分。
ステップ３および４：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチル−１−［（メチルカルバモイル）オキシ］ペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ２７）の調製：
表題化合物は、化合物＃Ａ１１について上記で記載した方法を使用して、エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチル−１−［（メチルカルバモイル）オキシ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（６４、０．１７９ｍｍｏｌ）および１，２−ジメチル−Ｄ−プロリン（Ｄｏｒｏｓｋｉら、米国特許第８８２８４０１Ｂ２号）（０．２１５ｍｍｏｌ）から６５％収率で調製した。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５５４．６［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．６１分。
表題化合物は、化合物＃Ａ１１について上記で記載した方法を使用して、エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチル−１−［（メチルカルバモイル）オキシ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（６４、０．１７９ｍｍｏｌ）および１，２−ジメチル−Ｄ−プロリン（Ｄｏｒｏｓｋｉら、米国特許第８８２８４０１Ｂ２号）（０．２１５ｍｍｏｌ）から６５％収率で調製した。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５５４．６［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．６１分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−１−［（ジメチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ２８）の調製：
表題化合物６５は、化合物６３について上記で記載した方法を使用して、エチル２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（＃Ａ１、０．１４４ｍｍｏｌ）、ＣＤＩ（０．２７２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルアミン（１．１ｍＬ、ＴＨＦ中２Ｍ）から９７％収率で調製した。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５９３．６［Ｍ＋Ｎａ］＋；保持時間＝１．０１分。
ステップ２：エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（ジメチルカルバモイル）オキシ］−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（６６）の調製：
表題化合物６６は、化合物６４について上記で記載した方法を使用して、エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−［（ジメチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（７９、０．１３１ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（０．５ｍＬ）から定量的収率で調製した。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ４７１．３［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝１．０１分。
表題化合物６６は、化合物６４について上記で記載した方法を使用して、エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−［（ジメチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（７９、０．１３１ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（０．５ｍＬ）から定量的収率で調製した。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ４７１．３［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝１．０１分。
ステップ３および４：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−１−［（ジメチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ２８）の調製：
表題化合物は、化合物＃Ａ１１について上記で記載した方法を使用して、エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（ジメチルカルバモイル）オキシ］−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（６６、０．０８３ｍｍｏｌ）および１，２−ジメチル−Ｄ−プロリン（Ｄｏｒｏｓｋｉら、米国特許第８８２８４０１Ｂ２号）（０．１００ｍｍｏｌ）から出発して７５％の全収率で調製した。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５６８．７［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝１．０１分。
表題化合物は、化合物＃Ａ１１について上記で記載した方法を使用して、エチル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（ジメチルカルバモイル）オキシ］−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（６６、０．０８３ｍｍｏｌ）および１，２−ジメチル−Ｄ−プロリン（Ｄｏｒｏｓｋｉら、米国特許第８８２８４０１Ｂ２号）（０．１００ｍｍｏｌ）から出発して７５％の全収率で調製した。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ５６８．７［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝１．０１分。
４−［（２Ｓ）−２−アミノ−２−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アニリン塩酸塩（＃Ａ２９）の調製：
ｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−１−アミノ−３−（４−ニトロフェニル）−１−チオキソプロパン−２−イル］カルバメート（米国特許出願公開第２０１４、０２４９１００Ａ１号）（６７、１．２ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（３７ｍＬ）中溶液に、２−ブロモ−１，１−ジメトキシエタン（３．１２ｇ、１８．４４ｍｍｏｌ）を加えた。添加の後、反応混合物を撹拌しながら３時間加熱還流させた。反応混合物を濃縮乾燥し、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の５％〜２５％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物６８および６９の混合物を得た。混合物はＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＣｅｌ ＯＪ−Ｈ、２５０×３０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、５μｍ；移動相Ａ：ＣＯ２；移動相Ｂ：エタノール；勾配：３０％Ｂ；６０ｍＬ／分、１００バールの逆圧、３８℃；波長：２２０ｎｍ）によって分離し、純粋な６８（２００ｍｇ、１６％、保持時間＝４．７６分）および６９（保持時間＝４．４５分）を黄色固体として得た。
ステップ２。ｔｅｒｔ−ブチル［（１Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］カルバメート（７０）の調製：
ｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−１−アミノ−３−（４−ニトロフェニル）−１−チオキソプロパン−２−イル］カルバメート（６８、３００ｍｇ、０．８５９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中溶液に、Ｚｎ粉末（３３５ｍｇ、５．１５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を脱気し、Ｎ２を１０分間泡立てた。上記の懸濁液に、ギ酸アンモニウム（５４１ｍｇ、８．５９ｍｍｏｌ）を０℃にて一度に加えた。反応混合物を室温にてＮ２下で２時間撹拌し、濾過し、濾過ケークをＭｅＯＨで洗浄した。合わせた有機相を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃおよびブラインに分配し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、粗生成物に濃縮し、これをフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の１％〜４０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物７０（２１５ｍｇ、７８％）を黄色固体として得た。
ｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−１−アミノ−３−（４−ニトロフェニル）−１−チオキソプロパン−２−イル］カルバメート（６８、３００ｍｇ、０．８５９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中溶液に、Ｚｎ粉末（３３５ｍｇ、５．１５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を脱気し、Ｎ２を１０分間泡立てた。上記の懸濁液に、ギ酸アンモニウム（５４１ｍｇ、８．５９ｍｍｏｌ）を０℃にて一度に加えた。反応混合物を室温にてＮ２下で２時間撹拌し、濾過し、濾過ケークをＭｅＯＨで洗浄した。合わせた有機相を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃおよびブラインに分配し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、粗生成物に濃縮し、これをフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の１％〜４０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物７０（２１５ｍｇ、７８％）を黄色固体として得た。
ステップ３。４−［（２Ｓ）−２−アミノ−２−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］アニリン塩酸塩（＃Ａ２９）の調製：
ｔｅｒｔ−ブチル［（１Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］カルバメート（７０、２１５ｍｇ、０．６７３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（４ｍＬ）中溶液に、ジオキサン（４ｍＬ）中の４ＮのＨＣｌを０℃にて加えた。添加の後、反応混合物を室温に温め、２時間撹拌した。反応混合物を２０℃にて一晩撹拌し、次いで、濾過し、濾過ケークをＭＴＢＥで洗浄し、ＭｅＯＨで希釈し、高真空下にて濃縮した。このように得られた粗残渣をＨ２Ｏに溶解し、凍結乾燥し、表題化合物＃Ａ２９（１２８．５ｍｇ、７５％）を黄色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.46
(br, 2H), 9.02 (s, 3H), 7.88 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.31 (d, 2H), 7.27 (d, 2H),
5.08 (m, 1H), 3.51(m, 1H), 3.27 (m, 1H); LC-MS (プロトコルB): m/z 220.1 [M+H]+; 保持時間 = 0.16分; 100% ee; カラム: Chiralcel OZ-3 150 x 4.6 mm I.D., 3μm; 移動相: 5%〜40% EtOH (0.05%ジエチルアミン)、CO2 12分間;
波長: 220 nm; 保持時間 = 5.7分。
ｔｅｒｔ−ブチル［（１Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−１−（１，３−チアゾール−２−イル）エチル］カルバメート（７０、２１５ｍｇ、０．６７３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（４ｍＬ）中溶液に、ジオキサン（４ｍＬ）中の４ＮのＨＣｌを０℃にて加えた。添加の後、反応混合物を室温に温め、２時間撹拌した。反応混合物を２０℃にて一晩撹拌し、次いで、濾過し、濾過ケークをＭＴＢＥで洗浄し、ＭｅＯＨで希釈し、高真空下にて濃縮した。このように得られた粗残渣をＨ２Ｏに溶解し、凍結乾燥し、表題化合物＃Ａ２９（１２８．５ｍｇ、７５％）を黄色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.46
(br, 2H), 9.02 (s, 3H), 7.88 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.31 (d, 2H), 7.27 (d, 2H),
5.08 (m, 1H), 3.51(m, 1H), 3.27 (m, 1H); LC-MS (プロトコルB): m/z 220.1 [M+H]+; 保持時間 = 0.16分; 100% ee; カラム: Chiralcel OZ-3 150 x 4.6 mm I.D., 3μm; 移動相: 5%〜40% EtOH (0.05%ジエチルアミン)、CO2 12分間;
波長: 220 nm; 保持時間 = 5.7分。
ペンタフルオロフェニル２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボキシレート（＃Ａ３０）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−１−｛４−［（ペンタフルオロフェノキシ）カルボニル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ３１）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチル−１−｛４−［（ペンタフルオロフェノキシ）カルボニル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ３２）の調製
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−［（エチルカルバモイル）アミノ］−４−メチル−１−｛４−［（ペンタフルオロフェノキシ）カルボニル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ３３）の調製：
下記のＰＦＰエステルを、＃Ａ３１について上記で記載した方法を使用して、対応する酸から５０〜９０％の範囲の収率で調製した。
メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−｛［（２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−３−［（Ｎ−｛［１−（ジメチルアミノ）シクロペンチル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−イル）カルボニル］アミノ｝−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（＃Ｂ１）の調製：
１，２−ジメチル−Ｌ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−メトキシ−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ２）の調製：
Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−１−（４−｛［（２Ｓ）−１−フェニル−４−ホスホノペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）ペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｎ〜２〜−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ３）の調製：
３−｛２−［（２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−イル）カルボニル］−１−ベンジルヒドラジニル｝−２−メチルプロパン酸（＃Ｂ４）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−メトキシ−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ５）の調製：
２−メチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−メトキシ−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ６）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−エトキシ−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ７）の調製：
表題化合物は、化合物＃Ａ２について上記で記載した２ステップ方法を使用して、２−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（１５、０．１９５ｍｍｏｌ）およびエチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（＃Ａ９、０．２１５ｍｍｏｌ）から出発して８５％収率で調製した。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＢ）：ｍ／ｚ７５３［Ｍ＋Ｎａ］＋；保持時間＝２．３４分。
ステップ２：エチル（２Ｒ，４Ｓ）−４−｛［（２−｛（１Ｒ，３Ｓ）−１−（アセチルオキシ）−３−［Ｌ−アロイソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−イル）カルボニル］アミノ｝−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（７２）の調製：
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（｛２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−イル｝カルボニル）アミノ］−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（７１、０．１２ｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２．０ｍＬ）中溶液をジオキサン（２．０ｍＬ）中の４．０ＮのＨＣｌで処理し、混合物を室温にて６時間撹拌した。反応物を蒸発乾固させ、残渣をＥｔＯＡｃ（２×５ｍＬ）で共沸混合し、表題化合物７２（０．１１ｇ、定量的収率）を吸湿性固体として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＢ）：ｍ／ｚ６３１．９［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝１．３２分。
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（｛２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−３−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−イソロイシル］（メチル）アミノ｝−４−メチルペンチル］−１，３−チアゾール−４−イル｝カルボニル）アミノ］−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（７１、０．１２ｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２．０ｍＬ）中溶液をジオキサン（２．０ｍＬ）中の４．０ＮのＨＣｌで処理し、混合物を室温にて６時間撹拌した。反応物を蒸発乾固させ、残渣をＥｔＯＡｃ（２×５ｍＬ）で共沸混合し、表題化合物７２（０．１１ｇ、定量的収率）を吸湿性固体として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＢ）：ｍ／ｚ６３１．９［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝１．３２分。
ステップ３：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−エトキシ−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ７）の調製：
表題化合物は、化合物＃Ｂ２について上記で記載した方法を使用して、エチル（２Ｒ，４Ｓ）−４−｛［（２−｛（１Ｒ，３Ｓ）−１−（アセチルオキシ）−３−［Ｌ−アロイソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−イル）カルボニル］アミノ｝−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（７２、０．１６３ｍｍｏｌ）および１，２−ジメチル−Ｌ−プロリン（Ｄｏｒｏｓｋｉら、米国特許第８８２８４０１Ｂ２号）（０．１６３ｍｍｏｌ）から７．７％収率で調製した。
表題化合物は、化合物＃Ｂ２について上記で記載した方法を使用して、エチル（２Ｒ，４Ｓ）−４−｛［（２−｛（１Ｒ，３Ｓ）−１−（アセチルオキシ）−３−［Ｌ−アロイソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−イル）カルボニル］アミノ｝−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（７２、０．１６３ｍｍｏｌ）および１，２−ジメチル−Ｌ−プロリン（Ｄｏｒｏｓｋｉら、米国特許第８８２８４０１Ｂ２号）（０．１６３ｍｍｏｌ）から７．７％収率で調製した。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ８）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリン（２０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．４ｍＬ）中スラリーに、ＤＩＰＥＡ（０．４１７ｍＬ、０．４１７ｍｍｏｌ）、それに続いてＴＰＴＵ（５１．１ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１５分間撹拌し、メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−｛［（２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−３−［Ｌ−イソロイシル（メチル）アミノ］−４−メチルペンチル｝−１，３−チアゾール−４−イル）カルボニル］アミノ｝−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（＃Ａ１０、９０．８ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．２５ｍＬ）中溶液を加えた。反応物を室温にて１８時間撹拌し、次いで、水（１．５ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×２．５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。油をＴＨＦ（６ｍＬ）中でスラリー化し、ＬｉＯＨ（１７ｍｇ）のＨ２Ｏ（２ｍＬ）中溶液を加えた。このように得られた反応混合物を室温にて７２時間撹拌した。反応物を真空中で濃縮し、粗残渣を中圧逆相Ｃ１８クロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ中の１０％〜８０％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製し、泡を得て、これをＤＣＭに再溶解し、ヘキサンにより沈殿させ、表題化合物７３（９１ｍｇ、８１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ６８６．８［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．７分。
ステップ２。１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ８）の合成：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７３、９０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）中溶液に、ピリジン（１ｍＬ）および無水酢酸（０．１ｍＬ）を加え、反応物を室温にて２時間撹拌した。さらなる無水酢酸（０．１ｍＬ）を加え、反応物を室温にて１８時間撹拌した。反応物を真空中で濃縮し、粗残渣を中圧逆相クロマトグラフィー（表１）によって精製し、泡を得て、これをＤＣＭにさらに溶解し、ヘキサンにより沈殿させ、表題化合物＃Ｂ８（７４ｍｇ、９０％）を得た。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７３、９０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）中溶液に、ピリジン（１ｍＬ）および無水酢酸（０．１ｍＬ）を加え、反応物を室温にて２時間撹拌した。さらなる無水酢酸（０．１ｍＬ）を加え、反応物を室温にて１８時間撹拌した。反応物を真空中で濃縮し、粗残渣を中圧逆相クロマトグラフィー（表１）によって精製し、泡を得て、これをＤＣＭにさらに溶解し、ヘキサンにより沈殿させ、表題化合物＃Ｂ８（７４ｍｇ、９０％）を得た。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−１−（４−アミノフェニル）−４−カルボキシペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ９）の調製：
