TW202246242A - 免疫調節抗體藥物結合物 - Google Patents

免疫調節抗體藥物結合物 Download PDF

Info

Publication number
TW202246242A
TW202246242A TW111101750A TW111101750A TW202246242A TW 202246242 A TW202246242 A TW 202246242A TW 111101750 A TW111101750 A TW 111101750A TW 111101750 A TW111101750 A TW 111101750A TW 202246242 A TW202246242 A TW 202246242A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
compound
compound according
alkyl
subscript
hydrogen
Prior art date
Application number
TW111101750A
Other languages
English (en)
Inventor
亞當 Ｇ 希爾
伊利亞貝斯 Ｅ 格雷
伊利亞貝斯 Ｊ 康明斯
派翠克 J 布魯克
席拉 Ｊ 佳黛
Original Assignee
美商西健公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商西健公司 filed Critical 美商西健公司
Publication of TW202246242A publication Critical patent/TW202246242A/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/22—Cyclohexane rings, substituted by nitrogen atoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本發明尤其提供可用於治療各種疾病、例如癌症之抗體藥物結合物。

Description

免疫調節抗體藥物結合物
本發明係關於化學及醫學領域。更特定而言，本發明係關於抗體藥物結合物、組合物、其製備及其作為治療劑之用途。
cGAS-STING路徑係一種先天性免疫路徑，其識別細胞內DNA並觸發對於抗病毒及抗腫瘤免疫性較為重要之I型干擾素及發炎性細胞介素反應。在結合DNA時，cGMP-AMP合酶(cGAS)產生STING之內源性配體cGAMP。 例如參見Villanueva, Nat. Rev. Drug Disc.2019: 18；15。在分子層面上由cGAMP活化時，跨膜STING二聚體自內質網易位至高爾基體(Golgi apparatus)中，最終募集TANK結合激酶1 (TBK1)及轉錄因子干擾素調控因子3 (IRF3)，從而誘導I型干擾素(IFN)及發炎反應。 參見Konno等人， Cell2013: 155; 688-698。此先天性免疫路徑必須嚴格調控，此乃因過度cGAS-STING活性與各種自體免疫及發炎性病症有關。 參見Barber, Nat. Rev. Immunol.2015: 15; 760-770； 亦參見Liu等人， N. Engl. J. Med.2014: 371; 507-518。
外源性STING激動劑可幫助藉由激活針對腫瘤之免疫反應以使腫瘤消退來克服免疫抑制性腫瘤微環境。 參見Sun等人， Science2013: 6121; 786-791； 亦參見Corrales及Gajewski, Clinc. Cancer Res.2015: 21；4774-4779。實例包含基於核苷酸之STING激動劑，其如同內源性配體一般係環狀二核苷酸。該等化合物通常帶電並具有親水性，易於發生酶促降解，且具有較差之生物可用性及藥物動力學。因此，仍需要具有避免全身性細胞介素誘導之改良藥理學性質之STING激動劑。
本文所闡述之一些實施例係關於抗體藥物結合物(ADC)，其可誘發針對靶細胞之局部化免疫反應，且由此展現減小之脫靶毒性(例如使用經全身性投與之免疫刺激化合物所觀察者)。
一些實施例提供一種抗體藥物結合物(ADC)，其包括： 抗體； 如本文所闡述之連接體；及 如本文所闡述之式(I)化合物； 其中式(I)化合物結合至連接體；且 其中每一連接體經由共價連接至抗體之半胱胺酸殘基之硫原子之琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺結合至抗體。
一些實施例提供具有下式之抗體藥物結合物(ADC)： Ab-(S*-M 1-(D)) p 其中： Ab係抗體； 每一S*係來自抗體之半胱胺酸殘基之硫原子； M 1係琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺； 下標p係2至8之整數；且 每一(D)係如本文所闡述之式(I)藥物單元。
在一些實施例中，式(I)具有以下結構：
Figure 02_image003
(I)。
一些實施例提供式(II)化合物：
Figure 02_image005
(II)。
一些實施例提供具有下式之抗體藥物結合物(ADC)： Ab-(S*-(D')) p 其中： Ab係抗體； 每一S*係來自抗體之半胱胺酸殘基之硫原子； D'係藥物單元，其係如本文所闡述之式(IV)化合物之基團；且 下標p係2至8之整數。
在一些實施例中，式(IV)具有以下結構：
Figure 02_image007
(IV)。
一些實施例提供式(III)化合物：
Figure 02_image009
(III)。
一些實施例提供具有式(V)結構之化合物：
Figure 02_image011
(V)。
一些實施例提供包括如本文所闡述之ADC之分佈之組合物。
一些實施例提供治療有需要之個體之癌症之方法，其包括向個體投與治療有效量之如本文所闡述之ADC組合物。
一些實施例提供治療有需要之個體之癌症之方法，其包括向個體投與治療有效量之如本文所闡述之ADC。
一些實施例提供誘導有需要之個體中之抗腫瘤免疫反應之方法，其包括向個體投與治療有效量之如本文所闡述之ADC組合物。
一些實施例提供誘導有需要之個體中之抗腫瘤免疫反應之方法，其包括向個體投與治療有效量之如本文所闡述之ADC。
相關申請案交叉參考
本申請案主張2021年1月15日提出申請之美國臨時申請案第63/138,360號及2021年12月22日提出申請之第63/292,779號(標題皆為「IMMUNOMODULATORY ANTIBODY-DRUG CONJUGATES」)之權益，其全部內容皆以引用方式併入本文中。
本文提供抗體藥物結合物(ADC)，其可誘發對靶細胞之局部免疫反應且由此(例如)與通常在全身性投與免疫刺激化合物(例如STING激動劑)時所觀察之毒性相比減小脫靶毒性。該等化合物之活體內毒性通常與全身性細胞介素活化有關，從而產生在靶及脫靶免疫反應。本文所闡述之ADC包含STING激動劑作為藥物酬載以提供細胞介素之局部選擇性誘導。 例如參見Milling等人， Adv. Drug Deliv. Rev.2017: 114；79-101； 亦參見Hu等人， EBioMedicine2019: 41；497-508。此方式可提供特定STING活化以及局部免疫細胞募集，且同時減少全身性細胞介素釋放及其伴隨不良效應。 定義
除非另外定義，否則本文所使用之所有技術及科學術語皆具有與熟習本發明所屬技術領域者通常所理解相同之含義。本文闡述用於本申請案中之方法及材料；亦可在本發明之一些態樣中使用業內已知之其他適宜方法及材料。該等材料、方法及實例僅係闡釋性的且並非意欲加以限制。本文提及之所有出版物、專利申請案、專利、序列、資料庫條目及其他參考文獻皆以全文引用方式併入。倘若出現衝突，則以本說明書(包含定義)為準。在本文中使用商品名時，除非上下文另外指示，否則商品名包含商品名產品之產品配方、學名藥及活性醫藥成分。
本文所用之術語「一(a、an)」或「該」不僅包含具有一種成員之態樣，且亦包含具有一種以上成員之態樣。舉例而言，除非上下文另外明確規定，否則單數形式「一(a、an)」及「該」包含複數個指示物。因此，舉例而言，提及「連接體」包含提及一或多個此類連接體，且提及「細胞」包含提及複數個此類細胞。
在提及數量或數值範圍時，術語「約」意指所提及之數量或數值範圍係(例如)實驗可變性內及/或統計學實驗誤差內之近似值，且由此數量或數值範圍之變化可為該數量或數值範圍之最高10%。在提及包括如本文所闡述之ADC之分佈之ADC組合物時，組合物中之結合至抗體之STING激動劑化合物之平均數量可為整數或非整數，尤其在擬部分地加載抗體時。因此，在平均藥物載量值之前引用之術語「約」意欲體現ADC組合物內之藥物載量的預期變化。
本文所用之術語「抗體」涵蓋展現期望生物活性之完整單株抗體、多株抗體、單特異性抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)，包含完整抗體及抗原結合抗體片段以及一或多個鏈間二硫鍵經破壞之其還原形式，且條件係抗原結合抗體片段具有所需數量之用於期望數量之如本文所闡述連接基團(例如連接體(L))之連接位點。在一些態樣中，連接體經由琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺連接至經還原鏈間二硫鍵之半胱胺酸殘基及/或藉由基因改造引入之半胱胺酸殘基之硫原子。天然抗體形式係四聚體且由兩對相同免疫球蛋白鏈組成，每一對具有一條輕鏈及一條重鏈。在每一對中，輕鏈及重鏈可變結構域(VL及VH)一起主要負責結合至抗原。輕鏈及重鏈可變結構域由間雜有三個超變區(亦稱為「互補決定區」或「CDR」)之框架區組成。輕鏈及重鏈亦含有可由免疫系統識別並與其相互作用之恆定區。( 例如參見Janeway等人，2001, Immuno. Biology ， 第 5 版 ，Garland Publishing, New York)。抗體包含任何同型(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)或子類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。抗體可衍生自任何適宜物種。在一些態樣中，抗體屬人類或鼠類來源，且在一些態樣中，抗體係人類、人類化或嵌合抗體。抗體可岩藻糖基化至不同程度或無岩藻糖基化。
「完整抗體」係包括抗原結合可變區以及輕鏈恆定結構域(C L)及重鏈恆定結構域(C H1、C H2、C H3及C H4，視抗體種類需要)。恆定結構域係天然序列恆定結構域(例如人類天然序列恆定結構域)或其胺基酸序列變體。
「抗體片段」包括完整抗體之一部分(包括其抗原結合或可變區)。本發明之抗體片段包含至少一個提供連接體及/或連接體藥物化合物之連接位點之半胱胺酸殘基(天然或經改造)。在一些實施例中，抗體片段包含Fab、Fab′或F(ab′) 2。
如本文中所使用，術語「經改造半胱胺酸殘基」或「eCys殘基」係指納入抗體中之半胱胺酸胺基酸或其衍生物。在彼等態樣中，一或多個eCys殘基可納入抗體中，且通常，eCys殘基納入抗體之重鏈或輕鏈中。通常，藉由誘變親代抗體之核酸序列以編碼一或多個含有半胱胺酸或其衍生物之胺基酸殘基來將eCys殘基納入抗體中。。適宜突變包含使用半胱胺酸或其衍生物代替抗體之輕鏈或重鏈中之期望殘基，在抗體之輕鏈或重鏈中之期望位置處納入額外半胱胺酸或其衍生物，以及將額外半胱胺酸或其衍生物添加至胺基酸之期望重鏈或輕鏈之N-末端及/或C-末端。其他資訊可參見美國專利第9,000,130號，該專利之內容全文併入本文中。半胱胺酸(Cys)之衍生物包含(但不限於) β-2-Cys、β-3-Cys、高半胱胺酸及N-甲基半胱胺酸。
在一些實施例中，本發明抗體包含具有一或多個經改造半胱胺酸(eCys)殘基者。在一些實施例中，半胱胺酸(Cys)之衍生物包含(但不限於) β-2-Cys、β-3-Cys、高半胱胺酸及N-甲基半胱胺酸。
「抗原」係抗體所特異性地結合之實體。
術語「特異性結合」及「特異性地結合」意指，抗體或其抗體片段以選擇性方式與其相應靶抗原結合且不與多種其他抗原結合。通常，抗體或抗體片段以至少約1 × 10 -7M (例如10 -8M至10 -9M、10 -10M、10 -11M或10 -12M)之親和力進行結合，且以至少兩倍於其結合至除預定抗原或密切相關抗原外之非特異性抗原(例如BSA、酪蛋白)之親和力的親和力結合至預定抗原。
本文所用之術語「胺基酸」係指天然及非天然以及蛋白原性胺基酸。實例性胺基酸包含(但不限於)丙胺酸、精胺酸、天門冬胺酸、天門冬醯胺酸、組胺酸、甘胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、離胺酸、白胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、脯胺酸、色胺酸、纈胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、鳥胺酸、β-丙胺酸、瓜胺酸、絲胺酸甲醚、天門冬胺酸甲酯、麩胺酸甲酯、高絲胺酸甲醚及N,N-二甲基離胺酸。
本文所用之「糖部分」係指單醣(例如吡喃糖或呋喃糖)之單價基團。糖部分可包括半縮醛或羧酸(來自懸垂-CH 2OH基團之氧化)。在一些實施例中，糖部分呈β-D構形。在一些實施例中，糖部分係葡萄糖、葡萄糖醛酸或甘露糖基團。
術語「抑制(inhibit或inhibition of)」意指減小可量測量或完全預防(例如100%抑制)。
術語「治療有效量」係指如本文所闡述之ADC之有效治療哺乳動物之疾病或病症之量。在癌症情形下，治療有效量之ADC提供下列生物效應中之一或多者：減小癌細胞數；減小腫瘤大小；抑制癌細胞浸潤至周邊器官中；抑制腫瘤轉移；在一定程度上抑制腫瘤生長；及/或在一定程度上減輕一或多種與癌症有關之症狀。對於癌症療法而言，在一些態樣中，藉由評價疾病進展時間(TTP)及/或測定反應率(RR)來量測效能。
除非上下文另外指示或暗示，否則術語「實質性」或「實質上」係指大部分(亦即＞50%)之群體、混合物或試樣，通常係大於50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。
術語「經細胞內裂解」及「細胞內裂解」係指發生於細胞內部之代謝過程或反應，其中細胞機制作用於ADC或其片段上以在細胞內自ADC釋放游離藥物或其其他降解產物。源自代謝過程或反應之部分由此係細胞內代謝物。
術語「癌症」及「癌性」係指或闡述哺乳動物中特徵通常在於細胞生長失調之生理學病狀或病症。「腫瘤」包括多種癌細胞。
本文所用之「個體」係指投與ADC之個體。「個體」之實例包含(但不限於)哺乳動物，例如人類、大鼠、小鼠、天竺鼠、非人類靈長類動物、豬、山羊、牛、馬、狗、貓、鳥及家禽。通常，個體係大鼠、小鼠、狗、非人類靈長類動物或人類。在一些態樣中，個體係人類。
除非上下文另外指示或暗示，否則術語「治療(treat或treatment)」係指治療性治療及用以預防復發之防治性措施，其中目標在於抑制不期望生理學變化或病症(例如癌症之發生或擴散)。出於本發明目的，有益或期望臨床結果包含(但不限於)緩解症狀、減小疾病範圍、穩定疾病狀態(亦即不惡化)、延遲或減緩疾病進展、改善或緩和疾病狀態及可檢測或不可檢測地緩解病情(部分或全部)。在一些態樣中，「治療」亦意指與不接受治療之預期存活相比延長存活。
在癌症背景中，術語「治療」包含以下各項中之任一者或全部：抑制癌細胞或腫瘤之生長；抑制癌細胞複製；減小整體腫瘤負荷或降低癌細胞數；及改善一或多種與疾病有關之症狀。
本文所用之術語「鹽」係指化合物(例如藥物單元(D)、連接體(例如本文所闡述者)或ADC)之有機或無機鹽。在一些態樣中，化合物含有至少一個胺基，且由此可與胺基形成酸加成鹽。實例性鹽包含(但不限於)硫酸鹽、三氟乙酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、鞣酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽(亦即1,1’-亞甲基-雙-(2-羥基3-萘酸鹽))。鹽可涉及納入另一分子，例如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其他相對離子。相對離子可為穩定母體化合物上之電荷之任何有機或無機部分。另外，鹽在其結構中具有一個或一個以上帶電原子。在存在多個作為鹽部分之帶電原子之情況下，可存在多個相對離子。因此，鹽可具有一或多個帶電原子及/或一或多個相對離子。「醫藥上可接受之鹽」係適於投與如本文所闡述之個體者且在一些態樣中包含如由P. H. Stahl及C. G. Wermuth (編者)，Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, Weinheim/Zürich:Wiley-VCH/VHCA, 2002所闡述之鹽，其清單之全部內容以引用方式明確併入本文中。
本文所用之術語「互變異構體」係指結構之原子配置顯著不同但易於快速平衡存在之化合物，且應理解，本文所提供之化合物可繪示為不同互變異構體，且在化合物具有互變異構體形式時，所有互變異構體形式意欲屬本發明範圍內，且化合物之命名不排除任何互變異構體。
術語「鹵基」或「鹵素」係指氟、氯、溴或碘。
術語「烷基」係指具有指示數量之碳原子(舉例而言，「C 1-C 4烷基」、「C 1-C 6烷基」、「C 1-C 8烷基」或「C 1-C 10」烷基分別具有1至4、1至6、1至8或1至10個碳原子)之未取代直鏈或具支鏈飽和烴，且係藉由自母體烷烴去除一個氫原子衍生。代表性直鏈「C 1-C 8烷基」包含(但不限於)甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基及正辛基；而具支鏈C 1-C 8烷基包含(但不限於)異丙基、第二丁基、異丁基、第三丁基、異戊基及2-甲基丁基。
術語「伸烷基」係指具有規定數量之碳原子(舉例而言，C 1- C 6伸烷基具有1至6個碳原子)且具有兩個單價自由基中心之二價未取代飽和具支鏈或直鏈烴，該等單價自由基中心係藉由自母體烷烴之相同或兩個不同碳原子去除兩個氫原子所衍生。伸烷基可(例如)在碳主鏈上(如-CHF-或-CF 2-)或在直鏈或具支鏈伸烷基之末端碳上(例如-CHF 2或-CF 3)經1-6個氟基取代。伸烷基包含(但不限於)：亞甲基(-CH 2-)、伸乙基(-CH 2CH 2-)、伸正丙基(-CH 2CH 2CH 2-)、伸正丙基(-CH 2CH 2CH 2-)、伸正丁基(-CH 2CH 2CH 2CH 2-)、二氟亞甲基(-CF 2-)、四氟伸乙基(-CF 2CF 2-)及諸如此類。
術語「烯基」係指具有至少一個碳-碳雙鍵及指示數量之碳原子(舉例而言，「C 2-C 8烯基」或「C 2-C 10」烯基分別具有2至8或2至10個碳原子)之未取代直鏈或具支鏈烴。在未指示碳原子數時，烯基具有2至6個碳原子。
術語「炔基」係指具有至少一個碳-碳三鍵及指示數量之碳原子(舉例而言，「C 2-C 8炔基」或「C 2-C 10」炔基分別具有2至8或2至10個碳原子)之未取代直鏈或具支鏈烴。在未指示碳原子數時，炔基具有2至6個碳原子。
術語「雜烷基」係指具有規定數量之總原子及至少一個(例如1至15個)選自由O、N、Si及S組成之群之雜原子之穩定直鏈或具支鏈飽和烴。雜烷基之碳及雜原子可經氧化(例如用以形成酮、N-氧化物、碸及諸如此類)且氮原子可經四級銨化。雜原子可位於雜烷基之任何內部位置處及/或位於雜烷基連接至分子其他部分之位置處。雜烷基可(例如)在碳主鏈上(如-CHF-或-CF 2-)或在直鏈或具支鏈雜烷基之末端碳上(例如-CHF 2或-CF 3)經1-6個氟基取代。雜烷基之實例包含(但不限於) -CH 2-CH 2-O-CH 3、-CH 2-CH 2-NH-CH 3、-CH 2-CH 2-N(CH 3) 2、-C(=O)-NH-CH 2-CH 2-NH-CH 3、-C(=O)-N(CH 3)-CH 2-CH 2-N(CH 3) 2、-C(=O)-NH-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 3、-C(=O)-N(CH 3)-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(=O)-CH 2-CH 3、-O-CH 2-CH 2-CH 2-NH(CH 3)、-O-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3) 2、-O-CH 2-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 3、-O-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(=O)-CH 2-CH 3、-CH 2-CH 2-CH 2-NH(CH 3)、-O-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3) 2、-CH 2-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 3、-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(=O)-CH 2-CH 3、-CH 2-S-CH 2-CH 3、-CH 2-CH 2-S(O)-CH 3、-NH-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 3、-CH 2-CH 2-S(O) 2-CH 3、-CH 2-CH 2-O-CF 3及-Si(CH 3) 3。可連續存在最多兩個雜原子，例如-CH 2-NH-OCH 3及-CH 2-O-Si(CH 3) 3。末端聚乙二醇(PEG)部分係一類雜烷基。
術語「伸雜烷基」係指衍生自雜烷基(如本文所定義)之二價未取代直鏈或具支鏈基團。伸雜烷基之實例包含(但不限於) -CH 2-CH 2-O-CH 2-、-CH 2-CH 2-O-CF 2-、-CH 2-CH 2-NH-CH 2-、-C(=O)-NH-CH 2-CH 2-NH-CH 2-、-C(=O)-N(CH 3)-CH 2-CH 2-N(CH 3)-CH 2-、-C(=O)-NH-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 2-、-C(=O)-N(CH 3)-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(=O)-CH 2-CH 2-、-O-CH 2-CH 2-CH 2-NH-CH 2-、-O-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3)-CH 2-、-O-CH 2-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 2-、-O-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(=O)-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-NH-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3)-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(=O)-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-、-CH 2-CH 2-N(CH 3)-CH 2-、-CH 2-CH 2-N +(CH 3) 2-、-NH-CH 2-CH 2(NH 2)-CH 2-及-NH-CH 2-CH 2(NHCH 3)-CH 2-。二價聚乙二醇(PEG)部分係一類伸雜烷基。
術語「烷氧基」係指經由氧原子連接至分子之如本文所定義之烷基。舉例而言，烷氧基包含(但不限於)甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基、正戊氧基及正己氧基。
術語「烷硫基」係指經由硫原子連接至分子之如本文所定義之烷基。舉例而言，烷硫基包含(但不限於)硫甲基、硫乙基、硫正丙基、硫異丙基及諸如此類。
術語「鹵代烷基」係指具有指示數量之碳原子(舉例而言，「C 1-C 4烷基」、「C 1-C 6烷基」、「C 1-C 8烷基」或「C 1-C 10」烷基分別具有1至4、1至6、1至8或1至10個碳原子)之未取代直鏈或具支鏈飽和烴，其中烷基之至少一個氫原子由鹵素(例如氟、氯、溴或碘)代替。在未指示碳原子數時，鹵代烷基具有1至6個碳原子。代表性C 1-6鹵代烷基包含(但不限於)三氟甲基、2,2,2-三氟乙基及1-氯異丙基。
術語「鹵代烷氧基」係指經由氧原子連接至分子之如本文所定義之鹵代烷基。舉例而言，鹵代烷氧基包含(但不限於)三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基及1,1,1-三氟2-甲基丙氧基。
術語「環烷基」係指具有指示數量之碳原子(舉例而言，「C 3-8環烷基」或「C 3-6」環烷基分別具有3至8或3至6個碳原子)之環狀、飽和或部分不飽和烴。在未指示碳原子數時，環烷基具有3至6個碳原子。環烷基包含橋接、稠合及螺環系統以及一個環係芳香族且另一環不飽和之橋接雙環系統。代表性「C 3-6環烷基」包含環丙基、環丁基、環戊基及環己基。
術語「芳基」係指具有6-10個碳原子之未取代單價碳環芳香族烴基團，其係藉由自母體芳香族環系統之單一碳原子去除一個氫原子所衍生。芳基包含(但不限於)苯基、萘基、蒽基、聯苯及諸如此類。
術語「雜環」係指飽和或部分不飽和環或多稠合環系統，包含橋接、稠合及螺環系統。雜環可由環系統中之總原子數來闡述，舉例而言，3-10員雜環總共具有3至10個環原子。該術語包含在環中具有約1至6個碳原子及約1至3個選自由氧、氮及硫組成之群之雜原子之單一飽和或部分不飽和環(例如3、4、5、6或7員環)。環可經一或多個(例如1、2或3個)側氧基取代且硫及氮原子亦可以其氧化形式存在。該等環包含(但不限於)氮雜環丁基、四氫呋喃基及六氫吡啶基。術語「雜環」亦包含多稠合環系統(例如包括2、3或4個環之環系統)，其中單一雜環(如上文所定義)可與一或多個雜環(例如十氫萘啶基)、碳環(例如十氫喹啉基)或芳基縮合。在化合價要求容許時，多稠合環系統之各環可經由稠合、螺及橋接鍵彼此連結。應理解，多稠合環系統(如上文針對雜環所定義)之連接點可位於多稠合環系統之任何位置處，包含該環之雜環、芳基及碳環部分。亦應理解，雜環或雜環多稠合環系統之連接點可位於雜環或雜環多稠合環系統之任何適宜原子處，包含碳原子及雜原子(例如氮)。實例性雜環包含(但不限於)氮丙啶基、氮雜環丁基、吡咯啶基、六氫吡啶基、高六氫吡啶基、嗎啉基、硫嗎啉基、六氫吡嗪基、四氫呋喃基、二氫噁唑基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、1,2,3,4-四氫喹啉基、苯并噁嗪基、二氫噁唑基、𠳭烷基、1,2-二氫吡啶基、2,3-二氫苯并呋喃基、1,3-苯并二氧雜環戊烯基及1,4-苯并二噁烷基。
術語「雜芳基」係指在單一環內或稠合環系統內具有至少一個選自由O、N及S組成之群之雜原子之芳香族烴環系統。環或環系統在共軛π系統中具有4n +2個電子，其中所有對共軛π系統有貢獻之原子皆位於同一平面中。在一些實施例中，雜芳基具有總共5-10個環原子及1、2或3個雜原子(稱為「5-10員雜芳基」)。雜芳基包含(但不限於)咪唑、三唑、噻吩、呋喃、吡咯、苯并咪唑、吡唑、吡嗪、吡啶、嘧啶及吲哚。
術語「羥基」係指-OH基團。
術語「氰基」係指-CN基團。
術語「羧基」係指-C(=O)OH基團。
術語「側氧基」係指=O基團。
用作抗體藥物結合物(ADC)之一部分之術語「琥珀醯亞胺」係指：
Figure 02_image013
。
用作抗體藥物結合物(ADC)之一部分之術語「經水解琥珀醯亞胺」係指：
Figure 02_image015
或
Figure 02_image017
。
熟習此項技術者應瞭解，具有對掌性中心之本發明化合物可以光學活性及外消旋形式存在及分離。
如本文中所使用，術語「游離藥物」係指不共價連接至抗體之生物活性物質。因此，游離藥物係指任何未結合化合物，包含在自ADC裂解後立即存在之化合物。釋放機制可為經由ADC中之可裂解連接體或經由ADC之細胞內轉化或代謝。在一些態樣中，游離藥物將發生質子化及/或可以帶電部分形式存在。游離藥物係能夠施加期望生物效應之藥理學活性物質。在一些實施例中，藥理學活性物質係單獨之母體藥物。在一些實施例中，藥理學活性物質係鍵結至ADC之組分或殘留物(例如連接體、琥珀醯亞胺、經水解琥珀醯亞胺及/或抗體中不發生後續細胞內代謝之組分)之母體藥物。在一些實施例中，游離藥物係指(例如)如本文所闡述之式(I)化合物，其中X B、Y、W、A及M 1中之一或多者不存在。在一些實施例中，游離藥物係指如本文所闡述之式(II)化合物。在一些實施例中，游離藥物係指如本文所闡述之式(II-A)化合物。在一些實施例中，游離藥物係指如本文所闡述之式(III)化合物。在一些實施例中，游離藥物係指如本文所闡述之式(IV)化合物。在一些實施例中，游離藥物係指如本文所闡述之式(V)化合物。
如本文中所使用，術語「藥物單元」係指如本文所闡述之ADC中之結合至抗體之游離藥物。 抗體藥物結合物(ADC)化合物
一些實施例提供一種抗體藥物結合物(ADC)，其包括： 抗體； 如本文所闡述之連接體；及如本文所闡述之式(I)化合物； 其中式(I)化合物結合至連接體；且 其中每一連接體經由共價連接至半胱胺酸殘基之硫原子之琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺結合至抗體。
一些實施例提供具有下式之抗體藥物結合物(ADC)： Ab-(S*-M 1-(D)) p 其中： Ab係抗體； 每一S*係來自抗體之半胱胺酸殘基之硫原子； M 1係琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺； 下標p係2至8之整數；且 每一(D)係式(I)藥物單元：
Figure 02_image019
(I) 其中：
Figure 02_image021
代表L與M 1之共價連接； R 1係氫、羥基、C 1-6烷氧基、-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B或PEG2至PEG4； 每一R 2及R 3獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F； 每一R A、R B、R C、R D、R E及R F獨立地係氫或C 1-3烷基； 每一下標n獨立地係0至6之整數； 每一下標m獨立地係0或1； 每一下標q係0至6之整數； X A係-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X B不存在或係2-16員伸雜烷基； X B、M 1及L各自獨立地視情況經自PEG1至PEG72之PEG單元取代；且 L係如本文所闡述之可選連接體。在存在時，L經由共價鍵連接至X B或X A(若X B不存在)，如式(I)中所繪示。在L不存在時，M 1經由共價鍵連接至X B或X A(若X B不存在)，如式(I)中所繪示。
在一些實施例中，M 1係琥珀醯亞胺。在一些實施例中，M 1係經水解琥珀醯亞胺。應理解，經水解琥珀醯亞胺可以兩種區域異構體形式存在。下文針對鍵結至*S-Ab之M 1之水解來例示彼等形式，其中代表來自該水解之區域異構體之結構係式M 1a及M 1b；其中毗鄰鍵之波浪線代表與式(I)之共價連接。
Figure 02_image023
Figure 02_image025
Figure 02_image027
M或M 1基團在存在時能夠將抗體連接至A基團(在存在時) (或若下標a及/或下標w及/或下標y為0，則連接至W、Y或X B基團)。就此而言，抗體具有可與M或M 1之官能基形成鍵之官能基。可天然或通過化學操作存在於抗體上之有用官能基包含(但不限於)硫氫基(-SH)、胺基、羥基、羧基及碳水化合物之變旋異構羥基。在一態樣中，抗體官能基係硫氫基及胺基。可藉由還原抗體之分子內二硫鍵來生成硫氫基。或者，硫氫基可藉由使用2-亞胺基四氫噻吩(喬特試劑(Traut's reagent))或另一硫氫基生成劑使抗體中之離胺酸部分之胺基發生反應來生成。在一些實施例中，M或M 1與抗體之硫原子形成鍵。硫原子可衍生自抗體之硫氫基。
在一些實施例中，L具有式-(A) a-(W) w-(Y) y-，其中： A係視情況經1-3個R a1取代之C 2-20伸烷基或視情況經1-3個R b1取代之2至40員伸雜烷基； 每一R a1獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R b1獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R d1及R e1獨立地係氫或C 1-3烷基； W具有1-12個胺基酸或具有以下結構：
Figure 02_image029
或
Figure 02_image031
其中Su係糖部分； -O A-代表醣苷鍵； 每一R g獨立地係氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或係-O-C(=O)-；
Figure 02_image033
代表與A或M 1之共價連接； *代表與式(I)中之Y、X A或X B之共價連接； Y係自消除部分(self-immolative moiety)、非自消除可釋放部分或非裂解部分； 下標a為0或1； 下標y為0或1；且 下標w為0或1。
在一些實施例中，R 1係氫。在一些實施例中，R 1係羥基。在一些實施例中，R 1係C 1-6烷氧基。在一些實施例中，R 1係甲氧基。在一些實施例中，R 1係-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基。在一些實施例中，R 1係甲氧基乙基。在一些實施例中，R 1係PEG2至PEG4。
在一些實施例中，R 1係-(CH 2) n-NR AR B。在一些實施例中，R A及R B皆係氫。在一些實施例中，R A及R B獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R A及R B中之一者係氫且R A及R B中之另一者係C 1-3烷基。在一些實施例中，C 1-3烷基係甲基。在一些實施例中，每一下標n為0。在一些實施例中，每一下標n為1。在一些實施例中，每一下標n為2。在一些實施例中，每一下標n為3、4、5或6。
在一些實施例中，每一R 2及R 3獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2及R 3相同。在一些實施例中，每一R 2及R 3獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2及R 3不同。
在一些實施例中，R 2係-(C=O) m-NR CR D。在一些實施例中，R 3係-(C=O) m-NR CR D。在一些實施例中，R C及R D皆係氫。在一些實施例中，R C及R D各自獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，C 1-3烷基係甲基。在一些實施例中，R C及R D中之一者係氫且R C及R D中之另一者係C 1-3烷基。在一些實施例中，每一下標m為0。在一些實施例中，每一下標m為1。
在一些實施例中，R 2係-(CH 2) q-NR ER F。在一些實施例中，R 3係-(CH 2) q-NR ER F。在一些實施例中，R E及R F皆係氫。在一些實施例中，R E及R F各自獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，C 1-3烷基係甲基。在一些實施例中，R E及R F中之一者係氫且R E及R F中之另一者係C 1-3烷基。在一些實施例中，每一下標q為0。在一些實施例中，每一下標q係1至6之整數。在一些實施例中，每一下標q為1。在一些實施例中，每一下標q為2。在一些實施例中，每一下標q為3、4、5或6。
在一些實施例中，R 3係-CO 2H。在一些實施例中，R 2係-CO 2H。
在一些實施例中，X A係-CH 2-。在一些實施例中，X A係-O-。在一些實施例中，X A係-S-。在一些實施例中，X A係-NH-。在一些實施例中，X A係-N(CH 3)-。
在一些實施例中，X B係2-16員伸雜烷基。在一些實施例中，X B係2-12員伸雜烷基。在一些實施例中，X B係2-10員伸雜烷基。在一些實施例中，X B係2-8員伸雜烷基。在一些實施例中，X B係4-8員伸雜烷基。在一些實施例中，伸雜烷基係直鏈的。在一些實施例中，伸雜烷基具支鏈。在一些實施例中，伸雜烷基係具支鏈的且具有1-4個甲基。在一些實施例中，伸雜烷基係具支鏈的且具有1或2個甲基。在一些實施例中，伸雜烷基經1-3個氟基取代。在一些實施例中，X B包括一或兩個氮原子。在一些實施例中，X B包括一或兩個側氧基。在一些實施例中，X B包括一個氮原子及一個側氧基。在一些實施例中，X B包括兩個氮原子及兩個側氧基。在一些實施例中，X B包括胺基甲酸酯。
在一些實施例中，Y及X B之共價連接包括醯胺。在一些實施例中，Y及X B之共價連接包括胺基甲酸酯。在一些實施例中，Y及X B之共價連接包括醚。
在一些實施例中，X B係
Figure 02_image035
，其中
Figure 02_image037
代表與X A之共價連接，且*代表與L (在存在時)或M 1之共價連接。在一些實施例中，X B係
Figure 02_image039
，其中
Figure 02_image041
代表與X A之共價連接，且*代表與L (在存在時)或M 1之共價連接。在一些實施例中，X B係
Figure 02_image043
，其中
Figure 02_image045
代表與X A之共價連接，且*代表與L (在存在時)或M 1之共價連接。在一些實施例中，X B係
Figure 02_image047
，其中
Figure 02_image049
代表與X A之共價連接，且*代表與L (在存在時)或M 1之共價連接。在一些實施例中，X B係
Figure 02_image051
，其中
Figure 02_image053
代表與X A之共價連接，且*代表與L (在存在時)或M 1之共價連接。在一些實施例中，X B係
Figure 02_image055
，其中
Figure 02_image057
代表與X A之共價連接，且*代表與L (在存在時)或M 1之共價連接。
在一些實施例中，X B係選自由下文結構組成之群，其中
Figure 02_image059
代表與X A之共價連接，且*代表與L (在存在時)或M 1之共價連接。
Figure 02_image061
在一些實施例中，X B及L中之一者經如本文所闡述之自PEG1至PEG72之PEG單元取代。在一些實施例中，X B及L各自經如本文所闡述之自PEG2至PEG72之獨立選擇之PEG單元取代。在一些實施例中，自PEG 1至PEG72之每一PEG單元可為PEG8至PEG12、PEG12至PEG24或PEG36至PEG72。在一些實施例中，自PEG 1至PEG72之每一PEG單元係PEG8至PEG24。
在一些實施例中，X B及L未經取代。
在一些實施例中，R 1係甲氧基；R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2；且X A係-O-。
在一些實施例中，L不存在且X A-X B-M 1係選自由以下組成之群：
Figure 02_image063
Figure 02_image065
及
Figure 02_image067
； 其中
Figure 02_image069
代表與式(I)之其他部分之共價連接。
在一些實施例中，X A-X B-L係選自：
Figure 02_image071
及
Figure 02_image073
； 其中
Figure 02_image075
代表與式(I)之其他部分之共價連接。
在一些實施例中，R 1係甲氧基且R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2。在一些實施例中，X A係-O-且X B係
Figure 02_image077
，其中
Figure 02_image079
代表與X A之共價連接且*代表與L (在存在時)或M 1之共價連接。在一些實施例中，R 1係甲氧基；R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2；X A係-O-；且X B係
Figure 02_image081
；其中
Figure 02_image083
代表與X A之共價連接且*代表與L (在存在時)或M 1之共價連接。在一些實施例中，R 1係甲氧基；R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2；X A係-O-；X B係
Figure 02_image085
；
Figure 02_image083
代表與X A之共價連接且*代表與L之共價連接；且下標a及下標y皆為0。
在一些實施例中，X B不存在。
在一些實施例中，下標p係2至8、2至6、2至4、4至8或6至8之整數。在一些實施例中，下標p為2、4、6或8。在一些實施例中，下標p為2。在一些實施例中，下標p為4。在一些實施例中，下標p為6。在一些實施例中，下標p為8。
在一些實施例中，X B不存在且L共價連接至X A。在一些實施例中，X B不存在且Y共價連接至X A。在一些實施例中，X B不存在且Y不存在，且W共價連接至X A。在一些實施例中，X B不存在，Y不存在，W不存在，且A共價連接至X A。
在一些實施例中，X B係2-16員伸雜烷基且L共價連接至X B。在一些實施例中，X B係2-16員伸雜烷基且Y共價連接至X B。在一些實施例中，X B係2-16員伸雜烷基，Y不存在，且W共價連接至X B。在一些實施例中，X B係2-16員伸雜烷基，Y不存在，W不存在，且A共價連接至X B。
在一些實施例中，W 1係-OC(=O)-且下標y為1。在一些實施例中，X A係-O-且X B及W 1不存在。在一些實施例中，X A係NH或-O-，X B不存在，且W 1係-OC(=O)。在一些實施例中，X A係-N(CH 3)-，X B不存在，且W 1係-OC(=O)。在一些實施例中，X A係-S-，X B不存在，且W 1係-OC(=O)。在一些實施例中，W 1係-OC(=O)-且X B經由-O-或-NH-共價連接至W。
在一些實施例中，A共價連接至M 1。在一些實施例中，在下標a為0時，W共價連接至M 1。在一些實施例中，在下標a為0且下標w為0時，Y共價連接至M 1。在一些實施例中，在下標a、y及w各自為0時，X B共價連接至M 1。
在一些實施例中，ADC具有下式：
Figure 02_image088
、
Figure 02_image090
或
Figure 02_image092
， 其中： Ab係抗體； R 1、R 2、R 3、X A、X B及L係如上文結合式(I)所定義；且 每一下標p獨立地係2至8之整數。
一些實施例提供具有下式之抗體藥物結合物(ADC)： Ab-(S*-(D')) p 其中： Ab係抗體； 每一S*係來自抗體之半胱胺酸殘基之硫原子； D'係藥物單元，其係如下文所闡述之式(IV)化合物之基團；且 下標p係2至8之整數。
在一些實施例中，式(IV)化合物之基團包括式(IV)內之取代基中之M基團。在一些實施例中，藥物單元D'具有以下結構：
Figure 02_image094
、
Figure 02_image096
或
Figure 02_image098
, 其中***指示與S*之連接且其他變量係如下文結合式(IV)所定義。
在一些實施例中，ADC具有下式：
Figure 02_image100
、
Figure 02_image102
或
Figure 02_image104
, 其中： Ab係抗體； 每一下標p獨立地係2至8之整數；且 其他變量係如下文結合式(IV)所定義。
一些實施例提供選自由以下組成之群之抗體藥物結合物(ADC)：
Figure 02_image106
；
Figure 02_image108
；
Figure 02_image110
；
Figure 02_image112
；
Figure 02_image114
；
Figure 02_image116
；
Figure 02_image118
；
Figure 02_image120
；
Figure 02_image122
；
Figure 02_image124
；
Figure 02_image126
；
Figure 02_image128
；
Figure 02_image130
Figure 02_image132
Figure 02_image134
Figure 02_image136
Figure 02_image138
Figure 02_image140
Figure 02_image142
及其醫藥上可接受之鹽， 其中： Ab係抗體；且 每一下標p獨立地係2至8之整數。 抗體
在一些實施例中，抗體係多株抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係嵌合抗體。在一些實施例中，抗體係人類化抗體。在一些實施例中，抗體係全人類抗體。在一些實施例中，抗體係抗原結合片段。
本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上均質抗體之群體獲得之抗體，亦即，除可少量存在之可能天然突變外，構成該群體之個別抗體皆相同。單株抗體具有高度特異性，其針對單一抗原位點。修飾詞「單株」指示抗體之特徵在於自實質上同質之抗體群體獲得，且不應理解為需要藉由任何特定方法來產生該抗體。
有用多株抗體係衍生自免疫化動物之血清之抗體分子之異質群體。有用單株抗體係特定抗原決定子(例如癌細胞抗原、蛋白質、肽、碳水化合物、化學物、核酸或其片段)之抗體之均質群體。可藉由使用業內已知之任何技術來製備所關注抗原之單株抗體(mAb)，該技術可藉由培養中之連續細胞系來產生抗體分子。
有用單株抗體包含(但不限於)人類單株抗體、人類化單株抗體或嵌合人類-小鼠(或其他物種)單株抗體。抗體包含全長抗體及其抗原結合片段。人類單株抗體可藉由業內已知之諸多技術中之任一者製得(例如Teng等人，1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA.80:7308-7312；Kozbor等人，1983, Immunology Today4:72-79；及Olsson等人，1982, Meth. Enzymol. 92:3-16)。
在一些實施例中，抗體包含特異性結合至靶細胞(例如癌細胞抗原)之功能活性抗體片段、衍生物或類似物或結合至癌細胞或基質之其他抗體。就此而言，「功能活性」意指，片段、衍生物或類似物能夠特異性結合至靶細胞。為確定結合抗原之CDR序列，通常將含有CDR序列之合成肽用於抗原結合分析(藉由業內已知之任何結合分析方法，例如Biacore分析)中( 例如參見Kabat等人，1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，National Institute of Health, Bethesda, Md；Kabat E等人，1980, J. Immunology125(3):961-969)。
另外，通常使用標準重組DNA技術獲得之包括人類及非人類部分之重組抗體(例如嵌合及人類化單株抗體)係有用抗體。嵌合抗體係不同部分衍生自不同動物物種之分子，例如具有衍生自鼠類單株人類免疫球蛋白之可變區及衍生自人類免疫球蛋白之恆定區者。 例如參見美國專利第4,816,567號；及美國專利第4,816,397號，其全部內容以引用方式併入本文中。人類化抗體係來自非人類物種之抗體分子，其具有一或多個來自非人類物種之CDR及來自人類免疫球蛋白分子之框架區。 例如參見美國專利第5,585,089號，其全部內容以引用方式併入本文中。該等嵌合及人類化單株抗體可藉由業內已知之重組DNA技術產生，例如使用以下文獻中所闡述之方法：國際公開案第WO 87/02671號；歐洲專利公開案第0 184 187號；歐洲專利公開案第0 171 496號；歐洲專利公開案第0 173 494號；國際公開案第WO 86/01533號；美國專利第4,816,567號；歐洲專利公開案第012 023號；Berter等人，1988, Science240:1041-1043；Liu等人，1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA84:3439-3443；Liu等人，1987, J. Immunol. 139:3521-3526；Sun等人，1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA84:214-218；Nishimura等人，1987, Cancer. Res.47:999-1005；Wood等人，1985, Nature314:446-449；及Shaw等人，1988, J. Natl.Cancer Inst. 80:1553-1559；Morrison, 1985, Science229:1202-1207；Oi等人，1986, BioTechniques4:214；美國專利第5,225,539號；Jones等人，1986, Nature321: 522-525；Verhoeyan等人，1988, Science239:1534；及Beidler等人，1988, J. Immunol.141:4053-4060，該等文獻中之每一者之全部內容以引用方式併入本文中。
在一些實施例中，抗體係完全人類抗體。在一些實施例中，使用不能表現內源性免疫球蛋白重鏈及輕鏈基因但能夠表現人類重鏈及輕鏈基因之轉基因小鼠來產生抗體。
在一些實施例中，抗體係完整或完全還原之抗體。術語「完全還原」欲指所有4個鏈間二硫鍵聯皆已還原以提供8個可連接至連接體(L)之硫醇之抗體。
與抗體之連接可經由來自天然及/或經改造半胱胺酸殘基或來自經改造以參與與相應連接體中間體之環加成反應(例如點擊反應)之胺基酸殘基之硫醚鍵聯。 例如參見Maerle等人， PLOS One2019: 14(1); e0209860。在一些實施例中，抗體係完整或完全還原之抗體，或係具有經可參與(例如)點擊化學或其他環加成反應(用於連接如本文所闡述之ADC之其他組分，例如狄爾斯-阿爾德反應(Diels-Alder reaction)或其他[3+2]或[4+2]環加成)之官能基修飾之經改造半胱胺酸基團之抗體。
特異性結合至癌細胞抗原之抗體市面有售或藉由熟習此項技術者已知之任何方法(例如化學合成或重組表現技術)來產生。編碼特異性結合至癌細胞抗原之抗體之核苷酸序列可(例如)自基因庫資料庫或類似資料庫、文獻公開案或藉由常規選殖及定序來獲得。
在一些實施例中，抗體可用於治療癌症(例如由FDA及/或EMA批準之抗體)。特異性結合至癌細胞抗原之抗體市面有售或藉由熟習此項技術者已知之任何方法(例如重組表現技術)來產生。編碼特異性結合至癌細胞抗原之抗體之核苷酸序列可(例如)自基因庫資料庫或類似資料庫、文獻公開案或藉由常規選殖及定序來獲得。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至表現於淋巴球上之受體或受體複合物。受體或受體複合物可包括免疫球蛋白基因超家族成員、TNF受體超家族成員、整聯蛋白、細胞介素受體、趨化介素受體、主要組織相容性蛋白、凝集素或補體控制蛋白。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至癌細胞抗原。應理解，ADC中之抗體組分係呈殘基形式之抗體，從而本文所闡述之ADC結構中之「Ab」納入抗體結構。
可用於治療癌症之抗體及特異性結合至腫瘤相關抗原之抗體之非限制性實例揭示於以下文獻中：Franke, A. E., Sievers, E. L.及Scheinberg, D. A., 「Cell surface receptor-targeted therapy of acute myeloid leukemia: a review」 Cancer Biother Radiopharm. 2000,15, 459‑76；Murray, J. L., 「Monoclonal antibody treatment of solid tumors: a coming of age」 Semin Oncol. 2000, 27, 64‑70；Breitling, F.及Dubel, S., Recombinant Antibodies, John Wiley, and Sons, New York, 1998，該等文獻中之每一者之全部內容以引用方式併入本文中。
結合至癌細胞抗原及免疫細胞抗原中之一或多者之抗體之實例提供於下文中。
可用於治療癌症之靶抗原及相關抗體以及特異性結合至癌細胞抗原(亦稱為腫瘤抗原)之抗體之非限制性實例包含B7-DC (例如目錄號：PA5-20344)；BCMA；B7-H3 (例如依諾妥珠單抗(enoblituzumab)、奧馬他單抗(omburtamab)、MGD009、MGC018、DS-7300)；B7-H4 (例如目錄號：14-5949-82)；B7-H6 (例如目錄號：12-6526-42)；B7-H7；C5補體(例如BCD-148; CAN106)；CA-125；CA9 (例如吉瑞妥昔單抗(girentuximab))；CCR8 (例如JTX-1811)；CLEC12A (例如特迪妥單抗(tepoditamab))；CSPG4 (例如美國專利第10,822,427號)；CCNB1；DDR1；de2-7 EGFR (例如MAb 806)；DPEP1；DR4 (例如馬帕木單抗(mapatumumab))；內皮唾液酸蛋白(例如恩妥昔單抗(ontuxizumab))；ENPP1；EPCAM(例如阿德木單抗(adecatumumab))；EPHA2；ERBB2 (例如曲妥珠單抗(trastuzumab))；ERBB3；ERVMER34_1；FAP(例如西羅珠單抗(sibrotuzumab))；FasL；FGFR2 (例如阿普盧妥單抗(aprutumab))；FGFR4 (例如MM-161)；FLT3 (例如4G8SDIEM)；FBP；FucGM1 (例如BMS-986012)；FZD8；G250；GAGE；GD2 (例如地妥昔單抗(dinutuximab))；gpNMB (例如格萊巴姆單抗(glembatumumab))；GPR87；GUCY2C (例如英度妥單抗(indusatumab))；HAVCR2；IDO1；ITGB6；ITGB8；L1CAM (例如JCAR023)；MRC1 (例如ThermoFisher目錄號：12-2061-82)；ML-IAP (例如88C570，ThermoFisher目錄號：40958)；NT5E (例如7G2，ThermoFisher目錄號：41-0200)；OY-TES1；p53；p53突變體；PAX5；PDPN (例如ThermoFisher目錄號：14-5381-82)；VSIR (例如ThermoFisher目錄號：PA5-52493)；Dectin2 (例如ThermoFisher目錄號：MA5-16250)；PAX3 (例如GT1210，ThermoFisher目錄號：MA5-31583)；唾液醯基-湯姆森新抗原(Sialyl-Thomsen-nouveau-antigen) (例如Eavarone等人， PLoS One, 2018；13(7): e0201314)；PDGFR-B (例如利努蘇單抗(rinucumab))；ADAM12 (例如目錄號：14139-1-AP)；ADAM9 (例如IMGC936)；AFP (例如ThermoFisher目錄號：PA5-25959)；AGR2 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-34517)；AKAP-4 (例如目錄號：PA5-52230)；雄激素受體(例如ThermoFisher目錄號：MA5-13426)；ALPP (例如目錄號：MA5-15652)；CD44 (例如RG7356)；AMHR2 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-13902)；ANTXR1 (例如目錄號：MA1-91702)；ARTN (例如ThermoFisher目錄號：PA5-47063)；αVβ6；CA19-9 (例如AbGn-7；MVT-5873)；癌胚抗原(例如阿西莫單抗(arcitumomab)、瑟妥珠單抗(cergutuzumab)、阿姆介白素(amunaleukin)、拉貝珠單抗(labetuzumab))；CD115 (例如艾克利單抗(axatilimab)、卡比利珠單抗(cabiralizumab)、艾瑪土珠單抗(emactuzumab))；CD137 (例如ADG106、CTX-471)；CD147 (例如加維莫單抗(gavilimomab)、美妥珠單抗(metuzumab))；CD155 (例如美國公開案第2018/0251548號)；CD274 (例如阿得貝利單抗(adebrelimab)、阿替珠單抗(atezolizumab)、加里烏利單抗(garivulimab))；CDCP1 (例如RG7287)；CDH3 (例如PCA062)；CDH6 (例如HKT288)；CEACAM1；CEACAM6；CLDN18.1 (例如佐洛昔單抗(zolbetuximab))；CLDN18.2 (例如佐洛昔單抗)；CLPTM1L；CS-1 (例如替加珠單抗(tigatuzumab))；GD3 (例如米妥莫單抗(mitumomab))；HLA-G (例如TTX-080)；IL1RAP (例如尼達利單抗(nidanilimab))；LAG-3 (例如安沙利單抗(encelimab))；LY6G6D (例如PA5-23303)；LYPD1 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-26749)；MAD-CT-2；MAGEA3 (例如ThermoFisher目錄號：60054-1-IG)；MAGEA4 (例如目錄號：MA5-26117)；MAGEC2 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-64010)；MLANA (例如目錄號：MA5-15237)；MELTS (例如ThermoFisher目錄號：H00004241-M04A)；MSLN (例如5B2，目錄號：MA5-11918)；MUC1 (例如MH1 (CT2)，ThermoFisher目錄號：MA5-11202)；MUC5AC (例如45M1，目錄號：MA5-12178)；MYCN (例如NCM-II 100，ThermoFisher目錄號：MA1-170)；NCAM1 (例如ThermoFisher目錄號：MA5-11563)；黏連蛋白-4 (例如恩佛土單抗(enfortumab))；NY-BR-1 (例如NY-BR-1 No. 2，目錄號：MA5-12645)；PSMA (例如BAY 2315497)；PSA (例如ThermoFisher目錄號：PA1-38514；Daniels-Wells等人， BMC Cancer, 2013；13:195)；PSCA (例如AGS-1C4D4)；PTK7 (例如考非妥珠單抗(cofetuzumab))；PVRIG；Ras突變體(例如Shin等人， Sci Adv.2020；6(3):eaay2174)；RET (例如WO2020210551)；RGS5 (例如TF-TA503075)；RhoC (例如ThermoFisher目錄號：PA5-77866)；ROR2 (例如BA3021)；ROS1 (例如WO2019107671)；SART3 (例如TF 18025-1-AP)；SLC12A2 (例如ThermoFisher目錄號：13884-1-AP)；SLC38A1 (例如ThermoFisher目錄號：12039-1-AP)；SLC39A6 (例如拉地珠單抗(ladiratuzumab))；SLC44A4 (例如ASG-5ME)；SLC7A11 (例如ThermoFisher目錄號：PA1-16893)；SLITRK6 (例如斯妥尤單抗(sirtratumab))；SSX2 (例如ThermoFisher目錄號：MA5-24971)；存活素(例如PA1-16836)；TACSTD2 (例如PA5-47074)；TAG-72 (例如MA1-25956)；TIGIT (例如依替吉單抗(etigilimab))；TM4SF5 (例如18239-1-AP)；TMPRSS11D (例如PA5-30927)；TNFRSF12 (例如BAY-356)；TRAIL (例如目錄號：12-9927-42)；Trem2 (例如PY314)；TRP-2 (例如PA5-52736)；uPAR (例如ATN-658)；UPK1B (例如ThermoFisher目錄號：PA5-56863)；UPK2 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-60318)；UPK3B (例如ThermoFisher目錄號：PA5-52696)；VEGF (例如GNR-011)；VEGFR2 (例如金妥昔單抗(gentuximab))；CD44 (例如RG7356)；WT1 (例如ThermoFisher目錄號：MA5-32215)；XAGE1 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-46413)；CTLA4 (例如伊匹單抗(ipilimumab))；精子蛋白17 (例如BS-5754R)；TLR2/4/1 (例如托拉利單抗(tomaralimab))；B7-1 (例如加利昔單抗(galiximab))；ANXA1 (例如目錄號：71-3400)；BCR-ABL；CAMPATH-1 (例如阿倫單抗(alemtuzumab)、ALLO-647、ANT1034)；CD123 (例如BAY-943、CSL360)；CD19 (例如ALLO-501)；CD20 (例如地伏利單抗(divozilimab)、伊土莫單抗(ibritumomab))；CD30 (例如伊妥木單抗(iratumumab))；CD33 (例如林妥珠單抗(lintuzumab)、BI 836858、AMG 673)；CD352 (例如SGN-CD352A)；CD37 (例如利洛托單抗(lilotomab)、GEN3009)；CD40 (例如達西珠單抗(dacetuzumab)、魯卡木單抗(lucatumumab))；CD45 (例如阿帕米單抗(apamistamab))；CD48 (例如SGN-CD48A)；CXCR4 (例如武羅魯單抗(ulocuplumab))；ETV6-AML (例如目錄號：PA5-81865)；ROR1 (例如西爾珠單抗(cirmtuzumab))；CD74 (例如米拉珠單抗(milatuzumab))；SIT1 (例如PA5-53825)；SLAMF7 (例如埃羅妥珠單抗(elotuzumab))；Axl (例如BA3011、替衛妥單抗(tilvestamab))；Siglecs 1-16 (例如參見Angata等人，Trends Pharmacol Sci. 2015；36(10): 645-660)；SIRPa (例如目錄號：17-1729-42)；SIRPg (例如PA5-104381)；OX40 (例如ABM193)；PROM1 (例如目錄號：14-1331-82)；TMEM132A (例如目錄號：PA5-62524)；TMEM40 (例如PA5-60636)；PD-1 (例如巴替利單抗(balstilimab)、布格利單抗(budigalimab)、傑諾利單抗(geptanolimab))；ALK (例如DLX521)；CCR4 (例如AT008；莫加珠單抗(mogamulizumab)-kpkc)；CD27 (例如瓦利珠單抗(varlilumab))；CD278 (例如費拉地利單抗(feladilimab)、伏派利單抗(vopratelimab))；CD32 (例如mAb 2B6)；CD47 (例如來普利單抗(letaplimab)、莫洛利單抗(magrolimab))；及CD70 (例如庫妥珠單抗(cusatuzumab))。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至與實體腫瘤及/或血液學癌症有關之癌細胞抗原。靶抗原及特異性結合至與實體腫瘤及/或血液學癌症靶抗原有關之癌細胞抗原之相關抗體之非限制性實例包含Axl (例如BA3011；替衛妥單抗)；B7-H3 (例如依諾妥珠單抗、奧馬他單抗、MGD009、MGC018、DS-7300)；B7-H4 (例如目錄號：14-5949-82)；B7-H6 (例如目錄號：12-6526-42)；B7-H7；Siglecs 1-16 (例如參見Angata等人， Trends Pharmacol Sci.2015；36(10): 645-660)；SIRPa (例如目錄號：17-1729-42)；SIRPg (例如PA5-104381)；OX40 (例如ABM193)；PROM1 (例如目錄號：14-1331-82)；TMEM132A (例如目錄號：PA5-62524)；TMEM40 (例如PA5-60636)；PD-1 (例如巴替利單抗、布格利單抗、傑諾利單抗)；ALK (例如DLX521)；CCR4 (例如AT008；莫加珠單抗-kpkc)；CD27 (例如瓦利珠單抗)；CD278 (例如費拉地利單抗、伏派利單抗)；CD32 (例如mAb 2B6)；CD47 (例如來普利單抗、莫洛利單抗)；及CD70 (例如庫妥珠單抗)。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至與實體腫瘤有關之癌細胞抗原。靶抗原及特異性結合至實體腫瘤相關靶抗原之相關抗體之非限制性實例包含PAX3 (例如GT1210，ThermoFisher目錄號：MA5-31583)；唾液醯基-湯姆森新抗原(例如Eavarone等人， PLoS One. 2018；13(7): e0201314)；PDGFR-B (例如利努蘇單抗)；ADAM12 (例如目錄號：14139-1-AP)；ADAM9 (例如IMGC936)；AFP (例如ThermoFisher目錄號：PA5-25959)；AGR2 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-34517)；AKAP-4 (例如目錄號：PA5-52230)；雄激素受體(例如ThermoFisher目錄號：MA5-13426)；ALPP (例如目錄號：MA5-15652)；CD44 (例如RG7356)；AMHR2 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-13902)；ANTXR1 (例如目錄號：MA1-91702)；ARTN (例如ThermoFisher目錄號：PA5-47063)；αVβ6；CA19-9 (例如AbGn-7；MVT-5873)；癌胚抗原(例如阿西莫單抗、瑟妥珠單抗、阿姆介白素、拉貝珠單抗)；CD115 (例如艾克利單抗、卡比利珠單抗、艾瑪土珠單抗)；CD137 (例如ADG106、CTX-471)；CD147 (例如加維莫單抗、美妥珠單抗)；CD155 (例如美國公開案第2018/0251548號)；CD274 (例如阿得貝利單抗、阿替珠單抗、加里烏利單抗)；CDCP1 (例如RG7287)；CDH3 (例如PCA062)；CDH6 (例如HKT288)；CEACAM1；CEACAM6)；CLDN18.1 (例如佐洛昔單抗)；CLDN18.2 (例如佐洛昔單抗)；CLPTM1L；CS-1 (例如替加珠單抗)；GD3 (例如米妥莫單抗)；HLA-G (例如TTX-080)；IL1RAP (例如尼達利單抗)；LAG-3 (例如安沙利單抗)；LY6G6D (例如PA5-23303)；LYPD1 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-26749)；MAD-CT-2；MAGEA3 (例如ThermoFisher目錄號：60054-1-IG)；MAGEA4 (例如目錄號：MA5-26117)；MAGEC2 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-64010)；MLANA (例如目錄號：MA5-15237)；MELTF (例如ThermoFisher目錄號：H00004241-M04A)；MSLN (例如5B2，目錄號：MA5-11918)；MUC1 (例如MH1 (CT2)，ThermoFisher目錄號：MA5-11202)；MUC5AC (例如45M1，目錄號：MA5-12178)；MYCN (例如NCM-II 100，ThermoFisher目錄號：MA1-170)；NCAM1 (例如ThermoFisher目錄號：MA5-11563)；Nectin-4 (例如恩佛土單抗)；NY-BR-1 (例如NY-BR-1 No. 2，目錄號：MA5-12645)；PSMA (例如BAY 2315497)；PSA (例如ThermoFisher目錄號：PA1-38514；Daniels-Wells等人， BMC Cancer2013；13:195)；PSCA (例如AGS-1C4D4)；PTK7 (例如考非妥珠單抗)；PVRIG；Ras突變體(例如Shin等人， Sci Adv.2020；6(3):eaay2174)；RET (例如WO2020210551)；RGS5 (例如TF-TA503075)；RhoC (例如ThermoFisher目錄號：PA5-77866)；ROR2 (例如BA3021)；ROS1 (例如WO2019107671)；SART3 (例如TF 18025-1-AP)；SLC12A2 (例如ThermoFisher目錄號：13884-1-AP)；SLC38A1 (例如ThermoFisher目錄號：12039-1-AP)；SLC39A6 (例如拉地珠單抗)；SLC44A4 (例如ASG-5ME)；SLC7A11 (例如ThermoFisher目錄號：PA1-16893)；SLITRK6 (例如斯妥尤單抗)；SSX2 (例如ThermoFisher目錄號：MA5-24971)；存活素(例如PA1-16836)；TACSTD2 (例如PA5-47074)；TAG-72 (例如MA1-25956)；TIGIT (例如依替吉單抗)；TM4SF5 (例如18239-1-AP)；TMPRSS11D (例如PA5-30927)；TNFRSF12 (例如BAY-356)；TRAIL (例如目錄號：12-9927-42)；Trem2 (例如PY314)；TRP-2 (例如PA5-52736)；uPAR (例如ATN-658)；UPK1B (例如ThermoFisher目錄號：PA5-56863)；UPK2 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-60318)；UPK3B (例如ThermoFisher目錄號：PA5-52696)；VEGF (例如GNR-011)；VEGFR2 (例如金妥昔單抗)；CD44 (例如RG7356)；WT1 (例如ThermoFisher目錄號：MA5-32215)；XAGE1 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-46413)；及CTLA4 (例如伊匹單抗)。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至與血液學癌症有關之癌細胞抗原。靶抗原及特異性結合至血液學癌細胞靶抗原之相關抗體之非限制性實例包含精子蛋白17 (例如BS-5754R)；TLR2/4/1 (例如托拉利單抗)；B7-1 (例如加利昔單抗)；ANXA1 (例如目錄號：71-3400)；BCR-ABL；CAMPATH-1 (例如阿倫單抗、ALLO-647、ANT1034)；CD123 (例如BAY-943、CSL360)；CD19 (例如ALLO-501)；CD20 (例如地伏利單抗、伊土莫單抗)；CD30 (例如伊妥木單抗)；CD33 (例如林妥珠單抗、BI 836858、AMG 673)；CD352 (例如SGN-CD352A)；CD37 (例如利洛托單抗、GEN3009)；CD40 (例如達西珠單抗、魯卡木單抗)；CD45 (例如阿帕米單抗)；CD48 (例如SGN-CD48A)；CXCR4 (例如武羅魯單抗)；ETV6-AML (例如目錄號：PA5-81865)；ROR1 (例如西爾珠單抗)；CD74 (例如米拉珠單抗)；SIT1 (例如PA5-53825)；及SLAMF7 (例如埃羅妥珠單抗)。
在一些實施例中，可使用特異性結合至靶抗原(例如與疾病或病症有關之抗原)之抗體。特異性結合至靶抗原(例如與疾病或病症有關之抗原)之抗體市面有售或可藉由熟習此項技術者已知之任何方法(例如重組表現技術)來產生。編碼特異性結合至靶抗原(例如與疾病或病症有關之抗原)之抗體之核苷酸序列可(例如)自基因庫資料庫或類似資料庫、文獻公開案或藉由常規選殖及定序來獲得。
靶抗原及特異性結合至靶抗原(例如與疾病或病症有關之抗原或與免疫細胞有關之抗原)之相關抗體之非限制性實例包含CD163 (例如TBI 304H)；TIGIT (例如依替吉單抗)；DCSIGN (例如參見國際公開案第WO2018134389號)；IFNAR1 (例如法拉莫單抗(faralimomab))；ASCT2 (例如伊達妥單抗(idactamab))；ULBP1/2/3/4/5/6 (例如PA5-82302)；CLDN1 (例如INSERM抗密連蛋白-1)；CLDN2 (例如參見國際公開案第WO2018123949號)；IL-21R (例如PF-05230900)；DCIR；DCLK1 (例如參見國際公開案第WO2018222675號)；Dectin1 (例如參見美國專利第9,045,542號)；GITR (例如拉格芙利單抗(ragifilimab))；ITGAV (例如阿比妥珠單抗(abituzumab))；LY9 (例如PA5-95601)；MICA (例如1E2C8，目錄號：66384-1-IG)；MICB (例如目錄號：MA5-29422)；NOX1 (例如目錄號：PA5-103220)；CD2 (例如BTI-322、西利珠單抗(siplizumab))；CD247 (例如AFM15)；CD25 (例如巴利昔單抗(basiliximab))；CD28 (例如REGN5668)；CD3 (例如奧昔組單抗(otelixizumab)、維西珠單抗(visilizumab))；CD38 (例如菲澤妥單抗(felzartamab)、AMG 424)；CD3E (例如福雷蘆單抗(foralumab)、替利組單抗(teplizumab))；CD5 (例如MAT 304、阿佐莫單抗(zolimomab aritox))；ALPPL2 (例如目錄號：PA5-22336)；B7-2 (例如目錄號：12-0862-82)；B7-H3 (例如依諾妥珠單抗、奧馬他單抗、MGD009、MGC018、DS-7300)；B7-H4 (例如目錄號：14-5949-82)；B7-H6 (例如目錄號：12-6526-42)；B7-H7；BAFF-R (例如目錄號：14-9117-82)；BMPR2；BORIS；CD112 (例如參見美國公開案第20100008928號)；CD24 (例如參見美國專利第8,614,301號)；CD244 (例如 R&D AF1039)；CD30L (例如參見美國專利第9926373號)；CD3D；CD3G；CD79A (例如參見國際公開案第WO 2020252110號)；CD83 (例如CBT004)；CD97；CDH17 (例如參見國際公開案第WO 2018115231號)；CLDN16；CLDN19；CYP1B1；DPEP3；DPP4；DSG2 (例如參見美國專利第10,836,823號)；EPHA受體；表皮生長因子；FAS；FGFR1 (例如RG7992)；FGFR3 (例如沃凡妥單抗(vofatamab))；FN1；FOLR1 (例如法利珠單抗(farletuzumab))；FSHR；FZD5；GM2 (例如BIW-8962)；GM3 (例如拉妥木單抗(racotumomab))；GPA33 (例如KRN330)；GPC3 (例如考曲妥珠單抗(codrituzumab))；HAS3；HLA-E；HLA-F；HLA-DR；ICAM1；IFNAR2；IL13Ra2；IL-5R (例如貝那利珠單抗(benralizumab))；KISS1R；LAMP1；LAYN；LCK；天門冬醯胺內肽酶；LILRB2；LILRB4；LMP2；MAD-CT-1；MAGEA1 (例如目錄號：MA5-11338)；MerTk (例如DS5MMER，目錄號：12-5751-82)；MFSD13A；hTERT；gp100；Fas相關抗原1；金屬蛋白酶；巨噬細胞誘導型C型凝集素(Mincle) (例如OTI2A8，目錄號：TA505101)；NA17；NY-ESO-1 (例如E978m，目錄號：35-6200)；聚唾液酸(例如參見Watzlawik等人， J Nat Sci.2015；1(8):e141)；PR1；肉瘤易位斷點；SLC10A2 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-18990)；SLC17A2 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-106752)；SLC39A5 (例如ThermoFisher目錄號：MA5-27260)；SLC6A15 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-52586)；SLC6A6 (例如ThermoFisher目錄號：PA5-53431)；SLC7A5；及CALCR (例如參見國際公開案第WO 2015077826號)。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至與貧血有關之抗原。特異性結合至與貧血有關之抗原之抗體之非限制性實例包含CD163 (例如TBI 304H)。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至與病毒感染有關之抗原。靶抗原及特異性結合至與病毒感染有關之抗原之相關抗體之非限制性實例包含DCSIGN (例如參見國際公開案第WO2018134389號) IFNAR1 (例如法拉莫單抗)；ASCT2 (例如伊達妥單抗)；ULBP1/2/3/4/5/6 (例如PA5-82302)；及CLDN1 (例如INSERM抗密連蛋白-1)。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至與自體免疫疾病有關之抗原。靶抗原及特異性結合至與自體免疫疾病有關之抗原之相關抗體之非限制性實例包含CLDN2 (例如參見國際公開案第WO 2018123949號)；IL-21R (例如PF-05230900)；DCIR；DCLK1 (例如參見WO2018222675)；Dectin1 (例如參見美國專利第9,045,542號)；GITR (例如拉格芙利單抗)；ITGAV (例如阿比妥珠單抗)；LY9 (例如PA5-95601)；MICA  (例如1E2C8，目錄號：66384-1-IG)；MICB (例如目錄號：MA5-29422)；NOX1 (例如目錄號：PA5-103220)；CD2 (例如BTI-322、西利珠單抗)；CD247 (例如AFM15)；CD25 (例如巴利昔單抗)；CD28 (例如REGN5668)；CD3 (例如奧昔組單抗、維西珠單抗)；CD38 (例如菲澤妥單抗、AMG 424)；CD3E (例如福雷蘆單抗、替利組單抗)；及CD5 (例如MAT 304、阿佐莫單抗)。
在一些實施例中，抗體係非靶向抗體，例如非結合或對照抗體。
在一些實施例中，抗原係CD30。在一些實施例中，抗體係結合至CD30之抗體或抗原結合片段，如國際專利公開案第WO 02/43661號中所闡述。在一些實施例中，抗CD30抗體係cAC10，其闡述於國際專利公開案第WO 02/43661號中。cAC10亦稱為貝倫妥單抗(brentuximab)。在一些實施例中，抗CD30抗體包括cAC10之CDR。在一些實施例中，CDR係如藉由Kabat編號方案所定義。在一些實施例中，CDR係如藉由Chothia編號方案所定義。在一些實施例中，CDR係如藉由IMGT編號方案所定義。在一些實施例中，CDR係如藉由AbM編號方案所定義。在一些實施例中，抗CD30抗體包括分別包括SEQ ID NO: 1、2、3、4、5及6之胺基酸序列之CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，抗CD30抗體包括：重鏈可變區，其包括與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包括與SEQ ID NO: 8之胺基酸序列至少95%至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，抗CD30抗體包括含有SEQ ID NO: 9或SEQ ID NO: 10之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之輕鏈。
在一些實施例中，本文所提供之抗體結合至EphA2。在一些實施例中，抗體包括分別包括SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及17之胺基酸序列之CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，抗EphA2抗體包括：重鏈可變區，其包括與SEQ ID NO: 18之胺基酸序列至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包括與SEQ ID NO: 19之胺基酸序列至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，抗EphA2抗體包括含有SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，抗EphA2抗體包括含有SEQ ID NO: 23或SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，抗EphA2抗體包括含有SEQ ID NO: 26或SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，抗體係h1C1或1C1。 序列表
SEQ ID NO 說明 序列
1 cAC10 CDR-H1 DYYIT
2 cAC10 CDR-H2 WIYPGSGNTKYNEKFKG
3 cAC10 CDR-H3 YGNYWFAY
4 cAC10 CDR-L1 KASQSVDFDGDSYMN
5 cAC10 CDR-L2 AASNLES
6 cAC10 CDR-L3 QQSNEDPWT
7 cAC10 VH QIQLQQSGPEVVKPGASVKISCKASGYTFTDYYITWVKQKPGQGLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGKATLTVDTSSSTAFMQLSSLTSEDTAVYFCANYGNYWFAYWGQGTQVTVSA
8 cAC10 VL DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDFDGDSYMNWYQQKPGQPPKVLIYAASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQQSNEDPWTFGGGTKLEIK
9 cAC10 HC QIQLQQSGPEVVKPGASVKISCKASGYTFTDYYITWVKQKPGQGLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGKATLTVDTSSSTAFMQLSSLTSEDTAVYFCANYGNYWFAYWGQGTQVTVSAAST KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
10 cAC10 HC v2 QIQLQQSGPEVVKPGASVKISCKASGYTFTDYYITWVKQKPGQGLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGKATLTVDTSSSTAFMQLSSLTSEDTAVYFCANYGNYWFAYWGQGTQVTVSAAST KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
11 cAC10 LC DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDFDGDSYMNWYQQKPGQPPKVLIYAASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQQSNEDPWTFGGGTKLEIKR TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
12 h1C1 CDR-H1 HYMMA
13 h1C1 CDR-H2 RIGPSGGPTHYADSVKG
14 h1C1 CDR-H3 YDSGYDYVAVAGPAEYFQH
15 h1C1 CDR-L1 RASQSISTWLA
16 h1C1 CDR-L2 KASNLHT
17 h1C1 CDR-L3 QQYNSYSRT
18 h1C1 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSS
19 h1C1 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTEFSLTISGLQPDDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIK
20 h1C1 HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
21 h1C1 HC v2 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
22 h1C1 LC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTEFSLTISGLQPDDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
23 h1C1 mIgG2a HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
24 h1C1 mIgG2a HC v2 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPG
25 h1C1 mIgG2a LC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTEFSLTISGLQPDDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
26 h1C1 mIgG2a LALAPG HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNAAGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLGAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
27 h1C1 mIgG2a LALAPG HC v2 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNAAGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLGAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPG
28 h1C1 mIgG2a LALAPG LC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTEFSLTISGLQPDDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
式(II)化合物
一些實施例提供式(II)化合物：
Figure 02_image144
(II) 或其醫藥上可接受之鹽，其中： M係琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺； R 1係氫、羥基、C 1-6烷氧基、-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B或PEG2至PEG4； 每一R 2及R 3獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F； 每一R A、R B、R C、R D、R E及R F獨立地係氫或C 1-3烷基； 每一下標n獨立地係0至6之整數； 每一下標m獨立地係0或1； 每一下標q獨立地係0至6之整數； X A係-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X B不存在或係2-16員伸雜烷基； X B、M及L各自獨立地視情況經自PEG1至PEG72之PEG單元取代；且 L係如本文所闡述之可選連接體。
在一些實施例中，式(II)化合物具有以下結構：
Figure 02_image146
(II) 或其醫藥上可接受之鹽，其中： R 1係氫、羥基、C 1-6烷氧基、-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B或PEG2至PEG4； 每一R 2及R 3獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F； 每一R A、R B、R C、R D、R E及R F獨立地係氫或C 1-3烷基； 每一下標n獨立地係0至6之整數； 每一下標m獨立地係0或1； 每一下標q獨立地係0至6之整數； X A係-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X B不存在或係2-16員伸雜烷基； L係具有式-(A) a-(W) w-(Y) y-之連接體，其中： A係視情況經1-3個R a1取代之C 2-20伸烷基或視情況經1-3個R b1取代之2至40員伸雜烷基； 每一R a1獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R b1獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R d1及R e1獨立地係氫或C 1-3烷基； W具有1-12個胺基酸或具有以下結構：
Figure 02_image148
或
Figure 02_image150
； 其中Su係糖部分； -O A-代表醣苷鍵； 每一R g獨立地係氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或係-O-C(=O)-；
Figure 02_image152
代表與A或M之共價連接；去*代表與Y、X A或X B之共價連接。 Y係自消除部分、非自消除可釋放部分或非裂解部分； 下標a為0或1； 下標y為0或1； 下標w為0或1； M係
Figure 02_image154
或
Figure 02_image156
； 每一AA係獨立選擇之胺基酸，其中(AA) b經由硫原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺； 每一下標b獨立地係1至6之整數；且 X B及L各自獨立地視情況經自PEG2至PEG72之PEG單元取代。
如本文中所使用，A在存在時共價連接至M或M 1，且Y在存在時連接至X B或X A(在X B不存在時)。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image158
。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image160
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image162
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image164
。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image166
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image168
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image170
。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image171
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image173
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image175
。
