TW202400246A - 免疫調節抗體-藥物結合物 - Google Patents

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Abstract

本發明尤其提供適用於治療諸如癌症之各種疾病的抗體-藥物結合物。

Description

免疫調節抗體-藥物結合物
本發明係關於化學及醫學領域。更特定而言，本發明係關於抗體-藥物結合物、組成物、其製備及其用作治療劑之用途。
cGAS-STING路徑為先天免疫路徑，其識別胞內DNA且觸發對於抗病毒免疫與抗腫瘤免疫均具有重要作用的I型干擾素及發炎性細胞介素反應。DNA結合後，cGMP-AMP合酶(cGAS)產生cGAMP，cGAMP為STING的內源配位體。參見例如Villanueva, Nat. Rev. Drug Disc.2019: 18; 15。在分子層面上，跨膜STING二聚體在藉由cGAMP活化後，自內質網易位至高基氏器(Golgi apparatus)，最終募集TANK結合激酶1 (TBK1)及轉錄因子干擾素調控因子3 (IRF3)，從而誘導I型干擾素(IFNs)及發炎反應。參見Konno等人, Cell2013: 155; 688-698。由於過度的cGAS-STING活性已與各種自體免疫及發炎病症有關，因此必須緊密地調控此先天免疫路徑。參見Barber, Nat. Rev. Immunol.2015: 15; 760-770；亦參見Liu等人, N. Engl. J. Med.2014: 371; 507-518。
外源STING促效劑可藉由活化針對腫瘤的免疫反應而有助於克服免疫抑制性腫瘤微環境，從而引起腫瘤消退。參見Sun等人, Science2013: 6121; 786-791；亦參見Corrales及Gajewski, Clinc. Cancer Res.2015: 21; 4774-4779。實例包括基於核苷酸的STING促效劑，如同內源配位體，該等STING促效劑為環狀二核苷酸。此等化合物典型地帶有電荷且具親水性，容易發生酶促降解，且具有不良的生物可用性及藥物動力學。因此，仍需要具有改良之藥理學特性、避免全身細胞介素誘導的STING促效劑。
本文所述之一些實施例係關於抗體-藥物結合物(ADC)，其可誘發針對目標細胞的局部免疫反應，且因此展現減少的脫靶毒性，諸如在全身性投與之免疫刺激性化合物存在下所觀測到的脫靶毒性。
一些實施例提供一種抗體-藥物結合物(ADC)，其包含： 抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)；及 如本文所述的式(I)化合物； 其中該式(I)化合物與該抗原結合蛋白或其抗原結合片段經由丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺結合，該丁二醯亞胺共價連接至該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子。
一些實施例提供一種抗體-藥物結合物(ADC)，其具有式： Ab-(S*-M 1-(D)) p 其中： Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； M 1為丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺； 下標p為整數2至8；且 各(D)為如本文所述的式(I)之藥物-連接子單元。
在一些實施例中，式(I)具有以下結構： 其中可變基團R 1、R 2、R 3、X A及X B如本文所定義。
一些實施例提供式(II)化合物： 其中M、L、R 1、R 2、R 3、X A及X B如本文所定義。
一些實施例提供一種抗體-藥物結合物，其具有以下結構： ， 其中Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)，S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子，下標p為整數2至8，且其餘可變基團如本文所定義。在一些實施例中，Ab結合CD228。在一些實施例中，Ab結合αvβ6。在一些實施例中，Ab結合B7-H4。
一些實施例提供一種抗體-藥物結合物，其具有以下結構： ， 其中Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)，S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子，下標p為整數2至8，且其餘可變基團如本文所定義。在一些實施例中，Ab結合CD228。在一些實施例中，Ab結合αvβ6。在一些實施例中，Ab結合B7-H4。
一些實施例提供一種抗體-藥物結合物，其具有結構： ， 其中Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)，S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子，下標p為整數2至8，且其餘可變基團如本文所定義。在一些實施例中，Ab結合CD228。在一些實施例中，Ab結合αvβ6。在一些實施例中，Ab結合B7-H4。
一些實施例提供一種抗體-藥物結合物(ADC)，其具有式： Ab-(S*-(D')) p 其中： Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； D'為藥物-連接子單元，其為如本文所述之式(IV)化合物的基團；且 下標p為整數2至8。
在一些實施例中，式(IV)具有以下結構： 其中變數如本文中所定義。
一些實施例提供一種抗體-藥物結合物，其具有以下結構： ， 其中Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)，S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子，下標p為整數2至8，且其餘可變基團如本文所定義。在一些實施例中，Ab結合CD228。在一些實施例中，Ab結合αvβ6。在一些實施例中，Ab結合B7-H4。
一些實施例提供一種抗體-藥物結合物，其具有以下結構： ， 其中Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)，S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子，下標p為整數2至8，且其餘可變基團如本文所定義。在一些實施例中，Ab結合CD228。在一些實施例中，Ab結合αvβ6。在一些實施例中，Ab結合B7-H4。
一些實施例提供式(III)化合物： 其中變數如本文中所定義。
一些實施例提供一種具有式(V)結構之化合物： 其中變數如本文中所定義。
一些實施例提供一種組成物，其包含如本文所述之ADC之分佈。
一些實施例提供一種治療有需要之個體之癌症的方法，其包含向該個體投與治療有效量的如本文所述之ADC組成物。
一些實施例提供一種治療有需要之個體之癌症的方法，其包含向該個體投與治療有效量的如本文所述之ADC。
一些實施例提供一種誘導有需要之個體發生抗腫瘤免疫反應的方法，其包含向該個體投與治療有效量的如本文所述之ADC組成物。
一些實施例提供一種誘導有需要之個體發生抗腫瘤免疫反應的方法，其包含向該個體投與治療有效量的如本文所述之ADC。
對序列表之參考
本申請案連同序列表一起正以電子格式提申。序列表作為2023年4月26日創建之名稱為SGENE.010WO.xml的檔案提供，其大小為954,186個位元組。電子格式之序列表中的資訊以全文引用之方式併入本文中。
本文提供抗體-藥物結合物(ADC)，其可誘發針對目標細胞的局部免疫反應且因此減少脫靶毒性，例如相較於在全身投與免疫刺激性化合物(諸如STING促效劑)之情況下通常觀測到的毒性。此類化合物的活體內毒性通常與全身免疫活化有關，引起在靶與脫靶免疫反應。本文所述之ADC包括STING促效劑作為藥物有效負載，以提供選擇性誘導的局部免疫活化。參見例如Milling等人, Adv. Drug Deliv. Rev.2017: 114; 79-101；亦參見Hu等人, EBioMedicine2019: 41; 497-508。此方法可遞送特異性STING活化，以及局部的免疫細胞募集，同時減少全身免疫活化及其伴隨副作用。 定義
除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語具有與本發明所屬領域中具通常知識者通常所理解相同的含義。本文描述用於本申請案之方法及材料；在本發明之一些態樣中，亦使用此項技術中已知的其他適合方法及材料。該等材料、方法及實例僅具說明性且不希望具限制性。本文提及的所有出版物、專利申請案、專利、序列、資料庫條目及其他參考文獻均以全文引用的方式併入。在有抵觸的情況下，將以本說明書(包括定義)為準。除非上下文另外指明，否則當本文使用商標時，該商標包括商標產品的產品調配物、通用藥物及活性醫藥成分。
如本文所用，術語「一(a/an)」或「該」不僅包括一個成員之態樣，而且包括超過一個成員之態樣。舉例而言，除非上下文另外明確規定，否則單數形式「一(a/an)」及「該」包括複數個提及物。因此，例如，提及「連接子」包括提及一或多種此類連接子，且提及「細胞」包括提及複數個此類細胞。
術語「約」當提及數值或數值範圍時，意謂所提及之數值或數值範圍為近似值，例如實驗偏差及/或實驗統計誤差內的近似值，且因此，數值或數值範圍的變化幅度可為所述數值或數值範圍的至多±10%。關於包含如本文所述之ADC分佈的ADC組成物，該組成物中與抗體結合之STING促效劑化合物的平均數目可為整數或非整數，尤其是當抗體將部分負載時。因此，在平均藥物負載值之前敍述的術語「約」旨在捕捉ADC組成物內之藥物負載的預期變化。如本文所用，術語「抗原結合蛋白或其抗原結合片段」係指能夠結合至所需目標抗原之肽、多肽、蛋白質或蛋白質片段。抗原結合蛋白或其抗原結合片段包括抗體、完整抗體及抗體片段。在一些態樣中，所需目標抗原為CD228或CD228片段。在一些態樣中，指定的目標抗原為ανβ6或ανβ6片段。在一些態樣中，指定的目標抗原為B7-H4或B7-H4片段。
如本文所用，術語「抗體」涵蓋完整單株抗體、多株抗體、單特異性抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)，包括完整抗體及抗原結合抗體片段以及其中一或多個鏈間二硫鍵斷裂的其還原形式，其展現所需生物活性，且限制條件為抗原結合抗體片段對於所需數目個連接基團(諸如如本文所述之連接子(L))具有必需數目個連接點。在一些態樣中，連接子經由丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺連接至還原之鏈間二硫鍵之半胱胺酸殘基及/或藉由基因工程改造引入之半胱胺酸殘基的硫原子。抗體之原生形式為四聚體且特徵為兩對相同的免疫球蛋白鏈對，各對具有一個輕鏈及一個重鏈。各對中的輕鏈可變域及重鏈可變域(VL及VH)一起主要負責對抗原之結合。輕鏈及重鏈可變域含有間雜有三個高變區(亦稱為「互補決定區」或「CDR」)的構架區。在一些實施例中，輕鏈及重鏈亦含有被免疫系統識別且與免疫系統相互作用的恆定區。(參見例如Janeway等人, 2001, Immuno. Biology, 第 5 版, Garland Publishing, New York)。抗體包括任何同型(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)或其亞類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。抗體來源於任何適合物種。在一些態樣中，抗體為人類或鼠類來源的，且在一些態樣中，抗體為人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體。在一些態樣中，抗體發生不同程度的岩藻糖基化或去岩藻糖基化。
「完整抗體」為按抗體類別之需要包含抗原結合可變區以及輕鏈恆定域(C L)及重鏈恆定域(C H1、C H2、C H3及C H4)之抗體。恆定域為原生序列恆定域(例如人類原生序列恆定域)或其胺基酸序列變異體。
「抗體片段」包含完整抗體之一部分，包含其抗原結合區或可變區。本發明之抗體片段包括至少一個半胱胺酸殘基(天然或經工程改造)，其提供連接子及/或連接子-藥物化合物的連接點。在一些態樣中，抗體片段包括Fab、Fab'或F(ab') 2。
如本文所用，術語「經工程改造的半胱胺酸殘基」或「eCys殘基」係指併入抗體中之半胱胺酸胺基酸或其衍生物。在一些態樣中，一或多個eCys殘基併入抗體中，且典型地，eCys殘基併入抗體重鏈或輕鏈中。一般而言，藉由對親本抗體之核酸序列進行誘變以編碼具有半胱胺酸或其衍生物的一或多個胺基酸殘基來使eCys殘基併入抗體中。適合突變包括用半胱胺酸或其衍生物置換抗體輕鏈或重鏈中的所需殘基，將另一個半胱胺酸或其衍生物併入抗體輕鏈或重鏈中的所需位置，以及將另一個半胱胺酸或其衍生物添加至胺基酸之所需重鏈或輕鏈的N端及/或C端。其他資訊可見於美國專利第9,000,130號，其內容全部併入本文中。半胱胺酸(Cys)之衍生物包括但不限於β-2-Cys、β-3-Cys、高半胱胺酸及N-甲基半胱胺酸。
在一些態樣中，本發明之抗體包括具有一或多個經工程改造之半胱胺酸(eCys)殘基的彼等抗體。在一些態樣中，半胱胺酸(Cys)之衍生物包括但不限於β-2-Cys、β-3-Cys、高半胱胺酸及N-甲基半胱胺酸。
「抗原」為抗體特異性結合的實體。
術語「CD228」、「黑色素轉鐵蛋白」、「MELTF」、「p97」及「MF12」在本文中可互換地使用，且除非另外說明，否則包括人類CD228的天然存在之任何變異體(例如剪接變異體、對偶基因變異體)、同功型及脊椎動物物種同源物。術語涵蓋未處理的「全長」CD228以及細胞內處理所產生之CD228的任何形式。例示性人類CD228之胺基酸序列提供於Uniprot # P08582中。CD228為糖基化磷脂醯肌醇錨定的醣蛋白且最初鑑定為惡性黑色素瘤細胞的97 kDa細胞表面標記物。CD228過度表現於大部分臨床黑色素瘤分離株上且亦在多種人類癌瘤上觀測到。已顯示CD228表現於多種癌症中。
術語「αvβ6」、「ανβ6」、「αvβ6」、「avb6」、「α-vβ-6」或「β6」在本文中可互換使用，且除非另外說明，否則包括人類ανβ6的天然存在之任何變異體(例如剪接變異體、對偶基因變異體)、同功型及脊椎動物物種同源物。術語涵蓋未處理的「全長」αvβ6以及細胞內處理所產生之αvβ6的任何形式。例示性β6人類序列被賦予GenBank登錄號AAA36122。例示性αv人類序列被賦予NCBI NP_002201.1。αvβ6為結合細胞外基質蛋白(諸如纖維連接蛋白)的細胞黏附受體。αvβ6由αv亞單元及β6亞單元構成，且在包括非小細胞肺癌(NSCLC)的多種癌症中上調。NSCLC為最常見的肺癌類型。在過去的一年，逾200,000人經診斷患有肺癌，肺癌為癌症死亡之主要原因。
術語「B7-H4」、「B7X」、「B7H4」、「B7S1」、「B7h.5」、「VCTN1」或「PRO1291」在本文中可互換使用，且除非另外說明，否則包括人類B7-H4之天然存在之任何變異體(例如剪接變異體、對偶基因變異體)、同功型及脊椎動物物種同源物。術語涵蓋未處理的「全長」B7-H4以及細胞內處理所產生之B7-H4的任何形式。例示性人類B7-H4之胺基酸序列提供於Uniprot # Q7Z7D3中。B7-H4為一種免疫調控分子，其與其他B7家族成員(包括PD-L1)共享同源性。人類B7-H4由 VTCN1編碼。其為包含IgV與IgC胞外域的I型跨膜蛋白。雖然健康組織中的B7-H4表現在蛋白質層面上相對有限，但B7-H4表現於若干實體腫瘤中，諸如乳房、卵巢及子宮內膜之婦科癌瘤。B7-H4表現於腫瘤中傾向於與不良預後相關。B7-H4之受體未知，但咸信其表現於T細胞上。咸信B7-H4直接抑制T細胞活性。
術語「特異性結合(specific binding)及「特異性結合(specifically binds)」意謂抗體或其抗體片段將以選擇性方式與其相應目標抗原結合而與多種其他抗原不結合。典型地，抗體或抗體片段以至少約1×10 - 7M之親和力結合，例如10 - 8M至10 - 9M、10 - 10M、10 - 11M或10 - 12M，且結合至預定抗原的親和力比其結合至除預定抗原或密切相關抗原之外之非特異性抗原(例如BSA、酪蛋白)的親和力大至少兩倍。
如本文所用，術語「胺基酸」係指天然及非天然及蛋白質性胺基酸。例示性胺基酸包括但不限於丙胺酸、精胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺、組胺酸、甘胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、離胺酸、白胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、脯胺酸、色胺酸、纈胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、鳥胺酸、β-丙胺酸、瓜胺酸、絲胺酸甲基醚、天冬胺酸甲酯、麩胺酸甲酯、高絲胺酸甲基醚及N,N-二甲基離胺酸。
如本文所用，「糖部分」係指單醣(例如哌喃醣或呋喃醣)的單價基團。糖部分可包含半縮醛或羧酸(來自側接-CH 2OH基團之氧化)。在一些態樣中，糖部分呈β-D構形。在一些態樣中，糖部分為葡萄糖、葡糖醛酸或甘露糖基團。
術語「抑制(inhibit)」或「抑制(inhibition of」意謂降低可量測之量或完全預防(例如100%抑制)。
術語「治療有效量」係指本文所述之ADC有效治療哺乳動物之疾病或病症的量。在癌症之情況下，治療有效量之ADC提供以下生物效應中之一或多者：減少癌細胞數目；減小腫瘤尺寸；抑制癌細胞浸潤至周邊器官中；抑制腫瘤轉移；在一定程度上抑制腫瘤生長；及/或在一定程度上緩解與癌症相關之一或多種症狀。對於癌症療法而言，在一些態樣中，藉由評估疾病進展時間(TTP)及/或測定反應率(RR)來量測功效。
除非上下文另外指示或暗示，否則術語「實質性」或「實質上」係指群體、混合物或樣品之大部分，亦即，＞50%，典型地大於50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。
術語「細胞內裂解(intracellularly cleaved)」及「胞內裂解(intracellular cleavage)」係指細胞內部發生的代謝過程或反應，其中細胞機器作用於ADC或其片段，以在細胞內釋放ADC之游離藥物或其其他降解產物。由代謝過程或反應產生之部分因此為胞內代謝物。
術語「癌症」及「癌變」係指或描述哺乳動物中典型地以不受調控之細胞生長為特徵的生理病狀。「腫瘤」包含多個癌細胞。
如本文所用，「個體」係指ADC所投與的個體。「個體」之實例包括但不限於哺乳動物，諸如人類、大鼠、小鼠、天竺鼠、非人類靈長類動物、豬、山羊、牛、馬、犬、貓、鳥及家禽。典型地，個體為大鼠、小鼠、犬、非人類靈長類動物或人類。在一些態樣中，個體為人類。
除非上下文另外指示或暗示，否則術語「治療(treat)」或「治療(treatment)」係指治療性治療及防止復發之預防性措施，其中目的為抑制不希望發生的生理變化或病症，諸如癌症之惡化或擴散。出於本發明的目的，有益或所需的臨床結果包括但不限於症狀的緩解、疾病程度的減輕、疾病狀態的穩定(亦即，不惡化)、疾病惡化的延遲或減緩、疾病狀態的改善或緩和，以及緩解(不論部分或全部)，不論可偵測或不可偵測。在一些態樣中，「治療」亦意謂相較於預期存活期(若未接受治療)，存活期延長。
在癌症之情形下，術語「治療」包括以下中之任一者或全部：抑制癌細胞或腫瘤生長；抑制癌細胞複製；減輕總體腫瘤負荷或減少癌細胞數目；及改善與疾病相關之一或多種症狀。
如本文所用，術語「鹽」係指化合物(諸如藥物單元(D)、連接子(諸如本文所述之連接子)或ADC)的有機或無機鹽。在一些態樣中，化合物含有至少一個胺基，且因此，可與胺基形成酸加成鹽。例示性鹽包括但不限於硫酸鹽、三氟乙酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、丹寧酸鹽(tannate)、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、丁二酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、葡糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽(亦即，1,1'-亞甲基-雙(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。鹽可涉及另一分子(諸如乙酸根離子、丁二酸根離子或其他相對離子)之包含。在一些態樣中，相對離子可為使母化合物上之電荷穩定的任何有機或無機部分。另外，鹽在其結構中具有一個或超過一個帶電荷原子。在存在多個帶電荷原子作為鹽之一部分的情況下，可存在多個相對離子。因此，鹽可具有一或多個帶電荷原子及/或一或多個相對離子。「醫藥學上可接受之鹽」為適合投與個體的如本文所述之鹽且在一些態樣中包括以下文獻中所述的鹽：P. H. Stahl及C. G. Wermuth編, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, Weinheim/Zürich:Wiley-VCH/VHCA, 2002，其清單以全文引用的方式特別併入本文中。
如本文所用，術語「互變異構體」係指其結構因原子排列而顯著不同、但容易且快速達成平衡的化合物，且應瞭解，在一些情況下，本文所提供的化合物被描繪為不同的互變異構體，且當化合物具有互變異構形式時，所有互變異構形式意欲屬於本發明的範疇內，且化合物命名不排除任何互變異構體。
術語「鹵基」或「鹵素」係指氟、氯、溴或碘(例如在一些態樣中，氟或氯)。
術語「烷基」係指未取代的甲基或直鏈或分支鏈飽和烴，該飽和烴具有指定碳原子數(例如「C 1-C 4烷基」、「C 1-C 6烷基」、「C 1-C 8烷基」或「C 1-C 10」烷基分別具有1至4、1至6、1至8、或1至10個碳原子)且藉由自母烷烴移除一個氫原子而衍生。代表性「C 1-C 8烷基」包括但不限於甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基及正辛基；而分支鏈C 1-C 8烷基包括但不限於異丙基、二級丁基、異丁基、三級丁基、異戊基及2-甲基丁基。
術語「伸烷基」係指亞甲基或未取代的二價飽和分支鏈或直鏈烴，其具有所述碳原子數(例如C 1-C 6伸烷基具有1至6個碳原子)且具有兩個單價基團中心，該兩個基團中心係藉由自母烷烴之同一個或兩個不同碳原子移除兩個氫原子而衍生。在一些態樣中，伸烷基經1至6個氟基取代，例如在直鏈或分支鏈伸烷基之碳主鏈上經取代(如-CHF-或-CF 2-)或末端碳上經取代(諸如-CHF 2或-CF 3)。伸烷基包括但不限於：亞甲基(-CH 2-)、伸乙基(-CH 2CH 2-)、伸正丙基(-CH 2CH 2CH 2-)、伸正丙基(-CH 2CH 2CH 2-)、伸正丁基(-CH 2CH 2CH 2CH 2-)、二氟亞甲基(-CF 2-)、四氟伸乙基(-CF 2CF 2-)及其類似基團。
術語「烯基」係指未取代的直鏈或分支鏈烴，其具有至少一個碳-碳雙鍵及指定碳原子數(例如「C 2-C 8烯基」或「C 2-C 10烯基」分別具有2至8個或2至10個碳原子)。當未指定碳原子數時，烯基具有2至6個碳原子。
術語「炔基」係指未取代的直鏈或分支鏈烴，其具有至少一個碳-碳參鍵及指定碳原子數(例如「C 2-C 8炔基」或「C 2-C 10」炔基分別具有2至8個或2至10個碳原子)。當未指定碳原子數時，炔基具有2至6個碳原子。
術語「雜烷基」係指穩定的直鏈或分支鏈飽和烴，其具有規定原子總數及至少一個(例如1至15個)選自由O、N、Si及S組成之群的雜原子。在一些態樣中，雜烷基中的碳及雜原子被氧化(例如以形成酮、N-氧化物、碸及其類似物)且在一些態樣中，氮原子發生四級銨化。雜原子安置在雜烷基之任何內部位置或雜烷基與分子其餘部分連接之位置。在一些態樣中，雜烷基經1至6個氟基取代，例如在直鏈或分支鏈雜烷基之碳主鏈上經取代(如-CHF-或-CF 2-)或末端碳上經取代(諸如-CHF 2或-CF 3)。雜烷基之實例包括但不限於-CH 2-CH 2-O-CH 3、-CH 2-CH 2-NH-CH 3、-CH 2-CH 2-N(CH 3) 2、-C(=O)-NH-CH 2-CH 2-NH-CH 3、-C(=O)-N(CH 3)-CH 2-CH 2-N(CH 3) 2、-C(=O)-NH-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 3、-C(=O)-N(CH 3)-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(=O)-CH 2-CH 3、-O-CH 2-CH 2-CH 2-NH(CH 3)、-O-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3) 2、-O-CH 2-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 3、-O-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(=O)-CH 2-CH 3、-CH 2-CH 2-CH 2-NH(CH 3)、-O-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3) 2、-CH 2-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 3、-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(=O)-CH 2-CH 3、-CH 2-S-CH 2-CH 3、-CH 2-CH 2-S(O)-CH 3、-NH-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 3、-CH 2-CH 2-S(O) 2-CH 3、-CH 2-CH 2-O-CF 3及-Si(CH 3) 3。在一些態樣中，至多兩個雜原子為鄰接的，諸如-CH 2-NH-OCH 3及-CH 2-O-Si(CH 3) 3。末端聚乙二醇(PEG)部分為雜烷基的一種類型。
術語「伸雜烷基」係指衍生自雜烷基(如本文所定義)之未取代的二價直鏈或分支鏈基團。伸雜烷基之實例包括但不限於-CH 2-CH 2-O-CH 2-、-CH 2-CH 2-O-CF 2-、-CH 2-CH 2-NH-CH 2-、-C(=O)-NH-CH 2-CH 2-NH-CH 2- -C(=O)-N(CH 3)-CH 2-CH 2-N(CH 3)-CH 2-、-C(=O)-NH-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 2-、-C(=O)-N(CH 3)-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(=O)-CH 2-CH 2-、-O-CH 2-CH 2-CH 2-NH-CH 2-、-O-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3)-CH 2-、-O-CH 2-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 2-、-O-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(=O)-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-NH-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3)-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(=O)-CH 2-CH 2-、-CH 2-CH 2-NH-C(=O)-、-CH 2-CH 2-N(CH 3)-CH 2-、-CH 2-CH 2-N +(CH 3) 2-、-NH-CH 2-CH 2(NH 2)-CH 2-及-NH-CH 2-CH 2(NHCH 3)-CH 2-。二價聚乙二醇(PEG)部分為伸雜烷基的一種類型。
術語「烷氧基」係指經由氧原子與分子連接之如本文所定義之烷基。舉例而言，烷氧基包括但不限於甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、二級丁氧基、三級丁氧基、正戊氧基及正己氧基。
術語「烷硫基」係指經由氧原子與分子連接之如本文所定義之烷基。舉例而言，烷硫基包括但不限於硫基甲基、硫基乙基、硫基正丙基、硫基異丙基及其類似基團。
術語「鹵烷基」係指具有指定碳原子數的未取代之直鏈或分支鏈飽和烴(例如「C 1-C 4烷基」、「C 1-C 6烷基」、「C 1-C 8烷基」或「C 1-C 10」烷基分別具有1至4個、1至6個、1至8個或1至10個碳原子)，其中烷基之至少一個氫原子經鹵素(例如氟、氯、溴或碘)置換。當未指定碳原子數時，鹵烷基具有1至6個碳原子。代表性C 1 - 6鹵烷基包括但不限於三氟甲基、2,2,2-三氟乙基及1-氯異丙基。
術語「鹵烷氧基」係指經由氧原子與分子連接之如本文所定義之鹵烷基。舉例而言，鹵烷氧基包括但不限於三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基及1,1,1-三氟2-甲基丙氧基。
術語「環烷基」係指具有指定碳原子數的飽和或部分不飽和環狀烴(例如「C 3 - 8環烷基」或「C 3 - 6」環烷基分別具有3至8個或3至6個碳原子)。當未指定碳原子數時，環烷基具有3至6個碳原子。環烷基包括橋接、稠合及螺接的環系統，以及其中一個環為芳族且另一者為不飽和的橋接雙環系統。代表性「C 3 - 6環烷基」包括環丙基、環丁基、環戊基及環己基。
術語「芳基」係指藉由自母芳族環系統之單個碳原子移除一個氫原子而衍生的具有6至10個碳原子之未取代單價碳環芳族烴基。芳基包括但不限於苯基、萘基、蒽基、聯苯及其類似基團。
術語「雜環」係指飽和或部分不飽和環或多縮合環系統，包括橋接、稠合及螺接環系統。在一些態樣中，雜環藉由環系統中之原子總數描述，例如3員至10員雜環具有3至10個總環原子。該術語包括在環中具有約1至6個碳原子及約1至3個選自由氧、氮及硫組成之群之雜原子的單飽和或部分不飽和環(例如3、4、5、6或7員環)。在一些態樣中，該環經一或多個(例如1、2或3個)側氧基取代且硫及氮原子亦可以其氧化形式存在。此類環包括但不限於氮雜環丁烷基、四氫呋喃基及哌啶基。術語「雜環」亦包括多縮合環系統(例如包含2、3或4個環之環系統)，其中單個雜環(如上文所定義)可與一或多個雜環(例如十氫萘啶基)、碳環(例如十氫喹啉基)或芳基縮合。在一些態樣中，多縮合環系統中的環在價數要求允許時可經由稠合、螺接及橋接鍵彼此連接。應瞭解，多縮合環系統(如上文關於雜環所定義)之連接點可處於多縮合環系統之任何位置，包括環之雜環、芳基及碳環部分。亦應理解，雜環或雜環多縮合環系統之連接點可處於雜環或雜環多縮合環系統之任何適合原子處，包括碳原子及雜原子(例如氮)。例示性雜環包括但不限於氮雜環丙烷基、氮雜環丁烷基、吡咯啶基、哌啶基、高哌啶基、𠰌啉基、硫代𠰌啉基、哌𠯤基、四氫呋喃基、二氫㗁唑基、四氫哌喃基、四氫硫哌喃基、1,2,3,4-四氫喹啉基、苯并㗁𠯤基、二氫㗁唑基、𠳭烷基、1,2-二氫吡啶基、2,3-二氫苯并呋喃基、1,3-苯并間二氧雜環戊烯基及1,4-苯并二㗁烷基。
術語「雜芳基」係指在單個環內或在稠環系統內具有至少一個選自由O、N及S組成之群之雜原子的芳族烴環系統。該環或環系統在共軛π系統中具有4n +2個電子，其中促成共軛π系統之所有原子在同一平面中。在一些態樣中，雜芳基具有5至10個總環原子及1、2或3個雜原子(稱為「5至10員雜芳基」)。雜芳基包括但不限於咪唑、三唑、噻吩、呋喃、吡咯、苯并咪唑、吡唑、吡𠯤、吡啶、嘧啶及吲哚。
術語「羥基」係指-OH基團。
術語「氰基」係指-CN基團。
術語「羧基」係指-C(=O)OH基團。
術語「側氧基」係指=O基團。
如作為抗體-藥物結合物(ADC)之一部分使用的術語「丁二醯亞胺」係指： ，其中波浪線指示連接至藥物-連接子單元或抗原結合蛋白或其抗原結合片段。
如作為抗體-藥物結合物(ADC)之一部分使用的術語「水解的丁二醯亞胺」係指： ，其中波浪線指示連接至藥物-連接子單元或抗原結合蛋白或其抗原結合片段。
術語「視情況經取代」表示所提及的部分未經取代或經指定基團取代。
熟習此項技術者應瞭解，具有對掌性中心之本發明化合物可以光學活性及外消旋形式存在且分離。
如本文所用，術語「游離藥物」係指不與抗體共價連接之生物活性物種。因此，游離藥物係指任何未結合的化合物，包括自ADC裂解後隨即存在的化合物。在一些態樣中，釋放機制係經由ADC中之可裂解連接子，或經由ADC之胞內轉化或代謝。在一些態樣中，游離藥物將質子化及/或可以帶電荷部分之形式存在。游離藥物為一種能夠發揮所需生物效應之藥理學活性物種。在一些態樣中，藥理學活性物種為單獨的母藥。在一些態樣中，藥理學活性物種為鍵結至ADC之組分或殘留物(例如尚未經歷後續胞內代謝之連接子、丁二醯亞胺、水解丁二醯亞胺及/或抗體組分)的母藥。在一些態樣中，游離藥物係指如本文所述的式(I)化合物，例如其中X B、Y、W、A及M 1中之一或多者不存在。在一些態樣中，游離藥物係指如本文所述的式(II)化合物。在一些態樣中，游離藥物係指如本文所述的式(II-A)化合物。在一些態樣中，游離藥物係指如本文所述的式(III)化合物。在一些態樣中，游離藥物係指如本文所述的式(IV)化合物。在一些態樣中，游離藥物係指如本文所述的式(V)化合物。
如本文所用，術語「藥物單元」係指在ADC中與抗原結合蛋白或其抗原結合片段結合的游離藥物，如本文所述。在一些態樣中，藥物單元包括使藥物與抗原結合蛋白或其抗原結合片段結合之不可裂解連接組分的全部或部分。
如本文所用，術語「藥物-連接子單元」係指藥物及使藥物與抗原結合蛋白或其抗原結合片段結合的連接組分(不論可裂解或不可裂解)。
如本文所用，術語「抗體-藥物結合物」或簡稱「ADC」係指抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)與藥物單元的結合物，如本文所述。在一些態樣中，抗體-藥物結合物典型地結合至細胞表面上的目標抗原(例如CD228、ανβ6或B7-H4)，隨後抗體-藥物結合物被內化至細胞中，在細胞中釋放藥物單元。
如本文所用，術語「ADC組成物」係指包含ADC之分佈的組成物，該等ADC具有不同數目個藥物單元與抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)的結合物。 抗體-藥物結合物(ADC)化合物
一些實施例提供一種抗體-藥物結合物(ADC)，其包含： 抗原結合蛋白或其抗原結合片段；及 如本文所述的式(I)化合物； 其中該式(I)化合物與該抗原結合蛋白或其抗原結合片段經由丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺結合，該丁二醯亞胺共價連接至半胱胺酸殘基的硫原子。
一些實施例提供一種抗體-藥物結合物(ADC)，其具有式： Ab-(S*-M 1-(D)) p 其中： Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； M 1為丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺； 下標p為整數2至8；且 各(D)為式(I)之藥物-連接子單元： ， 其中： 表示L共價連接至M 1； R 1為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； 各R 2及R 3獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F； 各R A、R B、R C、R D、R E及R F獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標m獨立地為0或1； 各下標q為整數0至6； X A為-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X B不存在或為2員至16員伸雜烷基； X B、M 1及L各自獨立地視情況經選自PEG2至PEG72的PEG單元取代；且 L為如本文所述的視情況存在之連接子。當存在時，L經由共價鍵連接至X B、或X A(若X B不存在)，如式(I)中所描繪。當L不存在時，M 1經由共價鍵連接至X B、或X A(若X B不存在)，如式(I)中所描繪。
在一些實施例中，M 1為丁二醯亞胺。在一些實施例中，M 1為水解的丁二醯亞胺。應理解，水解的丁二醯亞胺可以兩種區位異構形式存在。彼等形式就鍵結至*S-Ab之M 1之水解舉例說明如下，其中表示來自該水解之區位異構體的結構為式M 1a及M 1b；其中鄰接於鍵的波浪線表示共價連接至式(I)。
M或M 1基團當存在時能夠共價連接至抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)、連接至A基團(當存在時)(或者，若下標a及/或下標w及/或下標y為0，則W、Y或X B基團)。就此而言，抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)具有可與官能基M或M 1形成鍵的官能基。在一些實施例中，天然地或經由化學操縱而存在於抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)上的適用官能基包括但不限於硫氫基(-SH)、胺基、羥基、羧基及碳水化合物之變旋異構羥基。在一個態樣中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)官能基為硫氫基及胺基。在一些實施例中，藉由使抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)之分子內二硫鍵還原而產生硫氫基。或者，在一些實施例中，使用2-亞胺基硫雜環戊烷(妥特氏試劑(Traut's reagent))或另一種產生硫氫基的試劑、藉由使抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)之離胺酸部分之胺基發生反應來產生硫氫基。在一些實施例中，M或M 1與抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)之硫原子形成鍵。在一些實施例中，硫原子來源於抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)之硫氫基。
在一些實施例中，L具有式-(A) a-(W) w-(Y) y-，其中： A為視情況經1至3個R a1取代之C 2 - 20伸烷基；或視情況經1至3個R b1取代之2員至40員伸雜烷基； 各R a1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R b1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d1及R e1獨立地為氫或C 1 - 3烷基； W為1至12個胺基酸或具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至A或M 1； *表示共價連接至式(I)中之Y、X A或X B； Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分或不可裂解部分； 下標a為0或1； 下標y為0或1；且 下標w為0或1。
在一些實施例中，R 1為氫。在一些實施例中，R 1為羥基。在一些實施例中，R 1為C 1 - 6烷氧基。在一些實施例中，R 1為甲氧基。在一些實施例中，R 1為-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基。在一些實施例中，R 1為甲氧基乙基。在一些實施例中，R 1為PEG2至PEG4。
在一些實施例中，R 1為-(CH 2) n-NR AR B。在一些實施例中，R A與R B均為氫。在一些實施例中，R A及R B獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R A及R B中之一者為氫且R A及R B中之另一者為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，C 1 - 3烷基為甲基。在一些實施例中，各下標n為0。在一些實施例中，各下標n為1。在一些實施例中，各下標n為2。在一些實施例中，各下標n為3、4、5或6。
在一些實施例中，各R 2及R 3獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2與R 3相同。在一些實施例中，各R 2及R 3獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2與R 3不同。
在一些實施例中，R 2為-(C=O) m-NR CR D。在一些實施例中，R 3為-(C=O) m-NR CR D。在一些實施例中，R C與R D均為氫。在一些實施例中，R C及R D各自獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，C 1 - 3烷基為甲基。在一些實施例中，R C及R D中之一者為氫且R C及R D中之另一者為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，各下標m為0。在一些實施例中，各下標m為1。
在一些實施例中，R 2為-(CH 2) q-NR ER F。在一些實施例中，R 3為-(CH 2) q-NR ER F。在一些實施例中，R E與R F均為氫。在一些實施例中，R E與R F各自獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，C 1 - 3烷基為甲基。在一些實施例中，R E及R F中之一者為氫且R E及R F中之另一者為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，各下標q為0。在一些實施例中，各下標q為整數1至6。在一些實施例中，各下標q為1。在一些實施例中，各下標q為2。在一些實施例中，各下標q為3、4、5或6。
在一些實施例中，R 3為-CO 2H。在一些實施例中，R 2為-CO 2H。
在一些實施例中，X A為-CH 2-。在一些實施例中，X A為-O-。在一些實施例中，X A為-S-。在一些實施例中，X A為-NH-。在一些實施例中，X A為-N(CH 3)-。
在一些實施例中，X B為2員至16員伸雜烷基。在一些實施例中，X B為2員至12員伸雜烷基。在一些實施例中，X B為2員至10員伸雜烷基。在一些實施例中，X B為2員至8員伸雜烷基。在一些實施例中，X B為4員至8員伸雜烷基。在一些實施例中，伸雜烷基為直鏈。在一些實施例中，伸雜烷基為分支鏈。在一些實施例中，伸雜烷基為分支鏈，具有1至4個甲基。在一些實施例中，伸雜烷基為分支鏈，具有1或2個甲基。在一些實施例中，伸雜烷基經1至3個氟基取代。在一些實施例中，X B包含一或兩個氮原子。在一些實施例中，X B包含一或兩個側氧基。在一些實施例中，X B包含一個氮原子及一個側氧基。在一些實施例中，X B包含兩個氮原子及兩個側氧基。在一些實施例中，X B包含胺基甲酸酯。
在一些實施例中，Y與X B之共價連接包含醯胺。在一些實施例中，Y與X B之共價連接包含胺基甲酸酯。在一些實施例中，Y與X B之共價連接包含醚。
在一些實施例中，X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L (當存在時)或M 1。在一些實施例中，X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L (當存在時)或M 1。在一些實施例中，X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L (當存在時)或M 1。在一些實施例中，X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L (當存在時)或M 1。在一些實施例中，X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L (當存在時)或M 1。在一些實施例中，X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L (當存在時)或M 1。
在一些實施例中，X B選自由以下結構組成之群，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L (當存在時)或M 1。
在一些實施例中，X B及L中之一者經選自PEG2至PEG72的PEG單元取代，如本文所述。在一些實施例中，X B及L各自經獨立選自PEG2至PEG72的PEG單元取代，如本文所述。在一些實施例中，選自PEG2至PEG72的各PEG單元可在PEG8至PEG12、PEG12至PEG24、或PEG36至PEG72範圍內。在一些實施例中，選自PEG2至PEG72的各PEG單元為PEG8至PEG24。
在一些實施例中，X B及L未經取代。
在一些實施例中，R 1為甲氧基；R 2與R 3均為-C(=O)NH 2；且X A為-O-。
在一些實施例中，L不存在且X A-X B-M 1選自由以下組成之群： ； 其中 表示共價連接至式(I)之剩餘部分。
在一些實施例中，X A-X B-L係選自： ； 其中 表示共價連接至式(I)之剩餘部分。
在一些實施例中，R 1為甲氧基且R 2與R 3均為-C(=O)NH 2。在一些實施例中，X A為-O-且X B為 ，其中 表示共價連接至X A且*表示共價連接至L (當存在時)或M 1。在一些實施例中，R 1為甲氧基；R 2與R 3均為-C(=O)NH 2；X A為-O-；且X B為 ；其中 表示共價連接至X A且*表示共價連接至L (當存在時)或M 1。在一些實施例中，R 1為甲氧基；R 2與R 3均為-C(=O)NH 2；X A為-O-；X B為 ； 表示共價連接至X A且*表示共價連接至L；且下標a與下標y均為0。
在一些實施例中，X B不存在。
在一些實施例中，下標p為整數2至8、2至6、2至4、4至8、或6至8。在一些實施例中，下標p為2、4、6或8。在一些實施例中，下標p為2。在一些實施例中，下標p為4。在一些實施例中，下標p為6。在一些實施例中，下標p為8。在一些替代實施例中，下標p為整數1至16。因此，在本文所示的任一結構中，下標p可替代地定義為整數1至16。
在一些實施例中，X B不存在且L共價連接至X A。在一些實施例中，X B不存在且Y共價連接至X A。在一些實施例中，X B不存在且Y不存在，且W共價連接至X A。在一些實施例中，X B不存在，Y不存在，W不存在，且A共價連接至X A。
在一些實施例中，X B為2員至16員伸雜烷基且L共價連接至X B。在一些實施例中，X B為2員至16員伸雜烷基且Y共價連接至X B。在一些實施例中，X B為2員至16員伸雜烷基，Y不存在且W共價連接至X B。在一些實施例中，X B為2員至16員伸雜烷基，Y不存在，W不存在，且A共價連接至X B。
在一些實施例中，W 1為-OC(=O)-且下標y為1。在一些實施例中，X A為-O-且X B及W 1不存在。在一些實施例中，X A為NH或-O-，X B不存在，且W 1為-OC(=O)。在一些實施例中，X A為-N(CH 3)-，X B不存在且W 1為-OC(=O)。在一些實施例中，X A為-S-，X B不存在，且W 1為-OC(=O)。在一些實施例中，W 1為-OC(=O)-且X B經由-O-或-NH-共價連接至W。
在一些實施例中，A共價連接至M 1。在一些實施例中，當下標a為0時，W共價連接至M 1。在一些實施例中，當下標a為0且下標w為0時，Y共價連接至M 1。在一些實施例中，當下標a、y及w各自為0時，X B共價連接至M 1。
在一些實施例中，ADC具有下式： ， ，或 ， 其中： Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； R 1、R 2、R 3、X A、X B及L如上文關於式(I)所定義；且 各下標p獨立地為整數2至8。
在一些態樣中，ADC具有下式： ， 其中： Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； R 1、R 2、R 3、X A、X B及L如上文關於式(I)所定義；且 各下標p獨立地為整數2至8。
在一些態樣中，ADC具有下式： ， 其中： Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； R 1、R 2、R 3、X A、X B、Y、W及A如上文關於式(I)所定義； 各下標y獨立地為0或1； 各下標w獨立地為0或1； 各下標a獨立地為0或1；且 各下標p獨立地為整數2至8。
在一些實施例中，ADC具有下式： ， ，或 ， 其中： Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； R 1、R 2、R 3、L A、R H、Y、W及L B如下文關於式(II-A)所定義； 各下標y獨立地為0或1； 各下標w獨立地為0或1；且 各下標p獨立地為整數2至8。
在一些態樣中，ADC具有下式： ， 其中： Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； R 1、R 2、R 3、L A、R H、Y、W及L B如下文關於式(II-A)所定義； 各下標y獨立地為0或1； 各下標w獨立地為0或1；且 各下標p獨立地為整數2至8。
在一些實施例中，ADC具有下式： ， ，或 ， 其中： Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； R 1、R 2、R 3、L A、R H及L B如下文關於式(II-B)所定義；且 各下標p獨立地為整數2至8。
在一些態樣中，ADC具有下式： ， 其中： Ab為抗體； R 1、R 2、R 3、L A、R H及L B如下文關於式(II-B)所定義；且 各下標p獨立地為整數2至8。
一些實施例提供一種抗體-藥物結合物(ADC)，其具有式： Ab-(S*-(D')) p 其中： Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； D'為藥物-連接子單元，其為如下文所述之式(IV)化合物的基團；且 下標p為整數2至8。
在一些實施例中，式(IV)化合物之基團包含式(IV)內之取代基M的基團。在一些實施例中，藥物-連接子單元D'具有以下結構： ， ，或 ， 其中***指示連接至S*且其餘變數如下文關於式(IV)所定義。
在一些態樣中，藥物-連接子單元D'具有以下結構： ， 其中***指示連接至S*且其餘變數如下文關於式(IV)所定義。
在一些實施例中，ADC具有下式： ， ，或 ， 其中： Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； 各下標p獨立地為整數2至8；且 其餘變數如下文關於式(IV)所定義。
在一些態樣中，ADC具有下式： ， 其中： Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； 各下標p獨立地為整數2至8；且 其餘變數如下文關於式(IV)所定義。
一些實施例提供選自由以下組成之群的抗體-藥物結合物(ADC)： ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； 及其醫藥學上可接受之鹽， 其中： Ab為抗原結合蛋白或其抗原結合片段(例如抗體)； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子；且 各下標p獨立地為整數2至8。
上文所示的結構包括所有互變異構形式。因此，舉例而言，以下結構： 應理解為涵蓋以下互變異構形式： 、 、 ，及 。 抗原結合蛋白及其片段(例如抗體)
在一些實施例中，抗體為多株抗體。在一些實施例中，抗體為單株抗體。在一些實施例中，抗體為嵌合抗體。在一些實施例中，抗體為人源化抗體。在一些實施例中，抗體為完全人類。在一些實施例中，抗體為抗原結合片段。
如本文所用，術語「單株抗體」係指自基本上均質之抗體群(亦即，構成該群體之個別抗體為相同的，但其中可少量存在可能天然存在之突變)獲得的抗體。單株抗體具有針對單一抗原部位的高度特異性。修飾語「單株」表示獲自基本上均質抗體群之抗體特性，且不應解釋為需要藉由任何特定方法產生抗體。
適用的多株抗體為衍生自免疫接種動物血清的非均質抗體分子群。適用的單株抗體為針對特定抗原決定子(例如癌細胞抗原、蛋白質、肽、碳水化合物、化學物質、核酸或其片段)之均質抗體群。在一些實施例中，針對所關注抗原之單株抗體(mAb)係藉由使用此項技術中已知之藉由細胞株連續培養來產生抗體分子的任何技術來製備。
適用的單株抗體包括但不限於人類單株抗體、人源化單株抗體，或嵌合人類-小鼠(或其他物種)單株抗體。抗體包括全長抗體及其抗原結合片段。人類單株抗體可藉由此項技術中已知眾多技術中之任一者來製備(例如Teng等人, 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA.80:7308-7312; Kozbor等人, 1983, Immunology Today4:72-79; 及Olsson等人, 1982, Meth. Enzymol. 92:3-16)。
在一些實施例中，抗體包括特異性結合至目標細胞(例如癌細胞抗原)之抗體或與癌細胞或基質結合之其他抗體的功能活性片段、衍生物或類似物。就此而言，「功能活性」意謂該片段、衍生物或類似物能夠特異性結合至目標細胞。為了確定哪些CDR序列結合抗原，在使用抗原、藉由此項技術中已知之任何結合分析方法(例如Biacore分析)的結合分析中，典型地使用含有CDR序列之合成肽(參見例如Kabat等人, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版，國立衛生研究院(National Institute of Health), Bethesda, Md; Kabat E等人, 1980, J. Immunology125(3):961-969)。
另外，典型地使用標準重組DNA技術獲得之包含人類與非人類部分的重組抗體(諸如嵌合及人源化單株抗體)為適用抗體。嵌合抗體為其中不同部分來源於不同動物物種之分子，諸如具有來源於鼠類單株之可變區及來源於人類免疫球蛋白之恆定區的彼等分子。參見例如美國專利第4,816,567號；及美國專利第4,816,397號，其以全文引用之方式併入本文中。人源化抗體為來自非人類物種之抗體分子，其具有一或多個來自非人類物種之CDR及來自人類免疫球蛋白分子之構架區。參見例如美國專利第5,585,089號，其以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，此類嵌合及人源化單株抗體係藉由此項技術中已知之重組DNA技術產生，例如使用以下文獻中所述之方法產生：國際公開案第WO 87/02671號；歐洲專利公開案第0 184 187號；歐洲專利公開案第0 171 496號；歐洲專利公開案第0 173 494號；國際公開案第WO 86/01533號；美國專利第4,816,567號；歐洲專利公開案第012 023號；Berter等人, 1988, Science240:1041-1043; Liu等人, 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA84:3439-3443; Liu等人, 1987, J. Immunol. 139:3521-3526; Sun等人, 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA84:214-218; Nishimura等人, 1987, Cancer. Res.47:999-1005; Wood等人, 1985, Nature314:446-449; 及Shaw等人, 1988, J. Natl. Cancer Inst. 80:1553-1559; Morrison, 1985, Science229:1202-1207; Oi等人, 1986, BioTechniques4:214; 美國專利第5,225,539號; Jones等人, 1986, Nature321: 522-525; Verhoeyan等人, 1988, Science239:1534; 及Beidler等人, 1988, J. Immunol.141:4053-4060; 各文獻以全文引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，抗體為完全人類抗體。在一些實施例中，使用不能表現內源免疫球蛋白重鏈及輕鏈基因、但能夠表現人類重鏈及輕鏈基因之轉殖基因小鼠產生抗體。
在一些實施例中，抗體為完整或完全還原的抗體。術語『完全還原』意謂指其中所有四個鏈間二硫鍵已經還原以提供八個可連接至連接子(L)之硫醇的抗體。
在一些實施例中，連接至抗體係經由硫醚、胺或醯胺鍵聯，該等鍵聯來自原生及/或工程化半胱胺酸、離胺酸或甲硫胺酸殘基或來自經工程改造以參與環加成反應(諸如點擊反應)(與相應連接子中間物之反應)的胺基酸殘基。參見例如Maerle等人, PLOS One2019: 14(1); e0209860。在一些實施例中，抗體為完整或完全還原抗體，或為攜有工程化半胱胺酸、離胺酸或甲硫胺酸基團的抗體，該基團經修飾具有官能基，該官能基可參與例如點擊化學或其他環加成反應以便連接如本文所述之ADC之其他組分(例如狄爾斯-阿爾德反應(Diels-Alder reactions)或其他[3+2]或[4+2]環加成)。
特異性結合至癌細胞抗原之抗體可市購或藉由熟習此項技術者已知之任何方法產生，諸如化學合成或重組表現技術。編碼特異性結合至癌細胞抗原之抗體的核苷酸序列可獲自例如GenBank資料庫或類似資料庫、文獻出版物，或藉由常規選殖及定序獲得。
在一些實施例中，抗體係用於治療癌症(例如FDA及/或EMA批准之抗體)。特異性結合至癌細胞抗原之抗體可市購或藉由熟習此項技術者已知之任何方法產生，諸如重組表現技術。編碼特異性結合至癌細胞抗原之抗體的核苷酸序列可獲自例如GenBank資料庫或類似資料庫、文獻出版物，或藉由常規選殖及定序獲得。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至淋巴球上表現之受體或受體複合物。受體或受體複合物可包含免疫球蛋白基因超家族成員、TNF受體超家族成員、整合素、細胞介素受體、趨化因子受體、主要組織相容蛋白、凝集素或補體控制蛋白。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至癌細胞抗原。應理解，ADC中之抗體組分為呈殘基形式之抗體，使得本文所述之ADC結構中的「Ab」併入抗體結構。
可用於治療癌症之抗體及特異性結合至腫瘤相關抗原之抗體的非限制性實例揭示於Franke, A. E., Sievers, E. L., 及Scheinberg, D. A., "Cell surface receptor-targeted therapy of acute myeloid leukemia: a review" Cancer Biother Radiopharm. 2000,15, 459-76; Murray, J. L., "Monoclonal antibody treatment of solid tumors: a coming of age" Semin Oncol. 2000, 27, 64-70; Breitling, F., 及Dubel, S., Recombinant Antibodies, John Wiley, and Sons, New York, 1998，該等文獻各自以全文引用的方式併入本文中。
下文提供結合至癌細胞抗原及免疫細胞抗原中之一或多者的抗體實施例。
適用於治療癌症之目標抗原及相關抗體以及特異性結合至癌細胞抗原(亦稱為腫瘤抗原)之抗體的非限制性實例包括B7-DC (例如目錄#PA5-20344)；BCMA；B7-H3 (例如伊諾珠單抗(enoblituzumab)、安博他單抗(omburtamab)、MGD009、MGC018、DS-7300)；B7-H4 (例如目錄#14-5949-82)；B7-H6 (例如目錄#12-6526-42)；B7-H7；C5補體(例如BCD-148；CAN106)；CA-125；CA9 (例如吉妥昔單抗(girentuximab))；CCR8 (例如JTX-1811)；CLEC12A (例如特泊迪單抗(tepoditamab))；CSPG4 (例如美國專利第10,822,427號)；CCNB1；DDR1；de2-7 EGFR (例如MAb 806)；DPEP1；DR4 (例如馬帕木單抗(mapatumumab))；內皮唾酸蛋白(例如安妥珠單抗(ontuxizumab))；ENPP1；EPCAM (例如阿達木單抗(adecatumumab))；EPHA2；ERBB2 (例如曲妥珠單抗(trastuzumab))；ERBB3；ERVMER34_1；FAP (例如西羅珠單抗(sibrotuzumab))；FasL；FGFR2 (例如阿普妥單抗(aprutumab))；FGFR4 (例如MM-161)；FLT3 (例如4G8SDIEM)；FBP；FucGM1 (例如BMS-986012)；FZD8；G250；GAGE；GD2 (例如迪奴圖單抗(dinutuximab))；gpNMB (例如格巴妥木單抗(glembatumumab))；GPR87；GUCY2C (例如印多沙單抗(indusatumab))；HAVCR2；IDO1；ITGB6；ITGB8；L1CAM (例如JCAR023)；MRC1 (例如ThermoFisher目錄#12-2061-82)；ML-IAP (例如88C570，ThermoFisher目錄#40958)；NT5E (例如7G2，ThermoFisher目錄#41-0200)；OY-TES1；p53；p53突變體；PAX5；PDPN (例如ThermoFisher目錄#14-5381-82)；VSIR (例如ThermoFisher目錄#PA5-52493)；樹凝素2 (例如ThermoFisher目錄#MA5-16250)；PAX3 (例如GT1210，ThermoFisher目錄#MA5-31583)；唾液酸基-Thomsen-nouveau抗原(例如Eavarone等人, PLoS One, 2018; 13(7): e0201314)；PDGFR-B (例如利奴單抗(rinucumab))；ADAM12 (例如目錄#14139-1-AP)；ADAM9 (例如IMGC936)；AFP (例如ThermoFisher目錄#PA5-25959)；AGR2 (例如ThermoFisher目錄#PA5-34517)；AKAP-4 (例如目錄#PA5-52230)；雄激素受體(例如ThermoFisher目錄#MA5-13426)；ALPP (例如目錄#MA5-15652)；CD44 (例如RG7356)；AMHR2 (例如ThermoFisher目錄#PA5-13902)；ANTXR1 (例如目錄#MA1-91702)；ARTN (例如ThermoFisher目錄#PA5-47063)；αvβ6；CA19-9 (例如AbGn-7；MVT-5873)；癌胚抗原(例如阿西莫單抗(arcitumomab)；賽妥珠單抗(cergutuzumab)；阿姆介白素(amunaleukin)；拉貝珠單抗(labetuzumab))；CD115 (例如阿克利單抗(axatilimab)；卡比拉單抗(cabiralizumab)；艾瑪圖單抗(emactuzumab))；CD137 (例如ADG106；CTX-471)；CD147 (例如加維莫單抗(gavilimomab)；美妥珠單抗(metuzumab))；CD155 (例如美國公開案第2018/0251548號)；CD274 (例如阿德雷單抗(adebrelimab)；阿特珠單抗(atezolizumab)；加瑞利單抗(garivulimab))；CDCP1 (例如RG7287)；CDH3 (例如PCA062)；CDH6 (例如HKT288)；CEACAM1；CEACAM6；CLDN18.1 (例如唑貝昔單抗(zolbetuximab))；CLDN18.2 (例如唑貝昔單抗(zolbetuximab))；CLPTM1L；CS-1 (例如替加珠單抗(tigatuzumab))；GD3 (例如米妥莫單抗(mitumomab))；HLA-G (例如TTX-080)；IL1RAP (例如尼達尼單抗(nidanilimab))；LAG-3 (例如恩斯單抗(encelimab))；LY6G6D (例如PA5-23303)；LYPD1 (例如ThermoFisher目錄#PA5-26749)；MAD-CT-2；MAGEA3 (例如ThermoFisher目錄#60054-1-IG)；MAGEA4 (例如目錄#MA5-26117)；MAGEC2 (例如ThermoFisher目錄#PA5-64010)；MLANA (例如目錄#MA5-15237)；MELTF (例如ThermoFisher目錄#H00004241-M04A)；MSLN (例如5B2，目錄#MA5-11918)；MUC1 (例如MH1 (CT2)，ThermoFisher目錄#MA5-11202)；MUC5AC (例如45M1，目錄#MA5-12178)；MYCN (例如NCM-II 100，ThermoFisher目錄#MA1-170)；NCAM1 (例如ThermoFisher目錄#MA5-11563)；連接素-4 (例如恩弗妥單抗(enfortumab))；NY-BR-1 (例如NY-BR-1第2號，目錄#MA5-12645)；PSMA (例如BAY 2315497)；PSA (例如ThermoFisher目錄#PA1-38514；Daniels-Wells等人, BMC Cancer, 2013; 13:195)；PSCA (例如AGS-1C4D4)；PTK7 (例如考妥珠單抗(cofetuzumab))；PVRIG；Ras突變體(例如Shin等人, Sci Adv .2020; 6(3): eaay2174)；RET (例如WO2020210551)；RGS5 (例如TF-TA503075)；RhoC (例如ThermoFisher目錄PA5-77866)；ROR2 (例如BA3021)；ROS1 (例如WO2019107671)；SART3 (例如TF 18025-1-AP)；SLC12A2 (例如ThermoFisher目錄#13884-1-AP)；SLC38A1 (例如ThermoFisher目錄#12039-1-AP)；SLC39A6 (例如拉妥珠單抗(ladiratuzumab))；SLC44A4 (例如ASG-5ME)；SLC7A11 (例如ThermoFisher目錄#PA1-16893)；SLITRK6 (例如西曲妥單抗(sirtratumab))；SSX2 (例如ThermoFisher目錄#MA5-24971)；存活素(例如PA1-16836)；TACSTD2 (例如PA5-47074)；TAG-72 (例如MA1-25956)；TIGIT (例如艾吉利單抗(etigilimab))；TM4SF5 (例如18239-1-AP)；TMPRSS11D (例如PA5-30927)；TNFRSF12 (例如BAY-356)；TRAIL (例如目錄#12-9927-42)；Trem2 (例如PY314)；TRP-2 (例如PA5-52736)；uPAR (例如ATN-658)；UPK1B (例如ThermoFisher目錄#PA5-56863)；UPK2 (例如ThermoFisher目錄#PA5-60318)；UPK3B (例如ThermoFisher目錄#PA5-52696)；VEGF (例如GNR-011)；VEGFR2 (例如淨妥昔單抗(gentuximab))；CD44 (例如RG7356)；WT1 (例如ThermoFisher目錄#MA5-32215)；XAGE1 (例如ThermoFisher目錄#PA5-46413)；CTLA4 (例如伊匹單抗(ipilimumab))；精子蛋白質17 (例如BS-5754R)；TLR2/4/1 (例如托馬利單抗(tomaralimab))；B7-1 (例如加利昔單抗(galiximab))；ANXA1 (例如目錄#71-3400)；BCR-ABL；CAMPATH-1 (例如阿侖單抗(alemtuzumab)；ALLO-647；ANT1034)；CD123 (例如BAY-943；CSL360)；CD19 (例如ALLO-501)；CD20 (例如地沃利單抗(divozilimab)；替伊莫單抗(ibritumomab))；CD30 (例如伊妥木單抗(iratumumab))；CD33 (例如林妥珠單抗(lintuzumab)；BI 836858；AMG 673)；CD352 (例如SGN-CD352A)；CD37 (例如利洛托單抗(lilotomab)；GEN3009)；CD40 (例如達西組單抗(dacetuzumab)；盧卡木單抗(lucatumumab))；CD45 (例如阿帕米單抗(apamistamab))；CD48 (例如SGN-CD48A)；CXCR4 (例如尤洛庫單抗(ulocuplumab))；ETV6-AML (例如目錄#PA5-81865)；ROR1 (例如瑟吐珠單抗(cirmtuzumab))；CD74 (例如米拉組單抗(milatuzumab))；SIT1 (例如PA5-53825)；SLAMF7 (例如埃羅妥珠單抗(Elotuzumab))；Axl (例如BA3011；替維他單抗(tilvestamab))；唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素1-16 (參見例如Angata等人, Trends Pharmacol Sci. 2015; 36(10): 645-660)；SIRPa (例如目錄#17-1729-42)；SIRPg (例如PA5-104381)；OX40 (例如ABM193)；PROM1 (例如目錄#14-1331-82)；TMEM132A (例如目錄#PA5-62524)；TMEM40 (例如PA5-60636)；PD-1 (例如巴替利單抗(balstilimab)；布地哥利單抗(budigalimab)；蓋普坦單抗(geptanolimab))；ALK (例如DLX521)；CCR4 (例如AT008；莫加珠單抗-kpkc (mogamulizumab-kpkc))；CD27 (例如瓦利魯單抗(varlilumab))；CD278 (例如菲阿迪利單抗(feladilimab)；沃普瑞單抗(vopratelimab))；CD32 (例如mAb 2B6)；CD47 (例如來塔普利單抗(letaplimab)；馬羅單抗(magrolimab))；及CD70 (例如庫薩珠單抗(cusatuzumab))。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至與實體腫瘤及/或血液學癌症相關的癌細胞抗原。目標抗原及特異性結合至與實體腫瘤及/或血液學癌症目標抗原相關之癌細胞抗原之相關抗體的非限制性實例包括Axl (例如BA3011；替維他單抗(tilvestamab))；B7-H3 (例如伊諾珠單抗(enoblituzumab)、安博他單抗(omburtamab)、MGD009、MGC018、DS-7300)；B7-H4 (例如目錄#14-5949-82)；B7-H6 (例如目錄#12-6526-42)；B7-H7；唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素1-16 (參見例如Angata等人, Trends Pharmacol Sci .2015; 36(10): 645-660)；SIRPa (例如目錄#17-1729-42)；SIRPg (例如PA5-104381)；OX40 (例如ABM193)；PROM1 (例如目錄#14-1331-82)；TMEM132A (例如目錄#PA5-62524)；TMEM40 (例如PA5-60636)；PD-1 (例如巴替利單抗(balstilimab)、布地哥利單抗(budigalimab)、蓋普坦單抗(geptanolimab))；ALK (例如DLX521)；CCR4 (例如AT008；莫加珠單抗-kpkc (mogamulizumab-kpkc))；CD27 (例如瓦利魯單抗)；CD278 (例如菲阿迪利單抗(feladilimab)；沃普瑞單抗(vopratelimab))；CD32 (例如mAb 2B6)；CD47 (例如來塔普利單抗(letaplimab)；馬羅單抗(magrolimab))；及CD70 (例如庫薩珠單抗(cusatuzumab))。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至與實體腫瘤相關的癌細胞抗原。目標抗原及特異性結合至實體腫瘤相關目標抗原之相關抗體的非限制性實例包括PAX3 (例如GT1210，ThermoFisher #MA5-31583)；唾液酸基-Thomsen-nouveau抗原(例如Eavarone等人, PLoS One. 2018; 13(7): e0201314)；PDGFR-B (例如利奴單抗(rinucumab))；ADAM12 (例如目錄#14139-1-AP)；ADAM9 (例如IMGC936)；AFP (例如ThermoFisher目錄#PA5-25959)；AGR2 (例如ThermoFisher目錄#PA5-34517)；AKAP-4 (例如目錄#PA5-52230)；雄激素受體(例如ThermoFisher目錄#MA5-13426)；ALPP (例如目錄#MA5-15652)；CD44 (例如RG7356)；AMHR2 (例如ThermoFisher目錄#PA5-13902)；ANTXR1 (例如目錄#MA1-91702)；ARTN (例如ThermoFisher目錄#PA5-47063)；αvβ6；CA19-9 (例如AbGn-7；MVT-5873)；癌胚抗原(例如阿西莫單抗(arcitumomab)、賽妥珠單抗(cergutuzumab)、阿姆介白素(amunaleukin)、拉貝珠單抗(labetuzumab))；CD115 (例如阿克利單抗(axatilimab)、卡比拉單抗(cabiralizumab)、艾瑪圖單抗(emactuzumab))；CD137 (例如ADG106；CTX-471)；CD147 (例如加維莫單抗(gavilimomab)、美妥珠單抗(Metuzumab))；CD155 (例如美國公開案第2018/0251548號)；CD274 (例如阿德雷單抗(adebrelimab)、阿特珠單抗(atezolizumab)、加瑞利單抗(garivulimab))；CDCP1 (例如RG7287)；CDH3 (例如PCA062)；CDH6 (例如HKT288)；CEACAM1；CEACAM6)；CLDN18.1 (例如唑貝昔單抗(zolbetuximab))；CLDN18.2 (例如唑貝昔單抗(zolbetuximab))；CLPTM1L；CS-1 (例如替加珠單抗(tigatuzumab))；GD3 (例如米妥莫單抗(mitumomab))；HLA-G (例如TTX-080)；IL1RAP (例如尼達尼單抗)；LAG-3 (例如恩斯單抗(encelimab))；LY6G6D (例如PA5-23303)；LYPD1 (例如ThermoFisher目錄#PA5-26749)；MAD-CT-2；MAGEA3 (例如ThermoFisher目錄#60054-1-IG)；MAGEA4 (例如目錄#MA5-26117)；MAGEC2 (例如ThermoFisher目錄#PA5-64010)；MLANA (例如目錄#MA5-15237)；MELTF (例如ThermoFisher目錄#H00004241-M04A)；MSLN (例如5B2，目錄#MA5-11918)；MUC1 (例如MH1 (CT2)，ThermoFisher目錄#MA5-11202)；MUC5AC (例如45M1，目錄#MA5-12178)；MYCN (例如NCM-II 100，ThermoFisher目錄#MA1-170)；NCAM1 (例如ThermoFisher目錄#MA5-11563)；連接素-4 (例如恩弗妥單抗(enfortumab))；NY-BR-1 (例如NY-BR-1第2號，目錄#MA5-12645)；PSMA (例如BAY 2315497)；PSA (例如ThermoFisher目錄#PA1-38514；Daniels-Wells等人, BMC Cancer2013; 13:195)；PSCA (例如AGS-1C4D4)；PTK7 (例如考妥珠單抗(cofetuzumab))；PVRIG；Ras突變體(例如Shin等人, Sci Adv .2020; 6(3):eaay2174)；RET (例如WO2020210551)；RGS5 (例如TF-TA503075)；RhoC (例如ThermoFisher目錄PA5-77866)；ROR2 (例如BA3021)；ROS1 (例如WO2019107671)；SART3 (例如TF 18025-1-AP)；SLC12A2 (例如ThermoFisher目錄#13884-1-AP)；SLC38A1 (例如ThermoFisher目錄#12039-1-AP)；SLC39A6 (例如拉妥珠單抗(ladiratuzumab))；SLC44A4 (例如ASG-5ME)；SLC7A11 (例如ThermoFisher目錄#PA1-16893)；SLITRK6 (例如西曲妥單抗(sirtratumab))；SSX2 (例如ThermoFisher目錄#MA5-24971)；存活素(例如PA1-16836)；TACSTD2 (例如PA5-47074)；TAG-72 (例如MA1-25956)；TIGIT (例如艾吉利單抗(etigilimab))；TM4SF5 (例如18239-1-AP)；TMPRSS11D (例如PA5-30927)；TNFRSF12 (例如BAY-356)；TRAIL (例如目錄#12-9927-42)；Trem2 (例如PY314)；TRP-2 (例如PA5-52736)；uPAR (例如ATN-658)；UPK1B (例如ThermoFisher目錄#PA5-56863)；UPK2 (例如ThermoFisher目錄#PA5-60318)；UPK3B (例如ThermoFisher目錄#PA5-52696)；VEGF (例如GNR-011)；VEGFR2 (例如淨妥昔單抗(gentuximab))；CD44 (例如RG7356)；WT1 (例如ThermoFisher目錄#MA5-32215)；XAGE1 (例如ThermoFisher目錄#PA5-46413)；及CTLA4 (例如伊匹單抗(ipilimumab))。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至與血液學癌症相關的癌細胞抗原。目標抗原及特異性結合至血液學癌症細胞目標抗原之相關抗體的非限制性實例包括精子蛋白質17 (例如BS-5754R)；TLR2/4/1 (例如托馬利單抗(Tomaralimab))；B7-1 (例如加利昔單抗(galiximab))；ANXA1 (例如目錄#71-3400)；BCR-ABL；CAMPATH-1 (例如阿侖單抗(alemtuzumab)；ALLO-647；ANT1034)；CD123 (例如BAY-943；CSL360)；CD19 (例如ALLO-501)；CD20 (例如地沃利單抗(divozilimab)；替伊莫單抗(ibritumomab))；CD30 (例如伊妥木單抗(iratumumab))；CD33 (例如林妥珠單抗(lintuzumab)；BI 836858；AMG 673)；CD352 (例如SGN-CD352A)；CD37 (例如利洛托單抗(lilotomab)；GEN3009)；CD40 (例如達西組單抗(dacetuzumab)；盧卡木單抗(lucatumumab))；CD45 (例如阿帕米單抗(apamistamab))；CD48 (例如SGN-CD48A)；CXCR4 (例如尤洛庫單抗(ulocuplumab))；ETV6-AML (例如目錄#PA5-81865)；ROR1 (例如瑟吐珠單抗(cirmtuzumab))；CD74 (例如米拉組單抗(milatuzumab))；SIT1 (例如PA5-53825)；及SLAMF7 (例如埃羅妥珠單抗(elotuzumab))。
在一些實施例中，使用特異性結合至目標抗原(例如與疾病或病症相關的抗原)的抗體。特異性結合至目標抗原(例如與疾病或病症相關的抗原)的抗體可市購或藉由熟習此項技術者已知的任何方法產生，諸如重組表現技術。編碼特異性結合至目標抗原(例如與疾病或病症相關的抗原)之抗體的核苷酸序列可獲自例如GenBank資料庫或類似資料庫、文獻出版物，或藉由常規選殖及定序獲得。
目標抗原及特異性結合至目標抗原(例如與疾病或病症相關的抗原，或與免疫細胞相關的抗原)之相關抗體的非限制性實例包括CD163 (例如TBI 304H)；TIGIT (例如艾吉利單抗(etigilimab))；DCSIGN (參見例如國際公開案第WO2018134389號)；IFNAR1 (例如法拉莫單抗(faralimomab))；ASCT2 (例如依達單抗(idactamab)；ULBP1/2/3/4/5/6 (例如PA5-82302)；CLDN1 (例如INSERM抗密連蛋白-1)；CLDN2 (參見例如國際公開案第WO2018123949號)；IL-21R (例如PF-05230900)；DCIR；DCLK1 (參見例如國際公開案第WO2018222675號)；樹凝素1 (參見例如美國專利第9,045,542號)；GITR (例如拉吉利單抗(ragifilimab))；ITGAV (例如阿吐珠單抗(abituzumab))；LY9 (例如PA5-95601)；MICA (例如1E2C8，目錄#66384-1-IG)；MICB (例如目錄#MA5-29422)；NOX1 (例如目錄#PA5-103220)；CD2 (例如BTI-322；西利珠單抗(siplizumab))；CD247 (例如AFM15)；CD25 (例如巴利昔單抗(basiliximab))；CD28 (例如REGN5668)；CD3 (例如奧昔組單抗(otelixizumab)、維西珠單抗(visilizumab))；CD38 (例如菲澤妥單抗(felzartamab)；AMG 424)；CD3E (例如福雷蘆單抗(foralumab)、替利組單抗(teplizumab))；CD5 (例如MAT 304；阿佐莫單抗(zolimomab aritox))；ALPPL2 (例如目錄#PA5-22336)；B7-2 (例如目錄#12-0862-82)；B7-H3 (例如伊諾珠單抗(enoblituzumab)、安博他單抗(omburtamab)、MGD009、MGC018、DS-7300)；B7-H4 (例如目錄#14-5949-82)；B7-H6 (例如目錄#12-6526-42)；B7-H7；BAFF-R (例如目錄#14-9117-82)；BMPR2；BORIS；CD112 (參見例如美國公開案第20100008928號)；CD24 (參見例如美國專利第8,614,301號)；CD244 (例如R&D AF1039)；CD30L (參見例如美國專利第9926373號)；CD3D；CD3G；CD79A (參見例如國際公開案第WO 2020252110號)；CD83 (例如CBT004)；CD97；CDH17 (參見例如國際公開案第WO 2018115231號)；CLDN16；CLDN19；CYP1B1；DPEP3；DPP4；DSG2 (參見例如美國專利第10,836,823號)；EPHA受體；表皮生長因子；FAS；FGFR1 (例如RG7992)；FGFR3 (例如沃法單抗(vofatamab))；FN1；FOLR1 (例如法勒珠單抗(farletuzumab))；FSHR；FZD5；GM2 (例如BIW-8962)；GM3 (例如拉克妥單抗(racotumomab))；GPA33 (例如KRN330)；GPC3 (例如考曲妥珠單抗(codrituzumab))；HAS3；HLA-E；HLA-F；HLA-DR；ICAM1；IFNAR2；IL13Ra2；IL-5R (例如苯納珠單抗(benralizumab))；KISS1R；LAMP1；LAYN；LCK；豆莢蛋白(legumain)；LILRB2；LILRB4；LMP2；MAD-CT-1；MAGEA1 (例如目錄#MA5-11338)；MerTk (例如DS5MMER，目錄#12-5751-82)；MFSD13A；hTERT；gp100；Fas相關抗原1；金屬蛋白酶；Mincle (例如OTI2A8，目錄#TA505101)；NA17；NY-ESO-1 (例如E978m，目錄#35-6200)；聚唾液酸(參見例如Watzlawik等人, J Nat Sci .2015; 1(8):e141)；PR1；肉瘤易位斷裂點；SLC10A2 (例如ThermoFisher目錄#PA5-18990)；SLC17A2 (例如ThermoFisher目錄#PA5-106752)；SLC39A5 (例如ThermoFisher目錄#MA5-27260)；SLC6A15 (例如ThermoFisher目錄#PA5-52586)；SLC6A6 (例如ThermoFisher目錄#PA5-53431)；SLC7A5；及CALCR (參見例如國際公開案第WO 2015077826號)。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至與貧血相關的抗原。特異性結合至與貧血相關之抗原的抗體之非限制性實例包括CD163 (例如TBI 304H)。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至與病毒感染相關的抗原。目標抗原及特異性結合至與病毒感染相關之抗原之相關抗體的非限制性實例包括DCSIGN (參見例如國際公開案第WO2018134389號)；IFNAR1 (例如法拉莫單抗)；ASCT2 (例如依達單抗)；ULBP1/2/3/4/5/6 (例如PA5-82302)；及CLDN1 (例如INSERM抗密連蛋白-1)。
在一些實施例中，抗體可特異性結合至與自體免疫疾病相關的抗原。目標抗原及特異性結合至與自體免疫疾病相關之抗原之相關抗體的非限制性實例包括CLDN2 (參見例如國際公開案第WO 2018123949號)；IL-21R (例如PF-05230900)；DCIR；DCLK1 (參見例如WO2018222675)；樹凝素1 (參見例如美國專利第9,045,542號)；GITR (例如拉吉利單抗(ragifilimab))；ITGAV (例如阿吐珠單抗(abituzumab))；LY9 (例如PA5-95601)；MICA (例如1E2C8，目錄#66384-1-IG)；MICB (例如目錄#MA5-29422)；NOX1 (例如目錄#PA5-103220)；CD2 (例如BTI-322；西利珠單抗(siplizumab))；CD247 (例如AFM15)；CD25 (例如巴利昔單抗(basiliximab))；CD28 (例如REGN5668)；CD3 (例如奧昔組單抗(otelixizumab)；維西珠單抗(visilizumab))；CD38 (例如菲澤妥單抗(felzartamab)；AMG 424)；CD3E (例如福雷蘆單抗(foralumab)；替利組單抗(teplizumab))；及CD5 (例如MAT 304；阿佐莫單抗(zolimomab aritox))。
在一些實施例中，抗體為非靶向抗體，例如非結合或對照抗體。在一些實施例中，抗原為CD30。在一些實施例中，抗體為結合至CD30的抗體或抗原結合片段，諸如國際專利公開案第WO 02/43661號中所述。在一些實施例中，抗CD30抗體為cAC10，其描述於國際專利公開案第WO 02/43661號中。cAC10亦已知為本妥昔單抗(brentuximab)。在一些實施例中，抗CD30抗體包含cAC10之CDR。在一些實施例中，CDR如由Kabat編號方案所定義。在一些實施例中，CDR如由Chothia編號方案所定義。在一些實施例中，CDR如由IMGT編號方案所定義。在一些實施例中，CDR如由AbM編號方案所定義。在一些實施例中，抗CD30抗體包含CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3，其分別包含SEQ ID NO: 1、2、3、4、5及6之胺基酸序列。在一些實施例中，抗CD30抗體包含胺基酸序列與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致的重鏈可變區及胺基酸序列與SEQ ID NO: 8之胺基酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗CD30抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 9或SEQ ID NO: 10的重鏈及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 11的輕鏈。
在一些實施例中，本文所提供之抗體結合至EphA2。在一些實施例中，抗體包含CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3，其分別包含SEQ ID NO: 12、13、14、15、16及17之胺基酸序列。在一些實施例中，抗EphA2抗體包含胺基酸序列與SEQ ID NO: 18之胺基酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致的重鏈可變區及胺基酸序列與SEQ ID NO: 19之胺基酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致的輕鏈可變區。在一些實施例中，抗EphA2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 21的重鏈及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 22的輕鏈。在一些實施例中，抗EphA2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 23或SEQ ID NO: 24的重鏈及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 25的輕鏈。在一些實施例中，抗EphA2抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 26或SEQ ID NO: 27的重鏈及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 28的輕鏈。在一些實施例中，抗體為h1C1或1C1。
在一些實施例中，本文所揭示之ADC的目標抗原為CD228。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段為hL49 HALC hIgG1。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含以下6個CDR： 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29之CDR-H1； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30之CDR-H2； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31之CDR-H3； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32之CDR-L1； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 33之CDR-L2；及 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34之CDR-L3。
在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH與SEQ ID NO: 35之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性且該VL與SEQ ID NO: 36之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列且該VL包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 37或SEQ ID NO: 38的HC及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 39的LC。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 40或SEQ ID NO: 41的HC及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 42的LC。
在一些實施例中，本文所揭示之ADC的目標抗原為αvβ6。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段為h2A2 HCLG hIgG1。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含以下6個CDR： 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43之CDR-H1； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 44之CDR-H2； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 45之CDR-H3； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 46之CDR-L1； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 47之CDR-L2；及 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48之CDR-L3。
在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH與SEQ ID NO: 49之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性且該VL與SEQ ID NO: 50之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列且該VL包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 52的HC及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 53的LC。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 54或SEQ ID NO: 55的HC及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 56的LC。
在一些實施例中，本文所揭示之ADC的目標抗原為B7-H4。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段為B7H41001 hIgG1。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含以下6個CDR： 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57之CDR-H1； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58之CDR-H2； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59之CDR-H3； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 60之CDR-L1； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 61之CDR-L2；及 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62之CDR-L3。
在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH與SEQ ID NO: 63之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性且該VL與SEQ ID NO: 64之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列且該VL包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 65或SEQ ID NO: 66的HC及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 67的LC。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 68或SEQ ID NO: 69的HC及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 70的LC。
在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段選自由以下組成之群：B7H4-15461、B7H4-20500、B7H4-20501、B7H4-20502.1、B7H4-22208、B7H4-15462、B7H4-22213、B7H4-15465、B7H4-20506、B7H4-15483、B7H4-20513、B7H4-22216、B7H4-15489、B7H4-20516、B7H4-15472、B7H4-15503、B7H4-15495、B7H4-15478、B7H4-15441及B7H4-20496。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含分別選自由以下組成之群的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3及VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3序列： (a)    SEQ ID NOs: 71-76； (b)    SEQ ID NOs: 79-84； (c)    SEQ ID NOs: 87-92； (d)    SEQ ID NOs: 95-100； (e)    SEQ ID NOs: 103-108； (f)    SEQ ID NOs: 111-116； (g)    SEQ ID NOs: 119-124； (h)    SEQ ID NOs: 127-132； (i)    SEQ ID NOs: 135-140； (j)    SEQ ID NOs: 143-148； (k)    SEQ ID NOs: 151-156； (l)    SEQ ID NOs: 159-164； (m)   SEQ ID NOs: 167-172； (n)    SEQ ID NOs: 175-180； (o)    SEQ ID NOs: 183-188； (p)    SEQ ID NOs: 191-196； (q)    SEQ ID NOs: 199-204； (r)    SEQ ID NOs: 207-212； (s)    SEQ ID NOs: 215-220；及 (t)    SEQ ID NOs: 223-228。
在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH與分別選自由以下組成之群的胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性：SEQ ID NOs: 77、85、93、101、109、117、125、133、141、149、157、165、173、181、189、197、205、213、221及229，且該VL與分別選自由以下組成之群的胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性：SEQ ID NOs: 78、86、94、102、110、118、126、134、142、150、158、166、174、182、190、198、206、214、222及230。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH具有分別選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 77、85、93、101、109、117、125、133、141、149、157、165、173、181、189、197、205、213、221及229，且該VL具有分別選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 78、86、94、102、110、118、126、134、142、150、158、166、174、182、190、198、206、214、222及230。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含HC，該HC包含分別選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267及269；及LC，該LC包含分別選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NOs: 232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268及270。
在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含與SEQ ID NOs 271-1032之胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性的CDR、VH、VL、HC及LC序列。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含根據SEQ ID NOs 271-1032的CDR、VH、VL、HC及LC胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供結合CD228、αvβ6、B7-H4、EphA2或CD30的抗原結合蛋白(ABP)，包括其抗原結合片段(例如抗體及其抗原結合片段)。抗原結合蛋白及片段含有特異性結合至CD228、αvβ6、B7-H4、EphA2或CD30 (包括人類CD228、αvβ6、B7-H4、EphA2或CD30)的抗原結合域。在一些實施例中，抗CD228、抗αvβ6、抗B7-H4、抗EphA2或抗CD30抗體-藥物結合物(ADC)包含如上文所述之抗CD228、抗αvβ6、抗B7-H4、抗EphA2或抗CD30 ABP與本文所述之藥物-連接子的結合物。在一些實施例中，此等抗CD228 ADC係用於治療表現CD228的癌症，諸如黑色素瘤、胰臟癌、間皮瘤、大腸直腸癌、肺癌、甲狀腺癌、乳癌、膽管癌、食道癌及頭頸癌。在一些實施例中，此等抗B7-H4 ADC係用於治療表現B7-H4的癌症，諸如乳癌、卵巢癌、肺癌、子宮內膜癌、膽管癌或膽囊癌。在一些實施例中，此等抗αvβ6 ADC係用於治療表現αvβ6的癌症，諸如非小細胞肺癌(NSCLC)、頭頸癌、食道癌、乳癌、卵巢癌、膀胱癌、皮膚癌(SCC)、卵巢癌、子宮頸癌、胃癌及胰臟癌。在一些實施例中，此等抗CD30 ADC係用於治療表現CD30的疾病，諸如癌症、自體免疫疾病及其他感染性疾病。在其他實施例中，此等抗CD30 ADC係用於治療實體及液體腫瘤，以及自體免疫疾病，諸如HIV及AIDS。在一些實施例中，此等抗EphA2 ADC係用於治療表現EphA2的癌症，諸如食道癌、膀胱癌、腎細胞癌、大腸癌、卵巢癌、子宮內膜癌、子宮頸癌或黑色素瘤。 序列表
SEQ ID NO 描述 序列
1 cAC10 CDR-H1 DYYIT
