JP2023113685A - 抗体－ａｌｋ５阻害剤コンジュゲートおよびその使用 - Google Patents

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エー． トーマス－カーヤット，ドリー
A Thomas-Karyat Dori
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Synthis Therapeutics Inc
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Abstract

【課題】心臓組織で観察されるもののような宿主組織の毒性を最小限にするために、ＡＬＫ５阻害剤を標的組織に標的化するための新規のアプローチを提供する。【解決手段】Ｔ細胞表面分子に結合する抗体または抗原結合性断片に作動可能に連結されたＡＬＫ５阻害剤を含む、抗体－ＡＬＫ５阻害剤コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供する。前記ＡＬＫ５阻害剤が、下記の構造を有する。JPEG2023113685000049.jpg38156【選択図】図１

Description

１．背景
サイトカインのトランスフォーミング増殖因子－ベータ（ＴＧＦ－β）ファミリーのメ
ンバーは、正常な組織の発達の間ならびに疾患状態の両方で、多種多様の生物学的プロセ
スを調節する、多機能性タンパク質である。ＴＧＦ－βファミリーメンバーは、炎症、創
傷治癒、細胞外マトリックスの蓄積、骨形成、組織の発達、細胞分化、心臓弁リモデリン
グ、組織線維化、および腫瘍進行などに関与している。（Barnard et al., 1990, Biochi
m Biophys Acta. 1032:79-87、Sporn et al., 1992, J Cell Biol 119:1017-1021、Yingl
ing et al., 2004, Nature Reviews, 3:1011-1022、Janssens et al., 2005, Endocr Rev
., 26(6):743-74）。３つの哺乳動物イソ型が、これまでに同定されている：ＴＧＦ－β
１、ＴＧＦ－β２、およびＴＧＦ－β３（Massague, 1990, Annu Rev Cell Biol 6:597-6
41）。トランスフォーミング増殖因子スーパーファミリーの他のメンバーとして、アクチ
ビン、インヒビン、骨形態形成タンパク質、増殖および分化因子、ならびにミュラー阻害
物質が挙げられる。
ＴＧＦ－βΙは、２つの高度に保存された単一の膜貫通セリン／トレオニンキナーゼ受
容体、Ｉ型（ＡＬＫ５）およびＩＩ型のＴＧＦ－β受容体を介して、シグナルを変換する
。リガンド誘導性結合およびオリゴマー化が起こると、ＩＩ型受容体は、ＡＬＫ５のＧＳ
領域において、セリン／トレオニン残基をリン酸化し、これにより、ＡＬＫ５の活性化、
および新規のＳＭＡＤ導入部位の生成が生じる。ＳＭＡＤは、細胞外環境から細胞の核へ
のＴＧＦ－βのシグナルを変換するのに特化する、細胞内タンパク質である。活性化する
と、ＡＬＫ５は、Ｃ末端ＳＳＸＳモチーフで、Ｓｍａｄ２およびＳｍａｄ３をリン酸化す
るので、受容体からのそれらの解離およびＳｍａｄ４との錯体の形成をもたらす。次いで
、Ｓｍａｄ錯体は、核内に移動し、細胞特異的ＤＮＡ結合補因子と集合して、細胞の成長
、分化、および発生を調節する遺伝子の発現を修飾する。
アクチビンは、ＴＧＦ－βと同様の方法で、シグナルを変換する。アクチビンは、セリ
ン／トレオニンキナーゼ、アクチビンＩＩ型受容体（ＡｃｔＲＩＩＢ）と結合し、活性化
したＩＩ型受容体は、ＡＬＫ４のＧＳ領域において、セリン／トレオニン残基を高リン酸
化する（hyperphosphorylate）。活性化したＡＬＫ４は、順次、Ｓｍａｄ２およびＳｍａ
ｄ３をリン酸化する。結果としてＳｍａｄ４とのヘテロＳｍａｄ複合体を形成することに
より、アクチビンに誘導された遺伝子転写の調節が生ずる。
ＴＧＦ－βシグナル伝達は、Ｔリンパ球およびＢリンパ球、ＮＫ細胞、ならびに樹状細
胞のような抗原提示細胞を含む、先天性および適応性免疫細胞の両方を調節することによ
り、免疫ホメオスタシスを維持するのに必須である。ＴＧＦ－βは、一般に、胸腺でのＴ
細胞の発生、ならびに末梢性寛容を維持するのに必須の役割を担う、免疫抑制性サイトカ
インとみなされる。ＴＧＦ－βは、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方の増殖、サイト
カインの産生、細胞毒性、ならびにＴヘルパーサブセットへの分化を阻害する（Li et al
., 2008, Cell 134:392-404）。ＴＧＦ－βはまた、胸腺で生じる天然の制御性Ｔ細胞（
ｎＴｒｅｇ）の発生、ならびに、炎症およびがんのような様々な疾患に応答して末梢で発
生する誘導性Ｔｒｅｇ（ｉＴｒｅｇ）において重要な役割を担う（Tran et al., 2012, J
Mol Cell Bio 4:29-37, 2012）。ｎＴｒｅｇは、典型的にはＣＤ２５＋ ＦｏｘＰ３＋
であり、末梢性Ｔ細胞寛容を維持する助けとなるＴ細胞の活性化を積極的に抑制する、少
ない割合のＣＤ４＋Ｔ細胞サブセットである。ＴＧＦ－βは、末梢におけるｎＴｒｅｇの
生存および膨張に重要である（Marie et al., 2005, J Exp Med 201:1061-67）。適切な
炎症性条件の下、ＴＧＦ－βは、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＦｏｘＰ３＋ ｉＴｒｅｇ
に転換して、局所的な組織常在Ｔ細胞を抑制する。高レベルのｉＴｒｅｇは、多くの場合
、腫瘍自身の中で、Ｔ細胞媒介性腫瘍クリアランスを防ぐことが見出されている（Whites
ide, 2014, Expert Opin Biol Ther 14:1411-25）。
一般的に、高レベルのＴＧＦ－β発現は、臨床予後を不良にするのに関連している。多
くの場合、腫瘍は、ＴＧＦ－β経路を組み入れ、それを利用してＴ細胞媒介性腫瘍クリア
ランスを避ける（Yang et al., Trends Immunol 31:220-7, 2010、Tu et al., Cytokine
Growth Factor Rev 25:423-35, 2014）。これは、２通りで起こる。１つ目は、ＴＧＦ－
βが、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の膨張、サイトカインの産生、ならびに腫瘍細胞死
を直接的に阻害することである。２つ目は、ＴＧＦ－βが、ｎＴｒｅｇおよびｉＴｒｅｇ
の生存および／または転換にそれぞれ重要であり、これもまた、免疫媒介性腫瘍クリアラ
ンスを抑制する。多数の前臨床マウスモデルにおいて、ＴＧＦ－βの中和により、Ｔ細胞
媒介性腫瘍クリアランスの増加に起因して腫瘍負荷が低下することが実証されている。重
要なことに、優性ネガティブＴＧＦ－βＲＩＩの発現を介するか、または可溶性ＴＧＦ－
β受容体を用いた、Ｔ細胞におけるＴＧＦ－βシグナル伝達の阻害は、ｉｎ ｖｉｖｏで
の効果的な免疫媒介性腫瘍クリアランスを回復するのに十分である。Gorelik et al., 20
01, Nat Med 7:1118-22、Thomas et al., 2005, Cancer Cell 8:369-80。
免疫系に対するその効果以外に、ＴＧＦ－βシグナル伝達は、腫瘍発生において、重要
であるが複雑な役割を担う。前臨床研究では、ＴＧＦ－βが、腫瘍自身に対する逆説的な
効果、および周囲の間質細胞に対する交絡効果を有することが示されている。がん進行の
初期段階では、ＴＧＦ－βは、細胞周期メディエーターの調節を介して、腫瘍の増殖およ
び膨張を阻害する。しかし、後期段階では、ＴＧＦ－βは、その増殖阻害特性を喪失し、
上皮－間葉移行（ＥＭＴ）の誘導を介して、ならびに、間質性線維芽細胞、血管形成、お
よび細胞外マトリックス（ＥＣＭ）での影響を介して、腫瘍転移を促進する（Connolly e
t al., 2012, Int J Bio 8:964-78）。誤った段階で送達された場合、ＴＧＦ－βシグナ
ル伝達の広域スペクトルの阻害には、腫瘍転移を促進する危険性、および／または、非腫
瘍性間質細胞集団を阻害し、腫瘍進行を間接的に悪化させる危険性がある（Cui et al.,
1996, Cell 86:531-、Siegel et al., 2003, PNAS 100:8430-35、Connolly et al., 2011
, Cancer Res 71:2339-49、Achyut et al., 2013, PLOS Genetics 9:1-15）。ＴＧＦ－β
阻害剤により、意図した増殖阻害効果の代わりに、腫瘍は、より侵襲的になり、転移性に
なる可能性がある。
腫瘍自身に対する逆説的な効果、およびＴＧＦ－β受容体の広範な発現にもかかわらず
、がん治療としてのＴＧＦ－β経路の阻害は、長い間注目されている。阻害剤は、ＴＧＦ
－β中和抗体、ＴＧＦ－β２アンチセンスＲＮＡ、および小分子ＡＴＰ競合ＡＬＫ５キナ
ーゼ阻害剤を含む。開発されている古典的なＡＬＫ５阻害剤のいくつかは、ピラゾール系
、イミダゾール系、およびトリアゾール系である（Bonafoux et al., 2009, Expert Opin
Ther Patents 19:1759-69、Ling et al., 2011, Current Pharma Biotech 12:2190-2202
）。多くのＡＬＫ５阻害剤は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞ベースアッセイ、ならびにｉｎ ｖ
ｉｖｏマウス異種移植および同系腫瘍モデルの両方で試験されており、有意な効能が実証
されている（Neuzillet et al., 2015, Pharm & Therapeutics 147:22-31）。しかし、Ｔ
ＧＦ－β受容体が偏在的に発現されるので、宿主毒性の問題、および腫瘍の増殖を意図せ
ず促進する恐れから、ＴＧＦ－β阻害剤の多く、とりわけＡＬＫ５阻害剤は、前臨床の発
見段階のままである。例えば、ラットにおける前臨床の毒性学研究において、２つの異な
るシリーズのＡＬＫ５阻害剤では、出血、炎症、変性、および弁の間質細胞の増殖を特徴
とする心臓弁の病変が認められた（Anderton et al., 2011, Tox Path 39:916-24）。
したがって、心臓組織で観察されるもののような宿主組織の毒性を最小限にしながら、
ＴＧＦ－βシグナル伝達の阻害が治療的に有用である細胞種に対してＡＬＫ５阻害剤を標
的とする必要性がある。
２．概要
標的とする宿主毒性を避け、ならびにＡＬＫ５阻害剤療法による腫瘍進行の意図しない
悪化を防ぐために、発明者は、治療利益をもたらすこれら細胞にのみ化合物を指向させる
ための新規のアプローチを開発した。
がんの処置のために、本アプローチは、ＡＬＫ５阻害剤をＴ細胞区画に抗体を介して指
向させて、Ｔ細胞媒介性腫瘍クリアランスを促進し、全身毒性をもたらすことなく長期的
な緩解を確実に行うことを包含する。理論により拘束されるものではないが、Ｔ細胞内の
ＴＧＦ－βシグナル伝達の阻害が、Ｔ細胞媒介性クリアランスを直接向上させるだけでな
く、Ｔ細胞を誘導性Ｔｒｅｇに転換することを阻害し、腫瘍内の天然のＴｒｅｇの生存率
を下げると考えられる。ゆえに、Ｔ細胞内のＴＧＦ－βシグナル伝達の阻害は、ＣＤ４＋
およびＣＤ８＋Ｔ細胞の活性を回復させるだけでなく、Ｔ細胞でのＴｒｅｇ「ブレーキ」
を除去して、免疫系を効果的に再連結させる。より重要なことには、Ｔ細胞内のみのＴＧ
Ｆ－βシグナル伝達の阻害は、腫瘍の観点ならびに宿主組織の毒性の両方から、広域スペ
クトルのＴＧＦ－β阻害より安全である。
したがって、本開示は、薬物がＡＬＫ５阻害剤である、抗体－薬物コンジュゲート（Ａ
ＤＣ）を提供する。ＡＤＣの抗体成分は、Ｔ細胞表面分子に結合する抗体または抗原結合
性断片であり得る。第４．２節は、本開示のＡＤＣで使用することができる、例示的な抗
体成分を記載する。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、イミダゾール－ベ
ンゾジオキソール化合物、イミダゾール－キノキサリン化合物、ピラゾール－ピロロ化合
物、またはチアゾール系化合物である。例示的なＡＬＫ５阻害剤は、第４．３節、および
表１～３に記載される。
ＡＬＫ５阻害剤は、抗体成分と直接、コンジュゲートすることができるか、またはリン
カーにより抗体成分に連結することができる。リンカーは、非切断可能リンカーであるか
、または好ましくは、切断可能リンカーであり得る。例示的な非切断可能リンカーおよび
切断可能リンカーは、第４．４節に記載されている。抗体または抗原結合性断片ごとに結
合したＡＬＫ５阻害剤分子の平均数は、様々であり得、一般に、抗体または抗原結合性断
片ごとに２から８個のＡＬＫ５阻害剤分子の範囲である。薬物搭載は、第４．５節に詳述
されている。
本開示は、本開示のＡＤＣを含む、医薬組成物をさらに提供する。本開示のＡＤＣを含
む、医薬組成物を製剤化するのに使用することができる、例示的な医薬添加剤は、第４．
６節に記載されている。
本開示は、本開示のＡＤＣまたは本開示の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与
することにより、がんを処置する方法をさらに提供する。本開示のＡＤＣおよび医薬組成
物は、単独療法として、または併用療法の一部として投与することができる。本開示のＡ
ＤＣおよび医薬組成物で処置することができる例示的ながん、ならびに例示的な併用療法
は、第４．７節に記載されている。
ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞でのＴＧＦ－βの効果を示す。腫瘍進行の間、腫瘍およびＴ細胞自身の両方に由来し得るＴＧＦ－βは、サイトカイン産生、増殖、およびＴｈ分化のようなＣＤ４＋Ｔ細胞の機能を阻害する。同時に、ＴＧＦ－βはまた、細胞毒性ＣＤ８＋Ｔ細胞中のグランザイムおよびパーフォリンの発現を阻害することにより、腫瘍死を阻害する。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞集団の両方を阻害することで、Ｔ細胞媒介性腫瘍クリアランスを完全に抑制する。 腫瘍進行の間のＴｒｅｇ細胞でのＴＧＦ－βの効果を示す。腫瘍進行の間、ｎＴｒｅｇおよびｉＴｒｅｇ細胞は、典型的には、腫瘍の中に見出され、ｉｎ ｓｉｔｕのＴ細胞媒介性機能を制御する。ＴＧＦ－βは、ｎＴｒｅｇ細胞生存率、およびｉＴｒｅ ｇ細胞の転換を促進して、Ｔ細胞媒介性腫瘍クリアランスを抑制する。腫瘍部位でのＴｒ ｅｇ細胞の増加により、腫瘍に浸潤するＴ細胞がまた腫瘍を取り除くことも防ぐことが確実となる。 ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞での本開示のＡＤＣの作用機序を示す。ＴＧＦ－βシグナル伝達のＴ細胞標的化阻害は、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性、およびＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性腫瘍死を回復する。 Ｔｒｅｇ細胞での本開示のＡＤＣの作用機序を示す。ＴＧＦ－βシグナル伝達のＴ細胞標的化阻害はまた、ｉｎ ｓｉｔｕの免疫媒介性腫瘍クリアランスのＴｒｅｇ媒介性抑制を遮断する。 化合物Ａ～Ｂによる、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞のＴＧＦ－β誘導性ルシフェラーゼ活性の阻害を示す。図５Ａ：化合物Ａ、図５Ｂ：化合物Ｂ。 化合物Ｃ～Ｄによる、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞のＴＧＦ－β誘導性ルシフェラーゼ活性の阻害を示す。図５Ｃ：化合物Ｃ、図５Ｄ：化合物Ｄ 化合物Ａ～Ｄに対するＭＴＳ増殖アッセイデータを示す。化合物Ａ～Ｃは、ＴＧＦ－β処置したＣＤＣ４＋Ｔ細胞における増殖を回復する。図６Ａ：化合物Ａ～Ｄに対するデータ。図６Ａにおいて、「ＴＧＦ－βなし」の上の「Ａ」、「Ｂ」、「Ｃ」、および「Ｄ」と標識したバーは、ＴＧＦ－βを含まずに１００ｎＭで化合物を使用して実施した実験の結果を示す。図６Ｂ：化合物Ｂに対するデータ、図６Ｃ：化合物Ｃに対するデータ。 化合物Ａ～Ｄに対するＭＴＳ増殖アッセイデータを示す。化合物Ａ～Ｃは、ＴＧＦ－β処置したＣＤＣ４＋Ｔ細胞における増殖を回復する。図６Ｂ：化合物Ｂに対するデータ、図６Ｃ：化合物Ｃに対するデータ。 本開示の例示的なＡＤＣ（ＡＤＣ２）に対するＬＣ－ＭＳデータを示す。図７Ａ：ＡＤＣ重鎖に対するＬＣ－ＭＳデータ、図７Ｂ：ＡＤＣ軽鎖に対するＬＣ－ＭＳデータ。 ＳＥＣにより精製した、Ｓ－４ＦＢ／Ａｂ比を６で調製したＡＤＣ２のクロマトグラムである。精製したＡＤＣ２のＳＥＣ解析では、凝集が５％未満であることが示されている。 本開示の例示的な抗体（抗トランスフェリン受容体抗体Ｒ１７２１７）が、初代マウスＣＤ４＋Ｔ細胞で、抗体の標的であるトランスフェリン受容体（ＴｆＲ）の内在化を誘導することを示す。図９Ａ：抗トランスフェリン受容体抗体を含まない対照、図９Ｂ：抗トランスフェリン受容体抗体での１５分のインキュベーション。 本開示の例示的な抗体（抗トランスフェリン受容体抗体Ｒ１７２１７）が、初代マウスＣＤ４＋Ｔ細胞で、抗体の標的であるトランスフェリン受容体（ＴｆＲ）の内在化を誘導することを示す。図９Ｃ：抗トランスフェリン受容体抗体での３０分のインキュベーション、図９Ｄ：抗トランスフェリン受容体抗体での６０分のインキュベーション。 本開示の例示的な抗体（抗トランスフェリン受容体抗体Ｒ１７２１７）が、初代マウスＣＤ４＋Ｔ細胞で、抗体の標的であるトランスフェリン受容体（ＴｆＲ）の内在化を誘導することを示す。図９Ｅ：抗トランスフェリン受容体抗体での１８０分のインキュベーション、図９Ｆ：３時間の時間経過にわたる平均蛍光強度（ＭＦＩ）。 本開示の例示的なＡＤＣ（ＡＤＣ１）による、マウスＣＴＬＬ２細胞での増殖のＴＧＦ－β媒介性阻害の逆転を示す。 本開示の例示的なＡＤＣ（ＡＤＣ１）による、ＴＧＦ－βで活性化した初代ＣＤ８＋Ｔ細胞でのグランザイムＢ発現の抑制解除を示す。ＡＤＣ１は、遊離ＡＬＫ５阻害剤に匹敵してグランザイムＢ発現を部分的に回復する。 本開示の例示的なＡＤＣ（ＡＤＣ１）が、１００ｍＭの遊離ＡＬＫ５阻害剤と同様に、ｉＴｒｅｇ生成を低下させることを示す。 ＣＤ５（図１３Ａ）ならびにＣＤ２（図１３Ｂ）の、活性化した初代マウスＣＤ３＋Ｔ細胞への内在化を示す。 ＣＤ５（図１３Ｃ）ならびにＣＤ２（図１３Ｄ）の、活性化した初代マウスＣＤ３＋Ｔ細胞への内在化を示す。 Ｔ３Ａ ＃２～＃５の存在下で、活性化したマウスＣＤ３＋Ｔ細胞の３６時間のインキュベーションに続いて、グランザイム（ＧｚｍＢ）を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルを示す。 Ｔ３Ａ ＃２～＃５の存在下で、活性化したマウスＣＤ３＋Ｔ細胞の３６時間のインキュベーションに続く、分泌したＩＬ２のレベルを示す。 Ｔ３Ａ ＃２～＃５の存在下で、活性化したマウスＣＤ３＋Ｔ細胞の３６時間のインキュベーションに続く、分泌したＩＦＮ－γのレベルを示す。 Ｔ３Ａ ＃２～＃５の存在下で、活性化したマウスＣＤ３＋Ｔ細胞の７２時間のインキュベーションに続く、Ｔ細胞増殖の量を示す。 ＣＤ７の活性化した初代ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞への内在化を示す。
４．詳細な説明
本開示は、がんを処置するのに有用な抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、
直接的に、またはリンカーを通してＡＬＫ５阻害剤と共有結合した抗体成分を含む、抗体
－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供する。本開示のＡＤＣの概説は、第４．１節に表
す。ＡＤＣの抗体成分は、完全な抗体またはその断片であり得る。本開示のＡＤＣで使用
することができる抗体は、第４．２節に詳述されている。本開示のＡＤＣで使用すること
ができるＡＬＫ５阻害剤は、第４．３節に詳述されている。本開示のＡＤＣは、典型的に
は、抗体とＡＬＫ５阻害剤の間にリンカーを含有する。本開示のＡＤＣで使用することが
できる例示的なリンカーは、第４．４節に詳述されている。本開示のＡＤＣは、抗体当た
り様々な数のＡＬＫ５阻害剤部分を含有することができる。薬物搭載は、第４．５節に詳
述されている。本開示は、本開示のＡＤＣを含む、医薬製剤をさらに提供する。ＡＤＣを
含む医薬製剤は、第４．６節に記載されている。本開示は、本開示のＡＤＣを使用して様
々ながんを処置する方法をさらに提供する。がんの処置のために単独療法として、または
併用療法の一部として本開示のＡＤＣを使用する方法は、第４．７節に記載されている。
４．１．抗体薬物コンジュゲート
本開示のＡＤＣは、一般に、共有結合が抗体の標的への結合に干渉しないように、典型
的にはリンカーを介して、抗体と共有結合したＡＬＫ５阻害剤で構成される。
薬物を抗体にコンジュゲートするための技術は、当該技術分野に周知されている（例え
ば、Hellstrom et al., Controlled Drug Delivery, 2nd Ed., at pp. 623-53（Robinson
et al., eds., 1987）、Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58、Dubowchik e
t al., 1999, Pharmacology and Therapeutics 83:67-123、およびZhou, 2017, Biomedic
ines 5(4):E64を参照）。ＡＬＫ５阻害剤は、好ましくは、部位に特異的なコンジュゲー
ションを介して、本開示のＡＤＣ中の抗体成分と結合する。例えば、ＡＬＫ５阻害剤は、
１つもしくは複数の天然もしくは操作されたシステイン、リジン、もしくはグルタミン残
基、１つもしくは複数の非天然アミノ酸（例えば、ｐ－アセチルフェニルアラニン（ｐＡ
ｃＦ）、ｐ－アジドメチル－Ｌ－フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、もしくはセレノシステ
イン（Ｓｅｃ））、１つもしくは複数のグリカン（例えば、フコース、６－チオフコース
、ガラクトース、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ－アセチルグルコサ
ミン（ＧｌｃＮＡｃ）、もしくはシアル酸（ＳＡ））、または、４～６個のアミノ酸の１
つもしくは複数の短いペプチドタグを介して、抗体成分とコンジュゲートすることができ
る。例えば、Zhou, 2017, Biomedicines 5(4):E64を参照し、その内容は、参照によりそ
の全体が本明細書に組み込まれる。
一例において、抗体またはその断片は、別のタンパク質（またはその部分、例えば、タ
