CN116723866A - 抗pd-l1免疫缀合物和其用途 - Google Patents

抗pd-l1免疫缀合物和其用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供式I的免疫缀合物，所述免疫缀合物包含通过与一个或多个8‑Cyc‑2‑氨基苯并氮杂卓衍生物缀合而连接的抗PD‑L1抗体。本发明还提供了包含反应性官能团的8‑Cyc‑2‑氨基苯并氮杂卓衍生物中间体组合物。此类中间体组合物是适合通过接头或连接部分形成所述免疫缀合物的基质。本发明进一步提供用所述免疫缀合物治疗癌症的方法。

Description

抗PD-L1免疫缀合物和其用途
相关申请的交叉引用
本非临时申请要求2020年12月11日提交的美国临时申请第63/124,396号的优先权益，所述临时申请以全文引用的方式并入。
序列表
本申请包含以ASCII格式用电子方式递交并且特此以全文引用的方式并入的序列表。2021年12月6日创建的所述ASCII拷贝命名为17019 013WO1_SL.txt并且大小为244,809字节。
发明领域
本发明总体上涉及一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包含缀合至一个或多个8-环基-2-氨基苯并氮杂卓分子的抗PD-L1抗体。
发明背景
需要用于递送抗体和免疫佐剂的新组合物和方法，以达到难以接近的肿瘤和/或扩展用于癌症患者和其它受试者的治疗选项。本发明提供了此类组合物和方法。
发明内容
本发明总体上关于免疫缀合物，所述免疫缀合物包含通过缀合而连接至一个或多个8-环基-2-氨基苯并氮杂卓衍生物的抗PD-L1抗体。本发明进一步关于包含反应性官能团的8-环基-2-氨基苯并氮杂卓衍生物中间体组合物。此类中间体组合物是适合用于形成免疫缀合物的基质，其中抗体可以通过接头L共价结合至具有下式的8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓(CycBz)部分：
其中Cyc选自苯基二基、杂环基二基和杂芳基二基；且R1、R2、R3和R4中的一者附接至L。R1-4和X1-4取代基在本文中定义。
本发明进一步关于此种免疫缀合物在治疗疾患，尤其癌症中的用途。
本发明的一个方面是一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包含共价附接至接头的抗PD-L1抗体，所述接头共价附接至一个或多个8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓部分。
本发明的另一个方面是8-环基-2-氨基苯并氮杂卓-接头化合物。
本发明的另一个方面是一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括施用治疗有效量的免疫缀合物，所述免疫缀合物包含通过缀合而连接至一个或多个8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓部分的抗PD-L1抗体。
本发明的另一个方面是一种免疫缀合物用于治疗癌症的用途，所述免疫缀合物包含通过缀合而连接至一个或多个8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓部分的抗PD-L1抗体。
本发明的另一个方面是一种通过一个或多个8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓部分与抗PD-L1抗体缀合来制备免疫缀合物的方法。
附图说明
图1A-D显示PD-L1 A型结合剂1-42的重链和轻链CDR。
图2A-D显示PD-L1 A型结合剂1-42的第一(HFW1)、第二(HFW2)、第三(HFW3)和第四(HFW4)重链构架区多肽。
图3A-D显示PD-L1 A型结合剂1-42的第一(LFW1)、第二(LFW2)、第三(LFW3)和第四(LFW4)轻链构架区多肽。
图4A-D显示PD-L1 A型结合剂1-42的重链可变区(VH)。
图4E-G显示PD-L1 A型结合剂1-42的轻链可变区(VL)。
图5A-B显示PD-L1 B型结合剂1-21的重链和轻链CDR。
图6A-B显示PD-L1 B型结合剂1-21的第一(HFW1)、第二(HFW2)、第三(HFW3)和第四(HFW4)重链构架区多肽。
图7A-B显示PD-L1 B型结合剂1-21的第一(LFW1)、第二(LFW2)、第三(LFW3)和第四(LFW4)轻链构架区多肽。
图8A-B显示PD-L1 B型结合剂1-21的重链可变区(VH)。
图8C-D显示PD-L1 B型结合剂1-21的轻链可变区(VL)。
图9a显示了治疗后肿瘤体积随时间变化的体内研究图，比较了免疫缀合物PD-L1IC-51与未缀合的抗PD-L1抗体在同基因MB49肿瘤模型中的功效。用包含CycBzL-24(表2b)的表3b的免疫缀合物IC-51、包含CycBzL-24的大鼠IgG2b同型对照免疫缀合物、未缀合的抗PD-L1和未缀合的IgG2b同型抗体以10mg/kg IP，Q3Dx4治疗带有大(～200mm3)同基因MB49肿瘤的小鼠(n＝6只/组)。
图9b显示了植入MB49肿瘤细胞后肿瘤体积随时间变化的体内研究图，评估了再攻击研究中的免疫记忆。在图9a的研究中，在用表3b的免疫缀合物PD-L1 IC-51治疗后经历MB49肿瘤完全消退的所有6只小鼠在肿瘤清除后约1个月(最终剂量后约7周)用MB49肿瘤细胞再次攻击。
图10a显示了用包含CycBzL-24(表2b)的表3b的免疫缀合物IC-51、包含CycBzL-24的大鼠IgG2b同型对照免疫缀合物、未缀合的抗PD-L1和未缀合的IgG2b同型抗体以5mg/kgIP，Q3Dx4治疗亲本同基因MB49肿瘤后肿瘤体积随时间变化的图。
图10b显示了用包含CycBzL-24(表2b)的表3b的免疫缀合物IC-51、包含CycBzL-24的大鼠IgG2b同型对照免疫缀合物、未缀合的抗PD-L1和未缀合的IgG2b同型抗体以5mg/kgIP，Q3Dx4治疗肿瘤细胞上缺乏PD-L1表达的PD-L1敲除(PD-L1 KO)同基因MB49肿瘤后肿瘤体积随时间变化的图。
具体实施方式
现在将详细参考本发明的某些实施方案，其实例以所附结构和化学式说明。虽然将结合所列举的实施方案描述本发明，但应了解，并不意图将本发明限于那些实施方案。相反，本发明意图涵盖可以包括于如权利要求书所界定的本发明范围内的所有替代物、修改和等同物。
本领域技术人员将识别类似或等同于本文所描述的那些的许多方法和材料，其可以用于实施本发明。本发明决不限于所描述的方法和材料。
定义
术语“免疫缀合物”或“免疫刺激抗体缀合物”是指经由接头共价键结至佐剂部分的抗体构建体。术语“佐剂”是指能够在暴露于佐剂的受试者中引发免疫反应的物质。
“佐剂部分”是指如本文所描述，例如经由接头共价键结至抗体构建体的佐剂。佐剂部分可以在键结至抗体构建体时或在向受试者施用免疫缀合物后从抗体构建体裂解(例如酶促裂解)之后引发免疫反应。
“佐剂”是指能够在暴露于佐剂的受试者中引发免疫反应的物质。
术语“Toll样受体”和“TLR”是指高度保守的哺乳动物蛋白家族的任何成员，所述成员识别病原体相关的分子模式并且充当先天免疫中的关键信号传导元件。TLR多肽共享特征结构，所述特征结构包括具有富亮氨酸重复的细胞外结构域、跨膜结构域和TLR信号传导中所涉及的细胞内结构域。
术语“Toll样受体7”和“TLR7”是指与公开可用的TLR7序列，例如人类TLR7多肽的GenBank寄存编号AAZ99026或鼠类TLR7多肽的GenBank寄存编号AAK62676共享至少约70％、约80％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高序列同一性的核酸或多肽。
术语“Toll样受体8”和“TLR8”是指与公开可用的TLR7序列，例如人类TLR8多肽的GenBank寄存编号AAZ95441或鼠类TLR8多肽的GenBank寄存编号AAK62677共享至少约70％、约80％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高序列同一性的核酸或多肽。
“TLR激动剂”是直接或间接结合至TLR(例如TLR7和/或TLR8)以诱导TLR信号传导的物质。TLR信号传导中任何可检测的差异可以指示激动剂刺激或活化TLR。信号传导差异可以表现为例如以下各者的变化：靶基因的表达、信号转导组分的磷酸化、诸如核因子-κB(NF-κB)的下游元件的细胞内定位、某些组分(诸如IL-1受体相关激酶(IRAK))与其它蛋白质或细胞内结构的缔合，或诸如激酶(诸如有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK))的组分的生物化学活性。
“抗体”是指包含来自免疫球蛋白基因的抗原结合区(包括互补决定区(CDR))的多肽或其片段。术语“抗体”特定涵盖展现所需生物活性的单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段。示例性免疫球蛋白(抗体)结构单元包含四聚体。每个四聚体由两对相同多肽链组成，每一对具有由二硫键连接的一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50-70kDa)。每条链由结构域组成，所述结构域称作免疫球蛋白结构域。这些结构域按大小和功能分为不同类别，例如，轻链和重链上的可变结构域或区(分别是VL和VH)以及轻链和重链上的恒定结构域或区(分别是CL和CH)。每条链的N端界定约100至110个或更多个氨基酸的可变区，称作互补位(paratope)，其主要负责抗原识别，即，抗原结合结构域。轻链分为κ或λ。重链分为γ、μ、α、δ或ε，其依次分别定义免疫球蛋白种类IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。IgG抗体是由四条肽链组成的约150kDa大分子。IgG抗体含有两条约50kDa的相同种类γ重链和两条约25kDa的相同轻链，由此成为四聚四级结构。两条重链由二硫键彼此连接并且各自连接至轻链。所得四聚体具有两个相同半部分，它们一起形成类Y形状。叉形物的每个末端含有相同抗原结合结构域。人类中存在四种IgG子类(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)，以它们在血清中的丰度顺序命名(即，IgG1最丰富)。通常，抗体的抗原结合结构域在结合至癌细胞的特异性和亲和力中将最为关键。
“抗体构建体”是指包含(i)抗原结合结构域和(ii)Fc结构域的抗体或融合蛋白。
在一些实施方案中，结合剂是抗原结合抗体“片段”，其为至少包含抗体的抗原结合区的构建体，所述抗原结合区是单独的或与共同构成抗原结合构建体的其它组分一起。许多不同类型的抗体“片段”在本领域中是已知的，包括例如(i)Fab片段，其为由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，其为包含两个在铰链区由二硫桥连接的Fab片段的二价片段；(iii)Fv片段，其由抗体的单臂的VL和VH结构域组成；(iv)Fab'片段，其通过使用温和还原条件使F(ab')2片段的二硫桥断裂而产生；(v)二硫键稳定的Fv片段(dsFv)；以及(vi)单链Fv(scFv)，其为由Fv片段的经合成接头连接的两个结构域(即，VL和VH)组成的单价分子，所述合成接头使两个结构域能够合成为单一多肽链。
抗体或抗体片段可以是较大构建体的一部分，例如，抗体片段与额外区域的缀合物或融合构建体。举例来说，在一些实施方案中，抗体片段可以融合至如本文所描述的Fc区。在其它实施方案中，抗体片段(例如Fab或scFv)可以是嵌合抗原受体或嵌合T细胞受体的一部分，例如，通过融合至跨膜结构域(任选地具有间插接头或“茎(stalk)”(例如铰链区))和任选的细胞间信号传导结构域。
“表位”意指与抗原结合结构域结合的抗原的任何抗原决定子或表位决定子(即，在抗原结合结构域的互补位处)。抗原决定子通常由分子的化学活性表面基团，诸如氨基酸或糖侧链组成，并且通常具有特定三维结构特征以及特定电荷特征。
术语“Fc受体”或“FcR”是指结合至抗体的Fc区的受体。存在三个主要种类的Fc受体：(1)结合至IgG的FcγR，(2)结合至IgA的FcαR，以及(3)结合至IgE的FcεR。FcγR家族包括若干成员，诸如FcγI(CD64)、FcγRIIA(CD32A)、FcγRIIB(CD32B)、FcγRIIIA(CD16A)和FcγRIIIB(CD16B)。Fcγ受体对IgG的亲和力不同，并且对IgG子类(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)的亲和力也不同。
如本文所提及的核酸或氨基酸序列“同一性”可以通过将所关注的核酸或氨基酸序列与参考核酸或氨基酸序列进行比较来确定。百分比同一性是在最佳比对的所关注序列与参考序列之间相同(即，同一)的核苷酸或氨基酸残基数除以最长序列的长度(即，所关注序列或参考序列任一者的长度，以较长者为准)。序列的比对和百分比同一性的计算可以使用可用的软件程序进行。此类程序的实例包括CLUSTAL-W、T-Coffee和ALIGN(用于核酸和氨基酸序列的比对)、BLAST程序(例如BLAST 2.1、BL2SEQ、BLASTp、BLASTn等等)和FASTA程序(例如FASTA3x、FASTM和SSEARCH)(用于序列比对和序列相似性搜索)。序列比对算法也在以下文献中公开：例如Altschul等,J.Molecular Biol.,215(3):403-410(1990)；Beigert等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,106(10):3770-3775(2009)；Durbin等编,Biological SequenceAnalysis:Probalistic Models of Proteins and Nucleic Acids,CambridgeUniversity Press,Cambridge,UK(2009)；Soding,Bioinformatics,21(7):951-960(2005)；Altschul等,Nucleic Acids Res.,25(17):3389-3402(1997)；以及Gusfield,Algorithms on Strings,Trees and Sequences,Cambridge University Press,Cambridge UK(1997))。序列的百分比(％)同一性还可以计算为例如100x[(相同位置)/min(TGA、TGB)]，其中TGA和TGB是在比对中使TGA和TGB最小化的肽序列A和B中的残基数与内部空位的总和。参见例如Russell等,J.Mol Biol.,244:332-350(1994)。
结合剂包含一起形成抗原结合位点的Ig重链和轻链可变区多肽。重链和轻链可变区中的每一者是包含由构架区连接的三个互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)的多肽。结合剂可以是本领域中已知的包含Ig重链和轻链的多种类型结合剂中的任一者。举例来说，结合剂可以是抗体、抗原结合抗体“片段”或T细胞受体。
“生物类似药(Biosimilar)”是指具有类似于以下抗体的活性特性的经核准的抗体构建体：例如，PD-L1靶向抗体，诸如阿特珠单抗(atezolizumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)和阿维鲁单抗(avelumab)。
“生物改良药(Biobetter)”是指经核准的抗体构建体，其为诸如阿特珠单抗、德瓦鲁单抗和阿维鲁单抗的先前经核准的抗体构建体的改良。生物改良药相对于先前经核准的抗体构建体可以具有一个或多个修饰(例如改变的聚糖谱，或独特表位)。生物改良药是一种重组蛋白药物，与现有的生物制药属于同一类，但并不完全相同；并且优于原版。生物改良药不仅仅是一种新药，也不是一种仿制药。生物类似药和生物改良药都是生物制剂的变体；前者是原研药的近似复制品，而后者在疗效、安全性和耐受性或给药方案方面有所改进。
“氨基酸”是指可以并入肽、多肽或蛋白质中的任何单体单元。氨基酸包括天然存在的α-氨基酸及其立体异构体，以及非天然(非天然存在的)氨基酸及其立体异构体。给定氨基酸的“立体异构体”是指具有相同分子式和分子内键，但键和原子的三维排列不同的异构体(例如L-氨基酸和对应的D-氨基酸)。氨基酸可以经糖基化(例如N-连接的聚糖、O-连接的聚糖、磷酸聚糖、C-连接的聚糖，或糖基化阳离子(glypication))或去糖基化。氨基酸在本文中可以由通常已知的三字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号来提及。
天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及后来经修饰的那些氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。天然存在的α-氨基酸包括但不限于丙氨酸(Ala)、半胱氨酸(Cys)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、苯丙氨酸(Phe)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Ile)、精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、亮氨酸(Leu)、甲硫氨酸(Met)、天冬酰胺(Asn)、脯氨酸(Pro)、谷氨酰胺(Gln)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、缬氨酸(Val)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和它们的组合。天然存在的α-氨基酸的立体异构体包括但不限于D-丙氨酸(D-Ala)、D-半胱氨酸(D-Cys)、D-天冬氨酸(D-Asp)、D-谷氨酸(D-Glu)、D-苯丙氨酸(D-Phe)、D-组氨酸(D-His)、D-异亮氨酸(D-Ile)、D-精氨酸(D-Arg)、D-赖氨酸(D-Lys)、D-亮氨酸(D-Leu)、D-甲硫氨酸(D-Met)、D-天冬酰胺(D-Asn)、D-脯氨酸(D-Pro)、D-谷氨酰胺(D-Gln)、D-丝氨酸(D-Ser)、D-苏氨酸(D-Thr)、D-缬氨酸(D-Val)、D-色氨酸(D-Trp)、D-酪氨酸(D-Tyr)和它们的组合。
天然存在的氨基酸包括通过转译后修饰在蛋白质中形成的那些氨基酸，诸如瓜氨酸(Cit)。
非天然(非天然存在的)氨基酸包括但不限于氨基酸类似物、氨基酸模拟物、合成氨基酸、N-取代的甘氨酸和呈L-构型或D-构型的N-甲基氨基酸，所述非天然氨基酸以类似于天然存在的氨基酸的方式发挥功能。举例来说，“氨基酸类似物”可以是具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构(即，键结至氢、羧基、氨基的碳)，但具有经修饰的侧链基团或经修饰的肽主链的非天然氨基酸，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜和甲硫氨酸甲基锍。“氨基酸模拟物”是指具有不同于氨基酸的一般化学结构的结构，但以类似于天然存在的氨基酸的方式发挥功能的化合物。
“接头”是指共价键结化合物或材料中的两个或更多个部分的官能团。举例来说，连接部分可以用于将佐剂部分共价键结至免疫缀合物中的抗体构建体。
“连接部分”是指共价键结化合物或材料中的两个或更多个部分的官能团。举例来说，连接部分可以用于将佐剂部分共价键结至免疫缀合物中的抗体。可用于将连接部分连接至蛋白质和其它材料的键包括但不限于酰胺、胺、酯、氨基甲酸酯、脲、硫醚、硫代氨基甲酸酯、硫代碳酸酯和硫脲。
“二价”是指含有用于连接两个官能团的两个附接点的化学部分；多价连接部分可以具有用于连接其它官能团的额外附接点。二价基团可以用后缀“二基”表示。举例来说，二价连接部分包括二价聚合物部分，诸如二价聚(乙二醇)、二价环烷基、二价杂环烷基、二价芳基和二价杂芳基。“二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基”是指具有用于共价连接分子或材料中的两个部分的两个附接点的环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基。环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基可以经取代或未经取代。环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基可以经一个或多个选自卤基、羟基、氨基、烷基氨基、酰胺基、酰基、硝基、氰基和烷氧基的基团取代。
波形线代表指定化学部分的附接点。如果指定化学部分存在两条波形线，那么应了解，可以双向使用所述化学部分，即，从左至右或从右至左读取。
“烷基”是指具有所指示的碳原子数的直链(线性)或支链饱和脂肪族基团。烷基可以包括任何数目的碳，例如一个至十二个。烷基的实例包括但不限于甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、正丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、异丙基、-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、正丁基、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、异丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、仲丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、叔丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3、1-庚基、1-辛基等。烷基可以经取代或未经取代。“经取代的烷基”基团可以经一个或多个选自卤基、羟基、氨基、氧代(＝O)、烷基氨基、酰胺基、酰基、硝基、氰基和烷氧基的基团取代。
术语“烷二基”是指二价烷基。烷二基的实例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚丙基(-CH2CH2CH2-)等。烷二基也可以称作“亚烷基”基团。
“烯基”是指具有所指示的碳原子数和至少一个碳碳双键sp2的直链(线性)或支链不饱和脂肪族基团。烯基可以包括两个至约12个或更多个碳原子。烯基是具有“顺式”和“反式”取向或替代地具有“E”和“Z”取向的基团。实例包括但不限于乙烯基(ethylenyl/vinyl)(-CH＝CH2)、烯丙基(-CH2CH＝CH2)、丁烯基、戊烯基和它们的异构体。烯基可以经取代或未经取代。“经取代的烯基”基团可以经一个或多个选自卤基、羟基、氨基、氧代(＝O)、烷基氨基、酰胺基、酰基、硝基、氰基和烷氧基的基团取代。
术语“亚烯基”或“烯二基”是指直链或支链二价烃基。实例包括但不限于亚乙烯基(ethylenylene/vinylene)(-CH＝CH-)、烯丙基(-CH2CH＝CH-)等。
“炔基”是指具有所指示的碳原子数和至少一个碳碳三键sp的直链(线性)或支链不饱和脂肪族基团。炔基可以包括两个至约12个或更多个碳原子。举例来说，C2-C6炔基包括但不限于乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(炔丙基、-CH2C≡CH)、丁炔基、戊炔基、己炔基和它们的异构体。炔基可以经取代或未经取代。“经取代的炔基”基团可以经一个或多个选自卤基、羟基、氨基、氧代(＝O)、烷基氨基、酰胺基、酰基、硝基、氰基和烷氧基的基团取代。
术语“亚炔基”或“炔二基”是指二价炔基。
术语“碳环”、“碳环基”、“碳环状环”和“环烷基”是指含有3至12个环原子或所指示的原子数的饱和或部分不饱和单环、稠合双环或桥联多环组合体。饱和单环碳环包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环辛基。饱和双环和多环碳环包括例如降莰烷、[2.2.2]双环辛烷、十氢萘和金刚烷。碳环基团还可以是部分不饱和的，在环中具有一个或多个双键或三键。部分不饱和的代表性碳环基团包括但不限于环丁烯、环戊烯、环己烯、环己二烯(1,3-异构体和1,4-异构体)、环庚烯、环庚二烯、环辛烯、环辛二烯(1,3-异构体、1,4-异构体和1,5-异构体)、降莰烯和降莰二烯。
术语“环烷二基”是指二价环烷基。
“芳基”是指通过从母体芳香族环系统的单个碳原子上去除一个氢原子而得到的6-20个碳原子(C6-C20)的单价芳香族烃基。芳基可以是单环，稠合形成双环或三环基团，或由键连接形成联芳基。代表性芳基包括苯基、萘基和联苯基。其它芳基包括具有亚甲基连接基团的苯甲基。一些芳基具有6至12个环成员，诸如苯基、萘基或联苯基。其它芳基具有6至10个环成员，诸如苯基或萘基。
术语“亚芳基”或“芳二基”意指通过从母体芳香族环系统的两个碳原子上去除两个氢原子而得到的6-20个碳原子(C6-C20)的二价芳香族烃基。一些芳二基在示例性结构中以“Ar”表示。芳二基包括包含稠合至饱和、部分不饱和环或芳香族碳环的芳香族环的双环基团。典型芳二基包括但不限于从苯(苯二基)、经取代的苯、萘、蒽、亚联苯基、亚茚基、亚茚满基、1,2-二氢萘、1,2,3,4-四氢萘基等所得的基团。芳二基也称作“亚芳基”，并且任选地经一个或多个本文所描述的取代基取代。
术语“杂环”、“杂环基”和“杂环状环”在本文中可互换使用并且是指3个至约20个环原子的饱和或部分不饱和(亦即，在环内具有一个或多个双键和/或三键)碳环基团，其中至少一个环原子是选自氮、氧、磷和硫的杂原子，其余环原子是C，其中一个或多个环原子任选地独立地经一个或多个下文所描述的取代基取代。杂环可以是具有3至7个环成员(2至6个碳原子和1至4个选自N、O、P和S的杂原子)的单环或具有7至10个环成员(4至9个碳原子和1至6个选自N、O、P和S的杂原子)的双环，例如：双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。杂环描述于以下文献中：Paquette,Leo A.；"Principles of Modern HeterocyclicChemistry"(W.A.Benjamin,New York,1968)，尤其第1、3、4、6、7和9章；"The Chemistry ofHeterocyclic Compounds,Aseries of Monographs"(John Wiley&Sons,New York,1950至今)，尤其第13、14、16、19和28卷；以及J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566。“杂环基”还包括其中杂环基团与饱和、部分不饱和环或芳香族碳环或杂环稠合的基团。杂环的实例包括但不限于吗啉-4-基、哌啶-1-基、哌嗪基、哌嗪-4-基-2-酮、哌嗪-4-基-3-酮、吡咯烷-1-基、硫代吗啉-4-基、S-二氧代硫代吗啉-4-基、氮杂环辛烷-1-基、氮杂环丁烷-1-基、八氢吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、[1,4]二氮杂环庚烷-1-基、吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶代、吗啉代、硫代吗啉代、氧硫杂环己烷基、高哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、硫氮杂环庚烷基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二噁烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫杂环戊烷基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、氮杂双环[2.2.2]己基、3H-吲哚基喹嗪基和N-吡啶基脲。螺杂环基部分也包括于本定义的范围内。螺杂环基部分的实例包括氮杂螺[2.5]辛基和氮杂螺[2.4]庚基。其中2个环原子经氧代(＝O)部分取代的杂环基的实例是嘧啶酮基和1,1-二氧代-硫代吗啉基。本文中的杂环基任选地独立地经一个或多个本文所描述的取代基取代。
术语“杂环二基”是指3个至约20个环原子的二价饱和或部分不饱和(亦即，在环内具有一个或多个双键和/或三键)碳环基团，其中至少一个环原子是选自氮、氧、磷和硫的杂原子，其余环原子是C，其中一个或多个环原子任选地独立地经一个或多个所描述的取代基取代。5元和6元杂环二基的实例包括吗啉二基、哌啶二基、哌嗪二基、吡咯烷二基、二噁烷二基、硫代吗啉二基和S-二氧代硫代吗啉二基。
术语“杂芳基”是指5元、6元或7元环的单价芳香族基团，并且包括5-20个原子的稠环系统(其中至少一个环是芳香族的)，其含有一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子。杂芳基的实例是吡啶基(包括例如2-羟基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括例如4-羟基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲哚嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋呫基、苯并呋呫基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基和呋喃并吡啶基。杂芳基任选地独立地经一个或多个本文所描述的取代基取代。
术语“杂芳二基”是指5元、6元或7元环的二价芳香族基团，并且包括5-20个原子的稠环系统(其中至少一个环是芳香族的)，其含有一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子。5元和6元杂芳二基的实例包括吡啶二基、咪唑二基、嘧啶二基、吡唑二基、三唑二基、吡嗪二基、四唑二基、呋喃二基、噻吩二基、异噁唑二基二基、噻唑二基、噁二唑二基、噁唑二基、异噻唑二基和吡咯二基。
在可能的情况下，杂环或杂芳基可以是碳(碳连接)或氮(氮连接)键结的。举例来说并且不受限制，碳键结的杂环或杂芳基在以下位置处键结：吡啶的2、3、4、5或6位，哒嗪的3、4、5或6位，嘧啶的2、4、5或6位，吡嗪的2、3、5或6位，呋喃、四氢呋喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氢吡咯的2、3、4或5位，噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位，异噁唑、吡唑或异噻唑的3、4或5位，氮杂环丙烷的2或3位，氮杂环丁烷的2、3或4位，喹啉的2、3、4、5、6、7或8位，或异喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。
举例来说并且不受限制，氮键结的杂环或杂芳基在以下位置处键结：氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑的1位，异吲哚或异吲哚啉的2位，吗啉的4位，以及咔唑或β-咔啉的9位。
单独或作为另一取代基的一部分的术语“卤基”和“卤素”是指氟、氯、溴或碘原子。
单独或作为另一取代基的一部分的术语“羰基”是指C(＝O)或-C(＝O)-，即，碳原子双键键结至氧并且结合至具有羰基的部分中的两个其它基团。
如本文所用的短语“季铵盐”是指已用烷基取代基(例如C1-C4烷基，诸如甲基、乙基、丙基或丁基)季铵化的叔胺。
术语“治疗(treat/treatment/treating)”是指成功治疗或改善损伤、病变、疾患(例如癌症)或症状(例如认知障碍)的任何指标，包括任何客观或主观参数，诸如消除；缓解；减轻症状或使患者更能忍受症状、损伤、病变或疾患；症状进展的速率降低；减少症状或疾患的频率或持续时间；或在一些情况下预防症状发作。症状的治疗或改善可以基于任何客观或主观参数，包括例如身体检查的结果。
术语“癌症”、“赘瘤”和“肿瘤”在本文中用于指展现自主、不受调控的生长的细胞，使得细胞展现以对细胞增殖的控制显著损失为特征的异常生长表型。在本发明的情形中用于检测、分析和/或治疗的所关注细胞包括癌细胞(例如，来自患有癌症的个体的癌细胞)、恶性癌细胞、转移前癌细胞、转移性癌细胞和非转移性癌细胞。几乎每个组织的癌症都是已知的。短语“癌症负担”是指受试者中的癌细胞数量或癌症体积。因此，减少癌症负担是指减小受试者中的癌细胞数目或癌细胞体积。如本文所用的术语“癌细胞”是指成为癌细胞(例如，来自可治疗个体的任何癌症，例如从患有癌症的个体分离)或来源于癌细胞，例如癌细胞克隆体的任何细胞。举例来说，癌细胞可以来自已建立的癌细胞系，可以是从患有癌症的个体分离的初生细胞，可以是来自于从患有癌症的个体分离的初生细胞的子代细胞，等等。在一些实施方案中，这个术语还可以指癌细胞的一部分，诸如癌细胞的亚细胞部分、细胞膜部分或细胞溶解产物。本领域技术人员已知许多类型的癌症，包括实体肿瘤，诸如癌瘤、肉瘤、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、淋巴瘤和骨髓瘤，以及循环癌，诸如白血病。
如本文所用的术语“癌症”包括任何形式的癌症，包括但不限于实体肿瘤癌(例如皮肤癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、结肠癌、卵巢癌、胰脏癌、肾癌、肝癌、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、平滑肌肉瘤、头颈部鳞状细胞癌、黑色素瘤和神经内分泌癌)和液体癌(例如血液学癌症)；癌瘤；软组织肿瘤；肉瘤；畸胎瘤；黑色素瘤；白血病；淋巴瘤；以及脑癌，包括微小残留病，并且包括原发性和转移性肿瘤。
癌症的“病变”包括所有损害患者健康的现象。这包括但不限于异常或不可控的细胞生长、转移、干扰邻近细胞正常发挥功能、以异常水平释放细胞因子或其它分泌产物、抑制或加重炎症或免疫反应、赘瘤、癌前病变、恶性病以及侵入周围或远端组织或器官(诸如淋巴结)。
如本文所用的短语“癌症复发”和“肿瘤复发”及其语法变型是指在诊断出癌症之后赘生性细胞或癌细胞的进一步生长。特别地，当癌组织中发生癌细胞进一步生长时可能会发生复发。类似地，当肿瘤细胞播散至局部或远端组织和器官中时发生“肿瘤扩散”，因此，肿瘤扩散涵盖肿瘤转移。当肿瘤生长局部扩散开以通过压缩、破坏或阻止正常器官功能来损害所涉及组织的功能时发生“肿瘤侵入”。
如本文所用的术语“转移”是指癌性肿瘤在器官或身体部分中的生长，所述器官或身体部分不直接连接至原始癌性肿瘤的器官。转移应理解为包括微转移，其为在不直接连接至原始癌性肿瘤的器官的器官或身体部分中存在不可检测量的癌细胞。转移还可以定义为过程的若干步骤，诸如癌细胞从原始肿瘤部位离开以及癌细胞迁移和/或侵入身体的其它部分。
短语“有效量”和“治疗有效量”是指对于施用来说产生治疗作用的物质，诸如免疫缀合物的剂量或量。确切剂量将取决于治疗目的，并且将由本领域技术人员使用已知技术可确定(参见例如Lieberman,Pharmaceutical Dosage Forms(第1-3卷,1992)；Lloyd,TheArt,Science and Technology of Pharmaceutical Compounding(1999)；Pickar,DosageCalculations(1999)；Goodman&Gilman's The Pharmacological Basis ofTherapeutics,第11版(McGraw-Hill,2006)；以及Remington:The Science and Practiceof Pharmacy,第22版,(Pharmaceutical Press,London,2012))。在癌症的情况下，治疗有效量的免疫缀合物可以减少癌细胞的数目；减小肿瘤大小；抑制(即，在一定程度上减缓并且优选地停止)癌细胞浸润至周边器官中；抑制(即，在一定程度上减缓并且优选地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解一种或多种与癌症相关的症状。在免疫缀合物可以阻止现有癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞的程度上，其可能具有细胞生长抑制性和/或细胞毒性。对于癌症疗法，可以例如通过评估疾病进展时间(TTP)和/或确定反应率(RR)来测量功效。
“接受者”、“个体”、“受试者”、“宿主”和“患者”可互换使用并且是指需要诊断、治疗或疗法的任何哺乳动物受试者(例如人类)。用于治疗目的的“哺乳动物”是指归类为哺乳动物的任何动物，包括人类、家养和农场动物以及动物园动物、运动型动物或宠物，诸如犬、马、猫、牛、绵羊、山羊、猪、骆驼等。在某些实施方案中，哺乳动物是人类。
在本发明的情形中，短语“协同佐剂”或“协同组合”包括两种免疫调节剂的组合，诸如受体激动剂、细胞因子和佐剂多肽，所述免疫调节剂以组合形式相对于单独施用的任一者对免疫引发协同作用。特别地，本文所公开的免疫缀合物包含所要求的佐剂与抗体构建体的协同组合。举例来说，相对于在不存在其它部分的情况下施用抗体构建体或佐剂时，这些协同组合在施用后对免疫引发更大作用。此外，与单独施用抗体构建体或佐剂时相比，可以施用减少量的免疫缀合物(如由作为免疫缀合物的一部分施用的抗体构建体的总数或佐剂的总数来测量)。
如本文所用的术语“施用”是指向受试者肠道外、静脉内、腹膜内、肌肉内、肿瘤内、病灶内、鼻内或皮下施用、经口施用、以栓剂施用、局部接触、鞘内施用或植入缓释装置，例如微型渗透泵。
如本文中用于修饰数值的术语“约”和“左右”指示在所述数值周围的接近范围。因此，如果“X”是所述值，那么“约X”或“X左右”指示0.9X至1.1X，例如0.95X至1.05X或0.99X至1.01X的值。提及“约X”或“X左右”特定指示至少值X、0.95X、0.96X、0.97X、0.98X、0.99X、1.01X、1.02X、1.03X、1.04X和1.05X。因此，“约X”和“X左右”意图教示并提供对例如“0.98X”的权利要求限制的书面描述支持。
PD-L1抗体
在示例性实施方案中，本发明的免疫缀合物包含抗体构建体，所述抗体构建体包含特异性识别和结合PD-L1的抗原结合结构域。
程序性死亡配体1(PD-L1、分化簇274、CD274、B7-同源物1或B7-H1)属于B7蛋白质超家族，并且是程序性细胞死亡蛋白1(PD-1、PDCD1、分化簇279或CD279)的配体。PD-L1还可以与B7.1(CD80)相互作用，并且据信此种相互作用可以抑制T细胞启动。PD-L1/PD-1轴在抑制适应性免疫反应中起重要作用。更具体来说，据信PD-L1与其受体PD-1的啮合递送抑制T细胞活化和增殖的信号。结合至PD-L1并且阻止配体与PD-1受体结合的剂可以防止这种免疫抑制，并且因此可以在需要时增强免疫反应，诸如用于治疗癌症或感染。PD-L1/PD-1路径还有助于防止自体免疫；因此针对PD-L1的激动剂或递送免疫抑制性有效负荷的剂可以帮助治疗自体免疫病症。
已经开发了若干靶向PD-L1的抗体用于治疗癌症，包括阿特珠单抗(TECENTRIQTM)、德瓦鲁单抗(IMFINZITM)和阿维鲁单抗(BAVENCIOTM)。尽管如此，持续需要新的PD-L1结合剂，包括以高亲和力结合PD-L1并且有效防止PD-L1/PD-1信号传导的剂以及可以将治疗性有效负荷递送至PD-L1表达细胞的剂。另外，需要新的PD-L1结合剂以治疗自体免疫病症和感染。
提供了一种将8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓衍生物有效负荷递送至表达PD-L1的细胞的方法，所述方法包括向所述细胞或包含所述细胞的哺乳动物施用免疫缀合物，所述免疫缀合物包含共价附接至接头的抗PD-L1抗体，所述接头共价附接至一个或多个8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓部分。
还提供了一种用于增强或减少或抑制哺乳动物的免疫反应的方法和用于治疗对PD-L1抑制有反应的哺乳动物的疾病、病症或疾患的方法，所述方法包括向哺乳动物施用其PD-L1免疫缀合物。
本发明提供了一种PD-L1结合剂，所述PD-L1结合剂包含免疫球蛋白重链可变区多肽和免疫球蛋白轻链可变区多肽。
PD-L1结合剂特异性结合PD-L1。所述试剂的结合特异性允许靶向PD-L1表达细胞，例如，以将治疗性有效负荷递送至此类细胞。
在一些实施方案中，PD-L1结合剂(A型或B型)结合人类PD-L1，例如包含SEQ IDNO:307的蛋白质。然而，结合任何PD-L1同源物或旁系物的结合剂也被包含在内。在一些实施方案中，PD-L1蛋白与SEQ ID NO:307具有至少约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高的序列同一性。在一些实施方案中，结合剂结合人类PD-L1和食蟹猴PD-L1；或人类、食蟹猴和小鼠PD-L1。
在一些实施方案中，PD-L1结合剂结合PD-L1而基本上不抑制或阻止PD-L1与其受体PD-1的结合。然而，在其它实施方案中，PD-L1结合剂可以完全或部分阻断(抑制或阻止)PD-L1与其受体PD-1的结合，因此抗体可用于抑制PD-L1/PD-1信号(例如，用于治疗目的)。
抗体或抗原结合抗体片段可以对PD-L1具有单特异性，或可以是双特异性或多特异性的。举例来说，在二价或多价抗体或抗体片段中，结合结构域可以是不同的，其靶向相同抗原的不同表位或靶向不同抗原。构建多价结合构建体的方法在本领域中是已知的。双特异性和多特异性抗体在本领域中是已知的。此外，可以提供双功能抗体、三功能抗体或四功能抗体，其为多肽链的二聚体、三聚体或四聚体，所述多肽链各自包含由肽接头连接至VL的VH，所述肽接头过短而不允许同一多肽链上的VH与VL之间配对，从而驱动不同VH-VL多肽链上的互补结构域之间配对，以产生具有两个、三个或四个功能性抗原结合位点的多聚分子。同样，可以产生双scFv片段，所述片段是具有两个不同可变结构域的小scFv片段，以产生能够结合两个不同表位的双特异性双scFv片段。可以使用遗传工程改造方法产生Fab二聚体(Fab2)和Fab三聚体(Fab3)，以基于Fab片段创建多特异性构建体。
PD-L1结合剂也可以是抗体缀合物。在这方面，PD-L1结合剂可以是(1)抗体、替代支架或其片段，和(2)蛋白质或非蛋白质部分的缀合物。例如，PD-L1结合剂可以与肽、荧光分子、化学治疗剂或其它细胞毒性有效负载、免疫激活剂或免疫抑制剂缀合。
PD-L1抗体可以是或可以获自人类抗体、非人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体或对应的抗体片段。“嵌合”抗体是通常包含人类恒定区和非人类可变区的抗体或其片段。“人源化”抗体是通常包含人类抗体支架，但在至少一个CDR(例如1个、2个、3个、4个、5个或全部六个CDR)中具有非人类来源的氨基酸或序列的单克隆抗体。
PD-L1结合剂–A型
本文提供包含免疫球蛋白重链可变区多肽和免疫球蛋白轻链可变区多肽的PD-L1结合剂。在一些实施方案中，PD-L1结合剂(A型)包含SEQ ID NO:223-264中的任一者的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR；SEQ ID NO:265-306中的任一者的免疫球蛋白轻链可变区或至少其CDR。在其它实施方案中，PD-L1结合剂(A型)包含具有与SEQ ID NO:223-264中的任一者至少90％同一的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区多肽，和具有与SEQ ID NO:265-306中的任一者至少90％同一的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链链可变区多肽。在其它实施方案中，PD-L1结合剂(A型)、免疫球蛋白重链可变区多肽包含：包含SEQ ID NO:1-23中的任一者的互补决定区1(HCDR1)、包含SEQ ID NO:24-57中的任一者的互补决定区2(HCDR2)以及包含SEQ ID NO:58-95中的任一者的互补决定区3(HCDR3)；和/或免疫球蛋白轻链可变区多肽包含：包含SEQ ID NO:96-128中的任一者的互补决定区1(LCDR1)、包含SEQID NO:129-151中的任一者的互补决定区2(LCDR2)以及包含SEQ ID NO:152-155中的任一者的互补决定区3(LCDR3)。还提供了编码PD-L1结合剂或其单独的重链和轻链的核酸；包含核酸的载体和细胞；以及包含结合剂或核酸的组合物。
此外，在一些实施方案中，本文提供的PD-L1结合剂(A型)在与细胞表面上的PD-L1结合后引起PD-L1或PD-L1/PD-L1结合剂复合物的细胞内化。不希望受任何特定理论或作用机制的束缚，据信根据此实施方案的PD-L1结合剂在结合时引起PD-L1内化，并在内化过程中保持与PD-L1结合，使得结合剂与PD-L1一起内化。PD-L1与结合的PD-L1结合剂的细胞内化可以通过任何合适的方法来确定，例如分析细胞表面上的持久性和/或内化抗体的检测。在一些实施方案中，PD-L1结合剂足够强烈地内化以使得至少约25％(例如，至少约35％、至少约50％、至少约75％或至少约90％)与细胞表面上的PD-L1结合的PD-L1结合剂被内化(例如，使用表面持久性分析，约75％或更少、约65％或更少、约50％或更少、约25％或更少或约10％或更少的在分析开始时与细胞表面上的PD-L1结合的PD-L1结合剂分子在分析结束时仍保持结合)。
在一个实施方案中，PD-L1结合剂(A型)包含SEQ ID NO:223-264中的任一者、与SEQ ID NO:223-264至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR；和/或SEQ ID NO:265-306中的任一者、与SEQ ID NO:265-306至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR。
作为进一步的说明，PD-L1结合剂(A型)可以包括：
(1)SEQ ID NO:223的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:265的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(2)SEQ ID NO:224的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:266的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(3)SEQ ID NO:225的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:267的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(4)SEQ ID NO:226的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:268的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(5)SEQ ID NO:227的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:269的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(6)SEQ ID NO:228的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:270的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(7)SEQ ID NO:229的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:271的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(8)SEQ ID NO:230的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:272的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(9)SEQ ID NO:231的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:273的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(10)SEQ ID NO:232的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:274的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(11)SEQ ID NO:233的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:275的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(12)SEQ ID NO:234的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:276的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(13)SEQ ID NO:235的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:277的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(14)SEQ ID NO:236的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:278的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(15)SEQ ID NO:237的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:279的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(16)SEQ ID NO:238的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:280的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(17)SEQ ID NO:239的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:281的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(18)SEQ ID NO:240的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:282的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(19)SEQ ID NO:241的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:283的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(20)SEQ ID NO:242的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:284的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(21)SEQ ID NO:243的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:285的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(22)SEQ ID NO:244的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:286的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(23)SEQ ID NO:245的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:287的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(24)SEQ ID NO:246的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:288的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(25)SEQ ID NO:247的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:289的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(26)SEQ ID NO:248的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:290的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(27)SEQ ID NO:249的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:291的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(28)SEQ ID NO:250的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:292的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(29)SEQ ID NO:251的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:293的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(30)SEQ ID NO:252的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:294的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(31)SEQ ID NO:253的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:295的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(32)SEQ ID NO:254的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:296的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(33)SEQ ID NO:255的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:297的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(34)SEQ ID NO:256的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:298的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(35)SEQ ID NO:257的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:299的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(36)SEQ ID NO:258的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:300的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(37)SEQ ID NO:259的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:301的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(38)SEQ ID NO:260的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:302的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(39)SEQ ID NO:261的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:303的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(40)SEQ ID NO:262的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:304的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(41)SEQ ID NO:263的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:305的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(42)SEQ ID NO:264的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:306的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；和/或
