KR20230147135A - 친양쪽성 펩티드에 기초한 자기-어셈블리 나노입자 - Google Patents

친양쪽성 펩티드에 기초한 자기-어셈블리 나노입자 Download PDF

Info

Publication number
KR20230147135A
KR20230147135A KR1020237031419A KR20237031419A KR20230147135A KR 20230147135 A KR20230147135 A KR 20230147135A KR 1020237031419 A KR1020237031419 A KR 1020237031419A KR 20237031419 A KR20237031419 A KR 20237031419A KR 20230147135 A KR20230147135 A KR 20230147135A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
vaccine
peptide antigen
independently
amphiphile
amino acid
Prior art date
Application number
KR1020237031419A
Other languages
English (en)
Inventor
제프리 엠. 린
빈센트 엘. 코블
사라 알. 니콜스
앤드류 에스. 이시즈카
휴 클라크 웰스
로버트 엔. 갓두
크리스토퍼 마틴 오'브라이언 갈리스
라미로 안드레이 라미레즈-발데즈
Original Assignee
백시테크 노쓰 아메리카, 인크.
더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 백시테크 노쓰 아메리카, 인크., 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 filed Critical 백시테크 노쓰 아메리카, 인크.
Publication of KR20230147135A publication Critical patent/KR20230147135A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/35—Allergens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6907—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a microemulsion, nanoemulsion or micelle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A61K47/6915—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome the form being a liposome with polymerisable or polymerized bilayer-forming substances, e.g. polymersomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 개시내용은 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체 및 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신에 관한 것이며, 여기서 친양쪽성체 및/또는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 덴드론 증폭제를 포함한다. 백신은 암, 자가면역 질환, 알레르기, 감염성 질환, 심혈관 질환 또는 신경변성 질환을 치료 또는 예방하는 데 유용하다.

Description

친양쪽성 펩티드에 기초한 자기-어셈블리 나노입자
본 출원은 2021년 6월 4일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 63/197,092 및 2021년 2월 16일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 63/149,996에 대한 우선권의 이익을 주장하며, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본 발명은 미국 보건복지부의 기관인 국립 보건원과의 협동 연구 개발 협정의 수행으로 이루어졌다. 미국 정부는 본 발명에 특정 권리를 갖는다.
기술 분야
본 개시내용은 미셀 구조 또는 폴리머솜을 비롯한 나노입자를 형성하는 데 사용될 수 있는 신규 친양쪽성체 조성물, 특히 펩티드 친양쪽성체 조성물, 친양쪽성체 조성물의 제조 방법, 나노입자를 형성하는 친양쪽성체 조성물과 함께 약물 분자를 제제화하는 방법, 및 약물 전달을 위한 나노입자의 치료 용도에 관한 것이다.
백신은 질환 발병을 예방하거나 또는 질환 중증도를 감소시키는 수단으로서 질환과 연관된 임의의 병원체 또는 분자(들)에 대한 항체 및/또는 T 세포 반응을 생성하는 데 사용될 수 있다. 이용되는 백신접종 플랫폼의 선택은 부분적으로 표적 병원체 또는 분자(들) 및 필요한 면역 반응의 유형에 좌우된다.
펩티드-기반 백신은 감염성 유기체, 독소 또는 질환과 연관된 유형의 단백질 상에 존재하는 천연 단백질과 교차-반응하는 펩티드 항원에 대한 항체 및 T 세포 반응을 유도하는 데 사용되는, 감염성 유기체, 독소, 또는 병리상태와 연관된 임의의 단백질 (예를 들어, 프리온, 미스폴딩된 단백질 등)로부터 유래된 합성 펩티드 항원을 포함한다. 펩티드 단독은 면역원성이 아니기 때문에, 펩티드 항원은 전형적으로 백신 아주반트로 지칭되는 면역자극제 및/또는 전달 비히클과 함께 제제화된다. 펩티드-기반 백신의 주요 이점은 병원체 또는 질환-유발 단백질로부터 유래된 단백질의 작은 단편이 번역후 변형 (예를 들어, 글리칸, 포스페이트 기 등)을 포함하여 합성적으로 생산될 수 있고, 병원체, 독소 및 질환-유발 단백질의 보존된 구조 (즉, 펩티드 서열 및 임의의 고차 구조)에 대한 고도로 집중된 면역 반응을 유도하기 위한 항원으로서 사용될 수 있다는 것이다. 특정 관심 부위에 대해 면역 반응을 좁게 집중시키는 것의 이익은, 이것이 면역 반응을 희석시키고 잠재적으로 병리상태로 이어질 수 있는 오프-타겟 항체 및 T 세포 반응을 피한다는 것이다.
이들 특징에 기초하여, 펩티드-기반 백신은 암을 예방 또는 치료하기 위해 종양 항원에 대한 T 세포 반응을 집중시키는 데 특히 적합하다. 따라서, 종양-유래 펩티드 항원은 건강한 조직에 대한 면역 반응을 피하면서 암 세포에 대한 면역 반응을 집중시키는 데 사용될 수 있다. 유사하게, 펩티드-기반 백신은 또한 심혈관 질환, 신경변성 질환 및 노화와 연관된 다른 병리상태와 연관된 단백질에 대한 항체 반응을 생성하는 데 특히 적합하다. 펩티드-기반 백신의 이익은 항체 반응이 오프-타겟 항체를 유도하지 않으면서 표적 단백질의 단지 작은 부분 또는 단백질의 단지 이상 버전, 예를 들어 미스폴딩된 단백질 또는 스플라이스 변이체의 생성물인 비정상적 단백질에 대해서만 지시될 수 있다는 것이다.
펩티드-기반 백신의 또 다른 적용은 감염성 유기체, 예컨대 HIV, 말라리아, SARS 및 다른 코로나바이러스에 대한 중화 항체를 유도하기 위한 것이며, 여기서 감염을 예방하기 위해서는 보존된 중화 부위에 대해 고도로 집중된 항체 반응이 요구될 수 있다.
추가적으로, 펩티드-기반 백신 단독은 단독으로 또는 면역억제제와 조합되어 투여되어 알레르기 및 자가면역의 치료를 위한 관용을 유도할 수 있다.
다수의 펩티드-기반 백신 기술이 개발되었지만, 주요 도전과제는 펩티드 항원의 엄청난 물리화학적 불균질성을 고려하여 균일한 제제의 일관된 제조를 보장하는 것이다. 따라서, 임의의 펩티드 항원을 갖는 일관된 제제를 보장하기 위해 개선된 제제화 및 전달 접근법이 필요하다.
또 다른 도전과제는 전장 단백질 항원의 단편을 나타내는 최소 면역원에 대해 항체 반응을 집중시키는 것이다. 이러한 접근법은 고도로 가변적이어서 보존된 부위에 대해 집중된 항체 유도를 필요로 할 수 있는 특정 바이러스에 대해 지시된 성공적인 예방적 백신접종 전략의 개발을 위해 필요할 수 있다. 최소 면역원 백신은 또한 안전성 및 효능의 균형을 맞추기 위해 집중적인 항체 반응이 요구될 수 있는 특정 신경변성 질환, 심혈관 질환 및 암을 치료하는 데 유익할 수 있다. 그러나, 현재의 도전과제는 대부분의 백신 플랫폼, 예를 들어 전체 유기체, 발현 시스템 (예를 들어, DNA 및 바이러스), 및 단백질 서브유닛 백신이 광범위한 항체 반응을 초래하고, 최소 면역원에 대해 항체를 집중시키는 데 적합하지 않은 반면, 가장 통상적으로 사용되는 최소 면역원 백신 플랫폼, 즉 KLH 및 바이러스 유사 입자는 재조합 담체에 대한 합성 펩티드의 접합에 의존적이며, 이는 종종 재조합 제조 방법의 사용으로 인해 제제 가변성뿐만 아니라 증가된 비용을 발생시킨다는 것이다. 따라서, 최소 면역원을 디스플레이하기 위한 대안적인, 바람직하게는 완전 합성 시스템이 필요하다.
마지막으로, 알레르기 및 자가면역을 치료하기 위해 관용을 유도하기 위해 펩티드-기반 백신을 사용하는 것에 관심이 증가되어 왔지만, 현재 사용되는 PLGA 입자 및 리포솜은 요구될 수 있는 다중 펩티드 항원 및 면역조정제를 갖는 입자 제제를 생성하는 데 적합하지 않은 실험적 제제화 방법에 의존적이다. 또한, 펩티드 항원과 면역조정제의 최적의 조합은 공지되어 있지 않다. 따라서, 알레르기 및 자가면역의 치료를 위해 관용을 유도하기 위해 입자 내에 다중 면역조정제 및 펩티드 항원을 전달하는 개선된 방법이 요구된다.
상기 언급된 도전과제를 해결하는 개선된 조성물 및 백신 제조 방법이 본원에 논의된다.
본 개시내용은 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체; 및 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신에 관한 것이며,
여기서 S는 각 경우에 독립적으로 가용화 블록이고;
B는 스페이서이고;
H는 각 경우에 독립적으로 소수성 블록이고,
여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
A는 각 경우에 독립적으로 펩티드 항원이고;
E1은 각 경우에 독립적으로 N-말단 연장부이고;
E2는 각 경우에 독립적으로 C-말단 연장부이고;
U는 각 경우에 독립적으로 링커이고;
[ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
-는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
여기서 친양쪽성체 및/또는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 덴드론 증폭제를 포함한다.
본 개시내용은 또한 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체; 및 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는, 관용을 유도하기 위한 백신에 관한 것이며,
여기서 S는 각 경우에 독립적으로 가용화 블록이고;
B는 스페이서이고;
H는 각 경우에 독립적으로 소수성 블록이고,
여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
A는 각 경우에 독립적으로 펩티드 항원이고;
E1은 각 경우에 독립적으로 N-말단 연장부이고;
E2는 각 경우에 독립적으로 C-말단 연장부이고;
U는 각 경우에 독립적으로 링커이고;
[ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
-는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
여기서 친양쪽성체 및/또는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 덴드론 증폭제를 포함하고,
적어도 1개의 펩티드 항원은 자가항원, 동종항원 및 알레르겐으로부터 선택된다.
본 개시내용은 또한 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체; 및 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는, 관용을 유도하기 위한 백신에 관한 것이며,
여기서 S는 각 경우에 독립적으로 가용화 블록이고;
B는 스페이서이고;
H는 각 경우에 독립적으로 소수성 블록이고,
여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
A는 각 경우에 독립적으로 펩티드 항원이고;
E1은 각 경우에 독립적으로 N-말단 연장부이고;
E2는 각 경우에 독립적으로 C-말단 연장부이고;
U는 각 경우에 독립적으로 링커이고;
[ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
-는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
여기서 친양쪽성체 및/또는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 덴드론 증폭제를 포함하고,
적어도 1개의 A는 1개 이상의 시스테인 잔기가 알파 아미노-부티르산으로 대체되고/거나 1개 이상의 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체된 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 적어도 1개의 펩티드 항원 (A)을 포함하는 백신에 관한 것이며, 여기서 적어도 1개의 A는 1개 이상의 시스테인 잔기가 알파 아미노-부티르산으로 대체되고/거나 1개 이상의 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체된 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신에 관한 것이며,
여기서 S는 각 경우에 독립적으로 가용화 블록이고;
H는 각 경우에 독립적으로 소수성 블록이고,
여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
A는 각 경우에 독립적으로 펩티드 항원이고;
E1은 각 경우에 독립적으로 N-말단 연장부이고;
E2는 각 경우에 독립적으로 C-말단 연장부이고;
U는 각 경우에 독립적으로 링커이고;
[ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
-는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
여기서 적어도 1개의 펩티드 항원은 자가항원, 동종항원 및 알레르겐으로부터 선택되고, 적어도 1개의 약물 분자 D가 존재하며 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택되거나;
또는 여기서 적어도 1개의 펩티드 항원은 종양 항원 또는 감염성 질환 항원이고, 적어도 1개의 약물 분자 D가 존재하며 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8 및 STING의 효능제로부터 선택되고, 제2 약물 분자 (D2)가 존재하며 mTORC1의 억제제로부터 선택된다.
상기 백신의 특정 실시양태에서, 적어도 1개의 A는 1개 이상의 시스테인 잔기가 알파 아미노-부티르산으로 대체되고/거나 1개 이상의 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체된 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 적어도 1개의 펩티드 항원 (A)을 포함하는 백신에 관한 것이며, 여기서 적어도 1개의 펩티드 항원 (A)은 1개 이상의 시스테인 잔기가 알파 아미노-부티르산으로 대체되고/거나 1개 이상의 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체된 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신에 관한 것이며,
여기서 S는 각 경우에 독립적으로 가용화 블록이고;
H는 각 경우에 독립적으로 소수성 블록이고,
여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
A는 각 경우에 독립적으로 펩티드 항원이고;
E1은 각 경우에 독립적으로 N-말단 연장부이고;
E2는 각 경우에 독립적으로 C-말단 연장부이고;
U는 각 경우에 독립적으로 링커이고;
여기서:
(i) 적어도 1개의 A가 알파 아미노-부티르산 및/또는 노르류신을 포함하거나;
(ii) 적어도 1개의 A가 종양 항원으로부터 선택되고, 적어도 1개의 D가 존재하며 TLR-7/8의 효능제로부터 선택되고, 백신이 mTOR의 억제제로부터 선택된 제2 약물 분자 (D2)를 추가로 포함하거나;
(iii) 적어도 1개의 A가 당펩티드이거나; 또는
(iv) 적어도 1개의 A가 자가항원, 알레르겐 및 동종항원으로부터 선택되고, 적어도 1개의 D가 존재하며 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택되고;
[ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
-는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타낸다.
본 개시내용은 또한 적어도 1개의 펩티드 항원 (A)을 코딩하는 DNA 또는 RNA를 포함하는 발현 시스템을 포함하는 백신에 관한 것이며, 여기서 백신은 Treg 촉진 면역조정제로부터 선택된 적어도 1개의 약물 분자 (D)를 추가로 포함한다.
본 개시내용은 또한 S-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 및 [D]-H-[U]-[E1]-A-[E2]-S로부터 선택된 화학식을 갖는 펩티드 항원 접합체 또는 S-[E1]-A-[E2]-[U1] 및 [U1]-[E1]-A-[E2]-S로부터 선택된 화학식을 갖는 펩티드 항원 단편에 관한 것이며,
여기서 S는 가용화 블록이고;
H는 소수성 블록이고,
여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
A는 펩티드 항원이고;
E1은 N-말단 연장부이고;
E2는 C-말단 연장부이고;
U는 링커이고;
U1은 링커 전구체이고;
[ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
-는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
여기서 S는 1개 이상의 아미노산을 포함한다.
본 개시내용은 또한 면역 반응의 유도를 필요로 하는 대상체에게 제1 백신 (V1)의 적어도 1회의 용량에 이어서 제2 백신 (V2)의 적어도 1회의 용량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이며, 여기서 V1은 본원에 개시된 백신이고; V2는 바이러스 백신이다.
도 1은 (i) 알짜 전하, (ii) 스페이서 조성 (PEG 대 펩티드), (iii) 스페이서 길이 및 (iv) 소수성 블록 길이를 다르게 하는 것이 화학식 S-B-U-H의 선형 친양쪽성체의 유체역학적 거동에 미치는 효과를 보여준다. 데이터는 알짜 전하를 증가시키는 것이 나노입자 미셀화를 촉진하고; 에틸렌 옥시드 (PEG)를 포함하는 스페이서, B를 갖는 친양쪽성체는 아미노산을 포함하는 스페이서를 갖는 친양쪽성체와 비교하여 응집체 및/또는 초분자 회합체를 형성하는 경향이 덜하고; 선형 친양쪽성체에 의한 미셀화를 유도하는 데 필요한 알짜 전하는 소수성 블록 (H)의 길이 및/또는 소수성 표면적의 증가에 따라 증가한다는 것을 보여준다.
도 2는 (A) 선형, (B) 덴드론 또는 (C) 브러시 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-[U]-H-D의 친양쪽성 담체의 카툰 개략도를 보여준다.
도 3은 가용화 블록 관능기 (i) 조성, (ii) 수 및 (iii) 알짜 전하를 다르게 하는 것이 선형, 덴드론 또는 브러시 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-U-H-D의 친양쪽성체의 유체역학적 거동에 미치는 효과를 보여준다. 기 NH2, COOH, OH 및 Man은 각각 1급 아민, 카르복실산, 히드록실 및 만노스 기를 지칭한다. 입자 크기를 동적 광 산란에 의해 평가하였고, 직경 (d, nm) 단위의 수 평균 입자 크기를 보고한다.
도 4는 화학식 A-[E2]-[U]-H-D의 펩티드 항원 접합체와 혼합된 화학식 S-B-[U]-H-D의 선형 친양쪽성 담체에 기초한 백신 조성물을 도시한 카툰 개략도를 보여준다.
도 5는 가용화 블록 관능기 (i) 조성, (ii) 수 및 (iii) 알짜 전하를 다르게 하는 것이 선형, 덴드론 또는 브러시 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-U-H-D의 친양쪽성체와 혼합된 화학식 A-U-H-D의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신의 유체역학적 거동에 미치는 효과를 보여주며, 여기서 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비는 1:1이다. 펩티드 항원 접합체는 화합물 198이다. 선형 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 안정한 나노입자 미셀을 유도하기 위해 +4 이상 또는 -4 이하의 알짜 전하를 필요로 하는 반면, 알짜 중성 하전된 덴드론 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 브러시 아키텍처를 갖는 친양쪽성체보다 더 균일한 크기 및 점조도로 나노입자 미셀을 형성하였음에 주목한다. 입자 크기를 동적 광 산란에 의해 평가하였고, 직경 (d, nm) 단위의 수 평균 입자 크기를 보고한다.
도 6은 상이한 암 백신 조성물 또는 대조군으로의 백신접종 후 마우스 (n = 3/군)에서 유도된 T 세포 반응을 보여준다. 마우스를 비히클 대조군 (제1 칼럼), 화학식 S-E1-A-E2-U-H-D의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 나노입자 (즉, 화합물 249, 제2 칼럼) 또는 화학식 A-U-H-D 및 A-U-E2-H-D의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 모자이크 나노입자 (각각 화합물 202 및 225) 및 알짜 양전하 및 선형 아키텍처 (화합물 245, 제3 칼럼), 알짜 음전하 및 선형 아키텍처 (화합물 246, 제4 칼럼) 또는 알짜 중성 전하 및 덴드론 아키텍처 (화합물 162, 제5 칼럼)를 갖는 화학식 S-B-U-H-D의 친양쪽성체로 백신접종하였다. (A) CD8 및 (B) CD4 T 세포 반응을 세포내 시토카인 염색 (ICS)을 사용하여 면역화 후 제13일에 전혈로부터 결정하였다. 데이터는 95% 신뢰 구간을 갖는 기하 평균으로서 보고된다. 펩티드 항원 접합체, 화합물 249 및 202는 흑색종 세포주, MC-38로부터 유래된 신생항원, Adpgk를 포함하고, 펩티드 항원 접합체, 화합물 225는 PADRE로 지칭되는 범용 CD4 T 세포 에피토프를 포함한다는 것에 주목한다.
도 7A는 마우스 (n = 5/군)에서의 연구 설계, 및 단독으로 또는 아주반트의 공급원으로서 백시니아 바이러스와 조합되어 사용된 신생항원 (Reps1, Adpgk, Cpne1 및 Irgq)을 포함하는 상이한 암 백신 조성물로의 면역화 후의 T 세포 반응을 보여준다. (A) 처리군이 표에 열거되며, 이는 프라이밍 (제0일의 제1 면역화) 및 부스팅 (제14일의 제2 면역화) 면역화에 사용된 조성물을 요약한다. 군 1 내지 11을, 단독으로 제공되거나 또는 백시니아 바이러스 ('바이러스')와 공-투여된 펩티드 항원 접합체를 추가로 포함하는 나노입자를 포함하는 백신으로 처리하였다. 군 2를 제외하고, 백시니아 바이러스는 신생항원을 코딩하지 않았다.
도 7B-C는 세포내 시토카인 염색 (ICS)을 사용하여 면역화 후 (B) 제7일 및 (C) 제28일에 전혈로부터 결정된 항원-특이적 CD8 T 세포 반응을 보여준다. 데이터는 95% 신뢰 구간을 갖는 기하 평균으로서 보고된다. 주: 중성 전하 및 덴드론 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-U-H의 친양쪽성체 및 화학식 A-U-H의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 모자이크 나노입자로 처리된 군 11은 단일 면역화 후에 최고 규모의 CD8 T 세포 반응을 유도하였다.
도 8은 브러시 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-[U]-H-D의 친양쪽성 담체를, 항원 (A)이 용매 노출되는 정도를 제어하기 위한 것인 짧은 또는 긴 연장부 (E2) 서열을 갖는 화학식 S-A-E2-[U]-H-D의 펩티드 항원 접합체와 혼합함으로써 형성된 모자이크 나노입자의 카툰 개략도를 보여준다.
도 9는 펩티드 항원 접합체 조성 및 친양쪽성 담체 알짜 전하, 스페이서 길이 및 아키텍처를 다르게 하는 것이 항체 반응을 유도하는 모자이크 나노입자-기반 백신의 유체역학적 거동에 미치는 효과를 보여준다. 그래프 상의 각각의 데이터 점은 화학식 S-B-U-H-D의 친양쪽성체 및 펩티드 항원 접합체를 1:1 몰비로 포함하는 단일 모자이크 나노입자 조성물에 대해 결정된 입자 크기를 나타낸다. 친양쪽성체 및 펩티드 항원 접합체를 DMSO 중에서 1:1 몰비로 조합한 다음, DMSO 용액을 PBS 완충제, pH 7.4로 0.05 mM의 최종 농도로 희석함으로써 모자이크 나노입자를 제제화하였다. 입자 크기를 동적 광 산란에 의해 평가하였고, 직경 (d, nm) 단위의 수 평균 입자 크기를 보고한다. 선형 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 균일한 크기의 나노입자 미셀을 생성하는 반면, 브러시 아키텍처를 갖는 친양쪽성체를 포함하는 모자이크 나노입자의 경우에 입자 크기 가변성이 더 높다는 것에 주목한다.
도 10은 SARS-CoV-2에 대한 상이한 백신 조성물의 유체역학적 거동을 보여준다. 화학식 H-D-U-E1-A (화합물 207, 212 및 216) 또는 가용화 블록을 갖는 HD-U-E1-A-S (화합물 208, 213 및 217)의 펩티드 항원 접합체를 범용 CD4 T 세포 에피토프를 포함하는 화학식 A-U-H-D의 펩티드 항원 접합체 (화합물 225) 및 화학식 S-B-U-H-D의 친양쪽성체와 1:1 몰비의 총 펩티드 항원 접합체 대 총 친양쪽성체로 혼합하였다. 친양쪽성체 및 펩티드 항원 접합체를 DMSO 중에서 1:1 몰비로 조합한 다음, DMSO 용액을 PBS 완충제, pH 7.4로 0.05 mM의 최종 농도로 희석함으로써 모자이크 나노입자를 제제화하였다. 입자 크기를 동적 광 산란에 의해 평가하였고, 직경 (d, nm) 단위의 수 평균 입자 크기를 보고한다. 선형 또는 덴드론 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 균일한 크기의 나노입자 미셀을 생성하는 반면, 브러시 아키텍처를 갖는 친양쪽성체를 포함하는 모자이크 나노입자의 경우에 입자 크기 가변성이 더 높다는 것에 주목한다.
도 11은 상이한 백신 조성물로 유도된 항-SARS-CoV-2 항체 역가를 보여준다. C57BL/6 (n = 3/군)을 제0일 및 제14일에 표시된 백신 조성물로 면역화하고, 샌드위치 ELISA에 의해 제28일에 전혈로부터 3종의 고유 SARS-CoV-2 에피토프에 대한 항체 역가를 평가하였다. 각각의 에피토프에 대해 도출된 중간점 항체 역가가 제시된다.
도 12는 상이한 백신 조성물로 유도된 항-SARS-CoV-2 항체 역가를 보여준다. C57BL/6 (n = 3/군)을 제0일 및 제14일에 표시된 백신 조성물로 면역화하고, 샌드위치 ELISA에 의해 제28일에 전혈로부터 단일 SARS-CoV-2 에피토프에 대한 항체 역가를 평가하였다. 에피토프에 대해 도출된 중간점 항체 역가가 제시된다.
도 13은 (A) 메티오닌 (M 또는 Met) 및 메티오닌에 대한 대체물로서 사용된 아미노산 노르류신 (n 또는 nLeu), 및 (B) 시스테인 및 시스테인에 대한 대체물로서 사용된 알파-아미노 부티르산 (B 또는 aBut)의 화학 구조를 보여준다.
도 14A-E는 자연 발생 (또는 "천연") 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체된 T 세포 에피토프를 추가로 포함하는 펩티드 항원을 포함하는 펩티드 항원 접합체가 천연 항원 및 비-천연 항원 (즉, 메티오닌이 노르류신으로 치환된 항원) 둘 다를 인식하는 신생 T 세포 반응을 도출한다는 것을 보여준다. (A) 종양 자기-항원 (천연 Trp1) 및 노르류신-치환된 Trp1 (norTrp1)의 서열을 화합물 257 및 258 내에 함유시켰다. (B) C57BL/6 마우스 (군당 n = 10-15)를 제0일 및 제14일에 피하로 (SC) 백신접종하고 (257 또는 258의 8 nmol로), 제7일 및 제21일에 채혈하고, 제28일에 B16-F10의 105개 세포로 피하로 챌린지하고, 제35일 및 제42일에 항-PD-L1로 처리하였다. (C) 제21일에 6시간 동안 시험관내 펩티드 자극 후 IFN-γ에 대한 세포내 시토카인 염색에 의해 측정된 바와 같은 CD8 T 세포 반응. 각각의 샘플을 분할하고, 천연 Trp1 min 또는 norTrp1 min으로 2.5 μg/mL로 자극하였다. 히스토그램은 각각의 조건에 대한 모든 획득된 사건의 연쇄 샘플 (좌측), 및 쌍형성된 샘플을 연결하는 선으로 정량화된 개별 샘플 (우측)을 보여준다. P-값은 군에 걸쳐 Trp1 min에 대한 반응을 비교한 일원 ANOVA (크루스칼-왈리스 및 던 보정)에 의한 것이다. (D) TAPDNLGYM:H-2Db-PE로의 사량체 염색에 의해 측정된 바와 같은 제21일의 CD8 T 세포 반응. 히스토그램은 각각의 백신 군에 대한 모든 획득된 사건의 연쇄 샘플을 보여주고 (좌측), 막대 그래프는 각각의 개별 샘플의 정량화를 보여준다 (우측). P-값은 모든 군에 걸쳐 반응을 비교한 일원 ANOVA (크루스칼-왈리스 및 던 보정)에 의한 것이다. 데이터는 평균 ± 표준 편차이다. (E) 종양 챌린지 후 종양 성장 곡선 (좌측) 및 생존 (우측). P-값은 생존 곡선에 대한 것이고, 로그-순위 검정과 다중 비교에 대한 보정에 의한다.
도 15A-E는 3개의 자연 발생 (또는 "천연") 메티오닌 잔기가 모두 노르류신으로 대체된 T 세포 에피토프를 추가로 포함하는 펩티드 항원을 포함하는 펩티드 항원 접합체가 천연 항원 및 비-천연 항원 (즉, 각각의 메티오닌이 노르류신으로 치환된 항원) 둘 다를 인식하는 신생 T 세포 반응을 도출한다는 것을 보여준다. (A) 종양 신생항원 (천연 Adpgk) 및 노르류신-치환된 Adpgk (norAdpgk)의 서열을 화합물 259 및 260 내에 함유시켰다. (B) C57BL/6 마우스 (군당 n = 10-15)를 제0일 및 제14일에 피하로 (SC) 백신접종하였다 (295 또는 260의 8 nmol로). (B) C57BL/6 마우스 (군당 n = 10-15)를 제0일 및 제14일에 피하로 (SC) 백신접종하고, 제7일 및 제21일에 채혈하고, 제28일에 B16-BFP-Adpgk의 105개 세포로 피하로 챌린지하고, 제35일 및 제42일에 항-PD-L1로 처리하였다. (C) 제21일에 6시간 동안 시험관내 펩티드 자극 후 IFN-γ에 대한 세포내 시토카인 염색에 의해 측정된 바와 같은 CD8 T 세포 반응. 각각의 샘플을 분할하고, 천연 Adpgk min 또는 norAdpgk min으로 2.5 μg/mL로 자극하였다. 히스토그램은 각각의 조건에 대한 모든 획득된 사건의 연쇄 샘플 (좌측), 및 쌍형성된 샘플을 연결하는 선으로 정량화된 개별 샘플 (우측)을 보여준다. P-값은 군에 걸쳐 Adpgk min에 대한 반응을 비교한 일원 ANOVA (크루스칼-왈리스 및 던 보정)에 의한 것이다. (D) ASMTNMELM:H-2Db-PE로의 사량체 염색에 의해 측정된 바와 같은 제21일의 CD8 T 세포 반응. 히스토그램은 각각의 백신 군에 대한 모든 획득된 사건의 연쇄 샘플을 보여주고 (좌측), 막대 그래프는 각각의 개별 샘플의 정량화를 보여준다 (우측). P-값은 모든 군에 걸쳐 반응을 비교한 일원 ANOVA (크루스칼-왈리스 및 던 보정)에 의한 것이다. 데이터는 평균 ± 표준 편차이다. (E) 종양 챌린지 후 종양 성장 곡선 (좌측) 및 생존 (우측). P-값은 생존 곡선에 대한 것이고, 로그-순위 검정과 다중 비교에 대한 보정에 의한다.
도 16A-F는 3개의 자연 발생 (또는 "천연") 메티오닌 잔기가 모두 노르류신으로 대체되었지만 노르발린 또는 류신으로 대체된 것은 아닌 T 세포 에피토프를 추가로 포함하는 펩티드 항원을 포함하는 펩티드 항원 접합체가 천연 항원 및 비-천연 항원 (즉, 각각의 메티오닌이 노르류신으로 치환된 항원) 둘 다를 인식하는 신생 T 세포 반응을 도출한다는 것을 보여준다.
(A) 메티오닌, 노르류신, 노르발린 및 류신의 화학 구조. (B) 종양 신생항원 (천연 Adpgk), 노르류신-치환된 Adpgk (norAdpgk 또는 노르류신 Adpgk), 노르발린-치환된 Adpgk (노르발린 Adpk) 및 류신-치환된 Adpgk (류신 Adpgk)의 서열을 각각 화합물 259, 260, 261 및 262 내에 함유시켰다. (C) 역상 HPLC로 화합물 259, 260, 261 및 262를 추적하였고; y-축은 320 nm에서의 흡광도를 임의 흡광도 단위 (mAU)로 보여준다. (D) C57BL/6 마우스 (군당 n = 5)를 제0일 및 제14일에 8 nmol의 259, 260 261 또는 261로 피하로 (SC) 백신접종하고, 제7일 및 제21일에 채혈하였다. (E) ASMTNMELM:H-2Db-PE로의 사량체 염색에 의해 (좌측) 또는 6시간 동안 시험관내 펩티드 자극 후 IFN-γ에 대한 세포내 시토카인 염색에 의해 (우측) 측정된 바와 같은 제7일의 CD8 T 세포 반응. 각각의 샘플을 Adpgk min으로 2.5 μg/mL로 자극하였다. P-값은 일원 ANOVA (크루스칼-왈리스 및 던 보정)에 의한 것이다. 데이터는 평균 ± 평균의 표준 오차이다. (F) E에서와 같이 측정한 제21일의 CD8 T 세포 반응.
도 17A-D는 자연 발생 (또는 "천연") 시스테인 잔기가 알파 아미노부티르산 (B 또는 aBut)으로 대체된 T 세포 에피토프를 추가로 포함하는 펩티드 항원을 포함하는 펩티드 항원 접합체가 천연 항원 및 비-천연 항원 (즉, 시스테인이 aBut으로 대체된 항원) 둘 다를 인식하는 신생 T 세포 반응을 도출한다는 것을 보여준다. (A) 바이러스 항원 (천연 gp33) 및 aBut-치환된 gp33 (aBut gp33)의 서열을 화합물 263 및 264 내에 함유시켰다. (B) C57BL/6 마우스 (군당 n = 9)를 제0일 및 제14일에 화합물 263 또는 264의 8 nmol로 피하로 (SC) 백신접종하고, 제7일 및 제21일에 채혈하였다. (C) 제21일에 6시간 동안 시험관내 펩티드 자극 후 IFN-γ에 대한 세포내 시토카인 염색에 의해 측정된 바와 같은 CD8 T 세포 반응. 각각의 샘플을 gp33 min으로 2.5 μg/mL로 자극하였다. P-값은 군에 걸쳐 gp33 min에 대한 반응을 비교한 일원 ANOVA (크루스칼-왈리스 및 던 보정)에 의한 것이다. (D) 비장세포를 수거하고 (군당 n = 4마리 마우스; 각각의 기호는 상이한 마우스를 나타냄), gp33 min으로 표시된 농도에서 6시간 동안 자극하고, 세포내 시토카인 염색에 의해 IFN-γ에 대해 평가하였다. y-축은 10,000 nM에서의 반응의 퍼센트로서, 주어진 농도에서의 IFN-γ 반응의 %이다. 선은 비-선형 S자형 회귀 (좌측)이다. 각각의 마우스에 대해 내삽된 EC50을 그래프화하였다 (우측). P-값은 만-휘트니에 의한 것이다.
도 18A-D는 자연 발생 (또는 "천연") 시스테인 잔기가 알파 아미노부티르산 (B 또는 aBut)으로 대체된 T 세포 에피토프를 추가로 포함하는 펩티드 항원을 포함하는 펩티드 항원 접합체가 천연 항원 및 비-천연 항원 (즉, 시스테인이 aBut으로 대체된 항원) 둘 다를 인식하는 신생 T 세포 반응을 도출한다는 것을 보여준다. (A) 종양 신생항원 (천연 m27) 및 aBut-치환된 m27 (aBut m27)의 서열을 화합물 266 및 267 내에 함유시켰다. (B) C57BL/6 마우스 (군당 n = 10)를 제0일 및 제14일에 화합물 266 또는 267의 8 nmol로 피하로 (SC) 백신접종하고, 제7일 및 제21일에 채혈하였다. (C) 제21일에 6시간 동안 시험관내 펩티드 자극 후 IFN-γ에 대한 세포내 시토카인 염색에 의해 측정된 바와 같은 CD8 T 세포 반응. 각각의 샘플을 M27 min 또는 aBut M27 min으로 2.5 μg/mL로 자극하였다. P-값은 군에 걸쳐 M27 min에 대한 반응을 비교한 일원 ANOVA (크루스칼-왈리스 및 던 보정)에 의한 것이다. (D) 제21일의 M27 min으로의 자극 후 IFN-γ+ 세포의 기억 표현형. 데이터는 평균 ± 표준 편차이다.
도 19A-E는 자연 발생 (또는 "천연") 시스테인 잔기가 세린 (S 또는 Ser)으로 대체된 T 세포 에피토프를 추가로 포함하는 펩티드 항원을 포함하는 펩티드 항원 접합체가 천연 서열을 포함하는 것보다 유의하게 더 낮은 규모의 T 세포 반응을 도출한다는 것을 보여준다. (A) 시스테인 및 세린의 화학 구조. (B) 바이러스 항원 (천연 gp33) 및 ser-치환된 gp33 (ser gp33)의 서열을 화합물 263 및 265 내에 함유시켰다. (C) C57BL/6 마우스 (군당 n = 5)를 제0일 및 제14일에 화합물 263 또는 265의 8 nmol로 피하로 (SC) 백신접종하고, 제7일 및 제21일에 채혈하였다. (D-E) 제7일 (D) 및 제21일 (E)에 6시간 동안 시험관내 펩티드 자극 후 IFN-γ에 대한 세포내 시토카인 염색에 의해 측정된 바와 같은 CD8 T 세포 반응. 각각의 샘플을 분할하고, gp33 min 또는 ser gp33 min으로 2.5 μg/mL로 자극하였다. 선은 쌍 형성된 샘플을 연결한다 (우측). P-값은 군에 걸쳐 gp33 min에 대한 반응을 비교한 일원 ANOVA (크루스칼-왈리스 및 던 보정)에 의한 것이다. 주: 나이브 군은 단지 gp33 min으로만 자극되었다.
도 20A-C는 3개의 자연 발생 (또는 "천연") 시스테인 잔기가 모두 aBut로 대체된 펩티드 항원을 포함하는 펩티드 항원 접합체가 천연 항원 및 비-천연 항원 (즉, 각각의 시스테인이 aBut로 치환된 항원) 둘 다를 인식하는 신생 T 세포 반응을 도출한다는 것을 보여준다. (A) 바이러스 항원 (천연 E7) 및 aBut-치환된 E7 (aBut E7)의 서열을 화합물 268 및 269 내에 함유시켰다. (B) C57BL/6 마우스 (군당 n = 5)를 제0일 및 제14일에 화합물 268 또는 269의 8 nmol로 피하로 (SC) 백신접종하고, 제21일에 채혈하였다. (C) 제21일의 CD8 T 세포 반응이 제시된다.
도 21A-21B는 카르복실산 가용화 기를 포함하는 S 블록을 갖는 예시적인 친양쪽성체의 pH-반응성을 보여준다. (A) 친양쪽성체의 구조: 화합물 160, 270 및 271은 각각 베타-알라닌, 글리신 및 -OH로부터 선택된 R25를 갖는 PEG-기반 덴드론 증폭제를 포함한다. 화합물 272는 글루타르산으로부터 선택된 R26을 갖는 펩티드-기반 덴드론 증폭제를 포함하고, 화합물 272 및 273은 둘 다 숙신산으로부터 선택된 R26을 갖는 펩티드-기반 덴드론 증폭제를 포함하지만, 화합물 273의 경우에는 스페이서 B가 부재한다. U는 트리아졸을 포함하고, H 블록은 Ahx-2B3W2이다. (B) 490 nm에서의 흡광도 (탁도)를 명시된 pH의 PBS 완충제 중 0.1 mM에서 상이한 친양쪽성체의 도달에 대해 평가하였다. 이 연구에서 약 0.04 초과의 흡광도 값은 응집이 발생한 것을 나타낸다.
도 22A-22B는 펩티드 항원 접합체 알짜 전하, 친양쪽성체의 존재 및 친양쪽성체 스페이서 (B) 길이가 상이한 백신 조성물에 대한 제타 전위, 용혈 및 입자 크기 안정성에 미치는 영향을 보여준다. 결과는 (A) 알짜 전하 및 중성 친양쪽성체의 존재를 감소시키는 것은 감소된 RBC 용해로 이어지고; (B) 알짜 전하를 증가시키는 것은 개선된 입자 크기 안정성으로 이어진다는 것을 보여준다.
도 23은 펩티드 항원 접합체 알짜 전하가 다양한 친양쪽성체 조성을 갖는 백신 조성물에 대한 입자 크기 안정성에 미치는 영향을 보여준다. 결과는 펩티드 항원 접합체 알짜 전하를 증가시키는 것이 친양쪽성체 조성과 무관하게 개선된 입자 크기 안정성으로 이어진다는 것을 보여준다.
도 24는 펩티드 항원 접합체 알짜 전하 및 친양쪽성체의 존재가 다중 동결-해동 사이클을 거친 백신 조성물에 대한 입자 크기 안정성에 미치는 영향을 보여준다. 결과는 펩티드 항원 접합체 알짜 전하를 증가시키는 것이 개선된 입자 크기 안정성으로 이어지고, PEG24 (또는 PEG36, 데이터는 제시되지 않음) 스페이서를 갖는 친양쪽성체를 포함하는 제제는, 증가된 응집 성향 (본 연구에서 0.05 초과의 흡광도 ('탁도')에 의해 표시된 바와 같음)을 나타내는 PEG48 스페이서를 갖는 것과 비교하여 더 큰 입자 크기 안정성을 갖는다.
도 25는 Tbet 또는 Foxp3을 발현하는 T 세포의 비율에 대한 상이한 억제제 및/또는 면역자극제의 영향을 보여준다.
도 26A-B는 상이한 면역자극제를 갖는 관용 백신에 의해 유도된 Treg의 규모에 대한 ATP-경쟁적 mTOR 억제제, 토린-1의 영향을 보여준다. (A) 결과는 TLR-7/8a, 2BXy와 조합된 토린-1 (또는 '토린')이 최고 규모의 Treg 반응을 발생시키고, (B) 이는 토린-1 단독에 의해 유도된 것보다 2-배 더 높고, 토린-1이 없는 백신보다 8-배 더 높다는 것을 보여준다. 주: 펩티드 항원 접합체의 농도는 500 nM이고; 총 펩티드 항원 접합체 대 Treg 촉진 면역조정제의 몰비는 500 nM의 억제제에서 1:1, 125 nM의 억제제에서 1:0.25 및 50 nM의 억제제에서 1:0.1이다. 결과는 예시적인 mTORC1/2 억제제, 토린1을 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신이 예시적인 RORγt 억제제 (SR1555), 예시적인 mTORC1 억제제, 라파마이신 및 예시적인 AHR 효능제, ITE를 포함하는 백신과 비교하여 FOXP3을 발현하는 항원 특이적 CD4 T 세포의 보다 높은 비율을 유도한다는 것을 보여준다.
도 27A-27B는 E2의 조성물이 최소 면역원을 추가로 포함하는 펩티드 항원 (A)에 대해 생성된 항체 반응에 미치는 영향을 보여준다. (A)는 백신접종 및 샘플링 스케줄을 보여주고; (B)는 제1 백신접종 28일 후, 면역화된 마우스의 혈청으로부터 평가된 SARS-CoV2 스파이크 단백질에 대한 항체 반응 (총 IgG)의 규모를 보여준다.
도 28A-28B는 E1 및/또는 E2가 시험관내 T 세포 활성화에 미치는 영향을 보여준다. (A, B) 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U1] 또는 [U1]-[E1]-A-[E2]-[S] (여기서, A는 (A) 및 (B)의 경우에 각각 RAHYNIVTF 또는 AQLANDVVL임)의 상이한 펩티드 항원 단편을 농도 범위 (0.001 내지 10,000 nmol)에 걸쳐 CD8 T 세포와 함께 인큐베이션하고, 세포내 시토카인 염색에 의해 IFN-γ 반응을 측정함으로써 시험관내 항원 제시를 평가하였다. 각각의 펩티드 항원 단편에 대한 EC50은 곡선을 농도 대비 % 최대 반응으로서 표현된 데이터에 피팅하고 반수-최대 반응에서의 농도를 계산함으로써 결정하였다.
도 29A-29B는 백신 요법 (상동 또는 이종 프라이밍-부스팅) 및 부스팅 경로가 T 세포 반응에 어떻게 영향을 미치는지를 보여준다. (A)는 백신접종 및 샘플링 스케줄을 보여준다; 주: 펩티드 항원 접합체를 100 μl PBS 중 32 nmol/마우스로 투여하였고, ChAdOx를 100 μl PBS 중 1e8 감염 단위 (IU)로 투여하였다. (B)는 유동 세포측정법에 의해 평가된 바와 같은 제7일 및 제28일의 상이한 백신 요법에 의해 유도된 항원-특이적 T 세포의 규모 (총 CD8+ T 세포 중 % 사량체+)를 보여준다.
도 30A-30B는 경로 및 백신 요법 (상동 또는 이종 프라이밍-부스팅)이 T 세포 반응에 어떻게 영향을 미치는지를 보여준다. (A)는 백신접종 및 샘플링 스케줄을 보여준다; 주: 펩티드 항원 접합체를 100 μl PBS 중 32 nmol/마우스로 IV 경로에 의해 또는 100 μl PBS 중 8 nmol/마우스로 IM 경로에 의해 투여하였고; ChAdOx를 100 μl PBS 중 1e8 감염 단위 (IU)로 투여하였다. (B)는 유동 세포측정법에 의해 평가된 바와 같은 제7일 및 제28일의 상이한 백신 요법에 의해 유도된 항원-특이적 T 세포의 규모 (총 CD8+ T 세포 중 % 사량체+)를 보여준다.
도 31A-31B는 펩티드 항원 접합체 알짜 전하 및/또는 친양쪽성체의 존재가 T 세포 반응에 어떻게 영향을 미치는지를 보여준다. (A)는 백신접종 및 샘플링 스케줄을 보여준다; 주: 펩티드 항원 접합체를 100 μl PBS 중 32 nmol/마우스로 투여하였고, ChAdOx를 100 μl PBS 중 1e8 감염 단위 (IU)로 투여하였다. (B)는 유동 세포측정법에 의해 평가된 바와 같은 제7일 및 제28일의 상이한 백신 요법에 의해 유도된 항원-특이적 T 세포의 규모 (총 CD8+ T 세포 중 % 사량체+)를 보여준다.
도 32A-32B는 ChAdOx가 생물학적 아주반트로서 사용될 수 있음을 보여준다. (A)는 백신접종 및 샘플링 스케줄을 보여준다; 주: 펩티드 항원 접합체를 프라이밍의 경우에는 100μl PBS 중 32 nmol/마우스로 투여하되, 부스팅의 경우에는 100μl PBS 중 32 nmol/마우스로 투여하였고; ChAdOx를 100 μl PBS 중 1e8 감염 단위 (IU)로 투여하였다. (B)는 유동 세포측정법에 의해 평가된 바와 같은 제7일 및 제28일의 상이한 백신 요법에 의해 유도된 항원-특이적 T 세포의 규모 (총 CD8+ T 세포 중 % 사량체+)를 보여준다.
정의
용어 및 방법의 세부사항은 본 개시내용의 실시에서 관련 기술분야의 통상의 기술자를 안내할 목적으로 화합물, 조성물, 방법 및 그의 용도(들)에 관한 보다 큰 명확성을 제공하기 위해 하기에 제공된다. 본 개시내용의 용어는 특정한 실시양태의 보다 우수한 설명을 제공하기 위한 목적으로 유용한 것으로 이해되며, 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다.
약: 본 개시내용의 문맥에서, "약"은 측정가능한 값, 예컨대 양, 시간 기간 등을 지칭하는 경우에, 명시된 값으로부터 ±20%, ±10%, ±5%, ±1% 또는 ±0.1%의 변동을 포괄하는 것으로 의도되며, 이는 이러한 변동이 개시된 방법을 수행하는 데 적절하기 때문이다. 예를 들어, "약 10"은 9.5 내지 10.5를 지칭한다. "약 5:1"의 비는 4.75:1 내지 5.25:1의 비를 지칭한다.
투여: 임의의 효과적인 경로에 의해 작용제, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 친양쪽성 블록 공중합체 및 약물(들)을 포함하는 면역원성 조성물을 대상체에게 제공하거나 주기 위한 것. 예시적인 투여 경로는 경구, 주사 (예컨대 피하, 근육내, 피내, 복강내 및 정맥내), 경피, 국소, 비강내, 질 및 흡입 경로를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
화합물의 "투여" 및 화합물을 "투여하는"은 본원에 기재된 바와 같은 화합물, 화합물의 전구약물 또는 제약 조성물을 제공하는 것을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 화합물 또는 조성물은 또 다른 사람에 의해 대상체에게 투여될 수 있거나, 또는 대상체에 의해 자기-투여될 수 있다.
항원: T 세포 또는 B 세포 수용체에 결합하고 대상체에서 면역 반응, 특히 B 세포 반응 및/또는 T 세포 반응을 자극할 수 있는 에피토프를 함유하는 임의의 분자. 에피토프는 특이적 B 세포 또는 T 세포 수용체의 성분과 상호작용할 수 있는 에피토프를 함유하는 펩티드, 당펩티드, 지질 또는 임의의 적합한 분자를 포함할 수 있다. 이러한 상호작용은 면역 세포에 의한 반응을 생성할 수 있다. "에피토프"는 B 및/또는 T 세포 단백질, 즉 B-세포 수용체 및 T-세포 수용체가 상호작용하는 펩티드 항원의 영역을 지칭한다. 본 개시내용의 실시양태에 사용되는 항원은 병원체, 암성 세포, 자가항원, 동종항원 또는 알레르겐으로부터 선택될 수 있다. 많은 이러한 항원은 본 개시내용의 본 발명의 실시양태에 따라 사용될 수 있고, 본 명세서 전반에 걸쳐 보다 상세하게 논의된다.
항원-제시 세포 (APC): 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, B 세포, T 세포 및 랑게르한스 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는, MHC 부류 I 또는 부류 II 분자에 결합된 항원을 T 세포에 제시하는 임의의 세포.
친양쪽성: 용어 "친양쪽성"은 친수성 또는 극성 및 소수성 기 둘 다를 함유하는 물질을 의미하는 것으로 본원에 사용된다.
CD4: 다른 세포의 표면 상에 존재하는 MHC 부류 II 분자와 상호작용하는 표면 당단백질인 분화 클러스터 4. T 세포의 하위세트는 CD4를 발현하고, 이들 세포는 통상적으로 헬퍼 T 세포 또는 CD4 T 세포로 지칭된다.