ンパク質の少なくとも１０個、２０個、または５０個のアミノ酸部分）のアミノ酸配列に
対して、共有結合（例えば、ペプチド結合）を介して、抗体のＮ末端もしくはＣ末端を通
して、または内部で、融合させる。抗体、またはその断片は、他のタンパク質と、抗体の
定常ドメインのＮ末端で連結することができる。組換えＤＮＡ手順は、このような融合体
を作製するのに使用することができ、例えば、国際公開第８６／０１５３３号パンフレッ
ト、および欧州特許出願公開第０３９２７４５号明細書に記載されている。別の例におい
て、エフェクター分子は、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期を増加させることができる、および／ま
たは、上皮性関門を通過した、免疫系への抗体の送達を向上することができる。この種の
好適なエフェクター分子の例として、ポリマー、アルブミン、アルブミン結合タンパク質
、またはアルブミン結合化合物が挙げられ、例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２００５／
１１７９８４号パンフレットに記載されているものである。
代謝プロセスまたは代謝反応は、酵素プロセス、例えばＡＤＣのペプチドリンカーのタ
ンパク分解性切断、または、官能基、例えばヒドラゾン、エステル、もしくはアミドの加
水分解であり得る。細胞内代謝物として、限定されないが、細胞への侵入、拡散、取込み
、または輸送の後に、細胞内切断される、抗体および遊離薬物が挙げられる。
用語「細胞内で切断される」および「細胞内切断」とは、抗体－薬物コンジュゲート（
ＡＤＣ）の細胞内での代謝プロセスまたは代謝反応を指し、これにより、薬物部分（Ｄ）
と抗体（Ａｂ）との間の共有結合、すなわちリンカーが破壊され、その結果、細胞内に抗
体から解離した遊離薬物をもたらす。ゆえに、ＡＤＣの切断した部分は、細胞内代謝物で
ある。
４．２．抗体成分
本開示は、抗体成分がＴ細胞表面分子に結合する、抗体薬物コンジュゲートを提供する
。別段指示されない限り、用語「抗体」（Ａｂ）とは、特定の抗原と特異的に結合するか
、または免疫学的に反応する、免疫グロブリン分子を指し、ポリクローナル抗体、モノク
ローナル抗体、遺伝子操作した抗体、および他の修飾した形態の抗体が挙げられ、限定さ
れないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗
体（bispecific antibody）、二重特異性抗体（diabody）、三重特異性抗体、および四重
特異性抗体）、ならびに、例えばＦａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒＩｇＧ、
およびｓｃＦｖ断片を含む抗体の抗原結合断片が挙げられる。さらに、別段指示されない
限り、用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）とは、タンパク質に特異的に結合すること
が可能である、完全な分子、ならびに抗体断片（例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断
片）の両方を含むことを意味する。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、完全な抗体のＦ
ｃ断片が欠如しており、動物または植物の循環からより迅速に取り除かれ、完全な抗体よ
り少ない非特異的組織結合を有し得る（Wahl et al., 1983, J. Nucl. Med. 24:316）。
用語「ｓｃＦｖ」とは、従来の抗体由来の重鎖および軽鎖の可変ドメインを結合して１
本の鎖を形成する、一本鎖Ｆｖ抗体を指す。
「ＶＨ」に対する言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、またはＦａｂの重鎖を含む、抗体の免疫グ
ロブリン重鎖の可変領域を指す。「ＶＬ」に対する言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、
またはＦａｂの軽鎖を含む、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。抗体（Ａｂ）および
免疫グロブリン（Ｉｇ）は、同じ構造特性を有する、糖タンパク質である。抗体が、特異
的な標的に対する結合特異性を呈するのに対し、免疫グロブリンは、抗体、および標的特
異性が欠如している、他の抗体様分子の両方を含む。天然の抗体および免疫グロブリンは
、２つの同一の軽鎖（Ｌ）および２つの同一の重鎖（Ｈ）からなる、通常、約１５０，０
００ダルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質である。各重鎖は、アミノ末端で、可変ドメ
イン（ＶＨ）と、それに続くいくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、アミノ末端で
の可変ドメイン（ＶＬ）と、カルボキシ末端での定常ドメインを有する。
細胞内のＡＬＫ５阻害剤の最適な送達のために、抗体は、好ましくは、内在化する。内
在化抗体は、細胞表面でそれらの標的分子に結合した後、結合の結果として、細胞により
内在化される。この効果は、ＡＤＣが細胞により取り込まれることである。抗原に結合し
た後、抗体の内在化の決定を可能にするプロセスは、当業者に知られており、例えば、Ｐ
ＣＴ公開の国際公開第２００７／０７０５３８号パンフレットの８０頁、および以下の第
５．１１節に記載されている。内在化されると、例えば第４．４節に記載されるように、
切断可能リンカーを使用してＡＬＫ５阻害剤が抗体に結合する場合、ＡＬＫ５阻害剤は、
リソソームでの切断により、または他の細胞機構により、抗体から放出することができる
。
用語「抗体断片」とは、全長抗体の部分、一般に標的結合または可変領域を指す。抗体
断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片が挙げられる。「
Ｆｖ」断片は、完全な標的認識および結合部位を含有する、最小限の抗体断片である。こ
の領域は、密接に非共有結合した１本の重鎖と１本の軽鎖の可変ドメインの二量体からな
る（ＶＨ－ＶＬ二量体）。この構造中で、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用し、
ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上に抗原結合部位を規定する。多くの場合、６つのＣＤＲは、抗
体に対する標的結合特異性を与える。しかし、いくつかの例において、単一の可変ドメイ
ン（または、標的に特異的な３つのＣＤＲだけを含むＦｖの半分）は、標的を認識し、結
合する能力を有することができる。「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、１本
のポリペプチド鎖において、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む。一般に、Ｆｖポリペ
プチドは、ｓｃＦｖが標的結合に対する所望の構造を形成することが可能である、ＶＨお
よびＶＬドメイン間のポリペプチドリンカーをさらに含む。「単一ドメイン抗体」は、Ｔ
ＮＦ－αに対する十分な親和性を呈する、単一のＶＨまたはＶＬドメインで構成される。
具体的な実施形態において、単一ドメイン抗体は、ラクダ抗体である（例えば、Riechman
n, 1999, Journal of Immunological Methods 231:25-38を参照）。
Ｆａｂ断片は、軽鎖の定常ドメイン、および重鎖の第一の定常ドメイン（ＣＨ１）を含
有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つまたは複数のシステインを含む重鎖
ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端で、いくつかの残基の付加により、Ｆａｂ断片と相違
する。Ｆ（ａｂ’）断片は、Ｆ（ａｂ’）２ペプシン消化産物のヒンジシステインでのジ
スルフィド結合の切断により産生される。抗体断片のさらなる化学結合は、当業者に知ら
れている。
ある特定の実施形態において、本開示の抗体は、モノクローナル抗体である。本明細書
で使用される用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術を通して産生される抗
体に限定されない。用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核、原核、またはファー
ジクローンを含む単一のクローンに由来する抗体を指し、それを産生する方法は含まない
。本開示と関連して有用であるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、および
ファージディスプレイ技術、またはそれらの組合せの使用を含む、当該技術分野に公知の
多種多様な技術を使用して調製することができる。本開示の抗体として、キメラ、霊長類
化（primatized）、ヒト化、またはヒト抗体が挙げられる。
本開示の抗体は、キメラ抗体であり得る。本明細書で使用される用語「キメラ」抗体と
は、ラットまたはマウス抗体のような非ヒト免疫グロブリンに由来する可変配列、および
、ヒト免疫グロブリンテンプレートから典型的には選択されるヒト免疫グロブリン定常領
域を有する抗体を指す。キメラ抗体を産生するための方法は、当該技術分野に知られてい
る。例えば、Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7、Oi et al., 1986, BioTechni
ques 4:214-221、Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202、米国特許
第５，８０７，７１５号明細書、米国特許第４，８１６，５６７号明細書、および米国特
許第４，８１６，３９７号明細書を参照し、その内容は、参照によりその全体が本明細書
に組み込まれる。
本開示の抗体は、ヒト化され得る。非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化」形態は、
非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロ
ブリン鎖、またはその断片（例えば、抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、
または他の標的結合サブドメイン）である。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、
典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここでＣＤＲ領域の全て、または
実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、ＦＲ領域の全て、または実質的
に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定
常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリン共通配列のものを含む
ことができる。抗体のヒト化の方法は、当該技術分野に知られている。例えば、Riechman
n et al., 1988, Nature 332:323-7、Ｑｕｅｅｎらに対する米国特許第５，５３０，１０
１号明細書、米国特許第５，５８５，０８９号明細書、米国特許第５，６９３，７６１号
明細書、米国特許第５，６９３，７６２号明細書、米国特許第６，１８０，３７０号明細
書、欧州特許出願公開第２３９４００号明細書、ＰＣＴ公開の国際公開第９１／０９９６
７号パンフレット、米国特許第５，２２５，５３９号明細書、欧州特許出願公開第５９２
１０６号明細書、欧州特許出願公開第５１９５９６号明細書、Padlan, 1991, Mol. Immun
ol., 28:489-49８、Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7:805-814、Roguska et al.,
1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:969-973、米国特許第５，５６５，３３２号明細書を
参照し、その全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本開示の抗体は、ヒト抗体であり得る。完全「ヒト」抗体は、ヒトの患者の治療的な処
置に対して望ましくあり得る。本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」は、ヒト免疫グ
ロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリー、または
１つもしくは複数のヒト免疫グロブリンに関してトランスジェニックである動物から分離
され、内在性免疫グロブリンを発現しない抗体を含む。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン
配列由来の抗体ライブラリーを使用するファージディスプレイ方法を含む、当該技術分野
に公知の様々な方法により作製することができる。例えば、米国特許第４，４４４，８８
７号明細書および米国特許第４，７１６，１１１号明細書、ならびにＰＣＴ公開の国際公
開第９８／４６６４５号パンフレット、国際公開第９８／５０４３３号パンフレット、国
際公開第９８／２４８９３号パンフレット、国際公開第９８／１６６５４号パンフレット
、国際公開第９６／３４０９６号パンフレット、国際公開第９６／３３７３５号パンフレ
ット、国際公開第９１／１０７４１パンフレットを参照し、その各々は、参照によりその
全体が本明細書に組み込まれる。ヒト抗体はまた、機能性内因性免疫グロブリンを発現す
ることは不可能であるが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができる、トランス
ジェニックマウスを使用して産生することができる。例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第９
８／２４８９３号パンフレット、国際公開第９２／０１０４７号パンフレット、国際公開
第９６／３４０９６号パンフレット、国際公開第９６／３３７３５号パンフレット、米国
特許第５，４１３，９２３号明細書、米国特許第５，６２５，１２６号明細書、米国特許
第５，６３３，４２５号明細書、米国特許第５，５６９，８２５号明細書、米国特許第５
，６６１，０１６号明細書、米国特許第５，５４５，８０６号明細書、米国特許第５，８
１４，３１８号明細書、米国特許第５，８８５，７９３号明細書、米国特許第５，９１６
，７７１号明細書、および米国特許第５，９３９，５９８号明細書を参照し、その内容は
、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。加えて、Ｍｅｄａｒｅｘ（Ｐｒｉｎｃ
ｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、Ｉｌｌ
．）、Ａｍｇｅｎ（Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、Ｃａｌｉｆ．）、およびＲｅｇｅｎｅ
ｒｏｎ（Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、Ｎ．Ｙ．）のような企業に、上述と同様の技術を使用して
選択した抗原に対して指向させたヒト抗体を提供させることができる。選択したエピトー
プを認識する、完全ヒト抗体は、「誘導選択（guided selection）」と称する技術を使用
して生成することができる。このアプローチにおいて、選択した非ヒトモノクローナル抗
体、例えばマウス抗体を使用して、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選択を誘導
する（Jespers et al., 1988, Biotechnology 12:899-903）。
本開示の抗体は、霊長類化され得る。用語「霊長類化抗体」とは、サル可変領域および
ヒト定常領域を含む、抗体を指す。霊長類化抗体を産生するための方法は、当該技術分野
に知られている。例えば、米国特許第５，６５８，５７０号明細書、米国特許第５，６８
１，７２２号明細書、および米国特許第５，６９３，７８０号明細書を参照し、その内容
は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本開示の抗体は、誘導体化抗体を含む。例えば、限定はしないが、誘導体化抗体は、典
型的には、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブ
ロッキング基による誘導体化、タンパク分解性切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質
への連結（抗体コンジュゲートの考察については第４．１節を参照）などにより修飾され
る。数多くの化学的な修飾のいずれかは、限定されないが、特定の化学的切断、アセチル
化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含む、公知の技術により行うことがで
きる。加えて、誘導体は、例えばａｍｂｒｘ技術を使用して、１つまたは複数の非天然ア
ミノ酸を含有することができる（例えば、Wolfson, 2006, Chem. Biol. 13(10):1011-2を
参照）。
本開示のさらに別の実施形態において、抗体またはその断片は、相当する野生型配列に
対して少なくとも１つの定常領域媒介性の生物学的エフェクターの機能を改変するために
その配列を修飾した、抗体または抗体断片であり得る。例えば、いくつかの実施形態にお
いて、本開示の抗体を修飾して、非修飾抗体に対して少なくとも１つの定常領域媒介性の
生物学的エフェクターの機能を低下させることができ、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）
またはＣ１ｑに対する結合を低下させることができる。ＦｃγＲおよびＣ１ｑ結合は、Ｆ
ｃγＲまたはＣ１ｑ相互作用に必要な特定の領域で、抗体の免疫グロブリン定常領域セグ
メントを変異させることにより低下し得る（例えば、Canfield and Morrison, 1991, J.
Exp. Med. 173:1483-1491、Lund et al., 1991, J. Immunol. 147:2657-2662、Lo. et al
., 2017, J Biol Chem 292: 3900-08、Wang et al., 2018, Protein Cell 9:63-73を参照
）。
抗体のＦｃγＲ結合能の低下はまた、ＦｃγＲ相互作用に依存している別のエフェクタ
ー機能、例えばオプソニン作用、食作用および抗体依存性細胞毒性（「ＡＤＣＣ」）も低
減する場合があるが、Ｃ１ｑ結合の低下は、補体依存性細胞毒性（「ＣＤＣＣ」）を低減
し得る。ゆえに、エフェクター機能の低下または排除により、本開示のＡＤＣにより標的
化されるＴ細胞が、ＡＤＣＣまたはＣＤＣを介して破壊されることを防ぎ得る。したがっ
て、いくつかの実施形態において、抗体のエフェクター機能は、抗体のＦｃ部分の選択的
突然変異により修飾され、その結果、抗原特異性および内在化能力を維持するが、ＡＤＣ
Ｃ／ＣＤＣ機能は排除する。
ＦｃγＲおよびＣ１ｑ結合を低下させる数多くの突然変異が、当該技術分野で記載され
ており、このような突然変異は、本開示のＡＤＣに含まれ得る。例えば、米国特許第６，
７３７，０５６号明細書では、位置２３８、２６５、２６９、２７０、２９２、２９４、
２９５、２９８、３０３、３２４、３２７、３２９、３３３、３３５、３３８、３７３、
３７６、４１４、４１６、４１９、４３５、４３８、または４３９での単一位置のＦｃ領
域アミノ酸修飾により、ＦｃγＲＩＩへの結合およびＦｃγＲＩＩが低下する結果となる
ことが開示されている。米国特許第９，７９０，２６８号明細書では、アミノ酸位置２９
８でのアスパラギン残基、およびアミノ酸位置３００でのセリンまたはトレオニン残基が
、ＦｃγＲ結合を低下させることが開示されている。ＰＣＴ公開の国際公開第２０１４／
１９０４４１号パンフレットでは、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ：Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／
Ｅ２３３Ｋ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ｓ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５
Ｒ／Ｄ２６５Ｓ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２
３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｋ３２２Ａ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／
Ｌ２３５Ｒ／Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３２９Ｗ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４
Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｐ３２９Ｗ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３
２２Ａ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ａ、
Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ｅ／Ｅ３３３Ｋ：Ｅ２３３
Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ｅ／Ｅ３３３Ｋ突然変
異を有するＦｃγＲ結合が低下した、修飾したＦｃドメインが記載されており、ここで、
セミコロンに先行する突然変異の一式は、第一のＦｃポリペプチド中にあり、セミコロン
に続く突然変異は、Ｆｃ二量体の第二のＦｃポリペプチド中にある。ＦｃγＲ受容体結合
ならびにＣ１ｑ結合を低減することができる突然変異として、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、
Ｎ２９７Ｇ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３４
Ａ／Ｌ２３５Ａ、およびＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ａが挙げられる（Lo. et al.
