JP7335957B2 - 抗体-alk5阻害剤コンジュゲートおよびその使用 - Google Patents
抗体-alk5阻害剤コンジュゲートおよびその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7335957B2 JP7335957B2 JP2021523548A JP2021523548A JP7335957B2 JP 7335957 B2 JP7335957 B2 JP 7335957B2 JP 2021523548 A JP2021523548 A JP 2021523548A JP 2021523548 A JP2021523548 A JP 2021523548A JP 7335957 B2 JP7335957 B2 JP 7335957B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- adc
- antibody
- linker
- antigen
- alk5 inhibitor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2806—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/77—Internalization into the cell
Description
サイトカインのトランスフォーミング増殖因子-ベータ(TGF-β)ファミリーのメンバーは、正常な組織の発達の間ならびに疾患状態の両方で、多種多様の生物学的プロセスを調節する、多機能性タンパク質である。TGF-βファミリーメンバーは、炎症、創傷治癒、細胞外マトリックスの蓄積、骨形成、組織の発達、細胞分化、心臓弁リモデリング、組織線維化、および腫瘍進行などに関与している。(Barnard et al., 1990, Biochim Biophys Acta. 1032:79-87、Sporn et al., 1992, J Cell Biol 119:1017-1021、Yingling et al., 2004, Nature Reviews, 3:1011-1022、Janssens et al., 2005, Endocr Rev., 26(6):743-74)。3つの哺乳動物イソ型が、これまでに同定されている:TGF-β1、TGF-β2、およびTGF-β3(Massague, 1990, Annu Rev Cell Biol 6:597-641)。トランスフォーミング増殖因子スーパーファミリーの他のメンバーとして、アクチビン、インヒビン、骨形態形成タンパク質、増殖および分化因子、ならびにミュラー阻害物質が挙げられる。
標的とする宿主毒性を避け、ならびにALK5阻害剤療法による腫瘍進行の意図しない悪化を防ぐために、発明者は、治療利益をもたらすこれら細胞にのみ化合物を指向させるための新規のアプローチを開発した。
本開示は、がんを処置するのに有用な抗体-薬物コンジュゲート(ADC)であって、直接的に、またはリンカーを通してALK5阻害剤と共有結合した抗体成分を含む、抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を提供する。本開示のADCの概説は、第4.1節に表す。ADCの抗体成分は、完全な抗体またはその断片であり得る。本開示のADCで使用することができる抗体は、第4.2節に詳述されている。本開示のADCで使用することができるALK5阻害剤は、第4.3節に詳述されている。本開示のADCは、典型的には、抗体とALK5阻害剤の間にリンカーを含有する。本開示のADCで使用することができる例示的なリンカーは、第4.4節に詳述されている。本開示のADCは、抗体当たり様々な数のALK5阻害剤部分を含有することができる。薬物搭載は、第4.5節に詳述されている。本開示は、本開示のADCを含む、医薬製剤をさらに提供する。ADCを含む医薬製剤は、第4.6節に記載されている。本開示は、本開示のADCを使用して様々ながんを処置する方法をさらに提供する。がんの処置のために単独療法として、または併用療法の一部として本開示のADCを使用する方法は、第4.7節に記載されている。
本開示のADCは、一般に、共有結合が抗体の標的への結合に干渉しないように、典型的にはリンカーを介して、抗体と共有結合したALK5阻害剤で構成される。
本開示は、抗体成分がT細胞表面分子に結合する、抗体薬物コンジュゲートを提供する。別段指示されない限り、用語「抗体」(Ab)とは、特定の抗原と特異的に結合するか、または免疫学的に反応する、免疫グロブリン分子を指し、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、遺伝子操作した抗体、および他の修飾した形態の抗体が挙げられ、限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヘテロコンジュゲート抗体(例えば、二重特異性抗体(bispecific antibody)、二重特異性抗体(diabody)、三重特異性抗体、および四重特異性抗体)、ならびに、例えばFab’、F(ab’)2、Fab、Fv、rIgG、およびscFv断片を含む抗体の抗原結合断片が挙げられる。さらに、別段指示されない限り、用語「モノクローナル抗体」(mAb)とは、タンパク質に特異的に結合することが可能である、完全な分子、ならびに抗体断片(例えば、FabおよびF(ab’)2断片)の両方を含むことを意味する。FabおよびF(ab’)2断片は、完全な抗体のFc断片が欠如しており、動物または植物の循環からより迅速に取り除かれ、完全な抗体より少ない非特異的組織結合を有し得る(Wahl et al., 1983, J. Nucl. Med. 24:316)。
本開示のALK5阻害剤は、好ましくは、競合的、可逆的に、ALK5受容体の細胞質キナーゼドメインでATP結合部位と結合し、下流のR-Smadリン酸化を防ぐ、小分子である。
典型的には、ADCは、ALK5阻害剤と抗体との間のリンカーを含む。リンカーは、共有結合を含む部分、または抗体を薬物部分に共有結合する原子の鎖である。様々な実施形態において、リンカーとして、アルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイルのような二価基、-(CR2)nO(CR2)n-、アルキルオキシ(例えばポリエチレンオキシ、PEG、ポリメチレンオキシ)およびアルキルアミノ(例えばポリエチレンアミノ、Jeffamine(商標))の繰返し単位のような部分、ならびにコハク酸塩、スクシンアミド、ジグリコール酸塩、マロン酸塩、およびカプロアミドを含む二酸エステルおよびアミドが挙げられる。
Ab-(L-D)p I
(式中、AbおよびDは、式Iについて上記で定義されており、Aは、ストレッチャーであり、aは、0から1の範囲の整数であり、Wは、アミノ酸単位であり、wは、0から12の範囲の整数であり、Qは、-C1~C8アルキル、-O-(C1~C8アルキル)、-ハロゲン、-ニトロ、または-シアノであり、mは、0~4の範囲の整数であり、nは、0または1であり、pは、1から約20の範囲である)
Ab-(-[Aa-Ww-Yy]-D)p II
(式中、Ab、A、a、W、w、D、およびpは、先の段落で定義されており、Yは、スペーサー単位であり、yは、0、1、または2である)。このようなリンカーの例示的な実施形態は、米国特許出願公開第2005/0238649号明細書に記載され、それは、参照により本明細書に組み込まれる。
薬物搭載は、pで表され、分子中の抗体当たりのALK5阻害剤部分の平均数である。平均数は、多くの場合、分数または小数であるが、薬物搭載(「p」)は、抗体当たり1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20またはそれ以上の部分(D)であり得る。一般に、ALK5阻害剤搭載は、平均すると抗体当たり2から8個の薬物部分、より好ましくは抗体当たり2から4個の薬物部分、または抗体当たり5から7個の薬物部分となる。
ADCの投与の好適な経路として、限定されないが、経口、非経口、直腸、経粘膜、腸内投与、髄内、鞘内、直接心室内、静脈内、硝子体内、体腔内、腹腔内、または腫瘍内注射が挙げられる。投与の好ましい経路は、非経口であり、より好ましいのは静脈内である。あるいは、全身ではなく局所的な方法において、例えば、固体または血液腫瘍への化合物の直接的な注射を介して、化合物を投与することができる。
本開示のADCは、様々ながんの処置に使用することができる。ADCは、例えば、標準ケアの薬剤またはレジメンで、単独療法として、または併用療法レジメンの一部として使用することができる。がんの処置のためのADCに含めるのに好適な抗体は、T細胞の表面抗原を標的化するものである。例示的な抗体は、第4.2節に記載される。
Boc - tert-ブチルオキシカルボニル
DCM - ジクロロメタン
DMA - ジメチルアミン
DMF - ジメチルホルムアミド
DIPEA - N,N-ジイソプロピルエチルアミン
EtOAc - 酢酸エチル
EtOH - エタノール
Fmoc - フルオレニルメチルオキシカルボニル
HOBt - ヒドロキシベンゾトリアゾール
MeOH - メタノール
NaHMDS - ナトリウムヘキサメチルジシルアジド
RT - 室温、およそ21℃
TBTU - O-(ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
TEA - トリエチルアミン
THF - テトラヒドロフラン
TFA - トリフルオロ酢酸
TMS-イミダゾール - 1-(トリメチルシリル)イミダゾール
[実施例1]
4-(6-メチルピリジン-2-イル)-5-(1,5-ナフチリジン-2-イル)-1,3-チアゾール-2-アミン(化合物A)の合成
化合物Aを、以下のスキーム1における一般的方法にしたがって調製した。
濃硫酸(2.5ml)、m-ニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム(2.08g、9.24mmol)、ボロン酸(445mg、7.21mmol)、および硫酸第一鉄七水和物(167mg、0.60mmol)の混合物を、室温で撹拌した。グリセロール(1.5ml)を、続いて5-アミノ-2-メチルピリジン(A-SM)(500mg、4.62mmol)および水(2.5ml)を、反応混合物に添加し、135℃で18時間加熱した。TLCにより測定した反応完了後、反応混合物をおよそ21℃に冷却し、4NのNaOHを使用して塩基化し、EtOAc(2×100ml)で抽出した。有機抽出物を合わせて、水(200ml)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、粗化合物A1を得た。粗体を、(2%のMeOH/CH2Cl2)を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡褐色結晶質固体として化合物A1(200mg、30%)を得た。