(43)图4A-D的免疫球蛋白重链可变区和/或图4E-G的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR。
给定重链或轻链Ig序列的CDR可以根据各种已知的Ig编号方案(例如，Kabat、Chothia、Martin(增强型Chothia)、IGMT、AbM)中的任一者来确定。在某些实施方案中，PD-L1结合剂(A型)包含以下CDR中的一者或多者：
包含SEQ ID NO:1-23中的任一者或与SEQ ID NO:1-23至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列或由其组成的HCDR1；
包含SEQ ID NO:24-57中的任一者或与SEQ ID NO:24-57至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列或由其组成的HCDR2；和
包含SEQ ID NO:58-95中的任一者或与SEQ ID NO:58-95至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含
包含SEQ ID NO:96-128中的任一者或与SEQ ID NO:96-128至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列或由其组成的LCDR1；
包含SEQ ID NO:129-151中的任一者或与SEQ ID NO:129-151至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列或由其组成的LCDR2；和
包含SEQ ID NO:152-155中的任一者或与SEQ ID NO:152-155至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列或由其组成的LCDR3。
在具体实施方案中，结合剂(A型)包含免疫球蛋白重链多肽和免疫球蛋白轻链多肽，其中：
(1)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:1或由其组成的HCDR1、包含SEQ IDNO:24或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:58或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:96或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:129或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:152或由其组成的LCDR3；
(2)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:2或由其组成的HCDR1、包含SEQ IDNO:25或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:59或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:97或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:129或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:153或由其组成的LCDR3；
(3)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:3或由其组成的HCDR1、包含SEQ IDNO:26或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:60或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:98或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:129或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:154或由其组成的LCDR3；
(4)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:4或由其组成的HCDR1、包含SEQ IDNO:27或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:61或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:99或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:130或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:155或由其组成的LCDR3；
(5)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:5或由其组成的HCDR1、包含SEQ IDNO:28或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:62或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:100或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:129或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:153或由其组成的LCDR3；
(6)免疫球蛋白重链多肽包括包含SEQ ID NO:6或由其组成的HCDR1、包含SEQ IDNO:29或由其组成的HCDR2和包含SEQ ID NO:63或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:101或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:131或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:156或由其组成的LCDR3；
(7)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:7或由其组成的HCDR1、包含SEQ IDNO:30或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:64或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:102或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:132或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:157或由其组成的LCDR3；
(8)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:2或由其组成的HCDR1、包含SEQ IDNO:31或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:65或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:103或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:133或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:155或由其组成的LCDR3；
(9)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:8或由其组成的HCDR1、包含SEQ IDNO:32或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:66或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:104或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:134或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:158或由其组成的LCDR3；
(10)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:9或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:33或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:67或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:97或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:135或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:159或由其组成的LCDR3；
(11)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:7或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:34或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:64或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:102或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:132或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:160或由其组成的LCDR3；
(12)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:10或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:35或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:68或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:105或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:136或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:161或由其组成的LCDR3；
(13)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:2或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:25或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:69或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:106或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:129或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:162或由其组成的LCDR3；
(14)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:11或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:36或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:70或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:107或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:129或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:163或由其组成的LCDR3；
(15)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:12或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:37或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:71或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:108或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:137或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:164或由其组成的LCDR3；
(16)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:1或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:38或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:72或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:109或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:138或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:165或由其组成的LCDR3；
(17)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:13或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:39或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:73或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:98或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:129或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:155或由其组成的LCDR3；
(18)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:2或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:40或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:74或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:110或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:137或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:166或由其组成的LCDR3；
(19)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:14或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:41或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:75或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:111或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:129或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:165或由其组成的LCDR3；
(20)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:15或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:42或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:74或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:97或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:139或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:152或由其组成的LCDR3；
(21)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:14或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:43或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:76或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:112或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:137或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:155或由其组成的LCDR3；
(22)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:16或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:44或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:77或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:113或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:140或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:165或由其组成的LCDR3；
(23)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:9或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:45或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:78或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:114或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:141或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:165或由其组成的LCDR3；
(24)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:17或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:46或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:79或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:98或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:129或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:155或由其组成的LCDR3；
(25)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:9或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:25或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:80或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:115或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:142或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:165或由其组成的LCDR3；
(26)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:17或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:41或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:81或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:116或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:143或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:167或由其组成的LCDR3；
(27)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:7或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:47或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:82或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:117或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:144或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:155或由其组成的LCDR3；
(28)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:2或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:41或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:83或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:118或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:131或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:168或由其组成的LCDR3；
(29)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:18或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:48或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:84或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:119或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:145或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:165或由其组成的LCDR3；
(30)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:19或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:49或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:85或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:120或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:146或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:155或由其组成的LCDR3；
(31)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:2或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:50或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:86或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:121或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:147或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:169或由其组成的LCDR3；
(32)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:2或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:51或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:87或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:122或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:137或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:155或由其组成的LCDR3；
(33)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:20或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:44或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:88或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:123或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:148或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:170或由其组成的LCDR3；
(34)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:3或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:52或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:60或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:98或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:129或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:171或由其组成的LCDR3；
(35)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:2或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:53或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:89或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:97或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:147或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:172或由其组成的LCDR3；
(36)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:21或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:38或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:90或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:109或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:150或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:165或由其组成的LCDR3；
(37)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:22或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:41或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:91或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:124或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:151或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:173或由其组成的LCDR3；
(38)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:2或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:54或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:92或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:126或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:129或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:165或由其组成的LCDR3；
(39)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:2或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:55或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:93或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:97或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:149或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:174或由其组成的LCDR3；
(40)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:23或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:56或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:94或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:125或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:142或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:175或由其组成的LCDR3；
(41)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:14或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:43或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:76或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:127或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:137或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:176或由其组成的LCDR3；
(42)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:3或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:57或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:95或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:128或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:137或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:155或由其组成的LCDR3；和/或
(43)免疫球蛋白重链多肽和轻链多肽包括PD-L1 A型结合剂1-42的图1A-D中所列CDR的任何组合。
在特定实施方案中，结合剂包含免疫球蛋白重链多肽和免疫球蛋白轻链多肽，其中免疫球蛋白重链多肽包含第一框架区、第二框架区、第三框架区和/或第四框架区；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含第一构架区、第二构架区、第三构架区和/或第四构架区；和/或免疫球蛋白重链多肽和轻链多肽包含分别列于图2A-D和图3A-D中的构架区的任何组合。
PD-L1结合剂–B型
本文提供包含免疫球蛋白重链可变区多肽和免疫球蛋白轻链可变区多肽的PD-L1结合剂(B型)。在一些实施方案中，PD-L1结合剂(B型)包含SEQ ID NO:430-450中的任一者的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR；SEQ ID NO:451-471中的任一者的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR。在其它实施方案中，PD-L1结合剂包含具有与SEQ ID NO:430-450中的任一者至少90％同一的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区多肽，和具有与SEQ IDNO:451-471中的任一者至少90％同一的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区多肽。在其它实施方案中，PD-L1结合剂、免疫球蛋白重链可变区多肽包含：包含SEQ ID NO:308-321中的任一者的互补决定区1(HCDR1)、包含SEQ ID NO:322-338中的任一者的互补决定区2(HCDR2)以及包含SEQ ID NO:339-359中的任一者的互补决定区3(HCDR3)；和/或免疫球蛋白轻链可变区多肽包含：包含SEQ ID NO:360-374中的任一者的互补决定区1(LCDRl)、包含SEQ ID NO:131和375-386中的任一者的互补决定区2(LCDR2)以及包含SEQ ID NO:387-398中的任一者的互补决定区3(LCDR3)。还提供了编码PD-L1结合剂或其单独的重链和轻链的核酸；包含核酸的载体和细胞；以及包含结合剂或核酸的组合物。
在一个实施方案中，PD-L1结合剂(B型)包含SEQ ID NO:430-450中的任一者、与SEQ ID NO:430-450至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR；和/或SEQ ID NO:451-471中的任一者、与SEQ ID NO:451-471至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR。
作为进一步的说明，PD-L1结合剂(B型)可以包括：
(1)SEQ ID NO:430的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:451的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(2)SEQ ID NO:430的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:451的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(3)SEQ ID NO:431的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:452的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(4)SEQ ID NO:432的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:453的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(5)SEQ ID NO:433的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:454的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(6)SEQ ID NO:434的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:455的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(7)SEQ ID NO:435的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:456的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(8)SEQ ID NO:436的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:457的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(9)SEQ ID NO:437的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:458的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(10)SEQ ID NO:438的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:459的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(11)SEQ ID NO:439的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:460的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(12)SEQ ID NO:440的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:461的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(13)SEQ ID NO:441的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:462的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(14)SEQ ID NO:442的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:463的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(15)SEQ ID NO:443的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:464的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(16)SEQ ID NO:444的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:465的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(17)SEQ ID NO:445的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:466的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(18)SEQ ID NO:446的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:467的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(19)SEQ ID NO:447的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:468的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(20)SEQ ID NO:448的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:469的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；和/或
(21)SEQ ID NO:449的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:470的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；
(22)SEQ ID NO:450的免疫球蛋白重链可变区，或至少其CDR，和/或SEQ ID NO:471的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR；和/或
(23)图8A-B的免疫球蛋白重链可变区和/或图8C-D的免疫球蛋白轻链可变区，或至少其CDR。
给定重链或轻链Ig序列的CDR可以根据各种已知的Ig编号方案(例如，Kabat、Chothia、Martin(增强型Chothia)、IGMT、AbM)中的任一者来确定。在某些实施方案中，PD-L1结合剂包含以下CDR中的一者或多者：
包含SEQ ID NO:308-321中的任一者或与SEQ ID NO:308-321至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列或由其组成的HCDR1；
包含SEQ ID NO:322-338中的任一者或与SEQ ID NO:332-338至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列或由其组成的HCDR2；和
包含SEQ ID NO:339-359中的任一者或与SEQ ID NO:339-359至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含
包含SEQ ID NO:360-374中的任一者或与SEQ ID NO:360-374至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列或由其组成的LCDR1；
包含SEQ ID NO:375-386中的任一者或与SEQ ID NO:375-386至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列或由其组成的LCDR2；和
包含SEQ ID NO:387-398中的任一者或与SEQ ID NO:387-398至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一的序列或由其组成的LCDR3。
在特定实施方案中，结合剂包含免疫球蛋白重链多肽和免疫球蛋白轻链多肽，其中：
(1)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:308或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:322或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:339或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:360或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:375或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:387或由其组成的LCDR3；
(2)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:309或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:323或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:340或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:361或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:376或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:388或由其组成的LCDR3；
(3)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:310或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:324或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:341或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:360或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:375或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:387或由其组成的LCDR3；
(4)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:311或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:325或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:342或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:362或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:377或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:389或由其组成的LCDR3；