, 2017, J Biol Chem 292: 3900-08、Wang et al., 2018, Protein Cell 9:63-73）。
エフェクター機能を低下させるために定常領域を変異させる、例えば上述のＦｃドメイ
ンを変異させるのに代えて、エフェクター機能は、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’
、またはＦ（ａｂ’）２断片）を利用することにより排除することができる。
本開示の他の実施形態において、抗体またはその断片を修飾して、非修飾抗体に対して
少なくとも１つの定常領域媒介性の生物学的エフェクターの機能を獲得または改善するこ
とができ、例えば、ＦｃγＲ相互作用を向上させることができる（例えば、米国特許出願
公開第２００６／０１３４７０９号明細書を参照）。例えば、本開示の抗体は、ＦｃγＲ
ＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、および／またはＦｃγＲＩＩＩＡを、相当する野生型定常領域
より高い親和性で結合する、定常領域を有することができる。
ゆえに、本開示の抗体は、オプソニン作用、食作用またはＡＤＣＣの低減をもたらす生
物活性の変化を有し得る。このような変化は、当該技術分野に知られている。例えば、Ａ
ＤＣＣ活性を低減する抗体における修飾は、米国特許第５，８３４，５９７号明細書に記
載されている。
さらに別の態様において、抗体またはその断片は、例えば、ＦｃＲｎ相互作用に関与す
る特定の領域で免疫グロブリン定常領域セグメントを変異させることにより、修飾して、
胎児性Ｆｃ受容体、ＦｃＲｎに対するその結合親和性を高めるか、または低減する抗体ま
たはその断片であり得る（例えば、国際公開第２００５／１２３７８０号パンフレットを
参照）。このような突然変異は、ＦｃＲｎへの抗体の結合を高めることができ、抗体を分
解から保護し、その半減期を延長させる。
さらに他の態様において、抗体は、例えば、Jung and Pluckthun, 1997, Protein Engi
neering 10(9):959-966、Yazaki et al., 2004, Protein Eng. Des Sel. 17(5):481-9、
および米国特許出願公開第２００７／０２８０９３１号明細書に記載される通り、その超
可変領域の１つまたは複数に挿入された、１つまたは複数のアミノ酸を有する。
抗体の標的は、ＡＤＣの所望の治療用途に依存する。典型的には、標的は、ＡＬＫ５阻
害剤を送達するのに望ましい細胞、例えばＴ細胞の表面に存在する分子であり、抗体は、
好ましくは、標的に結合すると内在化される。内在化抗体は、例えば、Franke et al., 2
000, Cancer Biother. Radiopharm. 15:459 76、Murray, 2000, Semin. Oncol. 27:64 70
、Breitling et al., Recombinant Antibodies, John Wiley, and Sons, New York, 1998
に記載されている。
ＡＤＣがＴＧＦ－β活性を低減することにより免疫系を刺激することが意図される用途
について、Ｔ細胞表面分子に結合する抗体を生成することが望ましい。理論に制約される
ことなく、Ｔ細胞へのＡＬＫ５阻害剤の送達が、とりわけ、ＣＤ４＋および／またはＣＤ
８＋Ｔ細胞の活性を活性化し、制御性Ｔ細胞活性を阻害することができ、その両方が、腫
瘍の免疫寛容に寄与すると考えられる。したがって、本開示のＡＤＣでのＴ細胞表面分子
に結合する抗体の使用は、例えば、以下の第４．７節に記載される様々ながんの処置に有
用である。様々な実施形態において、抗体は、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＴＲＥ
Ｇ細胞、または前述の任意の組合せに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、
汎Ｔ細胞表面分子に結合する。標的化するのに好適なＴ細胞表面分子の例として、限定さ
れないが、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２
５、ＣＤ２８、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ１０３、ＣＤ１８４、Ｔｉｍ３、ＬＡＧ３、Ｃ
ＴＬＡ４、およびＰＤ１が挙げられる。Ｔ細胞表面分子に結合し、内在化すると考えられ
ている抗体の例として、ＯＫＴ６（抗ＣＤ１、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ８０２０）、ＯＫ
Ｔ１１（抗ＣＤ２、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ８０２７）、ＯＫＴ３（抗ＣＤ３、ＡＴＣＣ
受託番号ＣＲＬ８００１）、ＯＫＴ４（抗ＣＤ４、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ８００２）、
ＯＫＴ８（抗ＣＤ８、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ８０１４）、７Ｄ４（抗ＣＤ２５、ＡＴＣ
Ｃ受託番号ＣＲＬ１６９８）、ＯＫＴ９（抗ＣＤ７１、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ８０２１
）、ＣＤ２８．２（抗ＣＤ２８、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５５６６２
０）、ＵＣＨＴ１（抗ＣＤ３、ＢｉｏＸＣｅｌｌカタログ番号ＢＥ０２３１）、Ｍ２９０
（抗ＣＤ１０３、ＢｉｏＸＣｅｌｌカタログ番号ＢＥ００２６）、およびＦＲ７０（抗Ｃ
Ｄ７０、ＢｉｏＸＣｅｌｌカタログ番号ＢＥ００２２）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、標的化したＴ細胞表面分子は、エンドソームを通して、
内在化の後に細胞表面へと再循環することが可能なＴ細胞表面分子である（Goldenring,
2015 Curr. Opin. Cell Biol., 35:117-22を参照）。エンドソームを介して再循環するこ
とが可能であると考えられている例示的なＴ細胞表面分子として、ＣＤ５およびＣＤ７が
挙げられる。理論に制約されることなく、エンドソームを通して再循環することができる
Ｔ細胞表面分子を標的化することは、ＡＬＫ５がまたエンドソームを通して再循環するこ
とができることから、ＡＬＫ５阻害剤のＡＬＫ５への送達を促進することができると考え
られる。ゆえに、エンドソームを通して再循環することができるＴ細胞表面分子を標的化
することは、ＡＬＫ５阻害剤をＡＬＫ５に近接させる助けとなり得る。
４．３．ＡＬＫ５阻害剤
本開示のＡＬＫ５阻害剤は、好ましくは、競合的、可逆的に、ＡＬＫ５受容体の細胞質
キナーゼドメインでＡＴＰ結合部位と結合し、下流のＲ－Ｓｍａｄリン酸化を防ぐ、小分
子である。
ＡＬＫ５阻害剤は、ＡＬＫ５対他のＴＧＦ－βファミリー受容体、例えば、ＡＬＫ４お
よび／もしくはＡＬＫ７ならびに／またはＴＧＦ－β受容体ＩＩに対して、特異的または
選択的であり得るが、必ずしもその必要はない。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ５
阻害剤は、ＡＬＫ５およびＴＧＦ－β受容体ＩＩの両方に対して活性を有する。ＡＬＫ５
阻害剤が、ＢＭＰ ＩＩ受容体に対する限定的な阻害活性を有するのが好ましい一方、こ
れは、本開示のＡＤＣはＢＭＰ ＩＩ活性が最小限であるか、またはないＴ細胞に標的化
されることから必要ではない。
少なくとも３名の対象、少なくとも５名の対象、または少なくとも１０名の対象由来の
Ｔ細胞を使用するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞アッセイで測定される場合、本開示のＡＬＫ５阻
害剤のＩＣ５０は、好ましくは１００ｎＭ以下、より好ましくは５０ｎＭ以下、最も好ま
しくは２０ｎＭ以下である。例示的な細胞アッセイは、以下の第５．６節で説明する。Ａ
ＤＣが、マウスＴ細胞表面分子ではなくヒトを標的とする場合、マウス細胞の代わりにヒ
ト細胞、ならびにマウスＣＤ２８およびＣＤ３の代わりにヒトを認識する抗体を使用する
ことができる。
本開示の抗体－薬物コンジュゲートでの使用に好適なＡＬＫ５阻害剤の具体例として、
イミダゾール－ベンゾジオキソール化合物、イミダゾール－キノキサリン化合物、ピラゾ
ール－ピロロ化合物、およびチアゾール系化合物が挙げられる。
本開示の一態様にしたがって、イミダゾール－ベンゾジオキソール系ＡＬＫ５阻害剤は
、下記の式を有する。
Figure 2023113685000002
式中、Ｒ１は、水素、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルであり、Ｒ２
は、水素、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルであり、Ｒ３は、アミド、
ニトリル、１～約３個の炭素原子を有するアルキニル、カルボキシル、または１～約５個
の炭素原子を有するアルカノールであり、Ａは、直接結合、または１～約５個の炭素原子
を有するアルキルであり、Ｂは、直接結合、または１～約５個の炭素原子を有するアルキ
ルである。本開示の別個の好ましい実施形態において、Ｒ２は、水素またはメチルであり
、Ａは、１個の炭素原子を有し、Ｂは、ベンジル基への直接結合であり、Ｒ３は、アミド
である。本開示の組み合わせた好ましい実施形態において、Ｒ２は、水素またはメチルで
あり、Ａは、１個の炭素原子を有し、Ｂは、ベンジル基への直接結合である。
本開示の別の態様にしたがって、イミダゾール－キノキサリン系ＡＬＫ５阻害剤は、下
記の式を有する。
Figure 2023113685000003
式中、Ｒ１は、水素、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルであり、Ｒ２
は、水素、ハロゲン、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルであり、Ｒ３は
、アミド、ニトリル、１～約３個の炭素原子を有するアルキニル、カルボキシル、または
１～約５個の炭素原子を有するアルカノールであり、Ａは、直接結合、または１～約５個
の炭素原子を有するアルキルであり、Ｂは、直接結合、または１～約５個の炭素原子を有
するアルキルである。本開示の別個の好ましい実施形態において、Ｒ２は、水素またはメ
チルであり、ハロゲンは、フッ素または塩素を含み、Ａは、１個の炭素原子を有し、Ｂは
、ベンジル基への直接結合であり、Ｒ３は、アミドである。本開示の組み合わせた好まし
い実施形態において、Ｒ２は、水素またはメチルであり、Ａは、１個の炭素原子を有し、
Ｂは、ベンジル基への直接結合である。
本開示の別の態様にしたがって、ピラゾール系ＡＬＫ５阻害剤は、下記の式を有する。
Figure 2023113685000004
式中、Ｒ２は、水素、ハロゲン、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルで
あり、Ｒ４は、水素、ハロゲン、１～約５個の炭素原子を有する低級アルキル、１～約５
個の炭素原子を有するアルコキシ、ハロアルキル、カルボキシル、カルボキシアルキルエ
ステル、ニトリル、アルキルアミン、または下記の式を有する基である。
Figure 2023113685000005
式中、Ｒ５は、１～約５個の炭素原子を有する低級アルキル、ハロゲン、またはモルホ
リノであり、Ｒ６は、ピロール、シクロヘキシル、モルホリノ、ピラゾール、ピラン、イ
ミダゾール、オキサン、ピロリジニル、またはアルキルアミンであり、Ａは、直接結合、
または１～約５個の炭素原子を有するアルキルである。
本開示の別の態様にしたがって、ピラゾール－ピロロ系ＡＬＫ５阻害剤は、下記の式を
有する。
Figure 2023113685000006
式中、Ｒ７は、水素、ハロゲン、１～約５個の炭素原子を有する低級アルキル、アルカ
ノール、モルホリノ、またはアルキルアミンであり、Ｒ２は、水素、ハロゲン、または１
～約５個の炭素原子を有する低級アルキルであり、Ｒ８は、水素、ヒドロキシル、アミノ
、ハロゲン、または下記の式を有する基である。
Figure 2023113685000007
式中、Ｒ５は、ピペラジニルであり、Ｒ６は、モルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニ
ル、アルコキシ、ヒドロキシル、オキサン、ハロゲン、チオアルキル、またはアルキルア
ミンであり、Ａは、１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルである。
本開示の別の態様にしたがって、チアゾール系ＡＬＫ５阻害剤は、下記の式を有する。
Figure 2023113685000008
式中、Ｒ９は、水素、ハロゲン、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルで
あり、Ｒ１０は、水素、または１～約５個の炭素原子を有する低級アルキルである。
ある特定の実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、以下の表１でＡ～Ｎと指定された化
合物のいずれかから選択される。
Figure 2023113685000009
Figure 2023113685000010
Figure 2023113685000011
さらに具体的な実施形態において、ＡＬＫ５阻害剤は、以下の表２で１～２８３と指定
された化合物のいずれかから選択される。
Figure 2023113685000012
Figure 2023113685000013
Figure 2023113685000014
Figure 2023113685000015
Figure 2023113685000016
Figure 2023113685000017
Figure 2023113685000018
Figure 2023113685000019
Figure 2023113685000020
Figure 2023113685000021
Figure 2023113685000022
Figure 2023113685000023
Figure 2023113685000024
Figure 2023113685000025
Figure 2023113685000026
Figure 2023113685000027
Figure 2023113685000028
Figure 2023113685000029
ＡＬＫ５阻害剤の調製および使用は、科学文献および特許文献において、周知であり、
十分に実証されている。ＰＣＴ公開の国際公開第２０００／６１５７６号パンフレット、
および米国特許出願公開第２００３／０１４９２７７号明細書では、トリアリールイミダ
ゾール誘導体、およびＡＬＫ５阻害剤としてのその使用が開示されている。ＰＣＴ公開の
国際公開第２００１／６２７５６パンフレットでは、ピリジニルイミダゾール誘導体、お
よびＡＬＫ５阻害剤としてのその使用が開示されている。ＰＣＴ公開の国際公開第２００
２／０５５０７７パンフレットでは、ＡＬＫ５阻害剤としてのイミダゾリル環状アセター
ル誘導体の使用が開示されている。ＰＣＴ公開の国際公開第２００３／０８７３０４パン
フレットでは、トリ置換ヘテロアリール、ならびにＡＬＫ５および／またはＡＬＫ４阻害
剤としてのその使用が開示されている。国際公開第２００５／１０３０２８号パンフレッ
ト、米国特許出願公開第２００８／０３１９０１２号明細書、および米国特許第７，４０
７，９５８号明細書では、ＡＬＫ５および／またはＡＬＫ４阻害剤としての２－ピリジル
置換イミダゾールが開示されている。代表的な化合物の１つ、ＩＮ－１１３０は、いくつ
かの動物モデルにおいて、ＡＬＫ５および／またはＡＬＫ４阻害剤活性を示す。以下の特
許および特許公開は、ＡＬＫ５阻害剤の追加例を提供し、例示的な合成スキーム、および
ＡＬＫ５阻害剤を使用する方法を提供する：米国特許第６，４６５，４９３号明細書、米
国特許第６，９０６，０８９号明細書、米国特許第７，３６５，０６６号明細書、米国特
許第７，０８７，６２６号明細書、米国特許第７，３６８，４４５号明細書、米国特許第
７，２６５，２２５号明細書、米国特許第７，４０５，２９９号明細書、米国特許第７，
４０７，９５８号明細書、米国特許第７，５１１，０５６号明細書、米国特許第７，６１
２，０９４号明細書、米国特許第７，６９１，８６５号明細書、米国特許第７，８６３，
２８８号明細書、米国特許第８，４１０，１４６号明細書、米国特許第８，４１０，１４
６号明細書、米国特許第８，４２０，６８５号明細書、米国特許第８，５１３，２２２号
明細書、米国特許第８，６１４，２２６号明細書、米国特許第８，７９１，１１３号明細
書、米国特許第８，８１５，８９３号明細書、米国特許第８，８４６，９３１号明細書、
米国特許第８，９１２，２１６号明細書、米国特許第８，９８７，３０１号明細書、米国
特許第９，０５１，３０７号明細書、米国特許第９，０５１，３１８号明細書、米国特許
第９，０７３，９１８号明細書、ならびにＰＣＴ公開の国際公開第２００４／０６５３９
２号パンフレット、国際公開第２００９／０５０１８３号パンフレット、国際公開第２０
０９／１３３０７０号パンフレット、国際公開第２０１１／１４６２８７号パンフレット
、および国際公開第２０１３／００９１４０号パンフレット。前述の特許および特許公開
は、参照によりその全体が組み込まれる。
いくつかのＡＬＫ５阻害剤は、市販されており、ＳＢ－５２５３３４（ＣＡＳ ３５６
５５９－２０－１）、ＳＢ－５０５１２４（ＣＡＳ ６９４４３３－５９－５）、ＳＢ－
４３１５４２（ＣＡＳ ３０１８３６－４１－９）、ＳＢ－２０２４７４（ＥＭＤ４ Ｂ
ｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）
、ＬＹ－３６４９４７（ＣＡＳ ３９６１２９－５３－６）、ＩＮ－１１３０、ＧＷ－７
８８３８８、およびＤ４４７６（ＥＭＤ４ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｍｅｒｃｋ ＫＧ
ａＡ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられる。
本明細書に記載されるＡＬＫ５阻害剤の構造および名称は、抗体および／またはリンカ
ーへの結合前の分子を指す。
好ましいＡＬＫ５阻害剤は、遊離ＮＨまたはＮＨ２基、好ましくはアルキル、ヘテロア
リール、もしくはアリール基に結合するＮＨもしくはＮＨ２基、またはアルキル、ヘテロ
アリール、もしくはアリール基のＮＨもしくはＮＨ２基部分を介して、リンカーに結合す
ることができるものである（例えば、表２に示される化合物１～２３、２６－２９、３１
、３５、３７、３９、４０、４２、４３、４５～４８、５０～８５、８７～９０、９３、
９６、９８～１０４、１０６、１０８、１０９、１１１、１１２、１１４、１１６～１２
０、１３２、１４６、１４９、１５６、１８４、１８７、１９３、２１８、２６０－２７
７、２８２、および２８３）。ＡＬＫ５阻害剤を誘導体化して、遊離ＮＨまたはＮＨ２基
を添加することができる。誘導体化したＡＬＫ５阻害剤の設計は、好ましくは、活性は経
験的に決定することもできるが、ＮＨまたはＮＨ２基を加える場合に阻害剤活性を無効に
する可能性を減らすために、阻害剤の構造活性相関（ＳＡＲ）を考慮に入れるべきである
。表１に示されるいくつかの化合物の例示的な誘導体化した対応物質は、以下の表３に示
される。
Figure 2023113685000030
４．４．リンカー
典型的には、ＡＤＣは、ＡＬＫ５阻害剤と抗体との間のリンカーを含む。リンカーは、
共有結合を含む部分、または抗体を薬物部分に共有結合する原子の鎖である。様々な実施
形態において、リンカーとして、アルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイ
ルのような二価基、－（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ－、アルキルオキシ（例えばポリエチ
レンオキシ、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ）およびアルキルアミノ（例えばポリエチレン
アミノ、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標））の繰返し単位のような部分、ならびにコハク酸塩
、スクシンアミド、ジグリコール酸塩、マロン酸塩、およびカプロアミドを含む二酸エス
テルおよびアミドが挙げられる。
リンカーは、ストレッチャーおよびスペーサー部分のような１つまたは複数のリンカー
成分を含み得る。例えば、ペプチジルリンカーは、２つ以上のアミノ酸、ならびに、任意
で１つまたは複数のストレッチャーおよび／またはスペーサー部分のペプチジル成分を含
むことができる。様々なリンカー成分は、当該技術分野に知られており、そのいくつかは
、以下に記載する。
リンカーは、細胞内の薬物の放出を促進する「切断可能リンカー」であり得る。例えば
、酸不安定リンカー（例としてヒドラゾン）、プロテアーゼ感受性（例としてペプチター
ゼ感受性）リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リン
カー（Chari et al., 1992, Cancer Research 52:127-131、米国特許第５，２０８，０２
０号明細書）を、使用することができる。
当該技術分野に公知のリンカーおよびリンカー成分の例として、アレイミドカプロイル
（ｍｃ）；マレイミドカプロイル－ｐ－アミノベンジルカルバメート；マレイミドカプロ
イル－ペプチド－アミノベンジルカルバメートリンカー、例えば、マレイミドカプロイル
－Ｌ－フェニルアラニン－Ｌ－リジン－ｐ－アミノベンジルカルバメート、およびマレイ
ミドカプロイル－Ｌ－バリン－Ｌ－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメート（ｖｃ
）；Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロプリオネート（Ｎ－スクシン
イミジル４－（２－ピリジルジチオ）ペンタノエートまたはＳＰＰとしても知られる）；
４－スクシンイミジル－オキシカルボニル－２－メチル－２－（２－ピリジルジチオ）－
トルエン（ＳＭＰＴ）；Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネー
ト（ＳＰＤＰ）；Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ブチレート（ＳＰＤ
Ｂ）；２－イミノチオラン；Ｓ－アセチル無水コハク酸；ジスルフィドベンジルカルバメ
ート；カルボネート；ヒドラゾンリンカー；Ｎ－（α－マレイミドアセトキシ）スクシン
イミドエステル；Ｎ－［４－（ｐ－アジドサリチルアミド）ブチル］－３’－（２’－ピ
リジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＭＡＳ）；Ｎ［β－マレイミドプロピルオキシ］ス
クシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）；［Ｎ－ε－マレイミドカプロイルオキシ］スクシン
イミドエステル（ＥＭＣＳ）；Ｎ－［γ－マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエ
ステル（ＧＭＢＳ）；スクシンイミジル－４－［Ｎ－マレイミドメチル］シクロヘキサン
－１－カルボキシ－［６－アミドカプロエート］（ＬＣ－ＳＭＣＣ）；スクシンイミジル
６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサノエート（ＬＣ－ＳＰＤ
Ｐ）；ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）；
Ｎ－スクシンイミジル［４－ヨードアセチル］アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）；スクシ
ンイミジル４－［Ｎ－マレイミドメチル］シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭ
ＣＣ）；Ｎ－スクシンイミジル３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド（ＳＰＤ
Ｐ）；［Ｎ－ε－マレイミドカプロイルオキシ］スルホスクシンイミドエステル（スルホ
－ＥＭＣＳ）；Ｎ－［γ－マレイミドブチリルオキシ］スルホスクシンイミドエステル（
スルホ－ＧＭＢＳ）；４－スルホスクシンイミジル－６－メチル－α－（２－ピリジルジ
チオ）トルアミド］ヘキサノエート－）（スルホ－ＬＣ－ＳＭＰＴ）；スルホスクシンイ
ミジル６－（３’－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサノエート（スル
ホ－ＬＣ－ＳＰＤＰ）；ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミ
ドエステル（スルホ－ＭＢＳ）；Ｎ－スルホスクシンイミジル［４－ヨードアセチル］ア
ミノベンゾエート（スルホ－ＳＩＡＢ）；スルホスクシンイミジル４－［Ｎ－マレイミド
メチル］シクロヘキサン－１－カルボキシレート（スルホ－ＳＭＣＣ）；スルホスクシン
イミジル４－［ｐ－マレイミドフェニル］ブチレート（スルホ－ＳＭＰＢ）；エチレング
リコール－ビス（コハク酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）（ＥＧＳ）；ジスク
シンイミジルタルトレート（ＤＳＴ）；１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－
１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）；ジエチレントリアミン－五酢酸（ＤＴＰＡ）；
チオ尿素リンカー；およびオキシム含有リンカーが挙げられる。
いくつかの実施形態において、リンカーは、細胞内または細胞外の条件下で切断可能で
あるので、リンカーの切断により、適切な環境において抗体からＡＬＫ５阻害剤が放出さ
れる。さらに他の実施形態において、リンカーは、切断可能ではなく、薬物は、例えばリ
ソソームでの抗体の分解により放出される（米国特許出願公開第２００５／０２３８６４
９号明細書を参照し、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる
）。
本開示のＡＤＣで使用することができる非切断可能リンカーの例として、Ｎ－マレイミ
ドメチルシクロヘキサン１－カルボキシレート、マレイミドカプロイル、またはメルカプ
トアセトアミドカプロイルリンカーが挙げられる。
いくつかの実施形態において、リンカーは、細胞内環境（例えば、リソソームもしくは
エンドソーム、またはカベオラ内）に存在する切断剤により切断可能である。リンカーは
、例えば、限定されないが、リソソームまたはエンドソームプロテアーゼを含む、細胞内
ペプチターゼまたはプロテアーゼ酵素により切断されるペプチジルリンカーであり得る。
いくつかの実施形態において、ペプチジルリンカーは、少なくとも２アミノ酸長、または
少なくとも３アミノ酸長、またはそれ以上である、ペプチジル成分を含む。
切断剤は、限定されないが、カテプシンＢおよびＤ、およびプラスミンを含み得るが、
これらの全ては、標的細胞内で活性薬物を放出するジペプチド薬物誘導体を加水分解する
ことが知られている（例えば、Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:6
7-123を参照）。例えば、ペプチジルリンカーは、チオール依存性プロテアーゼカテプシ
ンＢ（例えば、Ｐｈｅ－Ｌｅｕ、またはＧｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙリンカー）によ
り切断可能である。このようなリンカーの他の例は、例えば、米国特許第６，２１４，３
４５号明細書に記載されており、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組
み込まれる。
いくつかの実施形態において、細胞内プロテアーゼにより切断可能であるペプチジルリ
ンカーは、Ｖａｌ－ＣｉｔリンカーまたはＰｈｅ－Ｌｙｓリンカーである（例えば、ｖａ
ｌ－ｃｉｔリンカーでのドキソルビシンの合成を記載する、米国特許第６，２１４，３４
５号明細書を参照）。
他の実施形態において、切断可能リンカーは、ｐＨ感受性、すなわち、ある特定のｐＨ
値での加水分解に感受性がある。典型的には、ｐＨ感受性リンカーは、酸性条件下で加水
分解可能である。例えば、リソソームにおいて加水分解可能である、酸不安定リンカー（
例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、ｃｉｓ－アコニット酸アミ
ド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）を、使用することができる（例えば、
米国特許第５，１２２，３６８号明細書、米国特許第５，８２４，８０５号明細書、米国
特許第５，６２２，９２９号明細書、Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutic
s 83:67-123、Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661を参照）。このよう
なリンカーは、血液中のような中性ｐＨ条件下で比較的安定であるが、リソソームのｐＨ
に近いｐＨ５．５または５．０未満で不安定である。ある特定の実施形態において、加水
分解性リンカーは、チオエーテルリンカー（例えば、アシルヒドラゾン結合を介して治療
剤と結合するチオエーテル）である（例えば、米国特許第５，６２２，９２９号明細書を
参照）。
さらに他の実施形態において、リンカーは、還元条件下で切断可能である（例えば、ジ
スルフィドリンカー）。様々なジスルフィドリンカーは、当該技術分野に知られており、
例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ－スクシンイミジル－５－アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（
Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ－
スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ））ブチレート）、およびＳＭＰＴ（Ｎ－
スクシンイミジル－オキシカルボニル－アルファ－メチル－アルファ－（２－ピリジル－
ジチオ）－トルエン）－、ＳＰＤＢ、ならびにＳＭＰＴを使用して形成することができる
ものを含む。（例えば、Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931、Wawrzynczak
et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of
Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987を参照。また米国特許第４，８８０
，９３５号明細書も参照）
他の実施形態において、リンカーは、マロン酸リンカー（Johnson et al., 1995, Anti
cancer Res. 15:1387-93）、マレイミドベンゾイルリンカー（Lau et al., 1995, Bioorg
-Med-Chem. 3(10):1299-1304）、または３’－Ｎ－アミド類似体（Lau et al., 1995, Bi
oorg-Med-Chem. 3(10):1305-12）である。
多くの場合、リンカーは、細胞外環境に実質的に感受性ではない。本明細書で使用され
る場合、リンカーの文脈における「細胞外環境に実質的に感受性ではない」とは、ＡＤＣ
のサンプルにおいて約２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、３％以下、また
は約１％以下のリンカーが、ＡＤＣが細胞外環境（例えば血漿）に存在する場合に切断さ
れることを意味する。
リンカーが細胞外環境に実質的に感受性ではないかどうかは、例えば、血漿でＡＤＣを
所定の時間（例えば２、４、８、１６、または２４時間）インキュベートし、次いで血漿
に存在する遊離薬物の量を定量化することにより決定することができる。
互いに排他的ではない他の実施形態において、リンカーは、細胞内在化を促進すること
ができる。ある特定の実施形態において、リンカーは、治療剤とコンジュゲートされる場
合（すなわち、本明細書に記載されるＡＤＣのリンカー－治療剤部分の環境において）、
細胞内在化を促進する。さらに他の実施形態において、リンカーは、ＡＬＫ５阻害剤およ
び抗体の両方とコンジュゲートされる場合に細胞内在化を促進する。
多くの実施形態において、リンカーは、自己犠牲型である。本明細書で使用される場合
、用語「自己犠牲」とは、間隔をあけた２つの化学部分と共有結合させて安定な三連分子
にすることができる二官能化学部分を指す。それは、第一の部分へのその結合が切断され
る場合、第二の化学部分から自発的に分離する。例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２００
７／０５９４０４号パンフレット、国際公開第２００６／１１０４７６号パンフレット、
国際公開第２００５／１１２９１９号パンフレット、国際公開第２０１０／０６２１７１
号パンフレット、国際公開第２００９／０１７３９４号パンフレット、国際公開第２００
７／０８９１４９号パンフレット、国際公開第２００７／０１８４３１号パンフレット、
国際公開第２００４／０４３４９３号パンフレット、および国際公開第２００２／０８３
１８０号パンフレットを参照し、これらは、薬物および切断可能物質が任意で自己犠牲リ
ンカーを通して連結する、薬物－切断可能物質コンジュゲートを対象とし、その全てが明
白に参照により組み込まれる。自己犠牲リンカーを生成するのに使用することができる自
己犠牲スペーサー単位の例は、以下の式Iに記載される。
本組成物および方法で使用することができる様々な例示的なリンカーは、ＰＣＴ公開の
国際公開第２００４／０１０９５７号パンフレット、米国特許出願公開第２００６／００
７４００８号明細書、米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号明細書、および米
国特許出願公開第２００６／００２４３１７号明細書に記載される（その各々は、全ての
目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
本開示のＡＤＣは、以下の式Ｉであり得、ここで抗体（Ａｂ）は、任意のリンカー（Ｌ
）を介して１つまたは複数のＡＬＫ５阻害剤の薬物部分（Ｄ）とコンジュゲートされる。
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｐ Ｉ
したがって、抗体は、直接的に、またはリンカーを介してのいずれかで、薬物とコンジ
ュゲートすることができる。式Ｉにおいて、ｐは、抗体当たりの薬物（すなわちＡＬＫ５
阻害剤）部分の平均数であり、これは、例えば、抗体当たり約１から約２０個の薬物部分
の範囲であり得、ある特定の実施形態においては、抗体当たり２から約８個の薬物部分で
あり得る。薬物搭載のさらなる詳細は、以下の第４．５節に記載される。
いくつかの実施形態において、リンカー成分は、例えばシステイン残基を介して、別の
リンカー成分または薬物部分に抗体を連結する、「ストレッチャー」を含み得る。例示的
なストレッチャーは、以下に示される（式中、左の波線は、抗体への共有結合の部位を示
し、右の波線は、別のリンカー成分または薬物部分への共有結合の部位を示す）。
Figure 2023113685000031
米国特許第９，１０９，０３５号明細書、Ducry et al., 2010, Bioconjugate Chem. 21:
5-13を参照。
いくつかの実施形態において、リンカー成分は、アミノ酸単位を含み得る。このような
一実施形態において、アミノ酸単位は、プロテアーゼによるリンカーの切断を許容し、そ
れにより、リソソーム酵素のような細胞内プロテアーゼに曝露されると、ＡＤＣからの薬
物の放出が促進される。例えば、Doronina et al., 2003, Nat. Biotechnol. 21:778-784
を参照。例示的なアミノ酸単位として、限定されないが、ジペプチド、トリペプチド、テ
トラペプチド、およびペンタペプチドが挙げられる。例示的なジペプチドとして、バリン
－シトルリン（ＶＣもしくはｖａｌ－ｃｉｔ）、アラニン－フェニルアラニン（ＡＦもし
くはａｌａ－ｐｈｅ）、フェニルアラニン－リジン（ＦＫまたはｐｈｅ－ｌｙｓ）、また
はＮ－メチル－バリン－シトルリン（Ｍｅ－ｖａｌ－ｃｉｔ）が挙げられる。トリペプチ
ドの例として、グリシン－バリン－シトルリン（ｇｌｙ－ｖａｌ－ｃｉｔ）、およびグリ
シン－グリシン－グリシン（ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｇｌｙ）が挙げられる。アミノ酸単位は、
天然に生じるアミノ酸残基、ならびに少数のアミノ酸、および非天然アミノ酸類似体を含
み得、例えば、シトルリンアミノ酸単位が、特定の酵素、例えばカテプシンＢ、Ｃ、およ
びＤ、またはプラスミンプロテアーゼにより、酵素切断に対する選択において設計し最適
化することができる。
いくつかの実施形態において、リンカー成分は、直接的に、またはストレッチャーおよ
び／もしくはアミノ酸単位のいずれかにより、抗体を薬物部分に連結する、「スペーサー
」単位を有し得る。スペーサー単位は、「自己犠牲」または「非自己犠牲」であり得る。
「非自己犠牲」スペーサー単位は、一部または全てのスペーサー単位がＡＤＣの酵素（例
えばプロテアーゼ）切断時に薬物部分に結合し続けるものである。非自己犠牲スペーサー
単位の例として、限定されないが、グリシンスペーサー単位およびグリシン－グリシンス
ペーサー単位が挙げられる。「自己犠牲」スペーサー単位は、別個の加水分解ステップを
行わずに、薬物部分の放出が可能である。ある特定の実施形態において、リンカーのスペ
ーサー単位は、ｐ－アミノベンジル単位を含む。このような一実施形態において、ｐ－ア
ミノベンジルアルコールは、アミド結合を介してアミノ酸単位と結合し、カルバミン酸塩
、メチルカルバミン酸塩、または炭酸塩は、ベンジルアルコールと細胞毒性剤との間で作
製される。例えば、Hamann et al., 2005, Expert Opin. Ther. Patents 15:1087-1103を
参照。一実施形態において、スペーサー単位は、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（
ＰＡＢ）である。ある特定の実施形態において、ｐ－アミノベンジル単位のフェニレン部
分は、Ｑｍで置換され、ここでＱは、－Ｃ１～Ｃ８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ８アルキ
ル）、－ハロゲン、－ニトロ、または－シアノであり、ｍは、０～４の範囲の整数である
。自己犠牲スペーサー単位の例として、限定されないが、ｐ－アミノベンジルアルコール
と電子的に類似する芳香族化合物（例えば、米国特許出願公開第２００５／０２５６０３
０号明細書を参照）、例えば２－アミノイミダゾール－５－メタノール誘導体（Hay et a
l., 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237）、およびオルト－またはパラ－アミノベ
ンジルアセタールがさらに挙げられる。置換および非置換４－アミノ酪酸アミド（Rodrig
ues et al., 1995, Chemistry Biology 2:223）、適切に置換したビシクロ［２．２．１
］およびビシクロ［２．２．２］環系（Storm et al., 1972, Amer. Chem. Soc. 94:5815
）、ならびに２－アミノフェニルプロピオン酸アミド（Amsberry et al., 1990, J. Org.
