CN116829551A - 免疫调节抗体药物结合物 - Google Patents

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CN116829551A CN202280015408.9A CN202280015408A CN116829551A CN 116829551 A CN116829551 A CN 116829551A CN 202280015408 A CN202280015408 A CN 202280015408A CN 116829551 A CN116829551 A CN 116829551A
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A·G·希尔
E·E·格雷
E·J·卡明斯
P·J·伯克
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Abstract

本发明提供苯并咪唑衍生物和其抗体药物结合物，其用作STING激动剂且可用于治疗各种疾病、例如癌症。

Description

免疫调节抗体药物结合物
相关申请案交叉参考
本申请案主张2021年1月15日提出申请的美国临时申请案第63/138,360号和2021年12月22日提出申请的第63/292,779号(标题都为“免疫调节抗体药物结合物(IMMUNOMODULATORY ANTIBODY-DRUG CONJUGATES)”)的权益，其全部内容都以引用方式并入本文中。
技术领域
本发明涉及化学和医学领域。更特定来说，本发明涉及抗体药物结合物、组合物、其制备和其作为治疗剂的用途。
背景技术
cGAS-STING路径是一种先天性免疫路径，其识别细胞内DNA并触发对于抗病毒和抗肿瘤免疫性较为重要的I型干扰素和炎症性细胞因子反应。在结合DNA时，cGMP-AMP合酶(cGAS)产生STING的内源性配体cGAMP。例如参见维拉纽瓦(Villanueva)，自然评论:药物发现(Nat.Rev.Drug Disc.)2019:18；15。在分子层面上由cGAMP活化时，跨膜STING二聚体从内质网易位到高尔基体(Golgi apparatus)中，最终募集TANK结合激酶1(TBK1)和转录因子干扰素调控因子3(IRF3)，从而诱导I型干扰素(IFN)和炎症反应。参见今野(Konno)等人，细胞(Cell)2013:155；688-698。此先天性免疫路径必须严格调控，这是因为过度cGAS-STING活性与各种自体免疫和炎症性病症有关。参见巴伯(Barber)，自然免疫学评论(Nat.Rev.Immunol.)2015:15；760-770；还参见刘(Liu)等人，新英格兰医学杂志(N.Engl.J.Med.)2014:371；507-518。
外源性STING激动剂可帮助通过激活针对肿瘤的免疫反应以使肿瘤消退来克服免疫抑制性肿瘤微环境。参见孙(Sun)等人，科学(Science)2013:6121；786-791；还参见科拉莱斯(Corrales)和加耶夫斯基(Gajewski)，临床癌症研究(Clinc.Cancer Res.)2015:21；4774-4779。实例包含基于核苷酸的STING激动剂，其如同内源性配体一般是环状二核苷酸。这些化合物通常带电并具有亲水性，易于发生酶促降解，并且具有较差的生物可用性和药物代谢动力学。因此，仍需要具有避免全身性细胞因子诱导的改良药理学性质的STING激动剂。
发明内容
本文所描述的一些实施例涉及抗体药物结合物(ADC)，其可诱发针对靶细胞的局部化免疫反应，并且由此展现减小的脱靶毒性(例如使用经全身性投与的免疫刺激化合物所观察者)。
一些实施例提供一种抗体药物结合物(ADC)，其包括：
抗体；
如本文所描述的连接体；和
如本文所描述的式(I)化合物；
其中式(I)化合物结合到连接体；且
其中每一连接体经由共价连接到抗体的半胱氨酸残基的硫原子的琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺结合到抗体。
一些实施例提供具有下式的抗体药物结合物(ADC)：
Ab-(S*-M1-(D))p
其中：
Ab是抗体；
每一S*是来自所述抗体的半胱氨酸残基的硫原子；
M1是琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺；
下标p是2到8的整数；且
每一(D)是如本文所描述的式(I)药物单元。
在一些实施例中，式(I)具有以下结构：
一些实施例提供式(II)化合物：
一些实施例提供具有下式的抗体药物结合物(ADC)：
Ab-(S*-(D'))p
其中：
Ab是抗体；
每一S*是来自所述抗体的半胱氨酸残基的硫原子；
D'是药物单元，其是如本文所描述的式(IV)化合物的基团；且下标p是2到8的整数。
在一些实施例中，式(IV)具有以下结构：
一些实施例提供式(III)化合物：
一些实施例提供具有式(V)结构的化合物：
一些实施例提供包括如本文所描述的ADC的分布的组合物。
一些实施例提供治疗有需要的个体的癌症的方法，其包括向个体投与治疗有效量的如本文所描述的ADC组合物。
一些实施例提供治疗有需要的个体的癌症的方法，其包括向个体投与治疗有效量的如本文所描述的ADC。
一些实施例提供诱导有需要的个体中的抗肿瘤免疫反应的方法，其包括向个体投与治疗有效量的如本文所描述的ADC组合物。
一些实施例提供诱导有需要的个体中的抗肿瘤免疫反应的方法，其包括向个体投与治疗有效量的如本文所描述的ADC。
附图说明
图1图解说明THP1-DualTM细胞(还称为THP1双重报告细胞)对各种小分子STING激动剂的反应。
图2图解说明野生型(WT)和STING缺陷型鼠类骨髓源巨噬细胞对各种小分子STING激动剂的反应。
图3图解说明THP1双重报告细胞对包括结合到化合物11(可裂解连接体-化合物1)、化合物12(非裂解连接体-化合物12a)或化合物13或14(可裂解连接体-化合物12a)的非靶向或靶向抗体的ADC的反应。
图4图解说明THP1双重报告细胞对化合物12(非裂解连接体-化合物12a)和化合物16(化合物12和从含有化合物12的ADC释放的游离药物的半胱氨酸加合物)的反应。
图5图解说明在培育48小时后THP1双重报告细胞对化合物12a和15b(呈游离药物形式或结合到非结合或靶向抗体(化合物12和15的ADC))的反应。
图6A和6B图解说明SU-DHL-1淋巴瘤细胞对包括结合到化合物11(可裂解连接体-化合物1)的非靶向、抗原C靶向或PD-L1靶向抗体的ADC的反应。将细胞因子产生(MIP-1α)(图6A)和生存力(图6B)绘图。
图7图解说明THP1双重报告细胞(单独培养或与经改造以表达靶抗原C的HEK 293T细胞一起共培养)对包括抗原C靶向mAb(具有结合到化合物12、13或14的hIgG1 LALAPG骨架)的ADC的反应。
图8图解说明使用伦卡癌细胞(Renca cancer cell)和THP1双重报告细胞测得的包括EphA2靶向mAb或非结合mAb(具有结合到化合物12的mIgG2a WT或LALAPG骨架)的ADC的旁观者活性。
图9A和9B图解说明伦卡肿瘤小鼠模型中的q7dx3 ADC投药(3个周剂量)反应以评估包括非结合或EphA2靶向mAb(具有结合到化合物11(经腹膜腔内投用)或化合物1或(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(3-吗啉基丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺三(2,2,2-三氟乙酸盐)(化合物A，参考化合物，经静脉内投用)的mIgG2aLALAPG骨架)的各种ADC。图9A：肿瘤生长；图9B：重量变化％。
图10A和10B图解说明伦卡肿瘤小鼠模型中的q7dx3 ADC投药(3个周剂量)反应以评估包括非结合或EphA2靶向mAb(具有结合到化合物11或12(经腹膜腔内投用)的mIgG2aLALAPG骨架)的各种ADC。图10A：肿瘤生长；图10B：重量变化％。
图11A和11B图解说明伦卡肿瘤小鼠模型(其经改造以表达人类蛋白)中的q7dx3ADC投药(3个周剂量)反应以评估包括非结合或EphA2靶向mAb(具有结合到化合物12或15的mIgG2a野生型(WT)或mIgG2a LALAPG骨架)的各种ADC。图11A：肿瘤生长；图11B：重量变化％。
图12图解说明伦卡肿瘤小鼠模型中的q7dx3投药(3个周剂量，经腹膜腔内)反应以评估包括EphA2靶向mAb(具有结合到化合物12或未结合化合物12a的mIgG2a LALAPG骨架)的ADC。
图13图解说明伦卡肿瘤模型中的各种化合物的q7dx3投药(3个周剂量)反应以评估PD-L1靶向mAb和包括结合到化合物11的非结合、PD-L1靶向或抗原C靶向mAb的各种ADC。
图14图解说明CT26肿瘤模型中的各种化合物的q7dx3投药(3个周剂量)反应以评估未结合化合物1、PD-L1靶向mAb和包括结合到化合物11的非结合、抗原C、PD-L1或EphA2靶向mAb的各种ADC。
图15A-D图解说明MC38肿瘤模型中的所指示ADC的q7dx3(3个周剂量)或单一剂量的反应以评估包括非结合或EphA2靶向mAb(具有结合到化合物12的mIgG2a LALAPG骨架)的各种ADC。使用MC38肿瘤细胞再攻击响应于ADC治疗而实现完全肿瘤消退的小鼠且监测肿瘤生长。图15A：肿瘤生长(WT小鼠)；图15B：重量减轻(WT小鼠)；图15C：肿瘤生长(STING缺陷型Tmem173gt小鼠)；图15D：MC38肿瘤再攻击后的肿瘤生长。
图16A和16B图解说明4T1肿瘤模型中的q7dx3 mAb或ADC投药(3个周剂量，由箭头指示)反应以评估包括非结合或EphA2靶向mAb(具有结合到化合物12的mIgG2aLALAPG骨架)的各种ADC。图16A：肿瘤生长；图16B：重量变化％。
图17图解说明包括结合到化合物12的[去糖基化]非结合mAb的ADC在投与雄性C57BL/6小鼠后的药物代谢动力学特征。
具体实施方式
本文提供抗体药物结合物(ADC)，其可诱发对靶细胞的局部免疫反应且由此(例如)与通常在全身性投与免疫刺激化合物(例如STING激动剂)时所观察的毒性相比减小脱靶毒性。所述化合物的活体内毒性通常与全身性细胞因子活化有关，从而产生在靶和脱靶免疫反应。本文所描述的ADC包含STING激动剂作为药物酬载以提供细胞因子的局部选择性诱导。例如参见米林(Milling)等人，先进药物递送综述(Adv.Drug Deliv.Rev.)2017:114；79-101；还参见胡(Hu)等人，爱思唯尔生物医学(EBioMedicine)2019:41；497-508。此方式可提供特定STING活化以及局部免疫细胞募集，并且同时减少全身性细胞因子释放和其伴随不良效应。
定义
除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语都具有与熟习本发明所属技术领域者通常所理解相同的含义。本文描述用于本申请案中的方法和材料；还可在本发明的一些方面中使用业内已知的其它适宜方法和材料。所述材料、方法和实例仅是阐释性的且并非打算加以限制。本文提到的所有出版物、专利申请案、专利、序列、数据库条目和其它参考文献都以全文引用方式并入。如果出现冲突，那么以本说明书(包含定义)为准。在本文中使用商品名时，除非上下文另外指示，否则商品名包含商品名产品的产品配方、学名药和活性医药成分。
本文所用的术语“一(a、an)”或“所述”不仅包含具有一种成员的方面，并且还包含具有一种以上成员的方面。举例来说，除非上下文另外明确规定，否则单数形式“一(a、an)”和“所述”包含多个指示物。因此，举例来说，提到“连接体”包含提到一或多个此类连接体，并且提到“细胞”包含提及多个此类细胞。
在提到数量或数值范围时，术语“约”意指所提到的数量或数值范围是(例如)实验可变性内和/或统计学实验误差内的近似值，并且由此数量或数值范围的变化可为所述数量或数值范围的最高10％。在提到包括如本文所描述的ADC的分布的ADC组合物时，组合物中的结合到抗体的STING激动剂化合物的平均数量可为整数或非整数，尤其在待部分地加载抗体时。因此，在平均药物载量值之前引用的术语“约”打算体现ADC组合物内的药物载量的预期变化。
本文所用的术语“抗体”涵盖展现所需生物活性的完整单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)，包含完整抗体和抗原结合抗体片段以及一或多个链间二硫键经破坏的其还原形式，并且条件是抗原结合抗体片段具有所需数量的用于所需数量的如本文所描述连接基团(例如连接体(L))的连接位点。在一些方面中，连接体经由琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺连接到经还原链间二硫键的半胱氨酸残基和/或通过基因改造引入的半胱氨酸残基的硫原子。天然抗体形式是四聚体且由两对相同免疫球蛋白链组成，每一对具有一条轻链和一条重链。在每一对中，轻链和重链可变结构域(VL和VH)一起主要负责结合到抗原。轻链和重链可变结构域由间杂有三个超变区(还称为“互补决定区”或“CDR”)的框架区组成。轻链和重链还含有可由免疫系统识别并与其相互作用的恒定区。(例如参见詹韦(Janeway)等人，2001，免疫生物学(Immuno.Biology)，第5版，加兰德出版社(Garland Publishing)，纽约)，抗体包含任何同型(例如IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)或子类(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。抗体可衍生自任何适宜物种。在一些方面中，抗体属于人类或鼠类来源，并且在一些方面中，抗体是人类、人源化或嵌合抗体。抗体可岩藻糖基化到不同程度或无岩藻糖基化。
“完整抗体”是包括抗原结合可变区以及轻链恒定结构域(CL)和重链恒定结构域(CH1、CH2、CH3和CH4，视抗体种类需要)。恒定结构域是天然序列恒定结构域(例如人类天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。
“抗体片段”包括完整抗体的一部分(包括其抗原结合或可变区)。本发明的抗体片段包含至少一个提供连接体和/或连接体药物化合物的连接位点的半胱氨酸残基(天然或经改造)。在一些实施例中，抗体片段包含Fab、Fab′或F(ab′)2。
如本文中所使用，术语“经改造半胱氨酸残基”或“eCys残基”是指纳入抗体中的半胱氨酸氨基酸或其衍生物。在那些方面中，一或多个eCys残基可纳入抗体中，并且通常，eCys残基纳入抗体的重链或轻链中。通常，通过诱变亲代抗体的核酸序列以编码一或多个含有半胱氨酸或其衍生物的氨基酸残基来将eCys残基纳入抗体中。。适宜突变包含使用半胱氨酸或其衍生物代替抗体的轻链或重链中的所需残基，在抗体的轻链或重链中的所需位置处纳入额外半胱氨酸或其衍生物，以及将额外半胱氨酸或其衍生物添加到氨基酸的所需重链或轻链的N-末端和/或C-末端。其它信息可参见美国专利第9,000,130号，所述专利的内容全文并入本文中。半胱氨酸(Cys)的衍生物包含(但不限于)β-2-Cys、β-3-Cys、高半胱氨酸和N-甲基半胱氨酸。
在一些实施例中，本发明抗体包含具有一或多个经改造半胱氨酸(eCys)残基者。在一些实施例中，半胱氨酸(Cys)的衍生物包含(但不限于)β-2-Cys、β-3-Cys、高半胱氨酸和N-甲基半胱氨酸。
“抗原”是抗体所特异性地结合的实体。
术语“特异性结合”和“特异性地结合”意指，抗体或其抗体片段以选择性方式与其相应靶抗原结合且不与多种其它抗原结合。通常，抗体或抗体片段以至少约1×10-7M(例如10-8M到10-9M、10-10M、10-11M或10-12M)的亲和力进行结合，并且以至少两倍于其结合到除预定抗原或密切相关抗原外的非特异性抗原(例如BSA、酪蛋白)的亲和力的亲和力结合到预定抗原。
本文所用的术语“氨基酸”是指天然和非天然以及蛋白原性氨基酸。实例性氨基酸包含(但不限于)丙氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、天门冬酰氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、鸟氨酸、β-丙氨酸、瓜氨酸、丝氨酸甲醚、天门冬氨酸甲酯、谷氨酸甲酯、高丝氨酸甲醚和N,N-二甲基赖氨酸。
本文所用的“糖部分”是指单糖(例如吡喃糖或呋喃糖)的单价基团。糖部分可包括半缩醛或羧酸(来自悬垂-CH2OH基团的氧化)。在一些实施例中，糖部分呈β-D构形。在一些实施例中，糖部分是葡萄糖、葡萄糖醛酸或甘露糖基团。
术语“抑制(inhibit或inhibition of)”意指减小可测量量或完全预防(例如100％抑制)。
术语“治疗有效量”是指如本文所描述的ADC的有效治疗哺乳动物的疾病或病症的量。在癌症情形下，治疗有效量的ADC提供下列生物效应中的一或多者：减小癌细胞数；减小肿瘤大小；抑制癌细胞浸润到周边器官中；抑制肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻一或多种与癌症有关的症状。对于癌症疗法来说，在一些方面中，通过评价疾病进展时间(TTP)和/或测定反应率(RR)来测量效能。
除非上下文另外指示或暗示，否则术语“实质性”或“大体上”是指大部分(也就是>50％)的群体、混合物或试样，通常是大于50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。
术语“经细胞内裂解”和“细胞内裂解”是指发生于细胞内部的代谢过程或反应，其中细胞机制作用于ADC或其片段上以在细胞内从ADC释放游离药物或其其它降解产物。源自代谢过程或反应的部分由此是细胞内代谢物。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中特征通常在于细胞生长失调的生理学病状或病症。“肿瘤”包括多种癌细胞。
本文所用的“个体”是指投与ADC的个体。“个体”的实例包含(但不限于)哺乳动物，例如人类、大鼠、小鼠、天竺鼠、非人类灵长类动物、猪、山羊、牛、马、狗、猫、鸟和家禽。通常，个体是大鼠、小鼠、狗、非人类灵长类动物或人类。在一些方面中，个体是人类。
除非上下文另外指示或暗示，否则术语“治疗(treat或treatment)”是指治疗性治疗和用以预防复发的防治性措施，其中目标在于抑制不需要的生理学变化或病症(例如癌症的发生或扩散)。出于本发明目的，有益或所需临床结果包含(但不限于)缓解症状、减小疾病范围、稳定疾病状态(也就是不恶化)、延迟或减缓疾病进展、改善或缓和疾病状态和可检测或不可检测地缓解病情(部分或全部)。在一些方面中，“治疗”还意指与不接受治疗的预期存活相比延长存活。
在癌症背景中，术语“治疗”包含以下各项中的任一者或全部：抑制癌细胞或肿瘤的生长；抑制癌细胞复制；减小整体肿瘤负荷或降低癌细胞数；和改善一或多种与疾病有关的症状。
本文所用的术语“盐”是指化合物(例如药物单元(D)、连接体(例如本文所描述者)或ADC)的有机或无机盐。在一些方面中，化合物含有至少一个氨基，并且由此可与氨基形成酸加成盐。实例性盐包含(但不限于)硫酸盐、三氟乙酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、延胡索酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖二酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(也就是1,1’-亚甲基-双-(2-羟基3-萘酸盐))。盐可涉及纳入另一分子，例如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其它相对离子。相对离子可为稳定母体化合物上的电荷的任何有机或无机部分。另外，盐在其结构中具有一个或一个以上带电原子。在存在多个作为盐部分的带电原子的情况下，可存在多个相对离子。因此，盐可具有一或多个带电原子和/或一或多个相对离子。“医药上可接受的盐”是适于投与如本文所描述的个体者且在一些方面中包含如由P.H.斯塔尔(P.H.Stahl)和C.G.韦穆特(C.G.Wermuth)(编者)，医药盐手册：性质、选择和应用(Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection and Use)，魏因海姆(Weinheim)/苏黎世(Zürich)：威利(Wiley)-VCH/VHCA,2002所描述的盐，其清单的全部内容以引用方式明确并入本文中。
本文所用的术语“互变异构体”是指结构的原子配置显著不同但易于快速平衡存在的化合物，并且应理解，本文所提供的化合物可绘示为不同互变异构体，并且在化合物具有互变异构体形式时，所有互变异构体形式打算属于本发明范围内，并且化合物的命名不排除任何互变异构体。
术语“卤基”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语“烷基”是指具有指示数量的碳原子(举例来说，“C1-C4烷基”、“C1-C6烷基”、“C1-C8烷基”或“C1-C10”烷基分别具有1到4、1到6、1到8或1到10个碳原子)的未取代直链或具支链饱和烃，并且是通过从母体烷烃去除一个氢原子衍生。代表性直链“C1-C8烷基”包含(但不限于)甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基和正辛基；而具支链C1-C8烷基包含(但不限于)异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、异戊基和2-甲基丁基。
术语“亚烷基”是指具有规定数量的碳原子(举例来说，C1-C6亚烷基具有1到6个碳原子)且具有两个单价自由基中心的二价未取代饱和具支链或直链烃，所述单价自由基中心是通过从母体烷烃的相同或两个不同碳原子去除两个氢原子所衍生。亚烷基可(例如)在碳主链上(如-CHF-或-CF2-)或在直链或具支链亚烷基的末端碳上(例如-CHF2或-CF3)经1-6个氟基取代。亚烷基包含(但不限于)：亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚正丙基(-CH2CH2CH2-)、亚正丙基(-CH2CH2CH2-)、亚正丁基(-CH2CH2CH2CH2-)、二氟亚甲基(-CF2-)、四氟亚乙基(-CF2CF2-)和诸如此类。
术语“烯基”是指具有至少一个碳-碳双键和指示数量的碳原子(举例来说，“C2-C8烯基”或“C2-C10”烯基分别具有2到8或2到10个碳原子)的未取代直链或具支链烃。在未指示碳原子数时，烯基具有2到6个碳原子。
术语“炔基”是指具有至少一个碳-碳三键和指示数量的碳原子(举例来说，“C2-C8炔基”或“C2-C10”炔基分别具有2到8或2到10个碳原子)的未取代直链或具支链烃。在未指示碳原子数时，炔基具有2到6个碳原子。
术语“杂烷基”是指具有规定数量的总原子和至少一个(例如1到15个)选自由O、N、Si和S组成的群组的杂原子的稳定直链或具支链饱和烃。杂烷基的碳和杂原子可经氧化(例如用以形成酮、N-氧化物、砜和诸如此类)且氮原子可经季铵化。杂原子可位于杂烷基的任何内部位置处和/或位于杂烷基连接到分子其它部分的位置处。杂烷基可(例如)在碳主链上(如-CHF-或-CF2-)或在直链或具支链杂烷基的末端碳上(例如-CHF2或-CF3)经1-6个氟基取代。杂烷基的实例包含(但不限于)-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)2、-C(＝O)-NH-CH2-CH2-NH-CH3、-C(＝O)-N(CH3)-CH2-CH2-N(CH3)2、-C(＝O)-NH-CH2-CH2-NH-C(＝O)-CH2-CH3、-C(＝O)-N(CH3)-CH2-CH2-N(CH3)-C(＝O)-CH2-CH3、-O-CH2-CH2-CH2-NH(CH3)、-O-CH2-CH2-CH2-N(CH3)2 、 -O-CH2-CH2-CH2-NH-C(＝O)-CH2-CH3 、-O-CH2-CH2-CH2-N(CH3)-C(＝O)-CH2-CH3 、 -CH2-CH2-CH2-NH(CH3) 、-O-CH2-CH2-CH2-N(CH3)2 、 -CH2-CH2-CH2-NH-C(＝O)-CH2-CH3 、-CH2-CH2-CH2-N(CH3)-C(＝O)-CH2-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2-S(O)-CH3、-NH-CH2-CH2-NH-C(＝O)-CH2-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH2-CH2-O-CF3和-Si(CH3)3。可连续存在最多两个杂原子，例如-CH2-NH-OCH3和-CH2-O-Si(CH3)3。末端聚乙二醇(PEG)部分是一类杂烷基。
术语“亚杂烷基”是指衍生自杂烷基(如本文所定义)的二价未取代直链或具支链基团。亚杂烷基的实例包含(但不限于)-CH2-CH2-O-CH2-、-CH2-CH2-O-CF2-、-CH2-CH2-NH-CH2-、-C(＝O)-NH-CH2-CH2-NH-CH2-、-C(＝O)-N(CH3)-CH2-CH2-N(CH3)-CH2-、-C(＝O)-NH-CH2-CH2-NH-C(＝O)-CH2-CH2-、-C(＝O)-N(CH3)-CH2-CH2-N(CH3)-C(＝O)-CH2-CH2-、-O-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-、-O-CH2-CH2-CH2-N(CH3)-CH2-、 -O-CH2-CH2-CH2-NH-C(＝O)-CH2-CH2-、-O-CH2-CH2-CH2-N(CH3)-C(＝O)-CH2-CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-NH-CH2- 、-CH2-CH2-CH2-N(CH3)-CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-NH-C(＝O)-CH2-CH2- 、-CH2-CH2-CH2-N(CH3)-C(＝O)-CH2-CH2-、-CH2-CH2-NH-C(＝O)-、-CH2-CH2-N(CH3)-CH2-、-CH2-CH2-N+(CH3)2-、-NH-CH2-CH2(NH2)-CH2-和-NH-CH2-CH2(NHCH3)-CH2-。二价聚乙二醇(PEG)部分是一类亚杂烷基。
术语“烷氧基”是指经由氧原子连接到分子的如本文所定义的烷基。举例来说，烷氧基包含(但不限于)甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和正己氧基。
术语“烷硫基”是指经由硫原子连接到分子的如本文所定义的烷基。举例来说，烷硫基包含(但不限于)硫甲基、硫乙基、硫正丙基、硫异丙基和诸如此类。
术语“卤代烷基”是指具有指示数量的碳原子(举例来说，“C1-C4烷基”、“C1-C6烷基”、“C1-C8烷基”或“C1-C10”烷基分别具有1到4、1到6、1到8或1到10个碳原子)的未取代直链或具支链饱和烃，其中烷基的至少一个氢原子由卤素(例如氟、氯、溴或碘)代替。在未指示碳原子数时，卤代烷基具有1到6个碳原子。代表性C1-6卤代烷基包含(但不限于)三氟甲基、2,2,2-三氟乙基和1-氯异丙基。
术语“卤代烷氧基”是指经由氧原子连接到分子的如本文所定义的卤代烷基。举例来说，卤代烷氧基包含(但不限于)三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基和1,1,1-三氟2-甲基丙氧基。
术语“环烷基”是指具有指示数量的碳原子(举例来说，“C3-8环烷基”或“C3-6”环烷基分别具有3到8或3到6个碳原子)的环状、饱和或部分不饱和烃。在未指示碳原子数时，环烷基具有3到6个碳原子。环烷基包含桥接、稠合和螺环系统以及一个环是芳香族且另一环不饱和的桥接双环系统。代表性“C3-6环烷基”包含环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
术语“芳基”是指具有6-10个碳原子的未取代单价碳环芳香族烃基团，其是通过从母体芳香族环系统的单一碳原子去除一个氢原子所衍生。芳基包含(但不限于)苯基、萘基、蒽基、联苯和诸如此类。
术语“杂环”是指饱和或部分不饱和环或多稠合环系统，包含桥接、稠合和螺环系统。杂环可由环系统中的总原子数来描述，举例来说，3-10元杂环总共具有3到10个环原子。所述术语包含在环中具有约1到6个碳原子和约1到3个选自由氧、氮和硫组成的群组的杂原子的单一饱和或部分不饱和环(例如3、4、5、6或7元环)。环可经一或多个(例如1、2或3个)氧代基取代且硫和氮原子还可以其氧化形式存在。所述环包含(但不限于)氮杂环丁基、四氢呋喃基和哌啶基。术语“杂环”还包含多稠合环系统(例如包括2、3或4个环的环系统)，其中单一杂环(如上文所定义)可与一或多个杂环(例如十氢萘啶基)、碳环(例如十氢喹啉基)或芳基缩合。在化合价要求容许时，多稠合环系统的各环可经由稠合、螺和桥接键彼此连结。应理解，多稠合环系统(如上文针对杂环所定义)的连接点可位于多稠合环系统的任何位置处，包含所述环的杂环、芳基和碳环部分。还应理解，杂环或杂环多稠合环系统的连接点可位于杂环或杂环多稠合环系统的任何适宜原子处，包含碳原子和杂原子(例如氮)。实例性杂环包含(但不限于)氮丙啶基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、高哌啶基、吗啉基、硫吗啉基、哌嗪基、四氢呋喃基、二氢恶唑基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、1,2,3,4-四氢喹啉基、苯并恶嗪基、二氢恶唑基、色烷基、1,2-二氢吡啶基、2,3-二氢苯并呋喃基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基和1,4-苯并二恶烷基。
术语“杂芳基”是指在单一环内或稠合环系统内具有至少一个选自由O、N和S组成的群组的杂原子的芳香族烃环系统。环或环系统在共轭π系统中具有4n+2个电子，其中所有对共轭π系统有贡献的原子都位于同一平面中。在一些实施例中，杂芳基具有总共5-10个环原子和1、2或3个杂原子(称为“5-10元杂芳基”)。杂芳基包含(但不限于)咪唑、三唑、噻吩、呋喃、吡咯、苯并咪唑、吡唑、吡嗪、吡啶、嘧啶和吲哚。
术语“羟基”是指-OH基团。
术语“氰基”是指-CN基团。
术语“羧基”是指-C(＝O)OH基团。
术语“氧代基”是指＝O基团。
用作抗体药物结合物(ADC)的一部分的术语“琥珀酰亚胺”是指：
用作抗体药物结合物(ADC)的一部分的术语“水解的琥珀酰亚胺”是指：
所属领域技术人员应了解，具有对掌性中心的本发明化合物可以光学活性和外消旋形式存在和分离。
如本文中所使用，术语“游离药物”是指不共价连接到抗体的生物活性物质。因此，游离药物是指任何未结合化合物，包含在从ADC裂解后立即存在的化合物。释放机制可为经由ADC中的可裂解连接体或经由ADC的细胞内转化或代谢。在一些方面中，游离药物将发生质子化和/或可以带电部分形式存在。游离药物是能够施加所需生物效应的药理学活性物质。在一些实施例中，药理学活性物质是单独的母体药物。在一些实施例中，药理学活性物质是键结到ADC的组分或残留物(例如连接体、琥珀酰亚胺、水解的琥珀酰亚胺和/或抗体中不发生后续细胞内代谢的组分)的母体药物。在一些实施例中，游离药物是指(例如)如本文所描述的式(I)化合物，其中XB、Y、W、A和M1中的一或多者不存在。在一些实施例中，游离药物是指如本文所描述的式(II)化合物。在一些实施例中，游离药物是指如本文所描述的式(II-A)化合物。在一些实施例中，游离药物是指如本文所描述的式(III)化合物。在一些实施例中，游离药物是指如本文所描述的式(IV)化合物。在一些实施例中，游离药物是指如本文所描述的式(V)化合物。
如本文中所使用，术语“药物单元”是指如本文所描述的ADC中的结合到抗体的游离药物。
抗体药物结合物(ADC)化合物
一些实施例提供一种抗体药物结合物(ADC)，其包括：
抗体；
如本文所描述的连接体；和
如本文所描述的式(I)化合物；
其中式(I)化合物结合到连接体；且
其中每一连接体经由共价连接到半胱氨酸残基的硫原子的琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺结合到抗体。
一些实施例提供具有下式的抗体药物结合物(ADC)：
Ab-(S*-M1-(D))p
其中：
Ab是抗体；
每一S*是来自所述抗体的半胱氨酸残基的硫原子；
M1是琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺；
下标p是2到8的整数；且
每一(D)是式(I)药物单元：
其中：
代表L与M1的共价连接；
R1是氢、羟基、C1-6烷氧基、-(C1-6烷基)C1-6烷氧基、-(CH2)n-NRARB或PEG2到PEG4；
每一R2和R3独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；
每一RA、RB、RC、RD、RE和RF独立地是氢或C1-3烷基；
每一下标n独立地是0到6的整数；
每一下标m独立地是0或1；
每一下标q是0到6的整数；
XA是-CH2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH3)-；
XB不存在或是2到16元亚杂烷基；
XB、M1和L各自独立地任选地经从PEG1到PEG72的PEG单元取代；且
L是如本文所描述的可选连接体。在存在时，L经由共价键连接到XB或XA(如果XB不存在)，如式(I)中所绘示。在L不存在时，M1经由共价键连接到XB或XA(如果XB不存在)，如式(I)中所绘示。
在一些实施例中，M1是琥珀酰亚胺。在一些实施例中，M1是水解的琥珀酰亚胺。应理解，水解的琥珀酰亚胺可以两种区域异构体形式存在。下文针对键结到*S-Ab的M1的水解来例示那些形式，其中代表来自所述水解的区域异构体的结构是式M1a和M1b；其中毗邻键的波浪线代表与式(I)的共价连接。
M或M1基团在存在时能够将抗体连接到A基团(在存在时)(或如果下标a和/或下标w和/或下标y为0，那么连接到W、Y或XB基团)。就此来说，抗体具有可与M或M1的官能团形成键的官能团。可天然或通过化学操作存在于抗体上的有用官能团包含(但不限于)硫氢基(-SH)、氨基、羟基、羧基和碳水化合物的变旋异构羟基。在一方面中，抗体官能团是硫氢基和氨基。可通过还原抗体的分子内二硫键来生成硫氢基。或者，硫氢基可通过使用2-亚胺基四氢噻吩(乔特试剂(Traut's reagent))或另一硫氢基生成剂使抗体中的赖氨酸部分的氨基发生反应来生成。在一些实施例中，M或M1与抗体的硫原子形成键。硫原子可衍生自抗体的硫氢基。
在一些实施例中，L具有式-(A)a-(W)w-(Y)y-，其中：
A是任选地经1到3个Ra1取代的C2-20亚烷基或任选地经1到3个Rb1取代的2到40元亚杂烷基；
每一Ra1独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、＝O、-NRd1Re1、-C(O)NRd1Re1、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rb1独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、-NRd1Re1、-C(O)NRd1Re1、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rd1和Re1独立地是氢或C1-3烷基；
W是1到12个氨基酸或具有以下结构：
其中Su是糖部分；
-OA-代表糖苷键；
每一Rg独立地是氢、卤素、-CN或-NO2；
W1不存在或是-O-C(＝O)-；
代表与A或M1的共价连接；
*代表与式(I)中的Y、XA或XB的共价连接；
Y是自分解部分、非自分解可释放部分或非裂解部分；
下标a为0或1；
下标y为0或1；且
下标w为0或1。
在一些实施例中，R1是氢。在一些实施例中，R1是羟基。在一些实施例中，R1是C1-6烷氧基。在一些实施例中，R1是甲氧基。在一些实施例中，R1是-(C1-6烷基)C1-6烷氧基。在一些实施例中，R1是甲氧基乙基。在一些实施例中，R1是PEG2到PEG4。
在一些实施例中，R1是-(CH2)n-NRARB。在一些实施例中，RA和RB都是氢。在一些实施例中，RA和RB独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RA和RB中的一者是氢且RA和RB中的另一者是C1-3烷基。在一些实施例中，C1-3烷基是甲基。在一些实施例中，每一下标n为0。在一些实施例中，每一下标n为1。在一些实施例中，每一下标n为2。在一些实施例中，每一下标n为3、4、5或6。
在一些实施例中，每一R2和R3独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2和R3相同。在一些实施例中，每一R2和R3独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2和R3不同。
在一些实施例中，R2是-(C＝O)m-NRCRD。在一些实施例中，R3是-(C＝O)m-NRCRD。在一些实施例中，RC和RD都是氢。在一些实施例中，RC和RD各自独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，C1-3烷基是甲基。在一些实施例中，RC和RD中的一者是氢且RC和RD中的另一者是C1-3烷基。在一些实施例中，每一下标m为0。在一些实施例中，每一下标m为1。
在一些实施例中，R2是-(CH2)q-NRERF。在一些实施例中，R3是-(CH2)q-NRERF。在一些实施例中，RE和RF都是氢。在一些实施例中，RE和RF各自独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，C1-3烷基是甲基。在一些实施例中，RE和RF中的一者是氢且RE和RF中的另一者是C1-3烷基。在一些实施例中，每一下标q为0。在一些实施例中，每一下标q是1到6的整数。在一些实施例中，每一下标q为1。在一些实施例中，每一下标q为2。在一些实施例中，每一下标q为3、4、5或6。
在一些实施例中，R3是-CO2H。在一些实施例中，R2是-CO2H。
在一些实施例中，XA是-CH2-。在一些实施例中，XA是-O-。在一些实施例中，XA是-S-。在一些实施例中，XA是-NH-。在一些实施例中，XA是-N(CH3)-。
在一些实施例中，XB是2-16元亚杂烷基。在一些实施例中，XB是2-12元亚杂烷基。在一些实施例中，XB是2-10元亚杂烷基。在一些实施例中，XB是2-8元亚杂烷基。在一些实施例中，XB是4-8元亚杂烷基。在一些实施例中，亚杂烷基是直链的。在一些实施例中，亚杂烷基具支链。在一些实施例中，亚杂烷基是具支链的且具有1-4个甲基。在一些实施例中，亚杂烷基是具支链的且具有1或2个甲基。在一些实施例中，亚杂烷基经1-3个氟基取代。在一些实施例中，XB包括一或两个氮原子。在一些实施例中，XB包括一或两个氧代基。在一些实施例中，XB包括一个氮原子和一个氧代基。在一些实施例中，XB包括两个氮原子和两个氧代基。在一些实施例中，XB包括氨基甲酸酯。
在一些实施例中，Y和XB的共价连接包括酰胺。在一些实施例中，Y和XB的共价连接包括氨基甲酸酯。在一些实施例中，Y和XB的共价连接包括醚。
在一些实施例中，XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L(在存在时)或M1的共价连接。在一些实施例中，XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L(在存在时)或M1的共价连接。在一些实施例中，XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L(在存在时)或M1的共价连接。在一些实施例中，XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L(在存在时)或M1的共价连接。在一些实施例中，XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L(在存在时)或M1的共价连接。在一些实施例中，XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L(在存在时)或M1的共价连接。
在一些实施例中，XB是选自由下文结构组成的群组，其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L(在存在时)或M1的共价连接。
在一些实施例中，XB和L中的一者经如本文所描述的从PEG1到PEG72的PEG单元取代。在一些实施例中，XB和L各自经如本文所描述的从PEG2到PEG72的独立选择的PEG单元取代。在一些实施例中，从PEG 1到PEG72的每一PEG单元可为PEG8到PEG12、PEG12到PEG24或PEG36到PEG72。在一些实施例中，从PEG 1到PEG72的每一PEG单元是PEG8到PEG24。
在一些实施例中，XB和L未经取代。
在一些实施例中，R1是甲氧基；R2和R3都是-C(＝O)NH2；且XA是-O-。
在一些实施例中，L不存在且XA-XB-M1是选自由以下组成的群组：
其中代表与式(I)的其它部分的共价连接。
在一些实施例中，XA-XB-L是选自：
其中代表与式(I)的其它部分的共价连接。
在一些实施例中，R1是甲氧基且R2和R3都是-C(＝O)NH2。在一些实施例中，XA是-O-且XB是其中代表与XA的共价连接且*代表与L(在存在时)或M1的共价连接。在一些实施例中，R1是甲氧基；R2和R3都是-C(＝O)NH2；XA是-O-；且XB是其中代表与XA的共价连接且*代表与L(在存在时)或M1的共价连接。在一些实施例中，R1是甲氧基；R2和R3都是-C(＝O)NH2；XA是-O-；XB是 代表与XA的共价连接且*代表与L的共价连接；且下标a和下标y都为0。
在一些实施例中，XB不存在。
在一些实施例中，下标p是2到8、2到6、2到4、4到8或6到8的整数。在一些实施例中，下标p为2、4、6或8。在一些实施例中，下标p为2。在一些实施例中，下标p为4。在一些实施例中，下标p为6。在一些实施例中，下标p为8。
在一些实施例中，XB不存在且L共价连接到XA。在一些实施例中，XB不存在且Y共价连接到XA。在一些实施例中，XB不存在且Y不存在，并且W共价连接到XA。在一些实施例中，XB不存在，Y不存在，W不存在，并且A共价连接到XA。
在一些实施例中，XB是2-16元亚杂烷基且L共价连接到XB。在一些实施例中，XB是2-16元亚杂烷基且Y共价连接到XB。在一些实施例中，XB是2-16元亚杂烷基，Y不存在，并且W共价连接到XB。在一些实施例中，XB是2-16元亚杂烷基，Y不存在，W不存在，并且A共价连接到XB。
在一些实施例中，W1是-OC(＝O)-且下标y为1。在一些实施例中，XA是-O-且XB和W1不存在。在一些实施例中，XA是NH或-O-，XB不存在，并且W1是-OC(＝O)。在一些实施例中，XA是-N(CH3)-，XB不存在，并且W1是-OC(＝O)。在一些实施例中，XA是-S-，XB不存在，并且W1是-OC(＝O)。在一些实施例中，W1是-OC(＝O)-且XB经由-O-或-NH-共价连接到W。
在一些实施例中，A共价连接到M1。在一些实施例中，在下标a为0时，W共价连接到M1。在一些实施例中，在下标a为0且下标w为0时，Y共价连接到M1。在一些实施例中，在下标a、y和w各自为0时，XB共价连接到M1。
在一些实施例中，ADC具有下式：
其中：
Ab是抗体；
R1、R2、R3、XA、XB和L是如上文结合式(I)所定义；且
每一下标p独立地是2到8的整数。
在一些方面中，ADC具有下式：
其中：
Ab是抗体；
R1、R2、R3、XA、XB和L是如上文结合式(I)所定义；且
每一下标p独立地是2到8的整数。
在一些方面中，ADC具有下式：
其中：
Ab是抗体；
R1、R2、R3、XA、XB、Y、W和A是如上文结合式(I)所定义；
每一下标y独立地是0或1；
每一下标w独立地是0或1；
每一下标a独立地是0或1；且
每一下标p独立地是2到8的整数。
在一些实施例中，ADC具有下式：
其中：
Ab是抗体；
R1、R2、R3、LA、RN、Y、W和LB是如下文结合式(II-A)所定义；
每一下标y独立地是0或1；
每一下标w独立地是0或1；且
每一下标p独立地是2到8的整数。
在一些方面中，ADC具有下式：
其中：
Ab是抗体；
R1、R2、R3、LA、RN、Y、W和LB是如下文结合式(II-A)所定义；
每一下标y独立地是0或1；
每一下标w独立地是0或1；且
每一下标p独立地是2到8的整数。
在一些实施例中，ADC具有下式：
其中：
Ab是抗体；
R1、R2、R3、LA、RN和LB是如下文结合式(II-B)所定义；且
每一下标p独立地是2到8的整数。
在一些方面中，ADC具有下式：
其中：
Ab是抗体；
R1、R2、R3、LA、RN和LB是如下文结合式(II-B)所定义；且
每一下标p独立地是2到8的整数。
一些实施例提供具有下式的抗体药物结合物(ADC)：
Ab-(S*-(D'))p
其中：
Ab是抗体；
每一S*是来自所述抗体的半胱氨酸残基的硫原子；
D'是药物单元，其是如下文所描述的式(IV)化合物的基团；且
下标p是2到8的整数。
在一些实施例中，式(IV)化合物的基团包括式(IV)内的取代基中的M基团。在一些实施例中，药物单元D'具有以下结构：
其中***指示与S*的连接且其它变量是如下文结合式(IV)所定义。
在一些方面中，药物单元D'具有以下结构：
其中***指示与S*的连接且其它变量是如下文结合式(IV)所定义。
在一些实施例中，ADC具有下式：
其中：
Ab是抗体；
每一下标p独立地是2到8的整数；且
其它变量是如下文结合式(IV)所定义。
在一些方面中，ADC具有下式：
其中：
Ab是抗体；
每一下标p独立地是2到8的整数；且
其它变量是如下文结合式(IV)所定义。
一些实施例提供选自由以下组成的群组的抗体药物结合物(ADC)：
和其医药上可接受的盐，
其中：
Ab是抗体；且
每一下标p独立地是2到8的整数。
抗体
在一些实施例中，抗体是多克隆抗体。在一些实施例中，抗体是单克隆抗体。在一些实施例中，抗体是嵌合抗体。在一些实施例中，抗体是人源化抗体。在一些实施例中，抗体是全人类抗体。在一些实施例中，抗体是抗原结合片段。
本文所用的术语“单克隆抗体”是指从大体上均质抗体的群体获得的抗体，也就是，除可少量存在的可能天然突变外，构成所述群体的个别抗体都相同。单克隆抗体具有高度特异性，其针对单一抗原位点。修饰词“单克隆”指示抗体的特征在于从大体上同质的抗体群体获得，并且不应理解为需要通过任何特定方法来产生所述抗体。
有用多克隆抗体是衍生自免疫化动物的血清的抗体分子的异质群体。有用单克隆抗体是特定抗原决定子(例如癌细胞抗原、蛋白质、肽、碳水化合物、化学物、核酸或其片段)的抗体的均质群体。可通过使用业内已知的任何技术来制备所关注抗原的单克隆抗体(mAb)，所述技术可通过培养中的连续细胞系来产生抗体分子。
有用单克隆抗体包含(但不限于)人类单克隆抗体、人源化单克隆抗体或嵌合人类-小鼠(或其它物种)单克隆抗体。抗体包含全长抗体和其抗原结合片段。人类单克隆抗体可通过业内已知的诸多技术中的任一者制得(例如滕(Teng)等人，1983，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.)80:7308-7312；科兹博(Kozbor)等人，1983，今日免疫学(Immunology Today)4:72-79；和奥尔森(Olsson)等人，1982，酶学方法(Meth.Enzymol.)92:3-16)。
在一些实施例中，抗体包含特异性结合到靶细胞(例如癌细胞抗原)的功能活性抗体片段、衍生物或类似物或结合到癌细胞或基质的其它抗体。就此来说，“功能活性”意指，片段、衍生物或类似物能够特异性结合到靶细胞。为确定结合抗原的CDR序列，通常将含有CDR序列的合成肽用于抗原结合分析(通过业内已知的任何结合分析方法，例如比亚科尔分析(Biacore assay))中(例如参见卡巴特(Kabat)等人，1991，具有免疫学重要性的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第五版，国家卫生研究院(National Institute of Health)，贝塞斯达(Bethesda)，马里兰州(Md)；卡巴特E等人，1980，免疫学杂志(J.Immunology)125(3):961-969)。
另外，通常使用标准重组DNA技术获得的包括人类和非人类部分的重组抗体(例如嵌合和人源化单克隆抗体)是有用抗体。嵌合抗体是不同部分衍生自不同动物物种的分子，例如具有衍生自鼠类单克隆人类免疫球蛋白的可变区和衍生自人类免疫球蛋白的恒定区者。例如参见美国专利第4,816,567号；和美国专利第4,816,397号，其全部内容以引用方式并入本文中。人源化抗体是来自非人类物种的抗体分子，其具有一或多个来自非人类物种的CDR和来自人类免疫球蛋白分子的框架区。例如参见美国专利第5,585,089号，其全部内容以引用方式并入本文中。所述嵌合和人源化单克隆抗体可通过业内已知的重组DNA技术产生，例如使用以下文献中所描述的方法：国际公开案第WO 87/02671号；欧洲专利公开案第0 184 187号；欧洲专利公开案第0 171 496号；欧洲专利公开案第0 173 494号；国际公开案第WO 86/01533号；美国专利第4,816,567号；欧洲专利公开案第012 023号；伯特(Berter)等人，1988，科学(Science)240:1041-1043；刘(Liu)等人，1987，美国国家科学院院刊84:3439-3443；刘等人，1987，免疫学杂志(J.Immunol.)139:3521-3526；孙(Sun)等人，1987，美国国家科学院院刊84:214-218；西村(Nishimura)等人，1987，癌症研究(Cancer.Res.)47:999-1005；伍德(Wood)等人，1985，自然(Nature)314:446-449；和肖(Shaw)等人，1988，国立癌症研究所杂志(J.Natl.Cancer Inst.)80:1553-1559；莫里森(Morrison)，1985，科学229:1202-1207；奥伊(Oi)等人，1986，生物技术(BioTechniques)4:214；美国专利第5,225,539号；琼斯(Jones)等人，1986，自然321:522-525；韦霍延(Verhoeyan)等人，1988，科学239:1534；和贝德勒(Beidler)等人，1988，免疫学杂志141:4053-4060，所述文献中的每一者的全部内容以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，抗体是完全人类抗体。在一些实施例中，使用不能表达内源性免疫球蛋白重链和轻链基因但能够表达人类重链和轻链基因的转基因小鼠来产生抗体。
在一些实施例中，抗体是完整或完全还原的抗体。术语“完全还原”要指所有4个链间二硫键联都已还原以提供8个可连接到连接体(L)的硫醇的抗体。
与抗体的连接可经由来自天然和/或经改造半胱氨酸残基或来自经改造以参与与相应连接体中间体的环加成反应(例如点击反应)的氨基酸残基的硫醚键联。例如参见马尔勒(Maerle)等人，公共科学图书馆-综合(PLOS One)2019:14(1)；e0209860。在一些实施例中，抗体是完整或完全还原的抗体，或是具有经可参与(例如)点击化学或其它环加成反应(用于连接如本文所描述的ADC的其它组分，例如狄尔斯-阿尔德反应(Diels-Alderreaction)或其它[3+2]或[4+2]环加成)的官能团修饰的经改造半胱氨酸基团的抗体。
特异性结合到癌细胞抗原的抗体市面有售或通过所属领域技术人员已知的任何方法(例如化学合成或重组表达技术)来产生。编码特异性结合到癌细胞抗原的抗体的核苷酸序列可(例如)从基因库数据库或类似数据库、文献公开案或通过常规克隆和定序来获得。
在一些实施例中，抗体可用于治疗癌症(例如由FDA和/或EMA批准的抗体)。特异性结合到癌细胞抗原的抗体市面有售或通过所属领域技术人员已知的任何方法(例如重组表达技术)来产生。编码特异性结合到癌细胞抗原的抗体的核苷酸序列可(例如)从基因库数据库或类似数据库、文献公开案或通过常规克隆和定序来获得。
在一些实施例中，抗体可特异性结合到表达于淋巴细胞上的受体或受体复合物。受体或受体复合物可包括免疫球蛋白基因超家族成员、TNF受体超家族成员、整联蛋白、细胞因子受体、趋化介素受体、主要组织相容性蛋白、凝集素或补体控制蛋白。
在一些实施例中，抗体可特异性结合到癌细胞抗原。应理解，ADC中的抗体组分是呈残基形式的抗体，从而本文所描述的ADC结构中的“Ab”纳入抗体结构。
可用于治疗癌症的抗体和特异性结合到肿瘤相关抗原的抗体的非限制性实例揭示于以下文献中：弗兰克A.E.(Franke,A.E.)、西弗斯E.L.(Sievers,E.L.)和谢恩伯格D.A.(Scheinberg,D.A.)，“急性骨髓样白血病的细胞表面受体靶向疗法：综述(Cell surfacereceptor-targeted therapy of acute myeloid leukemia:a review)”，癌症生物治疗和放射性药物(Cancer Biother Radiopharm.)2000,15,459-76；穆雷J.L.(Murray,J.L.)，“实体肿瘤的单克隆抗体治疗：新时代(Monoclonal antibody treatment of solidtumors:a coming of age)”，肿瘤学研讨会(Semin Oncol.)2000,27,64-70；布赖特林F.(Breitling,F.)及杜贝尔S.(Dubel,S.)，重组抗体(Recombinant Antibodies)，约翰威利父子公司(John Wiley,and Sons)，纽约，1998，所述文献中的每一者的全部内容以引用方式并入本文中。
结合到癌细胞抗原和免疫细胞抗原中的一或多者的抗体的实例提供于下文中。
