HU224351B1 - Lizoszómás enzim hatására hasadó, daganatgátló hatóanyag-konjugátumok, ilyen konjugátumokat tartalmazó gyógyászati készítmények és eljárás ezek előállítására - Google Patents

Lizoszómás enzim hatására hasadó, daganatgátló hatóanyag-konjugátumok, ilyen konjugátumokat tartalmazó gyógyászati készítmények és eljárás ezek előállítására Download PDF

Info

Publication number
HU224351B1
HU224351B1 HU9401507A HU9401507A HU224351B1 HU 224351 B1 HU224351 B1 HU 224351B1 HU 9401507 A HU9401507 A HU 9401507A HU 9401507 A HU9401507 A HU 9401507A HU 224351 B1 HU224351 B1 HU 224351B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
lys
phe
room temperature
compound
caproyl
Prior art date
Application number
HU9401507A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT66485A (en
HU9401507D0 (en
Inventor
Raymond Armand Firestone
Gene Michael Dubowchik
Original Assignee
Bristol-Myers Squibb Co.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22042014&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU224351(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Bristol-Myers Squibb Co. filed Critical Bristol-Myers Squibb Co.
Publication of HU9401507D0 publication Critical patent/HU9401507D0/hu
Publication of HUT66485A publication Critical patent/HUT66485A/hu
Publication of HU224351B1 publication Critical patent/HU224351B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/021—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)n-C(=0)-, n being 5 or 6; for n > 6, classification in C07K5/06 - C07K5/10, according to the moiety having normal peptide bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Abstract

A találmány (I) általános képletű vegyületekreL–[–A–Ym–Z–X–]–D (I), a képletben L jelentése immunglobulin-ligandum vagy annak fragmentuma; A jelentése acilkapcsolórész; Yjelentése D- vagy L-Phe, Ala, Val, Leu, Ile, Gly vagy Tyraminosavmaradék; Z jelentése Lys, Arg, Orn vagy Cit aminosavmaradék; Xjelentése (III) képletű csoport vagy (IV) általános képletű csoport,amelyben R1 jelentése 1–5 szénatomos alkiléncsoport; D jelentésecitotoxikus hatóanyagegységként aminocsoportján kapcsolódódoxorubicin, olyan (A) általános képletű mitomicinszármazék, ahol R1 akapcsolódás helye és R2 jelentése –NH2 csoport (MMC), éshidroxilcsoportján kapcsolódó 2'- vagy 7-taxol, illetve 7-taxol-2'-(etil-karbonát); m értéke 1 vagy 2; a vegyületek előállítására ésezeket hatóanyagaként tartalmazó gyógyászati készítményekrevonatkozik.