Chem. 55:5867）のような、アミド結合の加水分解時に環形成を行うスペーサーを使用す
ることができる。グリシンのａ位置で置換されるアミン含有薬物の排除（Kingsbury et a
l., 1984, J. Med. Chem. 27:1447）もまた、ＡＤＣに有用な自己犠牲スペーサーの例で
ある。
一実施形態において、スペーサー単位は、以下に記載される分岐ビス（ヒドロキシメチ
ル）スチレン（ＢＨＭＳ）単位であり、これを使用して複数の薬物を組み込み、放出する
ことができる。
Figure 2023113685000032
（式中、ＡｂおよびＤは、式Ｉについて上記で定義されており、Ａは、ストレッチャーで
あり、ａは、０から１の範囲の整数であり、Ｗは、アミノ酸単位であり、ｗは、０から１
２の範囲の整数であり、Ｑは、－Ｃ１～Ｃ８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ８アルキル）、
－ハロゲン、－ニトロ、または－シアノであり、ｍは、０～４の範囲の整数であり、ｎは
、０または１であり、ｐは、１から約２０の範囲である）
リンカーは、上記のリンカー成分の任意の１つまたは複数を含み得る。ある特定の実施
形態において、リンカーは、以下のＡＤＣの式において、括弧内に示される：
Ａｂ－（－［Ａａ－Ｗｗ－Ｙｙ］－Ｄ）ｐ ＩＩ
（式中、Ａｂ、Ａ、ａ、Ｗ、ｗ、Ｄ、およびｐは、先の段落で定義されており、Ｙは、ス
ペーサー単位であり、ｙは、０、１、または２である）。このようなリンカーの例示的な
実施形態は、米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号明細書に記載され、それは
、参照により本明細書に組み込まれる。
例示的なリンカー成分およびその組合せは、式ＩＩのＡＤＣの文脈で下記に示される：
Figure 2023113685000033
ストレッチャー、スペーサー、およびアミノ酸単位を含む、リンカー成分は、当該技術
分野に公知の方法、例えば米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号明細書に記載
されるものにより合成することができる。
４．５．薬物搭載
薬物搭載は、ｐで表され、分子中の抗体当たりのＡＬＫ５阻害剤部分の平均数である。
平均数は、多くの場合、分数または小数であるが、薬物搭載（「ｐ」）は、抗体当たり１
、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７
、１８、１９、２０またはそれ以上の部分（Ｄ）であり得る。一般に、ＡＬＫ５阻害剤搭
載は、平均すると抗体当たり２から８個の薬物部分、より好ましくは抗体当たり２から４
個の薬物部分、または抗体当たり５から７個の薬物部分となる。
当業者に理解される通り、多くの例において、ＡＤＣに対する言及は、（ときに医薬組
成物の文脈において）ＡＤＣ分子の集団または集合の省略表現であり、各分子は、１つま
たは複数のＡＬＫ５阻害剤部分に共有結合した抗体で構成され、個別の分子基部での比が
集団においてＡＤＣ分子ごとに変化し得るが、薬物搭載比は、集団または集合の平均薬物
搭載を表す。いくつかの実施形態において、集団または集合は、１～３０個の薬物部分の
いずれの場所に、いくつかの実施形態においては１～２０個、１～１５個、２～１２個、
または２～８個の薬物部分のいずれかの場所に共有結合する抗体を含む、ＡＤＣ分子を含
有する。好ましくは、集団における平均は、先の段落に記載されており、例えば、抗体当
たり２～８個の薬物部分、より好ましくは抗体当たり４～８個の薬物部分、または抗体当
たり５～７個の薬物部分である。
いくつかのＡＤＣ集団は、本明細書に記載されるＡＤＣ、および薬物部分が欠如する抗
体分子、例えば、ＡＬＫ５抗体との結合が失敗した抗体を含む組成物の形態であり得る。
コンジュゲート反応からのＡＤＣの調製における、抗体当たりのＡＬＫ５阻害剤部分の
平均数は、質量分光法およびＥＬＩＳＡアッセイのような従来の手段により特徴付けられ
る。
ｐに関してＡＤＣの定量分配もまた決定することができる。いくつかの例において、均
一なＡＤＣの分離、精製、および特徴付けは、ｐが他のＡＬＫ５阻害剤搭載を伴うＡＤＣ
からのある特定の値であるが、電気泳動のような手段により達成することができる。
いくつかの抗体－薬物コンジュゲートに対して、ｐは、抗体上の結合部位の数により限
定され得る。例えば、結合が、システインチオールである場合、上記の例示的な実施形態
において、抗体は、１つもしくは複数のシステインチオール基のみを有し得るか、または
、リンカーを結合させることができる、十分な反応性の１つもしくは複数のチオール基の
みを有し得る。ある特定の実施形態において、より高い薬物搭載、例えばｐ＞５では、あ
る特定の抗体－薬物コンジュゲートの凝集、不溶性、毒性、または細胞浸透性の低下が起
こり得る。ある特定の実施形態において、本開示のＡＤＣに対する薬物搭載は、１～約８
、約２～約６、約３～約５、約３～約４、約３．１～約３．９、約３．２～約３．８、約
３．２～約３．７、約３．２～約３．６、約３．３～約３．８、または約３．３～約３．
７の範囲である。実際に、ある特定のＡＤＣに対して、抗体当たりの薬物部分の最適比が
、８未満であり得、約２～約５であり得ることが示されている。米国特許出願公開第２０
０５／０２３８６４９号明細書（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照
。
ある特定の実施形態において、理論上の最大値未満の薬物部分が、コンジュゲート反応
の間、抗体にコンジュゲートされる。抗体は、例えば、以下で論ずる通り、薬物－リンカ
ー中間体またはリンカー試薬と反応しない、リジン残基を含有し得る。一般に、抗体は、
薬物部分に連結することができる多くの遊離性反応性システインチオール基を含有せず、
実際に、抗体内の多くのシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。
ある特定の実施形態において、抗体を、部分的または全体的な還元条件下、ジチオトレイ
トール（ＤＴＴ）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）のような還元化剤
で還元して、反応性システインチオール基を生成することができる。ある特定の実施形態
において、抗体を変性条件にさらして、リジンまたはシステインのような反応性求核性基
を現す。
ＡＤＣの搭載（薬物／抗体比）は、様々な手法、例えば、（ｉ）抗体に対する薬物－リ
ンカー中間体またはリンカー試薬のモル過剰を制限すること、（ｉｉ）コンジュゲート反
応の時間または温度を制限すること、（ｉｉｉ）システインチオール修飾に対する部分的
な還元条件または還元条件を制限すること、（ｉｖ）システイン残基の数および位置を、
リンカー－薬物結合（例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２００６／０３４４８８号パンフ
レット（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されるようなチオＭａｂ
またはチオＦａｂ）の数および／または位置を制御するために修飾するように、組換え技
術により抗体のアミノ酸配列を操作することによって制御することができる。
２つ以上の求核性基が、薬物－リンカー中間体またはリンカー試薬と反応し、続いて薬
物部分試薬と反応する場合、次いで、得られる生成物が、抗体に結合した１つまたは複数
の薬物部分の分布を有するＡＤＣ化合物の混合物であることは理解すべきである。抗体当
たりの薬物の平均数は、デュアルＥＬＩＳＡ抗体アッセイにより混合物から計算すること
ができ、これは、抗体に特異的であり、薬物に特異的である。個別のＡＤＣ分子は、質量
分光法により混合物内で同定され、ＨＰＬＣ、例えば疎水性相互作用クロマトグラフィー
により分離され得る。
いくつかの実施形態において、単一の搭載値を有する均一なＡＤＣは、電気泳動または
クロマトグラフィーにより複合混合物から単離することができる。
４．６．製剤および投与
ＡＤＣの投与の好適な経路として、限定されないが、経口、非経口、直腸、経粘膜、腸
内投与、髄内、鞘内、直接心室内、静脈内、硝子体内、体腔内、腹腔内、または腫瘍内注
射が挙げられる。投与の好ましい経路は、非経口であり、より好ましいのは静脈内である
。あるいは、全身ではなく局所的な方法において、例えば、固体または血液腫瘍への化合
物の直接的な注射を介して、化合物を投与することができる。
免疫コンジュゲートは、薬学的に有用な組成物を調製する公知の方法にしたがって製剤
化することができ、それにより、ＡＤＣは、混合物を薬学的に有用な添加剤と組み合わせ
る。滅菌性のリン酸緩衝生理食塩水は、薬学的に有用な添加剤の一例である。他の有用な
添加剤は、当業者に周知されている。例えば、Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Fo
rms And Drug Delivery Systems, 5th Edition (Lea & Febiger 1990)、およびGennaro (
ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (Mack Publishing Company
1990)、ならびにその改訂版を参照。
好ましい実施形態において、ＡＤＣは、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタン
スルホン酸（ＡＣＥＳ）；Ｎ－（２－アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）；Ｎ，Ｎ－
ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）；４－（２－ヒ
ドロキシエチル）ピペラジン－１－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）；２－（Ｎ－モルホ
リノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）；３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯ
ＰＳ）；３－（Ｎ－モルホリニル）－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）
；およびピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）［Ｐｉｐｅｓ］からなる
群から選択される緩衝液を使用して、Ｇｏｏｄの生物学的緩衝液（ｐＨ６～７）で製剤化
される。より好ましい緩衝液は、好ましくは２０～１００ｍＭの範囲、より好ましくは約
２５ｍＭの濃度でのＭＥＳまたはＭＯＰＳである。最も好ましいのは、ｐＨ６．５での２
５ｍＭのＭＥＳである。製剤は、添加剤として２５ｍＭのトレハロース、および０．０１
％ｖ／ｖのポリソルベート８０をさらに含み、添加した添加剤の結果として、最終緩衝液
濃度が２２．２５ｍＭに調整される。保管の好ましい方法は、コンジュゲートの凍結乾燥
製剤としてであり、－２０℃～２℃の範囲の温度で保管され、最も好ましくは２℃～８℃
で保管される。
ＡＤＣは、例えば、ボーラス注射、緩慢な注入、または連続注入を介して、静脈内投与
用に製剤化することができる。好ましくは、ＡＤＣは、約４時間未満、より好ましくは約
３時間未満にわたって注入される。例えば、最初の２５～５０ｍｇは、３０分以内、好ま
しくは１５分ちょうどで注入し、残りは、次の２～３時間にわたって注入する。注射用の
製剤は、添加した保存剤を伴う単位剤形で、例えば、アンプルまたは多用量容器で提供さ
れ得る。組成物は、油性または水性のビヒクル中の懸濁液、溶液、または乳剤のような形
態を取り得、懸濁化剤、安定化剤、および／または分散化剤のような製剤化剤を含有する
ことができる。あるいは、有効成分は、使用前に、好適なビヒクル、例えば滅菌性のパイ
ロジェンを含まない水で構成するための粉末形態であり得る。
さらなる薬学的な方法を利用して、ＡＤＣの作用の期間を制御することができる。制御
放出の調製物は、ＡＤＣを複合体にするかまたは吸着するポリマーの使用を通して調製す
ることができる。例えば、生体適合性ポリマーとして、ポリ（エチレン－ｃｏ－酢酸ビニ
ル）のマトリックス、およびステアリン酸二量体およびセバシン酸のポリ無水物コポリマ
ーのマトリックスが挙げられる。Sherwood et al., 1992, Bio/Technology 10:1446。こ
のようなマトリックスからのＡＤＣの放出速度は、ＡＤＣの分子量、マトリックス内のＡ
ＤＣの量、および分散粒子のサイズに依存する。Saltzman et al., 1989, Biophys. J. 5
5:163、Sherwood et al.、上記参照。他の固体剤形は、Ansel et al., Pharmaceutical D
osage Forms And Drug Delivery Systems, 5th Edition (Lea & Febiger 1990)、およびG
ennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (Mack Publishing
Company 1990)、ならびにその改訂版に記載されている。
一般に、ヒトに投与されるＡＤＣの投与量は、患者の年齢、体重、身長、性別、全身の
健康状態、および過去の病歴のような因子によって異なる。約０．３ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ
／ｋｇの範囲の投与量のＡＤＣを単回の静脈内注入としてレシピエントに提供することが
望ましい場合があるが、状況に応じてこれよりも低い投与量または高い投与量が投与され
る場合もある。例えば、７０ｋｇの患者に対する０．３～５ｍｇ／ｋｇの投与量は、２１
～３５０ｍｇであり、これは１．７ｍの患者に対する１２～２０６ｍｇ／ｍ２の投与量で
もある。投与量は、必要に応じて、例えば、２～１０週間にわたり週に１回、８週間にわ
たり週に１回、または４週間にわたり週に１回、繰り返すことができる。維持療法で必要
に応じて、より少ない頻度で、例えば、数か月間にわたり１週おきに、または数か月間に
わたり月に１回もしくは３か月に１回、与えることもできる。好ましい投与量として、限
定されないが、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／
ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３
．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、および５．
０ｍｇ／ｋｇが挙げられ得る。より好ましい投与量は、１週間の投与に対して０．６ｍｇ
／ｋｇであり、より低い頻度での投与に対しては１．２ｍｇ／ｋｇである。０．３～５ｍ
ｇ／ｋｇの範囲の任意の量を使用することができる。投与量は、好ましくは、１週間に１
回、複数回投与される。４週間、より好ましくは８週間、より好ましくは１６週間、また
はそれより長い期間の最小投与量のスケジュールを使用することができ、その投与頻度は
、血液毒性に最も関連する、有害な副作用およびそれからの回復に依存する。投与のスケ
ジュールは、（ｉ）週に１回；（ｉｉ）１週おき；（ｉｉｉ）１週間の療法と、続く２週
間、３週間、または４週間の休止；（ｉｖ）２週間の療法と、続く１週間、２週間、３週
間、または４週間の休止；（ｖ）３週間の療法と、続く１週間、２週間、３週間、４週間
、または５週間の休止；（ｖｉ）４週間の療法と、続く１週間、２週間、３週間、４週間
、または５週間の休止；（ｖｉｉ）５週間の療法と、続く１週間、２週間、３週間、４週
間、または５週間の休止；および（ｖｉｉｉ）月に１回からなる群から選択されるサイク
ルでの、週に１回または２回の投与を含み得る。サイクルは、２回、４回、６回、８回、
１０回、または１２回、またはそれ以上繰り返すことができる。
あるいは、ＡＤＣは、２週または３週ごとに１投与量で、合計で少なくとも３投与量を
繰り返して、投与することができる。または、４～６週間にわたり、週に２回である。投
与量は、１週おきに１回、またはさらにより低い頻度で投与することができるので、患者
は、いかなる薬物関連毒性からも回復することができる。あるいは、投与量スケジュール
は、短縮することができる、すなわち、２～３か月間にわたり２週または３週ごとである
。投与スケジュールは、任意で、他の間隔で繰り返すこともでき、投与量は、用量および
スケジュールを適切に調節することで、様々な非経口経路を通して投与することができる
。
４．７．処置の方法
本開示のＡＤＣは、様々ながんの処置に使用することができる。ＡＤＣは、例えば、標
準ケアの薬剤またはレジメンで、単独療法として、または併用療法レジメンの一部として
使用することができる。がんの処置のためのＡＤＣに含めるのに好適な抗体は、Ｔ細胞の
表面抗原を標的化するものである。例示的な抗体は、第４．２節に記載される。
本開示のＡＤＣを使用して処置することができるがんの例として、限定されないが、膵
がん、神経膠芽細胞腫、骨髄異形成症候群、前立腺がん、肝がん（例えば肝細胞癌）、黒
色腫、乳がん、および尿路上皮がん（例えば膀胱がん、尿道がん、および尿管がん）が挙
げられる。
ＢＲＡＦ突然変異を担持する黒色腫の処置のために、本開示のＡＤＣは、ベヌラフェニ
ブ（venurafenibm）、ダブラフェニブ、およびトラメチニブのようなＢＲＡＦ突然変異を
特異的に標的化する薬物と組み合わせて使用することができる。
悪性黒色腫の処置のために、本開示のＡＤＣは、イピリムマブまたはニボルマブまたは
ペムブロリズマブのようなチェックポイント阻害剤と組み合わせて使用することができる
。
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の処置のために、本開示のＡＤＣは、含まれるシスプラチ
ン、カルボプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、ビノレルビン、イリノテカン、エ
トポシド、またはビンブラスチンのような標準ケアの化学療法の処置と組み合わせて使用
することができる。加えて、ＡＤＣは、ベバシズマブまたはＥｒｂｉｔｕｘのような標的
療法と組み合わせて使用することができる。
膀胱がんの処置のために、本開示のＡＤＣは、シスプラチン、マイトマイシンＣ、カル
ボプラチン、ドセタキセル、パクリタキセル、ドキソルビシン、５－ＦＵ、メトトレキセ
ート、ビンブラスチン、イホスファミド、およびペメトレキセドを含むが、限定されない
標準ケアの処置と組み合わせて使用することができる。
腎がんの処置のために、本開示のＡＤＣは、標準ケアの処置、例えば、血管形成および
／または特異的チロシンキナーゼを遮断する薬剤、例として、ソラフェニブ、スニチニブ
、テムシロリムス、エベロリムス、パゾパニブ、およびアキシチニブと組み合わせて使用
することができる。
乳がんの処置のために、本開示のＡＤＣは、アンスラサイクリン（ドキソルビシンまた
はエピルビシン）、およびタキサン（パクリタキセルまたはドセタキセル）、ならびにフ
ルオロウラシル、シクロホスファミド、およびカルボプラチンのような、標準ケアの化学
療法剤と組み合わせて使用することができる。加えて、本開示のＡＤＣは、標的療法と組
み合わせて使用することができる。ＨＥＲ２／ｎｅｕ陽性腫瘍に対する標的療法として、
トラスツズマブおよびペルツズマブが挙げられ、エストロゲン受容体（ＥＲ）陽性腫瘍に
対する標的療法として、タモキシフェン、トレミフェン、およびフルベストラントが挙げ
られる。
膵がんに対して、本開示のＡＤＣは、ゲムシタビン、５－フルオロウラシル、イリノテ
カン、オキサリプラチン、パクリタキセル、カペシタビン、シスプラチン、またはドセタ
キセルのような、標準ケアの化学療法剤と組み合わせて使用することができる。加えて、
ＡＤＣは、ＥＧＦＲを阻害するエルロチニブのような、標的療法と組み合わせて使用する
ことができる。
神経膠芽細胞腫に対して、本開示のＡＤＣは、カルボプラチン、シクロホスファミド、
エトポシド、ロムスチン、メトトレキセート、またはプロカルバジンのような、標準ケア
の化学療法剤と組み合わせて使用することができる。
前立腺がんに対して、本開示のＡＤＣは、ドセタキセルを含み、任意で、ステロイドで
あるプレドニゾン、またはカバジタキセルを含む、標準ケアの化学療法剤と組み合わせて
使用することができる。
以下の略語は、実施例を通して見られる。
Ｂｏｃ － ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ － ジクロロメタン
ＤＭＡ － ジメチルアミン
ＤＭＦ － ジメチルホルムアミド
ＤＩＰＥＡ － Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＥｔＯＡｃ － 酢酸エチル
ＥｔＯＨ － エタノール
Ｆｍｏｃ － フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＨＯＢｔ － ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＭｅＯＨ － メタノール
ＮａＨＭＤＳ － ナトリウムヘキサメチルジシルアジド
ＲＴ － 室温、およそ２１℃
ＴＢＴＵ － Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメ
チルウロニウムテトラフルオロボレート
ＴＥＡ － トリエチルアミン
ＴＨＦ － テトラヒドロフラン
ＴＦＡ － トリフルオロ酢酸
ＴＭＳ－イミダゾール － １－（トリメチルシリル）イミダゾール
５．１．
[実施例１]
４－（６－メチルピリジン－２－イル）－５－（１，５－ナフチリジン－２－イル）－１
，３－チアゾール－２－アミン（化合物Ａ）の合成
化合物Ａを、以下のスキーム１における一般的方法にしたがって調製した。
Figure 2023113685000034
５．１．１． ２－メチル－１，５－ナフチリジン（Ａ１）
濃硫酸（２．５ｍｌ）、ｍ－ニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム（２．０８ｇ、９．
２４ｍｍｏｌ）、ボロン酸（４４５ｍｇ、７．２１ｍｍｏｌ）、および硫酸第一鉄七水和
物（１６７ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で撹拌した。グリセロール（１．
５ｍｌ）を、続いて５－アミノ－２－メチルピリジン（Ａ－ＳＭ）（５００ｍｇ、４．６
２ｍｍｏｌ）および水（２．５ｍｌ）を、反応混合物に添加し、１３５℃で１８時間加熱
した。ＴＬＣにより測定した反応完了後、反応混合物をおよそ２１℃に冷却し、４ＮのＮ
ａＯＨを使用して塩基化し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で抽出した。有機抽出物を合
わせて、水（２００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、粗
化合物Ａ１を得た。粗体を、（２％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）を使用したシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーにより精製して、淡褐色結晶質固体として化合物Ａ１（２００ｍ
ｇ、３０％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.92 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 9.0 Hz, 1H)
, 8.31 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.62 (dd, J = 8.5, 4.5 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 5.9 Hz,
1H), 2.8 (s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ １４５［Ｍ＋Ｈ］＋
５．１．２． １－（６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１，５－ナフチリジン－
２－イル）エタン－１－オン（Ａ２）
Ａ１（２００ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）およびメチル６－メチルピコリネート（２０９
ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の溶液を、Ｎ２雰囲気下に置き、
－７８℃に冷却した。カリウムビス（トリメチルシリル）アミド（トルエン中に０．５Ｍ
、６．９ｍｌ、３．４７ｍｍｏｌ）を、５分間にわたって滴下添加した。反応混合物を、
－７８℃で１時間撹拌し、次いでおよそ２１℃に加温し、２０時間維持した。反応完了後
（ＴＬＣにより測定）、反応混合物を、飽和塩化アンモニウム溶液（２０ｍｌ）でクエン
チした。水性層をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、水（
１００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、粗化合物Ａ２を得た。粗
物質を、カラムクロマトグラフィー（１％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）により精製して、
橙黄色固体として化合物Ａ２（１１０ｍｇ、３０．５％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3: エノール型):δ 15.74 (brs,-OH), 8.69 (t, J = 3.6, 1H),
8.12 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.06 (dd, J = 8.4, 4.4 Hz, 2H), 7.82 (t, J = 7.6 Hz,
1H), 7.55 (dd, J = 8.4, 4.8 Hz, 1H) 7.45 (d, J= 9.6 Hz,1H), 7.3 (dd, J = 7.6,
4.0 Hz, 1H), 7.16 ( s, 1H), 2.75(s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２６４［Ｍ＋Ｈ］＋
５．１．３． ４－（６－メチルピリジン－２－イル）－５－（１，５－ナフチリジン－
２－イル）－１，３－チアゾール－２－アミン（化合物Ａ）
Ａ２（１１０ｍｇ、０．４１８ｍｍｏｌ）の１，４－ジオキサン（１０ｍｌ）中の溶液
を、臭素（０．０２５ｍｌ、０．５０１ｍｍｏｌ）で処理した。得られた反応混合物を、
およそ２１℃で１時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮して、粗Ａ３（１２０ｍｇ）を得て、
これをさらに精製することなく次のステップで用いた。粗Ａ３（１２０ｍｇ）を、エタノ
ール（１５ｍｌ）に溶解させた。次いで、チオ尿素（３．５ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）
を添加し、反応混合物を、（出発物質の完全な消費がＴＬＣにより観察されるまで）７８
℃で４時間加熱した。反応混合物を、およそ２１℃に冷却し、アンモニア溶液（２５％、
１．５ｍｌ）を穏やかに撹拌しながら添加した。溶媒を蒸発させ、次いで残留物をＣＨ２
Ｃｌ２（２×２０ｍｌ）に溶解させ、水（５０．０ｍｌ）で洗浄した。次いで、分離した
有機層を、１ＮのＨＣｌ（３０ｍｌ×２）で洗浄した。合わせた水性層を３５％の水酸化
ナトリウム水溶液（２０ｍｌ）で塩基化し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２０ｍｌ）で抽出した。
有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、粗化合物Ａを得た。粗化合物Ａをアセ
トニトリル（２ｍｌ）から再結晶させて、黄色結晶質固体として精製した化合物Ａ（３５
ｍｇ、２ステップにわたって４９％の収率）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.86 (dd, J = 4.4, 1.6 Hz, 1H), 8.29 (t, J = 8.4 H
z, 1H), 8.06 (d, J = 9.2 Hz,1H), 7.64 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.60-7.55 (m, 2H), 7
.46 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 7.6, 1H), 5.32 (brs, 2H), 2.57 (s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３２０［Ｍ＋Ｈ］＋
ＵＰＬＣ純度：９７．６％
５．２．
[実施例２]
Ｎ－メチル－２－（４－｛４－［３－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－