（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｓ，４Ｒ）−１−（４−アミノフェニル）−４−（ジエトキシホスホリル）ペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチルアセテート（＃Ｂ１０）の調製：
（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｓ，４Ｓ）−１−（４−アミノフェニル）−４−（ジエトキシホスホリル）ペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチルアセテート（＃Ｂ１１）の調製：
Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ１２）の調製：
表題化合物７４は、化合物＃Ａ３１について上記で記載した方法を使用して、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−カルボキシ−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ａ２０、０．３１９ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル（０．９５７ｍｍｏｌ）から８６％収率で調製した。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ８１５．３［Ｍ＋Ｎａ］＋；保持時間＝１．２０分。
ステップ２およびステップ３：Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７５）の調製：
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−１−｛４−［（ペンタフルオロフェノキシ）カルボニル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７４，１４３ｍｇ、０．１８０ｍｍｏｌ）およびエチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−フェニルペンタノエート塩酸塩（＃Ａ９、２１ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＭＦ（７ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（１２９μＬ、０．７３１ｍｍｏｌ）を加え、反応物をＮ２下で室温にて１６時間撹拌した。反応物を濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（２０分に亘りヘプタン中の０％〜６０％ＥｔＯＡｃ、次いで、６０％ＥｔＯＡｃで６分間保持）によって精製し、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−エトキシ−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（６５ｍｇ、４３％）を得て、これを１，４−ジオキサン（６ｍＬ）およびＨ２Ｏ（０．８ｍＬ）に再溶解した。２．５ＭのＮａＯＨ水溶液（０．８ｍＬ）を加え、反応物を７５℃にて２１時間加熱した。反応物を室温へと冷却し、濃縮し、ジオキサンを除去し、次いで、クエン酸水溶液でｐＨ＝３に酸性化した。このように得られた懸濁液をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出し、次いで、合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、表題化合物７５（３７ｍｇ、１００％）を僅かに黄色のゴム状物として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＢ）：ｍ／ｚ７７４．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝２．２４分。
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−１−｛４−［（ペンタフルオロフェノキシ）カルボニル］−１，３−チアゾール−２−イル｝ペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７４，１４３ｍｇ、０．１８０ｍｍｏｌ）およびエチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−フェニルペンタノエート塩酸塩（＃Ａ９、２１ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＭＦ（７ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（１２９μＬ、０．７３１ｍｍｏｌ）を加え、反応物をＮ２下で室温にて１６時間撹拌した。反応物を濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（２０分に亘りヘプタン中の０％〜６０％ＥｔＯＡｃ、次いで、６０％ＥｔＯＡｃで６分間保持）によって精製し、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−エトキシ−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（６５ｍｇ、４３％）を得て、これを１，４−ジオキサン（６ｍＬ）およびＨ２Ｏ（０．８ｍＬ）に再溶解した。２．５ＭのＮａＯＨ水溶液（０．８ｍＬ）を加え、反応物を７５℃にて２１時間加熱した。反応物を室温へと冷却し、濃縮し、ジオキサンを除去し、次いで、クエン酸水溶液でｐＨ＝３に酸性化した。このように得られた懸濁液をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出し、次いで、合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、表題化合物７５（３７ｍｇ、１００％）を僅かに黄色のゴム状物として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＢ）：ｍ／ｚ７７４．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝２．２４分。
ステップ４および５：Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ１２）の調製：
粗Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７５、３７．０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ／ピリジン（１／１、３．１２ｍＬ）中溶液に、無水酢酸（１１２μＬ）を加えた。反応物を室温にて７時間撹拌し、次いで、濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（６分に亘りＤＣＭ中の０％〜１０％ＭｅＯＨ、次いで、１０％で３分間保持）によって濃縮し、粗残渣を得て、これをＤＣＭ（１．８ｍＬ）に直ちに溶解した。ＴＦＡ（９０μＬ）を加え、反応物を室温にて２．２５時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を逆相クロマトグラフィー（表１）によって精製し、目標化合物＃Ｂ１２（１３．７ｍｇ、７２％）を得た。
粗Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ−メチル−Ｄ−バリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７５、３７．０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ／ピリジン（１／１、３．１２ｍＬ）中溶液に、無水酢酸（１１２μＬ）を加えた。反応物を室温にて７時間撹拌し、次いで、濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（６分に亘りＤＣＭ中の０％〜１０％ＭｅＯＨ、次いで、１０％で３分間保持）によって濃縮し、粗残渣を得て、これをＤＣＭ（１．８ｍＬ）に直ちに溶解した。ＴＦＡ（９０μＬ）を加え、反応物を室温にて２．２５時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を逆相クロマトグラフィー（表１）によって精製し、目標化合物＃Ｂ１２（１３．７ｍｇ、７２％）を得た。
メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（｛２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−３−｛メチル［（２Ｓ，３Ｓ）−３−メチル−２−｛［（７−メチル−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−１−イル）カルボニル］アミノ｝ペンタノイル］アミノ｝ペンチル］−１，３−チアゾール−４−イル｝カルボニル）アミノ］−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（＃Ｂ１３）の調製：
メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（｛２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−３−（メチル｛Ｎ−［（２−メチル−２−アザビシクロ［３．１．１］ヘプタ−１−イル）カルボニル］−Ｌ−イソロイシル｝アミノ）ペンチル］−１，３−チアゾール−４−イル｝カルボニル）アミノ］−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（＃Ｂ１４）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ１５）の調製：
メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（｛２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−３−（メチル｛Ｎ−［（９−メチル−９−アザビシクロ［３．３．１］ノナ−１−イル）カルボニル］−Ｌ−イソロイシル｝アミノ）ペンチル］−１，３−チアゾール−４−イル｝カルボニル）アミノ］−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（＃Ｂ１６）の調製：
メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（｛２−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−３−（メチル｛Ｎ−［（２−メチル−２−アザビシクロ［２．１．１］ヘキサ−１−イル）カルボニル］−Ｌ−イソロイシル｝アミノ）ペンチル］−１，３−チアゾール−４−イル｝カルボニル）アミノ］−２−メチル−５−フェニルペンタノエート（＃Ｂ１７）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−エトキシ−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ１８）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ１９）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルアミノ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−メトキシ−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ２０）の調製：
実施例＃Ｂ２１〜＃Ｂ３３の調製：
これらの化合物は、実施例＃Ｂ１９について上記で記載した方法を使用して、ＤＩＰＥＡ（１０当量）の存在下でそれぞれのＰＦＰエステル（１．０当量）とＤＭＦ中のアミン求核試薬（１〜１．５当量）との反応によって１５〜８０％収率で調製した。
これらの化合物は、実施例＃Ｂ１９について上記で記載した方法を使用して、ＤＩＰＥＡ（１０当量）の存在下でそれぞれのＰＦＰエステル（１．０当量）とＤＭＦ中のアミン求核試薬（１〜１．５当量）との反応によって１５〜８０％収率で調製した。
Ｎ，Ｎ，−２−トリメチルアラニル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−メトキシ−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ３４）の調製：
２−メチルアラニル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−メトキシ−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ３５）の調製：
パラレルフォーマットでのアミン求核試薬とのペンタフルオロエステル（＃Ａ３０）のカップリングのための一般的方法
パラレルフォーマットでのアミン求核試薬とのペンタフルオロエステル（＃Ａ３１）のカップリングのための一般的方法
ＰＦＰエステル＃Ａ３１（１．０当量）を、ＤＩＰＥＡ（５当量）の存在下でＤＭＦ中のアミン求核試薬（１〜１．５当量）と反応させ、室温にて１８〜２４時間撹拌した。反応物を濃縮乾燥させ、逆相クロマトグラフィー（プロトコルＡ）によって精製した。
ＰＦＰエステル＃Ａ３１（１．０当量）を、ＤＩＰＥＡ（５当量）の存在下でＤＭＦ中のアミン求核試薬（１〜１．５当量）と反応させ、室温にて１８〜２４時間撹拌した。反応物を濃縮乾燥させ、逆相クロマトグラフィー（プロトコルＡ）によって精製した。
リンカーペイロード（＃ＬＰ）の調製
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］グリシル｝アミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃ＬＰ１）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］グリシル｝アミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃ＬＰ１）の調製：
Ｎ−Ｂｏｃグリシン（１６６ｍｇ、０．９４８ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（３６４ｍｇ、０．９４８ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＭＦ（２ｍＬ）、およびＤＩＰＥＡ（４１７μＬ、２．３７ｍｍｏｌ）を加えた。反応物をＮ２下で約０．５時間撹拌し、次いで、１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−１−（４−アミノフェニル）−４−カルボキシペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ９、２０３ｍｇ、０．２３７ｍｍｏｌ）を含有するバイアルにシリンジによって加え、ＤＭＦ（１．２ｍＬ）でさらに希釈した。室温にて２．５時間撹拌した後、反応物を濃縮し、残渣をＤＭＳＯ（約２ｍＬ）およびＨ２Ｏ（約１ｍＬ、０．０２％ＴＦＡを含有）に再溶解し、中圧Ｃ１８クロマトグラフィー（５分間１０％アセトニトリル／９０％Ｈ２Ｏ、次いで、１８分に亘りＨ２Ｏ中の１０％アセトニトリルから９５％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製し、表題化合物（７３ｍｇ、３５％）を白色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ９００．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．８４分。
ステップ２：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（グリシルアミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドＴＦＡ塩（７６）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−１−（４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシル］アミノ｝フェニル）−４−カルボキシペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（３５ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＴＦＡ（３５０μＬ）を加え、反応物を室温にてＮ２下で撹拌した。３時間後、反応物を真空中で濃縮し、高真空下にて乾燥させ、表題化合物（４５ｍｇ、定量的収率）をゴム状残渣として得て、これを次のステップにおいて未精製で使用した。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ８００．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．６８分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−１−（４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシル］アミノ｝フェニル）−４−カルボキシペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（３５ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＴＦＡ（３５０μＬ）を加え、反応物を室温にてＮ２下で撹拌した。３時間後、反応物を真空中で濃縮し、高真空下にて乾燥させ、表題化合物（４５ｍｇ、定量的収率）をゴム状残渣として得て、これを次のステップにおいて未精製で使用した。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ８００．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．６８分。
ステップ３：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］グリシル｝アミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃ＬＰ１）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（グリシルアミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドＴＦＡ塩（７６、７９ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（３１ｍｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（２．６ｍＬ）を加えた。ＤＩＰＥＡ（５２μＬ、０．２９６ｍｍｏｌ）を加え、反応物を密封したバイアルにおいて室温にて１．５時間撹拌した。さらなる（１０ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンおよびＤＩＰＥＡ（１４μＬ、０．０８１ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温にて２時間撹拌した。反応物を濃縮し、逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ）によって精製し、表題化合物＃ＬＰ１（３５ｍｇ、２６％）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ（プロトコルＤ）ｍ／ｚ９９３．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝７．０２分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（グリシルアミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドＴＦＡ塩（７６、７９ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（３１ｍｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（２．６ｍＬ）を加えた。ＤＩＰＥＡ（５２μＬ、０．２９６ｍｍｏｌ）を加え、反応物を密封したバイアルにおいて室温にて１．５時間撹拌した。さらなる（１０ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンおよびＤＩＰＥＡ（１４μＬ、０．０８１ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温にて２時間撹拌した。反応物を濃縮し、逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ）によって精製し、表題化合物＃ＬＰ１（３５ｍｇ、２６％）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ（プロトコルＤ）ｍ／ｚ９９３．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝７．０２分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−｛４−［（｛［４−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ〜５〜−カルバモイル−Ｌ−オルニチル｝アミノ）ベンジル］オキシ｝カルボニル）アミノ］フェニル｝ペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃ＬＰ２）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃ＬＰ３）の調製：
Ｎ−Ｂｏｃ Ｌ−アラニン（５ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（９ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＭＦ（０．９ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ、０．１２０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物をＮ２下で０．７５時間撹拌し、次いで、１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−１−（４−アミノフェニル）−４−カルボキシペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ９、２１ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液を加えた。反応物を室温にて１７時間撹拌し、０．１９２ｍｍｏｌのＨＡＴＵ−活性化Ｎ−Ｂｏｃ Ｌ−アラニン（０．６ｍＬのＤＭＦ中のＨＡＴＵ（７４ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ）、Ｎ−Ｂｏｃ Ｌ−アラニン（３６ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（８５μｌ、０．４８０ｍｍｏｌ）を３０分間撹拌することによって調製）を２４時間に亘って２つの等しい一定分量で加えた。室温にて合計で４０時間撹拌した後、反応物を濃縮し、残渣をＤＭＳＯ（１．５ｍＬ）に再溶解し、中圧Ｃ１８クロマトグラフィー（２５分に亘りＨ２Ｏ中の１０％〜９５％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製し、表題化合物（８ｍｇ、４０％）を白色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ９１４．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．８５分。
ステップ２、１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−１−［４−（Ｌ−アラニルアミノ）フェニル］−４−カルボキシペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドＴＦＡ塩の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−１−（４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニル］アミノ｝フェニル）−４−カルボキシペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（８ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＣＭ（０．９ｍＬ）およびＴＦＡ（８０μＬ）を加え、反応物をＮ２下で室温にて撹拌した。３時間後、反応物を真空中で濃縮し、高真空下にて乾燥させ、表題化合物（１０ｍｇ、定量的収率）をゴム状残渣として得て、これを次のステップにおいて未精製で使用した。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ８１４．６［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．５８分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−１−（４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アラニル］アミノ｝フェニル）−４−カルボキシペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（８ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＣＭ（０．９ｍＬ）およびＴＦＡ（８０μＬ）を加え、反応物をＮ２下で室温にて撹拌した。３時間後、反応物を真空中で濃縮し、高真空下にて乾燥させ、表題化合物（１０ｍｇ、定量的収率）をゴム状残渣として得て、これを次のステップにおいて未精製で使用した。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ８１４．６［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．５８分。