CD8: 다른 세포의 표면 상에 존재하는 MHC 부류 I 분자와 상호작용하는 표면 당단백질인 분화 클러스터 8. T 세포의 하위세트는 CD8을 발현하고, 이들 세포는 통상적으로 세포독성 T 세포 (CTL), 킬러 T 세포 또는 CD8 T 세포로 지칭된다.
전하: 용질 및 용매를 비롯한 다른 원자 및 분자와의 상호작용에 영향을 미치는 물질의 물리적 특성. 하전된 물질은 다른 유형의 하전된 물질뿐만 아니라 전하의 완전한 정수 값을 보유하지 않는 분자, 예컨대 극성 분자로부터 정전기력을 경험한다. 유사한 전하의 2개의 하전된 분자는 서로 밀어내는 반면, 상이한 전하의 2개의 하전된 분자는 서로 끌어당긴다. 전하는 종종 양의 정수 또는 음의 정수 단위로 기재된다. 분자의 전하는 분자의 루이스 구조 및 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 허용되는 방법에 기초하여 용이하게 추정될 수 있다. 전하는 유도 효과로부터 초래될 수 있으며, 예를 들어 전자 친화도의 차이와 함께 결합된 원자는 극성 공유 결합을 초래하여 부분적으로 음으로 하전된 원자 및 부분적으로 양으로 하전된 원자를 초래할 수 있다. 예를 들어, 수소에 결합된 질소는 질소 상에 부분 음전하 및 수소 원자 상에 부분 양전하를 초래한다. 대안적으로, 분자 내의 원자는 그 원자에 할당된 전자의 수가 원자의 원자 수 이하인 경우에 완전한 정수 값의 전하를 갖는 것으로 간주될 수 있다. 분자의 전하는 분자를 구성하는 각각의 원자의 전하를 합하여 결정된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 분자 내의 각각의 원자의 형식 전하를 합하여 분자의 전하를 추정하는 방법에 친숙하다. "하전된 관능기는 영구적으로 하전되거나 pH에 따라 전하를 가질 수 있는 관능기를 지칭한다. 하전된 관능기는 양성 또는 음성일 수 있는 전하의 부분 또는 완전한 정수 값일 수 있고, 이는 각각 양으로 하전된 관능기 또는 음으로 하전된 관능기로 지칭된다. 양성 또는 음성일 수 있는 1개 이상의 하전된 관능기를 포함하는 분자의 부분은 "하전된 기", 예를 들어 양으로 하전된 기 또는 음으로 하전된 기로 지칭된다. 하전된 기는 양성 관능기, 음성 관능기 또는 양성 및 음성 둘 다의 관능기를 포함할 수 있다. 하전된 기의 알짜 전하는 양성, 음성 또는 중성일 수 있다. 하전된 단량체는 하전된 기를 포함하는 단량체를 지칭한다. 하전된 아미노산은 하전된 단량체의 유형이다. 주: 하전된 기, 예를 들어 하전된 단량체, 예컨대 하전된 아미노산을 추가로 포함하는 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 입자의 알짜 전하는 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체 내의 각각의 관능기의 전하를 합하여 추정될 수 있다.
화학요법제: 암의 치료에 유용한 임의의 제약 활성 분자로서 광범위하게 정의되는 약물 분자 (D)의 유형으로, 성장 억제제 또는 세포독성제, 예컨대 알킬화제, 항대사물, 항미세관 억제제, 토포이소머라제 억제제, 수용체 티로신 키나제 억제제, 혈관신생 억제제 등을 포함한다. 화학요법제의 예는 알킬화제 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드 (시톡산(CYTOXAN)®); 알킬 술포네이트 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸멜라민 예컨대 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민; 질소 머스타드 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 시클로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴; 항생제 예컨대 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 칼리케아미신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물 예컨대 메토트렉세이트 및 5-FU; 폴산 유사체 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항부신제 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 포도필린산 산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK®; 라족산; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드 또는 탁산 패밀리의 구성원, 예컨대 파클리탁셀 (탁솔(TAXOL)®), 도세탁셀 (탁소테레(TAXOTERE)®) 및 그의 유사체; 클로람부실; 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미토마이신 C; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 나벨빈; 노반트론; 테니포시드; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노산; 에스페라미신; 카페시타빈; 수용체 티로신 키나제 및/또는 혈관신생의 억제제, 예컨대 소라페닙 (넥사바르(NEXAVAR)®), 수니티닙 (수텐트(SUTENT)®), 파조파닙 (보트리엔트(VOTRIENT)™), 토세라닙 (팔라디아(PALLADIA)™), 반데타닙 (작티마(ZACTIMA)™), 세디라닙 (레센틴(RECENTIN)®), 레고라페닙 (BAY 73-4506), 악시티닙 (AG013736), 레스타우르티닙 (CEP-701), 에를로티닙 (타르세바(TARCEVA)®), 게피티닙 (이레사(IRESSA)™), BIBW 2992 (토복(TOVOK)™), 라파티닙 (타이커브(TYKERB)®), 네라티닙 (HKI-272) 등 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 또한, 이러한 정의에는 종양에 대한 호르몬 작용을 조절 또는 억제하는 작용을 하는 항호르몬제, 예컨대 항에스트로겐 예컨대 예를 들어 타목시펜, 랄록시펜, 아로마타제 억제 4(5)-이미다졸, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY 117018, 오나프리스톤, 및 토레미펜 (파레스톤(FARESTON)®); 및 항안드로겐 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드, 및 고세렐린; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체가 포함된다. 문헌 [Wiemann et al., 1985, in Medical Oncology (Calabresi et al., eds.), Chapter 10, McMillan Publishing]에 개시된 바와 같은 다른 통상적인 세포독성 화학적 화합물이 또한 적합한 화학요법제이다.
화학요법제 (또한 화학 요법제로도 지칭됨)는 제약 활성 화합물이고, 따라서 본원에서 일반적으로 약물 또는 약물 분자, 또는 화학식에서 "D"로 지칭될 수 있다. 명확성을 위해, 용어 화학요법제(들) 및 화학 요법제(들)는 암 치료에 유용한 임의의 합성 또는 자연 발생 분자를 기재하는 것으로 본원에 사용되지만, 특정 부류의 약물 분자는 대안적으로 그의 작용 메카니즘에 의해 기재될 수 있고, 예를 들어 혈관신생 억제제는 혈관신생을 억제하는 화학요법제이다. 특정 면역조정제, 예를 들어 면역자극제가 암 치료에 유용할 수 있지만, 면역자극제 및 면역억제제를 포함한 면역조정제는 본 명세서에서 화학요법제로 지칭되지 않는다.
클릭 화학 반응: 최소, 생체적합성 및/또는 무해한 부산물을 생성하는 고수율 반응으로 온화한 조건 하에 2종의 화합물을 함께 연결하는 생물직교 반응. 본 개시내용에 사용된 예시적인 클릭 화학 반응은 변형-촉진된 [3+2] 아지드-알킨 고리화-첨가를 통해 트리아졸 링커를 형성하는 아지드 기와 알킨의 반응이다.
공중합체: 단지 1개의 단량체가 사용된 단독중합체와 대조적으로, 2개 (또는 그 초과)의 상이한 단량체로부터 유도된 중합체. 공중합체는 적어도 2가지 유형의 구성 단위 (또한 구조 단위)를 포함하기 때문에, 공중합체는 이들 단위가 쇄를 따라 어떻게 배열되는지에 기초하여 분류될 수 있다. 공중합체는 2개 이상의 단량체 단위가 무작위로 분포되어 있는 통계적 (또는 무작위) 공중합체일 수 있거나; 공중합체는 2개 이상의 단량체 단위가 교호 순서로 분포되어 있는 교호 공중합체일 수 있거나; 또는 예를 들어 공중합체, 예를 들어 폴리(아미노산)는 고체-상 펩티드 합성 (SPPS)에 의해 생성될 수 있고, 특정 순서의 단량체 단위를 가질 수 있다. 용어 "블록 공중합체"는 일반적으로 상이한 구성성분 단량체 또는 공단량체의 2개 이상의 인접 블록으로 구성된 중합체를 지칭한다 (블록이 2개 이상의 상이한 단량체를 포함하는 경우). 블록 공중합체는 본원에서 2개 이상의 단독중합체 서브유닛, 2개 이상의 공중합체 서브유닛 또는 1개 이상의 단독중합체 서브유닛 및 1개 이상의 공중합체 서브유닛을 포함하는 공중합체를 지칭하는 데 사용될 수 있으며, 여기서 서브유닛은 공유 결합에 의해 직접 연결될 수 있거나 또는 서브유닛은 중간 비-반복 서브유닛, 예컨대 접합 블록 또는 링커를 통해 간접적으로 연결될 수 있다. 블록은 선형 및/또는 브러시 아키텍처에 기초할 수 있다. 2 또는 3개의 별개의 블록을 갖는 블록 공중합체는 본원에서 각각 "이블록 공중합체" 및 "삼블록 공중합체"로 지칭된다. 공중합체는 일반적으로 중합체로 지칭될 수 있으며, 예를 들어 통계적 공중합체는 중합체 또는 공중합체로 지칭될 수 있다. 유사하게, 블록 공중합체는 일반적으로 중합체로 지칭될 수 있다. 본원에 사용된 공중합체는 2가지 이상의 유형의 단량체를 포함하는 중합체를 의미하지만, 삼원공중합체는 3개의 단량체 단위를 갖는 공중합체이다.
임계 미셀 농도 (CMC): 그 초과에서 미셀이 자발적으로 형성되어 열역학적 평형을 충족시키는 물질의 농도를 지칭한다.
약물: 섭취되거나 또는 달리 신체 내로 도입되는 경우에 생리학적 효과를 갖는 임의의 제약 활성 분자 - 비제한적으로, 단백질, 펩티드, 당, 사카라이드, 뉴클레오시드, 무기 화합물, 지질, 핵산, 소형 합성 화학적 화합물, 마크로사이클 등을 포함함 - 를 지칭한다. 제약 활성 화합물은, 예를 들어 진통제, 마취제, 항염증제, 구충제, 항부정맥제, 항천식제, 항생제 (페니실린 포함), 항암제, 항응고제, 항우울제, 항당뇨병제, 항간질제, 항히스타민제, 진해제, 항고혈압제, 항무스카린제, 항미코박테리아제, 항신생물제, 항산화제, 해열제, 면역억제제, 면역자극제, 항갑상선제, 항바이러스제, 불안완화제 진정제 (수면제 및 신경이완제), 수렴제, 정박테리아제, 베타-아드레날린수용체 차단제, 혈액 제품 및 대체물, 기관지확장제, 완충제, 심장 수축촉진제, 화학요법제, 조영제, 코르티코스테로이드, 기침 억제제 (거담제 및 점액용해제), 진단제, 진단 영상화제, 이뇨제, 도파민작용제 (항파킨슨병제), 자유 라디칼 스캐빈징제, 성장 인자, 지혈제, 면역학적 작용제, 지질 조절제, 근육 이완제, 단백질, 예컨대 치료 항체 및 항체 단편, MHC-펩티드 복합체, 시토카인 및 성장 인자, 당단백질, 펩티드 및 폴리펩티드, 부교감신경흥분제, 부갑상선 칼시토닌, 비포스포네이트, 프로스타글란딘, 방사성-제약, 호르몬, 성 호르몬 (스테로이드 포함), 항알레르기제, 자극제 및 식욕감퇴제, 스테로이드, 교감신경흥분제, 갑상선 작용제, 백신, 혈관확장제 및 크산틴을 포함한 다양한 공지된 부류의 화합물로부터 선택될 수 있다. 약물은 또한 제약 활성제, 제약 활성 물질 또는 생물학적 활성 화합물 또는 생물활성 분자로 지칭될 수 있다. 본원에 기재된 화학식 내의 임의의 약물 분자는 "D"로 약칭된다.
약물 전달: 인간 또는 동물에서 치료 효과를 달성하기 위해 제약 화합물을 투여하는 방법 또는 과정.
유효량: 특정한 생물학적 결과, 예컨대 비제한적으로 본원에 개시되거나, 기재되거나 또는 예시된 생물학적 결과를 달성하는 데 효과적인 화합물, 물질 또는 조성물의 양. 이러한 결과는 관련 기술분야에 적합한 임의의 수단에 의해 결정된 바와 같은, 본원에 언급된 질환 상태 중 임의의 것과 연관된 증상의 효과적인 감소를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
그라프트 공중합체: 제2 중합체 (예를 들어, 중합체 B)의 1개 이상의 측쇄를 갖는 주 중합체 쇄 (예를 들어, 중합체 A)를 갖는 중합체. 제1 중합체 A는 그의 단량체 및 측쇄를 통해 제2 중합체 B에 연결되고, 이는 중합체 A의 개별 단량체에 결합됨으로써 중합체 A의 쇄로부터 분지된다. 말단 기를 통해 제2 중합체에 연결된 제1 중합체는 블록 중합체 (예를 들어, A-B 유형 이-블록) 또는 말단-그라프팅된 중합체로 기재될 수 있다.
소수친수성 지수 / GRAVY 값: 아미노산 또는 아미노산 서열의 소수성 또는 친수성 특징을 나타내는 수이다. 펩티드를 구성하는 아미노산의 상대적 소수성 및 친수성 특징을 기재하는 데 사용될 수 있는 다양한 척도가 존재한다. 본 개시내용에서, 카이트(Kyte) 및 두리틀(Doolittle)의 소수친수성 척도 (Kyte J, Doolittle RF, J. Mol. Biol 157: 105-32, 1983)를 사용하여 소수친수성의 전체 평균 (GRAVY) 값을 계산하며, 이는 때때로 GRAVY 점수로 지칭된다. 펩티드의 GRAVY 값은 펩티드를 구성하는 모든 아미노산의 소수친수성 값을 펩티드의 길이 (즉, 아미노산의 수)로 나눈 것의 합이다. GRAVY 값은 상대 값이다. GRAVY 값이 클수록, 펩티드 서열이 보다 소수성인 것으로 간주되는 반면, GRAVY 값이 낮을수록, 펩티드 서열이 보다 친수성인 것으로 간주된다.
친수성: 물질이 수용액 (때때로 수성 매질로 지칭됨) 중에서 자유롭게 분산되거나 가용화되는 경향을 지칭한다. 물질은 다른 친수성 물질과의 상호작용을 선호하고 소수성 물질과의 상호작용을 피하는 경우에 친수성으로 간주된다. 일부 경우에, 친수성은 상대적인 용어로서 사용될 수 있고, 예를 들어 비교되는 것에 따라 동일한 분자가 친수성으로서 또는 친수성이 아닌 것으로서 기재될 수 있다. 친수성 분자는 종종 극성이고/거나 하전되고, 우수한 수용해도를 가지며, 예를 들어 적어도 1.0 mg/mL 이상의 농도로 가용성이다. 친수성 기는 극성이고/거나 하전되고 우수한 수용해도를 갖는 분자의 부분을 지칭한다.
소수성: 물과의 접촉을 피하는 물질의 경향을 지칭한다. 물질은 다른 소수성 물질과의 상호작용을 선호하고 친수성 물질과의 상호작용을 피하는 경우에 소수성으로 간주된다. 소수성은 상대적인 용어이고; 비교되는 것에 따라 동일한 분자가 소수성으로서 또는 소수성이 아닌 것으로서 기재될 수 있다. 소수성 분자는 종종 비-극성이고 비-하전되고, 불량한 수용해도를 가지며, 예를 들어 물에 불용성이거나, 또는 단지 1 mg/mL 이하, 전형적으로 0.1 mg/mL 이하 또는 보다 바람직하게는 0.01 mg/mL 이하의 농도로만 물에 가용성이다. 소수성 단량체는 소수성 기를 포함하고 물에 불용성이거나 또는 특정 온도, pH 및 염 농도에서 물에 불용성인 중합체를 형성하는 단량체, 예를 들어 소수성 아미노산이다. 소수성 기는 소수성인 분자의 부분을 지칭한다. 예를 들어, 스티렌 단량체는 폴리(스티렌)가 수불용성 중합체이기 때문에 소수성 단량체로 지칭될 수 있다. 소수성 약물은 약 pH 7.4의 pH의 수용액 중에서 불용성이거나 또는 단지 약 1.0 mg/mL 이하의 농도로만 가용성인 약물 분자를 지칭한다. 친양쪽성 약물은 수용액 중에서 초분자 구조, 예를 들어 미셀로 어셈블리되는 경향을 갖고/거나 약 pH 7.4의 pH의 수용액 중에서 제한된 용해도를 갖는 약물 분자이다.
면역 반응: 직접적 또는 간접적, 예컨대 세포 또는 시토카인 중간자를 통한 자극의 결과로서, 면역계의 세포, 예컨대 B 세포, T 세포, 또는 단핵구의 활성에서의 변화. 특정 실시양태에서, 반응은 특정한 항원에 대해 특이적이다 ("항원-특이적 반응"). 면역 반응은 T 세포 반응, 예컨대 CD4 T 세포 반응 또는 CD8 T 세포 반응을 포함할 수 있다. 이러한 면역 반응은 추가의 T 세포 자손의 생산 및/또는 T 세포의 이동을 발생시킬 수 있다. 다른 실시양태에서, 반응은 B 세포 반응이고, 특이적 항체의 생산 또는 추가의 B 세포 자손의 생산을 발생시킨다. 또 다른 실시양태에서, 반응은 항원-제시 세포 반응이다. 항원은 바이러스 감염된 세포 또는 암성 세포를 사멸시키는 세포독성 T 세포의 활성화로 이어지는 면역 반응을 자극하는 데 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 항원은 관용 또는 면역 억제를 유도하는 데 사용될 수 있다. 면역관용성 반응은 항원에 대한 T 세포 또는 B 세포의 비반응성으로부터 발생할 수 있다. 억제성 면역 반응은 조절 세포, 예컨대 조절 T 세포의 프라이밍 및/또는 활성화, 또는 면역 반응을 하향조절하는, 즉 면역 반응을 약화시키는 조절 세포로의 이펙터 세포의 전환-분화로 인해 발생할 수 있다.
면역원성 조성물: 항원 및 임의로 항원에 대한 측정가능한 면역 반응을 유도하는 면역조정제를 포함하는 물질의 제제. 예를 들어, 백신은 면역원성 조성물의 한 유형이다.
면역조정제: 면역자극제 및 면역억제제를 포함하는, 면역계의 세포의 활성을 조정하는 약물의 유형을 지칭한다.
면역자극제: 면역 세포에 의한 염증유발 및/또는 세포독성 활성을 촉진하는 임의의 합성 또는 자연 발생 약물을 지칭한다. 예시적인 면역자극제는 패턴 인식 수용체 (PRR) 효능제, 예컨대 톨-유사 수용체 (TLR)의 합성 또는 자연 발생 효능제, 인터페론 유전자의 자극인자 효능제 (STINGa), 뉴클레오티드-결합 올리고머화 도메인-유사 수용체 (NLR) 효능제, 레티노산-유도성 유전자-I-유사 수용체 (RLR) 효능제 및 특정 C-유형 렉틴 수용체 (CLR), 뿐만 아니라 특정 시토카인 (예를 들어, 특정 인터류킨), 예컨대 IL-2; 케모카인 수용체에 결합하는 특정 케모카인 또는 소분자; 예를 들어 자극 수용체에 대한 결합을 통해 (예를 들어 항-CD40), 또는 예를 들어 억제 수용체를 차단함으로써 (예를 들어 항-CTLA4, 항-PD1 등) 면역 세포를 활성화시키는 특정 항체, 항체 단편 또는 합성 펩티드를 포함한다. 본 개시내용의 실시에 적합한 다양한 면역자극제가 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있다. 명확성을 위해, 면역계를 자극하는 특정 제약 활성 화합물은 면역자극제로서 또는 보다 일반적으로 약물 분자로서 (화학식에서 "D"로 약칭됨) 지칭될 수 있다.
면역억제제: 면역 세포 또는 체액성 면역계, 예를 들어 항체 및 보체 단백질에 의한 염증유발 및/또는 세포독성 활성을 억제하는 임의의 합성 또는 자연 발생 약물을 지칭한다. 면역억제제는 하기 작용 메카니즘 중 1종 이상을 통해 효과를 매개할 수 있다: 억제 세포, 예를 들어 조절 T 세포의 프라이밍; 염증유발 세포, 세포독성 세포 및/또는 B 세포의 사멸, 억제 또는 탈활성화; 염증유발 및/또는 세포독성 T 세포의 억제 세포로의 전환-분화; 및/또는 염증유발 세포, 세포독성 세포 및/또는 B 세포의 격리 및/또는 이동성의 제한에 의함. 예시적인 면역억제제는 아릴 탄화수소 수용체 (AHR)의 합성 또는 자연 발생 효능제; 글루코코르티코이드를 포함한 특정 스테로이드; 특정 히스톤 데아세틸라제 억제제 (HDACS), 예컨대 HDAC9의 억제제; 레티노산 수용체 효능제; 포유동물 라파마이신 표적 (mTOR) 억제제, 예컨대 라파마이신; 특정 시클린 의존성 키나제 (CDK) 억제제; 특정 아데노신 수용체 효능제; PD1의 효능제; 및 면역 세포 또는 항체에 의한 염증유발 또는 세포독성 활성을 억제하는 다른 분자를 포함한다. 본 개시내용의 실시에 적합한 다양한 면역억제제가 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있고, Treg 촉진 면역조정제를 포함한다. 명확성을 위해, 면역억제제는 보다 일반적으로 약물 분자로서 (화학식에서 "D"로 약칭됨) 지칭될 수 있다.
생체내 전달: 대상체에 대한 국소, 경피, 좌제 (직장, 질), 페사리 (질), 정맥내, 경구, 피하, 복강내, 척수강내, 근육내, 두개내, 흡입, 경구, 또는 임의의 다른 적합한 경로에 의한 조성물, 예컨대 친양쪽성 블록 공중합체 및 약물(들)을 포함하는 조성물의 투여.
연결된 또는 커플링된: 용어 "연결된" 및 "커플링된"은 직접적으로 또는 간접적으로 함께 이어진 것을 의미한다. 제1 모이어티는 제2 모이어티에 공유적으로 또는 비공유적으로 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 분자는 공유 결합에 의해 또 다른 분자에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 분자는 정전기 인력에 의해 또 다른 분자에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 분자는 쌍극자-쌍극자 힘 (예를 들어, 수소 결합)에 의해 또 다른 분자에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 분자는 반 데르 발스 힘 (또한 런던 힘으로도 공지됨)에 의해 또 다른 분자에 연결된다. 제1 분자는 이러한 커플링의 임의의 및 모든 조합에 의해 또 다른 분자에 연결될 수 있다. 분자는 예컨대 링커 (때때로 링커 분자로 지칭됨)를 사용하여 간접적으로 연결될 수 있다. 분자는 둘 다의 분자에 독립적으로 비공유적으로 결합하는 성분의 개재에 의해 간접적으로 연결될 수 있다. 본원에서 화학식에 사용된, 때때로 "X"로 약칭되는 용어 "링커"는 임의의 적합한 링커 분자를 의미한다. 구체적인, 바람직한 링커는 다른 기호, 예컨대 X1, X2, X3, X4, X5 및 U로 표시될 수 있다. 다양한 링커가 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있다.
"이중층 막" 또는 "이중층(들)"은 수용액 중 친양쪽성체 또는 초-친양쪽성체의 자기-어셈블리된 막이다.
미셀: 닫힌 구획을 규정하는 단일 단층을 갖는 구형 리셉터클. 일반적으로, 친양쪽성 분자는 극성 용매에서 자발적으로 미셀 구조를 형성한다. 이중층, 예를 들어 리포솜 이중층과 대조적으로, 미셀은 친수성 극성 외부 표면을 돌출시키고 소수성 내부 표면을 나타낸다는 점에서 "측면"이다.
mol%: 중합체에 존재하는 특정한 유형의 단량체 단위 (또는 "단량체")의 백분율을 지칭한다. 예를 들어, 단량체 A의 밀도 (또는 "mol%")가 10 mol%와 동등한, A 및 B의 100개의 단량체 단위를 갖는 중합체는 A의 10개의 단량체 단위를 가질 것이고, 나머지 90개의 단량체 단위 (또는 "단량체")는 달리 명시되지 않는 한 단량체 B 또는 또 다른 단량체일 수 있다.
단량체 단위: 용어 "단량체 단위" 또는 "단량체성 단위"는 단량체 중 하나와 동일하거나 유사한 수의 원자를 함유하는 중합체 분자의 단위를 의미하는 것으로 본원에 사용된다. 본 명세서에 사용된 단량체 단위는 단일 유형 (균질) 또는 다양한 유형 (불균질)일 수 있다. 예를 들어, 폴리(아미노산)는 아미노산 단량체 단위를 포함한다. 단량체 단위는 또한 단량체 또는 단량체성 단위 등으로 지칭될 수 있다.
알짜 전하: 분자에 의해, 또는 명시된 경우에 분자의 부분 또는 섹션에 의해 운반되는 정전하의 합.
입자: 분자의 어셈블리로 구성된 나노- 또는 마이크로-크기의 초분자 구조. 예를 들어, 본 개시내용의 친양쪽성체 및 펩티드 항원 접합체는 수용액 중에서 입자를 형성한다. 일부 실시양태에서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체에 의한 입자 형성은 pH 또는 온도에 좌우된다. 일부 실시양태에서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체로 구성된 나노입자는 5 나노미터 (nm) 내지 500 nm의 평균 직경을 갖는다. 일부 실시양태에서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체로 구성된 나노입자는 미셀을 형성하고, 5 나노미터 (nm) 내지 50 nm, 예컨대 10 내지 30 nm의 평균 직경을 갖는다. 일부 실시양태에서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체로 구성된 나노입자는 100 nm 초과일 수 있다.
패턴 인식 수용체 (PRR): 다양한 세포 집단, 특히 광범위한 군의 합성 및 자연 발생 분자에 결합하는 선천성 면역 세포에 의해 발현되는 수용체. PRR에는 여러 부류가 존재한다. PRR의 비제한적 예는 톨-유사 수용체 (TLR), RIG-I-유사 수용체 (RLR), NOD-유사 수용체 (NLR), 인터페론 유전자 수용체의 자극인자 (STING), 및 C-유형 렉틴 수용체 (CLR)를 포함한다. 이러한 PRR의 효능제는 면역자극 약물로 지칭되고, 항원에 대한 면역 반응을 증진시키고/거나 변형시키는 데 사용될 수 있다. 패턴 인식 수용체에 대한 보다 많은 정보에 대해서는, 문헌 [Wales et al., Biochem Soc Trans., 35:1501-1503, 2007]을 참조한다.
펩티드 또는 폴리펩티드: 1개 이상의 아미드 결합을 통해 연속하여 함께 연결된 2개 이상의 천연 또는 비-천연 아미노산 잔기. 아미노산 잔기는 번역후 변형(들) (예를 들어, 글리코실화, 시트룰린화, 호모시트룰린화, 산화 및/또는 인산화)을 함유할 수 있다. 이러한 변형은 생체내에서 자연적으로 발생하거나 또는 비-자연일 수 있는 번역후 변형을 모방할 수 있다. 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 성분 중 어느 하나 이상은 펩티드를 포함할 수 있다.
펩티드 변형: 펩티드는 하기 제시된 바와 같은 여러 변형 중 1종 이상으로 변경되거나 또는 달리 합성될 수 있다. 또한, 이들 펩티드의 유사체 (비-펩티드 유기 분자), 유도체 (펩티드로부터 출발하여 수득된 화학적으로 관능화된 펩티드 분자) 및 변이체 (상동체)가 본원에 기재된 방법에 이용될 수 있다. 본원에 기재된 펩티드는 L- 및/또는 D-버전일 수 있는 아미노산, 유사체, 유도체 및 변이체의 서열을 포함한다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에 언급된 임의의 펩티드 서열은 L 아미노산, 바람직하게는 독점적으로 L 아미노산을 포함한다. 이러한 펩티드는 자연 발생 및 다른 펩티드, 유사체, 유도체 및 변이체를 함유할 수 있다.
펩티드는 임의의 다양한 화학적 기술을 통해 변형되어 비변형된 펩티드와 유사한 활성을 갖고 임의로 다른 바람직한 특성을 갖는 유도체를 생산할 수 있다. 예를 들어, 펩티드의 카르복실산 기는, 카르복실 말단에서든 또는 측쇄에서든, 제약상 허용되는 양이온의 염의 형태로 제공될 수 있거나, 또는 에스테르화되어 CC1-CC16 에스테르 (여기서 CC는 탄소 쇄를 지칭함) (따라서, CC1은 단일 탄소를 지칭하고, CC16은 16개의 탄소를 지칭함)를 형성할 수 있거나, 또는 아미드로 전환될 수 있다. 펩티드의 아미노 기는, 아미노 말단에서든 또는 측쇄에서든, 제약상 허용되는 산 부가염, 예컨대 HCl, HBr, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 포름산, 벤조산, 톨루엔 술폰산, 말레산, 타르타르산 및 다른 유기 염의 형태일 수 있거나, 또는 예를 들어 아세틸화에 의해 변형되거나 아미드로 전환될 수 있다.
펩티드는 양전하 또는 음전하 또는 둘 다를 함유하는 치환기를 함유하도록 변형될 수 있다. 양전하 및/또는 음전하는 펩티드가 존재하는 pH에 의해 영향을 받을 수 있다.
펩티드 측쇄의 히드록실 기는 널리 인식된 기술을 사용하여 C1-C16 알콕시 또는 C1-C16 에스테르로 전환될 수 있거나, 또는 히드록실 기는 음전하를 도입하기 위해 전환 (예를 들어, 황산화 또는 인산화)될 수 있다. 펩티드 측쇄의 페닐 및 페놀 고리는 1개 이상의 할로겐 원자, 예컨대 플루오린, 염소, 브로민 또는 아이오딘, 또는 C1-C16 알킬, C1-C16 알콕시, 카르복실산 및 그의 에스테르, 또는 이러한 카르복실산의 아미드로 치환될 수 있다. 펩티드 측쇄의 메틸렌 기는 상동 C2-C4 알킬렌으로 연장될 수 있다. 티올은, 예를 들어 말레이미드와의 반응을 통해 디술피드 결합 또는 티오에테르를 형성하는 데 사용될 수 있다. 티올은 다수의 널리 인식된 보호기 중 임의의 것, 예컨대 아세트아미드 기로 보호될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 또한 증진된 안정성을 발생시키는 구조에 대한 입체형태적 제약을 선택하고 제공하기 위해 본 발명의 펩티드 내로 시클릭 구조를 도입하는 방법을 인식할 것이다. 관능기에 대해 이루어질 수 있는 추가의 변형의 세부사항에 대해서는 문헌 [Greene et al., "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis" Fourth Edition, John Wiley & Sons, Inc. 2006]을 참조할 수 있다.
본원에 보고된 예상외의 발견은 자연 발생 펩티드 항원의 시스테인 잔기가 알파 아미노부티르산 또는 세린으로 대체될 수 있고, 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체되어 자연 발생 펩티드 항원과 교차-반응성인 면역 반응을 유도하는 비천연 펩티드 항원을 생성할 수 있다는 것이다. 비천연 서열을 갖는 펩티드 항원을 제조하고 사용하는 바람직한 방법은 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있다.
제약상 허용되는 비히클: 본 개시내용에 유용한 제약상 허용되는 비히클 (또는 담체)은 통상적인 담체, 부형제 및 희석제를 포함한다. 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 15th Edition (1975)]은 1종 이상의 치료 조성물, 예컨대 1종 이상의 치료 암 백신, 및 추가의 제약 작용제의 제약 전달에 적합한 조성물 및 제제를 기재한다.
제약상 허용되는 담체는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 수용액, 예컨대 물 또는 생리학상 완충 염수 또는 다른 용매 또는 비히클, 예컨대 글리콜, 글리세롤, 오일, 예컨대 올리브 오일, 또는 주사가능한 유기 에스테르를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 이러한 제약 조성물이 인간 투여, 특히 침습적 투여 경로 (즉, 상피 장벽을 통한 수송 또는 확산을 피하는 경로, 예컨대 주사 또는 이식)를 위한 것인 경우에, 수용액은 발열원-무함유이거나, 또는 실질적으로 발열원-무함유이다. 부형제는, 예를 들어 작용제의 지연 방출이 일어나도록 또는 1종 이상의 세포, 조직 또는 기관을 선택적으로 표적화하도록 선택될 수 있다. 제약 조성물은 투여 단위 형태, 예컨대 정제, 캡슐 (스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐 포함), 과립, 재구성용 동결건조물, 분말, 용액, 시럽, 좌제, 주사 등일 수 있다. 조성물은 또한 경피 전달 시스템, 예를 들어 피부 패치에 존재할 수 있다. 조성물은 또한 국소 투여에 적합한 용액, 예컨대 연고 또는 크림에 존재할 수 있다.
제약상 허용되는 담체는, 예를 들어 화합물, 예컨대 본 발명의 화합물을 안정화시키거나, 용해도를 증가시키거나, 또는 그의 흡수를 증가시키는 작용을 하는 생리학상 허용되는 작용제를 함유할 수 있다. 이러한 생리학상 허용되는 작용제는, 예를 들어 탄수화물, 예컨대 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란, 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 글루타티온, 킬레이트화제, 저분자량 단백질 또는 다른 안정화제 또는 부형제를 포함한다. 생리학상 허용되는 작용제를 비롯한 제약상 허용되는 담체의 선택은, 예를 들어 조성물의 투여 경로에 좌우된다. 제약 조성물의 제제는 자기-유화 약물 전달 시스템 또는 자기-미세유화 약물 전달 시스템일 수 있다. 제약 조성물 (제제)은 또한 그 안에 예를 들어 본 발명의 화합물이 혼입될 수 있는 리포솜 또는 다른 중합체 매트릭스일 수 있다. 예를 들어, 인지질 또는 다른 지질을 포함하는 리포솜은 제조 및 투여가 비교적 간단한 비독성의 생리학상 허용되고 대사가능한 담체이다.
극성: 물질의 특성의 설명. 극성은 상대적 용어이고, 질소와 수소 사이의 결합과 같이 분자에서 함께 결합된 원자 사이의 전기음성도 차이로부터 비롯된 부분 전하를 갖는 분자 또는 분자의 부분을 기재할 수 있다. 극성 분자는 다른 극성 분자와의 상호작용을 선호하고, 전형적으로 비-극성 분자와 회합하지 않는다. 구체적인 비제한적 경우에, 극성 기는 히드록실 기, 또는 아미노 기, 또는 카르복실 기, 또는 하전된 기를 함유할 수 있다. 구체적인 비제한적 경우에, 극성 기는 극성 용매, 예컨대 물과의 상호작용을 선호할 수 있다. 구체적인 비제한적 경우에, 추가의 극성 기의 도입은 분자의 부분의 용해도를 증가시킬 수 있다.
중합체: 반복 구조 단위 (단량체)를 함유하는 분자. 본 개시내용 전반에 걸쳐 보다 상세하게 기재된 바와 같이, 중합체는 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체 및 약물 분자 접합체의 임의의 수의 성분에 사용될 수 있고, 천연 또는 합성일 수 있다. 본 발명의 실시에 유용한 중합체의 다양한 조성은 다른 곳에서 보다 상세하게 논의된다. 주: 중합체는 본 명세서 전반에 걸쳐, 때때로 올리고머로 지칭될 수 있는, 3개 이상만큼 적은 단량체를 갖는 분자를 광범위하게 포괄하는 것으로 사용된다.
중합: 단량체가 조합되어 쇄형, 분지형 또는 가교된 거대분자 (중합체)를 형성하는, 통상적으로 촉매, 열 또는 광을 사용하여 수행되는 화학 반응. 쇄, 분지 또는 가교된 거대분자는 적절한 치환기 및 화학 반응을 사용하는 추가의 화학적 합성에 의해 추가로 변형될 수 있다. 중합은 통상적으로 부가 또는 축합에 의해 일어난다. 부가 중합은 개시제, 통상적으로 자유 라디칼이 단량체 내의 이중 결합과 반응할 때 일어난다. 자유 라디칼은 이중 결합의 한 쪽에 부가되어, 다른 쪽에 자유 전자를 생성한다. 이어서, 이러한 자유 전자는 또 다른 단량체와 반응하고, 쇄는 자기-전파되어, 성장하는 쇄의 말단에 한 번에 1개의 단량체 단위를 부가한다. 축합 중합은 2개의 단량체 단위가 반응하여 물 분자의 분리가 발생하는 것을 수반한다. 다른 형태의 중합에서, 단량체는 예컨대 고체 상 펩티드 합성 (SPPS) 동안 활성화된 단량체의 단계적 도입을 통해 성장하는 쇄에 한 번에 1개씩 부가된다.
폴리머솜: 수용액에서 합성 다중-블록 중합체로부터 어셈블리된 소포. 리포솜과 달리, 폴리머솜은 그의 주요 성분으로서 지질 또는 인지질을 포함하지 않는다. 결과적으로, 폴리머솜은 열적으로, 기계적으로, 및 화학적으로 구별될 수 있고, 특히 지질 소포의 가장 안정한 것보다 더 내구성이고 탄성일 수 있다. 폴리머솜은, 예를 들어 필름 또는 벌크 재수화에 의해 또는 하기 기재된 바와 같은 추가의 포레시스(phoresis) 단계를 통해, 또는 다른 공지된 방법에 의해, 층상 팽윤 공정 동안 어셈블리된다. 리포솜과 같이, 폴리머솜은 폐쇄된 반투과성 막을 제조하는 자발적 엔트로피-구동 과정인 "자기-어셈블리"에 의해 형성된다.
정제된: 물질 또는 조성물에 섞이거나 이를 오염시키는 불순물 또는 물질이 비교적 없는 물질 또는 조성물. 용어 정제된은 상대적 용어이고, 절대 순도를 요구하지 않는다. 실질적인 정제는 불순물로부터의 정제를 나타낸다. 실질적으로 정제된 물질 또는 조성물은 전형적으로 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 순수하다.
가용성: 용매에 분자 또는 이온 분산되어 균질 용액을 형성할 수 있음. 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체, 약물 분자 접합체 및/또는 약물 분자를 언급할 때, 가용성은 소수성 또는 다른 비-공유 상호작용을 통해 다량체 또는 다른 초분자 구조로 어셈블리되지 않는 용액 중의 단일 분자인 것으로 이해된다. 가용성 분자는 용액 중의 단일 분자로서 자유롭게 분산되는 것으로 이해된다. 본원에 기재된 소수성 블록 (H)은 불용성이거나 또는 단지 약 0.1 mg/mL 이하의 농도로만 가용성이다. 용해도는 육안 검사, 탁도 측정 또는 동적 광 산란에 의해 결정될 수 있다.
대상체 및 환자: 이들 용어는 조류 및 비-인간 포유동물, 예컨대 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트), 비-인간 영장류 (예를 들어, 레서스 마카크), 반려 동물 (예를 들어, 집 개 및 고양이), 가축 (예를 들어, 돼지, 양, 소, 라마 및 낙타), 뿐만 아니라 비-집 동물 (예를 들어, 대형 고양이)을 포함한 인간 및 비-인간 동물 둘 다를 지칭하는 것으로 본원에서 상호교환가능하게 사용될 수 있다.
표적화 분자: 약물 분자를 특정 조직 또는 세포 집단으로 지시하는 분자로서 광범위하게 정의됨. 표적화 분자는 그의 의도된 용도에 의해 정의되고, 따라서 비제한적으로 항체, Fab, 펩티드, 압타머, 사카라이드 (예를 들어, 렉틴 수용체에 결합하고/거나 세포 수송체에 의해 인식되는 사카라이드), 아미노산, 신경전달물질 등을 포함한 구조적으로 다양한 분자를 포함한다. 표적화 분자는 종종 하류 신호전달 캐스케이드를 활성화시키고/거나 다른 연결된 분자의 활성에 영향을 미칠 수 있는 세포 수용체에 결합하는 분자로부터 선택되기 때문에, 표적화 분자는 종종 본 개시내용에서 약물 분자 (D)로서 분류된다. 추가적으로, 표적화 분자는 또한 가용화 효과를 가질 수 있고, 약물 분자 (D) 및/또는 가용화 (SG) 기 중 어느 하나 또는 둘 다로 간주될 수 있다.
T 세포: 면역계의 일부이고 면역 반응에 참여할 수 있는 백혈구의 한 유형. T 세포는 CD4 T 세포 및 CD8 T 세포를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. CD4 T 세포는 그의 표면 상에 CD4 당단백질을 디스플레이하고, 이들 세포는 종종 헬퍼 T 세포로 지칭된다. 이들 세포는 종종 항체 반응 및 세포독성 T 세포 반응을 포함한 면역 반응을 조정하지만, CD4 T 세포 (예를 들어, 조절 T 세포)는 또한 면역 반응을 억제할 수 있거나 또는 CD4 T 세포는 세포독성 T 세포로서 작용할 수 있다. CD8 T 세포는 그의 표면 상에 CD8 당단백질을 디스플레이하고, 이들 세포는 종종 세포독성 또는 킬러 T 세포로 지칭되지만, CD8 T 세포는 또한 면역 반응을 억제할 수 있다.
질환의 치료, 예방 또는 호전: "치료하는"은 질환 또는 병리학적 상태가 발생하기 시작한 후에 그의 징후 또는 증상 또는 마커를 감소시키는 개입을 지칭한다. 예를 들어, 질환을 치료하는 것은 종양 및/또는 전이의 수 또는 크기의 감소를 의미하는 종양 부담의 감소를 발생시킬 수 있거나, 또는 질환을 치료하는 것은 자가면역과 연관된 시스템을 감소시키는 면역 관용을 발생시킬 수 있다. 질환을 "예방하는" 것은 질환의 완전한 발생을 억제하는 것을 지칭한다. 질환은 전혀 발생하지 않도록 예방될 수 있다. 질환은 중증도 또는 정도 또는 종류에 있어서 발생하지 않도록 예방될 수 있다. "호전시키는" 것은 질환, 예컨대 암의 징후 또는 증상 또는 마커의 수 또는 중증도를 감소시키는 것을 지칭한다.
질환 또는 질환과 관련된 병리학적 상태의 징후 또는 증상 또는 마커를 감소시키는 것은 치료의 임의의 관찰가능한 유익한 효과 및/또는 증후성인지에 관계 없이 근위, 대용물 종점, 예를 들어 종양 부피에 대한 임의의 관찰가능한 효과를 지칭한다. 종양 또는 바이러스 감염과 연관된 징후 또는 증상을 감소시키는 것은, 예를 들어 감수성 대상체 (예컨대 아직 전이되지 않은 종양을 갖는 대상체, 또는 바이러스 감염에 노출될 수 있는 대상체)에서의 질환의 임상 증상의 지연된 발병, 질환의 일부 또는 모든 임상 증상의 중증도의 감소, 질환의 보다 느린 진행 (예를 들어 종양 또는 바이러스 감염을 갖는 대상체의 수명을 연장시키는 것에 의함), 질환의 재발 횟수의 감소, 대상체의 전반적 건강 또는 웰빙의 개선에 의해, 또는 관련 기술분야에 널리 공지된 (예를 들어, 특정한 종양 또는 바이러스 감염에 특이적인) 다른 파라미터에 의해 입증될 수 있다. "예방적" 치료는 질환의 징후를 나타내지 않거나 또는 병리상태 발생의 위험 또는 중증도를 감소시킬 목적으로 단지 초기 징후만을 나타내는 대상체에게 투여되는 치료이다.
종양 또는 암 또는 신생물: 양성 또는 악성일 수 있는 세포의 비정상적 성장, 항상은 아니지만 종종 임상 증상을 유발함. "신생물성" 세포 성장은 생리학상 신호, 예컨대 성장 및 억제 인자에 반응하지 않는 세포 성장을 지칭한다.
"종양"은 신생물성 세포의 집합이다. 대부분의 경우에, 종양은 고형 덩이를 형성하는 신생물성 세포의 집합을 지칭한다. 이러한 종양은 고형 종양으로 지칭될 수 있다. 일부 경우에, 신생물성 세포는 일부 백혈병의 경우와 같이 고형 덩이를 형성하지 않을 수 있다. 이러한 경우에, 신생물성 세포의 집합은 액상 암으로 지칭될 수 있다.
암은 고형 또는 액상인 신생물성 세포의 악성 성장을 지칭한다. 이를 악성으로 정의하는 암의 특색은 전이, 이웃 세포의 정상 기능 방해, 시토카인 또는 다른 분비 생성물의 비정상적 수준으로의 방출 및 염증성 또는 면역학적 반응(들)의 억제 또는 악화, 주위 또는 원위 조직 또는 기관, 예컨대 림프절의 침습 등을 포함한다.
실질적 유해 임상 증상을 나타내지 않고/거나 느리게 성장하는 종양은 "양성"으로 지칭된다.
"악성"은 유의한 임상 증상을 유발하거나 미래에 유발할 가능성이 있는 것을 의미한다. 주위 조직을 침습하고/거나 전이하고/거나 근위 또는 원위 신체 계통에 영향을 미치는 화학적 매개체의 생산 및 분비를 통해 실질적인 임상 증상을 생성하는 종양은 "악성"으로 지칭된다.
"전이성 질환"은 원래의 종양 부위를 떠나 신체의 다른 부분으로, 예를 들어 혈류를 통해, 림프계를 통해, 또는 체강, 예컨대 복막강 또는 흉강을 통해 이동한 암 세포를 지칭한다.
개체에서 종양의 양은 "종양 부담"이다. 종양 부담은 종양의 수, 부피 또는 질량으로서 측정될 수 있고, 종종 신체 검사, 방사선학적 영상화 또는 병리학적 검사에 의해 평가된다.
"확립된" 또는 "존재하는" 종양은 요법이 개시되는 시점에 존재하는 종양이다. 종종, 확립된 종양은 진단 시험에 의해 식별될 수 있다. 일부 실시양태에서, 확립된 종양은 촉진될 수 있다. 일부 실시양태에서, 확립된 종양은 적어도 500 mm3, 예컨대 적어도 600 mm3, 적어도 700 mm3, 또는 적어도 800 mm3 크기이다. 다른 실시양태에서, 종양은 적어도 1 cm 길이이다. 고형 종양과 관련하여, 확립된 종양은 일반적으로 새롭게 확립되고 강건한 혈액 공급을 갖고, 조절 T 세포 (Treg) 및 골수 유래 억제 세포 (MDSC)를 유도할 수 있다.
단위 용량: 미리 결정된 양의 활성 성분을 포함하는 제약 조성물의 개별 양.
소포: 유체가 충전된 낭. 일부 실시양태에서, 소포는 친양쪽성 물질을 포함하는 낭이다. 일부 실시양태에서, 낭은 나노입자-기반 소포이며, 이는 나노미터 범위의 크기 또는 치수를 갖는 소포를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 중합체 소포는 1개 이상의 중합체로부터 형성된 소포이다.
정의:
본원에 사용된 용어 "임의적인" 또는 "임의로"는 후속적으로 기재된 사건 또는 상황이 발생할 수 있거나 발생하지 않을 수 있고, 기재가 사건 또는 상황이 발생하는 경우뿐만 아니라 발생하지 않는 경우를 포함한다는 것을 의미한다. 예를 들어, "임의로 치환된 알킬"은 치환될 수 있거나 치환되지 않을 수 있는 알킬을 지칭한다.
본 발명의 화합물 상의 치환기 및 치환 패턴은 용이하게 입수가능한 출발 물질로부터 관련 기술분야에 공지된 기술, 뿐만 아니라 하기 제시된 방법에 의해 용이하게 합성될 수 있는 화학적으로 안정한 화합물을 생성하기 위해 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 선택될 수 있는 것으로 이해된다. 치환기가 그 자체로 1개 초과의 기로 치환되는 경우에, 안정한 구조가 생성되는 한, 이들 다중 기는 동일한 탄소 상에 또는 상이한 탄소 상에 존재할 수 있는 것으로 이해된다.
본원에 사용된 용어 "임의로 치환된"은 주어진 구조에서 1 내지 6개의 수소 라디칼이 히드록실, 히드록시알킬, 알콕시, 할로겐, 알킬, 니트로, 실릴, 아실, 아실옥시, 아릴, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아미노, 아미노알킬, 시아노, 할로알킬, 할로알콕시, -OCO-CH2-O-알킬, -OP(O)(O-알킬)2 또는 -CH2-OP(O)(O-알킬)2를 포함하나 이에 제한되지는 않는 명시된 치환기의 라디칼로 대체된 것을 지칭한다. 바람직하게는, "임의로 치환된"은 주어진 구조에서 1 내지 4개의 수소 라디칼이 상기 언급된 치환기로 대체된 것을 지칭한다. 보다 바람직하게는, 1 내지 3개의 수소 라디칼이 상기 언급된 바와 같은 치환기에 의해 대체된다. 치환기는 추가로 치환될 수 있는 것으로 이해된다.