イル］ピリジン－２－イル｝フェノキシ）エタン－１－アミン（化合物Ｂ）の合成
化合物Ｂを、以下のスキーム２における一般的方法にしたがって調製した。
Figure 2023113685000035
５．２．１． ｔｅｒｔ－ブチル（２－クロロエチル）（メチル）カルバメート（Ｂ７）
Ｂｏｃ－無水物（１．７ｍｌ、７．３０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍｌ）中の撹拌溶液に
、同時に、Ｂ６（１ｇ、７．６９ｍｍｏｌ）の水（４ｍｌ）中の溶液、およびＴＥＡ（１
ｍｌ、７．６９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍｌ）中の溶液を、１時間にわたって添加した。
得られた混合物を、およそ２１℃で１６時間撹拌した。反応混合物を、飽和ＮａＣｌ溶液
（２０ｍｌ）で希釈し、ＤＣＭ（３×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ
２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮して、粗化合物を得て、これを１０％のＥｔＯＡｃ／ヘ
キサンを使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色液体とし
て化合物Ｂ７（１ｇ、５．１８ｍｍｏｌ、７１％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.58-3.52 (m, 4H), 2.93 (s, 3H), 1.46 (s, 9H)
５．２．２． ｔｅｒｔ－ブチルメチル（２－（４－（４，４，５，５－テトラメチル－
１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェノキシ）エチル）カルバメート（Ｉｎｔ
－Ｂ）
４－ヒドロキシフェニルボロン酸ピナコールエステル（７８９ｍｇ、３．５８ｍｍｏｌ
）のＤＭＦ（１３ｍｌ）中の撹拌溶液に、Ｂ７（９００ｍｇ、４．６６ｍｍｏｌ）、ＫＩ
（１８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（２．５７ｇ、７．８８ｍｍｏｌ
）を、アルゴン雰囲気下で添加した。反応混合物を、６５℃に加熱し、１６時間撹拌した
。反応混合物を、水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出した。
合わせた有機層を、減圧下で濃縮して粗体を得て、これを７％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを
使用してカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体としてＩｎｔ－Ｂ（５８
０ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ、４３％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 7.74 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.87 (d, J = 8.8 Hz, 2 H)
, 4.16-4.06 (m, 2H), 3.65-3.59 (m, 2H), 2.97 (s, 3H), 1.45 (s, 9H), 1.33 (s, 12H
)
５．２．３． ２－（２－ブロモピリジン－４－イル）－１－（ピリジン－２－イル）エ
タン－１－オン（Ｂ２）
２－ブロモ－４－メチルピリジン（Ｂ１）（２ｇ、１１．６２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３
０ｍｌ）中の撹拌溶液に、アルゴン下の－７８℃で、ＮａＨＭＤＳ（ＴＨＦ中の２Ｍ、１
２．７ｍｌ、２５．５８ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。黄色溶液を、－７８℃で３０
分間撹拌した。次いで、ピコリン酸エチル（１．７２ｍｌ、１２．７９ｍｍｏｌ）のＴＨ
Ｆ（１０ｍｌ）中の溶液を添加し、反応混合物を、およそ２１℃に加温し、１６時間撹拌
した。溶媒を減圧下で蒸発させ、固体残留物をジエチルエーテルで粉砕し、濾過し、ジエ
チルエーテルで洗浄した。次いで、固体を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（３０ｍｌ）で希釈し、水
性相をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃
縮した。粗生成物を、１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したシリカゲルカラムクロマ
トグラフィーにより精製して、黄色固体として化合物Ｂ２（２．０６ｇ、７．４６ｍｍｏ
ｌ、６４．３％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 8.75 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.32 (d, J= 5.2 Hz, 1H),
8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.89 (t, J =7.6 Hz 1H), 7.56-7.51(m, 2H), 7.28-7.25 (m
, 1H), 4.55 (s, 2H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２７７［Ｍ］＋
５．２．４． ２－ブロモ－４－［３－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４
－イル］ピリジン（Ｂ３）
Ｂ２（８５０ｍｇ、３．０７ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（３．４ｍｌ）中の溶液を、アル
ゴン下で、ＤＭＦ中の氷酢酸（０．４５ｍｌ、７．３９ｍｍｏｌ）で処理した。ＤＭＡ（
０．６ｍｌ、４．６１ｍｍｏｌ）を滴下添加し、混合物をおよそ２１℃で２時間、アルゴ
ン雰囲気下で撹拌した。ヒドラジン一水和物（１．１５ｍｌ、２３．０９ｍｍｏｌ）を滴
下添加し、得られた混合物を、５０℃で３時間加熱し、およそ２１℃で１６時間加熱した
。反応混合物を、水（３０ｍｌ）に注ぎ入れ、ＣＨ２Ｃｌ２（３×３０ｍｌ）で抽出した
。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過した。溶媒を減圧下で蒸発させて、粗化合物を
得た。粗生成物を、３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したシリカゲルカラムクロマト
グラフィーにより精製して、黄色固体として化合物Ｂ３（５６０ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ
、６０．６％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ 8.74 (brs, 1H), 8.34 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.83 (brs
, 1H), 7.81 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.49 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39-7.
84 (m, 1H), 7.31-7.26 (m, 1H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３０１［Ｍ］＋
５．２．５． ２－ブロモ－４－（３－（ピリジン－２－イル）－１－トリチル－１Ｈ－
ピラゾール－４－イル）ピリジン（Ｂ４）
Ｂ３（５００ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に、Ｋ２
ＣＯ３（１．３７ｇ、９．９９ｍｍｏｌ）およびトリチルクロリド（４６４ｍｇ、２．４
９ｍｍｏｌ）を添加した。その後、反応混合物を、加熱還流し、２４時間撹拌した。反応
混合物を濾過し、濾液を濃縮し、次いで、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）と水（１０ｍｌ）と
の間で分配した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗固体を、２％のＭｅＯ
Ｈ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄
色固体として化合物Ｂ４（４０２ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ、４４％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.53 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 5.5 Hz, 1H)
, 7.75-7.05 (m, 2H), 7.56 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.35-7.32 (m, 9H), 7.25-7.22 (m
, 8H)
５．２．６． ｔｅｒｔ－ブチルメチル（２－（４－（４－（３－（ピリジン－２－イル
）－１－トリチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エ
チル）カルバメート（Ｂ５）
Ｂ４（１００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のトルエン（２ｍｌ）中の撹拌溶液に、ＥｔＯ
Ｈ（０．７５ｍｌ）中のＩｎｔ－Ｂ（１８５ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を、続いて２Ｍの
Ｎａ２ＣＯ３溶液（０．４５ｍｌ）を、アルゴン雰囲気下で添加した。反応混合物を、ア
ルゴンで２０分間脱気し、次いでＰｄ（ＰＰｈ３）４（１６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を
添加し、３時間還流した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応
混合物を、水に注ぎ入れ、トルエン（３×１５ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４
で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これを３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン
を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、無色固体として化合物
Ｂ５（７０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、５３％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.53 (s, 1H), 8.49 (d, J= 4.8 Hz, 1H),7.82 (d, J =
8.8 Hz, 2H) 7.74-7.76 (m, 3H), 7.60 (s, 1H), 7.40-7.34 (s, 8H), 7.31-7.30 (m, 2
H), 7.24-7.19 (m, 4H), 7.12- 7.10 (m, 1H), 6.93(d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.19-4.12 (m
, 2H), 3.66-3.58 (m, 2H), 2.98 (s, 3H), 1.46 (s, 9H)
５．２．７． Ｎ－メチル－２－（４－（４－（３－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピ
ラゾール－４－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エタン－１－アミン塩酸塩（化
合物Ｂ）
Ｂ５（７０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（６ｍｌ）中の撹拌溶液に、１，
４－ジオキサン（０．５ｍｌ）中の４ＮのＨＣｌを０℃で添加した。反応混合物を、アル
ゴン雰囲気下で１時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）
、溶媒を減圧下で蒸発させて、粗化合物を得て、これをｎ－ペンタン（２×１ｍｌ）で粉
砕し、乾燥させて、無色固体として化合物ＢのＨＣｌ塩を得た（２５ｍｇ、０．０６ｍｍ
ｏｌ、６９％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 8.94 (brs, 2H), 8.62-8.56 (m, 3H), 8.30 (brs, 1H)
, 8.03-7.96 (m, 3H), 7.86 (d, J = 7.6 Hz, 1H),7.69 (brs, 1H), 7.49 (dd, J =7.2,
5.6 Hz, 1H), 7.29 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.36 (t, J = 4.8
Hz, 2H), 3.39-3.35 (m, 2H), 2.67-2.63 (m, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３７２［Ｍ＋Ｈ］＋
５．３．
[実施例３]
Ｎ－メチル－２－（４－｛４－［３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾ
ール－４－イル］ピリジン－２－イル｝フェノキシ）エタン－１－アミン（化合物Ｃ）の
合成
化合物Ｃを、以下のスキーム３における一般的方法にしたがって調製した。
Figure 2023113685000036
５．３．１． ２－（２－ブロモピリジン－４－イル）－１－（６－メチルピリジン－２
－イル）エタン－１－オン（Ｃ２）
２－ブロモ－４－メチルピリジン（Ｂ１）（１ｇ、５．８１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５
ｍｌ）中の撹拌溶液に、アルゴン下の－７８℃で、ＮａＨＭＤＳ（ＴＨＦ中の２Ｍ、６．
３９ｍｌ、１２．８ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。黄色溶液を、－７８℃で３０分間
撹拌した。次いで、６－メチルピコリン酸メチルエステル（１．１９ｍｌ、８．７２ｍｍ
ｏｌ）のＴＨＦ（７ｍｌ）中の溶液を添加し、反応混合物を、最大でおよそ２１℃に加温
し、１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、固体残留物をジエチルエーテルで粉砕
し、濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。次いで、固体を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２０ｍ
ｌ）で希釈し、水性相をＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ
４で乾燥させ、濃縮した。粗生成物を、１０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として化合物Ｃ２（１．１ｇ、
３．７９ｍｍｏｌ、６５．４％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.30 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 8 Hz, 1H),
7.73 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.36 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 5
Hz, 1H), 4.52 (s, 2H), 2.64 (s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２９１［Ｍ］＋
５．３．２． ２－ブロモ－４－［３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラ
ゾール－４－イル］ピリジン（Ｃ３）
Ｃ２（３００ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（１ｍｌ）中の溶液を、アルゴン
下で、ＤＭＦ中の氷酢酸（０．１４ｍｌ、２．４８ｍｍｏｌ）で処理した。ＤＭＡ（０．
２ｍｌ、１．５５ｍｍｏｌ）を滴下添加し、混合物をおよそ２１℃で１時間、アルゴン雰
囲気下で撹拌した。ヒドラジン一水和物（０．３７ｍｌ、７．７５ｍｍｏｌ）を滴下添加
し、得られた混合物を、５０℃で３時間加熱し、およそ２１℃で１６時間加熱した。反応
混合物を、水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２０ｍｌ）で抽出した。有機
層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過した。溶媒を減圧下で蒸発させて、粗Ｃ３を得た。粗
Ｃ３を、２％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより
精製して、黄色固体として精製したＣ３（１７２ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、５３％）を得
た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ 11.40 (brs, 1H), 8.37 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.74 (s,
1H), 7.64 (s, 1H), 7.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.34 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 7.26 (d,
J = 8.0 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 2.60 (s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３１５［Ｍ＋Ｈ］＋
５．３．３． ２－ブロモ－４－（３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１－トリチ
ル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリジン（Ｃ４）
Ｃ３（４０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）のアセトン（２ｍｌ）中の撹拌溶液に、Ｋ２ＣＯ
３（５３ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）およびトリチルクロリド（５３ｍｇ、０．１９ｍｍｏ
ｌ）を添加した。その後、反応混合物を、加熱還流し、２４時間撹拌した。反応混合物を
濾過し、濾液を濃縮し、次いで、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）と水（５ｍｌ）との間で分配し
た。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗固体を、２％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃ
ｌ２を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体として
化合物Ｃ４（３０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、４１％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 8.22 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.59 (s, 3H
), 7.39-7.35 (m, 9H), 7.31 (s, 1H), 7.28-7.25 (m, 6H), 7.24 (d, J = 12 Hz, 1H),
2.53 (s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５５８［Ｍ＋Ｈ］＋
５．３．４． ｔｅｒｔ－ブチルメチル（２－（４－（４－（３－（６－メチルピリジン
－２－イル）－１－トリチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリジン－２－イル）フェ
ノキシ）エチル）カルバメート（Ｃ５）
Ｃ４（１５０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）のトルエン（５ｍｌ）中の撹拌溶液に、ＥｔＯ
Ｈ（１ｍｌ）中のＩｎｔ－Ｂ（１５２ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を、続いて２ＭのＮａ２
ＣＯ３溶液（０．７ｍｌ）を、アルゴン雰囲気下で添加した。反応混合物を、アルゴンで
２０分間脱気し、次いでＰｄ（ＰＰｈ３）４（２５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を添加し、
６時間還流した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物を
、水に注ぎ入れ、トルエン（３×１０ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥さ
せ、減圧下で濃縮して、粗Ｃ５を得て、これを３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用して
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、褐色固体として精製したＣ５（５
１ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ、２６％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.48 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.8 Hz, 3H)
, 7.74 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.56 (d, J = 15.2Hz, J = 7.6Hz, 2H), 7.35-7.33 (m
, 8H), 7.28-7.27 (m, 6H), 7.08 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.
16-4.08 (m, 2H), 3.63-3.58 (m, 2H), 2.98 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 1.46 (s, 9H)
５．３．５． Ｎ－メチル－２－（４－｛４－［３－（６－メチルピリジン－２－イル）
－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］ピリジン－２－イル｝フェノキシ）エタン－１－アミン
（化合物Ｃ）
Ｃ５（５１ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）中の撹拌溶液に、１，
４－ジオキサン（０．３ｍｌ）中の４ＮのＨＣｌを０℃で添加した。次いで、反応混合物
を、アルゴン雰囲気下で１時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタ
リング）、溶媒を減圧下で蒸発させて、粗化合物Ｃを得た。次いで、粗化合物Ｃをｎ－ペ
ンタン（２×１ｍｌ）で粉砕し、乾燥させて、褐色固体として化合物ＣをＨＣｌ塩として
得た（２０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、７４％）
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 8.93 (brs, 2H), 8.61 (d, J = 5.6 Hz, 1H),8.56 (br
s, 1H), 8.33 (brs, 1H), 8.03 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.88 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.78
-7.74 (m,1H), 7.65 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8
.4 Hz, 2H), 4.36 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.36 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.66-2.63 (m, 3H
), 2.50-2.46 (m, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３８６［Ｍ＋Ｈ］＋
５．４．
[実施例４]
（Ｚ）－Ｎ－エチル－３－（（（４－（Ｎ－（２－（メチルアミノ）エチル）メチルスル
ホンアミド）フェニル）アミノ）（フェニル）メチレン）－２－オキソインドリン－６－
カルボキサミド（化合物Ｄ）の合成
化合物Ｄを、以下のスキーム４における一般的方法にしたがって調製した。
Figure 2023113685000037
５．４．１． メチル１－アセチル－２－オキソインドリン－６－カルボキシレート（Ｄ
２）
メチル２－オキソインドリン－６－カルボキシレート（Ｄ１）（２．０ｇ、１０．４７
ｍｍｏｌ）の無水酢酸（１６ｍｌ）中の撹拌溶液を、１３０℃に、不活性雰囲気下で６時
間加熱した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物を、お
よそ２１℃に冷却した。沈殿物を濾過し、ｎ－ヘキサン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、真空
で乾燥して、黄色固体として化合物Ｄ２（１．５ｇ、６１．５％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 8.66 (s, 1H), 7.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 (d,
J = 8.0 Hz, 1H), 3.91 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 2.57 (s, 3H)
５．４．２． メチル（Ｚ）－１－アセチル－３－（ヒドロキシ（フェニル）メチレン）
－２－オキソインドリン－６－カルボキシレート（Ｄ３）
化合物Ｄ２（１．５ｇ、６．４３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に、Ｔ
ＢＴＵ（２．６９ｇ、８．３６ｍｍｏｌ）、安息香酸（９０３ｍｇ、７．４０ｍｍｏｌ）
、およびトリエチルアミン（２．２ｍｌ）を、不活性雰囲気下の０℃で添加した。反応混
合物を、およそ２１℃に加温し、１６時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣに
よりモニタリング）、反応混合物を、氷冷水（３０ｍｌ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２
×４０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空
で濃縮して、粗生成物Ｄ３を得て、これを８０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用してシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として化合物Ｄ３（９００ｍ
ｇ、４２％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.01 (brs, 1H), 8.93 (s, 1H), 7.76-7.70 (m, 3H),
7.67-7.63 (m, 1H), 7.59-7.56 (m, 2H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.