A1(200mg、1.38mmol)およびメチル6-メチルピコリネート(209mg、1.38mmol)の無水THF(10ml)中の溶液を、N2雰囲気下に置き、-78℃に冷却した。カリウムビス(トリメチルシリル)アミド(トルエン中に0.5M、6.9ml、3.47mmol)を、5分間にわたって滴下添加した。反応混合物を、-78℃で1時間撹拌し、次いでおよそ21℃に加温し、20時間維持した。反応完了後(TLCにより測定)、反応混合物を、飽和塩化アンモニウム溶液(20ml)でクエンチした。水性層をEtOAc(2×20ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を、水(100ml)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、蒸発させて、粗化合物A2を得た。粗物質を、カラムクロマトグラフィー(1%のMeOH/CH2Cl2)により精製して、橙黄色固体として化合物A2(110mg、30.5%)を得た。
A2(110mg、0.418mmol)の1,4-ジオキサン(10ml)中の溶液を、臭素(0.025ml、0.501mmol)で処理した。得られた反応混合物を、およそ21℃で1時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮して、粗A3(120mg)を得て、これをさらに精製することなく次のステップで用いた。粗A3(120mg)を、エタノール(15ml)に溶解させた。次いで、チオ尿素(3.5mg、0.046mmol)を添加し、反応混合物を、(出発物質の完全な消費がTLCにより観察されるまで)78℃で4時間加熱した。反応混合物を、およそ21℃に冷却し、アンモニア溶液(25%、1.5ml)を穏やかに撹拌しながら添加した。溶媒を蒸発させ、次いで残留物をCH2Cl2(2×20ml)に溶解させ、水(50.0ml)で洗浄した。次いで、分離した有機層を、1NのHCl(30ml×2)で洗浄した。合わせた水性層を35%の水酸化ナトリウム水溶液(20ml)で塩基化し、CH2Cl2(2×20ml)で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、粗化合物Aを得た。粗化合物Aをアセトニトリル(2ml)から再結晶させて、黄色結晶質固体として精製した化合物A(35mg、2ステップにわたって49%の収率)を得た。
[実施例2]
N-メチル-2-(4-{4-[3-(ピリジン-2-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]ピリジン-2-イル}フェノキシ)エタン-1-アミン(化合物B)の合成
化合物Bを、以下のスキーム2における一般的方法にしたがって調製した。
Boc-無水物(1.7ml、7.30mmol)のTHF(4ml)中の撹拌溶液に、同時に、B6(1g、7.69mmol)の水(4ml)中の溶液、およびTEA(1ml、7.69mmol)のTHF(4ml)中の溶液を、1時間にわたって添加した。得られた混合物を、およそ21℃で16時間撹拌した。反応混合物を、飽和NaCl溶液(20ml)で希釈し、DCM(3×50ml)で抽出した。合わせた有機抽出物をNa2SO4で乾燥させ、真空で濃縮して、粗化合物を得て、これを10%のEtOAc/ヘキサンを使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色液体として化合物B7(1g、5.18mmol、71%)を得た。
4-ヒドロキシフェニルボロン酸ピナコールエステル(789mg、3.58mmol)のDMF(13ml)中の撹拌溶液に、B7(900mg、4.66mmol)、KI(18mg、0.10mmol)、およびCs2CO3(2.57g、7.88mmol)を、アルゴン雰囲気下で添加した。反応混合物を、65℃に加熱し、16時間撹拌した。反応混合物を、水(20ml)に注ぎ入れ、EtOAc(3×20ml)で抽出した。合わせた有機層を、減圧下で濃縮して粗体を得て、これを7%のEtOAc/ヘキサンを使用してカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体としてInt-B(580mg、1.53mmol、43%)を得た。
2-ブロモ-4-メチルピリジン(B1)(2g、11.62mmol)のTHF(30ml)中の撹拌溶液に、アルゴン下の-78℃で、NaHMDS(THF中の2M、12.7ml、25.58mmol)の溶液を滴下添加した。黄色溶液を、-78℃で30分間撹拌した。次いで、ピコリン酸エチル(1.72ml、12.79mmol)のTHF(10ml)中の溶液を添加し、反応混合物を、およそ21℃に加温し、16時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、固体残留物をジエチルエーテルで粉砕し、濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。次いで、固体を飽和NH4Cl溶液(30ml)で希釈し、水性相をEtOAc(2×200ml)で抽出した。有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮した。粗生成物を、10%のEtOAc/ヘキサンを使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として化合物B2(2.06g、7.46mmol、64.3%)を得た。
B2(850mg、3.07mmol)の乾燥DMF(3.4ml)中の溶液を、アルゴン下で、DMF中の氷酢酸(0.45ml、7.39mmol)で処理した。DMA(0.6ml、4.61mmol)を滴下添加し、混合物をおよそ21℃で2時間、アルゴン雰囲気下で撹拌した。ヒドラジン一水和物(1.15ml、23.09mmol)を滴下添加し、得られた混合物を、50℃で3時間加熱し、およそ21℃で16時間加熱した。反応混合物を、水(30ml)に注ぎ入れ、CH2Cl2(3×30ml)で抽出した。有機層をNa2SO4で乾燥させ、濾過した。溶媒を減圧下で蒸発させて、粗化合物を得た。粗生成物を、30%のEtOAc/ヘキサンを使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として化合物B3(560mg、1.86mmol、60.6%)を得た。
B3(500mg、1.66mmol)のアセトン(10ml)中の撹拌溶液に、K2CO3(1.37g、9.99mmol)およびトリチルクロリド(464mg、2.49mmol)を添加した。その後、反応混合物を、加熱還流し、24時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮し、次いで、CH2Cl2(20ml)と水(10ml)との間で分配した。有機相をNa2SO4で乾燥させ、濃縮した。粗固体を、2%のMeOH/CH2Cl2を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体として化合物B4(402mg、0.74mmol、44%)を得た。
B4(100mg、0.18mmol)のトルエン(2ml)中の撹拌溶液に、EtOH(0.75ml)中のInt-B(185mg、0.49mmol)を、続いて2MのNa2CO3溶液(0.45ml)を、アルゴン雰囲気下で添加した。反応混合物を、アルゴンで20分間脱気し、次いでPd(PPh3)4(16mg、0.01mmol)を添加し、3時間還流した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、反応混合物を、水に注ぎ入れ、トルエン(3×15ml)で抽出した。有機層をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これを30%のEtOAc/ヘキサンを使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、無色固体として化合物B5(70mg、0.09mmol、53%)を得た。
B5(70mg、0.09mmol)のCH2Cl2(6ml)中の撹拌溶液に、1,4-ジオキサン(0.5ml)中の4NのHClを0℃で添加した。反応混合物を、アルゴン雰囲気下で1時間撹拌した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、溶媒を減圧下で蒸発させて、粗化合物を得て、これをn-ペンタン(2×1ml)で粉砕し、乾燥させて、無色固体として化合物BのHCl塩を得た(25mg、0.06mmol、69%)。
[実施例3]
N-メチル-2-(4-{4-[3-(6-メチルピリジン-2-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]ピリジン-2-イル}フェノキシ)エタン-1-アミン(化合物C)の合成
化合物Cを、以下のスキーム3における一般的方法にしたがって調製した。
2-ブロモ-4-メチルピリジン(B1)(1g、5.81mmol)のTHF(15ml)中の撹拌溶液に、アルゴン下の-78℃で、NaHMDS(THF中の2M、6.39ml、12.8mmol)の溶液を滴下添加した。黄色溶液を、-78℃で30分間撹拌した。次いで、6-メチルピコリン酸メチルエステル(1.19ml、8.72mmol)のTHF(7ml)中の溶液を添加し、反応混合物を、最大でおよそ21℃に加温し、16時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、固体残留物をジエチルエーテルで粉砕し、濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。次いで、固体を飽和NH4Cl溶液(20ml)で希釈し、水性相をEtOAc(2×150ml)で抽出した。有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮した。粗生成物を、10%のEtOAc/ヘキサンを使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として化合物C2(1.1g、3.79mmol、65.4%)を得た。
C2(300mg、1.03mmol)の乾燥DMF(1ml)中の溶液を、アルゴン下で、DMF中の氷酢酸(0.14ml、2.48mmol)で処理した。DMA(0.2ml、1.55mmol)を滴下添加し、混合物をおよそ21℃で1時間、アルゴン雰囲気下で撹拌した。ヒドラジン一水和物(0.37ml、7.75mmol)を滴下添加し、得られた混合物を、50℃で3時間加熱し、およそ21℃で16時間加熱した。反応混合物を、水(20ml)に注ぎ入れ、CH2Cl2(3×20ml)で抽出した。有機層をNa2SO4で乾燥させ、濾過した。溶媒を減圧下で蒸発させて、粗C3を得た。粗C3を、2%のMeOH/DCMを使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として精製したC3(172mg、0.54mmol、53%)を得た。
C3(40mg、0.12mmol)のアセトン(2ml)中の撹拌溶液に、K2CO3(53mg、0.38mmol)およびトリチルクロリド(53mg、0.19mmol)を添加した。その後、反応混合物を、加熱還流し、24時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮し、次いで、CH2Cl2(5ml)と水(5ml)との間で分配した。有機相をNa2SO4で乾燥させ、濃縮した。粗固体を、2%のMeOH/CH2Cl2を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体として化合物C4(30mg、0.05mmol、41%)を得た。