ステップ３：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−１−（４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル］アミノ｝フェニル）−４−カルボキシペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７８）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−１−［４−（Ｌ−アラニルアミノ）フェニル］−４−カルボキシペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドＴＦＡ塩（８．２ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、Ｌ−バリンＮ−ヒドロキシスクシンイミド（３．５ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７００μＬ）中溶液、それに続いてＤＩＰＥＡ（１４μＬ、０．０８０ｍｍｏｌ）およびさらなるＤＭＦ（１００μＬ）を加えた。反応物を室温にて４時間撹拌し、濃縮し、分取ＨＰＬＣ（方法Ｈ）によって精製し、目標化合物７８（５．８ｍｇ、５７％）を無色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ１０１３．８［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．８２分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−１−［４−（Ｌ−アラニルアミノ）フェニル］−４−カルボキシペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドＴＦＡ塩（８．２ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、Ｌ−バリンＮ−ヒドロキシスクシンイミド（３．５ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７００μＬ）中溶液、それに続いてＤＩＰＥＡ（１４μＬ、０．０８０ｍｍｏｌ）およびさらなるＤＭＦ（１００μＬ）を加えた。反応物を室温にて４時間撹拌し、濃縮し、分取ＨＰＬＣ（方法Ｈ）によって精製し、目標化合物７８（５．８ｍｇ、５７％）を無色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ１０１３．８［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．８２分。
ステップ４：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル｝アミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃ＬＰ３）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−１−（４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル］アミノ｝フェニル）−４−カルボキシペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７８、５．８ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＣＭ（０．５ｍＬ）およびＴＦＡ（３０μＬ）を加え、反応物を室温にてＮ２下で撹拌した。３時間後、反応物を真空中で濃縮し、高真空下にて乾燥させ、１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−｛４−［（Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル）アミノ］フェニル｝ペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドをゴム状残渣として得て、これをＤＭＦ（０．９ｍＬ）中の１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（３．５ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）で直ちに処理した。この反応混合物に、ＤＩＰＥＡ（１１μｌ、０．０６４ｍｍｏｌ）を加え、反応物を密封したバイアルにおいて室温にて５時間撹拌した。反応物を濃縮し、残渣を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ）によって精製し、表題化合物＃ＬＰ３（３．４ｍｇ、３８％）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ（プロトコルＤ）ｍ／ｚ１１０７．５［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝７．１６分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−１−（４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル］アミノ｝フェニル）−４−カルボキシペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７８、５．８ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＣＭ（０．５ｍＬ）およびＴＦＡ（３０μＬ）を加え、反応物を室温にてＮ２下で撹拌した。３時間後、反応物を真空中で濃縮し、高真空下にて乾燥させ、１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−｛４−［（Ｌ−バリル−Ｌ−アラニル）アミノ］フェニル｝ペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドをゴム状残渣として得て、これをＤＭＦ（０．９ｍＬ）中の１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（３．５ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）で直ちに処理した。この反応混合物に、ＤＩＰＥＡ（１１μｌ、０．０６４ｍｍｏｌ）を加え、反応物を密封したバイアルにおいて室温にて５時間撹拌した。反応物を濃縮し、残渣を逆相クロマトグラフィー（方法Ｂ）によって精製し、表題化合物＃ＬＰ３（３．４ｍｇ、３８％）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ（プロトコルＤ）ｍ／ｚ１１０７．５［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝７．１６分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−｛（２Ｚ）−２−［１−（４−｛［５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチル］オキシ｝フェニル）エチリデン］ヒドラジニル｝−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃ＬＰ４）の調製
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ１５、９０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）中溶液に、ピリジン（１ｍＬ）および無水酢酸（０．１ｍＬ）を加えた。反応物を室温にて２時間撹拌し、次いで、さらなる無水酢酸（０．１ｍＬ）を加え、反応物を室温にて１８時間撹拌した。反応物を真空中で濃縮し、粗残渣を中圧逆相Ｃ１８クロマトグラフィー（水中の１０％〜８０％アセトニトリル、各相中の０．０２％ＴＦＡ）によって精製した。このように得られた泡をＤＣＭに再溶解し、ヘキサンにより沈殿させ、表題化合物７９（７４ｍｇ、９０％）を得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＢ）：ｍ／ｚ７２８．８［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．７７分。
ステップ２：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−ヒドラジニル−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（８０）の合成：
ＤＭＦ（０．４ｍＬ）に溶解した１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７９、３８ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＴＰＴＵ（１９ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．１５６ｍＬ、０．１５６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１５分間撹拌し、ｔｅｒｔ−ブチルヒドラジンカルボキシレート（７ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温にて７２時間撹拌し、次いで、Ｈ２Ｏ（１．５ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（４×２．５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。原油をＤＣＭ（１．０ｍＬ）に溶解し、ジオキサン（１．０ｍＬ）中の４ＮのＨＣｌを加えた。反応混合物を室温にて１５分間撹拌し、溶媒を真空中で除去し、粗残渣を中圧逆相Ｃ１８クロマトグラフィー（水中の１０％〜８５％アセトニトリル、各相中の０．０２％ＴＦＡ）によって精製した。このように得られた泡をＤＣＭに再溶解し、ヘキサンにより沈殿させ、表題化合物８０（３１ｍｇ、８３％）を得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ７４３．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝６．４９分。
ＤＭＦ（０．４ｍＬ）に溶解した１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７９、３８ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＴＰＴＵ（１９ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．１５６ｍＬ、０．１５６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１５分間撹拌し、ｔｅｒｔ−ブチルヒドラジンカルボキシレート（７ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温にて７２時間撹拌し、次いで、Ｈ２Ｏ（１．５ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（４×２．５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。原油をＤＣＭ（１．０ｍＬ）に溶解し、ジオキサン（１．０ｍＬ）中の４ＮのＨＣｌを加えた。反応混合物を室温にて１５分間撹拌し、溶媒を真空中で除去し、粗残渣を中圧逆相Ｃ１８クロマトグラフィー（水中の１０％〜８５％アセトニトリル、各相中の０．０２％ＴＦＡ）によって精製した。このように得られた泡をＤＣＭに再溶解し、ヘキサンにより沈殿させ、表題化合物８０（３１ｍｇ、８３％）を得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ７４３．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝６．４９分。
ステップ３：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−｛（２Ｚ）−２−［１−（４−｛［５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチル］オキシ｝フェニル）エチリデン］ヒドラジニル｝−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃ＬＰ４）の合成：
エタノール（１．４ｍＬ）中の１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−ヒドラジニル−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（８０、２１ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、１−［５−（４−アセチルフェノキシ）ペンチル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（＃Ａ２６、８．４ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）および氷酢酸（０．０２７ｍＬ、０．４７６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温にて１８時間撹拌し、次いで、真空中で濃縮し、１／１のＤＣＭ／ヘプタンで共沸混合し、粗固体を得た。固体を逆相クロマトグラフィー（方法Ｃ）によって精製し、表題化合物＃ＬＰ４（５．８ｍｇ、２０％）を得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１０２５．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝７．９８分。
エタノール（１．４ｍＬ）中の１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−５−ヒドラジニル−４−メチル−５−オキソ−１−フェニルペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（８０、２１ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、１−［５−（４−アセチルフェノキシ）ペンチル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（＃Ａ２６、８．４ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）および氷酢酸（０．０２７ｍＬ、０．４７６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温にて１８時間撹拌し、次いで、真空中で濃縮し、１／１のＤＣＭ／ヘプタンで共沸混合し、粗固体を得た。固体を逆相クロマトグラフィー（方法Ｃ）によって精製し、表題化合物＃ＬＰ４（５．８ｍｇ、２０％）を得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ１０２５．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝７．９８分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］グリシル｝アミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃ＬＰ５）の調製：
Ｎ−Ｂｏｃグリシン（８ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１７ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（５４μＬ、０．３１ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を密封したバイアルにおいて０．５時間撹拌し、次いで、１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−１−（４−アミノフェニル）−４−カルボキシペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃Ｂ３２、２１ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中溶液を含有するバイアルにシリンジによって加えた。室温にて２４時間撹拌した後、さらなる０．００３ｍｍｏｌのＨＡＴＵ−活性化Ｎ−Ｂｏｃグリシン（０．５ｍＬのＤＭＦ中のＨＡＴＵ（１０ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ）、Ｎ−Ｂｏｃグリシン（６ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３６μｌ、０．２０７ｍｍｏｌ）を３０分間撹拌することによって調製）を加え、反応混合物を２４時間撹拌した。反応物を粗ゴム状残渣に濃縮し、これをＤＭＳＯ（約２ｍＬ）に再溶解し、中圧Ｃ１８クロマトグラフィー（２５分に亘りＨ２Ｏ中の１０％〜９５％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製し、表題化合物（７ｍｇ、２０％）を得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ８５８．５［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．７１分。
ステップ２：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（グリシルアミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドＴＦＡ塩（８１）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−１−（４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシル］アミノ｝フェニル）−４−カルボキシペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＣＭ（２００μＬ）およびＴＦＡ（８０μＬ）を加え、反応物を室温にてＮ２下で撹拌した。３時間後、反応物を高真空下にて濃縮し、表題化合物８１（９．５ｍｇ、定量的収率）をゴム状残渣として得て、これを次のステップにおいて未精製で使用した。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｒ，４Ｓ）−１−（４−｛［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシル］アミノ｝フェニル）−４−カルボキシペンタン−２−イル］カルバモイル｝−１，３−チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（７ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＣＭ（２００μＬ）およびＴＦＡ（８０μＬ）を加え、反応物を室温にてＮ２下で撹拌した。３時間後、反応物を高真空下にて濃縮し、表題化合物８１（９．５ｍｇ、定量的収率）をゴム状残渣として得て、これを次のステップにおいて未精製で使用した。
ステップ３：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］グリシル｝アミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃ＬＰ５）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（グリシルアミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドＴＦＡ塩（８１、９．２ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（３．６ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（０．７ｍＬ）を加えた。ＤＩＰＥＡ（２０μＬ、０．１１０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を密封したバイアルにおいて１７．５時間室温にて撹拌した。反応物を茶色のゴム状残渣に濃縮し、逆相クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製し、目標化合物＃ＬＰ５（３ｍｇ、２６％）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ（プロトコルＤ）ｍ／ｚ９５１．５［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝６．７０分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（グリシルアミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドＴＦＡ塩（８１、９．２ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（３．６ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（０．７ｍＬ）を加えた。ＤＩＰＥＡ（２０μＬ、０．１１０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を密封したバイアルにおいて１７．５時間室温にて撹拌した。反応物を茶色のゴム状残渣に濃縮し、逆相クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製し、目標化合物＃ＬＰ５（３ｍｇ、２６％）を白色固体として得た。ＨＰＬＣ（プロトコルＤ）ｍ／ｚ９５１．５［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝６．７０分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］グリシル｝アミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃ＬＰ６）の調製：
（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−メチル−２−（プロパン−２−イル）シクロヘキシル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチル−５−（４−ニトロフェニル）ペンタノエート（８００ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）およびＰｄ−Ｃ（５００ｍｇ）のＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中溶液を、４０ｐｓｉのＨ２下で室温にて一晩撹拌した。反応混合物はセライトのパッドを通して濾過し、濾液を真空中で濃縮し、表題化合物（７５０ｍｇ、定量的収率）を黄色油状物として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ４８３．２［Ｍ＋Ｎａ］＋；保持時間＝０．８８３分。
ステップ２：（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−５−［４−（｛Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）フェニル］−２−メチルペンタン酸の調製：
（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−メチル−２−（プロパン−２−イル）シクロヘキシル（２Ｓ，４Ｒ）−５−（４−アミノフェニル）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチルペンタノエート（７００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）、Ｎ−Ｆｍｏｃグリシン（４９７ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（２９５ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＨＡＴＵ（６３６ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温にて２時間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（１００％ＥｔＯＡｃから１０％ＭｅＯＨ／９０％ＤＣＭ）によって精製し、目標化合物（９００ｍｇ、８０％）を黄色油状物として得た。
（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−メチル−２−（プロパン−２−イル）シクロヘキシル（２Ｓ，４Ｒ）−５−（４−アミノフェニル）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチルペンタノエート（７００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）、Ｎ−Ｆｍｏｃグリシン（４９７ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（２９５ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に０℃にて、ＨＡＴＵ（６３６ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温にて２時間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（１００％ＥｔＯＡｃから１０％ＭｅＯＨ／９０％ＤＣＭ）によって精製し、目標化合物（９００ｍｇ、８０％）を黄色油状物として得た。
ステップ３：（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−５−［４−（｛Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）フェニル］−２−メチルペンタン酸ＴＦＡ塩（８２）の調製：
（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−５−［４−（｛Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）フェニル］−２−メチルペンタン酸（１．０ｇ、１．３５１ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（１０ｍＬ）中溶液を、１１０℃にて１時間還流させた。反応混合物を、マイクロ波条件下で１３０℃にて１５分間撹拌した。反応混合物を真空中で原油に濃縮し、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ、２５０ｍｍ×５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、１０μｍ；移動相：３０分に亘りＨ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中の２５％アセトニトリルからＨ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中の５５％アセトニトリル）によって精製し、表題化合物８２（３３０ｍｇ、４９％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.01
(br, 1H), 7.92-7.82 (m, 5H), 7.74-7.73 (m, 2H), 7.58-7.56 (m, 3H), 7.43-7.41
(m, 2H), 7.36-7.34 (m, 2H), 7.19-7.17 (m, 2H), 4.32-4.20 (m, 3H), 3.80-3.73 (m,