(5)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:312或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:326或由其组成的HCDR2和包含SEQ ID NO:343或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:360或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:378或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:387或由其组成的LCDR3；
(6)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:313或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:327或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:344或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:363或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:379或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:390或由其组成的LCDR3；
(7)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:314或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:327或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:345或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:364或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:380或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:391或由其组成的LCDR3；
(8)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:312或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:328或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:346或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:365或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:375或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:387或由其组成的LCDR3；
(9)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:314或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:329或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:347或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:366或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:375或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:389或由其组成的LCDR3；
(10)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:309或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:330或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:348或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:360或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:381或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:392或由其组成的LCDR3；
(11)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:309或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:327或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:349或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:367或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:382或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:389或由其组成的LCDR3；
(12)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:309或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:322或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:350或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:360或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:383或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:387或由其组成的LCDR3；
(13)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:315或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:323或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:351或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:368或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:375或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:393或由其组成的LCDR3；
(14)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:316或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:331或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:352或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:365或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:375或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:389或由其组成的LCDR3；
(15)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:317或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:332或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:353或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:369或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:384或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:394或由其组成的LCDR3；
(16)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:318或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:333或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:354或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:370或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:379或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:395或由其组成的LCDR3；
(17)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:310或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:334或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:355或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:371或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:375或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:387或由其组成的LCDR3；
(18)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:310或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:335或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:356或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:360或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:385或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:396或由其组成的LCDR3；
(19)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:319或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:336或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:357或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:372或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:386或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:397或由其组成的LCDR3；
(20)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:320或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:337或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:358或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:373或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:379或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:398或由其组成的LCDR3；
(21)免疫球蛋白重链多肽包含：包含SEQ ID NO:321或由其组成的HCDR1、包含SEQID NO:338或由其组成的HCDR2以及包含SEQ ID NO:359或由其组成的HCDR3；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含：包含SEQ ID NO:374或由其组成的LCDR1、包含SEQ ID NO:379或由其组成的LCDR2以及包含SEQ ID NO:389或由其组成的LCDR3；和/或
(22)免疫球蛋白重链多肽和轻链多肽包含图5A-B(B型)中所列的CDR的任何组合。
在特定实施方案中，结合剂包含免疫球蛋白重链多肽和免疫球蛋白轻链多肽，其中免疫球蛋白重链多肽包含第一框架区、第二框架区、第三框架区和/或第四框架区；和/或免疫球蛋白轻链多肽包含第一构架区、第二构架区、第三构架区和/或第四构架区；和/或免疫球蛋白重链多肽和轻链多肽包含分别在图6A-B和/或图7A-B(B型)中列出的构架区的任何组合。
本发明的免疫缀合物包含靶向、结合或识别PD-L1的抗体。本发明的实施方案的范围内包括本文所描述的抗体构建体或抗原结合结构域的功能变异体。如本文所用的术语“功能变异体”是指具有与亲本抗体构建体或抗原结合结构域具有实质或显著序列同一性或相似性的抗原结合结构域的抗体构建体，所述功能变异体保留作为其变异体的抗体构建体或抗原结合结构域的生物活性。功能变异体涵盖例如本文所描述的抗体构建体或抗原结合结构域(亲本抗体构建体或抗原结合结构域)的那些变异体，所述变异体保留以与亲本抗体构建体或抗原结合结构域相似的程度、相同的程度或更高的程度识别表达PD-L1的靶细胞的能力。
关于抗体构建体或抗原结合结构域，功能变异体的氨基酸序列与抗体构建体或抗原结合结构域可以例如具有至少约30％、约50％、约75％、约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高同一性。
功能变异体可以例如包含具有至少一个保守氨基酸取代的亲本抗体构建体或抗原结合结构域的氨基酸序列。替代地或另外，功能变异体可以包含具有至少一个非保守氨基酸取代的亲本抗体构建体或抗原结合结构域的氨基酸序列。在这种情况下，非保守氨基酸取代优选地不干扰或抑制功能变异体的生物活性。非保守氨基酸取代可以增强功能变异体的生物活性，使得功能变异体的生物活性与亲本抗体构建体或抗原结合结构域相比增加。
包含本发明的免疫缀合物的抗体包括Fc工程改造的变异体。在一些实施方案中，在Fc区中调节与一种或多种Fc受体的结合的突变可以包括以下突变中的一者或多者：SD(S239D)、SDIE(S239D/I332E)、SE(S267E)、SELF(S267E/L328F)、SDIE(S239D/I332E)、SDIEAL(S239D/I332E/A330L)、GA(G236A)、ALIE(A330L/I332E)、GASDALIE(G236A/S239D/A330L/I332E)、V9(G237D/P238D/P271G/A330R)和V11(G237D/P238D/H268D/P271G/A330R)；和/或以下氨基酸处的一个或多个突变：E345R、E233、G237、P238、H268、P271、L328和A330。用于调节Fc受体结合的额外Fc区修饰在例如美国专利申请公开案2016/0145350以及美国专利7,416,726和5,624,821中描述，所述文献特此以全文引用的方式并入本文中。
包含本发明的免疫缀合物的抗体包括聚糖变异体，诸如去岩藻糖基化。在一些实施方案中，结合剂的Fc区经修饰以与原生未经修饰的Fc区相比具有改变的Fc区糖基化模式。
本发明抗体构建体或抗原结合结构域的氨基酸取代优选地是保守氨基酸取代。保守氨基酸取代在本领域中是已知的，并且包括用一个具有某些物理和/或化学特性的氨基酸交换另一个具有相同或类似化学或物理特性的氨基酸的氨基酸取代。举例来说，保守氨基酸取代可以是酸性/带负电荷极性氨基酸取代另一个酸性/带负电荷极性氨基酸(例如Asp或Glu)、具有非极性侧链的氨基酸取代另一个具有非极性侧链的氨基酸(例如Ala、Gly、Val、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Trp、Cys、Val等)、碱性/带正电荷极性氨基酸取代另一个碱性/带正电荷极性氨基酸(例如Lys、His、Arg等)、具有极性侧链的不带电荷氨基酸取代另一个具有极性侧链的不带电荷氨基酸(例如Asn、Gln、Ser、Thr、Tyr等)、具有β分支侧链的氨基酸取代另一个具有β分支侧链的氨基酸(例如Ile、Thr和Val)、或具有芳香族侧链的氨基酸取代另一个具有芳香族侧链的氨基酸(例如His、Phe、Trp和Tyr)等。
抗体构建体或抗原结合结构域可以基本上由本文所描述的一个或多个指定氨基酸序列组成，使得其它组分(例如其它氨基酸)不会本质上改变抗体构建体或抗原结合结构域功能变异体的生物活性。
在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体含有经修饰的Fc区，其中修饰会调节Fc区与一个或多个Fc受体的结合。
在一些实施方案中，与Fc区中缺乏突变的原生抗体相比，免疫缀合物中的抗体(例如，缀合至至少两个佐剂部分的抗体)在Fc区中含有一个或多个修饰(例如，氨基酸插入、缺失和/或取代)，从而调节与一个或多个Fc受体(例如，FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32A)、FcγRIIB(CD32B)、FcγRIIIA(CD16a)和/或FcγRIIIB(CD16b))的结合(例如，结合增加或结合减少)。在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体在Fc区中含有一个或多个修饰(例如，氨基酸插入、缺失和/或取代)，从而减少抗体的Fc区与FcγRIIB的结合。在一些实施方案中，与Fc区中缺乏突变的原生抗体相比，免疫缀合物中的抗体在抗体的Fc区中含有一个或多个修饰(例如，氨基酸插入、缺失和/或取代)，从而减少抗体与FcγRIIB的结合，同时维持与FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32A)和/或FcRγIIIA(CD16a)的相同结合或结合增加。在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体在Fc区中含有一个或多个修饰，从而增加抗体的Fc区与FcγRIIB的结合。
在一些实施方案中，经调节的结合是由抗体的Fc区中相对于抗体的原生Fc区的突变来提供。突变可以在CH2结构域、CH3结构域或它们的组合中。“原生Fc区”与“野生型Fc区”同义并且包含与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列相同或与原生抗体(例如，西妥昔单抗)中发现的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。原生序列人类Fc区包括原生序列人类IgG1Fc区、原生序列人类IgG2 Fc区、原生序列人类IgG3 Fc区和原生序列人类IgG4 Fc区，以及它们的天然存在的变异体。原生序列Fc包括Fc的各种同种异型(Jefferis等,(2009)mAbs,1(4):332-338)。
在一些实施方案中，Fc区中导致与一种或多种Fc受体的结合受到调节的突变可包括以下突变中的一者或多者：SD(S239D)、SDIE(S239D/I332E)、SE(S267E)、SELF(S267E/L328F)、SDIE(S239D/I332E)、SDIEAL(S239D/I332E/A330L)、GA(G236A)、ALIE(A330L/I332E)、GASDALIE(G236A/S239D/A330L/I332E)、V9(G237D/P238D/P271G/A330R)和V11(G237D/P238D/H268D/P271G/A330R)，和/或以下氨基酸处的一个或多个突变：E233、G237、P238、H268、P271、L328和A330。用于调节Fc受体结合的其它Fc区修饰在例如特此以引用的方式整体并入的US 2016/0145350、US 7416726和US 5624821中有所描述。
在一些实施方案中，免疫缀合物的抗体的Fc区经修饰以与原生未经修饰的Fc区相比具有改变的Fc区糖基化模式。
人类免疫球蛋白在每条重链的Cγ2结构域中的Asn297残基处糖基化。这种N-连接的寡糖由核心七糖N-乙酰基葡糖胺4甘露糖3(GlcNAc4Man3)组成。已知用糖苷内切酶或PNGase F去除七糖引起抗体Fc区中的构象变化，这可以显著降低对活化FcγR的抗体结合亲和力并且降低效应子功能。核心七糖通常用半乳糖、平分GlcNAc、岩藻糖或唾液酸装饰，这差异性地影响Fc与活化或抑制性FcγR的结合。另外，已经证明了α2,6-唾液酸化增强体内消炎活性，而去岩藻糖基化会改善FcγRIIIa结合并且使抗体依赖性细胞毒性和抗体依赖性吞噬作用增加10倍。因此，特定糖基化模式可以用于控制炎性效应子功能。
在一些实施方案中，用以改变糖基化模式的修饰是突变。举例来说，突变可为Asn297处的取代。在一些实施方案中，使Asn297突变为谷氨酰胺(N297Q)。用调节FcγR调控的信号传导的抗体控制免疫反应的方法描述于例如US 7416726、US 2007/0014795和US2008/0286819中，所述文献特此以全文引用的方式并入。
在一些实施方案中，免疫缀合物的抗体经修饰以含有具有非天然存在的糖基化模式的工程改造的Fab区。举例来说，杂交瘤可以经遗传工程改造以分泌具有能够增加FcRγIIIa结合和效应子功能的特异性突变的无岩藻糖基化mAb、去唾液酸化mAb或去糖基化Fc。在一些实施方案中，将免疫缀合物的抗体工程改造为无岩藻糖基化的。
在一些实施方案中，将免疫缀合物中的抗体的整个Fc区与不同Fc区交换，以使得抗体的Fab区缀合至非原生Fc区。举例来说，通常包含IgG1 Fc区的西妥昔单抗的Fab区可以缀合至IgG2、IgG3、IgG4或IgA，或者通常包含IgG4 Fc区的纳武单抗(nivolumab)的Fab区可以缀合至IgG1、IgG2、IgG3、IgA1或IgG2。在一些实施方案中，具有非原生Fc结构域的Fc修饰的抗体还包含一个或多个氨基酸修饰，诸如IgG4 Fc内的S228P突变，其调节所描述的Fc结构域的稳定性。在一些实施方案中，具有非原生Fc结构域的Fc修饰的抗体还包含本文所描述的一个或多个氨基酸修饰，其调节Fc与FcR的结合。
在一些实施方案中，与原生未经修饰的抗体相比，调节Fc区与FcR的结合的修饰不改变抗体的Fab区与其抗原的结合。在其它实施方案中，与原生未经修饰的抗体相比，调节Fc区与FcR的结合的修饰增加抗体的Fab区与其抗原的结合。
在一些实施方案中，抗体构建体还包含Fc结构域。在某些实施方案中，抗体构建体是抗体。在某些实施方案中，抗体构建体是融合蛋白。抗原结合结构域可以是单链可变区片段(scFv)。可以使用常规重组DNA技术工艺产生单链可变区片段(scFv)，所述片段是截短的Fab片段，包括经由合成肽连接至轻抗体链的V结构域的抗体重链的可变(V)结构域。类似地，可以通过重组DNA技术制备二硫键稳定的可变区片段(dsFv)。抗体构建体或抗原结合结构域可以包含抗PD-L1抗体的抗原结合结构域的一个或多个可变区(例如两个可变区)，每个可变区包含CDR1、CDR2和CDR3。
在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体含有经修饰的Fc区，其中修饰调节Fc区与一种或多种Fc受体的结合。
在一些实施方案中，通过包含能够结合TGFβ1的转化生长因子β1(TGFβ1)受体或其片段来修饰Fc区。举例来说，受体可以是TGFβ受体II(TGFβRII)。在一些实施方案中，TGFβ受体是人类TGFβ受体。在一些实施方案中，IgG具有与TGFβRII细胞外结构域(ECD)的C端融合，如全文并入本文的US 9676863中所述。可以使用“Fc接头”将IgG附接至TGFβRII细胞外结构域。Fc接头可以是短柔性肽，其允许分子的适当三维折叠，同时维持与标靶的结合特异性。在一些实施方案中，TGFβ受体的N端融合至抗体构建体的Fc(在存在或不存在Fc接头的情况下)。在一些实施方案中，抗体构建体重链的C端融合至TGFβ受体(在存在或不存在Fc接头的情况下)。在一些实施方案中，抗体构建体重链的C端赖氨酸残基突变为丙氨酸。
在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体经糖基化。
在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体是半胱氨酸工程改造的抗体，其经由某些位点处的半胱氨酸取代而提供佐剂、标记或药物部分与抗体的位点特异性缀合，在所述位点处工程改造的半胱氨酸可以用于缀合但不扰乱免疫球蛋白折叠和组装或改变抗原结合和效应功能(Junutula等,2008b Nature Biotech.,26(8):925-932；Dornan等(2009)Blood 114(13):2721-2729；以及以下专利，其各自特此以引用的方式整体并入：US7521541、US 7723485、US 2012/0121615、WO 2009/052249)。“半胱氨酸工程改造的抗体”或“半胱氨酸工程改造的抗体变异体”是其中抗体的一个或多个残基经半胱氨酸残基取代的抗体。半胱氨酸工程改造的抗体可以按均匀化学计量(例如，在具有单一工程改造的半胱氨酸位点的抗体中，每个抗体至多两个8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓部分)缀合至呈8-环基-2-氨基苯并氮杂卓-接头化合物的8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓佐剂部分。
在一些实施方案中，用于制备表3的免疫缀合物的半胱氨酸工程改造的抗体具有在轻链的149-赖氨酸位点处引入的半胱氨酸残基(LC K149C)。在其它实施方案中，半胱氨酸工程改造的抗体具有在重链的118-丙氨酸位点(EU编号)处引入的半胱氨酸残基(HCA118C)。或者，这个位点通过依序编号而编号为121或通过Kabat编号而编号为114。在其它实施方案中，半胱氨酸工程改造的抗体具有在轻链中根据Kabat编号的G64C或R142C处或在重链中根据Kabat编号的D101C、V184C或T205C处引入的半胱氨酸残基。
8-环基-2-氨基苯并氮杂卓佐剂化合物
本发明的免疫缀合物包含8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓佐剂部分。本文所描述的佐剂部分是引发免疫反应的化合物(即，免疫刺激剂)。一般来说，本文所描述的佐剂部分是TLR激动剂。TLR是负责脊椎动物中先天免疫反应的起始的I型跨膜蛋白。TLR识别来自细菌、病毒和真菌的多种病原体相关分子模式并且充当对抗侵入性病原体的第一道防线。归因于细胞表达和TLR起始的信号传导路径不同，TLR引发重叠但截然不同的生物反应。一旦啮合(例如通过天然刺激或合成性TLR激动剂)，TLR起始信号转导级联，从而经由转接蛋白髓样分化初级反应基因88(MyD88)活化核因子-κB(NF-κB)并募集IL-1受体相关激酶(IRAK)。IRAK的磷酸化然后募集TNF受体相关因子6(TRAF6)，这引起NF-κB抑制剂I-κB磷酸化。因此，NF-κB进入细胞核并且起始其启动子含有NF-κB结合位点的基因(诸如细胞因子)的转录。用于TLR信号传导的额外调控模式包括含TIR-结构域的转接子诱导干扰素-β(TRIF)依赖性TNF-受体相关因子6(TRAF6)诱导以及经由TRIF和TRAF3活化MyD88非依赖性路径，从而引起干扰素反应因子3(IRF3)的磷酸化。类似地，MyD88依赖性路径还活化若干IRF家族成员，包括IRF5和IRF7，而TRIF依赖性路径还活化NF-κB路径。
通常，本文所描述的佐剂部分是TLR7和/或TLR8激动剂。TLR7和TLR8两者均在单核细胞和树突状细胞中表达。在人类中，TLR7也在浆细胞样树突状细胞(pDC)和B细胞中表达。TLR8主要在髓样来源的细胞，即，单核细胞、粒细胞和髓样树突状细胞中表达。TLR7和TLR8能够检测细胞内“外来”单股RNA的存在，以此作为对病毒侵入作出反应的手段。用TLR8激动剂处理TLR8表达细胞可以产生高水平的IL-12、IFN-γ、IL-1、TNF-α、IL-6和其它炎性细胞因子。类似地，用TLR7激动剂刺激TLR7表达细胞(诸如pDC)可以产生高水平的IFN-α和其它炎性细胞因子。TLR7/TLR8啮合以及所得细胞因子产生可以活化树突状细胞和其它抗原呈递细胞，从而驱动造成肿瘤破坏的各种先天和后天免疫反应机制。
本发明的示例性8-环基-2-氨基苯并氮杂卓化合物(CycBz)示于表1a和1b中。每种化合物通过质谱法来合成、纯化和表征并且显示具有所指示的质量。额外的实验程序见实施例。根据实施例202测量针对表达人类TLR7或人类TLR8的HEK293 NFKB报告体细胞的活性。表1a和1b的8-环基-2-氨基苯并氮杂卓化合物证明TLR8激动剂选择性的令人惊讶并且意想不到的特性，其可以预测可用于治疗癌症和其它病症的治疗活性。
表1a：8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓化合物(CycBz)，其中Cyc是杂环基二基或杂芳基二基
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表1b：8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓化合物(CycBz)，其中Cyc是苯基二基
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8-环基-2-氨基苯并氮杂卓-接头化合物
本发明的免疫缀合物是通过使抗PD-L1抗体与8-环基-2-氨基苯并氮杂卓-接头化合物CycBzL缀合来制备。8-环基-2-氨基苯并氮杂卓-接头化合物包含共价附接至接头单元的8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓(Cyc)部分。接头单元包含影响免疫缀合物的稳定性、渗透性、溶解性和其它药物动力学、安全性和功效特性的官能团和亚单元。接头单元包括反应性官能团，其与抗体的反应性官能团反应，即，缀合。举例来说，抗体的亲核基团，诸如赖氨酸侧链氨基与CycBz-接头化合物的亲电反应性官能团反应以形成免疫缀合物。同样，举例来说，抗体的半胱氨酸硫醇与Hx-接头化合物的马来酰亚胺或溴乙酰胺基团反应以形成免疫缀合物。
适用于CycBz-接头化合物的亲电反应性官能团包括但不限于N-羟基琥珀酰亚胺基(NHS)酯和N-羟基磺基琥珀酰亚胺基(磺基-NHS)酯(胺反应性)；碳二亚胺(胺和羧基反应性)；羟甲基膦(胺反应性)；马来酰亚胺(硫醇反应性)；卤化乙酰胺，诸如N-碘乙酰胺(硫醇反应性)；芳基叠氮化物(伯胺反应性)；氟化芳基叠氮化物(经由碳-氢(C-H)插入而具有反应性)；五氟苯基(PFP)酯(胺反应性)；四氟苯基(TFP)酯(胺反应性)；亚胺基酯(胺反应性)；异氰酸酯(羟基反应性)；乙烯基砜(硫醇、胺和羟基反应性)；吡啶基二硫化物(硫醇反应性)；以及二苯甲酮衍生物(经由C-H键插入而具有反应性)。其它试剂包括但不限于Hermanson,Bioconjugate Techniques第2版,Academic Press,2008中所描述的那些试剂。
本发明提供了针对免疫缀合物的设计、制备和使用的局限性和挑战的解决方案。一些接头可能在血流中不稳定，从而在靶细胞中内化之前释放不可接受量的佐剂/药物(Khot,A.等(2015)Bioanalysis7(13):1633-1648)。其它接头可能在血流中提供稳定性，但细胞内释放有效性可能受负面影响。提供所需细胞内释放的接头通常在血流中具有较差稳定性。换句话说，血流稳定性与细胞内释放通常呈逆相关。另外，在标准缀合过程中，负载于抗体上的佐剂/药物部分的量(即，药物负荷)、在缀合反应中形成的聚集体的量以及可获得的最终纯化缀合物的产量相互关联。举例来说，聚集体形成一般与缀合至抗体的佐剂/药物部分及其衍生物的当量数呈正相关。在高药物负荷下，必须去除所形成的聚集体以用于治疗应用。因此，药物负荷介导的聚集体形成会降低免疫缀合物产量并且可能使工艺规模扩大变得困难。
示例性实施方案包括式II的8-环基-2-氨基苯并氮杂卓-接头化合物：
其中Cyc选自由苯基二基、杂环基二基和杂芳基二基组成的组；
R1、R2、R3和R4独立地选自由H、C1-C12烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C12碳环基、C6-C20芳基、C2-C9杂环基和C1-C20杂芳基组成的组，其中烷基、烯基、炔基、碳环基、芳基、杂环基和杂芳基独立地并且任选地经一个或多个选自以下的基团取代：
-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷二基)-OR5；
-(C3-C12碳环基)；
-(C3-C12碳环基)-*；
-(C3-C12碳环基)-(C1-C12烷二基)-NR5-*；
-(C3-C12碳环基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C3-C12碳环基)-NR5-C(＝NR5)NR5-*；
-(C6-C20芳基)；
-(C6-C20芳二基)-*；
-(C6-C20芳二基)-N(R5)-*；
-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-(C2-C20杂环二基)-*；
-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-NR5-C(＝NR5a)N(R5)-*；
-(C2-C20杂环基)；
-(C2-C20杂环基)-*；
-(C2-C9杂环基)-(C1-C12烷二基)-NR5-*；
-(C2-C9杂环基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C2-C9杂环基)-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C2-C9杂环基)-NR5-C(＝NR5a)NR5-*；
-(C2-C9杂环基)-NR5-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C2-C9杂环基)-(C6-C20芳二基)-*；
-(C1-C20杂芳基)；
-(C1-C20杂芳二基)-*；
-(C1-C20杂芳基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C1-C20杂芳基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C1-C20杂芳基)-NR5-C(＝NR5a)N(R5)-*；
-(C1-C20杂芳基)-N(R5)C(＝O)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-C(＝O)-*；
-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环二基)-*；
-C(＝O)N(R5)2；
-C(＝O)N(R5)-*；
-C(＝O)N(R5)-(C1-C12烷二基)-N(R5)C(＝O)R5；
-C(＝O)N(R5)-(C1-C12烷二基)-N(R5)C(＝O)N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷二基)-N(R5)CO2R5；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷二基)-N(R5)C(＝NR5a)N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷二基)-NR5C(＝NR5a)R5；
-C(＝O)NR5-(C1-C8烷二基)-NR5(C2-C5杂芳基)；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳二基)-N(R5)-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳二基)-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳二基)-(C2-C20杂环二基)-C(＝O)NR5-(C1-C12烷二基)-NR5-*；
-N(R5)2；
-N(R5)-*；
-N(R5)C(＝O)R5；
-N(R5)C(＝O)-*；
-N(R5)C(＝O)N(R5)2；
-N(R5)C(＝O)N(R5)-*；
-N(R5)CO2R5；
-NR5C(＝NR5a)N(R5)2；
-NR5C(＝NR5a)N(R5)-*；
-NR5C(＝NR5a)R5；
-N(R5)C(＝O)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-N(R5)-(C2-C5杂芳基)；
-N(R5)-S(＝O)2-(C1-C12烷基)；
-O-(C1-C12烷基)；
-O-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-O-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-O-C(＝O)N(R5)2；
-O-C(＝O)N(R5)-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环二基)-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环二基)-(C1-C12烷二基)-NR5-*；以及
-S(＝O)2-(C2-C20杂环二基)-(C1-C12烷二基)-OH；
或R2与R3一起形成5元或6元杂环基环；
X1、X2、X3和X4独立地选自由一键、C(＝O)、C(＝O)N(R5)、O、N(R5)、S、S(O)2和S(O)2N(R5)组成的组；
R5独立地选自由H、C6-C20芳基、C3-C12碳环基、C6-C20芳二基、C1-C12烷基和C1-C12烷二基组成的组，或两个R5基团一起形成5元或6元杂环基环；
R5a选自由C6-C20芳基和C1-C20杂芳基组成的组；
其中星号*指示L的附接位点，并且其中R1、R2、R3和R4中的一者附接至L；
L是选自由以下组成的组的接头：
Q-C(＝O)-PEG-；
Q-C(＝O)-PEG-C(＝O)N(R6)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-Gluc-；
Q-C(＝O)-PEG-O-；
Q-C(＝O)-PEG-O-C(＝O)-；
Q-C(＝O)-PEG-C(＝O)-；
Q-C(＝O)-PEG-C(＝O)-PEP-；
Q-C(＝O)-PEG-N(R6)-；
Q-C(＝O)-PEG-N(R6)-C(＝O)-；
Q-C(＝O)-PEG-N(R6)-PEG-C(＝O)-PEP-；
Q-C(＝O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(＝O)-PEP-；
Q-C(＝O)-PEG-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-；
Q-C(＝O)-PEG-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)N(R6)C(＝O)-(C2-C5单杂环二基)-；
Q-C(＝O)-PEG-SS-(C1-C12烷二基)-OC(＝O)-；
Q-C(＝O)-PEG-SS-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-；
Q-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-PEP-；
Q-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-；
Q-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-C(＝O)；
Q-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-N(R6)C(＝O)-(C2-C5单杂环二基)-；
Q-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-；
Q-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-C(＝O)N(R6)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-Gluc-；
Q-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-O-；
Q-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-O-C(＝O)-；
Q-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-C(＝O)-；
Q-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-N(R5)-；
Q-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(＝O)-；
Q-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-C(＝O)-PEP-；
Q-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12烷二基)-OC(＝O)-；
Q-(CH2)m-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-；
Q-(CH2)m-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)N(R6)C(＝O)-；以及
Q-(CH2)m-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)N(R6)C(＝O)-(C2-C5单杂环二基)-；
R6独立地是H或C1-C6烷基；
PEG具有下式：-(CH2CH2O)n-(CH2)m-；m是1至5的整数，并且n是2至50的整数；
Gluc具有下式：
PEP具有下式：
其中AA独立地选自天然或非天然氨基酸侧链，或AA中的一者或多者和相邻氮原子形成5元环脯氨酸氨基酸，并且波形线指示附接点；
Cyc选自C6-C20芳二基和C1-C20杂芳二基，任选地经一个或多个选自以下的基团取代：F、Cl、NO2、-OH、-OCH3，以及具有以下结构的葡糖醛酸：
R7选自由-CH(R8)O-、-CH2-、-CH2N(R8)-和-CH(R8)O-C(＝O)-组成的组，其中R8选自H、C1-C6烷基、C(＝O)-C1-C6烷基和-C(＝O)N(R9)2，其中R9独立地选自由H、C1-C12烷基和-(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH组成的组，其中m是1至5的整数，并且n是2至50的整数，或两个R9基团一起形成5元或6元杂环基环；
y是2至12的整数；
z是0或1；
Q选自由N-羟基琥珀酰亚胺基、N-羟基磺基琥珀酰亚胺基、马来酰亚胺和苯氧基组成的组，经一个或多个独立地选自F、Cl、NO2和SO3 -的基团取代；并且
烷基、烷二基、烯基、烯二基、炔基、炔二基、芳基、芳二基、碳环基、碳环二基、杂环基、杂环二基、杂芳基和杂芳二基独立地并且任选地经一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CH2OP(O)(OH)2、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH(CH3)CN、-C(CH3)2CN、-CH2CN、-CH2NH2、-CH2NHSO2CH3、-CH2NHCH3、-CH2N(CH3)2、-CO2H、-COCH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-N(CH3)COCH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、-NHC(＝NH)H、-NHC(＝NH)CH3、-NHC(＝NH)NH2、-NHC(＝O)NH2、-NO2、＝O、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OH、-OCH2CH2N(CH3)2、-O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H、-O(CH2CH2O)nH、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、-OP(O)(OH)2、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-S(O)2CH3和-S(O)3H。
式II的8-环基-2-氨基苯并氮杂卓-接头化合物的示例性实施方案包括其中Q选自：
式II的8-环基-2-氨基苯并氮杂卓-接头化合物的示例性实施方案包括其中Q是被一个或多个F取代的苯氧基。
式II的8-环基-2-氨基苯并氮杂卓-接头化合物的示例性实施方案包括其中Q是2,3,5,6-四氟苯氧基。
8-环基-2-氨基苯并氮杂卓-接头(CycBzL)化合物的示例性实施方案选自表2a和2b。每种化合物都经过合成、纯化和质谱表征，并显示出具有指示的质量。额外的实验程序见实施例。表2a和2b的8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓-接头化合物证明了TLR8激动剂选择性的令人惊讶和意想不到的特性，这可以预测治疗癌症和其它病症的有用治疗活性。表2的8-环基-2-氨基苯并氮杂卓-接头中间体、式II化合物用于通过实施例201的方法与抗体缀合以形成表3a和3b的免疫缀合物。
表2a8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓-接头中间体，式II化合物(CycBzL)
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表2b8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓-接头中间体，式II化合物(CycBzL)
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PD-L1免疫缀合物
免疫刺激抗体缀合物，即免疫缀合物将TLR7/8激动剂引导至肿瘤中，以激活肿瘤浸润性骨髓细胞并启动广泛的先天性和适应性抗肿瘤免疫反应(Ackerman等,(2021)Nature Cancer 2:18-33。
PD-L1是一种免疫检查点跨膜蛋白，其调节抗肿瘤T细胞反应，并且在肿瘤细胞以及多种肿瘤类型的肿瘤浸润免疫细胞上表达。免疫刺激抗体缀合物(ISAC)由与免疫刺激剂缀合的肿瘤靶向抗体组成，并且被设计成在全身给药后激活针对肿瘤细胞的先天性和适应性免疫系统。PD-L1靶向TLR7/8免疫缀合物可引发强大的骨髓细胞激活，与临床前肿瘤模型中的抗PD-L1治疗相比，这会使得抗肿瘤反应改善。
通过噬菌体展示筛选鉴定了一组抗PD-L1抗体，并随后测试了PD-L1结合亲和力和特异性、PD-L1/PD-1阻断、骨髓细胞的抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)、以及抗肿瘤功效。抗PD-L1抗体通过骨髓效应细胞和中度至强PD-L1/PD-1体外阻断诱导强大的ADCP。选定的抗体在体内抑制同基因MC38-hPD-L1肿瘤的生长，证实了有效的免疫检查点阻断。
某些抗体通过接头与8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓(CycBz)TLR7/8激动剂缀合，并评估所得PD-L1免疫缀合物的体外骨髓细胞活化以及体内抗同基因和异种移植肿瘤的功效(实施例203)。当与表达PD-L1的肿瘤细胞共培养时，某些PD-L1免疫缀合物会诱导骨髓细胞的强大、靶标依赖性激活，如通过诸如IL-12p70、IFNa和TNFa等细胞因子的分泌增加所测量。在与具有人类肿瘤中观察到的PD-L1表达范围内的各种内源性PD-L1表达水平的肿瘤细胞共培养后观察到髓样激活。全身给药的替代PD-L1免疫缀合物在小鼠中具有良好的耐受性，并且显示出比抗PD-L1抗体更高的抗肿瘤功效，在同基因(例如MB49、MC38-hPD-L1)以及异种移植(例如HCC1954-hPD-L1)肿瘤模型中经常观察到显著的肿瘤生长延迟或完全反应。这些数据证明了PD-L1靶向免疫缀合物作为多功能治疗剂的潜力，可以通过将三种作用机制组合至单个分子中来提高PD-L1/PD-1抑制的功效：TLR介导的骨髓细胞激活、通过免疫检查点抑制的T细胞激活以及ADCP。
图9a显示了治疗后肿瘤体积随时间变化的体内研究图，比较了表3b中的免疫缀合PD-L1 IC-51与未缀合的抗PD-L1抗体在同基因MB49肿瘤模型中的功效。用包括CycBzL-24(表2b)的表3b中的免疫缀合物IC-51、包括CycBzL-24的大鼠IgG2b同型对照免疫缀合物、未缀合的抗PD-L1和未缀合的IgG2b同型抗体以10mg/kg腹膜内(IP)，Q3Dx4治疗带有大(约200mm3)同基因MB49肿瘤的小鼠(n＝6只/组)。用抗mPD-L1免疫缀合物IC-51治疗使得所有6只动物的抗肿瘤功效均相对于未缀合的抗PD-L1得到改善并产生完全缓解(CR)。
图9b显示了植入MB49肿瘤细胞后肿瘤体积随时间变化的体内研究图，评估了再攻击研究中的免疫记忆。在图9a的研究中，在用表3b的免疫缀合物PD-L1 IC-51治疗后经历MB49肿瘤完全消退的所有6只小鼠在肿瘤清除后约1个月(最终剂量后约7周)用MB49肿瘤细胞再次攻击。先前治愈的小鼠均未产生肿瘤，而所有未治疗小鼠(n＝5)均表明在用抗PD-L1免疫缀合物IC-51治疗后产生免疫记忆。
图10a显示了用包含CycBzL-24(表2b)的表3b的免疫缀合物IC-51、包含CycBzL-24的大鼠IgG2b同型对照免疫缀合物、未缀合的抗PD-L1和未缀合的IgG2b同型抗体以5mg/kgIP，Q3Dx4治疗亲本同基因MB49肿瘤后肿瘤体积随时间变化的图。
图10b显示了用包含CycBzL-24(表2b)的表3b的免疫缀合物IC-51、包含CycBzL-24的大鼠IgG2b同型对照免疫缀合物、未缀合的抗PD-L1和未缀合的IgG2b同型抗体以5mg/kgIP，Q3Dx4治疗肿瘤细胞上缺乏PD-L1表达的PD-L1敲除(PD-L1 KO)同基因MB49肿瘤后肿瘤体积随时间变化的图。
即使在肿瘤细胞上没有PD-L1表达的情况下，用PD-L1 IC-51治疗也能提高抗肿瘤功效，证明本发明的免疫缀合物可以通过免疫细胞上的PD-L1诱导抗肿瘤反应。
免疫缀合物的示例性实施方案包含通过接头共价连接至一个或多个8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓(CycBz)部分并具有式I的抗PD-L1抗体：
Ab-[L-CycBz]p I
或其药学上可接受的盐，
其中：
Ab是具有结合PD-L1的抗原结合结构域的抗体构建体；
p是1至8的整数；
CycBz是具有下式的8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓部分：
Cyc选自由苯基二基、杂环基二基和杂芳基二基组成的组；
R1、R2、R3和R4独立地选自由H、C1-C12烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C12碳环基、C6-C20芳基、C2-C9杂环基和C1-C20杂芳基组成的组，其中烷基、烯基、炔基、碳环基、芳基、杂环基和杂芳基独立地并且任选地经一个或多个选自以下的基团取代：
-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷二基)-OR5；
-(C3-C12碳环基)；
-(C3-C12碳环基)-*；
-(C3-C12碳环基)-(C1-C12烷二基)-NR5-*；
-(C3-C12碳环基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C3-C12碳环基)-NR5-C(＝NR5)NR5-*；
-(C6-C20芳基)；
-(C6-C20芳基)-*；
-(C6-C20芳二基)-N(R5)-*；