C4(150mg、0.26mmol)のトルエン(5ml)中の撹拌溶液に、EtOH(1ml)中のInt-B(152mg、0.40mmol)を、続いて2MのNa2CO3溶液(0.7ml)を、アルゴン雰囲気下で添加した。反応混合物を、アルゴンで20分間脱気し、次いでPd(PPh3)4(25mg、0.02mmol)を添加し、6時間還流した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、反応混合物を、水に注ぎ入れ、トルエン(3×10ml)で抽出した。有機層をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗C5を得て、これを30%のEtOAc/ヘキサンを使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、褐色固体として精製したC5(51mg、0.07mmol、26%)を得た。
C5(51mg、0.07mmol)のCH2Cl2(5ml)中の撹拌溶液に、1,4-ジオキサン(0.3ml)中の4NのHClを0℃で添加した。次いで、反応混合物を、アルゴン雰囲気下で1時間撹拌した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、溶媒を減圧下で蒸発させて、粗化合物Cを得た。次いで、粗化合物Cをn-ペンタン(2×1ml)で粉砕し、乾燥させて、褐色固体として化合物CをHCl塩として得た(20mg、0.05mmol、74%)
[実施例4]
(Z)-N-エチル-3-(((4-(N-(2-(メチルアミノ)エチル)メチルスルホンアミド)フェニル)アミノ)(フェニル)メチレン)-2-オキソインドリン-6-カルボキサミド(化合物D)の合成
化合物Dを、以下のスキーム4における一般的方法にしたがって調製した。
メチル2-オキソインドリン-6-カルボキシレート(D1)(2.0g、10.47mmol)の無水酢酸(16ml)中の撹拌溶液を、130℃に、不活性雰囲気下で6時間加熱した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、反応混合物を、およそ21℃に冷却した。沈殿物を濾過し、n-ヘキサン(2×50ml)で洗浄し、真空で乾燥して、黄色固体として化合物D2(1.5g、61.5%)を得た。
化合物D2(1.5g、6.43mmol)のDMF(10ml)中の撹拌溶液に、TBTU(2.69g、8.36mmol)、安息香酸(903mg、7.40mmol)、およびトリエチルアミン(2.2ml)を、不活性雰囲気下の0℃で添加した。反応混合物を、およそ21℃に加温し、16時間撹拌した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、反応混合物を、氷冷水(30ml)でクエンチし、EtOAc(2×40ml)で抽出した。合わせた有機抽出物をNa2SO4で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、粗生成物D3を得て、これを80%のEtOAc/ヘキサンを使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として化合物D3(900mg、42%)を得た。
化合物D3(900mg、2.67mmol)のMeOH(15ml)中の撹拌溶液に、1NのNaOH水溶液(15ml)をおよそ21℃で添加した。反応混合物を、100℃に加熱し、6時間撹拌した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、反応混合物を、およそ21℃に冷却し、1NのHCl水溶液(13ml)でクエンチし、30分間撹拌した。沈殿した固体を濾過し、20%のEtOAc/ヘキサンで洗浄して、オフホワイトの固体として化合物D4(580mg、77%)を得て、これをさらに精製することなく次のステップで用いた。
化合物D4(580mg、2.06mmol)のDMF(10ml)中の撹拌溶液に、TBTU(729mg、2.27mmol)、HOBt(306mg、2.27mmol)、およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(1.9ml、10.32mmol)を、不活性雰囲気下のおよそ21℃で添加した。30分後、THF(2.1ml、4.12mmol)中の2Nのエチルアミンを、0℃で添加し、1時間撹拌した。次いで、反応混合物を、およそ21℃に加温し、さらに16時間撹拌した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、揮発物を、真空で除去した。残留物を水(15ml)で希釈し、濾過し、20%のEtOAc/ヘキサン(2×10ml)で洗浄し、粗生成物を得て、これを10%のMeOH/CH2Cl2を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、オフホワイトの固体として断片A(410mg、64.5%)を得た。
化合物D7(800mg、3.70mmol)のアセトン(15ml)中の撹拌溶液に、炭酸カリウム(1.32g、9.62mmol)、ヨウ化ナトリウム(110mg、0.74mmol)、および化合物B6(799mg、5.55mmol)を、不活性雰囲気下の0℃で添加した。反応混合物を、50℃に加熱し、20時間撹拌した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、揮発物を、真空で除去した。残留物を、水(20ml)で希釈し、EtOAc(2×40ml)で抽出した。合わせた有機抽出物をNa2SO4で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、粗生成物を得て、これを5%のMeOH/CH2Cl2を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体として化合物D8(460mg、43%)を得た。
化合物D8(460mg、1.60mmol)のMeOH(10ml)中の撹拌溶液に、10%のPd/C(40mg)を添加し、水素雰囲気(バルーン圧)下のおよそ21℃で3時間撹拌した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、反応混合物を、Celite(登録商標)のパッドを通して濾過し、MeOH(10ml)で洗浄した。濾液を真空で濃縮して、粗生成物を得て、これを10%のMeOH/CH2Cl2を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体として断片B(300mg、73%)を得た。
断片A(200mg、0.64mmol)、断片B(500mg、1.94mmol)およびTMS-イミダゾール(455mg、3.24mmol)のTHF(5ml)中の溶液を、マイクロ波の下、170℃に1時間加熱した。出発物質の消費(TLCおよびLC-MSによりモニタリング)後、揮発物を、真空で除去した。残留物を水(10ml)で希釈し、EtOAc(3×25ml)で抽出して、粗生成物を得て、これを分取HPLCにより精製して、淡黄色固体として化合物D5(150mg、42%)を得た。
化合物D5(70mg、0.12mmol)の乾燥トルエン(3ml)中の撹拌溶液に、2,2,2-トリクロロエトキシカルボニルクロリド(0.04ml、0.19mmol)を、不活性雰囲気下のおよそ21℃で添加した。反応混合物を、還流温度(120℃)に加熱し、16時間維持した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、反応混合物を、およそ21℃に冷却し、EtOAc(30ml)で希釈し、1NのHCl水溶液(15ml)で洗浄した。有機層をNa2SO4で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、モノ脱メチル化し、ジ-troc保護化した化合物(40mg)を得た。
[実施例5]
(Z)-N-エチル-3-(((4-(N-(2-(メチルアミノ)エチル)メチルスルホンアミド)フェニル)アミノ)(フェニル)メチレン)-2-オキソインドリン-6-カルボキサミド(化合物D)の代替合成
化合物Dをまた、以下のスキーム5における一般的方法にしたがって調製した。
化合物D7(1.0g、4.65mmol)のDMF(10ml)中の撹拌溶液に、水酸化ナトリウム(鉱油中に60%、320mg、7.99mmol)を、不活性雰囲気下の0℃で添加し、およそ21℃で30分間撹拌した。この混合物に、1,2-ジブロモエタン(2.18g、11.60mmol)を、およそ21℃で添加した。混合物を、90℃に加熱し、24時間撹拌した。反応物をTLCによりモニタリングした。反応混合物をおよそ21℃に冷却し、氷冷水(30ml)でクエンチし、EtOAc(2×40ml)で抽出した。合わせた有機抽出物をNa2SO4で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、粗生成物を得て、これを5%のMeOH/CH2Cl2を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、40%の未反応出発物質を含有する混合物として1.2gのD9を得た。得られた混合物を、さらに精製することなく次の反応に直接用いた。
化合物D9(1.2g、不純)のTHF(10ml)中の撹拌溶液に、トリエチルアミン(1.6ml)およびメチルアミン(THF中の2M、9.3ml、18.63mmol)を、封管中で、不活性雰囲気下のおよそ21℃で添加した。反応混合物を、80℃に加熱し、16時間維持した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、反応混合物を、およそ21℃に冷却し、減圧下で濃縮して、粗D10を得た。粗D10を、15%のMeOH/CH2Cl2を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として化合物D10(500mg、2ステップにわたって39%の全収率)を得た。
D10(500mg、1.83mmol)のCH2Cl2(10ml)中の撹拌溶液に、トリエチルアミン(0.4ml、2.61mmol)および無水Boc(659mg、3.02mmol)を、不活性雰囲気下のおよそ21℃で添加し、5時間維持した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、揮発物を、真空で除去して、粗生成物を得て、これを5%のMeOH/CH2Cl2を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、無色の濃厚なシロップとしてD11(320mg、47%)を得た。