2 cAC10 CDR-H2 WIYPGSGNTKYNEKFKG
3 cAC10 CDR-H3 YGNYWFAY
4 cAC10 CDR-L1 KASQSVDFDGDSYMN
5 cAC10 CDR-L2 AASNLES
6 cAC10 CDR-L3 QQSNEDPWT
7 cAC10 VH QIQLQQSGPEVVKPGASVKISCKASGYTFTDYYITWVKQKPGQGLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGKATLTVDTSSSTAFMQLSSLTSEDTAVYFCANYGNYWFAYWGQGTQVTVSA
8 cAC10 VL DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDFDGDSYMNWYQQKPGQPPKVLIYAASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQQSNEDPWTFGGGTKLEIK
9 cAC10 HC QIQLQQSGPEVVKPGASVKISCKASGYTFTDYYITWVKQKPGQGLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGKATLTVDTSSSTAFMQLSSLTSEDTAVYFCANYGNYWFAYWGQGTQVTVSAAST KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
10 cAC10 HC v2 QIQLQQSGPEVVKPGASVKISCKASGYTFTDYYITWVKQKPGQGLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGKATLTVDTSSSTAFMQLSSLTSEDTAVYFCANYGNYWFAYWGQGTQVTVSAAST KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
11 cAC10 LC DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDFDGDSYMNWYQQKPGQPPKVLIYAASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQQSNEDPWTFGGGTKLEIKR TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
12 h1C1 CDR-H1 HYMMA
13 h1C1 CDR-H2 RIGPSGGPTHYADSVKG
14 h1C1 CDR-H3 YDSGYDYVAVAGPAEYFQH
15 h1C1 CDR-L1 RASQSISTWLA
16 h1C1 CDR-L2 KASNLHT
17 h1C1 CDR-L3 QQYNSYSRT
18 h1C1 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSS
19 h1C1 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTEFSLTISGLQPDDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIK
20 h1C1 HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
21 h1C1 HC v2 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
22 h1C1 LC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTEFSLTISGLQPDDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
23 h1C1 mIgG2a HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
24 h1C1 mIgG2a HC v2 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPG
25 h1C1 mκ LC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTEFSLTISGLQPDDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
26 h1C1 mIgG2a LALAPG HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNAAGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLGAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
27 h1C1 mIgG2a LALAPG HC v2 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYMMAWVRQAPGKGLEWVSRIGPSGGPTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGYDSGYDYVAVAGPAEYFQHWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNAAGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLGAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPG
28 h1C1 LALAPG mκ LC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTEFSLTISGLQPDDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
29 hL49 HA CDR-H1 SGYWN
30 hL49 HA CDR-H2 YISDSGITYYNPSLKS
31 hL49 HA CDR-H3 RTLATYYAMDY
32 hL49 LC CDR-L1 RASQSLVHSDGNTYLH
33 hL49 LC CDR-L2 RVSNRFS
34 hL49 LC CDR-L3 SQSTHVPPT
35 hL49 HA VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSITSGYWNWIRQPPGKGLEYIGYISDSGITYYN PSLKSRVTISRDTSKNQYSLKLSSVTAADTAVYYCARRTLATYYAMDYWGQGTLVTVSS
36 hL49 LC VL DFVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRASQSLVHSDGNTYLHWYQQRPGQSPRLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPTFGQGTKLEIK
37 hL49 HA HC QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSITSGYWNWIRQPPGKGLEYIGYISDSGITYYNPSLKSRVTISRDTSKNQYSLKLSSVTAADTAVYYCARRTLATYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
38 hL49 HA HC v2 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSITSGYWNWIRQPPGKGLEYIGYISDSGITYYNPSLKSRVTISRDTSKNQYSLKLSSVTAADTAVYYCARRTLATYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
39 hL49 LC LC DFVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRASQSLVHSDGNTYLHWYQQRPGQSPRLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
40 hL49 HA LALAKA HC QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSITSGYWNWIRQPPGKGLEYIGYISDSGITYYNPSLKSRVTISRDTSKNQYSLKLSSVTAADTAVYYCARRTLATYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
41 hL49 HA LALAKA HC v2 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSITSGYWNWIRQPPGKGLEYIGYISDSGITYYNPSLKSRVTISRDTSKNQYSLKLSSVTAADTAVYYCARRTLATYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
42 hL49 LC LALAKA LC DFVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRASQSLVHSDGNTYLHWYQQRPGQSPRLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
43 H2A2 HC CDR-H1 DYNVN
44 H2A2 HC CDR-H2 VINPKYGTTRYNQKFKG
45 H2A2 HC CDR-H3 GLNAWDY
46 H2A2 LG CDR-L1 GASENIYGALN
47 H2A2 LG CDR-L2 GATNLED
48 H2A2 LG CDR-L3 QNVLTTPYT
49 h2A2 HC VH QFQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYNVNWVRQAPGQGLEWIGVINPKYGTTRYNQKFKGRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRGLNAWDYWGQGTLVTVSS
50 h2A2 LG VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCGASENIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGATNLEDGVPSRFSGSGSGRDYTFTISSLQPEDIATYYCQNVLTTPYTFGQGTKLEIK
51 h2A2 HC HC QFQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYNVNWVRQAPGQGLEWIGVINPKYGTTRYNQKFKGRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRGLNAWDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
52 h2A2 HC HC v2 QFQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYNVNWVRQAPGQGLEWIGVINPKYGTTRYNQKFKGRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRGLNAWDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
53 h2A2 LG LC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCGASENIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGATNLEDGVPSRFSGSGSGRDYTFTISSLQPEDIATYYCQNVLTTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
54 h2A2 HC LALAKA HC QFQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYNVNWVRQAPGQGLEWIGVINPKYGTTRYNQKFKGRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRGLNAWDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
55 h2A2 HC LALAKA HC v2 QFQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYNVNWVRQAPGQGLEWIGVINPKYGTTRYNQKFKGRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRGLNAWDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
56 h2A2 LG LALAKA LC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCGASENIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGATNLEDGVPSRFSGSGSGRDYTFTISSLQPEDIATYYCQNVLTTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
57 B7H41001 CDR-H1 SGSYYWG
58 B7H41001 CDR-H2 NIYYSGSTYYNPSLRS
59 B7H41001 CDR-H3 EGSYPNQFDP
60 B7H41001 CDR-L1 RASQSVSSNLA
61 B7H41001 CDR-L2 GASTRAT
62 B7H41001 CDR-L3 QQYHSFPFT
63 B7H41001 VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLRSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNQFDPWGQGTLVTVSS
64 B7H41001 VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIK
65 B7H41001 HC QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLRSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNQFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
66 B7H41001 HC v2 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLRSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNQFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
67 B7H41001 LC EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
68 B7H41001 LALAKA HC QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLRSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNQFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
69 B7H41001 LALAKA HC v2 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLRSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNQFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
70 B7H41001 LALAKA LC EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
71 B7H4-15461 CDR-H1 GSISSSSYYWG
72 B7H4-15461 CDR-H2 NIYYSGSTYYNPSLKS
73 B7H4-15461 CDR-H3 AREGSYPNWFDP
74 B7H4-15461 CDR-L1 RASQSVSSNLA
75 B7H4-15461 CDR-L2 GASTRAT
76 B7H4-15461 CDR-L3 QQYHSFPFT
77 B7H4-15461 VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNWFDPWGQGTLVTVSS
78 B7H4-15461 VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIK
79 B7H4-20500 CDR-H1 GSIKSGSHYWG
80 B7H4-20500 CDR-H2 NIYYSGSTYYNPSLRS
81 B7H4-20500 CDR-H3 AREGSYPNWFDP
82 B7H4-20500 CDR-L1 RASQSVSSNLA
83 B7H4-20500 CDR-L2 GASTRAT
84 B7H4-20500 CDR-L3 QQYHSFPFT
85 B7H4-20500 VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSHYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLRSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNWFDPWGQGTLVTVSS
86 B7H4-20500 VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIK
87 B7H4-20501 CDR-H1 GSIKSGSHYWG
88 B7H4-20501 CDR-H2 NIYYSGSTYYNPSLKS
89 B7H4-20501 CDR-H3 AREGSYPNWLDP
90 B7H4-20501 CDR-L1 RASQSVSSNLA
91 B7H4-20501 CDR-L2 GASTRAT
92 B7H4-20501 CDR-L3 QQYHSFPFT
93 B7H4-20501 VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSHYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNWLDPWGQGTLVTVSS
94 B7H4-20501 VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIK
95 B7H4-20502.1 CDR-H1 GSIKSGSYYWG
96 B7H4-20502.1 CDR-H2 NIYYSGSTYYNPSLKS
97 B7H4-20502.1 CDR-H3 AREGSYPNQFDP
98 B7H4-20502.1 CDR-L1 RASQSVSSNLA
99 B7H4-20502.1 CDR-L2 GASTRAT
100 B7H4-20502.1 CDR-L3 QQYHSFPFT
101 B7H4-20502.1 VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNQFDPWGQGILVTVSS
102 B7H4-20502.1 VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIK
103 B7H4-22208 CDR-H1 GSIKSGSHYWG
104 B7H4-22208 CDR-H2 NIYYSGSTYYNPSLKS
105 B7H4-22208 CDR-H3 AREGSYPNWFDP
106 B7H4-22208 CDR-L1 RASQSVSTNLA
107 B7H4-22208 CDR-L2 DASARVT
108 B7H4-22208 CDR-L3 QQYHSFPFT
109 B7H4-22208 VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSHYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNWFDPWGQGTLVTVSS
110 B7H4-22208 VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSTNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASARVTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIK
111 B7H4-15462 CDR-H1 GSISSSSYYWG
112 B7H4-15462 CDR-H2 NIYYSGSTYYNPSLKS
113 B7H4-15462 CDR-H3 AREGSYTTVLNV
114 B7H4-15462 CDR-L1 RASQSVSSSYLA
115 B7H4-15462 CDR-L2 GASSRAT
116 B7H4-15462 CDR-L3 QQAASYPLT
117 B7H4-15462 VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYTTVLNVWGQGTMVTVSS
118 B7H4-15462 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAASYPLTFGGGTKVEIK
119 B7H4-22213 CDR-H1 GSIGRGSYYWG
120 B7H4-22213 CDR-H2 NIYYSGSTYYNPSLKS
121 B7H4-22213 CDR-H3 AREGSYTTVLNV
122 B7H4-22213 CDR-L1 RASQSVASSHLA
123 B7H4-22213 CDR-L2 DAVSRAT
124 B7H4-22213 CDR-L3 QQAASYPLT
125 B7H4-22213 VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIGRGSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYTTVLNVWGQGTMVTVSS
126 B7H4-22213 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVASSHLAWYQQKPGQAPRLLIYDAVSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAASYPLTFGGGTKVEIK
127 B7H4-15465 CDR-H1 GSISSGGYYWS
128 B7H4-15465 CDR-H2 NIYYSGSTYYNPSLKS
129 B7H4-15465 CDR-H3 ARESSTISADFDL
130 B7H4-15465 CDR-L1 RASQGISRWLA
131 B7H4-15465 CDR-L2 AASSLQS
132 B7H4-15465 CDR-L3 QQAHTFPYT
133 B7H4-15465 VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESSTISADFDLWGRGTLVTVSS
134 B7H4-15465 VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAHTFPYTFGGGTKVEIK
135 B7H4-20506 CDR-H1 GSISHGGYYWS
136 B7H4-20506 CDR-H2 NIYYSGSTYYNPSLKS
137 B7H4-20506 CDR-H3 ARESSTISADFDL
138 B7H4-20506 CDR-L1 RASQGISRWLA
139 B7H4-20506 CDR-L2 AASSLQS
140 B7H4-20506 CDR-L3 QQAHTFPYT
141 B7H4-20506 VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTASGGSISHGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESSTISADFDLWGRGTLVTVSS
142 B7H4-20506 VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAHTFPYTFGGGTKVEIK
143 B7H4-15483 CDR-H1 GSISSGGYYWS
144 B7H4-15483 CDR-H2 NIYYSGSTYYNPSLKS
145 B7H4-15483 CDR-H3 ARGLSTIDEAFDP
146 B7H4-15483 CDR-L1 RASQSISSWLA
147 B7H4-15483 CDR-L2 KASSLES
148 B7H4-15483 CDR-L3 QQDNSYPYT
149 B7H4-15483 VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGLSTIDEAFDPWGQGTLVTVSS
150 B7H4-15483 VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQDNSYPYTFGGGTKVEIK
151 B7H4-20513 CDR-H1 GSISDGSYYWS
152 B7H4-20513 CDR-H2 NIYYSGSTYYNPSLRS
153 B7H4-20513 CDR-H3 ARGLSTIDEAFDP
154 B7H4-20513 CDR-L1 RASQSISSWLA
155 B7H4-20513 CDR-L2 KASSLES
156 B7H4-20513 CDR-L3 QQDNSYPYT
157 B7H4-20513 VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDGSYYWSWIRQHPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLRSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGLSTIDEAFDPWGQGTLVTVSS
158 B7H4-20513 VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQDNSYPYTFGGGTKVEIK
159 B7H4-22216 CDR-H1 GSISDGSYYWS
160 B7H4-22216 CDR-H2 NIYYSGSTYYNPSLRS
161 B7H4-22216 CDR-H3 ARGLSTIDEAFDP
162 B7H4-22216 CDR-L1 RASKSISSWLA
163 B7H4-22216 CDR-L2 EASSLHS
164 B7H4-22216 CDR-L3 QQDNSYPYT
165 B7H4-22216 VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISDGSYYWSWIRQHPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLRSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGLSTIDEAFDPWGQGTLVTVSS
166 B7H4-22216 VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASKSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLHSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQDNSYPYTFGGGTKVEIK
167 B7H4-15489 CDR-H1 GSISSYYWS
168 B7H4-15489 CDR-H2 YIYSSGSTNYNPSLKS
169 B7H4-15489 CDR-H3 ARGSGQYAAPDYGMD
170 B7H4-15489 CDR-L1 RASQSISSWLA
171 B7H4-15489 CDR-L2 KASSLES
172 B7H4-15489 CDR-L3 QQDNSFPFT
173 B7H4-15489 VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYSSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGSGQYAAPDYGMDVWGQGTTVTVSS
174 B7H4-15489 VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQDNSFPFTFGGGTKVEIK
175 B7H4-20516 CDR-H1 GSIISYYWG
176 B7H4-20516 CDR-H2 YIYSSGSTSYNPSLKS
177 B7H4-20516 CDR-H3 ARGSGLYAAPDYGLDV
178 B7H4-20516 CDR-L1 RASQSISSWLA
179 B7H4-20516 CDR-L2 KASSLES
180 B7H4-20516 CDR-L3 QQDNSFPFT
181 B7H4-20516 VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIISYYWGWIRQPPGKGLEWIGYIYSSGSTSYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGSGLYAAPDYGLDVWGQGTTVTVSS
182 B7H4-20516 VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQDNSFPFTFGGGTKVEIK
183 B7H4-15472 CDR-H1 FTFSSYAMS
184 B7H4-15472 CDR-H2 TISGSGGSTYYADSVKG
185 B7H4-15472 CDR-H3 ARGAGHYDLVGRY
186 B7H4-15472 CDR-L1 RASQSISSYLN
187 B7H4-15472 CDR-L2 AASSLQS
188 B7H4-15472 CDR-L3 QQLYSLPPT
189 B7H4-15472 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAGHYDLVGRYWGQGTLVTVSS
190 B7H4-15472 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQLYSLPPTFGGGTKVEIK
191 B7H4-15503 CDR-H1 FTFSSYAMS
192 B7H4-15503 CDR-H2 AISGSGGSTYYADSVKG
193 B7H4-15503 CDR-H3 ARVGFRALNY
194 B7H4-15503 CDR-L1 RASQDISSWLA
195 B7H4-15503 CDR-L2 AASSLQS
196 B7H4-15503 CDR-L3 QQATSYPPWT
197 B7H4-15503 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVGFRALNYWGQGTTVTVSS
198 B7H4-15503 VL DIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQATSYPPWTFGGGTKVEIK
199 B7H4-15495 CDR-H1 GTFSSYAIS
200 B7H4-15495 CDR-H2 GIIPIFGTASYAQKFQG
201 B7H4-15495 CDR-H3 ARQQYDGRRYFGL
202 B7H4-15495 CDR-L1 RASQSVSSNLA
203 B7H4-15495 CDR-L2 SASTRAT
204 B7H4-15495 CDR-L3 QQVNVWPPT
205 B7H4-15495 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTASYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQQYDGRRYFGLWGRGTLVTVSS
206 B7H4-15495 VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQVNVWPPTFGGGTKVEIK
207 B7H4-15478 CDR-H1 GTFSSYAIS
208 B7H4-15478 CDR-H2 GIIPIFGTANYAQKFQG
209 B7H4-15478 CDR-H3 ARGGPWFDP
210 B7H4-15478 CDR-L1 RASQSISSWLA
211 B7H4-15478 CDR-L2 KASSLES
212 B7H4-15478 CDR-L3 QQYNSYPPFT
213 B7H4-15478 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGPWFDPWGQGTLVTVSS
214 B7H4-15478 VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYPPFTFGGGTKVEIK
215 B7H4-15441 CDR-H1 FTFSSYAMS
216 B7H4-15441 CDR-H2 AISGSGGSTSYADSVKG
217 B7H4-15441 CDR-H3 AKPSLATMLAFDI
218 B7H4-15441 CDR-L1 RASQSISSWLA
219 B7H4-15441 CDR-L2 DASSLES
220 B7H4-15441 CDR-L3 QQSKSYPRT
221 B7H4-15441 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTSYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPSLATMLAFDIWGQGTMVTVSS
222 B7H4-15441 VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSKSYPRTFGGGTKVEIK
223 B7H4-20496 CDR-H1 GSISSSVYYWS
224 B7H4-20496 CDR-H2 SILVSGSTYYNPSLKS
225 B7H4-20496 CDR-H3 ARAVSFLDV
226 B7H4-20496 CDR-L1 RASQSISSYLN
227 B7H4-20496 CDR-L2 GASSLQS
228 B7H4-20496 CDR-L3 QQSYDPPWT
229 B7H4-20496 VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSVYYWSWIRQPPGKGLEWIGSILVSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARAVSFLDVWGQGTMVIVSS
230 B7H4-20496 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYDPPWTFGGGTKVEIK
231 B7H4-15461 HC QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
232 B7H4-15461 LC EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
233 B7H4-20500 HC QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSHYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLRSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
234 B7H4-20500 LC EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
235 B7H4-20501 HC QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSHYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNWLDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
236 B7H4-20501 LC EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
237 B7H4-20502.1 HC QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNQFDPWGQGILVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
238 B7H4-20502.1 LC EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
239 B7H4-22208 HC QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIKSGSHYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYPNWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 
240 B7H4-22208 LC EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSTNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASARVTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYHSFPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
241 B7H4-15462 HC QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYTTVLNVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
242 B7H4-15462 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAASYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 
243 B7H4-22213 HC QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIGRGSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSYTTVLNVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 
244 B7H4-22213 LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVASSHLAWYQQKPGQAPRLLIYDAVSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAASYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
245 B7H4-15465 HC QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESSTISADFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
246 B7H4-15465 LC DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAHTFPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
247 B7H4-20506 HC QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTASGGSISHGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESSTISADFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
248 B7H4-20506 LC DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAHTFPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
249 B7H4-15483 HC QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGLSTIDEAFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
250 B7H4-15483 LC DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQDNSYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
251 B7H4-20513 HC QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISDGSYYWSWIRQHPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLRSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGLSTIDEAFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
252 B7H4-20513 LC DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQDNSYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
253 B7H4-22216 HC QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISDGSYYWSWIRQHPGKGLEWIGNIYYSGSTYYNPSLRSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGLSTIDEAFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
254 B7H4-22216 LC DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASKSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYEASSLHSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQDNSYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
255 B7H4-15489 HC QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYSSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGSGQYAAPDYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
256 B7H4-15489 LC DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQDNSFPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
257 B7H4-20516 HC QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIISYYWGWIRQPPGKGLEWIGYIYSSGSTSYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGSGLYAAPDYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
258 B7H4-20516 LC DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQDNSFPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
259 B7H4-15472 HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAGHYDLVGRYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
260 B7H4-15472 LC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQLYSLPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
261 B7H4-15503 HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVGFRALNYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
262 B7H4-15503 LC DIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQATSYPPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
263 B7H4-15495 HC QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTASYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQQYDGRRYFGLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
264 B7H4-15495 LC EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQVNVWPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
265 B7H4-15478 HC QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGPWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
266 B7H4-15478 LC DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYPPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
267 B7H4-15441 HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTSYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPSLATMLAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
268 B7H4-15441 LC DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSKSYPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
269 B7H4-20496 HC QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSVYYWSWIRQPPGKGLEWIGSILVSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARAVSFLDVWGQGTMVIVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
270 B7H4-20496 LC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYDPPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
271 SG-559-01/PD-L1 CDR-H1 TAAIS
272 SG-559-01/PD-L1 CDR-H2 GIIPIFGKAHYAQKFQG
273 SG-559-01/PD-L1 CDR-H3 KFHFVSGSPFGMDV
274 SG-559-01/PD-L1 CDR-L1 RASQSVSSYLA
275 SG-559-01/PD-L1 CDR-L2 DASNRAT
276 SG-559-01/PD-L1 CDR-L3 QQRSNWPT
277 SG-559-01/PD-L1 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKTSGDTFSTAAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGKAHYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARKFHFVSGSPFGMDVWGQGTTVTVSS
278 SG-559-01/PD-L1 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPA RFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPTFGQGTKVEIK
279 h1F6 CDR-H1 NYGMN
280 h1F6 CDR-H2 WINTYTGEPTYADAFKG
281 h1F6 CDR-H3 DYGDYGMDY
282 h1F6 CDR-L1 RASKSVSTSGYSFMH
283 h1F6 CDR-L2 LASNLES
284 h1F6 CDR-L3 QHSREVPWT
285 h1F6 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTY ADAFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDYGDYGMDYWGQGTTVTVSS
286 h1F6 VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSFMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLES GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREVPWTFGQGTKVEIK
287 h1F6 HC QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTY ADAFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDYGDYGMDYWGQGTTVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPS VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
288 h1F6 LC DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSFMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLES GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
289 TROP2 CDR-H1 NYGMN
290 TROP2 CDR-H2 WINTYTGEPTYTDDFKG
291 TROP2 CDR-H3 GGFGSSYWYFDV
292 TROP2 CDR-L1 KASQDVSIAVA
293 TROP2 CDR-L2 SASYRYT
294 TROP2 CDR-L3 QQHYITPLT
295 TROP2 VH QVQLQQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQGLKWMGWINTYTGEPT YTDDFKGRFAFSLDTSVSTAYLQISSLKADDTAVYFCARGGFGSSYWYFDVWGQGSLVTVSS
296 TROP2 VL DIQLTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSIAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVP DRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQHYITPLTFGAGTKVEIK
297 TROP2 CDR-H1 TAGMQ
298 TROP2 CDR-H2 WINTHSGVPKYAEDFKG
299 TROP2 CDR-H3 SGFGSSYWYFDV
300 TROP2 CDR-L1 KASQDVSTAVA
301 TROP2 CDR-L2 SASYRYT
302 TROP2 CDR-L3 QQHYITPLT
303 TROP2 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTAGMQWVRQAPGQGLEWMGWINTHSGVPKYAEDFKGRVTISADTSTSTAYLQLSSLKSEDTAVYYCARSGFGSSYWYFDVWGQGTLVTVSS
304 TROP2 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQHYITPLTFGQGTKLEIK
305 MICA CDR-H1 SQNIY
306 MICA CDR-H2 YIEPYNVVPMYNPKFKG
307 MICA CDR-H3 SGSSNFDY
308 MICA CDR-L1 SASSSISSHYLH
309 MICA CDR-L2 RTSNLAS
310 MICA CDR-L3 QQGSSLPLT
311 MICA VH EIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSQNIYWVRQAPGQGLEWIGYIEPYNVVPMYNPKFKGRATLTVDKSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCARSGSSNFDYWGQGTLVTVSS
312 MICA VL DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSISSHYLHWYQQKPGKSPKLLIYRTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQGSSLPLTFGQGTKVEIK
313 MICA CDR-H1 NYAMH
314 MICA CDR-H2 LIWYDGSNKFYGDSVKG
315 MICA CDR-H3 EGSGHY
316 MICA CDR-L1 RASQGISSALA
317 MICA CDR-L2 DASSLES
318 MICA CDR-L3 QQFNSYPIT
319 MICA VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMHWVRQAPGEGLEWVALIWYDGSNKFYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLSAEDTAVYYCAREGSGHYWGQGTLVTVSS
320 MICA VL AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKVPKSLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPITFGQGTRLEIK
321 MICA CDR-H1 NYAMS
322 MICA CDR-H2 YISPGGDYIYYADSVKG
323 MICA CDR-H3 DRRHYGSYAMDY
324 MICA CDR-L1 RSSKSLLHSNLNTYLY
325 MICA CDR-L2 RMSNLAS
326 MICA CDR-L3 MQHLEYPFT
327 MICA VH QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWIRQAPGKGLEWVSYISPGGDYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTDRRHYGSYAMDYWGQGTLVTVSS
328 MICA VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLHSNLNTYLYWFLQKPGQSPQILIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLKISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGPGTKLEIK
329 MICA CDR-H1 TYAFH
330 MICA CDR-H2 GIVPIFGTLKYAQKFQD
331 MICA CDR-H3 AIQLEGRPFDH
332 MICA CDR-L1 RASQGITSYLA
333 MICA CDR-L2 AASALQS
334 MICA CDR-L3 QQVNRGAAIT
335 MICA VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVRVSCRASGGSSTTYAFHWVRQAPGQGLEWMGGIVPIFGTLKYAQKFQDRVTLTADKSTGTAYMELNSLRLDDTAVYYCARAIQLEGRPFDHWGQGTQVTVSA
336 MICA VL DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGITSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASALQSGVPSRFSGRGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQVNRGAAITFGHGTRLDIK
337 ITGav/CD51 CDR-H1 RYTMH
338 ITGav/CD51 CDR-H2 VISFDGSNKYYVDSVKG
339 ITGav/CD51 CDR-H3 EARGSYAFDI
340 ITGav/CD51 CDR-L1 RASQSVSSYLA
341 ITGav/CD51 CDR-L2 DASNRAT
342 ITGav/CD51 CDR-L3 QQRSNWPPFT
343 ITGav/CD51 VH QVQLVESGGGVVQPGRSRRLSCAASGFTFSRYTMHWVRQAPGKGLEWVAVISFDGSNKYYVDSVKGRFTISRDNSENTLYLQVNILRAEDTAVYYCAREARGSYAFDIWGQGTMVTVSS
344 ITGav/CD51 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTFGPGTKVDIK
345 ITGav CDR-H1 SFWMH
346 ITGav CDR-H2 YINPRSGYTEYNEIFRD
347 ITGav CDR-H3 FLGRGAMDY
348 ITGav CDR-L1 RASQDISNYLA
349 ITGav CDR-L2 YTSKIHS
350 ITGav CDR-L3 QQGNTFPYT
351 ITGav VH QVQLQQSGGELAKPGASVKVSCKASGYTFSSFWMHWVRQAPGQGLEWIGYINPRSGYTEYNEIFRDKATMTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCASFLGRGAMDYWGQGTTVTVSS
352 ITGav VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYYTSKIHSGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQGNTFPYTFGQGTKVEIK
353 gpA33 CDR-H1 TSSYYWG
354 gpA33 CDR-H2 TIYYNGSTYYSPSLKS
355 gpA33 CDR-H3 QGYDIKINIDV
356 gpA33 CDR-L1 RASQSVSSYLA
357 gpA33 CDR-L2 VASNRAT
358 gpA33 CDR-L3 QQRSNWPLT
359 gpA33 VH QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISTSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGTIYYNGSTYYSPSLKSRVSISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTSVYYCARQGYDIKINIDVWGQGTTVTVSS
360 gpA33 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYVASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK
361 IL1Rap CDR-H1 SSWMN
362 IL1Rap CDR-H2 RIYPGDGNTHYAQKFQG
363 IL1Rap CDR-H3 GYLDPMDY
364 IL1Rap CDR-L1 QASQGINNYLN
365 IL1Rap CDR-L2 YTSGLHA
366 IL1Rap CDR-L3 QQYSILPWT
367 IL1Rap VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFTSSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPGDGNTHYAQKFQGRVTLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCGEGYLDPMDYWGQGTLVTVSS
368 IL1Rap VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQGINNYLNWYQQKPGKAPKLLIHYTSGLHAGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDVATYYCQQYSILPWTFGGGTKVEIK
369 EpCAM CDR-H1 SYGMH
370 EpCAM CDR-H2 VISYDGSNKYYADSVKG
371 EpCAM CDR-H3 DMGWGSGWRPYYYYGMDV
372 EpCAM CDR-L1 RTSQSISSYLN
373 EpCAM CDR-L2 WASTRES
374 EpCAM CDR-L3 QQSYDIPYT
375 EpCAM VH EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDMGWGSGWRPYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
376 EpCAM VL ELQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISSYLNWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDSATYYCQQSYDIPYTFGQGTKLEIK
377 EpCAM CDR-H1 NYWMS
378 EpCAM CDR-H2 NIKQDGSEKFYADSVKG
379 EpCAM CDR-H3 VGPSWEQDY
380 EpCAM CDR-L1 TGSSSNIGSYYGVH
381 EpCAM CDR-L2 SDTNRPS
382 EpCAM CDR-L3 QSYDKGFGHRV
383 EpCAM VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKFYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVGPSWEQDYWGQGTLVTVSA
384 EpCAM VL QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGSYYGVHWYQQLPGTAPKLLIYSDTNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDKGFGHRVFGGGTKLTVL
385 EpCAM CDR-H1 SYAIS
386 EpCAM CDR-H2 GIIPIFGTANYAQKFQG
387 EpCAM CDR-H3 GLLWNY
388 EpCAM CDR-L1 RASQSVSSNLA
389 EpCAM CDR-L2 GASTTAS
390 EpCAM CDR-L3 QQYNNWPPAYT
391 EpCAM VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLLWNYWGQGTLVTVSS
392 EpCAM VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLIIYGASTTASGIPARFSASGSGTDFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPPAYTFGQGTKLEIK
393 EpCAM CDR-H1 NYGMN
394 EpCAM CDR-H2 WINTYTGEPTYGEDFKG
395 EpCAM CDR-H3 FGNYVDY
396 EpCAM CDR-L1 RSSKNLLHSNGITYLY
397 EpCAM CDR-L2 QMSNLAS
398 EpCAM CDR-L3 AQNLEIPRT
399 EpCAM VH QVQLVQSGPEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTYTGEPTYGEDFKGRFAFSLDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCARFGNYVDYWGQGSLVTVSS
400 EpCAM VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSKNLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSSSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQNLEIPRTFGQGTKVEIK
401 EpCAM CDR-H1 KYGMN
402 EpCAM CDR-H2 WINTYTEEPTYGDDFKG
403 EpCAM CDR-H3 FGSAVDY
404 EpCAM CDR-L1 RSSKSLLHSNGITYLY
405 EpCAM CDR-L2 QMSNRAS
406 EpCAM CDR-L3 AQNLELPRT
407 EpCAM VH QIQLVQSGPEVKKPGESVKISCKASGYTFTKYGMNWVKQAPGQGLKWMGWINTYTEEPTYGDDFKGRFTFTLDTSTSTAYLEISSLRSEDTATYFCARFGSAVDYWGQGTLVTVSS
408 EpCAM VL DIVMTQSALSNPVTLGESGSISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNRASGVPDRFSSSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQNLELPRTFGQGTKLEMKR
409 EpCAM CDR-H1 DYSMH
410 EpCAM CDR-H2 WINTETGEPTYADDFKG
411 EpCAM CDR-H3 TAVY
412 EpCAM CDR-L1 RASQEISVSLS
413 EpCAM CDR-L2 ATSTLDS
414 EpCAM CDR-L3 LQYASYPWT
415 EpCAM VH QVKLQESGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSMHWVKQAPGKGLKWMGWINTETGEPTYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCARTAVYWGQGTTVTVSS
416 EpCAM VL DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQEISVSLSWLQQEPDGTIKRLIYATSTLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCLQYASYPWTFGGGTKLEIKR
417 CD352 CDR-H1 NYGMN
418 CD352 CDR-H2 WINTYSGEPRYADDFKG
419 CD352 CDR-H3 DYGRWYFDV
420 CD352 CDR-L1 RASSSVSHMH
421 CD352 CDR-L2 ATSNLAS
422 CD352 CDR-L3 QQWSSTPRT
423 CD352 VH QIQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQDLKWMGWINTYSGEPRYADDFKGRFVFSLDKSVNTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYGRWYFDVWGQGTTVTVSS
424 CD352 VL QIVLSQSPATLSLSPGERATMSCRASSSVSHMHWYQQKPGQAPRPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSTPRTFGGGTKVEIKR
425 CS1 CDR-H1 RYWMS
426 CS1 CDR-H2 EINPDSSTINYAPSLKD
427 CS1 CDR-H3 PDGNYWYFDV
428 CS1 CDR-L1 KASQDVGIAVA
429 CS1 CDR-L2 WASTRHT
430 CS1 CDR-L3 QQYSSYPYT
431 CS1 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYAPSLKDKFIISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPDGNYWYFDVWGQGTLVTVSS
432 CS1 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGIAVAWYQQKPGKVPKLLIYWASTRHTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYSSYPYTFGQGTKVEIKR
433 CD38 CDR-H1 SFAMS
434 CD38 CDR-H2 AISGSGGGTYYADSVKG
435 CD38 CDR-H3 DKILWFGEPVFDY
436 CD38 CDR-L1 RASQSVSSYLA
437 CD38 CDR-L2 DASNRAT
438 CD38 CDR-L3 QQRSNWPPT
439 CD38 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFNSFAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGGTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAKDKILWFGEPVFDYWGQGTLVTVSS
440 CD38 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPTFGQGTKVEIKR
441 CD25 CDR-H1 SYRMH
442 CD25 CDR-H2 YINPSTGYTEYNQKFKD
443 CD25 CDR-H3 GGGVFDY
444 CD25 CDR-L1 SASSSISYMH
445 CD25 CDR-L2 TTSNLAS
446 CD25 CDR-L3 HQRSTYPLT
447 CD25 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYRMHWVRQAPGQGLEWIGYINPSTGYTEYNQKFKDKATITADESTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGGVFDYWGQGTLVTVSS
448 CD25 VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCSASSSISYMHWYQQKPGKAPKLLIYTTSNLASGVPARFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCHQRSTYPLTFGQGTKVEVK
449 ADAM9 CDR-H1 SYWMH
450 ADAM9 CDR-H2 EIIPINGHTNYNEKFKS
451 ADAM9 CDR-H3 GGYYYYGSRDYFDY
452 ADAM9 CDR-L1 KASQSVDYDGDSYMN
453 ADAM9 CDR-L2 AASDLES
454 ADAM9 CDR-L3 QQSHEDPFT
455 ADAM9 VH QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGEIIPINGHTNYNEKFKSKATLTLDKSSSTAYMQLSSLASEDSAVYYCARGGYYYYGSRDYFDYWGQGTTLTVSS
456 ADAM9 VL DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYMNWYQQIPGQPPKLLIYAASDLESGIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQQSHEDPFTFGGGTKLEIK
457 ADAM9 CDR-H1 SYWMH
458 ADAM9 CDR-H2 EIIPIFGHTNYNEKFKS
459 ADAM9 CDR-H3 GGYYYYPRQGFLDY
460 ADAM9 CDR-L1 KASQSVDYSGDSYMN
461 ADAM9 CDR-L2 AASDLES
462 ADAM9 CDR-L3 QQSHEDPFT
463 ADAM9 VH EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMHWVRQAPGKGLEWVGEIIPIFGHTNYNEKFKSRFTISLDNSKNTLYLQMGSLRAEDTAVYYCARGGYYYYPRQGFLDYWGQGTTVTVSS
464 ADAM9 VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATISCKASQSVDYSGDSYMNWYQQKPGQPPKLLIYAASDLESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQSHEDPFTFGQGTKLEIK
465 CD59 CDR-H1 SYGMN
466 CD59 CDR-H2 YISSSSSTIYYADSVKG
467 CD59 CDR-H3 GPGMDV
468 CD59 CDR-L1 KSSQSVLYSSNNKNYLA
469 CD59 CDR-L2 WASTRES
470 CD59 CDR-L3 QQYYSTPQLT
471 CD59 VH QVQLQQSGGGVVQPGRSLGLSCAASGFTFSSYGMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGPGMDVWGQGTTVTVS
472 CD59 VL DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTPAISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPQLTFGGGTKVDIK
473 CD19 (hBU12) CDR-H1 TSGMGVG
474 CD19 (hBU12)  CDR-H2 HIWWDDDKRYNPALKS
475 CD19 (hBU12)  CDR-H3 MELWSYYFDY
476 CD19 (hBU12)  CDR-L1 SASSSVSYMH
477 CD19 (hBU12)  CDR-L2 DTSKLAS
478 CD19 (hBU12)  CDR-L3 FQGSVYPFT
479 CD19 (hBU12)  VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISTSGMGVGWIRQHPGKGLEWIGHIWWDDDKRYNPALKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMELWSYYFDYWGQGTLVTVSS
480 CD19 (hBU12)  VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHWYQQKPGQAPRLLIYDTSKLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDVAVYYCFQGSVYPFTFGQGTKLEIKR
481 CD19 (hBU12) HC QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISTSGMGVGWIRQHPGKGLEWIGHIWWDDDKR YNPALKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMELWSYYFDYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
482 CD19 (hBU12) LC EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHWYQQKPGQAPRLLIYDTSKLASGIPAR FSGSGSGTDFTLTISSLEPEDVAVYYCFQGSVYPFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
483 CD138 CDR-H1 NYWIE
484 CD138 CDR-H2 EILPGTGRTIYNEKFKG
485 CD138 CDR-H3 RDYYGNFYYAMDY
486 CD138 CDR-L1 SASQGINNYLN
487 CD138 CDR-L2 YTSTLQS
488 CD138 CDR-L3 QQYSKLPRT
489 CD138 VH QVQLQQSGSELMMPGASVKISCKATGYTFSNYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGTGRTIY NEKFKGKATFTADISSNTVQMQLSSLTSEDSAVYYCARRDYYGNFYYAMDYWGQGTSVTVSS
490 CD138 VL DIQMTQSTSSLSASLGDRVTISCSASQGINNYLNWYQQKPDGTVELLIYYTSTLQSGVP SRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIGTYYCQQYSKLPRTFGGGTKLEIK
491 CD166 CDR-H1 TYGMGVG
492 CD166 CDR-H2 NIWWSEDKHYSPSLKS
493 CD166 CDR-H3 IDYGNDYAFTY
494 CD166 CDR-L1 RSSKSLLHSNGITYLY
495 CD166 CDR-L2 QMSNLAS
496 CD166 CDR-L3 AQNLELPYT
497 CD166 VH QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTYGMGVGWIRQPPGKALEWLANIWWSEDKHYSPSLKSRLTITKDTSKNQVVLTITNVDPVDTATYYCVQIDYGNDYAFTYWGQGTLVTVSS
498 CD166 VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQNLELPYTFGQGTKLEIK
499 CD56 CDR-H1 SFGMH
500 CD56 CDR-H2 YISSGSFTIYYADSVKG
501 CD56 CDR-H3 MRKGYAMDY
502 CD56 CDR-L1 RSSQIIIHSDGNTYLE
503 CD56 CDR-L2 KVSNRFS
504 CD56 CDR-L3 FQGSHVPHT
505 CD56 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGSFTIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMRKGYAMDYWGQGTLVTVSS
506 CD56 VL DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQIIIHSDGNTYLEWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPHTFGQGTKVEIK
507 CD74 CDR-H1 NYGVN
508 CD74 CDR-H2 WINPNTGEPTFDDDFKG
509 CD74 CDR-H3 SRGKNEAWFAY
510 CD74 CDR-L1 RSSQSLVHRNGNTYLH
511 CD74 CDR-L2 TVSNRFS
512 CD74 CDR-L3 SQSSHVPPT
513 CD74 VH QVQLQQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGVNWIKQAPGQGLQWMGWINPNTGEPTFDDDFKGRFAFSLDTSVSTAYLQISSLKADDTAVYFCSRSRGKNEAWFAYWGQGTLVTVSS
514 CD74 VL DIQLTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHRNGNTYLHWFQQRPGQSPRLLIYTVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSSHVPPTFGAGTRLEIK
515 CEACAM5 CDR-H1 TYWMS
516 CEACAM5 CDR-H2 EIHPDSSTINYAPSLKD
517 CEACAM5 CDR-H3 LYFGFPWFAY
518 CEACAM5 CDR-L1 KASQDVGTSVA
519 CEACAM5 CDR-L2 WTSTRHT
520 CEACAM5 CDR-L3 QQYSLYRS
521 CEACAM5 VH EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFDFTTYWMSWVRQAPGKGLEWIGEIHPDSSTINYAPSLKDRFTISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCASLYFGFPWFAYWGQGTPVTVSS
522 CEACAM5 VL DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGTSVAWYQQKPGKAPKLLIYWTSTRHTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYSLYRSFGQGTKVEIK
523 CanAg CDR-H1 YYGMN
524 CanAg CDR-H2 WIDTTTGEPTYAQKFQG
525 CanAg CDR-H3 RGPYNWYFDV
526 CanAg CDR-L1 RSSKSLLHSNGNTYLY
527 CanAg CDR-L2 RMSNLVS
528 CanAg CDR-L3 LQHLEYPFT
529 CanAg VH QVQLVQSGAEVKKPGETVKISCKASDYTFTYYGMNWVKQAPGQGLKWMGWIDTTTGEPTYAQKFQGRIAFSLETSASTAYLQIKSLKSEDTATYFCARRGPYNWYFDVWGQGTTVTVSS
530 CanAg VL DIVMTQSPLSVPVTPGEPVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLVSGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCLQHLEYPFTFGPGTKLELK
531 DLL-3 CDR-H1 NYGMN
532 DLL-3 CDR-H2 WINTYTGEPTYADDFKG
533 DLL-3 CDR-H3 IGDSSPSDY
534 DLL-3 CDR-L1 KASQSVSNDVV
535 DLL-3 CDR-L2 YASNRYT
536 DLL-3 CDR-L3 QQDYTSPWT
537 DLL-3 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTYTGEPTY ADDFKGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARIGDSSPSDYWGQGTLVTVSS
538 DLL-3 VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQSVSNDVVWYQQKPGQAPRLLIYYASNRYTGIPA RFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQDYTSPWTFGQGTKLEIK
539 DPEP-3 CDR-H1 SYWIE
540 DPEP-3 CDR-H2 EILPGSGNTYYNERFKD
541 DPEP-3 CDR-H3 RAAAYYSNPEWFAY
542 DPEP-3 CDR-L1 TASSSVNSFYLH
543 DPEP-3 CDR-L2 STSNLAS
544 DPEP-3 CDR-L3 HQYHRSPYT
545 DPEP-3 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYWIEWVRQAPGQGLEWMGEILPGSGNTYYNERFKDRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRAAAYYSNPEWFAYWGQGTLVTVSS
546 DPEP-3 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCTASSSVNSFYLHWYQQKPGLAPRLLIYSTSNLASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCHQYHRSPYTFGQGTKLEIK
547 EGFR CDR-H1 SYWMQ
548 EGFR CDR-H2 TIYPGDGDTTYTQKFQG
549 EGFR CDR-H3 YDAPGYAMDY
550 EGFR CDR-L1 RASQDINNYLA
551 EGFR CDR-L2 YTSTLHP
552 EGFR CDR-L3 LQYDNLLYT
553 EGFR VH QVQLVQSGAEVAKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMQWVKQRPGQGLECIGTIYPGDGDTTYTQKFQGKATLTADKSSSTAYMQLSSLRSEDSAVYYCARYDAPGYAMDYWGQGTLVTVSS
554 EGFR VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINNYLAWYQHKPGKGPKLLIHYTSTLHPGIPSRFSGSGSGRDYSFSISSLEPEDIATYYCLQYDNLLYTFGQGTKLEIK
555 EGFR CDR-H1 RDFAWN
556 EGFR CDR-H2 YISYNGNTRYQPSLKS
557 EGFR CDR-H3 ASRGFPY
558 EGFR CDR-L1 HSSQDINSNIG
559 EGFR CDR-L2 HGTNLDD
560 EGFR CDR-L3 VQYAQFPWT
561 EGFR VH EVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYSISRDFAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYNGNTRYQPSLKSRITISRDTSKNQFFLKLNSVTAADTATYYCVTASRGFPYWGQGTLVTVSS
562 EGFR VL DIQMTQSPSSMSVSVGDRVTITCHSSQDINSNIGWLQQKPGKSFKGLIYHGTNLDDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCVQYAQFPWTFGGGTKLEIK
563 EGFR CDR-H1 NYGVH
564 EGFR CDR-H2 VIWSGGNTDYNTPFTS
565 EGFR CDR-H3 ALTYYDYEFAY
566 EGFR CDR-L1 RASQSIGTNIH
567 EGFR CDR-L2 YASESIS
568 EGFR CDR-L3 QQNNNWPTT
569 EGFR VH QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA
570 EGFR VL DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK
571 FRa CDR-H1 GYFMN
572 FRa CDR-H2 RIHPYDGDTFYNQKFQG
573 FRa CDR-H3 YDGSRAMDY
574 FRa CDR-L1 KASQSVSFAGTSLMH
575 FRa CDR-L2 RASNLEA
576 FRa CDR-L3 QQSREYPYT
577 FRa VH QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTGYFMNWVKQSPGQSLEWIGRIHPYDGDTFY NQKFQGKATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRYDGSRAMDYWGQGTTVTVSS
578 FRa VL DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCKASQSVSFAGTSLMHWYHQKPGQQPRLLIYRASNLEAGVPDRFSGSGSKTDFTLTISPVEAEDAATYYCQQSREYPYTFGGGTKLEIK
579 FRa CDR-H1 GYGLS
580 FRa CDR-H2 MISSGGSYTYYADSVKG
581 FRa CDR-H3 HGDDPAWFAY
582 FRa CDR-L1 SVSSSISSNNLH
583 FRa CDR-L2 GTSNLAS
584 FRa CDR-L3 QQWSSYPYMYT
585 FRa VH EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFSGYGLSWVRQAPGKGLEWVAMISSGGSYTYY ADSVKGRFAISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARHGDDPAWFAYWGQGTPVTVSS
586 FRa VL DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSISSNNLHWYQQKPGKAPKPWIYGTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSYPYMYTFGQGTKVEIK
587 MUC-1 CDR-H1 NYWMN
588 MUC-1 CDR-H2 EIRLKSNNYTTHYAESVKG
589 MUC-1 CDR-H3 HYYFDY
590 MUC-1 CDR-L1 RSSKSLLHSNGITYFF
591 MUC-1 CDR-L2 QMSNLAS
592 MUC-1 CDR-L3 AQNLELPPT
593 MUC-1 VH EVQLVESGGGLVQPGGSMRLSCVASGFPFSNYWMNWVRQAPGKGLEWVGEIRLKSNNYTTHYAESVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCTRHYYFDYWGQGTLVTVSS
594 MUC-1 VL DIVMTQSPLSNPVTPGEPASISCRSSKSLLHSNGITYFFWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCAQNLELPPTFGQGTKVEIK
595 間皮素CDR-H1 SYWIG
596 間皮素CDR-H2 IIDPGDSRTRYSPSFQG
597 間皮素CDR-H3 GQLYGGTYMDG
598 間皮素CDR-L1 TGTSSDIGGYNSVS
599 間皮素CDR-L2 GVNNRPS
600 間皮素CDR-L3 SSYDIESATPV
601 間皮素VH QVELVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQAPGKGLEWMGIIDPGDSRTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGQLYGGTYMDGWGQGTLVTVSS
602 間皮素VL DIALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDIGGYNSVSWYQQHPGKAPKLMIYGVNNRPSGV SNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDIESATPVFGGGTKLTVL
603 ROR-1 CDR-H1 AYNIH
604 ROR-1 CDR-H2 SFDPYDGGSSYNQKFKD
605 ROR-1 CDR-H3 GWYYFDY
606 ROR-1 CDR-L1 RASKSISKYLA
607 ROR-1 CDR-L2 SGSTLQS
608 ROR-1 CDR-L3 QQHDESPYT
609 ROR-1 VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYAFTAYNIHWVRQAPGQGLEWMGSFDPYDGGSSYNQKFKDRLTISKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARGWYYFDYWGHGTLVTVSS
610 ROR-1 VL DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRASKSISKYLAWYQQKPGQAPRLLIYSGSTLQSGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCQQHDESPYTFGEGTKVEIK
611 B7-H3 CDR-H1 SFGMH
612 B7-H3 CDR-H2 YISSDSSAIYYADTVKG
613 B7-H3 CDR-H3 GRENIYYGSRLDY
614 B7-H3 CDR-L1 KASQNVDTNVA
615 B7-H3 CDR-L2 SASYRYS
616 B7-H3 CDR-L3 QQYNNYPFT
617 B7-H3 VH DVQLVESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPEKGLEWVAYISSDSSAIYY ADTVKGRFTISRDNPKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCGRGRENIYYGSRLDYWGQGTTLTVSS
618 B7-H3 VL DIAMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVDTNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPD RFTGSGSGTDFTLTINNVQSEDLAEYFCQQYNNYPFTFGSGTKLEIK
619 B7-H3 CDR-H1 SYGMS
620 B7-H3 CDR-H2 TINSGGSNTYYPDSLKG
621 B7-H3 CDR-H3 HDGGAMDY
622 B7-H3 CDR-L1 RASESIYSYLA
623 B7-H3 CDR-L2 NTKTLPE
624 B7-H3 CDR-L3 QHHYGTPPWT
625 B7-H3 VH EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVATINSGGSNTYY PDSLKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHDGGAMDYWGQGTTVTVSS
626 B7-H3 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASESIYSYLAWYQQKPGKAPKLLVYNTKTLPEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPPWTFGQGTRLEIK
627 B7-H3 CDR-H1 SFGMH
628 B7-H3 CDR-H2 YISSGSGTIYYADTVKG
629 B7-H3 CDR-H3 HGYRYEGFDY
630 B7-H3 CDR-L1 KASQNVDTNVA
631 B7-H3 CDR-L2 SASYRYS
632 B7-H3 CDR-L3 QQYNNYPFT
633 B7-H3 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGSGTIY YADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHGYRYEGFDYWGQGTTVTVSS
634 B7-H3 VL DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGKAPKALIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAEYFCQQYNNYPFTFGQGTKLEIK
635 B7-H3 CDR-H1 NYVMH
636 B7-H3 CDR-H2 YINPYNDDVKYNEKFKG
637 B7-H3 CDR-H3 WGYYGSPLYYFDY
638 B7-H3 CDR-L1 RASSRLIYMH
639 B7-H3 CDR-L2 ATSNLAS
640 B7-H3 CDR-L3 QQWNSNPPT
641 B7-H3 VH EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTNYVMHWVKQKPGQGLEWIGYINPYNDDVKYNEKFKGKATQTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCARWGYYGSPLYYFDYWGQGTTLTVSS
642 B7-H3 VL QIVLSQSPTILSASPGEKVTMTCRASSRLIYMHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPAR FSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWNSNPPTFGTGTKLELK
643 B7-H3 CDR-H1 NYVMH
644 B7-H3 CDR-H2 YINPYNDDVKYNEKFKG
645 B7-H3 CDR-H3 WGYYGSPLYYFDY
646 B7-H3 CDR-L1 RASSRLIYMH
647 B7-H3 CDR-L2 ATSNLAS
648 B7-H3 CDR-L3 QQWNSNPPT
649 B7-H3 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTNYVMHWVRQAPGQGLEWMGYINPYNDDVKYNE KFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARWGYYGSPLYYFDYWGQGTLVTVSS