-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-(C2-C20杂环二基)-*；
-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-NR5-C(＝NR5a)N(R5)-*；
-(C2-C20杂环基)；
-(C2-C20杂环基)-*；
-(C2-C9杂环基)-(C1-C12烷二基)-NR5-*；
-(C2-C9杂环基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C2-C9杂环基)-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C2-C9杂环基)-NR5-C(＝NR5a)NR5-*；
-(C2-C9杂环基)-NR5-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C2-C9杂环基)-(C6-C20芳二基)-*；
-(C1-C20杂芳基)；
-(C1-C20杂芳基)-*；
-(C1-C20杂芳基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C1-C20杂芳基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C1-C20杂芳基)-NR5-C(＝NR5a)N(R5)-*；
-(C1-C20杂芳基)-N(R5)C(＝O)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-C(＝O)-*；
-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环二基)-*；
-C(＝O)N(R5)2；
-C(＝O)N(R5)-*；
-C(＝O)N(R5)-(C1-C12烷二基)-N(R5)C(＝O)R5；
-C(＝O)N(R5)-(C1-C12烷二基)-N(R5)C(＝O)N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷二基)-N(R5)CO2R5；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷二基)-N(R5)C(＝NR5a)N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷二基)-NR5C(＝NR5a)R5；
-C(＝O)NR5-(C1-C8烷二基)-NR5(C2-C5杂芳基)；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳二基)-N(R5)-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳二基)-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳二基)-(C2-C20杂环二基)-C(＝O)NR5-(C1-C12烷二基)-NR5-*；
-N(R5)2；
-N(R5)-*；
-N(R5)C(＝O)R5；
-N(R5)C(＝O)-*；
-N(R5)C(＝O)N(R5)2；
-N(R5)C(＝O)N(R5)-*；
-N(R5)CO2R5；
-NR5C(＝NR5a)N(R5)2；
-NR5C(＝NR5a)N(R5)-*；
-NR5C(＝NR5a)R5；
-N(R5)C(＝O)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-N(R5)-(C2-C5杂芳基)；
-N(R5)-S(＝O)2-(C1-C12烷基)；
-O-(C1-C12烷基)；
-O-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-O-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-O-C(＝O)N(R5)2；
-O-C(＝O)N(R5)-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环二基)-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环二基)-(C1-C12烷二基)-NR5-*；以及
-S(＝O)2-(C2-C20杂环二基)-(C1-C12烷二基)-OH；
或R2与R3一起形成5元或6元杂环基环；
X1、X2、X3和X4独立地选自由一键、C(＝O)、C(＝O)N(R5)、O、N(R5)、S、S(O)2和S(O)2N(R5)组成的组；
R5独立地选自由H、C6-C20芳基、C3-C12碳环基、C6-C20芳二基、C1-C12烷基和C1-C12烷二基组成的组，或两个R5基团一起形成5元或6元杂环基环；
R5a选自由C6-C20芳基和C1-C20杂芳基组成的组；
其中星号*指示L的附接位点，并且其中R1、R2、R3和R4中的一者附接至L；
L是选自由以下组成的组的接头：
-C(＝O)-PEG-；
-C(＝O)-PEG-C(＝O)N(R6)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-Gluc-；
-C(＝O)-PEG-O-；
-C(＝O)-PEG-O-C(＝O)-；
-C(＝O)-PEG-C(＝O)-；
-C(＝O)-PEG-C(＝O)-PEP-；
-C(＝O)-PEG-N(R6)-；
-C(＝O)-PEG-N(R6)-C(＝O)-；
-C(＝O)-PEG-N(R6)-PEG-C(＝O)-PEP-；
-C(＝O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(＝O)-PEP-；
-C(＝O)-PEG-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-；
-C(＝O)-PEG-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)N(R6)C(＝O)-(C2-C5单杂环二基)-；
-C(＝O)-PEG-SS-(C1-C12烷二基)-OC(＝O)-；
-C(＝O)-PEG-SS-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-；
-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-PEP-；
-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-；
-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-C(＝O)；
-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-N(R6)C(＝O)-(C2-C5单杂环二基)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-C(＝O)N(R6)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-Gluc-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-O-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-O-C(＝O)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-C(＝O)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-N(R5)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(＝O)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-C(＝O)-PEP-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12烷二基)-OC(＝O)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)N(R6)C(＝O)-；以及
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)N(R6)C(＝O)-(C2-C5单杂环二基)-；
R6独立地是H或C1-C6烷基；
PEG具有下式：-(CH2CH2O)n-(CH2)m-；m是1至5的整数，并且n是2至50的整数；
Gluc具有下式：
PEP具有下式：
其中AA独立地选自天然或非天然氨基酸侧链，或AA中的一者或多者和相邻氮原子形成5元环脯氨酸氨基酸，并且波形线指示附接点；
Cyc选自C6-C20芳二基和C1-C20杂芳二基，任选地经一个或多个选自以下的基团取代：F、Cl、NO2、-OH、-OCH3，以及具有以下结构的葡糖醛酸：
R7选自由-CH(R8)O-、-CH2-、-CH2N(R8)-和-CH(R8)O-C(＝O)-组成的组，其中R8选自H、C1-C6烷基、C(＝O)-C1-C6烷基和-C(＝O)N(R9)2，其中R9独立地选自由H、C1-C12烷基和-(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH组成的组，其中m是1至5的整数，并且n是2至50的整数，或两个R9基团一起形成5元或6元杂环基环；
y是2至12的整数；
z是0或1；并且
烷基、烷二基、烯基、烯二基、炔基、炔二基、芳基、芳二基、碳环基、碳环二基、杂环基、杂环二基、杂芳基和杂芳二基独立地并且任选地经一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CH2OP(O)(OH)2、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH(CH3)CN、-C(CH3)2CN、-CH2CN、-CH2NH2、-CH2NHSO2CH3、-CH2NHCH3、-CH2N(CH3)2、-CO2H、-COCH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-N(CH3)COCH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、-NHC(＝NH)H、-NHC(＝NH)CH3、-NHC(＝NH)NH2、-NHC(＝O)NH2、-NO2、＝O、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OH、-OCH2CH2N(CH3)2、-O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H、-O(CH2CH2O)nH、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、-OP(O)(OH)2、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-S(O)2CH3和-S(O)3H。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中所述抗体选自阿特珠单抗、德瓦鲁单抗和阿维鲁单抗和或其生物类似药或生物改良药。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中X2是一键，并且R2是C1-C8烷基。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中X1是一键，并且R1是H。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中X2和X3各自是一键，并且R2和R3独立地选自C1-C8烷基、-O-(C1-C12烷基)、-(C1-C12烷二基)-OR5、-(C1-C8烷二基)-N(R5)CO2R5、-(C1-C12烷基)-OC(O)N(R5)2、-O-(C1-C12烷基)-N(R5)CO2R5和-O-(C1-C12烷基)-OC(O)N(R5)2。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中R2是C1-C8烷基并且R3是-(C1-C8烷二基)-N(R5)CO2R5。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中R2是-CH2CH2CH3并且R3选自-CH2CH2CH2NHCO2(t-Bu)、-OCH2CH2NHCO2(环丁基)和-CH2CH2CH2NHCO2(环丁基)。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中R2和R3各自独立地选自-CH2CH2CH3、-OCH2CH3、-CH2CH2CF3和-CH2CH2CH2OH。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中R2和R3各自是-CH2CH2CH3。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中R2是-CH2CH2CH3并且R3是-OCH2CH3。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中X3-R3选自由以下组成的组：
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中X4是一键，并且R4是H。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中R1附接至L。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中R2或R3附接至L。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中X3-R3-L选自由以下组成的组：
其中波形线指示与N的附接点。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中R4是C1-C12烷基。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中R4是-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；其中星号*指示L的附接位点。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中L是-C(＝O)-PEG-或-C(＝O)-PEG-C(＝O)-。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中L附接至所述抗体的半胱氨酸硫醇。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中对于所述PEG，m是1或2，并且n是2至10的整数。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中对于所述PEG，n是10。
式I的免疫缀合物的一个示例性实施方案包括其中L包含PEP，并且PEP是二肽并具有下式：
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中AA1和AA2独立地选自H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2(C6H5)、-CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2NHC(NH)NH2、-CHCH(CH3)CH3、-CH2SO3H和-CH2CH2CH2NHC(O)NH2；或AA1和AA2形成一个五元环脯氨酸氨基酸。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中AA1是-CH(CH3)2，并且AA2是-CH2CH2CH2NHC(O)NH2。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中AA1和AA2独立地选自GlcNAc天冬氨酸、-CH2SO3H和-CH2OPO3H。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中PEP具有下式：
其中AA1和AA2独立地选自天然存在的氨基酸的侧链。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中L包含PEP并且PEP是三肽并且具有下式：
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中L包含PEP并且PEP是四肽并且具有下式：
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中：
AA1选自由Abu、Ala和Val组成的组；
AA2选自Nle(O-Bzl)、Oic和Pro；
AA3选自Ala和Met(O)2；并且
AA4选自Oic、Arg(NO2)、Bpa和Nle(O-Bzl)。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中L包含PEP并且PEP选自由Ala-Pro-Val、Asn-Pro-Val、Ala-Ala-Val、Ala-Ala-Pro-Ala(SEQ ID NO:473)、Ala-Ala-Pro-Val(SEQ ID NO:474)和Ala-Ala-Pro-Nva(SEQ ID NO:475)组成的组。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中L包含PEP并且PEP选自以下结构：
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中L选自以下结构：
其中波形线表示与R5的附接。
具有式Ia的式I的免疫缀合物的示例性实施方案：
式Ia的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中X4是一个键并且R4是H。
式Ia的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中Cyc选自由吡啶二基、嘧啶二基、吡唑二基、哌嗪二基、哌啶二基和吡嗪二基组成的组。
式Ia的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中X2和X3各自是一键，并且R2和R3独立地选自C1-C8烷基、-O-(C1-C12烷基)、-(C1-C12烷二基)-OR5、-(C1-C8烷二基)-N(R5)CO2R5、-(C1-C12烷基)-OC(O)N(R5)2、-O-(C1-C12烷基)-N(R5)CO2R5和-O-(C1-C12烷基)-OC(O)N(R5)2。
选自式Ib-Ii的式Ia免疫缀合物的示例性实施方案：
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选自式Ij-In的式Ia免疫缀合物的示例性实施方案：
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式Ia的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中X2和X3各自为一键，并且R2和R3独立地选自C1-C8烷基、-O-(C1-C12烷基)、-(C1-C12烷二基)-OR5、-(C1-C8烷二基)-N(R5)CO2R5和-O-(C1-C12烷基)-N(R5)CO2R5。
式Ia的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中X2和X3各自为一键，R2为C1-C8烷基，并且R3选自-O-(C1-C12烷基)和-O-(C1-C12烷基)-N(R5)CO2R5。
本发明包括式I实施方案的所有合理组合和特征排列。
在某些实施方案中，本发明的免疫缀合物化合物包括具有免疫刺激活性的那些化合物。本发明的抗体-药物缀合物选择性地将有效剂量的8-环基-2-氨基苯并氮杂卓药物递送至肿瘤组织，从而可以达成相对于未缀合的8-环基-2-氨基苯并氮杂卓更大的选择性(即，较低有效剂量)，同时增加治疗指数(“治疗窗”)。
药物负荷由p表示，即，式I的免疫缀合物中每个抗体的Cyc部分的数目。药物(CycBz)负荷可以在每个抗体1个至约8个药物部分(D)的范围内。式I的免疫缀合物包括与1个至约8个范围内的药物部分缀合的抗体混合物或集合。在一些实施方案中，可以缀合至抗体的药物部分的数目受反应性或可用氨基酸侧链残基，诸如赖氨酸和半胱氨酸的数目限制。在一些实施方案中，通过本文所描述的方法将游离半胱氨酸残基引入抗体氨基酸序列中。在此类方面，p可以是1、2、3、4、5、6、7或8及其范围，诸如1至8或2至5。在任何此类方面，p和n相等(即，p＝n＝1、2、3、4、5、6、7或8或介于之间的某个范围)。式I的示例性免疫缀合物包括但不限于具有1、2、3或4个工程改造的半胱氨酸氨基酸的抗体(Lyon,R.等(2012)Methods in Enzym.502:123-138)。在一些实施方案中，在不使用工程改造的情况下形成链内二硫键的抗体中已存在一个或多个游离半胱氨酸残基，在这种情况下可以使用现有游离半胱氨酸残基将抗体缀合至药物。在一些实施方案中，在抗体缀合之前使抗体暴露于还原条件，以产生一个或多个游离半胱氨酸残基。
对于一些免疫缀合物，p可能受抗体上的附接位点的数目限制。举例来说，在附接半胱氨酸硫醇的情况下，如在本文所描述的某些示例性实施方案中，抗体可能仅具有一个或有限数目的半胱氨酸硫醇基团，或可能仅具有一个或有限数目的充分反应性硫醇基团，药物可以附接至所述基团。在其它实施方案中，抗体中的一个或多个赖氨酸氨基对于与式II的CycBz-接头化合物缀合来说可以是可用的并且具有反应性。在某些实施方案中，较高药物负荷，例如p>5，可能导致某些抗体-药物缀合物的聚集、不溶性、毒性或细胞渗透性损失。在某些实施方案中，免疫缀合物的平均药物负荷在1至约8、约2至约6或约3至约5的范围内。在某些实施方案中，使抗体经受变性条件以显露反应性亲核基团，诸如赖氨酸或半胱氨酸。
免疫缀合物的负荷(药物/抗体比率)可以按不同方式控制，并且例如通过：(i)限制CycBz-接头中间化合物相对于抗体的摩尔过量；(ii)限制缀合反应时间或温度；以及(iii)用于优化的抗体反应性的部分或限制性还原变性条件。
应了解，在抗体的多于一个亲核基团与药物反应的情况下，那么所得产物是免疫缀合物化合物的混合物，其具有一个或多个药物部分附接至抗体的分布。可以通过对抗体具有特异性并且对药物具有特异性的双重ELISA抗体分析从混合物计算每个抗体的平均药物数。可以通过质谱法在混合物中鉴定个别免疫缀合物分子，并且通过HPLC，例如疏水相互作用色谱法进行分离(参见例如McDonagh等(2006)Prot.Engr.Design&Selection 19(7):299-307；Hamblett等(2004)Clin.Cancer Res.10:7063-7070；Hamblett,K.J.等"Effectof drug loading on the pharmacology,pharmacokinetics,and toxicity of an anti-CD30antibody-drug conjugate",摘要号624,American Association for CancerResearch,2004Annual Meeting,2004年3月27-31日,Proceedings of the AACR,第45卷,2004年3月；Alley,S.C.等"Controlling the location of drug attachment inantibody-drug conjugates",摘要号627,American Association for Cancer Research,2004Annual Meeting,2004年3月27-31日,Proceedings of the AACR,第45卷,2004年3月)。在某些实施方案中，可以通过电泳或色谱法从缀合混合物中分离具有单一负荷值的均质免疫缀合物。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案选自表3a和3b免疫缀合物。根据实施例203的方法进行体外免疫缀合物活性的评估。
表3a抗PD-L1、CycBz免疫缀合物(IC)
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表3b抗PD-L1、CycBz免疫缀合物(IC)
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免疫缀合物的组合物
本发明提供了一种组合物，例如药学上或药理学上可接受的组合物或制剂，其包含多种如本文所描述的免疫缀合物和其任选的载体，例如药学上或药理学上可接受的载体。免疫缀合物在组成上可以相同或不同，即，组合物可以包含具有连接至抗体构建体上的相同位置的相同数目的佐剂的免疫缀合物和/或具有连接至抗体构建体上的不同位置的相同数目的CycBz佐剂，具有连接至抗体构建体上的相同位置的不同数目的佐剂，或具有连接至抗体构建体上的不同位置的不同数目的佐剂的免疫缀合物。
在一个示例性实施方案中，包含免疫缀合物化合物的组合物包含免疫缀合物化合物的混合物，其中免疫缀合物化合物的混合物中每个抗体的平均药物(Hx)负荷为约2至约5。
本发明的免疫缀合物的组合物可以具有约0.4至约10的平均佐剂与抗体构建体比率(DAR)。技术人员将认识到，在包含本发明的多种免疫缀合物的组合物中，缀合至抗体构建体的8-环基-2-氨基苯并氮杂卓佐剂的数目可能随着免疫缀合物的不同而变化，并且因此，可以用平均值测量佐剂与抗体构建体(例如抗体)比率，这可以称作药物与抗体比率(DAR)。佐剂与抗体构建体(例如抗体)比率可以通过任何适合的手段来评估，其中许多手段在本领域中是已知的。
在从缀合反应制备免疫缀合物中每个抗体的佐剂部分的平均数目(DAR)可以通过常规手段，诸如质谱法、ELISA分析和HPLC来表征。还可以确定免疫缀合物在组合物中的定量分布，以p表示。在一些情况下，可以通过诸如反相HPLC或电泳的手段，从具有其它药物负荷的免疫缀合物中分离、纯化和表征其中p是一定值的均质免疫缀合物。
在一些实施方案中，组合物还包含一种或多种药学上或药理学上可接受的赋形剂。举例来说，本发明的免疫缀合物可以经配制用于肠道外施用，诸如静脉内施用或向器官的体腔或内腔中施用。或者，可以肿瘤内注射免疫缀合物。注射用组合物通常将包含免疫缀合物溶解于药学上可接受的载体中的溶液。可以采用的可接受媒剂和溶剂是水和一种或多种盐的等张溶液，诸如氯化钠，例如林格氏溶液(Ringer's solution)。另外，无菌非挥发性油可以常规地用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可以采用任何温和的非挥发性油，包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯。另外，诸如油酸的脂肪酸同样可以用于可注射剂的制备中。这些组合物理想地是无菌的并且一般不含非所需的物质。这些组合物可以通过常规的熟知灭菌技术进行灭菌。组合物可以含有接近生理条件所需的药学上可接受的辅助物质，诸如pH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂，例如乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等等。
组合物可以含有任何适合浓度的免疫缀合物。组合物中免疫缀合物的浓度可以广泛变化，并且将根据所选特定施用模式和患者需要，主要基于流体体积、粘度、体重等等来选择。在某些实施方案中，注射用溶液制剂中免疫缀合物的浓度将在约0.1％(w/w)至约10％(w/w)的范围内。
用免疫缀合物治疗癌症的方法
本发明提供了一种用于治疗癌症的方法。所述方法包括向有需要的受试者，例如患有癌症并且需要治疗癌症的受试者施用治疗有效量的如本文所描述的免疫缀合物(例如，如本文所描述的组合物)。所述方法包括施用治疗有效量的选自表3的免疫缀合物(IC)。
预期本发明的免疫缀合物可以用于治疗各种过度增生性疾病或病症，例如以肿瘤抗原的过表达为特征。示例性过度增生性病症包括良性或恶性实体肿瘤和血液学病症，诸如白血病和淋巴样恶性病。
在另一个方面，提供了一种用作药剂的免疫缀合物。在某些实施方案中，本发明提供了一种用于治疗受试者的方法中的免疫缀合物，所述方法包括向受试者施用有效量的免疫缀合物。在一个此类实施方案中，所述方法还包括向受试者施用有效量的至少一种额外治疗剂，例如，如本文所描述。
在另一个方面，本发明提供了免疫缀合物在药剂制造或制备中的用途。在一个实施方案中，药剂用于治疗癌症，所述方法包括向患有癌症的受试者施用有效量的药剂。在一个此类实施方案中，所述方法还包括向受试者施用有效量的至少一种额外治疗剂，例如，如本文所描述。
癌瘤是起源于上皮组织的恶性病。上皮细胞覆盖身体的外表面，内衬于内腔，并且形成腺组织的衬里。癌瘤的实例包括但不限于腺癌(始于腺(分泌)细胞的癌症，诸如乳腺癌、胰脏癌、肺癌、前列腺癌、胃癌、胃食管连接部癌症和结肠癌)；肾上腺皮质癌；肝细胞癌；肾细胞癌；卵巢癌；原位癌；导管癌；乳腺癌；基底细胞癌；鳞状细胞癌；移行细胞癌；结肠癌；鼻咽癌；多房囊性肾细胞癌；燕麦细胞癌；大细胞肺癌；小细胞肺癌；非小细胞肺癌；等等。在前列腺、胰脏、结肠、脑(通常是继发性转移)、肺、乳房和皮肤中可以发现癌瘤。在一些实施方案中，用于治疗非小细胞肺癌的方法包括施用含有能够结合PD-L1的抗体构建体(例如阿特珠单抗、德瓦鲁单抗和阿维鲁单抗，或其生物类似药或其生物改良药)的免疫缀合物。
软组织肿瘤是来源于结缔组织的罕见肿瘤的高度多样化群组。软组织肿瘤的实例包括但不限于肺泡状软组织肉瘤；血管瘤样纤维组织细胞瘤；软骨粘液样纤维瘤；骨骼软骨肉瘤；骨骼外粘液样软骨肉瘤；透明细胞肉瘤；促结缔组织增生性小圆细胞瘤；隆突性皮肤纤维肉瘤；子宫内膜间质瘤；尤因氏肉瘤(Ewing's sarcoma)；纤维瘤病(硬纤维)；婴儿纤维肉瘤；胃肠道间质瘤；骨巨细胞瘤；腱鞘巨细胞瘤；炎性肌纤维母细胞瘤；子宫平滑肌瘤；平滑肌肉瘤；脂肪母细胞瘤；典型脂肪瘤；梭形细胞或多形性脂肪瘤；非典型脂肪瘤；软骨样脂肪瘤；高分化脂肪肉瘤；粘液样/圆形细胞脂肪肉瘤；多形性脂肪肉瘤；粘液样恶性纤维组织细胞瘤；高度恶性纤维组织细胞瘤；粘液性纤维肉瘤；恶性周边神经鞘瘤；间皮瘤；神经母细胞瘤；骨软骨瘤；骨肉瘤；原始神经外胚层肿瘤；肺泡状横纹肌肉瘤；胚胎横纹肌肉瘤；良性或恶性神经鞘瘤；滑膜肉瘤；埃文氏肿瘤(Evan's tμmor)；结节性筋膜炎；硬纤维型纤维瘤病；孤立性纤维瘤；隆突性皮肤纤维肉瘤(DFSP)；血管肉瘤；上皮样血管内皮瘤；腱鞘巨细胞瘤(TGCT)；色素绒毛结节性滑膜炎(PVNS)；纤维性发育不良；粘液性纤维肉瘤；纤维肉瘤；滑膜肉瘤；恶性周边神经鞘瘤；神经纤维瘤；软组织多形性腺瘤；以及来源于纤维母细胞、肌纤维母细胞、组织细胞、血管细胞/内皮细胞和神经鞘细胞的赘瘤。
肉瘤是罕见类型的癌症，其出现于间叶来源的细胞中，例如身体的骨骼中或软组织中，所述软组织包括软骨、脂肪、肌肉、血管、纤维组织或其它结缔组织或支持组织。不同类型的肉瘤基于癌症形成的部位。举例来说，骨肉瘤在骨骼中形成，脂肪肉瘤在脂肪中形成，并且横纹肌肉瘤在肌肉中形成。肉瘤的实例包括但不限于阿斯金氏肿瘤(askin'stumor)；葡萄状肉瘤；软骨肉瘤；尤因氏肉瘤；恶性血管内皮瘤；恶性神经鞘瘤；骨肉瘤；以及软组织肉瘤(例如肺泡状软组织肉瘤；血管肉瘤；叶状囊性肉瘤；隆突性皮肤纤维肉瘤(DFSP)；硬纤维瘤；促结缔组织增生性小圆细胞瘤；上皮样肉瘤；骨骼外软骨肉瘤；骨骼外骨肉瘤；纤维肉瘤；胃肠道间质瘤(GIST)；血管外皮细胞瘤；血管肉瘤(hemangiosarcoma)(更常称作“血管肉瘤(angiosarcoma)”)；卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)；平滑肌肉瘤；脂肪肉瘤；淋巴管肉瘤；恶性周边神经鞘瘤(MPNST)；神经纤维肉瘤；滑膜肉瘤；以及未分化多形性肉瘤)。
畸胎瘤是一种类型的生殖细胞肿瘤，其可以含有若干不同类型的组织(例如可以包括来源于以下三个胚层中的任一者和/或全部的组织：内胚层、中胚层和外胚层)，包括例如毛发、肌肉和骨骼。畸胎瘤最常出现于女性的卵巢、男性的睾丸和儿童的尾骨中。
黑色素瘤是始于黑色素细胞(制造黑色素的细胞)的癌症形式。黑色素瘤可以始于黑痣(皮肤黑色素瘤)，但也可以始于其它有色素组织，诸如眼中或肠中。
默克尔细胞癌(Merkel cell carcinoma)是一种罕见类型的皮肤癌，其通常以肉色或蓝红色结节出现于面部、头部或颈部。默克尔细胞癌也称为皮肤神经内分泌癌。在一些实施方案中，用于治疗默克尔细胞癌的方法包括施用含有能够结合PD-L1的抗体构建体(例如阿特珠单抗、德瓦鲁单抗、阿维鲁单抗、其生物类似药或其生物改良药)的免疫缀合物。在一些实施方案中，当进行施用时默克尔细胞癌已转移。
白血病是始于血液形成组织(诸如骨髓)的癌症，并且导致大量异常血细胞产生并且进入血流。举例来说，白血病可以起源于通常在血流中成熟的骨髓源性细胞。白血病以疾病发展及进展的速度(例如急性对比慢性)和受影响的白血球类型(例如髓样对比淋巴样)而命名。髓样白血病也称为骨髓性或骨髓母细胞性白血病。淋巴样白血病也称为淋巴母细胞性或淋巴细胞性白血病。淋巴样白血病细胞可聚集于淋巴结中，从而淋巴结可变得肿胀。白血病的实例包括但不限于急性髓样白血病(AML)、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、慢性髓样白血病(CML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。
淋巴瘤是始于免疫系统细胞的癌症。举例来说，淋巴瘤可以起源于通常在淋巴系统中成熟的骨髓源性细胞。淋巴瘤存在两种基本类别。一种类别的淋巴瘤是霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma，HL)，其以称为里-斯二氏细胞(Reed-Sternberg cell)的细胞类型的存在为标志。当前存在6种公认的HL类型。霍奇金淋巴瘤的实例包括结节性硬化经典型霍奇金淋巴瘤(CHL)、混合细胞型CHL、淋巴细胞耗竭型CHL、富淋巴细胞型CHL和结节性淋巴细胞为主型HL。
另一种类别的淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma，NHL)，其包括免疫系统细胞癌的大型多样化群组。非霍奇金淋巴瘤可以进一步分为具有无痛性(缓慢生长)病程的癌症和具有侵袭性(快速生长)病程的癌症。当前存在61种公认的NHL类型。非霍奇金淋巴瘤的实例包括但不限于AIDS相关淋巴瘤、退行性大细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、伯基特样淋巴瘤(Burkitt-like lymphoma)(小无裂细胞淋巴瘤)、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤、皮肤性T细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、肝脾γ-δT细胞淋巴瘤、T细胞白血病、淋巴母细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、鼻部T细胞淋巴瘤、小儿淋巴瘤、周边T细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、转化性淋巴瘤、治疗相关T细胞淋巴瘤和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom'smacroglobulinemia)。
脑癌包括脑组织的任何癌症。脑癌的实例包括但不限于神经胶质瘤(例如胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、寡树突神经胶质瘤、室管膜瘤和类似癌症)、脑膜瘤、垂体腺瘤和前庭神经鞘瘤、原始神经外胚层肿瘤(髓母细胞瘤)。
本发明的免疫缀合物可以单独或与其它剂组合用于疗法中。举例来说，免疫缀合物可以与至少一种额外治疗剂，诸如化学治疗剂共同施用。此类组合疗法涵盖组合施用(其中两种或更多种治疗剂包括于相同或独立制剂中)；以及独立施用，在这种情况下，免疫缀合物的施用可以在额外治疗剂和/或佐剂施用之前、同时和/或之后进行。免疫缀合物还可以与放射线疗法组合使用。
本发明的免疫缀合物(和任何额外治疗剂)可以通过任何适合的手段施用，包括肠道外、肺内和鼻内，并且必要时对于局部治疗，病灶内施用。肠道外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。给药可以通过任何适合的途径进行，例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射，在部分程度上取决于施用是短暂的还是长期的。本文预期各种给药方案，包括但不限于单次施用或经多个时间点的多次施用、推注施用和脉冲输注。
使用任何适合的给药方案，诸如用于阿特珠单抗、德瓦鲁单抗和阿维鲁单抗、其生物类似药及其生物改良药的给药方案，以任何治疗有效量向有需要的受试者施用免疫缀合物。举例来说，所述方法可以包括施用免疫缀合物以向受试者提供约100ng/kg至约50mg/kg的剂量。免疫缀合物剂量可以在约5mg/kg至约50mg/kg、约10μg/kg至约5mg/kg、或约100μg/kg至约1mg/kg的范围内。免疫缀合物剂量可以为约100、200、300、400或500μg/kg。免疫缀合物剂量可以为约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10mg/kg。取决于特定缀合物以及所治疗的癌症的类型和严重性，免疫缀合物剂量也可以在这些范围外。施用频率可以在每周单次给药至多次给药的范围内，或更高频率。在一些实施方案中，每月约一次至每周约五次施用免疫缀合物。在一些实施方案中，每周一次施用免疫缀合物。
在另一个方面，本发明提供了一种用于预防癌症的方法。所述方法包括向受试者施用治疗有效量的免疫缀合物(例如，如上文所描述的组合物)。在某些实施方案中，受试者易患某种有待预防的癌症。
本发明的一些实施方案提供用于治疗如上文所描述的癌症的方法，其中所述癌症是乳腺癌。乳腺癌可以起源于乳房的不同区域，并且许多不同类型的乳腺癌已表征。举例来说，本发明的免疫缀合物可以用于治疗原位导管癌；浸润性导管癌(例如小管癌；髓质癌；粘液癌；乳突癌；或乳房筛状癌)；原位小叶癌；浸润性小叶癌；炎性乳腺癌；以及其它形式的乳腺癌，诸如三阴性(对雌激素受体、黄体酮受体和过量HER2蛋白质测试呈阴性)乳腺癌。在一些实施方案中，用于治疗乳腺癌的方法包括施用含有能够结合PD-L1或过表达PD-L1的肿瘤的抗体构建体(例如其阿维鲁单抗)的免疫缀合物。
在一些实施方案中，癌症容易发生由TLR7和/或TLR8诱导的促炎反应。
在一些实施方案中，向需要治疗宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、食道癌、膀胱癌、尿道癌、尿路上皮癌、肺癌、非小细胞肺癌、默克尔细胞癌、结肠癌、结肠直肠癌、胃癌或乳腺癌的患者施用治疗有效量的免疫缀合物。默克尔细胞癌可以是转移性默克尔细胞癌。乳腺癌可以是三阴性乳腺癌。食道癌可以是胃食管连接部腺癌。
实施例
实施例L-9合成1-(1-((3-(2-氨基-4-(乙氧基(丙基)氨基甲酰基)-3H-苯并[b]氮杂卓-8-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)-3-氧代基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-十氧杂-2-氮杂六十烷-36-酸2,3,5,6-四氟苯基酯，CycBzL-9
制备3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[1-[3-[2-氨基-4]-[乙氧基(丙基)氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲基氨基]-3-氧代基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸叔丁酯，CycBzL-9b
向2-氨基-8-[3-[3-(氨基甲基)氮杂环丁烷-1-基]磺酰基苯基]-N-乙氧基-N-丙基-3H-1-苯并氮杂卓-4-甲酰胺，CycBzL-9a(270mg，431μmol，1当量，TFA)于DMF(2mL)中的溶液中添加Et3N(131mg，1.29mmol，180μL，3当量)和3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(3-叔丁氧基-3-氧代基-丙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(2,3,5,6-四氟苯基)酯、TFP-PEG10-CO2H(329mg，431μmol，1当量)，且接着在0℃下搅拌1小时。将混合物过滤，并通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：35％-57％，8min)纯化，得到呈无色油状的CycBzL-9b(270mg，243μmol，56.45％产率)。
制备3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[1-[3-[2-氨基-4-[乙氧基(丙基)氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲基氨基]-3-氧代基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸，CycBzL-9c
向CycBzL-9b(270mg，243μmol，1当量)于CH3CN(2mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加TFA(222mg，1.95mmol，144μL，8当量)，且接着在80℃下搅拌1小时。浓缩混合物并用水(10mL)稀释残余物，且接着通过逐渐添加NaHCO3水溶液将水相的pH调节至约5，并用DCM:i-PrOH＝3:1(10mL×3)萃取，有机相经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C1875*30mm*3μm；流动相：[水(0.2％FA)-ACN]；B％：20％-50％，8min)，得到呈无色油状的CycBzL-9c(50mg，47.52μmol，19.51％产率)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.16-8.09(m,2H),7.94-7.79(m,2H),7.75(s,1H),7.73-7.62(m,2H),7.41(s,1H),3.97(q,J＝7.0Hz,2H),3.86(t,J＝8.2Hz,2H),3.79-3.69(m,4H),3.66-3.49(m,40H),3.32(s,2H),3.18(d,J＝6.4Hz,2H),2.71-2.61(m,1H),2.48(t,J＝6.5Hz,2H),2.30(t,J＝6.0Hz,2H),1.78(sxt,J＝7.2Hz,2H),1.21(t,J＝7.2Hz,3H),1.01(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备CycBzL-9
向CycBzL-9c(50mg，72μmol，1当量，TFA)于DCM(2mL)和DMA(0.1mL)中的溶液中添加2,3,5,6-四氟苯酚(95mg，503μmol，8当量)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，EDCI，CAS注册号1892-57-5(140mg，700μmol，10当量)，且接着将混合物在25℃下搅拌0.5小时。将反应混合物用水稀释并通过HPLC纯化，以得到CycBzL-9(0.046g，0.038mmol，53％)。LC/MS[M+H]1200.50(计算值)；LC/MS[M+H]1200.80(观测值)。
实施例L-10合成4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[2-氨基-4-[乙氧基(丙基)氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]吡唑-1-基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酰氧基]-2,3,5,6-四氟苯磺酸，CycBzL-10
制备3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡唑-1-基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸叔丁酯，CycBzL-10a
在0℃下向4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(1g，5.15mmol，1当量)于THF(15mL)中的溶液中添加PPh3(1.35g，5.15mmol，1当量)和DEAD(0.89g，5.15mmol，0.94mL，1当量)并在25℃下搅拌0.5小时，接着添加3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸叔丁酯(3.02g，5.15mmol，1当量)，且接着在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用20mL水稀释并用EtOAc(50mL*3)萃取。合并的有机层用盐水(20mL*3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝50/1至乙酸乙酯:MeOH＝10:1)纯化，得到呈黄色油状的CycBzL-10a(3.5g，4.59mmol，89.04％产率)。
制备3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[2-氨基-4-[乙氧基(丙基)氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]吡唑-1-基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸叔丁酯，CycBzL-10b
将CycBzL-10a(625mg，819μmol，2.5当量)、2-氨基-8-溴-N-乙氧基-N-丙基-3H-1-苯并氮杂卓-4-甲酰胺(120mg，328μmol，1当量)、Na2CO3(69.5mg，655μmol，2当量)于水(0.3mL)中的溶液和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)，Pd(dppf)Cl2(23.9mg，32.8μmol，0.1当量)于DMF(3mL)中的混合物脱气，且接着在N2下加热至120℃后维持5小时。将混合物过滤并减压浓缩，且将残余物通过制备型HPLC(TFA条件；柱：Phenomenex lunaC18 250*50mm*10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：35％-65％，10min)纯化，得到呈黄色固体状的CycBzL-10b(300mg，290μmol，88.4％产率，TFA)。
制备3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-[2-氨基-4-[乙氧基(丙基)氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]吡唑-1-基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸，CycBzL-10c
向CycBzL-10b(300mg，325μmol，1当量)于水(3mL)和MeCN(0.5mL)中的溶液中添加HCl(12M，407μL，15当量)，且接着在80℃下搅拌0.5小时。在减压下浓缩混合物，得到呈无色油状的CycBzL-10c(200mg，222μmol，68.1％产率，HCl)。
制备CycBzL-10
向CycBzL-10c(80.0mg，88.7μmol，1当量，HCl)和2,3,5,6-四氟-4-羟基-苯磺酸钠(119mg，443μmol，5当量)于DCM(1mL)和DMA(1mL)中的溶液中添加EDCI(84.9mg，443μmol，5当量)，且接着在25℃下搅拌0.5小时。将混合物过滤并减压浓缩，残余物通过制备型HPLC(TFA条件；柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：25％-50％，8min)纯化，得到呈黄色油状的CycBzL-10(30mg，24.8μmol，28.01％产率，TFA)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.20(s,1H),7.93(s,1H),7.65-7.61(m,1H),7.59(s,1H),7.55-7.52(m,1H),7.40(s,1H),4.36(t,J＝4.8Hz,2H),3.96(q,J＝7.2Hz,2H),3.89-3.82(m,4H),3.74(t,J＝7.2Hz,2H),3.63-3.52(m,36H),3.42(s,2H),2.95(t,J＝5.6Hz,2H),1.76(sxt,J＝7.2Hz,2H),1.20(t,J＝7.2Hz,3H),0.99(t,J＝7.6Hz,3H)。LC/MS[M+H]1094.4(计算值)；LC/MS[M+H]1094.3(观测值)。
实施例L-11合成4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-氨基-4-[乙氧基(丙基)氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]嘧啶-2-基]甲基氨基]-3-氧代基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酰氧基]-2,3,5,6-四氟苯磺酸，CycBzL-11
制备5-溴-2-(溴甲基)嘧啶CycBzL-11b
在0℃下在N2下向(5-溴嘧啶-2-基)甲醇，CycBzL-11a(300mg，1.59mmol，1.0当量)于THF(10mL)中的溶液中一次性添加PPh3(499mg，1.90mmol，1.2当量)和CBr4(631mg，1.90mmol，1.2当量)。将混合物在20℃下搅拌10小时。添加水(10mL)，且用乙酸乙酯(10mL*3)萃取水相，合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物经硅胶色谱(柱高：250mm，直径：100mm，100-200目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝1/0，8/1)纯化，得到呈白色固体状的CycBzL-11b(290mg，1.15mmol，72.4％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.81(s,2H),4.59(s,2H)。
制备N-[(5-溴嘧啶-2-基)甲基]-N-叔丁氧羰基-氨基甲酸叔丁酯，CycBzL-11c
在20℃下在N2下向CycBzL-11b(290mg，1.15mmol，1.0当量)和N-叔丁氧基羰基氨基甲酸叔丁酯(250mg，1.15mmol，1.0当量)于DMF(3mL)中的混合物中逐份添加Cs2CO3(562mg，1.73mmol，1.5当量)，将混合物在20℃下搅拌2.5小时。添加水(5mL)，且水相用乙酸乙酯(5mL*3)萃取，合并的有机相用盐水(5mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物经硅胶色谱(柱高：250mm，直径：100mm，100-200目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝1/0，5/1)纯化，得到呈白色固体状的CycBzL-11c(350mg，901μmol，78.3％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.74(s,2H),5.01(s,2H),1.48(s,18H)。
制备N-[[5-[2-氨基-4-[乙氧基(丙基)氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]嘧啶-2-基]甲基]-N-叔丁基-丁氧羰基氨基甲酸叔丁酯，CycBzL-11d
在N2下向CycBzL-11c(184mg，473μmol，1.0当量)和2-氨基-N-乙氧基-N-丙基-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3H-1-苯并氮杂卓-4-甲酰胺(195mg，474μmol，1.0当量)于二噁烷(10mL)和H2O(2mL)中的混合物中一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(19.3mg，23.7μmol，0.05当量)和K2CO3(163mg，1.18mmol，2.5当量)，将混合物脱气并在N2下加热至90℃后维持2小时。真空去除二噁烷(10mL)并添加水(20mL)，并将水相用乙酸乙酯(10mL*3)萃取，合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物经硅胶色谱(柱高：250mm，直径：100mm，100-200目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1，0/1至乙酸乙酯/甲醇＝10/1)纯化，得到呈灰色固体状的CycBzL-11d(280mg，470.83μmol，99.35％产率)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.08(s,2H),7.61(s,1H),7.59(d,J＝2.8Hz,2H),7.38(s,1H),5.08(s,2H),3.98(q,J＝7.2Hz,2H),3.76(t,J＝7.2Hz,2H),1.83-1.75(m,2H),1.47(s,18H),1.20(t,J＝7.2Hz,3H),1.02(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备2-氨基-8-[2-(氨基甲基)嘧啶-5-基]-N-乙氧基-N-丙基-3H-1-苯并氮杂卓-4-甲酰胺，CycBzL-11e
