JP2023524271A - エラスターゼ－基質ペプチドリンカーイムノコンジュゲート、及びそれらの使用 - Google Patents

エラスターゼ－基質ペプチドリンカーイムノコンジュゲート、及びそれらの使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、１つ以上の免疫刺激部分へのコンジュゲーションによって連結された細胞結合剤を含む式（Ｉ）のイムノコンジュゲートを提供し、その場合、リンカーはエラスターゼの基質である。本発明はまた、反応性官能基を含む免疫刺激剤中間体組成物を提供する。そのような中間体組成物は、リンカーまたは連結部分を介したイムノコンジュゲートの形成に好適な基質である。本発明は、イムノコンジュゲートによりがんを治療する方法をさらに提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本非仮出願は、２０２０年５月８日出願の米国仮出願第６３／０２２，０６９号の優先権の利益を主張するものであり、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２１年５月５日作成の前記ＡＳＣＩＩコピーは、１７０１９＿００８ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔと称され、サイズは３０９，０５６バイトである。
本発明は一般に、エラスターゼ－基質ペプチドリンカーによって１つ以上の免疫刺激部分に共有結合した抗体を含む、イムノコンジュゲートに関する。
アクセスできない腫瘍に到達するため、及び／またはがん患者及び他の対象のための治療選択肢を拡大するために、抗体及び免疫刺激アジュバントを送達するための新しい組成物及び方法が必要である。
ヒト好中球エラスターゼ（ＨＮＥ）は、破壊的なタンパク質分解活性を有するセリンプロテアーゼである。エラスターゼは、好中球のアズール顆粒に貯蔵され、感染や炎症刺激によって細胞外空間に放出される。エラスターゼは、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を含む骨髄系の細胞、骨髄幹細胞に由来する骨髄系由来の免疫細胞の異種群、及び腫瘍微小環境内でも産生される。高レベルのエラスターゼが原発性腫瘍及び転移で報告されており、エラスターゼは、発がん性シグナル伝達を促進し、腫瘍抑制因子を阻害する（Ｓｔａｒｃｈｅｒ，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍ．（１９９６），１０７：１５９－１６３）。循環及び浸潤好中球及び顆粒球性ＭＤＳＣは、腫瘍の進行及び患者の生存率と相関している（Ｌｅｒｍａｎ，Ｉ．（２０１８）Ｓｔｅｒｏｉｄｓ １３３：９６－１０１）。その結果、好中球エラスターゼレベルの上昇は、様々な種類の固形腫瘍の予後不良と相関する。エラスターゼが結合して切断するペプチドモチーフには、Ｘ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ（配列番号６３７）またはＸ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｖａ（式中、Ｘはペプチドアミノキャッピング基であり、Ｎｖａはノルバリンである）（配列番号６３８）が含まれる（ＵＳ２００２／０１９３３１１；ＵＳ６８５５６８９；ＷＯ２０００／０６９４７２）。
腫瘍を標的とするペプチド模倣インテグリンリガンドｃｙｃｌｏ（ＤＫＰ－ＲＧＤ）を、Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ（ＮＰＶ）トリペプチドリンカーを介して抗がん剤パクリタキセルにコンジュゲートした。Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ（ＮＰＶ）トリペプチドリンカーは、好中球分泌エラスターゼの基質である。ｉｎ ｖｉｔｒｏリンカー切断アッセイ及び細胞抗増殖実験により、この腫瘍標的コンジュゲートの有効性が示された（Ｄｉａｓ，Ａ．Ｒ．Ｍ ｅｔ ａｌ（２０１９）Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２５：１６９６－１７００）。炎症誘発性環境及び免疫系の浸潤細胞の存在は、がんの十分に確立された特徴である（Ｈａｎａｈａｎ Ｄ．ｅｔ ａｌ（２０１１）Ｃｅｌｌ １４４：６４６－６７４）。したがって、エラスターゼ活性化可能なプロドラッグは、多種多様な腫瘍型に対して治療的に有効であり得ると思われる。
循環中の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の安定性は、多くの要因によって決定され、その１つが、循環中のエステラーゼ及びプロテアーゼによるリンカーの中途切断感受性である。実際、好中球エラスターゼなどのプロテアーゼは、臨床で評価されているいくつかのＡＤＣの薬物動態（ＰＫ）曝露及び毒性の両方において重要な役割を果たしていると推測されている（Ｆｌｙｇａｒｅ，Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ（２０１３）Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．，８１：１１３－１２１。
１０２個の非天然アミノ酸のプールを、コンビナトリアルライブラリーアプローチにおいて、ヒト好中球エラスターゼのＳ１－Ｓ４結合ポケットにテトラペプチドとして組み込み、基質の触媒切断効率を最適化した（Ｋａｓｐｅｒｋｉｅｗｉｃｚ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１１１：２５１８－２５２３）。最適な基質は、一般的に使用されるエラスターゼの基質と比較して３桁以上高い触媒効率と選択性を示し、好中球細胞外トラップ形成の過程で活性エラスターゼが特異的に存在することを明らかにした。非天然アミノ酸は、天然アミノ酸と比較して、特異性と選択性の点ではるかに優れた基質であることが示された（Ｚｅｒｖｏｕｄｉ Ｅ，ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ４３５（２）：４１１－４２０；Ｐｏｒｅｂａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．（２０１２）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ７（２）：ｅ３１９３８。
本発明の一態様は、エラスターゼ－基質ペプチドリンカーによって１つ以上の免疫刺激部分に共有結合した細胞結合剤を含むイムノコンジュゲートである。
本発明の別の態様は、細胞結合剤と結合可能な、免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物である。
本発明の別の態様は、治療有効量のイムノコンジュゲートを含む医薬組成物である。
本発明の別の態様は、治療有効量のイムノコンジュゲートをがんまたは免疫関連障害を有する患者に投与することを含む治療方法である。
本発明の別の態様は、治療におけるイムノコンジュゲートの使用である。
ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の重鎖及び軽鎖ＣＤＲを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の重鎖及び軽鎖ＣＤＲを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の重鎖及び軽鎖ＣＤＲを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の重鎖及び軽鎖ＣＤＲを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の第１（ＨＦＷ１）、第２（ＨＦＷ２）、第３（ＨＦＷ３）、及び第４（ＨＦＷ４）重鎖フレームワーク領域ポリペプチドを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の第１（ＨＦＷ１）、第２（ＨＦＷ２）、第３（ＨＦＷ３）、及び第４（ＨＦＷ４）重鎖フレームワーク領域ポリペプチドを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の第１（ＨＦＷ１）、第２（ＨＦＷ２）、第３（ＨＦＷ３）、及び第４（ＨＦＷ４）重鎖フレームワーク領域ポリペプチドを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の第１（ＨＦＷ１）、第２（ＨＦＷ２）、第３（ＨＦＷ３）、及び第４（ＨＦＷ４）重鎖フレームワーク領域ポリペプチドを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の第１（ＬＦＷ１）、第２（ＬＦＷ２）、第３（ＬＦＷ３）、及び第４（ＬＦＷ４）軽鎖フレームワーク領域ポリペプチドを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の第１（ＬＦＷ１）、第２（ＬＦＷ２）、第３（ＬＦＷ３）、及び第４（ＬＦＷ４）軽鎖フレームワーク領域ポリペプチドを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の第１（ＬＦＷ１）、第２（ＬＦＷ２）、第３（ＬＦＷ３）、及び第４（ＬＦＷ４）軽鎖フレームワーク領域ポリペプチドを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の第１（ＬＦＷ１）、第２（ＬＦＷ２）、第３（ＬＦＷ３）、及び第４（ＬＦＷ４）軽鎖フレームワーク領域ポリペプチドを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の重鎖可変領域（ＶＨ）を示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の重鎖可変領域（ＶＨ）を示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の重鎖可変領域（ＶＨ）を示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の重鎖可変領域（ＶＨ）を示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の軽鎖可変領域（ＶＬ）を示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の軽鎖可変領域（ＶＬ）を示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の軽鎖可変領域（ＶＬ）を示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＢ結合剤１～２１の重鎖及び軽鎖ＣＤＲを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＢ結合剤１～２１の重鎖及び軽鎖ＣＤＲを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＢ結合剤１～２１の第１（ＨＦＷ１）、第２（ＨＦＷ２）、第３（ＨＦＷ３）、及び第４（ＨＦＷ４）重鎖フレームワーク領域ポリペプチドを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＢ結合剤１～２１の第１（ＨＦＷ１）、第２（ＨＦＷ２）、第３（ＨＦＷ３）、及び第４（ＨＦＷ４）重鎖フレームワーク領域ポリペプチドを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＢ結合剤１～２１の第１（ＬＦＷ１）、第２（ＬＦＷ２）、第３（ＬＦＷ３）、及び第４（ＬＦＷ４）軽鎖フレームワーク領域ポリペプチドを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＢ結合剤１～２１の第１（ＬＦＷ１）、第２（ＬＦＷ２）、第３（ＬＦＷ３）、及び第４（ＬＦＷ４）軽鎖フレームワーク領域ポリペプチドを示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＢ結合剤１～２１の重鎖可変領域（ＶＨ）を示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＢ結合剤１～２１の重鎖可変領域（ＶＨ）を示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＢ結合剤１～２１の軽鎖可変領域（ＶＬ）を示す。 ＰＤ－Ｌ１タイプＢ結合剤１～２１の軽鎖可変領域（ＶＬ）を示す。 図９は、エラスターゼ切断性リンカー（Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ）イムノコンジュゲートＩＳＡＣ－１とカテプシンＢ切断性リンカー（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）イムノコンジュゲートＩＳＡＣ－２との比較による、ＲＡＷ２６４．７マウスマクロファージ細胞株及びＨＣＣ１９５４ ＨＥＲ２発現腫瘍細胞の共培養における効力のグラフを示す。ＩＳＡＣ－１は、ＲＡＷＳのみにおいて、カテプシンＢ切断性ペプチド（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）ＩＳＡＣ－２と比較して、高い効力を有している。ＩＳＡＣ－２のＶａｌ－Ｃｉｔリンカーユニットは、既知のカテプシンＢ基質である。細胞を１０：１のエフェクター対標的比で一晩培養し、炎症誘発性応答の読み出しとしてマウスＴＮＦαをＥＬＩＳＡで測定する。
これより本発明のある特定の実施形態を詳細に参照するが、それらの例は、添付の構造及び式に例証されている。本発明は、列挙される実施形態と組み合わせて記載されるが、それらは、本発明をそれらの実施形態に限定することを意図するものではないことを理解されたい。逆に、本発明は、全ての代替形、修正形、及び同等物を網羅することが意図されており、それらは、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれ得る。
当業者であれば、本発明の実施に使用することができる、本明細書に記載されるものに類似または同等である多くの方法及び材料を理解するであろう。本発明は、決して記載される方法及び材料に限定されるものではない。
定義
「イムノコンジュゲート」という用語は、リンカーを介して免疫刺激部分に共有結合している抗体コンストラクトを指す。「免疫刺激剤」及び「免疫刺激性」という用語は、同等の意味で用いられ、ｉｎ ｖｉｖｏでのリンカー切断後に、免疫刺激部分または免疫刺激化合物に曝露された対象において免疫応答を誘発することができる部分、物質またはアジュバントを指す。「アジュバント部分」または「免疫刺激部分」という用語は、本明細書に記載されるように、例えばエラスターゼ－基質ペプチドリンカーを介して、抗体コンストラクトなどの細胞結合剤に共有結合しているアジュバントを指す。アジュバント部分は、抗体コンストラクトに結合している間、または対象へのイムノコンジュゲートの投与後の抗体コンストラクトからの切断（例えば、酵素的切断）後に、免疫応答を誘発することができる。イムノコンジュゲートは、標的抗原が結合している間、活性アジュバント部分の標的化送達を可能にする。
「パターン認識受容体」（ＰＲＲ）という用語は、病原体に典型的な分子を検出し、自然免疫系の機能を調節する、生殖細胞系にコードされた宿主センサーを指す（Ｍａｈｌａ，ＲＳ ｅｔ ａｌ（２０１３）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４：２４８；Ｋｕｍａｒ，Ｈ ｅｔ ａｌ（２０１１）Ｉｎｔｌ．Ｒｅｖ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎ．３０：１６－３４；Ｓｃｈｒｏｄｅｒ Ｋ ｅｔ ａｌ（２０１０）Ｃｅｌｌ １４０（６）：８２１－８３２）。ＰＲＲは、主に樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球、上皮細胞などの自然免疫系の細胞が発現するタンパク質であり、微生物病原体に関連する病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）、及び細胞損傷または細胞死の際に放出される宿主細胞の成分に関連する損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を識別する。ＰＲＲは、免疫系の他の部分、特に適応免疫よりも以前に進化したため、原始パターン認識受容体とも呼ばれる。ＰＲＲは、抗原特異的な適応免疫応答の開始と炎症性サイトカインの放出も媒介する。ＰＲＲには、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＳＴＩＮＧ様受容体、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）、ＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）、Ｃ型レクチン様受容体（ＣＬＲ）、及びＤＮＡセンサーが含まれるが、これらに限定されない。
「アジュバント」は、アジュバントに曝露された対象において免疫応答を誘発することができる免疫刺激物質を指す。「アジュバント部分」という句は、本明細書に記載されるように、例えばリンカーを介して、抗体コンストラクトに共有結合されるアジュバントを指す。アジュバント部分は、抗体コンストラクトに結合している間、または対象へのイムノコンジュゲートの投与後の抗体コンストラクトからの切断（例えば、酵素的切断）後に、免疫応答を誘発することができる。
「Ｔｏｌｌ様受容体」及び「ＴＬＲ」という用語は、病原体関連分子パターンを認識し、自然免疫における重要なシグナル伝達要素として作用する、高度に保存された哺乳類タンパク質のファミリーの任意のメンバーを指す。ＴＬＲポリペプチドは、ロイシンリッチリピートを有する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＴＬＲシグナル伝達に関与する細胞内ドメインを含む特徴的な構造を共有している。
「Ｔｏｌｌ様受容体７」及び「ＴＬＲ７」という用語は、公開されているＴＬＲ７配列、例えば、ヒトＴＬＲ７ポリペプチドの場合はＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＺ９９０２６、またはマウスＴＬＲ７ポリペプチドの場合はＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ６２６７６に対して、少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上の配列同一性を共有する核酸またはポリペプチドを指す。
「Ｔｏｌｌ様受容体８」及び「ＴＬＲ８」という用語は、公開されているＴＬＲ７配列、例えば、ヒトＴＬＲ８ポリペプチドの場合はＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＺ９５４４１、またはマウスＴＬＲ８ポリペプチドの場合はＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ６２６７７、に対して、少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上の配列同一性を共有する核酸またはポリペプチドを指す。
「ＴＬＲアゴニスト」は、ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８）に直接的または間接的に結合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導する物質である。ＴＬＲシグナル伝達の任意の検出可能な差は、アゴニストがＴＬＲを刺激または活性化することを示し得る。シグナル伝達の差は、例えば、標的遺伝子の発現における変化、シグナル伝達成分のリン酸化における変化、核因子κＢ（ＮＦ－κＢ）などの下流要素の細胞内局在における変化、ある特定の成分（ＩＬ－１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）など）と他のタンパク質もしくは細胞内構造体との会合における変化、またはキナーゼ（マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）など）などの成分の生化学的活性における変化として、明らかにすることができる。
「細胞結合剤」は、少なくとも１つの結合部位を介して細胞に結合するポリペプチドを指す。細胞結合剤には、抗体または抗体の断片、ペプチド及びペプチド模倣物が含まれる。細胞結合剤の例には、リンホカイン、ホルモン、成長因子、栄養輸送分子、または任意の他の細胞結合分子もしくは物質も含まれる。細胞結合剤のコンジュゲートは、抗原が抗体に結合している間、作用細胞への活性部分の標的送達を可能にする。
「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子またはそのフラグメントからの抗原結合領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む）を含むポリペプチドを指す。「抗体」という用語は、具体的には、所望される生物学的活性を呈する、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体フラグメントを包含する。例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖対で構成され、各対は、ジスルフィド結合によって接続された１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖は、免疫グロブリンドメインと呼ばれる構造ドメインで構成されている。これらのドメインは、サイズ及び機能によって異なるカテゴリー、例えば、軽鎖及び重鎖上の可変ドメインまたは領域（それぞれ、ＶＬ及びＶＨ）ならびに軽鎖及び重鎖上の定常ドメインまたは領域（それぞれ、ＣＬ及びＣＨ）、に分類されている。各鎖のＮ末端は、主に抗原認識に関与する、パラトープと呼ばれる、約１００～１１０以上のアミノ酸の可変領域、すなわち、抗原結合ドメインを画定する。軽鎖は、κまたはλのいずれかに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δまたはεとして分類され、また、これらの重鎖によって、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥという免疫グロブリンクラスが定義される。ＩｇＧ抗体は、４つのペプチド鎖で構成される約１５０ｋＤａの大分子である。ＩｇＧ抗体は、約５０ｋＤａの２つの同一のクラスγ重鎖と約２５ｋＤａの２つの同一の軽鎖を含み、したがって四量体の四次構造を含む。２つの重鎖は、ジスルフィド結合によって互いにかつそれぞれ軽鎖に連結している。得られた四量体は２つの半分の同一部分を有し、これらが一緒になってＹ字形状を形成する。フォークの各端部は、同一の抗原結合ドメインを含有する。ヒトには４つのＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）があり、血清中の存在量の順に名付けられている（つまり、ＩｇＧ１が最も豊富である）。典型的には、抗体の抗原結合ドメインは、がん細胞への結合の特異性及び親和性において最も重要である。
「抗体コンストラクト」は、（ｉ）抗原結合ドメイン及び（ｉｉ）Ｆｃドメインを含む抗体または融合タンパク質を指す。
いくつかの実施形態において、結合剤は、抗原結合抗体「フラグメント」であり、これは、抗体の少なくとも抗原結合領域を、単独で、または一緒に抗原結合コンストラクトを構成する他の成分と共に含むコンストラクトである。多くの異なるタイプの抗体「フラグメント」が当技術分野で知られており、例えば、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む２価のフラグメントである、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）抗体の単群のＶＬ及びＶＨドメインで構成されたＦｖフラグメント、（ｉｖ）穏やかな還元条件を使用してＦ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を切断した結果生じるＦａｂ’フラグメント、（ｖ）ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、及び（ｖｉ）２つのドメインを単一のポリペプチド鎖として合成できるようにする合成リンカーによって結合されたＦｖフラグメントの２つのドメイン（すなわち、ＶＬ及びＶＨ）で構成された一価の分子である、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）が挙げられる。
抗体または抗体フラグメントは、より大きなコンストラクト、例えば、付加領域への抗体フラグメントのコンジュゲートまたは融合コンストラクトの一部であり得る。例えば、いくつかの実施形態において、抗体フラグメントは、本明細書に記載されるように、Ｆｃ領域に融合され得る。他の実施形態において、抗体フラグメント（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）は、例えば、膜貫通ドメイン（任意選択で介在するリンカーまたは「ストーク」（例えば、ヒンジ領域）を伴う）及び任意の細胞間シグナル伝達ドメインに融合することによって、キメラ抗原受容体またはキメラＴ細胞受容体の一部であり得る。例えば、抗体フラグメントを、Ｔ細胞受容体のガンマ鎖及び／またはデルタ鎖に融合させて、ＰＤ－Ｌ１に結合するＴ細胞受容体様コンストラクトを提供することができる。さらに別の実施形態において、抗体フラグメントは、ＣＤ１またはＣＤ３結合ドメイン及びリンカーを含む二重特異性Ｔ細胞誘導体（ＢｉＴＥ）の一部である。
「エピトープ」は、抗原結合ドメインが結合する（すなわち、抗原結合ドメインのパラトープで）抗原の任意の抗原決定基またはエピトープ決定基を意味する。抗原決定基は通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面分類からなり、通常、特定の３次元構造特性ならびに特定の電荷特性を有する。
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を指す。Ｆｃ受容体には３つの主要なクラス：（１）ＩｇＧに結合するＦｃγＲ、（２）ＩｇＡに結合するＦｃαＲ、及び（３）ＩｇＥに結合するＦｃεＲ、がある。ＦｃγＲファミリーには、ＦｃγＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）、及びＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６Ｂ）などのいくつかのメンバーが含まれる。Ｆｃγ（Ｆｃガンマ）受容体はＩｇＧに対する親和性が異なり、ＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４など）に対する親和性も異なる。
本明細書で参照される核酸またはアミノ酸配列の「同一性」は、目的の核酸またはアミノ酸配列を参照核酸またはアミノ酸配列と比較することによって決定することができる。同一性パーセントは、最適に整列された目的の配列と参照配列との間のものと同じである（すなわち、同一である）ヌクレオチドまたはアミノ酸残基の数を最長の配列の長さ（つまり、目的の配列または参照配列のいずれか長い方の長さ）で割ったものである。配列のアラインメント及び同一性パーセントの計算は、利用可能なソフトウェアプログラムを使用して実行することができる。そのようなプログラムの例としては、ＣＬＵＳＴＡＬ－Ｗ、Ｔ－Ｃｏｆｆｅｅ、及びＡＬＩＧＮ（核酸及びアミノ酸配列のアラインメント用）、ＢＬＡＳＴプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ２．１、ＢＬ２ＳＥＱ、ＢＬＡＳＴｐ、ＢＬＡＳＴｎなど）及びＦＡＳＴＡプログラム（例えば、ＦＡＳＴＡ３ｘ、ＦＡＳＴＭ、及びＳＳＥＡＲＣＨ）（配列アラインメント及び配列類似性検索用）が挙げられる。配列アラインメントアルゴリズムはまた、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３－４１０（１９９０）、Ｂｅｉｇｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０６（１０）：３７７０－３７７５（２００９）、Ｄｕｒｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ｐｒｏｂａｌｉｓｔｉｃ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ（２００９）、Ｓｏｄｉｎｇ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，２１（７）：９５１－９６０（２００５）、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５（１７）：３３８９－３４０２（１９９７）、及びＧｕｓｆｉｅｌｄ，Ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ ｏｎ Ｓｔｒｉｎｇｓ，Ｔｒｅｅｓ ａｎｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＵＫ（１９９７））に開示されている。配列の同一性パーセント（％）は、例えば、１００×［（同一位置）／最小（ＴＧＡ，ＴＧＢ）］として計算することもでき、ここで、ＴＧＡ及びＴＧＢは、ＴＧＡ及びＴＧＢを最小化するアラインメントのペプチド配列Ａ及びＢの残基数と内部ギャップ位置数の合計である。例えば、Ｒｕｓｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２４４：３３２－３５０（１９９４）を参照のこと。
結合剤は、一緒に抗原結合部位を形成するＩｇ重鎖及び軽鎖可変領域ポリペプチドを含む。重鎖及び軽鎖可変領域のそれぞれは、フレームワーク領域によって接続された３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含むポリペプチドである。結合剤は、Ｉｇ重鎖及び軽鎖を含む、当技術分野で知られているさまざまなタイプの結合剤のいずれかであり得る。例えば、結合剤は、抗体、抗原結合抗体「フラグメント」、またはＴ細胞受容体であり得る。
「バイオシミラー」は、例えば、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、及びアベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（商標）、ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ、Ｐｆｉｚｅｒ）などの以前に承認されたＰＤ－Ｌ１標的化抗体コンストラクト；トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、及びペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）などの以前に承認されたＨＥＲ２標的化抗体コンストラクト、またはラベツズマブ（ＣＥＡ－ＣＩＤＥ（商標）、ＭＮ－１４、ｈＭＮ１４、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）ＣＡＳ登録番号２１９６４９－０７－７）などのＣＥＡ標的化抗体と同様の活性特性を有する承認された抗体コンストラクトを指す。
「バイオベター」は、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラベツズマブ、またはサシツズマブなどの以前に承認された抗体コンストラクトの改良である承認された抗体コンストラクトを指す。バイオベターは、以前に承認された抗体コンストラクトに対して、１つ以上の修飾（例えば、変更されたグリカンプロファイル、または固有のエピトープ）を有することができる。
「アミノ酸」は、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質に組み込むことができる任意のモノマー単位を指す。アミノ酸には、天然に存在するα－アミノ酸及びその立体異性体、ならびに非天然型（天然に存在しない）アミノ酸及びその立体異性体が含まれる。所与のアミノ酸の「立体異性体」は、同じ分子式及び分子内結合を有するが、結合及び原子の三次元配列が異なる異性体を指す（例えば、Ｌ－アミノ酸及び対応するＤ－アミノ酸）。アミノ酸は、グリコシル化（例えば、Ｎ－結合型グリカン、Ｏ－結合型グリカン、ホスホグリカン、Ｃ－結合型グリカン、もしくはグリピエーション（ｇｌｙｐｉｃａｔｉｏｎ））または脱グリコシル化することができる。アミノ酸は、本明細書では、広く知られている３文字の記号、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨されている１文字の記号のいずれかによって表されていることがある。
天然に存在するアミノ酸は、遺伝コードによってコードされるもの、ならびにそれらのアミノ酸が後で修飾されたもの、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタメート及びＯ－ホスホセリンである。天然に存在するα－アミノ酸には、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、及びそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。天然に存在するα－アミノ酸の立体異性体としては、Ｄ－アラニン（Ｄ－Ａｌａ）、Ｄ－システイン（Ｄ－Ｃｙｓ）、Ｄ－アスパラギン酸（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－Ｇｌｕ）、Ｄ－フェニルアラニン（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｄ－ヒスチジン（Ｄ－Ｈｉｓ）、Ｄ－イソロイシン（Ｄ－Ｉｌｅ）、Ｄ－アルギニン（Ｄ－Ａｒｇ）、Ｄ－リジン（Ｄ－Ｌｙｓ）、Ｄ－ロイシン（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｄ－メチオニン（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｄ－アスパラギン（Ｄ－Ａｓｎ）、Ｄ－プロリン（Ｄ－Ｐｒｏ）、Ｄ－グルタミン（Ｄ－Ｇｌｎ）、Ｄ－セリン（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｄ－スレオニン（Ｄ－Ｔｈｒ）、Ｄ－バリン（Ｄ－Ｖａｌ）、Ｄ－トリプトファン（Ｄ－Ｔｒｐ）、Ｄ－チロシン（Ｄ－Ｔｙｒ）、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
天然に存在するアミノ酸には、シトルリン（Ｃｉｔ）などの翻訳後修飾によってタンパク質に形成されるアミノ酸が含まれる。
非天然型（天然に存在しない）アミノ酸としては、天然に存在するアミノ酸と類似して機能する、アミノ酸アナログ、アミノ酸模倣物、合成アミノ酸、Ｎ－置換グリシン、及びＬ－またはＤ－配置のいずれかのＮ－メチルアミノ酸が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、「アミノ酸アナログ」は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造（すなわち、水素に結合している炭素、カルボキシル基、アミノ基）を有するが、修飾された側鎖基または修飾されたペプチド骨格を有する非天然型アミノ酸、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、及びメチオニンメチルスルホニウムであり得る。「アミノ酸模倣体」とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様の形で機能する化学化合物を指す。
「リンカー」は、化合物または材料の２つ以上の部分を共有結合する官能基を指す。例えば、連結部分は、アジュバント部分をイムノコンジュゲート中の抗体コンストラクトに共有結合するように機能することができる。
「連結部分」は、化合物または材料の２つ以上の部分を共有結合する官能基を指す。例えば、連結部分は、アジュバント部分をイムノコンジュゲート中の抗体に共有結合するように機能することができる。連結部分をタンパク質及び他の材料に接続するための有用な結合には、アミド、アミン、エステル、カルバメート、尿素、チオエーテル、チオカルバメート、チオカーボネート、及びチオ尿素が含まれるが、これらに限定されない。
「二価」は、２つの官能基を連結するための２つの結合点を含有する化学部分を指し；多価結合部分は、さらなる官能基を連結するための追加の結合点を有することができる。二価ラジカルは、接尾辞「ジイル」で示すことができる。例えば、二価連結部分には、二価ポリ（エチレングリコール）、二価シクロアルキル、二価ヘテロシクロアルキル、二価アリール、及び二価ヘテロアリール基などの二価ポリマー部分が含まれる。「二価シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基」は、分子または材料中の２つの部分を共有結合させるための２つの結合点を有するシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基を指す。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、置換もしくは非置換であり得る。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換することができる。
波線
Figure 2023524271000001
 は、指定された化学部分の結合点を表す。指定された化学部分に、２本の波線
Figure 2023524271000002
 が存在する場合、その化学部分を両側で、つまり左から右または右から左に読み取るように使用することができることが理解される。いくつかの実施形態において、２本の波線
Figure 2023524271000003
 が存在する指定された部分は、左から右へと読み取るように使用されると考えられる。
「アルキル」は、示された炭素原子の数を有する、直鎖（線状）または分岐鎖の飽和脂肪族ラジカルを指す。アルキルには、任意の数、例えば１～１２個の炭素を含めることができる。アルキル基の例として、メチル（Ｍｅ、－ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、－ＣＨ２ＣＨ３）、１－プロピル（ｎ－Ｐｒ、ｎ－プロピル、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２－プロピル（ｉ－Ｐｒ、ｉ－プロピル、－ＣＨ（ＣＨ３）２）、１－ブチル（ｎ－Ｂｕ、ｎ－ブチル、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２－メチル－１－プロピル（ｉ－Ｂｕ、ｉ－ブチル、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２－ブチル（ｓ－Ｂｕ、ｓ－ブチル、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２－メチル－２－プロピル（ｔ－Ｂｕ、ｔ－ブチル、－Ｃ（ＣＨ３）３）、１－ペンチル（ｎ－ペンチル、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２－メチル－２－ブチル（－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３－メチル－２－ブチル（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３－メチル－１－ブチル（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２－メチル－１－ブチル（－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１－ヘキシル（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２－ヘキシル（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３－ヘキシル（－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２－メチル－２－ペンチル（－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３－メチル－２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４－メチル－２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３－メチル－３－ペンチル（－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２－メチル－３－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３－ジメチル－２－ブチル（－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３－ジメチル－２－ブチル（－ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３、１－ヘプチル、１－オクチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、置換または非置換であり得る。「置換アルキル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換することができる。
「アルキルジイル」という用語は、二価のアルキルラジカルを指す。アルキルジイル基の例として、メチレン（－ＣＨ２－）、エチレン（－ＣＨ２ＣＨ２－）、プロピレン（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）などが挙げられるが、これらに限定されない。アルキルジイル基は、「アルキレン」基と呼ばれる場合もある。
「アルケニル」は、示された炭素原子の数と少なくとも１つの炭素－炭素二重結合ｓｐ２を有する、直鎖（線状）または分岐鎖の不飽和脂肪族ラジカルを指す。アルケニルは、２～約１２個またはそれ以上の炭素原子を含み得る。アルケニル基は、「シス」及び「トランス」配向、または「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有するラジカルである。例として、エチレニルまたはビニル（－ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（－ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、ブテニル、ペンテニル、及びそれらの異性体が挙げられるが、これらに限定されない。アルケニル基は、置換または非置換であり得る。「置換アルケニル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換され得る。
「アルケニレン」または「アルケニルジイル」という用語は、直鎖または分岐鎖の二価炭化水素ラジカルを指す。例として、エチレニレンまたはビニレン（－ＣＨ＝ＣＨ－）、アリル（－ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ－）などが挙げられるが、これらに限定されない。
「アルキニル」は、示された炭素原子の数及び少なくとも１つの炭素－炭素三重結合ｓｐを有する、直鎖（線状）または分岐鎖の不飽和脂肪族ラジカルを指す。アルキニルは、２個～約１２個またはそれ以上の炭素原子を含み得る。例えば、Ｃ２－Ｃ６アルキニルには、エチニル（－Ｃ≡ＣＨ）、プロピニル（プロパルギル、－ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、及びそれらの異性体が含まれるが、これらに限定されない。アルキニル基は、置換または非置換であり得る。「置換アルキニル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換され得る。
「アルキニレン」または「アルキニルジイル」という用語は、二価のアルキニルラジカルを指す。
「炭素環」、「カルボシクリル」、「環状炭素」及び「シクロアルキル」は、３～１２個の環原子、または示された数の原子を含有する、飽和もしくは部分的不飽和、単環式、縮合二環式、または架橋多環式環集合体を指す。飽和単環式炭素環式環には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロオクチルが含まれる。飽和二環式及び多環式炭素環式環には、例えば、ノルボルナン、［２．２．２］ビシクロオクタン、デカヒドロナフタレン及びアダマンタンが含まれる。炭素環式基は部分的に不飽和であり、環中に１つ以上の二重結合または三重結合を有することもできる。部分的に不飽和である代表的な炭素環式基として、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘキサジエン（１，３－及び１，４－異性体）、シクロヘプテン、シクロヘプタジエン、シクロオクテン、シクロオクタジエン（１，３－、１，４－及び１，５－異性体）、ノルボルネン、及びノルボルナジエンが挙げられるが、これらに限定されない。
「シクロアルキルジイル」という用語は、二価のシクロアルキルラジカルを指す。
「アリール」は、親芳香環系の単一の炭素原子から１つの水素原子を除去することによって誘導される６～２０個の炭素原子（Ｃ６－Ｃ２０）の一価芳香族炭化水素ラジカルを指す。アリール基は、単環式であるか、縮合して二環式もしくは三環式基を形成するか、または結合によって連結してビアリール基を形成することができる。代表的なアリール基には、フェニル、ナフチル、及びビフェニルが含まれる。他のアリール基には、メチレン結合基を有するベンジルが含まれる。一部のアリール基、例としてフェニル、ナフタレン、またはビフェニルは、６～１２個の環員を有する。他のアリール基、例としてフェニルやナフチルは、６～１０個の環員を有する。
「アリーレン」または「アリールジイル」という用語は、親芳香環系の２つの炭素原子から２つの水素原子を除去することによって誘導される６～２０個の炭素原子（Ｃ６－Ｃ２０）の二価芳香族炭化水素ラジカルを意味する。いくつかのアリールジイル基は、例示的な構造では「Ａｒ」として表される。アリールジイルは、飽和環、部分的不飽和環、または芳香族の環状炭素に縮合した芳香族環を含む二環式ラジカルを含む。一般的なアリールジイル基として、ベンゼン（フェニルジイル）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニレン、インデニレン、インダニレン、１，２－ジヒドロナフタレン、１，２，３，４－テトラヒドロナフチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アリールジイル基は「アリーレン」とも呼ばれ、任意選択で、本明細書に記載の１つ以上の置換基で置換される。
「複素環」、「ヘテロシクリル」及び「ヘテロ環」という用語は、本明細書中では同じ意味で使用され、飽和または部分的不飽和（すなわち、環内に１つ以上の二重及び／または三重結合を有する）の３～約２０個の環原子の炭素環ラジカルを指し、その場合、少なくとも１つの環原子が、窒素、酸素、リン及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子がＣであり、１つ以上の環原子が、任意選択で、独立して、以下に記載する１つ以上の置換基で置換される。複素環は、３～７個の環員（２～６個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～４個のヘテロ原子）を有する単環、または７～１０個の環員（４～９個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～６個のヘテロ原子）を有する二環、例えば：ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系であってもよい。複素環は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ Ａ．；“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６８）、特に第１、３、４、６、７、及び９章；“Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ， Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９５０ ｔｏ ｐｒｅｓｅｎｔ）、特に第１３、１４、１６、１９、及び２８巻；ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。「ヘテロシクリル」には、複素環ラジカルが飽和環、部分的不飽和環、または芳香族の炭素環もしくはヘテロ環と融合しているラジカルも含まれる。ヘテロ環の例として、モルホリン－４－イル、ピペリジン－１－イル、ピペラジニル、ピペラジン－４－イル－２－オン、ピペラジン－４－イル－３－オン、ピロリジン－１－イル、チオモルホリン－４－イル、Ｓ－ジオキソチオモルホリン－４－イル、アゾカン－１－イル、アゼチジン－１－イル、オクタヒドロピリド［１，２－ａ］ピラジン－２－イル、［１，４］ジアゼパン－１－イル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２－ピロリニル、３－ピロリニル、インドリニル、２Ｈ－ピラニル、４Ｈ－ピラニル、ジオキサニル、１，３－ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニルイミダゾリニル、イミダゾリジニル、３－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３－アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、アザビシクロ［２．２．２］ヘキサニル、３Ｈ－インドリルキノリジニル及びＮ－ピリジル尿素が挙げられるが、これらに限定されない。スピロヘテロシクリル部分もまた、この定義の範囲に含まれる。スピロヘテロシクリル部分の例として、アザスピロ［２．５］オクタニル及びアザスピロ［２．４］ヘプタニルが挙げられる。２つの環原子がオキソ（＝Ｏ）部分で置換されている複素環基の例は、ピリミジノニル及び１，１－ジオキソ－チオモルホリニルである。本明細書の複素環基は、任意選択で、独立して、本明細書に記載の１つ以上の置換基で置換される。
「ヘテロシクリルジイル」という用語は、３～約２０個の環原子の二価、飽和または部分的不飽和（すなわち、環内に１つ以上の二重結合及び／または三重結合を有する）炭素環ラジカルを指し、その場合、少なくとも１つの環原子が、窒素、酸素、リン及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子がＣであり、１つ以上の環原子は、記載するように、任意選択で、独立して１つ以上の置換基で置換される。５員及び６員のヘテロシクリルジイルの例として、モルホリニルジイル、ピペリジニルジイル、ピペラジニルジイル、ピロリジニルジイル、ジオキサニルジイル、チオモルホリニルジイル、及びＳ－ジオキソチオモルホリニルジイルが挙げられる。
「ヘテロアリール」という用語は、５、６、または７員環の一価芳香族ラジカルを指し、独立して、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１つ以上のヘテロ原子を含む５～２０原子の縮合環系（それらの少なくとも１つは芳香族である）を含む。ヘテロアリール基の例は、ピリジニル（例えば、２－ヒドロキシピリジニルを含む）、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピリミジニル（例えば、４－ヒドロキシピリミジニルを含む）、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、及びフロピリジニルである。ヘテロアリール基は、任意選択で、独立して、本明細書に記載の１つ以上の置換基で置換される。
「ヘテロアリールジイル」という用語は、５、６、または７員環の二価芳香族ラジカルを指し、独立して、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１つ以上のヘテロ原子を含む５～２０原子の縮合環系（それらの少なくとも１つは芳香族である）を含む。５員及び６員のヘテロアリールジイルの例として、ピリジルジイル、イミダゾリルジイル、ピリミジニルジイル、ピラゾリルジイル、トリアゾリルジイル、ピラジニルジイル、テトラゾリルジイル、フリルジイル、チエニルジイル、イソキサゾリルジイルジイル、チアゾリルジイル、オキサジアゾリルジイル、オキサゾリルジイル、イソチアゾリルジイル、及びピロリルジイルが挙げられる。
複素環またはヘテロアリール基は、可能であれば、炭素（炭素結合）または窒素（窒素結合）で結合され得る。例として、限定されないが、炭素で結合された複素環またはヘテロアリールは、ピリジンの２、３、４、５、または６位、ピリダジンの３、４、５、または６位、ピリミジンの２、４、５、または６位、ピラジンの２、３、５、または６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロールまたはテトラヒドロピロールの２、３、４、または５位、オキサゾール、イミダゾールまたはチアゾールの２、４、または５位、イソキサゾール、ピラゾール、またはイソチアゾールの３、４、または５位、アジリジンの２または３位、アゼチジンの２、３、または４位、キノリンの２、３、４、５、６、７、または８位、あるいはイソキノリンの１、３、４、５、６、７、または８位で結合する。
例として、限定されないが、窒素で結合された複素環またはヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２－ピロリン、３－ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２－イミダゾリン、３－イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２－ピラゾリン、３－ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ－インダゾールの１位、イソインドール、またはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾール、またはβ－カルボリンの９位で結合する。