650 B7-H3 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSRLIYMHWYQQKPGQAPRPLIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQWNSNPPTFGQGTKVEIK
651 B7-H3 CDR-H1 SYTIH
652 B7-H3 CDR-H2 YINPNSRNTDYAQKFQG
653 B7-H3 CDR-H3 YSGSTPYWYFDV
654 B7-H3 CDR-L1 RASSSVSYMN
655 B7-H3 CDR-L2 ATSNLAS
656 B7-H3 CDR-L3 QQWSSNPLT
657 B7-H3 VH EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYSFTSYTIHWVRQAPGQGLEWMGYINPNSRNTDYAQKFQGRVTLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYSGSTPYWYFDVWGQGTTVTVSS
658 B7-H3 VL DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASSSVSYMNWYQQKPGKSPKPWIYATSNLASGVPSRFSVSVSGTEHTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSNPLTFGQGTKLEIK
659 B7-H3 CDR-H1 SYWMH
660 B7-H3 CDR-H2 LIHPDSGSTNYNEMFKN
661 B7-H3 CDR-H3 GGRLYFDY
662 B7-H3 CDR-L1 RSSQSLVHSNGDTYLR
663 B7-H3 CDR-L2 KVSNRFS
664 B7-H3 CDR-L3 SQSTHVPYT
665 B7-H3 VH EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSSYWMHWVRQAPGQGLEWIGLIHPDSGSTNYNEMFKNRATLTVDRSTSTAYVELSSLRSEDTAVYFCAGGGRLYFDYWGQGTTVTVSS
666 B7-H3 VL DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVHSNGDTYLRWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGGGTKVEIK
667 B7-H3 CDR-H1 SYWMH
668 B7-H3 CDR-H2 LIHPESGSTNYNEMFKN
669 B7-H3 CDR-H3 GGRLYFDY
670 B7-H3 CDR-L1 RSSQSLVHSNQDTYLR
671 B7-H3 CDR-L2 KVSNRFS
672 B7-H3 CDR-L3 SQSTHVPYT
673 B7-H3 VH EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSSYWMHWVRQAPGQGLEWIGLIHPESGSTNY NEMFKNRATLTVDRSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAGGGRLYFDYWGQGTTVTVSS
674 B7-H3 VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVHSNQDTYLRWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGGGTKVEIK
675 B7-H3 CDR-H1 SGYSWH
676 B7-H3 CDR-H2 YIHSSGSTNYNPSLKS
677 B7-H3 CDR-H3 YDDYFEY
678 B7-H3 CDR-L1 KASQNVGFNVAW
679 B7-H3 CDR-L2 SASYRYS
680 B7-H3 CDR-L3 QQYNWYPFT
681 B7-H3 VH EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVTGYSITSGYSWHWIRQFPGNGLEWMGYIHSSGSTNY NPSLKSRISISRDTSKNQFFLKLSSVTAADTAVYYCAGYDDYFEYWGQGTTVTVSS
682 B7-H3 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGFNVAWYQQKPGKSPKALIYSASYRYSGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAEYFCQQYNWYPFTFGQGTKLEIK
683 B7-H3 CDR-H1 NYDIN
684 B7-H3 CDR-H2 WIFPGDDSTQYNEKFKG
685 B7-H3 CDR-H3 QTTGTWFAY
686 B7-H3 CDR-L1 RASQSISDYLY
687 B7-H3 CDR-L2 YASQSIS
688 B7-H3 CDR-L3 QNGHSFPLT
689 B7-H3 VH QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQY NEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSS
690 B7-H3 VL EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPA RFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELK
691 B7-H3 VH QVQLQQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPILGIAN YAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGSGSYHMDVWGKGTTVTVSS
692 B7-H3 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIP ARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPRITFGQGTRLEIK
693 B7-H3 CDR-H1 IYNVH
694 B7-H3 CDR-H2 TIFPGNGDTSYNQKFKD
695 B7-H3 CDR-H3 WDDGNVGFAH
696 B7-H3 CDR-L1 RASENINNYLT
697 B7-H3 CDR-L2 HAKTLAE
698 B7-H3 CDR-L3 QHHYGTPPT
699 B7-H3 VH QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTIYNVHWIKQTPGQGLEWMGTIFPGNGDTSY NQKFKDKATLTTDKSSKTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARWDDGNVGFAHWGQGTLVTVSA
700 B7-H3 VL DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENINNYLTWFQQKQGKSPQLLVYHAKTLAEGVPS RFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPPTFGGGTKLEIK
701 B7-H3 VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTIYNVHWVRQAPGQGLEWMGTIFPGNGDTS YNQKFKDKVTMTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARWDDGNVGFAHWGQGTLVTVSS
702 B7-H3 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENINNYLTWFQQKQGKSPQLLIYHAKTLAEGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPPTFGGGTKVEIK
703 B7-H3 VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTIYNVHWIRQAPGQGLEWMGTIFPGNGDTSY NQKFKDRATLTTDKSTKTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDDGNVGFAHWGQGTLVTVSS
704 B7-H3 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENINNYLTWFQQKPGKAPKLLVYHAKTLAEGVPS RFSGSGSGTQFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPPTFGQGTKLEIK
705 HER3 H QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEINHSGSTNYN PSLKSRVTISVETSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDKWTWYFDLWGRGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
706 HER3 L DIEMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSVLYSSSNRNYLAWYQQNPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
707 HER3 H EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYVMAWVRQAPGKGLEWVSSISSSGGWTLY ADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRGLKMATIFDYWGQGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRV VSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
708 HER3 L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNVVSWYQQHPGKAPKLIIYEVSQRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQTEDEADYYCCSYAGSSIFVIFGGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLVSDFYPGAVTVAWKADGSPVKVGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCRVTHEGSTVEKTVAPAECS
709 HER3 H EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAINSQGKSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWGDEGFDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
710 HER3 L DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSFPTTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
711 HER3 H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFRSSYISWVRQAPGQGLEWMGWIYAGTGSPSYNQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARHRDYYSNSLTYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
712 HER3 L DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQSDYSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
713 PTK7 CDR-H1 TSNMGVG
714 PTK7 CDR-H2 HIWWDDDKYYSPSLKS
715 PTK7 CDR-H3 SNYGYAWFAY
716 PTK7 CDR-L1 KASQDIYPYLN
717 PTK7 CDR-L2 RTNRLLD
718 PTK7 CDR-L3 LQYDEFPLT
719 PTK7 VH QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSNMGVGWIRQPPGKALEWLAHIWWDDDKYYSPSLKSRLTITKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCVRSNYGYAWFAYWGQGTLVTVSS
720 PTK7 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDIYPYLNWFQQKPGKAPKTLIYRTNRLLDGVPS RFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCLQYDEFPLTFGAGTKLEIK
721 PTK7 CDR-H1 DYAVH
722 PTK7 CDR-H2 VISTYNDYTYNNQDFKG
723 PTK7 CDR-H3 GNSYFYALDY
724 PTK7 CDR-L1 RASESVDSYGKSFMH
725 PTK7 CDR-L2 RASNLES
726 PTK7 CDR-L3 QQSNEDPWT
727 PTK7 VH QVQLVQSGPEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYAVHWVRQAPGKRLEWIGVISTYNDYTY NNQDFKGRVTMTRDTSASTAYMELSRLRSEDTAVYYCARGNSYFYALDYWGQGTSVTVSS
728 PTK7 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVDSYGKSFMHWYQQKPGQAPRLLIYRASNLES GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSNEDPWTFGGGTKLEIK
729 PTK7 CDR-H1 RYWMS
730 PTK7 CDR-H2 DLNPDSSAINYVDSVKG
731 PTK7 CDR-H3 ITTLVPYTMDF
732 PTK7 CDR-L1 ITNTDIDDDMN
733 PTK7 CDR-L2 EGNGLRP
734 PTK7 CDR-L3 LQSDNLPLT
735 PTK7 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGDLNPDSSAINY VDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTLITTLVPYTMDFWGQGTSVTVSS
736 PTK7 VL ETTLTQSPAFMSATPGDKVNISCITNTDIDDDMNWYQQKPGEAAILLISEGNGLRPGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIESEDAAYYFCLQSDNLPLTFGSGTKLEIK
737 hLIV22/LIV1 CDR-H1 DYYMH
738 hLIV22/LIV1 CDR-H2 WIDPENGDTEYGPKFQG
739 hLIV22/LIV1 CDR-H3 HNAHYGTWFAY
740 hLIV22/LIV1 CDR-L1 RSSQSLLHSSGNTYLE
741 hLIV22/LIV1 CDR-L2 KISTRFS
742 hLIV22/LIV1 CDR-L3 FQGSHVPYT
743 hLIV22/LIV1 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGLTIEDYYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDTEY GPKFQGRVTMTRDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCAVHNAHYGTWFAYWGQGTLVTVSS
744 hLIV22/LIV1 VL DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLLHSSGNTYLEWYQQRPGQSPRPLIYKISTRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKVEIK
745 hLIV22/LIV1 HC QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGLTIEDYYMHWVRQAPGQGLEWMGWIDPENGDTEYGPKFQGRVTMTRDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCAVHNAHYGTWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
746 hLIV22/LIV1 LC DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLLHSSGNTYLEWYQQRPGQSPRPLIYKISTRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
747 h15H3/avb6 CDR-H1 GYFMN
748 h15H3/avb6 CDR-H2 LINPYNGDSFYNQKFKG
749 h15H3/avb6 CDR-H3 GLRRDFDY
750 h15H3/avb6 CDR-L1 KSSQSLLDSDGKTYLN
751 h15H3/avb6 CDR-L2 LVSELDS
752 h15H3/avb6 CDR-L3 WQGTHFPRT
753 h15H3/avb6 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSGYFMNWVRQAPGQGLEWMGLINPYNGDSFY NQKFKGRVTMTRQTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCVRGLRRDFDYWGQGTLVTVSS
754 h15H3/avb6 VL DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLFQRPGQSPRRLIYLVSELD SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPRTFGGGTKLEIK
755 CD48 CDR-H1 DFGMN
756 CD48 CDR-H2 WINTFTGEPSYGNVFKG
757 CD48 CDR-H3 RHGNGNVFDS
758 CD48 CDR-L1 RASQSIGSNIH
759 CD48 CDR-L2 YTSESIS
760 CD48 CDR-L3 QQSNSWPLT
761 CD48 VH QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTFTGEPSYGNVFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARRHGNGNVFDSWGQGTLVTVSS
762 CD48 VL EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSIGSNIHWYQQKPDQSPKLLIKYTSESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQSNSWPLTFGGGTKVEIKR
763 IGF-1R CDR-H1 SYAIS
764 IGF-1R CDR-H2 GIIPIFGTANYAQKFQG
765 IGF-1R CDR-H3 APLRFLEWSTQDHYYYYYMDV
766 IGF-1R CDR-L1 QGDSLRSYYAT
767 IGF-1R CDR-L2 GENKRPS
768 IGF-1R CDR-L3 KSRDGSGQHLV
769 IGF-1R VH EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANY AQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAPLRFLEWSTQDHYYYYYMDVWGKGTTVTVSS
770 IGF-1R VL SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYATWYQQKPGQAPILVIYGENKRPSGIPDR FSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCKSRDGSGQHLVFGGGTKLTVL
771 密連蛋白-18.2 CDR-H1 SYWIN
772 密連蛋白-18.2 CDR-H2 NIYPSDSYTNYNQKFKD
773 密連蛋白-18.2 CDR-H3 SWRGNSFDY
774 密連蛋白-18.2 CDR-L1 KSSQSLLNSGNQKNYLT
775 密連蛋白-18.2 CDR-L2 WASTRES
776 密連蛋白-18.2 CDR-L3 QNDYSYPFT
777 密連蛋白-18.2 VH QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTSYWINWVKQRPGQGLEWIGNIYPSDSYTN YNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSPTSEDSAVYYCTRSWRGNSFDYWGQGTTLTVSS
778 密連蛋白-18.2 VL DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTR ESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPFTFGSGTKLEIK
779 密連蛋白-18.2 CDR-H1 NYGMN
780 密連蛋白-18.2 CDR-H2 WINTNTGEPTYAEEFKG
781 密連蛋白-18.2 CDR-H3 LGFGNAMDY
782 密連蛋白-18.2 CDR-L1 KSSQSLLNSGNQKNYLT
783 密連蛋白-18.2 CDR-L2 WASTRES
784 密連蛋白-18.2 CDR-L3 QNDYSYPLT
785 密連蛋白-18.2 VH QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTNTGEPTY AEEFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCARLGFGNAMDYWGQGTSVTVSS
786 密連蛋白-18.2 VL DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTR ESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPLTFGAGTKLELK
787 連接素-4 CDR-H1 SYNMN
788 連接素-4 CDR-H2 YISSSSSTIYYADSVKG
789 連接素-4 CDR-H3 AYYYGMDV
790 連接素-4 CDR-L1 RASQGISGWLA
791 連接素-4 CDR-L2 AASTLQS
792 連接素-4 CDR-L3 QQANSFPPT
793 連接素-4 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYNMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTIYY ADSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMNSLRDEDTAVYYCARAYYYGMDVWGQGTTVTVSS
794 連接素-4 VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISGWLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPTFGGGTKVEIK
795 SLTRK6 CDR-H1 SYGMH
796 SLTRK6 CDR-H2 VIWYDGSNQYYADSVKG
797 SLTRK6 CDR-H3 GLTSGRYGMDV
798 SLTRK6 CDR-L1 RSSQSLLLSHGFNYLD
799 SLTRK6 CDR-L2 LGSSRAS
800 SLTRK6 CDR-L3 MQPLQIPWT
801 SLTRK6 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNQYY ADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMHSLRAEDTAVYYCARGLTSGRYGMDVWGQGTTVTVSS
802 SLTRK6 VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLLSHGFNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSSRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYYCMQPLQIPWTFGQGTKVEIK
803 CD142 (TF) CDR-H1 NYAMS
804 CD142 (TF) CDR-H2 SISGSGDYTYYTDSVKG
805 CD142 (TF) CDR-H3 SPWGYYLDS
806 CD142 (TF) CDR-L1 RASQGISSRLA
807 CD142 (TF) CDR-L2 AASSLQS
808 CD142 (TF) CDR-L3 QQYNSYPYT
809 CD142 (TF) VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGDYTY YTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSPWGYYLDSWGQGTLVTVSS
810 CD142 (TF) VL DIQMTQSPPSLSASAGDRVTITCRASQGISSRLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK
811 h2G12/STn CDR-H1 DHAIH
812 h2G12/STn CDR-H2 YFSPGNDDIKYNEKFRG
813 h2G12/STn CDR-H3 SLSTPY
814 h2G12/STn CDR-L1 KSSQSLLNRGNHKNYLT
815 h2G12/STn CDR-L2 WASTRES
816 h2G12/STn CDR-L3 QNDYTYPYT
817 h2G12/STn VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHAIHWVRQAPGQGLEWMGYFSPGNDDIKY NEKFRGRVTMTADKSSSTAYMELRSLRSDDTAVYFCKRSLSTPYWGQGTLVTVSS
818 h2G12/STn VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNRGNHKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWAST RESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYTYPYTFGQGTKVEIK
819 CD20 CDR-H1 SYNMH
820 CD20 CDR-H2 AIYPGNGDTSYNQKFKG
821 CD20 CDR-H3 STYYGGDWYFNV
822 CD20 CDR-L1 RASSSVSYIH
823 CD20 CDR-L2 ATSNLAS
824 CD20 CDR-L3 QQWTSNPPT
825 CD20 VH QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSY NQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA
826 CD20 VL QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVR FSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK
827 HER2 CDR-H1 DTYIH
828 HER2 CDR-H2 RIYPTNGYTRYADSVKG
829 HER2 CDR-H3 WGGDGFYAMDY
830 HER2 CDR-L1 RASQDVNTAVA
831 HER2 CDR-L2 SASFLYS
832 HER2 CDR-L3 QQHYTTPPT
833 HER2 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRY ADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS
834 HER2 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPS RFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK
835 CD79b CDR-H1 SYWIE
836 CD79b CDR-H2 EILPGGGDTNYNEIFKG
837 CD79b CDR-H3 RVPIRLDY
838 CD79b CDR-L1 KASQSVDYEGDSFLN
839 CD79b CDR-L2 AASNLES
840 CD79b CDR-L3 QQSNEDPLT
841 CD79b VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFSSYWIEWVRQAPGKGLEWIGEILPGGGDTNYNEIFKGRATFSADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRRVPIRLDYWGQGTLVTVSS
842 CD79b VL DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYEGDSFLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLES GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPLTFGQGTKVEIK
843 NaPi2B CDR-H1 DFAMS
844 NaPi2B CDR-H2 TIGRVAFHTYYPDSMKG
845 NaPi2B CDR-H3 HRGFDVGHFDF
846 NaPi2B CDR-L1 RSSETLVHSSGNTYLE
847 NaPi2B CDR-L2 RVSNRFS
848 NaPi2B CDR-L3 FQGSFNPLT
849 NaPi2B VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSDFAMSWVRQAPGKGLEWVATIGRVAFHTYY PDSMKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHRGFDVGHFDFWGQGTLVTVSS
850 NaPi2B VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSETLVHSSGNTYLEWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRF SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFQGSFNPLTFGQGTKVEIK
851 Muc16 CDR-H1 NDYAWN
852 Muc16 CDR-H2 YISYSGYTTYNPSLKS
853 Muc16 CDR-H3 WTSGLDY
854 Muc16 CDR-L1 KASDLIHNWLA
855 Muc16 CDR-L2 GATSLET
856 Muc16 CDR-L3 QQYWTTPFT
857 Muc16 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSITNDYAWNWVRQAPGKGLEWVGYISYSGYTTY NPSLKSRFTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWTSGLDYWGQGTLVTVSS
858 Muc16 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASDLIHNWLAWYQQKPGKAPKLLIYGATSLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYWTTPFTFGQGTKVEIK
859 STEAP1 CDR-H1 SDYAWN
860 STEAP1 CDR-H2 YISNSGSTSYNPSLKS
861 STEAP1 CDR-H3 ERNYDYDDYYYAMDY
862 STEAP1 CDR-L1 KSSQSLLYRSNQKNYLA
863 STEAP1 CDR-L2 WASTRES
864 STEAP1 CDR-L3 QQYYNYPRT
865 STEAP1 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGYSITSDYAWNWVRQAPGKGLEWVGYISNSGSTSYNPSLKSRFTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERNYDYDDYYYAMDYWGQGTLVTVSS
866 STEAP1 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYRSNQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYNYPRTFGQGTKVEIK
867 BCMA CDR-H1 NYWMH
868 BCMA CDR-H2 ATYRGHSDTYYNQKFKG
869 BCMA CDR-H3 GAIYDGYDVLDN
870 BCMA CDR-L1 SASQDISNYLN
871 BCMA CDR-L2 YTSNLHS
872 BCMA CDR-L3 QQYRKLPWT
873 BCMA VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSNYWMHWVRQAPGQGLEWMGATYRGHSDTYYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAIYDGYDVLDNWGQGTLVTVSS
874 BCMA VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSNLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYRKLPWTFGQGTKLEIK
875 c-Met CDR-H1 AYTMH
876 c-Met CDR-H2 WIKPNNGLANYAQKFQG
877 c-Met CDR-H3 SEITTEFDY
878 c-Met CDR-L1 KSSESVDSYANSFLH
879 c-Met CDR-L2 RASTRES
880 c-Met CDR-L3 QQSKEDPLT
881 c-Met VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFTAYTMHWVRQAPGQGLEWMGWIKPNNGLAN YAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSEITTEFDYWGQGTLVTVSS
882 c-Met VL DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSESVDSYANSFLHWYQQKPGQPPKLLIYRASTRE SGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEDPLTFGGGTKVEIK
883 EGFR CDR-H1 SDFAWN
884 EGFR CDR-H2 YISYSGNTRYQPSLKS
885 EGFR CDR-H3 AGRGFPY
886 EGFR CDR-L1 HSSQDINSNIG
887 EGFR CDR-L2 HGTNLDD
888 EGFR CDR-L3 VQYAQFPWT
889 EGFR VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYSISSDFAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGNTRY QPSLKSRITISRDTSKNQFFLKLNSVTAADTATYYCVTAGRGFPYWGQGTLVTVSS
890 EGFR VL DIQMTQSPSSMSVSVGDRVTITCHSSQDINSNIGWLQQKPGKSFKGLIYHGTNLDDGVPS RFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCVQYAQFPWTFGGGTKLEIK
891 SLAMF7 CDR-H1 DYYMA
892 SLAMF7 CDR-H2 SINYDGSSTYYVDSVKG
893 SLAMF7 CDR-H3 DRGYYFDY
894 SLAMF7 CDR-L1 RSSQSLVHSNGNTYLH
895 SLAMF7 CDR-L2 KVSNRFS
896 SLAMF7 CDR-L3 SQSTHVPPFT
897 SLAMF7 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMAWVRQAPGKGLEWVASINYDGSSTY YVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGYYFDYWGQGTTVTVSS
898 SLAMF7 VL DVVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRF SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTHVPPFTFGGGTKVEIK
899 C4.4a CDR-H1 NAWMS
900 C4.4a CDR-H2 YISSSGSTIYYADSVKG
901 C4.4a CDR-H3 EGLWAFDY
902 C4.4a CDR-L1 TGSSSNIGAGYVVH
903 C4.4a CDR-L2 DNNKRPS
904 C4.4a CDR-L3 AAWDDRLNGPV
905 C4.4a VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYY ADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGLWAFDYWGQGTLVTVSS
906 C4.4a VL ESVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYVVHWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGV PDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDRLNGPVFGGGTKLTVL
907 GCC CDR-H1 GYYWS
908 GCC CDR-H2 EINHRGNTNDNPSLKS
909 GCC CDR-H3 ERGYTYGNFDH
910 GCC CDR-L1 RASQSVSRNLA
911 GCC CDR-L2 GASTRAT
912 GCC CDR-L3 QQYKTWPRT
913 GCC VH QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVFGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEINHRGNTNDN PSLKSRVTISVDTSKNQFALKLSSVTAADTAVYYCARERGYTYGNFDHWGQGTLVTVSS
914 GCC VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSRNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIP ARFSGSGSGTEFTLTIGSLQSEDFAVYYCQQYKTWPRTFGQGTNVEIK
915 Axl CDR-H1 SYAMN
916 Axl CDR-H2 TTSGSGASTYYADSVKG
917 Axl CDR-H3 IWIAFDI
918 Axl CDR-L1 RASQSVSSSYLA
919 Axl CDR-L2 GASSRAT
920 Axl CDR-L3 QQYGSSPYT
921 Axl VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSTTSGSGASTYY ADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKIWIAFDIWGQGTMVTVSS
922 Axl VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIP DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPYTFGQGTKLEIK
923 CR011/gpNMB CDR-H1 SFNYYWS
924 CR011/gpNMB CDR-H2 YIYYSGSTYSNPSLKS
925 CR011/gpNMB CDR-H3 GYNWNYFDY
926 CR011/gpNMB CDR-L1 RASQSVDNNLV
927 CR011/gpNMB CDR-L2 GASTRAT
928 CR011/gpNMB CDR-L3 QQYNNWPPWT
929 CR011/gpNMB VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSFNYYWSWIRHHPGKGLEWIGYIYYSGSTY SNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLTLSSVTAADTAVYYCARGYNWNYFDYWGQGTLVTVSS
930 CR011/gpNMB VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVDNNLVWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPA RFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIK
931 CR011/gpNMB HC QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSFNYYWSWIRHHPGKGLEWIGYIYYSGSTYSNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLTLSSVTAADTAVYYCARGYNWNYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
932 CR011/gpNMB LC EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVDNNLVWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
933 催乳素受體CDR-H1 TYWMH
934 催乳素受體CDR-H2 EIDPSDSYSNYNQKFKD
935 催乳素受體CDR-H3 NGGLGPAWFSY
936 催乳素受體CDR-L1 KASQYVGTAVA
937 催乳素受體CDR-L2 SASNRYT
938 催乳素受體CDR-L3 QQYSSYPWT
939 催乳素受體VH EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTTYWMHWVRQAPGQGLEWIGEIDPSDSYSNY NQKFKDRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNGGLGPAWFSYWGQGTLVTVSS
940 催乳素受體VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASQYVGTAVAWYQQKPGKSPKLLIYSASNRYTGVPS RFSDSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQYSSYPWTFGGGTKVEIK
941 FGFR2 CDR-H1 SYAMS
942 FGFR2 CDR-H2 AISGSGTSTYYADSVKG
943 FGFR2 CDR-H3 VRYNWNHGDWFDP
944 FGFR2 CDR-L1 SGSSSNIGNNYVS
945 FGFR2 CDR-L2 ENYNRPA
946 FGFR2 CDR-L3 SSWDDSLNYWV
947 FGFR2 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGTSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVRYNWNHGDWFDPWGQGTLVTVSS
948 FGFR2 VL QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYENYNRPAGVP DRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCSSWDDSLNYWVFGGGTKLTVL
949 CDCP1 CDR-H1 SYGMS
950 CDCP1 CDR-H2 TISSGGSYKYYVDSVKG
951 CDCP1 CDR-H3 HPDYDGVWFAY
952 CDCP1 CDR-L1 SVSSSVFYVH
953 CDCP1 CDR-L2 DTSKLAS
954 CDCP1 CDR-L3 QQWNSNPPT
955 CDCP1 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNSYGMSWVRQAPGKGLEWVATISSGGSYKYY VDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHPDYDGVWFAYWGQGTLVTVSS
956 CDCP1 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSVFYVHWYQQKPGKAPKLLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQWNSNPPTFGGGTKVEIK
957 CDCP1 CDR-H1 SYGMS
958 CDCP1 CDR-H2 TISSGGSYTYYPDSVKG
959 CDCP1 CDR-H3 HPDYDGVWFAY
960 CDCP1 CDR-L1 SVSSSVFYVH
961 CDCP1 CDR-L2 DTSKLAS
962 CDCP1 CDR-L3 QQWNSNPPT
963 CDCP1 VH EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFNSYGMSWVRQTPDKRLEWVATISSGGSYTYY PDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCARHPDYDGVWFAYWGQGTLVTVSA
964 CDCP1 VL QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSVSSSVFYVHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPARF SGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWNSNPPTFGGGTKLEIK
965 CDCP1 CDR-H1 SYYMH
966 CDCP1 CDR-H2 IINPSGGSTSYAQKFQG
967 CDCP1 CDR-H3 DGVLRYFDWLLDYYYYMDV
968 CDCP1 CDR-L1 RASQSVGSYLA
969 CDCP1 CDR-L2 DASNRAT
970 CDCP1 CDR-L3 QQRANVFT
971 CDCP1 VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSY AQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDGVLRYFDWLLDYYYYMDVWGKG TTVTVSS
972 CDCP1 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGSYLAWYQQRPGQAPRLLIYDASNRATGIPA RFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRANVFTFGQGTKVEIK
973 CDCP1 CDR-H1 SYYMH
974 CDCP1 CDR-H2 IINPSGGSTSYAQKFQG
975 CDCP1 CDR-H3 DAELRHFDHLLDYHYYMDV
976 CDCP1 CDR-L1 RASQSVGSYLA
977 CDCP1 CDR-L2 DASNRAT
978 CDCP1 CDR-L3 QQRAQEFT
979 CDCP1 VH EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDAELRHFDHLLDYHYYMDVWGQGTTVTVSS
980 CDCP1 VL EIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVGSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPA RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQRAQEFTFGQGTKVEIK
981 ASCT2 VH QVQLVQSGSELKKPGAPVKVSCKASGYTFSTFGMSWVRQAPGQGLKWMGWIHTYAGVPIYGDDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYFCARRSDNYRYFFDYWGQGTTVTVSS
982 ASCT2 VL DIQMTQSPSSLSASLGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQGHTLPPTFGQGTKLEIK
983 ASCT2 VH QIQLVQSGPELKKPGAPVKISCKASGYTFTTFGMSWVKQAPGQGLKWMGWIHTYAGVPIYGDDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSVKAEDTATYFCARRSDNYRYFFDYWGQGTTLTVSS
984 ASCT2 VL DIQMTQSPSSLSASLGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHSGVPS RFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQGHTLPPTFGQGTKLEIK
985 ASCT2 CDR-H1 NYYMA
986 ASCT2 CDR-H2 SITKGGGNTYYRDSVKG
987 ASCT2 CDR-H3 QVTIAAVSTSYFDS
988 ASCT2 CDR-L1 KTNQKVDYYGNSYVY
989 ASCT2 CDR-L2 LASNLAS
990 ASCT2 CDR-L3 QQSRNLPYT
991 ASCT2 VH EVQLVESGGGLVQSGRSIRLSCAASGFSFSNYYMAWVRQAPSKGLEWVASITKGGGNTYYRDSVKGRFTFSRDNAKSTLYLQMDSLRSEDTATYYCARQVTIAAVSTSYFDSWGQGVMVTVSS
992 ASCT2 VL DIVLTQSPALAVSLGQRATISCKTNQKVDYYGNSYVYWYQQKPGQQPKLLIYLASNLASGIPARFSGRGSGTDFTLTIDPVEADDTATYYCQQSRNLPYTFGAGTKLELK
993 CD123 CDR-H1 DYYMK
994 CD123 CDR-H2 DIIPSNGATFYNQKFKG
995 CD123 CDR-H3 SHLLRASWFAY
996 CD123 CDR-L1 KSSQSLLNSGNQKNYLT
997 CD123 CDR-L2 WASTRES
998 CD123 CDR-L3 QNDYSYPYT
999 CD123 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKMSCKASGYTFTDYYMKWVKQAPGQGLEWIGDIIPSNGATFYNQKFKGKATLTVDRSISTAYMHLNRLRSDDTAVYYCTRSHLLRASWFAYWGQGTLVTVSS
1000 CD123 VL DFVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYSYPYTFGQGTKLEIK
1001 GPC3 CDR-H1 DYEMH
1002 GPC3 CDR-H2 GIDPETGGTAYNQKFKG
1003 GPC3 CDR-H3 YYSFAY
1004 GPC3 CDR-L1 RSSQSIVHSNANTYLQ
1005 GPC3 CDR-L2 KVSNRFS
1006 GPC3 CDR-L3 FQVSHVPYT
1007 GPC3 VH EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTDYEMHWVQQAPGKGLEWMGGIDPETGGTAYNQKFKGRVTLTADKSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCGRYYSFAYWGQGTLVTVSS
1008 GPC3 VL DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNANTYLQWFQQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQVSHVPYTFGQGTKLEIK
1009 TIGIT CDR-H1 SYAIS
1010 TIGIT CDR-H2 SIIPIFGTANYAQKFQG
1011 TIGIT CDR-H3 GPSEVGAILGYVWFDP
1012 TIGIT CDR-L1 RSSQSLLHSNGYNYLD
1013 TIGIT CDR-L2 LGSNRAS
1014 TIGIT CDR-L3 MQARRIPIT
1015 TIGIT VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGSIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGPSEVGAILGYVWFDPWGQGTLVTVSS
1016 TIGIT VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQARRIPITFGGGTKVEIK
1017 CD33 CDR-H1 NYDIN
1018 CD33 CDR-H2 WIYPGDGSTKYNEKFKA
1019 CD33 CDR-H3 GYEDAMDY
1020 CD33 CDR-L1 KASQDINSYLS
1021 CD33 CDR-L2 RANRLVD
1022 CD33 CDR-L3 LQYDEFPLT
1023 CD33 VH QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYDINWVRQA PGQGLEWIGW IYPGDGSTKY NEKFKAKATL TADTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCASGY EDAMDYWGQG TTVTVSS
1024 CD33 VL DIQMTQSPS SLSASVGDRVT INCKASQDINSYLSWFQQKPGKAPKTL IYRANRLVDGVPS RFSGSGSGQDYTLT ISSLQPEDFATYYCLQYDEFPLTFGGGTKVEIK
1025 BCMA CDR-H1 DYYIH
1026 BCMA CDR-H2 YINPNSGYTNYAQKFQG
1027 BCMA CDR-H3 YMWERVTGFFDF
1028 BCMA CDR-L1 LASEDISDDLA
1029 BCMA CDR-L2 TTSSLQS
1030 BCMA CDR-L3 QQTYKFPPT
1031 BCMA VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYTFTDYYIHWVRQAPGQGLEWIGYINPNSGYTNYAQKFQGRATMTADKSINTAYVELSRLRSDDTAVYFCTRYMWERVTGFFDFWGQGTMVTVSS
1032 BCMA VL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCLASEDISDDLAWYQQKPGKAPKVLVYTTSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQTYKFPPTFGGGTKVEIK
1033 ＜Q13433；蛋白質 MARKLSVILI LTFALSVTNP LHELKAAAFP QTTEKISPNW ESGINVDLAI STRQYHLQQL FYRYGENNSL SVEGFRKLLQ NIGIDKIKRI HIHHDHDHHS DHEHHSDHER HSDHEHHSEH EHHSDHDHHS HHNHAASGKN KRKALCPDHD SDSSGKDPRN SQGKGAHRPE HASGRRNVKD SVSASEVTST VYNTVSEGTH FLETIETPRP GKLFPKDVSS STPPSVTSKS RVSRLAGRKT NESVSEPRKG FMYSRNTNEN PQECFNASKL LTSHGMGIQV PLNATEFNYL CPAIINQIDA RSCLIHTSEK KAEIPPKTYS LQIAWVGGFI AISIISFLSL LGVILVPLMN RVFFKFLLSF LVALAVGTLS GDAFLHLLPH SHASHHHSHS HEEPAMEMKR GPLFSHLSSQ NIEESAYFDS TWKGLTALGG LYFMFLVEHV LTLIKQFKDK KKKNQKKPEN DDDVEIKKQL SKYESQLSTN EEKVDTDDRT EGYLRADSQE PSHFDSQQPA VLEEEEVMIA HAHPQEVYNE YVPRGCKNKC HSHFHDTLGQ SDDLIHHHHD YHHILHHHHH QNHHPHSHSQ RYSREELKDA GVATLAWMVI MGDGLHNFSD GLAIGAAFTE GLSSGLSTSV AVFCHELPHE LGDFAVLLKA GMTVKQAVLY NALSAMLAYL GMATGIFIGH YAENVSMWIF ALTAGLFMYV ALVDMVPEML HNDASDHGCS RWGYFFLQNA GMLLGFGIML LISIFEHKIV FRINF
1034 hLIV22抗原決定基 KGAHRPEH 
式(II)化合物
一些實施例提供式(II)化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： M為丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺； R 1為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； 各R 2及R 3獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F； 各R A、R B、R C、R D、R E及R F獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標m獨立地為0或1； 各下標q獨立地為整數0至6； X A為-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X B不存在或為2員至16員伸雜烷基； X B、M及L各自獨立地視情況經選自PEG2至PEG72的PEG單元取代；且 L為如本文所述的視情況存在之連接子。
在一些實施例中，式(II)化合物具有以下結構： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； 各R 2及R 3獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F； 各R A、R B、R C、R D、R E及R F獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標m獨立地為0或1； 各下標q獨立地為整數0至6； X A為-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X B不存在或為2員至16員伸雜烷基； L為具有式-(A) a-(W) w-(Y) y-的連接子，其中： A為視情況經1至3個R a1取代之C 2 - 20伸烷基；或視情況經1至3個R b1取代之2員至40員伸雜烷基； 各R a1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R b1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d1及R e1獨立地為氫或C 1 - 3烷基； W為1至12個胺基酸或具有以下結構： ； 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至A或M；且*表示共價連接至Y、X A或X B。 Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分或不可裂解部分； 下標a為0或1； 下標y為0或1； 下標w為0或1； M為 ； 各AA為獨立選擇之胺基酸，其中(AA) b經由硫原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺； 各下標b獨立地為整數1至6；且 X B及L各自獨立地視情況經選自PEG2至PEG 72的PEG單元取代。
如本文所用，A當存在時共價連接至M或M 1，且Y當存在時連接至X B或連接至X A(當X B不存在時)。
在一些實施例中，M為 。
在一些實施例中，M為 。在一些態樣中，M為 。在一些態樣中，M為 。
在一些實施例中，M為 。在一些態樣中，M為 。在一些態樣中，M為 。
在一些實施例中，M為 。在一些態樣中，M為 。在一些態樣中，M為 。
在一些實施例中，各AA獨立地為天然胺基酸；其中(AA) b經由硫原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺。在一些實施例中，各AA獨立地為天然胺基酸；其中(AA) b經由半胱胺酸殘基的硫原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺。
在一些實施例中，各AA獨立地為天然胺基酸；其中(AA) b經由氮原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺。在一些實施例中，各AA獨立地為天然胺基酸；其中(AA) b經由離胺酸殘基的ϵ-氮原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺。
在一些實施例中，各下標b為1、2或3。在一些實施例中，各下標b為1。在一些實施例中，各下標b為2。在一些實施例中，各下標b為3。在一些實施例中，各下標b為3、4、5或6。在一些實施例中，各下標b為4。在一些實施例中，各下標b為5。在一些實施例中，各下標b為6。
在一些實施例中，M為 。在一些態樣中，M為 。在一些態樣中，M為 。
在一些實施例中，M為 。在一些態樣中，M為 。在一些態樣中，M為 。
在一些實施例中，M為 。在一些態樣中，M為 。在一些態樣中，M為 。
在一些實施例中，R 1為甲氧基且R 2與R 3均為-C(=O)NH 2。在一些實施例中，X A為-O-且X B為 ，其中 表示共價鍵聯至X A，且*表示共價鍵聯至L (當存在時)或M。在一些實施例中，R 1為甲氧基；R 2與R 3均為-C(=O)NH 2；X A為-O-；且X B為 ，其中 表示共價鍵聯至X A，且*表示共價鍵聯至L (當存在時)或M。在一些此類實施例中，L不存在。在一些實施例中，R 1為甲氧基；R 2與R 3均為-C(=O)NH 2；X A為-O-；X B為 ，其中 表示共價鍵聯至X A，且*表示共價鍵聯至L；且下標a與下標y均為0 (亦即，X B共價連接至W)。在一些實施例中，X A為-O-；且X B為 ，其中 表示共價鍵聯至X A，且*表示共價鍵聯至L。在一些實施例中，R 1為甲氧基；R 2與R 3均為-C(=O)NH 2；X A為-O-；且X B為 ，其中 表示共價鍵聯至X A，且*表示共價鍵聯至L；且下標a與下標w均為0。
在一些實施例中，R 1為甲氧基；R 2與R 3均為-C(=O)NH 2；X A為-O-；且X B為 ，其中 表示共價鍵聯至X A，且*表示共價鍵聯至L；且下標y與下標w均為0。
在一些實施例中，R 1為甲氧基；R 2與R 3均為-C(=O)NH 2；X A為-O-；且X B為 ，其中 表示共價鍵聯至X A，且*表示共價鍵聯至L；且下標y為0。
在一些實施例中，R 1為甲氧基且R 2與R 3均為-C(=O)NH 2。在一些實施例中，X A為-CH 2-；且X B為 ，其中 表示共價鍵聯至X A，且*表示共價鍵聯至L (當存在時)或M。在一些實施例中，R 1為甲氧基；R 2與R 3均為-C(=O)NH 2；X A為-CH 2-；且X B為 ，其中 表示共價鍵聯至X A，且*表示共價鍵聯至L (當存在時)或M。在一些實施例中，R 1為甲氧基；R 2與R 3均為-C(=O)NH 2；X A為-CH 2-；且X B為 ，其中 表示共價鍵聯至X A，且*表示共價鍵聯至L；且下標a與下標y均為0 (亦即，X B共價連接至W)。在一些實施例中，X A為-CH 2-；且X B為 ，其中 表示共價鍵聯至X A，且*表示共價鍵聯至L。在一些實施例中，R 1為甲氧基；R 2與R 3均為-C(=O)NH 2；X A為-CH 2-；且X B為 ，其中 表示共價鍵聯至X A，且*表示共價鍵聯至L；且下標a與下標y均為0 (亦即，X B共價結合至Y)。
在一些此類實施例中，L為具有式-(A) a-(W) w-(Y) y-的連接子。
在一些實施例中：X B不存在且L共價連接至X A。在一些實施例中：X B不存在且Y共價連接至X A。在一些實施例中：X B不存在且Y不存在，且W共價連接至X A。在一些實施例中：X B不存在，Y不存在，W不存在，且A共價連接至X A。
在一些實施例中：X B為2員至16員伸雜烷基且L共價連接至X B。在一些實施例中：X B為2員至16員伸雜烷基且Y共價連接至X B。在一些實施例中：X B為2員至16員伸雜烷基，Y不存在且W共價連接至X B。在一些實施例中：X B為2員至16員伸雜烷基，Y不存在，W不存在，且A共價連接至X B。
在一些實施例中，W 1為-OC(=O)-且下標y為1。在一些實施例中，X A為-O-且X B及W不存在。在一些實施例中，X A為NH或-O-，X B不存在，且W 1為-OC(=O)。在一些實施例中，X A為-N(CH 3)-，X B不存在且W 1為-OC(=O)。在一些實施例中，X A為-S-，X B不存在，且W 1為-OC(=O)。在一些實施例中，W 1為-OC(=O)-且X B經由-O-或-NH-共價連接至W。
在一些實施例中，A共價連接至M。在一些實施例中，當下標a為0且下標w為0時，Y共價連接至M。在一些實施例中，當下標a、y及w各自為0時，X B共價連接至M。
在一些實施例中，式(II)化合物選自由以下組成之群：
。
上文所示的結構包括所有互變異構形式。因此，舉例而言，結構： 應理解為涵蓋以下互變異構形式： ， ， ，及 。 式(II-A)化合物
在一些實施例中，式(II)化合物具有式(II-A)之結構： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： L A為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-或-C(O)NR H(CH 2) 1 - 6-； 各R H獨立地為氫或C 1 - 3烷基； Y為 ； #表示共價連接至-NR HL A； ##表示共價連接至W或L B； L B為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-或-[NHC(O)(CH 2) 1 - 4] 1 - 3-；且 其餘變數如上文關於式(II)所定義。
在一些實施例中，R H為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R H為甲基。在一些實施例中，R H不為氫。在一些實施例中，L A為-(CH 2) 2 - 6-。在一些實施例中，L A為-(CH 2) 3-。在一些實施例中，下標y為0。在一些實施例中，下標y為1。在一些實施例中，下標w為0。在一些實施例中，下標w為1。在一些實施例中，下標y且下標w均為1。在一些實施例中，下標y與下標w均為0。當下標y與下標w均為0時，式(II)化合物具有式(II-B)之結構： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： L A為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-或-C(O)NR H(CH 2) 1 - 6-； 各R H獨立地為氫或C 1 - 3烷基； L B為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-或-[NHC(O)(CH 2) 1 - 4] 1 - 3-；且 其餘變數如上文關於式(II)所定義。
在一些實施例中，W為1至6個胺基酸之鏈。在一些實施例中，W為1至4個胺基酸之鏈。在一些實施例中，W為1至3個胺基酸之鏈。在一些實施例中，W之各胺基酸獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、組胺酸、精胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、O-甲基絲胺酸、O-甲基天冬胺酸、O-甲基麩胺酸、N-甲基離胺酸、O-甲基酪胺酸、O-甲基組胺酸及O-甲基蘇胺酸。
在一些實施例中，W為： ，其中： 表示共價連接至L B；且 * 表示共價連接至Y或NR H。
在一些實施例中，L B為-C(O)(CH 2) 2 - 6-。在一些實施例中，L B為-C(O)(CH 2) 2-。在一些實施例中，L B為-C(O)(CH 2) 3-。在一些實施例中，L B為-C(O)(CH 2) 4-。在一些實施例中，L B為-C(O)(CH 2) 5-。在一些實施例中，L B為-C(O)(CH 2) 6-。在一些實施例中，L B為-[NHC(O)(CH 2) 2] 2-。在一些實施例中，M為 。在一些實施例中，M為 。在一些態樣中，M為 。在一些態樣中，M為 。
在一些實施例中，式(II-A)化合物選自由以下組成之群： ，及其醫藥學上可接受之鹽。 式(III)化合物
一些實施例提供式(III)化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1A為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) nn-NR AAR BB； 各R 2A及R 3A獨立地為-CO 2H、-(C=O) mm-NR CCR DD或-(CH 2) qq-NR EE1R FF1； 各下標nn獨立地為整數0至6； 各下標mm獨立地為0或1； 各下標qq獨立地為整數0至6； Y 1為-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X 1為C 2-C 6伸烷基； Z 1為-NR EER FF、-C(=O)NR GGR HH或-CO 2H； 各R AA、R BB、R CC、R DD、R EE1及R FF1獨立地為氫或C 1 - 3烷基；且 各R EE、R FF、R GG及R HH獨立地為氫或C 1 - 6烷基。
在一些實施例中，R 1A為氫。在一些實施例中，R 1A為羥基。在一些實施例中，R 1A為C 1 - 6烷氧基。在一些實施例中，R 1為甲氧基。在一些實施例中，R 1A為-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基。在一些實施例中，R 1A為甲氧基乙基。
在一些實施例中，R 1為-(CH 2) nn-NR AAR BB。在一些實施例中，R AA與R BB均為氫。在一些實施例中，R AA及R BB獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R AA及R BB中之一者為氫且R AA及R BB中之另一者為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，C 1 - 3烷基為甲基。在一些實施例中，各下標nn為0。在一些實施例中，各下標nn為1。在一些實施例中，各下標nn為2。在一些實施例中，各下標nn為3。在一些實施例中，各下標nn為3、4、5或6。在一些實施例中，各下標nn為4。在一些實施例中，各下標nn為5。在一些實施例中，各下標nn為6。
在一些實施例中，各R 2A及R 3A獨立地為-CO 2H、-(C=O) mm-NR CCR DD或-(CH 2) qq-NR EE1R FF1；且R 2A與R 3A相同。在一些實施例中，各R 2A及R 3A獨立地為-CO 2H、-(C=O) mm-NR CCR DD或-(CH 2) qq-NR EE1R FF1；且R 2A與R 3A不同。
在一些實施例中，R 2A為-(C=O) mm-NR CCR DD。在一些實施例中，R 3A為-(C=O) mm-NR CCR DD。在一些實施例中，各R CC及各R DD為氫。在一些實施例中，各R CC及各R DD獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，各R CC及R DD中之一者為氫且各R CC及R DD中之另一者為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，C 1 - 3烷基為甲基。在一些實施例中，各下標mm為0。在一些實施例中，各下標mm為1。
在一些實施例中，R 2A為-(CH 2) qq-NR EE1R FF1。在一些實施例中，R 3A為-(CH 2) qq-NR EE1R FF1。在一些實施例中，各R EE1及各R FF1為氫。在一些實施例中，各R EE1及各R FF1獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，各R EE1及R FF1中之一者為氫且各R EE1及R FF1中之另一者為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，C 1 - 3烷基為甲基。在一些實施例中，各下標q為0。在一些實施例中，各下標q為整數1至6。在一些實施例中，各下標qq為1。在一些實施例中，各下標qq為2。在一些實施例中，各下標qq為3、4、5或6。
在一些實施例中，R 3A為-CO 2H。在一些實施例中，R 2A為-CO 2H。
在一些實施例中，Y 1為-CH 2-。在一些實施例中，Y 1為-O-。在一些實施例中，Y 1為-S-。在一些實施例中，Y 1為-NH-。在一些實施例中，Y 1為-N(CH 3)-。
在一些實施例中，X 1為C 2-C 5伸烷基。在一些實施例中，X 1為C 2-C 4伸烷基。在一些實施例中，X 1為伸乙基或伸正丙基。在一些實施例中，X 1為伸乙基。在一些實施例中，X 1為伸正丙基。
在一些實施例中，Z 1為-NR E1R F1。在一些實施例中，R EE與R FF均為氫。在一些實施例中，R EE及R FF獨立地為C 1 - 6烷基。在一些實施例中，R EE及R FF中之一者為氫且R EE及R FF中之另一者為C 1 - 6烷基。在一些實施例中，C 1 - 6烷基為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，C 1 - 3烷基為甲基。
在一些實施例中，Z 1為-C(=O)NR GGR HH。在一些實施例中，R GG與R HH均為氫。在一些實施例中，R GG及R HH獨立地為C 1 - 6烷基。在一些實施例中，R GG及R HH中之一者為氫且R GG及R HH中之另一者為C 1 - 6烷基。在一些實施例中，C 1 - 6烷基為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，C 1 - 3烷基為甲基。在一些實施例中，Z 1為-CO 2H。在一些實施例中，Z 1為-NR EER FF。在一些實施例中，R EE為氫且R FF為甲基。
在一些實施例中，R 1A為甲氧基且R 2A與R 3A均為-C(=O)NH 2。在一些實施例中，Y 1為-O-且X 1為C 3伸烷基。在一些實施例中，Y 1為-O-且X 1為伸正丙基。在一些實施例中，Y 1為-O-，X 1為伸正丙基且Z 1為-NH 2。在一些實施例中，Y 1為-O-，X 1為伸正丙基，且Z 1為-NHCH 3。在一些實施例中，Y 1為-O-，X 1為伸正丙基，且Z 1為-N(CH 3) 2。
在一些實施例中，R 1A為甲氧基；R 2A與R 3A均為-C(=O)NH 2；Y 1為-O-；X 1為伸正丙基；且Z 1為-NH 2。在一些實施例中，R 1A為甲氧基；R 2A與R 3A均為-C(=O)NH 2；Y 1為-O-；X 1為伸正丙基；且Z 1為-NHCH 3。在一些實施例中，R 1A為甲氧基；R 2A與R 3A均為-C(=O)NH 2；Y 1為-O-；X 1為伸正丙基；且Z 1為-N(CH 3) 2。
在一些實施例中，式(III)化合物為 。 式(IV)化合物
一些實施例包括式(IV)化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1C為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； R 2C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 2C連接於標記為1、2或3之任一位置； R 3C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 3C連接於標記為1'、2'或3'之任一位置； 各R A、R B、R C、R D、R E、R F及R M獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標q獨立地為整數0至6； L E為-(C=O)-或-S(O) 2-； L C為-(CR IR J) 1-3- 各R I及R J獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 下標s為0或1； 各Cy 1獨立地為4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或C 3 - 6環烷基，其各自視情況經一或多個R K取代； 各R K獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d2R e2、-C(O)NR d2R e2、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d2及R e2獨立地為氫或C 1 - 3烷基； L AA為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-、-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6-、-(CH 2) 1 - 6O-、-C(O)(CH 2) 1 - 6O-或-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6O-； R L為氫或C 1 - 3烷基； Cy 2為C 3 - 6環烷基、4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或苯基，其各自視情況經一或多個R U取代； 各R U獨立地選自由以下組成之群：-CO 2R j1、-(C=O)NR d3R e3、-S(O) 2NR d3R e3、-(CH 2) q1-NR g1R h1、-(CH 2) q1-OR j1及-(CH 2) q1-(OCH 2CH 2) 1 - 8OH； 各R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 下標q1為整數0至6； 下標t1及t2獨立地為0或1，其中t1及t2中之至少一者為1； L D為-(CH 2) 1-6-； 下標u為0或1； Z為-N(R HH)-或-N +(C 1 - 6烷基)(R HH)-； R HH為氫、C 1 - 6烷基、C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 1 - 3烷氧基、-(CH 2) 1 - 34員至6員雜環、或-(CH 2) 1 - 35員至6員雜芳基； Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分或不可裂解部分； 下標y為0或1； W為1至12個胺基酸之鏈或具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至L BB； * 表示共價連接至Y、L D、NR HH或Cy 2； 下標w為0或1； L BB為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-或-[NHC(O)(CH 2) 1 - 4] 1 - 3-；且 M為 ； 各AA為獨立選擇之胺基酸，其中(AA) b經由硫原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺；且 各下標b獨立地為整數1至6。
在一些實施例中，R 1C為氫。在一些實施例中，R 1C為羥基。在一些實施例中，R 1C為C 1 - 6烷氧基。在一些實施例中，R 1C為甲氧基。在一些實施例中，R 1C為-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基。在一些實施例中，R 1C為甲氧基乙基。在一些實施例中，R 1C為PEG2至PEG4。在一些實施例中，R 1C為-(CH 2) n-NR AR B。
在一些實施例中，R A與R B均為氫。在一些實施例中，R A與R B獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R A及R B中之一者為氫且R A及R B中之另一者為C 1 - 3烷基。
在一些實施例中，各下標n為0。在一些實施例中，各下標n為1。在一些實施例中，各下標n為2。在一些實施例中，各下標n為3、4、5或6。
在一些實施例中，R 2C及R 3C獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C與R 3C相同。在一些實施例中，R 2C及R 3C獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C與R 3C不同。在一些實施例中，R 2C為-(C=O) m-NR CR D。在一些實施例中，R 3C為-(C=O) m-NR CR D。在一些實施例中，R C與R D均為氫。在一些實施例中，R C及R D各自獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R C及R D中之一者為氫且R C及R D中之另一者為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，各下標m為0。在一些實施例中，各下標m為1。
在一些實施例中，R 2C為-(CH 2) q-NR ER F。在一些實施例中，R 3C為-(CH 2) q-NR ER F。在一些實施例中，R E與R F均為氫。在一些實施例中，R E及R F各自獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R E及R F中之一者為氫且R E及R F中之另一者為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，各下標q為0。在一些實施例中，各下標q為整數1至6。
在一些實施例中，R 2C為-CO 2R M。在一些實施例中，R 3C為-CO 2R M。在一些實施例中，R M為氫。在一些實施例中，R M為C 1 - 3烷基。
在一些實施例中，R 2C為-(CH 2) q-OR M。
在一些實施例中，R 3C為-(CH 2) q-OR M。在一些實施例中，R M為氫。在一些實施例中，q為0。在一些實施例中，q為1。
在一些實施例中，R 2C為-O(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R 3C為-O(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R E與R F均為氫。在一些實施例中，R E及R F各自獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R E及R F為氫且R E及R F中之另一者為C 1 - 3烷基。
在一些實施例中，R 2C為-NR M(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R 3C為-NR M(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R E、R F及R M皆為氫。在一些實施例中，R E、R F及R M各自獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R E、R F及R M中之一者為C 1 - 3烷基且R E、R F及R M之其餘部分為氫。
在一些實施例中，R 2C為-S(O) 2NR CR D。在一些實施例中，R 3C為-S(O) 2NR CR D。在一些實施例中，R C與R D均為氫。在一些實施例中，R C及R D各自獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R C及R D中之一者為氫且R C及R D中之另一者為C 1 - 3烷基。
在一些實施例中，R 2C為-S(O) 2R M。在一些實施例中，R 3C為-S(O) 2R M。在一些實施例中，R M為氫。在一些實施例中，R M為C 1 - 3烷基。
在一些實施例中，R 2C連接在位置1。在一些實施例中，R 2C連接在位置2。在一些實施例中，R 2C連接在位置3。在一些實施例中，R 3C連接在位置1'。在一些實施例中，R 3C連接在位置2'。在一些實施例中，R 3C連接在位置3'。
在一些實施例中，L E為-(C=O)-。在一些實施例中，L E為-S(O) 2-。
在一些實施例中，各R I及R J為氫。在一些實施例中，各R I及R J為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R I及R J中之一者為氫且R I及R J中之另一者為C 1 - 3烷基。
在一些實施例中，L C為-(CR IR J)-。
在一些實施例中，s為0。在一些實施例中，s為1。
在一些實施例中，各Cy 1獨立地為5員至6員雜芳基。在一些實施例中，各Cy 1為視情況經一或多個R K取代的吡唑。在一些實施例中，各Cy 1獨立地選自由以下組成之群：吡唑、咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、㗁唑、異㗁唑、吡咯、嗒𠯤、吡啶、嘧啶及吡𠯤，其各自視情況經一或多個R K取代。在一些實施例中，各Cy 1獨立地選自由以下組成之群：咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、㗁唑、異㗁唑、吡咯、嗒𠯤、吡啶、嘧啶及吡𠯤，其各自視情況經一或多個R K取代。在一些實施例中，各Cy 1獨立地為視情況經一或多個R K取代的C 4 - 5環烷基。在一些實施例中，各R K獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 3烷基、C 1 - 3鹵烷基及鹵素。在一些實施例中，各R K獨立地選自由以下組成之群：甲基、乙基、-CF 3及鹵素。
在一些實施例中，各Cy 1相同。在一些實施例中，各Cy 1不同。
在一些實施例中，L AA為-(CH 2) 1 - 6-。在一些實施例中，L AA為-(CH 2) 1 - 3-。在一些實施例中，L AA為-(CH 2) 1 - 6O-。在一些實施例中，L AA為-(CH 2) 1 - 3O-。
在一些實施例中，Cy 2為4員至6員雜環。在一些實施例中，Cy 2具有以下結構： ，其中下標z1及z2中之每一者獨立地為整數1至3且**指示連接至L AA。在一些實施例中，z1及z2為1。在一些實施例中，z1及z2為2。在一些實施例中，z1為1且z2為2。
在一些實施例中，Cy 2具有以下結構： ，其中 Z 1選自由以下組成之群：-O-、-S-、-CR NR O-及-NR P-； R N、R O及R P獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 下標z3為整數1至3；且 **指示連接至L AA。
在一些實施例中，R N及R O為氫。在一些實施例中，R P為氫。在一些實施例中，R P為甲基。
在一些實施例中，Cy 2為5員至6員雜芳基。在一些實施例中，Cy 2選自由以下組成之群： ，其中 Z 2為=CR N-或=N； R N為氫或C 1 - 6烷基；且 **指示連接至L AA。
在一些實施例中，Z 2為=CR N且R N為氫。在一些實施例中，Z 2為=N-。
在一些實施例中，Cy 2選自由以下組成之群： ， 其中Z 3為-O-或-S-且**指示連接至L AA、L D、NR HH、Y、W或L BB。
在一些實施例中，**指示連接至L AA。在一些實施例中，**指示連接至L D、NR HH、Y、W或L BB。
在一些實施例中，Cy 2選自由以下組成之群： ， 其中**指示連接至L AA。
在一些實施例中，Cy 2選自由以下組成之群： ，其中 各Z 2獨立地為=CR N-或=N-；且 各R N為氫或C 1 - 6烷基。
在一些實施例中，至少一個Z 2為=N-。在一些實施例中，一個Z 2為=N-且其餘Z 2為=CR N-。在一些實施例中，兩個Z 2為=N-且其餘Z 2為=CR N-。
在一些實施例中，R N為氫。
在一些實施例中，Cy 2選自由以下組成之群： 。
在一些實施例中，Cy 2為環丁基。
在一些實施例中，各R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地為氫或-CH 3。
在一些實施例中，各R U獨立地選自-CO 2H、-(C=O)NH 2、-S(O) 2NH 2、-CH 2NH 2及-CH 2OH。
在一些實施例中，t1為0且t2為1。在一些實施例中，t1為1且t2為0。在一些實施例中，t1為1且t2為1。
在一些實施例中，u為1且L D為-(CH 2) 1 - 3。在一些實施例中，u為0。
在一些實施例中，t2為1且R HH為氫。在一些實施例中，t2為1且R HH為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，t2為1且R HH為C 3 - 4環烷基。在一些實施例中，t2為1且R HH為-(CH 2)C 3 - 4環烷基。在一些實施例中，t2為1且R HH為-(CH 2) 4員至5員雜環。在一些實施例中，t2為1且R HH為-(CH 2) 5員雜芳基。
在一些實施例中，Z為-N(R HH)-。在其他實施例中，Z為-N +(C 1 - 6烷基)(R HH)-。
在一些實施例中，Y為 。
在一些實施例中，Y為環己烷羧基、十一醯基、己醯基(caproyl)、己醯基(hexanoyl)、丁醯基或丙醯基。在一些實施例中，Y為PEG4至PEG12。在一些實施例中，y為0。在一些實施例中，y為1。
在一些實施例中，W為1至12個胺基酸之鏈。在一些實施例中，W為1至6個胺基酸之鏈。在一些實施例中，W為1至3個胺基酸之鏈。
在一些實施例中，W獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、組胺酸、精胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、O-甲基絲胺酸、O-甲基天冬胺酸、O-甲基麩胺酸、N-甲基離胺酸、O-甲基酪胺酸、O-甲基組胺酸及O-甲基蘇胺酸。在一些實施例中，W中的各胺基酸獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、絲胺酸、天冬胺酸、天冬胺酸甲酯、N,N-二甲基-離胺酸、苯丙胺酸、瓜胺酸、纈胺酸-丙胺酸、纈胺酸-瓜胺酸、苯丙胺酸-離胺酸或高絲胺酸甲醚。
在一些實施例中，W具有以下結構： 。
在一些實施例中，W 1為-O-C(=O)-。在一些實施例中，一個R g為鹵素、-CN或-NO 2，且其餘R G為氫。在一些實施例中，各R g為氫。
在一些實施例中，w為0。在一些實施例中，w為1。
在一些實施例中，L BB為-(CH 2) 1 - 3-。在一些實施例中，L BB為-C(O)(CH 2) 1 - 2-。
在一些實施例中，L BB為-C(O)(CH 2) 2-。在一些實施例中，L BB為-[NHC(O)(CH 2) 2] 1 - 2-。在一些實施例中，L BB為-[NHC(O)(CH 2) 2] 2-。
在一些實施例中，M為 。在一些態樣中，M為 。在一些態樣中，M為 。
在一些實施例中，M為 。在一些態樣中，M為 。在一些態樣中，M為 。
在一些實施例中，M為 。在一些態樣中，M為 。在一些態樣中，M為 。
在一些實施例中，各AA獨立地為天然胺基酸；其中(AA)b經由硫原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺。在一些實施例中，各AA獨立地為天然胺基酸；其中(AA) b經由氮原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺。在一些實施例中，各下標b為1。在一些實施例中，各下標b為2。在一些實施例中，各下標b為3、4、5或6。
在一些實施例中，M為 。在一些態樣中，M為 。在一些態樣中，M為 。
在一些實施例中，M為 。在一些態樣中，M為 。在一些態樣中，M為 。
在一些實施例中，M為 。在一些態樣中，M為 。在一些態樣中，M為 。
在一些實施例中，M為 。
式(IV)化合物的一些實施例包括選自由以下組成之群的化合物： 。 ， 及其醫藥學上可接受之鹽。 式(V)化合物
一些實施例包括式(V)化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1C為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； R 2C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 2C連接於標記為1、2或3之任一位置； R 3C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 3C連接於標記為1'、2'或3'之任一位置； 各R A、R B、R C、R D、R E、R F及R M獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標q獨立地為整數0至6； L E為-(C=O)-或-S(O) 2-； L C為-(CR IR J) 1 - 3- 各R I及R J獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 下標s為0或1； 各Cy 1獨立地為4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或C 3 - 6環烷基，其各自視情況經一或多個R K取代； 各R K獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d2R e2、-C(O)NR d2R e2、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d2及R e2獨立地為氫或C 1 - 3烷基； L AA為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-、-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6-、-(CH 2) 1 - 6O-、-C(O)(CH 2) 1 - 6O-或-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6O-； R L為氫或C 1 - 3烷基； Cy 2為C 3 - 6環烷基、4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或苯基，其各自視情況經一或多個R U取代； 各R U獨立地選自由以下組成之群：-CO 2R j1、-(C=O)NR d3R e3、-S(O) 2NR d3R e3、-(CH 2) q1-NR g1R h1、-(CH 2) q1-OR j1及-(CH 2) q1-(OCH 2CH 2) 1 - 8OH； 各R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 下標q1為整數0至6； 下標t1為0或1； L D為-(CH 2) 1 - 6-； 下標u為0或1； 當t1為0時，ZZ為-NR QR R、-N +(C 1 - 6烷基)R QR R、-C(=O)N SR T、-C(O)O(C 1 - 6烷基)、-CO 2H或胺基酸，或當t1為1時，ZZ為氫、-NR QR R、-N +(C 1 - 6烷基)R QR R、-C(=O)N SR T、-C(O)O(C 1 - 6烷基)、-CO 2H或胺基酸； R Q為氫、C 1 - 6烷基、C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 1 - 3烷氧基、-(CH 2) 1 - 34員至6員雜環、或-(CH 2) 1 - 35員至6員雜芳基，限制條件為 若t1為0且兩個Cy 1均為 ，則R Q為C 2 - 6烷基、C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 1 - 3烷氧基、-(CH 2) 1 - 34員至6員雜環，或-(CH 2) 1 - 35員至6員雜芳基，且 若t1為0且至少一個Cy 1不為 ，則ZZ為-NR QR R、-N +(C 1 - 6烷基)R QR R、或-C(=O)N SR T，且R Q為C 1 - 6烷基、C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 1 - 3烷氧基、-(CH 2) 1 - 34員至6員雜環、或-(CH 2) 1 - 35員至6員雜芳基；且 各R R、R S及R T獨立地為氫或C 1 - 6烷基。
在一些實施例中，R 1C為氫。在一些實施例中，R 1C為羥基。在一些實施例中，R 1C為C 1 - 6烷氧基。在一些實施例中，R 1C為甲氧基。在一些實施例中，R 1C為-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基。在一些實施例中，R 1C為甲氧基乙基。在一些實施例中，R 1C為PEG2至PEG4。在一些實施例中，R 1C為-(CH 2) n-NR AR B。在一些實施例中，R A與R B均為氫。在一些實施例中，R A及R B獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R A及R B中之一者為氫且R A及R B中之另一者為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，各下標n為0。在一些實施例中，各下標n為1。在一些實施例中，各下標n為2。在一些實施例中，各下標n為3、4、5或6。
在一些實施例中，R 2C及R 3C為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C與R 3C相同。在一些實施例中，R 2C及R 3C獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C與R 3C不同。
在一些實施例中，R 2C為-(C=O) m-NR CR D。在一些實施例中，R 3C為-(C=O) m-NR CR D。在一些實施例中，R C與R D均為氫。在一些實施例中，R C及R D各自獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R C及R D中之一者為氫且R C及R D中之另一者為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，各下標m為0。在一些實施例中，各下標m為1。