Description

A találmány olyan hatóanyag-konjugátumokra vonatkozik, amelyekben egy immunglobulin-ligandum a hatóanyaghoz egy peptidfehérje-specifikáló egységből, karbonsav-acil-egységből és önmagától leépülő térköztartó egységből álló kapcsolórész útján kötődik, s a konjugátumokat a lizoszomális enzimek aktiválják. A találmány szerint a hatóanyagot farmakológiailag hatástalan peptidilszármazék-konjugátummá alakítjuk, amelyből a daganat helyén enzimes hasítás révén a daganatgátló szer farmakológiailag hatásos formában szabaddá válik.
Ismertek olyan kétrészű vegyületek, amelyek egy vivőanyagból vagy kapcsolóegységből és hatóanyagegységből állnak. Az ilyen vegyületek különösen hasznosnak bizonyultak közvetlenül a daganattal kapcsolatos antigének ellen irányuló immunkonjugátumok kialakításában. Egyes esetekben azonban ezek a kétrészű vegyületek instabilisak lehetnek az ellenanyagokat és a hatóanyagot összekapcsoló kötés elmaradhatatlan sajátságai, valamint a hatóanyag elektronos vagy szférikus sajátságai következtében, amelyek a kötésnek a célzott enzim általi hidrolízisét gátolhatják [Katzenellenbogen: J. Amer. Chem. Soc. 24, 479-480 (1981)].
A WO 90/03188 számú nemzetközi közzétételi iratban in vivő adagolt immunkonjugátumok nem célszervekben való felhalmozódásának csökkentésére alkalmas eljárást ismertetnek. A leírásban nem ismertetik a jelen találmány szerinti vegyületeket.
Az 5 013 547 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás rákellenes hatóanyag-antitest konjugátumokra vonatkozik. A jelen találmány szerinti vegyületeket ebben a leírásban nem ismertetik.
A 0554708 számú európai szabadalmi leírás olyan tioétervegyületekre vonatkozik, amelyek hatóanyag-kapcsolóként alkalmazhatók. A leírásban a jelen találmány szerinti vegyületeket nem ismertetik.
Tsukada és munkatársai a J. N. C. I. 73 (3), 721 (1984) irodalmi helyen olyan antitest-daunorubicin konjugátumokról számolnak be, amelyekben az antitestet és a rákellenes hatóanyagot új poli(L-glutaminsav-származék) kapcsolja össze. Ennek a konjugátumnak a peptidrésze eltér a jelen találmány szerinti konjugátumokétól.
Naoji Umemoto és munkatársai az Int. J. Cancer 43, 677-684 (1989) irodalmi helyen olyan konjugátumot írnak le, amelyben egy monoklonális antitest egy oligopeptid térköztartón keresztül kapcsolódik a metotrexáthoz. A konjugátum szerkezete eltér a jelen találmány szerinti vegyületekétől.
A jelen találmány tehát daganatspecifikus, ligandumból, hatóanyagból és peptidkapcsolórészből álló hatóanyag-ligandum konjugátumokra vonatkozik; ezek a konjugátumok a daganat helyén szelektíven aktiválhatok.
A találmány szerinti hatóanyag-ligandum konjugátumok egy hatóanyag-molekulából, egy, a kiválasztott sejtpopuláció célzására alkalmas ligandumból, valamint olyan peptidkapcsolórészből állnak, amely egy karbonsav-acil-egységet és egy peptidfehérje-specifikáló egységet tartalmaz. A peptidkapcsolórész tartalmaz továbbá egy önmagától leépülő térköztartó egységet is, amely a fehérje peptidszekvenciáját a hatóanyagtól bizonyos távolságban tartja (elválasztja).
A ligandum egy tioétert tartalmazó kapcsolóegységből leágazás útján kötődik a karbonsav-acil-egységhez; ez a tioéterkötés a ligandumon lévő tiolcsoport reakciójával alakul ki. Egy előnyös megvalósítási mód szerinti, a célzásra alkalmas ligandum kovalens tioéterkötés útján közvetlenül kapcsolódik a peptidkapcsolórészhez.
A jelen találmány egyik tárgya olyan hatóanyag-konjugátumok kialakítása, amelyek a daganat helyén szelektíven aktiválhatok.
A találmány egy további tárgya olyan daganatspecifikus hatóanyag-konjugátumok kialakítása, amelyek egy vagy több daganathoz kapcsolódó enzimek által bekövetkező hasadás szempontjából igen szelektív szubsztrátumok, s ennek következtében a hatóanyag aktiválódik.
A jelen találmány egy még további tárgya olyan daganatspecifikus hatóanyag-konjugátumok kifejlesztése, ahol az aktiválóenzim a daganatban elegendő mennyiségben van jelen ahhoz, hogy a daganat közelében a szabad hatóanyagot citotoxikus koncentrációban hozza létre.
A találmány továbbá olyan daganatspecifikus hatóanyag-konjugátumokra vonatkozik, amelyek daganatspecifitása csupán a ligandumból származik.
A találmány olyan daganatspecifikus hatóanyagkonjugátumokra is vonatkozik, amelyek a vérben esetleg jelen levő proteázokkal szemben stabilisak.
A jelen találmány körébe tartoznak továbbá olyan daganatspecifikus hatóanyag-konjugátumok - a fentiekkel összhangban -, amelyek az aktivált hatóanyagnál lényegesen kevésbé toxikusak.
A találmány egy további jellemző vonása, hogy eljárást biztosít a hatóanyag-konjugátumok és gyógyászati készítmények előállítására.
A jelen találmány fenti és további céljait úgy valósítjuk meg, hogy egy daganatgátló hatóanyagot - amely egy ligandumhoz peptidkapcsolórészen át kötődik, amely kapcsolórész peptidfehérje-szekvenciából és önmagától leépülő térköztartó egységből áll - a daganatgátló szer farmakológiai hatásának gátlására alkalmas, reakcióképes helyén származékká alakítunk (derivatizálunk), s így a daganatgátló hatóanyagot farmakológiailag hatástalan peptidilszármazék-konjugátummá alakítjuk. A peptidkapcsolórész aminosavszekvenciája olyan specifikus kialakítású, hogy a peptidilszármazékot egy vagy több lizoszomális proteáz - például a katepszin B, C vagy D lizoszomális proteázok - enzimes hasító hatása szempontjából a hatóanyag aktiválására szelektív szubsztrátummá tegye. Az enzimes hasítás a hatóanyag-konjugátumról a peptidkapcsolórészt eltávolítja, s így a daganatgátló hatóanyagot farmakológiailag hatásos alakban szelektíven a daganat helyén teszi szabaddá. Összehasonlítva olyan ligandum-hatóanyag kapcsolórészekkel, amelyek a hatóanyagot egyszerű savas hidrolízis útján szabadítják fel, a túlságosan korán végbemenő, kapcsolórészes hidrolízis következtében fellépő szisztémás toxicitás az új módszer haszná2
HU 224 351 Β1 latéval lényegesen csekélyebb, mivel a hatóanyagnak nagyobb mennyisége jut el a daganat helyére, és a módszer lehetővé teszi a konjugátum hosszabb tárolási élettartamát és egyszerűbb kezelését.
A jelen találmány szerinti hatóanyag-ligandum konjugátumok lényegesen kisebb szisztémás toxicitást mutatnak, mint a kétrészű konjugátumok vagy a szabad hatóanyag. A találmány szerinti konjugátumok mind a specifikusságukat, mind a kiválasztott célsejt-populáció kezelése szempontjából terápiás hatóanyag-aktivitásukat megtartják; felhasználhatók továbbá gyógyászati, például olyan készítményben, amely egy alábbiakban leírt (I) általános képletű vegyület gyógyászati szempontból hatásos mennyiségét gyógyászatilag elfogadható vivőanyaggal, hígítószerrel vagy segédanyagokkal összekeverve tartalmazza.
Az alábbiakban részletesen leírjuk a találmányt a teljesebb megértés céljából.
A találmány olyan új hatóanyag-ligandum konjugátumokra vonatkozik, amelyek egy, a kiválasztott sejtpopuláció megcélzására képes ligandumból és a ligandumhoz peptidkapcsolórész útján kötődő hatóanyagból állnak. A peptidkapcsolórész egy karbonsav-acil-egységből és egy fehérje peptidszekvenciájából épül fel. A peptidkapcsolórész tartalmaz továbbá egy önmagától leépülő térköztartó egységet is, amely a hatóanyagot a fehérje peptidszekvenciájától elválasztja.
A ligandum molekulája immunreaktív (immunreakcióra képes) fehérje, azaz immunglobulin vagy annak fragmentuma, amely reakcióképes tiolcsoportot (-SH csoportot) visel, vagy úgy módosítható, hogy szabad tiolcsoportot tartalmazzon. A karbonsav-acil-egység a ligandumhoz tioéterkötés útján kapcsolódik; a hatóanyag a kapcsolórészhez valamilyen funkciós csoport, így amino- vagy hidroxilcsoport útján kötődik.
Mindezek alapján a találmány szerinti konjugátumokat az (I) általános képlet szemlélteti, ahol
L jelentése immunglobulin-ligandum vagy annak fragmentuma;
A jelentése benzil-oxi-karbonil-, 1-7 szénatomos alkoxi-karbonil- vagy 1-7 szénatomos alkenil-oxi-karbonil-csoport, olyan (a^ általános képletű csoport, ahol q értéke 1 és 8 közötti egész szám, 4-(2-acetamido)benzoil-, 3-tiopropionil- vagy 6-(3-tiopropionil-amido)-hexanoil-csoport;
Y jelentése D- vagy L-Phe, Alá, Val, Leu, He, Gly vagy Tyr aminosavmaradék;
Z jelentése Lys, Arg, Orn vagy Cit aminosavmaradék;
X jelentése (III) képletű csoport vagy (IV) általános képletű csoport, amelyben R1 jelentése 1-5 szénatomos alkiléncsoport;
D jelentése hatóanyagegységként aminocsoportján kapcsolódó doxorubicin, olyan (A) általános képletű mitomicinszármazék, ahol R1 a kapcsolódás helye és R2 jelentése -NH2 csoport (MMC), 2’- vagy 7-taxol, illetve 7-taxol-2'-(etil-karbonát);
m értéke 1 vagy 2.
Az alábbiakban rövid magyarázatot fűzünk a csatolt rajzokhoz.
Az 1. ábra mutatja a BR96 kifejeződését (expresszióját) az L2987 tüdősejtvonalban, az A2780 petefészek-sejtvonalban, valamint a HCT116 vastagbélsejtvonalban.
A 2. ábrán összehasonlítottuk a BR96-doxorubicin konjugátum és a nem konjugált doxorubicin hatását.
A találmány jobb megértése céljából az alábbiakban külön-külön tárgyaljuk a hatóanyagokat, a ligandumokat, a peptideket és a térköztartó egységeket. Ezt követően fejtjük ki a konjugátumok szintézisét. Megjegyezzük, hogy az alábbi részletes leírásban és ugyanúgy az igénypontokban is az aminosav- és peptidkémiában standardizáltan alkalmazott rövidítéseket és nómenklatúrát használjuk; továbbá, hogy valamennyi említett aminosav L-konfigurációjú, ha erre vonatkozóan külön megjegyzést nem teszünk.
Ha ezt külön meg nem jegyezzük, akkor az alábbi leírásban alkalmazott rövidítések a következők:
AcOH: ecetsav; Alá: L-alanin; Alloc: allil-oxi-karbonil; Arg: L-arginin; Boc: terc-butil-oxi-karbonil; Cit: L-citrullin; DBU: diaza-bicikloundecén; DCC: diciklohexil-karbodiimid; DCI: direkt kémiai ionizáció: DCU: diciklohexil-karbamid; DIEA: diizopropil-etil-amin; DMAP: 4-(dimetil-amino)-piridin; DME: 1,2-dimetoxi-etán: DOX: doxorubicin; DTT: ditiotreit; EEDQ: N-(etoxi-karbonil)-2-etoxí-1,2-dihidrokinolin; EtOAc: etil-acetát; FAB: gyorsatombombázás; Fmoc: fluorenil-metoxi-karbonil; GABA: γ-amino-vajsav; Gly: glicin; HOBt: N-hidroxi-benzotriazol; HRMS: nagy felbontású tömegspektroszkópia; LDL: kis sűrűségű lipoprotein; He: L-izoleucin; Leu: L-leucin; Lys: L-lizin; MC: 6-maleimido-kaproil; MMC: mitomicin C; Mtr: 4-metoxi-tritil; NHS: N-hidroxi-szukcinimid; NMP: N-metil-pirrolidinon; PABC: p-amino-benzil-oxi-karbonil; PAB-OH: pamino-benzil-alkohol; Phe: L-fenil-alanin; PNP: p-nitro-fenol; TFA: trifluor-ecetsav; THF: tetrahidrofurán; Trp: L-triptofán; Val: L-valin; Z: benzil-oxi-karbonil.
A találmány szerinti peptidkapcsolórész karbonsav-acil-egységből és fehérje peptidszekvenciájából épül fel. A kapcsolórész egy önmagától leépülő térköztartó egységet is tartalmaz, amely távolságot (térközt) tart a hatóanyag és a fehérje peptidszekvenciája között.
Az (I) általános képletű konjugátumban a peptidkapcsolórészt az „A-Y-Z-X” egység jelenti, amelyben ,A” a karbonsav-acil-egység; „Y” és „Z” mindegyike aminosavat jelent, és együttesen fehérje-peptidszekvenciát képeznek; „X” önmagától leépülő térköztartó egység, amely a fehérje peptidszekvenciája és a hatóanyag között távolságot (térközt) tart.
A fehérje peptidszekvenciája
Az (I) általános képletű konjugátumban:
Y egy vagy két aminosavat, így alanint, valint, leucint, izoleucint, D- vagy L-fenil-alanint vagy triptofánt, előnyösen fenil-alanint vagy valint jelent; és
Z egy aminosavat jelent, amely lizin, arginin, ornitin vagy citrullin, előnyösen lizin vagy citrullin lehet.
Az aminosavmaradékokból álló szekvencia specifikusan olyan felépítésű, hogy enzimes úton szelektíven
HU 224 351 Β1 lehasad a peptidilszármazékok és hatóanyag konjugátumából egy vagy több, a daganathoz kapcsolódó proteáz hatására.
A jelen találmány szerinti konjugátumok közelebbi bemutatása céljából példaként megnevezzük az alábbi peptidkapcsolórészeket:
Phe-Lys, Val-Lys, Phe-Phe-Lys, D-Phe-Phe-Lys,
Gly-Phe-Lys, Ala-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, lle-Cit, Trp-Cit.
A peptidszekvenciák előnyös megvalósítási formáinak konkrét példái: a Phe-Lys, Val-Lys és a Val-Cit.
Számos, a jelen találmányban történő alkalmazásra megfelelő, specifikus peptid-kapcsolóegység tervezhető, amelyek egy konkrét, tumorhoz kapcsolódó proteáz általi enzimes hasítás szempontjából optimalizálhatok. A jelen találmányban való alkalmazás szempontjából azok a peptidkapcsolórészek előnyösek, amelyek a katepszin B, C és D proteázok szempontjából optimálisak. Kimutattuk, hogy egy konjugátumból 5,3 pH-érték mellett a katepszin B enzim doxorubicint szabadít fel (37 °C hőmérsékleten, t1/2=3,0 óra felezési idővel).
A térköztartó egység
A találmány szerinti hatóanyag-konjugátumok egy közbenső elhelyezkedésű, önmagától leépülő térköztartó egységet tartalmaznak, amely egyrészt elválasztja, másrészt kovalens módon összeköti egymással a hatóanyagegységet és a fehérje peptidszekvenciáját. Az önmagától leépülő térköztartó egység olyan bifunkciós kémiai egységként definiálható, amely képes kovalensen összekötni egymással két, egymástól térközzel elválasztott kémiai egységet normális stabilitású, háromrészes molekulává úgy, hogy enzimes hasítás hatására a háromrészes molekulából az egymástól elválasztott kémiai egységek egyike felszabadul, majd az enzimes hasítást követően spontán módon lehasad a molekula megmaradó részéről, s így a másik, térközzel elválasztott kémiai egység is felszabadul. A jelen találmány értelmében az önmagától leépülő térköztartó egység az egyik végével kovalensen kötődik a fehérje peptidszekvenciájához, másik végével kovalensen kötődik a hatóanyagegység kémiailag reakcióképes helyével, amelynek derivatizálása (származékká alakítása) annak farmakológiai hatását felfüggeszti; így a térköztartó egység egyrészt elválasztja, másrészt kovalensen összekapcsolja a fehérjepeptid-egységet és a hatóanyagegységet egy háromrészes molekulává, amely stabilis, és a célzott enzim távollétében farmakológiailag hatástalan; azonban a célzott enzim által enzimesen hasítható azon kötés mentén, amely kovalensen összekapcsolja a térköztartó egységet a fehérjepeptid-egységgel; ennek következtében a fehérjepeptid-egység a háromrészes molekulából felszabadul. Az ilyen enzimes hasítás egyszersmind aktiválja a térköztartó egység önmagától leépülő jellegét, kiváltja annak a kötésnek a spontán hasadását, amely kovalensen kapcsolja a térköztartó egységet a hatóanyagegységhez, és ezáltal a hatóanyag farmakológiailag aktív alakjában szabaddá válik.
Az (I) általános képletű konjugátumban X olyan térköztartó egységet jelent, amely térközzel elválasztja és kovalensen összeköti egymással a hatóanyagegységet és a Z helyén álló aminosavat, s amely a (III) képletű vagy (IV) általános képletű csoportokkal szemléltethető, ahol a (IV) általános képletben R1 jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport.
Leírásunkban az „1-5 szénatomos alkilcsoport ha erre vonatkozó más megjegyzést nem teszünk 1-5 szénatomos, egyenes vagy elágazó szénláncú alkilcsoportot, például - azonban korlátozás nélkül - metil-, etil-, izopropil-, η-propil-, szek-butil-, izobutil- vagy n-butil-csoportot jelent.
A találmányban térköztartó egységként előnyösen alkalmazható a (III) képletű p-amino-benzil-oxikarbonil- (PABC) csoport.
A találmány értelmében egy másik előnyös térköztartó egység a (IVa) képletű γ-amino-vajsavból (GABA) levezethető csoport.
Egy további, a találmányban célszerűen alkalmazható, előnyös térköztartó egység a (IVb) képletű α,α-dimetil-y-amino-vajsavból levezethető csoport.
Egy még további, a találmány szerinti alkalmazásra célszerű, előnyös térköztartó a (IVc) képletű β,βα-dimetil-y-amino-vajsavból levezethető csoport.
A karbonsav-acil-egység
Az (I) általános képletű konjugátumban az ,A” karbonsav-acil-egység a ligandumhoz egy, a ligandumból származó kénatom útján kapcsolódik. A találmány szerinti reprezentatív konjugátumok például a (IXa) és a (IXe) általános képletű vegyületek, ahol az ,A csoport zárójelben látható.
A (IXa) általános képletben a q értéke 1-8, L, Y, Z, X és D jelentése a fentiekben meghatározott.
A (IXe) általános képletű vegyületben - amelyet N-szukcinimidil-[4-(jód-acetil)-amino-benzoát]-ból (SIAB) [Pierce Catalog E-17. old. (1992)] állítunk elő
- L, Y, Z, X és D jelentése a fentiekben meghatározott.
Az A egység kapcsolatban áll a peptiddel, és a ligandumhoz valamely, a ligandumból származó kénatom, másrészt a karbonsav-acil-egységből eredő kénatom, azaz ditiokötés útján kapcsolódik.
A találmány szerinti konjugátumok reprezentatív képviselői a (Xa) és a (Xc) általános képletű vegyületek.
A (Xa) általános képletű vegyületekben - amelyeket N-szukcinimidil-[3-(2-pirídil-ditio)-propionát]-ból (SPDP) [Pierce Catalog E-13. old. (1992)] állítunk elő
- L, Y, Z, X és D jelentése a fentiekben meghatározott.
A (Xc) általános képletű vegyületekben - amelyeket hosszú láncú SPDP-ből állítunk elő [Pierce Catalog E-14. old. (1992)] - L, Y, Z, X és D jelentése a fentiekben meghatározott.
A hatóanyag
A találmány szerinti hatóanyag-konjugátumok általában azon célok szempontjából hatékonyak, amelyekre a megfelelő hatóanyagok általában alkalmazhatók; hatékonyságuk azonban nagyobb, a ligandum azon képességének következtében, hogy a hatóanyagot a kívánt sejthez juttatja, ahol a hatásfoka különösen előnyös. A találmány szerinti konjugátumok egy adott biológiai válasz módosítására használhatók, s így a ható4
HU 224 351 Β1 anyagegységet nem szükséges olyan korlátozott értelemben választani, mint a klasszikus kemoterápiás hatóanyagokat.
A jelen találmányban a hatóanyagok citotoxikus hatású vegyületek, különösen a rákgyógyászatban alkalmazott hatóanyagok. Ilyen hatóanyag például a doxorubicin, a mitomicin C, a taxol és ezen vegyületek analógjai.
Amint fentebb megjegyeztük, a szakmai gyakorlattal rendelkező egyén kémiai módosításokat végezhet kívánt vegyületek előállítására abból a célból, hogy egy kapott vegyület reakciói a találmány szerinti konjugátumok előállítására célszerűbbek legyenek.
Az (I) általános képletű konjugátumban D egy hatóanyagegység, vázán kémiailag reakcióképes funkciós csoportot hordoz, amelynek segítségével a hatóanyag váza a fehérjepeptid-kapcsolórésszel kötődik; ez a funkciós csoport primer vagy szekunder amino- vagy hidroxilcsoport.
Az említett aminocsoportot tartalmazó hatóanyag például az (A) általános képletű mitomicin C (a képletben R1 jelentése hidrogénatom és R2 jelentése aminocsoport) és a (B) általános képletű doxorubicin (a képletben R1 jelentése -CH2OH, R2 jelentése -OCH3, R3 jelentése -NH2 és R4 jelentése -OH csoport, és R5 jelentése hidrogénatom).
Az említett alkoholcsoportot tartalmazó hatóanyag például a (C) általános képletű taxol (a képletben R1 jelentése -OH csoport, R2’ jelentése hidrogénatom, R3 jelentése -OAc és R4, valamint R5 jelentése fenilcsoport).
A ligandum
A „ligandum” olyan molekula, amely kötésbe lép, komplexet alkot vagy reagál egy olyan sejtpopulációval, amelyet terápiás vagy más biológiai céllal módosítani kívánunk, s amely szabad, reakcióképes merkapto- (-SH) csoportot tartalmaz, vagy olyan csoportot hordoz, amely merkaptocsoporttá alakítható. Ez a sejttel szemben reakcióképes molekula a terápiás hatású hatóanyagegységet eljuttatja ahhoz a célzott sejtpopulációhoz, amellyel a ligandum reakcióba lép.
A találmány szerinti konjugátumok kialakítására alkalmas immunreaktív ligandumok egy antigénfelismerő immunglobulinból (ezt „antitestnek” is nevezik) vagy annak egy antigénfelismerő fragmentumából állnak. Különösen előnyösek azok az immunglobulinok, amelyek egy daganattal kapcsolatos antigén felismerésére képesek. Általában „immunglobulin” bármilyen, az immunglobulinok felismert csoportját vagy alcsoportját jelentheti, amilyenek például az IgG, IgA, IgM, IgD és az IgE anyagok. Előnyösek ezek közül az immunglobulinok IgG-csoportjába tartozó anyagok. Az immunglobulin bármilyen fajból eredhet; előnyösen azonban emberből, rágcsálókból vagy nyúlból származik. Az immunglobulin továbbá poliklonális vagy monoklonális lehet, előnyösen monoklonális.
Amint megjegyeztük, a szakmai gyakorlattal rendelkező egyén számára nyilvánvaló, hogy a találmány az antigénfelismerő immunglobulin-fragmentumok alkalmazását is magában foglalja. Ilyen immunglobulin-fragmentumok lehetnek például: a Fab’, F(ab’)2, Fv vagy Fab fragmentumok; vagy más, antigénfelismerő immunglobulin-fragmentumok. Ezek az immunglobulin-fragmentumok például proteolitikus enzimmel végzett emésztés útján, így pepszinnel vagy papainnal végrehajtott emésztés segítségével reduktív alkilezéssel vagy rekombináns módszerekkel állíthatók elő. A szakember számára az ilyen immunglobulin-fragmentumok előállításának alapanyagai és módszerei jól ismertek [lásd például J. Parham: J. Immunology 131, 2895 (1983); Lamoyi és munkatársai: J. Immunological Methods 56, 235 (1983); J. Parham az idézett helyen: 53, 133 (1982), valamint Matthew és munkatársai ugyanott: 50, 239 (1982)].
Az immunglobulin lehet „kiméra antitest” e fogalom általános jelentése szerint. Továbbá, az immunglobulin lehet „bifunkciós” vagy „hibrid” antitest, tehát olyan antitest, amelynek van egy, az antigén helyének szempontjából specifikus leágazása: például egy daganattal kapcsolatos antigén számára, míg egy másik leágazása egy ettől különböző célt, például egy heptént ismer fel, amely az antigént hordozó daganatsejt számára halálos hatóanyag, vagy amelyhez ez a daganatsejttel szemben halálos hatóanyag kötődik. Másrészt a bifunkciós antitest olyan anyag lehet, amelynek mindegyik leágazása a terápiásán vagy biológiailag módosítandó sejt daganattal kapcsolódó antigénje különböző epitópjaival szemben specifikus. Bármely esetben a hibrid antitestek kettős specifitással rendelkeznek, előnyösen egy vagy több kötőhellyel, amelyek a heptén vonatkozásában specifikusak; vagy egy vagy több kötőhellyel, amely egy célzott antigénnel szemben - például egy daganattal, fertőző szervezettel vagy más kóros állapottal kapcsolatos antigénnel szemben - specifikus.
Biológiai szempontból bifunkciós antitesteket ismertetnek például a 0 105 360 számú publikált európai szabadalmi bejelentésben, amelyre - szakmai gyakorlattal rendelkező egyén számára - hivatkozunk. Ilyen hibrid vagy bifunkciós antitestek - amint ezt megjegyeztük - kialakíthatók biológiai úton, sejtfúziós eljárással vagy kémiai úton, különösen térhálósító szerekkel vagy diszulfidhidat képező reagensekkel; továbbá teljes antitestekből és/vagy azok fragmentumaiból is állhatnak. Ilyen hibrid antitestek előállításának módszereit közük például az 1983. október 27-én WO 82/03679 szám alatt publikált nemzetközi PCT bejelentésben, valamint az 1987. április 8-án 0 217 577 szám alatt publikált európai szabadalmi bejelentésben; e közléseket hivatkozásként foglaljuk leírásunkba, Különösen előnyösek a „polidomá”-ból vagy „quadromá”ból biológiai úton előállított bifunkciós antitestek, továbbá a térhálósító szerekkel szintetikus úton előállított antitestek, például a bisz(maleimido)-metil-éterrel („BMME”), vagy a szakember számára jól ismert, más térhálósító szerekkel szintetikus úton előállított bifunkciós antitestek.
Az immunglobulin lehet továbbá egyetlen láncból álló antitest („SCA”). Ezek az antitestek tartalmazhatnak egyláncú Fv fragmentumokat („scFv), amelyben a
HU 224 351 Β1 variálható könnyű szakaszok („VL”) és változtatható nehéz („VH”) szakaszok peptidkötéssel vagy diszulfidkötésekkel kapcsolódnak. Az immunglobulin állhat továbbá egyedüli VH szakaszokból (dAbs), melyek antigént megkötő hatással rendelkeznek [lásd például: G. Winter és C. Milstein: Natúré 349, 295 (1991); R. Glockshuber és munkatársai: Biochemistry 29, 1362 (1990); és E. S. Ward és munkatársai: Natúré 341, 544 (1989)].
A jelen találmányban való alkalmazásra különösen előnyösek a kiméra „chimeric” monoklonális antitestek, előnyösen olyan kiméra antitestek, amelyek egy daganattal kapcsolatos antigénnel szemben specifikusak. A „kiméra antitest” fogalmán olyan monoklonális antitestet értünk, amely variálható tartományból (szakaszból), azaz egy kötő jellegű tartományból - amely egyik forrásból vagy fajból származik - és legalább egy állandó tartományból áll, amely utóbbi egy másik forrásból vagy fajból származik; a kiméra antitestet általában rekombináns DNS-eljárással hozzák létre. Olyan kiméra antitestek, amelyek egy egérből származó, variálható tartományt és egy állandó humán tartományt tartalmaznak, különösen előnyösek a találmány egyes kiviteli formáiban, különösen az embergyógyászatban, mivel ezek az antitestek könnyen előállíthatok, és kevésbé immunogének, mint kizárólag egéreredetű monoklonális antitestek. Az ilyen egér/emberi kiméra antitestek olyan, kifejezett immunglobulingének termékei, amelyek egyrészt az egéreredetű immunglobulin variálható tartományait, másrészt az emberi immunglobulin állandó tartományait kódoló DNS-szegmentumokat tartalmazzák. Más, szintén a találmány körébe tartozó kiméra antitestek azok az antitestek, amelyekben az eredeti antitest csoportja vagy alcsoportja módosított vagy megváltoztatott formában van. Az ilyen „kiméra” antitesteket „megmásított csoportú antitesteknek” („class-switched antibodies”] nevezzük. A kiméra antitestek előállítási módszerei a szokásos rekombináns DNS- és géntranszfekciós technológián alapulnak, amelyek e szakterületen jól ismertek [lásd például: S. L. Morrison és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. 81, 6851 (1984)].
A „kiméra antitest” fogalma magában foglalja a „humanizált antitest” fogalmát is: ez utóbbiak olyan antitestek, amelyekben a leolvasókeretet vagy „a komplementaritást meghatározó szakaszokat (CDR)” úgy módosították, hogy a kiinduló immunglobulintól különböző specificitású immunglobulin CDR-tartományát tartalmazza. Ennek egyik előnyös kiviteli formája szerint egér CDR-tartományát illesztik egy emberi antitest leolvasóterületére „humanizált antitest előállítása céljából [lásd például: L. Riechmann és munkatársai: Natúré 332, 323 (1988); M. S. Neuberger és munkatársai: Natúré 314, 268 (1985)]. Különösen előnyösek azok, amelyek megfelelnek az antigéneket felismerő szekvenciáknak, amint ezt fentebb a kiméra és bifunkciós antitestekre vonatkozóan megjegyeztük. Felhívjuk a figyelmet a 0 239 400 számú, 1987. szeptember 30-án publikált európai szabadalmi bejelentésre, amelynek módosított CDR-t tartalmazó antitestjeire vonatkozó közléseit e leírásunkba hivatkozásként építjük be.
A szakmai gyakorlattal rendelkező egyén számára felismerhető, hogy előállítható olyan bifunkciós-kiméra antitest, amely egyrészt a kiméra vagy humanizált antitest csekélyebb immunogén jellegével, másrészt hajlékonyságával rendelkezik, és a terápiás eljárás szempontjából ez előnyökkel jár; ilyenek különösen a fentebb leírt bifunkciós antitestek. Az ilyen bifunkciós-kiméra antitestek például kémiai szintézissel alakíthatók ki térhálósító szerek és/vagy a fentebb leírt típusú rekombináns eljárások segítségével. A jelen találmány egyetlen esetben sem korlátozható bármely konkrét antitest-előállítási módszerre a bifunkciós, kiméra, bifunkciós-kiméra, humanizált vagy antigént felismerő antitest, fragmentum vagy azok származékai vonatkozásában.
A találmány körébe tartoznak továbbá a fentebb meghatározott, olyan immunglobulinok vagy immunglobulin-fragmentumok, amelyeket aktív fehérjékkel fuzionálunk, például egy Neuberger és munkatársai által ismertetett típusú enzim (lásd az 1986. március 13-án publikált WO 86/01533 számú nemzetközi PCT bejelentést). E termékek ismertetését hivatkozásként foglaljuk leírásunkba.
Amint ezt már megjegyeztük, a „bifunkciós”, „fuzionált”, „kiméra” (beleértve a humanizált) és „bifunkciós-kiméra” felépítésű antitestek (beleértve a humanizált antitestszerkezetet is) egyedi vonatkozásaikban antigénfelismerő fragmentumokat tartalmaznak. A gyakorlott szakember felismeri, hogy az ilyen fragmentumok ép bifunkciós, kiméra, humanizált vagy kiméra-bifunkciós antitestek hagyományos enzimes hasításával állíthatók elő. Ha viszont az ép antitestek az ilyen hasítással szemben nem érzékenyek, szerkezetük természete következtében, akkor a fentebb tárgyalt szerkezetek előállíthatok a kiindulóanyagokként alkalmazott immunglobulin-fragmentumokból; vagy rekombináns eljárást alkalmazunk, amelynek útján a DNS-szekvenciákat úgy alakítjuk ki, hogy azok a kívánt „fragmentumot” kódolják, amely kifejeződése után in vivő vagy in vitro körülmények között, kémiai vagy biológiai úton kombinálható a végső, kívánt, teljes immunglobulin-„fragmentum” előállítása céljából. A fentiekben e vonatkozásban használtuk a „fragmentum” kifejezést.
Továbbá, mint ezt fentebb megjegyeztük, a jelen találmányban alkalmazott immunglobulin (antitest) vagy annak fragmentuma poliklonális vagy monoklonális jellegű lehet; a monoklonális antitestek azonban előnyösebb immunglobulinok. Az ilyen poliklonális vagy monoklonális antitestek előállítása jelenleg már jól ismert a területen jártas szakember számára, akik természetesen teljes mértékben képesek a jelen találmányban alkalmazható immunglobulinok előállítására [lásd például: G. Kohler és C. Milstein: Natúré 256, 495 (1975)]. Megjegyezzük továbbá, hogy hibridómák és/vagy az ilyen hibridómák által termelt monoklón antitestek amelyek a jelen találmány gyakorlati megvalósítása során alkalmazhatók - beszerezhetők olyan forrásokból,
HU 224 351 Β1 mint például az American Type Culture Collection („ATCC) (12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852) vagy a kereskedelmi forgalomból, például a Boehringer-Mannheim Biochemicals cégtől (P. O. Box 50816, Indianapolis, Indiana 46250). 5
A jelen találmányban való alkalmazás céljára különösen előnyösek azok a monoklonális antitestek, amelyek daganattal kapcsolt antigéneket felismernek. Ezek a monoklonális antitestek azonban nem korlátozhatók például az alább felsoroltakra.
Az antigén felismert helye Monoklonális antitestek Irodalom
Tüdődaganatok KS1/4 N. M. Varki és munkatársai: Cancer Rés. 44, 681 (1984)
534,F8; 604A9 F. Cuttitta és munkatársai a következő helyen: G. L. Wright szerk.: „Monoklonális antitestek és a rák” (angolul) Marcel Dekker, Inc., NY. 161. old. (1984)
Pikkelyes tüdőrák G1, LuCa2, LuCa3, LuCa4 Kyoizumi és munkatársai: Cancer Rés. 45, 3274 (1985)
Kissejtes tüdőrák TFS-2 Okabe és munkatársai: Cancer Rés. 45, 1930 (1985)
Vastagbélrák 11.285.14 14.95.55 G. Rowland és munkatársai: Cancer Immunoi. Immunother 19, 1 (1985)
NS-3a-22, NS-10 NS-19-9, NS-33a NS-52a, 17-1A Z. Steplewski és munkatársai: Cancer Rés. 41, 2723(1981)
Karcinoembrionális daganat MoAb 35 vagy ZCE025 R. S. Acolla és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 77, 563(1980)
Melanoma 9.2.27 T. F. Bumol és R. A. Reisfeld: Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 79, 1245(1982)
P97 96.5 K. E. Hellstrom és munkatársai, „Monoklonális antitestek és a rák” (angolul), id. helyen 31. old.
T65 antigén T101 Boehringer-Mannheim P. O. Box 50816, Indianapolis, IN 46250
Ferritin Antiferrin Boehringer-Mannheim, lásd fentebb
R24 W. G. Dippold és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci, USA, 77, 6114(1980)
Neuroblasztóma P1 153/3 R. H. Kennet és F. Gilbert: Science 203, 1120 (1979)
MIN 1 J. T. Kemmshead a következő helyen: „Monoklonális antitestek és a rák (angolul) id. helyen, 49. old.
UJ13A Goldman és munkatársai: Pediatrics 105, 252 (1984)
Glioma BF7, GE2, CG12 N. de Tribolet és munkatársai: id. munkában 81. old.
Gangliozid L6 I. Hellstrom és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 83, 7059 (1986); 1990. március 6-án engedélyezett 4 906 562 számú és 1990. június 19-én engedélyezett 4 935 495 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírás
L6 kiméra 1986. október 27-én benyújtott 07/923,244 számú egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés; ekvivalense az 1988. május 5-én WO 88/03145 számon publikált nemzetközi PCT szabadalmi bejelentés
Lewis Y BR64 1988. december 22-én benyújtott 07/289,635 és 1989 nov. 29-én benyújtott 07/443,696 számú egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés, ekvivalense a 0 375 562 számú, 1990. jún. 27-én publikált európai szabadalmi bejelentés
HU 224 351 Β1
Táblázat (folytatás)
Az antigén felismert helye Monoklonális antitestek Irodalom
Fukozilezett Lewis Y BR96, kiméra BR96 1989. jún. 30-án 07/374, 947 szám alatt, valamint 1990. jún. 26-án 07/544,246 szám alatt benyújtott egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés, ekvivalense az 1991. jan. 10-én WO 91/00295 szám alatt publikált nemzetközi PCT szabadalmi bejelentés
Emlőrák B6.2, B72.3 D. Colcher és munkatársai: az idézett munkában, 121. old.
Oszteogén szarkóma 791T/48 791T/36 M. J. Embleton, ugyanott, 181. old.
Leukémia CALL2 C. T. Teng és munkatársai: Láncét 1, 01, (1982)
Antiidiotípus — R. A. Miller és munkatársai: N. Eng. J. Med. 306, 517(1982)
Petefészekrák OC 125 R. C. Bast és munkatársai: J. Clin. Invest 68, 1331 (1981)
Prosztatarák D83.21, P6.2, Turp-27 J. J. Starling és munkatársai: idézett munka 253. old.
Veserák A6H, D50 P. H. Lángé és munkatársai: Surgery 98, 143 (1985)
A legelőnyösebb megoldás szerint a ligandumot tartalmazó konjugátum egy BR96 kiméra antitesttől származó „ChiBR96”, amelyet az 1990. június 26-án 07/544,246 szám alatt benyújtott egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben ismertetnek (ekvivalense az 1991. január 10-én WO 91/00295 szám alatt publikált PCT szabadalmi bejelentés). A ChiBR96 egy internalizáló egér/humán kiméra antitest, és - amint megjegyeztük - emberi ráksejtek által kifejezett fukozilezett Lewis Y antigénnel szemben reakcióképes; ilyen karcinómasejtek például az emlő-, tüdő-, vastagbél- és petefészekrákból származó humán sejtek. A kiméra BR96-ot kifejező és ChiBR96-tal azonosított hibridómát 1990. május 23-án a Budapesti Egyezmény rendelkezései értelmében az American Type Culture Collection („ATCC”) intézményben (12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852) letétbe helyeztük. Ennek a hibridómának a mintái ATCC KB 10460 tételszám alatt rendelkezésre állnak. A ChiBR96 részben a BR96 anyaforrásból ered. A BR96-ot kifejező hibridómát 1989. február 21-én az ATCC intézményben a Budapesti Egyezmény rendelkezései szerint letétbe helyeztük, és HB 10 036 lajstromszám alatt beszerezhető. A kívánt hibridómát tenyésztjük, és az így kapott antitesteket a sejttenyészet felülúszójából jelenleg már jól ismert, standard eljárásokkal izoláljuk [lásd például: „Monoklonális hibridóma antitestek: eljárás és alkalmazások” (angolul), szerk. Hurell, CRC Press (1982)].
Mindezek alapján az „immunglobulin” és „antitest” fogalmán az immunglobulinok és antitestek valamennyi formáit és szerkezeteit értjük, fenti ismertetésünk szerint.
A konjugátumok előállítása
A találmány szerinti konjugátumokat úgy alakíthatjuk ki, hogy a hatóanyagegységet kötjük az antitesthez egy peptidszekvenciából - amelyet a lizoszomális katepszin B, C és D proteázok hasítani képesek - és egy önmagától leépülő, térköztartó egységből összetevődő kapcsolórész útján.
A találmány szerinti vegyületek előállítási eljárásának egyik módja szerint az antitestnek foszfátpufferrel készült vagy PBS-sel (foszfáttal puffereit konyhasóoldattal) készült oldatát ditiotreit (DTT) oldatával 25-45 °C hőmérsékleten nitrogéngáz alatt körülbelül 1-10 órán át keverjük, majd az oldatot dializáló szűrésnek vetjük alá foszfáttal puffereit konyhasóoldattal (PBS) szemben 0,5-12 órán át a dializálócella méretétől és az oldat térfogatától függően. E műveletet nitrogéngáz alatt végezzük mindaddig, amíg az elfolyó anyag SH csoportoktól mentessé válik. Ezt követően az oldatot megfelelő mennyiségű peptid-PABC-hatóanyagtermékkel kezeljük (a Mabban levő SH csoportok számától függően; ezt Ellman-titrálással határozzuk meg) desztillált vízben 0±10 °C hőmérsékleten 15 perctől 8 óráig terjedő időn át. Ezt követően az oldatot PBS-sel szemben szobahőmérsékleten körülbelül 24 órán át dializáljuk, majd szűrjük, és a szűrletet szobahőmérsékleten 15 perctől 8 óráig terjedő időn át biogyöngyökkel együtt rázzuk, majd ismét szűrjük.
Az 1)—11) reakcióvázlatokban olyan modellvegyületek szintézisét mutatjuk be, amelyeket katepszin B enzimmel vizsgáltunk, hogy a peptidszekvenciát és az önmagától leépülő térköztartó egységet magában foglaló kapcsolórész optimális sajátságait, valamint az antitesttel kialakuló kapcsolat optimális sajátságait meghatározzuk.
A 12) reakcióvázlat mutatja az (50) képletű MC-Phe-Lys-PABC-DOX kapcsolórész vegyület szintézisét, amelyet az antitesttel mint hordozóval kapcsolunk. E szintézis során a Fmoc-Phe [(43) képletű ve8
HU 224 351 Β1 gyület] NHS aktív észterét szerves-vizes oldószerelegyben kapcsoljuk a (42) Ne-Mtr-Lys vegyülettel, s így a Fmoc-Phe-NF-Mtr-Lys [(44) képletű] vegyülethez jutunk. Ez utóbbit EEDQ reagens alkalmazásával p-amino-benzil-alkohollal kapcsoljuk, s így a (45) képletű alkoholszármazékot kapjuk. Ezt követően a Fmoc-csoportot dietil-aminnal eltávolítjuk, és a szabad N-terminálissal rendelkező Phe-t MC-NHS-sel összekötve kapjuk a (47) képletű maleimido-peptid-alkoholt. Ezt követi bisz(p-nitro-fenil)-karbonát addíciója, amely a (48) képletű, aktivált karbonáthoz vezet, s ennek p-nitro-fenil-csoportját NMP oldószerben szobahőmérsékleten DOX-szal cseréljük. Az így kapott (49) képletű MC-Phe-N£-Mtr-Lys-PABC-DOX termékből a védőcsoportot kvantitatív hozammal távolítjuk el úgy, hogy diklór-metán (DKM) oldószerben diklór-ecetsavval és anizollal 1 órán át kezeljük, s így az (50) képletű kapcsolórészt kapjuk.
A 13) reakcióvázlatban illusztráljuk az (52) képletű MC-Phe-Lys-PABC-MMC, azaz egy MMC-t tartalmazó kapcsolóvegyület szintézisét a (48) képletű aktivált karbonát-észterből. Az MMC aziridin-nitrogénje nem eléggé nukleofil jellegű ahhoz, hogy közvetlenül kicserélődési reakcióba lépjen a (48) képletű nitro-fenil-származékkal; azonban tízszeres feleslegű HOBt jelenlétében kis mennyiségben a megfelelő HOBt aktív észter keletkezik, amely - eléggé reakcióképes lévén - reakcióba lép az MMC-vel. Az MMC savakkal szemben mutatott érzékenysége következtében az (51) képletű termékből a védőcsoportot diklór-ecetsav helyett klór-ecetsav alkalmazásával távolítjuk el.
A 14) reakcióvázlatban bemutatjuk egy taxolt tartalmazó kapcsolóvegyület, az (55) képletű MC-PheLys-PABC-7-taxol előállítását. A (47) képletű maleimido-peptid-alkoholt 2’-Mtr-taxol-7-(klór-formiát)-tal kezeljük [ez utóbbit az (53) képletű vegyületből állítjuk elő], s így az (54) képletű MC-Phe-N£-Mtr-LysPABC-7-taxolhoz jutunk. Ez utóbbiból a védőcsoportot klór-ecetsavval eltávolítva kapjuk az (55) képletű célterméket.
A 15) reakcióvázlatban illusztráljuk a citrullint tartalmazó (62) képletű MC-Val-Cit-PABC-DOX kapcsolóvegyület szintézisét, amelyet lényegében ugyanúgy végzünk, mint ezt a (49) képletű vegyület esetére fentebb leírtuk; ez a szintézis nem teszi szükségessé az oldalláncból védőcsoport eltávolítását.
A 16) reakcióvázlatban bemutatjuk egy amino-kaproil térköztartó csoportot tartalmazó kapcsolórész előállítását, amelyet úgy terveztünk, hogy az enzimes hasítás helyét a nagy térkitöltésű antitesttől eltávolítjuk. A (72) képletű MC-NH-C-Phe-Lys-PABC-DOX vegyületet lényegében ugyanolyan folyamatokkal állítjuk elő, mint az (50) és (55) képletű vegyületek szintézise során.
A 17) reakcióvázlat illusztrálja az MMC-t tartalmazó, (78) képletű MC-Phe-Lys-GABA-MMC kapcsolórész szintézisét: ez a kapcsolóvegyület PABC helyett GABA-csoportot tartalmaz térköztartó egységként. E vegyületet lényegében a fentebb az (52) képletű vegyületre leírt módon állítjuk elő.