在一些實施例中，每一AA獨立地係天然胺基酸；其中(AA) b經由硫原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺。在一些實施例中，每一AA獨立地係天然胺基酸；其中(AA) b經由半胱胺酸殘基之硫原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺。
在一些實施例中，每一AA獨立地係天然胺基酸；其中(AA) b經由氮原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺。在一些實施例中，每一AA獨立地係天然胺基酸；其中(AA) b經由離胺酸殘基之ϵ-氮原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺。
在一些實施例中，每一下標b為1、2或3。在一些實施例中，每一下標b為1。在一些實施例中，每一下標b為2。在一些實施例中，每一下標b為3。在一些實施例中，每一下標b為3、4、5或6。在一些實施例中，每一下標b為4。在一些實施例中，每一下標b為5。在一些實施例中，每一下標b為6。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image177
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image179
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image181
。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image183
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image185
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image187
。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image189
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image191
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image193
。
在一些實施例中，R 1係甲氧基且R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2。在一些實施例中，X A係-O-且X B係
Figure 02_image195
，其中
Figure 02_image197
代表與X A之共價鍵聯，且*代表與L (在存在時)或M之共價鍵聯。在一些實施例中，R 1係甲氧基；R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2；X A係-O-；且X B係
Figure 02_image199
，其中
Figure 02_image201
代表與X A之共價鍵聯，且*代表與L (在存在時)或M之共價鍵聯。在一些該等實施例中，L不存在。在一些實施例中，R 1係甲氧基；R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2；X A係-O-；X B係
Figure 02_image203
，其中
Figure 02_image205
代表與X A之共價鍵聯，且*代表與L之共價鍵聯；且下標a及下標y皆為0 (亦即，X B共價連接至W)。在一些實施例中，X A係-O-；X B係
Figure 02_image207
，其中
Figure 02_image209
代表與X A之共價鍵聯，且*代表與L之共價鍵聯。在一些實施例中，R 1係甲氧基；R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2；X A係-O-；且X B係
Figure 02_image211
，其中
Figure 02_image213
代表與X A之共價鍵聯，且*代表與L之共價鍵聯；且下標a及下標w皆為0。
在一些實施例中，R 1係甲氧基；R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2；X A係-O-；且X B係
Figure 02_image215
，其中
Figure 02_image217
代表與X A之共價鍵聯，且*代表與L之共價鍵聯；且下標y及下標w皆為0。
在一些實施例中，R 1係甲氧基；R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2；X A係-O-；且X B係
Figure 02_image219
，其中
Figure 02_image217
代表與X A之共價鍵聯，且*代表與L之共價鍵聯；且下標y為0。
在一些實施例中，R 1係甲氧基且R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2。在一些實施例中，X A係-CH 2-；且X B係
Figure 02_image222
，其中
Figure 02_image217
代表與X A之共價鍵聯，且*代表與L (在存在時)或M之共價鍵聯。在一些實施例中，R 1係甲氧基；R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2；X A係-CH 2-；且X B係
Figure 02_image225
，其中
Figure 02_image217
代表與X A之共價鍵聯，且*代表與L (在存在時)或M之共價鍵聯。在一些實施例中，R 1係甲氧基；R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2；X A係-CH 2-；且X B係
Figure 02_image227
，其中
Figure 02_image229
代表與X A之共價鍵聯，且*代表與L之共價鍵聯；且下標a及下標y皆為0 (亦即，X B共價連接至W)。在一些實施例中，X A係-CH 2-；且X B係
Figure 02_image231
，其中
Figure 02_image233
代表與X A之共價鍵聯，且*代表與L之共價鍵聯。在一些實施例中，R 1係甲氧基；R 2及R 3皆係-C(=O)NH 2；X A係-CH 2-；且X B係
Figure 02_image235
，其中
Figure 02_image233
代表與X A之共價鍵聯，且*代表與L之共價鍵聯；且下標a及下標w皆為0 (亦即，X B共價結合至Y)。
在一些該等實施例中，L係具有式-(A) a-(W) w-(Y) y-之連接體。
在一些實施例中：X B不存在且L共價連接至X A。在一些實施例中：X B不存在且Y共價連接至X A。在一些實施例中：X B不存在且Y不存在，且W共價連接至X A。在一些實施例中：X B不存在，Y不存在，W不存在，且A共價連接至X A。
在一些實施例中：X B係2-16員伸雜烷基且L共價連接至X B。在一些實施例中：X B係2-16員伸雜烷基且Y共價連接至X B。在一些實施例中：X B係2-16員伸雜烷基，Y不存在，且W共價連接至X B。在一些實施例中：X B係2-16員伸雜烷基，Y不存在，W不存在，且A共價連接至X B。
在一些實施例中，W 1係-OC(=O)-且下標y為1。在一些實施例中，X A係-O-且X B及W不存在。在一些實施例中，X A係NH或-O-，X B不存在，且W 1係-OC(=O)。在一些實施例中，X A係-N(CH 3)-，X B不存在，且W 1係-OC(=O)。在一些實施例中，X A係-S-，X B不存在，且W 1係-OC(=O)。在一些實施例中，W 1係-OC(=O)-且X B經由-O-或-NH-共價連接至W。
在一些實施例中，A共價連接至M。在一些實施例中，在下標a為0且下標w為0時，Y共價連接至M。在一些實施例中，在下標a、y及w各自為0時，X B共價連接至M。
在一些實施例中，式(II)化合物係選自由以下組成之群：
Figure 02_image238
Figure 02_image240
Figure 02_image242
Figure 02_image244
Figure 02_image246
Figure 02_image248
Figure 02_image250
Figure 02_image252
Figure 02_image254
Figure 02_image256
Figure 02_image258
Figure 02_image260
Figure 02_image262
Figure 02_image264
式(II-A)化合物
在一些實施例中，式(II)化合物具有式(II-A)結構：
Figure 02_image266
(II-A)或其醫藥上可接受之鹽，其中： L A係-(CH 2) 1-6-、-C(O)(CH 2) 1-6-或-C(O)NR H(CH 2) 1-6-； 每一R H獨立地係氫或C 1-3烷基； Y係
Figure 02_image268
； #代表與-NR HL A之共價連接； ##代表與W或L B之共價連接； L B係-(CH 2) 1-6-、-C(O)(CH 2) 1-6-或-[NHC(O)(CH 2) 1-4] 1-3-；且 其他變量係如上文結合式(II)所定義。
在一些實施例中，R H係甲基。在一些實施例中，L A係-(CH 2) 2-6-。在一些實施例中，L A係-(CH 2) 3-。在一些實施例中，y為0。在一些實施例中，y為1。
在一些實施例中，W係具有1-3個胺基酸之鏈。在一些實施例中，W之每一胺基酸獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、天門冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、組胺酸、精胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、O-甲基絲胺酸、O-甲基天門冬胺酸、O-甲基麩胺酸、N-甲基離胺酸、O-甲基酪胺酸、O-甲基組胺酸及O-甲基蘇胺酸。
在一些實施例中，W係：
Figure 02_image270
或
Figure 02_image272
，其中：
Figure 02_image274
代表與L B之共價連接；且 *代表與Y或NR H之共價連接。
在一些實施例中，L B係-C(O)(CH 2) 2-。在一些實施例中，L B係-[NHC(O)(CH 2) 2] 2-。
在某些實施例中，式(II-A)化合物係選自由以下組成之群：
Figure 02_image276
Figure 02_image278
Figure 02_image280
Figure 02_image282
及其醫藥上可接受之鹽。 式(III)化合物
一些實施例提供式(III)化合物：
Figure 02_image284
(III) 或其醫藥上可接受之鹽，其中： R 1A係氫、羥基、C 1-6烷氧基、-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基、-(CH 2) nn-NR AAR BB； 每一R 2A及R 3A獨立地係-CO 2H、-(C=O) mm-NR CCR DD或-(CH 2) qq-NR EE1R FF1； 每一下標nn獨立地係0至6之整數； 每一下標mm獨立地係0或1； 每一下標qq獨立地係0至6之整數； Y 1係-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X 1係C 2-C 6伸烷基； Z 1係-NR EER FF、-C(=O)NR GGR HH或-CO 2H； 每一R AA、R BB、R CC、R DD、R EE1及R FF1獨立地係氫或C 1-3烷基；且 每一R EE、R FF、R GG及R HH獨立地係氫或C 1-6烷基。
在一些實施例中，R 1A係氫。在一些實施例中，R 1A係羥基。在一些實施例中，R 1A係C 1-6烷氧基。在一些實施例中，R 1係甲氧基。在一些實施例中，R 1A係-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基。在一些實施例中，R 1A係甲氧基乙基。
在一些實施例中，R 1係-(CH 2) nn-NR AAR BB。在一些實施例中，R AA及R BB皆係氫。在一些實施例中，R AA及R BB獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R AA及R BB中之一者係氫且R AA及R BB中之另一者係C 1-3烷基。在一些實施例中，C 1-3烷基係甲基。在一些實施例中，每一下標nn為0。在一些實施例中，每一下標nn為1。在一些實施例中，每一下標nn為2。在一些實施例中，每一下標nn為3。在一些實施例中，每一下標nn為3、4、5或6。在一些實施例中，每一下標nn為4。在一些實施例中，每一下標nn為5。在一些實施例中，每一下標nn為6。
在一些實施例中，每一R 2A及R 3A獨立地係-CO 2H、-(C=O) mm-NR CCR DD或-(CH 2) qq-NR EE1R FF1；且R 2A及R 3A相同。在一些實施例中，每一R 2A及R 3A獨立地係-CO 2H、-(C=O) mm-NR CCR DD或-(CH 2) qq-NR EE1R FF1；且R 2A及R 3A不同。
在一些實施例中，R 2A係-(C=O) mm-NR CCR DD。在一些實施例中，R 3A係-(C=O) mm-NR CCR DD。在一些實施例中，每一R CC及每一R DD係氫。在一些實施例中，每一R CC及每一R DD獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，每一R CC及R DD中之一者係氫且每一R CC及R DD中之另一者係C 1-3烷基。在一些實施例中，C 1-3烷基係甲基。在一些實施例中，每一下標mm為0。在一些實施例中，每一下標mm為1。
在一些實施例中，R 2A係-(CH 2) qq-NR EE1R FF1。在一些實施例中，R 3A係-(CH 2) qq-NR EE1R FF1。在一些實施例中，每一R EE1及每一R FF1係氫。在一些實施例中，每一R EE1及每一R FF1獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，每一R EE1及R FF1中之一者係氫且每一R EE1及R FF1中之另一者係C 1-3烷基。在一些實施例中，C 1-3烷基係甲基。在一些實施例中，每一下標q為0。在一些實施例中，每一下標q係1至6之整數。在一些實施例中，每一下標qq為1。在一些實施例中，每一下標qq為2。在一些實施例中，每一下標qq為3、4、5或6。
在一些實施例中，R 3A係-CO 2H。在一些實施例中，R 2A係-CO 2H。
在一些實施例中，Y 1係-CH 2-。在一些實施例中，Y 1係-O-。在一些實施例中，Y 1係-S-。在一些實施例中，Y 1係-NH-。在一些實施例中，Y 1係-N(CH 3)-。
在一些實施例中，X 1係C 2-C 5伸烷基。在一些實施例中，X 1係C 2-C 4伸烷基。在一些實施例中，X 1係伸乙基或伸正丙基。在一些實施例中，X 1係伸乙基。在一些實施例中，X 1係伸正丙基。
在一些實施例中，Z 1係-NR E1R F1。在一些實施例中，R EE及R FF皆係氫。在一些實施例中，R EE及R FF獨立地係C 1-6烷基。在一些實施例中，R EE及R FF中之一者係氫且R EE及R FF中之另一者係C 1-6烷基。在一些實施例中，C 1-6烷基係C 1-3烷基。在一些實施例中，C 1-3烷基係甲基。
在一些實施例中，Z 1係-C(=O)NR GGR HH。在一些實施例中，R GG及R HH皆係氫。在一些實施例中，R GG及R HH獨立地係C 1-6烷基。在一些實施例中，R GG及R HH中之一者係氫且R GG及R HH中之另一者係C 1-6烷基。在一些實施例中，C 1-6烷基係C 1-3烷基。在一些實施例中，C 1-3烷基係甲基。在一些實施例中，Z 1係-CO 2H。在一些實施例中，Z 1係-NR EER FF。在一些實施例中，R EE係氫且R FF係甲基。
在一些實施例中，R 1A係甲氧基且R 2A及R 3A皆係-C(=O)NH 2。在一些實施例中，Y 1係-O-且X 1係C 3伸烷基。在一些實施例中，Y 1係-O-且X 1係伸正丙基。在一些實施例中，Y 1係-O-，X 1係伸正丙基，且Z 1係-NH 2。在一些實施例中，Y 1係-O-，X 1係伸正丙基，且Z 1係-NHCH 3。在一些實施例中，Y 1係-O-，X 1係伸正丙基，且Z 1係-N(CH 3) 2。
在一些實施例中，R 1A係甲氧基；R 2A及R 3A皆係-C(=O)NH 2；Y 1係-O-；X 1係伸正丙基；且Z 1係-NH 2。在一些實施例中，R 1A係甲氧基；R 2A及R 3A皆係-C(=O)NH 2；Y 1係-O-；X 1係伸正丙基；且Z 1係-NHCH 3。在一些實施例中，R 1A係甲氧基；R 2A及R 3A皆係-C(=O)NH 2；Y 1係-O-；X 1係伸正丙基；且Z 1係-N(CH 3) 2。
在一些實施例中，式(III)化合物係：
Figure 02_image286
。 式(IV)化合物
一些實施例包含式(IV)化合物：
Figure 02_image288
(IV)或其醫藥上可接受之鹽，其中： R 1C係氫、羥基、C 1-6烷氧基、-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B或PEG2至PEG4； R 2C係-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 2C連接於標記為1、2或3之任一位置處； R 3C係-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 3C連接於標記為1'、2'或3'之任一位置處； 每一R A、R B、R C、R D、R E、R F及R M獨立地係氫或C 1-6烷基； 每一下標n獨立地係0至6之整數； 每一下標q獨立地係0至6之整數； L E係-(C=O)-或-S(O) 2-； L C係-(CR IR J) 1-3- 每一R I及R J獨立地係氫或C 1-3烷基； 下標s為0或1； 每一Cy 1獨立地係4至6員雜環、5至6員雜芳基或C 3-6環烷基，其各自視情況經一或多個R K取代； 每一R K獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d2R e2、-C(O)NR d2R e2、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R d2及R e2獨立地係氫或C 1-3烷基； L AA係-(CH 2) 1-6-、-C(O)(CH 2) 1-6-、-C(O)NR L(CH 2) 1-6-、-(CH 2) 1-6O-、-C(O)(CH 2) 1-6O-或-C(O)NR L(CH 2) 1-6O-； R L係氫或C 1-3烷基； Cy 2係C 3-6環烷基、4至6員雜環、5至6員雜芳基或苯基，其各自視情況經一或多個R U取代； 每一R U獨立地選自由以下組成之群：-CO 2R j1、-(C=O)NR d3R e3、-S(O) 2NR d3R e3、-(CH 2) q1-NR g1R h1、-(CH 2) q1-OR j1及-(CH 2) q1-(OCH 2CH 2) 1-8OH； 每一R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地係氫或C 1-6烷基； 下標q1係0至6之整數； 下標t1及t2獨立地係0或1，其中t1及t2中之至少一者為1； L D係-(CH 2) 1-6-； 下標u為0或1； Z係-N(R HH)-或-N +(C 1-6烷基)(R HH)-； R HH係氫、C 1-6烷基、C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 1-3烷氧基、-(CH 2) 1-34至6員雜環或-(CH 2) 1-35至6員雜芳基； Y係自消除部分、非自消除可釋放部分或非裂解部分； 下標y為0或1； W係1-12個胺基酸之鏈或具有以下結構：
Figure 02_image290
或
Figure 02_image292
其中Su係糖部分； -O A-代表醣苷鍵； 每一R g獨立地係氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或係-O-C(=O)-；
Figure 02_image294
代表與L BB之共價連接； *代表與Y、L D、NR HH或Cy 2之共價連接； 下標w為0或1； L BB係-(CH 2) 1-6-、-C(O)(CH 2) 1-6-或-[NHC(O)(CH 2) 1-4] 1-3-；且 M係
Figure 02_image296
或
Figure 02_image298
； 每一AA係獨立選擇之胺基酸，其中(AA) b經由硫原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺；且 每一下標b獨立地係1至6之整數。
在一些實施例中，R 1C係氫。在一些實施例中，R 1C係羥基。在一些實施例中，R 1C係C 1-6烷氧基。在一些實施例中，R 1C係甲氧基。在一些實施例中，R 1C係-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基。在一些實施例中，R 1C係甲氧基乙基。在一些實施例中，R 1C係PEG2至PEG4。在一些實施例中，R 1C係-(CH 2) n-NR AR B。
在一些實施例中，R A及R B皆係氫。在一些實施例中，R A及R B獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R A及R B中之一者係氫且R A及R B中之另一者係C 1-3烷基。
在一些實施例中，每一下標n為0。在一些實施例中，每一下標n為1。在一些實施例中，每一下標n為2。在一些實施例中，每一下標n為3、4、5或6。
在一些實施例中，R 2C及R 3C獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C及R 3C相同。在一些實施例中，R 2C及R 3C獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C及R 3C不同。在一些實施例中，R 2C係-(C=O) m-NR CR D。在一些實施例中，R 3C係-(C=O) m-NR CR D。在一些實施例中，R C及R D皆係氫。在一些實施例中，R C及R D各自獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R C及R D中之一者係氫且R C及R D中之另一者係C 1-3烷基。在一些實施例中，每一下標m為0。在一些實施例中，每一下標m為1。
在一些實施例中，R 2C係-(CH 2) q-NR ER F。在一些實施例中，R 3C係-(CH 2) q-NR ER F。在一些實施例中，R E及R F皆係氫。在一些實施例中，R E及R F各自獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R E及R F中之一者係氫且R E及R F中之另一者係C 1-3烷基。在一些實施例中，每一下標q為0。在一些實施例中，每一下標q係1至6之整數。
在一些實施例中，R 2C係-CO 2R M。在一些實施例中，R 3C係-CO 2R M。在一些實施例中，R M係氫。在一些實施例中，R M係C 1-3烷基。
在一些實施例中，R 2C係-(CH 2) q-OR M。
在一些實施例中，R 3C係-(CH 2) q-OR M。在一些實施例中，R M係氫。在一些實施例中，q為0。在一些實施例中，q為1。
在一些實施例中，R 2C係-O(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R 3C係-O(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R E及R F皆係氫。在一些實施例中，R E及R F各自獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R E及R F係氫且R E及R F中之另一者係C 1-3烷基。
在一些實施例中，R 2C係-NR M(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R 3C係-NR M(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R E、R F及R M皆係氫。在一些實施例中，R E、R F及R M各自獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R E、R F及R M中之一者係C 1-3烷基且R E、R F及R M中之其餘者係氫。
在一些實施例中，R 2C係-S(O) 2NR CR D。在一些實施例中，R 3C係-S(O) 2NR CR D。在一些實施例中，R C及R D皆係氫。在一些實施例中，R C及R D各自獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R C及R D中之一者係氫且R C及R D中之另一者係C 1-3烷基。
在一些實施例中，R 2C係-S(O) 2R M。在一些實施例中，R 3C係-S(O) 2R M。在一些實施例中，R M係氫。在一些實施例中，R M係C 1-3烷基。
在一些實施例中，R 2C連接於位置1處。在一些實施例中，R 2C連接於位置2處。在一些實施例中，R 2C連接於位置3處。在一些實施例中，R 3C連接於位置1'處。在一些實施例中，R 3C連接於位置2'處。在一些實施例中，R 3C連接於位置3'處。
在一些實施例中，L E係-(C=O)-。在一些實施例中，L E係-S(O) 2-。
在一些實施例中，每一R I及R J係氫。在一些實施例中，每一R I及R J係C 1-3烷基。在一些實施例中，R I及R J中之一者係氫且R I及R J中之另一者係C 1-3烷基。
在一些實施例中，L C係-(CR IR J)-。
在一些實施例中，s為0。在一些實施例中，s為1。
在一些實施例中，每一Cy 1獨立地係5至6員雜芳基。在一些實施例中，每一Cy 1係視情況經一或多個R K取代之吡唑。在一些實施例中，每一Cy 1獨立地選自由以下組成之群：吡唑、咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、噁唑、異噁唑、吡咯、噠嗪、吡啶、嘧啶及吡嗪，其各自視情況經一或多個R K取代。在一些實施例中，每一Cy 1獨立地選自由以下組成之群：咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、噁唑、異噁唑、吡咯、噠嗪、吡啶、嘧啶及吡嗪，其各自視情況經一或多個R K取代。在一些實施例中，每一Cy 1獨立地係視情況經一或多個R K取代之C 4-5環烷基。在一些實施例中，每一R K獨立地選自由以下組成之群：C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基及鹵素。在一些實施例中，每一R K獨立地選自由以下組成之群：甲基、乙基、-CF 3及鹵素。
在一些實施例中，每一Cy 1相同。在一些實施例中，每一Cy 1不同。
在一些實施例中，L AA係-(CH 2) 1-6-。在一些實施例中，L AA係-(CH 2) 1-3-。在一些實施例中，L AA係-(CH 2) 1-6O-。在一些實施例中，L AA係-(CH 2) 1-3O-。
在一些實施例中，Cy 2係4至6員雜環。在一些實施例中，Cy 2具有結構
Figure 02_image300
，其中下標z1及z2中之每一者獨立地係1至3之整數且**指示與L AA之連接。在一些實施例中，z1及z2為1。在一些實施例中，z1及z2為2。在一些實施例中，z1為1且z2為2。
在一些實施例中，Cy 2具有結構
Figure 02_image302
，其中 Z 1係選自由以下組成之群：-O-、-S-、-CR NR O-及-NR P-； R N、R O及R P獨立地係氫或C 1-6烷基； 下標z3係1至3之整數；且 **指示與L AA之連接。
在一些實施例中，R N及R O係氫。在一些實施例中，R P係氫。在一些實施例中，R P係甲基。
在一些實施例中，Cy 2係5至6員雜芳基。在一些實施例中，Cy 2係選自由以下組成之群：
Figure 02_image304
Figure 02_image306
及
Figure 02_image308
，其中 Z 2係=CR N-或=N； R N係氫或C 1-6烷基；且 **指示與L AA之連接。
在一些實施例中，Z 2係=CR N且R N係氫。在一些實施例中，Z 2係=N-。
在一些實施例中，Cy 2係選自由以下組成之群：
Figure 02_image310
及
Figure 02_image312
，其中Z 3係-O-或-S-且**指示與L AA、L D、NR HH、Y、W或L BB之連接。
在一些實施例中，**指示與L AA之連接。在一些實施例中，**指示與L D、NR HH、Y、W或L BB之連接。
在一些實施例中，Cy 2係選自由以下組成之群：
Figure 02_image314
及
Figure 02_image316
，其中**指示與L AA之連接。
在一些實施例中，Cy 2係選自由以下組成之群：
Figure 02_image318
及
Figure 02_image320
，其中 每一Z 2獨立地係=CR N-或=N-；且 每一R N係氫或C 1-6烷基。
在一些實施例中，至少一個Z 2係=N-。在一些實施例中，一個Z 2係=N-且其餘Z 2係=CR N-。在一些實施例中，兩個Z 2係=N-且其餘Z 2係=CR N-。
在一些實施例中，R N係氫。
在一些實施例中，Cy 2係選自由以下組成之群：
Figure 02_image322
及
Figure 02_image324
。
在一些實施例中，Cy 2係環丁基。
在一些實施例中，每一R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地係氫或-CH 3。
在一些實施例中，每一R U獨立地選自-CO 2H、-(C=O)NH 2、-S(O) 2NH 2、-CH 2NH 2及-CH 2OH。
在一些實施例中，t1為0且t2為1。在一些實施例中，t1為1且t2為0。在一些實施例中，t1為1且t2為1。
在一些實施例中，u為1且L D係-(CH 2) 1-3。在一些實施例中，u為0。
在一些實施例中，t2為1且R HH係氫。在一些實施例中，t2為1且R HH係C 1-3烷基。在一些實施例中，t2為1且R HH係C 3-4環烷基。在一些實施例中，t2為1且R HH係-(CH 2) C 3-4環烷基。在一些實施例中，t2為1且R HH係-(CH 2) 4-5員雜環。在一些實施例中，t2為1且R HH係-(CH 2) 5員雜芳基。
在一些實施例中，Z係-N(R HH) -。在其他實施例中，Z係-N +(C 1-6烷基)(R HH)-。
在一些實施例中，Y係
Figure 02_image326
。
在一些實施例中，Y係環己烷羧基、十一烷醯基、己醯基(caproyl、hexanoyl)、丁醯基或丙醯基。在一些實施例中，Y係PEG4至PEG12。在一些實施例中，y為0。在一些實施例中，y為1。
在一些實施例中，W係具有1-12個胺基酸之鏈。在一些實施例中，W係具有1-6個胺基酸之鏈。在一些實施例中，W係具有1-3個胺基酸之鏈。
在一些實施例中，W獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、天門冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、組胺酸、精胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、O-甲基絲胺酸、O-甲基天門冬胺酸、O-甲基麩胺酸、N-甲基離胺酸、O-甲基酪胺酸、O-甲基組胺酸及O-甲基蘇胺酸。在一些實施例中，W中之每一胺基酸獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、絲胺酸、天門冬胺酸、天門冬胺酸甲酯、N,N-二甲基-離胺酸、苯丙胺酸、瓜胺酸、纈胺酸-丙胺酸、纈胺酸-瓜胺酸、苯丙胺酸-離胺酸或高絲胺酸甲醚。
在一些實施例中，W具有以下結構：
Figure 02_image328
或
Figure 02_image330
。
在一些實施例中，W 1係-O-C(=O)-。在一些實施例中，一個R g係鹵素、-CN或-NO 2，且其餘R G係氫。在一些實施例中，每一R g係氫。
在一些實施例中，w為0。在一些實施例中，w為1。
在一些實施例中，L BB係-(CH 2) 1-3-。在一些實施例中，L BB係-C(O)(CH 2) 1-2-。
在一些實施例中，L BB係-C(O)(CH 2) 2-。在一些實施例中，L BB係-[NHC(O)(CH 2) 2] 1-2-。在一些實施例中，L BB係-[NHC(O)(CH 2) 2] 2-。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image332
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image334
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image336
。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image338
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image340
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image342
。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image344
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image346
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image348
。
在一些實施例中，每一AA獨立地係天然胺基酸；其中(AA) b經由硫原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺。在一些實施例中，每一AA獨立地係天然胺基酸；其中(AA) b經由氮原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺。在一些實施例中，每一下標b為1。在一些實施例中，每一下標b為2。在一些實施例中，每一下標b為3、4、5或6。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image350
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image352
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image354
。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image356
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image358
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image360
。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image362
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image364
。在一些態樣中，M係
Figure 02_image366
。
在一些實施例中，M係
Figure 02_image368
。
式(IV)化合物之一些實施例包含選自由以下組成之群之化合物：
Figure 02_image370
Figure 02_image372
Figure 02_image374
Figure 02_image376
Figure 02_image378
Figure 02_image380
Figure 02_image382
Figure 02_image384
Figure 02_image386
Figure 02_image388
Figure 02_image390
Figure 02_image392
Figure 02_image394
Figure 02_image396
及其醫藥上可接受之鹽。 式(V)化合物
一些實施例包含式(V)化合物：
Figure 02_image398
(V)或其醫藥上可接受之鹽，其中： R 1C係氫、羥基、C 1-6烷氧基、-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B或PEG2至PEG4； R 2C係-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 2C連接於標記為1、2或3之任一位置處； R 3C係-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 3C連接於標記為1'、2'或3'之任一位置處； 每一R A、R B、R C、R D、R E、R F及R M獨立地係氫或C 1-6烷基； 每一下標n獨立地係0至6之整數； 每一下標q獨立地係0至6之整數； L E係-(C=O)-或-S(O) 2-； L C係-(CR IR J) 1-3- 每一R I及R J獨立地係氫或C 1-3烷基； 下標s為0或1； 每一Cy 1獨立地係4至6員雜環、5至6員雜芳基或C 3-6環烷基，其各自視情況經一或多個R K取代； 每一R K獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d2R e2、-C(O)NR d2R e2、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R d2及R e2獨立地係氫或C 1-3烷基； L AA係-(CH 2) 1-6-、-C(O)(CH 2) 1-6-、-C(O)NR L(CH 2) 1-6-、-(CH 2) 1-6O-、-C(O)(CH 2) 1-6O-或-C(O)NR L(CH 2) 1-6O-； R L係氫或C 1-3烷基； Cy 2係C 3-6環烷基、4至6員雜環、5至6員雜芳基或苯基，其各自視情況經一或多個R U取代； 每一R U獨立地選自由以下組成之群：-CO 2R j1、-(C=O)NR d3R e3、-S(O) 2NR d3R e3、-(CH 2) q1-NR g1R h1、-(CH 2) q1-OR j1及-(CH 2) q1-(OCH 2CH 2) 1-8OH； 每一R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地係氫或C 1-6烷基； 下標q1係0至6之整數； 下標t1為0或1； L D係-(CH 2) 1-6-； 下標u為0或1； 在t1為0時，ZZ係-NR QR R、-N +(C 1-6烷基)R QR R、-C(=O)N SR T、-C(O)O(C 1-6烷基)、-CO 2H或胺基酸，或在t1為1時，ZZ係氫、-NR QR R、-N +(C 1-6烷基)R QR R、-C(=O)N SR T、-C(O)O(C 1-6烷基)、-CO 2H或胺基酸； R Q係氫、C 1-6烷基、C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 1-3烷氧基、-(CH 2) 1-34至6員雜環或-(CH 2) 1-35至6員雜芳基，條件係 若t1為0且兩個Cy 1皆係
Figure 02_image400
，則R Q係C 2-6烷基、C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 1-3烷氧基、-(CH 2) 1-34至6員雜環或-(CH 2) 1-35至6員雜芳基，且 若t1為0且至少一個Cy 1不為
Figure 02_image402
，則ZZ係-NR QR R、-N +(C 1-6烷基)R QR R或-C(=O)N SR T，且R Q係C 1-6烷基、C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 1-3烷氧基、-(CH 2) 1-34至6員雜環或-(CH 2) 1-35至6員雜芳基；且 每一R R、R S及R T獨立地係氫或C 1-6烷基。
在一些實施例中，R 1C係氫。在一些實施例中，R 1C係羥基。在一些實施例中，R 1C係C 1-6烷氧基。在一些實施例中，R 1C係甲氧基。在一些實施例中，R 1C係-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基。在一些實施例中，R 1C係甲氧基乙基。在一些實施例中，R 1C係PEG2至PEG4。在一些實施例中，R 1C係-(CH 2) n-NR AR B。在一些實施例中，R A及R B皆係氫。在一些實施例中，R A及R B獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R A及R B中之一者係氫且R A及R B中之另一者係C 1-3烷基。在一些實施例中，每一下標n為0。在一些實施例中，每一下標n為1。在一些實施例中，每一下標n為2。在一些實施例中，每一下標n為3、4、5或6。
在一些實施例中，R 2C及R 3C係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C及R 3C相同。在一些實施例中，R 2C及R 3C獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C及R 3C不同。
在一些實施例中，R 2C係-(C=O) m-NR CR D。在一些實施例中，R 3C係-(C=O) m-NR CR D。在一些實施例中，R C及R D皆係氫。在一些實施例中，R C及R D各自獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R C及R D中之一者係氫且R C及R D中之另一者係C 1-3烷基。在一些實施例中，每一下標m為0。在一些實施例中，每一下標m為1。
在一些實施例中，R 2C係-(CH 2) q-NR ER F。在一些實施例中，R 3C係-(CH 2) q-NR ER F。在一些實施例中，R E及R F皆係氫。在一些實施例中，R E及R F各自獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R E及R F中之一者係氫且R E及R F中之另一者係C 1-3烷基。
在一些實施例中，每一下標q為0。在一些實施例中，每一下標q係1至6之整數。
在一些實施例中，R 2C係-CO 2R M。在一些實施例中，R 3C係-CO 2R M。
在一些實施例中，R M係氫。在一些實施例中，R M係C 1-3烷基。
在一些實施例中，R 2C係-(CH 2) q-OR M。在一些實施例中，R 3C係-(CH 2) q-OR M。
在一些實施例中，R M係氫。在一些實施例中，下標q為0。在一些實施例中，下標q為1。
在一些實施例中，R 2C係-O(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R 3C係-O(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R E及R F皆係氫。在一些實施例中，R E及R F各自獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R E及R F中之一者係氫且R E及R F中之另一者係C 1-3烷基。
在一些實施例中，R 2C係-NR M(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R 3C係-NR M(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R E、R F及R M皆係氫。在一些實施例中，R E、R F及R M各自獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R E、R F及R M中之一者係C 1-3烷基且R E、R F及R M中之其餘者係氫。
在一些實施例中，R 2C係-S(O) 2NR CR D。
在一些實施例中，R 3C係-S(O) 2NR CR D。在一些實施例中，R C及R D皆係氫。在一些實施例中，R C及R D各自獨立地係C 1-3烷基。在一些實施例中，R C及R D中之一者係氫且R C及R D中之另一者係C 1-3烷基。
在一些實施例中，R 2C係-S(O) 2R M。在一些實施例中，R 3C係-S(O) 2R M。在一些實施例中，R M係氫。在一些實施例中，R M係C 1-3烷基。
在一些實施例中，R 2C連接於位置1處。在一些實施例中，R 2C連接於位置2處。在一些實施例中，R 2C連接於位置3處。在一些實施例中，R 3C連接於位置1'處。在一些實施例中，R 3C連接於位置2'處。在一些實施例中，R 3C連接於位置3'處。
在一些實施例中，L E係-(C=O)-。在一些實施例中，L E係-S(O) 2-。
在一些實施例中，每一R I及R J係氫。在一些實施例中，每一R I及R J係C 1-3烷基。在一些實施例中，R I及R J中之一者係氫且R I及R J中之另一者係C 1-3烷基。
在一些實施例中，L C係-(CR IR J)-。
在一些實施例中，下標s為0。在一些實施例中，下標s為1。
在一些實施例中，每一Cy 1獨立地係5至6員雜芳基。在一些實施例中，每一Cy 1係視情況經一或多個R K取代之吡唑。在一些實施例中，每一Cy 1獨立地選自由以下組成之群：吡唑、咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、噁唑、異噁唑、吡咯、噠嗪、吡啶、嘧啶及吡嗪，其各自視情況經一或多個R K取代。在一些實施例中，每一Cy 1獨立地選自由以下組成之群：咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、噁唑、異噁唑、吡咯、噠嗪、吡啶、嘧啶及吡嗪，其各自視情況經一或多個R K取代。在一些實施例中，每一Cy 1獨立地係視情況經一或多個R K取代之C 4-5環烷基。在一些實施例中，每一R K獨立地選自由C 1-3烷基、C 1-3鹵烷基及鹵素組成之群。在一些實施例中，每一R K獨立地選自由以下組成之群：甲基、乙基、-CF 3及鹵素。
在一些實施例中，每一Cy 1相同。在一些實施例中，每一Cy 1不同。
在一些實施例中，L AA係-(CH 2) 1-6-。在一些實施例中，L AA係-(CH 2) 1-3-。在一些實施例中，L AA係-(CH 2) 1-6O-。在一些實施例中，L AA係-(CH 2) 1-3O-。
在一些實施例中，Cy 2係4至6員雜環。在一些實施例中，Cy 2具有結構
Figure 02_image404
，其中下標z1及z2中之每一者獨立地係1至3之整數且**指示與L AA之連接。
在一些實施例中，下標z1及下標z2為1。在一些實施例中，下標z1及下標z2為2。
在一些實施例中，下標z1為1且下標z2為2。
在一些實施例中，Cy 2具有結構
Figure 02_image406
，其中 Z 1係選自由以下組成之群：-O-、-S-、-CR NR O-及-NR P-； R N、R O及R P獨立地係氫或C 1-6烷基； 下標z3係1至3之整數；且 **指示與L AA之連接。
在一些實施例中，R N及R O係氫。在一些實施例中，R P係氫。在一些實施例中，R P係甲基。
在一些實施例中，Cy 2係5至6員雜芳基。
在一些實施例中，Cy 2係選自由以下組成之群：
Figure 02_image408
Figure 02_image410
及
Figure 02_image412
，其中 Z 2係=CR N-或=N-； R N係氫或C 1-6烷基；且 **指示與L AA之連接。
在一些實施例中，Z 2係=CR N-且R N係氫。在一些實施例中，Z 2係=N-。
在一些實施例中，Cy 2係選自由以下組成之群：
Figure 02_image414
及
Figure 02_image416
，其中Z 3係-O-或-S-且**指示與L AA、L D、NR HH、Y、W或L BB之連接。
在一些實施例中，**指示與L AA之連接。在一些實施例中，**指示與L D、NR HH、Y、W或L BB之連接。
在一些實施例中，Cy 2係選自由以下組成之群：
Figure 02_image418
及
Figure 02_image420
，其中**指示與L AA之連接。
在一些實施例中，Cy 2係選自由以下組成之群：
Figure 02_image422
及
Figure 02_image424
，其中 每一Z 2獨立地係=CR N-或=N-；且 每一R N係氫或C 1-6烷基。
在一些實施例中，至少一個Z 2係=N-。在一些實施例中，一個Z 2係=N-且剩餘Z 2係=CR N-。在一些實施例中，兩個Z 2係-NR P-且其餘Z 2係=CR N-。
在一些實施例中，R N係氫。
在一些實施例中，Cy 2係選自由以下組成之群：
Figure 02_image426
及
Figure 02_image428
。
在一些實施例中，Cy 2係環丁基。
在一些實施例中，R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地係氫或-CH 3。
在一些實施例中，每一R U獨立地選自-CO 2H、-(C=O)NH 2、-S(O) 2NH 2、-CH 2NH 2及-CH 2OH。
在一些實施例中，t1為0。在一些實施例中，t1為1。
在一些實施例中，u為1且L D係-(CH 2) 1-3。在一些實施例中，u為0。
在一些實施例中，ZZ係-NR QR R。在一些實施例中，R Q係C 1-6烷基。在一些實施例中，R Q係C 3-6環烷基。在一些實施例中，R Q係環丙基。在一些實施例中，R Q係-(CH 2) 1-3C 3-6環烷基。在一些實施例中，R R係氫。
在一些實施例中，ZZ係-N +(C 1-6烷基)R QR R。
在一些實施例中，ZZ係-C(=O)N SR T。
在一些實施例中，ZZ係-C(O)O(第三丁基)。
在一些實施例中，ZZ係-CO 2H。
在一些實施例中，ZZ係選自由以下組成之群之胺基酸：丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、天門冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、組胺酸、精胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、O-甲基絲胺酸、O-甲基天門冬胺酸、O-甲基麩胺酸、N-甲基離胺酸、O-甲基酪胺酸、O-甲基組胺酸及O-甲基蘇胺酸。
一些式(V)實施例包含選自由以下組成之群之化合物：
Figure 02_image430
Figure 02_image432
Figure 02_image434
Figure 02_image436
Figure 02_image438
Figure 02_image440
Figure 02_image442
及其醫藥上可接受之鹽。 連接體
如本文所闡述，如結合式(I)、(II)及(II-A)所定義之連接體(L)係連結X A或X B(在存在時)與M或M 1之可選基團。舉例而言，A在存在時共價連接至M或M 1，且Y在存在時連接至X B或X A(在X B不存在時)。在一些實施例中，連接體(L)具有式-(A) a-(W) w-(Y) y，其中： A係視情況經1-3個R a1取代之C 2-20伸烷基或視情況經1-3個R b1取代之2至40員伸雜烷基； 每一R a1獨立地選自由以下組成之群： C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R b1獨立地選自由以下組成之群： C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R d1及R e1獨立地係氫或C 1-3烷基； a為0或1； W具有1-12個胺基酸或具有以下結構：
Figure 02_image444
或
Figure 02_image446
其中Su係糖部分； -O A-代表醣苷鍵； 每一R g獨立地係氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或係-O-C(=O)-；
Figure 02_image448
代表與式(II)化合物中之A (在存在時)或M之共價連接及與本文所闡述ADC及化合物中之A、M或M 1之共價連接； *代表與式(II)化合物中之Y、X A或X B及與本文所闡述ADC中之Y、X A或X B之共價連接； w為0或1； Y係自消除部分、非自消除可釋放部分或非裂解部分；且 y為0或1。
在一些實施例中，-O A-代表醣苷鍵。在一些實施例中，醣苷鍵提供β-葡萄糖醛酸苷酶或β-甘露糖苷酶裂解位點。在一些實施例中，β-葡萄糖醛酸苷酶裂解位點可由人類溶酶體β-葡萄糖醛酸苷酶裂解。在一些實施例中，β-甘露糖苷酶裂解位點可由人類溶酶體β-甘露糖苷酶裂解。
在一些實施例中，a為0。在一些實施例中，a為1。在一些實施例中，w為0。在一些實施例中，w為1。在一些實施例中，y為0。在一些實施例中，y為1。在一些實施例中，a + y + w = 1。在一些實施例中，a + y + w = 2。在一些實施例中，a + y + w = 3。在一些實施例中，a + y + w = 0 (亦即，連接體(L)不存在)。
在一些實施例中，A係視情況經1-3個R a1取代之C 2-20伸烷基。在一些實施例中，A係視情況經1-3個R a1取代之C 2-10伸烷基。在一些實施例中，A係視情況經1-3個R a1取代之C 4-10伸烷基。在一些實施例中，A係經R a1取代之C 2-20伸烷基。在一些實施例中，A係經R a1取代之C 2-10伸烷基。在一些實施例中，A係經R a1取代之C 2-10伸烷基。
在一些實施例中，每一R a1獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)。在一些實施例中，每一R a1係C 1-6烷基。在一些實施例中，每一R a1係C 1-6鹵代烷基。在一些實施例中，每一R a1係C 1-6烷氧基。在一些實施例中，每一R a1係C 1-6鹵代烷氧基。在一些實施例中，每一R a1係鹵素。在一些實施例中，每一R a1係-OH。在一些實施例中，每一R a1係=O。在一些實施例中，每一R a1係-NR d1R e1。在一些實施例中，每一R a1係C(O)NR d1R e1。在一些實施例中，每一R a1係-C(O)(C 1-6烷基)。在一些實施例中，每一R a1係-C(O)O(C 1-6烷基)。在一些實施例中，一種情形之R a1係-NR d1R e1。在一些實施例中，A係經1或2個各自係=O之R a1取代之C 2-20伸烷基。
在一些實施例中，R d1及R e1獨立地係氫或C 1-3烷基。在一些實施例中，R d1及R e1中之一者係氫，且R d1及R e1中之另一者係C 1-3烷基。在一些實施例中，R d1及R e1皆係氫或C 1-3烷基。在一些實施例中，R d1及R e1皆係C 1-3烷基。在一些實施例中，R d1及R e1皆係甲基。
在一些實施例中，A係C 2-20伸烷基。在一些實施例中，A係C 2-10伸烷基。在一些實施例中，A係C 2-10伸烷基。在一些實施例中，A係C 2-6伸烷基。在一些實施例中，A係C 4-10伸烷基。
在一些實施例中，A係視情況經1-3個R b1取代之2至40員伸雜烷基。在一些實施例中，A係視情況經1-3個R b1取代之2至20員伸雜烷基。在一些實施例中，A係視情況經1-3個R b1取代之2至12員伸雜烷基。在一些實施例中，A係視情況經1-3個R b1取代之4至12員伸雜烷基。在一些實施例中，A係視情況經1-3個R b1取代之4至8員伸雜烷基。在一些實施例中，A係經R b1取代之2至40員伸雜烷基。在一些實施例中，A係經R b1取代之2至20員伸雜烷基。在一些實施例中，A係經R b1取代之2至12員伸雜烷基。在一些實施例中，A係經R b1取代之4至12員伸雜烷基。在一些實施例中，A係經R b1取代之4至8員伸雜烷基。
在一些實施例中，每一R b1獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)。在一些實施例中，每一R b1係C 1-6烷基。在一些實施例中，每一R b1係C 1-6鹵代烷基。在一些實施例中，每一R b1係C 1-6烷氧基。在一些實施例中，每一R b1係C 1-6鹵代烷氧基。在一些實施例中，每一R b1係鹵素。在一些實施例中，每一R b1係-OH。在一些實施例中，每一R b1係-NR d1R e1。在一些實施例中，每一R b1係C(O)NR d1R e1。在一些實施例中，每一R b1係-C(O)(C 1-6烷基)。在一些實施例中，每一R b1係-C(O)O(C 1-6烷基)。在一些實施例中，一種情形之R b1係-NR d1R e1。
在一些實施例中，R d1及R e1獨立地係氫或C 1-3烷基。在一些實施例中，R d1及R e1中之一者係氫，且R d1及R e1中之另一者係C 1-3烷基。在一些實施例中，R d1及R e1皆係氫或C 1-3烷基。在一些實施例中，R d1及R e1皆係C 1-3烷基。在一些實施例中，R d1及R e1皆係甲基。
在一些實施例中，A係2至40員伸雜烷基。在一些實施例中，A係2至20員伸雜烷基。在一些實施例中，A係2至12員伸雜烷基。在一些實施例中，A係4至12員伸雜烷基。在一些實施例中，A係4至8員伸雜烷基。在一些實施例中，A係選自由以下組成之群：
Figure 02_image450
Figure 02_image452
Figure 02_image454
及
Figure 02_image456
，其中
Figure 02_image458
代表與W或Y之共價連接，且*代表與M 1或M (例如分別在式(I)或(II)之化合物中)之共價鍵聯。在一些實施例中，M係琥珀醯亞胺。在一些實施例中，M係經水解琥珀醯亞胺。在一些實施例中，M 1係琥珀醯亞胺。在一些實施例中，M 1係經水解琥珀醯亞胺。應理解，經水解琥珀醯亞胺可以兩種區域異構體形式存在。下文針對M之水解來例示彼等形式，其中代表來自該水解之區域異構體之結構係式M’及M’’；其中毗鄰鍵之波浪線係如針對A所定義。
Figure 02_image460
在一些實施例中，M’係
Figure 02_image462
。在一些實施例中，M’係
Figure 02_image464
。在一些實施例中，M''係
Figure 02_image466
。在一些實施例中，M''係
Figure 02_image468
。
在一些實施例中，A係PEG4至PEG12。在一些實施例中，A係PEG4至PEG8。代表性A基團包含(但不限於)：
Figure 02_image470
及
Figure 02_image472
。
在一些實施例中，w為0。在一些實施例中，w為1。
在一些實施例中，W係單一胺基酸。在一些實施例中，W係單一天然胺基酸。在一些實施例中，W係包含2-12個胺基酸之肽，其中每一胺基酸獨立地係天然或非天然胺基酸。在一些實施例中，天然或非天然胺基酸係D或L異構體。在一些實施例中，每一胺基酸獨立地係天然胺基酸。在一些實施例中，每一W獨立地係天然或非天然α、β或γ胺基酸。在一些實施例中，W包括連接至非天然胺基酸之天然胺基酸。在一些實施例中，W包括連接至天然或非天然胺基酸之D異構體之天然或非天然胺基酸。在一些實施例中，W係二肽。在一些實施例中，W係三肽。在一些實施例中，W係四肽。在一些實施例中，W係五肽。在一些實施例中，W係六肽。在一些實施例中，W具有7、8、9、10、11或12個胺基酸。在一些實施例中，W之每一胺基酸獨立地選自由以下組成之群：纈胺酸、丙胺酸、β-丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、白胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、天門冬胺酸、絲胺酸、麩胺酸、高絲胺酸甲醚、天門冬胺酸甲酯、N,N-二甲基離胺酸、精胺酸、纈胺酸-丙胺酸、纈胺酸-瓜胺酸、苯丙胺酸-離胺酸及瓜胺酸。在一些實施例中，W係天門冬胺酸。在一些實施例中，W係離胺酸。在一些實施例中，W係甘胺酸。在一些實施例中，W係丙胺酸。在一些實施例中，W係天門冬胺酸甲酯。在一些實施例中，W係N,N-二甲基離胺酸。在一些實施例中，W係高絲胺酸甲醚。在一些實施例中，W係絲胺酸。在一些實施例中，W係纈胺酸-丙胺酸。
在一些實施例中，w為1；W具有1-12個胺基酸；且W與X B之間或W與Y之間之鍵可由腫瘤相關蛋白酶以酶促方式裂解。在一些實施例中，腫瘤相關蛋白酶係細胞自溶酶。在一些實施例中，腫瘤相關蛋白酶係細胞自溶酶B、C或D。
在一些實施例中，w為1；且W具有以下結構：
Figure 02_image474
或
Figure 02_image476
其中Su係糖部分； -O A-代表醣苷鍵； 每一R g獨立地係氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或係-O-C(=O)-；
Figure 02_image478
代表與式(II)化合物中之A或M之共價連接；且 *代表與式(II)化合物中之Y、X A或X B之共價連接；
在一些實施例中，w為1；且W具有以下結構：
Figure 02_image480
或
Figure 02_image482
其中Su係糖部分； -O A-代表醣苷鍵； 每一R g獨立地係氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或係-O-C(=O)-；
Figure 02_image484
代表與本文所闡述之ADC中之A或M之共價連接；且 *代表與本文所闡述之ADC中之Y、X A或X B之共價連接；
在一些實施例中，-O A-代表醣苷鍵。在一些實施例中，醣苷鍵提供β-葡萄糖醛酸苷酶或β-甘露糖苷酶裂解位點。在一些實施例中，β-葡萄糖醛酸苷酶或β-甘露糖苷酶裂解位點可由人類溶酶體β-葡萄糖醛酸苷酶或由人類溶酶體β-甘露糖苷酶裂解。
在一些實施例中，W係
Figure 02_image486
。在一些實施例中，W係
Figure 02_image488
。在一些實施例中，W係
Figure 02_image490
。
在一些實施例中，每一R g係氫。在一些實施例中，一個R g係氫，且其餘R g獨立地係鹵基、-CN或-NO 2。在一些實施例中，兩個R g係氫，且其餘R g係鹵基、-CN或-NO 2。
在一些實施例中，一個R g係鹵素、-CN或-NO 2，且其他R g係氫。在一些實施例中，每一R g係氫。
在一些實施例中，O A-Su在生理學pH下為電中性。在一些實施例中，O A-Su係甘露糖。在一些實施例中，O A-Su係
Figure 02_image492
。在一些實施例中，O A-Su包括羧酸酯部分。在一些實施例中，O A-Su係葡萄糖醛酸。在一些實施例中，O A-Su係
Figure 02_image494
。
在一些實施例中，W係
Figure 02_image496
。在一些實施例中，W係
Figure 02_image498
或
Figure 02_image500
。在一些實施例中，W係
Figure 02_image502
。在一些實施例中，W係
Figure 02_image504
。
在一些實施例中，a為0。
在一些實施例中，y為0。在一些實施例中，y為1。
在一些實施例中，Y係自消除部分、非自消除可釋放部分或非裂解部分。在一些實施例中，Y係自消除部分或非自消除可釋放部分。在一些實施例中，Y係自消除部分。在一些實施例中，Y係非自消除部分。
非自消除部分係需要酶促裂解者，其中部分或所有基團在藥物單元自ADC裂解之後仍與其結合，由此形成游離藥物。非自消除部分之實例包含(但不限於)：-甘胺酸-及-甘胺酸-甘胺酸。在Y係-甘胺酸-或-甘胺酸-甘胺酸-之ADC發生酶促裂解(例如經由癌細胞相關蛋白酶或淋巴球相關蛋白酶)時，藥物單元自ADC裂解，從而游離藥物包含來自Y之甘胺酸或甘胺酸-甘胺酸基團。在一些實施例中，獨立水解反應發生於靶細胞內或其附近，從而進一步自游離藥物裂解甘胺酸或甘胺酸-甘胺酸基團。在一些實施例中，如本文所闡述之非自消除部分之酶促裂解不產生任何其他水解步驟。
自消除部分係指能夠將兩個間隔化學部分一起共價連接至通常穩定之三聯分子之雙功能化學部分。若自消除基團與第一部分之鍵裂解，則其將自發地自第二化學部分分離。舉例而言，自消除部分包含視情況經一或多個烷基、烷氧基、鹵素、氰基或硝基取代之對胺基苄醇(PAB)。自消除部分之其他實例包含(但不限於)在電子上類似於PAB基團之芳香族化合物(例如2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物) ( 例如參見Hay等人，1999 , Bioorg. Med. Chem. Lett.9:2237)、鄰或對胺基苄基縮醛、經取代及未經取代之4-胺基丁醯胺( 例如參見Rodrigues等人，1995 , Chemistry Biology2:223)、經適當取代之雙環[2.2.1]及雙環[2.2.2]環系統( 例如參見Storm等人，1972 , J. Amer. Chem. Soc.94:5815)、2-胺基苯基丙醯胺(例如參見Amsberry等人，1990 , J. Org. Chem.55:5867)及在甘胺酸α位處經取代之含胺藥物之消除( 例如參見Kingsbury等人，1984 , J. Med. Chem.27:1447)。
在一些實施例中，Y係PAB基團，其視情況經一或多個烷基、烷氧基、鹵素、氰基或硝基取代；對胺基苄基氧基-羰基(PABC)基團，其視情況經糖部分取代；-甘胺酸-；-甘胺酸-甘胺酸-；或具支鏈雙(羥甲基)苯乙烯(BHMS)單元，其能夠納入(及釋放)多個藥物單元。
在一些實施例中，-(A) a-(W) w-(Y) y包括在ADC已內化至靶細胞中後釋放游離藥物之非自消除可釋放連接體。在一些實施例中，-(A) a-(W) w-(Y) y包括在靶向細胞內或其附近釋放游離藥物之可釋放連接體。可釋放連接體擁有識別位點，例如肽裂解位點、糖裂解位點或二硫化物裂解側。在一些實施例中，每一可釋放連接體係二肽。在一些實施例中，每一可釋放連接體係二硫化物。在一些實施例中，每一可釋放連接體係腙。在一些實施例中，每一可釋放連接體獨立地係Val-Cit-、-Phe-Lys-或-Val-Ala-。在一些實施例中，每一可釋放連接體在結合至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺時獨立地係琥珀醯亞胺基-己醯基(mc)、琥珀醯亞胺基-己醯基-纈胺酸-瓜胺酸(sc-vc)、琥珀醯亞胺基-己醯基-纈胺酸-瓜胺酸-對胺基苄基氧基羰基(sc-vc-PABC)或SDPr-vc (其中「S」係指琥珀醯亞胺基)。
在一些實施例中，-(A) a-(W) w-(Y) y包括非裂解連接體。非裂解連接體為業內所已知且可作為「Y」基團適用於本文所闡述之ADC中。非裂解連接體能夠以通常穩定及共價之方式將藥物單元連接至抗體且實質上抵抗酸誘導裂解、光誘導裂解、肽酶或酯酶誘導裂解及二硫鍵裂解。可經由替代機制(例如蛋白水解性抗體降解)自含有非裂解連接體之ADC釋放游離藥物。在一些實施例中，藥物單元可作為ADC之一部分(亦即在仍經由連接體結合至抗體時)施加生物效應。
形成非裂解連接體-馬來醯亞胺及非裂解連接體-琥珀醯亞胺化合物為業內所已知且可適用於本文中。實例性試劑包括基於馬來醯亞胺基或之部分，例如6-馬來醯亞胺基己酸N-羥基琥珀醯亞胺酯(MCC)、4-(馬來醯亞胺基甲基)環己烷甲酸N-琥珀醯亞胺基酯(SMCC)、N-琥珀醯亞胺基-4-(N-馬來醯亞胺基甲基)-環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸酯) (LC-SMCC)、馬來醯亞胺基十一烷酸N-琥珀醯亞胺基酯(KMUA)、γ-馬來醯亞胺基丁酸N-琥珀醯亞胺基酯(GMBS)、c-馬來醯亞胺基己酸N-羥基琥珀醯亞胺酯(EMCS)、間馬來醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)、N-(α-馬來醯亞胺基乙醯氧基)-琥珀醯亞胺酯[AMAS]、琥珀醯亞胺基-6-(β-馬來醯亞胺基丙醯胺基)己酸酯(SMPH)、4-(對馬來醯亞胺基苯基)-丁酸N-琥珀醯亞胺基酯(SMPB)及N-(對馬來醯亞胺基苯基)異氰酸酯(PMPI)、N-琥珀醯亞胺基-4-(碘乙醯基)-胺基苯甲酸酯(STAB)、碘乙酸N-琥珀醯亞胺基酯(SIA)、溴乙酸N-琥珀醯亞胺基酯(SBA)及3-(溴乙醯胺基)丙酸N-琥珀醯亞胺基酯(SBAP)。用於本文所闡述之ADC中之其他「A-M」及「A-M 1」基團可參見(例如)美國專利第8,142,784號，該專利之全部內容以引用方式併入本文中。
在一些實施例中，y為1；且Y係
Figure 02_image506
，其中
Figure 02_image508
代表與式(II)化合物中之W、A或M之連結；且*代表與式(II)化合物中之X A或X B之連結。
在一些實施例中，y為1；且Y係
Figure 02_image510
，其中
Figure 02_image512
代表與本文所闡述之ADC中之W、A、M或M 1之連結；且*代表與本文所闡述之ADC中之X A或X B之連結。
在一些實施例中，-(A) a-(W) w-(Y) y-包括非釋放性連接體，其中藥物係在ADC已內化至靶細胞中並降解(從而釋放藥物)之後釋放。
在一些實施例中，連接體(L)經選自由PEG2至PEG20組成之群之聚乙二醇部分取代。在一些實施例中，L經選自由以下組成之群之聚乙二醇部分取代：PEG2、PEG4、PEG6、PEG8、PEG10、PEG12、PEG16及PEG20。在一些實施例中，L未經選自由PEG2至PEG20組成之群之聚乙二醇部分取代。
可使用多分散PEG、單分散PEG及離散PEG來製備ADC及其中間體。多分散PEG係具有不同大小及分子量之異質混合物，而單分散PEG通常係自異質混合物純化而來且由此提供單一鏈長及分子量。離散PEG係以逐步方式合成，而非經由聚合製程合成。離散PEG提供具有界定及指定鏈長之單一分子。PEG單元之-CH 2CH 2O-亞單元之數量(例如)介於8至24或12至24之間，分別稱為PEG8至PEG24及PEG12至PEG24。
本文所提供之PEG部分(其亦稱為PEG單元)包括一或多條聚乙二醇鏈。聚乙二醇鏈(例如)以直鏈、具支鏈或星形構形連接至一起。通常，PEG單元之至少一條聚乙二醇鏈係在一端經衍生以用於共價連接至ADC組分(例如L)上之適當位點。與ADC之實例性連接係藉助非條件性可裂解鍵聯或經由條件性可裂解鍵聯。實例性連接係經由醯胺鍵聯、醚鍵聯、酯鍵聯、腙鍵聯、肟鍵聯、二硫化物鍵聯、肽鍵聯或三唑鍵聯。在一些實施例中，與式(I) ADC之連接係藉助非條件性可裂解鍵聯。在一些實施例中，與ADC之連接並非經由酯鍵聯、腙鍵聯、肟鍵聯或二硫化物鍵聯。在一些實施例中，與ADC之連接並非經由腙鍵聯。
條件性可裂解鍵聯係指在循環於血漿中時對裂解並不實質上敏感但在細胞內或腫瘤內環境中對裂解敏感之鍵聯。非條件性可裂解鍵聯係在投與ADC之個體中之任何生物相關環境中對裂解並不實質上敏感者。腙化學水解、二硫鍵還原及葡萄糖醛酸苷單元之肽鍵或醣苷鍵之酶促裂解(如由WO 2007/011968所闡述，該案件之全部內容以引用方式併入)係條件性可裂解鍵聯之實例。
在一些實施例中，PEG單元在L處直接連接至ADC (或其中間體)。在彼等實施例中，PEG單元之另一末端(或端)係自由的且未系連(亦即未共價連接)，且在一些實施例中其係甲氧基、羧酸、醇或其他適宜官能基。甲氧基、羧酸、醇或其他適宜官能基用作PEG單元之末端聚乙二醇亞單元之帽。未系連意指，PEG單元並未在該未系連位點處共價連接至藥物單元、抗體或藥物單元及/或抗體之連接組分。此一配置可容許足夠長之PEG單元相對於呈結合形式(亦即作為藥物單元(D))之藥物呈平行定向。對於PEG單元包括一條以上聚乙二醇鏈之彼等實施例而言，多條聚乙二醇鏈係獨立選擇，例如係相同或不同化學部分(例如具有不同分子量或-CH 2CH 2O-亞單元數量之聚乙二醇鏈)。具有多條聚乙二醇鏈之PEG單元在單一連接位點處連接至ADC。熟習此項技術者應理解，除包括重複聚乙二醇亞單元外，PEG單元亦可含有非PEG物質(例如用以促進多條聚乙二醇鏈彼此之偶合或用以促進與ADC之偶合)。非PEG物質係指PEG單元中並非重複-CH 2CH 2O-亞單元之一部分之原子。在本文所提供之一些實施例中，PEG單元包括兩條彼此經由非PEG元件連接之單體聚乙二醇鏈。在本文所提供之其他實施例中，PEG單元包括兩條連接至之中心核心(其連接至ADC)之線性聚乙二醇鏈(亦即，PEG單元本身具支鏈)。
熟習此項技術者可利用諸多PEG連接方法：例如參見：Goodson等人，(1990) Bio/Technology8:343 (在定點誘變之後於醣基化位點處對介白素-2實施聚乙二醇化)；EP 0 401 384 (使PEG偶合至G-CSF)；Malik等人，(1992) Exp. Hematol. 20:1028-1035 (使用三氟代乙烷磺醯氯對GM-CSF實施聚乙二醇化)；ACT Pub. No. WO 90/12874 (使用半胱胺酸特異性mPEG衍生物對含有重組引入之半胱胺酸殘基之紅血球生成素實施聚乙二醇化)；美國專利第5,757,078號(對EPO肽實施聚乙二醇化)；美國專利第5,672,662號(用於生物技術應用之經丙酸或丁酸及其功能衍生物單取代之聚(乙二醇)及相關聚合物)；美國專利第6,077,939號(對肽之N-末端α碳實施聚乙二醇化)；Veronese等人，(1985) Appl. Biochem. Bioechnol11:141-142 (使用PEG-硝基苯基碳酸酯(「PEG-NPC」)或PEG-三氯苯基碳酸酯對肽之N-末端α碳實施聚乙二醇化)；及Veronese (2001) Biomaterials22:405-417 (關於肽及蛋白質聚乙二醇化之綜述文章)。
舉例而言，PEG單元可經由含聚乙二醇化合物及胺基酸殘基之反應性基團共價結合至胺基酸殘基。胺基酸殘基之反應性基團包含對活化PEG分子具有反應性者(例如游離胺基或羧基)。舉例而言，N-末端胺基酸殘基及離胺酸(K)殘基具有游離胺基；且C-末端胺基酸殘基具有游離羧基。硫醇基(如半胱胺酸殘基上所發現)亦可用作用於與PEG形成共價連接之反應性基團。另外，已闡述在多肽之C-末端特異性引入活化基團(例如醯肼、醛及芳香族-胺基)之酶輔助方法。 參見Schwarz等人，(1990) Methods Enzymol.184:160；Rose等人，(1991) Bioconjugate Chem. 2:154；及Gaertner等人，(1994) J. Biol. Chem. 269: 7224。
在一些實施例中，含聚乙二醇化合物使用具有不同反應性部分之甲氧基化PEG (「mPEG」)與胺基形成共價連接。該等反應性部分之非限制性實例包含琥珀酸琥珀醯亞胺基酯(SS)、碳酸琥珀醯亞胺基酯(SC)、mPEG-亞胺酸酯、對硝基苯基碳酸酯(NPC)、丙酸琥珀醯亞胺基酯(SPA)及氰尿醯氯。該等mPEG之非限制性實例包含mPEG-琥珀酸琥珀醯亞胺基酯(mPEG-SS)、mPEG 2-琥珀酸琥珀醯亞胺基酯(mPEG 2-SS)；mPEG-碳酸琥珀醯亞胺基酯(mPEG-SC)、mPEG 2-碳酸琥珀醯亞胺基酯(mPEG 2-SC)；mPEG-亞胺酸酯、mPEG-對硝基苯基碳酸酯(mPEG-NPC)、mPEG-亞胺酸酯；mPEG 2-對硝基苯基碳酸酯(mPEG 2-NPC)；mPEG-丙酸琥珀醯亞胺基酯(mPEG-SPA)；mPEG 2-丙酸琥珀醯亞胺基酯(mPEG--SPA)；mPEG-N-羥基-琥珀醯亞胺(mPEG-NHS)；mPEG 2-N-羥基-琥珀醯亞胺(mPEG 2--NHS)；mPEG-氰尿醯氯；mPEG 2-氰尿醯氯；mPEG 2-離胺醇-NPC及mPEG 2-Lys-NHS。
通常，對至少一條構成PEG之聚乙二醇鏈實施官能化以共價連接至ADC。作為PEG前體之含聚乙二醇化合物之官能化包含(例如)經由胺、硫醇、NHS酯、馬來醯亞胺、炔烴、疊氮化物、羰基或其他官能基進行者。在一些實施例中，PEG進一步包括非PEG物質(亦即不包括-CH 2CH 2O-之物質)，以提供至ADC之偶合或在構築含聚乙二醇化合物或PEG時促進兩條或更多條聚乙二醇鏈之偶合。
在一些實施例中，在ADC中存在PEG單元能夠對所得ADC之藥物動力學具有兩個潛在影響。一個影響係降低了清除(且由此增加暴露)，此係源於由藥物單元之所暴露疏水性元件誘導之非特異性相互作用之減少。第二影響係降低了體積及分佈速率，此有時係源於ADC分子量之增加。增加聚乙二醇亞單元之數量會增加結合物之流體動力學半徑，從而通常降低擴散性。繼而，降低之擴散性通常減弱ADC滲透至腫瘤中之能力。 參見Schmidt及Wittrup, Mol Cancer Ther2009；8:2861-2871。因該兩種競爭性藥物動力學效應，可期望使用足夠大之PEG單元以降低ADC清除，由此增加血漿暴露，但不應大至大大減弱其擴散性，此會導致干擾ADC到達預期靶細胞群體之能力。 例如參見US 2016/0310612之實例1、18及21，該案件以引用方式併入本文中(例如關於選擇用於特定藥物單元、連接體及/或藥物-連接體化合物之最佳PEG單元大小之方法)。
在一組實施例中，PEG單元包括一或多條線性聚乙二醇鏈，每一條鏈具有至少8個亞單元、至少9個亞單元、至少10個亞單元、至少11個亞單元、至少12個亞單元、至少13個亞單元、至少14個亞單元、至少15個亞單元、至少16個亞單元、至少17個亞單元、至少18個亞單元、至少19個亞單元、至少20個亞單元、至少21個亞單元、至少22個亞單元、至少23個亞單元或至少24個亞單元。在一些實施例中，PEG包括總共至少8個亞單元、至少10個亞單元或至少12個亞單元。在一些該等實施例中，PEG包括總共不超過約72個亞單元。在一些該等實施例中，PEG包括總共不超過約36個亞單元。在一些實施例中，PEG包括約8至約24個亞單元(稱為PEG8至PEG24)。
在另一組實施例中，PEG單元包括總共8至72、8至60、8至48、8至36或8至24個亞單元、9至72、9至60、9至48、9至36或9至24個亞單元、10至72、10至60、10至48、10至36或10至24個亞單元、11至72、11至60、11至48、11至36或11至24個亞單元、12至72、12至60、12至48、12至36或12至24個亞單元、13至72、13至60、13至48、13至36或13至24個亞單元、14至72、14至60、14至48、14至36或14至24個亞單元、15至72、15至60、15至48、15至36或15至24個亞單元、16至72、16至60、16至48、16至36或16至24個亞單元、17至72、17至60、17至48、17至36或17至24個亞單元、18至72、18至60、18至48、18至36或18至24個亞單元、19至72、19至60、19至48、19至36或19至24個亞單元、20至72、20至60、20至48、20至36或20至24個亞單元、21至72、21至60、21至48、21至36或21至24個亞單元、22至72、22至60、22至48、22至36或22至24個亞單元、23至72、23至60、23至48、23至36或23至24個亞單元或24至72、24至60、24至48、24至36或24個亞單元。
可用於本文所提供之任一實施例中之闡釋性直鏈PEG如下：
Figure 02_image514
其中波浪線指示與ADC之連接位點，且每一下標b獨立地選自由以下組成之群：7至72、8至72、10至72、12至72、6至24或8至24。在一些實施例中，每一下標b為約8、約12或約24。
如本文所闡述，PEG單元可經選擇以便其改良所得ADC之清除，但不顯著影響ADC滲透至腫瘤中之能力。
在一些實施例中，PEG為約300道爾頓至約5千道爾頓、約300道爾頓至約4千道爾頓、約300道爾頓至約3千道爾頓、約300道爾頓至約2千道爾頓、約300道爾頓至約1千道爾頓或其間之任何值。在一些實施例中，PEG具有至少8、10或12個亞單元。在一些實施例中，PEG單元為PEG8至PEG72，例如PEG8、PEG10、PEG12、PEG16、PEG20、PEG24、PEG28、PEG32、PEG36、PEG48或PEG72。
在一些實施例中，除ADC之聚乙二醇化，在ADC中不存在其他PEG亞單元(亦即，不存在作為本文所提供之結合物及連接體之任一其他組分(例如A及X B)之一部分之PEG亞單元)。在一些實施例中，除PEG外，在ADC或其中間體中存在不超過8、不超過7、不超過6、不超過5、不超過4、不超過3、不超過2或不超過1個其他聚乙二醇(-CH 2CH 2O-)亞單元(亦即，在本文所提供之ADC (或其中間體)之其他組分中存在不超過8、7、6、5、4、3、2或1其他聚乙二醇亞單元)。
應瞭解，在提及PEG單元之聚乙二醇亞單元時且端視上下文，亞單元數量可代表平均數量，例如在提及ADC或其中間體之群體及/或使用多分散PEG時。 使用方法
在一些實施例中，本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽用於將所結合藥物遞送至靶細胞中。不受限於理論，在一些實施例中，ADC與靶細胞表面上之抗原締合。藥物單元然後可以游離藥物形式釋放以誘導其生物效應(例如免疫刺激效應)。藥物單元亦可保持連接至抗體或抗體之一部分及/或連接體，並誘導其生物效應。
一些實施例提供治療有需要之個體之癌症之方法，其包括向個體投與治療有效量之本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽。
一些實施例提供治療有需要之個體之癌症之方法，其包括向個體投與治療有效量之包括本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽之組合物。
一些實施例提供誘導有需要之個體中之抗腫瘤免疫反應之方法，其包括向個體投與治療有效量之包括本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽之組合物。
一些實施例提供誘導有需要之個體中之抗腫瘤免疫反應之方法，其包括向個體投與治療有效量之本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽。
一些實施例提供治療有需要之個體之癌症之方法，其包括向個體投與治療有效量之如本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽與另一抗癌療法(例如手術及輻射療法)及/或抗癌劑(例如免疫療法，例如尼沃魯單抗(nivolumab)或派姆單抗(pembrolizumab))的組合。可在向個體投與抗癌療法及/或抗癌劑之前、期間或之後投與本文所闡述之ADC。在一些實施例中，可在使用輻射治療後及/或在手術之後向個體投與本文所闡述之ADC。
一些實施例提供延遲或預防對抗癌劑之獲得性抗性之方法，其包括向處於產生或具有針對抗癌劑之獲得性抗性之風險下之患者投與治療有效量之如本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，向患者投與一定劑量之抗癌劑(例如與向患者投與如本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽之劑量實質上同時)。
一些實施例提供延遲及/或預防在個體中發生抵抗抗癌劑之癌症之方法，其包括在投與治療有效量之抗癌劑之前、期間或之後向個體投與治療有效量之如本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽。
本文所闡述之ADC可用於抑制癌細胞繁殖，使癌細胞發生細胞凋亡，增加癌細胞之吞噬作用，及/或治療有需要之個體之癌症。ADC可由此用於癌症治療之各種環境中。可使用ADC將藥物遞送至癌細胞中。不受限於理論，在一些實施例中，ADC之抗體與癌細胞相關抗原結合或締合。抗原可連接至癌細胞或可為與癌細胞締合之細胞外基質蛋白。藥物可釋放於癌細胞附近，由此募集/活化免疫細胞以攻擊癌細胞。在一些實施例中，藥物單元自ADC裂解於癌細胞外部。在一些實施例中，藥物單元保持連接至與抗原結合之抗體。
在一些實施例中，抗體結合至癌細胞。在一些實施例中，抗體結合至癌細胞表面上之癌細胞抗原。在一些實施例中，抗體結合至作為與腫瘤細胞或癌細胞締合之細胞外基質蛋白之癌細胞抗原。在一些實施例中，ADC之抗體與癌症相關細胞或癌症相關細胞上之抗原結合或締合。在一些實施例中，癌症相關細胞係腫瘤中之基質細胞，例如癌症相關纖維母細胞(CAF)。
在一些實施例中，ADC之抗體與免疫細胞或免疫細胞相關抗原結合或締合。抗原可連接至免疫細胞或可為與免疫細胞締合之細胞外基質蛋白。藥物可釋放於免疫細胞附近，由此募集/活化免疫細胞以攻擊癌細胞。在一些實施例中，藥物單元自ADC裂解於免疫細胞外部。在一些實施例中，藥物單元保持連接至與抗原結合之抗體。在一些實施例中，免疫細胞係淋巴球、抗原呈遞細胞、天然殺手(NK)細胞、嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、肥大細胞、先天性淋巴樣細胞或前述各項中之任一者之組合。在一些實施例中，免疫細胞係選自由以下組成之群：B細胞、漿細胞、T細胞、NKT細胞、伽馬-德爾塔T (γδT)細胞、單核球、巨噬球、樹突狀細胞、天然殺手(NK)細胞、嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、肥大細胞、先天性淋巴樣細胞及前述各項中之任一者之組合。
特定癌細胞之抗體之特異性可能對於確定最有效治療之彼等腫瘤或癌症較為重要。舉例而言，在一些實施例中，靶向存在於造血癌細胞上之癌細胞抗原之ADC可治療血液學惡性腫瘤。在一些實施例中，ADC靶向存在於實體腫瘤之異常細胞上之癌細胞抗原以用於治療該等實體腫瘤。在一些實施例中，ADC係針對造血性癌症(例如淋巴瘤(何傑金氏淋巴瘤(Hodgkin Lymphoma)及非何傑金氏淋巴瘤)及白血病)之異常細胞。
在一些實施例中，藉由投與ADC來治療或抑制癌症，包含(但不限於)腫瘤、轉移或特徵在於異常細胞(其特徵在於不受控細胞生長)之其他疾病或病症。
在一些實施例中，個體先前已經受癌症治療。在一些實施例中，先前治療係手術、輻射療法、投與一或多種抗癌劑或前述各項中之任一者之組合。
在本文所闡述之任一方法中，癌症係選自由以下組成之群：腺癌、腎上腺皮質癌、腎上腺神經母細胞瘤、肛門鱗狀細胞癌、闌尾腺癌、膀胱尿路上皮癌、膽管腺癌、膀胱癌、膀胱尿路上皮癌、骨脊索瘤、淋巴球性慢性骨髓白血病、非淋巴球性急性骨髓細胞性骨髓白血病、骨髓淋巴增殖性疾病、骨髓多發性骨髓瘤、骨肉瘤、腦星形細胞瘤、腦神經膠母細胞瘤、腦髓母細胞瘤、腦膜瘤、腦寡樹突神經膠細胞瘤、乳房腺樣囊性癌、乳癌、原位乳房導管癌、乳房侵襲性導管癌、乳房侵襲性小葉癌、乳房化生癌、子宮頸神經內分泌癌、子宮頸鱗狀細胞癌、結腸腺癌、結腸類癌腫瘤、十二指腸腺癌、子宮內膜樣腫瘤、食道腺癌、食道-胃癌、眼內黑色素瘤、眼內鱗狀細胞癌、眼睛淚管癌、輸卵管管漿液性癌、膽囊腺癌、膽囊血管球腫瘤、胃食道結合部腺癌、頭頸腺樣囊性癌、頭頸癌、頭頸神經母細胞瘤、頭頸鱗狀細胞癌、腎嫌色性癌、腎髓質癌、腎細胞癌、腎乳頭狀癌、腎肉瘤樣癌、腎尿路上皮癌、腎癌、淋巴球性白血病、淋巴球性慢性白血病、肝膽管癌、肝細胞癌、肝癌、肺腺癌、肺腺鱗狀癌、肺非典型類癌、肺癌肉瘤、肺大細胞神經內分泌癌、肺非小細胞肺癌、肺肉瘤、肺肉瘤樣癌、肺小細胞癌、肺小細胞未分化癌、肺鱗狀細胞癌、上呼吸消化道鱗狀細胞癌、上呼吸消化道癌、瀰漫性大B細胞淋巴結淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤-淋巴結淋巴瘤、縱隔B細胞淋巴結淋巴瘤、漿母細胞性肺腺癌-淋巴結淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、非何傑金氏淋巴瘤、鼻咽及鼻旁竇未分化癌、卵巢癌、卵巢癌肉瘤、卵巢透明細胞癌、卵巢上皮癌、卵巢粒層細胞腫瘤、卵巢漿液性癌、胰臟癌、胰臟導管腺癌、胰臟神經內分泌癌、腹膜間皮瘤、腹膜漿液性癌、胎盤絨毛膜癌、胸膜間皮瘤、前列腺腺泡腺癌、前列腺癌、直腸腺癌、直腸鱗狀細胞癌、皮膚附屬器癌、皮膚基底細胞癌、皮膚黑色素瘤、皮膚默克爾細胞(Merkel cell)癌、皮膚鱗狀細胞癌、小腸腺癌、小腸胃腸道基質腫瘤(GIST)、大腸/結腸癌、大腸腺癌、軟組織血管肉瘤、軟組織尤恩氏肉瘤(soft tissue Ewing sarcoma)、軟組織血管內皮瘤、軟組織發炎性肌纖維母細胞腫瘤、軟組織平滑肌肉瘤、軟組織脂肪肉瘤、軟組織神經母細胞瘤、軟組織副神經節瘤、軟組織血管周上皮樣細胞腫瘤、軟組織肉瘤、軟組織滑膜肉瘤、胃腺癌、擴散型胃腺癌、腸型胃腺癌、腸型胃腺癌、胃平滑肌肉瘤、胸腺癌、淋巴球性胸腺瘤、甲狀腺乳頭狀癌、未明原發腺癌、未明原發癌、未明原發惡性贅瘤、淋巴樣贅瘤、未明原發黑色素瘤、未明原發肉瘤樣癌、未明原發鱗狀細胞癌、未明未分化神經內分泌癌、未明原發未分化小細胞癌、子宮癌肉瘤、子宮內膜腺癌、子宮內膜樣子宮內膜腺癌、乳頭狀漿液性子宮內膜腺癌及子宮平滑肌肉瘤。
在一些實施例中，向個體同時投與一或多種其他抗癌劑與本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，個體同時接受輻射療法與本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，在投與本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽之後向個體投與一或多種其他抗癌劑。在一些實施例中，個體在投與本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽之後接受輻射療法。
在一些實施例中，個體已(例如)因不可接受或不能承受之副效應而中斷先前療法，其中先前療法具有過高毒性，或其中個體對先前療法產生抗性。
一些實施例提供延遲或預防疾病或病症之方法，其包括向處於發生疾病或病症之風險下之患者投與治療有效量之如本文所闡述之ADC或其醫藥上可接受之鹽及針對該疾病或病症的疫苗。在一些實施例中，疾病或病症係如本文所闡述之癌症。在一些實施例中，疾病或病症係病毒性病原體。在一些實施例中，經皮下投與疫苗。在一些實施例中，經肌內投與疫苗。在一些實施例中，經由相同途徑來投與ADC及疫苗(舉例而言，ADC及疫苗皆係經皮下投與)。在一些實施例中，經由不同途徑來投與ADC或其醫藥上可接受之鹽及疫苗。在一些實施例中，疫苗及ADC或其醫藥上可接受之鹽提供於單一調配物中。在一些實施例中，疫苗及ADC或其醫藥上可接受之鹽提供於分開調配物中。 組合物及投與方法
一些實施例提供包括如本文所闡述之ADC之分佈之組合物。在一些實施例中，該組合物包括如本文所闡述之ADC之分佈及至少一種醫藥上可接受之載劑。在一些實施例中，投與途徑係非經腸途徑。非經腸投與包含皮下注射、靜脈內、肌內、胸骨內注射或輸注技術。在一些實施例中，非經腸投與組合物。在彼等實施例中之一者中，經靜脈內投與ADC。投與通常係經由任何便利途徑，例如藉由輸注或濃注。
調配ADC組合物以容許在向個體投與組合物時ADC生物可利用。組合物可呈一或多個可注射劑量單元之形式。
用於製備組合物之材料之所用量可無毒。熟習此項技術者將明瞭，組合物中之活性成分之最佳劑量取決於多個因素。相關因素包含(但不限於)類型動物(例如人類)、特定化合物形式、投與方式及所採用組合物。
在一些實施例中，ADC組合物係適於在投與之前重構成液體之固體，例如呈凍乾粉末形式。在一些實施例中，ADC組合物係液體組合物，例如溶液或懸浮液。液體組合物或懸浮液可用於注射遞送且凍乾固體適於使用適用於注射之稀釋劑重構為液體或懸浮液。在藉由注射投與之組合物中，通常包含表面活性劑、防腐劑、潤濕劑、分散劑、懸浮劑、緩衝劑、穩定劑及等滲劑中之一或多者。
在一些實施例中，不論呈溶液、懸浮液抑或其他類似形式，液體組合物亦可包含下列各項中之一或多者：無菌稀釋劑，例如注射用水、鹽水溶液、生理鹽水、林格氏溶液(Ringer’s solution)、等滲氯化鈉；不揮發性油，例如可用作溶劑或懸浮介質之合成單或二甘油酯、聚乙二醇、甘油、環糊精、丙二醇或其他溶劑；抗細菌劑，例如苄醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸；緩衝劑，例如胺基酸、乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；洗滌劑，例如非離子型表面活性劑、多元醇；及用於調節張力之試劑(例如氯化鈉或右旋糖)。非經腸組合物通常封閉於安瓿(由玻璃、塑膠或其他材料製得之可棄式注射器或多劑量小瓶)中。在一些實施例中，無菌稀釋劑包括生理學鹽水。在一些實施例中，無菌稀釋劑係生理學鹽水。在一些實施例中，本文所闡述之組合物係無菌液體可注射組合物。
有效治療特定病症或病狀之ADC量取決於病症或病狀之性質，其通常藉由標準臨床技術來確定。另外，有時採用活體外或活體內分析來幫助確定最佳劑量範圍。組合物中所利用之確切劑量亦將取決於非經腸投與途徑及疾病或病症之嚴重程度，且應根據從業醫師之判斷及各個體之情況來決定。