「ハロ」及び「ハロゲン」という用語は、それ自体で、または別の置換基の一部として、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子を指す。
「カルボニル」という用語は、それ自体で、または別の置換基の一部として、Ｃ（＝Ｏ）また－Ｃ（＝Ｏ）－を指し、すなわち、炭素原子は酸素に二重結合し、カルボニルを有する部分の他の２つの基に結合する。
本明細書で使用される場合、「第四級アンモニウム塩」という句は、アルキル置換基（例えば、メチル、エチル、プロピル、またはブチルなどのＣ１～Ｃ４アルキル）で四級化された第三級アミンを指す。
「治療する」、「治療」、及び「治療すること」という用語は、軽減；寛解；症状の軽減、または症状、傷害、病状、もしくは状態を患者にとってより耐えられるものにすること；症状の進行速度の低下；症状もしくは状態の頻度または期間を低減すること；あるいは、状況によっては、症状の発症を予防することなどの、任意の客観的または主観的パラメータを含む、傷害、病状、状態（例えば、がん）、または症状（例えば、認知障害）の治療または改善における成功の兆候を指す。症状の治療または改善は、例えば、身体検査の結果を含む、任意の客観的または主観的パラメータに基づくことができる。
「がん」、「新生物」、及び「腫瘍」という用語は、本明細書では、細胞が細胞増殖に勝る制御の有意な喪失を特徴とする異常な成長表現型を示すような、自律的な、未制御の成長を示す細胞を指すために使用される。本発明の文脈における検出、分析、及び／または治療の対象となる細胞としては、がん細胞（例えば、がんを有する個体からのがん細胞）、悪性がん細胞、前転移性がん細胞、転移性がん細胞、及び非転移がん細胞が挙げられる。実質的にすべての組織のがんは、既知である。「がん負荷量」という句は、対象中のがん細胞量またはがん体積を指す。したがって、がん負荷量を減少させることは、対象中のがん細胞数またはがん細胞体積を減少させることを指す。本明細書で使用される「がん細胞」という用語は、がん細胞である（例えば、個体を治療することができる任意のがんに由来するもの、例えば、がんを有する個体から単離されたもの）か、またはがん細胞に由来するもの、例えば、がん細胞のクローンである、任意の細胞を指す。例えば、がん細胞は、確立されたがん細胞株に由来することができ、がんを有する個体から単離された初代細胞であり得、がんを有する個体から単離された初代細胞からの子孫細胞等であり得る。いくつかの実施形態において、この用語はまた、細胞内部分、細胞膜部分、またはがん細胞の細胞溶解物などのがん細胞の一部を指すことができる。多くのタイプのがんは、当業者に知られており、細胞腫、肉腫、膠芽腫、メラノーマ、リンパ腫、及び骨髄腫などの固形腫瘍、ならびに白血病などの循環癌を含む。
本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、固形腫瘍癌（例えば、皮膚、肺、前立腺、乳房、胃、膀胱、結腸、卵巣、膵臓、腎臓、肝臓、神経膠芽腫、髄芽腫、平滑筋肉腫、頭頸部扁平上皮癌、黒色腫、及び神経内分泌）及び液体のがん（例、血液癌）；癌腫；軟部組織腫瘍；肉腫；奇形腫；黒色腫；白血病；リンパ腫；及び脳癌、例えば、微小残存病変、例として、原発性腫瘍及び転移性腫瘍の両方を含むがこれらに限定されない、任意の形態のがんを含む。
「ＰＤ－Ｌ１発現」は、細胞の表面上にＰＤ－Ｌ１受容体を有する細胞を指す。本明細書で使用される場合、「ＰＤ－Ｌ１過剰発現」は、対応する非がん細胞と比較してより多くのＰＤ－Ｌ１受容体を有する細胞を指す。
「ＨＥＲ２」は、タンパク質ヒト上皮成長因子受容体２を指す。
「ＨＥＲ２発現」は、細胞の表面上にＨＥＲ２受容体を有する細胞を指す。例えば、細胞は、細胞の表面上に約２０，０００～約５０，０００のＨＥＲ２受容体を有し得る。本明細書で使用される場合、「ＨＥＲ２過剰発現」は、約５０，０００を超えるＨＥＲ２受容体を有する細胞を指す。例えば、細胞は、対応する非がん細胞と比較して、ＨＥＲ２受容体の数が２、５、１０、１００、１，０００、１０，０００、１００，０００、または１，０００，０００倍である（例えば、約１００万または２００万のＨＥＲ２受容体）。ＨＥＲ２は乳癌の約２５％～約３０％で過剰発現していると推定されている。
がんの「病理」には、患者の健康状態を損なう全ての現象が含まれる。これには、異常または制御不能な細胞成長、転移、隣接細胞の正常な機能への干渉、異常なレベルでのサイトカインまたは他の分泌産物の放出、炎症性または免疫応答の抑制または悪化、新生物、前悪性腫瘍、悪性腫瘍、及びリンパ節などの周囲または遠隔の組織または臓器への浸潤が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「がん再発」及び「腫瘍再発」という句、ならびにそれらの文法的変形は、がんの診断後の腫瘍性またはがん性細胞のさらなる成長を指す。特に、がん性組織においてさらなるがん性細胞成長が起こると、再発が起こり得る。同様に、「腫瘍の広がり」は、腫瘍の細胞が局所または遠隔の組織や臓器に広がるときに発生し、したがって、腫瘍の広がりは腫瘍の転移を包含する。「腫瘍浸潤」は、腫瘍成長が局所的に広がり、正常な臓器機能の圧迫、破壊、または抑制によって関与する組織の機能を損なうときに発生する。
本明細書で使用される場合、「転移」という用語は、元のがん性腫瘍の器官に直接接続されていない、器官または身体部分におけるがん性腫瘍の成長を指す。転移は、元のがん性腫瘍の器官に直接接続されていない器官または身体部分における検出不可能な量のがん性細胞の存在である微小転移を含むと理解されるであろう。転移はまた、元の腫瘍部位からのがん細胞の離脱、及び体の他の部分へのがん細胞の移動及び／または浸潤などのプロセスのいくつかのステップとして定義することができる。
「有効量」及び「治療有効量」という句は、それが投与される治療効果を生み出すイムノコンジュゲートなどの物質の用量または量を指す。正確な用量は、治療の目的に依存し、また既知の技術を使用して当業者によって確認可能であろう（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１－３，１９９２）；Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）；Ｐｉｃｋａｒ， Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）；Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１１ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，２００６）；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，２０１２）を参照のこと）。がんの場合、治療有効量のイムノコンジュゲートは、がん細胞の数を低下、腫瘍サイズを低下、末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害（すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止）、腫瘍転移を阻害（すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止）、腫瘍成長をある程度阻害、及び／またはがんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。イムノコンジュゲートが、既存のがん細胞の成長を予防及び／またはそれらを殺滅し得る程度に、このイムノコンジュゲートは、細胞増殖抑制性及び／または細胞毒性であり得る。がん療法に関して、有効性は、例えば、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）の評価及び／または奏効率（ＲＲ）の決定によって、測定することができる。
「レシピエント」、「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」は互換的に使用され、診断、治療、または療法が望まれる任意の哺乳動物対象（例えば、ヒト）を指す。治療目的のための「哺乳動物」は、ヒト、飼育動物及び家畜、ならびに動物園、競技用、または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ラクダ等を含む哺乳動物に分類される任意の動物を指す。ある特定の実施形態において、哺乳動物はヒトである。
本発明の文脈における「相乗的アジュバント」または「相乗的組み合わせ」という句は、受容体アゴニスト、サイトカイン、及びアジュバントポリペプチドなどの２つの免疫モジュレーターの組み合わせを含み、これらは、いずれかの単独投与と比較して、組み合わせて、免疫に対する相乗効果を誘発する。特に、本明細書に開示されるイムノコンジュゲートは、特許請求されたアジュバント及び抗体コンストラクトの相乗的組み合わせを含む。投与時のこれらの相乗的組み合わせは、例えば、抗体コンストラクトまたはアジュバントが他の部分の非存在下で投与される場合と比較して、免疫に対してより大きな効果を誘発する。さらに、抗体コンストラクトまたはアジュバントのいずれかが単独で投与される場合と比較して、（抗体コンストラクトの総数またはイムノコンジュゲートの一部として投与されるアジュバントの総数によって測定される）イムノコンジュゲートの量を減らして投与することができる。
本明細書で使用される場合、「投与する」という用語は、非経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、病巣内、鼻腔内、または皮下投与、経口投与、坐剤としての投与、局所接触、髄腔内投与、または例えば、小型浸透圧ポンプなどの緩徐放出デバイスの対象への移植を指す。
本明細書で数値を修正するために使用される「約」及び「およそ」という用語は、数値を取り巻く接近範囲を示す。したがって、「Ｘ」が値である場合、「約Ｘ」または「およそＸ」は、０．９Ｘ～１．１Ｘの値、例えば０．９５Ｘ～１．０５Ｘまたは０．９９Ｘ～１．０１Ｘの値を示す。「約Ｘ」または「およそＸ」への言及は、少なくとも値Ｘ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘ、及び１．０５Ｘを具体的に示す。したがって、「約Ｘ」及び「およそＸ」は、例えば「０．９８Ｘ」のクレーム限定についての書面による説明の支持を教示及び提供することを意図している。
抗体
本発明のイムノコンジュゲートは抗体を含む。本発明の実施形態の範囲に含まれるのは、本明細書に記載の抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインの機能的バリアントである。本明細書で使用される「機能的バリアント」という用語は、親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインと実質的または有意な配列同一性または類似性を有する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトを指し、この機能的バリアントは、それがバリアントである抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインの生物学的活性を保持する。機能的バリアントは、例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＨＥＲ２、またはＣＥＡを、親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインと同様の程度、同程度、またはより高い程度に発現する標的細胞を認識する能力を保持する、本明細書に記載の抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメイン（親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメイン）のバリアントを包含する。
抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインに関して、機能的バリアントは、例えば、少なくとも約３０％、約５０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれ以上、アミノ酸配列が抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインと同一であり得る。
機能的バリアントは、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含むことができる。代替的または追加的に、機能的バリアントは、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換が機能的バリアントの生物学的活性を妨害または阻害しないことが好ましい。非保存的アミノ酸置換は、機能的バリアントの生物学的活性を増強することができ、その結果、機能的バリアントの生物学的活性は、親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインと比較して増加する。
本発明のイムノコンジュゲートを含む抗体には、Ｆｃ操作バリアントが含まれる。いくつかの実施形態において、１つ以上のＦｃ受容体への結合調節をもたらすＦｃ領域における変異は、以下の変異：ＳＤ（Ｓ２３９Ｄ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＥ（Ｓ２６７Ｅ）、ＳＥＬＦ（Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＤＩＥＡＬ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ）、ＧＡ（Ｇ２３６Ａ）、ＡＬＩＥ（Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、ＧＡＳＤＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、Ｖ９（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）、及びＶ１１（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）のうちの１つ以上、及び／または、以下のアミノ酸：Ｅ３４５Ｒ、Ｅ２３３、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｈ２６８、Ｐ２７１、Ｌ３２８及びＡ３３０における１つ以上の変異、を含み得る。Ｆｃ受容体結合を調節するための追加のＦｃ領域修飾は、例えば、ＵＳ２０１６／０１４５３５０、ＵＳ７４１６７２６、及びＵＳ５６２４８２１に記載されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本発明のイムノコンジュゲートを含む抗体には、アフコシル化などのグリカンバリアントが含まれる。いくつかの実施形態において、結合剤のＦｃ領域は、ネイティブ非修飾Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃ領域のグリコシル化パターンの変更を有するように修飾される。
本発明の抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインのアミノ酸置換は、好ましくは保存的アミノ酸置換である。保存的アミノ酸置換は当技術分野で知られており、ある特定の物理的及び／または化学的特性を有する１つのアミノ酸が、同じまたは類似の化学的または物理的特性を有する別のアミノ酸と交換されるアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、酸性／負に帯電した極性アミノ酸を別の酸性／負に帯電した極性アミノ酸（例えば、ＡｓｐまたはＧｌｕ）で置換すること、非極性側鎖を有するアミノ酸を別の非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｖａｌなど）で置換すること、塩基性／正に帯電した極性アミノ酸を別の塩基性／正に帯電した極性アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇなど）で置換すること、極性側鎖を有する非荷電アミノ酸を別の極性側鎖を有する非荷電アミノ酸（例えば、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）で置換すること、ベータ分岐側鎖を有するアミノ酸を別のベータ分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、及びＶａｌ）で置換すること、芳香族側鎖を有するアミノ酸を別の芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、及びＴｙｒ）で置換することなどであり得る。
抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、他の成分、例えば他のアミノ酸が抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメイン機能的バリアントの生物学的活性を実質的に変化させないように、本明細書に記載の特定のアミノ酸配列または複数の配列から本質的になり得る。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲート中の抗体は、改変されたＦｃ領域を含み、改変は、１つ以上のＦｃ受容体へのＦｃ領域の結合を調節する。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲート中の抗体（例えば、少なくとも２つのアジュバント部分に複合体化した抗体）は、Ｆｃ領域内に１つ以上の改変（例えば、アミノ酸挿入、欠失、及び／または置換）を含み、これにより、Ｆｃ領域に変異を有さない天然抗体と比較して、１つ以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、及び／またはＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ））への結合が調節される（例えば、結合が増加または減少する）。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲート中の抗体は、ＦｃγＲＩＩＢへの抗体のＦｃ領域の結合を減少させるＦｃ領域内の１つ以上の改変（例えば、アミノ酸挿入、欠失、及び／または置換）を含む。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲート中の抗体は、Ｆｃ領域に変異を有さない天然抗体と比較して、ＦｃγＲＩＩＢへの抗体の結合を減少させる一方で、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、及び／またはＦｃＲγＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）に対して、同じ結合を維持するか、または結合を増加させる抗体のＦｃ領域内の１つ以上の改変（例えば、アミノ酸挿入、欠失、及び／または置換）を含む。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲート中の抗体は、ＦｃγＲＩＩＢへの抗体のＦｃ領域の結合を増加させるＦｃ領域内の１つ以上の改変を含む。
いくつかの実施形態では、調節された結合は、抗体の天然のＦｃ領域と比較した抗体のＦｃ領域における変異によって提供される。変異は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそれらの組み合わせに存在させることができる。「天然Ｆｃ領域」は、「野生型Ｆｃ領域」と同義であり、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるか、または天然抗体（例えば、セツキシマブ）に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびにそれらの天然のバリアントが含まれる。天然配列Ｆｃには、Ｆｃｓの様々なアロタイプが含まれる（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，（２００９）ｍＡｂｓ，１（４）：３３２－３３８）。
いくつかの実施形態では、１つ以上のＦｃ受容体への結合を調節するＦｃ領域内の変異には、以下の変異のうちの１つ以上が含まれ得る：ＳＤ（Ｓ２３９Ｄ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＥ（Ｓ２６７Ｅ）、ＳＥＬＦ（Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＤＩＥＡＬ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ）、ＧＡ（Ｇ２３６Ａ）、ＡＬＩＥ（Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、ＧＡＳＤＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、Ｖ９（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）、及びＶ１１（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）、及び／または以下のアミノ酸での１つ以上の変異：Ｅ２３３、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｈ２６８、Ｐ２７１、Ｌ３２８及びＡ３３０。Ｆｃ受容体結合を調節するための追加のＦｃ領域改変は、例えば、ＵＳ２０１６／０１４５３５０及びＵＳ７４１６７２６及びＵＳ５６２４８２１に記載されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートの抗体のＦｃ領域を、天然の未改変Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃ領域のグリコシル化パターンを変化させるように改変する。
ヒト免疫グロブリンは、各重鎖のＣγ２ドメインのＡｓｎ２９７残基でグリコシル化されている。このＮ－結合型オリゴ糖は、コアの七糖であるＮ－アセチルグルコサミン４マンノース３（ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３）からなる。エンドグリコシダーゼまたはＰＮＧａｓｅＦによる七糖の除去は、抗体Ｆｃ領域のコンフォメーション変化を引き起こすことが知られており、活性化ＦｃγＲに対する抗体結合親和性を有意に低下させ、エフェクター機能を低下させ得る。コア七糖は、多くの場合、ガラクトース、二分岐ＧｌｃＮＡｃ、フコース、またはシアル酸で修飾されており、活性化及び阻害性ＦｃγＲへのＦｃ結合に差次的影響を与える。さらに、α２，６－シアル化はｉｎ ｖｉｖｏで抗炎症活性を増強し、一方、脱フコシル化はＦｃγＲＩＩＩａ結合の向上ならびに抗体依存性細胞傷害及び抗体依存性食作用の１０倍の増加をもたらすことが示されている。したがって、特定のグリコシル化パターンを使用して、炎症性エフェクター機能を制御することができる。
いくつかの実施形態では、グリコシル化パターンを変化させるための改変は、変異である。例えば、Ａｓｎ２９７での置換である。いくつかの実施形態では、Ａｓｎ２９７を、グルタミンに変異させる（Ｎ２９７Ｑ）。ＦｃγＲ調節性シグナル伝達を調節する抗体を用いて免疫応答を制御する方法は、例えば、ＵＳ７４１６７２６、ＵＳ２００７／００１４７９５、及びＵＳ２００８／０２８６８１９に記載されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートの抗体を、非天然のグリコシル化パターンを有する改変されたＦａｂ領域を含むように改変する。例えば、ハイブリドーマを遺伝子改変して、ＦｃＲγＩＩＩａ結合及びエフェクター機能を増加させ得る特定の変異を有する脱フコシル化ｍＡｂ、脱シアル化ｍＡｂまたは脱グリコシル化Ｆｃを分泌させることができる。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートの抗体を、脱フコシル化されるように改変する。
いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトは、Ｆｃドメインをさらに含む。特定の実施形態では、抗体コンストラクトは抗体である。特定の実施形態では、抗体コンストラクトは融合タンパク質である。抗原結合ドメインは、単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）であり得る。合成ペプチドを介して抗体軽鎖のＶドメインに連結された抗体重鎖の可変（Ｖ）ドメインを含む、短縮型Ｆａｂフラグメントである単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）は、日常的な組換えＤＮＡ技術を使用して生成することができる。同様に、組換えＤＮＡ技術によって、ジスルフィド安定化可変領域フラグメント（ｄｓＦｖ）を調製することができる。抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＨＥＲ２抗体、または抗ＣＥＡ抗体の抗原結合ドメインの１つ以上の可変領域（例えば、２つの可変領域）を含み得、各可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲート中の抗体は、改変されたＦｃ領域を含み、改変は、１つ以上のＦｃ受容体へのＦｃ領域の結合を調節する。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲート中の抗体の全Ｆｃ領域を、異なるＦｃ領域と交換し、その結果、抗体のＦａｂ領域を、非天然のＦｃ領域に結合させる。例えば、通常はＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含むセツキシマブのＦａｂ領域を、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＩｇＡに結合させることができ、あるいは、通常はＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含むニボルマブのＦａｂ領域をＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１、またはＩｇＧ２に結合させることができる。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ改変抗体はまた、記載されるＦｃドメインの安定性を調節する、ＩｇＧ４ Ｆｃ内のＳ２２８Ｐ変異などの１つ以上のアミノ酸改変を含む。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ改変抗体はまた、ＦｃＲへのＦｃ結合を調節する、本明細書に記載の１つ以上のアミノ酸改変を含む。
いくつかの実施形態では、ＦｃＲへのＦｃ領域の結合を調節する改変は、天然の未改変抗体と比較した場合、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合を変化させない。他の実施形態では、ＦｃＲへのＦｃ領域の結合を調節する改変は、天然の未改変抗体と比較した場合、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合も増加させる。
例示的な実施形態において、本発明のイムノコンジュゲートは、ＰＤ－Ｌ１を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。
例示的な実施形態において、本発明のイムノコンジュゲートは、ＰＤ－Ｌ１を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。
プログラム死－リガンド１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ Ｄｅａｔｈ－Ｌｉｇａｎｄ １）（ＰＤ－Ｌ１、分化クラスター２７４、ＣＤ２７４、Ｂ７ホモログ１、またはＢ７－Ｈ１）は、Ｂ７タンパク質スーパーファミリーに属し、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１、ＰＤＣＤ１、分化クラスター２７９、またはＣＤ２７９）のリガンドである。ＰＤ－Ｌ１は、Ｂ７．１（ＣＤ８０）とも相互作用する可能性があり、そのような相互作用はＴ細胞のプライミングを阻害すると考えられている。ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１軸は、適応免疫応答の抑制に大きな役割を果たす。より具体的には、ＰＤ－Ｌ１とその受容体であるＰＤ－１との結合により、Ｔ細胞の活性化と増殖を阻害するシグナルが伝達されると考えられている。ＰＤ－Ｌ１に結合し、リガンドがＰＤ－１受容体に結合するのを防止する薬剤は、この免疫抑制を防止し、したがって、がんまたは感染症の治療の場合などの、所望の場合に免疫応答を高めることができる。ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１経路は、自己免疫の防止にも寄与するため、ＰＤ－Ｌ１に対するアゴニスト剤、または免疫抑制性ペイロードを送達する薬剤が自己免疫疾患の治療に役立つ場合がある。
アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標））、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（商標））、及びアベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（商標））を含む、ＰＤ－Ｌ１を標的とするいくつかの抗体が、がんの治療用に開発されている。それにもかかわらず、ＰＤ－Ｌ１に高い親和性で結合し、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１シグナル伝達を効果的に防止する薬剤、及びＰＤ－Ｌ１発現細胞に治療用ペイロードを送達できる薬剤など、新しいＰＤ－Ｌ１結合剤が引き続き必要とされている。さらに、自己免疫疾患及び感染症を治療するための新しいＰＤ－Ｌ１結合剤が必要である。
１つ以上のアミノベンズアゼピン部分に共有結合しているリンカーに共有結合した抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含むイムノコンジュゲートを、細胞または細胞を含む哺乳動物に投与することを含む、ＰＤ－Ｌ１を発現する細胞にアミノベンズアゼピン誘導体ペイロードを送達する方法が提供される。
哺乳動物の免疫応答を増強または低減または阻害するための方法、ならびにＰＤ－Ｌ１阻害に応答する哺乳動物における疾患、障害、または状態を治療するための方法であって、そのＰＤ－Ｌ１イムノコンジュゲートを哺乳動物に投与することを含む、方法もまた提供する。
本発明は、免疫グロブリン重鎖可変領域ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖可変領域ポリペプチドを含むＰＤ－Ｌ１結合剤を提供する。
ＰＤ－Ｌ１結合剤はＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する。薬剤の結合特異性により、ＰＤ－Ｌ１発現細胞を標的にして、例えば、そのような細胞に治療用ペイロードを送達することができる。
いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤（タイプＡまたはタイプＢ）は、ヒトＰＤ－Ｌ１、例えば、配列番号３０７を含むタンパク質に結合する。ただし、任意のＰＤ－Ｌ１ホモログまたはパラログに結合する結合剤も含まれる。いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはそれ以上の、配列番号３０７に対する配列同一性を含む。いくつかの実施形態において、結合剤は、ヒトＰＤ－Ｌ１及びカニクイザルＰＤ－Ｌ１；またはヒト、カニクイザル、及びマウスＰＤ－Ｌ１に結合する。
ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲＴＨＬＶＩＬＧＡＩＬＬＣＬＧＶＡＬＴＦＩＦＲＬＲＫＧＲＭＭＤＶＫＫＣＧＩＱＤＴＮＳＫＫＱＳＤＴＨＬＥＥＴ 配列番号３０７
いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤は、ＰＤ－Ｌ１がその受容体であるＰＤ－１に結合することを実質的に阻害または防止することなく、ＰＤ－Ｌ１に結合する。しかし、他の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤は、ＰＤ－Ｌ１が、その受容体であるＰＤ－１に結合することを完全にまたは部分的に遮断（阻害または防止）することができ、したがって、抗体を使用してＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１シグナル伝達を阻害することができる（例えば、治療目的で）。
抗体または抗原結合抗体フラグメントは、ＰＤ－Ｌ１に対して単一特異的であってもよく、または二重特異的もしくは多重特異的であってもよい。例えば、二価もしくは多価抗体または抗体フラグメントにおいて、結合ドメインは、同じ抗原の異なるエピトープを標的とするか、または異なる抗原を標的とするように、異なっている可能性がある。多価結合コンストラクトを構築する方法は当技術分野で知られている。二重特異性及び多重特異性抗体は当技術分野で知られている。さらに、同じポリペプチド鎖上のＶＨとＶＬの間のペアリングを可能にするには短すぎるペプチドリンカーによってＶＬに接続されたＶＨをそれぞれ含み、それにより、異なるＶＨ－ＶＬポリペプチド鎖上の相補的ドメイン間のペアリングを駆動して、２つ、３つ、または４つの機能的な抗原結合部位を有する多量体分子を生成する、ポリペプチド鎖の二量体、三量体、または四量体である、ダイアボディ、トリアボディ、またはテトラボディを提供することができる。また、２つの異なる可変ドメインを有する小型ｓｃＦｖフラグメントであるｂｉｓ－ｓｃＦｖフラグメントを生成して、２つの異なるエピトープに結合できる二重特異性ｂｉｓ－ｓｃＦｖフラグメントを生成することができる。Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）及びＦａｂ三量体（Ｆａｂ３）は、遺伝子工学的方法を使用して生成し、Ｆａｂフラグメントに基づいて多重特異性コンストラクトを作出することができる。
ＰＤ－Ｌ１結合剤はまた、抗体コンジュゲートであり得る。この点で、ＰＤ－Ｌ１結合剤は、（１）抗体、代替足場、またはそのフラグメント、及び（２）タンパク質もしくは非タンパク質部分のコンジュゲートであり得る。例えば、ＰＤ－Ｌ１結合剤は、ペプチド、蛍光分子、化学療法剤または他の細胞毒性ペイロード、免疫活性化剤または免疫抑制剤にコンジュゲートさせることができる。
ＰＤ－Ｌ１結合剤は、ヒト抗体、非ヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体、または対応する抗体フラグメントであり得るか、またはそれらから得ることができる。「キメラ」抗体は、典型的にはヒト定常領域及び非ヒト可変領域を含む抗体またはそのフラグメントである。「ヒト化」抗体は、典型的にはヒト抗体足場を含むが、少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５、または６つすべてのＣＤＲ）に非ヒト起源のアミノ酸または配列を有するモノクローナル抗体である。
ＰＤ－Ｌ１結合剤－タイプＡ
本明細書では、免疫グロブリン重鎖可変領域ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖可変領域ポリペプチドを含むＰＤ－Ｌ１結合剤を提供する。いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤（タイプＡ）は、配列番号２２３～２６４のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；及び配列番号２６５～３０６のいずれか１つの免疫グロブリン軽鎖可変領域または少なくともそのＣＤＲ、を含む。他の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤（タイプＡ）は、配列番号２２３～２６４のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域ポリペプチド、及び配列番号２６５～３０６のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域ポリペプチドを含む。さらに他の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤（タイプＡ）、免疫グロブリン重鎖可変領域ポリペプチドは、配列番号１～２３のいずれか１つを含む相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２４～５７のいずれか１つを含む相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号５８～９５のいずれか１つを含む相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、を含み；及び／または免疫グロブリン軽鎖可変領域ポリペプチドは、配列番号９６～１２８のいずれか１つを含む相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１２９～１５１のいずれか１つを含む相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号１５２～１５５のいずれか１つを含む相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）、を含む。ＰＤ－Ｌ１結合剤をコードする核酸、またはその個々の重鎖及び軽鎖；核酸を含むベクター及び細胞；結合剤または核酸を含む組成物、も提供される。
さらに、いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＰＤ－Ｌ１結合剤（タイプＡ）は、細胞表面上のＰＤ－Ｌ１に結合すると、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ１結合剤複合体の細胞内在化を引き起こす。特定の理論または作用機序に拘束されることを望まないが、この実施形態によるＰＤ－Ｌ１結合剤は、結合時にＰＤ－Ｌ１内在化を引き起こし、内在化中にＰＤ－Ｌ１に結合したままであり、ＰＤ－Ｌ１とともに結合剤の内在化をもたらすと考えられる。ＰＤ－Ｌ１及び結合ＰＤ－Ｌ１結合剤の細胞内在化は、細胞表面上での持続性のアッセイ及び／または内在化抗体の検出など、任意の好適な方法で判定することができる。いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤は、細胞表面上でＰＤ－Ｌ１に結合するＰＤ－Ｌ１結合剤の少なくとも約２５％（例えば、少なくとも約３５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、または少なくとも約９０％）が内在化される程度に十分に強く内在化する（例えば、表面持続性アッセイを使用して、アッセイ開始時に細胞表面上のＰＤ－Ｌ１に結合したＰＤ－Ｌ１結合剤分子の約７５％以下、約６５％以下、約５０％以下、約７５％以下、または約１０％以下が、アッセイの終了時に結合したままである）。
一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤（タイプＡ）は、配列番号２２３～２６４のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖可変領域、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号２２３～２６４と同一である配列、または少なくともそのＣＤＲ；及び／または配列番号２６５～３０６のいずれか１つの免疫グロブリン軽鎖可変領域、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号２６５～３０６と同一である配列または少なくともそのＣＤＲを含む。
さらなる例示として、ＰＤ－Ｌ１結合剤（タイプＡ）は以下を含むことができる：
（１）配列番号２２３の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２６５の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（２）配列番号２２４の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２６６の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（３）配列番号２２５の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２６７の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（４）配列番号２２６の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２６８の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（５）配列番号２２７の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２６９の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（６）配列番号２２８の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２７０の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（７）配列番号２２９の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２７１の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（８）配列番号２３０の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２７２の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；２
（９）配列番号２３１の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２７３の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１０）配列番号２３２の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２７４の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１１）配列番号２３３の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２７５の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１２）配列番号２３４の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２７６の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１３）配列番号２３５の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２７７の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１４）配列番号２３６の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２７８の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１５）配列番号２３７の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２７９の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１６）配列番号２３８の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２８０の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１７）配列番号２３９の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２８１の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１８）配列番号２４０の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２８２の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１９）配列番号２４１の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２８３の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（２０）配列番号２４２の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２８４の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（２１）配列番号２４３の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２８５の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（２２）配列番号２４４の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２８６の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（２３）配列番号２４５の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２８７の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（２４）配列番号２４６の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２８８の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（２５）配列番号２４７の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２８９の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（２６）配列番号２４８の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２９０の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（２７）配列番号２４９の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２９１の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（２８）配列番号２５０の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２９２の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（２９）配列番号２５１の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２９３の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（３０）配列番号２５２の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２９４の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（３１）配列番号２５３の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２９５の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（３２）配列番号２５４の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２９６の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（３３）配列番号２５５の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２９７の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（３４）配列番号２５６の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２９８の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（３５）配列番号２５７の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号２９９の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（３６）配列番号２５８の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号３００の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（３７）配列番号２５９の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号３０１の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（３８）配列番号２６０の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号３０２の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（３９）配列番号２６１の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号３０３の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（４０）配列番号２６２の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号３０４の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（４１）配列番号２６３の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号３０５の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（４２）配列番号１６４の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号３０６の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；及び／または
（４３）図４Ａ～Ｄの免疫グロブリン重鎖可変領域及び／または図４Ｅ～Ｇの免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ。
所与の重鎖または軽鎖Ｉｇ配列のＣＤＲは、種々の既知のＩｇ番号付けスキーム（例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｍａｒｔｉｎ（拡張Ｃｈｏｔｈｉａ）、ＩＧＭＴ、ＡｂＭ）のいずれかに従って決定することができる。ある特定の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤（タイプＡ）は、以下のＣＤＲのうちの１つまたは複数を含む：
配列番号１～２３のいずれか１つ、または少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号１～２３と同一である配列、を含むまたはそれからなるＨＣＤＲ１；
配列番号２４～５７のいずれか１つ、または少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号２４～５７と同一である配列、を含むまたはそれからなるＨＣＤＲ２；及び
配列番号５８～９５のいずれか１つ、または少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号５８～９５と同一である配列、を含むまたはそれからなるＨＣＤＲ３；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、
配列番号９６～１２８のいずれか１つ、または少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号９６～１２８と同一である配列、を含むまたはそれからなるＬＣＤＲ１；
配列番号１２９～１５１のいずれか１つ、または少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号１２９～１５１と同一である配列、を含むまたはそれからなるＬＣＤＲ２；及び
配列番号１５２～１５５のいずれか１つ、または少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号１５２～１５５と同一である配列、を含むまたはそれからなるＬＣＤＲ３、を含む。
特定の実施形態において、結合剤（タイプＡ）は、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含み、ここで、