2H), 2.89-2.73 (m, 1H), 1.86-1.81 (m, 1H), 1.01 (d, 3H). m/z 502.3 [M+H]+;
92% ee: カラム: Chiralcel CD-PH
150 x 4.6 mm I.D., 5 μm, 移動相: 10%〜80% アセトニトリル (0.1%
TFA) H2O (0.1% TFA)中;
波長: 254 nm; 保持時間 = 15.6分。
（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−５−［４−（｛Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）フェニル］−２−メチルペンタン酸（１．０ｇ、１．３５１ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（１０ｍＬ）中溶液を、１１０℃にて１時間還流させた。反応混合物を、マイクロ波条件下で１３０℃にて１５分間撹拌した。反応混合物を真空中で原油に濃縮し、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ、２５０ｍｍ×５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．、１０μｍ；移動相：３０分に亘りＨ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中の２５％アセトニトリルからＨ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中の５５％アセトニトリル）によって精製し、表題化合物８２（３３０ｍｇ、４９％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.01
(br, 1H), 7.92-7.82 (m, 5H), 7.74-7.73 (m, 2H), 7.58-7.56 (m, 3H), 7.43-7.41
(m, 2H), 7.36-7.34 (m, 2H), 7.19-7.17 (m, 2H), 4.32-4.20 (m, 3H), 3.80-3.73 (m,
2H), 2.89-2.73 (m, 1H), 1.86-1.81 (m, 1H), 1.01 (d, 3H). m/z 502.3 [M+H]+;
92% ee: カラム: Chiralcel CD-PH
150 x 4.6 mm I.D., 5 μm, 移動相: 10%〜80% アセトニトリル (0.1%
TFA) H2O (0.1% TFA)中;
波長: 254 nm; 保持時間 = 15.6分。
ステップ４：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（｛Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドの調製：
ＰＦＰエステル＃Ａ３２（２０ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）および（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−５−［４−（｛Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）フェニル］−２−メチルペンタン酸ＴＦＡ塩（８２、１７ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（３３μＬ、０．１８９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を密封したバイアルにおいて室温にて撹拌した。室温にて１６時間撹拌した後、反応物をゴム状残渣へと濃縮し、これをＤＭＳＯ（約１．５ｍＬ）およびアセトニトリル／Ｈ２Ｏ（０．５ｍＬ、１／１、それぞれが０．０２％ＴＦＡを含有）に再溶解し、中圧Ｃ１８クロマトグラフィー（２５分に亘りＨ２Ｏ中の１０％〜９５％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製し、目標化合物（１９ｍｇ、６７％）を無色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ１０５１．６［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．８３分。
ＰＦＰエステル＃Ａ３２（２０ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）および（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−５−［４−（｛Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）フェニル］−２−メチルペンタン酸ＴＦＡ塩（８２、１７ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（３３μＬ、０．１８９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を密封したバイアルにおいて室温にて撹拌した。室温にて１６時間撹拌した後、反応物をゴム状残渣へと濃縮し、これをＤＭＳＯ（約１．５ｍＬ）およびアセトニトリル／Ｈ２Ｏ（０．５ｍＬ、１／１、それぞれが０．０２％ＴＦＡを含有）に再溶解し、中圧Ｃ１８クロマトグラフィー（２５分に亘りＨ２Ｏ中の１０％〜９５％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製し、目標化合物（１９ｍｇ、６７％）を無色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ１０５１．６［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．８３分。
ステップ５：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（グリシルアミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドＴＦＡ塩（８３）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（｛Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（１９ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジエチルアミン（３０μＬ、０．２９０ｍｍｏｌ）を加え、このように得られた反応物を閉じられたバイアルにおいて３時間室温にて撹拌し、この時間の後で、さらなるＮ，Ｎ−ジエチルアミン（１３０μＬ）を４時間に亘って３つの一定分量で加えた。室温にて合計で７時間撹拌した後、反応物を真空中で濃縮し、残渣をＤＭＳＯ（約１．５ｍＬ）およびアセトニトリル／Ｈ２Ｏ（０．５ｍＬ、１／１、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）に再溶解し、中圧Ｃ１８クロマトグラフィー（２５分に亘りＨ２Ｏ中の１０％〜９５％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製し、表題化合物８３（１０ｍｇ、６２％）を無色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ８２９．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．６１分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（｛Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（１９ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジエチルアミン（３０μＬ、０．２９０ｍｍｏｌ）を加え、このように得られた反応物を閉じられたバイアルにおいて３時間室温にて撹拌し、この時間の後で、さらなるＮ，Ｎ−ジエチルアミン（１３０μＬ）を４時間に亘って３つの一定分量で加えた。室温にて合計で７時間撹拌した後、反応物を真空中で濃縮し、残渣をＤＭＳＯ（約１．５ｍＬ）およびアセトニトリル／Ｈ２Ｏ（０．５ｍＬ、１／１、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）に再溶解し、中圧Ｃ１８クロマトグラフィー（２５分に亘りＨ２Ｏ中の１０％〜９５％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製し、表題化合物８３（１０ｍｇ、６２％）を無色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＣ）：ｍ／ｚ８２９．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝０．６１分。
ステップ６：１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］グリシル｝アミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミド（＃ＬＰ６）の調製：
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（グリシルアミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドＴＦＡ塩（８３、１０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（３ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１．２ｍＬ）を加えた。ＤＩＰＥＡ（１７μＬ、０．０９９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を閉じられたバイアルにおいて１７時間室温にて撹拌した。反応物を濃縮し、このように得られた残渣を逆相クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製し、目標化合物＃ＬＰ６（５．８ｍｇ、５２％）を無色固体として得た。ＨＰＬＣ（プロトコルＤ）ｍ／ｚ１０２２．８［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝６．９２分。
１，２−ジメチル−Ｄ−プロリル−Ｎ−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−［４−（｛（２Ｒ，４Ｓ）−４−カルボキシ−１−［４−（グリシルアミノ）フェニル］ペンタン−２−イル｝カルバモイル）−１，３−チアゾール−２−イル］−１−［（エチルカルバモイル）オキシ］−４−メチルペンタン−３−イル｝−Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシンアミドＴＦＡ塩（８３、１０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに、１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（３ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１．２ｍＬ）を加えた。ＤＩＰＥＡ（１７μＬ、０．０９９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を閉じられたバイアルにおいて１７時間室温にて撹拌した。反応物を濃縮し、このように得られた残渣を逆相クロマトグラフィー（方法Ｄ）によって精製し、目標化合物＃ＬＰ６（５．８ｍｇ、５２％）を無色固体として得た。ＨＰＬＣ（プロトコルＤ）ｍ／ｚ１０２２．８［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝６．９２分。
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−｛［（２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−イル）カルボニル］アミノ｝−２−メチル−５−｛４−［（ピリジン−２−イルジスルファニル）メチル］フェニル｝ペンタノエート（＃ＬＰ７）の調製：
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（４−ヒドロキシフェニル）−２−メチルペンタノエート（Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２００９、１１、５５６７）（８４、１２ｇ、２７．２ｍｍｏｌ）、１，１，１−トリフルオロ−Ｎ−フェニル−Ｎ−［（トリフルオロメチル）スルホニル］メタンスルホンアミド（３０．２ｇ、８１．６ｍｍｏｌ）、およびＥｔ３Ｎ（９．１ｇ、８９．８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍＬ）中溶液を、室温にて一晩撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、真空中で濃縮した。残渣をシリカカラムクロマトグラフィー（３０／１〜２０／１のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物８５（１４ｇ、８８％）を黄色油状物として得た。
ステップ２：エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（４−エテニルフェニル）−２−メチルペンタノエート（８６）の調製：
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチル−５−（４−｛［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ｝フェニル）ペンタノエート（８５、１４ｇ、２９ｍｍｏｌ）、２−エテニル−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（８．９ｇ、５８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（２．０ｇ、２．９ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（２８．４ｇ、８７ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（２１０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１０５ｍＬ）中溶液を、８０℃にてＮ２下で一晩撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（２００ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機相を真空下で濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（３０／１〜１０／１のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物８６（７．２ｇ、６８％）を油状物として得た。
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチル−５−（４−｛［（トリフルオロメチル）スルホニル］オキシ｝フェニル）ペンタノエート（８５、１４ｇ、２９ｍｍｏｌ）、２−エテニル−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（８．９ｇ、５８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（２．０ｇ、２．９ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（２８．４ｇ、８７ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（２１０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１０５ｍＬ）中溶液を、８０℃にてＮ２下で一晩撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（２００ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機相を真空下で濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（３０／１〜１０／１のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物８６（７．２ｇ、６８％）を油状物として得た。
ステップ３：エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（４−ホルミルフェニル）−２−メチルペンタノエート（８７）の調製：
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（４−エテニルフェニル）−２−メチルペンタノエート（８６、１６ｇ、１６．６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１２０ｍＬ）中溶液を、反応液が青色になるまで−６０℃にてオゾン（Ｏ３）で飽和した酸素で処置した。次いで、青い色の消失が観察されるまで、Ｎ２で反応混合物を泡立たせた。ＰＰｈ３（８．７ｇ、３３．２ｍｍｏｌ）をバッチで加え、このように得られた溶液を室温にて一晩撹拌し、その後、次のステップにおいて直ちに使用した。
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（４−エテニルフェニル）−２−メチルペンタノエート（８６、１６ｇ、１６．６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１２０ｍＬ）中溶液を、反応液が青色になるまで−６０℃にてオゾン（Ｏ３）で飽和した酸素で処置した。次いで、青い色の消失が観察されるまで、Ｎ２で反応混合物を泡立たせた。ＰＰｈ３（８．７ｇ、３３．２ｍｍｏｌ）をバッチで加え、このように得られた溶液を室温にて一晩撹拌し、その後、次のステップにおいて直ちに使用した。
ステップ４：エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−２−メチルペンタノエート（８８）の調製：
ステップ３からのエチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（４−ホルミルフェニル）−２−メチルペンタノエート（８７）の溶液に、メタノール（５０ｍＬ）およびＮａＢＨ４（１６．６ｍｍｏｌ）を−２０℃にて加えた。この温度にて２０分間撹拌した後、反応物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）の添加によってクエンチし、ＤＣＭ（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の３７％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物８８（６ｇ、１００％）を油状物として得た。
ステップ３からのエチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（４−ホルミルフェニル）−２−メチルペンタノエート（８７）の溶液に、メタノール（５０ｍＬ）およびＮａＢＨ４（１６．６ｍｍｏｌ）を−２０℃にて加えた。この温度にて２０分間撹拌した後、反応物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）の添加によってクエンチし、ＤＣＭ（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の３７％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物８８（６ｇ、１００％）を油状物として得た。
ステップ５：エチル（２Ｓ，４Ｒ）−５−［４−（ブロモメチル）フェニル］−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチルペンタノエート（８９）の調製：
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−２−メチルペンタノエート（８８、６．０ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１２０ｍＬ）中溶液に、ＰＰｈ３（１２．８ｇ、４９．２ｍｍｏｌ）、それに続いてＮＢＳ（８．８ｇ、４９．２ｍｍｏｌ）を０℃にて加えた。溶液を室温に温め、０．５時間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（３００ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の１８％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物８９（５．９ｇ、８４％）を無色液体として得た。
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−２−メチルペンタノエート（８８、６．０ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１２０ｍＬ）中溶液に、ＰＰｈ３（１２．８ｇ、４９．２ｍｍｏｌ）、それに続いてＮＢＳ（８．８ｇ、４９．２ｍｍｏｌ）を０℃にて加えた。溶液を室温に温め、０．５時間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（３００ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の１８％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物８９（５．９ｇ、８４％）を無色液体として得た。
ステップ６：エチル（２Ｓ，４Ｒ）−５−｛４−［（アセチルスルファニル）メチル］フェニル｝−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチルペンタノエート（９０）の調製：
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−５−［４−（ブロモメチル）フェニル］−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチルペンタノエート（８９、５．９ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）およびＴＢＡＩ（５１６．６ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６０ｍＬ）中溶液に、チオ酢酸カリウム（１．７ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）を０℃にて加え、懸濁液を室温にて一晩撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（１２０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。有機相をブライン（５０ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の３０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物９０（５．５ｇ、９５％）を黄色油状物として得て、これをＣｈｉｒａｌ ＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ、３００×５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．１０μｍ、移動相、Ａ中の１５％Ｂ（ＩＰＡ中の０．１％水酸化アンモニウム）：ＣＯ２、流量２２０ｍＬ／分、温度：３８℃）によってさらに精製し、９０を＞９５％ｅｅで得た。
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−５−［４−（ブロモメチル）フェニル］−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチルペンタノエート（８９、５．９ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）およびＴＢＡＩ（５１６．６ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６０ｍＬ）中溶液に、チオ酢酸カリウム（１．７ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）を０℃にて加え、懸濁液を室温にて一晩撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（１２０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。有機相をブライン（５０ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の３０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、表題化合物９０（５．５ｇ、９５％）を黄色油状物として得て、これをＣｈｉｒａｌ ＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ、３００×５０ｍｍ、Ｉ．Ｄ．１０μｍ、移動相、Ａ中の１５％Ｂ（ＩＰＡ中の０．１％水酸化アンモニウム）：ＣＯ２、流量２２０ｍＬ／分、温度：３８℃）によってさらに精製し、９０を＞９５％ｅｅで得た。
ステップ７：エチル（２Ｓ，４Ｒ）−５−｛４−［（アセチルスルファニル）メチル］フェニル｝−４−アミノ−２−メチルペンタノエート（９１）の調製：
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−５−｛４−［（アセチルスルファニル）メチル］フェニル｝−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチルペンタノエート（９０、１．６ｇ、３．８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）中溶液に、ジオキサン（１５ｍＬ）中の４．０ＭのＨＣｌを０℃にて滴下で添加した。添加の後、溶液を室温にて３時間撹拌し、反応混合物を真空下で濃縮し、表題化合物９１（１．２ｇ、８６％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400Hz, DMSO-d6): δ 8.30 (s, 3
H), 7.25 (d, 2H), 7.19 (d, 2H), 4.09 (s, 2H), 3.96 (m, 2 H), 3.30 (m, 1H), 3.04
(m, 1H), 2.74 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 1.77 (m, 1H), 1.74 (m, 1H), 1.09 (m, 6H).