A 18) reakcióvázlatban egy taxol-2’-(etil)-karbonátot, a taxol aktív prodrugját tartalmazó kapcsolóvegyület szintézisét mutatjuk be.
A biológiai aktivitás vizsgálata
A találmány szerinti konjugátumok reprezentatív képviselőit mind in vitro, mind in vivő rendszerekben vizsgáltuk a biológiai hatás meghatározása céljából. E vizsgálómódszerek (tesztek) alkalmazása során citotoxikus hatóanyagok konjugátumainak hatóképességét úgy határoztuk meg, hogy mértük a konjugátumok citotoxicitását emberi rákdaganatból eredő sejtekkel szemben. A következőkben leírjuk a legfőbb vizsgálati módszereket és kapott eredményeinket. A szakmai gyakorlattal rendelkező egyén számára nyilvánvaló, hogy bármely, a kívánt antigént kifejező daganattörzs felhasználható az alábbi elemző vizsgálatokban alkalmazott, specifikus daganattörzsek helyettesítésére.
/. vizsgálati módszer (teszt): DOX felszabadulása katepszin B hatására
A fenti konjugátum oldatából 300 μΙ-t 5,0 pH-értékű acetátpufferrel (25 millimól/liter+1 mM millimól/liter EDTA) 1 ml-re hígítunk, így a pH értéke 5,3-re áll be. Az így kapott oldatot körülbelül 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk, miközben 6 μΙ katepszin B oldatot (lásd II. alább) 20 μΙ aktiválóoldattal (lásd II. alább) körülbelül 15 percig szobahőmérsékleten inkubálunk. Ezután az enzimoldatot a konjugátum 5,3 pH-értékű oldatával kezeljük, és az így kapott keveréket körülbelül 37 °C-on inkubáljuk. Meghatározott időközökben 25 μΙ térfogatú aliquot mintákat veszünk, amelyeket 50 μΙ hideg metanollal hígítunk a fehérje kicsapására. A mintákat centrifugáljuk, és a kapott folyadékot HPLC oszlopra fecskendezzük (C-18 oszlop; metanol és 2,8 pH-értékű trietil-ammónium-formiát-puffer 80:20 arányú elegye; 1 ml/perc áramlási sebesség; detektálás 495 nm hullámhosszon). A csúcsterületeket ismert koncentrációjú DOX-oldat befecskendezésével kalibráljuk. Meghatározásunk szerint a szabad DOX felszabadulásának felezési ideje körülbelül 3 óra, s ennek során a számított elméleti DOXmennyiségnek 93%-a szabadul fel (némi szabad DOX valószínűleg a fehérjével együtt csapódik ki).
II. vizsgálati módszer (teszt): stabilitás az emberi plazmában
300 μΙ konjugátumoldatot 1 ml frissen leszívott emberi plazmával 1 ml-re hígítunk, és az elegyet körülbelül 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Szabályszerű időközökben 25 μΙ térfogatú aliquot mintákat veszünk ki, melyeket 50 μΙ hideg metanollal hígítunk. A mintákat centrifugáljuk, és a kapott folyadékot HPLC oszlopra fecskendezzük (a fentebb leírt körülmények megtartásával). Külön plazmamintákat az elméletileg felszabadítható DOX-mennyiség 1%-ával, illetve 2%-ával több percig inkubálunk, és a fenti módon kezeljük. E szinteken (ilyen koncentrációkban) a szabad DOX sikeresen detektálható, és mennyiségileg meghatározható. 7,5 óra eltelte után a plazmában a konjugátumból származó szabad DOX nem volt kimutatható (felezési ideje 375 óránál nagyobb).
HU 224 351 Β1
III. vizsgálati módszer (teszt):
Z-Phe-Lys-PABC-DOX maszklrozórészének (egységének) eltávolítása katepszin B-vel Szarvasmarhalépből származó 10 egység katepszin B-t (Sigma cég, EC jele 3.4.22.1, molekulatömege körülbelül 40 000) 1 ml 5,0 pH-értékű acetátpufferben (25 millimól/liter acetát+1 millimól/líter EDTA) oldva
13,7 mól/liter koncentrációjú oldatot kapunk. 6 μΙ enzimoldatot 12 μΙ aktiválóoldattal (30 millimól/liter ditiotreit és 15 millimól/liter EDTA) körülbelül 15 percig szobahőmérsékleten inkubálunk, ehhez az inkubált oldathoz 2 ml 5,0 pH-értékű acetátpuffert (25 millimól/liter acetát+1 millimól/liter EDTA) adunk, és körülbelül 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk, majd 8 μ110 mM koncentrációjú metanolos Z-Phe-Lys-PABC-DOX-oldatot ([szubsztrátum]=40 μΜ, [katepszin B]=körülbelül 41 nM) adunk. A keveréket körülbelül 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk, meghatározott időközönként aliquot mintákat veszünk ki, amelyeket HPLC vizsgálatnak vetünk alá [C-18 oszlop; metanol és 2,8 pH-értékű trietil-ammónium-formiát (50 millimól/liter) pufferoldat 80:20 arányú keveréke; 1 ml/perc áramlási sebesség; detektálás 495 nm hullámhosszon]. Meghatározásunk szerint a DOX felszabadulásának felezési ideje 7-9 perc.
IV. vizsgálati módszer (teszt): stabilitás az emberi plazmában μΙ 10 mM koncentrációjú Z-Phe-Lys-PABCDOX-oldatot 1 ml frissen leszívott emberi plazmában oldunk. Az oldatból 50 μΙ térfogatú aliquot mintákat veszünk meghatározott időközökben, és 100 μΙ hideg metanollal hígítjuk. A mintákat centrifugáljuk, és a kapott folyadékot HPLC oszlopra fecskendezzük (a fentebb megadott körülmények megtartásával). Egy külön plazmamintához elegendő mennyiségű DOX-ot adunk, hogy a szubsztrátumból az elméleti mennyiség 1%-a szabaduljon fel. Ezt a fentiekben megadott módszerekkel sikeresen detektáltuk. A plazmában 7 óra eltelte után Z-Phe-Lys-PABC-DOX-ból származó, szabad DOX nem mutatható ki (a felezési idő 350 óránál nagyobb).
V. vizsgálati módszer (teszt): anyagok és módszerek
Emberi daganatsejttörzsek
Az L2987 tüdőadenokarcinóma-törzset I. Hellstromtól kaptuk (Bristol-Myers Squibb, Seattle, WA). A HCT116 kolorektális (vastagbél-végbél) daganattörzset M. Brattaintól (Baylor Inst., TX) kaptuk. Az A2780 petefészekkarcinóma-törzset K. Scanlontól (National Cancer Institute) szereztük be.
Kötési kísérletek
Kötési vizsgálatainkat közvetett immunfluoreszcenciás meghatározásokkal végeztük. Röviden összefoglalva úgy jártunk el, hogy a célsejteket logaritmikus szaporodási fázisukban tripszin/EDTA alkalmazásával PBS-ben begyűjtöttük (GIBCO, Grand Island, NY). A sejteket 1% szarvasmarha-szérumalbumint tartalmazó PBS-sel kétszer mostuk, utána ismét szuszpendáltuk 1% szarvasmarha-szérumalbumint (BSA) és 0,1% nátrium-azidot tartalmazó PBS-ben, 1*107 ml koncentrációban, 0,1 ml sejtszuszpenziót különböző antitestekkel (0,1 ml, 40 pg MAb/ml) és körülbelül 45 percig körülbelül 4 °C hőmérsékleten inkubáltuk. A sejteket kétszer mostuk 0,1 ml megfelelő koncentrációjú antihumán nyúl-lgG-vel (Cappel Laboratories, Cochranville, PA, Fab'2 fragmentum), majd ugyanolyan oldatban ismét szuszpendáltuk, körülbelül 30 percig körülbelül 4 °C hőmérsékleten inkubáltuk, kétszer mostuk, és jéggel hűtve tároltuk a Coulter EPICS 753 típusú, fluoreszcenciával aktivált sejtosztályozó segítségével végzett elemzésig. Az adatokat fluoreszcenciaintenzitásban (FI) fejeztük ki: ezt az értéket akkor kapjuk, ha a specifikus antitest átlagos csatornaszámából a kontroliantitest átlagos csatornaszámát levonjuk.
A citotoxicitás vizsgálata in vitro körülmények között
Emberi karcinómasejtek egyrétegű tenyészeteit tripszin-EDTA alkalmazásával (GIBCO, Grand Island, NY) összegyűjtöttük, a sejteket megszámoltuk, és 1*105/ml koncentrációban 10%, hővel inaktivált borjúmagzatszérumot tartalmazó BPMI-1640 oldatban ismét szuszpendáltuk. 96 üreges mikrotitrálólemezek minden egyes üregébe 0,1 ml sejtszuszpenziót adagoltunk, és a lemezeket nedves, 5% szén-dioxidot tartalmazó atmoszférában körülbelül 37 °C hőmérsékleten éjszakán át inkubáltuk. Ekkor a közeget a lemezekről eltávolítottuk, és az üregekbe sorozathígított DOX-ot vagy MAb-DOX konjugátumot adagoltunk. Valamennyi hígítást négy párhuzamos kísérletben vizsgáltuk. A sejteket körülbelül 2 órán át körülbelül 37 °C hőmérsékleten nedves, 5% szén-dioxidot tartalmazó atmoszférában helyeztük a DOX, illetve MAb-DOX konjugátumok hatása alá. Ezután a lemezeket 5 percig 200*g sebességgel centrifugáltuk, a hatóanyagot, illetve a konjugátumot eltávolítottuk, és a sejteket háromszor mostuk 10% FCS-t (borjúmagzatszérumot) tartalmazó RPMI közeggel. Ezt követően a sejteket 10% FCS-t tartalmazó RPMI-ben 37 °C hőmérsékleten, 5% szén-dioxidot tartalmazó atmoszférában további 48 órán át tenyésztettük, majd a sejteket körülbelül 2 órán át, üregenként 1,0 pCi 3H-timidinnel (New England Nuclear, Boston, MA) pulzáltuk. Ezután a sejteket üvegrostból készült lemezekre gyűjtöttük (Skatron Instruments, Inc., Sterling, VA), szárítottuk, és meghatároztuk a szűrőrétegen megkötött 3H-radioaktivitást (β-Plate scintillation counter, Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, NJ). A 3H-timidin felvételének gátlását úgy határoztuk meg, hogy a kezelt minták átlagos CPM (percenkénti beütésszám) értékét a kezeletlen kontroll átlagos CPM-értékéhez viszonyítottuk.
Eredmények
A kötési vizsgálatok eredményei
Az L2987, A2780 és HCT116 emberi karcinómatörzseket a BR96 antigén expressziója (kifejezése) vonatkozásában direkt immunfluoreszcenciás méréssel értékeltük ki. Amint az 1. ábra mutatja, az L2987 tüdőkarcinóma-törzs fejezte ki a BR96 antigént a legnagyobb sűrűségben (Fl=172,8); az A2780 petefészekkarcinóma-törzs a BR96 antigént kisebb sűrűségben fejezte ki (FI=103,2); a HCT116 vastagbélkarcinóma-törzs a
HU 224 351 Β1
BR96 antigént jelentős mennyiségben nem fejezte ki (FI=O).
A BR96-DOX-peptid kapcsolatú konjugátum citotoxicitása
A BR96-DOX-peptid immunkonjugátum in vitro hatékonyságát az L2987, A2780 és HCT116 emberi karcinómatörzsekkel szemben párhuzamosan értékeltük ki. Amint fentebb leírtuk, ezek a sejtek a BR96 antigént különböző sűrűségben fejezték ki (L2987>A2780>HCT116). Kiértékeltük továbbá a nem konjugált doxorubicint is. A 2. ábrából kitűnik, hogy a BR96-DOX konjugátum hatékonysága az L2987 tüdőkarcinóma-törzzsel szemben egyenértékű volt a nem konjugált DOX hatásával. A BR96-DOX konjugátum az A2780 petefészektörzzsel szemben körülbelül 50-szer kevésbé volt hatásos, mint a nem konjugált DOX. Az antigénnegatív HCT116 törzzsel szemben a BR96-DOX konjugátum hatástalannak bizonyult. Ez a törzs azonban érzékenynek mutatkozott a nem konjugált DOX-szal szemben. Ezek az adatok közvetlen kapcsolatra utalnak a BR96-DOX konjugátum in vitro hatékonysága és a BR96 antigén epitópsűrűsége között. Összefoglalva: a BR96-DOX konjugátum in vitro körülmények között antigénspecifikus citotoxicitást mutat, és a konjugátum hatékonysága a különböző sejttörzsek által kifejezett BR96 antigén sűrűségének a függvénye.
VI. vizsgálati módszer (teszt)
A BR96-PEPTID-DOX konjugátumot (MR=4,41) in vivő körülmények között (lásd az 1. táblázatot) beültetett L2987 humán tüdőkarcinóma-törzzsel szemben értékeltük ki. A terápiát a daganat beültetése után 14 nappal kezdtük, amikor a daganatok mérete megközelítőleg 75 mm3 méretet ért el.
A BR96-PEPTID-DOX konjugátum hatásos és tolerálható volt 1,25-20 mg/kg DOX-ekvivalens/injekció dózistartományban. Az első kísérletünkben magasabb dózisokat nem értékeltünk. Az 1. táblázatból látható, hogy a BR96-PEPTID-DOX konjugátum jelentősen hatáso15 sabb volt, mint az optimizált DOX 2,5 mg/kg DOX-ekvivalens/injekció dózisszinten. Az 1,25 mg/kg dózisban adagolt BR96-PEPTID-DOX konjugátum aktivitása hasonló volt a 8 mg/kg dózisban adagolt, nem konjugált DOX hatásához. Ezek az adatok valószínűsítik, hogy a
BB96-PEPTID-DOX konjugátumok hatékonysága in vivő körülmények között a BMS-182248 hatásosságához hasonló. A peptid-DOX konjugátumokat antigénspecifikus daganatgátló hatásuk vonatkozásában akkor fogjuk kiértékelni, ha egy nem kötődő (IgG-PEP25 TID-DOX) konjugátum előállítható.
1. táblázat
BR96-DOX-peptid konjugátumok daganatgátló hatása beültetett emberi daganattörzzsel szemben
Kezelés Dózis/injekció mg/kg Lóg sejtpusztulás A daganat csökkenésének %-os értéke Az egerek száma
DOX BR96 Teljes Részleges
DOX 8 - 2,4 10 0 10
6 - 1,5 0 0 10
10
BR96-DOX 20 1250 >7 100 0 9
10 625 >7 89 11 10
5 312 >7 100 0 10
2,5 156 >7 90 10 10
1,25 78 2,4 10 10 10
0,63 39 0,3 0 0 10
0,31 20 0,2 0 0 10
A fenti tesztek eredményei azt mutatják, hogy a találmány szerinti vegyületek igen hatékony daganatgátló szerek. E vegyületek a daganatsejteket in vitro körülmények között specifikusan célzó mechanizmus útján pusztítják el, aminek során a kapcsolt MAb BR96 a célzóegység, s erre utal az a tény, hogy leginkább azok a sejtek pusztulnak el, amelyek a MAb által felismerhető antigént nagy mennyiségekben fejezik ki; kevesebb olyan sejtet pusztít el a hatóanyag, amelyek kisebb mennyiségű antigént fejeznek ki; és az antigént nem termelő sejtek nem pusztulnak el. Mivel mindhárom sejttípus DOX-szal szemben érzékeny, ezeknek az eredményeknek abból a tényből kell eredniük, hogy a
DOX a sejtekhez történő különböző kötődés után szabadul fel, és nem a DOX különböző toxicitásának a következménye a különböző sejttörzsekkel szemben. A találmányunk szerinti mechanizmust alátámasztja az a megfigyelés, hogy a katepszin B - egy lizoszomális proteáz - a szabad DOX-ot gyorsan szabadítja fel mind a peptidkapcsolórészből, mind a teljes immunkonjugátumból. Mivel az emberi vérben esetlegesen esetenként jelen levő proteázok a DOX-ot sem a peptidkapcsolórészből, sem a teljes immunkonjugátumból nem szabadítják fel, arra következtethetünk, hogy az
HU 224 351 Β1 immunkonjugátum teljes épségben jut a daganatsejtekbe, és útja közben szabad DOX nem szabadul fel. Végül daganatot hordozó egereken, in vivő körülmények között végzett vizsgálatok azt mutatják, hogy a találmány szerinti immunkonjugátum nagyobb hatásfokkal és kisebb toxicitással váltja ki antigénpozitív daganatok remisszióját, mint a szabad DOX.
A találmány egy másik megvalósítási formája eljárást tesz lehetővé a fentiekben definiált (I) általános képletű vegyületek előállítására.
A találmány szerinti konjugátumokat a betegeknek gyógyászati készítmény alakjában adagoljuk, amely egy (I) általános képletű konjugátumot és gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyagot, hígítószert és/vagy segédanyagokat tartalmaz. A „gyógyászati szempontból elfogadható” megjelölés olyan komponensekre utal, amelyek meleg vérű állatok - például ember, ló, sertés, szarvasmarha, rágcsálók, egér, kutya, macska vagy más emlősállatok, továbbá szárnyasok vagy más meleg vérű állatok - kezelése vagy diagnózisa során alkalmazhatók.
Az adagolást előnyösen parenterálisan, különösen intravénás, intramuszkuláris, szubkután, intraperitoneális vagy intralimfatikus (nyirokrendszeri) úton végezzük. Az említett gyógyászati készítmények a szakterületen jártas egyén számára jól ismert hígító- és vivőanyagok, valamint segédanyagok alkalmazásával állíthatók elő. [Erre vonatkozóan lásd például: Remington’s Pharmaceutical Sciences 16. kiadás (1980), Mack Publishing Company, szerk. Osol és munkatársai.] Ezek a készítmények fehérjéket, például szérumfehérjéket, így emberi szérumalbumint, puffereket vagy pufferhatású anyagokat, így foszfátokat, egyéb sókat vagy elektrolitokat és ezekhez hasonló komponenseket tartalmazhatnak. Célszerűen alkalmazható hígítószer például a steril víz, izotóniás konyhasóoldat, híg vizes dextrózoldat, többértékű alkohol, így a glicerin, propilénglikol és polietilénglikol vagy ilyen alkoholok keverékei. A készítmények továbbá tartósítószereket, például fenil-etil-alkoholt, metil- és propil-parabént, timerozált tartalmazhatnak. Kívánt esetben a készítmény 0,05 tömegszázaléktól körülbelül 0,20 tömegszázalékig terjedő mennyiségben antioxidánst - például nátrium-metabiszulfitot vagy nátriun-hidrogén-szulfitot - is tartalmazhat.
Intravénás adagolás céljára a készítményt előnyösen úgy alakítjuk ki, hogy a betegnek adagolandó mennyiség körülbelül 1 g-tól körülbelül 250 g-ig terjedő mennyiségű kívánt konjugátum legyen. Az adagolt mennyiség előnyösen körülbelül 4 g és 25 g konjugátum közötti tartományban van. A találmány szerinti konjugátumok széles dózistartományban hatásosak; ez több tényezőtől, így a kezelésre szoruló betegség állapotától vagy a módosítani kívánt biológiai hatás mértékétől, a konjugátum adagolási módjától, a beteg életkorától, testsúlyától és fizikai állapotától, valamint más olyan tényezőktől függ, amelyeket a kezelőorvosnak kell meghatároznia. Ezért egy adott beteg számára adagolandó mennyiséget egyénileg kell meghatározni.
E leírásunkban idézett valamennyi közlemény feltételezi az ezen bejelentés szakterületén szerzett gyakorlatot. Valamennyi közleményt azon a helyen, ahol idéztük, hivatkozásként foglaljuk leírásunkba.
A szakmai gyakorlattal rendelkező egyén számára nyilvánvaló, hogy jóllehet az alább következő, készítményekre vonatkozó és kiviteli példákban megadott reagensek és reakciókörülmények specifikusak, mindezek módosítása nem lépi túl a találmány szellemét és oltalmi körét. Az alábbi készítmények és kiviteli példák a találmány részletesebb ismertetésére szolgálnak.
A színképi és egyéb szerkezetvizsgálati adatoknál az alábbi rövidítéseket, illetve jelöléseket alkalmazzuk:
s=szingulett; d=dublett; t=triplett; q=kvadruplett; n=multiplett, br=széles; br s=széles szingulett; br d=széles dublett; br t=széles triplett; br m=széles multiplett; DCI=közvetlen kémiai ionizáció; FAB=gyorsatombombázás.
1. példa [Allil-(p-nitro-fenil)]-karbonát [(1) képletű vegyület] előállítása
0,5 ml (7,35 mmol) allil-alkohol 3 ml diklór-metánnal (a következőkben röviden: DKM) készült oldatához 1,482 g (1 ekvivalens) (p-nitro-fenil)-(klór-formiát)-ot adunk szobahőmérsékleten, majd 10 perc alatt cseppenként adjuk hozzá 0,6 ml (1 ekvivalens) piridin és 2 ml DKM oldatát. A reakcióelegyet 5 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd sorrendben 15%-os citromsavoldattal, vízzel, végül telített konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A halványsárga, sűrű, olajszerű maradékot szilikagélen kromatografáljuk, eluálásra 10-50% etil-acetátot tartalmazó hexánt használunk, s így a cím szerinti vegyületet szürkésfehér, kristályos alakban 1,542 g (94%) hozammal kapjuk. 1H-NMR (CDCI3, ppm): 4,78 (2H, d, CH2-O), 5,40 (2H, q, vinil CH2), 5,99 (1H, m, vinil CH), 7,37 és 8,26 (4H, 2*d, Ph) MS (DCI): 224 (MH)+.
Elemzés a C10H9NO5 összegképlet alapján: számított: C-53,82, H^t,06, N-6,28%;
talált: C-53,73, H^t,03, N-6,23%.
2. példa
Na-Boc-N£-alloc-Lys [(2) képletű vegyület] előállítása
8,4414 g (34,27 mmol) Boc-Lys és 2,88 g (1 ekvivalens) nátrium-hidrogén-karbonát 50 ml vízzel készült oldatát szobahőmérsékleten 7,649 g (1 ekvivalens) (I) képletű [allil-(p-nitro-fenil)]-karbonát 50 ml DME-vel készült oldatához adjuk, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten másnapig keverjük, majd 80 ml vizet adunk hozzá, és háromszor extraháljuk 50 ml éterrel. A vizes fázist 10%-os citromsavoldattal 2-es pH-ra savanyítjuk, és háromszor extraháljuk 80 ml etil-acetáttal. Az egyesített szerves oldatot előbb vízzel, majd telített konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk, és bepároljuk. A fehér, szilárd maradékot 100 ml éterrel kezeljük, az így kapott keveréket körülbelül 15 percig ultrahanggal kezeljük a p-nitro-fenol oldása végett, a szilárd anyagot 10,303 g (91%) szűrőre gyűjtjük, és éterrel többször mossuk. 1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,41 (9H, s, t-Bu),
1,49 és 1,70 (6H, m, Lys CH2), 3,13 (2H, m, Lys
HU 224 351 Β1
N-CH2), 4,25 (1H, m, CH), 4,52 (2H, d, allil O-CH2), 5,24 (2H, q, vinil CH2), 5,87 (1H, m, vinil CH); MS (DCI): 331 (MH+), 275 (MH+-C4H8).
3. példa
N£-alloc-Lys-TFA [(3) képletű vegyület] előállítása 50 ml DKM-mel oldott 9,94 g (30 mmol) (2) képletű hP-Boc-hF-alloc-Lys-hez szobahőmérsékleten 19 ml TFA-t adunk, a keveréket rövid ideig ultrahanggal kezeljük, majd körülbelül 1 órán át keverjük. Az oldószereket körülbelül 40 °C hőmérsékleten lepároljuk, és a sárga, gumiszerű maradékot 75 ml éterrel átdolgozzuk, így fehér, szilárd termékként 8,58 g (83%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (D2O, δ ppm): 1,46 és 1,87 (4H, illetve 2H; m, Lys CH2), 3,11 (2H, m, N-CH2), 3,80 (1H, t, Lys CH), 4,51 (2H, széles s, allil O-CH2), 5,22 (2H, q, vinil CH2), 5,90 (1H, m, vinil CH); MS (DCI): 231 (MH)+.
Elemzés a Ci2H19N2O6F3 összegképlet alapján: számított: C-41,86, H-5,56, N-8,14%;
talált: C-42,30, H-5,52, N-8,29%.
4. példa
Z-Phe-NHS [(4) képletű vegyület] előállítása 11,03 g (36,85 mmol) Z-Phe, 4,45 g (1,1 ekvivalens) NHS és 50 ml THF keverékéhez 0 °C körüli hőmérsékleten 7,98 g (1,05 ekvivalens) DCC-t adagolunk. Néhány perc múlva nehéz, fehér csapadék kezd leválni. A reakcióelegyet szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, és körülbelül 16 órán át tovább keverjük. A szilárd DCU-mellékterméket szűrjük, a szűrletet bepároljuk. A színtelen, sűrű, olajszerű maradékot 80 ml DKM-ben oldjuk, az elegyet 1 órán át állni hagyjuk, majd az időközben még levált DCU-t kiszűrjük. A szűrletet bepároljuk, az üvegszerű, színtelen maradékot vákuumban, körülbelül 3 órán át szárítjuk, s így 14,023 g (96%) habszerű, szilárd, cím szerinti terméket kapunk, amelyet további tisztítás nélkül felhasználunk. 1H-NMR (CDCl3/CD3OD, δ ppm): 2,88 (4H, s, NHS
CH2), 3,27 (2H, m, Phe CH2), 4,70 (1H, m, Phe CH), 5,13 (2H, s, Z CH2), 7,27 (10H, m, Ph).
5. példa
Z-Phe-Ni;-alloc-Lys [(5) képletű vegyület] előállítása 2,783 g (7,021 mmol) (4) képletű Z-Phe-NHS és ml DME elegyéhez szobahőmérsékleten 2,54 g (1,05 ekvivalens) NE-alloc-Lys-TFA és 1,24 g (2,1 ekvivalens) nátrium-hidrogén-karbonát 30 ml vízzel készült oldatát adjuk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 2 napon át erélyesen keverjük, a kis mennyiségű DCU-csapadékot szűrjük, a szűrletet 50 ml vízzel hígítjuk, és 15%-os citromavoldattal pH 3-ig savanyítjuk. Az így kapott keveréket háromszor extraháljuk 30 ml etil-acetáttal, az egyesített szerves fázist előbb vízzel, majd konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk, bepároljuk. Az üvegszerű, szilárd maradékot 150 ml étemel, utána ultrahanggal kezeljük, majd vízfürdőben 50 °C-ra melegítjük. A hűtés hatására kivált fehér, szilárd terméket szűrjük, éterrel mossuk, s így 2,79 g (78%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, ppm): 1,25, 1,43, 1,74 és l, 81 (6H, m, Lys CH2), 3,00 (2H, m, Phe CH2), 3,08 (2H, m, N-CH2), 4,43 (2H, m, CO-CH), 4,48 (2H, d, alliles O-CH2), 5,02 (2H, m, Z CH2), 5,20 (2H, q, vinil CH2), 5,84 (1H, m, vinil CH), 7,22 (10H, m, Ph); MS (FAB): 512 (MH)+, 534 (M+Na)+, 556 (M+K)+.
Elemzés a C27H33N3O7 összegképlet alapján: számított: C-63,39, H-6,50, N-8,21%;
talált: C-62,98, H-6,48, N-8,21%.
6. példa
Z-Phe-NE-alloc-Lys-PAB-OH [(6) képletű vegyület] előállítása
524,7 mg (1,026 mmol) (5) képletű Z-Phe-NE-alloc-Lys és 133 mg (1,05 ekvivalens) p-aminobenzil-alkohol 10 ml THF-fel készült oldatát szobahőmérsékleten 266,3 mg (1,05 ekvivalens) EEDQ-val kezeljük, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük, majd körülbelül 30 °C-on szárazra pároljuk. A maradékot 15 ml éterrel elkeverjük, a csapadékot szűrjük, éterrel mossuk, így fehér, szilárd termékként 591,6 mg (94%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCl3/CD3, δ ppm): 1,25, 1,42, 1,59 és 1,77 (6H, m, Lys CH2), 2,97 (2H, m, Phe CH2), 3,06 (2H, m, N-CH2), 4,37 (2H, m, Phe és Lys CH), 4,46 (2H, d, allil O-CH2), 4,55 (2H, s, Ph-C/72-OH), 4,98 (2H, m, Z CH2), 5,18 (2H, q, vinil CH2), 5,81 (1H, m, vinil CH) 7,08 és 7,43 (4H, 2*d, PAB Ph), 7,11 és 7,23 (10H, m, Z és Phe Ph); MS (FAB): 617 (MH)+, 639 (M+Na)+, 655 (M+K)+.
Elemzés a C35H40N4O7 összegképlet alapján: számított: C-66,22, H-6,54, N-9,08%;
talált: C-65,72, H-6,43, N-8,92%.
7. példa
Z-Phe-NE-alloc-Lys-PABC-PNP [(7) képletű vegyület] előállítása
269,6 mg (437,2 pmol) (6) képletű Z-Phe-N£-alloc-Lys-PAB-OH és 8 ml száraz THF oldatához szobahőmérsékleten 106 mg (1,2 ekvivalens) (p-nitro-fenil)-(klór-formiát)-ot és 42,5 μΙ (1,2 ekvivalens) piridint adunk. Körülbelül 6 óra múlva a VRK vizsgálat (szilikagélen, eluálószer DKM és metanol 25:1 arányú elegye) jelzi a reakció befejeződését. A reakcióelegyhez 25 ml etil-acetátot és 25 ml 10%-os citromsavoldatot adunk, a szerves fázist elválasztás után vízzel és konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A sárga, szilárd maradékot szilikagélen kromatografáljuk, eluálásra DKM és metanol 30:1 arányú elegyét használjuk, így
297,4 mg (87%) cím szerinti, szürkésfehér szilárd terméket kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,24, 1,42, 1,59 és
1,78 (6H, m, Lys CH2), 2,97 (2H, m, N-CH2), 3,04 (2H, m, Phe CH2), 4,38 (2H, m, Phe és Lys CH),
4,46 (2H, d, allil O-CH2), 5,01 (2H, s, Z CH2), 5,17 (2H, q, vinil CH2), 5,21 (2H, s, PAB CH2-O),
5,37 és 5,80 (mindegyik 1H, m, Phe és Lys NH),
5,83 (1H, m, vinil CH), 7,11 és 7,56 (4H, 2*d, PAB
Ph), 7,13 és 7,25 (10H, m, Phe és Z Ph), 7,35 és
HU 224 351 Β1
8,10 (mindegyik2H, d, PNP Ph), 9,23 (1H, széless,
PAB NH); MS (FAB): 782 (MH+), 804 (M+Na)+, 820 (M+K)+.
Elemzés a C41H43N5O11 összegképlet alapján: számított: C-62,99, H-5,54, N-8,96%;
talált: C-62,75, H-5,49, N-8,86%.
8. példa
Z-Phe-NE-alloc-Lys-PABC-DOX [(8) képletű vegyület] előállítása
337,2 mg (431,3 μιτιοΙ) (7) képletű Z-Phe-NE-alloc-Lys-PABC-PNP, 275,2 mg (1,1 ekvivalens) DOX-HCI és 8 ml NMP elegyéhez szobahőmérsékleten 66 μΙ (1,1 ekvivalens) trietil-amint adunk, és a reakcióelegyet fénytől védve körülbelül 2 napig állni hagyjuk. Ekkor az elegyet 100 ml, 10% izopropanolt tartalmazó etil-acetáttal hígítjuk, háromszor mossuk 100 ml vízzel, majd konyhasóoldattal szárítjuk és bepároljuk. A narancsszínű, szilárd maradékot szilikagélen kromatografáljuk, első eluálásra DKM és metanol 25:1 arányú elegyét, második eluálásra DKM és metanol 15:1 arányú elegyét alkalmazzuk. így 496,3 mg (97%) cím szerinti, narancsszínű, szilárd terméket kapunk. 1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,18 (3H, d, cukor
CH3), 1,22, 1,38, 1,56 és 1,77 (6H, m, Lys CH2),
1,74 (2H, m, D-gyűrű CH2), 2,23 (2H, m, D-gyűrű
CH2), 2,95 (2H, m, cukor CH2), 3,02 (2H, m,
N-CH2), 3,53 (1H, s, cukor HO-CW), 3,80 (1H, m, cukor HN-CH), 3,99 (3H, s, OCH3), 4,06 (1H, m, cukor CH3-CH), 4,39 (2H, m, Phe és Lys CH), 4,43 (2H, d, allil O-CH2), 4,70 (2H, s, PAB CH2-O), 4,89 (2H, m, Z CH2), 4,92 (1H, m, anomer CH), 4,96 (2H, d, CO-CH2-OH), 5,15 (2H, q, vinil CH2), 5,11, 5,39 (mindegyik 1H, s, OH), 5,41 (1H, széles, DOX Ph-CH), 5,60 és 5,92 (mindegyik 1H, m, amid NH), 5,79 (1H, m, vinil CH), 7,08 és 7,23 (10H, m, Phe és Z Ph), 7,13 és 7,40 (4H, 2*d, PAB Ph), 7,50,
7,68 és 7,90 (mindegyik 1H, m, DOX Ph), 9,15 (1H, széles s, PAB NH); MS (FAB): 1209 (M+Na)+, 1224 (M+K)+; HRMS (FAB):
Pontos molekulatömeg a C62H67N5O19 összegképletre:
számított: 1186,4509;
talált; 1186,4463.
9. példa
Z-Phe-Lys-PABC-DOX-HCI [(9) képletű vegyület] előállítása
34,9 mg (29,4 pmol) (8) képletű Z-Phe-NE-ailoc-Lys-PABC-DOX, 0,6 mg (3%) (PPh3)2PdCI2 és 1 ml száras THF elegyéhez szobahőmérsékleten, argongáz alatt előbb 3,5 μΙ (2 ekvivalens) ecetsavat, majd 10 μΙ (1,2 ekvivalens) Bu3SnH-t adunk, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül másfél órán át keverjük, majd 60 μΙ (2 ekvivalens) 1 mólos éteres hidrogén-klorid-oldatot adunk hozzá. Az elegyet körülbelül 1 órán át tartjuk hűtőszekrényben, utána a narancsvörös, szilárd nyersterméket szűrjük, éterrel többször mossuk, majd az üvegszűrőről DKM és metanol 5:1 arányú elegyével leoldjuk, és a szűrletet bepároljuk. A maradékot 5 ml metanolban felvéve ultrahanggal kezeljük legnagyobb részének a feloldására, utána az oldatlan, vörös mellékterméket szűréssel eltávolítjuk. A szűrlet bepárlása után szilárd, narancsvörös maradékként 25,1 mg (75%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,18 (2H, d, cukor CH3), 1,34, 1,65 és 1,73 (6H, m, Lys CH2), 2,14 (2H, m, cukor CH2), 2,81 (2H, m, CH2-NH3+), 3,76 (1H, m, cukor HO-CH), 3,98 (3H, s, OCH3), 4,05 (1H, m, HN-CH), 4,38 és 4,45 (mindegyik 1H, m, Phe és Lys CH), 4,67 (2H, s, CO-CH2-OH), 4,85 (1H, m, anomer CH), 7,04 és 7,20 (10H, m, Z és Phe Ph), 7,14 és 7,43 (4H, m, PAB Ph), 7,30,
7,69 és 7,92 (mindegyik 1H, m, DOX Ph); HPLC [C—18, 15 cm-es oszlop, 8:2 MeOH/50 mM Et3N-HCO2H puffer (pH 2,8), 1 ml/perc, 495 nm] egyetlen csúcs, retenciós ideje 7,1-7,2 perc, MS (FAB): 1102 (MH+), 1124 (M+Na)+; HRMS (FAB):
Pontos molekulatömeg a C58H64N5Oi7 összegképletre:
számított: 1102,4297;
talált: 1102,4260.
10. példa
Z-Val-NHS [(10) képletű vegyület] előállítása
699,4 mg (2,78 mmol) Z-Val, 352,4 mg (1,1 ekvivalens) NHS és 20 ml THF elegyéhez 0 °C körüli hőmérsékleten 632 mg (1,1 ekvivalens) DCC-t adunk. A rekcióelegy feldolgozását a fentebb a (4) képletű Z-Phe-NMS esetére leírt módon végezzük, így a cím szerinti terméket szilárd, üvegszerű alakban kapjuk, és a következő lépésben tisztítás nélkül alkalmazzuk. 1H-NMR δ ppm: 1,03 (6H, 2*d, Val CH3), 2,31 (1H, m,
Val CH3-CH), 2,82 (4H, s, NHS CH2), 4,65 (1H, AB Q, Val CO-CH), 5,12 (2H, s, Z CH2), 5,30 (1H, d, NH), 7,34 (5H, m, Ph).
11. példa
Z-Val-NE-alloc-Lys [(11) képletű vegyület] előállítása
Körülbelül 2,78 mmol (10) képletű Z-Val-NHS 30 ml
DME-vel készült oldatát 958,3 mg (1 ekvivalens) (3) képletű NE-alloc-Lys-TFA és 468 mg (2 ekvivalens) nátrium-hidrogén-karbonát 20 ml vízzel készült oldatához adjuk. A reakció feldolgozását a fentebb az (5) képletű termékre megadott módon végezzük, s így 1,2855 g (kvantitatív) hozammal kapjuk a fehér, szilárd, cím szerinti vegyületet.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 0,89 (6H, 2*d, Val CH3), 1,30, 1,42, 1,62 és 1,81 (6H, m, Lys CHZ), 2,03 (1H, m, Val CH3-CH), 3,07 (2H, m, Lys N-CH2), 3,92 (1H, AB q, Lys CH), 4,42 (1H, m, Val CO-CH), 4,49 (2H, d, allil O-CH2), 5,06 (2H, s, Z CH2), 5,19 (2H, q, vinil CH2), 5,82 (1H, m, vinil CH), 7,28 (5H, m, Ph); MS (FAB): 949 (MH+), 971 (M+Na)+, 987 (M+K)+.
Elemzés a C23H33N3O7 összegképlet alapján: számított: C-59,60, H-7,18, N-9,07%;
talált: C-59,94, H-7,31, N-8,90%.
HU 224 351 Β1
12. példa
Z-Val-N£-alloc-Lys-PAB-OH [(12) képletű vegyület] előállítása
587,9 mg (1,27 mmol) (13) képletű Z-Val-Nc-alloc-Lys, 172 mg (1,1 ekvivalens) p-amino-benzilalkohol és 20 ml THF elegyéhez szobahőmérsékleten 345 mg (1,1 ekvivalens) EEDQ-t adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 16 órán át keverjük, majd a fentebb a (6) képletű vegyületre megadott módon feldolgozzuk, s így 591,0 mg (82%) fehér, szilárd, cím szerinti terméket kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 0,86 (6H, m, Val
CH3), 1,24-1,67 (6H, m, Lys CH2), 2,03 (m, 1H, Val
CH3-CW), 3,08 (2H, m, Lys N-CH2), 4,00 (1H, m,
Lys CH), 4,47 (3H, m, Val CO-CH és allil O-CH2),
4,57 (2H, s, PAB-CH2-OH), 5,05 (2H, s, Z CH2),
5,19 (2H, q vinil CH2), 5,81 (1H, m, vinil CH),
7,26 és 7,43 (4H, m, PAB Ph), 7,30 (5H, s, Z Ph);
MS (FAB): 569 (MH)+, 591 (M+Na)+, 607 (M+K)+. Elemzés a C3oH40N407.1/2 H2O összegképlet alapján: számított: C-62,38, H-7,15, N-9,70%;
talált: C-62,40, H-7,22, N-9,79%.
13. példa
Z-Val-NE-alloc-Lys-PABC-PNP [(13) képletű vegyület] előállítása
297,4 mg (523 μιτιοΙ) (12) képletű Z-Val-NE-alloc-Lys-PAB-OH, 264 mg (2,5 ekvivalens) (p-nitrofenil)-(klór-formiát) és 15 ml DKM elegyéhez szobahőmérsékleten 106 μΙ (2,5 ekvivalens) piridint adunk, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük. A feldolgozást a fentebb a (7) képletű vegyületre leírt módon végezzük, s így fehér, szilárd termékként 271,0 mg (71%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 0,91 (6H, m, Val
CH3), 1,33-1,87 (6H, Lys CH2), 2,02 (1H, m, Val
CH3-CH), 3,08 (2H, m, Lys N-CH2), 3,95 (1H, m,
Lys CH), 4,41 (1H, m, Val CO-CH), 4,48 (2H, d, allil
O-CH2), 5,06 (2H, s, Z CH2), 5,17 (2H, q, vinil
CH2), 5,20 (2H, s, PAB CH2), 5,82 (1H, m, vinil
CH), 7,23 és 7,58 (4H, m, PAB Ph), 7,30 (5H, m, Z
Ph), 7,38 és 8,31 (4H, m, PNP Ph); MS (FAB): 734 (MH+), 756 (M+Na)+, 772 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a C37H44N50ii összegképletre:
számított: 734,3037;
talált: 734,3036.
14. példa
Z-Val-NE-alloc-Lys-PABC-DOX [(14) képletű vegyület] előállítása
260,0 mg (354 μιτιοΙ) (13) képletű Z-Val-NE-alloc-Lys-PABC-PNP és 216 mg (1,05 ekvivalens) DOX-HCI 12 ml NMP-vel készült oldatához szobahőmérsékleten 52 μΙ trietil-amint adunk, és a reakcióelegyet fénytől védve 2 napig állni hagyjuk. A feldolgozást a fentebb a (8) képletű vegyületre megadott módon végezzük, s így a cím szerinti terméket narancsszínű, szilárd alakban 278,0 mg (69%) hozammal kapjuk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 0,83 (6H, m, Val
CH3), 1,18 (3H, d, cukor CH3), 1,29, 1,41, 1,63 és
1,79 (6H, m, Lys CH2), 1,72 (2H, m, D-gyűrű CH2),
1,98 (1H, m, Val CH3-CH), 2,14 (2H, D-gyűrű
CH2), 3,03 (2H, q, cukor CH2), 3,02 (2H, m, Lys
N-CH2), 3,52 (1H, m, cukor HO-CH), 3,76 (1H, m, cukor N-CH), 3,94 (1H, m, Lys CH), 3,99 (3H, s, O-CH3), 4,39 (1H, m, Val CO-CH), 4,42 (2H, d, allil O-CH2), 4,69 (2H, s, PAB CH2), 4,88 (2H, m, Z CH2), 5,01 (2H, d, CO-CH2-OH), 5,14 (2H, q, vinil CH2), 5,18 (1H, m, anomer CH), 5,41 (1H, br, DOX Ph-CH), 5,80 (1H, m, vinil CH), 7,13 és 7,40 (4H, PAB Ph), 7,26 (5H, s, Z Ph), 7,32,
7,70 és 7,93 (mindegyik 1H m, DOX Ph), 9,25 (1H, széles, PAB NH); MS (FAB) 1160 (M+Na)+, 1176 (M+K).
Pontos molekulatömeg a C58H67N5O19 összegképletre:
számított: 1160,4328;
talált: 1160,4358.
15. példa
Z-Val-Lys-PABC-DOX-HCI [(15) képletű vegyület] előállítása
84,3 mg (74,06 μιτιοΙ) (14) képletű Z-Val-NE-alloc-Lys-PABC-DOX és 2 ml THF elegyébez szobahőmérsékleten, argongáz alatt 4,7 mg (5,13 μιτιοΙ) Pd2dba3-t és 13,5 mg (10 ekvivalens) PPh3-t tartalmazó 1 ml THF-oldatból argongáz alatt 220 μΙ-t, továbbá 11 μΙ (2,5 ekvivalens) ecetsavat és 30 μΙ (1,5 ekvivalens) tributil-ón-hidridet adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten fénytől védve körülbelül 1 órán át keverjük, eközben narancsszínű, szilárd csapadék kiválása kezdődik. Az elegyet előbb 2 ml éterrel, majd 1 ml 1 mólos éteres hidrogén-klorid-oldattal, majd további 25 ml éterrel hígítjuk. A kapott szuszpenziót rövid ideig ultrahanggal kezeljük, majd szűrjük. A narancsszínű, szilárd terméket éterrel többször mossuk, majd DKM és metanol 5:1 arányú elegyében oldjuk, körülbelül 2 g celitet adunk hozzá, és az oldószereket lepároljuk. Az így kapott, szilárd terméket szárazon celitoszlop tetejére helyezzük (az oszlopot 100:1 arányú DKM/metanol keverékkel állítjuk elő). Az oszlopot először DKM és metanol 100:1 arányú elegyével, majd ezt követően 10:1 arányú elegyével eluáljuk, s így narancsszínű, szilárd alakban 58,5 mg (72,4%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (kiválasztott csúcsok, CDCI3/CD3OD, δ ppm):
(allilcsúcsok vesztése) 0,83 (6H, m, Val CH3), 1,20 (3H, d, cukor CH3), 2,02 (1H, m, Val CH3-CH), 4,01 (3H, s, O-CH3), 7,10-7,57 (9H, m, Ph), 7,32,
7,72 és 7,91 (mindegyik 1H, m, DOX Ph); HPLC [C—18, 15 cm-es oszlop, 8:2 MeOH/50 mM
Et3N-HCO2H puffer (pH 2,8), 1 ml/perc, 495 nm]: egyetlen csúcs, retenciós ideje 6,1-6,4 perc; MS (FAB) 1054 (MH)+.
Pontos molekulatömeg a C54H64N5O17 összegképletre:
számított: 1054,4297;
talált: 1054,4283.
HU 224 351 Β1
16. példa
Alloc-D-Phe [(16) képletű vegyület] előállítása
2,0203 g (12,29 mmol) D-Phe, 1,08 g (1,05 ekvivalens) nátrium-hidrogén-karbonát és 30 ml víz elegyéhez 2,13 ml (1,05 ekvivalens) diallil-dikarbonát és 30 ml DME elegyét adjuk, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük, majd 15%-os citromsavoldatba öntjük. Az így kapott szuszpenziót kétszer extraháljuk 100 ml etil-acetáttal, az egyesített szerves fázist előbb háromszor 100 ml vízzel, majd konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk, és bepároljuk. Az így kapott színtelen, habszerű termék hozama 3,002 g (98%), és eléggé tiszta a következő lépésben történő felhasználásra.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 3,13 (2H, AB q, Phe
CH2), 4,52 (2H, d, CH2-O), 4,64 (1H, q, Phe CH),
5,20 (2H, q, vinil CH2), 5,85 (1H, m, vinil CH), 7,21 (5H, m, Ph); MS (DCI). 250 (MH)+ 192 (M-C3H5O)+. Elemzés a C13Hi5NO4.H2O összegképlet alapján: számított: C-58,42, H-6,40, N-5,24%;
talált: C-58,81, H-5,87, N-5,36%.
17. példa
Alloc-D-Phe-NHS [(17) képletű vegyület] előállítása
3,002 g (12,04 mmol) alloc-D-Phe [(16) képletű vegyület] és 1,525 g (1,1 ekvivalens) NHS DKM-mel készült oldatához 0 °C körüli hőmérsékleten 2,733 g (1,1 ekvivalens) DCC-t adunk. A jégfürdőt szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük. A feldolgozást a fentebb a (4) képletű vegyület előállítására megadott módon végezve a cím szerinti vegyületet színtelen, habszerű formában 4,045 g (97%) hozammal kapjuk, és további tisztítás nélkül alkalmazzuk.
18. példa
Alloc-D-Phe-Phe [(18) képletű vegyület] előállítása
1,7654 g (5,10 mmol) alloc-D-Phe-NHS és 30 ml BME oldatához szobahőmérsékleten 1,263 g (1,5 ekvivalens) Phe és 642,3 mg (1,5 ekvivalens) nátrium-hidrogén-karbonát 20 ml vízzel készült oldatát adjuk, a reakcióelegyet körülbelül 16 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd 100 ml 15%-os citromsavoldatba öntjük, és az így kapott szuszpenziót kétszer extraháljuk 100 ml etil-acetáttal. Az egyesített szerves fázist háromszor mossuk vízzel, utána konyhasóoldattal, majd szárítjuk, bepároljuk. A színtelen, üvegszerű maradékhoz 30 ml étert adunk, és az elegyet szobahőmérsékleten mintegy 15 percig ultrahanggal kezeljük, majd hűtőszekrényben tartjuk egy órán át. A szilárd csapadékot szűrjük, éterrel mossuk, s így 1,6973 g (84%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 2,83-3,16 (4H, m,
Ph-CH2), 4,45 (2H, d, CH2-O), 4,63 és 4,89 (mindegyik 1H, m, N-CH), 5,21 (2H, q, vinil CH2), 5,81 (1H, m, vinil CH), 6,93-7,34 (10H, m, Ph); MS (DCI): 397 (MH)+.
Elemzés a C22H24N2O5 összegképlet alapján: számított: C-66,65, H-6,10, N-7,07%;
talált: C-66,42, H-6,19, N-7,09%.
19. példa
Alloc-D-Phe-Phe-NHS [(19) képletű vegyület] előállítása
1,0151 g (2,60 mmol) (18) képletű alloc-D-Phe-Phe és 324,2 mg (1,1 ekvivalens) NHS 25 ml DKM-mel készült oldatához 0 °C hőmérsékleten 555 mg (1,05 ekvivalens) DCC-t adunk. A jégfürdőt szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, és a reakcióelegyet körülbelül 18 órán át keverjük. A szilárd DCU-t szűrjük, a szűrletből az oldószert lepároljuk. A maradékot etil-acetátban oldjuk, vízzel kétszer, majd konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. így 1,2897 g (100%) cím szerinti fehér, szilárd terméket kapunk, melyet további tisztítás nélkül használunk.
20. példa
Alloc-D-Phe-Phe-Nc-alloc-Lys [(20) képletű vegyület] előállítása
1,2897 g (2,61 mmol) (19) képletű alloc-D-PhePhe-NHS 40 ml DME-vel készült oldatához 945 mg (1,05 ekvivalens) NE-alloc-Lys-TFA és 461 mg (2,1 ekvivalens) nátrium-hidrogén-karbonát 20 ml vízzel készült oldatát adjuk, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át erélyesen keverjük, majd a feldolgozást a fentebb a (18) képletű termék előállítására leírt módon végezzük, s így fehér, szilárd nyersterméket kapunk. Ezt éterben szuszpendáljuk, és felváltva ultrahanggal kezeljük, illetve több percig körülbelül 40 °C-ra melegítjük, majd körülbelül 2 órán át 4 °C hőmérsékleten tartjuk, és szűrjük. Az így kapott fehér, szilárd terméket hideg éterrel mossuk, szárítjuk, s így 1,2046 g (76%) cím szerinti vegyületet kapunk. 1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,21-1,94 (6H, 4*m,
Lys CH2), 2,79 és 2,91 (mindegyik 2H, m, Phe
CH2), 3,08 (2H, m, N-CH2), 4,29 (1H, m, Lys CH),
4,38 és 4,59 (mindegyik 1H, m, Phe CH), 4,45 és
4,53 (mindegyik 2H, d, allil O-CH2), 5,20 (4H, m, vinil CH2), 5,85 (2H, m, vinil CH), 7,06-7,27 (10H, m, Ph); MS (FAB): 609 (MH)+, 631 (M+Na)+, 647 (M+K)+.
Elemzés a C32H40N4O8 összegképlet alapján: számított: C-63,14, H-6,62, N-9,20%;
talált: C-63,05, H-6,78, N-9,25%.
21. példa
Alloc-D-Phe-Phe-N£-alloc-Lys-PAB-OH [(21) képletű vegyület] előállítása