（１）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号２４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号５８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号９６を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号２５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号５９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号９７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５３を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（３）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号２６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号６０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号９８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５４を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（４）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号２７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号６１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号９９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（５）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号２８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号６２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１００を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５３を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（６）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号２９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号６３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１０１を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３１を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５６を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（７）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号６４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１０２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（８）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号６５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１０３を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３３を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（９）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号６６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１０４を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３４を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１０）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号６７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号９７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１１）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号６４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１０２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１２）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号６８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１０５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３６を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６１を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１３）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号２５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号６９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１０６を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１４）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号７０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１０７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６３を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１５）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号７１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１０８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６４を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１６）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号７２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１０９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１７）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号７３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号９８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１８）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号７４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１１０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６６を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１９）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号７５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１１１を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２０）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号７４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号９７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２１）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号７６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１１２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２２）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号７７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１１３を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１４０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２３）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号７８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１１４を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１４１を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２４）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号７９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号９８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２５）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号２５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号８０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１１５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１４２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２６）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号８１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１１６を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１４３を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２７）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号８２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１１７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１４４を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２８）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号８３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１１８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３１を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２９）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号８４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１１９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１４５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（３０）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号８５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１２０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１４６を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（３１）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号５０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号８６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１２１を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１４７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（３２）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号５１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号８７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１２２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（３３）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号８８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１２３を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１４８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１７０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（３４）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号５２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号６０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号９８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１７１を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（３５）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号５３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号８９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号９７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１４７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１７２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（３６）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号９０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１０９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１５０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（３７）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号９１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１２４を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１５１を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１７３を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（３８）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号５４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号９２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１２６を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１２９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１６５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（３９）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号５５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号９３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号９７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１４９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１７４を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（４０）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号５６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号９４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１２５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１４２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１７５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（４１）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号４３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号７６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１２７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１７６を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（４２）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号５７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号９５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号１２８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号１３７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号１５５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；及び／または
（４３）免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドは、ＰＤ－Ｌ１タイプＡ結合剤１～４２の図１Ａ～Ｄに記載されているＣＤＲの任意の組み合わせを含む。
特定の実施形態において、結合剤は、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含み、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、第１のフレームワーク領域、第２のフレームワーク領域、第３のフレームワーク領域、及び／または第４のフレームワーク領域を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、第１のフレームワーク領域、第２のフレームワーク領域、第３のフレームワーク領域、及び／または第４のフレームワーク領域を含む；及び／または免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドは、それぞれ図２Ａ～Ｄ及び図３Ａ～Ｄに記載されているフレームワーク領域の任意の組み合わせを含む。
ＰＤ－Ｌ１結合剤－タイプＢ
本明細書において、免疫グロブリン重鎖可変領域ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖可変領域ポリペプチドを含むＰＤ－Ｌ１結合剤（タイプＢ）を提供する。いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤（タイプＢ）は、配列番号４３０～４５０のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び配列番号４５１～４７１のいずれか１つの免疫グロブリン軽鎖可変領域または少なくともそのＣＤＲを含む。他の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤は、配列番号４３０～４５０のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域ポリペプチド、及び配列番号４５１～４７１のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域ポリペプチドを含む。さらに他の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤、免疫グロブリン重鎖可変領域ポリペプチドは、配列番号３０８～３２１のいずれか１つを含む相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号３３２～３３８のいずれか１つを含む相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、及び配列番号３３９～３５９のいずれか１つを含む相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、を含み；及び／または免疫グロブリン軽鎖可変領域ポリペプチドは、配列番号３６０～３７４のいずれか１つを含む相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号３７５～３８６のいずれか１つを含む相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、及び配列番号３８７～３９８のいずれか１つを含む相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）、を含む。ＰＤ－Ｌ１結合剤をコードする核酸、またはその個々の重鎖及び軽鎖；核酸を含むベクター及び細胞；ならびに結合剤または核酸を含む組成物、も提供される。
一実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤（タイプＢ）は、配列番号４３０～４５０のいずれか１つの免疫グロブリン重鎖可変領域、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号４３０～４５０と同一である配列、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４５１～４７１のいずれか１つの免疫グロブリン軽鎖可変領域、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号４５１～４７１と同一である配列または少なくともそのＣＤＲを含む。
さらなる例示として、ＰＤ－Ｌ１結合剤（タイプＢ）は以下を含むことができる：
（１）配列番号４２９の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４５０の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（２）配列番号４３０の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４５１の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（３）配列番号４３１の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４５２の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（４）配列番号４３２の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４５３の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（５）配列番号４３３の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４５４の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（６）配列番号４３４の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４５５の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（７）配列番号４３５の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４５６の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（８）配列番号４３６の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４５７の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（９）配列番号４３７の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４５８の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１０）配列番号４３８の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４５９の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１１）配列番号４３９の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４６０の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１２）配列番号４４０の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４６１の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１３）配列番号４４１の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４６２の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１４）配列番号４４２の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４６３の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１５）配列番号４４３の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４６４の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１６）配列番号４４４の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４６５の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１７）配列番号４４５の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４６６の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１８）配列番号４４６の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４６７の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（１９）配列番号４４７の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４６８の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；
（２０）配列番号４４８の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４６９の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；及び／または
（２１）配列番号４４９の免疫グロブリン重鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ、及び／または配列番号４７０の免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ；及び／または
（２２）図８Ａ～Ｂの免疫グロブリン重鎖可変領域及び／または図８Ｃ～Ｄの免疫グロブリン軽鎖可変領域、または少なくともそのＣＤＲ。
所与の重鎖または軽鎖Ｉｇ配列のＣＤＲは、種々の既知のＩｇ番号付けスキーム（例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｍａｒｔｉｎ（拡張Ｃｈｏｔｈｉａ）、ＩＧＭＴ、ＡｂＭ）のいずれかに従って決定することができる。ある特定の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合剤は、以下のＣＤＲのうちの１つまたは複数を含む：
配列番号３０８～３２１のいずれか１つ、または少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号３０８～３２１と同一である配列、を含むまたはそれからなるＨＣＤＲ１；
配列番号３２２～３３８のいずれか１つ、または少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号３２２～３３８と同一である配列、を含むまたはそれからなるＨＣＤＲ２；及び
配列番号３３９～３５９のいずれか１つ、または少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号３３９～３５９と同一である配列、を含むまたはそれからなるＨＣＤＲ３；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、
配列番号３６０～３７４のいずれか１つ、または少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号３６０～３７４と同一である配列、を含むまたはそれからなるＬＣＤＲ１；
配列番号３７５～３８６のいずれか１つ、または少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号３７５～３８６と同一である配列、を含むまたはそれからなるＬＣＤＲ２；
配列番号３８７～３９８のいずれか１つ、または少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、配列番号３８７～３９８と同一である配列、を含むまたはそれからなるＬＣＤＲ３、を含む。
特定の実施形態において、結合剤は、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含み、ここで、
（１）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３０８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３２２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３３９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３８７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３０９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３２３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３４０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６１を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７６を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３８８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（３）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３２４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３４１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３８７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（４）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３２５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３４２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３８９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（５）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３２６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３４３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３８７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（６）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３２７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３４４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６３を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３９０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（７）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３２７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３４５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６４を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３８０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３９１を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（８）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３２８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３４６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３８７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（９）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３２９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３４７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６６を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３８９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１０）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３０９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３３０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３４８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３８１を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３９２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１１）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３０９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３２７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３４９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３８２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３８９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１２）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３０９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３２２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３５０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３８３を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３８７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１３）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３２３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３５１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３９３を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１４）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３３１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３５２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３８９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１５）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３３２を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３５３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３８４を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３９４を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１６）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３３３を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３５４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３７０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３９５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１７）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３３４を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３５５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３７１を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３８７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１８）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３３５を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３５６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３６０を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３８５を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３９６を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（１９）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３１９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３３６を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３５７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３７２を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３８６を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３９７を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２０）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３２０を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３３７を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３５８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３７３を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３９８を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；
（２１）免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号３２１を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、配列番号３３８を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、及び配列番号３５９を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号３７４を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、配列番号３７９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び配列番号３８９を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３を含む；及び／または
（２２）免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドは、図５Ａ～Ｂ（タイプＢ）に列挙されているＣＤＲの任意の組み合わせを含む。
特定の実施形態において、結合剤は、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含み、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、第１のフレームワーク領域、第２のフレームワーク領域、第３のフレームワーク領域、及び／または第４のフレームワーク領域を含む；及び／または免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、第１のフレームワーク領域、第２のフレームワーク領域、第３のフレームワーク領域、及び／または第４のフレームワーク領域を含む；及び／または免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドは、それぞれ図６Ａ～Ｂ及び／または図７Ａ～Ｂ（タイプＢ）に列挙されているフレームワーク領域の任意の組み合わせを含む。
例示的な実施形態において、本発明のイムノコンジュゲートは、ＨＥＲ２を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。
ある特定の実施形態において、本発明のイムノコンジュゲートは、抗ＨＥＲ２抗体を含む。本発明の一実施形態において、本発明のイムノコンジュゲートの抗ＨＥＲ２抗体は、参照により本明細書に具体的に組み込まれているＵＳ５８２１３３７の表３に記載のように、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－７及びｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８を含む。これらの抗体は、ＨＥＲ２に結合するマウス抗体（４Ｄ５）の相補性決定領域を有するヒトフレームワーク領域を含む。ヒト化抗体ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８はトラスツズマブとも呼ばれ、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）の商品名で市販されている。
トラスツズマブ（ＣＡＳ １８０２８８－６９－１、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８、ｒｈｕＭＡｂ ＨＥＲ２、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、細胞ベースのアッセイにおいて、ＨＥＲ２の細胞外ドメインに高親和性で選択的に結合する（Ｋｄ＝５ｎＭ）マウス抗ＨＥＲ２抗体（４Ｄ５）のヒト化バージョンである、組み換えＤＮＡ由来のＩｇＧ１κ、モノクローナル抗体である（ＵＳ ５６７７１７１；ＵＳ ５８２１３３７；ＵＳ ６０５４２９７；ＵＳ ６１６５４６４；ＵＳ ６３３９１４２；ＵＳ ６４０７２１３；ＵＳ ６６３９０５５；ＵＳ ６７１９９７１；ＵＳ ６８００７３８；ＵＳ ７０７４４０４；Ｃｏｕｓｓｅｎｓ ｅｔ ａｌ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１１３２－９、Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：７０７－１２、Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２）。
本発明の一実施形態において、抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、トラスツズマブのＣＤＲ領域を含む。本発明の一実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブのフレームワーク領域をさらに含む。本発明の一実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブの一方または両方の可変領域をさらに含む。
本発明の別の実施形態において、本発明のイムノコンジュゲートの抗ＨＥＲ２抗体は、ＵＳ７８６２８１７に記載されているように、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、ヒト化２Ｃ４を含む。例示的なヒト化２Ｃ４抗体は、ペルツズマブ（ＣＡＳ登録番号３８０６１０－２７－５）、ＰＥＲＪＥＴＡ（商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）である。ペルツズマブは、ＨＥＲ二量体化阻害剤（ＨＤＩ）であり、他のＨＥＲ受容体（ＥＧＦＲ／ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、及びＨＥＲ４など）と活性ヘテロ二量体またはホモ二量体を形成するＨＥＲ２の能力を阻害するように機能する。例えば、Ｈａｒａｒｉ ａｎｄ Ｙａｒｄｅｎ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９：６１０２－１４（２０００）；Ｙａｒｄｅｎ ａｎｄ Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２：１２７－３７（２００１）；Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ １０：１５８－９（２００３）；Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔｕｒｅ ４２１：７５６－６０（２００３）；及びＭａｌｉｋ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏ Ａｍ Ｓｏｃ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ４４：１７６－７（２００３）を参照のこと。ＰＥＲＪＥＴＡ（商標）は乳癌の治療薬として承認されている。