83 (s, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３３８．３［Ｍ＋Ｈ］＋
５．４．３． （Ｚ）－３－（ヒドロキシ（フェニル）メチレン）－２－オキソインドリ
ン－６－カルボン酸（Ｄ４）
化合物Ｄ３（９００ｍｇ、２．６７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１５ｍｌ）中の撹拌溶液に
、１ＮのＮａＯＨ水溶液（１５ｍｌ）をおよそ２１℃で添加した。反応混合物を、１００
℃に加熱し、６時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、
反応混合物を、およそ２１℃に冷却し、１ＮのＨＣｌ水溶液（１３ｍｌ）でクエンチし、
３０分間撹拌した。沈殿した固体を濾過し、２０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで洗浄して、
オフホワイトの固体として化合物Ｄ４（５８０ｍｇ、７７％）を得て、これをさらに精製
することなく次のステップで用いた。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 12.76 (brs, 1H), 11.61 (brs, 1H), 7.77-7.50 (m, 8
H), 7.13 (brs, 1H)
５．４．４． （Ｚ）－Ｎ－エチル－３－（ヒドロキシ（フェニル）メチレン）－２－オ
キソインドリン－６－カルボキサミデレート（carboxamidelate）（断片Ａ）
化合物Ｄ４（５８０ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に、
ＴＢＴＵ（７２９ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３０６ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ
）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．９ｍｌ、１０．３２ｍｍｏｌ）を
、不活性雰囲気下のおよそ２１℃で添加した。３０分後、ＴＨＦ（２．１ｍｌ、４．１２
ｍｍｏｌ）中の２Ｎのエチルアミンを、０℃で添加し、１時間撹拌した。次いで、反応混
合物を、およそ２１℃に加温し、さらに１６時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（Ｔ
ＬＣによりモニタリング）、揮発物を、真空で除去した。残留物を水（１５ｍｌ）で希釈
し、濾過し、２０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２×１０ｍｌ）で洗浄し、粗生成物を得て
、これを１０％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにより精製して、オフホワイトの固体として断片Ａ（４１０ｍｇ、６４．５％）を得た
。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 13.62 (brs, 1H), 11.39 (brs, 1H), 8.35-8.33 (m, 1
H), 7.76-7.52 (m, 5H), 7.44-7.36 (m, 3H), 3.29-3.22 (m, 2H), 1.10 (t, J = 7.2 Hz
, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ３０７．１（Ｍ－Ｈ＋）
５．４．５． Ｎ－（２－（ジメチルアミノ）エチル）－Ｎ－（４－ニトロフェニル）メ
タンスルホンアミド（Ｄ８）
化合物Ｄ７（８００ｍｇ、３．７０ｍｍｏｌ）のアセトン（１５ｍｌ）中の撹拌溶液に
、炭酸カリウム（１．３２ｇ、９．６２ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（１１０ｍｇ、０
．７４ｍｍｏｌ）、および化合物Ｂ６（７９９ｍｇ、５．５５ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲
気下の０℃で添加した。反応混合物を、５０℃に加熱し、２０時間撹拌した。出発物質の
完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、揮発物を、真空で除去した。残留物を、水
（２０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×４０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を
Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、粗生成物を得て、これを５％のＭｅ
ＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡
黄色固体として化合物Ｄ８（４６０ｍｇ、４３％）を得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6):δ 8.27 (d, J = 9.5 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 9.5 Hz, 2H
), 3.85 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.13 (s, 3H), 2.31 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.12 (s, 6H
)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２８８．３［Ｍ＋Ｈ］＋
５．４．６． Ｎ－（４－アミノフェニル）－Ｎ－（２－（ジメチルアミノ）エチル）メ
タンスルホンアミド（断片Ｂ）
化合物Ｄ８（４６０ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に
、１０％のＰｄ／Ｃ（４０ｍｇ）を添加し、水素雰囲気（バルーン圧）下のおよそ２１℃
で３時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物
を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通して濾過し、ＭｅＯＨ（１０ｍｌ）で洗浄し
た。濾液を真空で濃縮して、粗生成物を得て、これを１０％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を
使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体として断片Ｂ
（３００ｍｇ、７３％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 6.99 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.54 (d, J = 8.8 Hz, 2H
), 5.25 (s, 2H), 3.55 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.24 (t, J = 7.2 Hz, 2H
), 2.12 (s, 6H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２５８．２［Ｍ＋Ｈ］＋
５．４．７． （Ｚ）－３－（（（４－（Ｎ－（２－（ジメチルアミノ）エチル）メチル
スルホンアミド）フェニル）アミノ）（フェニル）メチレン）－Ｎ－エチル－２－オキソ
インドリン－６－カルボキサミド（Ｄ５）
断片Ａ（２００ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、断片Ｂ（５００ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）
およびＴＭＳ－イミダゾール（４５５ｍｇ、３．２４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍｌ）中の
溶液を、マイクロ波の下、１７０℃に１時間加熱した。出発物質の消費（ＴＬＣおよびＬ
Ｃ－ＭＳによりモニタリング）後、揮発物を、真空で除去した。残留物を水（１０ｍｌ）
で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２５ｍｌ）で抽出して、粗生成物を得て、これを分取ＨＰＬ
Ｃにより精製して、淡黄色固体として化合物Ｄ５（１５０ｍｇ、４２％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 12.14 (s, 1H), 10.91 (s, 1H), 8.17 (t, J = 5.6 Hz
, 1H), 7.64-7.57 (m, 3H), 7.53-7.51 (m, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.17 (d, J = 8.8 Hz,
2H), 7.06 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.73 (d, J = 8.4 Hz, 1H
), 3.58 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.23-3.20 (m, 2H), 2.93 (s, 3H), 2.13 (t, J = 6.8 H
z, 2H), 1.90 (s, 6H), 1.06 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５４８．６［Ｍ＋Ｈ］＋
５．４．８． （Ｚ）－Ｎ－エチル－３－（（（４－（Ｎ－（２－（メチルアミノ）エチ
ル）メチルスルホンアミド）フェニル）アミノ）（フェニル）メチレン）－２－オキソイ
ンドリン－６－カルボキサミド（化合物Ｄ）
化合物Ｄ５（７０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の乾燥トルエン（３ｍｌ）中の撹拌溶液に
、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニルクロリド（０．０４ｍｌ、０．１９ｍｍｏ
ｌ）を、不活性雰囲気下のおよそ２１℃で添加した。反応混合物を、還流温度（１２０℃
）に加熱し、１６時間維持した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）
、反応混合物を、およそ２１℃に冷却し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）で希釈し、１ＮのＨＣ
ｌ水溶液（１５ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃
縮して、モノ脱メチル化し、ジ－ｔｒｏｃ保護化した化合物（４０ｍｇ）を得た。
上記の反応由来の粗生成物を、酢酸（３ｍｌ）に溶解させ、亜鉛粉末（９ｍｇ、０．１
３ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下のおよそ２１℃で添加した。反応混合物を、５０℃に加
熱し、８時間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混
合物を、およそ２１℃に冷却し、揮発物を、真空で除去した。残留物を、水（２０ｍｌ）
で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を飽和ＮａＨＣ
Ｏ３溶液（２０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、
粗化合物Ｄを得て、これを５～６％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーにより精製して、８３％のＨＰＬＣ純度の１２ｍｇの化合物Ｄを得
た。
反応物を６０ｍｇのスケールで繰り返し、得られた粗生成物を上記バッチと組み合わせ
、分取ＨＰＬＣにより精製して、淡黄色固体として化合物Ｄ（８．０ｍｇ、６．３％）を
得た。
1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ 7.65-7.59 (m, 3H), 7.52.7.50 (m, 2H), 7.40 (s, 1H),
7.31 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5
.95 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.95 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.39-3.32 (m, 2H), 3.05 (t, J
= 5.6 Hz, 2H), 2.93 (s, 3H), 2.71 (s, 3H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５３４．６［Ｍ＋Ｈ］＋
ＵＰＬＣ純度：９９．１８％
５．５．
[実施例５]
（Ｚ）－Ｎ－エチル－３－（（（４－（Ｎ－（２－（メチルアミノ）エチル）メチルスル
ホンアミド）フェニル）アミノ）（フェニル）メチレン）－２－オキソインドリン－６－
カルボキサミド（化合物Ｄ）の代替合成
化合物Ｄをまた、以下のスキーム５における一般的方法にしたがって調製した。
Figure 2023113685000038
５．５．１． Ｎ－（２－ブロモエチル）－Ｎ－（４－ニトロフェニル）メタンスルホン
アミド（Ｄ９）
化合物Ｄ７（１．０ｇ、４．６５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に、水
酸化ナトリウム（鉱油中に６０％、３２０ｍｇ、７．９９ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下
の０℃で添加し、およそ２１℃で３０分間撹拌した。この混合物に、１，２－ジブロモエ
タン（２．１８ｇ、１１．６０ｍｍｏｌ）を、およそ２１℃で添加した。混合物を、９０
℃に加熱し、２４時間撹拌した。反応物をＴＬＣによりモニタリングした。反応混合物を
およそ２１℃に冷却し、氷冷水（３０ｍｌ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×４０ｍｌ）
で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、
粗生成物を得て、これを５％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーにより精製して、４０％の未反応出発物質を含有する混合物として１．２
ｇのＤ９を得た。得られた混合物を、さらに精製することなく次の反応に直接用いた。
1H NMR (500 MHz, CDCl3):δ 8.29 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 8.5 Hz, 2H),
4.12 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.44 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.01 (s, 3H)
５．５．２． Ｎ－（２－（メチルアミノ）エチル）－Ｎ－（４－ニトロフェニル）メタ
ンスルホンアミド（Ｄ１０）
化合物Ｄ９（１．２ｇ、不純）のＴＨＦ（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に、トリエチルアミ
ン（１．６ｍｌ）およびメチルアミン（ＴＨＦ中の２Ｍ、９．３ｍｌ、１８．６３ｍｍｏ
ｌ）を、封管中で、不活性雰囲気下のおよそ２１℃で添加した。反応混合物を、８０℃に
加熱し、１６時間維持した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反
応混合物を、およそ２１℃に冷却し、減圧下で濃縮して、粗Ｄ１０を得た。粗Ｄ１０を、
１５％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより
精製して、黄色固体として化合物Ｄ１０（５００ｍｇ、２ステップにわたって３９％の全
収率）を得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6):δ 8.94 (brs, 1H), 8.31 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.80 (d
, J = 8.5 Hz, 2H), 4.06 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.15 (s, 3H), 3.00 (t, J = 6.0 Hz,
2H), 2.55 (s, 3H)
５．５．３． ｔｅｒｔ－ブチルメチル（２－（Ｎ－（４－ニトロフェニル）メチルスル
ホンアミド）エチル）カルバメート（Ｄ１１）
Ｄ１０（５００ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に
、トリエチルアミン（０．４ｍｌ、２．６１ｍｍｏｌ）および無水Ｂｏｃ（６５９ｍｇ、
３．０２ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下のおよそ２１℃で添加し、５時間維持した。出発
物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、揮発物を、真空で除去して、粗生成
物を得て、これを５％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーにより精製して、無色の濃厚なシロップとしてＤ１１（３２０ｍｇ、４７％）を
得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 8.27 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 8.4 Hz, 2H
), 3.91 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.28-3.25 (m, 2H), 3.07 (s, 3H), 2.72-2.70 (m, 3H),
1.33-1.27 (m, 9H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２７４．２（Ｍ＋－Ｂ℃）
５．５．４． ｔｅｒｔ－ブチル（２－（Ｎ－（４－アミノフェニル）メチルスルホンア
ミド）エチル）（メチル）カルバメート（断片ＢのＢｏｃ変異体）
化合物Ｄ１１（２５０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１０ｍｌ）中の溶液に、
ラネー－Ｎｉ（４０ｍｇ）を添加し、水素雰囲気（バルーン圧）下のおよそ２１℃で１時
間撹拌した。出発物質の完全な消費後（ＴＬＣによりモニタリング）、反応混合物を、Ｃ
ｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＨ（１０ｍｌ）で洗浄した。合
わせた濾液を真空で濃縮して、粗生成物を得て、これを１０％のＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２
を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色固体として断片
ＢのＢｏｃ変異体（１８０ｍｇ、７７％）を得た。
H NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 7.01 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.53 (d, J = 8.4 HZ, 2H)
, 5.24 (s, 2H), 3.60 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.18 (t, J = 6.4 HZ, 2H), 2.88 (s, 3H)
, 2.75-2.71 (m, 3H), 1.36-1.33 (m, 9H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ２４４．２（Ｍ＋－Ｂ℃）
５．５．５． ｔｅｒｔ－ブチル（Ｚ）－（２－（Ｎ－（４－（（（６－（エチルカルバ
モイル）－２－オキソインドリン－３－イリデン）（フェニル）メチル）アミノ）フェニ
ル）メチルスルホンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（Ｄ１０）
断片Ａ（７０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、断片ＢのＢｏｃ変異体（１５５ｍｇ、０．４
５ｍｍｏｌ）およびＴＭＳ－イミダゾール（１５９ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（
３ｍｌ）中の溶液を、マイクロ波の下、１７０℃に１６０分間加熱した。出発物質の消費
（ＴＬＣおよびＬＣ－ＭＳによりモニタリング）後、揮発物を、真空で除去して、残留物
を得て、これを分取ＨＰＬＣにより精製して、淡黄色固体として化合物Ｄ１０（５０ｍｇ
、３６％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 12.13 (brs, 1H), 8.01 (brs, 1H), 7.61-7.51 (m, 3H),
7.44-7.41 (m, 3H), 7.13-7.11 (m, 2H), 6.98 (d, J = 8.4 HZ, 1H), 6.75 (d, J = 8.
4 HZ, 2H), 5.96-5.91 (m, 2H), 3.74-3.71 (m, 2H), 3.49-3.41 (m, 2H), 3.30-3.27 (m
, 2H), 2.80 (s, 6H), 1.40-1.36 (m, 9H), 1.19 (t, J = 7.2 HZ, 3H)
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ６３４．６［Ｍ＋Ｈ］＋
５．５．６． （Ｚ）－Ｎ－エチル－３－（（（４－（Ｎ－（２－（メチルアミノ）エチ
ル）メチルスルホンアミド）フェニル）アミノ）（フェニル）メチレン）－２－オキソイ
ンドリン－６－カルボキサミド塩酸塩（ＨＣｌ塩としての化合物Ｄ）
化合物Ｄ１０（２０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（３ｍｌ）中の撹拌
溶液に、１，４－ジオキサン（０．３ｍｌ）中の４ＮのＨＣｌを、不活性雰囲気下の０℃
で添加した。反応混合物を、およそ２１℃で１時間撹拌した。出発物質の完全な消費（Ｔ
ＬＣによりモニタリング）後、揮発物を、真空で除去して、粗生成物を得て、これをｎ－
ペンタン（２×４ｍｌ）で粉砕して、淡黄色固体として、ＨＣｌ塩としての化合物Ｄ（１
２ｍｇ、７１％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CD3OD):δ 7.65-7.59 (m, 3H), 7.52.7.50 (m, 2H), 7.40 (s, 1H),
7.31 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5
.95 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.95 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.39-3.32 (m, 2H), 3.05 (t, J
= 5.6 Hz, 2H), 2.93 (s, 3H), 2.71 (s, 3H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ５３４．７［Ｍ＋Ｈ］＋
ＵＰＬＣ純度：９６．２６％
５．６．
[実施例６]
化合物Ａ～Ｄの活性を試験するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ
５．６．１． Ｎ－（２－ブロモエチル）－Ｎ－（４－ニトロフェニル）メタンスルホン
アミド（２）
化合物Ａ～Ｄを試験して、これらが、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＨＥＫ２９３Ｔ細胞のＴＧＦ
－β誘導性ルシフェラーゼ活性を阻害できるかどうかを決定した。
３０，０００個のＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、９６ウェル白色平底プレートに終夜、播種し
た。次の日、ウェル当たり１００ｎｇのＳＭＡＤルシフェラーゼのレポータープラスミド
を、リポフェクトアミンを使用して、２４時間、細胞内にトランスフェクトした。次の日
、細胞を、化合物Ａ～Ｄおよび１００ｐＭのＴＧＦβで２４時間処理した。ルシフェラー
ゼ活性を、Ｄｕａｌ－Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇ
ａ）を使用して測定した。アッセイは、化合物Ａ、Ｂ、およびＤに対しては２回行い、化
合物Ｃに対しては３回行った。結果を表４に示す。
Figure 2023113685000039
実験１の活性データを図５に示す。
化合物Ａ～Ｃは、最大の阻害活性を示した。
５．６．２． ＭＴＳ増殖アッセイ
化合物Ａ～Ｄを試験して、これらが、初代マウスＣＤ４＋Ｔ細胞のＴＧＦ－βシグナル
伝達を阻害できるかどうかを決定した。
初代マウスＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＲｏｂｏＳｅｐ（商標）細胞分離システム（Ｓｔｅｍｃ
ｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、Ｃ５７／Ｂ６マウスの脾臓から分離し
た。０．５μｇ／ｍｌのハムスター抗マウスＣＤ３ｅ抗体（１４５－２Ｃ１１、ｅＢｉｏ
ｓｃｉｅｎｃｅ）を、９６ウェル平底プレート上に終夜、コーティングした。１×１０５
個の精製したＣＤ４＋Ｔ細胞を、１μｇ／ｍｌの可溶性のハムスター抗マウスＣＤ２８抗
体（３７．５１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、１ｎＭのＴＧＦ－β１、および化合
物Ａ～Ｄの８倍連続希釈液でインキュベートした。７２時間後、細胞増殖を、製造会社の
説明書にしたがって、ＭＴＳアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。結果を表
５に示す。
Figure 2023113685000040
実験１のデータを図６に示す。
２つの異なる実験において、ＩＣ５０値は、化合物Ｄでは得られなかった。化合物Ａも
また、マウスＣＤ４＋Ｔ細胞において一貫した効果を示さなかった。しかし、化合物Ｂお
よびＣは、Ｔ細胞増殖のＴＧＦ－β媒介性阻害を逆転した。
２つのアッセイに基づいて、化合物Ｃが、ＡＤＣにコンジュゲートするのに選択された
。
５．７．
[実施例７]
４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（６－（２，５－ジオキソ－２Ｈ－ピロール－１（５
Ｈ）－イル）ヘキサンアミド）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミ
ド）ベンジルメチル（２－（４－（４－（３－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ
－ピラゾール－４－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エチル）カルバメートの合
成
化合物Ｃを、以下のスキーム６における一般的方法にしたがって、バリン－シトルリン
リンカーに連結させた。
Figure 2023113685000041
Ｌ１（１２２ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（５２μｌ、０．
３７５ｍｍｏｌ、２．５当量）を、化合物Ｃ（５８ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ、１．０当
量）のＤＭＦ（２ｍｌ）中の溶液に、０℃で添加し、反応混合物をおよそ２１℃で２時間
撹拌して、粗ＡＤＣ－１を得た。粗ＡＤＣ－１を、分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固
体として精製したＡＤＣ－１（３４ｍｇ、２４％の収率）を得た。
５．８．
[実施例８]
抗体薬物コンジュゲート１（ＡＤＣ１）の生成
抗マウストランスフェリン受容体抗体Ｒ１７２１７、およびラット抗マウスＩｇＧ２Ａ
アイソタイプコントロール抗体（ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を、複合緩衝液（２５ｍＭのホウ酸
ナトリウム／２５ｍＭのＮａＣｌ、および０．３ｍＭのＥＤＴＡ、最終ｐＨ７．４）中に
終夜透析した。抗体を、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）を使用
して、還元率１０～３０で２時間還元した。ＡＤＣ－１を、１０ｍＭの最終濃度までＤＭ
ＳＯ中に溶解し、次いで、１５％のＤＭＳＯの存在下、複合比５～３０で抗体にコンジュ
ゲートした。全ての反応は、およそ２１℃で行った。いくつかの薬物抗体比（ＤＡＲ）に
対して、５０％のプロピレングリコールを、コンジュゲートのステップの間、有機溶媒と
して使用した。最終ＡＤＣを、ＰＢＳ中で終夜透析し、０．２２μｍのフィルターを使用
して濾過し、ＨＰＬＣ－ＨＩＣを介して分析してＤＡＲを決定し、ＨＰＬＣ－ＳＥＣを介
して分析して凝集のレベルを決定した。ＨＰＬＣ－ＨＩＣに対して、サンプルを、流速０
．５ｍｌ／分で、ＴＳＫｇｅｌ（登録商標）ブチル－ＮＰＲカラム上で実行した。相Ａは
、２５ｍＭのリン酸ナトリウム、およびｐＨ６．９５での１．５Ｍの硫酸アンモニウムで
あった一方、相Ｂは、ｐＨ６．９５での７５％の２５ｍＭのリン酸ナトリウム、および２
５％のイソプロピルアルコールであった。ＨＰＬＣ－ＳＥＣ分析に対して、ＴＳＫｇｅｌ