在一些實施例中，該等組合物包括有效量之ADC，從而獲得適宜劑量。通常，此量為至少約0.01%之ADC (基於組合物重量)。
在一些實施例中，投與個體之ADC之組合物劑量為約0.01 mg/kg個體體重至約100 mg/kg個體體重、約1 mg/kg個體體重至約100 mg/kg個體體重或約0.1 mg/kg個體體重至約25 mg/kg個體體重。在一些實施例中，投與個體之劑量為約0.01 mg/kg個體體重至約15 mg/kg個體體重。在一些實施例中，投與個體之劑量為約0.1 mg/kg個體體重至約15 mg/kg個體體重。在一些實施例中，投與個體之劑量為約0.1 mg/kg個體體重至約20 mg/kg個體體重。在一些實施例中，投與劑量為約0.1 mg/kg個體體重至約5 mg/kg個體體重或約0.1 mg/kg個體體重至約10 mg/kg個體體重。在一些實施例中，投與劑量為約1 mg/kg個體體重至約15 mg/kg個體體重。在一些實施例中，投與劑量為約1 mg/kg個體體重至約10 mg/kg個體體重。在一些實施例中，一個治療週期中之投與劑量為約0.1 mg/kg個體體重至約4 mg/kg個體體重、約0.1 mg/kg個體體重至約3.2 mg/kg個體體重或約0.1 mg/kg個體體重至約2.7 mg/kg個體體重。
術語「載劑」係指與所投與化合物一起投與之稀釋劑、佐劑或賦形劑。該等醫藥載劑係液體。在經靜脈內投與化合物時，水係實例性載劑。鹽水溶液及右旋糖與甘油水溶液亦可用作用於可注射溶液之液體載劑。適宜醫藥載劑亦包含甘油、丙烯、乙二醇或乙醇。在一些實施例中，本發明組合物(若期望)亦含有極少量之潤濕劑或乳化劑及/或pH緩衝劑。
在一些實施例中，根據常規程序將ADC調配為適於經靜脈內投與動物、尤其人類之組合物。通常，用於靜脈內投與之載劑或媒劑係無菌等滲水性緩衝溶液。在一些實施例中，該組合物進一步包括局部麻醉劑(例如利多卡因(lignocaine))以減輕注射部位處之疼痛。在一些實施例中，ADC及調配物之其他部分可分開供應或以單位劑型混合在一起，例如作為於指示活性劑之量之氣密性密封容器(例如安瓿或小藥囊)中之乾燥凍乾粉劑或無水濃縮物。倘若ADC擬藉由輸注來投與，則有時(例如)使用含有無菌醫藥級水或鹽水之輸注瓶來分配該組合物。若ADC係藉由注射來投與，則通常提供含有注射用無菌水或鹽水之安瓿以使得可在投與之前混合各成分。
該等組合物通常調配為無菌、實質上等滲且完全符合美國食品藥物管理局(U.S. Food and Drug Administration)之所有良好製造實踐(Good Manufacturing Practice，GMP)規範。 實例 一般方法：
所有市售無水溶劑皆未經進一步純化即使用。除非另有所述，否則所有市售試劑皆未經進一步純化即使用。在矽膠60 F254鋁片或玻璃板(EMD Chemicals, Gibbstown, NJ)上實施分析型薄層層析(TLC)。在Biotage Isolera One™急速純化系統20或Biotage Selekt™急速純化系統(Charlotte, NC)上實施急速管柱層析。在以下4種系統中之一者上實施UPLC-MS分析。UPLC-MS系統1：界接至Waters Acquity UPLC系統之Waters單四極檢測器質譜儀，該UPLC系統配備有Waters Acquity UPLC BEH C18 2.1 × 50 mm、1.7 µm反相管柱。UPLC-MS系統2：界接至Waters Acquity H類超高效LC之Waters Xevo G2 TOF質譜儀，該LC配備有C8 Phenomenex Synergi 2.0 × 150 mm、4 μm,、80 Å反相管柱與Waters 2996光二極體陣列檢測器。UPLC-MS系統3 (C18)：與二極體陣列檢測器(DAD)及正ESI質譜儀界接之Shimadzu LC-20 AD & MS 2020，該質譜儀配備有Luna-C18 2.0×30 mm、3 μm粒度反相管柱(維持於40℃下)或Kinetex-C18 2.1×30 mm、5 μm反相管柱(維持於40℃下)。UPLC-MS系統4 (C18)：界接至二極體陣列檢測器(DAD)及Agilent 6110B正ESI四極質譜儀之Agilent 1200系列LC系統，該質譜儀配備有Kinetex-C18 2.1×50 mm、5 μm反相管柱(維持於40℃下)。
使用如本文所闡述之方法A-E中之一者來洗脫化合物。
方法A -在1.0 min內使用5-95%乙腈/水之線性梯度(1 mL/min)，隨後使用95%乙腈之等梯度流直至1.80 min (1.0 mL/min)且至2.20 min管柱平衡回5%乙腈(1.2 mL/min)。水含有0.037% TFA (v/v)且乙腈含有0.018% TFA (v/v)。所用管柱係Phenomenex Luna C18 2.0×30mm、3 µm反相管柱。
方法B -在1.0 min內使用5-95%乙腈/水之線性梯度(1 mL/min)，隨後使用95%乙腈之等梯度流直至1.80 min (1.0 mL/min)且至2.20 min管柱平衡回5%乙腈(1.2 mL/min)。水含有0.05% TFA (v/v)且乙腈含有0.05% TFA (v/v)。所用管柱係Phenomenex Kinetex C18 2.1×30mm、5 µm反相管柱。
方法C -在0.4 min內使用5%乙腈/水之等梯度流，隨後使用5-95%乙腈/水之線性梯度直至3.0 min，隨後使用95%乙腈之等梯度流直至4.0 min且至4.5 min管柱平衡回5%乙腈。流速為1.0 mL/min，並且水含有0.05% TFA (v/v)且乙腈含有0.05% TFA (v/v)。所用管柱係Phenomenex Kinetex C18 2.1×30mm、5 µm反相管柱。
方法D -在1.7 min內使用3- 60%乙腈之線性梯度，然後使用60-95%乙腈直至2.0 min，隨後使用95%乙腈之等梯度流直至2.5 min，隨後管柱平衡回3%乙腈。流速為0.6 mL/min，並且水含有0.1% (v/v)甲酸且乙腈含有0.1% (v/v)甲酸。所用管柱係Waters Acquity UPLC BEH C18 2.1 × 50 mm、1.7 µm反相管柱或C8 Phenomenex Synergi 2.0 × 150 mm、4 μm反相管柱。
方法E -在1.5 min內使用3 - 95%乙腈之線性梯度，隨後使用95%乙腈之等梯度洗脫直至2.4 min，隨後平衡回3%乙腈。流速為0.6 mL/min，並且水含有0.1% (v/v)甲酸且乙腈含有0.1% (v/v)甲酸。所用管柱係Waters Acquity UPLC BEH C18 2.1 × 50 mm、1.7 µm反相管柱或C8 Phenomenex Synergi 2.0 × 150 mm、4 μm反相管柱。
除非另外指定，否則在兩種儀器中之一者上使用本文所列示之程序來實施製備型HPLC (製備型HPLC)：(方法F) Shimadzu LC-8a製備型HPLC，具有Phenomenex Luna C-18 250×50 mm (10 μm)，使用含有0.09% (v/v) TFA之水/乙腈移動相，流速為80 mL/min；或Teledyne ISCO ACCQPrep HP150，其配備有以下三種Phenomemex製備型HPLC管柱中之一者：(i) (方法G) 10 × 250 mm Synergi C12, 4 µm, Max-RP 80 Å LC管柱；(ii) (方法H) 21.2 × 250 mm Synergi C12, 4 µm, Max-RP 80 Å LC管柱；或(iii) (方法I) 30 × 250 mm Synergi C12, 4 µm, Max-RP 80 Å LC管柱，使用含有0.05% (v/v)三氟乙酸或0.1% (v/v)甲酸作為添加劑之乙腈/水移動相。
在以下三種儀器中之一者上記錄NMR光譜：Bruker Avance III HD (400 MHz)、Varian 400-MR (400 MHz)或Bruker Avance NEO (400 MHz)。 實例1： STING激動劑及連接體之合成程序 (E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-羥基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物1)之合成
Figure 02_image516
Figure 02_image518
4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲醯胺(化合物2a)之合成
Figure 02_image520
在25℃下，將化合物 1a(4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯，18 g, 73 mmol，1當量)添加至NH 4OH水溶液(300mL，於H 2O中之28% NH 3)中。將反應混合物在40℃下攪拌16 hr，在此期間形成沈澱物。藉由過濾收集沈澱物，使用水洗滌並在真空中乾燥以得到黃色固體形式之 2a(13克，56 mmol，77%產率)。此產物未經進一步純化即用於後續步驟中。UPLC-MS (方法A，ESI+)：m/z (M+H) +231.0 (理論值)；231.2  (觀察值)。HPLC滯留時間：0.93 min。 1H NMR (DMSO- d 6, 400MHz): δ = 8.29 (br s, 1H), 8.05 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.88 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.79 (br s, 1H), 4.02 (s, 3H)。 (E)-(4-((4-胺甲醯基-2-甲氧基-6-硝基苯基)胺基)丁-2-烯-1-基)胺基甲酸第三丁基酯(化合物4a)之合成
Figure 02_image522
在25℃下，向 2a(10 g, 43.4 mmol，1當量)於乙醇(EtOH, 200 mL)中之溶液中添加 3a( (E)-(4-胺基丁-2-烯-1-基)胺基甲酸第三丁基酯，9.69 g, 52.0 mmol，1.2當量)及N,N-二異丙基乙基胺(DIPEA, 16.8 g, 130 mmol，3當量)。將反應混合物在80℃下攪拌64小時，然後藉由過濾收集沈澱物，使用乙醇洗滌，並在高真空下乾燥以得到紅色固體形式之 4a(8克，21 mmol，48%產率)。此產物未經進一步純化即用於後續步驟中。 1 H NMR(DMSO- d 6, 400MHz): δ = 8.18 (s, 1H), 8.01 (br s, 1H), 7.74 (br t, J=5.6 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.31 (br s, 1H), 6.92 (br s, 1H), 5.53 (br s, 2H), 4.08 (br s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.47 (br s, 2H), 1.35 (s, 9H)。 化合物5a之合成
Figure 02_image524
在25℃下，將化合物 4a(8 g, 21.0 mmol，1當量)添加至HCl於乙酸乙酯中之4M溶液(200 mL, 800 mmol HCl)。將反應混合物在25℃下攪拌1 h。藉由過濾收集沈澱物，使用EtOAc洗滌並在高真空下乾燥以得到紅色固體形式之 5a(HCl鹽，7.2 g，定量產率)。此產物未經進一步純化即用於後續步驟中。 1 H NMR(DMSO- d 6, 400MHz): δ = 8.21 (d, J=1.6 Hz, 1H), 8.02 (br s, 4H), 7.59 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.34 (br s, 1H), 5.87 (td, J=5.6, 15.6 Hz, 1H), 5.67 - 5.56 (m, 1H), 4.17 (br d, J=5.6 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.39 (br t, J=5.6 Hz, 2H)。 化合物2b之合成
Figure 02_image526
在20℃及氮下，向化合物 2a(4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲醯胺，16 g, 69.4 mmol，1當量)於二氯甲烷(DCM, 500 mL)中之溶液中逐滴添加三溴化硼溶液(BBr 3，1 M於DCM中，275 mL，4當量)。將反應混合物在20℃下攪拌16 h，此時LC-MS分析(方法B)展示反應已完成。將反應混合物傾倒至冰水(2 L)中並劇烈攪拌20 min。過濾所得懸浮液且使用乙酸乙酯(2 × 300 mL)萃取濾液，藉由無水Na 2SO 4乾燥，過濾並在真空中濃縮以得到粗產物。將粗產物(9 g)溶於DMF (30 mL)中並藉由反相急速層析在Biotage Isolera One (330克Agela C18管柱(20 - 35 µm粒度)，利用含有0.09% (v/v) TFA之水/乙腈，使用以下梯度洗脫：在20 min內20-40%乙腈，隨後在35 min時40 - 45%乙腈)上純化以得到灰白色固體形式之 2b(6克，27.7 mmol，40%產率) 。 LCMS(方法B，ESI+)：m/z [M+H] +217.0 (理論值)；217.2 (觀察值)。HPLC滯留時間：0.84 min。 化合物3b之合成
Figure 02_image528
向 2b(4.5 g, 20.8 mmol，1當量)於二甲基甲醯胺(DMF, 20 mL)中之溶液中添加1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(PMBCl, 3.42 g, 21.8 mmol，1.05當量)及碳酸銫(Cs 2CO 3, 7.45 g, 22.9 mmol，1.1當量)，將反應混合物在25℃下攪拌12 h，此時LC-MS分析(方法B)展示反應已完成。將反應混合物傾倒至冰水中，且過濾沈澱物並乾燥以得到淺黃色固體形式之 3b(6.4克，19.0 mmol，91%產率))。此產物未經進一步純化即用於後續步驟中。 LC-MS(方法B，ESI+)：m/z [M+H] +：337.1 (理論值)；337.2 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.11 min。 化合物5之合成
Figure 02_image530
將 5a(762 mg, 2.16 mmol，1.2當量)於正丁醇(10 mL)中之溶液添加至小瓶中，隨後添加DIPEA (1.11 g, 8.62 mmol，4.8當量)及碳酸氫鈉(457 mg, 4.31 mmol，2當量)。密封小瓶且將反應混合物在20℃下攪拌10 min。隨後添加 3b(600 mg, 1.78 mmol，2.4當量)，且將反應混合物在115℃下攪拌20小時，此時UPLC-MS分析(方法B)展示反應已完成。如上文所闡述再設置4個小瓶。在反應結束時合併所有5種反應混合物。將合併之所得反應混合物冷卻至20℃並使用MeCN (180 mL)稀釋。過濾反應混合物中之固體材料並使用MeCN (80 mL)沖洗以得到深紅色固體。然後使用水洗滌固體並在高真空下乾燥以得到磚紅色固體形式之 5(2.7克，4.65 mmol，52%產率)。此產物未經進一步純化即用於後續步驟中。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6): δ = 8.17 (dd, J=1.9, 7.8 Hz, 2H), 8.08 - 7.96 (m, 2H), 7.77 - 7.63 (m, 3H), 7.51 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.37 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.33 (br s, 2H), 6.92 (d, J=8.6 Hz, 2H), 5.57 - 5.42 (m, 2H), 5.04 (s, 2H), 4.01 (q, J=5.8 Hz, 4H), 3.79 (s, 3H), 3.74 (s, 3H). 化合物6之合成
Figure 02_image532
向 5(2 g, 3.45 mmol，1當量)於甲醇及水之1:1 (v/v)混合物(160 mL)中之溶液中添加Na 2CO 3(10.95 g, 103 mmol，30當量)及二硫亞磺酸鈉(Na 2S 2O 4, 8.40 g, 48.2 mmol，14當量)。將所得紅色反應混合物在25℃下攪拌12 h，此時紅色混合物變成淺黃色，且UPLC-MS分析(方法B)展示反應已完成。過濾反應混合物，且濃縮濾液並使用水稀釋。使用EtOAc萃取混合物且 濃縮有機層以得到灰白色固體形式之 6(1.0克，1.81 mmol，52%產率)。此產物未經進一步純化即用於後續步驟中。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ = 7.61 (br s, 2H), 7.37 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.97 (br s, 2H), 6.94 (s, 1H), 6.93 - 6.90 (m, 2H), 6.86 (s, 2H), 6.77 (d, J=1.8 Hz, 1H), 5.71 - 5.53 (m, 2H), 4.98 (s, 2H), 4.65 (br d, J=12.6 Hz, 4H), 3.74 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.49 (br s, 4H)。 化合物7之合成
Figure 02_image534
向 6(1.4 g, 2.69 mmol，1當量)於甲醇(20 mL)中之溶液中添加溴化氰(BrCN, 1.71 g, 16.1 mmol，6當量)。將反應混合物在25℃下攪拌2 h，在此期間觀察到沈澱物。LC-MS分析(方法C)展示反應已完成。藉由過濾收集固體，使用乙醇及石油醚洗滌以得到淺黃色固體形式之 7 (1.2 g, 1.64 mmol，61%產率)。此產物未經進一步純化即用於後續步驟中。 LC-MS(方法C，ESI+)：m/z [M+H] +571.2 (理論值)；571 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.634 min。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ = 12.94 (br s, 2H), 8.63 (br d, J=12.8 Hz, 4H), 8.08 (br s, 2H), 7.62 - 7.52 (m, 3H), 7.47 (br s, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.24 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.84 (d, J=8.6 Hz, 2H), 5.81 - 5.69 (m, 1H), 5.57 (td, J=5.4, 15.5 Hz, 1H), 5.07 (s, 2H), 4.80 (br t, J=6.6 Hz, 4H), 3.74 (s, 3H), 3.69 (s, 3H)。 化合物9之合成
Figure 02_image536
向化合物 8(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，331 mg, 2.15 mmol，2.1當量)於二甲基甲醯胺(DMF, 3 mL)中之溶液中添加六氟磷酸1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物(HATU, 973 mg, 2.56 mmol，2.5當量)且將反應混合物在60℃下攪拌10 min。然後將DIPEA (596 mg, 4.61 mmol，4.5當量)及 7(750 mg, 1.02 mmol，1當量)於DMF (1 mL)中之溶液添加至反應混合物中，在60℃下攪拌2 h，此時LC-MS分析(方法B)展示反應已完成。將反應混合物傾倒至冰水中，藉由過濾收集固體並乾燥以得到粗產物。粗產物未經進一步純化即用於下一步驟中。 LC-MS(方法B，ESI+)：m/z [M+H] +843.4 (理論值)；843.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.062 min。 化合物1之合成
Figure 02_image538
將化合物 9 (700 mg, 0.83 mmol)添加至含有三氟乙酸(TFA, 3 mL)之玻璃小瓶中，且將所得混合物在25℃下攪拌2 h,，此時LC-MS分析展示反應已完成。在真空中去除TFA且將殘餘物溶於DMSO及乙腈中，並藉由製備型HPLC (方法F)純化以得到灰白色固體形式之 1(40 mg, 0.055 mmol，經2個步驟之產率為7%)。 LCMS(方法B，ESI+)：m/z [M+H] +723.3 (理論值)；723.1 (觀察值)；[M+H] +, HPLC滯留時間：2.04 min。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ = 13.00 - 12.51 (m, 2H), 10.41 (s, 1H), 7.96 (br s, 1H), 7.81 (br s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.22 (br s, 1H), 7.14 - 7.07 (m, 1H), 6.51 (br d, J=11.0 Hz, 2H), 5.97 - 5.75 (m, 2H), 4.91 (br dd, J=3.5, 16.3 Hz, 4H), 4.51 (br d, J=3.3 Hz, 4H), 3.77 (s, 3H), 2.10 (d, J=6.0 Hz, 6H), 1.25 (dt, J=3.6, 6.9 Hz, 6H)。 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-((((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)羰基)(甲基)胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)-3-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-吡喃-2-甲酸(化合物11)之合成 化合物10b之合成
Figure 02_image540
如先前所報導( ACS Med. Chem. Lett. 2010, 1, 6, 277-280)來製備化合物 10a。
向烘乾之4 mL玻璃小瓶中裝填 10a(150 mg, 0.20 mmol，1當量)及碳酸五氟苯基酯(88 mg, 0.22 mmol，1.1當量)、DMF (1 mL)及DIPEA (0.15 mL, 0.86 mmol，4.3當量)。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘，此時觀察到淺粉紅色均質溶液。 將甲基(2-(甲基胺基)乙基)胺基甲酸第三丁基酯(50 uL, 0.27 mmol，1.3當量)添加至溶液中，此使得反應混合物變成淺黃色。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。使用水(50 mL)稀釋反應混合物，轉移至分液漏斗中並使用EtOAc (3×50 mL)萃取。收集有機層併合併，使用1M HCl洗滌，使用MgSO 4乾燥，過濾並在真空中去除溶劑。藉由急速管柱層析(25g SiO 2管柱，使用於DCM中之0 - 25% MeOH洗脫)純化所得固體以產生淺黃色固體形式之 10b(70.4 mg, 0.073 mmol，36%產率)。UPLC-MS (方法E，ESI+) m/z [(M-Boc)+2H] +：863.33 (理論值)；863.14 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.54 min。 化合物10c之合成
Figure 02_image542
將化合物 10b(70.4 mg, 0.073 mmol，1當量)以MeOH溶液形式轉移至配備有磁攪拌棒之烘乾之4 mL玻璃小瓶中。在真空下去除MeOH並使用氬回填小瓶。在Ar下，向小瓶中添加MeOH (0.5 mL)且將所得溶液冷卻至0℃，並添加甲醇鈉(於MeOH中之0.5 M溶液，150 uL, 0.075 mmol，1當量)。藉由LC-MS (方法D)監測反應且在完全去除所有三個乙酸酯基團後，添加氫氧化鋰(1M於水中，0.225 mL, 0.225 mmol，3當量)且將反應混合物在室溫下攪拌30 min。將DMSO (0.5 mL)及冰乙酸(50 uL)添加至反應混合物中，從而產生均質溶液。藉由製備型HPLC (方法H，於水中之5 - 40% MeCN，使用0.05% TFA作為移動相添加劑)純化粗產物以得到白色固體形式之 10c(16.8 mg, 0.028 mmol，38%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M+H] +601.26 (理論值)；601.15 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.09 min。 化合物10d之合成
Figure 02_image544
將化合物 10c(16.8 mg, 0.028 mmol，1當量)以MeOH溶液形式添加至配備有磁攪拌棒之烘乾之4 mL玻璃小瓶中。在真空下去除MeOH並使用氬填充小瓶。向小瓶中添加3-(馬來醯亞胺基)丙酸N-羥基琥珀醯亞胺酯(MP-OSu, 16 mg, 0.06 mmol，2當量)，隨後添加DMF (0.5 mL)及DIPEA (50 uL, 0.28 mmol，10當量)。在15分鐘之後，添加DMSO (0.5 mL)及冰乙酸(100 uL)並藉由製備型HPLC (方法H，於水中之10 - 60% MeCN，使用0.05% TFA作為移動相添加劑)純化粗產物以得到白色固體形式之 10d(15 mg, 0.020 mmol，71%產率)。UPLC-MS (方法A，ESI+)：m/z [M+H] +: 752.29 (理論值)；752.26 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.27 min。 化合物10之合成
Figure 02_image546
將化合物 10d(15 mg, 0.020 mmol，1當量)溶於於DCM中之20% (v/v) TFA (1 mL)中並轉移至配備有磁攪拌棒之4 mL玻璃小瓶中。使小瓶保持敞開且藉由LC-MS監測反應進展。在2h之後，在真空中去除溶劑以得到白色固體形式之 10(13 mg, 0.02 mmol，定量產率)，其未經任何進一步純化即用於後續步驟中。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M+H] +: 652.24 (理論值)；652.45 (觀察值)。HPLC滯留時間：0.69 min。 化合物11之合成
Figure 02_image548
向烘乾之4 mL玻璃小瓶中添加化合物 1(9.5 mg, 0.010 mmol，1當量)，隨後添加DMF (0.5 mL)、碳酸對硝基苯基酯(9.0 mg, 0.030 mmol，3當量)及DIPEA (20 uL, 0.115 mmol，11.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，此時藉由UPLC-MS分析(方法D)證實完全轉化成 11a。將化合物 10(20 mg, 0.031 mmol，3.1當量)單份添加至反應混合物中，在室溫下攪拌2 h。添加冰乙酸(20 uL)並藉由製備型HPLC (方法H，於水中之0 - 45% MeCN，使用0.05% TFA作為移動相添加劑)純化粗產物。合併含有 11之部分且經由凍乾去除溶劑以得到 11(6.31 mg, 0.0039 mmol，39%產率)。亦回收白色絨毛狀固體形式之化合物 1(2.81 mg, 0.0030 mmol，30%回收率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M+H] +: 1400.52 (理論值)；1400.25 (觀察值)及[M+2H] 2+= 701.43 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.28 min。 (E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙醯胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物12)之合成
Figure 02_image550
如先前所報導(WO2017/175147，實例40，第292頁)來製備化合物 12a。
向 12a(28.7 mg, 0.032 mmol，1.0當量)於DMA (635 µL)中之溶液中添加MP-OSu (15.9 mg, 0.0596 mmol，1.9當量)及DIPEA (35 µL, 0.199 mmol，6.2當量)。將反應混合物在室溫下攪拌1 h。在完成後，在減壓下濃縮溶液且藉由製備型HPLC (方法G，於水中之20-50-95% MeCN，使用0.1%甲酸作為移動相添加劑)純化粗產物以產生 12(46%產率，17.8 mg, 0.0152 mmol)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M+H] +945.40 (理論值)；945.72 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.79 min。 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)-3-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-吡喃-2-甲酸(化合物13)之合成 化合物13a及13b之合成
Figure 02_image552
將化合物 10a(13 mg, 0.017 mmol)溶於DMA (87 µL)中。向此溶液中添加碳酸五氟苯基酯(13.7 mg, 0.035 mmol)及DIPEA (14 µL, 0.078 mmol)。將混合物在室溫下攪拌30 min。在完全轉化成中間體 13a後，將此溶液轉移至含有 12a(10.6 mg, 0.012 mmol)之第二小瓶中。將反應混合物在室溫下攪拌18 h。然後使用水稀釋反應液並使用EtOAc (20 mL × 3)萃取三次。然後使用1M HCl洗滌合併之有機層。合併有機層，使用MgSO 4乾燥，過濾，並在真空中濃縮。藉由製備型HPLC (方法H，於水中之5-50-95% MeCN，使用0.05% TFA作為移動相添加劑)純化產物以產生呈三氟乙酸鹽形式之化合物 13b(10.0 mg, 0.0056 mmol，48%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1568.60 (理論值)；1568.95 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.70 min。 化合物13c之合成
Figure 02_image554
向充分吹掃之乾燥玻璃小瓶中添加於無水甲醇(40 µL)中之化合物 13b(10.0 mg, 0.0056 mmol)。在冰浴中冷卻溶液，且添加NaOMe (0.5 M於MeOH中，11.13 µL)。在約1 h之後，添加1 M LiOH (17 µL, 0.017 mmol，3當量)水溶液。在添加LiOH溶液時形成大量白色沈澱物。在1 hr之後，添加冰乙酸(12 µL)，且在真空中去除溶劑。藉由製備型HPLC (方法G，於水中之20-60-95% MeCN，使用0.05% TFA作為移動相添加劑)純化粗產物以產生呈三氟乙酸鹽形式之化合物 13c(4.13 mg, 0.0029 mmol，52%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M+H] += 1206.49 (理論值)；1206.50 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.45 min。 化合物13之合成
Figure 02_image556
在玻璃小瓶中於氬下，將化合物 13c(4.13 mg, 0.00342 mmol，1.0當量)溶於DMA (68 µL)中。添加MP-OSu (1.82 mg, 0.00685 mmol，2當量)及DIPEA (3.0 µL, 0.0171 mmol，5當量)且將反應混合物在室溫下攪拌1 h。添加冰乙酸(3.0 µL)，並藉由製備型HPLC (方法G，於水中之10-60-95% MeCN，使用0.1%甲酸作為移動相添加劑)純化粗產物以產生呈三氟乙酸鹽形式之 13(5.43 mg, 0.0034 mmol，93%產率)。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M+H] += 1357.52 (理論值)；1357.82 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.54 min。 (3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基甲酸4-((S)-2-((S)-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基酯(化合物14)之合成
Figure 02_image558
向裝填有化合物 12a(2.6 mg, 0.0033 mmol)之乾燥玻璃小瓶中添加DMA (66 µL)，隨後添加MP-Val-Ala-PAB-Opfp ( 14a, 3.2 mg, 0.049 mmol，15當量)及DIPEA (2.8 µL, 0.016 mmol，4.9當量)。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘且然後添加冰乙酸(2.85 µL)，並藉由製備型HPLC (方法G，於水中之30-60-95% MeCN，使用0.1%甲酸作為移動相添加劑)純化粗產物以產生呈三氟乙酸鹽形式之化合物 14(4.0 mg, 0.0027 mmol，82%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1264.56 (理論值)；1264.85 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.75 min。 (E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-羥基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙醯胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物15)之合成 化合物15b之合成
Figure 02_image560
如先前所報導(WO2017/175147，第292頁)來製備化合物 15a。
向含有於DCM (280 µL)中之化合物 15a(31.4 mg, 0.0280 mmol)之乾燥玻璃小瓶中逐滴添加三溴化硼(BBr 3, 1M於DCM中，168 µL, 0.168 mmol，6當量)。將反應混合物在40℃下攪拌18 h。將反應混合物冷卻至室溫且緩慢添加冷水(170 µL)。在真空中濃縮所得混合物並藉由製備型HPLC (20-50-95%，於乙腈中之0.1%甲酸，方法G)純化。合併含有期望產物之部分並經由凍乾去除溶劑以產生呈甲酸鹽形式之化合物 15b (17%產率，4.36 mg, 0.0047 mmol)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 780.36 (理論值)；780.38 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.33 min。 化合物15之合成
Figure 02_image562
向含有3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(MP-OSu, 1.7 mg, 0.0063 mmol)之乾燥4 mL小瓶中添加化合物 15b(3.9 mg, 0.0042 mmol)於DMA (423 µL)中之溶液。向混合物中添加DIPEA (3.7 µL, 0.0211 mmol，5當量)且將反應混合物在室溫下攪拌30 min，然後添加冰乙酸(3.68 µL)，且經由製備型HPLC (10-40-95%，於乙腈中之0.05% TFA，方法G)純化產物。合併含有期望產物之部分並經由凍乾去除溶劑以產生呈三氟乙酸鹽形式之化合物 15(20%產率，1.0 mg, 0.0009 mmol)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 931.39 (理論值)；931.41 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.62 min。 S-(1-(3-((3-((5- 胺甲醯基 -1-((E)-4-(5- 胺甲醯基 -2-(1- 乙基 -3- 甲基 -1H- 吡唑 -5- 甲醯胺基 )-7- 甲氧基 -1H- 苯并 [d] 咪唑 -1- 基 ) 丁 -2- 烯 -1- 基 )-2-(1- 乙基 -3- 甲基 -1H- 吡唑 -5- 甲醯胺基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -7- 基 ) 氧基 ) 丙基 )( 甲基 ) 胺基 )-3- 側氧基丙基 )-2,5- 二側氧基吡咯啶 -3- 基 )-L- 半胱胺酸 ( 化合物 16) 之合成
Figure 02_image564
將化合物 12(1.5 mg, 0.0015 mmol，1當量)溶於DMSO (50 µL)中。以水溶液形式添加L-半胱胺酸(1 M, 2.2 µL, 0.0022 mmol，1.5當量)。將反應混合物在30℃下攪拌30 min，且隨後經由製備型HPLC (30-70-95%，於乙腈中之0.05% TFA，方法G)直接純化。合併含有期望產物之部分並冷凍。經由凍乾去除溶劑以產生呈三氟乙酸鹽形式之化合物 16(49%產率，1.03 mg, 0.0007 mmol)。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 1066.42 (理論值)；1066.44 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.65 min。 (S,E)-4-((3-((5-胺甲醯基-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基)-3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-4-側氧基丁酸(化合物17)之合成
Figure 02_image566
化合物17a之合成
向配備有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填化合物 12a(10 mg, 0.011 mmol，1.0當量)、Fmoc-天門冬胺酸4-第三丁基酯(9.1 mg, 0.022 mmol，2.0當量)及HATU (8.4 mg, 0.022 mmol，2.0當量)，隨後裝填DMF (0.5 mL)及DIPEA (9.6 uL, 0.055 mmol，5.0當量)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜且觀察到完全轉化成醯胺。在真空中去除溶劑，且將所得粗製油狀物溶於DCM中，並藉由急速層析(10g SiO 2，於DCM中之0 - 40% MeOH)分離期望產物以得到淺褐色固體形式之 17a(12 mg, 0.0104 mmol，94%產率)。所分離材料仍含有一些雜質，但未經進一步純化即用於後續步驟中。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1187.54 (理論值)；1187.53 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.40 min。 化合物17b之合成
向配備有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填 17a(12 mg, 0.0104 mmol，1.0當量)及於DMF中之20%六氫吡啶(1 mL)。將反應混合物攪拌1小時，在真空中去除溶劑並藉由製備型HPLC (方法G，於水中之5 - 95%乙腈)純化產物以產生 17b(9.3 mg, 0.0096 mmol，93%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 965.47 (理論值)；965.48 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.68 min。 化合物17c之合成
藉由將7.7 mg MP-OSu及10 µL DIPEA溶於1.0 mL DMF中來製備MP-OSu及DIPEA之儲備溶液。向配備有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填 17b(9.3 mg, 0.0096 mmol，1.0當量)且將0.5 mL含有MP-OSu (3.8 mg, 0.014 mmol，1.5當量)及DIPEA (0.029 mmol，3當量)之儲備溶液添加至小瓶中。將反應混合物在室溫下攪拌2小時並在真空中去除溶劑以產生粗製 17c，其未經任何進一步純化即用於下一步驟中。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1116.50 (理論值)；1116.80 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.51 min。 化合物17之合成
向4 mL小瓶中裝填溶於20% (v/v) TFA/DCM (1 mL)中之化合物 17c(10.7 mg, 0.0096 mmol，1當量)且將反應混合物在室溫下攪拌3小時。隨後在真空中去除溶劑，且將粗產物溶於DMSO (0.75 mL)中並藉由製備型HPLC (方法G，於水中之5 - 50% MeCN)純化以得到白色固體形式之化合物 17(5.4 mg, 0.0051 mmol，53%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1060.44 (理論值)；1061.12 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.28 min。 (S,E)-7-(3-(6-胺基-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-N-甲基己醯胺基)丙氧基)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物18)之合成
Figure 02_image568
化合物18a之合成
向配備有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填HATU (7.8 mg, 0.021 mmol，2.0當量)及Fmoc-離胺酸N-ε-Boc (9.6 mg, 0.021 mmol，2.0當量)；且添加化合物 12a(9.3 mg, 0.0103 mmol，1.0當量)及DIPEA (9 uL, 0.051 mmol，5當量)於DMF (0.5 mL)中之溶液。將小瓶加蓋並使用石蠟膜密封，且將混合物在室溫下攪拌過夜。藉由UPLC-MS (方法D)觀察到完全轉化。在真空中去除溶劑且藉由急速層析(10g SiO 2，於DCM中之0 - 40% MeOH)純化產物以得到淺棕色固體形式之 18a(12 mg, 0.0097 mmol, 95%)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1244.60 (理論值)；1244.61 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.40 min。 化合物18b之合成
向配備有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填 18a(12 mg, 0.0096 mmol)且將於DMF中之20% (v/v)六氫吡啶(1 mL)添加至反應液中。攪拌反應混合物直至藉由UPLC-MS (方法D)觀察到完全轉化為止，此耗費大約1小時。在真空中去除溶劑且藉由製備型HPLC (方法G，於水中之5 - 95% MeCN，含有0.1% (v/v)甲酸)純化產物。在真空中去除HPLC溶劑以得到灰白色固體形式之 18b(4.2 mg, 0.0041 mmol, 36%)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1022.53 (理論值)；1022.80 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.30 min。 化合物18c之合成
向配備有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填 18b(4.2 mg, 0.0034 mmol，1當量)，隨後裝填MP-OSu (1.8 mg, 0.0068 mmol，2.0當量)、DIPEA (5.9 µL, 0.034 mmol，10當量)及DMF (0.8 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時，此時UPLC-MS (方法D)分析展示完全轉化。在真空中去除溶劑以產生粗產物 18c，其未經純化即用於下一步驟中。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1173.56 (理論值)；1173.94 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.54 min。 化合物18之合成
向含有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填來自前一步驟之粗製物 18c(0.0034 mmol)，且添加於DCM中之20% (v/v) TFA (1 mL)。將反應混合物攪拌一小時且隨後藉由製備型HPLC (方法G，於水中之5 - 50% MeCN，含有0.1% (v/v)甲酸)純化產物。在真空中去除HPLC溶劑以得到白色固體形式之 18c(4.2 mg, 0.0035 mmol，經2個步驟之產率為56%)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1073.51 (理論值)；1073.73 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.15 min。
Figure 02_image570
用於HATU偶合、Fmoc去保護及MP偶合之一般方法
HATU偶合(方法1)：向配備有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填化合物 12a(1.0當量)、HATU (2.0當量)、DIPEA (5當量)及DMF (20 mM於 12a中)且將反應混合物在室溫下攪拌過夜。在真空中去除溶劑並經由層析純化產物。
Fmoc去保護(方法2)：向配備有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填來自上文之HATU偶合產物，該HATU偶合產物溶於20% (v/v)六氫吡啶/DMF (1 mL)中。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，在真空中去除溶劑，並經由層析純化產物。
MP偶合(方法3)：向配備有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填來自前一反應之產物，且添加MP-OSu (2當量)及DIPEA (10當量)以及DMF (10 mM於Fmoc去保護之胺起始材料中)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時，在真空中去除溶劑並藉由製備型HPLC純化產物。
根據一般方法1來製備化合物 19a(8.0 mg, 0.0075 mol，85%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1073.47 (理論值)；1074.03 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.76 min。
根據一般方法2來製備化合物 19b(6.1 mg, 0.0072 mol，95%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 851.41 (理論值)；851.69 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.15 min。
根據一般方法3來製備化合物 19(4.3 mg, 0.0043 mol，60%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1002.43 (理論值)；1002.72 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.31 min。
根據一般方法1來製備化合物 20a(8.7 mg, 0.0080 mol，91%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1087.49 (理論值)；1087.90 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.75 min。
根據一般方法2來製備化合物 20b(5.6 mg, 0.0065 mol，81%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 865.42 (理論值)；865.66 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.12 min。
根據一般方法3來製備化合物 20(3.4 mg, 0.0034 mol，52%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1016.45 (理論值)；1017.08 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.33 min。
根據一般方法1來製備化合物 21a(14 mg, 0.0119 mol)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1145.50 (理論值)；1145.42 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.74 min。
根據一般方法2來製備化合物 21b(7.2 mg, 0.0078 mol，經2個步驟之產率為76%)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 923.43 (理論值)；923.67 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.13 min。
根據一般方法3來製備化合物 21(1.5 mg, 0.0014 mol，22%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1074.45 (理論值)；1074.90 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.36 min。
根據一般方法1來製備化合物 22a(7.6 mg, 0.0065 mol，63%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1172.58 (理論值)；1172.59 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.84 min。
根據一般方法2來製備化合物 22b(6.1 mg, 0.0064 mmol，57%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 950.51 (理論值)；950.83 (觀察值)。HPLC滯留時間：0.99 min。
根據一般方法1來製備化合物 22(2.6 mg, 0.0023 mol，37%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1101.54 (理論值)；1101.96 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.18 min。
根據一般方法1來製備化合物 23a(12 mg, 0.0105 mmol)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1117.50 (理論值)；1117.77 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.75 min。
根據一般方法2來製備化合物 23b(7.2 mg, 0.00804 mmol，經2個步驟之產率為91%)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 895.43 (理論值)；895.73 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.12 min。
根據一般方法3來製備化合物 23(8.4 mg, 0.0047，58%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] +=  1046.46 (理論值)；1047.06 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.36 min。 (S,E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-3-羥基-N-甲基丙醯胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物24)之合成
Figure 02_image572
化合物24a之合成
向配備有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填HATU (6.7 mg, 0.018 mmol，2.0當量)及2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)-3-甲氧基-丙酸(6.0 mg, 0.018 mmol，2.0當量)，且將化合物 12a(8 mg, 0.0088 mmol，1.0當量)及DIPEA (8 uL, 0.044 mmol，5當量)於DMF (0.5 mL)中之溶液添加至小瓶中。將小瓶加蓋並使用石臘膜密封，且將反應混合物在室溫下攪拌過夜，此時藉由UPLC-MS (方法D)觀察到完全轉化。在真空中去除溶劑並藉由急速層析(10g SiO 2，於DCM中之0 - 40% MeOH)純化產物以得到 24a(15 mg)，其未經進一步純化即用於下一反應中。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1345.59 (理論值)；1346.12 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.23 min。 化合物24b之合成
向配備有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填 24a(15 mg, 0.011 mmol)且向其中添加於DMF中之20% (v/v)六氫吡啶(1 mL)。攪拌反應混合物直至藉由UPLC-MS (方法D)觀察到完全轉化為止，此耗費大約1小時。在真空中去除溶劑且藉由製備型HPLC (方法G，於水中之5 - 95% MeCN，含有0.1% (v/v)甲酸)純化粗產物；在真空中去除HPLC溶劑以得到灰白色固體形式之 24b(8.4 mg, 0.0075 mmol，經2個步驟之產率為94%)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1123.53 (理論值)；1123.98 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.47 min。 化合物24c之合成
向配備有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填 24b(8.4 mg, 0.0075 mmol，1當量)，隨後裝填MP-OSu (3.0 mg, 0.011 mmol，1.5當量)、DIPEA (3.9 µL, 0.022 mmol，3當量)及DMF (0.5 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時，此時UPLC-MS (方法D)分析展示完全轉化。在真空中去除溶劑且所得粗產物未經純化即用於下一步驟中。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1274.55 (理論值)；1275.21 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.89 min。 化合物24之合成
向含有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填粗製 24c(0.0075 mmol)，且將於DCM中之20% (v/v) TFA (1 mL)添加至小瓶中。將反應混合物攪拌20分鐘，並在真空中去除溶劑。將所得粗產物溶於DMSO (0.5 mL)中並藉由製備型HPLC (方法G，於水中之5 - 50% MeCN，含有 0.1% (v/v)甲酸)純化，且在真空中去除溶劑以得到白色固體形式之 24(4.0 mg, 0.0031 mmol，經2個步驟之產率為42%)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1032.44 (理論值)；1033.09 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.28 min。 (E)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙醯胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物25)之合成。
Figure 02_image574
25a之合成
向具有攪拌棒之5 mL烘乾微波小瓶中裝填4-氯-3-硝基-苯磺醯胺(250 mg, 1.06 mmol，1當量)、N-[(E)-4-胺基丁-2-烯基]胺基甲酸第三丁基酯鹽酸鹽(353 mg, 1.6 mmol，1.5當量)及碳酸鈉(336 mg, 3.2 mmol，3當量)。向小瓶中添加 1-丁醇(3 mL)，隨後添加DIPEA (1.1 mL, 6.34 mmol，6當量)及額外1-丁醇以使總反應體積達到最高5 mL。將小瓶密封，且在微波反應器中加熱至140℃並保持120分鐘。
將粗產物傾倒至鹽水(100 mL)中並使用EtOAc (3×200 mL)萃取，合併有機物，使用鹽水(2×100 mL)洗滌，使用MgSO 4乾燥，過濾並在真空中去除溶劑以得到亮紅色油狀物。藉由急速層析(乾加載於矽藻土上，25g Sfar, HC Duo，SiO2管柱，於DCM中之0 - 40% MeOH)純化此材料以得到亮黃色固體形式之 25a(295 mg, 0.763 mmol，72%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H - Boc] += 287.1 (理論值)；287.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.53 min。 25b之合成
向20 mL小瓶中裝填溶於甲醇(7.5 mL)及4M HCl/1,4-二噁烷(40當量，7.5 mL, 30.0 mmol)中之 25a(295 mg, 0.763 mmol，1當量)。將溶液在40℃下攪拌30分鐘並在真空中去除溶劑以得到亮紅色固體形式之 25b(呈2x HCl鹽形式，274 mg, 0.764 mmol，定量產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 287.1 (理論值)；287.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：0.52 min。 25c之合成
向具有攪拌棒之烘乾之5 mL微波小瓶中裝填 25b(135 mg, 0.376 mmol，1當量)、N-[3-(5-胺甲醯基-2-氯-3-硝基-苯氧基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(211 mg, 0.564 mmol，1.5當量，如下文所闡述來製備)及碳酸鈉(119 mg, 1.13 mmol，3當量)，隨後添加正丁醇(3.75 mL)及DIPEA (0.39 mL, 2.25 mmol，6當量)。將小瓶密封，且在微波反應器中加熱至140℃並保持3小時以得到亮紅色異質混合物。藉由矽藻土過濾此溶液，使用1:1 DCM:MeOH (100 mL)洗滌，在真空中去除溶劑且將粗產物加載於矽藻土上，並藉由急速層析(25g SiO2管柱，於DCM中之0 - 40% MeOH)純化以得到呈產物及起始材料(3:2)之混合物形式之 25c(245 mg, 0.384 mmol)。產物混合物未經任何進一步純化即用於下一步驟中。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 638.2 (理論值)；638.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.75 min。 25d之合成
向具有攪拌棒之20 mL小瓶中裝填 25c(245 mg, 0.384 mmol，1當量)及碳酸氫鈉(580 mg, 6.90 mmol，18當量)且添加甲醇(4mL)。然後向小瓶中添加亞硫酸氫鈉(1.20 g, 6.90 mmol，18當量，於4 mL水中)，且將小瓶加熱至50℃並保持60分鐘。將反應液冷卻至室溫，藉由矽藻土過濾，使用MeOH (50 mL)及DCM (50 mL)洗滌並將粗產物加載於矽藻土上。藉由急速層析(25g Sfar HC Duo，SiO2管柱，於DCM中之0 - 40% 10:1 MeOH:NH 4OH)純化產物以得到呈不可分離之旋轉構形異構體之混合物形式之 25d(89 mg, 0.154 mmol，經2個步驟之產率為41%)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 578.3 (理論值)；578.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：0.98 & 1.18 min。 25e之合成
同步設置兩個相同反應。向具有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填溶於甲醇(1 mL)中之 25d(45 mg, 0.156 mmol，1當量)且添加溴化氰(200 uL, 1.20 mmol，8當量)。將反應液攪拌過夜，並在真空中去除溶劑且合併兩種反應液以得到淺灰色固體形式之 25e(呈2x HBr鹽，120 mg, 0.15 mmol，97%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 628.3 (理論值)；628.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：0.79 min。 25f之合成
向具有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填 25e(120 mg, 0.152 mmol，1當量)、2-乙基-5-甲基-吡唑-3-甲酸(94 mg, 0.61 mmol，4.0當量)及HATU (231 mg, 0.61 mmol，4當量)。將固體溶於DMF (1 mL)中且添加DIPEA (0.22 mL, 1.2 mmol，8當量)。將反應液在室溫下攪拌過夜，添加乙酸(100 uL)並藉由製備型HPLC (方法I，於水中之5 - 95% MeCN，含有0.05% TFA)純化產物，且在真空中去除溶劑以得到灰白色固體形式之 25f(107 mg, 0.12 mmol，78%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 900.4 (理論值)；900.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.69 min。 25g之合成
將化合物 25f(107 mg, 0.12 mmol，1當量)添加至具有攪拌棒之20 mL小瓶中並溶於20% TFA/DCM (5 mL)中。將反應液在室溫下攪拌20分鐘且然後在真空中去除溶劑以得到呈3x TFA鹽及灰白色固體形式之 25g(70 mg, 0.0615 mmol，52%產率)。藉由製備型HPLC純化(方法G，於水中之5 - 95% MeCN，0.05% TFA)獲得具有分析純度之試樣。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 800.3 (理論值)；800.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.12 min。 25之合成
向具有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填溶於DMF (1 mL)中之 25g(12 mg, 0.011 mmol，1當量)且然後將DIPEA (15 uL, 0.087 mmol，8當量)及MP-OSu (4.3 mg, 0.0163 mmol，1.5當量)添加至反應液中。將溶液在室溫下攪拌30分鐘，使用於DCM中之20% TFA (100 uL)驟冷並藉由製備型HPLC (方法G，於水中之5 - 95% MeCN，含有0.05% TFA)純化以得到呈2x TFA鹽形式之 25(5.7 mg, 0.0048 mmol，45%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 951.4 (理論值)；951.2 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.18 min。 (E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(2-(1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物26)之合成。
Figure 02_image576
26a之合成
向具有攪拌棒之烘乾之8 mL小瓶中裝填 2b(100 mg, 0.462 mmol，1當量)及碳酸鉀(191 mg, 1.39 mmol，3當量)，隨後添加3-(2-溴乙基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯(152 mg, 0.577 mmol，1.25當量)。將起始材料溶於DMF (3mL)中，使用石臘膜密封小瓶並在70℃下攪拌24小時。將粗製材料傾倒至含有飽和氯化銨(100 mL)及EtOAc (各100 mL)之分液漏斗中，振盪，分離各層，並使用EtOAc (2×100 mL)萃取水層。使用鹽水(2×50 mL)洗滌合併之有機部分，使用MgSO4乾燥，過濾並在真空中去除溶劑以得到淺黃色固體形式之粗產物。藉由急速層析(25g Sfar HC Duo SiO 2管柱，於DCM中之0 - 20% MeOH)純化粗產物以得到黃色固體形式之 26a(86 mg, 0.215 mmol，47%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 400.1 (理論值)；400.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.79 min。 26b之合成
向烘乾之2 mL微波小瓶中裝填 25a(35 mg, 0.0875 mmol，1當量)、 5a(62 mg, 0.175 mmol，2當量)及碳酸鈉(28 mg, 0.263 mmol，3當量)且向此小瓶中添加正丁醇(1 mL)及DIPEA (0.1 mL, 0.5 mmol，6當量)。將小瓶密封，且在微波反應器中加熱至140℃並保持3小時。然後藉由矽藻土過濾反應液，使用1:1 MeOH:DCM (100 mL)洗滌，在真空中去除溶劑並將粗製材料加載於矽藻土上。藉由急速層析(25g Sfar HC Duo SiO 2管柱，於DCM中之0 - 20% MeOH)純化產物以得到淺紅色固體形式之 25b(38 mg, 0.0592 mmol，68%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 644.3 (理論值)；644.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.72 min。 26c之合成
向烘乾之4 mL小瓶中裝填溶於甲醇(1mL)中之 25b(38 mg, 0.0592 mmol，1當量)且添加碳酸氫鈉(90 mg, 1.1 mmol，18當量)，隨後添加亞硫酸氫鈉(186 mg, 1.07 mmol，18當量)於水(1 mL)中之溶液。將反應液加熱至50℃並保持1小時，且藉由矽藻土過濾，使用1:1 DCM:MeOH (50 mL)洗滌。將粗產物加載於矽藻土上並藉由急速層析(25g Sfar HC Duo，SiO 2管柱，於DCM中之0 - 40% 10:1 MeOH:NH 4OH)純化以得到淺黃色固體形式之 25c(10 mg, 0.017 mmol，29%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 584.3 (理論值)；584.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.18 min。 26d之合成
向具有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填溶於甲醇(0.5 mL)中之 25c(10 mg, 0.017 mmol，10當量)且添加溴化氰(0.050 mL, 0.150 mmol，3M於DCM中，8.7當量)。將反應液攪拌18小時並在真空中去除溶劑以得到呈淺灰色固體及2x HBr鹽形式之 25d(13 mg, 0.0165 mmol，95%產率)，其未經任何進一步純化即使用。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 634.3 (理論值)；634.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：0.98 min。 26e之合成
向具有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填溶於DMF (0.5 mL)中之 25d(13 mg, 0.0165 mmol，1當量)、HATU (25 mg, 0.066 mmol，4當量)及2-乙基-5-甲基-吡唑-3-甲酸(10 mg, 0.066 mmol，4當量)且然後添加DIPEA (0.050 mL, 0.20 mmol，17當量)。將反應液在室溫下攪拌24小時。使用乙酸(100 uL)終止反應並藉由製備型HPLC (方法H，於水中之5 - 95% MeCN，含有0.05% TFA)純化產物以得到淺棕色固體形式之 25e(呈2x TFA鹽形式，14 mg, 0.016 mmol，95%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 906.4 (理論值)；906.3 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.44 min。 26f之合成
向具有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填溶於20% TFA/DCM (1 mL)中之 25e(14 mg, 0.016 mmol，1當量)並在室溫下攪拌15分鐘。在真空中去除溶劑以得到白色固體形式之 25f(呈3x TFA鹽形式，15 mg, 0.013 mmol，82%產率)且產物未經任何進一步純化即使用。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 806.4 (理論值)；806.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.25 min。 26之合成
向具有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填於DMSO (0.5 mL)中之 25f(5.7 mg, 0.0050 mmol，1當量)且添加MP-OSu (2.0 mg, 0.00750 mmol，1.5當量)及DIPEA (5 uL, 0.030 mmol，6當量)。將反應液在室溫下攪拌1小時。添加於DCM中之20% TFA (100 uL)以終止反應並藉由製備型HPLC (方法G，於水中之5 - 95% MeCN，含有0.05% TFA)純化產物以得到白色固體形式之 25(呈2x TFA鹽形式，3.8 mg, 0.00321 mmol，64%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 957.4 (理論值)；957.3 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.19 min。 (E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-((1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)氧基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物27)之合成。
Figure 02_image578
27a之合成
向具有攪拌棒之烘乾之8 mL小瓶中裝填溶於DMF (4.5mL)中之呈TFA鹽形式之 2b(150 mg, 0.454 mmol，1當量)、3-(3-溴丙氧基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯(133 mg, 0.454 mmol，1當量)及碳酸鉀(141 mg, 1.02 mmol，2.3當量)，且加熱至55℃並保持24小時。將反應液傾倒至含有飽和NaHCO 3(100 mL)及EtOAc (100 mL)之分液漏斗中，振盪，分離各層，並使用EtOAc (3×50 mL)萃取水層。合併有機部分並使用飽和NaHCO 3(3×50 mL)及鹽水(2×50 mL)進一步洗滌。然後使用MgSO4乾燥，過濾並在真空中去除溶劑以得到淺黃色固體形式之 27a(194 mg, 0.353 mmol，78%產率，起始材料對產物之比率為4:1)且未經進一步純化即使用。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 430.1 (理論值)；430.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.82 min。 27b之合成
向烘乾之5 mL微波小瓶中裝填碳酸鈉(144 mg, 1.36 mmol，3.00當量)、呈2x HCL鹽形式之 5a(240 mg, 0.678 mmol，1.50當量)及 27a(194 mg, 0.452 mmol，1當量)且然後添加1-丁醇(4mL)及DIPEA (0.5 mL, 2.7 mmol，6當量)。將小瓶密封，且在微波反應器中加熱至140℃並保持3小時。將反應液冷卻至室溫且藉由矽藻土過濾溶液，使用1:1 MeOH:DCM (100 mL)洗滌。將粗產物加載於矽藻土上並藉由急速層析(25g Sfar HC Duo，SiO 2管柱，於DCM中之0 - 20% MeOH)純化以得到淺紅色固體形式之 27b(95 mg, 0.141 mmol，31%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 674.3 (理論值)；674.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.73 min。 27c之合成
向20 mL小瓶中裝填 27b(95 mg, 0.141 mmol，1當量)及碳酸氫鈉(442 mg, 5.3 mmol，37當量)並將起始材料溶於甲醇(4mL)中。向小瓶中添加亞硫酸氫鈉(442 mg, 2.54 mmol，18當量)於水(4 mL)中之溶液，且將反應液在通氣下加熱至50℃並保持1小時。溶液在一小時過程中自亮紅色變成淺黃色。過濾反應液，使用1:1 MeOH:DCM (3×50 mL)洗滌濾餅，在真空中去除溶劑，將粗產物再溶於1:1 MeOH:DCM (100 mL)中並藉由矽藻土過濾。將粗產物加載於矽藻土上並藉由急速層析(25g Sfar HC Duo，SiO 2管柱，於DCM中之0 - 40% 10:1 MeOH:NH 4OH)純化以得到灰白色固體形式之 27c(42 mg, 0.0689 mmol，49%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 614.3 (理論值)；614.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：0.78 min。 27d之合成
向烘乾之4 mL小瓶中裝填溶於甲醇(1.3mL)中之 27c(42 mg, 0.0689 mmol，1當量)，且然後添加溴化氰(3M於DCM中，0.14 mL, 0.414 mmol，6當量)。將小瓶在室溫下攪拌24小時，並在真空中去除溶劑以得到灰白色固體形式之 27d(呈2x HBr鹽形式，57 mg, 0.0694 mmol，定量產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 664.3 (理論值)；664.7 (觀察值)。HPLC滯留時間：0.95 min。 27e之合成
向具有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填溶於DMF (1 mL)中之 27d(57 mg, 0.0694 mmol，1當量)、2-乙基-5-甲基-吡唑-3-甲酸(43 mg, 0.278 mmol，4當量)及HATU (106 mg, 0.278 mmol，4當量)且然後添加DIPEA (0.097 mL, 0.555 mmol，8當量)。將反應液在室溫下攪拌24小時，使用於MeCN中之20% TFA (200 uL)驟冷並藉由製備型HPLC (方法I，於水中之5 - 95% MeCN，使用0.05% TFA)純化產物，經由凍乾去除溶劑以得到淺棕色固體形式之 27e(呈2x TFA鹽形式，35 mg, 0.0302 mmol，43%產率)。經由第二製備型HPLC純化(方法G，於水中之5 - 60% MeCN，含有0.05% TFA)製備具有分析純度之試樣。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 936.4 (理論值)；936.3 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.37 min。 27f之合成
向20 mL小瓶中裝填溶於20% TFA/DCM (2 mL)中之 27e(31 mg, 0.0266 mmol，1當量)並在室溫下攪拌15分鐘。在真空中去除溶劑並藉由製備型HPLC (方法H，於水中之5 - 95% MeCN，含有0.05% TFA)純化粗產物以得到白色固體形式之 27f(呈3x TFA鹽形式，7.2 mg, 0.0061 mmol，23%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 836.4 (理論值)；836.3 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.02 min。 27之合成
向烘乾之4 mL小瓶中裝填 27f(10 mM於DMSO中，0.50 mL, 0.0050 mmol，1當量)且然後添加MP-OSu (2.0 mg, 0.0075 mmol，1.5當量)及DIPEA (20 uL, 0.12 mmol，23當量)。將反應液在室溫下攪拌90分鐘，使用於MeCN中之20% TFA (100 uL)驟冷且藉由製備型HPLC (方法G，於水中之5 - 95% MeCN，含有0.05% TFA)純化粗產物以得到白色固體形式之27 (呈3x TFA鹽形式，3.6 mg, 0.0029 mmol，58%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 987.4 (理論值)；987.2 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.23 min。 S-(1-(3-((3-((5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-((E)-4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物28)之合成。
Figure 02_image580
向1.7 mL埃彭道夫管(eppendorf tube)中裝填 25(10 mM於DMSO中，100 uL, 0.00100 mmol，1當量)且添加L-半胱胺酸(15 mM於4:1 DMSO:水中，150 uL, 0.00300 mmol，3當量)。將反應液加熱至37℃並保持90分鐘，且然後藉由製備型HPLC (方法G，於水中之5 - 95% MeCN，含有0.05% TFA)純化粗產物以得到白色固體形式之 28(呈2x TFA鹽，1.1 mg, 0.000861 mmol，86%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1072.4 (理論值)；1072.2 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.98 min。 S-(1-(3-(3-(2-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)乙基)氮雜環丁-1-基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物29)之合成。
Figure 02_image582
向1.7 mL埃彭道夫管中裝填 26(10 mM於DMSO中，100 uL, 0.00100 mmol，1當量)且添加L-半胱胺酸(15 mM於4:1 DMSO:水中，150 uL, 0.00300 mmol，3當量)。將反應液加熱至37℃並保持2小時，且然後藉由製備型HPLC (方法G，於水中之5 - 95% MeCN，含有0.05% TFA)純化粗產物以得到白色固體形式之 29(呈2x TFA鹽形式，0.91 mg, 0.000697 mmol，70%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1078.4 (理論值)；1078.3 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.03 min。 S-(1-(3-(3-(3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙氧基)氮雜環丁-1-基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物30)。
Figure 02_image584
向1.7 mL埃彭道夫管中裝填 27(10 mM於DMSO中，100 uL, 0.00100 mmol，1當量)及L-半胱胺酸(100 mM於DMSO在，30 uL, 0.00300 mmol，3當量)並將溶液在37℃下培育30分鐘。藉由製備型HPLC (方法G，於水中之5 - 95% MeCN，含有0.05%)純化粗產物以得到白色固體形式之 30(呈2x TFA鹽形式，1.2 mg, 0.000913 mmol，61%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1108.4 (理論值)；1108.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.08 min。 醯胺類似物之文庫合成. 反應圖及一般方法. 化合物31 - 60.
Figure 02_image586
HATU 偶合 ( 一般方法 4A)向羧酸(4當量)於DMA (400 µL)中之溶液中添加HATU (6.2 mg, 0.016 mmol，4當量)及DIPEA (4.3 µL, 0.025 mmol，6當量)。將混合物在室溫下攪拌30分鐘且然後將化合物 7(3 mg, 0.0041 mmol，1當量)添加至混合物中，且加熱至70℃並保持18 hr。此時，添加乙酸(4.3 µL)，且藉由製備型HPLC (於水中之20-50-95% MeCN，含有0.1% FA)純化所得產物。使用LC-MS方法D利用ESI+離子化來表徵所有分子。
COMU 偶合 ( 一般方法 4B)向羧酸(4當量)於DMA (400 µL)中之溶液中添加COMU (7 mg, 0.016 mmol，4當量)及DIPEA (4.3 µL, 0.025 mmol，6當量)。將混合物在室溫下攪拌30 min且然後將化合物 7(3 mg, 0.0041 mmol，1當量)添加至混合物中，且將溶液加熱至40℃並保持18 hr。此時，添加乙酸(4.3 µL)，且藉由製備型HPLC (於水中之20-50-95% MeCN，含有0.1% FA)純化所得產物。
Figure 02_image588
PMB 去保護 ( 一般方法 5)將來自前一步驟之所得醯胺溶於50% TFA/MeCN (0.01 M)中並在30℃下攪拌30 min。在完成後，濃縮混合物，並藉由製備型HPLC (20-50-95%水/乙腈，含有0.1% TFA)純化產物。
使用上文指定之一般方法製備下述實例。
化合物 結構 方法 產率 ( 經 2 個步驟 ) PMB LC-MS 數據 苯酚 LC-MS 數據
31
Figure 02_image590
 HATU -方法4a 45% 1.74 mg 0.00183 mmol RT: 1.49 理論值： 843.4 觀察值： 843.5 RT: 1.25 理論值：723.3 觀察值： 723.5
32
Figure 02_image592
 HATU -方法4a 58% 2.25 mg 0.00237 mmol RT: 1.67 理論值： 843.4 觀察值： 843.5 RT: 1.42 理論值：723.3 觀察值： 723.5
33
Figure 02_image594
 HATU -方法4a 56% 2.00 mg 0.00231 mmol RT: 1.78 理論值： 759.2 觀察值： 759.4 RT: 1.60 理論值：639.2 觀察值： 639.3
34
Figure 02_image596
 HATU -方法4a 61% 2.24 mg 0.00251 mmol RT: 1.92 理論值： 787.3 觀察值： 787.4 RT: 1.74 理論值： 667.2 觀察值： 667.4
35
Figure 02_image598
 HATU -方法4a 59% 2.19 mg 0.00244 mmol RT: 2.00 理論值： 791.2 觀察值： 791.3 RT: 1.85 理論值：671.1 觀察值： 671.3
36
Figure 02_image600
 HATU -方法4a 40% 1.52 mg 0.00164 mmol RT: 2.14 理論值： 819.2 觀察值： 819.4 RT: 2.01 理論值： 699.2 觀察值： 699.3
37
Figure 02_image602
 COMU - 方法4b 35% 1.32 mg 0.00143 mmol RT: 2.02 理論值： 815.3 觀察值： 815.5 RT: 1.63 理論值：695.3 觀察值： 695.4
38
Figure 02_image604
 COMU - 方法4b 39% 1.47 mg 0.00158 mmol RT: 2.02 理論值： 821.2 觀察值： 821.4 RT: 1.63 理論值： 701.2 觀察值： 701.3
39
Figure 02_image606
 COMU - 方法4b 57% 2.08 mg 0.00232 mmol RT: 1.86 理論值： 789.3 觀察值： 789.5 RT: 1.65 理論值： 669.2 觀察值： 669.4
40
Figure 02_image608
 COMU - 方法4b 36% 1.37 mg 0.00148 mmol RT: 2.00 理論值： 821.2 觀察值： 821.4 RT: 1.61 理論值： 701.2 觀察值： 701.3
41
Figure 02_image610
 HATU -方法4a 66% 2.50 mg 0.00272 mmol RT: 2.24 理論值： 813.3 觀察值： 813.5 RT: 1.84 理論值： 693.3 觀察值： 693.5
42
Figure 02_image612
 COMU - 方法4b 45% 1.64 mg 0.00184 mmol RT: 1.59 理論值：783.3 觀察值： 783.4 RT: 1.31 理論值： 663.2 觀察值： 663.4
43
Figure 02_image614
 COMU - 方法4b 29% 1.07 mg 0.00120 mmol RT: 1.63 理論值：783.3 觀察值： 783.4 RT: 1.36 理論值： 663.2 觀察值： 663.4
44
Figure 02_image616
 COMU - 方法4b 55% 2.00 mg 0.00225 mmol RT: 1.47 理論值：783.3 觀察值： 783.4 RT: 1.19 理論值： 663.2 觀察值： 663.4
45
Figure 02_image618
 COMU - 方法4b 37% 1.36 mg 0.00153 mg RT: 1.61 理論值：783.3 觀察值： 783.4 RT: 1.34 理論值： 663.2 觀察值： 663.4
46
Figure 02_image620
 COMU - 方法4b 63% 2.30 mg 0.00258 mmol RT: 1.62 理論值： 783.3 觀察值： 783.4 RT: 1.34 理論值： 663.2 觀察值： 663.4
47
Figure 02_image622
 COMU - 方法4b 46% 1.67 mg 0.00187 mmol RT: 1.74 理論值： 787.3 觀察值： 787.5 RT: 1.46 理論值： 667.2 觀察值： 667.4
48
Figure 02_image624
 COMU - 方法4b 60% 2.35 mg 0.00247 mmol RT: 1.79 理論值： 843.4 觀察值： 843.5 RT: 1.52 理論值： 723.3 觀察值： 723.5