本発明の一実施形態において、抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ペルツズマブのＣＤＲ領域を含む。本発明の一実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体は、ペルツズマブのフレームワーク領域をさらに含む。本発明の一実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体は、ペルツズマブの一方または両方の可変領域をさらに含む。
例示的な実施形態において、本発明のイムノコンジュゲートは、Ｃａｐｒｉｎ－１を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む（Ｅｌｌｉｓ ＪＡ，Ｌｕｚｉｏ ＪＰ（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７０（３５）：２０７１７－２３；Ｗａｎｇ Ｂ，ｅｔ ａｌ（２００５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５（７）：４２７４－８２；Ｓｏｌｏｍｏｎ Ｓ，ｅｔ ａｌ（２００７）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２７（６）：２３２４－４２）。ｃａｐｒｉｎ－１は、ＧＰＩＡＰ１、ＧＰＩＰ１３７、ＧＲＩＰ１３７、Ｍ１１Ｓ１、ＲＮＧ１０５、ｐ１３７ＧＰＩ、及び細胞周期関連タンパク質１としても知られている。
細胞質の活性化／増殖関連タンパク質－１（ｃａｐｒｉｎ－１）は、細胞周期制御関連遺伝子の制御に関与するＲＮＡ結合タンパク質である。ｃａｐｒｉｎ－１は、ｃ－Ｍｙｃ及びサイクリンＤ２ｍＲＮＡに選択的に結合し、Ｇ１期からＳ期への細胞進行を加速し、細胞生存率を高め、細胞成長を促進し、ｃａｐｒｉｎ－１が、腫瘍形成に重要な役割を果たす場合があることを示している（Ｗａｎｇ Ｂ，ｅｔ ａｌ（２００５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５：４２７４－４２８２）。ｃａｐｒｉｎ－１は、単独で、またはＲａｓＧＡＰＳＨ３ドメイン結合タンパク質１や脆弱Ｘ精神遅滞タンパク質などの他のＲＮＡ結合タンパク質と組み合わせて作用する。腫瘍形成プロセスにおいて、ｃａｐｒｉｎ－１は主に細胞増殖を活性化し、免疫チェックポイントタンパク質の発現をアップレギュレートすることによって機能する。ストレス顆粒の形成を通じて、ｃａｐｒｉｎ－１は腫瘍細胞が悪条件に適応するプロセスにも関与しており、これが放射線及び化学療法抵抗性に寄与している。種々の臨床悪性腫瘍におけるその役割を考えると、ｃａｐｒｉｎ－１はバイオマーカー及び新規治療薬の開発のターゲットとして使用される可能性を秘めている（Ｙａｎｇ，Ｚ－Ｓ，ｅｔ ａｌ（２０１９）Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １８：１５－２１）。
治療及び検出のためにｃａｐｒｉｎ－１を標的とする抗体が記載されている（ＷＯ２０１１／０９６５１９；ＷＯ２０１３／１２５６５４；ＷＯ２０１３／１２５６３６；ＷＯ２０１３／１２５６４０；ＷＯ２０１３／１２５６３０；ＷＯ２０１３／０１８８８９；ＷＯ２０１３／０１８８９１；ＷＯ２０１３／０１８８８３；ＷＯ２０１３／０１８８９２；ＷＯ２０１４／０１４０８２；ＷＯ２０１４／０１４０８６；ＷＯ２０１５／０２０２１２；ＷＯ２０１８／０７９７４０）。
例示的な実施形態において、本発明のイムノコンジュゲートは、ＣＥＡを特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。
癌胎児性抗原（ＣＥＡ、ＣＤ６６ｅ、ＣＥＡＣＡＭ５）の発現の上昇は、特に、腫瘍細胞接着、転移、細胞性免疫機構の遮断、及び抗アポトーシス機能を有することなど、新生物の種々の生物学的側面に関係している。ＣＥＡは、多くの癌腫の血液マーカーとしても使用されている。ＭＮ－１４及びｈＭＮ１４としても知られるラベツズマブ（ＣＥＡ－ＣＩＤＥ（商標），Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，ＣＡＳ登録番号２１９６４９－０７－７）は、ヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体であり、結腸直腸癌の治療のために研究されている（Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ，Ｒ．ｅｔ ａｌ（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ５４（４）：３１５－３２７）。カンプトテシンアナログにコンジュゲートしたラベツズマブ（ラベツズマブゴビテカン（ｌａｂｅｔｕｚｕｍａｂ ｇｏｖｉｔｅｃａｎ）、ＩＭＭＵ－１３０）は、癌胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）を標的とし、再発または難治性の転移性結腸直腸癌の患者において研究されている（Ｓｈａｒｋｅｙ，Ｒ．ｅｔ ａｌ，（２０１８），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １７（１）：１９６－２０３；Ｃａｒｄｉｌｌｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ（２０１８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １７（１）：１５０－１６０）。
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号４７２のｈＭＮ－１４／ラベツズマブの可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含む（ＵＳ６６７６９２４）。
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＳＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＳＴＲＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＳＬＹＲＳＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ 配列番号４７２
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号４７３～４７９のｈＭＮ－１４／ラベツズマブの軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ６６７６９２４）。
Figure 2023524271000004
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号４８０のｈＭＮ－１４／ラベツズマブの可変重鎖（ＶＨ）を含む（ＵＳ６６７６９２４）。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＳＳＳＧＦＤＦＴＴＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＥＩＨＰＤＳＳＴＩＮＹＡＰＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＳＬＹＦＧＦＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳ 配列番号４８０
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号４８１～４８７のｈＭＮ－１４／ラベツズマブの重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む（ＵＳ６６７６９２４）。
Figure 2023524271000005
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号４８８のｈＰＲ１Ａ３の可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含む（ＵＳ８６４２７４２）。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＡＡＶＧＴＹＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＫＲＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＨＱＹＹＴＹＰＬＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号４８８
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号４８９～４９５のｈＰＲ１Ａ３の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ８６４２７４２）。

Figure 2023524271000006
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号４９６～５０２のｈＰＲ１Ａ３の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む（ＵＳ８６４２７４２）。
Figure 2023524271000007
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５０３のｈＭＦＥ－２３の可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含む（ＵＳ７２３２８８）。
ＥＮＶＬＴＱＳＰＳＳＭＳＡＳＶＧＤＲＶＮＩＡＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＳＭＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号５０３
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５０４～５１０のｈＭＦＥ－２３の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ７２３２８８）。
Figure 2023524271000008
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５１１のｈＭＦＥ－２３の可変重鎖（ＶＨ）を含む（ＵＳ７２３２８８）。
ＱＶＫＬＥＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＳＹＭＨＷＬＲＱＧＰＧＱＲＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＥＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＦＴＴＤＴＳＡＮＴＡＹＬＧＬＳＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＥＧＴＰＴＧＰＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ 配列番号５１１
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５１２～５１８のｈＭＦＥ－２３の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む（ＵＳ７２３２８８）。
Figure 2023524271000009
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５１９のＳＭ３Ｅの可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含む（ＵＳ７２３２８８）。
ＥＮＶＬＴＱＳＰＳＳＭＳＶＳＶＧＤＲＶＴＩＡＣＳＡＳＳＳＶＰＹＭＨＷＬＱＱＫＰＧＫＳＰＫＬＬＩＹＬＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号５１９
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５２０～５２６のＳＭ３Ｅの軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ７２３２８８）。
Figure 2023524271000010
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５２７のＳＭ３Ｅの可変重鎖（ＶＨ）を含む（ＵＳ７２３２８８）。
ＱＶＫＬＥＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＳＹＭＨＷＬＲＱＧＰＧＱＲＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＥＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＦＴＴＤＴＳＡＮＴＡＹＬＧＬＳＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＥＧＴＰＴＧＰＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ 配列番号５２７
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５２８～５３４のＳＭ３Ｅの重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む（ＵＳ７２３２８８）。
Figure 2023524271000011
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５３５～５４１のＮＰ－４／アルシツモマブの軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。
Figure 2023524271000012
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５４２のＮＰ－４／アルシツモマブの可変重鎖（ＶＨ）を含む。
ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＴＦＴＤＹＹＭＮＷＶＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＧＦＩＧＮＫＡＮＧＹＴＴＥＹＳＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＫＳＱＳＩＬＹＬＱＭＮＴＬＲＡＥＤＳＡＴＹＹＣＴＲＤＲＧＬＲＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ 配列番号５４２。
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５４３～５４９のＮＰ－４の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。
Figure 2023524271000013
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５５０のＭ５Ａ／ｈＴ８４．６６の可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含む（ＵＳ７７７６３３０）。
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＧＥＳＶＤＩＦＧＶＧＦＬＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＲＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＴＮＥＤＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ 配列番号５５０
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５５１～５５７のＭ５Ａ／ｈＴ８４．６６の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ７７７６３３０）。
Figure 2023524271000014
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５５８のＭ５Ａ／ｈＴ８４．６６の可変重鎖（ＶＨ）を含む（ＵＳ７７７６３３０）。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＤＰＡＮＧＮＳＫＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＰＦＧＹＹＶＳＤＹＡＭＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号５５８）
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５５９～５６５のＭ５Ａ／ｈＴ８４．６６の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。
Figure 2023524271000015
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５６６のｈＡｂ２－３の可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含む（ＵＳ９６１７３４５）。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＥＮＩＦＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＬＬＶＹＮＴＲＴＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＨＹＧＴＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号５６６
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５６７～５７３のｈＡｂ２－３の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ９６１７３４５）。
Figure 2023524271000016
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５７４の可変重鎖（ＶＨ）を含む（ＵＳ９６１７３４５）。
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＧＧＳＬＳＬＳＣＡＡＳＧＦＶＦＳＳＹＤＭＳＷＶＲＱＴＰＥＲＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＩＴＹＡＰＳＴＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＨＹＦＧＳＳＧＰＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ 配列番号５７４
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５７５～５８１のｈＡｂ２－３の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。
Figure 2023524271000017
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５８２のＡ２４０ＶＬ－Ｂ９ＶＨ／ＡＭＧ－２１１の可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含む（ＵＳ９９８２０６３）。
ＱＡＶＬＴＱＰＡＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＲＧＩＮＶＧＡＹＳＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＲＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＳＳＲＦＳＡＳＫＤＡＳＡＮＡＧＩＬＬＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＧＡＳＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ 配列番号５８２
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５８３～５８９のＡ２４０ＶＬ－Ｂ９ＶＨ／ＡＭＧ－２１１の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ９９８２０６３）。
Figure 2023524271000018
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５９０のＢ９ＶＨの可変重鎖（ＶＨ）を含む（ＵＳ９９８２０６３）。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＳＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＲＮＫＡＮＧＧＴＴＥＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＧＬＲＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ 配列番号５９０
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５９１～５９７の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む（ＵＳ９９８２０６３）。
Figure 2023524271000019
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５９８のＥ１２ＶＨの可変重鎖（ＶＨ）を含む（ＵＳ９９８２０６３）。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＳＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＬＮＫＡＮＧＧＴＴＥＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＧＬＲＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ 配列番号５９８
本発明の実施形態において、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５９９～６０５の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む（ＵＳ９９８２０６３）。
Figure 2023524271000020
例示的な実施形態では、本発明のイムノコンジュゲートは、Ｔｒｏｐ２を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２（ＴＲＯＰ－２）は、ＴＡＣＳＴＤ２遺伝子によってコードされる膜貫通糖タンパク質である（Ｌｉｎｎｅｎｂａｃｈ ＡＪ，ｅｔ ａｌ（１９９３）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１３（３）：１５０７－１５；Ｃａｌａｂｒｅｓｅ Ｇ，ｅｔ ａｌ（２００１））Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔ．９２（１－２）：１６４－５）。Ｔｒｏｐ２は、細胞内カルシウムシグナルトランスデューサーであり、多くのがんで示差的に発現し、自己複製、増殖、浸潤、及び生存のために、細胞にシグナルを伝達する。Ｔｒｏｐ２は、幹細胞マーカーと考えられており、多くの正常組織で発現しているが、対照的に、多くのがんでは過剰発現している（Ｏｈｍａｃｈｉ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１２（１０），３０５７－３０６３；Ｍｕｈｌｍａｎｎ Ｇ，ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．，６２（２），１５２－１５８；Ｆｏｎｇ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，９９（８），１２９０－１２９５；Ｆｏｎｇ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｍｏｄ．Ｐａｔｈｏｌ．，２１（２），１８６－１９１；Ｎｉｎｇ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，３４（１０），１７４５－１７５０）。Ｔｒｏｐ２の過剰発現は予後的に重要である。Ｔｒｏｐ２と相互作用するいくつかのリガンドが提案されている。Ｔｒｏｐ２は、様々な経路を介して細胞にシグナルを伝達し、いくつかの転写因子の複雑なネットワークによって転写調節されている。
ヒトＴｒｏｐ２（ＴＡＣＳＴＤ２：腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２、ＧＡ７３３－１、ＥＧＰ－１、Ｍ１Ｓ１、以降ではｈＴｒｏｐ２と称する）は、３２３個のアミノ酸残基からなる１回膜貫通型１型細胞膜タンパク質である。免疫抵抗（ヒトの栄養芽層及びがん細胞に共通する）に関与する細胞膜タンパク質の存在（Ｆａｕｌｋ ＷＰ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７５（４）：１９４７－１９５１（１９７８））が以前に示唆されていた一方で、ヒト絨毛癌細胞株の細胞膜タンパク質に対するモノクローナル抗体によって認識される抗原分子が同定され、ヒト栄養芽層で発現する分子の１つとしてＴｒｏｐ２と命名された（Ｌｉｐｉｎｓｋｉ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７８（８），５１４７－５１５０（１９８１））。この分子はまた、胃癌細胞株による免疫化によって得られたマウスモノクローナル抗体ＧＡ７３３によって認識される腫瘍抗原ＧＡ７３３－１（Ｌｉｎｎｅｎｂａｃｈ Ａ Ｊ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６（１），２７－３１（１９８９））、または非小細胞肺がん細胞による免疫化によって得られたマウスモノクローナル抗体ＲＳ７－３Ｇ１１によって認識される上皮糖タンパク質（ＥＧＰ－１；Ｂａｓｕ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６２（４），４７２－４７９（１９９５））とも命名された。しかしながら、１９９５年に Ｔｒｏｐ２遺伝子がクローニングされ、これらの分子はすべて同一分子であることが確認された（Ｆｏｒｎａｒｏ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６２（５），６１０－６１８（１９９５））。ｈＴｒｏｐ２のＤＮＡ配列及びアミノ酸配列は、公的データベースで入手可能であり、例えば登録番号ＮＭ＿００２３５３及びＮＰ＿００２３４４（ＮＣＢＩ）で参照することができる。
そのようながんとの関連性を示唆する情報を受けて、これまでに複数の抗ｈＴｒｏｐ２抗体が確立され、その抗腫瘍効果が研究されている。これらの抗体の中で特に、例えば、ヌードマウス異種移植モデルにおいてそれ自体で抗腫瘍活性を示す非結合抗体（ＷＯ２００８／１４４８９１、ＷＯ２０１１／１４５７４４、ＷＯ２０１１／１５５５７９、ＷＯ２０１３／０７７４５８）、及び細胞障害薬と共にＡＤＣとして抗腫瘍活性を示す抗体（ＷＯ２００３／０７４５６６、ＷＯ２０１１／０６８８４５、ＷＯ２０１３／０６８９４６、ＵＳ７９９９０８３）が開示されている。しかしながら、その活性の強さや範囲はまだ不十分であり、治療標的としてのｈＴｒｏｐ２に対する医学的ニーズは満たされていない。
がん細胞におけるＴｒｏｐ２の発現は、薬剤耐性と相関している。抗体、抗体融合タンパク質、化学阻害剤、ナノ粒子などを含むがん細胞上のＴｒｏｐ２を標的とするいくつかの戦略が存在する。これらの様々な治療法を使用したｉｎ ｖｉｔｒｏ研究及び前臨床研究では、マウスにおけるｉｎ ｖｉｔｒｏとｉｎ ｖｉｖｏの両方で腫瘍細胞の増殖が有意に抑制された。臨床研究では、予後バイオマーカーとして、また耐性を逆転させるための治療標的として、Ｔｒｏｐ２の潜在的な用途が調査されている。
サシツズマブ ゴビテカン（ＴＲＯＤＥＬＶＹ（登録商標），Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，ＩＭＭＵ－１３２）は、トポイソメラーゼ阻害薬に結合したＴｒｏｐ２指向性抗体を含む抗体薬物複合体であり、少なくとも２つの治療を以前に受けている成人患者の転移性トリプルネガティブ乳癌（ｍＴＮＢＣ）の治療に適応される。サシツズマブ ゴビテカンのＴｒｏｐ２抗体は、イリノテカンの活性代謝産物であるＳＮ－３８にコンジュゲートしている（ＵＳ２０１６／０２９７８９０、ＷＯ２０１５／０９８０９９）。
本発明の一実施形態では、Ｔｒｏｐ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＲＳ７（ヒト化ＲＳ７）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列、配列番号６０７～６０９（参照により本明細書に援用されるＵＳ７２３８７８５）を含む。
Figure 2023524271000021
本発明の一実施形態では、Ｔｒｏｐ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＲＳ７（ヒト化ＲＳ７）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列、配列番号６１０～６１２を含む（ＵＳ７２３８７８５、ＵＳ９７９７９０７、ＵＳ９３８２３２９、ＷＯ２０２０／１４２６５９、それぞれ参照により本明細書に援用される）。
Figure 2023524271000022
本発明の一実施形態では、Ｔｒｏｐ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ＡＲ４７Ａ６．４．２の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列、配列番号６０７～６０９を含む（ＵＳ７４２００４０、参照により本明細書に援用される）。
Figure 2023524271000023
本発明の一実施形態では、Ｔｒｏｐ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ＡＲ４７Ａ６．４．２の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列、配列番号６１０、６１３、６１４を含む（ＵＳ７４２００４０、参照により本明細書に援用される）。
Figure 2023524271000024
本発明の一実施形態では、Ｔｒｏｐ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ヒト化ＫＭ４０９７の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列、配列番号６１５～６１７を含む（ＵＳ２０１２／０２３７５１８、参照により本明細書に援用される）。
Figure 2023524271000025
本発明の一実施形態では、Ｔｒｏｐ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ヒト化ＫＭ４０９７の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列、配列番号６１８～６２０を含む（ＵＳ２０１２／０２３７５１８、参照により本明細書に援用される）。
Figure 2023524271000026
本発明の一実施形態では、Ｔｒｏｐ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＴＩＮＡ１－Ｈ１Ｌ１の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列、配列番号６０８、６０９、６２１を含む（ＵＳ１０，２２７，４１７、参照により本明細書に援用される）。
Figure 2023524271000027
本発明の一実施形態では、Ｔｒｏｐ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＴＩＮＡ１－Ｈ１Ｌ１の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列、配列番号６２２～６２４を含む（ＵＳ１０，２２７，４１７、参照により本明細書に援用される）。
Figure 2023524271000028
本発明の一実施形態では、Ｔｒｏｐ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＴＩＮＡ１－Ｈ１Ｌ１の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列、配列番号６２５～６２７を含む（ＵＳ８８７１９０８、参照により本明細書に援用される）。
Figure 2023524271000029
本発明の一実施形態では、Ｔｒｏｐ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＴＩＮＡ１－Ｈ１Ｌ１の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列、配列番号 ６２８～６３３を含む（ＵＳ８８７１９０８、参照により本明細書に援用される）。
Figure 2023524271000030
本発明の一実施形態では、Ｔｒｏｐ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＴＩＮＡ１－Ｈ１Ｌ１の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列、配列番号６２６、６２７、６３４を含む（ＵＳ８８７１９０８、参照により本明細書に援用される）。
Figure 2023524271000031
本発明の一実施形態では、Ｔｒｏｐ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＴＩＮＡ１－Ｈ１Ｌ１の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列、配列番号６２８～６３０、６３３、６３５、６３６を含む（ＵＳ８８７１９０８、参照により本明細書に援用される）。
Figure 2023524271000032
いくつかの実施形態において、抗体コンストラクトは、Ｆｃドメインをさらに含む。ある特定の実施形態において、抗体コンストラクトは抗体である。ある特定の実施形態において、抗体コンストラクトは、融合タンパク質である。抗原結合ドメインは、単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）であり得る。単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）は、合成ペプチドを介して抗体軽鎖の可変（Ｖ）ドメインに連結した抗体重鎖のＶドメインを含む短縮化Ｆａｂフラグメントであり、通常の組換えＤＮＡ技術技法を使用して生成することができる。同様に、ジスルフィド安定化可変領域フラグメント（ｄｓＦｖ）は、組換えＤＮＡ技術によって調製することができる。抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、抗Ｔｒｏｐ２抗体の抗原結合ドメインの１つ以上の可変領域（例えば、２つの可変領域）を含んでもよく、各可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、トランスフォーミング増殖因子ベータ１（ＴＧＦβ１）に結合することができるＴＧＦβ１受容体またはそのフラグメントを含めることによって修飾される。例えば、受容体は、ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）であり得る。いくつかの実施形態において、ＴＧＦβ受容体は、ヒトＴＧＦβ受容体である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧは、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメインＥＣＤへのＣ末端融合を有する（ＵＳ９６７６８６３）。「Ｆｃリンカー」を使用して、ＩｇＧをＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメインに結合させることができる。Ｆｃリンカーは、標的への結合特異性を維持しながら、分子の適切な三次元折り畳みが可能になる、短くかつ柔軟なペプチドであり得る。いくつかの実施形態において、ＴＧＦβ受容体のＮ末端は、（Ｆｃリンカーの有無にかかわらず）抗体コンストラクトのＦｃに融合されている。いくつかの実施形態において、抗体コンストラクト重鎖のＣ末端は、（Ｆｃリンカーの有無にかかわらず）ＴＧＦβ受容体に融合されている。いくつかの実施形態において、抗体コンストラクト重鎖のＣ末端リジン残基は、アラニンに変異している。
いくつかの実施形態において、イムノコンジュゲート中の抗体は、グリコシル化されている。
いくつかの実施形態において、イムノコンジュゲート中の抗体は、操作されたシステインがコンジュゲーションに利用可能である部位でのシステイン置換を通して抗体へのアジュバント、標識、または薬物部分の部位特異的コンジュゲーションを提供するが、免疫グロブリンの折り畳み及び集合を乱さないか、または抗原結合及びエフェクター機能を改変しない、システイン操作抗体である。（Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ｅｔ ａｌ．，２００８ｂ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５－９３２；Ｄｏｒｎａｎ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｂｌｏｏｄ １１４（１３）：２７２１－２７２９；ＵＳ７５２１５４１；ＵＳ７７２３４８５；ＵＳ２０１２／０１２１６１５；ＷＯ２００９／０５２２４９）。「システイン操作抗体」または「システイン操作抗体バリアント」は、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている抗体である。システイン操作抗体を、均一な化学量論によりチエノアゼピン－リンカー化合物としてチエノアゼピンアジュバント部分にコンジュゲートさせることができる（例えば、単一の操作システイン部位を有する抗体では、抗体あたり最大２つのチエノアゼピン部分）。
いくつかの実施形態において、表３のイムノコンジュゲートを調製するために使用されるシステイン操作抗体は、軽鎖（ＬＣ Ｋ１４９Ｃ）の１４９－リジン部位に導入されたシステイン残基を有する。他の実施形態において、システイン操作抗体は、重鎖（ＨＣ Ａ１１８Ｃ）の１１８－アラニン部位（ＥＵ番号付け）に導入されたシステイン残基を有する。この部位には、順次付番で１２１、Ｋａｂａｔ付番で１１４が付番されている。他の実施形態において、システイン操作抗体は、Ｋａｂａｔ付番に従ってＧ６４ＣまたはＲ１４２Ｃで軽鎖に、またはＫａｂａｔ付番に従ってＤ１０１Ｃ、Ｖ１８４ＣまたはＴ２０５Ｃで重鎖に導入されたシステイン残基を有する。
免疫刺激化合物
本発明のイムノコンジュゲートは、免疫刺激部分を含む。細胞結合剤からのエラスターゼ－基質ペプチドリンカーの切断後、活性免疫刺激化合物は、受容体と相互作用し、及び／または受容体を調節して免疫応答を誘発することができる。そのような受容体には、（１）様々なｔｏｌｌ様受容体、ＴＬＲ（Ｊａｖａｉｄ，Ｎ．ｅｔ ａｌ（２０１９）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ １１（９），４４１）、（２）ＳＴＩＮＧ、ＳＴＩＮＧ１（Ｒａｍａｎｊｕｌｕ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ（２０１８）Ｎａｔｕｒｅ ５６４：４３９－４４３、Ｂａｒｂｅｒ，Ｇ．Ｎ．（２０１５）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５：７６０－７７０、ＵＳ２０１９／０３００５１３）、（３）ＮＯＤ２（Ｎｅｇｒｏｎｉ，Ａ．ｅｔ ａｌ（２０１８）Ｊ．Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．１１：４９－６０、Ｃｏｕｌｏｍｂｅ，Ｆ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０６（８）：１７０９－１７１６、ＷＯ２０１７／１５６１５２）、（４）ＲＩＧ－１、ＤＤＸ５８（Ｅｌｉｏｎ，Ｄ．Ｌ．ｅｔ ａｌ（２０１８）Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ９（４８）：２９００７－２９０１７、Ｋｏｈｌｗａｙ，Ａ．（２０１３）ＥＭＢＯ Ｒｅｐ １４：７７２－７７９、ＷＯ２０１５／１７２０９９）、及び（５）ＮＬＲＰ３（Ｍａｎｇａｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ（２０１８）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ １７：５８８－６０６）が含まれるが、これらに限定されない。
免疫刺激部分は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）と相互作用し、及び／または調節し得る。ＰＲＲには、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＳＴＩＮＧ様受容体、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）、ＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）、Ｃ型レクチン様受容体（ＣＬＲ）、及びＤＮＡセンサーが含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態では、免疫刺激部分は、ＴＬＲアゴニストである。ＴＬＲは、脊椎動物の自然免疫応答の開始に関与するＩ型膜貫通タンパク質である。ＴＬＲは、細菌、ウイルス、及び真菌からのさまざまな病原体関連分子パターンを認識し、侵入する病原体に対する防御の第一線として機能する。ＴＬＲは、細胞発現及びそれらが開始するシグナル伝達経路の違いにより、重複しているが異なる生物学的応答を誘発する。一旦関与すると（例えば、自然刺激または合成ＴＬＲアゴニストによって）、ＴＬＲはシグナル伝達カスケードを開始し、アダプタータンパク質骨髄分化一次応答遺伝子８８（ＭｙＤ８８）及びＩＬ－１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）の動員を介して核因子－κＢ（ＮＦ－κＢ）の活性化をもたらす。ＩＲＡＫのリン酸化は、ＴＮＦ受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）の動員につながり、そうして、ＮＦ－κＢ阻害剤Ｉ－κＢがリン酸化される。その結果、ＮＦ－κＢは細胞核に入り、そのプロモーターが、ＮＦ－κＢ結合部位を含有する遺伝子、例としてサイトカインなどの転写を開始する。ＴＬＲシグナル伝達の追加の制御様式には、ＴＩＲドメイン含有アダプター誘導インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）依存性のＴＮＦ受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）の誘導、及びＴＲＩＦ及びＴＲＡＦ３を介したＭｙＤ８８非依存性経路の活性化が含まれ、これによりインターフェロン応答因子３（ＩＲＦ３）のリン酸化がもたらされる。同様に、ＭｙＤ８８依存性経路はまた、ＩＲＦ５及びＩＲＦ７を含むいくつかのＩＲＦファミリーメンバーを活性化し、一方、ＴＲＩＦ依存性経路はまた、ＮＦ－κＢ経路を活性化する。
典型的には、本明細書に記載のＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８アゴニストである。ＴＬＲ７とＴＬＲ８は両方とも、単球及び樹状細胞で発現している。ヒトでは、ＴＬＲ７は形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及びＢ細胞でも発現している。ＴＬＲ８は主に骨髄由来の細胞、すなわち単球、顆粒球、及び骨髄樹状細胞で発現している。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８は、ウイルスの侵入に応答する手段として、細胞内の「外来」一本鎖ＲＮＡの存在を検出することができる。ＴＬＲ８アゴニストによるＴＬＲ８発現細胞の治療は、高レベルのＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、及び他の炎症性サイトカインの産生をもたらす可能性がある。同様に、ＴＬＲ７アゴニストによるｐＤＣなどのＴＬＲ７発現細胞の刺激は、高レベルのＩＦＮ－α及び他の炎症性サイトカインの産生をもたらす可能性がある。ＴＬＲ７／ＴＬＲ８関与及びその結果としてのサイトカイン産生は、樹状細胞及び他の抗原提示細胞を活性化し、腫瘍破壊につながる多様な自然免疫応答メカニズム及び獲得免疫応答メカニズムを促進する。
例示的なＴＬＲ７／８アゴニストには、式ａ～ｄのアミノ－イミダゾキノリンが含まれる：
Figure 2023524271000033
 式ｂのアミノキノリン：
Figure 2023524271000034
 式ｃのアミノベンズアゼピン：
Figure 2023524271000035
 式ｄのアミノチエノアゼピン：

Figure 2023524271000036
 式ｅ及びｆのアミノ－ピラゾロアゼピン：
Figure 2023524271000037
Figure 2023524271000038
 式中、置換基Ｘ１－４及びＲ１－４は、本明細書に記載されている。
例示的なアミノベンズアゼピン免疫刺激ＴＬＲ部分は、以下の構造を有する：
Figure 2023524271000039
 式中、波線は、エラスターゼ－基質ペプチドリンカーＬへの接続部位を示す。
エラスターゼ－基質ペプチドリンカー
本発明は、細胞結合剤と免疫刺激部分との間に連結単位、すなわちＬまたはリンカーを含む。リンカーは、腫瘍関連エラスターゼ酵素またはエラスターゼ様活性を有する酵素によって選択的に切断され得る、特定のアミノ酸残基の直鎖状配列に基づくペプチドラジカルである。ペプチドラジカルは、約２個～約１２個のアミノ酸であり得る。エラスターゼによるエラスターゼ－基質ペプチドリンカー内の結合の切断は、免疫刺激部分の活性型を放出する。これは、本発明によるコンジュゲートの組織特異性の増加につながり、したがって、他の組織型における本発明によるコンジュゲートの毒性のさらなる減少につながる。
リンカーは、生物学的媒体、例えば、培養培地または血清中でイムノコンジュゲートの十分な安定性、及び同時に、免疫刺激部分、すなわち「ペイロード」の放出を伴う特異的な酵素的または加水分解的切断性の結果として、腫瘍組織内での望ましい細胞内作用を提供する。
エラスターゼの酵素活性は、生理学的条件下でイムノコンジュゲートの共有結合の切断を触媒することができる。酵素活性は、腫瘍組織に関連する細胞の発現産物である。標的化ペプチドの切断部位での酵素活性により、イムノコンジュゲートが、標的化ペプチド及び連結基を含まない活性な免疫刺激剤に変換される。切断部位は、エラスターゼによって特異的に認識され得る。エラスターゼは、特定のペプチドのＣ末端アミノ酸残基とイムノコンジュゲートの免疫刺激部分との間の特定のペプチド結合の切断を触媒し得る。
本発明のイムノコンジュゲートの特異的切断は、免疫系の腫瘍浸潤細胞及び白血球分泌酵素の存在を利用して、腫瘍部位での抗がん剤の活性化を促進する。
一実施形態では、エラスターゼ基質ペプチドリンカー（ＥｓＰＥＰ）は、式：
Figure 2023524271000040
 を有し、式中、ＡＡは、天然または非天然のアミノ酸側鎖、または１つ以上のＡＡから独立して選択され、隣接する窒素原子は５員環のプロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示し、
Ｒ７は、－ＣＨ２Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＣＨ２Ｏ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２Ｎ（Ｒ８）－、及び－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－から選択される１つの基で置換された、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイルからなる群から選択され、式中、Ｒ８は、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ｙは、２～１２の整数であり、及び
ｚは、０または１である。
例示的な実施形態では、ＥｓＰＥＰはトリペプチドであり、式：
Figure 2023524271000041
 を有し、
またはＥｓＰＥＰはテトラペプチドであり、式：
Figure 2023524271000042
 を有し、
式中、ＡＡ１、ＡＡ２、及びＡＡ３は、天然もしくは非天然のアミノ酸側鎖から独立して選択されるか、または１つ以上のＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、及び隣接する窒素原子が５員環のプロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示す。
Ｃｙｃは、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイルから選択され、任意選択で、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ２、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、及び構造：
Figure 2023524271000043
 を有するグルクロン酸から選択される１つ以上の基で置換され、
Ｒ７は、－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２Ｎ（Ｒ８）－、及び－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択され、式中、Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－Ｃ６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２から選択され、式中、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－ＯＨからなる群から独立して選択され、式中、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ９基が、一緒になって５員または６員のヘテロシクリル環を形成し、
ｚは、０または１である。
例示的な実施形態では、ＥｓＰＥＰはトリペプチドであり、ＡＡ１はメチルであり、ＡＡ２はプロリンを形成し、ＡＡ３はイソプロピルである。
例示的な実施形態では、ＥｓＰＥＰはテトラペプチドであり、
ＡＡ１は、Ａｂｕ、Ａｌａ、及びＶａｌからなる群から選択され、
ＡＡ２は、Ｎｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）、Ｏｉｃ及びＰｒｏからなる群から選択され、
ＡＡ３は、Ａｌａ及びＭｅｔ（Ｏ）２からなる群から選択され、ならびに
ＡＡ４は、Ｏｉｃ、Ａｒｇ（ＮＯ２）、Ｂｐａ、及びＮｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）からなる群から選択される。
例示的な実施形態では、ＥｓＰＥＰは、
Figure 2023524271000044
Figure 2023524271000045
 からなる群から選択されるアミノ酸のアミノ酸残基からなる。
例示的な実施形態では、ＥｓＰＥＰは、Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ａｌａ（配列番号６３９）、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ（配列番号６４０）、及びＡｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｖａ（配列番号６４１）からなる群から選択される。
例示的な実施形態では、ＥｓＰＥＰは式：
Figure 2023524271000046
 を有する。
例示的な実施形態では、ＥｓＰＥＰは、式：
Figure 2023524271000047
 を有する。
免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物
本発明のイムノコンジュゲートは、細胞結合剤と免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物とのコンジュゲートによって調製される。免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物は、リンカーユニットに共有結合した免疫刺激部分を含む。リンカーユニットは、エラスターゼ基質ペプチドユニット、ならびにイムノコンジュゲートの安定性、透過性、溶解性、及び他の薬物動態、安全性、及び有効性に影響を及ぼす官能基及びサブユニットを含む。リンカーユニットは、抗体の反応性官能基と反応する、すなわちコンジュゲートする反応性官能基を含む。例えば、抗体のリジン側鎖アミノなどの求核基は、免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物の求電子反応性官能基と反応して、イムノコンジュゲートを形成する。細胞結合剤、例えば、抗体のシステインチオールは、免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物のマレイミドまたはブロモアセトアミド基と反応して、イムノコンジュゲートを形成する。