본원에 사용된 용어 "알킬"은 C1-C10 직쇄 알킬 기 또는 C1-C10 분지쇄 알킬 기를 포함하나 이에 제한되지는 않는 포화 지방족 기를 지칭한다. 바람직하게는, "알킬" 기는 C1-C6 직쇄 알킬 기 또는 C1-C6 분지쇄 알킬 기를 지칭한다. 가장 바람직하게는, "알킬" 기는 C1-C4 직쇄 알킬 기 또는 C1-C4 분지쇄 알킬 기를 지칭한다. "알킬"의 예는 메틸, 에틸, 1-프로필, 2-프로필, n-부틸, sec-부틸, tert-부틸, 1-펜틸, 2-펜틸, 3-펜틸, 네오-펜틸, 1-헥실, 2-헥실, 3-헥실, 1-헵틸, 2-헵틸, 3-헵틸, 4-헵틸, 1-옥틸, 2-옥틸, 3-옥틸 또는 4-옥틸 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "알킬" 기는 임의로 치환될 수 있다.
용어 "아실"은 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 화학식 히드로카르빌C(O)-, 바람직하게는 알킬C(O)-에 의해 나타내어지는 기를 지칭한다.
용어 "아실아미노"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 아실 기로 치환된 아미노 기를 지칭하고, 예를 들어 화학식 히드로카르빌C(O)NH-에 의해 나타내어질 수 있다.
용어 "아실옥시"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 화학식 히드로카르빌C(O)O-, 바람직하게는 알킬C(O)O-에 의해 나타내어지는 기를 지칭한다.
용어 "알콕시"는 산소가 부착된 알킬 기를 지칭한다. 대표적인 알콕시 기는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, tert-부톡시 등을 포함한다.
용어 "알콕시알킬"은 알콕시 기로 치환된 알킬 기를 지칭하고, 화학식 알킬-O-알킬에 의해 나타내어질 수 있다.
용어 "알킬"은 직쇄 알킬 기, 분지쇄 알킬 기, 시클로알킬 (지환족) 기, 알킬-치환된 시클로알킬 기 및 시클로알킬-치환된 알킬 기를 비롯한 포화 지방족 기를 지칭한다. 바람직한 실시양태에서, 직쇄 또는 분지쇄 알킬은 그의 백본에 30개 이하의 탄소 원자 (예를 들어, 직쇄의 경우 C1-30, 분지쇄의 경우 C3-30), 보다 바람직하게는 20개 이하의 탄소 원자를 갖는다.
더욱이, 명세서, 실시예 및 청구범위 전반에 걸쳐 사용된 용어 "알킬"은 비치환된 및 치환된 알킬 기 둘 다를 포함하는 것으로 의도되며, 후자는 탄화수소 백본의 1개 이상의 탄소 상의 수소를 대체하는 치환기를 갖는 알킬 모이어티를 지칭하고, 할로알킬 기, 예컨대 트리플루오로메틸 및 2,2,2-트리플루오로에틸 등을 포함한다.
용어 "Cx-y" 또는 "Cx-Cy"는 화학적 모이어티, 예컨대 아실, 아실옥시, 알킬, 알케닐, 알키닐 또는 알콕시와 함께 사용되는 경우에 쇄에 x 내지 y개의 탄소를 함유하는 기를 포함하는 것으로 의도된다. C0알킬은 기가 말단 위치에 있는 경우 수소, 내부라면 결합을 나타낸다. 예를 들어, C1-6알킬 기는 쇄에 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유한다.
본원에 사용된 용어 "알킬아미노"는 적어도 1개의 알킬 기로 치환된 아미노 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알킬티오"는 알킬 기로 치환된 티올 기를 지칭하고, 화학식 알킬S-에 의해 나타내어질 수 있다.
본원에 사용된 용어 "아미드"는 기
를 지칭하며, 여기서 R22 및 R23은 각각 독립적으로 수소 또는 히드로카르빌 기를 나타내거나, 또는 R22 및 R23은 이들이 부착되어 있는 N 원자와 함께 고리 구조에 4 내지 8개의 원자를 갖는 헤테로사이클을 완성한다.
용어 "아민" 및 "아미노"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 비치환 및 치환된 아민 둘 다 및 그의 염, 예를 들어
에 의해 나타내어질 수 있는 모이어티를 지칭하고, 여기서 R22, R23, 및 R24는 각각 독립적으로 수소 또는 히드로카르빌 기를 나타내거나, 또는 R22 및 R23은 이들이 부착되어 있는 N 원자와 함께 고리 구조에 4 내지 8개의 원자를 갖는 헤테로사이클을 완성한다.
본원에 사용된 용어 "아미노알킬"은 아미노 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아르알킬"은 아릴 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아릴"은 치환 또는 비치환된 방향족 카르보사이클뿐만 아니라 헤테로아릴을 포함한다. 용어 "아릴"은 본원에서 용어 "방향족 기"와 상호교환가능하게 사용된다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 아릴 모이어티는 독립적으로 알킬, 헤테로알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 히드록시, 할로, 시아노, 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 니트로, 트리메틸실라닐, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -OC(O)N(Ra)2, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(NRa)N(Ra)2, -N(Ra)S(O)tRa (여기서, t는 1 또는 2임), -S(O)tORa (여기서, t는 1 또는 2임), -S(O)tN(Ra)2 (여기서, t는 1 또는 2임), 또는 PO3(Ra)2인 1개 이상의 치환기로 임의로 치환되며, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 수소, 알킬, 플루오로알킬, 카르보시클릴, 카르보시클릴알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알킬알킬, 헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬이다. 방향족 카르보사이클은 고리의 각각의 원자가 탄소인 단일-고리 방향족 기를 포함한다. 바람직하게는 고리는 5- 내지 7-원 고리, 보다 바람직하게는 6-원 고리이다. 용어 "아릴"은 또한 2개 이상의 시클릭 고리를 갖고, 여기서 2개 이상의 탄소가 2개의 인접한 고리에서 공통인 폴리시클릭 고리계를 포함하며, 여기서 고리 중 적어도 1개는 방향족이고, 예를 들어 다른 시클릭 고리는 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알키닐, 아릴, 헤테로아릴 및/또는 헤테로시클릴일 수 있다. 아릴 기는 벤젠, 나프탈렌, 페난트렌, 페놀, 아닐린 등을 포함한다.
용어 "카르바메이트"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 기
를 지칭하고, 여기서 R22 및 R23은 독립적으로 수소 또는 히드로카르빌 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "카르보시클릴알킬"은 카르보사이클 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
용어 "카르보사이클"은 5-7원 모노시클릭 및 8-12원 비시클릭 고리를 포함한다. 비시클릭 카르보사이클의 각각의 고리는 포화, 불포화 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있다. 카르보사이클은 1, 2 또는 3개 또는 그 초과의 원자가 2개의 고리 사이에 공유된 비시클릭 분자를 포함한다. 용어 "융합된 카르보사이클"은 각각의 고리가 다른 고리와 2개의 인접한 원자를 공유하는 비시클릭 카르보사이클을 지칭한다. 융합된 카르보사이클의 각각의 고리는 포화, 불포화 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 방향족 고리, 예를 들어 페닐은 포화 또는 불포화 고리, 예를 들어 시클로헥산, 시클로펜탄 또는 시클로헥센에 융합될 수 있다. 원자가가 허용하는 바에 따라 포화, 불포화 및 방향족 비시클릭 고리의 임의의 조합이 카르보시클릭의 정의에 포함된다. 예시적인 "카르보사이클"은 시클로펜탄, 시클로헥산, 비시클로[2.2.1]헵탄, 1,5-시클로옥타디엔, 1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌, 비시클로[4.2.0]옥트-3-엔, 나프탈렌 및 아다만탄을 포함한다. 예시적인 융합된 카르보사이클은 데칼린, 나프탈렌, 1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌, 비시클로[4.2.0]옥탄, 4,5,6,7-테트라히드로-1H-인덴 및 비시클로[4.1.0]헵트-3-엔을 포함한다. "카르보사이클"은 수소 원자를 보유할 수 있는 임의의 1개 이상의 위치에서 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "카르보시클릴알킬"은 카르보사이클 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
용어 "카르보네이트"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 기 -OCO2-를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "카르복시"는 화학식 -CO2H에 의해 나타내어지는 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "에스테르"는 기 -C(O)OR22를 지칭하며, 여기서 R22는 히드로카르빌 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "에테르"는 산소를 통해 또 다른 히드로카르빌 기에 연결된 히드로카르빌 기를 지칭한다. 따라서, 히드로카르빌 기의 에테르 치환기는 히드로카르빌-O-일 수 있다. 에테르는 대칭 또는 비대칭일 수 있다. 에테르의 예는 헤테로사이클-O-헤테로사이클 및 아릴-O-헤테로사이클을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 에테르는 화학식 알킬-O-알킬에 의해 나타내어질 수 있는 "알콕시알킬" 기를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "할로" 및 "할로겐"은 할로겐을 의미하고, 클로로, 플루오로, 브로모 및 아이오도를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "헤타르알킬" 및 "헤테로아르알킬"은 헤타릴 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
용어 "헤테로아릴" 및 "헤타릴"은 고리 구조가 적어도 1개의 헤테로원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 헤테로원자, 보다 바람직하게는 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함하는 치환 또는 비치환된 방향족 단일 고리 구조, 바람직하게는 5- 내지 7-원 고리, 보다 바람직하게는 5- 내지 6-원 고리를 포함한다. 용어 "헤테로아릴" 및 "헤타릴"은 또한 2개 이상의 시클릭 고리를 갖고, 여기서 2개 이상의 탄소가 2개의 인접한 고리에서 공통인 폴리시클릭 고리계를 포함하며, 여기서 고리 중 적어도 1개는 헤테로방향족이고, 예를 들어 다른 시클릭 고리는 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알키닐, 아릴, 헤테로아릴 및/또는 헤테로시클릴일 수 있다. 헤테로아릴 기는, 예를 들어 피롤, 푸란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진 및 피리미딘 등을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로원자"는 탄소 또는 수소 이외의 임의의 원소의 원자를 의미한다. 바람직한 헤테로원자는 질소, 산소 및 황이다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클릴알킬"은 헤테로사이클 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
용어 "헤테로시클릴", "헤테로사이클" 및 "헤테로시클릭"은 고리 구조가 적어도 1개의 헤테로원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 헤테로원자, 보다 바람직하게는 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함하는 치환 또는 비치환된 비-방향족 고리 구조, 바람직하게는 3- 내지 10-원 고리, 보다 바람직하게는 3- 내지 7-원 고리를 지칭한다. 용어 "헤테로시클릴" 및 "헤테로시클릭"은 또한 2개 이상의 시클릭 고리를 갖고, 여기서 2개 이상의 탄소가 2개의 인접한 고리에서 공통인 폴리시클릭 고리계를 포함하며, 여기서 고리 중 적어도 1개는 헤테로시클릭이고, 예를 들어 다른 시클릭 고리는 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알키닐, 아릴, 헤테로아릴 및/또는 헤테로시클릴일 수 있다. 헤테로시클릴 기는, 예를 들어 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 모르폴린, 락톤, 락탐 등을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "히드로카르빌"은 =O 또는 =S 치환기를 갖지 않는 탄소 원자를 통해 결합된 기를 지칭하고, 전형적으로 적어도 1개의 탄소-수소 결합 및 주로 탄소 백본을 갖지만, 임의로 헤테로원자를 포함할 수 있다. 따라서, 메틸, 에톡시에틸, 2-피리딜, 및 심지어 트리플루오로메틸과 같은 기는 본 출원의 목적상 히드로카르빌인 것으로 간주되지만, 아세틸 (연결 탄소 상에 =O 치환기를 가짐) 및 에톡시 (탄소가 아니라 산소를 통해 연결됨)와 같은 치환기는 그렇지 않다. 히드로카르빌 기는 아릴, 헤테로아릴, 카르보사이클, 헤테로사이클, 알킬, 알케닐, 알키닐 및 그의 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "히드록시알킬"은 히드록시 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
용어 "저급"은 화학적 모이어티, 예컨대 아실, 아실옥시, 알킬, 알케닐, 알키닐 또는 알콕시와 함께 사용되는 경우에 치환기 내에 10개 이하, 바람직하게는 6개 이하의 원자가 존재하는 기를 포함하는 것으로 의도된다. "저급 알킬"은, 예를 들어 10개 이하, 바람직하게는 6개 이하의 탄소 원자를 함유하는 알킬 기를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 본원에 정의된 아실, 아실옥시, 알킬, 알케닐, 알키닐 또는 알콕시 치환기는, 단독으로 나타나든 또는 히드록시알킬 및 아르알킬의 언급에서와 같이 다른 치환기와 조합되어 나타나든 (이 경우에, 예를 들어 아릴 기 내의 원자는 알킬 치환기 내의 탄소 원자를 계수할 때 계수되지 않음), 각각 저급 아실, 저급 아실옥시, 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 알키닐 또는 저급 알콕시이다.
용어 "폴리시클릴", "폴리사이클" 및 "폴리시클릭"은 2개 이상의 원자가 2개의 인접한 고리에 공통인 2개 이상의 고리 (예를 들어, 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알키닐, 아릴, 헤테로아릴 및/또는 헤테로시클릴)를 지칭하며, 예를 들어 고리는 "융합된 고리"이다. 폴리사이클의 각각의 고리는 치환 또는 비치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 폴리사이클의 각각의 고리는 고리 내에 3 내지 10개, 바람직하게는 5 내지 7개의 원자를 함유한다.
용어 "술페이트"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 기 -OSO3H 또는 그의 제약상 허용되는 염을 지칭한다.
용어 "술폰아미드"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 화학식
에 의해 나타내어지는 기를 지칭하고, 여기서 R22 및 R23은 독립적으로 수소 또는 히드로카르빌을 나타낸다.
용어 "술폭시드"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 기 -S(O)-를 지칭한다.
용어 "술포네이트"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 기 SO3H 또는 그의 제약상 허용되는 염을 지칭한다.
용어 "술폰"은 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 기 -S(O)2-를 지칭한다.
용어 "치환된"은 백본의 1개 이상의 탄소 상의 수소를 대체하는 치환기를 갖는 모이어티를 지칭한다. "치환" 또는 "로 치환된"은 이러한 치환이 치환된 원자 및 치환기의 허용되는 원자가에 따르고, 치환이 예를 들어 재배열, 고리화, 제거 등에 의한 것과 같은 변환을 자발적으로 겪지 않는 안정한 화합물을 생성한다는 내포된 단서를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 본원에 사용된 용어 "치환된"은 유기 화합물의 모든 허용되는 치환기를 포함하는 것으로 고려된다. 넓은 측면에서, 허용되는 치환기는 유기 화합물의 비-시클릭 및 시클릭, 분지형 및 비분지형, 카르보시클릭 및 헤테로시클릭, 방향족 및 비-방향족 치환기를 포함한다. 허용되는 치환기는 적절한 유기 화합물에 대해 1개 이상이고 동일하거나 상이할 수 있다. 본 발명의 목적상, 헤테로원자, 예컨대 질소는 수소 치환기 및/또는 헤테로원자의 원자가를 충족시키는 본원에 기재된 유기 화합물의 임의의 허용되는 치환기를 가질 수 있다. 치환기는 본원에 기재된 임의의 치환기, 예를 들어 할로겐, 히드록실, 카르보닐 (예컨대 카르복실, 알콕시카르보닐, 포르밀 또는 아실), 티오카르보닐 (예컨대 티오에스테르, 티오아세테이트 또는 티오포르메이트), 알콕실, 포스포릴, 포스페이트, 포스포네이트, 포스피네이트, 아미노, 아미도, 아미딘, 이민, 시아노, 니트로, 아지도, 술프히드릴, 알킬티오, 술페이트, 술포네이트, 술파모일, 술폰아미도, 술포닐, 헤테로시클릴, 아르알킬 또는 방향족 또는 헤테로방향족 모이어티를 포함할 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는, 적절한 경우에, 탄화수소 쇄 상의 치환된 모이어티가 그 자신이 치환될 수 있다는 것을 이해할 것이다.
본원에 사용된 용어 "티오알킬"은 티올 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "티오에스테르"는 기 -C(O)SR22 또는 -SC(O)R22를 지칭하며, 여기서 R22는 히드로카르빌을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "티오에테르"는 산소가 황으로 대체된 에테르와 동등하다.
용어 "우레아"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 화학식
에 의해 나타내어질 수 있고, 여기서 R22 및 R23은 독립적으로 수소 또는 히드로카르빌을 나타낸다.
용어 "방향족 아미노산"은 방향족 기를 포함하는 측쇄를 갖는 아미노산, 예컨대 페닐알라닌, 티로신 또는 트립토판을 포함한다. 방향족 기는 방향족 고리를 포함하는 분자의 부분을 지칭한다. 예를 들어, 페닐알라닌은 방향족 기, 즉 벤질 기를 포함하는 방향족 아미노산이다. 페닐알라닌 (Phe) 및 트립토판 (Trp)은 원형 방향족 아미노산이다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 상기 제공된 정의가 허용되지 않는 치환 패턴 (예를 들어, 5개의 상이한 기로 치환된 메틸 등)을 포함하는 것으로 의도되지 않는다는 것을 인식할 것이다. 이러한 허용되지 않는 치환 패턴은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 인식된다. 본원에 개시되고/거나 상기 정의된 임의의 관능기는 본원에 달리 나타내지 않는 한 치환 또는 비치환될 수 있다. 달리 설명되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 용어 "포함하다"는 "수반하다"를 의미한다. 따라서, "A" 또는 "B"를 포함하는 것은 A를 수반하는 것, B를 수반하는 것, 또는 A 및 B 둘 다를 수반하는 것을 지칭한다. 추가로 핵산 또는 폴리펩티드에 대해 주어진 모든 염기 크기 또는 아미노산 크기, 및 모든 분자량 또는 분자 질량 값은 근사치이고, 설명을 위해 제공되는 것으로 이해되어야 한다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 개시내용의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 물질은 본원에 기재된 것이다. 상충되는 경우에, 용어의 설명을 포함한 본 명세서가 우선할 것이다. 또한, 물질, 방법 및 예는 단지 예시적이며, 제한적인 것으로 의도되지 않는다.
실시양태의 설명
질환, 예를 들어 암(들), 자가면역 질환(들), 알레르기(들) 및/또는 감염성 질환(들)의 치료 또는 예방에 유용한 친양쪽성체 및 약물 분자를 포함하는 입자의 조성물이 본원에 제공된다. 친양쪽성체 및 펩티드 항원 접합체의 특정 조성물을 포함하는 입자는 질환을 치료 또는 예방하기 위한, 예컨대 암(들), 자가면역 질환(들), 알레르기(들) 및/또는 감염성 질환(들)을 예방 또는 치료하기 위한 백신으로서 사용하는 데 있어서 특별한 유용성을 갖는다.
본 개시내용은 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체; 및 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신에 관한 것이며,
여기서 S는 각 경우에 독립적으로 가용화 블록이고;
B는 스페이서이고;
H는 각 경우에 독립적으로 소수성 블록이고,
여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
A는 각 경우에 독립적으로 펩티드 항원이고;
E1은 각 경우에 독립적으로 N-말단 연장부이고;
E2는 각 경우에 독립적으로 C-말단 연장부이고;
U는 각 경우에 독립적으로 링커이고;
[ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
-는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
여기서 친양쪽성체 및/또는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 덴드론 증폭제를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체는 덴드론 증폭제를 포함한다. 다른 실시양태에서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 덴드론 증폭제를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 덴드론 증폭제를 포함한다. 다른 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 수지상 아키텍처를 갖는다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 2개 이상의 가용화 기 (SG)를 포함한다. 다른 실시양태에서, 2개 이상의 SG는 덴드론 증폭제에 의해 S의 나머지 부분에 연결되고, 예를 들어 4 내지 8개의 SG가 S에 연결된다.
백신의 일부 실시양태에서, SG는 아민, 히드록실, 카르복실산 및/또는 당 분자로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 당 분자는 만노스, 글루코스, 글루코사민, N-아세틸 글루코스, 갈락토스, 갈락토사민, N-아세틸 갈락토사민, 포스포세린 및 그의 임의의 유도체, CD22a의 효능제, 시알릴 루이스 x, 및 그의 조합으로부터 독립적으로 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 덴드론 증폭제는 세대당 2 내지 6개의 분지를 갖는 1 내지 10 세대의 반복 단량체 단위를 포함한다. 다른 실시양태에서, 덴드론 증폭제는 세대당 2 내지 3개의 분지를 갖는 2 내지 3 세대의 반복 단량체 단위를 포함한다. 백신의 일부 실시양태에서, 반복 단량체 단위는 FG1-(CH2)y2CH(R1)2, FG1-(CH2)y2C(R1)3, FG1-(CH2CH2O)y2CH(R1)2, FG1-(CH2CH2O)y2C(R1)3, 및 FG1-CH(R1)2, FG1-C(R1)3으로부터 선택되며, 여기서 R1은 각 경우에 독립적으로 (CH2)y3-FG2, (OCH2CH2)y3-FG2, 및 CH2(OCH2CH2)y3-FG2)로부터 선택되고; y2 및 y3은 각 경우에 독립적으로 각각 1 내지 6의 정수의 반복 단위이고; FG1은 제1 관능기이고; FG2는 제2 관능기이다. 일부 실시양태에서, FG1은 -NH2이고; FG2는 각 경우에 독립적으로 -CO2- 또는 -CO2H이다. 일부 실시양태에서, FG1은 각 경우에 독립적으로 -CO2- 또는 -CO2H이고; FG2는 -NH2이다.
백신의 일부 실시양태에서, SG는 적합한 링커 X5를 통해 S에 연결된다. 백신의 일부 실시양태에서, SG를 S에 연결하는 적합한 링커 X5는 저급 알킬 및 PEG 기로부터 선택된다. 백신의 일부 실시양태에서, 2개 이상의 SG는 2개 이상의 SG를 아미드 결합을 통해 덴드론 증폭제의 말단 관능기 (FGt)에 연결하는 적합한 링커 X5를 통해, 덴드론 증폭제에 의해 S의 나머지 부분에 연결된다. 일부 실시양태에서, SG를 덴드론 증폭제에 연결하는 링커 X5는 -NH-R19, -NH-C(O)-R19, -C(O)-NH-R19- 또는 -C(O)-R19로부터 선택되고, 여기서 R19는 -(CH2)t-, -(CH2CH2O)t-CH2CH2-, -(CH2)t-C(O)-NH-(CH2)u-, -(CH2CH2O)tCH2CH2C(O)-NH-(CH2)u-, -(CH2)t-NH-C(O)-NH-(CH2)u-, 또는 -(CH2CH2O)tCH2CH2NH-C(O)-(CH2)u-로부터 선택될 수 있으나 이에 제한되지는 않고, 여기서 t 및 u는 각각 독립적으로 1 내지 6으로부터 전형적으로 선택된 정수, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다.
백신의 일부 실시양태에서, 덴드론 증폭제는 폴리에틸렌 옥시드 (PEG) 기를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 H는 고급 알칸, 방향족 기, 지방산, 스테롤, 다중불포화 탄화수소, 스쿠알렌, 사포닌, 및/또는 중합체를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체의 H는 고급 알칸, 방향족 기, 지방산, 스테롤, 다중불포화 탄화수소, 및/또는 중합체를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 각각의 H는 독립적으로 소수성 아미노산 (M), 반응성 아미노산 (N), 스페이서 아미노산 (O), 하전된 아미노산 (P) 및 그의 조합으로부터 선택된 단량체를 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하며, 단 M 또는 N 중 적어도 1개는 존재한다.
백신의 일부 실시양태에서, 각각의 H는 독립적으로 화학식
을 갖는 폴리(아미노산)를 포함하며,
여기서 M, N, O 및 P는 각각 독립적으로 존재하거나 부재하며, 단 M 또는 N 중 적어도 1개는 존재하고;
m, n, o 및 p는 각각 독립적으로 1 내지 100의 정수를 나타내고, m, n, o 및 p의 합계는 100 이하이고;
R3은 수소, NH2, NH-CH3, NH-(CH2)y5CH3, OH, 또는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 연결된 약물 분자 (D)로부터 선택되고;
y5는 1 내지 6으로부터 선택된 정수이다.
백신의 일부 실시양태에서, P는 부재한다. 다른 실시양태에서, N, O 및 P는 각각 부재한다.
백신의 일부 실시양태에서, P는 이고, 여기서 각각의 R5는 독립적으로 1 내지 2개의 하전된 관능기를 포함하는 기이다.
백신의 일부 실시양태에서, O는 이고, 여기서 각각의 Q는 독립적으로 (CH2)y6 및 (CH2CH2O)y7CH2CH2로부터 선택되고; 각각의 y6은 독립적으로 1 내지 6의 정수로부터 선택되고; 각각의 y7은 독립적으로 1 내지 4의 정수로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, N은 이고, 여기서 각각의 X1은 독립적으로 적합한 링커이고; 각각의 D는 독립적으로 약물 분자이다. 백신의 일부 실시양태에서, X1은 부재한다. 다른 실시양태에서, X1은 존재하고, 저급 알킬 및 PEG 기로부터 선택된다. 다른 실시양태에서, X1은 존재하고, 효소 절단가능한 링커 및 pH 감수성 링커로부터 선택된다. 백신의 일부 실시양태에서, X1은 존재하고, 효소 분해성 펩티드 및/또는 자기 희생적 링커로서 포함한다.
일부 실시양태에서, X1은 존재하고, -(CH2)y10-W 및 -(CH2)y10-R6으로부터 선택되며, 여기서 y10은 1 내지 6으로부터 선택된 정수이고, R6은 -C(O)-NH-R7, -NH-C(O)-R7, -NH-C(O)-O-R7, -O-C(O)-NH-R7, -O-C(O)-R7, -C(O)-O-R7 , -O-R7 , O-C(O)-W, 또는 -C(O)-W 중 어느 하나 이상으로부터 선택되고, 여기서 R7은 -(CH2)y11-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13-W, -CHR8-C(O)-W, -CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-W, -(CH2)y11-C(O)-NH-CHR8-C(O)-W, -(CH2)y11-C(O)-NH-CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-C(O)-NH-CHR8-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13C(O)-NH-CHR8-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-C(O)-NH-CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13-C(O)-NH-CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-W, -CHR8-C(O)-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -CHR8-C(O)-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W, -CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W , -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13-C(O)-NH-(CH2)y14-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13C(O)-NH-(CH2)y14-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-C(O)-NH-(CH2)y14-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-C(O)-NH-(CH2)y14-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W, -CHR8-C(O)-NH-(CH2)y15-W, -CHR8-NH-C(O)-(CH2)y15-W, -CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-(CH2)y15-W, -CHR8-NH-(C(O)-CHR8-NH)j-C(O)-(CH2)y15-W 중 어느 하나 이상으로부터 선택되고, 여기서, y11, y12, y13, y14, y15 및 j는 각각 독립적으로 1 내지 6으로부터 선택된 정수로부터 선택되고, R8은 임의의 아미노산 측기이고, W는 독립적으로 H (수소), FG3, LG 및 w로부터 선택될 수 있고; 여기서 FG3은 약물 분자 상에 존재하는 관능기 ("FG4")에의 부착을 위한 임의의 적합한 관능기이며, 카르복실산, 활성화된 카르복실산 (예를 들어, 카르보닐티아졸리딘-2-티온 ("TT"), NHS 또는 니트로페놀 에스테르), 카르복실산 무수물, 아민 및 보호된 아민 (예를 들어, tert-부틸옥시카르보닐 보호된 아민), OSi(CH3), 알켄, 아지드, 알킨, 염색된-알킨, 할로겐 (예를 들어, 플루오라이드, 클로라이드), 올레핀 및 엔도 시클릭 올레핀 (예를 들어, 알릴), CN, OH, 및 에폭시, 히드라진 (히드라지드 포함), 카르보히드라지드, 알데히드, 케톤, 카르바메이트 및 활성화된 카르바메이트로부터 선택될 수 있으나 이에 제한되지는 않고, LG는 임의의 적합한 이탈기 (예를 들어, NHS, TT, 니트로페놀 등)로부터 선택될 수 있는 임의의 적합한 이탈기이고; w는 FG4와 FG3의 반응 또는 LG의 FG4로의 치환으로부터 생성된 기이고, NH-, C(O)-, NH-C(O)-, C(O)-NH-, O-C(O)-NH-, C(O)-NH-N=C(CH3)-, NH-N=C(CH3)- 또는 -C(CH3)=N-NH-C(O)-로부터 전형적으로 선택되고, 여기서 w는 항상 D에 직접적으로 (즉, w-D) 또는 X3을 통해 간접적으로 (즉, w-X3-D) 연결된다.
백신의 일부 실시양태에서, M은 이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 소수성 기이다.
백신의 일부 실시양태에서, R4는
이고, 여기서
α는 아릴 또는 헤테로아릴이고;
X2는 존재하거나 부재하고, 존재하는 경우에 적합한 링커이고;
y8은 0 내지 6의 정수로부터 선택되고;
Z1, Z2, 및 Z3은 각각 독립적으로 H, F, 히드록시, 아미노, 알킬, 및 플루오로알킬로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, α는 아릴, 예를 들어 페닐 또는 나프틸이다. 다른 실시양태에서, α는 헤테로아릴, 예를 들어 피리디닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌릴 또는 벤즈이미다졸릴이다.
백신의 일부 실시양태에서, X2는 부재한다. 다른 실시양태에서, X2는 존재하고, C(O), CO2(CH2)y9, CO2, C(O)NH(CH2)y9, NHC(O) 및 NHC(O)(CH2)y9로부터 선택되며, 여기서 y9는 1 내지 6으로부터 전형적으로 선택된 정수이다. 다른 실시양태에서, X2는 존재하고, 저급 알킬 및 PEG 기로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 하기로부터 선택되며:
여기서 각각의 X2는 독립적으로 적합한 링커로부터 선택되고, 각각의 y8은 독립적으로 0 및 6의 정수로부터 선택된다. 다른 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 하기로부터 선택되며:
여기서 각각의 y8은 독립적으로 0 및 6의 정수로부터 선택된다. 다른 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 하기로부터 선택된다:
.
다른 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 하기로부터 선택된다:
.
바람직한 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 하기로부터 선택된다:
.
백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D는
이며, 여기서
R20은 H, 알킬, 알콕시알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아미노알킬, 아미드 및 에스테르로부터 선택되고; X3은 알킬, 알콕시알킬, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 카르복시로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, R20은 H, 알킬 및 알콕시알킬로부터 선택되고; X3은 알킬 및 아르알킬로부터 선택된다. 다른 실시양태에서, R20은 부틸이다.
백신의 일부 실시양태에서, X3은 알킬이다.
백신의 일부 실시양태에서, m, n, o 및 p는 각각 독립적으로 1 내지 30의 정수를 나타내고, m, n, o 및 p의 합계는 30 이하이다.
백신의 일부 실시양태에서, m, n, o 및 p는 각각 독립적으로 1 내지 10의 정수를 나타내고, m, n, o 및 p의 합계는 10 이하이다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 존재하고, 친수성 중합체, 예를 들어, PEG 기이다. 다른 실시양태에서, B는 존재하고, 친수성 펩티드이다.
백신의 일부 실시양태에서, PEG 기는 4 내지 36개의 단량체 단위를 포함한다. 다른 실시양태에서, PEG 기는 4 내지 12개의 단량체 단위를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친수성 펩티드는 4 내지 36개의 아미노산을 포함한다. 다른 실시양태에서, 친수성 펩티드는 4 내지 12개의 아미노산을 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체는 화학식 S-H를 갖는다. 다른 실시양태에서, 친양쪽성체는 화학식 S-B-U-H를 갖는다. 다른 실시양태에서, 친양쪽성체는 화학식 S-B-U-H-D를 갖는다.
백신의 일부 실시양태에서, 백신은 약 4:1 내지 약 1:20의 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체 몰비를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 백신은 암 백신, 감염성 질환 백신, 관용 유도 알레르기 백신, 관용 유도 자가면역 질환 백신, 관용 유도 이식 거부 백신, 심혈관 백신 또는 신경변성 질환 백신이다.
백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 1개 이상의 시스테인 잔기가 알파 아미노-부티르산으로 대체되고/거나 1개 이상의 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체된 서열을 포함한다. 백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 최소 면역원으로부터 선택된 A를 포함한다. 최소 면역원은, 예를 들어 B 세포 에피토프를 포함하는 자연 발생 단백질로부터 유래된 소형 펩티드 단편이다. 최소 면역원은 암, 감염성 질환 및 관용 유도 백신에 대해서 뿐만 아니라 심혈관 또는 신경변성 질환의 치료에 사용될 수 있다.
백신의 일부 실시양태에서, A는 RGYLTKILHVFHGLLPGFLVKMSGDLLE, PGFLVKMSGDLLE, PGFLVKnSGDLLE (여기서 n = 노르류신); PGFLVKMSSDLLG, PGFLVKnSSDLLG (여기서 n은 노르류신); SIPWNLERITPPR; SIPWNLERITPPR; SIPWNLE; SIPWNLEKVTPPR; SIPWNLDRVTPPR; NVPEEDGTRFHRQASKC; NVPEEDGTRFHRQASK; PEEDGTR, NVPEEDG; NVPEEDATRFHRQGSK; LFAPGEDIIGASSDCSTCFVSQSGTSQAAA;CSTCFVSQSGTSQAAA; STCFVSQSGTSQAAA, STBFVSQSGTSQAAA; STBFVSQ; MFTIKLLLFIVPLVISSRIDQDNSSFDSLSPEPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGLKDFVHKTKGQIND; EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGLKDFVHKTKGQIND; EPKSRFAMLDDVKI; MLDDVKILANGLLQ, LANGLLQLGHGLKD; LGHGLKDFVHKTKG; LKDFVHKTKGQIND; RFAMLDDVKILANGLLQLGH; GLLQLGHGLKDFVHKTKGQI; 및 IFQKLNIFDQSFYDLSLQTSEIKEEEKELRRTTYKLQVKNEEVKNMSLELNSKLESLLEEKILLQQKVK로부터 선택된 펩티드 항원이다.
백신의 일부 실시양태에서, A는 공유 결합에 의해 직접적으로 또는 U를 통해 간접적으로 H에 부착된 E1에 공유 결합에 의해 직접적으로 부착된다.
백신의 일부 실시양태에서, A는 공유 결합에 의해 직접적으로 또는 U를 통해 간접적으로 H에 부착된 E2에 공유 결합에 의해 직접적으로 부착된다.
백신의 일부 실시양태에서, E1 및 E2는 각각 4 내지 36개의 단량체 단위의 PEG 기를 포함하고, 예를 들어 PEG 기는 4 내지 24개의 단량체 단위를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, E1 및 E2는 각각 펩티드를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 펩티드는 4 내지 24개의 아미노산을 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 펩티드는 글리신, 세린, 트레오닌, 알라닌, 및 프롤린으로부터 선택된 아미노산을 포함하고, 예를 들어, 펩티드는 (Gly-Ser)2-12, (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)1-4, 및 (Ala-Pro)2-12로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 펩티드는 7 내지 28개의 아미노산을 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 펩티드는 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)1-4의 헵타드 반복부를 포함하며, 여기서 AAH는 이소류신, 류신, 발린 및 노르류신으로부터 선택된 코일 도메인에 적합한 소수성 아미노산이고; AAP는 알라닌, 세린, 리신, 아스파르트산 및 글루탐산으로부터 선택된 코일 도메인에 적합한 친수성 아미노산이고, 예를 들어 펩티드는 (Ile-Ala-Ala-Ile-Glu-Ser-Lys)1-4, (Ile-Ala-Ala-Ile-Lys-Ser-Lys)1-4 및 (Ile-Ala-Ala-Ile-Glu-Ser-Glu)1-4로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 자가항원, 동종항원, 및 알레르겐으로부터 선택된 A를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 카르복실산, 포스포세린, 및/또는 당 분자로부터 독립적으로 선택된 2개 이상의 가용화 기 (SG)를 포함하며, 여기서 당 분자는 만노스, 글루코스, 글루코사민, N-아세틸 글루코스, 갈락토스, 갈락토사민, 및 N-아세틸 갈락토사민, 및 CD22a의 효능제로부터 독립적으로 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 백신은 mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제 및 AHR, RAR 및 A2a의 효능제로부터 선택된 적어도 1개의 D를 포함한다. 백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D는 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 백신은 mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제, AHR, RAR 및 A2a의 효능제, 및 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 면역자극제로부터 독립적으로 선택된 제2 약물 분자 (D2)를 추가로 포함하며, 단 D 및 D2는 상이한 수용체에 결합한다.
백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D는 mTOR의 억제제 및 AHR의 효능제로부터 선택되고, D2는 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된다. 백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D는 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택되고, D2는 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, D2는 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8, TLR-9 및 STING의 효능제로부터 선택된다. 백신의 일부 실시양태에서, D2는 TLR-7, TLR-8 및 TLR-7/8의 RNA 및 이미다조퀴놀린 효능제로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 백신은 mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제, AHR, RAR 및 A2a의 효능제, 및 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 면역자극제로부터 독립적으로 선택된 제3 약물 분자 (D3)를 추가로 포함하며, 단 D, D2 및 D3은 상이한 수용체에 결합한다.
백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D는 AZD-8055, AZD-2016, KU-0063794, CC223, 토린-1, 토린-2, INK-128, WYE354, WYE132, OSI-027, OXA-01, PI-103, NVP-BEZ235, GNE-493, GSK2126458, 라파마이신, 타크롤리무스, 에베롤리무스, RAD001, CCI-779 및 AP23573으로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 총 펩티드 항원 접합체 대 적어도 1개의 D의 몰비는 약 20:1 내지 1:2, 또는 약 10:1 내지 약 1:1 또는 약 4:1 내지 약 2:1이다.
백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 종양 항원으로부터 선택된 A를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 아민 또는 당 분자로부터 독립적으로 선택된 2개 이상의 가용화 기 (SG)를 포함하며, 여기서 당 분자는 만노스 및 시알릴 루이스 x, 및 그의 조합으로부터 독립적으로 선택된다. 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 아민, 카르복실산 또는 당 분자로부터 독립적으로 선택된 2개 이상의 가용화 기 (SG)를 포함하며, 여기서 당 분자는 만노스, 시알릴 루이스 x, 시알릴 루이스 a, 루이스 y, 루이스 x, Tn, sTn, TF, sTF, 글로보 H, SSEA-3, GM2, GD2, GD3 및 푸코실 GM1 및 그의 조합으로부터 독립적으로 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 각각의 H는 독립적으로, 트립토판, 1-메틸 트립토판 및 파라-아미노 페닐알라닌으로부터 선택된 소수성 아미노산 (M)의 단량체를 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다. 다른 실시양태에서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 각각의 H는 반응성 아미노산 (N)의 단량체를 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하며, 여기서 단량체는 Glu-TLR-7/8a로부터 선택된 D를 포함한다. 백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D가 존재하고, 이는 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8, TLR-9 및 STING의 효능제로부터 선택된다. 백신의 일부 실시양태에서, 백신은 mTOR의 억제제로부터 선택된 제2 약물 분자 (D2)를 추가로 포함한다. 다른 실시양태에서, D2는 라파마이신, 타크롤리무스, 에베롤리무스, RAD001, CCI-779 및 AP23573으로부터 선택된다. 백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체 대 D2의 몰비는 약 20:1 내지 1:2, 또는 약 10:1 내지 약 1:1 또는 약 4:1 내지 약 2:1이다.
백신의 일부 실시양태에서, A는 당펩티드이다. 다른 실시양태에서, A는 HGVT*S*APDT*RPAPGS*T*APPA, DT*RPAPGS*T*APPAHGVT*S*AP, GS*T*APPAHGVT*S*APDT*RPAPGS*T*APPA, GVT*S*APDT*RPAP, APDT*RPAPGS*T*A, GS*T*APPAHGVT*S*AP, VT*S*AP, DT*RPAP 및 GS*T*AP로부터 선택되며, 여기서 *는 O-연결된 글리칸이고, 각 경우에 독립적으로 시알릴 루이스 x, 시알릴 루이스 a, 루이스 y, 루이스 x, Tn, sTn, TF, sTF로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; SG는 만노스를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; SG는 만노스를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; SG는 만노스를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; SG는 만노스를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하며; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; SG는 만노스를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; SG는 만노스를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; SG는 만노스를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하며; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; SG는 만노스를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 만노스를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하며; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
본 개시내용은 또한 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체; 및 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는, 관용을 유도하기 위한 백신에 관한 것이며,
여기서 S는 각 경우에 독립적으로 가용화 블록이고;
B는 스페이서이고;
H는 각 경우에 독립적으로 소수성 블록이고,
여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
A는 각 경우에 독립적으로 펩티드 항원이고;
E1은 각 경우에 독립적으로 N-말단 연장부이고;
E2는 각 경우에 독립적으로 C-말단 연장부이고;
U는 각 경우에 독립적으로 링커이고;
[ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
-는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
여기서 친양쪽성체 및/또는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 덴드론 증폭제를 포함하고, 적어도 1개의 펩티드 항원은 자가항원, 동종항원, 또는 알레르겐으로부터 선택된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, A는 자가항원이다. 다른 실시양태에서, A는 알레르겐이다. 다른 실시양태에서, A는 동종항원이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체는 덴드론 증폭제를 포함한다. 다른 실시양태에서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 덴드론 증폭제를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 덴드론 증폭제를 포함한다. 다른 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 수지상 아키텍처를 갖는다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 2개 이상의 가용화 기 (SG)를 포함한다. 다른 실시양태에서, 2개 이상의 SG는 덴드론 증폭제에 의해 S의 나머지 부분에 연결되고, 예를 들어 4 내지 8개의 SG가 S에 연결된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, SG는 아민, 히드록실, 카르복실산 및/또는 당 분자로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 당 분자는 만노스, 글루코스, 글루코사민, N-아세틸 글루코스, 갈락토스, 갈락토사민, N-아세틸 갈락토사민, 포스포세린 및 그의 임의의 유도체, CD22a의 효능제, 시알릴 루이스 x, 및 그의 조합으로부터 독립적으로 선택된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 SG는 갈락토스이다. 다른 실시양태에서, 적어도 1개의 SG는 포스포세린이다. 다른 실시양태에서, 적어도 1개의 SG는 CD22a의 효능제이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 덴드론 증폭제는 세대당 2 내지 6개의 분지를 갖는 1 내지 10 세대의 반복 단량체 단위를 포함한다. 다른 실시양태에서, 덴드론 증폭제는 세대당 2 내지 3개의 분지를 갖는 2 내지 3 세대의 반복 단량체 단위를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 반복 단량체 단위는 FG1-(CH2)y2CH(R1)2, FG1-(CH2)y2C(R1)3, FG1-(CH2CH2O)y2CH(R1)2, FG1-(CH2CH2O)y2C(R1)3, 및 FG1-CH(R1)2, FG1-C(R1)3으로부터 선택되며, 여기서 R1은 각 경우에 독립적으로 (CH2)y3-FG2, (OCH2CH2)y3-FG2, 및 CH2(OCH2CH2)y3-FG2)로부터 선택되고; y2 및 y3은 각 경우에 독립적으로 1 내지 6의 정수의 반복 단위이고; FG1은 제1 관능기이고; FG2는 제2 관능기이다. 일부 실시양태에서, FG1은 -NH2이고; FG2는 각 경우에 독립적으로 -CO2- 또는 -CO2H이다. 일부 실시양태에서, FG1은 -CO2- 또는 -CO2H이고; FG2는 각 경우에 독립적으로 -NH2이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, SG는 적합한 링커 X5를 통해 S에 연결된다. 관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, SG를 S에 연결하는 적합한 링커 X5는 저급 알킬 및 PEG 기로부터 선택된다. 관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 2개 이상의 SG는 2개 이상의 SG를 아미드 결합을 통해 덴드론 증폭제의 말단 관능기 (FGt)에 연결하는 적합한 링커 X5를 통해, 덴드론 증폭제에 의해 S의 나머지 부분에 연결된다. 관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, SG를 덴드론 증폭제에 연결하는 링커 X5는 -NH-R19, -NH-C(O)-R19, -C(O)-NH-R19- 또는 -C(O)-R19로부터 선택되고, 여기서 R19는 -(CH2)t-, -(CH2CH2O)t-CH2CH2-, -(CH2)t-C(O)-NH-(CH2)u-, -(CH2CH2O)tCH2CH2C(O)-NH-(CH2)u-, -(CH2)t-NH-C(O)-NH-(CH2)u-, 또는 -(CH2CH2O)tCH2CH2NH-C(O)-(CH2)u-로부터 선택될 수 있으나 이에 제한되지는 않고, 여기서 t 및 u는 각각 독립적으로 1 내지 6으로부터 전형적으로 선택된 정수, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 덴드론 증폭제는 폴리에틸렌 옥시드 (PEG) 기를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 H는 고급 알칸, 방향족 기, 지방산, 스테롤, 다중불포화 탄화수소, 스쿠알렌, 사포닌, 및/또는 중합체를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체의 H는 고급 알칸, 방향족 기, 지방산, 스테롤, 다중불포화 탄화수소, 및/또는 중합체를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 각각의 H는 독립적으로 소수성 아미노산 (M), 반응성 아미노산 (N), 스페이서 아미노산 (O), 하전된 아미노산 (P) 및 그의 조합으로부터 선택된 단량체를 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하며, 단 M 또는 N 중 적어도 1개는 존재한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 각각의 H는 독립적으로 화학식
을 갖는 폴리(아미노산)를 포함하며,
여기서 M, N, O 및 P는 각각 독립적으로 존재하거나 부재하며, 단 M 또는 N 중 적어도 1개는 존재하고;
m, n, o 및 p는 각각 독립적으로 1 내지 100의 정수를 나타내고, m, n, o 및 p의 합계는 100 이하이고;
R3은 수소, NH2, NH-CH3, NH-(CH2)y5CH3, OH, 또는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 연결된 약물 분자 (D)로부터 선택되고;
y5는 1 내지 6으로부터 선택된 정수이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, P는 부재한다. 다른 실시양태에서, N, O 및 P는 각각 부재한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, P는 이고, 여기서 각각의 R5는 독립적으로 1 내지 2개의 하전된 관능기를 포함하는 기이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, O는 이고, 여기서 각각의 Q는 독립적으로 (CH2)y 및 (CH2CH2O)iCH2CH2로부터 선택되고; 각각의 y는 독립적으로 1 내지 6의 정수로부터 선택되고; 각각의 i는 독립적으로 1 내지 4의 정수로부터 선택된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, N은 이고, 여기서 각각의 X1은 독립적으로 적합한 링커이고; 각각의 D는 독립적으로 약물 분자이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, M은 이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 소수성 기이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, R4는
이고, 여기서
α는 아릴 또는 헤테로아릴이고;
X2는 존재하거나 부재하고, 존재하는 경우에 적합한 링커이고;
Y8은 0 내지 6의 정수로부터 선택되고;
Z1, Z2, 및 Z3은 각각 독립적으로 H, F, 히드록시, 아미노, 알킬, 및 플루오로알킬로부터 선택된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, α는 아릴, 예를 들어 페닐 또는 나프틸이다. 다른 실시양태에서, α는 헤테로아릴, 예를 들어 피리디닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌릴 또는 벤즈이미다졸릴이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, X는 부재한다. 다른 실시양태에서, X2는 존재하고, C(O), CO2(CH2)y9, CO2, C(O)NH(CH2)y9, NHC(O) 및 NHC(O)(CH2)y9로부터 선택되며, 여기서 y9는 1 내지 6으로부터 전형적으로 선택된 정수이다. 다른 실시양태에서, X2는 존재하고, 저급 알킬 및 PEG 기로부터 선택된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 하기로부터 선택되며:
여기서 각각의 X2는 독립적으로 적합한 링커로부터 선택되고, 각각의 y8은 독립적으로 0 및 6의 정수로부터 선택된다. 다른 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 하기로부터 선택되며:
여기서 각각의 y8은 독립적으로 0 및 6의 정수로부터 선택된다. 다른 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 하기로부터 선택된다:
.
다른 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 하기로부터 선택된다:
.