49
Figure 02_image626
 COMU - 方法4b 60% 2.42 mg 0.00244 mmol RT: 2.18 理論值： 883.3 觀察值： 883.5 RT: 1.90 理論值： 763.2 觀察值： 763.4
50
Figure 02_image628
 COMU - 方法4b 55% 2.17 mg 0.00225 mmol RT: 2.17 理論值：855.2 觀察值： 855.4 RT: 1.59 理論值： 735.2 觀察值： 735.3
51
Figure 02_image630
 COMU - 方法4b 71% 2.76 mg 0.00289 mmol RT: 1.89 理論值：847.3 觀察值： 847.5 RT: 1.31 理論值： 727.3 觀察值： 727.6
52
Figure 02_image632
 COMU - 方法4b 51% 2.23 mg 0.00211 mmol RT: 2.50 理論值：951.3 觀察值：951.6 RT: 1.99 理論值： 831.3 觀察值： 831.6
53
Figure 02_image634
 COMU - 方法4b 51% 2.00 mg 0.00210 mmol RT: 2.01 理論值：843.4 觀察值： 843.5 RT: 1.44 理論值： 723.3 觀察值： 723.6
54
Figure 02_image636
 COMU - 方法4b 52% 1.97 mg 0.00214 mmol RT: 1.86理論值： 815.3 觀察值： 615.5 RT: 1.28 理論值： 695.3 觀察值： 695.5
55
Figure 02_image638
 HATU -方法4a 56% 2.04 mg 0.00228 mmol RT: 1.88 理論值：1027.4 觀察值： 1028.0 RT: 1.35 理論值： 667.2 觀察值： 667.8
56
Figure 02_image640
 COMU - 方法4b 63% 2.24 mg 0.00257 mmol RT: 1.78 理論值：763.4 觀察值： 763.5 RT: 1.11 理論值： 643.3 觀察值： 643.9
57
Figure 02_image642
 HATU -方法4a 60% 2.08 mg 0.00247 mmol RT: 1.31 理論值：735.3 觀察值：735.7 RT: 0.99 理論值： 615.3 觀察值： 615.6
58
Figure 02_image644
 HATU -方法4a 55% 2.02 mg 0.00225 mmol RT: 1.88 理論值：789.3 觀察值： 789.4 RT: 1.60 理論值： 669.2 觀察值： 669.3
59
Figure 02_image646
 HATU -方法4a 56% 2.00 mg 0.00230 mmol RT: 1.81 理論值： 761.2 觀察值：761.4 RT: 1.56 理論值： 641.2 觀察值： 641.3
60
Figure 02_image648
 HATU -方法4a 48% 1.82 mg 0.00196 mmol RT: 1.98 理論值：821.2 觀察值： 821.4 RT: 1.68 理論值： 701.2 觀察值： 701.4
4-氯-3-((4-甲氧基苄基)氧基)-5-硝基苯甲酸甲酯(化合物61)之合成。
Figure 02_image650
61a之合成
在0℃及氮下，經20 min向4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(15 g, 61 mmol，1當量)於DC (60 mL)中之溶液中逐滴添加BBr3 (1 M於DCM中，153 mL, 153 mmol，2.5當量)。將反應混合物在0℃下攪拌30 min且然後升溫至25℃，並進一步攪拌12 h。將反應混合物冷卻至0℃，使用甲醇驟冷，並在真空中濃縮以得到深褐色油狀物形式之 61a(12.3 g, 56.5 mmol，93%產率)。LC-MS (方法C，ESI+)：m/z [M + H] += 218.0 (理論值)；217.9 (觀察值)。HPLC滯留時間：0.21 min。 61b之合成
向 61a(26.6 g, 122 mmol，1當量)於甲醇(800 mL)中之溶液中添加濃H 2SO 4(600 mg, 6.11 mmol，0.05當量)，將混合物在60℃下攪拌12 h。LCMS分析(方法C)展示反應已完成。將混合物冷卻至室溫並在真空中濃縮。使用水(50 mL)稀釋粗製殘餘物且小心添加飽和NaHCO 3(50 mL)以達成pH ＞ 7。藉由過濾收集所得固體，使用水(25 mL)洗滌並在真空下乾燥以得到褐色固體形式之 61b(25 g，88%產率)。LC-MS (方法C，ESI+)：m/z [M + H] += 232.0 (理論值)；231.9 (觀察值)。HPLC滯留時間：0.92 min。 61之合成
向 61b(18 g, 78 mmol，1當量)於DMF (200 mL)中之溶液中添加Cs 2CO 3(27.9 g, 86 mmol，1.1當量)及1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(12.8 g, 82 mmol, 1.05當量)且將混合物在25℃下攪拌16 h。LCMS分析(方法C)展示反應已完成。將反應液傾倒至水中，過濾並在高真空下乾燥以得到淺黃色固體形式之 61(22.3 g，82%產率)。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ =8.11 (d, J=1.4 Hz, 1H), 7.97 (d, J=1.4 Hz, 1H), 7.43 (d, J=8.5 Hz, 2H), 6.99 (d, J=8.5 Hz, 2H), 5.33 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.77 (s, 3H)。 (E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-羥基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物62)之合成。
Figure 02_image652
62a之合成
向(E)-(4-胺基丁-2-烯-1-基)胺基甲酸第三丁基酯(12.5 g, 67.2 mmol，1.1當量)於DMSO (150 mL)中之溶液中添加4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(15 g, 61.1 mmol，1當量)及DIPEA (39.5 g, 305 mmol，5當量)，將混合物在100℃下攪拌12 h。將混合物傾倒至水中，使用EtOAc萃取並在真空中濃縮以得到深紅色固體形式之 62a(16.4 g, 41.4 mmol，68%產率)。LC-MS (方法C，ESI+)：m/z [M - tBu] += 340.1 (理論值)；340.1 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.08 min。 62b之合成
將 62a(21 g, 53.1 mmol，1當量)添加至於乙酸乙酯中之HCl溶液(4 M, 350 mL, 1400 mmol，26當量)中且將混合物在25℃下攪拌2 h。在真空中濃縮混合物並使用EtOAc洗滌粗製固體以得到深紅色固體形式之 62b(呈HCl鹽形式，14.5 g, 43.7 mmol，82%產率)。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ = 8.19 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.12 (br s, 1H), 8.01 (br s, 3H), 7.46 (d, J=1.6 Hz, 1H), 5.87 (td, J=5.8, 15.5 Hz, 1H), 5.71 - 5.55 (m, 1H), 4.21 (br s, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.42 - 3.35 (m, 2H)。 62c之合成
向 61(4.5 g, 12.8 mmol)於DMSO (70 mL)中之溶液中添加 62b(4.67 g, 14.1 mmol，HCl鹽)及DIPEA (8.3 g, 64 mmol，5當量)且將反應液在80℃下攪拌10 h。將混合物傾倒至冰水中，使用EtOAc萃取並在真空中濃縮。使殘餘物重結晶(乙酸乙酯，20V，回流)以得到深紅色固體形式之 62c(6.4 g, 10.5 mmol，82%產率)。MS (方法C，ESI+)：m/z [M + H] += 611.2 (理論值)；611.2 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.34 min。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ = 8.06 (dd, J=1.5, 9.5 Hz, 2H), 7.96 (br d, J=2.9 Hz, 2H), 7.44 (s, 1H), 7.36 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.30 (s, 1H), 6.94 (d, J=8.5 Hz, 2H), 5.53 - 5.29 (m, 2H), 5.00 (s, 2H), 4.03 (br t, J=5.4 Hz, 4H), 3.84 (s, 6H), 3.76 (d, J=3.5 Hz, 6H)。 62d之合成
向 62c(6.0 g, 9.83 mmol，1當量)於MeOH (300 mL)中之溶液中添加NH 4OH (60 mL，28% NH 3於H 2O中)及Na 2S 2O 4(20.5 g, 118 mmol，12當量)。將混合物在25℃下攪拌16 h且其自亮紅色變成淺黃色/近無色異質混合物。過濾混合物，濃縮以去除MeOH且使用EtOAc萃取剩餘水溶液。合併有機相，使用Na 2SO 4乾燥並在真空中濃縮以得到灰白色固體形式之 62d(4.0 g, 7.25 mmol，74%產率)。MS (方法B，ESI+)：m/z [M + H] += 551.25 (理論值)；551.2 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.29 min。 62e之合成
向 62d(4.0 g, 7.25 mmol，1當量)於MeOH (200 mL)中之溶液中添加BrCN (4.62 g, 43.6 mmol，6當量)。將混合物在25℃下攪拌2 h，此時LC-MS分析(方法C)展示完全轉化。在真空中濃縮反應混合物並使用乙醇及石油醚洗滌粗產物以得到灰白色固體形式之 62e(呈2x HBr鹽形式，2.6 g, 3.53 mmol，49%產率)。MS (方法C，ESI+)：m/z [M + H] += 601.2 (理論值)；601.3 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.73 min。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ = 12.87 (br s, 1H), 8.72 (br d, J=17.0 Hz, 4H), 7.59 (s, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 6.82 (d, J=8.6 Hz, 2H), 5.70 (br d, J=15.7 Hz, 1H), 5.57 - 5.48 (m, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.83 - 4.73 (m, 4H), 3.88 (s, 6H), 3.71 (s, 3H), 3.65 (s, 3H)。 62f之合成
向1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(3.15 g, 20.5 mmol，2.6當量)於DMF (30 mL)中之溶液中添加HATU (8.38 g, 22.0 mmol，2.8當量)且將溶液在60℃下攪拌10 min。製備DIPEA (5.09 g, 39 mmol，5當量)及 62e(6.0 g, 7.87 mmol，1當量，2x HBr鹽)於DMF (30 mL)中之第二溶液並添加至活化酸中。然後將反應液在60℃下攪拌2 h。將溶液傾倒至水中，過濾並使用乙腈研磨以得到灰白色固體形式之 62f(2.54 g, 2.91 mmol，37%產率)。MS (方法C，ESI+)：m/z [M + H] += 873.4 (理論值)；873.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：3.44 min。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6) δ = 12.88 (br s, 2H), 7.74 (br s, 2H), 7.22 (br s, 1H), 7.16 - 6.97 (m, 3H), 6.66 (br d, J=7.9 Hz, 2H), 6.57 - 6.36 (m, 2H), 5.87 - 5.37 (m, 2H), 4.78 (br s, 6H), 4.51 (br dd, J=7.0, 17.3 Hz, 4H), 3.85 (s, 6H), 3.59 (s, 3H), 3.52 (br s, 3H), 2.10 (br d, J=11.1 Hz, 6H), 1.26 (td, J=6.8, 18.8 Hz, 6H)。 62之合成
向具有攪拌棒之烘乾之4 mL小瓶中裝填溶於1:1 MeCN:TFA (1 mL)中之 62f(9 mg, 0.010 mmol，1當量)並在室溫下攪拌1小時。在真空中去除溶劑並在高真空中乾燥產物過夜以得到淺棕色固體形式之 62(7.5 mg, 0.0099 mmol，定量產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 753.3 (理論值)；753.7 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.99 min。 (E)-1-(4-(5-羧基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-羥基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物63)之合成。
Figure 02_image654
63a之合成
將化合物 62f(100 mg, 0.115 mmol，1當量)溶於乙腈(1 mL)中，添加1M LiOH (1 mL, 1 mmol，9當量)，且將溶液加熱至80℃並保持1小時。冷卻小瓶，在真空中去除溶劑並藉由製備型HPLC (方法I，於水中之5 - 95% MeCN，含有0.1% TFA)純化產物以得到白色固體形式之 63a(78 mg, 0.092 mmol，97%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 845.3 (理論值)；845.8 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.95 min。 63之合成
如先前所闡述來製備化合物 63(參見「62之合成」)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 725.3 (理論值)；725.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.83 min。 (E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-羥基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物64)及(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-羥基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物65)之合成。
Figure 02_image656
64a及65a之合成
如先前所闡述來製備化合物64a及65a之不可分離之1:1混合物(參見「65a之合成」)，其中使用氫氧化鈉代替氫氧化鋰並在50%轉化時終止反應，隨後經由製備型HPLC (方法H，使用0.1% FA)純化。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 859.4 (理論值)；859.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.46 min。 64及65之合成
如先前所闡述來製備化合物64a及65a之不可分離之1:1混合物(參見「65a之合成」)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 739.4 (理論值)；739.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.99及2.04 min。 (E)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙醯胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物66)之合成
Figure 02_image658
66a之合成
在20 mL小瓶中，將化合物 62(397 mg, 0.527 mmol，1當量)、(3-溴丙基)(甲基)胺基甲酸第三丁基酯(146 mg, 0.580 mmol，1.1當量)及碳酸鉀(218 mg, 1.58 mmol，3當量)溶於DMF (5.3 mL)中。將反應液在55℃下攪拌18小時且然後過濾混合物，使用甲醇洗滌並在真空中濃縮濾液。向粗製固體中添加冷水並經由過濾分離沈澱物以得到 66a(232 mg, 0.251 mmol，48%產率)。MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 924.4 (理論值)；924.9 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.42 min。 66b之合成
將化合物 66a(232 mg, 0.251 mmol，1當量)溶於甲醇(2.5 mL)中且添加於二噁烷中之4M HCl (0.5 mL, 2.01 mmol，8當量)。將反應液在30℃下攪拌90分鐘。在真空中去除溶劑並藉由製備型HPLC (方法I，使用0.05% TFA)純化粗產物以提供 66b(206 mg, 0.24 mmol，96%產率)。MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 824.4 (理論值)；824.9 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.56 min。 66之合成
將化合物 66(25 mg, 0.0291 mmol，1當量)及MP-OSu (11.6 mg, 0.0436 mmol，1.5當量)溶於DMA (0.58 mL)中且添加DIPEA (20 µL, 0.116 mmol)。將反應液在室溫下攪拌1小時。藉由製備型HPLC (方法H，使用0.05% TFA)直接純化混合物以提供白色固體形式之 66(10.88 mg, 0.0112 mmol，38%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 975.4 (理論值)；975.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.24 min。 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(3-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)-4-((((3-((2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-((E)-4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-吡喃-2-甲酸(化合物67)之合成
Figure 02_image660
67a之合成
將化合物 13a(65 mg, 0.0868 mmol，1.4當量)及碳酸雙(五氟苯基)酯(120 mg, 0.304 mmo，5當量)溶於DMA (0.43 mL)中且添加DIPEA (70 µL, 0.404 mmol，6.7當量)。將反應液攪拌30分鐘且然後添加 66b(52 mg, 0.0607 mmol，1當量)。將反應液在室溫下攪拌18小時。使用H2O稀釋溶液並使用EtOAc (3×)萃取，且使用1M HCl (3×)洗滌合併之有機物，使用MgSO4乾燥，過濾並在真空中去除溶劑以得到粗製固體。將此材料溶於DMSO中並藉由製備型HPLC (方法H，使用0.05% TFA)純化以得到白色固體形式之 67a(33.1 mg, 0.0207 mmol，34%產率)。 LCMS(方法D，ESI+) m/z [M+H] +1598.6 (理論值)，1598.6 (觀察值)。LCMS滯留時間：2.65 min。 MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1598.6 (理論值)；1598.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.65 min。 67b之合成
將化合物 67a(33.1 mg, 0.0207 mmol)溶於無水甲醇(0.21 mL)中，在冰浴中冷卻，且添加於MeOH中之0.5M NaOMe (41.5 µL, 0.0414 mmol，2當量)。藉由LCMS (方法D)監測反應且在完全乙酸酯去保護後添加1M LiOH (62µL, 0.0621 mmol，3當量)。將反應液在室溫下攪拌1h，且藉由LCMS (方法E)監測。在完全轉化後，添加乙酸(62µL)，在真空中去除溶劑並經由製備型HPLC (方法H，使用0.05% TFA)純化粗產物以得到白色固體形式之 67b(10.1 mg, 0.0075 mmol，36%產率)。 LCMS(方法D，ESI+) m/z [M+H] +1236.5 (理論值)，1236.5 (觀察值)。LCMS滯留時間：2.31 min。 MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 1236.5 (理論值)；1236.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.31 min。 67之合成
將化合物 67b(10.1 mg, 0.0075 mmol，1當量)及MP-OSu (3.0 mg, 0.0112 mmol，1.5當量)溶於DMA (150 µL)中，添加DIPEA (4µL, 0.0224 mmol)。將反應液在室溫下攪拌30 min，此時添加乙酸(4 µL)，且經由製備型HPLC (方法G，使用0.05% TFA)純化混合物以獲得白色固體形式之 67(3.3 mg, 0.0024mmol，32%產率)。 LCMS(方法E，ESI+) m/z [M+H] +1387.5 (理論值)，1387.5 (觀察值)。LCMS滯留時間：1.92 min。
MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 1387.5 (理論值)；1387.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.92 min。 (E)-1-(4-(5-羧基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙醯胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物68)之合成
Figure 02_image662
68a之合成
將化合物 66b(30 mg, 0.032 mmol)溶於甲醇(0.32 mL)中且添加1M LiOH (0.256 mL, 0.256 mmol，8當量)。將混合物在80℃下攪拌1h。在真空中濃縮混合物並經由製備型HPLC (方法H，使用0.05% TFA)純化以提供白色固體形式之 68a(17.4 mg, 0.0191 mmol，60%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 796.4 (理論值)；796.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.83 min。 68之合成
將化合物 68a(16.7 mg, 0.0183 mmol，1當量)及MP-OSu (7.3 mg, 0.0275 mmol，1.5當量)溶於DMA (0.37 mL)中且添加DIPEA (10 µL, 0.0574 mmol，2當量)。將反應液在室溫下攪拌1小時，添加AcOH (10µL)且經由製備型HPLC (方法H，使用0.05% TFA)純化粗產物以提供白色固體形式之 68(7.6 mg, 0.0080 mmol，44%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 974.4 (理論值)；974.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.42 min。 1-((E)-4-(5-羧基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-((((4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羥基四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)-2-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物69)之合成
Figure 02_image664
69a之合成
如先前所闡述來製備化合物 69a(參見「67a之合成」) 。MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 1570.6 (理論值)；1570.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.95 min。 69b之合成
如先前所闡述來製備化合物 69b(參見「67b之合成」) 。MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 1208.5 (理論值)；1208.3 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.48 min。 69之合成
如先前所闡述來製備化合物 69(參見「67之合成」) 。MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 1359.5 (理論值)；1359.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.68 min。 (E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(3-嗎啉基丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物70)之合成
Figure 02_image666
70之合成
向化合物 A(6 mg, 0.00706 mmol)於無水DCM (0.10 mL)中之溶液中逐滴添加BBr 3(0.04 mL，1M於DCM中)。將所形成漿液在30℃及氬下攪拌過夜。藉由UPLC-MS監測反應。在完成後，添加冷水(0.10 mL)且劇烈攪拌混合物。在30 min.之後，蒸發溶劑，並藉由製備型HPLC (方法G)使用甲酸作為添加劑來純化產物。收集純淨部分，冷凍，並凍乾以提供白色固體形式之化合物 70(5.14 mg, 0.00528 mmol，75%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 836.9 (理論值)，836.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.34 min。
使用下列方法製備化合物17-24之半胱胺酸加合物。
一般方法6。將10 mM馬來醯亞胺溶液與1當量L-半胱胺酸(100 mM於水中)在37℃下一起培育1小時且產物未經任何進一步純化即使用。
化合物 結構 LC-MS 數據
71
Figure 02_image668
 RT: 1.17 理論值：1181.5 觀察值：1182.1
72
Figure 02_image670
 RT: 1.21 理論值：1195.5 觀察值：1195.7
73
Figure 02_image672
 RT: 1.17 理論值：1123.5 觀察值：1124.0
74
Figure 02_image674
 RT: 1.19 理論值：1137.5 觀察值：1137.9
75
Figure 02_image676
 RT: 1.16 理論值：1153.5 觀察值：1153.8
76
Figure 02_image678
 RT: 1.19 理論值：1167.5 觀察值：1168.0
(3-(5-胺甲醯基-2-氯-3-硝基苯氧基)丙基)(甲基)胺基甲酸第三丁基酯(化合物77)之合成
Figure 02_image680
向具有攪拌棒之火焰乾燥之100 mL RB中裝填 2b(1.0 g, 4.62 mmol，1當量)於DMF (10 mL)中之溶液、碳酸鉀(830 mg, 6.00 mmol，1.3當量)及N-(3-溴丙基)-N-甲基-胺基甲酸第三丁基酯(1.20當量，1.40 g, 5.54 mmol，1.20當量)於DMF (5 mL)中之溶液。添加額外 DMF以使總體積達到45 mL，且將反應液加熱至70℃並保持24小時。將反應液冷卻至室溫並藉由矽藻土過濾，使用DMF (3×10 mL)洗滌。將此溶液傾倒至冰水(900 mL)中，攪拌90分鐘並經由過濾分離粗產物。最後，使用冷水(300 mL)洗滌濾液並在真空中乾燥過夜以得到 77(1.23 g, 3.16 mmol，68%產率)。 (E)-(3-((2-胺基-5-胺甲醯基-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基甲酸第三丁基酯(化合物78)之合成
Figure 02_image682
78a之合成
向具有攪拌棒之500 mL圓底燒瓶中裝填 4a(3.0 g, 7.9 mmol，1當量)及碳酸氫鈉(12.5 g, 148 mmol，19當量)且添加乙醇(105 mL)以得到異質溶液。在冰浴中冷卻此溶液且在保持內部溫度低於10℃之速率下逐滴添加亞硫酸氫鈉(25.8 g, 148 mmol，19當量)於105 mL水中之溶液。將混合物在通氣下加熱至45℃並保持1小時，且冷卻至室溫。藉由矽藻土過濾混合物，使用EtOH (100 mL)洗滌並在真空中去除溶劑。將粗製材料再溶於1:1 DCM:MeOH (200 mL)中，藉由矽藻土過濾並在真空中去除溶劑。再重複此程序一次且然後將粗產物加載於矽藻土上，並藉由急速層析(50g Sfar HC Duo，SiO 2管柱，於DCM中之0 - 40% 10:1 NH 4OH:MeOH)純化以得到 78a(1.45 g, 4.13 mmol，52%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 351.2 (理論值)；351.1 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.53 min。 78b之合成
向烘乾之200 mL圓底燒瓶中裝填溶於甲醇(45mL)中之 78a(1.95 g, 5.58 mmol，1當量)且添加溴化氰(3M於DCM中，5.6 mL, 16.7 mmol，3當量)以得到黃色均質溶液。將反應液在室溫下攪拌48小時並在真空中去除溶劑以得到呈HBr鹽形式之 78b(2.48 g, 5.44 mmol，98%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 376.2  (理論值)；376.1 (觀察值)。HPLC滯留時間：0.71 min。 78c之合成
向具有攪拌棒之火焰乾燥之40 mL小瓶中裝填 78bHBr (867 mg, 1.90 mmol，1當量)、2-乙基-5-甲基-吡唑-3-甲酸(879 mg, 5.70 mmol，3當量)及HATU (2.17 g, 5.70 mmol，3當量)。將固體溶於DMF (15mL)中且然後添加DIPEA (2.0 mL, 11.4 mmol，6當量)。將小瓶密封並在室溫下攪拌48小時。將溶液傾倒至含有NH4OH之冰冷水(450 mL)中(28% NH 3於水中，10 mL)並在4℃下沈澱過夜。經由過濾分離白色沈澱物並在真空中乾燥過夜以得到 78c(658 mg, 1.29 mmol，68%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 512.3  (理論值)；512.2 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.35 min。 78d之合成
向具有攪拌棒之烘乾之8 mL小瓶中裝填 78c(800 mg, 1.56 mmol，3當量)，在於MeOH中之3M HCl (5.2 mL, 15.6 mmol HCl，10當量)中攪拌1小時。在真空中去除溶劑以得到呈2xHCl鹽形式之 78d(700 mg, 1.56 mmol，定量產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 412.2  (理論值)；412.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：0.73 min。 78e之合成
向烘乾之20 mL微波小瓶中裝填 78e(700 mg, 1.56 mmol，1當量)、 77(909 mg, 2.34 mmol，1.5當量)及碳酸鈉(497 mg, 4.69 mmol，3當量)且向混合物中添加1-丁醇(15mL)及DIPEA (1.6 mL, 9.38 mmol，6當量)。將小瓶密封並在微波反應器中於140℃下加熱3小時以得到淺紅色異質混合物。將此混合物傾倒至DCM (100 mL)中並藉由矽藻土過濾，使用DCM (50 mL)及MeOH (50 mL)洗滌。將粗產物加載於矽藻土上並經由急速層析(50g Sfar HC Duo，SiO2管柱，於DCM中之0 - 20% MeOH)純化以得到淺紅色固體形式之 78e(569 mg, 0.746 mmol，48%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 763.4  (理論值)；763.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.17 min。 78f之合成
向 78e(569 mg, 0.746 mmol，1當量)於甲醇(8mL)及NH 4OH (2.0 mL，28% NH 3於水中)中之混合物中添加亞硫酸氫鈉(2.34 g, 13.4 mmol，18當量)於水(8 mL)中之溶液。將此溶液在50℃下加熱1小時。將反應液傾倒至含有水(250 mL)及EtOAc (250 mL)之分液漏斗中。振盪混合物，分離各層且使用EtOAc (3×100 mL)進一步萃取水層。合併有機物，使用鹽水(2×100 mL)洗滌，使用MgSO4乾燥，過濾並在真空中去除溶劑以得到淺棕色固體形式之 78f(400 mg, 0.546 mmol，73%產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 733.4  (理論值)；733.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.39 min。 78之合成
向 78f(1.00當量，400 mg, 0.546 mmol)於甲醇(5.5 mL)中之溶液中添加溴化氰(3M於DCM中，0.55 mL, 1.65 mmol，3當量)且將混合物在室溫下攪拌24小時。在真空中去除溶劑以得到呈HBr鹽形式之 78(456 mg, 0.544 mmol，定量產率)。MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 758.4  (理論值)；758.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.19 min。 第2組醯胺類似物之文庫合成。反應圖及一般方法。化合物71 - 95。
Figure 02_image684
COMU 偶合 ( 一般方法 7A) ：向2 mL微波小瓶中裝填化合物 78(20 mg, 0.0238 mmol，1當量)於DMA (0.50 mL)中之溶液。添加相應羧酸(2當量)、COMU (20.4 mg, 0.0477 mmol，2當量)及DIPEA (20.8 µL, 0.119 mmol，5當量)。將小瓶密封，且在微波反應器中加熱至80℃並保持1h。經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。在完成後，添加乙酸(20 µL)且藉由製備型HPLC (方法H)使用0.05% TFA作為添加劑來純化所得產物。收集純淨部分，冷凍，並凍乾以提供白色固體產物。
HATU 偶合 ( 一般方法 7B) ：向2 mL微波小瓶中裝填化合物 78(20 mg, 0.0238 mmol，1當量)於DMA (0.50 mL)在之溶液。添加各別羧酸(4當量)、HATU (36.3 mg, 0.0954 mmol，2當量)及DIPEA (20.8 µL, 0.119 mmol，5當量)。將小瓶密封，且在微波反應器中加熱至80℃並保持1h。經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。在完成後，添加乙酸(20 µL)且藉由製備型HPLC (方法H)使用0.05% TFA作為添加劑來純化所得產物。收集純淨部分，冷凍，並凍乾以提供白色固體產物。
Figure 02_image686
Boc 去保護 ( 一般方法 8) ：將一般方法 7A或 7B之所得產物溶於MeOH (0.01 M)中，向其中添加於二噁烷中之4M HCl (8當量)。將溶液在室溫下攪拌30 min。經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。在完成後，濃縮溶液，再溶於DMSO中，並經由製備型HPLC (方法G或H)使用TFA作為添加劑來純化。收集純淨部分，冷凍，並凍乾以提供白色固體產物。
化合物 結構 方法 Boc LC-MS 數據 胺 LC-MS 數據 產率 ( 經 2 個步驟 )
79
Figure 02_image688
 7A RT: 1.57 理論值：864.4 觀察值： 864.7 RT: 1.32 理論值： 764.3 觀察值： 764.4 17% 4.5 mg 0.00406 mmol
80
Figure 02_image690
 7A RT: 2.18 理論值：864.4 觀察值： 864.4 RT: 1.24 理論值： 764.3 觀察值： 764.4 19% 5.0 mg 0.00455 mmol
81
Figure 02_image692
 7A RT: 1.79 理論值：867.4 觀察值： 867.7 RT: 1.55 理論值：767.3 觀察值： 767.3 18% 4.8 mg 0.00436 mmol
82
Figure 02_image694
 7A RT: 1.83 理論值： 867.4 觀察值： 967.4 RT: 1.37 理論值：767.3 觀察值： 767.3 9% 2.4 mg 0.00216 mmol
83
Figure 02_image696
 7B RT: 1.85 理論值：883.4 觀察值：883.4 RT: 1.35 理論值： 783.3 觀察值： 783.3 10% 2.8 mg 0.00247 mmol
84
Figure 02_image698
 7A RT: 1.69 理論值：864.4 觀察值： 864.4 RT: 1.18 理論值： 764.3 觀察值： 764.4 5% 1.2 mg 0.00110 mmol
85
Figure 02_image699
 7B RT: 1.75 理論值： 894.4 觀察值： 894.5 RT: 1.31 理論值： 794.4 觀察值： 794.4 3% 0.88 mg 0.00077 mmol
86
Figure 02_image701
 7B RT: 1.59 理論值： 894.4 觀察值： 894.5 RT: 1.19 理論值： 794.4 觀察值： 794.4 11% 3.1 mg 0.00270 mmol
87
Figure 02_image703
 7B RT: 1.70 理論值： 894.4 觀察值： 894.5 RT: 1.38 理論值： 794.4 觀察值： 794.4 13% 3.5 mg 0.00307 mmol
88
Figure 02_image705
 7B RT: 1.63 理論值： 880.4 觀察值： 880.5 RT: 1.28理論值： 780.4 觀察值： 780.4 16% 4.4 mg 0.00391 mmol
89
Figure 02_image707
 7B RT: 1.77 理論值： 894.4 觀察值：894.5 RT: 1.46 理論值： 794.4 觀察值： 794.4 9% 2.4 mg 0.00211 mmol
90
Figure 02_image709
 7B RT: 1.70 理論值：883.4 觀察值： 883.4 RT: 1.30 理論值： 783.3 觀察值： 783.4 17% 4.7 mg 0.00416 mmol
91
Figure 02_image711
 7B RT: 1.65 理論值： 880.4 觀察值： 880.5 RT: 1.32 理論值： 780.4 觀察值： 780.4 6% 1.7 mg 0.00153 mmol
92
Figure 02_image713
 7B RT: 1.83 理論值： 948.4 觀察值： 948.5 RT: 1.49 理論值： 848.4 觀察值： 848.4 10% 2.7 mg 0.00229 mmol
93
Figure 02_image715
 7B RT: 1.74 理論值： 880.4 觀察值：880.5 RT: 1.37 理論值： 780.4 觀察值： 780.4 22% 5.9 mg 0.00529 mmol
94
Figure 02_image717
 7B RT: 1.88 理論值： 911.4 觀察值： 911.5 RT: 1.38 理論值： 811.3 觀察值： 811.4 30% 8.1 mg 0.00703 mmol
95
Figure 02_image719
 7B RT: 1.86 理論值： 895.4 觀察值： 895.5 RT: 1.41 理論值： 795.4 觀察值： 795.4 8% 2.1 mg 0.0018 mmol
Figure 02_image721
馬來醯亞胺偶合 ( 一般方法 9) ：將來自前一反應之所得胺(化合物 79- 95)溶於DMSO (0.01M)中，向其中添加MP-OSu (2當量)及DIPEA (5當量)。將混合物在30℃下攪拌過夜，並藉由UPLC-MS (方法E，ESI+)進行監測。在完成後，經由製備型HPLC (方法G)使用0.05% TFA作為添加劑來純化所得產物。
化合物 結構 LC-MS 數據 [M+H] + 產率
96
Figure 02_image723
 RT: 1.38 理論值：915.4 觀察值：915.4 68% 3.14 mg 0.0027 mmol
97
Figure 02_image725
 RT: 1.65 理論值：918.4 觀察值：918.4 62% 3.11 mg 0.0027 mmol
98
Figure 02_image727
 RT: 1.42 理論值：915.4 觀察值：915.4 84% 4.38 mg 0.0038 mmol
99
Figure 02_image729
 RT: 1.47 理論值：934.3 觀察值：934.4 31% 0.89 mg 0.0008 mmol
100
Figure 02_image731
 RT: 1.50 理論值：918.4 觀察值：918.4 53% 1.3 mg 0.0011 mmol
101
Figure 02_image733
 RT: 1.35 理論值：915.4 觀察值：915.4 86% 5.88 mg 0.0051 mmol
102
Figure 02_image735
 RT: 1.45 理論值：945.4 觀察值：945.4 40% 0.36 mg 0.0003 mmol
103
Figure 02_image737
 RT: 1.37 理論值：945.4 觀察值：945.4 41% 1.29 mg 0.0011 mmol
104
Figure 02_image739
 RT: 1.67 理論值：945.4 觀察值：945.5 52% 1.87 mg 0.0016 mmol
105
Figure 02_image741
 RT: 1.48 理論值：931.4 觀察值：931.4 88% 4.00 mg 0.0035 mmol
106
Figure 02_image743
 RT: 1.61 理論值：945.4 觀察值：945.4 31% 0.76 mg 0.0006 mmol
107
Figure 02_image745
 RT: 1.45 理論值：934.3 觀察值：934.4 51% 2.46 mg 0.0021 mmol
108
Figure 02_image747
 RT: 1.49 理論值：931.4 觀察值：931.4 53% 0.94 mg 0.0008 mmol
109
Figure 02_image749
 RT: 1.83 理論值：999.4 觀察值：999.4 51% 1.43 mg 0.0012 mmol
110
Figure 02_image751
 RT: 1.50 理論值：931.4 觀察值：931.4 63% 3.86 mg 0.0033 mmol
111
Figure 02_image753
 RT: 1.50 理論值：962.4 觀察值：962.4 40% 3.39 mg 0.0028 mmol
112
Figure 02_image755
 RT: 1.59 理論值：946.4 觀察值：946.4 31% 0.67 mg 0.0006 mmol
(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙醯胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113)之合成。
Figure 02_image757
(E)-3-胺基-4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁-2-烯-1-基)胺基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯(化合物113a)之合成
Figure 02_image759
將化合物 62a(500 mg, 1.26 mmol，1當量)溶於MeOH (20 mL)及NH 4OH (6 mL)中。緩慢添加於H 2O (5 mL)中之Na 2S 2O 4(1.10 g, 6.32 mmol，5當量)並將混合物在室溫下攪拌30 min。藉由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。在完成後，過濾混合物並濃縮。將所得產物再溶於EtOAc中並使用H 2O (×3)洗滌。收集有機物，使用MgSO 4乾燥，過濾，並濃縮以提供黃色固體形式之化合物 113a(343 mg, 0.938 mmol，74%產率)。所得產物未經進一步純化即使用。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 366.2 (理論值)，366.2 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.54 min。 (E)-2-胺基-1-(4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁-2-烯-1-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯氫溴酸鹽(化合物113b)之合成
Figure 02_image761
將化合物 113a(343 mg, 0.938 mmol，1當量)溶於MeOH (9.3 mL)中，向其中添加CNBr (3 M於MeCN中，0.374 mL, 1.2當量)。將反應液在室溫下攪拌18 h，並藉由UPLC-MS (方法E，ESI+)進行監測。在完成後，濃縮溶液以提供化合物 113b(402 mg, 0.853 mmol，91%產率)，其未經進一步純化即使用。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 391.2 (理論值)，391.1 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.51 min。 (E)-1-(4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113c)之合成
Figure 02_image763
在5 mL微波小瓶中，將化合物 113b(402 mg, 0.853 mmol，1當量)、1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(394 mg, 2.56 mmol，3當量)及HATU (973 mg, 2.56 mmol，3當量)溶於DMA (1.7 mL)中。添加DIPEA (0.74 mL, 4.26 mmol，5當量)，且將反應液在微波反應器中加熱至80℃並保持1 h。經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。在完成後，將反應混合物緩慢添加至冰冷水(300 mL)中以沈澱化合物 113c(295 mg, 0.560 mmol，66%產率)，其未經進一步純化即使用。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 527.3 (理論值)，527.1 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.30 min。 (E)-1-(4-胺基丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113d)之合成
Figure 02_image765
將化合物 113c(319 mg, 0.606 mmol，1當量)溶於 MeOH (1 mL)中，向其中添加於二噁烷中之HCl (4 M, 1.2 mL, 4.85 mmol，8當量)。將反應液在室溫下攪拌30 min.且藉由UPLC-MS (方法E，ESI+)進行監測。在完成後，濃縮溶液且化合物 113d(280 mg, 0.605 mmol，定量產率)未經進一步純化即使用。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 427.2 (理論值)，427.2 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.54 min。 (E)-1-(4-((2-(3-((第三丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙氧基)-4-胺甲醯基-6-硝基苯基)胺基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113e)之合成
Figure 02_image767
將化合物 113d(280 mg, 0.605 mmol，1當量)及化合物 77(305 mg, 0.787 mmol，1.3當量)溶於DMSO (3.0 mL)中，向其中添加DIPEA (0.316 mL, 1.82 mmol，3當量)。將反應液在80℃下攪拌18 h並經由UPLC-MS (方法E，ESI+)進行監測。在完成後，添加AcOH (0.30 mL)，且藉由製備型HPLC (方法I)使用0.05% TFA作為添加劑來純化產物。收集純淨部分，冷凍，並凍乾以提供橙色固體形式之化合物 113e(58.6 mg, 0.0753 mmol，12%產率)。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 778.3 (理論值)，778.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.88 min。 (E)-1-(4-((2-胺基-6-(3-((第三丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙氧基)-4-胺甲醯基苯基)胺基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113f)之合成
Figure 02_image769
將化合物 113e(58.6 mg, 0.0753 mmol，1當量)溶於1:1 AcOH/DCM混合物(0.75 mL)中並冷卻至0℃。添加Zn (49.2 mg, 0.753 mmol，10當量)且將混合物升溫至室溫，且同時攪拌30 min。經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。在完成後，濃縮溶液並再溶於DCM中，藉由急速層析(25g SiO2管柱，於DCM中之0 - 40% MeOH:NH 4OH (10:1))純化以提供化合物 113f(28.3 mg, 0.378 mmol，50%產率)。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 748.4 (理論值)，748.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.84 min。 (E)-1-(4-(2-胺基-7-(3-((第三丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙氧基)-5-胺甲醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113g)之合成
Figure 02_image771
將化合物 113f(28.3 mg, 0.378 mmol，1當量)溶於MeOH (0.38 mL)中，向其中添加CNBr (3 M於MeCN中，15 µL, 0.0454 mmol，1.2當量)。將反應液在室溫下攪拌18 h且經由UPLC-MS (方法E，ESI+)進行監測。在完成後，濃縮溶液以提供產物 113g(30.7 mg, 0.360 mmol，定量產率)，其未經進一步純化即使用。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 773.4 (理論值)，773.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.53 min。 (E)-1-(4-(7-(3-((第三丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙氧基)-5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物H)之合成
Figure 02_image773
在2 mL微波小瓶中，將化合物 113g(30.7 mg, 0.0360 mmol，1當量)、1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(22.1 mg, 0.144 mmol，4當量)及HATU (54.6 mg, 0.144 mmol，4當量)溶於DMA (0.50 mL)中。添加DIPEA (0.025 mL, 0.144 mmol，4當量)，且將反應液在微波反應器中於80℃下加熱1 h。經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。在完成後，藉由製備型HPLC (方法H)使用0.05% TFA作為添加劑來純化產物。收集純淨部分，冷凍，並凍乾以提供白色固體形式之化合物 113h(6.52 mg, 0.0064 mmol，18%產率)。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 909.4 (理論值)，909.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.90 min。 (E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(3-(甲基胺基)丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113i)之合成
Figure 02_image775
將化合物 113h(3.02 mg, 0.0030 mmol，1當量)溶於MeOH (0.30 mL)中，向其中添加於二噁烷中之HCl (4 M, 6.00 µL, 0.0236 mmol，8當量)。將反應液在室溫下攪拌30 min並經由UPLC-MS (方法E，ESI+)進行監測。在完成後，經由製備型HPLC (方法G)使用0.05% TFA作為添加劑來純化產物。收集純淨部分，冷凍，並凍乾以提供白色固體形式之化合物 113i(1.35 mg, 0.0013 mmol，44%產率)。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 809.4 (理論值)，809.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.57 min。
Figure 02_image777
將化合物 113i(7.53 mg, 0.0085 mmol，1當量)及MP-OSu (4.55 mg, 0.0171 mmol，2當量)溶於DMA (0.854 mL)中，且添加DIPEA (42.7 µL, 0.0074 mmol，5當量)。將反應液在室溫下攪拌18 h並藉由UPLC-MS (方法E，ESI+)進行監測。在完成後，添加AcOH (42 µL)，且經由製備型HPLC (方法G)使用0.05% TFA作為添加劑來純化產物。收集純淨部分，冷凍，並凍乾以提供白色固體形式之化合物 113(4.43 mg, 0.0041 mmol，48%產率)。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 960.4 (理論值)，960.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.79 min。 連接體文庫合成(化合物114 - 124)。
Figure 02_image779
醯胺偶合 ( 一般方法 10)：在DMF (0.02 M於 12a中)中製備化合物 12a(1當量)、HATU (2當量)、DIPEA (5當量)、適當L-胺基酸(2當量)之混合物並在室溫下攪拌過夜。在真空中去除溶劑，且所得產物未經進一步純化即用於下一步驟中。
Fmoc 去保護 ( 一般方法 11)：將所得Fmoc保護胺溶於20%六氫吡啶/DMF (1 mL)中並在室溫下攪拌15分鐘。在真空中去除溶劑並經由製備型HPLC (方法H，5 - 95%/MeCN/H 2O/0.05% TFA)純化產物。
化合物 UPLC-MS [M+H] + 產率
Figure 02_image781
 RT: 1.83 min 理論值：907.5 觀察值：907.5 18.6 mg (58%)
Figure 02_image783
 RT:  1.77 理論值：907.5 觀察值：907.5 24.9 mg (78%)
Figure 02_image785
 RT: 1.76 理論值：941.5 觀察值：941.5 13.5 mg (28%)
Figure 02_image787
 RT: 2.05 理論值：937.4 觀察值：937.5 9.8 mg (35%)
Figure 02_image789
 RT: 1.93 理論值：971.5 觀察值：971.5 18.6 mg (64%)
Figure 02_image791
 RT: 1.93 理論值：945.5 觀察值：945.5 19.4 (64%)
Figure 02_image793
 RT: 2.05 理論值：909.4 觀察值：909.5 24.5 mg (76.4%)
Figure 02_image795
根據 一般 方法 9來合成含有馬來醯亞胺之藥物-連接體(化合物 121- 125)。
化合物 UPLC-MS [M+H] + 產率
Figure 02_image797
 RT: 2.16 理論值：1058.5 觀察值：1058.5 1.5 mg (42%)
Figure 02_image799
 RT: 2.00 理論值：1092.5 觀察值：1092.5 0.5 mg (21%)
Figure 02_image801
 RT: 2.21 理論值：1088.5 觀察值：1088.5 1.1 mg (32%)
Figure 02_image803
 RT: 1.81 理論值：1122.5 觀察值：1122.6 1.1 mg (32%)
Figure 02_image805
 RT: 1.79 理論值：1060.5 觀察值：1060.5 0.3 mg (8.6%)
(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙醯胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物126)。
Figure 02_image807
化合物126a之合成
將化合物 113h(25.44 mg, 0.0249 mmol，1當量)溶於MeOH (166 µL)中。添加1M LiOH水溶液(200 µL，8當量)且將反應液在80℃下攪拌2h。在完成後，在減壓下濃縮溶液並藉由製備型HPLC (方法H)使用0.05% TFA作為添加劑來純化。收集純淨部分，冷凍，並凍乾以提供白色固體形式之化合物 126a(7.1 mg, 0.0071 mmol，28%產率)。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 895.4 (理論值)，895.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.97 min。 化合物126b之合成
遵循用於製備化合物 113i之相同程序來製備化合物 126b。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 795.4 (理論值)，795.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.40 min。 化合物126之合成
遵循用於製備化合物 113之相同程序來製備化合物 126。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 946.4 (理論值)，946.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.68 min。 (E)-(3-((5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-(N-甲基胺磺醯基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基甲酸第三丁基酯(化合物127)之合成。
Figure 02_image809
遵循與化合物 25f相同之程序來製備化合物 127，其中使用4-氯-N-甲基-3-硝基苯磺醯胺代替4-氯-3-硝基苯磺醯胺。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 914.4 (理論值)，914.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.80 min。 (E)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙醯胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-(N-甲基胺磺醯基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物128)之合成。
Figure 02_image811
128a之合成
遵循用於製備化合物 66b之相同程序來製備化合物 128a。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 814.4 (理論值)，814.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.53 min。 128之合成
遵循用於製備化合物12之相同程序來製備化合物128。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 965.4 (理論值)，965.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.60 min。 S-(1-(3-((3-((5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-((E)-4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物129)之合成
Figure 02_image813
遵循一般方法6來製備化合物 129。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 1081.4 (理論值)，1081.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.88 min。 1-((E)-4-(7-(3-(3-(3-(((R)-2-胺基-2-羧基乙基)硫基)-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)-N-甲基丙醯胺基)丙氧基)-5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物130)之合成。
Figure 02_image815
遵循一般方法6來製備化合物 130。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 1067.4 (理論值)，1067.6 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.49 min。 (E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基己醯胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物131)之合成。
Figure 02_image817
遵循與化合物 12相同之程序來製備化合物 131，其中使用6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯代替3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 987.5 (理論值)，987.7 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.85 min。 S-(1-(6-((3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基)-6-側氧基己基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物132)之合成。
Figure 02_image819
遵循一般方法6來製備化合物 132。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 1108.5 (理論值)，1108.7 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.42 min。 (E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(N-環丙基-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物133)之合成。
Figure 02_image821
133a之合成
向烘乾之4 mL小瓶中裝填 1(10 mg, 0.0105 mmol，1當量)、碳酸鉀(7.3 mg, 0.0526 mmol，5當量)及N-(3-溴丙基)-N-環丙基-胺基甲酸第三丁基酯(0.49 mL於DMF中之9 mg/mL溶液，0.0158 mmol，1.50當量)且使起始材料溶於DMF (0.50 mL)中。將反應液在55℃下攪拌過夜並藉由製備型HPLC (方法B)純化，然後冷凍並凍乾以提供化合物 133a(8.8 mg, 0.0077 mmol，73%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 920.45 (理論值)，920.64 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.32 min。 133b之合成
向烘乾之4 mL小瓶中裝填 133a(8.8 mg, 0.0077 mmol)及於DCM中之20% TFA (100 µL)。將反應液在室溫下攪拌30分鐘並藉由製備型HPLC (方法B)純化，然後冷凍並凍乾以提供化合物 133b(5.0 mg, 0.0043 mmol，56%產率)。UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 820.40 (理論值)，820.49 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.29 min。 133之合成
向烘乾之8 mL小瓶中裝填溶於DMSO (1 mL)中之 133b(3.3 mg, 0.0085 mmol，1當量)以及3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯於DMSO中之溶液(10mM於DMSO中，0.43 mL, 0.0043 mmol，1.5當量)及DIPEA (1.5 µL, 0.00851 mmol，3當量)。將反應液加熱至30℃過夜，使用乙酸驟冷並藉由製備型HPLC (方法B)純化，然後冷凍化合物並凍乾以提供 133(1.9 mg, 0.00158 mmol，56%產率)。
UPLC-MS (方法D，ESI+)：m/z [M + H] += 971.43 (理論值)，971.48 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.99 min。 3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)-N-(4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羥基四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)-2-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)-N,N-二甲基丙烷-1-銨2,2,2-三氟乙酸鹽(化合物134)之合成。
Figure 02_image823
134a之合成
向烘乾之8 mL小瓶中裝填(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(二甲基胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(20 mg, 0.0248 mmol，1當量，如先前在WO2017/175147實例39第291頁中所闡述來製備)及(2S,3R,4S,5S,6S)-三乙酸2-(3-(3-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙醯胺基)-4-(溴甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2H-吡喃-3,4,5-三基酯(60.3 mg, 0.0743 mmol，3當量，如先前在 Mol Cancer Ther 201615(5), 938-945中所闡述來製備)並與無水乙腈共沸。向小瓶中添加2-丁酮(2.5 mL)且將溶液加熱至100℃過夜。藉由製備型HPLC (方法B)直接純化化合物，冷凍並凍乾以提供 134a(11.3 mg, 0.0070 mmol，28%產率)。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] +=1538.64 (理論值)，1538.83 (觀察值)。HPLC滯留時間：2.55 min 134b之合成
向烘乾之4 mL小瓶中裝填 134a(4.5 mg, 0.0094 mmol，1當量)並溶於無水MeOH (0.5 mL)中。在乙腈/乾冰浴中於-40℃下冷卻小瓶且添加0.5 M NaOMe (19 µL, 0.0094 mmol，1當量)。將反應液攪拌1小時，然後升溫至室溫且添加LiOH (1 M於H 2O中，31 µL，0.031 mmol，3當量)。將反應液在室溫下攪拌1小時且然後藉由製備型HPLC (方法B)直接純化，然後冷凍並凍乾以提供 134b(5.8 mg, 0.0049 mmol，48%產率)。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 1176.52 (理論值)，1176.76 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.29 min 134之合成
將 134b(5.8 mg, 0.0038 mmol，1當量)添加至烘乾之4 mL小瓶在並溶於DMSO (1 mL)中，且然後添加MP-OSu (10 mM於DMSO中，0.57 mL, 0.0057 mL，1.5當量)及DIPEA (2 µL, 0.0115 mmol，3當量)。將溶液攪拌30 min，使用乙酸驟冷並藉由製備型HPLC (方法B)純化，然後冷凍並凍乾以提供 134(3.6 mg, 0.0023 mmol，61%產率)。UPLC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 1327.55 (理論值)，1327.77 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.38 min。 (E)-7-(2-(氮雜環丁-3-基)乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物135)之合成
Figure 02_image825
135a之合成
向 25a(1.61 g, 4.18 mmol，1當量)於MeOH (63 mL)及NH 4OH水溶液(21 mL)中之溶液中添加Na 2S 2O 4水溶液(1 M, 21 mL, 21 mmol，5當量)。將混合物在30℃下攪拌1小時，且藉由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。在完成後，藉由矽藻土過濾溶液並使用MeOH洗滌。濃縮濾液且藉由急速層析(乾加載於矽藻土上，Sfar HC Duo SiO 2管柱，於DCM中之10:1 MeOH:NH 4OH梯度)純化產物以產生 135a(774 mg, 2.17 mmol，52%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 357.2 (理論值)，357.3 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.44 min。 135b之合成
向化合物 135a(774 mg, 2.17 mmol，1當量)於MeOH (4 mL)中之溶液中添加於MeCN中之溴化氰(3 M, 1.5 mL, 4.35 mmol，2當量)。將溶液在30℃下攪拌18小時且經由UPLC-MS (方法E，ESI+)進行監測。在完成後，在真空中去除溶劑以產生 135b(1.0 g, 2.25 mmol，定量產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 382.2 (理論值)，382.2 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.12 min。 135c之合成
向微波小瓶中裝填 135b(1.0 g, 2.25 mmol，1當量)於DMA (11 mL)中之溶液，向其中添加化合物 8(1.0 g, 6.74 mmol，3當量)、HATU (2.6 g, 6.74 mmol，3當量)及DIPEA (1.2 mL, 6.74 mmol，3當量)。將此混合物在微波反應器中加熱至80℃並保持1小時。在完成後，藉由使用冷水沈澱來分離 135c(1.0 g, 1.93 mmol，86%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 518.2 (理論值)，518.3 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.60 min。 135d之合成
向 135c(1.0g, 1.93 mmol，1當量) 於MeOH (3.3 mL)中之溶液中添加於二噁烷中之HCl (4 M, 5.3 mL, 21 mmol，8當量)。將混合物攪拌在30℃下1小時。在完成後，在真空中去除溶劑且 135d(1.2 g, 2.65 mmol，定量產率)未經進一步純化即使用。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 418.2 (理論值)，418.2 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.09 min。 135e之合成
在5 mL微波小瓶中，將化合物 135d(200 mg, 0.408 mmol，1當量) 及 26a(245 mg, 0.612 mmol，1.5當量)溶於正丁醇(2.0 mL)中，向其中添加Na 2CO 3(130 mg, 1.22 mmol，3當量)及DIPEA (0.36 mL, 2.04 mmol，5當量)。經由微波反應器將反應液在140℃下加熱3小時。過濾所得產物並使用MeOH及DCM洗滌。濃縮濾液並經由急速層析(乾加載於矽藻土上，Sfar HC Duo SiO 2管柱，於DCM中之10:1 MeOH:NH 4OH梯度)純化以產生 135e(51 mg, 0.0651 mmol，16%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 781.3 (理論值)，781.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.72 min。 135f之合成
使用與 135a相同之程序且使用 135e(51 mg, 0.0651 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 135f(30 mg, 0.0402 mmol，62%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 751.3 (理論值)，751.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.46 min。 135g之合成
使用與 135b相同之程序且使用 135f(30 mg, 0.0402 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 135g(34 mg, 00394 mmol，定量產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 776.3 (理論值)，776.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.54 min。 135h之合成
使用與 135c相同之程序且使用 135g(17 mg, 0.0197 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 135h。在完成後，藉由製備型HPLC (方法H)純化產物。收集純淨部分，冷凍並凍乾以提供白色粉末形式之 135h(2.34 mg, 0.0021 mmol，10%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 912.4 (理論值)，912.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.65 min。 135之合成
將化合物 135h(2.34 mg, 0.0021 mmol，1當量)溶於MeOH (0.21 mL)中且添加於二噁烷中之HCl (4 M, 4.1 µL, 0.0164 mmol，8當量)。將溶液加熱至40℃並保持1小時。然後在真空中去除溶劑且 135(1.86 mg, 0.0020 mmol，定量產率)未經進一步純化即使用。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 812.3 (理論值)，812.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.26 min。 (E)-7-(2-(氮雜環丁-3-基)乙氧基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物136)之合成
Figure 02_image827
136a之合成
使用與 135h相同之程序且使用 135g(17 mg, 0.0197 mmol，1當量)及1, 3-二甲基-1 H-吡唑-5-甲酸作為起始材料來製備化合物 136a(3.15 mg, 0.0028 mmol，14%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 898.4 (理論值)，898.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.62 min。 136之合成
使用與 135相同之程序且使用 136a(3.15 mg, 0.0028 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 136(2.09 mg, 0.0023 mmol，82%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 798.3 (理論值)，798.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.24 min。 (E)-7-(3-(氮雜環丁-3-基氧基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物137)之合成
Figure 02_image829
137a之合成
使用與 135e相同之程序且使用 135d(200 mg, 0.408 mmol，1當量)及 27a(263 mg, 0.612 mmol，1.5當量)作為起始材料來製備化合物 137a(72 mg, 0.0893 mmol，22%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 811.3 (理論值)，811.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.72 min。 137b之合成
使用與 135a相同之方法且使用 137a(72 mg, 0.0893 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 137b(30 mg, 0.0386 mmol，43%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 781.3 (理論值)，781.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.46 min。 137c之合成
使用與 135b相同之程序且使用 137b(30 mg, 0.03896 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 137c(34 mg, 0.0387 mmol，定量產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 806.3 (理論值)，806.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.53 min。 137d之合成
使用與 135h相同之程序且使用 137c(17 mg, 0.0194 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 137d(4.21 mg, 0.0036 mmol，19%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 942.4 (理論值)，942.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.65 min。 化合物137之合成
使用與 135相同之程序且使用 137d(4.21 mg, 0.0036 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 137(3.35 mg, 0.0035 mmol，定量產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 842.3 (理論值)，842.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.29 min。 (E)-7-(3-(氮雜環丁-3-基氧基)丙氧基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物138)之合成
Figure 02_image831
138a之合成
使用與 135h相同之程序且使用 137c(17 mg, 0.0197 mmol，1當量)及1, 3-二甲基-1 H-吡唑-5-甲酸作為起始材料來製備化合物 138a(3.00 mg, 0.0026 mmol，13%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 928.4 (理論值)，928.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.62 min。 138之合成
使用與 135相同之程序且使用 138a(3.00 mg, 0.0026 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 138(2.35 mg, 0.0025 mmol，定量產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 828.3 (理論值)，828.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.26 min。 (E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(甲基胺基)丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物139)之合成
Figure 02_image833
139a之合成
使用與 135e相同之程序且使用 135d(250 mg, 0.551 mmol，1當量)及 77(320 mg, 0.826 mmol，1.5當量)作為起始材料來製備化合物 139a(125 mg, 0.162 mmol，29%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 769.3 (理論值)，769.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.67 min。 139b之合成
使用與 135a相同之程序且使用 139a(125 mg, 0.162 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 139b(51 mg, 0.0686 mmol，42%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 739.3 (理論值)，739.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.45 min。 139c之合成
使用與 135b相同之程序且使用 139b(51 mg, 0.0686 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 139c(57 mg, 0.0670 mmol，定量產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 764.3 (理論值)，764.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.31 min。 139d之合成
遵循與 135h相同之程序使用 139c(57 mg, 0.0670 mmol，1當量)及1, 3-二甲基-1 H-吡唑-5-甲酸作為起始材料來製備化合物 139d(34 mg, 0.0303 mmol，45%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 886.4 (理論值)，886.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.61 min。 139之合成
使用與 135相同之程序且使用 139d(34 mg, 0.0303 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 139(27 mg, 0.0291，定量產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 786.3 (理論值)，786.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.23 min。 (E)-7-(2-(氮雜環丁-3-基)乙氧基)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物140)之合成
Figure 02_image835
140a之合成
使用與 135e相同之程序且使用 26a(250 mg, 0.625 mmol，1當量)及 78d(420 mg, 0.938 mmol，1.5當量)作為起始材料來製備化合物 140a(380 mg, 0.490 mmol，78%產率)。在冷水中沈澱產物且未經進一步純化即使用。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 775.3 (理論值)，775.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.66 min。 140b之合成