在一些實施例中，R 2C為-(CH 2) q-NR ER F。在一些實施例中，R 3C為-(CH 2) q-NR ER F。在一些實施例中，R E與R F均為氫。在一些實施例中，R E及R F各自獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R E及R F中之一者為氫且R E及R F中之另一者為C 1 - 3烷基。
在一些實施例中，各下標q為0。在一些實施例中，各下標q為整數1至6。
在一些實施例中，R 2C為-CO 2R M。在一些實施例中，R 3C為-CO 2R M。
在一些實施例中，R M為氫。在一些實施例中，R M為C 1 - 3烷基。
在一些實施例中，R 2C為-(CH 2) q-OR M。在一些實施例中，R 3C為-(CH 2) q-OR M。
在一些實施例中，R M為氫。在一些實施例中，下標q為0。在一些實施例中，下標q為1。
在一些實施例中，R 2C為-O(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R 3C為-O(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R E與R F均為氫。在一些實施例中，R E及R F各自獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R E及R F中之一者為氫且R E及R F中之另一者為C 1 - 3烷基。
在一些實施例中，R 2C為-NR M(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R 3C為-NR M(C=O)-NR ER F。在一些實施例中，R E、R F及R M皆為氫。在一些實施例中，R E、R F及R M各自獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R E、R F及R M中之一者為C 1 - 3烷基且R E、R F及R M之其餘部分為氫。
在一些實施例中，R 2C為-S(O) 2NR CR D。
在一些實施例中，R 3C為-S(O) 2NR CR D。在一些實施例中，R C與R D均為氫。在一些實施例中，R C及R D各自獨立地為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R C及R D中之一者為氫且R C及R D中之另一者為C 1 - 3烷基。
在一些實施例中，R 2C為-S(O) 2R M。在一些實施例中，R 3C為-S(O) 2R M。在一些實施例中，R M為氫。在一些實施例中，R M為C 1 - 3烷基。
在一些實施例中，R 2C連接在位置1。在一些實施例中，R 2C連接在位置2。在一些實施例中，R 2C連接在位置3。在一些實施例中，R 3C連接在位置1'。在一些實施例中，R 3C連接在位置2'。在一些實施例中，R 3C連接在位置3'。
在一些實施例中，L E為-(C=O)-。在一些實施例中，L E為-S(O) 2-。
在一些實施例中，各R I及R J為氫。在一些實施例中，各R I及R J為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R I及R J中之一者為氫且R I及R J中之另一者為C 1 - 3烷基。
在一些實施例中，L C為-(CR IR J)-。
在一些實施例中，下標s為0。在一些實施例中，下標s為1。
在一些實施例中，各Cy 1獨立地為5員至6員雜芳基。在一些實施例中，各Cy 1為視情況經一或多個R K取代的吡唑。在一些實施例中，各Cy 1獨立地選自由以下組成之群：吡唑、咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、㗁唑、異㗁唑、吡咯、嗒𠯤、吡啶、嘧啶及吡𠯤，其各自視情況經一或多個R K取代。在一些實施例中，各Cy 1獨立地選自由以下組成之群：咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、㗁唑、異㗁唑、吡咯、嗒𠯤、吡啶、嘧啶及吡𠯤，其各自視情況經一或多個R K取代。在一些實施例中，各Cy 1獨立地為視情況經一或多個R K取代的C 4 - 5環烷基。在一些實施例中，各R K獨立地選自由C組成之群。在一些實施例中，各R K獨立地選自由以下組成之群：甲基、乙基、-CF 3及鹵素。
在一些實施例中，各Cy 1相同。在一些實施例中，各Cy 1不同。
在一些實施例中，L AA為-(CH 2) 1 - 6-。在一些實施例中，L AA為-(CH 2) 1 - 3-。在一些實施例中，L AA為-(CH 2) 1 - 6O-。在一些實施例中，L AA為-(CH 2) 1 - 3O-。
在一些實施例中，Cy 2為4員至6員雜環。在一些實施例中，Cy 2具有以下結構： ，其中下標z1及z2中之每一者獨立地為整數1至3且**指示連接至L AA。
在一些實施例中，下標z1且下標z2為1。在一些實施例中，下標z1且下標z2為2。
在一些實施例中，下標z1為1且下標z2為2。
在一些實施例中，Cy 2具有以下結構： ，其中 Z 1選自由以下組成之群：-O-、-S-、-CR NR O-及-NR P-； R N、R O及R P獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 下標z3為整數1至3；且 **指示連接至L AA。
在一些實施例中，R N及R O為氫。在一些實施例中，R P為氫。在一些實施例中，R P為甲基。
在一些實施例中，Cy 2為5員至6員雜芳基。
在一些實施例中，Cy 2選自由以下組成之群： ，其中 Z 2為=CR N-或=N-； R N為氫或C 1 - 6烷基；且 **指示連接至L AA。
在一些實施例中，Z 2為=CR N-且R N為氫。在一些實施例中，Z 2為=N-。
在一些實施例中，Cy 2選自由以下組成之群： ，其中Z 3為-O-或-S-且**指示連接至L AA、L D、NR HH、Y、W或L BB。
在一些實施例中，**指示連接至L AA。在一些實施例中，**指示連接至L D、NR HH、Y、W或L BB。
在一些實施例中，Cy 2選自由以下組成之群： ，其中 ** 指示連接至L AA。
在一些實施例中，Cy 2選自由以下組成之群： ，其中 各Z 2獨立地為=CR N-或=N-；且 各R N為氫或C 1 - 6烷基。
在一些實施例中，至少一個Z 2為=N-。在一些實施例中，一個Z 2為=N-且其餘Z 2為=CR N-。在一些實施例中，兩個Z 2為-NR P-且其餘Z 2為=CR N-。
在一些實施例中，R N為氫。
在一些實施例中，Cy 2選自由以下組成之群： 。
在一些實施例中，Cy 2為環丁基。
在一些實施例中，R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地為氫或-CH 3。
在一些實施例中，各R U獨立地選自-CO 2H、-(C=O)NH 2、-S(O) 2NH 2、-CH 2NH 2及-CH 2OH。
在一些實施例中，t1為0。在一些實施例中，t1為1。
在一些實施例中，u為1且L D為-(CH 2) 1 - 3。在一些實施例中，u為0。
在一些實施例中，ZZ為-NR QR R。在一些實施例中，R Q為C 1 - 6烷基。在一些實施例中，R Q為C 3 - 6環烷基。在一些實施例中，R Q為環丙基。在一些實施例中，R Q為-(CH 2) 1 - 3C 3 - 6環烷基。在一些實施例中，R R為氫。
在一些實施例中，ZZ為-N +(C 1 - 6烷基)R QR R。
在一些實施例中，ZZ為-C(=O)N SR T。
在一些實施例中，ZZ為-C(O)O(三級丁基)。
在一些實施例中，ZZ為-CO 2H。
在一些實施例中，ZZ為選自由以下組成之群的胺基酸：丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、組胺酸、精胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、O-甲基絲胺酸、O-甲基天冬胺酸、O-甲基麩胺酸、N-甲基離胺酸、O-甲基酪胺酸、O-甲基組胺酸及O-甲基蘇胺酸。
式(V)一些實施例包括選自由以下組成之群的化合物： ，及其醫藥學上可接受之鹽。 連接子
如本文所述，如關於式(I)、(II)及(II-A)中所定義的連接子(L)為視情況存在之基團，其使X A或X B(當存在時)與M或M 1連接。舉例而言，A當存在時共價連接至M或M 1，且Y當存在時連接至X B或連接至X A(當X B不存在時)。在一些實施例中，連接子(L)具有式-(A) a-(W) w-(Y) y，其中： A為視情況經1至3個R a1取代之C 2 - 20伸烷基；或視情況經1至3個R b1取代之2員至40員伸雜烷基； 各R a1獨立地選自由以下組成之群： C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R b1獨立地選自由以下組成之群： C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d1及R e1獨立地為氫或C 1 - 3烷基； a為0或1； W為1至12個胺基酸或具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至式(II)化合物中的A (當存在時)或M且共價連接至本文所述之ADC及化合物中的A、M或M 1； * 表示共價連接至式(II)化合物中的Y、X A或X B且共價連接至本文所述之ADC中的Y、X A或X B； w為0或1； Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分或不可裂解部分；且 y為0或1。
在一些實施例中，-O A-表示糖苷鍵。在一些實施例中，糖苷鍵提供β-葡萄糖醛酸苷酶或β-甘露糖苷酶裂解位。在一些實施例中，β-葡萄糖醛酸苷酶裂解位可藉由人類溶酶體β-葡萄糖醛酸苷酶裂解。在一些實施例中，β-甘露糖苷酶裂解位可藉由人類溶酶體β-甘露糖苷酶裂解。
在一些實施例中，a為0。在一些實施例中，a為1。在一些實施例中，w為0。在一些實施例中，w為1。在一些實施例中，y為0。在一些實施例中，y為1。在一些實施例中，a + y + w = 1。在一些實施例中，a + y + w = 2。在一些實施例中，a + y + w = 3。在一些實施例中，a + y + w = 0 (亦即，連接子(L)不存在)。
在一些實施例中，A為視情況經1至3個R a1取代的C 2 - 20伸烷基。在一些實施例中，A為視情況經1至3個R a1取代的C 2 - 10伸烷基。在一些實施例中，A為視情況經1至3個R a1取代的C 4 - 10伸烷基。在一些實施例中，A為經R a1取代的C 2 - 20伸烷基。在一些實施例中，A為經R a1取代的C 2 - 10伸烷基。在一些實施例中，A為經R a1取代的C 2 - 10伸烷基。
在一些實施例中，各R a1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)。在一些實施例中，各R a1為C 1 - 6烷基。在一些實施例中，各R a1為C 1 - 6鹵烷基。在一些實施例中，各R a1為C 1 - 6烷氧基。在一些實施例中，各R a1為C 1 - 6鹵烷氧基。在一些實施例中，各R a1為鹵素。在一些實施例中，各R a1為-OH。在一些實施例中，各R a1為=O。在一些實施例中，各R a1為-NR d1R e1。在一些實施例中，各R a1為C(O)NR d1R e1。在一些實施例中，各R a1為-C(O)(C 1 - 6烷基)。在一些實施例中，各R a1為-C(O)O(C 1 - 6烷基)。在一些實施例中，出現一次的R a1為-NR d1R e1。在一些實施例中，A為經1或2個各自為=O之R a1取代的C 2 - 20伸烷基。
在一些實施例中，R d1及R e1獨立地為氫或C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R d1及R e1中之一者為氫，且R d1及R e1中之另一者為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R d1與R e1均為氫或C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R d1與R e1均為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R d1與R e1均為甲基。
在一些實施例中，A為C 2 - 20伸烷基。在一些實施例中，A為C 2 - 10伸烷基。在一些實施例中，A為C 2 - 10伸烷基。在一些實施例中，A為C 2 - 6伸烷基。在一些實施例中，A為C 4 - 10伸烷基。
在一些實施例中，A為視情況經1至3個R b1取代的2員至40員伸雜烷基。在一些實施例中，A為視情況經1至3個R b1取代的2員至20員伸雜烷基。在一些實施例中，A為視情況經1至3個R b1取代的2員至12員伸雜烷基。在一些實施例中，A為視情況經1至3個R b1取代的4員至12員伸雜烷基。在一些實施例中，A為視情況經1至3個R b1取代的4員至8員伸雜烷基。在一些實施例中，A為經R b1取代的2員至40員伸雜烷基。在一些實施例中，A為經R b1取代的2員至20員伸雜烷基。在一些實施例中，A為經R b1取代的2員至12員伸雜烷基。在一些實施例中，A為經R b1取代的4員至12員伸雜烷基。在一些實施例中，A為經R b1取代的4員至8員伸雜烷基。
在一些實施例中，各R b1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)。在一些實施例中，各R b1為C 1 - 6烷基。在一些實施例中，各R b1為C 1 - 6鹵烷基。在一些實施例中，各R b1為C 1 - 6烷氧基。在一些實施例中，各R b1為C 1 - 6鹵烷氧基。在一些實施例中，各R b1為鹵素。在一些實施例中，各R b1為-OH。在一些實施例中，各R b1為-NR d1R e1。在一些實施例中，各R b1為C(O)NR d1R e1。在一些實施例中，各R b1為-C(O)(C 1 - 6烷基)。在一些實施例中，各R b1為-C(O)O(C 1 - 6烷基)。在一些實施例中，出現一次的R b1為-NR d1R e1。
在一些實施例中，R d1及R e1獨立地為氫或C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R d1及R e1中之一者為氫，且R d1及R e1中之另一者為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R d1與R e1均為氫或C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R d1與R e1均為C 1 - 3烷基。在一些實施例中，R d1與R e1均為甲基。
在一些實施例中，A為2員至40員伸雜烷基。在一些實施例中，A為2員至20員伸雜烷基。在一些實施例中，A為2員至12員伸雜烷基。在一些實施例中，A為4員至12員伸雜烷基。在一些實施例中，A為4員至8員伸雜烷基。在一些實施例中，A選自由以下組成之群： ，其中 表示共價連接至W或Y，且*表示共價鍵聯至M 1或M (例如分別存在於式(I)或(II)化合物中)。在一些實施例中，M為丁二醯亞胺。在一些實施例中，M為水解的丁二醯亞胺。在一些實施例中，M 1為丁二醯亞胺。在一些實施例中，M 1為水解的丁二醯亞胺。應理解，水解的丁二醯亞胺可以兩種區位異構形式存在。彼等形式結合M的水解舉例說明如下，其中代表得自水解之區位異構體的結構為式M'及M''；其中鄰接於鍵的波浪線如關於A所定義。
在一些實施例中，M'為 。在一些實施例中，M'為 。在一些實施例中，M"為 。在一些實施例中，M"為 。
在一些實施例中，A為PEG4至PEG12。在一些實施例中，A為PEG4至PEG8。代表性A基團包括但不限於： 。
在一些實施例中，w為0。在一些實施例中，w為1。
在一些實施例中，W為單一胺基酸。在一些實施例中，W為單一天然胺基酸。W為包括2至12個胺基酸的肽，其中各胺基酸獨立地為天然或非天然胺基酸。在一些實施例中，天然或非天然胺基酸為D或L異構體。在一些實施例中，各胺基酸獨立地為天然胺基酸。在一些實施例中，各W獨立地為天然或非天然的α、β或γ胺基酸。在一些實施例中，W包含與非天然胺基酸有關的天然胺基酸。在一些實施例中，W包含與天然或非天然胺基酸之D-異構體有關的天然或非天然胺基酸。在一些實施例中，W為二肽。在一些實施例中，W為三肽。在一些實施例中，W為四肽。在一些實施例中，W為五肽。在一些實施例中，W為六肽。在一些實施例中，W為7、8、9、10、11或12個胺基酸。在一些實施例中，W之各胺基酸獨立地選自由以下組成之群：纈胺酸、丙胺酸、β-丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、白胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、天冬胺酸、絲胺酸、麩胺酸、高絲胺酸甲基醚、天冬胺酸甲酯、N,N-二甲基離胺酸、精胺酸、纈胺酸-丙胺酸、纈胺酸-瓜胺酸、苯丙胺酸-離胺酸及瓜胺酸。在一些實施例中，W為天冬胺酸。在一些實施例中，W為離胺酸。在一些實施例中，W為甘胺酸。在一些實施例中，W為丙胺酸。在一些實施例中，W為天冬胺酸甲酯。在一些實施例中，W為N,N-二甲基離胺酸。在一些實施例中，W為高絲胺酸甲醚。在一些實施例中，W為絲胺酸。在一些實施例中，W為纈胺酸-丙胺酸。
在一些實施例中，w為1；W為1至12個胺基酸；且W與X B之間或W與Y之間的鍵為酶可裂解的，其藉由腫瘤相關蛋白酶裂解。在一些實施例中，腫瘤相關蛋白酶為組織蛋白酶。在一些實施例中，腫瘤相關蛋白酶為組織蛋白酶B、C或D。
在一些實施例中，w為1；且W具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至式(II)化合物中的A或M；且 *表示共價連接至式(II)化合物中之Y、X A或X B；
在一些實施例中，w為1；且W具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至本文所述之ADC中的A或M；且 *表示共價連接至本文所述之ADC中的Y、X A或X B；
在一些實施例中，-O A-表示糖苷鍵。在一些實施例中，糖苷鍵提供β-葡萄糖醛酸苷酶或β-甘露糖苷酶裂解位。在一些實施例中，β-葡萄糖醛酸苷酶或β-甘露糖苷酶裂解位可藉由人類溶酶體β-葡萄糖醛酸苷酶裂解或藉由人類溶酶體β-甘露糖苷酶裂解。
在一些實施例中，W為 。在一些實施例中，W為 。在一些實施例中，W為 。
在一些實施例中，各R g為氫。在一些實施例中，一個R g為氫，且其餘R g獨立地為鹵基、-CN或-NO 2。在一些實施例中，兩個R g為氫，且其餘R g為鹵基、-CN或-NO 2。
在一些實施例中，一個R g為鹵素、-CN或-NO 2，且另一R g為氫。在一些實施例中，各R g為氫。
在一些實施例中，O A-Su在生理pH下呈電中性。在一些實施例中，O A-Su為甘露糖。在一些實施例中，O A-Su為 。在一些實施例中，O A-Su包含羧酸酯部分。在一些實施例中，O A-Su為葡糖醛酸。在一些實施例中，O A-Su為 。
在一些實施例中，W為 。在一些實施例中，W為 。在一些實施例中，W為 。在一些實施例中，W為 。
在一些實施例中，a為0。
在一些實施例中，y為0。在一些實施例中，y為1。
在一些實施例中，Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分、或不可裂解部分。在一些實施例中，Y為自分解型部分或非自分解型可釋放部分。在一些實施例中，Y為自分解型部分。在一些實施例中，Y為非自分解型部分。
非自分解型部分為需要酶裂解之部分，且其中部分或所有基團在自ADC裂解之後保持與藥物單元結合，從而形成游離藥物。非自分解型部分之實例包括但不限於：-甘胺酸-；及-甘胺酸-甘胺酸。當具有Y為-甘胺酸-或-甘胺酸-甘胺酸-之ADC經歷酶裂解(例如，經由癌細胞相關蛋白酶或淋巴球相關蛋白酶)時，藥物單元自ADC裂解以使得游離藥物包括來自Y之甘胺酸或甘胺酸-甘胺酸基團。在一些實施例中，自主水解反應發生在目標細胞內或在目標細胞近端，從而自游離藥物進一步裂解甘胺酸或甘胺酸-甘胺酸基團。在一些實施例中，如本文所述之非自分解型部分的酶裂解不產生任何其他水解步驟。
自分解型部分係指一種雙官能化學部分，其能夠使兩個間隔開之化學部分共價鍵聯在一起成為通常穩定之三聯分子。若自分解型基團與第一部分之鍵斷裂，則其將自發地與第二化學部分分離。舉例而言，自分解型部分包括視情況經一或多個烷基、烷氧基、鹵素、氰基或硝基取代的對胺基苯甲醇(PAB)。自分解型部分之其他實例包括但不限於與PAB基團在電子上類似的芳族化合物，諸如2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物(參見例如Hay等人, 1999, Bioorg . Med . Chem . Lett .9:2237)、鄰胺基苯甲基乙醛或對胺基苯甲基乙醛、經取代及未經取代之4-胺基丁酸醯胺(參見例如Rodrigues等人, 1995, Chemistry Biology2:223)、經適當取代之雙環[2.2.1]環系統及雙環[2.2.2]環系統(參見例如Storm等人, 1972, J. Amer . Chem . Soc .94:5815)、2-胺基苯基丙酸醯胺(參見例如Amsberry等人, 1990, J . Org . Chem .55:5867)，及甘胺酸之α位置經取代之含胺藥物的消去(參見例如Kingsbury等人, 1984, J . Med . Chem .27:1447)。
在一些實施例中，Y為PAB基團，其視情況經一或多個烷基、烷氧基、鹵素、氰基或硝基取代；對胺基苯甲氧基羰基(PABC)基團，其視情況經糖部分取代；-甘胺酸-；-甘胺酸-甘胺酸-；或分支鏈雙(羥甲基)苯乙烯(BHMS)單元，其能夠併入(及釋放)多個藥物單元。
在一些實施例中，-(A) a-(W) w-(Y) y為非自分解型可釋放連接子，一旦ADC已內化至目標細胞中，其提供游離藥物之釋放。在一些實施例中，-(A) a-(W) w-(Y) y包含可釋放連接子，其提供游離藥物在目標細胞內或附近的釋放。可釋放連接子具有識別位，諸如肽裂解位、糖裂解位或二硫鍵裂解位。在一些實施例中，各可釋放連接子為二肽。在一些實施例中，各可釋放連接子為二硫鍵。在一些實施例中，各可釋放連接子為腙。在一些實施例中，各可釋放連接子獨立地為Val-Cit-、-Phe-Lys-或-Val-Ala-。在一些實施例中，各可釋放連接子在結合至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺時，獨立地為丁二醯亞胺醯基-己醯基(mc)、丁二醯亞胺醯基-己醯基-纈胺酸-瓜胺酸(sc-vc)、丁二醯亞胺醯基-己醯基-纈胺酸-瓜胺酸-對胺基苯甲氧基羰基(sc-vc-PABC)及SDPr-vc (其中「S」係指丁二醯亞胺醯基)。
在一些實施例中，-(A) a-(W) w-(Y) y包含不可裂解連接子。不可裂解連接子在此項技術中已知且在一些實施例中，經調適以用於本文中描述為「Y」基團的ADC。不可裂解連接子能夠使藥物單元與抗體以通常穩定且共價之方式連接且實質上抵抗酸誘導之裂解、光誘導之裂解、肽酶或酯酶誘導之裂解及二硫鍵裂解。在一些實施例中，游離藥物經由替代機制(諸如蛋白水解抗體降解)自含有不可裂解連接子之ADC釋放。在一些實施例中，藥物單元可作為ADC之一部分(亦即，同時仍經由連接子與抗體結合)發揮生物作用。
形成不可裂解連接子-順丁烯二醯亞胺及不可裂解連接子-丁二醯亞胺化合物的試劑為此項技術中已知的且可適用於本文中。例示性試劑包含基於順丁烯二醯亞胺基或鹵乙醯基之部分，諸如6-順丁烯二醯亞胺基己酸N-羥基丁二醯亞胺酯(MCC)、4-(順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷甲酸N-丁二醯亞胺酯(SMCC)、N-丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸酯) (LC-SMCC)、順丁烯二醯亞胺基十一烷酸N-丁二醯亞胺酯(KMUA)、γ-順丁烯二醯亞胺基丁酸N-丁二醯亞胺酯(GMBS)、c-順丁烯二醯亞胺基己酸N-羥基丁二醯亞胺酯(EMCS)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基丁二醯亞胺酯(MBS)、N-(α-順丁烯二醯亞胺基乙醯氧基)-丁二醯亞胺酯[AMAS]、丁二醯亞胺基-6-(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸酯(SMPH)、4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)-丁酸N-丁二醯亞胺酯(SMPB)及N-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)異氰酸酯(PMPI)、N-丁二醯亞胺基-4-(碘乙醯基)-胺基苯甲酸酯(STAB)、碘乙酸N-丁二醯亞胺酯(SIA)、溴乙酸N-丁二醯亞胺酯(SBA)及3-(溴乙醯胺基)丙酸N-丁二醯亞胺酯(SBAP)。用於本文所述之ADC中的其他「A-M」及「A-M 1」基團可見於例如美國專利第8,142,784號中，其以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，y為1；且Y為 ，其中 表示連接至式(II)化合物中的W、A或M；且*表示連接至式(II)化合物中的X A或X B。
在一些實施例中，y為1；且Y為 ，其中 表示連接至本文所述之ADC中的W、A、M或M 1；且*表示連接至本文所述之ADC中的X A或X B。
在一些實施例中，-(A) a-(W) w-(Y) y-包含不可釋放連接子，其中藥物在ADC已內化至目標細胞中且降解之後釋放，從而釋出藥物。
在一些實施例中，連接子(L)經選自由PEG2至PEG20組成之群的聚乙二醇部分取代。在一些實施例中，L經選自由以下組成之群的聚乙二醇部分取代：PEG2、PEG4、PEG6、PEG8、PEG10、PEG12、PEG16及PEG20。在一些實施例中，L未經選自由PEG2至PEG20組成之群的聚乙二醇部分取代。
在一些實施例中，使用多分散PEG、單分散PEG或離散PEG製造ADC及其中間物。多分散PEG係各尺寸及分子量之非均質混合物，而單分散PEG典型地自非均質混合物純化且因此提供單鏈長度及分子量。以逐步方式且不經由聚合方法合成離散PEG。離散PEG提供具有限定及指定鏈長之單一分子。PEG單元之-CH 2CH 2O-亞單元數目範圍為例如8至24或12至24，分別稱為PEG8至PEG24及PEG12至PEG24。
本文所提供之PEG部分(其亦稱為PEG單元)包含一或多條聚乙二醇鏈。聚乙二醇鏈係以例如線性、分支或星型組態連接在一起。典型地，PEG單元中的至少一條聚乙二醇鏈在一端經衍生化以共價連接至ADC之組分(例如L)上的適當位點。與ADC之例示性連接係藉由非條件性可裂解鍵聯或經由條件性可裂解鍵聯。例示性連接係經由醯胺鍵、醚鍵、酯鍵、腙鍵、肟鍵、二硫鍵、肽鍵或三唑鍵實現。在一些實施例中，與式(I) ADC之連接係藉由非條件性可裂解鍵聯。在一些實施例中，與ADC之連接不經由酯鍵、腙鍵、肟鍵或二硫鍵鍵。在一些實施例中，與ADC之連接不經由腙鍵。
條件性可裂解鍵聯係指在血漿中循環時對裂解基本上不敏感、但在細胞內或瘤內環境中對裂解敏感之鍵聯。非條件性可裂解鍵聯係在投與ADC之個體中在任何生物相關環境中對裂解基本上不敏感之鍵聯。如WO 2007/011968 (其以全文引用之方式併入)所述的腙化學水解、二硫鍵還原及葡萄糖醛酸苷單元之肽鍵或糖苷鍵之酶促裂解為條件性可裂解鍵聯之實例。
在一些實施例中，PEG單元在L處直接連接至ADC (或其中間物)。在彼等實施例中，PEG單元之另一末端(或多個末端)為游離及未繫拴的(亦即，未共價連接)，且在一些實施例中，為甲氧基、羧酸、醇或其他適合官能基。甲氧基、羧酸、醇或其他適合官能基充當PEG單元之末端聚乙二醇亞單元之端基。未繫拴意謂PEG單元不在未繫拴位點共價連接至藥物單元、抗體、或藥物單元及/或抗體之連接組分。此類配置可允許PEG單元的長度足以相對於呈結合形式之藥物(亦即，藥物單元(D))採取平行取向。在其中PEG單元包含超過一條聚乙二醇鏈之彼等實施例中，獨立地選擇多條聚乙二醇鏈，例如為相同或不同的化學部分(例如-CH 2CH 2O-亞單元之分子量或數目不同的聚乙二醇鏈)。具有多條聚乙二醇鏈之PEG單元在單個連接位連接至ADC。熟習此項技術者應理解，PEG單元除包含重複聚乙二醇亞單元以外，亦可含有非PEG材料(例如，以促進多條聚乙二醇鏈彼此偶聯或促進與ADC偶聯)。非PEG材料係指PEG單元中並非重複-CH 2CH 2O-亞單元之一部分的原子。在本文所提供之一些實施例中，PEG單元包含經由非PEG元件彼此連接之兩條單體聚乙二醇鏈。在本文提供之其他實施例中，PEG單元包含兩個連接至中央核心之線性聚乙二醇鏈，該中央核心連接至ADC (亦即PEG單元本身為分支鏈的)。
熟習此項技術者可獲得的PEG連接方法存在多種：參見例如：Goodson等人, (1990) Bio / Technology8:343 (定點誘變之後，介白素-2在其糖基化位發生聚乙二醇化)；EP 0 401 384 (PEG與G-CSF偶聯)；Malik等人, (1992) Exp . Hematol .20:1028-1035 (使用三氟乙烷磺醯氯使GM-CSF發生聚乙二醇化)；ACT公開案第WO 90/12874號(使用半胱胺酸特異性mPEG衍生物使含有重組引入之半胱胺酸殘基的紅血球生成素發生聚乙二醇化)；美國專利第5,757,078號(EPO肽之聚乙二醇化)；美國專利第5,672,662號(用於生物技術應用的聚(乙二醇)及經丙酸或丁酸及其功能衍生物單取代之相關聚合物)；美國專利第6,077,939號(肽N端α碳之聚乙二醇化)；Veronese等人, (1985) Appl . Biochem . Bioechnol11:141-142 (使用PEG-硝基苯基碳酸酯(「PEG-NPC」)或PEG-三氯苯基碳酸酯使肽N端α碳發生聚乙二醇化)；及Veronese (2001) Biomaterials22:405-417 (關於肽及蛋白質聚乙二醇化的評審論文)。
舉例而言，在一些實施例中，PEG單元係經由含聚乙二醇化合物及胺基酸殘基之反應性基團共價結合至胺基酸殘基。胺基酸殘基之反應性基團包括對活化PEG分子具有反應性之基團(例如游離胺基或羧基)。舉例而言，N端胺基酸殘基及離胺酸(K)殘基具有游離胺基；且C端胺基酸殘基具有游離羧基。硫醇基(例如在半胱胺酸殘基上發現)亦適用作與PEG形成共價連接之反應性基團。另外，已描述了在多肽之C端特異性引入活化基團(例如醯肼、醛及芳族胺基)之酶輔助方法。參見Schwarz等人, (1990) Methods Enzymol.184:160; Rose等人, (1991) Bioconjugate Chem. 2:154; 及Gaertner等人, (1994) J. Biol. Chem. 269: 7224。
在一些實施例中，含聚乙二醇化合物使用具有不同反應性部分之甲氧基化PEG (「mPEG」)與胺基形成共價連接。此類反應性部分之非限制性實例包括丁二酸丁二醯亞胺酯(SS)、碳酸丁二醯亞胺酯(SC)、mPEG-亞胺酸酯、對硝基苯基碳酸酯(NPC)、丙酸丁二醯亞胺酯(SPA)及三聚氯化氰。此類mPEG之非限制性實例包括mPEG-丁二酸丁二醯亞胺酯(mPEG-SS)、mPEG 2-丁二酸丁二醯亞胺酯(mPEG 2-SS)；mPEG-碳酸丁二醯亞胺酯(mPEG-SC)、mPEG 2-碳酸丁二醯亞胺酯(mPEG 2-SC)；mPEG-亞胺酸酯、mPEG-對硝基苯基碳酸酯(mPEG-NPC)、mPEG-亞胺酸酯；mPEG 2-對硝基苯基碳酸酯(mPEG 2-NPC)；mPEG-丙酸丁二醯亞胺酯(mPEG-SPA)；mPEG 2-丙酸丁二醯亞胺酯(mPEG--SPA)；mPEG-N-羥基-丁二醯亞胺(mPEG-NHS)；mPEG 2-N-羥基-丁二醯亞胺(mPEG 2--NHS)；mPEG-三聚氯化氰；mPEG 2-三聚氯化氰；mPEG 2-離胺醇-NPC及mPEG 2-Lys-NHS。
一般而言，構成PEG之至少一條聚乙二醇鏈經官能化以提供與ADC之共價連接。作為PEG之前驅物的含聚乙二醇化合物之官能化包括例如經由胺、硫醇、NHS酯、順丁烯二醯亞胺、炔烴、疊氮基、羰基或其他官能基。在一些實施例中，PEG進一步包含非PEG材料(亦即，不包含-CH 2CH 2O-之材料)，其提供與ADC之偶聯或在構築含聚乙二醇化合物或PEG時促進兩條或更多條聚乙二醇鏈之偶聯。
在一些實施例中，ADC中存在PEG單元能夠對所得ADC之藥物動力學具有兩種潛在影響。一種影響為清除率降低(及隨之而來的暴露增加)，其起因於藥物單元之所暴露疏水性元素誘導的非特異性相互作用減少。第二種影響為分佈體積及分佈率降低，其有時起因於ADC之分子量增加。增加聚乙二醇亞單元數目使結合物之流體動力學半徑增加，其典型地導致擴散率降低。擴散率降低典型地又降低ADC滲入腫瘤中之能力。參見Schmidt及Wittrup, Mol Cancer Ther2009; 8:2861-2871。由於此兩種競爭性藥物動力學效應，因此可能需要使用大足以降低ADC清除率、從而增加血漿暴露的PEG單元，但該PEG單元不能大到導致其擴散程度大大降低，以致其干擾ADC到達預定目標細胞群的能力。參見例如US 2016/0310612之實例1、18及21，該文獻以引用之方式併入本文中(例如，用於選擇特定藥物單元、連接子及/或藥物-連接子化合物之PEG單元之最佳尺寸的方法)。
在一組實施例中，PEG單元包含一或多條線性聚乙二醇鏈，該等聚乙二醇鏈各自具有至少8個亞單元、至少9個亞單元、至少10個亞單元、至少11個亞單元、至少12個亞單元、至少13個亞單元、至少14個亞單元、至少15個亞單元、至少16個亞單元、至少17個亞單元、至少18個亞單元、至少19個亞單元、至少20個亞單元、至少21個亞單元、至少22個亞單元、至少23個亞單元或至少24個亞單元。在一些實施例中，PEG包含至少8個亞單元、至少10個亞單元或至少12個亞單元之組合總數。在一些此類實施例中，PEG包含不超過約72個亞單元之組合總數。在一些此類實施例中，PEG包含不超過約36個亞單元之組合總數。在一些實施例中，PEG包含約8至約24個亞單元(稱為PEG8至PEG24)。
在另一組實施例中，PEG單元包含8至72、8至60、8至48、8至36或8至24個亞單元、9至72、9至60、9至48、9至36或9至24個亞單元、10至72、10至60、10至48、10至36或10至24個亞單元、11至72、11至60、11至48、11至36或11至24個亞單元、12至72、12至60、12至48、12至36或12至24個亞單元、13至72、13至60、13至48、13至36或13至24個亞單元、14至72、14至60、14至48、14至36或14至24個亞單元、15至72、15至60、15至48、15至36或15至24個亞單元、16至72、16至60、16至48、16至36或16至24個亞單元、17至72、17至60、17至48、17至36或17至24個亞單元、18至72、18至60、18至48、18至36或18至24個亞單元、19至72、19至60、19至48、19至36或19至24個亞單元、20至72、20至60、20至48、20至36或20至24個亞單元、21至72、21至60、21至48、21至36或21至24個亞單元、22至72、22至60、22至48、22至36或22至24個亞單元、23至72、23至60、23至48、23至36或23至24個亞單元、或24至72、24至60、24至48、24至36或24個亞單元之組合總數。
在一些實施例中，本文所提供之任一實施例中使用的說明性線性PEG如下： 其中波浪線指示連至ADC的連接點，且各下標b獨立地選自由以下組成之群：7至72、8至72、10至72、12至72、6至24、或8至24。在一些實施例中，各下標b為約8、約12或約24。
如本文所述，在一些實施例中，PEG單元經選擇以使得其改善所得ADC之清除率，但不顯著影響ADC滲入腫瘤中之能力。
在一些實施例中，PEG為約300道爾頓至約5千道爾頓；約300道爾頓至約4千道爾頓；約300道爾頓至約3千道爾頓；約300道爾頓至約2千道爾頓；約300道爾頓至約1千道爾頓；或其間任何值。在一些實施例中，PEG具有至少8、10或12個亞單元。在一些實施例中，PEG單元為PEG8至PEG72，例如PEG8、PEG10、PEG12、PEG16、PEG20、PEG24、PEG28、PEG32、PEG36、PEG48或PEG72。
在一些實施例中，除ADC之聚乙二醇化以外，ADC中不存在其他PEG亞單元(亦即，不存在PEG亞單元作為本文所提供之結合物及連接子之任何其他組分(諸如A及X B)之一部分存在)。在一些實施例中，除PEG之外，ADC或其中間物中存在的其他聚乙二醇(-CH 2CH 2O-)亞單元不超過8、不超過7、不超過6、不超過5、不超過4、不超過3、不超過2或不超過1個(亦即，本文所提供之ADC(或其中間物)之其他組分中的其他聚乙二醇亞單元不超過8、7、6、5、4、3、2或1個)。
應瞭解，當提及PEG單元之聚乙二醇亞單元時，且視上下文而定，亞單元之數目可表示平均數目，例如在提及ADC或其中間物之群體及/或使用多分散PEG時。 使用方法
在一些實施例中，本文所述之ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽用於將所結合的藥物遞送至目標細胞。不受理論束縛，在一些實施例中，ADC與目標細胞之表面上的抗原締合。藥物單元接著可作為游離藥物釋放以誘導其生物作用(諸如免疫刺激作用)。藥物單元亦可保持連接至抗體或抗體及/或連接子之一部分，且誘導其生物作用。
一些實施例提供一種治療有需要之個體之癌症的方法，包含將治療有效量之本文所述ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽投與個體。
一些實施例提供一種治療有需要之個體之癌症的方法，包括將治療有效量之包含本文所述ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽的組成物投與個體。
一些實施例提供一種誘導有需要之個體之抗腫瘤免疫反應的方法，包括將治療有效量之包含本文所述之ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽的組成物投與個體。
一些實施例提供一種誘導有需要之個體之抗腫瘤免疫反應的方法，包含將治療有效量之本文所述ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽投與個體。
一些實施例提供一種治療有需要之個體之癌症的方法，其包含將治療有效量之如本文所述之ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽與另一種抗癌療法(例如手術及放射療法)及/或抗癌劑(例如免疫療法，諸如尼沃單抗或派立珠單抗)組合投與個體。在一些實施例中，本文所述之ADC或ADC組成物係在抗癌療法及/或抗癌劑投與之前、期間或之後投與個體。在一些實施例中，本文所述之ADC或ADC組成物係在輻射治療後及/或手術後投與個體。
一些實施例提供一種延遲或預防針對抗癌劑之後天抗性的方法，其包含將治療有效量之如本文所述之ADC或其醫藥學上可接受之鹽投與面臨產生或出現針對抗癌劑之後天抗性之風險的患者。在一些實施例中，向患者投與抗癌劑之劑量(例如與如本文所述之ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽之劑量投與患者的時間基本上相同)。
一些實施例提供一種延遲及/或預防個體之癌症對抗癌劑產生抗性的方法，包含在治療有效量之抗癌劑投與之前、期間或之後將治療有效量的如本文所述之ADC或ADC組成物投與該個體。
本文所述之ADC及或ADC組成物適用於抑制癌細胞增殖、促使癌細胞發生細胞凋亡、增加癌細胞之吞噬及/或治療有需要之個體之癌症。在一些實施例中，因此，在用於治療癌症之多種背景下使用ADC或ADC組成物。在一些實施例中，ADC或ADC組成物用於將藥物遞送至癌細胞。不受理論束縛，在一些實施例中，ADC之抗體結合至癌細胞相關抗原或與癌細胞相關抗原締合。在一些實施例中，抗原附著於癌細胞或為與癌細胞相關的細胞外基質蛋白。在一些實施例中，藥物近接於癌細胞釋放，從而募集/活化免疫細胞攻擊癌細胞。在一些實施例中，在癌細胞外部，藥物單元自ADC裂解。在一些實施例中，藥物單元保持連接至與抗原結合之抗體。
在一些實施例中，抗體結合至癌細胞。在一些實施例中，抗體結合至癌細胞表面上的癌細胞抗原。在一些實施例中，抗體結合至癌細胞抗原，該癌細胞抗原為與腫瘤細胞或癌細胞相關的細胞外基質蛋白。在一些實施例中，ADC之抗體結合至癌症相關細胞或癌症相關細胞上的抗原或與其締合。在一些實施例中，癌症相關細胞為腫瘤中的基質細胞，例如癌症相關成纖維細胞(CAF)。
在一些實施例中，ADC之抗體結合至免疫細胞或免疫細胞相關抗原或與其締合。在一些實施例中，抗原附著於免疫細胞或為與免疫細胞相關的細胞外基質蛋白。在一些實施例中，藥物近接於免疫細胞釋放，從而募集/活化免疫細胞攻擊癌細胞。在一些實施例中，在免疫細胞外部，藥物單元自ADC裂解。在一些實施例中，藥物單元保持連接至與抗原結合的抗體。在一些實施例中，免疫細胞為淋巴球、抗原呈遞細胞、自然殺手(NK)細胞、嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、肥大細胞、先天淋巴細胞或前述任一者之組合。在一些實施例中，免疫細胞選自由以下組成之群：B細胞、漿細胞、T細胞、NKT細胞、gamma delta T (γδT)細胞、單核球、巨噬細胞、樹突狀細胞、自然殺手(NK)細胞、嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、肥大細胞、先天淋巴細胞及前述任一者之組合。
對於確定彼等腫瘤或癌症受到最有效治療而言，抗體對特定癌細胞的特異性可具重要作用。舉例而言，在一些實施例中，靶向造血癌細胞上存在之癌細胞抗原的ADC係治療血液學惡性病。在一些實施例中，ADC靶向實體腫瘤之異常細胞上存在的癌細胞抗原以便治療此類實體腫瘤。在一些實施例中，ADC係針對造血癌症(諸如淋巴瘤(霍奇金氏淋巴瘤及非霍奇金氏淋巴瘤)及白血病)之異常細胞。
在一些實施例中，癌症，包括但不限於腫瘤、轉移或以異常細胞為特徵之其他疾病或病症，係藉由投與ADC或ADC組成物來治療或抑制，該等異常細胞的特徵為細胞生長不可控。
在一些實施例中，個體先前已經歷癌症治療。在一些實施例中，先前治療為手術、放射療法、投與一或多種抗癌劑或前述任一者之組合。
在本文所述之任一方法中，癌症係選自由以下組成之群：腺癌、腎上腺皮質癌、腎上腺神經母細胞瘤、肛門鱗狀細胞癌、闌尾腺癌、膀胱尿道上皮癌、膽管腺癌、膀胱癌、膀胱尿道上皮癌、骨脊索瘤、淋巴球性慢性骨髓白血病、非淋巴球急性髓細胞骨髓白血病、骨髓淋巴增生性疾病、骨髓多發性骨髓瘤、骨肉瘤、腦星形細胞瘤、腦神經膠母細胞瘤、腦神經管胚細胞瘤、腦脊髓膜瘤、腦寡樹突神經膠質瘤、乳房腺體囊性癌、乳癌、乳腺導管原位癌、侵襲性乳腺管癌、乳房侵襲性小葉癌、乳房化生性癌、子宮頸神經內分泌癌、子宮頸鱗狀細胞癌、大腸腺癌、大腸類癌瘤、十二指腸腺癌、子宮內膜樣腫瘤、食道腺癌、食道及胃癌、眼內黑色素瘤、眼內鱗狀細胞癌、眼淚管癌、輸卵管漿液性癌、膽囊腺癌、膽囊血管球腫瘤、胃食管結合部腺癌、頭頸部腺體囊性癌、頭頸癌、頭頸部神經母細胞瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、腎臟嫌色細胞癌、腎臟髓質癌、腎臟腎細胞癌、腎臟腎乳頭狀癌、腎臟肉瘤樣癌、腎臟尿道上皮癌、腎癌、淋巴球性白血病、淋巴球慢性白血病、肝臟膽管癌、肝臟肝細胞癌、肝癌、肺腺癌、肺腺鱗癌、肺非典型類癌、肺癌肉瘤、肺大細胞神經內分泌癌、肺非小細胞肺癌、肺肉瘤、肺肉瘤樣癌、肺小細胞癌、肺小細胞未分化癌、肺鱗狀細胞癌、上呼吸消化道鱗狀細胞癌、上呼吸消化道癌瘤、瀰漫性大B細胞淋巴結淋巴瘤、淋巴結淋巴瘤濾泡淋巴瘤、縱隔B細胞淋巴結淋巴瘤、淋巴結淋巴瘤漿母細胞肺腺癌、淋巴瘤濾泡淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、鼻咽及副鼻竇未分化癌、卵巢癌、卵巢肉瘤、卵巢透明細胞癌、卵巢上皮癌、卵巢顆粒層細胞腫瘤、卵巢漿液性癌瘤、胰臟癌、胰臟導管腺癌、胰臟神經內分泌癌、腹膜間皮瘤、腹膜漿液性癌、胎盤絨毛膜癌、胸膜間皮瘤、前列腺腺泡腺癌、前列腺癌、直腸腺癌、直腸鱗狀細胞癌、皮膚附件癌、皮膚基底細胞癌、皮膚黑色素瘤、皮膚梅克爾細胞癌(skin Merkel cell carcinoma)、皮膚鱗狀細胞癌、小腸腺癌、小腸胃腸道間質瘤(GIST)、大腸/結腸癌、大腸腺癌、軟組織血管肉瘤、軟組織尤文氏肉瘤(Ewing sarcoma)、軟組織血管內皮瘤、軟組織炎症性肌纖維母細胞瘤、軟組織平滑肌肉瘤、軟組織脂肪肉瘤、軟組織神經母細胞瘤、軟組織副神經節瘤、軟組織血管周圍上皮細胞瘤、軟組織肉瘤、軟組織滑膜肉瘤、胃腺癌、瀰漫型胃腺癌、腸道型胃腺癌、腸道型胃腺癌、胃平滑肌肉瘤、胸腺癌瘤、胸腺淋巴球性胸腺瘤、甲狀腺乳頭狀癌、未知原發腺癌、未知原發癌、未知原發惡性贅瘤、淋巴贅瘤、未知原發黑色素瘤、未知原發肉瘤樣癌、未知原發鱗狀細胞癌、未知未分化神經內分泌癌、未知原發未分化小細胞癌、子宮癌肉瘤、子宮內膜腺癌、子宮內膜樣子宮內膜腺癌、乳頭狀漿液性子宮內膜腺癌及子宮平滑肌肉瘤。
在一些實施例中，將一或多種其他抗癌劑與本文所述之ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽並行投與個體。在一些實施例中，個體並行接受放射療法與本文所述之ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，在本文所述之ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽投與之後，向個體投與一或多種其他抗癌劑。在一些實施例中，在本文所述ADC或ADC之組成物或其醫藥學上可接受之鹽投與之後，個體接受放射療法。
在一些實施例中，個體中斷先前療法，例如由於不可接受的或不堪忍受的副作用而中斷先前療法，其中先前療法毒性太大，或其中個體對先前療法產生抗性。
一些實施例提供一種用於延遲或預防疾病或病症的方法，包含將治療有效量之本文所述ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽及針對該疾病或病症的疫苗投與面臨產生該疾病或病症之風險的患者。在一些實施例中，疾病或病症為如本文所述的癌症。在一些實施例中，疾病或病症為病毒病原體。在一些實施例中，該疫苗係皮下投與。在一些實施例中，疫苗係肌肉內投與。在一些實施例中，ADC或ADC組成物及疫苗係經由相同途徑投與(例如ADC與疫苗均皮下投與)。在一些實施例中，ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽與疫苗係經由不同途徑投與。在一些實施例中，疫苗及ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽係以單一調配物提供。在一些實施例中，疫苗及ADC或ADC組成物或其醫藥學上可接受之鹽係以各別調配物提供。 組成物及投藥方法
一些實施例提供一種組成物，其包含如本文所述之ADC (亦即，ADC組成物)之分佈。在一些實施例中，該組成物包含如本文所述之ADC之分佈及至少一種醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，投與途徑為非經腸。非經腸投藥包括皮下注射、靜脈內、肌肉內、胸骨內注射或輸注技術。在一些實施例中，組成物係非經腸投與。在彼等實施例中之一者中，靜脈內投與ADC。投與典型地經由任何方便的途徑，例如藉由輸注或推注注射。
ADC之組成物經調配以便在組成物投與個體後，允許ADC為生物可用的。在一些實施例中，組成物將呈一或多個可注射劑量單元形式。
在一些實施例中，用於製備組成物之材料在使用量下係無毒的。對於一般技術者顯而易見的是，組成物中之活性成分的最佳劑量將視多種因素而定。相關因素包括但不限於動物類型(例如人類)、化合物的特定形式、投藥方式及所用組成物。
在一些實施例中，ADC組成物為在投與之前適合復原成液體的固體，例如凍乾粉末。在一些實施例中，ADC組成物為液體組成物，諸如溶液或懸浮液。液體組成物或懸浮液適用於藉由注射遞送且凍乾固體適合使用適用於注射之稀釋劑復原為液體或懸浮液。在注射投與的組成物中，典型地包括界面活性劑、防腐劑、濕潤劑、分散劑、懸浮劑、緩衝劑、穩定劑及等張劑中之一或多者。
在一些實施例中，液體組成物不論其為溶液、懸浮液或其他類似形式，亦可包括以下中之一或多者：無菌稀釋劑，諸如注射用水、生理鹽水溶液、生理鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)、等張性氯化鈉、不揮發性油(諸如合成單甘油脂或二甘油脂，其可充當溶劑或懸浮介質)、聚乙二醇、甘油、環糊精、丙二醇或其他溶劑；抗細菌劑，諸如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸；緩衝劑，諸如胺基酸、乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；洗滌劑，諸如非離子界面活性劑、多元醇；以及張力調節劑，諸如氯化鈉或右旋糖。非經腸組成物典型地封裝於由玻璃、塑膠或其他材料製成之安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。在一些實施例中，無菌稀釋劑包含生理鹽水。在一些實施例中，無菌稀釋劑為生理鹽水。在一些實施例中，本文所述之組成物為無菌之液體可注射組成物。
有效治療特定病症或病狀之ADC或ADC組成物的量將視該病症或病狀之性質而定，且通常藉由標準臨床技術來確定。另外，有時採用活體外或活體內分析來幫助鑑別最佳劑量範圍。組成物採用的精確劑量亦視非經腸投藥途徑及疾病或病症之嚴重度而定，且應根據從業者之判斷及各個體之情況來決定。
在一些實施例中，組成物包含有效量之ADC，以便獲得適合劑量。典型地，以組成物之重量計，此量為至少約0.01%的ADC。
在一些實施例中，投與個體之ADC或ADC組成物的組成物劑量以個體之體重計為約0.01 mg/kg至約100 mg/kg、約1至約100 mg/kg、或約0.1至約25 mg/kg。在一些實施例中，投與個體之劑量以個體之體重計為約0.01 mg/kg至約15 mg/kg。在一些實施例中，投與個體之劑量以個體之體重計為約0.1 mg/kg至約15 mg/kg。在一些實施例中，投與個體之劑量以個體之體重計為約0.1 mg/kg至約20 mg/kg。在一些實施例中，投與的劑量以個體之體重計為約0.1 mg/kg至約5 mg/kg或約0.1 mg/kg至約10 mg/kg。在一些實施例中，投與的劑量以個體之體重計為約1 mg/kg至約15 mg/kg。在一些實施例中，投與的劑量以個體之體重計為約1 mg/kg至約10 mg/kg。在一些實施例中，在治療週期期間投與的劑量以個體之體重計為約0.1至約4 mg/kg、約0.1至約3.2 mg/kg、或約0.1至約2.7 mg/kg。
術語「載劑」係指與化合物一起投與之稀釋劑、佐劑或賦形劑。此類醫藥載劑為液體。當靜脈內投與化合物時，水為一種例示性載劑。生理鹽水溶液及右旋糖水溶液及甘油溶液亦用作可注射溶液之液體載劑。適合之醫藥載劑亦包括甘油、丙烯、二醇或乙醇。必要時，本發明之組成物在一些實施例中亦可含有少量濕潤劑或乳化劑，及/或pH緩衝劑。
在一些實施例中，ADC或ADC組成物係根據常規程序調配為適於靜脈內投與動物(尤其人類)的組成物。典型地，用於靜脈內投與之載劑或媒劑為無菌等張緩衝水溶液。在一些實施例中，組成物進一步包含局部麻醉劑，諸如利諾卡因(lignocaine)，以減輕注射部位之疼痛。在一些實施例中，ADC或ADC組成物及調配物之剩餘部分係分開提供或以單位劑型混合在一起，例如呈乾燥凍乾粉末或無水濃縮物形式，其存在於指示活性劑之量的氣密密封式容器(諸如安瓿或藥囊)中。在藉由輸注投與ADC或ADC組成物的情況下，其有時例如用含有無菌醫藥級水或生理鹽水之輸注瓶施配。在藉由注射投與ADC或ADC組成物的情況下，典型地提供具有注射用無菌水或生理鹽水之安瓿，以便在投與之前混合該等成分。
組成物一般調配為無菌的、基本上等張的，且完全符合美國食品藥物管理局(U.S. Food and Drug Administration)之所有良好生產規範(GMP)規定。 各種實施例
本文所揭示之各種實施例包括以下： 1.     一種式(II)化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； 各R 2及R 3獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F； 各R A、R B、R C、R D、R E及R F獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標m獨立地為0或1； 各下標q獨立地為整數0至6； X A為-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X B不存在或為2員至16員伸雜烷基； L為具有式-(A) a-(W) w-(Y) y-的連接子，其中： 下標a為0或1； 下標y為0或1； 下標w為0或1； A為視情況經1至3個R a1取代之C 2 - 20伸烷基；或視情況經1至3個R b1取代之2員至40員伸雜烷基； 各R a1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R b1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d1及R e1獨立地為氫或C 1 - 3烷基； W為1至12個胺基酸或具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至A或M； *表示共價連接至Y、X A或X B；且 Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分或不可裂解部分； M為 ； 各AA為獨立選擇之胺基酸，其中(AA) b經由硫原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺； 各下標b獨立地為整數1至6；且 X B及L各自獨立地視情況經選自PEG2至PEG 72的PEG單元取代。 2.     如實施例1之化合物，其中R 1為氫。 3.     如實施例1之化合物，其中R 1為羥基。 4.     如實施例1之化合物，其中R 1為C 1 - 6烷氧基。 5.     如實施例1或4之化合物，其中R 1為甲氧基。 6.     如實施例1之化合物，其中R 1為-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基。 7.     如實施例1或6之化合物，其中R 1為甲氧基乙基。 8.     如實施例1之化合物，其中R 1為PEG2至PEG4。 9.     如實施例1之化合物，其中R 1為-(CH 2) n-NR AR B。 10.   如實施例1或9之化合物，其中R A與R B均為氫。 11.   如實施例1或9之化合物，其中R A與R B獨立地為C 1 - 3烷基。 12.   如實施例1或9之化合物，其中R A及R B中之一者為氫且R A及R B中之另一者為C 1 - 3烷基。 13.   如實施例1或9至12中任一例之化合物，其中各下標n為0。 14.   如實施例1或9至12中任一例之化合物，其中各下標n為1。 15.   如實施例1或9至12中任一例之化合物，其中各下標n為2。 16.   如實施例1或9至12中任一例之化合物，其中各下標n為3、4、5或6。 17.   如實施例1至16中任一例之化合物，其中R 2及R 3獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2與R 3相同。 18.   如實施例1至16中任一例之化合物，其中R 2及R 3獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2與R 3不同。 19.   如實施例1至18中任一例之化合物，其中R 2為-(C=O) m-NR CR D。 20.   如實施例1至18中任一例之化合物，其中R 3為-(C=O) m-NR CR D。 21.   如實施例1至20中任一例之化合物，其中R C與R D均為氫。 22.   如實施例1至20中任一例之化合物，其中R C及R D各自獨立地為C 1 - 3烷基。 23.   如實施例1至20中任一例之化合物，其中R C及R D中之一者為氫且R C及R D中之另一者為C 1 - 3烷基。 24.   如實施例1至20中任一例之化合物，其中各下標m為0。 25.   如實施例1至20中任一例之化合物，其中各下標m為1。 26.   如實施例1至18中任一例之化合物，其中R 2為-(CH 2) q-NR ER F。 27.   如實施例1至18中任一例之化合物，其中R 3為-(CH 2) q-NR ER F。 28.   如實施例1至18、26或27中任一例之化合物，其中R E與R F均為氫。 29.   如實施例1至18、26或27中任一例之化合物，其中R E及R F各自獨立地為C 1 - 3烷基。 30.   如實施例1至18、26或27中任一例之化合物，其中R E及R F中之一者為氫且R E及R F中之另一者為C 1 - 3烷基。 31.   如實施例1至18、26或27中任一例之化合物，其中各下標q為0。 32.   如實施例1至18、26或27中任一例之化合物，其中各下標q為整數1至6。 33.   如實施例1至18中任一例之化合物，其中R 3為-CO 2H。 34.   如實施例1至18中任一例之化合物，其中R 2為-CO 2H。 35.   如實施例1至34中任一例之化合物，其中X A為-CH 2-。 36.   如實施例1至34中任一例之化合物，其中X A為-O-。 37.   如實施例1至34中任一例之化合物，其中X A為-S-。 38.   如實施例1至34中任一例之化合物，其中X A為-NH-。 39.   如實施例1至38中任一例之化合物，其中X B為2員至16員伸雜烷基。 40.   如實施例1至39中任一例之化合物，其中X B為2員至12員伸雜烷基。 41.   如實施例1至40中任一例之化合物，其中X B為2員至8員伸雜烷基。 42.   如實施例39至41中任一例之化合物，其中該伸雜烷基為分支鏈，具有1至4個甲基。 43.   如實施例39至42中任一例之化合物，其中該伸雜烷基為分支鏈，具有1或2個甲基。 44.   如實施例39至43中任一例之化合物，其中該伸雜烷基經1至3個氟基取代。 45.   如實施例1至44中任一例之化合物，其中X B包含一或兩個氮原子。 46.   如實施例1至45中任一例之化合物，其中X B包含一或兩個側氧基。 47.   如實施例1至46中任一例之化合物，其中X B包含一個氮原子及一個側氧基。 48.   如實施例1至47中任一例之化合物，其中X B包含兩個氮原子及一個側氧基。 49.   如實施例1至41或45至47中任一例之化合物，其中X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L或M。 50.   如實施例1至41或45至47中任一例之化合物，其中X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L或M。 51.   如實施例1至41或45至47中任一例之化合物，其中X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L或M。 52.   如實施例1至41或45至47中任一例之化合物，其中X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L或M。 53.   如實施例1至43或48中任一例之化合物，其中X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L。 54.   如實施例1至43或45中任一例之化合物，其中X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L。 55.   如實施例1至38中任一例之化合物，其中X B不存在。 56.   如實施例1至55中任一例之化合物，其中下標a為1。 57.   如實施例1至56中任一例之化合物，其中下標y為1。 58.   如實施例1至57中任一例之化合物，其中下標w為1。 59.   如實施例1至55中任一例之化合物，其中下標a、下標y及下標w之總和為1。 60.   如實施例1至55中任一例之化合物，其中下標a、下標y及下標w之總和為2。 61.   如實施例1至58中任一例之化合物，其中下標a、下標y及下標w之總和為3。 62.   如實施例1至61中任一例之化合物，其中Y為自分解型部分。 63.   如實施例1至61中任一例之化合物，其中Y為 。 64.   如實施例1至54或56至61中任一例之化合物，其中Y為不可裂解部分且a為0。 65.   如實施例1至54、56至61或64中任一例之化合物，其中Y為環己烷羧基、十一醯基、己醯基(caproyl)、己醯基(hexanoyl)、丁醯基或丙醯基。 66.   如實施例1至54、56至61或64中任一例之化合物，其中Y為PEG4至PEG12。 67.   如實施例1至66中任一例之化合物，其中W為1至12個胺基酸。 68.   如實施例1至67中任一例之化合物，其中W為1至6個胺基酸。 69.   如實施例1至68中任一例之化合物，其中W中的各胺基酸獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、絲胺酸、天冬胺酸、天冬胺酸甲酯、N,N-二甲基-離胺酸、苯丙胺酸、瓜胺酸、纈胺酸-丙胺酸、纈胺酸-瓜胺酸、苯丙胺酸-離胺酸或高絲胺酸甲醚。 70.   如實施例1至66中任一例之化合物，其中W具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至A或M；且 *表示共價連接至Y、X A或X B。 71.   如實施例1至66或70中任一例之化合物，其中W 1為-O-C(=O)-。 72.   如實施例1至66或70至71中任一例之化合物，其中一個R g為鹵素、-CN或NO 2，且其餘R g為氫。 73.   如實施例1至66或70至71中任一例之化合物，其中各R g為氫。 74.   如實施例1至73中任一例之化合物，其中A為視情況經1至3個R a1取代之C 2 - 20伸烷基。 75.   如實施例1至74中任一例之化合物，其中A為視情況經1至3個R a1取代之C 4 - 10伸烷基。 76.   如實施例1至75中任一例之化合物，其中A為視情況經R a1取代之C 2 - 20伸烷基。 77.   如實施例1至76中任一例之化合物，其中A為視情況經R a1取代之C 4 - 10伸烷基。 78.   如實施例1至75中任一例之化合物，其中A為C 2 - 20伸烷基。 79.   如實施例1至75中任一例之化合物，其中A為C 4 - 10伸烷基。 80.   如實施例1至73中任一例之化合物，其中A為視情況經1至3個R b1取代的2員至40員伸雜烷基。 81.   如實施例1至72中任一例之化合物，其中A為視情況經1至3個R b1取代的4員至12員伸雜烷基。 82.   如實施例1至73或80中任一例之化合物，其中A為視情況經一個R b1取代的2員至40員伸雜烷基。 83.   如實施例1至73或80中任一例之化合物，其中A為視情況經一個R b1取代的4員至12員伸雜烷基。 84.   如實施例1至73或80中任一例之化合物，其中A為2員至40員伸雜烷基。 85.   如實施例1至73或80中任一例之化合物，其中A為4員至12員伸雜烷基。 86.   如實施例1至73或84至85中任一例之化合物，其中A為 ，其中 表示共價連接至W，且*表示共價鍵聯至M。 87.   如實施例1至54或61至73中任一例之化合物，其中下標a為0。 88.   如實施例1至54或67至79中任一例之化合物，其中下標y為0。 89.   如實施例1至54、58至66或79至80中任一例之化合物，其中下標w為0。 90.   如實施例1至54中任一例之化合物，其中下標a、下標y及下標w之總和為0。 91.   如實施例1至90中任一例之化合物，其中M為 。 92.   如實施例1至90中任一例之化合物，其中M為 。 93.   如實施例1至90中任一例之化合物，其中M為 。 94.   如實施例1至93中任一例之化合物，其中各AA獨立地為天然胺基酸；其中(AA) b經由硫原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺。 95.   如實施例1至93中任一例之化合物，其中各AA獨立地為天然胺基酸；其中(AA) b經由氮原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺。 96.   如實施例1至95中任一例之化合物，其中各下標b為1。 97.   如實施例1至95中任一例之化合物，其中各下標b為2。 98.   如實施例1至95中任一例之化合物，其中各下標b為3、4、5或6。 99.   如實施例1至91、94或96中任一例之化合物，其中M為 。 100.  如實施例1至90、92或96中任一例之化合物，其中M為 。 101.  如實施例1至90、93或96中任一例之化合物，其中M為 。 102.  如實施例1至90中任一例之化合物，其中M為 。 103.  如實施例1至102中任一例之化合物，其中X B及L中之一者經獨立選自PEG2至PEG 72之PEG單元取代。 104.  如實施例1至102中任一例之化合物，其中X B及L未經取代。 105.  如實施例1之化合物，其選自由以下組成之群： ， 及其醫藥學上可接受之鹽。 106.  如實施例1之化合物，其具有式(II-A)之結構： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： L A為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-或-C(O)NR H(CH 2) 1 - 6-； 各R H獨立地為氫或C 1 - 3烷基； Y為 ； #表示共價連接至-NR HL A； ##表示共價連接至W或L B；且 L B為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-、或-[NHC(O)(CH 2) 1 - 4] 1 - 3-。 107.  如實施例106之化合物，其中R H為甲基。 108.  如實施例106或107之化合物，其中L A為-(CH 2) 2 - 6-。 109.  如實施例106或107之化合物，其中L A為-(CH 2) 3-。 110.  如實施例106至109中任一例之化合物，其中y為0。 111.  如實施例106至109中任一例之化合物，其中y為1。 112.  如實施例106至111中任一例之化合物，其中W為1至3個胺基酸之鏈。 113.  如實施例112之化合物，其中W之各胺基酸獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、組胺酸、精胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、O-甲基絲胺酸、O-甲基天冬胺酸、O-甲基麩胺酸、N-甲基離胺酸、O-甲基酪胺酸、O-甲基組胺酸及O-甲基蘇胺酸。 114.  如請求項106至111中任一例之化合物，其中W為： ，其中： 表示共價連接至L B；且 * 表示共價連接至Y或NR H。 115.  如實施例106至114中任一例之化合物，其中L B為-C(O)(CH 2) 2-。 116.  如實施例106至114中任一例之化合物，其中L B為-[NHC(O)(CH 2) 2] 2-。 117.  如實施例106之化合物，其選自由以下組成之群： ，及其醫藥學上可接受之鹽。 118.  一種抗體-藥物結合物(ADC)，其具有下式： Ab-(S*-M 1-(D)) p 其中： Ab為抗體； 各S*為來自該抗體之半胱胺酸殘基的硫原子； M 1為丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺； 下標p為整數2至8；且 各(D)為式(I)之藥物-連接子單元： 其中： 表示L共價連接至M 1； R 1為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； R 2及R 3獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F； 各R A、R B、R C、R D、R E及R F獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標m獨立地為0或1； 各下標q為整數0至6； X A為-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X B不存在或為2員至16員伸雜烷基； L具有式-(A) a-(W) w-(Y) y-，其中： 下標a為0或1； 下標y為0或1； 下標w為0或1； A為視情況經1至3個R a1取代之C 2 - 20伸烷基；或視情況經1至3個R b1取代之2員至40員伸雜烷基； 各R a1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R b1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d1及R e1獨立地為氫或C 1 - 3烷基； W為1至12個胺基酸或具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至A或M 1； *表示共價連接至Y、X B或X A； Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分或不可裂解部分；且 X B及L各自獨立地視情況經選自PEG2至PEG 72的PEG單元取代。 119.  如實施例118之ADC，其中R 1為氫。 120.  如實施例118之ADC，其中R 1為羥基。 121.  如實施例118之ADC，其中R 1為C 1 - 6烷氧基。 122.  如實施例118或121之ADC，其中R 1為甲氧基。 123.  如實施例118之化合物，其中R 1為-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基。 124.  如實施例118或123之ADC，其中R 1為甲氧基乙基。 125.  如實施例118之ADC，其中R 1為PEG2至PEG4。 126.  如實施例118之ADC，其中R 1為-(CH 2) n-NR AR B。 127.  如實施例118或126之ADC，其中R A與R B均為氫。 128.  如實施例118或126之ADC，其中R A及R B獨立地為C 1 - 3烷基。 129.  如實施例118或126之ADC，其中R A及R B中之一者為氫且R A及R B中之另一者為C 1 - 3烷基。 130.  如實施例118或126至129中任一例之ADC，其中各下標n為0。 131.  如實施例118或126至129中任一項之化合物，其中各下標n為1。 132.  如實施例118或126至129中任一例之化合物，其中各下標n為2。 133.  如實施例118或126至129中任一例之ADC，其中各下標n為3、4、5或6。 134.  如實施例118至133中任一例之ADC，其中R 2及R 3獨立地為-CO 2H或-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2與R 3相同。 135.  如實施例118至133中任一例之ADC，其中R 2及R 3獨立地為-CO 2H或-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2與R 3不同。 136.  如實施例118至135中任一例之ADC，其中R 2為-(C=O) m-NR CR D。 137.  如實施例118至135中任一例之ADC，其中R 3為-(C=O) m-NR CR D。 138.  如實施例118至137中任一例之ADC，其中R C與R D均為氫。 139.  如實施例118至137中任一例之ADC，其中R C及R D各自獨立地為C 1 - 3烷基。 140.  如實施例118至137中任一例之ADC，其中R C及R D中之一者為氫且R C及R D中之另一者為C 1 - 3烷基。 141.  如實施例118至140中任一例之ADC，其中各下標m為0。 142.  如實施例118至140中任一例之ADC，其中各下標m為1。 143.  如實施例118至135中任一例之ADC，其中R 2為-(CH 2) q-NR ER F。 144.  如實施例118至135中任一例之ADC，其中R 3為-(CH 2) q-NR ER F。 145.  如實施例118至135、143或144中任一例之ADC，其中R E與R F均為氫。 146.  如實施例118至135、143或144中任一例之ADC，其中R E及R F各自獨立地為C 1 - 3烷基。 147.  如實施例118至135、143或144中任一例之ADC，其中R E及R F中之一者為氫且R E及R F中之另一者為C 1 - 3烷基。 148.  如實施例118至135、143或144中任一例之ADC，其中各下標q為0。 149.  如實施例118至135、143或144中任一例之化合物，其中各下標q為整數1至6。 150.  如實施例118至135中任一例之ADC，其中R 3為-CO 2H。 151.  如實施例118至135中任一例之ADC，其中R 2為-CO 2H。 152.  如實施例118至151中任一例之ADC，其中X A為-CH 2-。 153.  如實施例118至151中任一例之ADC，其中X A為-O-。 154.  如實施例118至151中任一例之ADC，其中X A為-S-。 155.  如實施例118至151中任一例之ADC，其中X A為-NH-。 156.  如實施例118至155中任一例之ADC，其中X B為2員至16員伸雜烷基。 157.  如實施例118至155中任一例之ADC，其中X B為2員至12員伸雜烷基。 158.  如實施例118至157中任一例之ADC，其中X B為2員至8員伸雜烷基。 159.  如實施例118至158中任一例之化合物，其中該伸雜烷基為分支鏈，具有1至4個甲基。 160.  如實施例118至159中任一例之ADC，其中該伸雜烷基為分支鏈，具有1或2個甲基。 161.  如實施例118至160中任一例之ADC，其中該伸雜烷基經1至3個氟基取代。 162.  如實施例118至161中任一例之ADC，其中X B包含一或兩個氮原子。 163.  如實施例118至162中任一例之ADC，其中X B包含一或兩個側氧基。 164.  如實施例118至163中任一例之ADC，其中X B包含一個氮原子及一個側氧基。 165.  如實施例118至163中任一例之ADC，其中X B包含兩個氮原子及一個側氧基。 166.  如實施例118至158或162至164中任一例之ADC，其中X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L或M 1。 167.  如實施例118至158或162至164中任一例之ADC，其中X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L或M 1。 168.  如實施例118至158或162至163中任一例之ADC，其中X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L或M 1。 169.  如實施例118至158或162至164中任一例之ADC，其中X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L或M 1。 170.  如實施例118至158或162至165中任一例之ADC，其中X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L。 171.  如實施例118至158或162至165中任一例之ADC，其中X B為 ，其中 表示共價連接至X A，且*表示共價連接至L。 172.  如實施例118至158中任一例之ADC，其中X B不存在。 173.  如實施例118至171中任一例之ADC，其中下標a為1。 174.  如實施例118至171或173中任一例之ADC，其中下標y為1。 175.  如實施例118至173中任一例之ADC，其中下標w為1。 176.  如實施例118至171中任一例之ADC，其中下標a、下標y及下標w之總和為1。 177.  如實施例118至171中任一例之ADC，其中下標a、下標y及下標w之總和為2。 178.  如實施例118至171中任一例之ADC，其中下標a、下標y及下標w之總和為3。 179.  如實施例118至178中任一例之ADC，其中Y為自分解型部分。 180.  如請求項118至178中任一例之ADC，其中Y為 。 181.  如實施例118至172中任一例之ADC，其中Y為不可裂解部分且a為0。 182.  如實施例118至178或181中任一例之ADC，其中Y為MCC或SMCC。 183.  如請求項118至178或181中任一例之ADC，其中Y為PEG4至PEG12。 184.  如實施例118至183中任一例之ADC，其中W為1至12個胺基酸。 185.  如實施例118至184中任一例之ADC，其中W為1至6個胺基酸。 186.  如實施例118至185中任一例之ADC，其中W中的各胺基酸選自由以下組成之群：丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、絲胺酸、天冬胺酸、天冬胺酸甲酯、N,N-二甲基-離胺酸、苯丙胺酸、瓜胺酸、纈胺酸-丙胺酸、纈胺酸-瓜胺酸、苯丙胺酸-離胺酸或高絲胺酸甲醚。 187.  如實施例118至183中任一例之ADC，其中W具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至A或M 1；且 *表示共價連接至Y、X B或X A。 188.  如實施例118至187中任一例之ADC，其中W 1為-O-C(=O)-。 189.  如實施例118至187中任一例之ADC，其中W 1不存在。 190.  如實施例118至188中任一例之ADC，其中一個R g為鹵素、-CN或NO 2，且其餘R G為氫。 191.  如請求項118至188中任一項之ADC，其中各R g為氫。 192.  如實施例118至191中任一例之ADC，其中A為視情況經1至3個R a1取代之C 2 - 20伸烷基。 193.  如實施例118至192中任一例之ADC，其中A為視情況經1至3個R a1取代之C 4 - 10伸烷基。 194.  如實施例118至191中任一例之ADC，其中A為視情況經R a1取代之C 2 - 20伸烷基。 195.  如實施例118至192中任一例之ADC，其中A為視情況經R a1取代之C 4 - 10伸烷基。 196.  如實施例118至191中任一例之ADC，其中A為C 2 - 20伸烷基。 197.  如實施例118至192中任一例之ADC，其中A為C 4 - 10伸烷基。 198.  如實施例118至191中任一例之ADC，其中A為視情況經1至3個R b1取代的2員至40員伸雜烷基。 199.  如實施例118至191中任一例之ADC，其中A為視情況經1至3個R b1取代的4員至12員伸雜烷基。 200.  如實施例118至191或199中任一例之ADC，其中A為視情況經一個R b1取代的2員至40員伸雜烷基。 201.  如實施例118至191或199中任一例之ADC，其中A為視情況經一個R b1取代的4員至12員伸雜烷基。 202.  如實施例118至191或199中任一例之ADC，其中A為2員至40員伸雜烷基。 203.  如實施例118至191或199中任一例之ADC，其中A為4員至12員伸雜烷基。 204.  如實施例118至191或202至203中任一例之ADC，其中A為 。 205.  如實施例118至145中任一例之ADC，其中下標a為0。 206.  如請求項118至145中任一例之ADC，其中下標y為0。 207.  如實施例118至145中任一例之ADC，其中下標w為0。 208.  如實施例118至145或205至207中任一例之ADC，其中下標a、下標y及下標w之總和為0。 209.  如實施例118至208中任一例之ADC，其中該連接子為可裂解連接子。 210.  如實施例118至209中任一例之ADC，其中該連接子可藉由組織蛋白酶B、C或D；β-葡萄糖醛酸苷酶；及β-甘露糖苷酶中之一或多者裂解。 211.  如實施例118至208之ADC，其中該連接子為不可裂解連接子。 212.  如實施例118至211中任一例之ADC，其中該抗體為人源化抗體。 213.  如請求項118至212中任一項之ADC，其中該抗體為單株抗體。 214.  如請求項118至187中任一例之ADC，其中該抗體發生岩藻糖基化。 215.  如請求項118至187中任一例之ADC，其中該抗體發生去岩藻糖基化。 216.  一種化合物，其具有式(IV)之結構： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1C為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； R 2C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 2C連接於標記為1、2或3之任一位置； R 3C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 3C連接於標記為1'、2'或3'之任一位置； 各R A、R B、R C、R D、R E、R F及R M獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標q獨立地為整數0至6； L E為-(C=O)-或-S(O) 2-； L C為-(CR IR J) 1 - 3- 各R I及R J獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 下標s為0或1； 各Cy 1獨立地為4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或C 3 - 6環烷基，其各自視情況經一或多個R K取代； 各R K獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d2R e2、-C(O)NR d2R e2、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d2及R e2獨立地為氫或C 1 - 3烷基； L AA為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-、-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6-、-(CH 2) 1 - 6O-、-C(O)(CH 2) 1 - 6O-或-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6O-； R L為氫或C 1 - 3烷基； Cy 2為C 3 - 6環烷基、4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或苯基，其各自視情況經一或多個R U取代； 各R U獨立地選自由以下組成之群：-CO 2R j1、-(C=O)NR d3R e3、-S(O) 2NR d3R e3、-(CH 2) q1-NR g1R h1、-(CH 2) q1-OR j1及-(CH 2) q1-(OCH 2CH 2) 1 - 8OH； 各R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 下標q1為整數0至6； 下標t1及t2獨立地為0或1，其中t1及t2中之至少一者為1； L D為-(CH 2) 1 - 6-； 下標u為0或1； Z為-N(R HH)-或-N +(C 1 - 6烷基)(R HH)-； R HH為氫、C 1 - 6烷基、C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 1 - 3烷氧基、-(CH 2) 1 - 34員至6員雜環、或-(CH 2) 1 - 35員至6員雜芳基； Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分或不可裂解部分； 下標y為0或1； W為1至12個胺基酸之鏈或具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至L BB； *表示共價連接至Y、L D、NR HH或Cy 2； 下標w為0或1； L BB為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-或-[NHC(O)(CH 2) 1 - 4] 1 - 3-；且 M為 ； 各AA為獨立選擇之胺基酸，其中(AA) b經由硫原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺；且 各下標b獨立地為整數1至6。 217.  如實施例216之化合物，其中R 1C為氫。 218.  如實施例216之化合物，其中R 1C為羥基。 219.  如實施例216之化合物，其中R 1C為C 1 - 6烷氧基。 220.  如實施例216之化合物，其中R 1C為甲氧基。 221.  如實施例216之化合物，其中R 1C為-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基。 222.  如實施例216之化合物，其中R 1C為甲氧基乙基。 223.  如實施例216之化合物，其中R 1C為PEG2至PEG4。 224.  如實施例216之化合物，其中R 1C為-(CH 2) n-NR AR B。 225.  如實施例216至224中任一例之化合物，其中R A與R B均為氫。 226.  如請求項216至224中任一例之化合物，其中R A及R B獨立地為C 1 - 3烷基。 227.  如實施例216至224中任一例之化合物，其中R A及R B中之一者為氫且R A及R B中之另一者為C 1 - 3烷基。 228.  如實施例216至227中任一例之化合物，其中各下標n為0。 229.  如實施例216至227中任一例之化合物，其中各下標n為1。 230.  如實施例216至227中任一例之化合物，其中各下標n為2。 231.  如實施例216至227中任一例之化合物，其中各下標n為3、4、5或6。 232.  如實施例216至231中任一例之化合物，其中R 2C及R 3C獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C與R 3C相同。 233.  如實施例216至231中任一例之化合物，其中R 2C及R 3C獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C與R 3C不同。 234.  如實施例216至231中任一例之化合物，其中R 2C為-(C=O) m-NR CR D。 235.  如實施例216至231中任一例之化合物，其中R 3C為-(C=O) m-NR CR D。 236.  如實施例216至235中任一例之化合物，其中R C與R D均為氫。 237.  如實施例216至235中任一例之化合物，其中R C及R D各自獨立地為C 1 - 3烷基。 238.  如實施例216至235中任一例之化合物，其中R C及R D中之一者為氫且R C及R D中之另一者為C 1 - 3烷基。 239.  如實施例216至238中任一例之化合物，其中各下標m為0。 240.  如實施例216至238中任一例之化合物，其中各下標m為1。 241.  如實施例216至240中任一例之化合物，其中R 2C為-(CH 2) q-NR ER F。 242.  如實施例216至241中任一例之化合物，其中R 3C為-(CH 2) q-NR ER F。 243.  如實施例216至242中任一例之化合物，其中R E與R F均為氫。 244.  如實施例216至242中任一例之化合物，其中R E及R F各自獨立地為C 1 - 3烷基。 245.  如實施例216至242中任一例之化合物，其中R E及R F中之一者為氫且R E及R F中之另一者為C 1 - 3烷基。 246.  如實施例216至245中任一例之化合物，其中各下標q為0。 247.  如實施例216至245中任一例之化合物，其中各下標q為整數1至6。 248.  如實施例216至247中任一例之化合物，其中R 2C為-CO 2R M。 249.  如實施例216至248中任一例之化合物，其中R 3C為-CO 2R M。 250.  如實施例248或249之化合物，其中R M為氫。 251.  如實施例248或249之化合物，其中R M為C 1 - 3烷基。 252.  如實施例216至247中任一例之化合物，其中R 2C為-(CH 2) q-OR M。 253.  如實施例216至247及252中任一例之化合物，其中R 3C為-(CH 2) q-OR M。 254.  如實施例252或253之化合物，其中R M為氫。 255.  如實施例252至254中任一例之化合物，其中q為0。 256.  如實施例252至254中任一例之化合物，其中q為1。 257.  如實施例216至247中任一例之化合物，其中R 2C為-O(C=O)-NR ER F。 258.  如實施例216至247及257中任一例之化合物，其中R 3C為-O(C=O)-NR ER F。 259.  如實施例216至258中任一例之化合物，其中R E與R F均為氫。 260.  如實施例216至258中任一例之化合物，其中R E及R F各自獨立地為C 1 - 3烷基。 261.  如實施例216至258中任一例之化合物，其中R E及R F中之一者為氫且R E及R F中之另一者為C 1 - 3烷基。 262.  如實施例216至247中任一例之化合物，其中R 2C為-NR M(C=O)-NR ER F。 263.  如實施例216至247及262中任一例之化合物，其中R 3C為-NR M(C=O)-NR ER F。 264.  如實施例262或263之化合物，其中R E、R F及R M皆為氫。 265.  如實施例262或263之化合物，其中R E、R F及R M各自獨立地為C 1 - 3烷基。 266.  如實施例262或263之化合物，其中R E、R F及R M中之一者為C 1 - 3烷基且R E、R F及R M之其餘部分為氫。 267.  如實施例216至247中任一例之化合物，其中R 2C為-S(O) 2NR CR D。 268.  如實施例216至247及267中任一例之化合物，其中R 3C為-S(O) 2NR CR D。 269.  如實施例267或268之化合物，其中R C與R D均為氫。 270.  如實施例267或268之化合物，其中R C及R D各自獨立地為C 1 - 3烷基。 271.  如實施例267或268之化合物，其中R C及R D中之一者為氫且R C及R D中之另一者為C 1 - 3烷基。 272.  如實施例216至247中任一例之化合物，其中R 2C為-S(O) 2R M。 273.  如實施例216至247及272中任一例之化合物，其中R 3C為-S(O) 2R M。 274.  如實施例272或273之化合物，其中R M為氫。 275.  如實施例272或273之化合物，其中R M為C 1 - 3烷基。 276.  如實施例216至275中任一例之化合物，其中R 2C連接在位置1。 277.  如實施例216至275中任一例之化合物，其中R 2C連接在位置2。 278.  如實施例216至275中任一例之化合物，其中R 2C連接在位置3。 279.  如實施例216至275中任一例之化合物，其中R 3C連接在位置1'。 280.  如實施例216至275中任一例之化合物，其中R 3C連接在位置2'。 281.  如實施例216至275中任一例之化合物，其中R 3C連接在位置3'。 282.  如實施例216至281中任一例之化合物，其中L E為-(C=O)-。 283.  如實施例216至281中任一例之化合物，其中L E為-S(O) 2-。 284.  如實施例216至283中任一例之化合物，其中各R I及R J為氫。 285.  如實施例216至283中任一例之化合物，其中各R I及R J為C 1 - 3烷基。 286.  如實施例216至283中任一例之化合物，其中R I及R J中之一者為氫且R I及R J中之另一者為C 1 - 3烷基。 287.  如實施例216至286中任一例之化合物，其中L C為-(CR IR J)-。 288.  如實施例216至287中任一例之化合物，其中s為0。 289.  如實施例216至287中任一例之化合物，其中s為1。 290.  如實施例216至289中任一例之化合物，其中各Cy 1獨立地為5員至6員雜芳基。 291.  如實施例216至289中任一例之化合物，其中各Cy 1為視情況經一或多個R K取代的吡唑。 292.  如實施例216至289中任一例之化合物，其中各Cy 1獨立地選自由以下組成之群：吡唑、咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、㗁唑、異㗁唑、吡咯、嗒𠯤、吡啶、嘧啶及吡𠯤，其各自視情況經一或多個R K取代。 293.  如實施例216至289中任一例之化合物，其中各Cy 1獨立地選自由以下組成之群：咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、㗁唑、異㗁唑、吡咯、嗒𠯤、吡啶、嘧啶及吡𠯤，其各自視情況經一或多個R K取代。 294.  如實施例216至289中任一例之化合物，其中各Cy 1獨立地為視情況經一或多個R K取代的C 4 - 5環烷基。 295.  如實施例216至294中任一例之化合物，其中各R K獨立地選自由C 1 - 3烷基、C 1 - 3鹵烷基及鹵素組成之群。 296.  如實施例295之化合物，其中各R K獨立地選自由甲基、乙基、-CF 3及鹵素組成之群。 297.  如實施例216至296中任一例之化合物，其中各Cy 1為相同的。 298.  如實施例216至296中任一例之化合物，其中各Cy 1為不同的。 299.  如實施例216至298中任一例之化合物，其中L AA為-(CH 2) 1 - 6-。 300.  如實施例216至298中任一例之化合物，其中L AA為-(CH 2) 1 - 3-。 301.  如實施例216至298中任一例之化合物，其中L AA為-(CH 2) 1 - 6O-。 302.  如實施例216至298中任一例之化合物，其中L AA為-(CH 2) 1 - 3O-。 303.  如實施例216至302中任一例之化合物，其中Cy 2為4員至6員雜環。 304.  如實施例216至302中任一例之化合物，其中Cy 2具有以下結構： ，其中下標z1及z2中之每一者獨立地為整數1至3且**指示連接至L AA。 305.  如實施例304之化合物，其中z1及z2為1。 306.  如實施例304之化合物，其中z1及z2為2。 307.  如實施例304之化合物，其中z1為1且z2為2。 308.  如實施例216至302中任一例之化合物，其中Cy 2具有以下結構： ，其中 Z 1選自由以下組成之群：-O-、-S-、-CR NR O-及-NR P-； R N、R O及R P獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 下標z3為整數1至3；且 **指示連接至L AA。 309.  如實施例308之化合物，其中R N及R O為氫。 310.  如實施例308之化合物，其中R P為氫。 311.  如實施例308之化合物，其中R P為甲基。 312.  如實施例216至302中任一例之化合物，其中Cy 2為5員至6員雜芳基。 313.  如實施例216至302中任一例之化合物，其中Cy 2選自由以下組成之群： ，其中 Z 2為=CR N-或=N-； R N為氫或C 1 - 6烷基；且 **指示連接至L AA。 314.  如實施例313之化合物，其中Z 2為=CR N-。 315.  如實施例314之化合物，其中R N為氫。 316.  如實施例313之化合物，其中Z 2為=N-。 317.  如實施例216至302中任一例之化合物，其中Cy 2選自由以下組成之群： ，其中Z 3為-O-或-S-且**指示連接至L AA、L D、NR HH、Y、W或L BB。 318.  如實施例317之化合物，其中**指示連接至L AA。 319.  如實施例317之化合物，其中**指示連接至L D、NR HH、Y、W或L BB。 320.  如實施例216至302中任一例之化合物，其中Cy 2選自由以下組成之群： ，其中**指示連接至L AA。 321.  如實施例216至302中任一例之化合物，其中Cy 2選自由以下組成之群： ，其中 各Z 2獨立地為=CR N-或=N-；且 各R N為氫或C 1 - 6烷基。 322.  如實施例321之化合物，其中至少一個Z 2為=N-。 323.  如實施例321之化合物，其中一個Z 2為=N-且其餘Z 2為=CR N-。 324.  如實施例321之化合物，其中兩個Z 2為-=N-且其餘Z 2為=CR N-。 325.  如實施例321、323及324中任一例之化合物，其中R N為氫。 326.  如實施例216至302中任一例之化合物，其中Cy 2為 。 327.  如實施例216至302中任一例之化合物，其中Cy 2為 。 328.  如實施例216至302中任一例之化合物，其中Cy 2為 。 329.  如實施例216至302中任一例之化合物，其中Cy 2為環丁基。 330.  如實施例216至329中任一例之化合物，其中各R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地為氫或-CH 3。 331.  如實施例216至330中任一例之化合物，其中各R U獨立地選自-CO 2H、-(C=O)NH 2、-S(O) 2NH 2、-CH 2NH 2及-CH 2OH。 332.  如實施例216至331中任一例之化合物，其中t1為0且t2為1。 333.  如實施例216至331中任一例之化合物，其中t1為1且t2為0。 334.  如實施例216至331中任一例之化合物，其中t1為1且t2為1。 335.  如實施例216至334中任一例之化合物，其中u為1且L D為-(CH 2) 1 - 3-。 336.  如實施例216至334中任一例之化合物，其中u為0。 337.  如實施例216至331中任一例之化合物，其中t2為1且R HH為氫。 338.  如實施例216至331中任一例之化合物，其中t2為1且R HH為C 1 - 3烷基。 339.  如實施例216至331中任一例之化合物，其中t2為1且R HH為C 3 - 4環烷基。 340.  如實施例216至331中任一例之化合物，其中t2為1且R HH為-(CH 2)C 3 - 4環烷基。 341.  如實施例216至331中任一例之化合物，其中t2為1且R HH為-(CH 2) 4員至5員雜環。 342.  如實施例216至331中任一例之化合物，其中t2為1且R HH為-(CH 2) 5員雜芳基。 343.  如實施例216至331及333至342中任一例之化合物，其中Z為-N(R HH)-。 344.  如實施例216至343中任一例之化合物，其中Y為 。 345.  如實施例216至343中任一例之化合物，其中Y為環己烷羧基、十一醯基、己醯基(caproyl)、己醯基(hexanoyl)、丁醯基或丙醯基。 346.  如實施例216至343中任一例之化合物，其中Y為PEG4至PEG12。 347.  如實施例216至343中任一例之化合物，其中y為0。 348.  如實施例216至346中任一例之化合物，其中y為1。 349.  如實施例216至348中任一例之化合物，其中W為1至12個胺基酸之鏈。 350.  如實施例216至348中任一例之化合物，其中W為1至6個胺基酸之鏈。 351.  如實施例216至348中任一例之化合物，其中W為1至3個胺基酸之鏈。 352.  如實施例216至351之化合物，其中W之各胺基酸獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、組胺酸、精胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、O-甲基絲胺酸、O-甲基天冬胺酸、O-甲基麩胺酸、N-甲基離胺酸、O-甲基酪胺酸、O-甲基組胺酸及O-甲基蘇胺酸。 353.  如實施例216至351中任一例之化合物，其中W中的各胺基酸獨立地選自由以下組成之群：丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、絲胺酸、天冬胺酸、天冬胺酸甲酯、N,N-二甲基-離胺酸、苯丙胺酸、瓜胺酸、纈胺酸-丙胺酸、纈胺酸-瓜胺酸、苯丙胺酸-離胺酸或高絲胺酸甲醚。 354.  如實施例216至348中任一例之化合物，其中W具有以下結構： 。 355.  如實施例354之化合物，其中W 1為-O-C(=O)-。 356.  如實施例354或355之化合物，其中一個R g為鹵素、-CN或-NO 2，且其餘R G為氫。 357.  如實施例354或355之化合物，其中各R g為氫。 358.  如實施例216至348中任一例之化合物，其中w為0。 359.  如實施例216至348中任一例之化合物，其中w為1。 360.  如實施例216至359中任一例之化合物，其中L BB為-(CH 2) 1 - 3-。 361.  如實施例216至359中任一例之化合物，其中L BB為-C(O)(CH 2) 1 - 2-。 362.  如實施例361之化合物，其中L BB為-C(O)(CH 2) 2-。 363.  如實施例216至359中任一例之化合物，其中L BB為-[NHC(O)(CH 2) 2] 1 - 2-。 364.  如實施例363之化合物，其中L BB為-[NHC(O)(CH 2) 2] 2-。 365.  如實施例216至364中任一例之化合物，其中M為 。 366.  如實施例216至364中任一例之化合物，其中M為 。 367.  如實施例216至364中任一例之化合物，其中M為 。 368.  如實施例216至367中任一例之化合物，其中各AA獨立地為天然胺基酸；其中(AA) b經由硫原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺。 369.  如實施例216至367中任一例之化合物，其中各AA獨立地為天然胺基酸；其中(AA) b經由氮原子連接至丁二醯亞胺或水解的丁二醯亞胺。 370.  如實施例216至369中任一例之化合物，其中各下標b為1。 371.  如實施例216至369中任一例之化合物，其中各下標b為2。 372.  如實施例216至369中任一例之化合物，其中各下標b為3、4、5或6。 373.  如實施例216至365中任一例之化合物，其中M為 。 374.  如實施例216至364中任一例之化合物，其中M為 。 375.  如實施例216至364中任一例之化合物，其中M為 。 376.  如實施例216至364中任一例之化合物，其中M為 。 377.  如實施例216之化合物，其選自由以下組成之群： 、 ， 及其醫藥學上可接受之鹽。 378.  