JP2023509760A - Ａｌｋ５阻害剤複合体およびその使用 - Google Patents

Ａｌｋ５阻害剤複合体およびその使用 Download PDF

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Abstract

本開示は、線維症およびがんに関与する細胞、例えば、筋線維芽細胞、活性化した線維芽細胞、および移行する線維芽細胞にＡＬＫ５阻害剤を指向させる、ＡＬＫ５阻害剤および標的化部分を含む、標的化薬物複合体、ならびにその使用に関し、特にＡＬＫ５阻害剤は、Ｎ－メチル－２－（４－（４－（３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エタン－１－アミンである。

Description

１．関連出願への相互参照
本出願は、２０２０年１月８日に出願された米国仮出願第６２／９５８，４６１号の優先権の利益を主張し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
２．背景
２．１．線維症
特発性肺線維症（ＩＰＦ）は、肺組織の進行性の硬化および瘢痕化を特徴とする肺における破壊的な慢性疾患である（Lederer et al., 2018, NEJM, 378:1811-23、Barratt et al., 2018, J Clin Med 7(8):201）。およそ１３０，０００名の患者が米国において毎年診断されており、５年での死亡率は８０％である。これまでに、その進行を緩慢にする選択肢のみで、この疾患に対する治療法は存在しない（Somogyi et al., 2019, Eur Respir Rev, 28(153):190021）。ＩＰＦは、外因性の刺激物（例えば喫煙）と、続く持続する線維芽細胞活性化により繰り返す肺胞上皮の損傷に始まり、これが線維症の駆動体の１つである。線維症は、本質的に、一定の肺の傷害により治癒することができない創傷である。
肺線維芽細胞の筋線維芽細胞への分化は、組織線維症の発症における一次ステップである（Yazdani et al., 2017, Adv Drug Deliv Rev 121:101-116、Huang et al., 2014, Austin J Pulm Resp, 1(1):3-9）。筋線維芽細胞は、線維形成に関与し、線維性の領域において主に見出され、活性である。ＩＰＦにおいて筋線維芽細胞の３つの可能性のある原因が存在する：１）上皮－間葉移行（ＥＭＴ）として知られるプロセスにおいて筋線維芽細胞に変換される常在性肺上皮細胞、２）筋線維芽細胞（ＦＭＴ）に変換される常在性肺線維芽細胞、ならびに／または、３）肺内に動員されて線維症および瘢痕化を引き起こす筋線維芽細胞（Pardali et al., 2017, Int J Mol Sci, 18(10)）。これらの３つの経路の組合せは、肺－常在性筋線維芽細胞の増加をもたらし、線維性の疾患を引き起こす。筋線維芽細胞を阻害することは、線維性肺疾患を逆転させる際の主要なステップである。
多面発現性サイトカインのトランスフォーミング増殖因子－ベータ（ＴＧＦ－β）は、体内の組織の大部分の発生、維持、およびホメオスタシスに関与している。ＴＧＦ－βは、ＴＧＦ－β受容体ＩＩおよびＴＧＦ－β受容体Ｉ／ＡＬＫ５に結合することを介して、シグナル伝達を開始する。ＡＬＫ５は、セリントレオニンキナーゼ受容体であり、これは、下流のシグナル伝達メディエーター、Ｓｍａｄ２およびＳｍａｄ３をリン酸化する。活性化したＳｍａｄ２／３は、Ｓｍａｄ４と錯体を形成し、核内に移動して、遺伝子発現を調節するが、これは、細胞状況により決定される（Derynck et al., 2003, Nature, 425(6958):577-84）。肺において、ＴＧＦ－βは、肺胞マクロファージ、好中球、活性化した肺胞上皮細胞、内皮細胞、線維芽細胞、および筋線維芽細胞を含む、多種多様な細胞種により産生される（Caja et al., 2018, Int J Mol Sci, 19(5)）。ＴＧＦ－βは、アルファ－平滑筋アクチン（αＳＭＡ）、コラーゲン、およびフィブロネクチンを含む、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）産生の最も強力な誘発物質の１つである（Pohlers et al., 2009, Biochim Biophys Acta, 1792(8):746-56、Kim et al., 2018, Cold Spring Harb Perspect Biol, 10(4)）。ＩＰＦの疾患進行の間、ＴＧＦ－βは、コラーゲン発現およびＥＣＭ沈着、筋線維芽細胞の膨張、線維芽細胞の筋線維芽細胞への移行、ならびに上皮－間葉形質転換（ＥＭＴ）を増大させる（Pardali et al., 2017, Int J Mol Sci, 18(10)、Yue et al., 2010, Curr Enzym Inhib, 6(2)）。さらに、ＴＧＦ－βの発現は、肺線維症の動物モデルおよび線維性ヒト肺の両方において増加している（Tashiro et al., 2017, Front Med (Lausanne), 4:118）。肺線維症の動物モデルにおいて、ＴＧＦ－βレベルの上昇は、コラーゲンの合成および沈着に先行する。ｉｎ ｖｉｖｏでの肺線維症の駆動体としてのＴＧＦ－βの役割のさらなる証明として、肺においてアデノウィルスを発現したＴＧＦ－β１またはＴＧＦ－β１のトランスジェニック肺特異的発現の動物モデルは、肺線維症を引き起こすのに十分であった（Lee et al., Korean J Intern Med, 29: 281）。ブレオマイシン誘発性ＩＰＦの古典的なマウスモデルにおいて、ＴＧＦ－βレベルは、肺において上昇し、Ｓｍａｄ３ノックアウトマウスまたは特異的に線維芽細胞におけるＴＧＦ－βＲＩＩの優性ネガティブ発現のいずれかによるＴＧＦ－βシグナル伝達の遮断により、疾患の重症度は低減した（Fernandez et al., 2012, Proc Am Thorac Soc, 9(3):111-116、Degryse et al., 2011, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 300(6):887-897、Li et al., 2011, J Clin Invest, 121(1):277-87）。治療的に、小分子ＴＧＦ－β受容体阻害剤または抗ＴＧＦ－β抗体での処置はまた、ブレオマイシンにおける疾患および放射線誘発性線維症を阻害した（Giri et al., 1993, Thorax, 48:959-66、Flechsig et al., 2012, Clin Cancer Res, 18(13):3616-27）。
ＩＰＦを引き起こすことに対してのＴＧＦ－βの重要な役割により、ＴＧＦ－β経路を標的化する療法は、ＩＰＦの処置に対して研究されている。しかし、体内のＴＧＦ－βおよびその受容体の広範な発現により、宿主組織の毒性の危険性は、安全で効果的な療法の開発を困難にする（Anderton et al., 2011, Toxicologic Path, 39:916-24、Stauber et al., 2014, Clinical Tox, 4(3):1-10、Lonning et al, 2011, Curr Pharma Biotech, 12:2176-89）。例えば、ＴＧＦ－β活性化を全身で遮断する、αｖβ６インテグリン抗体（ＢＧ０００１１）の第２相試験は、最近、安全性の問題により終了した（Arefayene, et al., 2018, European Respiratory Journal, 52 (suppl 62) PA596）。大部分の薬物と同様に、毒性および治療ウインドウは均衡を保つ必要があり、ＴＧＦ－β阻害剤の作用範囲が広いので、安全性および毒性の危険性は最優先事項である。線維症を安全に逆転する選択的で強力なＴＧＦ－β阻害剤は、疾患進行を停止する可能性があるが、患者の生存率も改善し得る。
２０１４年、２つのＩＰＦ薬、抗線維性分子であるピルフェニドン、ならびにチロシンキナーゼ阻害剤であるニンテダニブが承認され、その両方ともに、他の経路と共にＴＧＦ－βシグナル伝達を部分的に遮断し得る（Gan et al., 2011, Ther Clin Risk Manag, 7:39-47、Margaritopoulos et al., 2016, Core Evid, 11:11-22、Lunardi et al., 2018, Arch Pathol Lab Med, 142:1090-1097）。一般的に、ピルフェニドンおよびニンテダニブの処置により、軽度～中程度の疾患の患者の５０％でＩＰＦの疾患進行の危険性が低減した（Ren et al., 2017, Saudi Med J, 38(9):889-894、Case et al., 2017, BMJ Open Resp Res, 4:e000192）。しかし、５０％未満へと肺機能（患者が吐き出すことができる空気の総量である、努力肺活量ＦＶＣにより測定）が著しく低下したＩＰＦ患者、共存症の高齢患者、またはその疾患がＩＰＦと公的に診断されていない患者は、これらの試験から除外した。両方の薬物が疾患を緩慢にすることができる一方、疾患進行を完全に停止させるか、または逆転することはできなかった。ＩＰＦでの試験は、線維症患者で依然として残る著しく対処されていない必要性により熱心に注目されている。
ＩＦＮ－γ阻害剤、血管形成阻害剤、およびＴＮＦ－αブロッカーのような他の療法は、ＩＰＦを処置するのに成功しないことが判明した（Yazdani et al., 2017, Adv Drug Deliv Rev, 121:101-116、Somogyi et al., 2019, Eur Respir Rev, 28(153):190021）。ＩＰＦの進行中の試験は、血漿アミロイドタンパク質Ｐ（ペントラキシン、ＰＴＸ－２）を含み、これは、単球に結合し、前線維性線維細胞へのその分化を阻害する循環するタンパク質であり、線維症の上皮治癒および消散を促進する。ペントラキシンのレベルは、ＩＰＦ患者では低く、進行中の第２相試験は、６分間の歩行試験で肺機能の改善を実証する。第２相試験において、パムレブルマブは、線維症を軽減する結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）に対する完全組換えヒトモノクローナル抗体であるが、ＩＰＦ患者の肺機能（ＦＶＣ）における低下を軽減した（Somogyi et al., 2019, Eur Respir Rev, 28(153):190021）。対照的に、トラロキヌマブは、ＴＧＦ－βおよびＣＣｌ２の発現を低下させるＩＬ－１３抗体であり、シムツズマブは、ＥＣＭ架橋を低下させる抗ＬＯＸＬ２抗体であるが、これら両方は、呼吸機能の改善の欠如により第２相試験は不成功であった（Raghu, 2017, European Respiratory Review, 26:170071）。療法の多くは、ＴＧＦ－β機能を直接的または間接的に変化させる。しかし、これらの努力にもかかわらず、ＩＰＦ患者に対する改善した処置、特に疾患を選択的で安全に変化させる療法に対する対処されていない必要性が依然として残る。
線維症は、ＩＰＦ以外の複数の疾患においてＴＧＦ－βにより引き起こされ、他の種類の肺線維症（例えば、全身性硬化症に関連）、肝線維症（例えば、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）に関連）、腎線維症、および心臓線維症を含む（Meng et al., 2016, Nat Rev Nephrol. 12(6):325-38、Biernacka et al., 2011, Growth Factors, 29(5):196-202、Gyorfi et al., 2017, Matrix Biology, 68-69:8-27）。ゆえに、それを必要とする対象、特に、肺線維症、例えばＩＰＦ、肝線維症、例えばＮＡＳＨに関連する肝線維症、腎線維症、心臓線維症、および全身性硬化症に苦しむ患者において、ＴＧＦ－βにより引き起こされた筋線維芽細胞の活性化を逆転し、線維症を軽減することを可能にする療法に対する対処されていない必要性がある。
２．２．がん
ＴＧＦ－βシグナル伝達はまた、腫瘍進行に関係しており、がん療法としてのＴＧＦ－β経路の阻害は、長いこと注目されている（Syed, 2016, J Cell Biochem. 117(6):1279-87）。しかし、ＴＧＦ－β受容体が遍在的に発現されるので、宿主毒性の問題、および腫瘍の増殖を故意でなく促進する恐れから、ＴＧＦ－β阻害剤の多くは、前臨床の発見段階のままである。
ＴＧＦ－βは、腫瘍細胞、がん関連の線維芽細胞（ＣＡＦ）、および／または周囲の腫瘍微小環境（ＴＭＥ）細胞により分泌されている。ＴＭＥの間質細胞の中で、ＣＡＦは、最も豊富に存在し、がん進行に決定的に関与している（Pure and Blomberg, 2018, Oncogene, 37(32):4343-4357、Calon et al., 2014, Seminars in Cancer Bio, 25:15-22、Chen and Song, 2019, Nat Rev Drug Disc. 18:90）。ＴＧＦ－βは、上皮－間葉移行（ＥＭＴ）を介して組織常在性線維芽細胞および上皮細胞からその分化を引き起こし、その生存を支持する、ＣＡＦの活性化、動員、および生存能力の重要な駆動体である。そこで、ＣＡＦは、腫瘍増殖、血管形成、がんの幹細胞性、ＥＣＭのリモデリング、組織浸潤、転移、および化学抵抗性に対する効果を有する（Harryvan and van der Burg, 2019, J Clin Med, 8:1989）。ＣＡＦは複合体であり、多くの場合、細胞内のアルファ－平滑筋アクチン（ＳＭＡ）および細胞表面の線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）の発現の増加を含む、様々な細胞内および細胞表面のマーカーの組合せを使用して同定される細胞の不均一な集団である（Pure and Blomberg, 2018, Oncogene, 37(32):4343-4357）。膀胱がんおよび結腸直腸がんの患者において、ＴＧＦ－βシグナル伝達は、排除された免疫または「冷たい」腫瘍を促進し、Ｔ細胞は、ＣＡＦにより腫瘍の外側で捕獲されたままであり、これは、腫瘍に浸潤することからこれらを物理的に遮断する（Hegde, 2020, Immunity, 52: 17-35、Gajewski, 2015, Semin Oncol, 42: 663-671、Mariathasan and Powles, 2018, Nature, 554: 544-48）。
ＴＧＦ－β療法が、がんの処置に対して注目されているが、歴史的に、ＴＧＦ－βの広い発現およびその受容体、ならびに心臓および骨を含む組織の発生、維持、およびホメオスタシスにおけるその役割により、その完全な治療的潜在性に達していない。加えて、ＴＧＦ－βは、初期の腫瘍の増殖の制御に関与している初期の腫瘍抑制因子であり、全身性ＴＧＦ－β療法は、組織の毒性および初期の腫瘍増殖の増大を引き起こすことが示されている（Anderton and Heier, 2011, Toxicologic Path, 39: 916、Stauber et al., 2014, Clinical Tox, 4(3):1-10、Lonning and McPherson, 2011, Curr Pharma Biotech, 12:2176-89）。
したがって、宿主組織の毒性を最小限にしながら、ＴＧＦ－βシグナル伝達の阻害が治療的に有用である細胞種、例えば、がん関連の線維芽細胞（「ＣＡＦ」）に対するＴＧＦ－β阻害剤を標的化する必要性がある。
３．概要
本開示は、線維症およびがんの処置のための組成物および方法に関する。組成物および方法は、有利には、主にこれらを好ましくは治療利益をもたらすこれら細胞のみに標的化し、それにより多面発現性の標的外効果を回避することにより、ＴＧＦ－β阻害剤の全身投与に関連する標的とする宿主毒性を避ける。
特に、組成物および方法は、標的細胞の細胞表面分子に結合する、筋線維芽細胞、活性化した線維芽細胞（例えば、がん関連の線維芽細胞（「ＣＡＦ」））、および標的化部分、例えば、抗体または抗体断片を介する筋線維芽細胞に移行する線維芽細胞（各細胞種「標的細胞」）に線維芽細胞にＡＬＫ５阻害剤を指向させる。理論に制約されることなく、標的化部分の使用が、ＡＬＫ５阻害剤の標的細胞への限局化および標的細胞への内在化をもたらし、それにより、全身毒性を制限しながら標的細胞においてＴＧＦβ経路を阻害することができると考えられる。例えば筋線維芽細胞または筋線維芽細胞に移行する線維芽細胞におけるＴＧＦβ経路の阻害は、線維形成の阻害をもたらし得る（線維症または線維症に関連する疾患を有する対象の場合）。ＣＡＦにおけるＴＧＦβ経路の阻害は、腫瘍進行の阻害をもたらし得る（がんを有する対象の場合）。理論に制約されることなく、ＣＡＦにおけるＴＧＦ－βシグナル伝達の選択的遮断が、１）免疫細胞浸潤でのＣＡＦ媒介性遮断を除去することができる、および／または、２）腫瘍クリアランスを引き起こすことができる、および／または、３）ＣＡＦの生存能力を下げることができる、および／または、４）全身性ＴＧＦ－β阻害剤に関連する毒性の問題を回避することができると考えられる。
したがって、本開示は、薬物がＡＬＫ５阻害剤である標的化薬物複合体（ＴＤＣ）を提供する。本開示のＴＤＣは、標的化成分、例えば、標的細胞の細胞表面分子（例えば、ヒト筋線維芽細胞の細胞表面分子）に結合する抗体または抗体断片を含む。あるいは、標的化部分は、標的細胞表面分子の細胞表面に結合する非免疫グロブリン系ペプチドまたはポリペプチドを含むことができる。理論に制約されることなく、本開示のＴＤＣが、標的細胞の休止している線維芽細胞への脱分化を促進する、および／または標的細胞のアポトーシスを促進することにより治療効果を提供することができると考えられる。第５．２節は、本開示のＴＤＣで使用することができる、例示的な標的化部分を記載する。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、イミダゾール－ベンゾジオキソール化合物、イミダゾール－キノキサリン化合物、ピラゾール－ピロロ化合物、またはチアゾール系化合物である。例示的なＡＬＫ５阻害剤は、第５．３節、および表１～３に記載される。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、Ｎ－メチル－２－（４－（４－（３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エタン－１－アミン（本明細書で「化合物Ｃ」と称する）である。
ＡＬＫ５阻害剤は、標的化部分と直接、複合体化することができるか、またはリンカーにより標的化部分に連結することができる。リンカーは、非切断性リンカーであるか、または好ましくは、切断性リンカーであり得る。例示的な非切断性リンカーおよび切断性リンカーは、第５．４節に記載されている。標的化部分ごとに結合したＡＬＫ５阻害剤分子の平均数は、様々であり得、一般に、標的化部分ごとに２から８個のＡＬＫ５阻害剤分子の範囲である。薬物負荷は、第５．５節に詳述されている。
本開示は、本開示のＴＤＣを含む、医薬組成物をさらに提供する。本開示のＴＤＣを含む、医薬組成物を製剤化するのに使用することができる、例示的な医薬添加剤は、第５．６節に記載されている。
本開示は、本開示のＴＤＣまたは本開示の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することにより、線維症を処置する方法およびがんを処置する方法をさらに提供する。本開示のＴＤＣおよび医薬組成物は、単独療法として、または併用療法の一部として、例えば、ピルフェニドンもしくはニンテダニブのような別の治療剤（線維症もしくは線維症に関連する疾患を有する対象を処置する場合）、または化学療法剤（がんを有する対象を処置する場合）と組み合わせて投与することができる。別の例として、ＴＤＣおよび医薬組成物は、がんを有する対象を処置する場合、チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与することができる。本開示のＴＤＣおよび医薬組成物で処置することができる状態の例示的な種類、ならびに例示的な併用療法は、第５．７節に記載されている。
４．図面の簡単な説明
化合物Ａ～Ｄによる、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞のＴＧＦ－β誘導性ルシフェラーゼ活性の阻害を示す。図１Ａ：化合物Ａ、図１Ｂ：化合物Ｂ、図１Ｃ：化合物Ｃ、図１Ｄ：化合物Ｄ。 図１－１の続きである。 ヒトＦＡＰ ｃＤＮＡが、細胞表面でトンランスフェクトおよび発現する場合のみ、抗ＦＡＰ抗体がＨＥＫ細胞に結合することを示す。図２Ａ：非染色ＨＥＫ細胞。図２Ｂ：抗ＦＡＰ抗体で染色されたＨＥＫ細胞。図２Ｃ：ＦＡＰ ｃＤＮＡでトランスフェクトされ、抗ＦＡＰ抗体で染色されたＨＥＫ細胞。 図２－１の続きである。 標的化薬物複合体ＳＹＮ－３０１（図３Ａ）およびＳＹＮ－３０２（図３Ｂ）で使用されるリンカーおよびペイロードを示す。 図３－１の続きである。 ＳＹＮ－３０１が、ヒトＦＡＰタンパク質を発現するＨＥＫ細胞におけるＴＧＦ－βシグナル伝達を抑制することを示す。図４Ａ：ヒトＦＡＰタンパク質を発現するＨＥＫ細胞における相対ルシフェラーゼのレポーター発現。図４Ｂ：未トランスフェクトＨＥＫ細胞における相対ルシフェラーゼのレポーター発現。 図４－１の続きである。 ＷＩ－３８細胞の５０～６０％がＦＡＰを発現することを示す。図５Ａ：非染色ＷＩ－３８細胞。図５Ｂ：抗ＦＡＰ抗体で染色されたＷＩ－３８細胞。図５Ｃ：ＳＹＮ－３０１で染色されたＷＩ－３８細胞。図５Ｄ：ＳＹＮ－３０２で染色されたＷＩ－３８細胞。図５Ｅ：アイソタイプコントロールＡＤＣで染色されたＷＩ－３８細胞。 図５－１の続きである。 図５－１の続きである。 抗ＦＡＰ抗体（６３％）、ＳＹＮ－３０１（６３％）、およびＳＹＮ－３０２（５２％）により誘導された％ＦＡＰ内在化を示す。 ＷＩ－３８細胞におけるコラーゲンおよびフィブロネクチン（図７Ａ）、ならびにＬＲＲＣ１５（図７Ｂ）のＲＮＡ発現におけるＳＹＮ－３０１およびＳＹＮ－３０２の効果を示す。 図７－１の続きである。
５．詳細な説明
本開示は、線維症およびがんを処置するのに有用な標的化薬物複合体（ＴＤＣ）であって、直接的に、またはリンカーを通してＡＬＫ５阻害剤と共有結合した標的化部分を含む、標的化薬物複合体（ＴＤＣ）を提供する。本開示のＴＤＣの概説は、第５．１節に表す。ＴＤＣの標的化部分は、例えば、完全な抗体またはその断片を含み得る。本開示のＴＤＣで使用することができる標的化部分は、第５．２節に詳述されている。本開示のＴＤＣで使用することができるＡＬＫ５阻害剤は、第５．３節に詳述されている。本開示のＴＤＣは、典型的には、標的化部分とＡＬＫ５阻害剤の間にリンカーを含有する。本開示のＴＤＣで使用することができる例示的なリンカーは、第５．４節に詳述されている。本開示のＴＤＣは、標的化部分ごとに様々な数のＡＬＫ５阻害剤部分を含有することができる。薬物負荷は、第５．５節に詳述されている。本開示は、本開示のＴＤＣを含む、医薬製剤をさらに提供する。ＴＤＣを含む医薬製剤は、第５．６節に記載されている。本開示は、本開示のＴＤＣを使用して線維症を処置する方法およびがんを処置する方法をさらに提供する。線維症またはがんの処置のために単独療法として、または併用療法の一部として本開示のＴＤＣを使用する方法は、第５．７節に記載されている。
５．１．薬物複合体
本開示のＴＤＣは、一般的に、共有結合が標的化部分の標的への結合に干渉しないように、典型的にはリンカーを介して、抗体または抗体断片のような標的化部分と共有結合したＡＬＫ５阻害剤からなる。
薬物を抗体および抗体断片のような標的化部分に複合体化するための技術は、当該技術分野で周知である（例えば、Hellstrom et al., Controlled Drug Delivery, 2nd Ed., at pp. 623-53 (Robinson et al., eds., 1987))、Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58、Dubowchik et al., 1999, Pharmacology and Therapeutics 83:67-123、およびZhou, 2017, Biomedicines 5(4):E64を参照）。ＡＬＫ５阻害剤は、好ましくは、部位に特異的な複合体化を介して、本開示のＴＤＣ中の標的化部分と結合する。例えば、ＡＬＫ５阻害剤は、１つもしくは複数の天然もしくは作成されたシステイン、リジン、もしくはグルタミン残基、１つもしくは複数の非天然アミノ酸（例えば、ｐ－アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）、ｐ－アジドメチル－Ｌ－フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、もしくはセレノシステイン（Ｓｅｃ））、１つもしくは複数のグリカン（例えば、フコース、６－チオフコース、ガラクトース、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、もしくはシアル酸（ＳＡ））、または、４～６個のアミノ酸の１つもしくは複数の短いペプチドタグを介して、標的化部分と複合体化することができる。例えば、Zhou, 2017, Biomedicines 5(4):E64を参照し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
一例において、標的化部分は、別のタンパク質（またはその部分、例えば、タンパク質の少なくとも１０個、２０個、または５０個のアミノ酸部分）のアミノ酸配列に対して、共有結合（例えば、ペプチド結合）を介して、標的化部分のＮ末端もしくはＣ末端を通して、または内部で、融合させる。標的化部分は、他のタンパク質とＮ末端で連結することができ、例えば、抗体または抗体断片は、他のタンパク質と、抗体の定常ドメインのＮ末端で連結することができる。組換えＤＮＡ手順は、このような融合体を作製するのに使用することができ、例えば、国際公開第８６／０１５３３号パンフレット、および欧州特許出願公開第０３９２７４５号明細書に記載されている。別の例において、エフェクター分子は、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期を増加させることができる、および／または、標的細胞へのＴＤＣの送達を向上することができる。この種の好適なエフェクター分子の例として、ポリマー、アルブミン、アルブミン結合タンパク質、またはアルブミン結合化合物が挙げられ、例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２００５／１１７９８４号パンフレットに記載されているものである。
代謝プロセスまたは代謝反応は、酵素プロセス、例えばＴＤＣのペプチドリンカーのタンパク分解性切断、または、官能基、例えばヒドラゾン、エステル、もしくはアミドの加水分解であり得る。細胞内代謝物として、限定されないが、細胞への侵入、拡散、取込み、または輸送の後に、細胞内切断される、ペプチドおよび遊離薬物が挙げられる。
用語「細胞内で切断される」および「細胞内切断」とは、薬物複合体の細胞内での代謝プロセスまたは代謝反応を指し、これにより、薬物部分（Ｄ）と標的化部分との間の共有結合、例えばリンカーが破壊され、その結果、細胞内に標的化部分から解離した遊離薬物をもたらす。ゆえに、ＴＤＣの切断した部分は、細胞内代謝物である。
５．２．標的化部分
本開示は、標的化部分が標的細胞の細胞表面分子に結合する、薬物複合体を提供する。標的化部分は、典型的には、抗体または抗体断片を含む（このような複合体は、ときに本明細書で「抗体薬物複合体」または「ＡＤＣ」と称する）。あるいは、標的化部分は、非免疫グロブリン系、例えば、非免疫グロブリン系ペプチドまたはポリペプチド（例えば、標的細胞の表面に発現した受容体のリガンド）であり得る。ゆえに、用語「標的化部分」が、ペプチド（例えば、１０～４０アミノ酸長であるペプチド）、一本鎖ポリペプチド（例えば、４０超のアミノ酸長のポリペプチド、例えば、一本鎖可変領域またはｓｃＦｖｓ）、および複数のポリペプチド鎖を含む分子（例えば、多量体免疫グロブリン分子）を包含することは理解すべきである。
別段指示されない限り、用語「抗体」とは、特定の抗原と特異的に結合するか、または免疫学的に反応する、免疫グロブリン分子を指し、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、遺伝子操作した抗体、および別に修飾した形態の抗体が挙げられ、限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヘテロ複合体抗体（例えば、二重特異性抗体（bispecific antibody）、二重特異性抗体（diabody）、三重特異性抗体、および四重特異性抗体）、ならびに、例えばＦａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒＩｇＧ、およびｓｃＦｖ断片を含む抗体の抗体断片が挙げられる。さらに、別段指示されない限り、用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）とは、タンパク質に特異的に結合することが可能である、完全な分子、ならびに抗体断片（例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片）の両方を含むことを意味する。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、完全な抗体のＦｃ断片が欠如しており、動物または植物の循環からより迅速に取り除かれ、完全な抗体より少ない非特異的組織結合を有し得る（Wahl et al., 1983, J. Nucl. Med. 24:316）。
「ＶＨ」に対する言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、またはＦａｂの重鎖を含む、抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。「ＶＬ」に対する言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、またはＦａｂの軽鎖を含む、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。抗体および免疫グロブリン（Ｉｇ）は、同じ構造特性を有する、糖タンパク質である。抗体が、特異的な標的に対する結合特異性を呈しながら、免疫グロブリンは、標的特異性が欠如している、抗体、および他の抗体様分子の両方を含む。天然の抗体および免疫グロブリンは、２つの同一の軽鎖（Ｌ）および２つの同一の重鎖（Ｈ）からなる、通常、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質である。各重鎖は、アミノ末端で、可変ドメイン（ＶＨ）と、それに続くいくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、アミノ末端での可変ドメイン（ＶＬ）と、カルボキシ末端での定常ドメインを有する。
細胞内のＡＬＫ５阻害剤の最適な送達のために、標的化部分は、好ましくは、内在化しており、例えば、抗体を内在化する。内在化する標的化部分は、細胞表面でそれらの標的分子に結合した後、結合の結果として、細胞により内在化される。この効果は、ＴＤＣが細胞により取り込まれることである。例えば、抗原に結合した後、抗体の内在化の決定を可能にするプロセスは、当業者に知られており、例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２００７／０７０５３８号パンフレットの８０頁に記載されている。内在化されると、例えば第５．４節に記載されるように、切断性リンカーを使用してＡＬＫ５阻害剤が標的化部分に結合する場合、ＡＬＫ５阻害剤は、リソソームでの切断により、または他の細胞機構により、標的化部分から放出することができる。