化合物D11(250mg、0.67mmol)のEtOH(10ml)中の溶液に、ラネー-Ni(40mg)を添加し、水素雰囲気(バルーン圧)下のおよそ21℃で1時間撹拌した。出発物質の完全な消費後(TLCによりモニタリング)、反応混合物を、Celite(登録商標)のパッドを通して濾過し、EtOH(10ml)で洗浄した。合わせた濾液を真空で濃縮して、粗生成物を得て、これを10%のMeOH/CH2Cl2を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体として断片BのBoc変異体(180mg、77%)を得た。
断片A(70mg、0.22mmol)、断片BのBoc変異体(155mg、0.45mmol)およびTMS-イミダゾール(159mg、1.13mmol)のTHF(3ml)中の溶液を、マイクロ波の下、170℃に160分間加熱した。出発物質の消費(TLCおよびLC-MSによりモニタリング)後、揮発物を、真空で除去して、残留物を得て、これを分取HPLCにより精製して、淡黄色固体として化合物D10(50mg、36%)を得た。
化合物D10(20mg、0.03mmol)のジエチルエーテル(3ml)中の撹拌溶液に、1,4-ジオキサン(0.3ml)中の4NのHClを、不活性雰囲気下の0℃で添加した。反応混合物を、およそ21℃で1時間撹拌した。出発物質の完全な消費(TLCによりモニタリング)後、揮発物を、真空で除去して、粗生成物を得て、これをn-ペンタン(2×4ml)で粉砕して、淡黄色固体として、HCl塩としての化合物D(12mg、71%)を得た。
[実施例6]
化合物A~Dの活性を試験するためのin vitroアッセイ
5.6.1. N-(2-ブロモエチル)-N-(4-ニトロフェニル)メタンスルホンアミド(2)
化合物A~Dを試験して、これらが、in vitroでHEK293T細胞のTGF-β誘導性ルシフェラーゼ活性を阻害できるかどうかを決定した。
化合物A~Dを試験して、これらが、初代マウスCD4+T細胞のTGF-βシグナル伝達を阻害できるかどうかを決定した。
[実施例7]
4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-ジオキソ-2H-ピロール-1(5H)-イル)ヘキサンアミド)-3-メチルブタンアミド)-5-ウレイドペンタンアミド)ベンジルメチル(2-(4-(4-(3-(6-メチルピリジン-2-イル)-1H-ピラゾール-4-イル)ピリジン-2-イル)フェノキシ)エチル)カルバメートの合成
化合物Cを、以下のスキーム6における一般的方法にしたがって、バリン-シトルリンリンカーに連結させた。
[実施例8]
抗体薬物コンジュゲート1(ADC1)の生成
抗マウストランスフェリン受容体抗体R17217、およびラット抗マウスIgG2Aアイソタイプコントロール抗体(BioXCell)を、複合緩衝液(25mMのホウ酸ナトリウム/25mMのNaCl、および0.3mMのEDTA、最終pH7.4)中に終夜透析した。抗体を、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)を使用して、還元率10~30で2時間還元した。ADC-1を、10mMの最終濃度までDMSO中に溶解し、次いで、15%のDMSOの存在下、複合比5~30で抗体にコンジュゲートした。全ての反応は、およそ21℃で行った。いくつかの薬物抗体比(DAR)に対して、50%のプロピレングリコールを、コンジュゲートのステップの間、有機溶媒として使用した。最終ADCを、PBS中で終夜透析し、0.22μmのフィルターを使用して濾過し、HPLC-HICを介して分析してDARを決定し、HPLC-SECを介して分析して凝集のレベルを決定した。HPLC-HICに対して、サンプルを、流速0.5ml/分で、TSKgel(登録商標)ブチル-NPRカラム上で実行した。相Aは、25mMのリン酸ナトリウム、およびpH6.95での1.5Mの硫酸アンモニウムであった一方、相Bは、pH6.95での75%の25mMのリン酸ナトリウム、および25%のイソプロピルアルコールであった。HPLC-SEC分析に対して、TSKgel(登録商標)G3000SWカラム(Tosoh Bioscience)を、流速0.25ml/分、280nMで25分間使用した。
[実施例9]
ジスルフィドリンカーに連結した化合物C(ADC-2)の合成
化合物Cを、以下のスキーム7A~Bにおける一般的方法にしたがって、ジスルフィドリンカーに連結させた。
2-クロロトリチルクロリド樹脂(L2)(4g、4mmol)を、DCM(2×40ml)で洗浄し、50mlのDCM内で10分間膨潤させ、次いで排出させる。Fmoc-Cys(Trt)-OH(L3)(7.03g、12mmol)を、40mlのDCMに溶解し、2-クロロトリチルクロリド樹脂を含有する容器に添加する。8.7mlのDIPEA(6.8ml、40mmol)を容器に添加し、混合物をおよそ21℃で2時間かき混ぜる。次いで、10mlのメタノールを混合物に添加し、30分間かき混ぜる。次いで、得られた樹脂(L4)を排出させ、DMFで5回洗浄する。次いで、樹脂L4を脱保護して、DMF中のおよそ40mlの20%のピペリジンを樹脂L4に添加し、混合物を振とうし、次いで樹脂から液体を排出することにより、樹脂L5を生成する。DMF中の別の40mlの20%のピペリジンを、樹脂に添加し、15分間振とうする。次いで、樹脂L5を、液体から排出させ、DMF(6×40ml)で洗浄する。
化合物C(40mg、0.1038mmol)および4-ニトロフェニル2-(ピリジン-2-イルジスルファニル)エチルカルバメート(L11)(80mg、0.2272mmol)のDMF(5ml)中の溶液に、DIPEA(0.5ml)およびHOBt(14mg、0.1038mmol)を添加した。混合物をN2下のおよそ21℃で16時間撹拌して、L12を生成した。粗L12を、分取HPLCにより精製して、白色固体として35mgの精製したL12(56%の収率)を得た。
L12(35mg、0.058mmol)のTHF/H2O(5ml/5ml)中の溶液に、中間体A(80mg、0.106mmol)を、N2下で添加した。混合物をおよそ21℃で16時間撹拌して、L13を生成した。粗L13を、分取HPLCにより精製して、白色固体として23mgの精製したL13(31%の収率)を生成した。
L13(32mg、0.025mmol)のDMF(3ml)中の溶液に、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル2-(tert-ブトキシカルボニルアミノオキシ)アセテート(L14)(28mg、0.097mmol)を、続いてTEA(0.5ml)を添加した。反応混合物を、N2雰囲気下のおよそ21℃で16時間撹拌して、L15を生成した。粗L15を、分取HPLCにより精製して、白色固体として12mgの精製したL15(33%の収率)を生成した。
L15(12mg、0.0085mmol)のDCM(5ml)中の混合物に、TFA(1ml)を添加した。混合物を、およそ21℃で30分間撹拌して、ADC-2を生成した。粗ADC-2を濃縮し、分取HPLCにより精製して、白色固体として3.5mgの精製したADC-2(31%の収率)を生成した。
[実施例10]
抗体薬物コンジュゲート2(ADC2)の生成
ADC-2を、以下のスキーム8における一般的方法にしたがって、抗体リジン残基を介して、抗TfR抗体に結合した。
[実施例11]
抗体誘導性受容体の内在化アッセイ
96ウェル平底プレートを、抗マウスCD3e抗体で終夜、4℃でコーティングした。CD4+T細胞を、RoboSep(商標)細胞分離システム(Stemcell Technologies)を使用して、マウスの脾臓から分離した。およそ2×105個の細胞を、37℃で24~48時間、可溶性抗CD28抗体を伴うウェルごとにプレーティングした。活性化されると、CD4+T細胞を収集し、洗浄し、37℃での示した時点で、5μg/mlの一次(抗トランスフェリン受容体)抗体で再びプレーティングして、内在化を誘導した。反応を、氷冷染色緩衝液で停止し、氷上に維持して、内在化を停止させた。アッセイの終了時点で、細胞を、氷冷染色緩衝液で2回洗浄して、未結合抗体を除去した。細胞をペレット化し、次いでPEで染色し、ヤギ抗ラット二次抗体とコンジュゲートし、氷上で30分間インキュベートした。細胞を染色緩衝液で洗浄し、次いでFACSを介する発現を分析した。図9に示す通り、TfR発現は、1時間以内に初代CD4+T細胞で内在化し始め、3時間以内に、TfRの70%超が、抗トランスフェリン受容体抗体、R17217により内在化される。
[実施例12]
In vitroアッセイ
5.12.1.増殖アッセイ
マウスCTLL2細胞を、0.2ng/mlのIL2中、細胞1×105個/ウェルで培養した。1nMのTGF-βで示される各ウェルに、1μg/mlのADC、および/または100nMのALK5阻害剤化合物Cを、24時間ウェルに添加した。増殖を、各ウェルにBrdU試薬(Abcam)をさらに12時間添加することにより定量化し、次いでELISAにより分析した。
マウスCD3+T細胞を、EasySep(商標)マウスT細胞分離キット(ネガティブ選択)(Stemcell Technologies)を使用して、マウスの脾臓から精製した。CD3+T細胞を、プレート結合抗CD3e、および可溶性抗CD28を使用する前に、48時間活性化した。T細胞を、洗浄し、5%の血清および1nMのTGF-β -/+ADCを含む培地に再びプレーティングした。
ナイーブCD4 T細胞を、ネガティブ選択キットを使用して、分離したマウス脾臓細胞から分離した。細胞密度を、細胞0.4×106個/mlに調節し、10ng/mlのマウスIL-2、20ng/mlのTGF-β、および1μg/mlの可溶性抗CD28を、細胞懸濁液に添加した。
[実施例13]
化合物Nの合成および特徴付け
化合物Nを、以下のスキーム9における一般的方法にしたがって合成した。
[実施例14]
T細胞へのCD2およびCD5の内在化
2つの異なる内在化研究を実施して、それぞれ、抗CD2抗体および抗CD5抗体でのT細胞のインキュベーションに続く、CD2およびCD5の内在化を測定した。
マウスCD3+T細胞を、プレート結合抗CD3抗体(1μg/ml)および可溶性抗CD28抗体(2μg/ml)で36時間活性化した。細胞を洗浄し、1μg/mlのラット抗マウスCD2抗体(クローン12-15、Southern Biotech、カタログ番号1525)、ラット抗マウスCD5抗体(クローン53-7.3、Southern Biotech、カタログ番号1547)、または、ラットアイソタイプコントロール抗体で、示された時点(0、15分、または0.5、1、3、もしくは6時間)、37℃でインキュベートした。各時点で、アッセイを、氷上に細胞を配置することにより停止させた。CD2およびCD5の発現を、蛍光的にコンジュゲートした二次抗体を使用して検出した。
研究1を、遊離抗体を4℃で30分間、細胞でインキュベートした以外を繰り返して、細胞表面の受容体全てを飽和した。上澄みに残る抗体を、時間経過を開始する前に洗い流した。