m/z 324.0 [M+H]+; 100% ee; カラム: Chiralcel AD-H 150 x 4.6 mm I.D., 5 μm; 移動相: エタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%, 波長: 220 nm; 保持時間 =
5.41分。
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−５−｛４−［（アセチルスルファニル）メチル］フェニル｝−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−メチルペンタノエート（９０、１．６ｇ、３．８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）中溶液に、ジオキサン（１５ｍＬ）中の４．０ＭのＨＣｌを０℃にて滴下で添加した。添加の後、溶液を室温にて３時間撹拌し、反応混合物を真空下で濃縮し、表題化合物９１（１．２ｇ、８６％）を白色固体として得た。
1H NMR
(400Hz, DMSO-d6): δ 8.30 (s, 3
H), 7.25 (d, 2H), 7.19 (d, 2H), 4.09 (s, 2H), 3.96 (m, 2 H), 3.30 (m, 1H), 3.04
(m, 1H), 2.74 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 1.77 (m, 1H), 1.74 (m, 1H), 1.09 (m, 6H).
m/z 324.0 [M+H]+; 100% ee; カラム: Chiralcel AD-H 150 x 4.6 mm I.D., 5 μm; 移動相: エタノール (0.05%ジエチルアミン)、CO2 5%〜40%, 波長: 220 nm; 保持時間 =
5.41分。
ステップ８：エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−［４−（スルファニルメチル）フェニル］ペンタノエート（９２）の調製：
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−５−｛４−［（アセチルスルファニル）メチル］フェニル｝−４−アミノ−２−メチルペンタノエート（９１、３００ｍｇ、０．８３４ｍｍｏｌ）のエタノール（１ｍＬ）中溶液に、ジオキサン（２．０ｍＬ）中の４ＮのＨＣｌを加え、反応物を３５℃にて１８時間加熱した。反応物を真空下で濃縮し、粗表題化合物９２を得て、これを下記のステップにおいて直接使用した。
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−５−｛４−［（アセチルスルファニル）メチル］フェニル｝−４−アミノ−２−メチルペンタノエート（９１、３００ｍｇ、０．８３４ｍｍｏｌ）のエタノール（１ｍＬ）中溶液に、ジオキサン（２．０ｍＬ）中の４ＮのＨＣｌを加え、反応物を３５℃にて１８時間加熱した。反応物を真空下で濃縮し、粗表題化合物９２を得て、これを下記のステップにおいて直接使用した。
ステップ９：エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−｛４−［（ピリジン−２−イルジスルファニル）メチル］フェニル｝ペンタノエート（９３）の合成：
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−［４−（スルファニルメチル）フェニル］ペンタノエート（９２、２６５ｍｇ、０．８３４ｍｍｏｌ）のエタノール（２ｍＬ）中溶液に、２，２’−ジスルファンジイルジピリジン（１８４ｍｇ。０８３４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて２時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、粗残渣を中圧逆相Ｃ１８クロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ中の０％〜８０％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製した。このように得られた油状物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｇ）によってさらに精製し、表題化合物９３（１３０ｍｇ、３１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＢ）：ｍ／ｚ３９１．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝１．０１分。
エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−［４−（スルファニルメチル）フェニル］ペンタノエート（９２、２６５ｍｇ、０．８３４ｍｍｏｌ）のエタノール（２ｍＬ）中溶液に、２，２’−ジスルファンジイルジピリジン（１８４ｍｇ。０８３４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温にて２時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、粗残渣を中圧逆相Ｃ１８クロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ中の０％〜８０％アセトニトリル、各溶媒は０．０２％ＴＦＡを含有）によって精製した。このように得られた油状物を逆相クロマトグラフィー（方法Ｇ）によってさらに精製し、表題化合物９３（１３０ｍｇ、３１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＢ）：ｍ／ｚ３９１．４［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝１．０１分。
ステップ１０：エチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−｛［（２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−イル）カルボニル］アミノ｝−２−メチル−５−｛４−［（ピリジン−２−イルジスルファニル）メチル］フェニル｝ペンタノエート（＃ＬＰ７）の調製：
表題化合物は、化合物＃Ｂ１について上記で記載した方法を使用して、２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（＃Ａ３、０．２７８ｍｍｏｌ）およびエチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−｛４−［（ピリジン−２−イルジスルファニル）メチル］フェニル｝ペンタノエート（９３、０．２５３ｍｍｏｌ）から３０％収率で調製した［（ＨＰＬＣによる精製（方法Ｂ）］。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ９１１．５［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝７．９７分。
表題化合物は、化合物＃Ｂ１について上記で記載した方法を使用して、２−｛（１Ｒ，３Ｒ）−１−（アセチルオキシ）−４−メチル−３−［メチル（Ｎ−｛［（２Ｒ）−１−メチルピペリジン−２−イル］カルボニル｝−Ｌ−イソロイシル）アミノ］ペンチル｝−１，３−チアゾール−４−カルボン酸（＃Ａ３、０．２７８ｍｍｏｌ）およびエチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−｛４−［（ピリジン−２−イルジスルファニル）メチル］フェニル｝ペンタノエート（９３、０．２５３ｍｍｏｌ）から３０％収率で調製した［（ＨＰＬＣによる精製（方法Ｂ）］。ＬＣ−ＭＳ（プロトコルＤ）：ｍ／ｚ９１１．５［Ｍ＋Ｈ］＋；保持時間＝７．９７分。
ＡＤＣの調製、精製および分析のための一般的方法：
方法Ａ：内部ジスルフィドを介したリンカーペイロードとの市販のＨＥＲＣＥＰＴＩＮ抗体のコンジュゲーション
市販のＨＥＲＣＥＰＴＩＮ抗体（約１５ｍｇ／ｍＬ）の溶液を、５０ｍＭのＥＤＴＡを含有する５０ｍＭのリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．０）中で調製した。トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）を、蒸留水中の５ｍＭ溶液として加えた（約２．０モル当量）。このように得られた溶液を３７℃にて１時間加熱した。冷却すると、反応物を適切な容量のＰＢＳおよびジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）で処理した、このように得られた溶液を、約１０％ＤＭＡ（ｖｏｌ／ｖｏｌ）を含有するＰＢＳ中で約５ｍｇ／ｍＬとした。適切なリンカーペイロードをＤＭＡ中の１０ｍＭストック（約７当量）として加え、反応物を静置するか、または室温にて穏やかに撹拌した。７０分後、メーカーの説明書に従ってＧＥ ＰＤ−１０Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラムを使用して反応物をＰＢＳへと緩衝液交換した。このように得られた材料を僅かに濃縮し（限外濾過による）、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム上のサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。モノマー画分を濃縮し、濾過滅菌し、最終ＡＤＣを得た。
方法Ａ：内部ジスルフィドを介したリンカーペイロードとの市販のＨＥＲＣＥＰＴＩＮ抗体のコンジュゲーション
市販のＨＥＲＣＥＰＴＩＮ抗体（約１５ｍｇ／ｍＬ）の溶液を、５０ｍＭのＥＤＴＡを含有する５０ｍＭのリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．０）中で調製した。トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）を、蒸留水中の５ｍＭ溶液として加えた（約２．０モル当量）。このように得られた溶液を３７℃にて１時間加熱した。冷却すると、反応物を適切な容量のＰＢＳおよびジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）で処理した、このように得られた溶液を、約１０％ＤＭＡ（ｖｏｌ／ｖｏｌ）を含有するＰＢＳ中で約５ｍｇ／ｍＬとした。適切なリンカーペイロードをＤＭＡ中の１０ｍＭストック（約７当量）として加え、反応物を静置するか、または室温にて穏やかに撹拌した。７０分後、メーカーの説明書に従ってＧＥ ＰＤ−１０Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラムを使用して反応物をＰＢＳへと緩衝液交換した。このように得られた材料を僅かに濃縮し（限外濾過による）、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム上のサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。モノマー画分を濃縮し、濾過滅菌し、最終ＡＤＣを得た。
方法Ｂ：操作されたシステイン残基を含有するトラスツズマブ抗体へのリンカーペイロードの部位特異的コンジュゲーション
操作されたシステイン残基（Ｋａｂａｔのナンバリング、ＷＯ２０１３０９３８０９を参照されたい）を含有するトラスツズマブの溶液は、５０ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ７．４中で調製した。ＰＢＳ、ＥＤＴＡ（０．５Ｍのストック）、およびＴＣＥＰ（０．５Ｍのストック）を、最終タンパク質濃度が約１０ｍｇ／ｍＬであり、最終ＥＤＴＡ濃度が約２０ｍＭであり、最終ＴＣＥＰ濃度が概ね約６．６ｍＭ（１００モル当量）であるように加えた。反応物を室温にて２〜４８時間静置し、次いで、メーカーの説明書に従ってＧＥ ＰＤ−１０Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラムを使用してＰＢＳへと緩衝液交換した。代替方法、例えば、ダイアフィルトレーションまたは透析はまた、特定の状況において有用である。このように得られた溶液を、概ね５０当量のデヒドロアスコルベート（１：１のＥｔＯＨ／水中の５０ｍＭのストック）で処理した。抗体を４℃にて一晩静置し、それに続いて、メーカーの説明書に従ってＧＥ ＰＤ−１０Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラムを使用してＰＢＳへと緩衝液交換した。再び、代替方法、例えば、ダイアフィルトレーションまたは透析はまた、特定の状況において有用である。
操作されたシステイン残基（Ｋａｂａｔのナンバリング、ＷＯ２０１３０９３８０９を参照されたい）を含有するトラスツズマブの溶液は、５０ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ７．４中で調製した。ＰＢＳ、ＥＤＴＡ（０．５Ｍのストック）、およびＴＣＥＰ（０．５Ｍのストック）を、最終タンパク質濃度が約１０ｍｇ／ｍＬであり、最終ＥＤＴＡ濃度が約２０ｍＭであり、最終ＴＣＥＰ濃度が概ね約６．６ｍＭ（１００モル当量）であるように加えた。反応物を室温にて２〜４８時間静置し、次いで、メーカーの説明書に従ってＧＥ ＰＤ−１０Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラムを使用してＰＢＳへと緩衝液交換した。代替方法、例えば、ダイアフィルトレーションまたは透析はまた、特定の状況において有用である。このように得られた溶液を、概ね５０当量のデヒドロアスコルベート（１：１のＥｔＯＨ／水中の５０ｍＭのストック）で処理した。抗体を４℃にて一晩静置し、それに続いて、メーカーの説明書に従ってＧＥ ＰＤ−１０Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラムを使用してＰＢＳへと緩衝液交換した。再び、代替方法、例えば、ダイアフィルトレーションまたは透析はまた、特定の状況において有用である。
このように調製した抗体は、１０％ＤＭＡ（ｖｏｌ／ｖｏｌ）を含有するＰＢＳ中で約２．５ｍｇ／ｍＬに希釈し、ＤＭＡ中の１０ｍＭのストック溶液として適切なリンカーペイロード（１０モル当量）で処理した。室温にて２時間後、混合物をＰＢＳへと緩衝液交換し（上記による）、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム上のサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。モノマー画分を濃縮し、濾過滅菌し、最終ＡＤＣを得た。
方法Ｃ：反応性グルタミン残基を担持する抗体への酵素が媒介するコンジュゲーション：
トランスグルタミン酵素反応性グルタミン残基を担持する治療用抗体を、ダルベッコリン酸緩衝溶液（ＤＰＢＳ、Ｌｏｎｚａ）中に透析する。トランスグルタミナーゼによって媒介されるコンジュゲーションは、２５ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ８．０）中の０．５〜５．０ｍｇ／ｍＬのトランスグルタミナーゼ反応性グルタミン含有抗体、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ペイロード（ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中５〜１０ｍＭ）を担持する５．０〜２０．０倍過剰なモル濃度のアミノアルキルリンカーを伴う０．３１ｍＭの還元型グルタチオン、および２％ｗ／ｖのトランスグルタミナーゼ（Ａｊｉｎｏｍｏｔ Ａｃｔｉｖａ ＴＩ）を混合することによって行う。次いで、反応物を室温にて４〜１６時間インキュベートする。それに続いて、反応混合物は、メーカーの説明書に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用してＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）へと緩衝液交換する。粗材料を、ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムおよびＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶離液を伴うＧＥ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシステムを使用してサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製する。次いで、ＡＫＴＡからのプールしたモノマー画分を必要に応じて濃縮する。ＡＤＣを純度についてサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、および液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析法（ＬＣ−ＥＳＩ ＭＳ）によってさらに特性決定し、薬物抗体比（充填）を計算した。タンパク質濃度は、ＵＶ分光光度計によって決定する。