616,8 mg (1,013 mmol) alloc-D-Phe-Phe-NE-alloc-Lys [(20) képletű vegyület], 137,3 mg (1,1 ekvivalens) p-amino-benzil-alkohol és 12 ml THF oldatához szobahőmérsékleten 276 mg (1,1 ekvivalens) EEDQ-t adunk, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 18 órán át keverjük, majd a fentebb a (6) képletű vegyület feldolgozására leírt módon feldolgozzuk, s így fehér, szilárd termékként 685,7 mg (95%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CO3OD, δ ppm): 1,20-1,98 (6H, 4*m,
Lys CH2), 2,95 (4H, m, Phe CH2), 3,08 (2H, m,
N-CH2), 4,25 (2H, AB q, allil O-CH2), 4,49 (2H, d, allil O-CH2), 4,57 (2H, s, PAB CH2), 5,15 (4H, m,
HU 224 351 Β1 vinil CH2), 5,62 és 5,87 (mindegyik 1H, m, vinil CH), 6,96 és 7,54 (mindegyik 2H, m, PAB Ph), 7,06-7,31 (10H, m, Ph); MS (FAB): 714 (MH)+, 736 (M+Na)+, 752 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a C39H47N5O8 összegképletre: számított: 714,3503;
talált: 714,3494.
Elemzés a C39H47N5O8.H2O összegképlet alapján: számított: C-64,01, H-6,75, N-9,57%;
talált: C-64,39, H-6,63, N-9,54%.
22. példa
Alloc-D-Phe-Phe-NF-allOC-Lys-PABC-PNP [(22) képletű vegyület] előállítása
330,8 mg (463,4 μιτιοΙ) (21) képletű alloc-D-PhePhe-NE-alloc-Lys-PAB-OH, 140,1 mg (1,5 ekvivalens) (p-nitro-fenil)-(klór-formiát) és 20 ml DKM elegyéhez szobahőmérsékleten 56,2 μΙ (1,5 ekvivalens) száraz piridint adunk. A feldolgozást az előbbiekben a (7) képletű vegyületre leírt módon végezzük, s így fehér, szilárd termékként 379,0 mg (93%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,20-2,00 (6H, 4xm, Lys CH2), 2,97 (4H, m, Phe CH2), 3,10 (2H, m, N-CH2), 4,21 (2H, AB q, allil O-CH2), 4,30, 4,52 és 4,67 (mindegyik 1H, m, N-CH), 4,49 (2H, d, allil O-CH2), 5,10 (2H, m, vinil CH2), 5,22 (2H, s, PAB CH2), 5,58 és 5,87 (mindegyik 1H, m, vinil CH), 6,93 és 7,66 (mindegyik 2H, m, PAB Ph), 7,04-7,25 (10H, m, Ph), 7,32 és 8,04 (mindegyik 2H, m, PNP Ph); MS (FAB): 879 (MH)+, 901 (M+Na)+, 917 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a C46H51N6O12 összegképletre:
számított: 879,3565;
talált: 879,3533.
23. példa
Alloc-D-Phe-Phe-N£-alloc-Lys-PABC-DOX [(23) képletű vegyület] előállítása
379,0 mg (431,2 mmol) (22) képletű alloc-D-Pho-Phe-N£-alloc-Lys-PABG-PNP, 262,6 mg (1,05 ekvivalens) DOX-HCI és 10 ml BMP elegyét 63 ml (1,05 ekvivalens) trietil-aminnal kezeljük. A reakcióelegyet fénytől védve szobahőmérsékleten 2 napig állni hagyjuk, majd 150 ml, 10% izopropanolt tartalmazó etil-acetáttal hígítjuk. Az oldatot négyszer mossuk vízzel, majd konyhasóoldattal, a kis mennyiségű narancsszínű, szilárd mellékterméket szűrjük, a szűrletet bepároljuk. A narancsszínű, szilárd maradékot szilikagélen kromatografáljuk, első eluálószerként 30:1 arányú, második eluálószerként 15:1 arányú DKM-metanol elegyet alkalmazunk, s így narancsszínű, szilárd alakban 418,8 mg (76%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,21 (3H, d, cukor CH3), 1,28-1,96 (6H, 4*m, Lys CH2), 1,76 (2H, m, D-gyűrű CH2), 2,18 (D-gyűrű CH2), 2,87 (2H, m, cukor CH2), 3,05 (2H, m, N-CH2), 3,55 (1H, s, cukor HO-CH), 3,78 (1H, m, cukor N-CH), 3,99 (3H, s,
CH3-O), 4,10 (1H, m, cukor CH3-CH), 4,26 (2H, m, allil O-CH2), 4,40 (3H, m, CO-CH), 4,45 (2H, d, allil O-CH2), 4,70 (2H, s, CO-CH2-OH), 4,89 (2H, m, PAB CH2), 5,16 (4H, m, vinil CH2), 5,20 (1H, s, anomer CH), 5,41 (1H, s, DOX Ph-CH), 5,52 és 5,80 (mindegyik 1H, m, vinil CH), 6,85-7,52 (14H, m, Ph), 7,32, 7,72 és 7,97 (mindegyik 1H, m, DOX Ph); MS (FAB-): 1282,4 (MH).
Pontos molekulatömeg a C67H74N6O 20Na összegképletre:
számított: 1305,4856;
talált: 1305,4877.
24. példa
D-Phe-Phe-Lys-PABC-DOX-2HCI [(24) képletű vegyület] előállítása
164,0 mg (127,8 μιτιοΙ) alloc-D-Phe-Phe-NE-alloc-Lys-PABC-DOX [(23) képletű vegyület] és 4 ml 2:1 arányú, gázmentesített DKM-metanol elegyhez szobahőmérsékleten argongáz alatt előbb 37 μΙ (5 ekvivalens) ecetsavat, majd 460 μΙ Pd(PPh3)4-oldatot (6,4 mg Pd2dba3 és 18 mg PPh3 1 ml 2:1 arányú, gázmentesített DKM-metanol keverékben) adunk, az így kapott keverékhez 61 μΙ (3 ekvivalens) trietil-szilánt adunk, és a reakcióelegyet fénytől védve szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük, majd az oldószereket forgóbepárló készülékben 40 °C hőmérsékleten eltávolítjuk.
A narancsszínű, üvegszerű maradékhoz 2 ml étert és 1 ml 1 mólos éteres hidrogén-klorid-oldatot adunk, és az így kapott elegyet több percig ultrahanggal kezeljük. A narancsszínű, szilárd terméket szűrjük, és amennyire lehetséges - vízben felvesszük. Az oldatlan anyagot kiszűrjük, a szűrletet szárazra pároljuk, a maradékot celiten kromatografáljuk. Első eluálószerként 50:1, második eluálószerként 12:1, harmadik eluálószerként 5:1 arányú DKM-metanol elegyet használunk. Az első eluálószer némi változatlan anyagot eluál, ezt követi az egyik védőcsoportjától mentesített termék, majd a harmadik eluálással kapjuk a cím szerinti vegyületet 100,4 mg (66%) hozammal.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,12 (3H, d, cukor
CH3), 1,00-1,90 (8H, m, Lys CH2 és D-gyűrű CH2),
2,07 (2H, m, D-gyűrű CH2), 2,55-3,16 (8H, m, +H3N-CH2), cukor CH2, Phe CH2), 3,45 (1H, s, cukor HO-CH), 3,70 (1H, m, cukor N-CH), 3,90 (3H, s, O-CH3), 4,21, 4,33 és 4,43 (mindegyik 1H, m, CO-CH), 4,61 (2H, s, CO-CH2-OH), 4,80 (2H, m, PAB CH2), 5,12 (1H, széles s, anomer CH), 5,33 (1H, széles s, DOX Ph-CH), 6,80-7,90 (17H, m, Ph); HPLC: [C-18, 15 cm-es oszlop 8:2 MeOH/50 mM Et3N-HCO2H puffer (pH 2,8), 1 ml/perc, 495 nm] egyetlen csúcs, retenciós ideje 5,5-5,8 perc; MS (FAB); 1114,6 (MH).
25. példa
Z-Val-Cit [(26) képletű vegyület] előállítása
2,98 g (8,566 mmol) (10) képletű Z-Val-NHS 25 ml DME-vel készült oldatához szobahőmérsékleten 2,25 g (1,5 ekvivalens) citrullin, 1,08 g (1,5 ekvivalens)
HU 224 351 Β1
NaHCO3 és 25 ml víz elegyét adjuk, és a reakcióelegyet 2 napig erélyesen keverjük. Ekkor 2 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldatot tartalmazó 20 ml vizet adunk hozzá, az így kapott elegyet etil-acetáttal mossuk, majd 3-as pH-ra savanyítjuk 10%-os sósavoldattal. Az így kapott szuszpenziót háromszor extraháljuk 10% butanolt tartalmazó etil-acetáttal, az egyesített szerves fázist szárítjuk és bepároljuk. így fehér, szilárd maradékként 3,39 g (97%) cím szerinti terméket kapunk. 1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 0,73 (6H, q, Val
CH3), 1,31-1,46 és 1,63 (4H, m, Cit CH2), 1,87 (1H, m, Val CH3-C/7), 2,88 (2H, m, N-CH2), 3,72 (1H, AB q, Cit CH), 4,17 (1H, m, Val COCH), 4,86 (2H, s, Z CH2), 7,10 (5H, m, Z Ph); MS (FAB): 409 (MH)+, 431 (M+Na)+, 447 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a C19H29N4O6 összegképletre: számított: 409,2087;
talált: 409,2086.
26. példa
Z-Val-Cit-PAB-OH [(27) képletű vegyület] előállítása l, 0397 g (2,545 mmol) Z-Val-Cit, 470,2 mg (1,5 ekvivalens) p-amino-benzil-alkohol és 10 ml THF elegyéhez szobahőmérsékleten 944,2 mg (1,5 ekvivalens) EEDQ-t adunk, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 óráig keverjük, majd 100 ml, 10% izopropanolt tartalmazó etil-acetáttal hígítjuk. A kapott keveréket 10%-os citromsavoldattal, utána vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A halványsárga, szilárd maradékot éterben 15 percig ultrahanggal kezeljük, majd a szilárd nyersterméket szűrjük, szárítjuk, s így 954,2 mg (73%) cím szerinti vegyülethez jutunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 0,79 (6H, q, Val
CH3), 1,37,1,53 és 1,72 (4H, m, Cit CH2), 1,92 (1H, m, Val CH3-CH), 3,00 (2H, m, N-CH2), 3,85 (1H, m, Cit CH), 4,41 (1H, m, Val COCH), 4,45 (2H, s, PAB CH2), 4,95 (2H, m, Z CH2), 7,08-7,40 (9H, m, Ph); MS (FAB): 514 (MH)+, 536 (M+Na)+, 552 (M+K)+.
Elemzés a C26H35N5O6H2O összegképlet alapján: számított: C-58,74, H-7,01, N-13,17% talált: C-59,01, H-6,62, N-13,17%.
27. példa
Z-Val-Cit-PABC-PNP [(28) képletű vegyület] előállítása
383,0 mg (745,7 pmol) (27) képletű Z-Val-CitPAB-OH, 225,5 mg (1,5 ekvivalens) (p-nitro-fenil)-(klór-formiát), 10 ml THF és 5 ml DKM elegyét szobahőmérsékleten 91 μΙ (1,5 ekvivalens) piridinnel kezeljük. A feldolgozást az előbbiekben a (7) képletű vegyületre leírt módon végezzük, s így szilárd, halványsárga nyersterméket kapunk, amelyet szilikagélen kromatografálunk. Az első eluálást 30:1, a második eluálást 12:1 arányú DKM-metanol eleggyel végezzük, s az utóbbi eluálás során 440,3 mg (87%) hozammal szürkésfehér, szilárd termékként kapjuk a cím szerinti vegyületet.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 0,88 (6H, m, Val CH3), 1,42,1,61 és 1,80 (4H, m, Cit CH2), 2,02 (1H, m, Val CH3-CH), 3,08 (2H, m, N-CH2), 3,99 (1H, m, Cit CH), 4,51 (1H, m, Val COCH), 5,00 (2H, m, Z CH2), 7,20-7,57 (9H, m, Ph), 7,30 és 8,20 (mindegyik 2H, m, PNP Ph); MS (FAB): 679 (MH)+, 701 (M+Na)+, 717 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a C33H39N6O10 összegképletre:
számított: 679,2728;
talált: 679,2720.
28. példa
Z-Val-Cit-PABC-DOX [(29) képletű vegyület] előállítása
126,9 mg (187 pmol) (28) képletű Z-Val-CitPABC-PNP, 119,3 mg (1,1 ekvivalens) DOX-HCI és 5 ml NMP elegyéhez szobahőmérsékleten 29 pl (1,1 ekvivalens) trietil-amint adunk, és a reakcióelegyet fénytől védve, szobahőmérsékleten 2 napig keverjük. A feldolgozást a fentebb a (23) képletű vegyületre megadott módon végezve narancsszínű, szilárd nyersterméket kapunk, melyet szilikagélen kromatografálunk. Első eluálószerként 12:1, második eluálószerként 8:1, harmadik eluálószerként 5:1 arányú DKM-metanol elegyet alkalmazunk, és a harmadik eluálásból 158,0 mg (78%) hozammal narancsvörös, szilárd alakban kapjuk a cím szerinti vegyületet.
1H-NMR (CDCI3/CO3OO, δ ppm): 0,74 (6H, m, Val CH3), 1,07 (3H, d, cukor CH2), 1,28-1,88 (4H, m, Cit CH2), 1,64 és 2,08 (mindegyik H, m, D-gyűrű CH2), 1,88 (1H, m, Val CH2-CH), 2,87 (2H, m, cukor CH2), 3,42 (1H, brs, cukor HO-CH), 3,95 (1H, m, cukor N-CH), 4,11 (3H, s, O-CH3), 4,38 (2H, m, CO-CH), 4,58 (2H, s, CO-CH2-OH), 4,78 (2H, s, PAB CH2), 4,90 (2H, s, Z CH2), 5,04 (1H, széles s, anomer CH), 5,30 (1H, széles s, DOX pH-CH), 7,00-7,86 (12H, m, Ph), 9,31 (1H, széles s, PAB NH); HPLC: [C-18, 15 cm-es oszlop,
8:2 MeOH/50 mM Et3N-HCO2H puffer (pH 2,8), 1 ml/perc, 495 nm]: egyetlen csúcs, retenciós ideje 3,65-3,75 perc; MS, (FAB): 1082,8 (M).
Pontos molekulatömeg Ο^Η^ΝθΟ^ összegképletre: számított: 1083,4199;
talált: 1083,4161.
29. példa
Z-Phe-N8-alloc-Lys-PABC-2’-taxol [(30) képletű vegyület] előállítása
15,8 mg (18,5 pmol) taxol, 14,5 mg (1 ekvivalens)
Z-Phe-NE-alloc-Lys-PABC-PNP [(7) képletű vegyület] és 2 ml DKM keverékéhez szobahőmérsékleten 2,5 mg (1,1 ekvivalens) DMAP-t adunk, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 2 napig tároljuk. Az ezen időpontban végzett VRK vizsgálat (szilikagélen, kifejlesztő rendszer DKM és metanol 25:1 arányú elegye) jelzi a reakció befejeződését. Az elegyhez 25 ml etil-acetátot adunk, 10%-os citromsavoldattal, utána vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. Az így kapott halványsárga, üvegszerű maradékot szilika18
HU 224 351 Β1 gélen kromatografáljuk, eluálószerként DKM és metanol 30:1 arányú elegyét alkalmazzuk, s így színtelen, üvegszerű termékként 26,1 mg (94%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (kiválasztott csúcsok, δ ppm): 1,13, 1,23, l, 68 és 1,81 (mindegyik 3H, s taxol CH3), 2,20 és
2,46 (mindegyik 3H, s, Ac CH3), 3,13 (2H, m,
CON-CH2), 4,25 (2H, AB q, C-20 CH2), 4,47 (1H, m, C-7 CH), 4,52 (2H, d, alloc O-CH2), 4,97 (2H, m,
Z CH2), 5,05 (2H, s, PAB CH2), 5,12 (2H, m, vinil
CH2), 5,45 (1H, d, C-2’ CH), 5,88 (1H, m, vinil CH),
7,10-8,17 (29H, m, Ph), 8,59 (1H, s, PABC NH); MS (ionpermetezéssel): 1496,8 (MH)+, 1519,6 (M+Na)+.
Pontos molekulatömeg a Cg2H89N5O22 összegképletre:
számított: 1496,6078;
talált: 1496,6082.
30. példa
Z-Phe-Lys-PABC-2’-taxol-HCI [(31) képletű vegyület] előállítása
18,1 mg (12,09 pmol) (30) képletű Z-Phe-NE-alloc-Lys-PABC-2’-taxol és 1 ml száraz TEF elegyéhez szobahőmérsékleten, argongáz alatt 1,7 pl (2,5 ekvivalens) ecetsavat és Pd(PPh3)4-t [45 μΙ Pd2dba3-oldat (6,2 mg, 6,77 pmol) és 17,8 mg (10 ekvivalens) PPh3 1 ml száraz THF-ben], valamint 5 pl (1,5 ekvivalens) Bu3SnH-t adunk, majd körülbelül 30 perc múlva még 5 pl Bu3SnH-t adunk a reakcióelegyhez. Körülbelül 30 perc elmúltával 5 ml étert, utána 1 ml 1 mólos éteres hidrogén-klorid-oldatot adunk hozzá, és a kapott szuszpenziót több percig ultrahanggal kezeljük. A fehér, szilárd terméket szűrjük, éterrel többször mossuk, s így 14,37 mg (82%) cím szerinti vegyületet kapunk. 1H-NMR (kiválasztott csúcsok, CDCI3/CD3OD δ ppm):
(allilcsúcsok vesztése) 2,98 (2H, m, +H3N-CH2),
4,27 (2H, AB q, C-20 CH2), 4,39 (1H, m, C-7 CH),
5,02 (2H, m, Z CH2), 5,09 (2H, m, PAB CH2),
7,06-8,20 (29H, m, Ph); HPLC: [C-18, 15 cm-es oszlop 8:2 MeOH/50 mM Et3N-HCO2H puffer (pH 2,8), 1 ml/perc, 230 nm]: egyetlen csúcs, retenciós ideje: 4,8 perc [6:4 MeCN/50 mM Et3N-HCO2H puffer (pH 2,8)]: egyetlen csúcs, retenciós ideje:
9,6 perc, MS (ionpermetezéssel): 1413,2 (MH)+.
Pontos molekulatömeg a C78H86N5O20 összegképletre:
számított: 1412,5866;
talált: 1412,5883.
31. példa
Boc-Phe-NHS [(32) képletű vegyület] előállítása
5,4257 g (20,45 mmol) Boc-Phe, 2,354 g (1 ekvivalens) NHS és 55 ml THF elegyéhez 0 °C körüli hőmérsékleten 4,22 g (1 ekvivalens) DCC-t adunk. A jégfürdőt hagyjuk felolvadni, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük. A szilárd DCU-csapadék kiszűrése után kapott szűrletet bepároljuk, s így fehér, szilárd termékként 7,2624 g (98%) cím szerinti vegyületet kapunk, melyet további tisztítás nélkül használunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,39 (9H, s, t-Bu),
2.85 (4H, széles s, NHS CH2), 3,22 (2H, m, Phe
CH2), 4,94 (1H, m, CH), 7,29 (5H, m, Ph).
32. példa
Boc-Phe-NE-Fmoc-Lys [(33) képletű vegyület] előállítása
3,0651 g (8,32 mmol) NE-Fmoc-Lys, 769 mg (1,1 ekvivalens) nátrium-hidrogén-karbonát, 50 ml víz és 20 ml DME elegyéhez 3,015 g (1 ekvivalens) (32) képletű Boc-Phe-NHS 40 ml DME-vel készült oldatát adjuk szobahőmérsékleten, majd a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 18 órán át erélyesen keverjük, utána 100 ml etil-acetáttal és 10%-os citromsavoldattal hígítjuk. A vizes fázist további 50 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves fázist kétszer mossuk vízzel, majd konyhasóoldattal, szárítjuk, bepároljuk. Az így maradékként kapott halványsárga, szilárd terméket éterben oldjuk, a csekély mennyiségű oldatlan szilárd anyagot szűréssel eltávolítjuk, a szűrletet szárazra pároljuk, és a halványsárga, habszerű maradékot vákuumban szárítjuk. így 5,0381 g (99%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,30, 1,48, 1,67 és
1.85 (6H, m, Lys CH2), 1,35 (9H, s, t-Bu), 3,01 (2H, m, Phe CH2), 3,12 (2H, m, N-CH2), 4,18 (1H, t, Fmoc CH), 4,36 (2H, d, Fmoc CH2), 4,41 és 4,50 (mindegyik 1H, m, CO-CH), 7,12-7,77 (13H, m, Ph); MS (FAB): 616 (MH)+ 638 (M+Na)+ 654 (M+K)+.
Elemzés a C35H41N3O7 összegképlet alapján: számított: C-68,27, H-6,71, N-6,44%;
talált: C-68,13, H-6,84, N-6,44%.
33. példa
Boc-Phe-NE-Fmoc-Lys-FAB-OH [(34) képletű vegyület] előállítása
4,8207 g (7,83 mmol) (33) képletű Boc-Phe-N£Fmoc-Lys, 1061 g (1,1 ekvivalens) p-aminobenzil-alkohol és 50 ml THF elegyéhez szobahőmérsékleten 2,13 g (1,1 ekvivalens) EEDQ-t adunk, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük, majd a feldolgozást a fentebb a (6) képletű vegyületre megadott módon végezzük. így 4,4579 g (79%) hozammal szürkésfehér, szilárd alakban kapjuk a cím szerinti vegyületet.
1H-NMR (CDCl3/CD3OD) δ ppm: 1,28, 1,48, 1,63, és l, 84 (6H, m, Lys CH2), 1,33 (9H, s, t-Bu), 3,00 (2H, m, Phe CH2), 3,11 (2H, m, N-CH2), 4,15 (1H, t,
Fmoc CH), 4,31 (2H, d, Fmoc CH2), 4,38 (2H, m,
CO-CH), 4,57 (2H, s, PAB CH2), 7,08-7,75 (17H, m, Ph); MS (FAB): 721 (MH)+ 743 (M+Na)+, 759 (M+K)+.
Elemzés a C42H48N4O7.1/2 H2O összegképlet alapján számított: C-69,12, H-6,77, N-7,68%;
talált: C-68,96, H-6,87, N-7,64%.
34. példa
2'-Fmoc-taxol [(35) képletű vegyület] előállítása
134,6 mg (157,6 pmol) taxol, 58,5 mg Fmoc-NHS (1,1 ekvivalens) és 3 ml DKM elegyéhez szobahőmér19
HU 224 351 Β1 sékleten 19,3 mg (1 ekvivalens) DMAP-t adunk, és a reakcióelegyet körülbelül 5 napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az ezen időpontban végzett VRK vizsgálat szerint (szilikagélen, kifejlesztő rendszer DKM és metanol 25:1 arányú elegye) a reakció befejeződött. Az elegyhez 50 ml etil-acetátot adunk, a kapott keveréket 10%-os citromsavoldattal, utána vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk, bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk, eluálószerként DKM és metanol 35:1 arányú elegyét alkalmazzuk, s így színtelen, üvegszerű termékként 165,6 mg (98%) cím szerinti vegyülethez jutunk.
1H-NMR δ ppm: 1,13, 1,24 és 1,67 (mindegyik 3H, s, C-16, C-17 és C-19 CH3), 1,92 (3H, s, C-18 CH3), 1,87 és 2,52 (2H, m, C-6 CH2), 2,22 és 2,44 (mindegyik 3H, s, Ac CH3), 2,41 (2H, m, C-14 CH2), 2,50 (1H, d, C-7 OH), 3,82 (1H, d, C-3 CH), 4,28-4,51 (6H, m, C-20 CH2, C-7 CH, Fmoc CH és CH2),
4,98 (1H, d, C-5 CH), 5,47 (1H, d, C-2’ CH), 5,69 (1H, d, C-2 CH), 6,03 (1H, m, C-3’ CH), 6,30 (1H, s, C-10 CH), 6,32 (1H, t, C-13 CH), 6,99 (1H, d, NH), 7,22-8,20 (23H, m, Ph); MS (FAB): 1076 (MH)+, 1098 (M+Na)+, 1114 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a C26H62NO16 összegképletre: számított: 1076,4069;
talált: 1076,4031.
35. példa
Boc-Phe-NE-Fmoc-Lys-PABC-7-taxol-2'-Fmoc [(36) képletű vegyület] előállítása
112,1 mg (90,3 pmol) 2’-Fmoc-taxol [(35) képletű vegyület] és 1 ml száraz DKM elegyéhez argongáz alatt 0 °C körüli hőmérsékleten 8 μΙ (1,1 ekvivalens) piridint és 6,5 μΙ (0,6 ekvivalens) difoszgént adunk, majd az elegyhez körülbelül 40 perc múlva 65,1 mg (1 ekvivalens) Boc-Phe-NE-Fmoc-Lys-PAB-OH és 0,5 mg DHAP 1 ml DKM és 0,2 ml piridin elegyével készült oldatát adjuk. A reakcióelegyet 0 °C körüli hőmérsékleten körülbelül 30 percig, majd szobahőmérsékleten körülbelül 4 órán át keverjük. Ekkor 30 ml etil-acetátot adunk hozzá, és 10%-os citromsavoldattal kétszer, majd vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. Az így kapott fehér, szilárd maradékot szilikagélen kromatografáljuk, eluálószerként DKM és metanol 30:1 arányú elegyét alkalmazzuk. így színtelen, üvegszerű termékként 81,7 mg (50%) terméket kapunk; a három, terméket tartalmazó frakció közül két frakció 2’-Fmoc-taxollal szennyezett.
1H-NMR (CDCl3/CD3OD, δ ppm): 1,19, 1,22 és 1,80 (mindegyik 3H, s, C-16, C-17 és C-19 CH3), 1,10-1,90 (6H, m, Lys CH2), 1,38 (9H, s, t-Bu), l, 82 és 2,54 (mindegyik 1H, m, C-6 CH2), 2,05 (3H, s, C-18 CH3), 2,23 és 2,42 (mindegyik 1H, m, C-14 CH2), 2,18 és 2,47 (mindegyik 3H, s, Ac CH3), 3,09 (2H, m, Phe CH2), 3,19 (2H, m, Lys N-CH2), 3,98 (1H, d, C-3 CH), 4,15-4,52 (7H, m, Phe és Lys CO-CH, Fmoc CH2 és CH, C-20 CH2),
4,98 (1H, m, C-5 CH), 5,14 (2H, m, PAB CH2), 5,48 (1H, d, C-2’ CH), 5,55 (1H, m, C-7 CH), 5,69 (1H, m, C-2 CH), 6,02 (1H, m, C-3’ CH), 6,29 (1H, m,
C-13 CH), 6,41 (1H, s, C-10 CH), 6,96-8,18 (40H, m, Ph); MS (FAB): 1823 (MH)+ 1846 (M+Na)+ 1862 (M+K)+.
36. példa
Boc-Phe-Lys-PABC-7-taxol-HCI [(37) képletű vegyület] előállítása
74,6 mg (40,95 pmol) (36) képletű Boc-PheN£-Fmoc-Lys-PABC-7-taxol-2’-Fmoc és 2 ml THF elegyéhez szobahőmérsékleten 2 ml 2% DBU-t tartalmazó THF-oldatot adunk, majd körülbelül 6 perc múlva 25 ml étert adunk hozzá szobahőmérsékleten, és a kivált fehér, szilárd terméket szűrjük, éterrel mossuk. E szilárd anyagot 5 ml éterben szuszpendáljuk, 2 ml 1 mólos éteres hidrogén-klorid-oldatot adunk hozzá, majd körülbelül 2 perc múlva a szilárd terméket szűrjük, és éterrel alaposan kimossuk. A szilárd terméket LH-20 jelű lipofil Sephadex gyantán kromatografáljuk, eluálószerként DKM és metanol 1:1 arányú elegyét alkalmazzuk, s így színtelen, üvegszerű termékként
35,6 mg (90%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,13, 1,19 és 1,78 (mindegyik 3H, s, C-16, C-17 és C-19 CH3), 1,37 (9H, s, t-Bu), 1,10-1,90 (6H, m, Lys CH2), 1,86 és
2,54 (mindegyik 1H, m, C-6 CH2), 2,05 (3H, s,
C-18 CH3), 2,16 és 2,38 (mindegyik 3H, s, Ac
CH3), 2,97 (2H, m, +H3N-CH2), 3,12 (2H, m, Phe
CH2), 3,90 (1H, d, C-3 CH), 4,24 (2H, m,
C-20 CH2), 4,45 és 4,68 (mindegyik 1H, m, Phe és
Lys CO-CH), 4,83 (1H, brs, C-2’ CH), 4,91 (1H, d,
C-5 CH), 5,12 (2H, m, PAB CH2), 5,48 (1H, m,
C-7 CH), 5,67 (1H, d, C-2 CH), 5,78 (1H, d, C-3’
CH), 6,12 (1H, m, C-13 CH), 6,33 (1H, s,
C-10 CH), 7,08-8,12 (24H, m, Ph); HPLC: [C-18, cm-es oszlop, 8:2 MeOH/50 mM Et3N-HCO2H puffer (pH 2,8), 1 ml/perc, 230 nmj: egyetlen csúcs, retenciós ideje: 7,1-7,3 perc; MS (ionpermet):
1379.2 (MH)+.
Pontos molekulatömeg a C75H88N5P2o összegképletre: számított: 1378,6023;
talált: 1378,6043.
37. példa
Boc-Phe-N£-Fmoc-Lys-PABC-CI [(38) képletű vegyület] előállítása
211.2 mg (293 pmol) (34) képletű Boc-PheNe-Fmoc-Lys-PAB-OH, 0,5 ml piridin és 2 ml DKM elegyéhez -42 °C hőmérsékleten (szárazjég és acetonitril keverékével hűtünk), argongáz alatt 21,2 pl (0,6 ekvivalens) difoszgént adunk. A reakcióelegyet körülbelül -42 °C hőmérsékleten körülbelül 20 percig keverjük, eközben szilárd piridinium-klorid-csapadék válik ki. Az oldatot közvetlenül felhasználjuk.
38. példa
Boc-Phe-NE-Fmoc-Lys-PABC-MMC [(39) képletű vegyület] előállítása
Az előző példában előállított (38) képletű vegyület oldatához körülbelül -42 °C hőmérsékleten 1 ml NMPben oldott 118,0 mg (1,2 ekvivalens) NMC-t adunk. Ez20
HU 224 351 Β1 után a hűtőfürdőt szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni fokozatosan, és a reakcióelegyet fénytől védve szobahőmérsékleten körülbelül 12 órán át keverjük. Ekkor a reakcióelegyet 50 ml, 10% izopropanolt tartalmazó etil-acetáttal és 50 ml 10%-os citromsavoldattal hígítjuk. Az elválasztott szerves fázist vízzel háromszor, utána konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. Az így kapott, barnás-bíborszínű maradékot mm vastagságú szilikagéllemezen kromatografáljuk, eluálószerként DKM és metanol 12:1 arányú elegyét alkalmazzuk, s így halvány bíborszínü, szilárd termékként 103,0 mg (34%) cím szerinti vegyületet kapunk. 1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,21, 1,43, 1,61 és
1.81 (6H, m, Lys CH2), 1,32 (9H, s, t-Bu), 2,10 (3H, s, MMC CH3), 2,99 (2H, m, Phe CH2), 3,11 (2H, m, Lys N-CH2), 3,14 (3H, s, O-CH3), 3,20-3,50 (3H, m, C-1 és C-2 CH, és C-3 CH), 3,62 (1H, ABq, C-9 CH), 4,18 (1H, t, Fmoc CH), 4,22 és 4,89 (mindegyik 1H, ABq, C-10 CH2), 4,32 (2H, d, Fmoc CH2), 4,41 (1H, d, C-3 CH), 4,45 (2H, m, Phe és Lys CO-CH), 5,01 (2H, m, PAB CH2), 7,05-7,90 (17H, m, Ph); MS (FAB): 1082 (MH)+, 1103 (M+Na)+, 1119 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a C^H^NgO-o összegképletre: számított: 1103,4491;
talált: 1103,4451.
39. példa
Boc-Phe-Lys-PABC-NMC-HCI [(40) képletű vegyület] előállítása
11,2 mg (10,36 μίτιοΙ) (39) képletű Boc-Phe-NEFmoc-Lys-PABC-MMC és 1 ml THF elegyéhez szobahőmérsékleten 1 ml 2% DBU-t tartalmazó THF-oldatot adunk. Lassanként finom eloszlású, bíborszínű csapadék válik ki. Körülbelül 5 perc múlva a reakcióelegyet forgóbepárló készülékben, 30 °C fürdőhőmérsékletig körülbelül 1 ml térfogatra töményítjük, és a maradékhoz 10 ml étert adunk. A kivált szilárd terméket szűrjük, éterrel mossuk, 2 ml éterben szuszpendáljuk, és 3 ml 1 mólos éteres hidrogén-klorid-oldatot adunk hozzá. Mintegy perc elmúltával a szilárd terméket szűrjük, alaposan mossuk, éterrel, majd 2 ml DKM-mel elkeverjük. Az így kapott szilárd terméket szűrjük, DKM-mel mossuk, így
9,1 mg (98%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CO3OD, δ ppm): 1,30 (9H, s, t-Bu), l, 20-1,90 (6H, m, Lys CH2), 1,94 (3H, s, MMC
CH3), 2,83 (2H, m, +H3N-CH2), 2,98 (2H, m, Phe
CH2), 3,13 (3H, s, O-CH3), 3,20-3,70 (4H, m,
C-1 és C-2 CH, C-3 CH és ABq, C-9 CH), 4,14 és
4.82 (mindegyik 1H, ABq, C-10 CH), 4,25-4,52 (3H, m, Phe és Lys CO-CH és C-3 CH), 4,97 (2H, m, PAB CH2), 7,12 (5H, széles s, Phe Ph), 7,23 és
7,50 (mindegyik 2H, m, PAB Ph); HPLC: [C-18, cm-es oszlop, 65:35 MeOH/50 mM
Et3N-HCO2H puffer (pH 2,8), 1 ml/perc; 365 nm]: egyetlen csúcs, retenciós ideje: 4,1-4,3 perc; MS (FAB): 859 (MH)+, 881 (M+Na)+ 897 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a C^HggNgO^ összegképletre: számított: 859,3990;
talált: 859,3980.
40. példa
N“-Fmoc-Nc-Mtr-Lys [(41) képletű vegyület] előállítása
14,840 g (40,28 mmol) N“-Fmoc-Lys 200 ml száras DKM-mel készült szuszpenziójához szobahőmérsékleten argongáz alatt 10,9 ml (2 ekvivalens) trimetil-szilil-kloridot adunk erélyes keverés közben, és a reakcióelegyet visszafolyató hűtő alatt körülbelül 1 órán át forraljuk, majd 0 °C körüli hőmérsékletre hűtjük. Az elegyhez ekkor 14,0 ml (2 ekvivalens) DlEA-t adunk, utána 13,061 g (1,05 ekvivalens) (p-anizil)-difenil-metil-klorid és 50 ml DKM elegyét adjuk hozzá. A jégfürdőt eltávolítjuk, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 2 órán át keverjük. Ekkor
8,2 ml (5 ekvivalens) metanolt adunk hozzá, további 1 órán át keverjük, majd az oldószereket lepároljuk. A maradékot etil-acetát és 5-ös pH-értékű puffer (biftalát) között megoszlatjuk, a szerves fázist előbb vízzel, majd konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk, bepároljuk. A maradékként kapott halvány narancsszínű, gumiszerű terméket DKM-mel öblítjük, vákuumban szárítjuk. így 25,693 g (99%) habszerű termékként kapjuk a cím szerinti vegyületet, melyet tisztítás nélkül viszünk tovább.
1H-NMR (CDCI3, δ ppm): 1,26 és 1,68 (2H és 4H, m,
Lys CH2), 2,45 (2H, m, N-CH2), 3,71 (3H, s,
OCH3), 4,05-4,40 (4H, m, Fmoc CH2 és CH,
CO-CH), 6,81 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,15-7,77 (20H, m, Ph); MS (FAB) 641 (MH)+ 663 (M+Na)+
679 (M+K)+.
41. példa
NF-Mtr-Lys [(42) képletű vegyület] előállítása
10,006 g (15,615 mmol) (41) képletű NF-Fmoc-N'Mtr-Lys és 50 ml DKM elegyéhez szobahőmérsékleten 40 ml dietil-amint adunk, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 24 órán át keverjük, majd az oldószereket lepároljuk, és a maradékot háromszor mossuk 100 ml DKM-mel. Az így kapott halványsárga maradékot éterrel alaposan elkeverjük, és a kapott szuszpenziót több percig ultrahanggal kezeljük. A szilárd csapadékot szűrjük, éterrel mossuk, és vákuumban több órán át szárítjuk. így 6,191 g (95%) cím szerinti vegyülethez jutunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,34, 1,57 és
1,72 (6H, m, Lys CH2), 2,05 (2H, m, N-CH2),
3,38 (1H, m, CO-CH), 3,68 (3H, s, OCH3), 3,71 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,03-7,40 (12H, m, Ph);
MS (FAB) 419,2 (MH)+, 441,4 (M+Na)+, 457,4 (M+K)+.
42. példa
Fmoc-Phe-NHS [(43) képletű vegyület] előállítása
5,1043 g (13,17 mmol) Fmoc-Phe és 1,592 g (1,05 ekvivalens) NHS 100 ml DKM-mel készült elegyéhez 0 °C körüli hőmérsékleten 2,854 g (1,05 ekvivalens) DCC-t adunk. A jégfürdőt szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni, és a reakcióelegyet körülbelül 14 órán át keverjük. Ekkor a DCU-mellékterrnéket kiszűrjük, a szürletet bepároljuk, és az így kapott színte21
HU 224 351 Β1 len üvegszerű nyersterméket tisztítás nélkül visszük tovább.
43. példa
Fmoc-Phe-N£-Mtr-Lys [(44) képletű vegyület] előállítása
4,686 g (11,20 mmol) (42) képletű NE-Mtr-Lys, 941,0 mg (1 ekvivalens) nátrium-hidrogén-karbonát, 100 ml víz és 50 ml DME szuszpenziójához 11,20 mmol (43) képletű Fmoc-Phe-NHS 40 ml DME-vel készült oldatát adjuk, és még 25 ml THF-et adunk hozzá az oldódás elősegítésére. E reakcióelegyet szobahőmérsékleten 2 napon át keverjük, majd körülbelül 30 °C hőmérsékletű fürdőn forgóbepárló készülékben a DME oldószert, amennyire lehetséges, eltávolítjuk. Az így kapott gumiszerű szuszpenziót etil-acetát és 5 pH-értékű pufferoldat között megoszlatjuk.
A szerves fázist előbb vízzel, majd konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. Az így kapott halványsárga, habszerű anyagot 100 ml DKM-mel öblítjük. A VRK vizsgálat szerint ez a termék közepesen tiszta, ezért további tisztítás nélkül felhasználjuk. Hozama 8,559 g (97%).
1H-NMR (CDCI3/CD3OD δ ppm): 1,10-1,93 (6H, m,
Lys CH2), 2,31 (2H, t, N-CH2), 3,00 (2H, m, Phe
CH2), 3,71 (3H, s, O-CH3), 4,02-4,48 (5H, m,
Fmoc CH2 és CH, CO-CH), 6,79 (2H, d, MeOPh
O-CH), 7,00-7,75 (25H, m, Ph); MS (FAB) 788,2 (MH)+, 810,4 (M+Na)+, 826 (M+K)+.
Elemzés a C50H4qN3O6.H2O összegképlet alapján: számított: C-74,51, H-6,38, N-5,21%;
talált: C-74,17, H-6,57, N-5,41%.
44. példa
Fmoc-Phe-N,;-Mtr-Lys-PAB-OH [(45) képletű vegyület] előállítása
7,728 g (9,808 mmol) (44) képletű Fmoc-PheNE-Mtr-Lys, 1,450 g (1,2 ekvivalens) p-aminobenzil-alkohol és 100 ml DKM elegyéhez szobahőmérsékleten 3,640 g (1,5 ekvivalens) EEDQ-t adunk, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 20 órán át keverjük, majd az oldószert mintegy 30 °C-ig terjedő fürdőhőmérséklet mellett lepároljuk. A szilárd maradékot 200 ml éterrel alaposan elkeverjük, és az így kapott szuszpenziót körülbelül 15 percig ultrahanggal kezeljük, majd szobahőmérsékleten mintegy 2 órán át állni hagyjuk. A kivált szilárd terméket szűrjük, éterrel alaposan mossuk, vákuumban szárítjuk, s így a cím szerinti vegyületet 7,6140 g (87%) hozammal kapjuk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD δ ppm): 0,98-1,91 (6H, m,
Lys CH2), 2,06 (2H, t, N-CH2), 2,97 (2H, m, Phe
CH2), 3,71 (3H, s, O-CH3), 4,12 (1H, t, Fmoc-CH),
4,20-4,41 (4H, m, Fmoc CH2 és CO-CH), 4,59 (2H, s, PAB CH2), 6,72 (2H, d, MeOPh O-CH),
7,00-7,73 (29H, m, Ph); MS (FAB) 891,4 (MH)+,
916,7 (M+Na)+, 931 (M+K)+.
Elemzés a C57H56N4O6.H2O összegképlet alapján: számított: C-75,14, H-6,42, N-6,15%;
talált: C-75,25, H-6,02, N-6,49%.
45. példa
Phe-N,:-Mtr-Lys-PAB-OH [(46) képletű vegyület] előállítása
4,2857 g (4,80 mmol) (45) képletű FmocPhe-NF-Mtr-Lys-PAB-OH és 35 ml DKM elegyéhez szobahőmérsékleten 50 ml dietil-amint adunk, az elegyet rövid ideig ultrahanggal kezeljük, majd szobahőmérsékleten 4 órán át keverjük. Az ezen időpontban végzett VRK vizsgálat szerint kiindulóanyag már nincs jelen. Az oldószereket lepároljuk. A maradékot DKM-mel öblítjük és szilikagélen kromatografáljuk. Az első eluálást 2% metanolt tartalmazó DKM-mel, a második eluálást 3% metanolt tartalmazó DKM-mel, a harmadik eluálást 4% metanolt tartalmazó DKM-mel végezzük, s így színtelen, habszerű termékként 2,230 g (69%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3, δ ppm): 1,26-2,00 (6H, m, Lys CH2), 2,12 (2H, t, N-CH2), 2,75 és 3,21 (mindegyik 1H, ABq, Phe CH2), 3,68 (1H, ABq, Phe CO-CH), 3,76 (3H, s, O-CH3), 4,42 (1H, q, Lys CO-CH), 4,66 (2H, széles s, PAB, CH2), 6,79 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,10-7,42 (21H, m, Ph), 7,81 (1H, d, amid NH), 8,71 (1H, s, PAB NH): MS (FAB) 693,4 (M+Na)+, 709 (M+K)+.
Elemzés a C42H46N4O4.1/2H2O összegképlet alapján: számított: C-74,20, H-6,97, N-8,24%;
talált: C-74,28, H-7,00, N-8,34%.
46. példa
MC-Phe-NE-Mtr-Lys-PAB-OH [(47) képletű vegyület] előállítása
448,1 mg (0,668 mmol) (46) képletű Phe-N£Mtr-Lys-PAB-OH, 0,128 ml (1,1 ekvivalens) DIEA és 5 ml DKM elegyéhez szobahőmérsékleten 2 ml DKMben oldott 230,4 mg (1,12 ekvivalens) MC-NHS-t adunk. A reakcióelegyet 3 napig szobahőmérsékleten keverjük, majd 60 ml etil-acetátot adunk hozzá, és előbb 5 pH-értékű pufferoldattal kétszer, utána vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot 60 ml éterrel alaposan elkeverjük, a szilárd csapadékot szűrjük és éterrel mossuk. így 563,8 mg (98%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3, δ ppm): 1,05-1,96 (12H, m, Lys és kaproil CH2), 2,07 (2H, t, Lys N-CH2), 2,18 (2H, t, CO-CH2), 3,02 (2H, m, Phe CH2), 3,39 (2H, t, M-CH2), 3,71 (3H, s, O-CH3), 4,64 (3H, s és m, PAB CH2 és Lys CO-CH), 4,99 (1H, q, Phe CO-CH), 6,61 (2H, s, M CH), 6,71 (2H, d, MeOPh O-CH), 6,89 (1H, m, amid NH), 7,00-7,55 (21H, m, Ph), 8,97 (1H, széles s, PAB NH); MS (FAB) 864 (MH)+, 886 (M+Na)+, 902,4 (M+K)+.
47. példa
MC-Phe-N,:-Mtr-Lys-PABC-PNP [(48) képletű vegyület] előállítása
679,3 mg (0,786 mmol) (47) képletű MC-Phe-N£Mtr-Lys-PAB-OH-t és 1,196 g (5 ekvivalens) bisz(p-nitro-fenil)-karbonátot szobahőmérsékleten argongáz
HU 224 351 Β1 alatt 25 ml DKM-ben oldunk, és 0,411 ml (3 ekvivalens) DlEA-t adunk hozzá. 3 nap múlva a VRK vizsgálat a reakció befejeződését mutatja. A reakcióelegy térfogatát forgóbepárló készülékben körülbelül 5 ml-re csökkentjük, a maradékot 80 ml etil-acetáttal hígítjuk, 5 pH-értékű pufferoldattal, utána vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk, és bepároljuk. Az így kapott szilárd terméket 80 ml éterrel alaposan elkeverjük, a szilárd terméket szűrjük, éterrel mossuk, és szilikagélen kromatografáljuk. (A terméket minimális mennyiségű 8:1 arányú etil-acetát és hexán eleggyel visszük az oszlop tetejére.) Első eluálószerként 1:1, második eluálószerként 8:1 arányú etil-acetát/hexán keveréket alkalmazunk, s így halványsárga, üvegszerű termék alakjában 670,7 mg (83%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3, δ ppm): 1,10-1,95 (12H, m, Lys és kaproil CH2), 2,04 (2H, t, Lys N-CH2), 2,13 (2H, t, CO-CH2), 3,04 (2H, m, Phe CH2), 3,39 (2H, t, M-CH2), 3,72 (3H, s, O-CH3), 4,58 (1H, q, Lys CO-CH), 4,86 (1H, q, Phe CO-CH), 5,27 (2H, s, PAB CH2), 6,58 (1H, d, amid NH), 6,61 (2H, s, M CH), 6,72 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,03-7,62 (27H, m, Ph és NH), 8,22 (2H, d, PNP CH), 8,86 (1H, széles s, PAB NH); MS (FAB) 1029 (MH)+, 1051,5 (M+Na)+, 1069,4 (M+K)+.
48. példa
MC-Phe-NE-Mtr-Lys-PABC-DOX [(49) képletű vegyület] előállítása
126,6 mg (0,123 mmol) (48) képletű MC-PheN£-Mtr-Lys-PABC-PNP, 71,3 mg (1 ekvivalens) DOX-HCI és 5 ml NMP elegyéhez szobahőmérsékleten 21,4 μΙ (1 ekvivalens) DlEA-t adunk, és a reakcióelegyet fénytől védve, szobahőmérsékleten 2 napig állni hagyjuk. Ezután 60 ml etil-acetáttal hígítjuk, vízzel négyszer, majd konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk. Az első eluálást 25:1, a második eluálást 20:1 DKM-metanol eleggyel végezzük, így a cím szerinti vegyületet narancsszínű, üvegszerű termék alakjában 149,0 mg (85%) hozammal nyerjük.
1H-NMR (CDCI3, ppm): 1,10-1,95 (14H, m, Lys és kaproil CH2, D-gyűrű CH2), 1,27 (3H, d, cukor CH2), 2,10 (4H, m, Lys N-CH2 és kaproil CO-CH2), 2,23 (2H, m, D-gyűrű CH2), 3,03 (2H, m, Phe CH2), 3,20 (2H, m, cukor CH2), 3,41 (2H, t, M-CH2), 3,67 (1H, széles s, cukor HO-CH), 3,77 (3H, s, Mtr O-CH3), 4,08 (3H, s, DOX O-CH3), 4,13 (cukor N-CH), 4,40 (1H, m, Phe CO-CH), 4,56 (2H, m, Lys CO-CH és cukor CH3-CH), 4,76 (2H, széles s, CO-CH2-OH), 4,99 (2H, m, PAB CH2), 5,29 (1H, széles s, anomer CH), 5,51 (1H, széles s, DOX Ph-CH), 5,18 6,02 és 6,38 (mindegyik 1H, m, NH), 6,62 (2H, s, M CH), 6,77 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,00-7,60 (22H, m, Ph), 7,78 és 8,03 (mindegyik 1H, m, DOX Ph CH), 8,22 (1H, széles s, PAB NH); MS (FAB) 1433,8 (MH)+, 1456,0 (M+Na)+, 1471,8 (M+K)+.
49. példa
MC-Phe-Lys-PABC-DOX.CI2CHCO2H [(50) képletű vegyület] előállítása l, 1520 g (0,804 mmol) (49) képletű MC-Ph-NE-MtrLys-PABC-DOX, 50 ml DKM és 8,73 ml (100 ekvivalens) anizol elegyéhez keverés közben 0,663 ml (10 ekvivalens) diklór-ecetsavat adunk, majd körülbelül 1 óra múlva 80 ml etil-acetátot adunk hozzá, és az így kapott szuszpenziót hűtőszekrényben körülbelül másfél órán át hagyjuk állni. A szilárd terméket szűrjük, etil-acetáttal mossuk és vákuumban szárítjuk. A szűrletet forgóbepárlón körülbelül 30 ml térfogatra töményítjük (körülbelül 27 °C hőmérsékletű fürdőben), majd 50 ml étert adunk hozzá. Az így kapott szuszpenziót mintegy 1 órán át hűtőszekrényben tartjuk, utána szűrjük. A narancsszínű, szilárd terméket DKM-mel többször keverjük és vákuumban szárítjuk. így 1,0092 g (97%) cím szerinti vegyülethez jutunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,10-1,90 (14H, m,
Lys és kaproil CH2, D-gyűrű CH2), 1,21 (3H, d, cukor CH3), 2,10 (2H, t kaproil CO-CH2), 2,20 (2H, m, D-gyűrű CH2), 2,88 (2H, m, Lys N-CH2), 3,02 (2H, m, Phe CH2), 3,12 (2H, m, cukor CH2), 3,38 (2H, t,
M-CH2), 3,52 (1H, széles s, cukor HO-CH), 3,79 (1H, m, cukor HN-CH), 4,02 (3H, s, DOX O-CH3),
4,10 (1H, m, cukor CH3-CH), 4,43 és 4,54 (mindegyik 1H, m, Phe és Lys CO-CH), 4,72 (2H, s, DOX CO-CH2-OH), 4,92 (2H, m, PAB CH2), 5,24 (1H, széles s, anomer CH), 5,44 (1H, széles s, DOX Ph-C/7-O-cukor), 5,84 (1H, s, CI2CH), 6,67 (2H, s, M CH), 7,10 (5H, széles s, Phe Ph), 7,21 és 7,48 (mindegyik 2H, d, PAB Ph), 7,38, 7,77 és 7,99 (mindegyik 1H, d, t, és d, resp., DOX Ph), HPLC vizsgálat [C-18 gyantán, 15 cm hosszúságú oszlopon, eluálószer metanol és 50 millimól/liter koncentrációjú (trietil-ammónium)-formiát pufferoldat (pH 2,8) 8:2 arányú elegye; áramlási sebesség 1 ml/perc, detektálás 495 nm hullámhosszon]: egyetlen csúcs, retenciós ideje 4,4-4,5 perc; MS (FAB): 1159 (M-H); a pontos molekulatömeg számított értéke a C60H68N6Oi8Na összegképletre 1183,4488, talált értéke: 1183,4457.
50. példa
MC-Phe-NE-Mtr-Lys-PABC-MMC [(51) képletű vegyület] előállítása
160,4 mg (0,1559 mmol) (48) képletű MCPhe-Nt:-Mtr-Lys-PABC-PNP, 211,0 mg (10 ekvivalens) HOBt, 57,3 mg (1,1 ekvivalens) MMC és 5 ml NMP elegyéhez keverés közben szobahőmérsékleten 0,271 ml (10 ekvivalens) DlEA-t adunk. Körülbelül 14 óra elmúltával (szobahőmérsékleten) a reakcióelegyhez 100 ml etil-acetátot adunk, 5-ös pH-értékű pufferoldattal, utána vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk, eluálószerként előbb 25:1 arányú, majd második eluálásra 20:1 arányú DKM-metanol elegyet alkalmazunk, így a cím szerinti vegyületet bíborszínű, üvegszerű alakban 136,2 mg (71%) hozammal kapjuk.
HU 224 351 Β1 1H-NMR (CDCI3, δ ppm): 1,08-1,90 (12H, m, CH2), l, 73 (3H, s, MMC CH3), 2,10 (4H, m, Lys N-CH2 és
CO-CH2), 3,05 (2H, m, Phe CH2), 3,18 (3H, s,
MMC O-CH3), 3,23-3,50 (5H, m, C-1, C-2 és
C-3 CH és M-CH2), 3,63 (1H, ABq, C-9 CH), 3,74 (3H, s, Mtr O-CH3), 4,28 és 4,90 (mindegyik 1H, t és ABq, C-10 CH2), 4,41 (2H, d és m, C-3 CH és Phe CO-CH), 4,71 (1H, m, Lys CO-CH), 5,01 (2H, m, PAB CH2), 5,09 (1H, széles s, amid NH), 5,30 (4H, széles s, NH2), 6,31 és 6,88 (mindegyik 1H, d, amid NH), 6,63 (2H, s, M CH), 6,76 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,06-7,57 (21H, m, Ph), 8,81 (1H, széles s, PAB NH); MS (FAB) 1246,5 (M+Na)+, 1262,3 (M+K)+.
51. példa
MC-Phe-Lys-PABC-MMC.CICH2CO2H [(52) képletű vegyület] előállítása
68,1 mg (55,6 pmol) (53) képletű MC-Phe-N£Mtr-Lys-PABC-MMC, 3 ml DKM és 0,604 ml (100 ekvivalens) anizol elegyéhez 0,56 ml (10 ekvivalens) 1 mólos diklór-metános klór-ecetsav-oldatot adunk keverés közben. Fokozatosan bíborszínű csapadék válik le. A reakcióelegyhez 3 óra elmúltával 5 ml étert adunk, a kapott szilárd terméket szűrjük, előbb éterrel, azután DKM-mel mossuk, utána metanolban oldjuk. A HPLC elemzés szerint tisztasága 95%-nál nagyobb, hozama 44,7 mg (74%).
1H-NMR (CDCI3/CO3OD, δ ppm): 1,11, 1,40, 1,63 és
1,77 (12H, m, CH2), m, CH2, 2,09 (2H, t, CO-CH2),
3,02 (2H, m, Phe CH2), 3,13 (3H, s, MMC O-CH3),
3,23-3,50 (5H, m, C-1, C-2 és C-3 CH és
M-CH2), 3,56 (1H, ABq, C-9 CH), 3,92 (2H, széles s, CICH2), 4,13 és 4,82 (mindegyik 1H, t és ABq, C-10 CH2), 4,30 (1H, d, C-3 CH), 4,41 (1H, m, Phe CO-CH), 4,65 (1H, m, Lys CO-CH), 4,99 (2H, q, PAB CH2), 6,63 (2H, s, M CH), 7,10 (5H, széles s, Phe Ph), 7,22 és 7,48 (mindegyik 2H,d, PAB Ph); MS (FAB) 952,3 (MH)+, 974 (M+Na)+, 990,3 (M+K)+; HPLC: [C-18, 15 cm-es oszlop, 65:35 metanol/50 mM (trietil-ammónium)-formát-puffer (pH 2,8), 1 ml/perc, 360 nm]: egyetlen csúcs, retenciós ideje: 2,84 perc.
52. példa
2’-(Metoxi-tritil)-taxol [(53) képletű vegyület] előállítása
0,51 g (0,597 mmol) taxol, 4,63 g (25 ekvivalens) (p-metoxi-tritil)-klorid és 14 ml DMK oldatához szobahőmérsékleten nitrogéngáz alatt keverés közben
1,23 ml (25 ekvivalens) piridint adunk. Körülbelül 16 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk az elegyet, majd az oldószert lepároljuk, és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot 5 pH-értékű, hideg pufferoldattal (kétszer 100 ml), utána vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk. Eluálószerként 3% metanolt tartalmazó DKM-et alkalmazunk, s így 482 mg (72%) cím szerinti vegyületet kapunk fehér, szilárd termék alakjában.