用語「抗体断片」とは、全長抗体の部分、一般に標的結合または可変領域を指す。抗体断片の例として、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、および単一ドメイン抗体が挙げられる。
「Ｆｖ」断片は、完全な標的認識および結合部位を含有する、最小限の抗体断片である。この領域は、密接に非共有結合した１本の重鎖と１本の軽鎖の可変ドメインの二量体からなる（ＶＨ－ＶＬ二量体）。この構造中で、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用し、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上に抗原結合部位を規定する。多くの場合、６つのＣＤＲは、抗体に対する標的結合特異性を与える。しかし、いくつかの例において、単一の可変ドメイン（または、標的に特異的な３つのＣＤＲだけを含むＦｖの半分）は、標的を認識し、結合する能力を有することができる。
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、１本のポリペプチド鎖において、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが標的結合に対する所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨおよびＶＬドメイン間のポリペプチドリンカーをさらに含む。様々なｓｃＦｖリンカーは、当該技術分野で記載されている。例えば、Shen et al., 2008, Anal Chem. 80(6): 1910-1917、Yusakul, et al., 2016, Biosci Biotechnol Biochem. 80(7):1306-12を参照。例示的なｓｃＦｖリンカーは、配列（ＧＧＧＧＳ）ｎを含み、ｎは、１～１０である。
「ジスルフィドで安定化されたＦｖ」または「ｄｓＦｖ」抗体断片は、ドメイン間のジスルフィド結合により安定化された抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む。Brinkmann U., 2010, Disulfide-Stabilized Fv Fragments. In: Kontermann R., Dubel S. (eds) Antibody Engineering. Springer, Berlin, Heidelbergを参照。
「単一ドメイン抗体」は、標的（例えばＦＡＰ）に対する十分な親和性を呈する、（例えば、ヒトまたはマウスの抗体の）単一のＶＨまたはＶＬドメインからなる。具体的な実施形態において、単一ドメイン抗体は、ラクダＶＨＨ抗体断片である（例えば、Riechmann, 1999, Journal of Immunological Methods 231:25-38を参照）。本開示のＴＤＣにおける単一ドメイン抗体の使用は、全長抗体と比較してその小さいサイズ、高い可溶性、高い安定性、およびｉｎ ｖｉｖｏでの優れた組織浸透性のために有利であり得る。単一ドメイン抗体を作成する様々な方法が記載されている。例えば、米国特許第１０，０３０，０６８号明細書、米国特許出願公開第２００６／０２４６０５８号明細書、米国特許第７，３７１，８４９号明細書、Vincke et al, 2008, JBC, 284(5):3273-3284を参照。
Ｆａｂ断片は、軽鎖の定常ドメイン、および重鎖の第一の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つまたは複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端で、いくつかの残基の付加により、Ｆａｂ断片と相違する。Ｆ（ａｂ’）断片は、Ｆ（ａｂ’）２ペプシン消化産物のヒンジシステインでのジスルフィド結合の切断により産生される。抗体断片のさらなる化学結合は、当業者に知られている。
ある特定の実施形態において、本開示の抗体は、モノクローナル抗体である。本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術を通して産生される抗体に限定されない。用語「モノクローナル抗体」とは、単一のクローンに由来する抗体を指し、任意の真核、原核、またはファージクローンを含むが、それを産生する方法は含まない。本開示と関連して有用であるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術の使用、またはそれらの組合せを含む、当該技術分野に公知の多種多様な技術を使用して調製することができる。本開示の抗体として、キメラ、霊長類化（primatized）、ヒト化、またはヒト抗体が挙げられる。
本開示の抗体は、キメラ抗体であり得る。本明細書で使用される用語「キメラ」抗体とは、ラットまたはマウス抗体のような非ヒト免疫グロブリン、および、ヒト免疫グロブリンテンプレートから典型的には選択されるヒト免疫グロブリン定常領域に由来する可変配列を有する抗体を指す。キメラ抗体を産生するための方法は、当該技術分野に知られている。例えば、Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7、Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221、Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202、米国特許第５，８０７，７１５号明細書、米国特許第４，８１６，５６７号明細書、および米国特許第４，８１６，３９７号明細書を参照し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本開示の抗体は、ヒト化であり得る。非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（例えば、抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または他の標的結合サブドメイン）である。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＣＤＲ領域の全て、または実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、ＦＲ領域の全て、または実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリン共通配列のものを含むことができる。抗体のヒト化の方法は、当該技術分野に知られている。例えば、Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-7、Ｑｕｅｅｎらに対する米国特許第５，５３０，１０１号明細書、米国特許第５，５８５，０８９号明細書、米国特許第５，６９３，７６１号明細書、米国特許第５，６９３，７６２号明細書、米国特許第６，１８０，３７０号明細書、欧州特許出願公開第２３９４００号明細書、ＰＣＴ公開の国際公開第９１／０９９６７号パンフレット、米国特許第５，２２５，５３９号明細書、欧州特許出願公開第５９２１０６号明細書、欧州特許出願公開第５１９５９６号明細書、Padlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489-498、Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7:805-814、Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:969-973、米国特許第５，５６５，３３２号明細書を参照し、その全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本開示の抗体は、ヒト抗体であり得る。完全「ヒト」抗体は、ヒトの患者の治療的な処置に対して望ましくあり得る。本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリー、または１つもしくは複数のヒト免疫グロブリンに関してトランスジェニックである動物から分離され、内在性免疫グロブリンを発現しない抗体を含む。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリーを使用するファージディスプレイ方法を含む、当該技術分野に公知の様々な方法により作製することができる。例えば、米国特許第４，４４４，８８７号明細書および米国特許第４，７１６，１１１号明細書、ならびにＰＣＴ公開の国際公開第９８／４６６４５号パンフレット、国際公開第９８／５０４３３号パンフレット、国際公開第９８／２４８９３号パンフレット、国際公開第９８／１６６５４号パンフレット、国際公開第９６／３４０９６号パンフレット、国際公開第９６／３３７３５号パンフレット、国際公開第９１／１０７４１パンフレットを参照し、その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ヒト抗体はまた、機能性内因性免疫グロブリンを発現することは不可能であるが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができる、トランスジェニックマウスを使用して産生することができる。例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第９８／２４８９３号パンフレット、国際公開第９２／０１０４７号パンフレット、国際公開第９６／３４０９６号パンフレット、国際公開第９６／３３７３５号パンフレット、米国特許第５，４１３，９２３号明細書、米国特許第５，６２５，１２６号明細書、米国特許第５，６３３，４２５号明細書、米国特許第５，５６９，８２５号明細書、米国特許第５，６６１，０１６号明細書、米国特許第５，５４５，８０６号明細書、米国特許第５，８１４，３１８号明細書、米国特許第５，８８５，７９３号明細書、米国特許第５，９１６，７７１号明細書、および米国特許第５，９３９，５９８号明細書を参照し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。加えて、Ｍｅｄａｒｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、Ｉｌｌ．）、Ａｍｇｅｎ（Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、Ｃａｌｉｆ．）、およびＲｅｇｅｎｅｒｏｎ（Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、Ｎ．Ｙ．）のような企業と、上述と同様の技術を使用して選択した抗原に対して指向させたヒト抗体を提供する契約を結ぶことができる。選択したエピトープを認識する、完全ヒト抗体は、「誘導選択（guided selection）」と称する技術を使用して生成することができる。このアプローチにおいて、選択した非ヒトモノクローナル抗体、例えばマウス抗体を使用して、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選択を誘導する（Jespers et al., 1988, Biotechnology 12:899-903）。
本開示の抗体は、霊長類化であり得る。用語「霊長類化抗体」とは、サル可変領域およびヒト定常領域を含む、抗体を指す。霊長類化抗体を産生するための方法は、当該技術分野に知られている。例えば、米国特許第５，６５８，５７０号明細書、米国特許第５，６８１，７２２号明細書、および米国特許第５，６９３，７８０号明細書を参照し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本開示の抗体は、誘導体化抗体を含む。例えば、限定はしないが、誘導体化抗体は、典型的には、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク分解性切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質との連鎖（抗体複合体の考察である第５．１節を参照）などにより修飾される。数多くの化学的な修飾のいずれかは、限定されないが、特定の化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含む、公知の技術により行うことができる。加えて、誘導体は、例えばａｍｂｒｘ技術を使用して、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含有することができる（例えば、Wolfson, 2006, Chem. Biol. 13(10):1011-2を参照）。
本開示のさらに別の実施形態において、抗体またはその断片は、その配列を修飾して、相当する野生型配列に対して少なくとも１つの定常領域媒介性の生物学的エフェクターの機能を改変する、抗体または抗体断片であり得る。例えば、いくつかの実施形態において、本開示の抗体を修飾して、非修飾抗体に対して少なくとも１つの定常領域媒介性の生物学的エフェクターの機能を低下させることができ、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）またはＣ１ｑに対する結合を低下させることができる。ＦｃγＲおよびＣ１ｑ結合は、ＦｃγＲまたはＣ１ｑ相互作用に必要な特定の領域で、抗体の免疫グロブリン定常領域セグメントを変異させることにより低下し得る（例えば、Canfield and Morrison, 1991, J. Exp. Med. 173:1483-1491、Lund et al., 1991, J. Immunol. 147:2657-2662、Lo. et al., 2017, J Biol Chem 292: 3900-08、Wang et al., 2018, Protein Cell 9:63-73を参照）。
抗体のＦｃγＲ結合能の低下はまた、ＦｃγＲ相互作用に依存している別のエフェクター機能、例えばオプソニン作用、食作用および抗体依存性細胞毒性（「ＡＤＣＣ」）も低減する場合があるが、Ｃ１ｑ結合の低下は、補体依存性細胞毒性（「ＣＤＣＣ」）を低減し得る。ゆえに、エフェクター機能の低下または排除により、本開示の薬物複合体により標的化される標的細胞が、ＡＤＣＣまたはＣＤＣＣを介して破壊されることを防ぎ得る。したがって、いくつかの実施形態において、抗体のエフェクター機能は、抗体のＦｃ部分の選択的突然変異により修飾され、その結果、抗原特異性および内在化能力を維持するが、ＡＤＣＣ／ＣＤＣＣ機能は排除する。他の実施形態において、抗体のエフェクター機能は、ＡＤＣＣ／ＣＤＣＣ機能を低下または排除するように修飾されていない。理論に制約されることなく、ＡＤＣＣ／ＣＤＣＣ機能を伴う抗体または抗体断片を含む本開示のＴＤＣが、標的細胞のアポトーシスを促進し、それにより線維形成をさらに阻害することによりＴＧＦβシグナル伝達を阻害する治療効果を向上することができると考えられる。
数多くの突然変異は、ＦｃγＲおよびＣ１ｑ結合が低下することについて当該技術分野で記載されており、このような突然変異は、本開示の薬物複合体に含まれ得る。例えば、米国特許第６，７３７，０５６号明細書では、位置２３８、２６５、２６９、２７０、２９２、２９４、２９５、２９８、３０３、３２４、３２７、３２９、３３３、３３５、３３８、３７３、３７６、４１４、４１６、４１９、４３５、４３８、または４３９での単一位置のＦｃ領域アミノ酸修飾により、ＦｃγＲＩＩへの結合およびＦｃγＲＩＩが低下する結果となることが開示されている。米国特許第９，７９０，２６８号明細書では、アミノ酸位置２９８でのアスパラギン残基、およびアミノ酸位置３００でのセリンまたはトレオニン残基が、ＦｃγＲ結合を低下させることが開示されている。ＰＣＴ公開の国際公開第２０１４／１９０４４１号パンフレットでは、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ：Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２３３Ｋ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ｓ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｄ２６５Ｓ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｋ３２２Ａ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３２９Ｗ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｐ３２９Ｗ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ａ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ｅ／Ｅ３３３Ｋ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ｅ／Ｅ３３３Ｋ突然変異を有するＦｃγＲ結合が低下した、修飾したＦｃドメインが記載されており、ここで、セミコロンに先行する突然変異の一式は、第一のＦｃポリペプチド中にあり、セミコロンに続く突然変異は、Ｆｃ二量体の第二のＦｃポリペプチド中にある。ＦｃγＲ受容体結合ならびにＣ１ｑ結合を低減することができる突然変異として、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、およびＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ａが挙げられる（Lo. et al., 2017, J Biol Chem 292: 3900-08、Wang et al., 2018, Protein Cell 9:63-73）。
エフェクター機能を低下させるために定常領域を変異させる、例えば上述のＦｃドメインを変異させるのに代えて、エフェクター機能は、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２断片）を利用することにより排除することができる。
本開示の他の実施形態において、抗体またはその断片を修飾して、非修飾抗体に対して少なくとも１つの定常領域媒介性の生物学的エフェクターの機能を獲得または改善することができ、例えば、ＦｃγＲ相互作用を向上させることができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０１３４７０９号明細書を参照）。例えば、本開示の抗体は、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、および／またはＦｃγＲＩＩＩＡを、相当する野生型定常領域より高い親和性で結合する、定常領域を有することができる。
ゆえに、本開示の抗体は、オプソニン作用、食作用またはＡＤＣＣを低減する生物活性の変化を有し得る。このような変化は、当該技術分野に知られている。例えば、ＡＤＣＣ活性を低減する抗体における修飾は、米国特許第５，８３４，５９７号明細書に記載されている。
さらに別の態様において、抗体またはその断片は、例えば、ＦｃＲｎ相互作用に関与する特定の領域で免疫グロブリン定常領域セグメントを変異させることにより、修飾して、胎児性Ｆｃ受容体、ＦｃＲｎに対するその結合親和性を高めるか、または低減する抗体またはその断片であり得る（例えば、国際公開第２００５／１２３７８０号パンフレットを参照）。このような突然変異は、ＦｃＲｎへの抗体の結合を高めることができ、抗体が分解することから保護し、その半減期を延長させる。
さらに他の態様において、抗体は、例えば、Jung and Pluckthun, 1997, Protein Engineering 10(9):959-966、Yazaki et al., 2004, Protein Eng. Des Sel. 17(5):481-9、および米国特許出願公開第２００７／０２８０９３１号明細書に記載される通り、その超可変領域の１つまたは複数に挿入された、１つまたは複数のアミノ酸を有する。
標的化部分の標的は、ＴＤＣの所望の治療用途に依存する。典型的には、標的は、ＡＬＫ５阻害剤を送達するのに望ましい細胞、例えば筋線維芽細胞またはがん関連の線維芽細胞の表面に存在する分子であり、標的化部分は、好ましくは、標的に結合すると内在化される。内在化する標的化部分、例えば抗体は、例えば、Franke et al., 2000, Cancer Biother. Radiopharm. 15:459 76、Murray, 2000, Semin. Oncol. 27:64 70、Breitling et al., Recombinant Antibodies, John Wiley, and Sons, New York, 1998に記載されている。ある特定の実施形態において、標的化部分は、標的細胞表面分子の活性を著しく遮断しない。例えば、アゴニスト抗体もしくはその断片、または非アゴニスト抗体もしくはその断片は、例えば標的分子がＦＡＰまたはαｖβ６である場合、標的化部分として使用することができる。
好ましくは、標的化部分は、他の細胞種、例えば休止している線維芽細胞、肺上皮細胞、肝細胞、Ｔ細胞、コラーゲンを発現しない細胞、および／またはα－平滑筋アクチン（αＳＭＡ）を発現しない細胞より、筋線維芽細胞、活性化した線維芽細胞、筋線維芽細胞に移行する線維芽細胞、またはそれらの組合せに選択的に結合する。休止している、または静止した線維芽細胞は、紡錘状の単一の細胞として同定することができる一方、活性化した線維芽細胞は、αＳＭＡおよびビメンチンの発現を得て、星状の形になる。選択的な結合は、１つまたは複数の標的細胞の表面で発現するが、他の細胞種での発現がほとんどないまたは発現がない細胞表面分子を標的化することにより達成することができる。選択性は、当該技術分野に知られている様々なアッセイ、例えばフローサイトメトリーにより測定することができる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、例えばＦＡＣＳにより測定した、休止している線維芽細胞より筋線維芽細胞に対して少なくとも２倍または少なくとも３倍（例えば、２～１０００倍、２～１００倍、２～５０倍、２～１０倍、３～１０００倍、３～１００倍、３～５０倍、３～１０倍、５～１０００倍、５～１００倍、５～５０倍、５～１０倍、２０～１０００倍、２０～１００倍、２０～５０倍、５０～１０００倍、５０～１００倍、１００～１０００倍、または１０００倍超）の選択性を有する。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、例えばＦＡＣＳにより測定した、休止している線維芽細胞より活性化した線維芽細胞（例えば、ＣＡＦ）に対して少なくとも２倍または少なくとも３倍（例えば、２～１０００倍、２～１００倍、２～５０倍、２～１０倍、３～１０００倍、３～１００倍、３～５０倍、３～１０倍、５～１０００倍、５～１００倍、５～５０倍、５～１０倍、２０～１０００倍、２０～１００倍、２０～５０倍、５０～１０００倍、５０～１００倍、１００～１０００倍、または１０００倍超）の選択性を有する。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、例えばＦＡＣＳにより測定した、休止している線維芽細胞より筋線維芽細胞に移行する線維芽細胞に対して少なくとも２倍または少なくとも３倍（例えば、２～１０００倍、２～１００倍、２～５０倍、２～１０倍、３～１０００倍、３～１００倍、３～５０倍、３～１０倍、５～１０００倍、５～１００倍、５～５０倍、５～１０倍、２０～１０００倍、２０～１００倍、２０～５０倍、５０～１０００倍、５０～１００倍、１００～１０００倍、または１０００倍超）の選択性を有する。標的化部分により標的化するのに好適な細胞表面分子の例として、限定されないが、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、血小板由来増殖因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ－β）、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）、ペルオキシゾーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲ－γ）、線維芽細胞特異的タンパク質１（ＦＳＰ１）、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ファシン、ＣＤ１４７、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、アルファＶベータ６（αｖβ６）、ＡＸＬ、およびＭＥＲＴＫが挙げられる。ＡＸＬおよびＭＥＲＴＫは、ＴＡＭ受容体キナーゼファミリーのメンバーである。標的化部分により標的化するのに好適な細胞表面分子のさらなる例は、１５個を含有するロイシンリッチリピート（ＬＲＲＣ１５）である。
いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＦＡＰに結合する。他の実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＰＤＧＦＲ－βに結合する。他の実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＦＧＦＲ１に結合する。他の実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＰＰＡＲ－γに結合する。他の実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＦＳＰ１に結合する。他の実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＧＦＡＰに結合する。他の実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ファシンに結合する。他の実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＣＤ１４７に結合する。他の実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＣＸＣＲ４に結合する。他の実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、αｖβ６に結合する。他の実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＡＸＬに結合する。他の実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＭＥＲＴＫに結合する。他の実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＬＲＲＣ１５に結合する。
線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）は、ジペプチジルペプチダーゼ（ＤＰＰ）ファミリーのメンバーであり、ＩＩ型膜内在性タンパク質として発現している。膜結合性ＦＡＰは、短い細胞質テール（残基１～４）、膜貫通領域（残基５～２５）、および細胞外ドメイン（残基２６～７６０）を含有する（www.uniprot.org/uniprot/Q12884）。ＦＡＰは、細胞表面において１７０ｋＤの二量体として活性であるが、細胞外ドメインもまた、膜からの切断にしたがって活性である。ＦＡＰは、ジペプチダーゼおよびエンドペプチターゼ活性の両方を有する。酵素のＤＰＰファミリーの他のメンバーと同様に、ＦＡＰは、プロリル特異的セリンプロテアーゼであるが、ゼラチナーゼ活性も有するＦＡＰでもあり、これは、変性コラーゲンＩおよびＩＩＩ、ヒト線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ－２１）、ならびにヒトアルファ２アンチプラスミンを分解することを可能にする。ＦＡＰは、発育の間に発現するが、健康な成人組織においてはごく稀である。しかし、活性化した線維芽細胞において増加したＦＡＰ発現は、炎症および創傷治癒を含む活性組織のリモデリング、線維症、ならびにがんの部位で発現される。ＦＡＰが、いくつかの疾患背景における活性化した線維芽細胞および筋線維芽細胞に対するマーカーであるので、ＦＡＰ標的化療法は、がん患者に限定されないが、ＩＰＦ、ならびにＮＡＳＨ（肝臓）、心臓、および／または腎線維症のような他の線維性疾患の処置に広く適用することができる。さらに、ＦＡＰ発現は、ＴＧＦ－βにより増加することができ、ＦＡＰのプロモーターは、Ｓｍａｄ３結合要素を有する。線維性組織におけるこの限定的な組織発現および局在化した発現により、ＦＡＰは、疾患組織の画像化ならびに治療的標的化に使用されている。がんにおいて、ＦＡＰは、がん増殖および転移を支持するがん関連の線維芽細胞（ＣＡＦ）で高度で選択的に発現する。ＦＡＰは、細胞内に容易に内在化し、優れた細胞標的化および送達ビヒクルとなる。細胞毒性ペイロードに結合した抗ＦＡＰ抗体は、化学療法と組み合わせて腫瘍クリアランスを実証した一方、放射性ヌクレオチドに複合体化した抗ＦＡＰは、ｉｎ ｖｉｖｏでのマウス腫瘍モデルにおいて高い生存をもたらした（Ostermann et al., 2008, Clin Cancer Res, 2008. 14(14):4584-92、Fang et al., 2016, Int J Cancer, 138(4):1013-23、Fischer et al., Clin Cancer Res 18(22):6208-18）。複合体化していないヒト抗ＦＡＰ抗体、シブロツズマブ（sibroluzumab）が、転移性のＦＡＰ＋がん患者において単一薬剤の効能を示さなかった一方、腫瘍では特異的に蓄積し、正常組織では蓄積せず、限定的な有害事象を有する患者において十分な許容性を示した。可溶型のＦＡＰは、アンチプラスミン切断酵素（ＡＰＣＥ）としても知られるが、膜結合性ＦＡＰの細胞質テールおよび膜貫通領域が欠如している。可溶性ＦＡＰは、疾患の重症度に伴い上昇するレベルで、肝硬変患者において上昇することを示している（de Willige et al., 2013, J Thromb Haemost. 11(11):2029-36）。好ましくは、ＦＡＰを標的化する標的化部分は、可溶型より、膜結合型のＦＡＰに優先的に結合する。理論に制約されることなく、可溶性ＦＡＰが、膜結合型のＦＡＰに優先的に結合するＴＤＣと比較して、可溶型のＦＡＰに結合するＴＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ活性を低下させるシンクとして作用することができると考えられる。
ＦＡＰに結合する抗体の例は、国際公開第２０１２／０２０００６号パンフレット、国際公開第２０１６／１１６３９９号パンフレット（例えば、抗体Ｆ５）、および国際公開第２０１６／１１０５９８号パンフレットに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２０１２／０２０００６号パンフレット、国際公開第２０１６／１１６３９９号パンフレット、もしくは国際公開第２０１６／１１０５９８号パンフレットに記載されている抗ＦＡＰ抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、シブロツズマブ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。
ＰＤＧＦＲ－βに結合する抗体の例は、国際公開第２０１７／１０６６０９号パンフレットおよび国際公開第２０１４／１０９９９９号パンフレットに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２０１７／１０６６０９号もしくは国際公開第２０１４／１０９９９９号パンフレットに記載されている抗ＰＤＧＦＲ－β抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＩＭＣ－２Ｃ５（ＩｍＣｌｏｎｅ）、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。