使用與 135a相同之程序且使用 140a(380 mg, 0.490 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 140b(193 mg, 0.260 mmol，53%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 745.4 (理論值)，745.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.44 min。 140c之合成
使用與 135b相同之程序且使用 140b(193 mg, 0.260 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 140c(212 mg, 0.249 mmol，定量產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 770.4 (理論值)，770.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.60 min。 140d之合成
使用與 135h相同之程序且使用 140c(106 mg, 0.124mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 140d(38 mg, 0.0339 mmol，27%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 892.4 (理論值)，892.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.59 min。 140之合成
使用與 135相同之程序且使用 140d(38 mg, 0.0339 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 140(30 mg, 0.0334 mmol，定量產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 792.4 (理論值)，792.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.28 min。 (E)-N-(7-(2-(氮雜環丁-3-基)乙氧基)-5-胺甲醯基-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-4-乙基-2-甲基噁唑-5-甲醯胺(化合物141)之合成
Figure 02_image837
141a之合成
使用與 135h相同之程序且使用 140c(106 mg, 0.124 mmol，1當量)及4-乙基-2-甲基-噁唑-5-甲酸作為起始材料來製備化合物 141a(27 mg, 0.0237 mmol，19%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 907.4 (理論值)，907.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.57 min。 141之合成
使用與 135相同之程序且使用 141a(27 mg, 0.0237 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 141(21 mg, 0.0230 mmol，定量產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 807.4 (理論值)，807.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.26 min。 (E)-7-(3-(氮雜環丁-3-基氧基)丙氧基)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物142)之合成
Figure 02_image839
142a之合成
使用與 135e相同之程序且使用 27a(250 mg, 0.582 mmol，1當量)及 78d(391 mg, 0.872 mmol，1.5當量)作為起始材料來製備化合物 142a。使用冷水沈澱產物且未經進一步純化即使用。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 805.4 (理論值)，805.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.66 min。 142b之合成
使用與 135a相同之程序且使用 142a(548 mg, 0.681 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 142b(193 mg, 0.250 mmol，經2個步驟之產率為37%)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 775.4 (理論值)，775.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.50 min。 142c之合成
使用與 135b相同之程序且使用 142b(193 mg, 0.260 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 142c(164 mg, 0.186 mmol，75%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 800.4 (理論值)，800.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.33 min。 142d之合成
使用與 135h相同之程序且使用 142c(48 mg, 0.373 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 142d(40 mg, 0.0345 mmol，37%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 922.4 (理論值)，922.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.58 min。 142之合成
使用與 135相同之程序且使用 142d(40 mg, 0.0345 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 142(32 mg, 0.0323 mmol，定量產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 822.4 (理論值)，822.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.29 min。 (E)-N-(7-(3-(氮雜環丁-3-基氧基)丙氧基)-5-胺甲醯基-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-4-乙基-2-甲基噁唑-5-甲醯胺(化合物143)之合成
Figure 02_image841
143a之合成
使用與 135h相同之程序且使用 142c(82 mg, 0.0.0931 mmol，1當量)及4-乙基-2-甲基-噁唑-5-甲酸作為起始材料來製備化合物 143a(31 mg, 0.0263 mmol，28%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 937.4 (理論值)，937.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.56 min。 143之合成
使用與 135相同之程序且使用 141a(31 mg, 0.0263 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 143(25 mg, 0.0261 mmol，定量產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 837.4 (理論值)，837.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.29 min。 (E)-7-(2-(1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物144)之合成
Figure 02_image843
根據一般方法9使用化合物 135(1.86 mg, 0.0020 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 144之x2 TFA鹽(0.59 mg, 0.0005 mmol，24%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 963.4 (理論值)，963.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.44 min。 (E)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(2-(1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)乙氧基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物145)之合成
Figure 02_image845
根據一般方法9使用化合物 136(2.09 mg, 0.0023 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 145之x2 TFA鹽(0.31 mg, 0.0003 mmol，12%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 949.3 (理論值)，949.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.40 min。 (E)-7-(3-((1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)氧基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物146)之合成
Figure 02_image847
根據一般方法9使用化合物 137(3.35 mg, 0.0035 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 146之x2 TFA鹽(0.92 mg, 0.0008 mmol，21%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 993.4 (理論值)，993.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.43 min。 (E)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(3-((1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)氧基)丙氧基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物147)之合成
Figure 02_image849
根據一般方法9使用化合物 136(2.83 mg, 0.0024 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 147之x2 TFA鹽(0.36 mg, 0.0003 mmol，12%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 979.4 (理論值)，979.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.41 min。 (E)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙醯胺基)丙氧基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物148)之合成
Figure 02_image851
根據一般方法9使用化合物 139作為起始材料來製備化合物 148之x2 TFA鹽(15 mg, 0.0129 mmol，44%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 937.3 (理論值)，937.4 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.42 min。 (E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(2-(1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)乙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物149)之合成
Figure 02_image853
根據一般方法9使用化合物 140(30 mg, 0.0334 mmol, 1當量)作為起始材料來製備化合物 149之x2 TFA鹽(16 mg, 0.0136 mmol，41%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 943.4 (理論值)，943.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.41 min。 (E)-N-(5-胺甲醯基-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(2-(1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)乙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-4-乙基-2-甲基噁唑-5-甲醯胺(化合物150)之合成
Figure 02_image855
根據一般方法9使用化合物 141(21 mg, 0.0230 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 150之x2 TFA鹽(15 mg, 0.0123 mmol，53%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 943.4 (理論值)，943.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.41 min。 (E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(3-((1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)氧基)丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物151)之合成
Figure 02_image857
根據一般方法9使用化合物 142(30 mg, 0.0323 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 151之x2 TFA鹽(22 mg, 0.0182 mmol，56%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 973.4 (理論值)，973.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.42 min。 (E)-N-(5-胺甲醯基-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-((1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)氧基)丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-4-乙基-2-甲基噁唑-5-甲醯胺(化合物152)之合成
Figure 02_image859
根據一般方法9使用化合物 143(37 mg, 0.0388 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 152之x2 TFA鹽(20 mg, 0.0168 mmol，43%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 988.4 (理論值)，988.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.40 min。 S-(1-(3-(3-(2-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)乙基)氮雜環丁-1-基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物153)之合成
Figure 02_image861
向化合物 149之溶液(10 mM於DMSO中，0.42 mL, 0.0042 mmol，1當量)中添加l-半胱胺酸(0.1 M H 2O, 63 µL, 0.063 mmol，1.5當量)。將反應液在30℃下攪拌1 h且藉由UPLC-MS進行監測。在完成後，藉由製備型HPLC (方法G)直接純化反應混合物。收集純淨部分，冷凍，並凍乾以產生化合物 153(2.17 mg, 0.0015 mmol，36%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 1079.4 (理論值)，1079.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.28 min。 S-(1-(3-(3-(2-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(4-乙基-2-甲基噁唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)乙基)氮雜環丁-1-基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物154)之合成
Figure 02_image863
使用與化合物 153相同之程序且使用化合物 145(10 mM於DMSO中，0.43 mL, 0.0043 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 150(2.35 mg, 0.0017 mmol，39%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 1064.4 (理論值)，1064.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.29 min。 S-(1-(3-(3-(3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙氧基)氮雜環丁-1-基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物155)之合成
Figure 02_image865
使用與化合物 153相同之程序且使用化合物 151(10 mM於DMSO中，0.41 mL, 0.0041 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 155(2.34 mg, 0.0016 mmol，39%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] += 1109.4 (理論值)，1109.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.30 min。 S-(1-(3-(3-(3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(4-乙基-2-甲基噁唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙氧基)氮雜環丁-1-基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物156)之合成
Figure 02_image867
使用與化合物 153相同之程序且使用化合物 152(10 mM於DMSO中，0.42 mL, 0.0042 mmol，1當量)作為起始材料來製備化合物 156(2.31 mg, 0.0016 mmol，39%產率)。LC-MS (方法E，ESI+)：m/z [M + H] +=1094.4 (理論值)，1094.5 (觀察值)。HPLC滯留時間：1.32 min。 用於製備ADC之一般程序：
如先前所闡述( Methods Enzymol. 2012, 502,123-138)來製備ADC。簡言之，藉由使用亞化學計量量之參(2-羧基乙基)膦(TCEP)部分還原抗體鏈間二硫鍵來製備DAR (藥物/抗體比率) 4結合物。將TCEP相對於抗體大約2.2莫耳當量(TCEP:抗體)添加至於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS,Gibco, PN 10010023)及1 M EDTA中之預熱(37℃)抗體儲備溶液中。將還原反應混合物在37℃下培育大約60分鐘。藉由添加6莫耳當量呈DMSO儲備溶液形式之藥物-連接體來使部分還原之抗體與馬來醯亞胺藥物-連接體結合。視需要添加額外DMSO以達成10% (v/v) DMSO之最終反應濃度，從而使藥物-連接體在結合反應期間保持呈溶液形式。使結合反應在室溫下進行30分鐘或直至所有可用抗體半胱胺酸硫醇皆已由藥物-連接體烷基化為止，如藉由反相HPLC (方法G)所指示。藉由將反應混合物與100%莫耳過量之QuadraSil® MP樹脂(Millipore Sigma, PN 679526)在室溫下一起培育30分鐘來去除過量藥物-連接體。藉由凝膠過濾層析使用預填充PD-10管柱(GE Life Sciences, PN 17043501)根據製造商說明書來將緩衝液交換成調配緩衝液(PBS, Gibco, PN 10010023)。藉由使用30千道爾頓截止分子量離心過濾器(Millipore Sigma, PN Z717185)重複滲濾(5-10次)含有於調配物緩衝液中之ADC之反應混合物來進一步去除殘餘藥物-連接體，直至並無可檢測游離藥物-連接體剩餘為止，如藉由HPLC分析(方法K)所指示。 用於表徵ADC之一般程序：
使用下列方法表徵ADC：
方法I：Waters ACQUITY UPLC系統及Acquity UPLC Protein BEH SEC管柱(200 Å, 1.7µm, 4.6 × 150mm, PN: 186005225)實施粒徑篩析層析(SEC)。所用移動相為於92.5%水溶液(25 mM磷酸鈉、350mM NaCl, pH 6.8)中之7.5%異丙醇(v/v)。在環境溫度下以0.4 mL/min之流速以等梯度方式實施洗脫。
方法J：在Waters 2695 HPLC系統及Agilent PLRP-S管柱(1000 Å, 8µm 50×2.1mm, PN: PL1912-1802)上實施反相層析(RP-HPLC)。在分析之前，使用10 mM DTT處理ADC以還原二硫鍵。在80℃下使用移動相A (於水中之0.05% (v/v) TFA)及移動相B (於MeCN中之0.01% (v/v) TFA)利用在12.5分鐘內25-44% B之梯度來洗脫試樣。基於在UV 280 nm下量測之積分峰面積來計算藥物/抗體比率(DAR)。 莫耳比之計算
使用下述方程式計算每一抗體輕鏈(MR DLC)或抗體重鏈(MR DHC)之平均藥物載量：
Figure 02_image869
其中         MR DLC=平均藥物/輕鏈比率 LC%面積 n=第 n種輕鏈加載物質之面積% 面積%僅基於輕鏈峰 MR n=第 n種加載物質之藥物/抗體比率 及
Figure 02_image871
其中         MR DHC=平均藥物/重鏈比率 HC%面積 n=第 n種重鏈加載物質之面積% %面積僅基於重鏈峰 MR n=第 n種加載物質之藥物/抗體比率
使用下述方程式計算每一抗體之平均藥物載量(MR D)： MR D=   2 × (MR DLC+ MR DHC) 其中         MR D=平均藥物/抗體比率 MR DLC=平均藥物/輕鏈比率 MR DHC=平均藥物/重鏈比率
方法K：在Waters ACQUITY UPLC系統使用ACQUITY UPLC BEH C18管柱(130Å, 1.7 µm, 2.1 mm × 50 mm, PN: 186002350)來量測殘餘未結合藥物連接體。使用2x體積之冰冷MeOH處理ADC試樣以誘導沈澱並藉由離心粒化。將含有任何殘餘未結合藥物-連接體之上清液注入該系統上。在50℃下使用移動相A (於水中之0.05% (v/v) TFA)及移動相B (於MeCN中之0.01% TFA (v/v))利用在2分鐘內1-95% B之梯度來洗脫試樣。在215 nm下實施檢測且使用相應連接體之外部標準品量化殘餘藥物-連接體化合物。 實例2： STING激動劑及相應ADC之活體外功效評估 活體外生物分析之實驗程序 THP1-Dual™細胞報告基因分析
使用含有IRF-Lucia螢光素酶報告基因之THP1-Dual™細胞(InvivoGen PN: thpd-nfis [亦稱為THP1雙重報告細胞])評估化合物及ADC之功效。在含有10%熱滅活胎牛血清、Pen-Strep (100 U/mL-100µg/mL, Gibco)、HEPES (10mM, Gibco))、丙酮酸鈉(1mM, Gibco)、MEM非必需胺基酸(1x, Gibco)、GlutaMAX (1x, Gibco)及β-巰基乙醇(55µM, Gibco)之RPMI-1640 (Gibco)中培養細胞。將200 μL細胞以約100,000個細胞/孔平鋪於含有指示濃度之化合物或ADC之96孔平底組織培養物處理性透明聚苯乙烯板(Corning Costar #3596)中。在平鋪後24小時(化合物)或48小時(ADC)收穫上清液以供報告基因分析，或按照指示進行。為量測Lucia報告信號，將10 μL上清液與40 μL QUANTI-Luc™發光分析試劑(Invivogen PN: rep-qlc1)組合於96孔透明平底組織培養物處理性黑色聚苯乙烯板(Corning Costar #3603)中並在Perkin Elmer Envision讀板儀上讀取。 骨髓源巨噬球分析
使用自野生型(C57BL/6J，Jackson實驗室#000664)或STING缺陷型(C57BL/6J- Sting1 gt /J，Jackson實驗室#017537)小鼠培養之小鼠骨髓源巨噬球來評估本文所闡述之化合物之功效。簡言之，將小鼠骨髓細胞在含有10%熱滅活牛血清、Pen-Strep (100 U/mL-100 µg/mL、Gibco)、HEPES (10mM, Gibco))、丙酮酸鈉(1 mM, Gibco)、GlutaMAX (1x, Gibco)、β-巰基乙醇(55 µM, Gibco)及20-40 ng/mL鼠類M-CSF (Peprotech, #315-02)之RPMI-1640 (Gibco)中培養7-10天。將200 μL細胞以約100,000個細胞/孔平鋪於含有指示濃度之化合物之96孔平底組織培養物處理性透明聚苯乙烯板(Corning Costar #3596)中。在24小時時收穫上清且使用Milliplex MAP小鼠細胞介素/趨化介素磁珠面板分析套組(MCYTOMAG-70k定製11元套組：MCP1、MIP1α、MIP1β、TNFα、IFNγ、IL-10、IL-12p70、IL-1β、IL-6、IP10、RANTES)量測細胞介素並使用Luminex™ MAGPIX™儀器系統進行分析。 旁觀者活性分析
使用Renca癌細胞及含有IRF-Lucia螢光素酶報告基因之THP1-Dual™細胞(InvivoGen)來評估ADC之旁觀者活性。在含有10%熱滅活胎牛血清、Pen-Strep (100 U/ml-100µg/ml, Gibco)、HEPES (10mM, Gibco)、丙酮酸鈉(1mM, Gibco)、MEM非必需胺基酸(1x, Gibco)、GlutaMAX (1x, Gibco)及β-巰基乙醇(55µM, Gibco)之RPMI-1640 (Gibco)中培養細胞。將100 µL Renca細胞以50,000個細胞/孔平鋪於96孔平底組織培養物處理性透明聚苯乙烯板(Corning Costar #3596)中。在初始平鋪第二天，將50,000個THP1-Dual™細胞以200 µL之總體積添加至含有指示濃度之ADC之每一孔中。在添加THP1-Dual™細胞後48小時收穫上清液。為量測Lucia報告信號，將10μL上清液與40μL QUANTI-Luc™發光分析試劑(Invivogen PN: rep-qlc1)組合於96孔透明平底組織培養物處理性黑色聚苯乙烯板(Corning Costar PN: 3603)中並在Perkin Elmer Envision讀板儀上讀取。在一些實驗中，如上所述平鋪經改造以表現通常由免疫細胞表現之鼠類蛋白(靶抗原C—免疫細胞抗原)之HEK 293T細胞以代替Renca腫瘤細胞。 癌細胞直接細胞毒性分析
對癌細胞進行計數並平鋪於384孔、白壁組織培養物處理板(Corning)中之40 µL完全生長培養基中。將細胞板在37℃及5% CO 2下培育過夜以使平衡細胞。在RPMI-1640 + 20%胎牛血清(FBS)中連續稀釋含有ADC或游離藥物之儲備溶液。然後一式兩份將每一濃度之10 µL溶液添加至每一細胞板中。然後將細胞在37℃及5% CO 2下培育96小時，然後自培育器取出細胞板，且在分析之前冷卻至室溫並保持30分鐘。根據Promega方案來製備CellTiter-Glo®發光分析試劑(Promega Corporation, Madison, WI)。使用Formulatrix Tempest液體處理儀(Formulatrix)將10 µL細胞Titer-Glo®添加至分析板中且使板在室溫下避光30分鐘。使用EnVision Multimode讀板儀(Perkin Elmer, Waltham, MA)量測試樣之發光。在Graphpad Prism (San Diego, CA)中使用非線性、4參數曲線擬合模型[Y=最小值+ (最大值-最小值)/(1+10^((LogEC50-X)*希爾斜率(HillSlope)))]來分析原始數據。將結果報告為X50值，其定義為將細胞生存力減小至50%所需之ADC或游離藥物濃度。 SU-DHL-1 分析
使用SU-DHL-1淋巴瘤細胞評估ADC之功效。在含有10%熱滅活胎牛血清、Pen-Strep (100 U/mL-100µg/mL, Gibco)、HEPES (10mM, Gibco))、丙酮酸鈉(1mM, Gibco)、MEM非必需胺基酸(1x, Gibco)、GlutaMAX (1x, Gibco)及β-巰基乙醇(55µM, Gibco)之RPMI-1640 (Gibco)中培養細胞。將200 μL細胞以約100,000個細胞/孔平鋪於含有指示濃度之ADC之96孔平底組織培養物處理性透明聚苯乙烯板(Corning Costar #3596)中。在48小時之後，收穫50 µL上清液且使用MILLIPLEX MAP人類細胞介素/趨化介素磁珠面板(HCYTOMAG-60K定製8元套組：IL-6、IL-8、MCP1、TNFα、GRO、IP-10、MIP1α及MIP1β)評估細胞介素產生。藉由將100 µL CellTiter-Glo®發光分析試劑(Promega Corporation, Madison, WI)添加至板中之剩餘150 µL細胞中並將混合物轉移至96孔黑壁板(Corning Costar #3603)中來評估細胞生存力。使板在室溫下避光30分鐘，且使用EnVision Multimode讀板儀(Perkin Elmer, Waltham, MA)量測試樣之發光。 活體外生物分析之結果
評價STING激動劑化合物活化THP1-Dual TM報告細胞之能力，該等報告細胞係其中可經由所分泌螢光素酶報告蛋白(Lucia)監測I型干擾素(IRF)信號傳導之人類單核球細胞系。使用增加濃度之激動劑將THP1-Dual TM細胞處理24h，然後收穫上清液且使用QUANTI-Luc™發光分析試劑量化Lucia報告信號。化合物 A及化合物 1之功效顯著大於(2',3')-Rp,Rpc-二AMPS二鈉(化合物 B)且分別以3 nM及5 nM之EC50值活化Lucia報告基因。化合物 12a之功效小於化合物1及化合物A ( 圖 1，EC 50值為21 nM)。在用於刺激野生型(WT) (而非STING缺陷型)鼠類骨髓源巨噬球時，化合物 1及 12a會誘導細胞介素產生，從而指示該等化合物之活性係STING依賴性( 圖 2)。
使STING激動劑化合物結合至靶向及非靶向抗體且評價所得ADC活化THP1-Dual TM報告細胞之能力。使用基於葡萄糖醛酸苷之可裂解連接體( 11)結合化合物 1。使用非裂解連接體、基於肽之可裂解連接體及基於葡萄糖醛酸苷之可裂解連接體(分別係化合物 12、 14及 13)結合化合物 12a。使用增加濃度之具有結合至化合物之非結合或靶向mAb之ADC將THP1-Dual TM細胞處理48h，然後收穫上清液，且使用QUANTI-Luc™發光分析試劑量化Lucia報告信號。儘管化合物 12a作為游離藥物之功效小於化合物 1(圖 1)，但化合物 12a在經由可裂解葡萄糖醛酸苷連接體( 13)結合至靶向mAb時之功效大於類似化合物 1結合物( 11)。另外，化合物 12a在經由非裂解連接體( 12)結合至靶向mAb時之功效大於使用可裂解連接體 13或 14時(圖 3)，從而證實使STING激動劑小分子結合至抗體可增加其功效。
評價化合物 12及在內溶酶體中裂解mAb結合物時釋放之半胱胺酸加合物(化合物 16)活化THP1-Dual TM報告細胞之能力。使用增加濃度之化合物將THP1-Dual TM細胞處理24h，然後收穫上清液且使用QUANTI-Luc™發光分析試劑量化Lucia報告信號。化合物 12及化合物 16皆具有活性且EC50值 (分別為37 nM及34 nM)類似於母體游離藥物 12a(21nM， 圖 4及 圖 1)。
亦評估呈游離藥物形式及在使用非裂解連接體( 15)結合至靶向抗體時之化合物 15b。使用增加濃度之游離藥物或具有結合至化合物之非結合或靶向mAb之ADC將THP1-Dual TM細胞處理48h；然後收穫上清液，且使用QUANTI-Luc™發光分析試劑量化Lucia報告基因信號。化合物 15b之功效大於 12a，而在連接至相同靶向mAb時 15之ADC之功效與 12之ADC的功效類似( 圖 5)。
使用各種非裂解連接體( 12、 17、 19-24)使化合物 12a結合至靶向及非靶向抗體且評價所得ADC活化THP1-Dual TM報告細胞之能力。所有含有靶向mAb之結合物皆具有活性且EC50值介於約1.7-7.3 ng/mL之間( 表 1)。亦評估該等連接體在結合至結合腫瘤抗原A或抗原B (CD30)之靶向mAb時直接殺死癌細胞之能力。所有結合物皆在癌細胞系子組中具有活性(不論靶抗原表現如何)，從而指示了一些癌細胞之靶獨立性殺死；化合物 1、 12a及 16亦對癌細胞系子組顯示直接細胞毒性活性( 表 2；靶向mAb A結合物包括結合至各種藥物連接體化合物之靶向腫瘤抗原A之mAb；靶向mAb B結合物包括結合至各種藥物連接體之靶向CD30之cAC10 mAb)。 表1：靶STING激動劑在ADC在THP1-Dual TM報告細胞中之活性。
化合物 EC 50(ng/mL)**
12 4.2
17 2.2
19 7.3
20 1.7
21 4.2
22 4.7
23 2.4
24 2.1
25 307
26 14.4
27 10.4
66 ＞10,000
67 ＞10,000
68 ＞10,000
69 ＞10,000
96 ＞10,000
97 *
98 ＞10,000
99 *
100 *
101 ＞10,000
102 ＞10,000
103 ＞10,000
104 ＞10,000
105 52.5
106 ＞10,000
107 ＞10,000
108 63.5
109 ＞10,000
110 ＞10,000
111 13.2
112 2
121 3.0
122 5.6
123 1.6
124 9.1
125 1.4
126 ＞10,000
128 ＞10,000
131 3.6
133 12.2
134 10.3
144 ＞10,000
145 ＞10,000
146 ＞10,000
147 ＞10,000
148 ＞10,000
149 ＞10,000
150 7.9
151 ＞10,000
152 6.5
*未評估含有＞10%聚集物之ADC **對於一些化合物而言，EC50值包括多個實驗之平均值 表2：各種ADC及化合物對人類癌細胞系之直接細胞毒性之數據。
靶A表現 + + + + + + + + + + +
靶B表現 - - - + + + + - - - -
ADC×50 (ng/mL)
786-O A2058 BxPC3 DEL DELBVR Karpas299 L540cy LS174T MDAMB231 MOLM-13 SU-DHL-4
靶向mAb A 12(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.04 1 1 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 12(4負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.012 0.03 3 2 ＞1K ＞1K 12 ＞1K
靶向mAb B 12(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.004 1 1 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
靶向mAb B 12(4負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.1 2 1 ＞1K ＞1K 7 ＞1K
靶向mAb A 17(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.004 1 1 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
靶向mAb A 17(4負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.1 0.03 5 2 ＞1K ＞1K 26 ＞1K
靶向mAb B 17(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 ＜0.004 1 0.2 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
靶向mAb B 17(4負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.004 0.01 1 1 ＞1K ＞1K 25 ＞1K
靶向mAb A 21(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.03 4 1 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
靶向mAb A 21(4負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.1 0.2 7 2 ＞1K ＞1K 20 ＞1K
靶向mAb B 21(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.01 1 0.4 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
靶向mAb A 22(6負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.02 0.1 2 1 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
靶向mAb A 22(2負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.03 0.2 29 4 ＞1K ＞1K 29 ＞1K
靶向mAb B 22(6負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.1 1 1 ＞1K ＞1K 3 ＞1K
靶向mAb A 19(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.02 1 1 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 19(4負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.1 3 5 ＞1K ＞1K 13 ＞1K
靶向mAb B 19(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.01 0.3 0.3 ＞1K ＞1K 0.4 ＞1K
靶向mAb B 19(4負載) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.02 0.5 1 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 20(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.02 0.2 0.3 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 20(4負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.02 1 1 ＞1K ＞1K 10 ＞1K
靶向mAb B 20(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 ＜0.004 0.1 0.1 ＞1K ＞1K 0.2 ＞1K
靶向mAb B 20(4負載) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.02 0.1 0.5 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 24(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.01 0.3 1 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 24(4負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.01 1 4 ＞1K ＞1K 11 ＞1K
靶向mAb B 24(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.01 0.03 0.5 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb B 24(4負載) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.01 0.2 2 ＞1K ＞1K 4 ＞1K
靶向mAb A 23(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.03 1 1 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 23(4負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.02 0.05 4 5 ＞1K ＞1K 8 ＞1K
靶向mAb B 23(8負載) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.01 0.1 0.2 ＞1K ＞1K 0.3 ＞1K
靶向mAb B 23(4負載) ＞1K ＞1K ＞1K 0.002 0.02 0.3 0.3 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
化合物×50 (nM))
化合物 1 ＞1K ＞1K ＞1K 2 16 ＞1K 31 ＞1K ＞1K 42 ＞1K
化合物 12a ＞1K ＞1K ＞1K 3 111 ＞1K 83 ＞1K ＞1K 87 ＞1K
化合物 16 ＞1K ＞1K ＞1K 4 7 ＞1K 29 ＞1K ＞1K 27 ＞1K
合成多種其他化合物並評估其活化THP1-Dual TM報告細胞之能力。若干化合物具有活性且EC50值介於1.3 nM (化合物 27e)至6337 nM (化合物 126a， 表 3)之間。具有高達10 µM之最小活性之化合物在 表 3中列示為具有＞10,000 nM之EC50值。若干化合物經由可裂解或非裂解藥物連接體結合至靶向( 表 1)及非結合抗體(未展示)且評價所得ADC活化THP1-Dual TM報告細胞之能力。含有藥物連接體 25-27 、 105 、 108 、 111-112及 121-125之結合物具有活性且EC50值介於1.4 ng/mL至307 ng/mL之間( 表 1)。所測試之所有其他結合物在此分析中於高達10 µg/mL下並無活性(包含含有衍生自活性小分子之藥物連接體之結合物( 表 3、 表 1))，由此突出顯示了研發用於此靶之活性ADC之挑戰。 表3：STING激動劑小分子在THP1-Dual TM報告細胞中之活性。
化合物 EC 50(nM)** 化合物 EC 50(nM)** 化合物 EC 50(nM)**
A 3 49 ＞10,000 93 ＞10,000
1 5 50 ＞10,000 94 132.8
12 37 51 ＞10,000 95 12.9
12a 21 52 ＞10,000 114 9.4
15b 5.8 53 ＞10,000 115 17.4
16 52 / 34 54 ＞10,000 116 11.6
17 66.28 55 ＞10,000 117 14.6
19 190.2 56 ＞10,000 118 23.6
20 53.91 57 ＞10,000 119 49.9
21 2632 58 ＞10,000 120 5.2
23 62.55 59 ＞10,000 126a 6337
24 83.29 60 ＞10,000 126b ＞10,000
25f 12 62 ＞10,000 127 301
25g 1576 63 2508 128a ＞10,000
26e 5 64/65 388.3 129 836
26f 69 66b 1159 130 2260
27e 1.3 68a 2238 132 37.4
27f 38 70 1.6 135 2011
28 954 71 70.11 136 ＞5,000
29 52 72 275.3 137 1685
30 87 73 216.25 138 ＞5,000
31 175.6 74 35.98 139 ＞4,000
32 44.5 75 57.73 140 1793
33 ＞10,000 76 58.8 141 159
   79 ＞10,000 142 1123
35 ＞10,000 80 ＞10,000 143 155
37 ＞10,000 81 ＞10,000 154 ＞10,000
38 ＞10,000 82 ＞10,000 155 94
39 ＞10,000 83 ＞10,000 156 1561
40 ＞10,000 84 ＞10,000 157 51
41 ＞10,000 85 ＞10,000      
42 ＞10,000 86 2465      
43 ＞10,000 87 ＞10,000      
44 ＞10,000 88 394      
45 ＞10,000 89 1324      
46 ＞10,000 90 ＞10,000      
47 ＞10,000 91 350      
48 ＞10,000 92 1190      
**對於一些化合物而言，EC50值包括多個實驗之平均值
使用可裂解連接體 11使化合物 1結合至非結合抗體以及抗原C及PD-L1靶向mAb，且評價所得ADC誘導細胞介素產生及SU-DHL-1細胞之直接細胞毒性之能力。靶向抗原C及PD-L1之結合物(而非非結合結合物)誘導穩定產生細胞介素MIP-1α且引起SU-DHL-1細胞死亡( 圖 6A及 圖 6B)。
評估結合物以旁觀者方式活化THP1雙重報告免疫細胞之能力。在將THP1雙重細胞與經改造以表現抗原C之HEK 293T細胞一起共培養時，由靶向抗原C且具有結合至化合物 12、 13及 14之hIgG1 LALAPG Fc骨架之抗體組成之結合物顯示一定旁觀者活性( 圖 7)。在將THP1雙重細胞與鼠類Renca腫瘤細胞一起共培養時，由靶向EphA2且具有結合至化合物 12之mIgG2a WT或LALAPG Fc骨架( 例如參見Schlothauer等人，Protein Engineering, Design and Selection, 2016, 29(10):457-466；及Hezareh等人，Journal of Virology, 2001, 75(24):12161-12168，其中之每一者之全部內容以引用方式併入本文中)之h1C1抗體組成之結合物亦顯示旁觀者活性。使用具有完整WT Fc骨架之結合物觀察到顯著增強之旁觀者活性( 圖 8)。 實例3 由STING激動劑ADC誘導之抗腫瘤免疫反應之活體內評估 活體內研究之實驗程序 活體內細胞介素分析
使用Milliplex MAP小鼠細胞介素/趨化介素磁珠面板分析套組(MCYTOMAG-70k定製11元套組：MCP1、MIP1α、MIP1β、TNFα、IFNγ、IL-10、IL-12p70、IL-6、IL-1β、IP10、RANTES)在收穫於使用化合物或ADC處理之後3、6、24或48小時之小鼠血漿中量測細胞介素，並使用Luminex™ MAGPIX™儀器系統進行分析。在計算平均值時排除標準曲線範圍以為之值(＜ 3.2 pg/mL或＞ 10,000 pg/mL)。 活體內抗腫瘤活性研究 Renca癌細胞
在含有10%熱滅活胎牛血清、Pen-Strep (100 U/mL-100 µg/mL)、MEM非必需胺基酸(1x)、丙酮酸鈉(1 mM)及L-麩醯胺酸(2 mM)之RPMI-1640 (ATCC)中培養Renca癌細胞(ATCC)。將Renca癌細胞經皮下植入(2*10 6個細胞，於200 µL 25%基質膠中) Balb/c雌性小鼠中。在一些實驗中，改造Renca腫瘤細胞以表現指示鼠類或人類靶抗原。
在腫瘤體積達到100 mm 3時，以指示投藥時間表藉由腹膜腔內或靜脈內注射向小鼠投用化合物或ADC且每週監測腫瘤體積兩次。在40% PEG400/鹽水中調配化合物。 CT26癌細胞
在經1mM丙酮酸鈉、10mM HEPES、2.8mL 45%葡萄糖(1.25g)改質且補充有10%胎牛血清及1% Pen/Strep/麩醯胺酸之RPMI 1640中培養CT26癌細胞(ATCC)。將CT26癌細胞經皮下植入(0.5*106個細胞，於200uL無血清RPMI 1640中) Balb/c小鼠中。 MC38癌細胞
在含有10%熱滅活胎牛血清、Pen-Strep (100 U/mL-100µg/mL)、MEM非必需胺基酸(1x)、丙酮酸鈉(1mM)及L-麩醯胺酸(2mM)之DMEM中培養MC38癌細胞(Kerafast)。將MC38癌細胞經皮下植入(1*10 6個細胞，於100uL 25%基質膠中) C57BL/6小鼠中。
在一些實驗中，使用MC38腫瘤細胞「再攻擊」在ADC治療後達成完全腫瘤消退之具腫瘤小鼠；將MC38癌細胞經皮下植入(1*10 6個細胞，於100uL 25%基質膠中) C57BL/6小鼠之另一側腹中。 4T1癌細胞
在含有10%熱滅活胎牛血清之RPMI中培養4T1癌細胞(ATCC)並經皮下植入(0.02*10 6個細胞，於200uL純RPMI中) Balb/c小鼠中。 活體內研究之結果 Renca癌細胞
使用同基因系統來評價STING激動劑ADC誘導活體內免疫反應及驅動抗腫瘤免疫反應之能力。Renca系統係一種皮下小鼠腎腺癌模型。在第0天時，向雌性Balb/c小鼠之側腹中經皮下植入2×10 6個Renca細胞。在達到100 mm 3之平均腫瘤大小(藉由使用式體積(mm 3) = 0.5 *長度*寬度 2來量測，其中長度係較長尺寸)時，將小鼠隨機分成每組≥ 5隻小鼠之治療組。然後每7天使用指示治療經腹膜腔內(ADC或化合物)或經靜脈內(化合物)來治療動物，總共3個劑量(或按照指示)。在整個研究中量測腫瘤長度及寬度以及動物重量且使用上式計算腫瘤體積。追蹤動物直至腫瘤體積達到約1000 mm 3為止；然後對動物實施安樂死。
評估化合物 1與結合至非結合或EphA2靶向mAb (mIgG2a LALAPG骨架； 例如參見Schlothauer等人，Protein Engineering, Design and Selection, 2016, 29(10):457-466；及Hezareh等人，Journal of Virology, 2001, 75(24):12161-12168，其中之每一者之全部內容以引用方式併入本文中)之可裂解連接體 11相比之抗腫瘤活性；應注意，本文所闡述之所有EphA2靶向mAb結合物皆由結合至各種藥物連接體化合物之h1C1 mIgG2a mAb組成。在使用化合物 1或 11之非結合mAb結合物治療動物時，觀察到一定之腫瘤生長延遲；然而，使用 11之EphA2靶向mAb結合物可顯著增強腫瘤生長延遲，尤其在較高12 mg/kg劑量下( 圖 9A)，從而明確證實了使用靶向ADC遞送STING激動劑之抗腫瘤益處。
在下一活體內研究中，評估結合至非結合或EphA2靶向mAb (mIgG2a LALAPG骨架)之非裂解連接體化合物 12之抗腫瘤活性。 12之EphA2靶向mAb結合物展現穩定抗腫瘤活性且令人吃驚地其活性大於之結合至相同EphA2靶向mAb之 11的ADC ( 圖 10A)。在下一活體內研究中，評估結合至非結合或EphA2靶向mAb (mIgG2a WT骨架)之非裂解連接體 15之抗腫瘤活性。 15之EphA2靶向mAb結合物展現類似於 12之相應ADC之穩定抗腫瘤活性( 圖 11A)。在此研究中，亦評估結合至具有mIgG2a WT及LALAPG骨架之EphA2靶向抗體之 12之活性，且兩種結合物具有類似活性。此發現令人吃驚，此乃因活體外旁觀者分析指示，完整WT Fc骨架與LALAPG Fc骨架相比可顯著增強旁觀者免疫細胞活化( 圖 8)。
化合物 1及 11及 12在mIgG2a LALAPG骨架上之所有抗體結合物皆充分耐受-第1及第2治療劑量後之平均重量減輕＜約5%。STING激動劑化合物 A之耐受性較差-小鼠在第2劑量之後展現平均6.2%之重量減輕( 圖 9B 、 10B及 11B)。此外，3 mg/kg劑量值下之 12及 15與mIgG2a WT骨架之EphA2靶向mAb結合物之耐受性差於 12與LALAPG骨架的結合物-經靶向WT骨架ADC治療之小鼠展現約8%之重量減輕( 圖 11B)。
在下一活體內研究中，評估結合至EphA2靶向mAb (mIgG2a LALAPG骨架)之非裂解連接體化合物 12以及未結合化合物 12a之抗腫瘤活性。 12之EphA2靶向mAb結合物在1 mg/kg及3 mg/kg之劑量下展現穩定抗腫瘤活性，而化合物 12a具有有限抗腫瘤效能( 圖 12)。總而言之，此表明，可藉由結合至抗體來將在腫瘤模型中活體內惰性之STING激動劑化合物(例如化合物 1及 12a)轉化成活性治療劑(例如 11及 12之靶向mAb結合物)。
量測因應於游離藥物及結合物之全身性細胞介素產生來代替全身性活性。化合物 1以及 11、 12及 15之所有抗體結合物皆誘導極小促發炎性細胞介素(IL-6及TNF)產生。另一方面，化合物 A及化合物 12a誘導穩定產生IL-6及TNF ( 表 4、 表 5及 表 6)。此外，與 12與LALAPG Fc骨架之結合物相比， 11及 12與WT Fc骨架之EphA2靶向結合物誘導較大全身性MIP1α、MIP1β及MCP-1表現。此指示，在使用以3 mg/kg q7dx3投用之特定EphA2靶向抗體(闡述於圖 10-12中)之Renca腫瘤模型中，LALAPG Fc骨架可減小在靶毒性(全身性細胞介素/重量減輕)，且並不影響抗腫瘤效能。此亦指示，結合STING激動劑化合物(例如化合物 12a對 12之靶向mAb結合物 )可改良效能及安全性(減少全身性細胞介素)。 表4：在使用包括非結合或EphA2靶向mAb (具有結合至化合物 11或 12或者化合物 1或化合物A之mIgG2a LALAPG骨架)之各種ADC治療後Renca具腫瘤小鼠之周邊血(血漿)中之細胞介素產生。
時間 (h) 對照 3mg/kg 非結合mAb 11 3mg/kg 非結合 mAb 12 3mg/kg 靶向 mAb 11 3mg/kg 靶向 mAb 12 對照 2.4mg/kg 非結合 mAb 11 2.4mg/g 靶向 mAb 11 12mg/kg 靶向 mAb 11 1.48mg/kg 化合物 1 1.86mg/kg 化合物 A
IFNγ 3 ＜3.2 1.1 0.4 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 0.3
6 ＜3.2 15.6 7.1 8.5 22.6 ＜3.2 ＜3.2 1.3 4.3 0.2 71.8
24 ＜3.2 ＜3.2 1.4 ＜3.2 3.0 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 0.9 ＜3.2 ＜3.2
IL1β 3 3.2 5.3 4.3 4.3 5.3 0.4 0.3 0.5 0.3 0.7 1.5
6 3.2 4.3 4.3 5.3 6.4 0.3 1.7 0.3 1.8 1.5 0.6
24 3.2 4.3 4.8 4.3 5.8 0.3 0.3 0.3 0.3 0.8 0.3
IL-6 3 9.2 120.1 23.8 150.5 109.5 154.7 14.3 5.5 37.7 95.7 3553.0
6 26.9 472.1 176.6 305.6 404.4 0.7 162.2 81.9 303.4 6.8 731.9
24 33.2 12.0 58.6 28.0 75.3 7.7 19.6 4.8 27.0 13.5 16.4
IL-10 3 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 1.5 48.8 0.5
6 ＜3.2 3.9 4.3 4.8 6.4 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 0.8 ＜3.2
24 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 0.8 34.6 ＜3.2
IL12p70 3 ＜3.2 5.9 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 17.6 174.5 0.2
6 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 3.1 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 0.2
24 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 23.4 140.0 ＜3.2
IP10 3 235.3 973.2 402.4 1069.7 1094.1 59.8 176.7 80.5 295.4 702.8 4785.0
6 179.7 2976.0 2783.5 2963.1 3037.2 37.0 3977.4 4205.6 7374.2 3391.5 4976.1
24 192.3 1129.0 2329.0 1019.3 2564.0 71.5 559.7 358.1 1524.0 551.1 889.6
MCP-1 3 50.2 138.6 97.6 152.5 166.5 67.8 21.6 10.0 65.2 167.8 14494.4
6 35.8 1168.1 615.0 1727.0 7542.0 19.7 3822.7 1811.8 10211.9 795.6 10776.8
24 50.2 157.0 2374.8 2S4.9 7777.1 26.9 238.0 161.9 1486.0 332.6 539.5
MIP1α 3 ＜3.2 26.1 ＜3.2 26.1 ＜3.2 24.1 3.0 13.9 10.0 55.6 1300.3
6 ＜3.2 36.4 44.5 38.4 67.1 10.0 49.1 24.0 108.5 38.9 208.8
24 ＜3.2 ＜3.2 62.9 62.9 36.4 33.9 10.0 49.4 29.9 69.9 41.7
MIP1β 3 ＜3.2 78.2 40.4 66.6 53.3 6.4 11.3 6.4 45.4 362.3 6365.1
6 ＜3.2 736.5 697.0 657.3 1267.3 ＜3.2 469.0 197.9 1170.5 168.7 2153.8
24 ＜3.2 61.8 439.4 35.9 705.5 ＜3.2 35.6 26.4 270.7 70.7 35.5
RANTES 3 4.4 6.4 1.3 7.8 5.3 2.9 2.2 1.7 3.4 10.6 91.6
6 ＜3.2 14.9 3.4 13.2 34.1 2.7 19.9 11.9 57.3 18.4 736.9
24 4.3 25.5 186.5 22.3 239.1 3.5 18.2 11.9 90.6 15.6 113.2
TNTa 3 ＜3.2 3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 1.6 1.4 1.3 2.5 3.6 57.0
6 ＜3.2 12.9 7.2 10.2 4.6 0.8 3.8 2.1 6.2 1.9 17.3
24 ＜3.2 ＜3.2 3.2 ＜3.2 8.2 1.3 1.4 1.3 3.1 2.0 1.3
表5：在使用包括非結合或EphA2靶向mAb (具有結合至化合物 12或 15之mIgG2a野生型(WT)或mIgG2a LALAPG骨架)之各種ADC治療後經改造Renca具腫瘤小鼠(闡述於 圖 8A-10B中)之周邊血(血漿)中之細胞介素產生。
時間 (h) 對照 3 mg/kg非靶向mAb 12(LALAPG) 3mg/kg非靶向mAb 12(WT) 3mg/kg靶向mAb 12(LALAPG) 3mg/kg靶向mAb 12(WT) 3mg/kg非靶向mAb 15(WT) 3mg/kg靶向mAb 15(WT)
IFNγ 3 1.1 1.2 2.2 0.7 1.2 1.3 1.8
6 0.8 8.9 5.2 12.1 19.3 8.5 17.5
24 1.3 7.1 6.1 18.8 27.0 6.6 21.1
48 2.0 1.5 2.0 2.1 2.0 1.8 2.0
IL1β 3 8.8 12.7 26.0 19.8 7.8 15.9 30.3
6 8.8 35.5 14.7 ＜3.2 27.0 27.3 19.0
24 10.7 12.2 22.7 4.9 10.7 10.8 7.8
48 ＜3.2 4.9 22.7 7.8 2.1 13.7 10.7
IL-6 3 5.1 12.7 12.6 71.6 61.6 12.0 105.8
6 5.5 55.3 47.3 327.4 279.5 82.4 475.4
24 3.5 33.4 25.2 61.1 80.8 41.3 63.0
48 2.3 5.0 5.8 29.9 15.6 11.5 17.9
IL-10 3 2.6 4.0 4.4 4.1 2.2 5.9 5.1
6 2.5 8.2 4.8 5.2 9.6 8.4 6.3
24 1.6 3.2 2.7 4.9 5.5 4.9 7.3
48 0.6 0.6 2.7 1.7 1.0 2.6 2.1
IL12p70 3 12.1 5.0 31.9 26.6 ＜3.2 23.3 12.5
6 0.9 48.9 13.7 ＜3.2 23.5 29.0 10.3
24 0.9 10.5 7.1 4.0 0.9 10.5 4.0
48 ＜3.2 0.9 20.1 ＜3.2 0.9 7.1 0.9
IP10 3 99.4 134.0 104.9 335.5 371.9 185.4 637.3
6 71.0 2469.9 2651.6 2757.9 3219.0 2885.3 3422.1
24 86.3 1798.9 1652.7 2219.9 2004.1 2616.0 2324.1
48 127.6 738.5 822.9 824.4 819.2 1052.2 935.8
MCP-1 3 63.2 120.4 165.9 135.5 96.9 142.7 276.1
6 72.1 1368.6 1195.0 915.2 4492.9 1764.0 6594.8
24 57.0 2083.8 1878.0 6406.5 8018.1 9546.4 15026.1
48 42.1 285.6 599.9 794.1 934.2 1629.3 2234.6
MIP1α 3 137.3 142.9 205.0 166.4 101.3 187.3 163.7  
6 101.3 178.8 130.0 61.4 284.3 133.8 271.9  
24 133.8 120.7 153.3 101.3 227.0 193.7 205.2  
48 ＜3.2 101.3 140.2 101.3 101.3 140.2 166.4  
MIP1β 3 ＜3.2 ＜3.2 78.1 ＜3.2 349.4 49.8 942.0  
6 ＜3.2 578.4 850.5 735.3 2898.1 677.8 4342.5  
24 ＜3.2 425.4 456.2 661.8 1493.2 1561.0 1387.7  
48 ＜3.2 178.9 227.9 221.2 309.4 567.1 378.3  
RANTES 3 5.6 8.0 11.0 9.1 6.7 10.1 11.0  
6 6.6 24.5 18.9 14.4 168.0 37.5 206.6  
24 5.6 77.1 52.5 338.9 174.8 335.7 772.2  
48 6.6 21.3 43.9 69.6 59.2 140.4 190.4  
TNFα 3 4.6 6.2 6.8 7.7 4.3 11.0 9.8  
6 2.7 15.0 5.8 3.5 16.5 9.9 22.9  
24 5.4 7.7 7.7 6.6 8.8 13.3 11.0  
48 1.9 5.4 6.5 5.4 5.4 6.6 7.6  
表6：在使用包括EphA2靶向mAb (具有結合至化合物 12或化合物 12a之mIgG2a LALAPG骨架)之ADC治療後Renca具腫瘤小鼠之周邊血(血漿)中之細胞介素產生。
劑量號 時間 (h) 未治療 媒劑 0.2mg/kg 化合物 12a 0.6mg/kg 化合物 12a 1.8mg/kg 化合物 12a 0.3mg/kg 靶向 mAb 12 (LALAPG) 1.0mg/kg 靶向 mAb 12 (LALAPG) 3.0mg/kg 靶向 mAb 12 (LALAPG)
IFNg 1 3 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2
1 6 ＜3.2 ＜3.2 4.6 18.3 36.4 ＜3.2 ＜3.2 9.4
1 24 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 5.8 5.3
1 48 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2
2 6 ＜3.2 ＜3.2 16.5 41.5 80.4 0.0 1.7 20.1
IL-lb 1 3 0.7 0.7 0.7 0.7 7.5 3.2 0.7 0.7
1 6 0.7 ＜3.2 0.7 5.7 0.7 3.2 11.0 5.7
1 24 7.0 3.2 3.2 1.6 3.2 2.4 0.7 3.2
1 48 3.2 5.7 0.7 5.7 3.2 3.2 3.2 5.8
2 6 ＜3.2 ＜3.2 2.7 5.8 4.6 2.7 2.7 ＜3.2
IL-6 1 3 3.3 16.6 780.0 1899.7 4314.6 5.8 13.9 17.8
1 6 0.4 4.9 266.1 424.0 543.0 25.0 28.3 152.1
1 24 2.8 1.5 4.1 6.1 6.8 8.6 22.5 74.1
1 48 0.9 0.9 5.6 1.8 1.5 1.9 1.8 26.3
2 6 2.2 5.1 410.9 516.9 1681.6 13.6 53.2 130.1
IL-10 1 3 ＜3.2 ＜3.2 15.6 30.4 27.3 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2
1 6 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 3.8 9.9 ＜3.2 ＜3.2 3.8
1 24 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 3.8
1 48 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2
2 6 ＜3.2 ＜3.2 1.2 ＜3.2 7.7 ＜3.2 1.2 ＜3.2
IL12p70 1 3 ＜3.2 9.4 ＜3.2 ＜3.2 3.1 ＜3.2 ＜3.2 9.4
1 6 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 3.1 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2
1 24 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 3.1
1 48 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2
2 6 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 28.4 28.4 ＜3.2 ＜3.2 12.1
IP10 1 3 88.9 124.3 1989.6 4826.2 8222.7 122.1 200.3 278.0
1 6 95.4 116.3 8985.4 8828.3 7S89.2 4294.0 5279.6 6945.6
1 24 102.2 78.1 257.9 381.8 595.6 1123.5 1703.4 4251.8
1 48 80.8 85.1 172.8 218.4 223.5 317.8 566.2 1631.2
2 6 139.5 191.4 ＞10000 3996.6 4151.5 1451.7 2590.8 2963.6
MCP-1 1 3 17.3 65.0 333.3 1547.8 5805.3 21.8 48.1 50.2
1 6 11.9 62.8 7790.8 12898.6 13861.5 518.9 311.8 1080.9
1 24 24.4 2.0 53.0 141.5 143.9 283.5 694.9 5104.5
1 48 29.3 19.4 56.8 40.0 2.0 118.0 108.0 530.5
2 6 51.7 87.7 5244.6 9761.2 17185.9 175.5 338.2 592.4
MIP1a 1 3 ＜3.2 ＜3.2 10.3 251.5 1052.6 ＜3.2 ＜3.2 10.3
1 6 ＜3.2 10.3 101.9 137.2 172.2 10.3 10.3 100.5
1 24 10.3 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 10.3 ＜3.2 ＜3.2 92.5
1 48 ＜3.2 ＜3.2 10.3 10.3 ＜3.2 10.3 ＜3.2 ＜3.2
2 6 32.6 32.6 104.9 115.5 209.9 52.2 32.6 99.2
MIPlb 1 3 ＜3.2 ＜3.2 727.2 2471.0 7438.6 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2
1 6 ＜3.2 ＜3.2 670.7 1050.0 1162.7 155.7 256.7 695.2
1 24 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 497.5
1 48 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 157.8
2 6 ＜3.2 ＜3.2 718.6 837.6 1407.7 ＜3.2 216.1 449.7
RANTES 1 3 ＜3.2 ＜3.2 ＜3.2 20.1 51.2 ＜3.2 5.0 ＜3.2
1 6 20.3 ＜3.2 130.3 255.0 526.2 14.7 17.1 23.2
1 24 ＜3.2 ＜3.2 3.2 46.2 48.8 11.3 34.5 131.7
1 48 9.2 ＜3.2 ＜3.2 5.0 ＜3.2 7.9 17.1 79.4
2 6 8.2 2.9 133.8 621.6 892.1 12.5 15.6 45.8
TNFa 1 3 ＜3.2 4.3 9.1 21.0 46.4 3.2 3.2 4.5
1 6 ＜3.2 3.2 8.1 15.6 21.2 3.2 10.6 7.3
1 24 7.3 3.2 3.2 5.2 3.2 5.2 5.9 15.2
1 48 ＜3.2 5.4 4.3 ＜3.2 3.2 5.2 7.3 8.9
2 6 ＜3.2 ＜3.2 10.0 16.7 46.4 3.2 3.2 3.2
亦在Renca具腫瘤小鼠中評估結合至非結合mAb、PD-L1靶向mAb (靶向腫瘤及/或免疫細胞)或抗原C靶向mAb (靶向免疫細胞)之可裂解連接體 11之抗腫瘤活性。與未治療腫瘤相比，所有結合物皆顯示腫瘤生長延遲。與未結合PD-L1靶向mAb相比， 11之PD-L1靶向mAb結合物顯示增強之抗腫瘤活性。此證實了使用靶向抗原C及PD-L1之ADC遞送STING激動劑之抗腫瘤益處 ( 圖 13)。亦在Renca具腫瘤小鼠中評估結合至PD-L1靶向mAb之非裂解連接體 12之抗腫瘤活性；該等結合物可有效減小腫瘤體積，但其耐受性差於 11之PD-L1靶向mAb結合物。 CT26癌細胞
在CT26具腫瘤小鼠中評估化合物 1與結合至非結合mAb、抗原C靶向mAb、PD-L1靶向mAb或EphA2靶向mAb之可裂解連接體 11相比之抗腫瘤活性。在使用化合物 1或未結合PD-L1靶向mAb治療動物時，觀察到最小腫瘤生長延遲。使用 11之非結合mAb結合物觀察到中等腫瘤生長延遲。與之相比，在使用 11之所有三種靶向mAb結合物治療後觀察到顯著腫瘤生長延遲。此證實了使用靶向各種抗原之ADC (包含免疫細胞靶向結合物(抗原C)、免疫及/或腫瘤靶向結合物(PD-L1)及腫瘤靶向結合物(EphA2))遞送STING激動劑之抗腫瘤益處( 圖 14)。周邊血漿中之細胞介素產生之結果呈現於表7中。 表7：在使用包括結合至化合物 11之mAb之各種ADC治療後CT26具腫瘤小鼠之周邊血(血漿)中的細胞介素產生。
   時間 (h) 未治療 1.86 mg/kg 化合物 1 12 mg/kg EphA2 靶向 mAb 11(mlgG2a LALAPG) 2.4 mg/kg EphA2 靶向 mAb 11(mlgG2a LALAPG) 2.4 mg/kg 抗原 C 靶向 mAb 11(mlgG2a LALAPG) 2.4 mg/kg 非結合 mAb 11(mlgG2a LALAPG) 2.4 mg/kg PD-L1 靶向 mAb 11 2.4 mg/kg PD-L1 靶向 mAb
IL-6 3 0.5 3.2 3.2 622.1 781.4 1128.3 185.8 0.5 217.7 17.8 27.7 23.4 483.9 182.4 442.5 1.4 100.6 56.5 18.1 56.9 3.3 25.6 0.6 5.8
6 2.7 3.2 0.2 2652.5 2393.5 2412.7 2677.9 1790.2 2777.7 168.7 303.4 304.8 1821.4 2769.8 2324.8 123.7 151.3 266.9 119.4 72.6 162.5 3.2 3.2 1
24 5.7 5.4 0.6 44.5 31.8 36.5 72.8 0.2 67.6 16.2 143.2 16.1 9.4 34.4 126.9 5 16.9 3.2 23.8 21.8 5.2 21.2 6.5 216.8
48 26.5 262.8 7.6 47.8 142.7 29.2 214.1 61.7 80.4 6.5 39.1 7.8 48.9 32.2 19.5 2.9 2.9 2.3 26.6 26.8 89.7 1.4 3.2 12.2
IL-10 3 3.2 3.2 3.2 0.2 2.3 1.2 3.2 3.2 1.2 3.2 3.2 3.2 0.9 3.2 0.4 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 33.8 3.2 3.2
6 3.2 3.2 3.2 7.8 9 4.4 7.2 2 4.3 4 1.2 1.6 1.2 3.7 4.3 0.4 0.4 2 0.4 0 0 3.2 3.2 3.2
24 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 1.5 3.2 3.2 3.2 0.4 3.2 3.2 3.1 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 26.2 3.2 3.2
48 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 0.4 3.2 3.2 3.2
IP-10 3 242.4 109.7 200.2 1439.4 1501.7 1160.7 592.6 125.9 377.2 198.1 190.9 196.9 1271.3 629.1 627.8 109.4 450 308.7 163.9 154.4 178.3 105.7 190.4 96.1
6 174.7 117.4 188.2 2610.8 2133.6 2473.4 2039.3 2711.3 2008.6 2327.7 2740.5 1949.2 2062.9 2328 2713.5 1779.6 1376.6 2092 1814.4 1744 1389.4 130.6 151.9 110.7
24 272.5 134.4 201.1 1121.6 1025.3 696.2 1468.5 145 1900.5 1189.9 1094.8 1089 2565 1994.5 1329.8 246.4 693.7 3.2 717.5 1002.6 833.1 247.7 689.9 166.7
48 122.9 155.8 74.7 560.1 398.8 560 1293.4 541.3 716.9 307.2 167.2 250.2 448.8 273.5 378 107.3 235.9 319.2 748.1 599.3 580.4 128.1 183.3 135.9
MCP-1 3 2.7 3.2 3.2 73.7 78.6 110.3 36.4 2.7 23.1 3.2 10.5 2.7 393.2 69.9 78.6 3.2 46.2 2.7 18.9 13.8 3.2 169.8 3.2 3.2
6 7.2 7.2 3.2 3185.3 2816.3 1634.8 6186.6 3754.5 3698.6 656.5 578.3 382.2 10207.3 4960.7 37687.1 162 556.2 425 143.3 133 252 3.1 7.5 7.5
24 3.2 3.2 3.2 397.7 294.7 305.9 765.3 3.2 821 99.1 99.1 99.1 1009.2 637.8 194 3.2 55.1 3.2 129.2 191.4 98 129.2 7.5 3.2
48 13.5 18.6 3.2 93.1 20.9 41.4 207.4 85.1 108.7 27.2 10.5 13.5 39.8 34.7 365.9 3.2 2.7 20.9 135.9 127.3 253.1 7.5 13.8 16.4
MIP-la 3 3.2 3.2 3.2 3.9 3.2 3.2 3.9 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 217.7 103.1 139.8 3.2 3.2 3.2 3.2 3 3.2 3 3 3
6 3.9 3.2 3.2 94.6 93.6 73.9 222.1 127.3 261.8 12.7 3.9 3.2 144 152.7 82.1 17.7 12.7 3.9 11.2 3 3 3 3 11.2
24 3.2 3.2 3.2 12.7 25.1 3.2 21.7 3.2 21.7 3.2 3.2 3.2 17.7 21.7 12.7 3.2 3.2 3.2 3 3 3 3 11.2 24
46 3.2 3.2 3.2 3.9 12.7 3.2 3.9 3.2 3.9 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 17.7 3.2 3.2 3.2 11.2 11.2 3 3 7.9 3
MIP-lb 3 3.2 1.6 3.2 297.7 336.8 224 311.6 3.2 185.9 26.9 19.7 5.4 1600.5 682.1 991.5 3.2 31.2 7.2 3.2 5.4 9.9 3.2 3.2 3.2
6 3.2 3.2 3.2 925.8 369.7 1161.4 1679.2 1460.7 1237.9 367.2 264.6 356.3 1377.1 1236.6 1740.4 137.2 215.4 203.6 70 61.7 85.7 3.2 3.2 3.2
24 3.2 3.2 3.2 127.6 125.3 55.3 268.8 3.2 356.8 84.9 63.2 51.3 197.4 142.2 127.5 3.2 26.9 3.2 3.2 19.3 32 3.2 3.2 46.1
48 3.2 14.8 3.2 61.1 10.8 57.6 66.7 26.9 56.9 11.4 3.2 8.8 13.8 13.2 69 3.2 3.2 3.2 26.5 23.5 30 3.2 3.2 3.2
TNFa 3 3.2 3.2 3.2 3.2 4.9 4.3 1.4 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 31 25.6 27.6 3.2 3.2 3.2 5.8 3.2 3.2 75.5 3.2 3.2
6 3.2 3.2 3.2 16.9 16.6 10 29.1 26.2 34.8 6.2 3.8 2.6 31 45.5 39.5 3.2 4.3 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2
24 3.2 3.2 3.2 0.4 0.7 3.2 4.3 3.2 3.2 3.2 2.9 8.5 2 7 3.8 3.2 1.4 3.2 6.4 3.2 3.2 58.6 3.2 3.2
48 3.2 3.2 3.2 1.1 3.2 3.2 1.4 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 1.7 3.2 3.2 3.2 3.6 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2
MC38癌細胞
在MC38具腫瘤野生型(WT)或STING缺陷型( Tmem173 gt)小鼠中評估結合至具有LALAPG mIgG2a Fc骨架之非結合mAb或EphA2靶向mAb之可裂解連接體 12之抗腫瘤活性。在WT (而非STING缺陷型)具腫瘤小鼠中，經3個週劑量之1 mg/kg非結合 12結合物或0.1 mg/kg靶向 12結合物治療之動物分別顯示中等及最小之腫瘤生長延遲。在WT (而非STING缺陷型)具腫瘤小鼠中，經3個週劑量之1 mg/kg靶向 12結合物治療之動物顯示穩定腫瘤生長延遲。此證實，在MC38具腫瘤小鼠中，腫瘤微環境中之非腫瘤細胞需要STING信號傳導方達成抗腫瘤活性( 圖 15A及 15C)。
在WT具腫瘤小鼠中，經單一劑量之1 mg/kg EphA2靶向 12結合物治療之動物亦顯示穩定腫瘤生長延遲，從而證實單一劑量之EphA2靶向 12結合物足以驅動完全腫瘤消退( 圖 15A)。
使用MC38腫瘤細胞在另一側腹再攻擊因應於單一劑量或3個週劑量之ADC達成完全腫瘤消退之小鼠且監測腫瘤生長。所有經再攻擊小鼠(但非使用MC38腫瘤細胞攻擊之所有初始未治療小鼠)均免於被再攻擊，從而表明 12之靶向結合物誘發免疫記憶( 圖 15D)。 4T1癌細胞
在4T1具腫瘤小鼠中評估結合至具有LALAPG mIgG2a Fc骨架之非結合或EphA2靶向mAb之可裂解連接體 12之抗腫瘤活性。化合物 12之所有結合物在所測試劑量下皆產生顯著腫瘤生長延遲，其中化合物 12之靶向mAb結合物與非結合結合物相比顯示增強之腫瘤生長延遲。此證實，化合物 12之EphA2靶向mAb結合物在多種腫瘤模型中具有活性，其中針對具有LALAPG Fc骨架之結合物觀察到最小重量減輕( 圖 12-16)。 大鼠耐受性研究：
在非GLP大鼠毒理學研究中評估結合至以下各項之化合物 12之非臨床安全特徵：具有WT Fc骨架之非結合抗體、具有無Fc骨架之非結合抗體、具有WT Fc骨架之靶向抗體及具有無Fc骨架之靶向抗體。在高於小鼠腫瘤模型中之最小有效劑量之劑量下，所有含有化合物 12藥物連接體之結合物(非結合及靶向，WT及無Fc骨架)皆耐受於大鼠中。 實例4 活體內藥物動力學研究 方法
在向雄性C57BL/6小鼠投與兩個包括結合至化合物 12之[去醣基化]非結合mAb之1 mg/kg ADC週劑量後，分析藥物動力學特徵。收集血漿並藉由免疫分析來分析一般總抗體(gTAb)。藉由Gyros流經免疫分析平臺來測定小鼠K 2EDTA血漿中之TAb濃度。在分析緩衝液中稀釋試樣及標準品並與以夾心形式含有生物素化鼠類抗人類κ輕鏈抗體及螢光山羊抗人類IgG Fcg F(ab’) 2抗體片段之溶液一起培育。使所得免疫複合物在光碟(CD)之親和管柱中結合至經鏈黴抗生物素蛋白(streptavidin)塗覆之珠粒上。藉由雷射讀取CD，該雷射會激發螢光檢測試劑，從而產生與C57BL/6雄性小鼠血漿試樣中之測試物品之濃度成正比之信號。使用Phoenix WinNonlin 8.2 (Certara, USA)對所匯總動物血漿濃度數據(稀疏採樣)實施非分室分析。將低於量化限值(BLQ)之濃度值處理為零以供分析。使用標稱劑量及採樣時間。 結果
在向雄性C57BL/6小鼠投與兩個包括結合至化合物 12之[去醣基化]非結合mAb之1 mg/kg ADC週劑量後，分析藥物動力學特徵。第一劑量及第二劑量後之最大觀察濃度(Cmax)分別為40500 ng/mL及52400 ng/mL。自時間0至第7天之濃度-時間曲線下面積(AUC0-7d)為85600 d*ng/mL。此表明，化合物 12之非結合結合物之總抗體暴露高於所公開小分子STING激動劑之小分子暴露( 圖 17) ( 例如參見Ramanjulu等人，2018, Nature 564, 439-443)。
本發明中所引用之每一參考文獻之內容以全文引用方式併入本文中。
已闡述本發明之若干實施例。然而，應理解，可在不背離本發明之精神及範圍之情況下作出各種修改。因此，其他實施例皆在下列申請專利範圍之範圍內。
圖1圖解說明THP1-Dual TM細胞(亦稱為THP1雙重報告細胞)對各種小分子STING激動劑之反應。
圖2圖解說明野生型(WT)及STING缺陷型鼠類骨髓源巨噬球對各種小分子STING激動劑之反應。
圖3圖解說明THP1雙重報告細胞對包括結合至化合物 11(可裂解連接體-化合物 1)、化合物 12(非裂解連接體-化合物 12a)或化合物 13或 14(可裂解連接體-化合物 12a)之非靶向或靶向抗體之ADC之反應。
圖4圖解說明THP1雙重報告細胞對化合物 12(非裂解連接體-化合物 12a)及化合物 16(化合物 12及自含有化合物 12之ADC釋放之游離藥物之半胱胺酸加合物)之反應。
圖5圖解說明在培育48小時後THP1雙重報告細胞對化合物 12a及 15b(呈游離藥物形式或結合至非結合或靶向抗體(化合物 12及 15之ADC))之反應。
圖6A及6B圖解說明SU-DHL-1淋巴瘤細胞對包括結合至化合物 11(可裂解連接體-化合物 1)之非靶向、抗原C靶向或PD-L1靶向抗體之ADC之反應。將細胞介素產生(MIP-1α) (圖6A)及生存力(圖6B)繪圖。
圖7圖解說明THP1雙重報告細胞(單獨培養或與經改造以表現靶抗原C之HEK 293T細胞一起共培養)對包括抗原C靶向mAb (具有結合至化合物 12、 13或 14之hIgG1 LALAPG骨架)之ADC之反應。
圖8圖解說明使用Renca癌細胞及THP1雙重報告細胞測得之包括EphA2靶向mAb或非結合mAb (具有結合至化合物 12之mIgG2a WT或LALAPG骨架)之ADC之旁觀者活性。
圖9A及9B圖解說明Renca腫瘤小鼠模型中之q7dx3 ADC投藥(3個週劑量)反應以評估包括非結合或EphA2靶向mAb (具有結合至化合物11 (經腹膜腔內投用)或化合物1或(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(3-嗎啉基丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺參(2,2,2-三氟乙酸鹽) (化合物A，參考化合物，經靜脈內投用)之mIgG2a LALAPG骨架)之各種ADC。圖9A：腫瘤生長；圖9B：重量變化%。
圖10A及10B圖解說明Renca腫瘤小鼠模型中之q7dx3 ADC投藥(3個週劑量)反應以評估包括非結合或EphA2靶向mAb (具有結合至化合物 11或 12(經腹膜腔內投用)之mIgG2a LALAPG骨架)之各種ADC。圖10A：腫瘤生長；圖10B：重量變化%。
圖11A及11B圖解說明Renca腫瘤小鼠模型(其經改造以表現人類蛋白)中之q7dx3 ADC投藥(3個週劑量)反應以評估包括非結合或EphA2靶向mAb (具有結合至化合物 12或 15之mIgG2a野生型(WT)或mIgG2a LALAPG骨架)之各種ADC。圖11A：腫瘤生長；圖11B：重量變化%。
圖12圖解說明Renca腫瘤小鼠模型中之q7dx3投藥(3個週劑量，經腹膜腔內)反應以評估包括EphA2靶向mAb (具有結合至化合物 12或未結合化合物 12a之mIgG2a LALAPG骨架)之ADC。
圖13圖解說明Renca腫瘤模型中之各種化合物之q7dx3投藥(3個週劑量)反應以評估PD-L1靶向mAb及包括結合至化合物 11之非結合、PD-L1靶向或抗原C靶向mAb的各種ADC。
圖14圖解說明CT26腫瘤模型中之各種化合物之q7dx3投藥(3個週劑量)反應以評估未結合化合物 1、PD-L1靶向mAb及包括結合至化合物 11之非結合、抗原C、PD-L1或EphA2靶向mAb的各種ADC。
圖15A-D圖解說明MC38腫瘤模型中之所指示ADC之q7dx3 (3個週劑量)或單一劑量之反應以評估包括非結合或EphA2靶向mAb (具有結合至化合物 12之mIgG2a LALAPG骨架)的各種ADC。使用MC38腫瘤細胞再攻擊因應於ADC治療而達成完全腫瘤消退之小鼠且監測腫瘤生長。圖15A：腫瘤生長(WT小鼠)；圖15B：重量減輕(WT小鼠)；圖15C：腫瘤生長(STING缺陷型 Tmem173 gt小鼠)；圖15D：MC38腫瘤再攻擊後之腫瘤生長。
圖16A及16B圖解說明4T1腫瘤模型中之q7dx3 mAb或ADC投藥(3個週劑量，由箭頭指示)反應以評估包括非結合或EphA2靶向mAb (具有結合至化合物 12之mIgG2a LALAPG骨架)之各種ADC。圖16A：腫瘤生長；圖16B：重量變化%。
圖17圖解說明包括結合至化合物 12之[去醣基化]非結合mAb之ADC在投與雄性C57BL/6小鼠後之藥物動力學特徵。 