トランスグルタミン酵素反応性グルタミン残基を担持する治療用抗体を、ダルベッコリン酸緩衝溶液（ＤＰＢＳ、Ｌｏｎｚａ）中に透析する。トランスグルタミナーゼによって媒介されるコンジュゲーションは、２５ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ８．０）中の０．５〜５．０ｍｇ／ｍＬのトランスグルタミナーゼ反応性グルタミン含有抗体、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ペイロード（ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中５〜１０ｍＭ）を担持する５．０〜２０．０倍過剰なモル濃度のアミノアルキルリンカーを伴う０．３１ｍＭの還元型グルタチオン、および２％ｗ／ｖのトランスグルタミナーゼ（Ａｊｉｎｏｍｏｔ Ａｃｔｉｖａ ＴＩ）を混合することによって行う。次いで、反応物を室温にて４〜１６時間インキュベートする。それに続いて、反応混合物は、メーカーの説明書に従ってＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５Ｍ緩衝液交換カラムを使用してＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）へと緩衝液交換する。粗材料を、ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムおよびＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶離液を伴うＧＥ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒシステムを使用してサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製する。次いで、ＡＫＴＡからのプールしたモノマー画分を必要に応じて濃縮する。ＡＤＣを純度についてサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、および液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析法（ＬＣ−ＥＳＩ ＭＳ）によってさらに特性決定し、薬物抗体比（充填）を計算した。タンパク質濃度は、ＵＶ分光光度計によって決定する。
コンジュゲーション例についての一般的分析方法：
ＬＣ−ＭＳ（方法ＡＤＣ１）：カラム＝Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨ３００−Ｃ４、２．１×１００ｍｍ（Ｐ／Ｎ＝１８６００４４９６）；機器＝ＳＱＤ２質量スペクトル検出器を有するＡｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ；流量＝０．７ｍＬ／分；温度＝８０℃；緩衝液Ａ＝水＋０．１％ギ酸；緩衝液Ｂ＝アセトニトリル＋０．１％ギ酸。勾配は２分に亘り３％Ｂから９５％Ｂで実行し、９５％Ｂで０．７５分間保持し、次いで、３％Ｂで再平衡化する。注射の直前に、試料はＴＣＥＰまたはＤＴＴで還元する。溶出液をＬＣＭＳ（４００〜２０００ダルトン）によってモニターし、ＭａｘＥｎｔ１を使用してタンパク質ピークを解析する。ＤＡＲは、従前に記載してきたように重量平均充填として報告する。
ＳＥＣ（方法ＡＤＣ２）：カラム：Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００（５／１５０ＧＬ）；移動相：２％アセトニトリルを含有するリン酸緩衝溶液、ｐＨ７．４；流量＝０．２５ｍＬ／分；温度＝周囲；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＨＰＬＣ。
ＨＩＣ（方法ＡＤＣ３）：カラム：ＴＳＫＧｅｌ Ｂｕｔｙｌ ＮＰＲ、４．６ｍｍ×３．５ｃｍ（Ｐ／Ｎ＝Ｓ０５５７−８３５）；緩衝液Ａ＝１０ｍＭのホスフェート（ｐＨ７）を含有する１．５Ｍの硫酸アンモニウム；緩衝液Ｂ＝１０ｍＭのホスフェート（ｐＨ７）＋２０％イソプロピルアルコール；流量＝０．８ｍＬ／分；温度＝周囲；勾配＝１２分に亘り０％Ｂ〜１００％Ｂ、１００％Ｂで２分間保持、次いで、１００％Ａで再平衡化する；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＨＰＬＣ。
ＬＣ−ＭＳ（方法ＡＤＣ１）：カラム＝Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨ３００−Ｃ４、２．１×１００ｍｍ（Ｐ／Ｎ＝１８６００４４９６）；機器＝ＳＱＤ２質量スペクトル検出器を有するＡｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ；流量＝０．７ｍＬ／分；温度＝８０℃；緩衝液Ａ＝水＋０．１％ギ酸；緩衝液Ｂ＝アセトニトリル＋０．１％ギ酸。勾配は２分に亘り３％Ｂから９５％Ｂで実行し、９５％Ｂで０．７５分間保持し、次いで、３％Ｂで再平衡化する。注射の直前に、試料はＴＣＥＰまたはＤＴＴで還元する。溶出液をＬＣＭＳ（４００〜２０００ダルトン）によってモニターし、ＭａｘＥｎｔ１を使用してタンパク質ピークを解析する。ＤＡＲは、従前に記載してきたように重量平均充填として報告する。
ＳＥＣ（方法ＡＤＣ２）：カラム：Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００（５／１５０ＧＬ）；移動相：２％アセトニトリルを含有するリン酸緩衝溶液、ｐＨ７．４；流量＝０．２５ｍＬ／分；温度＝周囲；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＨＰＬＣ。
ＨＩＣ（方法ＡＤＣ３）：カラム：ＴＳＫＧｅｌ Ｂｕｔｙｌ ＮＰＲ、４．６ｍｍ×３．５ｃｍ（Ｐ／Ｎ＝Ｓ０５５７−８３５）；緩衝液Ａ＝１０ｍＭのホスフェート（ｐＨ７）を含有する１．５Ｍの硫酸アンモニウム；緩衝液Ｂ＝１０ｍＭのホスフェート（ｐＨ７）＋２０％イソプロピルアルコール；流量＝０．８ｍＬ／分；温度＝周囲；勾配＝１２分に亘り０％Ｂ〜１００％Ｂ、１００％Ｂで２分間保持、次いで、１００％Ａで再平衡化する；機器：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＨＰＬＣ。
ＢＯＤＩＰＹ標識されたビンカペプチドプローブ｛Ｎ−（５−｛２−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル−カッパＮ）メチリデン］−２Ｈ−ピロール−５−イル−カッパＮ｝ペンタノイル）−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−｛（２Ｓ）−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−３−｛［（１Ｓ）−１−カルボキシ−２−フェニルエチル］アミノ｝−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル］ピロリジン−１−イル｝−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル］−Ｎ−メチル−Ｌ−バリンアミダト｝（ジフルオロ）ホウ素（＃Ｂ８１）の合成：
チューブリンペプチド結合部位競合アッセイ
チューブリン結合の効力は、蛍光偏光（ＦＰ）競合アッセイを使用してペイロードまたはシステインでキャップしたリンカーペイロードについて測定した。チューブリン／ＲＢ３−スタスミン様ドメイン（ＲＢ３−ＳＬＤ−ｔｄｍ）複合体へのＢＯＤＩＰＹ標識されたビンカペプチドプローブ（＃Ｂ３１）の結合は、高いＦＰシグナルを生じさせ、これは、ＦＰプローブと競合する試験化合物と混合するとき減少させることができる。ＦＰアッセイにおける試薬についての添加の順序は、ＦＰプローブを様々な濃度の試験化合物と事前混合し、その後、これらをチューブリン／ＲＢ３−ＳＬＤ−ｄｍ複合体と混合するように設計した。プローブ、チューブリンおよびＲＢ３−ＳＬＤ−ｄｍの最終アッセイ濃度は、それぞれ、３ｎＭ、６ｎＭ、および１００ｎＭであった。各試験化合物についてのＩＣ５０は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン５ソフトウェア（Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を使用して用量依存的なＦＰシグナルの変化をフィットさせることによって得て、一方、Ｋｉは、従前に記載された等式を使用してＩＣ５０から変換する（Ｎｉｋｏｌｏｖｓｋａ−Ｃｏｌｅｓｋａら、２００４）。ＦＰシグナルは、ウェル毎に１５μＬの溶液を伴うＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ−３８４Ｆ Ｐｌｕｓ、ブラック（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ、カタログ番号６００８２６０）を使用してＩｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００（Ｔｅｃａｎ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）で測定した。Ｂｅｃｋｍａｎ Ｂｉｏｍｅｋ ＸＦ（Ｂｒｅａ、ＣＡ）を使用して試料の希釈および混合を行った。ブタチューブリンは、Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ，Ｉｎｃ．（Ｄｅｎｖｅｒ、ＣＯ、カタログ番号Ｔ２４０）から購入し、ＲＢ３−ＳＬＤは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）において発現させ、Ｑ、次いで、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５カラム上で精製した。各化合物についてのＦＰアッセイ試験は、ＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ−３８４マイクロプレート上で、２．５×試験化合物（７．８μＭの最高濃度からの２．５×段階希釈、全部で１１の濃度）、および８０ｍＭのＰＩＰＥＳ、ｐＨ７．０中の７．５ｎＭのＦＰプローブ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ２０、２ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡおよび３％ＤＭＳＯを含有する６μＬの溶液１と、５ｎＭのブタチューブリンおよび１６７ｎＭのＲＢ３−ＳＬＤ−ｄｍペプチド（ＭＡＤＭＥＶＩＥＬＮＫＡＴＳＧＱＳＷＥＶＩ−ＬＫＰＰＳＦＤＧＶＰＥＦＮＡＳＬＰＲＲＲＤＰＳＬＥＥＩＱＫＫＬＥＡＡＥＥＲＲＫＹＱＥＡＥＬＬＫＨＬＡＥＫＲＥＨＥＲＥＶＩＱＫＡＩＥＥＮＮＮＦＩＫＭＡＫＥＫＬＡＱＫＭＥＳＮＫＥＮＲＥＡＨＬＡＡＭＬＥＲＬＱＥＫＤＫＨＡＥＥＶＲＫＮＫＥＬＫＥＥＡＳＲ）を含有する９μＬの溶液２とを混合することによって２連で行った。ＦＰシグナルは２２℃での５時間のインキュベーションの後に読み取り、用量応答曲線のためにフィットさせ、ＩＣ５０を得た。
チューブリン結合の効力は、蛍光偏光（ＦＰ）競合アッセイを使用してペイロードまたはシステインでキャップしたリンカーペイロードについて測定した。チューブリン／ＲＢ３−スタスミン様ドメイン（ＲＢ３−ＳＬＤ−ｔｄｍ）複合体へのＢＯＤＩＰＹ標識されたビンカペプチドプローブ（＃Ｂ３１）の結合は、高いＦＰシグナルを生じさせ、これは、ＦＰプローブと競合する試験化合物と混合するとき減少させることができる。ＦＰアッセイにおける試薬についての添加の順序は、ＦＰプローブを様々な濃度の試験化合物と事前混合し、その後、これらをチューブリン／ＲＢ３−ＳＬＤ−ｄｍ複合体と混合するように設計した。プローブ、チューブリンおよびＲＢ３−ＳＬＤ−ｄｍの最終アッセイ濃度は、それぞれ、３ｎＭ、６ｎＭ、および１００ｎＭであった。各試験化合物についてのＩＣ５０は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン５ソフトウェア（Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を使用して用量依存的なＦＰシグナルの変化をフィットさせることによって得て、一方、Ｋｉは、従前に記載された等式を使用してＩＣ５０から変換する（Ｎｉｋｏｌｏｖｓｋａ−Ｃｏｌｅｓｋａら、２００４）。ＦＰシグナルは、ウェル毎に１５μＬの溶液を伴うＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ−３８４Ｆ Ｐｌｕｓ、ブラック（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ、カタログ番号６００８２６０）を使用してＩｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００（Ｔｅｃａｎ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）で測定した。Ｂｅｃｋｍａｎ Ｂｉｏｍｅｋ ＸＦ（Ｂｒｅａ、ＣＡ）を使用して試料の希釈および混合を行った。ブタチューブリンは、Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ，Ｉｎｃ．（Ｄｅｎｖｅｒ、ＣＯ、カタログ番号Ｔ２４０）から購入し、ＲＢ３−ＳＬＤは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）において発現させ、Ｑ、次いで、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５カラム上で精製した。各化合物についてのＦＰアッセイ試験は、ＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ−３８４マイクロプレート上で、２．５×試験化合物（７．８μＭの最高濃度からの２．５×段階希釈、全部で１１の濃度）、および８０ｍＭのＰＩＰＥＳ、ｐＨ７．０中の７．５ｎＭのＦＰプローブ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ２０、２ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡおよび３％ＤＭＳＯを含有する６μＬの溶液１と、５ｎＭのブタチューブリンおよび１６７ｎＭのＲＢ３−ＳＬＤ−ｄｍペプチド（ＭＡＤＭＥＶＩＥＬＮＫＡＴＳＧＱＳＷＥＶＩ−ＬＫＰＰＳＦＤＧＶＰＥＦＮＡＳＬＰＲＲＲＤＰＳＬＥＥＩＱＫＫＬＥＡＡＥＥＲＲＫＹＱＥＡＥＬＬＫＨＬＡＥＫＲＥＨＥＲＥＶＩＱＫＡＩＥＥＮＮＮＦＩＫＭＡＫＥＫＬＡＱＫＭＥＳＮＫＥＮＲＥＡＨＬＡＡＭＬＥＲＬＱＥＫＤＫＨＡＥＥＶＲＫＮＫＥＬＫＥＥＡＳＲ）を含有する９μＬの溶液２とを混合することによって２連で行った。ＦＰシグナルは２２℃での５時間のインキュベーションの後に読み取り、用量応答曲線のためにフィットさせ、ＩＣ５０を得た。
Ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞アッセイ手順
標的を発現している（ＢＴ４７４（乳がん）、Ｎ８７（胃がん）、ＨＣＣ１９５４（乳がん）、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１−ＤＹＴ２（乳がん））、または発現していない（ＨＴ２９）細胞を、処理の前に９６ウェル細胞培養プレートに２４時間添加した。細胞を、３倍段階希釈した抗体薬物コンジュゲートまたは遊離化合物（すなわち、抗体は、薬物にコンジュゲートしていない）によって１０の濃度にて２連で処置した。細胞生存率を、処置の９６時間後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖ＭＴＳアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）によって決定した。相対的細胞生存率を、未処置対照の百分率として決定した。ＩＣ５０値を、４パラメーターロジスティックモデル＃２０３を使用してＸＬｆｉｔ ｖ４．２（ＩＤＢＳ、Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ、Ｓｕｒｒｙ、ＵＫ）で計算した。結果を表１〜表３において示す。
標的を発現している（ＢＴ４７４（乳がん）、Ｎ８７（胃がん）、ＨＣＣ１９５４（乳がん）、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１−ＤＹＴ２（乳がん））、または発現していない（ＨＴ２９）細胞を、処理の前に９６ウェル細胞培養プレートに２４時間添加した。細胞を、３倍段階希釈した抗体薬物コンジュゲートまたは遊離化合物（すなわち、抗体は、薬物にコンジュゲートしていない）によって１０の濃度にて２連で処置した。細胞生存率を、処置の９６時間後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖ＭＴＳアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）によって決定した。相対的細胞生存率を、未処置対照の百分率として決定した。ＩＣ５０値を、４パラメーターロジスティックモデル＃２０３を使用してＸＬｆｉｔ ｖ４．２（ＩＤＢＳ、Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ、Ｓｕｒｒｙ、ＵＫ）で計算した。結果を表１〜表３において示す。
インビボでのＮ８７腫瘍異種移植片モデル：