免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物に好適な求電子反応性官能基としては、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステル及びＮ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル（スルホ－ＮＨＳ）エステル（アミン反応性）；カルボジイミド（アミン及びカルボキシル反応性）；ヒドロキシメチルホスフィン（アミン反応性）；マレイミド（チオール反応性）；Ｎ－ヨードアセトアミドなどのハロゲン化アセトアミド（チオール反応性）；アリールアジド（一級アミン反応性）；フッ素化アリールアジド（炭素－水素（Ｃ－Ｈ）挿入を介して反応性）；ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル（アミン反応性）；テトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）エステル（アミン反応性）；テトラフルオロフェニルスルホン酸（スルホ－ＴＦＰ）エステル；イミドエステル（アミン反応性）；イソシアネート（ヒドロキシル反応性）；ビニルスルホン（チオール、アミン、及びヒドロキシル反応性）；ピリジルジスルフィド（チオール反応性）；及びベンゾフェノン誘導体（Ｃ－Ｈ結合挿入を介して反応性）、が含まれるが、これらに限定されない。さらなる試薬としては、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，２００８に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明は、イムノコンジュゲートの設計、調製及び使用に対する制限及び課題に対する解決策を提供する。一部のリンカーは、血流中で不安定であり、それにより、標的細胞内での内在化前に許容できない量のアジュバント／薬物を放出することがある（Ｋｈｏｔ，Ａ．ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｂｉｏａｎａｌｙｓｉｓ７（１３）：１６３３－１６４８）。他のリンカーは、血流中では安定性を提供し得るが、細胞内放出の有効性に悪影響が及ぼされ得る。所望の細胞内放出を提供するリンカーは典型的には、血流中での安定性に乏しい。換言すると、血流安定性及び細胞内放出は典型的には、反比例関係にある。さらに、標準的なコンジュゲーションプロセスにおいて、抗体上に負荷されたアジュバント／薬物部分、すなわち薬物負荷の量、コンジュゲーション反応において形成される凝集体の量、及び得ることができる最終精製コンジュゲートの収率は、相互に関係する。例えば、凝集体の形成は一般に、抗体にコンジュゲートされるアジュバント／薬物部分及びその誘導体の当量数に正相関する。高薬物負荷下では、形成された凝集体は、治療用途では除去されなければならない。結果として、薬物負荷媒介凝集体形成は、イムノコンジュゲートの収率を減少させ、プロセスの規模拡大を困難にする場合がある。
免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物の例示的な実施形態は、式ＩＩａ～ｆから選択され：
Figure 2023524271000048
Figure 2023524271000049
 式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニル、Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル、及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から独立して選択され、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールは、
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＲ６；
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）；
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－＊；
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）ＮＲ６－＊；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリール）；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）；
－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）－＊；
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）ＮＲ６－＊；
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ６－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）；
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－ＮＲ６－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）ＣＯ２Ｒ６；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｒ６；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－ＮＲ６（Ｃ２－Ｃ５ヘテロアリール）；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；
－Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６；
－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－＊；
－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｎ（Ｒ６）ＣＯ２Ｒ６；
－Ｎ（Ｒ６）ＣＯ２（Ｒ６）－＊；
－ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）２；
－ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
－ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｒ６；
－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ２－Ｃ５ヘテロアリール）；
－Ｎ（Ｒ６）－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）；
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）；
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；及び
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＨ；から選択される１つ以上の基で独立して任意選択で置換されており；
または式ＩｃもしくはＩｄのＲ２及びＲ３は一緒になって５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、及びＸ５は、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）、Ｏ、Ｎ（Ｒ６）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、及びＳ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ６）からなる群から独立して選択され；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及びＣ１－Ｃ１２アルキルジイル、からなる群から選択されるか、または２つのＲ６基が一緒になって５員または６員のヘテロシクリル環を形成しており；
Ｒ６ａは、Ｃ６－Ｃ２０アリール及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から選択され；
ここでアスタリスク＊は、Ｌの結合部位を示し、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５のうちの１つが、Ｌに結合しており；
Ｌは、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｎ（Ｒ６）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｎ＋（Ｒ６）２－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ６）ＣＨ（ＡＡ１）Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－Ｃ（＝Ｏ）；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－；
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－；
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－、からなる群から選択され；
ＰＥＧは、式：－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－を有し；ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり；
ＥｓＰＥＰは、２～１２アミノ酸残基を含む、エラスターゼ－基質ペプチドリンカーユニットであり；
Ｑは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ２及びＳＯ３ －から独立して選択される１つ以上の基で置換されたＮ－ヒドロキシスクシンイミジル、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル、マレイミド、及びフェノキシからなる群から選択され；
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール、及びヘテロアリールジイルは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＦ２、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＨＦ２、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨＣＨ３、－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯ２ＣＨ３、－ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＯＮＨ２、－ＣＯＮＨＣＨ３、－ＣＯＮ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣＯＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、－ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－ＮＯ２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＳＣＨ３、－Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、及び－Ｓ（Ｏ）３Ｈ、から独立して選択される１つ以上の基で、独立して及び任意選択で置換される。
免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物の例示的な実施形態は、式：
Figure 2023524271000050
 を有し；
式中、ＴＦＰは、２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシである。
免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物の例示的な実施形態は、ＰＥＧが式：－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２５－（ＣＨ２）２－または－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１０－（ＣＨ２）２－を有するものを含む。
免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物の例示的な実施形態は、ＩＩｅ～ｈから選択される構造を含み：
Figure 2023524271000051
Figure 2023524271000052
 式中、波線は、Ｌを介した抗体への結合を示す。
免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物の例示的な実施形態は、ＩＩｉ～ｌから選択される構造を含み：
Figure 2023524271000053
 式中、波線は、Ｌを介した抗体への結合を示す。
本発明は、式ＩＩの実施形態のすべての合理的な組み合わせ、及び特徴の順列を含む。
式ＩＩの免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物の例示的な実施形態は、表１ａ及び１ｂから選択される。各化合物は、本明細書に提供する実施例の方法により合成し、精製し、質量分析によって特徴決定を行い、示された質量を有することが示された。表１ａ及び１ｂの化合物は、抗体にコンジュゲートされると、がん及び他の障害を治療するための有用な治療活性を予測し得る驚くべき予想外の特性を示す。
Figure 2023524271000054
Figure 2023524271000055
Figure 2023524271000056
イムノコンジュゲート
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、式Ｉを有する、エラスターゼ基質ペプチドリンカーによって１つ以上の免疫刺激部分に共有結合した細胞結合剤を含む：
細胞結合剤の標的特性は、腫瘍部位でのイムノコンジュゲートの蓄積を促進し得、その場合、炎症性刺激が好中球などの腫瘍浸潤白血球の動員をもたらす。後者の活性化は、エラスターゼの放出を促進し、腫瘍微小環境でのペイロード放出を引き起こす。遊離ペイロードが腫瘍塊に拡散し、多種多様な細胞（抗原陰性がん細胞、内皮及び他のがん関連宿主細胞など）に対して作用して、局所的な損傷をもたらすため、この活性化様式は潜在的な治療上の利点をもたらし得る（Ｌｉ，Ｆ．ｅｔ ａｌ（２０１６）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７６：２７１０－２７１９）。親油性免疫刺激部分は、膜透過性がいわゆる「傍観者効果」によって生物学的活性を促進し得るため、この戦略に最も適している可能性がある。
本発明は、エラスターゼ基質ペプチドリンカーによって１つ以上の免疫刺激部分に共有結合した細胞結合剤を含むイムノコンジュゲートを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、細胞結合剤が抗体である場合を含む。
抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトであり得る。抗体は、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、及びアベルマブ、またはそのバイオシミラーもしくはバイオベターからなる群から選択され得る。
抗体は、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトであり得る。抗体は、トラスツズマブ及びペルツズマブ、またはそのバイオシミラーもしくはバイオベターからなる群から選択され得る。
抗体は、ＣＥＡに結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトであり得る。抗体は、ラベツズマブ、またはそのバイオシミラーもしくはバイオベターであり得る。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、１つ以上の免疫刺激部分がパターン認識受容体であるものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、１つ以上の免疫刺激性部分が、ＴＬＲ、ＳＴＩＮＧ、ＮＯＤ２、ＲＩＧ－１、及びＮＬＲＰ３からなる群から選択される受容体と相互作用するかまたは調節することを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、式Ｉ：
Ａｂ－［Ｌ－Ｉｍｓ］ｐ Ｉ
またはその薬学的に許容される塩を有し、
式中：
Ａｂは抗体であり；
Ｌは、エラスターゼ基質ペプチドリンカーユニットを含むリンカーであり；
Ｉｍｓは免疫刺激部分であり；及び
ｐは、１～８の整数である。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、Ｉｍｓが式Ｉａ～ｆから選択されるものを含み：
Figure 2023524271000057
Figure 2023524271000058
 式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニル、Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル、及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から独立して選択され、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールは、
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＲ６；
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）；
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－＊；
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）ＮＲ６－＊；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリール）；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）；
－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）－＊；
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）ＮＲ６－＊；
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ６－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）；
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－ＮＲ６－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）ＣＯ２Ｒ６；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｒ６；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－ＮＲ６（Ｃ２－Ｃ５ヘテロアリール）；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；
－Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６；
－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－＊；
－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｎ（Ｒ６）ＣＯ２Ｒ６；
－Ｎ（Ｒ６）ＣＯ２（Ｒ６）－＊；
－ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）２；
－ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
－ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｒ６；
－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ２－Ｃ６ヘテロアリール）；
－Ｎ（Ｒ６）－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）；
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）；
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；及び
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＨ、から選択される１つ以上の基で独立して任意選択で置換されており；
または式ＩｃもしくはＩｄのＲ２及びＲ３は、一緒になって５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、及びＸ５は、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）、Ｏ、Ｎ（Ｒ６）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、及びＳ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ６）からなる群から独立して選択され；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及びＣ１－Ｃ１２アルキルジイル、からなる群から選択されるか、または２つのＲ６基が一緒になって５員または６員のヘテロシクリル環を形成しており；
Ｒ６ａは、Ｃ６－Ｃ２０アリール及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から選択され；
ここでアスタリスク＊は、Ｌの結合部位を示し、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５のうちの１つが、Ｌに結合しており；
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール、及びヘテロアリールジイルは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＦ２、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＨＦ２、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨＣＨ３、－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯ２ＣＨ３、－ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＯＮＨ２、－ＣＯＮＨＣＨ３、－ＣＯＮ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣＯＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、－ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－ＮＯ２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＳＣＨ３、－Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、及び－Ｓ（Ｏ）３Ｈ、から独立して選択される１つ以上の基で独立して任意選択で置換される。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５のうちの１つが、式：
Figure 2023524271000059
 から選択されるものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、Ｉｍｓが式Ｉｇ：
Figure 2023524271000060
 を有するものを含み、
式中、Ｘａ及びＸｂは、５員ヘテロアリールから独立して選択され；
Ｒ１は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、及び－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ６アルキルジイル）からなる群から選択され、
Ｒ２ａ及びＲ２ｂは、独立して－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２から選択され；
Ｒ３は、Ｃ１－Ｃ６アルキルジイル、－（Ｃ１－Ｃ３アルキルジイル）－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ３アルキルジイル）－、Ｃ２－Ｃ６アルケニルジイル及びＣ２－Ｃ６アルキニルジイルから選択され、Ｆ、Ｃｌ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２から選択される１つ以上の基で、任意選択で置換され；
Ｒ４は：
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊；
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊；
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊；
－Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊；
－Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊；
－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊
からなる群から選択され；
式中、アスタリスク＊は、Ｌの結合部位を示し；
Ｒ５は、独立してＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであるか、または２つのＲ５基が、一緒になって５員または６員のヘテロシクリル環を形成し；
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール、及びヘテロアリールジイルは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＦ２、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＨＦ２、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨＣＨ３、－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯ２ＣＨ３、－ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＯＮＨ２、－ＣＯＮＨＣＨ３、－ＣＯＮ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣＯＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、－ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－ＮＯ２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ、－ＯＣＨ２Ｆ、－ＯＣＨＦ２、－ＯＣＦ３、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＳＣＨ３、－Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、及び－Ｓ（Ｏ）３Ｈ、から独立して選択される１つ以上の基で独立して任意選択で置換される。
式Ｉｇの例示的な実施形態は、Ｘａ及びＸｂが、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、オキサジアゾリル、及びチアジアゾリルからなる群から独立して選択されるものを含む。
式Ｉｇの例示的な実施形態は、Ｘａ及びＸｂが、それぞれピラゾリルであり、１つ以上のＣ１－Ｃ１２アルキル基で置換されているものを含む。
式Ｉｇの例示的な実施形態は、式中、Ｒ１が、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、及び－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２からなる群から選択されるものを含む。
式Ｉｇの例示的な実施形態は、Ｒ１が－ＯＣＨ３であるものを含む。
式Ｉｇの例示的な実施形態は、Ｒ１がＦであるものを含む。
式Ｉｇの例示的な実施形態は、Ｒ２ａ及びＲ２ｂが、それぞれ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であるものを含む。
式Ｉｇの例示的な実施形態は、Ｒ３が、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ＝ＣＨ－、及び－Ｃ≡Ｃ－から選択されるものを含む。
式Ｉｇの例示的な実施形態は、Ｒ３が、Ｆ、－ＯＨ、及び－ＯＣＨ３から選択される１つ以上の基で置換されたＣ２－Ｃ４アルケニルジイルであるものを含む。
式Ｉｇの例示的な実施形態は、Ｒ４が－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊であるものを含む。
式Ｉｇの例示的な実施形態は、Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイルがプロピルジイルであり、Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイルがピペリジイルであるものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、Ｌが：
－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｎ（Ｒ６）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｎ＋（Ｒ６）２－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ６）ＣＨ（ＡＡ１）Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－Ｃ（＝Ｏ）；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
－（スクシンイミジル）－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－
からなる群から選択されるものを含み；
ＰＥＧは、式：－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－を有し；ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり；
ＥｓＰＥＰは、２～１２個のアミノ酸残基を含む、エラスターゼ基質ペプチドリンカーユニットであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及びＣ１－Ｃ１２アルキルジイルからなる群から選択されるか、または２つのＲ６基が一緒になって５員または６員のヘテロシクリル環を形成し；
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール、及びヘテロアリールジイルは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＦ２、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＨＦ２、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨＣＨ３、－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯ２ＣＨ３、－ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＯＮＨ２、－ＣＯＮＨＣＨ３、－ＣＯＮ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣＯＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、－ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－ＮＯ２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＳＣＨ３、－Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、及び－Ｓ（Ｏ）３Ｈ、から独立して選択される１つ以上の基で独立して任意選択で置換される。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、ＥｓＰＥＰが、式：
Figure 2023524271000061
 を有するものを含み、
式中、ＡＡは、天然もしくは非天然のアミノ酸側鎖から独立して選択されるか、または１つ以上のＡＡと、隣接する窒素原子が５員環のプロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示し；
Ｃｙｃは、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイルから選択され、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ２、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、及び構造：
Figure 2023524271000062
 を有するグルクロン酸から選択される１つ以上の基で、任意選択で置換され；
Ｒ７は、－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２Ｎ（Ｒ８）－、及び－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択され、Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－Ｃ６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２から選択され、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－ＯＨからなる群から独立して選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ９基が、一緒になって５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し、
ｙは２～１２の整数であり；
ｚは０または１である。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、ｙが、２、３、及び４から選択されるものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、ＥｓＰＥＰが、式：
Figure 2023524271000063
 を有するトリペプチドであり、
式中、ＡＡ１、ＡＡ２、及びＡＡ３は、天然または非天然のアミノ酸から独立して選択され、波線は結合点を示し；
Ｃｙｃは、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイルから選択され、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ２、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、及び構造：
Figure 2023524271000064
 を有するグルクロン酸から選択される１つ以上の基で、任意選択で置換され；
Ｒ７は、－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２Ｎ（Ｒ８）－、及び－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択され、Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－Ｃ６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２から選択され、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－ＯＨからなる群から独立して選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ９基が、一緒になって５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し；
ｚは、０または１である。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、ＡＡ１がメチルであり、ＡＡ２がプロリンを形成し、ＡＡ３がイソプロピルであるものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態には、ＥｓＰＥＰが、式：
Figure 2023524271000065
 を有するものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、ＥｓＰＥＰが、式：
Figure 2023524271000066
Figure 2023524271000067
 を有するものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、Ｌが：
－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－であるものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、ＰＥＧが：
－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２５－（ＣＨ２）２－であるものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、式：
Figure 2023524271000068
 を有するものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、Ｉｍｓが、式ＩＩｃ：
Figure 2023524271000069
 を有するものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、Ｉｍｓが、構造：
Figure 2023524271000070
 を有するものを含み、
式中、波線は、リンカーへの接続部位を示す。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、ＥｓＰＥＰが、式：
Figure 2023524271000071
 を有するトリペプチドであるものを含み、式中、ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、及びＡＡ４は、天然または非天然のアミノ酸から独立して選択され、波線は結合点を示し；
Ｃｙｃは、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイルから選択され、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ２、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、及び構造：
Figure 2023524271000072
 を有するグルクロン酸から選択される１つ以上の基で、任意選択で置換され；
Ｒ７は、－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２Ｎ（Ｒ８）－、及び－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択され、Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－Ｃ６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２から選択され、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－ＯＨからなる群から独立して選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ９基が一緒になって５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し；
ｚは、０または１である。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、
ＡＡ１が、Ａｂｕ、Ａｌａ、及びＶａｌからなる群から選択され；
ＡＡ２が、Ｎｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）、Ｏｉｃ、及びＰｒｏからなる群から選択され；
ＡＡ３が、Ａｌａ及びＭｅｔ（Ｏ）２からなる群から選択され；
ＡＡ４が、Ｏｉｃ、Ａｒｇ（ＮＯ２）、Ｂｐａ、及びＮｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）からなる群から選択されるものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、ＥｓＰＥＰが、式：
Figure 2023524271000073
 を有するものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、ＥｓＰＥＰが、式：
Figure 2023524271000074
 を有するものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、ＩＩｅ～ｈから選択される構造を含み：
Figure 2023524271000075
 式中、波線は、Ｌを介した抗体への結合を示す。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、ＩＩｉ～Ｉから選択される構造を含み：
Figure 2023524271000076
 式中、波線は、Ｌを介した抗体への結合を示す。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、Ｒ２及びＲ３が、それぞれＣ１－Ｃ８アルキルであるものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３であるものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、Ｘ２及びＸ３が、それぞれ結合であり、Ｒ２またはＲ３が－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）であるものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、Ｒ２またはＲ３が－ＯＣＨ２ＣＨ３であるものを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、エラスターゼ基質ペプチドリンカーが、エラスターゼによって切断されることを含む。
イムノコンジュゲートの例示的な実施形態は、構造：
Figure 2023524271000077
Figure 2023524271000078
 を有する。
本発明は、式Ｉの実施形態のすべての合理的な組み合わせ、及び特徴の順列を含む。
薬物負荷は、ｐによって表される、式Ｉのイムノコンジュゲートにおける１抗体当たりの免疫刺激部分の数である。薬物（免疫刺激剤）負荷は、１抗体当たり１～８個の薬物部分（Ｄ）の範囲であり得る。式Ｉのイムノコンジュゲートは、１～約８個の範囲の薬物部分にコンジュゲートされた抗体の混合物または集合体を含む。いくつかの実施形態において、抗体にコンジュゲートすることができる薬物部分の数は、リシン及びシステインなどの反応性または利用可能なアミノ酸側鎖残基の数によって限定される。いくつかの実施形態において、遊離システイン残基は、本明細書に記載される方法によって抗体アミノ酸配列中に導入される。そのような態様において、ｐは、１、２、３、４、５、６、７、または８、及びその範囲、例として、１～８または２～５であり得る。そのような態様において、ｐ及びｎは等しい（すなわち、ｐ＝ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、もしくは８、またはその間の範囲）。式Ｉの例示的なイムノコンジュゲートとしては、１、２、３、または４つの操作されたシステインアミノ酸を有する抗体が挙げられるが、これらに限定されない（Ｌｙｏｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍ．５０２：１２３－１３８）。いくつかの実施形態において、１つ以上の遊離システイン残基が、操作を使用することなく、抗体においてすでに存在して、鎖内ジスルフィド結合を形成する。その場合、既存の遊離システイン残基を使用して、抗体を薬物にコンジュゲートしてもよい。いくつかの実施形態において、抗体は、１つ以上の遊離システイン残基を生成するために、抗体のコンジュゲーション前に還元条件に曝露される。
一部の抗イムノコンジュゲートについて、ｐは、抗体上の結合部位の数によって限定され得る。例えば、本明細書に記載されるある特定の例示的な実施形態におけるように、結合がシステインチオールである場合、抗体は、１つのみもしくは限定された数のシステインチオール基を有し得るか、または１つのみもしくは限定された数の反応性が十分なチオール基を有し得、それに、薬物が結合され得る。他の実施形態において、抗体中の１つ以上のリジンアミノ基が利用可能であり、式ＩＩの免疫抑制剤－リンカー化合物とのコンジュゲーションに対して反応性であり得る。ある特定の実施形態において、より高い薬物負荷、例えば、５超のｐは、ある特定の抗体－薬物コンジュゲートにおいて凝集、不溶性、毒性、または細胞透過性の喪失を引き起こし得る。ある特定の実施形態において、イムノコンジュゲートの平均薬物負荷は、１～約８；約２～約６；または約３～約５の範囲である。ある特定の実施形態において、抗体は、リシンまたはシステインなどの反応性求核基を明らかにするために変性条件に供される。
イムノコンジュゲートの負荷（薬物／抗体比）は、異なる方式で、ならびに例えば、（ｉ）抗体と比較してモル過剰の免疫抑制剤－リンカー中間体化合物を制限すること、（ｉｉ）コンジュゲーション反応時間または温度を制限すること、及び（ｉｉｉ）最適化された抗体反応性のための部分的または限定的な還元的変性条件、によって制御され得る。
抗体の２つ以上の求核性基が薬物と反応する場合、結果として生じる生成物は、抗体に結合した１つ以上の薬物部分が分布するイムノコンジュゲート化合物の混合物である。１抗体当たりの薬物平均数は、抗体に特異的かつ薬物に特異的である、二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から算出されてもよい。個々のイムノコンジュゲート分子は、質量分析法によって混合物中で同定され、ＨＰＬＣ、例えば、疎水相互作用クロマトグラフィーによって、分離されてもよい（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ １９（７）：２９９－３０７；Ｈａｍｂｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３－７０７０；Ｈａｍｂｌｅｔｔ， Ｋ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ－ＣＤ３０ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７－３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００４；Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７－３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００４を参照されたい）。ある特定の実施形態において、単一の負荷値を有する同種のイムノコンジュゲートが、電気泳動またはクロマトグラフィーによってコンジュゲーション混合物から単離されてもよい。
イムノコンジュゲートの生物学的活性
図９は、ＲＡＷ２６４．７マウスのマクロファージ細胞及びＨＣＣ１９５４ ＨＥＲ２発現腫瘍細胞との共培養実験におけるＴＮＦα産生によって測定される効力を測定するグラフを示す。この実験では、エラスターゼ切断性リンカー（Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ）イムノコンジュゲートＩＳＡＣ－１と、カテプシンＢ切断性リンカー（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）イムノコンジュゲートＩＳＡＣ－２を比較した。ＩＳＡＣ－１とＩＳＡＣ－２の抗体は、抗ＨＥＲ２トラスツズマブである。ＩＳＡＣ－２のＶａｌ－Ｃｉｔリンカーユニットは、既知のカテプシンＢ基質である。細胞を、エフェクター（マクロファージ）対標的（ＨＣＣ１９５４腫瘍細胞）比１０：１で一晩培養し、マウスＴＮＦαを、炎症誘発性応答の読み出しとしてＥＬＩＳＡで測定した。データからは、ＩＳＡＣ－１が、カテプシンＢ切断性ペプチド（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）ＩＳＡＣ－２と比較して、効力が増加していることが示された。
ＲＡＷ２６４．７マウスのマクロファージ細胞株は、ベンダーのプロトコル（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）及び実施例２０３に従って培養した。
イムノコンジュゲートの医薬組成物
本発明は、本明細書に記載の複数のイムノコンジュゲート及び任意選択でそのための担体、例えば、薬学的もしくは薬理学的に許容される担体を含む、組成物、例えば、薬学的もしくは薬理学的に許容される組成物または製剤を提供する。イムノコンジュゲートは、組成が同じであっても異なっていてもよい、すなわち、組成物は、抗体コンストラクト上の同じ位置に連結された同じ数の免疫刺激剤を有するイムノコンジュゲート、及び／または抗体コンストラクト上の異なる位置に連結された同じ数の免疫刺激剤を有するイムノコンジュゲート、抗体コンストラクト上の同じ位置に連結された異なる数の免疫刺激剤を有するイムノコンジュゲートか、もしくは抗体コンストラクト上の異なる位置に連結された異なる数の免疫刺激剤を有するイムノコンジュゲート、を含み得る。
例示的な実施形態において、医薬組成物は、治療有効量のイムノコンジュゲート、及び１つ以上の薬学的に許容される希釈剤、ビヒクル、担体または賦形剤を含む。
例示的な実施形態において、イムノコンジュゲート化合物を含む組成物は、イムノコンジュゲート化合物の混合物を含み、イムノコンジュゲート化合物の混合物中の１抗体当たりの平均薬物（免疫刺激部分）負荷は、約２～約５である。
本発明のイムノコンジュゲートの組成物は、約０．４対約１０の平均アジュバント対抗体コンストラクト比（ＤＡＲ）を有することができる。当業者は、抗体コンストラクトにコンジュゲートした免疫刺激部分の数が、本発明の複数のイムノコンジュゲートを含む組成物中のイムノコンジュゲートよって異なっている場合があることを認識するであろう。したがって、アジュバント対抗体コンストラクト（例えば、抗体）比を、平均として測定することができ、これは、薬物対抗体比（ＤＡＲ）と呼ばれることがある。アジュバント対抗体コンストラクト（例えば、抗体）比は、任意の好適な手段によって評価することができ、その多くは当技術分野で知られている。
コンジュゲーション反応からイムノコンジュゲートを調製する上での１抗体当たりのアジュバント部分の平均数（ＤＡＲ）は、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣなどの従来の手段によって特徴付けることができる。ｐの単位での組成物中のイムノコンジュゲートの定量的分布もまた、決定することができる。いくつかの事例において、ｐがある特定の値である同種のイムノコンジュゲートの、他の薬物負荷を有するイムノコンジュゲートからの分離、精製、及び特性評価は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって達成されてもよい。
いくつかの実施形態において、組成物は、１つ以上の薬学的または薬理学的に許容される賦形剤をさらに含む。例えば、本発明のイムノコンジュゲートは、静脈内投与または体腔または臓器の内腔への投与などの非経口投与のために製剤化することができる。あるいは、イムノコンジュゲートを腫瘍内に注射することができる。注射用の組成物は、一般に、薬学的に許容される担体に溶解したイムノコンジュゲートの溶液を含む。用いることができる許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水及び塩化ナトリウムなどの１つ以上の塩の等張液、例えば、リンゲル液がある。加えて、滅菌不揮発性油を、溶媒または懸濁媒として慣習的に用いることができる。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激性不揮発性油を用いることができる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸を、注射剤の調製において同様に使用することができる。これらの組成物は、望ましくは減菌であり、一般に望ましくない物質を含まない。これらの組成物を、従来の、周知の減菌技術によって減菌することができる。組成物は、生理学的条件に近似させるために必要とされる、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、浸透圧調整剤（ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｄｊｕｓｔｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）などの薬学的に許容可能な補助物質、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含有してもよい。