바람직한 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 하기로부터 선택되며:
여기서 y는 1 및 6의 정수로부터 선택된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D는
이며, 여기서
R20은 H, 알킬, 알콕시알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아미노알킬, 아미드 및 에스테르로부터 선택되고; X3은 알킬, 알콕시알킬, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 카르복시로부터 선택된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, R20은 H, 알킬 및 알콕시알킬로부터 선택되고; X3은 알킬 및 아르알킬로부터 선택된다. 다른 실시양태에서, R20은 부틸이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, X3은 알킬이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, m, n, o 및 p는 각각 독립적으로 1 내지 30의 정수를 나타내고, m, n, o 및 p의 합계는 30 이하이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, m, n, o 및 p는 각각 독립적으로 1 내지 10의 정수를 나타내고, m, n, o 및 p의 합계는 10 이하이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 존재하고, 친수성 중합체, 예를 들어, PEG 기이다. 다른 실시양태에서, B는 존재하고, 친수성 펩티드이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, PEG 기는 4 내지 36개의 단량체 단위를 포함한다. 다른 실시양태에서, PEG 기는 4 내지 12개의 단량체 단위를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친수성 펩티드는 4 내지 36개의 아미노산을 포함한다. 다른 실시양태에서, 친수성 펩티드는 4 내지 12개의 아미노산을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체는 화학식 S-H를 갖는다. 다른 실시양태에서, 친양쪽성체는 화학식 S-B-U-H를 갖는다. 다른 실시양태에서, 친양쪽성체는 화학식 S-B-U-H-D를 갖는다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 백신은 약 4:1 내지 약 1:20의 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체 몰비를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 1개 이상의 시스테인 잔기가 알파 아미노-부티르산으로 대체되고/거나 1개 이상의 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체된 서열을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 백신은 mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제 및 AHR, RAR 및 A2a의 효능제로부터 선택된 적어도 1개의 D를 포함한다. 다른 실시양태에서, 적어도 1개의 D는 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 백신은 mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제, AHR, RAR 및 A2a의 효능제, 및 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 면역자극제로부터 독립적으로 선택된 제2 약물 분자 (D2)를 추가로 포함하며, 단 D 및 D2는 상이한 수용체에 결합한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D는 mTOR의 억제제 및 AHR의 효능제로부터 선택되고, D2는 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D는 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택되고, D2는 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 다른 실시양태에서, D2는 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8, TLR-9 및 STING의 효능제로부터 선택된다. 관용을 유도하기 위한 백신의 다른 실시양태에서, D2는 TLR-7, TLR-8 및 TLR-7/8의 RNA 및 이미다조퀴놀린 효능제로부터 선택된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 백신은 mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제, AHR, RAR 및 A2a의 효능제, 및 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 면역자극제로부터 독립적으로 선택된 제3 약물 분자 (D3)를 추가로 포함하며, 단 D, D2 및 D3은 상이한 수용체에 결합한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D는 AZD-8055, AZD2016, KU-0063794, CC223, 토린-1, 토린-2, INK-128, WYE354, WYE132, OSI-027, OXA-01, PI-103, NVP-BEZ235, GNE-493, GSK2126458, 라파마이신, 타크롤리무스, 에베롤리무스, RAD001, CCI-779 및 AP23573으로부터 선택된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 총 펩티드 항원 접합체 대 적어도 1개의 D의 몰비는 약 20:1 내지 1:2, 또는 약 10:1 내지 약 1:1 또는 약 4:1 내지 약 2:1이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; SG는 N-아세틸 갈락토사민을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 펩티드 항원 접합체는 효소 분해성 링커를 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 친양쪽성체는 아미노-헥산산을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 파라 아미노-페닐알라닌의 중합체를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 제2 또는 제3 세대 덴드리머를 포함하고; B는 4 내지 36개의 PEG 단량체 단위를 포함하고; 친양쪽성체의 H는 이미다조퀴놀린을 포함하는 반응성 아미노산 (N) 및 트립토판의 폴리(아미노산)를 포함하고; 덴드리머 단량체는 히드록시산 및 아미노 알콜을 포함하고; 펩티드 항원 접합체의 H는 소수성 아미노산 (M)을 포함하는 폴리(아미노산)를 포함한다.
본 개시내용은 또한 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체; 및 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신에 관한 것이며,
여기서 S는 각 경우에 독립적으로 가용화 블록이고;
B는 스페이서이고;
H는 각 경우에 독립적으로 소수성 블록이고,
여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
A는 각 경우에 독립적으로 펩티드 항원이고;
E1은 각 경우에 독립적으로 N-말단 연장부이고;
E2는 각 경우에 독립적으로 C-말단 연장부이고;
U는 각 경우에 독립적으로 링커이고;
[ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
-는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
여기서 친양쪽성체 및/또는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 덴드론 증폭제를 포함하고,
적어도 1개의 A는 1개 이상의 시스테인 잔기가 알파 아미노-부티르산으로 대체되고/거나 1개 이상의 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체된 서열을 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, S는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체에 대해 존재하고, 아민 또는 카르복실산으로부터 선택된 SG를 포함한다. 백신의 일부 실시양태에서, S는 1개 이상의 리신 또는 오르니틴 잔기를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 생리학적 pH에서 약 +1 내지 약 +10의 알짜 양전하를 갖는다.
백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 생리학적 pH에서 약 +2 내지 약 +6 또는 약 +3 내지 약 +5의 알짜 양전하를 갖는다.
백신의 일부 실시양태에서, S는 1개 이상의 글루탐산 또는 아스파르트산 잔기를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 생리학적 pH에서 약 -1 내지 약 -10의 알짜 음전하를 갖는다. 백신의 다른 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 생리학적 pH에서 약 -2 내지 약 -6 또는 약 -3 내지 약 -5의 알짜 음전하를 갖는다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 카르복실산을 포함한다. 백신의 다른 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 숙신산 또는 베타 알라닌을 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비는 약 4:1 내지 1:20이다.
백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체의 평균 알짜 전하는 생리학적 pH에서 양성이고, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비는 약 4:1 내지 약 2:1 또는 약 1:2 내지 약 1:16, 또는 약 1:2 내지 약 1:4이다.
본 개시내용은 또한 적어도 1개의 펩티드 항원 (A)을 포함하는 백신에 관한 것이며, 여기서 적어도 1개의 펩티드 항원 (A)은 1개 이상의 시스테인 잔기가 알파 아미노-부티르산으로 대체되고/거나 1개 이상의 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체된 서열을 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 백신은 지질 에멀젼, 리포솜, PLGA 입자, 무기 염 입자 및 금속 나노입자로부터 선택된 입자 전달 시스템을 추가로 포함한다. 백신의 다른 실시양태에서, 백신은 면역자극제 및 Treg 촉진 면역조정제로부터 선택된 적어도 1개의 약물 분자 (D)를 추가로 포함한다.
본 개시내용은 또한 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신에 관한 것이며,
여기서 S는 각 경우에 독립적으로 가용화 블록이고;
H는 각 경우에 독립적으로 소수성 블록이고,
여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
A는 각 경우에 독립적으로 펩티드 항원이고;
E1은 각 경우에 독립적으로 N-말단 연장부이고;
E2는 각 경우에 독립적으로 C-말단 연장부이고;
U는 각 경우에 독립적으로 링커이고;
여기서:
(i) 적어도 1개의 A가 알파 아미노-부티르산 및/또는 노르류신을 포함하거나;
(ii) 적어도 1개의 A가 종양 항원으로부터 선택되고, 적어도 1개의 D가 존재하며 TLR-7/8의 효능제로부터 선택되고, 백신이 mTOR의 억제제로부터 선택된 제2 약물 분자 (D2)를 추가로 포함하거나;
(iii) 적어도 1개의 A가 당펩티드이거나; 또는
(iv) 적어도 1개의 A가 자가항원, 알레르겐 및 동종항원으로부터 선택되고, 적어도 1개의 D가 존재하며 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택되고; [ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
-는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타낸다.
백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 종양 항원으로부터 선택된 적어도 1개의 A를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D는 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-9 및 STING의 효능제로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 각각의 H는 반응성 아미노산 (N)의 단량체를 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하며, 여기서 단량체는 TLR-7/8의 효능제로부터 선택된 D를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, D2는 라파마이신, 타크롤리무스, 에베롤리무스, RAD001, CCI-779 및 AP23573으로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체 대 D2의 몰비는 약 20:1 내지 1:2, 또는 약 10:1 내지 약 1:1 또는 약 4:1 내지 약 2:1이다.
백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 A는 당펩티드이고, 예를 들어 A는 HGVT*S*APDT*RPAPGS*T*APPA, DT*RPAPGS*T*APPAHGVT*S*AP, GS*T*APPAHGVT*S*APDT*RPAPGS*T*APPA, GVT*S*APDT*RPAP, APDT*RPAPGS*T*A, GS*T*APPAHGVT*S*AP, VT*S*AP, DT*RPAP 및 GS*T*AP로부터 선택된 당펩티드이며, 여기서 *는 O-연결된 글리칸이고, 각 경우에 독립적으로 시알릴 루이스 x, 시알릴 루이스 a, 루이스 y, 루이스 x, Tn, sTn, TF, sTF로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, S는 부재한다. 다른 실시양태에서, S는 존재한다.
백신의 일부 실시양태에서, 백신은 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체를 추가로 포함하며,
여기서 S는 가용화 블록이고;
B는 스페이서이고;
H는 소수성 블록이고;
U는 링커이고;
[ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
-는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
여기서 친양쪽성체의 S는 덴드론 증폭제를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 아민, 카르복실산 또는 당 분자로부터 독립적으로 선택된 2개 이상의 가용화 기 (SG)를 포함하며, 여기서 당 분자는 만노스, 시알릴 루이스 x, 시알릴 루이스 a, 루이스 y, 루이스 x, Tn, sTn, TF, sTF, 글로보 H, SSEA-3, GM2, GD2, GD3 및 푸코실 GM1 및 그의 조합으로부터 독립적으로 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 자가항원, 동종항원, 및 알레르겐으로부터 선택된 적어도 1개의 A를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 백신은 mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제 및 AHR, RAR 및 A2a의 효능제로부터 선택된 적어도 1개의 D를 추가로 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 백신은 mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제, AHR, RAR 및 A2a의 효능제, 및 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 면역자극제로부터 독립적으로 선택된 제2 약물 분자 (D2)를 추가로 포함하며, 단 D 및 D2는 상이한 수용체에 결합한다.
백신의 일부 실시양태에서, D2는 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된다. 다른 실시양태에서, D2는 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8, TLR-9 및 STING의 효능제로부터 선택된다. 다른 실시양태에서, D2는 TLR-7, TLR-8 및 TLR-7/8의 RNA 및 이미다조퀴놀린 효능제로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 백신은 mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제, AHR, RAR 및 A2a의 효능제, 및 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 면역자극제로부터 독립적으로 선택된 제3 약물 분자 (D3)를 추가로 포함하며, 단 D, D2 및 D3은 상이한 수용체에 결합한다.
백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D는 AZD-8055, AZD2016, KU-0063794, CC223, 토린-1, 토린-2, INK-128, WYE354, WYE132, OSI-027, OXA-01, PI-103, NVP-BEZ235, GNE-493, GSK2126458, 라파마이신, 타크롤리무스, 에베롤리무스, RAD001, CCI-779 및 AP23573으로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 총 펩티드 항원 접합체 대 적어도 1개의 D의 몰비는 약 20:1 내지 1:2, 또는 약 10:1 내지 약 1:1 또는 약 4:1 내지 약 2:1이다.
백신의 일부 실시양태에서, 백신은 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체를 추가로 포함하며,
여기서 S는 가용화 블록이고;
B는 스페이서이고;
H는 소수성 블록이고;
U는 링커이고;
[ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
-는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
여기서 친양쪽성체의 S는 덴드론 증폭제를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체의 S는 카르복실산, 포스포세린 및 당 분자로부터 독립적으로 선택된 2개 이상의 가용화 기 (SG)를 포함하며, 여기서 당 분자는 만노스, 글루코스, 글루코사민, N-아세틸 글루코스, 갈락토스, 갈락토사민, N-아세틸 갈락토사민, 및 CD22a의 효능제로부터 독립적으로 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체의 S는 아민으로부터 선택된 SG를 포함한다. 다른 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체의 S는 1개 이상의 리신 또는 오르니틴 잔기를 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 생리학적 pH에서 약 +1 내지 약 +10의 알짜 양전하를 갖는다. 다른 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 생리학적 pH에서 약 +2 내지 약 +6 또는 약 +3 내지 약 +5의 알짜 양전하를 갖는다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체가 존재하고, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비는 약 4:1 내지 1:20이다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체는 카르복실산을 포함하고, 알짜 음전하를 갖는다. 다른 실시양태에서, 친양쪽성체는 베타 알라닌 및 숙신산으로부터 선택된 카르복실산을 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체의 평균 알짜 전하는 생리학적 pH에서 양성이고, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비는 약 4:1 내지 약 2:1 또는 약 1:2 내지 약 1:16, 또는 약 1:2 내지 약 1:4이다. 특정의 바람직한 실시양태에서, 몰비는 약 1:1이다.
본 개시내용은 또한 적어도 1개의 펩티드 항원 (A)을 코딩하는 DNA 또는 RNA를 포함하는 발현 시스템을 포함하는 백신에 관한 것이며, 여기서 백신은 Treg 촉진 면역조정제로부터 선택된 적어도 1개의 약물 분자 (D)를 추가로 포함한다.
발현 시스템을 포함하는 백신의 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D는 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택된다.
발현 시스템을 포함하는 백신의 일부 실시양태에서, D는 AZD-8055, AZD2016, KU-0063794, CC223, 토린-1, 토린-2, INK-128, WYE354, WYE132, OSI-027, OXA-01, PI-103, NVP-BEZ235, GNE-493, GSK2126458, 라파마이신, 타크롤리무스, 에베롤리무스, RAD001, CCI-779 및 AP23573으로부터 선택된다.
발현 시스템을 포함하는 백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 자가항원, 동종항원 및 알레르겐으로부터 선택된다.
발현 시스템을 포함하는 백신의 일부 실시양태에서, 백신은 양이온성 리포솜 입자를 추가로 포함한다.
백신의 일부 실시양태에서, 백신은 친양쪽성체 및 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 추가로 포함하는 입자를 포함한다. 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체 및 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 또는 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]를 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 입자를 포함하며, 여기서 A는 펩티드 항원이고, S는 가용화 블록이고; E1 및 E2는 각각 N- 및 C-말단 연장부이고; B는 스페이서이고; U는 링커 분자이고; H는 소수성 블록이고; [ ]는 기가 임의적임을 나타내고; -는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고; 친양쪽성체 및 펩티드 항원 접합체의 S, U 및 H는 동일할 수 있거나, 상이할 수 있거나, 또는 1개 이상의 동일한 관능기 또는 모이어티를 포함할 수 있다.
백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체는 1개 이상의 약물 분자 (D)를 추가로 포함한다. 약물 분자 (D)는 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록 (H)에 직접적으로 또는 X1을 통해 간접적으로 연결될 수 있다 (예를 들어, S-[B]-[U]-H-D 및/또는 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-D). 약물 분자 (D)는 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체와 혼합될 수 있거나 (예를 들어, D + S-[B]-[U]-H + [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H), 또는 약물 분자 (D)는 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체와 혼합된 약물 분자 접합체의 형태 (즉, D-[U]-H 또는 H-D)일 수 있다 (예를 들어, D-H + S-[B]-[U]-H + [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H). 약물 분자 (D)를 추가로 포함하는 백신의 바람직한 조성물은 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있다. D는 측쇄로서 또는 측쇄 기의 일부로서 인접한 기에 직접적으로 또는 간접적으로 결합된다.
백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 친양쪽성체 및 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 입자를 포함하며, 면역조정제로부터 선택된 약물 분자 (D)를 추가로 포함한다. 면역조정제로부터 선택된 약물 분자 (D)는 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록 (H)에 직접적으로 또는 X1을 통해 간접적으로 연결될 수 있거나 (예를 들어, S-[B]-[U]-H-D 및/또는 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-HD); 약물 분자 (D)는 친양쪽성체 및 펩티드 항원 접합체와 혼합될 수 있거나 (예를 들어, D + S-[B]-[U]-H + [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H); 또는 약물 분자 (D)는 친양쪽성체 및 펩티드 항원 접합체와 혼합된 약물 분자 접합체의 형태 (즉, D-[U]-H 또는 H-D)일 수 있다 (예를 들어, D-H + S-[B]-[U]-H + [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H). 약물 분자 (D)를 추가로 포함하는 백신의 바람직한 조성물은 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있다.
자가면역 질환을 치료 또는 예방하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 자기-항원 (때때로 자가항원으로 지칭됨)으로부터 선택된 항원 (A)을 포함한다. 알레르기를 치료 또는 예방하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 알레르겐으로부터 선택된 항원 (A)을 포함한다. 암을 치료 또는 예방하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 자기-항원, 신생항원 또는 바이러스 항원으로부터 선택된 항원 (A)을 포함한다. 감염성 질환을 치료하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 바이러스, 박테리아, 원충 또는 진균으로부터 선택된 항원 (A)을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 백신은 내인성으로 생산된 단백질로부터 선택된 항원을 포함하고, 백신은 심혈관 질환의 치료에 사용된다. 백신의 또 다른 실시양태에서, 항원은 소분자 합텐으로부터 선택되고, 백신은 신경 작용제를 비롯하여 화학적 독소에 노출 시 독성을 방지하는 데 사용된다. 바람직한 항원뿐만 아니라 상이한 질환을 치료하기 위해 항원을 선택하는 바람직한 방법은 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있다.
친양쪽성체의 특정 조성물을 포함하는 입자는 암, 염증, 자가면역 질환, 황반 변성뿐만 아니라 CNS, 심장 및 간을 포함한 생명유지 기관의 질환, 및 대사 질환의 치료를 포함한 다양한 적용을 위해 소분자 약물을 전달하는 데 특정한 유용성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
암 치료를 위한 조성물의 일부 실시양태에서, 암 치료는 친양쪽성체, 및 화학요법제 및/또는 면역조정제로부터 선택된 약물 분자를 포함하는 입자를 포함한다. 암 치료의 바람직한 실시양태에서, 입자는 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체 및 약물 D를 포함하며, 여기서 S는 가용화 블록이고; B는 스페이서이고; U는 링커 분자이고; H는 소수성 블록이고; [ ]는 기가 임의적임을 나타내고; 약물 D는 공유 또는 비-공유 상호작용을 통해 입자와 회합된다.
본 개시내용은 또한 S-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 및 [D]-H-[U]-[E1]-A-[E2]-S로부터 선택된 화학식을 갖는 펩티드 항원 접합체 또는 S-[E1]-A-[E2]-[U1] 및 [U1]-[E1]-A-[E2]-S로부터 선택된 화학식을 갖는 펩티드 항원 단편에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 약물 분자 (D)는 친양쪽성체의 소수성 블록 (H)에 연결되어, 예를 들어 S-[B]-[U]-H-D이고, 여기서 1개 이상의 D는 직접적으로 또는 X1을 통해 간접적으로 인접한 기에 말단(들)에서 또는 측쇄 기의 일부로서 결합된다. 다른 실시양태에서, 약물 분자는 친양쪽성체와 혼합되거나 (예를 들어, D + S-[B]-[U]-H) 또는 소수성 블록 (H)에 연결되고 친양쪽성체와 혼합되며 (예를 들어, D-[B]-[U]-H + S-[B]-[U]-H, 또는 H-D + S-[B]-[U]-H), 약물은 친양쪽성체에 의해 형성된 입자 내에 혼입된다. 친양쪽성체 및 적어도 1개의 화학요법제 및/또는 면역자극제를 포함하는 암 치료의 바람직한 조성물은 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있다.
본 개시내용은 또한 S-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 및 [D]-H-[U]-[E1]-A-[E2]-S로부터 선택된 화학식을 갖는 펩티드 항원 접합체 또는 S-[E1]-A-[E2]-[U1] 및 [U1]-[E1]-A-[E2]-S로부터 선택된 화학식을 갖는 펩티드 항원 단편에 관한 것이며,
여기서 S는 가용화 블록이고;
H는 소수성 블록이고,
여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
A는 펩티드 항원이고;
E1은 N-말단 연장부이고;
E2는 C-말단 연장부이고;
U는 링커이고;
U1은 링커 전구체이고;
[ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
-는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
여기서 S는 1개 이상의 아미노산을 포함한다.
일부 실시양태에서, S는 2 내지 12개의 아미노산을 포함한다. 다른 실시양태에서, S는 2 내지 8개의 아미노산을 포함한다. 다른 실시양태에서, S는 4 내지 6개의 아미노산을 포함한다. 다른 실시양태에서, S는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개의 아미노산을 포함한다.
일부 실시양태에서, S 아미노산은 리신, 아르기닌 및 오르니틴으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 항원 단편은 화학식 A-[E2]-S를 갖는다.
일부 실시양태에서, E1 및/또는 E2가 존재하고, 이는 화학식 P4-P3-P2-P1의 카텝신 절단가능한 테트라펩티드로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, E1 및/또는 E2가 존재하고, Ser-Pro-Val-Arg, Ser-Pro-Val-Cit 및 Ser-Pro-Val-aBut로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 노르류신 및 알파-아미노부티르산으로부터 선택된 적어도 1개의 아미노산을 포함한다.
일부 실시양태에서, 백신은 본원에 개시된 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편을 포함한다.
일부 실시양태에서, T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키는 방법은 본원에 개시된 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편을 포함하는 수용액을 시험관내 또는 생체외에서 T 세포에 첨가하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, E1 및 E2 중 적어도 1개는 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편에 존재한다.
일부 실시양태에서, 각각의 E1 및/또는 E2는 독립적으로 화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 헵타드 반복부를 포함하며, 여기서
각 경우의 AAa 및 AAd는 독립적으로 류신, 이소류신, 노르류신, 발린, 노르발린, T-류신, 알로-이소류신, N-프로필 글리신, 메티오닌, 및 O-메틸 세린으로부터 선택되고;
각 경우의 AAb, AAc 및 AAf는 독립적으로 알라닌, 시스테인, 아스파르트산, 글리신, 아스파라긴, 프롤린, 세린, 트레오닌, 발린, 알파-아미노-부티르산, 및 노르발린으로부터 선택되고;
각 경우의 AAe 및 AAg는 독립적으로 아스파르트산, 글루탐산, 리신, 아르기닌, 오르니틴, 술포-세린, 및 포스포세린을 포함하나 이에 제한되지는 않는 하전된 아미노산으로부터 선택되고;
e는 1 내지 6으로부터 선택된 정수이다.
일부 실시양태에서, 각 경우의 AAa 및 AAd는 독립적으로 류신, 이소류신 및 노르류신으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 각 경우의 AAb, AAc 및 AAf는 독립적으로 알라닌, 프롤린 및 세린으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 각 경우의 AAe 및 AAg는 독립적으로 아스파르트산, 글루탐산, 리신, 아르기닌, 및 오르니틴으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 각각의 E1 및/또는 E2는 독립적으로 (I-A-A-L-E-S-K)e, (I-A-A-L-K-S-K)e, (I-A-A-L-E-S-E)e, (I-A-A-L-K-S-E)e, (V-A-A-L-K-A-E)e, (I-A-A-L-K-A-E)e, (L-A-A-L-K-A-E)e, (V-S-A-L-K-A-E)e, (I-S-A-L-K-A-E)e, (L-S-A-L-K-A-E)e, (V-A-S-L-K-A-E)e, (I-A-S-L-K-A-E)e, (L-A-S-L-K-A-E)e, (V-S-S-L-K-A-E)e, (I-S-S-L-K-A-E)e, (L-S-S-L-K-A-E)e, (V-A-A-L-K-S-E)e, (L-A-A-L-K-S-E)e, (V-S-A-L-K-S-E)e, (I-S-A-L-K-S-E)e, (L-S-A-L-K-S-E)e, (V-A-S-L-K-S-E)e, 및 (I-A-S-L-K-S-E)e로부터 선택된 헵타드 반복부를 포함한다.
일부 실시양태에서, 각각의 E1 및/또는 E2는 독립적으로 (K-S-E-L-A-A-I)e, (K-S-K-L-A-A-I)e, (E-S-S-L-A-A-I)e, (E-S-K-L-A-A-I)e, (E-A-K-L-A-A-V)e, (E-A-K-L-A-A-I)e, (E-A-K-L-A-A-L)e, (E-A-K-L-A-S-V)e, (E-A-K-L-A-S-I)e, (E-A-K-L-A-S-L)e, (E-A-K-L-S-A-V)e, (E-A-K-L-S-A-I)e, (E-A-K-L-S-A-L)e, (E-A-K-L-S-S-V)e, (E-A-K-L-S-S-I)e, (E-A-K-L-S-S-L)e, (E-S-K-L-A-A-V)e, (E-S-K-L-A-A-I)e, (E-S-K-L-A-A-L)e, (E-S-K-L-A-S-V)e, (E-S-K-L-A-S-I)e, (E-S-K-L-A-S-L)e, (E-S-K-L-S-A-V)e, (E-S-K-L-S-A-I)e로부터 선택된 헵타드 반복부를 포함한다.
일부 실시양태에서, e는 1 내지 4로부터 선택된 정수이다. 다른 실시양태에서, e는 2 또는 3으로부터 선택된 정수이다.
일부 실시양태에서, 각각의 헵타드의 6개의 아미노산은 D-아미노산이다. 다른 실시양태에서, 각각의 헵타드의 7개의 아미노산은 D-아미노산이다.
일부 실시양태에서, E1 및 E2 중 적어도 1개는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체에 존재한다.
일부 실시양태에서, 각각의 E1 및/또는 E2는 독립적으로 화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 헵타드 반복부를 포함하며, 여기서
각 경우의 AAa 및 AAd는 독립적으로 류신, 이소류신, 노르류신, 발린, 노르발린, T-류신, 알로-이소류신, N-프로필 글리신, 메티오닌, 및 O-메틸 세린으로부터 선택되고;
각 경우의 AAb, AAc 및 AAf는 독립적으로 알라닌, 시스테인, 아스파르트산, 글리신, 아스파라긴, 프롤린, 세린, 트레오닌, 발린, 알파-아미노-부티르산, 및 노르발린으로부터 선택되고;
각 경우의 AAe 및 AAg는 독립적으로 아스파르트산, 글루탐산, 리신, 아르기닌, 오르니틴, 술포-세린, 및 포스포세린을 포함하나 이에 제한되지는 않는 하전된 아미노산으로부터 선택되고;
e는 1 내지 6으로부터 선택된 정수이다.
일부 실시양태에서, 각 경우의 AAa 및 AAd는 독립적으로 류신, 이소류신 및 노르류신으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 각 경우의 AAb, AAc 및 AAf는 독립적으로 알라닌, 프롤린 및 세린이다.
일부 실시양태에서, 각 경우의 AAe 및 AAg는 독립적으로 아스파르트산, 글루탐산, 리신, 아르기닌, 및 오르니틴으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 각각의 E1 및/또는 E2는 독립적으로 (I-A-A-L-E-S-K)e, (I-A-A-L-K-S-K)e, (I-A-A-L-E-S-E)e, (I-A-A-L-K-S-E)e, (V-A-A-L-K-A-E)e, (I-A-A-L-K-A-E)e, (L-A-A-L-K-A-E)e, (V-S-A-L-K-A-E)e, (I-S-A-L-K-A-E)e, (L-S-A-L-K-A-E)e, (V-A-S-L-K-A-E)e, (I-A-S-L-K-A-E)e, (L-A-S-L-K-A-E)e, (V-S-S-L-K-A-E)e, (I-S-S-L-K-A-E)e, (L-S-S-L-K-A-E)e, (V-A-A-L-K-S-E)e, (L-A-A-L-K-S-E)e, (V-S-A-L-K-S-E)e, (I-S-A-L-K-S-E)e, (L-S-A-L-K-S-E)e, (V-A-S-L-K-S-E)e, 및 (I-A-S-L-K-S-E)e로부터 선택된 헵타드 반복부를 포함한다.
일부 실시양태에서, 각각의 E1 및/또는 E2는 독립적으로 (K-S-E-L-A-A-I)e, (K-S-K-L-A-A-I)e, (E-S-S-L-A-A-I)e, (E-S-K-L-A-A-I)e, (E-A-K-L-A-A-V)e, (E-A-K-L-A-A-I)e, (E-A-K-L-A-A-L)e, (E-A-K-L-A-S-V)e, (E-A-K-L-A-S-I)e, (E-A-K-L-A-S-L)e, (E-A-K-L-S-A-V)e, (E-A-K-L-S-A-I)e, (E-A-K-L-S-A-L)e, (E-A-K-L-S-S-V)e, (E-A-K-L-S-S-I)e, (E-A-K-L-S-S-L)e, (E-S-K-L-A-A-V)e, (E-S-K-L-A-A-I)e, (E-S-K-L-A-A-L)e, (E-S-K-L-A-S-V)e, (E-S-K-L-A-S-I)e, (E-S-K-L-A-S-L)e, (E-S-K-L-S-A-V)e, (E-S-K-L-S-A-I)e로부터 선택된 헵타드 반복부를 포함한다.
일부 실시양태에서, e는 1 내지 4로부터 선택된 정수이다. 다른 실시양태에서, e는 2 또는 3으로부터 선택된 정수이다.
일부 실시양태에서, 각각의 헵타드의 6개의 아미노산은 D-아미노산이다. 다른 실시양태에서, 각각의 헵타드의 7개의 아미노산은 D-아미노산이다.
본 개시내용은 또한 면역 반응의 유도를 필요로 하는 대상체에게 제1 백신 (V1)의 적어도 1회의 용량에 이어서 제2 백신 (V2)의 적어도 1회의 용량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이며, 여기서 V1은 본원에 개시된 백신이고; V2는 바이러스 백신이다.
일부 실시양태에서, 대상체에서의 T 세포 반응은 제1 백신 (V1)의 적어도 1회의 용량의 단독 투여에 비해 증가된다.
일부 실시양태에서, 대상체에서의 T 세포 반응은 제2 백신 (V2)의 적어도 1회의 용량의 단독 투여에 비해 증가된다.
일부 실시양태에서, V1의 1회 용량은 제1 시간 (V1T1)에 투여된다. 다른 실시양태에서, V1의 2회 용량은 제1 시간 (V1T1) 및 제2 시간 (V1T2)에 투여된다. 다른 실시양태에서, V1의 3회 용량은 제1 시간 (V1T1), 제2 시간 (V1T2), 및 제3 시간 (V1T3)에 투여된다.
일부 실시양태에서, V2의 1회 용량은 제1 시간 (V2T1)에 투여된다. 다른 실시양태에서, V2의 2회 용량은 제1 시간 (V2T1) 및 제2 시간 (V2T2)에 투여된다. 다른 실시양태에서, V2의 3회 용량은 제1 시간 (V2T1), 제2 시간 (V2T2) 및 제3 시간 (V2T3)에 투여된다.
일부 실시양태에서, V1은 근육내 또는 정맥내 경로에 의해 투여된다.
일부 실시양태에서, V2는 정맥내 경로에 의해 투여된다.
일부 실시양태에서, V2의 초기 용량은 V1의 최종 용량의 1 내지 6주 후에 투여된다. 다른 실시양태에서, V2의 초기 용량은 V1의 최종 용량의 1 내지 12주 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, V2는 아데노바이러스 벡터 백신이다.
일부 실시양태에서, 아데노바이러스는 V1의 펩티드 항원 (A)을 코딩한다.
일부 실시양태에서, V2는 ChAdOx 백신이다.
링커
용어 링커는 임의의 2개 이상의 분자 (또는 "모이어티"), 예컨대 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체, 합텐 접합체 또는 약물 접합체 중 임의의 2개 이상의 성분을 함께 연결하고, 하기 기능 중 어느 하나 이상을 추가적으로 수행할 수 있는 임의의 분자를 지칭한다: I) 수용해도의 증가 또는 감소; II) 임의의 2개의 성분 사이의 거리의 증가; III) 강성 또는 가요성의 부여; 또는 IV) 임의의 2개 이상의 상이한 분자 사이의 연결의 분해 속도의 조정. 본원에 사용된 용어 "링커"는 링커 (U), 적합한 링커 (X), 예컨대 X1, X2, X3, X4 및 X5, 및 연장부 (E1 또는 E2)를 기재하는 데 사용될 수 있다.
특정한 유용성을 갖는 링커가 명명되며, 그렇게 명명된 링커의 구체적인 바람직한 조성은 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있다. 따라서, 연장부 E1 및 E2는 각각 펩티드 항원 (A)의 N- 및 C-말단으로부터 연장되는 임의적인 펩티드-기반 링커이며, 이는 가용화 블록 (S)과 항원 (A) 사이에 또는 항원 (A)과 소수성 블록 (H) 사이에 또는 항원 (A)과 임의적인 링커 U 사이에 포함될 수 있다. 스페이서 (B)는 친양쪽성체 상의 가용화 블록 (S)과 소수성 블록 (H) 사이의 링커이다. 직접적으로 또는 스페이서 (B)를 통해 간접적으로 가용화 블록 또는 약물 (D)에 연결된 링커 전구체 1 ("U1")과 소수성 블록 (H) 상의 링커 전구체 2 ("U2")의 반응으로부터 생성된 분자는 링커 U로서 지칭된다. 적합한 링커 X는 2개 이상의 인접한 기 기를 연결하는 데 적합한 임의의 링커를 지칭한다. 약물 분자 (D)를 소수성 블록 (H)에 연결하는 데 바람직한 적합한 링커는 X1로 지칭된다. 아릴 또는 헤테로아릴 기를 소수성 블록에 연결하는 데 바람직한 적합한 링커는 X2로 지칭된다. 반응성 관능기 ("FG4")를 약물 분자 (D)의 약물작용발생단에 연결하는 데 사용되는 적합한 링커는 X3으로 지칭된다. 하전된 기를 소수성 블록 (H)에 연결하는 데 바람직한 적합한 링커는 X4로 지칭된다. SG를 S에 연결하는 데 바람직한 적합한 링커는 X5로 지칭된다.
링커는 임의의 2개 이상의 성분을 연결하기 위해 공유 또는 비-공유 수단을 사용할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 링커는 공유 결합을 통해 임의의 2개의 성분을 연결, 즉 이을 수 있다. 공유 결합은 임의의 2개의 성분을 연결하고, 대상체에게의 투여 후 성분이 다른 성분으로부터 즉시 분산될 수 없도록 보장하기 위해 사용되는 바람직한 연결이다.
관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 많은 적합한 링커가 존재하며, 직쇄 또는 분지쇄 탄소 링커, 헤테로시클릭 탄소 링커, 강성 방향족 링커, 가요성 에틸렌 옥시드 링커, 펩티드 링커, 또는 그의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않고, 공유 링커의 경우에, 이는 임의의 2개의 분자, 예를 들어 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체 및/또는 약물 접합체 중 임의의 2개의 성분을 공유 결합을 통해 연결하는 데 사용되는 동일하거나 상이할 수 있는 2개 이상의 관능기를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 탄소 링커는 C1-C18 알칸 링커, 예를 들어, 저급 알킬 링커, 예컨대 C1-C6 (즉, 1 내지 6개의 메틸렌 단위)을 포함할 수 있으며, 이는 2개 이상의 분자, 즉, 상이한 성분 사이의 공간을 증가시키는 역할을 할 수 있는 한편, 보다 장쇄의 알칸 링커는 소수성 특징을 부여하는 데 사용될 수 있다. 대안적으로, 친수성 링커, 예컨대 에틸렌 옥시드 링커를 알칸 링커 대신 사용하여 임의의 2개 이상의 이종 분자 사이의 공간을 증가시키고 수용해도를 증가시킬 수 있다. 다른 실시양태에서, 링커는 시클릭 및/또는 방향족 화합물, 또는 강성을 부여하는 폴리(방향족) 화합물일 수 있다. 링커 분자는 친수성 또는 소수성 링커를 포함할 수 있다. 여러 실시양태에서, 링커는 세포내 효소 (예컨대 카텝신 또는 이뮤노프로테아솜)에 의해 절단가능한 분해성 펩티드 서열을 포함한다.
성분 중 적어도 1개가 펩티드를 포함하는, 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체 및 약물 접합체 중 2개의 성분을 연결하는 데 있어서, 2 내지 7개의 메틸렌 기를 포함하는 링커가 성분 중 2개의 커플링을 개선시키는 것으로 발견되었다. 비제한적 예에서, 펩티드-기반 소수성 블록 (H)의 N-말단 아미노산의 아미드와 아민 사이의 메틸렌 단위의 수를 증가시키는 것은 U2, 항원 (A), 연장부 E2, 스페이서 (B) 및 가용화 블록 (S)을 포함하는 다른 분자에 대한 개선된 커플링으로 이어졌다. 따라서, 바람직한 실시양태에서, 폴리(아미노산)-기반 소수성 블록 (H)의 N-말단 아미노산은 2개 이상, 전형적으로 2 내지 7개, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7개의 메틸렌 단위를 포함한다. 명확성을 위해, 2개의 메틸렌 단위를 갖는 아미노산은 베타-알라닌이고, 5개의 메틸렌 단위를 갖는 아미노산은 아미노-헥산산이다. 특정의 바람직한 실시양태에서, 펩티드-기반 소수성 블록 (H)의 N-말단 아미노산은 아미노-헥산산 (때때로 Ahx로 지칭됨; CAS 번호 60-32-3)이다. 다른 실시양태에서, 펩티드-기반 소수성 블록 (H)의 N-말단 아미노산은 베타-알라닌이다.
일부 실시양태에서, 링커는 폴리(에틸렌 옥시드) (PEG)를 포함할 수 있다. 링커의 길이는 링커의 목적에 좌우된다. 예를 들어, 링커, 예컨대 PEG 링커의 길이는 임의의 2종 이상의 성분을 분리하기 위해, 예를 들어 입체 장애를 감소시키기 위해 증가될 수 있거나, 또는 친수성 PEG 링커의 경우에는 수용해도를 개선시키기 위해 사용될 수 있다. 링커, 예컨대 PEG는 약 1 내지 약 24개 단량체 길이, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24개 단량체 길이 또는 그 초과일 수 있다. 스페이서 (B)로서 사용되는 경우에, PEG는 최대 45개의 단량체 길이 또는 그 초과일 수 있지만, 전형적으로 4 내지 36개의 단량체 길이이다.
링커가 탄소 쇄를 포함하는 일부 실시양태에서, 링커는 약 1 또는 2 내지 약 18개의 탄소, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18개 또는 그 초과의 탄소 길이의 쇄를 포함할 수 있다. 링커가 탄소 쇄를 포함하는 일부 실시양태에서, 링커는 약 12 내지 약 20개의 탄소의 쇄를 포함할 수 있다. 링커가 탄소 쇄를 포함하는 일부 실시양태에서, 링커는 18개 이하 사이의 탄소, 전형적으로 약 1 내지 6개의 탄소 원자의 쇄를 포함할 수 있다.
임의의 2개 이상의 분자, 예를 들어 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체 및/또는 약물 접합체 중 임의의 2개 이상의 성분을 잇는 데 사용되는 연결은 아미드, 에스테르, 에테르, 티오에테르, 실릴 에테르, 디술피드, 카르바메이트, 카르바미드, 히드라지드, 히드라존, 아세탈 및 트리아졸을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 적합한 관능기를 포함할 수 있다.
공유 연결의 비제한적 예에서, 클릭 화학 반응은 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체, 또는 약물 분자 접합체 중 임의의 2개의 성분을 연결하는, 즉 함께 잇는 트리아졸을 생성할 수 있다. 여러 실시양태에서, 클릭 화학 반응은 변형-촉진된 [3+2] 아지드-알킨 고리화-첨가 반응이다. 알킨 기 및 아지드 기는 "클릭 화학"에 의해 연결될 각각의 분자 상에 제공될 수 있다. 일부 실시양태에서, 아지드 관능기를 보유하는 항원 (A)은 적절한 반응성 기, 예컨대 알킨, 예를 들어 디벤질시클로옥틴 (DBCO)을 갖는 소수성 블록 (H)에 커플링된다.
일부 실시양태에서, 아민은 하나의 분자 상에 제공되고, 아민을 임의의 적합한 친전자성 기, 예컨대 카르복실산, 산 클로라이드, 활성화된 에스테르 (예를 들어, NHS 에스테르)와 반응시켜 아미드 결합을 생성함으로써 또 다른 분자에 연결될 수 있거나; 아민은 알켄과 반응할 수 있거나 (마이클 첨가를 통함); 아민은 알데히드 및 케톤과 반응할 수 있거나 (쉬프 염기를 통함); 또는 아민은 활성화된 카르보네이트 또는 카르바메이트와 반응하여 카르바메이트를 생성할 수 있다.
일부 실시양태에서, 링커는 세포내 조건 하에 절단가능하여, 링커의 절단은 링커에 연결된 임의의 성분, 예를 들어 약물 분자 (D)의 방출을 유발한다.
예를 들어, 링커는 세포내 소포 내에 (예를 들어, 리소솜 또는 엔도솜 또는 카베올라 내에) 국재화된 효소에 의해 또는 시토졸 내의 효소, 예컨대 프로테아솜 또는 이뮤노프로테아솜에 의해 절단가능할 수 있다. 링커는, 예를 들어 세포내 소포 내에 국재화된 프로테아제, 예컨대 세포의 리소솜 또는 엔도솜 구획 내의 카텝신을 포함하나 이에 제한되지는 않는 프로테아제 효소에 의해 절단되는 펩티드 링커일 수 있다.
펩티드 링커는 전형적으로 1-10개 아미노산, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 초과 (예컨대 최대 20개)의 아미노산 길이, 예컨대 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 또는 그 초과의 아미노산 길이이다. 스페이서 (B)로서 사용되는 경우에, 펩티드 링커는 최대 약 45개의 아미노산일 수 있다. 특정 디펩티드는 카텝신, 예컨대 카텝신 B 및 D 및 플라스민을 포함하는 프로테아제에 의해 가수분해되는 것으로 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123] 참조). 예를 들어, 티올-의존성 프로테아제 카텝신-B에 의해 절단가능한 펩티드 링커 (예를 들어, Phe-Leu 또는 Gly-Phe-Leu-Gly (서열식별번호: 1) 링커)가 사용될 수 있다. 이러한 링커의 다른 예는, 예를 들어 미국 특허 번호 6,214,345에 기재되어 있고, 이는 본원에 참조로 포함된다. 특정의 이러한 실시양태에서, 세포내 프로테아제에 의해 절단가능한 펩티드 링커는 Val-Cit 링커 또는 Phe-Lys 링커이다 (예를 들어, Val-Cit 링커를 갖는 독소루비신의 합성을 기재하는 미국 특허 번호 6,214,345 참조). 주: 본 명세서 전반에 걸쳐 (도면의 텍스트 내에) 제공된 아미노산 및 펩티드의 예에 대해, 달리 명시되지 않는 한, 펩티드 및 아미노산은 L-아미노산인 것으로 이해되어야 한다.
절단가능한 펩티드 링커는 면역 세포에 의한 세포내 섭취 후에 펩티드 링커의 프로세싱 (즉, 가수분해)을 촉진하도록 선택될 수 있다. 절단가능한 펩티드 링커의 서열은 세포내 프로테아제, 예컨대 세포내 소포 내의 카텝신 또는 세포질 공간 내의 프로테아솜 또는 이뮤노프로테아솜에 의한 프로세싱을 촉진하도록 선택될 수 있다.
여러 실시양태에서, 화학식 Pn...P4-P3-P2-P1의 펩티드 서열을 포함하는 링커는 카텝신에 의한 인식을 촉진하는 데 사용되며, 여기서 P1은 아르기닌, 리신, 아세틸 리신 (즉, 엡실론 아민이 아세틸화됨), boc 보호된 리신 (즉, 엡실론 아민이 boc 보호됨), 시트룰린, 글루타민, 트레오닌, 류신, 노르류신, 알파-아미노부티르산 (본원에서 "a-But"로 약칭됨) 또는 메티오닌으로부터 선택되고; P2는 글리신, 세린, 류신, 발린 또는 이소류신으로부터 선택되고; P3은 글리신, 세린, 알라닌, 프롤린 또는 류신으로부터 선택되고; P4는 글리신, 세린, 아르기닌, 리신, 아세틸 리신 (즉, 엡실론 아민이 아세틸화됨), boc 보호된 리신, 아스파르트산, 글루탐산 또는 베타-알라닌으로부터 선택된다. 비제한적 예에서, 화학식 P4-P3-P2-P1의 테트라펩티드 링커는 아미드 결합을 통해 또 다른 분자에 연결되었고, 서열 Lys-Pro-Leu-Arg (서열식별번호: 2)를 갖는다. 명확성을 위해, 아미노산 잔기 (Pn)는 P1 잔기에 대해 C-말단인 절단 부위로부터 근위에서 원위로 넘버링되며, 예를 들어 P1-P1' 사이의 아미드 결합은 가수분해된다. 엔도솜 및 리소솜 프로테아제, 예컨대 카텝신에 의한 절단을 촉진하는 적합한 펩티드 서열은 문헌에 널리 기재되어 있다 (문헌 [Choe, et al., J. Biol. Chem., 281:12824-12832, 2006] 참조).
여러 실시양태에서, 펩티드 서열을 포함하는 링커는 프로테아솜 또는 이뮤노프로테아솜에 의한 인식을 촉진하도록 선택된다. 화학식 Pn...P4-P3-P2-P1의 펩티드 서열은 프로테아솜 또는 이뮤노프로테아솜에 의한 인식을 촉진하도록 선택되며, 여기서 P1은 염기성 잔기 및 소수성, 분지형 잔기, 예컨대 아르기닌, 리신, 류신, 이소류신 및 발린으로부터 선택되고; P2, P3 및 P4는 류신, 이소류신, 발린, 리신 및 티로신으로부터 임의로 선택된다. 비제한적 예에서, 프로테아솜에 의해 인식되는 화학식 P4-P3-P2-P1의 절단가능한 링커는 P1에서 아미드 결합을 통해 또 다른 분자에 연결되고, 서열 Tyr-Leu-Leu-Leu (서열식별번호: 3)를 갖는다. 프로테아솜 또는 이뮤노프로테아솜에 의한 분해를 촉진하는 서열은 단독으로 또는 카텝신 절단가능한 링커와 조합되어 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이뮤노프로테아솜 프로세싱을 촉진하는 아미노산은 엔도솜 프로테아제에 의한 프로세싱을 촉진하는 링커에 연결된다. 이뮤노프로테아솜에 의한 절단을 촉진하기 위한 다수의 적합한 서열은 문헌에 널리 기재되어 있다 (문헌 [Kloetzel, et al., Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 2:179-187), 2001, Huber, et al., Cell, 148:727-738, 2012, 및 Harris et al., Chem. Biol., 8:1131-1141, 2001] 참조).
특정의 바람직한 실시양태에서, 약물 분자 (D)는 효소 분해성 펩티드를 포함하는 링커 X1을 통해 소수성 블록 (H)에 연결된다. 비제한적 예가 본원에 제시되며:
여기서 D는 약물 분자이고; "링커"는 임의의 적합한 링커 분자이고; j는 임의의 정수를 나타내지만, j는 전형적으로 1 내지 6개의 아미노산, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 아미노산이고; R8은 임의의 적합한 아미노산 측기이고; 펩티드의 N-말단 아민은 직접적으로 또는 말단을 통해, 예를 들어 폴리(아미노산)를 포함하는 소수성 블록 (H)의 N- 또는 C-말단에 직접적으로 또는 U를 통해, 또는 소수성 블록 (H)을 포함하는 반응성 단량체를 통해 연결되고; 괄호 "[ ]"는 기가 임의적임을 나타낸다.
효소 분해성 펩티드를 포함하는 링커 X1을 통해 소수성 블록 (H)에 연결된 약물 분자의 특정의 바람직한 실시양태에서, 약물 분자 (D)는 본원에 제시된 바와 같이 아미드 결합을 통해 펩티드에 직접적으로 연결된다:
N-말단 링커 기가 존재하고 베타 알라닌으로부터 선택된 것인 상기 구조의 비제한적 예에서, 구조는 하기이다:
일부 실시양태에서, 약물 분자 (D)는 자기 희생적 카르바메이트 링커를 통해 펩티드에 연결된다. 비제한적 예가 본원에 제시된다:
j가 4이고 아미노산이 세린-리신(Ac)-발린-노르-류신인 상기 예에서, 구조는 하기이다:
일부 실시양태에서, 약물 분자 (D)는 술파타제 분해성 링커 X1을 통해 소수성 블록 (H)에 연결되며, 여기서 술파타제에 의한 술페이트의 가수분해는 링커로부터 약물 분자의 방출을 유발한다. 다수의 아릴술파타제 및 알킬술파타제 분해성 링커가 최근에 기재되었다 (예를 들어, 문헌 [Bargh, et al., 2020, Chem. Sci. 11, 2375] 참조). 본 개시내용의 일부 실시양태에서, 약물 분자는 술파타제 분해성 링커를 통해 소수성 블록 (H)에 연결된다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시되며:
여기서 D는 약물 분자이고; "링커"는 직접적으로 또는 말단을 통해, 예를 들어 폴리(아미노산)를 포함하는 소수성 블록 (H)의 N- 또는 C-말단에 직접적으로 또는 U를 통해, 또는 소수성 블록 (H)을 포함하는 반응성 단량체를 통해 연결된 임의의 적합한 링커 분자이고; 괄호 "[ ]"는 기가 임의적임을 나타낸다.
"링커"가 존재하고 아미드를 통해 소수성 블록에 연결된 짧은 알킬 링커로부터 선택된 것인 상기 구조의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
.
다른 실시양태에서, 임의의 2개 이상의 성분은 산성 조건 하에서 가수분해에 감수성인 pH-감수성 링커 X를 통해 함께 연결될 수 있다. 다수의 pH-감수성 링커는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 친숙하고, 예를 들어 히드라존, 카르보히드라존, 세미카르바존, 티오세미카르바존, 시스-아코니트산 아미드, 오르토에스테르, 아세탈, 케탈, 실릴에테르 등을 포함한다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,122,368; 5,824,805; 5,622,929; 문헌 [Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661] 참조).
특정 실시양태에서, 상이한 성분 (예를 들어, 약물 분자 및 소수성 블록 (H))은 혈액 pH, 예를 들어 약 7.4의 pH에서 안정하지만, 엔도솜 / 리소솜 pH, ~ pH 5-6.5에서 보다 신속한 가수분해를 겪는 pH-감수성 링커를 통해 함께 연결된다. 특정의 바람직한 실시양태에서, 약물 분자 (D)는 pH-감수성 결합, 예컨대 케톤과 히드라진 사이의 반응으로부터 생성되는 히드라존 결합을 통해 반응성 단량체를 통해 소수성 블록 (H)에 연결된다. 카르보닐에 연결된 관능기 히드라진은 때때로 히드라지드로 지칭되지만, 히드라진은 카르보닐에 연결된 경우, 예를 들어 C(O)-NH-NH2를 포함하여 -NH-NH2 기를 광범위하게 지칭하는 것으로 의도된다. pH-감수성 연결, 예컨대 히드라존은 결합이 생리학적 pH, 약 pH 7.4에서는 안정하지만, 더 낮은 pH 값, 예컨대 세포내 소포의 pH에서는 가수분해된다는 이점을 제공한다.