ＦＧＦＲ１に結合する抗体の例は、国際公開第２０１８／０９５９３２号パンフレットおよび国際公開第２０１２／１２５１２４号パンフレットに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２０１８／０９５９３２号もしくは国際公開第２０１２／１２５１２４号パンフレットに記載されている抗ＦＧＦＲ１抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２０１２／１２５１２４号パンフレットの配列番号４５のアミノ酸配列を有する重鎖、および国際公開第２０１２／１２５１２４号パンフレットの配列番号５０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。
ＰＰＡＲ－γに結合する抗体の例は、国際公開第２００５／０２６３３６号パンフレットに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２００５／０２６３３６号パンフレットに記載されている抗ＰＰＡＲ－γ抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２００５／０２６３３６号パンフレットでＰγ４８．３４Ａと指定された抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。
ＦＳＰ１に結合する抗体の例は、国際公開第２０１１／１５７７２４号パンフレットに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２０１１／１５７７２４号パンフレットに記載されている抗ＦＳＰ１抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、抗体ＭＡＢ４１３７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。
ＧＦＡＰに結合する抗体の例は、国際公開第２０１８／０８１６４９号パンフレットに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２０１８／０８１６４９号パンフレットに記載されている抗ＧＦＡＰ抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２０１８／０８１６４９号パンフレットでＧＦＡＰ－１からＧＦＡＰ－１９と指定された抗体の１つ、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。
ファシンに結合する抗体の例として、ＦＣＮ０１（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、ａｂ１２６７７２（Ａｂｃａｍ）、およびａｂ１８３８９１（Ａｂｃａｍ）が挙げられる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＦＣＮ０１、ａｂ１２６７７２、もしくはａｂ１８３８９１の１つ、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。
ＣＤ１４７に結合する抗体の例は、国際公開第２０１５／１６０８５３号パンフレット、国際公開第２０１８／１２１５７８号パンフレット、および国際公開第２０１８／１６５６１９号パンフレットに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２０１５／１６０８５３号パンフレット、国際公開第２０１８／１２１５７８号パンフレット、もしくは国際公開第２０１８／１６５６１９号パンフレットに記載されている抗ＣＤ１４７抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２０１８／１６５６１９号パンフレットで３Ａ１１と指定された抗体、もしくは国際公開第２０１８／１６５６１９号パンフレットに記載されているヒト化変異体、またはこのような抗体の断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。
ＣＸＣＲ４に結合する抗体の例は、国際公開第２０１１／０９８７６２号パンフレット、国際公開第２００８／０６０３６７号パンフレット、および国際公開第２００６／０８９１４１号パンフレットに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２０１１／０９８７６２号パンフレット、国際公開第２００８／０６０３６７号パンフレット、もしくは国際公開第２００６／０８９１４１号パンフレットに記載されている抗ＣＸＣＲ４抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２０１１／０９８７６２号パンフレットに記載されている抗体Ｃ－９Ｐ２１、Ｂ－１Ｍ２２、Ｃ－１Ｉ２４、Ｄ－１Ｋ２１、もしくは９Ｎ１０、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。
αｖβ６に結合する抗体の例は、国際公開第２００８／１１２００４号パンフレットおよび国際公開第２０１３／１２３１５２号パンフレットに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２００８／１１２００４号もしくは国際公開第２０１３／１２３１５２号パンフレットに記載されている抗αｖβ６抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、抗体ＳＴＸ－１００（Ｂｉｏｇｅｎ）、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。
ＡＸＬに結合する抗体の例は、国際公開第２００９／０６２６９０号パンフレット、国際公開第２０１０／１３０７５１号パンフレット、国際公開第２０１５／１９３４３０号パンフレット、および国際公開第２０１６／００５５９３号パンフレットに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２００９／０６２６９０号パンフレット、国際公開第２０１０／１３０７５１号パンフレット、国際公開第２０１５／１９３４３０号パンフレット、もしくは国際公開第２０１６／００５５９３号パンフレットに記載されている抗ＡＸＬ抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、ＡＤＣＴ－６０１（ＡＤＣ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）の抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。
ＭＥＲＴＫに結合する抗体の例は、国際公開第２０１６／１０６２２１号パンフレット、国際公開第２０１９／００５７５６号パンフレット、および国際公開第２０１９／０８４３０７号パンフレットに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２０１６／１０６２２１号パンフレット、国際公開第２０１９／００５７５６号パンフレット、もしくは国際公開第２０１９／０８４３０７号パンフレットに記載されている抗ＭＥＲＴＫ抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、抗体ＲＧＸ－０１９（Ｒｇｅｎｉｘ）、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。
ＬＲＲＣ１５は、多くのがん、例えば乳がん、頭頚部がん、肺がん、膵がん、卵巣がん、結腸がん、腎がん、食道がん、胃腺がん、および膀胱がんにおいてがん関連の線維芽細胞で発現する（Purcell et al., 2018, Cancer Res. 78(14):4059-4072、Dominguez et al., 2019, Cancer Discovery 10(2):232-253）。ゆえに、いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣはＬＲＲＣ１５を標的化する。ＬＲＲＣ１５に結合する抗体の例は、国際公開第２０１７／０９５８０５号パンフレットに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＬＲＲＣ１５に結合する抗体はまた、市販されており、例えば、Ａｂｃａｍのカタログ番号ａｂ１５０３７６およびＣｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓのカタログ番号ＴＡＢ－０７０９ＣＬである。ＡＢＢＶ－０８５（Ａｂｂｖｉｅ）は、ＬＲＲＣ１５に対して指向させたＡＤＣを含有するＭＭＡＥである（Purcell et al., 2018, Cancer Res. 78(14):4059-4072）。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣの標的化部分は、国際公開第２０１７／０９５８０５号パンフレットに記載されている抗体、ＡＢＢＶ－０８５の抗体、本段落に記載されている市販されている抗体の１つ、またはその断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、もしくは単一ドメイン抗体）を含む。
５．３．ＡＬＫ５阻害剤
本開示のＡＬＫ５阻害剤は、好ましくは、競合的、可逆的に、ＡＬＫ５受容体の細胞質キナーゼドメインでＡＴＰ結合部位と結合する、小分子である。
ＡＬＫ５阻害剤は、ＡＬＫ５対他のＴＧＦ－βファミリー受容体、例えば、ＡＬＫ４および／もしくはＡＬＫ７ならびに／またはＴＧＦ－β受容体ＩＩに対して、特異的または選択的であり得るが、必ずしもその必要はない。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、ＡＬＫ５およびＴＧＦ－β受容体ＩＩの両方に対して活性を有する。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、ＢＭＰ ＩＩ受容体に対する限定的な阻害活性を有する。
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を使用するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞アッセイで測定される場合、本開示のＡＬＫ５阻害剤のＩＣ５０は、好ましくは１００ｎＭ以下、より好ましくは５０ｎＭ以下、最も好ましくは２０ｎＭ以下である。例示的な細胞アッセイは、以下の第６．６節で説明する。
本開示のＴＤＣでの使用に好適なＡＬＫ５阻害剤の具体例として、イミダゾール－ベンゾジオキソール化合物、イミダゾール－キノキサリン化合物、ピラゾール－ピロロ化合物、およびチアゾール系化合物が挙げられる。
本開示の一態様にしたがって、イミダゾール－ベンゾジオキソール系ＡＬＫ５阻害剤は、下記の式を有する。
Figure 2023509760000002
式中、Ｒ１は、水素、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルであり、Ｒ２は、水素、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルであり、Ｒ３は、アミド、ニトリル、１～約３個の炭素原子を有するアルキニル、カルボキシル、または１～約５個の炭素原子を有するアルカノールであり、Ａは、直接結合、または１～約５個の炭素原子を有するアルキルであり、Ｂは、直接結合、または１～約５個の炭素原子を有するアルキルである。本開示の別個の好ましい実施形態において、Ｒ２は、水素またはメチルであり、Ａは、１個の炭素原子を有し、Ｂは、ベンジル基への直接結合であり、Ｒ３は、アミドである。本開示の組み合わせた好ましい実施形態において、Ｒ２は、水素またはメチルであり、Ａは、１個の炭素原子を有し、Ｂは、ベンジル基への直接結合である。
本開示の別の態様にしたがって、イミダゾール－キノキサリン系ＡＬＫ５阻害剤は、下記の式を有する。
Figure 2023509760000003
式中、Ｒ１は、水素、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルであり、Ｒ２は、水素、ハロゲン、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルであり、Ｒ３は、アミド、ニトリル、１～約３個の炭素原子を有するアルキニル、カルボキシル、または１～約５個の炭素原子を有するアルカノールであり、Ａは、直接結合、または１～約５個の炭素原子を有するアルキルであり、Ｂは、直接結合、または１～約５個の炭素原子を有するアルキルである。本開示の別個の好ましい実施形態において、Ｒ２は、水素またはメチルであり、ハロゲンは、フッ素または塩素を含み、Ａは、１個の炭素原子を有し、Ｂは、ベンジル基への直接結合であり、Ｒ３は、アミドである。本開示の組み合わせた好ましい実施形態において、Ｒ２は、水素またはメチルであり、Ａは、１個の炭素原子を有し、Ｂは、ベンジル基への直接結合である。
本開示の別の態様にしたがって、ピラゾール系ＡＬＫ５阻害剤は、下記の式を有する。
Figure 2023509760000004
式中、Ｒ２は、水素、ハロゲン、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルであり、Ｒ４は、水素、ハロゲン、１～約５個の炭素原子を有する低級アルキル、１～約５個の炭素原子を有するアルコキシ、ハロアルキル、カルボキシル、カルボキシアルキルエステル、ニトリル、アルキルアミン、または下記の式を有する基である。
Figure 2023509760000005
式中、Ｒ５は、１～約５個の炭素原子を有する低級アルキル、ハロゲン、またはモルホリノであり、Ｒ６は、ピロール、シクロヘキシル、モルホリノ、ピラゾール、ピラン、イミダゾール、オキサン、ピロリジニル、またはアルキルアミンであり、Ａは、直接結合、または１～約５個の炭素原子を有するアルキルである。
本開示の別の態様にしたがって、ピラゾール－ピロロ系ＡＬＫ５阻害剤は、下記の式を有する。
Figure 2023509760000006
式中、Ｒ７は、水素、ハロゲン、１～約５個の炭素原子を有する低級アルキル、アルカノール、モルホリノ、またはアルキルアミンであり、Ｒ２は、水素、ハロゲン、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルであり、Ｒ８は、水素、ヒドロキシル、アミノ、ハロゲン、または下記の式を有する基である。
Figure 2023509760000007
式中、Ｒ５は、ピペラジニルであり、Ｒ６は、モルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニル、アルコキシ、ヒドロキシル、オキサン、ハロゲン、チオアルキル、またはアルキルアミンであり、Ａは、１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルである。
本開示の別の態様にしたがって、チアゾール系ＡＬＫ５阻害剤は、下記の式を有する。
Figure 2023509760000008
式中、Ｒ９は、水素、ハロゲン、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルであり、Ｒ１０は、水素、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルである。
ある特定の実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、以下の表１でＡ～Ｎと指定された化合物のいずれかから選択される。
Figure 2023509760000009
Figure 2023509760000010
Figure 2023509760000011
さらに具体的な実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、以下の表２で１～２８３と指定された化合物のいずれかから選択される。
Figure 2023509760000012
Figure 2023509760000013
Figure 2023509760000014
Figure 2023509760000015
Figure 2023509760000016
Figure 2023509760000017
Figure 2023509760000018
Figure 2023509760000019
Figure 2023509760000020
Figure 2023509760000021
Figure 2023509760000022
Figure 2023509760000023
Figure 2023509760000024
Figure 2023509760000025
Figure 2023509760000026
Figure 2023509760000027
Figure 2023509760000028
Figure 2023509760000029
ＡＬＫ５阻害剤の調製および使用は、科学文献および特許文献において、周知であり、十分に実証されている。ＰＣＴ公開の国際公開第２０００／６１５７６号パンフレット、および米国特許出願公開第２００３／０１４９２７７号明細書では、トリアリールイミダゾール誘導体、およびＡＬＫ５阻害剤としてのその使用が開示されている。ＰＣＴ公開の国際公開第２００１／６２７５６パンフレットでは、ピリジニルイミダゾール誘導体、およびＡＬＫ５阻害剤としてのその使用が開示されている。ＰＣＴ公開の国際公開第２００２／０５５０７７パンフレットでは、ＡＬＫ５阻害剤としてのイミダゾリル環状アセタール誘導体の使用が開示されている。ＰＣＴ公開の国際公開第２００３／０８７３０４パンフレットでは、トリ置換ヘテロアリール、ならびにＡＬＫ５および／またはＡＬＫ４阻害剤としてのその使用が開示されている。国際公開第２００５／１０３０２８号パンフレット、米国特許出願公開第２００８／０３１９０１２号明細書、および米国特許第７，４０７，９５８号明細書では、ＡＬＫ５および／またはＡＬＫ４阻害剤としての２－ピリジル置換イミダゾールが開示されている。代表的な化合物の１つ、ＩＮ－１１３０は、いくつかの動物モデルにおいて、ＡＬＫ５および／またはＡＬＫ４阻害剤活性を示す。以下の特許および特許公開は、ＡＬＫ５阻害剤の追加例を提供し、例示的な合成スキーム、およびＡＬＫ５阻害剤を使用する方法を提供する：米国特許第６，４６５，４９３号明細書、米国特許第６，９０６，０８９号明細書、米国特許第７，３６５，０６６号明細書、米国特許第７，０８７，６２６号明細書、米国特許第７，３６８，４４５号明細書、米国特許第７，２６５，２２５号明細書、米国特許第７，４０５，２９９号明細書、米国特許第７，４０７，９５８号明細書、米国特許第７，５１１，０５６号明細書、米国特許第７，６１２，０９４号明細書、米国特許第７，６９１，８６５号明細書、米国特許第７，８６３，２８８号明細書、米国特許第８，４１０，１４６号明細書、米国特許第８，４１０，１４６号明細書、米国特許第８，４２０，６８５号明細書、米国特許第８，５１３，２２２号明細書、米国特許第８，６１４，２２６号明細書、米国特許第８，７９１，１１３号明細書、米国特許第８，８１５，８９３号明細書、米国特許第８，８４６，９３１号明細書、米国特許第８，９１２，２１６号明細書、米国特許第８，９８７，３０１号明細書、米国特許第９，０５１，３０７号明細書、米国特許第９，０５１，３１８号明細書、米国特許第９，０７３，９１８号明細書、ならびにＰＣＴ公開の国際公開第２００４／０６５３９２号パンフレット、国際公開第２００９／０５０１８３号パンフレット、国際公開第２００９／１３３０７０号パンフレット、国際公開第２０１１／１４６２８７号パンフレット、および国際公開第２０１３／００９１４０号パンフレット。前述の特許および特許公開は、参照によりその全体が組み込まれる。
いくつかのＡＬＫ５阻害剤は、市販されており、ＳＢ－５２５３３４（ＣＡＳ ３５６５５９－２０－１）、ＳＢ－５０５１２４（ＣＡＳ ６９４４３３－５９－５）、ＳＢ－４３１５４２（ＣＡＳ ３０１８３６－４１－９）、ＳＢ－２０２４７４（ＥＭＤ４ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＬＹ－３６４９４７（ＣＡＳ ３９６１２９－５３－６）、ＩＮ－１１３０、ＧＷ－７８８３８８、およびＤ４４７６（ＥＭＤ４ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられる。
本明細書に記載されるＡＬＫ５阻害剤の構造および名称は、抗体および／またはリンカーへの結合前の分子を指す。
好ましいＡＬＫ５阻害剤は、遊離ＮＨまたはＮＨ２基、好ましくはアルキル、ヘテロアリール、もしくはアリール基に結合するＮＨもしくはＮＨ２基、またはアルキル、ヘテロアリール、もしくはアリール基のＮＨもしくはＮＨ２基部分を介して、リンカーに結合することができるものである（例えば、表２に示される化合物１～２３、２６－２９、３１、３５、３７、３９、４０、４２、４３、４５～４８、５０～８５、８７～９０、９３、９６、９８～１０４、１０６、１０８、１０９、１１１、１１２、１１４、１１６～１２０、１３２、１４６、１４９、１５６、１８４、１８７、１９３、２１８、２６０－２７７、２８２、および２８３）。ＡＬＫ５阻害剤を誘導体化して、遊離ＮＨまたはＮＨ２基を添加することができる。誘導体化したＡＬＫ５阻害剤の設計は、好ましくは、活性は経験的に決定することもできるが、ＮＨまたはＮＨ２基を添加する場合の阻害剤活性を無効にする可能性を減らすために、阻害剤の構造活性相関（ＳＡＲ）を考慮に入れるべきである。表１に示されるいくつかの化合物の例示的な誘導体化した対応物質は、以下の表３に示される。
Figure 2023509760000030
５．４．リンカー
典型的には、ＴＤＣは、ＡＬＫ５阻害剤と標的化部分との間のリンカーを含む。リンカーは、共有結合を含む部分、または標的化部分を薬物部分に共有結合する原子の鎖である。様々な実施形態において、リンカーとして、アルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイルのような二価基、－（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ－、アルキルオキシ（例えばポリエチレンオキシ、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ）およびアルキルアミノ（例えばポリエチレンアミノ、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標））の繰返し単位のような部分、ならびにコハク酸塩、スクシンアミド、ジグリコール酸塩、マロン酸塩、およびカプロアミドを含む二酸エステルおよびアミドが挙げられる。例えば、様々なＰＥＧを含有するリンカーは、当該技術分野に知られており、（例えばＢｒｏａｄＰｈａｒｍ（ｂｒｏａｄｐｈａｒｍ．ｃｏｍ）から）市販されている。例示的なＰＥＧを含有するリンカーとして、Ｍａｌ－ＰＥＧ２－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＯＨ（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍカタログ番号ＢＰ－２３２０３）、Ｍａｌ－ＰＥＧ４－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＯＨ（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍカタログ番号ＢＰ－２３２０４）、Ｍａｌ－ＰＥＧ４－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰ（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍカタログ番号ＢＰ－２３６６８）、Ｍａｌ－ａｍｉｄｏ－ＰＥＧ２－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰ（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍカタログ番号ＢＰ－２３６７５）、アジド－ＰＥＧ３－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＯＨ（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍカタログ番号ＢＰ－２３２０６）、アジド－ＰＥＧ４－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＯＨ（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍカタログ番号ＢＰ－２３２０７）、アジド－ＰＥＧ３－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰ（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍカタログ番号ＢＰ－２３３６８）、Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ４－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ＰＡＢ（ＢＰ－２３３２８）、アジド－ＰＥＧ５－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ－ＰＡＢ（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍカタログ番号ＢＰ－２３３２９）、Ｆｍｏｃ－ＰＥＧ３－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＰＡＢ（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍカタログ番号ＢＰ－２３２８５）、アジド－ＰＥＧ４－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＰＡＢ（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍカタログ番号ＢＰ－２３２８４）、およびＦｍｏｃ－ＰＥＧ３－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＰＡＢ－ＰＮＰ（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍカタログ番号ＢＰ－２３２９７）が挙げられる。いくつかの実施形態において、ＴＤＣリンカーは、ＰＥＧおよびペプチド、例えば、Ｖａｌ－Ｃｉｔのような本節に記載されているジペプチドの１つを含む。
リンカーは、ストレッチャーおよびスペーサー部分のような１つまたは複数のリンカー成分を含み得る。例えば、ペプチジルリンカーは、２つ以上のアミノ酸、ならびに、任意で１つまたは複数のストレッチャーおよび／またはスペーサー部分のペプチジル成分を含むことができる。様々なリンカー成分は、当該技術分野に知られており、そのいくつかは、以下に記載する。
リンカーは、細胞内の薬物の放出を促進する「切断性リンカー」であり得る。例えば、酸不安定リンカー（例としてヒドラゾン）、プロテアーゼ感受性（例としてペプチターゼ感受性）リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Chari et al., 1992, Cancer Research 52:127-131、米国特許第５，２０８，０２０号明細書）を、使用することができる。
当該技術分野に公知のリンカーおよびリンカー成分の例として、マレイミドカプロイル（ｍｃ）；マレイミドカプロイル－ｐ－アミノベンジルカルバメート；マレイミドカプロイル－ペプチド－アミノベンジルカルバメートリンカー、例えば、マレイミドカプロイル－Ｌ－フェニルアラニン－Ｌ－リジン－ｐ－アミノベンジルカルバメート、およびマレイミドカプロイル－Ｌ－バリン－Ｌ－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメート（ｖｃ）；Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロプリオネート（Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ペンタノエートまたはＳＰＰとしても知られる）；４－スクシンイミジル－オキシカルボニル－２－メチル－２－（２－ピリジルジチオ）－トルエン（ＳＭＰＴ）；Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）；Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ブチレート（ＳＰＤＢ）；２－イミノチオラン；Ｓ－アセチル無水コハク酸；ジスルフィドベンジルカルバメート；カルボネート；ヒドラゾンリンカー；Ｎ－（α－マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステル；Ｎ－［４－（ｐ－アジドサリチルアミド）ブチル］－３’－（２’－ピリジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＭＡＳ）；Ｎ［β－マレイミドプロピルオキシ］スクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）；［Ｎ－ε－マレイミドカプロイルオキシ］スクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）；Ｎ－［γ－マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）；スクシンイミジル－４－［Ｎ－マレイミドメチル］シクロヘキサン－１－カルボキシ－［６－アミドカプロエート］（ＬＣ－ＳＭＣＣ）；スクシンイミジル６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサノエート（ＬＣ－ＳＰＤＰ）；ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）；Ｎ－スクシンイミジル［４－ヨードアセチル］アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）；スクシンイミジル４－［Ｎ－マレイミドメチル］シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）；Ｎ－スクシンイミジル３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド（ＳＰＤＰ）；［Ｎ－ε－マレイミドカプロイルオキシ］スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＥＭＣＳ）；Ｎ－［γ－マレイミドブチリルオキシ］スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＧＭＢＳ）；４－スルホスクシンイミジル－６－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサノエート－）（スルホ－ＬＣ－ＳＭＰＴ）；スルホスクシンイミジル６－（３’－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサノエート（スルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰ）；ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＭＢＳ）；Ｎ－スルホスクシンイミジル［４－ヨードアセチル］アミノベンゾエート（スルホ－ＳＩＡＢ）；スルホスクシンイミジル４－［Ｎ－マレイミドメチル］シクロヘキサン－１－カルボキシレート（スルホ－ＳＭＣＣ）；スルホスクシンイミジル４－［ｐ－マレイミドフェニル］ブチレート（スルホ－ＳＭＰＢ）；エチレングリコール－ビス（コハク酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）（ＥＧＳ）；ジスクシンイミジルタルトレート（ＤＳＴ）；１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）；ジエチレントリアミン－五酢酸（ＤＴＰＡ）；チオ尿素リンカー；およびオキシム含有リンカーが挙げられる。