          <![CDATA[<110>  美商西健公司(Seagen Inc.)]]>
          <![CDATA[<120>  免疫調節抗體藥物結合物]]>
          <![CDATA[<130>  SGENE.008WO]]>
          <![CDATA[<140> TW 111101750]]>
          <![CDATA[<141> 2022-01-14]]>
          <![CDATA[<150>  US 63/292,779]]>
          <![CDATA[<151>  2021-12-21]]>
          <![CDATA[<150>  US 63/138,360]]>
          <![CDATA[<151>  2021-01-15]]>
          <![CDATA[<160>  28    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  cAC10 CDR-H1]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Asp Tyr Tyr Ile Thr 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  cAC10 CDR-H2]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  cAC10 CDR-H3]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Tyr Gly Asn Tyr Trp Phe Ala Tyr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  cAC10 CDR-L1]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Phe Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  cAC10 CDR-L2]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  cAC10 CDR-L3]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Trp Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  cAC10 VH]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile Thr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Tyr Gly Asn Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ala 
                  115         
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  cAC10 VL]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Phe Asp 
                      20                  25                  30          
          Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Val Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  cAC10 HC]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile Thr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Tyr Gly Asn Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 
              130                 135                 140                 
          Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 
              210                 215                 220                 
          Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  446]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  cAC10 HC v2]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile Thr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Asn Tyr Gly Asn Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 
              130                 135                 140                 
          Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 
              210                 215                 220                 
          Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  218]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  cAC10 LC]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Phe Asp 
                      20                  25                  30          
          Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Val Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215             
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 CDR-H1]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          His Tyr Met Met Ala 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 CDR-H2]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 CDR-H3]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala Glu Tyr 
          1               5                   10                  15      
          Phe Gln His 
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 CDR-L1]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp Leu Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 CDR-L2]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Lys Ala Ser Asn Leu His Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 CDR-L3]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  128]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 VH]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr 
                      20                  25                  30          
          Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala 
                      100                 105                 110         
          Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125             
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 VL]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  458]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 HC]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr 
                      20                  25                  30          
          Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala 
                      100                 105                 110         
          Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125             
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
              130                 135                 140                 
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
                  195                 200                 205             
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
              210                 215                 220                 
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
                          245                 250                 255     
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
                      260                 265                 270         
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 
                  275                 280                 285             
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
              290                 295                 300                 
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
          305                 310                 315                 320 
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
                      340                 345                 350         
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 
                  355                 360                 365             
          Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
              370                 375                 380                 
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                          405                 410                 415     
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
                      420                 425                 430         
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
                  435                 440                 445             
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
              450                 455             
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  457]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 HC v2]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr 
                      20                  25                  30          
          Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala 
                      100                 105                 110         
          Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125             
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
              130                 135                 140                 
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
                  195                 200                 205             
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
              210                 215                 220                 
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
                          245                 250                 255     
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
                      260                 265                 270         
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 
                  275                 280                 285             
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
              290                 295                 300                 
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
          305                 310                 315                 320 
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
                      340                 345                 350         
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 
                  355                 360                 365             
          Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
              370                 375                 380                 
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                          405                 410                 415     
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
                      420                 425                 430         
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
                  435                 440                 445             
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
              450                 455         
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 LC]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  458]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 mIgG2a HC]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr 
                      20                  25                  30          
          Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala 
                      100                 105                 110         
          Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125             
          Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly 
              130                 135                 140                 
          Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile 
                  195                 200                 205             
          Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys 
              210                 215                 220                 
          Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 
                          245                 250                 255     
          Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys 
                      260                 265                 270         
          Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp 
                  275                 280                 285             
          Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg 
              290                 295                 300                 
          Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln 
          305                 310                 315                 320 
          His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn 
                          325                 330                 335     
          Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly 
                      340                 345                 350         
          Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu 
                  355                 360                 365             
          Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe 
                          405                 410                 415     
          Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn 
                      420                 425                 430         
          Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr 
                  435                 440                 445             
          Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 
              450                 455             
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  457]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 mIgG2a HC v2]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr 
                      20                  25                  30          
          Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala 
                      100                 105                 110         
          Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125             
          Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly 
              130                 135                 140                 
          Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile 
                  195                 200                 205             
          Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys 
              210                 215                 220                 
          Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 
                          245                 250                 255     
          Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys 
                      260                 265                 270         
          Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp 
                  275                 280                 285             
          Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg 
              290                 295                 300                 
          Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln 
          305                 310                 315                 320 
          His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn 
                          325                 330                 335     
          Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly 
                      340                 345                 350         
          Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu 
                  355                 360                 365             
          Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe 
                          405                 410                 415     
          Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn 
                      420                 425                 430         
          Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr 
                  435                 440                 445             
          Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly 
              450                 455         
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 mIgG2a LC]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile 
              130                 135                 140                 
          Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 
                      180                 185                 190         
          Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Asn Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  458]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 mIgG2a LALAPG HC]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr 
                      20                  25                  30          
          Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala 
                      100                 105                 110         
          Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125             
          Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly 
              130                 135                 140                 
          Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile 
                  195                 200                 205             
          Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys 
              210                 215                 220                 
          Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ala Pro Asn Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 
                          245                 250                 255     
          Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys 
                      260                 265                 270         
          Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp 
                  275                 280                 285             
          Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg 
              290                 295                 300                 
          Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln 
          305                 310                 315                 320 
          His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn 
                          325                 330                 335     
          Lys Asp Leu Gly Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly 
                      340                 345                 350         
          Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu 
                  355                 360                 365             
          Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe 
                          405                 410                 415     
          Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn 
                      420                 425                 430         
          Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr 
                  435                 440                 445             
          Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 
              450                 455             
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  457]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 mIgG2a LALAPG HC v2]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr 
                      20                  25                  30          
          Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala 
                      100                 105                 110         
          Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120                 125             
          Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly 
              130                 135                 140                 
          Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile 
                  195                 200                 205             
          Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys 
              210                 215                 220                 
          Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ala Pro Asn Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 
                          245                 250                 255     
          Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys 
                      260                 265                 270         
          Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp 
                  275                 280                 285             
          Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg 
              290                 295                 300                 
          Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln 
          305                 310                 315                 320 
          His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn 
                          325                 330                 335     
          Lys Asp Leu Gly Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly 
                      340                 345                 350         
          Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu 
                  355                 360                 365             
          Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe 
                          405                 410                 415     
          Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn 
                      420                 425                 430         
          Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr 
                  435                 440                 445             
          Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly 
              450                 455         
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  h1C1 mIgG2a LALAPG LC]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile 
              130                 135                 140                 
          Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 
                      180                 185                 190         
          Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Asn Glu Cys 
              210
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 12_A0101_SEQ_0032
Figure 12_A0101_SEQ_0033
Figure 111101750-A0101-11-0001-1