1H-NMR (CDCI3, δ ppm): 1,11, 1,17 és 1,55 (mindegyik 3H, s, C-16, C-17 és C-19 CH3), 1,67 (3H, s, C-18 CH3), 1,90 és 2,54 (2H, m, C-6 CH2), 2,26 és 2,51 (mindegyik 3H, s, Ac CH3), 2,54 (2H, m, C-14 CH2), 3,66 (1H, d, C-3 CH), 3,78 (3H, s, O-CH3), 4,21 (2H, ABq, C-20 CH2), 4,41 (1H, m, C-7 CH), 4,63 (1H, d, C-2’ CH), 4,92 (1H, d, C-5 CH), 5,62 (1H, d, C-2 CH), 5,70 (2H, m, C-13 és C-3’ CH), 6,22 (1H, s, C-10 CH), 6,74 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,09-7,60 (23H, m, Ph), 7,80 és 8,09 (mindegyik 2H, d, Bz O-CH); MS (FAB) 1148 (M+Na)+, 1164 (M+K)+.
53. példa
MC-Phe-N£-Mtr-Lys-PABC-7-taxol-2’-Mtr [(54) képletű vegyület] előállítása
218,8 mg (0,194 mmol) (53) képletű 2’-(metoxitritil)-taxol 3 ml száraz DKM-mel készült oldatához 0 °C körüli hőmérsékleten argongáz alatt 34 μΙ (1 ekvivalens) DlEA-t, 15,7 μΙ (1 ekvivalens) piridint, majd 12 μΙ (0,5 ekvivalens) difoszgént adunk. A jégfürdő eltávolítása után a reakcióelegyet szobahőmérsékleten keverjük körülbelül 1 órán át, majd ismét körülbelül 0 °C-ra hűtjük. Ezzel egy időben 167,9 mg (1 ekvivalens) (47) képletű MC-Phe-N-£-Mtr-Lys-PAB-OH-t 6 ml száraz DKM-mel öblítünk, vákuumban szárítjuk, majd 2 ml száraz DKM és 34 μΙ (1 ekvivalens) DIEA elegyében oldjuk. Ezt az oldatot injekciós tű segítségével 0 °C körüli hőmérsékleten adjuk a fenti nyers klór-formiáthoz. Mintegy 10 perc múlva a jégfürdőt eltávolítjuk, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 18 órán át keverjük. Ekkor az elegyet etil-acetáttal hígítjuk, 5 pH-értékű pufferoldattal, utána vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk, első eluálószerként 2:1 arányú, második eluálószerként 1:1 arányú DKM-etil-acetát elegyet, harmadik eluálószerként etil-acetát és DKM 4:1 arányú elegyét, negyedik eluálószerként etil-acetátot alkalmazunk, s így a cím szerinti vegyületet színtelen, üvegszerű termék alakjában 237,9 mg (61%) hozammal a nem reagált kiindulóanyagokkal együtt kapjuk.
1H-NMR (CDCI3, δ ppm: 1,13, 1,16 és 1,57 (mindegyik 3H, s, C-16, C-17 és C-19CH3), 1,10-1,80 (12H, m, Lys és kaproil CH2), 1,88 és 2,61 (mindegyik 1H, m, C-6 CH2), 1,78 (3H, s, C-18 CH3),
2,10 (4H, m, Lys N-CH2 és kaproil CO-CH2),
2.17 és 2,29 (mindegyik 3H, s, Ac CH3), 3,06 (2H, m, Phe CH2), 3,42 (2H, t, kaproil N CH2), 3,75 és 3,78 (mindegyik 3H, s, O-CH3), 3,82 (1H, m, C-3 CH), 4,21 (2H, ABq, C-20 CH2), 4,42 és 4,70 (mindegyik 1H, q, Phe és Lys CO-CH), 4,62 (1H, d, C-2’ CH), 4,93 (1H, d, C-5 CH), 5,19 (2H, q, PAB CH2), 5,59 (1H, m, C-7 CH), 5,62 (1H, d, C-2 CH), 5,72 (2H, m, C-3’ CH és C-13 CH),
6.17 és 6,60 (mindegyik 1H, széles d, amid NH),
6,32 (1H, s, C-10 CH), 6,64 (2H, s, M CH), 6,77 (4H, m, MeOPh O-CH), 7,05-7,62 (44H, m, Ph), 7,80 és 8,06 (mindegyik 2H, d, Bz O-CH), 8,37 (1H, széles s, PAB NH).
HU 224 351 Β1
54. példa
MC-Phe-Lys-PABC-7-taxol.CICH2CO2H [(55) képletű vegyület] előállítása
194,8 mg (0,097 mmol) (54) képletű MC-PheNE-Mtr-Lys-PABC-7-taxol-2’-Mtr, 4,5 ml DKM és 1,05 ml (100 ekvivalens) anizol elegyéhez 0,97 ml (10 ekvivalens) 1 mólos diklór-metános klór-ecetsav-oldatot adunk. Körülbelül 4 óra múlva a reakcióelegyhez 25 ml étert adunk, a kivált szilárd terméket szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. így 142,0 mg (94%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3, δ ppm): 1,13, 1,20 és 1,72 (mindegyik 3H, s, C-16, C-17 és C-19 CH3), 1,10-1,90 (12H, m, Lys és kaproil CH2), 2,13 és 2,33 (mindegyik 3H, s, Ac CH3), 2,96 (2H, m, +H3N-CH2), 3,05 (2H, m, Phe CH2), 3,38 (2H, m, kaproil N-CH2), 3,86 (1H, d, C-3 CH), 4,21 (2H, m, C-20 CH2), 4,50 és 4,61 (mindegyik 1H, m, Phe és Lys CO-CH), 4,77 (1H, széles s, C-2’ CH), 4,91 (1H, d, C-5 CH), 5,10 (2H, m, PAB CH2), 5,42 (1H, m, C-7 CH), 5,64 (1H, d, C-2 CH), 5,71 (1H, m, C-3’ CH), 6,11 (1H, m, C-13 CH), 6,30 (1H, s, C-13 CH), 6,73 (2H, s, M CH), 7,00-8,20 (24H, m, Ph); HPLC [C-18, 15 cm-es oszlop, 7:3 acetonitril/50 mM (trietil-ammónium)-formiát-puffer (pH 2,8), 1 ml/perc, 250 nm]: egyetlen csúcs, retenciós ideje 2,91 perc; MS (FAB) 1471,6 (MH+), 1509,5 (M+Na)+, 1511,8 (M+K)+.
55. példa
Fmoc-Val-NHS [(56) képletű vegyület] előállítása 5,060 g (14,91 mmol) Fmoc-Val, 1,72 g (1 ekvivalens) NHS és 50 ml THF elegyéhez 0 °C körüli hőmérsékleten 3,080 g (1 ekvivalens) DCC-t adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük, majd a szilárd DCU-mellékterméket szűrjük és THF-fel mossuk. Az oldószert forgóbepárlón eltávolítjuk, és az így kapott színtelen, üvegszerű szilárd terméket tisztítás nélkül használjuk a következő lépésben.
56. példa
Fmoc-Val-Cit [(57) képletű vegyület] előállítása 14,91 mmol (56) képletű Fmoc-Val-NHS 40 ml
DME-vel készült oldatát 2,743 g (1,05 ekvivalens) L-citrullin és 1,315 g (1,05 ekvivalens) nátrium-hidrogén-karbonát 40 ml vízzel készült oldatához adjuk, és 20 ml THF-et is hozzáadunk az oldódás elősegítésére. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük, utána 75 ml 15%-os vizes citromsavoldatot adunk hozzá, és az elegyet kétszer extraháljuk 100 ml, 10% izopropanolt tartalmazó etil-acetáttal. A szilárd termék kezd kiválni, azonban a szerves fázisban marad. A szuszpenziót kétszer mossuk 150 ml vízzel, és az oldószereket lepároljuk. A fehér, szilárd maradékot vákuumban körülbelül 5 órán át szárítjuk, majd 80 ml étert adunk hozzá, ultrahanggal kezeljük, éterrel alaposan elkeverjük és szűrjük. így fehér, szilárd termék alakjában 5,8007 g (78%) cím szerinti vegyülethez jutunk.
1H-NMR (DMSO-dg, δ ppm): 0,87 (6H, q, Val CH3), 1,40, 1,59 és 1,69 (4H, m, Cit CH2), 1,97 (1H, m, Val CH3-CH), 2,94 (2H, q, Cit N-CH2), 3,92 (1H, t, Fmoc CH), 4,10-4,35 (2H, m, Val és Cit CO-CH),
4,23 (2H, t, Fmoc CH2), 5,37 (2H, széles s, Cit NH2), 5,92 t, Cit NH), 7,28-7,90 (8H, m, Ph), 8,15 (1H, d, amid NH); MS (FAB) 497 (MH)+, 519 (M+Na)+, 535 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a C26H33N40g összegképletre: számított: 497,2400;
talált: 497,2394.
Elemzés a C26H32N4O6 összegképlet alapján: számított; C-62,89, H-6,50, N-11,28%;
talált: C-62,92, H-6,67, N-11,07%.
57. példa
Fmoc-Val-Cit-Pab-OH [(58) képletű vegyület] előállítása
1,0443 g (2,103 mmol) (57) képletű Fmoc-Val-Cit,
518,0 mg (2 ekvivalens) p-amino-benzil-alkohol és 35 ml 2:1 arányú DKM-metanol keverék elegyéhez 1,0402 g (2 ekvivalens) EEDQ-t adunk. A reakcióelegyet fénytől védve szobahőmérsékleten másfél napig keverjük, utána az oldószereket forgóbepárlón körülbelül 40 °C hőmérsékletű fürdőn eltávolítjuk, és a fehér, szilárd maradékot 75 ml éterrel elkeverjük. Az így kapott szuszpenziót körülbelül 5 percig ultrahanggal kezeljük, majd körülbelül 30 percig állni hagyjuk. A szilárd terméket szűrjük, éterrel többször mossuk, s így 1,0070 g (80%) cím szerinti vegyülethez jutunk. 1H-NMR (DMSO-dg, δ ppm): 0,88 (6H, t, Val CH3), l, 41 és 1,65 (4H, m, Cit CH2), 2,00 (1H, m, Val CH3-CH), 2,99 (2H, m, Cit N-CH2), 3,92 (1H, t, Fmoc CH), 4,24 (2H, d, Fmoc CH2), 4,19-4,50 (2H, m, Val és Cit CO-CH), 4,43 (2H, d, PAB CH2), 5,11 (1H, t, PAB OH), 5,42 (2H, széles s, Cit NH2), 5,98 (1H, t, Cit NH), 7,15-7,92 (12H, m, Ph), 8,12 (1H, d, amid NH), 9,99 (1H, széles s, PAB NH); MS (FAB) 602 (MH)+, 624 (M+Na)+, 640 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a C33H40N5Og összegképletre: számított: 602,2979;
talált: 602,2977.
Elemzés a C33H39N5O6 összegképlet alapján: számított: C-65,87, H-6,53, N-11,64%;
talált: C-65,61, H-6,49, H-11,73%.
58. példa
Val-Cit-PAB-OH [(59) képletű vegyület] előállítása
245,2 mg (407,5 μΙ) (58) képletű Fmoc-ValCit-PAB-OH és 5 ml NMP elegyéhez szobahőmérsékleten 0,8 ml dietil-amint adunk, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át állni hagyjuk, majd az oldószereket forgóbepárló készülékben körülbelül 40 °C hőmérsékletű fürdőn eltávolítjuk. A sűrű, olajszerű maradékot 15 ml DKM-mel kezeljük; dörzsölgetés és ultrahangkezelés hatására a kezdetben gumiszerű termék megszilárdul, ekkor szűrjük, DKM-mel mossuk, így 141,6 mg (92%) cím szerinti vegyületet kapunk. 1H-NMR (DMSO-dg, δ ppm): 0,82 (6H, 2*d, Val CH3),
1,39, 1,59 és 1,66 (4H, m, Cit CH2), 1,92 (1H, m,
HU 224 351 Β1
Val CH3-CH), 2,98 (1H, m, Val CO-CH), 3,03 (2H, d, Val NH2), 4,45 (2H, d, PAB CH2), 4,48 (1H, m, Cit CO-CH), 5,10 (1H, széles t, PAB OH), 5,41 (2H, széles s, Cit NH2), 5,99 (1H, széles t, Cit NH), 7,21 és 7,52 (mindegyik 2H, d, PAB Ph), 8,12 (1H, széles d, amid NH), 10,03 (1H, széles s, PAB NH); MS (FAB) 380 (MH)+, 402 (M+Na)+, 418 (M+K)+.
59. példa
MC-Val-Cit-PAB-OH [(60) képletű vegyület] előállítása
136,8 mg (360,5 pmol) (59) képletű Val-CitPAB-OH, 122,3 mg (1,1 ekvivalens) MC-NHS és 5 ml NMP elegyét szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át állni hagyjuk, majd az NMP-t forgóbepárlón, körülbelül 40 °C hőmérsékletű fürdőn eltávolítjuk, és a visszamaradó, sűrű olajat 20 ml éterrel alaposan elkeverjük. A szilárd terméket szűrjük, éterrel többször mossuk, s így 205,7 mg (99,6%) cím szerinti vegyülethez jutunk. 1H-NMR (DMSO-d6, δ ppm): 0,82 (6H, ABq, Val CH3), l, 10-1,90 (10H, m, Cit és kaproil CH2), 1,92 (1H, m, Val CH3-CH), 2,16 (2H, t, kaproil CO-CH2),
2,98 (2H, m, Cit N-CH2), 3,33 (2H, t, M-CH2), 4,19 (1H, t, Val CO-CH), 4,38 (1H, m, Cit CO-CH), 4,42 (2H, széles d, PAB CH2), 5,10 (1H, széles t, PAB
OH), 5,42 (2H, széles s, Cit NH2), 5,97 (1H, széles t, Cit NH), 6,99 (2H, s, M CH), 7,21 és 7,52 (mindegyik 2H, d, PAB Ph), 7,82 és 8,07 (mindegyik 1H, d, amid NH), 9,90 (1H, széles s, PAB NH); MS (FAB) 573 (MH)+, 595 (M+Na)+, 611 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a C28H41N6O7 összegképletre: számított: 573,3037;
talált: 573,3016.
60. példa
MC-Val-Cit-PABC-PNP [(61) képletű vegyület] előállítása
112,4 mg (196,3 μπηοΙ) (60) képletű MCVal-Cit-PAB-OH-t argongáz alatt szobahőmérsékleten 3 ml száraz piridinben oldunk, az oldatot körülbelül 0 °C-ra hűtjük, és egyszerre hozzáadjuk 119 mg (3 ekvivalens) (p-nitro-fenil)-(klór-fomiát) 2 ml DKM-mel készült oldatát. A reakcióelegyet körülbelül 10 percig, körülbelül 0 °C hőmérsékleten tartjuk, majd a jégfürdőt eltávolítjuk, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 2 órán át keverjük. Ekkor 50 ml etil-acetátot és 75 ml 15%-os cítromsavoldatot adunk hozzá. A szerves fázist további mennyiségű citromsavoldattal, majd vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. így halványsárga, gumiszerű terméket kapunk, amelyet szilikagélen kromatografálunk. Első eluálószerként 20:1 arányú, második eluálószerként 15:1 arányú DKM-metanol elegyet alkalmazunk, s így a cím szerinti vegyületet fehér, szilárd termékként 21,5 mg (15%) hozammal kapjuk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 0,90 (6H, d, Val
CH3), 1,16-1,95 (10H, m, Cit és kaproil CH2), 2,12 (1H, m, Val CH3-CHJ, 2,23 (2H, t, kaproil
CO-CH2), 3,17 (2H, m, Cit N-CH2), 3,48 (2H, t,
M-CH2), 4,20 (1H, m, Val CO-CH), 4,59 (1H, m,
Cit CO-CH), 5,22 (2H, s, PAB CH2), 6,66 (2H, s, M
CH), 6,91 és 7,79 (mindegyik 1H, d, amid NH),
7,34 és 7,60 (mindegyik 2H, d, PAB Ph), 7,34 és
8,23 (mindegyik 2H, d, PNP Ph), 9,49 (1H, széles
S, PAB NH); MS (FAB) 738 (MH)+, 760 (M+Na)+,
776 (M+K)+.
61. példa
HC-Val-Cit-PABC-DOX [(62) képletű vegyület] előállítása
21,2 mg (28,7 pmol) (61) képletű MC-Val-CitPABC-PNP, 18,3 mg (1,1 ekvivalens) DOX-HCI és 1,5 ml NMP elegyét szobahőmérsékleten 5,5 μΙ (1,1 ekvivalens) DlEA-val kezeljük. A reakcióelegyet fénytől védve szobahőmérsékleten 2 napig állni hagyjuk, majd 25 ml DKM-et adunk hozzá. Finom eloszlású csapadék válik ki. A szuszpenziót másnapig hűtőszekrényben tartjuk, utána a narancsszínű, szilárd terméket szűrjük, DKM-mel mossuk. A VRK vizsgálat arra utal, hogy némi termék az anyalúgokban marad a szorosan együtt elmozduló szennyezések legnagyobb részével együtt. A szilárd nyersterméket szilikagéllel kromatografáljuk, az első eluálást 15:1 arányú, a második eluálást 10:1, a harmadik eluálást 5:1 arányú DKM-metanol eleggyel végezzük (a terméket minimális térfogatú 2:1 arányú DKM-metanol eleggyel visszük az oszlopra), így a cím szerinti terméket narancsszínű, szilárd alakban 22,4 mg (63%) hozammal kapjuk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 0,83 (6H, d, Val
CH3), 1,18 (3H, d, cukor CH3), 1,20-1,86 (12H, m, cit és kaproil CH2, D-gyűrű CH2), 1,93 (1H, m, Val CH3-CH), 2,12 (2H, m, D-gyűrű CH2), 2,17 (2H, t, kaproil CO-CH2), 2,90-3,20 (4H, q és m, cukor CH2 és Cit N-CH2), 3,39 (2H, t, M-CH2), 3,50 (1H, széles s, HO—CH), 3,98 (3H, s, O-CH3), 4,02 (1H, m, Val CO-CH), 4,05 (1H, m, cukor CH3-CH), 4,46 (1H, m, Cit CO-CH), 4,68 (2H, s, CO-CH2-OH), 4,88 (2H, q, PAB CH2), 5,16 (1H, széles, s, anomer CH), 5,39 (1H, széles s, DOX Ph-CH), 6,62 (2H, s, M CH), 7,13 és 7,42 (mindegyik 2H, d, PAB Ph), 7,32, 7,71 és 7,92 (mindegyik 1H; d, t és d, DOX Ph); MS (FAB) 1141 (M)+, 1164,6 (M+Na)+, 1180 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a ^56^67^70 i9Na összegképletre:
számított: 1164,4389;
talált: 1164,4363.
62. példa
N-Boc-amino-kapronsav [(63) képletű vegyület] előállítása
5,2331 g (39,89 mmol) 6-amino-kapronsav, 3,3514 g (1 ekvivalens) nátrium-hidrogén-karbonát és 50 ml víz elegyét 9,58 g (1,1 ekvivalens) di(terc-butil)-dikarbonáttal kezeljük, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten éjszakán át keverjük, majd 150 ml vizet és 5 ml telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldatot adunk hozzá. Az oldatot 100 ml éterrel extraháljuk, utána 10 g szilárd citromsavat adunk hozzá, s így olajos szuszpenziót kapunk, amelyet háromszor extrahálunk
HU 224 351 Β1 etil-acetáttal. Az egyesített szerves fázist előbb vízzel, majd konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk, bepároljuk, s így színtelen, olajszerű terméket kapunk, amely vákuumban tartva megszilárdul, hozama 9,23 g (kvantitatív).
1H-NMR (DMSO-d6, δ ppm): 1,10-1,55 (6H, m, kaproil CH2), 1,33 (9H, s, CH3), 2,28 (2H, m, CO-CH2), 2,88 (2H, m, N-CH2), 6,77 (1H, m, NH); MS (DCI) 232 (MH)+, 176 (MH-C4H9)+.
Elemzés a C11H21NO4 összegképlet alapján: számított: C-57,12, H-9,15, N-6,06%;
talált: C-57,11, H-9,22, N-6,09%.
63. példa
Boc-NH-C-NHS [(64) képletű vegyület] előállítása
9,23 g (39,9 mmol) (63) képletű N-Boc-amino-kapronsav, 5,05 g (1,1 ekvivalens) NHS és 75 ml THF oldatához szobahőmérsékleten 9,05 g (1,1 ekvivalens) DCC-t adunk, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük, majd a szilárd DCU-mellékterméket szűrjük. A szűrlet bepárlása után kapott sűrű, olajszerű maradékot 150 ml DKM-ben oldjuk, 1 órán át állni hagyjuk, és az utólag kivált DCU-t kiszűrjük. A szűrletet ismét bepároljuk, és a sűrű olajszerű maradékot vákuumban szárítjuk; eközben megszilárdul. így 13,052 g (99,6%) cím szerinti vegyületet kapunk, melyet további tisztítás nélkül alkalmazunk.
64. példa
Boc-NH-C-Phe [(65) képletű vegyület] előállítása 12,52 g (58,13 mmol) (64) képletű Boc-NH-C-NHS
100 ml DME-vel készült oldatát 6,930 g (1,1 ekvivalens) L-Phe, 3,524 g (1,1 ekvivalens) nátrium-hidrogén-karbonát és 100 ml víz elegyéhez adjuk szobahőmérsékleten, majd további 30 ml TSF-et adunk hozzá az oldódás elősegítésére. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük, majd 100 ml 15%-os citromsavoldatot keverünk hozzá, és az így kapott szuszpenziót háromszor mossuk 80 ml, 10% izopropanolt tartalmazó etil-acetáttal. Az egyesített szerves fázist előbb vízzel, utána konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. Az így kapott fehér, szilárd terméket éterrel alaposan elkeverjük, a fehér, szilárd csapadékot szűrjük és éterrel mossuk. így 12,122 g (84%) cím szerinti vegyületet kapunk. 1H-NMR (DMSO-dg, δ ppm): 1,09 és 1,30 (6H, m, kaproil CH2), 1,38 (9H, s, CH3), 1,80-2,25 (2H, m, CO-CH2), 2,82 (4H, m, Phe CH2 és N-CH2), 4,52 (1H, m, CO-CH), 6,73 (1H, m, NH), 7,20 (5H, m, Ph); MS (DCI) 379 (MH)+, 323 (MH-C4H9)+, 279 (MH-C5H9O2)+.
Elemzés a C20H30N2O5 összegképlet alapján: számított: C-63,47, H-7,99, N-7,40%;
talált: C-63,37, H-8,05, N-7,76%.
65. példa
Boc-NH-C-Phe-NHS [(66) képletű vegyület] előállítása
11,527 g (30,46 mmol) (65) képletű BOC-NH-CPhe, 3,86 g (1,1 ekvivalens) NHS és 100 ml THF elegyéhez 0 °C körüli hőmérsékleten 6,913 g (1,1 ekvivalens) DCC-t adunk, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük, majd a feldolgozást a (64) képletű vegyületre fentebb megadott módon végezzük. így 14,369 g (99,2%) cím szerinti vegyületet kapunk színtelen, üvegszerű termékként, melyet további tisztítás nélkül használunk fel.
66. példa
Boc-NH-C-Phe-Ne-Fmoc-Lys [(67) képletű vegyület] előállítása
14,369 g (30,22 mmol) (66) képletű BocNH-C-Phe-NHS 100 ml DME-vel készült oldatát 11,222 g (1 ekvivalens) NE-Fmoc-Lys és 2,560 g (1 ekvivalens) nátrium-hidrogén-karbonát 50 ml vízzel és 50 ml DME-vel készült oldatához adjuk, az így kapott elegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át erélyesen keverjük, és utána 150 ml 15%-os citromsavoldatot és 250 ml, 10% izopropanolt tartalmazó etil-acetátot adunk hozzá. A vizes fázist még kétszer extraháljuk 100 ml, 10% izopropanolt tartalmazó etil-acetáttal. Az egyesített szerves fázist előbb vízzel, majd konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. így szürkésfehér, szilárd terméket kapunk, amelyet éterrel alaposan elkeverünk, az így kapott fehér, szilárd anyagot szűrjük, éterrel mossuk, így 17,842 g (81%) cím szerinti vegyülethez jutunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,00-1,92 (12H, m, Lys és kaproil CH2), 1,42 (9H, s, CH3), 2,09 (2H, m, CO-CH2), 2,96 (2H, m, Phe CH2), 3,10 (2H, m, kaproil N-CH2), 3,31 (2H, m, Lys N-CH2), 4,18 (1H, t, Fmoc CH), 4,37 (2H, d, Fmoc CH2), 4,46 és 4,71 (mindegyik 1H, m Phe és Lys CO-CH), 7,10-7,80 (13H, m, Ph); MS (FAB) 729 (MH)+, 751 (M+Na)+, 767 (M+K)+.
Elemzés a C41H52N4O8.H2O összegképlet alapján: számított: C-65,93, H-7,32, N-7,66%;
talált: C-66,07, H-7,32, N-7,66%.
67. példa
Boc-NH-C-Phe-N£-Fmoc-Lys-PAB-OH [(68 képletű vegyület] előállítása
15,716 g (21,56 mmol) (67) képletű Boc-NH-CPhe-N£-Fmoc-Lys, 3,983 g (1,5 ekvivalens) p-aminobenzil-alkohol és 100 ml THF elegyéhez szobahőmérsékleten 8,000 g (1,5 ekvivalens) EEDQ-t adunk, a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük, majd 30 °C hőmérsékletű vízfürdőben szárazra pároljuk. A maradékot 100 ml éterrel alaposan elkeverjük, az így kapott fehér, szilárd terméket szűrjük és éterrel mossuk. így 16,453 g (92%) cím szerinti vegyülethez jutunk.
1H-NMR (DMSO-d6, δ ppm): 0,90-1,80 (12H, m, Lys és kaproil CH2), 1,35 (9H, s, CH3), 2,00 (2H, t, CO-CH2), 2,66-3,07 (6H, m, N-CH2 és Phe CH2), 4,19 (1H, m, Fmoc CH), 4,23 (2H, d, Fmoc CH2), 4,36 és 4,58 (mindegyik 1H, m, Phe és Lys CO-CH), 4,41 (2H, s, PAB CH2), 7,10-8,22 (17H, m, Ph), 9,94 (1H, széles s, PAB NH); MS (FAB) 834 (MH)+, 856 (M+Na)+, 872 (M+K)+.
HU 224 351 Β1
Elemzés a C48H59N5O8.2H2O összegképlet alapján: számított: C-68,39, H-7,17, N-8,31%;
talált: C-68,18, H-7,12, H-8,42%.
68. példa
MC-NH-C-Phe-NE-Fmoc-Lys-PAB-OH [(69) képletű vegyület] előállítása
2,1323 g (2,860 mmol) (68) képletű BOC-NHC-Phe-NE-Fmoc-Lys-Pab-OH-t 30 ml 2:1 arányú DKM-TFA elegyben oldunk, az oldatot szobahőmérsékleten körülbelül 15 percig ultrahanggal kezeljük, majd körülbelül 1 órán át állni hagyjuk.
Az oldószerek lepárlása után kapott barna, olajszerű maradékot vákuumban körülbelül 1 órán át szárítjuk, majd 75 ml étert adunk hozzá, és az olajat addig dörzsölgetjük, amíg meg nem szilárdul. E szilárd terméket szűrjük, éterrel mossuk, vákuumban több órán át szárítjuk, majd 40 ml 3:1 arányú DME-víz elegyben oldjuk. Ehhez az oldathoz 788,2 mg (1 ekvivalens) MC-NHS, 20 ml DME és 540 mg (2,5 ekvivalens) szilárd nátrium-hidrogén-karbonát elegyét adjuk. Az így kapott keveréket szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keverjük, majd forgóbepárló készülékben a lehető legtöbb DME-t körülbelül 30 °C hőmérsékletű vízfürdőn eltávolítjuk. így gumiszerű, szilárd maradékot kapunk vizes keverékben. A szilárd anyagot szűrjük, vízzel mossuk, vákuumban szárítjuk, majd 25 ml éterrel alaposan elkeverjük. Az így kapott szilárd terméket szűrjük és éterrel mossuk. így 1,4283 g (60%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,00-1,90 (18H, m,
Lys és kaproil CH2), 2,07 (4H, m, Phe CH2 és
CO-CH2), 2,22 (2H, t, CO-CH2), 3,05 (4H, m, Lys
N-CH2, és kaproil N-CH2), 3,41 (2H, m, M-CH2),
4,11 (1H, t, Fmoc CH), 4,28 (2H, d, Fmoc CH2),
4,38 és 4,63 (mindegyik 1H, m, Phe és Lys
CO-CH), 4,52 (2H, s, PAB CH2), 5,61 (2H, s, M
CH), 6,96-7,71 (17H, m, Ph); MS (FAB) 927,5 (MH)+, 949,3 (M+Na)+, 965,3 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a összegképletre:
számított: 927,4657;
talált: 927,4642.
69. példa
MC-NH-C-Phe-N£-Fmoc-Lys-PABC-PNP [(70) képletű vegyület] előállítása
1,3793 g (1,487 mmol) (69) képletű MC-NH-CPhe-NF-Fmoc-Lys-PAB-OH és 449,5 mg (1,5 ekvivalens) (p-nitro-fenil)-(klór-formiát) 50 ml DKM-mel készült oldatához szobahőmérsékleten 0,18 ml (1,5 ekvivalens) piridint adunk, a szuszpenziót szobahőmérsékleten körülbelül 30 percig ultrahanggal kezeljük, majd körülbelül 16 órán át keverjük. Ekkor további 150 mg (0,5 ekvivalens) (p-nitro-fenil)-(klór-formiát)-ot és 0,06 ml (0,5 ekvivalens) piridint adunk hozzá, az elegyet körülbelül 30 percig ismét ultrahanggal kezeljük, majd körülbelül 4 órán át keverjük. A feldolgozást a fentebb a (61) képletű vegyületre megadott módon végezve gumiszerű, szilárd nyersterméket kapunk, melyet szilikagélen kromatografálunk. Eluálásra először
35:1, másodszor 25:1, harmadszor 20:1 arányú DKM-metanol elegyet alkalmazunk, s így halványsárga, gumiszerű termékként 593,1 mg (0,543 mmol) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,10-1,95 (18H, m, Lys és kaproil CH2), 2,12 (4H, m, kaproil CO-CH2), 3,00 (2H, m, Phe CH2), 3,11 (4H, m, Lys és kaproil N-CH2), 3,44 (2H, t, M-CH2), 4,13 (1H, t, Fmoc CH), 4,32 (2H, d, Fmoc CH2), 4,39 és 4,63 (mindegyik 1H, m, Phe és Lys CO-CH), 5,18 (2H, s, PAB CH2), 6,63 (2H, s, M CH), 7,00-8,25 (21H, m, Ph); MS (FAB): 1114 (M+Na)+, 1130 (M+K)+.
Pontos molekulatömeg a C60H66N7O13 összegképletre:
számított: 1092,4719;
talált: 1092,4680.
70. példa
MC-NH-C-Phe-N£-Fmoc-Lys-PABC-DOX [(71) képletű vegyület] előállítása
382,8 mg (0,350 mmol) (70) képletű MC-NH-CPhe-NE-Fmoc-Lys-PABC-PNP és 213 mg (1,05 ekvivalens) DOX-HCI 16 ml NMP-vel készült oldatához 61 μΙ (1 ekvivalens) DlEA-t adunk, és a reakcióelegyet fénytől védve 2 napig állni hagyjuk. A feldolgozást a fentebb a (62) képletű vegyületre megadott módon végezve narancsszínű, üvegszerű termék alakjában
293,1 mg (56%) cím szerinti vegyületet kapunk. 1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,00-1,85 (20H, m,
Lys és kaproil CH2, D-gyűrű CH2), 1,21 (3H, d, cukor CH3), 2,09 (4H, m, kaproil CO-CH2), 2,17 (2H, m, D-gyűrű CH2), 2,80-3,27 (8H, m, Lys és kaproil N-CH2, cukor CH2, Phe CH2), 3,40 (2H, t, M-CH2), 3,53 (1H, széles s, HO-CW), 3,78 (1H, m, cukor N-CH), 3,99 (3H, s, O-CH3), 4,11 (2H, t, Fmoc CH és cukor CH3-CH), 4,29 (2H, d, Fmoc CH2),
4,33 és 4,57 (mindegyik 1H, m, Phe és Lys CO-CH), 4,71 (2H, s, CO-CH2-OH), 4,89 (2H, q, PAB CH2), 5,20 (1H, széles s, anomer CH), 5,42 (1H, széles s, DOX Ph-CH), 6,60 (2H, s, M CH), 6,90-8,00 (20H, m, Ph); MS (FAB) 1519 (M+Na)+, 1534 (M+K)-.
Pontos molekulatömeg a C81H89N7O2iNa összegképletre:
számított: 1518,6009;
talált: 1518,5962.
71. példa
MC-NH-C-Phe-Lys-PABC-DOX.HCI [(72) képletű vegyület] előállítása
95,2 cg (63,6 pmol) (71) képletű MC-NH-C-PheKF-Fmoc-Lys-PABC-DOX és 0,3 ml NMP keverékét 10 ml THF-fel hígítjuk, majd keverés közben 10 ml, 2% DBU-t tartalmazó THF-et adunk hozzá, körülbelül 45 másodperc múlva 40 ml étert adunk hozzá, a levált kék, szilárd csapadékot szűrőre gyűjtjük és éterrel mossuk. A szilárd terméket 10 ml éterben ismét szuszpendáljuk, és 10 ml 1 mólos éteres hidrogén-klorid-oldatot adunk hozzá. Néhány perc múlva a narancsszínű, szilárd terméket szűrjük, éterrel többször mossuk,
HU 224 351 Β1 ml DKM-mel alaposan elkeverjük. Az így kapott narancsvörös, szilárd anyagot szűrjük, majd LH-20 típusú lipofil Sephadex gyantán kromatografáljuk. Eluálószerként DKM és metanol 1:1 arányú elegyét alkalmazzuk, a terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és LH-20 gyantán ismét kromatografáljuk. Eluálószerként metanol alkalmazásával narancsszínű, üvegszerű alakban 40,2 mg (43,2%) hozammal kapjuk a cím szerinti vegyületet, amely a HPLC elemzés szerint kis mennyiségű szennyezést tartalmaz.
1H-NMR (CDCI3/CO3OD, kiválasztott csúcsok, δ ppm): 1,00-1,95 (23H, m, cukor CH3, Lys és kaproil CH2, D-gyűrű CH2), 2,00-2,40 (6H, m, kaproil CO-CH2 és D-gyűrű CH2), 2,96 (2H, m, +H3N-CH2), 4,05 (3H, s, O-CH3), 4,72 (2H, s, CO-CH2-OH), 4,93 (2H, széles S, PAB CH2), 5,17 (1H, széles s, anomer CH), 5,42 (1H, széles s, DOX Ph-CH), 6,63 (2H, széles s, M CH), 6,90-8,20 (12H, m, Ph).
72. példa
Fmoc-Phe-KF-Mtr-Lys-NMS [(73) képletű vegyület] előállítása l, 8873 g (2,40 mmol) (44) képletű Fmoc-Phe-hFMtr-Lys és 303,2 mg (1,1 ekvivalens) NHS 40 ml DKM-mel készült elegyét 0 °C körüli hőmérsékleten 543,6 mg (1,1 ekvivalens) DCC-vel kezeljük, majd körülbelül 24 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, utána a DCU-t szűrjük, a szűrletet bepároljuk, és a maradékot etil-acetátban felvesszük. Ez utóbbi oldatot vízzel kétszer, majd konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk, eluálószerként etil-acetát és hexán 1:1 arányú elegyét használjuk. A termék jelentős része az oszlopon bomlik, hozama 472,5 mg (22%) cím szerinti vegyület.
1H-NMR (CDCI3 δ ppm): 1,00-1,98 (6H, m, CH2), 2,01 (2H, t, H-CH2), 2,77 (4H, széles s, NHS CH2), 3,09 (2H, m, Phe CH2), 3,76 (3H, s, O-CH3), 4,10-4,51 (4H, m, Fmoc CH2 és CH, Phe CO-CH), 4,83 (1H, m, Lys CO-CH), 5,48 és 6,41 (mindegyik 1H, m, NH), 6,79 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,06-7,80 (25H, m, Ph).
73. példa
Fmoc-Phe-N'-Mtr-Lys-GABA [(74) képletű vegyület] előállítása
472,5 mg (0,534 mmol) (73) képletű Fmoc-Phe-N6Mtr-Lys-NHS 25 ml DME-vel készült oldatát keverés közben, szobahőmérsékleten 83 mg (1,5 ekvivalens) GABA és 67 mg (1,5 ekvivalens) nátrium-hidrogén-karbonát 15 ml vízzel készült oldatához adjuk, a reakcióelegyet 16 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd forgóbepárló készülékben a DME lehető legnagyobb részét eltávolítjuk, és a visszamaradó szuszpenziót etil-acetát és 5 pH-értékű pufferoldat között megoszlatjuk. A szerves fázist előbb vízzel, majd konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot éterrel alaposan elkeverjük, a fehér, szilárd terméket szűrjük, s így a cím szerinti vegyületet 387,0 mg (83%) hozammal kapjuk.
1H-NMR (CDCI3 δ ppm): 0,96-1,99 (8H, m, CH2), 2,10-2,42 (4H, m, Lys N-CH2 és CO-CH2), 3,03 (2H, m, Phe CH2), 3,22 (2H, m, GABA N-CH2), 4,03-4,66 (5H, m, Fmoc CH2 és CH, CO-CH), 6,78 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,00-7,77 (25H, m, Ph); MS (FAB) 895 (M+Na)+, 911 (M+K)+.
74. példa
Fmoc-Phe-NE-Mtr-Lys-GABA-MMC [(75) képletű vegyület] előállítása
296,9 mg (0,340 mmol) (74) képletű Fmoc-PheNE-Mtr-Lys-GABA, 46 mg (1 ekvivalens) HOBt,
119.4 mg (1,05 ekvivalens) MMC, 3 ml NMP és 3 ml DKM elegyéhez szobahőmérsékleten 77,2 mg (1,1 ekvivalens) DCC-t adunk, a reakcióelegyet körülbelül 14 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd etil-acetátot adunk hozzá, és a kapott oldatot vízzel háromszor, majd konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk, eluálószerként DKM és metanol 25:1 arányú elegyét használjuk, s így bíborszínű, üvegszerű alakban
303,1 mg (75%) cím szerinti vegyületet kapunk. 1H-NMR (CDCI3 δ ppm): 0,97-1,90 (8H, m, CH2), 1,71 (3H, s, MMC CH3), 2,08 (2H, m, Lys N-CH2), 2,46 (2H, m, CO-CH2), 2,99 (2H, m, Phe CH2), 3,12 (2H, m, GABA N-CH2), 3,20 (3H, s, MMC O-CH3), 3,28-3,55 (3H, m, C-1, C-2 és C-3 CH), 3,68 (1H, ABq, C-9 CH), 3,73 (3H, s, Mtr O-CH3), 4,04-4,51 és 4,64 (7H, m, Fmoc CH2 és CH, C-10 CH2, CO-CH), 5,14 (2H, széles, NH2), 5,38, 5,49, 5,70 és 6,67 (mindegyik 1H, széles, NH), 6,79 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,03-7,78 (25H, m, Ph); MS (FAB) 1189,8 (MH)+, 1211 (M+Na)+, 1227,5 (M+K)+.
75. példa
Phe-N£-Mtr-Lys-GABA-MMC [(76) képletű vegyület] előállítása
236,1 ml (0,198 mmol) (75) képletű Fmoc-PheNE-Mtr-Lys-GABA-MMC és 2 ml DKM elegyéhez szobahőmérsékleten 2 ml dietil-amint adunk. Körülbelül 3 óra múlva az oldószereket lepároljuk, és a maradékot 10 ml DKM-mel öblítjük. Az így kapott maradékot szilikagélen kromatografáljuk, első eluálószerként 25:1, második eluálószerként 15:1 arányú DKM-metanol elegyet alkalmazunk, s így bíborszínű, üvegszerű termék alakjában
157.4 mg (82%) cím szerinti vegyületet kapunk. 1H-NMR (CDCI3, δ ppm): 1,15-1,83 (8H, m, CH2), 1,77 (3H, s, MMC CH3), 2,10 (2H, t, Lys N-CH2), 2,46 (2H, m, CO-CH2), 2,69 és 3,21 (mindegyik 1H, ABq, Phe CH2), 3,19 (3H, s, MMC O-CH3), 3,20-3,53 (5H, m, GABA N-CH2, C-1, C-2 és C-3 CH), 3,48 (2H, széles s, NH2), 3,68 (2H, m, C-9 CH és Phe CO-CH), 3,76 (3H, s, Mtr O-CH3), 4,09 és 4,82 (mindegyik 1H, t és ABq, C-10 CH2),
4.29 (1H, m, Lys CO-CH), 4,41 (1H, d, C-3 CH),
5.29 (2H, széles s, NH2), 6,60 (1H, széles t, GABA NH), 6,79 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,10-7,48 (17H, m, Ph), 7,72 (1H, d, amid NH); MS (FAB) 967,4 (MH)+, 989,2 (M+Na)+, 1005,3 (M+K)+.
HU 224 351 Β1
76. példa
MC-Phe-Nf-Mtr-Lys-GABA-MMC [(77) képletű vegyület] előállítása
108,9 mg (0,113 mmol) (76) képletű Phe-Nt:-MtrLys-GABA-MMC és 15 ml DKM oldatát 0,124 mmol MC-NHS-hez adjuk, az elegyet szobahőmérsékleten 3 napig keverjük, majd az oldószert lepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk. Első eluálószerként 20:1, második eluálószerként 15:1 arányú DKM-metanol elegyet alkalmazunk, s így bíborszínű, üvegszerű termékként 75,8 mg (58%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3, δ ppm): 1,05-1,90 (14H, m, CH2), l, 76 (3H, s, MMC CH3), 2,07 (4H, m, Lys N-CH2 és kaproil CO-CH2), 2,49 (2H, m, GABA CO-CH2), 2,98 és 3,20 (mindegyik 1H, ABq, Phe CH2), 3,19 (2H, m, GABA N-CH2), 3,23 (3H, s, MMC O-CH3),
3,33 (2H, t, M-CH2), 3,20-3,53 (3H, m, C-1, C-2 és C-3 CH), 3,68 (1H, ABq, C-9 CH), 3,78 (3H, s, Mtr O-CH3), 4,11 és 4,62 (mindegyik 1H, t és ABq, C-10 CH2), 4,24 (1H, m, Lys CO-CH), 4,49 (1H, d, C-3 CH), 5,19 (2H, széles, NH2), 6,27 (1H, d, NH), 6,67 (2H, s, M CH), 6,72 (1H, széles t, NH), 6,80 (2H, d, MeOPh O-CH), 7,10-7,47 (17H, m, Ph), 7,19 (1H, d, NH).
77. példa
MC-Phe-Lys-GABA-MMC.CICH2CO2H [(78) képletű vegyület] előállítása
43.2 mg (37,2 μιηοΙ) (77) képletű termék és 2 ml DKM oldatához 0,405 ml (100 ekvivalens) anizolt és 0,40 ml 1 mólos DKM-es klór-ecetsav-oldatot (11 ekvivalens) adunk. A reakcióelegyhez körülbelül 3 óra múlva 5 ml étert adunk, és az elegyet körülbelül 1 órán át hűtőszekrényben tartjuk. A szilárd csapadékot szűrjük, éterrel mossuk, és DKM-mel alaposan elkeverjük. így
36,1 mg (99%) cím szerinti vegyületet kapunk. 1H-NMR (CDCI3/CD3OD, δ ppm): 1,03-1,82 (8H, m,
CH2), 1,71 (3H, s, MMC CH3), 2,08 (2H, t, kaproil
CO-CH2), 2,40 (2H, széles t, GABA CO-CH2),
2,83 (4H, m, GABA N-CH2 és N+-CH2), 3,39 (2H, t, M-CH2), 3,59 (1H, ABq, C-9 CH), 3,95 (1H, t, C-10 CH2), 4,18 (1H, m, Lys CO-CH), 4,42 (1H, d, C-3 CH), 4,67 (2H, m, Phe CO-CH és C-10 CH2), 6,63 (2H, s, M CH), 7,17 (5H, m, Ph); HPLC: [C-18, 15 cm-es oszlop, 65:35 metanol/50 mM (trietil-ammónium)-formiát-puffer (pH 2,8), 1 ml/perc, 360 nm]: egyetlen csúcs, retenciós ideje: 2,19 perc.
78. példa
Taxol-2’-(etil-karbonát)-7-(klór-formiát) [(83) képletű vegyület] előállítása
154.2 mg (0,1665 mmol) (82) képletű taxol-2’(etil-karbonát) 3 ml DKM-mel készült oldatához argongáz alatt 0 °C hőmérsékleten 13,5 μΙ (1 ekvivalens) piridint, majd utána 10,0 μΙ (0,5 ekvivalens) difoszgént adunk. A jégfürdőt eltávolítjuk, és az elegyet szobahőmérsékleten keverjük 1 órán át, majd 0 °C-ra hűtjük, és közvetlenül felhasználjuk.
79. példa
MC-Phe-NE-Mtr-Lys-PABC-7-taxol-2’-(etil-karbonát) [(84) képletű vegyület] előállítása
143,9 mg (0,1665 mmol) (47) képletű MC-PheN£-Mtr-Lys-PAB-OH és 4 ml DKM oldatát a (83) képletű taxol-2’-(etil-karbonát)-7-(klór-formiát) (0,1665 mmol) fenti oldatához adagoljuk körülbelül 0 °C hőmérsékleten. Ezután a jégfürdőt eltávolítjuk, és a reakcióelegyet körülbelül 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd etil-acetátot adunk hozzá, és a kapott oldatot 5 pH-értékű pufferoldattal, majd vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A színtelen, üvegszerű maradékot szilikagélen kromatografáljuk; első eluálószerként 2:1, második eluálószerként 1:1 arányú DKM-etil-acetát elegyet alkalmazunk, s így színtelen, üvegszerű alakban 251,0 mg (83%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3, δ ppm): 1,16, 1,21 és 1,78 (mindegyik 3H), s, C-16, C-17 és C-19 CH2), l, 10-1-90 (12H, m, Lys és kaproil CH2), 1,31 (3H, t, etil CH3), 1,91 és 2,60 (mindegyik 1H, m, C-6 CH2), 2,04 (3H, s, C-18 CH2), 2,12 (4H, t, Lys N-CH2 és kaproil CO-CH2), 2,18 és 2,48 (mindegyik 3H, s, Ac CH3), 2,22 és 2,40 (mindegyik 1H, m, C-14 CH2), 3,03 (2H, m, Phe CH2), 3,42 (2H, t, kaproil N-CH2), 3,97 (1H, d, C-3 CH), 4,29 (2H, m, C-20 CH2), 4,21 (2H, q, etil CH2), 4,46 és 4,72 (mindegyik 1H, m, Phe és Lys CO-CH), 4,96 (1H, d, C-5 CH), 5,16 (2H, q, PAB CH2), 5,44 (1H, d, C-2’ CH), 5,56 (1H, m, C-7 CH), 5,70 (1H, d, C-2 CH), 5,97 (1H, m, C-3’ CH), 6,26 (1H, m, C-13 CH), 6,40 (1H, s, C-10 CH), 6,65 (2H, s, M CH), 6,78 (2H, d, MeOPh O-CH), 6,98 és 7,60 (mindegyik 1H, d, NH), 7,04-8,20 (31H, m, Ph),
8.38 (1H, széles s, PAB NH); MS 1837,2 (M+Na)+,
1853,5 (M+K)+.
80. példa
MC-Phe-Lys-PABC-7-taxol-2’-(etil-karbonát).CICH2CO2H [(85) képletű vegyület] előállítása
80,2 mg (44,2 μητιοΙ) (84) képletű MC-PheNe-Mtr-Lys-PABC-7-taxol-2’-(etil-karbonát) 3,5 ml DKM-mel készült oldatához szobahőmérsékleten 0,48 ml (100 ekvivalens) anizolt és 0,442 ml (10 ekvivalens) 1 mólos DKM-es klór-ecetsav-oldatot adunk. Körülbelül 3 óra múlva a reakcióelegyhez 15 ml étert adunk, és a kapott keveréket körülbelül 2 órán át hűtőszekrényben tartjuk. A kivált fehér, szilárd terméket szűrjük, éterrel mossuk, így 72,2 mg (99%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (CDCI3, δ ppm): 1,16, 1,20 és 1,80 (mindegyik 3H, s, C-16, C-17 és C-19 CH3), 1,10-1,90 (12H, m, Lys és caproil CH2), 1,30 (3H, t, etil CH3), 1,91 és 2,58 (mindegyik 1H, m C-6 CH2), 2,02 (3H, s, C-18 CH3), 2,13 (2H, m, kaproil CO-CH2), 2,17 és 2,45 (mindegyik 3H, s, Ac CH3), 2,20 és
2.39 (mindegyik 1H, m, C-14 CH2), 2,97 (2H, m, Lys N-CH2), 3,01 (2H, m, Phe CH2), 3,42 (2H, t, kaproil N-CH2), 3,97 (1H, d, C-3 CH), 4,29 (4H, m, C-20 CH2 és etil CH2), 4,56 és 4,83 (mindegyik 1H,
HU 224 351 Β1 m, Phe és Lys CO-CH), 4,95 (1H, d, C-5 CH), 5,17 (2H, q, PAB CH2), 5,42 (1H, d, C-2’ CH), 5,54 (1H, m, C-7 CH), 5,69 (1H, d, C-2 CH), 5,97 (1H, m, C-3’ CH), 6,29 (1H, m, C-13 CH), 6,41 (1H, s, C-10 CH), 6,66 (2H, s, M CH), 6,98 és 8,39 (mindegyik 1H, d, NH), 7,08-8,14 (19H, m Ph), 9,25 (1H, széles s, PAB NH).
81. példa
A konjugátumok szintézise ml, 10,46 mg/ml koncentrációjú mAb BR96 oldatot (6,54* 10-5 mól/liter koncentrációt 280 nm hullámhosszon UV-abszorpció útján határoztuk meg; 1 mg/ml mAb megfelel 1,4 absz. egységnek) 0,125 mól/liter kálium-foszfát-pufferoldatban 0,523 ml 10 millimól/liter koncentrációjú, frissen előállított ditiotreit- (DTT) oldattal kezelünk körülbelül 37 °C hőmérsékleten körülbelül 3 órán át nitrogénatmoszférában. Ezután az oldatot Amicon-cellába visszük át, és dializáló szűrést hajtunk végre foszfáttal pufferezett konyhasóoldattal (PBS) mindaddig, amíg az elfolyó termék SH csoportoktól mentessé nem válik (ennek kimutatását Ellman-reagenssel végezzük). A mAb és -SH csoportok koncentrációját meghatároztuk [10,11 mg/ml (6,32*10-5 mól/liter), illetve 4,48x1ο-4 mól/liter, ami annyit jelent, hogy az -SH csoportok mAb-hez viszonyított mólaránya (MR) 7,01]. Az oldathoz 5 mg/ml (4,77*10-3 mól/liter MC-Phe-Lys-PABC-DOX-anyagot adunk 1,2 ml desztillált vízben oldva, majd a keveréket éjszakán át körülbelül 4 °C hőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután az oldatot dializálócsőbe visszük át, és háromszor dializáljuk 1 liter PBS-sel szemben körülbelül 24 órán át, körülbelül 4 °C hőmérsékleten. Ezt követően a konjugátum oldatát Millex-GV (0,22 pm pórusméret) szűrőegységen (Millipore Corp.) szűrjük, és a szűrletet több órán át biogyöngyökkel együtt (Bio-Rad Laboratories) enyhén rázzuk, majd Millivexx-GV egységen ismételten szűrjük. A DOX koncentrációját a 495 nm hullámhosszon mért UV-abszorpció mérésével határozzuk meg (ε=8030, 283 pm, 164 pg/ml), a mAb koncentrációját 280 nm hullámhosszon - korrigálva a DOX 280 nm hullámhosszon mért abszorpciójával - a következő képlettel számítjuk:
A280-(0,724*A495) mAb (mg/ml)= 1,4 ahol A az adott hullámhosszon megfigyelt abszorbanciát jelenti.
82. példa
Phe-(Ne-Mtr)-Lys-PABC-DOX megfelelő oldószerrel készült oldatához ekvivalens mennyiségű (N-szukcinimidil)-[p-(jód-acetamido)-benzoát]-ot adunk. Az így kapott oldatot körülbelül 30 °C hőmérsékleten tartjuk körülbelül 1 órán át, majd az oldószert vákuumban lepároljuk. Az Mtr védőcsoportot a peptidről a szokott módon eltávolítjuk, és a jódacetilezett peptidet vízben vagy vízzel elegyedő szerves oldószerben ismert koncentrációban oldjuk. Ennek az oldatnak megfelelő mennyiségét a tiolozott mAb BR96 PBS-sel készült oldatához adjuk, s így a mAb-ban kialakított valamennyi tiolcsoportot elreagáltatjuk. Az oldatot körülbelül 4 °C hőmérsékleten tartjuk körülbelül 1 órán át, majd molekulaméret-kizárásos oszlopon kromatografáljuk a kis molekulatömegű vegyületeknek a konjugátumról való kiküszöbölése céljából. Végül a konjugátumot tartalmazó oldatot kis mennyiségű biogyönggyel néhány órán át rázzuk, és utána 0,22 mikron pórusméretű szűrőn szűrjük. A mAb és DOX koncentrációját 280, illetve 495 nm hullámhosszon mért abszorpciójukkal határozzuk meg, és ebből számítjuk a hatóanyagnak mAb-hoz viszonyított mólarányát.
83. példa
Phe-(Nc-Mtr)-Lys-PABC-DOX megfelelő oldószerrel készült oldatához ekvivalens mennyiségű (N-szukcinimidil)-[3-(2-piridil-ditio)-propionát]-ot (SPDP) adunk, az oldatot körülbelül 1 órán át körülbelül 30 °C hőmérsékleten tartjuk, majd az oldószert vákuumban lepároljuk. A peptidről az Mtr védőcsoportot a szokásos módon eltávolítjuk, és a peptidet vízben vagy vízzel elegyedő szerves oldószerben ismert koncentrációban oldjuk. Ennek az oldatnak megfelelő mennyiségét tiolozott mAb BR96 PBS-sel készült oldatához adjuk, s így a mAb-on kialakított összes tiocsoportokat elreagáltatjuk. Az oldatot körülbelül 1 órán át körülbelül 4 °C hőmérsékleten tartjuk, majd molekulaméret-kizáró oszlopon kromatografáljuk a kis molekulatömegű vegyületeknek a kiküszöbölésére a konjugátumból. Végül a konjugátumot tartalmazó oldatot kis mennyiségű biogyönggyel néhány órán át rázzuk, majd 0,22 mikron pórusméretű szűrőn szűrjük. A mAb és DOX koncentrációját 280, illetve 495 nm hullámhosszon mért abszorpciójuk alapján határozzuk meg, és ebből számítjuk a hatóanyagnak az mAb-hoz viszonyított mólarányát.
A találmányt konkrét példákkal, anyagokkal és adatokkal írtuk le. A szakmai gyakorlattal rendelkező egyén számára nyilvánvaló, hogy a találmány különböző jellegzetességei más módszerek alkalmazásával és más előállítási módszerekkel is megvalósíthatók. Az ilyen alternatív megoldásokat úgy tekintjük, hogy az alábbi igénypontokkal definiált jelen találmány tartalmán és szellemén belül esnek.