いくつかの実施形態において、リンカーは、細胞内または細胞外の条件下で切断可能であるので、リンカーの切断により、適切な環境において標的化部分からＡＬＫ５阻害剤が放出される。さらに他の実施形態において、リンカーは、切断可能ではなく、薬物は、例えばリソソームでの標的化部分の分解により放出される（米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号明細書を参照し、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
本開示のＴＤＣで使用することができる非切断性リンカーの例として、Ｎ－マレイミドメチルシクロヘキサン１－カルボキシレート、マレイミドカプロイル、またはメルカプトアセトアミドカプロイルリンカーが挙げられる。
いくつかの実施形態において、リンカーは、細胞内環境（例えば、リソソームもしくはエンドソーム、またはカベオラ内）に存在する切断剤により切断可能である。リンカーは、例えば、限定されないが、リソソームまたはエンドソームプロテアーゼを含む、細胞内ペプチターゼまたはプロテアーゼ酵素により切断されるペプチジルリンカーであり得る。いくつかの実施形態において、ペプチジルリンカーは、少なくとも２アミノ酸長、または少なくとも３アミノ酸長、またはそれ以上である、ペプチジル成分を含む。
切断剤は、限定されないが、カテプシンＢおよびＤ、およびプラスミンを含み得るが、これらの全ては、標的細胞内で活性薬物を放出するジペプチド薬物誘導体を加水分解することが知られている（例えば、Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123を参照）。例えば、ペプチジルリンカーは、チオール依存性プロテアーゼカテプシンＢ（例えば、Ｐｈｅ－Ｌｅｕ、またはＧｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙリンカー）により切断可能である。このようなリンカーの他の例は、例えば、米国特許第６，２１４，３４５号明細書に記載されており、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態において、細胞内プロテアーゼにより切断可能であるペプチジルリンカーは、Ｖａｌ－ＣｉｔリンカーまたはＰｈｅ－Ｌｙｓリンカーである（例えば、ｖａｌ－ｃｉｔリンカーでのドキソルビシンの合成を記載する、米国特許第６，２１４，３４５号明細書を参照）。
他の実施形態において、切断性リンカーは、ｐＨ感受性、すなわち、ある特定のｐＨ値での加水分解に感受性がある。典型的には、ｐＨ感受性リンカーは、酸性条件下で加水分解可能である。例えば、リソソームに加水分解可能である、酸不安定リンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、ｃｉｓ－アコニット酸アミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）を、使用することができる（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号明細書、米国特許第５，８２４，８０５号明細書、米国特許第５，６２２，９２９号明細書、Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123、Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661を参照）。このようなリンカーは、血液中のような中性ｐＨ条件下で比較的安定であるが、リソソームのｐＨに近いｐＨ５．５または５．０未満で不安定である。ある特定の実施形態において、加水分解性リンカーは、チオエーテルリンカー（例えば、アシルヒドラゾン結合を介して治療剤と結合するチオエーテル）である（例えば、米国特許第５，６２２，９２９号明細書を参照）。
さらに他の実施形態において、リンカーは、還元条件下で切断可能である（例えば、ジスルフィドリンカー）。様々なジスルフィドリンカーは、当該技術分野に知られており、例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ－スクシンイミジル－５－アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ））ブチレート）、およびＳＭＰＴ（Ｎ－スクシンイミジル－オキシカルボニル－アルファ－メチル－アルファ－（２－ピリジル－ジチオ）－トルエン）－、ＳＰＤＢ、ならびにＳＭＰＴを使用して形成することができるものを含む。（例えば、Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931、Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987を参照。また米国特許第４，８８０，９３５号明細書も参照）
他の実施形態において、リンカーは、マロン酸リンカー（Johnson et al., 1995, Anticancer Res. 15:1387-93）、マレイミドベンゾイルリンカー（Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1299-1304）、または３’－Ｎ－アミド類似体（Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1305-12）である。
いくつかの実施形態において、リンカーは、多くの薬物分子を単一の標的化部分の分子（例えば単一の抗体分子）に連結するのに使用することができる多価リンカーである。例えば、Ｍｅｒｓａｎａにより開発されたＦｌｅｘｉｍｅｒリンカー技術は、エステル結合の配列を介して、薬物分子を可溶化したポリアセタールバックボーンに組み込むことに基づいている。方法は、良好な物理化学特性を維持しながら、負荷の高いＴＤＣ（例えば、最大２０の薬物抗体比（ＤＡＲ）を有する）を可能にする。例示的な多価リンカーは、例えば、国際公開第２００９／０７３４４５号パンフレット、国際公開第２０１０／０６８７９５号パンフレット、国際公開第２０１０／１３８７１９号パンフレット、国際公開第２０１１／１２００５３号パンフレット、国際公開第２０１１／１７１０２０号パンフレット、国際公開第２０１３／０９６９０１号パンフレット、国際公開第２０１４／００８３７５号パンフレット、国際公開第２０１４／０９３３７９号パンフレット、国際公開第２０１４／０９３３９４号パンフレット、および国際公開第２０１４／０９３６４０号パンフレットに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
多くの場合、リンカーは、細胞外環境に実質的に感受性ではない。本明細書で使用される場合、リンカーの文脈における「細胞外環境に実質的に感受性ではない」とは、ＴＤＣのサンプルにおいて約２０％以下、１５％、１０％、５％、３％、または約１％以下のリンカーが、ＴＤＣが細胞外環境（例えば血漿）に存在する場合に切断されることを意味する。
リンカーが細胞外環境に実質的に感受性ではないかどうかは、例えば、血漿でＴＤＣを所定の時間（例えば２、４、８、１６、または２４時間）インキュベートし、次いで血漿に存在する遊離薬物の量を定量化することにより決定することができる。
互いに排他的ではない他の実施形態において、リンカーは、細胞内在化を促進することができる。ある特定の実施形態において、リンカーは、治療剤と複合体化する場合（すなわち、本明細書に記載されるＴＤＣのリンカー－治療剤部分の環境において）、細胞内在化を促進する。さらに他の実施形態において、リンカーは、ＡＬＫ５阻害剤および抗体の両方と複合体化する場合に細胞内在化を促進する。
多くの実施形態において、リンカーは、自己犠牲型である。本明細書で使用される場合、用語「自己犠牲」とは、間隔をあけた２つの化学部分と共有結合させて安定な三連分子にすることができる二官能化学部分を指す。それは、第一の部分へのその結合が切断される場合、第二の化学部分から自発的に分離する。例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２００７／０５９４０４号パンフレット、国際公開第２００６／１１０４７６号パンフレット、国際公開第２００５／１１２９１９号パンフレット、国際公開第２０１０／０６２１７１号パンフレット、国際公開第２００９／０１７３９４号パンフレット、国際公開第２００７／０８９１４９号パンフレット、国際公開第２００７／０１８４３１号パンフレット、国際公開第２００４／０４３４９３号パンフレット、および国際公開第２００２／０８３１８０号パンフレットを参照し、これらは、薬物および切断性物質が任意で自己犠牲リンカーを通して連結する、薬物－切断性物質複合体を対象とし、その全てが明白に参照により組み込まれる。自己犠牲リンカーを生成するのに使用することができる自己犠牲スペーサー単位の例は、以下の式に記載される。
本組成物および方法で使用することができる様々な例示的なリンカーは、ＰＣＴ公開の国際公開第２００４／０１０９５７号パンフレット、米国特許出願公開第２００６／００７４００８号明細書、米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号明細書、および米国特許出願公開第２００６／００２４３１７号明細書に記載される（その各々は、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
本開示のＴＤＣは、以下の式Ｉであり得、抗体または他の標的化部分（式Ｉにおいて「Ａｂ」と示す）は、任意のリンカー（Ｌ）を通して１つまたは複数のＡＬＫ５阻害剤の薬物部分（Ｄ）と複合体化する。
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｐ Ｉ
したがって、標的化部分は、直接的に、またはリンカーを介してのいずれかで、薬物と複合体化することができる。式Ｉにおいて、ｐは、標的化部分当たりの薬物（すなわちＡＬＫ５阻害剤）部分の平均数であり、これは、例えば、標的化部分当たり約１から約２０個の薬物部分の範囲であり得、ある特定の実施形態においては、標的化部分当たり２から約８個の薬物部分であり得る。薬物負荷のさらなる詳細は、以下の第５．５節に記載される。
いくつかの実施形態において、リンカー成分は、例えばシステイン残基を介して、別のリンカー成分または薬物部分に標的化部分を連結する、「ストレッチャー」を含み得る。例示的なストレッチャーは、以下に示される（式中、左の波線は、標的化部分への共有結合の部位を示し、右の波線は、別のリンカー成分または薬物部分への共有結合の部位を示す）。
Figure 2023509760000031
米国特許第９，１０９，０３５号明細書、Ducry et al., 2010, Bioconjugate Chem. 21:5-13を参照。
いくつかの実施形態において、リンカー成分は、アミノ酸単位を含み得る。このような一実施形態において、アミノ酸単位は、プロテアーゼによりリンカーを切断することができ、それにより、リソソーム酵素のような細胞内プロテアーゼに曝露すると、ＴＤＣからの薬物の放出を促進する。例えば、Doronina et al., 2003, Nat. Biotechnol. 21:778-784を参照。例示的なアミノ酸単位として、限定されないが、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、およびペンタペプチドが挙げられる。例示的なジペプチドとして、バリン－シトルリン（ＶＣもしくはｖａｌ－ｃｉｔ）、アラニン－フェニルアラニン（ＡＦもしくはａｌａ－ｐｈｅ）、フェニルアラニン－リジン（ＦＫまたはｐｈｅ－ｌｙｓ）、またはＮ－メチル－バリン－シトルリン（Ｍｅ－ｖａｌ－ｃｉｔ）が挙げられる。トリペプチドの例として、グリシン－バリン－シトルリン（ｇｌｙ－ｖａｌ－ｃｉｔ）、およびグリシン－グリシン－グリシン（ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｇｌｙ）が挙げられる。例示的なテトラペプチドとして、グリシン－グリシン－フェニルアラニン－グリシン（ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｐｈｅ－ｇｌｙ）が挙げられる。アミノ酸単位は、天然に生じるアミノ酸残基、ならびに少数のアミノ酸、および非天然アミノ酸類似体を含み得、例えば、シトルリンアミノ酸単位が、特定の酵素、例えばカテプシンＢ、Ｃ、およびＤ、またはプラスミンプロテアーゼにより、酵素切断に対する選択において設計し最適化することができる。
いくつかの実施形態において、リンカー成分は、直接的に、またはストレッチャーおよび／もしくはアミノ酸単位のいずれかにより、標的化部分を薬物部分に連結する、「スペーサー」単位を有し得る。スペーサー単位は、「自己犠牲」または「非自己犠牲」であり得る。「非自己犠牲」スペーサー単位は、一部または全てのスペーサー単位がＴＤＣの酵素（例えばプロテアーゼ）切断時に薬物部分に結合し続けるものである。非自己犠牲スペーサー単位の例として、限定されないが、グリシンスペーサー単位およびグリシン－グリシンスペーサー単位が挙げられる。「自己犠牲」スペーサー単位は、別個の加水分解ステップを行わずに、薬物部分の放出が可能である。ある特定の実施形態において、リンカーのスペーサー単位は、ｐ－アミノベンジル単位を含む。このような一実施形態において、ｐ－アミノベンジルアルコールは、アミド結合を介してアミノ酸単位と結合し、カルバミン酸塩、メチルカルバミン酸塩、または炭酸塩は、ベンジルアルコールと細胞毒性剤との間で作製される。例えば、Hamann et al., 2005, Expert Opin. Ther. Patents 15:1087-1103を参照。一実施形態において、スペーサー単位は、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）である。ある特定の実施形態において、ｐ－アミノベンジル単位のフェニレン部分は、Ｑｍで置換され、ここでＱは、－Ｃ１～Ｃ８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ８アルキル）、－ハロゲン、－ニトロ、または－シアノであり、ｍは、０～４の範囲の整数である。自己犠牲スペーサー単位の例として、限定されないが、ｐ－アミノベンジルアルコールと電子的に類似する芳香族化合物（例えば、米国特許出願公開第２００５／０２５６０３０号明細書を参照）、例えば２－アミノイミダゾール－５－メタノール誘導体（Hay et al., 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237）、およびオルト－またはパラ－アミノベンジルアセタールがさらに挙げられる。置換および非置換４－アミノ酪酸アミド（Rodrigues et al., 1995, Chemistry Biology 2:223）、適切に置換したビシクロ［２．２．１］およびビシクロ［２．２．２］環系（Storm et al., 1972, Amer. Chem. Soc. 94:5815）、ならびに２－アミノフェニルプロピオン酸アミド（Amsberry et al., 1990, J. Org. Chem. 55:5867）のような、アミド結合の加水分解時に環形成を行うスペーサーを使用することができる。グリシンのａ位置で置換されるアミン含有薬物の排除（Kingsbury et al., 1984, J. Med. Chem. 27:1447）もまた、ＴＤＣに有用な自己犠牲スペーサーの例である。
一実施形態において、スペーサー単位は、以下に記載される分岐ビス（ヒドロキシメチル）スチレン（ＢＨＭＳ）単位であり、これを使用して組み込み、複数の薬物を放出することができる。
Figure 2023509760000032
（式中、ＡｂおよびＤは、式Ｉについて上記で定義されており、Ａは、ストレッチャーであり、ａは、０から１の範囲の整数であり、Ｗは、アミノ酸単位であり、ｗは、０から１２の範囲の整数であり、Ｑは、－Ｃ１～Ｃ８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ８アルキル）、－ハロゲン、－ニトロ、または－シアノであり、ｍは、０～４の範囲の整数であり、ｎは、０または１であり、ｐは、１から約２０の範囲である）
リンカーは、上記のリンカー成分の任意の１つまたは複数を含み得る。ある特定の実施形態において、リンカーは、以下のＴＤＣの式において、括弧内に示される：
Ａｂ－（－［Ａａ－Ｗｗ－Ｙｙ］－Ｄ）ｐ ＩＩ
（式中、Ａｂ、Ａ、ａ、Ｗ、ｗ、Ｄ、およびｐは、先の段落で定義されており、Ｙは、スペーサー単位であり、ｙは、０、１、または２である）。このようなリンカーの例示的な実施形態は、米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号明細書に記載され、それは、参照により本明細書に組み込まれる。
例示的なリンカー成分およびその組合せは、式ＩＩのＴＤＣの文脈で下記に示される：
Figure 2023509760000033
ストレッチャー、スペーサー、およびアミノ酸単位を含む、リンカー成分は、当該技術分野に公知の方法、例えば米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号明細書に記載されるものにより合成することができる。
５．５．薬物負荷
薬物負荷は、ｐで表され、分子中の標的化部分当たり（例えば抗体当たり）のＡＬＫ５阻害剤部分の平均数である。平均数は、多くの場合、分数または小数であるが、薬物負荷（「ｐ」）は、標的化部分当たり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上の部分（Ｄ）であり得る。一般に、ＡＬＫ５阻害剤負荷は、平均すると標的化部分当たり２から８個の薬物部分、より好ましくは抗体当たり２から４個の薬物部分、または標的化部分当たり５から７個の薬物部分となる。
当業者に理解される通り、多くの例において、ＴＤＣに対する言及は、（ときに医薬組成物の文脈において）ＴＤＣ分子の集団または集合の省略表現であり、各分子は、１つまたは複数のＡＬＫ５阻害剤部分に共有結合した標的化部分からなり、個別の分子基部での比が集団においてＴＤＣ分子ごとに変化し得るが、薬物負荷比は、集団または集合の平均薬物負荷を表す。いくつかの実施形態において、集団または集合は、１～３０個の薬物部分のいずれの場所に、いくつかの実施形態においては１～２０個、１～１５個、２～１２個、２～８個、４～１５個、または６～１２個の薬物部分のいずれかの場所に共有結合する抗体を含む、ＴＤＣ分子を含有する。好ましくは、集団における平均は、先の段落に記載されており、例えば、標的化部分当たり２～８個の薬物部分、より好ましくは標的化部分当たり４～８個の薬物部分、または標的化部分当たり５～７個の薬物部分である。
いくつかのＴＤＣ集団は、本明細書に記載されるＴＤＣを含む組成物、および薬物部分が欠如する標的化部分分子、例えば、ＡＬＫ５阻害剤との結合が失敗する抗体の形態であり得る。
複合体化反応からのＴＤＣの調製における、標的化部分当たりのＡＬＫ５阻害剤部分の平均数は、質量分光法、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、およびＥＬＩＳＡアッセイのような従来の手段により特徴付けられ得る。
ｐに関してＴＤＣの定量分配もまた決定することができる。いくつかの例において、均一なＴＤＣの分離、精製、および特徴付けは、ｐが他のＡＬＫ５阻害剤負荷を伴うＴＤＣからのある特定の値であるが、電気泳動のような手段により達成することができる。
いくつかの薬物複合体に対して、ｐは、標的化部分上の結合部位の数により限定され得る。例えば、結合が、システインチオールである場合、上記の例示的な実施形態において、標的化部分（例えば、抗体）は、１つもしくは複数のシステインチオール基のみを有し得るか、または、リンカーを結合させることができる、十分な反応性の１つもしくは複数のチオール基のみを有し得る。ある特定の実施形態において、より高い薬物負荷、例えばｐ＞５では、ある特定の薬物複合体の凝集、不溶性、毒性、または細胞浸透性の低下が起こり得る。ある特定の実施形態において、本開示のＴＤＣに対する薬物負荷は、１～約８、約２～約６、約３～約５、約３～約４、約３．１～約３．９、約３．２～約３．８、約３．２～約３．７、約３．２～約３．６、約３．３～約３．８、または約３．３～約３．７の範囲である。実際に、ある特定のＴＤＣに対して、抗体当たりの薬物部分の最適比が、８未満であり得、約２～約５であり得ることが示されている。米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号明細書（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照。
ある特定の実施形態において、理論上の最大値未満の薬物部分は、複合体化反応の間、標的化部分に複合体化する。標的化部分は、例えば、以下で論ずる通り、薬物－リンカー中間体またはリンカー試薬と反応しない、リジン残基を含有し得る。一般に、抗体は、薬物部分に連結することができる多くの遊離性反応性システインチオール基を含有せず、実際に、抗体内の多くのシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある特定の実施形態において、抗体または他の標的化部分を、部分的または全体的な還元条件下、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）のような還元化剤で還元して、反応性システインチオール基を生成することができる。ある特定の実施形態において、抗体または他の標的化部分を変性条件にさらして、リジンまたはシステインのような反応性求核性基を現す。
ＴＤＣの負荷（薬物／抗体比）は、例えば、（ｉ）標的化部分に対する薬物－リンカー中間体またはリンカー試薬のモル過剰を制限すること、（ｉｉ）複合体化反応の時間または温度を制限すること、（ｉｉｉ）システインチオール修飾に対する部分的な還元条件または還元条件を制限すること、（ｉｖ）システイン残基の数および位置を、リンカー－薬物結合（例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２００６／０３４４８８号パンフレット（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されるようなチオＭａｂまたはチオＦａｂ）の数および／または位置を制御するために修飾するように、組換え技術により標的化部分のアミノ酸配列を操作することによる、様々な手法で制御することができる。
２つ以上の求核性基が、薬物－リンカー中間体またはリンカー試薬と反応し、続いて薬物部分試薬と反応する場合、次いで、得られる生成物が、標的化部分に結合した１つまたは複数の薬物部分の分布を有するＴＤＣ化合物の混合物であることは理解すべきである。標的化部分当たりの薬物の平均数は、デュアルＥＬＩＳＡ抗体アッセイにより混合物から計算することができ、これは、標的化部分に特異的であり、薬物に特異的である。個別のＴＤＣ分子は、質量分光法により混合物内で同定され、ＨＰＬＣ、例えば疎水性相互作用クロマトグラフィーにより分離され得る。
いくつかの実施形態において、単一の負荷値を有する均一なＴＤＣは、電気泳動またはクロマトグラフィーにより複合混合物から単離することができる。
５．６．製剤および投与
ＴＤＣの投与の好適な経路として、限定されないが、経口、非経口、直腸、経粘膜、腸内投与、髄内、鞘内、直接心室内、静脈内、硝子体内、体腔内、腹腔内、または腫瘍内注射が挙げられる。投与の好ましい経路は、非経口であり、より好ましいのは静脈内である。あるいは、１つは、全身ではなく局所的な方法において、例えば、線維症により影響を受けた領域への化合物の直接的な注射を介して、または充実性腫瘍への化合物の直接的な注射を介して、化合物を投与してもよい。
免疫複合体は、薬学的に有用な組成物を調製する公知の方法にしたがって製剤化することができ、それにより、ＴＤＣは、混合物を薬学的に有用な添加剤と組み合わせる。滅菌性のリン酸緩衝生理食塩水は、薬学的に有用な添加剤の一例である。他の有用な添加剤は、当業者に周知されている。例えば、Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms And Drug Delivery Systems, 5th Edition (Lea & Febiger 1990)、およびGennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (Mack Publishing Company 1990)、ならびにその改訂版を参照。
好ましい実施形態において、ＴＤＣは、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）；Ｎ－（２－アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）；Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）；４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）；２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）；３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）；３－（Ｎ－モルホリニル）－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）；およびピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）［Ｐｉｐｅｓ］からなる群から選択される緩衝液を使用して、Ｇｏｏｄの生物学的緩衝液（ｐＨ６～７）で製剤化される。より好ましい緩衝液は、好ましくは２０～１００ｍＭの範囲、より好ましくは約２５ｍＭの濃度でのＭＥＳまたはＭＯＰＳである。最も好ましいのは、ｐＨ６．５での２５ｍＭのＭＥＳである。製剤は、添加剤として２５ｍＭのトレハロース、および０．０１％ｖ／ｖのポリソルベート８０をさらに含み、添加した添加剤の結果として、最終緩衝液濃度が２２．２５ｍＭに調整される。保管の好ましい方法は、２℃～８℃での最も好ましい保管で、－２０℃～２℃の範囲の温度で保管される、複合体の凍結乾燥製剤としてである。
ＴＤＣは、例えば、ボーラス注射、緩慢な注入、または連続注入を介して、静脈内投与用に製剤化することができる。好ましくは、ＴＤＣは、約４時間未満、より好ましくは約３時間未満にわたって注入される。例えば、最初の２５～５０ｍｇは、３０分以内、好ましくは１５分ちょうどで注入し、残りは、次の２～３時間にわたって注入する。注射用の製剤は、添加した保存剤を伴う単位剤形で、例えば、アンプルまたは多用量容器で提供され得る。組成物は、油性または水性のビヒクル中の懸濁液、溶液、または乳剤のような形態を取り得、懸濁化剤、安定化剤、および／または分散化剤のような製剤化剤を含有することができる。あるいは、有効成分は、使用前に、好適なビヒクル、例えば滅菌性のパイロジェンを含まない水で構成するための粉末形態であり得る。
さらなる薬学的な方法を利用して、ＴＤＣの作用の期間を制御することができる。制御放出の調製物は、ＴＤＣを錯体にするかまたは吸着するポリマーの使用を通して調製することができる。例えば、生体適合性ポリマーとして、ポリ（エチレン－ｃｏ－酢酸ビニル）のマトリックス、およびステアリン酸二量体およびセバシン酸のポリ無水物コポリマーのマトリックスが挙げられる。Sherwood et al., 1992, Bio/Technology 10:1446。このようなマトリックスからのＴＤＣの放出速度は、ＴＤＣの分子量、マトリックス内のＴＤＣの量、および分散粒子のサイズに依存する。Saltzman et al., 1989, Biophys. J. 55:163、Sherwood et al.、上記参照。他の固体剤形は、Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms And Drug Delivery Systems, 5th Edition (Lea & Febiger 1990)、およびGennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (Mack Publishing Company 1990)、ならびにその改訂版に記載されている。
一般に、ヒトに投与されるＴＤＣの投与量は、患者の年齢、体重、身長、性別、全身の健康状態、および過去の病歴のような因子によって異なる。約０．３ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇの範囲の投与量のＴＤＣを単回の静脈内注入としてレシピエントに提供することが望ましい場合があるが、状況に応じてこれよりも低い投与量または高い投与量が投与される場合もある。例えば、７０ｋｇの患者に対する０．３～５ｍｇ／ｋｇの投与量は、２１～３５０ｍｇであり、これは１．７ｍの患者に対する１２～２０６ｍｇ／ｍ２の投与量でもある。投与量は、必要に応じて、例えば、２～１０週間にわたり週に１回、８週間にわたり週に１回、または４週間にわたり週に１回、繰り返すことができる。維持療法で必要に応じて、より少ない頻度で、例えば、数か月間にわたり１週おきに、または数か月間にわたり月に１回もしくは３か月に１回、与えることもできる。好ましい投与量として、限定されないが、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、および５．０ｍｇ／ｋｇが挙げられ得る。より好ましい投与量は、１週間の投与に対して０．６ｍｇ／ｋｇであり、より低い頻度での投与に対しては１．２ｍｇ／ｋｇである。０．３～５ｍｇ／ｋｇの範囲の任意の量を使用することができる。投与量は、好ましくは、１週間に１回、複数回投与される。４週間、より好ましくは８週間、より好ましくは１６週間、またはそれより長い期間の最小投与量のスケジュールを使用することができ、その投与頻度は、血液毒性に最も関連する、有害な副作用およびそれからの回復に依存する。投与のスケジュールは、例えば、（ｉ）週に１回；（ｉｉ）１週おき；（ｉｉｉ）１週間の療法と、続く２週間、３週間、または４週間の休止；（ｉｖ）２週間の療法と、続く１週間、２週間、３週間、または４週間の休止；（ｖ）３週間の療法と、続く１週間、２週間、３週間、４週間、または５週間の休止；（ｖｉ）４週間の療法と、続く１週間、２週間、３週間、４週間、または５週間の休止；（ｖｉｉ）５週間の療法と、続く１週間、２週間、３週間、４週間、または５週間の休止；および（ｖｉｉｉ）月に１回からなる群から選択されるサイクルでの、週に１回または２回の投与を含み得る。サイクルは、２回、４回、６回、８回、１０回、または１２回、またはそれ以上繰り返すことができる。
あるいは、ＴＤＣは、２週または３週ごとに１投与量で、合計で少なくとも３投与量を繰り返して、投与することができる。または、４～６週間にわたり、週に２回である。投与量は、１週おきに１回、またはさらにより低い頻度で投与することができるので、患者は、いかなる薬物関連毒性からも回復することができる。あるいは、投与量スケジュールは、短縮することができる、すなわち、２～３か月間にわたり２週または３週ごとである。投与スケジュールは、任意で、他の間隔で繰り返すこともでき、投与量は、用量およびスケジュールを適切に調節することで、様々な非経口経路を通して投与することができる。
５．７．処置の方法
５．７．１．線維症