組成物は、任意の好適な濃度のイムノコンジュゲートを含有することができる。組成物中のイムノコンジュゲートの濃度は大きく変動する可能性があり、選択された特定の投与様式及び患者のニーズに従って、主に流体量、粘度、体重などに基づいて選択される。ある特定の実施形態において、注射用の溶液製剤中のイムノコンジュゲートの濃度は、約０．１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）の範囲である。
イムノコンジュゲートによりがんを治療する方法
本発明は、がんを治療するための方法を提供する。この方法は、治療有効量の本明細書に記載のイムノコンジュゲートを（例えば、本明細書に記載の組成物として）それを必要とする対象、例えば、がんを有し、がんの治療を必要とする対象に投与することを含む。この方法は、治療有効量のイムノコンジュゲート（ＩＣ）を投与することを含む。
ある特定の実施形態において、本発明のイムノコンジュゲート化合物は、免疫刺激活性を有するものを含む。本発明のイムノコンジュゲートは、有効用量の免疫刺激剤を腫瘍組織に選択的に送達し、それによって、非コンジュゲート免疫刺激剤と比較して治療指数（「治療濃度域」）を増加させながら、より高い選択性（すなわち、より低い効果的用量）が達成され得る。
例示的な実施形態では、本発明は、治療に使用するための医薬組成物を提供する。
本発明は、免疫関連障害を有する患者に治療有効量のイムノコンジュゲートを投与することを含む治療方法を提供する。イムノコンジュゲートのエラスターゼ－基質ペプチドリンカーは、エラスターゼによって切断され得る。
本発明のイムノコンジュゲートを使用して、種々の過剰増殖性疾患または障害、例えば、腫瘍抗原の過剰発現を特徴とするものを治療することができることが企図される。例示的な過剰増殖性障害には、良性または悪性の固形腫瘍、ならびに白血病及びリンパ系腫瘍などの血液学的疾患が含まれる。
別の態様において、医薬として使用するためのイムノコンジュゲートが提供される。ある特定の実施形態において、本発明は、有効量のイムノコンジュゲートを個体に投与することを含む、個体を治療する方法における使用のためのイムノコンジュゲートを提供する。そのような一実施形態において、この方法は、例えば、本明細書に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することを更に含む。
さらなる態様において、本発明は、医薬の製造または調製における、イムノコンジュゲートの使用を提供する。一実施形態において、医薬は、がんの治療のためのものであり、この方法は、がんを有する個体に有効量の医薬を投与することを含む。そのような一実施形態において、この方法は、例えば、本明細書に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することを更に含む。
癌腫は、上皮組織に由来する悪性腫瘍である。上皮細胞は、体の外面を覆い、内部の空洞を裏打ちし、腺組織の裏打ちを形成する。癌腫の例としては、腺癌（乳癌、膵臓癌、肺癌、前立腺癌、胃癌、胃食道接合部癌、及び結腸癌などの腺（分泌）細胞で発生するがん）副腎皮質癌；肝細胞癌；腎細胞癌；卵巣癌；上皮内癌；腺管癌；乳癌；基底細胞癌；扁平上皮癌；移行上皮癌；結腸癌；鼻咽頭癌；多房性嚢胞状腎細胞癌；燕麦細胞癌；大細胞肺癌；小細胞肺癌；非小細胞肺癌；などが挙げられるが、これらに限定されない。癌腫は、前立腺、膵臓、結腸、脳（通常は二次転移として）、肺、乳房、及び皮膚に見られることがある。いくつかの実施形態において、非小細胞肺癌を治療するための方法は、ＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベター）を含有するイムノコンジュゲートを投与することを含む。いくつかの実施形態において、乳癌を治療するための方法は、ＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベター）を含有するイムノコンジュゲートを投与することを含む。いくつかの実施形態において、トリプルネガティブ乳癌を治療するための方法は、ＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベター）を含有するイムノコンジュゲートを投与することを含む。
軟部組織腫瘍は、結合組織に由来する非常に多様な希少腫瘍の群である。軟部組織腫瘍の例としては、胞巣状軟部肉腫；血管腫様線維性組織球腫；軟骨粘液線維腫（ｃｈｏｎｄｒｏｍｙｏｘｉｄ ｆｉｂｒｏｍａ）；骨系統軟骨肉腫；骨外性粘液型軟骨肉腫；明細胞肉腫；維形成性小円形細胞腫瘍；隆起性皮膚線維肉腫；子宮内膜間質腫瘍；ユーイング肉腫；線維腫症（デスモイド）；乳児線維肉腫（ｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ，ｉｎｆａｎｔｉｌｅ）；消化管間質腫瘍；骨巨細胞腫瘍；腱鞘巨細胞腫；炎症性筋線維芽細胞腫瘍；子宮平滑筋腫；平滑筋肉腫；脂肪芽細胞腫；典型脂肪腫；紡錘細胞脂肪腫または多形性脂肪腫；異型脂肪腫；軟骨性脂肪腫；高分化型脂肪肉腫；粘液性／円形細胞脂肪肉腫；多形性脂肪腫；粘液性悪性線維性組織球腫；高悪性度悪性線維性組織球腫；粘液線維肉腫；悪性末梢神経鞘腫瘍；中皮腫；神経芽細胞腫；骨軟骨腫；骨肉腫；未分化神経外胚葉性腫瘍；胞巣状横紋筋肉腫；胎児型横紋筋肉腫；良性または悪性シュワン腫；滑膜肉腫；エバンス腫瘍；結節性筋膜炎；デスモイド型線維腫症；孤立性線維性腫瘍；隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）；血管肉腫；類上皮血管内皮腫；腱鞘巨細胞腫（ＴＧＣＴ）；色素性絨毛結節性滑膜炎（ＰＶＮＳ）；線維性骨異形成症；粘液線維肉腫；線維肉腫；滑膜肉腫；悪性末梢神経鞘腫瘍；神経線維腫；軟部組織の多形性腺腫；ならびに線維芽細胞、筋線維芽細胞、組織球、血管細胞／内皮細胞、及び神経鞘細胞に由来する新生物が挙げられるが、これらに限定されない。
肉腫は、間葉系由来の細胞、例えば、軟骨、脂肪、筋肉、血管、線維組織、または他の結合組織もしくは支持組織を含む骨または体の軟組織で発生する希少なタイプのがんである。さまざまなタイプの肉腫は、がんが発生する場所に基づいている。例えば、骨肉腫は骨に、脂肪肉腫は脂肪に、横紋筋肉腫は筋肉に発生する。肉腫の例としては、アスキン腫瘍；ブドウ状肉腫；軟骨肉腫；ユーイング肉腫；悪性血管内皮腫；悪性神経鞘腫；骨肉腫；及び軟部肉腫（例えば、胞巣状軟部肉腫；血管肉腫；葉状嚢胞肉腫；隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）；デスモイド腫瘍；線維形成性小円形細胞腫瘍；類上皮肉腫；骨外性軟骨肉腫；骨外性骨肉腫；線維肉腫；消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）；血管周囲細胞腫；血管肉腫（ｈｅｍａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）（より一般的には「血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）」と呼ばれる）；カポジ肉腫；平滑筋肉腫；脂肪肉腫；リンパ管肉腫；悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）；神経線維肉腫；滑膜肉腫；及び未分化多形性肉腫）、が挙げられるが、これらに限定されない。
奇形腫は、例えば、毛髪、筋肉、及び骨など、いくつかの異なるタイプの組織を含有する場合がある胚細胞腫瘍の一種である（例えば、３つの胚葉：内胚葉、中胚葉、及び外胚葉のいずれか及び／またはすべてに由来する組織を含めることができる）。奇形腫は、女性において卵巣で、男性において睾丸で、及び子供において尾骨で最も頻繁に発生する。
黒色腫は、メラノサイト（色素メラニンを作る細胞）で始まるがんの一形態である。黒色腫は、ほくろ（皮膚黒色腫）で始まる場合があるが、目や腸などの他の色素性組織で始まる場合もある。
メルケル細胞癌は、希少なタイプの皮膚癌であり、通常、顔、頭、または首に肌色または青みがかった赤色の結節として現れる。メルケル細胞癌は、皮膚の神経内分泌癌とも呼ばれる。いくつかの実施形態において、メルケル細胞癌を治療するための方法は、ＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベター）を含有するイムノコンジュゲートを投与することを含む。いくつかの実施形態において、メルケル細胞癌は、投与が行われるときに転移している。
白血病は、骨髄などの造血組織で発生し、多数の異常な血球を生成させて血流に入れるがんである。例えば、白血病は、通常は血流で成熟する骨髄由来細胞において発生する可能性がある。白血病は、疾患の発症及び進行の速さ（例えば、急性と慢性）、及び影響を受ける白血球の種類（例えば、骨髄とリンパ球）にちなんで名付けられている。骨髄性白血病は、骨髄白血病または骨髄芽球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病は、リンパ芽球性白血病またはリンパ球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病細胞はリンパ節に集合し、腫脹する場合がある。白血病の例としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、が挙げられるが、これらに限定されない。
リンパ腫は、免疫系の細胞で始まるがんである。例えば、リンパ腫は、通常はリンパ系で成熟する骨髄由来細胞において発生する可能性がある。リンパ腫には２つの基本的なカテゴリーがある。リンパ腫の１つのカテゴリーはホジキンリンパ腫（ＨＬ）であり、リードシュテルンベルク細胞と呼ばれる細胞のタイプの存在によって特徴付けられる。現在、６種の認識されているＨＬのタイプが存在する。ホジキンリンパ腫の例としては、結節性硬化型古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、混合細胞型ＣＨＬ、リンパ球減少型ＣＨＬ、リンパ球豊富型ＣＨＬ、及び結節性リンパ球優位型ＨＬが挙げられる。
リンパ腫の他のカテゴリーは非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であり、これには免疫系細胞のがんの大規模で多様な群を含む。非ホジキンリンパ腫は、緩徐な（成長の遅い）経過を有するがんと、攻撃的な（成長の速い）経過を有するがんにさらに分けることができる。現在、６１種の認識されているＮＨＬのタイプが存在する。非ホジキンリンパ腫の例としては、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、血液免疫芽細胞性リンパ腫、芽細胞性ＮＫ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキット様リンパ腫（小型非開裂細胞性リンパ腫）、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、肝脾ガンマ・デルタＴ細胞リンパ腫、Ｔ細胞白血病、リンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、鼻Ｔ細胞リンパ腫、小児リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、形質転換リンパ腫、治療関連Ｔ細胞リンパ腫、及びワルデンストレームマクログロブリン血症が挙げられるが、これらに限定されない。
脳癌には、脳組織の任意のがんが含まれる。脳癌の例としては、神経膠腫（例えば、神経膠芽腫、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫など）、髄膜腫、下垂体腺腫、及び前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明のイムノコンジュゲートは、治療法において、単独で、または他の薬剤と組み合わせてのいずれかで使用することができる。例えば、イムノコンジュゲートは、化学療法剤などの少なくとも１つの追加の治療剤とともに同時投与され得る。このような併用療法は、組み合わせた投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）、及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、イムノコンジュゲートの投与は、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与の前、それと同時、及び／またはその後に行われ得る。イムノコンジュゲートはまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
本発明のイムノコンジュゲート（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに局所治療のために所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、投与が短期であるか、または長期であるかに部分的に依存して、任意の好適な経路、例として、静脈内または皮下注射などの注射によるものであってよい。種々の時点での単回または複数回投与、ボーラス投与、及びパルス点滴を含むがこれらに限定されない種々の投薬スケジュールが、本明細書において企図される。
アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、及びそれらのバイオベターは、がん、特に乳癌、特にトリプルネガティブ（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、及び過剰なＨＥＲ２タンパク質の検査で陰性）乳癌、膀胱癌、及びメルケル細胞癌の治療に有用であることが知られている。本明細書に記載のイムノコンジュゲートを使用して、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、及びそれらのバイオベターの場合と同じタイプのがん、特に乳癌、特にトリプルネガティブ（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、及び過剰なＨＥＲ２タンパク質の検査で陰性）乳癌、膀胱癌及びメルケル細胞癌を治療することができる。
イムノコンジュゲートは、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、及びそれらのバイオベターに利用される投薬レジメンなどの任意の好適な投薬レジメンを使用して、治療有効量でそれを必要とする対象に投与される。例えば、方法は、対象に約１００ｎｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの用量を提供するためのイムノコンジュゲートを投与することを含むことができる。イムノコンジュゲートの用量は、約５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。イムノコンジュゲートの用量は、約１００、２００、３００、４００、または５００μｇ／ｋｇであり得る。イムノコンジュゲートの用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇであり得る。イムノコンジュゲートの用量は、特定のコンジュゲート、ならびに治療されるがんのタイプ及び重症度に応じて、これらの範囲外にもなり得る。投与の頻度は、週あたり単回投与から複数回投与までの範囲、またはより頻繁であり得る。いくつかの実施形態において、イムノコンジュゲートは、月に約１回～週に約５回投与される。いくつかの実施形態において、イムノコンジュゲートは、週に１回投与される。
別の態様において、本発明は、がんを予防するための方法を提供する。この方法は、治療有効量のイムノコンジュゲートを（例えば、上記のような組成物として）対象に投与することを含む。ある特定の実施形態において、対象は、予防されるべきある特定のがんに感受性である。例えば、方法は、対象に約１００ｎｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの用量を提供するためのイムノコンジュゲートを投与することを含むことができる。イムノコンジュゲートの用量は、約５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。イムノコンジュゲートの用量は、約１００、２００、３００、４００、または５００μｇ／ｋｇであり得る。イムノコンジュゲートの用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇであり得る。イムノコンジュゲートの用量は、特定のコンジュゲート、ならびに治療されるがんのタイプ及び重症度に応じて、これらの範囲外にもなり得る。投与の頻度は、週あたり単回投与から複数回投与までの範囲、またはより頻繁であり得る。いくつかの実施形態において、イムノコンジュゲートは、月に約１回～週に約５回投与される。いくつかの実施形態において、イムノコンジュゲートは、週に１回投与される。
本発明のいくつかの実施形態は、がんが乳癌である、上記のようながんを治療するための方法を提供する。乳癌は、乳房のさまざまな領域から発生する可能性があり、さまざまなタイプの複数の乳がんが特徴付けられる。例えば、本発明のイムノコンジュゲートは、非浸潤性乳管癌；浸潤性乳管癌（例えば、乳房の管状癌；髄様癌；粘液癌；乳頭癌；または篩状癌）；非浸潤性小葉癌；浸潤性小葉癌；炎症性乳癌；及びトリプルネガティブ（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、及び過剰なＨＥＲ２タンパク質の検査で陰性）乳癌などの他の形態の乳癌を治療するために使用することができる。いくつかの実施形態において、乳癌を治療するための方法は、ＨＥＲ２に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、それらのバイオシミラー、またはバイオベター）及びＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはバイオベター）を含有するイムノコンジュゲートを投与することを含む。いくつかの実施形態において、結腸癌、肺癌、腎癌、膵臓癌、胃癌、及び食道癌を治療するための方法は、ＣＥＡ、またはＣＥＡを過剰発現する腫瘍に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、ラベツズマブ、それらのバイオシミラー、またはバイオベター）を含有するイムノコンジュゲートを投与することを含む。
いくつかの実施形態において、がんは、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８によって誘発される炎症誘発性応答に感受性である。
免疫刺激化合物及び中間体の調製
実施例１ ２，３，５，６－テトラフルオロフェニル（Ｒ）－１－（（Ｓ）－２－（（（Ｓ）－１－（（４－（（（（（１－（（３－（２－アミノ－４－（ジプロピルカルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）フェニル）スルホニル）アゼチジン－３－イル）メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－２－メチル－１，４－ジオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９－ペンタコサオキサ－３－アザドオクタコンタン－８２－オエート、ＩＩ－１の合成
Ｏ２－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）Ｏ１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル）（２Ｓ）－ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート、ＩＩ－１ｂの調製
Figure 2023524271000079
 （２Ｓ）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル）ピロリジン－２－カルボン酸、ＩＩ－１ａ（１５ｇ、４４．５ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（２００ｍＬ）溶液に、１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（５．１２ｇ、４４．５ｍｍｏｌ、１．０当量）及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、ＥＤＣＩ（１０．２ｇ、５３．４４ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。混合物を２０℃で１２時間撹拌し、次いでＮａＨＣＯ３の飽和水溶液（７０ｍＬ×３）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、ＩＩ－１ｂ（１７．５ｇ、４０．２８ｍｍｏｌ、収率９０．６０％）を白色の固体として得た。
（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル）ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタン酸、ＩＩ－１ｃの調製
（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタン酸（４．９５ｇ、４２．３ｍｍｏｌ、１．０５当量）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液に、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）中のＮａＨＣＯ３（３．５５ｇ、４２．３ｍｍｏｌ、１．６４ｍＬ、１．０５当量）及びＩＩ－１ｂ（１７．５ｇ、４０．２８ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、２０℃で１２時間撹拌した。混合物を、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルＭＴＢＥ（２×１００ｍＬ）で抽出した（廃棄した）。水層のｐＨをＨＣｌ（６Ｍ）で５～６に調整し、ＥｔＯＡｃ（３×２００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、ＩＩ－１ｃ（１５ｇ、３４．３６ｍｍｏｌ、収率８５．３１％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ４００ ＭＨｚ） δ７．８０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７０－７．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４３－７．２８ （ｍ， ４Ｈ）， ４．４９－４．１５ （ｍ， ５Ｈ）， ３．６９ －３．３８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４２－２．０１ （ｍ， ３Ｈ）， ２．００－１．８２ （ｍ， ２Ｈ）， １．０１－０．８６ （ｍ， ６Ｈ）
９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（２Ｓ）－２－［［（１Ｓ）－１－［［４－（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］ピロリジン－１－カルボキシレート、ＩＩ－１ｄの調製
ＭｅＯＨ（８０ｍＬ）及びＤＣＭ（８０ｍＬ）中のＩＩ－１ｃ（１０ｇ、２２．９ｍｍｏｌ、１．０当量）及び（４－アミノフェニル）メタノール（４．２３ｇ、３４．４ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液に、Ｎ－エトキシカルボニル－２－エトキシ－１，２－ジヒドロキノリンＥＥＤＱ（８．５０ｇ、３４．３６ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、２０℃で１２時間撹拌した。混合物を真空で濃縮して残留物を得、残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（シリカフラッシュカラム、６５ｍＬ／分で０～４０％酢酸エチル／ＭｅＯＨの溶離液）により精製した。粗生成物をＥｔＯＡｃで２０℃にて２０分間摩砕して、ＩＩ－１ｄ（１３ｇ、２４．０ｍｍｏｌ、収率５２．３８％）を黄色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ４００ ＭＨｚ） δ ７．８５－７．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．６８－７．４８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．４７－７．１６ （ｍ， ７Ｈ）， ４．５３ （ｄ， Ｊ ＝ １５．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４９－ ４．４１ （ｍ， １Ｈ）， ４．４０－４．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３２－４．２７ （ｍ， １Ｈ）， ４．２６－４．１７ （ｍ， １Ｈ）， ４．１６－４．０７ （ｍ， １Ｈ）， ３．６９－３．３８ （ｍ， ２Ｈ） ），２．４０－２．０５ （ｍ、２Ｈ），１．９９－１．８２ （ｍ，２Ｈ），１．０８－０．８８ （ｍ，６Ｈ）
（２Ｓ）－Ｎ－［（１Ｓ）－１－［［４－（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］ピロリジン－２－カルボキサミド、ＩＩ－１ｅの調製
ＩＩ－１ｄ（１３ｇ、２４．０ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（１３０ｍＬ）溶液に、ピペリジン（１０．２２ｇ、１２０ｍｍｏｌ、１１．８５ｍＬ、５．０当量）を加え、２０℃で２時間撹拌した。混合物を濃縮して残留物を得、残留物をＥｔＯＡｃで２０℃にて２０分間摩砕して、ＩＩ－１ｅ（８ｇ、粗製）を白色の固体として得た。
９Ｈ－フルオレン－９－イルメチルＮ－［（１Ｒ）－２－［（２Ｓ）－２－［［（１Ｓ）－１－［［４－（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］ピロリジン－１－イル］－１－メチル－２－オキソ－エチル］カルバメート、ＩＩ－１ｆの調製
（２Ｒ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパン酸 （２．７３ｇ、８．７７ｍｍｏｌ、１．４当量）のＤＣＭ（３０ｍＬ）溶液に、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム ３－オキシドヘキサフルオロホスフェート；ヘキサフルオロホスフェート アザベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム、ＨＡＴＵ（２．５０ｇ、６．５７ｍｍｏｌ、１．０５当量）、４－メチルモルホリン（１．９０ｇ、１８．８ｍｍｏｌ、２．０７ｍＬ、３．０当量）、及びＩＩ－１ｅ（２ｇ、６．２６ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、２０℃で２時間撹拌した。混合物を水（４０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；３．５ｇ ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、４５ｍＬ／分で０～１００％酢酸エチル／石油エーテル勾配の溶離液）によって精製して、ＩＩ－１ｆ（１．８ｇ、２．９４ｍｍｏｌ、収率４６．９２％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ４００ ＭＨｚ） δ ７．８３－７．７１ （ｍ， ４Ｈ）， ７．５６－７．４５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３９－７．２０ （ｍ， ６Ｈ）， ４．５３－４．４１ （ｍ， ４Ｈ）， ４．０５－３．９３ （ｍ ， ２Ｈ）， ３．８２－３．６４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１８－３．０８ （ｍ， １Ｈ）， ２．５３－２．４２ （ｍ， １Ｈ）， ２．３８－２．２６ （ｍ， １Ｈ）， ２．１０－２．０４ （ｍ， ２Ｈ）， １．３７ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．０６－０．９６ （ｍ， ６Ｈ）
［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｒ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル（４－ニトロフェニル）カーボネート、ＩＩ－１ｇの調製
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中のＩＩ－１ｆ（１．８ｇ、２．９４ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＤＩＥＡ（５６９ｍｇ、４．４１ｍｍｏｌ、７６７μＬ、１．５当量）及びビス（４－ニトロフェニル）カーボネート（１．０７ｇ、３．５３ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、次いで２０℃で１２時間撹拌した。混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；４ｇのＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム）、４５ｍＬ／分で０～１００％の濃度勾配の酢酸エチル／石油エーテルの溶離液）によって精製して、ＩＩ－１ｇ（１．１ｇ、１．４１ｍｍｏｌ、収率４８．１４％）を淡黄色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ４００ ＭＨｚ） δ ８．５７ （ｓ， １Ｈ）， ８．１９－８．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ８．００ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７４－７．６３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３８－７．２５ （ｍ， ７Ｈ）， ７．２３－７．１４ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０８ （ｄ， Ｊ ＝ １０．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１８－５．１６ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．０， ４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４４－４．３２ （ｍ， １Ｈ）， ４．１０－４．０３ （ｍ， １Ｈ）， ３．９８－３．８２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６８－３．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７９－２．６７ （ｍ， １Ｈ）， ２．４１－２．２１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１７－２．０６ （ｍ， ２Ｈ）， １．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ６Ｈ）
ＩＩ－１ｌの調製
Figure 2023524271000080
ｔｅｒｔ－ブチル（（１－（（３－ブロモフェニル）スルホニル）アゼチジン－３－イル）メチル）カルバメート、ＩＩ－１ｈの調製
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル Ｎ－（アゼチジン－３－イルメチル）カルバメート（１．６ｇ、８．５９ｍｍｏｌ、１．２当量）の混合物に、トリエチルアミン（ＴＥＡ）（１．４５ｇ、１４．３２ｍｍｏｌ、１．９９ｍＬ、２当量）及び３－ブロモベンゼンスルホニルクロリド（１．８３ｇ、７．１６ｍｍｏｌ、１．０３ｍＬ、１当量）を０℃で加えた。混合物を２０℃で１時間撹拌した。混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２５ｍｌ×３）で抽出した。有機層をブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；４ｇのＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、３５ｍＬ／分で０～１００％の濃度勾配の酢酸エチル／石油エーテルの溶離液）によって精製した。化合物ＩＩ－１ｈ（２．５ｇ、６．１７ｍｍｏｌ、収率８６．１６％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ４００ ＭＨｚ） δ ７．９９ （ｔ， Ｊ ＝ ４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７４－７．８１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４７ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６１ （ｓ， １Ｈ）， ３．８６ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５０－３．５８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１９ （ｔ， Ｊ ＝ ４．０ ２Ｈ）， ２．５８－２．７０ （ｍ， １Ｈ）， １．４２ （ｓ， ９Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル Ｎ－［［１－［３－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェニル］スルホニルアゼチジン－３－イル］メチル］カルバメート、ＩＩ－１ｉの調製
ジオキサン（１０ｍＬ）中のＩＩ－１ｈ（１ｇ、２．４７ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’－オクタメチル－２，２’－ビ（１，３，２－ジオキサボロラン）、Ｐｉｎ２Ｂ２（９３９．８０ｍｇ、３．７０ｍｍｏｌ、１．５当量）及びＫＯＡｃ（４８４．２９ｍｇ、４．９３ｍｍｏｌ、２当量）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（９０．２７ｍｇ、１２３．３６μｍｏｌ、０．０５当量）を、１５℃、Ｎ２下で加えた。混合物を１１０℃で２時間撹拌した。生成物ＩＩ－１ｉは単離せず、次のステップに使用した。
ｔｅｒｔ－ブチル（（１－（（３－（２－アミノ－４－（ジプロピルカルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）フェニル）スルホニル）アゼチジン－３－イル）メチル）カルバメート、ＩＩ－１ｋの調製
ジオキサン（３ｍＬ）中のＩＩ－１ｉ（１．１２ｇ、２．４８ｍｍｏｌ、１当量）及び２－アミノ－８－ブロモ－Ｎ，Ｎ－ジプロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＩＩ－１ｊ（９０１．９０ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、Ｋ２ＣＯ３（６８４．３５ｍｇ、４．９５ｍｍｏｌ、２当量）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（９０．５８ｍｇ、１２３．７９μｍｏｌ、０．０５当量）をＮ２下、１５℃で加えた。混合物を１２０℃で２時間撹拌した。混合物を濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；２ｇ ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、０～１００％の濃度勾配の酢酸エチル／石油エーテル、６０ｍＬ／分の溶離液）によって精製して、ＩＩ－１ｋ（６００ｍｇ、９８３．９７μｍｏｌ、収率３９．７４％、純度１００％）を黄色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ－ｄ４， ４００ ＭＨｚ） δ ７．９９－８．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７４－７．８６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３６－７．５２ （ｍ， ３Ｈ）， ６．８９ （ｓ， １Ｈ）， ３．８３ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５４ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３４－３．４８ （ｍ， ６Ｈ）， ３．０２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．４８－２．６４ （ｍ， １Ｈ）， １．５９－１．７６ （ｍ， ４Ｈ）， １．３７ （ｓ， ９Ｈ）， ０．９６－０．８９ （ｍ， ６Ｈ）． ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ ６１０．３１ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ ６１０．４０ （実測値）。
２－アミノ－８－［３－［３－（アミノメチル）アゼチジン－１－イル］スルホニルフェニル］－Ｎ，Ｎ－ジプロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＩＩ－１ｌの調製
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のＩＩ－１ｋ（０．１５ｇ、２４５．９９μｍｏｌ、１当量）の溶液に、２５℃でＴＦＡ（５６．１０ｍｇ、４９１．９８μｍｏｌ、３６．４３μＬ、２当量）を加え、１時間撹拌した。混合物を４０℃で、減圧下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ ５ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２５％～５０％、１０分）によって精製して、ＩＩ－１ｌ（０．０５４６ｇ、１０５．６９μｍｏｌ、収率４２．９７％、純度９８．６６％）を黄色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ－ｄ４， ４００ ＭＨｚ） δ ８．１６－８．０７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．９２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７９－７．７２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０９ （ｓ， １Ｈ）， ３．９６ （ｔ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６７－３．６３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５０－３．４２ （ｍ， ４Ｈ）， ３．３７ （ｓ， ２Ｈ）， ３．０５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．７８－２．６５ （ｍ， １Ｈ）， １．７５－１．６６ （ｍ， ４Ｈ）， １．０８－０．８２ （ｍ， ６Ｈ）． ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ ５１０．２５ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ ５１０．１０ （実測値）。
［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｒ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル Ｎ－［［１－［３－［２－アミノ－４－（ジプロピルカルバモイル）－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］フェニル］スルホニルアゼチジン－３－イル］メチル］カルバメート、ＩＩ－１ｍの調製
Figure 2023524271000081
 ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＩＩ－１ｌ（１００ｍｇ、１９６ｕｍｏｌ、１．０当量）及びＩＩ－１ｇ（１５３ｍｇ、１９６ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、ＤＩＥＡ（５０．７ｍｇ、３９２ｕｍｏｌ、６８．３ｕＬ、２．０当量）を２５℃、Ｎ２下で加え、次いで２５℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ ８ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：３５％～６０％、１０分）により精製して、ＩＩ－１ｍ（７０ｍｇ、６０．９６ｕｍｏｌ、収率３１．０７％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６， ４００ ＭＨｚ） δ１２．１６ （ｓ， １Ｈ）， １０．１０ （ｓ， １Ｈ）， ９．８２ （ｓ， ２Ｈ）， ９．５５ （ｓ， １Ｈ）， ９．２３ （ｓ， ２Ｈ）， ８．３３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０９－８．０６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．９７ （ｓ， １Ｈ）， ７．９０－７．４８ （ｍ， １４Ｈ）， ７．４２－７．１１ （ｍ， ６Ｈ）， ７．０１ （ｓ， １Ｈ）， ４．８３－４．７９ （ｍ， ３Ｈ）， ４．４０－３．９３ （ｍ， ９Ｈ）， ３．７９－３．６６ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５７－３．４５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．２９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．９５－２．８３ （ｍ， ３Ｈ）， ２．２０－１．９５ （ｍ， ２Ｈ）， １．９１－１．８３ （ｍ， ３Ｈ）， １．７３－１．６７ （ｍ， １Ｈ）， １．６１－１．４６ （ｍ， ３Ｈ）， １．２０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．０５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ０．９３－０．６６ （ｍ， １２Ｈ）． ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １１４８．５ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １１４８．６ （実測値）。
（Ｒ）－１－（（Ｓ）－２－（（（Ｓ）－１－（（４－（（（（（１－（（３－（２－アミノ－４－（ジプロピルカルバモイル））－３Ｈ）－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）フェニル）スルホニル）アゼチジン－３－イル）メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－２－メチル－１，４－ジオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９－ペンタコサオキサ－３－アザドオクタコンタン－８２－オイック酸、ＩＩ－１ｎの調製
Ｆｍｏｃ－アミン、ＩＩ－１ｍ（０．０１４ｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ中の５０％ジエチルアミンに溶解し、室温で放置した。脱保護が完了したら、溶液を一晩濃縮した。粗製物質に、ＤＣＭ中のＰＥＧ２５－ＮＨＳ、７９－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－７９－オキソ－４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６－ペンタコサオキサノヘプタコン酸（０．０２０ｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、１当量）の溶液を加え、続いてＴＥＡ（０．０１ｍｌ、０．０７２ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。反応混合物を濃縮し、ＨＰＬＣによって精製して、ＩＩ－１ｎ（０．０２１ｇ、０．０１ｍｍｏｌ、６５％）を得た。ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋２Ｈ］ １０６４．５７ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋２Ｈ］ １０６４．７０ （実測値）。
ＩＩ－１の調製：酸、ＩＩ－１ｎ（０．０２１ｇ、０．００９７ｍｍｏｌ、１当量）及び２，３，５，６－テトラフルオロフェノール、ＴＦＰ（０．００３２ｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、２当量）を１ｍｌのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解した。コリジン（トリメチルピリジン、０．００６ｍｌ、０．０４８ｍｍｏｌ、５当量）を加え、続いてＥＤＣ－ＨＣｌ（０．００５６ｇ、０．０２９ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。反応物を室温で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングし、次いでＨＰＬＣによって精製して、テトラフルオロフェノール（ＴＦＰ）エステル、ＩＩ－１（０．００９７ｇ、０．００４３ｍｍｏｌ、４４％）を得た。ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋２Ｈ］ １１３８．５７ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋２Ｈ］ １１３８．７３ （実測値）。
実施例２ ２，３，５，６－テトラフルオロフェニル（Ｒ）－１－（（Ｓ）－２－（（（Ｓ）－１－（（４－（（（（１－（（３－（２－アミノ－４－（（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）フェニル）スルホニル）アゼチジン－３－イル）メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－２－メチル－１，４－ジオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９－ペンタコサオキサ－３－アザドオクタコンタン－８２－オエート、ＩＩ－２の合成
Figure 2023524271000082
Figure 2023524271000083
 ［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｒ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル Ｎ－［［１－［３－［２－アミノ－４－［３－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）プロピル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］フェニル］スルホニルアゼチジン－３－イル］メチル］カルバメート、ＩＩ－２ｂの調製
ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＮ－［３－［［２－アミノ－８－［３－［３－（アミノメチル）アゼチジン－１－イル］スルホニルフェニル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］プロピル］カルバメート、ＩＩ－２ａ（１００ｍｇ、１６０μｍｏｌ、１．０当量）及び［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｒ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル（４－ニトロフェニル）カーボネート、ＩＩ－１ｇ（１２５ｍｇ、１６０μｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、ＤＩＥＡ（４１．４ｍｇ、３２０ｕｍｏｌ、５５．７ｕＬ、２．０当量）をＮ２下、２５℃で加え、次いで２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００＊３０ｍｍ ８ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：３５％～６０％、１０分）により精製して、ＩＩ－２ｂ（５８ｍｇ、４５．９０ｕｍｏｌ、収率２８．６８％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６， ４００ ＭＨｚ） δ１２．１４ （ｓ， ２Ｈ）， １０．０９ （ｓ， １Ｈ）， ９．８２ （ｓ， １Ｈ）， ９．５５ （ｓ， １Ｈ）， ９．２０ （ｓ， ２Ｈ）， ８．３２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０８ （ｓ， １Ｈ）， ７．９７ （ｓ， １Ｈ）， ７．８９－７．６２ （ｍ， ８Ｈ）， ７．６２－７．４９ （ｍ， ４Ｈ）， ７．４１－７．１３ （ｍ， ５Ｈ）， ７．０１ （ｓ， １Ｈ）， ６．８１ （ｓ， １Ｈ）， ４．８３－４．８０ （ｍ， ３Ｈ）， ４．４１－３．９６ （ｍ， ７Ｈ）， ３．７８－３．６５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３８－３．２２ （ｍ， ７Ｈ）， ２．９４－２．８６ （ｍ， ５Ｈ）， ２．１９－１．９７ （ｍ， １Ｈ）， １．９２－１．８４ （ｍ， ３Ｈ）， １．７４－１．６１ （ｍ， ３Ｈ）， １．５８－１．４８ （ｍ， ３Ｈ）， １．４１－１．００ （ｍ， １２Ｈ）， ０．９３－０．７５ （ｍ， ９Ｈ）． ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １２６３．６ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １２６３．６ （実測値）。
（Ｒ）－１－（（Ｓ）－２－（（（Ｓ）－１－（（４－（（（（（１－（（３－（２－アミノ－４－（（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）フェニル）スルホニル）アゼチジン－３－イル）メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－２－メチル－１，４－ジオキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６，７９－ペンタコサオキサ－３－アザドオクタコンタン－８２－オイック酸、ＩＩ－２ｃの調製
Ｆｍｏｃ－アミン、ＩＩ－２ｂ（０．０３ｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、１当量）を、ＤＣＭ中の５０％ジエチルアミンに溶解し、室温で放置した。脱保護が完了したら、溶液を一晩濃縮した。粗製物質に、ＤＣＭ中のＰＥＧ２５－ＮＨＳ、７９－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－７９－オキソ－４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６－ペンタコサオキサノヘプタコンタン酸（０．０３１ｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、１当量）の溶液を加え、続いてＴＥＡ（０．０１ｍｌ、０．０７２ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。反応混合物を濃縮し、ＨＰＬＣにより精製して、ＩＩ－２ｃ（０．０１５ｇ、０．００６６ｍｍｏｌ、２８％）を得た。ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋２Ｈ］ １１２２．１０ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋２Ｈ］ １１２２．４０ （実測値）。
ＩＩ－２の調製：酸ＩＩ－２ｃ（０．０１５ｇ、０．００６６ｍｍｏｌ、１当量）及びＴＦＰ（０．００２２ｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、２当量）を１ｍｌのＤＭＦに溶解した。コリジン（０．００４ｍｌ、０．０３３ｍｍｏｌ、５当量）を加え、続いてＥＤＣ－ＨＣｌ；１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩；ＣＡＳ２５９５２－５３－８（０．００３８ｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、３当量）を加えた。反応物を室温で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングし、次いでＨＰＬＣによって精製して、ＴＦＰエステル、ＩＩ－２（０．００９ｇ、０．００３８ｍｍｏｌ、５７％）を得た。ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋２Ｈ］ １１９６．１０ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋２Ｈ］ １１９６．４０ （実測値）。