특정의 바람직한 실시양태에서, 약물 분자는 케톤을 포함하는 링커 X1에 의해 연결되고, 화학식:
에 의해 나타내어질 수 있으며, 여기서 D는 임의의 약물 분자이고; "링커"는 임의의 적합한 링커 분자이고; y1은 1 내지 6의 정수, 바람직하게는 4를 나타내고; 괄호 "[ ]"는 기가 임의적임을 나타내고; 여기서 상기 예에서 케톤은 링커 연결된 약물 분자 (D)를 히드라존 결합을 통해 반응성 단량체에 연결하는 데 사용된다.
y1이 4이고 약물 분자가 아미드 결합을 통해 직접적으로 연결된 (즉, "링커"가 부재하는) 상기 예에서, 구조는 하기이다:
바람직한 실시양태에서, 케톤에 연결된 약물 분자는 히드라존 또는 카르보히드라존 결합을 통해 소수성 블록 (H)에 연결된다. 히드라존 및 카르보히드라존 결합을 통해 글루탐산-기반 반응성 단량체 (N)에 연결된 약물 분자의 비제한적 예가 본원에 제시된다:
.
일부 실시양태에서, 약물 분자는 케톤을 포함하고, 히드라존 또는 카르보히드라존을 통해 반응성 단량체에 직접적으로 연결될 수 있다.
다른 실시양태에서, 링커는 환원 조건 하에 절단가능한 연결, 예컨대 환원성 디술피드 결합을 포함한다. 디술피드 연결을 도입하기 위해 사용되는 많은 상이한 링커가 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987); Phillips et al., Cancer Res. 68:92809290, 2008] 참조). 또한, 미국 특허 번호 4,880,935를 참조한다.
바람직한 실시양태에서, 소수성 블록 (H)과 1개 이상의 약물 분자 (D)를 연결하는 링커 X1은 짧은 알킬 또는 PEG 링커이다. 다른 바람직한 실시양태에서, 소수성 블록 (H)과 1개 이상의 약물 분자 (D)를 연결하는 링커 X1은 효소 분해성 링커, 예컨대 카텝신 분해성 펩티드 또는 술파타제 분해성 링커이다. 다른 바람직한 실시양태에서, 소수성 블록 (H)과 1개 이상의 약물 분자 (D)를 연결하는 링커 X1은 효소 분해성 펩티드 및 자기-희생적 링커를 포함한다.
X는 임의의 적합한 링커일 수 있지만, 바람직한 실시양태에서 임의의 2개 이상의 기를 연결하는 링커 X는 짧은 알킬 (즉, 저급 알킬) 또는 PEG 링커, 예를 들어 약 1 내지 약 24개의 단량체 단위를 갖는 PEG 링커이다.
연장부 (E1 및 E2)
임의적인 N- 및 C-말단 연장부 (E1 및 E2)는 각각 펩티드 항원 (A)의 N- 및 C-말단에 연결된 모이어티를 나타낸다. N- 및 C-말단 연장부 E1 및 E2는 하기 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다: 비-천연 아미노산을 포함한 아미노산; 친수성 에틸렌 옥시드 단량체 (예를 들어, PEG); 소수성 알칸 쇄 등; 또는 그의 조합. N- 및 C-말단 연장부 E1 및 E2는 임의의 적합한 수단을 통해, 예를 들어 아미드 결합을 통해 펩티드 항원 (A)에 부착된다.
일부 실시양태에서, 연장부 (E1 및 E2)는 펩티드 항원 (A)의 분해 속도를 제어하는 기능을 하지만, 또한 어느 하나 이상의 추가의 기능을 수행할 수 있다. 일부 실시양태에서, N- 또는 C-말단 연장부 (E1 또는 E2)는 자유로울 수 있고 (여기서 N- 또는 C-말단 연장부의 한 말단은 펩티드 항원 (A)에 연결되고 다른 말단은 또 다른 분자에 연결되지 않음), 펩티드 항원의 분해를 늦추는 역할을 할 수 있으며; 예를 들어, E1 펩티드-기반 연장부는 아미드 결합을 통해 펩티드 항원의 N-말단에 연결되어 분해를 늦출 수 있다. 다른 실시양태에서, N- 및/또는 C-말단 연장부 (E1 및/또는 E2)는 이종 분자에 연결될 수 있고, 링커로서 기능할 뿐만 아니라 펩티드 항원 (A) 분해를 조정할 수 있다. 링커 기능을 제공하는 N- 및/또는 C-말단 연장부는 펩티드 항원을 직접적으로 또는 링커 U를 통해 간접적으로 소수성 블록 (H) 및/또는 가용화 블록 (S)에 연결할 수 있다. 일부 실시양태에서, 연장부 (E1 및/또는 E2)는 임의의 2개의 이종 분자 사이에 거리, 즉 공간을 제공하는 기능을 한다. 다른 실시양태에서, 연장부 (E1 및/또는 E2)는 펩티드 항원 접합체에 소수성 또는 친수성 특성을 부여하는 기능을 한다. 또 다른 실시양태에서, 연장부 (E1 및/또는 E2)의 조성은 강성 또는 가요성을 부여하도록 선택될 수 있다. 다른 실시양태에서, N- 및/또는 C-말단 연장부 (E1 및/또는 E2)는 펩티드 항원 접합체에 의해 형성된 입자를 안정화하는 것을 도울 수 있다.
일부 실시양태에서, 연장부 (E1 및/또는 E2)는 pH 7.4에서 전하를 부여하는 하전된 관능기, 예를 들어 하전된 아미노산 잔기 (예를 들어, 아르기닌, 오르니틴, 리신, 글루탐산, 아스파르트산 등)를 포함한다. 연장부에 존재하는 하전된 잔기의 수는 펩티드 항원 접합체의 알짜 전하를 조정하는 데 사용될 수 있다. 프로테아제에 의해 인식되고 특정한 정전하를 부여하여 펩티드 항원 접합체에 의해 형성된 입자를 안정화하는 펩티드-기반 연장부 (E1 및/또는 E2)는 하기에 기재되어 있다.
추가적으로, 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)에 부가되는 C-말단 연장부 (E2)는 화학식 [S]-[E1]-A-E2-[U1]을 포함하는 펩티드의 제조를 용이하게 하도록 선택되며, 여기서 [ ]는 기가 임의적임을 나타낸다. 따라서, 펩티드-기반 E2의 아미노산 서열은 펩티드 β-시트 형성을 방해하고 고체-상 펩티드 합성 동안 서열 말단절단을 방지하기 위해 선택될 수 있다. 비제한적 예에서, C-말단 디펩티드 링커 (E2), Gly-Ser은 고체-상 펩티드 합성 동안 슈도프롤린 디펩티드 (예를 들어, Gly-Ser(Psi(Me,Me)pro))로서 혼입된다. 추가의 실시양태에서, 프롤린은 E2, 예를 들어, Ser-Pro-Leu-Arg (서열식별번호: 4)에 포함되고; 이에 의해 프롤린은 제조를 용이하게 하고 또한 엔도솜 프로테아제에 의한 연장부의 프로세싱을 촉진하기 위해 포함된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 소수성 블록에 직접적으로 또는 링커 (U)를 통해 간접적으로 연결된 E2 연장부에 C-말단에서 연결되며, 예를 들어 여기서 펩티드 항원 접합체는 구조 A-E2-U-H 또는 A-E2-H를 갖는다. 일부 실시양태에서, E1 연장부는 펩티드 항원 (A)의 N-말단에 연결되고, E2 연장부는 펩티드 항원 (A)의 C-말단에서 연결되며, 여기서 E1 또는 E2는 직접적으로 또는 링커 (U)를 통해 소수성 블록 (H)에 연결되고, 예를 들어 여기서 펩티드 항원 접합체는 구조 E1-A-E2-U-H, H-U-E1-A-E2, E1-A-E2-H, 또는 H-E1-A-E2를 갖는다. 다른 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은, 직접적으로 또는 링커 (U)를 통해 소수성 블록 (H)에 연결된 E1 연장부에 N-말단에서 연결되며, 예를 들어 여기서 펩티드 항원 접합체는 구조 H-U-E1-A 또는 H-E1-A를 갖는다. 일부 실시양태에서, 가용화 블록은 각각 펩티드 항원 (A)의 N- 또는 C-말단에 연결된 연장부, E1 또는 E2에 연결되며, 여기서 가용화 블록 (S)에 연결되지 않은 연장부는 직접적으로 또는 링커 (U)를 통해 소수성 블록 (H)에 연결되고, 예를 들어 여기서 펩티드 항원 접합체는 구조 S-E1-A-E2-U-H, H-U-E1-A-E2-S, E1-A-E2-H, H-E1-A-E2-S를 갖는다.
추가의 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 각각 펩티드 항원 (A)의 N- 및 C-말단 둘 다에 연결된 E1 및 E2 연장부 둘 다에 연결되거나; 또는 가용화 블록 (S)은 펩티드 항원 (A)의 N-말단에 연결된 E1 연장부에는 연결되지만, 펩티드 항원 (A)의 C-말단에 부착된 E2 연장부에는 연결되지 않고, 이는 직접적으로 또는 링커 (U)를 통해 소수성 블록 (H)에 연결될 수 있다. 링커 전구체 U1 또는 링커 (U)는 임의의 적합한 수단, 예컨대 아미드 결합을 통해 연장부 중 어느 하나 (E1 또는 E2)에 연결될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 연장부 (E1 및 E2)는 효소, 예컨대 프로테아제에 의한 인식 및 가수분해를 위해 선택된 펩티드 서열이다. 연장부 (E1 및 E2)는 바람직하게는, 엔도솜 프로테아제 및/또는 이뮤노프로테아솜 중 하나 또는 둘 다에 의해 인식되는 아미노산을 포함하는, 절단가능한 펩티드이다.
일부 실시양태에서, N-말단 연장부 (E1)는 E1의 카르복실 기와 펩티드 항원 (A)의 N-말단 잔기의 알파 아민 사이에 형성된 아미드 결합을 통해 펩티드 항원 (A)에 연결되는, 약 1 내지 8개 아미노산 길이, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개 아미노산 길이, 전형적으로 10개 이하의 아미노산 길이의 펩티드 서열이다. E1과 펩티드 항원 (A) 사이의 아미드 결합은 효소에 의해 절단될 수 있다.
절단 부위로부터 근위에서 원위의 순서로 아미노산 위치를 넘버링하는 것이 통상적이며, 절단 부위에 대해 C-말단의 아미노산 위치는 프라임 기호 (예를 들어, Pn')에 의해 나타내어진다. 예를 들어, 옥타펩티드 (PA1'-PA2'-PA3'-PA4'-PA5'-PA6'-PA7'-PA8')인 펩티드 항원 (A)의 N-말단에 연결된 테트라펩티드 연장부 (PN4-PN3-PN2-PN1), 예를 들어 PN4-PN3-PN2-PN1-PA1'-PA2'-PA3'-PA4'-PA5'-PA6'-PA7'-PA8'의 경우에, PN1-PA1' 사이의 아미드 결합은 효소에 의해 인식되고 가수분해된다.
일부 실시양태에서, N-말단 연장부 (E1)는 엔도솜 프로테아제에 의해 인식되는 효소 분해성 테트라펩티드이며, 여기서 테트라펩티드 연장부 (예를 들어, PN4-PN3-PN2-PN1)의 PN1 위치는 바람직하게는 아르기닌, 리신, 시트룰린, 글루타민, 트레오닌, 류신, 노르류신, 또는 메티오닌으로부터 선택되어, 예를 들어 PN4-PN3-PN2-Arg이고; PN2는 글리신, 발린, 류신 또는 이소류신으로부터 선택되고; PN3은 글리신, 세린, 알라닌, 프롤린 또는 류신으로부터 선택되고; PN4는 글리신, 세린, 아르기닌, 리신, 아스파르트산 또는 글루탐산으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, N-말단 연장부 (E1)는 엔도솜 프로테아제에 의해 인식되는 효소 분해성 트리펩티드이며, 여기서 트리펩티드 연장부 (예를 들어, PN3-PN2-PN1)의 PN1 위치는 바람직하게는 아르기닌, 리신, 시트룰린, 글루타민, 트레오닌, 류신, 노르류신 또는 메티오닌으로부터 선택되고; PN2는 글리신, 발린, 류신 또는 이소류신으로부터 선택되고; PN3은 글리신, 세린, 알라닌, 프롤린 또는 류신으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, N-말단 연장부 (E1)는 엔도솜 프로테아제에 의해 인식되는 효소 분해성 디펩티드이며, 여기서 디펩티드 연장부 (예를 들어, PN2-PN1)의 PN1 위치는 바람직하게는 아르기닌, 리신, 시트룰린, 글루타민, 트레오닌, 류신, 노르류신 또는 메티오닌으로부터 선택되고; PN2는 글리신, 발린, 류신 또는 이소류신으로부터 선택된다. 추가의 실시양태에서, N-말단 연장부 (E1)는 엔도솜 프로테아제에 의해 인식되는 아미노산이며, 여기서 PN1 위치는 바람직하게는 아르기닌, 리신, 시트룰린, 글루타민, 트레오닌, 류신, 노르류신 또는 메티오닌으로부터 선택된다.
다른 실시양태에서, N-말단 연장부 (E1)는 이뮤노프로테아솜에 의해 인식되는 효소 분해성 펩티드이며, 여기서 테트라펩티드 연장부 (PN4-PN3-PN2-PN1)의 P1 위치는 바람직하게는 이소류신, 류신, 노르류신 또는 발린으로부터 선택되어, 예를 들어 PN4-PN3-PN2-Leu이다.
추가의 실시양태에서, N-말단 연장부 (E1)는 엔도솜 프로테아제 및 이뮤노프로테아솜 둘 다에 의해 인식되는 효소 분해성 펩티드이며, 여기서 옥타펩티드 연장부 (PN8-PN7-PN6-PN5-PN4-PN3-PN2-PN1)의 PN5 및 PN1 위치는 카텝신에 의해 인식되는 PN5 위치의 경우 아르기닌, 리신, 시트룰린, 글루타민, 트레오닌, 류신, 노르류신 또는 메티오닌으로부터 선택되고, 이뮤노프로테아솜에 의해 인식되는 PN1 위치의 경우 이소류신, 류신, 노르류신 또는 발린으로부터 선택되어; 예를 들어, PN8-PN7-PN6-Arg-PN4-PN3-PN2-Leu이다. 카텝신 및 이뮤노-프로테아솜에 의해 인식되는 N-말단 연장부 (E1)의 비제한적 예는 Lys-Pro-Leu-Arg-Tyr-Leu-Leu-Leu (서열식별번호: 5)이다.
이뮤노프로테아솜에 의해 인식되는 테트라펩티드 N-말단 연장부 (E1)의 비제한적 예는 Ser-Leu-Val-Cit (서열식별번호: 6), Ser-Leu-Val-Leu (서열식별번호: 7), Ser-Pro-Val-Cit (서열식별번호: 8), Glu-Leu-Val-Arg (서열식별번호: 9), Ser-Pro-Val-Arg (서열식별번호: 10), Ser-Leu-Val-Arg (서열식별번호: 11), Lys-Pro-Leu-Arg (서열식별번호: 2), Lys-Pro-Val-Arg (서열식별번호: 12), Glu-Leu-Val-Cit (서열식별번호: 13), Glu-Leu-Val-Leu (서열식별번호: 14), Glu-Pro-Val-Cit (서열식별번호: 15), 및 Lys-Pro-Val-Cit (서열식별번호: 16)를 포함한다. 트리펩티드 N-말단 연장부 (E1)의 비제한적 예는 Leu-Val-Cit, Leu-Val-Leu, Pro-Val-Cit, Leu-Val-Arg, Pro-Val-Arg, Pro-Leu-Arg, Gly-Val-Ser을 포함한다. 디펩티드 N-말단 연장부 (E1)의 비제한적 예는 Val-Cit, Val-Leu, Val-Arg, Leu-Arg를 포함한다. 단일 아미노산 N-말단 연장부 (E1)의 비제한적 예는 Cit, Arg, Leu 또는 Lys를 포함한다. 상기 예에서, Arg는 Lys로 대체될 수 있고; Lys는 Arg로 대체될 수 있고; Glu는 Asp로 대체될 수 있고; Asp는 Glu로 대체될 수 있다. Cit = 시트룰린임을 주목한다.
일부 실시양태에서, E2는 펩티드 항원 (A)의 C-말단 잔기에 연결된 분해성 펩티드이고, 특정 프로테아제에 의해 인식되고 가수분해되는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, C-말단 연장부 (E2)는 약 1 내지 8개 아미노산 길이, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개 아미노산, 전형적으로 10개 이하의 아미노산의 펩티드 서열이다. 바람직한 실시양태에서, C-말단 연장부 (E2)는 펩티드 항원 (A)의 C-말단 카르복실 기와 연장부 (E2)의 N-말단 잔기의 알파 아민 사이에 형성된 아미드 결합을 통해 펩티드 항원 (A)에 연결된다. E2와 펩티드 항원 (A) 사이의 아미드 결합은 효소에 의해 절단될 수 있다. 주: 절단 부위로부터 근위에서 원위의 순서로 아미노산 위치를 넘버링하는 것이 통상적이며, 절단 부위에 대해 C-말단의 아미노산 위치는 프라임 기호 (예를 들어, Pn')에 의해 나타내어진다. 예를 들어, 옥타펩티드 항원 (PA8-PA7-PA6-PA5-PA4-PA3-PA2-PA1)의 C-말단에 연결된 테트라펩티드 연장부 (PC1'-PC2'-PC3'-PC4'), 예를 들어 PA8-PA7-PA6-PA5-PA4-PA3-PA2-PA1-PC1'-PC2'-PC3'-PC4')의 경우에, PA1-PC1' 사이의 아미드 결합이 효소에 의해 인식되고 가수분해된다.
C-말단 연장부 (E2)의 바람직한 실시양태에서, C-말단 연장부 (E2)는 이뮤노프로테아솜 인식 및 절단 및 임의로 엔도솜 프로테아제 인식을 촉진하도록 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 펩티드 항원 (A)은 전형적으로, 예를 들어 펩티드 항원 (A)의 C-말단 잔기 근위의 아미드 결합에서 이뮤노프로테아솜에 의한 가수분해를 촉진하는 C-말단 잔기, 예를 들어 류신을 함유하기 때문에, 펩티드 항원 (A)의 C-말단에 연결된 연장부는 펩티드 항원 (A)의 C-말단 근위의 아미드 결합에서 이뮤노프로테아솜 인식 및 절단을 촉진하도록 선택되어야 한다. 이뮤노-프로테아솜은 펩티드 항원 (A)의 C-말단 아미노산 PA1에 인접한 PC1' 위치, 예를 들어 PA1-PC1' 사이의 아미드 결합에서 소형의 비-하전된 아미노산을 선호한다. 그러나, 엔도솜 프로테아제는 벌키 소수성 아미노산 (예를 들어, 류신, 노르류신, 메티오닌 또는 글루타민) 및 염기성 아미노산 (즉, 아르기닌 및 리신)을 선호한다. 따라서, C-말단 연장부는 프로테아제의 부류 중 어느 하나 또는 둘 다에 의한 인식을 촉진하도록 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, 서열 PA8-PA7-PA6-PA5-PA4-PA3-PA2-PA1을 갖는 펩티드 항원 (A)은 서열 PC1'...PCn'를 갖는 C-말단 펩티드 연장부 (E2)에 연결되고, 여기서 n은 1 내지 8의 정수 값이며, 예를 들어, PA8-PA7-PA6-PA4-PA3-PA2-PA1-PC1'...PCn'이다. C-말단 연장부 (E2)의 조성은 사용된 연장부 서열의 길이에 좌우된다. 일부 실시양태에서, C-말단 연장부 E2는 Gly, Ala, Ser, Arg, Lys, Cit, Gln, Thr, Leu, Nle 또는 Met로부터 선택된 단일 아미노산 PC1'이다. 추가의 실시양태에서, C-말단 연장부 E2는 디펩티드, PC1'-PC2'이며, 여기서 PC1'는 Gly, Ala 또는 Ser로부터 선택되고; PC2'는 Gly, Ala, Ser, Pro, Arg, Lys, Cit, Gln, Thr, Leu, Nle 또는 Met로부터 선택된다. 추가의 실시양태에서, C-말단 연장부 E2는 트리펩티드, PC1'-PC2'-PC3'이며, 여기서 P1'는 Gly, Ala 또는 Ser로부터 선택되고; PC2'는 Gly, Ala, Ser 또는 Pro로부터 선택되고; PC3'는 Gly, Ser, Arg, Lys, Cit, Gln, Thr, Leu, Nle 또는 Met로부터 선택된다.
추가의 실시양태에서, C-말단 연장부 E2는 테트라펩티드 연장부 PC1'-PC2'-PC3'-PC4'이며, 여기서 PC1'는 글리신, 알라닌 또는 세린으로부터 선택되고; PC2'는 글리신, 알라닌, 세린, 프롤린 또는 류신으로부터 선택되고; PC3'는 글리신, 알라닌, 세린, 발린, 류신 또는 이소류신으로부터 선택되고; PC4'는 아르기닌, 리신, 시트룰린, 글루타민, 트레오닌, 류신, 노르류신 또는 메티오닌으로부터 선택된다. 추가의 실시양태에서, C-말단 연장부 E2는 펜타펩티드, PC1'-PC2'-PC3'-PC4'-PC5'이고, 여기서 PC1'는 글리신, 알라닌 또는 세린으로부터 선택되고; PC2'는 글리신, 알라닌, 세린, 프롤린, 아르기닌, 리신, 글루탐산 또는 아스파르트산으로부터 선택되고; PC3'는 글리신, 알라닌, 세린, 프롤린 또는 류신으로부터 선택되고; PC4'는 글리신, 알라닌, 발린, 류신 또는 이소류신으로부터 선택되고; PC5'는 아르기닌, 리신, 시트룰린, 글루타민, 트레오닌, 류신, 노르류신 또는 메티오닌으로부터 선택된다. 추가의 실시양태에서, C-말단 연장부 E2는 헥사펩티드, PC1'-PC2'-PC3'-PC4'-PC5'-PC6'이고, 여기서 PC1'는 글리신, 알라닌 또는 세린으로부터 선택되고; PC2'는 글리신, 알라닌, 세린 또는 프롤린으로부터 선택되고; PC3'는 글리신, 세린, 프롤린, 아르기닌, 리신, 글루탐산 또는 아스파르트산으로부터 선택되고; PC4'는 프롤린 또는 류신으로부터 선택되고; PC5'는 글리신, 알라닌, 발린, 류신 또는 이소류신으로부터 선택되고; PC6'는 아르기닌, 리신, 시트룰린, 글루타민, 트레오닌, 류신, 노르류신 또는 메티오닌으로부터 선택된다.
헥사펩티드 C-말단 연장부 (E2)의 비제한적 예는 Gly-Gly-Lys-Leu-Val-Arg (서열식별번호: 17), Gly-Gly-Lys-Pro-Leu-Arg (서열식별번호: 18), Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Arg (서열식별번호: 19), Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Cit (서열식별번호: 20), Gly-Gly-Ser-Pro-Val-Cit (서열식별번호: 21), Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Leu (서열식별번호: 22), Gly-Gly-Glu-Leu-Val-Arg (서열식별번호: 23), Gly-Gly-Glu-Leu-Val-Leu (서열식별번호: 24)를 포함한다.
펜타펩티드 C-말단 연장부 (E2)의 비제한적 예는 Gly-Ser-Leu-Val-Arg (서열식별번호: 25), Gly-Ser-Leu-Val-Cit (서열식별번호: 26), Gly-Lys-Pro-Val-Cit (서열식별번호: 27), Gly-Lys-Pro-Val-Arg (서열식별번호: 28), Gly-Ser-Leu-Val-Leu (서열식별번호: 29), Gly-Glu-Leu-Val-Leu (서열식별번호: 30)를 포함한다.
테트라펩티드 C-말단 연장부 (E2)의 비제한적 예는 Ser-Leu-Val-Cit (서열식별번호: 6), Ser-Leu-Val-Leu (서열식별번호: 7), Ser-Pro-Val-Cit (서열식별번호: 8), Glu-Leu-Val-Arg (서열식별번호: 9), Ser-Pro-Val-Arg (서열식별번호: 10), Ser-Leu-Val-Arg (서열식별번호: 11), Lys-Pro-Leu-Arg (서열식별번호: 2), Glu-Leu-Val-Cit (서열식별번호: 13), Glu-Leu-Val-Leu (서열식별번호: 14), Glu-Pro-Val-Cit (서열식별번호: 15), Glu-Gly-Val-Cit (서열식별번호: 31)를 포함한다.
트리펩티드 C-말단 연장부 (E2)의 비제한적 예는 Gly-Ser-Gly, Gly-Ser-Arg, Gly-Ser-Leu, Gly-Ser-Cit, Gly-Pro-Gly, Gly-Pro-Arg, Gly-Pro-Leu, Gly-Pro-Cit를 포함한다. 디펩티드 C-말단 연장부 (E2)의 비제한적 예는 Gly-Ser, Gly-Pro, Val-Cit, Gly-Arg Gly-Cit를 포함한다. 단일 아미노산 C-말단 연장부 (E2)의 비제한적 예는 Gly, Ser, Ala, Arg, Lys, Cit, Val, Leu, Met, Thr, Gln 또는 Nle를 포함한다. 상기 예에서, Arg는 Lys로 대체될 수 있고; Lys는 Arg로 대체될 수 있고; Glu는 Asp로 대체될 수 있고; Asp는 Glu로 대체될 수 있다.
펩티드 항원 (A)의 C-말단에 연결되는 C-말단 링커 (E2)는 이뮤노프로테아솜 및 엔도솜 프로테아제 둘 다에 의한 인식 (즉, 가수분해)을 위해 선택될 수 있다. 비제한적 예에서, 서열 PA8-PA7-PA6-PA5-PA4-PA3-PA2-PA1을 갖는 펩티드 항원 (A)은 서열 PC1'-PC2'-PC3'-PC4'를 갖는 C-말단 테트라펩티드 연장부 (E2)에 C-말단에서 연결되며, 여기서 PC1'는 글리신, 알라닌 또는 세린으로부터 선택되고, PC4'는 아르기닌, 리신, 시트룰린, 글루타민, 트레오닌, 류신, 노르류신 또는 메티오닌으로부터 선택되고, 예를 들어 Ser-P3-P2-Arg이다. 일부 실시양태에서, 서열 PA8-PA7-PA6-PA5-PA4-PA3-PA2-PA1을 갖는 항원은 서열 PC1'-PC2'-PC3'-PC4'-PC5'-PC6'를 갖는 C-말단 헥사펩티드 연장부 (E2)에 C-말단에서 연결되며, 여기서 PC1' 및 PC2'는 글리신, 알라닌, 프롤린 또는 세린으로부터 선택되고, PC6'는 아르기닌, 리신, 시트룰린, 글루타민, 트레오닌, 류신, 노르류신 또는 메티오닌으로부터 선택되고, 예를 들어 Gly-Gly-PC3'-PC4'-PC5'-Arg이다. 펩티드 항원 (A)의 C-말단에 연결된 이뮤노-프로테아솜 및 카텝신 둘 다에 의한 프로세싱을 촉진하는 C-말단 연장부 (E2)의 비제한적 예는 Gly-Gly-Lys-Pro-Leu-Arg (서열식별번호: 18)이다. 이뮤노프로테아솜 및 카텝신에 의한 프로세싱을 선호하는 펩티드 항원 (A)의 C-말단에서 연결된 C-말단 연장부 (E2)의 추가의 비제한적 예는 Gly-Gly-Ser-Leu-Val-Cit (서열식별번호: 20) 또는 Gly-Gly-Ser-Pro-Val-Cit (서열식별번호: 21)이다.
백신의 일부 실시양태에서, 연장부(들) (E1 및/또는 E2)는 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부를 포함하며, 여기서 AAH는 전형적으로 코일 도메인에 적합한 소수성 아미노산이고, AAP는 전형적으로 코일 도메인에 적합한 친수성 또는 소형 아미노산이며, e는 1 내지 6으로부터 전형적으로 선택된 정수, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 내지 6, 바람직하게는 1 내지 4, 가장 바람직하게는 2 또는 3을 나타낸다. 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부의 각각의 아미노산은 생성된 서열이 코일드 코일 상부구조를 형성할 수 있는 나선형 2차 구조를 형성하는 것을 보장하도록 주의깊게 선택되어야 한다. 가이드 선택을 돕기 위해, 화학식 AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부는 하기 화학식, (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e에 따라 추가로 묘사될 수 있고, 여기서 AAa 및 AAd는 소수성 아미노산으로부터 전형적으로 선택되고; AAb, AAc 및 AAf는 소형 아미노산으로부터 전형적으로 선택되고; AAe 및 AAg는 하전된 아미노산으로부터 전형적으로 선택된다. 명확성을 위해, 아미노산은 단백질생성 및 비-단백질생성 아미노산 둘 다를 지칭한다.
본원에 기재된 헵타드 반복부에 사용하기 위한 아미노산을 선택하기 위한 목적으로, 천연 아미노산으로도 지칭되는 단백질생성 아미노산의 일반적 특성, 뿐만 아니라 비-천연 아미노산으로도 공지된 비-단백질생성 아미노산의 비제한적 예가 하기 표에 요약된다.
아미노산 명칭은 제1 열에서 괄호 안의 단일 문자 코드 및 임의적인 3 문자 코드 (적용가능한 경우)와 함께 제공된다. 아미노산 물리화학적 특성 ("소형", "지방족", "방향족", "소수성", "하전된 것")은 T ("참") 또는 F ("거짓")로 표시되고, 본원에 기재된 헵타드 반복부에 사용하기 위한 아미노산을 선택하는 데 있어서의 지침을 위해 제공된다. 설명 "전하"는 생리학적 pH, pH 7.4에서의 아미노산의 상태를 지칭한다. 예를 들어, 아스파르트산 (D, Asp)은 전하, 예를 들어 생리학적 pH (pH 7.4)에서 전하를 갖는 소형 아미노산으로서 표시된다.
화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e)의 헵타드 반복부의 특정 실시양태에서, 각 경우의 AAa 및 AAd는 독립적으로 소수성 아미노산, 보다 바람직하게는 류신, 이소류신, 노르류신, 발린, 노르발린, T-류신, 알로-이소류신, 뿐만 아니라 N-알킬화 아미노산, 예컨대 N-프로필 글리신, 메티오닌 및 알킬화 알콜, 예컨대 O-메틸 세린을 포함하나 이에 제한되지는 않는 지방족 아미노산으로부터 선택된다. 화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 헵타드 반복부의 바람직한 실시양태에서, 각 경우의 AAa 및 AAd는 독립적으로 류신, 이소류신 및 노르류신으로부터 선택된다.
화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e)의 헵타드 반복부의 특정 실시양태에서, 각 경우의 AAb, AAc 및 AAf는 독립적으로 알라닌, 시스테인, 아스파르트산, 글리신, 아스파라긴, 프롤린, 세린, 트레오닌, 발린, 알파-아미노-부티르산 및 노르발린을 포함하나 이에 제한되지는 않는 소형 아미노산으로부터 선택된다. 화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 헵타드 반복부의 바람직한 실시양태에서, 각 경우의 AAb, AAc 및 AAf는 독립적으로 알라닌, 프롤린 및 세린으로부터 선택된다.
화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e)의 헵타드 반복부의 특정 실시양태에서, 각 경우의 AAe 및 AAg는 독립적으로 아스파르트산, 글루탐산, 리신, 아르기닌, 오르니틴, 술포-세린 및 포스포세린을 포함하나 이에 제한되지는 않는 하전된 아미노산으로부터 선택된다. 화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 헵타드 반복부의 바람직한 실시양태에서, 각 경우의 AAe 및 AAg는 독립적으로 아스파르트산, 글루탐산, 리신, 아르기닌 및 오르니틴으로부터 선택된다.
화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 헵타드 반복부의 비제한적 예는 (I-A-A-L-E-S-K)e, (I-A-A-L-K-S-K)e, (I-A-A-L-E-S-E)e, (I-A-A-L-K-S-E)e, (V-A-A-L-K-A-E)e, (I-A-A-L-K-A-E)e, (L-A-A-L-K-A-E)e, (V-S-A-L-K-A-E)e, (I-S-A-L-K-A-E)e, (L-S-A-L-K-A-E)e, (V-A-S-L-K-A-E)e, (I-A-S-L-K-A-E)e, (L-A-S-L-K-A-E)e, (V-S-S-L-K-A-E)e, (I-S-S-L-K-A-E)e, (L-S-S-L-K-A-E)e, (V-A-A-L-K-S-E)e, (L-A-A-L-K-S-E)e, (V-S-A-L-K-S-E)e, (I-S-A-L-K-S-E)e, (L-S-A-L-K-S-E)e, (V-A-S-L-K-S-E)e 및 (I-A-S-L-K-S-E)e를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
명확성을 위해, 달리 명시되지 않는 한, 본원에 기재된 연장부 서열 또는 링커에 사용된 헵타드 반복부는 임의의 위치에서 시작 및 종결될 수 있다. 예를 들어, (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e는 또한 (AAc-AAd-AAe-AAf-AAg-AAa-AAb)e 또는 (AAe-AAf-AAg-AAa-AAb-AAc-AAd)e로 기재될 수 있다. 비제한적 예에서, 연장부 (E1 및/또는 E2)에 사용된 헵타드 반복부 (I-A-A-L-E-S-K)e는 헵타드 반복부 (E-S-K-I-A-A-L)e로 치환될 수 있다.
화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 헵타드 반복부에 대해 각 경우의 AAa, AAb, AAc, AAd, AAe, AAf 및 AAg는 동일하거나 상이할 수 있다. e가 2이고, 각 경우의 AAe AAe가 동일하거나 상이한 화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 헵타드 반복부의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다: I-A-A-L-K-S-K-I-A-A-K-E-S-E, I-A-A-L-K-S-K-I-A-A-K-E-S-K 및 I-A-A-L-E-S-E-I-A-A-K-E-S-K.
본원에 개시된 예상외의 발견은 L-아미노산을 포함하는 화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 특정 헵타드 반복부를 포함하는 백신이 미오신 단백질을 포함한 내인성 단백질로부터 유래된 특정 펩티드 서열에 결합하는 항체를 유도한 반면에, 1개 이상의 D-아미노산을 포함하는 화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 특정 헵타드 반복부를 포함하는 백신은 미오신 단백질로부터 유래된 펩티드 서열에 대해 항체를 유도하지 않았다는 것이다. 이들 예상외의 발견에 기초하여, 특정의 바람직한 실시양태에서, (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e로 기재될 수 있는 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부는 1개 이상의 D 아미노산으로부터 선택된 아미노산을 포함한다. D-아미노산을 포함하는 화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 헵타드 반복부의 비제한적 예는 (I-A-A-L-E-S-K)e, (I-A-A-L-K-S-K)e, (I-A-A-L-E-S-E)e, (I-A-A-L-K-S-E)e, (V-A-A-L-K-A-E)e, (I-A-A-L-K-A-E)e, (L-A-A-L-K-A-E)e, (V-S-A-L-K-A-E)e, (I-S-A-L-K-A-E)e, (L-S-A-L-K-A-E)e, (V-A-S-L-K-A-E)e, (I-A-S-L-K-A-E)e, (L-A-S-L-K-A-E)e, (V-S-S-L-K-A-E)e, (I-S-S-L-K-A-E)e, (L-S-S-L-K-A-E)e, (V-A-A-L-K-S-E)e, (L-A-A-L-K-S-E)e, (V-S-A-L-K-S-E)e, (I-S-A-L-K-S-E)e, (L-S-A-L-K-S-E)e, (V-A-S-L-K-S-E)e, (I-A-S-L-K-S-E)e를 포함하나 이에 제한되지는 않고, 여기서 이탤릭체는 아미노산이 D-아미노산이라는 것을 나타내고, 임의로 여기서 헵타드 반복부의 7개의 아미노산 중 최대 6개가 L-아미노산일 수 있고, 예를 들어 헵타드 반복부의 7개의 아미노산 중 1개가 D-아미노산이다.
추가의 주목할 만한 발견은 미오신 단백질로부터 유래된 특정 펩티드 서열에 결합하는 항체를 유도하는 L-아미노산을 포함하는 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e, 예를 들어 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 특정 헵타드 반복부의 경우에, 헵타드 반복부의 방향성을 예를 들어 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e로부터 (AAg-AAf-AAe-AAd-AAc-AAb-AAa)e로 변화시키는 것이 미오신 단백질로부터 유래된 펩티드 서열에 대한 항체를 유도하지 않는 헵타드 반복부를 발생시켰다는 것이다. 미오신에서 발견되는 헵타드 반복부에 대해 대안적 방향성을 갖는 헵타드 반복부의 비제한적 예는 (K-S-E-L-A-A-I)e, (K-S-K-L-A-A-I)e, (E-S-S-L-A-A-I)e, (E-S-K-L-A-A-I)e, (E-A-K-L-A-A-V)e, (E-A-K-L-A-A-I)e, (E-A-K-L-A-A-L)e, (E-A-K-L-A-S-V)e, (E-A-K-L-A-S-I)e, (E-A-K-L-A-S-L)e, (E-A-K-L-S-A-V)e, (E-A-K-L-S-A-I)e, (E-A-K-L-S-A-L)e, (E-A-K-L-S-S-V)e, (E-A-K-L-S-S-I)e, (E-A-K-L-S-S-L)e, (E-S-K-L-A-A-V)e, (E-S-K-L-A-A-I)e, (E-S-K-L-A-A-L)e, (E-S-K-L-A-S-V)e, (E-S-K-L-A-S-I)e, (E-S-K-L-A-S-L)e, (E-S-K-L-S-A-V)e, (E-S-K-L-S-A-I)e를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
백신의 일부 실시양태에서, 1개 이상의 펩티드 항원 접합체는 동일하거나 상이할 수 있는 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e, 예를 들어 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 헵타드 반복부를 추가로 포함하는 연장부를 각각 포함할 수 있다. 비제한적 예에서, 제1 펩티드 항원 접합체는 연장부 (I-A-A-L-E-S-K)e를 포함할 수 있고, 제2 펩티드 항원 접합체는 연장부 (I-A-A-L-E-S-K)e 또는 (I-A-A-L-K-S-E)e를 포함할 수 있거나, 또는 제1 펩티드 항원 접합체는 연장부 (I-A-A-L-E-S-E)e를 포함할 수 있고, 제2 펩티드 항원 접합체는 연장부 (I-A-A-L-K-S-K)e 또는 (I-A-A-L-R-S-R)e를 포함할 수 있다. 일반적으로, 화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 헵타드 반복부를 포함하는 연장부를 갖는 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신의 경우에, 위치 AAe 및 AAg의 아미노산은 알짜 전하가 0이 되도록 선택된다. 예를 들어, 제1 접합체 및 제2 접합체를 포함하는 백신의 경우에, 여기서 제1 접합체는 서열 (AAa-AAb-AAc-AAd-E-AAf-E)e, 예를 들어 (I-A-A-L-E-S-E)를 갖는 연장부를 포함하고, 제2 접합체는 알짜 전하가 0이고 (AAa-AAb-AAc-AAd-K-AAf-K)e, 예를 들어 (I-A-A-L-K-S-K)로부터 전형적으로 선택되도록 선택되며, 여기서 K (리신)는 R (아르기닌) 또는 오르니틴으로 임의로 치환될 수 있다.
항체 반응을 유도하기 위해 사용되는 백신의 경우에, 펩티드 항원에 헵타드 반복부를 포함하는 연장부를 연결하는 링커 분자는 항체 반응의 규모 및 품질에 영향을 미치는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 펩티드 항원 (A)에 헵타드 반복부 기반 연장부 (E1 또는 E2)를 연결하는 짧은 및/또는 강성의 아미노산 링커를 포함하는 백신은 펩티드 항원 (A)에 헵타드 반복부를 연결하는 보다 긴 및/또는 가요성의 링커를 포함하는 백신보다 더 높은 역가의 기능적 항체를 발생시켰다. 비제한적 설명은 강성의 링커가 항원을 제약하고, 보다 긴 및/또는 가요성의 링커와 비교하여 증진된 B-세포 수용체 클러스터링을 가능하게 한다는 것이다. 따라서, 헵타드 반복부로부터 선택된 연장부 (E1 또는 E2)를 포함하는 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 헵타드 반복부는 링커를 통하지 않거나 (즉, 링커가 부재함) 또는 알라닌, 프롤린, β-알라닌, N-에틸-β-알라닌, 히드록시프롤린, 피페콜산 및 스타키드린으로부터 선택되나 이에 제한되지 않는 단일 아미노산을 포함하나 이에 제한되지 않는 짧은 및/또는 강성 링커로부터 선택된 링커를 통해 백신의 다른 성분에 연결된다.
스페이서 (B)
스페이서 (B)는 가용화 블록 (S)을 직접적으로 또는 링커 (U)를 통해 소수성 블록 (H)에 연결하는 친양쪽성체의 임의적 성분이며, 예를 들어 여기서 친양쪽성체는 구조 S-B-H 또는 S-B-U-H를 갖는다. 스페이서 (B)는 하기 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다: 비-천연 아미노산을 포함한 아미노산; 친수성 중합체, 예를 들어 에틸렌 옥시드 (PEG), 아크릴레이트, 메타크릴레이트, 아크릴아미드 또는 메타크릴아미드 기반 단량체에 기초한 중합체; 알칸 쇄 등; 또는 그의 조합. 스페이서 (B)는 임의의 적합한 수단을 통해, 예를 들어 직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로 가용화 블록 (S) 및 소수성 블록 (H)에 연결될 수 있지만, 연결은 전형적으로 공유 결합, 예를 들어 아미드 결합을 포함한다.
일부 실시양태에서, 스페이서 (B)는 이종 분자, S와 H 사이에 거리, 즉 공간을 제공하는 기능을 한다. 다른 실시양태에서, 스페이서 (B)는 소수성 또는 친수성 특성을 부여하는 기능을 한다. 또 다른 실시양태에서, 스페이서의 조성은 강성 또는 가요성을 부여하도록 선택될 수 있다. 다른 실시양태에서, 스페이서의 조성은 효소에 의한 인식 및 분해 촉진을 위해 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, 스페이서 (B)는 아크릴레이트, (메트)아크릴레이트, 아크릴아미드, (메트)아크릴아미드, 알릴 에테르, 비닐 아세테이트, 비닐 아미드, 치환된 스티렌, 아미노산, 아크릴로니트릴, 헤테로시클릭 단량체 (예를 들어, 에틸렌 옥시드), 사카라이드, 포스포에스테르, 포스폰아미드, 술포네이트 에스테르, 술폰아미드 또는 그의 조합으로부터 선택된 단량체 단위를 갖는 친수성 중합체이다.
일부 실시양태에서, 스페이서 (B)는 약 1 내지 45개의 아미노산 길이, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 29, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 또는 45개의 아미노산 길이, 전형적으로 45개 이하의 아미노산 길이의 펩티드 서열이며, 이는 예를 들어 각각 스페이서 (B)의 N- 및 C-말단 카르복실 기 사이에 형성된 아미드 결합을 통해 소수성 블록 (H) 및 가용화 블록 (S)에 연결된다. 스페이서 (B)와 가용화 블록 (S) 및/또는 소수성 블록 (H) 사이의 아미드 결합은 효소에 의해 인식될 수 있거나, 또는 효소-매개된 가수분해에 대한 저항성을 위해 선택될 수 있다.
다른 실시양태에서, 스페이서 (B)는 약 1 내지 48개의 단량체 길이 (즉, 중합도), 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 29, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 또는 48개의 단량체, 전형적으로 48개 이하의 단량체 길이인 비-천연 친수성 단량체, 예를 들어 에틸렌 옥시드 (PEG), HPMA 또는 HEMA로부터 선택된 단량체 단위를 포함하는 친수성 중합체이며, 이는 소수성 블록 (H) 및 가용화 블록 (S)에 직접적으로 또는 링커를 통해 연결된다.
생물학적 활성의 예상외의 개선으로 이어지는 스페이서의 구체적 조성이 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있다. 주: 스페이서 기 (B) 및 가용화 블록 (S)은 둘 다 친수성 중합체 (예를 들어, 친수성 폴리(아미노산); 친수성 메타크릴레이트-기반 중합체, 예컨대 HEMA; 친수성 메타크릴아미드-기반 중합체, 예컨대 HPMA, PEG 등)를 포함할 수 있지만; S와 B 사이의 구별은 부분적으로 기능에 기초하며, 친양쪽성체의 구체적 예에서 주목된다.
링커 (U)
링커 (U)는 임의로 U1과 U2의 반응을 통해 가용화 블록 (S) 단편 (S-[B]-U1)을 소수성 블록 (H) 단편 (U2-H)에 연결하여 친양쪽성체 (S-[B]-U-H)를 형성한다.
링커 (U)는 또한 친양쪽성체 링커 U와 독립적으로, U1과 U2의 반응을 통해 펩티드 항원 접합체 단편 ([S]-[E1]-A-[E2]-U1 또는 U1-[E1]-A-[E2]-[S])을 소수성 블록 (H) 단편 (U2-H)에 연결하여 펩티드 항원 접합체 ([S]-[E1]-A-[E2]-U-H 또는 H-U-[E1]-A-[E2]-[S])를 형성한다.
펩티드 항원 (A)은 소수성 블록 (H)에 직접적으로, 즉 A-H로, 또는 연장부를 통해, 즉 A-E2-H (또는 H-E1-A)로, 전적으로 수지 상에서 고체-상 펩티드 합성에 의해 연결될 수 있지만, 특정 상황 하에서는 항원 (A) 및 소수성 블록 (H)을 링커 전구체 U1 ([S]-[E1]-A-[E2]-U1 또는 U1-[E1]-A-[E2]-[S]) 및 링커 전구체 U2 (U2-H)를 포함하는 별개의 단편으로서 생산하는 것이 유익할 수 있고, 이는 수지 상에서 또는 용액 중에서 연결되어 [S]-[E1]-A-[E2]-U-H (또는 H-U-[E1]-A-[E2]-[S])를 생성할 수 있다.
유사하게, 친양쪽성체 상의 가용화 블록 (S)은 소수성 블록 (H)에 직접적으로, 즉 S-H로, 또는 스페이서를 통해, 즉 S-B-H로, 전적으로 수지 상에서 고체-상 펩티드 합성에 의해 연결될 수 있지만, 특정 상황 하에서는 가용화 블록 (S) 및 소수성 블록 (H)을 링커 전구체 U1 (S-[B]-U1) 및 링커 전구체 U2 (U2-H)를 포함하는 별개의 단편으로서 생산하는 것이 유익할 수 있고, 이는 수지 상에서 또는 용액 중에서 연결되어 S-[B]-U-H를 생성할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 링커 U를 형성하는 데 사용되는 링커 전구체는 부위-선택성을 위해 선택되며, 즉 반응은 U1과 U2 사이에서만 일어나고 다른 기들 사이에서는 그렇지 않다. 일부 실시양태에서, 링커 전구체 U1은 활성화된 카르복실산을 포함하고, 아민을 포함하는 링커 전구체 U2와 반응하여 아미드를 포함하는 링커 U를 형성하거나; 또는, U1은 아민을 포함하고, 활성화된 카르복실산을 포함하는 U2와 반응하여 아미드를 포함하는 링커 U를 형성한다. 일부 실시양태에서, 링커 전구체 U1은 말레이미드를 포함하고, 티올을 포함하는 링커 전구체 U2와 반응하여 티오에테르 결합을 포함하는 링커 U를 형성하거나; 또는 U1은 티올을 포함하고, 말레이미드를 포함하는 U2와 반응하여 티오에테르 결합을 포함하는 링커 U를 형성한다. 일부 실시양태에서, 링커 전구체 U1은 아지드를 포함하고, 알킨을 포함하는 링커 전구체 U2와 반응하여 트리아졸을 포함하는 링커 U를 형성하거나; 또는 U1은 알킨을 포함하고, 아지드를 포함하는 U2와 반응하여 트리아졸을 포함하는 링커 US를 형성한다.
바람직한 실시양태에서, 화학식 S-[B]-U-H의 친양쪽성체는 가용화 블록 단편 (S-[B]-U1)을 소수성 블록 단편 (U2-H)에 연결하는 것에 의해 함께 연결되며, 여기서 링커 전구체 U1은 변형된 알킨 (예를 들어, 디벤조시클로옥틴 (DBCO), 비시클로노닌 (BCN) 등)을 포함하고, 이는 아지드를 포함하는 링커 전구체 U2와 반응하여 트리아졸을 포함하는 링커 U를 형성한다.