研究1において、新規で再循環した受容体は、存在する場合、時間経過の間、細胞表面に近づき、培地の遊離抗体と結合することができた。研究2において、時間経過を開始する時点で存在する、その受容体の内在化のみをモニタリングできるために、未結合抗体を時間経過を開始する前に洗い流した。CD2に対して、研究1および研究2の結果は、類似しており、CD2が、迅速に反転しないことを示唆している。CD5に対して、ウォッシュアウト研究(研究2)において内在化が約20%増加し、これは新規の受容体が、6時間の時間経過にわたって、de novo合成により再循環するか、または増加するかのいずれかだったことを示している。大量のde novo合成が、6時間の時間経過にわたって予測されないので、再循環が可能性の高い選択肢であると考えられる。ゆえに、研究1および研究2の結果により、CD5が、CD2より多く細胞表面へと再循環する可能性があることを示唆している。
[実施例15]
ADC標的化CD2およびCD5の生成および特徴付け
5.15.1.実施例15:ADCの生成
本実施例においてT細胞標的TGF-βアンタゴニスト(T3A)と称する、4つのALK5-ADCを、ラット抗マウスCD2抗体(クローン12-15、Southern Biotech、カタログ番号1525)、およびラット抗マウスCD5抗体(クローン53-7.3、Southern Biotech、カタログ番号1547)を使用して作製した。2つのリンカー-ALK5阻害剤ペイロードを使用して、T3Aを作製したが、そのうちの1つは、ALK5-化合物Cに結合した切断可能Val-Cit(VC)リンカーを含み、もう1つは、化合物Nに結合した非切断可能マレイミドカプロイル(MC)リンカーを含む。
逆転するTGF-β媒介性免疫抑制におけるT3A #2~5の効能を決定するために、マウスCD3+T細胞を、脾臓から精製し、1nMのTGF-β、および小分子ALK5阻害剤化合物C(陽性対照)、T3A #2~5、またはアイソタイプコントロールT3A(陰性対照)の存在下、抗CD3および抗CD28抗体で36~72時間活性化した。36時間後、グランザイム(GzmB)を発現するCD8+T細胞のレベルを、細胞毒性のマーカーとして測定し(図14)、分泌したサイトカインIL2のレベル(図15)およびIFN-γのレベル(図16)を、ELISAにより測定した。最終的に、72時間後、T細胞増殖の量を、Cell Titer Glo(Promega)により測定した(図17)。これらのアッセイの全ては、in vivoでの腫瘍クリアランスに関連がある。
上記の実施例のデータは、T細胞での標的発現のレベルが、初代T細胞アッセイでの効能に重要であることを示す。CD2およびCD5の両方は、活性T細胞の20~50%で高発現されるのみであるCD71と異なり、ナイーブT細胞および活性化T細胞の両方の85%超で、高発現される。しかし、CD2およびCD5の両方が、T細胞で高発現されるが、CD5標的化ADCは、CD2標的化ADCより高い効能を有することが観察された。実施例14において、CD2およびCD5で観察される受容体内在化のパターンに基づいて、6時間の時点で、初代マウスT細胞に、CD5の約85%は内在化されたが、CD2の53%のみが内在化された。加えて、CD5は、CD2より早く内在化を開始すると思われた。このデータは、内在化の量も効能に影響を及ぼすことを示す。
[実施例16]
T細胞へのCD7の内在化
内在化研究を実施して、2つの異なる抗CD7抗体でのT細胞のインキュベーションに続く、CD7の内在化を測定した。
本開示は、以下の具体的な実施形態により例示される。
1.T細胞表面分子に結合する抗体または抗原結合性断片に作動可能に連結されたALK5阻害剤を含む、抗体-ALK5阻害剤コンジュゲート(ADC)。
2.ALK5阻害剤のIC50が、少なくとも20nMである、実施形態1に記載のADC。
3.ALK5阻害剤が、イミダゾール系化合物、ピラゾール系化合物、またはチアゾール系化合物である、実施形態1または実施形態2に記載のADC。
4.ALK5阻害剤が、イミダゾール系化合物である、実施形態3に記載のADC。
5.ALK5阻害剤が、ピラゾール系化合物である、実施形態3に記載のADC。
6.ALK5阻害剤が、チアゾール系化合物である、実施形態3に記載のADC。
7.ALK5阻害剤が、イミダゾール-ベンゾジオキソール化合物、またはイミダゾール-キノキサリン化合物である、イミダゾール系化合物である、実施形態3に記載のADC。
8.ALK5阻害剤が、イミダゾール-ベンゾジオキソール化合物である、実施形態7に記載のADC。
9.ALK5阻害剤が、イミダゾール-キノキサリン化合物である、実施形態7に記載のADC。
10.ALK5阻害剤が、ピラゾール-ピロロ化合物である、ピラゾール系化合物である、実施形態3に記載のADC。
11.ALK5阻害剤が、イミダゾール-ベンゾジオキソール化合物、イミダゾール-キノキサリン化合物、ピラゾール-ピロロ化合物、またはチアゾール系化合物である、実施形態3に記載のADC。
12.ALK5阻害剤が、リンカーを介して、抗体または抗原結合性断片に連結されている、実施形態1から11のいずれかに記載のADC。
13.リンカーが、非切断可能リンカーである、実施形態12に記載のADC。
14.非切断可能リンカーが、N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート、マレイミドカプロイル、またはメルカプトアセトアミドカプロイルリンカーである、実施形態13に記載のADC。
15.非切断可能リンカーが、N-マレイミドメチルシクロヘキサン1-カルボキシレートリンカーである、実施形態14に記載のADC。
16.非切断可能リンカーが、マレイミドカプロイルリンカーである、実施形態14に記載のADC。
17.非切断可能リンカーが、メルカプトアセトアミドカプロイルリンカーである、実施形態14に記載のADC。
18.リンカーが、切断可能リンカーである、実施形態12に記載のADC。
19.切断可能リンカーが、ジペプチドリンカー、ジスルフィドリンカー、またはヒドラゾンリンカーである、実施形態18に記載のADC。
20.切断可能リンカーが、ジペプチドリンカーである、実施形態19に記載のADC。
21.切断可能リンカーが、ジスルフィドリンカーである、実施形態19に記載のADC。
22.切断可能リンカーが、ヒドラゾンリンカーである、実施形態19に記載のADC。
23.リンカーが、プロテアーゼ感受性バリン-シトルリンジペプチドリンカーである、実施形態19に記載のADC。
24.リンカーが、グルタチオン感受性ジスルフィドリンカーである、実施形態19に記載のADC。
25.リンカーが、酸感受性ジスルフィドリンカーである、実施形態19に記載のADC。
26.ALK5阻害剤が、部位特異的コンジュゲーションを介して、抗原または抗原結合性断片にコンジュゲートされる、実施形態1から25のいずれかに記載のADC。
27.ALK5阻害剤が、抗体または抗原結合性断片上の1つまたは複数のシステイン、リジン、またはグルタミン残基を介してコンジュゲートされる、実施形態26に記載のADC。
28.ALK5阻害剤が、抗体または抗原結合性断片上の1つまたは複数のシステイン残基を介してコンジュゲートされる、実施形態27に記載のADC。
29.ALK5阻害剤が、抗体または抗原結合性断片上の1つまたは複数のリジン残基を介してコンジュゲートされる、実施形態27に記載のADC。
30.ALK5阻害剤が、抗体または抗原結合性断片上の1つまたは複数のグルタミン残基を介してコンジュゲートされる、実施形態27に記載のADC。
31.ALK5阻害剤が、抗体または抗原結合性断片上の1つまたは複数の非天然アミノ酸残基を介してコンジュゲートされる、実施形態26に記載のADC。
32.1つまたは複数の非天然アミノ酸残基が、p-アセチルフェニルアラニン(pAcF)を含む、実施形態31に記載のADC。
33.1つまたは複数の非天然アミノ酸残基が、p-アジドメチル-L-フェニルアラニン(pAMF)を含む、実施形態31に記載のADC。
34.1つまたは複数の非天然アミノ酸残基が、セレノシステイン(Sec)を含む、実施形態31に記載のADC。
35.ALK5阻害剤が、抗体または抗原結合性断片上の1つまたは複数のグリカンを介してコンジュゲートされる、実施形態26に記載のADC。
36.1つまたは複数のグリカンが、フコースを含む、実施形態35に記載のADC。
37.1つまたは複数のグリカンが、6-チオフコースを含む、実施形態35に記載のADC。
38.1つまたは複数のグリカンが、ガラクトースを含む、実施形態35に記載のADC。
39.1つまたは複数のグリカンが、N-アセチルガラクトサミン(GalNAc)を含む、実施形態35に記載のADC。
40.1つまたは複数のグリカンが、N-アセチルグルコサミン(GlcNAc)を含む、実施形態35に記載のADC。
41.1つまたは複数のグリカンが、シアル酸(SA)を含む、実施形態35に記載のADC。
42.ALK5阻害剤が、リンカーを介してコンジュゲートされる、実施形態26から41のいずれかに記載のADC。
43.抗体または抗原結合性断片分子当たりのALK5阻害剤分子の平均数が、2~8の範囲である、実施形態1から42のいずれかに記載のADC。
44.抗体が、モノクローナル抗体である、実施形態1から43のいずれかに記載のADC。
45.抗体が、ヒトまたはヒト化である、実施形態44に記載のADC。
46.抗体が、ヒトである、実施形態45に記載のADC。
47.抗体が、ヒト化である、実施形態45に記載のADC。
48.抗原結合性断片が、Fab、Fab’、F(ab’)2、またはFv断片である、実施形態1から47のいずれかに記載のADC。
49.抗原結合性断片が、Fabである、実施形態48に記載のADC。
50.抗原結合性断片が、Fab’である、実施形態48に記載のADC。
51.抗原結合性断片が、F(ab’)2である、実施形態48に記載のADC。
52.抗原結合性断片が、Fv断片である、実施形態48に記載のADC。
53.抗原結合性断片が、ヒトまたはヒト化抗体の抗原結合性断片である、実施形態48から52のいずれかに記載のADC。
54.抗原結合性断片が、ヒト抗体の抗原結合性断片である、実施形態53に記載のADC。
55.抗原結合性断片が、ヒト化抗体の抗原結合性断片である、実施形態53に記載のADC。
56.抗体を含む、実施形態1から47のいずれかに記載のADC。
57.抗原結合性断片を含む、実施形態1から55のいずれかに記載のADC。
58.T細胞表面分子が、CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD25、CD28、CD70、CD71、CD103、CD184、Tim3、LAG3、CTLA4、またはPD1である、実施形態1から57のいずれかに記載のADC。
59.T細胞表面分子が、CD1である、実施形態58に記載のADC。
60.T細胞表面分子が、CD2である、実施形態58に記載のADC。
61.T細胞表面分子が、CD3である、実施形態58に記載のADC。
62.T細胞表面分子が、CD4である、実施形態58に記載のADC。
63.T細胞表面分子が、CD5である、実施形態58に記載のADC。
64.T細胞表面分子が、CD6である、実施形態58に記載のADC。
65.T細胞表面分子が、CD7である、実施形態58に記載のADC。
66.T細胞表面分子が、CD8である、実施形態58に記載のADC。
67.T細胞表面分子が、CD25である、実施形態58に記載のADC。
68.T細胞表面分子が、CD28である、実施形態58に記載のADC。
69.T細胞表面分子が、CD70である、実施形態58に記載のADC。