本開示のＴＤＣは、様々な線維性の状態、例えば全身性硬化症に関連する線維症（強皮症としても知られる）またはＮＡＳＨの処置に使用することができる。全身性硬化症の患者は、多くの場合、肺線維症、皮膚線維症、および食道線維症に苦しむが、線維症は、実質的にはいかなる臓器でも起こり得る。ＮＡＳＨの患者は、多くの場合、肝線維症に苦しむ。ＴＤＣは、例えば、標準ケアの薬剤またはレジメンで、単独療法として、または併用療法レジメンの一部として使用することができる。いくつかの実施形態において、併用療法は、ピルフェニドン、ニンテダニブ、ペントラキシン－２、パムレブルマブ、プレドニゾン、コルチゾン、シクロホスファミド、アザチオプリン、またはそれらの組合せと組み合わせて、ＴＤＣを投与することを含む。いくつかの実施形態において、併用療法は、ピルフェニドンおよび／またはニンテダニブと組み合わせて、ＴＤＣを投与することを含む。
本開示のＴＤＣを使用して処置することができる状態の例として、限定されないが、肺線維症、例えばＩＰＦ、肝線維症、例えばＮＡＳＨに関連する肝線維症、腎線維症、心臓線維症、皮膚線維症、食道線維症、および全身性硬化症が挙げられる。本開示のＴＤＣは、線維症の徴候および／または症状を発症する前に、線維症に関連する疾患、例えば全身性硬化症、またはＮＡＳＨを有する、例えばこれらと診断された対象に投与することができる。あるいは、または加えて、ＴＤＣは、線維症の徴候および／または症状が観察される後に、線維症に関連する疾患を有する、例えばこれと診断された対象に投与することができる。
１つまたは複数の療法と組み合わせる本開示のＴＤＣの使用は、療法を投与する順番を制限しない。例えば、本開示のＴＤＣは、対象が１つまたは複数の療法で処置される前、処置される間、または処置した後に投与することができる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣは、別の療法（例えば上述の第２の治療剤）での患者の処置の前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もしくは１２週間前）、処置と同時に、または処置に続いて（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もしくは１２週間後）、投与される。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣは、第２の治療剤として同じレジメンに組み込まれる。
５．７．２．がん
本開示のＴＤＣ（例えば、ＦＡＰを標的化したＴＤＣ）は、様々ながんの処置に使用することができる。ＴＤＣは、例えば、標準ケアの薬剤またはレジメンで、単独療法として、または併用療法レジメンの一部として使用することができる。いくつかの実施形態において、併用療法は、免疫療法、例えばチェックポイント阻害剤療法、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法、養子Ｔ細胞療法（例として自己Ｔ細胞療法）、腫瘍溶解性ウイルス療法、樹状細胞ワクチン療法、インターフェロン遺伝子の刺激物質（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト療法、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト療法、腫瘍内ＣｐＧ療法、サイトカイン療法（例としてＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＦＮ－α、もしくはＩＮＦ－γ療法）、またはそれらの組合せと組み合わせて、ＴＤＣを投与することを含む。いくつかの実施形態において、併用療法は、細胞毒性ペイロードを有するＡＤＣ、例えばＯＭＴＸ７０５（Ｏｎｃｏｍａｔｒｙｘ）のようなＦＡＰ標的化ＡＤＣと組み合わせて、ＴＤＣを投与することを含む。いくつかの実施形態において、併用療法は、免疫保存化学療法（例えば、５－フルオロウラシル、ゲムシタビン、もしくはメトトレキセートのような代謝拮抗物質、シクロホスファミド、ダカルバジン、メクロレタミン、ジアジコン、もしくはテモゾロマイドのようなアルキル化剤、ドキソルビシンもしくはエピルビシンのようなアントラサイクリン、ビンブラスチンのような抗微小管剤、シスプラチンもしくはオキサリプラチンのような白金化合物、パクリタキセルもしくはドセタキセルのようなタキサン、または、エトポシドもしくはミトキサントロンのようなトポイソメラーゼ阻害剤、または、ビンクリスチンのようなビンカアルカロイド）と組み合わせて、ＴＤＣを投与することを含む。
本開示のＴＤＣを使用して処置することができるがんの例として、限定されないが、尿路上皮がん（例えば膀胱がん、尿道がん、および尿管がん）、肺がん（例えば腺癌、扁平上皮細胞癌、大細胞癌のような非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、および小細胞肺がん）、乳がん、結腸直腸がん（例えば腺癌、カルチノイド腫瘍、消化管間質性腫瘍、および結腸直腸リンパ腫）、膵がん、前立腺がん、ならびに食道がんが挙げられる。本開示のＴＤＣで処置することができるがんの他の例として、頭頚部がん、卵巣がん、腎がん、および胃腺癌が挙げられる。
本開示のＴＤＣは、チェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、ＯＸ４０、ＣＤ４０、またはＶＩＳＴＡを標的化するチェックポイント阻害剤と組み合わせて使用することができる。チェックポイント阻害剤は、抗体および小分子を含む。ＰＤ１を標的化する例示的なチェックポイント阻害剤として、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、およびドスタルリマブが挙げられる。ＰＤＬ１を標的化する例示的なチェックポイント阻害剤として、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ－１００１、およびＢＭＳ－１１６６が挙げられる。ＣＴＬＡ４を標的化する例示的なチェックポイント阻害剤は、イピリムマブである。ＴＩＧＩＴを標的化する例示的なチェックポイント阻害剤として、エチギリマブ（etigilimab）、チラゴルマブ（tiragolumab）、およびＡＢ１５４が挙げられる。ＬＡＧ３を標的化する例示的なチェックポイント阻害剤として、ＬＡＧ５２５、Ｓｙｍ０２２、レラトリマブ（relatlimab）およびＴＳＲ－０３３が挙げられる。ＯＸ４０を標的化する例示的なチェックポイント阻害剤として、ＭＥＤＩ６４６９、ＰＦ－０４５１８６００、およびＢＭＳ ９８６１７８が挙げられる。ＣＤ４０を標的化する例示的なチェックポイント阻害剤として、セリクレルマブ（selicrelumab）、ＣＰ－８７０，８９３、およびＡＰＸ００５Ｍが挙げられる。ＶＩＳＴＡを標的化する例示的なチェックポイント阻害剤は、ＨＭＢＤ－００２である。尿路上皮がんの処置のために、本開示のＴＤＣは、シスプラチン、マイトマイシンＣ、カルボプラチン、ドセタキセル、パクリタキセル、ドキソルビシン、５－ＦＵ、メトトレキセート、ビンブラスチン、イホスファミド、およびペメトレキセドを含むが、限定されない標準ケアの処置と組み合わせて使用することができる。加えて、ＴＤＣは、イピリムマブのようなチェックポイント阻害剤と組み合わせて使用することができる。
非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）の処置のために、本開示のＴＤＣは、含まれるシスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、ビノレルビン、イリノテカン、エトポシド、またはビンブラスチンのような標準ケアの化学療法の処置と組み合わせて使用することができる。加えて、ＴＤＣは、ベバシズマブまたはＥｒｂｉｔｕｘのような標的療法と組み合わせて使用することができる。加えて、ＴＤＣは、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、またはイピリムマブなどのチェックポイント阻害剤と組み合わせて使用することができる。
乳がんの処置のために、本開示のＴＤＣは、アントラサイクリン（ドキソルビシンまたはエピルビシン）、およびタキサン（パクリタキセルまたはドセタキセル）、ならびにフルオロウラシル、シクロホスファミド、およびカルボプラチンのような標準ケアの化学療法剤と組み合わせて使用することができる。加えて、本開示のＴＤＣは、標的療法と組み合わせて使用することができる。ＨＥＲ２／ｎｅｕ陽性腫瘍に対する標的療法として、トラスツズマブおよびペルツズマブが挙げられ、エストロゲン受容体（ＥＲ）陽性腫瘍に対する標的療法として、タモキシフェン、トレミフェン、およびフルベストラントが挙げられる。加えて、ＴＤＣは、アテゾリズマブのようなチェックポイント阻害剤と組み合わせて使用することができる。
結腸直腸がんの処置のために、本開示のＴＤＣは、５－ＦＵ、カペシタビン、イリノテカン、オキサリプラチン、トリフルリジン、およびチピラシルを含むが、限定されない標準ケアの処置と組み合わせて使用することができる。加えて、本開示のＴＤＣは、標的療法と組み合わせて使用することができる。標的療法として、ベバシズマブ、ラムシルマブ、およびｚｉｖ－アフリベルセプトが挙げられる。加えて、ＴＤＣは、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、またはイピリムマブのようなチェックポイント阻害剤と組み合わせて使用することができる。
膵がんのために、本開示のＴＤＣは、ゲムシタビン、５－フルオロウラシル（fluouracil）、イリノテカン、オキサリプラチン、パクリタキセル、カペシタビン、シスプラチン、またはドセタキセルのような標準ケアの化学療法剤と組み合わせて使用することができる。加えて、ＴＤＣは、ＥＧＦＲを阻害するエルロチニブのような標的療法と組み合わせて使用することができる。
前立腺がんのために、本開示のＴＤＣは、任意でステロイドであるプレドニゾンを伴うドセタキセル、またはカバジタキセルを含む標準ケアの化学療法剤と組み合わせて使用することができる。加えて、ＴＤＣは、イピリムマブのようなチェックポイント阻害剤と組み合わせて使用することができる。
食道（espohageal）がんのために、本開示のＴＤＣは、カルボプラチンおよびパクリタキセル、シスプラチンおよび５－ＦＵ、エピルビシン、シスプラチン、および５－ＦＵ、ドセタキセル、シスプラチン、および５－ＦＵ、カペシタビンを伴うシスプラチン、オキサリプラチン、および５－ＦＵまたはカペシタビンのいずれか、イリノテカンまたはトリフルリジンおよびチピラシルのような標準ケアの化学療法剤と組み合わせて使用することができる。加えて、ＴＤＣは、トラスツズマブまたはラムシルマブのような標的療法と組み合わせて使用することができる。加えて、ＴＤＣは、ペムブロリズマブのようなチェックポイント阻害剤と組み合わせて使用することができる。
１つまたは複数の療法と組み合わせる本開示のＴＤＣの使用は、療法を投与する順番を制限しない。例えば、本開示のＴＤＣは、対象が１つまたは複数の療法で処置される前、処置される間、または処置した後に投与することができる。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣは、別の療法（例えば上述の第２の治療剤）での患者の処置の前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もしくは１２週間前）、処置と同時に、または処置に続いて（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もしくは１２週間後）、投与される。いくつかの実施形態において、本開示のＴＤＣは、第２の治療剤として同じレジメンに組み込まれる。
以下の略語は、実施例を通して見られる。
Ｂｏｃ － ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ － ジクロロメタン
ＤＭＡ － ジメチルアミン
ＤＭＦ － ジメチルホルムアミド
ＤＩＰＥＡ － Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＥｔＯＡｃ － 酢酸エチル
ＥｔＯＨ － エタノール
Ｆｍｏｃ － フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＨＯＢｔ － ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＭｅＯＨ － メタノール
ＮａＨＭＤＳ － ナトリウムヘキサメチルジシルアジド
ＲＴ － 室温、およそ２１℃
ＴＢＴＵ － Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
ＴＥＡ － トリエチルアミン
ＴＨＦ － テトラヒドロフラン
ＴＦＡ － トリフルオロ酢酸
ＴＭＳ－イミダゾール － １－（トリメチルシリル）イミダゾール
６．１．
[実施例１]
４－（６－メチルピリジン－２－イル）－５－（１，５－ナフチリジン－２－イル）－１，３－チアゾール－２－アミン（化合物Ａ）の合成
化合物Ａを、以下のスキーム１における一般的方法にしたがって調製した。
Figure 2023509760000034
６．１．１． ２－メチル－１，５－ナフチリジン（Ａ１）
濃硫酸（２．５ｍｌ）、ｍ－ニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム（２．０８ｇ、９．２４ｍｍｏｌ）、ボロン酸（４４５ｍｇ、７．２１ｍｍｏｌ）、および硫酸第一鉄七水和物（１６７ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で撹拌した。グリセロール（１．５ｍｌ）を、続いて５－アミノ－２－メチルピリジン（Ａ－ＳＭ）（５００ｍｇ、４．６２ｍｍｏｌ）および水（２．５ｍｌ）を、反応混合物に添加し、１３５℃で１８時間加熱した。ＴＬＣにより測定した反応完了後、反応混合物をおよそ２１℃に冷却し、４ＮのＮａＯＨを使用して塩基化し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で抽出した。有機抽出物を合わせて、水（２００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、粗化合物Ａ１を得た。粗体を、（２％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡褐色結晶質固体として化合物Ａ１（２００ｍｇ、３０％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.92 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.31 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.62 (dd, J = 8.5, 4.5 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 2.8 (s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ １４５［Ｍ＋Ｈ］＋
６．１．２． １－（６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１，５－ナフチリジン－２－イル）エタン－１－オン（Ａ２）
Ａ１（２００ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）およびメチル６－メチルピコリネート（２０９ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の溶液を、Ｎ２雰囲気下に置き、－７８℃に冷却した。カリウムビス（トリメチルシリル）アミド（トルエン中に０．５Ｍ、６．９ｍｌ、３．４７ｍｍｏｌ）を、５分間にわたって滴下添加した。反応混合物を、－７８℃で１時間撹拌し、次いでおよそ２１℃に加温し、２０時間維持した。反応完了後（ＴＬＣにより測定）、反応混合物を、飽和塩化アンモニウム溶液（２０ｍｌ）でクエンチした。水性層をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、水（１００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、粗化合物Ａ２を得た。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（１％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）により精製して、橙黄色固体として化合物Ａ２（１１０ｍｇ、３０．５％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3: エノール型):δ 15.74 (brs,-OH), 8.69 (t, J = 3.6, 1H), 8.12 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.06 (dd, J = 8.4, 4.4 Hz, 2H), 7.82 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 8.4, 4.8 Hz, 1H) 7.45 (d, J= 9.6 Hz,1H), 7.3 (dd, J = 7.6, 4.0 Hz, 1H), 7.16 ( s, 1H), 2.75(s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２６４［Ｍ＋Ｈ］＋
６．１．３． ４－（６－メチルピリジン－２－イル）－５－（１，５－ナフチリジン－２－イル）－１，３－チアゾール－２－アミン（化合物Ａ）
Ａ２（１１０ｍｇ、０．４１８ｍｍｏｌ）の１，４－ジオキサン（１０ｍｌ）中の溶液を、臭素（０．０２５ｍｌ、０．５０１ｍｍｏｌ）で処理した。得られた反応混合物を、およそ２１℃で１時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮して、粗Ａ３（１２０ｍｇ）を得て、これをさらに精製することなく次のステップで用いた。粗Ａ３（１２０ｍｇ）を、エタノール（１５ｍｌ）に溶解させた。次いで、チオ尿素（３．５ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、（出発物質の完全な消費がＴＬＣにより観察されるまで）７８℃で４時間加熱した。反応混合物を、およそ２１℃に冷却し、アンモニア溶液（２５％、１．５ｍｌ）を穏やかに撹拌しながら添加した。溶媒を蒸発させ、次いで残留物をＣＨ２Ｃｌ２（２×２０ｍｌ）に溶解させ、水（５０．０ｍｌ）で洗浄した。次いで、分離した有機層を、１ＮのＨＣｌ（３０ｍｌ×２）で洗浄した。合わせた水性層を３５％の水酸化ナトリウム水溶液（２０ｍｌ）で塩基化し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２０ｍｌ）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、粗化合物Ａを得た。粗化合物Ａをアセトニトリル（２ｍｌ）から再結晶させて、黄色結晶質固体として精製した化合物Ａ（３５ｍｇ、２ステップにわたって４９％の収率）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.86 (dd, J = 4.4, 1.6 Hz, 1H), 8.29 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 9.2 Hz,1H), 7.64 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.60-7.55 (m, 2H), 7.46 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 7.6, 1H), 5.32 (brs, 2H), 2.57 (s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３２０［Ｍ＋Ｈ］＋
ＵＰＬＣ純度：９７．６％
６．２．
[実施例２]
Ｎ－メチル－２－（４－｛４－［３－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリジン－２－イル｝フェノキシ）エタン－１－アミン（化合物Ｂ）の合成
化合物Ｂを、以下のスキーム２における一般的方法にしたがって調製した。
Figure 2023509760000035
６．２．１． ｔｅｒｔ－ブチル（２－クロロエチル）（メチル）カルバメート（Ｂ７）
Ｂｏｃ－無水物（１．７ｍｌ、７．３０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍｌ）中の撹拌溶液に、同時に、Ｂ６（１ｇ、７．６９ｍｍｏｌ）の水（４ｍｌ）中の溶液、およびＴＥＡ（１ｍｌ、７．６９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍｌ）中の溶液を、１時間にわたって添加した。得られた混合物を、およそ２１℃で１６時間撹拌した。反応混合物を、飽和ＮａＣｌ溶液（２０ｍｌ）で希釈し、ＤＣＭ（３×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮して、粗化合物を得て、これを１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色液体として化合物Ｂ７（１ｇ、５．１８ｍｍｏｌ、７１％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.58-3.52 (m, 4H), 2.93 (s, 3H), 1.46 (s, 9H)
６．２．２． ｔｅｒｔ－ブチルメチル（２－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェノキシ）エチル）カルバメート（Ｉｎｔ－Ｂ）
４－ヒドロキシフェニルボロン酸ピナコールエステル（７８９ｍｇ、３．５８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１３ｍｌ）中の撹拌溶液に、Ｂ７（９００ｍｇ、４．６６ｍｍｏｌ）、ＫＩ（１８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（２．５７ｇ、７．８８ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下で添加した。反応混合物を、６５℃に加熱し、１６時間撹拌した。反応混合物を、水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を、減圧下で濃縮して粗体を得て、これを７％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用してカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体としてＩｎｔ－Ｂ（５８０ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ、４３％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 7.74 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.87 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 4.16-4.06 (m, 2H), 3.65-3.59 (m, 2H), 2.97 (s, 3H), 1.45 (s, 9H), 1.33 (s, 12H)
６．２．３． ２－（２－ブロモピリジン－４－イル）－１－（ピリジン－２－イル）エタン－１－オン（Ｂ２）
２－ブロモ－４－メチルピリジン（Ｂ１）（２ｇ、１１．６２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍｌ）中の撹拌溶液に、アルゴン下の－７８℃で、ＮａＨＭＤＳ（ＴＨＦ中の２Ｍ、１２．７ｍｌ、２５．５８ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。黄色溶液を、－７８℃で３０分間撹拌した。次いで、ピコリン酸エチル（１．７２ｍｌ、１２．７９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）中の溶液を添加し、反応混合物を、およそ２１℃に加温し、１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、固体残留物をジエチルエーテルで粉砕し、濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。次いで、固体を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（３０ｍｌ）で希釈し、水性相をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗生成物を、１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として化合物Ｂ２（２．０６ｇ、７．４６ｍｍｏｌ、６４．３％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 8.75 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.32 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.89 (t, J =7.6 Hz 1H), 7.56-7.51(m, 2H), 7.28-7.25 (m, 1H), 4.55 (s, 2H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２７７［Ｍ］＋
６．２．４． ２－ブロモ－４－［３－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリジン（Ｂ３）
Ｂ２（８５０ｍｇ、３．０７ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（３．４ｍｌ）中の溶液を、アルゴン下で、ＤＭＦ中の氷酢酸（０．４５ｍｌ、７．３９ｍｍｏｌ）で処理した。ＤＭＡ（０．６ｍｌ、４．６１ｍｍｏｌ）を滴下添加し、混合物をおよそ２１℃で２時間、アルゴン雰囲気下で撹拌した。ヒドラジン一水和物（１．１５ｍｌ、２３．０９ｍｍｏｌ）を滴下添加し、得られた混合物を、５０℃で３時間加熱し、およそ２１℃で１６時間加熱した。反応混合物を、水（３０ｍｌ）に注ぎ入れ、ＣＨ２Ｃｌ２（３×３０ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過した。溶媒を減圧下で蒸発させて、粗化合物を得た。粗生成物を、３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として化合物Ｂ３（５６０ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ、６０．６％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ 8.74 (brs, 1H), 8.34 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.83 (brs, 1H), 7.81 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.49 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39-7.84 (m, 1H), 7.31-7.26 (m, 1H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３０１［Ｍ］＋
６．２．５． ２－ブロモ－４－（３－（ピリジン－２－イル）－１－トリチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリジン（Ｂ４）
Ｂ３（５００ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．３７ｇ、９．９９ｍｍｏｌ）およびトリチルクロリド（４６４ｍｇ、２．４９ｍｍｏｌ）を添加した。その後、反応混合物を、加熱還流し、２４時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮し、次いで、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）と水（１０ｍｌ）との間で分配した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗固体を、２％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体として化合物Ｂ４（４０２ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ、４４％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.53 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.75-7.05 (m, 2H), 7.56 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.35-7.32 (m, 9H), 7.25-7.22 (m, 8H)
６．２．６． ｔｅｒｔ－ブチルメチル（２－（４－（４－（３－（ピリジン－２－イル）－１－トリチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エチル）カルバメート（Ｂ５）
Ｂ４（１００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のトルエン（２ｍｌ）中の撹拌溶液に、ＥｔＯＨ（０．７５ｍｌ）中のＩｎｔ－Ｂ（１８５ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を、続いて２ＭのＮａ２ＣＯ３溶液（０．４５ｍｌ）を、アルゴン雰囲気下で添加した。反応混合物を、アルゴンで２０分間脱気し、次いでＰｄ（ＰＰｈ３）４（１６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を添加し、３時間還流した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物を、水に注ぎ入れ、トルエン（３×１５ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これを３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、無色固体として化合物Ｂ５（７０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、５３％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.53 (s, 1H), 8.49 (d, J= 4.8 Hz, 1H),7.82 (d, J = 8.8 Hz, 2H) 7.74-7.76 (m, 3H), 7.60 (s, 1H), 7.40-7.34 (s, 8H), 7.31-7.30 (m, 2H), 7.24-7.19 (m, 4H), 7.12- 7.10 (m, 1H), 6.93(d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.19-4.12 (m, 2H), 3.66-3.58 (m, 2H), 2.98 (s, 3H), 1.46 (s, 9H).