一種化合物，其具有式(V)之結構： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1C為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； R 2C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 2C連接於標記為1、2或3之任一位置； R 3C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 3C連接於標記為1'、2'或3'之任一位置； 各R A、R B、R C、R D、R E、R F及R M獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標q獨立地為整數0至6； L E為-(C=O)-或-S(O) 2-； L C為-(CR IR J) 1 - 3- 各R I及R J獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 下標s為0或1； 各Cy 1獨立地為4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或C 3 - 6環烷基，其各自視情況經一或多個R K取代； 各R K獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d2R e2、-C(O)NR d2R e2、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d2及R e2獨立地為氫或C 1 - 3烷基； L AA為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-、-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6-、-(CH 2) 1 - 6O-、-C(O)(CH 2) 1 - 6O-或-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6O-； R L為氫或C 1 - 3烷基； Cy 2為C 3 - 6環烷基、4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或苯基，其各自視情況經一或多個R U取代； 各R U獨立地選自由以下組成之群：-CO 2R j1、-(C=O)NR d3R e3、-S(O) 2NR d3R e3、-(CH 2) q1-NR g1R h1、-(CH 2) q1-OR j1及-(CH 2) q1-(OCH 2CH 2) 1 - 8OH； 各R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 下標q1為整數0至6； 下標t1為0或1； L D為-(CH 2) 1 - 6-； 下標u為0或1； 當t1為0時，ZZ為-NR QR R、-N +(C 1 - 6烷基)R QR R、-C(=O)N SR T、-C(O)O(C 1 - 6烷基)、-CO 2H或胺基酸，或當t1為1時，ZZ為氫、-NR QR R、-N +(C 1 - 6烷基)R QR R、-C(=O)N SR T、-C(O)O(C 1 - 6烷基)、-CO 2H或胺基酸； R Q為氫、C 1 - 6烷基、C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 1 - 3烷氧基、-(CH 2) 1 - 34員至6員雜環、或-(CH 2) 1 - 35員至6員雜芳基，限制條件為 若t1為0且兩個Cy 1均為 ， 則R Q為C 2 - 6烷基、C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 1 - 3烷氧基、-(CH 2) 1 - 34員至6員雜環，或-(CH 2) 1 - 35員至6員雜芳基，且 若t1為0且至少一個Cy 1不為 ，則ZZ為-NR QR R、-N +(C 1 - 6烷基)R QR R、或-C(=O)N SR T，且R Q為C 1 - 6烷基、C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 1 - 3烷氧基、-(CH 2) 1 - 34員至6員雜環、或-(CH 2) 1 - 35員至6員雜芳基；且 各R R、R S及R T獨立地為氫或C 1 - 6烷基。 379.  如實施例378之化合物，其中R 1C為氫。 380.  如實施例378之化合物，其中R 1C為羥基。 381.  如實施例378之化合物，其中R 1C為C 1 - 6烷氧基。 382.  如實施例378之化合物，其中R 1C為甲氧基。 383.  如實施例378之化合物，其中R 1C為-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基。 384.  如實施例378之化合物，其中R 1C為甲氧基乙基。 385.  如實施例378之化合物，其中R 1C為PEG2至PEG4。 386.  如實施例378之化合物，其中R 1C為-(CH 2) n-NR AR B。 387.  如實施例378至386中任一例之化合物，其中R A與R B均為氫。 388.  如請求項378至386中任一例之化合物，其中R A及R B獨立地為C 1 - 3烷基。 389.  如實施例378至386中任一例之化合物，其中R A及R B中之一者為氫且R A及R B中之另一者為C 1 - 3烷基。 390.  如實施例378至389中任一例之化合物，其中各下標n為0。 391.  如實施例378至389中任一例之化合物，其中各下標n為1。 392.  如實施例378至389中任一例之化合物，其中各下標n為2。 393.  如實施例378至389中任一例之化合物，其中各下標n為3、4、5或6。 394.  如實施例378至393中任一例之化合物，其中R 2C及R 3C獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C與R 3C相同。 395.  如實施例378至393中任一例之化合物，其中R 2C及R 3C獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F；且R 2C與R 3C不同。 396.  如實施例378至393中任一例之化合物，其中R 2C為-(C=O) m-NR CR D。 397.  如實施例378至396中任一例之化合物，其中R 3C為-(C=O) m-NR CR D。 398.  如實施例378至397中任一例之化合物，其中R C與R D均為氫。 399.  如實施例378至397中任一例之化合物，其中R C及R D各自獨立地為C 1 - 3烷基。 400.  如實施例378至397中任一例之化合物，其中R C及R D中之一者為氫且R C及R D中之另一者為C 1 - 3烷基。 401.  如實施例396或397之化合物，其中各下標m為0。 402.  如實施例396或397之化合物，其中各下標m為1。 403.  如實施例378至393中任一例之化合物，其中R 2C為-(CH 2) q-NR ER F。 404.  如實施例378至393及403中任一例之化合物，其中R 3C為-(CH 2) q-NR ER F。 405.  如實施例378至404中任一例之化合物，其中R E與R F均為氫。 406.  如實施例378至404中任一例之化合物，其中R E及R F各自獨立地為C 1 - 3烷基。 407.  如實施例378至404中任一例之化合物，其中R E及R F中之一者為氫且R E及R F中之另一者為C 1 - 3烷基。 408.  如實施例378至407中任一例之化合物，其中各下標q為0。 409.  如實施例378至407中任一例之化合物，其中各下標q為整數1至6。 410.  如實施例378至393中任一例之化合物，其中R 2C為-CO 2R M。 411.  如實施例378至393及410中任一例之化合物，其中R 3C為-CO 2R M。 412.  如實施例410或411之化合物，其中R M為氫。 413.  如實施例410或411之化合物，其中R M為C 1 - 3烷基。 414.  如實施例378至393中任一例之化合物，其中R 2C為-(CH 2) q-OR M。 415.  如實施例378至393及414中任一例之化合物，其中R 3C為-(CH 2) q-OR M。 416.  如實施例414或415之化合物，其中R M為氫。 417.  如實施例414至415中任一例之化合物，其中q為0。 418.  如實施例414至415中任一例之化合物，其中q為1。 419.  如實施例378至393中任一例之化合物，其中R 2C為-O(C=O)-NR ER F。 420.  如實施例378至393及419中任一例之化合物，其中R 3C為-O(C=O)-NR ER F。 421.  如實施例419或420之化合物，其中R E與R F均為氫。 422.  如實施例419或420之化合物，其中R E及R F各自獨立地為C 1 - 3烷基。 423.  如實施例419或420之化合物，其中R E及R F中之一者為氫且R E及R F中之另一者為C 1 - 3烷基。 424.  如實施例378至393中任一例之化合物，其中R 2C為-NR M(C=O)-NR ER F。 425.  如實施例378至393及424中任一例之化合物，其中R 3C為-NR M(C=O)-NR ER F。 426.  如實施例424或425之化合物，其中R E、R F及R M皆為氫。 427.  如實施例424或425之化合物，其中R E、R F及R M各自獨立地為C 1 - 3烷基。 428.  如實施例424或425之化合物，其中R E、R F及R M中之一者為C 1 - 3烷基且R E、R F及R M之其餘部分為氫。 429.  如實施例378至393中任一例之化合物，其中R 2C為-S(O) 2NR CR D。 430.  如實施例378至393及429中任一例之化合物，其中R 3C為-S(O) 2NR CR D。 431.  如實施例429或430之化合物，其中R C與R D均為氫。 432.  如實施例429或430之化合物，其中R C及R D各自獨立地為C 1 - 3烷基。 433.  如實施例429或430之化合物，其中R C及R D中之一者為氫且R C及R D中之另一者為C 1 - 3烷基。 434.  如實施例378至393中任一例之化合物，其中R 2C為-S(O) 2R M。 435.  如實施例378至393及434中任一例之化合物，其中R 3C為-S(O) 2R M。 436.  如實施例434或435之化合物，其中R M為氫。 437.  如實施例434或435之化合物，其中R M為C 1 - 3烷基。 438.  如實施例378至437中任一例之化合物，其中R 2C連接在位置1。 439.  如實施例378至437中任一例之化合物，其中R 2C連接在位置2。 440.  如實施例378至437中任一例之化合物，其中R 2C連接在位置3。 441.  如實施例378至437中任一例之化合物，其中R 3C連接在位置1'。 442.  如實施例378至437中任一例之化合物，其中R 3C連接在位置2'。 443.  如實施例378至437中任一例之化合物，其中R 3C連接在位置3'。 444.  如實施例378至443中任一例之化合物，其中L E為-(C=O)-。 445.  如實施例378至443中任一例之化合物，其中L E為-S(O) 2-。 446.  如實施例378至445中任一例之化合物，其中各R I及R J為氫。 447.  如實施例378至445中任一例之化合物，其中各R I及R J為C 1 - 3烷基。 448.  如實施例378至445中任一例之化合物，其中R I及R J中之一者為氫且R I及R J中之另一者為C 1 - 3烷基。 449.  如實施例378至448中任一例之化合物，其中L C為-(CR IR J)-。 450.  如實施例378至449中任一例之化合物，其中s為0。 451.  如實施例378至449中任一例之化合物，其中s為1。 452.  如實施例378至451中任一例之化合物，其中各Cy 1獨立地為5員至6員雜芳基。 453.  如實施例378至451中任一例之化合物，其中各Cy 1為視情況經一或多個R K取代的吡唑。 454.  如實施例378至451中任一例之化合物，其中各Cy 1獨立地選自由以下組成之群：吡唑、咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、㗁唑、異㗁唑、吡咯、嗒𠯤、吡啶、嘧啶及吡𠯤，其各自視情況經一或多個R K取代。 455.  如實施例378至451中任一例之化合物，其中各Cy 1獨立地選自由以下組成之群：咪唑、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、㗁唑、異㗁唑、吡咯、嗒𠯤、吡啶、嘧啶及吡𠯤，其各自視情況經一或多個R K取代。 456.  如實施例378至451中任一例之化合物，其中各Cy 1獨立地為視情況經一或多個R K取代的C 4 - 5環烷基。 457.  如實施例378至456中任一例之化合物，其中各R K獨立地選自由C 1 - 3烷基、C 1 - 3鹵烷基及鹵素組成之群。 458.  如實施例457之化合物，其中各R K獨立地選自由甲基、乙基、-CF 3及鹵素組成之群。 459.  如實施例378至451中任一例之化合物，其中各Cy 1為相同的。 460.  如實施例378至451中任一例之化合物，其中各Cy 1為不同的。 461.  如實施例378至460中任一例之化合物，其中L AA為-(CH 2) 1 - 6-。 462.  如實施例378至460中任一例之化合物，其中L AA為-(CH 2) 1 - 3-。 463.  如實施例378至460中任一例之化合物，其中L AA為-(CH 2) 1 - 6O-。 464.  如實施例378至460中任一例之化合物，其中L AA為-(CH 2) 1 - 3O-。 465.  如實施例378至464中任一例之化合物，其中Cy 2為4員至6員雜環。 466.  如實施例378至464中任一例之化合物，其中Cy 2具有結構： ，其中下標z1及z2中之每一者獨立地為整數1至3且**指示連接至L AA。 467.  如實施例466之化合物，其中z1及z2為1。 468.  如實施例466之化合物，其中z1及z2為2。 469.  如實施例466之化合物，其中z1為1且z2為2。 470.  如實施例378至464中任一例之化合物，其中Cy 2具有結構： ，其中 Z 1選自由以下組成之群：-O-、-S-、-CR NR O-及-NR P-； R N、R O及R P獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 下標z3為整數1至3；且 **指示連接至L AA。 471.  如實施例470之化合物，其中R N及R O為氫。 472.  如實施例470之化合物，其中R P為氫。 473.  如實施例470之化合物，其中R P為甲基。 474.  如實施例378至464中任一例之化合物，其中Cy 2為5員至6員雜芳基。 475.  如實施例378至464中任一例之化合物，其中Cy 2選自由以下組成之群： ，其中 Z 2為=CR N-或=N-； R N為氫或C 1 - 6烷基；且 **指示連接至L AA。 476.  如實施例475之化合物，其中Z 2為=CR N-。 477.  如實施例476之化合物，其中R N為氫。 478.  如實施例475之化合物，其中Z 2為=N-。 479.  如實施例378至464中任一例之化合物，其中Cy 2選自由以下組成之群： ，其中Z 3為-O-或-S-且**指示連接至L AA、L D、NR HH、Y、W或L BB。 480.  如實施例479之化合物，其中**指示連接至L AA。 481.  如實施例479之化合物，其中**指示連接至L D、NR HH、Y、W或L BB。 482.  如實施例378至464中任一例之化合物，其中Cy 2選自由以下組成之群： ，其中**指示連接至L AA。 483.  如實施例378至464中任一例之化合物，其中Cy 2選自由以下組成之群： ，其中 各Z 2獨立地為=CR N-或=N-；且 各R N獨立地為氫或C 1 - 6烷基。 484.  如實施例483之化合物，其中至少一個Z 2為=N-。 485.  如實施例483之化合物，其中一個Z 2為=N-且其餘Z 2為=CR N-。 486.  如實施例483之化合物，其中兩個Z 2為=N-且其餘Z 2為=CR N-。 487.  如實施例483、485及486中任一例之化合物，其中R N及R O為氫。 488.  如實施例378至464中任一例之化合物，其中Cy 2為 。 489.  如實施例378至464中任一例之化合物，其中Cy 2為 。 490.  如實施例378至464中任一例之化合物，其中Cy 2為 。 491.  如實施例378至464中任一例之化合物，其中Cy 2為環丁基。 492.  如實施例378至491中任一例之化合物，其中各R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地為氫或-CH 3。 493.  如實施例378至492中任一例之化合物，其中各R U獨立地選自-CO 2H、-(C=O)NH 2、-S(O) 2NH 2、-CH 2NH 2及-CH 2OH。 494.  如實施例378至493中任一例之化合物，其中t1為0。 495.  如實施例378至493中任一例之化合物，其中t1為1。 496.  如實施例378至495中任一例之化合物，其中u為1且L D為-(CH 2) 1 - 3。 497.  如實施例378至495中任一例之化合物，其中u為0。 498.  如實施例378至497中任一例之化合物，其中ZZ為-NR QR R。 499.  如實施例498之化合物，其中R Q為C 1 - 6烷基。 500.  如實施例498之化合物，其中R Q為C 3 - 6環烷基。 501.  如實施例500之化合物，其中R Q為環丙基。 502.  如實施例498之化合物，其中R Q為-(CH 2) 1 - 3C 3 - 6環烷基。 503.  如實施例498至501中任一例之化合物，其中R R為氫。 504.  如實施例378至497中任一例之化合物，其中ZZ為-C(=O)N SR T。 505.  如實施例378至497中任一例之化合物，其中ZZ為-C(O)O(三級丁基)。 506.  如實施例378至497中任一例之化合物，其中ZZ為-CO 2H。 507.  如實施例378至497中任一例之化合物，其中ZZ為選自由以下組成之群的胺基酸：丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、組胺酸、精胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、苯丙胺酸、O-甲基絲胺酸、O-甲基天冬胺酸、O-甲基麩胺酸、N-甲基離胺酸、O-甲基酪胺酸、O-甲基組胺酸及O-甲基蘇胺酸。 508.  如實施例378之化合物，其選自由以下組成之群： ，及其醫藥學上可接受之鹽。 509.  一種抗體-藥物結合物(ADC)，其具有下式： Ab-(S*-(D')) p 其中： Ab為抗體； 各S*為來自該抗體之半胱胺酸殘基的硫原子； D'為藥物-連接子單元，其為根據實施例216至377中任一例之式(IV)化合物的基團；且 下標p為整數2至8。 510.  如實施例509之ADC，其中該式(IV)化合物之基團包含取代基M中之基團。 511.  如實施例510之ADC，其中D'具有以下結構： ，其中***指示連接至S*。 512.  如實施例509至511中任一例之ADC，其中該抗體為人源化抗體。 513.  如實施例509或511之ADC，其中該抗體為單株抗體。 514.  如實施例509或511之ADC，其中該抗體發生岩藻糖基化。 515.  如實施例509或511之ADC，其中該抗體發生去岩藻糖基化。 516.  一種組成物，其包含如實施例118至215及509至515中任一例之ADC的分佈。 517.  如請求項516之組成物，其進一步包含至少一種醫藥學上可接受之載劑。 518.  一種治療有需要之個體之癌症的方法，其包含向該個體投與治療有效量的如請求項516或517之組成物。 519.  一種治療有需要之個體之癌症的方法，其包含將治療有效量的如實施例118至215及509至515中任一例之ADC投與該個體。 520.  一種誘導有需要之個體發生抗腫瘤免疫反應的方法，其包含將治療有效量的如請求項516或517之組成物投與該個體。 521.  一種誘導有需要之個體發生抗腫瘤免疫反應的方法，其包含將治療有效量的如實施例118至215及509至515中任一例之ADC投與該個體。 522.  一種式(III)化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1A為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) nn-NR AAR BB； R 2A及R 3A獨立地為-CO 2H、-(C=O) mm-NR CCR DD或-(CH 2) q-NR EE1R FF1； 各下標nn獨立地為整數0至6； 各下標mm獨立地為0或1； 各下標qq為整數0至6； Y 1為-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X 1為C 2 - 6伸烷基； Z 1為-NR EER FF、-C(=O)NR GGR HH或-CO 2H； 各R AA、R BB、R CC及R DD、R EE1及R FF1獨立地為氫或C 1 - 3烷基；且 各R EE、R FF、R GG及R HH獨立地為氫或C 1 - 6烷基。 523.  如實施例522之化合物，其中R 1A為氫。 524.  如實施例522之化合物，其中R 1A為羥基。 525.  如實施例522之化合物，其中R 1A為C 1 - 6烷氧基。 526.  如實施例522或525之化合物，其中R 1為甲氧基。 527.  如實施例522之化合物，其中R 1A為-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基。 528.  如實施例522或527之化合物，其中R 1A為甲氧基乙基。 529.  如實施例522之化合物，其中R 1為-(CH 2) nn-NR AAR BB。 530.  如實施例522或529之化合物，其中R AA與R BB均為氫。 531.  如實施例522或529之化合物，其中R AA及R BB獨立地為C 1 - 3烷基。 532.  如實施例522或529之化合物，其中R AA及R BB中之一者為氫且R AA及R BB中之另一者為C 1 - 3烷基。 533.  如實施例522或529至532中任一例之化合物，其中各下標nn為0。 534.  如實施例522或529至532中任一例之化合物，其中各下標nn為1。 535.  如實施例522或529至532中任一例之化合物，其中各下標nn為2。 536.  如實施例522或529至532中任一例之化合物，其中各下標n為3、4、5或6。 537.  如實施例522至536中任一例之化合物，其中R 2A及R 3A獨立地為-CO 2H、-(C=O) mm-NR CCR DD、或-(CH 2) q-NR EE1R FF1；且R 2A與R 3A相同。 538.  如實施例522至536中任一例之化合物，其中R 2A及R 3A獨立地為-CO 2H、-(C=O) mm-NR CCR DD、或-(CH 2) q-NR EE1R FF1；且R 2A與R 3A不同。 539.  如實施例522至538中任一例之化合物，其中R 2A為-(C=O) mm-NR CCR DD。 540.  如實施例522至538中任一例之化合物，其中R 3A為-(C=O) mm-NR CCR DD。 541.  如實施例522至537或539至540中任一例之化合物，其中各R CC及各R DD為氫。 542.  如實施例522至537或539至540中任一例之化合物，其中各R CC及各R DD獨立地為C 1 - 3烷基。 543.  如實施例522至536或538至540中任一例之化合物，其中各R CC及R DD中之一者為氫且各R CC及R DD中之另一者為C 1 - 3烷基。 544.  如實施例522至543中任一例之化合物，其中各下標mm為0。 545.  如實施例522至543中任一例之化合物，其中各下標mm為1。 546.  如實施例522至538中任一例之化合物，其中R 2A為-(CH 2) q-NR EE1R FF1。 547.  如實施例522至538中任一例之化合物，其中R 3A為-(CH 2) q-NR EE1R FF1。 548.  如實施例522至538或546至547中任一例之化合物，其中各R EE1及各R FF1為氫。 549.  如實施例522至538或546至547中任一例之化合物，其中各R EE1及各R FF1獨立地為C 1 - 3烷基。 550.  如實施例522至538或546至547中任一例之化合物，其中各R EE1及各R FF1中之一者為氫且各R EE1及各R FF1中之另一者為C 1 - 3烷基。 551.  如實施例522至538或546至547中任一例之化合物，其中各下標qq為0。 552.  如實施例522至538或546至550中任一例之化合物，其中各下標qq為整數1至6。 553.  如實施例522至538中任一例之化合物，其中R 3A為-CO 2H。 554.  如實施例522至538中任一例之化合物，其中R 2A為-CO 2H。 555.  如實施例522至554中任一例之化合物，其中Y 1為-CH 2-。 556.  如實施例522至554中任一例之化合物，其中Y 1為-O-。 557.  如實施例522至554中任一例之化合物，其中Y 1為-S-。 558.  如實施例522至554中任一例之化合物，其中Y 1為-NH-。 559.  如實施例522至558中任一例之化合物，其中X 1為C 2 - 5伸烷基。 560.  如實施例522至559中任一例之化合物，其中X 1為C 2 - 4伸烷基。 561.  如實施例522至560中任一例之化合物，其中X 1為伸乙基或伸正丙基。 562.  如實施例522至561中任一例之化合物，其中Z 1為-NR E1R F1。 563.  如實施例522至562中任一例之化合物，其中R EE與R FF均為氫。 564.  如實施例522至562中任一例之化合物，其中R EE及R FF獨立地為C 1 - 6烷基。 565.  如實施例522至562中任一例之化合物，其中R EE及R FF中之一者為氫且R EE及R FF中之另一者為C 1 - 6烷基。 566.  如實施例564或565之化合物，其中該C 1 - 6烷基為C 1 - 3烷基。 567.  如實施例566之化合物，其中該C 1 - 3烷基為甲基。 568.  如實施例522至561中任一例之化合物，其中Z 1為-C(=O)NR GGR HH。 569.  如實施例522至561或568中任一例之化合物，其中R GG與R HH均為氫。 570.  如實施例522至561或568中任一例之化合物，其中R GG及R HH獨立地為C 1 - 6烷基。 571.  如實施例522至561或568中任一例之化合物，其中R GG及R HH中之一者為氫且R GG及R HH中之另一者為C 1 - 6烷基。 572.  如實施例570或571之化合物，其中該C 1 - 6烷基為C 1 - 3烷基。 573.  如實施例569之化合物，其中該C 1 - 3烷基為甲基。 574.  如實施例522至561中任一例之化合物，其中Z 1為-CO 2H。 575.  如實施例522之化合物，其中R 1A為甲氧基且R 2A與R 3A均為-C(=O)NH 2。 576.  如實施例522或575之化合物，其中Y 1為-O-且X 1為C 3伸烷基。 577.  如實施例522至575至576中任一例之化合物，其中X 1為伸正丙基。 578.  如實施例522或575至577中任一例之化合物，其中Z 1為-NR EER FF。 579.  如實施例522或575至578中任一例之化合物，其中R EE為氫且R FF為甲基。 實例 通用方法：
所有市售無水溶劑不經進一步純化即使用。除非另外指出，否則所有市售試劑均未經進一步純化即使用。在矽膠60 F254鋁薄片或玻璃板(EMD Chemicals，Gibbstown, NJ)上進行分析型薄層層析(TLC)。在Biotage Isolera One™急驟純化系統20或Biotage Selekt™急驟純化系統(Charlotte, NC)上進行急驟管柱層析。在四種系統中之一者上進行UPLC-MS分析。UPLC-MS系統1：與Waters Acquity UPLC系統介接的Waters單個四極偵測器質譜儀，該系統配備有Waters Acquity UPLC BEH C18 2.1×50 mm，1.7 µm，逆相管柱。UPLC-MS系統2：與Waters Acquity H類Ultra Performance LC介接的Waters Xevo G2 TOF質譜儀，該LC配備有C8 Phenomenex Synergi 2.0×150 mm，4 μm，80 Å逆相管柱，及Waters 2996光二極體陣列偵測器。UPLC-MS系統3 (C18)：與二極體陣列偵測器(DAD)及正ESI質譜儀介接的Shimadzu LC-20 AD及MS 2020，該質譜儀配備有在40℃維持的Luna-C18 2.0x30 mm，3 μm粒度逆相管柱，或在40℃維持的Kinetex-C18 2.1x30 mm，5 μm逆相管柱。UPLC-MS系統4 (C18)：與二極體陣列偵測器(DAD)及Agilent 6110B正ESI四極子質譜儀介接的Agilent 1200系列LC系統，其配備有在40℃維持的Kinetex-C18 2.1×50 mm，5 μm逆相管柱。
使用如本文所述之方法A至E中之一者溶離化合物。
方法A - 5-95%乙腈/水(1 mL/min)之線性梯度，歷經1.0分鐘，隨後至1.80分鐘為95%乙腈之等度流動(1.0 mL/min)且至2.20分鐘為管柱平衡回至5%乙腈(1.2 mL/min)。水含有0.037% TFA (v/v)且乙腈含有0.018% TFA (v/v)。所用管柱為Phenomenex Luna C18 2.0x30mm，3 μm逆相管柱。
方法B - 5-95%乙腈/水(1 mL/min)之線性梯度，歷經1.0分鐘，隨後至1.80分鐘為95%乙腈之等度流動(1.0 mL/min)且至2.20分鐘為管柱平衡回至5%乙腈(1.2 mL/min)。水含有0.05% TFA (v/v)且乙腈含有0.05% TFA (v/v)。所用管柱為Phenomenex Kinetex C18 2.1x30 mm，5 μm逆相管柱。
方法C - 5%乙腈/水的等度流動，歷時0.4分鐘，隨後至3.0分鐘為5-95%乙腈/水的線性梯度，隨後至4.0分鐘為95%乙腈的等度流動且至4.5分鐘為管柱平衡回至5%乙腈。流量為1.0 mL/min且水含有0.05% TFA (v/v)且乙腈含有0.05% TFA (v/v)。所用管柱為Phenomenex Kinetex C18 2.1x30 mm，5 μm逆相管柱。
方法D - 3-60%乙腈之線性梯度，歷經1.7分鐘，接著至2.0分鐘為60-95%乙腈，隨後至2.5分鐘為95%乙腈的等度流動，隨後為管柱平衡回至3%乙腈。流量為0.6 mL/min且水含有0.1% (v/v)甲酸且乙腈含有0.1% (v/v)甲酸。所用管柱為Waters Acquity UPLC BEH C18 2.1 x 50 mm，1.7 µm，逆相管柱或C8 Phenomenex Synergi 2.0 x 150 mm，4 μm，逆相管柱。
方法E - 3-95%乙腈之線性梯度，歷經1.5分鐘，隨後至2.4分鐘為95%乙腈的等度溶離，隨後平衡回至3%乙腈。流量為0.6 mL/min且水含有0.1% (v/v)甲酸且乙腈含有0.1% (v/v)甲酸。所用管柱為Waters Acquity UPLC BEH C18 2.1 x 50 mm，1.7 µm，逆相管柱或C8 Phenomenex Synergi 2.0 x 150 mm，4 μm，逆相管柱。
除非另外說明，在兩種儀器中之一者上使用本文所列之程序執行製備型HPLC (PrepHPLC)：(方法F)：Shimadzu LC-8a製備型HPLC，其具有Phenomenex Luna C-18 250x50 mm，10 μm，使用含有0.09% (v/v) TFA的水/乙腈移動相，流量為80 mL/min，或Teledyne ISCO ACCQPrep HP150，其配備有三種Phenomemex 製備型HPLC管柱中之一者：(i)(方法G) 10 x 250 mm Synergi C12，4 µm，Max-RP 80 Å LC管柱，(ii)(方法H) 21.2 x 250 mm Synergi C12，4 µm，Max-RP 80 Å LC管柱或(iii)(方法I) 30 x 250 mm Synergi C12，4 µm，Max-RP 80 Å LC管柱，其使用含有0.05% (v/v)三氟乙酸或0.1% (v/v)甲酸作為添加劑的乙腈/水移動相。
在三種儀器中之一者上記錄NMR譜：Bruker Avance III HD (400 MHz)，Varian 400-MR (400 MHz)或Bruker Avance NEO (400 MHz)。 實例1： STING促效劑及連接子的合成程序 合成(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-羥基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物1) 合成4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲醯胺(化合物2a)
在25℃下，將化合物 1a(4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯，18 g，73 mmol，1當量)添加至NH 4OH水溶液(300 mL，28% NH 3之H 2O溶液)。在40℃下攪拌反應混合物16小時，在此期間形成沈澱物。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌且真空乾燥，得到呈黃色固體狀之2a (13公克，56 mmols，77%產率)。此產物不經進一步純化即用於後續步驟中。UPLC-MS (方法A, ESI+): m/z (M+H) +231.0 (理論值); 231.2  (觀測值)。HPLC滯留時間：0.93 min。 1H NMR (DMSO- d 6, 400MHz): δ = 8.29 (br s, 1H), 8.05 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.88 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.79 (br s, 1H), 4.02 (s, 3H)。 合成(E)-(4-((4-胺甲醯基-2-甲氧基-6-硝基苯基)胺基)丁-2-烯-1-基)胺基甲酸三級丁酯(化合物4a)
在25℃下，向 2a(10 g，43.4 mmol，1當量)於乙醇(EtOH，200 mL)中之溶液中添加 3a((E)-(4-胺基丁-2-烯-1-基)胺基甲酸三級丁酯，9.69 g，52.0 mmol，1.2當量)及N,N-二異丙基乙胺(DIPEA，16.8 g，130 mmol，3當量)。在80℃下攪拌反應混合物64小時，此時藉由過濾收集沈澱物，用乙醇洗滌且在高真空下乾燥，得到呈紅色固體狀之 4a(8公克，21 mmols，48%產率)。此產物不經進一步純化即用於後續步驟中。 1 H NMR(DMSO- d 6, 400MHz): δ = 8.18 (s, 1H), 8.01 (br s, 1H), 7.74 (br t, J=5.6 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.31 (br s, 1H), 6.92 (br s, 1H), 5.53 (br s, 2H), 4.08 (br s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.47 (br s, 2H), 1.35 (s, 9H)。 合成化合物5a
在25℃下，將化合物 4a(8 g，21.0 mmol，1當量)添加至HCl於乙酸乙酯中之4 M溶液(200 mL，800 mmol HCl)中。在25℃下攪拌反應混合物1小時。藉由過濾收集沈澱物，用EtOAc洗滌且在高真空下乾燥，得到呈紅色固體狀之呈鹽酸鹽形式之 5a(7.2 g，定量產量)。此產物不經進一步純化即用於後續步驟中。 1 H NMR(DMSO- d 6, 400MHz): δ = 8.21 (d, J=1.6 Hz, 1H), 8.02 (br s, 4H), 7.59 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.34 (br s, 1H), 5.87 (td, J=5.6, 15.6 Hz, 1H), 5.67 - 5.56 (m, 1H), 4.17 (br d, J=5.6 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.39 (br t, J=5.6 Hz, 2H)。 合成化合物2b
在20℃下，在氮氣下，向化合物 2a(4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲醯胺，16 g，69.4 mmol，1當量)於二氯甲烷(DCM，500 mL)中之溶液中逐滴添加三溴化硼溶液(BBr 3，1 M於DCM中，275 mL，4當量)。在20℃下攪拌反應混合物16小時，接著LC-MS分析(方法B)顯示反應完成。將反應混合物傾入中冰水(2 L)中且劇烈攪拌20分鐘。過濾所得懸浮液且濾液用乙酸乙酯(2×300 mL)萃取，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且真空濃縮，得到粗產物。將粗產物(9 g)溶解於DMF (30 mL)中且在Biotage Isolera One (330公克Agela C18管柱(20-35 µm粒度)上使用水/含有0.09% (v/v) TFA的乙腈、用20-40%乙腈(歷經20分鐘)、隨後40-45%乙腈(第35分鐘)之梯度溶離、藉由逆相急驟層析加以純化，得到呈灰白色固體狀的 2b(6公克，27.7 mmols，40%產率)。 LCMS(方法B, ESI+): m/z [M+H] +217.0 (理論值); 217.2 (觀測值)。HPLC滯留時間：0.84 min。 合成化合物3b
向 2b(4.5 g，20.8 mmol，1當量)於二甲基甲醯胺(DMF，20 mL)中之溶液中添加1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(PMBCl，3.42 g，21.8 mmol，1.05當量)及碳酸銫(Cs 2CO 3，7.45 g，22.9 mmol，1.1當量)，在25℃下攪拌反應混合物12小時，接著LC-MS分析(方法B)顯示反應完成。將反應混合物傾入冰水中，且過濾沈澱物且乾燥，得到呈淺黃色固體狀之 3b(6.4公克，19.0 mmols，91%產率)。此產物不經進一步純化即用於後續步驟中。 LC-MS(方法B, ESI+): m/z [M+H] +: 337.1 (理論值); 337.2 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.11 min。 合成化合物5
將 5a(762 mg，2.16 mmol，1.2當量)於正丁醇(10 mL)中之溶液添加至小瓶中，隨後添加DIPEA (1.11 g，8.62 mmol，4.8當量)及碳酸氫鈉(457 mg，4.31 mmol，2當量)。密封小瓶且在20℃下攪拌反應混合物10分鐘。隨後添加 3b(600 mg，1.78 mmol，2.4當量)，且在115℃下攪拌反應混合物20小時，隨後UPLC-MS分析(方法B)顯示反應完成。如上文所述配置四個額外小瓶。在反應結束時合併所有五個反應混合物。將合併的所得反應混合物冷卻至20℃且用MeCN (180 mL)稀釋。過濾反應混合物中的固體物質且用MeCN (80 mL)沖洗，得到深紅色固體。固體接著用水洗滌且在高真空下乾燥，得到呈磚紅色固體狀之 5(2.7公克，4.65 mmols，52%產率)。此產物不經進一步純化即用於後續步驟中。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6): δ = 8.17 (dd, J=1.9, 7.8 Hz, 2H), 8.08 - 7.96 (m, 2H), 7.77 - 7.63 (m, 3H), 7.51 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.37 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.33 (br s, 2H), 6.92 (d, J=8.6 Hz, 2H), 5.57 - 5.42 (m, 2H), 5.04 (s, 2H), 4.01 (q, J=5.8 Hz, 4H), 3.79 (s, 3H), 3.74 (s, 3H)。 合成化合物6
將Na 2CO 3(10.95 g，103 mmol，30當量)及連二亞硫酸鈉(Na 2S 2O 4，8.40 g，48.2 mmol，14當量)。添加至 5(2 g，3.45 mmol，1當量)於甲醇與水1:1 (v/v)混合物(160 mL)中之溶液中。所得紅色反應混合物在25℃下攪拌12小時，接著紅色混合物變為淺黃色，且UPLC-MS分析(方法B)顯示反應完成。過濾反應混合物，且濃縮濾液且用水稀釋。用EtOAc萃取混合物且濃縮有機層，得到呈灰白色固體狀的 6(1.0公克，1.81 mmols，52%產率)。此產物不經進一步純化即用於後續步驟中。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ = 7.61 (br s, 2H), 7.37 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.97 (br s, 2H), 6.94 (s, 1H), 6.93 - 6.90 (m, 2H), 6.86 (s, 2H), 6.77 (d, J=1.8 Hz, 1H), 5.71 - 5.53 (m, 2H), 4.98 (s, 2H), 4.65 (br d, J=12.6 Hz, 4H), 3.74 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.49 (br s, 4H)。 合成化合物7
向 6(1.4 g，2.69 mmol，1當量)於甲醇(20 mL)中之溶液中添加溴化氰(BrCN，1.71 g，16.1 mmol，6當量)。在25℃下攪拌反應混合物2小時，在此期間觀測到沈澱物。LC-MS分析(方法C)顯示反應完成。藉由過濾收集固體，用乙醇及石油醚洗滌，得到呈淺黃色固體狀之 7(1.2 g，1.64 mmols，61%產率)。此產物不經進一步純化即用於後續步驟中。 LC-MS(方法C, ESI+): m/z [M+H] +571.2 (理論值); 571 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.634 min。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ = 12.94 (br s, 2H), 8.63 (br d, J=12.8 Hz, 4H), 8.08 (br s, 2H), 7.62 - 7.52 (m, 3H), 7.47 (br s, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.24 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.84 (d, J=8.6 Hz, 2H), 5.81 - 5.69 (m, 1H), 5.57 (td, J=5.4, 15.5 Hz, 1H), 5.07 (s, 2H), 4.80 (br t, J=6.6 Hz, 4H), 3.74 (s, 3H), 3.69 (s, 3H)。 合成化合物9
向化合物 8(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸，331 mg，2.15 mmol，2.1當量)於二甲基甲醯胺(DMF，3 mL)中之溶液中添加1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡錠3-氧化物六氟磷酸鹽(HATU，973 mg，2.56 mmol，2.5當量)且在60℃下攪拌反應混合物10分鐘。接著將DIPEA (596 mg，4.61 mmol，4.5當量)及 7(750 mg，1.02 mmol，1當量)於DMF (1 mL)中之溶液添加至反應混合物中，在60℃下攪拌2小時，接著LC-MS分析(方法B)顯示反應完成。將反應混合物傾入冰水中，藉由過濾收集固體且乾燥，得到粗產物。粗產物不經進一步純化即用於下一步驟中。 LC-MS(方法B, ESI+): m/z [M+H] +843.4 (理論值); 843.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.062 min。 合成化合物1
將化合物 9(700 mg，0.83 mmol)添加至含有三氟乙酸(TFA，3 mL)之玻璃瓶中，且在25℃下攪拌所得混合物2小時，接著LC-MS分析顯示反應完成。真空移除TFA且將殘餘物溶解於DMSO及乙腈中且藉由製備型HPLC (方法F)純化，得到呈灰白色固體狀之 1(40 mg，0.055 mmols，經2個步驟的產率7%)。 LCMS(方法B, ESI+): m/z [M+H] +723.3 (理論值); 723.1 (觀測值); [M+H] +, HPLC滯留時間: 2.04 min。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ = 13.00 - 12.51 (m, 2H), 10.41 (s, 1H), 7.96 (br s, 1H), 7.81 (br s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.22 (br s, 1H), 7.14 - 7.07 (m, 1H), 6.51 (br d, J=11.0 Hz, 2H), 5.97 - 5.75 (m, 2H), 4.91 (br dd, J=3.5, 16.3 Hz, 4H), 4.51 (br d, J=3.3 Hz, 4H), 3.77 (s, 3H), 2.10 (d, J=6.0 Hz, 6H), 1.25 (dt, J=3.6, 6.9 Hz, 6H)。 合成(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((2-((((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)羰基)(甲基)胺基)乙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)-3-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸(化合物11) 合成化合物10b
如先前所報導製備化合物 10a( ACS Med. Chem. Lett. 2010, 1, 6, 277-280)。
向烘乾的4 mL玻璃瓶中裝入 10a(150 mg，0.20 mmol，1當量)及五氟苯基碳酸酯(88 mg，0.22 mmol，1.1當量)、DMF (1 mL)及DIPEA (0.15 mL，0.86 mmol，4.3當量)。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘，接著觀測到淺粉色均質溶液。將甲基(2-(甲胺基)乙基)胺基甲酸三級丁酯(50 μL，0.27 mmol，1.3當量)添加至溶液中，產生反應混合物，該反應混合物轉變為淺黃色。在室溫下攪拌反應混合物隔夜。將反應混合物用水(50 mL)稀釋，轉移至分液漏斗中且用EtOAc (3x50 mL)萃取。收集有機層且合併，用1 M HCl洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾且真空移除溶劑。所得固體藉由急驟管柱層析(25 g SiO 2管柱，用0至25% MeOH/DCM溶離)純化，得到呈淺黃色固體狀之 10b(70.4 mg，0.073 mmol，產率36%)。UPLC-MS (方法E, ESI+) m/z [(M-Boc)+2H] +: 863.33 (理論值); 863.14 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.54 min。 合成化合物10c
將化合物 10b(70.4 mg，0.073 mmol，1當量)於MeOH中的溶液轉移至配備有磁性攪拌棒的烘乾4 mL玻璃瓶中。在真空下移除MeOH且小瓶用氬氣回填。在Ar下，向小瓶中添加MeOH (0.5 mL)且將所得溶液冷卻至0℃且添加甲醇鈉(0.5 M於MeOH中之溶液，150 μL，0.075 mmol，1當量)。藉由LC-MS(方法D)監測反應且在所有三個乙酸酯基團完全移除後，添加氫氧化鋰(1 M於水中，0.225 mL，0.225 mmol，3當量)且在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。將DMSO (0.5 mL)及冰乙酸(50 μL)添加至反應混合物中，產生均質溶液。藉由製備型HPLC (方法H，5-40% MeCN/含有0.05% TFA作為移動相添加劑的水)純化粗產物，得到呈白色固體狀的 10c(16.8 mg，0.028 mmol，38%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M+H] +601.26 (理論值); 601.15 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.09 min。 合成化合物10d
將化合物 10c(16.8 mg，0.028 mmol，1當量)於MeOH中的溶液添加至配備有磁性攪拌棒的烘乾4 mL玻璃瓶中。在真空下移除MeOH且向小瓶填充氬氣。向小瓶中添加3-(順丁烯二醯亞胺基)丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(MP-OSu，16 mg，0.06 mmol，2當量)，隨後添加DMF (0.5 mL)及DIPEA (50 μL，0.28 mmol，10當量)。15分鐘之後，添加DMSO (0.5 mL)及冰乙酸(100 μL)且粗產物藉由製備型HPLC (方法H，10-60% MeCN/含有0.05% TFA作為移動相添加劑的水)純化，得到呈白色固體狀的 10d(15 mg，0.020 mmol，71%產率)。UPLC-MS (方法A, ESI+): m/z [M+H] +: 752.29 (理論值); 752.26 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.27 min。 合成化合物10
將化合物 10d(15 mg，0.020 mmols，1當量)溶解於含有20% (v/v)TFA的DCM (1 mL)中且轉移至配備有磁性攪拌棒的4 mL玻璃瓶中。小瓶不加蓋且藉由LC-MS監測反應進程。在2小時之後，真空移除溶劑，得到呈白色固體狀之 10(13 mg，0.02 mmol，定量產量)，其不經任何進一步純化即用於後續步驟中。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M+H] +: 652.24 (理論值); 652.45 (觀測值)。HPLC滯留時間：0.69 min。 合成化合物11
向烘乾的4 mL玻璃瓶中添加化合物 1(9.5 mg，0.010 mmol，1當量)，隨後添加DMF (0.5 mL)，對硝基苯基碳酸酯(9.0 mg，0.030 mmol，3當量)及DIPEA (20 μL，0.115 mmol，11.5當量)。在室溫下攪拌反應混合物1小時，此時藉由UPLC-MS分析(方法D)證實完全轉化為 11a。將化合物 10(20 mg，0.031 mmol，3.1當量)一次性添加至反應混合物中，在室溫下攪拌2小時。添加冰乙酸(20 μL)且藉由製備型HPLC (方法H，0-45% MeCN/含有0.05% TFA作為移動相添加劑的水)純化粗產物。合併含有 11之溶離份且經由凍乾移除溶劑，得到 11(6.31 mg，0.0039 mmol，39%產率)。亦回收呈白色蓬鬆固體狀之化合物 1(2.81 mg，0.0030 mmol，30%回收率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M+H] +: 1400.52 (理論值); 1400.25 (觀測值)及[M+2H] 2+= 701.43 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.28 min。 合成(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物12)
如先前所報導製備化合物 12a(WO2017/175147，實例40，第292頁)。
向 12a(28.7 mg，0.032 mmol，1.0當量)於DMA (635 µL)中之溶液中添加MP-OSu (15.9 mg，0.0596 mmol，1.9當量)及DIPEA (35 µL，0.199 mmol，6.2當量)。在室溫下攪拌反應混合物1小時。完成後，在減壓下濃縮溶液且藉由製備型HPLC (方法G，20-50-95% MeCN/含有0.1%甲酸作為移動相添加劑的水)純化粗產物，得到 12(46%產率，17.8 mg，0.0152 mmol)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M+H] +945.40 (理論值); 945.72 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.79 min。 合成(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)-3-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸(化合物13) 合成化合物13a及13b
將化合物 10a(13 mg，0.017 mmol)溶解於DMA (87 µL)中。向此溶液中添加五氟苯基碳酸酯(13.7 mg，0.035 mmol)及DIPEA (14 µL，0.078 mmol)。在室溫下攪拌混合物30分鐘。完全轉化為中間物 13a後，將此溶液轉移至含有 12a(10.6 mg，0.012 mmol)之第二小瓶中。在室溫下攪拌反應混合物18小時。反應物接著用水稀釋且用EtOAc (20 mL×3)萃取三次。合併之有機層接著用1 M HCl洗滌。合併有機層，經MgSO 4乾燥，過濾且真空濃縮。產物藉由製備型HPLC (方法H，5-50-95% MeCN/水，使用0.05% TFA作為移動相添加劑)純化，產生呈三氟乙酸鹽形式之化合物 13b(10.0 mg，0.0056 mmol，48%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1568.60 (理論值); 1568.95 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.70 min。 合成化合物13c
向充分吹掃之乾燥玻璃瓶中添加含化合物 13b(10.0 mg，0.0056 mmol)之無水甲醇(40 µL)。溶液在冰浴中冷卻，且添加NaOMe (0.5 M於MeOH中，11.13 µL)。在約1小時之後，添加1 M LiOH水溶液(17 µL，0.017 mmols，3當量)。添加LiOH溶液後，形成明顯的白色沈澱物。1小時之後，添加冰乙酸(12 µL)，且真空移除溶劑。粗產物藉由製備型HPLC (方法G，20-60-95% MeCN/含0.05% TFA作為移動相添加劑的水)純化，產生呈三氟乙酸鹽形式之化合物 13c(4.13 mg，0.0029 mmol，52%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M+H] += 1206.49 (理論值); 1206.50 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.45 min。 合成化合物13
在氬氣下，在玻璃瓶中，將化合物 13c(4.13 mg，0.00342 mmol，1.0當量)溶解於DMA (68 µL)中。添加MP-OSu (1.82 mg，0.00685 mmol，2當量)及DIPEA (3.0 µL，0.0171 mmol，5當量)且在室溫下攪拌反應混合物1小時。添加冰乙酸(3.0 µL)，且藉由製備型HPLC (方法G，10-60-95% MeCN/水，使用0.1%甲酸作為移動相添加劑)純化粗產物，產生呈三氟乙酸鹽形式之 13(5.43 mg，0.0034 mmol，93%產率)。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M+H] += 1357.52 (理論值); 1357.82 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.54 min。 合成(3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基甲酸4-((S)-2-((S)-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苯甲酯(化合物14)
向乾燥的玻璃瓶中裝入化合物 12a(2.6 mg，0.0033 mmol)，添加DMA (66 µL)，隨後添加MP-Val-Ala-PAB-Opfp ( 14a，3.2 mg，0.049 mmol，15當量)及DIPEA (2.8 µL，0.016 mmol，4.9當量)。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘且接著添加冰乙酸(2.85 µL)，且藉由製備型HPLC (方法G，30-60-95% MeCN/含有0.1%甲酸作為移動相添加劑的水)純化粗產物，產生呈三氟乙酸鹽形式之化合物 14(4.0 mg，0.0027 mmol，82%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1264.56 (理論值); 1264.85 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.75 min。 合成(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-羥基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物15) 合成化合物15b
如先前所報導製備化合物 15a(WO2017/175147，第292頁)。
向含有化合物 15a(31.4 mg，0.0280 mmol)於DCM (280 µL)中的乾燥玻璃瓶中逐滴添加三溴化硼(BBr 3，1 M於DCM中，168 µL，0.168 mmol，6當量)。在40℃下攪拌反應混合物18小時。使反應混合物冷卻至室溫且緩慢添加冷水(170 µL)。真空濃縮所得混合物且藉由製備型HPLC (20-50-95%，含0.1%甲酸之乙腈，方法G)純化。合併含有所需產物之溶離份且經由凍乾移除溶劑，得到呈甲酸鹽形式之化合物 15b(17%產率，4.36 mg，0.0047 mmol)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 780.36 (理論值); 780.38 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.33 min。 合成化合物15
向含有3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(MP-OSu，1.7 mg，0.0063 mmol)的4 mL乾燥小瓶中添加化合物 15b(3.9 mg，0.0042 mmol)於DMA (423 µL)中的溶液。向混合物中添加DIPEA (3.7 µL，0.0211 mmol，5當量)且在室溫下攪拌反應混合物30分鐘，隨後添加冰乙酸(3.68 µL)，且經由製備型HPLC (10-40-95%，含0.05% TFA之乙腈，方法G)純化產物。合併含有所需產物之溶離份且經由凍乾移除溶劑，得到呈三氟乙酸鹽形式之化合物 15(20%產率，1.0 mg，0.0009 mmol)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 931.39 (理論值);  931.41 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.62 min。 合成S-(1-(3-((3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物16)
將化合物 12(1.5 mg，0.0015 mmol，1當量)溶解於DMSO (50 µL)中。添加L-半胱胺酸(1 M，2.2 µL，0.0022 mmols，1.5當量)的水溶液。在30℃下攪拌反應混合物30分鐘，且隨後直接經由製備型HPLC (30-70-95%，含0.05% TFA之乙腈，方法G)純化。合併含有所需產物之溶離份且冷凍。經由凍乾移除溶劑，得到呈三氟乙酸鹽形式之化合物 16(49%產率，1.03 mg，0.0007 mmol)。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 1066.42 (理論值); 1066.44 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.65 min。 合成(S,E)-4-((3-((5-胺甲醯基-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基)-3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-4-側氧基丁酸(化合物17) 合成化合物17a
向配備有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中饋入化合物 12a(10 mg，0.011 mmol，1.0當量)、Fmoc-天冬胺酸4-三級丁酯(9.1 mg，0.022 mmol，2.0當量)及HATU (8.4 mg，0.022 mmol，2.0當量)，隨後饋入DMF (0.5 mL)及DIPEA (9.6 μL，0.055 mmol，5.0當量)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜且觀測到完全轉化為醯胺。真空移除溶劑，且將所得粗油狀物溶解於DCM中，且藉由急驟層析(10 g SiO 2，0至40% MeOH/DCM)分離所需產物，得到呈淡棕色固體狀之 17a(12 mg，0.0104 mmol，94%產率)。分離出的物質仍含有一些雜質，但不經進一步純化即用於後續步驟中。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1187.54 (理論值);  1187.53 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.40 min。 合成化合物17b
向配備有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中饋入 17a(12 mg，0.0104 mmol，1.0當量)及含20%哌啶之DMF (1 mL)。攪拌反應混合物1小時，真空移除溶劑且藉由prepHPLC (方法G，5至95%乙腈/水)純化產物，得到 17b(9.3 mg，0.0096 mmol，產率93%)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 965.47 (理論值);  965.48 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.68 min。 合成化合物17c
藉由將7.7 mg MP-OSu及10 µL DIPEA溶解於1.0 mL DMF中來製備MP-OSu及DIPEA之儲備溶液。向配備有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中饋入 17b(9.3 mg，0.0096 mmol，1.0當量)且將0.5 mL含有MP-OSu (3.8 mg，0.014 mmol，1.5當量)及DIPEA (0.029 mmol，3當量)的儲備溶液添加至小瓶中。在室溫下攪拌反應混合物2小時且真空移除溶劑，產生粗 17c，其不經任何進一步純化即用於下一步驟中。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1116.50 (理論值);  1116.80 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.51 min。 合成化合物17
將溶解於含20% (v/v) TFA之DCM (1 mL)中的化合物 17c(10.7 mg，0.0096 mmol，1當量)饋入4 mL小瓶中且在室溫下攪拌反應混合物3小時。隨後真空移除溶劑，且將粗產物溶解於DMSO (0.75 mL)中且藉由prepHPLC (方法G，5至50% MeCN/水)純化，得到呈白色固體狀之化合物 17(5.4 mg，0.0051 mmol，53%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1060.44 (理論值);  1061.12 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.28 min。 合成(S,E)-7-(3-(6-胺基-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-N-甲基己醯胺基)丙氧基)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物18) 合成化合物18a
將HATU (7.8 mg，0.021 mmol，2.0當量)及Fmoc-離胺酸N-ε-Boc (9.6 mg，0.021 mmol，2.0當量)饋入配備有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中；向其中添加化合物 12a(9.3 mg，0.0103 mmol，1.0當量)及DIPEA (9 μL，0.051 mmol，5當量)於DMF (0.5 mL)中之溶液中。將小瓶加蓋且用封口膜密封且在室溫下攪拌混合物隔夜。藉由UPLC-MS (方法D)觀測到完全轉化。真空移除溶劑且藉由急驟層析(10 g SiO 2，0至40% MeOH/DCM)純化產物，得到呈褐色固體狀之 18a(12 mg，0.0097 mmol，95%)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1244.60 (理論值);  1244.61 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.40 min。 合成化合物18b
將 18a(12 mg，0.0096 mmol)饋入配備有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中且將含20% (v/v)哌啶的DMF (1 mL)添加至反應物中。攪拌反應混合物直至藉由UPLC-MS (方法D)觀測到完全轉化為止，其花費約1小時。真空移除溶劑且藉由製備型HPLC (方法G，5-95% MeCN/含有0.1% (v/v)甲酸的水)純化產物。真空移除HPLC溶劑，得到呈灰白色固體狀的 18b(4.2 mg，0.0041 mmol，36%)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1022.53 (理論值);  1022.80 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.30 min。 合成化合物18c
向配備有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中饋入 18b(4.2 mg，0.0034 mmol，1當量)，隨後饋入MP-OSu (1.8 mg，0.0068 mmol，2.0當量)、DIPEA (5.9 μL，0.034 mmol，10當量)及DMF (0.8 mL)。在室溫下攪拌反應混合物3小時，此時UPLC-MS (方法D)分析顯示完全轉化。真空移除溶劑，產生粗產物 18c，其不經純化即用於下一步驟。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1173.56 (理論值);  1173.94 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.54 min。 合成化合物18
將得自前一步驟的粗 18c(0.0034 mmol)饋入含有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中且添加含20% (v/v) TFA的DCM (1 mL)。攪拌反應混合物一小時且隨後藉由製備型HPLC (方法G，5-50% MeCN/含有0.1% (v/v)甲酸的水)純化產物。真空移除HPLC溶劑，得到呈白色固體狀之 18c(4.2 mg，0.0035 mmol，經2個步驟的產率56%)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1073.51 (理論值);  1073.73 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.15 min。 用於HATU偶合、Fmoc保護基脫除及MP偶合的通用方法
HATU偶合(方法1)：向配備有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中饋入化合物 12a(1.0當量)、HATU (2.0當量)、DIPEA (5當量)及DMF (20 mM於 12a中)且在室溫下攪拌反應混合物隔夜。真空移除溶劑且產物經由層析純化。
Fmoc保護基脫除(方法2)：將得自以上的HATU偶合產物饋入配備有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中，該偶合產物溶解於含有20% (v/v)哌啶的DMF (1 mL)中。在室溫下攪拌反應混合物1小時，真空移除溶劑，且經由層析純化產物。
MP偶合(方法3)：將得自前一反應的產物饋入配備有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中，向其中添加MP-OSu (2當量)及DIPEA (10當量)及DMF (10 mM於Fmoc保護基脫除的胺起始物質中)。在室溫下攪拌反應混合物3小時，真空移除溶劑且藉由製備型HPLC純化產物。
根據通用方法1製備化合物 19a(8.0 mg，0.0075 mol，85%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1073.47 (理論值);  1074.03 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.76 min。
根據通用方法2製備化合物 19b(6.1 mg，0.0072 mol，95%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 851.41 (理論值);  851.69 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.15 min。
根據通用方法3製備化合物 19(4.3 mg，0.0043 mol，60%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1002.43 (理論值);  1002.72 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.31 min。
根據通用方法1製備化合物 20a(8.7 mg，0.0080 mol，91%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1087.49 (理論值);  1087.90 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.75 min。
根據通用方法2製備化合物 20b(5.6 mg，0.0065 mol，81%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 865.42 (理論值);  865.66 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.12 min。
根據通用方法3製備化合物 20(3.4 mg，0.0034 mol，52%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1016.45 (理論值);  1017.08 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.33 min。
根據通用方法1製備化合物 21a(14 mg，0.0119 mmol)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1145.50 (理論值);  1145.42 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.74 min。
根據通用方法2製備化合物 21b(7.2 mg，0.0078 mol，經2個步驟的產率76%)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 923.43 (理論值);  923.67 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.13 min。
根據通用方法3製備化合物 21(1.5 mg，0.0014 mols，22%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1074.45 (理論值);  1074.90 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.36 min。
根據通用方法1製備化合物 22a(7.6 mg，0.0065 mols，63%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1172.58 (理論值); 1172.59 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.84 min。
根據通用方法2 (6.1 mg，0.0064 mmols，57%產率)製備化合物 22b。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 950.51 (理論值);  950.83 (觀測值)。HPLC滯留時間：0.99 min。
根據通用方法1 (2.6 mg，0.0023莫耳，37%產率)製備化合物 22。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1101.54 (理論值); 1101.96 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.18 min。
根據通用方法1 (12 mg，0.0105 mmol)製備化合物 23a。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1117.50 (理論值); 1117.77 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.75 min。
根據通用方法2製備化合物 23b(7.2 mg，0.00804 mmol，91%，經2個步驟)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 895.43 (理論值); 895.73 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.12 min。
根據通用方法3製備化合物 23(8.4 mg，0.0047 mmol，58%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] +=  1046.46 (理論值); 1047.06 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.36 min。 合成(S,E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-3-羥基-N-甲基丙胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物24) 合成化合物24a
將HATU (6.7 mg，0.018 mmol，2.0當量)及2-(9H-茀-9-基甲氧羰基胺基)-3-甲氧基-丙酸(6.0 mg，0.018 mmol，2.0當量)饋入配備有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中，且將化合物 12a(8 mg，0.0088 mmols，1.0當量)及DIPEA (8 μL，0.044 mmols，5當量)於DMF (0.5 mL)中之溶液添加至小瓶中。將小瓶蓋好且用封口膜密封且在室溫下攪拌反應混合物隔夜，接著藉由UPLC-MS (方法D)觀測到完全轉化。真空移除溶劑且藉由急驟層析(10 g SiO 2，0-40% MeOH/DCM)純化，得到 24a(15 mg)，其不經進一步純化即用於下一反應。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1345.59 (理論值);  1346.12 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.23 min。 合成化合物24b
將 24a(15 mg，0.011 mmol)饋入配備有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中且將含20% (v/v)哌啶的DMF (1 mL)添加至其中。攪拌反應混合物直至藉由UPLC-MS (方法D)觀測到完全轉化為止，其花費約1小時。真空移除溶劑且藉由製備型HPLC (方法G，5-95% MeCN/含有0.1% (v/v)甲酸的水)純化粗產物；真空移除HPLC溶劑，得到呈灰白色固體狀之 24b(8.4 mg，0.0075 mmol，94%，經2個步驟)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1123.53 (理論值);  1123.98 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.47 min。 合成化合物24c
向配備有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中饋入 24b(8.4 mg，0.0075 mmol，1當量)，隨後饋入MP-OSu (3.0 mg，0.011 mmol，1.5當量)、DIPEA (3.9 μL，0.022 mmol，3當量)及DMF (0.5 mL)。在室溫下攪拌反應混合物3小時，此時UPLC-MS (方法D)分析顯示完全轉化。真空移除溶劑且所得粗產物不經純化即用於下一步驟中。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1274.55 (理論值);  1275.21 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.89 min。 合成化合物24
將粗 24c(0.0075 mmol)饋入含有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中且向小瓶中添加含20% (v/v) TFA的DCM (1 mL)。攪拌反應混合物20分鐘，且真空移除溶劑。將所得粗產物溶解於DMSO (0.5 mL)中且藉由製備型HPLC (方法G，5-50% MeCN/含有0.1% (v/v)甲酸的水)純化且真空移除溶劑，得到呈白色固體狀之 24(4.0 mg，0.0031 mmol，經2個步驟的產率42%)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1032.44 (理論值);  1033.09 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.28 min。 合成(E)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物25). 合成25a
將4-氯-3-硝基-苯磺醯胺(250 mg，1.06 mmol，1當量)、N-[(E)-4-胺基丁-2-烯基]胺基甲酸三級丁酯鹽酸鹽(353 mg，1.6 mmol，1.5當量)及碳酸鈉(336 mg，3.2 mmol，3當量)饋入具有攪拌棒的5 mL烘乾微波小瓶中。向小瓶中添加1-丁醇(3 mL)，隨後添加DIPEA (1.1 mL，6.34 mmol，6當量)及額外1-丁醇以使反應總體積達到5 mL。將小瓶密封且在微波反應器中加熱至140℃維持120分鐘。
將粗產物傾入鹽水(100 mL)中且用EtOAc (3×200 mL)萃取，合併有機相，用鹽水(2×100 mL)洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾且真空移除溶劑，得到亮紅色油狀物。此物質藉由急驟層析(乾燥負載於矽藻土上，25g Sfar，HC Duo，SiO2管柱，0-40% MeOH/DCM)純化，得到呈亮黃色固體狀之 25a(295 mg，0.763 mmol，72%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H - Boc] += 287.1 (理論值); 287.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.53 min。 合成25b
向20 mL小瓶中饋入 25a(295 mg，0.763 mmol，1當量)，將其溶解於甲醇(7.5 mL)及含4 M HCl之1,4-二㗁烷(40 eq，7.5 mL，30.0 mmol)。在40℃下攪拌溶液30分鐘且真空移除溶劑，得到呈亮紅色固體狀之呈2x HCl鹽形式之 25b(274 mg，0.764 mmol，定量產量)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 287.1 (理論值); 287.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：0.52 min。 合成25c
將 25b(135 mg，0.376 mmol，1當量)、N-[3-(5-胺甲醯基-2-氯-3-硝基-苯氧基)丙基]胺基甲酸三級丁酯(211 mg，0.564 mmol，1.5當量，如下文所述製備)及碳酸鈉(119 mg，1.13 mmol，3當量)饋入具有攪拌棒的烘乾5 mL微波小瓶中，隨後添加正丁醇(3.75 mL)及DIPEA (0.39 mL，2.25 mmol，6當量)。密封小瓶且在微波反應器中加熱至140℃維持3小時，得到亮紅色非均質混合物。此溶液用1:1 DCM:MeOH (100 mL)洗滌、經矽藻土過濾，真空移除溶劑且將粗產物負載於矽藻土上且藉由急驟層析(25g SiO2管柱，0-40% MeOH/DCM)純化，得到呈產物與起始物質之混合物(3:2)形式的 25c(245 mg，0.384 mmol)。產物混合物不經任何進一步純化即用於下一步驟中。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 638.2 (理論值); 638.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.75 min。 合成25d
將 25c(245 mg，0.384 mmol，1當量)及碳酸氫鈉(580 mg，6.90 mmol，18當量)饋入具有攪拌棒的20 mL小瓶中且添加甲醇(4 mL)。接著向小瓶中添加亞硫酸氫鈉(1.20 g，6.90 mmol，18當量，於4 mL水中)，且將小瓶加熱至50℃維持60分鐘。將反應物冷卻至室溫，用MeOH (50 mL)及DCM (50 mL)洗滌、經矽藻土過濾，且將粗產物負載於矽藻土上。藉由急驟層析(25g Sfar HC Duo，SiO2管柱，0-40% 10:1 MeOH:NH 4OH/DCM)純化產物，得到呈不可分離之旋轉構象異構體之混合物形式的 25d(89 mg，0.154 mmol，經2個步驟的產率41%)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 578.3 (理論值); 578.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：0.98及1.18 min。 合成25e
並行配置兩種相同反應。將溶解於甲醇(1 mL)中的 25d(45 mg，0.156 mmol，1當量)饋入具有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中，且添加溴化氰(200 μL，1.20 mmol，8當量)。攪拌反應物隔夜，且真空移除溶劑且合併兩個反應物，得到呈淺灰色固體狀之呈2x HBr鹽形式的 25e(120 mg，0.15 mmol，97%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 628.3 (理論值); 628.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：0.79 min。 合成25f
將 25e(120 mg，0.152 mmol，1當量)、2-乙基-5-甲基-吡唑-3-甲酸(94 mg，0.61 mmol，4.0當量)及HATU (231 mg，0.61 mmol，4當量)饋入具有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中。將固體溶解於DMF (1 mL)中且添加DIPEA (0.22 mL，1.2 mmol，8當量)。在室溫下攪拌反應物隔夜，添加乙酸(100 μL)且藉由prepHPLC (方法I，5-95% MeCN/含有0.05% TFA的水)純化產物且真空移除溶劑，得到呈灰白色固體狀的 25f(107 mg，0.12 mmol，78%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 900.4 (理論值); 900.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.69 min。 合成25g
將化合物 25f(107 mg，0.12 mmol，1當量)添加至具有攪拌棒之20 mL小瓶中且溶解於含20% TFA之DCM (5 mL)中。在室溫下攪拌反應物20分鐘且接著真空移除溶劑，得到呈灰白色固體狀之3x TFA鹽形式之 25g(70 mg，0.0615 mmol，52%產率)。藉由prepHPLC純化(方法G，5-95% MeCN/含有0.05% TFA的水)獲得分析純度的樣品。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 800.3 (理論值); 800.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.12 min。 合成25
將 25g(12 mg，0.011 mmol，1當量)饋入具有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中，將其溶解於DMF (1 mL)中且接著向反應物中添加DIPEA (15 μL，0.087 mmol，8當量)與MP-OSu (4.3 mg，0.0163 mmol，1.5當量)。在室溫下攪拌溶液30分鐘，用含20% TFA之DCM (100 μL)淬滅且藉由prepHPLC (方法G，5-95% MeCN/含0.05% TFA之水)純化，得到呈2x TFA鹽形式之 25(5.7 mg，0.0048 mmol，45%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 951.4 (理論值); 951.2 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.18 min。 合成(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(2-(1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物26). 合成26a
向具有攪拌棒的烘乾8 mL小瓶中饋入 2b(100 mg，0.462 mmol，1當量)及碳酸鉀(191 mg，1.39 mmol，3當量)，隨後添加3-(2-溴乙基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(152 mg，0.577 mmol，1.25當量)。將起始物質溶解於DMF (3 mL)中，用封口膜密封小瓶且在70℃下攪拌24小時。將粗物質傾入含有飽和氯化銨(100 mL)及EtOAc (各100 mL)之分液漏斗中，搖振，分離各層且用EtOAc (2×100 mL)萃取水層。合併之有機溶離份用鹽水(2×50 mL)洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且真空移除溶劑，得到呈淺黃色固體狀之粗產物。藉由急驟層析(25g Sfar HC Duo SiO 2管柱，0-20% MeOH/DCM)純化粗產物，得到呈黃色固體狀的 26a(86 mg，0.215 mmol，47%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 400.1 (理論值); 400.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.79 min。 合成26b
將 25a(35 mg，0.0875 mmol，1當量)、 5a(62 mg，0.175 mmol，2當量)及碳酸鈉(28 mg，0.263 mmol，3當量)饋入烘乾的2 mL微波小瓶中且向此小瓶中添加正丁醇(1 mL)及DIPEA (0.1 mL，0.5 mmol，6當量)。將小瓶密封且在微波反應器中加熱至140℃維持3小時。反應物接著用1:1 MeOH:DCM (100 mL)洗滌、經矽藻土過濾，真空移除溶劑且將粗物質負載於矽藻土上。藉由急驟層析(25g Sfar HC Duo SiO 2管柱，0-20% MeOH/DCM)純化產物，得到呈亮紅色固體狀的 25b(38 mg，0.0592 mmol，68%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 644.3 (理論值); 644.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.72 min。 合成26c
將 25b(38 mg，0.0592 mmol，1當量)饋入烘乾的4 mL小瓶中，將其溶解於甲醇(1 mL)中且添加碳酸氫鈉(90 mg，1.1 mmol，18當量)，隨後添加亞硫酸氫鈉(186 mg，1.07 mmol，18當量)之水溶液(1 mL)。將反應物加熱至50℃維持1小時且用1:1 DCM:MeOH (50 mL)洗滌、經矽藻土過濾。將粗產物負載於矽藻土上且藉由急驟層析(25g Sfar HC Duo，SiO 2管柱，0-40% 10:1 MeOH:NH 4OH/DCM)純化，得到呈淺黃色固體狀之 25c(10 mg，0.017 mmol，29%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 584.3 (理論值); 584.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.18 min。 合成26d
將 25c(10 mg，0.017 mmol，10當量)饋入具有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中，將其溶解於甲醇(0.5 mL)中且添加溴化氰(0.050 mL，0.150 mmol，3 M於DCM中，8.7當量)。攪拌反應物18小時且真空移除溶劑，得到呈淺灰色固體狀之2x HBr鹽形式的 25d(13 mg，0.0165 mmol，95%產率)，其不經任何進一步純化即使用。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 634.3 (理論值); 634.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：0.98 min。 合成26e
將 25d(13 mg，0.0165 mmol，1當量)、HATU (25 mg，0.066 mmol，4當量)及2-乙基-5-甲基-吡唑-3-甲酸(10 mg，0.066 mmol，4當量)饋入具有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中，溶解於DMF (0.5 mL)中且接著添加DIPEA (0.050 mL，0.20 mmol，17當量)。在室溫下攪拌反應物24小時。用乙酸(100 μL)淬滅反應且藉由製備型HPLC (方法H，5-95% MeCN/含0.05% TFA的水)純化產物，得到呈淺褐色固體狀之2x TFA鹽形式的 25e(14 mg，0.016 mmol，95%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 906.4 (理論值); 906.3 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.44 min。 合成26f
將 25e(14 mg，0.016 mmol，1當量)饋入具有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中，將其溶解於含20% TFA的DCM (1 mL)中且在室溫下攪拌15分鐘。真空移除溶劑，得到呈白色固體狀之3x TFA鹽形式的 25f(15 mg，0.013 mmol，82%產率)，且產物不經任何進一步純化即使用。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 806.4 (理論值); 806.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.25 min。 合成26
將DMSO (0.5 mL)中的 25f(5.7 mg，0.0050 mmol，1當量)饋入具有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中且添加MP-OSu (2.0 mg，0.00750 mmol，1.5當量)及DIPEA (5 μL，0.030 mmol，6當量)。在室溫下攪拌反應物1小時。藉由添加含20% TFA之DCM (100 μL)淬滅反應且藉由prepHPLC (方法G，5-95% MeCN/含0.05% TFA的水)純化產物，得到呈白色固體狀之2x TFA鹽形式的 25(3.8 mg，0.00321 mmol，64%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 957.4 (理論值); 957.3 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.19 min。 合成(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-((1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)氧基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物27). 合成27a
將呈TFA鹽形式之 2b(150 mg，0.454 mmol，1當量)、3-(3-溴丙氧基)氮雜環丁烷-1-甲酸三級丁酯(133 mg，0.454 mmol，1當量)及碳酸鉀(141 mg，1.02 mmol，2.3當量)饋入具有攪拌棒的烘乾8 mL小瓶中，溶解於DMF (4.5 mL)中且加熱至55℃維持24小時。將反應物傾入含有飽和NaHCO 3(100 mL)及EtOAc (100 mL)的分液漏斗中，搖振，分離各層，且用EtOAc (3x50 mL)萃取水層。合併有機溶離份且進一步用飽和NaHCO 3(3×50 mL)及鹽水(2×50 mL)洗滌。接著用MgSO4將其乾燥，過濾且真空移除溶劑，得到呈淺黃色固體狀之 27a(194 mg，0.353 mmol，78%產率)，其中起始物質相對於產物的比率為4:1且不經進一步純化即使用。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 430.1 (理論值); 430.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.82 min。 合成27b
將碳酸鈉(144 mg，1.36 mmol，3.00 eq)、呈2x HCl鹽形式之 5a(240 mg，0.678 mmol，1.50 eq)及 27a(194 mg，0.452 mmol，1當量)饋入烘乾的5 mL微波小瓶中且接著添加1-丁醇(4 mL)及DIPEA (0.5 mL，2.7 mmol，6當量)。將小瓶密封且在微波反應器中加熱至140℃維持3小時。使反應物冷卻至室溫且溶液用1:1 MeOH:DCM (100 mL)洗滌、經矽藻土過濾。將粗產物負載於矽藻土上且藉由急驟層析(25g Sfar HC Duo，SiO 2管柱，0-20% MeOH/DCM)純化，得到呈亮紅色固體狀之 27b(95 mg，0.141 mmol，31%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 674.3 (理論值); 674.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.73 min。 合成27c
將 27b(95 mg，0.141 mmol，1當量)及碳酸氫鈉(442 mg，5.3 mmol，37當量)饋入20 mL小瓶中且將起始物質溶解於甲醇(4 mL)中。向小瓶中添加亞硫酸氫鈉(442 mg，2.54 mmol，18當量)之水溶液(4 mL)且反應物通大氣加熱至50℃維持1小時。溶液在一小時過程中自亮紅色變為淺黃色。過濾反應物，濾餅用1:1 MeOH:DCM (3x50 mL)洗滌，真空移除溶劑，將粗產物再溶解於1:1 MeOH:DCM (100 mL)中且經由矽藻土過濾。將粗產物負載於矽藻土上且藉由急驟層析(25g Sfar HC Duo，SiO 2管柱，0-40% 10:1 MeOH:NH 4OH/DCM)純化，得到呈灰白色固體狀的 27c(42 mg，0.0689 mmol，49%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 614.3 (理論值); 614.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：0.78 min。 合成27d
向烘乾的4 mL小瓶中饋入 27c(42 mg，0.0689 mmol，1當量)，將其溶解於甲醇(1.3 mL)中且接著添加溴化氰(3 M於DCM中，0.14 mL，0.414 mmol，6當量)。在室溫下攪拌小瓶24小時且真空移除溶劑，得到呈灰白色固體狀的呈2x HBr鹽形式之 27d(57 mg，0.0694 mmol，定量產量)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 664.3 (理論值); 664.7 (觀測值)。HPLC滯留時間：0.95 min。 合成27e
將 27d(57 mg，0.0694 mmol，1當量)、2-乙基-5-甲基-吡唑-3-甲酸(43 mg，0.278 mmol，4當量)及HATU (106 mg，0.278 mmol，4當量)饋入具有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶中，溶解於DMF (1 mL)中且接著添加DIPEA (0.097 mL，0.555 mmol，8當量)。在室溫下攪拌反應物24小時，用含有20% TFA之MeCN (200 μL)淬滅且藉由prepHPLC (方法I，5-95% MeCN/含有0.05% TFA的水)純化產物，經由凍乾移除溶劑，得到呈褐色固體狀之2x TFA鹽形式的 27e(35 mg，0.0302 mmol，43%產率)。藉由第二prepHPLC純化(方法G，5-60% MeCN/含有0.05% TFA的水)獲得分析純度的樣品。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 936.4 (理論值); 936.3 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.37 min。 合成27f
將 27e(31 mg，0.0266 mmol，1當量)饋入20 mL小瓶中，將其溶解於含有20% TFA之DCM (2 mL)中且在室溫下攪拌15分鐘。真空移除溶劑且藉由prepHPLC (方法H，5-95% MeCN/含有0.05% TFA的水)純化粗產物，得到呈白色固體狀的3x TFA鹽形式之 27f(7.2 mg，0.0061 mmol，23%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 836.4 (理論值); 836.3 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.02 min。 合成27
向烘乾的4 mL小瓶中饋入 27f(10 mM於DMSO中，0.50 mL，0.0050 mmol，1當量)且接著添加MP-OSu (2.0 mg，0.0075 mmol，1.5當量)及DIPEA (20 μL，0.12 mmol，23當量)。在室溫下攪拌反應物90分鐘，用含有20% TFA之MeCN (100 μL)淬滅且藉由prepHPLC (方法G，5-95% MeCN/含有0.05% TFA之水)純化粗產物，得到呈白色固體狀的3x TFA鹽形式之27 (3.6 mg，0.0029 mmol，58%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 987.4 (理論值); 987.2 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.23 min。 合成S-(1-(3-((3-((5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-((E)-4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物28).