可用于治疗癌症的靶抗原和相关抗体以及特异性结合到癌细胞抗原(还称为肿瘤抗原)的抗体的非限制性实例包含B7-DC(例如目录号：PA5-20344)；BCMA；B7-H3(例如依诺妥珠单抗(enoblituzumab)、奥马他单抗(omburtamab)、MGD009、MGC018、DS-7300)；B7-H4(例如目录号：14-5949-82)；B7-H6(例如目录号：12-6526-42)；B7-H7；C5补体(例如BCD-148；CAN106)；CA-125；CA9(例如吉瑞妥昔单抗(girentuximab))；CCR8(例如JTX-1811)；CLEC12A(例如特迪妥单抗(tepoditamab))；CSPG4(例如美国专利第10,822,427号)；CCNB1；DDR1；de2-7 EGFR(例如MAb 806)；DPEP1；DR4(例如马帕木单抗(mapatumumab))；内皮唾液酸蛋白(例如恩妥昔单抗(ontuxizumab))；ENPP1；EPCAM(例如阿德木单抗(adecatumumab))；EPHA2；ERBB2(例如曲妥珠单抗(trastuzumab))；ERBB3；ERVMER34_1；FAP(例如西罗珠单抗(sibrotuzumab))；FasL；FGFR2(例如阿普卢妥单抗(aprutumab))；FGFR4(例如MM-161)；FLT3(例如4G8SDIEM)；FBP；FucGM1(例如BMS-986012)；FZD8；G250；GAGE；GD2(例如地妥昔单抗(dinutuximab))；gpNMB(例如格莱巴姆单抗(glembatumumab))；GPR87；GUCY2C(例如英度妥单抗(indusatumab))；HAVCR2；IDO1；ITGB6；ITGB8；L1CAM(例如JCAR023)；MRC1(例如赛默飞世尔目录(ThermoFisher Catalog)号：12-2061-82)；ML-IAP(例如88C570，赛默飞世尔目录号：40958)；NT5E(例如7G2，赛默飞世尔目录号：41-0200)；OY-TES1；p53；p53突变体；PAX5；PDPN(例如赛默飞世尔目录号：14-5381-82)；VSIR(例如赛默飞世尔目录号：PA5-52493)；戴克定(Dectin)2(例如赛默飞世尔目录号：MA5-16250)；PAX3(例如GT1210，赛默飞世尔目录号：MA5-31583)；唾液酰基-汤姆森新抗原(Sialyl-Thomsen-nouveau-antigen)(例如伊瓦龙(Eavarone)等人，公共科学图书馆-综合，2018；13(7):e0201314)；PDGFR-B(例如利努苏单抗(rinucumab))；ADAM12(例如目录号：14139-1-AP)；ADAM9(例如IMGC936)；AFP(例如赛默飞世尔目录号：PA5-25959)；AGR2(例如赛默飞世尔目录号：PA5-34517)；AKAP-4(例如目录号：PA5-52230)；雄激素受体(例如赛默飞世尔目录号：MA5-13426)；ALPP(例如目录号：MA5-15652)；CD44(例如RG7356)；AMHR2(例如赛默飞世尔目录号：PA5-13902)；ANTXR1(例如目录号：MA1-91702)；ARTN(例如赛默飞世尔目录号：PA5-47063)；αVβ6；CA19-9(例如AbGn-7；MVT-5873)；癌胚抗原(例如阿西莫单抗(arcitumomab)、瑟妥珠单抗(cergutuzumab)、阿姆介白素(amunaleukin)、拉贝珠单抗(labetuzumab))；CD115(例如艾克利单抗(axatilimab)、卡比利珠单抗(cabiralizumab)、艾玛土珠单抗(emactuzumab))；CD137(例如ADG106、CTX-471)；CD147(例如加维莫单抗(gavilimomab)、美妥珠单抗(metuzumab))；CD155(例如美国公开案第2018/0251548号)；CD274(例如阿得贝利单抗(adebrelimab)、阿替珠单抗(atezolizumab)、加里乌利单抗(garivulimab))；CDCP1(例如RG7287)；CDH3(例如PCA062)；CDH6(例如HKT288)；CEACAM1；CEACAM6；CLDN18.1(例如佐洛昔单抗(zolbetuximab))；CLDN18.2(例如佐洛昔单抗)；CLPTM1L；CS-1(例如替加珠单抗(tigatuzumab))；GD3(例如米妥莫单抗(mitumomab))；HLA-G(例如TTX-080)；IL1RAP(例如尼达利单抗(nidanilimab))；LAG-3(例如安沙利单抗(encelimab))；LY6G6D(例如PA5-23303)；LYPD1(例如赛默飞世尔目录号：PA5-26749)；MAD-CT-2；MAGEA3(例如赛默飞世尔目录号：60054-1-IG)；MAGEA4(例如目录号：MA5-26117)；MAGEC2(例如赛默飞世尔目录号：PA5-64010)；MLANA(例如目录号：MA5-15237)；MELTF(例如赛默飞世尔目录号：H00004241-M04A)；MSLN(例如5B2，目录号：MA5-11918)；MUC1(例如MH1(CT2)，赛默飞世尔目录号：MA5-11202)；MUC5AC(例如45M1，目录号：MA5-12178)；MYCN(例如NCM-II 100，赛默飞世尔目录号：MA1-170)；NCAM1(例如赛默飞世尔目录号：MA5-11563)；粘连蛋白-4(例如恩佛土单抗(enfortumab))；NY-BR-1(例如NY-BR-1No.2，目录号：MA5-12645)；PSMA(例如BAY 2315497)；PSA(例如赛默飞世尔目录号：PA1-38514；丹尼尔斯-韦尔斯(Daniels-Wells)等人，BMC癌症(BMC Cancer)，2013；13:195)；PSCA(例如AGS-1C4D4)；PTK7(例如考非妥珠单抗(cofetuzumab))；PVRIG；Ras突变体(例如希因(Shin)等人，科学进展(Sci Adv.)2020；6(3):eaay2174)；RET(例如WO2020210551)；RGS5(例如TF-TA503075)；RhoC(例如赛默飞世尔目录号：PA5-77866)；ROR2(例如BA3021)；ROS1(例如WO2019107671)；SART3(例如TF 18025-1-AP)；SLC12A2(例如赛默飞世尔目录号：13884-1-AP)；SLC38A1(例如赛默飞世尔目录号：12039-1-AP)；SLC39A6(例如拉地珠单抗(ladiratuzumab))；SLC44A4(例如ASG-5ME)；SLC7A11(例如赛默飞世尔目录号：PA1-16893)；SLITRK6(例如斯妥尤单抗(sirtratumab))；SSX2(例如赛默飞世尔目录号：MA5-24971)；存活素(例如PA1-16836)；TACSTD2(例如PA5-47074)；TAG-72(例如MA1-25956)；TIGIT(例如依替吉单抗(etigilimab))；TM4SF5(例如18239-1-AP)；TMPRSS11D(例如PA5-30927)；TNFRSF12(例如BAY-356)；TRAIL(例如目录号：12-9927-42)；特雷姆(Trem)2(例如PY314)；TRP-2(例如PA5-52736)；uPAR(例如ATN-658)；UPK1B(例如赛默飞世尔目录号：PA5-56863)；UPK2(例如赛默飞世尔目录号：PA5-60318)；UPK3B(例如赛默飞世尔目录号：PA5-52696)；VEGF(例如GNR-011)；VEGFR2(例如金妥昔单抗(gentuximab))；CD44(例如RG7356)；WT1(例如赛默飞世尔目录号：MA5-32215)；XAGE1(例如赛默飞世尔目录号：PA5-46413)；CTLA4(例如伊匹单抗(ipilimumab))；精子蛋白17(例如BS-5754R)；TLR2/4/1(例如托拉利单抗(tomaralimab))；B7-1(例如加利昔单抗(galiximab))；ANXA1(例如目录号：71-3400)；BCR-ABL；CAMPATH-1(例如阿伦单抗(alemtuzumab)、ALLO-647、ANT1034)；CD123(例如BAY-943、CSL360)；CD19(例如ALLO-501)；CD20(例如地伏利单抗(divozilimab)、伊土莫单抗(ibritumomab))；CD30(例如伊妥木单抗(iratumumab))；CD33(例如林妥珠单抗(lintuzumab)、BI 836858、AMG673)；CD352(例如SGN-CD352A)；CD37(例如利洛托单抗(lilotomab)、GEN3009)；CD40(例如达西珠单抗(dacetuzumab)、鲁卡木单抗(lucatumumab))；CD45(例如阿帕米单抗(apamistamab))；CD48(例如SGN-CD48A)；CXCR4(例如武罗鲁单抗(ulocuplumab))；ETV6-AML(例如目录号：PA5-81865)；ROR1(例如西尔珠单抗(cirmtuzumab))；CD74(例如米拉珠单抗(milatuzumab))；SIT1(例如PA5-53825)；SLAMF7(例如埃罗妥珠单抗(Elotuzumab))；Axl(例如BA3011、替卫妥单抗(tilvestamab))；西格赛斯(Siglecs)1-16(例如参见安嘉塔(Angata)等人，药理学科学趋势(Trends Pharmacol Sci.)2015；36(10):645-660)；SIRPa(例如目录号：17-1729-42)；SIRPg(例如PA5-104381)；OX40(例如ABM193)；PROM1(例如目录号：14-1331-82)；TMEM132A(例如目录号：PA5-62524)；TMEM40(例如PA5-60636)；PD-1(例如巴替利单抗(balstilimab)、布格利单抗(budigalimab)、杰诺利单抗(geptanolimab))；ALK(例如DLX521)；CCR4(例如AT008；莫加珠单抗(mogamulizumab)-kpkc)；CD27(例如瓦利珠单抗(varlilumab))；CD278(例如费拉地利单抗(feladilimab)、伏派利单抗(vopratelimab))；CD32(例如mAb 2B6)；CD47(例如来普利单抗(letaplimab)、莫洛利单抗(magrolimab))；及CD70(例如库妥珠单抗(cusatuzumab))。
在一些实施例中，抗体可特异性结合到与实体肿瘤和/或血液学癌症有关的癌细胞抗原。靶抗原和特异性结合到与实体肿瘤和/或血液学癌症靶抗原有关的癌细胞抗原的相关抗体的非限制性实例包含Axl(例如BA3011；替卫妥单抗)；B7-H3(例如依诺妥珠单抗、奥马他单抗、MGD009、MGC018、DS-7300)；B7-H4(例如目录号：14-5949-82)；B7-H6(例如目录号：12-6526-42)；B7-H7；西格赛斯1-16(例如参见安嘉塔等人，药理学科学趋势2015；36(10):645-660)；SIRPa(例如目录号：17-1729-42)；SIRPg(例如PA5-104381)；OX40(例如ABM193)；PROM1(例如目录号：14-1331-82)；TMEM132A(例如目录号：PA5-62524)；TMEM40(例如PA5-60636)；PD-1(例如巴替利单抗、布格利单抗、杰诺利单抗)；ALK(例如DLX521)；CCR4(例如AT008；莫加珠单抗-kpkc)；CD27(例如瓦利珠单抗)；CD278(例如费拉地利单抗、伏派利单抗)；CD32(例如mAb 2B6)；CD47(例如来普利单抗、莫洛利单抗)；及CD70(例如库妥珠单抗)。
在一些实施例中，抗体可特异性结合到与实体肿瘤有关的癌细胞抗原。靶抗原和特异性结合到实体肿瘤相关靶抗原的相关抗体的非限制性实例包含PAX3(例如GT1210，赛默飞世尔目录号：MA5-31583)；唾液酰基-汤姆森新抗原(例如伊瓦龙等人，公共科学图书馆-综合2018；13(7):e0201314)；PDGFR-B(例如利努苏单抗)；ADAM12(例如目录号：14139-1-AP)；ADAM9(例如IMGC936)；AFP(例如赛默飞世尔目录号：PA5-25959)；AGR2(例如赛默飞世尔目录号：PA5-34517)；AKAP-4(例如目录号：PA5-52230)；雄激素受体(例如赛默飞世尔目录号：MA5-13426)；ALPP(例如目录号：MA5-15652)；CD44(例如RG7356)；AMHR2(例如赛默飞世尔目录号：PA5-13902)；ANTXR1(例如目录号：MA1-91702)；ARTN(例如赛默飞世尔目录号：PA5-47063)；αVβ6；CA19-9(例如AbGn-7；MVT-5873)；癌胚抗原(例如阿西莫单抗、瑟妥珠单抗、阿姆介白素、拉贝珠单抗)；CD115(例如艾克利单抗、卡比利珠单抗、艾玛土珠单抗)；CD137(例如ADG106、CTX-471)；CD147(例如加维莫单抗、美妥珠单抗)；CD155(例如美国公开案第2018/0251548号)；CD274(例如阿得贝利单抗、阿替珠单抗、加里乌利单抗)；CDCP1(例如RG7287)；CDH3(例如PCA062)；CDH6(例如HKT288)；CEACAM1；CEACAM6)；CLDN18.1(例如佐洛昔单抗)；CLDN18.2(例如佐洛昔单抗)；CLPTM1L；CS-1(例如替加珠单抗)；GD3(例如米妥莫单抗)；HLA-G(例如TTX-080)；IL1RAP(例如尼达利单抗)；LAG-3(例如安沙利单抗)；LY6G6D(例如PA5-23303)；LYPD1(例如赛默飞世尔目录号：PA5-26749)；MAD-CT-2；MAGEA3(例如赛默飞世尔目录号：60054-1-IG)；MAGEA4(例如目录号：MA5-26117)；MAGEC2(例如赛默飞世尔目录号：PA5-64010)；MLANA(例如目录号：MA5-15237)；MELTF(例如赛默飞世尔目录号：H00004241-M04A)；MSLN(例如5B2，目录号：MA5-11918)；MUC1(例如MH1(CT2)，赛默飞世尔目录号：MA5-11202)；MUC5AC(例如45M1，目录号：MA5-12178)；MYCN(例如NCM-II 100，赛默飞世尔目录号：MA1-170)；NCAM1(例如赛默飞世尔目录号：MA5-11563)；粘连蛋白-4(例如恩佛土单抗)；NY-BR-1(例如NY-BR-1No.2，目录号：MA5-12645)；PSMA(例如BAY2315497)；PSA(例如赛默飞世尔目录号：PA1-38514；丹尼尔斯-韦尔斯等人，BMC癌症2013；13:195)；PSCA(例如AGS-1C4D4)；PTK7(例如考非妥珠单抗)；PVRIG；Ras突变体(例如希因等人，科学进展2020；6(3):eaay2174)；RET(例如WO2020210551)；RGS5(例如TF-TA503075)；RhoC(例如赛默飞世尔目录号：PA5-77866)；ROR2(例如BA3021)；ROS1(例如WO2019107671)；SART3(例如TF 18025-1-AP)；SLC12A2(例如赛默飞世尔目录号：13884-1-AP)；SLC38A1(例如赛默飞世尔目录号：12039-1-AP)；SLC39A6(例如拉地珠单抗)；SLC44A4(例如ASG-5ME)；SLC7A11(例如赛默飞世尔目录号：PA1-16893)；SLITRK6(例如斯妥尤单抗)；SSX2(例如赛默飞世尔目录号：MA5-24971)；存活素(例如PA1-16836)；TACSTD2(例如PA5-47074)；TAG-72(例如MA1-25956)；TIGIT(例如依替吉单抗)；TM4SF5(例如18239-1-AP)；TMPRSS11D(例如PA5-30927)；TNFRSF12(例如BAY-356)；TRAIL(例如目录号：12-9927-42)；Trem2(例如PY314)；TRP-2(例如PA5-52736)；uPAR(例如ATN-658)；UPK1B(例如赛默飞世尔目录号：PA5-56863)；UPK2(例如赛默飞世尔目录号：PA5-60318)；UPK3B(例如赛默飞世尔目录号：PA5-52696)；VEGF(例如GNR-011)；VEGFR2(例如金妥昔单抗)；CD44(例如RG7356)；WT1(例如赛默飞世尔目录号：MA5-32215)；XAGE1(例如赛默飞世尔目录号：PA5-46413)；及CTLA4(例如伊匹单抗)。
在一些实施例中，抗体可特异性结合到与血液学癌症有关的癌细胞抗原。靶抗原和特异性结合到血液学癌细胞靶抗原的相关抗体的非限制性实例包含精子蛋白17(例如BS-5754R)；TLR2/4/1(例如托拉利单抗)；B7-1(例如加利昔单抗)；ANXA1(例如目录号：71-3400)；BCR-ABL；CAMPATH-1(例如阿伦单抗、ALLO-647、ANT1034)；CD123(例如BAY-943、CSL360)；CD19(例如ALLO-501)；CD20(例如地伏利单抗、伊土莫单抗)；CD30(例如伊妥木单抗)；CD33(例如林妥珠单抗、BI 836858、AMG 673)；CD352(例如SGN-CD352A)；CD37(例如利洛托单抗、GEN3009)；CD40(例如达西珠单抗、鲁卡木单抗)；CD45(例如阿帕米单抗)；CD48(例如SGN-CD48A)；CXCR4(例如武罗鲁单抗)；ETV6-AML(例如目录号：PA5-81865)；ROR1(例如西尔珠单抗)；CD74(例如米拉珠单抗)；SIT1(例如PA5-53825)；和SLAMF7(例如埃罗妥珠单抗)。
在一些实施例中，可使用特异性结合到靶抗原(例如与疾病或病症有关的抗原)的抗体。特异性结合到靶抗原(例如与疾病或病症有关的抗原)的抗体市面有售或可通过所属领域技术人员已知的任何方法(例如重组表达技术)来产生。编码特异性结合到靶抗原(例如与疾病或病症有关的抗原)的抗体的核苷酸序列可(例如)从基因库数据库或类似数据库、文献公开案或通过常规克隆和定序来获得。
靶抗原和特异性结合到靶抗原(例如与疾病或病症有关的抗原或与免疫细胞有关的抗原)的相关抗体的非限制性实例包含CD163(例如TBI 304H)；TIGIT(例如依替吉单抗)；DCSIGN(例如参见国际公开案第WO2018134389号)；IFNAR1(例如法拉莫单抗(faralimomab))；ASCT2(例如伊达妥单抗(idactamab))；ULBP1/2/3/4/5/6(例如PA5-82302)；CLDN1(例如INSERM抗密连蛋白-1)；CLDN2(例如参见国际公开案第WO2018123949号)；IL-21R(例如PF-05230900)；DCIR；DCLK1(例如参见国际公开案第WO2018222675号)；戴克定1(例如参见美国专利第9,045,542号)；GITR(例如拉格芙利单抗(ragifilimab))；ITGAV(例如阿比妥珠单抗(abituzumab))；LY9(例如PA5-95601)；MICA(例如1E2C8，目录号：66384-1-IG)；MICB(例如目录号：MA5-29422)；NOX1(例如目录号：PA5-103220)；CD2(例如BTI-322、西利珠单抗(siplizumab))；CD247(例如AFM15)；CD25(例如巴利昔单抗(basiliximab))；CD28(例如REGN5668)；CD3(例如奥昔组单抗(otelixizumab)、维西珠单抗(visilizumab))；CD38(例如菲泽妥单抗(felzartamab)、AMG 424)；CD3E(例如福雷芦单抗(foralumab)、替利组单抗(teplizumab))；CD5(例如MAT 304、阿佐莫单抗(zolimomabaritox))；ALPPL2(例如目录号：PA5-22336)；B7-2(例如目录号：12-0862-82)；B7-H3(例如依诺妥珠单抗、奥马他单抗、MGD009、MGC018、DS-7300)；B7-H4(例如目录号：14-5949-82)；B7-H6(例如目录号：12-6526-42)；B7-H7；BAFF-R(例如目录号：14-9117-82)；BMPR2；BORIS；CD112(例如参见美国公开案第20100008928号)；CD24(例如参见美国专利第8,614,301号)；CD244(例如R&D AF1039)；CD30L(例如参见美国专利第9926373号)；CD3D；CD3G；CD79A(例如参见国际公开案第WO 2020252110号)；CD83(例如CBT004)；CD97；CDH17(例如参见国际公开案第WO 2018115231号)；CLDN16；CLDN19；CYP1B1；DPEP3；DPP4；DSG2(例如参见美国专利第10,836,823号)；EPHA受体；表皮生长因子；FAS；FGFR1(例如RG7992)；FGFR3(例如沃凡妥单抗(vofatamab))；FN1；FOLR1(例如法利珠单抗(farletuzumab))；FSHR；FZD5；GM2(例如BIW-8962)；GM3(例如拉妥木单抗(racotumomab))；GPA33(例如KRN330)；GPC3(例如考曲妥珠单抗(codrituzumab))；HAS3；HLA-E；HLA-F；HLA-DR；ICAM1；IFNAR2；IL13Ra2；IL-5R(例如贝那利珠单抗(benralizumab))；KISS1R；LAMP1；LAYN；LCK；天门冬酰胺内肽酶；LILRB2；LILRB4；LMP2；MAD-CT-1；MAGEA1(例如目录号：MA5-11338)；MerTk(例如DS5MMER，目录号：12-5751-82)；MFSD13A；hTERT；gp100；Fas相关抗原1；金属蛋白酶；巨噬细胞诱导型C型凝集素(Mincle)(例如OTI2A8，目录号：TA505101)；NA17；NY-ESO-1(例如E978m，目录号：35-6200)；聚唾液酸(例如参见瓦茨拉维克(Watzlawik)等人，自然科学杂志(J Nat Sci.)2015；1(8):e141)；PR1；肉瘤易位断点；SLC10A2(例如赛默飞世尔目录号：PA5-18990)；SLC17A2(例如赛默飞世尔目录号：PA5-106752)；SLC39A5(例如赛默飞世尔目录号：MA5-27260)；SLC6A15(例如赛默飞世尔目录号：PA5-52586)；SLC6A6(例如赛默飞世尔目录号：PA5-53431)；SLC7A5；和CALCR(例如参见国际公开案第WO 2015077826号)。
在一些实施例中，抗体可特异性结合到与贫血有关的抗原。特异性结合到与贫血有关的抗原的抗体的非限制性实例包含CD163(例如TBI 304H)。
在一些实施例中，抗体可特异性结合到与病毒感染有关的抗原。靶抗原和特异性结合到与病毒感染有关的抗原的相关抗体的非限制性实例包含DCSIGN(例如参见国际公开案第WO2018134389号)IFNAR1(例如法拉莫单抗)；ASCT2(例如伊达妥单抗)；ULBP1/2/3/4/5/6(例如PA5-82302)；和CLDN1(例如INSERM抗密连蛋白-1)。
在一些实施例中，抗体可特异性结合到与自体免疫疾病有关的抗原。靶抗原和特异性结合到与自体免疫疾病有关的抗原的相关抗体的非限制性实例包含CLDN2(例如参见国际公开案第WO 2018123949号)；IL-21R(例如PF-05230900)；DCIR；DCLK1(例如参见WO2018222675)；戴克定1(例如参见美国专利第9,045,542号)；GITR(例如拉格芙利单抗)；ITGAV(例如阿比妥珠单抗)；LY9(例如PA5-95601)；MICA(例如1E2C8，目录号：66384-1-IG)；MICB(例如目录号：MA5-29422)；NOX1(例如目录号：PA5-103220)；CD2(例如BTI-322、西利珠单抗)；CD247(例如AFM15)；CD25(例如巴利昔单抗)；CD28(例如REGN5668)；CD3(例如奥昔组单抗、维西珠单抗)；CD38(例如菲泽妥单抗、AMG 424)；CD3E(例如福雷芦单抗、替利组单抗)；和CD5(例如MAT 304、阿佐莫单抗)。
在一些实施例中，抗体是非靶向抗体，例如非结合或对照抗体。
在一些实施例中，抗原是CD30。在一些实施例中，抗体是结合到CD30的抗体或抗原结合片段，如国际专利公开案第WO 02/43661号中所描述。在一些实施例中，抗CD30抗体是cAC10，其描述于国际专利公开案第WO 02/43661号中。cAC10还称为贝伦妥单抗(brentuximab)。在一些实施例中，抗CD30抗体包括cAC10的CDR。在一些实施例中，CDR是如通过卡巴特编号方案(Kabat numbering scheme)所定义。在一些实施例中，CDR是如通过乔西娅编号方案(Chothia numbering scheme)所定义。在一些实施例中，CDR是如通过IMGT编号方案所定义。在一些实施例中，CDR是如通过AbM编号方案所定义。在一些实施例中，抗CD30抗体包括分别包括SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施例中，抗CD30抗体包括：重链可变区，其包括与SEQ IDNO:7的氨基酸序列至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％一致的氨基酸序列；和轻链可变区，其包括与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少95％至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％一致的氨基酸序列。在一些实施例中，抗CD30抗体包括含有SEQID NO:9或SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链。
在一些实施例中，本文所提供的抗体结合到EphA2。在一些实施例中，抗体包括分别包括SEQ ID NO:12、13、14、15、16和17的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施例中，抗EphA2抗体包括：重链可变区，其包括与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％一致的氨基酸序列；和轻链可变区，其包括与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％一致的氨基酸序列。在一些实施例中，抗EphA2抗体包括含有SEQID NO:20或SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，抗EphA2抗体包括含有SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，抗EphA2抗体包括含有SEQID NO:26或SEQ ID NO:27的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，抗体是h1C1或1C1。
序列表
式(II)化合物
一些实施例提供式(II)化合物：
或其医药上可接受的盐，其中：
M是琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺；
R1是氢、羟基、C1-6烷氧基、-(C1-6烷基)C1-6烷氧基、-(CH2)n-NRARB或PEG2到PEG4；每一R2和R3独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；
每一RA、RB、RC、RD、RE和RF独立地是氢或C1-3烷基；
每一下标n独立地是0到6的整数；
每一下标m独立地是0或1；
每一下标q独立地是0到6的整数；
XA是-CH2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH3)-；
XB不存在或是2到16元亚杂烷基；
XB、M和L各自独立地任选地经从PEG1到PEG72的PEG单元取代；且L是如本文所描述的可选连接体。
在一些实施例中，式(II)化合物具有以下结构：
或其医药上可接受的盐，其中：
R1是氢、羟基、C1-6烷氧基、-(C1-6烷基)C1-6烷氧基、-(CH2)n-NRARB或PEG2到PEG4；
每一R2和R3独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；
每一RA、RB、RC、RD、RE和RF独立地是氢或C1-3烷基；
每一下标n独立地是0到6的整数；
每一下标m独立地是0或1；
每一下标q独立地是0到6的整数；
XA是-CH2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH3)-；
XB不存在或是2-16元亚杂烷基；
L是具有式-(A)a-(W)w-(Y)y-的连接体，其中：
A是任选地经1到3个Ra1取代的C2-20亚烷基或任选地经1到3个Rb1取代的2到40元亚杂烷基；
每一Ra1独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、＝O、-NRd1Re1、-C(O)NRd1Re1、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rb1独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、-NRd1Re1、-C(O)NRd1Re1、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rd1和Re1独立地是氢或C1-3烷基；
W是1到12个氨基酸或具有以下结构：
其中Su是糖部分；
-OA-代表糖苷键；
每一Rg独立地是氢、卤素、-CN或-NO2；
W1不存在或是-O-C(＝O)-；
代表与A或M的共价连接；且*代表与Y、XA或XB的共价连接。
Y是自分解部分、非自分解可释放部分或非裂解部分；
下标a为0或1；
下标y为0或1；
下标w为0或1；
M是
每一AA是独立选择的氨基酸，其中(AA)b经由硫原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺；
每一下标b独立地是1到6的整数；且
XB和L各自独立地任选地经从PEG2到PEG72的PEG单元取代。
如本文中所使用，A在存在时共价连接到M或M1，并且Y在存在时连接到XB或XA(在XB不存在时)。
在一些实施例中，M是
在一些实施例中，M是在一些方面中，M是在一些方面中，M是
在一些实施例中，M是在一些方面中，M是在一些方面中，M是
在一些实施例中，M是在一些方面中，M是在一些方面中，M是
在一些实施例中，每一AA独立地是天然氨基酸；其中(AA)b经由硫原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺。在一些实施例中，每一AA独立地是天然氨基酸；其中(AA)b经由半胱氨酸残基的硫原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺。
在一些实施例中，每一AA独立地是天然氨基酸；其中(AA)b经由氮原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺。在一些实施例中，每一AA独立地是天然氨基酸；其中(AA)b经由赖氨酸残基的∈-氮原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺。
在一些实施例中，每一下标b为1、2或3。在一些实施例中，每一下标b为1。在一些实施例中，每一下标b为2。在一些实施例中，每一下标b为3。在一些实施例中，每一下标b为3、4、5或6。在一些实施例中，每一下标b为4。在一些实施例中，每一下标b为5。在一些实施例中，每一下标b为6。
在一些实施例中，M是在一些方面中，M是在一些方面中，M是
在一些实施例中，M是在一些方面中，M是在一些方面中，M是
在一些实施例中，M是在一些方面中，M是在一些方面中，M是
在一些实施例中，R1是甲氧基且R2和R3都是-C(＝O)NH2。在一些实施例中，XA是-O-且XB是其中代表与XA的共价键联，并且*代表与L(在存在时)或M的共价键联。在一些实施例中，R1是甲氧基；R2和R3都是-C(＝O)NH2；XA是-O-；且XB是其中代表与XA的共价键联，并且*代表与L(在存在时)或M的共价键联。在一些所述实施例中，L不存在。在一些实施例中，R1是甲氧基；R2和R3都是-C(＝O)NH2；XA是-O-；XB是其中代表与XA的共价键联，并且*代表与L的共价键联；且下标a和下标y都为0(也就是，XB共价连接到W)。在一些实施例中，XA是-O-；XB是其中代表与XA的共价键联，并且*代表与L的共价键联。在一些实施例中，R1是甲氧基；R2和R3都是-C(＝O)NH2；XA是-O-；且XB是其中代表与XA的共价键联，并且*代表与L的共价键联；且下标a和下标w都为0。
在一些实施例中，R1是甲氧基；R2和R3都是-C(＝O)NH2；XA是-O-；且XB是其中代表与XA的共价键联，并且*代表与L的共价键联；且下标y和下标w都为0。
在一些实施例中，R1是甲氧基；R2和R3都是-C(＝O)NH2；XA是-O-；且XB是其中代表与XA的共价键联，并且*代表与L的共价键联；且下标y为0。
在一些实施例中，R1是甲氧基且R2和R3都是-C(＝O)NH2。在一些实施例中，XA是-CH2-；且XB是其中代表与XA的共价键联，并且*代表与L(在存在时)或M的共价键联。在一些实施例中，R1是甲氧基；R2和R3都是-C(＝O)NH2；XA是-CH2-；且XB是其中代表与XA的共价键联，并且*代表与L(在存在时)或M的共价键联。在一些实施例中，R1是甲氧基；R2和R3都是-C(＝O)NH2；XA是-CH2-；且XB是其中代表与XA的共价键联，并且*代表与L的共价键联；且下标a和下标y都为0(也就是，XB共价连接到W)。在一些实施例中，XA是-CH2-；且XB是其中代表与XA的共价键联，并且*代表与L的共价键联。在一些实施例中，R1是甲氧基；R2和R3都是-C(＝O)NH2；XA是-CH2-；且XB是其中代表与XA的共价键联，并且*代表与L的共价键联；且下标a和下标w都为0(也就是，XB共价结合到Y)。
在一些所述实施例中，L是具有式-(A)a-(W)w-(Y)y-的连接体。
在一些实施例中：XB不存在且L共价连接到XA。在一些实施例中：XB不存在且Y共价连接到XA。在一些实施例中：XB不存在且Y不存在，并且W共价连接到XA。在一些实施例中：XB不存在，Y不存在，W不存在，并且A共价连接到XA。
在一些实施例中：XB是2-16元亚杂烷基且L共价连接到XB。在一些实施例中：XB是2-16元亚杂烷基且Y共价连接到XB。在一些实施例中：XB是2-16元亚杂烷基，Y不存在，并且W共价连接到XB。在一些实施例中：XB是2-16元亚杂烷基，Y不存在，W不存在，并且A共价连接到XB。
在一些实施例中，W1是-OC(＝O)-且下标y为1。在一些实施例中，XA是-O-且XB和W不存在。在一些实施例中，XA是NH或-O-，XB不存在，并且W1是-OC(＝O)。在一些实施例中，XA是-N(CH3)-，XB不存在，并且W1是-OC(＝O)。在一些实施例中，XA是-S-，XB不存在，并且W1是-OC(＝O)。在一些实施例中，W1是-OC(＝O)-且XB经由-O-或-NH-共价连接到W。
在一些实施例中，A共价连接到M。在一些实施例中，在下标a为0且下标w为0时，Y共价连接到M。在一些实施例中，在下标a、y和w各自为0时，XB共价连接到M。
在一些实施例中，式(II)化合物是选自由以下组成的群组：
式(II-A)化合物
在一些实施例中，式(II)化合物具有式(II-A)结构：
或其医药上可接受的盐，其中：
LA是-(CH2)1-6-、-C(O)(CH2)1-6-或-C(O)NRH(CH2)1-6-；
每一RH独立地是氢或C1-3烷基；
Y是
#代表与-NRHLA的共价连接；
##代表与W或LB的共价连接；
LB是-(CH2)1-6-、-C(O)(CH2)1-6-或-[NHC(O)(CH2)1-4]1-3-；且
其它变量是如上文结合式(II)所定义。
在一些实施例中，RH是甲基。在一些实施例中，LA是-(CH2)2-6-。在一些实施例中，LA是-(CH2)3-。在一些实施例中，下标y为0。在一些实施例中，下标y为1。在一些实施例中，下标w为0。在一些实施例中，下标w为1。在一些实施例中，下标y和下标w都为1。在一些实施例中，下标y和下标w都为0。在下标y和下标w都为0时，式(II)化合物具有式(II-B)结构：
或其医药上可接受的盐，其中：
LA是-(CH2)1-6-、-C(O)(CH2)1-6-或-C(O)NRH(CH2)1-6-；
每一RH独立地是氢或C1-3烷基；
LB是-(CH2)1-6-、-C(O)(CH2)1-6-或-[NHC(O)(CH2)1-4]1-3-；且
其它变量是如上文结合式(II)所定义。
在一些实施例中，W是具有1-6个氨基酸的链。在一些实施例中，W是具有1-4个氨基酸的链。在一些实施例中，W是具有1-3个氨基酸的链。在一些实施例中，W的每一氨基酸独立地选自由以下组成的群组：丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、O-甲基丝氨酸、O-甲基天门冬氨酸、O-甲基谷氨酸、N-甲基赖氨酸、O-甲基酪氨酸、O-甲基组氨酸和O-甲基苏氨酸。
在一些实施例中，W是：
其中：
代表与LB的共价连接；且
*代表与Y或NRH的共价连接。
在一些实施例中，LB是-C(O)(CH2)2-。在一些实施例中，LB是-[NHC(O)(CH2)2]2-。在一些实施例中，M是在一些实施例中，M是在一些方面中，M是在一些方面中，M是
在某些实施例中，式(II-A)化合物是选自由以下组成的群组：
和其医药上可接受的盐。
式(III)化合物
一些实施例提供式(III)化合物：
或其医药上可接受的盐，其中：
R1A是氢、羟基、C1-6烷氧基、-(C1-6烷基)C1-6烷氧基、-(CH2)nn-NRAARBB；
每一R2A和R3A独立地是-CO2H、-(C＝O)mm-NRCCRDD或-(CH2)qq-NREE1RFF1；
每一下标nn独立地是0到6的整数；
每一下标mm独立地是0或1；
每一下标qq独立地是0到6的整数；
Y1是-CH2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH3)-；
X1是C2-C6亚烷基；
Z1是-NREERFF、-C(＝O)NRGGRHH或-CO2H；
每一RAA、RBB、RCC、RDD、REE1和RFF1独立地是氢或C1-3烷基；且
每一REE、RFF、RGG和RHH独立地是氢或C1-6烷基。
在一些实施例中，R1A是氢。在一些实施例中，R1A是羟基。在一些实施例中，R1A是C1-6烷氧基。在一些实施例中，R1是甲氧基。在一些实施例中，R1A是-(C1-6烷基)C1-6烷氧基。在一些实施例中，R1A是甲氧基乙基。
在一些实施例中，R1是-(CH2)nn-NRAARBB。在一些实施例中，RAA和RBB都是氢。在一些实施例中，RAA和RBB独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RAA和RBB中的一者是氢且RAA和RBB中的另一者是C1-3烷基。在一些实施例中，C1-3烷基是甲基。在一些实施例中，每一下标nn为0。在一些实施例中，每一下标nn为1。在一些实施例中，每一下标nn为2。在一些实施例中，每一下标nn为3。在一些实施例中，每一下标nn为3、4、5或6。在一些实施例中，每一下标nn为4。在一些实施例中，每一下标nn为5。在一些实施例中，每一下标nn为6。
在一些实施例中，每一R2A和R3A独立地是-CO2H、-(C＝O)mm-NRCCRDD或-(CH2)qq-NREE1RFF1；且R2A和R3A相同。在一些实施例中，每一R2A和R3A独立地是-CO2H、-(C＝O)mm-NRCCRDD或-(CH2)qq-NREE1RFF1；且R2A和R3A不同。
在一些实施例中，R2A是-(C＝O)mm-NRCCRDD。在一些实施例中，R3A是-(C＝O)mm-NRCCRDD。在一些实施例中，每一RCC和每一RDD是氢。在一些实施例中，每一RCC和每一RDD独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，每一RCC和RDD中的一者是氢且每一RCC和RDD中的另一者是C1-3烷基。在一些实施例中，C1-3烷基是甲基。在一些实施例中，每一下标mm为0。在一些实施例中，每一下标mm为1。
在一些实施例中，R2A是-(CH2)qq-NREE1RFF1。在一些实施例中，R3A是-(CH2)qq-NREE1RFF1。在一些实施例中，每一REE1和每一RFF1是氢。在一些实施例中，每一REE1和每一RFF1独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，每一REE1和RFF1中的一者是氢且每一REE1和RFF1中的另一者是C1-3烷基。在一些实施例中，C1-3烷基是甲基。在一些实施例中，每一下标q为0。在一些实施例中，每一下标q是1到6的整数。在一些实施例中，每一下标qq为1。在一些实施例中，每一下标qq为2。在一些实施例中，每一下标qq为3、4、5或6。
在一些实施例中，R3A是-CO2H。在一些实施例中，R2A是-CO2H。
在一些实施例中，Y1是-CH2-。在一些实施例中，Y1是-O-。在一些实施例中，Y1是-S-。在一些实施例中，Y1是-NH-。在一些实施例中，Y1是-N(CH3)-。
在一些实施例中，X1是C2-C5亚烷基。在一些实施例中，X1是C2-C4亚烷基。在一些实施例中，X1是亚乙基或亚正丙基。在一些实施例中，X1是亚乙基。在一些实施例中，X1是亚正丙基。
在一些实施例中，Z1是-NRE1RF1。在一些实施例中，REE和RFF都是氢。在一些实施例中，REE和RFF独立地是C1-6烷基。在一些实施例中，REE和RFF中的一者是氢且REE和RFF中的另一者是C1-6烷基。在一些实施例中，C1-6烷基是C1-3烷基。在一些实施例中，C1-3烷基是甲基。
在一些实施例中，Z1是-C(＝O)NRGGRHH。在一些实施例中，RGG和RHH都是氢。在一些实施例中，RGG和RHH独立地是C1-6烷基。在一些实施例中，RGG和RHH中的一者是氢且RGG和RHH中的另一者是C1-6烷基。在一些实施例中，C1-6烷基是C1-3烷基。在一些实施例中，C1-3烷基是甲基。在一些实施例中，Z1是-CO2H。在一些实施例中，Z1是-NREERFF。在一些实施例中，REE是氢且RFF是甲基。
在一些实施例中，R1A是甲氧基且R2A和R3A都是-C(＝O)NH2。在一些实施例中，Y1是-O-且X1是C3亚烷基。在一些实施例中，Y1是-O-且X1是亚正丙基。在一些实施例中，Y1是-O-，X1是亚正丙基，并且Z1是-NH2。在一些实施例中，Y1是-O-，X1是亚正丙基，并且Z1是-NHCH3。在一些实施例中，Y1是-O-，X1是亚正丙基，并且Z1是-N(CH3)2。
在一些实施例中，R1A是甲氧基；R2A和R3A都是-C(＝O)NH2；Y1是-O-；X1是亚正丙基；且Z1是-NH2。在一些实施例中，R1A是甲氧基；R2A和R3A都是-C(＝O)NH2；Y1是-O-；X1是亚正丙基；且Z1是-NHCH3。在一些实施例中，R1A是甲氧基；R2A和R3A都是-C(＝O)NH2；Y1是-O-；X1是亚正丙基；且Z1是-N(CH3)2。
在一些实施例中，式(III)化合物是：
式(IV)化合物
一些实施例包含式(IV)化合物：
或其医药上可接受的盐，其中：
R1C是氢、羟基、C1-6烷氧基、-(C1-6烷基)C1-6烷氧基、-(CH2)n-NRARB或PEG2到PEG4；
R2C是-CO2RM、-(C＝O)NRCRD、-S(O)2NRCRD、-S(O)2RM、-(CH2)q-NRERF、-(CH2)q-ORM、-O(C＝O)-NRERF或-NRM(C＝O)-NRERF，其中R2C连接于标记为1、2或3的任一位置处；
R3C是-CO2RM、-(C＝O)NRCRD、-S(O)2NRCRD、-S(O)2RM、-(CH2)q-NRERF、-(CH2)q-ORM、-O(C＝O)-NRERF或-NRM(C＝O)-NRERF，其中R3C连接于标记为1'、2'或3'的任一位置处；
每一RA、RB、RC、RD、RE、RF和RM独立地是氢或C1-6烷基；
每一下标n独立地是0到6的整数；
每一下标q独立地是0到6的整数；
LE是-(C＝O)-或-S(O)2-；
LC是-(CRIRJ)1-3-
每一RI和RJ独立地是氢或C1-3烷基；
下标s为0或1；
每一Cy1独立地是4到6元杂环、5到6元杂芳基或C3-6环烷基，其各自任选地经一或多个RK取代；
每一RK独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、＝O、-NRd2Re2、-C(O)NRd2Re2、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rd2和Re2独立地是氢或C1-3烷基；
LAA是-(CH2)1-6-、-C(O)(CH2)1-6-、-C(O)NRL(CH2)1-6-、-(CH2)1-6O-、-C(O)(CH2)1-6O-或-C(O)NRL(CH2)1-6O-；
RL是氢或C1-3烷基；
Cy2是C3-6环烷基、4到6元杂环、5到6元杂芳基或苯基，其各自任选地经一或多个RU取代；
每一RU独立地选自由以下组成的群组：-CO2Rj1、-(C＝O)NRd3Re3、-S(O)2NRd3Re3、-(CH2)q1-NRg1Rh1、-(CH2)q1-ORj1和-(CH2)q1-(OCH2CH2)1-8OH；
每一Rd3、Re3、Rg1、Rh1和Rj1独立地是氢或C1-6烷基；
下标q1是0到6的整数；
下标t1和t2独立地是0或1，其中t1和t2中的至少一者为1；
LD是-(CH2)1-6-；
下标u为0或1；
Z是-N(RHH)-或-N+(C1-6烷基)(RHH)-；
RHH是氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、-(CH2)1-3C3-6环烷基、-(CH2)1-3C1-3烷氧基、-(CH2)1-34到6元杂环或-(CH2)1-3 5到6元杂芳基；
Y是自分解部分、非自分解可释放部分或非裂解部分；
下标y为0或1；
W是1到12个氨基酸的链或具有以下结构：
其中Su是糖部分；
-OA-代表糖苷键；
每一Rg独立地是氢、卤素、-CN或-NO2；
W1不存在或是-O-C(＝O)-；
代表与LBB的共价连接；
*代表与Y、LD、NRHH或Cy2的共价连接；
下标w为0或1；
LBB是-(CH2)1-6-、-C(O)(CH2)1-6-或-[NHC(O)(CH2)1-4]1-3-；且
M是
每一AA是独立选择的氨基酸，其中(AA)b经由硫原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺；且
每一下标b独立地是1到6的整数。
在一些实施例中，R1C是氢。在一些实施例中，R1C是羟基。在一些实施例中，R1C是C1-6烷氧基。在一些实施例中，R1C是甲氧基。在一些实施例中，R1C是-(C1-6烷基)C1-6烷氧基。在一些实施例中，R1C是甲氧基乙基。在一些实施例中，R1C是PEG2到PEG4。在一些实施例中，R1C是-(CH2)n-NRARB。
在一些实施例中，RA和RB都是氢。在一些实施例中，RA和RB独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RA和RB中的一者是氢且RA和RB中的另一者是C1-3烷基。
在一些实施例中，每一下标n为0。在一些实施例中，每一下标n为1。在一些实施例中，每一下标n为2。在一些实施例中，每一下标n为3、4、5或6。
在一些实施例中，R2C和R3C独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2C和R3C相同。在一些实施例中，R2C和R3C独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2C和R3C不同。在一些实施例中，R2C是-(C＝O)m-NRCRD。在一些实施例中，R3C是-(C＝O)m-NRCRD。在一些实施例中，RC和RD都是氢。在一些实施例中，RC和RD各自独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RC和RD中的一者是氢且RC和RD中的另一者是C1-3烷基。在一些实施例中，每一下标m为0。在一些实施例中，每一下标m为1。
在一些实施例中，R2C是-(CH2)q-NRERF。在一些实施例中，R3C是-(CH2)q-NRERF。在一些实施例中，RE和RF都是氢。在一些实施例中，RE和RF各自独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RE和RF中的一者是氢且RE和RF中的另一者是C1-3烷基。在一些实施例中，每一下标q为0。在一些实施例中，每一下标q是1到6的整数。
在一些实施例中，R2C是-CO2RM。在一些实施例中，R3C是-CO2RM。在一些实施例中，RM是氢。在一些实施例中，RM是C1-3烷基。
在一些实施例中，R2C是-(CH2)q-ORM。
在一些实施例中，R3C是-(CH2)q-ORM。在一些实施例中，RM是氢。在一些实施例中，q为0。在一些实施例中，q为1。
在一些实施例中，R2C是-O(C＝O)-NRERF。在一些实施例中，R3C是-O(C＝O)-NRERF。在一些实施例中，RE和RF都是氢。在一些实施例中，RE和RF各自独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RE和RF是氢且RE和RF中的另一者是C1-3烷基。
在一些实施例中，R2C是-NRM(C＝O)-NRERF。在一些实施例中，R3C是-NRM(C＝O)-NRERF。在一些实施例中，RE、RF和RM都是氢。在一些实施例中，RE、RF和RM各自独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RE、RF和RM中的一者是C1-3烷基且RE、RF和RM中的其余者是氢。
在一些实施例中，R2C是-S(O)2NRCRD。在一些实施例中，R3C是-S(O)2NRCRD。在一些实施例中，RC和RD都是氢。在一些实施例中，RC和RD各自独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RC和RD中的一者是氢且RC和RD中的另一者是C1-3烷基。
在一些实施例中，R2C是-S(O)2RM。在一些实施例中，R3C是-S(O)2RM。在一些实施例中，RM是氢。在一些实施例中，RM是C1-3烷基。
在一些实施例中，R2C连接于位置1处。在一些实施例中，R2C连接于位置2处。在一些实施例中，R2C连接于位置3处。在一些实施例中，R3C连接于位置1'处。在一些实施例中，R3C连接于位置2'处。在一些实施例中，R3C连接于位置3'处。
在一些实施例中，LE是-(C＝O)-。在一些实施例中，LE是-S(O)2-。
在一些实施例中，每一RI和RJ是氢。在一些实施例中，每一RI和RJ是C1-3烷基。在一些实施例中，RI和RJ中的一者是氢且RI和RJ中的另一者是C1-3烷基。
在一些实施例中，LC是-(CRIRJ)-。
在一些实施例中，s为0。在一些实施例中，s为1。
在一些实施例中，每一Cy1独立地是5到6元杂芳基。在一些实施例中，每一Cy1是任选地经一或多个RK取代的吡唑。在一些实施例中，每一Cy1独立地选自由以下组成的群组：吡唑、咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、恶唑、异恶唑、吡咯、哒嗪、吡啶、嘧啶和吡嗪，其各自任选地经一或多个RK取代。在一些实施例中，每一Cy1独立地选自由以下组成的群组：咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、恶唑、异恶唑、吡咯、哒嗪、吡啶、嘧啶和吡嗪，其各自任选地经一或多个RK取代。在一些实施例中，每一Cy1独立地是任选地经一或多个RK取代的C4-5环烷基。在一些实施例中，每一RK独立地选自由以下组成的群组：C1-3烷基、C1-3卤代烷基和卤素。在一些实施例中，每一RK独立地选自由以下组成的群组：甲基、乙基、-CF3和卤素。
在一些实施例中，每一Cy1相同。在一些实施例中，每一Cy1不同。
在一些实施例中，LAA是-(CH2)1-6-。在一些实施例中，LAA是-(CH2)1-3-。在一些实施例中，LAA是-(CH2)1-6O-。在一些实施例中，LAA是-(CH2)1-3O-。
在一些实施例中，Cy2是4到6元杂环。在一些实施例中，Cy2具有结构其中下标z1和z2中的每一者独立地是1到3的整数且**指示与LAA的连接。在一些实施例中，z1和z2为1。在一些实施例中，z1和z2为2。在一些实施例中，z1为1且z2为2。
在一些实施例中，Cy2具有结构其中
Z1是选自由以下组成的群组：-O-、-S-、-CRNRO-和-NRP-；
RN、RO和RP独立地是氢或C1-6烷基；
下标z3是1到3的整数；且
**指示与LAA的连接。
在一些实施例中，RN和RO是氢。在一些实施例中，RP是氢。在一些实施例中，RP是甲基。
在一些实施例中，Cy2是5到6元杂芳基。在一些实施例中，Cy2是选自由以下组成的群组：
其中
Z2是＝CRN-或＝N；
RN是氢或C1-6烷基；且
**指示与LAA的连接。
在一些实施例中，Z2是＝CRN且RN是氢。在一些实施例中，Z2是＝N-。
在一些实施例中，Cy2是选自由以下组成的群组：
其中Z3是-O-或-S-且**指示与LAA、LD、NRHH、Y、W或LBB的连接。
在一些实施例中，**指示与LAA的连接。在一些实施例中，**指示与LD、NRHH、Y、W或LBB的连接。
在一些实施例中，Cy2是选自由以下组成的群组：
其中**指示与LAA的连接。
在一些实施例中，Cy2是选自由以下组成的群组：
其中
每一Z2独立地是＝CRN-或＝N-；且
每一RN是氢或C1-6烷基。
在一些实施例中，至少一个Z2是＝N-。在一些实施例中，一个Z2是＝N-且其余Z2是＝CRN-。在一些实施例中，两个Z2是＝N-且其余Z2是＝CRN-。
在一些实施例中，RN是氢。
在一些实施例中，Cy2是选自由以下组成的群组：
在一些实施例中，Cy2是环丁基。
在一些实施例中，每一Rd3、Re3、Rg1、Rh1和Rj1独立地是氢或-CH3。
在一些实施例中，每一RU独立地选自-CO2H、-(C＝O)NH2、-S(O)2NH2、-CH2NH2和-CH2OH。
在一些实施例中，t1为0且t2为1。在一些实施例中，t1为1且t2为0。在一些实施例中，t1为1且t2为1。
在一些实施例中，u为1且LD是-(CH2)1-3。在一些实施例中，u为0。
在一些实施例中，t2为1且RHH是氢。在一些实施例中，t2为1且RHH是C1-3烷基。在一些实施例中，t2为1且RHH是C3-4环烷基。在一些实施例中，t2为1且RHH是-(CH2)C3-4环烷基。在一些实施例中，t2为1且RHH是-(CH2)4-5元杂环。在一些实施例中，t2为1且RHH是-(CH2)5元杂芳基。
在一些实施例中，Z是-N(RHH)-。在其它实施例中，Z是-N+(C1-6烷基)(RHH)-。
在一些实施例中，Y是
在一些实施例中，Y是环己烷羧基、十一烷酰基、己酰基(caproyl、hexanoyl)、丁酰基或丙酰基。在一些实施例中，Y是PEG4到PEG12。在一些实施例中，y为0。在一些实施例中，y为1。
在一些实施例中，W是具有1-12个氨基酸的链。在一些实施例中，W是具有1-6个氨基酸的链。在一些实施例中，W是具有1-3个氨基酸的链。
在一些实施例中，W独立地选自由以下组成的群组：丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、O-甲基丝氨酸、O-甲基天门冬氨酸、O-甲基谷氨酸、N-甲基赖氨酸、O-甲基酪氨酸、O-甲基组氨酸和O-甲基苏氨酸。在一些实施例中，W中的每一氨基酸独立地选自由以下组成的群组：丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丝氨酸、天门冬氨酸、天门冬氨酸甲酯、N,N-二甲基-赖氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、缬氨酸-丙氨酸、缬氨酸-瓜氨酸、苯丙氨酸-赖氨酸或高丝氨酸甲醚。
在一些实施例中，W具有以下结构：
在一些实施例中，W1是-O-C(＝O)-。在一些实施例中，一个Rg是卤素、-CN或-NO2，并且其余RG是氢。在一些实施例中，每一Rg是氢。
在一些实施例中，w为0。在一些实施例中，w为1。
在一些实施例中，LBB是-(CH2)1-3-。在一些实施例中，LBB是-C(O)(CH2)1-2-。
在一些实施例中，LBB是-C(O)(CH2)2-。在一些实施例中，LBB是-[NHC(O)(CH2)2]1-2-。在一些实施例中，LBB是-[NHC(O)(CH2)2]2-。
在一些实施例中，M是在一些方面中，M是在一些方面中，M是
在一些实施例中，M是在一些方面中，M是在一些方面中，M是
在一些实施例中，M是在一些方面中，M是在一些方面中，M是
在一些实施例中，每一AA独立地是天然氨基酸；其中(AA)b经由硫原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺。在一些实施例中，每一AA独立地是天然氨基酸；其中(AA)b经由氮原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺。在一些实施例中，每一下标b为1。在一些实施例中，每一下标b为2。在一些实施例中，每一下标b为3、4、5或6。
在一些实施例中，M是在一些方面中，M是在一些方面中，M是
在一些实施例中，M是在一些方面中，M是在一些方面中，M是
在一些实施例中，M是在一些方面中，M是在一些方面中，M是
在一些实施例中，M是
式(IV)化合物的一些实施例包含选自由以下组成的群组的化合物：
和其医药上可接受的盐。
式(V)化合物
一些实施例包含式(V)化合物：
或其医药上可接受的盐，其中：
R1C是氢、羟基、C1-6烷氧基、-(C1-6烷基)C1-6烷氧基、-(CH2)n-NRARB或PEG2到PEG4；
R2C是-CO2RM、-(C＝O)NRCRD、-S(O)2NRCRD、-S(O)2RM、-(CH2)q-NRERF、-(CH2)q-ORM、-O(C＝O)-NRERF或-NRM(C＝O)-NRERF，其中R2C连接于标记为1、2或3的任一位置处；
R3C是-CO2RM、-(C＝O)NRCRD、-S(O)2NRCRD、-S(O)2RM、-(CH2)q-NRERF、-(CH2)q-ORM、-O(C＝O)-NRERF或-NRM(C＝O)-NRERF，其中R3C连接于标记为1'、2'或3'的任一位置处；
每一RA、RB、RC、RD、RE、RF和RM独立地是氢或C1-6烷基；
每一下标n独立地是0到6的整数；
每一下标q独立地是0到6的整数；
LE是-(C＝O)-或-S(O)2-；
LC是-(CRIRJ)1-3-
每一RI和RJ独立地是氢或C1-3烷基；
下标s为0或1；
每一Cy1独立地是4到6元杂环、5到6元杂芳基或C3-6环烷基，其各自任选地经一或多个RK取代；
每一RK独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、＝O、-NRd2Re2、-C(O)NRd2Re2、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rd2和Re2独立地是氢或C1-3烷基；
LAA是-(CH2)1-6-、-C(O)(CH2)1-6-、-C(O)NRL(CH2)1-6-、-(CH2)1-6O-、-C(O)(CH2)1-6O-或-C(O)NRL(CH2)1-6O-；
RL是氢或C1-3烷基；
Cy2是C3-6环烷基、4到6元杂环、5到6元杂芳基或苯基，其各自任选地经一或多个RU取代；
每一RU独立地选自由以下组成的群组：-CO2Rj1、-(C＝O)NRd3Re3、-S(O)2NRd3Re3、-(CH2)q1-NRg1Rh1、-(CH2)q1-ORj1和-(CH2)q1-(OCH2CH2)1-8OH；
每一Rd3、Re3、Rg1、Rh1和Rj1独立地是氢或C1-6烷基；
下标q1是0到6的整数；
下标t1为0或1；
LD是-(CH2)1-6-；
下标u为0或1；
在t1为0时，ZZ是-NRQRR、-N+(C1-6烷基)RQRR、-C(＝O)NSRT、-C(O)O(C1-6烷基)、-CO2H或氨基酸，或在t1为1时，ZZ是氢、-NRQRR、-N+(C1-6烷基)RQRR、-C(＝O)NSRT、-C(O)O(C1-6烷基)、-CO2H或氨基酸；
RQ是氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、-(CH2)1-3C3-6环烷基、-(CH2)1-3C1-3烷氧基、-(CH2)1-34到6元杂环或-(CH2)1-3 5到6元杂芳基，条件是
如果t1为0且两个Cy1都是那么RQ是C2-6烷基、C3-6环烷基、-(CH2)1-3C3-6环烷基、-(CH2)1-3C1-3烷氧基、-(CH2)1-3 4到6元杂环或-(CH2)1-3 5到6元杂芳基，并且
如果t1为0且至少一个Cy1不为那么ZZ是-NRQRR、-N+(C1-6烷基)RQRR或-C(＝O)NSRT，并且RQ是C1-6烷基、C3-6环烷基、-(CH2)1-3C3-6环烷基、-(CH2)1-3C1-3烷氧基、-(CH2)1-3 4到6元杂环或-(CH2)1-3 5到6元杂芳基；且
每一RR、RS和RT独立地是氢或C1-6烷基。
在一些实施例中，R1C是氢。在一些实施例中，R1C是羟基。在一些实施例中，R1C是C1-6烷氧基。在一些实施例中，R1C是甲氧基。在一些实施例中，R1C是-(C1-6烷基)C1-6烷氧基。在一些实施例中，R1C是甲氧基乙基。在一些实施例中，R1C是PEG2到PEG4。在一些实施例中，R1C是-(CH2)n-NRARB。在一些实施例中，RA和RB都是氢。在一些实施例中，RA和RB独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RA和RB中的一者是氢且RA和RB中的另一者是C1-3烷基。在一些实施例中，每一下标n为0。在一些实施例中，每一下标n为1。在一些实施例中，每一下标n为2。在一些实施例中，每一下标n为3、4、5或6。
在一些实施例中，R2C和R3C是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2C和R3C相同。在一些实施例中，R2C和R3C独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2C和R3C不同。
在一些实施例中，R2C是-(C＝O)m-NRCRD。在一些实施例中，R3C是-(C＝O)m-NRCRD。在一些实施例中，RC和RD都是氢。在一些实施例中，RC和RD各自独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RC和RD中的一者是氢且RC和RD中的另一者是C1-3烷基。在一些实施例中，每一下标m为0。在一些实施例中，每一下标m为1。
在一些实施例中，R2C是-(CH2)q-NRERF。在一些实施例中，R3C是-(CH2)q-NRERF。在一些实施例中，RE和RF都是氢。在一些实施例中，RE和RF各自独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RE和RF中的一者是氢且RE和RF中的另一者是C1-3烷基。