在N2下在20℃下向CycBzL-11d(20.0mg，33.6μmol，1.0当量)于EtOAc(5mL)中的溶液中一次性添加HCl/EtOAc(4M，8.41μL，1.0当量)，将混合物在20℃下搅拌1小时。将反应混合物真空浓缩。残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18150*25*10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：1％-30％，8min)纯化，得到呈白色固体状的CycBzL-11e(6.2mg，9.84μmol，29.2％产率，98.8％纯度，2TFA)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.22(s,2H),7.82(d,J＝2.0Hz,1H),7.79-7.75(m,2H),7.47(s,1H),4.49(s,2H),4.00(q,J＝7.2Hz,2H),3.78(t,J＝7.2Hz,2H),3.46(s,2H),1.85-1.77(m,2H),1.22(t,J＝7.2Hz,3H),1.03(t,J＝7.2Hz,3H)。LC/MS[M+H]395.2(计算值)；LC/MS[M+H]395.1(观测值)。
制备3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-氨基-4-[乙氧基(丙基)氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]嘧啶-2-基]甲基氨基]-3-氧代基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸，CycBzL-11f
在25℃下在N2下向CycBzL-11e(70mg，149μmol，1.0当量，2HCl)和3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-氧代基-3-(2,3,5,6-四氟苯氧基)丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(127mg，179μmol，1.2当量)于DMF(0.5mL)中的混合物中一次性添加DIEA(77.4mg，599μmol，104μL，4.0当量)，将混合物在25℃下搅拌0.5小时。将反应混合物过滤并将滤液通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C1880*40mm*3μm；流动相：[水(0.04％HCl)-ACN]；B％：12％-39％，5.5min)纯化，得到呈黄色油状的CycBzL-11f(50.0mg，53.4μmol，35.7％产率)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.14(s,2H),7.86-7.81(m,1H),7.78-7.74(m,2H),7.48(s,1H),4.72(s,2H),4.00(q,J＝7.2Hz,2H),3.85-3.71(m,8H),3.69-3.58(m,38H),3.47(s,2H),2.62(t,J＝6.0Hz,2H),2.55(t,J＝6.4Hz,2H),1.85-1.76(m,2H),1.23(t,J＝7.2Hz,3H),1.03(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备CycBzL-11
在25℃下在N2下向CycBzL-11f(60mg，61.7μmol，1.0当量，HCl)和(2,3,5,6-四氟-4-羟基-苯基)磺酰氧基钠(99.3mg，370μmol，6.0当量)于DCM(2mL)和DMA(0.5mL)中的混合物中一次性添加EDCI(71.0mg，370μmol，6.0当量)，将混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物过滤并将滤液通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：20％-45％，8min)纯化，得到呈黄色油状的CycBzL-11(38.0mg，30.5μmol，49.3％产率，93.3％纯度)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.11(s,2H),7.83-7.79(m,1H),7.77(s,1H),7.76-7.71(m,1H),7.47(s,1H),4.71(s,2H),4.00(q,J＝7.2Hz,2H),3.88(t,J＝5.6Hz,2H),3.85-3.75(m,5H),3.70-3.57(m,38H),3.47(s,2H),2.99(t,J＝6.0Hz,2H),2.62(t,J＝4Hz,2H),1.85-1.75(m,2H),1.23(t,J＝7.2Hz,3H),1.02(t,J＝7.2Hz,3H)。LC/MS[M+H]1163.3(计算值)；LC/MS[M+H]1163.3(观测值)。
实施例L-12合成4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-氨基-4-[2-(环丁氧基-羰基氨基)乙氧基-丙基-氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]嘧啶-2-基]甲基氨基]-3-氧代基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酰氧基]-2,3,5,6-四氟-苯磺酸，CycBzL-12
制备N-[2-[[2-氨基-8-[2-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]嘧啶-5-基]-3H-1-苯并氮杂卓-4-羰基]-丙基-氨基]氧乙基]氨基甲酸环丁酯，CycBz-15b
在25℃下在N2下向2-氨基-8-[2-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]嘧啶-5-基]-3H-1-苯并氮杂卓-4-甲酸，CycBz-15a(250mg，611μmol，1.0当量)和N-[2-(丙基氨基氧基)乙基]氨基甲酸环丁酯(201mg，794μmol，1.3当量，HCl)于DCM(4mL)和DMA(2mL)中的混合物中一次性添加EDCI(468mg，2.44mmol，4.0当量)，并在25℃下搅拌2小时。真空去除DCM(4mL)，添加水(10mL)，并将水相用乙酸乙酯(10mL*3)萃取，合并的有机相用盐水(5mL*2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物经硅胶色谱(柱高：250mm，直径：100mm，100-200目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1、0/1至乙酸乙酯/甲醇＝10/1)纯化，得到呈棕色油状的CycBz-15b(190mg，313μmol，51.2％产率)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.08(s,2H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.58-7.52(m,2H),7.37(s,1H),4.74-4.67(m,2H),4.54(s,2H),3.96(t,J＝4.8Hz,2H),3.76(t,J＝7.2Hz,2H),3.33(s,2H),2.20(dd,J＝2.8,5.2Hz,2H),1.94-1.86(m,2H),1.82-1.75(m,2H),1.50(s,9H),1.38(d,J＝1.6Hz,2H),1.01(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备N-[2-[[2-氨基-8-[2-(氨基甲基)嘧啶-5-基]-3H-1-苯并氮杂卓-4-羰基]-丙基-氨基]氧乙基]氨基甲酸环丁酯，CycBz-15
在25℃下在N2下向CycBz-15b(190mg，313μmol，1.0当量)于DCM(5mL)中的溶液中一次性添加CF3COOH(535mg，4.69mmol，347μL，15当量)，且接着在25℃下搅拌1.5小时。真空去除DCM(5mL)，并将残余物用水(10mL)稀释，水相用MTBE(5mL*4)萃取以去除过量的TFA，接着将水相冷冻干燥，得到呈棕色固体状的CycBz-15(130mg，169μmol，产率54.1％，纯度95.7％，2TFA)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ＝9.21(s,2H),7.85-7.76(m,3H),7.49(s,1H),4.66(t,J＝7.2Hz,1H),4.48(s,2H),3.96(t,J＝5.2Hz,2H),3.76(t,J＝7.2Hz,2H),3.43(s,2H),3.31(s,2H),2.20-2.10(m,2H),1.91-1.83(m,2H),1.81-1.74(m,2H),1.70-1.60(m,1H),1.57-1.47(m,1H),1.00(t,J＝7.2Hz,3H)。LC/MS[M+H]508.3(计算值)；LC/MS[M+H]508.1(观测值)。
制备3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-氨基-4-[2-(环丁氧基羰基氨基)乙氧基-丙基-氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]嘧啶-2-基]甲基氨基]-3-氧代基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸，CycBzL-12a
在0℃下在N2下向CycBz-15(105mg，181μmol，1.0当量，2HCl)和Et3N(73.2mg，723μmol，100μL，4.0当量)于DMF(1.5mL)中的混合物中添加3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-氧代基-3-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸，PFP-PEG10-CO2H(131mg，181μmol，1.0当量)，且将其在0℃下搅拌0.5小时，且接着再加热至25℃后维持0.5小时。将反应混合物浓缩，残余物用水(5mL)稀释，并将水相用乙酸乙酯(3mL*2)萃取-弃去，接着用DCM/iPrOH＝3/1(5mL*3)进一步萃取水相，合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，得到呈黄色油状的CycBzL-12a(100mg，95.4μmol，52.7％产率)。
制备CycBzL-12
在25℃下在N2下向CycBzL-12a(100mg，95.4μmol，1.0当量)和(2,3,5,6-四氟-4-羟基-苯基)磺酰氧基钠(128mg，477μmol，5.0当量)于DCM(1mL)和DMA(0.5mL)中的混合物中一次性添加EDCI(91.4mg，477μmol，5.0当量)，且接着在25℃下搅拌1小时。将反应混合物过滤并将滤液通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18150*25*10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：15％-35％，8min)纯化，得到呈浅黄色油状的CycBzL-12(35.1mg，25.6μmol，26.9％产率，93.3％纯度)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.12(s,2H),7.84-7.77(m,3H),7.52(s,1H),4.75-4.67(m,3H),3.99(t,J＝5.2Hz,2H),3.88(t,J＝6.0Hz,2H),3.82(t,J＝6.0Hz,2H),3.78(t,J＝7.2Hz,2H),3.70-3.57(m,38H),3.45(s,2H),3.01-2.97(m,2H),2.62(t,J＝6.0Hz,2H),2.24-2.14(m,2H),1.96-1.86(m,2H),1.84-1.75(m,2H),1.73-1.61(m,1H),1.59-1.49(m,1H),1.01(t,J＝7.2Hz,3H)。LC/MS[M+H]1276.5(计算值)；LC/MS[M+H]1276.6(观测值)。
实施例L-13合成4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-氨基-4-[3-(环丁氧基羰基氨基)丙基-丙基-氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]嘧啶-2-基]甲基氨基]-3-氧代-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酰氧基]-2,3,5,6-四氟苯磺酸，CycBzL-13
制备环丁基N-[3-[[2-氨基-8-[2-[(叔丁氧基羰基氨基)甲基]嘧啶-5-基]-3H-1-苯并氮杂卓-4-羰基]-丙基-氨基]丙基]，CycBz-14
在0℃下向2-氨基-8-[2-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]嘧啶-5-基]-3H-1-苯并氮杂卓-4-甲酸，CycBz-14a(0.25g，611μmol，1.0当量)于DMF(4mL)中的混合物中一次性添加Et3N(185mg，1.83mmol，255μL，3.0当量)、N-[3-(丙氨基)丙基]氨基甲酸环丁酯(170mg，678μmol，1.11当量，HCl)和六氟磷酸盐氮杂苯并三唑四甲基脲鎓，HATU(232mg，611μmol，1.0当量)，并将其在0℃下搅拌0.5小时。接着将混合物用水稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物经硅胶色谱(柱高：250mm，直径：100mm，100-200目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝1/0，3/1)纯化，得到呈黄色固体状的CycBz-14(0.28g，462μmol，75.71％产率)。1H NMR(MeOD,400MHz)δ9.04(s,2H),7.52(d,J＝8.4Hz,1H),7.48(d,J＝1.6Hz,1H),7.45-7.40(m,1H),6.93(s,1H),4.84-4.84(m,1H),4.64(s,4H),3.54-3.47(m,2H),3.46-3.39(m,2H),3.30(m,2H),3.22-3.07(m,2H),2.32-2.28(m,2H),2.10-2.00(m,2H),1.88-1.79(m,3H),1.75-1.60(m,3H),1.48(s,9H),0.90(s,3H)。LC/MS[M+H]606.3(计算值)；LC/MS[M+H]606.2(观测值)。
制备N-[3-[[2-氨基-8-[2-(氨基甲基)嘧啶-5-基]-3H-1-苯并氮杂卓-4-羰基]-丙基-氨基]丙基]氨基甲酸环丁酯，CycBz-13
在25℃下向CycBz-14(0.26g，429μmol，1.0当量)于CH3CN(3mL)和H2O(1mL)中的混合物中一次性添加TFA(489mg，4.29mmol，318μL，10.0当量)，且接着在80℃下搅拌0.5小时。接着将混合物浓缩并将残余物用水(10mL)稀释，并将混合物用MTBE(10mL×2)萃取以去除过量的TFA。将水层冷冻干燥，得到呈黄色固体状的CycBz-13(0.2g，323μmol，75.20％产率，TFA)。1H NMR(MeOD,400MHz)δ9.21(s,2H),7.84-7.71(m,3H),7.12(s,1H),4.85-4.85(m,1H),4.47(s,2H),3.54(t,J＝7.2Hz,2H),3.48(s,2H),3.37(s,2H),3.15(d,J＝15.6Hz,2H),2.30-2.25(m,2H),2.08-2.00(m,2H),1.89-1.66(m,6H),1.01-0.88(m,3H)。LC/MS[M+H]506.3(计算值)；LC/MS[M+H]506.2(观测值)。
制备3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-氨基-4-[3-(环丁氧基羰基氨基)丙基-丙基-氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]嘧啶-2-基]甲基氨基]-3-氧代基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸，CycBzL-13a
在0℃下向CycBz-13(0.1g，161μmol，1.0当量，TFA)于THF(3mL)中的混合物中一次性添加Et3N(48.9mg，484μmol，67.4μL，3.0当量)和3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-氧代基-3-(2,3,5,6-四氟苯氧基)丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基[乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸，TFP-PEG10-CO2H(114mg，161μmol，1.0当量)，且接着在0℃下搅拌0.5小时。在0℃下用TFA将混合物的pH调节至5-6。接着将混合物用水(5mL)稀释并用MTBE(10mL×3)洗涤。接着将水层用DCM:i-PrOH＝3:1(20mL×3)进一步萃取。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色油状的CycBz-13a(0.15g，129μmol，80.11％产率，TFA)。
制备CycBzL-13
在25℃下向CycBz-13a(0.15g，129μmol，1.0当量，TFA)于DCM(3mL)和DMA(0.5mL)中的混合物中一次性添加2,3,5,6-四氟-4-羟基-苯磺酸钠(139mg，517μmol，4.0当量)和EDCI(149mg，776μmol，6.0当量)，且接着在25℃下搅拌0.5小时。将混合物浓缩并过滤。接着通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：15％-40％，8min)纯化残余物，得到呈黄色油状的CycBzL-13(75.3mg，59.1μmol，45.71％产率)。1H NMR(MeOD,400MHz)δ9.09(s,2H),7.82-7.67(m,3H),7.11(s,1H),4.86-4.82(m,1H),4.69(s,2H),3.86(t,J＝6.0Hz,2H),3.80(t,J＝6.0Hz,2H),3.66-3.48(m,40H),3.38(s,2H),3.22-3.06(m,2H),2.97(t,J＝6.0Hz,2H),2.64-2.58(m,2H),2.32-2.25(m,2H),2.09-1.95(m,2H),1.91-1.80(m,3H),1.75-1.61(m,3H),0.93(s,3H)。LC/MS[M+H]1274.5(计算值)；LC/MS[M+H]1274.3(观测值)。
实施例L-14合成4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-氨基-4-[2-(二甲基氨基甲酰氨基)乙氧基-丙基-氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]嘧啶-2-基]甲基氨基]-3-氧代基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酰氧基]-2,3,5,6-四氟-苯磺酸，CycBzL-14
制备((5-(2-氨基-4-((2-(3,3-二甲基脲基)乙氧基)(丙基)氨基甲酰基)-3H-苯并[b]氮杂卓-8-基)嘧啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯，CycBzL-14a
向2-氨基-8-[2-[(叔丁氧基羰基氨基)甲基]嘧啶-5-基]-3H-1-苯并氮杂卓-4-甲酸，CycBz-14a(250mg，611μmol，1当量)和1,1-二甲基-3-[2-(丙氨基氧基)乙基]脲(165mg，733μmol，1.2当量，HCl)于DCM(3mL)和DMA(1mL)中的混合物中添加EDCI(468mg，2.44mmol，4当量)，并将其在25℃下搅拌1小时。真空浓缩混合物以去除DCM，用水(10mL)稀释残余物，用Na2CO3水溶液将混合物的pH调节至～8。水相用乙酸乙酯(10mL*4)萃取。合并的有机相用盐水(20mL*1)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物经硅胶色谱(柱高：250mm，直径：100mm，100-200目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝1/0，0/1，乙酸乙酯/甲醇＝1/0，3/1)纯化，得到呈黄色固体状的CycBzL-14a(260mg，447.75μmol，73.33％产率)。
制备2-氨基-8-[2-(氨基甲基)嘧啶-5-基]-N-[2-(二甲基氨基甲酰基氨基)乙氧基]-N-丙基-3H-1-苯并氮杂卓-4-甲酰胺，CycBzL-14b
向CycBzL-14a(130mg，224μmol，1当量)于EtOAc(3.00mL)中的溶液中添加HCl/EtOAc(4M，3.00mL，53.60当量)，且接着在25℃下搅拌1小时。将混合物浓缩，得到呈浅红色固体的CycBzL-14b(115mg，207.77μmol，92.81％产率，2HCl)。1H NMR(MeOD,400MHz)δ9.22(s,2H),7.86-7.80(m,2H),7.80-7.74(m,1H),7.50(s,1H),4.48(s,2H),3.97(t,J＝5.2Hz,2H),3.76(t,J＝7.2Hz,2H),3.45(s,2H),3.38-3.34(m,2H),2.74(s,6H),1.83-1.73(m,2H),1.00(t,J＝7.6Hz,3H)。LC/MS[M+H]481.3(计算值)；LC/MS[M+H]481.1(观测值)。
制备3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-氨基-4-[2-(二甲基氨基甲酰基氨基)乙氧基-丙基-氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]嘧啶-2-基]甲基氨基]-3-氧代基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸，CycBzL-14c
向CycBzL-14b(65.0mg，117μmol，1当量，2HCl)于DMF(1.00mL)中的溶液中添加Et3N(48.0mg，470μmol，4当量)和3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-氧代基-3-(2,3,5,6-四氟苯氧基)丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(83.0mg，117μmol，1当量)，且接着在0℃下搅拌1小时。混合物用水(10mL)稀释，并通过逐渐添加TFA将混合物的pH调节至约6，并用MTBE(10mL)萃取-弃去，水层用DCM:i-PrOH＝3:1(20mL×3)进一步萃取。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈淡黄色油状的CycBzL-14c(95mg，93.03μmol，79.22％产率)。
制备CycBzL-14
向CycBzL-14c(90.0mg，88.1μmol，1当量)和(2,3,5,6-四氟-4-羟基-苯基)磺酰氧基钠(95.0mg，353μmol，4当量)于DCM(2.00mL)和DMA(0.10mL)中的溶液中添加EDCI(68.0mg，353μmol，4当量)，并将其在25℃下搅拌1小时。将混合物浓缩并过滤。残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：5％-35％，8min)纯化，得到呈淡黄色油状的CycBzL-14(51mg，37.41μmol，42.45％产率，TFA)。1H NMR(MeOD,400MHz)δ9.10(s,2H),7.83-7.70(m,3H),7.48(s,1H),4.69(s,2H),3.97(t,J＝5.2Hz,2H),3.86(t,J＝5.6Hz,2H),3.80(t,J＝6.0Hz,2H),3.78-3.74(m,2H),3.65-3.55(m,36H),3.45(s,2H),3.37-3.34(m,2H),2.97(t,J＝5.6Hz,2H),2.74(s,6H),2.60(t,J＝6.0Hz,2H),1.83-1.72(m,1H),1.00(t,J＝7.2Hz,3H)。LC/MS[M+H]1249.5(计算值)；LC/MS[M+H]1249.6(观测值)。
实施例L-15合成4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[1-[[5-[2-氨基-4-[3-(环丁氧基羰基氨基)丙基-丙基-氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]-3-吡啶基]磺酰基]氮杂环丁烷-3-基]甲基氨基]-3-氧代基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酰氧基]-2,3,5,6-四氟-苯磺酸，CycBzL-15
制备2-氨基-8-(5-((3-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)磺酰基)吡啶-3-基)-3H-苯并[b]氮杂卓-4-甲酸乙酯，CycBz-32b
在25℃下在N2下向N-[[1-[[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-吡啶基]磺酰基]氮杂环丁烷-3-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯，CycBz-32a(5g，11.0mmol，1当量)和2-氨基-8-溴-3H-1-苯并氮杂卓-4-甲酸乙酯(3.41g，11.0mmol，1当量)于二噁烷(50mL)和H2O(5mL)中的溶液中添加K2CO3(3.05g，22.1mmol，2当量)和Pd(dppf)Cl2(403mg，551μmol，0.05当量)，且接着在90℃下搅拌2小时。过滤混合物并浓缩，得到残余物。残余物用水(100mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到CycBz-32b，将其在25℃下用CH3CN湿磨15分钟，得到呈灰色固体状的CycBz-32b(5.5g，9.90mmol，89.75％产率)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ9.29(s,1H),8.94(s,1H),8.32(s,1H),7.80(s,1H),7.60(d,J＝8.0Hz,1H),7.50-7.41(m,2H),7.04-6.85(m,3H),4.25(q,J＝7.2Hz,2H),3.82(t,J＝8.0Hz,2H),3.58-3.52(m,2H),2.99-2.85(m,4H),2.56-2.51(m,1H),1.35-1.30(m,12H)。
制备2-氨基-8-(5-((3-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)磺酰基)吡啶-3-基)-3H-苯并[b]氮杂卓-4-甲酸，CycBz-32c
向CycBz-32b(3.2g，5.76mmol，1当量)于MeOH(40mL)和H2O(5mL)中的溶液中添加LiOH.H2O(725mg，17.3mmol，3当量)，且接着在60℃下搅拌4小时。减压浓缩反应混合物以去除EtOH。在0℃下用HCl(12M)将混合物的pH调节至约5且接着过滤，在减压下干燥滤饼，得到粗产物，将其在25℃下用CH3CN湿磨20分钟，得到呈灰色固体状的CycBz-32c(2.7g，5.12mmol，88.86％产率)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ9.34(s,1H),9.02(s,1H),8.42(s,1H),7.98-7.92(m,2H),7.89-7.83(m,2H),3.83(t,J＝8.0Hz,2H),3.59-3.49(m,4H),2.90(d,J＝6.0Hz,2H),2.56-2.54(m,1H),1.30(s,9H)。
制备N-[3-[[2-氨基-8-[5-[3-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]氮杂环丁烷-1-基]磺酰基-3-吡啶基]-3H-1-苯并氮杂卓-4-羰基]-丙基-氨基]丙基]氨基甲酸环丁酯，CycBz-32d
向CycBz-32c(400mg，758μmol，1当量)于DMF(10.0mL)中的溶液中添加HATU(317mg，834μmol，1.1当量)、DIEA(490mg，3.79mmol，660μL，5当量)和N-[3-(丙氨基)丙基]氨基甲酸环丁酯(380mg，1.52mmol，2当量，HCl)，并将其在25℃下搅拌1小时。混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。有机层用盐水(20mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶色谱法(1g />Silica Flash Column，洗脱液为0～30％乙酸乙酯/MeOH，35mL/min)纯化残余物，得到呈淡黄色固体状的CycBz-32d(340mg，469.69μmol，61.95％产率)。1H NMR(MeOD,400MHz)δ9.18(d,J＝2.0Hz,1H),8.95(d,J＝2.0Hz,1H),8.42(t,J＝2.0Hz,1H),7.58-7.50(m,2H),7.49-7.43(m,1H),6.93(s,1H),4.85-4.76(m,1H),3.90(t,J＝8.4Hz,2H),3.64-3.56(m,2H),3.54-3.48(m,2H),3.47-3.39(m,2H),3.32(br s,2H),3.22-3.02(m,4H),2.70-2.57(m,1H),2.35-2.01(m,4H),1.90-1.80(m,2H),1.77-1.47(m,4H),1.37(s,9H),1.05-0.76(m,3H)。
制备N-[3-[[2-氨基-8-[5-[3-(氨基甲基)氮杂环丁烷-1-基]磺酰基-3-吡啶基]-3H-1-苯并氮杂卓-4-羰基]-丙基-氨基]丙基]氨基甲酸环丁酯，CycBz-32
向CycBz-32d(340mg，470μmol，1当量)于CH3CN(2.00mL)和H2O(1.00mL)中的溶液中添加TFA(428mg，3.76mmol，278μL，8当量)，且接着在80℃下搅拌1小时。将混合物浓缩并过滤。残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 100*40mm*5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：5％-35％，8min)纯化，得到呈浅黄色固体状的CycBz-32(400mg，470μmol，99.98％产率，2TFA)。1H NMR(MeOD,400MHz)δ9.24(d,J＝1.6Hz,1H),9.04(d,J＝1.6Hz,1H),8.49(s,1H),7.88-7.71(m,3H),7.13(br s,1H),4.85-4.80(m,1H),4.03(t,J＝8.4Hz,2H),3.73(dd,J＝5.6,8.4Hz,2H),3.59-3.43(m,4H),3.38(br s,2H),3.12(br d,J＝7.6Hz,4H),2.83-2.73(m,1H),2.37-2.12(m,2H),2.00-2.10(m,4H),1.78-1.43(m,4H),1.05-0.83(m,3H).LC/MS[M+H]624.3(计算值)；LC/MS[M+H]624.2(观测值)。
制备3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[1-[[5-[2-氨基-4-[3-(环丁氧基羰基氨基)丙基-丙基-氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]-3-吡啶基]磺酰基]氮杂环丁烷-3-基]甲基氨基]-3-氧代基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸，CycBzL-15a
向CycBz-32(200mg，235μmol，1当量，2TFA)于THF(2.00mL)中的溶液中添加Et3N(71.0mg，704μmol，98.0μL，3当量)和3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-氧代基-3-(2,3,5,6-四氟苯氧基)丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(166mg，235μmol，1当量)，且接着在0℃下搅拌1小时。将混合物浓缩并用水(10mL)稀释，并通过逐渐添加TFA将混合物的pH调节至～6，并用MTBE(10mL)萃取-弃去，水相用DCM:i-PrOH＝3:1(20mL×3)进一步萃取。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈淡黄色油状的CycBzL-15a(210mg，180.36μmol，76.81％产率)。
制备CycBzL-15
向CycBzL-15a(210mg，180μmol，1当量)和2,3,5,6-四氟-4-羟基-苯磺酸(178mg，721μmol，4当量)于DCM(4.00mL)和DMA(0.20mL)中的溶液中添加EDCI(138mg，721μmol，4当量)，且接着在25℃下搅拌1小时。将混合物浓缩并过滤。残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相：[水(0.2％FA)-ACN]；B％：15％-40％，8min)纯化，得到呈白色固体状的CycBzL-15(98mg，68.13μmol，37.77％产率，FA)。1H NMR(MeOD,400MHz)δ9.23(d,J＝2.0Hz,1H),9.02(d,J＝2.0Hz,1H),8.48(t,J＝2.0Hz,1H),7.91-7.67(m,3H),7.13(s,1H),4.85-4.80(m,1H),3.93(t,J＝8.4Hz,2H),3.86(t,J＝5.6Hz,2H),3.66-3.55(m,40H),3.54-3.48(m,4H),3.40(br s,2H),3.25-3.08(m,4H),2.97(t,J＝5.6Hz,2H),2.79-2.68(m,1H),2.29(br t,J＝6.0Hz,3H),1.93-1.80(m,3H),1.77-1.52(m,4H),1.01-0.88(m,3H)。LC/MS[M+H]1392.5(计算值)；LC/MS[M+H]1392.3(观测值)。
实施例L-16合成4-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-氨基-4-[2-(环丁基氨基甲酰氨基)乙氧基-丙基-氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]嘧啶-2-基]甲基氨基]-3-氧代基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酰氧基]-2,3,5,6-四氟-苯磺酸，CycBzL-16
制备((5-(2-氨基-4-((2-(3-环丁基脲基)乙氧基)(丙基)氨基甲酰基)-3H-苯并[b]氮杂卓-8-基)嘧啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯，CycBzL-16b
向2-氨基-8-[2-[(叔丁氧基羰基氨基)甲基]嘧啶-5-基]-3H-1-苯并氮杂卓-4-甲酸，CycBzL-16a(250mg，611μmol，1当量)1-环丁基-3-[2-(丙基氨基氧基)乙基]脲(231mg，916μmol，1.5当量，HCl)于DCM(2mL)和DMA(2mL)中的溶液中添加EDCI(351mg，1.83mmol，3当量)，并将其在25℃下搅拌0.5小时。减压浓缩反应混合物以去除DCM。残余物用水(10mL)稀释并用EtOAc(20mL*3)萃取。合并的有机层用盐水(20mL*2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。残余物经柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝50/1至乙酸乙酯:MeOH＝5:1)纯化，得到呈棕色固体状的CycBzL-16b(230mg，380μmol，62.1％产率)。
制备2-氨基-8-[2-(氨基甲基)嘧啶-5-基]-N-[2-(环丁基氨基甲酰基氨基)乙氧基]-N-丙基-3H-1-苯并氮杂卓-4-甲酰胺，CycBzL-16c
向CycBzL-16b(230mg，0.38mmol，1当量)于水(2mL)和MeCN(2mL)中的溶液中添加TFA(432mg，3.79mmol，0.28mL，10当量)，且接着在80℃下搅拌0.5小时。将混合物减压浓缩，残余物用水(2mL)稀释并用MTBE(3mL*3)萃取-弃去，减压浓缩水相，得到呈棕色固体状的CycBzL-16c(230mg，371μmol，97.8％产率，TFA)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.21(s,2H),7.84-7.73(m,3H),7.47(s,1H),4.48(s,2H),4.01-3.89(m,3H),3.75(t,J＝7.2Hz,2H),3.44(s,2H),3.33(br s,2H),2.19-2.10(m,2H),1.81-1.68(m,4H),1.64-1.55(m,2H),1.00(t,J＝7.2Hz,3H)。LC/MS[M+H]507.3(计算值)；LC/MS[M+H]507.2(观测值)。
制备3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[[5-[2-氨基-4-[2-(环丁基氨基甲酰氨基)乙氧基-丙基-氨基甲酰基]-3H-1-苯并氮杂卓-8-基]嘧啶-2-基]甲基氨基]-3-氧代基-丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸，CycBzL-16d
向CycBzL-16c(100mg，136μmol，1当量，2TFA)和3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-氧代基-3-(2,3,5,6-四氟苯氧基)丙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸，TFP-PEG10-CO2H(96.2mg，0.14mmol，1当量)于THF(1mL)中的溶液中添加Et3N(41.3mg，0.41mmol，56.8μL，3当量)，且接着在25℃下搅拌0.5小时。在0℃下用TFA将混合物的pH调节至约6，用EtOAc(5mL三次)萃取-弃去，并且水层用DCM/i-PrOH(10mL*3，3/1)进一步萃取。有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。获得呈黄色油状的粗产物CycBzL-16d(120mg，115μmol，84.2％产率)并且不经进一步纯化即用于下一步。
制备CycBzL-16
向CycBzL-16d(70mg，66.9μmol，1当量)和2,3,5,6-四氟-4-羟基-苯磺酸钠(71.7mg，267μmol，4当量)于DMA(0.5mL)和DCM(1.5mL)中的溶液中添加EDCI(51.3mg，267μmol，4当量)，并将其在25℃下搅拌0.5小时。将混合物过滤并减压浓缩。通过制备型HPLC(TFA条件；柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：15％-35％，8min)纯化残余物。接着通过制备型HPLC(TFA条件；柱：Phenomenex SynergiC18 150*25*10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：15％-35％，8min)纯化残余物，得到呈无色油状的HxBzL-13(20mg，13.3μmol，19.9％产率，2TFA)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.09(s,2H),7.80-7.71(m,3H),7.47(s,1H),4.69(s,2H),3.95(br t,J＝5.2Hz,2H),3.86(t,J＝6.0Hz,2H),3.80(t,J＝6.0Hz,2H),3.75(br t,J＝7.2Hz,2H),3.68-3.57(m,38H),3.45(s,2H),2.97(t,J＝6.0Hz,2H),2.60(t,J＝6.0Hz,2H),2.15(br d,J＝7.2Hz,2H),1.83-1.68(m,4H),1.64-1.52(m,2H),0.99(t,J＝7.2Hz,3H)。LC/MS[M+H]1275.5(计算值)；LC/MS[M+H]1275.2(观测值)。
实施例L-18合成2-氨基-8-(2-(38-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3,37-二氧代基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-十氧杂-2,36-二氮杂三十八烷基)嘧啶-5-基)-N-乙氧基-N-丙基-3H-苯并[b]氮杂卓-4-甲酰胺，CycBzL-18
将2-氨基-8-(2-(氨基甲基)嘧啶-5-基)-N-乙氧基-N-丙基-3H-苯并[b]氮杂卓-4-甲酰胺，CycBzL-18a(0.0283g，0.072mmol，1当量)和1-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-十氧杂-3-氮杂三十六烷-36-酸，CycBzL-18b(0.0478g,0.072mmol，1当量)溶解于二甲基甲酰胺，DMF中。添加二异丙基乙胺，DIPEA(0.075mol，0.43mmol，6当量)，然后添加((7-氮杂苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐)，PyAOP，CAS注册号156311-83-0(0.091g，0.18mmol，2.4当量)。将反应物在室温下搅拌，接着浓缩并通过RP-HPLC纯化，得到CycBzL-18(0.0346g,0.033mmol，46％)。LC/MS[M+H]1043.53(计算值)；LC/MS[M+H]1043.84(观测值)。
实施例L-20合成2-氨基-8-(2-((1-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代基-6,9,12,15,18,21,24,27,30-九氧杂-3-氮杂三十二烷-32-基)氨基甲酰基)嘧啶-5-基)-N-乙氧基-N-丙基-3H-苯并[b]氮杂卓-4-甲酰胺，CycBzL-20
制备2-氨基-8-(2-((29-氨基-3,6,9,12,15,18,21,24,27-九氧萘基)氨基甲酰基)嘧啶-5-基)-N-乙氧基-N-丙基-3H-苯并[b]氮杂卓-4-甲酰胺，CycBzL-20b
向5-(2-氨基-4-(乙氧基(丙基)氨基甲酰基)-3H-苯并[b]氮杂卓-8-基)嘧啶-2-甲酸CycBzL-20a(0.0106g，0.026mmol，1当量)和(29-氨基-3,6,9,12,15,18,21,24,27-九氧九萘基)氨基甲酸叔丁酯(0.014g，0.026mmol，1当量)于DMF(0.5ml)中的溶液中添加三乙胺，TEA(36μl，0.26mmol，10当量)，然后添加(7-氮杂苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐，PyAOP，CAS注册号156311-83-0(0.013g，0.026mmol，1当量)。将反应物在室温下搅拌并通过LC/MS监测。将反应物浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到(1-(5-(2-氨基-4-(乙氧基(丙基)氨基甲酰基)-3H-苯并[b]氮杂卓-8-基)嘧啶-2-基)-1-氧代基-5,8,11,14,17,20,23,26,29-九氧杂-2-氮杂三十一烷-31-基)氨基甲酸叔丁酯，接着将其溶解于TFA中并浓缩，得到CycBzL-20b(17.1mg，0.020mmol，77％)。LC/MS[M+H]848.5(计算值)；LC/MS[M+H]848.8(观测值)。
制备CycBzL-20
向CycBzL-20b(17.1mg，0.020mmol，1.33当量)于DMF(0.5ml)中的溶液中添加TEA(28μl，0.20mmol，13.3当量)，然后添加N-(α-马来酰亚胺基乙酰氧基)琥珀酰亚胺酯(3.8mg，0.015mmol，1当量)。将反应物在室温下搅拌并通过LC/MS监测，接着浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到CycBzL-20(8.5mg，0.0086mmol，57％)。LC/MS[M+H]985.5(计算值)；LC/MS[M+H]985.6(观测值)。
实施例L-23合成(2-((2-氨基-N-丙基-8-(嘧啶-5-基)-3H-苯并[b]氮杂卓-4-甲酰胺基)氧基)乙基)氨基甲酸1-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-十氧杂-3-氮杂三十五烷-35-基酯，CycBzL-23
制备2-氨基-N-(2-氨基乙氧基)-N-丙基-8-(嘧啶-5-基)-3H-苯并[b]氮杂卓-4-甲酰胺，CycBzL-23b
将(2-((2-氨基-N-丙基-8-(嘧啶-5-基)-3H-苯并[b]氮杂卓-4-甲酰氨基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯，CycBzL-23a(5.1mg，0.011mmol，1当量)悬浮于100μl TFA中。30分钟后，将溶液浓缩，得到呈TFA盐状的CycBzL-23b(7.4mg，0.012mmol，100％)。LC/MS[M+H]381.2(计算值)；LC/MS[M+H]381.3(观测值)。
制备CycBzL-23
向CycBzL-23b(7.4mg，0.012mmol，1当量)于DMF(0.5ml)中的溶液中添加三乙胺(13.5μl，0.097mmol，8当量)和(4-硝基苯基)碳酸1-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-十氧杂-3-氮杂三十五烷-35-基酯，Mal-PEG10-PNC(15.6mg，0.019mmol，1.6当量)。将溶液在室温下搅拌并通过LC/MS监测。胺起始材料消耗后，将反应物浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到CycBzL-23。LC/MS[M+H]1045.5(计算值)；LC/MS[M+H]1045.8(观测值)。
实施例201制备免疫缀合物(IC)
为了制备赖氨酸缀合的免疫缀合物，使用G-25SEPHADEXTM脱盐柱(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)或ZebaTMSpin脱盐柱(Thermo Fisher Scientific)，将抗体缓冲液交换至含有100mM硼酸、50mM氯化钠、1mM乙二胺四乙酸(pH 8.3)的缀合缓冲液中。接着使用缓冲液将洗脱液各自调节至约1-10mg/ml的浓度，且接着无菌过滤。将抗体预热至20-30℃，并与2-20(例如，7-10)摩尔当量的四氟苯基(TFP)或磺酸四氟苯基(sulfoTFP)酯、溶解于二甲基亚砜(DMSO)或二甲基乙酰胺(DMA)中的式II的8-环基-2-氨基苯并氮杂卓-接头(CycBzL)化合物快速混合至5至20mM的浓度。允许反应在30℃下进行约16小时，并通过运行两个连续的G-25脱盐柱或ZebaTMSpin脱盐柱将免疫缀合物(IC)从反应物中分离出来，所述脱盐柱在pH 7.2的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中平衡以提供表3a和3b的免疫缀合物(IC)。佐剂-抗体比(DAR)是通过液相色谱质谱分析，使用C4反相柱在连接至XEVOTM G2-XS TOF质谱仪(WatersCorporation)的ACQUITYTM UPLC H-class(Waters Corporation，Milford，MA)上的测定的。
为了制备半胱氨酸缀合的免疫缀合物，使用ZebaTMSpin脱盐柱(Thermo FisherScientific)将抗体缓冲液交换至含有PBS，pH 7.2和2mM EDTA的缀合缓冲液中。使用2–4摩尔过量的三(2-羧乙基)膦(TCEP)或二硫苏糖醇(DTT)将链间二硫化物在37℃下还原30分钟至2小时。使用用缀合缓冲液预平衡的ZebaTMSpin脱盐柱去除过量的TCEP或DTT。使用缀合缓冲液将缓冲液交换抗体的浓度调节至大约5至20mg/ml，并进行无菌过滤。将马来酰亚胺-CycBzL化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)或二甲基乙酰胺(DMA)中，浓度为5至20mM。对于缀合，将抗体与10至20摩尔当量的马来酰亚胺-HxBzL混合。在一些情况下，添加至多20％(v/v)的额外DMA或DMSO以提高马来酰亚胺-CycBzL在缀合缓冲液中的溶解度。使反应在20℃下进行约30分钟至4小时。使用两个连续的ZebaTMSpin脱盐柱将所得缀合物从未反应的马来酰亚胺-CycBzL中纯化出来。所述柱已用磷酸盐缓冲盐水(PBS)，pH 7.2预平衡。佐剂与抗体比(DAR)是通过液相色谱质谱分析，使用C4反相柱在连接至XEVOTM G2-XS TOF质谱仪(WatersCorporation)的ACQUITYTM UPLC H-class(Waters Corporation，Milford，MA)上估算的。
为了进行缀合，可以将抗体溶解于本领域中已知的水性缓冲系统中，所述水性缓冲系统不会不利地影响抗体的稳定性或抗原结合特异性。可以使用磷酸盐缓冲盐水。将CycBzL化合物溶解于包含如本文别处所描述的至少一种极性非质子性溶剂的溶剂系统中。在一些此类方面，将CycBzL以约5mM、约10mM、约20mM、约30mM、约40mM或约50mM及其范围，诸如约5mM至约50mM或约10mM至约30mM的浓度溶解于pH 8Tris缓冲液(例如50mM Tris)中。在一些方面，将8-Het-2-氨基苯并氮杂卓-接头中间体溶解于DMSO(二甲亚砜)、DMA(二甲基乙酰胺)、乙腈或另一种适合的偶极非质子性溶剂中。
或者，在缀合反应中，可以稀释当量过量的CycBzL溶液并且与抗体溶液合并。可以用至少一种极性非质子性溶剂和至少一种极性质子性溶剂(其实例包括水、甲醇、乙醇、正丙醇和乙酸)适当稀释CycBzL溶液。8-Het-2-氨基苯并氮杂卓-接头中间体与抗体的摩尔当量可以为约1.5:1、约3:1、约5:1、约10:1、约15:1或约20:1及其范围，诸如约1.5:1至约20:1、约1.5:1至约15:1、约1.5:1至约10:1、约3:1至约15:1、约3:1至约10:1、约5:1至约15:1或约5:1至约10:1。可以通过本领域中已知的方法，诸如LC-MS适当监测反应的完成。缀合反应通常在约1小时至约16小时的范围内完成。反应完成后，可以将试剂添加至反应混合物中以淬灭反应物。如果抗体硫醇基与硫醇反应基，诸如8-Het-2-氨基苯并氮杂卓-接头中间体的马来酰亚胺反应，那么未反应的抗体硫醇基可以与封端试剂反应。适合封端试剂的实例是乙基马来酰亚胺。
缀合后，可以通过本领域中已知的纯化方法纯化免疫缀合物并且与未缀合的反应物和/或缀合物聚集体分离，所述纯化方法诸如并且不限于尺寸排阻色谱法、疏水相互作用色谱法、离子交换色谱法、色谱聚焦、超滤、离心超滤、切向流过滤和它们的组合。举例来说，在纯化之前可以稀释免疫缀合物，诸如在20mM琥珀酸钠(pH 5)中。将经稀释的溶液施加至阳离子交换柱，继而用例如至少10柱体积的20mM琥珀酸钠(pH 5)洗涤。可以用诸如PBS的缓冲液适当洗脱缀合物。
实施例202HEK报告体分析