바람직한 실시양태에서, 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-U-H 또는 H-U-[E1]-A-[E2]-[S]의 펩티드 항원 접합체는 펩티드 항원 단편 [S]-[E1]-A-[E2]-U1 또는 U1-[E1]-A-[E2]-[S]를 소수성 블록 단편 (U2-H)에 연결하는 것에 의해 함께 연결되며, 여기서 링커 전구체 U1은 변형된 알킨 (예를 들어, 디벤조시클로옥틴 (DBCO), 비시클로노닌 (BCN) 등)을 포함하고, 이는 아지드를 포함하는 링커 전구체 U2와 반응하여 트리아졸을 포함하는 링커 U를 형성한다.
다른 바람직한 실시양태에서, 링커 전구체 U1은 아지드를 포함하고, 이는 변형된 알킨 (예를 들어, 디벤조시클로옥틴 (DBCO), 비시클로노닌 (BCN) 등)을 포함하는 링커 전구체 U2와 반응하여 트리아졸을 포함하는 링커 U를 형성한다. 비제한적 예에서, DBCO를 포함하는 링커 전구체 U2는 적합한 링커 X (예를 들어, DBCO-NHS, CAS 번호 1353016-71-3)를 통해 소수성 블록 (H)에 연결되고, 링커 전구체 U1 (예를 들어 아지도 산, 예컨대 아지도펜탄산; 아지도 아미노산, 예컨대 아지도-리신 (Lys(N3)으로 약칭됨, CAS 번호 159610-92-1; 또는 아지도 아민, 예컨대 아지도-부틸아민)은 적합한 링커 X를 통해 가용화 블록 단편 (S-[B]-U1) 또는 펩티드 항원 단편 ([S]-[E1]-A-[E2]-U1 또는 U1-[E1]-A-[E2]-[S])에 연결된다.
바람직한 실시양태에서, 링커 U는 바람직하게는 아미드, 티오에테르 또는 트리아졸을 포함한다.
덴드론 증폭제
덴드론 증폭제는 본원에 기재된 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체 또는 약물 분자 접합체의 임의의 성분 상에 존재하는 기의 원자가 (즉, 수)를 증가시키는 기능을 하는 특정 유형의 링커 모이어티이다. 예를 들어, 가용화 블록 (S)의 바람직한 실시양태에서, 덴드론 증폭제는 가용화 블록 (S)의 표면 상에 존재하는 가용화 기 (화학식에서 "SG"로 지칭됨)의 원자가를 증가시키는 데 사용된다. 다른 실시양태에서, 덴드론 증폭제는 소수성 블록 (H)에 연결된 가용화 블록 (S) 및 스페이서 (B)의 원자가를 증가시키는 데 사용된다.
덴드론 증폭제 (또한 "덴드론"으로도 지칭됨)는 종종 대칭이고 전형적으로 3개 이상의 관능기 (FG) 및 분지점을 포함하는 단량체의 반복 단위를 포함하는 규칙적으로 분지된 분자이다. 덴드론 증폭제는 화학식 (FG')-T-(FGt)d로 표현될 수 있으며, 여기서 FG' 및 FGt는 각각 임의의 적합한 관능기로부터 선택된 초점 및 말단 관능기이고; T는 임의의 적합한 링커이고, "d"는 1 초과의 임의의 정수, 전형적으로 2 내지 32, 보다 바람직하게는 2 내지 8, 예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8이다. 덴드론 증폭제가 말단 관능기 (FGt)를 증가시키는 배수는 FGt = βγ로 표현될 수 있고, 여기서 β는 각 세대의 덴드론에 대해 발생한 분지의 수이고, 기호 γ는 세대의 수이고, 여기서 분지의 수는 임의의 정수이지만, 전형적으로 2 내지 6이고, 세대의 수는 임의의 정수이지만, 전형적으로 1 내지 10이다. 자유의 (즉, 미반응) 가용화 블록 상에 존재하는 말단 관능기는 또한 가용화 기 (SG)로 지칭될 수 있다.
덴드론 증폭제는 제1 관능기 (FG1) 및 제2 관능기 (FG2)를 포함하는 단량체의 반복부를 포함할 수 있으며, 여기서 제1 관능기는 제2 관능기에 대해 반응성이다. 예를 들어, 제1 관능기 (FG1) 및 제2 관능기 (FG2)를 포함하며, 여기서 제1 관능기는 제2 관능기에 대해 반응성인 단량체의 반복부를 포함하는 β = 2인 제2 세대 덴드론 증폭제의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
여기서, 출발점에서의 제1 관능기는 또한 초점 관능기 (FG')로 지칭되고, 말단 FG2는 말단 관능기 또는 FGt로 지칭된다.
제1 및 제2 관능기를 포함하며, 여기서 β = 2인 단량체로부터 형성된 제3 세대 덴드론의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
제1 관능기 (FG1) 및 제2 관능기 (FG2)를 포함하며, 여기서 제1 관능기는 제2 관능기에 대해 반응성인 제1 단량체의 반복부를 포함하는 β = 3인 제2 세대 덴드론 증폭제의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
제1 관능기 및 제2 관능기를 포함하며, 여기서 제1 관능기는 제2 관능기에 대해 반응성인 단량체, 및 적어도 1개의 제1 관능기 및 2개 이상의 제2 관능기를 포함하는 단량체는 임의의 적합한 단량체로부터 선택될 수 있다. 비제한적 예는 FG1-(CH2)y2CH(R1)2, FG1-(CH2)y2C(R1)3, FG1-(CH2CH2O)y2CH(R1)2, FG1-(CH2CH2O)y2C(R1)3, FG1-CH(R1)2, FG1-C(R1)3을 포함하며, 여기서 R1은 독립적으로 (CH2)y3-FG2, (OCH2CH2)y3-FG2 또는 CH2(OCH2CH2)y3-FG2)로부터 선택되고, y2 및 y3은 각각 1 내지 6으로부터 선택된 정수의 반복 단위이다.
FG1이 NH2이고, R1이 CH2(OCH2CH2)y3-FG2이고, y3이 1이고, FG2가 COOH인 FG1-CH(R1)2의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
상기 단량체가 제2 세대 증폭 링커를 생산하는 데 사용되는 경우에, 구조는 하기이다:
제1 관능기 및 제2 관능기를 포함하며, 여기서 제1 관능기는 제2 관능기에 대해 반응성인 단량체, 및 적어도 1개의 제1 관능기 및 2개 이상의 제2 관능기를 포함하는 단량체의 추가의 비제한적 예는 FG1-(CH2)y2N(R2)2, FG1-(CH2CH2O)y2CH2CH2N(R2)2를 포함하며, 여기서 R2는 독립적으로 (CH2)y3-FG2, (CH2CH2O)y3(CH2)y4-FG2, (CH2OCH2CH2)y3-FG2)로부터 선택되고, y2, y3 및 y4는 각각 1 내지 6으로부터 선택된 정수의 반복 단위이다. 주: 상기 예에서, FG'는 아민이고, 4개의 FGt는 카르복실산이다.
FG1이 NH2이고, R2가 (CH2CH2O)y3(CH2)y4-FG2이고, y2가 2이고, y3이 1이고, y4가 2이고, FG2가 COOH인 FG1-(CH2CH2O)y1CH2CH2N(R2)2의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
제1 관능기 및 제2 관능기를 포함하며, 여기서 제1 관능기는 제2 관능기에 대해 반응성인 단량체, 및 적어도 1개의 제1 관능기 및 2개 이상의 제2 관능기를 포함하는 단량체의 추가의 비제한적 예에서, 이는 특정 아미노산, 예컨대 글루탐산, 아스파르트산, 리신 또는 오르니틴을 포함한다. 제3 세대 리신 덴드론의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
덴드론 증폭제는 2개의 단량체의 반복부를 포함할 수 있으며, 여기서 제1 단량체는 3개 이상의 제1 관능기 (FG1)를 포함하고, 제2 단량체는 2개 이상의 제2 관능기 (FG2)를 포함하며, 여기서 제1 관능기는 제2 관능기에 대해 반응성이다. 예를 들어, 제1 및 제2 단량체의 반복부를 포함하며, 여기서 제1 단량체는 3개의 제1 관능기 (FG1)를 포함하고 제2 단량체는 2개의 제2 관능기 (FG2)를 포함하고, 여기서 제1 관능기는 제2 관능기에 대해 반응성인 β = 2인 제2 세대 덴드론 증폭제의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
제1 및 제2 단량체의 반복부를 포함하며, 여기서 제1 단량체는 3개의 제1 관능기 (FG1)를 포함하고 제2 단량체는 3개의 제2 관능기 (FG2)를 포함하고, 여기서 제1 관능기는 제2 관능기에 대해 반응성인 β = 2인 제1 세대 덴드론 증폭제의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
덴드론 증폭제는 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체 및 약물 분자 접합체의 임의의 3개 이상의 성분을 함께 연결하는 데 사용될 수 있다. 초점 관능기 (FG') 및 말단 관능기 (FGt)는 추가로 관능화, 즉 특정한 목적에 맞도록 반응될 수 있다.
화학식 S-[B]-[U]-H의 친양쪽성체의 바람직한 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 덴드론 증폭제를 포함하며, 여기서 초점은 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 소수성 블록 (H)에 연결되고, 말단 관능기 (FGt)는 연결되지 않고 가용화 기로서의 역할을 하거나 또는 가용화 기 (SG)에 연결된다. 가용화 기 (SG)는 친수성이고/거나 하전된 임의의 분자이고; 바람직한 가용화 기 (SG)는 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있다.
화학식 S-[B]-[U]-H-D의 친양쪽성체, 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-D 또는 H-D-[U]-[E1]-A-[E2]-[S])의 펩티드 항원 접합체 및 화학식 H-D의 약물 분자 접합체의 일부 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 덴드론 증폭제를 포함하고, 여기서 초점은 (i) 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 가용화 블록 (S)에, (ii) 직접적으로 또는 연장부 (E1 또는 E2) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 항원 (A)에; 또는 (iii) 직접적으로 또는 링커 X1을 통해 간접적으로 약물 분자에 연결된다.
일부 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 덴드론 증폭제를 포함하고, 말단 관능기 (FGt)는 소수성 약물 분자에 연결된다. 이러한 실시양태에서, 초점은 (i) 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 가용화 블록 (S)에 연결되거나, (ii) 직접적으로 또는 연장부 (E1 또는 E2) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 항원 (A)에 연결되거나; 또는 (iii) 미반응되거나 또는 말단 기, 예컨대 아세틸 기로 캡핑된다. 캡핑된 또는 캡핑은 관능기, 예컨대 FGt를 pH 7.4에서 덜 반응성이고/거나 중성 전하를 갖도록 변형시키는 것을 지칭한다. 예를 들어, 아민은 활성화된 카르복실산 (예를 들어, 아세틸 클로라이드)으로 캡핑되어 비교적 덜 반응성인 아미드를 생성할 수 있거나; 또는 예를 들어, 변형된 알킨은 알킬-아지드로 캡핑되어 비교적 덜 반응성인 트리아졸을 생성할 수 있다.
소수성 블록 (H)
소수성 블록 (때때로 화학식에서 "H"로 지정됨)은 실질적으로 제한된 수용해도를 갖거나, 또는 특성상 친양쪽성이고, 수용액 중에서 초분자 구조, 예를 들어 미셀, 나노- 또는 마이크로-입자로 어셈블리될 수 있는 분자이다. 특정 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 수용액 중에서 약 1.0 mg/mL 이하, 예를 들어 약 0.1 mg/mL 또는 약 0.01 mg/mL의 농도로 불용성이거나 미셀을 형성한다. 일부 실시양태에서, 소수성 블록은 특정 농도, 온도 및/또는 pH 범위에서 수용액 중에 가용성이지만, 농도, 온도 및/또는 pH의 변화에 반응하여 불용성이 된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 소수성 블록은 온도-반응성인 소수성 중합체이며, 즉 소수성 중합체는 전이 온도 미만의 온도 (Ttr)에서는 수용액에 가용성이지만, 전이 온도 초과의 온도에서는 불용성이 된다. 바람직한 소수성 블록 (H)은 생리학적 pH (~ pH 7.4) 또는 그 근처, 약 pH 6.5 내지 pH 8.5 또는 약 pH 6.0 내지 pH 9.0에서, 및 생리학적 온도 (~ 37℃) 및 생리학적 염 농도 (~10 g/L) 또는 그 근처 및 염 조성에서 적어도 약 1.0 mg/mL 미만, 예컨대 약 0.1 mg/mL 미만 또는 약 0.01 mg/mL 미만의 용해도를 갖는 분자이다.
소수성 블록 (H)은 고급 알칸, 시클릭 방향족, 지방산, 테르펜/이소프렌으로부터 유래된 화합물, 또는 제한된 수용해도 및/또는 친양쪽성 특징을 갖는 중합체 또는 올리고머를 포함한 임의의 분자로부터 선택될 수 있다.
예시적인 고급 알칸은 옥탄, 노난, 데칸, 운데칸, 도데칸, 트리데칸, 테트라데칸, 펜타데칸, 헥사데칸, 헵타데칸 및 옥타데칸을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 시클릭 방향족은 페닐을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 포화 및 불포화 지방산은 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산 또는 올레산을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 지방산, 예를 들어 미리스트산이다. 다른 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 디아실 지질, 예컨대 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 또는 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 또는 리포펩티드, 예를 들어 Pam2Cys를 포함한다. 일부 실시양태에서, 지방산 또는 지질 기반 소수성 블록 (H)은 PEG를 추가로 포함할 수 있다. 테르펜/이소프렌으로부터 유래된 예시적인 화합물은 스테롤 유도체, 예컨대 콜레스테롤 및 스쿠알렌을 포함한다. 일부 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 콜레스테롤을 포함한다. 일부 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 사포닌, 예를 들어 QS-21을 포함한다.
일부 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 선형, 분지형 또는 브러시 중합체 (또는 올리고머)이다. 소수성 블록 (H)은 단독중합체 또는 공중합체일 수 있다. 소수성 블록 (H)은 1종 또는 많은 상이한 유형의 단량체 단위를 포함할 수 있다. 소수성 블록 (H)은 통계적 공중합체 또는 교호 공중합체일 수 있다. 소수성 블록 (H)은 블록 공중합체, 예컨대 A-B 유형일 수 있거나, 또는 중합체는 그라프팅된 공중합체를 포함할 수 있으며, 이에 의해 2개 이상의 중합체가 중합체 유사한 반응을 통해 연결된다.
소수성 블록 (H)은 자연 발생 및/또는 비-자연 단량체를 포함하는 중합체 및 그의 조합을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 천연 생체중합체로부터 선택된다. 천연 생체중합체는 소수성 아미노산을 포함하는 펩티드 (때때로 폴리(아미노산)로 지칭됨)를 포함할 수 있다. 소수성 아미노산의 비제한적 예는 류신, 이소류신, 노르류신, 발린, 트립토판, 페닐아민, 티로신 및 메티오닌, 뿐만 아니라 소수성 특징을 갖도록 예컨대 아세틸화 또는 벤조일화에 의해 변형된 친수성 아미노산을 포함한다. 천연 형태에서 수용성인 천연 생체중합체가 사용될 수 있지만, 이러한 천연 생체중합체를 수불용성으로 만들고 소수성 블록 (H)으로서 사용하기에 적합하도록 화학적으로 변형되어야 한다. 예를 들어, 친수성 아미노산, 예컨대 글루탐산 또는 리신 잔기를 포함하는 생체중합체는 소수성 분자, 예컨대 소수성 약물 분자의 부착을 위해 각각 감마 카르복실 또는 엡실론 아민 기에서 변형되어, 생성되는 변형된 생체중합체의 소수성을 증가시킬 수 있다. 유사하게, 생체중합체는 글리코겐, 셀룰로스, 덱스트란, 알기네이트 및 키토산을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는 친수성 폴리사카라이드로부터 선택될 수 있지만, 이러한 폴리사카라이드는 생성된 개질된 폴리사카라이드를 수불용성으로 만들기 위해 예를 들어 친수성 관능기의 아세틸화 또는 벤조일화를 통해 화학적으로 개질되어야 한다. 또 다른 실시양태에서, 소수성 블록은 락트산 및/또는 글리콜산으로부터 선택된 단량체를 포함한다.
소수성 블록 (H)을 포함하는 단량체는 아크릴레이트, (메트)아크릴레이트, 아크릴아미드, (메트)아크릴아미드, 알릴 에테르, 비닐 아세테이트, 비닐 아미드, 치환된 스티렌, 아미노산, 아크릴로니트릴, 헤테로시클릭 단량체 (예를 들어, 에틸렌 옥시드), 사카라이드, 포스포에스테르, 포스폰아미드, 술포네이트 에스테르, 술폰아미드 또는 그의 조합으로부터 선택될 수 있다. (메트)아크릴레이트 및 (메트)아크릴아미드의 구체적 예는 각각 벤질 메타크릴아미드 (BnMAM) 및 벤질 메타크릴레이트 (BnMA)를 포함한다.
소수성 단량체로서 본원에 기재된 특정 단량체는 특정 조건 하에 수용성일 수 있지만, 특정 조건에서는 수용액 중에서 소수성 및 수불용성이다. 비제한적 예는 온도-반응성 단량체, 예컨대 N-이소프로필메타크릴아미드 (NIPMAM)를 포함하고; 전적으로 NIPMAM을 포함하는 단독중합체는 실온에서 수용성일 수 있지만, 승온에서 불용성이 되고 입자를 형성할 수 있다. 이러한 구별은 특정 실시양태의 설명을 용이하게 하기 위해 이루어진다. 일부 실시양태에서, 소수성 블록은 온도-반응성인 소수성 단량체 (때때로 "온도-반응성 단량체"로 지칭됨), 예컨대 NIPAM, NIPMAM, N,N'-디에틸아크릴아미드 (DEAAM), N-(L)-(1-히드록시메틸)프로필 메타크릴아미드 (HMPMAM), N,N'-디메틸아미노에틸메타크릴레이트 (DMEMA), N-(N-에틸카르바미도)프로필메타크릴아미드, N-비닐이소부티르아미드 (PNVIBA), N-비닐-n-부티르아미드 (PNVBA), N-아크릴로일-N-프로필피페라진 (PNANPP), N-비닐카프로락탐 (PVCa), DEGMA, TEGMA, 또는 폴리(아미노산) 또는 γ-(2-메톡시에톡시)에스테릴-L-글루타메이트로부터 선택된 대부분의 단량체 단위를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 소수성 블록 (H)는 에틸렌 옥시드, 프로필렌 옥시드 또는 그의 조합의 단량체를 포함할 수 있다.
중합체를 포함하는 소수성 블록 (H)은 전형적으로 소수성 단량체 및 1종 이상의 다른 유형의 단량체, 예컨대 약물 분자에 임의로 연결된 반응성 단량체, 스페이서 단량체 및/또는 하전된 단량체를 포함한다. 중합체 (또는 올리고머)를 포함하는 소수성 블록 (H)의 일부 실시양태에서, 대부분의 단량체 단위는 소수성 단량체로부터 선택된다. 중합체 (또는 올리고머)를 포함하는 소수성 블록 (H)의 다른 실시양태에서, 대부분의 단량체 단위는 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 단량체로부터 선택된다. 중합체 (또는 올리고머)를 포함하는 소수성 블록 (H)의 또 다른 실시양태에서, 중합체는 소수성 단량체 및 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 단량체를 포함한다. 중합체 (또는 올리고머)를 포함하는 소수성 블록 (H)의 추가 실시양태에서, 중합체는 소수성 단량체 및 하전된 단량체 및 임의로, 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 단량체를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 아릴 기를 추가로 포함하는 소수성 단량체를 포함하는 중합체 (또는 올리고머)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 헤테로아릴 기를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 소수성 블록 (H)의 아릴 또는 헤테로아릴 기는 아미노 치환기를 포함한다. 본 발명자들은 아미노아릴 또는 아미노헤테로아릴 기를 포함하는 소수성 블록 (H)이 개선된 제조성 및 수혼화성 용매 중에의 용해도를 유도한다는 것을 발견하였다. 본 발명자들은 또한 방향족 아민을 포함하는 소수성 블록 (H)을 갖는 친양쪽성체가 낮은 CMC를 갖는 안정한 입자의 형성을 유도한다는 것을 발견하였다.
바람직한 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 아릴 또는 헤테로아릴 기를 포함하는 단량체를 포함한다. 예시적인 아릴 기 (때때로 "방향족" 또는 "방향족 고리"로 지칭됨)는 페닐, 나프틸 및 퀴놀리닐을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 비제한적 예는 하기를 포함하며:
,
여기서 X는 임의의 적합한 링커 분자이고, y는 전형적으로 1 내지 6의 정수 값이다.
바람직한 실시양태에서, 아릴 또는 헤테로아릴 기는 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다:
.
또한, 상기 언급된 아릴 또는 헤테로아릴 기에서 1개 이상의 수소 원자는 1개 이상의 플루오린 원자로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 소수성 블록은 플루오린화 지방족, 아릴 또는 헤테로아릴 기를 포함하며, 여기서 소수성 단량체를 포함하는 상기 언급된 기의 1개 이상의 수소 원자는 1개 이상의 플루오린 원자로 치환될 수 있다. 플루오린화 아릴 기의 하기 비제한적 예가 소수성 단량체에 존재할 수 있으며:
,
여기서 X는 임의의 적합한 링커 분자이고, y는 전형적으로 1 내지 6의 정수 값이다.
본 발명자들은 아미노아릴 또는 아미노헤테로아릴 기를 포함하는 소수성 블록 (H)이 개선된 제조 및 극성 비양성자성 용매 및 알콜 중에의 용해도를 유도한다는 것을 예상외로 발견하였다. 따라서, 특정의 바람직한 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 화학식 -Ar-NHR의 모이어티를 포함하며, 여기서 Ar은 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있고, R은 독립적으로 수소, 알킬, 플루오로알킬, 카르보시클릴, 카르보시클릴알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알킬알킬, 헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬이다. 아미노아릴 또는 아미노헤테로아릴 기의 비제한적 예는 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않으며:
,
여기서 X는 임의의 적합한 링커 분자이고, y는 전형적으로 1 내지 6의 정수 값이다.
일부 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 융합된 아릴 기 (예를 들어, 나프틸) 또는 융합된 헤테로아릴 기 (예를 들어, 크산테닐 또는 퀴놀리닐)를 갖는 소수성 단량체를 추가로 포함하는 중합체 (또는 올리고머)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 단량체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 소수성 약물 분자 (예를 들어, 이미다조퀴놀린)는 방향족이고, 따라서 방향족 기를 포함하는 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 단량체는 또한 방향족 기를 포함하는 소수성 단량체 또는 약물에 연결된 반응성 단량체로서 기재될 수 있다.
일부 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하며:
여기서 화학식 I의 폴리(아미노산)는 소수성 아미노산 (M), 반응성 아미노산 (N), 스페이서 아미노산 (O), 하전된 아미노산 (P) 및 그의 조합으로부터 선택된 단량체를 포함하고, 단 적어도 단량체 M 또는 N은 존재하고; m, n, o 및 p는 특정 또는 무작위 순서로 중합체를 따라 분포될 수 있는, 각각 단량체 M, N, O 및 P의 정수의 반복 단위가 존재한다는 것을 나타내고; R3은 전형적으로 수소, NH2, NH2-CH3, NH2-(CH2)y5CH3, OH, 또는 직접적으로 또는 X1을 통해 연결된 약물 분자 (D)로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, P는 부재한다. 다른 실시양태에서, N, O 및 P는 각각 부재한다.
일부 실시양태에서, P는 이고, 여기서 각각의 R5는 독립적으로 1 내지 2개의 하전된 관능기를 포함하는 기이다.
일부 실시양태에서, O는 이고, 여기서 각각의 Q는 독립적으로 (CH2)y6 및 (CH2CH2O)y7CH2CH2로부터 선택되고; 각각의 y6은 독립적으로 1 내지 6의 정수로부터 선택되고; 각각의 y7은 독립적으로 1 내지 4의 정수로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, N은 이고, 여기서 각각의 X1은 독립적으로 적합한 링커이고; 각각의 D는 독립적으로 약물 분자이다.
일부 실시양태에서, M은 이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 소수성 기이다.
일부 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하며:
여기서 화학식 I의 폴리(아미노산)는 소수성 아미노산 (M), 반응성 아미노산 (N), 스페이서 아미노산 (O), 하전된 아미노산 (P) 및 그의 조합으로부터 선택된 단량체를 포함하고, 단 적어도 단량체 M 또는 N은 존재하고; m, n, o 및 p는 특정 또는 무작위 순서로 중합체를 따라 분포될 수 있는, 각각 단량체 M, N, O 및 P의 정수의 반복 단위가 존재한다는 것을 나타내고; R3은 전형적으로 수소, NH2, NH2-CH3, NH2-(CH2)y5CH3, OH, 또는 직접적으로 또는 X1을 통해 연결된 약물 분자 (D)로부터 선택되고; R4는 아릴 또는 헤테로아릴 기로부터 전형적으로 선택된 임의의 소수성 기이고; R5는 수용액 중에서 하전되거나, 또는 pH-반응성이고 특정 pH 범위의 수용액 중에서 하전된 1개 이상의 관능기를 포함하는 임의의 기이고; Q는 전형적으로 (CH2)y6 및 (CH2CH2O)y7CH2CH2를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 저급 알킬 또는 헤테로알킬로부터 선택되며, 여기서 y6은 1 내지 6의 임의의 정수이고, y7은 1 내지 4로부터 전형적으로 선택된 정수이고; N-말단은 (i) 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 가용화 블록 (S)에; (ii) 직접적으로 또는 연장부 (E1 또는 E2) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 펩티드 항원 (A)에; 또는 (iii) 직접적으로 또는 X1을 통해 약물 분자에 연결된다. 주: 소수성 아미노산, 반응성 아미노산, 스페이서 아미노산 및 하전된 아미노산은 때때로 각각 소수성 단량체, 반응성 단량체, 스페이서 단량체 및 하전된 단량체로서 보다 일반적으로 기재된다.
화학식 I의 폴리(아미노산)의 바람직한 실시양태에서, R4는
이며, 여기서
α는 아릴 또는 헤테로아릴이고;
X2는 존재하거나 부재하고, 존재하는 경우에 적합한 링커이고;
y8은 0 내지 6의 정수로부터 선택되고;
Z1, Z2, 및 Z3은 각각 독립적으로 H, F, 히드록시, 아미노, 알킬, 및 플루오로알킬로부터 선택된다.
화학식 I의 폴리(아미노산)의 바람직한 실시양태에서, α는 아릴, 예를 들어 페닐 또는 나프틸이다. 다른 실시양태에서, α는 헤테로아릴, 예를 들어 이미다졸릴, 피리디닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌릴 및 벤즈이미다졸릴이다.
화학식 I의 폴리(아미노산)의 바람직한 실시양태에서, X2는 부재한다. 다른 실시양태에서, X2는 존재하고, C(O), CO2(CH2)y9, 및 C(O)NH(CH2)y9, NHC(O) 및 NHC(O)(CH2)y9로부터 선택되며, 여기서 y9는 전형적으로 1 내지 6으로부터 선택된 정수이다. 다른 실시양태에서, X2는 존재하고, 저급 알킬 및 PEG 기로부터 선택된다.
화학식 I의 폴리(아미노산)의 바람직한 실시양태에서, 화학식 I의 폴리(아미노산)는 소수성 기, R4를 포함하는 임의의 천연 또는 비-천연 아미노산으로부터 선택된 소수성 아미노산, M을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, R4는 아릴 기, 헤테로아릴 기, 아미노아릴 및/또는 아미노헤테로아릴을 포함하는 소수성 기로부터 선택된다. R4의 비제한적 예는 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않으며:
,
여기서 X2는 임의의 적합한 링커 분자이고, y8은 전형적으로 0 내지 6의 정수 값이다. 바람직한 실시양태에서, y8은 1이다.
비제한적 예에서, R4는 이고, 단량체 M은 이다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 폴리(아미노산)-기반 소수성 블록 (H)은 임의의 천연 또는 비-천연 아미노산으로부터 선택된 반응성 아미노산, N을 포함하며, 여기서 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 X1을 통해 단량체에 연결된다. 적합한 반응성 아미노산은 약물 분자의 부착에 적합한 기를 보유하는 임의의 아미노산을 포함하나 이에 제한되지는 않고, 아지드, 알킨, 테트라진, 트랜스시클로옥틴 (TCO), 보호된 히드라진, 케톤, 알데히드, 특정 히드록실 기, 이소시아네이트, 이소티오시아네이트, 카르복실산, 활성화된 카르복실산, 활성화된 카르바메이트, 활성화된 카르바메이트, 보호된 말레이미드, 티올 및/또는 아민 기를 갖는 아미노산을 포함한다.
X1은 약물 분자, D를 소수성 블록 (H)에, 예컨대 폴리(아미노산)의 반응성 아미노산, N에 연결하기 위한 임의의 적합한 링커이고, 전형적으로 약물이 N-말단 또는 아민 기에서 떨어져서 연결되는 경우에 -(CH2)y10-FG3 및 -(CH2)y10-R6 (또는 약물이 C-말단 또는 카르보닐 기에서 떨어져서 연결되는 경우에 -C(O)-(CH2)y10-FG3 및 -C(O)-(CH2)y10-R6, 또는 -NH-(CH2)y10-FG3 및 -NH-(CH2)y10-R6)으로부터 선택되고, 여기서 y10은 전형적으로 1 내지 6으로부터 선택된 임의의 정수이고, R6은 전형적으로 -C(O)-NH-R7, -NH-C(O)-R7, -NH-C(O)-O-R7, -O-C(O)-NH-R7, -O-C(O)-R7, -C(O)-O-R7 , -O-R7 , O-C(O)-W, 또는 -C(O)-W 중 어느 하나 이상으로부터 선택되고, 여기서 R7은 전형적으로 -(CH2)y11-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13-W, -CHR8-C(O)-W, -CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-W, -(CH2)y11-C(O)-NH-CHR8-C(O)-W, -(CH2)y11-C(O)-NH-CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-C(O)-NH-CHR8-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13C(O)-NH-CHR8-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-C(O)-NH-CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13-C(O)-NH-CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-W, -CHR8-C(O)-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -CHR8-C(O)-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W, -CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13-C(O)-NH-(CH2)y14-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-(CH2)y13C(O)-NH-(CH2)y14-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-C(O)-NH-(CH2)y14-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W, -(CH2)y11-(OCH2CH2)y12-C(O)-NH-(CH2)y14-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-W, -CHR8-C(O)-NH-(CH2)y15-W, -CHR8-NH-C(O)-(CH2)y15-W, -CHR8-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-(CH2)y15-W, -CHR8-NH-(C(O)-CHR8-NH)j-C(O)-(CH2)y15-W 중 어느 하나 이상으로부터 선택되고, 여기서 y11, y12, y13, y14, y15 및 j는 각각 독립적으로, 전형적으로 1 내지 6으로부터 선택된 임의의 정수로부터 선택되고, R8은 임의의 아미노산 기이고, W는 H (수소), FG3, LG 및 w로부터 독립적으로 선택될 수 있고; 여기서 FG3은 약물 분자에의 부착을 위한 임의의 적합한 관능기이고, 이는카르복실산, 활성화된 카르복실산 (예를 들어, 카르보닐티아졸리딘-2-티온 ("TT"), NHS 또는 니트로페놀 에스테르), 카르복실산 무수물, 아민 및 보호된 아민 (예를 들어, tert-부틸옥시카르보닐 보호된 아민), OSi(CH3), 알켄, 아지드, 알킨, 염색된-알킨, 할로겐 (예를 들어, 플루오라이드, 클로라이드), 올레핀 및 엔도 시클릭 올레핀 (예를 들어, 알릴), CN, OH, 및 에폭시, 히드라진 (히드라지드 포함), 카르보히드라지드, 알데히드, 케톤, 카르바메이트 및 활성화된 카르바메이트로부터 선택될 수 있으나 이에 제한되지는 않고, LG는 임의의 적합한 이탈기 (예를 들어, NHS, TT, 니트로페놀 등)로부터 선택될 수 있으나 이에 제한되지는 않는 임의의 적합한 이탈기이고, w는 FG4와 FG3의 반응 또는 LG의 FG4로의 대체로부터 생성된 기이고, 전형적으로 NH-, C(O)-, NH-C(O)-, C(O)-NH-, O-C(O)-NH-, C(O)-NH-N=C(CH3)-, NH-N=C(CH3)- 또는 -C(CH3)=N-NH-C(O)-로부터 선택되며, 여기서 w는 항상 D에 직접적으로 (즉, w-D) 또는 X3을 통해 간접적으로 (즉, w-X3-D) 연결된다.
약물 분자 (D)는 반응성 아미노산, N에 직접적으로 또는 FG4와 FG3의 반응을 통해 X1을 통해 부착될 수 있으며, 여기서 FG4는 FG3과 반응성인 약물 (D) 상의 임의의 적합한 관능기이다. 대안적으로, 약물 분자 (D)는 LG의 친핵체, 예를 들어 1급 아민을 포함하는 임의의 적합한 FG4로의 대체를 통해 X1을 통해 반응성 아미노산, N에 연결될 수 있거나, 또는 약물 분자 (D)는 약물 분자 상에 존재하는 LG의 친핵체를 포함하는 임의의 적합한 FG3으로의 대체를 통해 X1을 통해 반응성 아미노산, N에 연결될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, FG3은 카르복실산이고, FG4는 아민이며, 이는 반응하여 아미드를 형성한다. 비제한적 예에서, X1은 -(CH2)y10-FG3으로부터 선택되고, y10은 2이고, FG3은 카르복실산이고, 약물 상에 존재하는 FG4는 아민 (즉, NH2-D)이고, 이는 반응하여 아미드를 형성하며, -(CH2)2-C(O)-D (아민은 제시되지 않음) 또는 -(CH2)2-C(O)-NH-D (아민이 제시됨)로서 나타내어질 수 있고, 이는 약물이 X1의 카르보닐에서 아미드 결합을 통해 연결된 것을 나타내며, (이마드 결합 형성 후에) -(CH2)y10-R6으로 기재될 수 있고, 여기서 y10은 2이고, R6 = C(O)-W이고, W는 NH-인 기 w이고, D에 연결되어 -(CH2)2-C(O)-NH-D를 생성한다.
약물은 반응성 관능기 FG4와 약물작용발생단 사이에 링커 X3을 추가적으로 포함하여, 예를 들어 FG4-X3-D일 수 있다. X3의 특정한, 바람직한 조성은 다른 곳에 기재된다.
다른 실시양태에서, FG3은 아민이고, FG4는 카르복실산이며, 이는 반응하여 아미드를 형성한다. 비제한적 예에서, X1은 -(CH2)y10-FG3이고, y10은 4이고, FG3은 아민이고, 약물 상에 존재하는 FG4는 카르복실산 (즉, COOH-D)이고, 이는 반응하여 아미드를 형성하며, -(CH2)4-NH-D (카르보닐은 제시되지 않음) 또는 -(CH2)4-NH-C(O)-D (카르보닐이 제시됨)로서 나타내어질 수 있고, 이는 약물이 X1의 아민에서 아미드 결합을 통해 연결된 것을 나타낸다.
또 다른 실시양태에서, FG3은 케톤 또는 알데히드이고, FG4는 히드라지드 또는 카르보히드라지드이며, 이는 반응하여 히드라존을 형성한다. 비제한적 예에서, X1은 -(CH2)y10-R6이고, y10은 4이고, R6은 -NH-C(O)-R7이고, R7은 (CH2)y11-W이고, y11은 2이고, W는 C(O)-CH3이고, 약물 분자 상에 존재하는 FG4는 X1과 반응하는 히드라지드 (NH2-NH2-C(O)-D), 즉 -(CH2)4-NH-C(O)-(CH2)2-C(O)-CH3이고, 이는 히드라존 결합, 즉 -(CH2)4-NH-C(O)-(CH2)2-C(CH3)=N-NH-C(O)-D를 형성한다. 또 다른 실시양태에서, FG3은 히드라지드 또는 카르보히드라지드이고, FG4는 케톤 또는 알데히드이며, 이는 반응하여 히드라존을 형성한다. 비제한적 예에서, X1은 -(CH2)y10-R6이고, y10은 2이고, R6은 -C(O)-W이고, W는 FG3이고, FG3은 -NH-NH2이고, 약물 분자 상에 존재하는 FG4는 케톤 CH3C(O)-D (또는 임의로 CH3C(O)-X3-D)이고, 이는 X1과 반응하여 -(CH2)4-C(O)-NH-NH2를 형성하여 히드라존 결합을 형성하고, 즉, -(CH2)4-C(O)-NH-N=C(CH3)-D를 형성한다.
특정의 바람직한 조성물에서, 약물 분자 (D)는 반응성 아미노산, N에 직접적으로 연결된다. 약물 분자에 연결된 -(CH2)y10-FG3 (여기서 y10 = 2, FG3은 카르복실산임 (즉, 반응성 아미노산은 글루탐산임))으로부터 선택된 링커를 포함하는 반응성 아미노산의 비제한적 예가 명확성을 위해 하기 제시된다:
특정의 다른 바람직한 실시양태에서, 약물 분자 (D)는 효소 분해성 펩티드 및/또는 자기-희생적 링커를 통해 반응성 아미노산 (N)에 연결되며, 여기서 자기-희생적 링커는 전형적으로 -NH-C6H4-CH2-O-C(O)- 또는 -NH(CH3)(CH2)2-O-C(O)-로부터 선택되고, 약물 상에 존재하는 FG4는 아민, 예를 들어 NH2-D 또는 NH2-X3-D이며, 이는 링커와 약물 사이에 카르바메이트 결합을 생성한다. 비제한적 예에서, 반응성 단량체는 (CH2)y10-R6으로부터 선택된 링커를 포함하며, 여기서 y10 = 2이고, R6은 -C(O)-NH-R7이고, R7은 (CH2)y11-C(O)-(NH-CHR8-C(O))j-NH-C6H4-CH2-O-C(O)-W이며, 여기서 y11은 2이고, R8은 임의의 아미노산 기이고, j는 1 내지 6으로부터 전형적으로 선택된 정수이고, W는 w 군으로부터 선택되며, 이는 본원에 제시된 바와 같이 약물 (D)에 NH-연결된다:
효소 분해성 링커를 포함하는 X1의 바람직한 조성에서, 효소 분해성 링커는 전형적으로 효소, 예컨대 카텝신 및/또는 이뮤노프로테아솜에 의해 인식되고 절단되는 단일 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드, 펜타펩티드 및 헥사펩티드로부터 선택된 1 내지 6개의 아미노산, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 아미노산을 포함한다.
반응성 아미노산 (N)은 전하를 부여할 수 있는 관능기를 포함할 수 있지만; 반응성 아미노산 단량체로서의 아미노산의 분류는 콘텍스트-의존적이고, 그의 의도된 용도에 기초한다. 예를 들어, 카르복실산을 포함하는 단량체는 카르복실산이 약물 부착에 사용되지 않는 경우에 하전된 단량체로 지칭될 수 있는 반면, 예를 들어 아미드 결합을 통해 아민 보유 약물 분자에 연결된 동일한 단량체는 반응성 단량체로 간주될 것이다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 폴리(아미노산)-기반 중합체는 비-벌키하고 거의 중성인 임의의 천연 또는 비-천연 아미노산으로부터 선택된 스페이서 아미노산, O, 예컨대 PEG 아미노산 스페이서를 포함하며, 예를 들어 단량체 O의 Q는 저급 알킬 또는 PEG, 예를 들어 -(CH2)y6-, -CH2-CH2-O- 또는 -(CH2-CH2-O)y7CH2-CH2-이고, 여기서 y6 및 y7은 각각 독립적으로 전형적으로 1 내지 6의 정수이다. 대안적으로, 단량체 O는 수소, 저급 알킬 또는 히드록실을 포함하는 저급 알킬로부터 선택된 소형의, 즉 비-벌키 치환기를 갖는 아미노산으로부터 선택되고, 중합체 백본의 간격 또는 가요성을 증가시키기 위해 제공된다.
비제한적 예는 하기를 포함한다:
.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 폴리(아미노산)-기반 중합체는 임의의 천연 또는 비-천연 아미노산으로부터 선택된 임의적인 공단량체(들), P를 포함하며, 여기서 R5는 영구적으로 또는 수용액 중 특정 pH에서 전하를 운반하는 관능기를 포함하는 임의의 군으로부터 선택된다. 하전된 아미노산의 비제한적 예는 직접적으로 또는 적합한 링커 분자를 통해 연결될 수 있는 아민, 4급 암모늄, 술폰산, 황산, 술포늄, 인산, 포스폰산, 포스포늄, 카르복실산, 보론산 관능기 및/또는 그의 조합, 예컨대 쯔비터이온을 포함한 임의의 천연 또는 비-천연 아미노산, 뿐만 아니라 그의 염의 임의의 조성을 포함한다. 염의 비제한적 예는, 예를 들어 양으로 하전된 관능기, 예를 들어 할라이드 (예를 들어, 클로라이드) 이온과 쌍형성된 암모늄 이온을 포함한다. 하전된 아미노산의 적합한 염의 다른 비제한적 예는 1족 금속, 예컨대 나트륨, 또는 암모늄 또는 구아니디늄 이온과 쌍형성된 카르복실산, 술폰산 및 포스폰산의 짝염기를 포함한다.
핵산 전달을 위한 친양쪽성체의 일부 바람직한 실시양태에서, 친양쪽성체는 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는 알짜 양전하를 갖는 군으로부터 선택된 R5를 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)-기반 중합체를 추가로 포함하는 소수성 블록 (H)을 포함하며:
,
여기서 X4는 임의의 적합한 링커이고, y16 및 y17은 각각 독립적으로 1 내지 6으로부터 전형적으로 선택된 임의의 정수이고, R9는 저급 알킬 또는 분지형 알킬 기, 예컨대 CH3, CH2CH3, CH2CH2CH3, CH(CH3)2, H2CH(CH3)2 등으로부터 선택되고, Z-는 전형적으로 약산의 짝염기 또는 할라이드 이온, 예컨대 Cl-, I-, 또는 Br-로부터 선택된 임의의 적합한 반대 음이온이다.
소수성 블록 (H)은 수용액에서 입자 어셈블리를 구동하는 기능을 하고, 따라서, 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체 또는 약물 분자 접합체의 바람직한 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 소수성 아미노산 및/또는 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 아미노산을 포함한다. 화학식 I의 폴리(아미노산)-기반 중합체의 바람직한 실시양태에서, 화학식 I의 폴리(아미노산)-기반 중합체 (또는 올리고머)는 소수성 아미노산 (M) 및/또는 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 아미노산 (N), 및 임의로 스페이서 아미노산 (O) 및/또는 하전된 아미노산 (P)을 포함한다. 펩티드 항원 전달 및/또는 중성 약물 분자의 전달에 사용되는 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체 또는 약물 분자 접합체의 바람직한 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 소수성 아미노산 (M) 및/또는 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 아미노산 (N), 및 임의로 스페이서 아미노산 (O)을 포함하지만, 하전된 아미노산 (P)은 포함하지 않는 화학식 I의 폴리(아미노산)-기반 중합체로부터 전형적으로 선택된다. 대조적으로, 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체 또는 약물 분자 접합체가 핵산 전달 또는 하전된 약물 분자의 전달에 사용되는 경우에, 소수성 블록 (H)은 소수성 아미노산 (M) 및/또는 하전된 아미노산 (P) (여기서 하전된 아미노산의 전하는 핵산 또는 하전된 약물 분자의 전하와 반대임), 및 임의로 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 아미노산 (N) 및 스페이서 아미노산 (O)을 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)-기반 중합체로부터 전형적으로 선택된다. 생물학적 활성의 예상외의 개선으로 이어진 화학식 I의 폴리(아미노산)-기반 중합체 또는 올리고머를 기초로 하는 소수성 블록 (H)의 특정한 조성이 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 전적으로 소수성 단량체 (m)를 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)이다:
.
비제한적 예는 하기를 포함한다:
.
m이 5 (즉, 5개의 단량체 단위)이고, R3이 아민이고, N-말단 아민이 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 가용화 블록 (S)에 연결된, 트립토판으로부터 선택된 소수성 단량체 (M)로 전적으로 구성된 화학식 I의 폴리(아미노산)의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
.
일부 실시양태에서, 약물 분자 (D)는 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하는 소수성 블록 (H)의 N-말단 또는 C-말단을 통해 연결된다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
여기서 폴리(아미노산)는 트립토판으로부터 선택된 소수성 아미노산을 포함하고, R3은 NH2이고, 구조는 하기이다:
.
여기서 X1이 숙시네이트 링커를 통해 폴리(아미노산)에 연결된 PAB-Cit-Val을 포함하는 경우에 구조는 하기이다:
.
대안적으로, X1은 아지드와 DBCO, 예시적인 변형된 알킨 사이의 반응으로부터 생성된 링커 U를 통해 폴리(아미노산)에 연결된 PAB-Cit-Val을 포함하며, 여기서 DBCO 모이어티는 Ahx를 통해 폴리(아미노산)에 연결되고, 구조는 하기이다:
.
본원에서, 본 발명자들은 방향족 아미노산 (예를 들어, 페닐알라닌, 아미노 페닐알라닌, 히스티딘, 트립토판, 티로신, 벤질 글루타메이트) 및/또는 방향족 약물 분자 (예를 들어, 이미다조퀴놀린)를 포함하는 폴리(아미노산)-기반 공중합체를 포함하는 소수성 중합체 또는 올리고머 (H)를 갖는 친양쪽성 공중합체가, 지방족 아미노산으로부터 선택된 소수성 아미노산을 포함하는 폴리(아미노산)와 비교하여, 극성 비양성자성 용매 및 알콜 중에서의 개선된 용해도를 통한 제조성에 있어서 예상외의 개선 뿐만 아니라 개선된 입자 안정성을 갖는다는 예상외의 발견을 보고한다.
추가의 주목할 만한 발견은 소수성 블록 (H)을 포함하는 단량체 단위의 수가 입자 형성에 어떻게 영향을 미치는지에 관한 것이다. 예를 들어, 화학식 S-[B]-[U]-H의 친양쪽성체를 포함하는 (임의로 약물 분자를 추가로 포함하는, 예를 들어 S-[B]-[U]-HD) 입자의 안정한 어셈블리를 보장하기 위해, 적어도 5개의 소수성 아미노산을 포함하는 폴리(아미노산)-기반 소수성 블록 (H)이 전형적으로 필요하였다. 그러나, 예상외로, 방향족 고리를 포함하는 3개만큼 적은 단량체를 갖는 올리고머를 포함하는 폴리(아미노산)-기반 소수성 블록 (H)이 안정한 입자 어셈블리를 구동하기에 충분한 것으로 발견되었다. 특히, 폴리(아미노산)-기반 소수성 블록 (H)을 포함하는 소수성 단량체의 수를 3에서 5개 및 5에서 10개의 소수성 단량체로 증가시키는 것은 개선된 입자 어셈블리로 이어졌다. 소수성 블록 (H)을 포함하는 단량체의 총수 (즉, 단량체의 총수 또는 중합도)를 증가시키는 것은 개선된 입자 안정성으로 이어졌지만, 화학식 I의 단량체의 총수 및 폴리(아미노산)의 조성 둘 다는 또한 제조성뿐만 아니라 안정성에 영향을 미쳤다. 예를 들어, 아릴 기 및/또는 헤테로아릴 기를 포함하는 소수성 아미노산으로부터 선택된 10-30개의 연속 단량체를 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)는 지방족 기를 포함하는 소수성 아미노산으로부터 선택된 10-30개의 연속 단량체를 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)보다 더 신뢰성 있게 제조되었다.
따라서, 폴리(아미노산)-기반 소수성 블록 (H)의 바람직한 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 3개 이상, 바람직하게는 약 3 내지 약 100개의 소수성 아미노산 (M) 및/또는 약물 분자 (D)에 연결된 반응성 아미노산을 포함하지만, 보다 바람직하게는 약 3 내지 30개의 소수성 아미노산 (M) 및/또는 약물 분자 (D)에 연결된 반응성 아미노산을 포함하고, 보다 바람직하게는 소수성 아미노산 및/또는 약물 분자 (D)에 연결된 반응성 아미노산은 아릴 기, 헤테로아릴, 아미노아릴 및/또는 아미노헤테로아릴을 추가로 포함한다.
분지형 아키텍처를 갖는 소수성 블록 (H)
일부 실시양태에서, 친양쪽성 블록 공중합체는 분지형인 소수성 블록 (H)을 포함한다. 특정의 바람직한 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 덴드론을 포함하며, 여기서 초점은 (i) 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 가용화 블록 (S)에, (ii) 직접적으로 또는 연장부 (E1 또는 E2) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 항원 (A)에; (iii) 직접적으로 또는 링커 U를 통해 약물 분자에; 또는 (iv) 캡핑 기에 연결되고, 말단 관능기 (FGt)는 소수성 분자, 예를 들어 소수성 약물 분자, 보다 바람직하게는 방향족 기를 포함하는 소수성 분자, 예를 들어 방향족 기를 포함하는 소수성 약물 분자에 연결된다.