実施例３ ２，３，５，６－テトラフルオロフェニル３４－（（Ｓ）－２－（（（Ｓ）－１－（（４－（（（（１－（（３－（２－アミノ－４－（（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）フェニル）スルホニル）アゼチジン－３－イル）メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３４－オキソ－４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１－デカオキサテトラトリアコンタノエート、ＩＩ－３の合成
Figure 2023524271000084
Figure 2023524271000085
 ９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（２Ｓ）－２－［［（１Ｓ）－２－メチル－１－［［４－［（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシメチル］フェニル］カルバモイル］プロピル］カルバモイル］ピロリジン－１－カルボン酸塩、ＩＩ－３ａの調製
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（２Ｓ）－２－［［（１Ｓ）－１－［［４－（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］ピロリジン－１－カルボキシレート、ＩＩ－１ｄ（１ｇ、１．８５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、ＤＩＥＡ（３５８ｍｇ、２．７７ｍｍｏｌ、４８２ｕＬ、１．５当量）及びビス（４－ニトロフェニル）カーボネート（６７４ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、次いで２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）で分配した。有機相を分離し、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１：０～０：１）で精製して、ＩＩ－３ａ（５５０ｍｇ、７７８ｕｍｏｌ、収率４２．２％）を得た。
９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（２Ｓ）－２－［［（１Ｓ）－１－［［４－［［１－［３－［２－アミノ－４－［３－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）プロピル］－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンズアゼピン－８－イル］フェニル］スルホニルアゼチジン－３－イル］メチルカルバモイルオキシメチル］フェニル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］ピロリジン－１－カルボキシレート、ＩＩ－３ｂの調製
ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル Ｎ－［３－［［２－アミノ－８－［３－［３－（アミノメチル）アゼチジン－１－イル］スルホニルフェニル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］プロピル］カルバメート、ＩＩ－２ａ（１００ｍｇ、１６０ｕｍｏｌ、１．０当量）及びＩＩ－３ａ（１１３ｍｇ、１６０ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（４１．４ｍｇ、３２０．１ｕｍｏｌ、５５．７ｕＬ、２．０当量）を２５℃で加えた。混合物を２５℃で０．５時間撹拌した。次いで、それを濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ－ｍｉｃｒｏ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８ １００＊３０ｍｍ ８ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：３５％～６５％、１０分）によって精製した。ＩＩ－３ｂ（７０ｍｇ、５８．７０ｕｍｏｌ、収率３６．６８％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６， ４００ ＭＨｚ） δ１２．０４ （ｓ， １Ｈ）， １０．１３－９．９９ （ｍ， ２Ｈ）， ９．８１ （ｓ， １Ｈ）， ９．０９ （ｓ， ２Ｈ）， ８．２０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０９ （ｓ， １Ｈ）， ７．９８ （ｓ， １Ｈ）， ７．８９－７．７０ （ｍ， ５Ｈ）， ７．６８－７．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５１ （ｔ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４２－７．２２ （ｍ， ５Ｈ）， ７．１８ （ｔ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．０２ （ｓ， １Ｈ）， ６．８１ （ｓ， １Ｈ）， ４．８２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．５６－４．５３ （ｍ， １Ｈ）， ４．３６－４．１４ （ｍ， ４Ｈ）， ４．０８－３．９２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７４ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３６－３．２２ （ｍ， ６Ｈ）， ２．９３－２．８９ （ｍ， ５Ｈ）， ２．２４－２．２０ （ｍ， １Ｈ）， ２．０３－１．７３ （ｍ， ６Ｈ）， １．７２－１．６１ （ｍ， ２Ｈ）， １．５６－１．５２ （ｍ， ２Ｈ）， １．４１－１．０８ （ｍ， ９Ｈ）， ０．９３－０．６０ （ｍ， ９Ｈ）． ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １１９２．６ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １１９２．６ （実測値）。
３４－（（Ｓ）－２－（（（Ｓ）－１－（（４－（（（（（１－（（３－（２－アミノ－４－（（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル））アミノ）プロピル）（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）フェニル）スルホニル）アゼチジン－３－イル）メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３４－オキソ－４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１－デカオキサテトラトリアコン酸、ＩＩ－３ｃの調製
Ｆｍｏｃ－アミン、ＩＩ－３ｂ（０．０３７ｇ、０．０３１ｍｍｏｌ、１当量）を０．５ｍｌのＤＭＦに溶解した。ジエチルアミン（０．１ｍｌ）を加え、反応物を室温で１時間放置した。反応混合物を濃縮し、生成物をジエチルエーテルで３回粉砕した。粗製物質に、アセトニトリル（ＡＣＮ）中のＰＥＧ１０－ＴＦＰ、３４－オキソ－３４－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）－４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１－デカオキサテトラトリアコンタン酸（０．０１８８ｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、０．８６当量）の溶液を加え、続いてトリエチルアミン（ＴＥＡ）（０．０２２ｍｌ、０．１６ｍｍｏｌ、５当量）及びＨＯＡｔ（０．００１７ｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、０．４当量）を加えた。完了したら、反応混合物を水で希釈し、生成物をＨＰＬＣで精製してＩＩ－３ｃ（０．０１６ｇ、０．０１ｍｍｏｌ、３３％）を得た。ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １５１０．７６ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １５１１．１４ （実測値）。
ＩＩ－３の調製：酸ＩＩ－３ａ（０．０１５６ｇ、０．０１０３ｍｍｏｌ、１当量）及びＴＦＰ（０．００４ｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、２．３当量）を１ｍｌのＡＣＮに溶解した。コリジン（０．００６８ｍｌ、０．０５１ｍｍｏｌ、５当量）を加え、続いてＥＤＣ－ＨＣｌ（０．００４５ｇ、０．０２３ｍｍｍｏｌ、２．２３当量）を加えた。反応物を室温で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングし、次いでＨＰＬＣによって精製して、ＴＦＰエステル、ＩＩ－３（０．００９７ｇ、０．００５８ｍｍｏｌ、５７％）を得た。ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １６５８．５６ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １６５９．１５ （実測値）。
実施例４ ［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｒ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル ４－［［５－アミノ－７－（ジプロピルカルバモイル）－６Ｈ－チエノ［３，２－ｂ］アゼピン－２－イル］メチル］ピペラジン－１－カルボキシレート、ＩＩ－４の合成
Figure 2023524271000086
 ＤＭＦ（１ｍＬ）中の５－アミノ－２－（ピペラジン－１－イルメチル）－Ｎ，Ｎ－ジプロピル－６Ｈ－チエノ［３，２－ｂ］アゼピン－７－カルボキサミド、ＩＩ－４ａ（１００ｍｇ、１６２ｕｍｏｌ、１．０当量、２ＴＦＡ）及び［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｒ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル（４－ニトロフェニル）カーボネート、ＩＩ－１ｇ（１３９ｍｇ、１７８ｕｍｏｌ、１．１当量）の混合物に、ＤＩＥＡ（６２．８ｍｇ、４８６ｕｍｏｌ、８４．６ｕＬ、３．０当量）を２０℃、Ｎ２下で加え、次いで２０℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０＊３０ｍｍ＊５ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：３５％～６５％、８分）によって精製して、ＩＩ－４（２４．５ｍｇ、２３．４０ｕｍｏｌ、収率１４．４５％、純度９８．１９％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ４００ ＭＨｚ） δ７．９１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．６， ３．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４３－７．３１ （ｍ， ６Ｈ）， ７．３０－７．２０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．１２ （ｓ， １Ｈ）， ５．０３ （ｓ， ２Ｈ）， ４．５８－４．５０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４６ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０７－３．９８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７８－３．６９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６２－３．５６ （ｍ， １Ｈ）， ３．５３－３．４３ （ｍ， ６Ｈ）， ３．４１ （ｓ， ３Ｈ）， ３．１１－２．８３ （ｍ， ４Ｈ）， ２．６０－２．４８ （ｍ， １Ｈ）， ２．４４－２．３１ （ｍ， １Ｈ）， ２．１７－２．０３ （ｍ， ３Ｈ）， １．７５－１．６３ （ｍ， ４Ｈ）， １．４２ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．０３－０．８７ （ｍ， １２Ｈ）． ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １０２８．５ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １０２８．５ （実測値）。
実施例５ ［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｒ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－］３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル Ｎ－［４－［［（１Ｓ）－１－（２－ヒドロキシエチル）ペンチル］アミノ］キナゾリン－２－イル］カルバメート、ＩＩ－５の合成
Figure 2023524271000087
Figure 2023524271000088
 Ｎ４－［（１Ｓ）－１－［２－［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシエチル］ペンチル］キナゾリン－２，４－ジアミン、ＩＩ－５ｂの調製
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（３Ｓ）－３－［（２－アミノキナゾリン－４－イル）アミノ］ヘプタン－１－オール、ＩＩ－５ａ（０．６９ｇ、２．５１ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物にイミダゾール（５１４ｍｇ、７．５４ｍｍｏｌ、３．０当量）及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＳＣｌ）（３７９ｍｇ、２．５１ｍｍｏｌ、１．０当量）を０℃で加え、次いで１５℃で１０時間撹拌した。混合物を水（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１：０～０／１）で精製して、ＩＩ－５ｂ（４００ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ、収率４０．９３％）を黄色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６， ４００ ＭＨｚ） δ８．０８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．９２ （ｓ， ２Ｈ）， ３．７３－３．６４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．２２－３．２１ （ｍ， １Ｈ）， １．８９－１．７８ （ｍ， ２Ｈ）， １．６５－１．６１ （ｍ， ２Ｈ）， １．３４－１．３１ （ｍ， ４Ｈ）， ０．９０－０．８６ （ｍ， １２Ｈ）， ０．００ （ｓ， ６Ｈ）。
［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｒ）－２－アミノプロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル Ｎ－［４－［［（１Ｓ）－１－［２－［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシエチル］ペンチル］アミノ］キナゾリン－２－イル］カルバメート、ＩＩ－５ｃの調製
ＴＨＦ（８ｍＬ）中のＩＩ－５ｂ（１１５ｍｇ、２９６ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、－７８℃でＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、２．９６ｍＬ、１０当量）を加え、次いでこの温度で０．５時間撹拌し、［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｒ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル（４－ニトロフェニル）カーボネート、ＩＩ－１ｇ（２３０ｍｇ、２９６ｕｍｏｌ、１．０当量）を加え、－７８℃で２時間撹拌した。反応物をＮＨ４Ｃｌ水溶液（１５ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、ＩＩ－５ｃ（０．３ｇ、粗製）を黄色の固体として得た。
［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｒ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル Ｎ－［４－［［（１Ｓ）－１－［２－［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシエチル］ペンチル］アミノ］キナゾリン－２－イル］カルバメート、ＩＩ－５ｄの調製
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のＩＩ－５ｃ（２９０ｍｇ、３６０ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、イミダゾール（７３．６ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、３．０当量）及びＦｍｏｃ－Ｃｌ；９Ｈ－フルオレン－９－イルメチルカルボノクロリデート（９３．２ｍｇ、３６０ｕｍｏｌ、１．０当量）を０℃で加え、次いで１５℃で１０時間撹拌した。反応混合物を水（５ｍＬ）で洗浄し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、ＩＩ－５ｄ（０．３７ｇ、３６０ｕｍｏｌ、収率９９％）を黄色の油状物として得た。
ＩＩ－５の調製：ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中のＩＩ－５ｄ（３００ｍｇ、２９２ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、塩化アセチル（２２．９ｍｇ、２９２ｕｍｏｌ、２０．８ｕＬ、１．０当量）を０℃で加え、次いで１５℃で２時間撹拌した。混合物を濃縮して残留物を得、残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：４０％～５６％、１０分）により精製して、（３０．４ｍｇ、２８．６６ｕｍｏｌ、収率９．８２％、純度９６．８４％、ＴＦＡ）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ４００ ＭＨｚ） δ８．８３ （ｓ， １Ｈ）， ８．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７７－７．６３ （ｍ， １Ｈ）， ７．５４－７．４８ （ｍ， １Ｈ）， ７．４７－７．３６ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３３－７．１７ （ｍ， ３Ｈ）， ７．１０－６．９７ （ｍ， ４Ｈ）， ５．２３－５．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６１－４．２８ （ｍ， ４Ｈ）， ３．９９－３．７３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６５－３．２６ （ｍ， ５Ｈ）， ２．４９－２．１６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１０－１．５７ （ｍ， ７Ｈ）， １．４４－１．１６ （ｍ， ７Ｈ）， １．０２－０．５８ （ｍ， ９Ｈ）． ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ ９１３．３ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ ９１３．３ （実測値）。
実施例６ ［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｒ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル ４－［［５－アミノ－７－［３－（３，３－ジメチルブタノイルアミノ）プロピル－プロピル－カルバモイル］－６Ｈ－チエノ［３，２－ｂ］アゼピン－２－イル］メチル］ピペラジン－１－カルボキシレート、ＩＩ－６の合成
Figure 2023524271000089
 ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の５－アミノ－Ｎ－［３－（３，３－ジメチルブタノイルアミノ）プロピル］－２－（ピペラジン－１－イルメチル）－Ｎ－プロピル－６Ｈ－チエノ［３，２－ｂ］アゼピン－７－カルボキサミド、ＩＩ－６ａ（１００ｍｇ、１７４ｕｍｏｌ、１．０当量、２ＨＣｌ）及びＤＩＥＡ（８９．８ｍｇ、６９５ｕｍｏｌ、１２１ｕＬ、４．０当量）の溶液に、［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｒ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル（４－ニトロフェニル）カーボネート、ＩＩ－１ｇ（１３３ｍｇ、１７０ｕｍｏｌ、１．０当量）を加えた。混合物をＮ２雰囲気下、２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：３５％～４５％、７分）により精製して、ＩＩ－６（５８．３ｍｇ、５１．０８ｕｍｏｌ、収率２９．４０％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ４００ ＭＨｚ） δ７．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．０， ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３８－７．２８ （ｍ， ５Ｈ）， ７．２７－７．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１３ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．９９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．５６－４．４８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４３ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２１－４．０５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０４－３．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７５－３．６５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５９－３．４７ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４６－３．３５ （ｍ， ６Ｈ）， ３．２１－３．１７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８６－２．６２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５５－２．４９ （ｍ， １Ｈ）， ２．４０－２．２８ （ｍ， １Ｈ）， ２．１５－１．９７ （ｍ， ５Ｈ）， １．８８－１．７８ （ｍ， ２Ｈ）， １．７１－１．５９ （ｍ， ２Ｈ）， １．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．０１－０．９７ （ｍ， ９Ｈ）， ０．９２－０．８６ （ｍ， ３Ｈ）． ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １１４１．６ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １１４１．５ （実測値）。
実施例７ ［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルアミノ］プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル ４－［３－［［（２Ｅ）－６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル］ブタ－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－１Ｈ－ベンゾイミダゾール－４－イル］オキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボキシレート、ＩＩ－７の合成
Figure 2023524271000090
Figure 2023524271000091
Figure 2023524271000092
 （Ｓ）－１－（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル）２－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート、７ｂの調製
ＤＣＭ（２００ｍＬ）中の（２Ｓ）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル）ピロリジン－２－カルボン酸、７ａ（１５ｇ、４４．５ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（５．１２ｇ、４４．５ｍｍｏｌ、１．０当量）及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ＥＤＣＩ、ＥＤＡＣ、ＥＤＣ、ＣＡＳ登録番号２５９５２－５３－８（１０．２ｇ、５３．４４ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、２０℃で１２時間撹拌した。混合物をＮａＨＣＯ３の飽和水溶液（７０ｍＬ×３）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、７ｂ（１７．５ｇ、４０．２８ｍｍｏｌ、収率９０．６０％）を白色の固体として得た。
（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル）ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタン酸、７ｃの調製
ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の（２Ｓ）－２－アミノ－３－メチル－ブタン酸、Ｌ－バリン（４．９５ｇ、４２．３ｍｍｏｌ、１．０５当量）の溶液に、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）中のＮａＨＣＯ３（３．５５ｇ、４２．３ｍｍｏｌ、１．６４ｍＬ、１．０５当量）及び７ｂ（１７．５ｇ、４０．２８ｍｍｏｌ、１．０当量）を加え、２０℃で１２時間撹拌した。混合物をＭＴＢＥ（２×１００ｍＬ）で抽出した（廃棄した）。水層のｐＨをＨＣｌ（６Ｍ）で５～６に調整し、ＥｔＯＡｃ（３×２００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、７ｃ（１５ｇ、３４．３６ｍｍｏｌ、収率８５．３１％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ４００ ＭＨｚ） δ７．８０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７０－７．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４３－７．２８ （ｍ， ４Ｈ）， ４．４９－４．１５ （ｍ， ５Ｈ）， ３．６９－３．３８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４２－２．０１ （ｍ， ３Ｈ）， ２．００－１．８２ （ｍ， ２Ｈ）， １．０１－０．８６ （ｍ， ６Ｈ）。
９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（２Ｓ）－２－［［（１Ｓ）－１－［［４－（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］ピロリジン－１－カルボキシレート、７ｄの調製
ＭｅＯＨ（８０ｍＬ）及びＤＣＭ（８０ｍＬ）中の溶液７ｃ（１０ｇ、２２．９ｍｍｏｌ、１．０当量）及び（４－アミノフェニル）メタノール（４．２３ｇ、３４．４ｍｍｏｌ、１．５当量）に、２－エトキシ－１－エトキシカルボニル－１，２－ジヒドロキノリン、ＥＥＤＱ、ＣＡＳ登録番号１６３５７－５９－８（８．５０ｇ、３４．３６ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、次いで２０℃で１２時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮して残留物を得、残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（シリカフラッシュカラム、０～４０％酢酸エチル／ＭｅＯＨ、６５ｍＬ／分の溶離液）により精製して、７ｄ（１３ｇ、２４．０ｍｍｏｌ、収率５２．３８％）を黄色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ４００ ＭＨｚ） δ７．８５－７．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．６８－７．４８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．４７－７．１６ （ｍ， ７Ｈ）， ４．５３ （ｄ， Ｊ ＝ １５．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４９－４．４１ （ｍ， １Ｈ）， ４．４０－４．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３２－４．２７ （ｍ， １Ｈ）， ４．２６－４．１７ （ｍ， １Ｈ）， ４．１６－４．０７ （ｍ， １Ｈ）， ３．６９－３．３８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４０－２．０５ （ｍ， ２Ｈ）， １．９９－１．８２ （ｍ， ２Ｈ）， １．０８－０．８８ （ｍ， ６Ｈ）。
（２Ｓ）－Ｎ－［（１Ｓ）－１－［［４－（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］ピロリジン－２－カルボキサミド、７ｅの調製
ＤＣＭ（１３０ｍＬ）中の７ｄ（１３ｇ、２４．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ピペリジン（１０．２２ｇ、１２０ｍｍｏｌ、１１．８５ｍＬ、５．０当量）を加え、次いで２０℃で２時間撹拌した。混合物を濃縮して残留物を得、残留物をＥｔＯＡｃで２０℃、２０分間摩砕して、７ｅ（８ｇ、粗製）を白色の固体として得た。
９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル Ｎ－［（１Ｓ）－２－［（２Ｓ）－２－［［（１Ｓ）－１－［［４－（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］ピロリジン－１－イル］－１－メチル－２－オキソ－エチル］カルバメート、７ｆの調製
ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパン酸（３．９５ｇ、１２．６８ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液に、１－ｂビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム ３－オキシドヘキサフルオロホスフェート、ヘキサフルオロホスフェート アザベンゾトリアゾール テトラメチルウロニウム、ＨＡＴＵ、ＣＡＳ登録番号１４８８９３－１０－１（４．８２ｇ、１２．６８ｍｍｏｌ、１．５当量）及びＤＩＰＥＡ（３．２８ｇ、２５．３６ｍｍｏｌ、４．４２ｍＬ、３当量）を０℃で加えた。添加後、混合物をこの温度で５分間撹拌し、次いで７ｅ（２．７ｇ、８．４５ｍｍｏｌ、１当量）を０℃で加え、次いで得られた混合物を０℃で２５分間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（１５０ｍＬ）の添加によりクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（７０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～０：１）、次いで（ＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ＝１：０～１０：１）で精製して、７ｆ（２．９４ｇ、４．８０ｍｍｏｌ、収率５６．７６％）をオフホワイトの固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ－ｄ４， ４００ＭＨｚ） δ７．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３５－７．２６ （ｍ， ４Ｈ）， ４．５９－４．５１ （ｍ， ３Ｈ）， ４．５０－４．４０ （ｍ， １Ｈ）， ４．３９－４．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２９－４．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８３－３．７１ （ｍ， １Ｈ）， ３．６８－３．６３ （ｍ， １Ｈ）， ２．３１－２．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０７－１．９１ （ｍ， ３Ｈ）， １．３６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．４， ９．６ Ｈｚ， ４Ｈ）， １．０３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．０， ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。
［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル（４－ニトロフェニル）カーボネート、７ｇの調製
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル Ｎ－［（１Ｓ）－２－［（２Ｓ）－２－［［（１Ｓ）－１－［［４－（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］カルバモイル］ピロリジン－１－イル］－１－メチル－２－オキソ－エチル］カルバメート（２．４ｇ、３．９２ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ビス（４－ニトロフェニル）カーボネート（２．３８ｇ、７．８３ｍｍｏｌ、２当量）及びＤＩＰＥＡ（１．０１ｇ、７．８３ｍｍｏｌ、１．３６ｍＬ、２当量）を加え、次いで２０℃で１時間撹拌した。Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）を０℃で加えて反応混合物をクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～０：１）によって精製して、７ｇ（２．７ｇ、３．４７ｍｍｏｌ、収率８８．６２％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ４００ＭＨｚ） δ ８．３２－８．２２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．７８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６７ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６０ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４６－７．２９ （ｍ， ８Ｈ）， ７．１８ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．６０ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２５ （ｓ， ２Ｈ）， ４．７０－４．６６ （ｍ， １Ｈ）， ４．６２－４．５２ （ｍ， １Ｈ）， ４．４６－４．２８ （ｍ， ３Ｈ）， ４．２８－４．１９ （ｍ， １Ｈ）， ３．８１－３．６８ （ｍ， １Ｈ）， ３．６２－３．５８ （ｍ， １Ｈ）， ２．４８－２．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１９－１．９８ （ｍ， ３Ｈ）， １．４１ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１０－０．９４ （ｍ， ６Ｈ）． ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ ７７８．３ （計算値）； ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ ７７８．２ （実測値）。
ｔｅｒｔ－ブチル ３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、７ｉの調製
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル ３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、７ｈ（１１．３ｇ、１９．３ｍｍｏｌ、１当量）、２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）酢酸（３ｇ、１９．３ｍｍｏｌ、１当量）及びＤＩＰＥＡ（１０．０ｇ、７７．４ｍｍｏｌ、１３．５ｍＬ、４当量）の溶液に、ＨＡＴＵ（８．０９ｇ、２１．３ｍｍｏｌ、１．１当量）を０℃で加え、次いで混合物を０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ ｃ１８ ２５０ｍｍ＊１００ｍｍ＊１０ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２５％～５５％、２５分）により精製して、７ｉ（４．５ｇ、６．２３ｍｍｏｌ、収率３２．２％）を黄色の油状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ４００ ＭＨｚ） δ６．８８－６．８０ （ｍ， １Ｈ）， ６．７８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２２ （ｓ， ２Ｈ）， ３．７７－３．５４ （ｍ， ４０Ｈ）， ３．４７ （ｑ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．５１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４６ （ｓ， ９Ｈ）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、７ｊの調製
ＣＨ３ＣＮ（２５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２５ｍＬ）中の７ｉ（４．５ｇ、６．２３ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＦＡ（５．６８ｇ、４９．８ｍｍｏｌ、３．６９ｍＬ、８当量）を加え、次いで８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＣＨ３ＣＮを除去した。残留物をＭＴＢＥ（１０ｍＬ×３）で抽出し、廃棄した。水相を減圧下で濃縮して残留物を得た。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ｃ１８ ２５０ｍｍ×１００ｍｍ×１０ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：０％～２５％、２４分）によって精製して、７ｊ（１．６ｇ、２．４０ｍｍｏｌ、収率３８．６％）を淡黄色の油状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ４００ ＭＨｚ） δ６．９５ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．７８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２２ （ｓ， ２Ｈ）， ３．７８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．７０－３．６３ （ｍ， ３６Ｈ）， ３．６０－３．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４６ （ｑ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．６１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）． ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）：質量 計算値 Ｃ４２Ｈ４３Ｎ５Ｏ１０ ６６７．３， ｍ／ｚ 実測値 ６６７．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
［４－［［（２Ｓ）－２－［［（２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－アミノプロパノイル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］－３－メチル－ブタノイル］アミノ］フェニル］メチル ４－［３－［［（２Ｅ）－６－カルバモイル－３－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンズイミダゾール－１－イル］ブト－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－１Ｈ－ベンズイミダゾール－４－イル］オキシ］プロピル］ピペラジン－１－カルボキシレート、７ｌの調製
ＤＭＦ（３．００ｍＬ）中の（２Ｅ）－１－［（Ｅ）－４－［（２Ｅ）－５－カルバモイル－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－（３－ピペラジン－１－イルプロポキシ）－３Ｈ－ベンズイミダゾール－１－イル］ブト－２－エニル］－２－（２－エチル－５－メチル－ピラゾール－３－カルボニル）イミノ－７－メトキシ－３Ｈ－ベンズイミダゾール－５－カルボキサミド、７ｋ（１５０ｍｇ、１５１ｕｍｏｌ、１当量、４ＨＣｌ）及び７ｇ（１２９ｍｇ、１６６ｕｍｏｌ、１．１当量）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（９７．０ｍｇ、７５４ｕｍｏｌ、１３１ｕＬ、５当量）を２０℃で加え、混合物をこの温度で２時間撹拌し、次いでピペリジン（３９．０ｍｇ、４５２．３５ｕｍｏｌ、４５．０ｕＬ、３当量）を加えた。混合物を２０℃でさらに２時間撹拌した。混合物を濾過し、残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％～４０％、８分）により精製して、７ｌ（９０ｍｇ、６０．２６ｕｍｏｌ、収率３９．９７％、２ＴＦＡ）を淡黄色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ４００ ＭＨｚ） δ７．６７－７．５３ （ｍ， ４Ｈ）， ７．３７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．２５ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．２， １４．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．６０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．８５－５．６８ （ｍ， ２Ｈ）， ５．１４ （ｓ， ２Ｈ）， ５．００ （ｂｒ ｓ， ５Ｈ）， ４．６４－４．５４ （ｍ， ４Ｈ）， ４．３３－４．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９５ （ｂｒ ｔ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．７４－３．５８ （ｍ， ５Ｈ）， ３．２５－３．１３ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２１ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１６－１．９２ （ｍ， ６Ｈ）， １．５２ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．４０－１．２９ （ｍ， ６Ｈ）， １．０８－０．９８ （ｍ， ６Ｈ）。
７の調製
ＤＭＦ（１．００ｍＬ）中の溶液７ｌ（５０ｍｇ、３３．５ｕｍｏｌ、１当量、２ＴＦＡ）及び７ｊ（２２．０ｍｇ、３３．５ｕｍｏｌ、１当量）に、Ｅｔ３Ｎ（７．００ｍｇ、６６．９ｕｍｏｌ、９．００ｕＬ、２当量）、１－プロパンホスホン酸無水物、Ｔ３Ｐ、ＣＡＳ登録番号６８９５７－９４－８（３２．０ｍｇ、５０．２ｕｍｏｌ、３０．０ｕＬ、純度５０％、１．５当量）を加え、次いで２０℃で２時間撹拌した。混合物を濾過し、残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４０％、８分）により精製して、７（１６ｍｇ、７．４７ｕｍｏｌ、収率２２．３１％、２ＴＦＡ）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ４００ ＭＨｚ） δ７．６８－７．５３ （ｍ， ４Ｈ）， ７．３７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３０－７．２０ （ｍ， ２Ｈ）， ６．８８ （ｓ， ２Ｈ）， ６．６０ （ｄ， Ｊ ＝ １２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．７８ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ５．１４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．９９ （ｂｒ ｓ， ４Ｈ）， ４．６８－４．４７ （ｍ， ８Ｈ）， ４．２９－４．２５ （ｍ， １Ｈ）， ４．１６ （ｓ， ３Ｈ）， ３．９６ （ｂｒ ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８０ （ｔｄ， Ｊ ＝ ６．８， ９．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．７４－３．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７０ （ｓ， ４Ｈ）， ３．６７－３．５６ （ｍ， ３６Ｈ）， ３．５３ （ｂｒ ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４８ （ｔｄ， Ｊ ＝ １．６， ３．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．３６ （ｂｒ ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．２３－３．１３ （ｍ， ４Ｈ）， ２．５４－２．４３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．２０ （ｄ， Ｊ ＝ １０．４ Ｈｚ， ６Ｈ）， ２．１８－２．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０６－１．９４ （ｍ， ５Ｈ）， １．４０－１．２８ （ｍ， ９Ｈ）， １．０２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．２， ６．４ Ｈｚ， ６Ｈ）． ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）： 質量 計算値 Ｃ４２Ｈ４３Ｎ５Ｏ１０ １９１３．９， ｍ／ｚ 実測値 １９１４．０ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例２０１ イムノコンジュゲート（ＩＣ）の調製
例示的な手順では、抗体を、Ｇ－２５ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）脱塩カラム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用して、ｐＨ８．３で、１００ｍＭホウ酸、５０ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭエチレンジアミン四酢酸を含有するコンジュゲーション緩衝液にバッファー交換する。次いで、溶出液を、緩衝液を使用してそれぞれ６ｍｇ／ｍｌに調整し、次に滅菌濾過する。６ｍｇ／ｍｌの抗体を、３０℃に予熱し、２～２０（例えば、７～１０）モル当量の免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物と急速に混合する。反応を３０℃で１６時間進行させ、ｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で平衡化した２つの連続するＧ－２５脱塩カラムを実行することにより、イムノコンジュゲートＡを反応物から分離し、表３のイムノコンジュゲート（ＩＣ）を提供する。アジュバント－抗体比（ＤＡＲ）を、ＸＥＶＯ（商標）Ｇ２－ＸＳ ＴＯＦ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に接続されたＡＣＱＵＩＴＹ（商標）ＵＰＬＣ Ｈクラス（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）のＣ４逆相カラムを使用した液体クロマトグラフィー質量分析によって決定する。
コンジュゲーションの場合、抗体を、抗体の安定性または抗原結合特異性に悪影響を及ぼさない、当技術分野で知られている生理学的緩衝液系に溶解してもよい。リン酸緩衝生理食塩水を使用することができる。免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物を、本明細書の別の箇所に記載される少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒を含む溶媒系に溶解する。いくつかのそのような態様において、免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー中間体を、ｐＨ８のトリス緩衝液（例えば、５０ｍＭのトリス）中に、約５ｍＭ、１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、または約５０ｍＭ、及びこれらの範囲、例えば、約５０ｍＭ～約５０ｍＭまたは約１０ｍＭ～約３０ｍＭの濃度になるまで溶解する。いくつかの態様において、免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー中間体は、ＤＭＳＯもしくはアセトニトリル中、またはＤＭＳＯ中に溶解される。コンジュゲーション反応において、当量過剰の免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー中間体溶液を、希釈し、冷却された抗体溶液（例えば、約１℃～約１０℃）と合わせる。免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー中間体溶液を、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒及び少なくとも１つの極性プロトン性溶媒で好適に希釈することができ、これらの例としては、水、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、及び酢酸が挙げられる。いくつかの特定の態様では、抗体溶液と混合する前に、チエノアゼピン－リンカー中間体をＤＭＳＯに溶解し、アセトニトリル及び水で希釈する。免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー中間体の抗体に対するモル当量は、約１．５：１、約３：１、約５：１、約１０：１、約１５：１または約２０：１、及びこれらの範囲内、例えば、約１．５：１～約２０：１、約１．５：１～約１５：１、約１．５：１～約１０：１、約３：１～約１５：１、約３：１～約１０：１、約５：１～約１５：１、または約５：１～約１０：１であり得る。反応は、ＬＣ－ＭＳなどの当技術分野で知られている方法によって完了について好適にモニタリングされ得、反応は、典型的には、約１時間～約２４時間で完了する。反応が完了した後、試薬を反応混合物に加えて、反応をクエンチし、及び／または未反応の抗体チオール基をキャップしてもよい。好適なキャッピング試薬の一例は、エチルマレイミドである。
コンジュゲーション後に、イムノコンジュゲートを、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、限外濾過、遠心限外濾過、及びこれらの組み合わせなどであるが、これらに限定されない、当技術分野で知られている精製方法によって、精製し、非コンジュゲート反応体及び／またはコンジュゲート凝集体から分離することができる。例えば、精製の前に、イムノコンジュゲートを２０ｍＭのコハク酸ナトリウム、ｐＨ５などで希釈することができる。希釈した溶液をカチオン交換カラムに適用し、続いて、例えば、少なくとも１０カラム体積の２０ｍＭコハク酸ナトリウム、ｐＨ５で洗浄する。コンジュゲートは、ＰＢＳなどの緩衝液で好適に溶出することができる。