Claims (12)

1. (I) általános képletű vegyület
L-[-A-Ym-Z-X-]-D (I), a képletben
L jelentése immunglobulin-ligandum vagy annak fragmentuma;
A jelentése benzil-oxi-karbonil-, 1-7 szénatomos alkoxi-karbonil- vagy 1-7 szénatomos alkenil-oxi-karbonil-csoport, olyan (a4) általános képletű csoport, ahol q értéke 1 és 8 közötti egész szám, 4-(2-acetamido)benzoil-, 3-tiopropionil- vagy 6-(3-tiopropionil-amido)-hexanoil-csoport;
Y jelentése D- vagy L-Phe, Alá, Val, Leu, Ile, Gly vagy Tyr aminosavmaradék;
HU 224 351 Β1
Z jelentése Lys, Arg, Orn vagy Cit aminosavmaradék;
X jelentése (III) képletű csoport vagy (IV) általános képletű csoport, amelyben R1 jelentése 1-5 szénatomos alkiléncsoport;
D jelentése citotoxikus hatóanyagegységként aminocsoportján kapcsolódó doxorubicin, olyan (A) általános képletű mitomicinszármazék, ahol R1 a kapcsolódás helye és R2 jelentése -NH2 csoport (MMC), és hidroxilcsoportján kapcsolódó 2’- vagy 7-taxol, illetve 7-taxol-2’-(etil-karbonát);
m értéke 1 vagy 2.
2. Az 1. igénypont szerinti vegyület, amelyben Y-Z jelentése fenil-alanin-lizin, valin-citrullin vagy valinlizin.
3. Az 1. igénypont szerinti vegyület, amelyben L jelentése BR96, BR64, L6, relaxált BR96, relaxált BR64, relaxált L6, kiméra BR96, kiméra BR64, kiméra L6, relaxált kiméra BR96, relaxált kiméra BR64, relaxált kiméra L6 vagy ezeknek egy antigénkötő fragmentuma.
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyület, amelyben X jelentése (III) képletű csoport.
5. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyület, amelyben X jelentése (IV) általános képletű csoport, a képletben R1 jelentése 1-5 szénatomos alkiléncsoport.
6. Az 5. igénypont szerinti vegyület, amelyben X jelentése γ-amino-vajsav, a.a-dimetil-y-amino-vajsav vagy p,p-dimetil-’/-amino-vajsav.
7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti vegyület, amelyben A jelentése (a^ általános képletű csoport, ahol q értéke 1 és 8 közötti egész szám.
8. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti vegyület, amelyben A jelentése 4-(2-acetamido)-benzoil-, 3-tiopropionil- vagy 6-(3-tiopropionil-amido)-hexanoil-csoport.
9. Az 1. igénypont szerinti vegyület, amely BR96-szukcinimido-kaproil-valin-lizin-(p-aminobenzil-oxi-karbonil)-doxorubicin, BR96-szukcinimidokaproil-valin-citrullin-(p-amino-benzil-oxi-karbonil)-doxorubicin, BR96-szukcinimido-kaproil-(fenil-alanin)-lizin-(p-amino-benzil-oxi-karbonil)-2’-taxol, BR96-szukcinimido-kaproil-(fenil-alanin)-lizin-(p-aminobenzil-oxi-karbonil)-7-taxol, BR96-szukcinimido-kaproil-(fenil-alanin)-lizin-(p-amino-benzil-oxi-karbonil)-mitomicin C vagy BR96-szukcinimido-kaproil-(fenil-alanin)-lizin-Y-amino-vajsav-mitomicin C.
10. Gyógyászati készítmény, amely az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti vegyületet és gyógyászatilag elfogadható hordozót tartalmaz.
11. Eljárás (maleimido-kaproil)-(fenil-alanil)-lizin(p-amino-benzil-oxi-karbonil)-doxorubicin előállítására, azzal jellemezve, hogy
i) N“-(9-fluorenil-metoxi-karbonil)-lizin diklór-metános szuszpenziójához argongáz alatt, szobahőmérsékleten trimetil-szilil-kloridot adunk, az elegyet körülbelül 1 órán át visszafolyató hűtő alatt forraljuk, majd 0 °C-ra hűtjük, és diizopropil-etil-amint, valamint [(p-anizil)-difenilj-metil-kloridot adagolunk hozzá, ezután vízzel eldolgozzuk, etil-acetáttal extraháljuk, az oldószert lepároljuk, s így Na-(9-fluorenil-metoxi-karbonil)-N£-(p-metoxi-tritil)-lizint kapunk;
ii) az így kapott Na-(9-fluorenil-metoxi-karbonil)-N6(p-metoxi-tritil)-lizint diklór-metánban szobahőmérsékleten körülbelül 4-24 órán át dietil-aminnal kezeljük, majd az oldószert lepároljuk, a maradékot éterrel alaposan elkeverjük, s így a védőcsoport eltávolításával N£-(p-metoxi-tritil)-lizint kapunk;
iii) (9-fluorenil-metoxi-karbonil)-(fenil-alanin)-t diciklohexil-karbodiimiddel és N-hidroxi-szukcinimiddel diklór-metánban szobahőmérsékleten körülbelül 12-24 órán át reagáltatunk, majd a melléktermékként képződött diciklohexil-karbamidot szűréssel eltávolítjuk, az oldószert lepároljuk, így (9-fluorenil-metoxi-karbonil)-(fenil-alanil)-N-hidroxi-szukcinimidet kapunk;
iv) az N£-(p-metoxi-tritil)-lizint és (9-fluorenilmetoxi-karbonil)-(fenil-alanil)-N-hidroxi-szukcinimidet 1,2-dimetoxi-etán és víz elegyében, 1 ekvivalens bázis jelenlétében, szobahőmérsékleten körülbelül 12 órától 2 napig terjedő időn át reagáltatva kapcsoljuk, majd az elegyet megsavanyítjuk, extrakciót végzünk etil-acetáttal, s így (9-fluorenil-metoxi-karbonil)-(fenil-alanil)-Nf-(p-metoxi-tritil)-lizint kapunk;
v) a kapott (9-fluorenil-metoxi-karbonil)-(fenil-alanil)-NE-(p-metoxi-tritil)-lizint p-amino-benzil-alkohollal és 2-etoxi-1-(etoxi-karbonil)-1,2-dihidrokinolinnal diklór-metánban szobahőmérsékleten körülbelül 12-24 órán át reagáltatjuk, utána az oldószert lepároljuk, a visszamaradó terméket éterrel alaposan elkeverjük, s így (9-fluorenil-metoxi-karbonil)-(fenil-alanil)N£-(p-metoxi-tritil)-lizin-(p-amino-benzil-alkohol)-t kapunk;
vi) a kapott (9-fluorenil-metoxi-karbonil)-(fenil-alanil)-NE-(p-metoxi-tritil)-lizin-(p-amino-benzil-alkohol)-ból a védőcsoportot diklór-metánban szobahőmérsékleten körülbelül 4-16 órán át dietil-aminnal reagáltatva eltávolítjuk, majd az oldószert lepároljuk, és a maradékot szilikagélen gyorsan kromatografáljuk, eluálószerként
2- 4% metanolt tartalmazó diklór-metánt alkalmazunk, s így (fenil-alanil)-Nc-(p-metoxi-tritil)-lizil-(p-aminobenzil-alkohol)-t kapunk;
vii) a (fenil-alanil)-Nc-(p-metoxi-tritil)-lizil-(p-aminobenzil-alkohol)-t 1 ekvivalens bázis jelenlétében diklór-metán, tetrahidrofurán vagy 1,2-dimetoxi-etán-közegben 1-3 napon át (maleimido-kaproil)-N-hidroxi-szukcinimiddel reagáltatjuk, a reakcióelegyet vízzel eldolgozzuk, a terméket éterrel alaposan elkeverjük, s így (maleimido-kaproil)-(fenil-alanil)-N£-(p-metoxi-tritil)-lizil-(p-amino-benzil-alkohol)-t kapunk;
viii) a kapott (maleimido-kaproil)-(fenil-alanil)-N£-(p-metoxi-tritil)-lizil-(p-amino-benzil-alkohol)-t
3- 5 ekvivalens bisz(p-nitro-fenil)-karbonáttal és diizopropil-etil-aminnal diklór-metánban szobahőmérsékleten 2-5 napig reagáltatjuk, majd vízzel feldolgozzuk, és az így kapott terméket szilikagélen gyorsan kromatografáljuk, eluálószerként etil-acetát és hexán 1:1-től 8:1-ig változó arányú elegyét alkalmazzuk, s így (maleimido-kaproil)-(fenil-alanil)-NE-(p-metoxi-tritil)-lizil-(p-amino-benzil)-(p-nitro-fenil)-karbonátot kapunk;
HU 224 351 Β1 ix) a kapott (maleimido-kaproil)-(fenil-alanil)-NE(p-metoxi-tritil)-lizil-(p-amino-benzil)-(p-nitro-fenil)-karbonátot N-metil-pirrolidinonban szobahőmérsékleten 2—4 napig doxorubicinnel reagáltatjuk, majd a reakcióelegyet vízzel feldolgozzuk, és szilikagélen gyorsan 5 kromatografáljuk, eluálószerként diklór-metán és metanol 25:1-től 20:1-ig változó arányú keverékeit alkalmazzuk, s így (maleimido-kaproil)-(fenil-alanil)-NE-(p-metoxi-tritil)-lizil-(p-amino-benzil-oxi-karbonil)-doxorubicint kapunk;
x) az így kapott termékből a lizin védőcsoportját valamilyen savval diklór-metánban kationkötő szer jelenlétében szobahőmérsékleten 1-6 órán át végzett reak10 cióval eltávolítjuk, majd a terméket etil-acetát vagy éter hozzáadásával kicsapjuk, szűrjük, s így a (maleimido-kaproil)-(fenil-alanil)-lizil-(p-amino-benzil-oxi-karbonil)-doxorubicin diklór-ecetsavas sóját kapjuk.
12. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (maleimido-kaproil)-(fenil-alanil)-NE(p-metoxi-tritil)-lizil-(p-amino-benzil-oxi-karbonil)-doxorubicin védőcsoportjának eltávolítását úgy végezzük, hogy 10 ekvivalens diklór-ecetsavval és 100 ekvivalens anizollal diklór-metánban 1-3 órán át reagáltatjuk, majd a képződött terméket etil-acetáttal kicsapjuk, s így a (maleimido-kaproil)-(fenil-alanil)-lizil-(p-amino-benziloxi-karbonil)-doxorubicin diklór-ecetsavas sóját kapjuk.
HU9401507A 1993-05-14 1994-05-13 Lizoszómás enzim hatására hasadó, daganatgátló hatóanyag-konjugátumok, ilyen konjugátumokat tartalmazó gyógyászati készítmények és eljárás ezek előállítására HU224351B1 (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/062,366 US6214345B1 (en) 1993-05-14 1993-05-14 Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9401507D0 HU9401507D0 (en) 1994-09-28
HUT66485A HUT66485A (en) 1994-11-28
HU224351B1 true HU224351B1 (hu) 2005-08-29