向1.7 mL微量離心管中饋入 25(10 mM於DMSO中，100 μL，0.00100 mmol，1當量)且添加L-半胱胺酸(15 mM於4:1 DMSO:水中，150 μL，0.00300 mmol，3當量)。將反應物加熱至37℃維持90分鐘且接著藉由prepHPLC (方法G，5-95% MeCN/含有0.05% TFA的水)純化粗產物，得到呈白色固體狀的2x TFA鹽形式之 28(1.1 mg，0.000861 mmol，86%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1072.4 (理論值); 1072.2 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.98 min。 合成S-(1-(3-(3-(2-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基))氧基)乙基)氮雜環丁-1-基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物29).
向1.7 mL微量離心管中饋入 26(10 mM於DMSO中，100 μL，0.00100 mmol，1當量)且添加L-半胱胺酸(15 mM於4:1 DMSO:水中，150 μL，0.00300 mmol，3當量)。將反應物加熱至37℃維持2小時且接著藉由prepHPLC (方法G，5-95% MeCN/含有0.05% TFA的水)純化粗產物，得到呈白色固體狀的2x TFA鹽形式之 29(0.91 mg，0.000697 mmol，70%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1078.4 (理論值); 1078.3 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.03 min。 S-(1-(3-(3-(3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙氧基)氮雜環丁-1-基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物30).
將 27(10 mM於DMSO中，100 μL，0.00100 mmol，1當量)及L-半胱胺酸(100 mM於DMSO中，30 μL，0.00300 mmol，3當量)饋入1.7 mL微量離心管中且在37℃下培育溶液30分鐘。藉由prepHPLC (方法G，5-95% MeCN/含有0.05%的水)純化粗產物，得到呈白色固體狀的2x TFA鹽形式之 30(1.2 mg，0.000913 mmol，61%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1108.4 (理論值); 1108.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.08 min。 醯胺類似物之庫合成. 流程及通用方法. 化合物31至60.
HATU 偶合 ( 通用方法 4A ).向羧酸(4當量)於DMA (400 µL)中之溶液中添加HATU (6.2 mg，0.016 mmol，4當量)及DIPEA (4.3 µL，0.025 mmol，6當量)。在室溫下攪拌混合物30分鐘且接著向混合物中添加化合物 7(3 mg，0.0041 mmol，1當量)且加熱至70℃維持18小時。此時，添加乙酸(4.3 µL)，且所得產物藉由prepHPLC (20-50-95% MeCN/含有0.1% FA的水)純化。所有分子使用LC-MS方法D聯合ESI+電離加以表徵。
COMU 偶合 ( 通用方法 4B ).向羧酸(4當量)於DMA (400 µL)中之溶液中添加COMU (7 mg，0.016 mmol，4當量)及DIPEA (4.3 µL，0.025 mmol，6當量)。在室溫下攪拌混合物30分鐘且接著向混合物中添加化合物 7(3 mg，0.0041 mmol，1當量)，且將溶液加熱至40℃維持18小時。此時，添加乙酸(4.3 µL)，且所得產物藉由prepHPLC (20-50-95% MeCN/含有0.1% FA的水)純化。
PMB 保護基脫除 ( 通用方法 5 ).將得自前一步驟的醯胺溶解於含有50% TFA之MeCN (0.01 M)中且在30℃下攪拌30分鐘。完成後，濃縮混合物，且藉由製備型HPLC (20-50-95%水/乙腈，0.1% TFA)純化產物。
使用上文指定的通用方法製備下述實例。
化合物 結構 方法 產率 ( 經 2 個步驟 ) PMB LC-MS 資料 苯酚 LC-MS 資料
31 HATU -方法4a 45% 1.74 mg 0.00183 mmol RT: 1.49 理論值: 843.4 觀測值: 843.5 RT: 1.25 理論值: 723.3 觀測值: 723.5
32 HATU -方法4a 58% 2.25 mg 0.00237 mmol RT: 1.67 理論值: 843.4 觀測值: 843.5 RT: 1.42 理論值: 723.3 觀測值: 723.5
33 HATU -方法4a 56% 2.00 mg 0.00231 mmol RT: 1.78 理論值: 759.2 觀測值: 759.4 RT: 1.60 理論值: 639.2 觀測值: 639.3
34 HATU -方法4a 61% 2.24 mg 0.00251 mmol RT: 1.92 理論值: 787.3 觀測值: 787.4 RT: 1.74 理論值: 667.2 觀測值: 667.4
35 HATU -方法4a 59% 2.19 mg 0.00244 mmol RT: 2.00 理論值: 791.2 觀測值: 791.3 RT: 1.85 理論值: 671.1 觀測值: 671.3
36 HATU -方法4a 40% 1.52 mg 0.00164 mmol RT: 2.14 理論值: 819.2 觀測值: 819.4 RT: 2.01 理論值: 699.2 觀測值: 699.3
37 COMU - 方法4b 35% 1.32 mg 0.00143 mmol RT: 2.02 理論值: 815.3 觀測值: 815.5 RT: 1.63 理論值: 695.3 觀測值: 695.4
38 COMU - 方法4b 39% 1.47 mg 0.00158 mmol RT: 2.02 理論值: 821.2 觀測值: 821.4 RT: 1.63 理論值: 701.2 觀測值: 701.3
39 COMU - 方法4b 57% 2.08 mg 0.00232 mmol RT: 1.86 理論值: 789.3 觀測值: 789.5 RT: 1.65 理論值: 669.2 觀測值: 669.4
40 COMU - 方法4b 36% 1.37 mg 0.00148 mmol RT: 2.00 理論值: 821.2 觀測值: 821.4 RT: 1.61 理論值: 701.2 觀測值: 701.3
41 HATU -方法4a 66% 2.50 mg 0.00272 mmol RT: 2.24 理論值: 813.3 觀測值: 813.5 RT: 1.84 理論值: 693.3 觀測值: 693.5
42 COMU - 方法4b 45% 1.64 mg 0.00184 mmol RT: 1.59 理論值: 783.3 觀測值: 783.4 RT: 1.31 理論值: 663.2 觀測值: 663.4
43 COMU - 方法4b 29% 1.07 mg 0.00120 mmol RT: 1.63 理論值: 783.3 觀測值: 783.4 RT: 1.36 理論值: 663.2 觀測值: 663.4
44 COMU - 方法4b 55% 2.00 mg 0.00225 mmol RT: 1.47 理論值: 783.3 觀測值: 783.4 RT: 1.19 理論值: 663.2 觀測值: 663.4
45 COMU - 方法4b 37% 1.36 mg 0.00153 mg RT: 1.61 理論值: 783.3 觀測值: 783.4 RT: 1.34 理論值: 663.2 觀測值: 663.4
46 COMU - 方法4b 63% 2.30 mg 0.00258 mmol RT: 1.62 理論值: 783.3 觀測值: 783.4 RT: 1.34 理論值: 663.2 觀測值: 663.4
47 COMU - 方法4b 46% 1.67 mg 0.00187 mmol RT: 1.74 理論值: 787.3 觀測值: 787.5 RT: 1.46 理論值: 667.2 觀測值: 667.4
48 COMU - 方法4b 60% 2.35 mg 0.00247 mmol RT: 1.79 理論值: 843.4 觀測值: 843.5 RT: 1.52 理論值: 723.3 觀測值: 723.5
49 COMU - 方法4b 60% 2.42 mg 0.00244 mmol RT: 2.18 理論值: 883.3 觀測值: 883.5 RT: 1.90 理論值: 763.2 觀測值: 763.4
50 COMU - 方法4b 55% 2.17 mg 0.00225 mmol RT: 2.17 理論值: 855.2 觀測值: 855.4 RT: 1.59 理論值: 735.2 觀測值: 735.3
51 COMU - 方法4b 71% 2.76 mg 0.00289 mmol RT: 1.89 理論值: 847.3 觀測值: 847.5 RT: 1.31 理論值: 727.3 觀測值: 727.6
52 COMU - 方法4b 51% 2.23 mg 0.00211 mmol RT: 2.50 理論值: 951.3 觀測值: 951.6 RT: 1.99 理論值: 831.3 觀測值: 831.6
53 COMU - 方法4b 51% 2.00 mg 0.00210 mmol RT: 2.01 理論值: 843.4 觀測值: 843.5 RT: 1.44 理論值: 723.3 觀測值: 723.6
54 COMU - 方法4b 52% 1.97 mg 0.00214 mmol RT: 1.86 理論值: 815.3 觀測值: 615.5 RT: 1.28 理論值: 695.3 觀測值: 695.5
55 HATU -方法4a 56% 2.04 mg 0.00228 mmol RT: 1.88 理論值: 1027.4 觀測值: 1028.0 RT: 1.35 理論值: 667.2 觀測值: 667.8
56 COMU - 方法4b 63% 2.24 mg 0.00257 mmol RT: 1.78 理論值: 763.4 觀測值: 763.5 RT: 1.11 理論值: 643.3 觀測值: 643.9
57 HATU -方法4a 60% 2.08 mg 0.00247 mmol RT: 1.31 理論值: 735.3 觀測值: 735.7 RT: 0.99 理論值: 615.3 觀測值: 615.6
58 HATU -方法4a 55% 2.02 mg 0.00225 mmol RT: 1.88 理論值: 789.3 觀測值: 789.4 RT: 1.60 理論值: 669.2 觀測值: 669.3
59 HATU -方法4a 56% 2.00 mg 0.00230 mmol RT: 1.81 理論值: 761.2 觀測值: 761.4 RT: 1.56 理論值: 641.2 觀測值: 641.3
60 HATU -方法4a 48% 1.82 mg 0.00196 mmol RT: 1.98 理論值: 821.2 觀測值: 821.4 RT: 1.68 理論值: 701.2 觀測值: 701.4
合成4-氯-3-((4-甲氧基苯甲基)氧基)-5-硝基苯甲酸甲酯(化合物61). 合成61a
在氮氣下，在0℃下，經20分鐘將BBr3 (1 M於DCM中，153 mL，153 mmols，2.5當量)逐滴添加至4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(15 g，61 mmol，1當量)於DC (60 mL)中之溶液中。在0℃下攪拌反應混合物30分鐘且接著升溫至25℃且再攪拌12小時。使反應混合物冷卻至0℃，用甲醇淬滅，且真空濃縮，得到呈深棕色油狀之 61a(12.3 g，56.5 ml，93%產率)。LC-MS (方法C, ESI+): m/z [M + H] += 218.0 (理論值); 217.9 (觀測值)。HPLC滯留時間：0.21 min。 合成61b
向 61a(26.6 g，122 mmol，1當量)於甲醇(800 mL)中之溶液中添加濃H 2SO 4(600 mg，6.11 mmol，0.05當量)，在60℃下攪拌混合物12小時。LCMS分析(方法C)顯示反應完成。將混合物冷卻至室溫且真空濃縮。粗殘餘物用水(50 mL)稀釋且謹慎地添加飽和NaHCO 3(50 mL)以達成pH＞7。藉由過濾收集所得固體，用水(25 mL)洗滌且真空乾燥，得到呈棕色固體狀之 61b(25 g，88%產率)。LC-MS (方法C, ESI+): m/z [M + H] += 232.0 (理論值); 231.9 (觀測值)。HPLC滯留時間：0.92 min。 合成61
向 61b(18 g，78 mmol，1當量)於DMF (200 mL)中之溶液中添加Cs 2CO 3(27.9 g，86 mmol，1.1當量)及1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(12.8 g，82 mmol，1.05當量)且在25℃下攪拌混合物16小時。LCMS分析(方法C)顯示反應完成。將反應物傾入水中，過濾且在高真空下乾燥，得到呈淺黃色固體狀之 61(22.3 g，82%產率)。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ =8.11 (d, J=1.4 Hz, 1H), 7.97 (d, J=1.4 Hz, 1H), 7.43 (d, J=8.5 Hz, 2H), 6.99 (d, J=8.5 Hz, 2H), 5.33 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.77 (s, 3H)。 合成(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-羥基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物62). 合成62a
向(E)-(4-胺基丁-2-烯-1-基)胺基甲酸三級丁酯(12.5 g，67.2 mmol，1.1當量)於DMSO (150 mL)中之溶液中添加4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(15 g，61.1 mmol，1當量)及DIPEA (39.5 g，305 mmol，5當量)，在100℃下攪拌混合物12小時。將混合物傾入水中，用EtOAc萃取且真空濃縮，得到呈深紅色固體狀之 62a(16.4 g，41.4 mmols，68%產率)。LC-MS (方法C, ESI+): m/z [M - tBu] += 340.1 (理論值); 340.1 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.08 min。 合成62b
將 62a(21 g，53.1 mmol，1當量)添加至HCl於乙酸乙酯中之溶液(4 M，350 mL，1400 mmols，26當量)中且在25℃下攪拌混合物2小時。真空濃縮混合物且用EtOAc洗滌粗固體，得到呈深紅色固體狀之HCl鹽形式之 62b(14.5 g，43.7 mmols，82%產率)。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ = 8.19 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.12 (br s, 1H), 8.01 (br s, 3H), 7.46 (d, J=1.6 Hz, 1H), 5.87 (td, J=5.8, 15.5 Hz, 1H), 5.71 - 5.55 (m, 1H), 4.21 (br s, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.42 - 3.35 (m, 2H)。 合成62c
向 61(4.5 g，12.8 mmol)於DMSO (70 mL)中之溶液中添加 62b(4.67 g，14.1 mmol，HCl鹽)及DIPEA (8.3 g，64 mmol，5當量)且在80℃下攪拌反應物10小時。將混合物傾入冰水中，用EtOAc萃取且真空濃縮。使殘餘物再結晶(乙酸乙酯，20V，回流)，得到呈深紅色固體狀之 62c(6.4 g，10.5 mmols，82%產率)。MS (方法C, ESI+): m/z [M + H] += 611.2 (理論值); 611.2 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.34 min。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ = 8.06 (dd, J=1.5, 9.5 Hz, 2H), 7.96 (br d, J=2.9 Hz, 2H), 7.44 (s, 1H), 7.36 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.30 (s, 1H), 6.94 (d, J=8.5 Hz, 2H), 5.53 - 5.29 (m, 2H), 5.00 (s, 2H), 4.03 (br t, J=5.4 Hz, 4H), 3.84 (s, 6H), 3.76 (d, J=3.5 Hz, 6H)。 合成62d
向 62c(6.0 g，9.83 mmol，1當量)於MeOH (300 mL)中之溶液中添加NH 4OH (60 mL，含28% NH 3之H 2O)及Na 2S 2O 4(20.5 g，118 mmol，12當量)。在25℃下攪拌混合物16小時且自亮紅色轉變為淺黃色/幾乎無色的非均質混合物。過濾混合物，濃縮以移除MeOH且用EtOAc萃取剩餘水溶液。合併有機相，經Na 2SO 4乾燥且真空濃縮，得到呈灰白色固體狀的 62d(4.0 g，7.25 mmols，74%產率)。MS (方法B, ESI+): m/z [M + H] += 551.25 (理論值); 551.2 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.29 min。 合成62e
向 62d(4.0 g，7.25 mmol，1當量)於MeOH (200 mL)中之溶液中添加BrCN (4.62 g，43.6 mmol，6當量)。在25℃下攪拌混合物2小時，此時，LC-MS分析(方法C)顯示完全轉化。真空濃縮反應混合物且用乙醇及石油醚洗滌粗產物，得到呈灰白色固體狀的2x HBr鹽形式之 62e(2.6 g，3.53 mmols，49%產率)。MS (方法C, ESI+): m/z [M + H] += 601.2 (理論值); 601.3 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.73 min。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6): δ = 12.87 (br s, 1H), 8.72 (br d, J=17.0 Hz, 4H), 7.59 (s, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 6.82 (d, J=8.6 Hz, 2H), 5.70 (br d, J=15.7 Hz, 1H), 5.57 - 5.48 (m, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.83 - 4.73 (m, 4H), 3.88 (s, 6H), 3.71 (s, 3H), 3.65 (s, 3H)。 合成62f
向1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(3.15 g，20.5 mmol，2.6當量)於DMF (30 mL)中之溶液中添加HATU (8.38 g，22.0 mmol，2.8當量)且在60℃下攪拌溶液10分鐘。製備含有DIPEA (5.09 g，39 mmol，5當量)及 62e(6.0 g，7.87 mmol，1當量，2x HBr鹽)於DMF (30 mL)中的第二溶液且添加至活化酸中。接著在60℃下攪拌反應物2小時。將溶液傾入水中，過濾且用乙腈濕磨，得到呈灰白色固體狀的 62f(2.54 g，2.91 mmols，37%產率)。MS (方法C, ESI+): m/z [M + H] += 873.4 (理論值); 873.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：3.44 min。 1 H NMR(400MHz, DMSO- d 6) δ = 12.88 (br s, 2H), 7.74 (br s, 2H), 7.22 (br s, 1H), 7.16 - 6.97 (m, 3H), 6.66 (br d, J=7.9 Hz, 2H), 6.57 - 6.36 (m, 2H), 5.87 - 5.37 (m, 2H), 4.78 (br s, 6H), 4.51 (br dd, J=7.0, 17.3 Hz, 4H), 3.85 (s, 6H), 3.59 (s, 3H), 3.52 (br s, 3H), 2.10 (br d, J=11.1 Hz, 6H), 1.26 (td, J=6.8, 18.8 Hz, 6H)。 合成62
將 62f(9 mg，0.010 mmols，1當量)饋入具有攪拌棒的烘乾4 mL小瓶，將其溶解於1:1 MeCN:TFA (1 mL)中且在室溫下攪拌1小時。真空移除溶劑且高真空乾燥產物隔夜，得到呈褐色固體狀之 62(7.5 mg，0.0099 mmols，定量產量)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 753.3 (理論值); 753.7 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.99 min。 合成(E)-1-(4-(5-羧基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-羥基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物63). 合成63a
將化合物 62f(100 mg，0.115 mmols，1當量)溶解於乙腈(1 mL)中，添加1 M LiOH (1 mL，1 mmol，9當量)且將溶液加熱至80℃維持1小時。冷卻小瓶，真空移除溶劑且藉由prepHPLC (方法I，5-95% MeCN/具有0.1% TFA之水)純化產物，得到呈白色固體狀的 63a(78 mg，0.092 mmols，97%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 845.3 (理論值); 845.8 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.95 min。 合成63
如先前所述製備化合物 63(參見「合成62」)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 725.3 (理論值); 725.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.83 min。 合成(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-羥基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物64)及(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-羥基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸化合物65). 合成64a及65a
藉由用氫氧化鈉取代氫氧化鋰且在50%轉化率時淬滅反應、如先前所述(參見「合成65a」)來製備化合物64a與65a之不可分離1:1混合物，隨後經由prepHPLC (方法H，使用0.1% FA)進行純化。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 859.4 (理論值); 859.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.46 min。 合成64及65
如先前所述製備化合物64a與65a之不可分離1:1混合物(參見「合成65a」)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 739.4 (理論值); 739.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.99及2.04 min。 合成(E)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物66) 合成66a
在20 mL小瓶中，將化合物 62(397 mg，0.527 mmol，1當量)、(3-溴丙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(146 mg，0.580 mmol，1.1當量)及碳酸鉀(218 mg，1.58 mmol，3當量)溶解於DMF (5.3 mL)中。在55℃下攪拌反應物18小時，且接著用甲醇洗滌、過濾混合物，且真空濃縮濾液。向粗固體中添加冷水且經由過濾分離沈澱物，得到 66a(232 mg，0.251 mmol，48%產率)。MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 924.4 (理論值); 924.9 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.42 min。 合成66b
將化合物 66a(232 mg，0.251 mmol，1當量)溶解於甲醇(2.5 mL)中且添加含4 M HCl之二㗁烷(0.5 mL，2.01 mmol，8當量)。在30℃下攪拌反應物90分鐘。真空移除溶劑且粗產物藉由prepHPLC (方法I，使用0.05% TFA)純化，得到 66b(206 mg，0.24 mmol，96%產率)。MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 824.4 (理論值); 824.9 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.56 min。 合成66
將化合物 66(25 mg，0.0291 mmol，1當量)及MP-OSu (11.6 mg，0.0436 mmol，1.5當量)溶解於DMA (0.58 mL)中且添加DIPEA (20 µL，0.116 mmol)。在室溫下攪拌反應物1小時。混合物直接藉由prepHPLC (方法H，使用0.05% TFA)純化，得到呈白色固體狀的 66(10.88 mg，0.0112 mmol，38%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 975.4 (理論值); 975.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.24 min。 合成(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(3-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)-4-((((3-((2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-((E)-4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺甲醯基)氧基)甲基)苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸(化合物67) 合成67a
將化合物 13a(65 mg，0.0868 mmol，1.4當量)及雙(五氟苯基)碳酸酯(120 mg，0.304 mmol，5當量)溶解於DMA (0.43 mL)中且添加DIPEA (70 µL，0.404 mmol，6.7當量)。攪拌反應物30分鐘且接著添加 66b(52 mg，0.0607 mmol，1當量)。在室溫下攪拌反應物18小時。溶液用H 2O稀釋且用EtOAc萃取(3次)，且合併之有機物用1 M HCl洗滌(3次)，經MgSO4乾燥，過濾且真空移除溶劑，得到粗固體。將此物質溶解於DMSO中且藉由prepHPLC (方法H，使用0.05% TFA)純化，得到呈白色固體狀的 67a(33.1 mg，0.0207 mmol，34%產率)。 LCMS(方法D, ESI+) m/z [M+H] +1598.6 (理論值), 1598.6 (觀測值)。LCMS滯留時間：2.65 min。 MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1598.6 (理論值); 1598.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.65 min。 合成67b
將化合物 67a(33.1 mg，0.0207 mmol)溶解於無水甲醇(0.21 mL)中，在冰浴中冷卻，且添加含0.5 M NaOMe之MeOH (41.5 µL，0.0414 mmol，2當量)。藉由LCMS (方法D)監測反應且在乙酸酯保護基完全脫除後，添加1 M LiOH (62 µL，0.0621 mmol，3當量)。在室溫下攪拌反應物1小時，藉由LCMS (方法E)監測。在完全轉化後，添加乙酸(62 µL)，真空移除溶劑且經由prepHPLC (方法H，使用0.05% TFA)純化粗產物，得到呈白色固體狀的 67b(10.1 mg，0.0075 mmol，36%產率)。 LCMS(方法D, ESI+) m/z [M+H] +1236.5 (理論值), 1236.5 (觀測值)。LCMS滯留時間2.31 min。 MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 1236.5 (理論值); 1236.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.31 min。 合成67
將化合物 67b(10.1 mg，0.0075 mmol，1當量)及MP-OSu (3.0 mg，0.0112 mmol，1.5當量)溶解於DMA (150 µL)中，添加DIPEA (4 µL，0.0224 mmol)。在室溫下攪拌反應物30分鐘，此時添加乙酸(4 µL)，且經由prepHPLC (方法G，使用0.05% TFA)純化混合物，獲得呈白色固體狀之 67(3.3 mg，0.0024 mmol，32%產率)。 LCMS(方法E, ESI+) m/z [M+H] +1387.5 (理論值), 1387.5 (觀測值)。LCMS滯留時間1.92 min。
MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 1387.5 (理論值); 1387.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.92 min。 合成(E)-1-(4-(5-羧基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物68) 合成68a
將化合物 66b(30 mg，0.032 mmol)溶解於甲醇(0.32 mL)中且添加1M LiOH (0.256 mL，0.256 mmols，8當量)。在80℃下攪拌混合物1小時。真空濃縮混合物且經由prepHPLC (方法H，使用0.05% TFA)純化，得到呈白色固體狀之 68a(17.4 mg，0.0191 mmol，60%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 796.4 (理論值); 796.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.83 min。 合成68
將化合物 68a(16.7 mg，0.0183 mmol，1當量)及MP-OSu (7.3 mg，0.0275 mmol，1.5當量)溶解於DMA (0.37 mL)中，且添加DIPEA (10 µL，0.0574 mmol，2當量)。在室溫下攪拌反應物1小時，添加AcOH (10 µL)且經由prepHPLC (方法H，使用0.05% TFA)純化粗產物，得到呈白色固體狀的 68(7.6 mg，0.0080 mmol，44%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 974.4 (理論值); 974.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.42 min。 合成1-((E)-4-(5-羧基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-((((4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-2-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物69) 合成69a
如先前所述製備化合物 69a(參見「合成67a」)。MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 1570.6 (理論值); 1570.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.95 min。 合成69b
如先前所述製備化合物 69b(參見「合成67b」)。MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 1208.5 (理論值); 1208.3 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.48 min。 合成69
如先前所述製備化合物 69(參見「合成67」)。MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 1359.5 (理論值); 1359.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.68 min。 合成(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(3-𠰌啉基丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物70) 合成70
向化合物A (6 mg，0.00706 mmol)於無水DCM (0.10 mL)中之溶液中逐滴添加BBr 3(0.04 mL，1 M於DCM中)。形成的漿液在氬氣下，在30℃下攪拌隔夜。藉由UPLC-MS監測反應。完成後，添加冷水(0.10 mL)且劇烈攪拌混合物。30分鐘之後，蒸發溶劑，且使用甲酸作為添加劑、藉由prepHPLC (方法G)純化產物。收集純溶離份，冷凍且凍乾，得到呈白色固體狀的化合物 70(5.14 mg，0.00528 mmol，75%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 836.9 (理論值), 836.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.34 min。
使用以下方法製備化合物 17 至 24 之半胱胺酸加成物。
通用方法 6.在37℃下將10 mM順丁烯二醯亞胺溶液與1當量的L-半胱胺酸(100 mM於水中)一起培育1小時且產物不經任何進一步純化即使用。
化合物 結構 LC-MS 資料
71 RT: 1.17 理論值: 1181.5 觀測值: 1182.1
72 RT: 1.21 理論值: 1195.5 觀測值: 1195.7
73 RT: 1.17 理論值: 1123.5 觀測值: 1124.0
74 RT: 1.19 理論值: 1137.5 觀測值: 1137.9
75 RT: 1.16 理論值: 1153.5 觀測值: 1153.8
76 RT: 1.19 理論值: 1167.5 觀測值: 1168.0
合成(3-(5-胺甲醯基-2-氯-3-硝基苯氧基)丙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(化合物77)
將 2b(1.0 g，4.62 mmol，1當量)於DMF (10 mL)中之溶液、碳酸鉀(830 mg，6.00 mmol，1.3當量)及N-(3-溴丙基)-N-甲基-胺基甲酸三級丁酯(1.20 eq，1.40 g，5.54 mmol，1.20當量)於DMF (5 mL)之溶液饋入具有攪拌棒的直火烘乾之100 mL RB中。添加額外DMF以使總體積達到45 mL，且將反應物加熱至70℃維持24小時。將反應物冷卻至室溫且用DMF (3×10 mL)洗滌、經矽藻土過濾。將此溶液傾入冰水(900 mL)中，攪拌90分鐘且經由過濾分離粗產物。最後，濾液用冷水(300 mL)洗滌且真空乾燥隔夜，得到 77(1.23 g，3.16 mmol，68%產率)。 合成(E)-(3-((2-胺基-5-胺甲醯基-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(化合物78) 合成78a
向具有攪拌棒的500 mL圓底燒瓶中饋入 4a(3.0 g，7.9 mmol，1當量)且碳酸氫鈉(12.5 g，148 mmol，19當量)且添加乙醇(105 mL)，得到非均質溶液。此溶液在冰浴中冷卻且以保持內部溫度低於10℃的此速率逐滴添加亞硫酸氫鈉(25.8 g，148 mmol，19當量)於105 mL水中之溶液。將混合物通大氣加熱至45℃維持1小時且冷卻至室溫。混合物用EtOH (100 mL)洗滌、經矽藻土過濾且真空移除溶劑。將粗物質再溶解於1:1 DCM:MeOH (200 mL)中，經矽藻土過濾且真空移除溶劑。再次重複此程序且接著將粗產物負載於矽藻土上且藉由急驟層析(50g Sfar HC Duo，SiO 2管柱，0-40% 10:1 NH 4OH:MeOH/DCM)純化，得到 78a(1.45 g，4.13 mmol，52%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 351.2 (理論值); 351.1 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.53 min。 合成78b
將 78a(1.95 g，5.58 mmol，1當量)饋入烘乾的200 mL圓底燒瓶中，將其溶解於甲醇(45 mL)中且添加溴化氰(3 M於DCM中，5.6 mL，16.7 mmol，3當量)，得到黃色均質溶液。在室溫下攪拌反應物48小時且真空移除溶劑，得到呈HBr鹽形式之 78b(2.48 g，5.44 mmol，98%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 376.2  (理論值); 376.1 (觀測值)。HPLC滯留時間：0.71 min。 合成78c
將 78bHBr (867 mg，1.90 mmol，1當量)、2-乙基-5-甲基-吡唑-3-甲酸(879 mg，5.70 mmol，3當量)及HATU (2.17 g，5.70 mmol，3當量)饋入具有攪拌棒的直火烘乾之40 mL小瓶中。將固體溶解於DMF (15 mL)中且接著添加DIPEA (2.0 mL，11.4 mmol，6當量)。密封小瓶且在室溫下攪拌48小時。將溶液傾入具有NH4OH (28% NH 3水，10 mL)之冰冷水(450 mL)中且允許在4℃下沈澱隔夜。經由過濾分離白色沈澱物且真空乾燥隔夜，得到 78c(658 mg，1.29 mmol，68%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 512.3  (理論值); 512.2 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.35 min。 合成78d
將 78c(800 mg，1.56 mmol，3當量)饋入具有攪拌棒的烘乾8 mL小瓶中，在含有3 M HCl之MeOH (5.2 mL，15.6 mmol HCl，10當量)中攪拌1小時。真空移除溶劑，得到呈2xHCl鹽形式之 78d(700 mg，1.56 mmol，定量產量)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 412.2  (理論值); 412.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：0.73 min。 合成78e
將 78e(700 mg，1.56 mmol，1當量)、 77(909 mg，2.34 mmol，1.5當量)及碳酸鈉(497 mg，4.69 mmol，3當量)饋入烘乾的20 mL微波小瓶中且向混合物中添加1-丁醇(15 mL)及DIPEA (1.6 mL，9.38 mmol，6當量)。密封小瓶且在微波反應器中、在140℃下加熱維持3小時，得到亮紅色非均質混合物。將此混合物傾入DCM (100 mL)中且用DCM (50 mL)及MeOH (50 mL)洗滌、經矽藻土過濾。將粗產物負載於矽藻土上且藉由急驟層析(50g Sfar HC Duo，SiO2管柱，0-20% MeOH/DCM)純化，得到呈亮紅色固體狀之 78e(569 mg，0.746 mmol，48%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 763.4  (理論值); 763.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.17 min。 合成78f
向 78e(569 mg，0.746 mmol，1當量)於甲醇(8 mL)及NH 4OH (2.0 mL，28% NH 3水)中的混合物中添加亞硫酸氫鈉(2.34 g，13.4 mmol，18當量)於水(8 mL)中之溶液。在50℃下加熱此溶液1小時。將反應混合物傾入含有水(250 mL)及EtOAc (250 mL)之分液漏斗中。搖振混合物，分離各層且進一步用EtOAc (3x100 mL)萃取水層。合併有機相，用鹽水(2x100 mL)洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且真空移除溶劑，得到呈褐色固體狀之 78f(400 mg，0.546 mmol，73%產率)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 733.4  (理論值); 733.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.39 min。 合成78
向 78f(1.00 eq，400 mg，0.546 mmol)於甲醇(5.5 mL)中之溶液中添加溴化氰(3 M於DCM中，0.55 mL，1.65 mmol，3當量)且在室溫下攪拌混合物24小時。真空移除溶劑，得到呈HBr鹽形式之 78(456 mg，0.544 mmol，定量產量)。MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 758.4  (理論值); 758.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.19 min。 第2組醯胺類似物之庫合成. 流程及通用方法. 化合物71至95.
COMU 偶合 ( 通用方法 7A) ：將化合物 78(20 mg，0.0238 mmol，1當量)於DMA (0.50 mL)中之溶液饋入2 mL微波小瓶中。添加各別甲酸(2當量)、COMU (20.4 mg，0.0477 mmol，2當量)及DIPEA (20.8 µL，0.119 mmol，5當量)。將小瓶密封且在微波反應器中加熱至80℃維持1小時。經由UPLC-MS (方法E, ESI+)監測反應。完成後，添加乙酸(20 µL)且使用0.05% TFA作為添加劑、藉由prepHPLC (方法H)純化所得產物。收集純溶離份，冷凍且凍乾，得到白色固體狀產物。
HATU 偶合 ( 通用方法 7B) ：將化合物 78(20 mg，0.0238 mmol，1當量)於DMA (0.50 mL)中之溶液饋入2 mL微波小瓶中。添加各別羧酸(4當量)、HATU (36.3 mg，0.0954 mmol，2當量)及DIPEA (20.8 µL，0.119 mmol，5當量)。將小瓶密封且在微波反應器中加熱至80℃維持1小時。經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。完成後，添加乙酸(20 µL)且使用0.05% TFA作為添加劑、藉由prepHPLC (方法H)純化所得產物。收集純溶離份，冷凍且凍乾，得到白色固體狀產物。
Boc 保護基脫除 ( 通用方法 8 ) ：將通用方法 7A或 7B所得產物溶解於MeOH (0.01 M)中，向其中添加含4 M HCl之二㗁烷(8當量)。在室溫下攪拌溶液30分鐘。經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。完成後，濃縮溶液，再溶解於DMSO中，且使用TFA作為添加劑、經由prepHPLC (方法G或H)純化。收集純溶離份，冷凍且凍乾，得到白色固體狀產物。
化合物 結構 方法 Boc LC-MS 資料 胺LC-MS 資料 產率 ( 經2 個步驟)
79 7A RT: 1.57 理論值: 864.4 觀測值: 864.7 RT: 1.32 理論值: 764.3 觀測值: 764.4 17% 4.5 mg 0.00406 mmol
80 7A RT: 2.18 理論值: 864.4 觀測值: 864.4 RT: 1.24 理論值: 764.3 觀測值: 764.4 19% 5.0 mg 0.00455 mmol
81 7A RT: 1.79 理論值: 867.4 觀測值: 867.7 RT: 1.55 理論值: 767.3 觀測值: 767.3 18% 4.8 mg 0.00436 mmol
82 7A RT: 1.83 理論值: 867.4 觀測值: 967.4 RT: 1.37 理論值: 767.3 觀測值: 767.3 9% 2.4 mg 0.00216 mmol
83 7B RT: 1.85 理論值: 883.4 觀測值: 883.4 RT: 1.35 理論值: 783.3 觀測值: 783.3 10% 2.8 mg 0.00247 mmol
84 7A RT: 1.69 理論值: 864.4 觀測值: 864.4 RT: 1.18 理論值: 764.3 觀測值: 764.4 5% 1.2 mg 0.00110 mmol
85 7B RT: 1.75 理論值: 894.4 觀測值: 894.5 RT: 1.31 理論值: 794.4 觀測值: 794.4 3% 0.88 mg 0.00077 mmol
86 7B RT: 1.59 理論值: 894.4 觀測值: 894.5 RT: 1.19 理論值: 794.4 觀測值: 794.4 11% 3.1 mg 0.00270 mmol
87 7B RT: 1.70 理論值: 894.4 觀測值: 894.5 RT: 1.38 理論值: 794.4 觀測值: 794.4 13% 3.5 mg 0.00307 mmol
88 7B RT: 1.63 理論值: 880.4 觀測值: 880.5 RT: 1.28 理論值: 780.4 觀測值: 780.4 16% 4.4 mg 0.00391 mmol
89 7B RT: 1.77 理論值: 894.4 觀測值: 894.5 RT: 1.46 理論值: 794.4 觀測值: 794.4 9% 2.4 mg 0.00211 mmol
90 7B RT: 1.70 理論值: 883.4 觀測值: 883.4 RT: 1.30 理論值: 783.3 觀測值: 783.4 17% 4.7 mg 0.00416 mmol
91 7B RT: 1.65 理論值: 880.4 觀測值: 880.5 RT: 1.32 理論值: 780.4 觀測值: 780.4 6% 1.7 mg 0.00153 mmol
92 7B RT: 1.83 理論值: 948.4 觀測值: 948.5 RT: 1.49 理論值: 848.4 觀測值: 848.4 10% 2.7 mg 0.00229 mmol
93 7B RT: 1.74 理論值: 880.4 觀測值: 880.5 RT: 1.37 理論值: 780.4 觀測值: 780.4 22% 5.9 mg 0.00529 mmol
94 7B RT: 1.88 理論值: 911.4 觀測值: 911.5 RT: 1.38 理論值: 811.3 觀測值: 811.4 30% 8.1 mg 0.00703 mmol
95 7B RT: 1.86 理論值: 895.4 觀測值: 895.5 RT: 1.41 理論值: 795.4 觀測值: 795.4 8% 2.1 mg 0.0018 mmol
順丁烯二醯亞胺偶合 ( 通用方法 9 ) ：將得自前一反應的胺(化合物 79至 95)溶解於DMSO (0.01 M)中，向其中添加MP-OSu (2當量)及DIPEA (5當量)。在30℃下攪拌混合物隔夜，且藉由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測。完成後，所得產物使用0.05% TFA作為添加劑、經由prepHPLC (方法G)純化。
化合物 結構 LC-MS 資料[M+H] + 產率
96 RT: 1.38 理論值: 915.4 觀測值: 915.4 68% 3.14 mg 0.0027 mmol
97 RT: 1.65 理論值: 918.4 觀測值: 918.4 62% 3.11 mg 0.0027 mmol
98 RT: 1.42 理論值: 915.4 觀測值: 915.4 84% 4.38 mg 0.0038 mmol
99 RT: 1.47 理論值: 934.3 觀測值: 934.4 31% 0.89 mg 0.0008 mmol
100 RT: 1.50 理論值: 918.4 觀測值: 918.4 53% 1.3 mg 0.0011 mmol
101 RT: 1.35 理論值: 915.4 觀測值: 915.4 86% 5.88 mg 0.0051 mmol
102 RT: 1.45 理論值: 945.4 觀測值: 945.4 40% 0.36 mg 0.0003 mmol
103 RT: 1.37 理論值: 945.4 觀測值: 945.4 41% 1.29 mg 0.0011 mmol
104 RT: 1.67 理論值: 945.4 觀測值: 945.5 52% 1.87 mg 0.0016 mmol
105 RT: 1.48 理論值: 931.4 觀測值: 931.4 88% 4.00 mg 0.0035 mmol
106 RT: 1.61 理論值: 945.4 觀測值: 945.4 31% 0.76 mg 0.0006 mmol
107 RT: 1.45 理論值: 934.3 觀測值: 934.4 51% 2.46 mg 0.0021 mmol
108 RT: 1.49 理論值: 931.4 觀測值: 931.4 53% 0.94 mg 0.0008 mmol
109 RT: 1.83 理論值: 999.4 觀測值: 999.4 51% 1.43 mg 0.0012 mmol
110 RT: 1.50 理論值: 931.4 觀測值: 931.4 63% 3.86 mg 0.0033 mmol
111 RT: 1.50 理論值: 962.4 觀測值: 962.4 40% 3.39 mg 0.0028 mmol
112 RT: 1.59 理論值: 946.4 觀測值: 946.4 31% 0.67 mg 0.0006 mmol
合成(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113). 合成(E)-3-胺基-4-((4-((三級丁氧基羰基)胺基)丁-2-烯-1-基)胺基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯(化合物113a)
將化合物 62a(500 mg，1.26 mmol，1當量)溶解於MeOH (20 mL)及NH 4OH (6 mL)中。緩慢添加含有Na 2S 2O 4(1.10 g，6.32 mmol，5當量)之H 2O (5 mL)且在室溫下攪拌混合物30分鐘。藉由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。完成後，過濾混合物且濃縮。將所得產物再溶解於EtOAc中且用H 2O (×3)洗滌。收集有機物，經MgSO 4乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之化合物 113a(343 mg，0.938 mmol，74%產率)。所得產物不經進一步純化即使用。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 366.2 (理論值), 366.2 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.54 min。 合成(E)-2-胺基-1-(4-((三級丁氧基羰基)胺基)丁-2-烯-1-基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯氫溴酸鹽(化合物113b)
將化合物 113a(343 mg，0.938 mmol，1當量)溶解於MeOH (9.3 mL)中，向其中添加CNBr (3 M於MeCN中，0.374 mL，1.2當量)。在室溫下攪拌反應物18小時，且藉由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測。完成後，濃縮溶液，得到化合物 113b(402 mg，0.853 mmol，91%產率)，其不經進一步純化即使用。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 391.2 (理論值), 391.1 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.51 min。 合成(E)-1-(4-((三級丁氧基羰基)胺基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113c)
在5 mL微波小瓶中，將化合物 113b(402 mg，0.853 mmol，1當量)、1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(394 mg，2.56 mmol，3當量)及HATU (973 mg，2.56 mmol，3當量)溶解於DMA (1.7 mL)中。添加DIPEA (0.74 mL，4.26 mmol，5當量)，且將反應物在微波反應器中加熱至80℃維持1小時。經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。完成後，將反應混合物緩慢添加至冰冷水(300 mL)中，沈澱析出化合物 113c(295 mg，0.560 mmol，66%產率)，其不經進一步純化即使用。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 527.3 (理論值), 527.1 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.30 min。 合成(E)-1-(4-胺基丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113d)
將化合物 113c(319 mg，0.606 mmol，1當量)溶解於MeOH (1 mL)中，向其中添加含HCl之二㗁烷(4 M，1.2 mL，4.85 mmol，8當量)。在室溫下攪拌反應物30分鐘且藉由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測。完成後，濃縮溶液且化合物 113d(280 mg，0.605 mmol，定量產量)不經進一步純化即使用。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 427.2 (理論值), 427.2 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.54 min。 合成(E)-1-(4-((2-(3-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙氧基)-4-胺甲醯基-6-硝基苯基)胺基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113e) 將化合物 113d(280 mg，0.605 mmol，1當量)及化合物 77(305 mg，0.787 mmol，1.3當量)溶解於DMSO (3.0 mL)中，向其中添加DIPEA (0.316 mL，1.82 mmol，3當量)。在80℃下攪拌反應物18小時，且經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測。完成後，添加AcOH (0.30 mL)，且使用0.05% TFA作為添加劑、藉由prepHPLC (方法I)純化產物。收集純溶離份，冷凍且凍乾，得到呈橙色固體狀之化合物 113e(58.6 mg，0.0753 mmol，12%產率)。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 778.3 (理論值), 778.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.88 min。 合成(E)-1-(4-((2-胺基-6-(3-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙氧基)-4-胺甲醯基苯基)胺基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113f)
將化合物 113e(58.6 mg，0.0753 mmol，1當量)溶解於AcOH/DCM之1:1混合物(0.75 mL)中且冷卻至0℃。添加Zn (49.2 mg，0.753 mmol，10當量)且將混合物升溫至室溫，同時攪拌30分鐘。經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。完成後，濃縮溶液且再溶解於DCM中，藉由急驟層析(25g SiO2管柱，0-40% MeOH:NH 4OH (10:1)/DCM)純化，得到化合物 113f(28.3 mg，0.378 mmol，50%產率)。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 748.4 (理論值), 748.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.84 min。 合成(E)-1-(4-(2-胺基-7-(3-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙氧基)-5-胺甲醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113g)
將化合物 113f(28.3 mg，0.378 mmol，1當量)溶解於MeOH (0.38 mL)中，向其中添加CNBr (3 M於MeCN中，15 µL，0.0454 mmol，1.2當量)。在室溫下攪拌反應物18小時，且經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測。完成時，濃縮溶液，得到產物 113g(30.7 mg，0.360 mmol，定量產量)，其不經進一步純化即使用。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 773.4 (理論值), 773.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.53 min。 合成(E)-1-(4-(7-(3-((三級丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙氧基)-5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物H)
在2 mL微波小瓶中，將化合物 113g(30.7 mg，0.0360 mmol，1當量)、1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(22.1 mg，0.144 mmol，4當量)及HATU (54.6 mg，0.144 mmol，4當量)溶解於DMA (0.50 mL)中。添加DIPEA (0.025 mL，0.144 mmol，4當量)，且在微波反應器中、在80℃下加熱反應物1小時。經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。完成後，使用0.05% TFA作為添加劑、經由prepHPLC (方法H)純化使用。收集純溶離份，冷凍且凍乾，得到呈白色固體狀的化合物 113h(6.52 mg，0.0064 mmol，18%產率)。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 909.4 (理論值), 909.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.90 min。 合成(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(3-(甲胺基)丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸甲酯(化合物113i)
將化合物 113h(3.02 mg，0.0030 mmol，1當量)溶解於MeOH (0.30 mL)中，向其中添加含HCl之二㗁烷(4 M，6.00 µL，0.0236 mmol，8當量)。在室溫下攪拌反應物30分鐘，且經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測。完成後，使用0.05% TFA作為添加劑、經由prepHPLC (方法G)純化產物。收集純溶離份，冷凍且凍乾，得到呈白色固體狀的化合物 113i(1.35 mg，0.0013 mmol，44%產率)。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 809.4 (理論值), 809.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.57 min。
將化合物 113i(7.53 mg，0.0085 mmol，1當量)及MP-OSu (4.55 mg，0.0171 mmol，2當量)溶解於DMA (0.854 mL)中且添加DIPEA (42.7 µL，0.0074 mmol，5當量)。在室溫下攪拌反應物18小時且藉由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測。完成後，添加AcOH (42 µL)，且使用0.05% TFA作為添加劑、經由prepHPLC (方法G)純化產物。收集純溶離份，冷凍且凍乾，得到呈白色固體狀之化合物 113(4.43 mg，0.0041 mmol，48%產率)。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 960.4 (理論值), 960.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.79 min。 連接子庫合成(化合物114至124).
醯胺偶合 ( 通用方法 10 ) ：製備化合物 12a(1當量)、HATU (2當量)、DIPEA (5當量)、適當L-胺基酸(2當量)於DMF (0.02 M於 12a中)中之混合物且在室溫下攪拌隔夜。真空移除溶劑，且所得產物不經純化即用於下一步驟中。
Fmoc 保護基脫除 ( 通用方法 11 ) ：將經Fmoc保護之所得胺溶解於含20%哌啶之DMF (1 mL)中且在室溫下攪拌15分鐘。真空移除溶劑且經由製備型HPLC (方法H，5-95% MeCN/含有0.05% TFA之H 2O)純化產物。
化合物 UPLC-MS [M+H] + 產率
RT: 1.83 min 理論值: 907.5 觀測值: 907.5 18.6 mg (58%)
RT:  1.77 理論值: 907.5 觀測值: 907.5 24.9 mg (78%)
RT: 1.76 理論值: 941.5 觀測值: 941.5 13.5 mg (28%)
RT: 2.05 理論值: 937.4 觀測值: 937.5 9.8 mg (35%)
RT: 1.93 理論值: 971.5 觀測值: 971.5 18.6 mg (64%)
RT: 1.93 理論值: 945.5 觀測值: 945.5 19.4 (64%)
RT: 2.05 理論值: 909.4 觀測值: 909.5 24.5 mg (76.4%)
根據 通用方法 9合成含有順丁烯二醯亞胺的藥物-連接子(化合物 121 至 125)。
化合物 UPLC-MS [M+H] + 產率
RT: 2.16 理論值: 1058.5 觀測值: 1058.5 1.5 mg (42%)
RT: 2.00 理論值: 1092.5 觀測值: 1092.5 0.5 mg (21%)
RT: 2.21 理論值: 1088.5 觀測值: 1088.5 1.1 mg (32%)
RT: 1.81 理論值: 1122.5 觀測值: 1122.6 1.1 mg (32%)
RT: 1.79 理論值: 1060.5 觀測值: 1060.5 0.3 mg (8.6%)
(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物126). 合成化合物126a
將化合物 113h(25.44 mg，0.0249 mmol，1當量)溶解於MeOH (166 µL)中。添加1 M LiOH水溶液(200 µL，8當量)且在80℃下攪拌反應物2小時。完成後，在減壓下濃縮溶液且使用0.05% TFA作為添加劑、藉由製備型HPLC (方法H)來純化。收集純溶離份，冷凍且凍乾，得到呈白色固體狀的化合物 126a(7.1 mg，0.0071 mmol，28%產率)。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 895.4 (理論值), 895.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.97 min。 合成化合物126b
依循用於製備化合物 113i的相同程序製備化合物 126b。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 795.4 (理論值), 795.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.40 min。 合成化合物126
依循用於製備化合物 113的相同程序製備化合物 126。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 946.4 (理論值), 946.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.68 min。 合成(E)-(3-((5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-(N-甲基胺磺醯基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(化合物127).
用4-氯-N-甲基-3-硝基苯磺醯胺取代4-氯-3-硝基苯磺醯胺、依循與化合物 25f相同的程序來製備化合物 127。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 914.4 (理論值), 914.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.80 min。 合成(E)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-(N-甲基胺磺醯基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物128). 合成128a
依循用於製備化合物 66b的相同程序製備化合物 128a。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 814.4 (理論值), 814.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.53 min。 合成128
依循用於製備化合物 12的相同程序製備化合物 128。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 965.4 (理論值), 965.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.60 min。 合成S-(1-(3-((3-((5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-((E)-4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物129)
依循通用方法6製備化合物 129。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 1081.4 (理論值), 1081.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.88 min。 合成1-((E)-4-(7-(3-(3-(3-(((R)-2-胺基-2-羧基乙基)硫代)-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)-N-甲基丙胺基)丙氧基)-5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酸(化合物130).
依循通用方法6製備化合物 130。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 1067.4 (理論值), 1067.6 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.49 min。 合成(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基己醯胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物131).
用6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯取代3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯、依循與化合物 12相同的程序製備化合物 131。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 987.5 (理論值), 987.7 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.85 min。 合成S-(1-(6-((3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙基)(甲基)胺基)-6-氧代己基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物132).