表达人类TLR7或人类TLR8的HEK293报告体细胞购自Invivogen，并且对于细胞繁殖和实验遵循供货商方案。简单地说，在5％CO2下于补充有10％FBS、吉欧霉素(Zeocin)和杀稻瘟菌素(Blasticidin)的DMEM中使细胞生长至80-85％汇合。然后将细胞以4×104个细胞/孔与含有HEK检测介质和免疫刺激分子的基质一起接种于96孔平板中。在620-655nm波长下使用板读取器测量活性。
实施例203体外免疫缀合物活性的评估
本实施例显示本发明的免疫缀合物有效引发免疫活化，并且因此可用于治疗癌症。
a)人类抗原呈递细胞的分离：人类髓样抗原呈递细胞(APC)是通过使用ROSETTESEPTM人类单核细胞富集混合液(Stem Cell Technologies,Vancouver,Canada)的密度梯度离心从获自健康献血者(Stanford Blood Center,Palo Alto,California)的人类外周血中阴性选择的，所述混合液含有针对CD14、CD16、CD40、CD86、CD123和HLA-DR的单克隆抗体。随后使用EASYSEPTM人类单核细胞富集试剂盒(Stem Cell Technologies)通过阴性选择将未成熟的APC纯化至>90％纯度，不含CD16耗竭，其中含有针对CD14、CD16、CD40、CD86、CD123和HLA-DR的单克隆抗体。
b)髓样APC激活分析：2×105个APC在96孔板(Corning,Corning,NY)中培育，所述板含有伊斯科夫氏改良的杜尔贝科氏培养基，IMDM(Lonza)，其补充有10％FBS、100U/mL青霉素、100μg/mL(微克/毫升)链霉素、2mM L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、非必需氨基酸，以及如有指示，不同浓度的未缀合(裸)抗体和本发明的免疫缀合物(根据上述实施例制备)。18小时后通过ELISA分析无细胞上清液以测量TNFα分泌作为促炎反应的读数。
c)PBMC激活分析：人类外周血单核细胞是通过密度梯度离心法从获自健康献血者(Stanford Blood Center,Palo Alto,California)的人类外周血中分离出来的。PBMC在96孔板(Corning,Corning,NY)中与表达CEA的肿瘤细胞(例如MKN-45、HPAF-II)以10:1的效应细胞与靶细胞比例进行共培养。用不同浓度的未缀合(裸)抗体和本发明的免疫缀合物(根据上述实施例制备)刺激细胞。根据制造商的指南(San Diego,CA)，使用LegendPlexTM试剂盒通过细胞因子珠阵列分析无细胞上清液。
d)人类常规树突状细胞的分离：通过密度梯度离心从获自健康血液供体(Stanford Blood Center,Palo Alto,California)的人类周边血液中阴性选择人类常规树突状细胞(cDC)。简单地说，首先通过使用ROSETTESEPTM人类CD3耗竭混合液(Stem CellTechnologies,Vancouver,Canada)以从细胞制剂中去除T细胞来富集细胞。然后经由使用EASYSEPTM人类髓样DC富集试剂盒(Stem Cell Technologies)进行阴性选择来进一步富集cDC。
e)cDC活化分析：将8×104个APC与表达ISAC靶抗原的肿瘤细胞以10:1效应子(cDC)与标靶(肿瘤细胞)比率共同培养。在含有补充有10％FBS的RPMI-1640培养基并且在指定情况下含有各种浓度的本发明的指定免疫缀合物(如根据上述实施例制备)的96孔板(Corning,Corning,NY)中培育细胞。过夜培育约18小时后，收集无细胞上清液并且使用BioLegend LEGENDPLEX细胞因子珠粒阵列来分析细胞因子分泌(包括TNFα)。
可以使用除所描述的分析(其中利用不同髓样群体)以外的各种筛选分析来测量髓样细胞类型的活化。这些类型可以包括以下：从健康供体血液分离的单核细胞、M-CSF分化的巨噬细胞、GM-CSF分化的巨噬细胞、源自GM-CSF+IL-4单核细胞的树突状细胞、从健康供体血液分离的常规树突状细胞(cDC)，以及极化成免疫抑制状态的髓样细胞(也称作髓源性抑制细胞或MDSC)。MDSC极化细胞的实例包括向免疫抑制状态分化的单核细胞，诸如M2aMΦ(IL4/IL13)、M2c MΦ(IL10/TGFb)、GM-CSF/IL6 MDSC和肿瘤驯化的单核细胞(TEM)。可以使用肿瘤条件培养基(例如786.O、MDA-MB-231、HCC1954)进行TEM分化。初级肿瘤相关髓样细胞还可以包括存在于离解的肿瘤细胞悬浮液(Discovery Life Sciences)中的初级细胞。
可以作为单一培养物或作为与表达所关注抗原的细胞的共同培养物进行所描述的髓样细胞群体活化的评估，免疫缀合物可以经由抗体的CDR区结合至所述抗原。培育18-48小时后，可以通过使用流式细胞术或通过测量分泌的促炎性细胞因子上调细胞表面共刺激分子来评估活化。为了进行细胞因子测量，收集无细胞上清液并且通过细胞因子珠粒阵列(例如来自Biolegend的LegendPlex)使用流式细胞术进行分析。
本文引用的所有参考文献，包括公布、专利申请和专利，特此以引用的方式并入，其程度如同每个参考文献个别地和特定地指示以引用的方式并入并且在本文中以全文阐述一样。
序列表
<110> 博尔特生物治疗药物有限公司
<120> 抗PD-L1免疫缀合物和其用途
<130> 17019.013WO1
<140>
<141>
<150> 63/124,396
<151> 2020-12-11
<160> 475
<170> PatentIn version 3.5
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1 5
<210> 10
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 10
Asn Tyr Met Tyr His
1 5
<210> 11
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 11
Thr Tyr Tyr Val His
1 5
<210> 12
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 12
Ser Tyr Ala Leu Ser
1 5
<210> 13
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 13
Arg His Tyr Val His
1 5
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 14
Ser His Tyr Met His
1 5
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 15
Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 16
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 16
Gly Tyr Thr Leu His
1 5
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 17
Asn His Tyr Met His
1 5
<210> 18
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 18
Asn Ser Tyr Met His
1 5
<210> 19
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 19
Thr Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 20
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 20
Arg His Phe Ile His
1 5
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 21
Thr Phe Gly Ile Ser
1 5
<210> 22
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 22
Ser Tyr Gly Ile Asn
1 5
<210> 23
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 23
Asn His Tyr Val His
1 5
<210> 24
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 24
Val Ile Asn Pro Ser Ala Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 25
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 25
Trp Met Asn Pro Asn Ser Asp Ile Ala Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 26
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 26
Trp Ile Ser Pro Gln His Gly Val Arg Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 27
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 27
Trp Val Ser Pro Ser His Gly Leu Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 28
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 28
Trp Met Ser Leu Asn Ser Gly Leu Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 29
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 29
Trp Met Lys Pro Ser Ser Gly Thr Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 30
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 30
Trp Met Asn Pro Asn Gly Asp Val Ala Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 31
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 31
Gly Ile Asp Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 32
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 32
Trp Met Asn Pro Asp Ser Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 33
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 33
Trp Met Ser Leu Asn Ser Gly Leu Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 34
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 34
Trp Met Asn Pro Asn Gly Asp Val Ala Gly Tyr Ala Asp Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 35
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 35
Trp Ile Ser Thr Tyr His Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 36
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 36
Trp Met Asn Pro Asn Thr Val Tyr Thr Gly Ser Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 37
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 37
Arg Ile Ile Pro Ala Val Gly Ser Val Thr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 38
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 38
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 39
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 39
Trp Met Ser Pro Ser Ser Gly Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 40
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 40
Trp Met Thr Pro Ser Thr Gly Asn Ala Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 41
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 41
Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 42
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 42
Trp Met His Pro Asn Ser Gly His Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 43
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 43
Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly His Thr Gly Asn Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 44
Trp Ile Asp Pro Asn Ser Gly Val Thr Ser Ser Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 45
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 45
Trp Ile Ser Pro Asn Ser Gly Val Thr Asp Phe Thr Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 46
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 46
Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly His Thr Gly Tyr Ala Gln Arg Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 47
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 47
Trp Met Ser Pro Asn Gly Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 48
Trp Met Asp Pro Ser Ser Gly Tyr Thr Gly Ser Ala His Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 49
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 49
Trp Met Asn Pro His Ser Ala Asp Thr Gly Tyr Ala Glu Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 50
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 50
Trp Leu Thr Pro Ser Thr Gly His Ala Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 51
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 51
Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly His Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 52
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 52
Trp Ile Ser Pro Gln His Gly Val Arg Asn Tyr Ala His Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 53
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 53
Met Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 54
Trp Ile Ser Pro Arg Ser Gly Val Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 55
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 55
Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 56
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 56
Trp Met Asn Pro Thr Gly Gly Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 57
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 57
Trp Val Ser Pro Ile His Gly Leu Thr Gly Tyr Ala Pro Arg Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 58
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 58
Asp Leu Tyr Pro Tyr Val Val Val Val Ala Ala Gly Ser Tyr Gly Met
1 5 10 15
Asp Val
<210> 59
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 59
Pro Ser Ile Val Gly Ala Tyr Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 60
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 60
Glu Ser Val Glu Gly Tyr Phe Asp Leu
1 5
<210> 61
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 61
Asp Asn Trp Asn Val His Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 62
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 62
Gly Thr Tyr Asn Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 63
Glu Gln Trp Leu Val Asn Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 64
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 64
Asp Ser Ser Gly Trp Met Arg Asn Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 65
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 65
Ser Met Phe Pro Thr Ile Phe Gly Asp Asn Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 66
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 66
Ala Leu Phe Pro Tyr Pro Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val
1 5 10
<210> 67
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 67
Asp Arg Gly Trp Phe Asp Pro
1 5
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 68
Asp Ala Arg Gly Tyr Ser Gly Tyr Asp Leu
1 5 10
<210> 69
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 69
Glu Gly Arg His Gly Glu Tyr Leu Tyr
1 5
<210> 70
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 70
Glu Gly Trp Gly Ser Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 71
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 71
His Leu Phe Pro Thr Val Phe Asp Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 72
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 72
Gly Gly Tyr Ser Tyr Gly Ser Phe Gln His
1 5 10
<210> 73
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 73
Val Arg Trp Ser Ser Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 74
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 74
Glu Glu Trp Leu Gly His Phe Gln His
1 5
<210> 75
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 75
Glu Arg Phe Leu Gly Gly Met Asp Val
1 5
<210> 76
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 76
Gly Asn Trp Val Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 77
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 77
Glu Ser Glu Val Met Met Ala Tyr Phe Gln His
1 5 10
<210> 78
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 78
Glu Ser Trp Ser Gly Glu Phe Asp Tyr
1 5
<210> 79
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 79
Glu Ala Val Ala Gly Pro Met Asp Val
1 5
<210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 80
Asp Ala Trp Glu Leu Leu Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 81
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 81
Asp Arg Trp Asp Gly Asp Tyr Tyr Ser Ala
1 5 10
<210> 82
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 82
Glu Ser Trp Glu Leu Thr Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 83
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 83
Glu Arg Phe Ala Gly Gly Met Asp Ala
1 5
<210> 84
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 84
Asp Ser Gly Gly Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 85
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 85
Glu Val Phe Glu Gly Gly Met Asp Val
1 5
<210> 86
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 86
Glu Gly Tyr Gly Gly Asn Tyr Gly Asn
1 5
<210> 87
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 87
Glu Asp Phe Tyr Gly Asp Phe Asp Tyr
1 5
<210> 88
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 88
Glu Leu Ser Arg Trp Gly Phe Asp Tyr
1 5
<210> 89
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 89
Asp Ile Phe Pro Thr Met Ile Ala Gly Gly Gly Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 90
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 90
Gly Gly Tyr Ser Tyr Gly Ser Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 91
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 91
Gly Ser Phe Pro Leu Val Phe Thr Ile Phe Gly Val Gly Asp Val
1 5 10 15
<210> 92
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 92
Asp Leu Asp Tyr Val Arg Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 93
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 93
Glu Ser Trp Gly Gly Tyr Phe Asp Leu
1 5
<210> 94
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 94
Asp Arg Thr Thr Tyr Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 95
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 95
Val His Gly Ser Gly Ser Asp Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 96
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 96
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 97
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 97
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 98
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 98
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 99
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 99
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 100
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 100
Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 101
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 101
Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Arg Asn Tyr Val Thr
1 5 10
<210> 102
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 102
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Gln Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 103
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 103
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 104
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 104
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 105
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 105
Arg Ala Ser Gln Ile Ile Gly Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 106
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 106
Arg Ala Ser Gln Ile Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 107
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 107
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 108
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 108
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 109
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 109
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Asn Leu Asn
1 5 10
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 110
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Gly Leu Ser
1 5 10
<210> 111
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 111
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Thr Gly Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 112
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 112
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Ala
1 5 10
<210> 113
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 113
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 114
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 114
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Thr Thr Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 115
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 115
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 116
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 116
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 117
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 117
Gln Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 118
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 118
Arg Ala Ser Gln Ser Leu Ser Ser Ser Ser Leu Ala
1 5 10
<210> 119
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 119
Arg Ala Ser Glu His Ile Ala Asn Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 120
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 120
Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Trp Val Ala
1 5 10
<210> 121
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 121
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Pro Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 122
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 122
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 123
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 123
Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 124
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 124
Arg Ser Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Ser
1 5 10
<210> 125
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 125
Arg Asp Ser His Ser Ile Thr Thr Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 126
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 126
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 127
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 127
Arg Ala Ser Gln Val Ile Arg Asn Asp Leu Ala
1 5 10
<210> 128
<400> 128
000
<210> 129
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 129
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 130
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 130
Gly Ala Ser Asn Leu Gln Ser
1 5
<210> 131
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 131
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 132
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 132
Gly Ala Ser Asn Leu His Ser
1 5
<210> 133
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 133
Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 134
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 134
Ser Ala Ser Asn Leu Gln Ser
1 5
<210> 135
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 135
Ala Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 136
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 136
His Ala Ser Ile Leu Glu Thr
1 5
<210> 137
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 137
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 138
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 138
Ala Ala Thr Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 139
Asp Ala Thr His Leu Glu Thr
1 5
<210> 140
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 140
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Thr
1 5
<210> 141
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 141
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Gly
1 5
<210> 142
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 142
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 143
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 143
Asp Val Ser His Leu Glu Ser
1 5
<210> 144
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 144
Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 145
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 145
Gly Val Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 146
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 146
Pro Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 147
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 147
Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr
1 5
<210> 148
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 148
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser
1 5
<210> 149
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 149
Asp Ser Ser Ser Leu Gln Thr
1 5
<210> 150
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 150
Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 151
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 151
Leu Ala Ser Asn Ser His Ser
1 5
<210> 152
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 152
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile Thr
1 5
<210> 153
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 153
Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Ile Thr
1 5
<210> 154
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 154
Gln Gln Ile Phe Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 155
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 155
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 156
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 156
Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 157
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 157
Gln Gln Thr Phe Thr Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 158
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 158
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe Thr
1 5
<210> 159
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 159
Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Tyr Ser
1 5
<210> 160
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 160
Gln Gln Thr Phe Ile Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 161
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 161
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Thr
1 5
<210> 162
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 162
Gln Gln Gly Phe Ser Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 163
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 163
Gln Gln Ser Phe Thr Asn Pro Val Thr
1 5
<210> 164
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 164
Gln Gln Ser Tyr Ser Ala Pro Tyr Thr
1 5
<210> 165
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 165
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 166
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 166
Gln Gln Ser His Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 167
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 167
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 168
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 168
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Phe Thr
1 5
<210> 169
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 169
Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Pro Ile Thr
1 5
<210> 170
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 170
Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 171
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 171
Gln Gln Ser Phe Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 172
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 172
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr
1 5
<210> 173
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 173
Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 174
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 174
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Val Thr
1 5
<210> 175
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 175
Gln His Phe Tyr Asn Thr Gln Tyr Thr
1 5
<210> 176
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 176
Gln Gln Ser Leu Gln Tyr Pro Ser His Phe
1 5 10
<210> 177
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 177
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 178
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 178
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 179
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 179
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn
20 25 30
<210> 180
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 180
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asn Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 181
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 181