６．２．７． Ｎ－メチル－２－（４－（４－（３－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エタン－１－アミン塩酸塩（化合物Ｂ）
Ｂ５（７０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（６ｍｌ）中の撹拌溶液に、１，４－ジオキサン（０．５ｍｌ）中の４ＮのＨＣｌを０℃で添加した。反応混合物を、アルゴン雰囲気下で１時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、溶媒を減圧下で蒸発させて、粗化合物を得て、これをｎ－ペンタン（２×１ｍｌ）で粉砕し、乾燥させて、無色固体として化合物ＢのＨＣｌ塩を得た（２５ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、６９％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 8.94 (brs, 2H), 8.62-8.56 (m, 3H), 8.30 (brs, 1H), 8.03-7.96 (m, 3H), 7.86 (d, J = 7.6 Hz, 1H),7.69 (brs, 1H), 7.49 (dd, J =7.2, 5.6 Hz, 1H), 7.29 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.36 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.39-3.35 (m, 2H), 2.67-2.63 (m, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３７２［Ｍ＋Ｈ］＋
６．３．
[実施例３]
Ｎ－メチル－２－（４－｛４－［３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリジン－２－イル｝フェノキシ）エタン－１－アミン（化合物Ｃ）の合成
化合物Ｃを、以下のスキーム３における一般的方法にしたがって調製した。
Figure 2023509760000036
６．３．１． ２－（２－ブロモピリジン－４－イル）－１－（６－メチルピリジン－２－イル）エタン－１－オン（Ｃ２）
２－ブロモ－４－メチルピリジン（Ｂ１）（１ｇ、５．８１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍｌ）中の撹拌溶液に、アルゴン下の－７８℃で、ＮａＨＭＤＳ（ＴＨＦ中の２Ｍ、６．３９ｍｌ、１２．８ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。黄色溶液を、－７８℃で３０分間撹拌した。次いで、６－メチルピコリン酸メチルエステル（１．１９ｍｌ、８．７２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７ｍｌ）中の溶液を添加し、反応混合物を、最大でおよそ２１℃に加温し、１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、固体残留物をジエチルエーテルで粉砕し、濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。次いで、固体を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２０ｍｌ）で希釈し、水性相をＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗生成物を、１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として化合物Ｃ２（１．１ｇ、３．７９ｍｍｏｌ、６５．４％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.30 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.73 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.36 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 5 Hz, 1H), 4.52 (s, 2H), 2.64 (s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２９１［Ｍ］＋
６．３．２． ２－ブロモ－４－［３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリジン（Ｃ３）
Ｃ２（３００ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（１ｍｌ）中の溶液を、アルゴン下で、ＤＭＦ中の氷酢酸（０．１４ｍｌ、２．４８ｍｍｏｌ）で処理した。ＤＭＡ（０．２ｍｌ、１．５５ｍｍｏｌ）を滴下添加し、混合物をおよそ２１℃で１時間、アルゴン雰囲気下で撹拌した。ヒドラジン一水和物（０．３７ｍｌ、７．７５ｍｍｏｌ）を滴下添加し、得られた混合物を、５０℃で３時間加熱し、およそ２１℃で１６時間加熱した。反応混合物を、水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２０ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過した。溶媒を減圧下で蒸発させて、粗Ｃ３を得た。粗Ｃ３を、２％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として精製したＣ３（１７２ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、５３％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ 11.40 (brs, 1H), 8.37 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.34 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 2.60 (s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３１５［Ｍ＋Ｈ］＋
６．３．３． ２－ブロモ－４－（３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１－トリチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリジン（Ｃ４）
Ｃ３（４０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）のアセトン（２ｍｌ）中の撹拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３（５３ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）およびトリチルクロリド（５３ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を添加した。その後、反応混合物を、加熱還流し、２４時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮し、次いで、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）と水（５ｍｌ）との間で分配した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗固体を、２％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体として化合物Ｃ４（３０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、４１％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 8.22 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.59 (s, 3H), 7.39-7.35 (m, 9H), 7.31 (s, 1H), 7.28-7.25 (m, 6H), 7.24 (d, J = 12 Hz, 1H), 2.53 (s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５５８［Ｍ＋Ｈ］＋
６．３．４． ｔｅｒｔ－ブチルメチル（２－（４－（４－（３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１－トリチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エチル）カルバメート（Ｃ５）
Ｃ４（１５０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）のトルエン（５ｍｌ）中の撹拌溶液に、ＥｔＯＨ（１ｍｌ）中のＩｎｔ－Ｂ（１５２ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を、続いて２ＭのＮａ２ＣＯ３溶液（０．７ｍｌ）を、アルゴン雰囲気下で添加した。反応混合物を、アルゴンで２０分間脱気し、次いでＰｄ（ＰＰｈ３）４（２５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を添加し、６時間還流した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物を、水に注ぎ入れ、トルエン（３×１０ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗Ｃ５を得て、これを３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、褐色固体として精製したＣ５（５１ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ、２６％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.48 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.8 Hz, 3H), 7.74 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.56 (d, J = 15.2Hz, J = 7.6Hz, 2H), 7.35-7.33 (m, 8H), 7.28-7.27 (m, 6H), 7.08 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.16-4.08 (m, 2H), 3.63-3.58 (m, 2H), 2.98 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 1.46 (s, 9H)
６．３．５． Ｎ－メチル－２－（４－｛４－［３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリジン－２－イル｝フェノキシ）エタン－１－アミン（化合物Ｃ）
Ｃ５（５１ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）中の撹拌溶液に、１，４－ジオキサン（０．３ｍｌ）中の４ＮのＨＣｌを０℃で添加した。次いで、反応混合物を、アルゴン雰囲気下で１時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、溶媒を減圧下で蒸発させて、粗化合物Ｃを得た。次いで、粗化合物Ｃをｎ－ペンタン（２×１ｍｌ）で粉砕し、乾燥させて、褐色固体として化合物ＣをＨＣｌ塩として得た（２０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、７４％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 8.93 (brs, 2H), 8.61 (d, J = 5.6 Hz, 1H),8.56 (brs, 1H), 8.33 (brs, 1H), 8.03 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.88 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.78-7.74 (m,1H), 7.65 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.36 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.36 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.66-2.63 (m, 3H), 2.50-2.46 (m, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３８６［Ｍ＋Ｈ］＋
６．４．
[実施例４]
（Ｚ）－Ｎ－エチル－３－（（（４－（Ｎ－（２－（メチルアミノ）エチル）メチルスルホンアミド）フェニル）アミノ）（フェニル）メチレン）－２－オキソインドリン－６－カルボキサミド（化合物Ｄ）の合成
化合物Ｄを、以下のスキーム４における一般的方法にしたがって調製した。
Figure 2023509760000037
６．４．１． メチル１－アセチル－２－オキソインドリン－６－カルボキシレート（Ｄ２）
メチル２－オキソインドリン－６－カルボキシレート（Ｄ１）（２．０ｇ、１０．４７ｍｍｏｌ）の無水酢酸（１６ｍｌ）中の撹拌溶液を、１３０℃に、不活性雰囲気下で６時間加熱した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物を、およそ２１℃に冷却した。沈殿物を濾過し、ｎ－ヘキサン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、真空で乾燥して、黄色固体として化合物Ｄ２（１．５ｇ、６１．５％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 8.66 (s, 1H), 7.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.91 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 2.57 (s, 3H)
６．４．２． メチル（Ｚ）－１－アセチル－３－（ヒドロキシ（フェニル）メチレン）－２－オキソインドリン－６－カルボキシレート（Ｄ３）
化合物Ｄ２（１．５ｇ、６．４３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に、ＴＢＴＵ（２．６９ｇ、８．３６ｍｍｏｌ）、安息香酸（９０３ｍｇ、７．４０ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（２．２ｍｌ）を、不活性雰囲気下の０℃で添加した。反応混合物を、およそ２１℃に加温し、１６時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物を、氷冷水（３０ｍｌ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×４０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、粗生成物Ｄ３を得て、これを８０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として化合物Ｄ３（９００ｍｇ、４２％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.01 (brs, 1H), 8.93 (s, 1H), 7.76-7.70 (m, 3H), 7.67-7.63 (m, 1H), 7.59-7.56 (m, 2H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.83 (s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３３８．３［Ｍ＋Ｈ］＋
６．４．３． （Ｚ）－３－（ヒドロキシ（フェニル）メチレン）－２－オキソインドリン－６－カルボン酸（Ｄ４）
化合物Ｄ３（９００ｍｇ、２．６７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１５ｍｌ）中の撹拌溶液に、１ＮのＮａＯＨ水溶液（１５ｍｌ）をおよそ２１℃で添加した。反応混合物を、１００℃に加熱し、６時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物を、およそ２１℃に冷却し、１ＮのＨＣｌ水溶液（１３ｍｌ）でクエンチし、３０分間撹拌した。沈殿した固体を濾過し、２０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで洗浄して、オフホワイトの固体として化合物Ｄ４（５８０ｍｇ、７７％）を得て、これをさらに精製することなく次のステップで用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 12.76 (brs, 1H), 11.61 (brs, 1H), 7.77-7.50 (m, 8H), 7.13 (brs, 1H)
６．４．４． （Ｚ）－Ｎ－エチル－３－（ヒドロキシ（フェニル）メチレン）－２－オキソインドリン－６－カルボキサミデレート（carboxamidelate）（断片Ａ）
化合物Ｄ４（５８０ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に、ＴＢＴＵ（７２９ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３０６ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．９ｍｌ、１０．３２ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下のおよそ２１℃で添加した。３０分後、ＴＨＦ（２．１ｍｌ、４．１２ｍｍｏｌ）中の２Ｎのエチルアミンを、０℃で添加し、１時間撹拌した。次いで、反応混合物を、およそ２１℃に加温し、さらに１６時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、揮発物を、真空で除去した。残留物を水（１５ｍｌ）で希釈し、濾過し、２０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２×１０ｍｌ）で洗浄し、粗生成物を得て、これを１０％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、オフホワイトの固体として断片Ａ（４１０ｍｇ、６４．５％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 13.62 (brs, 1H), 11.39 (brs, 1H), 8.35-8.33 (m, 1H), 7.76-7.52 (m, 5H), 7.44-7.36 (m, 3H), 3.29-3.22 (m, 2H), 1.10 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３０７．１（Ｍ－Ｈ＋）
６．４．５． Ｎ－（２－（ジメチルアミノ）エチル）－Ｎ－（４－ニトロフェニル）メタンスルホンアミド（Ｄ８）
化合物Ｄ７（８００ｍｇ、３．７０ｍｍｏｌ）のアセトン（１５ｍｌ）中の撹拌溶液に、炭酸カリウム（１．３２ｇ、９．６２ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（１１０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、および化合物Ｂ６（７９９ｍｇ、５．５５ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下の０℃で添加した。反応混合物を、５０℃に加熱し、２０時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、揮発物を、真空で除去した。残留物を、水（２０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×４０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、粗生成物を得て、これを５％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体として化合物Ｄ８（４６０ｍｇ、４３％）を得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6):δ 8.27 (d, J = 9.5 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 9.5 Hz, 2H), 3.85 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.13 (s, 3H), 2.31 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.12 (s, 6H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２８８．３［Ｍ＋Ｈ］＋
６．４．６． Ｎ－（４－アミノフェニル）－Ｎ－（２－（ジメチルアミノ）エチル）メタンスルホンアミド（断片Ｂ）
化合物Ｄ８（４６０ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に、１０％のＰｄ／Ｃ（４０ｍｇ）を添加し、水素雰囲気（バルーン圧）下のおよそ２１℃で３時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通して濾過し、ＭｅＯＨ（１０ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空で濃縮して、粗生成物を得て、これを１０％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体として断片Ｂ（３００ｍｇ、７３％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 6.99 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.54 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.25 (s, 2H), 3.55 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.24 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.12 (s, 6H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２５８．２［Ｍ＋Ｈ］＋
６．４．７． （Ｚ）－３－（（（４－（Ｎ－（２－（ジメチルアミノ）エチル）メチルスルホンアミド）フェニル）アミノ）（フェニル）メチレン）－Ｎ－エチル－２－オキソインドリン－６－カルボキサミド（Ｄ５）
断片Ａ（２００ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、断片Ｂ（５００ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）およびＴＭＳ－イミダゾール（４５５ｍｇ、３．２４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍｌ）中の溶液を、マイクロ波の下、１７０℃に１時間加熱した。出発物質の消費（ＴＬＣおよびＬＣ－ＭＳによりモニタリング）後、揮発物を、真空で除去した。残留物を水（１０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２５ｍｌ）で抽出して、粗生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣにより精製して、淡黄色固体として化合物Ｄ５（１５０ｍｇ、４２％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 12.14 (s, 1H), 10.91 (s, 1H), 8.17 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.64-7.57 (m, 3H), 7.53-7.51 (m, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.17 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.06 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.73 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.58 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.23-3.20 (m, 2H), 2.93 (s, 3H), 2.13 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.90 (s, 6H), 1.06 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５４８．６［Ｍ＋Ｈ］＋
６．４．８． （Ｚ）－Ｎ－エチル－３－（（（４－（Ｎ－（２－（メチルアミノ）エチル）メチルスルホンアミド）フェニル）アミノ）（フェニル）メチレン）－２－オキソインドリン－６－カルボキサミド（化合物Ｄ）
化合物Ｄ５（７０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の乾燥トルエン（３ｍｌ）中の撹拌溶液に、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニルクロリド（０．０４ｍｌ、０．１９ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下のおよそ２１℃で添加した。反応混合物を、還流温度（１２０℃）に加熱し、１６時間維持した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物を、およそ２１℃に冷却し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）で希釈し、１ＮのＨＣｌ水溶液（１５ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、モノ脱メチル化し、ジ－ｔｒｏｃ保護化した化合物（４０ｍｇ）を得た。
上記の反応由来の粗生成物を、酢酸（３ｍｌ）に溶解させ、亜鉛粉末（９ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下のおよそ２１℃で添加した。反応混合物を、５０℃に加熱し、８時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物を、およそ２１℃に冷却し、揮発物を、真空で除去した。残留物を、水（２０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗化合物Ｄを得て、これを５～６％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、８３％のＨＰＬＣ純度の１２ｍｇの化合物Ｄを得た。
反応物を６０ｍｇのスケールで繰り返し、得られた粗生成物を上記バッチと組み合わせ、分取ＨＰＬＣにより精製して、淡黄色固体として化合物Ｄ（８．０ｍｇ、６．３％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ 7.65-7.59 (m, 3H), 7.52.7.50 (m, 2H), 7.40 (s, 1H), 7.31 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.95 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.95 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.39-3.32 (m, 2H), 3.05 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.93 (s, 3H), 2.71 (s, 3H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５３４．６［Ｍ＋Ｈ］＋
ＵＰＬＣ純度：９９．１８％
６．５．
[実施例５]
（Ｚ）－Ｎ－エチル－３－（（（４－（Ｎ－（２－（メチルアミノ）エチル）メチルスルホンアミド）フェニル）アミノ）（フェニル）メチレン）－２－オキソインドリン－６－カルボキサミド（化合物Ｄ）の代替合成
化合物Ｄをまた、以下のスキーム５における一般的方法にしたがって調製した。
Figure 2023509760000038
６．５．１． Ｎ－（２－ブロモエチル）－Ｎ－（４－ニトロフェニル）メタンスルホンアミド（Ｄ９）
化合物Ｄ７（１．０ｇ、４．６５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に、水酸化ナトリウム（鉱油中に６０％、３２０ｍｇ、７．９９ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下の０℃で添加し、およそ２１℃で３０分間撹拌した。この混合物に、１，２－ジブロモエタン（２．１８ｇ、１１．６０ｍｍｏｌ）を、およそ２１℃で添加した。混合物を、９０℃に加熱し、２４時間撹拌した。反応物をＴＬＣによりモニタリングした。反応混合物をおよそ２１℃に冷却し、氷冷水（３０ｍｌ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×４０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、粗生成物を得て、これを５％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、４０％の未反応出発物質を含有する混合物として１．２ｇのＤ９を得た。得られた混合物を、さらに精製することなく次の反応に直接用いた。
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ 8.29 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.12 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.44 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.01 (s, 3H)
６．５．２． Ｎ－（２－（メチルアミノ）エチル）－Ｎ－（４－ニトロフェニル）メタンスルホンアミド（Ｄ１０）
化合物Ｄ９（１．２ｇ、不純）のＴＨＦ（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に、トリエチルアミン（１．６ｍｌ）およびメチルアミン（ＴＨＦ中の２Ｍ、９．３ｍｌ、１８．６３ｍｍｏｌ）を、封管中で、不活性雰囲気下のおよそ２１℃で添加した。反応混合物を、８０℃に加熱し、１６時間維持した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物を、およそ２１℃に冷却し、減圧下で濃縮して、粗Ｄ１０を得た。粗Ｄ１０を、１５％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として化合物Ｄ１０（５００ｍｇ、２ステップにわたって３９％の全収率）を得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6):δ 8.94 (brs, 1H), 8.31 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.80 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.06 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.15 (s, 3H), 3.00 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.55 (s, 3H)
６．５．３． ｔｅｒｔ－ブチルメチル（２－（Ｎ－（４－ニトロフェニル）メチルスルホンアミド）エチル）カルバメート（Ｄ１１）
Ｄ１０（５００ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に、トリエチルアミン（０．４ｍｌ、２．６１ｍｍｏｌ）および無水Ｂｏｃ（６５９ｍｇ、３．０２ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下のおよそ２１℃で添加し、５時間維持した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、揮発物を、真空で除去して、粗生成物を得て、これを５％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、無色の濃厚なシロップとしてＤ１１（３２０ｍｇ、４７％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 8.27 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.91 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.28-3.25 (m, 2H), 3.07 (s, 3H), 2.72-2.70 (m, 3H), 1.33-1.27 (m, 9H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２７４．２（Ｍ＋－Ｂ℃）
６．５．４． ｔｅｒｔ－ブチル（２－（Ｎ－（４－アミノフェニル）メチルスルホンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（断片ＢのＢｏｃ変異体）
化合物Ｄ１１（２５０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１０ｍｌ）中の溶液に、ラネー－Ｎｉ（４０ｍｇ）を添加し、水素雰囲気（バルーン圧）下のおよそ２１℃で１時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＨ（１０ｍｌ）で洗浄した。合わせた濾液を真空で濃縮して、粗生成物を得て、これを１０％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体として断片ＢのＢｏｃ変異体（１８０ｍｇ、７７％）を得た。
H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 7.01 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.53 (d, J = 8.4 HZ, 2H), 5.24 (s, 2H), 3.60 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.18 (t, J = 6.4 HZ, 2H), 2.88 (s, 3H), 2.75-2.71 (m, 3H), 1.36-1.33 (m, 9H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２４４．２（Ｍ＋－Ｂ℃）
６．５．５． ｔｅｒｔ－ブチル（Ｚ）－（２－（Ｎ－（４－（（（６－（エチルカルバモイル）－２－オキソインドリン－３－イリデン）（フェニル）メチル）アミノ）フェニル）メチルスルホンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（Ｄ１０）
断片Ａ（７０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、断片ＢのＢｏｃ変異体（１５５ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）およびＴＭＳ－イミダゾール（１５９ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍｌ）中の溶液を、マイクロ波の下、１７０℃に１６０分間加熱した。出発物質の消費（ＴＬＣおよびＬＣ－ＭＳによりモニタリング）後、揮発物を、真空で除去して、残留物を得て、これを分取ＨＰＬＣにより精製して、淡黄色固体として化合物Ｄ１０（５０ｍｇ、３６％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 12.13 (brs, 1H), 8.01 (brs, 1H), 7.61-7.51 (m, 3H), 7.44-7.41 (m, 3H), 7.13-7.11 (m, 2H), 6.98 (d, J = 8.4 HZ, 1H), 6.75 (d, J = 8.4 HZ, 2H), 5.96-5.91 (m, 2H), 3.74-3.71 (m, 2H), 3.49-3.41 (m, 2H), 3.30-3.27 (m, 2H), 2.80 (s, 6H), 1.40-1.36 (m, 9H), 1.19 (t, J = 7.2 HZ, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ６３４．６［Ｍ＋Ｈ］＋