在一些实施例中，每一下标q为0。在一些实施例中，每一下标q是1到6的整数。
在一些实施例中，R2C是-CO2RM。在一些实施例中，R3C是-CO2RM。
在一些实施例中，RM是氢。在一些实施例中，RM是C1-3烷基。
在一些实施例中，R2C是-(CH2)q-ORM。在一些实施例中，R3C是-(CH2)q-ORM。
在一些实施例中，RM是氢。在一些实施例中，下标q为0。在一些实施例中，下标q为1。
在一些实施例中，R2C是-O(C＝O)-NRERF。在一些实施例中，R3C是-O(C＝O)-NRERF。在一些实施例中，RE和RF都是氢。在一些实施例中，RE和RF各自独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RE和RF中的一者是氢且RE和RF中的另一者是C1-3烷基。
在一些实施例中，R2C是-NRM(C＝O)-NRERF。在一些实施例中，R3C是-NRM(C＝O)-NRERF。在一些实施例中，RE、RF和RM都是氢。在一些实施例中，RE、RF和RM各自独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RE、RF和RM中的一者是C1-3烷基且RE、RF和RM中的其余者是氢。
在一些实施例中，R2C是-S(O)2NRCRD。
在一些实施例中，R3C是-S(O)2NRCRD。在一些实施例中，RC和RD都是氢。在一些实施例中，RC和RD各自独立地是C1-3烷基。在一些实施例中，RC和RD中的一者是氢且RC和RD中的另一者是C1-3烷基。
在一些实施例中，R2C是-S(O)2RM。在一些实施例中，R3C是-S(O)2RM。在一些实施例中，RM是氢。在一些实施例中，RM是C1-3烷基。
在一些实施例中，R2C连接于位置1处。在一些实施例中，R2C连接于位置2处。在一些实施例中，R2C连接于位置3处。在一些实施例中，R3C连接于位置1'处。在一些实施例中，R3C连接于位置2'处。在一些实施例中，R3C连接于位置3'处。
在一些实施例中，LE是-(C＝O)-。在一些实施例中，LE是-S(O)2-。
在一些实施例中，每一RI和RJ是氢。在一些实施例中，每一RI和RJ是C1-3烷基。在一些实施例中，RI和RJ中的一者是氢且RI和RJ中的另一者是C1-3烷基。
在一些实施例中，LC是-(CRIRJ)-。
在一些实施例中，下标s为0。在一些实施例中，下标s为1。
在一些实施例中，每一Cy1独立地是5到6元杂芳基。在一些实施例中，每一Cy1是任选地经一或多个RK取代的吡唑。在一些实施例中，每一Cy1独立地选自由以下组成的群组：吡唑、咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、恶唑、异恶唑、吡咯、哒嗪、吡啶、嘧啶和吡嗪，其各自任选地经一或多个RK取代。在一些实施例中，每一Cy1独立地选自由以下组成的群组：咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、恶唑、异恶唑、吡咯、哒嗪、吡啶、嘧啶和吡嗪，其各自任选地经一或多个RK取代。在一些实施例中，每一Cy1独立地是任选地经一或多个RK取代的C4-5环烷基。在一些实施例中，每一RK独立地选自由C组成的群组。在一些实施例中，每一RK独立地选自由以下组成的群组：甲基、乙基、-CF3和卤素。
在一些实施例中，每一Cy1相同。在一些实施例中，每一Cy1不同。
在一些实施例中，LAA是-(CH2)1-6-。在一些实施例中，LAA是-(CH2)1-3-。在一些实施例中，LAA是-(CH2)1-6O-。在一些实施例中，LAA是-(CH2)1-3O-。
在一些实施例中，Cy2是4到6元杂环。在一些实施例中，Cy2具有结构其中下标z1和z2中的每一者独立地是1到3的整数且**指示与LAA的连接。
在一些实施例中，下标z1和下标z2为1。在一些实施例中，下标z1和下标z2为2。
在一些实施例中，下标z1为1且下标z2为2。
在一些实施例中，Cy2具有结构其中
Z1是选自由以下组成的群组：-O-、-S-、-CRNRO-和-NRP-；
RN、RO和RP独立地是氢或C1-6烷基；
下标z3是1到3的整数；且
**指示与LAA的连接。
在一些实施例中，RN和RO是氢。在一些实施例中，RP是氢。在一些实施例中，RP是甲基。
在一些实施例中，Cy2是5到6元杂芳基。
在一些实施例中，Cy2是选自由以下组成的群组：
其中
Z2是＝CRN-或＝N-；
RN是氢或C1-6烷基；且
**指示与LAA的连接。
在一些实施例中，Z2是＝CRN-且RN是氢。在一些实施例中，Z2是＝N-。
在一些实施例中，Cy2是选自由以下组成的群组：
其中Z3是-O-或-S-且**指示与LAA、LD、NRHH、Y、W或LBB的连接。
在一些实施例中，**指示与LAA的连接。在一些实施例中，**指示与LD、NRHH、Y、W或LBB的连接。
在一些实施例中，Cy2是选自由以下组成的群组：
其中**指示与LAA的连接。
在一些实施例中，Cy2是选自由以下组成的群组：
其中
每一Z2独立地是＝CRN-或＝N-；且
每一RN是氢或C1-6烷基。
在一些实施例中，至少一个Z2是＝N-。在一些实施例中，一个Z2是＝N-且其余Z2是＝CRN-。在一些实施例中，两个Z2是-NRP-且其余Z2是＝CRN-。
在一些实施例中，RN是氢。
在一些实施例中，Cy2是选自由以下组成的群组：
在一些实施例中，Cy2是环丁基。
在一些实施例中，Rd3、Re3、Rg1、Rh1和Rj1独立地是氢或-CH3。
在一些实施例中，每一RU独立地选自-CO2H、-(C＝O)NH2、-S(O)2NH2、-CH2NH2和-CH2OH。
在一些实施例中，t1为0。在一些实施例中，t1为1。
在一些实施例中，u为1且LD是-(CH2)1-3。在一些实施例中，u为0。
在一些实施例中，ZZ是-NRQRR。在一些实施例中，RQ是C1-6烷基。在一些实施例中，RQ是C3-6环烷基。在一些实施例中，RQ是环丙基。在一些实施例中，RQ是-(CH2)1-3C3-6环烷基。在一些实施例中，RR是氢。
在一些实施例中，ZZ是-N+(C1-6烷基)RQRR。
在一些实施例中，ZZ是-C(＝O)NSRT。
在一些实施例中，ZZ是-C(O)O(叔丁基)。
在一些实施例中，ZZ是-CO2H。
在一些实施例中，ZZ是选自由以下组成的群组的氨基酸：丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、O-甲基丝氨酸、O-甲基天门冬氨酸、O-甲基谷氨酸、N-甲基赖氨酸、O-甲基酪氨酸、O-甲基组氨酸和O-甲基苏氨酸。
一些式(V)实施例包含选自由以下组成的群组的化合物：
和其医药上可接受的盐。
连接体
如本文所描述，如结合式(I)、(II)和(II-A)所定义的连接体(L)是连结XA或XB(在存在时)与M或M1的可选基团。举例来说，A在存在时共价连接到M或M1，并且Y在存在时连接到XB或XA(在XB不存在时)。在一些实施例中，连接体(L)具有式-(A)a-(W)w-(Y)y，其中：
A是任选地经1到3个Ra1取代的C2-20亚烷基或任选地经1到3个Rb1取代的2到40元亚杂烷基；
每一Ra1独立地选自由以下组成的群组：
C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、＝O、-NRd1Re1、-C(O)NRd1Re1、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rb1独立地选自由以下组成的群组：
C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、＝O、-NRd1Re1、-C(O)NRd1Re1、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rd1和Re1独立地是氢或C1-3烷基；
a为0或1；
W是1到12个氨基酸或具有以下结构：
其中Su是糖部分；
-OA-代表糖苷键；
每一Rg独立地是氢、卤素、-CN或-NO2；
W1不存在或是-O-C(＝O)-；
代表与式(II)化合物中的A(在存在时)或M的共价连接和与本文所描述ADC和化合物中的A、M或M1的共价连接；
*代表与式(II)化合物中的Y、XA或XB和与本文所描述ADC中的Y、XA或XB的共价连接；
w为0或1；
Y是自分解部分、非自分解可释放部分或非裂解部分；且
y为0或1。
在一些实施例中，-OA-代表糖苷键。在一些实施例中，糖苷键提供β-葡萄糖醛酸苷酶或β-甘露糖苷酶裂解位点。在一些实施例中，β-葡萄糖醛酸苷酶裂解位点可由人类溶酶体β-葡萄糖醛酸苷酶裂解。在一些实施例中，β-甘露糖苷酶裂解位点可由人类溶酶体β-甘露糖苷酶裂解。
在一些实施例中，a为0。在一些实施例中，a为1。在一些实施例中，w为0。在一些实施例中，w为1。在一些实施例中，y为0。在一些实施例中，y为1。在一些实施例中，a+y+w＝1。在一些实施例中，a+y+w＝2。在一些实施例中，a+y+w＝3。在一些实施例中，a+y+w＝0(也就是，连接体(L)不存在)。
在一些实施例中，A是任选地经1-3个Ra1取代的C2-20亚烷基。在一些实施例中，A是任选地经1-3个Ra1取代的C2-10亚烷基。在一些实施例中，A是任选地经1-3个Ra1取代的C4-10亚烷基。在一些实施例中，A是经Ra1取代的C2-20亚烷基。在一些实施例中，A是经Ra1取代的C2-10亚烷基。在一些实施例中，A是经Ra1取代的C2-10亚烷基。
在一些实施例中，每一Ra1独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、＝O、-NRd1Re1、-C(O)NRd1Re1、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)。在一些实施例中，每一Ra1是C1-6烷基。在一些实施例中，每一Ra1是C1-6卤代烷基。在一些实施例中，每一Ra1是C1-6烷氧基。在一些实施例中，每一Ra1是C1-6卤代烷氧基。在一些实施例中，每一Ra1是卤素。在一些实施例中，每一Ra1是-OH。在一些实施例中，每一Ra1是＝O。在一些实施例中，每一Ra1是-NRd1Re1。在一些实施例中，每一Ra1是C(O)NRd1Re1。在一些实施例中，每一Ra1是-C(O)(C1-6烷基)。在一些实施例中，每一Ra1是-C(O)O(C1-6烷基)。在一些实施例中，一种情形的Ra1是-NRd1Re1。在一些实施例中，A是经1或2个各自是＝O的Ra1取代的C2-20亚烷基。
在一些实施例中，Rd1和Re1独立地是氢或C1-3烷基。在一些实施例中，Rd1和Re1中的一者是氢，并且Rd1和Re1中的另一者是C1-3烷基。在一些实施例中，Rd1和Re1都是氢或C1-3烷基。在一些实施例中，Rd1和Re1都是C1-3烷基。在一些实施例中，Rd1和Re1都是甲基。
在一些实施例中，A是C2-20亚烷基。在一些实施例中，A是C2-10亚烷基。在一些实施例中，A是C2-10亚烷基。在一些实施例中，A是C2-6亚烷基。在一些实施例中，A是C4-10亚烷基。
在一些实施例中，A是任选地经1-3个Rb1取代的2到40元亚杂烷基。在一些实施例中，A是任选地经1-3个Rb1取代的2到20元亚杂烷基。在一些实施例中，A是任选地经1-3个Rb1取代的2到12元亚杂烷基。在一些实施例中，A是任选地经1-3个Rb1取代的4到12元亚杂烷基。在一些实施例中，A是任选地经1-3个Rb1取代的4到8元亚杂烷基。在一些实施例中，A是经Rb1取代的2到40元亚杂烷基。在一些实施例中，A是经Rb1取代的2到20元亚杂烷基。在一些实施例中，A是经Rb1取代的2到12元亚杂烷基。在一些实施例中，A是经Rb1取代的4到12元亚杂烷基。在一些实施例中，A是经Rb1取代的4到8元亚杂烷基。
在一些实施例中，每一Rb1独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、-NRd1Re1、-C(O)NRd1Re1、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)。在一些实施例中，每一Rb1是C1-6烷基。在一些实施例中，每一Rb1是C1-6卤代烷基。在一些实施例中，每一Rb1是C1-6烷氧基。在一些实施例中，每一Rb1是C1-6卤代烷氧基。在一些实施例中，每一Rb1是卤素。在一些实施例中，每一Rb1是-OH。在一些实施例中，每一Rb1是-NRd1Re1。在一些实施例中，每一Rb1是C(O)NRd1Re1。在一些实施例中，每一Rb1是-C(O)(C1-6烷基)。在一些实施例中，每一Rb1是-C(O)O(C1-6烷基)。在一些实施例中，一种情形的Rb1是-NRd1Re1。
在一些实施例中，Rd1和Re1独立地是氢或C1-3烷基。在一些实施例中，Rd1和Re1中的一者是氢，并且Rd1和Re1中的另一者是C1-3烷基。在一些实施例中，Rd1和Re1都是氢或C1-3烷基。在一些实施例中，Rd1和Re1都是C1-3烷基。在一些实施例中，Rd1和Re1都是甲基。
在一些实施例中，A是2到40元亚杂烷基。在一些实施例中，A是2到20元亚杂烷基。在一些实施例中，A是2到12元亚杂烷基。在一些实施例中，A是4到12元亚杂烷基。在一些实施例中，A是4到8元亚杂烷基。在一些实施例中，A是选自由以下组成的群组：
其中代表与W或Y的共价连接，且*代表与M1或M(例如分别在式(I)或(II)的化合物中)的共价键联。在一些实施例中，M是琥珀酰亚胺。在一些实施例中，M是水解的琥珀酰亚胺。在一些实施例中，M1是琥珀酰亚胺。在一些实施例中，M1是水解的琥珀酰亚胺。应理解，水解的琥珀酰亚胺可以两种区域异构体形式存在。下文针对M的水解来例示那些形式，其中代表来自所述水解的区域异构体的结构是式M’和M”；其中毗邻键的波浪线是如针对A所定义。
在一些实施例中，M’是在一些实施例中，M’是在一些实施例中，M”是在一些实施例中，M”是
在一些实施例中，A是PEG4到PEG12。在一些实施例中，A是PEG4到PEG8。代表性A基团包含(但不限于)：
在一些实施例中，w为0。在一些实施例中，w为1。
在一些实施例中，W是单一氨基酸。在一些实施例中，W是单一天然氨基酸。在一些实施例中，W是包含2-12个氨基酸的肽，其中每一氨基酸独立地是天然或非天然氨基酸。在一些实施例中，天然或非天然氨基酸是D或L异构体。在一些实施例中，每一氨基酸独立地是天然氨基酸。在一些实施例中，每一W独立地是天然或非天然α、β或γ氨基酸。在一些实施例中，W包括连接到非天然氨基酸的天然氨基酸。在一些实施例中，W包括连接到天然或非天然氨基酸的D异构体的天然或非天然氨基酸。在一些实施例中，W是二肽。在一些实施例中，W是三肽。在一些实施例中，W是四肽。在一些实施例中，W是五肽。在一些实施例中，W是六肽。在一些实施例中，W具有7、8、9、10、11或12个氨基酸。在一些实施例中，W的每一氨基酸独立地选自由以下组成的群组：缬氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、天门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、高丝氨酸甲醚、天门冬氨酸甲酯、N,N-二甲基赖氨酸、精氨酸、缬氨酸-丙氨酸、缬氨酸-瓜氨酸、苯丙氨酸-赖氨酸和瓜氨酸。在一些实施例中，W是天门冬氨酸。在一些实施例中，W是赖氨酸。在一些实施例中，W是甘氨酸。在一些实施例中，W是丙氨酸。在一些实施例中，W是天门冬氨酸甲酯。在一些实施例中，W是N,N-二甲基赖氨酸。在一些实施例中，W是高丝氨酸甲醚。在一些实施例中，W是丝氨酸。在一些实施例中，W是缬氨酸-丙氨酸。
在一些实施例中，w为1；W具有1-12个氨基酸；且W与XB之间或W与Y之间的键可由肿瘤相关蛋白酶以酶促方式裂解。在一些实施例中，肿瘤相关蛋白酶是组织蛋白酶。在一些实施例中，肿瘤相关蛋白酶是组织蛋白酶B、C或D。
在一些实施例中，w为1；且W具有以下结构：
其中Su是糖部分；
-OA-代表糖苷键；
每一Rg独立地是氢、卤素、-CN或-NO2；
W1不存在或是-O-C(＝O)-；
代表与式(II)化合物中的A或M的共价连接；且
*代表与式(II)化合物中的Y、XA或XB的共价连接；
在一些实施例中，w为1；且W具有以下结构：
其中Su是糖部分；
-OA-代表糖苷键；
每一Rg独立地是氢、卤素、-CN或-NO2；
W1不存在或是-O-C(＝O)-；
代表与本文所描述的ADC中的A或M的共价连接；且
*代表与本文所描述的ADC中的Y、XA或XB的共价连接；
在一些实施例中，-OA-代表糖苷键。在一些实施例中，糖苷键提供β-葡萄糖醛酸苷酶或β-甘露糖苷酶裂解位点。在一些实施例中，β-葡萄糖醛酸苷酶或β-甘露糖苷酶裂解位点可由人类溶酶体β-葡萄糖醛酸苷酶或由人类溶酶体β-甘露糖苷酶裂解。
在一些实施例中，W是在一些实施例中，W是在一些实施例中，W是
在一些实施例中，每一Rg是氢。在一些实施例中，一个Rg是氢，并且其余Rg独立地是卤基、-CN或-NO2。在一些实施例中，两个Rg是氢，并且其余Rg是卤基、-CN或-NO2。
在一些实施例中，一个Rg是卤素、-CN或-NO2，并且其它Rg是氢。在一些实施例中，每一Rg是氢。
在一些实施例中，OA-Su在生理学pH下为电中性。在一些实施例中，OA-Su是甘露糖。在一些实施例中，OA-Su是在一些实施例中，OA-Su包括羧酸酯部分。在一些实施例中，OA-Su是葡萄糖醛酸。在一些实施例中，OA-Su是
在一些实施例中，W是在一些实施例中，W是在一些实施例中，W是在一些实施例中，W是
在一些实施例中，a为0。
在一些实施例中，y为0。在一些实施例中，y为1。
在一些实施例中，Y是自分解部分、非自分解可释放部分或非裂解部分。在一些实施例中，Y是自分解部分或非自分解可释放部分。在一些实施例中，Y是自分解部分。在一些实施例中，Y是非自分解部分。
非自分解部分是需要酶促裂解者，其中部分或所有基团在药物单元从ADC裂解之后仍与其结合，由此形成游离药物。非自分解部分的实例包含(但不限于)：-甘氨酸-和-甘氨酸-甘氨酸。在Y是-甘氨酸-或-甘氨酸-甘氨酸-的ADC发生酶促裂解(例如经由癌细胞相关蛋白酶或淋巴细胞相关蛋白酶)时，药物单元从ADC裂解，从而游离药物包含来自Y的甘氨酸或甘氨酸-甘氨酸基团。在一些实施例中，独立水解反应发生于靶细胞内或其附近，从而进一步从游离药物裂解甘氨酸或甘氨酸-甘氨酸基团。在一些实施例中，如本文所描述的非自分解部分的酶促裂解不产生任何其它水解步骤。
自分解部分是指能够将两个间隔化学部分一起共价连接到通常稳定的三联分子的双功能化学部分。如果自分解基团与第一部分的键裂解，那么其将自发地从第二化学部分分离。举例来说，自分解部分包含任选地经一或多个烷基、烷氧基、卤素、氰基或硝基取代的对氨基苄醇(PAB)。自分解部分的其它实例包含(但不限于)在电子上类似于PAB基团的芳香族化合物(例如2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物)(例如参见海(Hay)等人，1999，生物有机化学与医药化学通讯(Bioorg.Med.Chem.Lett.)9:2237)、邻或对氨基苄基缩醛、经取代和未经取代的4-氨基丁酰胺(例如参见罗德里格斯(Rodrigues)等人，1995，化学生物学(Chemistry Biology)2:223)、经适当取代的双环[2.2.1]和双环[2.2.2]环系统(例如参见斯托姆(Storm)等人，1972，美国化学学会杂志(J.Amer.Chem.Soc.)94:5815)、2-氨基苯基丙酰胺(例如参见阿姆斯贝里(Amsberry)等人，1990，有机化学杂志(J.Org.Chem.)55:5867)和在甘氨酸α位处经取代的含胺药物的消除(例如参见金斯伯里(Kingsbury)等人，1984，医药化学杂志(J.Med.Chem.)27:1447)。
在一些实施例中，Y是PAB基团，其任选地经一或多个烷基、烷氧基、卤素、氰基或硝基取代；对氨基苄基氧基-羰基(PABC)基团，其任选地经糖部分取代；-甘氨酸-；-甘氨酸-甘氨酸-；或具支链双(羟甲基)苯乙烯(BHMS)单元，其能够纳入(和释放)多个药物单元。
在一些实施例中，-(A)a-(W)w-(Y)y包括在ADC已内化到靶细胞中后释放游离药物的非自分解可释放连接体。在一些实施例中，-(A)a-(W)w-(Y)y包括在靶向细胞内或其附近释放游离药物的可释放连接体。可释放连接体拥有识别位点，例如肽裂解位点、糖裂解位点或二硫化物裂解侧。在一些实施例中，每一可释放连接体是二肽。在一些实施例中，每一可释放连接体是二硫化物。在一些实施例中，每一可释放连接体是腙。在一些实施例中，每一可释放连接体独立地是Val-Cit-、-Phe-Lys-或-Val-Ala-。在一些实施例中，每一可释放连接体在结合到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺时独立地是琥珀酰亚胺基-己酰基(mc)、琥珀酰亚胺基-己酰基-缬氨酸-瓜氨酸(sc-vc)、琥珀酰亚胺基-己酰基-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄基氧基羰基(sc-vc-PABC)或SDPr-vc(其中“S”是指琥珀酰亚胺基)。
在一些实施例中，-(A)a-(W)w-(Y)y包括非裂解连接体。非裂解连接体为业内所已知且可作为“Y”基团适用于本文所描述的ADC中。非裂解连接体能够以通常稳定和共价的方式将药物单元连接到抗体且大体上抵抗酸诱导裂解、光诱导裂解、肽酶或酯酶诱导裂解和二硫键裂解。可经由替代机制(例如蛋白水解性抗体降解)从含有非裂解连接体的ADC释放游离药物。在一些实施例中，药物单元可作为ADC的一部分(也就是在仍经由连接体结合到抗体时)施加生物效应。
形成非裂解连接体-马来酰亚胺和非裂解连接体-琥珀酰亚胺化合物为业内所已知且可适用于本文中。实例性试剂包括基于马来酰亚胺基或的部分，例如6-马来酰亚胺基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(MCC)、4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷甲酸N-琥珀酰亚胺基酯(SMCC)、N-琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-羧基-(6-酰胺基己酸酯)(LC-SMCC)、马来酰亚胺基十一烷酸N-琥珀酰亚胺基酯(KMUA)、γ-马来酰亚胺基丁酸N-琥珀酰亚胺基酯(GMBS)、c-马来酰亚胺基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(EMCS)、间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)、N-(α-马来酰亚胺基乙酰氧基)-琥珀酰亚胺酯[AMAS]、琥珀酰亚胺基-6-(β-马来酰亚胺基丙酰胺基)己酸酯(SMPH)、4-(对马来酰亚胺基苯基)-丁酸N-琥珀酰亚胺基酯(SMPB)和N-(对马来酰亚胺基苯基)异氰酸酯(PMPI)、N-琥珀酰亚胺基-4-(碘乙酰基)-氨基苯甲酸酯(STAB)、碘乙酸N-琥珀酰亚胺基酯(SIA)、溴乙酸N-琥珀酰亚胺基酯(SBA)和3-(溴乙酰胺基)丙酸N-琥珀酰亚胺基酯(SBAP)。用于本文所描述的ADC中的其它“A-M”和“A-M1”基团可参见(例如)美国专利第8,142,784号，所述专利的全部内容以引用方式并入本文中。
在一些实施例中，y为1；且Y是其中代表与式(II)化合物中的W、A或M的连结；且*代表与式(II)化合物中的XA或XB的连结。
在一些实施例中，y为1；且Y是其中代表与本文所描述的ADC中的W、A、M或M1的连结；且*代表与本文所描述的ADC中的XA或XB的连结。
在一些实施例中，-(A)a-(W)w-(Y)y-包括非释放性连接体，其中药物是在ADC已内化到靶细胞中并降解(从而释放药物)之后释放。
在一些实施例中，连接体(L)经选自由PEG2到PEG20组成的群组的聚乙二醇部分取代。在一些实施例中，L经选自由以下组成的群组的聚乙二醇部分取代：PEG2、PEG4、PEG6、PEG8、PEG10、PEG12、PEG16和PEG20。在一些实施例中，L未经选自由PEG2到PEG20组成的群组的聚乙二醇部分取代。
可使用多分散PEG、单分散PEG和离散PEG来制备ADC和其中间体。多分散PEG是具有不同大小和分子量的异质混合物，而单分散PEG通常是从异质混合物纯化而来且由此提供单一链长和分子量。离散PEG是以逐步方式合成，而非经由聚合工艺合成。离散PEG提供具有界定和指定链长的单一分子。PEG单元的-CH2CH2O-亚单元的数量(例如)介于8到24或12到24之间，分别称为PEG8到PEG24和PEG12到PEG24。
本文所提供的PEG部分(其还称为PEG单元)包括一或多条聚乙二醇链。聚乙二醇链(例如)以直链、具支链或星形配置连接到一起。通常，PEG单元的至少一条聚乙二醇链是在一端经衍生以用于共价连接到ADC组分(例如L)上的适当位点。与ADC的实例性连接是借助非条件性可裂解键联或经由条件性可裂解键联。实例性连接是经由酰胺键联、醚键联、酯键联、腙键联、肟键联、二硫化物键联、肽键联或三唑键联。在一些实施例中，与式(I)ADC的连接是借助非条件性可裂解键联。在一些实施例中，与ADC的连接并非经由酯键联、腙键联、肟键联或二硫化物键联。在一些实施例中，与ADC的连接并非经由腙键联。
条件性可裂解键联是指在循环于血浆中时对裂解并不大体上敏感但在细胞内或肿瘤内环境中对裂解敏感的键联。非条件性可裂解键联是在投与ADC的个体中的任何生物相关环境中对裂解并不大体上敏感者。腙化学水解、二硫键还原和葡萄糖醛酸苷单元的肽键或糖苷键的酶促裂解(如由WO 2007/011968所描述，所述案件的全部内容以引用方式并入)是条件性可裂解键联的实例。
在一些实施例中，PEG单元在L处直接连接到ADC(或其中间体)。在那些实施例中，PEG单元的另一末端(或端)是自由的且未系连(也就是未共价连接)，并且在一些实施例中其是甲氧基、羧酸、醇或其它适宜官能团。甲氧基、羧酸、醇或其它适宜官能团用作PEG单元的末端聚乙二醇亚单元的帽。未系连意指，PEG单元并未在所述未系连位点处共价连接到药物单元、抗体或药物单元和/或抗体的连接组分。此一配置可容许足够长的PEG单元相对于呈结合形式(也就是作为药物单元(D))的药物呈平行定向。对于PEG单元包括一条以上聚乙二醇链的那些实施例来说，多条聚乙二醇链是独立选择，例如是相同或不同化学部分(例如具有不同分子量或-CH2CH2O-亚单元数量的聚乙二醇链)。具有多条聚乙二醇链的PEG单元在单一连接位点处连接到ADC。所属领域技术人员应理解，除包括重复聚乙二醇亚单元外，PEG单元还可含有非PEG物质(例如用以促进多条聚乙二醇链彼此的偶合或用以促进与ADC的偶合)。非PEG物质是指PEG单元中并非重复-CH2CH2O-亚单元的一部分的原子。在本文所提供的一些实施例中，PEG单元包括两条彼此经由非PEG元件连接的单体聚乙二醇链。在本文所提供的其它实施例中，PEG单元包括两条连接到中心核心(其连接到ADC)的线性聚乙二醇链(也就是，PEG单元本身具支链)。
所属领域技术人员可利用诸多PEG连接方法：例如参见：古德森(Goodson)等人，(1990)生物技术(Bio/Technology)8:343(在定点诱变之后于糖基化位点处对白介素-2实施聚乙二醇化)；EP 0 401 384(使PEG偶合到G-CSF)；马利克(Malik)等人，(1992)实验血液学(Exp.Hematol.)20:1028-1035(使用三氟代乙烷磺酰氯对GM-CSF实施聚乙二醇化)；ACTPub.No.WO 90/12874(使用半胱氨酸特异性mPEG衍生物对含有重组引入的半胱氨酸残基的红细胞生成素实施聚乙二醇化)；美国专利第5,757,078号(对EPO肽实施聚乙二醇化)；美国专利第5,672,662号(用于生物技术应用的经丙酸或丁酸和其功能衍生物单取代的聚(乙二醇)和相关聚合物)；美国专利第6,077,939号(对肽的N-末端α碳实施聚乙二醇化)；委罗内塞(Veronese)等人，(1985)应用生物化学与生物技术(Appl.Biochem.Bioechnol)11:141-142(使用PEG-硝基苯基碳酸酯(“PEG-NPC”)或PEG-三氯苯基碳酸酯对肽的N-末端α碳实施聚乙二醇化)；和委罗内塞(2001)生物材料(Biomaterials)22:405-417(关于肽和蛋白质聚乙二醇化的综述文章)。
举例来说，PEG单元可经由含聚乙二醇化合物和氨基酸残基的反应性基团共价结合到氨基酸残基。氨基酸残基的反应性基团包含对活化PEG分子具有反应性者(例如游离氨基或羧基)。举例来说，N-末端氨基酸残基和赖氨酸(K)残基具有游离氨基；且C-末端氨基酸残基具有游离羧基。硫醇基(如半胱氨酸残基上所发现)还可用作用于与PEG形成共价连接的反应性基团。另外，已描述在多肽的C-末端特异性引入活化基团(例如酰肼、醛和芳香族-氨基)的酶辅助方法。参见施瓦茨(Schwarz)等人，(1990)酶学方法(Methods Enzymol.)184:160；罗斯(Rose)等人，(1991)生物结合物化学(Bioconjugate Chem.)2:154；和盖特纳(Gaertner)等人，(1994)生物化学杂志(J.Biol.Chem.)269:7224。
在一些实施例中，含聚乙二醇化合物使用具有不同反应性部分的甲氧基化PEG(“mPEG”)与氨基形成共价连接。所述反应性部分的非限制性实例包含琥珀酸琥珀酰亚胺基酯(SS)、碳酸琥珀酰亚胺基酯(SC)、mPEG-亚氨酸酯、对硝基苯基碳酸酯(NPC)、丙酸琥珀酰亚胺基酯(SPA)和氰尿酰氯。所述mPEG的非限制性实例包含mPEG-琥珀酸琥珀酰亚胺基酯(mPEG-SS)、mPEG2-琥珀酸琥珀酰亚胺基酯(mPEG2-SS)；mPEG-碳酸琥珀酰亚胺基酯(mPEG-SC)、mPEG2-碳酸琥珀酰亚胺基酯(mPEG2-SC)；mPEG-亚氨酸酯、mPEG-对硝基苯基碳酸酯(mPEG-NPC)、mPEG-亚氨酸酯；mPEG2-对硝基苯基碳酸酯(mPEG2-NPC)；mPEG-丙酸琥珀酰亚胺基酯(mPEG-SPA)；mPEG2-丙酸琥珀酰亚胺基酯(mPEG--SPA)；mPEG-N-羟基-琥珀酰亚胺(mPEG-NHS)；mPEG2-N-羟基-琥珀酰亚胺(mPEG2--NHS)；mPEG-氰尿酰氯；mPEG2-氰尿酰氯；mPEG2-离氨醇-NPC和mPEG2-Lys-NHS。
通常，对至少一条构成PEG的聚乙二醇链实施官能化以共价连接到ADC。作为PEG前体的含聚乙二醇化合物的官能化包含(例如)经由胺、硫醇、NHS酯、马来酰亚胺、炔烃、叠氮化物、羰基或其它官能团进行者。在一些实施例中，PEG进一步包括非PEG物质(也就是不包括-CH2CH2O-的物质)，以提供到ADC的偶合或在构筑含聚乙二醇化合物或PEG时促进两条或更多条聚乙二醇链的偶合。
在一些实施例中，在ADC中存在PEG单元能够对所得ADC的药物代谢动力学具有两个潜在影响。一个影响是降低了清除(且由此增加暴露)，此是源于由药物单元的所暴露疏水性元件诱导的非特异性相互作用的减少。第二影响是降低了体积和分布速率，此有时是源于ADC分子量的增加。增加聚乙二醇亚单元的数量会增加结合物的流体动力学半径，从而通常降低扩散性。继而，降低的扩散性通常减弱ADC渗透到肿瘤中的能力。参见施密特(Schmidt)和维特鲁普(Wittrup)，分子癌症治疗(Mol Cancer Ther)2009；8:2861-2871。因这两种竞争性药物代谢动力学效应，可能需要使用足够大的PEG单元以降低ADC清除，由此增加血浆暴露，但不应大到大大减弱其扩散性，此会导致干扰ADC到达预期靶细胞群体的能力。例如参见US2016/0310612的实例1、18和21，所述案件以引用方式并入本文中(例如关于选择用于特定药物单元、连接体和/或药物-连接体化合物的最优选PEG单元大小的方法)。
在一组实施例中，PEG单元包括一或多条线性聚乙二醇链，每一条链具有至少8个亚单元、至少9个亚单元、至少10个亚单元、至少11个亚单元、至少12个亚单元、至少13个亚单元、至少14个亚单元、至少15个亚单元、至少16个亚单元、至少17个亚单元、至少18个亚单元、至少19个亚单元、至少20个亚单元、至少21个亚单元、至少22个亚单元、至少23个亚单元或至少24个亚单元。在一些实施例中，PEG包括总共至少8个亚单元、至少10个亚单元或至少12个亚单元。在一些所述实施例中，PEG包括总共不超过约72个亚单元。在一些所述实施例中，PEG包括总共不超过约36个亚单元。在一些实施例中，PEG包括约8到约24个亚单元(称为PEG8到PEG24)。
在另一组实施例中，PEG单元包括总共8到72、8到60、8到48、8到36或8到24个亚单元、9到72、9到60、9到48、9到36或9到24个亚单元、10到72、10到60、10到48、10到36或10到24个亚单元、11到72、11到60、11到48、11到36或11到24个亚单元、12到72、12到60、12到48、12到36或12到24个亚单元、13到72、13到60、13到48、13到36或13到24个亚单元、14到72、14到60、14到48、14到36或14到24个亚单元、15到72、15到60、15到48、15到36或15到24个亚单元、16到72、16到60、16到48、16到36或16到24个亚单元、17到72、17到60、17到48、17到36或17到24个亚单元、18到72、18到60、18到48、18到36或18到24个亚单元、19到72、19到60、19到48、19到36或19到24个亚单元、20到72、20到60、20到48、20到36或20到24个亚单元、21到72、21到60、21到48、21到36或21到24个亚单元、22到72、22到60、22到48、22到36或22到24个亚单元、23到72、23到60、23到48、23到36或23到24个亚单元或24到72、24到60、24到48、24到36或24个亚单元。
可用于本文所提供的任一实施例中的阐释性直链PEG如下：
其中波浪线指示与ADC的连接位点，并且每一下标b独立地选自由以下组成的群组：7到72、8到72、10到72、12到72、6到24或8到24。在一些实施例中，每一下标b为约8、约12或约24。
如本文所描述，PEG单元可经选择以便其改良所得ADC的清除，但不显著影响ADC渗透到肿瘤中的能力。
在一些实施例中，PEG为约300道尔顿到约5千道尔顿、约300道尔顿到约4千道尔顿、约300道尔顿到约3千道尔顿、约300道尔顿到约2千道尔顿、约300道尔顿到约1千道尔顿或其间的任何值。在一些实施例中，PEG具有至少8、10或12个亚单元。在一些实施例中，PEG单元为PEG8到PEG72，例如PEG8、PEG10、PEG12、PEG16、PEG20、PEG24、PEG28、PEG32、PEG36、PEG48或PEG72。
在一些实施例中，除ADC的聚乙二醇化，在ADC中不存在其它PEG亚单元(也就是，不存在作为本文所提供的结合物和连接体的任一其它组分(例如A和XB)的一部分的PEG亚单元)。在一些实施例中，除PEG外，在ADC或其中间体中存在不超过8、不超过7、不超过6、不超过5、不超过4、不超过3、不超过2或不超过1个其它聚乙二醇(-CH2CH2O-)亚单元(也就是，在本文所提供的ADC(或其中间体)的其它组分中存在不超过8、7、6、5、4、3、2或1个其它聚乙二醇亚单元)。
应了解，在提到PEG单元的聚乙二醇亚单元时且根据上下文，亚单元数量可代表平均数量，例如在提到ADC或其中间体的群体和/或使用多分散PEG时。
使用方法
在一些实施例中，本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐用于将所结合药物递送到靶细胞中。不受限于理论，在一些实施例中，ADC与靶细胞表面上的抗原缔合。药物单元然后可以游离药物形式释放以诱导其生物效应(例如免疫刺激效应)。药物单元还可保持连接到抗体或抗体的一部分和/或连接体，并诱导其生物效应。
一些实施例提供治疗有需要的个体的癌症的方法，其包括向个体投与治疗有效量的本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐。
一些实施例提供治疗有需要的个体的癌症的方法，其包括向个体投与治疗有效量的包括本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐的组合物。
一些实施例提供诱导有需要的个体中的抗肿瘤免疫反应的方法，其包括向个体投与治疗有效量的包括本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐的组合物。
一些实施例提供诱导有需要的个体中的抗肿瘤免疫反应的方法，其包括向个体投与治疗有效量的本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐。
一些实施例提供治疗有需要的个体的癌症的方法，其包括向个体投与治疗有效量的如本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐与另一抗癌疗法(例如手术和辐射疗法)和/或抗癌剂(例如免疫疗法，例如尼沃鲁单抗(nivolumab)或派姆单抗(pembrolizumab))的组合。可在向个体投与抗癌疗法和/或抗癌剂之前、期间或之后投与本文所描述的ADC。在一些实施例中，可在使用辐射治疗后和/或在手术之后向个体投与本文所描述的ADC。
一些实施例提供延迟或预防对抗癌剂的获得性抗性的方法，其包括向处于产生或具有针对抗癌剂的获得性抗性的风险下的患者投与治疗有效量的如本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐。在一些实施例中，向患者投与一定剂量的抗癌剂(例如与向患者投与如本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐的剂量大体上同时)。
一些实施例提供延迟和/或预防在个体中发生抵抗抗癌剂的癌症的方法，其包括在投与治疗有效量的抗癌剂之前、期间或之后向个体投与治疗有效量的如本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐。
本文所描述的ADC可用于抑制癌细胞繁殖，使癌细胞发生细胞凋亡，增加癌细胞的吞噬作用，和/或治疗有需要的个体的癌症。ADC可由此用于癌症治疗的各种环境中。可使用ADC将药物递送到癌细胞中。不受限于理论，在一些实施例中，ADC的抗体与癌细胞相关抗原结合或缔合。抗原可连接到癌细胞或可为与癌细胞缔合的细胞外基质蛋白。药物可释放于癌细胞附近，由此募集/活化免疫细胞以攻击癌细胞。在一些实施例中，药物单元从ADC裂解于癌细胞外部。在一些实施例中，药物单元保持连接到与抗原结合的抗体。
在一些实施例中，抗体结合到癌细胞。在一些实施例中，抗体结合到癌细胞表面上的癌细胞抗原。在一些实施例中，抗体结合到作为与肿瘤细胞或癌细胞缔合的细胞外基质蛋白的癌细胞抗原。在一些实施例中，ADC的抗体与癌症相关细胞或癌症相关细胞上的抗原结合或缔合。在一些实施例中，癌症相关细胞是肿瘤中的基质细胞，例如癌症相关纤维母细胞(CAF)。
在一些实施例中，ADC的抗体与免疫细胞或免疫细胞相关抗原结合或缔合。抗原可连接到免疫细胞或可为与免疫细胞缔合的细胞外基质蛋白。药物可释放于免疫细胞附近，由此募集/活化免疫细胞以攻击癌细胞。在一些实施例中，药物单元从ADC裂解于免疫细胞外部。在一些实施例中，药物单元保持连接到与抗原结合的抗体。在一些实施例中，免疫细胞是淋巴细胞、抗原呈递细胞、天然杀手(NK)细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、先天性淋巴样细胞或前述各项中的任一者的组合。在一些实施例中，免疫细胞是选自由以下组成的群组：B细胞、浆细胞、T细胞、NKT细胞、伽马-德尔塔T(γδT)细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、天然杀手(NK)细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、先天性淋巴样细胞和前述各项中的任一者的组合。
特定癌细胞的抗体的特异性可能对于确定最有效治疗的那些肿瘤或癌症较为重要。举例来说，在一些实施例中，靶向存在于造血癌细胞上的癌细胞抗原的ADC可治疗血液学恶性肿瘤。在一些实施例中，ADC靶向存在于实体肿瘤的异常细胞上的癌细胞抗原以用于治疗所述实体肿瘤。在一些实施例中，ADC是针对造血性癌症(例如淋巴瘤(何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin Lymphoma)和非何杰金氏淋巴瘤)和白血病)的异常细胞。
在一些实施例中，通过投与ADC来治疗或抑制癌症，包含(但不限于)肿瘤、转移或特征在于异常细胞(其特征在于不受控细胞生长)的其它疾病或病症。
在一些实施例中，个体先前已经受癌症治疗。在一些实施例中，先前治疗是手术、辐射疗法、投与一或多种抗癌剂或前述各项中的任一者的组合。
在本文所描述的任一方法中，癌症是选自由以下组成的群组：腺癌、肾上腺皮质癌、肾上腺神经母细胞瘤、肛门鳞状细胞癌、阑尾腺癌、膀胱尿路上皮癌、胆管腺癌、膀胱癌、膀胱尿路上皮癌、骨脊索瘤、淋巴细胞性慢性骨髓白血病、非淋巴细胞性急性骨髓细胞性骨髓白血病、骨髓淋巴增殖性疾病、骨髓多发性骨髓瘤、骨肉瘤、脑星形细胞瘤、脑神经胶母细胞瘤、脑髓母细胞瘤、脑膜瘤、脑寡树突神经胶细胞瘤、乳房腺样囊性癌、乳癌、原位乳房导管癌、乳房侵袭性导管癌、乳房侵袭性小叶癌、乳房化生癌、子宫颈神经内分泌癌、子宫颈鳞状细胞癌、结肠腺癌、结肠类癌肿瘤、十二指肠腺癌、子宫内膜样肿瘤、食道腺癌、食道-胃癌、眼内黑色素瘤、眼内鳞状细胞癌、眼睛泪管癌、输卵管浆液性癌、胆囊腺癌、胆囊血管球肿瘤、胃食道结合部腺癌、头颈腺样囊性癌、头颈癌、头颈神经母细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肾嫌色性癌、肾髓质癌、肾细胞癌、肾乳头状癌、肾肉瘤样癌、肾尿路上皮癌、肾癌、淋巴细胞性白血病、淋巴细胞性慢性白血病、肝胆管癌、肝细胞癌、肝癌、肺腺癌、肺腺鳞状癌、肺非典型类癌、肺癌肉瘤、肺大细胞神经内分泌癌、肺非小细胞肺癌、肺肉瘤、肺肉瘤样癌、肺小细胞癌、肺小细胞未分化癌、肺鳞状细胞癌、上呼吸消化道鳞状细胞癌、上呼吸消化道癌、弥漫性大B细胞淋巴结淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤-淋巴结淋巴瘤、纵隔B细胞淋巴结淋巴瘤、浆母细胞性肺腺癌-淋巴结淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、鼻咽和鼻旁窦未分化癌、卵巢癌、卵巢癌肉瘤、卵巢透明细胞癌、卵巢上皮癌、卵巢粒层细胞肿瘤、卵巢浆液性癌、胰脏癌、胰脏导管腺癌、胰脏神经内分泌癌、腹膜间皮瘤、腹膜浆液性癌、胎盘绒毛膜癌、胸膜间皮瘤、前列腺腺泡腺癌、前列腺癌、直肠腺癌、直肠鳞状细胞癌、皮肤附属器癌、皮肤基底细胞癌、皮肤黑色素瘤、皮肤默克尔细胞(Merkel cell)癌、皮肤鳞状细胞癌、小肠腺癌、小肠胃肠道基质肿瘤(GIST)、大肠/结肠癌、大肠腺癌、软组织血管肉瘤、软组织尤恩氏肉瘤(soft tissue Ewing sarcoma)、软组织血管内皮瘤、软组织炎症性肌纤维母细胞肿瘤、软组织平滑肌肉瘤、软组织脂肪肉瘤、软组织神经母细胞瘤、软组织副神经节瘤、软组织血管周上皮样细胞肿瘤、软组织肉瘤、软组织滑膜肉瘤、胃腺癌、扩散型胃腺癌、肠型胃腺癌、肠型胃腺癌、胃平滑肌肉瘤、胸腺癌、淋巴细胞性胸腺瘤、甲状腺乳头状癌、未明原发腺癌、未明原发癌、未明原发恶性赘瘤、淋巴样赘瘤、未明原发黑色素瘤、未明原发肉瘤样癌、未明原发鳞状细胞癌、未明未分化神经内分泌癌、未明原发未分化小细胞癌、子宫癌肉瘤、子宫内膜腺癌、子宫内膜样子宫内膜腺癌、乳头状浆液性子宫内膜腺癌和子宫平滑肌肉瘤。
在一些实施例中，向个体同时投与一或多种其它抗癌剂与本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐。在一些实施例中，个体同时接受辐射疗法与本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐。在一些实施例中，在投与本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐之后向个体投与一或多种其它抗癌剂。在一些实施例中，个体在投与本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐之后接受辐射疗法。
在一些实施例中，个体已(例如)因不可接受或不能承受的副效应而中断先前疗法，其中先前疗法具有过高毒性，或其中个体对先前疗法产生抗性。
一些实施例提供延迟或预防疾病或病症的方法，其包括向处于发生疾病或病症的风险下的患者投与治疗有效量的如本文所描述的ADC或其医药上可接受的盐和针对所述疾病或病症的疫苗。在一些实施例中，疾病或病症是如本文所描述的癌症。在一些实施例中，疾病或病症是病毒性病原体。在一些实施例中，经皮下投与疫苗。在一些实施例中，经肌内投与疫苗。在一些实施例中，经由相同途径来投与ADC和疫苗(举例来说，ADC和疫苗都是经皮下投与)。在一些实施例中，经由不同途径来投与ADC或其医药上可接受的盐和疫苗。在一些实施例中，疫苗和ADC或其医药上可接受的盐提供于单一调配物中。在一些实施例中，疫苗和ADC或其医药上可接受的盐提供于分开调配物中。
组合物和投与方法
一些实施例提供包括如本文所描述的ADC的分布的组合物。在一些实施例中，所述组合物包括如本文所描述的ADC的分布和至少一种医药上可接受的载剂。在一些实施例中，投与途径是非经肠途径。非经肠投与包含皮下注射、静脉内、肌内、胸骨内注射或输注技术。在一些实施例中，非经肠投与组合物。在那些实施例中的一者中，经静脉内投与ADC。投与通常是经由任何便利途径，例如通过输注或浓注。
调配ADC组合物以容许在向个体投与组合物时ADC生物可利用。组合物可呈一或多个可注射剂量单元的形式。
用于制备组合物的材料的所用量可无毒。所属领域技术人员将明了，组合物中的活性成分的最优选剂量取决于多个因素。相关因素包含(但不限于)动物类型(例如人类)、特定化合物形式、投与方式和所采用组合物。
在一些实施例中，ADC组合物是适于在投与之前重构成液体的固体，例如呈冻干粉末形式。在一些实施例中，ADC组合物是液体组合物，例如溶液或悬浮液。液体组合物或悬浮液可用于注射递送且冻干固体适于使用适用于注射的稀释剂重构为液体或悬浮液。在通过注射投与的组合物中，通常包含表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、缓冲剂、稳定剂和等渗剂中的一或多者。
在一些实施例中，不论呈溶液、悬浮液还是其它类似形式，液体组合物还可包含下列各项中的一或多者：无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、生理盐水、林格氏溶液(Ringer’s solution)、等渗氯化钠；不挥发性油，例如可用作溶剂或悬浮介质的合成单或二甘油酯、聚乙二醇、甘油、环糊精、丙二醇或其它溶剂；抗细菌剂，例如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲剂，例如氨基酸、乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；洗涤剂，例如非离子型表面活性剂、多元醇；和用于调节张力的试剂(例如氯化钠或右旋糖)。非经肠组合物通常封闭于安瓿(由玻璃、塑料或其它材料制得的可弃式注射器或多剂量小瓶)中。在一些实施例中，无菌稀释剂包括生理学盐水。在一些实施例中，无菌稀释剂是生理学盐水。在一些实施例中，本文所描述的组合物是无菌液体可注射组合物。
有效治疗特定病症或病状的ADC量取决于病症或病状的性质，其通常通过标准临床技术来确定。另外，有时采用活体外或活体内分析来帮助确定最优选剂量范围。组合物中所利用的确切剂量还将取决于非经肠投与途径和疾病或病症的严重程度，并且应根据从业医师的判断和各个体的情况来决定。
在一些实施例中，所述组合物包括有效量的ADC，从而获得适宜剂量。通常，此量为至少约0.01％的ADC(基于组合物重量)。
在一些实施例中，投与个体的ADC的组合物剂量为约0.01mg/kg个体体重到约100mg/kg个体体重、约1mg/kg个体体重到约100mg/kg个体体重或约0.1mg/kg个体体重到约25mg/kg个体体重。在一些实施例中，投与个体的剂量为约0.01mg/kg个体体重到约15mg/kg个体体重。在一些实施例中，投与个体的剂量为约0.1mg/kg个体体重到约15mg/kg个体体重。在一些实施例中，投与个体的剂量为约0.1mg/kg个体体重到约20mg/kg个体体重。在一些实施例中，投与剂量为约0.1mg/kg个体体重到约5mg/kg个体体重或约0.1mg/kg个体体重到约10mg/kg个体体重。在一些实施例中，投与剂量为约1mg/kg个体体重到约15mg/kg个体体重。在一些实施例中，投与剂量为约1mg/kg个体体重到约10mg/kg个体体重。在一些实施例中，一个治疗周期中的投与剂量为约0.1mg/kg个体体重到约4mg/kg个体体重、约0.1mg/kg个体体重到约3.2mg/kg个体体重或约0.1mg/kg个体体重到约2.7mg/kg个体体重。
术语“载剂”是指与所投与化合物一起投与的稀释剂、佐剂或赋形剂。所述医药载剂是液体。在经静脉内投与化合物时，水是实例性载剂。盐水溶液和右旋糖与甘油水溶液还可用作用于可注射溶液的液体载剂。适宜医药载剂还包含甘油、丙烯、乙二醇或乙醇。在一些实施例中，本发明组合物(如果需要)还含有极少量的润湿剂或乳化剂和/或pH缓冲剂。
在一些实施例中，根据常规程序将ADC调配为适于经静脉内投与动物、尤其人类的组合物。通常，用于静脉内投与的载剂或媒剂是无菌等渗水性缓冲溶液。在一些实施例中，所述组合物进一步包括局部麻醉剂(例如利多卡因(lignocaine))以减轻注射部位处的疼痛。在一些实施例中，ADC和调配物的其它部分可分开供应或以单位剂型混合在一起，例如作为于指示活性剂的量的气密性密封容器(例如安瓿或小药囊)中的干燥冻干粉剂或无水浓缩物。如果ADC待通过输注来投与，那么有时(例如)使用含有无菌医药级水或盐水的输注瓶来分配所述组合物。如果ADC是通过注射来投与，那么通常提供含有注射用无菌水或盐水的安瓿以使得可在投与之前混合各成分。
所述组合物通常调配为无菌、大体上等渗且完全符合美国食品药物管理局(U.S.Food and Drug Administration)的所有良好制造实践(Good ManufacturingPractice，GMP)规范。
实例
一般方法：
所有市售无水溶剂都未经进一步纯化即使用。除非另有所述，否则所有市售试剂都未经进一步纯化即使用。在硅胶60F254铝片或玻璃板(EMD化学(EMD Chemicals)，吉布斯敦(Gibbstown)，新泽西州(NJ))上执行分析型薄层色谱(TLC)。在Biotage Isolera OneTM急速纯化系统20或Biotage SelektTM急速纯化系统(夏洛特(Charlotte)，北卡罗来纳州(NC))上执行急速管柱色谱。在以下4种系统中的一者上执行UPLC-MS分析。UPLC-MS系统1：界接到沃特世阿奎地(沃特世Acquity)UPLC系统的沃特世单四极检测器质谱仪，所述UPLC系统配备有沃特世阿奎地UPLC BEH C18 2.1×50mm、1.7μm反相管柱。UPLC-MS系统2：界接到沃特世阿奎地H类超高效LC的沃特世Xevo G2 TOF质谱仪，所述LC配备有C8菲罗门讯能集(Phenomenex Synergi)2.0×150mm、4μm、反相管柱与沃特世2996光二极管阵列检测器。UPLC-MS系统3(C18)：与二极管阵列检测器(DAD)和正ESI质谱仪界接的岛津(Shimadzu)LC-20 AD&MS 2020，所述质谱仪配备有卢纳(Luna)-C18 2.0×30mm、3μm粒度反相管柱(维持于40℃下)或金泰克(Kinetex)-C18 2.1×30mm、5μm反相管柱(维持于40℃下)。UPLC-MS系统4(C18)：界接到二极管阵列检测器(DAD)和安捷伦(Agilent)6110B正ESI四极质谱仪的安捷伦1200系列LC系统，所述质谱仪配备有金泰克-C18 2.1×50mm、5μm反相管柱(维持于40℃下)。
使用如本文所描述的方法A-E中的一者来洗脱化合物。
方法A-在1.0min内使用5-95％乙腈/水的线性梯度(1mL/min)，随后使用95％乙腈的等梯度流直到1.80min(1.0mL/min)且到2.20min管柱平衡回5％乙腈(1.2mL/min)。水含有0.037％ TFA(v/v)且乙腈含有0.018％ TFA(v/v)。所用管柱是飞诺美卢纳(PhenomenexLuna)C18 2.0×30mm、3μm反相管柱。
方法B-在1.0min内使用5-95％乙腈/水的线性梯度(1mL/min)，随后使用95％乙腈的等梯度流直到1.80min(1.0mL/min)且到2.20min管柱平衡回5％乙腈(1.2mL/min)。水含有0.05％ TFA(v/v)且乙腈含有0.05％ TFA(v/v)。所用管柱是飞诺美金泰克C18 2.1×30mm、5μm反相管柱。
方法C-在0.4min内使用5％乙腈/水的等梯度流，随后使用5-95％乙腈/水的线性梯度直到3.0min，随后使用95％乙腈的等梯度流直到4.0min且到4.5min管柱平衡回5％乙腈。流速为1.0mL/min，并且水含有0.05％ TFA(v/v)且乙腈含有0.05％ TFA(v/v)。所用管柱是飞诺美金泰克C18 2.1×30mm、5μm反相管柱。
方法D-在1.7min内使用3-60％乙腈的线性梯度，然后使用60-95％乙腈直到2.0min，随后使用95％乙腈的等梯度流直到2.5min，随后管柱平衡回3％乙腈。流速为0.6mL/min，并且水含有0.1％(v/v)甲酸且乙腈含有0.1％(v/v)甲酸。所用管柱是沃特世阿奎地UPLC BEH C18 2.1×50mm、1.7μm反相管柱或C8菲罗门讯能集2.0×150mm、4μm反相管柱。
方法E-在1.5min内使用3-95％乙腈的线性梯度，随后使用95％乙腈的等梯度洗脱直到2.4min，随后平衡回3％乙腈。流速为0.6mL/min，并且水含有0.1％(v/v)甲酸且乙腈含有0.1％(v/v)甲酸。所用管柱是沃特世阿奎地UPLC BEH C18 2.1×50mm、1.7μm反相管柱或C8菲罗门讯能集2.0×150mm、4μm反相管柱。
除非另外指定，否则在两种仪器中的一者上使用本文所列示的程序来执行制备型HPLC(制备型HPLC)：(方法F)岛津LC-8a制备型HPLC，具有飞诺美卢纳C-18 250×50mm(10μm)，使用含有0.09％(v/v)TFA的水/乙腈移动相，流速为80mL/min；或特利丹(Teledyne)ISCO ACCQPrep HP150，其配备有以下三种飞诺美制备型HPLC管柱中的一者：(i)(方法G)10×250mm讯能集C12,4μm,Max-RPLC管柱；(ii)(方法H)21.2×250mm讯能集C12,4μm,Max-RPLC管柱；或(iii)(方法I)30×250mm讯能集C12,4μm,Max-RPLC管柱，使用含有0.05％(v/v)三氟乙酸或0.1％(v/v)甲酸作为添加剂的乙腈/水移动相。
在以下三种仪器中的一者上记录NMR光谱：布鲁克阿凡斯(Bruker Avance)III HD(400MHz)、瓦里安(Varian)400-MR(400MHz)或布鲁克阿凡斯NEO(400MHz)。
实例1：
STING激动剂和连接体的合成程序
(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物1)的合成
4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺(化合物2a)的合成
在25℃下，将化合物1a(4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯，18g,73mmol，1当量)添加到NH4OH水溶液(300mL，于H2O中的28％ NH3)中。将反应混合物在40℃下搅拌16hr，在此期间形成沉淀物。通过过滤收集沉淀物，使用水洗涤并在真空中干燥以得到黄色固体形式的2a(13克，56mmol，77％产率)。此产物未经进一步纯化即用于后续步骤中。UPLC-MS(方法A，ESI+)：m/z(M+H)+231.0(理论值)；231.2(观察值)。HPLC滞留时间：0.93min。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ＝8.29(br s,1H),8.05(d,J＝2.0Hz,1H),7.88(d,J＝1.6Hz,1H),7.79(brs,1H),4.02(s,3H)。
(E)-(4-((4-氨甲酰基-2-甲氧基-6-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁基酯(化合物4a)的合成
在25℃下，向2a(10g,43.4mmol，1当量)于乙醇(EtOH,200mL)中的溶液中添加3a((E)-(4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁基酯，9.69g,52.0mmol，1.2当量)和N,N-二异丙基乙基胺(DIPEA,16.8g,130mmol，3当量)。将反应混合物在80℃下搅拌64小时，然后通过过滤收集沉淀物，使用乙醇洗涤，并在高真空下干燥以得到红色固体形式的4a(8克，21mmol，48％产率)。此产物未经进一步纯化即用于后续步骤中。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ＝8.18(s,1H),8.01(br s,1H),7.74(br t,J＝5.6Hz,1H),7.55(s,1H),7.31(br s,1H),6.92(brs,1H),5.53(br s,2H),4.08(br s,2H),3.87(s,3H),3.47(br s,2H),1.35(s,9H)。
化合物5a的合成
在25℃下，将化合物4a(8g,21.0mmol，1当量)添加到HCl于乙酸乙酯中的4M溶液(200mL,800mmol HCl)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。通过过滤收集沉淀物，使用EtOAc洗涤并在高真空下干燥以得到红色固体形式的5a(HCl盐，7.2g，定量产率)。此产物未经进一步纯化即用于后续步骤中。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ＝8.21(d,J＝1.6Hz,1H),8.02(brs,4H),7.59(d,J＝2.0Hz,1H),7.34(br s,1H),5.87(td,J＝5.6,15.6Hz,1H),5.67-5.56(m,1H),4.17(br d,J＝5.6Hz,2H),3.89(s,3H),3.39(br t,J＝5.6Hz,2H)。
化合物2b的合成