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ser Phe Thr
20 25 30
<210> 182
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 182
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Thr
20 25 30
<210> 183
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 183
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr
20 25 30
<210> 184
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 184
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 185
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 185
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 186
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 186
Gln Val Gln Leu Ala Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 187
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 187
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 188
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 188
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Ser
20 25 30
<210> 189
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 189
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr
20 25 30
<210> 190
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 190
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile
20 25 30
<210> 191
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 191
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 192
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 192
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 193
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 193
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Leu Gly
1 5 10
<210> 194
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 194
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 195
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 195
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val Gly
1 5 10
<210> 196
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 196
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 197
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 197
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ile
20 25 30
<210> 198
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 198
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 199
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 199
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 200
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 200
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Asn Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 201
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 201
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Glu
20 25 30
<210> 202
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 202
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 203
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 203
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 204
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 204
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 205
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 205
Trp Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 206
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 206
Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 207
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 207
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 208
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 208
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 209
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 209
Asp Ile Gln Ile Thr His Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Leu Thr Ile Thr Cys
20
<210> 210
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 210
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 211
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 211
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 212
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 212
Trp Tyr His Gln Lys Pro Trp Asn Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 213
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 213
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 214
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 214
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 215
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 215
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 216
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 216
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Pro Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 217
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 217
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 218
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 218
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 219
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 219
Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 220
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 220
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 221
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 221
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 222
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 222
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
1 5 10
<210> 223
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 223
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Ser Ala Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Tyr Pro Tyr Val Val Val Val Ala Ala Gly Ser Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 224
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 224
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<220>
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<400> 226
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<220>
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<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<220>
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<220>
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<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 242
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<211> 118
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 243
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<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<211> 118
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 250
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Arg Phe Ala Gly Gly Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 251
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 251
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asp Pro Ser Ser Gly Tyr Thr Gly Ser Ala His Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 252
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 252
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro His Ser Ala Asp Thr Gly Tyr Ala Glu Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 118
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<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 253
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115
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<211> 118
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<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 254
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
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20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115
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<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 255
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg His
20 25 30
Phe Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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50 55 60
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85 90 95
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100 105 110
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115
<210> 256
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 256
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg His
20 25 30
Leu Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 257
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 257
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 258
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Phe
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<210> 259
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 259
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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<211> 119
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 260
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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50 55 60
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85 90 95
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100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 261
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 261
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
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Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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100 105 110
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115
<210> 262
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 262
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asn His
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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100 105 110
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115
<210> 263
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 263
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
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100 105 110
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115
<210> 264
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 264
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg His
20 25 30
Leu Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 265
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 265
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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65 70 75 80
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100 105
<210> 266
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 266
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 267
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 267
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 268
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 268
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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100 105
<210> 269
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 269
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 270
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100 105
<210> 271
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 271
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 272
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 272
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 273
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 273
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 274
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 274
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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85 90 95
Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<210> 275
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 275
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Gln Tyr
20 25 30
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<210> 276
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 276
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ile Ile Gly Asn Tyr
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<210> 277
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 277
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1 5 10 15
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20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Phe Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 107
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 278
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65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 279
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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<220>
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1 5 10 15
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<220>
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1 5 10 15
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<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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1 5 10 15
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<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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1 5 10 15
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<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 284
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
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<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 285
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1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 286
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 287
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
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<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 288
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 289
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Trp
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 290
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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65 70 75 80
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 291
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 292
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu His Ile Ala Asn Trp
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Gly Val Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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<210> 294
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 294
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Trp
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<210> 295
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 295
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 296
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Tyr
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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<210> 297
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 297
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 298
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 299
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
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100 105
<210> 300
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 300
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 301
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 301
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Leu Ala Ser Asn Ser His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 302
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 302
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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<210> 303
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 303
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
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<210> 304
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 304
Asp Ile Gln Ile Thr His Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Leu Thr Ile Thr Cys Arg Asp Ser His Ser Ile Thr Thr Trp
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Leu Ala Trp Tyr His Gln Lys Pro Trp Asn Ala Pro Lys Leu Met Ile
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Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 305
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Gln Tyr Pro Ser
85 90 95
His Phe Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 306
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 306
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Pro Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 307
<211> 290
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 307
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val
115 120 125
Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val
130 135 140
Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr
145 150 155 160
Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser
165 170 175
Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn
180 185 190
Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr
195 200 205
Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu
210 215 220
Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His
225 230 235 240
Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr
245 250 255
Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys
260 265 270
Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu
275 280 285
Glu Thr
290
<210> 308
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 308
Ser Asp Tyr Met His
1 5
<210> 309
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 309
Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 310
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 310
Ser Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 311
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 311
Gly Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 312
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 312
Thr His Tyr Met His
1 5
<210> 313
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 313
Ser His Asp Ile Asn
1 5
<210> 314
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 314
Asp His Tyr Leu His
1 5
<210> 315
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 315
Asn Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 316
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 316
Ala Tyr Tyr Val His
1 5
<210> 317
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 317
Arg His Tyr Val His
1 5
<210> 318
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 318
Asn Tyr Ile His
1
<210> 319
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 319
Asn His Tyr Val His
1 5
<210> 320
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 320
Ser His Tyr Met His
1 5
<210> 321
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 321
Arg His Leu Leu His
1 5
<210> 322
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 322
Trp Met Ser Pro Tyr Asn Gly Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 323
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 323
Trp Met Ser Pro Ser Ser Gly Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 324
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 324
Trp Met Thr Thr Asn Ser Gly Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 325
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 325
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 326
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 326
Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly His Ala Gly Ser Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 327
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 327
Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 328
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 328
Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ser Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 329
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 329
Trp Met Asn Pro Asn Ile Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 330
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 330
Trp Met Asn Pro Asn Gly Gly Thr Thr Gly Tyr Ala Gln Asn Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 331
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 331
Trp Met Asn Pro Asn Arg Gly Ile Thr Asp Ser Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 332
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 332
Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Ser Ala Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 333
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 333
Trp Ile His Pro Arg Ser Gly Ala Thr Gly Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 334
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 334
Trp Ile Ser Pro Arg Ser Gly Val Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 335
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 335
Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 336
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 336
Trp Met Asn Pro Thr Gly Gly Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 337
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 337
Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly His Thr Gly Asn Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 338
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 338
Trp Val Ser Pro Ile His Gly Leu Thr Gly Tyr Ala Pro Arg Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 339
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 339
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Tyr Asp Tyr
1 5
<210> 340
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 340
Asp Arg Gly Trp Phe Asp Pro
1 5
<210> 341
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 341
Glu Gly Tyr Ser Ser Gly Leu Asp Tyr
1 5
<210> 342
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 342
Asp Gly Arg Phe Trp Ser Gly Tyr Pro Asp Tyr
1 5 10
<210> 343
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 343
Glu Ser Ile Ala Val Ala Gly Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 344
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 344
Asp Arg Trp Tyr Met Gly Ser Ala Asp Tyr
1 5 10
<210> 345
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 345
Asp Asp Trp Gly Gly Asp Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 346
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 346
Glu Arg Leu Ser Val Ala Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 347
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 347
Glu Pro Leu Gln Leu Gly Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 348
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 348
Glu Gly Phe Gly Pro Asn Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 349
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 349
Asp Ser Trp Tyr Gly Asp Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 350
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 350
Glu Val Ile Glu Val Gly Met Asp Val
1 5
<210> 351
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 351
Glu Ala Trp Phe Gly Glu Leu Ser Thr
1 5
<210> 352
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 352
Glu Ala Tyr Val Ala Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 353
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 353
Glu Arg Gly Tyr Asn Ala Phe Asp Tyr
1 5
<210> 354
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 354
Asp Ser Val Phe Gly Leu Asp Tyr
1 5
<210> 355
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 355
Asp Leu Asp Tyr Val Arg Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 356
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 356
Glu Ser Trp Gly Gly Tyr Phe Asp Leu
1 5
<210> 357
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 357
Asp Arg Thr Thr Tyr Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 358
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 358
Gly Asn Trp Val Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 359
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 359
Val His Gly Ser Gly Ser Asp Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 360
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 360