말단 관능기 (FGt)가 소수성 약물 분자에 연결된 것인, 덴드론 아키텍처를 갖는 소수성 블록 (H)을 포함하는 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체 또는 약물 분자 접합체의 비제한적 예가 명확성을 위해 하기에 제공된다:
.
여기서 X1은 존재하거나 부재하고, 존재하는 경우에 임의의 적합한 링커이고, D는 바람직하게는 방향족 기를 포함하는 소수성 약물 분자로부터 선택된 임의의 적합한 약물 분자이고, 초점은 (i) 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 가용화 블록 (S)에, (ii) 직접적으로 또는 연장부 (E1 또는 E2) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 항원 (A)에; (iii) 직접적으로 또는 링커 U를 통해 약물 분자에; 또는 (iv) 캡핑 기에 부착된다.
특정 적용에 대해 특정한 유용성을 갖고/거나 제조 및/또는 생물학적 활성의 예상외의 개선으로 이어지는 덴드론 아키텍처를 갖는 소수성 블록 (H)의 추가의 예가 본 명세서 전반에 걸쳐 제공되어 있다.
소수성 기 및/또는 약물 분자의 밀도 (mol%)
중합체-기반 소수성 블록 (H), 예를 들어 화학식 I의 폴리(아미노산)에 혼입된 소수성 단량체 (예를 들어, 소수성 아미노산 또는 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 단량체)의 밀도 (즉, mol%)는 본 개시내용의 본 발명자들에 의해 입자 안정성 및 생물학적 활성에 주요한 영향을 미치는 것으로 발견되었다. 따라서, 중합체-기반 소수성 블록에 혼입된 소수성 단량체 (예를 들어, 소수성 아미노산 또는 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 단량체)의 밀도 (즉, mol%)는 주의깊게 선택되어야 한다. 일반적으로, 요구되는 소수성 단량체 (예를 들어, 소수성 아미노산 또는 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 단량체)의 밀도 (mol%)는 중합체의 길이 (즉, 중합도)에 반비례한다.
예를 들어, 소수성 단량체 (예를 들어, 소수성 아미노산, M) 및/또는 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 단량체 (예를 들어, 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 아미노산 (N))의 바람직한 밀도 (mol%)는 전형적으로 3개의 단량체를 갖는 중합체 (또는 "올리고머")의 경우 100 mol%; 4개의 단량체를 갖는 중합체 (또는 "올리고머")의 경우 75-100 mol%, 예컨대 4개의 단량체를 갖는 중합체의 경우 75 mol% 또는 100 mol%; 5개의 단량체를 갖는 중합체 (또는 "올리고머")의 경우 60-100 mol%, 예컨대 60 mol%, 80 mol% 또는 100 mol%; 6개의 단량체를 갖는 중합체 (또는 "올리고머")의 경우 50-100 mol%, 예컨대 50 mol%, 66.6 mol%, 83.3 mol% 및 100 mol%; 7개의 단량체를 갖는 중합체 (또는 "올리고머")의 경우 42-100 mol%, 예컨대 42 mol%, 57 mol%, 71 mol%, 85.7 mol% 및 100 mol%; 8개의 단량체를 갖는 중합체 (또는 "올리고머")의 경우 37.5-100 mol%, 예컨대 37.5 mol%, 50 mol%, 75 mol%, 87.5 mol% 및 100 mol%; 9개의 단량체를 갖는 중합체 (또는 "올리고머")의 경우 33.3-100 mol%, 예컨대 33.3 mol%, 44.4 mol%, 55.6 mol%, 66.6 mol%, 77.9 mol%, 88.9 mol% 및 100 mol%; 10개의 단량체를 갖는 중합체 (또는 "올리고머")의 경우 30-100 mol%, 예컨대 30 mol%, 40 mol%, 50 mol%, 60 mol%, 70 mol%, 80 mol%, 90 mol% 및 100 mol%이다. 11 내지 20개의 단량체를 갖는 중합체의 경우 소수성 단량체 (예를 들어, 소수성 아미노산, M) 및/또는 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 단량체 (예를 들어, 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 아미노산 (N))의 바람직한 밀도 (mol%)는 전형적으로 20 mol% 내지 100 mol%, 예컨대 20 mol%, 21 mol%, 22 mol%, 23 mol%, 24 mol%, 25 mol%, 26 mol%, 27 mol%, 28 mol%, 29 mol%, 30 mol%, 31 mol%, 32 mol%, 33 mol%, 34 mol%, 35 mol%, 36 mol%, 37 mol%, 38 mol%, 39 mol%, 40 mol%, 41 mol%, 42 mol%, 43 mol%, 44 mol%, 45 mol%, 46 mol%, 47 mol%, 48 mol%, 49 mol%, 50 mol%, 51 mol%, 52 mol%, 53 mol%, 54 mol%, 55 mol%, 56 mol%, 57 mol%, 58 mol%, 59 mol%, 60 mol%, 61 mol%, 62 mol%, 63 mol%, 64 mol%, 65 mol%, 66 mol%, 67 mol%, 68 mol%, 69 mol%, 70 mol%, 71 mol%, 72 mol%, 73 mol%, 74 mol%, 75 mol%, 76 mol%, 77 mol%, 78 mol%, 79 mol%, 80 mol%, 81 mol%, 82 mol%, 83 mol%, 84 mol%, 85 mol%, 86 mol%, 87 mol%, 88 mol%, 89 mol%, 90 mol%, 91 mol%, 92 mol%, 93 mol%, 94 mol%, 95 mol%, 96 mol%, 97 mol%, 98 mol%, 99 mol% 또는 100 mol%이며, 단 적어도 3개의 소수성 단량체 (M) 또는 소수성 약물에 연결된 반응성 단량체 (N)가 존재하고; 21 내지 30개의 단량체를 갖는 중합체의 경우에는 10-100 mol%, 보다 바람직하게는 20-80 mol%, 예컨대 20 mol%, 21 mol%, 22 mol%, 23 mol%, 24 mol%, 25 mol%, 26 mol%, 27 mol%, 28 mol%, 29 mol%, 30 mol%, 31 mol%, 32 mol%, 33 mol%, 34 mol%, 35 mol%, 36 mol%, 37 mol%, 38 mol%, 39 mol%, 40 mol%, 41 mol%, 42 mol%, 43 mol%, 44 mol%, 45 mol%, 46 mol%, 47 mol%, 48 mol%, 49 mol%, 50 mol%, 51 mol%, 52 mol%, 53 mol%, 54 mol%, 55 mol%, 56 mol%, 57 mol%, 58 mol%, 59 mol%, 60 mol%, 61 mol%, 62 mol%, 63 mol%, 64 mol%, 65 mol%, 66 mol%, 67 mol%, 68 mol%, 69 mol%, 70 mol%, 71 mol%, 72 mol%, 73 mol%, 74 mol%, 75 mol%, 76 mol%, 77 mol%, 78 mol%, 79 mol% 또는 80 mol%이며, 단 적어도 3개의 소수성 단량체 (M) 또는 소수성 약물에 연결된 반응성 단량체 (N)가 존재하고; > 30개의 단량체를 갖는 중합체의 경우에는 5-60 mol%, 보다 바람직하게는 > 30개의 단량체를 갖는 중합체의 경우에는 10-40 mol%, 예컨대 10 mol%, 11 mol%, 12, mol%, 13 mol%, 14 mol%, 15 mol%, 16 mol%, 17 mol%, 18 mol%, 19 mol%, 20 mol%, 21 mol%, 22 mol%, 23 mol%, 24 mol%, 25 mol%, 26 mol%, 27 mol%, 28 mol%, 29 mol%, 30 mol%, 31 mol%, 32 mol%, 33 mol%, 34 mol%, 35 mol%, 36 mol%, 37 mol%, 38 mol%, 39 mol% 및 40 mol%이다.
상기 예에서, 바람직한 실시양태에서, 중합체는 폴리(아미노산)이고, 단량체는 아릴 기, 보다 바람직하게는 헤테로아릴, 아미노아릴 및/또는 아미노헤테로아릴을 포함하는 소수성 단량체 (예를 들어, 소수성 아미노산 및/또는 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 단량체)로부터 선택된다. 추가적으로, 상기 예에서, 소수성 단량체는 소수성 단량체의 총 mol%가 바람직한 범위 내에 속하도록 2개 이상의 단량체, 예를 들어 2개 이상의 별개의 소수성 단량체 (예를 들어, 소수성 아미노산), 또는 소수성 약물에 연결된 1개 이상의 소수성 단량체 및 1개 이상의 반응성 단량체 (예를 들어, 반응성 아미노산)로부터 선택될 수 있다.
중합체-기반 소수성 블록 (H)의 일반적 특성
중합체-기반 소수성 블록 (H)의 평균 분자량은 단량체 (예를 들어, 폴리(아미노산)의 경우 아미노산)의 수 및 조성에 기초하여 용이하게 추정될 수 있고, 전형적으로 약 500 g/mol 내지 약 20,000 g/mol이다. 일부 실시양태에서, 중합체 분자량은 약 1,000 내지 5,000, 또는 약 5,000 내지 10,000, 또는 약 10,000 내지 20,000 g/mol이다.
소수성 중합체 또는 올리고머 (H)의 다분산도 Mw/Mn은 전형적으로 약 1.0 내지 2.0의 범위이고, 이는 사용되는 중합 기술에 좌우된다. 예를 들어, 폴리(아미노산)-기반 소수성 중합체 또는 올리고머 (H)는 전형적으로 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조되고, 중합체가 분자적으로 규정됨에 따라 1.0의 다분산도를 가질 것이다. 쇄 성장 중합에 의해 형성된 중합체는 다분산도 > 1.0을 가질 것이다. 소수성 중합체 또는 올리고머 (H)는 또한 시클릭 단량체를 기초로 하는 중합체, 예컨대 폴리(아미노산)-기반 소수성 중합체 또는 아미노산 N-카르복시무수물 (NCA)을 기초로 하는 올리고머 (H)를 포함할 수 있다.
중합체-기반 소수성 블록 (H)의 크기는 분자량 또는 중합도에 의해 표현될 수 있다. 분자적으로 규정된 단분산 중합체의 경우, 중합체의 길이 (또는 정도 또는 중합도)는 분자량 (예를 들어, 이론치 또는 질량 분광측정법에 의해 실험적으로 결정된 것)을 중합체를 포함하는 단량체 단위(들)의 평균 분자량으로 나눔으로써 계산될 수 있다. 다분산 중합체의 경우, Mn으로 약칭되는 수평균 분자량이 중합도를 추정하는 데 바람직하다. 비제한적 예로서, 25 kDa의 Mn 및 250 g/mol의 평균 단량체 분자량을 갖는 다분산 중합체는 100의 중합도를 가질 것이다. 중합체의 분자량은 또한 중합도에 평균 단량체 분자량을 곱하여 계산할 수 있다.
소수성 블록 (H)의 바람직한 실시양태에서, 분자량 또는 Mn은 바람직하게는 약 0.5 kDa 내지 60 kDa, 예컨대 약 0.5 kDa, 1 kDa, 1.5 kDa, 2 kDa, 2.5 kDa, 3 kDa, 3,5 kDa, 4 kDa, 4,5 kDa, 5 kDa, 6 kDa, 7 kDa, 8 kDa, 9 kDa, 10 kDa, 11 kDa, 12 kDa, 13, kDa, 14 kDa, 15 kDa, 16 kDa, 17 kDa, 18 kDa, 19 kDa, 20 kDa, 21 kDa, 22 kDa, 23 kDa, 24 kDa, 25 kDa, 26 kDa, 27 kDa, 28 kDa, 29 kDa, 30 kDa, 31 kDa, 32 kDa, 33 kDa, 34 kDa, 35 kDa, 36 kDa, 37 kDa, 38 kDa, 39 kDa, 40 kDa, 41 kDa, 42 kDa, 43 kDa, 44 kDa, 45 kDa, 46 kDa, 47 kDa, 48 kDa, 49 kDa, 50 kDa, 51 kDa, 52 kDa, 53 kDa, 54 kDa, 55 kDa, 56 kDa, 57 kDa, 58 kDa, 59 kDa 또는 60 kDa이다. 보다 바람직하게는, 소수성 블록의 분자량은 약 0.5 kDa 내지 약 20 kDa이다. 특정 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 폴리(아미노산)이고, 약 0.5 kDa 내지 약 10 kDa 또는 약 1.5 kDa 내지 약 5 kDa의 분자량을 갖는다.
본원에 기재된 중합체는 임의의 적합한 수단에 의해 합성될 수 있고, 바람직하게는 낮은 다분산도를 갖거나 다분산도를 갖지 않아야 한다. 예를 들어, 본원에 기재된 폴리(아미노산)는 전형적으로 고체-상 펩티드 합성에 의해 생성되고, 다분산도 없이 분자적으로 규정된다. 유사하게, 본원에 기재된 PEG 기반 스페이서 및 덴드론은 제어된 가공에 의해 제조되며, 다분산도가 거의 내지 전혀 없다. 대조적으로, 라디칼 중합에 의해 제조된 중합체는 어느 정도의 다분산도를 가질 것이며, 이는 중량-평균 분자량 Mw를 Mn으로 나눔으로써, 즉, 다분산 지수 (PDI) = Mw/Mn으로 계산될 수 있다. 그러나, 라디칼 중합에 의해 제조된 중합체의 다분산도는 이용되는 중합 기술에 의해 제어될 수 있다. 따라서, 바람직한 실시양태에서, 리빙 중합, 예를 들어 RAFT 중합을 사용하여 2.0 미만, 전형적으로 약 1.01 내지 1.2의 PDI를 갖는 중합체를 합성한다.
가용화 블록
본원에 개시된 친양쪽성체는 특정 온도, pH 및 염 농도에서 수용액 중에서 용해도를 부여하는 기능을 하는 가용화 블록 (S)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 수용액 중에 최대 약 1 - 1,000 mg/mL, 예를 들어 최대 약 1 mg/mL, 약 10 mg/mL, 약 100 mg/mL, 약 200 mg/mL, 또는 약 500 mg/mL, 그러나 전형적으로 1,000 mg/mL 이하로 가용성이다. 일부 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 특정 농도, 온도 및/또는 pH 범위에서 수용액 중에 가용성이지만, 농도, 온도 및/또는 pH의 변화에 반응하여 불용성 또는 덜 가용성이 된다. 바람직한 가용화 블록 (S)은 생리학적 pH (~ pH 7.4) 또는 그 근처, 약 pH 6.5 내지 pH 8.5 또는 약 pH 6.0 내지 pH 9.0, 및 생리학적 온도 (~ 37℃) 또는 그 근처, 예컨대 약 32-40℃, 및 생리학적 염 농도 (~ 10 g/L) 및 염 조성에서 최대 적어도 1 mg/mL 또는 최대 적어도 약 10 mg/mL 또는 최대 적어도 약 100 mg/mL의 농도로 가용성인 분자이다.
가용화 블록은 수용성이고/거나 친수성 특징을 갖는 임의의 분자로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 선형, 분지형 또는 브러시 중합체 (또는 올리고머)로부터 선택된다. 가용화 블록 (S)은 단독중합체 또는 공중합체일 수 있다. 가용화 블록 (S)는 하나의 또는 많은 상이한 유형의 단량체 단위를 포함할 수 있다. 가용화 블록 (S)은 통계적 공중합체 또는 교호 공중합체일 수 있다. 가용화 블록 (S)는 블록 공중합체, 예컨대 A-B 유형일 수 있거나, 또는 중합체는 그라프팅된 공중합체를 포함할 수 있으며, 이에 의해 2개 이상의 중합체가 중합-유형 반응을 통해 연결된다.
가용화 블록 (S)은 자연 발생 및/또는 비-자연 단량체를 포함하는 중합체 및 그의 조합을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 천연 생체중합체로부터 선택된다. 가용화 블록 (S)으로서 선택된 천연 생체중합체는 친수성 아미노산을 포함하는 펩티드 (때때로 폴리(아미노산)로 지칭됨)를 포함할 수 있다. 친수성 아미노산의 비제한적 예는 세린, 술포-세린, 글루탐산, 아스파르트산, 리신, 오르니틴, 아르기닌을 포함한다. 생체중합체는 글리코겐, 셀룰로스, 덱스트란, 알기네이트 및 키토산을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는 친수성 폴리사카라이드로부터 선택될 수 있다.
가용화 블록 (S)을 포함하는 단량체는 아크릴레이트, (메트)아크릴레이트, 아크릴아미드, (메트)아크릴아미드, 알릴 에테르, 비닐 아세테이트, 비닐 아미드, 치환된 스티렌, 아미노산, 아크릴로니트릴, 헤테로시클릭 단량체 (예를 들어, 에틸렌 옥시드), 사카라이드, 포스포에스테르, 포스폰아미드, 술포네이트 에스테르, 술폰아미드 또는 그의 조합으로부터 선택될 수 있다. (메트)아크릴레이트 및 (메트)아크릴아미드 단량체의 구체적 예는 N-2-히드록시프로필(메타크릴아미드) (HPMA) 및 히드록시에틸(메타크릴레이트) (HEMA)를 포함한다. 가용화 블록 (S)에 적합한 다양한 단량체를 하기에 기재한다.
특정 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 합성 또는 천연 폴리(사카라이드), 예컨대 글리코겐, 셀룰로스, 덱스트란, 알기네이트 및 키토산으로부터 선택된 친수성 중합체를 포함한다. 가용화 블록 (S)으로서 사용되는 친수성 중합체는 친양쪽성체, 예를 들어 화학식 S-[B]-[U]-H의 친양쪽성체에 의해 형성된 입자를 안정화시키기에 충분한 표면 피복을 제공하기에 충분한 길이를 가져야 한다. 친수성 중합체를 포함하는 가용화 블록의 바람직한 실시양태에서, 친수성 중합체는 50개 또는 단량체 단위, 예컨대 50 내지 300개, 바람직하게는 50 내지 100개를 포함한다.
선형 중합체를 포함하는 가용화 블록 (H)은 단일 단량체 조성을 포함하는 단독중합체 또는 2개 이상의 별개의 단량체 조성을 갖는 공중합체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 단독중합체는 중성, 친수성 단량체 또는 하전된 단량체, 예를 들어 양성, 음성 또는 쯔비터이온 단량체를 포함한다. 다른 실시양태에서, 공중합체는 중성, 친수성 단량체, 및 양성, 음성 또는 쯔비터이온 단량체, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 선형 중합체를 포함하는 가용화 블록은, 일반적으로 임의의 친수성 기를 지칭하는, 완전한 정수 값의 전하를 운반하지 않는 중성 친수성 기; 중성이지만 정수 값의 양전하 및 정수 값의 음전하를 운반하는 쯔비터이온; 양으로 하전된 기; 및 음으로 하전된 기; 또는 그의 조합을 포함한 임의의 가용화 기 (SG) (또는 "모이어티")에 연결된 단량체를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 일반적으로 친수성 단량체로 기재될 수 있는 중성 친수성 단량체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 친수성 단량체는 화학식 CH2=CR11-C(O)-R10 ("화학식 II")의 (메트)아크릴레이트 또는 (메트)아크릴아미드 (아크릴레이트, 메타크릴레이트, 아크릴아미드 및 메타크릴아미드 포함)로부터 선택되고, 여기서 아크릴 측기 R10은 -OR2, -NHR12 또는 -N(CH3)R12 중 1개 이상으로부터 선택될 수 있고, 여기서 R11은 H 또는 CH3일 수 있고, R12는 임의의 친수성 치환기로부터 독립적으로 선택된다. R12의 비제한적 예는 H (OR13 제외), CH3, CH2CH3, CH2CH2OH, CH2(CH2)2OH, CH2CH(OH)CH3, CHCH3CH2OH 또는 (CH2CH2O)yH를 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 여기서 y는 전형적으로 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 정수의 반복 단위이다.
R10 = NHR12, R11 = CH3, 및 R13 = CH2CH(OH)CH3이 N-2-히드록시프로필(메타크릴아미드) (HPMA)인 화학식 II의 중성 친수성 단량체의 비제한적 예:
.
상기 예, N-(2-히드록시프로필(메타크릴아미드)) (HPMA)는 화학식 II의 중성 친수성 단량체의 예이다.
일부 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 고정된 전하를 갖거나 특정 생리학적 조건 하에 알짜 전하를 갖는 1개 이상의 관능기 ("하전된 관능기")를 함유하는 하전된 단량체를 포함한다. 하전된 단량체의 비제한적 예는 아민, 4급 암모늄, 술폰산, 황산, 술포늄, 인산, 포스폰산, 포스포늄, 카르복실산 및/또는 보론산 관능기를 포함하는 임의의 단량체, 뿐만 아니라 그의 임의의 조합 또는 염 형태를 포함한다.
일부 실시양태에서, 하전된 단량체는 화학식 CH2=CR14-C(O)-R13 ("화학식 III")을 갖는 (메트)아크릴레이트 및 (메트)아크릴아미드로부터 선택된다. 아크릴 측기 R13은 -OR15, -NHR15 또는 -N(CH3)R15로 이루어진 군 중 1개 이상으로부터 선택될 수 있고, 여기서 R14는 H 또는 CH3일 수 있고, R15는 H, 선형 알킬 구조, 예컨대 (CH2)yNH2, (CH2)y-이미다졸, (CH2)y-피리딘 아민, (CH2)y-(퀴놀린-아민), (CH2)y-피리딘 아민, (CH2)y-나프탈렌 아민, (CH2)yCH(NH2)COOH, (CH2)yCOOH, (CH2)yCH(CH3)COOH, (CH2)yC(CH3)2COOH, (CH2)yPO3H2, (CH2)yOPO3H2, (CH2)ySO3H, (CH2)yOSO3H, (CH2)yB(OH)2, CH2N(CH3)2, CH2CH2N(CH3)2, CH2CH2CH2N(CH3)2, CH2N(CH2CH3)2, CH2CH2N(CH2CH3)2, CH2CH2CH2N(CH2CH3)2, CH2N(CH(CH3)2), CH2CH2N((CH(CH3)2), CH2CH2CH2N(CH(CH3)2), CH[CH2N(CH3)2]2, CH(COOH)CHCH2COOH, (CH2)yNH(CH2)jCOOH, (CH2)yN(CH3)(CH2)yCOOH, (CH2)yN+(CH3)2(CH2)yCOOH, (CH2)yN+(CH2-CH3)2(CH2)yCOOH, [CH2CH(CH3)O]5PO3H2, C(CH3)2CH2SO3H, 및 C6H4B(OH)2로부터 선택될 수 있으나 이에 제한되지는 않으며, 여기서 y는 전형적으로 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 정수의 반복 단위이다. 화학식 III의 (메트)아크릴레이트 및 (메트)아크릴아미드의 일부 실시양태에서, 아크릴 측기는 테트라알킬 암모늄 염, 질소 함유 헤테로사이클, 아미노아릴 또는 아미노헤테로아릴을 포함하고, 이는 임의의 적합한 수단을 통해 직접적으로 또는 링커를 통해 단량체에 연결될 수 있다. 아릴, 질소 함유 헤테로아릴 및/또는 아미노헤테로아릴의 비제한적 예는 피롤릴, 이미다졸릴, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 디아제피닐, 인돌릴, 퀴놀리닐, 아미노 퀴놀리닐, 아미노 피리디닐, 퓨리닐, 프테리디닐, 아닐리닐, 아미노 나프틸 등을 포함한다. 화학식 III의 (메트)아크릴레이트 및 (메트)아크릴아미드의 특정의 바람직한 실시양태에서, 아크릴 측기는 카르복실산(들)을 포함하고, 이는 임의의 적합한 수단을 통해 직접적으로 또는 링커를 통해 단량체에 연결될 수 있다. R13 = -OR15, R4 = CH3 및 R15 = H인 화학식 III의 하전된 단량체의 비제한적 예는 하기이다:
.
덴드론-기반 가용화 블록
가용화 블록 (S)의 특정의 바람직한 실시양태는 덴드론 증폭제 ("덴드론")를 포함하며, 여기서 가용화 블록 (S)의 초점은 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 소수성 블록 (H)에 연결되고, 말단 기 (FGt)는 블라인드 말단이고 (비연결됨) 가용화 기로서 기능하거나, 또는 말단 관능기 (FGt)는 가용화 기에 연결되며, 여기서 가용화 기 (SG) (또는 "모이어티")는 일반적으로 완전한 정수 값의 전하를 운반하지 않는 중성 친수성 기; 중성이지만 정수 값의 양전하 및 정수 값의 음전하를 운반하는 쯔비터이온; 양으로 하전된 기; 및 음으로 하전된 기; 또는 그의 조합을 포함한 임의의 친수성 기를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 가용화 블록 (B)은 덴드론 아키텍처를 포함하고, 말단 관능기 (FGt)는 연결되지 않으므로, FGt는 가용화 기 (SG)이다. 다른 실시양태에서, 가용화 블록 (B)은 덴드론 아키텍처를 포함하고, 말단 관능기 (FGt)는 직접적으로 또는 링커를 통해 가용화 기 (SG)에 연결된다.
본원에 보고된 예상외의 발견은 화학식 S-[B]-[U]-H의 친양쪽성체의 아키텍처 및 조성이 입자 안정성 및 이러한 입자로의 약물 로딩에 현저한 영향을 미쳤다는 것이다. 따라서, 본 개시내용의 저자들은 덴드론 아키텍처를 갖는 가용화 블록을 포함하는 화학식 S-[B]-[U]-H의 친양쪽성체가 선형 아키텍처를 갖는 가용화 블록 (S)을 포함하는 화학식 S-[B]-[U]-H의 친양쪽성체와 비교하여 개선된 유체역학적 안정성, 보다 높은 약물 로딩 및 증가된 생물학적 활성을 갖는 나노입자를 형성하였음을 관찰하였다. 따라서, 친양쪽성체의 바람직한 실시양태에서, 친양쪽성체는 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 (U)를 통해 간접적으로 소수성 블록 (H)에 연결된 단일 ("코어" 또는 "초점") 관능기를 갖는, 덴드론 증폭제를 추가로 포함하는 가용화 블록 (S)을 포함하며, 추가적으로 여기서 덴드론은 2개 이상의 가용화 기 (SG), 바람직하게는 2 내지 32개의 가용화 기, 보다 바람직하게는 4 내지 8개의 가용화 기를 갖는다. 덴드론-기반 가용화 블록 (S)의 바람직한 조성은 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있다.
덴드론 아키텍처를 갖는 가용화 기 (SG) 포함 가용화 블록 (S)은 친양쪽성체에 의해 형성된 입자의 용해도 및 따라서 안정성을 개선시키는 기능을 할 뿐만 아니라, 혈액 단백질 상호작용, 세포 섭취 및 세포내 트래픽킹에 영향을 미치며, 이는 약동학뿐만 아니라 안전성 및 효능에 영향을 미친다. 따라서, 가용화 기 (SG)는 적용 요구를 충족시키기 위해 주의깊게 선택되어야 한다.
특정한 가용화 기 (SG) 조성물이 생물학적 활성의 예상외의 개선으로 이어진다는 것이 확인되었다. 따라서, (pH 7.4에서) 알짜 음전하를 갖는 카르복실산으로부터 선택된 가용화 기 (SG)를 갖는 덴드론을 포함하는 가용화 기를 갖는 친양쪽성체를 포함하는 입자는 단핵구 집단에 의해 효율적으로 포식되는 것으로 발견되었다. 대조적으로, 선형 중합체 또는 알짜 중성 또는 거의 중성 전하를 갖는 덴드론을 포함하는 가용화 기를 갖는 친양쪽성체를 포함하는 입자는, 선형 중합체 또는 덴드론이 면역 세포 집단에 의한 섭취를 촉진하는 C-유형 렉틴 수용체에 결합하는 중성 당 분자 또는 다양한 세포 집단에 의한 각각 GLUT1 및 아시알로당단백질을 통한 섭취를 촉진하는 다른 당 분자, 예컨대 글루코스 또는 갈락토스를 포함하지 않는 한, 일반적으로 면역 세포, 예를 들어 항원 제시 세포 및 다른 세포 집단에 의해 불량하게 포식되는 것으로 발견되었다. 또한, 선형 중합체 또는 알짜 양전하를 갖는 덴드론을 포함하는 가용화 기를 갖는 친양쪽성체를 포함하는 입자는 다양한 세포 집단, 특히 항원 제시 세포에 의해 광범위하게 흡수되는 것으로 발견되었다. 따라서, 가용화 블록 (S) 전하 및 조성은 생물학적 활성을 조정하기 위해 가용화 기 (SG)를 변화시키는 것에 의해 조율될 수 있다. 가용화 기의 바람직한 조성은 하기 및 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있다.
선형 폴리(아미노산)-기반 가용화 블록
일부 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 하전된 아미노산, 친수성 아미노산 또는 그의 조합을 포함하는 선형 폴리(아미노산)이다. 폴리(아미노산)를 포함하는 가용화 블록 (S)은 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 (U)를 통해 간접적으로 N- 또는 C-말단 또는 측쇄를 통해 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리(아미노산)를 포함하는 가용화 블록 (S)은 직접적으로 또는 연장부 (E1 또는 E2) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 펩티드 항원 접합체에 연결된다. 폴리(아미노산)를 포함하는 가용화 블록은, 일반적으로 임의의 친수성 기를 지칭하는, 완전한 정수 값의 전하를 운반하지 않는 중성 친수성 기; 중성이지만 정수 값의 양전하 및 정수 값의 음전하를 운반하는 쯔비터이온; 양으로 하전된 기; 및 음으로 하전된 기; 또는 그의 조합을 포함한 임의의 가용화 기 (SG) (또는 "모이어티")에 연결된 아미노산을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 알짜 음전하를 가지며, 1개 이상의 음으로 하전된 아미노산을 포함한다. 특정 실시양태에서, 알짜 음전하를 갖는 가용화 블록 (S)은 1 내지 20개의 음으로 하전된 아미노산, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개, 보다 바람직하게는 약 2 내지 12개의 음으로 하전된 아미노산을 포함한다.
비제한적 예에서, 12개의 아스파르트산 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어, Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp (서열식별번호: 32)는 -12의 알짜 음전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 11개의 아스파르트산 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어, Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp (서열식별번호: 33)는 -11의 알짜 음전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 10개의 아스파르트산 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어, Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp (서열식별번호: 34)는 -10의 알짜 음전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 9개의 아스파르트산 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어, Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp (서열식별번호: 35)는 -9의 알짜 음전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 8개의 아스파르트산 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어, Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp (서열식별번호: 36)는 -8의 알짜 음전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 7개의 아스파르트산 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어, Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp (서열식별번호: 37)는 -7의 알짜 음전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 6개의 아스파르트산 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어, Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp (서열식별번호: 38)는 -6의 알짜 음전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 5개의 아스파르트산 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어, Asp-Asp-Asp-Asp-Asp (서열식별번호: 39)는 -5의 알짜 음전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 4개의 아스파르트산 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어, Asp-Asp-Asp-Asp (서열식별번호: 40)는 -4의 알짜 음전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 3개의 아스파르트산 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어, Asp-Asp-Asp는 -3의 알짜 음전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 2개의 아스파르트산 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어, Asp-Asp는 -2의 알짜 음전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용된다. 상기 예에서, 아스파르트산 (Asp)은 글루탐산, 술포-세린 또는 포스포-세린을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 적합한 음으로 하전된 아미노산으로 대체될 수 있으며, 여기서 음으로 하전된 아미노산은 동일하거나 상이할 수 있다.
특정 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 알짜 양전하를 가지며, 1개 이상의 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 특정 실시양태에서, 알짜 양전하를 갖는 가용화 블록 (S)은 1 내지 20개의 양으로 하전된 아미노산, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개, 보다 바람직하게는 약 2 내지 12개의 양으로 하전된 아미노산을 포함한다. 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체가 알짜 양전하를 갖는 것인 백신의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 1 내지 20개의 양으로 하전된 아미노산을 추가로 포함하는 가용화 블록 (S)을 포함한다.
비제한적 예에서, 12개의 리신 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어 Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (서열식별번호: 41)는 +12의 알짜 양전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 11개의 리신 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어 Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (서열식별번호: 42)는 +11의 알짜 양전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 10개의 리신 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어 Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (서열식별번호: 43)는 +10의 알짜 양전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 9개의 리신 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어 Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (서열식별번호: 44)는 +9의 알짜 양전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 8개의 리신 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어 Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (서열식별번호: 45)는 +8의 알짜 양전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 7개의 리신 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어 Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (서열식별번호: 46)는 +7의 알짜 양전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 6개의 리신 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어 Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (서열식별번호: 47)는 +6의 알짜 양전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 5개의 리신 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어 Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (서열식별번호: 48)는 +5의 알짜 양전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 4개의 리신 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어 Lys-Lys-Lys-Lys (서열식별번호: 49)는 +4의 알짜 양전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 3개의 리신 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어 Lys-Lys-Lys는 +3의 알짜 양전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용되고; 2개의 리신 단량체를 포함하는 폴리(아미노산), 예를 들어 Lys-Lys는 +2의 알짜 양전하를 갖는 가용화 블록 (S)을 제조하는 데 사용된다. 상기 예에서, 리신 (Lys)은 트리메틸-리신, 오르니틴 또는 아르기닌을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 적합한 양으로 하전된 아미노산으로 대체될 수 있으며, 여기서 양으로 하전된 아미노산은 동일하거나 상이할 수 있다. 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체가 알짜 양전하를 갖는 것인 백신의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 리신 및 오르니틴을 포함하나 이에 제한되지는 않는 1급 아민을 포함하는 1 내지 20개의 양으로 하전된 아미노산을 추가로 포함하는 가용화 블록 (S)을 포함한다.
쯔비터이온 펩티드
추가의 실시양태에서, 가용화 블록 (H)은 음으로 및 양으로 하전된 아미노산 둘 다, 또는 양으로 및 음으로 하전된 관능기 둘 다를 갖는 아미노산을 포함한다. 반대 전하의 아미노산, 예를 들어 Lys-Asp를 포함하는 디펩티드는 pH 7.4에서 알짜 중성, 0의 전하를 갖는 것으로 예측되기 때문에 쯔비터이온 디펩티드로 지칭된다. 1개 이상의 쯔비터이온 디펩티드는 i) 수용해도를 개선시키고, ii) 특정 pH 범위에 걸쳐 우세한 전하 (예를 들어, 알짜 음성 또는 알짜 양성)를 제공하는 수단으로서 가용화 블록 (S)에 포함될 수 있다. 예를 들어, 쯔비터이온 디펩티드는 pH 7.4에서 펩티드 서열의 전하를 증가 또는 감소시키지 않으면서 펩티드 서열의 친수성 특징을 증가시키는 데 사용될 수 있다. 그러나, 쯔비터이온은 특정한 pH에서 알짜 전하를 부여하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 이러한 예에서 N-말단 아민 및 C-말단 카르복실산의 기여를 제외하고, 쯔비터이온 디펩티드, Lys-Asp는 pH 7.4에서 0의 알짜 전하를 갖지만, pH < 4에서 +1의 알짜 전하 및 pH > 10에서 -1의 알짜 전하를 갖는다. 1개 이상의 쯔비터이온 디펩티드; 예를 들어, 1개의 디펩티드, Lys-Asp; 2개의 디펩티드 Lys-Asp-Lys-Asp (서열식별번호: 50); 3개의 디펩티드, Lys-Asp-Lys-Asp-Lys-Asp (서열식별번호: 51) 등이 폴리(아미노산)-기반 가용화 블록의 서열에 부가될 수 있다. 상기 예에서, 리신 (Lys)은 트리메틸-리신, 오르니틴 또는 아르기닌을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 적합한 양으로 하전된 아미노산으로 대체될 수 있고, 아스파르트산 (Asp)은 글루탐산, 술포-세린 또는 포스포-세린을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 적합한 음으로 하전된 아미노산으로 대체될 수 있으며, 여기서 양으로 또는 음으로 하전된 아미노산은 동일하거나 상이할 수 있다.
폴리(아미노산)를 포함하는 가용화 블록 (S)은 i) 수용해도를 개선시키고 ii) 하전된 관능기 사이의 거리를 증가시켜 불완전한 이온화를 방지하는 기능을 하는 소형의 비-하전된 친수성 아미노산 또는 친수성 링커, 예를 들어 에틸렌 옥시드를 추가적으로 포함할 수 있다. 예를 들어, 중합체 상의 1개의 관능기의 이온화는 국부 효과를 통해 이웃 관능기의 pKa에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 제2 아민에 매우 근접한 아민의 양성자화는 제2 아민의 짝산의 pKa의 감소를 유발할 수 있다. 이웃 관능기의 이온화 전위에 대한 국부 효과의 영향을 감소시키기 위해, 링커 분자를 사용하여 하전된 관능기 사이의 거리를 증가시킬 수 있다. 링커 분자는 1 내지 5개의 소형의 비-하전된 친수성 아미노산, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 및 5개의 아미노산을 포함할 수 있다. 대안적으로, 링커는 1 내지 4개 또는 그 초과의 단량체 단위, 예를 들어 1, 2, 3 또는 4개의 에틸렌 옥시드 단량체 길이의 에틸렌 옥시드 (즉, PEG) 링커를 포함할 수 있다. 폴리(아미노산)를 포함하는 가용화 블록의 특정 실시양태에서, 1 내지 2개의 비-벌키 비-하전된 친수성 아미노산은 이웃하는 하전된 아미노산 사이에 위치하고, 여기서 아미노산은 아미드 결합을 통해 연결된다. 특정 실시양태에서, 세린은 폴리(아미노산)-기반 가용화 블록 (S)을 구성하는 하전된 아미노산의 전부 또는 일부 사이에 위치한다.
가용화 기 (SG)
가용화 기 (SG) (또는 "모이어티")는 완전한 정수 값의 전하를 운반하지 않는 중성 친수성 기; 중성이지만 정수 값의 양전하 및 정수 값의 음전하를 운반하는 쯔비터이온; 양으로 하전된 기; 및 음으로 하전된 기; 또는 그의 조합을 포함한 임의의 친수성 기로서 폭넓게 정의된다.
특정의 바람직한 실시양태에서, 가용화 블록 (B)는 1개 이상의 당 단량체, 예를 들어 모노사카라이드, 디사카라이드, 트리사카라이드, 올리고사카라이드 등을 포함하는 당 분자로부터 선택된 가용화 기 (SG)를 포함한다. 당 분자로부터 선택된 가용화 기의 비제한적 예는 글루코스, 글루코사민, N-아세틸 글루코사민, 갈락토스, 갈락토사민, N-아세틸 갈락토사민, 만노스 및 시알릴 루이스X (sLeX)를 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 이는 임의의 적합한 부착 지점에서 임의의 적합한 링커를 통해 가용화 블록에 연결될 수 있고, 예를 들어:
이며, 여기서 X는 존재할 수 있거나 부재할 수 있는 임의의 적합한 링커 분자이고, 존재하는 경우에 저급 알킬 또는 PEG 기로부터 전형적으로 선택된다.
일부 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 pH 약 7.4의 수성 완충제 중에서 알짜 양전하 또는 알짜 음전하를 갖는 가용화 기 (SG)를 포함한다. 가용화 기 (SG)의 전하는 가용화 블록 (S)이 분산된 용액의 pH에 의존적이거나 독립적일 수 있고, 이는 예를 들어, 각각 pH 의존적 및 pH 독립적인 3급 아민 및 4급 암모늄 화합물의 경우이다. 수용액 중 특정 pH에서 알짜 양전하 또는 알짜 음전하를 갖거나 또는 pH 비의존성 전하를 갖는 가용화 기의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서 X는 존재할 수 있거나 부재할 수 있는 임의의 적합한 링커 분자이고, 존재하는 경우에 이는 저급 알킬 또는 PEG로부터 전형적으로 선택되고, y18 및 y19는 각각 독립적으로 1 내지 6으로부터 전형적으로 선택된 임의의 정수이고, R9는 저급 알킬 또는 분지형 알킬 기, 예컨대 CH3, CH2CH3, CH2CH2CH3, CH(CH3)2, H2CH(CH3)2 등으로부터 선택되고, Z-는 약산의 짝염기 또는 할라이드 이온, 예컨대 Cl-, I-, 또는 Br-로부터 전형적으로 선택된 임의의 적합한 반대 음이온이다.
특정의 바람직한 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 특정 pH에서 수성 조건에서 0 알짜 전하 또는 알짜 0 전하를 갖는 쯔비터이온으로부터 선택된 가용화 기 (SG)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 pH 7.4에서 0 알짜 전하를 갖지만 감소된 pH, 예를 들어 약 5.5 내지 7.0의 종양 pH에서 알짜 양전하를 갖는 쯔비터이온으로부터 선택된 가용화 기 (SG)를 포함한다. 쯔비터이온을 포함하는 가용화 기의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서 X는 존재할 수 있거나 부재할 수 있는 임의의 적합한 링커이고, 존재하는 경우에 이는 전형적으로 저급 알킬 또는 PEG 기로부터 선택되고, y20 및 y21은 각각 독립적으로 전형적으로 1 내지 6으로부터 선택된 임의의 정수이고, R9는 저급 알킬 또는 분지형 알킬 기, 예컨대 CH3, CH2CH3, CH2CH2CH3, CH(CH3)2, H2CH(CH3)2 등으로부터 선택되고, R16, R17 및 R18은 각각 독립적으로 -H, CH3, F 및 -NO2로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 가용화 기 (SG)는 표적화 모이어티 및/또는 약물 분자를 추가로 포함할 수 있다. 비제한적 예로서, 특정 당 분자는 용해도를 개선시킬 수 있고, 따라서 가용화 기로서 기능할 수 있고; 추가적으로, 당 분자는 세포 표면 수용체에 결합하고/거나 생리학적 효과를 발휘할 수 있고, 따라서 또한 표적화 모이어티 및/또는 약물 분자 (D)로서 기능할 수 있다. 따라서, 만노스를 포함하는 가용화 기 (SG)는 만노스 수용체에 결합하고, 따라서 이러한 수용체를 발현하는 세포 및 조직을 표적화하고; 추가적으로, 만노스 수용체에 대한 결합은 식세포작용을 촉진할 수 있고, 따라서 생리학적 효과를 발휘할 수 있다. 2가지 이상의 기능을 수행할 수 있는 가용화 기 (SG)의 추가의 비제한적 예는 친수성 펩티드, 당펩티드, 항체, 항체의 단편, 나노바디, 핵산 압타머, 및 둘 다 친수성이고 특정 세포 또는 조직에 결합하는 관련 분자를 포함한 표적화 분자를 포함한다.
가용화 블록에의 가용화 기 (SG)의 연결
가용화 기 (SG)는 임의의 적합한 링커 분자를 포함한 임의의 적합한 수단을 통해 가용화 블록 (S)에 연결될 수 있다. 덴드론-기반 가용화 블록 (S)의 특정의 바람직한 실시양태에서, 말단 관능기는 카르복실산이고, 가용화 기는 에스테르 또는 보다 바람직하게는 아미드 결합을 통해 연결된다. 덴드론-기반 가용화 블록 (S)의 특정의 다른 바람직한 실시양태에서, 말단 관능기는 아민이고, 가용화 기는 아미드 또는 카르바메이트 결합을 통해 말단 관능기에 연결된다.
바람직한 실시양태에서, 가용화 기 (SG)는 전형적으로 저급 알킬 또는 PEG 기로부터 선택된 적합한 링커 X를 통해 공유 결합을 통해 가용화 블록 (S)에 연결된다. SG를 S에 연결하는 데 바람직한 특히 적합한 링커 X는 X5로 지칭된다. 비제한적 예에서, 아민을 포함하는 단량체를 포함하는 중합체 또는 아민을 포함하는 말단 관능기 (FGt), 예를 들어 -NH2를 포함하는 덴드론으로부터 선택된 가용화 블록 (S)은 활성화된 카르복실산 (LG-C(O)-R19)과의 반응을 통해 적합한 링커, X5를 통해 가용화 기 (SG)에 공유 연결되어 -NH-C(O)-R19를 생성하거나; 활성화된 혼합 카르보네이트 (LG-C(O)-O-R19) 또는 클로로포르메이트 (Cl-C(O)-O-R19)와의 반응을 통해 NH-C(O)-O-R19를 생성하거나; 알데히드 또는 케톤 (CR22(O)-R19)과의 반응을 통해 화학식 (CR)22(-NH)-R19의 쉬프 염기를 생성하거나; 알켄 (C(R22)(R23)=C(R24)(R19)과의 반응을 통해 마이클-부가 생성물 (예를 들어, NH-C(R22)(R23)-CH(R24)(R19) 또는 -N(C(R22)(R23)-CH(R24)(R19))2)을 생성하거나; 또는 알킬 또는 아릴 할라이드 (LG-R19, 여기서 LG = Cl, Br 또는 I)와의 반응을 통해 -NH-R19, -N(-R19)2 및/또는 -N+(-R19)3을 생성한다. 추가의 비제한적 예에서, 카르복실산을 포함하는 단량체를 포함하는 중합체 또는 카르복실산을 포함하는 말단 관능기 (FGt), 예를 들어 -COOH (또는 -C(O)-LG)를 포함하는 덴드론으로부터 선택된 가용화 블록 (S)은 아민 (NH2-R19)과의 반응을 통해 적합한 링커, X5를 통해 가용화 기 (SG)에 공유 연결되어 -C(O)-NH-R19를 생성하거나, 또는 메틸아민 (R19-N(CH3)(H) 또는 R19-NHMe)과의 반응을 통해 -C(O)-N(CH3)(R19)를 생성한다.
상기 비제한적 예에서, LG는 임의의 적합한 이탈기이고, R19는 -(CH2)t-SG, -(CH2CH2O)t-CH2CH2-SG, -(CH2)t-C(O)-NH-(CH2)u-SG, -(CH2CH2O)tCH2CH2C(O)-NH-(CH2)u-SG, -(CH2)t-NH-C(O)-NH-(CH2)u-SG 및 (CH2CH2O)tCH2CH2NH-C(O)-(CH2)u-SG로부터 선택될 수 있으나 이에 제한되지는 않으며, 여기서 t 및 u는 각각 독립적으로 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6으로부터 전형적으로 선택된 정수이다. S를 SG에 연결하는 데 바람직한 X5 (즉, S-X5-SG)는 전형적으로 -NH-(CH2)t-, -NH-(CH2CH2O)t-CH2CH2-, -NH-(CH2)t-C(O)-NH-(CH2)u-, -NH-(CH2CH2O)tCH2CH2C(O)-NH-(CH2)u-, NH-(CH2)t-NH-C(O)-NH-(CH2)u-, -NH(CH2CH2O)tCH2CH2NH-C(O)-(CH2)u-, -C(O)-(CH2)t-, -C(O)-(CH2CH2O)t-CH2CH2-, -C(O)-(CH2)t-C(O)-NH-(CH2)u-, C(O)-(CH2CH2O)tCH2CH2C(O)-NH-(CH2)u-, C(O)-(CH2)t-NH-C(O)-NH-(CH2)u- 또는 -C(O)-(CH2CH2O)tCH2CH2NH-C(O)-(CH2)u-로부터 선택되고, 여기서 t 및 u는 각각 독립적으로 전형적으로 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6으로부터 선택된 정수이다.
덴드론 아키텍처를 갖는 가용화 블록 (S)을 포함하며, 여기서 덴드론은 제2 세대이고, FG1-CH(R1)2로부터 선택된 단량체 단위를 포함하고, 여기서 FG1 (및 초점)은 NH2이고, R1은 (OCH2CH2)y-FG2이고, y는 1이고, FG2 (및 FGt)는 COOH이고, 여기서 말단 관능기 (FGt) 카르복실산은 NH2-R19에 연결되어 -C(O)-NH2-R19를 생성하고, 여기서 R19는 -(CH2CH2O)t-CH2CH2-SG이고, t = 1이고, 가용화 기는 α 글루코스로부터 선택된 것인 친양쪽성체의 비제한적 예가 명확성을 위해 하기에 제공된다:
.
여기서 가용화 블록 (S)은 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 소수성 블록 (H)에 연결되며, 이는 약물 분자를 추가로 포함할 수 있다 (예를 들어, H-D). 상기 예에서, X5는 -NH-R19이고, R19는 -(CH2CH2O)t-CH2CH2-SG이며, 이는 -NH-(CH2CH2O)t-CH2CH2- (SG는 나타내지 않음)로 기재될 수 있고, 여기서 t = 1이고, SG는 α 글루코스이다.
특정 적용에 대해 특정한 유용성을 갖고/거나 제조 및/또는 생물학적 활성의 예상외의 개선으로 이어지는 덴드론 아키텍처를 갖는 소수성 블록 (H)의 추가의 예가 본 명세서 전반에 걸쳐 제공되어 있다.
하전된 관능기의 수의 영향
일부 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 알짜 음전하를 가지며, pH 7.4에서 음전하를 운반하는 1개 이상의 관능기를 포함한다. 알짜 음전하를 운반하는 적합한 가용화 블록 (S)은 생리학적 pH, 약 7.4 이하의 pH에서 산의 짝염기로서 발생하는 관능기 (예를 들어, 약 7.4 이하의 pKa를 갖는 관능기)를 보유하는 분자를 포함한다. 이들은 카르복실레이트, 술페이트, 포스페이트, 포스포르아미데이트 및 포스포네이트를 보유하는 분자를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 카르복실레이트를 보유하는 가용화 블록 (S)은 글루탐산, 아스파르트산, 피루브산, 락트산, 글리콜산, 글루쿠론산, 시트레이트, 이소시트레이트, 알파-케토-글루타레이트, 숙시네이트, 푸마레이트, 말레이트, 옥살로아세테이트, 부티레이트, 메틸부티레이트, 디메틸부티레이트 및 그의 유도체로부터 선택된 카르복실산으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 1 내지 20개의 음으로 하전된 관능기, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 음으로 하전된 관능기, 그러나 전형적으로 8개 이하의 음으로 하전된 관능기, 바람직하게는 4 내지 8개의 음으로 하전된 관능기를 갖는 분자를 포함한다.