Family

ID=22042014

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9401507A HU224351B1 (hu) 1993-05-14 1994-05-13 Lizoszómás enzim hatására hasadó, daganatgátló hatóanyag-konjugátumok, ilyen konjugátumokat tartalmazó gyógyászati készítmények és eljárás ezek előállítására

Country Status (18)

Country Link
US (1) US6214345B1 (hu)
EP (1) EP0624377B1 (hu)
JP (1) JP3645283B2 (hu)
CN (1) CN1117760C (hu)
AT (1) ATE212236T1 (hu)
AU (1) AU687795B2 (hu)
CA (1) CA2123363C (hu)
CZ (1) CZ118794A3 (hu)
DE (1) DE69429689T2 (hu)
DK (1) DK0624377T3 (hu)
ES (1) ES2170755T3 (hu)
FI (1) FI116038B (hu)
HU (1) HU224351B1 (hu)
MX (1) MX9403570A (hu)
NO (1) NO315162B1 (hu)
NZ (1) NZ260512A (hu)
PT (1) PT624377E (hu)
RU (1) RU94016384A (hu)

Families Citing this family (674)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU1140495A (en) * 1994-01-27 1995-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Method for preparing thioether conjugates
US5658592A (en) * 1994-05-13 1997-08-19 Kuraray Co., Ltd. Medical crosslinked polymer gel of carboxylic polysaccharide and diaminoalkane
US5677470A (en) * 1994-06-28 1997-10-14 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Baccatin derivatives and processes for preparing the same
CA2162759A1 (en) * 1994-11-17 1996-05-18 Kenji Tsujihara Baccatin derivatives and processes for preparing the same
US5843903A (en) * 1995-11-27 1998-12-01 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Targeted cytotoxic anthracycline analogs
ATE234635T1 (de) * 1995-12-22 2003-04-15 Bristol Myers Squibb Co Verzweigte hydrazongruppen enthaltende kuppler
CA2251742C (en) 1996-04-15 2001-12-11 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Drug complex
US6368598B1 (en) * 1996-09-16 2002-04-09 Jcrt Radiation Oncology Support Services, Inc. Drug complex for treatment of metastatic prostate cancer
WO1998013059A1 (en) * 1996-09-27 1998-04-02 Bristol-Myers Squibb Company Hydrolyzable prodrugs for delivery of anticancer drugs to metastatic cells
PT934329E (pt) * 1996-09-30 2002-05-31 Bayer Ag Glicoconjugados de derivados de camptotecina modificados (ligacao 20-o)
DE19640207A1 (de) * 1996-09-30 1998-04-02 Bayer Ag Glycokonjugate von modifizierten Camptothecin-Derivaten (A- oder B-Ring-Verknüpfung)
US5980883A (en) * 1996-10-02 1999-11-09 Kuraray Co., Ltd. Polymer gel for medical use
EP0941120A4 (en) 1996-11-05 2004-08-18 Bristol Myers Squibb Co BRANCHED PEPTIDLINKERS
ID23424A (id) * 1997-05-14 2000-04-20 Bayer Ag Glikokonjugat dari 20(s)-kamptotesin
WO1999025729A1 (fr) * 1997-11-18 1999-05-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composes possedant une activite antitumorale
GB9724838D0 (en) * 1997-11-26 1998-01-21 Franks Christopher R Compositions
AU2337599A (en) * 1998-01-23 1999-08-09 Microcide Pharmaceuticals, Inc. Efflux pump inhibitors
US6204279B1 (en) * 1998-06-03 2001-03-20 Microcide Pharmaceuticals, Inc. Peptidomimetic efflux pump inhibitors
CA2333321A1 (en) * 1998-05-22 1999-12-02 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Drug complex
AU765409B2 (en) * 1998-10-30 2003-09-18 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. DDS compounds and method for assaying the same
AU768027B2 (en) * 1999-02-24 2003-11-27 Uab Research Foundation, The Taxane derivatives for targeted therapy of cancer
US6613879B1 (en) 1999-05-14 2003-09-02 Boehringer Ingelheim Pharma Kg FAP-activated anti-tumour compounds
CA2370245A1 (en) 1999-05-14 2000-11-23 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Enzyme-activated anti-tumor prodrug compounds
DE19926475A1 (de) * 1999-06-10 2000-12-14 Ktb Tumorforschungs Gmbh Träger-Pharmaka-Konjugate
ATE349438T1 (de) 1999-11-24 2007-01-15 Immunogen Inc Cytotoxische wirkstoffe enthaltend taxane und deren therapeutische anwendung
DE10012120A1 (de) 2000-03-13 2001-09-27 Ktb Tumorforschungs Gmbh Therapeutische und diagnostische Ligandensysteme mit Transportmolekülbindenden Eigenschaften und diese enthaltende Arzneimittel
JP5242877B2 (ja) 2000-04-26 2013-07-24 オレゴン ヘルス アンド サイエンス ユニバーシティー チオールをベースとする化学保護剤の投与
AU7007001A (en) 2000-06-22 2002-01-02 Nitromed Inc Nitrosated and nitrosylated taxanes, compositions and methods of use
EP1365803A2 (en) * 2000-08-30 2003-12-03 Oregon Health and Science University Chemoprotectant for gastric toxicity
US20070258987A1 (en) * 2000-11-28 2007-11-08 Seattle Genetics, Inc. Recombinant Anti-Cd30 Antibodies and Uses Thereof
US20040018194A1 (en) * 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
JP2004528309A (ja) 2001-03-23 2004-09-16 ナプロ バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 癌治療用分子複合体
EP1243276A1 (en) * 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
AU2002251448A1 (en) * 2001-04-01 2002-10-15 Yeda Research And Development Co. Ltd. Weizmann Institute Of Science Oral absorbed drugs
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
EP2163256B1 (en) 2001-05-11 2015-09-02 Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. Specific binding proteins and uses thereof
US20110313230A1 (en) 2001-05-11 2011-12-22 Terrance Grant Johns Specific binding proteins and uses thereof
US6989452B2 (en) * 2001-05-31 2006-01-24 Medarex, Inc. Disulfide prodrugs and linkers and stabilizers useful therefor
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
US20050215472A1 (en) 2001-10-23 2005-09-29 Psma Development Company, Llc PSMA formulations and uses thereof
EP1448588A4 (en) 2001-10-23 2006-10-25 Psma Dev Company L L C ANTIBODIES AND MULTIMERS OF PSMA PROTEINS
US8435529B2 (en) 2002-06-14 2013-05-07 Immunomedics, Inc. Combining radioimmunotherapy and antibody-drug conjugates for improved cancer therapy
US7585491B2 (en) 2002-12-13 2009-09-08 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
US7591994B2 (en) 2002-12-13 2009-09-22 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US8877901B2 (en) * 2002-12-13 2014-11-04 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
CN1649600A (zh) * 2002-02-28 2005-08-03 A&D生物科学公司 氟西汀及类似物的糖醛酰胺、苷和原酸酯苷及其应用
US9770517B2 (en) 2002-03-01 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
US8361464B2 (en) 2002-03-01 2013-01-29 Immunomedics, Inc. Anthracycline-Antibody Conjugates for Cancer Therapy
SG108837A1 (en) * 2002-03-11 2005-02-28 Pi Eta Consulting Co Pte Ltd An enterprise knowledge and information acquisition, management and communications system with intelligent user interfaces
WO2003079980A2 (en) * 2002-03-19 2003-10-02 A & D Bioscience, Inc. Caboxylic acid glycuronides, glycosamides and glycosides of quinolones, penicillins, analogs, and uses thereof
US20050255038A1 (en) * 2002-04-12 2005-11-17 A And D Bioscience, Inc. Conjugates comprising cancer cell specific ligands, a sugar and diagnostic agents and uses thereof
US20050233949A1 (en) * 2002-04-12 2005-10-20 Holick Michael F Conjugates comprising cancer cell specific ligands, a sugar and cancer chemotherapeutic agents/boron neutron capture therapy agents, and uses thereof
EP1549323A2 (en) * 2002-05-07 2005-07-06 A & D Bioscience, Inc. Conjugates comprising central nervous system active drug
US20050215487A1 (en) * 2002-06-27 2005-09-29 Holick Michael F Conjugates comprising an nsaid and a sugar and uses thereof
HUE027549T2 (hu) * 2002-07-31 2016-10-28 Seattle Genetics Inc Hatóanyagot tartalmazó konjugátumok és alkalmazásuk rák, autoimmun betegség vagy fertõzéses betegség kezelésére
MXPA05001390A (es) 2002-08-02 2005-07-29 Immunogen Inc Agentes citotoxicos que contienen taxanos potentes novedosos y su uso terapeutico.
US7390898B2 (en) 2002-08-02 2008-06-24 Immunogen Inc. Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
US8420086B2 (en) 2002-12-13 2013-04-16 Immunomedics, Inc. Camptothecin conjugates of anti-CD22 antibodies for treatment of B cell diseases
AU2004213053C1 (en) * 2003-02-20 2009-07-16 Seagen Inc. Anti-CD70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
US20080025989A1 (en) * 2003-02-20 2008-01-31 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
AU2004232314B2 (en) 2003-04-22 2007-11-22 Ipsen Pharma S.A.S. Peptide vectors
US20040220085A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Compositions for nucleic acid delivery
US20040220390A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Composition useful for the treatment of tumors
US20040219101A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Composition useful for treatment of tumors
US20040219099A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Method for the treatment of tumors
US20040219104A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Methods for treatment of tumors
US20040219100A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Composition useful for the treatment of tumors
US20040219103A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Methods useful for the diagnosis, imaging and treatment of tumors
US20040220084A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Methods for nucleic acid delivery
US20040219102A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Compositions for drug delivery
US20040220121A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Methods for drug delivery
US20040219097A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Jasbir Sandhu Composition useful for the diagnosis, imaging and treatment of tumors
US7232805B2 (en) * 2003-09-10 2007-06-19 Inflabloc Pharmaceuticals, Inc. Cobalamin conjugates for anti-tumor therapy
DK2489364T3 (en) 2003-11-06 2015-03-02 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds conjugated to antibodies
US7375078B2 (en) * 2004-02-23 2008-05-20 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
NZ550934A (en) * 2004-05-19 2010-05-28 Medarex Inc Chemical linkers and conjugates thereof
US7691962B2 (en) * 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
UA85716C2 (en) * 2004-05-19 2009-02-25 Медарекс, Инк. Chemical linkers and their conjugates
AU2005249490B2 (en) 2004-06-01 2010-07-29 Genentech, Inc. Antibody drug conjugates and methods
US7541330B2 (en) * 2004-06-15 2009-06-02 Kosan Biosciences Incorporated Conjugates with reduced adverse systemic effects
AU2005286607B2 (en) 2004-09-23 2011-01-27 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
JP5222559B2 (ja) * 2004-10-15 2013-06-26 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 癌および免疫障害の処置および予防のための抗ｃｄ７０抗体ならびにその使用
US8337838B2 (en) * 2004-10-15 2012-12-25 Seattle Genetics, Inc. Anti-CD70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
US7641903B2 (en) * 2004-10-15 2010-01-05 Seattle Genetics, Inc. Anti-CD70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
US8288352B2 (en) * 2004-11-12 2012-10-16 Seattle Genetics, Inc. Auristatins having an aminobenzoic acid unit at the N terminus
DE602005022928D1 (de) 2004-11-30 2010-09-23 Abgenix Inc Antikörper gegen gpnmb und ihre verwendungen
US20120269886A1 (en) 2004-12-22 2012-10-25 Nitto Denko Corporation Therapeutic agent for pulmonary fibrosis
EP4005601A1 (en) 2004-12-22 2022-06-01 Nitto Denko Corporation Drug carrier and drug carrier kit for inhibiting fibrosis
NZ556661A (en) * 2005-02-18 2010-10-29 Medarex Inc Human monoclonal antibodies to prostate specific membrance antigen (PSMA)
US9707302B2 (en) 2013-07-23 2017-07-18 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
US10058621B2 (en) 2015-06-25 2018-08-28 Immunomedics, Inc. Combination therapy with anti-HLA-DR antibodies and kinase inhibitors in hematopoietic cancers
US7714016B2 (en) * 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
CA2605507C (en) 2005-04-19 2016-06-28 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-cd70 binding agents and uses thereof
WO2006135371A1 (en) * 2005-06-09 2006-12-21 Kosan Biosciences Incorporated Conjugates with reduced adverse systemic effects
WO2007002222A2 (en) * 2005-06-20 2007-01-04 Psma Development Company, Llc Psma antibody-drug conjugates
US8871720B2 (en) 2005-07-07 2014-10-28 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the C-terminus
AU2006269422B2 (en) 2005-07-07 2012-12-06 Seagen Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the C-terminus
WO2007031734A1 (en) * 2005-09-14 2007-03-22 Ucb Pharma S.A. Comb polymers
US20080279868A1 (en) 2005-09-26 2008-11-13 Medarex, Inc. Antibody-Drug Conjugates and Methods of Use
AU2006294663B2 (en) * 2005-09-26 2012-03-22 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to CD70
ES2375843T3 (es) 2005-10-26 2012-03-06 Medarex, Inc. Procedimientos y compuestos para la preparación de an�?logos de cc-1065.
WO2007102888A2 (en) * 2005-10-28 2007-09-13 The Regents Of The University Of Colorado Methods of treating cancer with doxazolidine and prodrugs thereof
WO2007059404A2 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
US9572886B2 (en) 2005-12-22 2017-02-21 Nitto Denko Corporation Agent for treating myelofibrosis
AU2007211104A1 (en) * 2006-01-27 2007-08-09 University Of Mississippi Medical Center Thermally-targeted delivery of medicaments, including doxorubicin
US7750116B1 (en) * 2006-02-18 2010-07-06 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugate metabolites
TWI523864B (zh) 2006-05-30 2016-03-01 建南德克公司 抗體及免疫接合物及其用途
GB0619291D0 (en) 2006-09-29 2006-11-08 Ucb Sa Altered antibodies
JP5398538B2 (ja) 2006-12-01 2014-01-29 メダレックス・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー Ｃｄ２２に結合するヒト抗体およびその使用
ES2523915T5 (es) 2006-12-01 2022-05-26 Seagen Inc Agentes de unión a la diana variantes y usos de los mismos
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
AU2007333098A1 (en) 2006-12-14 2008-06-19 Medarex, Inc. Human antibodies that bind CD70 and uses thereof
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
CN101711284A (zh) * 2007-01-25 2010-05-19 达娜-法勃肿瘤研究所 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
US8664407B2 (en) 2007-02-21 2014-03-04 Medarex, LLC Chemical linkers with single amino acids and conjugates thereof
CN101688229B (zh) * 2007-03-15 2013-06-12 路德维格癌症研究所 包含egfr抗体和src抑制剂的组合物及其在制备用于治疗哺乳动物癌症的药物中的用途
TWI407971B (zh) 2007-03-30 2013-09-11 Nitto Denko Corp Cancer cells and tumor-related fibroblasts
CA2687291A1 (en) 2007-05-16 2008-11-20 Ktb Tumorforschungsgesellschaft Mbh Low-viscous anthracycline formulation
EP2474557B1 (en) 2007-07-16 2014-08-20 Genentech, Inc. Anti-CD79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
PE20140625A1 (es) 2007-07-16 2014-05-29 Genentech Inc ANTICUERPOS ANTI-CD79b E INMUNOCONJUGADOS HUMANIZADOS
CN108424454B (zh) 2007-08-14 2022-05-31 路德维格癌症研究所有限公司 靶向egf受体的单克隆抗体175及其衍生物和用途
EP2185188B1 (en) 2007-08-22 2014-08-06 Medarex, L.L.C. Site-specific attachment of drugs or other agents to engineered antibodies with c-terminal extensions
CA2698812A1 (en) 2007-09-14 2009-03-19 Nitto Denko Corporation Drug carriers
PL2195017T3 (pl) 2007-10-01 2015-03-31 Bristol Myers Squibb Co Ludzkie antyciała, które wiążą mezotelinę i ich zastosowania
AU2008308509B2 (en) 2007-10-04 2014-10-23 Zymogenetics, Inc. B7 family member zB7H6 and related compositions and methods
DK2211904T3 (en) 2007-10-19 2016-10-24 Seattle Genetics Inc Cd19-binding agents and uses thereof
JP5606916B2 (ja) * 2007-10-19 2014-10-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド システイン操作抗ｔｅｎｂ２抗体および抗体薬物結合体
WO2009067546A2 (en) 2007-11-19 2009-05-28 Celera Corpration Lung cancer markers and uses thereof
BRPI0819765A2 (pt) * 2007-11-30 2015-05-05 Bristol Myers Squibb Co Conjugados de anticorpos anti-rg-1
AU2009205995B2 (en) 2008-01-18 2014-04-03 Medimmune, Llc Cysteine engineered antibodies for site-specific conjugation
RU2553566C2 (ru) 2008-01-31 2015-06-20 Дженентек, Инк. АНТИ-CD79b АНТИТЕЛА И ИММУНОКОНЪЮГАТЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
DK2265283T3 (da) * 2008-03-18 2014-10-20 Seattle Genetics Inc Auristatin-lægemiddel-linker-konjugater
KR101764081B1 (ko) 2008-04-30 2017-08-01 이뮤노젠 아이엔씨 가교제 및 그 용도
PL2282773T3 (pl) 2008-05-02 2014-08-29 Seattle Genetics Inc Sposoby i kompozycje do wytwarzania przeciwciał i pochodnych przeciwciał o obniżonej fukozylacji rdzeniowej
ES2438495T3 (es) 2008-09-08 2014-01-17 Psma Development Company, L.L.C. Compuestos para exterminar células cancerosas que expresan PSMA, resistentes a taxano
UA109633C2 (uk) 2008-12-09 2015-09-25 Антитіло людини проти тканинного фактора
HRP20221259T1 (hr) 2009-02-13 2022-12-09 Immunomedics, Inc. Imunokonjugati s intracelularnom vezom koja se može rascijepiti
HUE034196T2 (hu) 2009-03-05 2018-02-28 Squibb & Sons Llc CADM1-re specifikus teljesen humán antitestek
AU2010236787A1 (en) 2009-04-01 2011-11-10 Genentech, Inc. Anti-FcRH5 antibodies and immunoconjugates and methods of use
TR201907573T4 (tr) 2009-06-03 2019-06-21 Immunogen Inc Konjugasyon yöntemleri̇
EP2445520A4 (en) 2009-06-22 2013-03-06 Medimmune Llc MANIPULATED FC REGIONS FOR LOCAL SPECIFIC CONJUGATION
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
US20110076232A1 (en) * 2009-09-29 2011-03-31 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof
EP2470569A1 (en) 2009-10-13 2012-07-04 Oxford Biotherapeutics Ltd. Antibodies against epha10
BR112012007523A2 (pt) 2009-10-23 2017-06-20 Amgen British Columbia moléculas de anticorpo anti-gcc e composições e métodos relacionados
RU2016105962A (ru) 2009-12-04 2018-11-23 Дженентек, Инк. Мультиспецифические антитела, аналоги антител, композиции и способы
PL2510011T3 (pl) 2009-12-09 2015-02-27 Inst Nat Sante Rech Med Przeciwciała monoklonalne, które wiążą B7H6 i ich zastosowania
WO2011097627A1 (en) 2010-02-08 2011-08-11 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to 161p2f10b proteins
WO2011106297A2 (en) * 2010-02-23 2011-09-01 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
EP2789622B1 (en) 2010-04-15 2017-03-01 MedImmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
EP2528625B1 (en) 2010-04-15 2013-07-10 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CA2799540A1 (en) 2010-06-08 2011-12-15 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
WO2011154453A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Genmab A/S Antibodies against human cd38
CN106084053B (zh) 2010-06-15 2020-01-17 根马布股份公司 针对组织因子的人抗体药物缀合物
CA2806252C (en) 2010-07-29 2019-05-14 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
IL290591B2 (en) 2010-09-29 2024-08-01 Seagen Inc Antibody drug preparations (ADC) that bind to 191P4D12 proteins
EP3219731A1 (en) 2010-10-01 2017-09-20 Oxford BioTherapeutics Ltd Anti-ror1 antibodies
WO2012054748A2 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Seattle Genetics, Inc. Synergistic effects between auristatin-based antibody drug conjugates and inhibitors of the pi3k-akt mtor pathway
USRE48959E1 (en) 2010-12-06 2022-03-08 Seagen Inc. Humanized antibodies to LIV-1 and use of same to treat cancer
KR20130136494A (ko) * 2010-12-29 2013-12-12 애로우헤드 리서치 코오포레이션 효소 민감성 결합을 갖는 Ｉｎ Ｖｉｖｏ 폴리뉴클레오티드 전달 컨쥬게이트
EP2658981B1 (en) * 2010-12-29 2016-09-28 F.Hoffmann-La Roche Ag Small molecule conjugates for intracellular delivery of nucleic acids
JOP20210044A1 (ar) 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
US10294270B2 (en) 2011-02-25 2019-05-21 Lonza Ltd Branched linker for protein drug conjugates
CN104906592B (zh) * 2011-02-25 2017-11-03 广州南沙龙沙有限公司 用于蛋白质药物偶联物的支链联接体
AU2012236511B2 (en) 2011-03-30 2016-04-28 Arizona Board Of Regents, For And On Behalf Of, Arizona State University Auristatin tyramine phosphate salts and auristatin aminoquinoline derivatives and prodrugs thereof
JP6177231B2 (ja) 2011-04-20 2017-08-09 ゲンマブ エー／エス Ｈｅｒ２に対する二重特異性抗体
EA028220B1 (ru) 2011-05-27 2017-10-31 Глаксо Груп Лимитед Иммуноконъюгат на основе белка, связывающегося с bcma (cd269/tnfrsf17), его медицинское применение и фармацевтическая композиция
UA112434C2 (uk) 2011-05-27 2016-09-12 Ґлаксо Ґруп Лімітед Антигензв'язувальний білок, який специфічно зв'язується з всма
JP6209159B2 (ja) * 2011-06-21 2017-10-04 イミュノジェン・インコーポレーテッド ペプチドリンカーを有する新規メイタンシノイド誘導体およびその結合体
AU2015224535B2 (en) * 2011-06-21 2017-07-20 Immunogen, Inc. Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof
PL2726508T3 (pl) 2011-06-28 2017-12-29 Oxford Biotherapeutics Ltd Przeciwciała przeciwko cyklazie ADP-rybozylowej 2
UA117901C2 (uk) 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
WO2013022855A1 (en) 2011-08-05 2013-02-14 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points and immunofiltering
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
KR101860174B1 (ko) 2011-09-20 2018-05-21 메디뮨 리미티드 표적 접합체 내의 내포를 위한 비대칭 이량체 pbd 화합물로서 피롤로벤조디아제핀
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
DK2766392T3 (da) 2011-10-10 2019-10-07 Xencor Inc Fremgangsmåde til oprensning af antistoffer
AU2012322932B2 (en) 2011-10-14 2016-11-10 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
ES2945932T3 (es) 2011-10-14 2023-07-10 Seagen Inc Pirrolobenzodiazepinas y conjugados dirigidos
EP2751111B1 (en) 2011-10-14 2017-04-26 MedImmune Limited Asymmetrical bis-(5H-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one) derivatives for the treatment of proliferative or autoimmune diseases
KR101961976B1 (ko) 2011-10-14 2019-03-25 시애틀 지네틱스, 인크. 피롤로벤조디아제핀 및 표적 접합체
BR112014009050B1 (pt) 2011-10-14 2022-06-21 Medimmune Limited Conjugado anticorpo-fármaco de pirrolbenzodiazepinas, composição farmacêutica que compreende o mesmo, bem como compostos de pirrolbenzodiazepinas
CA2854233C (en) 2011-11-04 2020-05-12 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain
SI3327027T1 (sl) 2011-11-17 2021-03-31 Pfizer Inc. Citotoksični peptidi in njihovi konjugati zdravil s protitelesi
WO2013093809A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
US20140364359A1 (en) * 2012-01-18 2014-12-11 Raymond A FIRESTONE Compositions and methods for treating cancer and inflammation-related dieseases and conditions
JP2015505537A (ja) 2012-01-20 2015-02-23 シー レーン バイオテクノロジーズ， エルエルシー 結合分子コンジュゲート
LT2814829T (lt) 2012-02-13 2017-02-27 Bristol-Myers Squibb Company En-diino junginiai, jų konjugatai ir jų panaudojimas bei jo būdai
US20150335761A1 (en) * 2012-02-16 2015-11-26 Raymond Firestone Compositions and methods for contraception
PE20150090A1 (es) 2012-02-24 2015-02-16 Stem Centrx Inc Moduladores y metodos de empleo novedosos referencia cruzada a solicitudes
JP6067754B2 (ja) 2012-02-24 2017-01-25 アルテオジェン インコーポレイテッドＡｌｔｅｏｇｅｎ Ｉｎｃ． システイン残基を含むモチーフが結合した修飾抗体、前記修飾抗体を含む修飾抗体−薬物複合体及びその製造方法
CN104334580B (zh) 2012-02-24 2018-03-30 艾伯维施特姆森特克斯有限责任公司 抗sez6抗体及使用方法
WO2013130093A1 (en) 2012-03-02 2013-09-06 Genentech, Inc. Biomarkers for treatment with anti-tubulin chemotherapeutic compounds
MX2014010750A (es) 2012-03-08 2015-02-05 Halozyme Inc Anticuerpos receptores del factor de crecimiento anti-epidermico condicionalmente activos y metodos de uso de los mismos.
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
US20140079636A1 (en) 2012-04-16 2014-03-20 Dinesh U. Chimmanamada Targeted therapeutics
EP2844300B1 (en) 2012-05-01 2018-10-17 Genentech, Inc. Anti-pmel17 antibodies and immunoconjugates
US9801951B2 (en) 2012-05-15 2017-10-31 Concortis Biosystems, Corp. Drug-conjugates, conjugation methods, and uses thereof
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
MX368678B (es) 2012-05-15 2019-10-11 Seattle Genetics Inc Conjugados enlazadores auto-estabilizantes.
EP2852404B1 (en) 2012-05-21 2017-07-26 Genentech, Inc. ANTI-Ly6E ANTIBODIES AND IMMUNOCONJUGATES AND METHODS OF USE
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
EP3632462A1 (en) 2012-07-06 2020-04-08 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
EP2869845B1 (en) 2012-07-06 2019-08-28 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
TR201802376T4 (tr) 2012-07-09 2018-03-21 Genentech Inc Anti-CD79b antikorları içeren immünokonjugatlar.
WO2014011520A1 (en) 2012-07-09 2014-01-16 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
TW201406785A (zh) 2012-07-09 2014-02-16 Genentech Inc 抗ｃｄ２２抗體及免疫結合物
BR112015000437A2 (pt) 2012-07-09 2017-06-27 Genentech Inc imunoconjugados, formulação farmacêutica, métodos de tratamento e de inbir a proliferação de uma célula
CN112587671A (zh) 2012-07-18 2021-04-02 博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
MX2015001407A (es) 2012-08-02 2015-05-08 Genentech Inc Inmunoconjugados y anticuerpos anti-etbr.
JP2015528818A (ja) 2012-08-02 2015-10-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｅｔｂｒ抗体およびイムノコンジュゲート
US9382329B2 (en) 2012-08-14 2016-07-05 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells
US8968742B2 (en) 2012-08-23 2015-03-03 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (ADC) that bind to 158P1D7 proteins
SI3342785T1 (sl) 2012-10-11 2020-02-28 Daiichi Sankyo Company, Limited Povezovalci za konjugate protitelesa in zdravila
KR101995620B1 (ko) 2012-10-12 2019-07-03 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 피롤로벤조디아제핀-항체 컨주게이트
WO2014057072A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Spirogen Sàrl Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
LT2839860T (lt) 2012-10-12 2019-07-10 Medimmune Limited Pirolobenzodiazepinai ir jų konjugatai
CA2887894C (en) 2012-10-12 2019-10-29 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine - anti-psma antibody conjugates
CA3060520C (en) 2012-10-12 2022-05-17 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
NZ707490A (en) 2012-10-12 2018-09-28 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
NZ707534A (en) 2012-10-12 2018-08-31 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US10695433B2 (en) 2012-10-12 2020-06-30 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US10736903B2 (en) 2012-10-12 2020-08-11 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-anti-PSMA antibody conjugates
WO2014061277A1 (ja) 2012-10-19 2014-04-24 第一三共株式会社 親水性構造を含むリンカーで結合させた抗体－薬物コンジュゲート
EP2914600A2 (en) 2012-10-30 2015-09-09 Nerviano Medical Sciences S.r.l. Functionalized 9-bromo-camptothecin derivatives
JP6355641B2 (ja) 2012-11-05 2018-07-11 ファイザー・インク スプライソスタチン類似体
CN105849086B (zh) 2012-11-24 2018-07-31 杭州多禧生物科技有限公司 亲水性链接体及其在药物分子和细胞结合分子共轭反应上的应用
US9353150B2 (en) 2012-12-04 2016-05-31 Massachusetts Institute Of Technology Substituted pyrazino[1′,2′:1 ,5]pyrrolo[2,3-b]-indole-1,4-diones for cancer treatment
EP2928503B1 (en) 2012-12-10 2019-02-20 Mersana Therapeutics, Inc. Conjugates of auristatin compounds
US10744129B2 (en) 2012-12-13 2020-08-18 Immunomedics, Inc. Therapy of small-cell lung cancer (SCLC) with a topoisomerase-I inhibiting antibody-drug conjugate (ADC) targeting Trop-2
US10413539B2 (en) 2012-12-13 2019-09-17 Immunomedics, Inc. Therapy for metastatic urothelial cancer with the antibody-drug conjugate, sacituzumab govitecan (IMMU-132)
US9492566B2 (en) 2012-12-13 2016-11-15 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US10206918B2 (en) 2012-12-13 2019-02-19 Immunomedics, Inc. Efficacy of anti-HLA-DR antiboddy drug conjugate IMMU-140 (hL243-CL2A-SN-38) in HLA-DR positive cancers
HUE057977T2 (hu) 2012-12-13 2022-06-28 Immunomedics Inc Ellenanyagok és SN-38 immunkonjugátumainak dózisai javított hatásossággal és csökkentett toxicitással
US10137196B2 (en) 2012-12-13 2018-11-27 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US9107960B2 (en) 2012-12-13 2015-08-18 Immunimedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
US9931417B2 (en) 2012-12-13 2018-04-03 Immunomedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
AU2013366493B2 (en) 2012-12-21 2017-08-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
KR20150119848A (ko) * 2012-12-21 2015-10-26 바이오얼라이언스 씨.브이. 친수성 자기-희생 링커 및 그것의 포합체
EA032986B1 (ru) 2012-12-21 2019-08-30 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины
KR101597100B1 (ko) * 2013-01-03 2016-02-25 (주)셀트리온 항체-링커-약물 결합체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 항암제 조성물
KR101597110B1 (ko) * 2013-01-03 2016-02-25 (주)셀트리온 항체-링커-약물 결합체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 항암제 조성물
KR101597101B1 (ko) * 2013-01-03 2016-02-25 (주)셀트리온 항체-링커-약물 결합체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 항암제 조성물
KR101597105B1 (ko) * 2013-01-03 2016-02-25 (주)셀트리온 항체-링커-약물 결합체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 항암제 조성물
US9814784B2 (en) 2013-01-03 2017-11-14 Celltrion, Inc. Antibody-linker-drug conjugate, preparation method therefor, and anticancer drug composition containing same
WO2014108198A1 (en) 2013-01-10 2014-07-17 Genmab B.V. Human igg1 fc region variants and uses thereof
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EP3620473A1 (en) 2013-01-14 2020-03-11 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EP2945969A1 (en) 2013-01-15 2015-11-25 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
CN105209068A (zh) 2013-02-07 2015-12-30 免疫医疗公司 用于靶向癌症治疗的缀合至抗体的高效2-吡咯啉多柔比星的前药形式(p2pdox)
SG11201506243XA (en) 2013-02-14 2015-09-29 Bristol Myers Squibb Co Tubulysin compounds, methods of making and use
DK2958944T3 (da) 2013-02-22 2019-06-24 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-dll3-antistof-pbd-konjugater og anvendelser deraf
ITUD20130024A1 (it) 2013-02-22 2014-08-23 Carlo Galli Aptameri per la realizzazione di dispositivi biomedicali impiantabili in tessuto e relativo metodo
JP6340019B2 (ja) 2013-03-13 2018-06-06 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピン及びそのコンジュゲート
BR112015023333A8 (pt) 2013-03-13 2018-04-17 Medimmune Ltd pirrolbenzodiazepinas e conjugados dos mesmos
TWI680766B (zh) 2013-03-13 2020-01-01 英商梅迪繆思有限公司 吡咯并苯并二氮呯及其共軛物
BR112015022019A2 (pt) 2013-03-14 2017-08-29 Genentech Inc Anticorpos isolados, ácido nucleico, célula hospedeira, método de produção de anticorpos, imunoconjugado, formulação farmacêutica, métodos de tratamento de indivíduos, de inibição da proliferação de células, de detecção de b7-h4 humano e de detecção de câncer
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
US9789209B2 (en) 2013-03-14 2017-10-17 The Regents Of The University Of California, Berke Activatable membrane-interacting peptides and methods of use
PT2968440T (pt) 2013-03-15 2019-07-31 Zymeworks Inc Compostos citotóxicos e antimitóticos e métodos de utilização dos mesmos
AU2014232416B2 (en) 2013-03-15 2017-09-28 Xencor, Inc. Modulation of T Cells with Bispecific Antibodies and FC Fusions
SI2968588T1 (sl) 2013-03-15 2019-05-31 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Formulacije konjugatov protitelo proti-EGFR zdravilo
JP6594855B2 (ja) 2013-03-15 2019-10-23 ゼンコア インコーポレイテッド ヘテロ二量体タンパク質
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
WO2014152199A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Abbvie Inc. Antibody drug conjugate (adc) purification
CA2910945A1 (en) 2013-05-08 2014-11-13 Zymeworks Inc. Bispecific her2 and her3 antigen binding constructs
CN105358574B (zh) 2013-05-31 2020-10-16 基因泰克公司 抗壁磷壁酸抗体和缀合物
DK3004162T3 (da) 2013-05-31 2020-05-18 Genentech Inc Anti-væg-teichoin-antistoffer og konjugater
CA2913732A1 (en) 2013-06-04 2014-12-11 Cytomx Therapeutics, Inc. Compositions and methods for conjugating activatable antibodies
US11253606B2 (en) 2013-07-23 2022-02-22 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
WO2015017552A1 (en) 2013-08-01 2015-02-05 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to cd37 proteins
KR20160042080A (ko) 2013-08-12 2016-04-18 제넨테크, 인크. 1-(클로로메틸)-2,3-디히드로-1H-벤조[e]인돌 이량체 항체-약물 접합체 화합물, 및 사용 및 치료 방법
AU2014312215B2 (en) 2013-08-28 2020-02-27 Abbvie Stemcentrx Llc Site-specific antibody conjugation methods and compositions
AU2014312310A1 (en) 2013-08-28 2016-04-07 Abbvie Stemcentrx Llc Novel SEZ6 modulators and methods of use
EP3738594A1 (en) 2013-09-10 2020-11-18 Madrigal Pharmaceuticals, Inc. Targeted therapeutics having an hsp90 ligand as binding moiety
CA2922562A1 (en) 2013-09-12 2015-03-19 Halozyme, Inc. Modified anti-epidermal growth factor receptor antibodies and methods of use thereof
WO2015038426A1 (en) * 2013-09-13 2015-03-19 Asana Biosciences, Llc Self-immolative linkers containing mandelic acid derivatives, drug-ligand conjugates for targeted therapies and uses thereof
AR097685A1 (es) 2013-09-17 2016-04-06 Genentech Inc Métodos de uso de anticuerpos anti-lgr5
EP3620470B1 (en) 2013-10-11 2023-07-26 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Tem8 antibodies and their use
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EA036927B1 (ru) 2013-10-11 2021-01-15 Оксфорд Биотерепьютикс Лтд Конъюгированные антитела против ly75 для лечения рака
WO2015052535A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054985B1 (en) 2013-10-11 2018-12-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2015052532A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
SG11201600954XA (en) 2013-10-15 2016-03-30 Seattle Genetics Inc Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
RU2016134258A (ru) 2013-10-15 2018-02-28 Сорренто Терапьютикс Инк. Конъюгат лекарственного средства с направляющей молекулой и двумя различными лекарственными средствами
JP6908964B2 (ja) 2013-10-18 2021-07-28 ピーエスエムエー ディベロップメント カンパニー，エルエルシー Ｐｓｍａリガンドコンジュゲートによる併用療法
WO2015057250A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Psma Development Company, Llc Combination therapies with psma ligand conjugates
RU2016118573A (ru) 2013-10-21 2017-11-28 Дженентек, Инк. Анти-ly6e антитела и способы применения
WO2015066053A2 (en) 2013-10-28 2015-05-07 Synta Pharmaceuticals Corp. Targeted therapeutics
EP3066118B1 (en) 2013-11-06 2020-01-08 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Alk antibodies, conjugates, and chimeric antigen receptors, and their use
CA2930307A1 (en) 2013-11-13 2015-05-21 Zymeworks Inc. Monovalent antigen binding constructs targeting egfr and/or her2 and uses thereof
WO2015075201A1 (en) 2013-11-21 2015-05-28 Genmab A/S Antibody-drug conjugate lyophilised formulation
KR102306493B1 (ko) 2013-11-25 2021-09-28 씨젠 인크. 접합을 위한 ｃｈｏ 세포 배양물로부터의 항체 제조
CN110590950A (zh) 2013-12-13 2019-12-20 基因泰克公司 抗cd33抗体和免疫缀合物
WO2015095124A1 (en) 2013-12-16 2015-06-25 Genentech Inc. Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof
MX2016007578A (es) 2013-12-16 2016-10-03 Genentech Inc Compuestos de conjugado anticuerpo-farmaco dimerico de 1-(clorometil)-2,3-dihidro-1h-benzo [e] indol, y metodos de uso y tratamiento.
MX371092B (es) 2013-12-16 2020-01-16 Genentech Inc Compuestos peptidomimeticos y conjugados de anticuerpo-farmaco de los mismos.
BR112016013861A2 (pt) 2013-12-16 2017-10-10 Genentech Inc conjugados de droga e anticorpo, compostos, método de tratamento e composição farmacêutica
WO2015098099A1 (ja) 2013-12-25 2015-07-02 第一三共株式会社 抗ｔｒｏｐ２抗体－薬物コンジュゲート
EP3086815B1 (en) * 2013-12-27 2022-02-09 Zymeworks Inc. Sulfonamide-containing linkage systems for drug conjugates
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
WO2015103989A1 (en) 2014-01-10 2015-07-16 Shanghai Birdie Biotech, Inc. Compounds and compositions for immunotherapy
JP2017505305A (ja) 2014-01-24 2017-02-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｓｔｅａｐ１抗体及びイムノコンジュゲートを使用する方法
EP3099332A4 (en) 2014-01-29 2017-06-21 Madrigal Pharmaceuticals, Inc. Targeted therapeutics
RS62618B1 (sr) 2014-01-31 2021-12-31 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-her2 antitelo-lek konjugat
AU2015218633A1 (en) 2014-02-21 2016-09-01 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-DLL3 antibodies and drug conjugates for use in melanoma
US10464955B2 (en) 2014-02-28 2019-11-05 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Charged linkers and their uses for conjugation
MA39481A (fr) 2014-03-03 2015-09-11 Synta Pharmaceuticals Corp Thérapies ciblées
WO2015143004A1 (en) 2014-03-18 2015-09-24 Synta Pharmaceuticals Corp. Targeted therapeutics
AU2015231001A1 (en) 2014-03-21 2016-09-29 Abbvie Inc. Anti-EGFR antibodies and antibody drug conjugates
CN111410691B (zh) 2014-03-28 2024-02-13 Xencor公司 结合至cd38和cd3的双特异性抗体
EP3125943A4 (en) 2014-04-04 2017-12-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphate based linkers for intracellular delivery of drug conjugates
WO2015155976A1 (ja) 2014-04-10 2015-10-15 第一三共株式会社 抗ｈｅｒ２抗体－薬物コンジュゲート
EP3129063B1 (en) 2014-04-10 2021-01-27 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-her3 antibody-drug conjugate
GB201406767D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
ES2856927T3 (es) 2014-04-30 2021-09-28 Pfizer Conjugados de fármaco-anticuerpo anti-PTK7
JP2017522861A (ja) 2014-05-22 2017-08-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｇｐｃ３抗体及びイムノコンジュゲート
JP6453706B2 (ja) * 2014-05-23 2019-01-16 日本化薬株式会社 新規なグルタミン酸誘導体およびその用途
US9579317B2 (en) 2014-06-03 2017-02-28 Jiarui Biopharmaceuticals, Ltd. Peptide-drug conjugates
TWI695011B (zh) 2014-06-18 2020-06-01 美商梅爾莎納醫療公司 抗ｈｅｒ２表位之單株抗體及其使用之方法
JP2017528418A (ja) 2014-06-20 2017-09-28 バイオアライアンス コマンディテール フェンノートシャップ 抗葉酸受容体アルファ（ｆｒａ）抗体−薬物コンジュゲート及びその使用方法
EP3160513B1 (en) 2014-06-30 2020-02-12 Glykos Finland Oy Saccharide derivative of a toxic payload and antibody conjugates thereof
ME03665B (me) 2014-07-11 2020-10-20 Genmab As Antitela koja vezuju axl
MX2017001022A (es) 2014-07-24 2017-12-20 Genentech Inc Metodos para conjugar un agente a un resto tiol en una proteina que contiene al menos un enlace trisulfuro.
WO2016014984A1 (en) 2014-07-24 2016-01-28 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
ES2797754T3 (es) 2014-08-28 2020-12-03 Pfizer Enlazadores moduladores de la estabilidad para su uso con conjugados de fármaco y anticuerpo
ES2913865T3 (es) 2014-08-28 2022-06-06 Bioatla Inc Receptores de antígeno quimérico condicionalmente activos para células T modificadas
CN112546238A (zh) 2014-09-01 2021-03-26 博笛生物科技有限公司 用于治疗肿瘤的抗-pd-l1结合物
JP6531166B2 (ja) 2014-09-10 2019-06-12 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピン及びそのコンジュゲート
MX2017002313A (es) 2014-09-11 2017-05-08 Seattle Genetics Inc Suministro dirigido de sustancias farmacologicas que contienen amina terciaria.
TW201625688A (zh) 2014-09-12 2016-07-16 建南德克公司 經半胱胺酸改造之抗體及接合物
CN114106185A (zh) 2014-09-12 2022-03-01 基因泰克公司 抗her2抗体和免疫缀合物
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3191518B1 (en) 2014-09-12 2020-01-15 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
MX2017003022A (es) 2014-09-12 2017-05-12 Genentech Inc Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados.
WO2016044396A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-her2 antibodies and pyrrolobenzodiazepines
EP3194421B1 (en) 2014-09-17 2021-11-03 Zymeworks Inc. Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
WO2016049214A1 (en) 2014-09-23 2016-03-31 Genentech, Inc. METHOD OF USING ANTI-CD79b IMMUNOCONJUGATES
ES2735375T3 (es) 2014-11-05 2019-12-18 Nerviano Medical Sciences Srl Derivados funcionalizados de morfolinil antraciclina
US10077287B2 (en) 2014-11-10 2018-09-18 Bristol-Myers Squibb Company Tubulysin analogs and methods of making and use
ES2848376T3 (es) 2014-11-19 2021-08-09 Axon Neuroscience Se Anticuerpos de tau humanizados en la enfermedad de Alzheimer
US9775914B2 (en) * 2014-11-20 2017-10-03 Pharosgen Co., Ltd. Prodrugs activated by caspase
CN107148285B (zh) 2014-11-25 2022-01-04 Adc治疗股份有限公司 吡咯并苯并二氮杂䓬-抗体缀合物
LT3223845T (lt) 2014-11-26 2021-08-25 Xencor, Inc. Heterodimeriniai antikūnai, kurie suriša cd3 ir cd20
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
WO2016086196A2 (en) 2014-11-26 2016-06-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd38
CA2965540A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Genentech, Inc. Anti-staphylococcus aureus antibody rifamycin conjugates and uses thereof
WO2016090050A1 (en) * 2014-12-03 2016-06-09 Genentech, Inc. Quaternary amine compounds and antibody-drug conjugates thereof
BR112017011478A2 (pt) 2014-12-03 2018-02-27 Genentech, Inc. composto de conjugado anticorpo-antibiótico, conjugado anticorpo-antibiótico, composição farmacêutica, métodos de tratamento de uma infecção bacteriana e para exterminar staph aureus, processo para a preparação do composto, kit e intermediário antibiótico-ligante
EP3229836B1 (en) 2014-12-09 2019-11-13 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Human monoclonal antibodies against axl
EP3237449A2 (en) 2014-12-22 2017-11-01 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
JP6676058B2 (ja) 2015-01-14 2020-04-08 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ ヘテロアリーレン架橋したベンゾジアゼピン二量体、そのコンジュゲート、ならびに製造および使用方法
CN107849090A (zh) 2015-01-28 2018-03-27 索伦托医疗有限公司 抗体药物偶联物
WO2016141387A1 (en) 2015-03-05 2016-09-09 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
AU2016226083A1 (en) 2015-03-05 2017-10-12 Sirenas Llc Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
BR112017019062A2 (pt) 2015-03-09 2018-04-17 Agensys Inc conjugados de anticorpo-fármaco (adc) que se ligam a proteínas flt3
HRP20240075T1 (hr) 2015-03-09 2024-03-29 Heidelberg Pharma Research Gmbh Konjugati amatoksin-protutijela
EP3069734A1 (en) 2015-03-17 2016-09-21 Exiris S.r.l. Cryptophycin-based antibody-drug conjugates with novel self-immolative linkers
BR112017020689A2 (pt) 2015-04-07 2018-06-26 Univ Cornell imunoconjugados em nanopartículas
CA2982205A1 (en) 2015-04-10 2016-10-13 David W. Andrews Methods and compositions for treating cancers and enhancing therapeutic immunity by selectively reducing immunomodulatory m2 monocytes
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506389D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
CA2981543A1 (en) 2015-04-22 2016-10-27 Immunomedics, Inc. Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating trop-2-positive cancer cells
EP3091033A1 (en) 2015-05-06 2016-11-09 Gamamabs Pharma Anti-human-her3 antibodies and uses thereof
CN107614002B (zh) * 2015-05-29 2022-01-04 箭头药业股份有限公司 生物学可切割四肽连接剂
AU2016277121C1 (en) 2015-06-12 2022-07-14 Lentigen Technology, Inc. Method to treat cancer with engineered T-cells
CN108064246A (zh) 2015-06-15 2018-05-22 基因泰克公司 抗体和免疫结合物
US10195175B2 (en) 2015-06-25 2019-02-05 Immunomedics, Inc. Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors
BR112017027690A2 (pt) 2015-06-29 2018-10-09 Daiichi Sankyo Co Ltd “método para produção de uma composição de conjugado anticorpo-fármaco, e, composição de conjugado anticorpo-fármaco
SI3316885T1 (sl) 2015-07-01 2021-09-30 Immunomedics, Inc. Imunokonjugati protitelo-SN-38 z linkerjem CL2A
PL3319993T3 (pl) 2015-07-10 2020-07-27 Genmab A/S Specyficzne wobec AXL koniugaty przeciwciało-lek do leczenia raka
AU2015242213A1 (en) 2015-07-12 2018-03-08 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Bridge linkers for conjugation of cell-binding molecules
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
EP3325497B1 (en) 2015-07-24 2020-09-02 Arizona Board of Regents on behalf of Arizona State University Quinstatin compounds
US10799580B2 (en) 2015-09-09 2020-10-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Expression vector delivery system and use thereof for inducing an immune response
US10800826B2 (en) 2015-10-05 2020-10-13 Merck Sharp & Dohme Corp. Antibody peptide conjugates that have agonist activity at both the glucagon and glucagon-like peptide 1 receptors
EP3359194A4 (en) 2015-10-06 2019-04-24 Merck Sharp & Dohme Corp. ANTIBODY-ACTIVE CONJUGATE FOR ANTI-INFLAMMATORY APPLICATIONS
WO2017062748A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Il-7r-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
WO2017060397A1 (en) 2015-10-09 2017-04-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the survival time of subjects suffering from melanoma metastases
CN108779162B (zh) 2015-10-09 2021-12-07 美天施生物科技有限公司 嵌合抗原受体和使用方法
WO2017067944A1 (en) 2015-10-19 2017-04-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the survival time of subjects suffering from triple negative breast cancer
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
TWI814699B (zh) 2015-12-04 2023-09-11 美商思進公司 四級胺化妥布賴森(tubulysin)化合物之結合物
US10227410B2 (en) 2015-12-07 2019-03-12 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and PSMA
MX2018008144A (es) 2016-01-08 2018-11-09 Bioalliance Cv Anticuerpos tetravalentes anti ligando-1 de glicoproteina p-selectina (psgl-1) y usos de estos.
US20190030180A1 (en) 2016-01-13 2019-01-31 Genmab A/S Formulation for antibody and drug conjugate thereof
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
US10869929B2 (en) 2016-01-29 2020-12-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphonate linkers and their use to facilitate cellular retention of compounds
US10723727B2 (en) 2016-02-01 2020-07-28 Pfizer Inc. Tubulysin analogs and methods for their preparation
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
US20170224837A1 (en) 2016-02-10 2017-08-10 Immunomedics, Inc. Combination of abcg2 inhibitors with sacituzumab govitecan (immu-132) overcomes resistance to sn-38 in trop-2 expressing cancers
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
US11191821B2 (en) 2016-02-27 2021-12-07 The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Peptide vaccine formulations and use thereof for inducing an immune response
TW201740979A (zh) * 2016-02-29 2017-12-01 瑪德瑞高製藥公司 熱休克蛋白（ｈｓｐ）９０抑制劑藥物共軛物
WO2017151947A1 (en) 2016-03-02 2017-09-08 George Robert Pettit 4-azapodophylotoxins compounds
SG10202007520WA (en) 2016-03-02 2020-09-29 Eisai R&D Man Co Ltd Eribulin-based antibody-drug conjugates and methods of use
EP3222292A1 (en) * 2016-03-03 2017-09-27 Heidelberg Pharma GmbH Amanitin conjugates
MA45324A (fr) 2016-03-15 2019-01-23 Seattle Genetics Inc Polythérapie utilisant un adc-liv1 et un agent chimiothérapeutique
JP7137474B2 (ja) 2016-03-15 2022-09-14 メルサナ セラピューティクス，インコーポレイティド ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体－薬物コンジュゲート及びその使用方法
WO2017161206A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Halozyme, Inc. Conjugates containing conditionally active antibodies or antigen-binding fragments thereof, and methods of use
CN107216392A (zh) * 2016-03-17 2017-09-29 华东师范大学 蟾蜍毒素衍生物的抗体药物偶联物及其制备方法和应用
US10851160B2 (en) 2016-03-22 2020-12-01 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Humanized anti-claudin-1 antibodies and uses thereof
EA201892040A1 (ru) 2016-03-25 2019-04-30 Сиэтл Дженетикс, Инк. Способ получения пегилированных соединений лекарственный препарат - линкер и их промежуточных соединений
EP3442574A4 (en) 2016-04-15 2019-12-11 MacroGenics, Inc. NOVEL B7-H3 BINDING MOLECULES, THEIR ANTIBODY-MEDICINAL CONJUGATES AND METHODS OF USE
KR102459684B1 (ko) 2016-04-15 2022-10-26 바이오아트라, 인코퍼레이티드 항 Axl항체 및 이의 면역접합체와 이것들의 용도
CA3021098A1 (en) 2016-04-21 2017-10-26 Abbvie Stemcentrx Llc Novel anti-bmpr1b antibodies and methods of use
US11016085B2 (en) 2016-04-25 2021-05-25 The Johns Hopkins University ZNT8 assays for drug development and pharmaceutical compositions
CA3016917A1 (en) 2016-04-27 2017-11-02 Immunomedics, Inc. Efficacy of anti-trop-2-sn-38 antibody drug conjugates for therapy of tumors relapsed/refractory to checkpoint inhibitors
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
US10918627B2 (en) 2016-05-11 2021-02-16 Massachusetts Institute Of Technology Convergent and enantioselective total synthesis of Communesin analogs
HRP20221298T1 (hr) 2016-05-13 2022-12-23 Bioatla, Inc. Anti-ror2 protutijela, fragmenti protutijela, njihovi imunokonjugati i njihove uporabe
CN109152843A (zh) 2016-05-20 2019-01-04 豪夫迈·罗氏有限公司 Protac抗体缀合物及其使用方法
US10639378B2 (en) 2016-06-06 2020-05-05 Genentech, Inc. Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use
BR112018075630A2 (pt) 2016-06-08 2019-03-19 Abbvie Inc. anticorpos anti-cd98 e conjugados de fármaco de anticorpo
CA3027044A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
CN109562168A (zh) 2016-06-08 2019-04-02 艾伯维公司 抗cd98抗体及抗体药物偶联物
BR112018075649A2 (pt) 2016-06-08 2019-04-09 Abbvie Inc. anticorpos anti-b7-h3 e conjugados de fármaco de anticorpo
JP6751165B2 (ja) 2016-06-08 2020-09-02 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
US10787518B2 (en) 2016-06-14 2020-09-29 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
US20190328901A1 (en) 2016-06-17 2019-10-31 Magenta Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the depletion of cells
KR20190020341A (ko) 2016-06-28 2019-02-28 젠코어 인코포레이티드 소마토스타틴 수용체 2에 결합하는 이종이량체 항체
EP4339192A3 (en) 2016-06-29 2024-06-19 The Regents of the University of California Compounds and compositions for the treatment of cancer
US11479601B2 (en) 2016-06-29 2022-10-25 The Regents Of The University Of California Antibodies specific to Sonic Hedgehog and method of use thereof
WO2018025168A1 (en) 2016-08-03 2018-02-08 Pfizer Inc. Heteroaryl sulfone-based conjugation handles, methods for their preparation, and their use in synthesizing antibody drug conjugates
KR20240010534A (ko) 2016-08-09 2024-01-23 씨젠 인크. 개선된 물리화학적 특성을 갖는 자기 안정화 링커를 구비한 약물 접합체
CN109641911B (zh) 2016-08-19 2023-02-21 百时美施贵宝公司 seco-环丙吡咯并吲哚化合物和其抗体-药物缀合物以及制备和使用方法
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
WO2018045245A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Sirenas Llc Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
WO2018045325A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with duocars
EP3522933B1 (en) 2016-10-05 2021-12-15 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for preparing antibody drug conjugates
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
AU2017342560B2 (en) 2016-10-14 2022-03-17 Xencor, Inc. IL15/IL15Ralpha heterodimeric Fc-fusion proteins
SG11201903013SA (en) 2016-10-18 2019-05-30 Seattle Genetics Inc Targeted delivery of nicotinamide adenine dinucleotide salvage pathway inhibitors
US10398783B2 (en) 2016-10-20 2019-09-03 Bristol-Myers Squibb Company Antiproliferative compounds and conjugates made therefrom
AU2017351764A1 (en) 2016-10-25 2019-06-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Monoclonal antibodies binding to the CD160 transmembrane isoform
EP3535291A1 (en) 2016-11-01 2019-09-11 Genmab B.V. Polypeptide variants and uses thereof
US20210308277A1 (en) 2016-11-14 2021-10-07 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Conjugation linkers, cell binding molecule-drug conjugates containing the linkers, methods of making and uses such conjugates with the linkers
EP3468991A1 (en) 2016-11-21 2019-04-17 cureab GmbH Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates
US11273155B2 (en) 2016-12-12 2022-03-15 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate and immune checkpoint inhibitor
BR112019012937A2 (pt) 2016-12-23 2019-12-10 Heidelberg Pharma Res Gmbh novo conjugado de amanitina
JP6706394B1 (ja) 2017-01-09 2020-06-03 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッドＬｅｎｔｉｇｅｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｉｎｃ． 抗メソセリン免疫療法によりがんを処置するための組成物および方法
IL268102B1 (en) 2017-01-17 2024-08-01 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-GPR 20 antibody and anti-GPR 20 antibody-drug conjugate
WO2018134787A2 (en) 2017-01-20 2018-07-26 Magenta Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the depletion of cd137+ cells
EP3571221A2 (en) 2017-01-20 2019-11-27 Juno Therapeutics GmbH Cell surface conjugates and related cell compositions and methods
CN110300765B (zh) 2017-01-24 2024-08-23 依奈特制药公司 Nkp46结合剂
MX2019008773A (es) 2017-01-24 2019-09-18 Pfizer Derivados de caliqueamicina y conjugados anticuerpo-farmaco de los mismos.
WO2018141959A1 (en) 2017-02-06 2018-08-09 Innate Pharma Immunomodulatory antibody drug conjugates binding to a human mica polypeptide
PT3544636T (pt) 2017-02-08 2021-05-04 Medimmune Ltd Conjugados de anticorpos-pirrolobenzodiazepinas
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US11471538B2 (en) 2017-02-10 2022-10-18 INSERM (Institut National de la Santéet de la Recherche Medicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of cancers associated with activation of the MAPK pathway
CN110475569B (zh) 2017-02-28 2023-11-21 第一三共株式会社 Egfr-tki耐受性的非小细胞肺癌的治疗剂以及抗her3抗体-药物偶联物的应用
TW201834697A (zh) 2017-02-28 2018-10-01 美商梅爾莎納醫療公司 Her2標靶抗體－藥物結合物之組合療法
CN110392697A (zh) 2017-03-02 2019-10-29 国家医疗保健研究所 对nectin-4具有特异性的抗体及其用途
GB201703876D0 (en) 2017-03-10 2017-04-26 Berlin-Chemie Ag Pharmaceutical combinations
WO2018175988A1 (en) 2017-03-24 2018-09-27 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd33 immunotherapy
WO2018175994A1 (en) 2017-03-24 2018-09-27 Seattle Genetics, Inc. Process for the preparation of glucuronide drug-linkers and intermediates thereof
CN110392570A (zh) 2017-03-27 2019-10-29 免疫医疗公司 用沙妥珠单抗格维替康和rad51抑制剂治疗表达trop-2的三阴性乳腺癌
WO2018187074A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Immunomedics, Inc. Subcutaneous administration of antibody-drug conjugates for cancer therapy
EP3606551A1 (en) 2017-04-04 2020-02-12 Avidea Technologies, Inc. Peptide-based vaccines, methods of manufacturing, and uses thereof for inducing an immune response
MX2019012017A (es) 2017-04-07 2020-02-12 Juno Therapeutics Inc Celulas modificadas que expresan antigeno de membrana especifico de prostata (psma) o una forma modificada del mismo y metodos relacionados.
HUE059828T2 (hu) 2017-04-18 2023-01-28 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepin konjugátumok
EP3612567B1 (en) 2017-04-19 2024-09-11 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-vtcn1 antibodies and antibody drug conjugates
CA3057748A1 (en) 2017-04-20 2018-10-25 Adc Therapeutics Sa Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate
BR112019022445A2 (pt) 2017-04-27 2020-05-12 Seattle Genetics, Inc. Composição de conjugado ligante-fármaco, formulação, método para inibir a multiplicação de uma célula tumoral ou célula cancerosa ou causar apoptose em uma célula tumoral ou cancerosa, e, composto de conector de fármaco
KR20240111015A (ko) 2017-04-28 2024-07-16 아지노모토 가부시키가이샤 가용성 단백질에 대한 친화성 물질, 절단성 부분 및 반응성기를 갖는 화합물 또는 이의 염
US11932650B2 (en) 2017-05-11 2024-03-19 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
TWI794230B (zh) 2017-05-15 2023-03-01 日商第一三共股份有限公司 抗ｃｄｈ６抗體及抗ｃｄｈ６抗體-藥物結合物、以及其製造方法
BR112019026564A2 (pt) 2017-06-14 2020-06-30 Adc Therapeutics Sa regimes de dosagem para a administração de um adc anti-cd19
AU2018289349A1 (en) 2017-06-20 2020-01-02 Madrigal Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies comprising targeted therapeutics
JP2020524154A (ja) 2017-06-20 2020-08-13 マドリガル ファーマシューティカルズ インコーポレイテッドＭａｄｒｉｇａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 標的治療薬
EP3641802A1 (en) 2017-06-22 2020-04-29 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of fibrosis with agents capable of inhibiting the activation of mucosal-associated invariant t (mait) cells
JP2020529832A (ja) 2017-06-30 2020-10-15 ゼンコア インコーポレイテッド ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαおよび抗原結合ドメインを含む標的化ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質
CN111316099A (zh) 2017-07-12 2020-06-19 约翰霍普金斯大学 用于1型糖尿病诊断的基于脂蛋白体的znt8自身抗原
CA3071624A1 (en) 2017-07-31 2019-02-07 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19/cd20 immunotherapy
US10494370B2 (en) 2017-08-16 2019-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a pyridine or pyrazine moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10457681B2 (en) 2017-08-16 2019-10-29 Bristol_Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a tricyclic moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10487084B2 (en) 2017-08-16 2019-11-26 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a heterobiaryl moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10508115B2 (en) 2017-08-16 2019-12-17 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having heteroatom-linked aromatic moieties, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10472361B2 (en) 2017-08-16 2019-11-12 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a benzotriazole moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
SI3668874T1 (sl) 2017-08-18 2022-04-29 Medimmune Limited Pirolobenzodiazepinski konjugati
BR112020003646A2 (pt) 2017-08-31 2020-09-01 Daiichi Sankyo Company, Limited cristais, métodos para produção de cristais e de um conjugado anticorpo-fármaco, e, sal.
SG11202001514XA (en) 2017-08-31 2020-03-30 Daiichi Sankyo Co Ltd Novel method for producing antibody-drug conjugate
US10501539B2 (en) 2017-09-15 2019-12-10 Lentigen Technology Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD19 immunotherapy
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
WO2019079249A1 (en) 2017-10-16 2019-04-25 Lentigen Technology, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF CANCER WITH ANTI-CD22 IMMUNOTHERAPY
EP3700540A4 (en) 2017-10-24 2021-11-10 Magenta Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS OF DEPRODUCTION FROM CD117 + CELLS
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
KR20200085828A (ko) 2017-11-08 2020-07-15 젠코어 인코포레이티드 신규의 항-pd-1 서열을 사용한 이중특이적 및 단일특이적 항체
KR20200094185A (ko) 2017-11-30 2020-08-06 시애틀 지네틱스, 인크. 약물 링커 화합물의 제조방법
EP3498293A1 (en) 2017-12-15 2019-06-19 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Treatment of monogenic diseases with an anti-cd45rc antibody
US12006356B2 (en) 2017-12-15 2024-06-11 Juno Therapeutics, Inc. Anti-CCT5 binding molecules and chimeric antigen receptors comprising the same
SG11202005732XA (en) 2017-12-19 2020-07-29 Xencor Inc Engineered il-2 fc fusion proteins
WO2019126464A2 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating hiv/aids with immunotherapy
US20210107988A1 (en) 2018-01-24 2021-04-15 Genmab B.V. Polypeptide variants and uses thereof
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
RS64690B1 (sr) 2018-03-13 2023-11-30 Zymeworks Bc Inc Konjugati biparatopskog anti-her2 antitela i leka i postupci za njihovu upotrebu
WO2019180150A1 (en) 2018-03-22 2019-09-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for modulating innate lymphoid cell activity, antibody drug conjugates and uses in therapy
WO2019183438A1 (en) 2018-03-23 2019-09-26 Seattle Genetics, Inc. Use of antibody drug conjugates comprising tubulin disrupting agents to treat solid tumor
EP3774887A2 (en) 2018-03-28 2021-02-17 Axon Neuroscience SE Antibody-based methods of detecting and treating alzheimer's disease
CA3096052A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
EP3552631A1 (en) 2018-04-10 2019-10-16 Inatherys Antibody-drug conjugates and their uses for the treatment of cancer
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2019197654A1 (en) 2018-04-13 2019-10-17 Heidelberg Pharma Research Gmbh Targeted amatoxin conjugate for the treatment of solid tumors
US11524991B2 (en) 2018-04-18 2022-12-13 Xencor, Inc. PD-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing IL-15/IL-15Ra Fc-fusion proteins and PD-1 antigen binding domains and uses thereof
CN112437777A (zh) 2018-04-18 2021-03-02 Xencor股份有限公司 包含IL-15/IL-15RA Fc融合蛋白和TIM-3抗原结合结构域的靶向TIM-3的异源二聚体融合蛋白
WO2019209811A1 (en) 2018-04-24 2019-10-31 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic toll-like receptor 7 (tlr7) agonists
TW202010755A (zh) 2018-05-07 2020-03-16 丹麥商珍美寶股份有限公司 使用抗ｐｄ－１抗體與抗組織因子抗體－藥物共軛體之組合以治療癌症之方法
CN112368020B (zh) 2018-05-07 2024-05-31 展马博联合股份有限公司 抗pd-1抗体和抗组织因子抗体-药物偶联物组合治疗癌症的方法
SI3794042T1 (sl) 2018-05-18 2024-07-31 Daiichi Sankyo Co., Ltd. Konjugat protitelesa anti-MUC1-exatecan in citotoksično sredstvo
CA3104729A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Avidea Technologies, Inc. Improved methods of manufacturing peptide-based vaccines
EA202092747A1 (ru) 2018-05-29 2021-03-16 Бристол-Маерс Сквибб Компани Модифицированные саморазрушающиеся фрагменты для применения в пролекарствах и конъюгатах и способы применения и изготовления
EP3801632A1 (en) 2018-06-01 2021-04-14 Eisai R&D Management Co., Ltd. Splicing modulator antibody-drug conjugates and methods of use
GB201809746D0 (en) 2018-06-14 2018-08-01 Berlin Chemie Ag Pharmaceutical combinations
KR20210020901A (ko) 2018-06-14 2021-02-24 아지노모토 가부시키가이샤 항체에 대한 친화성 물질, 절단성 부분 및 반응성기를 갖는 화합물 또는 이의 염
KR20210020015A (ko) 2018-06-14 2021-02-23 아지노모토 가부시키가이샤 항체에 대한 친화성 물질 및 생체 직교성 관능기를 갖는 화합물 또는 이의 염
BR112020026724A2 (pt) 2018-07-02 2021-03-30 Amgen Inc. Proteína de ligação ao antígeno anti-steap1
CN112739340A (zh) 2018-07-23 2021-04-30 美真达治疗公司 抗cd5抗体药物缀合物(adc)在同种异体细胞疗法中的用途
WO2020028864A1 (en) 2018-08-02 2020-02-06 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11911484B2 (en) 2018-08-02 2024-02-27 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
SG11202100934PA (en) 2018-08-02 2021-02-25 Dyne Therapeutics Inc Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US11168141B2 (en) 2018-08-02 2021-11-09 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US12018087B2 (en) 2018-08-02 2024-06-25 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle-targeting complexes comprising an anti-transferrin receptor antibody linked to an oligonucleotide and methods of delivering oligonucleotide to a subject
US11554120B2 (en) 2018-08-03 2023-01-17 Bristol-Myers Squibb Company 1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine compounds as toll-like receptor 7 (TLR7) agonists and methods and uses therefor
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
WO2020058372A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of cancers resistant to immune checkpoint therapy
US20220072144A1 (en) 2018-09-20 2022-03-10 Daiichi Sankyo Company, Limited Treatment of her3-mutated cancer by administration of anti-her3 antibody-drug conjugate
CN118291501A (zh) 2018-09-20 2024-07-05 莱蒂恩技术公司 用于用抗cd123免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
EP3626265A1 (en) 2018-09-21 2020-03-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-human cd45rc antibodies and uses thereof
US10822412B2 (en) 2018-09-26 2020-11-03 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD19/CD22 immunotherapy
SG11202103192RA (en) 2018-10-03 2021-04-29 Xencor Inc Il-12 heterodimeric fc-fusion proteins
WO2020072681A1 (en) 2018-10-03 2020-04-09 Avidea Technologies, Inc. Aromatic ring substituted amphiphilic polymers as drug delivery systems
AU2019365238A1 (en) 2018-10-24 2021-05-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugated chemical inducers of degradation and methods of use
TWI844571B (zh) 2018-10-30 2024-06-11 丹麥商珍美寶股份有限公司 使用抗血管內皮生長因子（ｖｅｇｆ）抗體與抗組織因子（ｔｆ）抗體－藥物共軛體之組合以治療癌症之方法
EP3882261A4 (en) 2018-10-31 2023-02-08 Ajinomoto Co., Inc. COMPOUND COMPRISING A SUBSTANCE HAVING AN AFFINITY FOR AN ANTIBODY, CLEAVAGE SITE AND CORRESPONDING REACTIVE GROUP OR SALT
EP3877413A1 (en) 2018-11-06 2021-09-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of acute myeloid leukemia by eradicating leukemic stem cells
US11103533B2 (en) 2018-11-30 2021-08-31 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD38 immunotherapy
BR112021010908A2 (pt) 2018-12-06 2021-08-31 Genentech, Inc. Método para tratamento de linfoma difuso de grandes células b, kit e imunoconjugado
JP2022512401A (ja) 2018-12-13 2022-02-03 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 ハーボキシジエンスプライシング調節薬抗体－薬物コンジュゲート及びその使用方法
US20220064260A1 (en) 2018-12-14 2022-03-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Isolated mhc-derived human peptides and uses thereof for stimulating and activating the suppressive function of cd8+cd45rclow tregs
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
AU2020219732A1 (en) 2019-02-05 2021-08-05 Seagen Inc. Anti-CD228 antibodies and antibody-drug conjugates
CN114173875A (zh) 2019-03-01 2022-03-11 Xencor股份有限公司 结合enpp3和cd3的异二聚抗体
CN113924103A (zh) 2019-03-06 2022-01-11 莱蒂恩技术公司 用于用自驱动的嵌合抗原受体来治疗癌症的组合物和方法
MX2021011320A (es) 2019-03-19 2021-12-10 Fundacio Privada Inst Dinvestigacio Oncològica De Vall Hebron Terapia de combinacion con omomyc y un anticuerpo que se une a pd-1 o a ctla-4 para el tratamiento del cancer.
CA3134055A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 The Regents Of The University Of California Claudin-6 antibodies and drug conjugates
EP3941944A4 (en) 2019-03-20 2022-11-30 The Regents of the University of California B-SPECIFIC CLAUDIN-6 ANTIBODIES
KR20220025705A (ko) 2019-04-17 2022-03-03 아비디아 테크놀로지스, 인크. 리간드 디스플레이 및/또는 약물 전달을 위한 성상 중합체의 조성물 및 제조 방법
EP3958908A1 (en) 2019-04-24 2022-03-02 Heidelberg Pharma Research GmbH Amatoxin antibody-drug conjugates and uses thereof
MX2021013825A (es) 2019-05-14 2022-01-18 Genentech Inc Procedimientos de uso de inmunoconjugados anti-cd79b para tratar el linfoma folicular.
AU2020283027A1 (en) 2019-05-30 2021-12-23 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-BCMA immunotherapy
WO2020247054A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
GB201908128D0 (en) 2019-06-07 2019-07-24 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CN110339181A (zh) * 2019-07-02 2019-10-18 中国药科大学 一种基于点击反应的pH响应型纳米制剂及其制法和应用
AU2020299382A1 (en) 2019-07-02 2022-01-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind EGFRvIII and their use
TW202120551A (zh) 2019-08-12 2021-06-01 美商普瑞諾生物科技公司 藉由adcc靶向cd39表現細胞促進及增強t細胞介導免疫反應之方法及組合物
WO2021064184A1 (en) 2019-10-04 2021-04-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of ovarian cancer, breast cancer or pancreatic cancer
AU2020358859A1 (en) 2019-10-04 2022-05-12 Seagen Inc. Anti-PD-L1 antibodies and antibody-drug conjugates
CA3153880A1 (en) 2019-10-18 2020-06-09 Juana Elva HERNANDEZ MONTALVO Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
EP3812008A1 (en) 2019-10-23 2021-04-28 Gamamabs Pharma Amh-competitive antagonist antibody
TW202131954A (zh) 2019-11-07 2021-09-01 丹麥商珍美寶股份有限公司 利用鉑類劑與抗組織因子抗體－藥物共軛體之組合來治療癌症之方法
AU2020380732A1 (en) 2019-11-07 2022-06-02 Genmab A/S Methods of treating cancer with a combination of an anti-pd-1 antibody and an anti-tissue factor antibody-drug conjugate
US12076400B2 (en) 2019-12-06 2024-09-03 Zymeworks Bc Inc. Methods of using a bispecific antigen-binding construct targeting HER2 in combination with CDK4/6 inhibitors for the treatment of breast cancer
US20230040928A1 (en) 2019-12-09 2023-02-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies having specificity to her4 and uses thereof
TW202138388A (zh) 2019-12-30 2021-10-16 美商西根公司 以非海藻糖苷化抗－ｃｄ７０抗體治療癌症之方法
JP2023509760A (ja) 2020-01-08 2023-03-09 シンシス セラピューティクス，インコーポレイテッド Ａｌｋ５阻害剤複合体およびその使用
US20230099149A1 (en) 2020-01-31 2023-03-30 Innate Pharma Treatment of cancer
WO2021217051A1 (en) 2020-04-24 2021-10-28 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates
CN115551553A (zh) 2020-05-12 2022-12-30 Inserm(法国国家健康医学研究院) 治疗皮肤t细胞淋巴瘤和tfh起源淋巴瘤的新方法
EP3909612A1 (en) 2020-05-12 2021-11-17 Life Science Inkubator Betriebs GmbH & Co. KG Composition of nanoparticles
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
WO2021234110A1 (en) 2020-05-20 2021-11-25 Institut Curie Single domain antibodies and their use in cancer therapies
AR122546A1 (es) 2020-06-05 2022-09-21 Eisai R&D Man Co Ltd Conjugados de anticuerpo anti bcma-fármaco y métodos de uso
JPWO2021251358A1 (hu) 2020-06-09 2021-12-16
AU2021296423A1 (en) 2020-06-22 2023-02-02 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with TSLPR-CD19 or TSLPR-CD22 immunotherapy
WO2022002940A1 (en) 2020-06-29 2022-01-06 Genmab A/S Anti-tissue factor antibody-drug conjugates and their use in the treatment of cancer
AU2021307257A1 (en) 2020-07-17 2023-03-09 Daiichi Sankyo Company, Limited Method for producing antibody-drug conjugate
AR123019A1 (es) 2020-07-21 2022-10-26 Genentech Inc Inductores químicos de degradación conjugados con anticuerpo de brm y métodos de estos
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
EP4189071A1 (en) 2020-08-03 2023-06-07 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Population of treg cells functionally committed to exert a regulatory activity and their use for adoptive therapy
KR20230042518A (ko) 2020-08-04 2023-03-28 씨젠 인크. 항-cd228 항체 및 항체-약물 컨쥬게이트
WO2022043256A1 (en) 2020-08-23 2022-03-03 Cobiores Nv Synergistic combinations of anticancer drugs linked to a tetrapeptidic moiety and immunotherapeutic agents
CN112062855B (zh) 2020-08-26 2024-08-30 北京天诺健成医药科技有限公司 一种含有衔接器的药物治疗剂的开发和应用
IL300930A (en) 2020-08-27 2023-04-01 Enosi Therapeutics Corp Methods and compositions for the treatment of autoimmune diseases and cancer
EP3970752A1 (en) 2020-09-17 2022-03-23 Merck Patent GmbH Molecules with solubility tag and related methods
CA3193244A1 (en) 2020-09-22 2022-03-31 Geoffrey Martin Lynn Compositions and methods of manufacturing amphiphilic block copolymers that form nanoparticles in situ
WO2022079270A1 (en) 2020-10-16 2022-04-21 Université D'aix-Marseille Anti-gpc4 single domain antibodies
US20230390406A1 (en) 2020-10-19 2023-12-07 Vaccitech North America, Inc. Star Polymer Drug Conjugates
DK4103236T3 (en) 2020-10-27 2023-11-13 Elucida Oncology Inc Folate receptor targeted nanoparticle drug conjugates and uses thereof
WO2022099026A1 (en) 2020-11-05 2022-05-12 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19/cd22 immunotherapy
CN114524878B (zh) 2020-11-23 2024-08-02 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种双特异性抗体及其用途
AU2021387795A1 (en) 2020-11-25 2023-06-01 Innate Pharma Treatment of cancer
CN114573703A (zh) 2020-12-02 2022-06-03 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种t细胞衔接器治疗剂的开发和应用
CN114573702A (zh) 2020-12-02 2022-06-03 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种新型肿瘤衔接器治疗药物的开发和应用
EP4015004A1 (en) 2020-12-18 2022-06-22 Phi Pharma SA Proteoglycan specific branched peptides
CN116635054A (zh) 2020-12-22 2023-08-22 科比欧尔斯公司 包括四肽部分的化合物
CN114685657B (zh) 2020-12-31 2024-08-16 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种功能增强型抗体阻断剂的开发及其应用
CN117916271A (zh) 2021-01-14 2024-04-19 居里研究所 Her2单域抗体变体及其car
KR20230133294A (ko) 2021-01-18 2023-09-19 아지노모토 가부시키가이샤 화합물 또는 그 염, 및 그것들에 의해 얻어지는 항체
JPWO2022154127A1 (hu) 2021-01-18 2022-07-21
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
WO2022167664A1 (en) 2021-02-07 2022-08-11 Cobiores Nv Compounds comprising a tetrapeptidic moiety
KR20230147135A (ko) 2021-02-16 2023-10-20 백시테크 노쓰 아메리카, 인크. 친양쪽성 펩티드에 기초한 자기-어셈블리 나노입자
WO2022182415A1 (en) 2021-02-24 2022-09-01 Massachusetts Institute Of Technology Himastatin derivatives, and processes of preparation thereof, and uses thereof
AU2022232375A1 (en) 2021-03-09 2023-09-21 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
EP4305065A1 (en) 2021-03-10 2024-01-17 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and gpc3
KR20230154853A (ko) 2021-03-11 2023-11-09 아지노모토 가부시키가이샤 화합물 또는 이의 염, 및 이들에 의해 얻어지는 항체
WO2022196675A1 (ja) 2021-03-16 2022-09-22 味の素株式会社 複合体またはその塩、およびその製造方法
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
EP4313317A1 (en) 2021-03-23 2024-02-07 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the diagnosis and treatment of t cell-lymphomas
JP2024515934A (ja) 2021-03-30 2024-04-11 レゴケム バイオサイエンシズ， インク． ヒトｃｌｄｎ１８．２に対する抗体を含む抗体－薬物コンジュゲートおよびその使用
WO2022214681A1 (en) 2021-04-09 2022-10-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of anaplastic large cell lymphoma
TW202304524A (zh) 2021-04-10 2023-02-01 美商普方生物製藥美國公司 Folr1結合劑、其結合物及使用方法
EP4079327A1 (en) * 2021-04-22 2022-10-26 Centaurus Polytherapeutics Payloads for drug-conjugates and their use for treating cancer
TW202308699A (zh) 2021-04-23 2023-03-01 美商普方生物製藥美國公司 Ｃｄ７０結合劑、其結合物及其使用方法
MX2023013264A (es) 2021-05-12 2023-11-30 Genentech Inc Metodos para usar inmunoconjugados anti-cd79b para tratar linfoma difuso de linfocitos b grandes.
AU2022282609A1 (en) 2021-05-26 2023-11-30 Oxford Biotherapeutics Ltd Pharmaceutical combination comprising an anti-cd205 antibody and an immune checkpoint inhibitor
TW202320857A (zh) 2021-07-06 2023-06-01 美商普方生物製藥美國公司 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法
US11771776B2 (en) 2021-07-09 2023-10-03 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US11969475B2 (en) 2021-07-09 2024-04-30 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11638761B2 (en) 2021-07-09 2023-05-02 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11633498B2 (en) 2021-07-09 2023-04-25 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
US11672872B2 (en) 2021-07-09 2023-06-13 Dyne Therapeutics, Inc. Anti-transferrin receptor antibody and uses thereof
KR20240046524A (ko) 2021-08-07 2024-04-09 제넨테크, 인크. 미만성 거대 b-세포 림프종을 치료하기 위해 항-cd79b 면역접합체를 사용하는 방법
WO2023033129A1 (ja) 2021-09-03 2023-03-09 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
CA3231944A1 (en) 2021-09-16 2023-03-23 Carole GUILLONNEAU Anti-human cd45rc binding domains and uses thereof
KR20240073035A (ko) 2021-09-30 2024-05-24 아지노모토 가부시키가이샤 항체 및 기능성 물질의 컨쥬게이트 또는 그 염, 및 그 제조에 사용되는 항체 유도체 및 화합물 또는 그 염
WO2023056069A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Angiex, Inc. Degrader-antibody conjugates and methods of using same
KR20240095532A (ko) 2021-10-01 2024-06-25 유니켐 레버러토리스 리미티드 렉틴-약물 접합체
EP4433170A1 (en) 2021-11-18 2024-09-25 Oxford BioTherapeutics Ltd Pharmaceutical combinations
EP4433096A1 (en) 2021-11-19 2024-09-25 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2023110937A1 (en) 2021-12-14 2023-06-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Depletion of nk cells for the treatment of adverse post-ischemic cardiac remodeling
AR128023A1 (es) 2021-12-17 2024-03-20 3B Pharmaceuticals Gmbh Ligandos de anhidrasa carbónica ix
AR128331A1 (es) 2022-01-26 2024-04-17 Genentech Inc Inductores químicos de degradación conjugados con anticuerpos y métodos de estos
WO2023144303A1 (en) 2022-01-31 2023-08-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Cd38 as a biomarker and biotarget in t-cell lymphomas
US11590169B1 (en) 2022-03-02 2023-02-28 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD123 immunotherapy
US20230338424A1 (en) 2022-03-02 2023-10-26 Lentigen Technology, Inc. Compositions and Methods for Treating Cancer with Anti-CD123 Immunotherapy
WO2023194539A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Heidelberg Pharma Research Gmbh Methods of improving the therapeutic index of amatoxin-antibody conjugates
WO2023198648A1 (en) 2022-04-11 2023-10-19 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of t-cell malignancies
WO2023198874A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of t cell-lymphomas
US11931421B2 (en) 2022-04-15 2024-03-19 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and formulations for treating myotonic dystrophy
WO2023215737A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Genentech, Inc. Anti-ly6e antibodies, immunoconjugates, and uses thereof
WO2023213960A1 (en) 2022-05-06 2023-11-09 Genmab A/S Methods of treating cancer with anti-tissue factor antibody-drug conjugates
WO2023227660A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Innate Pharma Nectin-4 binding agents
WO2024003310A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the diagnosis and treatment of acute lymphoblastic leukemia
WO2024018046A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Garp as a biomarker and biotarget in t-cell malignancies
WO2024026107A2 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Lentigen Technology, Inc. Chimeric antigen receptor therapies for treating solid tumors
WO2024023283A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Lrrc33 as a biomarker and biotarget in cutaneous t-cell lymphomas
US20240075142A1 (en) 2022-08-26 2024-03-07 Lentigen Technology, Inc. Compositions and Methods for Treating Cancer with Fully Human Anti-CD20/CD19 Immunotherapy
WO2024052503A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to ltbp2 and uses thereof
WO2024079192A1 (en) 2022-10-12 2024-04-18 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Cd81 as a biomarker and biotarget in t-cell malignancies
WO2024092030A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Vaccitech North America, Inc. Self-assembling nanoparticles
WO2024092028A2 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Vaccitech North America, Inc. Combination treatment regimes for treating cancer
WO2024089013A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Peptomyc, S.L. Combination therapy for the treatment of cancer
WO2024097816A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 Seagen Inc. Anti-avb6 antibodies and antibody-drug conjugates and their use in the treatment of cancer
WO2024108178A1 (en) 2022-11-18 2024-05-23 Genentech, Inc. Signal amplification and multiplexing using mass tags for ia-lc-ms/ms based assays
EP4382120A1 (en) 2022-12-05 2024-06-12 Institut Regional du Cancer de Montpellier Anti-slc1a4 monoclonal antibodies and uses thereof
WO2024121632A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Crispr Therapeutics Ag Use of anti-cd117 antibody drug conjugate (adc)
WO2024127332A1 (en) 2022-12-14 2024-06-20 Pheon Therapeutics Ltd Cytotoxic compounds
WO2024165484A1 (en) 2023-02-06 2024-08-15 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Enrichment of genetically modified hematopoietic stem cells through multiplex base editing
WO2024165045A1 (en) 2023-02-09 2024-08-15 Beigene, Ltd. Self-stabilizing linker conjugates
WO2024170543A1 (en) 2023-02-14 2024-08-22 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Anti-cd44 antibodies and uses thereof
WO2024182569A2 (en) 2023-02-28 2024-09-06 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-psma antibodies, conjugates, and methods of use