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 361
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 361
Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Thr Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 362
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 362
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 363
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 363
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 364
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 364
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn His Leu Asn
1 5 10
<210> 365
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 365
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 366
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 366
Arg Ala Ser Glu Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 367
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 367
Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 368
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 368
Arg Ala Ser Gln Asn Ile Ser Asn Phe Leu Asn
1 5 10
<210> 369
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 369
Arg Ala Ser Gln Ser Leu Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 370
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 370
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 371
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 371
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 372
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 372
Arg Asp Ser His Ser Ile Thr Thr Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 373
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 373
Arg Ala Ser Gln Val Ile Arg Asn Asp Leu Ala
1 5 10
<210> 374
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 374
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 375
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 375
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 376
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 376
Ala Ala Ser Thr Leu Glu Asn
1 5
<210> 377
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 377
Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 378
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 378
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Arg
1 5
<210> 379
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 379
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 380
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 380
Gly Ala Ser Asn Leu Gln Arg
1 5
<210> 381
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 381
Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser
1 5
<210> 382
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 382
Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 383
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 383
Ala Ala Ser His Leu Gln Ser
1 5
<210> 384
<400> 384
000
<210> 385
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 385
Asp Ser Ser Ser Leu Gln Thr
1 5
<210> 386
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 386
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 387
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 387
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 388
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 388
Gln Gln Ser Phe Ser Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 389
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 389
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 390
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 390
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 391
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 391
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile Thr
1 5
<210> 392
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 392
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 393
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 393
Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Tyr Thr
1 5
<210> 394
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 394
His Gln Tyr Phe Thr Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 395
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 395
Gln Gln Ser Tyr Ser Met Pro Tyr Thr
1 5
<210> 396
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 396
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Val Thr
1 5
<210> 397
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 397
Gln His Phe Tyr Asn Thr Gln Tyr Thr
1 5
<210> 398
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 398
Gln Gln Ser Leu Gln Tyr Pro Ser His Phe
1 5 10
<210> 399
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 399
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 400
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 400
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 401
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 401
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 402
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 402
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Glu Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 403
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 403
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Phe Ser
20 25 30
<210> 404
<400> 404
000
<210> 405
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 405
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr
20 25 30
<210> 406
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 406
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile
20 25 30
<210> 407
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 407
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 408
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 408
Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 409
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 409
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 410
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 410
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 411
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 411
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 412
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 412
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 413
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 413
Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 414
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 414
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 415
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 415
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 416
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 416
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 417
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 417
Asp Ile Gln Ile Thr His Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Leu Thr Ile Thr Cys
20
<210> 418
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 418
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 419
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 419
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 420
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 420
Trp Tyr His Gln Lys Pro Trp Asn Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 421
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 421
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 422
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 422
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 423
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 423
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 424
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 424
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Pro Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 425
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 425
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 426
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 426
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 427
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 427
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 428
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 428
Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 429
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 429
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
1 5 10
<210> 430
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 430
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Ser Pro Tyr Asn Gly Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Phe Ser Gly Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 431
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 431
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Ser Pro Ser Ser Gly Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 432
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 432
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Thr Thr Asn Ser Gly Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Ser Ser Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 433
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 433
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Arg Phe Trp Ser Gly Tyr Pro Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 434
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 434
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Thr His
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly His Ala Gly Ser Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<220>
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<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 462
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 462
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser His Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 463
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 463
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Ser Asn Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 464
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 465
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Phe Thr Thr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 466
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Met Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 467
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 468
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ser Ser Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Val
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 469
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 469
Asp Ile Gln Ile Thr His Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Tyr Arg Leu Thr Ile Thr Cys Arg Asp Ser His Ser Ile Thr Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr His Gln Lys Pro Trp Asn Ala Pro Lys Leu Met Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Asn Thr Gln Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 470
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 470
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Gln Tyr Pro Ser
85 90 95
His Phe Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 471
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 471
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Pro Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 472
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成多肽”
<400> 472
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Pro
20 25 30
<210> 473
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 473
Ala Ala Pro Ala
1
<210> 474
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<400> 474
Ala Ala Pro Val
1
<210> 475
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成肽”
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Nva
<400> 475
Ala Ala Pro Xaa
1

Claims (62)

1.一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包含通过接头共价附接至一个或多个8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓部分的抗体，并且具有式I：
Ab-[L-CycBz]p I
或其药学上可接受的盐，
其中：
Ab是具有结合PD-L1的抗原结合结构域的抗体构建体；
p是1至8的整数；
CycBz是具有下式的8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓部分：
Cyc选自由苯基二基、杂环基二基和杂芳基二基组成的组；
R1、R2、R3和R4独立地选自由H、C1-C12烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C12碳环基、C6-C20芳基、C2-C9杂环基和C1-C20杂芳基组成的组，其中烷基、烯基、炔基、碳环基、芳基、杂环基和杂芳基独立地并且任选地经一个或多个选自以下的基团取代：
-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷二基)-OR5；
-(C3-C12碳环基)；
-(C3-C12碳环基)-*；
-(C3-C12碳环基)-(C1-C12烷二基)-NR5-*；
-(C3-C12碳环基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C3-C12碳环基)-NR5-C(＝NR5)NR5-*；
-(C6-C20芳基)；
-(C6-C20芳二基)-*；
-(C6-C20芳二基)-N(R5)-*；
-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-(C2-C20杂环二基)-*；
-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-NR5-C(＝NR5a)N(R5)-*；-(C2-C20杂环基)；
-(C2-C20杂环基)-*；
-(C2-C9杂环基)-(C1-C12烷二基)-NR5-*；
-(C2-C9杂环基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C2-C9杂环基)-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C2-C9杂环基)-NR5-C(＝NR5a)NR5-*；
-(C2-C9杂环基)-NR5-(C6-C20芳二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；-(C2-C9杂环基)-(C6-C20芳二基)-*；
-(C1-C20杂芳基)；
-(C1-C20杂芳基)-*；
-(C1-C20杂芳基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-(C1-C20杂芳基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-(C1-C20杂芳基)-NR5-C(＝NR5a)N(R5)-*；
-(C1-C20杂芳基)-N(R5)C(＝O)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-C(＝O)-*；
-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环二基)-*；
-C(＝O)N(R5)2；
-C(＝O)N(R5)-*；
-C(＝O)N(R5)-(C1-C12烷二基)-N(R5)C(＝O)R5；
-C(＝O)N(R5)-(C1-C12烷二基)-N(R5)C(＝O)N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷二基)-N(R5)CO2R5；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷二基)-N(R5)C(＝NR5a)N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷二基)-NR5C(＝NR5a)R5；
-C(＝O)NR5-(C1-C8烷二基)-NR5(C2-C5杂芳基)；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳二基)-N(R5)-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳二基)-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳二基)-(C2-C20杂环二基)-C(＝O)NR5-(C1-C12烷二基)-NR5-*；
-N(R5)2；
-N(R5)-*；
-N(R5)C(＝O)R5；
-N(R5)C(＝O)-*；
-N(R5)C(＝O)N(R5)2；
-N(R5)C(＝O)N(R5)-*；
-N(R5)CO2R5；
-NR5C(＝NR5a)N(R5)2；
-NR5C(＝NR5a)N(R5)-*；
-NR5C(＝NR5a)R5；
-N(R5)C(＝O)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-N(R5)-(C2-C5杂芳基)；
-N(R5)-S(＝O)2-(C1-C12烷基)；
-O-(C1-C12烷基)；
-O-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-O-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；
-O-C(＝O)N(R5)2；
-O-C(＝O)N(R5)-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环二基)-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环二基)-(C1-C12烷二基)-N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环二基)-(C1-C12烷二基)-NR5-*；以及
-S(＝O)2-(C2-C20杂环二基)-(C1-C12烷二基)-OH；
或R2与R3一起形成5元或6元杂环基环；
X1、X2、X3和X4独立地选自由一键、C(＝O)、C(＝O)N(R5)、O、N(R5)、S、S(O)2和S(O)2N(R5)组成的组；
R5独立地选自由H、C6-C20芳基、C3-C12碳环基、C6-C20芳二基、C1-C12烷基和C1-C12烷二基组成的组，或两个R5基团一起形成5元或6元杂环基环；
R5a选自由C6-C20芳基和C1-C20杂芳基组成的组；
其中星号*指示L的附接位点，并且其中R1、R2、R3和R4中的一者附接至L；
L是选自由以下组成的组的接头：
-C(＝O)-PEG-；
-C(＝O)-PEG-C(＝O)N(R6)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-Gluc-；
-C(＝O)-PEG-O-；
-C(＝O)-PEG-O-C(＝O)-；
-C(＝O)-PEG-C(＝O)-；
-C(＝O)-PEG-C(＝O)-PEP-；
-C(＝O)-PEG-N(R6)-；
-C(＝O)-PEG-N(R6)-C(＝O)-；
-C(＝O)-PEG-N(R6)-PEG-C(＝O)-PEP-；
-C(＝O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(＝O)-PEP-；
-C(＝O)-PEG-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-；
-C(＝O)-PEG-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)N(R6)C(＝O)-(C2-C5单杂环二基)-；
-C(＝O)-PEG-SS-(C1-C12烷二基)-OC(＝O)-；
-C(＝O)-PEG-SS-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-；
-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-PEP-；
-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-；
-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-N(R5)-C(＝O)；
-C(＝O)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-N(R6)C(＝O)-(C2-C5单杂环二基)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-C(＝O)N(R6)-(C1-C12烷二基)-C(＝O)-Gluc-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-O-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-O-C(＝O)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-C(＝O)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-N(R5)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(＝O)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-C(＝O)-PEP-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12烷二基)-OC(＝O)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)-；
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)N(R6)C(＝O)-；以及
-琥珀酰亚胺基-(CH2)m-C(＝O)-PEP-N(R6)-(C1-C12烷二基)N(R6)C(＝O)-(C2-C5单杂环二基)-；
R6独立地是H或C1-C6烷基；
PEG具有下式：-(CH2CH2O)n-(CH2)m-；m是1至5的整数，并且n是2至50的整数；
Gluc具有下式：
PEP具有下式：
其中AA独立地选自天然或非天然氨基酸侧链，或AA中的一者或多者和相邻氮原子形成5元环脯氨酸氨基酸，并且波形线指示附接点；
Cyc选自C6-C20芳二基和C1-C20杂芳二基，任选地经一个或多个选自以下的基团取代：F、Cl、NO2、-OH、-OCH3，以及具有以下结构的葡糖醛酸：
R7选自由-CH(R8)O-、-CH2-、-CH2N(R8)-和-CH(R8)O-C(＝O)-组成的组，其中R8选自H、C1-C6烷基、C(＝O)-C1-C6烷基和-C(＝O)N(R9)2，其中R9独立地选自由H、C1-C12烷基和-(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH组成的组，其中m是1至5的整数，并且n是2至50的整数，或两个R9基团一起形成5元或6元杂环基环；
y是2至12的整数；
z是0或1；并且
烷基、烷二基、烯基、烯二基、炔基、炔二基、芳基、芳二基、碳环基、碳环二基、杂环基、杂环二基、杂芳基和杂芳二基独立地并且任选地经一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CH2OP(O)(OH)2、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH(CH3)CN、-C(CH3)2CN、-CH2CN、-CH2NH2、-CH2NHSO2CH3、-CH2NHCH3、-CH2N(CH3)2、-CO2H、-COCH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-N(CH3)COCH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、-NHC(＝NH)H、-NHC(＝NH)CH3、-NHC(＝NH)NH2、-NHC(＝O)NH2、-NO2、＝O、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OH、-OCH2CH2N(CH3)2、-O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H、-O(CH2CH2O)nH、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、-OP(O)(OH)2、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-S(O)2CH3和-S(O)3H。
2.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体选自由阿特珠单抗、德瓦鲁单抗和阿维鲁单抗或其生物类似药或生物改良药组成的组。
3.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体构建体是A型PD-L1抗体并且包含免疫球蛋白重链可变区多肽和免疫球蛋白轻链可变区多肽，其中：
所述免疫球蛋白重链可变区多肽包含：包含A型SEQ ID NO:1-23中的任一者的互补决定区1(HCDR1)、包含SEQ ID NO:24-57中的任一者的互补决定区2(HCDR2)以及包含SEQ IDNO:58-95中的任一者的互补决定区3(HCDR3)；或
所述免疫球蛋白轻链可变区多肽包含：包含SEQ ID NO:96-128中的任一者的互补决定区1(LCDR1)、包含SEQ ID NO:129-151中的任一者的互补决定区2(LCDR2)以及包含SEQ IDNO:152-155中的任一者的互补决定区3(LCDR3)；
其中所述序列来自图1-4。
4.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体构建体是A型PD-L1抗体并且包含SEQID NO:223-264中的任一者的免疫球蛋白重链可变区或至少其CDR；和SEQ ID NO:265-306中的任一者的免疫球蛋白轻链可变区或至少其CDR；
其中所述序列来自图1-4。
5.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体构建体是A型PD-L1抗体并且包含具有与SEQ ID NO:223-264中的任一者至少90％同一的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区多肽，和具有与SEQ ID NO:265-306中的任一者至少90％同一的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区多肽；
其中所述序列来自图1-4。
6.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体构建体是A型PD-L1抗体并且包含图1A-D的PD-L1结合剂的重链和轻链免疫球蛋白多肽，或至少其CDR。
7.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体构建体是B型PD-L1抗体并且包含免疫球蛋白重链可变区多肽和免疫球蛋白轻链可变区多肽，其中：
所述免疫球蛋白重链可变区多肽包含：包含SEQ ID NO:1-14中的任一者的互补决定区1(HCDR1)、包含SEQ ID NO:15-31中的任一者的互补决定区2(HCDR2)以及包含SEQ ID NO:32-52中的任一者的互补决定区3(HCDR3)；或
所述免疫球蛋白轻链可变区多肽包含：包含SEQ ID NO:53-67中的任一者的互补决定区1(LCDR1)、包含SEQ ID NO:68-79中的任一者的互补决定区2(LCDR2)以及包含SEQ IDNO:80-91中的任一者的互补决定区3(LCDR3)；
其中所述序列来自图5-8。
8.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体构建体是B型PD-L1抗体并且包含SEQID NO:123-143中的任一者的免疫球蛋白重链可变区或至少其CDR；和SEQ ID NO:144-164中的任一者的免疫球蛋白轻链可变区或至少其CDR；
其中所述序列来自图5-8。
9.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体构建体是B型PD-L1抗体并且包含具有与SEQ ID NO:123-143-中的任一者至少90％同一的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区多肽，和具有与SEQ ID NO:144-164中的任一者至少90％同一的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区多肽；
其中所述序列来自图5-8。
10.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体构建体是B型PD-L1抗体并且包含图5A-B的PD-L1结合剂的重链和轻链免疫球蛋白多肽，或至少其CDR。
11.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中X1是一键，并且R1是H。
12.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中X2是一键，并且R2是C1-C8烷基。
13.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中X2和X3各自是一键，并且R2和R3独立地选自C1-C8烷基、-O-(C1-C12烷基)、-(C1-C12烷二基)-OR5、-(C1-C8烷二基)-N(R5)CO2R5、-(C1-C12烷基)-OC(O)N(R5)2、-O-(C1-C12烷基)-N(R5)CO2R5和-O-(C1-C12烷基)-OC(O)N(R5)2。
14.如权利要求13所述的免疫缀合物，其中R2是C1-C8烷基并且R3是-(C1-C8烷二基)-N(R5)CO2R5。
15.如权利要求14所述的免疫缀合物，其中R2是-CH2CH2CH3并且R3选自-CH2CH2CH2NHCO2(t-Bu)、-OCH2CH2NHCO2(环丁基)和-CH2CH2CH2NHCO2(环丁基)。
16.如权利要求13所述的免疫缀合物，其中R2和R3各自独立地选自-CH2CH2CH3、-OCH2CH3、-OCH2CF3、-CH2CH2CF3、-OCH2CH2OH和-CH2CH2CH2OH。
17.如权利要求16所述的免疫缀合物，其中R2和R3各自是-CH2CH2CH3。
18.如权利要求16所述的免疫缀合物，其中R2是-CH2CH2CH3并且R3是-OCH2CH3。
19.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中X3-R3选自由以下组成的组：
20.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中X4是一个键，并且R4是H。
21.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中R1附接至L。
22.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中R2或R3连接至L。
23.如权利要求22所述的免疫缀合物，其中X3-R3-L选自由以下组成的组：
其中波形线指示与N的附接点。
24.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中R4是C1-C12烷基。
25.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中R4是-(C1-C12烷二基)-N(R5)-*；其中星号*指示L的附接位点。
26.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中L是-C(＝O)-PEG-或-C(＝O)-PEG-C(＝O)-。
27.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中L附接至所述抗体的半胱氨酸硫醇。
28.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中对于所述PEG，m是1或2，并且n是2至10的整数。
29.如权利要求28所述的免疫缀合物，其中n是10。
30.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中L包含PEP并且PEP是二肽并且具有下式：
31.如权利要求30所述的免疫缀合物，其中AA1和AA2独立地选自H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2(C6H5)、-CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2NHC(NH)NH2、-CHCH(CH3)CH3、-CH2SO3H和-CH2CH2CH2NHC(O)NH2；或AA1和AA2形成5元环脯氨酸氨基酸。
32.如权利要求30所述的免疫缀合物，其中AA1是-CH(CH3)2，并且AA2是-CH2CH2CH2NHC(O)NH2。
33.如权利要求30所述的免疫缀合物，其中AA1和AA2独立地选自GlcNAc天冬氨酸、-CH2SO3H和-CH2OPO3H。
34.如权利要求30所述的免疫缀合物，其中PEP具有下式：
其中AA1和AA2独立地选自天然存在的氨基酸的侧链。
35.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中L包含PEP，并且PEP是三肽并具有下式：
36.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中L包含PEP，并且PEP是四肽并具有下式：
37.如权利要求36所述的免疫缀合物，其中
AA1选自由Abu、Ala和Val组成的组；
AA2选自由Nle(O-Bzl)、Oic和Pro组成的组；
AA3选自由Ala和Met(O)2组成的组；并且
AA4选自由Oic、Arg(NO2)、Bpa和Nle(O-Bzl)组成的组。
38.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中L包含PEP，并且PEP选自由Ala-Pro-Val、Asn-Pro-Val、Ala-Ala-Val、Ala-Ala-Pro-Ala(SEQ ID NO:473)、Ala-Ala-Pro-Val(SEQ ID NO:474)和Ala-Ala-Pro-Nva(SEQ ID NO:475)组成的组。
39.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中L包含PEP，并且PEP选自以下结构：
40.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中L选自以下结构：
其中波形线指示与R5的附接。
41.如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物具有式Ia：
42.如权利要求41所述的免疫缀合物，其中X4是一键并且R4是H。
43.如权利要求41所述的免疫缀合物，其中Cyc选自由吡啶二基、嘧啶二基、吡唑二基、哌嗪二基、哌啶二基和吡嗪二基组成的组。
44.如权利要求41所述的免疫缀合物，其中X2和X3各自是一键，并且R2和R3独立地选自C1-C8烷基、-O-(C1-C12烷基)、-(C1-C12烷二基)-OR5、-(C1-C8烷二基)-N(R5)CO2R5、-(C1-C12烷基)-OC(O)N(R5)2、-O-(C1-C12烷基)-N(R5)CO2R5和-O-(C1-C12烷基)-OC(O)N(R5)2。
45.如权利要求41所述的免疫缀合物，其中X2是O。
46.如权利要求41所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物选自式Ib-Ii：
/>
/>
47.如权利要求41所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物选自式Ij-In：
/>
48.如权利要求41所述的免疫缀合物，其中X2和X3各自是一键，并且R2和R3独立地选自C1-C8烷基、-O-(C1-C12烷基)、-(C1-C12烷二基)-OR5、-(C1-C8烷二基)-N(R5)CO2R5和-O-(C1-C12烷基)-N(R5)CO2R5。
49.如权利要求41所述的免疫缀合物，其中X2和X3各自是一键，R2是C1-C8烷基，并且R3选自-O-(C1-C12烷基)和-O-(C1-C12烷基)-N(R5)CO2R5。
50.一种选自表2a和表2b的8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓-接头化合物。
51.一种通过抗PD-L1抗体与选自表2a和表2b的8-Cyc-2-氨基苯并氮杂卓-接头化合物的缀合制备的免疫缀合物。
52.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的根据权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，和一种或多种药学上可接受的稀释剂、媒剂、载体或赋形剂。
53.一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中所述癌症选自膀胱癌、尿道癌、尿路上皮癌、肺癌、非小细胞肺癌、默克尔细胞癌、结肠癌、结肠直肠癌、胃癌和乳腺癌。
54.如权利要求53所述的方法，其中所述癌症容易发生由TLR7和/或TLR8激动诱导的促炎反应。
55.如权利要求53所述的方法，其中所述癌症是表达PD-L1的癌症。
56.如权利要求53所述的方法，其中所述乳腺癌是三阴性乳腺癌。
57.如权利要求53所述的方法，其中所述默克尔细胞癌是转移性默克尔细胞癌。
58.如权利要求53所述的方法，其中所述癌症是胃食管连接部腺癌。
59.如权利要求53所述的方法，其中所述免疫缀合物静脉内、肿瘤内或皮下施用于所述患者。
60.如权利要求53所述的方法，其中所述免疫缀合物以约0.01至20mg/kg体重的剂量施用于所述患者。
61.根据权利要求1至49中任一项所述的免疫缀合物用于治疗癌症的用途，其中所述癌症选自宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、食道癌、膀胱癌、尿道癌、尿路上皮癌、肺癌、非小细胞肺癌、默克尔细胞癌、结肠癌、结肠直肠癌、胃癌和乳腺癌。
62.一种制备如权利要求1所述的式I的免疫缀合物的方法，其中使表2a和表2b的所述8-Cyc-2-氨基-噻吩并氮杂卓-接头化合物与所述抗PD-L1抗体缀合。
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