Ｎ８７細胞系を使用して、標的を発現している異種移植片モデルによって抗体薬物コンジュゲートのインビボでの有効性研究を行った。有効性研究のために、５０％ｍａｔｒｉｇｅｌ中の７５０万個の腫瘍細胞を、腫瘍サイズが２５０〜３５０ｍｍに達するまで６〜８週齢のヌードマウスの皮下に埋め込む。尾静脈へのボーラス注射によって投薬を行う。処置に対する腫瘍応答によって、動物に４日毎に４回処置する１〜１０ｍｇ／ｋｇの抗体薬物コンジュゲートを注射する。全ての実験動物は、体重変化について毎週モニターする。腫瘍体積は、最初の５０日間週２回、およびその後週１回、カリパス装置によって測定し、下記の式で計算する。腫瘍体積５＝（長さ×幅）／２。これらの腫瘍体積が２５００ｍｍに達する前に、動物を人道的に屠殺する。処置の第１週の後に、腫瘍サイズは減少することが観察される。処置を中止した後で、動物を腫瘍の再成長について連続的にモニターし得る。Ｎ８７マウス異種移植片インビボスクリーニングモデルにおけるＡＤＣ１、３および１０の試験の結果を図１に示す。
Ｎ８７細胞系を使用して、標的を発現している異種移植片モデルによって抗体薬物コンジュゲートのインビボでの有効性研究を行った。有効性研究のために、５０％ｍａｔｒｉｇｅｌ中の７５０万個の腫瘍細胞を、腫瘍サイズが２５０〜３５０ｍｍに達するまで６〜８週齢のヌードマウスの皮下に埋め込む。尾静脈へのボーラス注射によって投薬を行う。処置に対する腫瘍応答によって、動物に４日毎に４回処置する１〜１０ｍｇ／ｋｇの抗体薬物コンジュゲートを注射する。全ての実験動物は、体重変化について毎週モニターする。腫瘍体積は、最初の５０日間週２回、およびその後週１回、カリパス装置によって測定し、下記の式で計算する。腫瘍体積５＝（長さ×幅）／２。これらの腫瘍体積が２５００ｍｍに達する前に、動物を人道的に屠殺する。処置の第１週の後に、腫瘍サイズは減少することが観察される。処置を中止した後で、動物を腫瘍の再成長について連続的にモニターし得る。Ｎ８７マウス異種移植片インビボスクリーニングモデルにおけるＡＤＣ１、３および１０の試験の結果を図１に示す。
ＡＤＣのインビトロでの血漿安定性アッセイ
ＡＤＣ試料（約１．５ｍｇ／ｍＬ）をマウス血漿（Ｌａｍｐｉｒｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｉｐｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＰＡ）中に希釈し、１０％ＡＤＣ、９０％血漿の最終溶液を得た。３つの時点を分析し、これらのＤＡＲ（Ｔ−０、Ｔ−２４時間およびＴ−４８時間）を決定した。各時点において、ＡＤＣを濃縮する免疫沈降プロセスを行った。手短に言えば、それぞれの一定分量を２０％ＭＰＥＲ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）に１：１で希釈し、等しい量のビオチン化マウス抗ヒトＦｃおよびヤギ抗ヒトカッパ抗体（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）を加えた。試料を４℃にて２時間インキュベートし、それに続いて、ストレプトアビジンＤｙｎａｂｅａｄｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を加えた。試料は、１０％ＭＰＥＲ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０からなる４回の洗浄ステップ、ならびにＰＢＳによる２回で、ＫｉｎｇＦｉｓｈｅｒ機器上にてプロセスした。ＡＤＣは、０．１５％ギ酸でビーズから溶出させた。試料は２ＭのＴｒｉｓ ｐＨ８．５で７．８にｐＨ調節し、これらのＮ−連結グリカンをＰＮＧａｓｅＦ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）で取り出した。試料はＴＣＥＰで還元し、９９３（親）に対する９５１（脱アセチル化）の質量シフトの高さによって、アセテート加水分解ＡＤＣ％についてＬＣ−ＭＳによって分析した。結果を図２に示す。（ＤＡＲ計算のために、アセチル化生成物（質量シフト＝９９３）を含有する重鎖または軽鎖は、「充填」としてカウントし、一方、脱アセチル化生成物（質量シフト＝９５１）を含有するものは、「非充填」としてカウントした）。ＡＤＣ＃１、ＡＤＣ＃２（３９２種の変異体）、およびＡＤＣ＃３（３３４種の変異体）を比較する結果を図２に示す。カルバメート切断はＡＤＣ＃４について観察されなかった。これらの結果は、ＡＤＣ＃１の不安定なエステルを、コンジュゲーションの部位の賢明な選択によって、およびカルバメートによるエステルの置換えによって安定化することができることを示す。
ＡＤＣ試料（約１．５ｍｇ／ｍＬ）をマウス血漿（Ｌａｍｐｉｒｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｉｐｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＰＡ）中に希釈し、１０％ＡＤＣ、９０％血漿の最終溶液を得た。３つの時点を分析し、これらのＤＡＲ（Ｔ−０、Ｔ−２４時間およびＴ−４８時間）を決定した。各時点において、ＡＤＣを濃縮する免疫沈降プロセスを行った。手短に言えば、それぞれの一定分量を２０％ＭＰＥＲ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）に１：１で希釈し、等しい量のビオチン化マウス抗ヒトＦｃおよびヤギ抗ヒトカッパ抗体（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）を加えた。試料を４℃にて２時間インキュベートし、それに続いて、ストレプトアビジンＤｙｎａｂｅａｄｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を加えた。試料は、１０％ＭＰＥＲ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０からなる４回の洗浄ステップ、ならびにＰＢＳによる２回で、ＫｉｎｇＦｉｓｈｅｒ機器上にてプロセスした。ＡＤＣは、０．１５％ギ酸でビーズから溶出させた。試料は２ＭのＴｒｉｓ ｐＨ８．５で７．８にｐＨ調節し、これらのＮ−連結グリカンをＰＮＧａｓｅＦ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）で取り出した。試料はＴＣＥＰで還元し、９９３（親）に対する９５１（脱アセチル化）の質量シフトの高さによって、アセテート加水分解ＡＤＣ％についてＬＣ−ＭＳによって分析した。結果を図２に示す。（ＤＡＲ計算のために、アセチル化生成物（質量シフト＝９９３）を含有する重鎖または軽鎖は、「充填」としてカウントし、一方、脱アセチル化生成物（質量シフト＝９５１）を含有するものは、「非充填」としてカウントした）。ＡＤＣ＃１、ＡＤＣ＃２（３９２種の変異体）、およびＡＤＣ＃３（３３４種の変異体）を比較する結果を図２に示す。カルバメート切断はＡＤＣ＃４について観察されなかった。これらの結果は、ＡＤＣ＃１の不安定なエステルを、コンジュゲーションの部位の賢明な選択によって、およびカルバメートによるエステルの置換えによって安定化することができることを示す。
ＡＤＣのインビボでの安定性
血液試料は、従前に記述したＮ８７異種移植片研究からの選択した腫瘍担持マウスからのＡＤＣの最終投薬の７２時間後に得た。（インビボでのＮ８７腫瘍異種移植片モデルを参照されたい）。試料は、３ｍｐｋの投薬群から採取した。このように得られたＡＤＣ試料は、ＰＮＧａｓｅ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂ）で３７℃にて１時間処理することによって脱グリコシル化した。インキュベーションに続いて、キャプチャー抗体（１．０ｍｇ／ｍＬでのビオチン化ヤギ抗ヒトＦｃ、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を加え、混合物を３７℃にて１時間加熱し、それに続いて室温にて次の１時間穏やかに振盪した。Ｄｙｎａｂｅａｄ ＭｙＯｎｅストレプトアビジンＴ１ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を試料に加え、穏やかに振盪しながら室温にて少なくとも３０分間インキュベートした。次いで、試料プレートを、２００μＬのＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、２００μＬのＰＢＳ、およびＨＰＬＣグレードの水で洗浄した。結合したＡＤＣを５５μＬの２％のギ酸（ｖ／ｖ）で溶出させた。５０マイクロリットルの各試料、それに続いてさらなる５μＬのＴＣＥＰ（２００ｍＭ）を、新規なプレート中に移した。
血液試料は、従前に記述したＮ８７異種移植片研究からの選択した腫瘍担持マウスからのＡＤＣの最終投薬の７２時間後に得た。（インビボでのＮ８７腫瘍異種移植片モデルを参照されたい）。試料は、３ｍｐｋの投薬群から採取した。このように得られたＡＤＣ試料は、ＰＮＧａｓｅ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂ）で３７℃にて１時間処理することによって脱グリコシル化した。インキュベーションに続いて、キャプチャー抗体（１．０ｍｇ／ｍＬでのビオチン化ヤギ抗ヒトＦｃ、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を加え、混合物を３７℃にて１時間加熱し、それに続いて室温にて次の１時間穏やかに振盪した。Ｄｙｎａｂｅａｄ ＭｙＯｎｅストレプトアビジンＴ１ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を試料に加え、穏やかに振盪しながら室温にて少なくとも３０分間インキュベートした。次いで、試料プレートを、２００μＬのＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、２００μＬのＰＢＳ、およびＨＰＬＣグレードの水で洗浄した。結合したＡＤＣを５５μＬの２％のギ酸（ｖ／ｖ）で溶出させた。５０マイクロリットルの各試料、それに続いてさらなる５μＬのＴＣＥＰ（２００ｍＭ）を、新規なプレート中に移した。
インタクトタンパク質分析は、捕捉ソフトウェアとしてＭａｓｓｌｙｎｘ ｖ４．１を使用して、Ｎａｎｏ Ａｃｑｕｉｔｙ（Ｗａｔｅｒｓ）およびＢＥＨ３００Ｃ４、１．７μｍ、０．３×１００ｍｍカラム（Ｗａｔｅｒｓ）とカップリングしたＸｅｖｏ Ｇ２ ＱＴｏｆ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ、Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ、ＵＫ）で行った。カラム温度は８５℃に設定した。移動相Ａは、水中の０．１％ＴＦＡ（ＴＦＡ）からなった。移動相Ｂは、アセトニトリル：１−プロパノール（１：１、ｖ／ｖ）中の０．１％ＴＦＡからなった。クロマトグラフィー分離は、７分に亘る５〜９０％の移動相Ｂの直線勾配を使用して１８μＬ／分の流量で達成した。デコンボリューションを含めたデータ分析は、Ｂｉｏｐｈａｒｍａｌｙｎｘ ｖ１．３３（Ｗａｔｅｒｓ）を使用して行った。結果を図３に示す。
Claims (29)
- 式（Ｉ）の化合物：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、水素、ＯＲ７、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ、およびＮ（Ｒ７）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＮまたはＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
ｄは、１〜５であり、
ｑは、１〜３であり、
各Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＮＲＲ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、および−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から独立に選択され、各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
ただし、Ｒ６が、−ＯＣ（Ｏ）Ｒまたは−ＯＲであり、Ｗが、
- 式（ＩＩ）の化合物：
Ｌ−Ｐ
（ＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ６を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（＊）Ｒ７、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−Ｎ（＊）ＳＯ２Ｒおよび−Ｎ（＊）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、＊は、Ｌへの結合であり、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＮまたはＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
ｄは、１〜５であり、
ｑは、１〜３であり、
各Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＮＲＲ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、および−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から独立に選択され、各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｌ１は、−ハロゲン、−ＮＲ２、
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−ＣＲ２ＮＲ−であるか、またはＬ３は、存在しない］。 - 式（ＩＩ）の化合物：
Ｌ−Ｐ
（ＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ１１を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、水素、ＯＲ７、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ、およびＮ（Ｒ７）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＮまたはＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
Ｒ１１は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮ（Ｒ）−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮＲ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ（Ｒ）Ｃ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）Ｏ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（＊）ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２−Ｎ（＊）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（＊）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９（式中、＊は、Ｌへの結合である）から選択されるか、またはＲ１１が、Ｎに直接に結合している場合、Ｒ１１は、結合であり、
各Ｒ１２は、水素、−ＯＨ、−ＣＮおよびＣＦ３から独立に選択され、
各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｌ１は、−ハロゲン、−ＮＲ２、
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−ＣＯ−、−ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−および−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲ−の１つもしくは複数から選択されるか、またはＬ３は、存在せず、
ただし、Ｒ５が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ６が、−ＯＣ（Ｏ）Ｒであり、Ｗが、
- 式（ＩＩ）の化合物：
Ｌ−Ｐ
（ＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｘを介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、水素、ＯＲ７、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ、およびＮ（Ｒ７）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
ｄは、１〜５であり、
ｑは、１〜３であり、
各Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＮＲＲ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、および−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から独立に選択され、各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）ＳＯ２Ｒ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）ＣＯＮＲ８Ｒ９、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキルＮ（＊）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から選択され、＊は、Ｌへの結合であり、