在20℃和氮下，向化合物2a(4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酰胺，16g,69.4mmol，1当量)于二氯甲烷(DCM,500mL)中的溶液中逐滴添加三溴化硼溶液(BBr3，1M于DCM中，275mL，4当量)。将反应混合物在20℃下搅拌16h，此时LC-MS分析(方法B)展示反应已完成。将反应混合物倾倒到冰水(2L)中并剧烈搅拌20min。过滤所得悬浮液且使用乙酸乙酯(2×300mL)萃取滤液，通过无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩以得到粗产物。将粗产物(9g)溶于DMF(30mL)中并通过反相急速色谱在Biotage Isolera One(330克阿格拉(Agela)C18管柱(20-35μm粒度)，利用含有0.09％(v/v)TFA的水/乙腈，使用以下梯度洗脱：在20min内20-40％乙腈，随后在35min时40-45％乙腈)上纯化以得到灰白色固体形式的2b(6克，27.7mmol，40％产率)。LCMS(方法B，ESI+)：m/z[M+H]+217.0(理论值)；217.2(观察值)。HPLC滞留时间：0.84min。
化合物3b的合成
向2b(4.5g,20.8mmol，1当量)于二甲基甲酰胺(DMF,20mL)中的溶液中添加1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(PMBCl,3.42g,21.8mmol，1.05当量)和碳酸铯(Cs2CO3,7.45g,22.9mmol，1.1当量)，将反应混合物在25℃下搅拌12h，此时LC-MS分析(方法B)展示反应已完成。将反应混合物倾倒到冰水中，并且过滤沉淀物并干燥以得到浅黄色固体形式的3b(6.4克，19.0mmol，91％产率))。此产物未经进一步纯化即用于后续步骤中。LC-MS(方法B，ESI+)：m/z[M+H]+：337.1(理论值)；337.2(观察值)。HPLC滞留时间：1.11min。
化合物5的合成
将5a(762mg,2.16mmol，1.2当量)于正丁醇(10mL)中的溶液添加到小瓶中，随后添加DIPEA(1.11g,8.62mmol，4.8当量)和碳酸氢钠(457mg,4.31mmol，2当量)。密封小瓶且将反应混合物在20℃下搅拌10min。随后添加3b(600mg,1.78mmol，2.4当量)，并且将反应混合物在115℃下搅拌20小时，此时UPLC-MS分析(方法B)展示反应已完成。如上文所描述再设置4个小瓶。在反应结束时合并所有5种反应混合物。将合并的所得反应混合物冷却到20℃并使用MeCN(180mL)稀释。过滤反应混合物中的固体材料并使用MeCN(80mL)冲洗以得到深红色固体。然后使用水洗涤固体并在高真空下干燥以得到砖红色固体形式的5(2.7克，4.65mmol，52％产率)。此产物未经进一步纯化即用于后续步骤中。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.17(dd,J＝1.9,7.8Hz,2H),8.08-7.96(m,2H),7.77-7.63(m,3H),7.51(d,J＝1.8Hz,1H),7.37(d,J＝8.6Hz,2H),7.33(br s,2H),6.92(d,J＝8.6Hz,2H),5.57-5.42(m,2H),5.04(s,2H),4.01(q,J＝5.8Hz,4H),3.79(s,3H),3.74(s,3H).
化合物6的合成
向5(2g,3.45mmol，1当量)于甲醇和水的1:1(v/v)混合物(160mL)中的溶液中添加Na2CO3(10.95g,103mmol，30当量)和二硫亚磺酸钠(Na2S2O4,8.40g,48.2mmol，14当量)。将所得红色反应混合物在25℃下搅拌12h，此时红色混合物变成浅黄色，并且UPLC-MS分析(方法B)展示反应已完成。过滤反应混合物，并且浓缩滤液并使用水稀释。使用EtOAc萃取混合物且浓缩有机层以得到灰白色固体形式的6(1.0克，1.81mmol，52％产率)。此产物未经进一步纯化即用于后续步骤中。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝7.61(br s,2H),7.37(d,J＝8.6Hz,2H),6.97(br s,2H),6.94(s,1H),6.93-6.90(m,2H),6.86(s,2H),6.77(d,J＝1.8Hz,1H),5.71-5.53(m,2H),4.98(s,2H),4.65(br d,J＝12.6Hz,4H),3.74(s,3H),3.71(s,3H),3.49(br s,4H)。
化合物7的合成
向6(1.4g,2.69mmol，1当量)于甲醇(20mL)中的溶液中添加溴化氰(BrCN,1.71g,16.1mmol，6当量)。将反应混合物在25℃下搅拌2h，在此期间观察到沉淀物。LC-MS分析(方法C)展示反应已完成。通过过滤收集固体，使用乙醇和石油醚洗涤以得到浅黄色固体形式的7(1.2g,1.64mmol，61％产率)。此产物未经进一步纯化即用于后续步骤中。LC-MS(方法C，ESI+)：m/z[M+H]+571.2(理论值)；571(观察值)。HPLC滞留时间：1.634min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝12.94(br s,2H),8.63(br d,J＝12.8Hz,4H),8.08(br s,2H),7.62-7.52(m,3H),7.47(br s,2H),7.38(s,1H),7.24(d,J＝8.6Hz,2H),6.84(d,J＝8.6Hz,2H),5.81-5.69(m,1H),5.57(td,J＝5.4,15.5Hz,1H),5.07(s,2H),4.80(br t,J＝6.6Hz,4H),3.74(s,3H),3.69(s,3H)。
化合物9的合成
向化合物8(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，331mg,2.15mmol，2.1当量)于二甲基甲酰胺(DMF,3mL)中的溶液中添加六氟磷酸1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶翁3-氧化物(HATU,973mg,2.56mmol，2.5当量)且将反应混合物在60℃下搅拌10min。然后将DIPEA(596mg,4.61mmol，4.5当量)和7(750mg,1.02mmol，1当量)于DMF(1mL)中的溶液添加到反应混合物中，在60℃下搅拌2h，此时LC-MS分析(方法B)展示反应已完成。将反应混合物倾倒到冰水中，通过过滤收集固体并干燥以得到粗产物。粗产物未经进一步纯化即用于下一步骤中。LC-MS(方法B，ESI+)：m/z[M+H]+843.4(理论值)；843.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.062min。
化合物1的合成
将化合物9(700mg,0.83mmol)添加到含有三氟乙酸(TFA,3mL)的玻璃小瓶中，并且将所得混合物在25℃下搅拌2h,，此时LC-MS分析展示反应已完成。在真空中去除TFA且将残余物溶于DMSO和乙腈中，并通过制备型HPLC(方法F)纯化以得到灰白色固体形式的1(40mg,0.055mmol，经2个步骤的产率为7％)。LCMS(方法B，ESI+)：m/z[M+H]+723.3(理论值)；723.1(观察值)；[M+H]+,HPLC滞留时间：2.04min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝13.00-12.51(m,2H),10.41(s,1H),7.96(br s,1H),7.81(br s,1H),7.63(s,1H),7.43(s,1H),7.37-7.28(m,2H),7.22(br s,1H),7.14-7.07(m,1H),6.51(br d,J＝11.0Hz,2H),5.97-5.75(m,2H),4.91(br dd,J＝3.5,16.3Hz,4H),4.51(br d,J＝3.3Hz,4H),3.77(s,3H),2.10(d,J＝6.0Hz,6H),1.25(dt,J＝3.6,6.9Hz,6H)。
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-((((5-氨甲酰基-1-((E)-4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨甲酰基)氧基)甲基)-3-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸(化合物11)的合成
化合物10b的合成
如先前所报道(ACS医药化学通讯(ACS Med.Chem.Lett.)2010,1,6,277-280)来制备化合物10a。
向烘干的4mL玻璃小瓶中装填10a(150mg,0.20mmol，1当量)和碳酸五氟苯基酯(88mg,0.22mmol，1.1当量)、DMF(1mL)和DIPEA(0.15mL,0.86mmol，4.3当量)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，此时观察到浅粉红色均质溶液。将甲基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(50uL,0.27mmol，1.3当量)添加到溶液中，此使得反应混合物变成浅黄色。将反应混合物在室温下搅拌过夜。使用水(50mL)稀释反应混合物，转移到分液漏斗中并使用EtOAc(3×50mL)萃取。收集有机层并合并，使用1M HCl洗涤，使用MgSO4干燥，过滤并在真空中去除溶剂。通过急速管柱色谱(25g SiO2管柱，使用于DCM中的0-25％ MeOH洗脱)纯化所得固体以产生浅黄色固体形式的10b(70.4mg,0.073mmol，36％产率)。UPLC-MS(方法E，ESI+)m/z[(M-Boc)+2H]+：863.33(理论值)；863.14(观察值)。HPLC滞留时间：1.54min。
化合物10c的合成
将化合物10b(70.4mg,0.073mmol，1当量)以MeOH溶液形式转移到配备有磁搅拌棒的烘干的4mL玻璃小瓶中。在真空下去除MeOH并使用氩回填小瓶。在Ar下，向小瓶中添加MeOH(0.5mL)且将所得溶液冷却到0℃，并添加甲醇钠(于MeOH中的0.5M溶液，150uL,0.075mmol，1当量)。通过LC-MS(方法D)监测反应且在完全去除所有三个乙酸酯基团后，添加氢氧化锂(1M于水中，0.225mL,0.225mmol，3当量)且将反应混合物在室温下搅拌30min。将DMSO(0.5mL)和冰乙酸(50uL)添加到反应混合物中，从而产生均质溶液。通过制备型HPLC(方法H，于水中的5-40％ MeCN，使用0.05％ TFA作为移动相添加剂)纯化粗产物以得到白色固体形式的10c(16.8mg,0.028mmol，38％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+601.26(理论值)；601.15(观察值)。HPLC滞留时间：1.09min。
化合物10d的合成
将化合物10c(16.8mg,0.028mmol，1当量)以MeOH溶液形式添加到配备有磁搅拌棒的烘干的4mL玻璃小瓶中。在真空下去除MeOH并使用氩填充小瓶。向小瓶中添加3-(马来酰亚胺基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(MP-OSu,16mg,0.06mmol，2当量)，随后添加DMF(0.5mL)和DIPEA(50uL,0.28mmol，10当量)。在15分钟之后，添加DMSO(0.5mL)和冰乙酸(100uL)并通过制备型HPLC(方法H，于水中的10-60％ MeCN，使用0.05％ TFA作为移动相添加剂)纯化粗产物以得到白色固体形式的10d(15mg,0.020mmol，71％产率)。UPLC-MS(方法A，ESI+)：m/z[M+H]+:752.29(理论值)；752.26(观察值)。HPLC滞留时间：1.27min。
化合物10的合成
将化合物10d(15mg,0.020mmol，1当量)溶于于DCM中的20％(v/v)TFA(1mL)中并转移到配备有磁搅拌棒的4mL玻璃小瓶中。使小瓶保持敞开且通过LC-MS监测反应进展。在2h之后，在真空中去除溶剂以得到白色固体形式的10(13mg,0.02mmol，定量产率)，其未经任何进一步纯化即用于后续步骤中。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+:652.24(理论值)；652.45(观察值)。HPLC滞留时间：0.69min。
化合物11的合成
向烘干的4mL玻璃小瓶中添加化合物1(9.5mg,0.010mmol，1当量)，随后添加DMF(0.5mL)、碳酸对硝基苯基酯(9.0mg,0.030mmol，3当量)和DIPEA(20uL,0.115mmol，11.5当量)。将反应混合物在室温下搅拌1小时，此时通过UPLC-MS分析(方法D)证实完全转化成11a。将化合物10(20mg,0.031mmol，3.1当量)单份添加到反应混合物中，在室温下搅拌2h。添加冰乙酸(20uL)并通过制备型HPLC(方法H，于水中的0-45％ MeCN，使用0.05％ TFA作为移动相添加剂)纯化粗产物。合并含有11的部分且经由冻干去除溶剂以得到11(6.31mg,0.0039mmol，39％产率)。还回收白色绒毛状固体形式的化合物1(2.81mg,0.0030mmol，30％回收率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+:1400.52(理论值)；1400.25(观察值)和[M+2H]2+＝701.43(观察值)。HPLC滞留时间：1.28min。
(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙酰胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物12)的合成
如先前所报道(WO2017/175147，实例40，第292页)来制备化合物12a。
向12a(28.7mg,0.032mmol，1.0当量)于DMA(635μL)中的溶液中添加MP-OSu(15.9mg,0.0596mmol，1.9当量)和DIPEA(35μL,0.199mmol，6.2当量)。将反应混合物在室温下搅拌1h。在完成后，在减压下浓缩溶液且通过制备型HPLC(方法G，于水中的20-50-95％MeCN，使用0.1％甲酸作为移动相添加剂)纯化粗产物以产生12(46％产率，17.8mg,0.0152mmol)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+945.40(理论值)；945.72(观察值)。HPLC滞留时间：1.79min。
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((3-((5-氨甲酰基-1-((E)-4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)氨甲酰基)氧基)甲基)-3-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸(化合物13)的合成
化合物13a和13b的合成
将化合物10a(13mg,0.017mmol)溶于DMA(87μL)中。向此溶液中添加碳酸五氟苯基酯(13.7mg,0.035mmol)和DIPEA(14μL,0.078mmol)。将混合物在室温下搅拌30min。在完全转化成中间体13a后，将此溶液转移到含有12a(10.6mg,0.012mmol)的第二小瓶中。将反应混合物在室温下搅拌18h。然后使用水稀释反应液并使用EtOAc(20mL×3)萃取三次。然后使用1M HCl洗涤合并的有机层。合并有机层，使用MgSO4干燥，过滤，并在真空中浓缩。通过制备型HPLC(方法H，于水中的5-50-95％ MeCN，使用0.05％ TFA作为移动相添加剂)纯化产物以产生呈三氟乙酸盐形式的化合物13b(10.0mg,0.0056mmol，48％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1568.60(理论值)；1568.95(观察值)。HPLC滞留时间：1.70min。
化合物13c的合成
向充分吹扫的干燥玻璃小瓶中添加于无水甲醇(40μL)中的化合物13b(10.0mg,0.0056mmol)。在冰浴中冷却溶液，并且添加NaOMe(0.5M于MeOH中，11.13μL)。在约1h之后，添加1M LiOH(17μL,0.017mmol，3当量)水溶液。在添加LiOH溶液时形成大量白色沉淀物。在1hr之后，添加冰乙酸(12μL)，并且在真空中去除溶剂。通过制备型HPLC(方法G，于水中的20-60-95％ MeCN，使用0.05％ TFA作为移动相添加剂)纯化粗产物以产生呈三氟乙酸盐形式的化合物13c(4.13mg,0.0029mmol，52％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1206.49(理论值)；1206.50(观察值)。HPLC滞留时间：1.45min。
化合物13的合成
在玻璃小瓶中于氩下，将化合物13c(4.13mg,0.00342mmol，1.0当量)溶于DMA(68μL)中。添加MP-OSu(1.82mg,0.00685mmol，2当量)和DIPEA(3.0μL,0.0171mmol，5当量)且将反应混合物在室温下搅拌1h。添加冰乙酸(3.0μL)，并通过制备型HPLC(方法G，于水中的10-60-95％ MeCN，使用0.1％甲酸作为移动相添加剂)纯化粗产物以产生呈三氟乙酸盐形式的13(5.43mg,0.0034mmol，93％产率)。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1357.52(理论值)；1357.82(观察值)。HPLC滞留时间：1.54min。
(3-((5-氨甲酰基-1-((E)-4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)氨基甲酸4-((S)-2-((S)-2-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)苄基酯(化合物14)的合成
向装填有化合物12a(2.6mg,0.0033mmol)的干燥玻璃小瓶中添加DMA(66μL)，随后添加MP-Val-Ala-PAB-Opfp(14a,3.2mg,0.049mmol，15当量)和DIPEA(2.8μL,0.016mmol，4.9当量)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟且然后添加冰乙酸(2.85μL)，并通过制备型HPLC(方法G，于水中的30-60-95％ MeCN，使用0.1％甲酸作为移动相添加剂)纯化粗产物以产生呈三氟乙酸盐形式的化合物14(4.0mg,0.0027mmol，82％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1264.56(理论值)；1264.85(观察值)。HPLC滞留时间：1.75min。
(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙酰胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物15)的合成
化合物15b的合成
如先前所报道(WO2017/175147，第292页)来制备化合物15a。
向含有于DCM(280μL)中的化合物15a(31.4mg,0.0280mmol)的干燥玻璃小瓶中逐滴添加三溴化硼(BBr3,1M于DCM中，168μL,0.168mmol，6当量)。将反应混合物在40℃下搅拌18h。将反应混合物冷却到室温且缓慢添加冷水(170μL)。在真空中浓缩所得混合物并通过制备型HPLC(20-50-95％，于乙腈中的0.1％甲酸，方法G)纯化。合并含有所需产物的部分并经由冻干去除溶剂以产生呈甲酸盐形式的化合物15b(17％产率，4.36mg,0.0047mmol)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝780.36(理论值)；780.38(观察值)。HPLC滞留时间：1.33min。
化合物15的合成
向含有3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二氧代基吡咯烷-1-基酯(MP-OSu,1.7mg,0.0063mmol)的干燥4mL小瓶中添加化合物15b(3.9mg,0.0042mmol)于DMA(423μL)中的溶液。向混合物中添加DIPEA(3.7μL,0.0211mmol，5当量)且将反应混合物在室温下搅拌30min，然后添加冰乙酸(3.68μL)，并且经由制备型HPLC(10-40-95％，于乙腈中的0.05％ TFA，方法G)纯化产物。合并含有所需产物的部分并经由冻干去除溶剂以产生呈三氟乙酸盐形式的化合物15(20％产率，1.0mg,0.0009mmol)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝931.39(理论值)；931.41(观察值)。HPLC滞留时间：1.62min。
S-(1-(3-((3-((5-氨甲酰基-1-((E)-4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)氨基)-3-氧代基丙基)-2,5-二氧代基吡咯烷-3-基)-L-半胱氨酸(化合物16)的合成
将化合物12(1.5mg,0.0015mmol，1当量)溶于DMSO(50μL)中。以水溶液形式添加L-半胱氨酸(1M,2.2μL,0.0022mmol，1.5当量)。将反应混合物在30℃下搅拌30min，并且随后经由制备型HPLC(30-70-95％，于乙腈中的0.05％ TFA，方法G)直接纯化。合并含有所需产物的部分并冷冻。经由冻干去除溶剂以产生呈三氟乙酸盐形式的化合物16(49％产率，1.03mg,0.0007mmol)。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1066.42(理论值)；1066.44(观察值)。HPLC滞留时间：1.65min。
(S,E)-4-((3-((5-氨甲酰基-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)氨基)-3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)-4-氧代基丁酸(化合物17)的合成
化合物17a的合成
向配备有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填化合物12a(10mg,0.011mmol，1.0当量)、Fmoc-天门冬氨酸4-叔丁基酯(9.1mg,0.022mmol，2.0当量)和HATU(8.4mg,0.022mmol，2.0当量)，随后装填DMF(0.5mL)和DIPEA(9.6uL,0.055mmol，5.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌过夜且观察到完全转化成酰胺。在真空中去除溶剂，并且将所得粗制油状物溶于DCM中，并通过急速色谱(10g SiO2，于DCM中的0-40％ MeOH)分离所需产物以得到浅褐色固体形式的17a(12mg,0.0104mmol，94％产率)。所分离材料仍含有一些杂质，但未经进一步纯化即用于后续步骤中。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1187.54(理论值)；1187.53(观察值)。HPLC滞留时间：2.40min。
化合物17b的合成
向配备有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填17a(12mg,0.0104mmol，1.0当量)和于DMF中的20％哌啶(1mL)。将反应混合物搅拌1小时，在真空中去除溶剂并通过制备型HPLC(方法G，于水中的5-95％乙腈)纯化产物以产生17b(9.3mg,0.0096mmol，93％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝965.47(理论值)；965.48(观察值)。HPLC滞留时间：1.68min。
化合物17c的合成
通过将7.7mg MP-OSu和10μL DIPEA溶于1.0mL DMF中来制备MP-OSu和DIPEA的储备溶液。向配备有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填17b(9.3mg,0.0096mmol，1.0当量)且将0.5mL含有MP-OSu(3.8mg,0.014mmol，1.5当量)和DIPEA(0.029mmol，3当量)的储备溶液添加到小瓶中。将反应混合物在室温下搅拌2小时并在真空中去除溶剂以产生粗制17c，其未经任何进一步纯化即用于下一步骤中。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1116.50(理论值)；1116.80(观察值)。HPLC滞留时间：1.51min。
化合物17的合成
向4mL小瓶中装填溶于20％(v/v)TFA/DCM(1mL)中的化合物17c(10.7mg,0.0096mmol，1当量)且将反应混合物在室温下搅拌3小时。随后在真空中去除溶剂，并且将粗产物溶于DMSO(0.75mL)中并通过制备型HPLC(方法G，于水中的5-50％ MeCN)纯化以得到白色固体形式的化合物17(5.4mg,0.0051mmol，53％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1060.44(理论值)；1061.12(观察值)。HPLC滞留时间：1.28min。
(S,E)-7-(3-(6-氨基-2-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)-N-甲基己酰胺基)丙氧基)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物18)的合成
化合物18a的合成
向配备有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填HATU(7.8mg,0.021mmol，2.0当量)和Fmoc-赖氨酸N-ε-Boc(9.6mg,0.021mmol，2.0当量)；且添加化合物12a(9.3mg,0.0103mmol，1.0当量)和DIPEA(9uL,0.051mmol，5当量)于DMF(0.5mL)中的溶液。将小瓶加盖并使用石蜡膜密封，并且将混合物在室温下搅拌过夜。通过UPLC-MS(方法D)观察到完全转化。在真空中去除溶剂且通过急速色谱(10g SiO2，于DCM中的0-40％ MeOH)纯化产物以得到浅棕色固体形式的18a(12mg,0.0097mmol,95％)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1244.60(理论值)；1244.61(观察值)。HPLC滞留时间：2.40min。
化合物18b的合成
向配备有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填18a(12mg,0.0096mmol)且将于DMF中的20％(v/v)哌啶(1mL)添加到反应液中。搅拌反应混合物直到通过UPLC-MS(方法D)观察到完全转化为止，此耗费大约1小时。在真空中去除溶剂且通过制备型HPLC(方法G，于水中的5-95％ MeCN，含有0.1％(v/v)甲酸)纯化产物。在真空中去除HPLC溶剂以得到灰白色固体形式的18b(4.2mg,0.0041mmol,36％)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1022.53(理论值)；1022.80(观察值)。HPLC滞留时间：1.30min。
化合物18c的合成
向配备有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填18b(4.2mg,0.0034mmol，1当量)，随后装填MP-OSu(1.8mg,0.0068mmol，2.0当量)、DIPEA(5.9μL,0.034mmol，10当量)和DMF(0.8mL)。将反应混合物在室温下搅拌3小时，此时UPLC-MS(方法D)分析展示完全转化。在真空中去除溶剂以产生粗产物18c，其未经纯化即用于下一步骤中。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1173.56(理论值)；1173.94(观察值)。HPLC滞留时间：1.54min。
化合物18的合成
向含有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填来自前一步骤的粗制物18c(0.0034mmol)，并且添加于DCM中的20％(v/v)TFA(1mL)。将反应混合物搅拌一小时且随后通过制备型HPLC(方法G，于水中的5-50％ MeCN，含有0.1％(v/v)甲酸)纯化产物。在真空中去除HPLC溶剂以得到白色固体形式的18c(4.2mg,0.0035mmol，经2个步骤的产率为56％)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1073.51(理论值)；1073.73(观察值)。HPLC滞留时间：1.15min。
用于HATU偶合、Fmoc去保护和MP偶合的一般方法
HATU偶合(方法1)：向配备有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填化合物12a(1.0当量)、HATU(2.0当量)、DIPEA(5当量)和DMF(20mM于12a中)且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中去除溶剂并经由色谱纯化产物。
Fmoc去保护(方法2)：向配备有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填来自上文的HATU偶合产物，所述HATU偶合产物溶于20％(v/v)哌啶/DMF(1mL)中。将反应混合物在室温下搅拌1小时，在真空中去除溶剂，并经由色谱纯化产物。
MP偶合(方法3)：向配备有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填来自前一反应的产物，并且添加MP-OSu(2当量)和DIPEA(10当量)以及DMF(10mM于Fmoc去保护的胺起始材料中)。将反应混合物在室温下搅拌3小时，在真空中去除溶剂并通过制备型HPLC纯化产物。
根据一般方法1来制备化合物19a(8.0mg,0.0075mol，85％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1073.47(理论值)；1074.03(观察值)。HPLC滞留时间：1.76min。
根据一般方法2来制备化合物19b(6.1mg,0.0072mol，95％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝851.41(理论值)；851.69(观察值)。HPLC滞留时间：1.15min。
根据一般方法3来制备化合物19(4.3mg,0.0043mol，60％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1002.43(理论值)；1002.72(观察值)。HPLC滞留时间：1.31min。
根据一般方法1来制备化合物20a(8.7mg,0.0080mol，91％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1087.49(理论值)；1087.90(观察值)。HPLC滞留时间：1.75min。
根据一般方法2来制备化合物20b(5.6mg,0.0065mol，81％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝865.42(理论值)；865.66(观察值)。HPLC滞留时间：1.12min。
根据一般方法3来制备化合物20(3.4mg,0.0034mol，52％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1016.45(理论值)；1017.08(观察值)。HPLC滞留时间：1.33min。
根据一般方法1来制备化合物21a(14mg,0.0119mol)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1145.50(理论值)；1145.42(观察值)。HPLC滞留时间：1.74min。
根据一般方法2来制备化合物21b(7.2mg,0.0078mol，经2个步骤的产率为76％)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝923.43(理论值)；923.67(观察值)。HPLC滞留时间：1.13min。
根据一般方法3来制备化合物21(1.5mg,0.0014mol，22％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1074.45(理论值)；1074.90(观察值)。HPLC滞留时间：1.36min。
根据一般方法1来制备化合物22a(7.6mg,0.0065mol，63％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1172.58(理论值)；1172.59(观察值)。HPLC滞留时间：1.84min。
根据一般方法2来制备化合物22b(6.1mg,0.0064mmol，57％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝950.51(理论值)；950.83(观察值)。HPLC滞留时间：0.99min。
根据一般方法1来制备化合物22(2.6mg,0.0023mol，37％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1101.54(理论值)；1101.96(观察值)。HPLC滞留时间：1.18min。
根据一般方法1来制备化合物23a(12mg,0.0105mmol)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1117.50(理论值)；1117.77(观察值)。HPLC滞留时间：1.75min。
根据一般方法2来制备化合物23b(7.2mg,0.00804mmol，经2个步骤的产率为91％)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝895.43(理论值)；895.73(观察值)。HPLC滞留时间：1.12min。
根据一般方法3来制备化合物23(8.4mg,0.0047，58％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1046.46(理论值)；1047.06(观察值)。HPLC滞留时间：1.36min。
(S,E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(2-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)-3-羟基-N-甲基丙酰胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物24)的合成
化合物24a的合成
向配备有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填HATU(6.7mg,0.018mmol，2.0当量)和2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-3-甲氧基-丙酸(6.0mg,0.018mmol，2.0当量)，并且将化合物12a(8mg,0.0088mmol，1.0当量)和DIPEA(8uL,0.044mmol，5当量)于DMF(0.5mL)中的溶液添加到小瓶中。将小瓶加盖并使用石腊膜密封，并且将反应混合物在室温下搅拌过夜，此时通过UPLC-MS(方法D)观察到完全转化。在真空中去除溶剂并通过急速色谱(10g SiO2，于DCM中的0-40％ MeOH)纯化产物以得到24a(15mg)，其未经进一步纯化即用于下一反应中。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1345.59(理论值)；1346.12(观察值)。HPLC滞留时间：2.23min。
化合物24b的合成
向配备有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填24a(15mg,0.011mmol)且向其中添加于DMF中的20％(v/v)哌啶(1mL)。搅拌反应混合物直到通过UPLC-MS(方法D)观察到完全转化为止，此耗费大约1小时。在真空中去除溶剂且通过制备型HPLC(方法G，于水中的5-95％MeCN，含有0.1％(v/v)甲酸)纯化粗产物；在真空中去除HPLC溶剂以得到灰白色固体形式的24b(8.4mg,0.0075mmol，经2个步骤的产率为94％)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1123.53(理论值)；1123.98(观察值)。HPLC滞留时间：1.47min。
化合物24c的合成
向配备有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填24b(8.4mg,0.0075mmol，1当量)，随后装填MP-OSu(3.0mg,0.011mmol，1.5当量)、DIPEA(3.9μL,0.022mmol，3当量)和DMF(0.5mL)。将反应混合物在室温下搅拌3小时，此时UPLC-MS(方法D)分析展示完全转化。在真空中去除溶剂且所得粗产物未经纯化即用于下一步骤中。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1274.55(理论值)；1275.21(观察值)。HPLC滞留时间：1.89min。
化合物24的合成
向含有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填粗制24c(0.0075mmol)，并且将于DCM中的20％(v/v)TFA(1mL)添加到小瓶中。将反应混合物搅拌20分钟，并在真空中去除溶剂。将所得粗产物溶于DMSO(0.5mL)中并通过制备型HPLC(方法G，于水中的5-50％MeCN，含有0.1％(v/v)甲酸)纯化，并且在真空中去除溶剂以得到白色固体形式的24(4.0mg,0.0031mmol，经2个步骤的产率为42％)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1032.44(理论值)；1033.09(观察值)。HPLC滞留时间：1.28min。
(E)-7-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙酰胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物25)的合成。
25a的合成
向具有搅拌棒的5mL烘干微波小瓶中装填4-氯-3-硝基-苯磺酰胺(250mg,1.06mmol，1当量)、N-[(E)-4-氨基丁-2-烯基]氨基甲酸叔丁基酯盐酸盐(353mg,1.6mmol，1.5当量)和碳酸钠(336mg,3.2mmol，3当量)。向小瓶中添加1-丁醇(3mL)，随后添加DIPEA(1.1mL,6.34mmol，6当量)和额外1-丁醇以使总反应体积达到最高5mL。将小瓶密封，并且在微波反应器中加热到140℃并保持120分钟。
将粗产物倾倒到盐水(100mL)中并使用EtOAc(3×200mL)萃取，合并有机物，使用盐水(2×100mL)洗涤，使用MgSO4干燥，过滤并在真空中去除溶剂以得到亮红色油状物。通过急速色谱(干加载于硅藻土上，25g Sfar,HC Duo，SiO2管柱，于DCM中的0-40％MeOH)纯化此材料以得到亮黄色固体形式的25a(295mg,0.763mmol，72％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H-Boc]+＝287.1(理论值)；287.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.53min。
25b的合成
向20mL小瓶中装填溶于甲醇(7.5mL)和4M HCl/1,4-二恶烷(40当量，7.5mL,30.0mmol)中的25a(295mg,0.763mmol，1当量)。将溶液在40℃下搅拌30分钟并在真空中去除溶剂以得到亮红色固体形式的25b(呈2x HCl盐形式，274mg,0.764mmol，定量产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝287.1(理论值)；287.6(观察值)。HPLC滞留时间：0.52min。
25c的合成
向具有搅拌棒的烘干的5mL微波小瓶中装填25b(135mg,0.376mmol，1当量)、N-[3-(5-氨甲酰基-2-氯-3-硝基-苯氧基)丙基]氨基甲酸叔丁基酯(211mg,0.564mmol，1.5当量，如下文所描述来制备)和碳酸钠(119mg,1.13mmol，3当量)，随后添加正丁醇(3.75mL)和DIPEA(0.39mL,2.25mmol，6当量)。将小瓶密封，并且在微波反应器中加热到140℃并保持3小时以得到亮红色异质混合物。通过硅藻土过滤此溶液，使用1:1DCM:MeOH(100mL)洗涤，在真空中去除溶剂且将粗产物加载于硅藻土上，并通过急速色谱(25g SiO2管柱，于DCM中的0-40％ MeOH)纯化以得到呈产物和起始材料(3:2)的混合物形式的25c(245mg,0.384mmol)。产物混合物未经任何进一步纯化即用于下一步骤中。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝638.2(理论值)；638.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.75min。
25d的合成
向具有搅拌棒的20mL小瓶中装填25c(245mg,0.384mmol，1当量)和碳酸氢钠(580mg,6.90mmol，18当量)且添加甲醇(4mL)。然后向小瓶中添加亚硫酸氢钠(1.20g,6.90mmol，18当量，于4mL水中)，并且将小瓶加热到50℃并保持60分钟。将反应液冷却到室温，通过硅藻土过滤，使用MeOH(50mL)和DCM(50mL)洗涤并将粗产物加载于硅藻土上。通过急速色谱(25g Sfar HC Duo，SiO2管柱，于DCM中的0-40％10:1MeOH:NH4OH)纯化产物以得到呈不可分离的旋转构形异构体的混合物形式的25d(89mg,0.154mmol，经2个步骤的产率为41％)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝578.3(理论值)；578.5(观察值)。HPLC滞留时间：0.98&1.18min。
25e的合成
同步设置两个相同反应。向具有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填溶于甲醇(1mL)中的25d(45mg,0.156mmol，1当量)且添加溴化氰(200uL,1.20mmol，8当量)。将反应液搅拌过夜，并在真空中去除溶剂且合并两种反应液以得到浅灰色固体形式的25e(呈2xHBr盐形式，120mg,0.15mmol，97％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝628.3(理论值)；628.4(观察值)。HPLC滞留时间：0.79min。
25f的合成
向具有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填25e(120mg,0.152mmol，1当量)、2-乙基-5-甲基-吡唑-3-甲酸(94mg,0.61mmol，4.0当量)和HATU(231mg,0.61mmol，4当量)。将固体溶于DMF(1mL)中且添加DIPEA(0.22mL,1.2mmol，8当量)。将反应液在室温下搅拌过夜，添加乙酸(100uL)并通过制备型HPLC(方法I，于水中的5-95％ MeCN，含有0.05％ TFA)纯化产物，并且在真空中去除溶剂以得到灰白色固体形式的25f(107mg,0.12mmol，78％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝900.4(理论值)；900.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.69min。
25g的合成
将化合物25f(107mg,0.12mmol，1当量)添加到具有搅拌棒的20mL小瓶中并溶于20％ TFA/DCM(5mL)中。将反应液在室温下搅拌20分钟且然后在真空中去除溶剂以得到呈3x TFA盐和灰白色固体形式的25g(70mg,0.0615mmol，52％产率)。通过制备型HPLC纯化(方法G，于水中的5-95％ MeCN，0.05％ TFA)获得具有分析纯度的试样。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝800.3(理论值)；800.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.12min。
25的合成
向具有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填溶于DMF(1mL)中的25g(12mg,0.011mmol，1当量)且然后将DIPEA(15uL,0.087mmol，8当量)和MP-OSu(4.3mg,0.0163mmol，1.5当量)添加到反应液中。将溶液在室温下搅拌30分钟，使用于DCM中的20％ TFA(100uL)骤冷并通过制备型HPLC(方法G，于水中的5-95％ MeCN，含有0.05％ TFA)纯化以得到呈2x TFA盐形式的25(5.7mg,0.0048mmol，45％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝951.4(理论值)；951.2(观察值)。HPLC滞留时间：2.18min。
(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(2-(1-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基)氮杂环丁-3-基)乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物26)的合成。
26a的合成
向具有搅拌棒的烘干的8mL小瓶中装填2b(100mg,0.462mmol，1当量)和碳酸钾(191mg,1.39mmol，3当量)，随后添加3-(2-溴乙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(152mg,0.577mmol，1.25当量)。将起始材料溶于DMF(3mL)中，使用石腊膜密封小瓶并在70℃下搅拌24小时。将粗制材料倾倒到含有饱和氯化铵(100mL)和EtOAc(各100mL)的分液漏斗中，振荡，分离各层，并使用EtOAc(2×100mL)萃取水层。使用盐水(2×50mL)洗涤合并的有机部分，使用MgSO4干燥，过滤并在真空中去除溶剂以得到浅黄色固体形式的粗产物。通过急速色谱(25g Sfar HC Duo SiO2管柱，于DCM中的0-20％ MeOH)纯化粗产物以得到黄色固体形式的26a(86mg,0.215mmol，47％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝400.1(理论值)；400.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.79min。
26b的合成
向烘干的2mL微波小瓶中装填25a(35mg,0.0875mmol，1当量)、5a(62mg,0.175mmol，2当量)和碳酸钠(28mg,0.263mmol，3当量)且向此小瓶中添加正丁醇(1mL)和DIPEA(0.1mL,0.5mmol，6当量)。将小瓶密封，并且在微波反应器中加热到140℃并保持3小时。然后通过硅藻土过滤反应液，使用1:1MeOH:DCM(100mL)洗涤，在真空中去除溶剂并将粗制材料加载于硅藻土上。通过急速色谱(25g Sfar HC Duo SiO2管柱，于DCM中的0-20％MeOH)纯化产物以得到浅红色固体形式的25b(38mg,0.0592mmol，68％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝644.3(理论值)；644.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.72min。
26c的合成
向烘干的4mL小瓶中装填溶于甲醇(1mL)中的25b(38mg,0.0592mmol，1当量)且添加碳酸氢钠(90mg,1.1mmol，18当量)，随后添加亚硫酸氢钠(186mg,1.07mmol，18当量)于水(1mL)中的溶液。将反应液加热到50℃并保持1小时，并且通过硅藻土过滤，使用1:1DCM:MeOH(50mL)洗涤。将粗产物加载于硅藻土上并通过急速色谱(25g Sfar HC Duo，SiO2管柱，于DCM中的0-40％10:1MeOH:NH4OH)纯化以得到浅黄色固体形式的25c(10mg,0.017mmol，29％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝584.3(理论值)；584.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.18min。
26d的合成
向具有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填溶于甲醇(0.5mL)中的25c(10mg,0.017mmol，10当量)且添加溴化氰(0.050mL,0.150mmol，3M于DCM中，8.7当量)。将反应液搅拌18小时并在真空中去除溶剂以得到呈浅灰色固体和2x HBr盐形式的25d(13mg,0.0165mmol，95％产率)，其未经任何进一步纯化即使用。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝634.3(理论值)；634.6(观察值)。HPLC滞留时间：0.98min。
26e的合成
向具有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填溶于DMF(0.5mL)中的25d(13mg,0.0165mmol，1当量)、HATU(25mg,0.066mmol，4当量)和2-乙基-5-甲基-吡唑-3-甲酸(10mg,0.066mmol，4当量)且然后添加DIPEA(0.050mL,0.20mmol，17当量)。将反应液在室温下搅拌24小时。使用乙酸(100uL)终止反应并通过制备型HPLC(方法H，于水中的5-95％MeCN，含有0.05％ TFA)纯化产物以得到浅棕色固体形式的25e(呈2x TFA盐形式，14mg,0.016mmol，95％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝906.4(理论值)；906.3(观察值)。HPLC滞留时间：2.44min。
26f的合成
向具有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填溶于20％ TFA/DCM(1mL)中的25e(14mg,0.016mmol，1当量)并在室温下搅拌15分钟。在真空中去除溶剂以得到白色固体形式的25f(呈3x TFA盐形式，15mg,0.013mmol，82％产率)且产物未经任何进一步纯化即使用。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝806.4(理论值)；806.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.25min。
26的合成
向具有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填于DMSO(0.5mL)中的25f(5.7mg,0.0050mmol，1当量)且添加MP-OSu(2.0mg,0.00750mmol，1.5当量)和DIPEA(5uL,0.030mmol，6当量)。将反应液在室温下搅拌1小时。添加于DCM中的20％ TFA(100uL)以终止反应并通过制备型HPLC(方法G，于水中的5-95％ MeCN，含有0.05％ TFA)纯化产物以得到白色固体形式的25(呈2x TFA盐形式，3.8mg,0.00321mmol，64％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝957.4(理论值)；957.3(观察值)。HPLC滞留时间：2.19min。
(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-((1-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基)氮杂环丁-3-基)氧基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物27)的合成。
27a的合成
向具有搅拌棒的烘干的8mL小瓶中装填溶于DMF(4.5mL)中的呈TFA盐形式的2b(150mg,0.454mmol，1当量)、3-(3-溴丙氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(133mg,0.454mmol，1当量)和碳酸钾(141mg,1.02mmol，2.3当量)，并且加热到55℃并保持24小时。将反应液倾倒到含有饱和NaHCO3(100mL)和EtOAc(100mL)的分液漏斗中，振荡，分离各层，并使用EtOAc(3×50mL)萃取水层。合并有机部分并使用饱和NaHCO3(3×50mL)和盐水(2×50mL)进一步洗涤。然后使用MgSO4干燥，过滤并在真空中去除溶剂以得到浅黄色固体形式的27a(194mg,0.353mmol，78％产率，起始材料对产物的比率为4:1)且未经进一步纯化即使用。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝430.1(理论值)；430.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.82min。
27b的合成
向烘干的5mL微波小瓶中装填碳酸钠(144mg,1.36mmol，3.00当量)、呈2x HCL盐形式的5a(240mg,0.678mmol，1.50当量)和27a(194mg,0.452mmol，1当量)且然后添加1-丁醇(4mL)和DIPEA(0.5mL,2.7mmol，6当量)。将小瓶密封，并且在微波反应器中加热到140℃并保持3小时。将反应液冷却到室温且通过硅藻土过滤溶液，使用1:1MeOH:DCM(100mL)洗涤。将粗产物加载于硅藻土上并通过急速色谱(25g Sfar HC Duo，SiO2管柱，于DCM中的0-20％MeOH)纯化以得到浅红色固体形式的27b(95mg,0.141mmol，31％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝674.3(理论值)；674.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.73min。
27c的合成
向20mL小瓶中装填27b(95mg,0.141mmol，1当量)和碳酸氢钠(442mg,5.3mmol，37当量)并将起始材料溶于甲醇(4mL)中。向小瓶中添加亚硫酸氢钠(442mg,2.54mmol，18当量)于水(4mL)中的溶液，并且将反应液在通气下加热到50℃并保持1小时。溶液在一小时过程中从亮红色变成浅黄色。过滤反应液，使用1:1MeOH:DCM(3×50mL)洗涤滤饼，在真空中去除溶剂，将粗产物再溶于1:1MeOH:DCM(100mL)中并通过硅藻土过滤。将粗产物加载于硅藻土上并通过急速色谱(25g Sfar HC Duo，SiO2管柱，于DCM中的0-40％10:1MeOH:NH4OH)纯化以得到灰白色固体形式的27c(42mg,0.0689mmol，49％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝614.3(理论值)；614.5(观察值)。HPLC滞留时间：0.78min。
27d的合成
向烘干的4mL小瓶中装填溶于甲醇(1.3mL)中的27c(42mg,0.0689mmol，1当量)，并且然后添加溴化氰(3M于DCM中，0.14mL,0.414mmol，6当量)。将小瓶在室温下搅拌24小时，并在真空中去除溶剂以得到灰白色固体形式的27d(呈2x HBr盐形式，57mg,0.0694mmol，定量产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝664.3(理论值)；664.7(观察值)。HPLC滞留时间：0.95min。
27e的合成