６．５．６． （Ｚ）－Ｎ－エチル－３－（（（４－（Ｎ－（２－（メチルアミノ）エチル）メチルスルホンアミド）フェニル）アミノ）（フェニル）メチレン）－２－オキソインドリン－６－カルボキサミド塩酸塩（ＨＣｌ塩としての化合物Ｄ）
化合物Ｄ１０（２０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（３ｍｌ）中の撹拌溶液に、１，４－ジオキサン（０．３ｍｌ）中の４ＮのＨＣｌを、不活性雰囲気下の０℃で添加した。反応混合物を、およそ２１℃で１時間撹拌した。出発物質の完全な消費（ＴＬＣによりモニタリング）後、揮発物を、真空で除去して、粗生成物を得て、これをｎ－ペンタン（２×４ｍｌ）で粉砕して、淡黄色固体として、ＨＣｌ塩としての化合物Ｄ（１２ｍｇ、７１％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ 7.65-7.59 (m, 3H), 7.52.7.50 (m, 2H), 7.40 (s, 1H), 7.31 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.95 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.95 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.39-3.32 (m, 2H), 3.05 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.93 (s, 3H), 2.71 (s, 3H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５３４．７［Ｍ＋Ｈ］＋
ＵＰＬＣ純度：９６．２６％
６．６．
[実施例６]
化合物Ａ～Ｄの活性を試験するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ
化合物Ａ～Ｄを試験して、これらが、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＨＥＫ２９３Ｔ細胞のＴＧＦ－β誘導性ルシフェラーゼ活性を阻害できるかどうかを決定した。
３０，０００個のＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、９６ウェル白色平底プレートに終夜、播種した。次の日、ウェル当たり１００ｎｇのＳＭＡＤルシフェラーゼのレポータープラスミドを、リポフェクトアミンを使用して、２４時間、細胞内にトランスフェクトした。次の日、細胞を、化合物Ａ～Ｄおよび１００ｐＭのＴＧＦ－βで２４時間処理した。ルシフェラーゼ活性を、Ｄｕａｌ－Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。アッセイは、化合物Ａ、Ｂ、およびＤに対しては２回行い、化合物Ｃに対しては３回行った。結果を表４に示す。
Figure 2023509760000039
実験１の活性データを図１に示す。
化合物Ａ～Ｃは、最大の阻害活性を示した。
６．７．
[実施例７]
４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２Ｈ－ピロール－１（５Ｈ）－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジルメチル（２－（４－（４－（３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エチル）カルバメートの合成
化合物Ｃを、以下のスキーム６における一般的方法にしたがって、バリン－シトルリンリンカーに連結させた。
Figure 2023509760000040
Ｌ１（１２２ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（５２μｌ、０．３７５ｍｍｏｌ、２．５当量）を、化合物Ｃ（５８ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（２ｍｌ）中の溶液に、０℃で添加し、反応混合物をおよそ２１℃で２時間撹拌して、粗ＡＤＣ－１を得た。粗ＡＤＣ－１を、分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体として精製したＡＤＣ－１（３４ｍｇ、２４％の収率）を得た。
６．８．
[実施例８]
抗体薬物複合体１（ＡＤＣ１）の生成
抗ヒトＦＡＰ抗体を、複合緩衝液（２５ｍＭのホウ酸ナトリウム／２５ｍＭのＮａＣｌ、および０．３ｍＭのＥＤＴＡ、最終ｐＨ７．４）中に終夜透析した。抗体を、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）を使用して、還元率１０～３０で２時間還元した。ＡＤＣ－１を、１０ｍＭの最終濃度までＤＭＳＯ中に溶解し、次いで、１５％のＤＭＳＯの存在下、複合比５～３０で抗体に複合体化した。全ての反応は、およそ２１℃で行う。いくつかの薬物抗体比（ＤＡＲ）に対して、５０％のプロピレングリコールを、複合体化のステップの間、有機溶媒として使用する。最終ＡＤＣを、ＰＢＳ中で終夜透析し、０．２２μｍのフィルターを使用して濾過し、ＨＰＬＣ－ＨＩＣを介して分析してＤＡＲを決定し、ＨＰＬＣ－ＳＥＣを介して分析して凝集のレベルを決定する。ＨＰＬＣ－ＨＩＣに対して、サンプルを、流速０．５ｍｌ／分で、ＴＳＫｇｅｌ（登録商標）ブチル－ＮＰＲカラム上で実行する。相Ａは、２５ｍＭのリン酸ナトリウム、およびｐＨ６．９５での１．５Ｍの硫酸アンモニウムである一方、相Ｂは、ｐＨ６．９５での７５％の２５ｍＭのリン酸ナトリウム、および２５％のイソプロピルアルコールである。ＨＰＬＣ－ＳＥＣ分析に対して、ＴＳＫｇｅｌ（登録商標）Ｇ３０００ＳＷカラム（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を、流速０．２５ｍｌ／分、２８０ｎＭで２５分間使用する。
６．９．
[実施例９]
ジスルフィドリンカーに連結した化合物Ｃ（ＡＤＣ－２）の合成
化合物Ｃを、以下のスキーム７Ａ～Ｂにおける一般的方法にしたがって、ジスルフィドリンカーに連結させた。
Figure 2023509760000041
Figure 2023509760000042
６．９．１． 中間体Ａの合成
２－クロロトリチルクロリド樹脂（Ｌ２）（４ｇ、４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２×４０ｍｌ）で洗浄し、５０ｍｌのＤＣＭ内で１０分間膨潤させ、次いで排出させる。Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ（Ｌ３）（７．０３ｇ、１２ｍｍｏｌ）を、４０ｍｌのＤＣＭに溶解し、２－クロロトリチルクロリド樹脂を含有する容器に添加する。８．７ｍｌのＤＩＰＥＡ（６．８ｍｌ、４０ｍｍｏｌ）を容器に添加し、混合物をおよそ２１℃で２時間かき混ぜる。次いで、１０ｍｌのメタノールを混合物に添加し、３０分間かき混ぜる。次いで、得られた樹脂（Ｌ４）を排出させ、ＤＭＦで５回洗浄する。次いで、樹脂Ｌ４を脱保護して、ＤＭＦ中のおよそ４０ｍｌの２０％のピペリジンを樹脂Ｌ４に添加し、混合物を振とうし、次いで樹脂から液体を排出することにより、樹脂Ｌ５を生成する。ＤＭＦ中の別の４０ｍｌの２０％のピペリジンを、樹脂に添加し、１５分間振とうする。次いで、樹脂Ｌ５を、液体から排出させ、ＤＭＦ（６×４０ｍｌ）で洗浄する。
Ｆｍｏｃ－アミノ酸の溶液は、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ（４．９３ｇ、１２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ（４．９３ｇ、１２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ（７．７９ｇ、１２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ（４．９３ｇ、１２ｍｍｏｌ）、およびＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ（５．１ｇ、１２ｍｍｏｌ）を、ＨＢＴＵ／ＨＯＢＴ（４．５５ｇ、１２ｍｍｏｌ／１．６２ｇ、１２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２ｍｌ、１２ｍｍｏｌ）と別々に組み合わせて調製する。
Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ溶液を、樹脂Ｌ５に添加し、６０分間振とうして、樹脂Ｌ６を生成する。樹脂Ｌ６をＤＭＦ（６×４０ｍｌ）で洗浄し、次いで上記の通り、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンで脱保護する。次いで、樹脂Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９、およびＬ１０を、Ｆｍｏｃ－アミノ酸溶液を使用する連続カップリングを実行することにより作製し、同じ手順を使用して、樹脂Ｌ５から樹脂Ｌ６を作製する。
例示的な合成において、乾燥樹脂Ｌ１０（８ｇ）をフラスコに添加し、８０ｍｌの切断溶液を添加した（ＴＦＡ：ＴＥＳ：ＥＤＴ：Ｈ２Ｏ＝９０：５：３：２、ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）。反応を１．５時間進行させた。次いで、樹脂を、加圧下で、濾過により反応混合物から分離した。次いで、樹脂をＴＦＡで２回洗浄した。濾液を合わせ、１０倍の体積の冷ＭＴＢＥを滴下添加した。次いで、沈殿したペプチド（中間体Ａ）を遠心分離し、冷ＭＴＢＥで４回洗浄した。次いで、中間体Ａを減圧下で乾燥し、分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体として１．１ｇの中間体Ａ（３７％の収率）を得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７５２［Ｍ＋Ｈ］＋。
６．９．２． ２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）エチルメチル（２－（４－（４－（４－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エチル）カルバメート（Ｌ１２）
化合物Ｃ（４０ｍｇ、０．１０３８ｍｍｏｌ）および４－ニトロフェニル２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）エチルカルバメート（Ｌ１１）（８０ｍｇ、０．２２７２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍｌ）中の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．５ｍｌ）およびＨＯＢｔ（１４ｍｇ、０．１０３８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２下のおよそ２１℃で１６時間撹拌して、Ｌ１２を生成した。粗Ｌ１２を、分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体として３５ｍｇの精製したＬ１２（５６％の収率）を得た。
６．９．３． （２Ｒ，５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１４Ｓ，１９Ｓ）－１９－アミノ－５，８，１４－トリス（カルボキシメチル）－１１－（３－グアニジノプロピル）－２－（（（２－（メチル（２－（４－（４－（４－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エチル）カルバモイルオキシ）エチル）ジスルファニル）メチル）－４，７，１０，１３，１６－ペンタオキソ－３，６，９，１２，１５－ペンタアザイコサン－１，２０－二酸（Ｌ１３）
Ｌ１２（３５ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（５ｍｌ／５ｍｌ）中の溶液に、中間体Ａ（８０ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下で添加した。混合物をおよそ２１℃で１６時間撹拌して、Ｌ１３を生成した。粗Ｌ１３を、分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体として２３ｍｇの精製したＬ１３（３１％の収率）を生成した。
６．９．４． （２Ｒ，５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１４Ｓ，１９Ｓ）－１９－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノオキシ）アセトアミド）－５，８，１４－トリス（カルボキシメチル）－１１－（３－グアニジノプロピル）－２－（（（２－（メチル（２－（４－（４－（４－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エチル）カルバモイルオキシ）エチル）ジスルファニル）メチル）－４，７，１０，１３，１６－ペンタオキソ－３，６，９，１２，１５－ペンタアザイコサン－１，２０－二酸（Ｌ１５）
Ｌ１３（３２ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍｌ）中の溶液に、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノオキシ）アセテート（Ｌ１４）（２８ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）を、続いてＴＥＡ（０．５ｍｌ）を添加した。反応混合物を、Ｎ２雰囲気下のおよそ２１℃で１６時間撹拌して、Ｌ１５を生成した。粗Ｌ１５を、分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体として１２ｍｇの精製したＬ１５（３３％の収率）を生成した。
６．９．５． （２Ｒ，５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１４Ｓ，１９Ｓ）－１９－（２－（アミノオキシ）アセトアミド）－５，８，１４－トリス（カルボキシメチル）－１１－（３－グアニジノプロピル）－２－（（（２－（メチル（２－（４－（４（４－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エチル）カルバモイルオキシ）エチル）ジスルファニル）メチル）－４，７，１０，１３，１６－ペンタオキソ－３，６，９，１２，１５－ペンタアザイコサン－１，２０－二酸（ＡＤＣ－２）
Ｌ１５（１２ｍｇ、０．００８５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍｌ）中の混合物に、ＴＦＡ（１ｍｌ）を添加した。混合物を、およそ２１℃で３０分間撹拌して、ＡＤＣ－２を生成した。粗ＡＤＣ－２を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体として３．５ｍｇの精製したＡＤＣ－２（３１％の収率）を生成した。
６．１０．
[実施例１０]
抗体薬物複合体２（ＡＤＣ２）の生成
ＡＤＣ－２を、以下のスキーム８における一般的方法にしたがって、抗体リジン残基を介して、抗ヒトＦＡＰ抗体に結合した。
Figure 2023509760000043
抗体を、ｐＨ７．４でＰＢＳ中で透析した。Ｓ－４ＦＢを、異なるモル比で、ｐＨ７．４でＰＢＳ中の抗体に添加し、およそ２１℃で３時間インキュベートした。Ｓ－４ＦＢ修飾した抗体溶液を、２－ヒドラジノピリジン溶液（１００ｍＭのＭＥＳ緩衝液中に０．５ｍＭ、ｐＨ５．０）と合わせて、５～５０の範囲の様々な複合比で、３７℃で３０分間インキュベートした。Ｓ４ＦＢ／Ａｂモル置換比を、Ａ３５４でＵＶ－Ｖｉｓにより決定する。修飾した抗体を、Ｚｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム、５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ６．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ）に交換した緩衝液を使用して精製し、次いで、リンカー－Ｓ－Ｓ－薬物ＡＤＣ－２（ＤＭＳＯ中に１０ｍＭ）と、異なるモル比で、３７℃で２４時間混合して、ＡＤＣ２を生成する。次の日、ＡＤＣ２サンプルを、ＰＢＳに対して終夜透析する。サンプルを濾過し、次いでＨＰＬＣ－ＳＥＣ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、およびＬＣ－ＭＳを介して試験する。
５％におけるＡＤＣ２凝集が、ＨＰＬＣ－ＳＥＣにより検出される場合、凝集した成分は、ＳＥＣカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ＧＬ）を備えたＡＫＴＡにより分離し、ＨＰＬＣ－ＳＥＣにより再び分析する。
６．１１．
[実施例１１]
化合物Ｎの合成および特徴付け
化合物Ｎを、以下のスキーム９における一般的方法にしたがって合成した。
Figure 2023509760000044
Figure 2023509760000045
化合物Ｎを、いくつかのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、化合物Ｃと比較した。組換えキナーゼアッセイにおけるそのＩＣ５０活性およびそのＫｉ値の概要は、表５に示す。表５はまた、ヒトＨＥＫ細胞における、化合物ＣのＴＧＦ－βシグナル伝達の阻害活性も示す。化合物Ｃは、キナーゼアッセイにおいて、化合物Ｎより１０倍強力であることが分かった。
Figure 2023509760000046
６．１２．
[実施例１２]
ＨＥＫ細胞に結合する抗ＦＡＰ抗体
抗ＦＡＰ抗体（市販のマウスＩｇＧ１、クローン４２７８１９）の、ヒトＦＡＰを発現するＨＥＫ２９３細胞に結合する能力を、ＦＡＣＳにより評価した。抗ＦＡＰ抗体は、ヒトＦＡＰ ｃＤＮＡを細胞表面にトランスフェクトおよび発現したＨＥＫ２９３細胞に結合した（図２Ｃ）が、ヒトｃＤＮＡをトランスフェクトしなかった親ＨＥＫ細胞に結合しなかった（図２Ｂ）。
６．１３．
[実施例１３]
標的化薬物複合体ＳＹＮ－３０１およびＳＹＮ－３０２の産生
２つの標的化薬物複合体を合成した。第１に、化合物Ｃを、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ切断性リンカーを使用して、抗ＦＡＰ抗体（市販のマウスＩｇＧ１、クローン４２７８１９）に複合体化した（図３Ａ）。この標的化薬物複合体を、本明細書でＳＹＮ－３０１と称する。第２に、化合物を、非切断性（ＭＣ）リンカーを使用して、抗ＦＡＰ抗体に複合体化した（図３Ｂ）。この標的化薬物複合体を、本明細書でＳＹＮ－３０２と称する。薬物抗体比を、ＰＬＲＰ－Ｓカラム（１０００Åの細孔径、５μｍの粒径、１×５０ｍｍ）を使用して、逆相液体クロマトグラフィーにより決定し、％凝集を、ＴＳＫｇｅｌ（登録商標）Ｇ３０００ＳＷＸＬカラムと使用して、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定した。ＳＹＮ－３０１の調製物は、５．５および４％の凝集の測定した薬物抗体比（ＤＡＲ）を有する一方、ＳＹＮ－３０２の調製物は、５および３．９％の凝集の測定したＤＡＲを有した。
６．１４．
[実施例１４]
ヒトＦＡＰタンパク質を発現するＨＥＫ細胞におけるＳＹＮ－３０１およびＳＹＮ－３０２によるＴＧＦ－βシグナル伝達抑制の評価
ＳＹＮ－３０１およびＳＹＮ－３０２のＴＧＦ－βシグナル伝達を阻害する能力を評価するために、アッセイを、ヒトＦＡＰを発現するＨＥＫ２９３ＦＴ細胞を使用して実施した。
ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞を、Ｍｉｒｕｓ ＴｒａｎｓＩＴ（登録商標）－ＬＴ１トランスフェクション試薬を含む、ヒトＦＡＰをコードする構築物、ならびにルシフェラーゼのレポーター遺伝子ｌｕｃ２Ｐ（ｐＧＬ４．４８［ｌｕｃ２Ｐ／ＳＢＥ／Ｈｙｇｒｏ］；Ｐｒｏｍｅｇａ）の発現を引き起こすＳＭＡＤ結合要素の３つのコピーを含むＴＧＦ－β応答性ルシフェラーゼ発現構築物、および発現する対照構築物（ＲｅｎｉｌｌａルシフェラーゼをコードするｐＧＬ４．７４；Ｐｒｏｍｅｇａ）（細胞培養１ｍｌ当たり１μｇ：１μｇ：０．１２５μｇ）で一時的にトランスフェクトした。細胞を、９６ウェルプレートに細胞３５０，０００個／ｍｌでプレーティングした（ウェルごとに１００μｌ）。２４時間後、細胞を、４時間、ＳＹＮ－３０１、ＳＹＮ－３０２、複合体化していない抗ＦＡＰ抗体、または複合体化していない化合物Ｃで前処置した。次いで、１ｎＭのＴＧＦ－βを添加し、細胞を３時間インキュベートした。次いで、ルシフェラーゼ発現を測定した（Ｄｕａｌ－Ｇｌｏルシフェラーゼ検出システム、Ｐｒｏｍｅｇａ）。
結果を図４Ａ～４Ｂに示す。切断性リンカーを伴うＳＹＮ－３０１は、ＦＡＰを発現する操作したＨＥＫ細胞においてＴＧＦ－βシグナル伝達を阻害することができた（図４Ａ）一方、ＳＹＮ－３０１は、ＦＡＰを発現しない親ＨＥＫ細胞においてＴＧＦ－βシグナル伝達に対する有意な効果を有することが観察されなかった（図４Ｂ）。非切断性リンカーを有するＳＹＮ－３０２は、ＳＹＮ－３０１より有効性が低いことが本アッセイで観察された（図４Ａ）。
６．１５．
[実施例１５]
ＳＹＮ－３０１およびＳＹＮ－３０２により誘導されたＦＡＰ内在化
ＳＹＮ－３０１およびＳＹＮ－３０２の、ＦＡＰを内因的に発現する標的細胞でＦＡＰを内在化する能力を評価するために、内在化アッセイを、ＷＩ－３８ヒト肺線維芽細胞を使用して実施した。
ＷＩ－３８細胞を、４℃で３０分間、抗ＦＡＰ抗体、ＳＹＮ－３０１、ＳＹＮ－３０２、またはアイソタイプコントロールＡＤＣ（切断性ＶａｌＣｉｔ－ＡＬＫ５阻害剤の化合物Ｃに複合体化した非特異的抗体対照）でインキュベートして、細胞表面ＦＡＰ発現を検出した。次いで、細胞を、冷ＰＢＳで２回洗浄して、上澄み中の残存の抗体／抗体複合体を除去し、次いで、３７℃で３時間インキュベートして、受容体内在化を誘導した。３時間のインキュベートの後、細胞を洗浄し、ＰＥ複合体化したラット抗マウス二次抗体でインキュベートして、残る細胞表面ＦＡＰ発現を検出した。相対ＦＡＰ発現を、４℃で、全体的なＦＡＰ発現の測定として抗ＦＡＰ抗体でインキュベートしたＷＩ－３８細胞または複合体と比較した。
結果を図５Ａ～５Ｅおよび図６に示す。ＷＩ－３８細胞の５０～６０％（図５Ａ～５Ｅ）はＦＡＰを発現し、抗ＦＡＰ抗体、ＳＹＮ－３０１、およびＳＹＮ－３０２は、ＷＩ－３８細胞においてＦＡＰと結合し、比較的内在化することができた（それぞれ、６３％、６３％、および５２％）（図６）。
６．１６．
[実施例１６]
ＷＩ－３８細胞におけるＳＹＮ－３０１およびＳＹＮ－３０２の機能的特徴付け
ＩＶ型コラーゲン（ＣＯＬ４Ａ１）、フィブロネクチン（ＦＮ１）、および１５個を含有するロイシンリッチリピート（ＬＲＲＣ１５）の発現の増加は、線維症の増加のマーカーである。ＷＩ－３８ヒト肺線維芽細胞を使用して、ＳＹＮ－３０１およびＳＹＮ－３０２の、ＣＯＬ４Ａ１、ＦＮ１、およびＬＲＲＣ１５の発現を低下させる能力を評価した。
ＷＩ－３８ヒト肺線維芽細胞を、２４ウェルに細胞５０，０００個／ｍｌでプレーティングし（ウェルごとに５００μｌ）、終夜インキュベートした。細胞を、１８時間血漿飢餓状態にして、ＴＧＦｂ－β調節された遺伝子における血漿効果を低下させ、次いで、１μｇ／ｍｌで、ＳＹＮ－３０１、ＳＹＮ－３０２、アイソタイプコントロールＡＤＣ、抗ＦＡＰ抗体、または化合物Ｃで前処置した。ＴＧＦ－βを添加し、細胞を１９時間インキュベートした。次いで、細胞をＲＬＴ緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ）に掻き入れ、ＲＮＡをＱｉａｇｅｎ ＲＮａｅａｓｙ Ｋｉｔを使用して抽出した。ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写し、次いで、ｑＰＣＲをＣＯＬ４Ａ１、ＦＮ１、およびＬＲＲＣ１５に対してＴａｑＭａｎプライマーで実施した。ＧＡＰＤＨをノーマライザーとして使用した。
結果を図７Ａ～７Ｂに示す。ＳＹＮ－３０１は、ＴＧＦ－β誘発性の遺伝子応答を部分的に遮断し、ＣＯＬ４Ａ１発現をおよそ２５－３０％低下させ（図７Ａ）、ＦＮ１発現をおよそ２０～２５％低下させ（図７Ａ）、ＬＲＲＣ１５発現をおよそ１５～２０％低下させた（図７Ｂ）。ＳＹＮ－３０２は、ＴＧＦ－βシグナル伝達の遮断においてより適度な応答があった一方、複合体化していない抗ＦＡＰ抗体およびアイソタイプコントロールＡＤＣは、ＴＧＦ－βシグナル伝達を阻害しなかった。
７．具体的な実施形態
本開示は、以下の具体的な実施形態により例示される。
１．筋線維芽細胞、活性化した線維芽細胞、筋線維芽細胞に移行する線維芽細胞、またはそれらの組合せの表面で発現する細胞表面分子に結合する標的化部分に作動可能に連結されたＡＬＫ５阻害剤を含む、標的化薬物複合体。
２．標的化部分が、筋線維芽細胞の細胞表面分子に結合する、実施形態１に記載の標的化薬物複合体。
３．標的化部分が、活性化した線維芽細胞の細胞表面分子に結合する、実施形態１または実施形態２に記載の標的化薬物複合体。
４．標的化部分が、筋線維芽細胞に移行する線維芽細胞の細胞表面分子に結合する、実施形態１から３のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
５．ＡＬＫ５阻害剤が、少なくとも２０ｎＭのＩＣ５０を有する、実施形態１から４のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
６．ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール系化合物、ピラゾール系化合物、またはチアゾール系化合物である、実施形態１から５のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
７．ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール系化合物である、実施形態６に記載の標的化薬物複合体。
８．ＡＬＫ５阻害剤が、ピラゾール系化合物である、実施形態６に記載の標的化薬物複合体。
９．ＡＬＫ５阻害剤が、チアゾール系化合物である、実施形態６に記載の標的化薬物複合体。
１０．ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール－ベンゾジオキソール化合物、またはイミダゾール－キノキサリン化合物である、イミダゾール系化合物である、実施形態６に記載の標的化薬物複合体。
１１．ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール－ベンゾジオキソール化合物である、実施形態１０に記載の標的化薬物複合体。
１２．ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール－キノキサリン化合物である、実施形態１０に記載の標的化薬物複合体。
１３．ＡＬＫ５阻害剤が、ピラゾール－ピロロ化合物である、ピラゾール系化合物である、実施形態６に記載の標的化薬物複合体。
１４．ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール－ベンゾジオキソール化合物、イミダゾール－キノキサリン化合物、ピラゾール－ピロロ化合物、またはチアゾール系化合物である、実施形態６に記載の標的化薬物複合体。
１５．ＡＬＫ５阻害剤が、化合物Ｃである、実施形態１から４のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
１６．ＡＬＫ５阻害剤が、化合物Ｎである、実施形態１から４のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
１７．ＡＬＫ５阻害剤が、リンカーを介して、標的化部分に連結されている、実施形態１から１６のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
１８．リンカーが、ＰＥＧを含有するリンカーである、実施形態１７に記載の標的化薬物複合体。
１９．リンカーが、多価リンカーである、実施形態１７または実施形態１８に記載の標的化薬物複合体。
２０．リンカーが、非切断性リンカーである、実施形態１７から１９のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
２１．非切断性リンカーが、Ｎ－マレイミドメチルシクロヘキサン－１－カルボキシレート、マレイミドカプロイル、またはメルカプトアセトアミドカプロイルリンカーである、実施形態２０に記載の標的化薬物複合体。
２２．非切断性リンカーが、Ｎ－マレイミドメチルシクロヘキサン１－カルボキシレートリンカーである、実施形態２１に記載の標的化薬物複合体。
２３．非切断性リンカーが、マレイミドカプロイルリンカーである、実施形態２１に記載の標的化薬物複合体。
２４．非切断性リンカーが、メルカプトアセトアミドカプロイルリンカーである、実施形態２１に記載の標的化薬物複合体。
２５．リンカーが、切断性リンカーである、実施形態１７から１９のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
２６．切断性リンカーが、ペプチドリンカーである、実施形態２５に記載の標的化薬物複合体。
２７．切断性リンカーが、ジペプチドリンカー、ジスルフィドリンカー、またはヒドラゾンリンカーである、実施形態２５に記載の標的化薬物複合体。
２８．切断性リンカーが、ジペプチドリンカーである、実施形態２７に記載の標的化薬物複合体。
２９．ペプチドリンカーが、トリペプチドリンカーである、実施形態２６に記載の標的化薬物複合体。
３０．ペプチドリンカーが、テトラペプチドリンカーである、実施形態２６に記載の標的化薬物複合体。
３１．ペプチドリンカーが、グリシン－グリシン－フェニルアラニン－グリシン（ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｐｈｅ－ｇｌｙ）リンカーである、実施形態３０に記載の標的化薬物複合体。
３２．切断性リンカーが、ジスルフィドリンカーである、実施形態２７に記載の標的化薬物複合体。
３３．切断性リンカーが、ヒドラゾンリンカーである、実施形態２７に記載の標的化薬物複合体。
３４．リンカーが、プロテアーゼ感受性バリン－シトルリンジペプチドリンカーである、実施形態２７に記載の標的化薬物複合体。
３５．リンカーが、プロテアーゼ感受性フェニルアラニン－リジンジペプチドリンカーである、実施形態２７に記載の標的化薬物複合体。
３６．リンカーが、グルタチオン感受性ジスルフィドリンカーである、実施形態２７に記載の標的化薬物複合体。
３７．リンカーが、酸感受性ジスルフィドリンカーである、実施形態２７に記載の標的化薬物複合体。
３８．ＡＬＫ５阻害剤が、部位特異的複合体化を介して、標的化部分に複合体化する、実施形態１から３７のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
３９．ＡＬＫ５阻害剤が、標的化部分上の１つまたは複数のシステイン、リジン、またはグルタミン残基を介して複合体化する、実施形態３８に記載の標的化薬物複合体。
４０．ＡＬＫ５阻害剤が、標的化部分上の１つまたは複数のシステイン残基を介して複合体化する、実施形態３９に記載の標的化薬物複合体。
４１．ＡＬＫ５阻害剤が、標的化部分上の１つまたは複数のリジン残基を介して複合体化する、実施形態３９に記載の標的化薬物複合体。
４２．ＡＬＫ５阻害剤が、標的化部分上の１つまたは複数のグルタミン残基を介して複合体化する、実施形態３９に記載の標的化薬物複合体。
４３．ＡＬＫ５阻害剤が、標的化部分上の１つまたは複数の非天然アミノ酸残基を介して複合体化する、実施形態３８に記載の標的化薬物複合体。
４４．１つまたは複数の非天然アミノ酸残基が、ｐ－アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＦ）を含む、実施形態４３に記載の標的化薬物複合体。
４５．１つまたは複数の非天然アミノ酸残基が、ｐ－アジドメチル－Ｌ－フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）を含む、実施形態４３に記載の標的化薬物複合体。
４６．１つまたは複数の非天然アミノ酸残基が、セレノシステイン（Ｓｅｃ）を含む、実施形態４３に記載の標的化薬物複合体。
４７．ＡＬＫ５阻害剤が、標的化部分上の１つまたは複数のグリカンを介して複合体化する、実施形態３８に記載の標的化薬物複合体。
４８．１つまたは複数のグリカンが、フコースを含む、実施形態４７に記載の標的化薬物複合体。
４９．１つまたは複数のグリカンが、６－チオフコースを含む、実施形態４７に記載の標的化薬物複合体。
５０．１つまたは複数のグリカンが、ガラクトースを含む、実施形態４７に記載の標的化薬物複合体。
５１．１つまたは複数のグリカンが、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を含む、実施形態４７に記載の標的化薬物複合体。
５２．１つまたは複数のグリカンが、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を含む、実施形態４７に記載の標的化薬物複合体。
５３．１つまたは複数のグリカンが、シアル酸（ＳＡ）を含む、実施形態４７に記載の標的化薬物複合体。
５４．ＡＬＫ５阻害剤が、リンカーを介して複合体化する、実施形態３８から５３のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
５５．標的化部分分子当たりのＡＬＫ５阻害剤分子の平均数が、１～３０の範囲である、実施形態１から５４のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
５６．標的化部分分子当たりのＡＬＫ５阻害剤分子の平均数が、１～２０の範囲である、実施形態１から５４のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
５７．標的化部分分子当たりのＡＬＫ５阻害剤分子の平均数が、１～１５の範囲である、実施形態１から５４のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
５８．標的化部分分子当たりのＡＬＫ５阻害剤分子の平均数が、２～１２の範囲である、実施形態１から５４のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
５９．標的化部分分子当たりのＡＬＫ５阻害剤分子の平均数が、４～１５の範囲である、実施形態１から５４のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
６０．標的化部分分子当たりのＡＬＫ５阻害剤分子の平均数が、６～１２の範囲である、実施形態１から５４のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
６１．標的化部分分子当たりのＡＬＫ５阻害剤分子の平均数が、２～８の範囲である、実施形態１から５４のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
６２．標的化部分が、内在化する、実施形態１から６１のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
６３．標的化部分が、抗体または抗体断片を含む、実施形態１から６２のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
６４．標的化部分が、抗体を含む、実施形態６３に記載の標的化薬物複合体。
６５．抗体が、モノクローナル抗体である、実施形態６４に記載の標的化薬物複合体。
６６．抗体が、ヒトまたはヒト化である、実施形態６５に記載の標的化薬物複合体。
６７．抗体が、ヒトである、実施形態６６に記載の標的化薬物複合体。
６８．抗体が、ヒト化である、実施形態６６に記載の標的化薬物複合体。
６９．標的化部分が、抗体断片を含む、実施形態６３に記載の標的化薬物複合体。
７０．抗体断片が、モノクローナル抗体の断片である、実施形態６９に記載の標的化薬物複合体。
７１．抗体断片が、ヒトまたはヒト化抗体の断片である、実施形態７０に記載の標的化薬物複合体。
７２．抗体断片が、ヒト抗体の断片である、実施形態７１に記載の標的化薬物複合体。
７３．抗体断片が、ヒト化抗体の断片である、実施形態７１に記載の標的化薬物複合体。
７４．抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、または単一ドメイン抗体である、実施形態６９から７３のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
７５．抗体断片が、Ｆａｂである、実施形態７４に記載の標的化薬物複合体。
７６．抗体断片が、Ｆａｂ’である、実施形態７４に記載の標的化薬物複合体。
７７．抗体断片が、Ｆ（ａｂ’）２である、実施形態７４に記載の標的化薬物複合体。
７８．抗体断片が、Ｆｖである、実施形態７４に記載の標的化薬物複合体。
７９．抗体断片が、ｓｃＦｖである、実施形態７４に記載の標的化薬物複合体。
８０．ｓｃＦｖが、ｓｃＦｖのＶＨおよびＶＬドメイン間のポリペプチドリンカーを含む、実施形態７９に記載の標的化薬物複合体。
８１．抗体断片が、ｄｓＦｖである、実施形態７４に記載の標的化薬物複合体。
８２．抗体断片が、単一ドメイン抗体である、実施形態７４に記載の標的化薬物複合体。
８３．単一ドメイン抗体が、ラクダＶＨＨ抗体断片またはヒト化ラクダＶＨＨ抗体断片である、実施形態８２に記載の標的化薬物複合体。
８４．標的化部分が、非免疫グロブリン系である、実施形態１から６２のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
８５．細胞表面分子が、ヒト細胞表面分子である、実施形態１から８４のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
８６．細胞表面分子が、ＦＡＰ、ＰＤＧＦＲ－β、ＦＧＦＲ１、ＰＰＡＲ－γ、ＦＳＰ１、ＧＦＡＰ、ファシン、ＣＤ１４７、ＣＸＣＲ４、αｖβ６、ＡＸＬ、またはＭＥＲＴＫである、実施形態１から８５のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
８７．細胞表面分子が、ＦＡＰである、実施形態８６に記載の標的化薬物複合体。