70.T細胞表面分子が、CD71である、実施形態58に記載のADC。
71.T細胞表面分子が、CD103である、実施形態58に記載のADC。
72.T細胞表面分子が、CD184である、実施形態58に記載のADC。
73.T細胞表面分子が、Tim3である、実施形態58に記載のADC。
74.T細胞表面分子が、LAG3である、実施形態58に記載のADC。
75.T細胞表面分子が、CTLA4である、実施形態58に記載のADC。
76.T細胞表面分子が、PD1である、実施形態58に記載のADC。
77.T細胞表面分子が、エンドソームを通して再循環することが可能なT細胞表面分子である、実施形態1から57のいずれかに記載のADC。
78.T細胞表面分子が、CD5またはCD7である、実施形態77に記載のADC。
79.T細胞表面分子が、CD5である、実施形態78に記載のADC。
80.T細胞表面分子が、CD7である、実施形態78に記載のADC。
81.エフェクター機能を低下させる、1つまたは複数のアミノ酸置換を有するFcドメインを含む、実施形態1から80のいずれかに記載のADC。
82.1つまたは複数の置換が、N297A、N297Q、N297G、D265A/N297A、D265A/N297G、L235E、L234A/L235A、L234A/L235A/P329A、L234D/L235E:L234R/L235R/E233K、L234D/L235E/D265S:E233K/L234R/L235R/D265S、L234D/L235E/E269K:E233K/L234R/L235R/E269K、L234D/L235E/K322A:E233K/L234R/L235R/K322A、L234D/L235E/P329W:E233K/L234R/L235R/P329W、L234D/L235E/E269K/D265S/K322A:E233K/L234R/L235R/E269K/D265S/K322A、またはL234D/L235E/E269K/D265S/K322E/E333K:E233K/L234R/L235R/E269K/D265S/K322E/E333Kを含む、実施形態81に記載のADC。
83.1つまたは複数の置換が、N297Aを含む、実施形態82に記載のADC。
84.1つまたは複数の置換が、N297Qを含む、実施形態82に記載のADC。
85.1つまたは複数の置換が、N297Gを含む、実施形態82に記載のADC。
86.1つまたは複数の置換が、D265A/N297Aを含む、実施形態82に記載のADC。
87.1つまたは複数の置換が、D265A/N297Gを含む、実施形態82に記載のADC。
88.1つまたは複数の置換が、L235Eを含む、実施形態82に記載のADC。
89.1つまたは複数の置換が、L234A/L235Aを含む、実施形態82に記載のADC。
90.1つまたは複数の置換が、L234A/L235A/P329Aを含む、実施形態82に記載のADC。
91.1つまたは複数の置換が、L234D/L235E:L234R/L235R/E233Kを含む、実施形態82に記載のADC。
92.1つまたは複数の置換が、L234D/L235E/D265S:E233K/L234R/L235R/D265Sを含む、実施形態82に記載のADC。
93.1つまたは複数の置換が、L234D/L235E/E269K:E233K/L234R/L235R/E269Kを含む、実施形態82に記載のADC。
94.1つまたは複数の置換が、L234D/L235E/K322A:E233K/L234R/L235R/K322Aを含む、実施形態82に記載のADC。
95.1つまたは複数の置換が、L234D/L235E/P329W:E233K/L234R/L235R/P329Wを含む、実施形態82に記載のADC。
96.1つまたは複数の置換が、L234D/L235E/E269K/D265S/K322A:E233K/L234R/L235R/E269K/D265S/K322Aを含む、実施形態82に記載のADC。
97.1つまたは複数の置換が、L234D/L235E/E269K/D265S/K322E/E333K:E233K/L234R/L235R/E269K/D265S/K322E/E333Kを含む、実施形態82に記載のADC。
98.実施形態1から97のいずれかに記載のADC、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
99.がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、実施形態1から97のいずれかに記載のADC、または実施形態98に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
100.がんが、免疫原性がんである、実施形態99に記載の方法。
101.がんが、腫瘍抗原を発現する充実性腫瘍である、実施形態100に記載の方法。
102.腫瘍抗原が、gp100、メランA、またはMAGE A1である、実施形態101に記載の方法。
103.腫瘍抗原が、gp100である、実施形態102に記載の方法。
104.腫瘍抗原が、メランAである、実施形態102に記載の方法。
105.腫瘍抗原が、MAGE A1である、実施形態102に記載の方法。
106.がんが、免疫性浸潤を含む充実性腫瘍である、実施形態99に記載の方法。
107.がんが、免疫療法により処置可能である、実施形態99から106のいずれかに記載の方法。
108.免疫療法が、サイトカイン療法、養子T細胞療法、キメラ抗原受容体(CAR)療法、またはT細胞チェックポイント阻害剤療法である、実施形態107に記載の方法。
109.免疫療法が、サイトカイン療法である、実施形態108に記載の方法。
110.免疫療法が、養子T細胞療法である、実施形態108に記載の方法。
111.免疫療法が、キメラ抗原受容体(CAR)療法である、実施形態108に記載の方法。
112.免疫療法が、T細胞チェックポイント阻害剤療法である、実施形態108に記載の方法。
113.T細胞チェックポイント阻害剤が、PD1、PDL1、またはCTLA4の阻害剤である、実施形態108または実施形態112に記載の方法。
114.T細胞チェックポイント阻害剤が、PD1の阻害剤である、実施形態113に記載の方法。
115.T細胞チェックポイント阻害剤が、PDL1の阻害剤である、実施形態113に記載の方法。
116.T細胞チェックポイント阻害剤が、CTLA4の阻害剤である、実施形態113に記載の方法。
117.がんが、非小細胞肺がん(NSCLC)、肝がん、尿路上皮がん、腎がん、乳がん、または黒色腫である、実施形態99から116のいずれかに記載の方法。
118.がんが、NSCLCである、実施形態117に記載の方法。
119.がんが、肝がんである、実施形態117に記載の方法。
120.肝がんが、肝細胞癌である、実施形態120に記載の方法。
121.がんが、尿路上皮がんである、実施形態117に記載の方法。
122.がんが、膀胱がんである、実施形態121に記載の方法。
123.がんが、腎がんである、実施形態117に記載の方法。
124.がんが、乳がんである、実施形態117に記載の方法。
125.がんが、黒色腫である、実施形態117に記載の方法。
126.がんが、ALK5阻害剤により処置可能である、実施形態99から125のいずれかに記載の方法。
127.ADCまたは医薬組成物が、単独療法として投与される、実施形態99から126のいずれかに記載の方法。
128.ADCまたは医薬組成物が、併用療法レジメンの一部として投与される、実施形態99から126のいずれかに記載の方法。
129.ADCまたは医薬組成物が、標準ケアの療法または治療レジメンと組み合わせて投与される、実施形態128に記載の方法。
本出願で引用される全ての刊行物、特許、特許出願、および他の文献は、各刊行物、特許、特許出願、または他の文献が、個別に、全ての目的に対して参照により組み込まれると示されるのと同様の程度まで、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書および本開示に組み込まれる参照文献の1つまたは複数の教示の間に不一致がある場合、本明細書の教示が意図される。
本発明の様々な実施形態を以下に示す。
1.T細胞表面分子に結合する抗体または抗原結合性断片に作動可能に連結されたALK5阻害剤を含む、抗体-ALK5阻害剤コンジュゲート(ADC)。
2.前記ALK5阻害剤のIC 50 が、少なくとも20nMである、請求項1に記載のADC。
3.前記ALK5阻害剤が、イミダゾール系化合物、ピラゾール系化合物、またはチアゾール系化合物である、上記1に記載のADC。
4.前記ALK5阻害剤が、イミダゾール-ベンゾジオキソール化合物、イミダゾール-キノキサリン化合物、ピラゾール-ピロロ化合物、またはチアゾール系化合物である、上記3に記載のADC。
5.前記ALK5阻害剤が、非切断可能リンカーまたは切断可能リンカーを介して、前記抗体またが抗原結合性断片に連結されている、上記1に記載のADC。
6.N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート、マレイミドカプロイル、またはメルカプトアセトアミドカプロイルリンカーである非切断可能リンカーを介して、前記ALK5阻害剤が、前記抗体または抗原結合性断片に連結されている、上記5に記載のADC。
7.ジペプチドリンカー、ジスルフィドリンカー、またはヒドラゾンリンカーである切断可能リンカーを介して、前記ALK5阻害剤が、前記抗体または抗原結合性断片に連結されている、上記5に記載のADC。
8.前記リンカーが、プロテアーゼ感受性バリン-シトルリンジペプチドリンカー、グルタチオン感受性ジスルフィドリンカー、または酸感受性ジスルフィドリンカーである、上記7に記載のADC。
9.前記ALK5阻害剤が、前記抗体もしくは抗原結合性断片上の1つもしくは複数のシステイン残基、または、前記抗体もしくは抗原結合性断片上の1つもしくは複数のリジン残基を介してコンジュゲートされ、任意で前記ALK5阻害剤が、リンカーを介してコンジュゲートされる、上記1に記載のADC。
10.抗体または抗原結合性断片分子当たりのALK5阻害剤分子の平均数が、2~8の範囲である、上記1に記載のADC。
11.前記抗体が、モノクローナル抗体である、上記1に記載のADC。
12.前記抗体が、ヒトまたはヒト化である、上記11に記載のADC。
13.前記抗原結合性断片が、Fab、Fab’、F(ab’) 2 、またはFv断片である、上記1に記載のADC。
14.前記抗原結合性断片が、ヒトまたはヒト化抗体の抗原結合性断片である、上記13に記載のADC。
15.前記T細胞表面分子が、CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD25、CD28、CD70、CD71、CD103、CD184、Tim3、LAG3、CTLA4、またはPD1である、上記1に記載のADC。
16.前記T細胞表面分子が、エンドソームを通して再循環することが可能なT細胞表面分子である、上記1に記載のADC。
17.前記T細胞表面分子が、CD5またはCD7である、上記16に記載のADC。
18.上記1に記載のADC、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