Claims (579)

  1. 一種式(II)化合物，
    Figure 03_image873
    (II) 或其醫藥上可接受之鹽，其中： R 1係氫、羥基、C 1-6烷氧基、-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B或PEG2至PEG4； 每一R 2及R 3獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F； 每一R A、R B、R C、R D、R E及R F獨立地係氫或C 1-3烷基； 每一下標n獨立地係0至6之整數； 每一下標m獨立地係0或1； 每一下標q獨立地係0至6之整數； X A係-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X B不存在或係2至16員伸雜烷基； L係具有式-(A) a-(W) w-(Y) y-之連接體，其中： 下標a為0或1； 下標y為0或1； 下標w為0或1； A係視情況經1至3個R a1取代之C 2-20伸烷基或視情況經1至3個R b1取代之2至40員伸雜烷基； 每一R a1獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R b1獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R d1及R e1獨立地係氫或C 1-3烷基； W係1至12個胺基酸或具有以下結構：
    Figure 03_image875
    或
    Figure 03_image877
    其中Su係糖部分； -O A-代表醣苷鍵； 每一R g獨立地係氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或係-O-C(=O)-；
    Figure 03_image879
    代表與A或M之共價連接； *代表與Y、X A或X B之共價連接；且 Y係自消除部分(self-immolative moiety)、非自消除可釋放部分或非裂解部分； M係
    Figure 03_image881
    或
    Figure 03_image883
    ； 每一AA係獨立選擇之胺基酸，其中(AA) b經由硫原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺； 每一下標b獨立地係1至6之整數；且 X B及L各自獨立地視情況經自PEG1至PEG72之PEG單元取代。
  2. 如請求項1之化合物，其中R 1係氫。
  3. 如請求項1之化合物，其中R 1係羥基。
  4. 如請求項1之化合物，其中R 1係C 1-6烷氧基。
  5. 如請求項1或4之化合物，其中R 1係甲氧基。
  6. 如請求項1之化合物，其中R 1係-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基。
  7. 如請求項1或6之化合物，其中R 1係甲氧基乙基。
  8. 如請求項1之化合物，其中R 1係PEG2至PEG4。
  9. 如請求項1之化合物，其中R 1係-(CH 2) n-NR AR B。
  10. 如請求項1或9之化合物，其中R A及R B皆係氫。
  11. 如請求項1或9之化合物，其中R A及R B獨立地係C 1-3烷基。
  12. 如請求項1或9之化合物，其中R A及R B中之一者係氫且R A及R B中之另一者係C 1-3烷基。
  13. 如請求項1或9至12中任一項之化合物，其中每一下標n為0。
  14. 如請求項1或9至12中任一項之化合物，其中每一下標n為1。
  15. 如請求項1或9至12中任一項之化合物，其中每一下標n為2。
  16. 如請求項1或9至12中任一項之化合物，其中每一下標n為3、4、5或6。
  17. 如請求項1至16中任一項之化合物，其中R 2及R 3獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2及R 3相同。
  18. 如請求項1至16中任一項之化合物，其中R 2及R 3獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2及R 3不同。
  19. 如請求項1至18中任一項之化合物，其中R 2係-(C=O) m-NR CR D。
  20. 如請求項1至18中任一項之化合物，其中R 3係-(C=O) m-NR CR D。
  21. 如請求項1至20中任一項之化合物，其中R C及R D皆係氫。
  22. 如請求項1至20中任一項之化合物，其中R C及R D各自獨立地係C 1-3烷基。
  23. 如請求項1至20中任一項之化合物，其中R C及R D中之一者係氫且R C及R D中之另一者係C 1-3烷基。
  24. 如請求項1至20中任一項之化合物，其中每一下標m為0。
  25. 如請求項1至20中任一項之化合物，其中每一下標m為1。
  26. 如請求項1至18中任一項之化合物，其中R 2係-(CH 2) q-NR ER F。
  27. 如請求項1至18中任一項之化合物，其中R 3係-(CH 2) q-NR ER F。
  28. 如請求項1至18、26或27中任一項之化合物，其中R E及R F皆係氫。
  29. 如請求項1至18、26或27中任一項之化合物，其中R E及R F各自獨立地係C 1-3烷基。
  30. 如請求項1至18、26或27中任一項之化合物，其中R E及R F中之一者係氫且R E及R F中之另一者係C 1-3烷基。
  31. 如請求項1至18、26或27中任一項之化合物，其中每一下標q為0。
  32. 如請求項1至18、26或27中任一項之化合物，其中每一下標q係1至6之整數。
  33. 如請求項1至18中任一項之化合物，其中R 3係-CO 2H。
  34. 如請求項1至18中任一項之化合物，其中R 2係-CO 2H。
  35. 如請求項1至34中任一項之化合物，其中X A係-CH 2-。
  36. 如請求項1至34中任一項之化合物，其中X A係-O-。
  37. 如請求項1至34中任一項之化合物，其中X A係-S-。
  38. 如請求項1至34中任一項之化合物，其中X A係-NH-。
  39. 如請求項1至38中任一項之化合物，其中X B係2至16員伸雜烷基。
  40. 如請求項1至39中任一項之化合物，其中X B係2至12員伸雜烷基。
  41. 如請求項1至40中任一項之化合物，其中X B係2至8員伸雜烷基。
  42. 如請求項39至41中任一項之化合物，其中該伸雜烷基係具支鏈的且具有1至4個甲基。
  43. 如請求項39至42中任一項之化合物，其中該伸雜烷基係具支鏈的且具有1或2個甲基。
  44. 如請求項39至43中任一項之化合物，其中該伸雜烷基經1至3個氟基取代。
  45. 如請求項1至44中任一項之化合物，其中X B包括一或兩個氮原子。
  46. 如請求項1至45中任一項之化合物，其中X B包括一或兩個側氧基。
  47. 如請求項1至46中任一項之化合物，其中X B包括一個氮原子及一個側氧基。
  48. 如請求項1至47中任一項之化合物，其中X B包括兩個氮原子及一個側氧基。
  49. 如請求項1至41或45至47中任一項之化合物，其中X B係
    Figure 03_image885
    ，其中
    Figure 03_image887
    代表與X A之共價連接，且*代表與L或M之共價連接。
  50. 如請求項1至41或45至47中任一項之化合物，其中X B係
    Figure 03_image889
    ，其中
    Figure 03_image891
    代表與X A之共價連接，且*代表與L或M之共價連接。
  51. 如請求項1至41或45至47中任一項之化合物，其中X B係
    Figure 03_image893
    ，其中
    Figure 03_image895
    代表與X A之共價連接，且*代表與L或M之共價連接。
  52. 如請求項1至41或45至47中任一項之化合物，其中X B係
    Figure 03_image897
    ，其中
    Figure 03_image899
    代表與X A之共價連接，且*代表與L或M之共價連接。
  53. 如請求項1至43或48中任一項之化合物，其中X B係
    Figure 03_image901
    ，其中
    Figure 03_image903
    代表與X A之共價連接，且*代表與L之共價連接。
  54. 如請求項1至43或45中任一項之化合物，其中X B係
    Figure 03_image905
    ，其中
    Figure 03_image907
    代表與X A之共價連接，且*代表與L之共價連接。
  55. 如請求項1至38中任一項之化合物，其中X B不存在。
  56. 如請求項1至55中任一項之化合物，其中下標a為1。
  57. 如請求項1至56中任一項之化合物，其中下標y為1。
  58. 如請求項1至57中任一項之化合物，其中下標w為1。
  59. 如請求項1至55中任一項之化合物，其中下標a、下標y及下標w之總和為1。
  60. 如請求項1至55中任一項之化合物，其中下標a、下標y及下標w之總和為2。
  61. 如請求項1至58中任一項之化合物，其中下標a、下標y及下標w之總和為3。
  62. 如請求項1至61中任一項之化合物，其中Y係自消除部分。
  63. 如請求項1至61中任一項之化合物，其中Y係
    Figure 03_image909
    。
  64. 如請求項1至54或56至61中任一項之化合物，其中Y係非裂解部分且a為0。
  65. 如請求項1至54、56至61或64中任一項之化合物，其中Y係環己烷羧基、十一烷醯基、己醯基(caproyl、hexanoyl)、丁醯基或丙醯基。
  66. 如請求項1至54、56至61或64中任一項之化合物，其中Y係PEG4至PEG12。
  67. 如請求項1至66中任一項之化合物，其中W係1至12個胺基酸。
  68. 如請求項1至67中任一項之化合物，其中W係1至6個胺基酸。
  69. 如請求項1至68中任一項之化合物，其中W中之每一胺基酸獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、絲胺酸、天門冬胺酸、天門冬胺酸甲酯、N,N-二甲基-離胺酸、苯丙胺酸、瓜胺酸、纈胺酸-丙胺酸、纈胺酸-瓜胺酸、苯丙胺酸-離胺酸或高絲胺酸甲醚。
  70. 如請求項1至66中任一項之化合物，其中W具有以下結構：
    Figure 03_image911
    或
    Figure 03_image913
    其中Su係糖部分； -O A-代表醣苷鍵； 每一R g獨立地係氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或係-O-C(=O)-；
    Figure 03_image915
    代表與A或M之共價連接；且 *代表與Y、X A或X B之共價連接。
  71. 如請求項1至66或70中任一項之化合物，其中W 1係-O-C(=O)-。
  72. 如請求項1至66或70至71中任一項之化合物，其中一個R g係鹵素、-CN或-NO 2，且其餘R g係氫。
  73. 如請求項1至66或70至71中任一項之化合物，其中每一R g係氫。
  74. 如請求項1至73中任一項之化合物，其中A係視情況經1至3個R a1取代之C 2-20伸烷基。
  75. 如請求項1至74中任一項之化合物，其中A係視情況經1至3個R a1取代之C 4-10伸烷基。
  76. 如請求項1至75中任一項之化合物，其中A係經R a1取代之C 2-20伸烷基。
  77. 如請求項1至76中任一項之化合物，其中A係經R a1取代之C 4-10伸烷基。
  78. 如請求項1至75中任一項之化合物，其中A係C 2-20伸烷基。
  79. 如請求項1至75中任一項之化合物，其中A係C 4-10伸烷基。
  80. 如請求項1至73中任一項之化合物，其中A係視情況經1至3個R b1取代之2至40員伸雜烷基。
  81. 如請求項1至72中任一項之化合物，其中A係視情況經1至3個R b1取代之4至12員伸雜烷基。
  82. 如請求項1至73或80中任一項之化合物，其中A係視情況經一個R b1取代之2至40員伸雜烷基。
  83. 如請求項1至73或80中任一項之化合物，其中A係視情況經一個R b1取代之4至12員伸雜烷基。
  84. 如請求項1至73或80中任一項之化合物，其中A係2至40員伸雜烷基。
  85. 如請求項1至73或80中任一項之化合物，其中A係4至12員伸雜烷基。
  86. 如請求項1至73或84至85中任一項之化合物，其中A係
    Figure 03_image917
    或
    Figure 03_image919
    ，其中
    Figure 03_image921
    代表與W之共價連接，且*代表與M之共價鍵聯。
  87. 如請求項1至54或61至73中任一項之化合物，其中下標a為0。
  88. 如請求項1至54或67至79中任一項之化合物，其中下標y為0。
  89. 如請求項1至54、58至66或79至80中任一項之化合物，其中下標w為0。
  90. 如請求項1至54中任一項之化合物，其中下標a、下標y及下標w之總和為0。
  91. 如請求項1至90中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image923
    。
  92. 如請求項1至90中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image925
    。
  93. 如請求項1至90中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image927
    。
  94. 如請求項1至93中任一項之化合物，其中每一AA獨立地係天然胺基酸；其中(AA) b經由硫原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺。
  95. 如請求項1至93中任一項之化合物，其中每一AA獨立地係天然胺基酸；其中(AA) b經由氮原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺。
  96. 如請求項1至95中任一項之化合物，其中每一下標b為1。
  97. 如請求項1至95中任一項之化合物，其中每一下標b為2。
  98. 如請求項1至95中任一項之化合物，其中每一下標b為3、4、5或6。
  99. 如請求項1至91、94或96中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image929
    。
  100. 如請求項1至90、92或96中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image931
    。
  101. 如請求項1至90、93或96中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image933
    。
  102. 如請求項1至90中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image935
    。
  103. 如請求項1至102中任一項之化合物，其中X B及L中之一者經獨立選擇之自PEG1至PEG 72之PEG單元取代。
  104. 如請求項1至102中任一項之化合物，其中X B及L未經取代。
  105. 如請求項1之化合物，其選自由以下組成之群：
    Figure 03_image937
    Figure 03_image939
    Figure 03_image941
    及其醫藥上可接受之鹽。
  106. 如請求項1之化合物，其具有式(II-A)結構：
    Figure 03_image943
    (II-A)或其醫藥上可接受之鹽，其中： L A係-(CH 2) 1-6-、-C(O)(CH 2) 1-6-或-C(O)NR H(CH 2) 1-6-； 每一R H獨立地係氫或C 1-3烷基； Y係
    Figure 03_image945
    ； #代表與-NR HL A之共價連接； ##代表與W或L B之共價連接；且 L B係-(CH 2) 1-6-、-C(O)(CH 2) 1-6-或-[NHC(O)(CH 2) 1-4] 1-3-。
  107. 如請求項106之化合物，其中R H係甲基。
  108. 如請求項106或107之化合物，其中L A係-(CH 2) 2-6-。
  109. 如請求項106或107之化合物，其中L A係-(CH 2) 3-。
  110. 如請求項106至109中任一項之化合物，其中y為0。
  111. 如請求項106至109中任一項之化合物，其中y為1。
  112. 如請求項106至111中任一項之化合物，其中W係1至3個胺基酸之鏈。
  113. 如請求項112之化合物，其中W之每一胺基酸獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、天門冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、組胺酸、精胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、O-甲基絲胺酸、O-甲基天門冬胺酸、O-甲基麩胺酸、N-甲基離胺酸、O-甲基酪胺酸、O-甲基組胺酸及O-甲基蘇胺酸。
  114. 如請求項106至111中任一項之化合物，其中W係：
    Figure 03_image947
    ，其中：
    Figure 03_image949
    代表與L B之共價連接；且 *代表與Y或NR H之共價連接。
  115. 如請求項106至114中任一項之化合物，其中L B係-C(O)(CH 2) 2-。
  116. 如請求項106至114中任一項之化合物，其中L B係-[NHC(O)(CH 2) 2] 2-。
  117. 如請求項106之化合物，其選自由以下組成之群：
    Figure 03_image951
    Figure 03_image953
    Figure 03_image955
    Figure 03_image957
    Figure 03_image959
    及其醫藥上可接受之鹽。
  118. 一種抗體藥物結合物(ADC)，其具有下式： Ab-(S*-M 1-(D)) p 其中： Ab係抗體； 每一S*係來自該抗體之半胱胺酸殘基之硫原子； M 1係琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺； 下標p係2至8之整數；且 每一(D)係式(I)藥物單元：
    Figure 03_image961
    (I) 其中：
    Figure 03_image963
    代表L與M 1之共價連接； R 1係氫、羥基、C 1-6烷氧基、-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B或PEG2至PEG4； R 2及R 3獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F； 每一R A、R B、R C、R D、R E及R F獨立地係氫或C 1-3烷基； 每一下標n獨立地係0至6之整數； 每一下標m獨立地係0或1； 每一下標q係0至6之整數； X A係-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X B不存在或係2至16員伸雜烷基； L具有式-(A) a-(W) w-(Y) y-，其中： 下標a為0或1； 下標y為0或1； 下標w為0或1； A係視情況經1至3個R a1取代之C 2-20伸烷基或視情況經1至3個R b1取代之2至40員伸雜烷基； 每一R a1獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R b1獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R d1及R e1獨立地係氫或C 1-3烷基； W係1至12個胺基酸或具有以下結構：
    Figure 03_image965
    或
    Figure 03_image967
    其中Su係糖部分； -O A-代表醣苷鍵； 每一R g獨立地係氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或係-O-C(=O)-；
    Figure 03_image969
    代表與A或M 1之共價連接； *代表與Y、X B或X A之共價連接； Y係自消除部分、非自消除可釋放部分或非裂解部分；且 X B及L各自獨立地視情況經自PEG1至PEG72之PEG單元取代。
  119. 如請求項118之ADC，其中R 1係氫。
  120. 如請求項118之ADC，其中R 1係羥基。
  121. 如請求項118之ADC，其中R 1係C 1-6烷氧基。
  122. 如請求項118或121之ADC，其中R 1係甲氧基。
  123. 如請求項118之ADC，其中R 1係-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基。
  124. 如請求項118或123之ADC，其中R 1係甲氧基乙基。
  125. 如請求項118之ADC，其中R 1係PEG2至PEG4。
  126. 如請求項118之ADC，其中R 1係-(CH 2) n-NR AR B。
  127. 如請求項118或126之ADC，其中R A及R B皆係氫。
  128. 如請求項118或126之ADC，其中R A及R B獨立地係C 1-3烷基。
  129. 如請求項118或126之ADC，其中R A及R B中之一者係氫且R A及R B中之另一者係C 1-3烷基。
  130. 如請求項118或126至129中任一項之ADC，其中每一下標n為0。
  131. 如請求項118或126至129中任一項之ADC，其中每一下標n為1。
  132. 如請求項118或126至129中任一項之ADC，其中每一下標n為2。
  133. 如請求項118或126至129中任一項之ADC，其中每一下標n為3、4、5或6。
  134. 如請求項118至133中任一項之ADC，其中R 2及R 3獨立地係-CO 2H或-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2及R 3相同。
  135. 如請求項118至133中任一項之ADC，其中R 2及R 3獨立地係-CO 2H或-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2及R 3不同。
  136. 如請求項118至135中任一項之ADC，其中R 2係-(C=O) m-NR CR D。
  137. 如請求項118至135中任一項之ADC，其中R 3係-(C=O) m-NR CR D。
  138. 如請求項118至137中任一項之ADC，其中R C及R D皆係氫。
  139. 如請求項118至137中任一項之ADC，其中R C及R D各自獨立地係C 1-3烷基。
  140. 如請求項118至137中任一項之ADC，其中R C及R D中之一者係氫且R C及R D中之另一者係C 1-3烷基。
  141. 如請求項118至140中任一項之ADC，其中每一下標m為0。
  142. 如請求項118至140中任一項之ADC，其中每一下標m為1。
  143. 如請求項118至135中任一項之ADC，其中R 2係-(CH 2) q-NR ER F。
  144. 如請求項118至135中任一項之ADC，其中R 3係-(CH 2) q-NR ER F。
  145. 如請求項118至135、143或144中任一項之ADC，其中R E及R F皆係氫。
  146. 如請求項118至135、143或144中任一項之ADC，其中R E及R F各自獨立地係C 1-3烷基。
  147. 如請求項118至135、143或144中任一項之ADC，其中R E及R F中之一者係氫且R E及R F中之另一者係C 1-3烷基。
  148. 如請求項118至135、143或144中任一項之ADC，其中每一下標q為0。
  149. 如請求項118至135、143或144中任一項之ADC，其中每一下標q係1至6之整數。
  150. 如請求項118至135中任一項之ADC，其中R 3係-CO 2H。
  151. 如請求項118至135中任一項之ADC，其中R 2係-CO 2H。
  152. 如請求項118至151中任一項之ADC，其中X A係-CH 2-。
  153. 如請求項118至151中任一項之ADC，其中X A係-O-。
  154. 如請求項118至151中任一項之ADC，其中X A係-S-。
  155. 如請求項118至151中任一項之化合物，其中X A係-NH-。
  156. 如請求項118至155中任一項之ADC，其中X B係2至16員伸雜烷基。
  157. 如請求項118至155中任一項之ADC，其中X B係2至12員伸雜烷基。
  158. 如請求項118至157中任一項之ADC，其中X B係2至8員伸雜烷基。
  159. 如請求項118至158中任一項之ADC，其中該伸雜烷基係具支鏈的且具有1至4個甲基。
  160. 如請求項118至159中任一項之ADC，其中該伸雜烷基係具支鏈的且具有1或2個甲基。
  161. 如請求項118至160中任一項之ADC，其中該伸雜烷基經1至3個氟基取代。
  162. 如請求項118至161中任一項之ADC，其中X B包括一或兩個氮原子。
  163. 如請求項118至162中任一項之ADC，其中X B包括一或兩個側氧基。
  164. 如請求項118至163中任一項之ADC，其中X B包括一個氮原子及一個側氧基。
  165. 如請求項118至163中任一項之ADC，其中X B包括兩個氮原子及一個側氧基。
  166. 如請求項118至158或162至164中任一項之ADC，其中X B係
    Figure 03_image971
    ，其中
    Figure 03_image973
    代表與X A之共價連接，且*代表與L或M 1之共價連接。
  167. 如請求項118至158或162至164中任一項之ADC，其中X B係
    Figure 03_image975
    ，其中
    Figure 03_image977
    代表與X A之共價連接，且*代表與L或M 1之共價連接。
  168. 如請求項118至158或162至163中任一項之ADC，其中X B係
    Figure 03_image979
    ，其中
    Figure 03_image981
    代表與X A之共價連接，且*代表與L或M 1之共價連接。
  169. 如請求項118至158或162至164中任一項之ADC，其中X B係
    Figure 03_image982
    ，其中
    Figure 03_image984
    代表與X A之共價連接，且*代表與L或M 1之共價連接。
  170. 如請求項118至158或162至165中任一項之ADC，其中X B係
    Figure 03_image986
    ，其中
    Figure 03_image988
    代表與X A之共價連接，且*代表與L之共價連接。
  171. 如請求項118至158或162至165中任一項之ADC，其中X B係
    Figure 03_image989
    ，其中
    Figure 03_image990
    代表與X A之共價連接，且*代表與L之共價連接。
  172. 如請求項118至158中任一項之ADC，其中X B不存在。
  173. 如請求項118至171中任一項之ADC，其中下標a為1。
  174. 如請求項118至171或173中任一項之ADC，其中下標y為1。
  175. 如請求項118至173中任一項之ADC，其中下標w為1。
  176. 如請求項118至171中任一項之ADC，其中下標a、下標y及下標w之總和為1。
  177. 如請求項118至171中任一項之ADC，其中下標a、下標y及下標w之總和為2。
  178. 如請求項118至171中任一項之ADC，其中下標a、下標y及下標w之總和為3。
  179. 如請求項118至178中任一項之ADC，其中Y係自消除部分。
  180. 如請求項118至178中任一項之ADC，其中Y係
    Figure 03_image991
    。
  181. 如請求項118至172中任一項之ADC，其中Y係非裂解部分且a為0。
  182. 如請求項118至178或181中任一項之ADC，其中Y係MCC或SMCC。
  183. 如請求項118至178或181中任一項之ADC，其中Y係PEG4至PEG12。
  184. 如請求項118至183中任一項之ADC，其中W係1至12個胺基酸。
  185. 如請求項118至184中任一項之ADC，其中W係1至6個胺基酸。
  186. 如請求項118至185中任一項之ADC，其中W中之每一胺基酸係選自由以下組成之群：丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、絲胺酸、天門冬胺酸、天門冬胺酸甲酯、N,N-二甲基-離胺酸、苯丙胺酸、瓜胺酸、纈胺酸-丙胺酸、纈胺酸-瓜胺酸、苯丙胺酸-離胺酸或高絲胺酸甲醚。
  187. 如請求項118至183中任一項之ADC，其中W具有以下結構：
    Figure 03_image992
    或
    Figure 03_image994
    其中Su係糖部分； -O A-代表醣苷鍵； 每一R g獨立地係氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或係-O-C(=O)-；
    Figure 03_image996
    代表與A或M 1之共價連接；及 *代表與Y、X B或X A之共價連接。
  188. 如請求項118至187中任一項之ADC，其中W 1係-O-C(=O)-。
  189. 如請求項118至187中任一項之ADC，其中W 1不存在。
  190. 如請求項118至188中任一項之ADC，其中一個R g係鹵素、-CN或-NO 2，且其餘R G係氫。
  191. 如請求項118至188中任一項之ADC，其中每一R g係氫。
  192. 如請求項118至191中任一項之ADC，其中A係視情況經1至3個R a1取代之C 2-20伸烷基。
  193. 如請求項118至192中任一項之ADC，其中A係視情況經1至3個R a1取代之C 4-10伸烷基。
  194. 如請求項118至191中任一項之ADC，其中A係經R a1取代之C 2-20伸烷基。
  195. 如請求項118至192中任一項之ADC，其中A係經R a1取代之C 4-10伸烷基。
  196. 如請求項118至191中任一項之ADC，其中A係C 2-20伸烷基。
  197. 如請求項118至192中任一項之ADC，其中A係C 4-10伸烷基。
  198. 如請求項118至191中任一項之ADC，其中A係視情況經1至3個R b1取代之2至40員伸雜烷基。
  199. 如請求項118至191中任一項之ADC，其中A係視情況經1至3個R b1取代之4至12員伸雜烷基。
  200. 如請求項118至191或199中任一項之ADC，其中A係視情況經一個R b1取代之2至40員伸雜烷基。
  201. 如請求項118至191或199中任一項之ADC，其中A係視情況經一個R b1取代之4至12員伸雜烷基。
  202. 如請求項118至191或199中任一項之ADC，其中A係2至40員伸雜烷基。
  203. 如請求項118至191或199中任一項之ADC，其中A係4至12員伸雜烷基。
  204. 如請求項118至191或202至203中任一項之ADC，其中A係
    Figure 03_image998
    或
    Figure 03_image1000
    。
  205. 如請求項118至145中任一項之ADC，其中下標a為0。
  206. 如請求項118至145中任一項之ADC，其中下標y為0。
  207. 如請求項118至145中任一項之ADC，其中下標w為0。
  208. 如請求項118至145或205至207中任一項之ADC，其中下標a、下標y及下標w之總和為0。
  209. 如請求項118至208中任一項之ADC，其中該連接體係可裂解連接體。
  210. 如請求項118至209中任一項之ADC，其中該連接體可由細胞自溶酶B、C或D；β-葡萄糖醛酸苷酶及β-甘露糖苷酶中之一或多者裂解。
  211. 如請求項118至208之ADC，其中該連接體係非裂解連接體。
  212. 如請求項118至211中任一項之ADC，其中該抗體係人類化抗體。
  213. 如請求項118至212中任一項之ADC，其中該抗體係單株抗體。
  214. 如請求項118至187中任一項之ADC，其中該抗體經岩藻醣基化。
  215. 如請求項118至187中任一項之ADC，其中該抗體經無岩藻醣基化。
  216. 一種化合物，其具有式(IV)結構：
    Figure 03_image1002
    (IV)或其醫藥上可接受之鹽，其中： R 1C係氫、羥基、C 1-6烷氧基、-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B或PEG2至PEG4； R 2C係-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 2C連接於標記為1、2或3之任一位置處； R 3C係-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 3C連接於標記為1'、2'或3'之任一位置處； 每一R A、R B、R C、R D、R E、R F及R M獨立地係氫或C 1-6烷基； 每一下標n獨立地係0至6之整數； 每一下標q獨立地係0至6之整數； L E係-(C=O)-或-S(O) 2-； L C係-(CR IR J) 1-3- 每一R I及R J獨立地係氫或C 1-3烷基； 下標s為0或1； 每一Cy 1獨立地係4至6員雜環、5至6員雜芳基或C 3-6環烷基，其各自視情況經一或多個R K取代； 每一R K獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d2R e2、-C(O)NR d2R e2、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R d2及R e2獨立地係氫或C 1-3烷基； L AA係-(CH 2) 1-6-、-C(O)(CH 2) 1-6-、-C(O)NR L(CH 2) 1-6-、-(CH 2) 1-6O-、-C(O)(CH 2) 1-6O-或-C(O)NR L(CH 2) 1-6O-； R L係氫或C 1-3烷基； Cy 2係C 3-6環烷基、4至6員雜環、5至6員雜芳基或苯基，其各自視情況經一或多個R U取代； 每一R U獨立地選自由以下組成之群：-CO 2R j1、-(C=O)NR d3R e3、-S(O) 2NR d3R e3、-(CH 2) q1-NR g1R h1、-(CH 2) q1-OR j1及-(CH 2) q1-(OCH 2CH 2) 1-8OH； 每一R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地係氫或C 1-6烷基； 下標q1係0至6之整數； 下標t1及t2獨立地係0或1，其中t1及t2中之至少一者為1； L D係-(CH 2) 1-6-； 下標u為0或1； Z係-N(R HH)-或-N +(C 1-6烷基)(R HH)-； R HH係氫、C 1-6烷基、C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 1-3烷氧基、-(CH 2) 1-34至6員雜環或-(CH 2) 1-35至6員雜芳基； Y係自消除部分、非自消除可釋放部分或非裂解部分； 下標y為0或1； W係1至12個胺基酸之鏈或具有以下結構：
    Figure 03_image1004
    或
    Figure 03_image1006
    其中Su係糖部分； -O A-代表醣苷鍵； 每一R g獨立地係氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或係-O-C(=O)-；
    Figure 03_image1008
    代表與L BB之共價連接； *代表與Y、L D、NR HH或Cy 2之共價連接； 下標w為0或1； L BB係-(CH 2) 1-6-、-C(O)(CH 2) 1-6-或-[NHC(O)(CH 2) 1-4] 1-3-；且 M係
    Figure 03_image1010
    或
    Figure 03_image1012
    ； 每一AA係獨立選擇之胺基酸，其中(AA) b經由硫原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺；且 每一下標b獨立地係1至6之整數。
  217. 如請求項216之化合物，其中R 1C係氫。
  218. 如請求項216之化合物，其中R 1C係羥基。
  219. 如請求項216之化合物，其中R 1C係C 1-6烷氧基。
  220. 如請求項216之化合物，其中R 1C係甲氧基。
  221. 如請求項216之化合物，其中R 1C係-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基。
  222. 如請求項216之化合物，其中R 1C係甲氧基乙基。
  223. 如請求項216之化合物，其中R 1C係PEG2至PEG4。
  224. 如請求項216之化合物，其中R 1C係-(CH 2) n-NR AR B。
  225. 如請求項216至224中任一項之化合物，其中R A及R B皆係氫。
  226. 如請求項216至224中任一項之化合物，其中R A及R B獨立地係C 1-3烷基。
  227. 如請求項216至224中任一項之化合物，其中R A及R B中之一者係氫且R A及R B中之另一者係C 1-3烷基。
  228. 如請求項216至227中任一項之化合物，其中每一下標n為0。
  229. 如請求項216至227中任一項之化合物，其中每一下標n為1。
  230. 如請求項216至227中任一項之化合物，其中每一下標n為2。
  231. 如請求項216至227中任一項之化合物，其中每一下標n為3、4、5或6。
  232. 如請求項216至231中任一項之化合物，其中R 2C及R 3C獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C及R 3C相同。
  233. 如請求項216至231中任一項之化合物，其中R 2C及R 3C獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C及R 3C不同。
  234. 如請求項216至231中任一項之化合物，其中R 2C係-(C=O) m-NR CR D。
  235. 如請求項216至231中任一項之化合物，其中R 3C係-(C=O) m-NR CR D。
  236. 如請求項216至235中任一項之化合物，其中R C及R D皆係氫。
  237. 如請求項216至235中任一項之化合物，其中R C及R D各自獨立地係C 1-3烷基。
  238. 如請求項216至235中任一項之化合物，其中R C及R D中之一者係氫且R C及R D中之另一者係C 1-3烷基。
  239. 如請求項216至238中任一項之化合物，其中每一下標m為0。
  240. 如請求項216至238中任一項之化合物，其中每一下標m為1。
  241. 如請求項216至240中任一項之化合物，其中R 2C係-(CH 2) q-NR ER F。
  242. 如請求項216至241中任一項之化合物，其中R 3C係-(CH 2) q-NR ER F。
  243. 如請求項216至242中任一項之化合物，其中R E及R F皆係氫。
  244. 如請求項216至242中任一項之化合物，其中R E及R F各自獨立地係C 1-3烷基。
  245. 如請求項216至242中任一項之化合物，其中R E及R F中之一者係氫且R E及R F中之另一者係C 1-3烷基。
  246. 如請求項216至245中任一項之化合物，其中每一下標q為0。
  247. 如請求項216至245中任一項之化合物，其中每一下標q係1至6之整數。
  248. 如請求項216至247中任一項之化合物，其中R 2C係-CO 2R M。
  249. 如請求項216至248中任一項之化合物，其中R 3C係-CO 2R M。
  250. 如請求項248或249之化合物，其中R M係氫。
  251. 如請求項248或249之化合物，其中R M係C 1-3烷基。
  252. 如請求項216至247中任一項之化合物，其中R 2C係-(CH 2) q-OR M。
  253. 如請求項216至247及252中任一項之化合物，其中R 3C係-(CH 2) q-OR M。
  254. 如請求項252或253之化合物，其中R M係氫。
  255. 如請求項252至254中任一項之化合物，其中q為0。
  256. 如請求項252至254中任一項之化合物，其中q為1。
  257. 如請求項216至247中任一項之化合物，其中R 2C係-O(C=O)-NR ER F。
  258. 如請求項216至247及257中任一項之化合物，其中R 3C係-O(C=O)-NR ER F。
  259. 如請求項216至258中任一項之化合物，其中R E及R F皆係氫。
  260. 如請求項216至258中任一項之化合物，其中R E及R F各自獨立地係C 1-3烷基。
  261. 如請求項216至258中任一項之化合物，其中R E及R F中之一者係氫且R E及R F中之另一者係C 1-3烷基。
  262. 如請求項216至247中任一項之化合物，其中R 2C係-NR M(C=O)-NR ER F。
  263. 如請求項216至247及262中任一項之化合物，其中R 3C係-NR M(C=O)-NR ER F。
  264. 如請求項262或263之化合物，其中R E、R F及R M皆係氫。
  265. 如請求項262或263之化合物，其中R E、R F及R M各自獨立地係C 1-3烷基。
  266. 如請求項262或263之化合物，其中R E、R F及R M中之一者係C 1-3烷基且R E、R F及R M中之其餘者係氫。
  267. 如請求項216至247中任一項之化合物，其中R 2C係-S(O) 2NR CR D。
  268. 如請求項216至247及267中任一項之化合物，其中R 3C係-S(O) 2NR CR D。
  269. 如請求項267或268之化合物，其中R C及R D皆係氫。
  270. 如請求項267或268之化合物，其中R C及R D各自獨立地係C 1-3烷基。
  271. 如請求項267或268之化合物，其中R C及R D中之一者係氫且R C及R D中之另一者係C 1-3烷基。
  272. 如請求項216至247中任一項之化合物，其中R 2C係-S(O) 2R M。
  273. 如請求項216至247及272中任一項之化合物，其中R 3C係-S(O) 2R M。
  274. 如請求項272或273之化合物，其中R M係氫。
  275. 如請求項272或273之化合物，其中R M係C 1-3烷基。
  276. 如請求項216至275中任一項之化合物，其中R 2C連接於位置1處。
  277. 如請求項216至275中任一項之化合物，其中R 2C連接於位置2處。
  278. 如請求項216至275中任一項之化合物，其中R 2C連接於位置3處。
  279. 如請求項216至275中任一項之化合物，其中R 3C連接於位置1'處。
  280. 如請求項216至275中任一項之化合物，其中R 3C連接於位置2'處。
  281. 如請求項216至275中任一項之化合物，其中R 3C連接於位置3'處。
  282. 如請求項216至281中任一項之化合物，其中L E係-(C=O)-。
  283. 如請求項216至281中任一項之化合物，其中L E係-S(O) 2-。
  284. 如請求項216至283中任一項之化合物，其中每一R I及R J係氫。
  285. 如請求項216至283中任一項之化合物，其中每一R I及R J係C 1-3烷基。
  286. 如請求項216至283中任一項之化合物，其中R I及R J中之一者係氫且R I及R J中之另一者係C 1-3烷基。
  287. 如請求項216至286中任一項之化合物，其中L C係-(CR IR J)-。
  288. 如請求項216至287中任一項之化合物，其中s為0。
  289. 如請求項216至287中任一項之化合物，其中s為1。
  290. 如請求項216至289中任一項之化合物，其中每一Cy 1獨立地係5至6員雜芳基。
  291. 如請求項216至289中任一項之化合物，其中每一Cy 1係視情況經一或多個R K取代之吡唑。
  292. 如請求項216至289中任一項之化合物，其中每一Cy 1獨立地選自由以下組成之群：吡唑、咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、噁唑、異噁唑、吡咯、噠嗪、吡啶、嘧啶及吡嗪，其各自視情況經一或多個R K取代。
  293. 如請求項216至289中任一項之化合物，其中每一Cy 1獨立地選自由以下組成之群：咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、噁唑、異噁唑、吡咯、噠嗪、吡啶、嘧啶及吡嗪，其各自視情況經一或多個R K取代。
  294. 如請求項216至289中任一項之化合物，其中每一Cy 1獨立地係視情況經一或多個R K取代之C 4-5環烷基。
  295. 如請求項216至294中任一項之化合物，其中每一R K獨立地選自由以下組成之群：C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基及鹵素。
  296. 如請求項295之化合物，其中每一R K獨立地選自由以下組成之群：甲基、乙基、-CF 3及鹵素。
  297. 如請求項216至296中任一項之化合物，其中每一Cy 1相同。
  298. 如請求項216至296中任一項之化合物，其中每一Cy 1不同。
  299. 如請求項216至298中任一項之化合物，其中L AA係-(CH 2) 1-6-。
  300. 如請求項216至298中任一項之化合物，其中L AA係-(CH 2) 1-3-。
  301. 如請求項216至298中任一項之化合物，其中L AA係-(CH 2) 1-6O-。
  302. 如請求項216至298中任一項之化合物，其中L AA係-(CH 2) 1-3O-。
  303. 如請求項216至302中任一項之化合物，其中Cy 2係4至6員雜環。
  304. 如請求項216至302中任一項之化合物，其中Cy 2具有結構
    Figure 03_image1014
    ，其中下標z1及z2中之每一者獨立地係1至3之整數且**指示與L AA之連接。
  305. 如請求項304之化合物，其中z1及z2為1。
  306. 如請求項304之化合物，其中z1及z2為2。
  307. 如請求項304之化合物，其中z1為1且z2為2。
  308. 如請求項216至302中任一項之化合物，其中Cy 2具有結構
    Figure 03_image1016
    ，其中 Z 1係選自由以下組成之群：-O-、-S-、-CR NR O-及-NR P-； R N、R O及R P獨立地係氫或C 1-6烷基； 下標z3係1至3之整數；且 **指示與L AA之連接。
  309. 如請求項308之化合物，其中R N及R O係氫。
  310. 如請求項308之化合物，其中R P係氫。
  311. 如請求項308之化合物，其中R P係甲基。
  312. 如請求項216至302中任一項之化合物，其中Cy 2係5至6員雜芳基。
  313. 如請求項216至302中任一項之化合物，其中Cy 2係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1018
    及
    Figure 03_image1020
    ，其中 Z 2係=CR N-或=N-； R N係氫或C 1-6烷基；且 **指示與L AA之連接。
  314. 如請求項313之化合物，其中Z 2係=CR N-。
  315. 如請求項314之化合物，其中R N係氫。
  316. 如請求項313之化合物，其中Z 2係=N-。
  317. 如請求項216至302中任一項之化合物，其中Cy 2係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1022
    及
    Figure 03_image1024
    ，其中Z 3係-O-或-S-且**指示與L AA、L D、NR HH、Y、W或L BB之連接。
  318. 如請求項317之化合物，其中**指示與L AA之連接。
  319. 如請求項317之化合物，其中**指示與L D、NR HH、Y、W或L BB之連接。
  320. 如請求項216至302中任一項之化合物，其中Cy 2係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1026
    及
    Figure 03_image1028
    ，其中**指示與L AA之連接。
  321. 如請求項216至302中任一項之化合物，其中Cy 2係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1030
    及
    Figure 03_image1032
    ，其中 每一Z 2獨立地係=CR N-或=N-；且 每一R N係氫或C 1-6烷基。
  322. 如請求項321之化合物，其中至少一個Z 2係=N-。
  323. 如請求項321之化合物，其中一個Z 2係=N-且其餘Z 2係=CR N-。
  324. 如請求項321之化合物，其中兩個Z 2係=N-且其餘Z 2係=CR N-。
  325. 如請求項321、323及324中任一項之化合物，其中R N係氫。
  326. 如請求項216至302中任一項之化合物，其中Cy 2係
    Figure 03_image1034
    。
  327. 如請求項216至302中任一項之化合物，其中Cy 2係
    Figure 03_image1036
    。
  328. 如請求項216至302中任一項之化合物，其中Cy 2係
    Figure 03_image1038
    。
  329. 如請求項216至302中任一項之化合物，其中Cy 2係環丁基。
  330. 如請求項216至329中任一項之化合物，其中每一R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地係氫或-CH 3。
  331. 如請求項216至330中任一項之化合物，其中每一R U獨立地選自-CO 2H、-(C=O)NH 2、-S(O) 2NH 2、-CH 2NH 2及-CH 2OH。
  332. 如請求項216至331中任一項之化合物，其中t1為0且t2為1。
  333. 如請求項216至331中任一項之化合物，其中t1為1且t2為0。
  334. 如請求項216至331中任一項之化合物，其中t1為1且t2為1。
  335. 如請求項216至334中任一項之化合物，其中u為1且L D為-(CH 2) 1-3-。
  336. 如請求項216至334中任一項之化合物，其中u為0。
  337. 如請求項216至331中任一項之化合物，其中t2為1且R HH係氫。
  338. 如請求項216至331中任一項之化合物，其中t2為1且R HH係C 1-3烷基。
  339. 如請求項216至331中任一項之化合物，其中t2為1且R HH係C 3-4環烷基。
  340. 如請求項216至331中任一項之化合物，其中t2為1且R HH係-(CH 2) C 3-4環烷基。
  341. 如請求項216至331中任一項之化合物，其中t2為1且R HH係-(CH 2) 4至5員雜環。
  342. 如請求項216至331中任一項之化合物，其中t2為1且R HH係-(CH 2) 5員雜芳基。
  343. 如請求項216至331及333至342中任一項之化合物，其中Z係-N(R HH)-。
  344. 如請求項216至343中任一項之化合物，其中Y係
    Figure 03_image1040
    。
  345. 如請求項216至343中任一項之化合物，其中Y係環己烷羧基、十一烷醯基、己醯基(caproyl、hexanoyl)、丁醯基或丙醯基。
  346. 如請求項216至343中任一項之化合物，其中Y係PEG4至PEG12。
  347. 如請求項216至343中任一項之化合物，其中y為0。
  348. 如請求項216至346中任一項之化合物，其中y為1。
  349. 如請求項216至348中任一項之化合物，其中W係1至12個胺基酸之鏈。
  350. 如請求項216至348中任一項之化合物，其中W係1至6個胺基酸之鏈。
  351. 如請求項216至348中任一項之化合物，其中W係1至3個胺基酸之鏈。
  352. 如請求項216至351之化合物，其中W之每一胺基酸獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、天門冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、組胺酸、精胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、O-甲基絲胺酸、O-甲基天門冬胺酸、O-甲基麩胺酸、N-甲基離胺酸、O-甲基酪胺酸、O-甲基組胺酸及O-甲基蘇胺酸。
  353. 如請求項216至351中任一項之化合物，其中W中之每一胺基酸獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、絲胺酸、天門冬胺酸、天門冬胺酸甲酯、N,N-二甲基-離胺酸、苯丙胺酸、瓜胺酸、纈胺酸-丙胺酸、纈胺酸-瓜胺酸、苯丙胺酸-離胺酸或高絲胺酸甲醚。
  354. 如請求項216至348中任一項之化合物，其中W具有以下結構：
    Figure 03_image1042
    或
    Figure 03_image1044
    。
  355. 如請求項354之化合物，其中W 1係-O-C(=O)-。
  356. 如請求項354或355之化合物，其中一個R g係鹵素、-CN或-NO 2，且其餘R G係氫。
  357. 如請求項354或355之化合物，其中每一R g係氫。
  358. 如請求項216至348中任一項之化合物，其中w為0。
  359. 如請求項216至348中任一項之化合物，其中w為1。
  360. 如請求項216至359中任一項之化合物，其中L BB係-(CH 2) 1-3-。
  361. 如請求項216至359中任一項之化合物，其中L BB係-C(O)(CH 2) 1-2-。
  362. 如請求項361之化合物，其中L BB係-C(O)(CH 2) 2-。
  363. 如請求項216至359中任一項之化合物，其中L BB係-[NHC(O)(CH 2) 2] 1-2-。
  364. 如請求項363之化合物，其中L BB係-[NHC(O)(CH 2) 2] 2-。
  365. 如請求項216至364中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image1046
    。
  366. 如請求項216至364中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image1048
    。
  367. 如請求項216至364中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image1050
    。
  368. 如請求項216至367中任一項之化合物，其中每一AA獨立地係天然胺基酸；其中(AA) b經由硫原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺。
  369. 如請求項216至367中任一項之化合物，其中每一AA獨立地係天然胺基酸；其中(AA) b經由氮原子連結至琥珀醯亞胺或經水解琥珀醯亞胺。
  370. 如請求項216至369中任一項之化合物，其中每一下標b為1。
  371. 如請求項216至369中任一項之化合物，其中每一下標b為2。
  372. 如請求項216至369中任一項之化合物，其中每一下標b為3、4、5或6。
  373. 如請求項216至365中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image1052
    。
  374. 如請求項216至364中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image1054
    。
  375. 如請求項216至364中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image1056
    。
  376. 如請求項216至364中任一項之化合物，其中M係
    Figure 03_image1058
    。
  377. 如請求項216之化合物，其選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1060
    Figure 03_image1062
    Figure 03_image1064
    Figure 03_image1066
    Figure 03_image1068
    Figure 03_image1070
    Figure 03_image1072
    Figure 03_image1074
    Figure 03_image1076
    Figure 03_image1078
    Figure 03_image1080
    Figure 03_image1082
    Figure 03_image1084
    Figure 03_image1086
    Figure 03_image1088
    及其醫藥上可接受之鹽。
  378. 一種化合物，其具有式(V)結構：
    Figure 03_image1090
    (V)或其醫藥上可接受之鹽，其中： R 1C係氫、羥基、C 1-6烷氧基、-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B或PEG2至PEG4； R 2C係-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 2C連接於標記為1、2或3之任一位置處； R 3C係-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 3C連接於標記為1'、2'或3'之任一位置處； 每一R A、R B、R C、R D、R E、R F及R M獨立地係氫或C 1-6烷基； 每一下標n獨立地係0至6之整數； 每一下標q獨立地係0至6之整數； L E係-(C=O)-或-S(O) 2-； L C係-(CR IR J) 1-3- 每一R I及R J獨立地係氫或C 1-3烷基； 下標s為0或1； 每一Cy 1獨立地係4至6員雜環、5至6員雜芳基或C 3-6環烷基，其各自視情況經一或多個R K取代； 每一R K獨立地選自由以下組成之群：C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d2R e2、-C(O)NR d2R e2、-C(O)(C 1-6烷基)及-C(O)O(C 1-6烷基)； 每一R d2及R e2獨立地係氫或C 1-3烷基； L AA係-(CH 2) 1-6-、-C(O)(CH 2) 1-6-、-C(O)NR L(CH 2) 1-6-、-(CH 2) 1-6O-、-C(O)(CH 2) 1-6O-或-C(O)NR L(CH 2) 1-6O-； R L係氫或C 1-3烷基； Cy 2係C 3-6環烷基、4至6員雜環、5至6員雜芳基或苯基，其各自視情況經一或多個R U取代； 每一R U獨立地選自由以下組成之群：-CO 2R j1、-(C=O)NR d3R e3、-S(O) 2NR d3R e3、-(CH 2) q1-NR g1R h1、-(CH 2) q1-OR j1及-(CH 2) q1-(OCH 2CH 2) 1-8OH； 每一R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地係氫或C 1-6烷基； 下標q1係0至6之整數； 下標t1為0或1； L D係-(CH 2) 1-6-； 下標u為0或1； 在t1為0時，ZZ係-NR QR R、-N +(C 1-6烷基)R QR R、-C(=O)N SR T、-C(O)O(C 1-6烷基)、-CO 2H或胺基酸，或在t1為1時，ZZ係氫、-NR QR R、-N +(C 1-6烷基)R QR R、-C(=O)N SR T、-C(O)O(C 1-6烷基)、-CO 2H或胺基酸； R Q係氫、C 1-6烷基、C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 1-3烷氧基、-(CH 2) 1-34至6員雜環或-(CH 2) 1-35至6員雜芳基，條件係 若t1為0且兩個Cy 1皆係
    Figure 03_image1092
    ，則R Q係C 2-6烷基、C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 1-3烷氧基、-(CH 2) 1-34至6員雜環或-(CH 2) 1-35至6員雜芳基，且 若t1為0且至少一個Cy 1不為
    Figure 03_image1094
    ，則ZZ係-NR QR R、-N +(C 1-6烷基)R QR R或-C(=O)N SR T，且R Q係C 1-6烷基、C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 3-6環烷基、-(CH 2) 1-3C 1-3烷氧基、-(CH 2) 1-34至6員雜環或-(CH 2) 1-35至6員雜芳基；且 每一R R、R S及R T獨立地係氫或C 1-6烷基。
  379. 如請求項378之化合物，其中R 1C係氫。
  380. 如請求項378之化合物，其中R 1C係羥基。
  381. 如請求項378之化合物，其中R 1C係C 1-6烷氧基。
  382. 如請求項378之化合物，其中R 1C係甲氧基。
  383. 如請求項378之化合物，其中R 1C係-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基。
  384. 如請求項378之化合物，其中R 1C係甲氧基乙基。
  385. 如請求項378之化合物，其中R 1C係PEG2至PEG4。
  386. 如請求項378之化合物，其中R 1C係-(CH 2) n-NR AR B。
  387. 如請求項378至386中任一項之化合物，其中R A及R B皆係氫。
  388. 如請求項378至386中任一項之化合物，其中R A及R B獨立地係C 1-3烷基。
  389. 如請求項378至386中任一項之化合物，其中R A及R B中之一者係氫且R A及R B中之另一者係C 1-3烷基。
  390. 如請求項378至389中任一項之化合物，其中每一下標n為0。
  391. 如請求項378至389中任一項之化合物，其中每一下標n為1。
  392. 如請求項378至389中任一項之化合物，其中每一下標n為2。
  393. 如請求項378至389中任一項之化合物，其中每一下標n為3、4、5或6。
  394. 如請求項378至393中任一項之化合物，其中R 2C及R 3C獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C及R 3C相同。
  395. 如請求項378至393中任一項之化合物，其中R 2C及R 3C獨立地係-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C及R 3C不同。
  396. 如請求項378至393中任一項之化合物，其中R 2C係-(C=O) m-NR CR D。
  397. 如請求項378至396中任一項之化合物，其中R 3C係-(C=O) m-NR CR D。
  398. 如請求項378至397中任一項之化合物，其中R C及R D皆係氫。
  399. 如請求項378至397中任一項之化合物，其中R C及R D各自獨立地係C 1-3烷基。
  400. 如請求項378至397中任一項之化合物，其中R C及R D中之一者係氫且R C及R D中之另一者係C 1-3烷基。
  401. 如請求項396或397之化合物，其中每一下標m為0。
  402. 如請求項396或397之化合物，其中每一下標m為1。
  403. 如請求項378至393中任一項之化合物，其中R 2C係-(CH 2) q-NR ER F。
  404. 如請求項378至393及403中任一項之化合物，其中R 3C係-(CH 2) q-NR ER F。
  405. 如請求項378至404中任一項之化合物，其中R E及R F皆係氫。
  406. 如請求項378至404中任一項之化合物，其中R E及R F各自獨立地係C 1-3烷基。
  407. 如請求項378至404中任一項之化合物，其中R E及R F中之一者係氫且R E及R F中之另一者係C 1-3烷基。
  408. 如請求項378至407中任一項之化合物，其中每一下標q為0。
  409. 如請求項378至407中任一項之化合物，其中每一下標q係1至6之整數。
  410. 如請求項378至393中任一項之化合物，其中R 2C係-CO 2R M。
  411. 如請求項378至393及410中任一項之化合物，其中R 3C係-CO 2R M。
  412. 如請求項410或411之化合物，其中R M係氫。
  413. 如請求項410或411之化合物，其中R M係C 1-3烷基。
  414. 如請求項378至393中任一項之化合物，其中R 2C係-(CH 2) q-OR M。
  415. 如請求項378至393及414中任一項之化合物，其中R 3C係-(CH 2) q-OR M。
  416. 如請求項414或415之化合物，其中R M係氫。
  417. 如請求項414至415中任一項之化合物，其中q為0。
  418. 如請求項414至415中任一項之化合物，其中q為1。
  419. 如請求項378至393中任一項之化合物，其中R 2C係-O(C=O)-NR ER F。
  420. 如請求項378至393及419中任一項之化合物，其中R 3C係-O(C=O)-NR ER F。
  421. 如請求項419或420之化合物，其中R E及R F皆係氫。
  422. 如請求項419或420之化合物，其中R E及R F各自獨立地係C 1-3烷基。
  423. 如請求項419或420之化合物，其中R E及R F中之一者係氫且R E及R F中之另一者係C 1-3烷基。
  424. 如請求項378至393中任一項之化合物，其中R 2C係-NR M(C=O)-NR ER F。
  425. 如請求項378至393及424中任一項之化合物，其中R 3C係-NR M(C=O)-NR ER F。
  426. 如請求項424或425之化合物，其中R E、R F及R M皆係氫。
  427. 如請求項424或425之化合物，其中R E、R F及R M各自獨立地係C 1-3烷基。
  428. 如請求項424或425之化合物，其中R E、R F及R M中之一者係C 1-3烷基且R E、R F及R M中之其餘者係氫。
  429. 如請求項378至393中任一項之化合物，其中R 2C係-S(O) 2NR CR D。
  430. 如請求項378至393及429中任一項之化合物，其中R 3C係-S(O) 2NR CR D。
  431. 如請求項429或430之化合物，其中R C及R D皆係氫。
  432. 如請求項429或430之化合物，其中R C及R D各自獨立地係C 1-3烷基。
  433. 如請求項429或430之化合物，其中R C及R D中之一者係氫且R C及R D中之另一者係C 1-3烷基。
  434. 如請求項378至393中任一項之化合物，其中R 2C係-S(O) 2R M。
  435. 如請求項378至393及434中任一項之化合物，其中R 3C係-S(O) 2R M。
  436. 如請求項434或435之化合物，其中R M係氫。
  437. 如請求項434或435之化合物，其中R M係C 1-3烷基。
  438. 如請求項378至437中任一項之化合物，其中R 2C連接於位置1處。
  439. 如請求項378至437中任一項之化合物，其中R 2C連接於位置2處。
  440. 如請求項378至437中任一項之化合物，其中R 2C連接於位置3處。
  441. 如請求項378至437中任一項之化合物，其中R 3C連接於位置1'處。
  442. 如請求項378至437中任一項之化合物，其中R 3C連接於位置2'處。
  443. 如請求項378至437中任一項之化合物，其中R 3C連接於位置3'處。
  444. 如請求項378至443中任一項之化合物，其中L E係-(C=O)-。
  445. 如請求項378至443中任一項之化合物，其中L E係-S(O) 2-。
  446. 如請求項378至445中任一項之化合物，其中每一R I及R J係氫。
  447. 如請求項378至445中任一項之化合物，其中每一R I及R J係C 1-3烷基。
  448. 如請求項378至445中任一項之化合物，其中R I及R J中之一者係氫且R I及R J中之另一者係C 1-3烷基。
  449. 如請求項378至448中任一項之化合物，其中L C係-(CR IR J)-。
  450. 如請求項378至449中任一項之化合物，其中s為0。
  451. 如請求項378至449中任一項之化合物，其中s為1。
  452. 如請求項378至451中任一項之化合物，其中每一Cy 1獨立地係5至6員雜芳基。
  453. 如請求項378至451中任一項之化合物，其中每一Cy 1係視情況經一或多個R K取代之吡唑。
  454. 如請求項378至451中任一項之化合物，其中每一Cy 1獨立地選自由以下組成之群：吡唑、咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、噁唑、異噁唑、吡咯、噠嗪、吡啶、嘧啶及吡嗪，其各自視情況經一或多個R K取代。
  455. 如請求項378至451中任一項之化合物，其中每一Cy 1獨立地選自由以下組成之群：咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、噁唑、異噁唑、吡咯、噠嗪、吡啶、嘧啶及吡嗪，其各自視情況經一或多個R K取代。
  456. 如請求項378至451中任一項之化合物，其中每一Cy 1獨立地係視情況經一或多個R K取代之C 4-5環烷基。
  457. 如請求項378至456中任一項之化合物，其中每一R K獨立地選自由以下組成之群：C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基及鹵素。
  458. 如請求項457之化合物，其中每一R K獨立地選自由以下組成之群：甲基、乙基、-CF 3及鹵素。
  459. 如請求項378至451中任一項之化合物，其中每一Cy 1相同。
  460. 如請求項378至451中任一項之化合物，其中每一Cy 1不同。
  461. 如請求項378至460中任一項之化合物，其中L AA係-(CH 2) 1-6-。
  462. 如請求項378至460中任一項之化合物，其中L AA係-(CH 2) 1-3-。
  463. 如請求項378至460中任一項之化合物，其中L AA係-(CH 2) 1-6O-。
  464. 如請求項378至460中任一項之化合物，其中L AA係-(CH 2) 1-3O-。
  465. 如請求項378至464中任一項之化合物，其中Cy 2係4至6員雜環。
  466. 如請求項378至464中任一項之化合物，其中Cy 2具有結構
    Figure 03_image1096
    ，其中下標z1及z2中之每一者獨立地係1至3之整數且**指示與L AA之連接。
  467. 如請求項466之化合物，其中z1及z2為1。
  468. 如請求項466之化合物，其中z1及z2為2。
  469. 如請求項466之化合物，其中z1為1且z2為2。
  470. 如請求項378至464中任一項之化合物，其中Cy 2具有結構
    Figure 03_image1098
    ，其中 Z 1係選自由以下組成之群：-O-、-S-、-CR NR O-及-NR P-； R N、R O及R P獨立地係氫或C 1-6烷基； 下標z3係1至3之整數；且 **指示與L AA之連接。
  471. 如請求項470之化合物，其中R N及R O係氫。
  472. 如請求項470之化合物，其中R P係氫。
  473. 如請求項470之化合物，其中R P係甲基。
  474. 如請求項378至464中任一項之化合物，其中Cy 2係5至6員雜芳基。
  475. 如請求項378至464中任一項之化合物，其中Cy 2係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1100
    及
    Figure 03_image1102
    ，其中 Z 2係=CR N-或=N-； R N係氫或C 1-6烷基；且 **指示與L AA之連接。
  476. 如請求項475之化合物，其中Z 2係=CR N-。
  477. 如請求項476之化合物，其中R N係氫。
  478. 如請求項475之化合物，其中Z 2係=N-。
  479. 如請求項378至464中任一項之化合物，其中Cy 2係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1104
    及
    Figure 03_image1106
    ，其中Z 3係-O-或-S-且**指示與L AA、L D、NR HH、Y、W或L BB之連接。
  480. 如請求項479之化合物，其中**指示與L AA之連接。
  481. 如請求項479之化合物，其中**指示與L D、NR HH、Y、W或L BB之連接。
  482. 如請求項378至464中任一項之化合物，其中Cy 2係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1108
    及
    Figure 03_image1110
    ，其中**指示與L AA之連接。
  483. 如請求項378至464中任一項之化合物，其中Cy 2係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1112
    及
    Figure 03_image1114
    ，其中 每一Z 2獨立地係=CR N-或=N-；且 每一R N獨立地係氫或C 1-6烷基。
  484. 如請求項483之化合物，其中至少一個Z 2係=N-。
  485. 如請求項483之化合物，其中一個Z 2係=N-且其餘Z 2係=CR N-。
  486. 如請求項483之化合物，其中兩個Z 2係=N-且其餘Z 2係=CR N-。
  487. 如請求項483、485及486中任一項之化合物，其中R N及R O係氫。
  488. 如請求項378至464中任一項之化合物，其中Cy 2係
    Figure 03_image1116
    。
  489. 如請求項378至464中任一項之化合物，其中Cy 2係
    Figure 03_image1118
    。
  490. 如請求項378至464中任一項之化合物，其中Cy 2係
    Figure 03_image1120
    。
  491. 如請求項378至464中任一項之化合物，其中Cy 2係環丁基。
  492. 如請求項378至491中任一項之化合物，其中每一R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地係氫或-CH 3。
  493. 如請求項378至492中任一項之化合物，其中每一R U獨立地選自-CO 2H、-(C=O)NH 2、-S(O) 2NH 2、-CH 2NH 2及-CH 2OH。
  494. 如請求項378至493中任一項之化合物，其中t1為0。
  495. 如請求項378至493中任一項之化合物，其中t1為1。
  496. 如請求項378至495中任一項之化合物，其中u為1且L D係-(CH 2) 1-3。
  497. 如請求項378至495中任一項之化合物，其中u為0。
  498. 如請求項378至497中任一項之化合物，其中ZZ係-NR QR R。
  499. 如請求項498之化合物，其中R Q係C 1-6烷基。
  500. 如請求項498之化合物，其中R Q係C 3-6環烷基。
  501. 如請求項500之化合物，其中R Q係環丙基。
  502. 如請求項498之化合物，其中R Q係-(CH 2) 1-3C 3-6環烷基。
  503. 如請求項498至501中任一項之化合物，其中R R係氫。
  504. 如請求項378至497中任一項之化合物，其中ZZ係-C(=O)N SR T。
  505. 如請求項378至497中任一項之化合物，其中ZZ係-C(O)O(第三丁基)。
  506. 如請求項378至497中任一項之化合物，其中ZZ係-CO 2H。
  507. 如請求項378至497中任一項之化合物，其中ZZ係選自由以下組成之群之胺基酸：丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、天門冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、組胺酸、精胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、O-甲基絲胺酸、O-甲基天門冬胺酸、O-甲基麩胺酸、N-甲基離胺酸、O-甲基酪胺酸、O-甲基組胺酸及O-甲基蘇胺酸。
  508. 如請求項378之化合物，其選自由以下組成之群：
    Figure 03_image1122
    Figure 03_image1124
    Figure 03_image1126
    Figure 03_image1128
    Figure 03_image1130
    Figure 03_image1132
    Figure 03_image1134
    及其醫藥上可接受之鹽。
  509. 一種抗體藥物結合物(ADC)，其具有下式： Ab-(S*-(D')) p 其中： Ab係抗體； 每一S*係來自該抗體之半胱胺酸殘基之硫原子； D'係藥物單元，其係如請求項216至377中任一項之式(IV)化合物之基團；且 下標p係2至8之整數。
  510. 如請求項509之ADC，其中該式(IV)化合物之該基團包括取代基M中之基團。
  511. 如請求項510之ADC，其中D'具有以下結構：
    Figure 03_image1136
    ，其中***指示與S*之連接。
  512. 如請求項509至511中任一項之ADC，其中該抗體係人類化抗體。
  513. 如請求項509或511之ADC，其中該抗體係單株抗體。
  514. 如請求項509或511之ADC，其中該抗體經岩藻糖基化。
  515. 如請求項509或511之ADC，其中該抗體經無岩藻糖基化。
  516. 一種組合物，其包括如請求項118至215及509至515中任一項之ADC之分佈。
  517. 如請求項516之組合物，其進一步包括至少一種醫藥上可接受之載劑。
  518. 一種治療有需要之個體之癌症之方法，其包括向該個體投與治療有效量之如請求項516或517之組合物。
  519. 一種治療有需要之個體之癌症之方法，其包括向該個體投與治療有效量之如請求項118至215及509至515中任一項之ADC。
  520. 一種誘導有需要之個體中之抗腫瘤免疫反應之方法，其包括向該個體投與治療有效量之如請求項516或517之組合物。
  521. 一種誘導有需要之個體之抗腫瘤免疫反應之方法，其包括向該個體投與治療有效量之如請求項118至215及509至515中任一項之ADC。
  522. 一種式(III)化合物，
    Figure 03_image1138
    (III) 或其醫藥上可接受之鹽，其中： R 1A係氫、羥基、C 1-6烷氧基、-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基、-(CH 2) nn-NR AAR BB； R 2A及R 3A獨立地係-CO 2H、-(C=O) mm-NR CCR DD或-(CH 2) q-NR EE1R FF1； 每一下標nn獨立地係0至6之整數； 每一下標mm獨立地係0或1； 每一下標qq係0至6之整數； Y 1係-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X 1係C 2-6伸烷基； Z 1係-NR EER FF、-C(=O)NR GGR HH或-CO 2H； 每一R AA、R BB、R CC及R DD、R EE1及R FF1獨立地係氫或C 1-3烷基；且 每一R EE、R FF、R GG及R HH獨立地係氫或C 1-6烷基。
  523. 如請求項522之化合物，其中R 1A係氫。
  524. 如請求項522之化合物，其中R 1A係羥基。
  525. 如請求項522之化合物，其中R 1A係C 1-6烷氧基。
  526. 如請求項522或525之化合物，其中R 1係甲氧基。
  527. 如請求項522之化合物，其中R 1A係-(C 1-6烷基)C 1-6烷氧基。
  528. 如請求項522或527之化合物，其中R 1A係甲氧基乙基。
  529. 如請求項522之化合物，其中R 1係 -(CH 2) nn-NR AAR BB。
  530. 如請求項522或529之化合物，其中R AA及R BB皆係氫。
  531. 如請求項522或529之化合物，其中R AA及R BB獨立地係C 1-3烷基。
  532. 如請求項522或529之化合物，其中R AA及R BB中之一者係氫且R AA及R BB中之另一者係C 1-3烷基。
  533. 如請求項522或529至532中任一項之化合物，其中每一下標nn為0。
  534. 如請求項522或529至532中任一項之化合物，其中每一下標nn為1。
  535. 如請求項522或529至532中任一項之化合物，其中每一下標nn為2。
  536. 如請求項522或529至532中任一項之化合物，其中每一下標nn為3、4、5或6。
  537. 如請求項522至536中任一項之化合物，其中R 2A及R 3A獨立地係-CO 2H、-(C=O) mm-NR CCR DD或-(CH 2) q-NR EE1R FF1；且R 2A及R 3A相同。
  538. 如請求項522至536中任一項之化合物，其中R 2A及R 3A獨立地係-CO 2H、-(C=O) mm-NR CCR DD或-(CH 2) q-NR EE1R FF1；且R 2A及R 3A不同。
  539. 如請求項522至538中任一項之化合物，其中R 2A係-(C=O) mm-NR CCR DD。
  540. 如請求項522至538中任一項之化合物，其中R 3A係-(C=O) mm-NR CCR DD。
  541. 如請求項522至537或539-540中任一項之化合物，其中每一R CC及每一R DD係氫。
  542. 如請求項522至537或539至540中任一項之化合物，其中每一R CC及每一R DD獨立地係C 1-3烷基。
  543. 如請求項522至536或538至540中任一項之化合物，其中每一R CC及R DD中之一者係氫且每一R CC及R DD中之另一者係C 1-3烷基。
  544. 如請求項522至543中任一項之化合物，其中每一下標mm為0。
  545. 如請求項522至543中任一項之化合物，其中每一下標mm為1。
  546. 如請求項522至538中任一項之化合物，其中R 2A係-(CH 2) q-NR EE1R FF1。
  547. 如請求項522至538中任一項之化合物，其中R 3A係-(CH 2) q-NR EE1R FF1。
  548. 如請求項522至538或546至547中任一項之化合物，其中每一R EE1及每一R FF1係氫。
  549. 如請求項522至538或546至547中任一項之化合物，其中每一R EE1及每一R FF1獨立地係C 1-3烷基。
  550. 如請求項522至538或546至547中任一項之化合物，其中每一R EE1及每一R FF1中之一者係氫且每一R EE1及每一R FF1中之另一者係C 1-3烷基。
  551. 如請求項522至538或546至547中任一項之化合物，其中每一下標qq為0。
  552. 如請求項522至538或546至550中任一項之化合物，其中每一下標qq係1至6之整數。
  553. 如請求項522至538中任一項之化合物，其中R 3A係-CO 2H。
  554. 如請求項522至538中任一項之化合物，其中R 2A係-CO 2H。
  555. 如請求項522至554中任一項之化合物，其中Y 1係-CH 2-。
  556. 如請求項522至554中任一項之化合物，其中Y 1係-O-。
  557. 如請求項522至554中任一項之化合物，其中Y 1係-S-。
  558. 如請求項522至554中任一項之化合物，其中Y 1係-NH-。
  559. 如請求項522至558中任一項之化合物，其中X 1係C 2-5伸烷基。
  560. 如請求項522至559中任一項之化合物，其中X 1係C 2-4伸烷基。
  561. 如請求項522至560中任一項之化合物，其中X 1係伸乙基或伸正丙基。
  562. 如請求項522至561中任一項之化合物，其中Z 1係-NR E1R F1。
  563. 如請求項522至562中任一項之化合物，其中R EE及R FF皆係氫。
  564. 如請求項522至562中任一項之化合物，其中R EE及R FF獨立地係C 1-6烷基。
  565. 如請求項522至562中任一項之化合物，其中R EE及R FF中之一者係氫且R EE及R FF中之另一者係C 1-6烷基。
  566. 如請求項564或565之化合物，其中該C 1-6烷基係C 1-3烷基。
  567. 如請求項566之化合物，其中該C 1-3烷基係甲基。
  568. 如請求項522至561中任一項之化合物，其中Z 1係-C(=O)NR GGR HH。
  569. 如請求項522至561或568中任一項之化合物，其中R GG及R HH皆係氫。
  570. 如請求項522至561或568中任一項之化合物，其中R GG及R HH獨立地係C 1-6烷基。
  571. 如請求項522至561或568中任一項之化合物，其中R GG及R HH中之一者係氫且R GG及R HH中之另一者係C 1-6烷基。
  572. 如請求項570或571之化合物，其中該C 1-6烷基係C 1-3烷基。
  573. 如請求項569之化合物，其中該C 1-3烷基係甲基。
  574. 如請求項522至561中任一項之化合物，其中Z 1係-CO 2H。
  575. 如請求項522之化合物，其中R 1A係甲氧基且R 2A及R 3A皆係-C(=O)NH 2。
  576. 如請求項522或575之化合物，其中Y 1係-O-且X 1係C 3伸烷基。
  577. 如請求項522或575至576中任一項之化合物，其中X 1係伸正丙基。
  578. 如請求項522或575至577中任一項之化合物，其中Z 1係-NR EER FF。
  579. 如請求項522或575至578中任一項之化合物，其中R EE係氫且R FF係甲基。
TW111101750A 2021-01-15 2022-01-14 免疫調節抗體藥物結合物 TW202246242A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163138360P 2021-01-15 2021-01-15
US63/138,360 2021-01-15
US202163292779P 2021-12-22 2021-12-22
US63/292,779 2021-12-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202246242A true TW202246242A (zh) 2022-12-01