向具有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填溶于DMF(1mL)中的27d(57mg,0.0694mmol，1当量)、2-乙基-5-甲基-吡唑-3-甲酸(43mg,0.278mmol，4当量)和HATU(106mg,0.278mmol，4当量)且然后添加DIPEA(0.097mL,0.555mmol，8当量)。将反应液在室温下搅拌24小时，使用于MeCN中的20％ TFA(200uL)骤冷并通过制备型HPLC(方法I，于水中的5-95％ MeCN，使用0.05％ TFA)纯化产物，经由冻干去除溶剂以得到浅棕色固体形式的27e(呈2x TFA盐形式，35mg,0.0302mmol，43％产率)。经由第二制备型HPLC纯化(方法G，于水中的5-60％MeCN，含有0.05％ TFA)制备具有分析纯度的试样。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝936.4(理论值)；936.3(观察值)。HPLC滞留时间：2.37min。
27f的合成
向20mL小瓶中装填溶于20％ TFA/DCM(2mL)中的27e(31mg,0.0266mmol，1当量)并在室温下搅拌15分钟。在真空中去除溶剂并通过制备型HPLC(方法H，于水中的5-95％MeCN，含有0.05％ TFA)纯化粗产物以得到白色固体形式的27f(呈3x TFA盐形式，7.2mg,0.0061mmol，23％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝836.4(理论值)；836.3(观察值)。HPLC滞留时间：2.02min。
27的合成
向烘干的4mL小瓶中装填27f(10mM于DMSO中，0.50mL,0.0050mmol，1当量)且然后添加MP-OSu(2.0mg,0.0075mmol，1.5当量)和DIPEA(20uL,0.12mmol，23当量)。将反应液在室温下搅拌90分钟，使用于MeCN中的20％ TFA(100uL)骤冷且通过制备型HPLC(方法G，于水中的5-95％ MeCN，含有0.05％ TFA)纯化粗产物以得到白色固体形式的27(呈3x TFA盐形式，3.6mg,0.0029mmol，58％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝987.4(理论值)；987.2(观察值)。HPLC滞留时间：2.23min。
S-(1-(3-((3-((5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-((E)-4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)氨基)-3-氧代基丙基)-2,5-二氧代基吡咯烷-3-基)-L-半胱氨酸(化合物28)的合成。
向1.7mL埃彭道夫管(eppendorf tube)中装填25(10mM于DMSO中，100uL,0.00100mmol，1当量)且添加L-半胱氨酸(15mM于4:1DMSO:水中，150uL,0.00300mmol，3当量)。将反应液加热到37℃并保持90分钟，并且然后通过制备型HPLC(方法G，于水中的5-95％ MeCN，含有0.05％ TFA)纯化粗产物以得到白色固体形式的28(呈2x TFA盐形式，1.1mg,0.000861mmol，86％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1072.4(理论值)；1072.2(观察值)。HPLC滞留时间：1.98min。
S-(1-(3-(3-(2-((5-氨甲酰基-1-((E)-4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)乙基)氮杂环丁-1-基)-3-氧代基丙基)-2,5-二氧代基吡咯烷-3-基)-L-半胱氨酸(化合物29)的合成。
向1.7mL埃彭道夫管中装填26(10mM于DMSO中，100uL,0.00100mmol，1当量)且添加L-半胱氨酸(15mM于4:1DMSO:水中，150uL,0.00300mmol，3当量)。将反应液加热到37℃并保持2小时，并且然后通过制备型HPLC(方法G，于水中的5-95％ MeCN，含有0.05％ TFA)纯化粗产物以得到白色固体形式的29(呈2x TFA盐形式，0.91mg,0.000697mmol，70％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1078.4(理论值)；1078.3(观察值)。HPLC滞留时间：2.03min。
S-(1-(3-(3-(3-((5-氨甲酰基-1-((E)-4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙氧基)氮杂环丁-1-基)-3-氧代基丙基)-2,5-二氧代基吡咯烷-3-基)-L-半胱氨酸(化合物30)。
向1.7mL埃彭道夫管中装填27(10mM于DMSO中，100uL,0.00100mmol，1当量)和L-半胱氨酸(100mM于DMSO在，30uL,0.00300mmol，3当量)并将溶液在37℃下培育30分钟。通过制备型HPLC(方法G，于水中的5-95％ MeCN，含有0.05％)纯化粗产物以得到白色固体形式的30(呈2x TFA盐形式，1.2mg,0.000913mmol，61％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1108.4(理论值)；1108.5(观察值)。HPLC滞留时间：2.08min。
酰胺类似物的文库合成.反应图和一般方法.化合物31-60。
HATU偶合(一般方法4A)向羧酸(4当量)于DMA(400μL)中的溶液中添加HATU(6.2mg,0.016mmol，4当量)和DIPEA(4.3μL,0.025mmol，6当量)。将混合物在室温下搅拌30分钟且然后将化合物7(3mg,0.0041mmol，1当量)添加到混合物中，并且加热到70℃并保持18hr。此时，添加乙酸(4.3μL)，并且通过制备型HPLC(于水中的20-50-95％MeCN，含有0.1％FA)纯化所得产物。使用LC-MS方法D利用ESI+离子化来表征所有分子。
COMU偶合(一般方法4B)向羧酸(4当量)于DMA(400μL)中的溶液中添加COMU(7mg,0.016mmol，4当量)和DIPEA(4.3μL,0.025mmol，6当量)。将混合物在室温下搅拌30min且然后将化合物7(3mg,0.0041mmol，1当量)添加到混合物中，并且将溶液加热到40℃并保持18hr。此时，添加乙酸(4.3μL)，并且通过制备型HPLC(于水中的20-50-95％MeCN，含有0.1％FA)纯化所得产物。
PMB去保护(一般方法5)将来自前一步骤的所得酰胺溶于50％ TFA/MeCN(0.01M)中并在30℃下搅拌30min。在完成后，浓缩混合物，并通过制备型HPLC(20-50-95％水/乙腈，含有0.1％ TFA)纯化产物。
使用上文指定的一般方法制备下述实例。
4-氯-3-((4-甲氧基苄基)氧基)-5-硝基苯甲酸甲酯(化合物61)的合成。
61a的合成
在0℃和氮下，经20min向4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(15g,61mmol，1当量)于DC(60mL)中的溶液中逐滴添加BBr3(1M于DCM中，153mL,153mmol，2.5当量)。将反应混合物在0℃下搅拌30min且然后升温到25℃，并进一步搅拌12h。将反应混合物冷却到0℃，使用甲醇骤冷，并在真空中浓缩以得到深褐色油状物形式的61a(12.3g,56.5mmol，93％产率)。LC-MS(方法C，ESI+)：m/z[M+H]+＝218.0(理论值)；217.9(观察值)。HPLC滞留时间：0.21min。
61b的合成
向61a(26.6g,122mmol，1当量)于甲醇(800mL)中的溶液中添加浓H2SO4(600mg,6.11mmol，0.05当量)，将混合物在60℃下搅拌12h。LCMS分析(方法C)展示反应已完成。将混合物冷却到室温并在真空中浓缩。使用水(50mL)稀释粗制残余物且小心添加饱和NaHCO3(50mL)以实现pH>7。通过过滤收集所得固体，使用水(25mL)洗涤并在真空下干燥以得到褐色固体形式的61b(25g，88％产率)。LC-MS(方法C，ESI+)：m/z[M+H]+＝232.0(理论值)；231.9(观察值)。HPLC滞留时间：0.92min。
61的合成
向61b(18g,78mmol，1当量)于DMF(200mL)中的溶液中添加Cs2CO3(27.9g,86mmol，1.1当量)和1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(12.8g,82mmol,1.05当量)且将混合物在25℃下搅拌16h。LCMS分析(方法C)展示反应已完成。将反应液倾倒到水中，过滤并在高真空下干燥以得到浅黄色固体形式的61(22.3g，82％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.11(d,J＝1.4Hz,1H),7.97(d,J＝1.4Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,2H),6.99(d,J＝8.5Hz,2H),5.33(s,2H),3.92(s,3H),3.77(s,3H)。
(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物62)的合成。
62a的合成
向(E)-(4-氨基丁-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁基酯(12.5g,67.2mmol，1.1当量)于DMSO(150mL)中的溶液中添加4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(15g,61.1mmol，1当量)和DIPEA(39.5g,305mmol，5当量)，将混合物在100℃下搅拌12h。将混合物倾倒到水中，使用EtOAc萃取并在真空中浓缩以得到深红色固体形式的62a(16.4g,41.4mmol，68％产率)。LC-MS(方法C，ESI+)：m/z[M-tBu]+＝340.1(理论值)；340.1(观察值)。HPLC滞留时间：1.08min。
62b的合成
将62a(21g,53.1mmol，1当量)添加到于乙酸乙酯中的HCl溶液(4M,350mL,1400mmol，26当量)中且将混合物在25℃下搅拌2h。在真空中浓缩混合物并使用EtOAc洗涤粗制固体以得到深红色固体形式的62b(呈HCl盐形式，14.5g,43.7mmol，82％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.19(d,J＝1.8Hz,1H),8.12(br s,1H),8.01(br s,3H),7.46(d,J＝1.6Hz,1H),5.87(td,J＝5.8,15.5Hz,1H),5.71-5.55(m,1H),4.21(br s,2H),3.90(s,3H),3.84(s,3H),3.42-3.35(m,2H)。
62c的合成
向61(4.5g,12.8mmol)于DMSO(70mL)中的溶液中添加62b(4.67g,14.1mmol，HCl盐)和DIPEA(8.3g,64mmol，5当量)且将反应液在80℃下搅拌10h。将混合物倾倒到冰水中，使用EtOAc萃取并在真空中浓缩。使残余物重结晶(乙酸乙酯，20V，回流)以得到深红色固体形式的62c(6.4g,10.5mmol，82％产率)。MS(方法C，ESI+)：m/z[M+H]+＝611.2(理论值)；611.2(观察值)。HPLC滞留时间：1.34min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.06(dd,J＝1.5,9.5Hz,2H),7.96(br d,J＝2.9Hz,2H),7.44(s,1H),7.36(d,J＝8.5Hz,2H),7.30(s,1H),6.94(d,J＝8.5Hz,2H),5.53-5.29(m,2H),5.00(s,2H),4.03(br t,J＝5.4Hz,4H),3.84(s,6H),3.76(d,J＝3.5Hz,6H)。
62d的合成
向62c(6.0g,9.83mmol，1当量)于MeOH(300mL)中的溶液中添加NH4OH(60mL，28％NH3于H2O中)和Na2S2O4(20.5g,118mmol，12当量)。将混合物在25℃下搅拌16h且其从亮红色变成浅黄色/近无色异质混合物。过滤混合物，浓缩以去除MeOH且使用EtOAc萃取剩余水溶液。合并有机相，使用Na2SO4干燥并在真空中浓缩以得到灰白色固体形式的62d(4.0g,7.25mmol，74％产率)。MS(方法B，ESI+)：m/z[M+H]+＝551.25(理论值)；551.2(观察值)。HPLC滞留时间：1.29min。
62e的合成
向62d(4.0g,7.25mmol，1当量)于MeOH(200mL)中的溶液中添加BrCN(4.62g,43.6mmol，6当量)。将混合物在25℃下搅拌2h，此时LC-MS分析(方法C)展示完全转化。在真空中浓缩反应混合物并使用乙醇和石油醚洗涤粗产物以得到灰白色固体形式的62e(呈2xHBr盐形式，2.6g,3.53mmol，49％产率)。MS(方法C，ESI+)：m/z[M+H]+＝601.2(理论值)；601.3(观察值)。HPLC滞留时间：2.73min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝12.87(br s,1H),8.72(br d,J＝17.0Hz,4H),7.59(s,2H),7.42(s,1H),7.26-7.16(m,3H),6.82(d,J＝8.6Hz,2H),5.70(br d,J＝15.7Hz,1H),5.57-5.48(m,1H),5.00(s,2H),4.83-4.73(m,4H),3.88(s,6H),3.71(s,3H),3.65(s,3H)。
62f的合成
向1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(3.15g,20.5mmol，2.6当量)于DMF(30mL)中的溶液中添加HATU(8.38g,22.0mmol，2.8当量)且将溶液在60℃下搅拌10min。制备DIPEA(5.09g,39mmol，5当量)和62e(6.0g,7.87mmol，1当量，2x HBr盐)于DMF(30mL)中的第二溶液并添加到活化酸中。然后将反应液在60℃下搅拌2h。将溶液倾倒到水中，过滤并使用乙腈研磨以得到灰白色固体形式的62f(2.54g,2.91mmol，37％产率)。MS(方法C，ESI+)：m/z[M+H]+＝873.4(理论值)；873.4(观察值)。HPLC滞留时间：3.44min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.88(br s,2H),7.74(br s,2H),7.22(br s,1H),7.16-6.97(m,3H),6.66(br d,J＝7.9Hz,2H),6.57-6.36(m,2H),5.87-5.37(m,2H),4.78(br s,6H),4.51(br dd,J＝7.0,17.3Hz,4H),3.85(s,6H),3.59(s,3H),3.52(br s,3H),2.10(br d,J＝11.1Hz,6H),1.26(td,J＝6.8,18.8Hz,6H)。
62的合成
向具有搅拌棒的烘干的4mL小瓶中装填溶于1:1MeCN:TFA(1mL)中的62f(9mg,0.010mmol，1当量)并在室温下搅拌1小时。在真空中去除溶剂并在高真空中干燥产物过夜以得到浅棕色固体形式的62(7.5mg,0.0099mmol，定量产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝753.3(理论值)；753.7(观察值)。HPLC滞留时间：1.99min。
(E)-1-(4-(5-羧基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物63)的合成。
63a的合成
将化合物62f(100mg,0.115mmol，1当量)溶于乙腈(1mL)中，添加1M LiOH(1mL,1mmol，9当量)，并且将溶液加热到80℃并保持1小时。冷却小瓶，在真空中去除溶剂并通过制备型HPLC(方法I，于水中的5-95％ MeCN，含有0.1％ TFA)纯化产物以得到白色固体形式的63a(78mg,0.092mmol，97％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝845.3(理论值)；845.8(观察值)。HPLC滞留时间：1.95min。
63的合成
如先前所描述来制备化合物63(参见“62的合成”)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝725.3(理论值)；725.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.83min。
(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-羟基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物64)和(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-羟基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物65)的合成。
64a和65a的合成
如先前所描述来制备化合物64a和65a的不可分离的1:1混合物(参见“65a的合成”)，其中使用氢氧化钠代替氢氧化锂并在50％转化时终止反应，随后经由制备型HPLC(方法H，使用0.1％ FA)纯化。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝859.4(理论值)；859.5(观察值)。HPLC滞留时间：2.46min。
64和65的合成
如先前所描述来制备化合物64a和65a的不可分离的1:1混合物(参见“65a的合成”)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝739.4(理论值)；739.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.99和2.04min。
(E)-7-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙酰胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物66)的合成
66a的合成
在20mL小瓶中，将化合物62(397mg,0.527mmol，1当量)、(3-溴丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(146mg,0.580mmol，1.1当量)和碳酸钾(218mg,1.58mmol，3当量)溶于DMF(5.3mL)中。将反应液在55℃下搅拌18小时且然后过滤混合物，使用甲醇洗涤并在真空中浓缩滤液。向粗制固体中添加冷水并经由过滤分离沉淀物以得到66a(232mg,0.251mmol，48％产率)。MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝924.4(理论值)；924.9(观察值)。HPLC滞留时间：2.42min。
66b的合成
将化合物66a(232mg,0.251mmol，1当量)溶于甲醇(2.5mL)中且添加于二恶烷中的4M HCl(0.5mL,2.01mmol，8当量)。将反应液在30℃下搅拌90分钟。在真空中去除溶剂并通过制备型HPLC(方法I，使用0.05％ TFA)纯化粗产物以提供66b(206mg,0.24mmol，96％产率)。MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝824.4(理论值)；824.9(观察值)。HPLC滞留时间：1.56min。
66的合成
将化合物66(25mg,0.0291mmol，1当量)和MP-OSu(11.6mg,0.0436mmol，1.5当量)溶于DMA(0.58mL)中且添加DIPEA(20μL,0.116mmol)。将反应液在室温下搅拌1小时。通过制备型HPLC(方法H，使用0.05％ TFA)直接纯化混合物以提供白色固体形式的66(10.88mg,0.0112mmol，38％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝975.4(理论值)；975.4(观察值)。HPLC滞留时间：2.24min。
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(3-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)-4-((((3-((2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-((E)-4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)氨甲酰基)氧基)甲基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸(化合物67)的合成
67a的合成
将化合物13a(65mg,0.0868mmol，1.4当量)和碳酸双(五氟苯基)酯(120mg,0.304mmo，5当量)溶于DMA(0.43mL)中且添加DIPEA(70μL,0.404mmol，6.7当量)。将反应液搅拌30分钟且然后添加66b(52mg,0.0607mmol，1当量)。将反应液在室温下搅拌18小时。使用H2O稀释溶液并使用EtOAc(3×)萃取，并且使用1M HCl(3×)洗涤合并的有机物，使用MgSO4干燥，过滤并在真空中去除溶剂以得到粗制固体。将此材料溶于DMSO中并通过制备型HPLC(方法H，使用0.05％ TFA)纯化以得到白色固体形式的67a(33.1mg,0.0207mmol，34％产率)。LCMS(方法D，ESI+)m/z[M+H]+1598.6(理论值)，1598.6(观察值)。LCMS滞留时间：2.65min。
MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1598.6(理论值)；1598.6(观察值)。HPLC滞留时间：2.65min。
67b的合成
将化合物67a(33.1mg,0.0207mmol)溶于无水甲醇(0.21mL)中，在冰浴中冷却，并且添加于MeOH中的0.5M NaOMe(41.5μL,0.0414mmol，2当量)。通过LCMS(方法D)监测反应且在完全乙酸酯去保护后添加1M LiOH(62μL,0.0621mmol，3当量)。将反应液在室温下搅拌1h，并且通过LCMS(方法E)监测。在完全转化后，添加乙酸(62μL)，在真空中去除溶剂并经由制备型HPLC(方法H，使用0.05％ TFA)纯化粗产物以得到白色固体形式的67b(10.1mg,0.0075mmol，36％产率)。LCMS(方法D，ESI+)m/z[M+H]+1236.5(理论值)，1236.5(观察值)。LCMS滞留时间：2.31min。
MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝1236.5(理论值)；1236.5(观察值)。HPLC滞留时间：2.31min。
67的合成
将化合物67b(10.1mg,0.0075mmol，1当量)和MP-OSu(3.0mg,0.0112mmol，1.5当量)溶于DMA(150μL)中，添加DIPEA(4μL,0.0224mmol)。将反应液在室温下搅拌30min，此时添加乙酸(4μL)，并且经由制备型HPLC(方法G，使用0.05％ TFA)纯化混合物以获得白色固体形式的67(3.3mg,0.0024mmol，32％产率)。LCMS(方法E，ESI+)m/z[M+H]+1387.5(理论值)，1387.5(观察值)。LCMS滞留时间：1.92min。
MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1387.5(理论值)；1387.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.92min。
(E)-1-(4-(5-羧基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙酰胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物68)的合成
68a的合成
将化合物66b(30mg,0.032mmol)溶于甲醇(0.32mL)中且添加1M LiOH(0.256mL,0.256mmol，8当量)。将混合物在80℃下搅拌1h。在真空中浓缩混合物并经由制备型HPLC(方法H，使用0.05％ TFA)纯化以提供白色固体形式的68a(17.4mg,0.0191mmol，60％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝796.4(理论值)；796.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.83min。
68的合成
将化合物68a(16.7mg,0.0183mmol，1当量)和MP-OSu(7.3mg,0.0275mmol，1.5当量)溶于DMA(0.37mL)中且添加DIPEA(10μL,0.0574mmol，2当量)。将反应液在室温下搅拌1小时，添加AcOH(10μL)且经由制备型HPLC(方法H，使用0.05％ TFA)纯化粗产物以提供白色固体形式的68(7.6mg,0.0080mmol，44％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝974.4(理论值)；974.4(观察值)。HPLC滞留时间：2.42min。
1-((E)-4-(5-羧基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-((((4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物69)的合成
69a的合成
如先前所描述来制备化合物69a(参见“67a的合成”)。MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1570.6(理论值)；1570.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.95min。
69b的合成
如先前所描述来制备化合物69b(参见“67b的合成”)。MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1208.5(理论值)；1208.3(观察值)。HPLC滞留时间：1.48min。
69的合成
如先前所描述来制备化合物69(参见“67的合成”)。MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1359.5(理论值)；1359.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.68min。
(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(3-吗啉基丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物70)的合成
70的合成
向化合物A(6mg,0.00706mmol)于无水DCM(0.10mL)中的溶液中逐滴添加BBr3(0.04mL，1M于DCM中)。将所形成浆液在30℃和氩下搅拌过夜。通过UPLC-MS监测反应。在完成后，添加冷水(0.10mL)且剧烈搅拌混合物。在30min.之后，蒸发溶剂，并通过制备型HPLC(方法G)使用甲酸作为添加剂来纯化产物。收集纯净部分，冷冻，并冻干以提供白色固体形式的化合物70(5.14mg,0.00528mmol，75％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝836.9(理论值)，836.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.34min。
使用下列方法制备化合物17-24的半胱氨酸加合物。
一般方法6。将10mM马来酰亚胺溶液与1当量L-半胱氨酸(100mM于水中)在37℃下一起培育1小时且产物未经任何进一步纯化即使用。
(3-(5-氨甲酰基-2-氯-3-硝基苯氧基)丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(化合物77)的合成
向具有搅拌棒的火焰干燥的100 mL RB中装填2b(1.0 g,4.62 mmol，1当量)于DMF(10 mL)中的溶液、碳酸钾(830 mg,6.00 mmol，1.3当量)和N-(3-溴丙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁基酯(1.20当量，1.40 g,5.54 mmol，1.20当量)于DMF(5 mL)中的溶液。添加额外DMF以使总体积达到45 mL，并且将反应液加热到70℃并保持24小时。将反应液冷却到室温并通过硅藻土过滤，使用DMF(3×10 mL)洗涤。将此溶液倾倒到冰水(900 mL)中，搅拌90分钟并经由过滤分离粗产物。最后，使用冷水(300 mL)洗涤滤液并在真空中干燥过夜以得到77(1.23 g,3.16 mmol，68％产率)。
(E)-(3-((2-氨基-5-氨甲酰基-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(化合物78)的合成
78a的合成
向具有搅拌棒的500mL圆底烧瓶中装填4a(3.0g,7.9mmol，1当量)和碳酸氢钠(12.5g,148mmol，19当量)且添加乙醇(105mL)以得到异质溶液。在冰浴中冷却此溶液且在保持内部温度低于10℃的速率下逐滴添加亚硫酸氢钠(25.8g,148mmol，19当量)于105mL水中的溶液。将混合物在通气下加热到45℃并保持1小时，并且冷却到室温。通过硅藻土过滤混合物，使用EtOH(100mL)洗涤并在真空中去除溶剂。将粗制材料再溶于1:1DCM:MeOH(200mL)中，通过硅藻土过滤并在真空中去除溶剂。再重复此程序一次且然后将粗产物加载于硅藻土上，并通过急速色谱(50g Sfar HC Duo，SiO2管柱，于DCM中的0-40％10:1NH4OH:MeOH)纯化以得到78a(1.45g,4.13mmol，52％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝351.2(理论值)；351.1(观察值)。HPLC滞留时间：1.53min。
78b的合成
向烘干的200mL圆底烧瓶中装填溶于甲醇(45mL)中的78a(1.95g,5.58mmol，1当量)且添加溴化氰(3M于DCM中，5.6mL,16.7mmol，3当量)以得到黄色均质溶液。将反应液在室温下搅拌48小时并在真空中去除溶剂以得到呈HBr盐形式的78b(2.48g,5.44mmol，98％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝376.2(理论值)；376.1(观察值)。HPLC滞留时间：0.71min。
78c的合成
向具有搅拌棒的火焰干燥的40mL小瓶中装填78b HBr(867mg,1.90mmol，1当量)、2-乙基-5-甲基-吡唑-3-甲酸(879mg,5.70mmol，3当量)和HATU(2.17g,5.70mmol，3当量)。将固体溶于DMF(15mL)中且然后添加DIPEA(2.0mL,11.4mmol，6当量)。将小瓶密封并在室温下搅拌48小时。将溶液倾倒到含有NH4OH的冰冷水(450mL)中(28％ NH3于水中，10mL)并在4℃下沉淀过夜。经由过滤分离白色沉淀物并在真空中干燥过夜以得到78c(658mg,1.29mmol，68％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝512.3(理论值)；512.2(观察值)。HPLC滞留时间：2.35min。
78d的合成
向具有搅拌棒的烘干的8mL小瓶中装填78c(800mg,1.56mmol，3当量)，在于MeOH中的3M HCl(5.2mL,15.6mmol HCl，10当量)中搅拌1小时。在真空中去除溶剂以得到呈2xHCl盐形式的78d(700mg,1.56mmol，定量产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝412.2(理论值)；412.5(观察值)。HPLC滞留时间：0.73min。
78e的合成
向烘干的20mL微波小瓶中装填78e(700mg,1.56mmol，1当量)、77(909mg,2.34mmol，1.5当量)和碳酸钠(497mg,4.69mmol，3当量)且向混合物中添加1-丁醇(15mL)和DIPEA(1.6mL,9.38mmol，6当量)。将小瓶密封并在微波反应器中于140℃下加热3小时以得到浅红色异质混合物。将此混合物倾倒到DCM(100mL)中并通过硅藻土过滤，使用DCM(50mL)和MeOH(50mL)洗涤。将粗产物加载于硅藻土上并经由急速色谱(50g Sfar HC Duo，SiO2管柱，于DCM中的0-20％ MeOH)纯化以得到浅红色固体形式的78e(569mg,0.746mmol，48％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝763.4(理论值)；763.4(观察值)。HPLC滞留时间：2.17min。
78f的合成
向78e(569mg,0.746mmol，1当量)于甲醇(8mL)和NH4OH(2.0mL，28％ NH3于水中)中的混合物中添加亚硫酸氢钠(2.34g,13.4mmol，18当量)于水(8mL)中的溶液。将此溶液在50℃下加热1小时。将反应液倾倒到含有水(250mL)和EtOAc(250mL)的分液漏斗中。振荡混合物，分离各层且使用EtOAc(3×100mL)进一步萃取水层。合并有机物，使用盐水(2×100mL)洗涤，使用MgSO4干燥，过滤并在真空中去除溶剂以得到浅棕色固体形式的78f(400mg,0.546mmol，73％产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝733.4(理论值)；733.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.39min。
78的合成
向78f(1.00当量，400mg,0.546mmol)于甲醇(5.5mL)中的溶液中添加溴化氰(3M于DCM中，0.55mL,1.65mmol，3当量)且将混合物在室温下搅拌24小时。在真空中去除溶剂以得到呈HBr盐形式的78(456mg,0.544mmol，定量产率)。MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝758.4(理论值)；758.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.19min。
第2组酰胺类似物的文库合成。反应图和一般方法。化合物71-95。
COMU偶合(一般方法7A)：向2mL微波小瓶中装填化合物78(20mg,0.0238mmol，1当量)于DMA(0.50mL)中的溶液。添加相应羧酸(2当量)、COMU(20.4mg,0.0477mmol，2当量)和DIPEA(20.8μL,0.119mmol，5当量)。将小瓶密封，并且在微波反应器中加热到80℃并保持1h。经由UPLC-MS(方法E，ESI+)监测反应。在完成后，添加乙酸(20μL)且通过制备型HPLC(方法H)使用0.05％ TFA作为添加剂来纯化所得产物。收集纯净部分，冷冻，并冻干以提供白色固体产物。
HATU偶合(一般方法7B)：向2mL微波小瓶中装填化合物78(20mg,0.0238mmol，1当量)于DMA(0.50mL)中的溶液。添加相应羧酸(4当量)、HATU(36.3mg,0.0954mmol，2当量)和DIPEA(20.8μL,0.119mmol，5当量)。将小瓶密封，并且在微波反应器中加热到80℃并保持1h。经由UPLC-MS(方法E，ESI+)监测反应。在完成后，添加乙酸(20μL)且通过制备型HPLC(方法H)使用0.05％ TFA作为添加剂来纯化所得产物。收集纯净部分，冷冻，并冻干以提供白色固体产物。
Boc去保护(一般方法8)：将一般方法7A或7B的所得产物溶于MeOH(0.01M)中，向其中添加于二恶烷中的4M HCl(8当量)。将溶液在室温下搅拌30min。经由UPLC-MS(方法E，ESI+)监测反应。在完成后，浓缩溶液，再溶于DMSO中，并经由制备型HPLC(方法G或H)使用TFA作为添加剂来纯化。收集纯净部分，冷冻，并冻干以提供白色固体产物。
马来酰亚胺偶合(一般方法9)：将来自前一反应的所得胺(化合物79-95)溶于DMSO(0.01M)中，向其中添加MP-OSu(2当量)和DIPEA(5当量)。将混合物在30℃下搅拌过夜，并通过UPLC-MS(方法E，ESI+)进行监测。在完成后，经由制备型HPLC(方法G)使用0.05％ TFA作为添加剂来纯化所得产物。
(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-7-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙酰胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113)的合成。
(E)-3-氨基-4-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁-2-烯-1-基)氨基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯(化合物113a)的合成
将化合物62a(500mg,1.26mmol，1当量)溶于MeOH(20mL)和NH4OH(6mL)中。缓慢添加于H2O(5mL)中的Na2S2O4(1.10g,6.32mmol，5当量)并将混合物在室温下搅拌30min。通过UPLC-MS(方法E，ESI+)监测反应。在完成后，过滤混合物并浓缩。将所得产物再溶于EtOAc中并使用H2O(×3)洗涤。收集有机物，使用MgSO4干燥，过滤，并浓缩以提供黄色固体形式的化合物113a(343mg,0.938mmol，74％产率)。所得产物未经进一步纯化即使用。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝366.2(理论值)，366.2(观察值)。HPLC滞留时间：1.54min。
(E)-2-氨基-1-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁-2-烯-1-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯氢溴酸盐(化合物113b)的合成
将化合物113a(343mg,0.938mmol，1当量)溶于MeOH(9.3mL)中，向其中添加CNBr(3M于MeCN中，0.374mL,1.2当量)。将反应液在室温下搅拌18h，并通过UPLC-MS(方法E，ESI+)进行监测。在完成后，浓缩溶液以提供化合物113b(402mg,0.853mmol，91％产率)，其未经进一步纯化即使用。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝391.2(理论值)，391.1(观察值)。HPLC滞留时间：1.51min。
(E)-1-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113c)的合成
在5mL微波小瓶中，将化合物113b(402mg,0.853mmol，1当量)、1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(394mg,2.56mmol，3当量)和HATU(973mg,2.56mmol，3当量)溶于DMA(1.7mL)中。添加DIPEA(0.74mL,4.26mmol，5当量)，并且将反应液在微波反应器中加热到80℃并保持1h。经由UPLC-MS(方法E，ESI+)监测反应。在完成后，将反应混合物缓慢添加到冰冷水(300mL)中以沉淀化合物113c(295mg,0.560mmol，66％产率)，其未经进一步纯化即使用。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝527.3(理论值)，527.1(观察值)。HPLC滞留时间：2.30min。
(E)-1-(4-氨基丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113d)的合成
将化合物113c(319mg,0.606mmol，1当量)溶于MeOH(1mL)中，向其中添加于二恶烷中的HCl(4M,1.2mL,4.85mmol，8当量)。将反应液在室温下搅拌30min.且通过UPLC-MS(方法E，ESI+)进行监测。在完成后，浓缩溶液且化合物113d(280mg,0.605mmol，定量产率)未经进一步纯化即使用。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝427.2(理论值)，427.2(观察值)。HPLC滞留时间：1.54min。
(E)-1-(4-((2-(3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙氧基)-4-氨甲酰基-6-硝基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113e)的合成
将化合物113d(280mg,0.605mmol，1当量)和化合物77(305mg,0.787mmol，1.3当量)溶于DMSO(3.0mL)中，向其中添加DIPEA(0.316mL,1.82mmol，3当量)。将反应液在80℃下搅拌18h并经由UPLC-MS(方法E，ESI+)进行监测。在完成后，添加AcOH(0.30mL)，并且通过制备型HPLC(方法I)使用0.05％ TFA作为添加剂来纯化产物。收集纯净部分，冷冻，并冻干以提供橙色固体形式的化合物113e(58.6mg,0.0753mmol，12％产率)。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝778.3(理论值)，778.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.88min。
(E)-1-(4-((2-氨基-6-(3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙氧基)-4-氨甲酰基苯基)氨基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113f)的合成
将化合物113e(58.6mg,0.0753mmol，1当量)溶于1:1AcOH/DCM混合物(0.75mL)中并冷却到0℃。添加Zn(49.2mg,0.753mmol，10当量)且将混合物升温到室温，并且同时搅拌30min。经由UPLC-MS(方法E，ESI+)监测反应。在完成后，浓缩溶液并再溶于DCM中，通过急速色谱(25g SiO2管柱，于DCM中的0-40％ MeOH:NH4OH(10:1))纯化以提供化合物113f(28.3mg,0.378mmol，50％产率)。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝748.4(理论值)，748.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.84min。
(E)-1-(4-(2-氨基-7-(3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙氧基)-5-氨甲酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113g)的合成
将化合物113f(28.3mg,0.378mmol，1当量)溶于MeOH(0.38mL)中，向其中添加CNBr(3M于MeCN中，15μL,0.0454mmol，1.2当量)。将反应液在室温下搅拌18h且经由UPLC-MS(方法E，ESI+)进行监测。在完成后，浓缩溶液以提供产物113g(30.7mg,0.360mmol，定量产率)，其未经进一步纯化即使用。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝773.4(理论值)，773.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.53min。
(E)-1-(4-(7-(3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙氧基)-5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物H)的合成
在2mL微波小瓶中，将化合物113g(30.7mg,0.0360mmol，1当量)、1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(22.1mg,0.144mmol，4当量)和HATU(54.6mg,0.144mmol，4当量)溶于DMA(0.50mL)中。添加DIPEA(0.025mL,0.144mmol，4当量)，并且将反应液在微波反应器中于80℃下加热1h。经由UPLC-MS(方法E，ESI+)监测反应。在完成后，通过制备型HPLC(方法H)使用0.05％ TFA作为添加剂来纯化产物。收集纯净部分，冷冻，并冻干以提供白色固体形式的化合物113h(6.52mg,0.0064mmol，18％产率)。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝909.4(理论值)，909.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.90min。
(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(3-(甲基氨基)丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113i)的合成
将化合物113h(3.02mg,0.0030mmol，1当量)溶于MeOH(0.30mL)中，向其中添加于二恶烷中的HCl(4M,6.00μL,0.0236mmol，8当量)。将反应液在室温下搅拌30min并经由UPLC-MS(方法E，ESI+)进行监测。在完成后，经由制备型HPLC(方法G)使用0.05％ TFA作为添加剂来纯化产物。收集纯净部分，冷冻，并冻干以提供白色固体形式的化合物113i(1.35mg,0.0013mmol，44％产率)。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝809.4(理论值)，809.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.57min。
将化合物113i(7.53mg,0.0085mmol，1当量)和MP-OSu(4.55mg,0.0171mmol，2当量)溶于DMA(0.854mL)中，并且添加DIPEA(42.7μL,0.0074mmol，5当量)。将反应液在室温下搅拌18h并通过UPLC-MS(方法E，ESI+)进行监测。在完成后，添加AcOH(42μL)，并且经由制备型HPLC(方法G)使用0.05％ TFA作为添加剂来纯化产物。收集纯净部分，冷冻，并冻干以提供白色固体形式的化合物113(4.43mg,0.0041mmol，48％产率)。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝960.4(理论值)，960.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.79min。
连接体文库合成(化合物114-124)。
酰胺偶合(一般方法10)：在DMF(0.02M于12a中)中制备化合物12a(1当量)、HATU(2当量)、DIPEA(5当量)、适当L-氨基酸(2当量)的混合物并在室温下搅拌过夜。在真空中去除溶剂，并且所得产物未经进一步纯化即用于下一步骤中。
Fmoc去保护(一般方法11)：将所得Fmoc保护胺溶于20％哌啶/DMF(1mL)中并在室温下搅拌15分钟。在真空中去除溶剂并经由制备型HPLC(方法H，5-95％/MeCN/H2O/0.05％TFA)纯化产物。
根据一般方法9来合成含有马来酰亚胺的药物-连接体(化合物121-125)。
(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-7-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙酰胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物126)。
化合物126a的合成
将化合物113h(25.44mg,0.0249mmol，1当量)溶于MeOH(166μL)中。添加1M LiOH水溶液(200μL，8当量)且将反应液在80℃下搅拌2h。在完成后，在减压下浓缩溶液并通过制备型HPLC(方法H)使用0.05％ TFA作为添加剂来纯化。收集纯净部分，冷冻，并冻干以提供白色固体形式的化合物126a(7.1mg,0.0071mmol，28％产率)。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝895.4(理论值)，895.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.97min。
化合物126b的合成。
遵循用于制备化合物113i的相同程序来制备化合物126b。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝795.4(理论值)，795.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.40min。
化合物126的合成
遵循用于制备化合物113的相同程序来制备化合物126。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝946.4(理论值)，946.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.68min。
(E)-(3-((5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-(N-甲基氨磺酰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(化合物127)的合成。
遵循与化合物25f相同的程序来制备化合物127，其中使用4-氯-N-甲基-3-硝基苯磺酰胺代替4-氯-3-硝基苯磺酰胺。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝914.4(理论值)，914.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.80min。
(E)-7-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙酰胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-(N-甲基氨磺酰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物128)的合成。
128a的合成
遵循用于制备化合物66b的相同程序来制备化合物128a。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝814.4(理论值)，814.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.53min。
128的合成
遵循用于制备化合物12的相同程序来制备化合物128。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝965.4(理论值)，965.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.60min。
S-(1-(3-((3-((5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-((E)-4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)氨基)-3-氧代基丙基)-2,5-二氧代基吡咯烷-3-基)-L-半胱氨酸(化合物129)的合成
遵循一般方法6来制备化合物129。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1081.4(理论值)，1081.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.88min。
1-((E)-4-(7-(3-(3-(3-(((R)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-2,5-二氧代基吡咯烷-1-基)-N-甲基丙酰胺基)丙氧基)-5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物130)的合成。
遵循一般方法6来制备化合物130。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1067.4(理论值)，1067.6(观察值)。HPLC滞留时间：1.49min。
(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(6-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基己酰胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物131)的合成。
遵循与化合物12相同的程序来制备化合物131，其中使用6-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸2,5-二氧代基吡咯烷-1-基酯代替3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二氧代基吡咯烷-1-基酯。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝987.5(理论值)，987.7(观察值)。HPLC滞留时间：1.85min。
S-(1-(6-((3-((5-氨甲酰基-1-((E)-4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)氨基)-6-氧代基己基)-2,5-二氧代基吡咯烷-3-基)-L-半胱氨酸(化合物132)的合成。
遵循一般方法6来制备化合物132。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1108.5(理论值)，1108.7(观察值)。HPLC滞留时间：1.42min。
(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(N-环丙基-3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物133)的合成。
133a的合成
向烘干的4mL小瓶中装填1(10mg,0.0105mmol，1当量)、碳酸钾(7.3mg,0.0526mmol，5当量)和N-(3-溴丙基)-N-环丙基-氨基甲酸叔丁基酯(0.49mL于DMF中的9mg/mL溶液，0.0158mmol，1.50当量)且使起始材料溶于DMF(0.50mL)中。将反应液在55℃下搅拌过夜并通过制备型HPLC(方法B)纯化，然后冷冻并冻干以提供化合物133a(8.8mg,0.0077mmol，73％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝920.45(理论值)，920.64(观察值)。HPLC滞留时间：2.32min。
133b的合成
向烘干的4mL小瓶中装填133a(8.8mg,0.0077mmol)和于DCM中的20％ TFA(100μL)。将反应液在室温下搅拌30分钟并通过制备型HPLC(方法B)纯化，然后冷冻并冻干以提供化合物133b(5.0mg,0.0043mmol，56％产率)。UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝820.40(理论值)，820.49(观察值)。HPLC滞留时间：1.29min。
133的合成
向烘干的8mL小瓶中装填溶于DMSO(1mL)中的133b(3.3mg,0.0085mmol，1当量)以及3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二氧代基吡咯烷-1-基酯于DMSO中的溶液(10mM于DMSO中，0.43mL,0.0043mmol，1.5当量)和DIPEA(1.5μL,0.00851mmol，3当量)。将反应液加热到30℃过夜，使用乙酸骤冷并通过制备型HPLC(方法B)纯化，然后冷冻化合物并冻干以提供133(1.9mg,0.00158mmol，56％产率)。
UPLC-MS(方法D，ESI+)：m/z[M+H]+＝971.43(理论值)，971.48(观察值)。HPLC滞留时间：1.99min。
3-((5-氨甲酰基-1-((E)-4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)-N-(4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)苄基)-N,N-二甲基丙烷-1-铵2,2,2-三氟乙酸盐(化合物134)的合成。