19.がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、上記1に記載のADCを投与することを含む、方法。
20.前記がんが、
(a)免疫原性がんであるか;
(b)免疫性浸潤を含む、充実性腫瘍であるか;
(c)免疫療法により処置可能である、充実性腫瘍であるか;または
(d)ALK5阻害剤により処置可能である、上記19に記載の方法。
21.前記がんが、腫瘍抗原を発現する充実性腫瘍である、上記20に記載の方法。
22.前記がんが、免疫療法により処置可能であり、前記免疫療法が、サイトカイン療法、養子T細胞療法、キメラ抗原受容体(CAR)療法、またはT細胞チェックポイント阻害剤療法である、上記20に記載の方法。
23.前記ADCが、単独療法として、または併用療法レジメンの一部として投与される、上記19に記載の方法。
Claims (26)
- T細胞表面分子に結合する抗体または抗原結合性断片に作動可能に連結されたALK5阻害剤を含む、抗体-ALK5阻害剤コンジュゲート(ADC)であって、前記ALK5阻害剤が、N-メチル-2-(4-{4-[3-(6-メチルピリジン-2-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]ピリジン-2-イル}フェノキシ)エタン-1-アミンである、ADC。
- 前記ALK5阻害剤が、非切断可能リンカーまたは切断可能リンカーを介して、前記抗体または抗原結合性断片に連結されている、請求項1に記載のADC。
- N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート、マレイミドカプロイル、またはメルカプトアセトアミドカプロイルリンカーである非切断可能リンカーを介して、前記ALK5阻害剤が、前記抗体または抗原結合性断片に連結されている、請求項2に記載のADC。
- プロテアーゼ感受性リンカーである切断可能リンカーを介して、前記ALK5阻害剤が、前記抗体または抗原結合性断片に連結されている、請求項2に記載のADC。
- 前記プロテアーゼ感受性リンカーが、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、またはペンタペプチドを含む、請求項4に記載のADC。
- ジペプチドリンカー、ジスルフィドリンカー、またはヒドラゾンリンカーである切断可能リンカーを介して、前記ALK5阻害剤が、前記抗体または抗原結合性断片に連結されている、請求項2に記載のADC。
- 前記リンカーが、プロテアーゼ感受性バリン-シトルリンジペプチドリンカー、グルタチオン感受性ジスルフィドリンカー、または酸感受性ジスルフィドリンカーである、請求項6に記載のADC。
- 前記ALK5阻害剤が、前記抗体もしくは抗原結合性断片上の1つもしくは複数のシステイン残基、または、前記抗体もしくは抗原結合性断片上の1つもしくは複数のリジン残基を介してコンジュゲートされ、任意で前記ALK5阻害剤が、リンカーを介してコンジュゲートされる、請求項1~7のいずれか一項に記載のADC。
- 抗体または抗原結合性断片分子当たりのALK5阻害剤分子の平均数が、2~8の範囲である、請求項1~8のいずれか一項に記載のADC。
- 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項1~9のいずれか一項に記載のADC。
- 前記抗体が、ヒトまたはヒト化である、請求項10に記載のADC。
- 前記抗原結合性断片が、Fab、Fab’、F(ab’)2、またはFv断片である、請求項1~11のいずれか一項に記載のADC。
- 前記抗原結合性断片が、ヒトまたはヒト化抗体の抗原結合性断片である、請求項12に記載のADC。
- 前記T細胞表面分子が、CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD25、CD28、CD70、CD71、CD103、CD184、Tim3、LAG3、CTLA4、またはPD1である、請求項1~13のいずれか一項に記載のADC。
- 前記T細胞表面分子が、エンドソームを通して再循環することが可能なT細胞表面分子である、請求項1~14のいずれか一項に記載のADC。
- 前記T細胞表面分子が、CD5またはCD7である、請求項15に記載のADC。
- 前記T細胞表面分子が、CD5である、請求項1~16のいずれか一項に記載のADC。
- 請求項1~17のいずれか一項に記載のADC、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
- がんを処置するための、請求項1~17のいずれか一項に記載のADCを含む、組成物。
- 前記がんが、
(a)免疫原性がんであるか;または
(b)免疫性浸潤を含む、充実性腫瘍である、
請求項19に記載の組成物。 - 前記がんが、腫瘍抗原を発現する充実性腫瘍である、請求項20に記載の組成物。
- 前記ADCが、単独療法として、または併用療法レジメンの一部として投与される、請求項19~21のいずれか一項に記載の組成物。
- 請求項1~17のいずれか一項に記載のADCの、がんを処置するための医薬の製造における使用。
- 前記がんが、
(a)免疫原性がんであるか;または
(b)免疫性浸潤を含む、充実性腫瘍である、
請求項23に記載の使用。 - 前記がんが、腫瘍抗原を発現する充実性腫瘍である、請求項24に記載の使用。
- 前記医薬が、単独療法として、または併用療法レジメンの一部として投与される、請求項23~25のいずれか一項に記載の使用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023080821A JP2023113685A (ja) | 2018-07-09 | 2023-05-16 | 抗体-alk5阻害剤コンジュゲートおよびその使用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/US2018/041291 WO2020013803A1 (en) | 2018-07-09 | 2018-07-09 | Antibody-alk5 inhibitor conjugates and their uses |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023080821A Division JP2023113685A (ja) | 2018-07-09 | 2023-05-16 | 抗体-alk5阻害剤コンジュゲートおよびその使用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022500486A JP2022500486A (ja) | 2022-01-04 |
JP7335957B2 true JP7335957B2 (ja) | 2023-08-30 |
Family
ID=69142765
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021523548A Active JP7335957B2 (ja) | 2018-07-09 | 2018-07-09 | 抗体-alk5阻害剤コンジュゲートおよびその使用 |
JP2023080821A Pending JP2023113685A (ja) | 2018-07-09 | 2023-05-16 | 抗体-alk5阻害剤コンジュゲートおよびその使用 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023080821A Pending JP2023113685A (ja) | 2018-07-09 | 2023-05-16 | 抗体-alk5阻害剤コンジュゲートおよびその使用 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210299268A1 (ja) |
EP (1) | EP3820467A4 (ja) |
JP (2) | JP7335957B2 (ja) |
CN (1) | CN112601522A (ja) |
AU (1) | AU2018431586A1 (ja) |
CA (1) | CA3104934A1 (ja) |
WO (1) | WO2020013803A1 (ja) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11583593B2 (en) | 2016-01-14 | 2023-02-21 | Synthis Therapeutics, Inc. | Antibody-ALK5 inhibitor conjugates and their uses |
WO2020256721A1 (en) * | 2019-06-19 | 2020-12-24 | Synthis, Llc | Antib0dy-alk5 inhibitor conjugates and their uses |
US20230090552A1 (en) * | 2020-01-08 | 2023-03-23 | Synthis Therapeutics, Inc. | Alk5 inhibitor conjugates and uses thereof |
US11801304B2 (en) | 2020-02-19 | 2023-10-31 | Nammi Therapeutics, Inc. | Formulated and/or co-formulated liposome compositions containing TFGB antagonist prodrugs useful in the treatment of cancer and methods thereof |
AU2021300362A1 (en) | 2020-07-01 | 2023-02-23 | ARS Pharmaceuticals, Inc. | Anti-ASGR1 antibody conjugates and uses thereof |
CN116249692A (zh) * | 2020-09-28 | 2023-06-09 | 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 | 吡唑类化合物及其制备方法和用途 |
WO2022076905A1 (en) * | 2020-10-09 | 2022-04-14 | Silverback Therapeutics, Inc. | Alk5 inhibitors, conjugates, and uses thereof |
CN115192731B (zh) * | 2021-04-12 | 2023-09-26 | 中国科学院上海有机化学研究所 | 一种抗体药物偶联物的制备方法 |
TW202345808A (zh) * | 2022-03-09 | 2023-12-01 | 南韓商歐倫醫療公司 | 效應t細胞之活化劑 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006502164A (ja) | 2002-09-06 | 2006-01-19 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | イミダゾロピリジンならびにその生成および使用方法 |