Family

ID=81125428

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW111101750A TW202246242A (zh) 2021-01-15 2022-01-14 免疫調節抗體藥物結合物

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20240123079A1 (zh)
EP (1) EP4277904A1 (zh)
JP (1) JP2024503508A (zh)
KR (1) KR20230133331A (zh)
AU (1) AU2022208054A1 (zh)
BR (1) BR112023014128A2 (zh)
CA (1) CA3207893A1 (zh)
IL (1) IL304239A (zh)
MX (1) MX2023008327A (zh)
TW (1) TW202246242A (zh)
WO (1) WO2022155518A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023215740A1 (en) * 2022-05-06 2023-11-09 Seagen Inc. Immunomodulatory antibody-drug conjugates
WO2024137619A1 (en) * 2022-12-20 2024-06-27 Bolt Biotherapeutics, Inc. Anti-claudin, bis-benzimid azole sting agonist immunoconjugates, and uses thereof

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2036891B (en) 1978-12-05 1983-05-05 Windsor Smith C Change speed gear
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
JPS6147500A (ja) 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
JPS61134325A (ja) 1984-12-04 1986-06-21 Teijin Ltd ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法
EP0247091B1 (en) 1985-11-01 1993-09-29 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
CA2006596C (en) 1988-12-22 2000-09-05 Rika Ishikawa Chemically-modified g-csf
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5166322A (en) 1989-04-21 1992-11-24 Genetics Institute Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof
JP2763020B2 (ja) 1995-04-27 1998-06-11 日本電気株式会社 半導体パッケージ及び半導体装置
US5672662A (en) 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
RU2199347C2 (ru) 1996-08-02 2003-02-27 Орто-Макнейл Фармасьютикал, Инк. Полипептиды, обладающие единственным ковалентно связанным n-концевым водорастворимым полимером
US7090843B1 (en) 2000-11-28 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
EP2286844A3 (en) 2004-06-01 2012-08-22 Genentech, Inc. Antibody-drug conjugates and methods
CA2616005C (en) 2005-07-18 2015-09-22 Seattle Genetics, Inc. Beta-glucuronide-linker drug conjugates
CA2666249A1 (en) 2006-10-06 2008-04-17 Takeda Pharmaceutical Company Limited Agent for preventing/treating cancer
CA2705353C (en) 2007-11-14 2017-07-25 The Medical Research, Infrastructure, And Health Services Fund Of The Tel Aviv Medical Center Methods of treating cancer using anti cd24 antibodies
EP2579897A1 (en) 2010-06-08 2013-04-17 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
AR088220A1 (es) 2011-08-29 2014-05-21 Baylor Res Inst Activacion de celulas dendriticas humanas por el receptor de dectina-1 o de tipo toll 2 (tlr2) en el control de la alergia y el asma
IL307989A (en) 2012-04-27 2023-12-01 Novo Nordisk As Human CD30 ligand antigen-binding proteins
WO2014194100A1 (en) 2013-05-29 2014-12-04 The Regents Of The University Of California Anti-cspg4 fusions with interferon for the treatment of malignancy
CA2921707C (en) 2013-10-15 2023-03-28 Seattle Genetics, Inc. Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
US10379127B2 (en) 2013-11-27 2019-08-13 Welcome Receptor Antibodies Pty Ltd Marker of cell death
JP2018531914A (ja) 2015-09-14 2018-11-01 コンパス セラピューティクス リミテッド ライアビリティ カンパニー ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路およびＴＧＦ−βのアンタゴニストを介してがんを処置するための組成物および方法
EP3440076B1 (en) 2016-04-07 2022-06-01 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Heterocyclic amides useful as protein modulators
JP6923957B2 (ja) 2016-06-06 2021-08-25 アスクリピウム タイワン シーオー．， エルティーディー．Ａｓｃｌｅｐｉｕｍｍ Ｔａｉｗａｎ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． Ｄｓｇ２モノクローナル抗体およびその応用
EP3360898A1 (en) 2017-02-14 2018-08-15 Boehringer Ingelheim International GmbH Bispecific anti-tnf-related apoptosis-inducing ligand receptor 2 and anti-cadherin 17 binding molecules for the treatment of cancer
EP3567053A4 (en) 2016-12-28 2020-08-12 Osaka University MONOCLONAL ANTI-CLAUDIN-2 ANTIBODY
WO2018134389A1 (en) 2017-01-23 2018-07-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating infections
WO2018222675A1 (en) 2017-05-30 2018-12-06 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Anti-doublecortin-like kinase 1 antibodies and methods of use
JP7041265B2 (ja) 2017-11-29 2022-03-23 ソウル大学校産学協力団 抗－ｒｏｓ１抗体およびその用途
KR20210120070A (ko) * 2019-01-31 2021-10-06 히트젠 주식회사 면역조절제
MX2021011686A (es) * 2019-03-28 2021-10-22 Lupin Ltd Compuestos macrociclicos como agonistas de sting.
MA55615A (fr) 2019-04-10 2022-02-16 Regeneron Pharma Anticorps humains qui se lient au ret et leurs procédés d'utilisation
US20220280567A1 (en) 2019-06-14 2022-09-08 2Seventy Bio, Inc. Compositions and methods for treating cancer
US20220289763A1 (en) * 2019-07-22 2022-09-15 Lupin Limited Macrocyclic Compounds as Sting Agonists and Methods and Uses Thereof
JP7474319B2 (ja) * 2019-07-25 2024-04-24 シャンハイ ジェミンケア ファーマシューティカル カンパニー，リミティド ヘテロ環式アミド化合物及びその製造方法並びに使用

Also Published As

Publication number Publication date
KR20230133331A (ko) 2023-09-19
WO2022155518A1 (en) 2022-07-21
IL304239A (en) 2023-09-01
EP4277904A1 (en) 2023-11-22
US20240123079A1 (en) 2024-04-18
BR112023014128A2 (pt) 2023-10-31
JP2024503508A (ja) 2024-01-25
CA3207893A1 (en) 2022-07-21
MX2023008327A (es) 2023-08-22
AU2022208054A1 (en) 2023-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102647074B1 (ko) 친수성 항체-약물 컨쥬게이트
JP2022549510A (ja) アミド結合したアミノベンズアゼピン免疫複合体、及びその使用
JP2023524271A (ja) エラスターゼ－基質ペプチドリンカーイムノコンジュゲート、及びそれらの使用
US20240123079A1 (en) Immunomodulatory antibody-drug conjugates
CN112601522A (zh) 抗体-alk5抑制剂偶联物及其用途
US20240165251A1 (en) Immunostimulatory compounds and conjugates
JP2023129495A (ja) 疎水性アウリスタチンｆ化合物およびそのコンジュゲート
TW202400137A (zh) 喜樹鹼偶聯物
CN114269388A (zh) 抗体-alk5抑制剂缀合物及其用途
JP2024511088A (ja) ２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン免疫複合体、及びその使用
JP2024501453A (ja) 抗ｃｅａイムノコンジュゲート、及びそれらの使用
JP2023552790A (ja) 抗ｐｄ－ｌ１イムノコンジュゲート、及びそれらの使用
KR20230118148A (ko) 암 치료에 유용한 하나 이상의 8-het-2-아미노벤자제핀유도체에 대한 접합에 의해 연결된 항-cea 항체를 포함하는 면역접합체
JP2023552791A (ja) 抗ｈｅｒ２免疫複合体、及びその使用
TW202400246A (zh) 免疫調節抗體-藥物結合物
CN116829551A (zh) 免疫调节抗体药物结合物
TW202313123A (zh) 蒽環黴素抗體結合物
TW202417053A (zh) 免疫刺激抗體－藥物結合物
WO2024030577A1 (en) Immunostimulatory anti-pd-l1-drug conjugates
WO2023154307A1 (en) Antibody-conjugated 8-sulfonyl-benzazepine compounds and their uses
JP2024096335A (ja) 親水性抗体－薬物コンジュゲート
JP2024512056A (ja) ２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン免疫複合体、及びその使用
EA040940B1 (ru) Гидрофильные конъюгаты антитело-лекарственное средство