134a的合成
向烘干的8mL小瓶中装填(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(二甲基氨基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(20mg,0.0248mmol，1当量，如先前在WO2017/175147实例39第291页中所描述来制备)和(2S,3R,4S,5S,6S)-三乙酸2-(3-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(溴甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基酯(60.3mg,0.0743mmol，3当量，如先前在分子癌症治疗201615(5),938-945中所描述来制备)并与无水乙腈共沸。向小瓶中添加2-丁酮(2.5mL)且将溶液加热到100℃过夜。通过制备型HPLC(方法B)直接纯化化合物，冷冻并冻干以提供134a(11.3mg,0.0070mmol，28％产率)。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1538.64(理论值)，1538.83(观察值)。HPLC滞留时间：2.55min
134b的合成
向烘干的4mL小瓶中装填134a(4.5mg,0.0094mmol，1当量)并溶于无水MeOH(0.5mL)中。在乙腈/干冰浴中于-40℃下冷却小瓶且添加0.5M NaOMe(19μL,0.0094mmol，1当量)。将反应液搅拌1小时，然后升温到室温且添加LiOH(1M于H2O中，31μL，0.031mmol，3当量)。将反应液在室温下搅拌1小时且然后通过制备型HPLC(方法B)直接纯化，然后冷冻并冻干以提供134b(5.8mg,0.0049mmol，48％产率)。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1176.52(理论值)，1176.76(观察值)。HPLC滞留时间：1.29min
134的合成
将134b(5.8mg,0.0038mmol，1当量)添加到烘干的4mL小瓶中并溶于DMSO(1mL)中，并且然后添加MP-OSu(10mM于DMSO中，0.57mL,0.0057mL，1.5当量)和DIPEA(2μL,0.0115mmol，3当量)。将溶液搅拌30min，使用乙酸骤冷并通过制备型HPLC(方法B)纯化，然后冷冻并冻干以提供134(3.6mg,0.0023mmol，61％产率)。UPLC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1327.55(理论值)，1327.77(观察值)。HPLC滞留时间：1.38min。
(E)-7-(2-(氮杂环丁-3-基)乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物135)的合成
135a的合成
向25a(1.61g,4.18mmol，1当量)于MeOH(63mL)和NH4OH水溶液(21mL)中的溶液中添加Na2S2O4水溶液(1M,21mL,21mmol，5当量)。将混合物在30℃下搅拌1小时，并且通过UPLC-MS(方法E，ESI+)监测反应。在完成后，通过硅藻土过滤溶液并使用MeOH洗涤。浓缩滤液且通过急速色谱(干加载于硅藻土上，Sfar HC Duo SiO2管柱，于DCM中的10:1MeOH:NH4OH梯度)纯化产物以产生135a(774mg,2.17mmol，52％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝357.2(理论值)，357.3(观察值)。HPLC滞留时间：1.44min。
135b的合成
向化合物135a(774mg,2.17mmol，1当量)于MeOH(4mL)中的溶液中添加于MeCN中的溴化氰(3M,1.5mL,4.35mmol，2当量)。将溶液在30℃下搅拌18小时且经由UPLC-MS(方法E，ESI+)进行监测。在完成后，在真空中去除溶剂以产生135b(1.0g,2.25mmol，定量产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝382.2(理论值)，382.2(观察值)。HPLC滞留时间：1.12min。
135c的合成
向微波小瓶中装填135b(1.0g,2.25mmol，1当量)于DMA(11mL)中的溶液，向其中添加化合物8(1.0g,6.74mmol，3当量)、HATU(2.6g,6.74mmol，3当量)和DIPEA(1.2mL,6.74mmol，3当量)。将此混合物在微波反应器中加热到80℃并保持1小时。在完成后，通过使用冷水沉淀来分离135c(1.0g,1.93mmol，86％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝518.2(理论值)，518.3(观察值)。HPLC滞留时间：1.60min。
135d的合成
向135c(1.0g,1.93mmol，1当量)于MeOH(3.3mL)中的溶液中添加于二恶烷中的HCl(4M,5.3mL,21mmol，8当量)。将混合物搅拌在30℃下1小时。在完成后，在真空中去除溶剂且135d(1.2g,2.65mmol，定量产率)未经进一步纯化即使用。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝418.2(理论值)，418.2(观察值)。HPLC滞留时间：1.09min。
135e的合成
在5mL微波小瓶中，将化合物135d(200mg,0.408mmol，1当量)和26a(245mg,0.612mmol，1.5当量)溶于正丁醇(2.0mL)中，向其中添加Na2CO3(130mg,1.22mmol，3当量)和DIPEA(0.36mL,2.04mmol，5当量)。经由微波反应器将反应液在140℃下加热3小时。过滤所得产物并使用MeOH和DCM洗涤。浓缩滤液并经由急速色谱(干加载于硅藻土上，Sfar HC DuoSiO2管柱，于DCM中的10:1MeOH:NH4OH梯度)纯化以产生135e(51mg,0.0651mmol，16％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝781.3(理论值)，781.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.72min。
135f的合成
使用与135a相同的程序且使用135e(51mg,0.0651mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物135f(30mg,0.0402mmol，62％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝751.3(理论值)，751.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.46min。
135g的合成
使用与135b相同的程序且使用135f(30mg,0.0402mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物135g(34mg,00394mmol，定量产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝776.3(理论值)，776.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.54min。
135h的合成
使用与135c相同的程序且使用135g(17mg,0.0197mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物135h。在完成后，通过制备型HPLC(方法H)纯化产物。收集纯净部分，冷冻并冻干以提供白色粉末形式的135h(2.34mg,0.0021mmol，10％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝912.4(理论值)，912.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.65min。
135的合成
将化合物135h(2.34mg,0.0021mmol，1当量)溶于MeOH(0.21mL)中且添加于二恶烷中的HCl(4M,4.1μL,0.0164mmol，8当量)。将溶液加热到40℃并保持1小时。然后在真空中去除溶剂且135(1.86mg,0.0020mmol，定量产率)未经进一步纯化即使用。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝812.3(理论值)，812.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.26min。
(E)-7-(2-(氮杂环丁-3-基)乙氧基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物136)的合成
136a的合成
使用与135h相同的程序且使用135g(17mg,0.0197mmol，1当量)和1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酸作为起始材料来制备化合物136a(3.15mg,0.0028mmol，14％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝898.4(理论值)，898.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.62min。
136的合成
使用与135相同的程序且使用136a(3.15mg,0.0028mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物136(2.09mg,0.0023mmol，82％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝798.3(理论值)，798.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.24min。
(E)-7-(3-(氮杂环丁-3-基氧基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物137)的合成
137a的合成
使用与135e相同的程序且使用135d(200mg,0.408mmol，1当量)和27a(263mg,0.612mmol，1.5当量)作为起始材料来制备化合物137a(72mg,0.0893mmol，22％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝811.3(理论值)，811.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.72min。
137b的合成
使用与135a相同的方法且使用137a(72mg,0.0893mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物137b(30mg,0.0386mmol，43％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝781.3(理论值)，781.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.46min。
137c的合成
使用与135b相同的程序且使用137b(30mg,0.03896mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物137c(34mg,0.0387mmol，定量产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝806.3(理论值)，806.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.53min。
137d的合成
使用与135h相同的程序且使用137c(17mg,0.0194mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物137d(4.21mg,0.0036mmol，19％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝942.4(理论值)，942.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.65min。
化合物137的合成
使用与135相同的程序且使用137d(4.21mg,0.0036mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物137(3.35mg,0.0035mmol，定量产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝842.3(理论值)，842.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.29min。
(E)-7-(3-(氮杂环丁-3-基氧基)丙氧基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物138)的合成
138a的合成
使用与135h相同的程序且使用137c(17mg,0.0197mmol，1当量)和1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酸作为起始材料来制备化合物138a(3.00mg,0.0026mmol，13％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝928.4(理论值)，928.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.62min。
138的合成
使用与135相同的程序且使用138a(3.00mg,0.0026mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物138(2.35mg,0.0025mmol，定量产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝828.3(理论值)，828.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.26min。
(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(甲基氨基)丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物139)的合成
139a的合成
使用与135e相同的程序且使用135d(250mg,0.551mmol，1当量)和77(320mg,0.826mmol，1.5当量)作为起始材料来制备化合物139a(125mg,0.162mmol，29％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝769.3(理论值)，769.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.67min。
139b的合成
使用与135a相同的程序且使用139a(125mg,0.162mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物139b(51mg,0.0686mmol，42％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝739.3(理论值)，739.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.45min。
139c的合成
使用与135b相同的程序且使用139b(51mg,0.0686mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物139c(57mg,0.0670mmol，定量产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝764.3(理论值)，764.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.31min。
139d的合成
遵循与135h相同的程序使用139c(57mg,0.0670mmol，1当量)和1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酸作为起始材料来制备化合物139d(34mg,0.0303mmol，45％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝886.4(理论值)，886.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.61min。
139的合成
使用与135相同的程序且使用139d(34mg,0.0303mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物139(27mg,0.0291，定量产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝786.3(理论值)，786.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.23min。
(E)-7-(2-(氮杂环丁-3-基)乙氧基)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物140)的合成
140a的合成
使用与135e相同的程序且使用26a(250mg,0.625mmol，1当量)和78d(420mg,0.938mmol，1.5当量)作为起始材料来制备化合物140a(380mg,0.490mmol，78％产率)。在冷水中沉淀产物且未经进一步纯化即使用。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝775.3(理论值)，775.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.66min。
140b的合成
使用与135a相同的程序且使用140a(380mg,0.490mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物140b(193mg,0.260mmol，53％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝745.4(理论值)，745.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.44min。
140c的合成
使用与135b相同的程序且使用140b(193mg,0.260mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物140c(212mg,0.249mmol，定量产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝770.4(理论值)，770.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.60min。
140d的合成
使用与135h相同的程序且使用140c(106mg,0.124mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物140d(38mg,0.0339mmol，27％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝892.4(理论值)，892.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.59min。
140的合成
使用与135相同的程序且使用140d(38mg,0.0339mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物140(30mg,0.0334mmol，定量产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝792.4(理论值)，792.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.28min。
(E)-N-(7-(2-(氮杂环丁-3-基)乙氧基)-5-氨甲酰基-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-4-乙基-2-甲基恶唑-5-甲酰胺(化合物141)的合成
141a的合成
使用与135h相同的程序且使用140c(106mg,0.124mmol，1当量)和4-乙基-2-甲基-恶唑-5-甲酸作为起始材料来制备化合物141a(27mg,0.0237mmol，19％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝907.4(理论值)，907.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.57min。
141的合成
使用与135相同的程序且使用141a(27mg,0.0237mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物141(21mg,0.0230mmol，定量产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝807.4(理论值)，807.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.26min。
(E)-7-(3-(氮杂环丁-3-基氧基)丙氧基)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物142)的合成
142a的合成
使用与135e相同的程序且使用27a(250mg,0.582mmol，1当量)和78d(391mg,0.872mmol，1.5当量)作为起始材料来制备化合物142a。使用冷水沉淀产物且未经进一步纯化即使用。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝805.4(理论值)，805.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.66min。
142b的合成
使用与135a相同的程序且使用142a(548mg,0.681mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物142b(193mg,0.250mmol，经2个步骤的产率为37％)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝775.4(理论值)，775.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.50min。
142c的合成
使用与135b相同的程序且使用142b(193mg,0.260mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物142c(164mg,0.186mmol，75％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝800.4(理论值)，800.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.33min。
142d的合成
使用与135h相同的程序且使用142c(48mg,0.373mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物142d(40mg,0.0345mmol，37％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝922.4(理论值)，922.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.58min。
142的合成
使用与135相同的程序且使用142d(40mg,0.0345mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物142(32mg,0.0323mmol，定量产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝822.4(理论值)，822.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.29min。
(E)-N-(7-(3-(氮杂环丁-3-基氧基)丙氧基)-5-氨甲酰基-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-4-乙基-2-甲基恶唑-5-甲酰胺(化合物143)的合成
143a的合成
使用与135h相同的程序且使用142c(82mg,0.0.0931mmol，1当量)和4-乙基-2-甲基-恶唑-5-甲酸作为起始材料来制备化合物143a(31mg,0.0263mmol，28％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝937.4(理论值)，937.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.56min。
143的合成
使用与135相同的程序且使用141a(31mg,0.0263mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物143(25mg,0.0261mmol，定量产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝837.4(理论值)，837.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.29min。
(E)-7-(2-(1-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基)氮杂环丁-3-基)乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物144)的合成
根据一般方法9使用化合物135(1.86mg,0.0020mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物144的x2 TFA盐(0.59mg,0.0005mmol，24％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝963.4(理论值)，963.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.44min。
(E)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(2-(1-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基)氮杂环丁-3-基)乙氧基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物145)的合成
根据一般方法9使用化合物136(2.09mg,0.0023mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物145的x2 TFA盐(0.31mg,0.0003mmol，12％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝949.3(理论值)，949.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.40min。
(E)-7-(3-((1-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基)氮杂环丁-3-基)氧基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物146)的合成
根据一般方法9使用化合物137(3.35mg,0.0035mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物146的x2 TFA盐(0.92mg,0.0008mmol，21％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝993.4(理论值)，993.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.43min。
(E)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(3-((1-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基)氮杂环丁-3-基)氧基)丙氧基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物147)的合成
根据一般方法9使用化合物136(2.83mg,0.0024mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物147的x2 TFA盐(0.36mg,0.0003mmol，12％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝979.4(理论值)，979.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.41min。
(E)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(3-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙酰胺基)丙氧基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-5-氨磺酰基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物148)的合成
根据一般方法9使用化合物139作为起始材料来制备化合物148的x2 TFA盐(15mg,0.0129mmol，44％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝937.3(理论值)，937.4(观察值)。HPLC滞留时间：1.42min。
(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(2-(1-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基)氮杂环丁-3-基)乙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物149)的合成
根据一般方法9使用化合物140(30mg,0.0334mmol,1当量)作为起始材料来制备化合物149的x2 TFA盐(16mg,0.0136mmol，41％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝943.4(理论值)，943.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.41min。
(E)-N-(5-氨甲酰基-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(2-(1-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基)氮杂环丁-3-基)乙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-4-乙基-2-甲基恶唑-5-甲酰胺(化合物150)的合成
根据一般方法9使用化合物141(21mg,0.0230mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物150的x2 TFA盐(15mg,0.0123mmol，53％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝943.4(理论值)，943.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.41min。
(E)-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-(3-((1-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基)氮杂环丁-3-基)氧基)丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物151)的合成
根据一般方法9使用化合物142(30mg,0.0323mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物151的x2 TFA盐(22mg,0.0182mmol，56％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝973.4(理论值)，973.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.42min。
(E)-N-(5-氨甲酰基-1-(4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-((1-(3-(2,5-二氧代基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基)氮杂环丁-3-基)氧基)丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-4-乙基-2-甲基恶唑-5-甲酰胺(化合物152)的合成
根据一般方法9使用化合物143(37mg,0.0388mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物152的x2 TFA盐(20mg,0.0168mmol，43％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝988.4(理论值)，988.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.40min。
S-(1-(3-(3-(2-((5-氨甲酰基-1-((E)-4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)乙基)氮杂环丁-1-基)-3-氧代基丙基)-2,5-二氧代基吡咯烷-3-基)-L-半胱氨酸(化合物153)的合成
向化合物149的溶液(10mM于DMSO中，0.42mL,0.0042mmol，1当量)中添加l-半胱氨酸(0.1M H2O,63μL,0.063mmol，1.5当量)。将反应液在30℃下搅拌1h且通过UPLC-MS进行监测。在完成后，通过制备型HPLC(方法G)直接纯化反应混合物。收集纯净部分，冷冻，并冻干以产生化合物153(2.17mg,0.0015mmol，36％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1079.4(理论值)，1079.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.28min。
S-(1-(3-(3-(2-((5-氨甲酰基-1-((E)-4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(4-乙基-2-甲基恶唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)乙基)氮杂环丁-1-基)-3-氧代基丙基)-2,5-二氧代基吡咯烷-3-基)-L-半胱氨酸(化合物154)的合成
使用与化合物153相同的程序且使用化合物145(10mM于DMSO中，0.43mL,0.0043mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物150(2.35mg,0.0017mmol，39％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1064.4(理论值)，1064.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.29min。
S-(1-(3-(3-(3-((5-氨甲酰基-1-((E)-4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙氧基)氮杂环丁-1-基)-3-氧代基丙基)-2,5-二氧代基吡咯烷-3-基)-L-半胱氨酸(化合物155)的合成
使用与化合物153相同的程序且使用化合物151(10mM于DMSO中，0.41mL,0.0041mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物155(2.34mg,0.0016mmol，39％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1109.4(理论值)，1109.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.30min。
S-(1-(3-(3-(3-((5-氨甲酰基-1-((E)-4-(5-氨甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(4-乙基-2-甲基恶唑-5-甲酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙氧基)氮杂环丁-1-基)-3-氧代基丙基)-2,5-二氧代基吡咯烷-3-基)-L-半胱氨酸(化合物156)的合成
使用与化合物153相同的程序且使用化合物152(10mM于DMSO中，0.42mL,0.0042mmol，1当量)作为起始材料来制备化合物156(2.31mg,0.0016mmol，39％产率)。LC-MS(方法E，ESI+)：m/z[M+H]+＝1094.4(理论值)，1094.5(观察值)。HPLC滞留时间：1.32min。
用于制备ADC的一般程序：
如先前所阐述(酶学方法2012,502,123-138)来製备ADC。简单地说，通过使用亚化学计量量的三(2-羧基乙基)膦(TCEP)部分还原抗体链间二硫键来制备DAR(药物/抗体比率)4结合物。将TCEP相对于抗体大约2.2摩尔当量(TCEP:抗体)添加到于磷酸盐缓冲盐水(PBS，吉布科(Gibco)，PN 10010023)和1M EDTA中的预热(37℃)抗体储备溶液中。将还原反应混合物在37℃下培育大约60分钟。通过添加6摩尔当量呈DMSO储备溶液形式的药物-连接体来使部分还原的抗体与马来酰亚胺药物-连接体结合。视需要添加额外DMSO以实现10％(v/v)DMSO的最终反应浓度，从而使药物-连接体在结合反应期间保持呈溶液形式。使结合反应在室温下进行30分钟或直到所有可用抗体半胱氨酸硫醇都已由药物-连接体烷基化为止，如通过反相HPLC(方法G)所指示。通过将反应混合物与100％摩尔过量的MP树脂(密理博西格玛(Millipore Sigma)，PN 679526)在室温下一起培育30分钟来去除过量药物-连接体。通过凝胶过滤色谱使用预填充PD-10管柱(GE生命科学(GE Life Sciences)，PN 17043501)根据制造商说明书来将缓冲液交换成调配缓冲液(PBS，吉布科，PN10010023)。通过使用30千道尔顿截止分子量离心过滤器(密理博西格玛，PN Z717185)重复渗滤(5-10次)含有于调配物缓冲液中的ADC的反应混合物来进一步去除残余药物-连接体，直到并无可检测游离药物-连接体剩余为止，如通过HPLC分析(方法K)所指示。
用于表征ADC的一般程序：
使用下列方法表征ADC：
方法I：沃特世阿奎地UPLC系统和阿奎地UPLC蛋白BEH SEC管柱(1.7μm,4.6×150mm,PN:186005225)执行粒径筛析色谱(SEC)。所用移动相为于92.5％水溶液(25mM磷酸钠、350mM NaCl,pH 6.8)中的7.5％异丙醇(v/v)。在环境温度下以0.4mL/min的流速以等梯度方式执行洗脱。
方法J：在沃特世2695HPLC系统和安捷伦PLRP-S管柱(8μm 50×2.1mm,PN:PL1912-1802)上执行反相色谱(RP-HPLC)。在分析之前，使用10mM DTT处理ADC以还原二硫键。在80℃下使用移动相A(于水中的0.05％(v/v)TFA)和移动相B(于MeCN中的0.01％(v/v)TFA)利用在12.5分钟内25-44％ B的梯度来洗脱试样。基于在UV 280nm下测量的积分峰面积来计算药物/抗体比率(DAR)。
摩尔比的计算
使用下述方程式计算每一抗体轻链(MRDLC)或抗体重链(MRDHC)的平均药物载量：
其中MRDLC＝平均药物/轻链比率
LC％面积n＝第n种轻链加载物质的面积％
面积％仅基于轻链峰
MRn＝第n种加载物质的药物/抗体比率
和
其中MRDHC＝平均药物/重链比率
HC％arean＝第n种重链加载物质的面积％
％面积仅基于重链峰
MRn＝第n种加载物质的药物/抗体比率
使用下述方程式计算每一抗体的平均药物载量(MRD)：
MRD＝2×(MRDLC+MRDHC)
其中MRD＝平均药物/抗体比率
MRDLC＝平均药物/轻链比率
MRDHC＝平均药物/重链比率
方法K：在沃特世阿奎地UPLC系统上使用阿奎地UPLC BEH C18管柱(1.7μm,2.1mm×50mm,PN:186002350)来测量残余未结合药物连接体。使用2x体积的冰冷MeOH处理ADC试样以诱导沉淀并通过离心粒化。将含有任何残余未结合药物-连接体的上清液注入所述系统上。在50℃下使用移动相A(于水中的0.05％(v/v)TFA)和移动相B(于MeCN中的0.01％ TFA(v/v))利用在2分钟内1-95％ B的梯度来洗脱试样。在215nm下执行检测且使用相应连接体的外部标准品量化残余药物-连接体化合物。
实例2：
STING激动剂和相应ADC的活体外功效评估
活体外生物分析的实验程序
THP1-DualTM细胞报告基因分析
使用含有IRF-露西亚(Lucia)荧光素酶报告基因的THP1-DualTM细胞(英伟沃基(InvivoGen)PN:thpd-nfis[还称为THP1双重报告细胞])评估化合物和ADC的功效。在含有10％热灭活胎牛血清、Pen-Strep(100U/mL-100μg/mL，吉布科)、HEPES(10mM，吉布科))、丙酮酸钠(1mM，吉布科)、MEM非必需氨基酸(1x，吉布科)、GlutaMAX(1x，吉布科)和β-巯基乙醇(55μM，吉布科)的RPMI-1640(吉布科)中培养细胞。将200μL细胞以约100,000个细胞/孔平铺于含有指示浓度的化合物或ADC的96孔平底组织培养物处理性透明聚苯乙烯板(康宁科斯塔(Corning Costar)#3596)中。在平铺后24小时(化合物)或48小时(ADC)收获上清液以供报告基因分析，或按照指示进行。为测量露西亚报告信号，将10μL上清液与40μL QUANTI-LucTM发光分析试剂(英伟沃基PN:rep-qlc1)组合于96孔透明平底组织培养物处理性黑色聚苯乙烯板(康宁科斯塔#3603)中并在珀金埃尔默易美逊(Perkin Elmer Envision)读板仪上读取。
骨髓源巨噬细胞分析
使用从野生型(C57BL/6J，杰克逊实验室(Jackson Laboratory)#000664)或STING缺陷型(C57BL/6J-Sting1gt/J，杰克逊实验室#017537)小鼠培养的小鼠骨髓源巨噬细胞来评估本文所描述的化合物的功效。简单地说，将小鼠骨髓细胞在含有10％热灭活牛血清、Pen-Strep(100U/mL-100μg/mL，吉布科)、HEPES(10mM，吉布科))、丙酮酸钠(1mM，吉布科)、GlutaMAX(1x，吉布科)、β-巯基乙醇(55μM，吉布科)和20-40ng/mL鼠类M-CSF(派普泰克(Peprotech)，#315-02)的RPMI-1640(吉布科)中培养7-10天。将200μL细胞以约100,000个细胞/孔平铺于含有指示浓度的化合物的96孔平底组织培养物处理性透明聚苯乙烯板(康宁科斯塔#3596)中。在24小时时收获上清液且使用密理普莱克(Milliplex)MAP小鼠细胞因子/趋化介素磁珠面板分析试剂盒(MCYTOMAG-70k定制11元试剂盒：MCP1、MIP1α、MIP1β、TNFα、IFNγ、IL-10、IL-12p70、IL-1β、IL-6、IP10、RANTES)测量细胞因子并使用LuminexTMMAGPIXTM仪器系统进行分析。
旁观者活性分析
使用伦卡癌细胞和含有IRF-露西亚荧光素酶报告基因的THP1-DualTM细胞(英伟沃基)来评估ADC的旁观者活性。在含有10％热灭活胎牛血清、Pen-Strep(100U/ml-100μg/ml，吉布科)、HEPES(10mM，吉布科)、丙酮酸钠(1mM，吉布科)、MEM非必需氨基酸(1x，吉布科)、GlutaMAX(1x，吉布科)和β-巯基乙醇(55μM，吉布科)的RPMI-1640(吉布科)中培养细胞。将100μL伦卡细胞以50,000个细胞/孔平铺于96孔平底组织培养物处理性透明聚苯乙烯板(康宁科斯塔#3596)中。在初始平铺第二天，将50,000个THP1-DualTM细胞以200μL的总体积添加到含有指示浓度的ADC的每一孔中。在添加THP1-DualTM细胞后48小时收获上清液。为测量露西亚报告信号，将10μL上清液与40μLQUANTI-LucTM发光分析试剂(英伟沃基PN:rep-qlc1)组合于96孔透明平底组织培养物处理性黑色聚苯乙烯板(康宁科斯塔PN:3603)中并在珀金埃尔默易美逊读板仪上读取。在一些实验中，如上所述平铺经改造以表达通常由免疫细胞表达的鼠类蛋白(靶抗原C—免疫细胞抗原)的HEK 293T细胞以代替伦卡肿瘤细胞。
癌细胞直接细胞毒性分析
对癌细胞进行计数并平铺于384孔、白壁组织培养物处理板(康宁)中的40μL完全生长培养基中。将细胞板在37℃和5％ CO2下培育过夜以使细胞平衡。在RPMI-1640+20％胎牛血清(FBS)中连续稀释含有ADC或游离药物的储备溶液。然后一式两份将每一浓度的10μL溶液添加到每一细胞板中。然后将细胞在37℃和5％ CO2下培育96小时，然后从培育器取出细胞板，并且在分析之前冷却到室温并保持30分钟。根据普洛麦格(Promega)方案来制备发光分析试剂(普洛麦格公司，麦迪逊(Madison)，威斯康星州(WI))。使用富默乐泰姆斯特(Formulatrix Tempest)液体处理仪(富默乐)将10μL添加到分析板中且使板在室温下避光30分钟。使用易美逊多功能读板仪(珀金埃尔默，沃尔瑟姆(Waltham)，马萨诸塞州)测量试样的发光。在格拉夫派得普锐斯(Graphpad Prism)(圣地亚哥(San Diego)，加利福尼亚州)中使用非线性、4参数曲线拟合模型[Y＝最小值+(最大值-最小值)/(1+10^((LogEC50-X)*希尔斜率(HillSlope)))]来分析原始数据。将结果报告为X50值，其定义为将细胞生存力减小到50％所需的ADC或游离药物浓度。
SU-DHL-1分析
使用SU-DHL-1淋巴瘤细胞评估ADC的功效。在含有10％热灭活胎牛血清、Pen-Strep(100U/mL-100μg/mL，吉布科)、HEPES(10mM，吉布科))、丙酮酸钠(1mM，吉布科)、MEM非必需氨基酸(1x，吉布科)、GlutaMAX(1x，吉布科)和β-巯基乙醇(55μM，吉布科)的RPMI-1640(吉布科)中培养细胞。将200μL细胞以约100,000个细胞/孔平铺于含有指示浓度的ADC的96孔平底组织培养物处理性透明聚苯乙烯板(康宁科斯塔#3596)中。在48小时之后，收获50μL上清液且使用密理普莱克MAP人类细胞因子/趋化介素磁珠面板(HCYTOMAG-60K定制8元试剂盒：IL-6、IL-8、MCP1、TNFα、GRO、IP-10、MIP1α和MIP1β)评估细胞因子产生。通过将100μL发光分析试剂(普洛麦格公司，麦迪逊，威斯康星州)添加到板中的剩余150μL细胞中并将混合物转移到96孔黑壁板(康宁科斯塔#3603)中来评估细胞生存力。使板在室温下避光30分钟，并且使用易美逊多功能读板仪(珀金埃尔默，沃尔瑟姆，马萨诸塞州)测量试样的发光。
活体外生物分析的结果
评价STING激动剂化合物活化THP1-DualTM报告细胞的能力，所述报告细胞是其中可经由所分泌荧光素酶报告蛋白(露西亚)监测I型干扰素(IRF)信号传导的人类单核细胞细胞系。使用增加浓度的激动剂将THP1-DualTM细胞处理24h，然后收获上清液且使用QUANTI-LucTM发光分析试剂量化露西亚报告信号。化合物A和化合物1的功效显著大于(2',3')-Rp,Rpc-二AMPS二钠(化合物B)且分别以3nM和5nM的EC50值活化露西亚报告基因。化合物12a的功效小于化合物1和化合物A(图1，EC50值为21nM)。在用于刺激野生型(WT)(而非STING缺陷型)鼠类骨髓源巨噬细胞时，化合物1和12a会诱导细胞因子产生，从而指示这些化合物的活性是STING依赖性(图2)。
使STING激动剂化合物结合到靶向和非靶向抗体且评价所得ADC活化THP1-DualTM报告细胞的能力。使用基于葡萄糖醛酸苷的可裂解连接体(11)结合化合物1。使用非裂解连接体、基于肽的可裂解连接体和基于葡萄糖醛酸苷的可裂解连接体(分别是化合物12、14和13)结合化合物12a。使用增加浓度的具有结合到化合物的非结合或靶向mAb的ADC将THP1-DualTM细胞处理48h，然后收获上清液，并且使用QUANTI-LucTM发光分析试剂量化露西亚报告信号。尽管化合物12a作为游离药物的功效小于化合物1(图1)，但化合物12a在经由可裂解葡萄糖醛酸苷连接体(13)结合到靶向mAb时的功效大于类似化合物1结合物(11)。另外，化合物12a在经由非裂解连接体(12)结合到靶向mAb时的功效大于使用可裂解连接体13或14时(图3)，从而证实使STING激动剂小分子结合到抗体可增加其功效。
评价化合物12和在内溶酶体中裂解mAb结合物时释放的半胱氨酸加合物(化合物16)活化THP1-DualTM报告细胞的能力。使用增加浓度的化合物将THP1-DualTM细胞处理24h，然后收获上清液且使用QUANTI-LucTM发光分析试剂量化露西亚报告信号。化合物12和化合物16都具有活性且EC50值(分别为37nM和34nM)类似于母体游离药物12a(21nM，图4和图1)。
还评估呈游离药物形式和在使用非裂解连接体(15)结合到靶向抗体时的化合物15b。使用增加浓度的游离药物或具有结合到化合物的非结合或靶向mAb的ADC将THP1-DualTM细胞处理48h；然后收获上清液，并且使用QUANTI-LucTM发光分析试剂量化露西亚报告基因信号。化合物15b的功效大于12a，而在连接到相同靶向mAb时15的ADC的功效与12的ADC的功效类似(图5)。
使用各种非裂解连接体(12、17、19-24)使化合物12a结合到靶向和非靶向抗体且评价所得ADC活化THP1-DualTM报告细胞的能力。所有含有靶向mAb的结合物都具有活性且EC50值介于约1.7-7.3ng/mL之间(表1)。还评估这些连接体在结合到结合肿瘤抗原A或抗原B(CD30)的靶向mAb时直接杀死癌细胞的能力。所有结合物都在癌细胞系子组中具有活性(不论靶抗原表达如何)，从而指示了一些癌细胞的靶独立性杀死；化合物1、12a和16还对癌细胞系子组显示直接细胞毒性活性(表2；靶向mAb A结合物包括结合到各种药物连接体化合物的靶向肿瘤抗原A的mAb；靶向mAb B结合物包括结合到各种药物连接体的靶向CD30的cAC10 mAb)。
表1：靶STING激动剂ADC在THP1-DualTM报告细胞中的活性。
*未评估含有>10％聚集物的ADC
**对于一些化合物来说，EC50值包括多个实验的平均值
表2：各种ADC和化合物对人类癌细胞系的直接细胞毒性的数据。
合成多种其它化合物并评估其活化THP1-DualTM报告细胞的能力。若干化合物具有活性且EC50值介于1.3nM(化合物27e)到6337nM(化合物126a，表3)之间。具有高达10μM的最小活性的化合物在表3中列示为具有>10,000nM的EC50值。若干化合物经由可裂解或非裂解药物连接体结合到靶向(表1)和非结合抗体(未展示)且评价所得ADC活化THP1-DualTM报告细胞的能力。含有药物连接体25-27、105、108、111-112和121-125的结合物具有活性且EC50值介于1.4ng/mL到307ng/mL之间(表1)。所测试的所有其它结合物在此分析中于高达10μg/mL下并无活性(包含含有衍生自活性小分子的药物连接体的结合物(表3、表1))，由此突出显示了研发靶向STING路径的活性ADC的挑战。
表3：STING激动剂小分子在THP1-DualTM报告细胞中的活性。
**对于一些化合物来说，EC50值包括多个实验的平均值
使用可裂解连接体11使化合物1结合到非结合抗体以及抗原C和PD-L1靶向mAb，并且评价所得ADC诱导细胞因子产生和SU-DHL-1细胞的直接细胞毒性的能力。靶向抗原C和PD-L1的结合物(而非非结合结合物)诱导稳定产生细胞因子MIP-1α且引起SU-DHL-1细胞死亡(图6A和图6B)。
评估结合物以旁观者方式活化THP1双重报告免疫细胞的能力。在将THP1双重细胞与经改造以表达抗原C的HEK 293T细胞一起共培养时，由靶向抗原C且具有结合到化合物12、13和14的hIgG1 LALAPG Fc骨架的抗体组成的结合物显示一定旁观者活性(图7)。在将THP1双重细胞与鼠类伦卡肿瘤细胞一起共培养时，由靶向EphA2且具有结合到化合物12的mIgG2a WT或LALAPG Fc骨架(例如参见施洛特豪尔(Schlothauer)等人，蛋白质改造、设计和选择(Protein Engineering,Design and Selection)，2016,29(10):457-466；和赫扎雷(Hezareh)等人，病毒性杂志(Journal of Virology)，2001,75(24):12161-12168，其中的每一者的全部内容以引用方式并入本文中)的h1C1抗体组成的结合物还显示旁观者活性。使用具有完整WT Fc骨架的结合物观察到显著增强的旁观者活性(图8)。
实例3
由STING激动剂ADC诱导的抗肿瘤免疫反应的活体内评估
活体内研究的实验程序
活体内细胞因子分析
使用密理普莱克MAP小鼠细胞因子/趋化介素磁珠面板分析试剂盒(MCYTOMAG-70k定制11元试剂盒：MCP1、MIP1α、MIP1β、TNFα、IFNγ、IL-10、IL-12p70、IL-6、IL-1β、IP10、RANTES)在收获于使用化合物或ADC处理之后3、6、24或48小时的小鼠血浆中测量细胞因子，并使用LuminexTMMAGPIXTM仪器系统进行分析。在计算平均值时排除标准曲线范围以外的值(<3.2pg/mL或>10,000pg/mL)。
活体内抗肿瘤活性研究
伦卡癌细胞
在含有10％热灭活胎牛血清、Pen-Strep(100U/mL-100μg/mL)、MEM非必需氨基酸(1x)、丙酮酸钠(1mM)和L-谷氨酰胺(2mM)的RPMI-1640(ATCC)中培养伦卡癌细胞(ATCC)。将伦卡癌细胞经皮下植入(2*106个细胞，于200μL 25％基质胶中)Balb/c雌性小鼠中。在一些实验中，改造伦卡肿瘤细胞以表达指示鼠类或人类靶抗原。
在肿瘤体积达到100mm3时，以指示投药时间表通过腹膜腔内或静脉内注射向小鼠投用化合物或ADC且每周监测肿瘤体积两次。在40％ PEG400/盐水中调配化合物。
CT26癌细胞
在经1mM丙酮酸钠、10mM HEPES、2.8mL 45％葡萄糖(1.25g)改质且补充有10％胎牛血清和1％ Pen/Strep/谷氨酰胺的RPMI 1640中培养CT26癌细胞(ATCC)。将CT26癌细胞经皮下植入(0.5*106个细胞，于200uL无血清RPMI 1640中)Balb/c小鼠中。
MC38癌细胞
在含有10％热灭活胎牛血清、Pen-Strep(100U/mL-100μg/mL)、MEM非必需氨基酸(1x)、丙酮酸钠(1mM)和L-谷氨酰胺(2mM)的DMEM中培养MC38癌细胞(克拉法斯特(Kerafast))。将MC38癌细胞经皮下植入(1*106个细胞，于100uL 25％基质胶中)C57BL/6小鼠中。
在一些实验中，使用MC38肿瘤细胞“再攻击”在ADC治疗后实现完全肿瘤消退的具肿瘤小鼠；将MC38癌细胞经皮下植入(1*106个细胞，于100uL 25％基质胶中)C57BL/6小鼠的另一侧腹中。
4T1癌细胞
在含有10％热灭活胎牛血清的RPMI中培养4T1癌细胞(ATCC)并经皮下植入(0.02*106个细胞，于200uL纯RPMI中)Balb/c小鼠中。
活体内研究的结果
伦卡癌细胞
使用同基因系统来评价STING激动剂ADC诱导活体内免疫反应和驱动抗肿瘤免疫反应的能力。伦卡系统是一种皮下小鼠肾腺癌模型。在第0天时，向雌性Balb/c小鼠的侧腹中经皮下植入2×106个伦卡细胞。在达到100mm3的平均肿瘤大小(通过使用公式体积(mm3)＝0.5*长度*宽度2来测量，其中长度是较长尺寸)时，将小鼠随机分成每组≥5只小鼠的治疗组。然后每7天使用指示治疗经腹膜腔内(ADC或化合物)或经静脉内(化合物)来治疗动物，总共3个剂量(或按照指示)。在整个研究中测量肿瘤长度和宽度以及动物重量且使用上式计算肿瘤体积。追踪动物直到肿瘤体积达到约1000mm3为止；然后对动物实施安乐死。
评估化合物1与结合到非结合或EphA2靶向mAb(mIgG2a LALAPG骨架；例如参见施洛特豪尔等人，蛋白质改造、设计和选择，2016,29(10):457-466；和赫扎雷等人，病毒性杂志，2001,75(24):12161-12168，其中的每一者的全部内容以引用方式并入本文中)的可裂解连接体11相比的抗肿瘤活性；应注意，本文所描述的所有EphA2靶向mAb结合物都由结合到各种药物连接体化合物的h1C1 mIgG2a mAb组成。在使用化合物1或11的非结合mAb结合物治疗动物时，观察到一定的肿瘤生长延迟；然而，使用11的EphA2靶向mAb结合物可显著增强肿瘤生长延迟，尤其在较高12mg/kg剂量下(图9A)，从而明确证实了使用靶向ADC递送STING激动剂的抗肿瘤益处。
在下一活体内研究中，评估结合到非结合或EphA2靶向mAb(mIgG2a LALAPG骨架)的非裂解连接体化合物12的抗肿瘤活性。12的EphA2靶向mAb结合物展现稳定抗肿瘤活性且令人吃惊地其活性大于结合到相同EphA2靶向mAb的11的ADC(图10A)。在下一活体内研究中，评估结合到非结合或EphA2靶向mAb(mIgG2a WT骨架)的非裂解连接体15的抗肿瘤活性。15的EphA2靶向mAb结合物展现类似于12的相应ADC的稳定抗肿瘤活性(图11A)。在此研究中，还评估结合到具有mIgG2a WT和LALAPG骨架的EphA2靶向抗体的12的活性，并且两种结合物具有类似活性。此发现令人吃惊，这是因为活体外旁观者分析指示，完整WT Fc骨架与LALAPG Fc骨架相比可显著增强旁观者免疫细胞活化(图8)。
化合物1和11和12在mIgG2a LALAPG骨架上的所有抗体结合物都充分耐受-第1和第2治疗剂量后的平均重量减轻<约5％。STING激动剂化合物A的耐受性较差-小鼠在第2剂量之后展现平均6.2％的重量减轻(图9B、10B和11B)。此外，3mg/kg剂量值下的12和15与mIgG2a WT骨架的EphA2靶向mAb结合物的耐受性差于12与LALAPG骨架的结合物-经靶向WT骨架ADC治疗的小鼠展现约8％的重量减轻(图11B)。
在下一活体内研究中，评估结合到EphA2靶向mAb(mIgG2a LALAPG骨架)的非裂解连接体化合物12以及未结合化合物12a的抗肿瘤活性。12的EphA2靶向mAb结合物在1mg/kg和3mg/kg的剂量下展现稳定抗肿瘤活性，而化合物12a具有有限抗肿瘤效能(图12)。总的来说，此表明，可通过结合到抗体来将在肿瘤模型中活体内惰性的STING激动剂化合物(例如化合物1和12a)转化成活性治疗剂(例如11和12的靶向mAb结合物)。
测量响应于游离药物和结合物的全身性细胞因子产生来代替全身性活性。化合物1以及11、12和15的所有抗体结合物都诱导极小促炎症性细胞因子(IL-6和TNF)产生。另一方面，化合物A和化合物12a诱导稳定产生IL-6和TNF(表4、表5和表6)。此外，与12与LALAPGFc骨架的结合物相比，11和12与WT Fc骨架的EphA2靶向结合物诱导较大全身性MIP1α、MIP1β和MCP-1表达。此指示，在使用以3mg/kg q7dx3投用的特定EphA2靶向抗体(描述于图10-12中)的伦卡肿瘤模型中，LALAPG Fc骨架可减小在靶毒性(全身性细胞因子/重量减轻)，并且并不影响抗肿瘤效能。此还指示，结合STING激动剂化合物(例如化合物12a对12的靶向mAb结合物)可改良效能和安全性(减少全身性细胞因子)。
表4：在使用包括非结合或EphA2靶向mAb(具有结合到化合物11或12或者化合物1或化合物A的mIgG2a LALAPG骨架)的各种ADC治疗后伦卡具肿瘤小鼠的周边血(血浆)中的细胞因子产生。
表5：在使用包括非结合或EphA2靶向mAb(具有结合到化合物12或15的mIgG2a野生型(WT)或mIgG2a LALAPG骨架)的各种ADC治疗后经改造伦卡具肿瘤小鼠的周边血(血浆)中的细胞因子产生。
表6：在使用包括EphA2靶向mAb(具有结合到化合物12或化合物12a的mIgG2aLALAPG骨架)的ADC治疗后伦卡具肿瘤小鼠的周边血(血浆)中的细胞因子产生。
还在伦卡具肿瘤小鼠中评估结合到非结合mAb、PD-L1靶向mAb(靶向肿瘤和/或免疫细胞)或抗原C靶向mAb(靶向免疫细胞)的可裂解连接体11的抗肿瘤活性。与未治疗肿瘤相比，所有结合物都显示肿瘤生长延迟。与未结合PD-L1靶向mAb相比，11的PD-L1靶向mAb结合物显示增强的抗肿瘤活性。此证实了使用靶向抗原C和PD-L1的ADC递送STING激动剂的抗肿瘤益处(图13)。还在伦卡具肿瘤小鼠中评估结合到PD-L1靶向mAb的非裂解连接体12的抗肿瘤活性；这些结合物可有效减小肿瘤体积，但其耐受性差于11的PD-L1靶向mAb结合物。
CT26癌细胞
在CT26具肿瘤小鼠中评估化合物1与结合到非结合mAb、抗原C靶向mAb、PD-L1靶向mAb或EphA2靶向mAb的可裂解连接体11相比的抗肿瘤活性。在使用化合物1或未结合PD-L1靶向mAb治疗动物时，观察到最小肿瘤生长延迟。使用11的非结合mAb结合物观察到中等肿瘤生长延迟。与之相比，在使用11的所有三种靶向mAb结合物治疗后观察到显著肿瘤生长延迟。此证实了使用靶向各种抗原的ADC(包含免疫细胞靶向结合物(抗原C)、免疫和/或肿瘤靶向结合物(PD-L1)和肿瘤靶向结合物(EphA2))递送STING激动剂的抗肿瘤益处(图14)。周边血浆中的细胞因子产生的结果呈现于表7中。
表7：在使用包括结合到化合物11的mAb的各种ADC治疗后CT26具肿瘤小鼠的周边血(血浆)中的细胞因子产生。
MC38癌细胞
在MC38具肿瘤野生型(WT)或STING缺陷型(Tmem173gt)小鼠中评估结合到具有LALAPG mIgG2a Fc骨架的非结合mAb或EphA2靶向mAb的可裂解连接体12的抗肿瘤活性。在WT(而非STING缺陷型)具肿瘤小鼠中，经3个周剂量的1mg/kg非结合12结合物或0.1mg/kg靶向12结合物治疗的动物分别显示中等和最小的肿瘤生长延迟。在WT(而非STING缺陷型)具肿瘤小鼠中，经3个周剂量的1mg/kg靶向12结合物治疗的动物显示稳定肿瘤生长延迟。此证实，在MC38具肿瘤小鼠中，肿瘤微环境中的非肿瘤细胞需要STING信号传导方实现抗肿瘤活性(图15A和15C)。
在WT具肿瘤小鼠中，经单一剂量的1mg/kg EphA2靶向12结合物治疗的动物还显示稳定肿瘤生长延迟，从而证实单一剂量的EphA2靶向12结合物足以驱动完全肿瘤消退(图15A)。
使用MC38肿瘤细胞在另一侧腹再攻击响应于单一剂量或3个周剂量的ADC实现完全肿瘤消退的小鼠且监测肿瘤生长。所有经再攻击小鼠(但非使用MC38肿瘤细胞攻击的所有初始未治疗小鼠)均免于被再攻击，从而表明12的靶向结合物诱发免疫记忆(图15D)。
4T1癌细胞
在4T1具肿瘤小鼠中评估结合到具有LALAPG mIgG2a Fc骨架的非结合或EphA2靶向mAb的可裂解连接体12的抗肿瘤活性。化合物12的所有结合物在所测试剂量下都产生显著肿瘤生长延迟，其中化合物12的靶向mAb结合物与非结合结合物相比显示增强的肿瘤生长延迟，且观察到最小重量损失(图16B)。此证实，化合物12的EphA2靶向mAb结合物在多种肿瘤模型中具有活性(图12-16)。
大鼠耐受性研究：
在非GLP大鼠毒理学研究中评估结合到以下各项的化合物12的非临床安全特征：具有WT Fc骨架的非结合抗体、具有无Fc骨架的非结合抗体、具有WT Fc骨架的靶向抗体和具有无Fc骨架的靶向抗体。在高于小鼠肿瘤模型中的最小有效剂量的剂量下，所有含有化合物12药物连接体的结合物(非结合和靶向，WT和无Fc骨架)都耐受于大鼠中。
实例4
活体内药物动力学研究
方法
在向雄性C57BL/6小鼠投与两个包括结合到化合物12的[去糖基化]非结合mAb的1mg/kg ADC周剂量后，分析药物代谢动力学特征。收集血浆并通过免疫分析来分析一般总抗体(gTAb)。通过格罗斯(Gyros)流经免疫分析平台来测定小鼠K2EDTA血浆中的TAb浓度。在分析缓冲液中稀释试样和标准品并与以夹心形式含有生物素化鼠类抗人类κ轻链抗体和荧光山羊抗人类IgG Fcg F(ab’)2抗体片段的溶液一起培育。使所得免疫复合物在光碟(CD)的亲和管柱中结合到经链霉抗生物素蛋白(streptavidin)涂覆的珠粒上。通过激光读取CD，所述激光会激发荧光检测试剂，从而产生与C57BL/6雄性小鼠血浆试样中的测试物品的浓度成正比的信号。使用菲尼克斯温诺林(Phoenix WinNonlin)8.2(塞尔塔拉(Certara)，美国)对所汇总动物血浆浓度数据(稀疏采样)实施非分室分析。将低于量化限值(BLQ)的浓度值处理为零以供分析。使用标称剂量和采样时间。
结果
在向雄性C57BL/6小鼠投与两个包括结合到化合物12的[去糖基化]非结合mAb的1mg/kg ADC周剂量后，分析药物代谢动力学特征。第一剂量和第二剂量后的最大观察浓度(Cmax)分别为40500ng/mL和52400ng/mL。从时间0到第7天的浓度-时间曲线下面积(AUC0-7d)为85600d*ng/mL。此表明，化合物12的非结合结合物的总抗体暴露高于所公开小分子STING激动剂的小分子暴露(图17)(例如参见拉曼朱鲁(Ramanjulu)等人，2018，自然564,439-443)。
本发明中所引用的每一参考文献的内容以全文引用方式并入本文中。
已描述本发明的若干实施例。然而，应理解，可在不背离本发明的精神和范围的情况下作出各种修改。因此，其它实施例都在下列权利要求书的范围内。
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> cAC10 CDR-H3
<400> 3
Tyr Gly Asn Tyr Trp Phe Ala Tyr
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<210> 4
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> cAC10 CDR-L1
<400> 4
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Phe Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn
1 5 10 15
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> cAC10 CDR-L2
<400> 5
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
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<213> 人工序列
<220>
<223> cAC10 CDR-L3
<400> 6
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Trp Thr
1 5
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<213> 人工序列
<220>
<223> cAC10 VH
<400> 7
Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile Thr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Asn Tyr Gly Asn Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln
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Val Thr Val Ser Ala
115
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> cAC10 VL
<400> 8
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Phe Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> cAC10 HC
<400> 9
Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile Thr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Asn Tyr Gly Asn Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> cAC10 HC v2
<400> 10
Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile Thr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Asn Tyr Gly Asn Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
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<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 11
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Phe Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
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Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
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His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<400> 13
Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
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<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h1C1 CDR-H3
<400> 14
Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala Glu Tyr
1 5 10 15
Phe Gln His
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h1C1 CDR-L1
<400> 15
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp Leu Ala
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<213> 人工序列
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Lys Ala Ser Asn Leu His Thr
1 5
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<213> 人工序列
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<223> h1C1 CDR-L3
<400> 17
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg Thr
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h1C1 VH
<400> 18
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala
100 105 110
Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 19
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h1C1 VL
<400> 19
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 20
<211> 458
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h1C1 HC
<400> 20
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala
100 105 110
Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
355 360 365
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 21
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h1C1 HC v2
<400> 21
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala
100 105 110
Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
355 360 365
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455
<210> 22
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h1C1 LC
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 23
<211> 458
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h1C1 mIgG2a HC
<400> 23
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala
100 105 110
Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly
130 135 140
Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
180 185 190
Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile
195 200 205
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp
275 280 285
Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg
290 295 300
Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
325 330 335
Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly
340 345 350
Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met
370 375 380
Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe
405 410 415
Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn
420 425 430
Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr
435 440 445
Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
450 455
<210> 24
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h1C1 mIgG2a HC v2
<400> 24
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala
100 105 110
Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly
130 135 140
Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
180 185 190
Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile
195 200 205
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp
275 280 285
Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg
290 295 300
Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
325 330 335
Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly
340 345 350
Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met
370 375 380
Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe
405 410 415
Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn
420 425 430
Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr
435 440 445
Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly
450 455
<210> 25
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h1C1 mIgG2a LC
<400> 25
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210
<210> 26
<211> 458
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h1C1 mIgG2a LALAPG HC
<400> 26
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala
100 105 110
Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly
130 135 140
Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
180 185 190
Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile
195 200 205
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Asn Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp
275 280 285
Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg
290 295 300
Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
325 330 335
Lys Asp Leu Gly Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly
340 345 350
Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met
370 375 380
Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe
405 410 415
Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn
420 425 430
Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr
435 440 445
Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
450 455
<210> 27
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h1C1 mIgG2a LALAPG HC v2
<400> 27
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Met Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Gly Pro Ser Gly Gly Pro Thr His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Tyr Asp Ser Gly Tyr Asp Tyr Val Ala Val Ala Gly Pro Ala
100 105 110
Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly
130 135 140
Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
180 185 190
Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile
195 200 205
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Asn Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp
275 280 285
Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg
290 295 300
Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
325 330 335
Lys Asp Leu Gly Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly
340 345 350
Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met
370 375 380
Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe
405 410 415
Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn
420 425 430
Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr
435 440 445
Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly
450 455
<210> 28
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h1C1 mIgG2a LALAPG LC
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210

Claims (579)

1.一种式(II)化合物，
或其医药上可接受的盐，其中：
R1是氢、羟基、C1-6烷氧基、-(C1-6烷基)C1-6烷氧基、-(CH2)n-NRARB或PEG2到PEG4；
每一R2和R3独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；
每一RA、RB、RC、RD、RE和RF独立地是氢或C1-3烷基；
每一下标n独立地是0到6的整数；
每一下标m独立地是0或1；
每一下标q独立地是0到6的整数；
XA是-CH2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH3)-；
XB不存在或是2到16元亚杂烷基；
L是具有式-(A)a-(W)w-(Y)y-的连接体，其中：
下标a为0或1；
下标y为0或1；
下标w为0或1；
A是任选地经1到3个Ra1取代的C2-20亚烷基或任选地经1到3个Rb1取代的2到40元亚杂烷基；
每一Ra1独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、＝O、-NRd1Re1、-C(O)NRd1Re1、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rb1独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、-NRd1Re1、-C(O)NRd1Re1、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rd1和Re1独立地是氢或C1-3烷基；
W是1到12个氨基酸或具有以下结构：
其中Su是糖部分；
-OA-代表糖苷键；
每一Rg独立地是氢、卤素、-CN或-NO2；
W1不存在或是-O-C(＝O)-；
代表与A或M的共价连接；
*代表与Y、XA或XB的共价连接；且
Y是自分解部分、非自分解可释放部分或非裂解部分；
M为
每一AA是独立选择的氨基酸，其中(AA)b经由硫原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺；
每一下标b独立地是1到6的整数；且
XB和L各自独立地任选地经从PEG1到PEG72的PEG单元取代。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是氢。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是羟基。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是C1-6烷氧基。
5.根据权利要求1或4所述的化合物，其中R1是甲氧基。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是-(C1-6烷基)C1-6烷氧基。
7.根据权利要求1或6所述的化合物，其中R1是甲氧基乙基。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是PEG2到PEG4。
9.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是-(CH2)n-NRARB。
10.根据权利要求1或9所述的化合物，其中RA和RB都是氢。
11.根据权利要求1或9所述的化合物，其中RA和RB独立地是C1-3烷基。
12.根据权利要求1或9所述的化合物，其中RA和RB中的一者是氢且RA和RB中的另一者是C1-3烷基。
13.根据权利要求1或9到12中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标n为0。
14.根据权利要求1或9到12中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标n为1。
15.根据权利要求1或9到12中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标n为2。
16.根据权利要求1或9到12中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标n为3、4、5或6。
17.根据权利要求1到16中任一权利要求所述的化合物，其中R2和R3独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2和R3相同。
18.根据权利要求1到16中任一权利要求所述的化合物，其中R2和R3独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2和R3不同。
19.根据权利要求1到18中任一权利要求所述的化合物，其中R2是-(C＝O)m-NRCRD。
20.根据权利要求1到18中任一权利要求所述的化合物，其中R3是-(C＝O)m-NRCRD。
21.根据权利要求1到20中任一权利要求所述的化合物，其中RC和RD都是氢。
22.根据权利要求1到20中任一权利要求所述的化合物，其中RC和RD各自独立地是C1-3烷基。
23.根据权利要求1到20中任一权利要求所述的化合物，其中RC和RD中的一者是氢且RC和RD中的另一者是C1-3烷基。
24.根据权利要求1到20中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标m为0。
25.根据权利要求1到20中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标m为1。
26.根据权利要求1到18中任一权利要求所述的化合物，其中R2是-(CH2)q-NRERF。
27.根据权利要求1到18中任一权利要求所述的化合物，其中R3是-(CH2)q-NRERF。
28.根据权利要求1到18、26或27中任一权利要求所述的化合物，其中RE和RF都是氢。
29.根据权利要求1到18、26或27中任一权利要求所述的化合物，其中RE和RF各自独立地是C1-3烷基。
30.根据权利要求1到18、26或27中任一权利要求所述的化合物，其中RE和RF中的一者是氢且RE和RF中的另一者是C1-3烷基。
31.根据权利要求1到18、26或27中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标q为0。
32.根据权利要求1到18、26或27中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标q是1到6的整数。
33.根据权利要求1到18中任一权利要求所述的化合物，其中R3是-CO2H。
34.根据权利要求1到18中任一权利要求所述的化合物，其中R2是-CO2H。
35.根据权利要求1到34中任一权利要求所述的化合物，其中XA是-CH2-。
36.根据权利要求1到34中任一权利要求所述的化合物，其中XA是-O-。
37.根据权利要求1到34中任一权利要求所述的化合物，其中XA是-S-。
38.根据权利要求1到34中任一权利要求所述的化合物，其中XA是-NH-。
39.根据权利要求1到38中任一权利要求所述的化合物，其中XB是2到16元亚杂烷基。
40.根据权利要求1到39中任一权利要求所述的化合物，其中XB是2到12元亚杂烷基。
41.根据权利要求1到40中任一权利要求所述的化合物，其中XB是2到8元亚杂烷基。
42.根据权利要求39到41中任一权利要求所述的化合物，其中所述亚杂烷基是具支链的且具有1到4个甲基。
43.根据权利要求39到42中任一权利要求所述的化合物，其中所述亚杂烷基是具支链的且具有1或2个甲基。
44.根据权利要求39到43中任一权利要求所述的化合物，其中所述亚杂烷基经1到3个氟基取代。
45.根据权利要求1到44中任一权利要求所述的化合物，其中XB包括一或两个氮原子。
46.根据权利要求1到45中任一权利要求所述的化合物，其中XB包括一或两个氧代基。
47.根据权利要求1到46中任一权利要求所述的化合物，其中XB包括一个氮原子和一个氧代基。
48.根据权利要求1到47中任一权利要求所述的化合物，其中XB包括两个氮原子和一个氧代基。
49.根据权利要求1到41或45到47中任一权利要求所述的化合物，其中XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L或M的共价连接。
50.根据权利要求1到41或45到47中任一权利要求所述的化合物，其中XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L或M的共价连接。
51.根据权利要求1到41或45到47中任一权利要求所述的化合物，其中XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L或M的共价连接。
52.根据权利要求1到41或45到47中任一权利要求所述的化合物，其中XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L或M的共价连接。
53.根据权利要求1到43或48中任一权利要求所述的化合物，其中XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L的共价连接。
54.根据权利要求1到43或45中任一权利要求所述的化合物，其中XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L的共价连接。
55.根据权利要求1到38中任一权利要求所述的化合物，其中XB不存在。
56.根据权利要求1到55中任一权利要求所述的化合物，其中下标a为1。
57.根据权利要求1到56中任一权利要求所述的化合物，其中下标y为1。
58.根据权利要求1到57中任一权利要求所述的化合物，其中下标w为1。
59.根据权利要求1到55中任一权利要求所述的化合物，其中下标a、下标y和下标w的总和为1。
60.根据权利要求1到55中任一权利要求所述的化合物，其中下标a、下标y和下标w的总和为2。
61.根据权利要求1到58中任一权利要求所述的化合物，其中下标a、下标y和下标w的总和为3。
62.根据权利要求1到61中任一权利要求所述的化合物，其中Y是自分解部分。
63.根据权利要求1到61中任一权利要求所述的化合物，其中Y是
64.根据权利要求1到54或56到61中任一权利要求所述的化合物，其中Y是非裂解部分且a为0。
65.根据权利要求1到54、56到61或64中任一权利要求所述的化合物，其中Y是环己烷羧基、十一烷酰基、己酰基(caproyl)、己酰基(hexanoyl)、丁酰基或丙酰基。
66.根据权利要求1到54、56到61或64中任一权利要求所述的化合物，其中Y是PEG4到PEG12。
67.根据权利要求1到66中任一权利要求所述的化合物，其中W是1到12个氨基酸。
68.根据权利要求1到67中任一权利要求所述的化合物，其中W是1到6个氨基酸。
69.根据权利要求1到68中任一权利要求所述的化合物，其中W中的每一氨基酸独立地选自由以下组成的群组：丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丝氨酸、天门冬氨酸、天门冬氨酸甲酯、N,N-二甲基-赖氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、缬氨酸-丙氨酸、缬氨酸-瓜氨酸、苯丙氨酸-赖氨酸或高丝氨酸甲醚。
70.根据权利要求1到66中任一权利要求所述的化合物，其中W具有以下结构：
其中Su是糖部分；
-OA-代表糖苷键；
每一Rg独立地是氢、卤素、-CN或-NO2；
W1不存在或是-O-C(＝O)-；
代表与A或M的共价连接；且
*代表与Y、XA或XB的共价连接。
71.根据权利要求1到66或70中任一权利要求所述的化合物，其中W1是-O-C(＝O)-。
72.根据权利要求1到66或70到71中任一权利要求所述的化合物，其中一个Rg是卤素、-CN或-NO2，并且其余Rg是氢。
73.根据权利要求1到66或70到71中任一权利要求所述的化合物，其中每一Rg是氢。
74.根据权利要求1到73中任一权利要求所述的化合物，其中A是任选地经1到3个Ra1取代的C2-20亚烷基。
75.根据权利要求1到74中任一权利要求所述的化合物，其中A是任选地经1到3个Ra1取代的C4-10亚烷基。
76.根据权利要求1到75中任一权利要求所述的化合物，其中A是经Ra1取代的C2-20亚烷基。
77.根据权利要求1到76中任一权利要求所述的化合物，其中A是经Ra1取代的C4-10亚烷基。
78.根据权利要求1到75中任一权利要求所述的化合物，其中A是C2-20亚烷基。
79.根据权利要求1到75中任一权利要求所述的化合物，其中A是C4-10亚烷基。
80.根据权利要求1到73中任一权利要求所述的化合物，其中A是任选地经1到3个Rb1取代的2到40元亚杂烷基。
81.根据权利要求1到72中任一权利要求所述的化合物，其中A是任选地经1到3个Rb1取代的4到12元亚杂烷基。
82.根据权利要求1到73或80中任一权利要求所述的化合物，其中A是任选地经一个Rb1取代的2到40元亚杂烷基。
83.根据权利要求1到73或80中任一权利要求所述的化合物，其中A是任选地经一个Rb1取代的4到12元亚杂烷基。
84.根据权利要求1到73或80中任一权利要求所述的化合物，其中A是2到40元亚杂烷基。
85.根据权利要求1到73或80中任一权利要求所述的化合物，其中A是4到12元亚杂烷基。
86.根据权利要求1到73或84到85中任一权利要求所述的化合物，其中A是
其中代表与W的共价连接，并且*代表与M的共价键联。
87.根据权利要求1到54或61到73中任一权利要求所述的化合物，其中下标a为0。
88.根据权利要求1到54或67到79中任一权利要求所述的化合物，其中下标y为0。
89.根据权利要求1到54、58到66或79到80中任一权利要求所述的化合物，其中下标w为0。
90.根据权利要求1到54中任一权利要求所述的化合物，其中下标a、下标y和下标w的总和为0。
91.根据权利要求1到90中任一权利要求所述的化合物，其中M是
92.根据权利要求1到90中任一权利要求所述的化合物，其中M是
93.根据权利要求1到90中任一权利要求所述的化合物，其中M是
94.根据权利要求1到93中任一权利要求所述的化合物，其中每一AA独立地是天然氨基酸；其中(AA)b经由硫原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺。
95.根据权利要求1到93中任一权利要求所述的化合物，其中每一AA独立地是天然氨基酸；其中(AA)b经由氮原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺。
96.根据权利要求1到95中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标b为1。
97.根据权利要求1到95中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标b为2。
98.根据权利要求1到95中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标b为3、4、5或6。
99.根据权利要求1到91、94或96中任一权利要求所述的化合物，其中M是
100.根据权利要求1到90、92或96中任一权利要求所述的化合物，其中M是
101.根据权利要求1到90、93或96中任一权利要求所述的化合物，其中M是
102.根据权利要求1到90中任一权利要求所述的化合物，其中M是
103.根据权利要求1到102中任一权利要求所述的化合物，其中XB和L中的一者经独立选择的从PEG1到PEG 72的PEG单元取代。
104.根据权利要求1到102中任一权利要求所述的化合物，其中XB和L未经取代。
105.根据权利要求1所述的化合物，其选自由以下组成的群组：
和其医药上可接受的盐。
106.根据权利要求1所述的化合物，其具有式(II-A)结构：
或其医药上可接受的盐，其中：
LA是-(CH2)1-6-、-C(O)(CH2)1-6-或-C(O)NRH(CH2)1-6-；
每一RH独立地是氢或C1-3烷基；
Y是
#代表与-NRHLA的共价连接；
##代表与W或LB的共价连接；且
LB是-(CH2)1-6-、-C(O)(CH2)1-6-或-[NHC(O)(CH2)1-4]1-3-。
107.根据权利要求106所述的化合物，其中RH是甲基。
108.根据权利要求106或107所述的化合物，其中LA是-(CH2)2-6-。
109.根据权利要求106或107所述的化合物，其中LA是-(CH2)3-。
110.根据权利要求106到109中任一权利要求所述的化合物，其中y为0。
111.根据权利要求106到109中任一权利要求所述的化合物，其中y为1。
112.根据权利要求106到111中任一权利要求所述的化合物，其中W是1到3个氨基酸的链。
113.根据权利要求112所述的化合物，其中W的每一氨基酸独立地选自由以下组成的群组：丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、O-甲基丝氨酸、O-甲基天门冬氨酸、O-甲基谷氨酸、N-甲基赖氨酸、O-甲基酪氨酸、O-甲基组氨酸和O-甲基苏氨酸。
114.根据权利要求106到111中任一权利要求所述的化合物，其中W是：
其中：
代表与LB的共价连接；且
*代表与Y或NRH的共价连接。
115.根据权利要求106到114中任一权利要求所述的化合物，其中LB是-C(O)(CH2)2-。
116.根据权利要求106到114中任一权利要求所述的化合物，其中LB是-[NHC(O)(CH2)2]2-。
117.根据权利要求106所述的化合物，其选自由以下组成的群组：
和其医药上可接受的盐。
118.一种抗体药物结合物(ADC)，其具有下式：
Ab-(S*-M1-(D))p
其中：
Ab是抗体；
每一S*是来自所述抗体的半胱氨酸残基的硫原子；
M1是琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺；
下标p是2到8的整数；且
每一(D)是式(I)药物单元：
其中：
代表L与M1的共价连接；
R1是氢、羟基、C1-6烷氧基、-(C1-6烷基)C1-6烷氧基、-(CH2)n-NRARB或PEG2到PEG4；
R2和R3独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；
每一RA、RB、RC、RD、RE和RF独立地是氢或C1-3烷基；
每一下标n独立地是0到6的整数；
每一下标m独立地是0或1；
每一下标q是0到6的整数；
XA是-CH2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH3)-；
XB不存在或是2到16元亚杂烷基；
L具有式-(A)a-(W)w-(Y)y-，其中：
下标a为0或1；
下标y为0或1；
下标w为0或1；
A是任选地经1到3个Ra1取代的C2-20亚烷基或任选地经1到3个Rb1取代的2到40元亚杂烷基；
每一Ra1独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、＝O、-NRd1Re1、-C(O)NRd1Re1、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rb1独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、-NRd1Re1、-C(O)NRd1Re1、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rd1和Re1独立地是氢或C1-3烷基；
W是1到12个氨基酸或具有以下结构：
其中Su是糖部分；
-OA-代表糖苷键；
每一Rg独立地是氢、卤素、-CN或-NO2；
W1不存在或是-O-C(＝O)-；
代表与A或M1的共价连接；
*代表与Y、XB或XA的共价连接；
Y是自分解部分、非自分解可释放部分或非裂解部分；且
XB和L各自独立地任选地经从PEG1到PEG72的PEG单元取代。
119.根据权利要求118所述的ADC，其中R1是氢。
120.根据权利要求118所述的ADC，其中R1是羟基。
121.根据权利要求118所述的ADC，其中R1是C1-6烷氧基。
122.根据权利要求118或121所述的ADC，其中R1是甲氧基。
123.根据权利要求118所述的ADC，其中R1是-(C1-6烷基)C1-6烷氧基。
124.根据权利要求118或123所述的ADC，其中R1是甲氧基乙基。
125.根据权利要求118所述的ADC，其中R1是PEG2到PEG4。
126.根据权利要求118所述的ADC，其中R1是-(CH2)n-NRARB。
127.根据权利要求118或126所述的ADC，其中RA和RB都是氢。
128.根据权利要求118或126所述的ADC，其中RA和RB独立地是C1-3烷基。
129.根据权利要求118或126所述的ADC，其中RA和RB中的一者是氢且RA和RB中的另一者是C1-3烷基。
130.根据权利要求118或126到129中任一权利要求所述的ADC，其中每一下标n为0。
131.根据权利要求118或126到129中任一权利要求所述的ADC，其中每一下标n为1。
132.根据权利要求118或126到129中任一权利要求所述的ADC，其中每一下标n为2。
133.根据权利要求118或126到129中任一权利要求所述的ADC，其中每一下标n为3、4、5或6。
134.根据权利要求118到133中任一权利要求所述的ADC，其中R2和R3独立地是-CO2H或-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2和R3相同。
135.根据权利要求118到133中任一权利要求所述的ADC，其中R2和R3独立地是-CO2H或-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2和R3不同。
136.根据权利要求118到135中任一权利要求所述的ADC，其中R2是-(C＝O)m-NRCRD。
137.根据权利要求118到135中任一权利要求所述的ADC，其中R3是-(C＝O)m-NRCRD。
138.根据权利要求118到137中任一权利要求所述的ADC，其中RC和RD都是氢。
139.根据权利要求118到137中任一权利要求所述的ADC，其中RC和RD各自独立地是C1-3烷基。
140.根据权利要求118到137中任一权利要求所述的ADC，其中RC和RD中的一者是氢且RC和RD中的另一者是C1-3烷基。
141.根据权利要求118到140中任一权利要求所述的ADC，其中每一下标m为0。
142.根据权利要求118到140中任一权利要求所述的ADC，其中每一下标m为1。
143.根据权利要求118到135中任一权利要求所述的ADC，其中R2是-(CH2)q-NRERF。
144.根据权利要求118到135中任一权利要求所述的ADC，其中R3是-(CH2)q-NRERF。
145.根据权利要求118到135、143或144中任一权利要求所述的ADC，其中RE和RF都是氢。
146.根据权利要求118到135、143或144中任一权利要求所述的ADC，其中RE和RF各自独立地是C1-3烷基。
147.根据权利要求118到135、143或144中任一权利要求所述的ADC，其中RE和RF中的一者是氢且RE和RF中的另一者是C1-3烷基。
148.根据权利要求118到135、143或144中任一权利要求所述的ADC，其中每一下标q为0。
149.根据权利要求118到135、143或144中任一权利要求所述的ADC，其中每一下标q是1到6的整数。
150.根据权利要求118到135中任一权利要求所述的ADC，其中R3是-CO2H。
151.根据权利要求118到135中任一权利要求所述的ADC，其中R2是-CO2H。
152.根据权利要求118到151中任一权利要求所述的ADC，其中XA是-CH2-。
153.根据权利要求118到151中任一权利要求所述的ADC，其中XA是-O-。
154.根据权利要求118到151中任一权利要求所述的ADC，其中XA是-S-。
155.根据权利要求118到151中任一权利要求所述的化合物，其中XA是-NH-。
156.根据权利要求118到155中任一权利要求所述的ADC，其中XB是2到16元亚杂烷基。
157.根据权利要求118到155中任一权利要求所述的ADC，其中XB是2到12元亚杂烷基。
158.根据权利要求118到157中任一权利要求所述的ADC，其中XB是2到8元亚杂烷基。
159.根据权利要求118到158中任一权利要求所述的ADC，其中所述亚杂烷基是具支链的且具有1到4个甲基。
160.根据权利要求118到159中任一权利要求所述的ADC，其中所述亚杂烷基是具支链的且具有1或2个甲基。
161.根据权利要求118到160中任一权利要求所述的ADC，其中所述亚杂烷基经1到3个氟基取代。
162.根据权利要求118到161中任一权利要求所述的ADC，其中XB包括一或两个氮原子。
163.根据权利要求118到162中任一权利要求所述的ADC，其中XB包括一或两个氧代基。
164.根据权利要求118到163中任一权利要求所述的ADC，其中XB包括一个氮原子和一个氧代基。
165.根据权利要求118到163中任一权利要求所述的ADC，其中XB包括两个氮原子和一个氧代基。
166.根据权利要求118到158或162到164中任一权利要求所述的ADC，其中XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L或M1的共价连接。
167.根据权利要求118到158或162到164中任一权利要求所述的ADC，其中XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L或M1的共价连接。
168.根据权利要求118到158或162到163中任一权利要求所述的ADC，其中XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L或M1的共价连接。
169.根据权利要求118到158或162到164中任一权利要求所述的ADC，其中XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L或M1的共价连接。
170.根据权利要求118到158或162到165中任一权利要求所述的ADC，其中XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L的共价连接。
171.根据权利要求118到158或162到165中任一权利要求所述的ADC，其中XB是其中代表与XA的共价连接，并且*代表与L的共价连接。
172.根据权利要求118到158中任一权利要求所述的ADC，其中XB不存在。
173.根据权利要求118到171中任一权利要求所述的ADC，其中下标a为1。
174.根据权利要求118到171或173中任一权利要求所述的ADC，其中下标y为1。
175.根据权利要求118到173中任一权利要求所述的ADC，其中下标w为1。
176.根据权利要求118到171中任一权利要求所述的ADC，其中下标a、下标y和下标w的总和为1。
177.根据权利要求118到171中任一权利要求所述的ADC，其中下标a、下标y和下标w的总和为2。
178.根据权利要求118到171中任一权利要求所述的ADC，其中下标a、下标y和下标w的总和为3。
179.根据权利要求118到178中任一权利要求所述的ADC，其中Y是自分解部分。
180.根据权利要求118到178中任一权利要求所述的ADC，其中Y是
181.根据权利要求118到172中任一权利要求所述的ADC，其中Y是非裂解部分且a为0。
182.根据权利要求118到178或181中任一权利要求所述的ADC，其中Y是MCC或SMCC。
183.根据权利要求118到178或181中任一权利要求所述的ADC，其中Y是PEG4到PEG12。
184.根据权利要求118到183中任一权利要求所述的ADC，其中W是1到12个氨基酸。
185.根据权利要求118到184中任一权利要求所述的ADC，其中W是1到6个氨基酸。
186.根据权利要求118到185中任一权利要求所述的ADC，其中W中的每一氨基酸是选自由以下组成的群组：丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丝氨酸、天门冬氨酸、天门冬氨酸甲酯、N,N-二甲基-赖氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、缬氨酸-丙氨酸、缬氨酸-瓜氨酸、苯丙氨酸-赖氨酸或高丝氨酸甲醚。
187.根据权利要求118到183中任一权利要求所述的ADC，其中W具有以下结构：
其中Su是糖部分；
-OA-代表糖苷键；
每一Rg独立地是氢、卤素、-CN或-NO2；
W1不存在或是-O-C(＝O)-；
代表与A或M1的共价连接；且
*代表与Y、XB或XA的共价连接。
188.根据权利要求118到187中任一权利要求所述的ADC，其中W1是-O-C(＝O)-。
189.根据权利要求118到187中任一权利要求所述的ADC，其中W1不存在。
190.根据权利要求118到188中任一权利要求所述的ADC，其中一个Rg是卤素、-CN或-NO2，并且其余RG是氢。
191.根据权利要求118到188中任一权利要求所述的ADC，其中每一Rg是氢。
192.根据权利要求118到191中任一权利要求所述的ADC，其中A是任选地经1到3个Ra1取代的C2-20亚烷基。
193.根据权利要求118到192中任一权利要求所述的ADC，其中A是任选地经1到3个Ra1取代的C4-10亚烷基。
194.根据权利要求118到191中任一权利要求所述的ADC，其中A是经Ra1取代的C2-20亚烷基。
195.根据权利要求118到192中任一权利要求所述的ADC，其中A是经Ra1取代的C4-10亚烷基。
196.根据权利要求118到191中任一权利要求所述的ADC，其中A是C2-20亚烷基。
197.根据权利要求118到192中任一权利要求所述的ADC，其中A是C4-10亚烷基。
198.根据权利要求118到191中任一权利要求所述的ADC，其中A是任选地经1到3个Rb1取代的2到40元亚杂烷基。
199.根据权利要求118到191中任一权利要求所述的ADC，其中A是任选地经1到3个Rb1取代的4到12元亚杂烷基。
200.根据权利要求118到191或199中任一权利要求所述的ADC，其中A是任选地经一个Rb1取代的2到40元亚杂烷基。
201.根据权利要求118到191或199中任一权利要求所述的ADC，其中A是任选地经一个Rb1取代的4到12元亚杂烷基。