JP2007514652A (ja) | 2003-11-06 | 2007-06-07 | シアトル ジェネティックス, インコーポレイテッド | リガンドに結合体化可能なモノメチルバリン化合物 |
JP2009519977A (ja) | 2005-12-16 | 2009-05-21 | アルコン,インコーポレイテッド | Alk5調整剤を用いた眼内圧のコントロール |
WO2016115218A1 (en) | 2015-01-14 | 2016-07-21 | The California Institute For Biomedical Research | Antibody drug conjugates for the treatment of immune conditions |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6491916B1 (en) * | 1994-06-01 | 2002-12-10 | Tolerance Therapeutics, Inc. | Methods and materials for modulation of the immunosuppresive activity and toxicity of monoclonal antibodies |
SE9402430L (sv) * | 1994-07-11 | 1996-01-12 | Pharmacia Ab | Konjugat mellan modifierat superantigen och en målsökande förening samt användning av konjugaten |
WO2004013135A1 (en) * | 2002-07-31 | 2004-02-12 | Smithkline Beecham Corporation | 2-phenylpyridin-4-yl derivatives as alk5 inhibitors |
US8871744B2 (en) * | 2010-07-21 | 2014-10-28 | B & G Partyers, LLC | Compounds and methods for selectively targeting tumor-associated mucins |
US10131682B2 (en) * | 2012-11-24 | 2018-11-20 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to a cell binding molecules |
CA2973978A1 (en) * | 2015-01-14 | 2016-07-21 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Treatment of cancer with anti-lap monoclonal antibodies |
US20170158772A1 (en) * | 2015-12-07 | 2017-06-08 | Opi Vi - Ip Holdco Llc | Compositions of antibody construct - agonist conjugates and methods of use thereof |
WO2018208720A1 (en) * | 2017-05-09 | 2018-11-15 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Combination pdl1 and tgf-beta blockade in patients with hpv+ malignancies |
EP3774798A1 (en) * | 2018-04-02 | 2021-02-17 | Silverback Therapeutics, Inc. | Alk5 inhibitors, conjugates, and uses thereof |
-
2018
- 2018-07-09 EP EP18926073.0A patent/EP3820467A4/en active Pending
- 2018-07-09 JP JP2021523548A patent/JP7335957B2/ja active Active
- 2018-07-09 WO PCT/US2018/041291 patent/WO2020013803A1/en unknown
- 2018-07-09 US US17/258,889 patent/US20210299268A1/en active Pending
- 2018-07-09 CA CA3104934A patent/CA3104934A1/en active Pending
- 2018-07-09 AU AU2018431586A patent/AU2018431586A1/en active Pending
- 2018-07-09 CN CN201880096817.XA patent/CN112601522A/zh active Pending
-
2023
- 2023-05-16 JP JP2023080821A patent/JP2023113685A/ja active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006502164A (ja) | 2002-09-06 | 2006-01-19 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | イミダゾロピリジンならびにその生成および使用方法 |
JP2007514652A (ja) | 2003-11-06 | 2007-06-07 | シアトル ジェネティックス, インコーポレイテッド | リガンドに結合体化可能なモノメチルバリン化合物 |
JP2009519977A (ja) | 2005-12-16 | 2009-05-21 | アルコン,インコーポレイテッド | Alk5調整剤を用いた眼内圧のコントロール |
WO2016115218A1 (en) | 2015-01-14 | 2016-07-21 | The California Institute For Biomedical Research | Antibody drug conjugates for the treatment of immune conditions |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3820467A4 (en) | 2022-05-04 |
CA3104934A1 (en) | 2020-01-16 |
EP3820467A1 (en) | 2021-05-19 |
US20210299268A1 (en) | 2021-09-30 |
AU2018431586A1 (en) | 2021-01-21 |
JP2022500486A (ja) | 2022-01-04 |
JP2023113685A (ja) | 2023-08-16 |
WO2020013803A1 (en) | 2020-01-16 |
CN112601522A (zh) | 2021-04-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7335957B2 (ja) | 抗体-alk5阻害剤コンジュゲートおよびその使用 | |
US11583593B2 (en) | Antibody-ALK5 inhibitor conjugates and their uses | |
JP2020128378A (ja) | Bcl−xL阻害性化合物およびこれを含む抗体薬物コンジュゲート | |
JP2018506509A (ja) | 細胞透過性Bcl−xL阻害剤との抗体薬物コンジュゲート | |
JP2023116596A (ja) | Cd117+細胞を減少させるための組成物及び方法 | |
KR102342934B1 (ko) | 항체-약물 접합체 및 면역독소 | |
RU2765098C2 (ru) | Производные майтанзиноида с саморасщепляющимися пептидными линкерами и их конъюгаты | |
TW202203978A (zh) | 電荷可變連接子 | |
US20210260212A1 (en) | Use of an anti-cd2 antibody drug conjugate (adc) in allogeneic cell therapy | |
AU2019311077A1 (en) | Use of anti-CD5 antibody drug conjugate (ADC) in allogeneic cell therapy | |
JP7446341B2 (ja) | 抗体-alk5阻害剤コンジュゲートおよびその使用 | |
JP2024506300A (ja) | 免疫刺激化合物及びコンジュゲート体 | |
TW202246242A (zh) | 免疫調節抗體藥物結合物 | |
JP2024059856A (ja) | 抗体-alk5阻害剤コンジュゲートおよびその使用 | |
US20230090552A1 (en) | Alk5 inhibitor conjugates and uses thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210706 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210706 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20220428 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220510 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220808 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221007 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230117 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230516 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20230704 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230725 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230818 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7335957 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |