KR20220088901A - 티에노아제핀 면역접합체, 및 이의 용도 - Google Patents

티에노아제핀 면역접합체, 및 이의 용도 Download PDF

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로마스 쿠디르카
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볼트 바이오테라퓨틱스 인코퍼레이티드
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Abstract

본 출원은 하나 이상의 티에노아제핀 유도체에 접합에 의해 연결된 항체를 포함하는 화학식 (I)의 면역접합체에 관한 것이다. 본 출원은 또한 반응성 작용기를 포함하는 티에노아제핀 유도체 중간체 조성물을 제공한다. 이러한 중간체 조성물은 링커 또는 연결 모이어티를 통한 면역접합체의 형성에 적합한 기질이다. 본 출원은 암을 치료하는 방법에 사용하기 위한 상기 언급한 면역접합체를 추가로 제공한다.

Description

티에노아제핀 면역접합체, 및 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 비-가출원은 2019년 10월 25일에 출원된 미국 가출원 제62/926,333호 및 2020년 3월 2일에 출원된 미국 가출원 제62/984,184호에 대한 우선권을 주장하며, 이들 각각은 그 전체가 참조로 포함된다.
서열 목록
본 출원에는 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록이 포함되어 있으며 전체 내용이 참조로 통합된다. 2020년 10월 5일에 생성된 ASCII 사본의 명칭은 17019_006WO1_SL.txt이고 크기는 299,288바이트이다.
발명의 분야
본 발명은 일반적으로 하나 이상의 티에노아제핀 분자에 접합된 항체를 포함하는 면역접합체에 관한 것이다.
접근하기 어려운 종양에 도달하고/하거나 암 환자 및 기타 대상체를 위한 치료 옵션을 확장하기 위해서는 항체 및 면역 애주번트의 전달을 위한 새로운 조성물 및 방법이 필요하다. 본 발명은 이러한 조성물 및 방법을 제공한다.
발명의 요약
본 발명은 일반적으로 하나 이상의 티에노아제핀 유도체에 접합에 의해 연결된 항체를 포함하는 면역접합체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 반응성 작용기를 포함하는 티에노아제핀 유도체 중간체 조성물에 관한 것이다. 이러한 중간체 조성물은 항체가 하기 화학식을 갖는 티에노아제핀(TAZ) 모이어티에 링커 L에 의해 공유 결합될 수 있는 면역접합체의 형성에 적합한 기질이다.
Figure pct00001
여기서 R1, R2, R3 및 R4 중 하나는 L에 부착된다. R1, R2, R3 및 R4 치환기는 본원에서 정의된다.
본 발명은 또한 질병, 특히 암의 치료에 있어서 이러한 면역접합체의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 한 측면은 하나 이상의 티에노아제핀 모이어티에 공유적으로 부착된 링커에 공유적으로 부착된 항체를 포함하는 면역접합체이다.
본 발명의 또 다른 측면은 티에노아제핀-링커 화합물이다.
본 발명의 또 다른 측면은 하나 이상의 티에노아제핀 모이어티에 접합에 의해 연결된 항체를 포함하는 면역접합체의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 암을 치료하는 방법이다.
본 발명의 또 다른 측면은 암 치료를 위한, 하나 이상의 티에노아제핀 모이어티에 접합에 의해 연결된 항체를 포함하는 면역접합체의 용도이다.
본 발명의 또 다른 측면은 하나 이상의 티에노아제핀 모이어티를 항체와 접합시켜 면역접합체를 제조하는 방법이다.
도 1a 내지 d는 PD-L1 A형 결합제 1 내지 42의 중쇄 및 경쇄 CDR을 보여준다.
도 2a 내지 d는 PD-L1 A형 결합제 1 내지 42의 제1 (HFW1), 제2 (HFW2), 제3 (HFW3) 및 제4 (HFW4) 중쇄 프레임워크 영역 폴리펩타이드를 보여준다.
도 3a 내지 d는 PD-L1 A형 결합제 1 내지 42의 제1 (LFW1), 제2 (LFW2), 제3 (LFW3) 및 제4 (LFW4) 경쇄 프레임워크 영역 폴리펩타이드를 보여준다.
도 4a 내지 d는 PD-L1 A형 결합제 1 내지 42의 중쇄 가변 영역 (VH)을 보여준다.
도 4e 내지 g는 PD-L1 A형 결합제 1 내지 42의 경쇄 가변 영역 (VL)을 보여준다.
도 5a 내지 b는 PD-L1 B형 결합제 1 내지 21의 중쇄 및 경쇄 CDR을 보여준다.
도 6a 내지 b는 PD-L1 B형 결합제 1 내지 21의 제1 (HFW1), 제2 (HFW2), 제3 (HFW3) 및 제4 (HFW4) 중쇄 프레임워크 영역 폴리펩타이드를 보여준다.
도 7a 내지 b는 PD-L1 B형 결합제 1 내지 21의 제1 (LFW1), 제2 (LFW2), 제3 (LFW3) 및 제4 (LFW4) 경쇄 프레임워크 영역 폴리펩타이드를 보여준다.
도 8a 내지 b는 PD-L1 B형 결합제 1 내지 21의 중쇄 가변 영역(VH)을 보여준다.
도 8c 내지 d는 PD-L1 B형 결합제 1 내지 21의 경쇄 가변 영역(VL)을 보여준다.
이제 본 발명의 특정 실시 양태를 상세히 참조할 것이며, 그 예는 첨부된 구조 및 화학식에 예시되어 있다. 본 발명은 열거된 실시 양태와 관련하여 설명될 것이지만, 그것들은 본 발명을 그러한 실시 양태로 제한하도록 의도된 것이 아님이 이해될 것이다. 반대로, 본 발명은 청구범위에 의해 정의된 본 발명의 범위 내에 포함될 수 있는 모든 대안, 수정 및 등가물을 포함하도록 의도된다.
당업자는 본 발명의 실시에 사용될 수 있는 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 등가인 많은 방법 및 재료를 인식할 것이다. 본 발명은 기술된 방법 및 재료에 제한되는 것은 아니다.
정의
용어 "면역접합체"는 링커를 통해 애주번트 모이어티에 공유 결합된 항체 작제물을 지칭한다. 용어 "애주번트"는 애주번트에 노출된 대상체에서 면역 반응을 유발할 수 있는 물질을 지칭한다. "애주번트 모이어티"라는 어구는 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어, 링커를 통해 항체 작제물에 공유 결합된 애주번트를 지칭한다. 애주번트 모이어티는 항체 작제물에 결합되어 있는 동안, 또는 대상체에게 면역접합체를 투여한 후 항체 작제물로부터 절단 (예를 들어, 효소적 절단)된 후에 면역 반응을 유발할 수 있다.
"애주번트"는 애주번트에 노출된 대상체에서 면역 반응을 유발할 수 있는 물질을 지칭한다. "애주번트 모이어티"라는 어구는 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어, 링커를 통해 항체 작제물에 공유 결합된 애주번트를 지칭한다. 애주번트 모이어티는 항체 작제물에 결합되어 있는 동안, 또는 대상체에게 면역접합체를 투여한 후 항체 작제물로부터 절단 (예를 들어, 효소적 절단)된 후에 면역 반응을 유발할 수 있다.
"톨-유사 수용체" 및 "TLR"이라는 용어는 병원체 관련 분자 패턴을 인식하고 선천 면역의 핵심 신호 요소로 작용하는 고도로 보존된 포유동물 단백질 패밀리의 임의의 구성원을 지칭한다. TLR 폴리펩타이드는 류신이 풍부한 반복을 갖는 세포외 도메인, 막횡단 도메인, 및 TLR 신호전달에 관여하는 세포내 도메인을 포함하는 특징적인 구조를 공유한다.
용어 "톨-유사 수용체 7" 및 "TLR7"은 공개적으로 이용가능한 TLR7 서열, 예를 들어, 인간 TLR7 폴리펩타이드의 경우 GenBank 수탁 번호 AAZ99026, 또는 뮤린 TLR7 폴리펩타이드의 경우 GenBank 수탁 번호 AAK62676에 대해 적어도 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 공유하는 핵산 또는 폴리펩타이드를 지칭한다.
용어 "톨-유사 수용체 8" 및 "TLR8"은 공개적으로 이용가능한 TLR7 서열, 예를 들어, 인간 TLR8 폴리펩타이드의 경우 GenBank 등록 번호 AAZ95441, 또는 뮤린 TLR8 폴리펩타이드의 경우 GenBank 등록 번호 AAK62677에 대해 적어도 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 공유하는 핵산 또는 폴리펩타이드를 지칭한다.
"TLR 작용제"는 TLR 신호전달을 유도하기 위해 TLR (예를 들어, TLR7 및/또는 TLR8)에 직접 또는 간접적으로 결합하는 물질이다. TLR 신호 전달에서 감지 가능한 차이는 작용제가 TLR을 자극하거나 활성화한다는 것을 나타낼 수 있다. 신호 차이는 예를 들어, 표적 유전자의 발현, 신호 전달 성분의 인산화, 핵 인자-κB (NF-κB)와 같은 하류 요소의 세포내 국소화, 특정 구성요소 (예컨대, IL-1 수용체 관련 키나제 (IRAK))와 다른 단백질 또는 세포내 구조의 회합, 또는 키나제 (예컨대, 미토겐 활성화 단백질 키나제 (MAPK))와 같은 구성요소의 생화학적 활성에서의 변화로 나타날 수 있다.
"항체"는 면역글로불린 유전자 또는 이의 단편으로부터의 항원 결합 영역 (상보성 결정 영역 (CDR) 포함)을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭한다. 용어 "항체"는 구체적으로, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 단일클론 항체 (전장 단일클론 항체 포함), 다중클론 항체, 다중특이적 항체 (예컨대, 이중특이적 항체), 및 항체 단편을 포함한다. 예시적인 면역글로불린 (항체) 구조 단위는 사량체를 포함한다. 각각의 사량체는 이황화 결합에 의해 연결된 하나의 "경쇄" (약 25 kDa)와 하나의 "중쇄" (약 50 내지 70 kDa)를 갖는 두 개의 동일한 폴리펩타이드 사슬쌍으로 구성된다. 각 사슬은 면역글로불린 도메인이라고 하는 구조적 도메인으로 구성된다. 이들 도메인은 크기 및 기능에 따라 다양한 범주, 예를 들어, 경쇄 및 중쇄 상의 가변 도메인 또는 영역 (각각 VL 및 VH) 및 경쇄 및 중쇄 상의 불변 도메인 또는 영역 (각각 CL 및 CH)으로 분류된다. 각 사슬의 N 말단은 주로 항원 인식, 즉 항원 결합 도메인을 담당하는 파라토프(paratope)라고 하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 정의한다. 경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로 분류되며, 이는 차례로 면역글로불린 클래스인 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 각각 정의한다. IgG 항체는 4개의 펩타이드 사슬로 구성된 약 150 kDa의 큰 분자이다. IgG 항체는 약 50 kDa의 동일한 클래스 γ 중쇄 2개와 약 25 kDa의 동일한 경쇄 2개를 함유하므로 사량체 4차 구조이다. 2개의 중쇄는 서로 연결되어 있고, 또한 각각 이황화 결합에 의해 경쇄에 연결되어 있다. 생성된 사량체는 2개의 동일한 반쪽을 가지며 함께 Y형 모양을 형성한다. 포크의 각 끝은 동일한 항원 결합 도메인을 함유한다. 인간에는 4개의 IgG 서브클래스 (IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)가 있으며, 혈청 내 존재도 순으로 명명된다 (즉, IgG1이 가장 풍부함). 전형적으로, 항체의 항원 결합 도메인은 암 세포에 대한 결합의 특이성 및 친화도에서 가장 중요할 것이다.
"항체 작제물"은 (i) 항원 결합 도메인 및 (ii) Fc 도메인을 포함하는 항체 또는 융합 단백질을 지칭한다.
일부 구현예에서, 결합제는 단독으로 또는 함께 항원-결합 작제물을 구성하는 다른 성분과 함께 항체의 적어도 항원-결합 영역을 포함하는 작제물인 항원-결합 항체 "단편"이다. 예를 들어, (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편인 Fab 단편, (ii) 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편, (iii) 항체의 단일 암의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, (iv) 온화한 환원 조건을 사용하여 F(ab')2 단편의 이황화 가교를 파괴함으로써 생성되는 Fab' 단편, (v) 이황화 안정화된 Fv 단편 (dsFv), 및 (vi) 2개의 도메인이 단일 폴리펩타이드 사슬로 합성될 수 있도록 하는 합성 링커에 의해 연결된 Fv 단편의 2개 도메인 (즉, VL 및 VH)으로 구성된 1가 분자인 단일 사슬 Fv (scFv)를 포함하여 많은 상이한 유형의 항체 "단편"이 당업계에 공지되어 있다.
항체 또는 항체 단편은 더 큰 작제물, 예를 들어, 항체 단편의 추가 영역에 대한 접합체 또는 융합 작제물의 일부일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이 Fc 영역에 융합될 수 있다. 다른 구현예에서, 항체 단편 (예를 들어, Fab 또는 scFv)은 예를 들어, 막횡단 도메인 (선택적으로 개재 링커 또는 "줄기" (예를 들어, 힌지 영역)와 함께) 및 선택적 세포간 신호전달 도메인에 융합함으로써 키메라 항원 수용체 또는 키메라 T-세포 수용체의 일부가 될 수 있다. 예를 들어, 항체 단편은 PD-L1에 결합하는 T-세포 수용체 유사 작제물을 제공하기 위해 t-세포 수용체의 감마 및/또는 델타 사슬에 융합될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 항체 단편은 CD1 또는 CD3 결합 도메인 및 링커를 포함하는 이중특이적 T-세포 인게이저 (BiTE)의 일부이다.
"에피토프"는 항원 결합 도메인이 결합하는 (즉, 항원 결합 도메인의 파라토프에서) 항원의 임의의 항원 결정자 또는 에피토프 결정자를 의미한다. 항원 결정자는 일반적으로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹들로 구성되며 일반적으로 특정 3차원 구조적 특성과 특정 전하 특성을 가지고 있다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 지칭한다. Fc 수용체에는 (1) IgG에 결합하는 FcγR, (2) IgA에 결합하는 FcαR, (3) IgE에 결합하는 FcεR의 3가지 주요 부류가 있다. FcγR 패밀리에는 FcγI (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16A) 및 FcγRIIIB (CD16B)와 같은 여러 구성원이 포함된다. Fcγ 수용체는 IgG에 대한 친화도가 다르며 또한 IgG 서브클래스 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)에 대한 친화도도 다르다.
본원에서 언급된 바와 같은 핵산 또는 아미노산 서열 "동일성"은 관심 핵산 또는 아미노산 서열을 참조 핵산 또는 아미노산 서열과 비교함으로써 결정될 수 있다. 동일성 퍼센트는 최적으로 정렬된 관심 서열과 참조 서열 사이에 똑같은 (즉, 동일한) 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 수를 가장 긴 서열의 길이 (즉, 관심 서열 또는 참조 서열 중 더 긴 것의 길이)로 나눈 것이다. 사용 가능한 소프트웨어 프로그램을 사용하여 서열 정렬 및 동일성 퍼센트 계산을 수행할 수 있다. 이러한 프로그램의 예로는 CLUSTAL-W, T-Coffee 및 ALIGN (핵산 및 아미노산 서열의 정렬용), BLAST 프로그램 (예를 들어, BLAST 2.1, BL2SEQ, BLASTp, BLASTn 등) 및 FASTA 프로그램 (예를 들어, FASTA3x, FASTM 및 SSEARCH) (서열 정렬 및 서열 유사성 검색용)이 있다. 서열 정렬 알고리즘은 또한 예를 들어, Altschul 등, J. Molecular Biol., 215(3): 403-410 (1990), Beigert 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106(10): 3770-3775 (2009), Durbin 등, eds., Biological Sequence Analysis: Probalistic Models of Proteins and Nucleic Acids, Cambridge University Press, Cambridge, UK (2009), Soding, Bioinformatics, 21(7): 951-960 (2005), Altschul 등, Nucleic Acids Res., 25(17): 3389-3402 (1997), 및 Gusfield, Algorithms on Strings, Trees and Sequences, Cambridge University Press, Cambridge UK (1997))에 기재되어 있다. 서열의 동일성 퍼센트(%)는 또한 예를 들어, 100 x [(동일한 위치)/min(TGA, TGB)]로 계산할 수 있고, 여기서 TGA 및 TGB는 TGA와 TGB를 최소화하는 정렬에서 펩타이드 서열 A와 B에서 잔기 수와 내부 갭 위치의 합이다. 예를 들어, Russell 등, J. Mol Biol., 244: 332-350 (1994) 참조.
결합제는 항원 결합 부위를 함께 형성하는 Ig 중쇄 및 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 포함한다. 중쇄 및 경쇄 가변 영역 각각은 프레임워크 영역에 의해 연결된 3개의 상보성 결정 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3)을 포함하는 폴리펩타이드이다. 결합제는 Ig 중쇄 및 경쇄를 포함하는 당업계에 공지된 다양한 유형의 결합제 중 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, 결합제는 항체, 항원-결합 항체 "단편", 또는 T-세포 수용체일 수 있다.
"바이오시밀러"는 예를 들어, 아테졸리주맙 (TECENTRIQTM, Genentech, Inc.), 더발루맙 (IMFINZITM, AstraZeneca), 및 아벨루맙 (BAVENCIOTM, EMD Serono, Pfizer)과 같이 이전에 승인된 PD-L1-표적화 항체 작제물; 트라스투주맙 (HERCEPTINTM, Genentech, Inc.) 및 퍼투주맙 (PERJETATM, Genentech, Inc.)과 같이 이전에 승인된 HER2-표적화 항체 작제물; 또는 라베투주맙 (CEA-CIDETM, MN-14, hMN14, Immunomedics) CAS 등록 번호 219649-07-7)과 같은 CEA 표적화 항체에 유사한 활성 성질을 갖는 승인된 항체 작제물을 지칭한다.
"바이오베터(Biobetter)"는 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 트라스투주맙, 퍼투주맙, 및 라베투주맙과 같이 이전에 승인된 항체 작제물의 개선체인, 승인된 항체 작제물을 지칭한다. 바이오베터는 이전에 승인된 항체 작제물에 대해 하나 이상의 변형 (예를 들어, 변경된 글리칸 프로필 또는 고유한 에피토프)을 가질 수 있다.
"아미노산"은 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질에 포함될 수 있는 임의의 단량체 단위를 의미한다. 아미노산에는 천연 발생 α-아미노산 및 이들의 입체 이성질체, 뿐만 아니라 비천연 (비천연 발생) 아미노산 및 이들의 입체 이성질체가 포함된다. 주어진 아미노산의 "입체 이성질체"는 동일한 분자식 및 분자내 결합을 갖지만 결합 및 원자의 3차원 배열이 상이한 이성질체 (예를 들어, L-아미노산 및 상응하는 D-아미노산)를 지칭한다. 아미노산은 글리코실화 (예를 들어, N-연결 글리칸, O-연결 글리칸, 포스포글리칸, C-연결 글리칸, 또는 글리피케이션) 또는 탈글리코실화될 수 있다. 아미노산은 일반적으로 알려진 세 글자 기호 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회에서 권장하는 한 글자 기호로 본 명세서에서 언급될 수 있다.
천연 발생 아미노산은 유전 코드에 의해 암호화된 아미노산과 나중에 변형되는 아미노산, 예를 들어, 하이드록시프롤린, γ-카르복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 천연 발생 α-아미노산은 알라닌 (Ala), 시스테인 (Cys), 아스파르트산 (Asp), 글루탐산 (Glu), 페닐알라닌 (Phe), 글리신 (Gly), 히스티딘 (His), 이소류신 (Ile), 아르기닌 (Arg), 라이신 (Lys), 류신 (Leu), 메티오닌 (Met), 아스파라긴 (Asn), 프롤린 (Pro), 글루타민 (Gln), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr), 발린 (Val), 트립토판 (Trp), 티로신 (Tyr), 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 천연 발생 α-아미노산의 입체 이성질체는 D-알라닌 (D-Ala), D-시스테인 (D-Cys), D-아스파라긴산 (D-Asp), D-글루탐산 (D-Glu), D-페닐알라닌 (D-Phe), D-히스티딘 (D-His), D-이소류신 (D-Ile), D-아르기닌 (D-Arg), D-라이신 (D-Lys), D-류신 (D-Leu), D-메티오닌 (D-Met), D-아스파라긴 (D-Asn), D-프롤린 (D-Pro), D-글루타민 (D-Gln), D-세린 (D-Ser), D-트레오닌 (D-Thr), D-발린 (D-Val), D-트립토판 (D-Trp), D-티로신 (D-Tyr), 및 이들의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
천연 발생 아미노산에는 시트룰린 (Cit)과 같은 번역 후 변형에 의해 단백질에서 형성된 것들이 포함된다.
비천연 (비-천연 발생) 아미노산은 천연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 L- 또는 D-배치 중 하나의 아미노산 유사체, 아미노산 모방체, 합성 아미노산, N-치환된 글리신, 및 N-메틸 아미노산을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, "아미노산 유사체"는 천연 발생 아미노산 (즉, 수소에 결합된 탄소, 카르복실기, 아미노기)과 동일한 기본 화학 구조를 갖지만 변형된 측쇄기 또는 변형된 펩타이드 골격을 갖는 비천연 아미노산, 예를 들어, 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭사이드 및 메티오닌 메틸 설포늄일 수 있다. "아미노산 모방체"는 아미노산의 일반적인 화학 구조와 다른 구조를 갖지만 천연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화합물을 지칭한다.
"링커"는 화합물 또는 물질에서 2개 이상의 모이어티를 공유 결합하는 작용기를 지칭한다. 예를 들어, 연결 모이어티는 면역접합체에서 항체 작제물에 애주번트 모이어티를 공유 결합하는 역할을 할 수 있다.
"연결 모이어티"는 화합물 또는 물질에서 2개 이상의 모이어티를 공유 결합하는 작용기를 지칭한다. 예를 들어, 연결 모이어티는 면역접합체에서 항체에 애주번트 모이어티를 공유 결합하는 역할을 할 수 있다. 연결 모이어티를 단백질 및 기타 물질에 연결하는 데 유용한 결합은 아미드, 아민, 에스테르, 카르바메이트, 우레아, 티오에테르, 티오카르바메이트, 티오카르보네이트, 및 티오우레아를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"2가"는 2개의 작용기를 연결하기 위한 2개의 부착점을 함유하는 화학적 모이어티를 지칭하고; 다가 연결 모이어티는 추가 작용기를 연결하기 위한 추가 부착점을 가질 수 있다. 2가 라디칼은 접미사 "디일"로 표시될 수 있다. 예를 들어, 2가 연결 모이어티는 2가 폴리(에틸렌 글리콜), 2가 사이클로알킬, 2가 헤테로사이클로알킬, 2가 아릴 및 2가 헤테로아릴기와 같은 2가 폴리머 모이어티를 포함한다. "2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기"는 분자 또는 물질에서 2개의 모이어티를 공유 연결하기 위한 2개의 부착점을 갖는 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기를 지칭한다. 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
물결선 ("
Figure pct00002
")은 특정 화학 모이어티의 부착점을 나타낸다. 특정 화학 모이어티에 2개의 물결선 ("
Figure pct00003
")이 존재하는 경우, 화학 모이어티는 양방향으로, 즉 왼쪽에서 오른쪽으로 또는 오른쪽에서 왼쪽으로 읽을 때 사용될 수 있음을 이해해야 한다. 일부 구현예에서, 2개의 물결선 ("
Figure pct00004
")이 존재하는 특정 모이어티는 왼쪽에서 오른쪽으로 읽을 때 사용되는 것으로 간주된다.
"알킬"은 표시된 탄소 원자 수를 갖는 직쇄(선형) 또는 분지형 포화 지방족 라디칼을 지칭한다. 알킬은 예를 들어 1에서 12까지의 임의의 수의 탄소를 포함할 수 있습니다. 알킬 기의 예는 메틸 (Me, -CH3), 에틸 (Et, -CH2CH3), 1-프로필 (n-Pr, n-프로필, -CH2CH2CH3), 2-프로필 (i-Pr, i-프로필, -CH(CH3)2), 1-부틸 (n-Bu, n-부틸, -CH2CH2CH2CH3), 2-메틸-1-프로필 (i-Bu, i-부틸, -CH2CH(CH3)2), 2-부틸 (s-Bu, s-부틸, -CH(CH3)CH2CH3), 2-메틸-2-프로필 (t-Bu, t-부틸, -C(CH3)3), 1-펜틸 (n-펜틸, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-펜틸 (-CH(CH2CH3)2), 2-메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH2CH3), 3-메틸-2-부틸 (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-메틸-1-부틸 (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-메틸-1-부틸 (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-헥실 (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-헥실 (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-헥실 (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-메틸-2-펜틸 (-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-메틸-3-펜틸 (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-메틸-3-펜틸 (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-디메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-디메틸-2-부틸 (-CH(CH3)C(CH3)3, 1-헵틸, 1-옥틸, 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알킬 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. "치환된 알킬" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노, 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
용어 "알킬디일"은 2가 알킬 라디칼을 지칭한다. 알킬디일 기의 예는 메틸렌 (-CH2-), 에틸렌 (-CH2CH2-), 프로필렌 (-CH2CH2CH2-), 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알킬디일 기는 또한 "알킬렌" 기로 지칭될 수 있다.
"알케닐"은 표시된 탄소 원자 수 및 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합, sp2를 갖는 직쇄(선형) 또는 분지형, 불포화 지방족 라디칼을 지칭한다. 알케닐은 2개 내지 약 12개 이상의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 알케닐 기는 "시스" 및 "트랜스" 배향, 또는 대안적으로 "E" 및 "Z" 배향을 갖는 라디칼이다. 그 예는 에틸레닐 또는 비닐 (-CH=CH2), 알릴 (-CH2CH=CH2), 부테닐, 펜테닐, 및 그의 이성질체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알케닐 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. "치환된 알케닐" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소 (=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노, 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
용어들 "알케닐렌" 또는 "알케닐디일"은 선형 또는 분지쇄 2가 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 그 예는 에틸레닐렌 또는 비닐렌 (-CH=CH-), 알릴 (-CH2CH=CH-), 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"알키닐"은 표시된 탄소 원자 수 및 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합 sp를 갖는 직쇄(선형) 또는 분지형, 불포화 지방족 라디칼을 지칭한다. 알키닐은 2개 내지 약 12개 이상의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 예를 들어, C2-C6 알키닐은 에티닐 (-C≡CH), 프로피닐 (프로파르길, -CH2C≡CH), 부티닐, 펜티닐, 헥시닐, 및 그의 이성질체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알키닐 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. "치환된 알키닐" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소 (=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노, 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
용어 "알키닐렌" 또는 "알키닐디일"은 2가 알키닐 라디칼을 지칭한다.
용어들 "카보사이클", "카보사이클릴", "카보사이클릭 고리" 및 "사이클로알킬"은 3 내지 12개의 고리 원자, 또는 표시된 원자의 수를 함유하는 포화 또는 부분 불포화, 모노사이클릭, 융합된 바이사이클릭, 또는 가교된 폴리사이클릭 고리 어셈블리를 지칭한다. 포화 모노사이클릭 카르보사이클릭 고리는 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 및 사이클로옥틸을 포함한다. 포화 바이사이클릭 및 폴리사이클릭 카르보사이클릭 고리는 예를 들어, 노르보르난, [2.2.2]바이사이클로옥탄, 데카하이드로나프탈렌 및 아다만탄을 포함한다. 카르보사이클릭기는 또한 고리에 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 갖고 부분적으로 불포화될 수 있다. 부분적으로 불포화된 대표적인 카르보사이클릭기는 사이클로부텐, 사이클로펜텐, 사이클로헥센, 사이클로헥사디엔 (1,3- 및 1,4-이성질체), 사이클로헵텐, 사이클로헵타디엔, 사이클로옥텐, 사이클로옥타디엔 (1,3-, 1,4- 및 1,5-이성질체), 노르보르넨 및 노르보르나디엔을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
용어 "사이클로알킬디일"은 2가 사이클로알킬 라디칼을 지칭한다.
"아릴"은 고리 시스템의 단일 탄소 원자로부터 하나의 수소 원자를 제거하여 유도된 6 내지 20개의 탄소 원자 (C6-C20)의 1가 방향족 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 아릴기는 모노사이클릭이거나, 융합되어 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 기를 형성하거나 결합에 의해 연결되어 바이아릴 기를 형성할 수 있다. 대표적인 아릴기는 페닐, 나프틸 및 바이페닐을 포함한다. 다른 아릴기는 메틸렌 연결 기를 갖는 벤질을 포함한다. 일부 아릴기는 페닐, 나프틸 또는 바이페닐과 같이 6 내지 12개의 고리 구성원을 갖는다. 다른 아릴기는 페닐 또는 나프틸과 같이 6 내지 10개의 고리 구성원을 갖는다.
용어들 "아릴렌" 또는 "아릴디일"은 방향족 고리 시스템의 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 6 내지 20개의 탄소 원자 (C6-C20) 의 2가 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 일부 아릴디일 기는 예시적인 구조에서 "Ar"로 표시된다. 아릴디일은 포화된, 부분적으로 불포화된 고리, 또는 방향족 카보사이클릭 고리에 융합된 방향족 고리를 포함하는 바이사이클릭 라디칼을 포함한다. 전형적인 아릴디일 기는 벤젠 (페닐디일), 치환된 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 바이페닐렌, 인데닐렌, 인다닐렌, 1,2-디하이드로나프탈렌, 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸, 등으로부터 유로된 라이칼을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 아릴디일 기는 또한 "아릴렌"으로 지칭되고, 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 치환된다.
용어들 "헤테로사이클," "헤테로사이클릴" 및 "헤테로사이클릭 고리"는 본원에서 상호교환적으로 사용되며 적어도 하나의 고리 원자가 질소, 산소, 인 및 황으로부터 선택된 헤테로원자이고 나머지 고리 원자는 C인 3 내지 약 20개의 고리 원자의 포화된 또는 부분적으로 불포화된 (즉, 고리 내에 하나 이상의 이중 및/또는 삼중 결합을 가짐) 카보사이클릭 라디칼을 지칭하고, 하나 이상의 고리 원자는 선택적으로 아래에 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다. 헤테로사이클은 3 내지 7개의 고리 구성원 (2 내지 6개의 탄소 원자 및 N, O, P, 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자)를 갖는 모노사이클 또는 7 내지 10개의 고리 구성원 (4 내지 9개의 탄소 원자 및 N, O, P, 및 S로부터 선택된 1 내지 6개의 헤테로원자)을 갖는 바이사이클, 예를 들어: 바이사이클로 [4,5], [5,5], [5,6], 또는 [6,6] 시스템일 수 있다. 헤테로사이클은 문헌 [Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamin, New York, 1968), particularly Chapters 1, 3, 4, 6, 7, 및 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950, 현재까지), 특히 Volumes 13, 14, 16, 19, 및 28; 및 J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566]에 기재되어 있다. "헤테로사이클릴"은 또한 헤테로사이클 라디칼이 포화된, 부분적으로 불포화된 고리, 또는 방향족 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리와 융합된 라디칼을 포함한다. 헤테로사이클릭 고리의 예는 모폴린-4-일, 피페리딘-1-일, 피페라지닐, 피페라진-4-일-2-온, 피페라진-4-일-3-온, 피롤리딘-1-일, 티오모폴린-4-일, S-디옥소티오모폴린-4-일, 아조칸-1-일, 아제티딘-1-일, 옥타하이드로피리도[1,2-a]피라진-2-일, [1,4]디아제판-1-일, 피롤리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 디하이드로푸라닐, 테트라하이드로티에닐, 테트라하이드로피라닐, 디하이드로피라닐, 테트라하이드로티오피라닐, 피페리디노, 모폴리노, 티오모폴리노, 티옥사닐, 피페라지닐, 호모피페라지닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 호모피페리디닐, 옥세파닐, 티에파닐, 옥사제피닐, 디아제피닐, 티아제피닐, 2-피롤리닐, 3-피롤리닐, 인돌리닐, 2H-피라닐, 4H-피라닐, 디옥사닐, 1,3-디옥소라닐, 피라졸리닐, 디티아닐, 디티올라닐, 디하이드로피라닐, 디하이드로티에닐, 디하이드로푸라닐, 피라졸리디닐이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐, 3-아자바이사이클로[4.1.0]헵타닐, 아자바이사이클로[2.2.2]헥사닐, 3H-인돌릴 퀴놀리지닐 및 N-피리딜 우레아를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 스피로 헤테로사이클릴 모이어티는 또한 이 정의의 범위 내에 포함된다. 스피로 헤테로사이클릴 모이어티의 예는 아자스피로[2.5]옥타닐 및 아자스피로[2.4]헵타닐을 포함한다. 2개 고리 원자가 옥소 (=O) 모이어티로 치환된 헤테로사이클릭 기의 예는 피리미디노닐 및 1,1-디옥소-티오모폴리닐이다. 본원의 헤테로사이클 기는 선택적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다.
용어 "헤테로사이클릴디일"은 적어도 하나의 고리 원자는 질소, 산소, 인 및 황으로부터 선택된 헤테로원자이고, 나머지 고리 원자 C인 3 내지 약 20개의 고리 원자의 2가, 포화된 또는 부분적으로 불포화된 (즉, 고리 내에 하나 이상의 이중 및/또는 삼중 결합을 가짐) 카보사이클릭 라디칼을 지칭하고, 하나 이상의 고리 원자는 선택적으로 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다. 5-원 및 6-원 헤테로사이클릴디일의 예는 모폴리닐디일, 피페리디닐디일, 피페라지닐디일, 피롤리디닐디일, 디옥사닐디일, 티오모폴리닐디일, 및 S-디옥소티오모폴리닐디일을 포함한다.
용어 "헤테로아릴"은 5-, 6-, 또는 7-원 고리의 1가 방향족 라디칼을 지칭하고, 질소, 산소, 및 황으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 함유하는 5 내지 20개의 원자의 융합 고리계 (이의 적어도 하나는 방향족임)를 포함한다. 헤테로아릴 기의 예는 피리디닐 (예를 들어, 2-하이드록시피리디닐 포함), 이미다졸릴, 이미다조피리디닐, 피리미디닐 (예를 들어, 4-하이드록시피리미디닐 포함), 피라졸릴, 트리아졸릴, 피라지닐, 테트라졸릴, 퓨릴, 티에닐, 이속사졸릴, 티아졸릴, 옥사디아졸릴, 옥사졸릴, 이소티아졸릴, 피롤릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 신놀리닐, 인다졸릴, 인돌리지닐, 프탈라지닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 이소인돌릴, 프테리디닐, 퓨리닐, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 티아디아졸릴, 푸라자닐, 벤조푸라자닐, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤즈옥사졸릴, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 나프티리디닐, 및 푸로피리디닐이다. 헤테로아릴 기는 선택적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다.
용어 "헤테로아릴디일"은 5-, 6-, 또는 7-원 고리의 2가 방향족 라디칼을 지칭하고, 질소, 산소, 및 황으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 함유하는 5 내지 20 원자의 융합 고리계 (이의 적어도 하나는 방향족임)를 포함한다. 5-원 및 6-원 헤테로아릴디일의 예는 피리딜디일, 이미다졸릴디일, 피리미디닐디일, 피라졸릴디일, 트리아졸릴디일, 피라지닐디일, 테트라졸릴디일, 퓨릴디일, 티에닐디일, 이속사졸릴디일디일, 티아졸릴디일, 옥사디아졸릴디일, 옥사졸릴디일, 이소티아졸릴디일, 및 피롤릴디일을 포함한다.
헤테로사이클 또는 헤테로아릴 기는 가능한 경우 결합된 탄소(탄소-연결) 또는 질소(질소-연결)일 수 있다. 비제한적인 예로서, 탄소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 피리딘의 위치 2, 3, 4, 5, 또는 6, 피리다진의 위치 3, 4, 5, 또는 6, 피리미딘의 위치 2, 4, 5, 또는 6, 피라진의 위치 2, 3, 5, 또는 6, 푸란, 테트라하이드로푸란, 티오푸란, 티오펜, 피롤 또는 테트라하이드로피롤의 위치 2, 3, 4, 또는 5, 옥사졸, 이미다졸 또는 티아졸의 위치 2, 4, 또는 5, 이속사졸, 피라졸, 또는 이소티아졸의 위치 3, 4, 또는 5, 아지리딘의 위치 2 또는 3, 아제티딘의 위치 2, 3, 또는 4, 퀴놀린의 위치 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8 또는 이소퀴놀린의 위치 1, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8에서 결합된다.
비제한적인 예로서, 질소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 아지리딘, 아제티딘, 피롤, 파이롤리딘, 2-파리롤린, 3-파리롤린, 이미다졸, 이미다졸리딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2-피라졸린, 3-피라졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌, 인돌린, 1H-인다졸의 위치 1, 이소인돌, 또는 이소인돌린의 위치 2, 모폴린의 위치 4, 및 카바졸, 또는 β-카볼린의 위치 9에서 결합된다.
그 자체로 또는 다른 치환기의 일부로서 용어 "할로" 및 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자를 의미한다.
그 자체로 또는 다른 치환기의 일부로서 용어 "카보닐"은 C(=O) 또는 -C(=O)-, 즉 산소에 이중 결합되고 카보닐을 가지고 있는 모이어티에서 다른 두 기에 결합된 탄소 원자를 나타낸다.
본원에 사용된 "4차 암모늄 염"이라는 문구는 알킬 치환기 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 또는 부틸과 같은 C1-C4 알킬)로 4차화된 3차 아민을 지칭한다.
"치료하다", "치료" 및 "치료하는"이라는 용어는 저감; 경감; 증상을 감소시키거나 증상, 부상, 병리 또는 병태를 환자가 더 견딜 수 있게 만드는 것; 증상 진행 속도 감소; 증상 또는 병태의 빈도 또는 기간 감소; 또는 일부 상황에서는 증상의 발병의 예방과 같은 임의의 객관적 또는 주관적 매개변수를 포함하여, 부상, 병리, 병태 (예를 들어, 암), 또는 증상 (예를 들어, 인지 장애)의 치료 또는 개선의 임의의 성공 표시를 지칭한다. 증상의 치료 또는 개선은 예를 들어, 신체 검사의 결과를 포함하는 임의의 객관적 또는 주관적 매개변수를 기반으로 할 수 있다.
용어 "암", "신생물" 및 "종양"은 세포 증식에 대한 제어의 유의미한 상실을 특징으로 하는 비정상적인 성장 표현형을 나타내도록 자율적이고 조절되지 않은 성장을 나타내는 세포를 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 본 발명의 맥락에서 검출, 분석 및/또는 치료를 위한 관심 세포는 암 세포 (예를 들어, 암에 걸린 개체의 암 세포), 악성 암 세포, 전-전이성 암 세포, 전이성 암 세포, 및 비-전이성 암 세포를 포함한다. 거의 모든 조직의 암이 알려져 있다. "암 부담"이라는 어구는 대상체에서 암 세포의 양 또는 암 부피를 지칭한다. 이에 따라 암 부담을 감소시키는 것은 대상체에서 암 세포의 수 또는 암 세포 부피를 감소시키는 것을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "암 세포"는 암 세포 (예를 들어, 개체가 치료될 수 있는, 예를 들어, 암에 걸린 개체로부터 단리될 수 있는 임의의 암)이거나 암 세포로부터 유래된 임의의 세포, 예를 들어, 암 세포의 클론을 지칭한다. 예를 들어, 암 세포는 확립된 암 세포주로부터 유래할 수 있고, 암에 걸린 개체로부터 단리된 1차 세포일 수 있고, 암에 걸린 개체로부터 단리된 1차 세포로부터의 자손 세포 등일 수 있다. 일부 구현예에서, 이 용어는 또한 암 세포의 일부, 예를 들어, 세포내 부분, 세포막 부분, 또는 암 세포의 세포 용해물을 지칭할 수 있다. 암종, 육종, 교모세포종, 흑색종, 림프종 및 골수종과 같은 고형 종양, 및 백혈병과 같은 순환성 암을 비롯한 많은 유형의 암이 당업자에게 공지되어 있다.
본원에 사용된 용어 "암"은 고형 종양 암 (예를 들어, 피부, 폐, 전립선, 유방, 위, 방광, 결장, 난소, 췌장, 신장, 간, 교모세포종, 수모세포종, 평활근육종, 두경부 편평 세포 암종, 흑색종 및 신경내분비) 및 액체 암 (예를 들어, 혈액암); 암종; 연조직 종양; 육종; 기형종; 흑색종; 백혈병; 림프종; 및 최소 잔류 질환을 포함하는 뇌암 및 원발성 및 전이성 종양을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 형태의 암을 포함한다.
"PD-L1 발현"은 세포 표면에 PD-L1 수용체가 있는 세포를 지칭한다. 본원에 사용된 "PD-L1 과발현"은 상응하는 비-암 세포와 비교하여 더 많은 PD-L1 수용체를 갖는 세포를 지칭한다.
"HER2"는 단백질 인간 표피 성장 인자 수용체 2를 지칭한다.
"HER2 발현"은 세포 표면에 HER2 수용체가 있는 세포를 지칭한다. 예를 들어, 세포는 세포 표면에 약 20,000 내지 약 50,000개의 HER2 수용체를 가질 수 있다. 본원에 사용된 "HER2 과발현"은 약 50,000개 초과의 HER2 수용체를 갖는 세포를 지칭한다. 예를 들어, 세포는 상응하는 비-암 세포와 비교할 때 HER2 수용체의 수가 2, 5, 10, 100, 1,000, 10,000, 100,000 또는 1,000,000배 (예를 들어, 약 1 또는 2백만개의 HER2 수용체)이다. HER2는 유방암의 약 25% 내지 약 30%에서 과발현되는 것으로 추정된다.
암의 "병리"에는 환자의 복지를 손상시키는 모든 현상이 포함된다. 여기에는 비정상적이거나 통제할 수 없는 세포 성장, 전이, 인접 세포의 정상적인 기능 방해, 비정상적인 수준의 사이토카인 또는 기타 분비 산물의 방출, 염증 또는 면역 반응의 억제 또는 악화, 신생물, 전암, 악성 종양 및 림프절과 같은 주변 또는 원거리 조직이나 기관의 침습이 포함되나 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에 사용되는 "암 재발" 및 "종양 재발"이라는 문구 및 이들의 문법적 변형은 암 진단 후 신생물 또는 암성 세포의 추가 성장을 지칭한다. 특히, 암 조직에 추가적인 암 세포 증식이 일어나면 재발이 일어날 수 있다. 유사하게 "종양 퍼짐(tumor spread)"은 종양의 세포가 국소 또는 원거리 조직 및 기관으로 퍼질 때 발생하므로 종양 퍼짐은 종양 전이를 포함한다. "종양 침습"은 종양 성장이 국부적으로 퍼져 정상 기관 기능의 압박, 파괴 또는 방지에 의해 관련 조직의 기능을 손상시킬 때 발생한다.
본 명세서에서 용어 "전이"는 원래의 암성 종양의 장기와 직접적으로 연결되지 않은 장기 또는 신체 부위에서의 암성 종양의 성장을 지칭한다. 전이는 원래 암성 종양의 기관에 직접 연결되지 않은 기관 또는 신체 부위에 검출할 수 없는 양의 암 세포가 존재하는 것인 미세전이를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 전이는 또한 암 세포가 원래 종양 부위에서 이탈하고 암 세포가 신체의 다른 부분으로 이동 및/또는 침습하는 것과 같은 과정의 여러 단계로 정의될 수 있다.
"유효량" 및 "치료 유효량"이라는 어구는 투여되어 치료 효과를 생성하는 면역접합체와 같은 물질의 용량 또는 양을 지칭한다. 정확한 용량은 치료의 목적에 따라 다르며 공지된 기술을 사용하여 당업자가 확인할 수 있다 (예를 들어, Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th Edition (McGraw-Hill, 2006); 및 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, (Pharmaceutical Press, London, 2012) 참조). 암의 경우, 면역접합체의 치료 유효량은 암 세포의 수를 감소시킬 수 있고; 종양 크기를 줄일 수 있고; 말초 기관으로의 암 세포 침윤을 억제 (즉, 어느 정도 느리게, 바람직하게는 중지)할 수 있고; 종양 전이를 억제 (즉, 어느 정도 느리게, 바람직하게는 중지)할 수 있고; 종양 성장을 어느 정도 억제할 수 있고/있거나; 암과 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화시킬 수 있다. 면역접합체가 기존 암 세포의 성장을 방지하고/하거나 죽일 수 있는 한, 이는 세포증식억제 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 치료의 경우 효능은 예를 들어, 질환 진행까지의 시간 (TTP)을 평가하고/하거나 반응률 (RR)을 결정하여 측정할 수 있다.
"수혜자", "개체", "대상체", "숙주" 및 "환자"는 상호교환적으로 사용되며 진단, 치료, 또는 요법이 바람직한 임의의 포유동물 대상체 (예를 들어, 인간)를 나타낸다. 치료 목적의 "포유동물"이라 함은 인간, 가축 및 농장동물, 개, 말, 고양이, 소, 양, 염소, 돼지, 낙타 등의 동물원, 스포츠 또는 애완 동물 등을 비롯한, 포유동물로 분류되는 임의의 동물을 지칭한다. 특정 구현예에서, 포유동물은 인간이다.
본 발명의 맥락에서 "상승적 애주번트" 또는 "상승적 조합"이라는 어구는 수용체 작용제, 사이토카인 및 애주번트 폴리펩타이드와 같은 2개의 면역 조절제의 조합을 포함하며, 이는 단독 투여되는 것에 비해 조합으로 면역에 대한 상승적 효과를 이끌어낸다. 특히, 본원에 개시된 면역접합체는 청구된 애주번트 및 항체 작제물의 상승적 조합을 포함한다. 투여 시 이러한 상승적 조합은, 예를 들어, 항체 작제물 또는 애주번트가 다른 모이어티의 부재 하에 투여되는 경우에 비해 면역에 대한 더 큰 효과를 유도한다. 또한, 항체 작제물 또는 애주번트가 단독으로 투여될 때와 비교하여 감소된 양의 면역접합체가 투여될 수 있다 (면역접합체의 일부로서 투여된 항체 작제물의 총 수 또는 애주번트의 총 수로 측정됨).
본원에 사용된 용어 "투여하는"은 비경구, 정맥내, 복강내, 근육내, 종양내, 병변내, 비강내, 또는 피하 투여, 경구 투여, 좌약으로서의 투여, 국소 접촉, 경막내 투여, 또는 서방성 장치, 예를 들어, 미니 삼투압 펌프의 대상에의 착상을 지칭한다.
수치를 수식하기 위해 본 명세서에서 사용된 용어 "약" 및 "대략"은 수치를 둘러싸는 가까운 범위를 나타낸다. 따라서, "X"가 값이면, "약 X" 또는 "대략 X"는 0.9X 내지 1.1X, 예를 들어, 0.95X 내지 1.05X 또는 0.99X 내지 1.01X의 값을 나타낸다. "약 X" 또는 "대략 X"에 대한 언급은 구체적으로 적어도 X, 0.95X, 0.96X, 0.97X, 0.98X, 0.99X, 1.01X, 1.02X, 1.03X, 1.04X, 및 1.05X 값을 나타낸다. 따라서 "약 X" 및 "대략 X"는 예를 들어, "0.98X"의 청구 제한에 대한 서면 설명 지원을 교시하고 제공하기 위한 것이다.
항체
본 발명의 면역접합체는 항체를 포함한다. 본 발명의 실시 양태의 범위에는 본원에 기재된 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 기능적 변이체가 포함된다. 본원에 사용된 용어 "기능적 변이체"는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 실질적으로 또는 상당한 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물을 지칭하며, 이 기능적 변이체는 항체 작제물 또는 그것의 변이체인 항원 결합 도메인의 생물학적 활성을 보유한다. 기능적 변이체는 예를 들어, PD-L1, HER2 또는 CEA를 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 유사한 정도, 동일한 정도, 또는 더 높은 정도로 발현하는 표적 세포를 인식하는 능력을 보유하는 본원에 기재된 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인 (모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인)의 변이체를 포함한다.
항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 관련하여, 기능적 변이체는 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 아미노산 서열이 예를 들어, 적어도 약 30%, 약 50%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 그 이상 동일하다.
기능적 변이체는 예를 들어, 적어도 하나의 보존적 아미노산 치환을 갖는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 기능적 변이체는 적어도 하나의 비보존적 아미노산 치환을 갖는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이 경우, 비보존적 아미노산 치환이 기능적 변이체의 생물학적 활성을 방해하거나 저해하지 않는 것이 바람직하다. 비보존적 아미노산 치환은 기능적 변이체의 생물학적 활성을 향상시켜, 기능적 변이체의 생물학적 활성이 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 비교하여 증가될 수 있다.
본 발명의 면역접합체를 포함하는 항체는 Fc 조작된 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 조절된 결합을 초래하는 Fc 영역 내의 돌연변이는 하기 돌연변이: SD (S239D), SDIE (S239D/I332E), SE (S267E), SELF (S267E/L328F), SDIE (S239D/I332E), SDIEAL (S239D/I332E/A330L), GA (G236A), ALIE (A330L/I332E), GASDALIE (G236A/S239D/A330L/I332E), V9 (G237D/P238D/P271G/A330R), 및 V11 (G237D/P238D/H268D/P271G/A330R) 중 하나 이상, 및/또는 다음 아미노산: E345R, E233, G237, P238, H268, P271, L328 및 A330에서 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. Fc 수용체 결합을 조절하기 위한 추가의 Fc 영역 변형은 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 2016/0145350 및 미국 특허 7,416,726 및 5,624,821에 기재되어 있으며, 이들은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
본 발명의 면역접합체를 포함하는 항체는 아푸코실화와 같은 글리칸 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 결합제의 Fc 영역은 천연의 비변형된 Fc 영역과 비교하여 Fc 영역의 변경된 글리코실화 패턴을 갖도록 변형된다.
본 발명의 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 아미노산 치환은 바람직하게는 보존적 아미노산 치환이다. 보존적 아미노산 치환은 당업계에 공지되어 있으며, 특정 물리적 및/또는 화학적 특성을 갖는 하나의 아미노산이 동일하거나 유사한 화학적 또는 물리적 특성을 갖는 다른 아미노산으로 교환되는 아미노산 치환을 포함한다. 예를 들어, 보존적 아미노산 치환은 산성/음으로 하전된 다른 극성 아미노산 (예를 들어, Asp 또는 Glu)으로 치환된 산성/음으로 하전된 극성 아미노산, 비극성 측쇄가 있는 다른 아미노산으로 치환된 비극성 측쇄가 있는 아미노산 (예를 들어, Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Trp, Cys, Val 등), 염기성/양으로 하전된 다른 극성 아미노산으로 치환된 염기성/양으로 하전된 극성 아미노산 (예를 들어, Lys, His, Arg 등), 극성 측쇄가 있는 다른 비하전 아미노산으로 치환된 극성 측쇄가 있는 비하전 아미노산 (예를 들어, Asn, Gln, Ser, Thr, Tyr 등), 베타 분지된 측쇄가 있는 다른 아미노산으로 치환된 베타 분지된 측쇄가 있는 아미노산 (예를 들어, Ile, Thr, Val), 방향족 측쇄가 있는 다른 아미노산으로 치환된 방향족 측쇄가 있는 아미노산 (예를 들어, His, Phe, Trp 및 Tyr) 등일 수 있다.
항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 다른 성분, 예를 들어, 다른 아미노산이 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인 기능적 변이체의 생물학적 활성을 실질적으로 변화시키지 않도록 본원에 기재된 특정 아미노산 서열 또는 서열들로 본질적으로 이루어질 수 있다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 변형된 Fc 영역을 함유하고, 여기서 변형은 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 조절한다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체(예를 들어, 적어도 2개의 보조제 모이어티에 접합된 항체)는 Fc 영역 내의 돌연변이가 결여된 고유 항체와 비교하여 하나 이상의 Fc 수용체 (예를 들어, FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a), 및/또는 FcγRIIIB (CD16b))에 대한 조절된 결합 (예를 들어, 증가된 결합 또는 감소된 결합)을 초래하는 Fc 영역에서 하나 이상의 변형 (예를 들어, 아미노산 삽입, 결실, 및/또는 치환)을 함유한다. 일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 FcγRIIB에 대한 항체의 Fc 영역의 결합을 감소시키는 Fc 영역 내의 하나 이상의 변형 (예를 들어, 아미노산 삽입, 결실 및/또는 치환)을 함유한다. 일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 Fc 영역 내의 돌연변이가 결여된 고유 항체와 비교하여 FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32A), 및/또는 FcRγIIIA (CD16a)에 대한 동일한 결합을 유지하거나 증가된 결합을 가지면서 FcγRIIB에 대한 항체의 결합을 감소시키는 항체의 Fc 영역에서 하나 이상의 변형 (예를 들어, 아미노산 삽입, 결실, 및/또는 치환)을 함유한다. 일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 FcγRIIB에 대한 항체의 Fc 영역의 결합을 증가시키는 Fc 영역 내의 하나 이상의 변형을 함유한다.
일부 구현예에서, 조절된 결합은 항체의 천연 Fc 영역에 비해 항체의 Fc 영역에서의 돌연변이에 의해 제공된다. 돌연변이는 CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 이들의 조합에 있을 수 있다. "천연 Fc 영역"은 "야생형 Fc 영역"과 동의어이며 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일하거나 천연 항체 (예를 들어, 세툭시맙)에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 천연 서열 인간 Fc 영역은 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역, 천연 서열 인간 IgG2 Fc 영역, 천연 서열 인간 IgG3 Fc 영역, 및 천연 서열 인간 IgG4 Fc 영역, 뿐만 아니라 그의 자연 발생 변이체를 포함한다. 천연 서열 Fc는 Fc의 다양한 동종이형을 포함한다 (Jefferis 등, (2009) mAbs, 1(4):332-338).
일부 구현예에서, 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 조절된 결합을 초래하는 Fc 영역 내의 돌연변이는 다음의 돌연변이: SD (S239D), SDIE (S239D/I332E), SE (S267E), SELF (S267E/L328F), SDIE (S239D/I332E), SDIEAL (S239D/I332E/A330L), GA (G236A), ALIE (A330L/I332E), GASDALIE (G236A/S239D/A330L/I332E), V9 (G237D/P238D/P271G/A330R), 및 V11 (G237D/P238D/H268D/P271G/A330R) 중 하나 이상, 및/또는 다음의 아미노산: E233, G237, P238, H268, P271, L328 및 A330에서의 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. Fc 수용체 결합을 조절하기 위한 추가의 Fc 영역 변형은 예를 들어, US 2016/0145350 및 US 7416726 및 US 5624821 에 기재되어 있고, 이들은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 면역접합체의 항체의 Fc 영역은 천연의 비변형된 Fc 영역과 비교하여 Fc 영역의 변경된 글리코실화 패턴을 갖도록 변형된다.
인간 면역글로불린은 각 중쇄의 Cγ2 도메인에 있는 Asn297 잔기에서 글리코실화된다. 이 N-연결된 올리고당은 핵심 헵타사카라이드, N-아세틸글루코사민4만노스3 (GlcNAc4Man3)으로 구성된다. 엔도글리코시다제 또는 PNGase F를 사용한 헵타사카라이드의 제거는 항체 Fc 영역의 형태적 변화를 유도하는 것으로 알려져 있으며, 이는 활성화 FcγR에 대한 항체 결합 친화도를 현저히 감소시키고 효과기 기능을 감소시킬 수 있다. 핵심 헵타사카라이드는 종종 갈락토스, 이등분 GlcNAc, 푸코스 또는 시알산으로 장식되어 있으며, 이는 활성화 및 억제 FcγR에 대한 Fc 결합에 차등적으로 영향을 미친다. 또한, α2,6-시알화는 생체내 항염증 활성을 향상시키는 반면, 탈푸코실화는 FcγRIIIa 결합을 개선하고 항체 의존성 세포독성 및 항체 의존성 포식작용을 10배 증가시킨다는 것이 입증되었다. 따라서 특정 글리코실화 패턴을 사용하여 염증 효과기 기능을 제어할 수 있다.
일부 구현예에서, 글리코실화 패턴을 변경하기 위한 변형은 돌연변이이다. 예를 들어, Asn297에서의 치환. 일부 구현예에서, Asn297은 글루타민(N297Q)으로 돌연변이된다. FcγR-조절 신호전달을 조절하는 항체로 면역 반응을 제어하는 방법은 예를 들어 미국 특허 7,416,726 및 미국 특허 출원 공개 2007/0014795 및 2008/0286819에 기재되어 있으며, 이들은 그 전체가 참고로 본 명세서에 포함된다.
일부 구현예에서, 면역접합체의 항체는 비-자연 발생 글리코실화 패턴을 갖는 조작된 Fab 영역을 함유하도록 변형된다. 예를 들어, 하이브리도마는 증가된 FcRγIIIa 결합 및 효과기 기능을 가능하게 하는 특이적 돌연변이를 갖는 비푸코실화된 mAb, 탈시알릴화된 mAb 또는 탈글리코실화된 Fc를 분비하도록 유전적으로 조작될 수 있다. 일부 구현예에서, 면역접합체의 항체는 비푸코실화되도록 조작된다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체의 전체 Fc 영역은 상이한 Fc 영역으로 교환되어, 항체의 Fab 영역이 비천연 Fc 영역에 접합된다. 예를 들어, 일반적으로 IgG1 Fc 영역을 포함하는 세툭시맙의 Fab 영역은 IgG2, IgG3, IgG4 또는 IgA에 접합될 수 있거나, 일반적으로 IgG4 Fc 영역을 포함하는 니볼루맙의 Fab 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgA1 또는 IgG2에 접합될 수 있다. 일부 구현예에서, 비-천연 Fc 도메인을 갖는 Fc 변형된 항체는 또한 기재된 Fc 도메인의 안정성을 조절하는 하나 이상의 아미노산 변형, 예컨대 IgG4 Fc 내의 S228P 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-천연 Fc 도메인을 갖는 Fc 변형된 항체는 또한 FcR에 대한 Fc 결합을 조절하는 본원에 기재된 하나 이상의 아미노산 변형을 포함한다.
일부 구현예에서, FcR에 대한 Fc 영역의 결합을 조절하는 변형은 천연 비-변형된 항체와 비교할 때 그의 항원에 대한 항체의 Fab 영역의 결합을 변경하지 않는다. 다른 구현예에서, FcR에 대한 Fc 영역의 결합을 조절하는 변형은 또한 천연 비-변형된 항체와 비교할 때 그의 항원에 대한 항체의 Fab 영역의 결합을 증가시킨다.
예시적인 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 PD-L1을 특이적으로 인식하고 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다.
프로그램된 사멸-리간드 1 (PD-L1, 분화 클러스터 274, CD274, B7-상동체 1 또는 B7-H1)은 B7 단백질 슈퍼패밀리에 속하며 프로그램된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1, PDCD1, 분화 클러스터 279 또는 CD279)의 리간드이다. PD-L1은 또한 B7.1 (CD80)과 상호작용할 수 있으며 이러한 상호작용은 T 세포 프라이밍을 억제하는 것으로 여겨진다. PD-L1/PD-1 축은 적응 면역 반응을 억제하는 데 큰 역할을 한다. 보다 구체적으로, PD-L1과 그의 수용체 PD-1의 결합은 T-세포의 활성화 및 증식을 억제하는 신호를 전달하는 것으로 여겨진다. PD-L1에 결합하고 리간드가 PD-1 수용체에 결합하는 것을 방지하는 제제는 이러한 면역억제를 방지하고, 따라서 암 또는 감염의 치료와 같이, 원하는 경우 면역 반응을 향상시킬 수 있다. PD-L1/PD-1 경로는 또한 자가면역을 예방하는 데 기여하므로 PD-L1에 대한 효능제 또는 면역 억제 페이로드를 전달하는 제제는 자가면역 장애의 치료에 도움이 될 수 있다.
아테졸리주맙 (TECENTRIQTM), 더발루맙 (IMFINZITM), 및 아벨루맙 (BAVENCIOTM)을 포함하여 PD-L1을 표적으로 하는 여러 항체가 암 치료를 위해 개발되었다. 그럼에도 불구하고, PD-L1에 높은 친화도로 결합하고 PD-L1/PD-1 신호전달을 효과적으로 방지하는 제제 및 PD-L1 발현 세포에 치료적 페이로드를 전달할 수 있는 제제를 비롯한 새로운 PD-L1-결합 제제에 대한 필요성이 계속 존재한다. 또한 자가면역 장애 및 감염을 치료하기 위한 새로운 PD-L1 결합제가 필요하다.
하나 이상의 티에노아제핀 모이어티에 공유 부착된 링커에 공유 부착된 항-PD-L1 항체를 포함하는 면역접합체를 세포, 또는 세포를 포함하는 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는, PD-L1을 발현하는 세포에 티에노아제핀 유도체 페이로드를 전달하는 방법이 제공된다.
또한, 포유동물에서 면역 반응을 향상 또는 감소 또는 억제하는 방법, 및 PD-L1 억제에 반응성인 포유동물의 질환, 장애 또는 병태를 치료하는 방법이 제공되며, 이 방법은 그의 PD-L1 면역접합체를 포유동물에 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 포함하는 PD-L1 결합제를 제공한다.
PD-L1 결합제는 PD-L1에 특이적으로 결합한다. 제제의 결합 특이성은 예를 들어, PD-L1 발현 세포를 표적화하여 이러한 세포에 치료적 페이로드를 전달할 수 있게 한다.
일부 구현예에서, PD-L1 결합제 (A형 또는 유형 B)는 인간 PD-L1, 예를 들어, 서열 번호 307을 포함하는 단백질에 결합한다. 그러나, 임의의 PD-L1 상동체 또는 파라로그에 결합하는 결합제도 포함된다. 일부 구현예에서, PD-L1 단백질은 서열 번호 307에 대해 적어도 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 포함한다. 일부 구현예에서, 결합제는 인간 PD-L1 및 시노몰구스 PD-L1에 결합하거나; 또는 인간, 시노몰구스 및 마우스 PD-L1에 결합한다.
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일부 구현예에서, PD-L1 결합제는 PD-L1이 그의 수용체인 PD-1에 결합하는 것을 실질적으로 억제하거나 방지하지 않으면서 PD-L1에 결합한다. 그러나, 다른 구현예에서, 항체가 PD-L1/PD-1 신호전달을 억제하는 데 사용될 수 있도록 (예를 들어, 치료 목적), PD-L1 결합제는 PD-L1이 그의 수용체인 PD-1에 결합하는 것을 완전히 또는 부분적으로 차단 (억제 또는 방지)할 수 있다.
항체 또는 항원 결합 항체 단편은 PD-L1에 대해 단일특이적일 수 있거나 이중특이적 또는 다중특이적일 수 있다. 예를 들어, 2가 또는 다가 항체 또는 항체 단편에서, 결합 도메인은 동일한 항원의 상이한 에피토프를 표적화하거나 상이한 항원을 표적화하는 데 상이할 수 있다. 다가 결합 작제물의 작제 방법은 당업계에 공지되어 있다. 이중특이적 및 다중특이적 항체는 당업계에 공지되어 있다. 또한, 디아바디, 트리아바디 또는 테트라바디가 제공될 수 있으며, 이는 각각이 동일한 폴리펩타이드 사슬 상의 VH와 VL 사이의 짝짓기를 허용하기에 너무 짧아 상이한 VH-VL 폴리펩타이드 사슬 상의 상보적 도메인 사이의 짝짓기를 유도하여 2개, 3개 또는 4개의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 다량체 분자를 생성하는 펩타이드 링커에 의해 VL에 연결된 VH를 포함하는 폴리펩타이드 사슬의 이량체, 삼량체 또는 사량체이다. 또한, 2개의 상이한 가변 도메인을 갖는 작은 scFv 단편인 bis-scFv 단편을 생성하여 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있는 이중특이적 bis-scFv 단편을 생성할 수 있다. Fab 이량체 (Fab2) 및 Fab 삼량체 (Fab3)는 Fab 단편을 기반으로 하는 다중특이적 작제물을 생성하기 위한 유전 공학 방법을 사용하여 생성할 수 있다.
PD-L1-결합제는 또한 항체 접합체일 수 있다. 이와 관련하여, PD-L1-결합제는 (1) 항체, 대안적 스캐폴드 또는 이의 단편, 및 (2) 단백질 또는 비-단백질 모이어티의 접합체일 수 있다. 예를 들어, PD-L1 결합제는 펩타이드, 형광 분자, 화학치료제 또는 기타 세포독성 페이로드, 면역 활성화제 또는 면역 억제제에 접합될 수 있다.
PD-L1-결합제는 인간 항체, 비-인간 항체, 인간화 항체, 또는 키메라 항체, 또는 상응하는 항체 단편일 수 있거나 이로부터 수득될 수 있다. "키메라" 항체는 전형적으로 인간 불변 영역 및 비-인간 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 단편이다. "인간화" 항체는 전형적으로 인간 항체 스캐폴드를 포함하지만 적어도 하나의 CDR (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 모든 6개의 CDR)에 비인간 기원 아미노산 또는 서열을 포함하는 단일클론 항체이다.
PD-L1 결합제 - 유형 A
면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 포함하는 PD-L1 결합제가 본원에서 제공된다. 일부 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 A)는 서열 번호 223 내지 264 중 어느 하나의 면역글로불린 중쇄 가변 영역 또는 적어도 그의 CDR; 및 서열 번호 265 내지 306 중 어느 하나의 면역글로불린 경쇄 가변 영역 또는 적어도 그의 CDR을 포함한다. 다른 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 A)는 서열 번호 223 내지 264 중 어느 하나와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드 및 서열 번호 265 내지 306 중 어느 하나와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 포함한다. 또 다른 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 A), 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드는 서열 번호 1 내지 23 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (HCDR1), 서열 번호 24 내지 57 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (HCDR2), 및 서열 번호 58 내지 95 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (HCDR3)을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드는 서열 번호 96 내지 128 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (LCDR1), 서열 번호 129 내지 151 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (LCDR2), 및 서열 번호 152 내지 155 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (LCDR3)을 포함한다. 또한 PD-L1 결합제, 또는 이의 개별 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 핵산; 핵산을 포함하는 벡터 및 세포; 및 결합제 또는 핵산을 포함하는 조성물이 제공된다.
추가로, 일부 구현예에서, 본원에 제공된 PD-L1 결합제 (유형 A)는 세포 표면 상의 PD-L1에 결합시 PD-L1 또는 PD-L1/PD-L1 결합제 복합체의 세포 내재화를 야기한다. 임의의 특정 이론 또는 작용 메커니즘에 얽매이지 않고, 이 구현예에 따른 PD-L1 결합제는 결합시 PD-L1 내재화를 유발하고 내재화 동안 PD-L1에 결합된 상태로 남아서 PD-L1과 함께 결합제의 내재화를 초래하는 것으로 여겨진다. PD-L1 및 결합된 PD-L1 결합제의 세포 내재화는 세포 표면 상의 지속성에 대한 검정 및/또는 내재화된 항체의 검출과 같은 임의의 적합한 방법에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, PD-L1 결합제는 세포 표면 상의 PD-L1에 결합하는 PD-L1 결합제의 적어도 약 25% (예를 들어, 적어도 약 35%, 적어도 약 50%, 적어도 약 75%, 또는 적어도 약 90%)가 내재화되기에 매우 충분할 정도 (예를 들어, 표면 지속성 검정을 사용하여, 검정 시작 시 세포 표면 상의 PD-L1에 결합된 PD-L1 결합제 분자의 약 75% 이하, 약 65% 이하, 약 50% 이하, 약 25% 이하 또는 약 10% 이하가 검정 종료 시에 결합된 상태로 유지됨)로 내재화된다.
일 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 A)는 서열 번호 223 내지 264 중 어느 하나의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 서열 번호 223 내지 264과 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열, 또는 적어도 그의 CDR; 및/또는 서열 번호 265 내지 306 중 어느 하나의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 서열 번호 265 내지 306과 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열, 또는 적어도 그의 CDR을 포함한다.
추가 예시로서, PD-L1 결합제 (유형 A)는 다음을 포함할 수 있다:
(1) 서열 번호 223의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 265의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(2) 서열 번호 224의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 266의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(3) 서열 번호 225의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 267의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(4) 서열 번호 226의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 268의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(5) 서열 번호 227의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 269의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(6) 서열 번호 228의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 270의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(7) 서열 번호 229의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 271의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(8) 서열 번호 230의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 272의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(9) 서열 번호 231의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 273의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(10) 서열 번호 232의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 274의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(11) 서열 번호 233의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 275의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(12) 서열 번호 234의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 276의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(13) 서열 번호 235의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 277의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(14) 서열 번호 236의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 278의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(15) 서열 번호 237의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 279의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(16) 서열 번호 238의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 280의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(17) 서열 번호 239의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 281의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(18) 서열 번호 240의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 282의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(19) 서열 번호 241의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 283의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(20) 서열 번호 242의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 284의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(21) 서열 번호 243의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 285의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(22) 서열 번호 244의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 286의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(23) 서열 번호 245의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 287의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(24) 서열 번호 246의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 288의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(25) 서열 번호 247의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 289의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(26) 서열 번호 248의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 290의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(27) 서열 번호 249의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 291의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(28) 서열 번호 250의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 292의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(29) 서열 번호 251의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 293의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(30) 서열 번호 252의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 294의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(31) 서열 번호 253의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 295의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(32) 서열 번호 254의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 296의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(33) 서열 번호 255의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 297의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(34) 서열 번호 256의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 298의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(35) 서열 번호 257의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 299의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(36) 서열 번호 258의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 300의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(37) 서열 번호 259의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 301의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(38) 서열 번호 260의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 302의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(39) 서열 번호 261의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 303의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(40) 서열 번호 262의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 304의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(41) 서열 번호 263의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 305의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(42) 서열 번호 164의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 306의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR; 및/또는
(43) 도 4a 내지 d의 면역글로불린 중쇄 가변 영역 및/또는 도 4e 내지 g의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR.
주어진 중쇄 또는 경쇄 Ig 서열의 CDR은 임의의 다양한 공지된 Ig 넘버링 방식 (예를 들어, Kabat, Chothia, Martin (Enhanced Chothia), IGMT, AbM)에 따라 결정될 수 있다. 특정 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 A)는 하기 CDR 중 하나 이상을 포함하고:
서열 번호 1 내지 23 중 어느 하나 또는 서열 번호 1 내지 23과 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1;
서열 번호 24 내지 57 중 어느 하나 또는 서열 번호 24 내지 57과 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2; 및
서열 번호 58 내지 95 중 어느 하나 또는 서열 번호 58 내지 95와 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3; 및/또는 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 다음을 포함한다:
서열 번호 96 내지 128 중 어느 하나 또는 서열 번호 96 내지 128과 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1;
서열 번호 129 내지 151 중 어느 하나 또는 서열 번호 129 내지 151과 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2; 및
서열 번호 152 내지 155 중 어느 하나 또는 서열 번호 152 내지 155와 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3.
특정 구현예에서, 결합제 (유형 A)는 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드 및 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서:
(1) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 1을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 24를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 58을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 96을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 129를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 152를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(2) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 2를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 25를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 59를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 97을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 129를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 153을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(3) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 3을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 26을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 60을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 98을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 129를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 154를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(4) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 4를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 27을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 61을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 99를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 130을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 155를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(5) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 5를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 28을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 62를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 100을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 129를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 153을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(6) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 6을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 29를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 63을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 101을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 131을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 156을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(7) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 7을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 30을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 64를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 102를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 132를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 157을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(8) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 2를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 31을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 65를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 103을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 133을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 155를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(9) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 8을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 32를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 66을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 104를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 134를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 158을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(10) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 9를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 33을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 67을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 97을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 135를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 159를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(11) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 7을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 34를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 64를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 102를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 132를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 160을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(12) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 10을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 35를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 68을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 105를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 136을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 161을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(13) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 2를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 25를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 69를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 106을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 129를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 162를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(14) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 11을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 36을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 70을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 107을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 129를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 163을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(15) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 12를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 37을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 71을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 108을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 137을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 164를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(16) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 1을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 38을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 72를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 109를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 138을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 165를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(17) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 13을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 39를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 73을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 98을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 129를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 155를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(18) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 2를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 40을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 74를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 110을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 137을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 166을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(19) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 14를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 41을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 75를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 111을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 129를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 165를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(20) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 15를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 42를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 74를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 97을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 139를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 152를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(21) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 14를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 43을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 76을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 112를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 137을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 155를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(22) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 16을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 44를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 77을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 113을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 140을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 165를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(23) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 9를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 45를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 78을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 114를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 141을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 165를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하거나;
(24) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 17을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 46을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 79를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 98을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 129를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 155를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(25) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 9를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 25를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 80을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 115를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 142를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 165를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하거나;
(26) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 17을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 41을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 81을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 116을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 143을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 167을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하거나;
(27) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 7을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 47을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 82를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 117을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 144를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 155를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(28) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 2를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 41을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 83을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 118을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 131을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 168을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(29) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 18을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 48을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 84를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 119를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 145를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 165를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(30) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 19를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 49를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 85를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 120을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 146을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 155를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(31) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 2를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 50을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 86을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 121을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 147을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 169를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(32) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 2를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 51을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 87을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 122를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 137을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 155를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(33) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 20을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 44를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 88을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 123을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 148을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 170을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(34) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 3을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 52를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 60을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 98을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 129를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 171을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(35) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 2를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 53을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 89를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 97을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 147을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 172를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(36) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 21을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 38을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 90을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 109를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 150을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 165를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(37) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 22를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 41을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 91을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 124를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 151을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 173을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(38) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 2를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 54를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 92를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 126을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 129를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 165를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(39) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 2를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 55를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 93을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 97을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 149를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 174를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(40) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 23을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 56을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 94를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 125를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 142를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 175를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(41) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 14를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 43을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 76을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 127을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 137을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 176을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(42) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 3을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 57을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 95를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 128을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 137을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 155를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고/거나;
(43) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드는 PD-L1 A형 결합제 1 내지 42의 도 1a 내지 d에 열거된 CDR의 임의의 조합을 포함한다.
특정 구현예에서, 결합제는 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드 및 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드를 포함하고, 여기서 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 제1 프레임워크 영역, 제2 프레임워크 영역, 제3 프레임워크 영역, 및/또는 제4 프레임워크 영역을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 제1 프레임워크 영역, 제2 프레임워크 영역, 제3 프레임워크 영역, 및/또는 제4 프레임워크 영역을 포함하고/거나; 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드는 각각 도 2a 내지 d 및 도 3a 내지 d에 열거된 프레임워크 영역의 임의의 조합을 포함한다.
PD-L1 결합제 - 유형 B
면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 포함하는 PD-L1 결합제 (유형 B)가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 B)는 서열 번호 430 내지 450 중 어느 하나의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR; 및 서열 번호 451 내지 471 중 어느 하나의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR을 포함한다. 다른 구현예에서, PD-L1 결합제는 서열 번호 430 내지 450 중 어느 하나와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드, 및 서열 번호 451 내지 471 중 어느 하나와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 포함한다. 또 다른 구현예에서, PD-L1 결합제, 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드는 서열 308 내지 321 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (HCDR1), 서열 번호 322 내지 338 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (HCDR2), 및 서열 번호 339 내지 359 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (HCDR3)을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드는 서열 번호 360 내지 374 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (LCDR1), 서열 번호 131 및 375 내지 386 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (LCDR2), 및 서열 번호 387 내지 398 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (LCDR3)을 포함한다. 또한 PD-L1 결합제, 또는 이의 개별 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 핵산; 핵산을 포함하는 벡터 및 세포; 및 결합제 또는 핵산을 포함하는 조성물이 제공된다.
한 구현예에서, PD-L1 결합제 (유형 B)는 서열 번호 430 내지 450 중 어느 하나의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 서열 번호 430 내지 450과 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열, 또는 적어도 그의 CDR; 및/또는 서열 번호 451 내지 471 중 어느 하나의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 서열 번호 451 내지 471과 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열, 또는 적어도 그의 CDR을 포함한다.
추가 예시로서, PD-L1 결합제 (유형 B)는 다음을 포함할 수 있다:
(1) 서열 번호 429의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 450의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(2) 서열 번호 430의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 451의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(3) 서열 번호 431의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 452의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(4) 서열 번호 432의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 453의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(5) 서열 번호 433의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 454의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(6) 서열 번호 434의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 455의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(7) 서열 번호 435의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 456의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(8) 서열 번호 436의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 457의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(9) 서열 번호 437의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 458의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(10) 서열 번호 438의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 459의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(11) 서열 번호 439의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 460의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(12) 서열 번호 440의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 461의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(13) 서열 번호 441의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 462의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(14) 서열 번호 442의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 463의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(15) 서열 번호 443의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 464의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(16) 서열 번호 444의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 465의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(17) 서열 번호 445의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 466의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(18) 서열 번호 446의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 467의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(19) 서열 번호 447의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 468의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR;
(20) 서열 번호 448의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 469의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR; 및/또는
(21) 서열 번호 449의 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR, 및/또는 서열 번호 470의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR; 및/또는
(22) 도 8a 내지 b의 면역글로불린 중쇄 가변 영역 및/또는 도 8c 내지 d의 면역글로불린 경쇄 가변 영역, 또는 적어도 그의 CDR.
주어진 중쇄 또는 경쇄 Ig 서열의 CDR은 임의의 다양한 공지된 Ig 넘버링 방식 (예를 들어, Kabat, Chothia, Martin (Enhanced Chothia), IGMT, AbM)에 따라 결정될 수 있다. 특정 구현예에서, PD-L1 결합제는 하기 CDR 중 하나 이상을 포함하고:
서열 번호 308 내지 321 중 어느 하나 또는 서열 번호 308 내지 321과 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1;
서열 번호 322 내지 338 중 어느 하나 또는 서열 번호 322 내지 338과 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 또는 약 99% 이상 동일한 서열을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2; 및
서열 번호 339 내지 359 중 어느 하나 또는 서열 번호 339 내지 359와 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3; 및/또는 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 다음을 포함한다:
서열 번호 360 내지 374 중 어느 하나 또는 서열 번호 360 내지 374와 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 또는 약 99% 이상 동일한 서열을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1;
서열 번호 375 내지 386 중 어느 하나 또는 서열 번호 375 내지 386과 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2; 및
서열 번호 387 내지 398 중 어느 하나 또는 서열 번호 387 내지 398과 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일한 서열을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3.
특정 구현예에서, 결합제는 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드 및 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서:
(1) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 308을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 322를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 339를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 360을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 375를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 387을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(2) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 309를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 323을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 340을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 361을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 376을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 388을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(3) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 310을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 324를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 341을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 360을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 375를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 387을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(4) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 311을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 325를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 342를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 362를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 377을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 389를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(5) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 312를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 326을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 343을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 360을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 378을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 387을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(6) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 313을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 327을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 344를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 363을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 379를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 390을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(7) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 314를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 327을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 345를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 364를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 380을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 391을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(8) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 312를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 328을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 346을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 365를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 375를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 387을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(9) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 314를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 329를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 347을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 366을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 375를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 389를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(10) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 309를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 330을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 348을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 360을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 381을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 392를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(11) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 309를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 327을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 349를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 367을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 382를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 389를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(12) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 309를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 322를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 350을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 360을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 383을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 387을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(13) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 315를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 323을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 351을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 368을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 375를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 393을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(14) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 316을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 331을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 352를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 365를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 375를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 389를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(15) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 317을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 332를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 353을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 369를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 384를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 394를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(16) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 318을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 333을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 354를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 370을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 379를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 395를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(17) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 310을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 334를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 355를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 371을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 375를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 387을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(18) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 310을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 335를 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 356을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 360을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 385를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 396을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(19) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 319를 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 336을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 357을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 372를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 386을 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 397을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(20) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 320을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 337을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 358을 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 373을 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 379를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 398을 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고;
(21) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 321을 포함하거나 이로 구성된 HCDR1, 서열 번호 338을 포함하거나 이로 구성된 HCDR2, 및 서열 번호 359를 포함하거나 이로 구성된 HCDR3을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 서열 번호 374를 포함하거나 이로 구성된 LCDR1, 서열 번호 379를 포함하거나 이로 구성된 LCDR2, 및 서열 번호 389를 포함하거나 이로 구성된 LCDR3을 포함하고/거나;
(22) 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드는 도 5a 내지 b (유형 B)에 열거된 CDR의 임의의 조합을 포함한다.
특정 구현예에서, 결합제는 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드 및 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드를 포함하고, 여기서 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드는 제1 프레임워크 영역, 제2 프레임워크 영역, 제3 프레임워크 영역, 및/또는 제4 프레임워크 영역을 포함하고/거나; 면역글로불린 경쇄 폴리펩타이드는 제1 프레임워크 영역, 제2 프레임워크 영역, 제3 프레임워크 영역, 및/또는 제4 프레임워크 영역을 포함하고/거나; 면역글로불린 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드는 각각 도 6a 내지 b 및/또는 도 7a 내지 b (유형 B)에 열거된 프레임워크 영역의 임의의 조합을 포함한다.
예시적인 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 HER2를 특이적으로 인식하고 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 항-HER2 항체를 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 본 발명의 면역접합체의 항-HER2 항체는 인간화 항-HER2 항체, 예를 들어, 본원에 참조로 구체적으로 포함되는 US 5821337의 표 3에 기술된 바와 같은 huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 및 huMAb4D5-8을 포함한다. 이러한 항체는 HER2에 결합하는 뮤린 항체 (4D5)의 상보성 결정 영역이 있는 인간 프레임워크 영역을 함유한다. 인간화 항체 huMAb4D5-8은 상표명 HERCEPTINTM (Genentech, Inc.)으로 상업적으로 입수가능한 트라스투주맙이라고도 지칭된다.
트라스투주맙 (CAS 180288-69-1, HERCEPTIN®, huMAb4D5-8, rhuMAb HER2, Genentech)은 HER2의 세포외 도메인에 대한 세포 기반 검정 (Kd = 5 nM)에서 높은 친화도를 갖고 선택적으로 결합하는 뮤린 항-HER2 항체 (4D5)의 인간화 버전인 재조합 DNA 유래, IgG1 카파, 단일클론 항체이다 (US 5677171; US 5821337; US 6054297; US 6165464; US 6339142; US 6407213; US 6639055; US 6719971; US 6800738; US 7074404; Coussens 등 (1985) Science 230:1132-9; Slamon 등 (1989) Science 244:707-12; Slamon 등 (2001) New Engl. J. Med. 344:783-792).
본 발명의 한 구현예에서, 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 트라스투주맙의 CDR 영역을 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 항-HER2 항체는 트라스투주맙의 프레임워크 영역을 추가로 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 항-HER2 항체는 트라스투주맙의 가변 영역 중 하나 또는 둘 모두를 추가로 포함한다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 발명의 면역접합체의 항-HER2 항체는 US 7862817에 기재된 바와 같은 인간화 항-HER2 항체, 예를 들어, 인간화 2C4를 포함한다. 예시적인 인간화 2C4 항체는 퍼투주맙 (CAS 등록 번호 380610-27-5), PERJETATM (Genentech, Inc.)이다. 퍼투주맙은 HER 이량체화 억제제 (HDI)이며 다른 HER 수용체 (예컨대, EGFR/HER1, HER2, HER3 및 HER4)와 활성 이종이량체 또는 동종이량체를 형성하는 HER2의 능력을 억제하는 기능을 한다. 예를 들어, Harari and Yarden, Oncogene 19:6102-14 (2000); Yarden and Sliwkowski. Nat Rev Mol Cell Biol 2:127-37 (2001); Sliwkowski Nat Struct Biol 10:158-9 (2003); Cho 등 Nature 421:756-60 (2003); 및 Malik 등 Pro Am Soc Cancer Res 44:176-7 (2003) 참조. PERJETATM는 유방암 치료제로 승인되었다.
본 발명의 한 구현예에서, 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 퍼투주맙의 CDR 영역을 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 항-HER2 항체는 퍼투주맙의 프레임워크 영역을 추가로 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 항-HER2 항체는 퍼투주맙의 가변 영역 중 하나 또는 둘 모두를 추가로 포함한다.
예시적인 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 CEA를 특이적으로 인식하고 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다. CD66e (분화 클러스터 66e)라고도 알려진 암종배아 항원 관련 세포 부착 분자 5(CEACAM5)는 암종배아 항원(CEA) 유전자 패밀리의 구성원이다.
예시적인 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 카프린-1을 특이적으로 인식하고 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다 (Ellis JA , Luzio JP (1995) J Biol Chem. 270(35):20717-23; Wang B, 등 (2005) J Immunol. 175 (7):4274-82; Solomon S, 등 (2007) Mol Cell Biol. 27(6):2324-42). 카프린-1은 GPIAP1, GPIP137, GRIP137, M11S1, RNG105, p137GPI 및 세포 주기 관련 단백질 1로도 알려져 있다.
세포질 활성화/증식 관련 단백질-1 (카프린-1)은 세포 주기 조절 관련 유전자의 조절에 참여하는 RNA 결합 단백질이다. 카프린-1은 c-Myc 및 cyclin D2 mRNA에 선택적으로 결합하여 G1 단계를 통해 S 단계로의 세포 진행을 가속화하고 세포 생존력을 향상시키며 세포 성장을 촉진하여, 종양 형성에 중요한 역할을 할 수 있음을 나타낸다 (Wang B, 등 (2005) J Immunol. 175:4274-4282). 카프린-1은 단독으로 또는 RasGAP SH3 도메인 결합 단백질 1 및 취약 X 정신 지체 단백질과 같은 다른 RNA 결합 단백질과 함께 작용한다. 종양 형성 과정에서 카프린-1은 주로 세포 증식을 활성화하고 면역 관문 단백질의 발현을 상향 조절함으로써 기능한다. 스트레스 과립의 형성을 통해 카프린-1은 종양 세포가 불리한 조건에 적응하는 과정에도 관여하여 방사선 및 화학 요법 내성에 기여한다. 다양한 임상 악성 종양에서의 역할을 감안할 때, 카프린-1은 바이오마커로서, 및 신규 치료제 개발의 표적으로서 사용될 가능성이 있다 (Yang, Z-S, 등 (2019) Oncology Letters 18:15-21).
치료 및 검출을 위해 카프린-1을 표적으로 하는 항체가 기술되어 있다 (WO 2011/096519; WO 2013/125654; WO 2013/125636; WO 2013/125640; WO 2013/125630; WO 2013/918889; WO 2013/018891); 2013/018883, WO 2013/018892, WO 2014/014082, WO 2014/014086, WO 2015/020212, WO 2018/079740).
예시적인 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 CEA를 특이적으로 인식하고 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다.
암 배아 항원 (CEA, CD66e, CEACAM5)의 증가된 발현은 종양의 다양한 생물학적 측면, 특히 종양 세포 부착, 전이, 세포 면역 메커니즘 차단 및 항아폽토시스 기능을 갖는 것과 관련이 있다. CEA는 또한 많은 암종에 대한 혈액 표지자로 사용된다. MN-14 및 hMN14로도 알려진 라베투주맙 (CEA-CIDETM, Immunomedics, CAS 등록 번호 219649-07-7)은 인간화 IgG1 단일클론 항체이며 결장직장암 치료를 위해 연구되었다 (Blumenthal, R. 등 (2005) Cancer Immunology Immunotherapy 54(4):315-327). 캄프토테신 유사체에 접합된 라베투주맙 (labetuzumab govitecan, IMMU-130)은 암 배아 항원 관련 세포 부착 분자 5 (CEACAM5)을 표적으로 하고 재발성 또는 불응성 전이성 결장직장암 환자에서 연구 중이다 (Sharkey, R. 등, (2018), Molecular Cancer Therapeutics 17(1):196-203; Cardillo, T. 등 (2018) Molecular Cancer Therapeutics 17(1):150-160).
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hMN-14/라베투주맙 서열 번호 472 (US 6676924)의 가변 경쇄 (VL 카파)를 포함한다.
Figure pct00006
본 발명의 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hMN-14/라베투주맙 서열 번호 473 내지 479 (미국 6676924)의 경쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크 (LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00007
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hMN-14/라베투주맙 서열 번호 480 (미국 6676924)의 가변 중쇄 (VH)를 포함한다.
Figure pct00008
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hMN-14/라베투주맙 서열 번호 481 내지 487 (US 6676924)의 중쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크 (HFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00009
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hPR1A3 서열 번호 488 (US 8642742)의 가변 경쇄 (VL 카파)를 포함한다.
Figure pct00010
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hPR1A3 서열 번호 489 내지 495 (US 8642742)의 경쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크 (LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00011
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hPR1A3 서열 번호 496 내지 502 (US 8642742)의 중쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크 (HFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00012
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hMFE-23 서열 번호 503 (US 723288)의 가변 경쇄 (VL 카파)를 포함한다.
Figure pct00013
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hMFE-23 서열 번호 504 내지 510 (US 723288)의 경쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크 (LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00014
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hMFE-23 서열 번호 511 (US 723288)의 가변 중쇄 (VH)를 포함한다.
Figure pct00015
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hMFE-23 서열 번호 512 내지 518 (US 723288)의 중쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크 (HFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00016
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 SM3E 서열 번호 519 (US 723288)의 가변 경쇄 (VL 카파)를 포함한다.
Figure pct00017
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 SM3E 서열 번호 520 내지 526 (US 723288)의 경쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크 (LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00018
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 SM3E 서열 번호 527 (US 723288)의 가변 중쇄 (VH)를 포함한다.
Figure pct00019
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 SM3E 서열 번호 528 내지 534 (US 723288)의 중쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크 (HFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00020
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 NP-4/아르시투모맙 서열 번호 535 내지 541의 경쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크 (LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00021
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 NP-4/아르시투모맙 서열 번호 542의 가변 중쇄 (VH)를 포함한다.
Figure pct00022
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 NP-4 서열 번호 543 내지 549의 중쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크 (HFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00023
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 M5A/hT84.66 서열 번호 550 (US 7776330)의 가변 경쇄 (VL 카파)를 포함한다.
Figure pct00024
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 M5A/hT84.66 서열 번호 551 내지 557 (US 7776330)의 경쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크 (LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00025
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 M5A/hT84.66 서열 번호 558 (US 7776330)의 가변 중쇄 (VH)를 포함한다.
Figure pct00026
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 M5A/hT84.66 서열 번호 559 내지 565 (US 7776330)의 중쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크 (HFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00027
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hAb2-3 서열 번호 566 (US 9617345)의 가변 경쇄 (VL 카파)를 포함한다.
Figure pct00028
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hAb2-3 서열 번호 567 내지 573 (US 9617345)의 경쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크 (LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00029
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 서열 번호 574 (US 9617345)의 가변 중쇄 (VH)를 포함한다.
Figure pct00030
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hAb2-3 서열 번호 575 내지 581의 중쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크 (HFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00031
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 A240VL-B9VH/AMG-211 서열 번호 582 (US 9982063)의 가변 경쇄 (VL 카파)를 포함한다.
Figure pct00032
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 A240VL-B9VH/AMG-211 서열 번호 583 내지 589 (US 9982063)의 경쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크 (LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00033
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 B9VH 서열 번호 590 (US 9982063)의 가변 중쇄 (VH)를 포함한다.
Figure pct00034
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 서열 번호 591 내지 598 (US 9982063)의 중쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크 (HFR) 서열을 포함한다. 구현예는 CDR-H2의 2개의 변이체, 서열 번호 594 및 서열 번호 595를 포함한다.
Figure pct00035
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 E12VH 서열 번호 599 (US 9982063)의 가변 중쇄 (VH)를 포함한다.
Figure pct00036
본 발명의 한 구현예에서, CEA-표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 서열 번호 600 내지 606 (US 9982063)의 중쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크 (HFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00037
일부 구현예에서, 항체 작제물은 Fc 도메인을 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 항체 작제물은 항체이다. 특정 구현예에서, 항체 작제물은 융합 단백질이다. 항원 결합 도메인은 단일쇄 가변 영역 단편 (scFv)일 수 있다. 합성 펩타이드를 통해 항체 경쇄의 V 도메인에 연결된 항체 중쇄의 가변 (V) 도메인을 포함하는 절단된 Fab 단편인 단일쇄 가변 영역 단편 (scFv)은 일상적인 재조합 DNA 기술 기법을 사용하여 생성할 수 있다. 유사하게, 이황화물-안정화된 가변 영역 단편 (dsFv)은 재조합 DNA 기술에 의해 제조될 수 있다. 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 항-PD-L1 항체, 항-HER2 항체, 또는 항-CEA 항체의 항원 결합 도메인의 하나 이상의 가변 영역 (예를 들어, 2개의 가변 영역)을 포함할 수 있으며, 각각의 가변 영역은 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 변형된 Fc 영역을 함유하고, 여기서 변형은 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 조절한다.
일부 구현예에서, Fc 영역은 TGFβ1에 결합할 수 있는 형질전환 성장 인자 베타 1 (TGFβ1) 수용체, 또는 그의 단편을 포함함으로써 변형된다. 예를 들어, 수용체는 TGFβ 수용체 II (TGFβRII)일 수 있다. 일부 구현예에서, TGFβ 수용체는 인간 TGFβ 수용체이다. 일부 구현예에서, IgG는 본원에 포함된 US 9676863에 기재된 바와 같은 TGFβRII 세포외 도메인 (ECD)에 대한 C-말단 융합을 갖는다. "Fc 링커"는 IgG를 TGFβRII 세포외 도메인에 부착하는 데 사용될 수 있다. Fc 링커는 표적에 대한 결합 특이성을 유지하면서 분자의 적절한 3차원 폴딩을 허용하는 짧고 유연한 펩타이드일 수 있다. 일부 구현예에서, TGFβ 수용체의 N-말단은 (Fc 링커가 있거나 없는) 항체 작제물의 Fc에 융합된다. 일부 구현예에서, 항체 작제물 중쇄의 C-말단은 (Fc 링커가 있거나 없는) TGFβ 수용체에 융합된다. 일부 구현예에서, 항체 작제물 중쇄의 C-말단 라이신 잔기는 알라닌으로 돌연변이된다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 글리코실화된다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 조작된 시스테인이 접합에 이용가능하지만, 면역글로불린 접힘 및 조립을 교란시키거나 항원 결합 및 효과기 기능을 변경하지 않는 부위에서 시스테인 치환을 통해 항체에 대한 애주번트, 표지 또는 약물 모이어티의 부위-특이적 접합을 제공하는 시스테인-조작된 항체이다 (Junutula, 등, 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan 등 (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; US 2012/0121615; WO 2009/052249). "시스테인 조작된 항체" 또는 "시스테인 조작된 항체 변이체"는 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 항체이다. 시스테인-조작된 항체는 균일한 화학량론 (예를 들어, 단일 조작된 시스테인 부위를 갖는 항체에서 항체당 최대 2개의 티에노아제핀 모이어티)을 갖는 티에노아제핀-링커 화합물로서 티에노아제핀 애주번트 모이어티에 접합될 수 있다.
일부 구현예에서, 표 3의 면역접합체를 제조하기 위해 사용된 시스테인-조작된 항체는 경쇄의 149-라이신 부위 (LC K149C)에 도입된 시스테인 잔기를 갖는다. 다른 구현예에서, 시스테인-조작된 항체는 중쇄의 118-알라닌 부위 (EU 넘버링) (HC A118C)에 도입된 시스테인 잔기를 갖는다. 이 부위는 대안적으로 순차적 넘버링으로는 121 또는 Kabat 넘버링으로는 114로 번호가 매겨진다. 다른 구현예에서, 시스테인-조작된 항체는 Kabat 넘버링에 따라 G64C 또는 R142C에서 경쇄에, 또는 Kabat 넘버링에 따라 D101C, V184C 또는 T205C에서 중쇄에 도입된 시스테인 잔기를 갖는다.
티에노아제핀 애주번트 화합물
본 발명의 면역접합체는 티에노아제핀 애주번트 모이어티를 포함한다. 본원에 기재된 애주번트 모이어티는 면역 반응을 유발하는 화합물 (즉, 면역자극제)이다. 일반적으로, 본원에 기재된 애주번트 모이어티는 TLR 작용제이다. TLR은 척추동물에서 선천적 면역 반응의 시작을 담당하는 I형 막횡단 단백질이다. TLR은 박테리아, 바이러스 및 곰팡이의 다양한 병원체 관련 분자 패턴을 인식하고 침입 병원체에 대한 1차 방어선 역할을 한다. TLR은 세포 발현과 이들이 시작하는 신호 전달 경로의 차이로 인해 중복되지만 뚜렷히 구별되는 생물학적 반응을 이끌어낸다. 일단 결합되면 (예를 들어, 자연 자극 또는 합성 TLR 작용제에 의해), TLR은 어댑터 단백질 골수성 분화 1차 반응 유전자 88 (MyD88) 및 IL-1 수용체 관련 키나제 (IRAK)의 동원을 통해 핵 인자 κB (NF-κB)의 활성화로 이어지는 신호 전달 캐스케이드를 시작한다. IRAK의 인산화는 TNF-수용체 관련 인자 6 (TRAF6)의 동원으로 이어져 NF-κB 억제제 I-κB의 인산화를 초래한다. 그 결과, NF-κB는 세포 핵으로 들어가 프로모터가 사이토카인과 같은 NF-κB 결합 부위를 포함하는 유전자의 전사를 시작한다. TLR 신호 전달에 대한 추가 조절 모드에는 TNF 수용체 관련 인자 6 (TRAF6)의 어댑터 유도 인터페론 β (TRIF) 의존성 유도를 함유하는 TIR 도메인과 TRIF 및 TRAF3를 통한 MyD88 독립 경로의 활성화가 포함되어 인터페론 반응 인자 3 (IRF3)의 인산화를 유도한다. 유사하게, MyD88 의존성 경로는 또한 IRF5 및 IRF7을 포함한 여러 IRF 계열 구성원을 활성화하는 반면 TRIF 의존성 경로는 NF-κB 경로도 활성화한다.
전형적으로, 본원에 기재된 애주번트 모이어티는 TLR7 및/또는 TLR8 작용제이다. TLR7 및 TLR8은 모두 단핵구 및 수지상 세포에서 발현된다. 인간에서 TLR7은 형질세포양 수지상 세포 (pDC) 및 B 세포에서도 발현된다. TLR8은 골수 기원의 세포, 즉 단핵구, 과립구 및 골수 수지상 세포에서 주로 발현된다. TLR7 및 TLR8은 바이러스 침입에 대응하는 수단으로서, 세포 내 "외부" 단일 가닥 RNA의 존재를 감지할 수 있다. TLR8 발현 세포를 TLR8 작용제로 처리하면 높은 수준의 IL-12, IFN-γ, IL-1, TNF-α, IL-6 및 기타 염증성 사이토카인이 생성될 수 있다. 유사하게, TLR7 작용제로 pDC와 같은 TLR7 발현 세포를 자극하면 높은 수준의 IFN-α 및 기타 염증성 사이토카인이 생성될 수 있다. TLR7/TLR8 결합 및 결과적인 사이토카인 생성은 수지상 세포 및 기타 항원 제시 세포를 활성화하여 다양한 선천성 및 후천성 면역 반응 메커니즘을 구동하여 종양 파괴를 유발할 수 있다.
본 발명의 예시적인 티에노아제핀 화합물(TAZ)은 표 1a-c에 제시되어 있다. 각 화합물은 합성, 정제 및 질량 분광분석에 의해 특성화되었으며 표시된 질량을 갖는 것으로 나타났다. 추가 실험 절차는 실시예에서 찾을 수 있다. 인간 TLR7 또는 인간 TLR8을 발현하는 HEK293 NFKB 리포터 세포에 대한 활성을 실시예 202에 따라 측정하였다. 표 1a-c의 티에노아제핀 화합물은 암 및 다른 장애를 치료하기 유용한 치료석 활성을 예측할 수 있는, TLR8 작용제 선택성의 놀랍고도 예상치 못한 특성을 입증한다.
Figure pct00038
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티에노아제핀-링커 화합물
본 발명의 면역접합체는 항체와 티에노아제핀-링커 화합물의 접합에 의해 제조된다. 티에노아제핀-링커 화합물은 링커 단위에 공유적으로 부착된 티에노아제핀(TAZ) 모이어티를 포함한다. 링커 단위는 면역접합체의 안정성, 투과성, 용해도 및 기타 약동학, 안전성 및 효능 특성에 영향을 미치는 작용기 및 하위단위를 포함한다. 링커 단위는 항체의 반응성 작용기와 반응하는, 즉 접합하는 반응성 작용기를 포함한다. 예를 들어, 항체의 라이신 측쇄 아미노와 같은 친핵성 기는 TAZ-링커 화합물의 친전자성 반응성 작용기와 반응하여 면역접합체를 형성한다. 또한, 예를 들어, 항체의 시스테인 티올은 TAZ-링커 화합물의 말레이미드 또는 브로모아세트아미드 기와 반응하여 면역접합체를 형성한다.
TAZ-링커 화합물에 적합한 친전자성 반응성 작용기는 N-하이드록시석신이미딜 (NHS) 에스테르 및 N-하이드록시설포석신이미딜 (설포-NHS) 에스테르 (아민 반응성); 카르보디이미드 (아민 및 카르복실 반응성); 하이드록시메틸 포스핀 (아민 반응성); 말레이미드 (티올 반응성); N-요오도아세트아미드와 같은 할로겐화 아세트아미드 (티올 반응성); 아릴 아지드 (1차 아민 반응성); 플루오르화 아릴 아지드 (탄소-수소 (C-H) 삽입을 통한 반응성); 펜타플루오로페닐 (PFP) 에스테르 (아민 반응성); 테트라플루오로페닐 (TFP) 에스테르 (아민 반응성); 이미도에스테르 (아민 반응성); 이소시아네이트 (하이드록실 반응성); 비닐 설폰 (티올, 아민 및 하이드록실 반응성); 피리딜 이황화물 (티올 반응성); 및 벤조페논 유도체 (C-H 결합 삽입을 통한 반응성)를 포함하나 이들로 제한되는 것은 아니다. 추가 시약은 Hermanson, Bioconjugate Techniques 2nd Edition, Academic Press, 2008에 기술된 것들을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 면역접합체의 설계, 제조 및 사용에 대한 한계 및 어려움에 대한 해결책을 제공한다. 일부 링커는 혈류에서 불안정하여 표적 세포에서 내재화되기 전에 허용할 수 없는 양의 애주번트/약물을 방출할 수 있다 (Khot, A. 등 (2015) Bioanalysis 7(13):1633-1648). 다른 링커는 혈류에서 안정성을 제공할 수 있지만 세포내 방출 효과에서는 부정적인 영향을 받을 수 있다. 원하는 세포내 방출을 제공하는 링커는 일반적으로 혈류에서 불량한 안정성을 갖는다. 달리 말하면, 혈류 안정성과 세포내 방출은 일반적으로 반비례한다. 또한, 표준 접합 과정에서 항체에 부하된 애주번트/약물 모이어티의 양, 즉 약물 부하, 접합 반응에서 형성되는 응집체의 양, 및 얻을 수 있는 최종 정제된 접합체의 수율은 상호 관련된다. 예를 들어, 응집체 형성은 일반적으로 항체에 접합된 애주번트/약물 모이어티 및 이의 유도체의 당량 수와 양의 상관관계가 있다. 높은 약물 부하 하에서, 형성된 응집체는 치료 용도를 위해 제거되어야 한다. 결과적으로, 약물 부하 매개 응집체 형성은 면역접합체 수율을 감소시키고 공정 규모 확대를 어렵게 만들 수 있다.
예시적인 구현예는 하기 화학식 II의 5-아미노티에노아제핀-링커 화합물을 포함한다:
Figure pct00100
II
R1, R2, R3, 및 R4는 중 하나는 L에 부착되고;
R1, R2, R3, 및 R4는 H, C1-C12 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C12 카르보사이클릴, C6-C20 아릴, C2-C9 헤테로사이클릴, 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 및 헤테로아릴은 독립적으로 다음으로부터 선택되는 하나 이상의 기로 선택적으로 치환되고:
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C1-C12 알킬디일)-OR5;
-(C3-C12 카보사이클릴);
-(C3-C12 카보사이클릴)-*;
-(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C3-C12 카보사이클릴)-NR5-C(=NR5)NR5-*;
-(C6-C20 아릴);
-(C6-C20 아릴)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-N(R5)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
-(C2-C20 헤테로사이클릴);
-(C2-C20 헤테로사이클릴)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-C(=NR5a)NR5-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C6-C20 아릴디일)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴);
-(C1-C20 헤테로아릴)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C1-C20 헤테로아릴)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴)-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-C(=O)-*;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-C(=O)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-C(=O)N(R5)2;
-C(=O)N(R5)-*;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)R5;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)CO2R5;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5a)N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5C(=NR5a)R5;
-C(=O)NR5-(C1-C8 알킬디일)-NR5(C2-C5 헤테로아릴);
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)-*;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-N(R5)2;
-N(R5)-*;
-N(R5)C(=O)R5;
-N(R5)C(=O)-*;
-N(R5)C(=O)N(R5)2;
-N(R5)C(=O)N(R5)-*;
-N(R5)CO2R5;
-NR5C(=NR5a)N(R5)2;
-NR5C(=NR5a)N(R5)-*;
-NR5C(=NR5a)R5;
-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-N(R5)-(C2-C5 헤테로아릴);
-N(R5)-S(=O)2-(C1-C12 알킬);
-O-(C1-C12 알킬);
-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*; 및
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-OH;
또는 R2 및 R3은 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
X1, X2, X3, 및 X4는 결합, C(=O), C(=O)N(R5), O, N(R5), S, S(O)2, 및 S(O)2N(R5)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R5는 H, C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴디일, C1-C12 알킬, 및 C1-C12 알킬디일로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 두 개의 R5기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
R5a는 C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내며, 여기서 R1, R2, R3 및 R4 중 하나가 L에 부착되고;
L은 다음으로 구성된 군에서 선택되는 링커이고:
Q-C(=O)-(PEG)-;
Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-;
Q-C(=O)-(PEG)-O-;
Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-(Mcgluc)-;
Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-(Mcgluc)-;
Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
Q-C(=O)-(PEG)-N(R5)-;
Q-C(=O)-(PEG)-N(R5)C(=O)-;
Q-C(=O)-(PEG)-N(R5)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
Q-C(=O)-(PEG)-N+(R5)2-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-N(R5)CH(AA1)C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-N(R5)CH(AA1)C(=O)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
Q-C(=O)-(PEG)-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
Q-C(=O)-(PEG)-SS-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-;
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-;
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=O);
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
Q-C(=O)-CH2CH2OCH2CH2-(C1-C20 헤테로아릴디일)-CH2O-(PEG)-C(=O)-(Mcgluc)-;
Q-C(=O)-CH2CH2OCH2CH2-(C1-C20 헤테로아릴디일)-CH2O-(PEG)-C(=O)-(Mcgluc)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-; 및
Q-(CH2)m-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
여기서 PEG는 화학식 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-를 갖고; m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고;
PEP는 다음 화학식을 갖고:
Figure pct00101
여기서 AA1 및 AA2는 아미노산 측쇄로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 AA1 또는 AA2와 인접한 질소 원자는 5원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
R6은 -CH2O-C(=O)- 및 임의로 다음으로 치환된, C6-C20 아릴디일 및 C1-C20 헤테로아릴디일로 이루어진 군으로부터 선택되고:
Figure pct00102
Mcgluc는 다음 기들로부터 선택되고:
Figure pct00103
및
Figure pct00104
여기서 q는 1 내지 8이고, AA는 아미노산 측쇄이고;
Q는 N-하이드록시석신이미딜, N-하이드록시설포석신이미딜, 말레이미드, 및 F, Cl, NO2, 및 SO3 -로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 페녹시로 이루어진 군으로부터 선택되고;
여기서 알킬, 알킬디일, 알케닐, 알케닐디일, 알키닐, 알키닐디일, 아릴, 아릴디일 카르보사이클릴, 카르보사이클릴디일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴디일, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴디일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, - NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OCH2F, -OCHF2, -OCF3, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 독립적으로 및 선택적으로 치환된다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 PEP가 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00105
여기서 AA1 및 AA2는 자연 발생 아미노산의 측쇄로부터 독립적으로 선택된다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 인접한 질소 원자를 갖는 AA1 또는 AA2가 5-원 고리를 형성하여 프롤린 아미노산을 형성하는 것을 포함한다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 PEP가 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00106
.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 Mcgluc가 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00107
.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 AA1 및 AA2가 H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2(C6H5), -CH2CH2CH2CH2NH2, -CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, -CHCH(CH3)CH3, -CH2SO3H, 및 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2로부터 독립적으로 선택되는 것을 포함한다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 AA1이 -CH(CH3)2이고, 그리고 AA2가 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2인 것을 포함한다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 AA1 및 AA2가 GlcNAc 아스파르트산, -CH2SO3H, 및 -CH2OPO3H로부터 독립적으로 선택되는 것을 포함한다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R1 또는 R3의 NR5(C2-C5 헤테로아릴)가 하기로부터 선택되는 것을 포함한다:
Figure pct00108
및
Figure pct00109
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 X1이 결합이고, R1이 H인 것을 포함한다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 X2가 결합이고, R2가 C1-C8 알킬인 것을 포함한다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 X2 및 X3이 각각 결합이고, R2 및 R3이 독립적으로 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R2 및 R3이 각각 독립적으로 -CH2CH2CH3, -OCH2CH3, -CH2CH2CF3, 및 -CH2CH2CH2OH로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R2가 C1-C8 알킬이고 R3이 -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R4인 것을 포함한다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R2가 -CH2CH2CH3이고 R3이 -CH2CH2CH2NHCO2(t-Bu)인 것을 포함한다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R2 및 R3이 각각 -CH2CH2CH3인 것을 포함한다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 X3-R3이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다:
Figure pct00110
Figure pct00111
Figure pct00112
및
Figure pct00113
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R2 및 R3 중 하나가 하기로부터 선택되는 것을 포함한다:
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=NR5)N(R5)-*;
-(C2-C6 알키닐디일)-N(R5)-*; 및
-(C2-C6 알키닐디일)-N(R5)C(=NR5)N(R5)-*;
X2 및 X3는 결합이며, 별표 *는 L의 부착 부위를 나타낸다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 L이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다:
Q-C(=O)-(PEG)-;
Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-;
Q-C(=O)-(PEG)-O-;
Q-C(=O)-(PEG)-N(R5)-; 및
Q-C(=O)-(PEG)-N(R5)C(=O)- .
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 하기 화학식 IIa-IIc로부터 선택된다:
Figure pct00114
및
Figure pct00115
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 하기 화학식 IId-IIh로부터 선택된다:
Figure pct00116
Figure pct00117
Figure pct00118
및
Figure pct00119
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적 구현예는 Q가 하기로부터 선택되는 것을 포함한다:
Figure pct00120
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 Q가 하나 이상의 F로 치환된 페녹시인 것을 포함한다.
화학식 II의 티에노아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 Q가 2,3,5,6-테트라플루오로페녹시인 것을 포함한다.
티에노아제핀-링커(TAZ-L) 화합물의 예시적인 구현예는 표 2a-c로부터 선택된다. 각 화합물은 합성, 정제 및 질량 분광분석에 의해 특성화되었으며 표시된 질량을 갖는 것으로 나타났다. 추가 실험 절차는 실시예에서 찾을 수 있다. 표 2a-c의 티에노아제핀-링커 화합물은 암 및 기타 장애를 치료하기 위한 유용한 치료 활성을 예측할 수 있는 TLR8 효능제 선택성의 놀랍고 예상치 못한 특성을 입증한다. 표 2a-c의 티에노아제핀-링커 화합물을 실시예 201의 방법에 의해 항체와의 접합에 사용하여 표 3a-c의 면역접합체를 형성한다.
Figure pct00121
Figure pct00122
Figure pct00123
Figure pct00124
Figure pct00125
Figure pct00126
Figure pct00127
Figure pct00128
Figure pct00129
Figure pct00130
Figure pct00131
Figure pct00132
Figure pct00133
Figure pct00134
Figure pct00135
Figure pct00136
Figure pct00137
Figure pct00138
Figure pct00139
Figure pct00140
Figure pct00141
Figure pct00142
Figure pct00143
Figure pct00144
Figure pct00145
Figure pct00146
Figure pct00147
Figure pct00148
Figure pct00149
Figure pct00150
Figure pct00151
Figure pct00152
Figure pct00153
Figure pct00154
Figure pct00155
Figure pct00156
Figure pct00157
Figure pct00158
Figure pct00159
Figure pct00160
Figure pct00161
Figure pct00162
Figure pct00163
Figure pct00164
Figure pct00165
Figure pct00166
Figure pct00167
Figure pct00168
Figure pct00169
Figure pct00170
Figure pct00171
Figure pct00172
Figure pct00173
Figure pct00174
면역접합체
면역접합체의 예시적인 구현예는 링커에 의해 하나 이상의 5-아미노티에노아제핀(TAZ) 모이어티에 공유적으로 부착되는 항체를 포함하고, 하기 화학식 I을 갖거나:
Figure pct00175
또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하고,
여기서:
Ab는 항체이고;
p는 1 내지 8의 정수이고;
TAZ는 다음 식을 갖는 5-아미노티에노아제핀 모이어티이고:
Figure pct00176
R1, R2, R3, 및 R4는 H, C1-C12 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C12 카르보사이클릴, C6-C20 아릴, C2-C9 헤테로사이클릴, 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 및 헤테로아릴은 독립적으로 다음으로부터 선택되는 하나 이상의 기로 선택적으로 치환되고:
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C1-C12 알킬디일)-OR5;
-(C3-C12 카보사이클릴);
-(C3-C12 카보사이클릴)-*;
-(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C3-C12 카보사이클릴)-NR5-C(=NR5)NR5-*;
-(C6-C20 아릴);
-(C6-C20 아릴)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-N(R5)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
-(C2-C20 헤테로사이클릴);
-(C2-C20 헤테로사이클릴)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-C(=NR5a)NR5-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C6-C20 아릴디일)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴);
-(C1-C20 헤테로아릴)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C1-C20 헤테로아릴)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴)-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-C(=O)-*;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-C(=O)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-C(=O)N(R5)2;
-C(=O)N(R5)-*;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)R5;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)CO2R5;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5a)N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5C(=NR5a)R5;
-C(=O)NR5-(C1-C8 알킬디일)-NR5(C2-C5 헤테로아릴);
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)-*;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-N(R5)2;
-N(R5)-*;
-N(R5)C(=O)R5;
-N(R5)C(=O)-*;
-N(R5)C(=O)N(R5)2;
-N(R5)C(=O)N(R5)-*;
-N(R5)CO2R5;
-NR5C(=NR5a)N(R5)2;
-NR5C(=NR5a)N(R5)-*;
-NR5C(=NR5a)R5;
-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-N(R5)-(C2-C5 헤테로아릴);
-N(R5)-S(=O)2-(C1-C12 알킬);
-O-(C1-C12 알킬);
-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*; 및
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-OH;
또는 R2 및 R3은 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
X1, X2, X3, 및 X4는 결합, C(=O), C(=O)N(R5), O, N(R5), S, S(O)2, 및 S(O)2N(R5)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R5는 H, C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴디일, C1-C12 알킬, 및 C1-C12 알킬디일로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 두 개의 R5 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
R5a는 C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내며, 여기서 R1, R2, R3 및 R4 중 하나가 L에 부착되고;
L은 다음으로 구성된 군에서 선택되는 링커이고:
-C(=O)-(PEG)-;
-C(=O)-(PEG)-C(=O)-;
-C(=O)-(PEG)-O-;
-C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
-C(=O)-(PEG)-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
-C(=O)-(PEG)-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
-C(=O)-(PEG)-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-(Mcgluc)-;
-C(=O)-(PEG)-C(=O)-(Mcgluc)-;
-C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
-C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
-C(=O)-(PEG)-N(R5)-;
-C(=O)-(PEG)-N(R5)C(=O)-;
-C(=O)-(PEG)-N(R5)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
-C(=O)-(PEG)-N+(R5)2-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
-C(=O)-(PEG)-C(=O)-N(R5)CH(AA1)C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
-C(=O)-(PEG)-C(=O)-N(R5)CH(AA1)C(=O)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
-C(=O)-(PEG)-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
-C(=O)-(PEG)-SS-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=O);
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
-C(=O)-CH2CH2OCH2CH2-(C1-C20 헤테로아릴디일)-CH2O-(PEG)-C(=O)-(Mcgluc)-;
-C(=O)-CH2CH2OCH2CH2-(C1-C20 헤테로아릴디일)-CH2O-(PEG)-C(=O)-(Mcgluc)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-; 및
-(석신이미딜)-(CH2)m-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
PEG는 화학식 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-를 갖고; m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고;
PEP는 다음 화학식을 갖고:
Figure pct00177
여기서 AA1 및 AA2는 아미노산 측쇄로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 AA1 또는 AA2와 인접한 질소 원자는 5원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
R6은 -CH2O-C(=O)- 및 임의로 다음으로 치환된 C6-C20 아릴디일 및 C1-C20 헤테로아릴디일로 이루어진 군으로부터 선택되고:
Figure pct00178
Mcgluc는 다음 기들로부터 선택되고:
Figure pct00179
및
Figure pct00180
여기서 q는 1 내지 8이고, AA는 아미노산 측쇄이고;
알킬, 알킬디일, 알케닐, 알케닐디일, 알키닐, 알키닐디일, 아릴, 아릴디일, 카르보사이클릴, 카르보사이클릴디일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴디일, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴디일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, - NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OCH2F, -OCHF2, -OCF3, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 독립적으로 선택적으로 치환된다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체가 PD-L1에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인 것을 포함한다
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체가 아테졸리주맙, 더발루맙 및 아벨루맙, 또는 그의 바이오시밀러 또는 바이오베터로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체가 HER2에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체가 트라스투주맙 및 퍼투주맙, 또는 그의 바이오시밀러 또는 바이오베터로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체가 CEA에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체가 라베투주맙, 또는 그의 바이오시밀러 또는 바이오베터인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체가 카프린-1(Caprin-1)에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 PEP가 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00181
여기서 AA1 및 AA2는 자연 발생 아미노산의 측쇄로부터 독립적으로 선택된다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 인접한 질소 원자를 갖는 AA1 또는 AA2가 5원 고리 프롤린 아미노산을 형성하는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 PEP가 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00182
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 MCgluc가 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00183
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 AA1 및 AA2가 H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2(C6H5), -CH2CH2CH2CH2NH2, -CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, -CHCH(CH3)CH3, -CH2SO3H, 및 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2로부터 독립적으로 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 AA1이 -CH(CH3)2이고, 그리고 AA2가 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 AA1 및 AA2가 GlcNAc 아스파르트산, -CH2SO3H, 및 -CH2OPO3H로부터 독립적으로 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R1 및 R4 중 하나가 하기 화학식으로부터 선택되는 것을 포함한다:
Figure pct00184
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R1 및 R4 중 하나가 -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5-L인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 C1-C20 헤테로아릴디일이 피리딘디일이고 C2-C20 헤테로사이클릴디일이 피페리디일인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R1, R2, R3, 및 R4 중 하나가 -(C1-C8 알킬디일)-NR5(C2-C5 헤테로아릴)인 것을 포함하고;
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R1, R2, R3, 및 R4의 NR5(C2-C5 헤테로아릴)가 하기로부터 선택되는 것을 포함한다:
Figure pct00185
및
Figure pct00186
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X1이 결합이고, R1이 H인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X2가 결합이고, R2가 C1-C8 알킬인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X2 및 X3이 각각 결합이고, R2 및 R3이 독립적으로 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2 및 R3이 각각 독립적으로 -CH2CH2CH3, -OCH2CH3, -CH2CH2CF3, 및 -CH2CH2CH2OH로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2가 C1-C8 알킬이고 R3이 -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R4인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2가 -CH2CH2CH3이고 R3이 -CH2CH2CH2NHCO2(t-Bu)인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2 및 R3이 각각 -CH2CH2CH3인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X3-R3이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다:
Figure pct00187
Figure pct00188
및
Figure pct00189
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2 및 R3 중 하나가 하기 화학식으로부터 선택되는 것을 포함한다:
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=NR5)N(R5)-*;
-(C2-C6 알키닐디일)-N(R5)-*; 및
-(C2-C6 알키닐디일)-N(R5)C(=NR5)N(R5)-*;
X2 및 X3는 결합이며, 별표 *는 L의 부착 부위를 나타낸다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다:
-C(=O)-(PEG)-;
-C(=O)-(PEG)-C(=O)-;
-C(=O)-(PEG)-O-;
-C(=O)-(PEG)-N(R5)-; 및
-C(=O)-(PEG)-N(R5)C(=O)- .
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 화학식 Ia-Ic로부터 선택된다:
Figure pct00190
및
Figure pct00191
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 화학식 Id-Ih로부터 선택된다:
Figure pct00192
Figure pct00193
Figure pct00194
및
Figure pct00195
본 발명은 화학식 I 실시 양태의 모든 합리적인 조합 및 특징의 순열을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 발명의 면역접합체 화합물은 면역자극 활성을 갖는 것들을 포함한다. 본 발명의 항체-약물 접합체는 종양 조직에 티에노아제핀 약물의 유효 용량을 선택적으로 전달함으로써, 비접합 티에노아제핀에 비해 치료 지수 ("치료 창(therapeutic window)")를 증가시키면서 더 큰 선택성 (즉, 더 낮은 유효 용량)을 달성할 수 있다.
약물 부하는 화학식 I의 면역접합체에서 항체당 TAZ 모이어티의 수인 p로 표시된다. 약물 (TAZ) 부하는 항체당 1 내지 약 8개의 약물 모이어티 (D) 범위일 수 있다. 화학식 I의 면역접합체는 1 내지 약 8의 범위의 약물 모이어티와 접합된 항체의 혼합물 또는 집합을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체에 접합될 수 있는 약물 모이어티의 수는 라이신 및 시스테인과 같이 반응성 또는 이용 가능한 아미노산 측쇄 잔기의 수로 제한된다. 일부 구현예에서, 유리 시스테인 잔기가 본원에 기재된 방법에 의해 항체 아미노산 서열 내로 도입된다. 그러한 측면에서, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8일 수 있고, 이들의 범위, 예컨대 1 내지 8 또는 2 내지 5일 수 있다. 임의의 이러한 측면에서, p 및 n은 동일하다 (즉, p = n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8, 또는 그 사이의 일부 범위). 화학식 I의 예시적인 면역접합체는 1, 2, 3, 또는 4개의 조작된 시스테인 아미노산을 갖는 항체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다 (Lyon, R. 등 (2012) Methods in Enzym. 502:123-138). 일부 구현예에서, 하나 이상의 유리 시스테인 잔기가 항체에 이미 존재하여 조작을 사용하지 않고 사슬내 이황화 결합을 형성하고, 이 경우 기존의 유리 시스테인 잔기를 사용하여 항체를 약물에 접합시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 하나 이상의 유리 시스테인 잔기를 생성하기 위해 항체의 접합 전에 환원 조건에 노출된다.
일부 면역접합체의 경우, p는 항체의 부착 부위 수에 의해 제한될 수 있다. 예를 들어, 부착이 시스테인 티올인 경우, 본원에 기재된 특정 예시적인 구현예에서, 항체는 약물이 부착될 수 있는, 단 하나 또는 제한된 수의 시스테인 티올 기를 가질 수 있거나, 단 하나 또는 제한된 수의 충분히 반응성인 티올기를 가질 수 있다. 다른 구현예에서, 항체에서 하나 이상의 라이신 아미노기가 이용가능하고 화학식 II의 TAZ-링커 화합물과의 접합에 반응성일 수 있다. 특정 구현예에서, 더 높은 약물 부하, 예를 들어, p > 5는 특정 항체-약물 접합체의 응집, 불용성, 독성 또는 세포 투과성의 손실을 유발할 수 있다. 특정 구현예에서, 면역접합체에 대한 평균 약물 부하 범위는 1 내지 약 8; 약 2 내지 약 6; 또는 약 3 내지 약 5이다. 특정 구현예에서, 항체는 라이신 또는 시스테인과 같은 반응성 친핵성 기를 나타내기 위해 변성 조건에 적용된다.
면역접합체의 부하 (약물/항체 비율)은 예를 들어, (i) 항체에 대한 TAZ-링커 중간체 화합물의 몰 과량을 제한하고, (ii) 접합 반응 시간 또는 온도를 제한하고, (iii) 최적화된 항체 반응성을 위한 환원성 변성 조건을 부분적으로 또는 제한함으로써 다양한 방식으로 제어될 수 있다.
항체의 하나 이상의 친핵성 기가 약물과 반응하는 경우, 생성된 생성물은 항체에 부착된 하나 이상의 약물 모이어티의 분포를 갖는 면역접합체 화합물의 혼합물임을 이해해야 한다. 항체당 약물의 평균 수는 항체에 특이적이고 약물에 대해 특이적인 이중 ELISA 항체 검정에 의해 혼합물로부터 계산될 수 있다. 개별 면역접합체 분자는 혼합물에서 질량 분광법으로 확인하고 HPLC, 예를 들어, 소수성 상호작용 크로마토그래피로 분리할 수 있다 (예를 들어, McDonagh 등 (2006) Prot. Engr. Design & Selection 19(7):299-307; Hamblett 등 (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Hamblett, K.J., 등 "Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate," Abstract No. 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Alley, S.C., 등 "Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates," Abstract No. 627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004 참조). 특정 구현예에서, 단일 부하 값을 갖는 균질한 면역접합체는 전기영동 또는 크로마토그래피에 의해 접합 혼합물로부터 단리될 수 있다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 표 3a-c 면역접합체로부터 선택된다. 시험관내 면역접합체 활성의 평가는 실시예 203의 방법에 따라 수행되었다.
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면역접합체의 조성물
본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 복수의 면역접합체 및 임의로 그를 위한 담체, 예를 들어, 제약상 또는 약리학상 허용되는 담체를 포함하는 조성물, 예를 들어, 제약상 또는 약리학상 허용되는 조성물 또는 제제를 제공한다. 면역접합체는 조성물에서 동일하거나 상이할 수 있다. 즉, 조성물은 항체 작제물의 동일한 위치에 연결된 동일한 수의 TAZ 애주번트를 갖는 면역접합체 및/또는 항체 작제물의 상이한 위치에 연결된 동일한 수의 애주번트를 가지거나, 항체 작제물 상의 동일한 위치에 연결된 상이한 수의 애주번트를 가지거나, 항체 작제물의 상이한 위치에 연결된 상이한 수의 애주번트를 갖는 면역접합체를 포함할 수 있다.
예시적인 구현예에서, 면역접합 화합물을 포함하는 조성물은 면역접합 화합물의 혼합물을 포함하고, 여기서 면역접합 화합물의 혼합물에서 항체당 평균 약물 (TAZ) 부하는 약 2 내지 약 5이다.
본 발명의 면역접합체의 조성물은 항체 작제물에 대한 평균 애주번트의 비(DAR)가 약 0.4 내지 약 10일 수 있다. 당업자는 항체 작제물에 접합된 티에노아제핀 애주번트의 수가 본 발명의 여러 면역접합체를 포함하는 조성물에서 면역접합체마다 다를 수 있으며, 따라서 항체 작제물 (예를 들어, 항체)에 대한 애주번트 비는 평균으로서 측정될 수 있고, 이는 항체에 대한 약물 비 (DAR)로 지칭될 수 있다. 항체 작제물 (예를 들어, 항체)에 대한 애주번트 비는 임의의 적합한 수단에 의해 평가될 수 있으며, 이들 중 다수는 당업계에 공지되어 있다.
접합 반응으로부터 면역접합체의 제조에서 항체당 애주번트 모이어티의 평균 수 (DAR)는 질량 분석, ELISA 검정, 및 HPLC와 같은 통상적인 수단에 의해 특성화될 수 있다. p와 관련하여 조성물에서 면역접합체의 정량적 분포 또한 결정될 수 있다. 일부 경우에, p가 다른 약물 부하를 갖는 면역접합체로부터 특정 값인 균질 면역접합체의 분리, 정제 및 특성화는 역상 HPLC 또는 전기영동과 같은 수단에 의해 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 약제학상 또는 약리학상 허용되는 부형제를 추가로 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 면역접합체는 IV 투여 또는 장기의 체강 또는 내강으로의 투여와 같은 비경구 투여용으로 제형화될 수 있다. 대안적으로, 면역접합체는 종양내 주사될 수 있다. 주사용 조성물은 일반적으로 약제학상 허용되는 담체에 용해된 면역접합체의 용액을 포함할 것이다. 사용할 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물 및 염화나트륨과 같은 하나 이상의 염의 등장성 용액, 예를 들어, 링거 용액이 있다. 또한, 멸균 고정 오일은 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로서 사용될 수 있다. 이러한 목적으로 합성 모노글리세라이드 또는 디글리세라이드를 비롯한 임의의 부드러운 고정 오일을 사용할 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산도 마찬가지로 주사제의 제조에 사용될 수 있다. 이들 조성물은 바람직하게는 멸균되고 일반적으로 바람직하지 않은 물질이 없다. 이들 조성물은 통상적이고 잘 알려진 멸균 기술에 의해 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조절제 및 완충제, 독성 조절제, 예를 들어, 아세트산나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 젖산나트륨 등과 같은 생리학적 조건을 근사화하는 데 필요한 약제학상 허용되는 보조 물질을 함유할 수 있다
조성물은 임의의 적합한 농도의 면역접합체를 함유할 수 있다. 조성물 중 면역접합체의 농도는 광범위하게 변할 수 있고, 선택된 특정 투여 방식 및 환자의 필요에 따라 주로 유체 부피, 점도, 체중 등에 기초하여 선택될 것이다. 특정 구현예에서, 주사용 용액 제제 중 면역접합체의 농도는 약 0.1% (w/w) 내지 약 10% (w/w) 범위일 것이다.
면역접합체를 이용한 암 치료 방법
본 발명은 암을 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 치료 유효량의 본원에 기재된 면역접합체 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 조성물로서)를 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 앓고 있고 암에 대한 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 표 3a 및 3b로부터 선택된 면역접합체 (IC)의 치료 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 면역접합체는 예를 들어, 종양 항원의 과발현을 특징으로 하는 다양한 과증식성 질환 또는 장애를 치료하는데 사용될 수 있는 것으로 고려된다. 예시적인 과증식성 장애는 양성 또는 악성 고형 종양 및 백혈병 및 림프성 악성종양과 같은 혈액학적 장애를 포함한다.
또 다른 측면에서, 약제로서 사용하기 위한 면역접합체가 제공된다. 특정 구현예에서, 본 발명은 개체에게 유효량의 면역접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 개체를 치료하는 방법에 사용하기 위한 면역접합체를 제공한다. 하나의 이러한 구현예에서, 방법은 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 유효량의 적어도 하나의 추가 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
추가 측면에서, 본 발명은 의약의 제조(manufacture) 또는 제조(preparation)에서의 면역접합체의 용도를 제공한다. 한 구현예에서, 의약은 암 치료를 위한 것이며, 이 방법은 암에 걸린 개체에게 유효량의 의약을 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 이러한 구현예에서, 방법은 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 유효량의 적어도 하나의 추가 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
암종은 상피 조직에서 발생하는 악성 종양이다. 상피 세포는 신체의 외부 표면을 덮고 내부 공동을 감싸며 선 조직의 라이닝을 형성한다. 암종의 예에는 선암 (유방, 췌장, 폐, 전립선, 위, 위식도 접합부, 및 결장의 암과 같은 선 (분비) 세포에서 시작하는 암) 부신피질 암종; 간세포 암; 신세포 암종; 난소 암종; 제자리(in situ) 암종; 도관 암종; 유방 암종; 기저 세포 암종; 편평 세포 암종; 이행 세포 암종; 결장 암종; 비인두 암종; 다안 낭포성 신세포 암종; 귀리 세포 암종; 대세포 폐 암종; 소세포 폐 암종; 비-소세포 폐 암종 등을 포함하나 이들로 제한되는 것은 아니다. 암종은 전립선, 췌장, 결장, 뇌 (보통 이차 전이로), 폐, 유방, 및 피부에서 발견될 수 있다. 일부 구현예에서, 비-소세포 폐 암종을 치료하는 방법은 PD-L1에 결합할 수 있는 항체 작제물 (예를 들어, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 그의 바이오시밀러, 또는 그의 바이오베터)을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 유방암을 치료하는 방법은 PD-L1에 결합할 수 있는 항체 작제물 (예를 들어, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 그의 바이오시밀러, 또는 그의 바이오베터)을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 삼중-음성 유방암을 치료하는 방법은 PD-L1에 결합할 수 있는 항체 작제물 (예를 들어, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 그의 바이오시밀러, 또는 그의 바이오베터)을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다.
연조직 종양은 결합 조직에서 유래하는 매우 다양한 희귀 종양군이다. 연조직 종양의 예에는 폐포 연부 육종; 혈관종 섬유성 조직구종; 연골근산화 섬유종; 골격 연골육종; 골격외 점액성 연골육종; 투명 세포 육종; 이형성 작은 원형 세포 종양; 피부섬유육종 돌기; 자궁내막 기질 종양; 유윙 육종; 섬유종증 (데스모이드(Desmoid)); 섬유육종, 유아; 위장관 기질 종양; 뼈 거대 세포 종양; 건활막 거대 세포 종양; 염증성 근섬유모세포 종양; 자궁 평활근종; 평활근육종; 지방모세포종; 전형적인 지방종; 방추 세포 또는 다형성 지방종; 비정형 지방종; 연골 지방종; 잘 분화된 지방육종; 점액질/원형 세포 지방육종; 다형성 지방육종; 점액질 악성 섬유성 조직구종; 고급 악성 섬유성 조직구종; 점액섬유육종; 악성 말초 신경초 종양; 중피종; 신경 모세포종; 골연골종; 골육종; 원시 신경외배엽 종양; 폐포 횡문근육종; 배아 횡문근육종; 양성 또는 악성 신경초종; 활액 육종; 에반의 종양(Evan's tumor); 결절성 근막염; 데스모이드형 섬유종증; 고립성 섬유성 종양; 피부섬유육종 원충 (DFSP); 혈관육종; 상피성 혈관내피종; 건활막 거대 세포 종양 (TGCT); 색소성 융모 결절성 활막염 (PVNS); 섬유성 이형성증; 점액섬유육종; 섬유육종; 활액 육종; 악성 말초 신경초 종양; 신경섬유종; 연조직의 다형성 선종; 및 섬유아세포, 근섬유아세포, 조직구, 혈관 세포/내피 세포, 및 신경초 세포로부터 유래된 신생물을 포함하나 이들로 제한되지 않는다.
육종은 뼈에서, 또는 연골, 지방, 근육, 혈관, 섬유 조직 또는 기타 결합 또는 지지 조직을 포함한 신체의 연조직과 같은 중간엽 기원의 세포에서 발생하는 드문 유형의 암이다. 다양한 유형의 육종은 암이 형성되는 위치에 따라 다르다. 예를 들어, 골육종은 뼈에, 지방육종은 지방에, 횡문근육종은 근육에 발생한다. 육종의 예에는 피부 종양; 육종 보트리오이데스; 연골육종; 유윙 육종; 악성 혈관내피종; 악성 신경초종; 골육종; 및 연조직 육종 (예: 폐포 연부 육종; 혈관육종; 낭포 육종 엽상체 피부섬유육종 원충 (DFSP); 데스모이드 종양; 결합조직형성 소원형세포종양; 상피 세포 육종; 골격외 연골육종; 골격외 골육종; 섬유육종; 위장관 기질 종양 (GIST); 혈관주위세포종; 혈관육종(hemangiosarcoma) (더 일반적으로 "혈관육종(angiosarcoma)"이라고 함), 카포시 육종, 평활근육종, 지방육종, 림프관육종, 악성 말초신경초종양 (MPNST), 신경섬유육종, 활액육종, 및 미분화 다형성 육종)을 포함하나 이들로 제한되지 않는다.
기형종은 예를 들어, 모발, 근육 및 뼈를 포함한 여러 다른 유형의 조직을 포함할 수 있는 생식 세포 종양의 한 유형이다 (예를 들어, 내배엽, 중배엽 및 외배엽의 세 가지 생식층의 일부 및/또는 모두에서 유래된 조직을 포함할 수 있음). 기형종은 여성의 난소, 남성의 고환, 어린이의 꼬리뼈에서 가장 흔하게 발생한다.
흑색종은 멜라닌 세포 (멜라닌 색소를 만드는 세포)에서 시작되는 암의 한 형태이다. 흑색종은 점 (피부 흑색종)에서 시작될 수 있지만 눈이나 장과 같은 다른 색소 조직에서도 시작할 수 있다.
메르켈 세포 암종은 일반적으로 얼굴, 머리 또는 목에 살색 또는 청적색 결절로 나타나는 드문 유형의 피부암이다. 메르켈 세포 암종은 피부의 신경 내분비 암종이라고도 한다. 일부 구현예에서, 메르켈 세포 암종을 치료하는 방법은 PD-L1에 결합할 수 있는 항체 작제물 (예를 들어, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 그의 바이오시밀러, 또는 그의 바이오베터)을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 메르켈 세포 암종은 투여가 일어날 때 전이되었다.
백혈병은 골수와 같은 혈액 형성 조직에서 시작하여 많은 수의 비정상 혈액 세포가 생성되어 혈류로 들어가는 암이다. 예를 들어, 백혈병은 정상적으로 혈류에서 성숙하는 골수 유래 세포에서 발생할 수 있다. 백혈병은 질환이 얼마나 빨리 발병하고 진행되는지 (예를 들어, 급성 대 만성) 및 영향을 받는 백혈구 유형 (예를 들어, 골수성 대 림프성)에 따라 명명된다. 골수성 백혈병은 골수성(myelogenous) 또는 골수모세포성(myeloblastic) 백혈병이라고도 한다. 림프성 백혈병은 림프모구성 또는 림프구성 백혈병이라고도 한다. 림프절 백혈병 세포가 림프절에 모여서 부어오를 수 있다. 백혈병의 예에는 급성 골수성 백혈병 (AML), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 만성 골수성 백혈병 (CML) 및 만성 림프구성 백혈병 (CLL)이 포함되지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
림프종은 면역 체계의 세포에서 시작되는 암이다. 예를 들어, 림프종은 림프계에서 정상적으로 성숙하는 골수 유래 세포에서 발생할 수 있다. 림프종에는 두 가지 기본 범주가 있다. 림프종의 한 범주는 리드-스턴버그(Reed-Sternberg) 세포라고 하는 세포 유형의 존재로 표시되는 호지킨 림프종 (HL)이다. 현재 6개의 인정된 HL 유형이 있다. 호지킨 림프종의 예로는 결절성 경화증 고전적 호지킨 림프종 (CHL), 혼합 세포성 CHL, 림프구 고갈 CHL, 림프구 풍부 CHL, 및 결절성 림프구 우세 HL이 있다.
림프종의 다른 범주는 비호지킨 림프종 (NHL)으로, 면역계 세포의 크고 다양한 암 군을 포함한다. 비호지킨 림프종은 추가로 무통성 (느린 성장) 과정이 있는 암과 공격적 (빠르게 성장하는) 과정이 있는 암으로 나눌 수 있다. 현재 61개의 인정된 NHL 유형이 있다. 비호지킨 림프종의 예에는 AIDS 관련 림프종, 역형성 대세포 림프종, 혈관면역모세포 림프종, 아세포 NK 세포 림프종, 버킷 림프종, 버킷 유사 림프종 (소형 비절단 세포 림프종), 만성 림프구성 백혈병/소림프구성 림프종, 피부 T-세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종, 장병증형 T-세포 림프종, 여포성 림프종, 간비장 감마 델타 T-세포 림프종, T-세포 백혈병, 림프모구 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 비강 T-세포 림프종, 소아 림프종, 말초 T-세포 림프종, 원발성 중추신경계 림프종, 형질전환 림프종, 치료 관련 T-세포 림프종, 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함하나 이들로 제한되는 것은 아니다.
뇌암에는 뇌 조직의 모든 암이 포함된다. 뇌암의 예는 신경교종 (예를 들어, 교모세포종, 성상세포종, 희소돌기아교종, 뇌실막종 등), 수막종, 뇌하수체 선종, 및 전정 신경초종, 원시 신경외배엽 종양 (수모세포종)을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 면역접합체는 단독으로 또는 요법에서 다른 제제와 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 면역접합체는 화학요법제와 같은 적어도 하나의 추가 치료제와 공동 투여될 수 있다. 이러한 병용 요법은 병용 투여 (2개 이상의 치료제가 동일하거나 별도의 제형에 포함되는 경우) 및 개별 투여를 포함하며, 이 경우 면역접합체의 투여는 추가 치료제 및/또는 애주번트의 투여 전, 동시 및/또는 후에 일어날 수 있다. 면역접합체는 또한 방사선 요법과 함께 사용할 수 있다.
본 발명의 면역접합체 (및 임의의 추가 치료제)는 비경구, 폐내 및 비강내를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있고, 국소 치료가 필요한 경우 병변내 투여가 가능하다. 비경구 주입에는 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여가 포함된다. 투여는 임의의 적절한 경로, 예를 들어, 부분적으로는 투여가 단기인지 만성인지에 따라 정맥내 또는 피하 주사와 같은 주사에 의해 이루어질 수 있다. 다양한 시점에 걸친 단일 또는 다중 투여, 볼루스 투여 및 펄스 주입을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 투여 스케줄이 본원에서 고려된다.
아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 이들의 바이오시밀러, 및 이들의 바이오베터는 암, 특히 유방암, 특히 삼중 음성 (에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 및 과잉 HER2 단백질에 대한 테스트 음성) 유방암, 방광암, 및 메르켈 세포 암종의 치료에 유용한 것으로 알려져 있다. 본원에 기술된 면역접합체는 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 이들의 바이오시밀러 및 이들의 바이오베터와 동일한 유형의 암, 특히 유방암, 특히 삼중 음성 (에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체 및 과잉 HER2 단백질에 대해 음성 테스트) 유방암, 방광암 및 메르켈 세포 암종을 치료하는 데 사용할 수 있다.
면역접합체는 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 이들의 바이오시밀러, 및 이들의 바이오베터에 사용되는 투여 요법과 같은 임의의 적합한 투여 요법을 사용하여 임의의 치료 유효량으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 예를 들어, 방법은 대상체에게 약 100 ng/kg 내지 약 50 mg/kg의 용량을 제공하도록 면역접합체를 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 면역접합체 용량은 약 5 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 5 mg/kg, 또는 약 100 μg/kg 내지 약 1 mg/kg의 범위일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 100, 200, 300, 400, 또는 500 μg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 mg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 또한 특정 접합체 뿐만 아니라 치료되는 암의 유형 및 중증도에 따라 이러한 범위를 벗어날 수 있다. 투여 빈도는 주 1회 투여 내지 다중 투여, 또는 더 빈번한 범위일 수 있다. 일부 구현예에서, 면역접합체는 1개월에 약 1회 내지 1주에 약 5회 투여된다. 일부 구현예에서, 면역접합체는 주 1회 투여된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 암을 예방하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 치료 유효량의 면역접합체 (예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 조성물로서)를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 예방될 특정 암에 취약하다. 예를 들어, 방법은 대상체에게 약 100 ng/kg 내지 약 50 mg/kg의 용량을 제공하도록 면역접합체를 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 면역접합체 용량은 약 5 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 5 mg/kg, 또는 약 100 μg/kg 내지 약 1 mg/kg의 범위일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 100, 200, 300, 400, 또는 500 μg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 mg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 또한 특정 접합체 뿐만 아니라 치료되는 암의 유형 및 중증도에 따라 이러한 범위를 벗어날 수 있다. 투여 빈도는 주 1회 투여 내지 다중 투여, 또는 더 빈번한 범위일 수 있다. 일부 구현예에서, 면역접합체는 1개월에 약 1회 내지 1주에 약 5회 투여된다. 일부 구현예에서, 면역접합체는 주 1회 투여된다.
본 발명의 일부 구현예는 상기 기재된 바와 같은 암을 치료하는 방법을 제공하고, 여기서 암은 유방암이다. 유방암은 유방의 다양한 부위에서 발생할 수 있으며, 다양한 상이한 유형의 유방암이 특성화되었다. 예를 들어, 본 발명의 면역접합체는 제자리 도관 암종; 침윤성 도관 암종 (예를 들어, 관상 암종, 수질 암종, 점액성 암종, 유두 암종, 또는 유방의 낭상 암종); 제자리 소엽 암종; 침윤성 소엽 암종; 염증성 유방암; 및 삼중 음성 (에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체 및 과량의 HER2 단백질에 대한 테스트 음성) 유방암과 같은 다른 형태의 유방암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 유방암을 치료하는 방법은 HER2 (예를 들어, 트라스투주맙, 퍼투주맙, 이들의 바이오시밀러 또는 바이오베터) 및 PD-L1 (예를 들어, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 이들의 바이오시밀러 또는 바이오베터)를 결합할 수 있는 항제 작제물을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 결장암 폐암, 신장암, 췌장암, 위암, 및 식도암을 치료하는 방법은 CEA, 또는 CEA를 과발현하는 종양에 결합할 수 있는 항체 작제물 (예를 들어, 라베투주맙, 이의 바이오시밀러, 또는 바이오베터)을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 암은 TLR7 및/또는 TLR8에 의해 유도된 전염증 반응에 민감하다.
실시예
티에노아제핀 화합물 (TAZ) 및 중간체의 제조
실시예 1 5-아미노-2-브로모-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-1의 합성
Figure pct00209
DMF (1 mL) 중 5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, TAZ-15 (70 mg, 244 μmol (마이크로몰), 1 eq)의 용액에 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트, 헥사플루오로포스페이트 아자벤조트리아졸 테트라메틸 우로늄, HATU (110 mg, 293 μmol, 1.2 eq), N-프로필프로판-1-아민 (74.0 mg, 731 μmol, 100 μL (마이크로리터), 3 eq) 및 트리에틸아민, Et3N (49.0 mg, 488 μmol, 67.8 μL, 2 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 prep-HPLC (칼럼: 나노-마이크로 Kromasil C18 100*30mm 8um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 20%-50%,10min)로 정제하여 TAZ-1 (27 mg, 72.91 μmol, 29.9% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 11.66 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 3.40 (s, 4H), 3.28 (s, 2H), 1.68-1.57 (m, 4H), 0.91 (t, J = 7.2 Hz, 6H). LC/MS [M+H] 370.0 (계산치); LC/MS [M+H] 370.0 (관측치).
실시예 2 5-아미노-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-2의 합성
Figure pct00210
에틸아세테이트, EtOAc (5 mL) 중 5-아미노-2-브로모-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-1 (70 mg, 189 μmol, 1 eq)의 용액에 탄소상 팔라듐, Pd/C (10 mg, 189 μmol, 20% 순도, 1 eq)을 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고 H2로 여러번 퍼징하고 그 다음 25℃에서 1시간 동안 H2 (50 psi) 하에 교반하였다. 혼합물을 여과하고 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: 나노-마이크로 Kromasil C18 100*30mm 8um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%-40%,10min)로 정제하여 TAZ-2 (12 mg, 41.18 μmol, 21.78% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 7.71 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.15-7.09 (m, 2H), 3.44-3.40 (m, 4H), 3.36 (s, 2H), 1.72-1.61 (m, 4H), 0.98-0.84 (m, 6 H). LC/MS [M+H] 292.1 (계산치); LC/MS [M+H] 292.1 (관측치)
실시예 3 tert-부틸 (2-(1-(5-(5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-카복사미도)피리딘-2-일)피페리딘-4-카복사미도)에틸)카바메이트, TAZ-3의 합성
Figure pct00211
메틸 5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노 [3,2-b]아제핀-2-카복실레이트, TAZ-20의 제조
MeOH (5 mL) 중 5-아미노-2-브로모-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-1 (0.5 g, 1.30 mmol, 1 eq)의 용액에 Et3N (409 mg, 4.05 mmol, 564 μL, 3 eq) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물, Pd(dppf)Cl2 (99.0 mg, 135 μmol, 0.1 eq)을 N2 하에 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고 일산화탄소, CO로 여러번 퍼징하였다. 혼합물을 CO (50psi) 하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 농축하여 TAZ-20 (0.5 g, 조물질)을 적색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 7.51 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.43-3.35 (m, 4H), 3.35 (s, 2H), 1.73-1.60 (m, 4H), 0.97-0.83 (m, 6H).
5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-2-카복실산, TAZ-22의 제조
MeOH (10 mL) 및 H2O (10 mL) 중 메틸 5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-2-카복실레이트, TAZ-20 (450 mg, 1.29 mmol, 1 eq)의 혼합물에 LiOH.H2O (270 mg, 6.44 mmol, 5 eq)을 첨가하고, 그 다음 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 MeOH를 제거하였다. 잔류물을 H2O 30 mL로 희석하고 EtOAc (10 mL x 2)로 추출하였다. 수성상 pH를 aq (수성) HCl (1M)로 약 4로 조정하고 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 TAZ-22 (0.2 g, 596.27 μmol, 46.30% 수율)을 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.49 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 3.32-3.28 (m, 4H), 3.16 (s, 2H), 1.61-1.46 (m, 4H), 0.82 (br s, 6H).
tert-부틸 (2-(1-(5-(5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-카복사미도)피리딘-2-일)피페리딘-4-카복사미도)에틸)카바메이트, TAZ-3의 제조
DMF (2 mL) 중 5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-카복실산 (150 mg, 447 μmol, 1 eq)의 용액에 7-아자-벤조트리아졸-1-일옥시-트리피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트, PYAOP (256 mg, 491.9 μmol, 1.1 eq), Et3N (45.0 mg, 447.2 μmol, 62.25 μL, 1 eq) 및 tert-부틸 N-[2-[[1-(5-아미노-2-피리딜)피페리딘-4-카보닐]아미노]에틸]카바메이트 (195. mg, 536.6 μmol, 1.2 eq)을 첨가하고 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 prep-HPLC (칼럼: Welch Xtimate C18 150*25mm*5um;이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 30%-60%,10.5min)로 정제하여 TAZ-3 (62 mg, 91.06 μmol, 20.36% 수율)을 회색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 8.35 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.89-7.82 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.91-6.84 (m, 1H), 4.28 (d, J = 12.8 Hz, 2H), 3.44-3.35 (m, 4H), 3.27-3.21 (m, 2H), 3.18-3.12 (m, 2H), 2.97 (s, 2H), 2.88 (t, J = 11.6 Hz, 2H), 2.48-2.32 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 2H), 1.79-1.56 (m, 6H), 1.43 (s, 9H), 0.90 (s, 6H). LC/MS [M+H] 681.3 (계산치); LC/MS [M+H] 681.4 (관측치).
실시예 4 5-아미노-2-[3-[3-(하이드록시메틸)아제티딘-1-일]설포닐페닐]- N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-4의 합성
Figure pct00212
디옥산 (1 mL) 및 H2O (0.5 mL) 중 5-아미노-2-브로모-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-1 (71.0 mg, 192 μmol, 1.1 eq)의 용액에 [1-[3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]설포닐아제티딘-3-일]메탄올 (62.0 mg, 174 μmol, 1 eq), K2CO3 (48.0 mg, 348 μmol, 2 eq) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물, Pd(dppf)Cl2 (6.0 mg, 8.7 μmol, 0.05 eq)을 N2 하에서 25℃에서 첨가하고 그 다음 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Welch Xtimate C18 150*25mm*5um;이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 30%-60%,10.5min)로 정제하여 TAZ-4 (22 mg, 42.58 μmol, 24.45% 수율)을 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 8.04-7.97 (m, 2H), 7.79-7.75 (m, 1H), 7.73-7.67 (m, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 3.85 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 3.62-3.56 (m, 2H), 3.45-3.37 (m, 6H), 2.99 (s, 2H), 2.63-2.52 (m, 1H), 1.71-1.59 (m, 4H), 0.99- 0.83 (m, 6 H). LC/MS [M+H] 517.2 (계산치); LC/MS [M+H] 517.2 (관측치)
실시예 5 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸N-[2-[[1-[5-[[5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노 [3,2-b]아제핀-2-카보닐]아미노]-2-피리딜]피페리딘-4-카보닐]아미노]에틸]카바메이트, TAZ-5의 합성
Figure pct00213
5-아미노-N2-[6-[4-(2-아미노에틸카바모일)-1-피페리딜]-3-피리딜]- N7,N7-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2,7-디카복사미드, 5a의 제조
DCM (1 mL) 중 tert-부틸 N-[2-[[1-[5-[[5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-2-카보닐]아미노]-2-피리딜]피페리딘-4-카보닐]아미노]에틸]카바메이트, TAZ-3 (50 mg, 73.4 μmol, 1 eq)의 용액에 TFA (84.0 mg, 734 μmol, 54.0 μL, 10 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 농축한 다음, 동결건조하여 5a (59 mg, 72.95 μmol, 99.34% 수율, 2TFA)을 회색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 8.62 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.17 (dd, J = 9.6, 2.8 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.43 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 4.21 (d, J = 13.6 Hz, 2H), 3.52-3.39 (m, 8H), 3.36-3.31 (m, 2H), 3.07 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.68-2.61 (m, 1H), 2.07-2.00 (m, 2H), 1.90-1.78 (m, 2H), 1.67 (dq, J = 14.8, 7.2 Hz, 4H), 0.93 (s, 6H).
TAZ-5의 제조
DMF (1 mL) 중 5a (50 mg, 61.8 μmol, 1 eq, 2TFA)의 용액에 DIEA (32.0 mg, 247.2 μmol, 43.0 μL, 4 eq) 및 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노)-3-메틸-부타노일]아미노]-5-우레이도-펜타노일]아미노]페닐]메틸 (4-니트로페닐) 카보네이트 (52.0 mg, 68.0 μmol, 1.1 eq)을 첨가하고 그 다음 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 prep-HPLC (칼럼: 나노-마이크로 Kromasil C18 100*30mm 8um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-45%,10min)로 정제하여 TAZ-5 (36 mg, 27.2 μmol, 44.03% 수율, TFA)을 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 8.58 (s, 1H), 8.07 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.93 (br s, 1H), 7.86-7.72 (m, 3H), 7.63 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.57 (br d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.41-7.34 (m, 2H), 7.33-7.25 (m, 4H), 7.13 (s, 1H), 5.03 (br s, 2H), 4.41-4.29 (m, 3H), 4.23-4.15 (m, 1H), 4.13-4.03 (m, 2H), 3.98-3.91 (m, 1H), 3.51-3.34 (m, 5H), 3.25-3.07 (m, 9H), 2.52-2.31 (m, 1H), 2.08 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 1.99-1.36 (m, 12H), 1.04-0.82 (m, 12H). LC/MS [M+H] 1208.6 (계산치); LC/MS [M+H] 1208.5 (관측치).
실시예 6 tert-부틸 N-[5-[5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H- 티에노[3,2-b]아제핀-2-일]펜트-4-이닐] 카바메이트, TAZ-6의 합성
Figure pct00214
TEA (0.2 mL) 및 DMF (0.6 mL) 중 5-아미노-2-브로모-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-1 (20 mg, 54.0 μmol, 1 eq), tert-부틸 N-펜트-4-이닐카바메이트 (29.69 mg, 162 μmol, 3 eq), Pd(PPh3)2Cl2 (1.90 mg, 2.70 μmol, 0.05 eq), CuI (2.06 mg, 10.8 μmol, 0.2 eq) 및 PPh3 (2.83 mg, 10.8 μmol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈기하고 N2로 3회 퍼징하고, 그 다음 N2 하에서 140℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 H2O (5 mL)의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 EtOAc (5 mL x 3)로 추출하였다. 조합된 유기층을 염수(5 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 prep-TLC (SiO2, EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여 TAZ-6 (8 mg, 16.9 μmol, 31.34% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 6.87 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 3.42-3.34 (m, 4H), 3.31 (s, 2H), 3.17 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.48 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.75 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.69-1.56 (m, 4H), 1.44 (s, 9H), 0.92-0.87 (m, 6H). LC/MS [M+H] 473.2 (계산치); LC/MS [M+H] 473.2 (관측치)
실시예 7 5-아미노-2-메틸-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드,TAZ-7의 합성
Figure pct00215
DMF (1 mL) 중 5-아미노-2-브로모-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-1 (30 mg, 81.0 μmol, 1 eq)의 용액에 메틸붕산 (73.0 mg, 1.22 mmol, 15 eq), K2CO3 (22.0 mg, 162.03 μmol, 2 eq) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물, Pd(dppf)Cl2 (2.96 mg, 4.05 μmol, 0.05 eq)을 N2 하에서 첨가하고 그 다음 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: 나노-마이크로 Kromasil C18 100*30mm 8um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 10%-40%,10min)로 정제하여 TAZ-7 (8 mg, 26.19 μmol, 32.33% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 7.00 (s, 1 H) 6.83 (s, 1 H) 3.43 (br t, J = 7.2 Hz, 4 H) 3.34 (s, 2 H) 2.53 (s, 3 H) 1.69-1.60 (m, 4 H) 0.98-0.85 (m, 6 H). LC/MS [M+H] 306.2 (계산치); LC/MS [M+H] 306.2 (관측치).
실시예 8 tert-부틸 N-[3-[(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-프로필-아미노]프로필]카바메이트, TAZ-8의 합성
Figure pct00216
EtOAc (10 mL) 중 tert-부틸 N-[3-[(5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐) -프로필-아미노]프로필]카바메이트, TAZ-9 (0.72 g, 1.48 mmol, 1 eq)의 용액에 탄소상 팔라듐, Pd/C (10%, 0.2 g)을 N2 하에 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고 H2로 여러번 퍼징하고, 그 다음 수소 가스 하에서 교반하고, H2 (50 psi) 하에 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, EtOAc:EtOH = 1:0 내지 3:1)로 정제하여 TAZ-8 (0.4 g, 984 μmol, 66.34% 수율)를 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.67 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.13-7.05 (m, 2H), 3.50 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.44 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.30-3.24 (m, 2H), 3.07 (s, 2H), 1.84-1.78 (m, 2H), 1.72-1.61 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 0.93-0.88 (m, 3H). LC/MS [M+H] 407.2 (계산치); LC/MS [M+H] 407.2 (관측치).
실시예 9 tert-부틸 N-[3-[(5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-프로필-아미노]프로필]카바메이트, TAZ-9의 합성
Figure pct00217
DMF (5 mL) 중 5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, TAZ-15 (0.5 g, 1.74 mmol, 1 eq)의 혼합물에 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트, 헥사플루오로포스페이트 아자벤조트리아졸 테트라메틸 우로늄, HATU (795 mg, 2.09 mmol, 1.2 eq) 및 DIPEA (675 mg, 5.22 mmol, 910 μL, 3 eq)을 25℃에서 첨가하였다. 15분 후, tert-부틸 N-[3-(프로필아미노)프로필]카바메이트 (489.70 mg, 2.26 mmol, 1.3 eq)을 25℃에서 첨가하고, 그 다음 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 H2O (30 mL)의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 EtOAc(15 mL x 3)로 추출하였다. 조합된 유기층을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 0/1) 및 (SiO2, EtOAc:MeOH = 1:0 내지 5:1) 로 정제하여 TAZ-9 (0.73 g, 1.50 mmol, 86.36% 수율)를 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 6.95 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 3.50-3.43 (m, 2H), 3.42-3.35 (m, 2H), 3.07-3.01 (m, 4H), 1.84-1.74 (m, 2H), 1.69-1.57 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 0.91-0.86 (m, 3H). LC/MS [M+H] 485.1 (계산치); LC/MS [M+H] 485.1 (관측치).
실시예 10 tert-부틸 N-[4-[(5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-프로필-아미노]부트-2-이닐]카바메이트, TAZ-10의 합성
Figure pct00218
DMF (4 mL) 중 5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, TAZ-15 (0.2 g, 697 μmol, 1 eq)의 용액에 HATU (318 mg, 836 μmol, 1.2 eq) 및 DIPEA (270 mg, 2.09 mmol, 3 eq)을 25℃에서 첨가하였다. 15분 후, tert-부틸 N-[4-(프로필아미노)부트-2-이닐]카바메이트 (205 mg, 906 μmol, 1.3 eq)을 25℃에서 첨가하고 그 다음 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 H2O (20 mL)의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합된 유기층을 염수 (5 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 0/1)로 정제하여 TAZ-10 (150 mg, 302.77 μmol, 43.47% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.20-7.18 (m, 2H), 4.29 (s, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.58-3.50 (m, 2H), 3.40 (s, 2H), 1.76-1.66 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 0.94 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 495.1 (계산치); LC/MS [M+H] 495.1 (관측치).
실시예 11 5-아미노-N-(3-아미노프로필)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-11의 합성
Figure pct00219
EtOAc (10 mL) 및 MeOH (1 mL) 중 tert-부틸 N-[3-[(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-프로필 -아미노]프로필]카바메이트, TAZ-8 (1.4 g, 3.44 mmol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 20 mL, 23.23 eq)을 25℃에서 첨가하고 그 다음 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 TAZ-11 (1.28 g, 조물질, HCl)를 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 7.74 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 7.15 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.59 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.49 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.41 (s, 2H), 3.00 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.08-1.97 (m, 2H), 1.75-1.62 (m, 2H), 0.91 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 307.2 (계산치); LC/MS [M+H] 307.1 (관측치).
실시예 12 5-아미노-2-[1-[3-(하이드록시메틸)아제티딘-1-일]설포닐피라졸-4-일] -N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-12의 합성
Figure pct00220
Figure pct00221
메틸 1-클로로설포닐아제티딘-3-카복실레이트, 12b의 제조
DCM (50 mL) 중 설푸릴 클로라이드 (3.34 g, 24.7 mmol, 2.47 mL, 1.5 eq)의 혼합물에 DCM (30 mL) 중 메틸 아제티딘-3-카복실레이트, 12a (2.5 g, 16.49 mmol, 1 eq, HCl) 및 DIEA (8.53 g, 65.97 mmol, 11.49 mL, 4 eq)의 용액을 -78℃에서 첨가하고 그 다음 2시간 동안 이 온도에서 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고 EtOAc (60 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 0/1)로 정제하여 12b (2.75 g, 12.87 mmol, 78.05% 수율)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 4.36-4.25 (m, 4H), 3.80 (s, 3H), 3.57-3.47 (m, 1H).
메틸 1-(4-브로모피라졸-1-일)설포닐아제티딘-3-카복실레이트, 12c의 제조
DCM (40 mL) 중 4-브로모-1H-피라졸 (1.58 g, 10.77 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 DABCO (1.57 g, 14.0 mmol, 1.54 mL, 1.3 eq) 및 12b (2.3 g, 10.8 mmol, 1.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 3/1)로 정제하여 12c (3 g, 9.25 mmol, 85.97% 수율)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 8.03 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 4.32-4.27 (m, 4H), 3.73 (s, 3H), 3.41-3.34 (m, 1H).
[1-(4-브로모피라졸-1-일)설포닐아제티딘-3-일]메탄올, 12d의 제조
DCM (50 mL) 중 12c (3.3 g, 10.2mmol, 1 eq)의 용액에 DIBAL-H (1 M, 40.7 mL, 4 eq)을 N2 하에서 0℃에서 천천히 첨가하고, 그 다음 이 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (1.5 mL)로 켄칭하고 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 12d (1.19 g, 조물질)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 8.04 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 4.18-4.14 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.96 (dd, J = 5.6, 8.4 Hz, 2H), 3.66 (d, J = 5.6 Hz, 2H).
[1-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸-1-일] 설포닐아제티딘-3-일]메탄올, 12e의 제조
디옥산 (2 mL) 중 12d (0.1 g, 338 μmol, 1.0 eq)의 혼합물에 Pin2B2 (129 mg, 507 μmol, 1.5 eq), 아세트산칼륨, KOAc (66.3 mg, 675μmol, 2.0 eq) 및 Pd(dppf)Cl2 (12.4 mg, 16.9 μmol, 0.05 eq)을 N2 하에서 25℃에서 한번에 첨가하고 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 물로 희석하고 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 12e (0.1 g, 조물질)을 흑색 오일로서 얻었다.
TAZ-12의 제조
디옥산 (2 mL) 및 H2O (0.2 mL) 중 5-아미노-2-브로모-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-1 (54 mg, 146 μmol, 1.0 eq) 및 12e (50 mg, 146 μmol, 1.0 eq)의 혼합물에 K2CO3 (60.4 mg, 437 μmol, 3.0 eq) 및 Pd(dppf)Cl2 (5.3 mg, 7.28 μmol, 0.05 eq)을 N2 하에서 25℃에서 한번에 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 다음 반응을 물로 희석하고 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3um;이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 30%-50%,10.5min)로 추가 정제하여 5-아미노-2-[1-[3- (하이드록시메틸)아제티딘-1-일]설포닐피라졸-4-일]-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드 (9 mg, 17.8 μmol, 12.19% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 8.56 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.38-7.35 (m, 2H), 6.85 (s, 1H), 4.13 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.89 (dd, J = 6.0, 8.4 Hz, 2H), 3.49 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.43-3.37 (m, 4H), 2.97 (s, 2H), 2.72-2.67 (m, 1H), 1.69-1.61 (m, 4H), 0.93-0.87 (m, 6H). LC/MS [M+H] 507.2 (계산치); LC/MS [M+H] 507.2 (관측치).
실시예 13 tert-부틸 N-[5-[5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]펜틸]카바메이트, TAZ-13의 합성
Figure pct00222
MeOH (30 mL) 중 tert-부틸 N-[5-[5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일] 펜트-4-이닐]카바메이트, TAZ-6 (0.8 g, 1.69 mmol, 1.0 eq)의 용액에 Pd(OH)2/C (10%, 0.3 g)을 N2 하에 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고 H2로 여러번 퍼징하였다. 혼합물을 H2 (50 psi) 하에 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 농축하였다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 20 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~100% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액 @ 60 mL/min)로 정제하여 TAZ-13 (0.6 g, 1.26 mmol, 74.37% 수율)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 6.80 (s, 1H), 6.62 (s, 1H), 3.43-3.35 (m, 4H), 3.03 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.91 (s, 2H), 2.78 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.69-1.60 (m, 6H), 1.50-1.40 (m, 13H), 0.92-0.87 (m, 6H). LC/MS [M+H] 477.3 (계산치); LC/MS [M+H] 477.3 (관측치)
실시예 14 5-아미노-2-(5-아미노펜틸)-N,N-디프로필-6H-티에노 [3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-14의 합성
Figure pct00223
EtOAc (10 mL) 중 tert-부틸 N-[5-[5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]펜틸]카바메이트, TAZ-13 (0.31 g, 650 μmol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 4.88 mL, 30.0 eq)을 25℃에서 첨가하고 그 다음 1시간 동안 이 온도에서 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축하여 TAZ-14 (0.26 g, 630 μmol, 96.80% 수율, HCl)을 황색 고체로서 얻었다. 1HNMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.02 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 3.45-3.43 (m, 4H), 3.35 (s, 2H), 2.98-2.86 (m, 4H), 1.82-1.62 (m, 8H), 1.55-1.45 (m, 2H), 0.92-0.87 (m, 6H). LC/MS [M+H] 377.2 (계산치); LC/MS [M+H] 377.2 (관측치).
실시예 15 5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, TAZ-15의 합성
Figure pct00224
메틸 3-(tert-부톡시카보닐아미노)티오펜-2-카복실레이트, 15b의 제조
DCM (100 mL) 중 메틸 3-아미노티오펜-2-카복실레이트, 15a (19 g, 121 mmol, 1 eq) 및 Et3N (14.7 g, 145 mmol, 20.2 mL, 1.2 eq)의 용액에 DCM (50 mL) 중 Boc2O (29.0 g, 133 mmol, 30.5 mL, 1.1 eq)을 25℃에서 적가하고, 그 다음 DMAP (738 mg, 6.0 mmol, 0.05 eq)을 혼합물에 첨가하였다. 수득한 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 DCM (50 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 20 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~20% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액 @ 45 mL/min)로 정제하여 15b (12 g, 46.64 mmol, 38.58% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 9.36 (s, 1H), 7.89 (d, J = 5.6 Hz 1H), 7.42 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 1.53 (s, 9H).
메틸 5-브로모-3-(tert-부톡시카보닐아미노)티오펜-2-카복실레이트, 15c의 제조
THF (50 mL) 중 15b (8.9 g, 34.6 mmol, 1 eq)의 용액에 LDA (2 M, 60.0 mL, 3.5 eq)을 -78℃에서 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 -78℃에서 교반하고, 그 다음 1,2-디브로모-1,1,2,2-테트라플루오로-에탄 (53.92 g, 207.54 mmol, 6 eq)을 첨가한 다음, 1시간 동안 이 온도에서 교반하였다. 혼합물을 격렬하게 교반하면서 차가운 염화암모늄 용액 (100 mL)에 부었고, EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 10 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~20% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액 @　45 mL/min)로 정제하여 15c (4 g, 11.90 mmol, 34.40% 수율)를 황백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 9.33 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 1.54 (s, 9H)
tert-부틸 N-[5-브로모-2-(하이드록시메틸)-3-티에닐]카바메이트, 15d의 제조
DCM (60 mL) 중 15c (4 g, 11.9 mmol, 1 eq)의 용액에 DIBAL-H (1 M, 59.0 mL, 5 eq)을 0℃에서 N2 하에서 첨가하고 그 다음 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 H2O 1 mL의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 15% NaOH (0.5 mL) 및 H2O (1 mL)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 25℃에서 교반하고, 여과하고 케이크를 EtOAc (50 mL)로 세척하고, 여과액을 농축하여 15d (3 g, 9.7 mmol, 81.82% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.21 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.60 (s, 2H), 1.51 (s, 9H).
tert-부틸 N-(5-브로모-2-포르밀-3-티에닐)카바메이트, 15e의 제조
DCM (30 mL) 중 15d (3 g, 9.73 mmol, 1 eq)의 용액에 MnO2 (8.5 g, 97.34 mmol, 10 eq)을 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 농축하여 15e (1.5 g, 4.90 mmol, 50.33% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 9.82 (s, 1H), 9.51 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 1.53 (s, 9H).
에틸 (E)-3-[5-브로모-3-(tert-부톡시카보닐아미노) -2-티에닐]-2-(시아노메틸)프로프-2-에노에이트, 15f의 제조
톨루엔 (15 mL) 중 15e (1.5 g, 4.90 mmol, 1 eq)의 용액에 에틸 3-시아노-2-(트리페닐-포스파닐리덴)프로파노에이트 (2.5 g, 6.4 mmol, 1.3 eq)을 25℃에서 첨가하고, 그 다음 75℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 2 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~80% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액 @ 45 mL/min)로 정제하여 15f (1.65 g, 3.97 mmol, 81.10% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.81 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.35 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.68 (s, 2H), 1.54 (s, 9H), 1.39 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
에틸 5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실레이트, 15g의 제조
EtOAc (10 mL) 중 15f (1.3 g, 3.13 mmol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 13.00 mL, 16.6 eq)을 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하고 그 다음 농축하여 15g (1 g, 조물질)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10.13 (s, 1H), 9.29 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 4.24 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.52 (s, 2H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, TAZ-15의 제조
EtOH (10 mL) 및 H2O (1 mL) 중 15g (1 g, 3.17 mmol, 1 eq)의 용액에 LiOH.H2O (665 mg, 15.8 mmol, 5 eq)을 첨가하고 그 다음 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 EtOH를 제거하였다. 잔류물을 H2O (30 mL)로 희석하고, 그 다음 혼합물의 pH를 aq HCl (1 M)로 4로 조정하고, EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 TAZ-15 (0.85 g, 2.96 mmol, 93.30% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.65 (s, 1H), 7.34 (br s, 2H), 6.97 (s, 1H), 2.97 (s, 2H).
실시예 16 tert-부틸 N-[4-[(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-프로필-아미노]부트-2-이닐]카바메이트, TAZ-16의 합성
Figure pct00225
5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, 16a의 제조
MeOH (20 mL) 중 5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, TAZ-15 (1 g, 3.48 mmol, 1 eq)의 용액에 Pd/C (10%, 0.2 g) 및 수성 수산화암모늄, NH3.H2O (4.88 g, 34.8 mmol, 5.37 mL, 25% 순도, 10 eq)을 N2 하에 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고 H2로 여러번 퍼징하고, 그 다음 H2 (50 psi) 하에 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 Celite® (Johns Manville)를 통해 여과하고 여과액의 pH를 0℃에서 2 N HCl로 ~ 6으로 조정하고, 그 다음 감압 하에서 농축하여 MeOH를 제거하였다. 고체를 여과하고 감압 하에 건조시켜 16a (0.54 g, 2.59 mmol, 74.46% 수율)를 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.71 (s, 1H), 7.61 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.98 (br s, 2H), 6.83 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 2.91 (s, 2H).
TAZ-16의 제조
DMF (4 mL) 중 16a (0.33 g, 1.58 mmol, 1 eq)의 용액에 HATU (662.82 mg, 1.74 mmol, 1.1 eq) 및 DIPEA (1.02 g, 7.92 mmol, 1.38 mL, 5 eq)을 0℃에서 첨가하였다. 10분 후, tert-부틸 N-[4-(프로필아미노)부트-2-이닐]카바메이트 (394.51 mg, 1.74 mmol, 1.1 eq)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 수득한 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 H2O (30 mL)의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 EtOAc(15 mL x 3)로 추출하였다. 조합된 유기층을 염수 (5 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (TFA 조건; 칼럼: Phenomenex Luna C18 100*30mm*5um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%-45%,10min)로 정제하여 TAZ-16 (0.185 g, 444.14 μmol, 28.03% 수율)를 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.74 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.13 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.30 (s, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.54-3.52 (m, 2H), 3.38 (s, 2H), 1.76-1.67 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 0.94 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 417.2 (계산치); LC/MS [M+H] 417.2 (관측치).
실시예 17 5-아미노-N-(4-아미노부트-2-이닐)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-17의 합성
Figure pct00226
EtOAc (2 mL) 중 tert-부틸 N-[4-[(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-프로필-아미노]부트-2-이닐]카바메이트, TAZ-16 (0.45 g, 1.08 mmol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 15.00 mL, 55 eq)을 25℃에서 첨가하고 그 다음 0.5시간 동안 이 온도에서 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 TAZ-17 (496 mg, 조물질, HCl)를 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.76 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.15 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.40 (s, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.57 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.40 (s, 2H), 1.81-1.65 (m, 2H), 0.95 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 317.1(계산치); LC/MS [M+H] 317.1 (관측치).
실시예 18 5-아미노-2-페닐-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-18의 합성
Figure pct00227
디옥산 (2 mL) 및 H2O (0.2 mL) 중 페닐붕산 (34.5 mg, 283 μmol, 1.5 eq), K2CO3 (52.0 mg, 378 μmol, 2.0 eq) 및 5-아미노-2-브로모-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-1 (70.0 mg, 190 μmol, 1.0 eq)의 혼합물에 Pd(dppf)Cl2 (7.0 mg, 9.45 μmol, 0.05 eq)을 N2 하에서 25℃에서 첨가하고 그 다음 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 prep-HPLC (칼럼: 나노-마이크로 Kromasil C18 100*30mm 8um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-50%,10min)로 정제하여 TAZ-18 (54 mg, 147 μmol, 77.7% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.69 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.49-7.37 (m, 4H), 7.11 (s, 1H), 3.54-3.38 (m, 6H), 1.68 (sxt, J = 7.4 Hz, 4H), 0.99-0.92 (m, 6H). LC/MS [M+H] 368.2 (계산치); LC/MS [M+H] 368.1 (관측치).
실시예 19 5-아미노-N,N-디프로필-2-(1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸) -1H-피라졸-4-일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-19의 합성
Figure pct00228
디옥산 (3 mL) 및 H2O (0.2 mL) 중 5-아미노-2-브로모-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-1 (100 mg, 270 μmol, 1.0 eq), K2CO3 (75.0 mg, 540 μmol, 2.0 eq) 및 트리메틸-[2-[[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸-1-일]메톡시]에틸]실란 (96 mg, 297 μmol, 1.1 eq)의 혼합물에 Pd(dppf)Cl2 (9.88 mg, 13.50 μmol, 0.05 eq)을 N2 하에서 25℃에서 첨가하고 그 다음 95℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3um;이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 40%-60%,10.5min)로 정제하여 TAZ-19 (80 mg, 164 μmol, 60.7% 수율)을 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 8.09 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 3.61 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.46-3.36 (m, 4H), 2.96 (s, 2H), 1.72-1.57 (m, 4H), 0.90 (t, J = 8.0 Hz, 8H), 0.00 (s, 9H). LC/MS [M+H] 488.2 (계산치); LC/MS [M+H] 488.2 (관측치).
실시예 20 메틸 5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H- 티에노[3,2-b]아제핀-2-카복실레이트, TAZ-20의 합성
Figure pct00229
MeOH (20 mL) 중 5-아미노-2-브로모-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-1 (1.2 g, 3.24 mmol, 1.0 eq) 및 Et3N (984 mg, 9.72 mmol, 1.35 mL, 3 eq)의 용액에 Pd(dppf)Cl2 (118.56 mg, 162.03 μmol, 0.05 eq)을 N2 하에 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고 CO로 여러 번 퍼징하였다. 혼합물을 CO (50psi) 하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 진공에서 농축하여 TAZ-20 (1.1 g, 3.15 mmol, 97.14% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.72 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.58-3.37 (m, 6H), 1.69-1.62 (m, 4H), 0.99-0.90 (m, 6H). LC/MS [M+H] 350.2 (계산치); LC/MS [M+H] 350.2 (관측치).
실시예 21 5-아미노-N,N-디프로필-2-(1H-피라졸-4-일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-21의 합성
Figure pct00230
MeOH (4 mL) 중 5-아미노-N,N-디프로필-2-[1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸) 피라졸-4-일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-19 (66.0 mg, 135 μmol, 1.0 eq)의 혼합물에 HCl/MeOH (4 M, 338 μL, 10.0 eq)을 25℃에서 첨가하고 그 다음 12시간 동안 이 온도에서 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하고, 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3um;이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 20%-50%,10.5min)로 정제하여 TAZ-21 (22 mg, 61.5 μmol, 45.5% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.87 (s, 2H), 6.95 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 3.44-3.35 (m, 4H), 2.96 (s, 2H), 1.66-1.60 (m, 4H), 0.99-0.89 (m, 6H). LC/MS [M+H] 358.2 (계산치); LC/MS [M+H] 358.2 (관측치).
실시예 22 5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-카복실산, TAZ-22의 합성
Figure pct00231
MeOH (20 mL) 중 메틸 5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀 -2-카복실레이트, TAZ-20 (1.1 g, 3.15 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 H2O (5 mL) 중 LiOH·H2O (396 mg, 9.44 mmol, 3.0 eq)을 25℃에서 첨가하고 그 다음 2시간 동안 이 온도에서 교반하였다. 혼합물을 pH가 5일 때까지 aq HCl (4 M)로 켄칭하고, 황백색 고체는 혼합물로부터 침전되었고 그 다음 여과시켜 TAZ-22 (0.85 g, 2.53 mmol, 80.5% 수율)를 황백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.41 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 3.37-3.25 (m, 4H), 3.05 (s, 2H), 1.61-1.45 (m, 4H), 0.86-0.75 (m, 6H). LC/MS [M+H] 336.1 (계산치); LC/MS [M+H] 336.1 (관측치).
실시예 23 5-아미노-N2-페닐-N7,N7-디프로필-6H-티에노 [3,2-b]아제핀-2,7-디카복사미드, TAZ-23의 합성
Figure pct00232
DMF (1 mL) 중 5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-카복실산, TAZ-22 (50 mg, 150 μmol, 1.0 eq) HATU (62 mg, 164 μmol, 1.1 eq) 및 DIEA (58 mg, 447 μmol, 3.0 eq)의 혼합물에 아닐린 (28 mg, 298 μmol, 2.0 eq)을 25℃에서 첨가하고 그 다음 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 prep-HPLC (칼럼: 나노-마이크로 Kromasil C18 100*30mm 8um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 10%-40%,10min)로 정제하여 TAZ-23 (34 mg, 82.8 μmol, 55.6% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.87 (s, 1H), 7.67 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 3.49-3.42 (m, 6H), 1.70-1.65 (m, 4H), 0.98-0.90 (m, 6H). LC/MS [M+H] 411.2 (계산치); LC/MS [M+H] 411.1 (관측치).
실시예 24 5-아미노-N2-에틸-N7,N7-디프로필-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-2,7-디카복사미드, TAZ-24의 합성
Figure pct00233
DMF (1 mL) 중 5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-카복실산, TAZ-1 (50 mg, 149 μmol, 1.0 eq), HATU (62.4 mg, 164 μmol, 1.1 eq) 및 DIEA (58 mg, 447 μmol, 3.0 eq)의 혼합물에 에탄아민 (20 mg, 298 μmol, 2.0 eq)을 25℃에서 첨가하고 그 다음 0.5시간 동안 이 온도에서 교반하였다. 혼합물을 여과하고 prep-HPLC (칼럼: 나노-마이크로 Kromasil C18 100*30mm 8um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 5%-35%,10min). Afforded TAZ-24 (28 mg, 77.2 μmol, 51.8% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.62 (s, 1H), 7.13 (s, 2H), 3.54-3.35 (m, 8H), 1.73-1.61 (m, 4H), 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.97-0.90 (m, 6H). LC/MS [M+H] 363.2 (계산치); LC/MS [M+H] 363.2 (관측치).
실시예 25 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]펜틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, TAZ-25의 합성
Figure pct00234
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7- (디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]펜틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, 25a의 제조
MeOH (80 mL) 중 5-아미노-2-(5-아미노펜틸)-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7- 카복사미드, TAZ-14 (0.2 g, 484 μmol, 1.0 eq, HCl)의 용액에 Et3N (73.5 mg, 726 μmol, 101 μL, 1.5 eq) 및 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시) 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (368.1 mg, 629 μmol, 1.3 eq)을 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 10분 동안 교반하고, 그 다음 NaBH3CN (60.8 mg, 968 μmol, 2.0 eq)을 첨가하고 동일한 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 포름알데하이드 (117.9 mg, 1.45 mmol, 108 μL, 3.0 eq)을 첨가한 다음, NaBH3CN (60.9 mg, 968 μmol, 2.0 eq)을 첨가하고 그 다음 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3um; 이동상: [물 (0.1%TFA) - ACN]; B%: 15% - 50%, 10min)로 정제하여 25a (0.4 g, 416.98 μmol, 86.11% 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
TAZ-25의 제조
H2O (20 mL) 중 25a (0.39 g, 406 μmol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (927 mg, 8.13 mmol, 602 μL, 20 eq)을 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 50℃에서 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: 나노-마이크로 Kromasil C18 100*30mm 8um;이동상: [물 (0.1%TFA) - ACN]; B%: 10%-30%, 15min)로 정제하여 TAZ-25 (0.18 g, 199.30 μmol, 49.02% 수율)을 담황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.02 (s, 1H), 6.90 (s, 1H), 3.84-3.82 (m, 2H), 3.75-3.59 (m, 41H), 3.45-3.42 (m, 4H), 3.35 (s, 2H), 2.96-2.87 (m, 5H), 2.54 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.84-1.76 (m, 4H), 1.71-1.60 (m, 4H), 1.54-1.44 (m, 2H), 0.94-0.89 (m, 6H). LC/MS [M+H] 903.5 (계산치); LC/MS [M+H] 903.5 (관측치).
실시예 26 5-아미노-2-벤질-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-7-카복사미드, TAZ-26의 합성
Figure pct00235
DMF (3 mL) 및 H2O (0.2 mL) 중 5-아미노-2-브로모-N,N-디프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-1 (0.11 g, 297 μmol, 1.0 eq), K2CO3 (82 mg, 594 μmol, 2 eq) 및 2-벤질-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (324 mg, 1.49 mmol, 5.0 eq)의 혼합물에 Pd(dppf)Cl2 (11 mg, 14.8 μmol, 0.05 eq)을 N2 하에서 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하고 그 다음 여과하고 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-45%,10min)로 정제하여 TAZ-26 (16 mg, 41.9 μmol, 14.1% 수율)을 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.40-7.21 (m, 5H), 6.98 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 4.17 (s, 2H), 3.41 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 3.34 (s, 2H), 1.66-1.62(m, 4H), 0.96-0.86 (m, 6H). LC/MS [M+H] 382.2 (계산치); LC/MS [M+H] 382.1 (관측치).
실시예 27 5-아미노-N7,N7-디프로필-N2-피리미딘-5-일-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2,7-디카복사미드, TAZ-27의 합성
Figure pct00236
CH3CN (2 mL) 중 5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-카복실산, TAZ-22 (50 mg, 149 μmol, 1 eq), 피리미딘-5-아민 (18.4 mg, 194 μmol, 1.3 eq) 및 1-메틸이미다졸 (42.8 mg, 522 μmol, 3.5 eq)의 혼합물에 클로로-N,N,N',N'-테트라메틸포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트, TCFH (50.19 mg, 179 μmol, 1.2 eq)을 25℃에서 첨가하고, 그 다음 16시간 동안 이 온도에서 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 H2O (10 mL)의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 조합된 유기층을 염수 (5 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (TFA 조건; 칼럼: Phenomenex Luna C18 100*30mm*5um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 10%-40%,10min)로 정제하여 TAZ-27 (13 mg, 31.5 μmol, 21.14% 수율)를 황백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 9.17 (s, 2H), 8.94 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 3.54-3.40 (m, 6H), 1.76-1.59 (m, 4H), 0.99-0.90 (m, 6H). LC/MS [M+H] 413.2 (계산치); LC/MS [M+H] 413.1 (관측치).
실시예 28 2-아미노-N,N-디프로필-3H-벤조[4,5]티에노[3,2-b]아제핀-4-카복사미드, TAZ-28의 합성
Figure pct00237
메틸 3-[비스(tert-부톡시카보닐)아미노]벤조티오펜-2-카복실레이트, 28b의 제조
피리딘, Pyr (30 mL) 중 메틸 3-아미노벤조티오펜-2-카복실레이트, 28a (3 g, 14.5 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 DMAP (177 mg, 1.45 mmol, 0.1 eq)을 첨가하였다. 그 다음, 피리딘 (10 mL) 중 Boc2O (6.32 g, 29.0 mmol, 6.65 mL, 2.0 eq)의 용액을 혼합물에 0℃에서 천천히 첨가하고 그 다음 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 EtOAc(20 ml)에 용해시키고 수성 포화 NaHCO3 및 염수로 연속적으로 세척하였다. 혼합물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 5/1)로 정제하여 메틸 3-[비스(tert-부톡시카보닐)아미노]벤조티오펜-2-카복실레이트 (5.6 g, 13.7 mmol, 94.94% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.83 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.52-7.42 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 1.35 (s, 18H).
tert-부틸 N-[2-(하이드록시메틸)벤조티오펜-3-일]카바메이트, 28c의 제조.
DCM (40 mL) 중 28b (3.8 g, 9.33 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 DIBAL-H (1 M, 37.3 mL, 4.0 eq)을 N2 하에서 0℃에서 천천히 첨가하고 그 다음 동일한 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 물 (2 mL)로 켄칭하고 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 3/1)로 정제하여 28c (2.3 g, 8.23 mmol, 88.29% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.83-7.78 (m, 1H), 7.63 (dd, J = 2.0, 6.8 Hz, 1H), 7.43-7.35 (m, 2H), 4.75 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 1.55 (s, 9H).
tert-부틸 N-(2-포르밀벤조티오펜-3-일)카바메이트, 28d의 제조
DCM (30 mL) 중 28c (1.8 g, 6.44 mmol, 1.0 eq)의 용액에 MnO2 (4.48 g, 51.6 mmol, 8.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 그 다음 12시간 동안 교반하였다. 반응을 여과하고 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0 내지 5/1)로 정제하여 28d (1.2 g, 4.33 mmol, 67.15% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 10.07 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.10 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.55-7.50 (m, 1H), 7.47-7.43 (m, 1H), 1.57 (s, 9H).
에틸 (E)-3-[3-(tert-부톡시카보닐아미노)벤조티오펜-2-일]-2- (시아노메틸)프로프-2-에노에이트, 28e의 제조
톨루엔 (15 mL) 중 28d (0.6 g, 2.16 mmol, 1.0 eq) 및 에틸 3-시아노-2-(트리페닐-포스파닐리덴)프로파노에이트 (1.09 g, 2.81 mmol, 1.3 eq)의 용액에 25℃에서 첨가하고 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 농축하였다. 잔류물을 물로 희석하고 EtOAc(30 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 5/1)로 정제하여 28e (0.6 g, 1.55 mmol, 71.88% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (DMSO, 400MHz) δ 8.08 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.78 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.56-7.47 (m, 2H), 4.28 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.90 (s, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
에틸 2-아미노-3H-벤조티오페노[3,2-b]아제핀-4-카복실레이트, 28f의 제조
EtOAc (2 mL) 중 28e (0.2 g, 518 μmol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (10 mL)을 25℃에서 한번에 첨가하고 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 28f (0.25 g, 조물질)을 녹색 고체로서 얻었다.
2-아미노-3H-벤조티오페노[3,2-b]아제핀-4-카복실산, 28g의 제조
MeOH (6 mL) 중 28f (0.25 g, 774 μmol, 1.0 eq)의 혼합물에 H2O (1 mL) 중 LiOHㆍH2O (162 mg, 3.87 mmol, 5.0 eq)의 용액을 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 pH가 5일 때까지 aq. HCl (1M)로 켄칭하고, 그 다음 농축하여 MeOH를 제거하였다. 원하는 고체는 혼합물로부터 침전되었고 그 다음 여과하여 28g (0.15 g, 조물질)을 황색 고체로서 얻었다
2-아미노-N,N-디프로필-3H-벤조[4,5]티에노[3,2-b]아제핀-4-카복사미드, TAZ-28의 제조
DMF (2 mL) 중 28 gm (0.05 g, 194 μmol, 1.0 eq)의 혼합물에 HATU (88.3 mg, 232 μmol, 1.2 eq) 및 DIEA (125 mg, 968 μmol, 169 μL, 5.0 eq)을 첨가하고 25℃에서 2분 동안 교반하였다. N-프로필프로판-1-아민 (25.5 mg, 252 μmol, 34.7 μL, 1.3 eq)을 혼합물에 첨가하고 그 다음 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 prep-HPLC (칼럼: 나노-마이크로 Kromasil C18 100*30mm 8um; 이동상: [물 (0.1%TFA) - ACN]; B%: 15%-45%, 10min)로 정제하여 TAZ-28 (19 mg, 55.64 μmol, 28.74% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 8.00-7.92 (m, 2H), 7.58-7.53 (m, 2H), 7.18 (s, 1H), 3.48 (s, 6H), 1.74-1.65(m, 4H), 0.94 (s, 6H). LC/MS [M+H] 342.2 (계산치); LC/MS [M+H] 342.2 (관측치).
실시예 29 tert-부틸 (4-((5-아미노-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미도)메틸)벤질)카바메이트, TAZ-29의 합성
Figure pct00238
tert-부틸 (4-((프로필아미노)메틸)벤질)카바메이트, 29b의 제조
tert-부틸 (4-(아미노메틸)벤질)카바메이트, 29a (0.98 g, 4.15 mmol, 1 eq.)을 10 ml의 DMF에 용해시켰다. 탄산칼륨 (2.9 g, 20.7 mmol, 5 eq.)을 첨가하고, 이어서 프로필 브로마이드 (0.38 ml, 4.15 mmol, 1 eq.)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 그 다음 여과하고, 농축하고, 역상 크로마토그래피로 정제하여 29b (0.36 g, 1.29 mmol, 31%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 279.21 (계산치); LC/MS [M+H] 279.24 (관측치).
tert-부틸 (4-((5-아미노-2-브로모-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미도)메틸)벤질)카바메이트, 29c의 제조
5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, TAZ-15 (0.330 g, 1.15 mmol, 1 eq.) 및 29b (0.32 g, 1.15 mmol, 1 eq.)를 5 ml의 DMF에 현탁시켰다. DIPEA (1.2 ml, 6.9 mmol, 6 eq.)을 첨가하고, 이어서 7-아자-벤조트리아졸-1-일옥시-트리피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트, PyAOP (0.90 g, 1.72 mmol, 1.5 eq.)을 첨가하였다. 반응을 LCMS로 모니터링하였다. 출발 물질의 소비 시, 반응 혼합물을 100 ml의 물에 첨가하고, 여과하고, 침전물을 플래시 크로마토그래피 (1% TEA를 갖는 MeOH/DCM)로 정제하여 29c (0.35 g, 0.64 mmol, 56%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 547.14/549.14 (계산치); LC/MS [M+H] 547.40/549.35 (관측치).
TAZ-29의 제조
중간체 29c (0.35 g, 0.64 mmol, 1 eq.)을 5 ml의 THF에 용해시켰다. 트리에틸아민 (0.89 ml, 6.4 mmol, 10 eq.) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물, Pd(dppf)Cl2 (0.023 g, 0.032 mmol, 0.05 eq.)를 첨가하고, 이어서 나트륨 붕소수화물 (0.12 g, 3.2 mmol, 5 eq.)을 첨가하였다. 2시간 후, 또 다른 부분의 나트륨 붕소수화물 (0.073 g, 1.9 mmol, 3 eq.)을 첨가하고 반응을 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고 HPLC로 정제하여 TAZ-29 (0.129 g, 0.28 mmol, 43%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 469.23 (계산치); LC/MS [M+H] 469.42 (관측치).
실시예 30 5-아미노-N-(4-(아미노메틸)벤질)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-30의 합성
Figure pct00239
tert-부틸 (4-((5-아미노-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미도)메틸)벤질)카바메이트, TAZ-29 (0.129 g, 0.28 mmol, 1 eq.)을 100 μl의 TFA에 용해시켰다. 15분 후, 생성물을 농축하고 HPLC로 정제하여 TAZ-30 (0.063 g, 0.17 mmol, 61%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 547.14/549.14 (계산치); LC/MS [M+H] 547.40/549.35 (관측치).
실시예 52 5-아미노-N-[[4-(아미노메틸)-2-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-52의 합성
Figure pct00240
tert-부틸 N-[[4-시아노-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]카바메이트, 52b의 제조
EtOH (20 mL) 및 H2O (4 mL) 중 4-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤조니트릴, 52a (0.5 g, 2.00 mmol, 1.0 eq), 칼륨; 칼륨 (((tert-부톡시카보닐)아미노)메틸)트리플루오로보레이트로도 알려진 (tert-부톡시카보닐아미노)메틸-트리플루오로-보라누이드, CAS 등록 번호 1314538-55-0 (711 mg, 3.00 mmol, 1.5 eq) 및 Na2CO3 (678 mg, 6.40 mmol, 3.2 eq)의 혼합물에 Pd(PPh3)2Cl2 (154 mg, 219 umol, 0.11 eq)을 N2 하에 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고 N2로 여러번 퍼징하고 그 다음 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응을 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 빙수 (5 mL)에 부었고 5분 동안 교반하였다. 수성상을 에틸 아세테이트 (5 mL x 3)로 추출하였다. 조합된 유기상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1, 1/1)로 정제하여 52b (0.5 g, 1.67 mmol, 83.2% 수율)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.95 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.71 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.36 (s, 2H), 1.45 (s, 9H).
tert-부틸 N-[[4-(아미노메틸)-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]카바메이트, 52c의 제조
MeOH (10 mL) 중 52b (0.5 g, 1.67 mmol, 1.0 eq)의 용액에 NH3ㆍH2O (17 mg, 166 umol, 33% 순도, 0.1 eq) 및 라니-Ni (1.43 g, 1.67 mmol, 10% 순도, 1.0 eq)을 N2 하에서 25℃에서 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고 H2로 여러번 퍼징하고, 그 다음 H2 (50 psi) 하에 25℃에서 10시간 동안 교반하였다. 그 다음 여과하고 여과액을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1, 1/1)로 정제하여 52c (200 mg, 657.23 umol, 39.47% 수율)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 6.99-6.92 (m, 2H), 6.89-6.86 (m, 1H), 3.62 (s, 2H), 2.66 (s, 2H), 0.80 (s, 9H)
tert-부틸 N-[[4-(프로필아미노메틸)-3-(트리플루오로메틸) 페닐]메틸]카바메이트, 52d의 제조
MeOH (2 mL) 및 THF (2 mL) 중 52c (190 mg, 624 umol, 1 eq)의 혼합물에 프로판알 (47 mg, 812 umol, 1.3 eq)를 첨가하고, 30분 후에, NaBH3CN (117 mg, 1.87 mmol, 3.0 eq) 및 AcOH (3 mg, 62 umol, 3 uL, 0.1 eq)을 25℃에서 첨가하고, 그 다음 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3um; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 30%-60%, 12 min)로 정제하여 52d (100 mg, 277 umol, 44.39% 수율, 96% 순도)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.65-7.57 (m, 2H), 7.53-7.50 (m, 1H), 4.27 (s, 2H), 3.91 (s, 2H), 2.58 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.63-1.59 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 0.93 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
tert-부틸 N-[[4-[[(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-프로필-아미노]메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]카바메이트, 52e의 제조
DMF (1 mL) 중 5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, 16a (24.0 mg, 115 umol, 1.0 eq)의 용액에 DIEA (74 mg, 577 umol, 100 uL, 5 eq) 및 PyAOP (66 mg, 127 umol, 1.1 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고, 30분 동안 교반하고, 그 다음 52d (60 mg, 173.22 umol, 1.5 eq)을 첨가한 다음, 추가 2 시간 동안 교반하였다. 그 이후로는, 반응을 농축하고 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 25%-50%, 10 min)로 정제하여 52e (15 mg, 27.95 umol, 24.21% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.75-7.68 (m, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.57 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.30-7.10 (m, 2H), 4.92 (s, 2H), 4.29 (s, 2H), 3.48 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.32 (s, 2H), 1.66-1.64 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 0.94-0.86 (m, 3H). LC/MS [M+H] 537.2 (계산치); LC/MS [M+H] 537.1 (관측치).
TAZ-52의 제조
EtOAc (2 mL) 중 52e (10 mg, 18.6 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 140 uL, 30 eq)을 한번에 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 농축하여 TAZ-52 (8 mg, 18.3 umol, 98.35% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.80 (s, 1H), 7.70-7.63 (m, 2H), 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.20-7.17 (m, 1H), 7.03 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.85 (s, 2H), 4.13 (s, 2H), 3.45-3.37 (m, 2H), 3.31 (s, 2H), 1.62-1.50 (m, 2H), 0.87-0.68 (m, 3H). LC/MS [M+H] 437.2 (계산치); LC/MS [M+H] 437.1 (관측치).
실시예 54 5-아미노-N-[[4-(아미노메틸)-2-(트리플루오로메틸)페닐] 메틸]-N-프로필-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-7-카복사미드, TAZ-54의 합성
Figure pct00241
4-시아노-N-프로필-2-(트리플루오로 메틸)벤즈아미드, 54b의 제조
DMF (20 mL) 중 4-브로모-3-(트리플루오로메틸)벤조니트릴, 54a (4.00 g, 16.0 mmol, 1.0 eq)의 용액에 프로판-1-아민 (2.84 g, 48.0 mmol, 3.95 mL, 3.0 eq), Et3N (4.86 g, 48.0 mmol, 6.68 mL, 3.0 eq) 및 Pd(dppf)Cl2 (585 mg, 800 umol, 0.05 eq)을 N2 하에 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고 CO로 여러번 퍼징하고, 혼합물을 CO (50psi) 하에 80℃에서 15시간 동안 교반하였다. 물 (50 mL)을 혼합물에 첨가하고 수성상을 에틸 아세테이트 (30 mL*3)로 추출하고, 조합된 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1, 1/1)로 정제하여 54b (4.00g, 15.6 mmol, 97.5% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 (s, 1H), 8.01 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.49 (br s, 1H), 3.37 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.66 - 1.54 (m, 2H), 0.92 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
tert-부틸 N-[[4-(프로필 카바모일)-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]카바메이트, 54c의 제조
MeOH (30 mL) 중 54b (2.30 g, 8.98 mmol, 1.0 eq)의 용액에 라니 Ni (0.5 g, 1.0 eq) 및 Boc2O (9.80 g, 44.8 mmol, 10.3 mL, 5.0 eq)을 N2 하에서 25℃에서 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고 H2로 여러번 퍼징하였다. 혼합물을 H2 (50 psi) 하에 25℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1, 1/1)로 정제하여 54c (2.50 g, 6.94 mmol, 77.2% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.26 (s, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.53 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.44 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 1.70-1.62 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.00 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
tert-부틸 N-[[4-(프로필아미노메틸)-3-(트리플루오로 메틸)페닐]메틸]카바메이트, 54d의 제조
THF (30 mL) 중 54c (1.03 g, 2.86 mmol, 1.0 eq) 및 RhH(CO)(PPh3)3 (263 mg, 286 umol, 0.1 eq)의 혼합물에 디페닐실란 (3.16 g, 17.1 mmol, 3.16 mL, 6.0 eq)을 N2 하에서 20℃에서 한번에 첨가하고, 그 다음 20℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1, 0/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올=5/1)로 정제하여 54d (0.4 g, 1.15 mmol, 40.40% 수율)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.89 (s, 1H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.48 (s, 2H), 4.29 (s, 2H), 3.08-3.01 (m, 2H), 1.82-1.71 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.05 (t, J = 7.6 Hz, 3H)
tert-부틸 N-[[4-[[(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-프로필-아미노] 메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]카바메이트, 54e의 제조
DMF (1 mL) 중 5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, 16a (12.0 mg, 57.7 umol, 1.0 eq)의 용액에 HATU (19.7 mg, 52.0 umol, 0.9 eq) 및 Et3N (17.53 mg, 173 umol, 24.1 uL, 3.0 eq)을 20℃에서 N2 하에서 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 10분 동안 교반하고, 그 다음 54d (20 mg, 57.7 umol, 1.0 eq)을 첨가한 다음, 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.1%TFA)-ACN]; B%: 30%-55%, 10min)로 정제하여 54e (5.00 mg, 7.47 umol, 12.9% 수율, 97.1% 순도, TFA)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.74 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.60-7.52(m, 3H), 7.22 (s, 1H), 7.12 (br d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.82 (br s, 2H), 4.45 (s, 2H), 3.51 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.42-3.35 (m, 2H), 1.75-1.64 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 0.96-0.90(m, 3H). LC/MS [M+H] 537.2 (계산치); LC/MS [M+H] 537.1 (관측치).
TAZ-54의 제조
EtOAc (1 mL) 중 54e (50.0 mg, 93.2 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 2.33 mL, 100 eq)을 20℃에서 첨가하고 그 다음 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고 냉동-건조하여 TAZ-54 (30.0 mg, 62.8 umol, 67.4% 수율, 99.0% 순도, HCl)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.67 (br s, 1H), 7.65-7.61 (m, 3H), 7.10 (s, 1H), 7.04 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.75 (s, 2H), 4.22 (s, 2H), 3.45-3.38 (m, 2H), 3.29 (br s, 2H), 1.63-1.52 (m, 2H), 0.79 (br t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 437.2 (계산치); LC/MS [M+H] 437.1 (관측치).
실시예 65 5-아미노-2-[5-(디메틸아미노)펜틸]-N-[[4-(메틸아미노메틸)페닐]메틸]-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-65의 합성
Figure pct00242
Figure pct00243
tert-부틸 N-[[4-[[(5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-프로필-아미노]메틸]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트, 65b의 제조
DMF (20 mL) 중 5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, 65a (1.0 g, 3.48 mmol, 1.0 eq)의 용액에 HATU (1.46 g, 3.83 mmol, 1.1 eq), DIEA (1.35 g, 10.45 mmol, 1.82 mL, 3.0 eq) 및 tert-부틸 N-메틸-N-[[4-(프로필아미노메틸) 페닐]메틸]카바메이트 (1.07 g, 3.66 mmol, 1.05 eq)을 첨가하고, 그 다음 1시간 동안 25℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)의 첨가로 켄칭하고 그 다음 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 최종적으로, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 200/1 내지 0/1)로 정제하여 65b (1.80 g, 3.21 mmol, 92.04% 수율)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.25-7.15 (m, 4H), 6.92 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 3.40 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.86 (s, 2H), 2.81 (s, 3H), 1.69-1.58 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 0.89 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
tert-부틸 N-[[4-[[[5-아미노-2-(4-시아노부트-1-인일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노]메틸]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트, 65c의 제조
TEA (13.2 mL) 및 DMF (44 mL) 중 65b (2.25 g, 4.01 mmol, 1.0 eq) 및 펜트-4-인니트릴 (951 mg, 12.0 mmol, 3.0 eq)의 혼합물에 Pd(PPh3)2Cl2 (140.6 mg, 200.34 umol, 0.050 eq), CuI (152.6 mg, 801.38 umol, 0.20 eq) 및 PPh3 (210 mg, 801 umol, 0.20 eq)을 15℃에서 첨가하고 그 다음 3시간 동안 140℃에서 N2 분위기 하에서 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 H2O (220 mL)의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 DCM/이소프로판올=3/1 (200 mL x 3)로 추출하였다. 조합된 유기층을 H2O (40 mL x 4)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 200/1 내지 0/1 내지 에틸 아세테이트/MeOH = 50/1 내지 5/1)로 정제하여 65c (1.62 g, 2.89 mmol, 72.23% 수율)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.21-7.20 (m, 4H), 7.00 (s, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.73 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 3.40 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.83-2.81 (m, 7H), 2.68-2.65 (m, 2H), 1.64-1.62 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 0.89 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
tert-부틸 N-[[4-[[[5-아미노-2-(4- 시아노부틸)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노]메틸]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트, 65d의 제조
MeOH (30 mL) 중 65c (1.47 g, 2.63 mmol, 1.0 eq)의 용액에 Pd(OH)2/C (369 mg, 262 umol, 10% 순도, 0.10 eq)을 N2 분위기 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 H2 (50 Psi) 하에 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 농축하여 65d (1.15 g, 2.04 mmol, 77.67% 수율)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.21-7.19 (m, 4H), 6.86 (s, 1H), 6.67 (s, 1H), 4.74 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 3.40 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.86-2.82 (m, 5H), 2.37 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.88-1.83 (m, 2H), 1.78-1.74 (m, 2H), 1.64-1.61 (m, 2H), 1.49 (m, 9H), 0.89 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
tert-부틸 N-[[4-[[[5-아미노-2-(5-아미노펜틸)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노]메틸]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트, 65e의 제조
MeOH (23 mL) 중 65d (1.15 g, 2.04 mmol, 1.0 eq)의 용액에 NH3ㆍH2O (2.86 g, 20.4 mmol, 3.14 mL, 25% 순도, 10 eq) 및 Ni (100 mg)을 N2 하에 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고 H2로 여러번 퍼징하였다. 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 H2 (50 psi) 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 농축하여 65e (1.03 g, 1.81 mmol, 88.93% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
tert-부틸 N-[[4-[[[5-아미노-2-[5- (디메틸아미노)펜틸]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노]메틸]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트, 65f의 제조
MeOH (8 mL) 중 65e (300 mg, 528 umol, 1.0 eq)의 용액에 AcOH (3.1 mg, 52.8 umol, 0.10 eq), HCHO (171.5 mg, 2.11 mmol, 157.3 uL, 37% 순도, 4.0 eq) 및 NaBH3CN (99.6 mg, 1.59 mmol, 3.0 eq)을 첨가하고, 그 다음 1시간 동안 25℃에서 교반하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)의 첨가로 켄칭하고 농축하여 MeOH를 제거하였다. 수성상을 DCM/이소프로판올=3/1 (10 mL x 3)로 추출하였다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 65f (314 mg, 조물질)을 황색 오일로서 얻었다.
TAZ-65의 제조
H2O (0.5 mL) 중 65f (50 mg, 83.9 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl (12 M, 140 uL, 20.0 eq)을 첨가하고 그 다음 1시간 동안 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 Prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물(0.1%TFA)-ACN]; B%: 5%-35%, 10 min)로 정제하여 TAZ-65 (10 mg, 13.74 umol, 16.37% 수율, 99.44% 순도, 2TFA)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz,) δ 7.50-7.40 (m, 4H), 7.09 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 4.78 (s, 2H), 4.19 (s, 2H), 3.45-3.35 (m, 4H), 3.32 (s, 2H), 3.14-3.10 (m, 2H), 2.88 (s, 6H), 2.72 (s, 3H), 1.80-1.74 (m, 4H), 1.66-1.64 (m, 2H), 1.49-1.47 (m, 2H), 0.89-0.86 (m, 3H). LC/MS [M+H] 496.3 (계산치); LC/MS [M+H] 496.3 (관측치).
실시예 109 5-아미노-2-(5-아미노펜틸)-N-(3-(3,3-디메틸부탄아미도)프로필)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-109의 합성
Figure pct00244
5-아미노-2-(5-(비스(tert-부톡시카보닐)아미노)펜틸)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, 109a (115 mg, 0.23 mmol, 1 eq.) 및 3,3-디메틸-N-(3-(프로필아미노)프로필)부탄아미드 (50 mg, 0.23, 1 eq.)를 8:3 ACN:DCM (2.75 ml)에 용해시켰다. DIPEA (0.121 ml, 0.7 mmol, 3 eq.)을 첨가하고, 이어서 7-아자-벤조트리아졸-1-일옥시-트리피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트, PyAOP (0.122 m, 0.23 mmol, 1 eq.)을 첨가하였다. 용액을 주위 온도에서 교반하였다. LCMS에 의한 완료 시, 반응 혼합물을 농축하고 HPLC로 정제하여 [아미드]를 얻었고, 이것을 후속적으로 최소 TFA에 용해시키고 15분 동안 정치되도록 하였다. 용액을 농축하고 디에틸 에테르로 분쇄하여 TAZ-109를 트리플루오로아세테이트 염 (61.4 mg, 0.102 mmol, 44%)으로서 얻었다. LC/MS [M+H] 490.32 (계산치); LC/MS [M+H] 490.39 (관측치).
실시예 133 tert-부틸 (3-(5-아미노-2-(5-아미노펜틸)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미도)프로필)카바메이트, TAZ-133의 합성
Figure pct00245
5-(5-아미노-7-(에톡시카보닐)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)펜탄-1-아미늄 트리플루오로아세테이트, 133b의 제조
에틸 5-아미노-2-(5-(비스(tert-부톡시카보닐)아미노)펜틸)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실레이트, 133a (0.188 g, 0.36 mmol, 1 당량)을 최소 TFA에 용해시켰다. 완전한 탈보호 시, 용액을 농축하고 생성물을 디에틸 에테르로부터 침전시켜 133b (0.082 g, 0.188 mmol, 52%)을 황색 분말로서 얻었다. LC/MS [M+H] 322.16 (계산치); LC/MS [M+H] 322.25 (관측치).
5-아미노-2-(5-(((벤질옥시)카보닐)아미노)펜틸)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, 133c의 제조
중간체 133b (0.296 g, 0.68 mmol, 1 당량)을 2 ml의 DMF에 현탁시켰다. 콜리딘 (0.27 ml, 2 mmol, 3 당량)을 첨가하고, 이어서 벤질 클로로포르메이트, Cbz-Cl, CAS 등록 번호 501-53-1 (0.1 ml, 0.68 mmol, 1 당량)을 첨가하였다. 반응을 LCMS로 모니터링하였다. 아민 출발 물질의 소비 시, 반응을 농축하고 7 ml 3:1:3 THF:MeOH:물에 재용해시켰다. 수산화리튬 (0.16 g, 6.8 mmol, 10 당량)을 첨가하고 반응을 실온에서 교반하였다. 완료 시, 반응 혼합물을 농축하고 역상 HPLC로 정제하여 133c (0.246 g, 0.58 mmol, 85%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 428.16 (계산치); LC/MS [M+H] 428.32 (관측치).
벤질 (5-(5-아미노-7-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)(프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)펜틸)카바메이트, 133d의 제조
중간체 133c (0.29 g, 0.68 mol, 1 당량) 및 tert-부틸 (3-(프로필아미노)프로필)카바메이트 (0.225 g, 1.0 mmol, 1.53 당량)를 1 ml의 DMF에 용해시켰다. 디이소프로필에틸아민, DIPEA (0.59 ml, 1.0 mmol, 1.53 당량)을 첨가하고, 이어서 PyAOP (0.541 g, 1.0 mmol, 1.53 당량)을 첨가하였다. 반응을 실온에서 교반하고, 그 다음 농축하고 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 133d (0.201 g, 0.32 mmol, 47%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 626.34 (계산치); LC/MS [M+H] 626.51 (관측치).
TAZ-133의 제조
중간체 133d (0.2 g, 0.32 mmol, 1 당량)을 2 ml의 MeOH에 용해시켰다. 트리에틸아민 (0.1 ml) 및 포름산 (0.049 ml, 1.29 mmol, 4 당량)를 첨가하고, 이어서 10% w/w Pd/C (0.04 g)을 첨가하였다. 교반된 반응을 60℃로 가열시켰다. 1시간 후, 20% w/w Pd(OH)2 (0.02 g)을 첨가하였다. 완료 시, 반응을 여과하고, 농축하고, HPLC로 정제하여 TAZ-133 0.139 g, 0.28 mmol, 88%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 492.30 (계산치); LC/MS [M+H] 492.45 (관측치).
실시예 176 5-아미노-N-에톡시-2-[2-(4-피페리딜)에틸]-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-176의 합성
Figure pct00246
에틸 5-아미노-2-[2-(1-tert- 부톡시카보닐-4-피페리딜)에티닐]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실레이트, 176a의 제조
CH3CN (60 mL) 중 에틸 5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실레이트, 15g (2 g, 6.35 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 tert-부틸 4-에티닐피페리딘-1-카복실레이트 (1.73 g, 8.25 mmol, 1.3 eq), Cs2CO3 (6.20 g, 19.0 mmol, 3.0 eq), CuI (242 mg, 1.27 mmol, 0.2 eq) 및 Pd(PPh3)2Cl2 (445 mg, 635 umol, 0.1 eq)을 N2 하에서 25℃에서 한번에 첨가하고 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0,10/1)로 정제하여 176a (3.5 g, 조물질)을 황색 고체로서 얻었다.
5-아미노-2-[2-(1-tert-부톡시카보닐-4-피페리딜) 에티닐]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, 176b의 제조
EtOH (50 mL) 및 H2O (8 mL) 중 176a (3.5 g, 7.89 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 LiOH.H2O (1.32 g, 31.6 mmol, 4.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 잔류물을 물 (30 mL)로 희석하였다. 그 다음 혼합물을 여과하였다. 필터 케이크를 25℃에서 0.5시간 동안 CH3CN로 분쇄하고, 그 다음 여과하여 176b (2.3 g, 5.54 mmol, 70.2% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
tert-부틸 4-[2-[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]에티닐]피페리딘-1-카복실레이트, 176c의 제조
DCM (10 mL) 및 DMA (10 mL) 중 176b (1 g, 2.41 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 N-에톡시프로판-1-아민 (353 mg, 2.53 mmol, 1.05 eq, HCl) 및 EDCI (1.85 g, 9.63 mmol, 4.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 DCM을 제거하고, 잔류물을 물 (50 mL)로 희석하고 혼합물의 pH를 sat, NaHCO3로 약 8로 조정하고, 그 다음 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 에틸 아세테이트/MeOH=1/0, 10/1)로 정제하여 176c (0.63 g, 1.26 mmol, 52.3% 수율)을 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.27 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 3.89 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.74-3.70 (m, 2H), 3.69 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.25-3.19 (m, 3H), 2.99 (s, 2H), 1.89-1.85 (m, 2H), 1.79-1.67 (m, 2H), 1.65-1.59 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.15 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.95 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 501.2 (계산치); LC/MS [M+H] 501.1 (관측치).
tert-부틸 4-[2-[5-아미노-7-[에톡시(프로필) 카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]에틸]피페리딘-1-카복실레이트, 176d의 제조
MeOH (15 mL) 중 176c (0.45 g, 899 umol, 1.0 eq)의 용액에 Pd(OH)2/C (0.2 g, 10% 순도)을 N2 하에 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고 H2로 여러번 퍼징하였다. 혼합물을 H2 (50psi) 하에 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 0/1)로 정제하여 176d (0.3 g, 594 umol, 66.13% 수율)을 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.32 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 4.06 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 3.89 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.69 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.98 (s, 2H), 2.85 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.73 (s, 2H), 1.77-1.73 (m, 4H), 1.69-1.60 (m, 2H), 1.58-1.50 (m, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.16 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.13-1.05 (m, 2H), 0.95 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 501.2 (계산치); LC/MS [M+H] 505.3 (관측치).
TAZ-176의 제조
EtOAc (5 mL) 중 176d (0.3 g, 594 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 HCl/EtOAc (4 M, 10 mL)을 25℃에서 한번에 첨가하고 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 TAZ-176 (0.3 g, 조물질, HCl)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.45 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 3.93 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.72 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.45-3.37 (m, 4H), 3.05-2.91 (m, 4H), 2.02 (d, J = 13.6 Hz, 2H), 1.80-1.65 (m, 5H), 1.52-1.35 (m, 2H), 1.18 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.97 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 405.2 (계산치); LC/MS [M+H] 405.1 (관측치).
실시예 183 5-아미노-2-(아제티딘-3-일메틸)-N-에톡시-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-183의 합성
Figure pct00247
에틸 5-아미노-2-[(1-tert-부톡시카보닐 아제티딘-3-일)메틸]- 6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실레이트, 183a의 제조
tert-부틸 3-메틸렌아제티딘-1-카복실레이트 (2.25 g, 13.3 mmol, 2 eq)을 THF (50 mL) 중 9-BBN (0.5 M, 53.3 mL, 4 eq)로 처리하고 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 가열하였다. 수득한 혼합물을 디옥산 (50 mL) 및 H2O (5 mL) 중 에틸 5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실레이트, 15g (2.1 g, 6.66 mmol, 1 eq), Pd2(dba)3 (610 mg, 666 umol, 0.1 eq), XPhos (953 mg, 2.00 mmol, 0.3 eq) 및 Na2CO3 (2.12 g, 20.0 mmol, 3 eq)의 교반 혼합물에 전달하였다. 수득한 혼합물을 N2 하에 100℃에서 12시간 동안 교반하고, 그 다음 여과하고, 여과액을 농축하여 THF 및 디옥산을 제거하고, EtOAc (100 mL) 및 물 (100 mL)을 혼합물에 부었다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1:0 내지 0:1, 그 다음 EtOAc: MeOH = 10:1)로 정제하여 183a (2 g, 2.47 mmol, 37.0% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
5-아미노-2-[(1-tert-부톡시카보닐아제티딘-3-일)메틸]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, 183b의 제조
THF (10 mL) 및 H2O (10 mL) 중 183a (2 g, 4.93 mmol, 1 eq)의 혼합물에 LiOH.H2O (621 mg, 14.8 mmol, 3 eq)을 첨가하고, 그 다음 15℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 THF를 제거하고, 그 다음 수성상의 pH를 HCl(4M)로 ~7로 조정하였다. 원하는 고체는 혼합물로부터 침전되었고, 여과시켜 183b (1.5 g, 3.97 mmol, 80.6% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ 7.65 (s, 1H), 6.94 (s, 2H), 6.66 (s, 1H), 4.05-3.93 (m, 2H), 3.70-3.55 (m, 2H), 3.07 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 2.88 (s, 2H), 2.80-2.65 (m, 1H), 1.43 (s, 9H).
tert-부틸 3-[[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-카복실레이트, 183c의 제조
DMA (3 mL) 및 DCM (3 mL) 중 183b (0.2 g, 530 umol, 1 eq) 및 N-에톡시프로판-1-아민 (96.2 mg, 689 umol, 1.3 eq, HCl)의 혼합물에 EDCI (406 mg, 2.12 mmol, 4 eq)을 첨가하고, 그 다음 15℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 Prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-55%,8min)로 정제하여 183c (130 mg, 273 umol, 51.6 % 수율, 97.2% 순도)을 밝은 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400MHz, MeOD) δ 7.47 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.07 (br t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.95 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.82-3.63 (m, 4H), 3.44 (s, 2H), 3.18 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 3.02-2.81 (m, 1H), 1.76 (sxt, J = 7.2 Hz, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.99 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 463.2 (계산치); LC/MS [M+H] 463.1 (관측치).
TAZ-183의 제조
DCM (10 mL) 중 183c (0.11 g, 238 umol, 1 eq)의 혼합물에 TFA (1.54 g, 13.5 mmol, 1 mL, 56.8 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물의 pH를 NaHCO3의 포화 수용액으로 ~7로 조정하고, 그 다음 DCM/i-PrOH(3:1, 10mL*3)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하여 TAZ-183 (60 mg, 151 umol, 63.3% 수율, 90.95% 순도)을 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400MHz, MeOD) δ 7.20 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 4.04 (br t, J = 9.6 Hz, 2H), 3.83-3.75 (m, 4H), 3.59 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.36-3.30 (m, 1H), 3.05 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 2.88 (s, 2H), 1.62 (sxt, J = 7.2 Hz, 2H), 1.08-1.00 (m, 3H), 0.85 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 363.2 (계산치); LC/MS [M+H] 363.1 (관측치).
실시예 185 사이클로부틸 N-[3-[[5-아미노-2-(4-피페리딜메틸)-6H- 티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노]프로필]카바메이트, TAZ-185의 합성
Figure pct00248
에틸 5-아미노-2-[(1-tert-부톡시카보닐-4-피페리딜) 메틸]-6H- 티에노[3,2-b] 아제핀-7-카복실레이트, 185a의 제조
tert-부틸 4-메틸렌피페리딘-1-카복실레이트 (4.51 g, 22.8 mmol, 2.0 eq) 및 9-BBN (1 M, 57.1 mL, 5.0 eq)의 혼합물을 70℃로 가열시키고 70℃에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 에틸 5-아미노-2-브로모-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실레이트, 15g (3.60 g, 11.4 mmol, 1.0 eq), Xantphos (1.59 g, 2.74 mmol, 0.24 eq), Pd2(dba)3 (836 mg, 913 umol, 0.08 eq), K2CO3 (4.74 g, 34.2 mmol, 3.0 eq), H2O (5 mL) 및 디옥산 (50 mL)을 이러한 혼합물에 첨가하고, 그 후, 20℃로 냉각시키고, 그 다음 혼합물을 N2 하에 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 물 (200 mL)을 첨가하고 수성상을 에틸 아세테이트 (50 mL*4)로 추출하고, 조합된 유기상을 염수 (100 mL*1)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1, 0/1)로 정제하여 185a (1.8 g, 4.15 mmol, 36.35% 수율)을 갈색 오일로서 얻었다.
5-아미노-2-[(1-tert-부톡시카보닐-4-피페리딜)메틸]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, 185b의 제조
EtOH (3 mL) 및 H2O (5 mL) 중 L-185a (1.80 g, 4.15 mmol, 1.0 eq)의 용액에 LiOHㆍH2O (696 mg, 16.6 mmol, 4.0 eq)을 N2 하에서 20℃에서 한번에 첨가하고, 그 다음 20℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 pH=6까지 HCl (4 M)로 켄칭하고, 그 다음 EtOH를 진공에서 제거하였다. 침전을 여과하고 건조시켜 185b (1.20 g, 2.96 mmol, 71.2% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.61 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 3.86 (d, 2.0 Hz, 2H), 2.92 (s, 2H), 2.65 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 1.65-1.60 (m, 3H), 1.35 (s, 9H), 1.07-0.96 (m, 2H)
tert-부틸 4-[[5-아미노-7-[3-(사이클로부톡시카보닐아미노) 프로필-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]피페리딘-1-카복실레이트, 185c의 제조
DMF (2 mL) 중 L-185b (200 mg, 493 umol, 1.0 eq) 및 사이클로부틸 N-[3-(프로필아미노) 프로필]카바메이트 (148 mg, 591 umol, 1.2 eq, HCl)의 혼합물에 HATU (187 mg, 493 umol, 1.0 eq) 및 DIEA (191 mg, 1.48 mmol, 257 uL, 3.0 eq)을 N2 하에서 20℃에서 한번에 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 물 (10 mL)을 첨가하고 수성상을 에틸 아세테이트 (10 mL*3)로 추출하고, 조합된 유기상을 염수 (15 mL*2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5/1, 0/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올=10/1)로 정제하여 185c (180 mg, 299 umol, 60.6% 수율)을 갈색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 6.88 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.88-4.80 (m, 1H), 4.08 (d, J = 12.4 Hz, 2H), 3.49 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.41 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.11 (s, 2H), 2.75 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 2.36-2.23 (m, 2H), 1.86-1.59 (m, 10H), 1.47 (s, 9H), 1.22-1.09 (m, 2H), 0.90 (t, J = 4.0, 3H)
TAZ-185의 제조
EtOAc (1 mL) 중 185c (180 mg, 299 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 3.74 mL, 50 eq)을 N2 하에서 20℃에서 한번에 첨가하고, 그 다음 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하여 TAZ-185 (140 mg, 260 umol, 86.98% 수율, HCl)을 황색 오일로서 얻었다.
실시예 198 5-아미노-N-에톡시-2-(4-피페리딜메틸)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-198의 합성
Figure pct00249
tert-부틸 4-[[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]피페리딘-1-카복실레이트, 198a의 제조
DMA (1 mL) 및 DCM (2 mL) 중 5-아미노-2-[(1-tert-부톡시카보닐-4-피페리딜)메틸]-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-7-카복실산, 185b (200 mg, 493 umol, 1.0 eq) 및 N-에톡시프로판-1-아민 (82.6 mg, 591 umol, 1.2 eq, HCl)의 혼합물에 EDCI (378 mg, 1.97 mmol, 4.0 eq)을 20℃에서 N2 하에서 첨가하고, 그 다음 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. DCM (2 mL)을 진공에서 제거하고, 그 다음 수성상을 pH=8까지 aq NaHCO3로 켄칭하고, 수성상을 EtOAc (15 mL*3)로 추출하고, 조합된 유기상을 염수 (15 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5/1, 0/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올=10/1)로 정제하여 198a (150 mg, 305 umol, 61.9% 수율)을 갈색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.35 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.08 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 3.90 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.71 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.33 (s, 2H), 3.08 (d, J = 8.0 Hz 2H), 2.76 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.80-1.70 (m, 5H), 1.47 (s, 9H), 1.20-1.10 (m, 5H), 0.97 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
TAZ-198의 제조
EtOAc (1 mL) 중 198a (150 mg, 305 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 3.82 mL, 50 eq)을 20℃에서 N2 하에서 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하여 TAZ-198 (100 mg, 234 umol, 76.6% 수율, HCl)을 황색 오일로서 얻었다.
실시예 238 사이클로부틸 N-[2-[[5-아미노-2-(아제티딘-3-일메틸)-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노] 옥시에틸]카바메이트, TAZ-238의 합성
Figure pct00250
tert-부틸 3-[[5-아미노-7-[2-(사이클로부톡시카보닐아미노)에톡시-프로필-카바모일] -6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-카복실레이트, 238a의 제조
DCM (2 mL) 및 DMA (2 mL) 중 5-아미노-2-[(1-tert-부톡시카보닐아제티딘-3-일)메틸] -6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, 261a (200 mg, 529.86 umol, 1 eq) 및 사이클로부틸 N-[2-(프로필아미노옥시)에틸]카바메이트 (174.09 mg, 688.82 umol, 1.3 eq, HCl)의 용액에 EDCI (304.72 mg, 1.59 mmol, 3 eq)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 H2O (10 mL)로 희석하고 혼합물의 pH를 0℃에서 aq. Na2CO3로 ~9로 조정하고 EtOAc (10 mL * 3)로 추출하였다. 조합된 유기층을 염수 (5 mL * 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0 내지 0/1) 및 그 다음 (SiO2, EtOAc: MeOH = 1:0 내지 3:1)로 정제하여 238a (0.2 g, 347.39 umol, 65.56% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.32 (s, 1H), 6.69 (s, 1H), 4.81 (s, 1H), 4.08-3.99 (m, 2H), 3.89 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.72-3.62 (m, 4H), 3.29-3.25 (m, 2H), 3.09 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 3.02 (s, 2H), 2.95-2.83 (m, 1H), 2.32-2.21 (m, 2H), 2.05-1.94 (m, 2H), 1.77-1.54 (m, 4H), 1.45-1.40 (m, 9H), 0.94 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 576.3 (계산치); LC/MS [M+H] 576.3 (관측치).
TAZ-238의 제조
DCM (6 mL) 중 238a (0.31 g, 538 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 TFA (1.23 g, 10.8 mmol, 797 uL, 20.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 그 다음 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었고, 잔류물을 H2O (15 mL)로 희석하고, 혼합물을 MTBE(10 mL*2)로 추출하여 과잉의 TFA를 제거하고, 수성상을 냉동건조시켜 TAZ-238 (0.38 g, 521 umol, 96.7% 수율, 96.4% 순도, TFA 염)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.47 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.81-4.74 (m, 1H), 4.22-4.13 (m, 2H), 3.96-3.86 (m, 4H), 3.71 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.41 (s, 2H), 3.29-3.22 (m, 5H), 2.25 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 2.03-1.89 (m, 2H), 1.80-1.55 (m, 4H), 0.96 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 476.2 (계산치); LC/MS [M+H] 476.1 (관측치).
실시예 253 5-아미노-2-(아제티딘-3-일메틸) -N-이소프로폭시-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-253의 합성
Figure pct00251
N-이소프로폭시프로판-1-아민의 제조
THF (15 mL) 중 O-이소프로필하이드록실아민 (2 g, 17.9 mmol, 1 eq, HCl)의 용액에 H2O (5 mL) 및 tert-부톡시카보닐 tert-부틸 카보네이트 (5.87 g, 26.9 mmol, 6.18 mL, 1.5 eq) 중 NaHCO3 (3.01 g, 35.8 mmol, 1.39 mL, 2 eq)의 용액을 첨가하고, 그 다음 20℃에서 2시간 동안 N2 분위기 하에서 교반하였다. H2O (50 mL)을 혼합물에 첨가하고 그 다음 EtOAc (80 mL x 3)로 추출하고, 조합된 유기상을 염수 (50 mL x 3)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 조 생성물을 (석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 1:0,1:1)로 용리된 실리카겔 크로마토그래피로 정제하였다. tert-부틸 N-이소프로폭시카바메이트 (2.81 g, 16.0 mmol, 89.46% 수율)을 담황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.00 (br s, 1H), 4.10-1.00 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.22 (d, J = 6.4 Hz, 6H).
DMF (10 mL) 중 tert-부틸 N-이소프로폭시카바메이트 (2.80 g, 15.9 mmol, 1 eq)의 용액에 NaH (959 mg, 23.9 mmol, 60% 순도, 1.5 eq)을 0℃에서 N2 하에서 첨가하고 0.5시간 동안 교반하고, 그 다음 1-요오도프로판 (5.43 g, 32.0 mmol, 3.12 mL, 2 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 N2 분위기 하에서 교반하였다. 반응 혼합물을 (50 mL) 포화NH4Cl 용액의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 EtOAc (80 mL x 3)로 추출하고, 조합된 유기상을 염수 (30 mL x 3)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 조 생성물을 석유 에테르/에틸 아세테이트=0:1-1:1로 용리된 실리카겔 크로마토그래피로 정제하였다. tert-부틸 N-이소프로폭시-N-프로필-카바메이트 (3.8 g, 조물질)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 4.12-4.02 (m, 1H), 3.39 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.70-1.61 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.21 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 0.90 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
EtOAc (5 mL) 중 tert-부틸 N-이소프로폭시-N-프로필-카바메이트 (3.2 g, 14.7 mmol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 55.2 mL, 15 eq)을 첨가하고, 그 다음 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 얻었다. N-이소프로폭시프로판-1-아민 (1.61 g, 10.48 mmol, 71.16% 수율, HCl)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 4.76-4.67 (m, 1H), 3.23-3.16 (m, 2H), 2.00-1.89 (m, 2H), 1.41 (d, J = 6.2 Hz, 6H), 1.03 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
tert-부틸 3-[[5-아미노-7-[이소프로폭시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-카복실레이트, 253a의 제조
DMA (2 mL) 및 DCM (2 mL) 중 5-아미노-2-[(1-tert-부톡시카보닐아제티딘-3-일)메틸]-6H-티에노 [3,2-b]아제핀-7-카복실산, 183b (400 mg, 1.06 mmol, 1 eq) 및 N-이소프로폭시프로판-1-아민 (244 mg, 1.59 mmol, 1.50 eq, HCl)의 혼합물에 EDCI (610 mg, 3.18 mmol, 3 eq)을 첨가하고, 그 다음 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 H2O (20 mL)을 첨가하고 그 다음 혼합물의 pH를 aq NaHCO3으로 ~8로 조정하고, EtOAc (30 mL x 3)로 추출하고, 조합된 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 조 생성물을 (에틸 아세테이트 : 메탄올 = 1:0,5:1)로 용리된 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 253a (410 mg, 860 umol, 81.17% 수율)를 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD,400MHz) δ 7.34 (s, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.20-4.15 (m, 1H), 4.09-4.00 (m, 2H), 3.74-3.63 (m, 4H), 3.06 (d, J = 8.0 Hz,2H), 2.95 (s, 2H), 2.90-2.84 (m, 1H), 1.76-1.67 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.17 (d, J = 6.2 Hz, 6H), 0.94 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
TAZ-253의 제조
CH3CN (2 mL) 및 H2O (2 mL) 중 253a (410 mg, 860 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (785 mg, 6.88 mmol, 510 uL, 8 eq)을 첨가하고, 그 다음 80℃에서 2시간 동안 N2 분위기 하에서 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 CH3CN을 제거하고, 수성상을 MTBE (15 mL x 3)로 추출하여 과잉의 TFA를 제거하고, 수성상을 냉동건조시켜 TAZ-253 (320 mg, 850 umol, 98.80% 수율)를 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD,400MHz) δ 7.43 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 4.27-4.20 (m, 1H), 4.20-4.14 (m, 2H), 3.97-3.87 (m, 2H), 3.73 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.40 (s, 2H), 3.30-3.25 (m, 3H), 1.81-1.69 (m, 2H), 1.18 (d, J = 6.2 Hz, 6H), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 377.2 (계산치); LC/MS [M+H] 377.1 (관측치).
실시예 260 이소프로필 N-[2-[[5-아미노-2-(아제티딘-3-일메틸)-6H-티에노 [3,2-b]아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노] 옥시에틸]카바메이트, TAZ-260의 합성
Figure pct00252
tert-부틸 3-[[5-아미노-7-[2-(이소프로폭시카보닐아미노) 에톡시-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-카복실레이트, 260a의 제조
DCM (4 mL) 및 DMA (0.5 mL) 중 이소프로필 N-[2-(프로필아미노옥시)에틸]카바메이트 (158 mg, 654 umol, 1.3 eq, HCl) 및 5-아미노-2-[(1-tert-부톡시카보닐아제티딘-3-일)메틸]-6H-티에노 [3,2-b]아제핀-7-카복실산, 261a (0.19 g, 503 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 EDCI (289 mg, 1.51 mmol, 3.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 그 다음 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 DCM을 제거하였다. 그 다음 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 수성상의 pH를 포화NaHCO3로 ~8로 조정하고 그 다음 혼합물을 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 에틸 아세테이트/MeOH=1/0, 10/1)로 정제하여 260a (0.18 g, 319 umol, 63.44% 수율)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOH, 400 MHz) δ 7.30 (s, 1H), 6.67 (s, 1H), 4.83-4.75 (m, 1H), 4.07-4.03 (m, 2H), 3.89 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.68 (t, J = 7.0 Hz, 4H), 3.30-3.26 (m, 2H), 3.08 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 3.00 (s, 2H), 2.90-2.85 (m, 1H), 1.76-1.67 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.18 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 0.94 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
TAZ-260의 제조
CH3CN (2 mL) 및 H2O (2 mL) 중 260a (0.18 g, 319 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 TFA (291 mg, 2.55 mmol, 189 uL, 8.0 eq)을 25℃에서 첨가하고 80℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 CH3CN을 제거하였다. 그 다음 혼합물을 MTBE (10 mL x 3)로 추출하여 과잉의 TFA를 제거하였다. 수성상을 냉동건조시켜 TAZ-260 (0.25 g, 310.30 umol, 97.18% 수율, TFA 염)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOH, 400 MHz) δ 7.47 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.81-4.76 (m, 1H), 4.23-4.09 (m, 2H), 3.98-3.86 (m, 4H), 3.71 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.41 (s, 2H), 3.29-3.18 (m, 5H), 1.83-1.64 (m, 2H), 1.25-1.12 (m, 6H), 0.96 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 464.2 (계산치); LC/MS [M+H] 464.1 (관측치).
실시예 261 5-아미노-2-(아제티딘-3-일메틸)-N-[2-(에틸카바모일아미노)에톡시] -N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-261의 합성
Figure pct00253
tert-부틸 3-[[5-아미노-7-[2-(에틸카바모일아미노)에톡시-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-카복실레이트, 261b의 제조
DCM (3.00 mL) 및 DMA (3.00 mL) 중 2-[(1-tert-부톡시카보닐아제티딘-3-일)메틸]-5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, 261a (230 mg, 607.76 umol, 1 eq) 및 1-에틸-3-[2-(프로필아미노옥시)에틸]우레아 (192 mg, 851 umol, 1.4 eq, HCl)의 용액에 EDCI (350 mg, 1.82 mmol, 3 eq)을 첨가하고, 그 다음 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 DCM을 제거하고 물 (20 mL)로 희석하고 혼합물의 pH를 sat, Na2CO3로 약 9로 조정하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 염수 (20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 0.5 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 0~30% 에틸 아세테이트/MeOH의 용리액 @ 35 mL/min)로 정제하여 261b (270 mg, 492 umol, 80.97% 수율)을 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.29 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.10-4.00 (m, 2H), 3.88 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.74-3.61 (m, 4H), 3.29 (br s, 2H), 3.12-3.05 (m, 4H), 3.01 (s, 2H), 2.95-2.83 (m, 1H), 1.72 (sxt, J = 7.2 Hz, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.06 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.94 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
TAZ-261의 제조
CH3CN (3.00 mL) 및 H2O (3.00 mL) 중 261b (270 mg, 492 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (449 mg, 3.94 mmol, 291 uL, 8 eq)을 첨가하고, 그 다음 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 물 (20 mL)로 희석하고 MTBE (20 mL x 2)로 추출하고 과잉의 TFA를 제거하고 수성상을 냉동건조시켜 TAZ-261 (300 mg, 443.38 umol, 90.10% 수율, 2TFA)을 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.45 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.21-4.13 (m, 2H), 3.97-3.86 (m, 4H), 3.71 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.42 (s, 2H), 3.30-3.20 (m, 3H), 3.06 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.80-1.68 (m, 2H), 1.05 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.96 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 449.2 (계산치); LC/MS [M+H] 449.1 (관측치).
실시예 L-1 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 (E)-40-(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-35-((3-시아노페닐)이미노)-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34,36,40-트리아자트리테트라콘타노에이트, TAZ-L-1의 합성
Figure pct00254
tert-부틸 (E)-40-(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-35-((3-시아노페닐)이미노)-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34,36,40-트리아자트리테트라콘타노에이트, L-1a의 제조
TAZ-11 (0.05 g, 0.16 mmol, 1 eq.) 및 tert-부틸 1-((3-시아노페닐)이미노)-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-데카옥사-2-아자펜타트리아콘트-1-엔-35-오에이트, PEG10-디이미드 (0.116 g, 0.16 mmol, 1 eq.)를 DMF에 용해시켰다. 트리에틸아민 (0.068 ml, 0.49 mmol, 3 eq.)을 첨가하고, 반응을 주위 온도에서 교반하였다. 아민 출발 물질의 소비 시, 반응을 농축하고 HPLC로 정제하여 L-1a (0.102 g, 0.10 mmol, 62%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1018.55 (계산치); LC/MS [M+H] 1018.91 (관측치).
(E)-40-(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-35-((3-시아노페닐)이미노)-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34,36,40-트리아자트리테트라콘탄산, L-1b의 제조
L-1a (0.102 g, 0.100 mmol, 1 eq.)을 100 μl의 TFA에 용해시켰다. 15분 후, 생성물을 디에틸 에테르로 분쇄하고 그 다음 진공 하에 농축하여 L-1b (94.4 mg, 0.98 mmol, 98%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 962.49 (계산치); LC/MS [M+H] 962.85 (관측치).
TAZ-L-1의 제조
L-1b (0.094 g, 0.098 mmol, 1 eq.) 및 2,3,5,6-테트라플루오로페놀, TFP (0.033 g, 0.20 mmol, 2 eq.)를 DMF에 용해시켰다. 콜리딘 (0.064 ml, 0.49 mmol, 5 eq.)을 첨가하고, 이어서 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드, EDC-HCl (0.038 g, 0.20 mmol, 2 eq.)을 첨가하였다. 반응을 완료될 때까지 실온에서 교반하고, 그 다음 HPLC로 정제하여 TAZ-L-1 (0.057 g, 0.051 mmol, 52%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1110.48 (계산치); LC/MS [M+H] 1110.87 (관측치).
실시예 L-2 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 (E)-41-(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-35-((3-시아노페닐)이미노)-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34,36,41-트리아자테트라테트라콘트-38-이노에이트, TAZ-L-2의 합성
Figure pct00255
Figure pct00256
tert-부틸 (E)-41-(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-35-((3-시아노페닐)이미노)-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34,36,41-트리아자테트라테트라콘트-38-이노에이트, L-2a의 제조
TAZ-17 (0.05 g, 0.16 mmol, 1 eq.) 및 tert-부틸 1-((3-시아노페닐)이미노)-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-데카옥사-2-아자펜타트리아콘트-1-엔-35-오에이트, PEG10-디이미드 (0.112 g, 0.16 mmol, 1 eq.)를 DMF에 용해시켰다. 트리에틸아민 (0.066 ml, 0.47 mmol, 3 eq.)을 첨가하고, 반응을 주위 온도에서 교반하였다. 아민 출발 물질의 소비 시, 반응을 농축하고 HPLC로 정제하여 L-2a (0.120 g, 0.12 mmol, 74%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1028.54 (계산치); LC/MS [M+H] 1028.92 (관측치).
(E)-41-(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-35-((3-시아노페닐)이미노)-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34,36,41-트리아자테트라테트라콘트-38-ynoic 산, L-2b의 제조
L-2a (0.120 g, 0.12 mmol, 1 eq.)을 100 μl의 TFA에 용해시켰다. 15분 후, 생성물을 농축하고 HPLC로 정제하여 L-2b (84.9 mg, 0.087 mmol, 75%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 972.47 (계산치); LC/MS [M+H] 972.83 (관측치).
TAZ-L-2의 제조
L-2b (0.085 g, 0.087 mmol, 1 eq.) 및 TFP (0.029 g, 0.17 mmol, 2 eq.)를 DMF에 용해시켰다. 콜리딘 (0.058 ml, 0.44 mmol, 5 eq.)을 첨가하고, 이어서 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드, EDC-HCl (0.033 g, 0.17 mmol, 2 eq.)을 첨가하였다. 반응을 완료될 때까지 실온에서 교반하고, 그 다음 HPLC로 정제하여 TAZ-L-2 (0.057 g, 0.055 mmol, 62%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1120.47 (계산치); LC/MS [M+H] 1120.85 (관측치).
실시예 L-3 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 39-(5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)-34-메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34-아자노나트리아콘타노에이트, TAZ-L-3의 합성
Figure pct00257
TAZ-25 (0.18 g, 0.20 mmol, 1 eq.) 및 TFP (0.066 g, 0.40 mmol, 2 eq.)를 1 ml의 DMF에 용해시켰다. 콜리딘 (0.13 ml, 1.0 mmol, 5 eq.)을 첨가하고, 이어서 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드, EDC-HCl (0.115 g, 0.60 mmol, 3 eq.)을 첨가하였다. 반응을 완료될 때까지 실온에서 교반하고, 그 다음 HPLC로 정제하여 TAZ-L-3 (0.103 g, 0.098 mmol, 49%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1051.53 (계산치); LC/MS [M+H] 1051.74 (관측치).
실시예 L-4 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 1-(4-((5-아미노-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미도)메틸)페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-데카옥사-2-아자펜타트리아콘탄-35-오에이트, TAZ-L-4의 합성
Figure pct00258
1-(4-((5-아미노-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미도)메틸)페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-데카옥사-2-아자펜타트리아콘탄-35-오익산, L-4a의 제조
5-아미노-N-(4-(아미노메틸)벤질)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-30 (0.063 g, 0.17 mmol, 1 eq.) 및 1-옥소-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30-데카옥사트리트리아콘탄-33-오익산 (0.09 g, 0.17 mmol, 1 eq.)를 메탄올에 용해시켰다. 트리에틸아민 (0.14 ml, 1.0 mmol, 6 eq.)을 첨가하고, 이어서 나트륨 시아노붕소수화물 (0.032 g, 0.51 mmol, 3 eq.)을 첨가하였다. 반응을 LCMS로 모니터링하였다. 2시간 후, 포름알데하이드 (14 μl, 0.17 mmol, 물 중 37% w/w 용액, 1 eq.)을 첨가하고 반응을 추가 30분 동안 교반하였다. 아민의 소비 시, 반응을 농축하고 HPLC로 정제하여 L-4a (0.045 g, 0.050 mmol, 29%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 895.47 (계산치); LC/MS [M+H] 895.80 (관측치).
TAZ-L-4의 제조
중간체 L-4a (0.045 g, 0.05 mmol, 1 eq.) 및 TFP (0.017 g, 0.10 mmol, 2 eq.)를 1 ml의 DMF에 용해시켰다. 콜리딘 (0.033 ml, 0.25 mmol, 5 eq.)을 첨가하고, 이어서 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드, EDC-HCl (0.029 g, 0.15 mmol, 3 eq.)을 첨가하였다. 반응을 완료될 때까지 실온에서 교반하고, 그 다음 HPLC로 정제하여 TAZ-L-4 (0.031 g, 0.030 mmol, 59%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1043.47 (계산치); LC/MS [M+H] 1043.79 (관측치).
실시예 L-10 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐) 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[4-[[[5-아미노-2-[5-(디메틸아미노)펜틸]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노]메틸]페닐]메틸-메틸아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, TAZ-L-10의 합성
Figure pct00259
Figure pct00260
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[4-[[[5-아미노-2-[5-(디메틸아미노)펜틸]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노]메틸]페닐]메틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-10a의 제조
MeOH (10 mL) 중 5-아미노-2-[5-(디메틸아미노)펜틸]-N-[[4-(메틸아미노메틸)페닐] 메틸]-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-65 (300 mg, 527 umol, 1.0 eq, 2 HCl)의 용액에 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시) 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (617 mg, 1.06 mmol, 2.0 eq), AcOH (3.1 mg, 52.7 umol, 0.10 eq) 및 NaBH3CN (66.3 mg, 1.06 mmol, 2.0 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 12시간 동안 25℃에서 교반하였다. 및 그 다음 농축하고 prep-HPLC (칼럼: 나노-마이크로 Kromasil C18 100*40mm 10um; 이동상: [물 (0.1%TFA)-ACN]; B%: 5%-45%, 8 min)로 정제하여 L-10a (350 mg, 328 umol, 62.33% 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[4-[[[5-아미노-2-[5- (디메틸아미노)펜틸]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노]메틸]페닐]메틸-메틸아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-10b의 제조
H2O (2 mL) 중 L-10a (100 mg, 84.8 umol, 1.0 eq, TFA)의 혼합물에 HCl (12 M, 141 uL, 20.0 eq)을 25℃에서 첨가하고, 그 다음 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 L-10b (80.0 mg, 76.6 umol, 90.2 %수율, HCl)을 담황색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-10의 제조
DCM (2 mL) 및 DMA (0.1 mL) 중 L-10b (50.0 mg, 49.6 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드, EDCI (95.0 mg, 495 umol, 10.0 eq)을 15℃에서 첨가하고 그 다음 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.1%TFA)-ACN]; B%: 25%-50%, 8 min)로 정제하여 TAZ-L-10 (21.0 mg, 16.5 umol, 34.5% 수율, TFA)을 담황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.57-7.50 (m, 2H), 7.48-7.43 (m, 3H), 7.12 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.50-4.32 (m, 2H), 3.90-3.87 (m, 4H), 3.70-3.59 (m, 38H), 3.38-3.40 (m, 6H), 3.01-2.99 (m, 2H), 2.90-2.98 (m, 2H), 2.90 (s, 9H), 1.79-1.78 (m, 4H), 1.70-1.65 (m, 2H), 1.52-1.49 (m, 2H), 0.93-0.87 (m, 3H). LC/MS [M+H] 1156.6 (계산치); LC/MS [M+H] 1156.6 (관측치).
실시예 L-13 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐) 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7-[[4-[(디메틸아미노)메틸]페닐]메틸-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]펜틸-메틸아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, TAZ-L-13의 합성
Figure pct00261
Figure pct00262
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7-[[4-[[tert-부톡시카보닐(메틸)아미노]메틸]페닐]메틸-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]펜틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-13a의 제조
MeOH (50 mL) 중 tert-부틸 N-[[4-[[[5-아미노-2-(5-아미노펜틸)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노]메틸]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트, 65e (130 mg, 229 umol, 1.0 eq)의 용액에 AcOH (13.7 mg, 228.96 umol, 13.0 uL, 1 eq) tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (200 mg, 343 umol, 1.50 eq) 및 NaBH3CN (43.1 mg, 687 umol, 3.0 eq)을 첨가하고, 그 다음 12시간 동안 25℃에서 교반하였다. 포름알데하이드, HCHO (56 mg, 674 umol, 37% 순도, 3.0 eq) 및 NaBH3CN (22.0 mg, 343 umol, 1.5 eq)를 혼합물에 첨가하고 그 다음 추가 2시간 동안 25℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O 2 mL의 첨가로 켄칭하고 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um; 이동상: [물(0.1%TFA)-ACN]; B%: 30%-60%, 10min)로 정제하여 L-13a (100 mg, 86.92 umol, 38% 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7-[[4-(메틸아미노메틸)페닐]메틸-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]펜틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-13b의 제조
H2O (0.5 mL) 중 L-13a (100 mg, 86.9 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl (12 M, 145 uL, 20.0 eq)을 첨가하고 그 다음 0.5시간 동안 80℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 압력 하에 농축하여 L-13b (92 mg, 조물질)을 무색 오일로서 얻었다.
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7-[[4-[(디메틸아미노)메틸]페닐]메틸-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]펜틸-메틸아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-13c의 제조
MeOH (1 mL) 중 HCHO, 포름알데하이드 (30.4 mg, 375 umol, 37% 순도, 5.0 eq) 및 L-13b (80 mg, 74.9 umol, 1.0 eq, 2HCl)의 용액에 NaBH3CN (9.4 mg, 150 umol, 2.0 eq)을 15℃에서 첨가하고 그 다음 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 여과액을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex luna C18 80*40mm*3 um; 이동상: [물(0.04%HCl)-ACN]; B%: 5%-35%, 7 min)로 정제하여 L-13c (55 mg, 50.87 umol, 67.86%수율, 2HCl)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.48 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.13 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.35 (s, 2H), 3.76-3.70 (m, 2H), 3.70-3.62 (m, 40H), 3.50-3.47 (m, 6H), 3.35-3.28 (m, 2H),2.94-2.91 (m, 5H), 2.88 (s, 6H), 2.56 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.82-1.81 (m, 3H), 1.69-1.65 (m, 2H), 1.53-1.49 (m, 2H), 0.91 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
TAZ-L-13의 제조
DCM (2 mL) 및 DMA (0.1 mL) 중 L-13c (50 mg, 49.6 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드, EDCI (95.0 mg, 496 umol, 10.0 eq)을 15℃에서 첨가하고 그 다음 15℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물(0.1%TFA)-ACN]; B%: 20%-40%, 10 min)로 정제하여 TAZ-L-13 (23 mg, 19.89 umol, 40.11%수율)을 담황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.53-7.51 (m, 2H), 7.46-7.40 (m, 3H), 7.11 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.33 (s, 2H), 3.89 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.89-3.85 (m, 2H), 3.70-3.63 (m, 38H), 3.54-3.42 (m, 4H), 3.39 (s, 2H), 2.99 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.94-2.91 (m, 5H), 2.87 (s, 6H), 1.80 (d, J = 6.4 Hz, 4H), 1.69-1.64 (m, 2H), 1.52-1.50 (m, 2H), 0.90 (t, J = 6.8 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1156.6 (계산치); LC/MS [M+H] 1156.6 (관측치).
실시예 L-16 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐) 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[4-[[(5-아미노-6H-티에노 [3,2-b]아제핀-7-카보닐)-프로필- 아미노]메틸]-2-(트리플루오로메틸)페닐]메틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트,TAZ-L-16의 합성
Figure pct00263
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[4-[[(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐) -프로필-아미노]메틸]-2-(트리플루오로메틸)페닐]메틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-16a의 제조
MeOH (20 mL) 중 5-아미노-N-[[4-(아미노메틸)-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]-N-프로필- 6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-54 (80.0 mg, 145 umol, 1.0 eq, TFA) 및 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (110 mg, 189 umol, 1.3 eq)의 혼합물에 NaBH3CN (22.8 mg, 363 umol, 2.5 eq)을 20℃에서 첨가하고 그 다음 20시간 동안 이 온도에서 교반하였다. HCHO (70.7 mg, 872 umol, 64.9 uL, 37% 순도, 6.0 eq) 및 NaBH3CN (22.8 mg, 363 umol, 2.5 eq)을 혼합물에 첨가하고, 20℃에서 1시간 더 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고 prep-HPLC (칼럼: 나노-마이크로 Kromasil C18 100*40mm 10um; 이동상: [물 (0.1%TFA)-ACN]; B%: 3%-40%,8min)로 정제하여 L-16a (88.0 mg, 86.3 umol, 59.4% 수율)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.90-7.83 (m, 2H), 7.83-7.78 (m, 1H), 7.76 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.73-4.55 (m, 2H), 3.93-3.84 (m, 2H), 3.71-3.70 (m, 4H), 3.68-3.57 (m, 38H), 3.49 (s, 2H), 3.41 (s, 2H), 2.95 (s, 3H), 2.48 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.75-1.67 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 0.93 (br t, J = 7.6 Hz, 3H).
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[4-[[(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-프로필-아미노]메틸]-2-(트리플루오로메틸)페닐]메틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-16b의 제조
H2O (0.5 mL) 및 MeCN (0.1 mL) 중 L-16a (78.0 mg, 76.5 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl (12 M, 191 uL, 30 eq)을 20℃에서 N2 하에서 첨가하고, 혼합물을 80℃로 가열하고 그 다음 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하여 L-16b (70.0 mg, 72.6 umol, 94.9% 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-16의 제조
DCM (1 mL) 및 DMA (0.1 mL) 중 L-16b (60 mg, 62.3 umol, 1 eq) 및 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (51.7 mg, 311 umol, 5.0 eq)의 혼합물에 EDCI (59.7 mg, 311 umol, 5.0 eq)을 20℃에서 N2 하에서 첨가하고, 그 다음 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.1%TFA)-ACN]; B%: 25%-50%,7 min)로 정제하여 TAZ-L-16 (15 mg, 13.5 umol, 21.67% 수율)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.88-7.83 (m, 2H), 7.82-7.78 (m, 1H), 7.76 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.48-7.41 (m, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.16 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.96 (s, 2H),3.92-3.87 (m, 4H), 3.71-3.58 (m, 38H), 3.52-3.48 (m, 2H), 3.41 (s, 2H), 3.34 (s, 2H), 2.99 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.95 (s, 3H), 1.75-1.66 (m, 2H), 0.92 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1111.5 (계산치); LC/MS [M+H] 1111.5 (관측치).
실시예 L-22 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐) 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[4-[[(5-아미노-6H-티에노 [3,2-b]아제핀-7-카보닐)-프로필 -아미노]메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, TAZ-L-22의 합성
Figure pct00264
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[4-[[(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)- 프로필-아미노]메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-22a의 제조
MeOH (3 mL) 중 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (51.9 mg, 89 umol, 1.4 eq)의 혼합물에 5-아미노-N-[[4-(아미노메틸)-2-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-52 (30 mg, 63 umol, 1.0 eq, HCl)을 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고, 그 다음 NaBH3CN (7.97 mg, 126.86 umol, 2 eq)을 첨가하고 25℃에서 23시간 동안 교반하고, 그 다음 포름알데하이드 (15.44 mg, 190.29 umol, 14.17 uL, 3 eq) 및 NaBH3CN (7.97 mg, 126.86 umol, 2 eq)을 첨가하고 반응을 1시간 더 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 농축하고 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 25%-55%, 10min)로 정제하여 L-22a (60 mg, 조물질)을 무색 오일로서 얻었다.
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[4-[[(5-아미노-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐)-프로필-아미노]메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-22b의 제조
H2O (0.5 mL) 중 L-22a (60 mg, 58.87 umol, 1 eq)의 혼합물에 HCl (12 M, 150 uL, 30 eq)을 15℃에서 한번에 첨가하고 그 다음 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하여 L-22b (45 mg, 45.02 umol, 76.47% 수율, HCl)을 담황색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-22의 제조
DCM (0.2 mL) 및 DMA (0.02 mL) 중 L-22b (40 mg, 40 umol, 1.0 eq, HCl)의 혼합물에 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (53.2 mg, 320 umol, 8.0 eq) 및 EDCI (76.7 mg, 400 umol, 10 eq)을 15℃에서 첨가하고, 그 다음 30분 동안 교반하였다. 반응을 30℃에서 감압 하에서 농축하고 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 20%-50%, 8 min)로 정제하여 TAZ-L-22 (24.7 mg, 22.23 umol, 55.55% 수율)을 담황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.98 (s, 1H), 7.86-7.84 (m, 1H), 7.76-7.72 (m, 1H), 7.65 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.48-7.39 (m, 1H), 7.14 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.70-4.41 (m, 2H), 3.92-3.82 (m, 4H), 3.70-3.54 (m, 38H), 3.44-3.40 (m, 4H), 3.34 (s, 2H), 2.97 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.91 (s, 3H), 1.75-1.59 (m, 2H), 0.91 (t, J = 6.8 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1111.5 (계산치); LC/MS [M+H] 1111.4 (관측치).
실시예 L-32 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 40-(5-아미노-7-((3-(3,3-디메틸부탄아미도)프로필)(프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)-34-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-35-아자테트라콘타노에이트, TAZ-L-32의 합성
Figure pct00265
비스(2,3,5,6-테트라플루오로페닐) 4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사테트라트리아콘탄디오에이트 (10 mg, 0.12 mmol, 1 eq.)을 0.5 ml의 아세토니트릴, ACN에 용해시켰다. 이 용액에 1 ml의 ACN 중 5-아미노-2-(5-아미노펜틸)-N-(3-(3,3-디메틸부탄아미도)프로필)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-109 (7.4 mg, 0.012 mmol, 1 eq.) 및 트리에틸아민, TEA (0.01 ml, 0.073 mmol, 6 eq.)의 트리플루오로아세테이트 염의 용액을 첨가하였다. 완료 시, 반응을 HPLC로 정제하여 TAZ-L-32를 무색 유리 (4 mg, 0.03 mmol, 28%)로서 얻었다. LC/MS [M+H] 1178.59 (계산치); LC/MS [M+H] 1178.83 (관측치).
실시예 L-34 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 39-(5-아미노-7-((3-(3,3-디메틸부탄아미도)프로필)(프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)-34-메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34-아자노나트리아콘타노에이트, TAZ-L-34의 합성
Figure pct00266
39-(5-아미노-7-((3-(3,3-디메틸부탄아미도)프로필)(프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)-34-메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34-아자노나트리아콘탄산, L-34a의 제조
옥살릴 클로라이드 (0.023 ml, 0.27 mmol, 3 eq.)을 -78℃에서 2.5 ml의 DCM에 용해시켰다. 디메틸설폭사이드, DMSO (0.038 ml, 0.54 mmol, 6 eq.)을 적가하였다. 반응을 -78℃에서 15분 동안 교반하고, 그 다음 tert-부틸 1-하이드록시-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30-데카옥사트리트리아콘탄-33-오에이트 (0.052 g, 0.089 mmol, 1 eq.)을 0.5 ml의 DCM 중 용액으로서 적가하였다. 반응을 30분 동안 -78℃에서 교반하고, 그 다음 트리에틸아민, TEA (0.112 ml, 0.80 mmol, 9 eq.)을 적가하였다. 반응을 30분 더 -78℃에서 교반하고, 그 다음 냉각으로 제거하고 30분에 걸쳐 주위 온도로 가온되도록 하여 조 알데하이드 중간체를 형성하였다. 5-아미노-2-(5-아미노펜틸)-N-(3-(3,3-디메틸부탄아미도)프로필)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-109 (0.054 g, 0.089 mmol, 1 eq.) 및 나트륨 트리아세톡시붕소수화물, STAB (0.186 g, 0.88 mmol, 9.8 eq.)의 트리플루오로아세테이트 염을 추가의 0.05 ml의 TEA와 함께 2 ml의 DCM에 현탁시켰다. 조 알데하이드 용액을 교반 용액에 첨가하였다. 반응을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 그 다음 포름알데하이드 (0.0073 g, 0.089 mmol, 1 eq., H2O 중 37 wt. %) 첨가하였다. 15분 후, 반응을 농축하고 HPLC로 정제하여 무색 잔류물을 얻었고, 이것을 최소 TFA에 용해시키고 15분 동안 정치되도록 하였다. 그 다음 용액을 농축하고 디에틸 에테르로 분쇄하여 L-34a (0.042 g, 0.041 mmol, 46%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1016.62 (계산치); LC/MS [M+H] 1016.95 (관측치).
TAZ-L-34의 제조
중간체 L-34a (0.042 g, 0.041 mmol, 1 eq.) 및 2,3,5,6-테트라플루오로페놀, TFP (0.014 g, 0.082 mmol, 2 eq.)를 3 ml의 ACN에 용해시켰다. 콜리딘 (0.054 ml, 0.406 mmol, 9.83 eq.)을 첨가하고, 이어서 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드, EDC-HCl (0.017 g, 0.088 mmol, 2.13 eq.)을 첨가하였다. 반응을 실온에서 교반하고 LCMS로 모니터링하고, 그 다음 2 ml의 H2O로 희석하고 HPLC로 정제하여 TAZ-L-34 (0.0198 g, 0.017 mmol, 41%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1164.61 (계산치); LC/MS [M+H] 1164.81 (관측치).
실시예 L-52 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 40-(5-아미노-7-(프로필(3-(2-(트리플루오로메톡시)아세트아미도)프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)-34-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-35-아자테트라콘타노에이트, TAZ-L-52의 합성
Figure pct00267
40-(5-아미노-7-(프로필(3-(2-(트리플루오로메톡시)아세트아미도)프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)-34-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-35-아자테트라콘탄산, L-52a의 제조
2,3,5,6-테트라플루오로페닐 2-(트리플루오로메톡시)아세테이트 (0.012 g, 0.041 mmol, 1 당량) 및 3-(5-아미노-2-(1-카복시-33-옥소-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30-데카옥사-34-아자노나트리아콘탄-39-일)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미도)프로판-1-아미늄 트리플루오로아세테이트, L-53b (0.038 g, 0.041 mmol, 1 당량)를 아세토니트릴에서 조합하였다. 콜리딘 (0.027 ml, 0.205 mmol, 5 당량)을 첨가하고, 반응을 HPLC로 모니터링하였다. 완료 시, 반응을 농축하고 HPLC로 정제하여 L-52a (0.07 g, 0.066 mmol, 160%)를 상당한 양의 잔류 콜리딘을 함유하는 시럽으로서 얻었다. 조 물질을 추가 정제없이 다음 단계로 운반하였다. LC/MS [M+H] 1058.52 (계산치); LC/MS [M+H] 1058.84 (관측치).
TAZ-L-52의 제조
중간체 L-52a (0.07 g, 0.066 mmol, 1 당량) 및 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (0.011 g, 0.66 mmol, 1 당량)를 1 ml의 아세토니트릴에 용해시켰다. 콜리딘 (0.017 ml, 0.16 mmol, 2 당량)을 첨가하고, 이어서 EDC (0.013 g, 0.66 mmol, 1 당량)을 첨가하였다. 반응을 실온에서 교반하고 LCMS로 모니터링하고, 그 다음 물로 희석하고 역상 HPLC로 정제하여 TAZ-L-52 (0.095 g, 0.075 mmol, 49%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1206.51 (계산치); LC/MS [M+H] 1206.51 (관측치).
실시예 L-53 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 40-(5-아미노-7-((3-((사이클로부톡시카보닐)아미노)프로필)(프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)-34-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-35-아자테트라콘타노에이트, TAZ-L-53의 합성
Figure pct00268
40-(5-아미노-7-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)(프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)-34-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-35-아자테트라콘탄산, L-53a의 제조
Tert-부틸 (3-(5-아미노-2-(5-아미노펜틸)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미도)프로필)카바메이트, TAZ-133 (0.234 g, 0.48 mmol, 1 당량) 및 34-옥소-34-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사테트라트리아콘탄산 (0.34 g, 0.48 mmol, 1 당량)를 DMF에 용해시켰다. 트리에틸아민 (0.33 g, 2.4 mmol, 5 당량)을 첨가하고 반응을 실온에서 교반하였다. 아민 출발 물질의 소비 시, 반응을 물로 희석하고 역상 HPLC로 정제하여 L-53a (0.385 g, 0.40 mmol, 84%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1032.58 (계산치); LC/MS [M+H] 1032.89 (관측치).
3-(5-아미노-2-(1-카복시-33-옥소-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30-데카옥사-34-아자노나트리아콘탄-39-일)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미도)프로판-1-아미늄 트리플루오로아세테이트, L-53b의 제조
중간체 L-53a (0.27 g, 0.26 mmol, 1 당량)을 최소 TFA에 용해시키고 실온에서 정치되도록 하였다. 출발 물질의 완전한 소비 시, 반응을 농축하고 디에틸 에테르로 분쇄하여 L-53b (0.268 g, 0.256 mmol, 98%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 932.53 (계산치); LC/MS [M+H] 932.81 (관측치).
TAZ-L-53의 제조
사이클로부틸 클로로포르메이트 (0.1 ml, 0.094 mmol, 1.24 당량), 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (0.065 g, 0.39 mmol, 5 당량), 및 콜리딘 (0.103 ml, 0.78 mmol, 10 당량)를 1 ml의 아세토니트릴에 용해시키고 1시간 동안 정치되도록 하였다. 중간체 L-53b (0.073 g, 0.078 mmol, 1 당량)을 이 반응 혼합물에 용해시키고 반응을 LCMS로 모니터링하였다. EDC (0.03 g, 0.157 mmol, 2 당량)을 아민의 소비 시 용액에 첨가하고, 반응을 실온에서 교반하였다. 완료 시, 반응을 농축하고 HPLC로 정제하여 TAZ-L-53 (0.027 g, 0.023 mmol, 29%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1178.56 (계산치); LC/MS [M+H] 1178.85 (관측치).
실시예 L-59 (R)-2-((5-(5-아미노-7-((3-(3,3-디메틸부탄아미도)프로필)(프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)펜틸)카바모일)-4,37-디옥소-37-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34-데카옥사-3-아자헵타트리아콘탄-1-설폰산, TAZ-L-59의 합성
Figure pct00269
(R)-43-(5-아미노-7-((3-(3,3-디메틸부탄아미도)프로필)(프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)-34,37-디옥소-36-(설포메틸)-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-35,38-디아자트리테트라콘탄산, L-59b의 제조
(R)-2-아미노-3-((5-(5-아미노-7-((3-(3,3-디메틸부탄아미도)프로필)(프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)펜틸)아미노)-3-옥소프로판-1-설폰산, L-59a (0.034 g, 0.053 mmol, 1 당량)을 DMF (1.5 ml)에 용해시켰다. 이 용액에 DIPEA (0.046 ml, 0.265 mmol, 5 당량), 이어서 34-옥소-34-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사테트라트리아콘탄산 (0.037 g, 0.053 mmol, 1 당량)을 첨가하였다. 반응을 20분 동안 40℃로 가열시키고, 그 다음 실온으로 냉각시키고 역상 HPLC로 정제하여 L-59b (0.036 g, 0.30 mmol, 58%)를 황색 필름으로서 얻었다. LC/MS [M+H] 1181.59 (계산치); LC/MS [M+H] 1181.87 (관측치).
TAZ-L-59의 제조
중간체 L-59b (0.036 g, 0.03 mmol, 1 당량)을 DMF에 용해시켰다. 이 용액에 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (0.02 g, 0.09 mmol, 3 당량), 콜리딘 (0.02 ml, 0.15 mmol, 5 당량), 및 EDCI (0.02 g, 0.09 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 반응을 LCMS로 모니터링하고, 그 다음 농축하고 HPLC로 정제하여 TAZ-L-59 (0.034 g, 0.031 mmol, 84%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1329.59 (계산치); LC/MS [M+H] 1329.88 (관측치).
실시예 L-83 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐)3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2 -[4-[[ 5-아미노-7-[3-(사이클로부톡시카보닐아미노)프로필-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]-1-피페리딜]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, TAZ-L-83의 합성
Figure pct00270
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[[5-아미노-7-[3-(사이클로부톡시카보닐아미노) 프로필-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]-1-피페리딜]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-83a의 제조
MeOH (5 mL) 중 사이클로부틸 N-[3-[[5-아미노-2-(4-피페리딜메틸)-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노]프로필]카바메이트, TAZ-185 (75.0 mg, 149 umol, 1.0 eq) 및 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (437 mg, 747 umol, 5.0 eq)의 혼합물에 NaBH3CN (37.5 mg, 598 umol, 4.0 eq)을 N2 하에서 20℃에서 한번에 첨가하고, 그 다음 20℃에서 40시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 20%-50%,8min)로 정제하여 L-83a (100 mg, 93.4 umol, 62.5% 수율)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.08 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.85-4.80 (m, 1H), 3.85 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 3.75-3.57 (m, 40H), 3.56-3.43 (m, 6H), 3.38 (s, 2H), 3.11 (dd, J = 4.0, 5.4 Hz, 2H), 3.08-2.97 (m, 2H), 2.91 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.36-2.23 (m, 2H), 2.10-1.92 (m, 5H), 1.87-1.75 (m, 3H), 1.72-1.54 (m, 5H), 1.47 (s, 9H), 0.93 (s, 3H)
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2 -[4-[[5-아미노-7-[3-(사이클로부톡시카보닐아미노)프로필-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]-1-피페리딜]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-83b의 제조
MeCN (0.5 mL) 및 H2O (2 mL) 중 L-83a(100 mg, 93.4 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl (12 M, 233 uL, 30 eq)을 N2 하에서 20℃에서 한번에 첨가하고, 그 다음 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하여 L-83b (80.0 mg, 78.8 umol, 84.4% 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-83의 제조
DCM (2 mL) 및 DMA (0.5 mL) 중 L-83b (80.0 mg, 78.8 umol, 1.0 eq) 및 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (131 mg, 788 umol, 10 eq)의 혼합물에 EDCI (151 mg, 788 umol, 10 eq)을 N2 하에서 20℃에서 한번에 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. DCM (2 mL)을 진공에서 제거하고 혼합물을 여과하고, 여과액을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 20%-50%,8min)로 정제하여 TAZ-L-83 (43.0 mg, 36.3 umol, 46.0% 수율, 98.20% 순도)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.49-7.42 (m, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 3.89 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.87-3.83 (m, 2H), 3.70-3.46 (m, 42H), 3.37 (s, 2H), 3.17-3.08 (m, 3H), 3.00 (t, J = 6.0 Hz, 4H), 2.91 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 2.34-2.25 (m, 2H), 2.09-1.96 (m, 5H), 1.87-1.58 (m, 8H), 0.92 (t, J = 4.0 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1162.6 (계산치); LC/MS [M+H] 1162.4 (관측치).
실시예 L-84 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐)3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]-1-피페리딜]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, TAZ-L-84의 합성
Figure pct00271
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2 -[2-[4-[[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]-1-피페리딜]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-84a의 제조
MeOH (5 mL) 중 5-아미노-N-에톡시-2-(4-피페리딜메틸)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-7 -카복사미드, TAZ-198 (60.0 mg, 153 umol, 1.0 eq) 및 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (449 mg, 768 umol, 5.0 eq)의 혼합물에 NaBH3CN (28.9 mg, 460 umol, 3.0 eq)을 N2 하에서 20℃에서 한번에 첨가하고, 그 다음 20℃에서 40시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 20%-45%,8min)로 정제하여 L-84a (100 mg, 104 umol, 67.8% 수율)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.48 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 3.95 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.85 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.77- 3.65 (m, 40H), 3.45 (s, 2H), 3.01 (d, J = 12.4 Hz, 2H), 2.92 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.49 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.05-2.00 (m, 3H), 1.82-1.72 (m, 2H), 1.66-1.54 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.00 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노 [3,2-b]아제핀-2-일]메틸]-1-피페리딜]에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-84b의 제조
MeCN (0.5 mL) 및 H2O (2 mL) 중 L-84a (100 mg, 104 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl (12 M, 260.62 uL, 30 eq)을 N2 하에서 20℃에서 한번에 첨가하고, 그 다음 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하여 L-84b (80 mg, 88.58 umol, 84.97% 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-84의 제조
DCM (2 mL) 및 DMA (0.5 mL) 중 L-84b (80 mg, 88.5 umol, 1.0 eq) 및 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (147 mg, 885 umol, 10 eq)의 혼합물에 EDCI (84.9 mg, 442 umol, 5.0 eq)을 N2 하에서 20℃에서 한번에 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. DCM (2 mL)을 진공에서 제거하고 혼합물을 여과하고, 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 20%-50%,8min)로 정제하여 TAZ-L-84 (37 mg, 35.09 umol, 39.61% 수율, 99.68% 순도)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.48 (s, 1H), 7.46-7.41 (m, 1H), 6.96 (s, 1H), 3.95 (q, J = 6.8 Hz, 3H), 3.89 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.87-3.83 (m, 2H), 3.71-3.61 (m, 40H), 3.44 (s, 2H), 3.37-3.34 (m, 3H), 3.05-2.95 (m, 5H), 2.91 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.05-1.95 (m, 2H), 1.82-1.72 (m, 2H), 1.66-1.54 (m, 2H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.99 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1151.5 (계산치); LC/MS [M+H] 1151.3 (관측치).
실시예 L-87 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐) 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2 -[2-[4-[2-[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]에틸]-1-피페리딜]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, TAZ-L-87의 합성
Figure pct00272
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[2-[5-아미노-7-[에톡시 (프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]에틸]-1-피페리딜]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-87a의 제조
MeOH (3 mL) 중 5-아미노-N-에톡시-2-[2-(4-피페리딜)에틸]-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-176 (0.15 g, 340 umol, 1.0 eq, HCl)의 혼합물에 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (597 mg, 1.02 mmol, 3.0 eq) 및 NaBH3CN (42.8 mg, 680 umol, 2.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex luna C18 100*40mm*5 um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 12%-42%,8min)로 정제하여 L-87a (0.18 g, 165.55 umol, 48.67% 수율, TFA)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.45 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 3.96-3.90 (m, 2H), 3.86-3.82 (m, 2H), 3.75-3.71 (m, 2H), 3.70-3.67 (m, 6H), 3.66-3.59 (m, 36H), 3.42 (s, 2H), 3.06-2.90 (m, 4H), 2.47 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.13-2.00 (m, 2H), 1.87-1.60 (m, 6H), 1.60-1.48 (m, 2H), 1.45 (s, 10H), 1.18 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.97 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[2-[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]에틸]-1-피페리딜]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-87b의 제조
H2O (2.5 mL) 및 CH3CN (0.3 mL) 중 L-87a (0.18 g, 166 umol, 1.0 eq, TFA)의 혼합물에 HCl (12 M, 345 uL, 25.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 L-87b (0.15 g, 조물질, HCl)을 황색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-87의 제조
DCM (1 mL) 및 DMA (0.2 mL) 중 L-87b (0.05 g, 52.4 umol, 1.0 eq, HCl)의 혼합물에 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (69.7 mg, 419 umol, 8.0 eq) 및 EDCI (101 mg, 524 umol, 10.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 20%-50%,8min)로 정제하여 TAZ-L-87 (14.5 mg, 12.30 umol, 23.45% 수율, TFA)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.49-7.38 (m, 2H), 6.92 (s, 1H), 3.93 (q, J = 8 Hz, 2H), 3.87 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.85-3.81 (m, 2H), 3.74-3.70 (m, 2H), 3.69-3.61 (m, 40H), 3.42 (s, 2H), 3.03-2.91 (m, 6H), 2.07 (d, J = 13.6 Hz, 2H), 1.79-1.66 (m, 5H), 1.58-1.43 (m, 2H), 1.18 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.97 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1065.5 (계산치); LC/MS [M+H] 1065.4 (관측치).
실시예 L-88 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐) 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[4-[2-[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]에틸]-1-피페리딜]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, TAZ-L-88의 합성
Figure pct00273
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[4-[2-[5-아미노-7-[에톡시(프로필) 카바모일]-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-2-일]에틸]-1-피페리딜]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-88a의 제조
DMF (0.5 mL) 중 5-아미노-N-에톡시-2-[2-(4-피페리딜)에틸]-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀 -7-카복사미드, TAZ-176 (60.0 mg, 136 umol, 1.0 eq, HCl) 및 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산 (106 mg, 150 umol, 1.1 eq)의 혼합물에 DIEA (52.8 mg, 408 umol, 71.1 uL, 3.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 여과하고 prep-HPLC (칼럼: Welch Xtimate C18 150*25mm*5um;이동상: [물(0.04%HCl)-ACN];B%: 20%-35%,8min)로 정제하여 L-88a (40 mg, 42.32 umol, 31.11% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-88의 제조
DCM (1 mL) 및 DMA (0.2 mL) 중 L-88a (40 mg, 40.8 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (54.1 mg, 326 umol, 8.0 eq) 및 EDCI (78.1 mg, 407 umol, 10.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었고, 잔류물을 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 30%-60%,8min)로 정제하여 TAZ-L-88 (36.2 mg, 33.11 umol, 81.26% 수율)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.46 (s, 1H), 7.45-7.39 (m, 1H), 6.90 (s, 1H), 4.53 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.93 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.87 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.77-3.69 (m, 4H), 3.66-3.60 (m, 36H), 3.42 (s, 2H), 3.06 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 2.98 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.93 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.78-2.51 (m, 3H), 1.89-1.63 (m, 7H), 1.30-1.07 (m, 5H), 0.97 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1093.5 (계산치); LC/MS [M+H] 1093.4 (관측치).
실시예 L-92 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐) 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, TAZ-L-92의 합성
Figure pct00274
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-92a의 제조
MeOH (5 mL) 중 5-아미노-2-(아제티딘 -3-일메틸)-N-에톡시 -N-프로필-6H-티에노 [3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-183 (0.06 g, 166 umol, 1 eq) 및 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (290 mg, 497 umol, 3 eq)의 혼합물에 NaBH3CN (20.8 mg, 331 umol, 2 eq) 및 AcOH (9.94 mg, 166 umol, 1 eq)을 첨가하고, 그 다음 15℃에서 10시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 정제된 prep-HPLC(TFA)(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 20%-45%,8min)로 정제하여 L-92a (20 mg, 19.1 umol, 11.6% 수율, TFA)을 황색 고체로서 얻었다.
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-92b의 제조
H2O (0.5 mL) 중 L-92a (20 mg, 19.1 umol, 1 eq, TFA)의 혼합물에 TFA (10.9 mg, 95.7 umol, 5 eq)을 25℃에서 첨가하고, 그 다음 80℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3um;이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 25%-45%,6min)로 정제하여 L-92b (13 mg, 14.9 umol, 77.6% 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-92의 제조
DCM (1 mL) 및 DMA (0.1 mL) 중 L-92b (12 mg, 13.7 umol, 1 eq) 및 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (18.2 mg, 110 umol, 8 eq)의 혼합물에 EDCI (26.3 mg, 137 umol, 10 eq)을 첨가하고, 그 다음 15℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 20%-50%,8min)로 정제하여 TAZ-L-92 (6.3 mg, 5.54 umol, 40.4% 수율, 100% 순도, TFA)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400MHz, MeOD) δ 7.57-7.32 (m, 2H), 6.98 (br s, 1H), 4.43-3.79 (m, 8H), 3.77-3.52 (m, 40H), 3.44 (s, 2H), 3.33-3.26 (m, 4H), 3.18-3.11 (m, 1H), 3.00 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.83-1.68 (m, 2H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.99 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1023.5 (계산치); LC/MS [M+H] 1023.3 (관측치).
실시예 L-93 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐) 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[4-[[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]-1-피페리딜]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, TAZ-L-93의 합성
Figure pct00275
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[4-[[5-아미노-7-[에톡시(프로필) 카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]-1-피페리딜]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-93a의 제조
DMF (0.5 mL) 중 5-아미노-N-에톡시-2-(4-피페리딜메틸)-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-198 (30.0 mg, 70.3 umol, 1.0 eq, HCl) 및 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산 (54.6 mg, 77.3 umol, 1.1 eq)의 혼합물에 DIEA (27.2 mg, 210 umol, 36.7 uL, 3.0 eq)을 N2 하에서 20℃에서 한번에 첨가하고, 그 다음 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3um; 이동상: [물 (0.04%HCl)-ACN]; B%: 22%-45%,8min)로 정제하여 L-93a (60.0 mg, 64.4 umol, 91.7% 수율)을 무색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-93의 제조
DCM (2 mL) 및 DMA (0.5 mL) 중 L-93a (60.0 mg, 64.4 umol, 1.0 eq) 및 2,3,5,6 -테트라플루오로페놀 (107 mg, 644 umol, 10 eq)의 혼합물에 EDCI (123.53 mg, 644.37 umol, 10 eq)을 N2 하에서 20℃에서 한번에 첨가하고, 그 다음 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 30%-55%,8min)로 정제하여 TAZ-L-93 (44.2 mg, 40.2 umol, 62.4% 수율, 98.2% 순도)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.49 (s, 1H), 7.47-7.41 (m, 1H), 6.92 (s, 1H), 4.56 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.06 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.95 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.89 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.80-3.71 (m, 4H), 3.70-3.58 (m, 36H), 3.45 (s, 2H), 3.10 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 3.00 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.86 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 2.77-2.57 (m, 3H), 1.95-1.90 (m, 1H), 1.80-1.75 (m, 4H), 1.35-1.20 (m, 5H), 0.99 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1079.5 (계산치); LC/MS [M+H] 1079.4 (관측치).
실시예 L-98 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐)3-[2-[2-[2 -[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[3-[[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, TAZ-L-98의 합성
Figure pct00276
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[3-[[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-98a의 제조
DMF (2 mL) 중 5-아미노-2-(아제티딘-3-일메틸)-N-에톡시-N-프로필-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-7-카복사미드, TAZ-183 (150 mg, 315 umol, 1 eq, TFA) 및 DIEA (102 mg, 787 umol, 137 uL, 2.5 eq)의 혼합물에 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산 (223 mg, 315 umol, 1 eq)을 첨가하고, 그 다음 20℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 Prep-HPLC(칼럼: Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um;이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 5%-40%,8min)로 정제하여 L-98a (0.08 g, 88.6 umol, 28.1% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-98의 제조
DCM (3 mL) 및 DMA (0.3 mL) 중 L-98a (0.08 g, 88.6 umol, 1 eq) 및 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (118 mg, 709 umol, 8 eq)의 혼합물에 EDCI (170 mg, 886 umol, 10 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 Prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-50%,10min 및 칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-50%,8min)로 정제하여 TAZ-L-98 (34.3 mg, 31.9 umol, 36.0 % 수율, 97.7% 순도)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400MHz, MeOD) δ 7.49-7.38 (m, 2H), 6.92 (s, 1H), 4.42-4.35 (m, 1H), 4.10 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.06-3.97 (m, 1H), 3.93 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.89-3.85(m, 2H), 3.73-3.69 (m, 4H), 3.66-3.51 (m, 37H), 3.40 (s, 2H), 3.19 (br d, J = 7.6 Hz, 2H), 2.99-2.96 (m, 3H), 2.48-2.24 (m, 2H), 1.74 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.18 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.97 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1051.5 (계산치); LC/MS [M+H] 1051.3 (관측치).
실시예 L-128 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[3-[[5-아미노-7-[2-(사이클로부톡시카보닐아미노)에톡시-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠설폰산, TAZ-L-128의 합성
Figure pct00277
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[3-[[5-아미노-7-[2- (사이클로부톡시카보닐아미노)에톡시-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, 128a의 제조
DMF (2 mL) 중 사이클로부틸 N-[2-[[5-아미노-2-(아제티딘-3-일메틸)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노]옥시에틸]카바메이트, TAZ-238 (0.12 g, 171 umol, 1.0 eq, TFA)의 혼합물에 DIEA (66.1 mg, 512 umol, 89.1 uL, 3.0 eq) 및 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산 (121 mg, 171 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 한번에 첨가하고 그 다음 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 prep-HPLC(칼럼: Welch Xtimate C18 100*25mm*3um;이동상: [물(0.05%HCl) -ACN];B%: 20%-40%,8min)로 정제하여 128a (45 mg, 42.8 umol, 25.1% 수율, HCl)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.51 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.81-4.76 (m, 1H), 4.40 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 4.11 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.03 (dd, J = 5.6, 8.8 Hz, 1H), 3.92 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.77-3.68 (m, 7H), 3.66-3.55 (m, 36H), 3.42 (s, 2H), 3.30-2.25 (m, 2H),3.20 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 3.06-2.89 (m, 1H), 2.54 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.44-2.31 (m, 2H), 2.30-2.20 (m, 2H), 2.05-1.90 (m, 2H), 1.80-1.68 (m, 3H), 1.66-1.52 (m, 1H), 0.96 (t, J = 7.6 Hz, 3H)
TAZ-128의 제조
DCM (1.5 mL) 및 DMA (0.2 mL) 중 128a (40 mg, 38.0 umol, 1.0 eq, HCl) 및 나트륨 2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-벤젠설포네이트 (50.9 mg, 190 umol, 5.0 eq)의 혼합물에 EDCI (51.0 mg, 266 umol, 7.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 그 다음 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 그 다음 혼합물을 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%- 45%,8min)로 정제하여 TAZ-128 (35.2 mg, 28.3 umol, 74.5% 수율)을 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.49 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.79-4.73 (m, 1H), 4.43-4.35 (m, 1H), 4.16-3.98 (m, 2H), 3.97-3.83 (m, 4H), 3.77-3.67 (m, 5H), 3.66-3.57 (m, 34H), 3.42 (s, 2H), 3.30-3.25 (m, 4H), 3.19 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 2.98 (t, J = 5.6 Hz, 3H), 2.44-2.19 (m, 4H), 2.03-1.89 (m, 2H), 1.80-1.54 (m, 4H), 0.96 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1244.5 (계산치); LC/MS [M+H] 1244.2 (관측치).
실시예 L-131 4-[3-[2-[2-[3-[4-[2-[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노 [3,2-b]아제핀-2-일]에틸]-1-피페리딜]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠설폰산, TAZ-L-131의 합성
Figure pct00278
3-[2-[2-[3-[4-[2-[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-티에노 [3,2-b]아제핀-2-일]에틸]-1- 피페리딜]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]프로판산, L-131a의 제조
DMF (2 mL) 중 5-아미노-N-에톡시-2-[2-(4-피페리딜)에틸]-N-프로필-6H-티에노[3,2-b] 아제핀-7-카복사미드, TAZ-176 (0.1 g, 227 umol, 1.0 eq, HCl)의 혼합물에 DIEA (87.9 mg, 680 umol, 118 uL, 3.0 eq) 및 3-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시] 에톡시]에톡시]프로판산 (90.3 mg, 227 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 한번에 첨가하고 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 prep-HPLC(칼럼: Welch Xtimate C18 100*25mm*3um;이동상: [물(0.05%HCl)-ACN];B%: 15%-35%,8min)로 정제하여 L-131a (0.06 g, 94.22 umol, 41.55% 수율)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.46 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 4.54 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.93 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.77-3.69 (m, 6H), 3.63-3.58 (m, 8H), 3.42 (s, 2H), 3.15-3.01 (m, 1H), 2.94 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.75-2.51 (m, 5H), 1.88-1.78 (m, 2H), 1.78-1.71 (m, 2H), 1.70-1.65 (m, 2H), 1.29-1.07 (m, 5H), 0.97 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
TAZ-L-131의 제조
DCM (1.5 mL) 및 DMA (0.3 mL) 중 L-131a (0.06 g, 89.1 umol, 1.0 eq, HCl) 및 나트륨 2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-벤젠설포네이트 (95.6 mg, 356umol, 4.0 eq)의 혼합물에 EDCI (103 mg, 535 umol, 6.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었고, 잔류물을 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.2%FA)-ACN];B%: 20%-45%,8min)로 정제하여 TAZ-L-131 (31.7 mg, 36.65 umol, 41.13% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.43 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 4.51 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.01 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.96-3.84 (m, 4H), 3.78-3.69 (m, 4H), 3.68-3.54 (m, 8H), 3.42 (s, 2H), 3.07-3.01 (m, 1H), 2.98 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.88 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.74-2.53 (m, 3H), 1.84-1.68 (m, 4H), 1.68-1.55 (m, 3H), 1.25-1.03 (m, 5H), 0.97 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 865.3 (계산치); LC/MS [M+H] 865.3 (관측치).
실시예 L-133 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-아미노-7-[2-(사이클로부톡시카보닐아미노)에톡시-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠설폰산, TAZ-L-133의 합성
Figure pct00279
Figure pct00280
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-아미노-7-[2- (사이클로부톡시카보닐아미노)에톡시-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-133a의 제조
MeOH (3 mL) 중 사이클로부틸 N-[2-[[5-아미노-2-(아제티딘-3-일메틸)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노]옥시에틸]카바메이트, TAZ-238 (0.14 g, 199 umol, 1.0 eq, TFA) 및 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (151 mg, 259 umol, 1.3 eq)의 혼합물에 NaBH3CN (25.0 mg, 398 umol, 2.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 그 다음 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 20%-50%,8min)로 정제하여 L-133a (0.2 g, 173 umol, 86.8% 수율, TFA)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.49 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.85-4.80 (m, 1H), 4.44-4.25 (m, 2H), 4.18-3.97 (m, 2H), 3.92 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.74-3.67 (m, 6H), 3.66-3.61 (m, 40H), 3.42 (s, 2H), 3.28-3.23 (m, 3H), 2.47 (td, J = 1.6, 6.4 Hz, 2H), 2.31-2.19 (m, 2H), 2.02-1.91 (m, 2H), 1.76-1.71 (m, 3H), 1.67-1.54 (m, 1H), 1.45 (s, 9H), 0.96 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-아미노-7-[2-(사이클로부톡시카보닐아미노)에톡시-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-133b의 제조
H2O (3 mL) 및 CH3CN (0.5 mL) 중 L-133a (0.2 g, 173 umol, 1.0 eq, TFA)의 혼합물에 HCl (12 M, 216 uL, 15.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 그 다음 80℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC(칼럼: Welch Xtimate C18 100*25mm*3um;이동상: [물(0.05%HCl)-ACN];B%: 10%-30%,8min)로 정제하여 L-133b (40 mg, 39.0 umol, 22.6% 수율, HCl)을 황색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-133의 제조
DCM (1 mL) 및 DMA (0.1 mL) 중 L-133b (40 mg, 39.0 umol, 1.0 eq, HCl) 및 나트륨 2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-벤젠설포네이트 (41.9 mg, 156 umol, 4.0 eq)의 혼합물에 EDCI (52.4 mg, 273 umol, 7.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 그 다음 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 10%-30%,8min)로 정제하여 TAZ-L-133 (14.7 mg, 12.1 umol, 30.9% 수율)을 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.48 (s, 1H), 7.02-6.96 (m, 1H), 4.84-4.84 (m, 1H), 4.41-4.25 (m, 2H), 4.15-4.14 (m, 1H), 4.19-3.97 (m, 2H), 3.95-3.84 (m, 4H), 3.76-3.68 (m, 4H), 3.68-3.58 (m, 38H), 3.52-3.44 (m, 2H), 3.42 (s, 2H), 3.28-3.21 (m, 3H), 2.99 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.25 (q, J = 8.4 Hz, 2H), 2.04-1.90 (m, 2H), 1.80-1.54 (m, 4H), 0.96 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1216.5 (계산치); LC/MS [M+H] 1216.6 (관측치).
실시예 L-139 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[3-[[5-아미노-7 -[이소프로폭시(프로필)카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠설폰산, TAZ-L-139의 합성
Figure pct00281
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[3-[[5-아미노-7-[이소프로폭시(프로필) 카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-139a의 제조
THF (3 mL) 중 5-아미노-2-(아제티딘-3-일메틸)-N-이소프로폭시-N-프로필 -6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-253 (100 mg, 204 umol, 1 eq, TFA) 및 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산 (158 mg, 224 umol, 1.1 eq)의 혼합물에 Et3N (61.9 mg, 612 umol, 85.1 uL, 3 eq)을 첨가하고, 그 다음 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 잔류물을 물 (5 mL)에 부었고 혼합물의 pH를 1M HCl으로 약 6 으로 조정하였다. 수성상을 에틸 아세테이트 (8 mL x 1)로 추출하여 버리고, 수성상을 디클로로메탄 /이소프로필 알코올 = 3:1 (8 mL x 3)로 추가로 추출하고, 조합된 유기상을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하여 L-139a (150 mg, 164 umol, 80.23% 수율)를 밝은 황색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-139의 제조
DCM (1.5 mL) 및 DMA (0.5 mL) 중 L-139a (100 mg, 109 umol, 1 eq)의 용액에 나트륨 2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-벤젠설포네이트 (117 mg, 436 umol, 4 eq) 및 EDCI (83.6 mg, 436 umol, 4 eq)을 첨가하고, 그 다음 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%-35%,8min)로 정제하여 TAZ-L-139 (69.7 mg, 55.3 umol, 50.76% 수율, TFA)를 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400MHz) δ 7.45 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.85-4.80 (m, 1H), 4.39 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 4.26-4.20 (m, 1H), 4.11 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.02 (dd, J = 5.2, 8.5 Hz, 1H), 3.87 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.82-3.67 (m, 6H), 3.66-3.58 (m, 34H), 3.42 (s, 2H), 3.18 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 3.05-2.95 (m, 3H), 2.42-2.31 (m, 2H), 1.79-1.69 (m, 2H), 1.18 (d, J = 6.2 Hz, 6H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1145.4 (계산치); LC/MS [M+H] 1145.4 (관측치).
실시예 L-144 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[3-[[5-아미노-7-[2-(이소프로폭시카보닐아미노)에톡시-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠설폰산, TAZ-L-144의 합성
Figure pct00282
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[3-[[5-아미노- 7-[2-(이소프로폭시카보닐아미노)에톡시-프로필- 카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-144a의 제조
THF (4 mL) 중 이소프로필 N-[2-[[5-아미노-2-(아제티딘-3-일메틸)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카보닐]-프로필-아미노]옥시에틸]카바메이트, TAZ-260 (0.13 g, 161 umol, 1.0 eq, TFA 염)의 혼합물에 Et3N (49.0 mg, 484 umol, 67.4 uL, 3.0 eq) 및 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산 (114 mg, 161 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 한번에 첨가하고 그 다음 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고 혼합물의 pH를 TFA로 ~6으로 조정하였다. 그 다음 EtOAc (10 mL)로 추출하여 버렸다. 수성상을 DCM:i-PrOH=3:1(10 mL x 3)로 추가 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 L-144a (0.21 g, 조물질, 3TFA)을 황색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-144의 제조
DCM (3 mL) 및 DMA (0.3 mL) 중 L-144a (0.2 g, 199 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 나트륨;2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시-벤젠설포네이트 (267 mg, 996 umol, 5.0 eq) 및 EDCI (267 mg, 1.39 mmol, 7.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 그 다음 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%-40%,8min)로 정제하여 TAZ-L-144 (98.2 mg, 79.69 umol, 40.01% 수율)을 담황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOH, 400 MHz) δ 7.49 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.82-4.74 (m, 1H), 4.39 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 4.11 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.03 (dd, J = 5.6, 9.2 Hz, 1H), 3.93 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.87 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.76-3.69 (m, 5H), 3.68-3.52 (m, 38H), 3.43 (s, 2H), 3.18 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 2.98 (t, J = 6.0 Hz, 3H), 2.43-2.30 (m, 2H), 1.79-1.68 (m, 2H), 1.17 (d, J = 6.4 Hz, 6H), 0.95 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1232.5 (계산치); LC/MS [M+H] 1232.7 (관측치).
실시예 L-145 4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[3-[[5-아미노-7-[2-(에틸카바모일아미노)에톡시-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노일옥시]-2,3,5,6-테트라플루오로-벤젠설폰산, TAZ-L-145의 합성
Figure pct00283
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[3-[[5-아미노-7-[2-(에틸카바모일아미노)에톡시-프로필-카바모일]-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일]메틸]아제티딘-1-일]-3-옥소-프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-145a의 제조
THF (3.00 mL) 중 5-아미노-2-(아제티딘-3-일메틸)-N-[2-(에틸카바모일아미노) 에톡시]-N-프로필-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복사미드, TAZ-261 (120 mg, 177 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 Et3N (54.0 mg, 532 umol, 3 eq) 및 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-옥소-3-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)프로폭시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산 (125 mg, 177 umol, 1 eq)을 첨가하고, 그 다음 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 혼합물의 pH를 TFA로 약 pH 6 으로 조정하고 MTBE (10 mL)로 추출하여 버리고 수성상을 DCM:i-PrOH=3:1 (20 mL x 3)로 추가 추출하였다. 유기층을 염수 (30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 L-145a (170 mg, 172 umol, 96.90% 수율)을 담황색 오일로서 얻었다.
TAZ-L-145의 제조
DCM (3.00 mL) 및 DMA (0.15 mL) 중 L-145a (170 mg, 172 umol, 1 eq) 및 나트륨 2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시벤젠설포네이트 (184 mg, 687 umol, 4 eq)의 용액에 EDCI (132 mg, 687 umol, 4 eq)을 첨가하고, 그 다음 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 20%-40%,8min)로 정제하여 TAZ-L-145 (103 mg, 77.37 umol, 45.02% 수율, TFA)을 담황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.47 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 4.39 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 4.11 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 4.02 (dd, J = 5.3, 8.8 Hz, 1H), 3.89 (td, J = 5.6, 13.9 Hz, 4H), 3.76-3.68 (m, 6H), 3.67-3.56 (m, 36H), 3.44 (s, 2H), 3.18 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 3.07 (q, J = 7.3 Hz, 3H), 2.98 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.44-2.30 (m, 2H), 1.79-1.69 (m, 2H), 1.05 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1217.5 (계산치); LC/MS [M+H] 1217.6 (관측치).
실시예 L-147 4-((40-(5-아미노-7-((2-((사이클로부톡시카보닐)아미노)에톡시)(프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)-34-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-35-아자테트라콘타노일)옥시)-2,3,5,6-테트라플루오로벤젠설폰산, TAZ-L-147의 합성
Figure pct00284
5-(5-아미노-7-((2-((사이클로부톡시카보닐)아미노)에톡시)(프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)펜탄-1-아미늄 클로라이드, L-147b의 제조
5-아미노-2-(5-((tert-부톡시카보닐)아미노)펜틸)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-7-카복실산, L-147a (0.78 g, 1.98 mmol, 1 당량) 및 사이클로부틸 (2-((프로필아미노)옥시)에틸)카바메이트 (0.5 g, 1.98 mmol, 1 당량)를 DMF에서 조합하였다. 콜리딘 (0.52 ml, 3.9 mmol, 1.98 당량)을 첨가하고, 이어서, EDC, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드로도 알려져 있는 EDCI, CAS 등록 번호 1892-57-5 (0.38 g, 1.98 mmol, 1 당량)을 첨가하였다. 반응을 LCMS로 모니터링하고, 그 다음 농축하고 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 조합된 분획을 동결건조하고, 그 다음 4 N HCl/디옥산에 용해시켰다. 탈보호된 생성물을 역상 플래시 크로마토그래피로 정제하여 L-147b (0.8 g, 1.51 mmol, 82%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 492.26 (계산치); LC/MS [M+H] 492.45 (관측치).
40-(5-아미노-7-((2-((사이클로부톡시카보닐)아미노)에톡시)(프로필)카바모일)-6H-티에노[3,2-b]아제핀-2-일)-34-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-35-아자테트라콘탄산, L-147c의 제조
중간체 L-147b (0.148 g, 0.3 mmol, 1 당량) 및 34-옥소-34-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사테트라트리아콘탄산 (0.23 g, 0.32 mmol, 1.07 당량)를 3 ml의 DMF에 용해시켰다. 콜리딘 (0.2 ml, 1.5 mmol, 5 당량)을 첨가하고, 반응을 주위 온도에서 교반하였다. 반응을 역상 HPLC로 정제하여 L-147c (0.16 g, 0.16 mmol, 52%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1032.54 (계산치); LC/MS [M+H] 1032.81 (관측치).
TAZ-L-147의 제조
중간체 L-147c (0.16 g, 0.155 mmol, 1 당량) 및 2,3,5,6-테트라플루오로-4-하이드록시벤젠설폰산 (0.083 g, 0.31 mmol, 2 당량)를 2 ml의 DMF에 용해시켰다. 콜리딘 (0.1 ml, 0.78 mmol, 5 당량)을 첨가하고, 이어서 EDC (0.045 g, 0.23 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 반응을 실온에서 교반하고 LCMS로 모니터링하고, 그 다음 물로 희석하고 역상 HPLC로 정제하여 TAZ-L-147 (0.095 g, 0.075 mmol, 49%)를 얻었다. LC/MS [M+H] 1260.49 (계산치); LC/MS [M+H] 1260.70 (관측치).
실시예 201 면역접합체 (IC)의 제조
예시적인 절차에서, 항체는 G-25 SEPHADEXTM 탈염 컬럼 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)를 사용하여 pH 8.3에서 100 mM 붕산, 50 mM 염화나트륨, 1 mM 에틸렌디아민테트라아세트산을 함유하는 접합 완충액으로 완충액 교환된다. 그 다음 완충액을 사용하여 용출액을 각각 약 1-10 mg/ml의 농도로 조정한 다음 멸균 여과한다. 항체를 20-30℃로 예열하고 화학식 II의 티에노아제핀-링커(TAZ-L) 화합물의 2 내지 20 (예를 들어, 7 내지 10) 몰 당량과 빠르게 혼합한다. 반응을 30℃에서 약 16시간 동안 진행되도록 하고 면역접합체 (IC)는 pH 7.2의 인산염 완충 식염수 (PBS)에서 평형화된 2개의 연속적인 G-25 탈염 컬럼을 실행하여 반응물로부터 분리되어 표 3의 면역접합체 (IC)를 제공한다. 애주번트-항체 비율 (DAR)은 XEVOTM G2-XS TOF 질량 분석기 (Waters Corporation)에 연결된 ACQUITYTM UPLC H-class (Waters Corporation, Milford, MA)에서 C4 역상 컬럼을 사용하여 액체 크로마토그래피 질량 분석기 분석에 의해 결정된다.
접합을 위해, 항체는 항체의 안정성 또는 항원 결합 특이성에 부정적인 영향을 미치지 않는 당업계에 공지된 수성 완충 시스템에 용해될 수 있다. 인산염 완충 식염수를 사용할 수 있다. 티에노아제핀-링커(TAZ-L) 중간체 화합물은 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 적어도 하나의 극성 비양성자성 용매를 포함하는 용매계에 용해된다. 일부 이러한 양태에서, 티에노아제핀-링커 (TAZ-L) 중간체는 pH 8의 Tris 완충액 (예를 들어, 50 mM Tris)에서 약 5 mM, 약 10 mM, 약 20 mM, 약 30 mM, 약 40 mM 또는 약 50 mM, 및 약 5 mM 내지 약 50mM 또는 약 10 mM 내지 약 30 Mm과 같은 범위의 농도로 용해된다. 일부 측면에서, 티에노아제핀-링커 중간체는 DMSO(디메틸설폭사이드), DMA(디메틸아세트아미드) 또는 아세토니트릴, 또는 다른 적합한 쌍극성 비양성자성 용매에 용해된다.
대안적으로 접합 반응에서, 등가 과량의 티에노아제핀-링커(TAZ-L) 중간 용액을 희석하고 항체 용액과 조합할 수 있다. 티에노아제핀-링커 중간체 용액은 적어도 하나의 극성 비양성자성 용매 및 적어도 하나의 극성 양성자성 용매로 적합하게 희석될 수 있으며, 그 예로는 물, 메탄올, 에탄올, n-프로판올 및 아세트산을 포함한다. 항체에 대한 티에노아제핀-링커 중간체의 몰 당량은 약 1.5:1, 약 3:1, 약 5:1, 약 10:1, 약 15:1, 또는 약 20:1, 및 약 1.5:1 내지 약 20:1 약 1.5:1 내지 약 15:1, 약 1.5:1 내지 약 10:1, 약 3:1 내지 약 15:1, 약 3:1 내지 약 10:1, 약 5:1 내지 약 15:1 또는 약 5:1 내지 약 10:1과 같은 범위일 수 있다. 반응은 LC-MS와 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 완료에 대해 적절하게 모니터링될 수 있다. 접합 반응은 전형적으로 약 1시간 내지 약 16시간 범위에서 완료된다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물에 시약을 첨가하여 반응을 켄칭할 수 있다. 항체 티올기가 티에노아제핀-링커 중간체의 말레이미드와 같은 티올 반응성 기와 반응하는 경우, 미반응 항체 티올 기가 캡핑 시약과 반응할 수 있다. 적절한 캡핑 시약의 예는 에틸말레이미드이다.
접합 후, 면역접합체를 정제하고, 예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 크로마토포커싱, 한외여과, 원심 한외여과, 접선 흐름 여과, 및 이들의 조합과 같은, 그러나 이들로 제한되지 않는 당업계에 공지된 정제 방법에 의해 접합되지 않은 반응물 및/또는 접합체 응집체로부터 분리할 수 있다. 예를 들어, 정제는 면역접합체를, 예컨대 20 mM 석신산나트륨, pH 5에서 희석하는 것이 선행될 수 있다. 희석된 용액을 양이온 교환 컬럼에 적용한 후, 예를 들어, 적어도 10개의 컬럼 부피의 20 mM 석신산나트륨, pH 5로 세척한다. 접합체는 PBS와 같은 완충액으로 적절히 용출될 수 있다.
실시예 202 HEK 리포터 분석
인간 TLR7 또는 인간 TLR8을 발현하는 HEK293 리포터 세포는 Invivogen에서 구입했으며 세포 증식 및 실험을 위해 판매자 프로토콜을 따랐다. 간략하게, 세포는 10% FBS, 제오신(Zeocin) 및 블라스티시딘(Blasticidin)이 보충된 DMEM 중 5% CO2에서 80-85% 합류까지 성장시켰다. 그 다음 세포를 HEK 검출 배지 및 면역자극 분자를 함유하는 기질과 함께 4x104세포/웰로 96-웰의 평평한 플레이트에 접종하였다. 620-655 nm 파장에서 플레이트 판독기를 사용하여 활성을 측정하였다.
실시예 203 시험관내 면역접합체 활성 평가
이 실시예는 본 발명의 면역접합체가 골수 활성화를 유도하는데 효과적이며, 따라서 암 치료에 유용함을 보여준다.
인간 항원 제시 세포의 단리: 인간 골수성 항원 제시 세포 (APC)는 CD14, CD16, CD40, CD86, CD123 및 HLA-DR에 대한 단일 클론 항체를 함유하는 ROSETTESEPTM 인간 단핵구 농축 칵테일 (Stem Cell Technologies, Vancouver, Canada)을 사용하여 밀도 구배 원심분리로 건강한 혈액 기증자 (Stanford Blood Center, Palo Alto, California)로부터 얻은 인간 말초 혈액으로부터 음성적으로 선택되었다. 미성숙 APC는 이어서 CD14, CD16, CD40, CD86, CD123 및 HLA-DR에 대한 단일 클론 항체를 함유하고 CD16 고갈이 없는 EASYSEPTM 인간 단핵구 농축 키트 (Stem Cell Technologies)를 사용하여 음성 선택을 통해 >90% 순도로 정제되었다.
골수성 APC 활성화 검정: 2 x 105 APC를 10% FBS, 100U/mL 페니실린, 100 μg/mL (밀리리터당 마이크로그램) 스트렙토마이신, 2 mM L-글루타민, 피루브산 나트륨, 비필수 아미노산, 및 지시된 경우 다양한 농도의 비접합 (네이키드) PD-L1 또는 HER2 항체 및 본 발명의 면역접합 (상기 실시예에 따라 제조됨)가 보충된 이스코브 변형 둘베코 배지, IMDM (Lonza)을 함유하는 96-웰 플레이트 (Corning, Corning, NY)에서 배양하였다. 트라스투주맙 및 아벨루맙을 항체 작제물로 사용하였다. 무세포 상청액을 18시간 후 ELISA를 통해 분석하여 전유발 반응의 판독으로서 TNFα 분비를 측정하였다.
본 명세서에 인용된 간행물, 특허 출원, 및 특허를 포함한 모든 참고 문헌은 각 참고 문헌이 개별적으로 그리고 구체적으로 참고로 인용되는 것으로 표시되고 그 전체가 여기에 기재된 것처럼 동일한 정도로 참고로 인용된다.
SEQUENCE LISTING <110> BOLT BIOTHERAPEUTICS, INC. <120> THIENOAZEPINE IMMUNOCONJUGATES, AND USES THEREOF <130> 17019.006WO1 <140> <141> <150> 62/984,184 <151> 2020-03-02 <150> 62/926,333 <151> 2019-10-25 <160> 607 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 1 Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 2 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 3 Arg His Leu Leu His 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 4 Ser His His Met His 1 5 <210> 5 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source 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Claims (74)

  1. 링커에 의해 하나 이상의 5-아미노티에노아제핀 모이어티에 공유 부착된 항체를 포함하고 하기 화학식 I을 갖는 면역접합체 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00285

    여기서:
    Ab는 항체이고;
    p는 1 내지 8의 정수이고;
    TAZ는 다음 식을 갖는 5-아미노티에노아제핀 모이어티이고:
    Figure pct00286

    R1, R2, R3, 및 R4는 H, C1-C12 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C12 카르보사이클릴, C6-C20 아릴, C2-C9 헤테로사이클릴, 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 및 헤테로아릴은 다음으로부터 선택되는 하나 이상의 기로 독립적으로 선택적으로 치환되고:
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C1-C12 알킬디일)-OR5;
    -(C3-C12 카보사이클릴);
    -(C3-C12 카보사이클릴)-*;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-NR5-C(=NR5)NR5-*;
    -(C6-C20 아릴);
    -(C6-C20 아릴)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-N(R5)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
    -(C2-C20 헤테로사이클릴);
    -(C2-C20 헤테로사이클릴)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-C(=NR5a)NR5-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C6-C20 아릴디일)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴);
    -(C1-C20 헤테로아릴)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C1-C20 헤테로아릴)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴)-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)-*;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -C(=O)N(R5)2;
    -C(=O)N(R5)-*;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)R5;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)CO2R5;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5a)N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5C(=NR5a)R5;
    -C(=O)NR5-(C1-C8 알킬디일)-NR5(C2-C5 헤테로아릴);
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -N(R5)2;
    -N(R5)-*;
    -N(R5)C(=O)R5;
    -N(R5)C(=O)-*;
    -N(R5)C(=O)N(R5)2;
    -N(R5)C(=O)N(R5)-*;
    -N(R5)CO2R5;
    -NR5C(=NR5a)N(R5)2;
    -NR5C(=NR5a)N(R5)-*;
    -NR5C(=NR5a)R5;
    -N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -N(R5)-(C2-C5 헤테로아릴);
    -N(R5)-S(=O)2-(C1-C12 알킬);
    -O-(C1-C12 알킬);
    -O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*; 및
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-OH;
    또는 R2 및 R3은 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    X1, X2, X3, 및 X4는 결합, C(=O), C(=O)N(R5), O, N(R5), S, S(O)2, 및 S(O)2N(R5)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    R5는 H, C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴디일, C1-C12 알킬, 및 C1-C12 알킬디일로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 두 개의 R5기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    R5a는 C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내며, 여기서 R1, R2, R3 및 R4 중 하나가 L에 부착되고;
    L은 다음으로 구성된 군에서 선택되는 링커이고:
    -C(=O)-(PEG)-;
    -C(=O)-(PEG)-C(=O)-;
    -C(=O)-(PEG)-O-;
    -C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
    -C(=O)-(PEG)-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
    -C(=O)-(PEG)-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    -C(=O)-(PEG)-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-(Mcgluc)-;
    -C(=O)-(PEG)-C(=O)-(Mcgluc)-;
    -C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
    -C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    -C(=O)-(PEG)-N(R5)-;
    -C(=O)-(PEG)-N(R5)C(=O)-;
    -C(=O)-(PEG)-N(R5)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
    -C(=O)-(PEG)-N+(R5)2-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
    -C(=O)-(PEG)-C(=O)-N(R5)CH(AA1)C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
    -C(=O)-(PEG)-C(=O)-N(R5)CH(AA1)C(=O)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
    -C(=O)-(PEG)-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
    -C(=O)-(PEG)-SS-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=O);
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    -C(=O)-CH2CH2OCH2CH2-(C1-C20 헤테로아릴디일)-CH2O-(PEG)-C(=O)-(Mcgluc)-;
    -C(=O)-CH2CH2OCH2CH2-(C1-C20 헤테로아릴디일)-CH2O-(PEG)-C(=O)-(Mcgluc)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-; 및
    -(석신이미딜)-(CH2)m-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    PEG는 화학식 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-을 갖고; m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고;
    PEP는 다음 화학식을 갖고:
    Figure pct00287

    여기서 AA1 및 AA2는 아미노산 측쇄로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 AA1 또는 AA2와 인접한 질소 원자는 5원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
    R6은 -CH2O-C(=O)- 및 임의로 다음으로 치환된, C6-C20 아릴디일 및 C1-C20 헤테로아릴디일로 이루어진 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00288

    Mcgluc는 다음 기들로부터 선택되고:
    Figure pct00289
    및
    Figure pct00290

    여기서 q는 1 내지 8이고 AA는 아미노산 측쇄이고;
    알킬, 알킬디일, 알케닐, 알케닐디일, 알키닐, 알키닐디일, 아릴, 아릴디일, 카르보사이클릴, 카르보사이클릴디일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴디일, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴디일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, - NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OCH2F, -OCHF2, -OCF3, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 독립적으로 선택적으로 치환되는, 면역접합체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체가 PD-L1에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인, 면역접합체.
  3. 제2항에 있어서, 상기 항체가 아테졸리주맙, 더발루맙, 및 아벨루맙, 또는 이들의 바이오시밀러 또는 바이오베터로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 면역접합체.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항체가 HER2에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인, 면역접합체.
  5. 제4항에 있어서, 상기 항체가 트라스투주맙 및 퍼투주맙, 또는 이들의 바이오시밀러 또는 바이오베터로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 면역접합체.
  6. 제1항에 있어서, 상기 항체가 CEA에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인, 면역접합체.
  7. 제6항에 있어서, 상기 항체가 라베투주맙, 또는 이의 바이오시밀러 또는 바이오베터인, 면역접합체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, PEP가 하기 화학식을 갖는 것인, 면역접합체:
    Figure pct00291

    여기서 AA1 및 AA2는 자연 발생 아미노산의 측쇄로부터 독립적으로 선택된다.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 인접한 질소 원자를 갖는 AA1 또는 AA2가 5원 고리 프롤린 아미노산을 형성하는 것인, 면역접합체.
  10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, PEP는 하기 화학식을 갖는, 면역접합체:
    Figure pct00292
  11. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, Mcgluc는 하기 화학식을 갖는, 면역접합체:
    Figure pct00293
  12. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, AA1 및 AA2는 H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2(C6H5), -CH2CH2CH2CH2NH2, -CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, -CHCH(CH3)CH3, -CH2SO3H, 및 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2로부터 독립적으로 선택되는, 면역접합체.
  13. 제12항에 있어서, AA1은 -CH(CH3)2이고, AA2는 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2인, 면역접합체.
  14. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, AA1 및 AA2는 GlcNAc 아스파르트산, -CH2SO3H, 및 -CH2OPO3H로부터 독립적으로 선택되는, 면역접합체.
  15. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, X1은 결합이고, R1은 H인, 면역접합체.
  16. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, X2는 결합이고, R2는 C1-C8 알킬인, 면역접합체.
  17. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, X2 및 X3은 각각 결합이고, R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5로부터 독립적으로 선택되는, 면역접합체.
  18. 제17항에 있어서, R2 및 R3은 각각 -CH2CH2CH3, -OCH2CH3, -CH2CH2CF3, 및 -CH2CH2CH2OH로부터 독립적으로 선택되는, 면역접합체.
  19. 제17항에 있어서, R2는 C1-C8 알킬이고, R3은 -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R4인, 면역접합체.
  20. 제19항에 있어서, R2는 -CH2CH2CH3이고 R3은 -CH2CH2CH2NHCO2(t-Bu)인, 면역접합체.
  21. 제17항에 있어서, R2 및 R3은 각각 -CH2CH2CH3인, 면역접합체.
  22. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, X3-R3은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체:
    Figure pct00294

    Figure pct00295
    및
    Figure pct00296
    .
  23. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3 중 하나는,
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C12 알킬디일)-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5)-N(R5)-*;
    -(C1-C12 알킬디일)-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C12 알킬디일)-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=NR5)N(R5)-*;
    -(C2-C6 알키닐디일)-N(R5)-*; 및
    -(C2-C6 알키닐디일)-N(R5)C(=NR5)N(R5)-*로부터 선택되며,
    X2 및 X3는 결합이며, 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내는, 면역접합체.
  24. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체:
    -C(=O)-(PEG)-;
    -C(=O)-(PEG)-C(=O)-;
    -C(=O)-(PEG)-O-;
    -C(=O)-(PEG)-N(R5)-; 및
    -C(=O)-(PEG)-N(R5)C(=O)-.
  25. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 Ia-Ic로부터 선택되는, 면역접합체:
    Figure pct00297

    및
    Figure pct00298
  26. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 Id-Ih로부터 선택되는, 면역접합체:
    Figure pct00299

    Figure pct00300

    Figure pct00301
    및
    Figure pct00302
  27. 제26항에 있어서, R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5로부터 독립적으로 선택되는, 면역접합체.
  28. 제27항에 있어서, R2 및 R3은 각각 -CH2CH2CH3, -OCH2CH3, -CH2CH2CF3, 및 -CH2CH2CH2OH로부터 독립적으로 선택되는, 면역접합체.
  29. 화학식 II의 5-아미노티에노아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00303

    여기서 R1, R2, R3, 및 R4 중 하나는 L에 부착되고;
    R1, R2, R3, 및 R4는 독립적으로 H, C1-C12 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C12 카르보사이클릴, C6-C20 아릴, C2-C9 헤테로사이클릴, 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 및 헤테로아릴은,
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C1-C12 알킬디일)-OR5;
    -(C3-C12 카보사이클릴);
    -(C3-C12 카보사이클릴)-*;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-NR5-C(=NR5)NR5-*;
    -(C6-C20 아릴);
    -(C6-C20 아릴)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-N(R5)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
    -(C2-C20 헤테로사이클릴);
    -(C2-C20 헤테로사이클릴)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-C(=NR5a)NR5-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C6-C20 아릴디일)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴);
    -(C1-C20 헤테로아릴)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C1-C20 헤테로아릴)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴)-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)-*;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -C(=O)N(R5)2;
    -C(=O)N(R5)-*;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)R5;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)CO2R5;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5a)N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5C(=NR5a)R5;
    -C(=O)NR5-(C1-C8 알킬디일)-NR5(C2-C5 헤테로아릴);
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -N(R5)2;
    -N(R5)-*;
    -N(R5)C(=O)R5;
    -N(R5)C(=O)-*;
    -N(R5)C(=O)N(R5)2;
    -N(R5)C(=O)N(R5)-*;
    -N(R5)CO2R5;
    -NR5C(=NR5a)N(R5)2;
    -NR5C(=NR5a)N(R5)-*;
    -NR5C(=NR5a)R5;
    -N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -N(R5)-(C2-C5 헤테로아릴);
    -N(R5)-S(=O)2-(C1-C12 알킬);
    -O-(C1-C12 알킬);
    -O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*; 및
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-OH로부터 선택되는 하나 이상의 기로 선택적으로 치환되고:
    또는 R2 및 R3은 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    X1, X2, X3, 및 X4는 결합, C(=O), C(=O)N(R5), O, N(R5), S, S(O)2, 및 S(O)2N(R5)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    R5는 H, C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴디일, C1-C12 알킬, 및 C1-C12 알킬디일로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 두 개의 R5기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    R5a는 C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내며, 여기서 R1, R2, R3 및 R4 중 하나가 L에 부착되고;
    L은,
    Q-C(=O)-(PEG)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-O-;
    Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-(Mcgluc)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-(Mcgluc)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-N(R5)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-N(R5)C(=O)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-N(R5)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-N+(R5)2-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-N(R5)CH(AA1)C(=O)-(PEG)-C(=O)-(PEP)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-N(R5)CH(AA1)C(=O)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-SS-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-;
    Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-;
    Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-;
    Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=O);
    Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    Q-C(=O)-CH2CH2OCH2CH2-(C1-C20 헤테로아릴디일)-CH2O-(PEG)-C(=O)-(Mcgluc)-;
    Q-C(=O)-CH2CH2OCH2CH2-(C1-C20 헤테로아릴디일)-CH2O-(PEG)-C(=O)-(Mcgluc)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-; 및
    Q-(CH2)m-C(=O)-(PEP)-N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-으로 구성된 군에서 선택되는 링커이고:
    여기서 PEG는 화학식 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-을 갖고; m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고;
    PEP는 다음 화학식을 갖고:
    Figure pct00304

    여기서 AA1 및 AA2는 아미노산 측쇄로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 AA1 또는 AA2와 인접한 질소 원자는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
    R6은 -CH2O-C(=O)- 및 임의로 다음으로 치환된, C6-C20 아릴디일 및 C1-C20 헤테로아릴디일로 이루어진 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00305

    Mcgluc는 다음 기들로부터 선택되고:
    Figure pct00306
    및
    Figure pct00307

    여기서 q는 1 내지 8이고 AA는 아미노산 측쇄이고;
    Q는 N-하이드록시석신이미딜, N-하이드록시설포석신이미딜, 말레이미드, 및 F, Cl, NO2, 및 SO3 -로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환된 페녹시로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    여기서 알킬, 알킬디일, 알케닐, 알케닐디일, 알키닐, 알키닐디일, 아릴, 아릴디일 카르보사이클릴, 카르보사이클릴디일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴디일, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴디일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, - NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OCH2F, -OCHF2, -OCF3, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 독립적으로 및 선택적으로 치환된다.
  30. 제29항에 있어서, PEP는 하기 화학식을 갖는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00308

    여기서 AA1 및 AA2는 자연 발생 아미노산의 측쇄로부터 독립적으로 선택된다.
  31. 제30항에 있어서, 인접한 질소 원자를 갖는 AA1 또는 AA2가 5-원 고리를 형성하여 프롤린 아미노산을 형성하는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  32. 제29항에 있어서, PEP는 하기 화학식을 갖는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00309
  33. 제29항에 있어서, Mcgluc는 하기 화학식을 갖는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00310
  34. 제29항에 있어서, AA1 및 AA2는 H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2(C6H5), -CH2CH2CH2CH2NH2, -CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, -CHCH(CH3)CH3, -CH2SO3H, 및 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2로부터 독립적으로 선택되는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  35. 제34항에 있어서, AA1은 -CH(CH3)2이고, AA2는 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2인, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  36. 제30항에 있어서, AA1 및 AA2가 GlcNAc 아스파르트산, -CH2SO3H, 및 -CH2OPO3H로부터 독립적으로 선택되는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  37. 제29항에 있어서, X1은 결합이고, R1은 H인, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  38. 제29항에 있어서, X2은 결합이고, R2는 C1-C8 알킬인, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  39. 제29항에 있어서, X2 및 X3은 각각 결합이고, R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5로부터 독립적으로 선택되는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  40. 제39항에 있어서, R2 및 R3은 각각 -CH2CH2CH3, -OCH2CH3, -CH2CH2CF3, 및 -CH2CH2CH2OH로부터 독립적으로 선택되는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  41. 제39항에 있어서, R2는 C1-C8 알킬이고 R3는 -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R4인, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  42. 제41항에 있어서, R2는 -CH2CH2CH3이고 R3는 -CH2CH2CH2NHCO2(t-Bu)인, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  43. 제40항에 있어서, R2 및 R3 각각은 -CH2CH2CH3인, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  44. 제29항에 있어서, X3-R3이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00311

    Figure pct00312

    Figure pct00313
    및
    Figure pct00314
    .
  45. 제29항에 있어서, R2 및 R3 각각은,
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C12 알킬디일)-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5)-N(R5)-*;
    -(C1-C12 알킬디일)-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C12 알킬디일)-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=NR5)N(R5)-*;
    -(C2-C6 알키닐디일)-N(R5)-*; 및
    -(C2-C6 알키닐디일)-N(R5)C(=NR5)N(R5)-*로부터 선택되며,
    X2 및 X3은 결합이며, 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  46. 제29항에 있어서, L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물:
    Q-C(=O)-(PEG)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-C(=O)-;
    Q-C(=O)-(PEG)-O-;
    Q-C(=O)-(PEG)-N(R5)-; 및
    Q-C(=O)-(PEG)-N(R5)C(=O)-.
  47. 제29항에 있어서, 화학식 IIa-IIc로부터 선택되는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00315

    및
    Figure pct00316
  48. 제29항에 있어서, 화학식 IId-IIh로부터 선택되는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00317

    Figure pct00318

    Figure pct00319
    및
    Figure pct00320
  49. 제48항에 있어서, R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5로부터 독립적으로 선택되는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  50. 제49항에 있어서, R2 및 R3은 각각 -CH2CH2CH3, -OCH2CH3, -CH2CH2CF3, 및 -CH2CH2CH2OH로부터 독립적으로 선택되는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  51. 제29항에 있어서, Q는 하기로부터 선택되는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00321

    Figure pct00322
    및
    Figure pct00323
  52. 제29항에 있어서, Q는 하나 이상의 F로 치환된 페녹시인, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  53. 제52항에 있어서, Q는 2,3,5,6-테트라플루오로페녹시인, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  54. 제29항에 있어서, 표 2a 및 표 2b로부터 선택되는, 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물.
  55. 항체와 표 2a 및 표 2b에서 선택된 5-아미노-티에노아제핀-링커 화합물과의 접합에 의해 제조된 면역접합체.
  56. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체의 치료적 유효량 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 비히클, 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  57. 암의 치료 방법으로서, 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체의 치료적 유효량을 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  58. 제57항에 있어서, 상기 암은 TLR7 및/또는 TLR8 효능작용에 의해 유도된 전염증 반응에 민감한, 방법.
  59. 제57항에 있어서, 상기 암은 PD-L1 발현 암, HER2 발현 암, 및 CEA 발현 암으로부터 선택되는, 방법.
  60. 제57항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 방광암, 요로암, 요로상피암, 폐암, 비-소세포 폐암, 메르켈 세포 암종, 결장암, 결장직장암, 위암, 및 유방암으로부터 선택되는 것인, 방법.
  61. 제60항에 있어서, 상기 유방암이 삼중-음성 유방암인, 방법.
  62. 제60항에 있어서, 상기 메르켈 세포 암종 암이 전이성 메르켈 세포 암종인, 방법.
  63. 제60항에 있어서, 상기 위암이 HER2 과발현 위암인, 방법.
  64. 제60항에 있어서, 상기 암이 위식도 접합부 선암종인, 방법.
  65. 암 치료를 위한 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체의 용도.
  66. 제29항의 화학식 II의 5-아미노티에노아제핀-링커 화합물을 항체와 접합하는, 제1항의 화학식 I의 면역접합체의 제조 방법.
  67. 제2항에 있어서, 상기 항체 작제물이 A형 PD-L1 항체이고 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 포함하고, 여기서:
    상기 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드는 A형 서열 번호 1 내지 23 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (HCDR1), 서열 번호 24 내지 57 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (HCDR2), 및 서열 번호 58 내지 95 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (HCDR3)을 포함하거나; 또는
    상기 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드는 서열 번호 96 내지 128 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (LCDR1), 서열 번호 129 내지 151 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (LCDR2), 및 서열 번호 152 내지 155 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (LCDR3)을 포함하고;
    여기서 서열은 도 1 내지 4로부터의 것인, 면역접합체.
  68. 제2항에 있어서, 상기 항체 작제물이 A형 PD-L1 항체이고 서열 번호 223 내지 264 중 어느 하나의 면역글로불린 중쇄 가변 영역 또는 적어도 그의 CDR; 및 서열 번호 265 내지 306 중 어느 하나의 면역글로불린 경쇄 가변 영역 또는 적어도 그의 CDR을 포함하고;
    여기서 서열은 도 1 내지 4로부터의 것인, 면역접합체.
  69. 제2항에 있어서, 상기 항체 작제물이 A형 PD-L1 항체이고 서열 번호 223 내지 264 중 어느 하나와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드, 및 서열 번호 265 내지 306 중 어느 하나와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 포함하고;
    여기서 서열은 도 1 내지 4로부터의 것인, 면역접합체.
  70. 제2항에 있어서, 상기 항체 작제물이 A형 PD-L1 항체이고 도 1a 내지 d의 PD-L1 결합제의 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 폴리펩타이드, 또는 적어도 그의 CDR을 포함하는, 면역접합체.
  71. 제2항에 있어서, 상기 항체 작제물이 B형 PD-L1 항체이고 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 포함하고, 여기서:
    상기 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드는 서열번호: 1-14 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (HCDR1), 서열번호: 15-31 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (HCDR2), 및 서열번호: 32-52 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (HCDR3)를 포함하거나; 또는
    상기 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드는 서열번호: 53-67 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 1 (LCDR1), 서열번호: 68-79 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 2 (LCDR2), 및 서열번호: 80-91 중 어느 하나를 포함하는 상보성 결정 영역 3 (LCDR3)를 포함하고;
    상기 서열은 도 5 내지 8로부터의 것인, 면역접합체.
  72. 제2항에 있어서, 상기 항체 작제물은 B형 PD-L1 항체이고 서열번호: 123-143 중 어느 하나의 면역글로불린 중쇄 가변 영역 또는 적어도 그의 CDR; 및 서열번호: 144-164 중 어느 하나의 면역글로불린 경쇄 가변 영역 또는 적어도 그의 CDR을 포함하고;
    상기 서열은 도 5 내지 8로부터의 것인, 면역접합체.
  73. 제2항에 있어서, 상기 항체 작제물은 B형 PD-L1 항체이고 서열번호: 123-143 중 어느 하나와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드, 및 서열번호: 144-164 중 어느 하나와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 포함하고;
    상기 서열은 도 5 내지 8로부터의 것인, 면역접합체.
  74. 제2항에 있어서, 항체 작제물이 B형 PD-L1 항체이고 도 5a 내지 b의 PD-L1 결합제의 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 폴리펩타이드, 또는 적어도 그의 CDR을 포함하는, 면역접합체.
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