（登録商標）Ｇ３０００ＳＷカラム（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を、流速０．
２５ｍｌ／分、２８０ｎＭで２５分間使用した。
５．９．
[実施例９]
ジスルフィドリンカーに連結した化合物Ｃ（ＡＤＣ－２）の合成
化合物Ｃを、以下のスキーム７Ａ～Ｂにおける一般的方法にしたがって、ジスルフィド
リンカーに連結させた。
Figure 2023113685000042
Figure 2023113685000043
５．９．１． 中間体Ａの合成
２－クロロトリチルクロリド樹脂（Ｌ２）（４ｇ、４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２×４０
ｍｌ）で洗浄し、５０ｍｌのＤＣＭ内で１０分間膨潤させ、次いで排出させる。Ｆｍｏｃ
－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ（Ｌ３）（７．０３ｇ、１２ｍｍｏｌ）を、４０ｍｌのＤＣＭ
に溶解し、２－クロロトリチルクロリド樹脂を含有する容器に添加する。８．７ｍｌのＤ
ＩＰＥＡ（６．８ｍｌ、４０ｍｍｏｌ）を容器に添加し、混合物をおよそ２１℃で２時間
かき混ぜる。次いで、１０ｍｌのメタノールを混合物に添加し、３０分間かき混ぜる。次
いで、得られた樹脂（Ｌ４）を排出させ、ＤＭＦで５回洗浄する。次いで、樹脂Ｌ４を脱
保護して、ＤＭＦ中のおよそ４０ｍｌの２０％のピペリジンを樹脂Ｌ４に添加し、混合物
を振とうし、次いで樹脂から液体を排出することにより、樹脂Ｌ５を生成する。ＤＭＦ中
の別の４０ｍｌの２０％のピペリジンを、樹脂に添加し、１５分間振とうする。次いで、
樹脂Ｌ５を、液体から排出させ、ＤＭＦ（６×４０ｍｌ）で洗浄する。
Ｆｍｏｃ－アミノ酸の溶液は、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ（４．９３ｇ、１
２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ（４．９３ｇ、１２ｍｍｏｌ）、Ｆ
ｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ（７．７９ｇ、１２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（Ｏ
ｔＢｕ）－ＯＨ（４．９３ｇ、１２ｍｍｏｌ）、およびＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ（５
．１ｇ、１２ｍｍｏｌ）を、ＨＢＴＵ／ＨＯＢＴ（４．５５ｇ、１２ｍｍｏｌ／１．６２
ｇ、１２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２ｍｌ、１２ｍｍｏｌ）と別々に組み合わせて調
製する。
Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ溶液を、樹脂Ｌ５に添加し、６０分間振とうして
、樹脂Ｌ６を生成する。樹脂Ｌ６をＤＭＦ（６×４０ｍｌ）で洗浄し、次いで上記の通り
、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンで脱保護する。次いで、樹脂Ｌ７、Ｌ８、Ｌ９、および
Ｌ１０を、Ｆｍｏｃ－アミノ酸溶液を使用する連続カップリングを実行することにより作
製し、同じ手順を使用して、樹脂Ｌ５から樹脂Ｌ６を作製する。
例示的な合成において、乾燥樹脂Ｌ１０（８ｇ）をフラスコに添加し、８０ｍｌの切断
溶液を添加した（ＴＦＡ：ＴＥＳ：ＥＤＴ：Ｈ２Ｏ＝９０：５：３：２、ｖ／ｖ／ｖ／ｖ
）。反応を１．５時間進行させた。次いで、樹脂を、加圧下で、濾過により反応混合物か
ら分離した。次いで、樹脂をＴＦＡで２回洗浄した。濾液を合わせ、１０倍の体積の冷Ｍ
ＴＢＥを滴下添加した。次いで、沈殿したペプチド（中間体Ａ）を遠心分離し、冷ＭＴＢ
Ｅで４回洗浄した。次いで、中間体Ａを減圧下で乾燥し、分取ＨＰＬＣにより精製して、
白色固体として１．１ｇの中間体Ａ（３７％の収率）を得た。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／
ｚ：７５２［Ｍ＋Ｈ］＋。
５．９．２． ２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）エチルメチル（２－（４－（
４－（４－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリジン
－２－イル）フェノキシ）エチル）カルバメート（Ｌ１２）
化合物Ｃ（４０ｍｇ、０．１０３８ｍｍｏｌ）および４－ニトロフェニル２－（ピリジ
ン－２－イルジスルファニル）エチルカルバメート（Ｌ１１）（８０ｍｇ、０．２２７２
ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍｌ）中の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．５ｍｌ）およびＨＯＢｔ（
１４ｍｇ、０．１０３８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２下のおよそ２１℃で１６時
間撹拌して、Ｌ１２を生成した。粗Ｌ１２を、分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体と
して３５ｍｇの精製したＬ１２（５６％の収率）を得た。
５．９．３． （２Ｒ，５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１４Ｓ，１９Ｓ）－１９－アミノ－５，８
，１４－トリス（カルボキシメチル）－１１－（３－グアニジノプロピル）－２－（（（
２－（メチル（２－（４－（４－（４－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラ
ゾール－３－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エチル）カルバモイルオキシ）エ
チル）ジスルファニル）メチル）－４，７，１０，１３，１６－ペンタオキソ－３，６，
９，１２，１５－ペンタアザイコサン－１，２０－二酸（Ｌ１３）
Ｌ１２（３５ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（５ｍｌ／５ｍｌ）中の溶
液に、中間体Ａ（８０ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下で添加した。混合物をおよ
そ２１℃で１６時間撹拌して、Ｌ１３を生成した。粗Ｌ１３を、分取ＨＰＬＣにより精製
して、白色固体として２３ｍｇの精製したＬ１３（３１％の収率）を生成した。
５．９．４． （２Ｒ，５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１４Ｓ，１９Ｓ）－１９－（２－（ｔｅｒ
ｔ－ブトキシカルボニルアミノオキシ）アセトアミド）－５，８，１４－トリス（カルボ
キシメチル）－１１－（３－グアニジノプロピル）－２－（（（２－（メチル（２－（４
－（４－（４－（６－メチルピリジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリ
ジン－２－イル）フェノキシ）エチル）カルバモイルオキシ）エチル）ジスルファニル）
メチル）－４，７，１０，１３，１６－ペンタオキソ－３，６，９，１２，１５－ペンタ
アザイコサン－１，２０－二酸（Ｌ１５）
Ｌ１３（３２ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍｌ）中の溶液に、２，５－ジ
オキソピロリジン－１－イル２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノオキシ）アセテ
ート（Ｌ１４）（２８ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）を、続いてＴＥＡ（０．５ｍｌ）を添
加した。反応混合物を、Ｎ２雰囲気下のおよそ２１℃で１６時間撹拌して、Ｌ１５を生成
した。粗Ｌ１５を、分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体として１２ｍｇの精製したＬ
１５（３３％の収率）を生成した。
５．９．５． （２Ｒ，５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１４Ｓ，１９Ｓ）－１９－（２－（アミノ
オキシ）アセトアミド）－５，８，１４－トリス（カルボキシメチル）－１１－（３－グ
アニジノプロピル）－２－（（（２－（メチル（２－（４－（４（４－（６－メチルピリ
ジン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリジン－２－イル）フェノキシ）エ
チル）カルバモイルオキシ）エチル）ジスルファニル）メチル）－４，７，１０，１３，
１６－ペンタオキソ－３，６，９，１２，１５－ペンタアザイコサン－１，２０－二酸（
ＡＤＣ－２）
Ｌ１５（１２ｍｇ、０．００８５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍｌ）中の混合物に、ＴＦＡ
（１ｍｌ）を添加した。混合物を、およそ２１℃で３０分間撹拌して、ＡＤＣ－２を生成
した。粗ＡＤＣ－２を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体として３．５ｍｇ
の精製したＡＤＣ－２（３１％の収率）を生成した。
５．１０．
[実施例１０]
抗体薬物コンジュゲート２（ＡＤＣ２）の生成
ＡＤＣ－２を、以下のスキーム８における一般的方法にしたがって、抗体リジン残基を
介して、抗ＴｆＲ抗体に結合した。
ヘテロ二官能性重合体リンカーＳ－４ＦＢを、Ｓｏｌｕｌｉｎｋより購入した。ラット
抗マウスＩｇＧ２ａ、および抗マウストランスフェリン受容体抗体Ｒ１７２１７を、ｐＨ
７．４でＰＢＳ中で透析した。Ｓ－４ＦＢを、異なるモル比で、ｐＨ７．４でＰＢＳ中の
抗体に添加し、およそ２１℃で３時間インキュベートした。Ｓ－４ＦＢ修飾した抗体溶液
を、２－ヒドラジノピリジン溶液（１００ｍＭのＭＥＳ緩衝液中に０．５ｍＭ、ｐＨ５．
０）と合わせて、５～５０の範囲の様々な複合比で、３７℃で３０分間インキュベートし
た。Ｓ４ＦＢ／Ａｂモル置換比を、Ａ３５４でＵＶ－Ｖｉｓにより決定した。修飾した抗
体を、Ｚｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム、５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ６．５、１５
０ｍＭのＮａＣｌ）に交換した緩衝液を使用して精製し、次いで、リンカー－Ｓ－Ｓ－薬
物ＡＤＣ－２（ＤＭＳＯ中に１０ｍＭ）と、異なるモル比で、３７℃で２４時間混合して
、ＡＤＣ２を生成した。次の日、ＡＤＣ２サンプルを、ＰＢＳに対して終夜透析した。サ
ンプルを濾過し、次いでＨＰＬＣ－ＳＥＣ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、およびＬＣ－ＭＳを介し
て試験した。Ｓ－４ＦＢ／Ａｂ比６およびＡＤＣ－２／Ａｂ比２０で調製したＡＤＣ２に
対する例示的なＬＣ－ＭＳデータは、図７に示す。図７は、試験したＡＤＣ２サンプルが
平均でＤＡＲ４．９９であり、重鎖のＤＡＲが１．９７であり、軽鎖のＤＡＲが０．５３
であることを示す。
５％におけるＡＤＣ２凝集が、ＨＰＬＣ－ＳＥＣにより検出される場合、凝集した成分
は、ＳＥＣカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓｕｐ
ｅｒｄｅｘ ２００ ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ＧＬ）を備えたＡＫＴＡにより分
離し、ＨＰＬＣ－ＳＥＣにより再び分析した。凝集体を除去するためにＳＥＣにより精製
したＡＤＣ２のクロマトグラムは、図８に示す。
５．１１．
[実施例１１]
抗体誘導性受容体の内在化アッセイ
９６ウェル平底プレートを、抗マウスＣＤ３ｅ抗体で終夜、４℃でコーティングした。
ＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＲｏｂｏＳｅｐ（商標）細胞分離システム（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、マウスの脾臓から分離した。およそ２×１０５個の
細胞を、３７℃で２４～４８時間、可溶性抗ＣＤ２８抗体を伴うウェルごとにプレーティ
ングした。活性化されると、ＣＤ４＋Ｔ細胞を収集し、洗浄し、３７℃での示した時点で
、５μｇ／ｍｌの一次（抗トランスフェリン受容体）抗体で再びプレーティングして、内
在化を誘導した。反応を、氷冷染色緩衝液で停止し、氷上に維持して、内在化を停止させ
た。アッセイの終了時点で、細胞を、氷冷染色緩衝液で２回洗浄して、未結合抗体を除去
した。細胞をペレット化し、次いでＰＥで染色し、ヤギ抗ラット二次抗体とコンジュゲー
トし、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を染色緩衝液で洗浄し、次いでＦＡＣＳ
を介する発現を分析した。図９に示す通り、ＴｆＲ発現は、１時間以内に初代ＣＤ４＋Ｔ
細胞で内在化し始め、３時間以内に、ＴｆＲの７０％超が、抗トランスフェリン受容体抗
体、Ｒ１７２１７により内在化される。
５．１２．
[実施例１２]
Ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ
５．１２．１．増殖アッセイ
マウスＣＴＬＬ２細胞を、０．２ｎｇ／ｍｌのＩＬ２中、細胞１×１０５個／ウェルで
培養した。１ｎＭのＴＧＦ－βで示される各ウェルに、１μｇ／ｍｌのＡＤＣ、および／
または１００ｎＭのＡＬＫ５阻害剤化合物Ｃを、２４時間ウェルに添加した。増殖を、各
ウェルにＢｒｄＵ試薬（Ａｂｃａｍ）をさらに１２時間添加することにより定量化し、次
いでＥＬＩＳＡにより分析した。
図１０で示す通り、ＴＧＦ－βでのＣＴＬＬ２細胞の処置により、およそ６０％の増殖
が阻害された。しかし、ＡＤＣ１（ＤＡＲ２－４、４－６、または６－８）を追加するこ
とにより、ＡＬＫ５阻害剤単独での細胞の処置と同様に、ＴＧＦ－β阻害はほぼ完全に逆
転し、ＣＴＬＬ２増殖は回復した。ラット抗マウスＩｇＧ２Ａアイソタイプコントロール
ＡＬＫ５ ＡＤＣで処置された細胞は、ＣＴＬＬ２増殖は回復しなかった。ＴＧＦ－βを
伴わないＡＤＣ１で処置されるか、または裸のＴｆｒ抗体単独で処置される細胞において
、増殖の阻害は起こらず、これは、ＴＧＦ－βが存在しない限り、ＡＤＣ１は増殖に影響
を及ぼさないことを示した（データは示さず）。
５．１２．２．グランザイムＢ発現アッセイ
マウスＣＤ３＋Ｔ細胞を、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）マウスＴ細胞分離キット（ネガティ
ブ選択）（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、マウスの脾臓か
ら精製した。ＣＤ３＋Ｔ細胞を、プレート結合抗ＣＤ３ｅ、および可溶性抗ＣＤ２８を使
用する前に、４８時間活性化した。Ｔ細胞を、洗浄し、５％の血清および１ｎＭのＴＧＦ
－β －／＋ＡＤＣを含む培地に再びプレーティングした。
ゴルジストップ試薬を、最後の４時間添加し、次いで細胞を、表面のＣＤ８（ＢＤ）お
よび細胞内のＧｚｍＢ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に対して免疫染色し、フローサイトメ
トリーを介して分析した。グランザイムＢ（ＧｚｍＢ）は、ＣＤ８＋Ｔ細胞により腫瘍細
胞を死滅させるために放出される、セリンプロテアーゼである。ゆえに、ＧｚｍＢの発現
の増加は、ＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞活性を示す。
図１１に示す通り、ＴＧＦ－βが、初代ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＧｚｍＢ発現を抑制す
るが、３つのＤＡＲ、２－４、４－６、および６－８の全てのＡＤＣ１での処置はまた、
ＡＬＫ５化合物と同等に、ＧｚｍＢ発現を回復することができた。加えて、ラット抗マウ
スＩｇＧ２ＡアイソタイプコントロールＡＬＫ５ ＡＤＣは、ＧｚｍＢ発現を回復しなか
った。
５．１２．３．ｉＴｒｅｇ転換アッセイ
ナイーブＣＤ４ Ｔ細胞を、ネガティブ選択キットを使用して、分離したマウス脾臓細
胞から分離した。細胞密度を、細胞０．４×１０６個／ｍｌに調節し、１０ｎｇ／ｍｌの
マウスＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ－β、および１μｇ／ｍｌの可溶性抗ＣＤ２８
を、細胞懸濁液に添加した。
１０μｇ／ｍｌでの抗マウスＣＤ３抗体を、２４ウェルプレート上にコーティングし、
４℃で終夜インキュベートした。次いで、抗体をプレートから吸引した。１ｍｌの細胞懸
濁液を、２４ウェルプレートの各ウェルに添加した。３μｇ／ｍｌおよび５μｇ／ｍｌで
のＡＤＣ１（ＤＡＲ４－６）、抗トランスフェリン受容体抗体、ラット抗マウスＩｇＧ２
ＡアイソタイプコントロールＡＬＫ５ ＡＤＣ、ならびに１００ｎＭおよび１μＭでのＡ
ＬＫ５阻害剤化合物Ｃを、２４ウェルプレートの別個のウェルに添加した。次いで、細胞
を７２時間培養した。ＴｆＲ発現を、４８時間の時点で試験した（データは示さず）。細
胞をＦｏｘＰ３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＦｏｘＰ３染色緩衝液）で染色し、７２時間
の時点でＦＡＣＳにより選別した。
図１２に示す通り、５μｇ／ｍｌでのＡＤＣ１（＋ＣＤ７１－ＡＬＫ５ ＡＤＣ）は、
１００ｎＭの遊離ＡＬＫ５阻害剤単独（＋ＡＬＫ５ ｉｎｈ １００ｎＭ）と同様に、生
成されるｉＴｒｅｇの量を適度に減少させる。対照的に、コントロールＡＬＫ５ ＡＤＣ
（＋Ｉｓｏ－ＡＬＫ５ ＡＤＣ）および裸の抗ＴｆＲ抗体（＋抗ＣＤ７１）は、ｉＴｒｅ
ｇ ＦｏｘＰ３発現に効果がなかった。
５．１３．
[実施例１３]
化合物Ｎの合成および特徴付け
化合物Ｎを、以下のスキーム９における一般的方法にしたがって合成した。
化合物Ｎを、いくつかのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、化合物Ｃと比較した。組
換えキナーゼアッセイにおけるそのＩＣ５０活性およびそのＫｉ値の概要は、表６に示す
。表６はまた、ヒトＨＥＫ細胞およびマウスＴ細胞における、化合物ＣのＴＧＦ－βシグ
ナル伝達の阻害活性も示す。化合物Ｃは、組換えアッセイにおいて、化合物Ｎより１０倍
強力であることが分かった。
Figure 2023113685000046
５．１４．
[実施例１４]
Ｔ細胞へのＣＤ２およびＣＤ５の内在化
２つの異なる内在化研究を実施して、それぞれ、抗ＣＤ２抗体および抗ＣＤ５抗体での
Ｔ細胞のインキュベーションに続く、ＣＤ２およびＣＤ５の内在化を測定した。
５．１４．１．研究１：抗体ウォッシュアウトなし
マウスＣＤ３＋Ｔ細胞を、プレート結合抗ＣＤ３抗体（１μｇ／ｍｌ）および可溶性抗
ＣＤ２８抗体（２μｇ／ｍｌ）で３６時間活性化した。細胞を洗浄し、１μｇ／ｍｌのラ
ット抗マウスＣＤ２抗体（クローン１２－１５、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カ
タログ番号１５２５）、ラット抗マウスＣＤ５抗体（クローン５３－７．３、Ｓｏｕｔｈ
ｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号１５４７）、または、ラットアイソタイプコント
ロール抗体で、示された時点（０、１５分、または０．５、１、３、もしくは６時間）、
３７℃でインキュベートした。各時点で、アッセイを、氷上に細胞を配置することにより
停止させた。ＣＤ２およびＣＤ５の発現を、蛍光的にコンジュゲートした二次抗体を使用
して検出した。
６時間の時点で、ＣＤ５の６０％超、およびＣＤ２の５０％超が、マウスＣＤ３＋Ｔ細
胞内で内在化した（それぞれ図１３Ａおよび図１３Ｂ）。
５．１４．２．研究２：抗体ウォッシュアウト
研究１を、遊離抗体を４℃で３０分間、細胞でインキュベートした以外を繰り返して、
細胞表面の受容体全てを飽和した。上澄みに残る抗体を、時間経過を開始する前に洗い流
した。
６時間の時点で、ＣＤ５のほぼ９０％、およびＣＤ２の５０％超が、マウスＣＤ３＋Ｔ
細胞内で内在化した（それぞれ図１３Ｃおよび図１３Ｄ）。
５．１４．３．考察
研究１において、新規で再循環した受容体は、存在する場合、時間経過の間、細胞表面
に近づき、培地の遊離抗体と結合することができた。研究２において、時間経過を開始す
る時点で存在する、その受容体の内在化のみをモニタリングできるために、未結合抗体を
時間経過を開始する前に洗い流した。ＣＤ２に対して、研究１および研究２の結果は、類
似しており、ＣＤ２が、迅速に反転しないことを示唆している。ＣＤ５に対して、ウォッ
シュアウト研究（研究２）において内在化が約２０％増加し、これは新規の受容体が、６
時間の時間経過にわたって、ｄｅ ｎｏｖｏ合成により再循環するか、または増加するか
のいずれかだったことを示している。大量のｄｅ ｎｏｖｏ合成が、６時間の時間経過に
わたって予測されないので、再循環が可能性の高い選択肢であると考えられる。ゆえに、
研究１および研究２の結果により、ＣＤ５が、ＣＤ２より多く細胞表面へと再循環する可
能性があることを示唆している。
５．１５．
[実施例１５]
ＡＤＣ標的化ＣＤ２およびＣＤ５の生成および特徴付け
５．１５．１．実施例１５：ＡＤＣの生成
本実施例においてＴ細胞標的ＴＧＦ－βアンタゴニスト（Ｔ３Ａ）と称する、４つのＡ
ＬＫ５－ＡＤＣを、ラット抗マウスＣＤ２抗体（クローン１２－１５、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号１５２５）、およびラット抗マウスＣＤ５抗体（クロー
ン５３－７．３、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号１５４７）を使用し
て作製した。２つのリンカー－ＡＬＫ５阻害剤ペイロードを使用して、Ｔ３Ａを作製した
が、そのうちの１つは、ＡＬＫ５－化合物Ｃに結合した切断可能Ｖａｌ－Ｃｉｔ（ＶＣ）
リンカーを含み、もう１つは、化合物Ｎに結合した非切断可能マレイミドカプロイル（Ｍ
Ｃ）リンカーを含む。
４つのＴ３Ａの抗体、リンカー、およびＡＬＫ５ペイロードの組合せは、表７に示す。
Figure 2023113685000047
Ｔ３Ａ ＃２～＃５を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により精製し、薬物
抗体比を、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）により計算した。Ｔ３Ａ ＃２
～＃５のそれぞれに対する％凝集、％未結合抗体、およびＤＡＲ値は、表８に示す。
Figure 2023113685000048
５．１５．２．ＡＤＣの特徴付け
逆転するＴＧＦ－β媒介性免疫抑制におけるＴ３Ａ ＃２～５の効能を決定するために
、マウスＣＤ３＋Ｔ細胞を、脾臓から精製し、１ｎＭのＴＧＦ－β、および小分子ＡＬＫ
５阻害剤化合物Ｃ（陽性対照）、Ｔ３Ａ ＃２～５、またはアイソタイプコントロールＴ
３Ａ（陰性対照）の存在下、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体で３６～７２時間活性化した
。３６時間後、グランザイム（ＧｚｍＢ）を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルを、細胞毒
性のマーカーとして測定し（図１４）、分泌したサイトカインＩＬ２のレベル（図１５）
およびＩＦＮ－γのレベル（図１６）を、ＥＬＩＳＡにより測定した。最終的に、７２時
間後、Ｔ細胞増殖の量を、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）により測定
した（図１７）。これらのアッセイの全ては、ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍クリアランスに関
連がある。
活性化Ｔ細胞に関連して観察される機能の量（１００％に設定）は、図１４～図１７の
それぞれに示す。Ｔ３Ａ ＃５は、ＧｚｍＢ発現およびＴ細胞増殖を回復したが、ＩＦＮ
－γ発現を部分的にのみ回復した。ＩＬ２発現への効果は観察されなかった。
５．１５．３．考察
上記の実施例のデータは、Ｔ細胞での標的発現のレベルが、初代Ｔ細胞アッセイでの効
能に重要であることを示す。ＣＤ２およびＣＤ５の両方は、活性Ｔ細胞の２０～５０％で
高発現されるのみであるＣＤ７１と異なり、ナイーブＴ細胞および活性化Ｔ細胞の両方の
８５％超で、高発現される。しかし、ＣＤ２およびＣＤ５の両方が、Ｔ細胞で高発現され
るが、ＣＤ５標的化ＡＤＣは、ＣＤ２標的化ＡＤＣより高い効能を有することが観察され
た。実施例１４において、ＣＤ２およびＣＤ５で観察される受容体内在化のパターンに基
づいて、６時間の時点で、初代マウスＴ細胞に、ＣＤ５の約８５％は内在化されたが、Ｃ
Ｄ２の５３％のみが内在化された。加えて、ＣＤ５は、ＣＤ２より早く内在化を開始する
と思われた。このデータは、内在化の量も効能に影響を及ぼすことを示す。
データはまた、ＡＬＫ５阻害剤を抗体に結合させるリンカー、および放出機構が、両方
とも効能に重要であることも示す。抗ＣＤ５抗体（Ｔ３Ａ ＃５）と組み合わせたカテプ
シンＢ切断可能ＶＣリンカーは、最も有効なＴ３Ａだった。しかし、抗ＣＤ５抗体（Ｔ３
Ａ ＃４）リンカーと組み合わせた非切断可能ＭＣは、同様に抗ＣＤ５抗体と結合する場
合、いくつかの活性を有した。
初代マウスＴ細胞での試験に基づいて、Ｔ３Ａは、以下の通り、効能をランク付けるこ
とができる：１）Ｔ３Ａ ＃５、２）Ｔ３Ａ ＃４、３）Ｔ３Ａ ＃３、および４）Ｔ３
Ａ ＃２。
理論に制約されるものではないが、高いＡＤＣ活性に対して、ＡＤＣは、ナイーブＴ細
胞および活性化Ｔ細胞にわたり広範囲で発現し（例えば、７０％以上の細胞で発現）、迅
速に内在化し、確立した細胞内放出機構（例えばタンパク質分解プロセシング）を有する
、Ｔ細胞標的を標的化すべきであると考えられる。
５．１６．
[実施例１６]
Ｔ細胞へのＣＤ７の内在化
内在化研究を実施して、２つの異なる抗ＣＤ７抗体でのＴ細胞のインキュベーションに
続く、ＣＤ７の内在化を測定した。
ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞を、プレート結合抗ＣＤ３抗体（１μｇ／ｍｌ）および可溶性抗Ｃ
Ｄ２８抗体（２μｇ／ｍｌ）で４０時間活性化した。細胞を洗浄し、１μｇ／ｍｌの抗ヒ
トＣＤ７抗体（クローン１２４－Ｄ１および４Ｈ９、Ｃａｐｒｉｃｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ）
、またはラットアイソタイプコントロール抗体で、４℃で３０分間インキュベートして、
細胞表面の受容体全てを飽和した。上澄みに残る抗体を洗い流し、次いで細胞を３７℃で
０～６時間インキュベートした。各時点（５、１５、３０、６０、１８０、および３６０
分）で、アッセイを、氷上に細胞を配置することにより停止させた。ＣＤ７の発現を、蛍
光的にコンジュゲートした二次抗体を使用して検出した。
６時間の時点で、ＣＤ７のほぼ７０～８０％を内在化した（図１８）。内在化の量をＣ
Ｄ２およびＣＤ５と同等に、ＡＤＣ標的としてＣＤ７の適合性が示された。
６．具体的な実施形態
本開示は、以下の具体的な実施形態により例示される。
１．Ｔ細胞表面分子に結合する抗体または抗原結合性断片に作動可能に連結されたＡＬＫ
５阻害剤を含む、抗体－ＡＬＫ５阻害剤コンジュゲート（ＡＤＣ）。
２．ＡＬＫ５阻害剤のＩＣ５０が、少なくとも２０ｎＭである、実施形態１に記載のＡＤ
Ｃ。
３．ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール系化合物、ピラゾール系化合物、またはチアゾール
系化合物である、実施形態１または実施形態２に記載のＡＤＣ。
４．ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール系化合物である、実施形態３に記載のＡＤＣ。
５．ＡＬＫ５阻害剤が、ピラゾール系化合物である、実施形態３に記載のＡＤＣ。
６．ＡＬＫ５阻害剤が、チアゾール系化合物である、実施形態３に記載のＡＤＣ。
７．ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール－ベンゾジオキソール化合物、またはイミダゾール
－キノキサリン化合物である、イミダゾール系化合物である、実施形態３に記載のＡＤＣ
。
８．ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール－ベンゾジオキソール化合物である、実施形態７に
記載のＡＤＣ。
９．ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール－キノキサリン化合物である、実施形態７に記載の
ＡＤＣ。
１０．ＡＬＫ５阻害剤が、ピラゾール－ピロロ化合物である、ピラゾール系化合物である
、実施形態３に記載のＡＤＣ。
１１．ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール－ベンゾジオキソール化合物、イミダゾール－キ
ノキサリン化合物、ピラゾール－ピロロ化合物、またはチアゾール系化合物である、実施
形態３に記載のＡＤＣ。
１２．ＡＬＫ５阻害剤が、リンカーを介して、抗体または抗原結合性断片に連結されてい
る、実施形態１から１１のいずれかに記載のＡＤＣ。
１３．リンカーが、非切断可能リンカーである、実施形態１２に記載のＡＤＣ。
１４．非切断可能リンカーが、Ｎ－マレイミドメチルシクロヘキサン－１－カルボキシレ
ート、マレイミドカプロイル、またはメルカプトアセトアミドカプロイルリンカーである
、実施形態１３に記載のＡＤＣ。
１５．非切断可能リンカーが、Ｎ－マレイミドメチルシクロヘキサン１－カルボキシレー
トリンカーである、実施形態１４に記載のＡＤＣ。
１６．非切断可能リンカーが、マレイミドカプロイルリンカーである、実施形態１４に記
載のＡＤＣ。
１７．非切断可能リンカーが、メルカプトアセトアミドカプロイルリンカーである、実施
形態１４に記載のＡＤＣ。