Ｌ１は、−ハロゲン、−ＮＲ２、
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−および−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−および−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−の１つもしくは複数から選択されるか、またはＬ３は、存在しない］。 - 式（ＩＩＩ）の化合物：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ６を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（＊）Ｒ７、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−Ｎ（＊）ＳＯ２Ｒおよび−Ｎ（＊）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、＊は、Ｌへの結合であり、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＮまたはＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
ｄは、１〜５であり、
ｑは、１〜３であり、
各Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＮＲＲ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、および−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から独立に選択され、各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｌ１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ２−（ＡＢへの結合）および
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−ＣＲ２ＮＲ−であるか、またはＬ３は、存在せず、
ｂは、１〜２０である］。 - 式（ＩＩＩ）の化合物：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｒ１１を介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、水素、ＯＲ７、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ、およびＮ（Ｒ７）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＮまたはＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
Ｒ１１は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮ（Ｒ）−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮＲ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ（Ｒ）Ｃ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）Ｏ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳ−、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（＊）ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２−Ｎ（＊）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（＊）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９（式中、＊は、Ｌへの結合である）から選択されるか、またはＲ１１が、Ｎに直接に結合している場合、Ｒ１１は、結合であり、
各Ｒ１２は、水素、−ＯＨ、−ＣＮおよびＣＦ３から独立に選択され、
各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ６カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ６〜Ｃ１４アリール、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｘは、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）ＯＨ、−ＯＮＲ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＲ２、−ＣＯＮＲＮＲＲ、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−ＳＯ２−ＮＲ８Ｒ９、−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、および−Ｓ（Ｏ）（ＯＲ）２から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒは、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ１〜Ｃ８ハロアルキルであり、
Ｌ１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ２−（ＡＢへの結合）および
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−ＣＯ−、−ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−および−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲ−の１つもしくは複数から選択されるか、またはＬ３は、存在せず、
ｂは、１〜２０である。
ただし、Ｒ５が、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ６が、−ＯＣ（Ｏ）Ｒであり、Ｗが、
- 式（ＩＩＩ）の化合物：
（ＡＢ）−（Ｌ−Ｐ）ｂ
（ＩＩＩ）
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｌは、リンカー部分Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３であり、Ｌは、Ｘを介してＰに結合しており、
Ｐは、式：
Ｗは、
ｍは、１〜３であり、
ｎは、１〜２であり、
ｐは、１〜４であり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ１〜Ｃ８ハロアルキルから選択され、
各Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、ハロゲンおよびアラルキルから独立に選択されるか、またはＲ３ＡおよびＲ３Ｂは一緒になって、Ｃ２〜Ｃ８アルキレンおよびＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキレンから選択され、
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキル、アラルキルから選択され、Ｒ５は、−（Ｃ（Ｒ）２）ｍＮＲ１Ｒ２で置換されていてもよく、
Ｒ６は、水素、ＯＲ７、ＯＣ（Ｏ）Ｒ７、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ、およびＮ（Ｒ７）ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８から選択され、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクリル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアラルキルおよびアラルキルからそれぞれ独立に選択されるか、またはＲ７およびＲ８は、これらが接合している窒素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ１０ヘテロシクリルを形成し、かつＲ７およびＲ８の１つもしくは複数は、ハロゲン、ＮＲ２、ＣＮ、ＯＨおよびＯＣ１〜Ｃ８アルキルから選択される１個もしくは複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｚは、ＣＲ２であり、
Ｙは、アリール、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクリルおよびＣ５〜Ｃ１４ヘテロアリールから選択され、Ｙは、１個もしくは複数のＲ１１で置換されていてもよいか、または
Ｙは、
ｄは、１〜５であり、
ｑは、１〜３であり、
各Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＯＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＮＲＲ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｃ（Ｏ）Ｒ、（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−ＣＯＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）ＮＲＮＲＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＨ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔ−Ｎ（Ｒ）−ＳＯ２Ｒ、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、および−（Ｃ（Ｒ）２）ｔＮ（Ｒ）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から独立に選択され、各ｔは、独立に、０〜３であり、
Ｘは、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）ＳＯ２Ｒ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ（＊）ＣＯＮＲ８Ｒ９、および−Ｃ１〜Ｃ６アルキルＮ（＊）ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９から選択され、＊は、Ｌへの結合であり、
Ｌ１は、ＡＢへの結合、−ＮＲ２−（ＡＢへの結合）および
Ｌ２は、Ｌ２Ａ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２ＣまたはＬ２Ｃ−Ｌ２Ｂ−Ｌ２Ａであり、
Ｌ２Ａは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−ＮＲＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）１〜６−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、−Ｎ＝ＣＲ−フェニル−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｓ−および−Ｓ−から選択される１つもしくは複数の構成要素を含むか、またはＬ２Ａは、存在せず、
Ｌ２Ｂは、ＡＡ０〜ａａであり、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸であり、ａａは、１２であり、
Ｌ２Ｃは、−ＰＡＢＡ−および−ＰＡＢＣ−から選択されるか、またはＬ２Ｃは、存在せず、
Ｌ３は、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−および−ＮＲ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−の１つもしくは複数から選択されるか、またはＬ３は、存在せず、
ｂは、１〜２０である］。 -
- Ｒ１が、水素またはメチルであり、Ｒ２が、水素またはメチルであり、Ｒ３Ａが、水素またはメチルであり、Ｒ３Ｂが、水素またはメチルであり、Ｒ５が、メチルであるか、またはＲ６が、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９（Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立に、水素またはＣ１〜Ｃ８アルキルである）、ならびに−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９（Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立に、水素またはＣ１〜Ｃ８アルキルである）から選択される、請求項１から７のいずれかに記載の化合物。
- Ｗが、
- Ｘが、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）２、−ＣＯＲおよび−ＯＨの１つもしくは複数で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項１に記載の化合物。
- Ｙが、−ＮＨ２で置換されていてもよいフェニルである、請求項１に記載の化合物。
- Ｌ１が、
Ｌ２Ａ、Ｌ２Ｂ、Ｌ２ＣおよびＬ３が、全て存在しない、請求項２から４のいずれかに記載の化合物。 - Ｌ１が、ＡＢへの結合、−ＮＲ−（ＡＢへの結合）および
-
-
-
から選択される化合物または薬学的に許容できるその塩。 - 前記抗体が、トラスツズマブ、トラスツズマブ変異体、オレゴボマブ、エドレコロマブ、セツキシマブ、ビトロネクチン受容体（αｖβ３）に対するヒト化モノクローナル抗体、アレムツズマブ、非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体、１３１Ｉ Ｌｙｍ−１、非ホジキンリンパ腫の処置のためのマウス抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体、ホジキン病または非ホジキンリンパ腫の処置のためのヒト化抗ＣＤ２ｍＡｂ、ラベツズマブ、ベバシズマブ、イブリツモマブチウキセタン、オファツムマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、イピリムマブ、ゲムツズマブ、癌胎児性タンパク質受容体５Ｔ４に対するヒト化モノクローナル抗体、Ｍ１／７０（ＣＤ１１ｂ受容体に対する抗体）、および他の抗体から選択される、請求項５から７および１７のいずれかに記載の化合物または塩。
- 前記抗体が、トランスグルタミナーゼの存在下でポリペプチド工学によって反応性とされたアシルドナーグルタミン含有タグまたは内因性グルタミンで操作されたＦｃ含有またはＦａｂ含有ポリペプチドを介して結合している、請求項１７または１８に記載の化合物。
- Ｐが、請求項９に記載の化合物のラジカルを表す、請求項２から７のいずれかに記載の化合物または塩。
- Ｌが、バリン、シトルリン、フェニルアラニン、リシン、アラニンおよびグリシンからなる群から選択される１個もしくは複数の独立に選択されたアミノ酸ジラジカルを含む、請求項２から７のいずれかに記載の化合物または塩。
- Ｌが、細胞内プロテアーゼによって、Ｐ、またはＰを含むラジカルから切断することができる、請求項５から７のいずれかに記載の化合物または塩。
- ＡＢが、ＡＢのシステイン残基を介してＬに付着している、請求項５から７のいずれかに記載の化合物または塩。
- ＡＢが、ＡＢのリシン残基を介してＬに付着している、請求項５から７のいずれかに記載の化合物または塩。
- ＡＢが、ＡＢのグルタミン残基を介してＬに付着している、請求項５から７のいずれかに記載の化合物または塩。
- 有効量の請求項１、５から９および１７のいずれか一項に記載の化合物もしくは塩、または薬学的に許容できる賦形剤、担体もしくは添加剤を含む医薬組成物。
- チューブリン形成阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、およびＤＮＡ結合剤からなる群から選択される、治療的有効量の化学療法剤をさらに含む、請求項２６に記載の医薬組成物。
- 腫瘍細胞またはがん細胞を死滅させるか、またはこれらの増殖を阻害する方法であって、患者における腫瘍細胞またはがん細胞を、ある量の請求項１、５から９および１７のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物で処置することを含み、前記量が、前記腫瘍細胞またはがん細胞を死滅させるか、またはこれらの増殖を阻害するのに有効である、方法。
- がんを処置する方法であって、患者にある量の請求項１、５から９および１７のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物を投与することを含み、前記量が、がんを処置するのに有効である、方法。
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