８８．標的化部分が、優先的には、可溶性ＦＡＰより膜結合型ＦＡＰに結合する、実施形態８７に記載の標的化薬物複合体。
８９．細胞表面分子が、ＰＤＧＦＲ－βである、実施形態８６に記載の標的化薬物複合体。
９０．細胞表面分子が、ＦＧＦＲ１である、実施形態８６に記載の標的化薬物複合体。
９１．細胞表面分子が、ＰＰＡＲ－γである、実施形態８６に記載の標的化薬物複合体。
９２．細胞表面分子が、ＦＳＰ１である、実施形態８６に記載の標的化薬物複合体。
９３．細胞表面分子が、ＧＦＡＰである、実施形態８６に記載の標的化薬物複合体。
９４．細胞表面分子が、ファシンである、実施形態８６に記載の標的化薬物複合体。
９５．細胞表面分子が、ＣＤ１４７である、実施形態８６に記載の標的化薬物複合体。
９６．細胞表面分子が、ＣＸＣＲ４である、実施形態８６に記載の標的化薬物複合体。
９７．細胞表面分子が、αｖβ６である、実施形態８６に記載の標的化薬物複合体。
９８．細胞表面分子が、ＡＸＬである、実施形態８６に記載の標的化薬物複合体。
９９．細胞表面分子が、ＭＥＲＴＫである、実施形態８６に記載の標的化薬物複合体。
１００．細胞表面分子が、ＬＲＲＣ１５である、実施形態１から８５のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
１０１．標的化薬物複合体と接触させた筋線維芽細胞（myofibrobast）のアポトーシスを促進する、実施形態１から１００のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
１０２．標的化薬物複合体と接触させた筋線維芽細胞の脱分化を促進する、実施形態１から１００のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
１０３．脱分化が、平滑筋アクチン発現の低下により測定される、実施形態１０２に記載の標的化薬物複合体。
１０４．エフェクター機能を低下させる、１つまたは複数のアミノ酸置換を有するＦｃドメインを含む、実施形態１から１０３のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
１０５．１つまたは複数の置換が、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ：Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２３３Ｋ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ｓ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｄ２６５Ｓ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｋ３２２Ａ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３２９Ｗ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｐ３２９Ｗ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ａ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ａ、またはＬ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ｅ／Ｅ３３３Ｋ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ｅ／Ｅ３３３Ｋを含む、実施形態１０４に記載の標的化薬物複合体。
１０６．１つまたは複数の置換が、Ｎ２９７Ａを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１０７．１つまたは複数の置換が、Ｎ２９７Ｑを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１０８．１つまたは複数の置換が、Ｎ２９７Ｇを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１０９．１つまたは複数の置換が、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１１０．１つまたは複数の置換が、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１１１．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３５Ｅを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１１２．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１１３．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１１４．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ：Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２３３Ｋを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１１５．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ｓ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｄ２６５Ｓを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１１６．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１１７．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｋ３２２Ａ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｋ３２２Ａを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１１８．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３２９Ｗ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｐ３２９Ｗを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１１９．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ａ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ａを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１２０．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ｅ／Ｅ３３３Ｋ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ｅ／Ｅ３３３Ｋを含む、実施形態１０５に記載の標的化薬物複合体。
１２１．実施形態１から１２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
１２２．医薬組成物の少なくとも３０％の標的化薬物複合体分子が、１～３０のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１２３．医薬組成物の少なくとも３０％の標的化薬物複合体分子が、１～２０のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１２４．医薬組成物の少なくとも３０％の標的化薬物複合体分子が、１～１５のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１２５．医薬組成物の少なくとも３０％の標的化薬物複合体分子が、２～１２のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１２６．医薬組成物の少なくとも３０％の標的化薬物複合体分子が、４～１５のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１２７．医薬組成物の少なくとも３０％の標的化薬物複合体分子が、６～１２のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１２８．医薬組成物の少なくとも３０％の標的化薬物複合体分子が、２～８のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１２９．医薬組成物の少なくとも４０％の標的化薬物複合体分子が、１～３０のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１３０．医薬組成物の少なくとも４０％の標的化薬物複合体分子が、１～２０のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１３１．医薬組成物の少なくとも４０％の標的化薬物複合体分子が、１～１５のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１３２．医薬組成物の少なくとも４０％の標的化薬物複合体分子が、２～１２のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１３３．医薬組成物の少なくとも４０％の標的化薬物複合体分子が、４～１５のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１３４．医薬組成物の少なくとも４０％の標的化薬物複合体分子が、６～１２のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１３５．医薬組成物の少なくとも４０％の標的化薬物複合体分子が、２～８のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１３６．医薬組成物の少なくとも５０％の標的化薬物複合体分子が、１～３０のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１３７．医薬組成物の少なくとも５０％の標的化薬物複合体分子が、１～２０のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１３８．医薬組成物の少なくとも５０％の標的化薬物複合体分子が、１～１５のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１３９．医薬組成物の少なくとも５０％の標的化薬物複合体分子が、２～１２のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１４０．医薬組成物の少なくとも５０％の標的化薬物複合体分子が、４～１５のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１４１．医薬組成物の少なくとも５０％の標的化薬物複合体分子が、６～１２のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１４２．医薬組成物の少なくとも５０％の標的化薬物複合体分子が、２～８のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１４３．医薬組成物の少なくとも６０％の標的化薬物複合体分子が、１～３０のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１４４．医薬組成物の少なくとも６０％の標的化薬物複合体分子が、１～２０のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１４５．医薬組成物の少なくとも６０％の標的化薬物複合体分子が、１～１５のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１４６．医薬組成物の少なくとも６０％の標的化薬物複合体分子が、２～１２のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１４７．医薬組成物の少なくとも６０％の標的化薬物複合体分子が、４～１５のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１４８．医薬組成物の少なくとも６０％の標的化薬物複合体分子が、６～１２のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１４９．医薬組成物の少なくとも６０％の標的化薬物複合体分子が、２～８のＡＬＫ５阻害剤：標的化部分の比を有する、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１５０．それを必要とする対象の線維症を処置する方法であって、対象に、実施形態１から１２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、または実施形態１２１から１４９のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
１５１．線維症が、肺線維症である、実施形態１５０に記載の方法。
１５２．線維症が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、実施形態１５１に記載の方法。
１５３．線維症が、肝線維症である、実施形態１５０に記載の方法。
１５４．線維症が、腎線維症である、実施形態１５０に記載の方法。
１５５．線維症が、心臓線維症である、実施形態１５０に記載の方法。
１５６．線維症が、皮膚線維症である、実施形態１５０に記載の方法。
１５７．線維症が、食道線維症である、実施形態１５０に記載の方法。
１５８．対象が、ＮＡＳＨを有する、例えば、ＮＡＳＨと診断されている、実施形態１５３に記載の方法。
１５９．対象が、全身性硬化症を有する、例えば、全身性硬化症と診断されている、実施形態１５０から１５７のいずれか一項に記載の方法。
１６０．全身性硬化症を有する、例えば、全身性硬化症と診断されている対象を処置する方法であって、対象に、実施形態１から１２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、または実施形態１２１から１４９のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
１６１．ＮＡＳＨを有する、例えば、ＮＡＳＨと診断されている対象の方法であって、対象に、実施形態１から１２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、または実施形態１２１から１４９のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
１６２．対象が、線維症の徴候および／または症状を呈する、実施形態１６０または実施形態１６１に記載の方法。
１６３．対象が、線維症の徴候および／または症状を呈さない、実施形態１６０または実施形態１６１に記載の方法。
１６４．標的化薬物複合体または医薬組成物が、１つまたは複数の第２の治療剤を投与することを含む併用療法レジメンの一部として投与され、任意で、１つまたは複数の薬剤が、実施形態１から１２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体ではない（各々「第２の治療剤」）、実施形態１５０から１６３のいずれか一項に記載の方法。
１６５．標的化薬物複合体または医薬組成物が、標準ケアの療法または治療レジメンと組み合わせて投与される、実施形態１６４に記載の方法。
１６６．併用療法が、少なくとも１つの第２の治療剤を対象に投与することを含む、実施形態１６４または１６５に記載の方法。
１６７．第２の治療剤が、ピルフェニドン、ニンテダニブ、ペントラキシン－２、パムレブルマブ、プレドニゾン、コルチゾン、シクロホスファミド、またはアザチオプリンを含む、実施形態１６４から１６６のいずれか一項に記載の方法。
１６８．第２の治療剤が、ピルフェニドンを含む、実施形態１６７に記載の方法。
１６９．第２の治療剤が、ニンテダニブを含む、実施形態１６７または実施形態１６８に記載の方法。
１７０．第２の治療剤が、ペントラキシン－２を含む、実施形態１６７から１６９のいずれか一項に記載の方法。
１７１．第２の治療剤が、パムレブルマブを含む、実施形態１６７から１７０のいずれか一項に記載の方法。
１７２．第２の治療剤が、プレドニゾンを含む、実施形態１６７から１７１のいずれか一項に記載の方法。
１７３．第２の治療剤が、コルチゾンを含む、実施形態１６７から１７２のいずれか一項に記載の方法。
１７４．第２の治療剤が、シクロホスファミドを含む、実施形態１６７から１７３のいずれか一項に記載の方法。
１７５．第２の治療剤が、アザチオプリンを含む、実施形態１６７から１７４のいずれか一項に記載の方法。
１７６．併用療法で対象を処置することを含む、実施形態１６４から１７５のいずれか一項に記載の方法。
１７７．第２の治療剤を対象に投与することを含む、実施形態１６４から１７６のいずれか一項に記載の方法。
１７８．がんを有する対象を処置する方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１から１２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、または実施形態１２１から１４９のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
１７９．がんが、尿路上皮がんである、実施形態１７８に記載の方法。
１８０．がんが、膀胱がんである、実施形態１７９に記載の方法。
１８１．がんが、尿道がんである、実施形態１７９に記載の方法。
１８２．がんが、尿管がんである、実施形態１７９に記載の方法。
１８３．がんが、肺がんである、実施形態１７８に記載の方法。
１８４．がんが、ＮＳＣＬＣである、実施形態１８３に記載の方法。
１８５．ＮＳＣＬＣが、腺癌である、実施形態１８４に記載の方法。
１８６．ＮＳＣＬＣが、扁平上皮細胞癌である、実施形態１８４に記載の方法。
１８７．ＮＳＣＬＣが、大細胞癌である、実施形態１８４に記載の方法。
１８８．がんが、小細胞肺がんである、実施形態１８３に記載の方法。
１８９．がんが、乳がんである、実施形態１７８に記載の方法。
１９０．がんが、膵がんである、実施形態１７８に記載の方法。
１９１．がんが、前立腺がんである、実施形態１７８に記載の方法。
１９２．がんが、食道がんである、実施形態１７８に記載の方法。
１９３．がんが、結腸直腸がんである、実施形態１７８に記載の方法。
１９４．結腸直腸がんが、腺癌である、実施形態１９３に記載の方法。
１９５．結腸直腸がんが、カルチノイド腫瘍である、実施形態１９３に記載の方法。
１９６．結腸直腸がんが、消化管間質性腫瘍である、実施形態１９３に記載の方法。
１９７．結腸直腸がんが、結腸直腸リンパ腫である、実施形態１９３に記載の方法。
１９８．がんが、頭頚部がんである、実施形態１７８に記載の方法。
１９９．がんが、卵巣がんである、実施形態１７８に記載の方法。
２００．がんが、腎がんである、実施形態１７８に記載の方法。
２０１．がんが、胃腺癌である、実施形態１７８に記載の方法。
２０２．標的化薬物複合体または医薬組成物が、１つまたは複数の第２の治療剤を投与することを含む併用療法レジメンの一部として投与され、任意で、１つまたは複数の薬剤が、実施形態１から１２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体ではない（各々「第２の治療剤」）、実施形態１７８から２０１のいずれか一項に記載の方法。
２０３．標的化薬物複合体または医薬組成物が、標準ケアの療法または治療レジメンと組み合わせて投与される、実施形態２０２に記載の方法。
２０４．併用療法が、少なくとも１つの第２の治療剤を対象に投与することを含む、実施形態２０２または２０３に記載の方法。
２０５．併用療法が、免疫療法を含み、任意で、免疫療法が、チェックポイント阻害剤療法、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法、養子Ｔ細胞療法、腫瘍溶解性ウイルス療法、樹状細胞ワクチン療法、ＳＴＩＮＧアゴニスト療法、ＴＬＲアゴニスト療法、腫瘍内ＣｐＧ療法、またはサイトカイン療法である、実施形態２０２から２０４のいずれか一項に記載の方法。
２０６．併用療法が、チェックポイント阻害剤療法を含む、実施形態２０２から２０５のいずれか一項に記載の方法。
２０７．チェックポイント阻害剤療法が、Ｔ細胞チェックポイント阻害剤療法を含む、実施形態２０６に記載の方法。
２０８．Ｔ細胞チェックポイント阻害剤療法が、抗体またはその抗原結合性断片を含む、実施形態２０７に記載の方法。
２０９．チェックポイント阻害剤療法が、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＶＩＳＴＡ、またはその組合せを標的化する、実施形態２０６から２０８のいずれか一項に記載の方法。
２１０．チェックポイント阻害剤療法が、ＰＤ１を標的化する、実施形態２０９に記載の方法。
２１１．第２の治療剤が、ペムブロリズマブである、実施形態２１０に記載の方法。
２１２．第２の治療剤が、ニボルマブである、実施形態２１０に記載の方法。
２１３．第２の治療剤が、セミプリマブである、実施形態２１０に記載の方法。
２１４．第２の治療剤が、ドスタルリマブである、実施形態２１０に記載の方法。
２１５．チェックポイント阻害剤療法が、ＰＤＬ１を標的化する、実施形態２０９から２１４のいずれか一項に記載の方法。
２１６．第２の治療剤が、アテゾリズマブである、実施形態２１５に記載の方法。
２１７．第２の治療剤が、アベルマブである、実施形態２１５に記載の方法。
２１８．第２の治療剤が、デュルバルマブである、実施形態２１５に記載の方法。
２１９．チェックポイント阻害剤療法が、ＣＴＬＡ４を標的化する、実施形態２０９から２１８のいずれか一項に記載の方法。
２２０．第２の治療剤が、イピリムマブである、実施形態２１９に記載の方法。
２２１．チェックポイント阻害剤療法が、ＴＩＧＩＴを標的化する、実施形態２０９から２２０のいずれか一項に記載の方法。
２２２．第２の治療剤が、エチギリマブである、実施形態２２１に記載の方法。
２２３．第２の治療剤が、チラゴルマブである、実施形態２２１に記載の方法。
２２４．第２の治療剤が、ＡＢ１５４である、実施形態２２１に記載の方法。
２２５．チェックポイント阻害剤療法が、ＬＡＧ３を標的化する、実施形態２０９から２２４のいずれか一項に記載の方法。
２２６．第２の治療剤が、ＬＡＧ５２５である、実施形態２２５に記載の方法。
２２７．第２の治療剤が、Ｓｙｍ０２２である、実施形態２２５に記載の方法。
２２８．第２の治療剤が、レラトリマブである、実施形態２２５に記載の方法。
２２９．第２の治療剤が、ＴＳＲ－０３３である、実施形態２２５に記載の方法。
２３０．チェックポイント阻害剤療法が、ＯＸ４０を標的化する、実施形態２０９から２２９のいずれか一項に記載の方法。
２３１．第２の治療剤が、ＭＥＤＩ６４６９である、実施形態２３０に記載の方法。
２３２．第２の治療剤が、ＰＦ－０４５１８６００である、実施形態２３０に記載の方法。
２３３．第２の治療剤が、ＢＭＳ ９８６１７８である、実施形態２３０に記載の方法。
２３４．チェックポイント阻害剤療法が、ＣＤ４０を標的化する、実施形態２０９から２３３のいずれか一項に記載の方法。
２３５．第２の治療剤が、セリクレルマブである、実施形態２３４に記載の方法。
２３６．第２の治療剤が、ＣＰ－８７０，８９３である、実施形態２３４に記載の方法。
２３７．第２の治療剤が、ＡＰＸ００５Ｍである、実施形態２３４に記載の方法。
２３８．チェックポイント阻害剤療法が、ＶＩＳＴＡを標的化する、実施形態２０９から２３７のいずれか一項に記載の方法。
２３９．第２の治療剤が、ＨＭＢＤ－００２である、実施形態２３８に記載の方法。
２４０．第２の治療剤が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態２０２から２３９のいずれか一項に記載の方法。
２４１．併用療法が、養子Ｔ細胞療法を含む、実施形態２０２から２４０のいずれか一項に記載の方法。
２４２．養子Ｔ細胞療法が、自己Ｔ細胞療法である、実施形態２４１に記載の方法。
２４３．併用療法が、腫瘍溶解性ウイルス療法を含む、実施形態２０２から２４２のいずれか一項に記載の方法。
２４４．併用療法が、樹状細胞ワクチン療法を含む、実施形態２０２から２４３のいずれか一項に記載の方法。
２４５．併用療法が、ＳＴＩＮＧアゴニスト療法を含む、実施形態２０２から２４４のいずれか一項に記載の方法。
２４６．併用療法が、ＴＬＲアゴニスト療法を含む、実施形態２０２から２４５のいずれか一項に記載の方法。
２４７．併用療法が、化学療法を含む、実施形態２０２から２４６のいずれか一項に記載の方法。
２４８．第２の治療剤が、代謝拮抗物質、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗微小管剤、白金化合物、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、またはビンカアルカロイドである、実施形態２４７に記載の方法。
２４９．第２の治療剤が、代謝拮抗物質である、実施形態２４８に記載の方法。
２５０．代謝拮抗物質が、５－フルオロウラシルである、実施形態２４９に記載の方法。
２５１．代謝拮抗物質が、ゲムシタビンである、実施形態２４９に記載の方法。
２５２．代謝拮抗物質が、メトトレキセートである、実施形態２４９に記載の方法。
２５３．第２の治療剤が、アルキル化剤である、実施形態２４８に記載の方法。
２５４．アルキル化剤が、シクロホスファミドである、実施形態２５３に記載の方法。
２５５．アルキル化剤が、ダカルバジンである、実施形態２５３に記載の方法。
２５６．アルキル化剤が、メクロレタミンである、実施形態２５３に記載の方法。
２５７．アルキル化剤が、ジアジコンである、実施形態２５３に記載の方法。
２５８．アルキル化剤が、テモゾロマイドである、実施形態２５３に記載の方法。
２５９．第２の治療剤が、アントラサイクリンである、実施形態２４８に記載の方法。
２６０．アントラサイクリンが、ドキソルビシンである、実施形態２５９に記載の方法。
２６１．アントラサイクリンが、エピルビシンである、実施形態２５９に記載の方法。
２６２．第２の治療剤が、抗微小管剤である、実施形態２４８に記載の方法。
２６３．抗微小管剤が、ビンブラスチンである、実施形態２６２に記載の方法。
２６４．第２の治療剤が、白金化合物である、実施形態２４８に記載の方法。
２６５．白金化合物が、シスプラチンである、実施形態２６４に記載の方法。
２６６．白金化合物が、オキサリプラチンである、実施形態２６４に記載の方法。
２６７．第２の治療剤が、タキサンである、実施形態２４８に記載の方法。
２６８．タキサンが、パクリタキセルである、実施形態２６７に記載の方法。
２６９．タキサンが、ドセタキセルである、実施形態２６７に記載の方法。
２７０．第２の治療剤が、トポイソメラーゼ阻害剤である、実施形態２４８に記載の方法。
２７１．トポイソメラーゼ阻害剤が、エトポシドである、実施形態２７０に記載の方法。
２７２．トポイソメラーゼ阻害剤が、ミトキサントロンである、実施形態２７０に記載の方法。
２７３．第２の治療剤が、ビンカアルカロイドである、実施形態２４８に記載の方法。
２７４．ビンカアルカロイドが、ビンクリスチンである、実施形態２７３に記載の方法。
２７５．併用療法が、腫瘍内ＣｐＧ療法を含む、実施形態２０２から２７４のいずれか一項に記載の方法。
２７６．第２の治療剤が、細胞毒性ペイロードを伴うＡＤＣである、実施形態２０２から２７５のいずれか一項に記載の方法。
２７７．細胞毒性ペイロードを伴うＡＤＣが、ＦＡＰを標的化する、実施形態２７６に記載の方法。
２７８．第２の治療剤が、ＯＭＴＸ７０５である、実施形態２７７に記載の方法。
２７９．第２の治療剤が、サイトカインである、実施形態２０２から２７８のいずれか一項に記載の方法。
２８０．サイトカインが、ＩＬ２である、実施形態２７９に記載の方法。
２８１．サイトカインが、ＩＬ１２である、実施形態２７９に記載の方法。
２８２．サイトカインが、ＩＦＮ－αである、実施形態２７９に記載の方法。
２８３．サイトカインが、ＩＦＮ－γである、実施形態２７９に記載の方法。
２８４．併用療法で対象を処置することを含む、実施形態２０２から２８３のいずれか一項に記載の方法。
２８５．第２の治療剤を対象に投与することを含む、実施形態２０２から２８４のいずれか一項に記載の方法。
２８６．筋線維芽細胞の休止している線維芽細胞への脱分化を促進する方法であって、筋線維芽細胞を、実施形態１から１２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、または実施形態１２１から１４９のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させることを含む、方法。
２８７．活性化した線維芽細胞の休止している線維芽細胞への脱分化を促進する方法であって、活性化した線維芽細胞を、実施形態１から１２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、または実施形態１２１から１４９のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させることを含む、方法。
２８８．筋線維芽細胞に移行する線維芽細胞の休止している線維芽細胞への脱分化を促進する方法であって、筋線維芽細胞に移行する線維芽細胞を、実施形態１から１２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、または実施形態１２１から１４９のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させることを含む、方法。
２８９．脱分化が、平滑筋アクチン発現の低下を含む、実施形態２８６から２８８のいずれか一項に記載の方法。
２９０．筋線維芽細胞のアポトーシスを促進する方法であって、筋線維芽細胞を、実施形態１から１２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、または実施形態１２１から１４９のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させることを含む、方法。
２９１．活性化した線維芽細胞のアポトーシスを促進する方法であって、活性化した線維芽細胞を、実施形態１から１２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、または実施形態１２１から１４９のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させることを含む、方法。
２９２．筋線維芽細胞に移行する線維芽細胞のアポトーシスを促進する方法であって、筋線維芽細胞に移行する線維芽細胞を、実施形態１から１２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、または実施形態１２１から１４９のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させることを含む、方法。
２９３．接触させることが、対象においてｉｎ ｖｉｖｏで実施される、実施形態２８６から２９２のいずれか一項に記載の方法。
２９４．標的化薬物複合体または医薬組成物を対象に投与することを含む、実施形態２９３に記載の方法。
２９５．化合物Ｃまたはその塩。
２９６．化合物Ｎまたはその塩。
２９７．標的化部分に作動可能に連結された化合物Ｃを含む、標的化薬物複合体。
２９８．標的化部分に作動可能に連結された化合物Ｎを含む、標的化薬物複合体。
２９９．リンカーに複合体化する、化合物Ｃ。
３００．リンカーに複合体化する、化合物Ｎ。
様々な具体的な実施形態が例示および記載されるが、本開示の精神および範囲を逸脱することなく、様々な変化がなされ得ることが理解されよう。
８．参照文献の引用
本出願で引用される全ての刊行物、特許、特許出願、および他の文献は、各刊行物、特許、特許出願、または他の文献が、個別に、全ての目的に対して参照により組み込まれると示されるのと同様の程度まで、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書および本開示に組み込まれる参照文献の１つまたは複数の教示の間に不一致がある場合、本明細書の教示が意図される。

Claims (29)

  1. 筋線維芽細胞、活性化した線維芽細胞、筋線維芽細胞に移行する線維芽細胞、またはそれらの組合せの表面で発現する細胞表面分子に結合する標的化部分に作動可能に連結されたＡＬＫ５阻害剤を含む、標的化薬物複合体であって、前記ＡＬＫ５阻害剤が、Ｎ－メチル－２－（４－（４－（３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エタン－１－アミンである、標的化薬物複合体。
  2. 前記ＡＬＫ５阻害剤が、リンカーを介して、前記標的化部分に連結されている、請求項１に記載の標的化薬物複合体。
  3. 前記リンカーが、ＰＥＧを含有するリンカーである、請求項２に記載の標的化薬物複合体。
  4. 前記ＡＬＫ５阻害剤が、非切断性リンカーまたは切断性リンカーを介して、前記標的化部分に連結されている、請求項１から３のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
  5. 前記ＡＬＫ５阻害剤が、Ｎ－マレイミドメチルシクロヘキサン－１－カルボキシレート、マレイミドカプロイル、またはメルカプトアセトアミドカプロイルリンカーである非切断性リンカーを介して、前記標的化部分に連結されている、請求項４に記載の標的化薬物複合体。
  6. 前記ＡＬＫ５阻害剤が、ジペプチドリンカー、ジスルフィドリンカー、またはヒドラゾンリンカーである切断性リンカーを介して、前記標的化部分に連結されている、請求項４に記載の標的化薬物複合体。
  7. 前記リンカーが、プロテアーゼ感受性バリン－シトルリンジペプチドリンカー、グルタチオン感受性ジスルフィドリンカー、または酸感受性ジスルフィドリンカーである、請求項６に記載の標的化薬物複合体。
  8. 前記リンカーが、バリン－シトルリンジペプチドリンカーである、請求項７に記載の標的化薬物複合体。
  9. 前記リンカーが、ジスルフィドリンカーである、請求項６に記載の標的化薬物複合体。
  10. 前記ＡＬＫ５阻害剤が、前記標的化部分上の１つもしくは複数のシステイン残基、または前記標的化部分上の１つもしくは複数のリジン残基を介して複合体化し、任意で、リンカーを介して複合体化する、請求項１から９のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
  11. 標的化部分の分子当たりのＡＬＫ５阻害剤分子の平均数が、２～８の範囲である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
  12. 前記標的化部分が、抗体または抗体断片を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
  13. 前記標的化部分が、抗体を含む、請求項１２に記載の標的化薬物複合体。
  14. 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１３に記載の標的化薬物複合体。
  15. 前記抗体が、ヒトまたはヒト化である、請求項１４に記載の標的化薬物複合体。
  16. 前記標的化部分が、抗体断片を含む、請求項１２に記載の標的化薬物複合体。
  17. 前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、または単一ドメイン抗体である、請求項１６に記載の標的化薬物複合体。
  18. 前記抗体断片が、ヒトまたはヒト化抗体の断片である、請求項１６に記載の標的化薬物複合体。
  19. 前記細胞表面分子が、ＦＡＰ、ＰＤＧＦＲ－β、ＦＧＦＲ１、ＰＰＡＲ－γ、ＦＳＰ１、ＧＦＡＰ、ファシン、αｖβ６、ＣＤ１４７、ＣＸＣＲ４、αｖβ６、ＡＸＬ、またはＭＥＲＴＫである、請求項１から１８のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体。
  20. 前記細胞表面分子が、ＦＡＰである、請求項１９に記載の標的化薬物複合体。
  21. 請求項１から２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
  22. 線維症を処置する方法での使用のための、請求項１から２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、または請求項２１に記載の医薬組成物。
  23. 前記線維症が、肺線維症、肝線維症、腎線維症、心臓線維症、皮膚線維症、または食道線維症である、請求項２２に記載の使用のための標的化薬物複合体または医薬組成物。
  24. 前記繊維症が、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、請求項２２に記載の使用のための標的化薬物複合体または医薬組成物。
  25. 前記標的化薬物複合体が、単独療法として投与される、請求項２２から２４のいずれか一項に記載の使用のための標的化薬物複合体または医薬組成物。
  26. 前記標的化薬物複合体が、併用療法レジメンの一部として投与される、請求項２２から２４のいずれか一項に記載の使用のための標的化薬物複合体または医薬組成物。
  27. 前記併用療法レジメンが、ピルフェニドンまたはニンテダニブを含む、請求項２６に記載の使用のための標的化薬物複合体または医薬組成物。
  28. 全身性硬化症を処置する方法での使用のための、請求項１から２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、または請求項２１に記載の医薬組成物。
  29. がんを処置する方法での使用のための、請求項１から２０のいずれか一項に記載の標的化薬物複合体、または請求項２１に記載の医薬組成物。
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