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1981001145A1 (en) 1979-10-18 1981-04-30 Univ Illinois Hydrolytic enzyme-activatible pro-drugs
US4867973A (en) 1984-08-31 1989-09-19 Cytogen Corporation Antibody-therapeutic agent conjugates
US4671958A (en) * 1982-03-09 1987-06-09 Cytogen Corporation Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites
JPS59116232A (ja) * 1982-12-24 1984-07-05 Teijin Ltd 細胞毒性複合体及びその製造法
US5057313A (en) 1986-02-25 1991-10-15 The Center For Molecular Medicine And Immunology Diagnostic and therapeutic antibody conjugates
IN165717B (hu) 1986-08-07 1989-12-23 Battelle Memorial Institute
EP0329184A3 (en) * 1988-02-19 1990-05-23 Neorx Corporation Antimers and antimeric conjugation
US5057301A (en) 1988-04-06 1991-10-15 Neorx Corporation Modified cellular substrates used as linkers for increased cell retention of diagnostic and therapeutic agents
US5144012A (en) 1988-08-08 1992-09-01 Eli Lilly And Company Cytotoxic drug conjugates
US5094849A (en) 1988-08-08 1992-03-10 Eli Lilly And Company Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized vinca analogs via simple organic linkers
US5169933A (en) 1988-08-15 1992-12-08 Neorx Corporation Covalently-linked complexes and methods for enhanced cytotoxicity and imaging
WO1990003188A1 (en) 1988-09-30 1990-04-05 Neorx Corporation Cleavable linkers for the reduction of non-target organ retention of immunoconjugates
EP0434765B1 (en) 1988-09-30 1995-11-08 Neorx Corporation Targeting substance-diagnostic/therapeutic agent conjugates having schiff base linkages
US5045451A (en) * 1988-10-26 1991-09-03 Board Of Regents Methods for screening antibodies for use as immunotoxins
US5013547A (en) * 1989-02-07 1991-05-07 Erbamont, Inc. Anticancer drug - antibody conjugates and method for preparing same
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5198560A (en) 1990-04-27 1993-03-30 Bristol-Myers Squibb Company Cytotoxic bicyclo[7.3.1]tridec-4-ene-2,6-diyne compounds and process for the preparation thereof
US5155210A (en) 1990-09-11 1992-10-13 Brunswick Corporation Methods of conjugating actinomycin d
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates

Also Published As

Publication number Publication date
NO315162B1 (no) 2003-07-21
CA2123363A1 (en) 1994-11-15
DE69429689T2 (de) 2002-10-17
DE69429689D1 (de) 2002-03-14
MX9403570A (es) 1995-01-31
ES2170755T3 (es) 2002-08-16
CN1100426A (zh) 1995-03-22
HUT66485A (en) 1994-11-28
EP0624377A2 (en) 1994-11-17
US6214345B1 (en) 2001-04-10
FI942237A (fi) 1994-11-15
CZ118794A3 (en) 1994-11-16
PT624377E (pt) 2002-07-31
FI942237A0 (fi) 1994-05-13
CA2123363C (en) 2005-04-12
CN1117760C (zh) 2003-08-13
FI116038B (fi) 2005-09-15
RU94016384A (ru) 1996-11-10
NO941819L (no) 1994-11-15
EP0624377A3 (en) 1995-11-15
AU6302694A (en) 1994-11-17
JPH0770175A (ja) 1995-03-14
NZ260512A (en) 1996-09-25
AU687795B2 (en) 1998-03-05
ATE212236T1 (de) 2002-02-15
DK0624377T3 (da) 2002-05-06
HU9401507D0 (en) 1994-09-28
JP3645283B2 (ja) 2005-05-11
NO941819D0 (no) 1994-05-13
EP0624377B1 (en) 2002-01-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU224351B1 (hu) Lizoszómás enzim hatására hasadó, daganatgátló hatóanyag-konjugátumok, ilyen konjugátumokat tartalmazó gyógyászati készítmények és eljárás ezek előállítására
US6759509B1 (en) Branched peptide linkers
US9249186B2 (en) Cytotoxic peptides and antibody drug conjugates thereof
WO1998019705A1 (en) Branched peptide linkers
AU2022204711B2 (en) Peptidic linkers and cryptophycin conjugates, useful in therapy, and their preparation
JP7256751B2 (ja) β－ガラクトシドが導入された自己犠牲リンカーを含む化合物
PL172824B1 (pl) Nowe koniugaty tioeterowe PL PL PL PL PL
JPH02191300A (ja) 抗体―薬物抱合体
WO2022246576A1 (en) Camptothecin analogues, conjugates and methods of use
EP3856258B1 (en) Sulfomaleimide-based linkers and corresponding conjugates
EA045708B1 (ru) Новые пептидные линкеры и конъюгаты на основе криптофицина, их получение и их терапевтическое применение

Legal Events

Date Code Title Description
DFD9 Temporary protection cancelled due to non-payment of fee
DNF4 Restoration of lapsed final protection
HFG4 Patent granted, date of granting

Effective date: 20050705