202.根据权利要求118到191或199中任一权利要求所述的ADC，其中A是2到40元亚杂烷基。
203.根据权利要求118到191或199中任一权利要求所述的ADC，其中A是4到12元亚杂烷基。
204.根据权利要求118到191或202到203中任一权利要求所述的ADC，其中A是
205.根据权利要求118到145中任一权利要求所述的ADC，其中下标a为0。
206.根据权利要求118到145中任一权利要求所述的ADC，其中下标y为0。
207.根据权利要求118到145中任一权利要求所述的ADC，其中下标w为0。
208.根据权利要求118到145或205到207中任一权利要求所述的ADC，其中下标a、下标y和下标w的总和为0。
209.根据权利要求118到208中任一权利要求所述的ADC，其中所述连接体是可裂解连接体。
210.根据权利要求118到209中任一权利要求所述的ADC，其中所述连接体可由组织蛋白酶B、C或D；β-葡萄糖醛酸苷酶和β-甘露糖苷酶中的一或多者裂解。
211.根据权利要求118到208所述的ADC，其中所述连接体是非裂解连接体。
212.根据权利要求118到211中任一权利要求所述的ADC，其中所述抗体是人源化抗体。
213.根据权利要求118到212中任一权利要求所述的ADC，其中所述抗体是单克隆抗体。
214.根据权利要求118到187中任一权利要求所述的ADC，其中所述抗体经岩藻糖基化。
215.根据权利要求118到187中任一权利要求所述的ADC，其中所述抗体是无岩藻糖基化的。
216.一种化合物，其具有式(IV)结构：
或其医药上可接受的盐，其中：
R1C是氢、羟基、C1-6烷氧基、-(C1-6烷基)C1-6烷氧基、-(CH2)n-NRARB或PEG2到PEG4；
R2C是-CO2RM、-(C＝O)NRCRD、-S(O)2NRCRD、-S(O)2RM、-(CH2)q-NRERF、-(CH2)q-ORM、-O(C＝O)-NRERF或-NRM(C＝O)-NRERF，其中R2C连接于标记为1、2或3的任一位置处；
R3C是-CO2RM、-(C＝O)NRCRD、-S(O)2NRCRD、-S(O)2RM、-(CH2)q-NRERF、-(CH2)q-ORM、-O(C＝O)-NRERF或-NRM(C＝O)-NRERF，其中R3C连接于标记为1'、2'或3'的任一位置处；
每一RA、RB、RC、RD、RE、RF和RM独立地是氢或C1-6烷基；
每一下标n独立地是0到6的整数；
每一下标q独立地是0到6的整数；
LE是-(C＝O)-或-S(O)2-；
LC是-(CRIRJ)1-3-
每一RI和RJ独立地是氢或C1-3烷基；
下标s为0或1；
每一Cy1独立地是4到6元杂环、5到6元杂芳基或C3-6环烷基，其各自任选地经一或多个RK取代；
每一RK独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、＝O、-NRd2Re2、-C(O)NRd2Re2、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rd2和Re2独立地是氢或C1-3烷基；
LAA是-(CH2)1-6-、-C(O)(CH2)1-6-、-C(O)NRL(CH2)1-6-、-(CH2)1-6O-、-C(O)(CH2)1-6O-或-C(O)NRL(CH2)1-6O-；
RL是氢或C1-3烷基；
Cy2是C3-6环烷基、4到6元杂环、5到6元杂芳基或苯基，其各自任选地经一或多个RU取代；
每一RU独立地选自由以下组成的群组：-CO2Rj1、-(C＝O)NRd3Re3、-S(O)2NRd3Re3、-(CH2)q1-NRg1Rh1、-(CH2)q1-ORj1和-(CH2)q1-(OCH2CH2)1-8OH；
每一Rd3、Re3、Rg1、Rh1和Rj1独立地是氢或C1-6烷基；
下标q1是0到6的整数；
下标t1和t2独立地是0或1，其中t1和t2中的至少一者为1；
LD是-(CH2)1-6-；
下标u为0或1；
Z是-N(RHH)-或-N+(C1-6烷基)(RHH)-；
RHH是氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、-(CH2)1-3C3-6环烷基、-(CH2)1-3C1-3烷氧基、-(CH2)1-3 4到6元杂环或-(CH2)1-3 5到6元杂芳基；
Y是自分解部分、非自分解可释放部分或非裂解部分；
下标y为0或1；
W是1到12个氨基酸的链或具有以下结构：
其中Su是糖部分；
-OA-代表糖苷键；
每一Rg独立地是氢、卤素、-CN或-NO2；
W1不存在或是-O-C(＝O)-；
代表与LBB的共价连接；
*代表与Y、LD、NRHH或Cy2的共价连接；
下标w为0或1；
LBB是-(CH2)1-6-、-C(O)(CH2)1-6-或-[NHC(O)(CH2)1-4]1-3-；且
M是
每一AA是独立选择的氨基酸，其中(AA)b经由硫原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺；且
每一下标b独立地是1到6的整数。
217.根据权利要求216所述的化合物，其中R1C是氢。
218.根据权利要求216所述的化合物，其中R1C是羟基。
219.根据权利要求216所述的化合物，其中R1C是C1-6烷氧基。
220.根据权利要求216所述的化合物，其中R1C是甲氧基。
221.根据权利要求216所述的化合物，其中R1C是-(C1-6烷基)C1-6烷氧基。
222.根据权利要求216所述的化合物，其中R1C是甲氧基乙基。
223.根据权利要求216所述的化合物，其中R1C是PEG2到PEG4。
224.根据权利要求216所述的化合物，其中R1C是-(CH2)n-NRARB。
225.根据权利要求216到224中任一权利要求所述的化合物，其中RA和RB都是氢。
226.根据权利要求216到224中任一权利要求所述的化合物，其中RA和RB独立地是C1-3烷基。
227.根据权利要求216到224中任一权利要求所述的化合物，其中RA和RB中的一者是氢且RA和RB中的另一者是C1-3烷基。
228.根据权利要求216到227中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标n为0。
229.根据权利要求216到227中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标n为1。
230.根据权利要求216到227中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标n为2。
231.根据权利要求216到227中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标n为3、4、5或6。
232.根据权利要求216到231中任一权利要求所述的化合物，其中R2C和R3C独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2C和R3C相同。
233.根据权利要求216到231中任一权利要求所述的化合物，其中R2C和R3C独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2C和R3C不同。
234.根据权利要求216到231中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-(C＝O)m-NRCRD。
235.根据权利要求216到231中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-(C＝O)m-NRCRD。
236.根据权利要求216到235中任一权利要求所述的化合物，其中RC和RD都是氢。
237.根据权利要求216到235中任一权利要求所述的化合物，其中RC和RD各自独立地是C1-3烷基。
238.根据权利要求216到235中任一权利要求所述的化合物，其中RC和RD中的一者是氢且RC和RD中的另一者是C1-3烷基。
239.根据权利要求216到238中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标m为0。
240.根据权利要求216到238中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标m为1。
241.根据权利要求216到240中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-(CH2)q-NRERF。
242.根据权利要求216到241中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-(CH2)q-NRERF。
243.根据权利要求216到242中任一权利要求所述的化合物，其中RE和RF都是氢。
244.根据权利要求216到242中任一权利要求所述的化合物，其中RE和RF各自独立地是C1-3烷基。
245.根据权利要求216到242中任一权利要求所述的化合物，其中RE和RF中的一者是氢且RE和RF中的另一者是C1-3烷基。
246.根据权利要求216到245中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标q为0。
247.根据权利要求216到245中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标q是1到6的整数。
248.根据权利要求216到247中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-CO2RM。
249.根据权利要求216到248中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-CO2RM。
250.根据权利要求248或249所述的化合物，其中RM是氢。
251.根据权利要求248或249所述的化合物，其中RM是C1-3烷基。
252.根据权利要求216到247中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-(CH2)q-ORM。
253.根据权利要求216到247和252中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-(CH2)q-ORM。
254.根据权利要求252或253所述的化合物，其中RM是氢。
255.根据权利要求252到254中任一权利要求所述的化合物，其中q为0。
256.根据权利要求252到254中任一权利要求所述的化合物，其中q为1。
257.根据权利要求216到247中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-O(C＝O)-NRERF。
258.根据权利要求216到247和257中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-O(C＝O)-NRERF。
259.根据权利要求216到258中任一权利要求所述的化合物，其中RE和RF都是氢。
260.根据权利要求216到258中任一权利要求所述的化合物，其中RE和RF各自独立地是C1-3烷基。
261.根据权利要求216到258中任一权利要求所述的化合物，其中RE和RF中的一者是氢且RE和RF中的另一者是C1-3烷基。
262.根据权利要求216到247中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-NRM(C＝O)-NRERF。
263.根据权利要求216到247和262中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-NRM(C＝O)-NRERF。
264.根据权利要求262或263所述的化合物，其中RE、RF和RM都是氢。
265.根据权利要求262或263所述的化合物，其中RE、RF和RM各自独立地是C1-3烷基。
266.根据权利要求262或263所述的化合物，其中RE、RF和RM中的一者是C1-3烷基且RE、RF和RM中的其余者是氢。
267.根据权利要求216到247中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-S(O)2NRCRD。
268.根据权利要求216到247和267中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-S(O)2NRCRD。
269.根据权利要求267或268所述的化合物，其中RC和RD都是氢。
270.根据权利要求267或268所述的化合物，其中RC和RD各自独立地是C1-3烷基。
271.根据权利要求267或268所述的化合物，其中RC和RD中的一者是氢且RC和RD中的另一者是C1-3烷基。
272.根据权利要求216到247中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-S(O)2RM。
273.根据权利要求216到247和272中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-S(O)2RM。
274.根据权利要求272或273所述的化合物，其中RM是氢。
275.根据权利要求272或273所述的化合物，其中RM是C1-3烷基。
276.根据权利要求216到275中任一权利要求所述的化合物，其中R2C连接于位置1处。
277.根据权利要求216到275中任一权利要求所述的化合物，其中R2C连接于位置2处。
278.根据权利要求216到275中任一权利要求所述的化合物，其中R2C连接于位置3处。
279.根据权利要求216到275中任一权利要求所述的化合物，其中R3C连接于位置1'处。
280.根据权利要求216到275中任一权利要求所述的化合物，其中R3C连接于位置2'处。
281.根据权利要求216到275中任一权利要求所述的化合物，其中R3C连接于位置3'处。
282.根据权利要求216到281中任一权利要求所述的化合物，其中LE是-(C＝O)-。
283.根据权利要求216到281中任一权利要求所述的化合物，其中LE是-S(O)2-。
284.根据权利要求216到283中任一权利要求所述的化合物，其中每一RI和RJ是氢。
285.根据权利要求216到283中任一权利要求所述的化合物，其中每一RI和RJ是C1-3烷基。
286.根据权利要求216到283中任一权利要求所述的化合物，其中RI和RJ中的一者是氢且RI和RJ中的另一者是C1-3烷基。
287.根据权利要求216到286中任一权利要求所述的化合物，其中LC是-(CRIRJ)-。
288.根据权利要求216到287中任一权利要求所述的化合物，其中s为0。
289.根据权利要求216到287中任一权利要求所述的化合物，其中s为1。
290.根据权利要求216到289中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1独立地是5到6元杂芳基。
291.根据权利要求216到289中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1是任选地经一或多个RK取代的吡唑。
292.根据权利要求216到289中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1独立地选自由以下组成的群组：吡唑、咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、恶唑、异恶唑、吡咯、哒嗪、吡啶、嘧啶和吡嗪，其各自任选地经一或多个RK取代。
293.根据权利要求216到289中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1独立地选自由以下组成的群组：咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、恶唑、异恶唑、吡咯、哒嗪、吡啶、嘧啶和吡嗪，其各自任选地经一或多个RK取代。
294.根据权利要求216到289中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1独立地是任选地经一或多个RK取代的C4-5环烷基。
295.根据权利要求216到294中任一权利要求所述的化合物，其中每一RK独立地选自由以下组成的群组：C1-3烷基、C1-3卤代烷基和卤素。
296.根据权利要求295所述的化合物，其中每一RK独立地选自由以下组成的群组：甲基、乙基、-CF3和卤素。
297.根据权利要求216到296中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1相同。
298.根据权利要求216到296中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1不同。
299.根据权利要求216到298中任一权利要求所述的化合物，其中LAA是-(CH2)1-6-。
300.根据权利要求216到298中任一权利要求所述的化合物，其中LAA是-(CH2)1-3-。
301.根据权利要求216到298中任一权利要求所述的化合物，其中LAA是-(CH2)1-6O-。
302.根据权利要求216到298中任一权利要求所述的化合物，其中LAA是-(CH2)1-3O-。
303.根据权利要求216到302中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是4到6元杂环。
304.根据权利要求216到302中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2具有结构其中下标z1和z2中的每一者独立地是1到3的整数且**指示与LAA的连接。
305.根据权利要求304所述的化合物，其中z1和z2为1。
306.根据权利要求304所述的化合物，其中z1和z2为2。
307.根据权利要求304所述的化合物，其中z1为1且z2为2。
308.根据权利要求216到302中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2具有结构其中
Z1是选自由以下组成的群组：-O-、-S-、-CRNRO-和-NRP-；
RN、RO和RP独立地是氢或C1-6烷基；
下标z3是1到3的整数；且
**指示与LAA的连接。
309.根据权利要求308所述的化合物，其中RN和RO是氢。
310.根据权利要求308所述的化合物，其中RP是氢。
311.根据权利要求308所述的化合物，其中RP是甲基。
312.根据权利要求216到302中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是5到6元杂芳基。
313.根据权利要求216到302中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是选自由以下组成的群组：
其中
Z2是＝CRN-或＝N-；
RN是氢或C1-6烷基；且
**指示与LAA的连接。
314.根据权利要求313所述的化合物，其中Z2是＝CRN-。
315.根据权利要求314所述的化合物，其中RN是氢。
316.根据权利要求313所述的化合物，其中Z2是＝N-。
317.根据权利要求216到302中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是选自由以下组成的群组：
其中Z3是-O-或-S-且**指示与LAA、LD、NRHH、Y、W或LBB的连接。
318.根据权利要求317所述的化合物，其中**指示与LAA的连接。
319.根据权利要求317所述的化合物，其中**指示与LD、NRHH、Y、W或LBB的连接。
320.根据权利要求216到302中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是选自由以下组成的群组：
其中**指示与LAA的连接。
321.根据权利要求216到302中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是选自由以下组成的群组：
其中
每一Z2独立地是＝CRN-或＝N-；且
每一RN是氢或C1-6烷基。
322.根据权利要求321所述的化合物，其中至少一个Z2是＝N-。
323.根据权利要求321所述的化合物，其中一个Z2是＝N-且其余Z2是＝CRN-。
324.根据权利要求321所述的化合物，其中两个Z2是＝N-且其余Z2是＝CRN-。
325.根据权利要求321、323和324中任一权利要求所述的化合物，其中RN是氢。
326.根据权利要求216到302中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是
327.根据权利要求216到302中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是
328.根据权利要求216到302中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是
329.根据权利要求216到302中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是环丁基。
330.根据权利要求216到329中任一权利要求所述的化合物，其中每一Rd3、Re3、Rg1、Rh1和Rj1独立地是氢或-CH3。
331.根据权利要求216到330中任一权利要求所述的化合物，其中每一RU独立地选自-CO2H、-(C＝O)NH2、-S(O)2NH2、-CH2NH2和-CH2OH。
332.根据权利要求216到331中任一权利要求所述的化合物，其中t1为0且t2为1。
333.根据权利要求216到331中任一权利要求所述的化合物，其中t1为1且t2为0。
334.根据权利要求216到331中任一权利要求所述的化合物，其中t1为1且t2为1。
335.根据权利要求216到334中任一权利要求所述的化合物，其中u为1且LD为-(CH2)1-3-。
336.根据权利要求216到334中任一权利要求所述的化合物，其中u为0。
337.根据权利要求216到331中任一权利要求所述的化合物，其中t2为1且RHH是氢。
338.根据权利要求216到331中任一权利要求所述的化合物，其中t2为1且RHH是C1-3烷基。
339.根据权利要求216到331中任一权利要求所述的化合物，其中t2为1且RHH是C3-4环烷基。
340.根据权利要求216到331中任一权利要求所述的化合物，其中t2为1且RHH是-(CH2)C3-4环烷基。
341.根据权利要求216到331中任一权利要求所述的化合物，其中t2为1且RHH是-(CH2)4到5元杂环。
342.根据权利要求216到331中任一权利要求所述的化合物，其中t2为1且RHH是-(CH2)5元杂芳基。
343.根据权利要求216到331和333到342中任一权利要求所述的化合物，其中Z是-N(RHH)-。
344.根据权利要求216到343中任一权利要求所述的化合物，其中Y是
345.根据权利要求216到343中任一权利要求所述的化合物，其中Y是环己烷羧基、十一烷酰基、己酰基(caproyl)、己酰基(hexanoyl)、丁酰基或丙酰基。
346.根据权利要求216到343中任一权利要求所述的化合物，其中Y是PEG4到PEG12。
347.根据权利要求216到343中任一权利要求所述的化合物，其中y为0。
348.根据权利要求216到346中任一权利要求所述的化合物，其中y为1。
349.根据权利要求216到348中任一权利要求所述的化合物，其中W是1到12个氨基酸的链。
350.根据权利要求216到348中任一权利要求所述的化合物，其中W是1到6个氨基酸的链。
351.根据权利要求216到348中任一权利要求所述的化合物，其中W是1到3个氨基酸的链。
352.根据权利要求216到351所述的化合物，其中W的每一氨基酸独立地选自由以下组成的群组：丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、O-甲基丝氨酸、O-甲基天门冬氨酸、O-甲基谷氨酸、N-甲基赖氨酸、O-甲基酪氨酸、O-甲基组氨酸和O-甲基苏氨酸。
353.根据权利要求216到351中任一权利要求所述的化合物，其中W中的每一氨基酸独立地选自由以下组成的群组：丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丝氨酸、天门冬氨酸、天门冬氨酸甲酯、N,N-二甲基-赖氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、缬氨酸-丙氨酸、缬氨酸-瓜氨酸、苯丙氨酸-赖氨酸或高丝氨酸甲醚。
354.根据权利要求216到348中任一权利要求所述的化合物，其中W具有以下结构：
355.根据权利要求354所述的化合物，其中W1是-O-C(＝O)-。
356.根据权利要求354或355所述的化合物，其中一个Rg是卤素、-CN或-NO2，并且其余RG是氢。
357.根据权利要求354或355所述的化合物，其中每一Rg是氢。
358.根据权利要求216到348中任一权利要求所述的化合物，其中w为0。
359.根据权利要求216到348中任一权利要求所述的化合物，其中w为1。
360.根据权利要求216到359中任一权利要求所述的化合物，其中LBB是-(CH2)1-3-。
361.根据权利要求216到359中任一权利要求所述的化合物，其中LBB是-C(O)(CH2)1-2-。
362.根据权利要求361所述的化合物，其中LBB是-C(O)(CH2)2-。
363.根据权利要求216到359中任一权利要求所述的化合物，其中LBB是-[NHC(O)(CH2)2]1-2-。
364.根据权利要求363所述的化合物，其中LBB是-[NHC(O)(CH2)2]2-。
365.根据权利要求216到364中任一权利要求所述的化合物，其中M是
366.根据权利要求216到364中任一权利要求所述的化合物，其中M是
367.根据权利要求216到364中任一权利要求所述的化合物，其中M是
368.根据权利要求216到367中任一权利要求所述的化合物，其中每一AA独立地是天然氨基酸；其中(AA)b经由硫原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺。
369.根据权利要求216到367中任一权利要求所述的化合物，其中每一AA独立地是天然氨基酸；其中(AA)b经由氮原子连结到琥珀酰亚胺或水解的琥珀酰亚胺。
370.根据权利要求216到369中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标b为1。
371.根据权利要求216到369中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标b为2。
372.根据权利要求216到369中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标b为3、4、5或6。
373.根据权利要求216到365中任一权利要求所述的化合物，其中M是
374.根据权利要求216到364中任一权利要求所述的化合物，其中M是
375.根据权利要求216到364中任一权利要求所述的化合物，其中M是
376.根据权利要求216到364中任一权利要求所述的化合物，其中M是
377.根据权利要求216所述的化合物，其选自由以下组成的群组：
和其医药上可接受的盐。
378.一种化合物，其具有式(V)结构：
或其医药上可接受的盐，其中：
R1C是氢、羟基、C1-6烷氧基、-(C1-6烷基)C1-6烷氧基、-(CH2)n-NRARB或PEG2到PEG4；
R2C是-CO2RM、-(C＝O)NRCRD、-S(O)2NRCRD、-S(O)2RM、-(CH2)q-NRERF、-(CH2)q-ORM、-O(C＝O)-NRERF或-NRM(C＝O)-NRERF，其中R2C连接于标记为1、2或3的任一位置处；
R3C是-CO2RM、-(C＝O)NRCRD、-S(O)2NRCRD、-S(O)2RM、-(CH2)q-NRERF、-(CH2)q-ORM、-O(C＝O)-NRERF或-NRM(C＝O)-NRERF，其中R3C连接于标记为1'、2'或3'的任一位置处；
每一RA、RB、RC、RD、RE、RF和RM独立地是氢或C1-6烷基；
每一下标n独立地是0到6的整数；
每一下标q独立地是0到6的整数；
LE是-(C＝O)-或-S(O)2-；
LC是-(CRIRJ)1-3-
每一RI和RJ独立地是氢或C1-3烷基；
下标s为0或1；
每一Cy1独立地是4到6元杂环、5到6元杂芳基或C3-6环烷基，其各自任选地经一或多个RK取代；
每一RK独立地选自由以下组成的群组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、卤素、-OH、＝O、-NRd2Re2、-C(O)NRd2Re2、-C(O)(C1-6烷基)和-C(O)O(C1-6烷基)；
每一Rd2和Re2独立地是氢或C1-3烷基；
LAA是-(CH2)1-6-、-C(O)(CH2)1-6-、-C(O)NRL(CH2)1-6-、-(CH2)1-6O-、-C(O)(CH2)1-6O-或-C(O)NRL(CH2)1-6O-；
RL是氢或C1-3烷基；
Cy2是C3-6环烷基、4到6元杂环、5到6元杂芳基或苯基，其各自任选地经一或多个RU取代；
每一RU独立地选自由以下组成的群组：-CO2Rj1、-(C＝O)NRd3Re3、-S(O)2NRd3Re3、-(CH2)q1-NRg1Rh1、-(CH2)q1-ORj1和-(CH2)q1-(OCH2CH2)1-8OH；
每一Rd3、Re3、Rg1、Rh1和Rj1独立地是氢或C1-6烷基；
下标q1是0到6的整数；
下标t1为0或1；
LD是-(CH2)1-6-；
下标u为0或1；
在t1为0时，ZZ是-NRQRR、-N+(C1-6烷基)RQRR、-C(＝O)NSRT、-C(O)O(C1-6烷基)、-CO2H或氨基酸，或在t1为1时，ZZ是氢、-NRQRR、-N+(C1-6烷基)RQRR、-C(＝O)NSRT、-C(O)O(C1-6烷基)、-CO2H或氨基酸；
RQ是氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、-(CH2)1-3C3-6环烷基、-(CH2)1-3C1-3烷氧基、-(CH2)1-3 4到6元杂环或-(CH2)1-3 5到6元杂芳基，条件是
如果t1为0且两个Cy1都是那么RQ是C2-6烷基、C3-6环烷基、-(CH2)1-3C3-6环烷基、-(CH2)1-3C1-3烷氧基、-(CH2)1-3 4到6元杂环或-(CH2)1-3 5到6元杂芳基，并且
如果t1为0且至少一个Cy1不为那么ZZ是-NRQRR、-N+(C1-6烷基)RQRR或-C(＝O)NSRT，并且RQ是C1-6烷基、C3-6环烷基、-(CH2)1-3C3-6环烷基、-(CH2)1-3C1-3烷氧基、-(CH2)1-3 4到6元杂环或-(CH2)1-3 5到6元杂芳基；且
每一RR、RS和RT独立地是氢或C1-6烷基。
379.根据权利要求378所述的化合物，其中R1C是氢。
380.根据权利要求378所述的化合物，其中R1C是羟基。
381.根据权利要求378所述的化合物，其中R1C是C1-6烷氧基。
382.根据权利要求378所述的化合物，其中R1C是甲氧基。
383.根据权利要求378所述的化合物，其中R1C是-(C1-6烷基)C1-6烷氧基。
384.根据权利要求378所述的化合物，其中R1C是甲氧基乙基。
385.根据权利要求378所述的化合物，其中R1C是PEG2到PEG4。
386.根据权利要求378所述的化合物，其中R1C是-(CH2)n-NRARB。
387.根据权利要求378到386中任一权利要求所述的化合物，其中RA和RB都是氢。
388.根据权利要求378到386中任一权利要求所述的化合物，其中RA和RB独立地是C1-3烷基。
389.根据权利要求378到386中任一权利要求所述的化合物，其中RA和RB中的一者是氢且RA和RB中的另一者是C1-3烷基。
390.根据权利要求378到389中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标n为0。
391.根据权利要求378到389中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标n为1。
392.根据权利要求378到389中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标n为2。
393.根据权利要求378到389中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标n为3、4、5或6。
394.根据权利要求378到393中任一权利要求所述的化合物，其中R2C和R3C独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2C和R3C相同。
395.根据权利要求378到393中任一权利要求所述的化合物，其中R2C和R3C独立地是-CO2H、-(C＝O)m-NRCRD或-(CH2)q-NRERF；且R2C和R3C不同。
396.根据权利要求378到393中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-(C＝O)m-NRCRD。
397.根据权利要求378到396中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-(C＝O)m-NRCRD。
398.根据权利要求378到397中任一权利要求所述的化合物，其中RC和RD都是氢。
399.根据权利要求378到397中任一权利要求所述的化合物，其中RC和RD各自独立地是C1-3烷基。
400.根据权利要求378到397中任一权利要求所述的化合物，其中RC和RD中的一者是氢且RC和RD中的另一者是C1-3烷基。
401.根据权利要求396或397所述的化合物，其中每一下标m为0。
402.根据权利要求396或397所述的化合物，其中每一下标m为1。
403.根据权利要求378到393中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-(CH2)q-NRERF。
404.根据权利要求378到393和403中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-(CH2)q-NRERF。
405.根据权利要求378到404中任一权利要求所述的化合物，其中RE和RF都是氢。
406.根据权利要求378到404中任一权利要求所述的化合物，其中RE和RF各自独立地是C1-3烷基。
407.根据权利要求378到404中任一权利要求所述的化合物，其中RE和RF中的一者是氢且RE和RF中的另一者是C1-3烷基。
408.根据权利要求378到407中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标q为0。
409.根据权利要求378到407中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标q是1到6的整数。
410.根据权利要求378到393中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-CO2RM。
411.根据权利要求378到393和410中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-CO2RM。
412.根据权利要求410或411所述的化合物，其中RM是氢。
413.根据权利要求410或411所述的化合物，其中RM是C1-3烷基。
414.根据权利要求378到393中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-(CH2)q-ORM。
415.根据权利要求378到393和414中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-(CH2)q-ORM。
416.根据权利要求414或415所述的化合物，其中RM是氢。
417.根据权利要求414到415中任一权利要求所述的化合物，其中q为0。
418.根据权利要求414到415中任一权利要求所述的化合物，其中q为1。
419.根据权利要求378到393中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-O(C＝O)-NRERF。
420.根据权利要求378到393和419中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-O(C＝O)-NRERF。
421.根据权利要求419或420所述的化合物，其中RE和RF都是氢。
422.根据权利要求419或420所述的化合物，其中RE和RF各自独立地是C1-3烷基。
423.根据权利要求419或420所述的化合物，其中RE和RF中的一者是氢且RE和RF中的另一者是C1-3烷基。
424.根据权利要求378到393中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-NRM(C＝O)-NRERF。
425.根据权利要求378到393和424中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-NRM(C＝O)-NRERF。
426.根据权利要求424或425所述的化合物，其中RE、RF和RM都是氢。
427.根据权利要求424或425所述的化合物，其中RE、RF和RM各自独立地是C1-3烷基。
428.根据权利要求424或425所述的化合物，其中RE、RF和RM中的一者是C1-3烷基且RE、RF和RM中的其余者是氢。
429.根据权利要求378到393中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-S(O)2NRCRD。
430.根据权利要求378到393和429中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-S(O)2NRCRD。
431.根据权利要求429或430所述的化合物，其中RC和RD都是氢。
432.根据权利要求429或430所述的化合物，其中RC和RD各自独立地是C1-3烷基。
433.根据权利要求429或430所述的化合物，其中RC和RD中的一者是氢且RC和RD中的另一者是C1-3烷基。
434.根据权利要求378到393中任一权利要求所述的化合物，其中R2C是-S(O)2RM。
435.根据权利要求378到393和434中任一权利要求所述的化合物，其中R3C是-S(O)2RM。
436.根据权利要求434或435所述的化合物，其中RM是氢。
437.根据权利要求434或435所述的化合物，其中RM是C1-3烷基。
438.根据权利要求378到437中任一权利要求所述的化合物，其中R2C连接于位置1处。
439.根据权利要求378到437中任一权利要求所述的化合物，其中R2C连接于位置2处。
440.根据权利要求378到437中任一权利要求所述的化合物，其中R2C连接于位置3处。
441.根据权利要求378到437中任一权利要求所述的化合物，其中R3C连接于位置1'处。
442.根据权利要求378到437中任一权利要求所述的化合物，其中R3C连接于位置2'处。
443.根据权利要求378到437中任一权利要求所述的化合物，其中R3C连接于位置3'处。
444.根据权利要求378到443中任一权利要求所述的化合物，其中LE是-(C＝O)-。
445.根据权利要求378到443中任一权利要求所述的化合物，其中LE是-S(O)2-。
446.根据权利要求378到445中任一权利要求所述的化合物，其中每一RI和RJ是氢。
447.根据权利要求378到445中任一权利要求所述的化合物，其中每一RI和RJ是C1-3烷基。
448.根据权利要求378到445中任一权利要求所述的化合物，其中RI和RJ中的一者是氢且RI和RJ中的另一者是C1-3烷基。
449.根据权利要求378到448中任一权利要求所述的化合物，其中LC是-(CRIRJ)-。
450.根据权利要求378到449中任一权利要求所述的化合物，其中s为0。
451.根据权利要求378到449中任一权利要求所述的化合物，其中s为1。
452.根据权利要求378到451中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1独立地是5到6元杂芳基。
453.根据权利要求378到451中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1是任选地经一或多个RK取代的吡唑。
454.根据权利要求378到451中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1独立地选自由以下组成的群组：吡唑、咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、恶唑、异恶唑、吡咯、哒嗪、吡啶、嘧啶和吡嗪，其各自任选地经一或多个RK取代。
455.根据权利要求378到451中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1独立地选自由以下组成的群组：咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、恶唑、异恶唑、吡咯、哒嗪、吡啶、嘧啶和吡嗪，其各自任选地经一或多个RK取代。
456.根据权利要求378到451中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1独立地是任选地经一或多个RK取代的C4-5环烷基。
457.根据权利要求378到456中任一权利要求所述的化合物，其中每一RK独立地选自由以下组成的群组：C1-3烷基、C1-3卤代烷基和卤素。
458.根据权利要求457所述的化合物，其中每一RK独立地选自由以下组成的群组：甲基、乙基、-CF3和卤素。
459.根据权利要求378到451中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1相同。
460.根据权利要求378到451中任一权利要求所述的化合物，其中每一Cy1不同。
461.根据权利要求378到460中任一权利要求所述的化合物，其中LAA是-(CH2)1-6-。
462.根据权利要求378到460中任一权利要求所述的化合物，其中LAA是-(CH2)1-3-。
463.根据权利要求378到460中任一权利要求所述的化合物，其中LAA是-(CH2)1-6O-。
464.根据权利要求378到460中任一权利要求所述的化合物，其中LAA是-(CH2)1-3O-。
465.根据权利要求378到464中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是4到6元杂环。
466.根据权利要求378到464中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2具有结构其中下标z1和z2中的每一者独立地是1到3的整数且**指示与LAA的连接。
467.根据权利要求466所述的化合物，其中z1和z2为1。
468.根据权利要求466所述的化合物，其中z1和z2为2。
469.根据权利要求466所述的化合物，其中z1为1且z2为2。
470.根据权利要求378到464中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2具有结构其中
Z1是选自由以下组成的群组：-O-、-S-、-CRNRO-和-NRP-；
RN、RO和RP独立地是氢或C1-6烷基；
下标z3是1到3的整数；且
**指示与LAA的连接。
471.根据权利要求470所述的化合物，其中RN和RO是氢。
472.根据权利要求470所述的化合物，其中RP是氢。
473.根据权利要求470所述的化合物，其中RP是甲基。
474.根据权利要求378到464中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是5到6元杂芳基。
475.根据权利要求378到464中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是选自由以下组成的群组：
其中
Z2是＝CRN-或＝N-；
RN是氢或C1-6烷基；且
**指示与LAA的连接。
476.根据权利要求475所述的化合物，其中Z2是＝CRN-。
477.根据权利要求476所述的化合物，其中RN是氢。
478.根据权利要求475所述的化合物，其中Z2是＝N-。
479.根据权利要求378到464中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是选自由以下组成的群组：
其中Z3是-O-或-S-且**指示与LAA、LD、NRHH、Y、W或LBB的连接。
480.根据权利要求479所述的化合物，其中**指示与LAA的连接。
481.根据权利要求479所述的化合物，其中**指示与LD、NRHH、Y、W或LBB的连接。
482.根据权利要求378到464中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是选自由以下组成的群组：
其中**指示与LAA的连接。
483.根据权利要求378到464中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是选自由以下组成的群组：
其中
每一Z2独立地是＝CRN-或＝N-；且
每一RN独立地是氢或C1-6烷基。
484.根据权利要求483所述的化合物，其中至少一个Z2是＝N-。
485.根据权利要求483所述的化合物，其中一个Z2是＝N-且其余Z2是＝CRN-。
486.根据权利要求483所述的化合物，其中两个Z2是＝N-且其余Z2是＝CRN-。
487.根据权利要求483、485和486中任一权利要求所述的化合物，其中RN和RO是氢。
488.根据权利要求378到464中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是
489.根据权利要求378到464中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是
490.根据权利要求378到464中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是
491.根据权利要求378到464中任一权利要求所述的化合物，其中Cy2是环丁基。
492.根据权利要求378到491中任一权利要求所述的化合物，其中每一Rd3、Re3、Rg1、Rh1和Rj1独立地是氢或-CH3。
493.根据权利要求378到492中任一权利要求所述的化合物，其中每一RU独立地选自-CO2H、-(C＝O)NH2、-S(O)2NH2、-CH2NH2和-CH2OH。
494.根据权利要求378到493中任一权利要求所述的化合物，其中t1为0。
495.根据权利要求378到493中任一权利要求所述的化合物，其中t1为1。
496.根据权利要求378到495中任一权利要求所述的化合物，其中u为1且LD是-(CH2)1-3。
497.根据权利要求378到495中任一权利要求所述的化合物，其中u为0。
498.根据权利要求378到497中任一权利要求所述的化合物，其中ZZ是-NRQRR。
499.根据权利要求498所述的化合物，其中RQ是C1-6烷基。
500.根据权利要求498所述的化合物，其中RQ是C3-6环烷基。
501.根据权利要求500所述的化合物，其中RQ是环丙基。
502.根据权利要求498所述的化合物，其中RQ是-(CH2)1-3C3-6环烷基。
503.根据权利要求498到501中任一权利要求所述的化合物，其中RR是氢。
504.根据权利要求378到497中任一权利要求所述的化合物，其中ZZ是-C(＝O)NSRT。
505.根据权利要求378到497中任一权利要求所述的化合物，其中ZZ是-C(O)O(叔丁基)。
506.根据权利要求378到497中任一权利要求所述的化合物，其中ZZ是-CO2H。
507.根据权利要求378到497中任一权利要求所述的化合物，其中ZZ是选自由以下组成的群组的氨基酸：丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、O-甲基丝氨酸、O-甲基天门冬氨酸、O-甲基谷氨酸、N-甲基赖氨酸、O-甲基酪氨酸、O-甲基组氨酸和O-甲基苏氨酸。
508.根据权利要求378的化合物，其选自由以下组成的群组：
和其医药上可接受的盐。
509.一种抗体药物结合物(ADC)，其具有下式：
Ab-(S*-(D'))p
其中：
Ab是抗体；
每一S*是来自所述抗体的半胱氨酸残基的硫原子；
D'是药物单元，其是根据权利要求216到377中任一权利要求所述的式(IV)化合物的基团；且
下标p是2到8的整数。
510.根据权利要求509所述的ADC，其中所述式(IV)化合物的所述基团包括取代基M中的基团。
511.根据权利要求510所述的ADC，其中D'具有以下结构：
，
其中***指示与S*的连接。
512.根据权利要求509到511中任一权利要求所述的ADC，其中所述抗体是人源化抗体。
513.根据权利要求509或511所述的ADC，其中所述抗体是单克隆抗体。
514.根据权利要求509或511所述的ADC，其中所述抗体经岩藻糖基化。
515.根据权利要求509或511所述的ADC，其中所述抗体是无岩藻糖基化的。
516.一种组合物，其包括根据权利要求118到215和509到515中任一权利要求所述的ADC的分布。
517.根据权利要求516所述的组合物，其进一步包括和至少一种医药上可接受的载剂。
518.一种治疗有需要的个体的癌症的方法，其包括向所述个体投与治疗有效量的根据权利要求516或517所述的组合物。
519.一种治疗有需要的个体的癌症的方法，其包括向所述个体投与治疗有效量的根据权利要求118到215和509到515中任一权利要求所述的ADC。
520.一种诱导有需要的个体中的抗肿瘤免疫反应的方法，其包括向所述个体投与治疗有效量的根据权利要求516或517所述的组合物。
521.一种诱导有需要的个体的抗肿瘤免疫反应的方法，其包括向所述个体投与治疗有效量的根据权利要求118到215和509到515中任一权利要求所述的ADC。
522.一种式(III)化合物，
或其医药上可接受的盐，其中：
R1A是氢、羟基、C1-6烷氧基、-(C1-6烷基)C1-6烷氧基、-(CH2)nn-NRAARBB；
R2A和R3A独立地是-CO2H、-(C＝O)mm-NRCCRDD或-(CH2)q-NREE1RFF1；
每一下标nn独立地是0到6的整数；
每一下标mm独立地是0或1；
每一下标qq是0到6的整数；
Y1是-CH2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH3)-；
X1是C2-6亚烷基；
Z1是-NREERFF、-C(＝O)NRGGRHH或-CO2H；
每一RAA、RBB、RCC和RDD、REE1和RFF1独立地是氢或C1-3烷基；且
每一REE、RFF、RGG和RHH独立地是氢或C1-6烷基。
523.根据权利要求522所述的化合物，其中R1A是氢。
524.根据权利要求522所述的化合物，其中R1A是羟基。
525.根据权利要求522所述的化合物，其中R1A是C1-6烷氧基。
526.根据权利要求522或525所述的化合物，其中R1是甲氧基。
527.根据权利要求522所述的化合物，其中R1A是-(C1-6烷基)C1-6烷氧基。
528.根据权利要求522或527所述的化合物，其中R1A是甲氧基乙基。
529.根据权利要求522所述的化合物，其中R1是-(CH2)nn-NRAARBB。
530.根据权利要求522或529所述的化合物，其中RAA和RBB都是氢。
531.根据权利要求522或529所述的化合物，其中RAA和RBB独立地是C1-3烷基。
532.根据权利要求522或529所述的化合物，其中RAA和RBB中的一者是氢且RAA和RBB中的另一者是C1-3烷基。
533.根据权利要求522或529到532中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标nn为0。
534.根据权利要求522或529到532中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标nn为1。
535.根据权利要求522或529到532中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标nn为2。
536.根据权利要求522或529到532中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标nn为3、4、5或6。
537.根据权利要求522到536中任一权利要求所述的化合物，其中R2A和R3A独立地是
-CO2H、-(C＝O)mm-NRCCRDD或-(CH2)q-NREE1RFF1；且R2A和R3A相同。
538.根据权利要求522到536中任一权利要求所述的化合物，其中R2A和R3A独立地是-CO2H、-(C＝O)mm-NRCCRDD或-(CH2)q-NREE1RFF1；且R2A和R3A不同。
539.根据权利要求522到538中任一权利要求所述的化合物，其中R2A是-(C＝O)mm-NRCCRDD。
540.根据权利要求522到538中任一权利要求所述的化合物，其中R3A是-(C＝O)mm-NRCCRDD。
541.根据权利要求522到537或539到540中任一权利要求所述的化合物，其中每一RCC和每一RDD是氢。
542.根据权利要求522到537或539到540中任一权利要求所述的化合物，其中每一RCC和每一RDD独立地是C1-3烷基。
543.根据权利要求522到536或538到540中任一权利要求所述的化合物，其中每一RCC和RDD中的一者是氢且每一RCC和RDD中的另一者是C1-3烷基。
544.根据权利要求522到543中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标mm为0。
545.根据权利要求522到543中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标mm为1。
546.根据权利要求522到538中任一权利要求所述的化合物，其中R2A是-(CH2)q-NREE1RFF1。
547.根据权利要求522到538中任一权利要求所述的化合物，其中R3A是-(CH2)q-NREE1RFF1。
548.根据权利要求522到538或546到547中任一权利要求所述的化合物，其中每一REE1和每一RFF1是氢。
549.根据权利要求522到538或546到547中任一权利要求所述的化合物，其中每一REE1和每一RFF1独立地是C1-3烷基。
550.根据权利要求522到538或546到547中任一权利要求所述的化合物，其中每一REE1和每一RFF1中的一者是氢且每一REE1和每一RFF1中的另一者是C1-3烷基。
551.根据权利要求522到538或546到547中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标qq为0。
552.根据权利要求522到538或546到550中任一权利要求所述的化合物，其中每一下标qq是1到6的整数。
553.根据权利要求522到538中任一权利要求所述的化合物，其中R3A是-CO2H。
554.根据权利要求522到538中任一权利要求所述的化合物，其中R2A是-CO2H。
555.根据权利要求522到554中任一权利要求所述的化合物，其中Y1是-CH2-。
556.根据权利要求522到554中任一权利要求所述的化合物，其中Y1是-O-。
557.根据权利要求522到554中任一权利要求所述的化合物，其中Y1是-S-。
558.根据权利要求522到554中任一权利要求所述的化合物，其中Y1是-NH-。
559.根据权利要求522到558中任一权利要求所述的化合物，其中X1是C2-5亚烷基。
560.根据权利要求522到559中任一权利要求所述的化合物，其中X1是C2-4亚烷基。
561.根据权利要求522到560中任一权利要求所述的化合物，其中X1是亚乙基或亚正丙基。
562.根据权利要求522到561中任一权利要求所述的化合物，其中Z1是-NRE1RF1。
563.根据权利要求522到562中任一权利要求所述的化合物，其中REE和RFF都是氢。
564.根据权利要求522到562中任一权利要求所述的化合物，其中REE和RFF独立地是C1-6烷基。
565.根据权利要求522到562中任一权利要求所述的化合物，其中REE和RFF中的一者是氢且REE和RFF中的另一者是C1-6烷基。
566.根据权利要求564或565所述的化合物，其中所述C1-6烷基是C1-3烷基。
567.根据权利要求566所述的化合物，其中所述C1-3烷基是甲基。
568.根据权利要求522到561中任一权利要求所述的化合物，其中Z1是-C(＝O)NRGGRHH。
569.根据权利要求522到561或568中任一权利要求所述的化合物，其中RGG和RHH都是氢。
570.根据权利要求522到561或568中任一权利要求所述的化合物，其中RGG和RHH独立地是C1-6烷基。
571.根据权利要求522到561或568中任一权利要求所述的化合物，其中RGG和RHH中的一者是氢且RGG和RHH中的另一者是C1-6烷基。
572.根据权利要求570或571所述的化合物，其中所述C1-6烷基是C1-3烷基。
573.根据权利要求569所述的化合物，其中所述C1-3烷基是甲基。
574.根据权利要求522到561中任一权利要求所述的化合物，其中Z1是-CO2H。
575.根据权利要求522所述的化合物，其中R1A是甲氧基且R2A和R3A都是-C(＝O)NH2。
576.根据权利要求522或575所述的化合物，其中Y1是-O-且X1是C3亚烷基。
577.根据权利要求522或575到576中任一权利要求所述的化合物，其中X1是亚正丙基。
578.根据权利要求522或575到577中任一权利要求所述的化合物，其中Z1是-NREERFF。
579.根据权利要求522或575到578中任一权利要求所述的化合物，其中REE是氢且RFF是甲基。
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