依循通用方法6製備化合物 132。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 1108.5 (理論值), 1108.7 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.42 min。 合成(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(N-環丙基-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物133). 合成133a
將 1(10 mg，0.0105 mmol，1當量)、碳酸鉀(7.3 mg，0.0526 mmol，5當量)及N-(3-溴丙基)-N-環丙基-胺基甲酸三級丁酯(0.49 mL於DMF中的9 mg/mL溶液，0.0158 mmol，1.50當量)饋入烘乾的4 mL小瓶中且將起始物質溶解於DMF (0.50 mL)中。反應物在55℃下攪拌隔夜且藉由製備型HPLC (方法B)純化，隨後將其冷凍且凍乾，得到化合物 133a(8.8 mg，0.0077 mmol，73%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 920.45 (理論值), 920.64 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.32 min。 合成133b
將 133a(8.8 mg，0.0077 mmol)及含20% TFA之DCM (100 μL)饋入烘乾的4 mL小瓶中。反應物在室溫下攪拌30分鐘且藉由製備型HPLC (方法B)純化，隨後將其冷凍且凍乾，得到化合物 133b(5.0 mg，0.0043 mmol，56%產率)。UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 820.40 (理論值), 820.49 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.29 min。 合成133
將 133b(3.3 mg，0.0085 mmols，1當量)饋入烘乾的8 mL小瓶中，將其溶解於DMSO (1 mL)中且添加3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯於DMSO (10 mM於DMSO中，0.43 mL，0.0043 mmol，1.5當量)及DIPEA (1.5 μL，0.00851 mmol，3當量)中之溶液。將反應物加熱至30℃隔夜，用乙酸淬滅且藉由製備型HPLC (方法B)純化，隨後冷凍且凍乾化合物，得到 133(1.9 mg，0.00158 mmol，56%產率)。
UPLC-MS (方法D, ESI+): m/z [M + H] += 971.43 (理論值), 971.48 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.99 min。 合成3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)-N-(4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-2-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-1-銨2,2,2-三氟乙酸鹽(化合物134). 合成134a
將(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(二甲胺基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(20 mg，0.0248 mmol，1當量，如先前WO2017/175147第291頁實例39中所述)及三乙酸(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(3-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙醯胺基)-4-(溴甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2H-哌喃-3,4,5-三基酯(60.3 mg，0.0743 mmol，3當量，如先前 Mol Cancer Ther 201615(5), 938-945所述製備)饋入烘乾的8 mL小瓶中且與無水乙腈共沸。向小瓶中添加2-丁酮(2.5 mL)且將溶液加熱至100℃隔夜。化合物直接藉由製備型HPLC (方法B)純化，冷凍且凍乾，得到 134a(11.3 mg，0.0070 mmol，28%產率)。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] +=1538.64 (理論值), 1538.83 (觀測值)。HPLC滯留時間：2.55 min。 合成134b
將 134a(4.5 mg，0.0094 mmol，1當量)饋入烘乾的4 mL小瓶中且溶解於無水MeOH (0.5 mL)中。將小瓶在乙腈/乾冰浴中、在-40℃下冷卻且添加0.5 M NaOMe (19 μL，0.0094 mmol，1當量)。攪拌反應物1小時，隨後將其升溫至室溫且添加LiOH (1 M於H 2O中，31 μL，0.031 mmols，3當量)。在室溫下攪拌反應物1小時且接著直接藉由製備型HPLC (方法B)純化，接著冷凍且凍乾，得到 134b(5.8 mg，0.0049 mmol，48%產率)。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 1176.52 (理論值), 1176.76 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.29 min。 合成134
將 134b(5.8 mg，0.0038 mmols，1當量)添加至烘乾的4 mL小瓶中且溶解於DMSO (1 mL)中且接著添加MP-OSu (10 mM於DMSO中，0.57 mL，0.0057 mL，1.5當量)及DIPEA (2 μL，0.0115 mmol，3當量)。攪拌溶液30分鐘，用乙酸淬滅且藉由製備型HPLC (方法B)純化，接著冷凍且凍乾，得到 134(3.6 mg，0.0023 mmol，61%產率)。UPLC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 1327.55 (理論值), 1327.77  (觀測值)。HPLC滯留時間：1.38 min。 合成(E)-7-(2-(氮雜環丁-3-基)乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物135) 合成135a
向 25a(1.61 g，4.18 mmol，1當量)於MeOH (63 mL)及NH 4OH水溶液(21 mL)中之溶液中添加Na 2S 2O 4水溶液(1 M，21 mL，21 mmol，5當量)。在30℃下攪拌混合物1小時，且藉由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測反應。完成後，溶液經矽藻土過濾且用MeOH洗滌。濃縮濾液且藉由急驟層析(乾燥負載於矽藻土上，Sfar HC Duo SiO 2管柱，10:1 MeOH:NH 4OH梯度，於DCM中)純化產物，產生 135a(774 mg，2.17 mmol，52%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 357.2 (理論值), 357.3 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.44 min。 合成135b
向化合物 135a(774 mg，2.17 mmol，1當量)於MeOH (4 mL)中之溶液中添加含溴化氰之MeCN (3 M，1.5 mL，4.35 mmol，2當量)。將溶液在30℃下攪拌18小時且經由UPLC-MS (方法E，ESI+)監測。完成後，真空移除溶劑，產生 135b(1.0 g，2.25 mmol，定量產量)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 382.2 (理論值), 382.2 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.12 min。 合成135c
將 135b(1.0 g，2.25 mmol，1當量)於DMA (11 mL)中之溶液饋入微波小瓶中，向其中添加化合物 8(1.0 g，6.74 mmol，3當量)、HATU (2.6 g，6.74 mmol，3當量)及DIPEA (1.2 mL，6.74 mmol，3當量)。在微波反應器中，將此混合物加熱至80℃維持1小時。完成後，藉由用冷水沈澱分離出 135c(1.0 g，1.93 mmol，86%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 518.2 (理論值), 518.3 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.60 min。 合成135d
向 135c(1.0 g，1.93 mmol，1當量)於MeOH (3.3 mL)中之溶液中添加含HCl之二㗁烷(4 M，5.3 mL，21 mmol，8當量)。在30℃下攪拌混合物1小時。完成後，真空移除溶劑且 135d(1.2 g，2.65 mmol，定量產量)不經進一步純化即使用。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 418.2 (理論值), 418.2 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.09 min。 合成135e
在5 mL微波小瓶中，將化合物 135d(200 mg，0.408 mmol，1當量)及 26a(245 mg，0.612 mmol，1.5當量)溶解於正丁醇(2.0 mL)中，向其中添加Na 2CO 3(130 mg，1.22 mmol，3當量)及DIPEA (0.36 mL，2.04 mmol，5當量)。反應物經由微波反應器、在140℃下加熱3小時。過濾所得產物且用MeOH及DCM洗滌。濃縮濾液且經由急驟層析(無水負載於矽藻土上，Sfar HC Duo SiO 2管柱，10:1 MeOH:NH 4OH於DCM中的梯度)純化，產生 135e(51 mg，0.0651 mmol，16%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 781.3 (理論值), 781.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.72 min。 合成135f
使用 135e(51 mg，0.0651 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135a相同的程序製備化合物 135f(30 mg，0.0402 mmol，62%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 751.3 (理論值), 751.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.46 min。 合成135g
使用 135f(30 mg，0.0402 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135b相同的程序製備化合物 135g(34 mg，00394 mmol，定量產量)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 776.3 (理論值), 776.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.54 min。 合成135h
使用 135g(17 mg，0.0197 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135c相同的程序製備化合物 135h。完成後，藉由製備型HPLC (方法H)純化產物。收集純溶離份，冷凍且凍乾，得到呈白色粉末狀之 135h(2.34 mg，0.0021 mmol，10%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 912.4 (理論值), 912.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.65 min。 合成135
將化合物 135h(2.34 mg，0.0021 mmol，1當量)溶解於MeOH (0.21 mL)中且添加含HCl之二㗁烷(4 M，4.1 µL，0.0164 mmol，8當量)。將溶液加熱至40℃維持1小時。接著真空移除溶劑且 135(1.86 mg，0.0020 mmol，定量產量)不經進一步純化即使用。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 812.3 (理論值), 812.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.26 min。 合成(E)-7-(2-(氮雜環丁-3-基)乙氧基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物136) 合成136a
使用 135g(17 mg，0.0197 mmol，1當量)及1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酸作為起始物質，使用與 135h相同的程序製備化合物 136a(3.15 mg，0.0028 mmol，14%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 898.4 (理論值), 898.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.62 min。 合成136
使用 136a(3.15 mg，0.0028 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135相同的程序製備化合物 136(2.09 mg，0.0023 mmol，82%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 798.3 (理論值), 798.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.24 min。 合成(E)-7-(3-(氮雜環丁-3-基氧基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物137) 合成137a
使用 135d(200 mg，0.408 mmol，1當量)及 27a(263 mg，0.612 mmol，1.5當量)作為起始材料，使用與 135e相同的程序製備化合物 137a(72 mg，0.0893 mmol，22%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 811.3 (理論值), 811.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.72 min。 合成137b
使用 137a(72 mg，0.0893 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135a相同的方法製備化合物 137b(30 mg，0.0386 mmol，43%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 781.3 (理論值), 781.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.46 min。 合成137c
使用 137b(30 mg，0.03896 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135b相同的程序製備化合物 137c(34 mg，0.0387 mmol，定量產量)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 806.3 (理論值), 806.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.53 min。 合成137d
使用 137c(17 mg，0.0194 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135h相同的程序製備化合物 137d(4.21 mg，0.0036 mmol，19%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 942.4 (理論值), 942.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.65 min。 合成化合物137
使用 137d(4.21 mg，0.0036 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135相同的程序製備化合物 137(3.35 mg，0.0035 mmol，定量產量)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 842.3 (理論值), 842.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.29 min。 合成(E)-7-(3-(氮雜環丁-3-基氧基)丙氧基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物138) 合成138a
使用 137c(17 mg，0.0197 mmol，1當量)及1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酸作為起始物質，使用與 135h相同的程序製備化合物 138a(3.00 mg，0.0026 mmol，13%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 928.4 (理論值), 928.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.62 min。 合成138
使用 138a(3.00 mg，0.0026 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135相同的程序製備化合物 138(2.35 mg，0.0025 mmol，定量產量)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 828.3 (理論值), 828.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.26 min。 合成(E)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-(甲胺基)丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物139) 合成139a
使用 135d(250 mg，0.551 mmol，1當量)及 77(320 mg，0.826 mmol，1.5當量)作為起始物質，使用與 135e相同的程序製備化合物 139a(125 mg，0.162 mmol，29%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 769.3 (理論值), 769.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.67 min。 合成139b
使用 139a(125 mg，0.162 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135a相同的程序製備化合物 139b(51 mg，0.0686 mmol，42%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 739.3 (理論值), 739.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.45 min。 合成139c
使用 139b(51 mg，0.0686 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135b相同的程序製備化合物 139c(57 mg，0.0670 mmol，定量產量)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 764.3 (理論值), 764.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.31 min。 合成139d
使用 139c(57 mg，0.0670 mmol，1當量)及1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲酸作為起始物質，依循與 135h相同的程序製備化合物 139d(34 mg，0.0303 mmol，45%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 886.4 (理論值), 886.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.61 min。 合成139
使用 139d(34 mg，0.0303 mmol，1當量)作為起始物質、使用與 135相同的程序製備化合物 139(27 mg，0.0291 mmol，定量產量)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 786.3 (理論值), 786.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.23 min。 合成(E)-7-(2-(氮雜環丁-3-基)乙氧基)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物140) 合成140a
使用 26a(250 mg，0.625 mmol，1當量)及 78d(420 mg，0.938 mmol，1.5當量)作為起始物質，使用與 135e相同的程序製備化合物 140a(380 mg，0.490 mmol，78%產率)。產物在冷水中沈澱且未經進一步純化即使用。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 775.3 (理論值), 775.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.66 min。 合成140b
使用 140a(380 mg，0.490 mmol，1當量)作為起始物質、使用與 135a相同的程序製備化合物 140b(193 mg，0.260 mmol，53%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 745.4 (理論值), 745.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.44 min。 合成140c
使用 140b(193 mg，0.260 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135b相同的程序製備化合物 140c(212 mg，0.249 mmol，定量產量)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 770.4 (理論值), 770.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.60 min。 合成140d
使用 140c(106 mg，0.124 mmol，1當量)作為起始物質、使用與 135h相同的程序製備化合物 140d(38 mg，0.0339 mmol，27%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 892.4 (理論值), 892.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.59 min。 合成140
使用 140d(38 mg，0.0339 mmol，1當量)作為起始物質、使用與 135相同的程序製備化合物 140(30 mg，0.0334 mmol，定量產量)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 792.4 (理論值), 792.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.28 min。 合成(E)-N-(7-(2-(氮雜環丁-3-基)乙氧基)-5-胺甲醯基-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-4-乙基-2-甲基噁唑-5-甲醯胺(化合物141) 合成141a
使用 140c(106 mg，0.124 mmol，1當量)及4-乙基-2-甲基-㗁唑-5-甲酸作為起始材料、使用與 135h相同的程序製備化合物 141a(27 mg，0.0237 mmol，19%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 907.4 (理論值), 907.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.57 min。 合成141
使用 141a(27 mg，0.0237 mmol，1當量)作為起始物質、使用與 135相同的程序製備化合物 141(21 mg，0.0230 mmol，定量產量)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 807.4 (理論值), 807.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.26 min。 合成(E)-7-(3-(氮雜環丁-3-基氧基)丙氧基)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物142) 合成142a
使用 27a(250 mg，0.582 mmol，1當量)及 78d(391 mg，0.872 mmol，1.5當量)作為起始物質，使用與 135e相同的程序製備化合物 142a。產物經由冷水沈澱且未經進一步純化即使用。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 805.4 (理論值), 805.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.66 min。 合成142b
使用 142a(548 mg，0.681 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135a相同的程序製備化合物 142b(193 mg，0.250 mmol，經2個步驟的產率37%)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 775.4 (理論值), 775.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.50 min。 合成142c
使用 142b(193 mg，0.260 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135b相同的程序製備化合物 142c(164 mg，0.186 mmol，75%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 800.4 (理論值), 800.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.33 min。 合成142d
使用 142c(48 mg，0.373 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135h相同的程序製備化合物 142d(40 mg，0.0345 mmol，37%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 922.4 (理論值), 922.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.58 min。 合成142
使用 142d(40 mg，0.0345 mmol，1當量)作為起始物質，使用與 135相同的程序製備化合物 142(32 mg，0.0323 mmol，定量產量)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 822.4 (理論值), 822.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.29 min。 合成(E)-N-(7-(3-(氮雜環丁-3-基氧基)丙氧基)-5-胺甲醯基-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-4-乙基-2-甲基噁唑-5-甲醯胺(化合物143) 合成143a
使用 142c(82 mg，0.0931 mmol，1當量)及4-乙基-2-甲基-㗁唑-5-甲酸作為起始物質，使用與 135h相同的程序製備化合物 143a(31 mg，0.0263 mmol，28%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 937.4 (理論值), 937.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.56 min。 合成143
使用 141a(31 mg，0.0263 mmol，1當量)作為起始物質、使用與 135相同的程序製備化合物 143(25 mg，0.0261 mmol，定量產量)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 837.4 (理論值), 837.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.29 min。 合成(E)-7-(2-(1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)乙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物144)
使用化合物 135(1.86 mg，0.0020 mmol，1當量)作為起始物質，根據通用方法9製備化合物 144之x2 TFA鹽(0.59 mg，0.0005 mmol，24%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 963.4 (理論值), 963.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.44 min。 合成(E)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(2-(1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)乙氧基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物145)
使用化合物 136(2.09 mg，0.0023 mmol，1當量)作為起始物質，根據通用方法9製備化合物 145之x2 TFA鹽(0.31 mg，0.0003 mmol，12%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 949.3 (理論值), 949.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.40 min。 合成(E)-7-(3-((1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)氧基)丙氧基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物146)
使用化合物 137(3.35 mg，0.0035 mmol，1當量)作為起始物質，根據通用方法9製備化合物 146之x2 TFA鹽(0.92 mg，0.0008 mmol，21%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 993.4 (理論值), 993.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.43 min。 合成(E)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(3-((1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)氧基)丙氧基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物147)
使用化合物 136(2.83 mg，0.0024 mmol，1當量)作為起始物質，根據通用方法9製備化合物 147之x2 TFA鹽(0.36 mg，0.0003 mmol，12%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 979.4 (理論值), 979.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.41 min。 合成(E)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(3-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丙胺基)丙氧基)-1-(4-(2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-5-胺磺醯基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物148)
使用化合物 139作為起始物質，根據通用方法9製備化合物 148之x2 TFA鹽(15 mg，0.0129 mmol，44%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 937.3 (理論值), 937.4 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.42 min。 合成(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(2-(1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)乙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物149)
使用化合物 140(30 mg，0.0334 mmol，1當量)作為起始物質，根據通用方法9製備化合物 149之x2 TFA鹽(16 mg，0.0136 mmol，41%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 943.4 (理論值), 943.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.41 min。 合成(E)-N-(5-胺甲醯基-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(2-(1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)乙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-4-乙基-2-甲基㗁唑-5-甲醯胺(化合物150)
使用化合物 141(21 mg，0.0230 mmol，1當量)作為起始物質，根據通用方法9製備化合物 150之x2 TFA鹽(15 mg，0.0123 mmol，53%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 943.4 (理論值), 943.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.41 min。 合成(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(3-((1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)氧基)丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺(化合物151)
使用化合物 142(30 mg，0.0323 mmol，1當量)作為起始物質，根據通用方法9製備化合物 151之x2 TFA鹽(22 mg，0.0182 mmol，56%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 973.4 (理論值), 973.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.42 min。 合成(E)-N-(5-胺甲醯基-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-7-(3-((1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)氮雜環丁-3-基)氧基)丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-4-乙基-2-甲基㗁唑-5-甲醯胺(化合物152)
使用化合物 143(37 mg，0.0388 mmol，1當量)作為起始物質，根據通用方法9製備化合物 152之x2 TFA鹽(20 mg，0.0168 mmol，43%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 988.4 (理論值), 988.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.40 min。 合成S-(1-(3-(3-(2-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基))氧基)乙基)氮雜環丁-1-基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物153)
向化合物 149之溶液(10 mM於DMSO中，0.42 mL，0.0042 mmol，1當量)中添加L-半胱胺酸(0.1 M H 2O，63 µL，0.063 mmol，1.5當量)。在30℃下攪拌反應物1小時且藉由UPLC-MS監測。完成後，反應混合物直接藉由製備型HPLC (方法G)純化。收集純溶離份，冷凍且凍乾，得到化合物 153(2.17 mg，0.0015 mmol，產率36%)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 1079.4 (理論值), 1079.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.28 min。 合成S-(1-(3-(3-(2-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(4-乙基-2-甲基噁唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基))氧基)乙基)氮雜環丁-1-基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物154)
使用化合物 145(10 mM於DMSO中，0.43 mL，0.0043 mmol，1當量)作為起始物質，使用與化合物 153相同的程序製備化合物 150(2.35 mg，0.0017 mmol，39%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 1064.4 (理論值), 1064.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.29 min。 合成S-(1-(3-(3-(3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙氧基)氮雜環丁-1-基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物155)
使用化合物 151(10 mM於DMSO中，0.41 mL，0.0041 mmol，1當量)作為起始物質，使用與化合物 153相同的程序製備化合物 155(2.34 mg，0.0016 mmol，39%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] += 1109.4 (理論值), 1109.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.30 min。 合成S-(1-(3-(3-(3-((5-胺甲醯基-1-((E)-4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(4-乙基-2-甲基噁唑-5-甲醯胺基)-1H-苯并[d]咪唑-7-基)氧基)丙氧基)氮雜環丁-1-基)-3-側氧基丙基)-2,5-二側氧基吡咯啶-3-基)-L-半胱胺酸(化合物156)
使用化合物 152(10 mM於DMSO中，0.42 mL，0.0042 mmol，1當量)作為起始物質，使用與化合物 153相同的程序製備化合物 156(2.31 mg，0.0016 mmol，39%產率)。LC-MS (方法E, ESI+): m/z [M + H] +=1094.4 (理論值), 1094.5 (觀測值)。HPLC滯留時間：1.32 min。 用於製備ADC的通用程序：
如先前所述( Methods Enzymol . 2012, 502, 123-138)製備ADC。簡言之，藉由使用低於化學計算量之參(2-羧基乙基)膦(TCEP)使抗體鏈間二硫鍵部分還原來製備DAR (藥物/抗體比率)結合物。將TCEP於磷酸鹽緩衝生理鹽水(PBS，Gibco，PN 10010023)及1 M EDTA中以約2.2莫耳當量(相對於抗體(TCEP:抗體))添加至預溫熱(37℃)的抗體儲備溶液中。在37℃下培育還原反應混合物約60分鐘。部分還原之抗體與順丁烯二醯亞胺藥物-連接子的結合在室溫下如下進行：用丙二醇稀釋抗體以改善藥物溶解度且以還原的半胱胺酸計添加1.2莫耳當量之藥物-連接子。添加丙二醇以達成40%之最終共溶劑濃度(包括添加DMSO藥物儲備液)；將一半的丙二醇添加至抗體中且在混合之前將一半添加至藥物儲備液中以起始結合反應。允許結合反應在室溫下繼續進行30分鐘，或直至可利用的所有抗體半胱胺酸硫醇已藉由如所指示的藥物-連接子烷基化(根據逆相HPLC (方法G))。藉由在室溫下將反應混合物與100%莫耳過量的QuadraSil® MP樹脂(Millipore Sigma，PN 679526)一起培育30分鐘來達成過量藥物-連接子的移除。使用預裝填的PD-10管柱(GE Life Sciences，PN 17043501)，根據製造商說明書，藉由凝膠過濾層析來達成在調配緩衝液中的緩衝液交換(PBS，Gibco，PN 10010023)。使用30千道爾頓的分子量截止值離心過濾器(Millipore Sigma，PN Z717185)，藉由對含有ADC於調配緩衝液中的反應混合物進行重複透濾(5至10次)來達成殘餘藥物-連接子的進一步移除，直至剩餘的游離藥物-連接子偵測不到，如HPLC分析(方法K)所指示。 用於表徵ADC的通用程序：
使用以下方法表徵ADC：
方法I：使用Waters ACQUITY UPLC系統及Acquity UPLC蛋白質BEH SEC管柱(200 Å，1.7 µm，4.6×150 mm，PN：186005225)進行尺寸排阻層析(SEC)。所用移動相為7.5%異丙醇之92.5%水溶液(25 mM磷酸鈉、350 mM NaCl，pH 6.8)，v/v。在環境溫度下，以0.4 mL/min之流量進行等度溶離。
方法J：在Waters 2695 HPLC系統及Agilent PLRP-S管柱(1000 Å，8 µm 50x2.1 mm，PN：PL1912-1802)上進行逆相層析(RP-HPLC)。分析之前，用10 mM DTT處理ADC以將二硫鍵還原。在80℃下，使用移動相A (0.05% (v/v) TFA/水)及移動相B (0.01% (v/v) TFA/MeCN)，使用25-44% B歷經12.5分鐘的梯度進行樣品溶離。基於在UV 280 nm量測的峰面積積分，計算藥物/抗體比率(DAR)。 莫耳比計算
使用下述方程式計算根據抗體輕鏈(MR DLC)或抗體重鏈(MR DHC)的平均藥物載量： 其中 MR DLC= 平均藥物/輕鏈比率 LC%面積 n= 第 n種負載輕鏈物種之面積% 僅基於輕鏈峰值的面積% MR n= 第 n種負載物種之藥物/抗體比率 以及 其中 MR DHC= 平均藥物/重鏈比率 HC%面積 n= 第 n種負載重鏈物種之面積% 僅基於重鏈峰值的面積% MR n= 第 n種負載物種之藥物/抗體比率
使用下述方程式計算根據抗體的平均藥物負載(MR D)： MR D=   2 x (MR DLC+ MR DHC) 其中 MR D= 平均藥物/抗體比率 MR DLC= 平均藥物/輕鏈比率 MR DHC= 平均藥物/重鏈比率
方法K：在使用ACQUITY UPLC BEH C18管柱(130 Å，1.7 µm，2.1 mm X 50 mm，PN：186002350)的Waters ACQUITY UPLC系統上量測未結合的殘餘藥物連接子。用2個體積的冰冷MeOH處理ADC樣品以誘導沈澱且藉由離心進行集結。將含有未結合之任何殘餘藥物-連接子的上清液注射於系統上。在50℃下，使用移動相A (0.05% (v/v) TFA/水)及移動相B (0.01% (v/v) TFA/MeCN)，使用1-95% B歷經2分鐘的梯度進行樣品溶離。在215 nm進行偵測且使用相應連接子之外部標準達成殘餘藥物-連接子化合物之定量。 實例 2 ： STING 促效劑及相應 ADC 的活體外效力評價 活體外生物分析的實驗程序 THP1 - Dual™ 細胞報導體分析
使用含有IRF-Lucia螢光素酶報導體的THP1-Dual™細胞(InvivoGen PN：thpd-nfis [亦稱為THP1雙重報導細胞])評價化合物及ADC之效力。在含有10%熱滅活胎牛血清、Pen-Strep (100 U/mL-100 μg/mL，Gibco)、HEPES (10 mM，Gibco)、丙酮酸鈉(1 mM，Gibco)、MEM非必要胺基酸(1x，Gibco)、GlutaMAX (1x，Gibco)及β-巰基乙醇(55 μM，Gibco)的RPMI-1640 (Gibco)中培養細胞。將細胞與指定濃度之化合物或ADC一起、以200 μL、以每孔約100,000個細胞接種於經組織培養物處理之96孔平底透明聚苯乙烯盤(Corning Costar #3596)中。在接種後第24小時(化合物)或第48小時(ADC)，收集上清液用於報導體分析，或如所指示。為了量測Lucia報導體信號，將10 μL上清液與40 μL QUANTI-Luc™冷光分析試劑(Invivogen PN：rep-qlc1)合併於經組織培養物處理之96孔透明平底黑色聚苯乙烯盤(Corning Costar #3603)中且在Perkin Elmer Envision讀盤器上讀取。 骨髓源巨噬細胞分析
使用來自野生型小鼠(C57BL/6J，Jackson Laboratory #000664)或缺乏STING之小鼠(C57BL/6J- Sting1 gt /J，Jackson Laboratory #017537)的經培養骨髓源巨噬細胞評價本文所述化合物的效力。簡言之，在含有10%熱滅活胎牛血清、Pen-Strep (100 U/mL-100 μg/mL，Gibco)、HEPES (10 mM，Gibco)、丙酮酸鈉(1 mM，Gibco)、GlutaMAX (1x，Gibco)、β-巰基乙醇(55 μM，Gibco)及20至40 ng/mL鼠類M-CSF (Peprotech，#315-02)的RPMI-1640 (Gibco)中培養小鼠骨髓細胞7至10天。將細胞與指定濃度之化合物一起、以200 μL、以每孔約100,000個細胞接種於經組織培養物處理之96孔平底透明聚苯乙烯盤(Corning Costar #3596)中。第24小時收集上清液且使用Milliplex MAP小鼠細胞介素/趨化因子磁珠成套分析套組(MCYTOMAG-70k定製11重套組：MCP1、MIP1α、MIP1β、TNFα、IFNγ、IL-10、IL-12p70、IL-1β、IL-6、IP10、RANTES)量測細胞介素且使用Luminex™ MAGPIX™儀器系統加以分析。 旁觀者活性分析
使用Renca癌細胞及含有IRF-Lucia螢光素酶報導體的THP1-Dual™細胞(InvivoGen)評價ADC的旁觀者活性。在含有10%熱滅活胎牛血清、Pen-Strep (100 U/ml-100 μg/ml，Gibco)、HEPES (10 mM，Gibco)、丙酮酸鈉(1 mM，Gibco)、MEM非必要胺基酸(1x，Gibco)、GlutaMAX (1x，Gibco)及β-巰基乙醇(55 μM，Gibco)的RPMI-1640 (Gibco)中培養細胞。將Renca細胞於100 µL中以每孔50,000個細胞接種於經組織培養物處理之96孔平底透明聚苯乙烯盤(Corning Costar #3596)中。在初始接種後的當天，將50,000個THP1-Dual™細胞與指定濃度的ADC一起以200 µL的總體積添加至各孔中。THP1-Dual™細胞添加後第48小時收集上清液。為了量測Lucia報導體信號，將10 μL上清液與40 μL QUANTI-Luc™冷光分析試劑(Invivogen PN：rep-qlc1)合併於經組織培養物處理之96孔透明平底黑色聚苯乙烯盤(Corning Costar PN：3603)中且在Perkin Elmer Envision讀盤器上讀取。在一些實驗中，如上所述接種經工程改造以表現鼠類蛋白質的HEK 293T細胞，而非Renca腫瘤細胞，該鼠類蛋白質典型地由免疫細胞表現(目標抗原C - 免疫細胞抗原)。 針對癌細胞之細胞毒性分析
對癌細胞進行計數且於40 µL完全生長培養基中接種於經組織培養物處理之384孔白壁盤(Corning)中。將細胞培養盤在37℃及5% CO 2下培育隔夜以允許細胞達到平衡。含有ADC或游離藥物的儲備溶液於RPMI-1640 + 20%胎牛血清(FBS)中連續稀釋。接著將10 μL各濃度雙重複添加至各細胞培養盤中。接著在37℃及5% CO 2下培育細胞96小時，隨後自培育箱移出細胞培養盤且允許30分鐘冷卻至室溫，隨後分析。根據Promega的方案製備CellTiter-Glo®冷光分析試劑(Promega Corporation, Madison, WI)。使用Formulatrix Tempest液體處置器(Formulatrix)將10 μL CellTiter-Glo®添加至分析盤中且將分析盤在室溫下避光30分鐘。使用EnVision多模讀盤器(Perkin Elmer, Waltham, MA)量測樣品的冷光。在Graphpad Prism (San Diego, CA)中使用非線性4參數曲線擬合模型[Y = 最小值 + (最大值-最小值)/(1+10^((LogEC50-X)*Hill斜率)]分析原始資料。結果作為X50值報告，其定義為將細胞存活率降低至50%所需之ADC或游離藥物的濃度。 SU - DHL - 1 分析
使用SU-DHL-1淋巴瘤細胞評價ADC效力。在含有10%熱滅活胎牛血清、Pen-Strep (100 U/mL-100 μg/mL，Gibco)、HEPES (10 mM，Gibco)、丙酮酸鈉(1 mM，Gibco)、MEM非必要胺基酸(1x，Gibco)、GlutaMAX (1x，Gibco)及β-巰基乙醇(55 μM，Gibco)的RPMI-1640 (Gibco)中培養細胞。將細胞與指定濃度之化合物或ADC一起、以200 μL、以每孔約100,000個細胞接種於經組織培養物處理之96孔平底透明聚苯乙烯盤(Corning Costar #3596)中。48小時之後，收集50 µL上清液且使用MILLIPLEX MAP人類細胞介素/趨化因子磁珠集合(HCYTOMAG-60K定製8重套組：IL-6、IL-8、MCP1、TNFα、GRO、IP-10、MIP1α及MIP1β)評價細胞介素產生。藉由將100 µL CellTiter-Glo®冷光分析試劑(Promega Corporation, Madison, WI)添加至培養盤中之剩餘150 µL細胞中且將混合物轉移至96孔黑色壁培養盤(Corning Costar #3603)中來評價細胞存活率。培養盤在室溫下避光30分鐘，且使用EnVision多模讀盤器(Perkin Elmer, Waltham, MA)量測樣品的冷光。 腫瘤 / PBMC 共培養分析
根據製造商說明書用Incucyte® Cytolight紅色慢病毒轉染腫瘤細胞且在嘌呤黴素選擇下產生表現mKate2 (紅色螢光蛋白，RFP)的穩定多株細胞群。藉由將RFP+腫瘤細胞(MDA-MB-468，HCT15，HT-1080)以多種密度(1×10 4或2.5×10 3)接種於96孔平底盤(Corning #3603)中且培養隔夜來進行即時細胞殺滅分析。次日，以10:1或40:1 E:T比率添加自健康供者分離的PBMC且用指定的小分子藥物或ADC處理培養物。使用IncuCyte S3即時細胞分析系統(Sartorius)，以10倍放大倍率進行自動化細胞成像。每孔使用四個視野，以約2至3小時間隔擷取影像，歷時3至4天。使用IncuCyte®分析軟體分析資料。執行面積(µm 2)及紅色平均強度(RCU)過濾臨限值以移除碎片及紅色螢光異常。藉由計算紅色螢光腫瘤細胞在第72或96小時的匯合度(相對於t=0標準化)來定量腫瘤細胞殺滅。將未結合之化合物 16、化合物 12mAb結合物或未結合之mAb的莫耳濃度(相對於有效負載當量濃度調整)作圖。
為了測定STING路徑活化且定量T細胞數目，串聯建立相同的腫瘤-免疫細胞(MDA-MB-468腫瘤細胞及PBMC)共培養。處理後第48小時，收集上清液且藉由ELISA (ThermoFisher，#CHC2363)評價CXCL10/IP-10產生。使用SpectraMax M3 (Molecular Devices)微定量盤讀取器量測光學密度(450 nm)。收集上清液之後，將細胞解離(TrypLE Express, Gibco)且使用LIVE/DEAD可固定近紅外死細胞染色套組(ThermoFisher, L34994)、根據製造商說明書將死細胞染色。存活率染色之後，使用人類TruStain FcX (Biolegend, 422302)阻斷Fc-γ受體。細胞用細胞染色緩衝液(BD, 554657)洗滌1次且隨後用抗體染色(30分鐘，在4℃)以便偵測表面抗原。使用以下抗體：CD8 V450 (殖株RPA-T8, BD)、CD14 BV650 (殖株M5E2, Biolegend)、CD19 SB702 (殖株HIB19, ThermoFisher)、CD4 FITC (殖株OKT4, Tonbo)、CD56 PerCP-eF710 (殖株TULY56, ThermoFisher)、CD69 PE-Cy7 (殖株FN50, Biolegend)、CD86 APC (殖株IT2.2, ThermoFisher)及HLA-DR A700 (殖株LN3, ThermoFisher)。最終洗滌之後，將細胞集結粒再懸浮於200 µL染色緩衝液中且在NXT Attune流式細胞儀(ThermoFisher)上加以分析。使用FlowJo軟體分析流式細胞術資料且藉由對RFP-/存活/CD19-/CD14-CD56-設門內的CD8+細胞事件總數目進行計數來定量CD8+ T細胞。
在含有10%熱滅活胎牛血清、Pen-Strep (100 U/mL-100 mg/mL，Gibco)、HEPES (10 mM，Gibco)、丙酮酸鈉(1 mM，Gibco)、MEM非必要胺基酸(1x，Gibco)、GlutaMAX (1x，Gibco)及β-巰基乙醇(55 μM，Gibco)的RPMI-1640 (Gibco)中培養MDA-MB-468及HCT15腫瘤細胞。在含有10%熱滅活胎牛血清、Pen-Strep (100 U/mL-100 mg/mL，Gibco)、HEPES (10 mM，Gibco)、丙酮酸鈉(1 mM，Gibco)、MEM非必要胺基酸(1x，Gibco)、GlutaMAX (1x，Gibco)及β-巰基乙醇(55 μM，Gibco)的DMEM (Gibco)中培養HT-1080細胞。 活體外生物分析結果
評估STING促效劑化合物活化THP1-Dual TM報導體細胞(一種人類單核球性細胞株，其中I型干擾素(IRF)信號傳導可經由分泌的螢光素酶報導蛋白(Lucia)監測)的能力。THP1-Dual TM細胞用濃度增加的促效劑處理24小時，接著收集上清液且使用QUANTI-Luc™冷光分析試劑定量Lucia報導體信號。化合物 A及化合物 1比(2',3')-Rp,Rpc-diAMPS二鈉(化合物 B )顯著更強且分別以3 nM及5 nM的EC50值活化Lucia報導體。化合物 12a不比化合物 1及化合物 A強( 圖 1，EC 50值為21 nM)。化合物 1與 12a當用於刺激野生型(WT)鼠骨髓源巨噬細胞時均誘導細胞介素產生，但用於刺激缺乏STING之鼠骨髓源巨噬細胞時不能誘導細胞介素產生，表明此等化合物的活性具有STING依賴性( 圖 2)。
使STING促效劑化合物與靶向及非結合抗體結合且評估所得ADC活化THP1-Dual TM報導體細胞的能力。化合物 1係使用基於葡萄糖苷酸的可裂解連接子( 11)結合。化合物 12a係使用不可裂解的連接子、基於肽之可裂解連接子及基於葡萄糖苷酸之可裂解連接子(分別為化合物 12 、 14及 13)結合。THP1-Dual TM細胞用濃度增加的含有非結合或靶向mAb與化合物結合之ADC處理48小時，接著收集上清液，且使用QUANTI-Luc™冷光分析試劑定量Lucia報導體信號。儘管化合物 12a作為游離藥物時不比化合物 1強 ( 圖 1)，但化合物 12a當與靶向mAb經由可裂解葡萄糖苷酸連接子( 13)結合時比類似化合物 1結合物( 11)更強。另外，化合物 12a當與靶向mAb經由不可裂解連接子( 12)結合時比可裂解連接子 13或 14更強( 圖 3)，證明STING促效劑小分子與抗體的結合可增強其效力。
評估化合物 12及在mAb結合物於內溶酶體中裂解後釋放的半胱胺酸加合物(化合物 16)活化THP1-Dual TM報導體細胞的能力。THP1-Dual TM細胞用濃度增加的化合物處理24小時，接著收集上清液且使用QUANTI-Luc™冷光分析試劑定量Lucia報導體信號。化合物 12與化合物 16均具有活性，其EC50值(分別為37 nM及34 nM)類似於母游離藥物 12a(21 nM， 圖 4及 圖 1)。
亦評價呈游離藥物形式及當與靶向抗體使用不可裂解連接子( 15)結合時的化合物 15b。THP1-Dual TM細胞用濃度增加的游離藥物或含有非結合或靶向mAb與化合物結合之ADC處理48小時，接著收集上清液，且使用QUANTI-Luc™冷光分析試劑定量Lucia報導體信號。化合物 15b比 12a更強，而當與相同靶向mAb連接時， 15之ADC的效力類似於 12之ADC的效力( 圖 5)。
化合物 12a使用多種不可裂解連接子( 12、 17、 19- 24 )與靶向及非結合抗體結合且評估所得ADC活化THP1-Dual TM報導體細胞的能力。含有靶向mAb的所有結合物皆具有EC50值在約1.7至7.3 ng/mL範圍內的活性( 表 1)。吾等亦評價此等連接子當與結合腫瘤抗原A或抗原B (CD30)之靶向mAb結合時直接殺滅癌細胞的能力。所有結合物皆對癌細胞株亞群具有活性(不論目標抗原表現)，表明一些癌細胞存在目標非依賴性殺滅；化合物 1、 12a及 16亦對癌細胞株亞群展現直接的細胞毒性活性( 表 2；靶向mAb A結合物包含靶向腫瘤抗原A之mAb與各種藥物連接子化合物的結合物；靶向mAb B結合物包含靶向CD30之cAC10 mAb與各種藥物連接子的結合物)。 表 1 ： 目標 STING 促效劑 ADC 於 THP1 - Dual TM 報導體細胞中的活性 .
化合物 EC 50(ng/mL)**
12 4.2
17 2.2
19 7.3
20 1.7
21 4.2
22 4.7
23 2.4
24 2.1
25 307
26 14.4
27 10.4
66 ＞10,000
67 ＞10,000
68 ＞10,000
69 ＞10,000
96 ＞10,000
97 *
98 ＞10,000
99 *
100 *
101 ＞10,000
102 ＞10,000
103 ＞10,000
104 ＞10,000
105 52.5
106 ＞10,000
107 ＞10,000
108 63.5
109 ＞10,000
110 ＞10,000
111 13.2
112 2
121 3.0
122 5.6
123 1.6
124 9.1
125 1.4
126 ＞10,000
128 ＞10,000
131 3.6
133 12.2
134 10.3
144 ＞10,000
145 ＞10,000
146 ＞10,000
147 ＞10,000
148 ＞10,000
149 ＞10,000
150 7.9
151 ＞10,000
152 6.5
* ＞10%聚集的ADC不予評價 **對於一些化合物而言，EC50值包含多個實驗的平均值 表 2 ： 各種 ADC 及化合物針對人類癌症細胞株的直接細胞毒性資料 .
目標A表現 + + + + + + + + + + +
目標B表現 - - - + + + + - - - -
   ADC X50 (ng/mL)
   786-O A2058 BxPC3 DEL DELBVR Karpas299 L540cy Ls174T MDAMB231 MOLM-13 SU-DHL-4
靶向mAb A 12(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.04 1 1 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 12(4倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.012 0.03 3 2 ＞1K ＞1K 12 ＞1K
靶向mAb B 12(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.004 1 1 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
靶向mAb B 12(4倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.1 2 1 ＞1K ＞1K 7 ＞1K
靶向mAb A 17(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.004 1 1 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
靶向mAb A 17(4倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.1 0.03 5 2 ＞1K ＞1K 26 ＞1K
靶向mAb B 17(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 ＜0.004 1 0.2 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
靶向mAb B 17(4倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.004 0.01 1 1 ＞1K ＞1K 25 ＞1K
靶向mAb A 21(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.03 4 1 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
靶向mAb A 21(4倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.1 0.2 7 2 ＞1K ＞1K 20 ＞1K
靶向mAb B 21(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.01 1 0.4 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
靶向mAb A 22(6倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.02 0.1 2 1 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
靶向mAb A 22(2倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.03 0.2 29 4 ＞1K ＞1K 29 ＞1K
靶向mAb B 22(6倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.1 1 1 ＞1K ＞1K 3 ＞1K
靶向mAb A 19(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.02 1 1 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 19(4倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.1 3 5 ＞1K ＞1K 13 ＞1K
靶向mAb B 19(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.01 0.3 0.3 ＞1K ＞1K 0.4 ＞1K
靶向mAb B 19(4倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.02 0.5 1 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 20(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.02 0.2 0.3 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 20(4倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.02 1 1 ＞1K ＞1K 10 ＞1K
靶向mAb B 20(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 ＜0.004 0.1 0.1 ＞1K ＞1K 0.2 ＞1K
靶向mAb B 20(4倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.02 0.1 0.5 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 24(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.01 0.3 1 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 24(4倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.01 1 4 ＞1K ＞1K 11 ＞1K
靶向mAb B 24(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.01 0.03 0.5 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb B 24(4倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.01 0.2 2 ＞1K ＞1K 4 ＞1K
靶向mAb A 23(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.01 0.03 1 1 ＞1K ＞1K 1 ＞1K
靶向mAb A 23(4倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.02 0.05 4 5 ＞1K ＞1K 8 ＞1K
靶向mAb B 23(8倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K ＜0.004 0.01 0.1 0.2 ＞1K ＞1K 0.3 ＞1K
靶向mAb B 23(4倍載量) ＞1K ＞1K ＞1K 0.002 0.02 0.3 0.3 ＞1K ＞1K 2 ＞1K
   化合物 X50 (nM))
化合物 1 ＞1K ＞1K ＞1K 2 16 ＞1K 31 ＞1K ＞1K 42 ＞1K
化合物 12a ＞1K ＞1K ＞1K 3 111 ＞1K 83 ＞1K ＞1K 87 ＞1K
化合物 16 ＞1K ＞1K ＞1K 4 7 ＞1K 29 ＞1K ＞1K 27 ＞1K
合成多種其他化合物且評價其活化THP1-Dual TM報導體細胞的能力。若干化合物具有EC50值在1.3 nM (化合物 27e)至6337 nM (化合物 126a， 表 3)範圍內的活性。具有至多10 µM之最小活性、EC50值＞10,000 nM的化合物列舉於 表 3中。若干化合物與靶向抗體( 表 1)及非結合抗體(未顯示)經由可裂解或不可裂解的藥物連接子結合且評估所得ADC活化THP1-Dual TM報導體細胞的能力。具有藥物連接子 25 - 27、 105、 108、 111 - 112、 121 - 125、 131 - 134、 150及 152的結合物具有EC50值在1.4至307 ng/mL範圍內的活性( 表 1)。測試的所有其他結合物在此分析中不具有至多10 µg/mL的活性，包括藥物連接子衍生自活性小分子的結合物( 表 3、 表 1)，從而突顯了開發靶向STING路徑之活性ADC的挑戰。 表 3 ： STING 促效劑 小分子於 THP1 - DualTM 報導體細胞中的活性 .
化合物 EC 50(nM)** 化合物 EC 50(nM)** 化合物 EC 50(nM)**
A 3 49 ＞10,000 93 ＞10,000
1 5 50 ＞10,000 94 132.8
12 37 51 ＞10,000 95 12.9
12a 21 52 ＞10,000 114 9.4
15b 5.8 53 ＞10,000 115 17.4
16 52 / 34 54 ＞10,000 116 11.6
17 66.28 55 ＞10,000 117 14.6
19 190.2 56 ＞10,000 118 23.6
20 53.91 57 ＞10,000 119 49.9
21 2632 58 ＞10,000 120 5.2
23 62.55 59 ＞10,000 126a 6337
24 83.29 60 ＞10,000 126b ＞10,000
25f 12 62 ＞10,000 127 301
25g 1576 63 2508 128a ＞10,000
26e 5 64/65 388.3 129 836
26f 69 66b 1159 130 2260
27e 1.3 68a 2238 132 37.4
27f 38 70 1.6 135 2011
28 954 71 70.11 136 ＞5,000
29 52 72 275.3 137 1685
30 87 73 216.25 138 ＞5,000
31 175.6 74 35.98 139 ＞4,000
32 44.5 75 57.73 140 1793
33 ＞10,000 76 58.8 141 159
   79 ＞10,000 142 1123
35 ＞10,000 80 ＞10,000 143 155
37 ＞10,000 81 ＞10,000 154 ＞10,000
38 ＞10,000 82 ＞10,000 155 94
39 ＞10,000 83 ＞10,000 156 1561
40 ＞10,000 84 ＞10,000 157 51
41 ＞10,000 85 ＞10,000      
42 ＞10,000 86 2465      
43 ＞10,000 87 ＞10,000      
44 ＞10,000 88 394      
45 ＞10,000 89 1324      
46 ＞10,000 90 ＞10,000      
47 ＞10,000 91 350      
48 ＞10,000 92 1190      
**對於一些化合物而言，EC50值包含多個實驗的平均值
化合物 1係使用可裂解連接子 11與非結合抗體以及靶向抗原C及靶向PD-L1之mAb結合，且評估所得ADC誘導SU-DHL-1細胞產生細胞介素及直接細胞毒性的能力。靶向抗原C及PD-L1的結合物、而非非結合的結合物誘導細胞介素MIP-1α的穩定產生且引起SU-DHL-1細胞死亡( 圖 6A及 圖 6B)。
評價結合物以旁觀者方式活化THP1雙重報導體免疫細胞的能力。當THP1雙重細胞與經工程改造以表現抗原C的HEK 293T細胞共培養時，由靶向抗原C之具有hIgG1 LALAPG Fc骨架之抗體與化合物 12 、 13及 14結合而組成的結合物展現一些旁觀者活性( 圖 7)。當THP1雙重細胞與鼠Renca腫瘤細胞共培養時，由靶向EphA2之具有mIgG2a WT或LALAPG Fc骨架之h1C1抗體(參見例如Schlothauer等人, Protein Engineering, Design and Selection, 2016, 29(10):457-466；及Hezareh等人, Journal of Virology, 2001, 75(24):12161-12168，該等文獻各自以全文引用的方式併入本文中)與化合物 12結合而組成的結合物亦展現旁觀者活性。對於具有完整WT Fc骨架之結合物而言，觀測到旁觀者活性明顯增強( 圖 8)。
藉由將RFP+ MDA-MB-468腫瘤細胞與人類周邊血液單核細胞(PBMC)共培養來評價化合物 12 -mAb結合物活體外誘發免疫介導性腫瘤細胞殺滅的能力(相較於化合物 16)。藉由定量RFP匯合度來量測腫瘤細胞殺滅，且藉由定量各培養物中之CD8 T細胞數目以及IP-10細胞介素分泌來評價免疫活化。所有化合物皆引起腫瘤細胞殺滅( 圖 9A)，其中靶向B7-H4的結合物展現比非結合之結合物及化合物 16更強的腫瘤細胞殺滅。此外，具有WT Fc骨架之靶向B7-H4的結合物展現的腫瘤細胞殺滅比具有Fc效應功能、無LALA-KA骨架之相同結合物更強( 圖 9A及 圖 10)。相較於其他結合物及化合物 16，靶向B7-H4之具有WT Fc骨架的結合物亦引起CD8 T細胞計數增加( 圖 9B)及細胞介素IP-10分泌增加( 圖 9C)。亦評價靶向αvβ6的結合物且其展現比化合物 16更大的腫瘤細胞殺滅活性( 圖 10)。最終，當分別用於處理RFP+ HCT15 ( 圖 11)或HT1080 ( 圖 12)腫瘤細胞及PBMC時，靶向αvβ6及靶向CD228的結合物展現比化合物 16更強的腫瘤細胞殺滅。相較於具有Fc效應功能、無LALAKA骨架的相同結合物，靶向CD228之具有WT Fc骨架的結合物展現更強的腫瘤細胞殺滅( 圖 13)。此表明，相較於具有Fc效應功能、無LALAKA骨架的結合物，具有WT Fc骨架的靶向結合物( 圖 9A、 圖 10及 圖 13 )活體外驅動增加的腫瘤細胞殺滅。
相較於化合物 11、 13及 14(可裂解連接子)以及化合物 25之靶向CD228的結合物，亦評價化合物 12(不可裂解連接子)之靶向CD228的結合物活體外誘發腫瘤細胞殺滅的能力。類似於上文所述的實驗，具有WT Fc骨架之靶向CD228的結合物誘發的細胞殺滅比具有Fc效應功能、無LALAKA骨架的結合物更強( 圖 35)。與THP1雙重分析中 11及 25之結合物的效力降低( 圖 3及 表 1)一致， 11及 25之靶向CD228的結合物在腫瘤/PBMC共培養分析中誘發的腫瘤細胞殺滅相較於化合物 12之靶向CD228的結合物減少( 圖 35)。然而有趣的是，與THP1雙重分析中 13及 14之結合物之效力中度降低( 圖 3及 表 1)形成對比， 13及 14之靶向CD228的結合物在腫瘤/PBMC共培養分析中誘發的腫瘤細胞殺滅類似於化合物 12之靶向CD228的結合物( 圖 35)。 實例 3 評價 STING 促效劑 ADC 活體內誘導的抗腫瘤免疫反應 用於活體內研究的實驗程序 活體內細胞介素分析
使用Milliplex MAP小鼠細胞介素/趨化因子磁珠成套分析套組(MCYTOMAG-70k定製11重套組：MCP1、MIP1α、MIP1β、TNFα、IFNγ、IL-10、IL-12p70、IL-6、IL-1β、IP10、RANTES)量測小鼠血漿中的細胞介素且使用Luminex™ MAGPIX™儀器系統加以分析，該小鼠血漿係在化合物或ADC治療之後的第3、6、24或48小時收集。標準曲線範圍外的值(＜3.2或＞10,000 pg/mL)自平均值計算中排除，或當指示時，轉換成3.2或10,000 pg/mL用於平均值計算。 活體內抗腫瘤活性研究 Renca 癌細胞
在含有10%熱滅活胎牛血清、Pen-Strep (100 U/mL-100 µg/mL)、MEM非必要胺基酸(1x)、丙酮酸鈉(1 mM)及L-麩醯胺酸(2 mM)的RPMI-1640 (ATCC)中培養Renca癌細胞(ATCC)。將Renca癌細胞(含有2*10 6個細胞的200 µL 25%基質膠)皮下植入Balb/c雌性小鼠中。在一些實驗中，Renca腫瘤細胞經工程改造以表現指定的鼠類或人類目標抗原。
當腫瘤體積達到100 mm 3時，藉由腹膜內或靜脈內注射、依指定的給藥時程將化合物或ADC給與小鼠且每週監測腫瘤體積兩次。化合物於含有40% PEG400的生理鹽水中調配。 CT26 癌細胞
在經1 mM丙酮酸鈉、10 mM HEPES、2.8 mL 45%葡萄糖(1.25 g)調節且補充有10%胎牛血清及1% Pen/Strep/麩醯胺酸的RPMI 1640中培養CT26癌細胞(ATCC)。將CT26癌細胞(含有0.5*10 6個細胞的200 μL無血清RPMI 1640)皮下植入Balb/c小鼠中。 MC38 癌細胞
在含有10%熱滅活胎牛血清、Pen-Strep (100 U/mL-100 μg/mL)、MEM非必要胺基酸(1x)、丙酮酸鈉(1 mM)及L-麩醯胺酸(2 mM)的DMEM中培養MC38癌細胞(Kerafast)。將MC38癌細胞(含有1*10 6個細胞的100 μL 25%基質膠)皮下植入C57BL/6小鼠中。
在一些實驗中，ADC治療之後達成腫瘤完全消退的荷瘤小鼠用MC38腫瘤細胞「再攻擊」；將MC38癌細胞(含有1*10 6個細胞的100 μL 25%基質膠)皮下植入C57BL/6小鼠的反向側腹中。 4T1 癌細胞
在含有10%熱滅活胎牛血清的RPMI中培養4T1癌細胞(ATCC)且皮下(含有0.02*10 6個細胞的200 μL普通RPMI)植入Balb/c小鼠。 mαvβ6 - CT26 腫瘤細胞
利用慢病毒轉導對CT26癌細胞(ATCC)進行工程改造以表現鼠類整合素αvβ6。在經MEM非必要胺基酸(1x)、1 mM丙酮酸鈉、2 mM Glutamax、10 mM HEPES、β巰基乙醇(55 µM)調節且補充有10%胎牛血清的RPMI 1640中培養CT26細胞。將CT26癌細胞(0.1x10 6個細胞存在於100 µL含有25%基質膠的無血清RPMI 1640中)皮下植入Balb/c小鼠。當腫瘤體積達到100 mm 3時，藉由腹膜內或靜脈內注射、依指定的給藥時程將化合物或ADC給與小鼠且每週監測腫瘤體積兩次。 mB7 - H4 - Renca 腫瘤細胞
利用慢病毒轉導對Renca癌細胞進行工程改造以表現鼠類B7-H4。在含有10%熱滅活胎牛血清、MEM非必要胺基酸(1x)、丙酮酸鈉(1 mM)及L-麩醯胺酸(2 mM)的高葡萄糖RPMI-1640 (ATCC)中培養Renca細胞。將Renca癌細胞(2×10 6個細胞存在於200 µL含有25%基質膠的RPMI 1640培養基中)皮下植入Balb/c雌性小鼠。當腫瘤體積達到100 mm 3時，藉由腹膜內或靜脈內注射、依指定的給藥時程將化合物或ADC給與小鼠且每週監測腫瘤體積兩次。 mB7 - H4 - EMT6 腫瘤細胞
利用慢病毒轉導對EMT6癌細胞進行工程改造以表現鼠類B7-H4。在含有MEM非必要胺基酸(1x)、丙酮酸鈉(1 mM)、Glutamax (2 mM)、HEPES (10 mM)、β巰基乙醇(55 µM)且補充有10%熱滅活胎牛血清的杜爾貝科氏調節之伊格爾氏培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium)中培養EMT6細胞。將EMT6癌細胞(0.5x10 6個細胞存在於100 µL含有25%基質膠的無血清RPMI 1640中)皮下植入Balb/c雌性小鼠。當腫瘤體積達到100 mm 3時，藉由腹膜內或靜脈內注射、依指定的給藥時程將化合物或ADC給與小鼠且每週監測腫瘤體積兩次。 hCD228-LL2 腫瘤細胞
利用慢病毒轉導對LL2癌細胞進行工程改造以表現人類CD228。在含有10%熱滅活胎牛血清的DMEM (ATCC)中培養LL2細胞。將存在於100 µL含有25%基質膠之RPMI 1640培養基中的1×10 6個hCD228-LL2腫瘤細胞皮下植入雌性C57BL/6小鼠。一旦腫瘤體積達到100 mm 3，將小鼠隨機分為治療組且如所指示進行給藥。每週兩次量測腫瘤體積，且當腫瘤體積達到750至1000 mm 3時，使動物安樂死。將mAb或結合物的儲備濃度稀釋至所需濃度(使用含有20 mM His、6%海藻糖或0.01% Tween20的PBS)且如所指示，腹膜內(i.p.)或靜脈內(i.v.)注射。小分子於含有40% PEG400的生理鹽水中調配且靜脈內注射。 評價結合物在路易斯肺腫瘤模型中的 Pk
1、5或10 mg/kg單次劑量之ADC投與(如所指示，靜脈內或腹膜內遞送)攜有表現hCD228之LL2腫瘤的雌性C57BL/6小鼠之後，分析藥物動力學概況，該等ADC包含靶向CD228之mAb (WT hIgG1 Fc)與化合物 12、 13或 14的結合物。收集血漿且藉由免疫分析對一般總抗體(gTAb)進行分析。藉由Gyros流過物免疫分析平台測定小鼠K2EDTA血漿中的TAb濃度。樣品及標準物在分析緩衝液中稀釋且與含有經生物素標記之鼠類抗人類κ輕鏈抗體及螢光山羊抗人類IgG Fcg F(ab')2抗體片段的溶液一起以夾層形式培育。所得免疫複合物結合至緊密光碟(CD)之親和管柱中的鏈黴抗生物素蛋白塗覆珠粒。藉由雷射讀取CD，該雷射激發螢光偵測試劑，產生信號，該信號與C57BL/6雌性小鼠血漿樣品中的測試物濃度成正比。使用Phoenix WinNonlin 8.2 (Certara, USA)對彙集的動物血漿濃度資料(連續取樣( 圖 31)或稀少取樣( 圖 33))應用非隔室分析。低於定量限值(BLQ)的濃度值在分析時作為零處理。使用標稱劑量及取樣時間。 MDAMB468 腫瘤模型
在含有10%胎牛血清(FBS)及丙酮酸鈉的RPMI中培養MDA-MB-468細胞。將存在於25%基質膠HC (Corning #354248)中的1×10 6個MDA-MB-468細胞皮下植入雌性裸小鼠。一旦腫瘤體積達到100 mm 3，則將小鼠隨機分為治療組，各8至10隻小鼠，且給與3 mg/kg單次劑量的ADC。每週兩次量測腫瘤體積；當腫瘤體積達到700至1000 mm 3時，將動物安樂死。給藥後第3天，在屍檢時自一些動物收集腫瘤且加以處理以便免疫組織化學染色。ADC儲備濃度稀釋至所需濃度(用含有0.01% Tween20的PBS)且腹膜內注射至各治療組。 活體內研究結果 Renca 癌細胞
使用同基因系統評估STING促效劑ADC活體內誘導免疫反應及驅動抗腫瘤免疫反應的能力。Renca系統為小鼠腎腺癌皮下模型。第0天將2x10 6個Renca細胞皮下植入雌性Balb/c小鼠的側腹。當達到100 mm 3平均腫瘤尺寸時(使用以下公式量測：體積(mm 3)＝0.5*長度*寬度 2，其中長度為較長尺寸)，將小鼠隨機分為治療組，每組≥5隻小鼠。接著腹膜內(ADC或化合物)或靜脈內(化合物)治療動物，每7天進行所示處理，總共3次劑量(或如所指示)。在整個研究期間量測腫瘤長度及寬度及動物體重且使用上述公式計算腫瘤體積。追蹤動物，直至腫瘤體積達到約1000 mm 3；接著將動物安樂死。
評價化合物 1(相較於可裂解連接子 11)與非結合mAb或靶向EphA2之mAb (mIgG2a LALAPG骨架；參見例如Schlothauer等人, Protein Engineering, Design and Selection, 2016, 29(10):457-466；及Hezareh等人, Journal of Virology, 2001, 75(24):12161-12168，該等文獻各自以全文引用的方式併入本文中)之結合物的抗腫瘤活性；應注意，本文所述之所有靶向EphA2之mAb結合物由h1C1 mIgG2a mAb與各種藥物連接子化合物的結合物組成。當動物用化合物 1或 11之非結合mAb結合物治療時，觀測到一些腫瘤生長延遲；然而，對於 11之靶向EphA2的mAb結合物而言，尤其在12 mg/kg較高劑量下，腫瘤生長延遲顯著增強( 圖 14A)，明顯展現使用靶向ADC遞送STING促效劑的抗腫瘤益處。
在接下來的活體內研究中，評價不可裂解連接子化合物 12與非結合mAb或靶向EphA2之mAb (mIgG2a LALAPG骨架)之結合物的抗腫瘤活性。 12之靶向EphA2的mAb結合物展現穩固的抗腫瘤活性且活性驚人地大於 11與靶向EphA2之相同mAb結合的ADC ( 圖 15A)。在接下來的活體內研究中，評價不可裂解連接子 15與非結合mAb或靶向EphA2之mAb (mIgG2a WT骨架)之結合物的抗腫瘤活性。 15之靶向EphA2的mAb結合物展現穩固的抗腫瘤活性，類似於 12之相應ADC ( 圖 16A)。在此研究中，亦評價 12與具有mIgG2a WT及LALAPG骨架之靶向EphA2之抗體之結合物的活性，且兩種結合物具有類似的活性。鑒於活體外旁觀者分析指明，相較於LALAPG Fc骨架，完整WT Fc骨架顯著增強旁觀者免疫細胞活化，因此此為驚人的發現( 圖 8)。
化合物 1及mIgG2a LALAPG骨架上之 11及 12之所有抗體結合物均具有良好耐受性 - 第1次及第2次劑量的治療之後，平均體重損失＜約5%。STING促效劑化合物A的耐受性不太好 - 小鼠在第2次劑量之後展現平均6.2%體重損失( 圖 14B、 圖 15B及 圖 16B)。此外，具有mIgG2a WT骨架之 12及 15之靶向EphA2的mAb結合物在3 mg/kg劑量水平下的良好耐受性低於具有LALAPG骨架之 12之結合物 - 經靶向WT骨架ADC治療的小鼠展現約8%體重損失( 圖 16B)。
在接下來的活體內研究中，評價不可裂解連接子化合物 12與靶向EphA2之mAb (mIgG2a LALAPG骨架)之結合物以及未結合之化合物 12a的抗腫瘤活性。 12之靶向EphA2的mAb結合物在1 mg/kg及3 mg/kg劑量下展現穩固的抗腫瘤活性，而化合物 12a具有有限的抗腫瘤功效( 圖 17)。總體而言，此表明在活體內對腫瘤模型之活性最低的STING促效劑化合物(例如化合物 1及 12a)可藉由與抗體結合(例如 11及 12之靶向mAb的結合物)而轉化成活性治療劑。
量測作為對游離藥物及結合物之反應而產生的全身細胞介素作為全身活性的表示。化合物 1及 11 、 12及 15之所有抗體結合物誘導極少的促炎性細胞介素(IL-6及TNF)產生。另一方面，化合物 A及化合物 12a誘導IL-6及TNF穩固產生( 表 4 、表 5及 表 6)。此外，具有WT Fc骨架之 11及 12之靶向EphA2的結合物誘導的全身MIP1α、MIP1β及MCP-1表現大於具有LALAPG Fc骨架之 12的結合物。此表明，在Renca腫瘤模型中，在 圖 15A至 圖 17中所述之靶向EphA2之特定抗體以3 mg/kg q7dx3給與的情況下，LALAPG Fc骨架可減少中靶毒性(全身細胞介素/體重損失)，而不影響抗腫瘤功效。此亦表明，STING促效劑化合物的結合(例如化合物 12a相對於 12之靶向mAb的結合物)可改善功效與安全(減少全身細胞介素)。 表 4 ： 包含具有 mIgG2a LALAPG 骨架之非結合 mAb 或靶向 EphA2 之 mAb 與化合物 11 或 12 、或化合物 1 或化合物 A 結合之各種 ADC 治療之後 ， 攜有 Renca 腫瘤之小鼠之周邊血液 ( 血漿 ) 中的 細胞介素產生 .
   時間 (h)    對照 3 mg/kg非結合mAb 11 3 mg/kg 非結合mAb 12 3 mg/kg 靶向mAb 11 3 mg/kg 靶向mAb 12    對照 2.4 mg/kg 非結合mAb 11 2.4 mg/g 靶向mAb 11 12 mg/kg 靶向mAb 11 1.48 mg/kg 化合物 1 1.86 mg/kg 化合物 A
IFN γ 3 ＜ 3.2 1.1 0.4 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 0.3
6 ＜ 3.2 15.6 7.1 8.5 22.6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 1.3 4.3 0.2 71.8
24 ＜ 3.2 ＜ 3.2 1.4 ＜ 3.2 3.0 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 0.9 ＜ 3.2 ＜ 3.2
IL-1β 3 3.2 5.3 4.3 4.3 5.3 0.4 0.3 0.5 0.3 0.7 1.5
6 3.2 4.3 4.3 5.3 6.4 0.3 1.7 0.3 1.8 1.5 0.6
24 3.2 4.3 4.8 4.3 5.8 0.3 0.3 0.3 0.3 0.8 0.3
   IL-6 3 9.2 120.1 23.8 150.5 109.5 154.7 14.3 5.5 37.7 95.7 3553.0
6 26.9 472.1 176.6 305.6 404.4 0.7 162.2 81.9 303.4 6.8 731.9
24 33.2 12.0 58.6 28.0 75.3 7.7 19.6 4.8 27.0 13.5 16.4
   IL-10 3 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 1.5 48.8 0.5
6 ＜ 3.2 3.9 4.3 4.8 6.4 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 0.8 ＜ 3.2
24 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 0.8 34.6 ＜ 3.2
   IL12p70 3 ＜ 3.2 5.9 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 17.6 174.5 0.2
6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 3.1 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 0.2
24 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 23.4 140.0 ＜ 3.2
   IP10 3 235.3 973.2 402.4 1069.7 1094.1 59.8 176.7 80.5 295.4 702.8 4785.0
6 179.7 2976.0 2783.5 2963.1 3037.2 37.0 3977.4 4205.6 7374.2 3391.5 4976.1
24 192.3 1129.0 2329.0 1019.3 2564.0 71.5 559.7 358.1 1524.0 551.1 889.6
   MCP-1 3 50.2 138.6 97.6 152.5 166.5 67.8 21.6 10.0 65.2 167.8 14494.4
6 35.8 1168.1 615.0 1727.0 7542.0 19.7 3822.7 1811.8 10211.9 795.6 10776.8
24 50.2 157.0 2374.8 284.9 7777.1 26.9 238.0 161.9 1486.0 332.6 539.5
MIP1α 3 ＜ 3.2 26.1 ＜ 3.2 26.1 ＜ 3.2 24.1 3.0 13.9 10.0 55.6 1300.3
6 ＜ 3.2 36.4 44.5 38.4 67.1 10.0 49.1 24.0 108.5 38.9 208.8
24 ＜ 3.2 ＜ 3.2 62.9 62.9 36.4 33.9 10.0 49.4 29.9 69.9 41.7
MIP1β 3 ＜ 3.2 78.2 40.4 66.6 53.3 6.4 11.3 6.4 45.4 362.3 6365.1
6 ＜ 3.2 736.5 697.0 657.3 1267.3 ＜ 3.2 469.0 197.9 1170.5 168.7 2153.8
24 ＜ 3.2 61.8 439.4 35.9 705.5 ＜ 3.2 35.6 26.4 270.7 70.7 35.5
   RANTES 3 4.4 6.4 1.3 7.8 5.3 2.9 2.2 1.7 3.4 10.6 91.6
6 ＜ 3.2 14.9 3.4 13.2 34.1 2.7 19.9 11.9 57.3 18.4 736.9
24 4.3 25.5 186.5 22.3 239.1 3.5 18.2 11.9 90.6 15.6 113.2
   TNFa 3 ＜ 3.2 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 1.6 1.4 1.3 2.5 3.6 57.0
6 ＜ 3.2 12.9 7.2 10.2 4.6 0.8 3.8 2.1 6.2 1.9 17.3
24 ＜ 3.2 ＜ 3.2 3.2 ＜ 3.2 8.2 1.3 1.4 1.3 3.1 2.0 1.3
表 5 ： 包含具有 mIgG2a 野生型 ( WT ) 或 mIgG2a 之 非結合 mAb 或靶向 EphA2 之 mAb 的 各種 ADC 治療後 ， 攜有 Renca 腫瘤之工程化小鼠之周邊血液 ( 血漿 ) 中的 細胞介素產生
   時間 (h) 對照 3mg/kg非靶向mAb 12(LALAPG) 3mg/kg非靶向mAb 12(WT) 3mg/kg靶向mAb 12(LALAPG) 3mg/kg靶向mAb 12(WT) 3mg/kg非靶向mAb 15(WT) 3mg/kg靶向mAb 15(WT)
IFNγ 3 1.1 1.2 2.2 0.7 1.2 1.3 1.8
   6 0.8 8.9 5.2 12.1 19.3 8.5 17.5
   24 1.3 7.1 6.1 18.8 27.0 6.6 21.1
   48 2.0 1.5 2.0 2.1 2.0 1.8 2.0
IL1β 3 8.8 12.7 26.0 19.8 7.8 15.9 30.3
   6 8.8 35.5 14.7 ＜ 3.2 27.0 27.3 19.0
   24 10.7 12.2 22.7 4.9 10.7 10.8 7.8
   48 ＜ 3.2 4.9 22.7 7.8 2.1 13.7 10.7
IL-6 3 5.1 12.7 12.6 71.6 61.6 12.0 105.8
   6 5.5 55.3 47.3 327.4 279.5 82.4 475.4
   24 3.5 33.4 25.2 61.1 80.8 41.3 63.0
   48 2.3 5.0 5.8 29.9 15.6 11.5 17.9
IL-10 3 2.6 4.0 4.4 4.1 2.2 5.9 5.1
   6 2.5 8.2 4.8 5.2 9.6 8.4 6.3
   24 1.6 3.2 2.7 4.9 5.5 4.9 7.3
   48 0.6 0.6 2.7 1.7 1.0 2.6 2.1
IL12p70 3 12.1 5.0 31.9 26.6 ＜ 3.2 23.3 12.5
   6 0.9 48.9 13.7 ＜ 3.2 23.5 29.0 10.3
   24 0.9 10.5 7.1 4.0 0.9 10.5 4.0
   48 ＜ 3.2 0.9 20.1 ＜ 3.2 0.9 7.1 0.9
IP10 3 99.4 134.0 104.9 335.5 371.9 185.4 637.3
   6 71.0 2469.9 2651.6 2757.9 3219.0 2885.3 3422.1
   24 86.3 1798.9 1652.7 2219.9 2004.1 2616.0 2324.1
   48 127.6 738.5 822.9 824.4 819.2 1052.2 935.8
MCP-1 3 63.2 120.4 165.9 135.5 96.9 142.7 276.1
   6 72.1 1368.6 1195.0 915.2 4492.9 1764.0 6594.8
   24 57.0 2083.8 1878.0 6406.5 8018.1 9546.4 15026.1
   48 42.1 285.6 599.9 794.1 934.2 1629.3 2234.6
                       
MIP1α 3 137.3 142.9 205.0 166.4 101.3 187.3 163.7
   6 101.3 178.8 130.0 61.4 284.3 133.8 271.9
   24 133.8 120.7 153.3 101.3 227.0 193.7 205.2
   48 ＜ 3.2 101.3 140.2 101.3 101.3 140.2 166.4
MIP1β 3 ＜ 3.2 ＜ 3.2 78.1 ＜ 3.2 349.4 49.8 942.0
   6 ＜ 3.2 578.4 850.5 735.3 2898.1 677.8 4342.5
   24 ＜ 3.2 425.4 456.2 661.8 1493.2 1561.0 1387.7
   48 ＜ 3.2 178.9 227.9 221.2 309.4 567.1 378.3
RANTES 3 5.6 8.0 11.0 9.1 6.7 10.1 11.0
   6 6.6 24.5 18.9 14.4 168.0 37.5 206.6
   24 5.6 77.1 52.5 338.9 174.8 335.7 772.2
   48 6.6 21.3 43.9 69.6 59.2 140.4 190.4
TNFα 3 4.6 6.2 6.8 7.7 4.3 11.0 9.8
   6 2.7 15.0 5.8 3.5 16.5 9.9 22.9
   24 5.4 7.7 7.7 6.6 8.8 13.3 11.0
   48 1.9 5.4 6.5 5.4 5.4 6.6 7.6
表 6 ： 包含具有 mIgG2a LALAPG 骨架之靶向 EphA2 之 mAb 與化合物 12 或化合物 12a 結合之 ADC 治療之後 ， 攜有 Renca 腫瘤之小鼠之周邊血液 ( 血漿 ) 中的 細胞介素產生 .