１８．リンカーが、切断可能リンカーである、実施形態１２に記載のＡＤＣ。
１９．切断可能リンカーが、ジペプチドリンカー、ジスルフィドリンカー、またはヒドラ
ゾンリンカーである、実施形態１８に記載のＡＤＣ。
２０．切断可能リンカーが、ジペプチドリンカーである、実施形態１９に記載のＡＤＣ。
２１．切断可能リンカーが、ジスルフィドリンカーである、実施形態１９に記載のＡＤＣ
。
２２．切断可能リンカーが、ヒドラゾンリンカーである、実施形態１９に記載のＡＤＣ。
２３．リンカーが、プロテアーゼ感受性バリン－シトルリンジペプチドリンカーである、
実施形態１９に記載のＡＤＣ。
２４．リンカーが、グルタチオン感受性ジスルフィドリンカーである、実施形態１９に記
載のＡＤＣ。
２５．リンカーが、酸感受性ジスルフィドリンカーである、実施形態１９に記載のＡＤＣ
。
２６．ＡＬＫ５阻害剤が、部位特異的コンジュゲーションを介して、抗原または抗原結合
性断片にコンジュゲートされる、実施形態１から２５のいずれかに記載のＡＤＣ。
２７．ＡＬＫ５阻害剤が、抗体または抗原結合性断片上の１つまたは複数のシステイン、
リジン、またはグルタミン残基を介してコンジュゲートされる、実施形態２６に記載のＡ
ＤＣ。
２８．ＡＬＫ５阻害剤が、抗体または抗原結合性断片上の１つまたは複数のシステイン残
基を介してコンジュゲートされる、実施形態２７に記載のＡＤＣ。
２９．ＡＬＫ５阻害剤が、抗体または抗原結合性断片上の１つまたは複数のリジン残基を
介してコンジュゲートされる、実施形態２７に記載のＡＤＣ。
３０．ＡＬＫ５阻害剤が、抗体または抗原結合性断片上の１つまたは複数のグルタミン残
基を介してコンジュゲートされる、実施形態２７に記載のＡＤＣ。
３１．ＡＬＫ５阻害剤が、抗体または抗原結合性断片上の１つまたは複数の非天然アミノ
酸残基を介してコンジュゲートされる、実施形態２６に記載のＡＤＣ。
３２．１つまたは複数の非天然アミノ酸残基が、ｐ－アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃ
Ｆ）を含む、実施形態３１に記載のＡＤＣ。
３３．１つまたは複数の非天然アミノ酸残基が、ｐ－アジドメチル－Ｌ－フェニルアラニ
ン（ｐＡＭＦ）を含む、実施形態３１に記載のＡＤＣ。
３４．１つまたは複数の非天然アミノ酸残基が、セレノシステイン（Ｓｅｃ）を含む、実
施形態３１に記載のＡＤＣ。
３５．ＡＬＫ５阻害剤が、抗体または抗原結合性断片上の１つまたは複数のグリカンを介
してコンジュゲートされる、実施形態２６に記載のＡＤＣ。
３６．１つまたは複数のグリカンが、フコースを含む、実施形態３５に記載のＡＤＣ。
３７．１つまたは複数のグリカンが、６－チオフコースを含む、実施形態３５に記載のＡ
ＤＣ。
３８．１つまたは複数のグリカンが、ガラクトースを含む、実施形態３５に記載のＡＤＣ
。
３９．１つまたは複数のグリカンが、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を含
む、実施形態３５に記載のＡＤＣ。
４０．１つまたは複数のグリカンが、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を含む
、実施形態３５に記載のＡＤＣ。
４１．１つまたは複数のグリカンが、シアル酸（ＳＡ）を含む、実施形態３５に記載のＡ
ＤＣ。
４２．ＡＬＫ５阻害剤が、リンカーを介してコンジュゲートされる、実施形態２６から４
１のいずれかに記載のＡＤＣ。
４３．抗体または抗原結合性断片分子当たりのＡＬＫ５阻害剤分子の平均数が、２～８の
範囲である、実施形態１から４２のいずれかに記載のＡＤＣ。
４４．抗体が、モノクローナル抗体である、実施形態１から４３のいずれかに記載のＡＤ
Ｃ。
４５．抗体が、ヒトまたはヒト化である、実施形態４４に記載のＡＤＣ。
４６．抗体が、ヒトである、実施形態４５に記載のＡＤＣ。
４７．抗体が、ヒト化である、実施形態４５に記載のＡＤＣ。
４８．抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはＦｖ断片である、
実施形態１から４７のいずれかに記載のＡＤＣ。
４９．抗原結合性断片が、Ｆａｂである、実施形態４８に記載のＡＤＣ。
５０．抗原結合性断片が、Ｆａｂ’である、実施形態４８に記載のＡＤＣ。
５１．抗原結合性断片が、Ｆ（ａｂ’）２である、実施形態４８に記載のＡＤＣ。
５２．抗原結合性断片が、Ｆｖ断片である、実施形態４８に記載のＡＤＣ。
５３．抗原結合性断片が、ヒトまたはヒト化抗体の抗原結合性断片である、実施形態４８
から５２のいずれかに記載のＡＤＣ。
５４．抗原結合性断片が、ヒト抗体の抗原結合性断片である、実施形態５３に記載のＡＤ
Ｃ。
５５．抗原結合性断片が、ヒト化抗体の抗原結合性断片である、実施形態５３に記載のＡ
ＤＣ。
５６．抗体を含む、実施形態１から４７のいずれかに記載のＡＤＣ。
５７．抗原結合性断片を含む、実施形態１から５５のいずれかに記載のＡＤＣ。
５８．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、
ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ１０３、ＣＤ１８４、Ｔｉｍ３
、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ４、またはＰＤ１である、実施形態１から５７のいずれかに記載の
ＡＤＣ。
５９．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ１である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
６０．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ２である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
６１．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ３である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
６２．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ４である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
６３．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ５である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
６４．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ６である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
６５．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ７である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
６６．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ８である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
６７．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ２５である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
６８．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ２８である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
６９．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ７０である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
７０．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ７１である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
７１．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ１０３である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
７２．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ１８４である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
７３．Ｔ細胞表面分子が、Ｔｉｍ３である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
７４．Ｔ細胞表面分子が、ＬＡＧ３である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
７５．Ｔ細胞表面分子が、ＣＴＬＡ４である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
７６．Ｔ細胞表面分子が、ＰＤ１である、実施形態５８に記載のＡＤＣ。
７７．Ｔ細胞表面分子が、エンドソームを通して再循環することが可能なＴ細胞表面分子
である、実施形態１から５７のいずれかに記載のＡＤＣ。
７８．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ５またはＣＤ７である、実施形態７７に記載のＡＤＣ。
７９．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ５である、実施形態７８に記載のＡＤＣ。
８０．Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ７である、実施形態７８に記載のＡＤＣ。
８１．エフェクター機能を低下させる、１つまたは複数のアミノ酸置換を有するＦｃドメ
インを含む、実施形態１から８０のいずれかに記載のＡＤＣ。
８２．１つまたは複数の置換が、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ
２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ
／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ：Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２３
３Ｋ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ｓ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｄ
２６５Ｓ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ
／Ｅ２６９Ｋ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｋ３２２Ａ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３
５Ｒ／Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３２９Ｗ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ
２３５Ｒ／Ｐ３２９Ｗ、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ａ
：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ａ、または
Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ｅ／Ｅ３３３Ｋ：Ｅ２３３
Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ｅ／Ｅ３３３Ｋを含む
、実施形態８１に記載のＡＤＣ。
８３．１つまたは複数の置換が、Ｎ２９７Ａを含む、実施形態８２に記載のＡＤＣ。
８４．１つまたは複数の置換が、Ｎ２９７Ｑを含む、実施形態８２に記載のＡＤＣ。
８５．１つまたは複数の置換が、Ｎ２９７Ｇを含む、実施形態８２に記載のＡＤＣ。
８６．１つまたは複数の置換が、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａを含む、実施形態８２に記載の
ＡＤＣ。
８７．１つまたは複数の置換が、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｇを含む、実施形態８２に記載の
ＡＤＣ。
８８．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３５Ｅを含む、実施形態８２に記載のＡＤＣ。
８９．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａを含む、実施形態８２に記載の
ＡＤＣ。
９０．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む、実施形態
８２に記載のＡＤＣ。
９１．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ：Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ
２３３Ｋを含む、実施形態８２に記載のＡＤＣ。
９２．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ｓ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ
２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｄ２６５Ｓを含む、実施形態８２に記載のＡＤＣ。
９３．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ
２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋを含む、実施形態８２に記載のＡＤＣ。
９４．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｋ３２２Ａ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ
２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｋ３２２Ａを含む、実施形態８２に記載のＡＤＣ。
９５．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３２９Ｗ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ
２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｐ３２９Ｗを含む、実施形態８２に記載のＡＤＣ。
９６．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ
３２２Ａ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ３２２Ａ
を含む、実施形態８２に記載のＡＤＣ。
９７．１つまたは複数の置換が、Ｌ２３４Ｄ／Ｌ２３５Ｅ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ／Ｋ
３２２Ｅ／Ｅ３３３Ｋ：Ｅ２３３Ｋ／Ｌ２３４Ｒ／Ｌ２３５Ｒ／Ｅ２６９Ｋ／Ｄ２６５Ｓ
／Ｋ３２２Ｅ／Ｅ３３３Ｋを含む、実施形態８２に記載のＡＤＣ。
９８．実施形態１から９７のいずれかに記載のＡＤＣ、および薬学的に許容される担体を
含む、医薬組成物。
９９．がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１から９７のい
ずれかに記載のＡＤＣ、または実施形態９８に記載の医薬組成物を投与することを含む、
方法。
１００．がんが、免疫原性がんである、実施形態９９に記載の方法。
１０１．がんが、腫瘍抗原を発現する充実性腫瘍である、実施形態１００に記載の方法。
１０２．腫瘍抗原が、ｇｐ１００、メランＡ、またはＭＡＧＥ Ａ１である、実施形態１
０１に記載の方法。
１０３．腫瘍抗原が、ｇｐ１００である、実施形態１０２に記載の方法。
１０４．腫瘍抗原が、メランＡである、実施形態１０２に記載の方法。
１０５．腫瘍抗原が、ＭＡＧＥ Ａ１である、実施形態１０２に記載の方法。
１０６．がんが、免疫性浸潤を含む充実性腫瘍である、実施形態９９に記載の方法。
１０７．がんが、免疫療法により処置可能である、実施形態９９から１０６のいずれかに
記載の方法。
１０８．免疫療法が、サイトカイン療法、養子Ｔ細胞療法、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
療法、またはＴ細胞チェックポイント阻害剤療法である、実施形態１０７に記載の方法。
１０９．免疫療法が、サイトカイン療法である、実施形態１０８に記載の方法。
１１０．免疫療法が、養子Ｔ細胞療法である、実施形態１０８に記載の方法。
１１１．免疫療法が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法である、実施形態１０８に記載の
方法。
１１２．免疫療法が、Ｔ細胞チェックポイント阻害剤療法である、実施形態１０８に記載
の方法。
１１３．Ｔ細胞チェックポイント阻害剤が、ＰＤ１、ＰＤＬ１、またはＣＴＬＡ４の阻害
剤である、実施形態１０８または実施形態１１２に記載の方法。
１１４．Ｔ細胞チェックポイント阻害剤が、ＰＤ１の阻害剤である、実施形態１１３に記
載の方法。
１１５．Ｔ細胞チェックポイント阻害剤が、ＰＤＬ１の阻害剤である、実施形態１１３に
記載の方法。
１１６．Ｔ細胞チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ４の阻害剤である、実施形態１１３
に記載の方法。
１１７．がんが、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、肝がん、尿路上皮がん、腎がん、乳が
ん、または黒色腫である、実施形態９９から１１６のいずれかに記載の方法。
１１８．がんが、ＮＳＣＬＣである、実施形態１１７に記載の方法。
１１９．がんが、肝がんである、実施形態１１７に記載の方法。
１２０．肝がんが、肝細胞癌である、実施形態１２０に記載の方法。
１２１．がんが、尿路上皮がんである、実施形態１１７に記載の方法。
１２２．がんが、膀胱がんである、実施形態１２１に記載の方法。
１２３．がんが、腎がんである、実施形態１１７に記載の方法。
１２４．がんが、乳がんである、実施形態１１７に記載の方法。
１２５．がんが、黒色腫である、実施形態１１７に記載の方法。
１２６．がんが、ＡＬＫ５阻害剤により処置可能である、実施形態９９から１２５のいず
れかに記載の方法。
１２７．ＡＤＣまたは医薬組成物が、単独療法として投与される、実施形態９９から１２
６のいずれかに記載の方法。
１２８．ＡＤＣまたは医薬組成物が、併用療法レジメンの一部として投与される、実施形
態９９から１２６のいずれかに記載の方法。
１２９．ＡＤＣまたは医薬組成物が、標準ケアの療法または治療レジメンと組み合わせて
投与される、実施形態１２８に記載の方法。
様々な具体的な実施形態が例示および記載されるが、本開示の精神および範囲を逸脱す
ることなく、様々な変化がなされ得ることが理解されよう。
７．参照文献の引用
本出願で引用される全ての刊行物、特許、特許出願、および他の文献は、各刊行物、特
許、特許出願、または他の文献が、個別に、全ての目的に対して参照により組み込まれる
と示されるのと同様の程度まで、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組
み込まれる。本明細書および本開示に組み込まれる参照文献の１つまたは複数の教示の間
に不一致がある場合、本明細書の教示が意図される。
７．参照文献の引用
本出願で引用される全ての刊行物、特許、特許出願、および他の文献は、各刊行物、特許、特許出願、または他の文献が、個別に、全ての目的に対して参照により組み込まれると示されるのと同様の程度まで、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書および本開示に組み込まれる参照文献の１つまたは複数の教示の間に不一致がある場合、本明細書の教示が意図される。

本発明の様々な実施形態を以下に示す。
１．Ｔ細胞表面分子に結合する抗体または抗原結合性断片に作動可能に連結されたＡＬＫ５阻害剤を含む、抗体－ＡＬＫ５阻害剤コンジュゲート（ＡＤＣ）。
２．前記ＡＬＫ５阻害剤のＩＣ ５０ が、少なくとも２０ｎＭである、請求項１に記載のＡＤＣ。
３．前記ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール系化合物、ピラゾール系化合物、またはチアゾール系化合物である、上記１に記載のＡＤＣ。
４．前記ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール－ベンゾジオキソール化合物、イミダゾール－キノキサリン化合物、ピラゾール－ピロロ化合物、またはチアゾール系化合物である、上記３に記載のＡＤＣ。
５．前記ＡＬＫ５阻害剤が、非切断可能リンカーまたは切断可能リンカーを介して、前記抗体または抗原結合性断片に連結されている、上記１に記載のＡＤＣ。
６．Ｎ－マレイミドメチルシクロヘキサン－１－カルボキシレート、マレイミドカプロイル、またはメルカプトアセトアミドカプロイルリンカーである非切断可能リンカーを介して、前記ＡＬＫ５阻害剤が、前記抗体または抗原結合性断片に連結されている、上記５に記載のＡＤＣ。
７．ジペプチドリンカー、ジスルフィドリンカー、またはヒドラゾンリンカーである切断可能リンカーを介して、前記ＡＬＫ５阻害剤が、前記抗体または抗原結合性断片に連結されている、上記５に記載のＡＤＣ。
８．前記リンカーが、プロテアーゼ感受性バリン－シトルリンジペプチドリンカー、グルタチオン感受性ジスルフィドリンカー、または酸感受性ジスルフィドリンカーである、上記７に記載のＡＤＣ。
９．前記ＡＬＫ５阻害剤が、前記抗体もしくは抗原結合性断片上の１つもしくは複数のシステイン残基、または、前記抗体もしくは抗原結合性断片上の１つもしくは複数のリジン残基を介してコンジュゲートされ、任意で前記ＡＬＫ５阻害剤が、リンカーを介してコンジュゲートされる、上記１に記載のＡＤＣ。
１０．抗体または抗原結合性断片分子当たりのＡＬＫ５阻害剤分子の平均数が、２～８の範囲である、上記１に記載のＡＤＣ。
１１．前記抗体が、モノクローナル抗体である、上記１に記載のＡＤＣ。
１２．前記抗体が、ヒトまたはヒト化である、上記１１に記載のＡＤＣ。
１３．前記抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’） ２ 、またはＦｖ断片である、上記１に記載のＡＤＣ。
１４．前記抗原結合性断片が、ヒトまたはヒト化抗体の抗原結合性断片である、上記１３に記載のＡＤＣ。
１５．前記Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ１０３、ＣＤ１８４、Ｔｉｍ３、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ４、またはＰＤ１である、上記１に記載のＡＤＣ。
１６．前記Ｔ細胞表面分子が、エンドソームを通して再循環することが可能なＴ細胞表面分子である、上記１に記載のＡＤＣ。
１７．前記Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ５またはＣＤ７である、上記１６に記載のＡＤＣ。
１８．上記１に記載のＡＤＣ、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
１９．がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、上記１に記載のＡＤＣを投与することを含む、方法。
２０．前記がんが、
（ａ）免疫原性がんであるか；
（ｂ）免疫性浸潤を含む、充実性腫瘍であるか；
（ｃ）免疫療法により処置可能である、充実性腫瘍であるか；または
（ｄ）ＡＬＫ５阻害剤により処置可能である、上記１９に記載の方法。
２１．前記がんが、腫瘍抗原を発現する充実性腫瘍である、上記２０に記載の方法。
２２．前記がんが、免疫療法により処置可能であり、前記免疫療法が、サイトカイン療法、養子Ｔ細胞療法、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法、またはＴ細胞チェックポイント阻害剤療法である、上記２０に記載の方法。
２３．前記ＡＤＣが、単独療法として、または併用療法レジメンの一部として投与される、上記１９に記載の方法。

Claims (23)

  1. Ｔ細胞表面分子に結合する抗体または抗原結合性断片に作動可能に連結されたＡＬＫ５
    阻害剤を含む、抗体－ＡＬＫ５阻害剤コンジュゲート（ＡＤＣ）。
  2. 前記ＡＬＫ５阻害剤のＩＣ５０が、少なくとも２０ｎＭである、請求項１に記載のＡＤ
    Ｃ。
  3. 前記ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール系化合物、ピラゾール系化合物、またはチアゾー
    ル系化合物である、請求項１に記載のＡＤＣ。
  4. 前記ＡＬＫ５阻害剤が、イミダゾール－ベンゾジオキソール化合物、イミダゾール－キ
    ノキサリン化合物、ピラゾール－ピロロ化合物、またはチアゾール系化合物である、請求
    項３に記載のＡＤＣ。
  5. 前記ＡＬＫ５阻害剤が、非切断可能リンカーまたは切断可能リンカーを介して、前記抗
    体またが抗原結合性断片に連結されている、請求項１に記載のＡＤＣ。
  6. Ｎ－マレイミドメチルシクロヘキサン－１－カルボキシレート、マレイミドカプロイル
    、またはメルカプトアセトアミドカプロイルリンカーである非切断可能リンカーを介して
    、前記ＡＬＫ５阻害剤が、前記抗体または抗原結合性断片に連結されている、請求項５に
    記載のＡＤＣ。
  7. ジペプチドリンカー、ジスルフィドリンカー、またはヒドラゾンリンカーである切断可
    能リンカーを介して、前記ＡＬＫ５阻害剤が、前記抗体または抗原結合性断片に連結され
    ている、請求項５に記載のＡＤＣ。
  8. 前記リンカーが、プロテアーゼ感受性バリン－シトルリンジペプチドリンカー、グルタ
    チオン感受性ジスルフィドリンカー、または酸感受性ジスルフィドリンカーである、請求
    項７に記載のＡＤＣ。
  9. 前記ＡＬＫ５阻害剤が、前記抗体もしくは抗原結合性断片上の１つもしくは複数のシス
    テイン残基、または、前記抗体もしくは抗原結合性断片上の１つもしくは複数のリジン残
    基を介してコンジュゲートされ、任意で前記ＡＬＫ５阻害剤が、リンカーを介してコンジ
    ュゲートされる、請求項１に記載のＡＤＣ。
  10. 抗体または抗原結合性断片分子当たりのＡＬＫ５阻害剤分子の平均数が、２～８の範囲
    である、請求項１に記載のＡＤＣ。
  11. 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１に記載のＡＤＣ。
  12. 前記抗体が、ヒトまたはヒト化である、請求項１１に記載のＡＤＣ。
  13. 前記抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはＦｖ断片である、
    請求項１に記載のＡＤＣ。
  14. 前記抗原結合性断片が、ヒトまたはヒト化抗体の抗原結合性断片である、請求項１３に
    記載のＡＤＣ。
  15. 前記Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、
    ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ１０３、ＣＤ１８４、Ｔｉｍ３
    、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ４、またはＰＤ１である、請求項１に記載のＡＤＣ。
  16. 前記Ｔ細胞表面分子が、エンドソームを通して再循環することが可能なＴ細胞表面分子
    である、請求項１に記載のＡＤＣ。
  17. 前記Ｔ細胞表面分子が、ＣＤ５またはＣＤ７である、請求項１６に記載のＡＤＣ。
  18. 請求項１に記載のＡＤＣ、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
  19. がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１に記載のＡＤＣを投
    与することを含む、方法。
  20. 前記がんが、
    （ａ）免疫原性がんであるか；
    （ｂ）免疫性浸潤を含む、充実性腫瘍であるか；
    （ｃ）免疫療法により処置可能である、充実性腫瘍であるか；または
    （ｄ）ＡＬＫ５阻害剤により処置可能である、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記がんが、腫瘍抗原を発現する充実性腫瘍である、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記がんが、免疫療法により処置可能であり、前記免疫療法が、サイトカイン療法、養
    子Ｔ細胞療法、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法、またはＴ細胞チェックポイント阻害剤
    療法である、請求項２０に記載の方法。
  23. 前記ＡＤＣが、単独療法として、または併用療法レジメンの一部として投与される、請
    求項１９に記載の方法。
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