実施例２０２ ＨＥＫレポーターアッセイ
ヒトＴＬＲ７またはヒトＴＬＲ８を発現するＨＥＫ２９３レポーター細胞をＩｎｖｉｖｏｇｅｎから購入し、ベンダーのプロトコルに従って細胞増殖及び実験を行った。要約すると、細胞を、１０％ＦＢＳ、ゼオシン、及びブラストサイジンを補充したＤＭＥＭ中で５％ＣＯ２にて、８０～８５％のコンフルエンスまで成長させた。次に、細胞を、ＨＥＫ検出培地及び免疫刺激分子を含有する基質を含む４×１０４細胞／ウェルの９６ウェル平底プレートに播種した。プレートリーダーを使用して、６２０～６５５ｎｍの波長で免疫刺激化合物の活性を測定する。
実施例２０３ インビトロでのイムノコンジュゲート活性の評価
ベンダーのプロトコル（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に従って、ＲＡＷ２６４．７マウスのマクロファージ細胞株を培養した。ＲＡＷ２６４．７細胞を、ヒトＨＥＲ２発現腫瘍細胞株ＨＣＣ１９５４と共培養し、次いで様々な濃度のトラスツズマブベースのＩＳＡＣ、ＩＳＡＣ１及びＩＳＡＣ２で刺激した（図９）。刺激した細胞を１８時間培養し、次いで炎症誘発性サイトカインＴＮＦαの産生に基づいて細胞活性化を評価した。無細胞上清を回収し、ＥＬＩＳＡで分析した。この実施例は、本発明のイムノコンジュゲートが骨髄活性化を誘発するのに有効であり、したがってがんの治療に有用であることを示している。
ヒト抗原提示細胞の単離：ヒト骨髄抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、及びＨＬＡ－ＤＲに対するモノクローナル抗体を含有するＲＯＳＥＴＴＥＳＥＰ（商標）Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ） を使用する密度勾配遠心分離によって、健康な血液ドナー（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から得られたヒト末梢血からネガティブに選択された。続いて、未成熟ＡＰＣを、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、及びＨＬＡ－ＤＲに対するモノクローナル抗体を含有するＥＡＳＹＳＥＰ（商標） Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｋｉｔ（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用する、ＣＤ１６除去を伴わないネガティブセレクションにより、＞９０％の純度に精製した。
骨髄ＡＰＣ活性化アッセイ：２×１０５ＡＰＣを、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬ（マイクログラム／ミリリットル）のストレプトマイシン、２ｍＭのＬ－グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸、及び示される場合、種々の濃度の非コンジュゲート（裸の）ＰＤ－Ｌ１またはＨＥＲ２抗体及び本発明のイムノコンジュゲート（上記の例に従って調製されたもの）を補充したＧｉｂｃｏ Ｉｓｃｏｖｅの改変ダルベッコ培地であるＩＭＤＭ（Ｌｏｎｚａ）を含有する９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）中でインキュベートした。トラスツズマブ及びアベルマブを、抗体コンストラクトとして使用した。無細胞上清を、１８時間後にＥＬＩＳＡによって、炎症誘発性応答の読み取り結果としてＴＮＦα分泌を測定するために分析した。
スクリーニングアッセイに使用する骨髄細胞型：通常型の骨髄細胞型には、ＴＬＲ７／８刺激アッセイ用の単球、Ｍ－ＣＳＦ ＭΦ（Ｍ０）、ＧＭ／ＩＬ４ ＤＣ、ｅｘ ｖｉｖｏ ｃＤＣが含まれる（不活性なアゴニストを除外するためのサイトカイン読み出しにおいて）。分極骨髄細胞には、Ｍ２ａ ＭΦ（ＩＬ４／ＩＬ１３）、Ｍ２ｃ ＭΦ（ＩＬ１０／ＴＧＦｂ）及び腫瘍教育単球（ＴＥＭ）などの免疫抑制状態に分化した単球－腫瘍調整培地による分化（７８６．Ｏ，ＭＤＡ－ＭＢ－２３１，ＨＣＣ１９５４）ＧＭ／ＩＬ６「ＭＤＳＣ」が含まれる（アッセイ全体にわたって活性が限定的なアゴニストを除外するためのサイトカイン読み出しにおいて）。腫瘍関連骨髄細胞には、アゴニスト発見用アッセイにおいて、解離腫瘍細胞懸濁液（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）中に存在する骨髄細胞が含まれる。
スクリーニング用の他の有用な細胞株として、上記のＲＡＷ２６４．７などのマウス細胞株、骨髄由来単球、骨髄由来樹状細胞またはマクロファージ、脾臓樹状細胞、ＴＡＭ（腫瘍関連マクロファージ）、及びマウス環境における骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）が挙げられ得る。
本明細書で引用される出版物、特許出願、及び特許を含む全ての参考文献は、各々の参考文献が参照によって個々に具体的に組み込まれるものと示され、その全体が本明細書で示されているのと同じ程度に参照によって本明細書に組み込まれる。

Claims (83)

  1. エラスターゼ－基質ペプチドリンカーユニットを含むリンカーによって、１つ以上の免疫刺激部分に共有結合した細胞結合剤を含むイムノコンジュゲート。
  2. 前記細胞結合剤が抗体である、請求項１に記載のイムノコンジュゲート。
  3. 前記抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトである、請求項２に記載のイムノコンジュゲート。
  4. 前記抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、及びアベルマブ、またはそのバイオシミラーもしくはバイオベターからなる群から選択される、請求項３に記載のイムノコンジュゲート。
  5. 前記抗体が、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトである、請求項２に記載のイムノコンジュゲート。
  6. 前記抗体が、トラスツズマブ及びペルツズマブ、またはそのバイオシミラーもしくはバイオベターからなる群から選択される、請求項５に記載のイムノコンジュゲート。
  7. 前記抗体が、ＣＥＡに結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトである、請求項２に記載のイムノコンジュゲート。
  8. 前記抗体が、ラベツズマブ、またはそのバイオシミラーもしくはバイオベターである、請求項７に記載のイムノコンジュゲート。
  9. 前記抗体が、Ｔｒｏｐ２に結合する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトである、請求項２に記載のイムノコンジュゲート。
  10. 前記抗体が、サシツズマブ、またはそのバイオシミラーもしくはバイオベターである、請求項７に記載のイムノコンジュゲート。
  11. 前記１つ以上の免疫刺激部分がパターン認識受容体である、請求項１～１０のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
  12. 前記１つ以上の免疫刺激性部分が、ＴＬＲ、ＳＴＩＮＧ、ＮＯＤ２、ＲＩＧ－１、及びＮＬＲＰ３からなる群から選択される受容体と相互作用するかまたは調節する、請求項１～１１のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
  13. 式Ｉ：
    Ａｂ－［Ｌ－Ｉｍｓ］ｐ Ｉ
    を有し、
    式中、
    Ａｂが、抗体であり；
    Ｌが、エラスターゼ基質ペプチドリンカーユニットを含むリンカーであり；
    Ｉｍｓが、免疫刺激部分であり；
    ｐが、１～８の整数である、請求項２～１２のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
  14. 式中、ＩｍｓがＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストである、請求項１３に記載のイムノコンジュゲート。
  15. 式中、Ｉｍｓが、式Ｉａ～ｆから選択され：
    Figure 2023524271000093
     式中、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５が、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニル、Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル、及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から独立して選択され、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールが、
    －（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＲ６
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）；
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－＊；
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）ＮＲ６－＊；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリール）；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）；
    －（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）－＊；
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）ＮＲ６－＊；
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ６－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊；
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）；
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－＊；
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－ＮＲ６－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５；
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）ＣＯ２Ｒ６；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｒ６；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－ＮＲ６（Ｃ２－Ｃ５ヘテロアリール）；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；
    －Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６；
    －Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－＊；
    －Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｎ（Ｒ６）ＣＯ２Ｒ６；
    －Ｎ（Ｒ６）ＣＯ２（Ｒ６）－＊；
    －ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）２；
    －ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｒ６；
    －Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ２－Ｃ５ヘテロアリール）；
    －Ｎ（Ｒ６）－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）；
    －Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）；
    －Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
    －ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；及び
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＨ；から選択される１つ以上の基で独立して任意選択で置換されており；
    または式Ｉｃ～ＩｆのＲ２及びＲ３が一緒になって５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し；
    Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、及びＸ５が、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）、Ｏ、Ｎ（Ｒ６）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、及びＳ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ６）からなる群から独立して選択され；
    Ｒ６が、Ｈ、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及びＣ１－Ｃ１２アルキルジイル、からなる群から選択されるか、または２つのＲ６基が一緒になって５員または６員のヘテロシクリル環を形成しており；
    Ｒ６ａが、Ｃ６－Ｃ２０アリール及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から選択され；
    ここでアスタリスク＊が、Ｌの結合部位を示し、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５のうちの１つが、Ｌに結合しており；
    アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール、及びヘテロアリールジイルが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＦ２、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＨＦ２、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨＣＨ３、－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯ２ＣＨ３、－ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＯＮＨ２、－ＣＯＮＨＣＨ３、－ＣＯＮ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣＯＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、－ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－ＮＯ２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＳＣＨ３、－Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、及び－Ｓ（Ｏ）３Ｈ、から独立して選択される１つ以上の基で、独立して及び任意選択で置換される、請求項１３に記載のイムノコンジュゲート。
  16. Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５のうちの１つが、式：
    Figure 2023524271000094
     から選択される、請求項１５に記載のイムノコンジュゲート。
  17. 式中、ＩｍｓがＳＴＩＮＧアゴニストである、請求項１３に記載のイムノコンジュゲート。
  18. 式中、Ｉｍｓが、式Ｉｇを有し：
    Figure 2023524271000095
     式中、Ｘａ及びＸｂが、５員ヘテロアリールから独立して選択され；
    Ｒ１が、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、及び－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ６アルキルジイル）からなる群から選択され、
    Ｒ２ａ及びＲ２ｂが、独立して－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２から選択され；
    Ｒ３が、Ｃ１－Ｃ６アルキルジイル、－（Ｃ１－Ｃ３アルキルジイル）－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ３アルキルジイル）－、Ｃ２－Ｃ６アルケニルジイル及びＣ２－Ｃ６アルキニルジイルから選択され、Ｆ、Ｃｌ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２から選択される１つ以上の基で、任意選択で置換され；
    Ｒ４が：
    －（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊；
    －（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
    －Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊；
    －Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
    －Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊；
    －ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊；
    －Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊；
    －Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊；
    －（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊
    からなる群から選択され；
    式中、アスタリスク＊が、Ｌの結合部位を示し；
    Ｒ５が、独立してＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであるか、または２つのＲ５基が一緒になって５員または６員のヘテロシクリル環を形成し；
    アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール、及びヘテロアリールジイルが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＦ２、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＨＦ２、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨＣＨ３、－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯ２ＣＨ３、－ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＯＮＨ２、－ＣＯＮＨＣＨ３、－ＣＯＮ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣＯＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、－ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－ＮＯ２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ、－ＯＣＨ２Ｆ、－ＯＣＨＦ２、－ＯＣＦ３、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＳＣＨ３、－Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、及び－Ｓ（Ｏ）３Ｈ、から独立して選択される１つ以上の基で独立して任意選択で置換される、請求項１３に記載のイムノコンジュゲート。
  19. 式中、Ｘａ及びＸｂが、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、オキサジアゾリル、及びチアジアゾリルからなる群から独立して選択される、請求項１８に記載のイムノコンジュゲート。
  20. 式中、Ｘａ及びＸｂが、それぞれ、１つ以上のＣ１－Ｃ１２アルキル基で置換されたピラゾリルである、請求項１９に記載のイムノコンジュゲート。
  21. 式中、Ｒ１が、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、及び－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２からなる群から選択される、請求項１８に記載のイムノコンジュゲート。
  22. 式中、Ｒ１が－ＯＣＨ３である、請求項２１に記載のイムノコンジュゲート。
  23. 式中、Ｒ１がＦである、請求項１８に記載のイムノコンジュゲート。
  24. 式中、Ｒ２ａ及びＲ２ｂが、それぞれ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２である、請求項１８に記載のイムノコンジュゲート。
  25. 式中、Ｒ３が、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ＝ＣＨ－、及び－Ｃ≡Ｃ－から選択される、請求項１８に記載のイムノコンジュゲート。
  26. 式中、Ｒ３が、Ｆ、－ＯＨ、及び－ＯＣＨ３から選択される１つ以上の基で置換されたＣ２－Ｃ４アルケニルジイルである、請求項１８に記載のイムノコンジュゲート。
  27. 式中、Ｒ４が、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊である、請求項１８に記載のイムノコンジュゲート。
  28. Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイルがプロピルジイルであり、Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイルがピペリジイルである、請求項２７に記載のイムノコンジュゲート。
  29. 式中、Ｌが：
    －Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｎ（Ｒ６）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｎ＋（Ｒ６）２－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ６）ＣＨ（ＡＡ１）Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－Ｃ（＝Ｏ）；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－；
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－；
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
    －（スクシンイミジル）－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－
    からなる群から選択され；
    ＰＥＧが、式：－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－を有し；ｍが１～５の整数であり、ｎが２～５０の整数であり；
    ＥｓＰＥＰが、２～１２個のアミノ酸残基を含む、エラスターゼ基質ペプチドリンカーユニットであり；
    Ｒ６が、Ｈ、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及びＣ１－Ｃ１２アルキルジイルからなる群から選択されるか、または２つのＲ６基が一緒になって５員または６員のヘテロシクリル環を形成し；
    アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール、及びヘテロアリールジイルが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＦ２、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＨＦ２、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨＣＨ３、－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯ２ＣＨ３、－ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＯＮＨ２、－ＣＯＮＨＣＨ３、－ＣＯＮ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣＯＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、－ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－ＮＯ２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＳＣＨ３、－Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、及び－Ｓ（Ｏ）３Ｈ、から独立して選択される１つ以上の基で独立して任意選択で置換される、請求項１３に記載のイムノコンジュゲート。
  30. ＥｓＰＥＰが、１つ以上の非天然アミノ酸残基からなる、請求項２９に記載のイムノコンジュゲート。
  31. ＥｓＰＥＰが：
    Figure 2023524271000096
    Figure 2023524271000097
     からなる群から選択されるアミノ酸のアミノ酸残基からなる、請求項２９に記載のイムノコンジュゲート。
  32. ＥｓＰＥＰが、Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ａｌａ（配列番号６３９）、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ（配列番号６４０）、及びＡｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｖａ（配列番号６４１）からなる群から選択される、請求項２９に記載のイムノコンジュゲート。
  33. ＥｓＰＥＰが、式：
    Figure 2023524271000098
     を有し、式中、ＡＡが、天然または非天然のアミノ酸側鎖、または１つ以上のＡＡから独立して選択され、隣接する窒素原子が５員環のプロリンアミノ酸を形成し、波線が結合点を示し、
    Ｃｙｃが、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイルから選択され、任意選択で、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ２、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、及び構造：

    Figure 2023524271000099
     を有するグルクロン酸から選択される１つ以上の基で置換され；
    Ｒ７が、－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２Ｎ（Ｒ８）－、及び－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択され、Ｒ８が、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－Ｃ６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２から選択され、Ｒ９が、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－ＯＨからなる群から独立して選択され、ｍが１～５の整数であり、ｎが２～５０の整数であり、または２つのＲ９基が一緒になって５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し；
    ｙが、２～１２の整数であり；
    ｚが、０または１である、請求項２９に記載のイムノコンジュゲート。
  34. 式中、ｙが、２、３、及び４から選択される、請求項３３に記載のイムノコンジュゲート。
  35. ＥｓＰＥＰが、式：
    Figure 2023524271000100
     を有するトリペプチドであり、
    式中、ＡＡ１、ＡＡ２、及びＡＡ３が、天然もしくは非天然のアミノ酸から独立して選択され、波線が結合点を示し；
    Ｃｙｃが、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイルから選択され、任意選択で、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ２、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、及び構造：
    Figure 2023524271000101
     を有するグルクロン酸から選択される１つ以上の基で置換され；
    Ｒ７が、－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２Ｎ（Ｒ８）－、及び－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択され、Ｒ８が、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－Ｃ６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２から選択され、Ｒ９が、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－ＯＨからなる群から独立して選択され、ｍが１～５の整数であり、ｎが２～５０の整数であり、または２つのＲ９基が一緒になって５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し；
    ｚが、０または１である、請求項２９に記載のイムノコンジュゲート。
  36. 式中、ＡＡ１がメチルであり、ＡＡ２がプロリンを形成し、ＡＡ３がイソプロピルである、請求項３５に記載のイムノコンジュゲート。
  37. ＥｓＰＥＰが、式：
    Figure 2023524271000102
     を有する、請求項３５に記載のイムノコンジュゲート。
  38. ＥｓＰＥＰが、式：
    Figure 2023524271000103
     から選択される、請求項３７に記載のイムノコンジュゲート。
  39. 式中、Ｌが：
    －Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－である、請求項２９に記載のイムノコンジュゲート。
  40. 式中、ＰＥＧが：
    －（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２５－（ＣＨ２）２－または－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１０－（ＣＨ２）２－である、請求項３９に記載のイムノコンジュゲート。
  41. 式：
    Figure 2023524271000104
     から選択される、請求項４０に記載のイムノコンジュゲート。
  42. 式中、Ｉｍｓが、構造：
    Figure 2023524271000105
     を有し、波線が結合点を示す、請求項４１に記載のイムノコンジュゲート。
  43. ＥｓＰＥＰが、式：
    Figure 2023524271000106
     を有するトリペプチドであり、
    式中、ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、及びＡＡ４が、天然もしくは非天然のアミノ酸から独立して選択され、波線が結合点を示し；
    Ｃｙｃが、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイルから選択され、任意選択で、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ２、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、及び構造：
    Figure 2023524271000107
     を有するグルクロン酸から選択される１つ以上の基で置換され；
    Ｒ７が、－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２Ｎ（Ｒ８）－、及び－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択され、Ｒ８が、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－Ｃ６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２から選択され、Ｒ９が、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－ＯＨからなる群から独立して選択され、ｍが１～５の整数であり、ｎが２～５０の整数であり、または２つのＲ９基が一緒になって５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し；
    ｚが、０または１である、請求項２９に記載のイムノコンジュゲート。
  44. 式中、ＡＡ１が、Ａｂｕ、Ａｌａ、及びＶａｌからなる群から選択され；
    ＡＡ２が、Ｎｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）、Ｏｉｃ、及びＰｒｏからなる群から選択され；
    ＡＡ３が、Ａｌａ及びＭｅｔ（Ｏ）２からなる群から選択され；
    ＡＡ４が、Ｏｉｃ、Ａｒｇ（ＮＯ２）、Ｂｐａ、及びＮｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）からなる群から選択される、請求項４３に記載のイムノコンジュゲート。
  45. ＥｓＰＥＰが、式：
    Figure 2023524271000108
     を有する、請求項４４に記載のイムノコンジュゲート。
  46. ＥｓＰＥＰが、式：
    Figure 2023524271000109
     を有する、請求項４５に記載のイムノコンジュゲート。
  47. ＩＩｅ～ｈ：
    Figure 2023524271000110
     から選択される構造を含み、波線が、Ｌを介した前記抗体への結合を示す、請求項２９に記載のイムノコンジュゲート。
  48. ＩＩｉ－ｌ：
    Figure 2023524271000111
     から選択される構造を含み、波線が、Ｌを介した前記抗体への結合を示す、請求項２９に記載のイムノコンジュゲート。
  49. 式中、Ｒ２及びＲ３が、それぞれＣ１－Ｃ８アルキルである、請求項４８に記載のイムノコンジュゲート。
  50. 式中、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である、請求項４９に記載のイムノコンジュゲート。
  51. 式中、Ｘ２及びＸ３が、それぞれ結合であり、Ｒ２またはＲ３が、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）である、請求項４８に記載のイムノコンジュゲート。
  52. 式中、Ｒ２またはＲ３が、－ＯＣＨ２ＣＨ３である、請求項５１に記載のイムノコンジュゲート。
  53. 前記エラスターゼ基質ペプチドリンカーが、エラスターゼによって切断される、請求項２～１２のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
  54. 式ＩＩａ－ｆ：
    Figure 2023524271000112
     から選択され、
    式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５が、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニル、Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル、及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から独立して選択され、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールが、
    －（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＲ６
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）；
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－＊；
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）ＮＲ６－＊；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリール）；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）；
    －（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）－＊；
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）ＮＲ６－＊；
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ６－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊；
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）；
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－＊；
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－ＮＲ６－Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５；
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）ＣＯ２Ｒ６；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｒ６；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－ＮＲ６（Ｃ２－Ｃ５ヘテロアリール）；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－＊；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；
    －Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６；
    －Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－＊；
    －Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｎ（Ｒ６）ＣＯ２Ｒ６；
    －Ｎ（Ｒ６）ＣＯ２（Ｒ６）－＊；
    －ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）２；
    －ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －ＮＲ６Ｃ（＝ＮＲ６ａ）Ｒ６；
    －Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ２－Ｃ５ヘテロアリール）；
    －Ｎ（Ｒ６）－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）；
    －Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）；
    －Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）２；
    －ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－＊；
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）２；
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ６－＊；及び
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＨ；から選択される１つ以上の基で独立して任意選択で置換されており；
    または式ＩｃもしくはＩｄのＲ２及びＲ３が一緒になって５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し；
    Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、及びＸ５が、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）、Ｏ、Ｎ（Ｒ６）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、及びＳ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ６）からなる群から独立して選択され；
    Ｒ６が、Ｈ、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及びＣ１－Ｃ１２アルキルジイル、からなる群から選択されるか、または２つのＲ６基が一緒になって５員または６員のヘテロシクリル環を形成しており；
    Ｒ６ａが、Ｃ６－Ｃ２０アリール及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から選択され；
    ここでアスタリスク＊が、Ｌの結合部位を示し、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５のうちの１つが、Ｌに結合しており；
    Ｌが：
    Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
    Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－；
    Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－；
    Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｎ（Ｒ６）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
    Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｎ＋（Ｒ６）２－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
    Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ６）ＣＨ（ＡＡ１）Ｃ（＝Ｏ）－（ＰＥＧ）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
    Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
    Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－；
    Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）－Ｃ（＝Ｏ）；
    Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－；
    Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－；
    Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－；
    Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
    Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＥｓＰＥＰ）－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－、からなる群から選択され；
    ＰＥＧが、式：－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－を有し；ｍが１～５の整数であり、ｎが２～５０の整数であり；
    ＥｓＰＥＰが、２～１２アミノ酸残基を含む、エラスターゼ－基質ペプチドリンカーユニットであり；
    Ｑが、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ２及びＳＯ３ －から独立して選択される１つ以上の基で置換されたＮ－ヒドロキシスクシンイミジル、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル、マレイミド、及びフェノキシからなる群から選択され；
    アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール、及びヘテロアリールジイルが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＦ２、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＨＦ２、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨＣＨ３、－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯ２ＣＨ３、－ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＯＮＨ２、－ＣＯＮＨＣＨ３、－ＣＯＮ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣＯＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、－ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－ＮＯ２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＳＣＨ３、－Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、及び－Ｓ（Ｏ）３Ｈ、から独立して選択される１つ以上の基で、独立して及び任意選択で置換される、免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物。
  55. 式中、ＰＥＧが、式：－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２５－（ＣＨ２）２－または－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１０－（ＣＨ２）２－を有する、請求項５４に記載の免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物。
  56. 式中、Ｒ２及びＲ３が、それぞれＣ１－Ｃ８アルキルである、請求項５４に記載の免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物。
  57. 式中、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である、請求項５６に記載の免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物。
  58. 式中、Ｘ２及びＸ３が、それぞれ結合であり、Ｒ２またはＲ３が、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）である、請求項５４に記載の免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物。
  59. 式中、Ｒ２またはＲ３が、－ＯＣＨ２ＣＨ３である、請求項５８に記載の免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物。
  60. 式：
    Figure 2023524271000113
     から選択され、式中、ＴＦＰが、２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシである、請求項５４に記載の免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物。
  61. ＩＩｅ～ｈ：

    Figure 2023524271000114
     から選択される構造を含み、
    式中、波線が、Ｌを介した前記抗体への結合を示す、請求項５４に記載の免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物。
  62. ＩＩｉ～ｌ：
    Figure 2023524271000115
     から選択される構造を含み、式中、波線が、Ｌを介した前記抗体への結合を示す、請求項５４に記載の免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物。
  63. 細胞結合剤と、請求項５４に記載の免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物とのコンジュゲーションによって調製されるイムノコンジュゲート。
  64. 細胞結合剤と、構造：
    Figure 2023524271000116
     を有する、免疫刺激剤－エラスターゼ基質ペプチドリンカー化合物とのコンジュゲーションによって調製されるイムノコンジュゲート。
  65. 前記細胞結合剤が抗体である、請求項６３または６４に記載のイムノコンジュゲート。
  66. 治療有効量の請求項１～５３のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート及び１つ以上の薬学的に許容される希釈剤、ビヒクル、担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
  67. 治療に使用するための、請求項６６に記載の医薬組成物。
  68. 治療有効用量の請求項６６に記載の医薬組成物を、免疫関連障害を有する患者に投与することを含む、治療方法。
  69. 前記イムノコンジュゲートの前記エラスターゼ基質ペプチドリンカーが、エラスターゼによって切断される、請求項６８に記載の方法。
  70. 治療に使用するための、請求項１～５３のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲート。
  71. 治療有効量の請求項６６に記載の医薬組成物を、治療を必要とする患者に投与することを含む、がんの治療方法。
  72. 前記がんが、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８アゴニズムによって誘導される炎症誘発性応答に感受性である、請求項７１に記載の方法。
  73. 前記がんが、ＳＴＩＮＧアゴニズムによって誘導される炎症誘発性応答に感受性である、請求項７１に記載の方法。
  74. 前記がんが、ＰＤ－Ｌ１発現がんである、請求項７１に記載の方法。
  75. 前記がんが、ＨＥＲ２発現がんである、請求項７１に記載の方法。
  76. 前記がんが、ＣＥＡ発現がんである、請求項７１に記載の方法。
  77. 前記がんが、Ｔｒｏｐ２発現がんである、請求項７１に記載の方法。
  78. 前記がんが、膀胱癌、尿路癌、尿路上皮癌、肺癌、非小細胞肺癌、メルケル細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、及び乳癌から選択される、請求項７２～７７のいずれか一項に記載の方法。
  79. 前記乳癌が、トリプルネガティブ乳癌である、請求項７８に記載の方法。
  80. 前記メルケル細胞癌が、転移性メルケル細胞癌である、請求項７８に記載の方法。
  81. 前記胃癌が、ＨＥＲ２過剰発現胃癌である、請求項７８に記載の方法。
  82. 前記がんが、胃食道接合部腺癌である、請求項７８に記載の方法。
  83. 前記がんを治療するための、請求項１～５３のいずれか一項に記載のイムノコンジュゲートの使用。
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