      劑量 #    時間 (h)    未治療    媒劑 0.2mg/kg 化合物 12a 0.6mg/kg 化合物 12a 1.8mg/kg 化合物 12a 0.3mg/kg 靶向 mAb 12 (LALAPG) 1.0mg/kg 靶向 mAb 12 (LALAPG) 3.0mg/kg 靶向 mAb 12 (LALAPG)
IFNg 1 3 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2
   1 6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 4.6 18.3 36.4 ＜ 3.2 ＜ 3.2 9.4
   1 24 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 5.8 5.3
   1 48 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2
   2 6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 16.5 41.5 80.4 0.0 1.7 20.1
IL-1b 1 3 0.7 0.7 0.7 0.7 7.5 3.2 0.7 0.7
   1 6 0.7 ＜ 3.2 0.7 5.7 0.7 3.2 11.0 5.7
   1 24 7.0 3.2 3.2 1.6 3.2 2.4 0.7 3.2
   1 48 3.2 5.7 0.7 5.7 3.2 3.2 3.2 5.8
   2 6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 2.7 5.8 4.6 2.7 2.7 ＜ 3.2
IL-6 1 3 3.3 16.6 780.0 1899.7 4314.6 5.8 13.9 17.8
   1 6 0.4 4.9 266.1 424.0 543.0 25.0 28.3 152.1
   1 24 2.8 1.5 4.1 6.1 6.8 8.6 22.5 74.1
   1 48 0.9 0.9 5.6 1.8 1.5 1.9 1.8 26.3
   2 6 2.2 5.1 410.9 516.9 1681.6 13.6 53.2 130.1
IL-10 1 3 ＜ 3.2 ＜ 3.2 15.6 30.4 27.3 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2
   1 6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 3.8 9.9 ＜ 3.2 ＜ 3.2 3.8
   1 24 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 3.8
   1 48 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2
   2 6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 1.2 ＜ 3.2 7.7 ＜ 3.2 1.2 ＜ 3.2
IL12p70 1 3 ＜ 3.2 9.4 ＜ 3.2 ＜ 3.2 3.1 ＜ 3.2 ＜ 3.2 9.4
   1 6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 3.1 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2
   1 24 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 3.1
   1 48 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2
   2 6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 28.4 28.4 ＜ 3.2 ＜ 3.2 12.1
IP10 1 3 88.9 124.3 1989.6 4826.2 8222.7 122.1 200.3 278.0
   1 6 95.4 116.3 8985.4 8828.3 7589.2 4294.0 5279.6 6945.6
   1 24 102.2 78.1 257.9 381.8 595.6 1123.5 1703.4 4251.8
   1 48 80.8 85.1 172.8 218.4 223.5 317.8 566.2 1631.2
   2 6 139.5 191.4 ＞ 10000 3996.6 4151.5 1451.7 2590.8 2963.6
MCP-1 1 3 17.3 65.0 333.3 1547.8 5805.3 21.8 48.1 50.2
   1 6 11.9 62.8 7790.8 12898.6 13861.5 518.9 311.8 1080.9
   1 24 24.4 2.0 53.0 141.5 143.9 283.5 694.9 5104.5
   1 48 29.3 19.4 56.8 40.0 2.0 118.0 108.0 530.5
   2 6 51.7 87.7 5244.6 9761.2 17185.9 175.5 338.2 592.4
MIP1a 1 3 ＜ 3.2 ＜ 3.2 10.3 251.5 1052.6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 10.3
   1 6 ＜ 3.2 10.3 101.9 137.2 172.2 10.3 10.3 100.5
   1 24 10.3 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 10.3 ＜ 3.2 ＜ 3.2 92.5
   1 48 ＜ 3.2 ＜ 3.2 10.3 10.3 ＜ 3.2 10.3 ＜ 3.2 ＜ 3.2
   2 6 32.6 32.6 104.9 115.5 209.9 52.2 32.6 99.2
MIP1b 1 3 ＜ 3.2 ＜ 3.2 727.2 2471.0 7438.6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2
   1 6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 670.7 1050.0 1162.7 155.7 256.7 695.2
   1 24 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 497.5
   1 48 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 157.8
   2 6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 718.6 837.6 1407.7 ＜ 3.2 216.1 449.7
RANTES 1 3 ＜ 3.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 20.1 51.2 ＜ 3.2 5.0 ＜ 3.2
   1 6 20.3 ＜ 3.2 130.3 255.0 526.2 14.7 17.1 23.2
   1 24 ＜ 3.2 ＜ 3.2 3.2 46.2 48.8 11.3 34.5 131.7
   1 48 9.2 ＜ 3.2 ＜ 3.2 5.0 ＜ 3.2 7.9 17.1 79.4
   2 6 8.2 2.9 133.8 621.6 892.1 12.5 15.6 45.8
TNFa 1 3 ＜ 3.2 4.3 9.1 21.0 46.4 3.2 3.2 4.5
   1 6 ＜ 3.2 3.2 8.1 15.6 21.2 3.2 10.6 7.3
   1 24 7.3 3.2 3.2 5.2 3.2 5.2 5.9 15.2
   1 48 ＜ 3.2 5.4 4.3 ＜ 3.2 3.2 5.2 7.3 8.9
   2 6 ＜ 3.2 ＜ 3.2 10.0 16.7 46.4 3.2 3.2 3.2
亦評價可裂解連接子 11與非結合mAb、靶向PD-L1之mAb (靶向腫瘤及/或免疫細胞)或靶向抗原C之mAb (靶向免疫細胞)的結合物在攜有Renca腫瘤之小鼠中的抗腫瘤活性。相較於未治療之腫瘤，所有結合物展現腫瘤生長延遲。相較於未結合的靶向PD-L1之mAb， 11之靶向PD-L1之mAb結合物展現增強的抗腫瘤活性。此展現使用靶向抗原C及PD-L1之ADC遞送STING促效劑的抗腫瘤益處( 圖 18)。亦評價不可裂解連接子 12與靶向PD-L1之mAb的結合物在攜有Renca腫瘤之小鼠中的抗腫瘤活性；此等結合物儘管耐受性不如 11之靶向PD-L1之mAb結合物那樣好，但誘導腫瘤生長延遲。 CT26 癌細胞
評價化合物 1(相較於可裂解連接子 11)與非結合mAb、靶向抗原C之mAb、靶向PD-L1之mAb或靶向EphA2之mAb的結合物在攜有CT26腫瘤之小鼠中的抗腫瘤活性。當用化合物 1或未結合的靶向PD-L1之mAb治療動物時，觀測到最小的腫瘤生長延遲。對於 11之非結合mAb結合物，觀測到中度的腫瘤生長延遲。相比之下，用 11之所有三種靶向mAb結合物治療之後，觀測到顯著的腫瘤生長延遲。此展現使用靶向多種抗原之ADC (包括靶向免疫細胞的結合物(抗原C)、靶向免疫及/或腫瘤的結合物(PD-L1)及靶向腫瘤之結合物(EphA2))遞送STING促效劑的抗腫瘤益處( 圖 19)。周邊血液血漿中的細胞介素產生結果呈現於表7中。 表 7 ： 包含 mAb 與化合物 11 結合之各種 ADC 治療後 ，攜有 CT26 腫瘤之小鼠之 周邊血液 ( 血漿 ) 中的 細胞介素產生 .
   時間 (h) 未治療 1.86 mg/kg 化合物 1 12 mg/kg 靶向 EphA2 的 mAb 11(mIgG2a LALAPG) 2.4 mg/kg 靶向 EphA2 的 mAb 11(mIgG2a LALAPG) 2.4 mg/kg 靶向抗原 C 的 mAb 11(mIgG2a LALAPG) 2.4 mg/kg 非結合 mAb 11(mIgG2a LALAPG) 2.4 mg/kg 靶向 PD-L1 的 mAb 11 2.4 mg/kg 靶向 PD-L1 的 mAb
   IL-6 3 0.5 3.2 3.2 622.1 781.4 1128.3 185.8 0.5 217.7 17.8 27.7 23.4 483.9 182.4 442.5 1.4 100.6 56.5 18.1 56.9 3.3 25.6 0.6 5.8
6 2.7 3.2 0.2 2652.5 2393.5 2412.7 2677.9 1790.2 2777.7 168.7 303.4 304.8 1821.4 2769.8 2324.8 123.7 151.3 266.9 119.4 72.6 162.5 3.2 3.2 1
24 5.7 5.4 0.6 44.5 31.8 36.5 72.8 0.2 67.6 16.2 143.2 16.1 9.4 34.4 126.9 5 16.9 3.2 23.8 21.8 5.2 21.2 6.5 216.8
48 26.5 262.8 7.6 47.8 142.7 29.2 214.1 61.7 80.4 6.5 39.1 7.8 48.9 32.2 19.5 2.9 2.9 2.3 26.6 26.8 89.7 1.4 3.2 12.2
   IL-10 3 3.2 3.2 3.2 0.2 2.3 1.2 3.2 3.2 1.2 3.2 3.2 3.2 0.9 3.2 0.4 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 33.8 3.2 3.2
6 3.2 3.2 3.2 7.8 9 4.4 7.2 2 4.3 4 1.2 1.6 1.2 3.7 4.3 0.4 0.4 2 0.4 0 0 3.2 3.2 3.2
24 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 1.5 3.2 3.2 3.2 0.4 3.2 3.2 3.1 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 26.2 3.2 3.2
48 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 0.4 3.2 3.2 3.2
   IP-10 3 242.4 109.7 200.2 1439.4 1501.7 1160.7 592.6 125.9 377.2 198.1 190.9 196.9 1271.3 629.1 627.8 109.4 450 308.7 163.9 154.4 178.3 105.7 190.4 96.1
6 174.7 117.4 188.2 2610.8 2133.6 2473.4 2039.3 2711.3 2008.6 2327.7 2740.5 1949.2 2062.9 2328 2713.5 1779.6 1376.6 2092 1814.4 1744 1389.4 130.6 151.9 110.7
24 272.5 134.4 201.1 1121.6 1025.3 696.2 1468.5 145 1900.5 1189.9 1094.8 1089 2565 1994.5 1329.8 246.4 693.7 3.2 717.5 1002.6 833.1 247.7 689.9 166.7
48 122.9 155.8 74.7 560.1 398.8 560 1293.4 541.3 716.9 307.2 167.2 250.2 448.8 273.5 378 107.3 235.9 319.2 748.1 599.3 580.4 128.1 183.3 135.9
   MCP-1 3 2.7 3.2 3.2 73.7 78.6 110.3 36.4 2.7 23.1 3.2 10.5 2.7 393.2 69.9 78.6 3.2 46.2 2.7 18.9 13.8 3.2 169.8 3.2 3.2
6 7.2 7.2 3.2 3185.3 2816.3 1634.8 6186.6 3754.5 3698.6 656.5 578.3 382.2 10207.3 4960.7 37687.1 162 556.2 425 143.3 133 252 3.1 7.5 7.5
24 3.2 3.2 3.2 397.7 294.7 305.9 765.3 3.2 821 99.1 99.1 99.1 1009.2 637.8 194 3.2 55.1 3.2 129.2 191.4 98 129.2 7.5 3.2
48 13.5 18.6 3.2 93.1 20.9 41.4 207.4 85.1 108.7 27.2 10.5 13.5 39.8 34.7 365.9 3.2 2.7 20.9 135.9 127.3 253.1 7.5 13.8 16.4
   MIP-1a 3 3.2 3.2 3.2 3.9 3.2 3.2 3.9 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 217.7 103.1 139.8 3.2 3.2 3.2 3.2 3 3.2 3 3 3
6 3.9 3.2 3.2 94.6 93.6 73.9 222.1 127.3 261.8 12.7 3.9 3.2 144 152.7 82.1 17.7 12.7 3.9 11.2 3 3 3 3 11.2
24 3.2 3.2 3.2 12.7 25.1 3.2 21.7 3.2 21.7 3.2 3.2 3.2 17.7 21.7 12.7 3.2 3.2 3.2 3 3 3 3 11.2 24
48 3.2 3.2 3.2 3.9 12.7 3.2 3.9 3.2 3.9 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 17.7 3.2 3.2 3.2 11.2 11.2 3 3 7.9 3
   MIP1b 3 3.2 1.6 3.2 297.7 336.8 224 311.6 3.2 185.9 26.9 19.7 5.4 1600.5 682.1 991.5 3.2 31.2 7.2 3.2 5.4 9.9 3.2 3.2 3.2
6 3.2 3.2 3.2 925.8 369.7 1161.4 1679.2 1460.7 1237.9 367.2 264.6 356.3 1377.1 1236.6 1740.4 137.2 215.4 203.6 70 61.7 85.7 3.2 3.2 3.2
24 3.2 3.2 3.2 127.6 125.3 55.3 268.8 3.2 356.8 84.9 63.2 51.3 197.4 142.2 127.5 3.2 26.9 3.2 3.2 19.3 32 3.2 3.2 46.1
48 3.2 14.8 3.2 61.1 10.8 57.6 66.7 26.9 56.9 11.4 3.2 8.8 13.8 13.2 69 3.2 3.2 3.2 26.5 23.5 30 3.2 3.2 3.2
   TNFa 3 3.2 3.2 3.2 3.2 4.9 4.3 1.4 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 31 25.6 27.6 3.2 3.2 3.2 5.8 3.2 3.2 75.5 3.2 3.2
6 3.2 3.2 3.2 16.9 16.6 10 29.1 26.2 34.8 6.2 3.8 2.6 31 45.5 39.5 3.2 4.3 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2
24 3.2 3.2 3.2 0.4 0.7 3.2 4.3 3.2 3.2 3.2 2.9 8.5 2 7 3.8 3.2 1.4 3.2 6.4 3.2 3.2 58.6 3.2 3.2
48 3.2 3.2 3.2 1.1 3.2 3.2 1.4 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 1.7 3.2 3.2 3.2 3.6 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2
MC38 癌細胞
評價可裂解連接子 12與具有LALAPG mIgG2a Fc骨架之非結合mAb或靶向EphA2之mAb的結合物在攜有MC38腫瘤之野生型小鼠(WT)或缺乏STING( Tmem173 gt)之小鼠中的抗腫瘤活性。在WT但不缺乏STING的荷瘤小鼠中，經3次週劑量之 12之1 mg/kg非結合結合物或 12之0.1 mg/kg靶向結合物治療的動物分別展現中度及最小腫瘤生長延遲。在WT但不缺乏STING的荷瘤小鼠中，經3次週劑量之 12之1 mg/kg靶向結合物治療的動物展現穩固的腫瘤生長延遲。此證明，在攜有MC38腫瘤之小鼠中，腫瘤微環境中之非腫瘤細胞需要STING信號傳導用於抗腫瘤活性( 圖 20A及 圖 20C)。
在WT荷瘤小鼠中，經單次劑量之 12之1 mg/kg靶向EphA2之結合物治療的動物亦展現穩固的腫瘤生長延遲，證明單次劑量之 12之靶向EphA2的結合物足以驅動完全的腫瘤消退( 圖 20A)。
作為對單次劑量或3次週劑量之ADC之反應而達成腫瘤完全消退的小鼠在反向側腹用MC38腫瘤細胞再攻擊且監測腫瘤生長。所有經再攻擊的小鼠、但非所有的經MC38腫瘤細胞攻擊之未治療初始小鼠被保護以免再攻擊，表明 12之靶向結合物誘發免疫記憶( 圖 20D)。 4T1 癌細胞
評價可裂解連接子 12與具有LALAPG mIgG2a Fc骨架之非結合mAb或靶向EphA2之mAb的結合物在攜有4T1腫瘤之小鼠中的抗腫瘤活性。化合物 12之所有結合物在測試劑量下均引起顯著的腫瘤生長延遲，其中化合物 12之靶向mAb結合物相較於非結合的結合物展現增強的腫瘤生長延遲( 圖 21A)，觀測到的體重損失最小( 圖 21B)。此證明，化合物 12之靶向EphA2的mAb結合物在多種腫瘤模型中具有活性( 圖 17至 圖 21B)。 靶向 B7 - H4 的 結合物
在經由慢病毒轉導加以工程改造以表現鼠類B7-H4 (mB7-H4)的Renca腫瘤模型中評價靶向B7-H4的結合物。攜有表現mB7-H4之Renca腫瘤的小鼠用3次週劑量之1 mg/kg未結合mAb或ADC治療。化合物 12之非結合的mAb結合物引起中度的腫瘤生長延遲，而化合物 12之靶向B7-H4的mAb結合物引起穩固的腫瘤生長延遲。具有WT mIgG2a Fc骨架之靶向B7-H4的結合物相較於具有Fc效應功能、無LALA-KA mIgG2a Fc骨架的彼等結合物引起稍微增強的腫瘤生長延遲(參見例如Schlothauer等人, Protein Engineering, Design and Selection, 2016, 29(10):457-466; 及Hezareh等人, Journal of Virology, 2001, 75(24):12161-12168，該等文獻各自以全文引用的方式併入本文中)。此表明，靶向B7-H4的ADC誘發穩固的抗腫瘤反應。此外，此表明在Renca腫瘤模型中，具有WT Fc骨架之靶向B7-H4的mAb結合物驅動的抗腫瘤反應比無LALA-KA Fc骨架的彼等結合物稍微更穩固( 圖 22A)。重要的是，所有結合物均耐受，但在具有WT Fc骨架之ADC治療之後，觀測到稍微更大的體重損失( 圖 22B)。表8中提供細胞介素產生。 表 8 ： 攜有表現 mB7 - H4 之 Renca 腫瘤之小鼠在各種 ADC 治療後之周邊血液 ( 血漿 ) 中的 細胞介素產生 ， 該等 ADC 包含具有 mIgG2a 野生型 ( WT ) 或 mIgG2a LALAPG 或 LALAKA 骨架之 mAb 與化合物 12 的 結合物 .
時間 (h) 對照 1 mg/kg 靶向 B7-H4 的 mAb 1 mg/kg 非結合 mAb 12 (WT) 1 mg/kg 靶向 B7-H4 的 mAb 12 (WT) 1 mg/kg 非結合 mAb 12 (LALAPG) 1 mg/kg 靶向 B7-H4 的 mAb 12 (LALAKA) 1 mg/kg 靶向 EphA2 的 mAb 12 (LALAPG)
IFN γ 3 3.5 0.5 3.2 4.3 2.0 1.2 2.1
6 3.4 1.2 5.8 6.3 1.6 1.8 2.9
IL1 β 3 56.7 25.4 50.5 58.5 48.5 23.9 27.9
6 50.9 62.3 66.1 38.4 15.9 27.7 51.0
IL-6 3 12.6 12.3 19.9 35.1 15.0 11.4 27.7
6 138.4 64.3 85.2 206.2 153.5 135.4 71.1
IL-10 3 17.3 24.8 32.8 26.8 23.4 11.2 9.4
6 23.4 35.0 35.0 23.0 14.8 12.8 11.0
IL12p70 3 44.9 53.6 55.1 44.8 42.0 33.4 24.3
6 60.8 79.4 79.5 38.5 19.7 33.4 35.8
IP10 3 158.7 100.3 172.0 205.7 167.7 132.6 308.9
6 108.8 72.5 630.2 1498.6 1134.8 617.0 1295.5
MCP-1 3 101.5 122.3 175.8 171.3 146.5 97.1 81.7
6 142.1 192.9 297.2 863.5 213.6 146.5 180.9
MIP1 α 3 150.5 161.6 171.4 200.8 179.9 136.8 118.3
6 223.3 268.0 221.6 151.7 98.9 131.8 84.1
MIP1 β 3 29.4 30.4 80.8 66.4 52.0 18.0 30.8
6 39.6 65.9 86.1 164.4 43.2 40.4 47.2
RANTES 3 14.5 13.9 13.6 17.5 14.2 12.1 6.6
6 15.0 16.5 18.8 20.7 9.3 11.5 11.7
TNF α 3 16.6 13.5 16.8 18.0 13.0 3.8 4.7
6 12.2 21.4 24.1 13.3 6.3 16.6 12.3
亦在經由慢病毒轉導加以工程改造以表現鼠類B7-H4 (mB7-H4)的EMT6腫瘤模型中評價靶向B7-H4的ADC。攜有表現mB7-H4之EMT6腫瘤的小鼠用3次週劑量之1或0.5 mg/kg STING ADC或單次劑量之1 mg/kg ADC治療。化合物 12之非結合mAb結合物引起中度的腫瘤生長延遲，而化合物 12之靶向B7-H4的mAb結合物以劑量依賴性方式引起穩固的腫瘤生長延遲( 圖 23A)。具有WT mIgG2a Fc骨架之靶向B7-H4的結合物相較於具有Fc效應功能、無LALA-KA mIgG2a Fc骨架的彼等結合物引起增強的腫瘤生長延遲。此表明，靶向B7-H4的ADC在表現mB7-H4的此EMT6腫瘤模型中誘發穩固的抗腫瘤反應。此外，此等資料證明，具有WT Fc骨架之靶向B7-H4的ADC驅動的抗腫瘤反應比無LALA-KA Fc骨架的彼等ADC更穩固。重要的是，所有結合物均耐受，因為在任何治療組中未觀測到顯著的體重損失( 圖 23B)。 靶向 αvβ6 的 ADC
在經由慢病毒轉導加以工程改造以表現鼠類整合素αv及β6 (mαvβ6)的CT26腫瘤模型中評價靶向整合素αvβ6的ADC。攜有表現鼠類αvβ6之CT26腫瘤的小鼠用3次週劑量之0.5、1或3 mg/kg ADC或單次劑量之1 mg/kg ADC治療。化合物12之非結合mAb結合物引起中度的腫瘤生長延遲，而化合物12之靶向αvβ6的mAb結合物以劑量依賴性方式引起穩固的腫瘤生長延遲( 圖 24)。具有WT mIgG2a Fc骨架之靶向αvβ6的ADC誘發的腫瘤生長延遲類似於具有Fc效應功能、無LALA-KA mIgG2a Fc骨架的彼等ADC，但WT骨架存在適當增強抗腫瘤活性的輕微傾向( 圖 24)。在任何治療組中均未觀測到顯著的體重損失。總體而言，此證明靶向αvβ6的ADC在表現鼠類αvβ6之此CT26腫瘤模型中具有活性。 在攜帶 hCD228 - LL2 腫瘤之小鼠中評價靶向 CD228 的 ADC
在經由慢病毒轉導加以工程改造以表現人類CD228 (hCD228)的LL2腫瘤模型中評價靶向CD228的ADC。當腫瘤為100 mm 3時，用單獨或組合之化合物 12之非結合或靶向CD228之mAb結合物(5 mg/kg單次劑量、3 mg/kg Q4Dx2，或3 mg/kg Q7Dx3)、化合物A (0.08或1.5 mg/kg Q4Dx3)或抗PD1 mAb (10 mg/kg Q4Dx3)治療攜有表現hCD228之LL2腫瘤的小鼠。每週兩次量測腫瘤體積。使用具有人類IgG1骨架的抗體製備一些ADC；因此，為了在重複給藥後避免免疫勝任小鼠中可能發生的抗藥物抗體(ADA)反應，選擇縮短的給藥時程。
用靶向CD228之ADC治療，而不是用非結合ADC治療，引起穩固的腫瘤生長延遲( 圖 25、 圖 26 )。此外，雖然單獨的抗PD1 mAb治療無活性，但抗PD1 mAb與靶向CD228之ADC的組合相較於單獨治療引起增強的腫瘤生長延遲( 圖 26)。所有ADC均耐受；在任何治療組中均未觀測到顯著的體重損失。
亦評價具有mIgG2a骨架之靶向CD228的ADC且其展現的抗腫瘤活性比具有hIgG1骨架的彼等ADC更穩固( 圖 26及 圖 27A)。此外，具有mIgG2a WT Fc骨架之靶向CD228的STING IDC展現的抗腫瘤活性顯著大於具有Fc效應功能、無LALAKA Fc骨架的彼等物( 圖 28A)，在第1次或第2次劑量之後，體重損失不受影響或全身細胞介素含量未增加( 圖 28B 及表 9)。因此，與活體外資料一致( 圖 13)，相較於無LALAKA Fc骨架的STING IDC，具有WT Fc骨架之靶向CD228的STING IDC驅動增強的抗腫瘤活性。最終，靜脈內給與靶向CD228的STING IDC相較於腹膜內給與引起更穩固的抗腫瘤活性，表明IDC遞送途徑影響抗腫瘤活性( 圖 28A)。
接著相較於化合物 13及 14(可裂解連接子)之結合物，評價化合物 12(不可裂解連接子)之靶向CD228的結合物誘發抗腫瘤活性的能力。儘管化合物 12 、 13及 14之靶向CD228的結合物在腫瘤/PBMC共培養分析中、在活體外誘發類似的腫瘤細胞殺滅( 圖 35)，但化合物 12之靶向CD228的結合物在活體內誘發的抗腫瘤活性比化合物 13或 14之結合物更穩固( 圖 30 )。所有三種結合物具有類似Pk概況，在靜脈內給藥之後的前4天具有類似的暴露( 圖 31)。此外，伴隨著化合物 13及 14之結合物的抗腫瘤活性減小，給藥後6小時若干細胞介素(例如IFNg、IL-6、IP10、MIP1a、MIP1b、RANTES)之含量存在升高的傾向且給藥後24小時細胞介素存在稍微減少的傾向。此表明，獨立於Pk概況，對IDC之全身細胞介素反應的動力學可視藥物連接子特性而變化，且此又可影響抗腫瘤活性( 表 10)。此外，此表明結合物的活體內抗腫瘤活性不能簡單地基於活體外效力預測。
亦跨越一系列劑量水平評價化合物 12之靶向CD228之結合物的抗腫瘤活性及藥物動力學概況。抗腫瘤活性隨著ADC的劑量增加而增強( 圖 32)。與劑量依賴性抗腫瘤活性一致，全身暴露亦具有劑量依賴性( 圖 33)，其中最大觀測濃度(C max)隨著ADC的劑量增加而按比例增大。0時至第7天之濃度時間曲線下面積(AUC 0 - 7d)及0時至第10天之濃度時間曲線下面積(AUC 0 - 10d)隨著ADC的劑量增加而以更小比例增加，原因潛在地為人類Fc骨架在免疫勝任小鼠中誘發抗藥物抗體。 表 9 ： 攜有經工程改造 之 LL2 腫瘤之小鼠在各種 ADC 治療後之周邊血液 ( 血漿 ) 中的 細胞介素產生 ， 該等 ADC 包含具有 mIgG2a 野生型 ( WT ) 或 mIgG2a LALAKA 骨架之非結合 mAb 、靶向 CD228 之 mAb 或靶向 EphA2 之 mAb 與化合物 12 的 結合物 .
   劑量    時間 (h) 靶向CD228的mAb 12(WT hIgG1 Fc) Q4Dx2 i.p. 靶向CD228的mAb 12(WT mIgG2a Fc) Q7dx3 i.v. 靶向CD228的mAb 12(WT mIgG2a Fc) Q7dx3 i.p. 靶向CD228的mAb 12(LALAKA mIgG2a Fc) Q7dx3 i.p. 靶向EphA2的mAb 12(WT mIgG2a Fc) Q7dx3 i.p. 非結合mAb 12(WT mIgG2a Fc) Q7dx3 i.p. 化合物 A(1.5 mg/kg Q7Dx3 i.v.) 化合物 A(0.08 mg/kg Q7Dx3 i.v.)
IFNg 1 3 3.2                     
1 6 6.0 62.8 9.9 5.4 29.2 ＜ 3.2 392.4 9.8
2 3 8.7                     
2 6 12.2 59.2 8.0 21.4 22.3 33.0 1550.6 11.7
1 24 10.2                     
3 6    11.5 25.2 17.6 38.1 2.5 1236.8 21.9
   劑量 時間 (h)                        
   1 3 32.0                     
IL1b 1 6 33.4 38.3 22.1 16.0 24.8 12.1 38.0 12.1
2 3 12.1                     
2 6 24.8 32.0 54.0 33.1 37.3 2670.8 57.4 26.2
1 24 38.3                     
3 6    64.9 1006.6 29.1 42.3 11.0 36.8 66.6
   劑量 時間 (h)                        
IL-6 1 3 79.9                     
1 6 689.2 2388.9 450.3 398.7 1671.2 108.9 10532.0 346.7
2 3 70.1                     
2 6 166.5 363.0 478.0 892.5 2984.4 848.6 22725.1 936.6
1 24 306.6                     
3 6    209.0 684.8 685.8 1750.7 133.6 14635.1 1494.7
劑量 時間 (h)                        
IL-10 1 3 9.8                     
1 6 41.5 24.8 27.9 33.5 41.7 9.8 71.5 15.8
2 3 12.8                     
2 6 24.5 36.4 27.2 35.4 49.5 294.1 92.3 9.5
1 24 20.4                     
3 6    73.8 305.7 36.0 76.2 26.6 62.8 36.3
   劑量 時間 (h)                        
IL-12p70 1 3 2.8                     
1 6 34.3 28.5 9.3 3.0 16.1 3.0 32.3 3.0
2 3 15.5                     
2 6 15.3 9.3 99.6 15.0 21.8 3005.9 75.4 9.7
1 24 32.9                     
3 6    43.9 1537.3 15.5 12.9 2.8 43.9 220.3
   劑量 時間 (h)                        
                          
IP10 1 3 459.9                     
   1 6 6335.8 9573.5 6777.7 8402.9 8605.7 3525.7 ＞ 10000 7501.0
   2 3 1192.3                     
   2 6 1323.4 8091.7 3979.4 6251.2 6699.0 2025.2 ＞ 10000 9045.3
   1 24 2189.6                     
   3 6    3410.9 6519.3 4653.6 7420.3 1435.8 ＞ 10000 7718.5
   劑量 時間 (h)                        
MCP-1 1 3 258.6                     
1 6 5512.0 8936.7 5632.5 3576.4 6704.7 3335.2 10000.0 3780.5
2 3 776.5                     
2 6 808.2 2864.3 2355.9 4122.0 4369.8 3250.3 ＞ 10000 7114.6
1 24 4295.5                     
3 6    2776.1 7830.5 2043.7 7114.1 383.7 ＞ 10000 5009.1
   劑量 時間 (h)                        
MIP1a 1 3 158.2                     
1 6 170.4 343.8 135.7 193.2 512.4 114.4 574.2 107.1
2 3 102.7                     
2 6 102.7 231.5 232.0 311.5 366.4 515.7 846.6 206.0
1 24 145.3                     
3 6    230.0 333.6 264.0 423.0 80.8 743.4 270.0
   劑量 時間 (h)                        
MIP1b 1 3 49.9                     
1 6 903.3 2671.2 1074.9 1126.5 3471.4 193.5 4253.1 474.6
2 3 51.7                     
2 6 124.2 1435.1 887.2 1461.3 1765.7 453.7 5235.4 1550.3
1 24 325.2                     
3 6    703.1 1415.0 743.6 2507.7 205.1 4517.1 1009.6
   劑量 時間 (h)                        
RANTES 1 3 11.0                     
1 6 14.4 161.6 29.1 16.8 43.6 4.7 1705.3 33.9
2 3 20.6                     
2 6 11.2 80.7 44.7 103.8 95.5 313.0 1906.1 236.6
1 24 109.0                     
3 6    102.9 264.4 57.5 275.4 19.5 2533.7 172.9
   劑量 時間 (h)                        
TNFa 1 3 18.2                     
1 6 16.0 46.3 18.8 13.3 41.2 3.3 95.7 11.0
2 3 8.5                     
2 6 8.5 29.9 38.5 37.3 54.2 204.1 204.0 18.4
1 24 22.7                     
3 6    43.3 176.8 16.8 58.7 11.0 195.3 29.6
*將標準曲線範圍外的值(例如＞10,000或＜3.2)分別轉換成10,000或3.2 pg/mL以計算平均細胞介素；若所有3個值均超出範圍，則其按照＜10,000或＜3.2 pg/mL作圖。 表 10 ： 攜有人類 CD228 - LL2 腫瘤之小鼠在用各種 ADC 治療後之周邊血液 ( 血漿 ) 中的 細胞介素產生 ， 該等 ADC 包含靶向 CD228 之 mAb ( hIgG1 WT ) 與化合物 12 、 13 或 14 的 結合物 .
未治療 靶向CD228的mAb- 12(WT hIgG1, i.v.) 靶向CD228的mAb- 13(WT hIgG1, i.v.) 靶向CD228的mAb- 14(WT hIgG1, i.v.) 靶向CD228的mAb- 12(WT hIgG1, i.p.)
IFNg 6 h 3.2 53.4 138.9 166.9 26.0
24 h 3.2 16.5 11.2 8.0 14.9
IL1b 6 h 18.9 31.6 44.4 50.8 38.0
24 h 18.9 22.1 25.3 25.3 34.8
IL-6 6 h 78.5 1939.1 3407.3 2422.3 886.8
24 h 27.9 459.6 197.2 117.4 339.9
IL-10 6 h 3.8 26.1 49.1 23.4 26.2
24 h 3.2 3.2 14.5 9.2 6.8
IL12p70 6 h 7.0 25.6 35.8 33.1 30.8
24 h 8.9 5.0 25.2 17.1 22.1
IP10 6 h 206.8 7593.2 9554.3 9735.5 6691.1
24 h 197.2 2894.2 2013.7 1426.2 2193.4
MCP-1 6 h 135.5 12716.4 17729.6 24776.7 5414.8
24 h 109.8 4183.4 1962.1 1979.7 4222.1
MIP1a 6 h 69.4 315.3 791.1 622.8 369.9
24 h 116.5 205.8 221.5 139.5 273.1
MIP1b 6 h 3.2 2692.2 4311.9 4274.3 1586.3
24 h 17.4 503.8 313.4 219.4 370.0
RANTES 6 h 7.5 178.1 627.4 609.8 43.5
24 h 6.0 264.6 203.2 154.6 153.3
TNFa 6 h 6.4 41.3 67.6 69.1 24.4
24 h 8.6 7.8 12.5 13.8 15.6
*超出標準曲線範圍的值(例如＞10,000或＜3.2)分別轉換成10,000或3.2 pg/mL以計算平均細胞介素。 在異種移植乳癌模型中評價 STING IDC
接著評價化合物 12之靶向B7-H4及靶向αvβ6之結合物在攜有MDA-MB-468腫瘤之免疫缺乏裸小鼠中誘發抗腫瘤活性的能力。 12(具有WT與LALAKA Fc骨架)之靶向B7-H4的結合物誘發穩固的抗腫瘤活性。類似地，化合物 12(具有WT與去糖基化Fc骨架以減少FcγR結合的h2A2 mAb)之靶向人類αvβ6的結合物誘發強腫瘤生長延遲。最終，化合物 12(具有WT與LALAKA Fc骨架的h15H3 mAb)之靶向人類/小鼠αvβ6的結合物誘發中度的腫瘤生長延遲，類似於化合物 12之非結合的結合物。此展現化合物 12之靶向腫瘤之結合物在缺乏細胞毒性T細胞的情況下且獨立於經由FcγR結合發生的先天性免疫細胞接合來誘發抗腫瘤活性的能力。亦評價此等結合物誘發的全身細胞介素且顯示於 表 11中。 表 11 ： 攜有人類 MDA - MB - 468 腫瘤之小鼠在用各種 ADC 治療後之周邊血液 ( 血漿 ) 中的 細胞介素產生 ， 該等 ADC 包含靶向 B7 - H4 或 αvβ6 之 mAb 與化合物 12 的 結合物 .
未治療 非結合mAb- 12(WT mIgG2a) 靶向B7-H4的mAb- 12(WT mIgG2a) 靶向B7-H4的mAb- 12(LALAKA Fc mIgG2a) 靶向αvβ6的mAb- 12(h15H3 WT mIgG2a) 靶向αvβ6的mAb- 12(h15H3 LALAKA mIgG2a) 靶向αvβ6的mAb- 12(h2A2 WT mIgG2a) 靶向αvβ6的mAb- 12(h2A2 去糖基化mIgG2a)
IFNg 3h 2.9 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2 3.2
6h 3.2 11.6 5.8 10.1 30.5 40.7 2.9 6.0
IL1b 3h 10.5 16.6 16.5 19.4 27.5 23.5 24.4 18.6
6h 5.6 13.7 20.5 35.7 27.6 26.5 15.4 11.7
IL-6 3h 12.3 30.9 29.0 24.6 25.3 34.3 16.3 24.4
6h 762.2 768.5 581.3 895.9 900.3 924.9 1001.9 505.5
IL-10 3h 10.4 131.0 10.4 25.9 15.9 5.8 11.7 10.4
6h 3.2 97.1 33.2 46.9 50.2 30.9 54.4 3.2
IL12p70 3h 16.4 20.5 16.4 25.1 27.2 16.4 18.4 16.7
6h 3.2 14.3 16.4 33.4 31.5 20.5 7.4 3.2
IP10 3h 172.7 221.9 217.3 185.5 342.3 189.0 238.1 187.7
6h 135.7 5612.7 5400.7 5730.7 6171.4 6085.6 5496.7 2627.5
MCP-1 3h 125.2 131.4 161.8 165.7 274.0 169.8 213.1 145.6
6h 73.1 2015.6 1195.0 2487.6 3820.9 3180.1 2250.2 368.4
MIP1a 3h 150.7 184.1 174.7 155.0 226.1 206.2 208.0 176.7
6h 98.3 197.1 221.0 230.8 411.5 259.2 279.5 168.8
MIP1b 3h 16.7 3.2 17.8 28.8 459.9 34.9 31.3 3.2
6h 3.2 560.1 716.0 853.8 2526.3 1171.0 1233.5 244.8
RANTES 3h 3.2 2.1 3.5 3.2 2.5 2.8 2.5 1.7
6h 3.2 6.4 9.9 11.2 49.3 19.4 9.5 3.5
TNFa 3h 9.6 4.8 4.8 14.4 18.2 7.1 8.7 3.2
6h 3.2 12.8 12.8 29.0 26.2 21.9 21.7 3.2
大鼠耐受性研究 ：
在非GLP大鼠毒理學研究中評價化合物 12與具有WT Fc骨架之非結合抗體、無Fc骨架之非結合抗體、具有WT Fc骨架之靶向抗體及無Fc骨架之靶向抗體的結合物的非臨床安全概況。在高於小鼠腫瘤模型之最低有效劑量的劑量下，具有化合物 12藥物連接子(非結合及靶向，WT及無Fc骨架)的所有結合物在大鼠中均耐受。 實例 4 活體內藥物動力學研究 方法
在兩次1 mg/kg週劑量之ADC投與雄性C57BL/6小鼠之後，分析藥物動力學概況，該ADC包含[去糖基化]非結合mAb與化合物 12的結合物。收集血漿且藉由免疫分析對一般總抗體(gTAb)進行分析。藉由Gyros流過物免疫分析平台測定小鼠K 2EDTA血漿中的TAb濃度。樣品及標準物在分析緩衝液中稀釋且與含有經生物素標記之鼠類抗人類κ輕鏈抗體及螢光山羊抗人類IgG Fcg F(ab') 2抗體片段的溶液一起以夾層形式培育。所得免疫複合物結合至緊密光碟(CD)之親和管柱中的鏈黴抗生物素蛋白塗覆珠粒。藉由雷射讀取CD，該雷射激發螢光偵測試劑，產生信號，該信號與C57BL/6雄性小鼠血漿樣品中的測試物濃度成正比。使用Phoenix WinNonlin 8.2 (Certara, USA)對彙集的動物血漿濃度資料(稀少取樣)應用非隔室分析。低於定量限值(BLQ)的濃度值在分析時作為零處理。使用標稱劑量及取樣時間。 結果
在兩次1 mg/kg週劑量之ADC投與雄性C57BL/6小鼠之後，分析藥物動力學概況，該ADC包含[去糖基化]非結合mAb與化合物 12的結合物。第一及第二次劑量之後的最大觀測濃度(Cmax)分別為40500及52400 ng/mL。0時至第7天的濃度-時間曲線下面積(AUC0-7d)為85600 d*ng/mL。此表明，化合物 12之非結合之結合物的總抗體暴露高於所公開之小分子STING促效劑的小分子暴露( 圖 29)(參見例如Ramanjulu等人, 2018, Nature 564, 439-443)。
本發明中所列舉之各參考文獻的內容以全文引用之方式併入本文中。
已描述本發明之許多實施例。然而，應瞭解可以在不背離本發明精神及範疇的情況下產生各種潤飾。因此，其他實施例亦屬於以下申請專利範圍之範疇內。
圖1繪示THP1-Dual TM細胞(亦稱為THP1雙重報導細胞)對各種小分子STING促效劑的反應。
圖2繪示野生型(WT)及缺乏STING之鼠骨髓源巨噬細胞對各種小分子STING促效劑的反應。
圖3繪示THP1雙重報導細胞對ADC的反應，該等ADC包含與化合物 11結合(經由可裂解連接子與化合物 1結合)、與化合物 12結合(經由不可裂解連接子與化合物 12a結合)或化合物 13或 14(經由可裂解連接子與化合物 12a結合)的非結合或目標抗體。
圖4繪示THP1雙重報導細胞對化合物 12(經由不可裂解連接子與化合物 12a結合)及化合物 16(自含有化合物 12之ADC釋放之化合物 12與游離藥物的半胱胺酸加合物)的反應。
圖5繪示在培育48小時之後，THP1雙重報導細胞對呈游離藥物形式或化合物 12a及 15b與非結合或目標抗體之結合物(化合物 12及 15之ADC)的反應。
圖6A及圖6B繪示SU-DHL-1淋巴瘤細胞對ADC的反應，該等ADC包含與化合物 11結合的靶向抗原C或靶向PD-L1之非結合抗體(經由可裂解連接子與化合物 1結合)。將細胞介素產生(MIP-1α)(圖6A)與存活率(圖6B)作圖。
圖7繪示單獨培養或與經工程改造以表現目標抗原C之HEK 293T細胞共培養的THP1雙重報導細胞對ADC的反應，該等ADC包含具有hIgG1 LALAPG骨架之靶向抗原C之mAb與化合物 12、 13或 14的結合物。
圖8繪示ADC的旁觀者活性(使用Renca癌細胞及THP1雙重報導細胞)，該等ADC包含具有mIgG2a WT或LALAPG骨架之靶向EphA2的mAb或非結合mAb與化合物 12的結合物。
圖9A至圖9C繪示RFP+ MDA-MB-468腫瘤細胞殺滅(圖9A)及免疫活化(圖9B：CD8 T細胞計數；圖9C：IP-10產生)，該腫瘤細胞殺滅及免疫活化係對化合物 16或結合物處理腫瘤細胞及周邊血液單核細胞(PBMC)共培養物的反應，該等結合物由具有WT或LALAKA Fc骨架之非結合mAb或靶向B7-H4之mAb與化合物 12的結合物組成。圖9A：RFP+腫瘤細胞匯合度(96小時)；圖9B：CD8+ T細胞計數(48小時)；圖9C：IP-10分泌(48小時)。
圖10繪示RFP+ MDA-MB-468腫瘤細胞殺滅，該腫瘤細胞殺滅係對化合物 16或結合物處理腫瘤細胞與周邊血液單核細胞(PBMC)共培養物的反應，該等結合物由具有WT或LALAKA Fc骨架之靶向αvβ6或B7-H4之mAb與化合物 12的結合物組成。將第96小時的RFP+腫瘤細胞匯合度作圖。
圖11繪示RFP+ HCT15腫瘤細胞殺滅，該腫瘤細胞殺滅係對化合物 16或與化合物 12結合之具有WT Fc骨架之靶向αvβ6之mAb的結合物處理腫瘤細胞與周邊血液單核細胞(PBMC)共培養物的反應。將第72小時的RFP+腫瘤細胞匯合度作圖。
圖12繪示RFP+ HT1080腫瘤細胞殺滅，該腫瘤細胞殺滅係對化合物 16或結合物處理腫瘤細胞與周邊血液單核細胞(PBMC)共培養物的反應，該等結合物由具有WT Fc骨架之非結合mAb或靶向CD228之mAb與化合物 12的結合物組成。將第96小時的RFP+腫瘤細胞匯合度作圖。
圖13繪示RFP+ HT1080腫瘤細胞殺滅，該腫瘤細胞殺滅係對化合物 16或結合物處理腫瘤細胞與周邊血液單核細胞(PBMC)共培養物的反應，該等結合物由具有WT或LALAKA Fc骨架之非結合mAb或靶向CD228之mAb與化合物 12的結合物組成。將第96小時的RFP+腫瘤細胞匯合度作圖。
圖14A及圖14B繪示Renca腫瘤小鼠模型對給予q7dx3 ADC (3次週劑量)的反應，用於評價各種ADC，該等ADC包含具有mIgG2a LALAPG骨架之非結合mAb或靶向EphA2之mAb與以下各者的結合物：化合物11 (腹膜內給與)，或化合物1或(E)-1-(4-(5-胺甲醯基-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-(3-𠰌啉基丙氧基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-7-甲氧基-1H-苯并[d]咪唑-5-甲醯胺參(2,2,2-三氟乙酸鹽)(化合物A，參考化合物，靜脈內給與)。圖14A：腫瘤生長；圖14B：體重變化%。
圖15A及圖15B繪示Renca腫瘤小鼠模型對給予q7dx3 ADC (3次週劑量)的反應，用於評價各種ADC，該等ADC包含具有mIgG2a LALAPG骨架之非結合mAb或靶向EphA2之mAb與化合物 11或 12的結合物(腹膜內給與)。圖15A：腫瘤生長；圖15B：體重變化%。
圖16A及圖16B繪示經工程改造以表現人類蛋白質之Renca腫瘤小鼠模型對給予q7dx3 ADC (3次週劑量)的反應，用於評價各種ADC，該等ADC包含具有mIgG2a野生型(WT)或mIgG2a LALAPG骨架之非結合mAb或靶向EphA2之mAb與化合物 12或 15的結合物。圖16A：腫瘤生長；圖16B：體重變化%。
圖17繪示Renca腫瘤小鼠模型對q7dx3給予(3次週劑量，腹膜內)的反應，用於評價ADC，該ADC包含具有mIgG2a LALAPG骨架之靶向EphA2之mAb與化合物 12的結合物或未結合的化合物 12a。
圖18繪示Renca腫瘤模型對q7dx3給予(3次週劑量)各種化合物的反應，用於評價靶向PD-L1的mAb，及包含靶向PD-L1或靶向抗原C之非結合mAb與化合物 11之結合物的各種ADC。
圖19繪示CT26腫瘤模型對q7dx3給予(3次週劑量)各種化合物的反應，用於評價未結合的化合物 1、靶向PD-L1的mAb，及包含靶向抗原C、PD-L1或EphA2之非結合mAb與化合物 11之結合物的各種ADC。
圖20A至圖20D繪示MC38腫瘤模型對q7dx3 (3次週劑量)或單次劑量之ADC (如所示)的反應，用於評價包含具有mIgG2a LALAPG骨架之非結合mAb或靶向EphA2之mAb與化合物 12之結合物的各種ADC。對ADC治療有反應而達成腫瘤完全消退的小鼠用MC38腫瘤細胞再攻擊且監測腫瘤生長。圖20A：腫瘤生長(野生型(WT)小鼠)；圖20B：體重變化%(WT小鼠)；圖20C：腫瘤生長(缺乏STING的 Tmem173 gt小鼠)；圖20D：MC38腫瘤再攻擊之後的腫瘤生長。
圖21A及圖21B繪示4T1腫瘤模型對給予q7dx3 mAb或ADC (由箭頭指示的3次週劑量)的反應，用於評價各種ADC，該等ADC包含具有mIgG2a LALAPG骨架之非結合mAb或靶向EphA2之mAb與化合物 12的結合物。圖21A：腫瘤生長；圖21B：體重變化%。
圖22A及圖22B繪示Renca腫瘤小鼠模型對給予q7dx3 ADC (3次週劑量)的反應，其中Renca腫瘤細胞經工程改造以表現鼠B7-H4，用於評價各種ADC，該等ADC包含具有mIgG2a野生型(WT)或mIgG2a LALAKA或LALAPG骨架之非結合mAb或靶向B7-H4之mAb與化合物 12的結合物。圖22A：腫瘤生長；圖22B：體重變化%。
圖23A及圖23B繪示EMT6腫瘤小鼠模型對q7dx3 ADC給予(3次週劑量)或單次劑量(如所示)的反應，其中EMT6腫瘤細胞經工程改造以表現鼠B7-H4，用於評價各種ADC，該等ADC包含具有mIgG2a野生型(WT)或mIgG2a LALAKA骨架之非結合mAb或靶向B7-H4之mAb與化合物 12的結合物。圖23A：腫瘤生長；圖23B：體重變化%。
圖24繪示CT26腫瘤小鼠模型對q7dx3 ADC給予(3次週劑量)或單次劑量(如所示)的反應，其中CT26腫瘤細胞經工程改造以表現鼠αvβ6，用於評價各種ADC，該等ADC包含具有mIgG2a野生型(WT)或mIgG2a LALAKA骨架之非結合mAb或靶向αvβ6之mAb與化合物 12的結合物。
圖25繪示LL2腫瘤小鼠模型對單次ADC劑量(腹膜內)或q4dx3 化合物A (3次劑量，相隔4天，靜脈內)的反應，其中LL2腫瘤細胞經工程改造以表現人類CD228，用於評價各種ADC，該等ADC包含具有hIgG1野生型(WT)骨架之非結合mAb或靶向CD228之mAb與化合物 12的結合物。
圖26繪示LL2腫瘤小鼠模型對q4dx2 ADC給予(2次劑量，相隔4天，腹膜內)及/或q4dx3抗PD1 mAb給予(3次劑量，相隔4天，腹膜內)的反應，其中LL2腫瘤細胞經工程改造以表現人類CD228，用於評價各種ADC，該等ADC包含具有hIgG1野生型(WT)骨架之非結合mAb或靶向CD228之mAb與化合物 12的結合物作為單一療法或與靶向PD-1之mAb的組合。
圖27A及圖27B繪示LL2腫瘤小鼠模型對q4dx2 ADC給予(2次劑量，相隔4天，腹膜內)及/或q7dx3化合物A給予(3次劑量，相隔7天，靜脈內)的反應，其中LL2腫瘤細胞經工程改造以表現人類CD228。ADC包含具有hIgG1或mIgG2a野生型(WT) Fc骨架之靶向CD228之mAb與化合物 12的結合物。圖27A：腫瘤生長；圖27B：體重變化%。
圖28A及圖28B繪示LL2腫瘤小鼠模型對q7dx3 ADC給予(3次劑量，相隔7天，靜脈內或腹膜內，如所示)的反應，其中LL2腫瘤細胞經工程改造以表現人類CD228。ADC包含具有mIgG2a野生型(WT)或LALAKA骨架之非結合mAb、靶向EphA2之mAb或靶向CD228之mAb與化合物 12的結合物。圖28A：腫瘤生長；圖28B：體重變化%。
圖29繪示ADC在投與雄性C57BL/6小鼠之後的藥物動力學概況，該ADC包含[去糖基化]非結合mAb與化合物 12的結合物。
圖30繪示抗腫瘤活性，其為LL2腫瘤小鼠模型對單次劑量(靜脈內(i.v.)或腹膜內(i.p.)，如所示)之ADC的反應，該等ADC包含具有hIgG1野生型(WT) Fc骨架之靶向CD228之mAb與化合物 12、 13或 14的結合物，其中LL2腫瘤細胞經工程改造以表現人類CD228。
圖31繪示單次劑量(靜脈內或腹膜內，如所示)之ADC在LL2腫瘤小鼠模型中的藥物動力學概況，該等ADC包含具有hIgG1野生型(WT) Fc骨架之靶向CD228之mAb與化合物 12、 13或 14的結合物，其中LL2腫瘤細胞經工程改造以表現人類CD228。
圖32繪示抗腫瘤活性，其為LL2腫瘤小鼠模型對1、5或10 mg/kg單次劑量(靜脈內)之ADC的反應，該等ADC包含具有hIgG1野生型(WT) Fc骨架之靶向CD228之mAb與化合物 12的結合物，其中LL2腫瘤細胞經工程改造以表現人類CD228。
圖33繪示單次劑量(靜脈內)之ADC在LL2腫瘤小鼠模型中的藥物動力學概況，該等ADC包含具有hIgG1野生型(WT) Fc骨架之靶向CD228之mAb與化合物 12的結合物，其中LL2腫瘤細胞經工程改造以表現人類CD228。
圖34繪示抗腫瘤活性，其為MDAMB468異種移植小鼠乳癌模型對3 mg/kg單次劑量(腹膜內)之各種ADC的反應，該等ADC包含靶向B7-H4或αvβ6之mAb與化合物 12的結合物。
圖35繪示RFP+ HT1080腫瘤細胞殺滅，該腫瘤細胞殺滅係對結合物處理腫瘤細胞與周邊血液單核細胞(PBMC)共培養物的反應，該等結合物由具有WT或LALAKA Fc骨架之靶向CD228之mAb與化合物 11 、 12、 13 、 14或 25的結合物組成。將第120小時相對於0小時之RFP+腫瘤細胞之比率作圖。
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Claims (46)

  1. 一種抗體-藥物結合物，其包含結合CD228的抗原結合蛋白或其抗原結合片段，其中該抗體-藥物結合物由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Ab為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； 下標p為整數2至8； R 1為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； R 2及R 3獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F； 各R A、R B、R C、R D、R E及R F獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標m獨立地為0或1； 各下標q為整數0至6； X A為-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X B不存在或為2員至16員伸雜烷基； L具有式-(A) a-(W) w-(Y) y-，其中： 下標a為0或1； 下標y為0或1； 下標w為0或1； A為視情況經1至3個R a1取代之C 2 - 20伸烷基；或視情況經1至3個R b1取代之2員至40員伸雜烷基； 各R a1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R b1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d1及R e1獨立地為氫或C 1 - 3烷基； W為1至12個胺基酸或具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至A或M 1； *表示共價連接至Y、X B或X A； Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分或不可裂解部分；且 X B及L各自獨立地視情況經選自PEG2至PEG 72的PEG單元取代。
  2. 如請求項1之抗體-藥物結合物，其中該抗體-藥物結合物係由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： L A為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-或-C(O)NR H(CH 2) 1 - 6-； 各R H獨立地為氫或C 1 - 3烷基； Y為 ； 下標y為0或1； #表示共價連接至-NR HL A； ##表示共價連接至W或L B； 下標w為0或1；且 L B為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-、或-[NHC(O)(CH 2) 1 - 4] 1 - 3-。
  3. 如請求項2之抗體-藥物結合物，其中該抗體-藥物結合物係由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽。
  4. 一種抗體-藥物結合物，其包含結合CD228的抗原結合蛋白或其抗原結合片段，其中該抗體-藥物結合物由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Ab為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； 下標p為整數2至8； R 1C為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； R 2C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 2C連接於標記為1、2或3之任一位置； R 3C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 3C連接於標記為1'、2'或3'之任一位置； 各R A、R B、R C、R D、R E、R F及R M獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標q獨立地為整數0至6； L E為-(C=O)-或-S(O) 2-； L C為-(CR IR J) 1 - 3- 各R I及R J獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 下標s為0或1； 各Cy 1獨立地為4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或C 3 - 6環烷基，其各自視情況經一或多個R K取代； 各R K獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d2R e2、-C(O)NR d2R e2、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d2及R e2獨立地為氫或C 1 - 3烷基； L AA為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-、-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6-、-(CH 2) 1 - 6O-、-C(O)(CH 2) 1 - 6O-或-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6O-； R L為氫或C 1 - 3烷基； Cy 2為C 3 - 6環烷基、4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或苯基，其各自視情況經一或多個R U取代； 各R U獨立地選自由以下組成之群：-CO 2R j1、-(C=O)NR d3R e3、-S(O) 2NR d3R e3、-(CH 2) q1-NR g1R h1、-(CH 2) q1-OR j1及-(CH 2) q1-(OCH 2CH 2) 1 - 8OH； 各R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 下標q1為整數0至6； 下標t1及t2獨立地為0或1，其中t1及t2中之至少一者為1； L D為-(CH 2) 1 - 6-； 下標u為0或1； Z為-N(R HH)-或-N +(C 1 - 6烷基)(R HH)-； R HH為氫、C 1 - 6烷基、C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 1 - 3烷氧基、-(CH 2) 1 - 34員至6員雜環、或-(CH 2) 1 - 35員至6員雜芳基； Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分或不可裂解部分； 下標y為0或1； W為1至12個胺基酸之鏈或具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至L BB； *表示共價連接至Y、L D、NR HH或Cy 2； 下標w為0或1； L BB為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-或-[NHC(O)(CH 2) 1 - 4] 1 - 3-；且 各下標b獨立地為整數1至6。
  5. 如請求項1至4中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗體-藥物結合物由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽。
  6. 如請求項1至5中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段為hL49 HALC hIgG1。
  7. 如請求項1至6中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含以下6個CDR： 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29之CDR-H1； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30之CDR-H2； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31之CDR-H3； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32之CDR-L1； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 33之CDR-L2；及 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34之CDR-L3。
  8. 如請求項1至7中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH與胺基酸序列SEQ ID NO: 35具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性，且該VL與胺基酸序列SEQ ID NO: 36具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性。
  9. 如請求項1至8中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH包含胺基酸序列SEQ ID NO: 35且該VL包含胺基酸序列SEQ ID NO: 36。
  10. 如請求項1至9中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 37或SEQ ID NO: 38的HC及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 39的LC。
  11. 如請求項1至10中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 40或SEQ ID NO: 41的HC及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 42的LC。
  12. 一種抗體-藥物結合物，其包含結合αvβ6的抗原結合蛋白或其抗原結合片段，其中該抗體-藥物結合物由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Ab為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； 下標p為整數2至8； R 1為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； R 2及R 3獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F； 各R A、R B、R C、R D、R E及R F獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標m獨立地為0或1； 各下標q為整數0至6； X A為-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X B不存在或為2員至16員伸雜烷基； L具有式-(A) a-(W) w-(Y) y-，其中： 下標a為0或1； 下標y為0或1； 下標w為0或1； A為視情況經1至3個R a1取代之C 2 - 20伸烷基；或視情況經1至3個R b1取代之2員至40員伸雜烷基； 各R a1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R b1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d1及R e1獨立地為氫或C 1 - 3烷基； W為1至12個胺基酸或具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至A或M 1； *表示共價連接至Y、X B或X A； Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分或不可裂解部分；且 X B及L各自獨立地視情況經選自PEG2至PEG 72的PEG單元取代。
  13. 如請求項12之抗體-藥物結合物，其中該抗體-藥物結合物係由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： L A為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-或-C(O)NR H(CH 2) 1 - 6-； 各R H獨立地為氫或C 1 - 3烷基； Y為 ； 下標y為0或1； #表示共價連接至-NR HL A； ##表示共價連接至W或L B； 下標w為0或1；且 L B為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-、或-[NHC(O)(CH 2) 1 - 4] 1 - 3-。
  14. 如請求項13之抗體-藥物結合物，其中該抗體-藥物結合物係由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽。
  15. 一種抗體-藥物結合物，其包含結合αvβ6的抗原結合蛋白或其抗原結合片段，其中該抗體-藥物結合物由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Ab為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； 下標p為整數2至8； R 1C為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； R 2C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 2C連接於標記為1、2或3之任一位置； R 3C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 3C連接於標記為1'、2'或3'之任一位置； 各R A、R B、R C、R D、R E、R F及R M獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標q獨立地為整數0至6； L E為-(C=O)-或-S(O) 2-； L C為-(CR IR J) 1 - 3- 各R I及R J獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 下標s為0或1； 各Cy 1獨立地為4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或C 3 - 6環烷基，其各自視情況經一或多個R K取代； 各R K獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d2R e2、-C(O)NR d2R e2、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d2及R e2獨立地為氫或C 1 - 3烷基； L AA為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-、-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6-、-(CH 2) 1 - 6O-、-C(O)(CH 2) 1 - 6O-或-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6O-； R L為氫或C 1 - 3烷基； Cy 2為C 3 - 6環烷基、4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或苯基，其各自視情況經一或多個R U取代； 各R U獨立地選自由以下組成之群：-CO 2R j1、-(C=O)NR d3R e3、-S(O) 2NR d3R e3、-(CH 2) q1-NR g1R h1、-(CH 2) q1-OR j1及-(CH 2) q1-(OCH 2CH 2) 1 - 8OH； 各R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 下標q1為整數0至6； 下標t1及t2獨立地為0或1，其中t1及t2中之至少一者為1； L D為-(CH 2) 1 - 6-； 下標u為0或1； Z為-N(R HH)-或-N +(C 1 - 6烷基)(R HH)-； R HH為氫、C 1 - 6烷基、C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 1 - 3烷氧基、-(CH 2) 1 - 34員至6員雜環、或-(CH 2) 1 - 35員至6員雜芳基； Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分或不可裂解部分； 下標y為0或1； W為1至12個胺基酸之鏈或具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至L BB； *表示共價連接至Y、L D、NR HH或Cy 2； 下標w為0或1； L BB為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-或-[NHC(O)(CH 2) 1 - 4] 1 - 3-；且 各下標b獨立地為整數1至6。
  16. 如請求項12至15中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗體-藥物結合物由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽。
  17. 如請求項12至16中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段為h2A2 HCLG hIgG1。
  18. 如請求項12至17中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含以下6個CDR： 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43之CDR-H1； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 44之CDR-H2； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 45之CDR-H3； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 46之CDR-L1； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 47之CDR-L2；及 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48之CDR-L3。
  19. 如請求項12至18中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH與胺基酸序列SEQ ID NO: 49具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性，且該VL與胺基酸序列SEQ ID NO: 50具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性。
  20. 如請求項12至19中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49且該VL包含胺基酸序列SEQ ID NO: 50。
  21. 如請求項12至20中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 52的HC及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 53的LC。
  22. 如請求項12至21中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 54或SEQ ID NO: 55的HC及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 56的LC。
  23. 一種抗體-藥物結合物，其包含結合B7-H4的抗原結合蛋白或其抗原結合片段，其中該抗體-藥物結合物由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Ab為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； 下標p為整數2至8； R 1為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； R 2及R 3獨立地為-CO 2H、-(C=O) m-NR CR D、或-(CH 2) q-NR ER F； 各R A、R B、R C、R D、R E及R F獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標m獨立地為0或1； 各下標q為整數0至6； X A為-CH 2-、-O-、-S-、-NH-或-N(CH 3)-； X B不存在或為2員至16員伸雜烷基； L具有式-(A) a-(W) w-(Y) y-，其中： 下標a為0或1； 下標y為0或1； 下標w為0或1； A為視情況經1至3個R a1取代之C 2 - 20伸烷基；或視情況經1至3個R b1取代之2員至40員伸雜烷基； 各R a1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R b1獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、-NR d1R e1、-C(O)NR d1R e1、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d1及R e1獨立地為氫或C 1 - 3烷基； W為1至12個胺基酸或具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至A或M 1； *表示共價連接至Y、X B或X A； Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分或不可裂解部分；且 X B及L各自獨立地視情況經選自PEG2至PEG 72的PEG單元取代。
  24. 如請求項23之抗體-藥物結合物，其中該抗體-藥物結合物係由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： L A為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-或-C(O)NR H(CH 2) 1 - 6-； 各R H獨立地為氫或C 1 - 3烷基； Y為 ； 下標y為0或1； #表示共價連接至-NR HL A； ##表示共價連接至W或L B； 下標w為0或1；且 L B為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-、或-[NHC(O)(CH 2) 1 - 4] 1 - 3-。
  25. 如請求項24之抗體-藥物結合物，其中該抗體-藥物結合物係由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽。
  26. 一種抗體-藥物結合物，其包含結合B7-H4的抗原結合蛋白或其抗原結合片段，其中該抗體-藥物結合物由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Ab為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段； 各S*為該抗原結合蛋白或其抗原結合片段之半胱胺酸殘基的硫原子； 下標p為整數2至8； R 1C為氫、羥基、C 1 - 6烷氧基、-(C 1 - 6烷基)C 1 - 6烷氧基、-(CH 2) n-NR AR B、或PEG2至PEG4； R 2C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 2C連接於標記為1、2或3之任一位置； R 3C為-CO 2R M、-(C=O)NR CR D、-S(O) 2NR CR D、-S(O) 2R M、-(CH 2) q-NR ER F、-(CH 2) q-OR M、-O(C=O)-NR ER F或-NR M(C=O)-NR ER F，其中R 3C連接於標記為1'、2'或3'之任一位置； 各R A、R B、R C、R D、R E、R F及R M獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 各下標n獨立地為整數0至6； 各下標q獨立地為整數0至6； L E為-(C=O)-或-S(O) 2-； L C為-(CR IR J) 1 - 3- 各R I及R J獨立地為氫或C 1 - 3烷基； 下標s為0或1； 各Cy 1獨立地為4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或C 3 - 6環烷基，其各自視情況經一或多個R K取代； 各R K獨立地選自由以下組成之群：C 1 - 6烷基、C 1 - 6鹵烷基、C 1 - 6烷氧基、C 1 - 6鹵烷氧基、鹵素、-OH、=O、-NR d2R e2、-C(O)NR d2R e2、-C(O)(C 1 - 6烷基)及-C(O)O(C 1 - 6烷基)； 各R d2及R e2獨立地為氫或C 1 - 3烷基； L AA為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-、-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6-、-(CH 2) 1 - 6O-、-C(O)(CH 2) 1 - 6O-或-C(O)NR L(CH 2) 1 - 6O-； R L為氫或C 1 - 3烷基； Cy 2為C 3 - 6環烷基、4員至6員雜環、5員至6員雜芳基、或苯基，其各自視情況經一或多個R U取代； 各R U獨立地選自由以下組成之群：-CO 2R j1、-(C=O)NR d3R e3、-S(O) 2NR d3R e3、-(CH 2) q1-NR g1R h1、-(CH 2) q1-OR j1及-(CH 2) q1-(OCH 2CH 2) 1 - 8OH； 各R d3、R e3、R g1、R h1及R j1獨立地為氫或C 1 - 6烷基； 下標q1為整數0至6； 下標t1及t2獨立地為0或1，其中t1及t2中之至少一者為1； L D為-(CH 2) 1 - 6-； 下標u為0或1； Z為-N(R HH)-或-N +(C 1 - 6烷基)(R HH)-； R HH為氫、C 1 - 6烷基、C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 3 - 6環烷基、-(CH 2) 1 - 3C 1 - 3烷氧基、-(CH 2) 1 - 34員至6員雜環、或-(CH 2) 1 - 35員至6員雜芳基； Y為自分解型部分、非自分解型可釋放部分或不可裂解部分； 下標y為0或1； W為1至12個胺基酸之鏈或具有以下結構： 其中Su為糖部分； -O A-表示糖苷鍵； 各R g獨立地為氫、鹵素、-CN或-NO 2； W 1不存在或為-O-C(=O)-； 表示共價連接至L BB； *表示共價連接至Y、L D、NR HH或Cy 2； 下標w為0或1； L BB為-(CH 2) 1 - 6-、-C(O)(CH 2) 1 - 6-或-[NHC(O)(CH 2) 1 - 4] 1 - 3-；且 各下標b獨立地為整數1至6。
  27. 如請求項23至26中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗體-藥物結合物由以下結構表示： ， 或其醫藥學上可接受之鹽。
  28. 如請求項23至27中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段為B7H41001 hIgG1。
  29. 如請求項23至28中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含以下6個CDR： 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57之CDR-H1； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58之CDR-H2； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59之CDR-H3； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 60之CDR-L1； 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 61之CDR-L2；及 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62之CDR-L3。
  30. 如請求項23至29中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH與胺基酸序列SEQ ID NO: 63具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性，且該VL與胺基酸序列SEQ ID NO: 64具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性。
  31. 如請求項23至30中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH包含胺基酸序列SEQ ID NO: 63且該VL包含胺基酸序列SEQ ID NO: 64。
  32. 如請求項23至31中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 65或SEQ ID NO: 66的HC及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 67的LC。
  33. 如請求項23至32中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 68或SEQ ID NO: 69的HC及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 70的LC。
  34. 如請求項23至27中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段係選自由以下組成之群：B7H4-15461、B7H4-20500、B7H4-20501、B7H4-20502.1、B7H4-22208、B7H4-15462、B7H4-22213、B7H4-15465、B7H4-20506、B7H4-15483、B7H4-20513、B7H4-22216、B7H4-15489、B7H4-20516、B7H4-15472、B7H4-15503、B7H4-15495、B7H4-15478、B7H4-15441及B7H4-20496。
  35. 如請求項23至27及34中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含分別選自由以下組成之群的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3及VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3序列： (a)    SEQ ID NOs: 71-76； (b)    SEQ ID NOs: 79-84； (c)    SEQ ID NOs: 87-92； (d)    SEQ ID NOs: 95-100； (e)    SEQ ID NOs: 103-108； (f)    SEQ ID NOs: 111-116； (g)    SEQ ID NOs: 119-124； (h)    SEQ ID NOs: 127-132； (i)    SEQ ID NOs: 135-140； (j)    SEQ ID NOs: 143-148； (k)    SEQ ID NOs: 151-156； (l)    SEQ ID NOs: 159-164； (m)   SEQ ID NOs: 167-172； (n)    SEQ ID NOs: 175-180； (o)    SEQ ID NOs: 183-188； (p)    SEQ ID NOs: 191-196； (q)    SEQ ID NOs: 199-204； (r)    SEQ ID NOs: 207-212； (s)    SEQ ID NOs: 215-220；及 (t)    SEQ ID NOs: 223-228。
  36. 如請求項23至27及34至35中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH與分別選自由SEQ ID NOs: 77、85、93、101、109、117、125、133、141、149、157、165、173、181、189、197、205、213、221及229組成之群的胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性，且該VL與分別選自由SEQ ID NOs: 78、86、94、102、110、118、126、134、142、150、158、166、174、182、190、198、206、214、222及230組成之群的胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%胺基酸序列一致性。
  37. 如請求項23至27及34至36中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含VH及VL，其中該VH具有分別選自由SEQ ID NOs: 77、85、93、101、109、117、125、133、141、149、157、165、173、181、189、197、205、213、221及229組成之群的胺基酸序列，且該VL具有分別選自由SEQ ID NOs: 78、86、94、102、110、118、126、134、142、150、158、166、174、182、190、198、206、214、222及230組成之群的胺基酸序列。
  38. 如請求項23至27及34至37中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段包含具有胺基酸序列分別選自由SEQ ID NOs: 231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267及269組成之群的HC，及具有胺基酸序列分別選自由SEQ ID NOs: 232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268及270組成之群的LC。
  39. 如請求項1至38中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段為單株抗體或其片段。
  40. 如請求項1至39中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段為嵌合抗體或其片段。
  41. 如請求項1至40中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗原結合蛋白或其抗原結合片段為人源化抗體或其片段。
  42. 如請求項1至41中任一項之抗體-藥物結合物，其中該片段選自Fab、Fab'、Fv、scFv或(Fab') 2片段。
  43. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至42中任一項之抗體-藥物結合物及醫藥學上可接受之載劑。
  44. 一種治療個體之表現CD228之癌症的方法，其包含向有需要之個體投與有效量的如請求項1至11中任一項之抗體-藥物結合物。
  45. 一種治療個體之表現αvβ6之癌症的方法，其包含向有需要之個體投與有效量的如請求項12至22中任一項之抗體-藥物結合物。
  46. 一種治療個體之表現B7-H4之癌症的方法，其包含向有需要之個體投與有效量的如請求項23至38中任一項之抗體-藥物結合物。
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