일부 실시양태에서, 가용화 블록 (S)은 알짜 양전하를 갖고 양으로 하전된 관능기를 포함한다. 알짜 양전하를 운반하는 적합한 가용화 블록 (S)은 pH 7.4에서 약염기의 짝산으로서 발생하는 분자를 포함하며, 여기서 염기의 짝산의 pKa는 7.4 초과이다. 이들은 1급, 2급 및 3급 아민, 뿐만 아니라 4급 암모늄, 구아니디늄, 포스포늄 및 술포늄 관능기를 보유하는 분자를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 암모늄 관능기를 보유하는 적합한 분자는, 예를 들어 이미다졸륨 및 테트라-알킬 암모늄 화합물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 가용화 블록은 pH와 무관한 영구 양전하를 운반하는 4급 암모늄 또는 술포늄 화합물을 포함한다.
일부 실시양태에서, 가용화 기 (S)는 1-20개의 양으로 하전된 관능기, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 양으로 하전된 관능기를 포함한다. 친양쪽성체의 경우에, 가용화 블록 (S)은 전형적으로 8개 이하의 하전된 관능기, 바람직하게는 4 내지 8개의 양으로 하전된 관능기를 갖는다.
펩티드 항원 접합체의 경우, 가용화 블록 (S)의 하전된 관능기의 수는 전형적으로, 생리학적 pH 7.4에서의 펩티드 항원 접합체의 알짜 전하가 +2 이상 또는 +3 이상이도록 보장하기 위해 선택되고, 가용화 블록은 전형적으로 리신 또는 오르니틴을 포함하는 폴리(아미노산)로부터 선택된다. 가용화 블록 (S)을 포함하지만 친양쪽성 담체 분자가 결여된 (즉, 친양쪽성체, 예를 들어 S-[B]-[U]-H가 부재함) 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신 조성물의 경우, 펩티드 항원 접합체의 가용화 블록 (S) 상에 존재하는 하전된 관능기의 수는 전형적으로, 생리학적 pH 7.4에서의 펩티드 항원 접합체의 알짜 전하가 +5 이상 또는 +6 이상, 바람직하게는 +6 내지 +12, 보다 바람직하게는 +8 내지 +10이도록 보장하기 위해 선택되고, 가용화 블록은 전형적으로 리신 또는 오르니틴을 포함하는 폴리(아미노산)로부터 선택된다. 가용화 블록을 포함하는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신 조성물의 경우, 여기서 백신은 친양쪽성 담체 분자 (예를 들어, 화학식 S-[B]-[U]-H의 "친양쪽성체")를 추가로 포함하고, 펩티드 항원 접합체의 가용화 블록 (S) 상에 존재하는 하전된 관능기의 수는 전형적으로, 생리학적 pH 7.4에서의 펩티드 항원 접합체의 알짜 전하가 +2 이상 또는 +3 이상이지만, 전형적으로 +10 이하이도록 보장하기 위해 선택되고, 가용화 블록은 전형적으로 리신 또는 오르니틴을 포함하는 폴리(아미노산)로부터 선택된다. 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체가 가용화 블록 (S)을 포함하고 백신이 친양쪽성 담체 분자 (예를 들어, 화학식 S-[B]-[U]-H의 "친양쪽성체")를 추가로 포함하는 것인, 정맥내 투여를 위해 의도되는 백신 조성물의 경우, 펩티드 항원 접합체의 가용화 블록 (S) 상에 존재하는 하전된 관능기의 수는 전형적으로, 생리학적 pH 7.4에서의 펩티드 항원 접합체의 알짜 전하가 +2 이상 또는 +3 이상이지만, 전형적으로 +6 이하, 보다 바람직하게는 +3 내지 +5이도록 보장하기 위해 선택되고, 가용화 블록은 전형적으로 리신 또는 오르니틴을 포함하는 폴리(아미노산)로부터 선택된다. 특정 알짜 전하를 달성하기 위해 펩티드 항원 접합체를 설계하고 제조하는 방법은 린(Lynn) 및 동료들에 의해 (문헌 [Lynn et al., Nature Biotechnology. 2020] 참조) 및 특허 출원 WO2018187515에 기재되어 있고, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
반대-이온 선택
하전된 분자 (C)에 관한 추가의 고려사항은 반대이온 선택이다. 양전하를 갖는 관능기를 보유하는 하전된 분자 (C)의 비제한적 예는 할라이드, 예컨대 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드 음이온, 및 산의 짝염기, 예컨대 포스페이트, 술페이트, 술파이트 및 카르복실레이트 음이온, 예컨대 포르메이트, 숙시네이트, 아세테이트 및 트리플루오로아세테이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 음전하를 갖는 관능기를 보유하는 하전된 분자 (C)에 적합한 반대이온은 수소 및 알칼리 금속 및 알칼리 토금속, 예컨대 예를 들어 나트륨, 칼륨, 마그네슘 및 칼슘, 또는 약염기의 짝산, 예컨대 암모늄 화합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 암모늄 염을 형성하는 데 사용되는 적합한 아민은 암모늄, 1급 아민, 예컨대 트리스(히드록시메틸)아미노메탄 ("TRIS"), 디-알킬 아민에 기초한 2급 아민, 예컨대 디메틸 아민 및 디에틸 아민, 트리-알킬 아민에 기초한 3급 아민, 예컨대 트리메틸아민, 디-이소프로필 에틸아민 (DIPEA) 및 트리에틸아민 (TEA), 뿐만 아니라 4급 암모늄 화합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예상외로, 음전하를 갖는 친양쪽성 블록 공중합체의 반대이온으로서 산의 암모늄 염으로서 트리스(히드록시메틸)아미노메탄 (또는 트리스)은 수혼화성 유기 용매, 예컨대 DMSO, DMF, 아세톤 및 에탄올, 및 수용액 둘 다에서 개선된 용해도를 갖는다. 이러한 이유로, 트리스(히드록시메틸)아미노메탄의 양성자화된 형태는 본 개시내용의 친양쪽성 블록 공중합체 상에 존재하는 산의 짝염기의 염의 제조에 사용하기에 바람직한 반대-이온이다.
항원
면역원성 조성물, 예를 들어 백신의 항원은 대상체에서 면역 반응을 유도하는 데 유용한 임의의 항원일 수 있고, 종종 펩티드 항원 (A)으로부터 선택되지만, 또한 소분자 (때때로 합텐으로 지칭됨)로부터 선택될 수 있다. 펩티드 항원 (A)은 적용에 요구되는 면역 반응의 성질에 따라 염증유발 또는 면역관용성 면역 반응을 유도하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 종양-연관 항원, 예컨대 자기-항원, 신생항원 또는 종양-연관 바이러스 항원 (예를 들어, HPV E6/E7)이다. 다른 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 감염성 질환 항원, 예컨대 바이러스, 박테리아, 진균 또는 원충 미생물 병원체로부터 단리된 단백질로부터 유래된 펩티드이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 알레르기 또는 자가면역을 유발하는 것으로 공지되어 있거나 의심되는 알레르겐 또는 자가항원으로부터 유래된 펩티드이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 심혈관 질환에 수반되는 단백질로부터 선택된 자기-항원이다. 또 다른 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 독소 및/또는 기분전환 약물의 유사체이다.
펩티드 항원 (A)은 대상체에서 면역 반응, 예컨대 T 세포 또는 B 세포 반응을 유도할 수 있는 아미노산 서열 또는 펩티드 모방체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 번역후 변형 (예를 들어, 글리코실화, 산화, 인산화, 시트룰린화 및/또는 호모시트룰린화)을 갖는 아미노산 또는 아미노산들, 비-천연 아미노산 또는 펩티드-모방체를 포함한다. 펩티드 항원은 항원 또는 예측된 항원, 즉 T 세포 및/또는 B 세포 에피토프를 갖는 항원을 갖는, 천연, 비-천연 또는 번역후 변형된 아미노산, 펩티드-모방체, 또는 그의 임의의 조합의 임의의 서열일 수 있다. 펩티드 항원 (A)은 또한 당펩티드를 비롯한 번역후 변형된 펩티드 항원 (A)을 포함한다.
본 개시내용의 본 발명자들은 예상외로, 자연 발생 펩티드 항원 서열에서 발견되는 특정 아미노산, 예를 들어 시스테인 및 메티오닌을 그러한 서열에서 자연적으로 발견되지 않는 아미노산, 예를 들어 알파 아미노부티르산 (aBut) 및 노르류신 (nLeu)으로 각각 대체하는 것이 백신 제조 및 생체내 면역원성에서 예상외의 개선을 발생시켰음을 발견하였다. 따라서, 펩티드 항원 (A)의 바람직한 실시양태에서, 자연 발생 시스테인 아미노산은 알파 아미노부티르산으로 대체되고, 메티오닌 아미노산은 노르류신으로 대체된다.
백신, 예를 들어, 관용을 유도하기 위한 백신 조성물을 포함하는 면역원성 조성물은 각각 상이한 펩티드 항원 (A) 조성을 갖는 1개 이상의 상이한 펩티드 항원 접합체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 각각 고유한 펩티드 항원 (A) 조성을 갖는 최대 50개의 상이한 펩티드 항원 접합체를 갖는 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 2개 이상의 상이한 펩티드 항원 접합체, 예를 들어, 최대 약 100개의 상이한 펩티드 항원 접합체, 전형적으로 약 40개 이하의 펩티드 항원 접합체, 예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 또는 40개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 모자이크 입자를 포함한다. 다른 실시양태에서, 면역원성 조성물은 5개의 상이한 펩티드 항원 접합체를 포함하는 모자이크 입자를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 면역원성 조성물은 단일 (1) 펩티드 항원 접합체 조성물을 포함하는 단일 입자 조성물을 포함한다.
펩티드 항원 (A)의 길이는 특정한 적용에 좌우되고, 전형적으로 약 5 내지 약 100개 아미노산이다. 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 약 7 내지 35개의 아미노산, 예를 들어, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35개의 아미노산이다. 또 다른 경우에, 펩티드 항원은 전장 폴리펩티드, 예컨대 재조합적으로 발현될 수 있는 단백질 항원이다. 심혈관 또는 신경변성 질환을 유발하는 전장 종양-연관 항원, 감염성 질환 항원, 알레르겐, 자가항원 또는 자기-항원에 기초한 펩티드 항원 (A)은 전장 서열로서 또는 중첩 펩티드 풀로서 전달될 수 있으며, 여기서 중첩 펩티드 풀의 각각의 펩티드 항원 (A)은 100개 이하의 아미노산 길이, 바람직하게는 35개 이하의 아미노산 길이이다.
일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 7 내지 35개의 아미노산, 전형적으로 약 25개이다. 따라서, 25개 초과의 아미노산 길이의 종양-연관 항원, 감염성 질환 항원, 알레르겐 또는 자가-항원, 예를 들어, 100개의 아미노산 항원의 경우, 항원은 7 내지 35개의 아미노산, 예를 들어, 25개의 아미노산, 펩티드 항원 (A)으로 나뉠 수 있고, 여기서 각각의 펩티드 항원 (A)은 고유한 조성의 아미노산을 함유하거나; 또는 펩티드 항원 (A)은 중첩 펩티드 풀일 수 있고, 여기서 항원은 중첩 서열을 갖는 7 내지 35개의 아미노산, 예를 들어, 25개의 아미노산, 펩티드 항원 (A)의 세트 수로 나뉜다. 예를 들어, 100개의 아미노산 항원을 포함하는 중첩 펩티드 풀은 각각 12개의 아미노산만큼 상쇄된 8개의 25개의 아미노산 펩티드 항원 (A)으로 나뉠 수 있다 (즉, 100개의 아미노산 펩티드 서열을 포함하는 각각의 후속 25개의 아미노산 펩티드는 선행 펩티드로부터 제13 아미노산 위치에서 시작함). 관련 기술분야의 통상의 기술자는 항원으로부터 펩티드 풀을 생성하기 위한 많은 순열이 존재한다는 것을 이해한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 MHC-I 또는 MHC-II 분자에 결합하는 것으로 인 실리코 예측되는 (또는 실험적으로 측정되는) 종양-연관 항원, 감염성 질환 항원, 알레르겐 또는 자가항원의 부분을 포함하는 최소 CD8 또는 CD4 T 세포 에피토프이다. MHC-I 또는 MHC-II 결합을 예측하기 위한 알고리즘은 널리 이용가능하다 (문헌 [Lundegaard et al., Nucleic Acids Res., 36:W509-W512, 2008] 및 http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHC/ 참조). 특정한 대상체에 대한 개인맞춤형 요법의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체를 구성하는 펩티드 항원 (A)은 그러한 대상체에 의해 발현되는 특정한 MHC-I 대립유전자에 대해 < 1,000 nM 결합 친화도를 갖는 것으로 예측되는 전형적으로 7-13개의 아미노산 펩티드인 종양-연관 항원, 감염성 질환 항원, 알레르겐 또는 자가항원으로부터의 최소 CD8 T 세포 에피토프를 포함할 수 있다. 특정한 대상체에 대한 개인맞춤형 요법의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 그러한 대상체에 의해 발현되는 특정한 MHC-II 대립유전자에 대해 < 1,000 nM 결합 친화도를 갖는 것으로 예측되는 8-20개의 아미노산 펩티드, 또는 보다 바람직하게는 10-16개의 아미노산 펩티드인 종양-연관 항원, 감염성 질환 항원, 알레르겐 또는 자가항원으로부터의 최소 CD4 T 세포 에피토프를 포함할 수 있다. 특정의 바람직한 실시양태에서, 최소 CD8 또는 CD4 T 세포 에피토프가 종양-연관 항원, 감염성 질환 항원, 알레르겐 또는 자가항원에 대해 확인될 수 없는 경우에, 또는 종양-연관 항원, 감염성 질환 항원, 알레르겐 또는 자가항원이 다중 CD8 및 CD4 T 세포 에피토프를 함유하는 경우에, 펩티드 항원 (A)은 16-35개의 아미노산, 예를 들어 모든 가능한 CD8 또는 CD4 T 세포 에피토프를 함유할 수 있도록 최대 35개의 아미노산일 수 있다.
일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 종양 항원으로부터 유래된다. 종양 항원은 건강한 세포 상에 존재하지만 종양 세포에 의해 우선적으로 발현되는 자기-항원, 또는 종양 세포에 특이적이고 개별 환자에 대해 고유한 이상 단백질인 신생항원을 포함한다. 종양 항원은 또한 바이러스 항원을 포함할 수 있다.
바람직한 자기-항원은 종양 세포에 의해 우선적으로 발현되는 항원, 예컨대 CLPP, 시클린-A1, MAGE-A1, MAGE-C1, MAGE-C2, SSX2, XAgE1b/GAGED2a, 멜란-A/MART-1, TRP-1, 티로시나제, CD45, 글리피칸-3, IGF2B3, 칼리크레인 4, KIF20A, 렝신, 멜로에, MUC5AC, 서바이빈, 전립선 산 포스파타제, NY-ESO-1 및 MAGE-A3을 포함한다.
신생항원은 암의 본질적인 유전적 불안정성으로부터 발생하며, 이는 DNA, RNA 스플라이스 변이체에서의 돌연변이 및 번역후 변형에서의 변화로 이어질 수 있고, 이는 모두 잠재적으로 신생항원 또는 때때로 예측 신생항원으로 집합적으로 지칭되는 신생 단백질 생성물로 이어진다. DNA 돌연변이는 비동의 미스센스 돌연변이, 넌센스 돌연변이, 삽입, 결실, 염색체 역위 및 염색체 전위를 비롯한 DNA에 대한 변화를 포함하며, 이는 모두 잠재적으로 신규 유전자 생성물 및 따라서 신생항원을 발생시킨다. RNA 스플라이스 부위 변화는 신규 단백질 생성물을 발생시킬 수 있고, 미스센스 돌연변이는 항원성일 수 있는 번역후 변형 (예를 들어, 인산화)에 허용성인 아미노산을 도입할 수 있다. 종양 세포의 불안정성은 또한 후성적 변화 및 특정 전사 인자의 활성화를 발생시킬 수 있으며, 이는 건강한 비-암성 세포에 의해서는 발현되지 않는 종양 세포에 의한 특정 항원의 선택적 발현을 발생시킬 수 있다.
개인맞춤형 암 백신에 사용되는 펩티드 항원 접합체는 종양 세포에 고유한 종양-연관 항원의 부분을 포함하는 펩티드 항원 (A)을 포함해야 한다. 미스센스 돌연변이로부터 발생하는 신생항원을 포함하는 펩티드 항원 (A)은 1개 이상의 뉴클레오티드 다형성에 의해 코딩되는 아미노산 변화를 포괄하여야 한다. 프레임시프트 돌연변이, 스플라이스 부위 변이체, 삽입, 역위 및 결실로부터 발생하는 신생항원을 포함하는 펩티드 항원 (A)은 신규 펩티드 서열 및 신규 펩티드 서열의 접합부를 포괄하여야 한다. 신규 번역후 변형을 갖는 신생항원을 포함하는 펩티드 항원 (A)은 포스페이트 또는 글리칸과 같은 번역후 변형(들)을 보유하는 아미노산을 포괄하여야 한다. 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 돌연변이로 인해 발생한 아미노산 변화 또는 신규 접합부에 플랭킹된 어느 하나의 측면 상에 최대 25개의 아미노산을 포함한다. 특정 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 단일 뉴클레오티드 다형성으로 인해 발생한 아미노산 변화에 플랭킹된 어느 하나의 측면 상에 12개의 아미노산을 포함하는 신생항원 서열, 예를 들어 25개의 아미노산 펩티드이며, 여기서 제13의 아미노산이 단일 뉴클레오티드 다형성으로 인해 생성된 아미노산 잔기이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 신규 번역후 변형된 아미노산에 플랭킹된 어느 하나의 측면 상에 12개의 아미노산을 포함하는 신생항원 서열, 예를 들어 25개의 아미노산 펩티드이며, 여기서 제13의 아미노산이 신규 번역후 변형 부위로부터 생성된 아미노산 잔기이다. 다른 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 삽입, 결실 또는 역위에 의해 생성된 신규 접합부에 플랭킹된 어느 하나의 측면 상에 0-12개의 아미노산을 포함하는 신생항원 서열이다. 일부 경우에, 신규 서열로부터 생성된 신생항원을 포함하는 펩티드 항원 (A)은 또한 발생할 수 있는 신규 접합부의 어느 하나의 측면 상에 0-25개의 아미노산을 포함한 전체 신규 서열을 포괄할 수 있다.
본 개시내용의 면역원성 조성물을 위한 펩티드 항원 (A)으로서 적합한 종양-연관 항원은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 익숙한 다양한 기술을 통해 확인될 수 있다. 종양-연관 항원은 건강한 세포, 즉 대상체로부터의 비-암성 세포와 비교하여 종양 세포의 단백질 발현을 평가함으로써 확인될 수 있다. 단백질 발현을 평가하기 위한 적합한 방법은 면역조직화학, 면역형광, 웨스턴 블롯, 크로마토그래피 (즉, 크기-배제 크로마토그래피), ELISA, 유동 세포측정법 및 질량 분광측정법을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 종양 세포에 의해서는 우선적으로 발현되지만 건강한 세포에 의해서는 그렇지 않거나 또는 제한된 수의 건강한 세포에 의해 발현되는 단백질 (예를 들어, CD20)이 적합한 종양-연관 항원이다. RNA로서 발현되고 환자 항원 제시 세포 (APC) 상의 MHC-I 또는 MHC-II 대립유전자에 결합할 것으로 예측되는 펩티드를 생산하는 단백질-코딩 DNA에서 돌연변이를 확인하기 위한 환자 종양 생검의 DNA 및 RNA 서열분석에 이은 생물정보학도 또한 본 개시내용의 면역원성 조성물을 위한 펩티드 항원 (A)으로서 적합한 종양-연관 항원을 확인하는 데 사용될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 면역원성 조성물을 위한 펩티드 항원 (A)으로서 적합한 종양-연관 항원은 질량 분광측정법을 사용하여 확인된다. 적합한 펩티드 항원 (A)은 환자 종양 생검으로부터 MHC 분자로부터 용리 후에 질량 분광측정법에 의해 확인된 펩티드이며, 동일한 대상체로부터의 건강한 조직으로부터의 것은 아니다 (즉, 펩티드 항원은 종양 세포 상에만 존재하며 동일한 대상체로부터의 건강한 세포에는 존재하지 않음). 질량 분광측정법은 종양-연관 항원을 확인하기 위해 단독으로 또는 다른 기술과 조합되어 사용될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 개시된 발명의 실시를 위한 펩티드 항원 (A)으로서 적합한 종양-연관 항원, 예컨대 신생항원을 확인하는 많은 방법이 존재한다는 것을 인식한다 (문헌 [Yadav et al., Nature, 515:572-576, 2014] 참조).
바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)으로서 사용된 종양-연관 항원은 신생물성 세포의 집단 내에서 클론성이거나 또는 거의 클론성이며, 이는 다른 측면에서 불균질한 것으로 간주될 수 있다.
개인맞춤형 암 백신접종 스킴에서 펩티드 항원 (A)으로서 사용하기 위해 선택된 종양-연관 항원은 종양 내에서의 펩티드-MHC 결합 및/또는 인 실리코 예측된 MHC 결합 친화도 및 RNA 발현 수준의 질량 분광측정법 확인에 기초하여 선택될 수 있다. 이들 데이터는 종양-연관 항원이 종양 세포에 의해 발현 및 제시되고 따라서 T 세포에 적합한 표적일 것인지 여부에 대한 정보를 제공한다. 이러한 기준은 개인맞춤형 암 백신에 사용되는 펩티드 항원 (A)을 선택하는 데 사용될 수 있다.
50개 초과의 종양-연관 신생항원을 갖는 고도로 돌연변이된 종양을 갖는 환자의 경우, 하향-선택 방법을 사용하여 펩티드 항원 접합체를 포함하는 개인맞춤형 암 백신에 사용하기 위한 펩티드 항원 (A)을 선택할 수 있다. 일부 실시양태에서, 하향-선택 방법을 사용하여 종양 세포 내에서 가장 높은 MHC 결합 친화도 및 RNA 발현 수준을 갖는 것으로 예측되는 에피토프를 포함하는 펩티드 항원 (A)을 선택한다. 추가의 기준이 종양-연관 자기-항원 또는 신생항원의 선택에 적용될 수 있다. 예를 들어, 자가면역으로 이어질 수 있는, 다른 자기-항원과 반응하는 T 세포로 이어지는 펩티드 항원 (A)의 예측된 면역원성 또는 예측된 능력이 고려되는 추가의 기준이다. 예를 들어, 종양-연관 항원을 포함하고 높은 예측된 면역원성을 갖지만 또한 자가면역으로 이어질 낮은 잠재력을 갖는 펩티드 항원 (A)이 개인맞춤형 암 백신에 사용하기 위한 잠재적 펩티드 항원 (A)을 선택하는 데 사용되는 기준이다. 일부 실시양태에서, 건강한 세포 상에서 발견되는 자기-항원과 반응하는 T 세포 또는 항체 반응을 유발할 것으로 예상되는 신생항원은 펩티드 항원 (A)으로서 사용하기 위해 선택되지 않는다. 예를 들어, 20-50개 미만의 예측된 신생항원을 갖는 환자의 경우, 하향 선택 방법은 중요하지 않을 수 있고, 따라서 모든 20-50개의 예측된 신생항원이 개인맞춤형 암 백신에서 펩티드 항원 (A)으로서 사용될 수 있다.
암 백신은 환자-특이적 종양-연관 항원 및/또는 환자 사이에 공유되는 종양-연관 항원을 포함하는 펩티드 항원 (A)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 종양-연관 항원은 보존된 자기-항원, 예컨대 NY-ESO-1 (고환암) 또는 gp100 (흑색종)일 수 있거나, 또는 항원은 건강한 세포에 의해서는 전형적으로 발현되지 않지만 특정 암 환자 사이에 보존되는 잠재적 에피토프, 예컨대 Na17 (흑색종)일 수 있다. 본 개시내용의 면역원성 조성물은 우연히 예측되는 것보다 더 빈번하게 발생하는 특정 유전자 또는 유전자 영역에서의 빈번한 돌연변이인 소위 핫-스팟 돌연변이로부터 발생하는 펩티드 항원 (A)을 포함할 수 있다. 핫 스팟 돌연변이의 비제한적 예는 흑색종, 유두상 갑상선 및 결장직장 암종에 공통인 BRAF 단백질에서의 V600E 돌연변이, 또는 가장 흔한 돌연변이 중 하나인 KRAS G12 돌연변이, 예컨대 KRAS G12C를 포함한다. 다수의 적합한 자기-항원뿐만 아니라 핫스팟 돌연변이로부터 발생하는 신생항원이 공지되어 있고, 본원에 참조로 포함된다: 문헌 [Chang et al., Nature Biotechnology, 34:155-163, 2016; Vigneron, N., et al., Cancer Immunology, 13:15-20, 2013] 참조.
일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 혈액 종양으로부터의 것일 수 있다. 혈액 종양의 비제한적 예는 급성 백혈병 (예컨대 11q23-양성 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병, 급성 골수 백혈병 및 골수모구성, 전골수구성, 골수단핵구성, 단핵구성 및 적백혈병), 만성 백혈병 (예컨대 만성 골수구성 (과립구성) 백혈병, 만성 골수 백혈병, 및 만성 림프구성 백혈병), 진성 다혈구혈증, 림프종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종 (무통성 및 고등급 형태), 다발성 골수종, 발덴스트롬 마크로불린혈증, 중쇄 질환, 골수이형성 증후군, 모발상 세포 백혈병 및 골수이형성증을 포함한 백혈병을 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 고형 종양으로부터의 것일 수 있다. 고형 종양, 예컨대 육종 및 암종의 비제한적 예는 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종, 및 다른 육종, 활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장 암종, 림프성 악성종양, 췌장암, 유방암 (기저 유방 암종, 관 암종 및 소엽성 유방 암종 포함), 폐암, 난소암, 전립선암, 간세포성 암종, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암종, 한선 암종, 수질성 갑상선 암종, 유두상 갑상선 암종, 크롬친화세포종 피지선 암종, 유두상 암종, 유두상 선암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 신세포 암종, 간세포암, 담관 암종, 융모막암종, 윌름스 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 정상피종, 방광 암종, 및 CNS 종양 (예컨대 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종, 핍지교종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종 및 망막모세포종)을 포함한다. 여러 예에서, 종양은 흑색종, 폐암, 림프종 유방암 또는 결장암이다.
일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 유방암, 예컨대 관 암종 또는 소엽성 암종으로부터의 종양-연관 항원이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 전립선암으로부터의 종양-연관 항원이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 피부암, 예컨대 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 카포시 육종 또는 흑색종으로부터의 종양-연관 항원이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 폐암, 예컨대 선암종, 세기관지폐포 암종, 대세포 암종 또는 소세포 암종으로부터의 종양-연관 항원이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 뇌암, 예컨대 교모세포종 또는 수막종으로부터의 종양-연관 항원이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 결장암으로부터의 종양-연관 항원이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 간암, 예컨대 간세포성 암종으로부터의 종양-연관 항원이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 췌장암으로부터의 종양-연관 항원이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 신장암, 예컨대 신세포 암종으로부터의 종양-연관 항원이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 고환암으로부터의 종양-연관 항원이다.
일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 전암성 상태, 예컨대 상피내 암종의 변이체, 또는 외음부 상피내 신생물, 자궁경부 상피내 신생물, 또는 질 상피내 신생물로부터 유래된 종양-연관 항원이다.
일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 감염원, 예컨대 바이러스, 박테리아 또는 진균으로부터의 항원이다. 추가의 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 감염원으로부터 유래된 펩티드 또는 당펩티드; 예를 들어, HIV 외피 융합 펩티드 또는 HIV로부터의 V3 또는 V1/V2 당펩티드이다. 일부 실시양태에서, 항원은 플라비바이러스, 예컨대 뎅기, 웨스트 나일 바이러스, 지카 바이러스, C형 간염 등; 코로나바이러스, 예컨대 MERS, SARS 또는 SARS-COV-2 바이러스; 파라믹소바이러스, 예컨대 볼거리, 홍역, 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV), 인간 파라인플루엔자 바이러스, 뿐만 아니라 인수공통 바이러스, 예컨대 뉴캐슬병 바이러스; 필로바이러스, 예컨대 에볼라 또는 마르부르크 바이러스; 인간 유두종바이러스; 헤파드나바이러스, 예컨대 B형 간염; 오르토믹소바이러스, 예컨대 인플루엔자; 렌티바이러스, 예컨대 HIV; 및 다른 바이러스 유래 단백질 또는 당단백질로부터 유래된 펩티드 항원이다.
HPV에 대한 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원은 MHQKRTAMFQDPQERPRKLPQLCTELQTT, PRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQL, HDIILECVYCKQQLLRREVYDFAFRDLCI, RREVYDFAFRDLCIVYRDGNPYAVCDKCL, YRDGNPYAVCDKCLKFYSKISEYRHYCYS, FYSKISEYRHYCYSLYGTTLEQQYNKPLC, YGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINCQKPLCP, LLIRCINCQKPLCPEEKQRHLDKKQRFHN, EKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCR, IRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQL, MHGDTPTLHEYMLDLQPETTDLYCYEQ, DLQPETTDLYCYEQLNDSSEEEDEI, YEQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDR, DEIDGPAGQAEPDRAHYNIVTFCCKCD, RAHYNIVTFCCKCDSTLRLCVQSTHVDIRTLE, LCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP 및 QLYQTCKAAGTCPSDVIPKI로부터 선택된다. HPV에 대한 백신의 바람직한 실시양태에서, 자연 발생 펩티드 항원의 1개 이상의 시스테인 및/또는 메티오닌 잔기는 각각 알파-아미노부티르산 ("B") 및/또는 노르류신 ("n")으로 대체된다. 비제한적 예는 nHQKRTAnFQDPQERPRKLPQLBTELQTT nHQKRTAnFQDPQERPRKLPQLCTELQTT, MHQKRTAMFQDPQERPRKLPQLBTELQTT, PRKLPQLBTELQTTIHDIILEBVYBKQQL, HDIILEBVYBKQQLLRREVYDFAFRDLBI, RREVYDFAFRDLBIVYRDGNPYAVBDKBL, YRDGNPYAVBDKBLKFYSKISEYRHYBYS, FYSKISEYRHYBYSLYGTTLEQQYNKPLB, YGTTLEQQYNKPLDLLIRBINBQKPLBP, LLIRBINBQKPLBPEEKQRHLDKKQRFHN, EKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRCnSCCR, EKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRBnSBBR, EKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRBMSBBR,IRGRWTGRCnSCCRSSRTRRETQL, IRGRWTGRBnSBBRSSRTRRETQL, IRGRWTGRBMSBBRSSRTRRETQL, nHGDTPTLHEYnLDLQPETTDLYCYEQ, nHGDTPTLHEYnLDLQPETTDLYBYEQ, nHGDTPTLHEYnLDLQPETTDLYMYEQ, DLQPETTDLYBYEQLNDSSEEEDEI, YEQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDR, DEIDGPAGQAEPDRAHYNIVTFBBKBD, RAHYNIVTFBBKBDSTLRLBVQSTHVDIRTLE, LCVQSTHVDIRTLEDLLnGTLGIVCPICSQKP, LBVQSTHVDIRTLEDLLnGTLGIVBPIBSQKP, LBVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVBPIBSQKP 및 QLYQTBKAAGTBPSDVIPKI 또는 적어도 6개의 아미노산 길이, 바람직하게는 적어도 9개의 아미노산을 갖는 그의 임의의 단편, 또는 그의 유도체를 포함한다.
HPV+ 암을 비롯한 HPV에 대한 백신의 특정의 다른 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원은 ALQAIELQLTLETIYNSQYSNEKWTLQDV, NSQYSNEKWTLQDVSLEVYLTAPTGCIKK, SVTVVEGQVDYYGLYYVHEGIRTYFVQFK, LKGDANTLKCLRYRFKKHCTLYTAVSSTWHWT, KHKSAIVTLTYDSEWQRDQFLSQVKIPKT, MHQKRTAMFQDPQERPRKLPQLCTELQTT, PRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQL, HDIILECVYCKQQLLRREVYDFAFRDLCI, RREVYDFAFRDLCIVYRDGNPYAVCDKCL, YRDGNPYAVCDKCLKFYSKISEYRHYCYS, FYSKISEYRHYCYSLYGTTLEQQYNKPLC, YGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINCQKPLCP, CPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCR, MHGDTPTLHEYMLDLQPETTDLYCYEQ, AGQAEPDRAHYNIVTFCCKCDSTLRLCVQ 및 LCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP로부터 선택되고, 여기서 바람직한 실시양태에서 1개 이상의 시스테인 및/또는 메티오닌 잔기는 각각 알파-아미노부티르산 및/또는 노르류신으로 대체되어, 예를 들어 ALQAIELQLTLETIYNSQYSNEKWTLQDV, NSQYSNEKWTLQDVSLEVYLTAPTGBIKK, SVTVVEGQVDYYGLYYVHEGIRTYFVQFK, LKGDANTLKBLRYRFKKHBTLYTAVSSTWHWT, KHKSAIVTLTYDSEWQRDQFLSQVKIPKT, nHQKRTAnFQDPQERPRKLPQLBTELQTT, PRKLPQLBTELQTTIHDIILEBVYBKQQL, HDIILEBVYBKQQLLRREVYDFAFRDLBI, RREVYDFAFRDLBIVYRDGNPYAVBDKBL, YRDGNPYAVBDKBLKFYSKISEYRHYBYS, FYSKISEYRHYBYSLYGTTLEQQYNKPLB, YGTTLEQQYNKPLBDLLIRBINBQKPLBP, BPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWTGRBnSBBR, nHGDTPTLHEYnLDLQPETTDLYBYEQ, AGQAEPDRAHYNIVTFBBKBDSTLRLBVQ 및 LBVQSTHVDIRTLEDLLnGTLGIVBPIBSQKP이다.
전립선암에 대한 암 백신의 일부 실시양태에서, 암 백신은 전립선 특이적 항원 (PSA), APLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP의 단편으로부터 선택된 펩티드 항원을 포함한다. 특정의 바람직한 실시양태에서, PSA의 단편으로부터 선택된 펩티드 항원 (A)은 전형적으로, 임의로 중첩될 수 있는 PSA의 7 내지 55개의 아미노산 스트레치로부터 선택된다. 비제한적 예는 CGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPE, SLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRP, PCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
전립선암에 대한 암 백신의 일부 실시양태에서, 암 백신은 전립선 산 포스파타제 (PAP), FFWLDRSVLAKELKFVTLVFRHGDRSPIDTFPTDPIKESSWPQGFGQLTQLGMEQHYELGEYIRKRYRKFLNESYKHEQVYIRSTDVDRTLMSAMTNLAALFPPEGVSIWNPILLWQPIPVHTVPLSEDQLLYLPFRNCPRFQELESETLKSEEFQKRLHPYKDFIATLGKLSGLHGQDLFGIWSKVYDPLYCESVHNFTLPSWATEDTMTKLRELSELSLLSLYGIHKQKEKSRLQGGVLVNEILNHMKRATQIPSYKKLIMYSAHDTTVSGLQMALDVYNGLLPPYASCHLTELYFEKGEYFVEMYYRNETQHEPYPLMLPGCSPSCPLERFAELVGPVIPQDWSTECMTTNSHQGTEDSTD의 단편으로부터 선택된 펩티드 항원을 포함한다. 특정의 바람직한 실시양태에서, PAP의 단편으로부터 선택된 펩티드 항원 (A)은 전형적으로, 임의로 중첩될 수 있는 PAP의 7 내지 55개의 아미노산 스트레치로부터 선택된다. 비제한적 예는 RTLMSAMTNLAALFPPEGVSIWNPILLWQPIPVHT, PILLWQPIPVHTVPLSEDQLLYLPFRNCPRFQELE, ATEDTMTKLRELSELSLLSLYGIHKQKEKSRLQGG, LQGGVLVNEILNHMKRATQIPSYKKLIMYSAHDTT, MALDVYNGLLPPYASCHLTELYFEKGEYFVEMYYR, YFEKGEYFVEMYYRNETQHEPYPLMLPGCSPSCPL을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
전립선암에 대한 암 백신의 일부 실시양태에서, 암 백신은 STEAP1, MESRKDITNQEELWKMKPRRNLEEDDYLHKDTGETSMLKRPVLLHLHQTAHADEFDCPSELQHTQELFPQWHLPIKIAAIIASLTFLYTLLREVIHPLATSHQQYFYKIPILVINKVLPMVSITLLALVYLPGVIAAIVQLHNGTKYKKFPHWLDKWMLTRKQFGLLSFFFAVLHAIYSLSYPMRRSYRYKLLNWAYQQVQQNKEDAWIEHDVWRMEIYVSLGIVGLAILALLAVTSIPSVSDSLTWREFHYIQSKLGIVSLLLGTIHALIFAWNKWIDIKQFVWYTPPTFMIAVFLPIVLIFKSILFLPCLRKKILKIRHGWEDVTKINKTEICSQL의 단편으로부터 선택된 펩티드 항원을 포함한다. 특정의 바람직한 실시양태에서, STEAP1의 단편으로부터 선택된 펩티드 항원 (A)은 전형적으로, 임의로 중첩될 수 있는 STEAP1의 7 내지 55개의 아미노산 스트레치로부터 선택된다. 비제한적 예는 LFPQWHLPIKIAAIIASLTFLYTLLREVIHPLATS, YTLLREVIHPLATSHQQYFYKIPILVINKVLPMVS, RKQFGLLSFFFAVLHAIYSLSYPMRRSYRYKLLNWAYQ, EDAWIEHDVWRMEIYVSLGIVGLAILALLAVTSIP, LAVTSIPSVSDSLTWREFHYIQSKLGIVSLLLGTI, DIKQFVWYTPPTFMIAVFLPIVLIFKSILFLPCLR을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
전립선암에 대한 암 백신의 일부 실시양태에서, 암 백신은 5T4, SSPTSSASSFSSSAPFLASAVSAQPPLPDQCPALCECSEAARTVKCVNRNLTEVPTDLPAYVRNLFLTGNQLAVLPAGAFARRPPLAELAALNLSGSRLDEVRAGAFEHLPSLRQLDLSHNPLADLSPFAFSGSNASVSAPSPLVELILNHIVPPEDERQNRSFEGMVVAALLAGRALQGLRRLELASNHFLYLPRDVLAQLPSLRHLDLSNNSLVSLTYVSFRNLTHLESLHLEDNALKVLHNGTLAELQGLPHIRVFLDNNPWVCDCHMADMVTWLKETEVVQGKDRLTCAYPEKMRNRVLLELNSADLDCDPILPPSLQTSYVFLGIVLALIGAIFLLVLYLNRKGIKKWMHNIRDACRDHMEGYHYRYEINADPRLTNLSSNSDV의 단편으로부터 선택된 펩티드 항원을 포함한다. 특정의 바람직한 실시양태에서, 5T4의 단편으로부터 선택된 펩티드 항원 (A)은 전형적으로, 임의로 중첩될 수 있는 5T4의 7 내지 55개의 아미노산 스트레치로부터 선택된다. 비제한적 예는 SPTSSASSFSSSAPFLASAVSAQPPLPDQCPALCE, RNLTEVPTDLPAYVRNLFLTGNQLAVLPAGAFARR, ALQGLRRLELASNHFLYLPRDVLAQLPSLRHLDLS, LSNNSLVSLTYVSFRNLTHLESLHLEDNALKVLHN, DCDPILPPSLQTSYVFLGIVLALIGAIFLLVLYLN을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
인플루엔자에 대한 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원은 RNNILRTQESE 및 LNDKHSNGTIKDRSPYR, SWRNNILRTQES, DNWHGSNRP, DNPRPNDKTGS 및 DPNGWTGTDNNFSI, 또는 적어도 6개의 아미노산 길이, 바람직하게는 적어도 9개의 아미노산 길이를 갖는 그의 임의의 단편, 또는 그의 유도체를 포함하나 이에 제한되지는 않는 최소 면역원으로부터 선택된다.
B형 간염에 대한 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원은 QLDPAFRAG, RGLYFPAGL 및 STGPCRTCMTK, 또는 적어도 6개의 아미노산 길이, 바람직하게는 적어도 9개의 아미노산 길이를 갖는 그의 임의의 단편, 또는 그의 유도체를 포함하나 이에 제한되지는 않는 최소 면역원으로부터 선택된다.
HIV에 대한 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원은 AVGIGAVFL, EINCTRPNNNTRPGEIIGDIRQAHCNISRA 또는 YNKRKRIHIGPGRAFYTTKNIIG를 포함하나 이에 제한되지는 않는 최소 면역원으로부터 선택된다.
말라리아에 대한 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원은 PADGNPDPNANPNVD, NPDPNANPNVDPNAN, NANPNVDPNANPNVD, NANPNANPNANPNAN, DPNANPNVDPNA, KQPADGNPDPNANPNV, EDNEKLRKPKHKKLKQPADGNPDPNANPNVDPNAN, KLRKPKHKKLKQPADGNPDP 또는 적어도 6개의 아미노산 길이, 바람직하게는 적어도 9개의 아미노산을 갖는 그의 임의의 단편, 또는 그의 유도체를 포함하나 이에 제한되지는 않는 최소 면역원으로부터 선택된다.
SARS에 대한 백신의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원은 TESNKKFLPFQQFGRDIA, SQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGF, SQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVT, PSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGF, DYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTN, LYNSASFSTFKCYGVSPTKL, SNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLK, YRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGS, ISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPL, VEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQ 및 SNNLDSKVGGNYNYLYRLFRGSGIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQ 또는 적어도 6개의 아미노산 길이, 바람직하게는 적어도 9개의 아미노산을 갖는 그의 임의의 단편, 또는 그의 유도체로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 펩티드 항원 (A)은 자가항원을 나타낸다. 자가항원은 환자 자신의 MHC-I 및/또는 MHC-II 분자와 관련하여 제시된 자기-항원에 대한 자가반응성에 대해 대상체 자신의 T 세포를 스크리닝하는 것에 기초하여 확인 및 선택될 수 있다. 대안적으로, 펩티드 항원은 (i) 대상체 자신의 MHC-I 및/또는 MHC-II 분자에 결합하는 것에 대해 예측된 높은 친화도를 갖고 (ii) 발현되고/거나 대상체의 자가면역 증후군의 원인이 되는 병리상태와 연관된 것으로 공지된 잠재적 자가항원을 예측하기 위해 인 실리코 방법을 사용하여 선택될 수 있다. 다른 실시양태에서, 펩티드 항원은 알레르겐으로부터 유래된 CD4 에피토프를 나타내고, 환자 자신의 MHC-II 분자에 대해 높은 결합 친화도를 갖는 펩티드 항원에 기초하여 선택된다.
일부 실시양태에서, 자가항원은 자가면역 반응에 의해 손상되고 있는 조직에 대해 특이적이다. 일부 실시양태에서, 자가항원은 광범위하게 발현된다. 일부 실시양태에서, 자가항원은 염증, 예컨대 열 쇼크 단백질에 의해 유도된다. 모든 경우에, 펩티드는 스플라이스 변이체 또는 번역후 변형 또는 단백질분해 프로세싱의 결과로서 1종 이상의 이소형을 포함하는 단백질 서열로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원은 공여자 조직으로부터 선택되고 이식 거부를 예방 또는 치료하는 데 사용되는 동종항원이다. 자가항원에 대해 본원에 기재된 관용을 유도하기 위한 백신 조성물이 또한 이식 거부를 예방 또는 치료하기 위한 동종항원에 사용될 수 있다. 관용을 유도하기 위한 조성물은 일반적으로 자가항원, 알레르겐 및 동종항원을 포함한, 염증성 질환을 치료하는 데 유용한 임의의 부류의 항원에 적용된다.
조성물이 다발성 경화증 및 관련 신경-염증성 질환을 치료하는 데 사용되는 일부 실시양태에서, 항원은 미엘린 염기성 단백질 (MBP), 미엘린 핍지교세포 단백질 (MBP) 및/또는 미엘린 단백질지질 단백질 (PLP)을 포함한 미엘린 수초 단백질로부터의 펩티드 서열로부터 선택된다. 조성물이 제1형 당뇨병을 치료하는 데 사용되는 일부 실시양태에서, 항원은 인슐린, 글루탐산 데카르복실라제, 크로모그라닌 A 및/또는 뉴로필린을 포함한, 췌장섬 세포에서 발현되는 펩티드로부터 선택된다. 조성물이 시신경척수염을 치료하는 데 사용되는 일부 실시양태에서, 항원은 아쿠아포린 4이다. 조성물이 복강 질환을 치료하는 데 사용되는 일부 실시양태에서, 항원은 글루텐 단백질 및/또는 트랜스글루타미나제이다. 조성물이 심상성 천포창을 치료하는 데 사용되는 일부 실시양태에서, 항원은 표피 카드헤린이다. 조성물이 중증 근무력증을 치료하는 데 사용되는 일부 실시양태에서, 항원은 아세틸콜린 수용체이다. 조성물이 알레르기를 치료하는 데 사용되는 일부 실시양태에서, 항원은 알레르겐이다.
조성물이 치료상 유용한 재조합 단백질 또는 벡터에 대한 항-약물 항체의 효과를 완화시키는 데 사용되는 일부 실시양태에서, 항원은 재조합 단백질 또는 그의 단편이다. 비제한적 예는 인자 VIII, 유전자 전달 벡터, 예컨대 아데노-연관 바이러스, 백신 바이러스 벡터, 예컨대 아데노바이러스, 모노클로날 항체 또는 융합 단백질을 포함한다.
다발성 경화증을 치료하는 데 사용되는 관용 백신의 일부 실시양태에서, 항원은 미엘린 핍지교세포 당단백질의 임의의 이소형, 예컨대 MASLSRPSLPSCLCSFLLLLLLQVSSSYAGQFRVIGPRHPIRALVGDEVELPCRISPGKNATGMEVGWYRPPFSRVVHLYRNGKDQDGDQAPEYRGRTELLKDAIGEGKVTLRIRNVRFSDEGGFTCFFRDHSYQEEAAMELKVEDPFYWVSPGVLVLLAVLPVLLLQITVGLIFLCLQYRLRGKLRAEIENLHRTFDPHFLRVPCWKITLFVIVPVLGPLVALIICYNWLHRRLAGQFLEELRNPF로부터 유래된 적어도 6개의 아미노산 길이, 보다 바람직하게는 적어도 적어도 9개의 아미노산 길이를 갖는 1개 이상의 펩티드 단편을 포함한다.
다발성 경화증을 치료하는 데 사용되는 관용 백신의 일부 실시양태에서, 항원은 미엘린 염기성 단백질의 임의의 이소형, 예컨대 MGNHAGKRELNAEKASTNSETNRGESEKKRNLGELSRTTSEDNEVFGEADANQNNGTSSQDTAVTDSKRTADPKNAWQDAHPADPGSRPHLIRLFSRDAPGREDNTFKDRPSESDELQTIQEDSAATSESLDVMASQKRPSQRHGSKYLATASTMDHARHGFLPRHRDTGILDSIGRFFGGDRGAPKRGSGK로부터 유래된 적어도 6개의 아미노산 길이, 보다 바람직하게는 적어도 9개의 아미노산 길이를 갖는 1개 이상의 펩티드 단편을 포함한다.
다발성 경화증을 치료하는 데 사용되는 관용 백신의 일부 실시양태에서, 항원은 미엘린 단백질지질 단백질의 임의의 이소형, 예컨대 MGLLECCARCLVGAPFASLVATGLCFFGVALFCGCGHEALTGTEKLIETYFSKNYQDYEYLINVIHAFQYVIYGTASFFFLYGALLLAEGFYTTGAVRQIFGDYKTTICGKGLSATVTGGQKGRGSRGQHQAHSLERVCHCLGKWLGHPDKFVGITYALTVVWLLVFACSAVPVYIYFNTWTTCQSIAFPSKTSASIGSLCADARMYGVLPWNAFPGKVCGSNLLSICKTAEFQMTFHLFIAAFVGAAATLVSLLTFMIAATYNFAVLKLMGRGTKF로부터 유래된 적어도 6개의 아미노산 길이, 보다 바람직하게는 적어도 9개의 아미노산 길이를 갖는 1개 이상의 펩티드 단편을 포함한다.
다발성 경화증, 또는 시신경척수염을 비롯한 다른 CNS 자가면역 질환을 치료하는 데 사용되는 관용 백신의 일부 실시양태에서, 펩티드 항원은 ...로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 관용을 유도하기 위한 백신은 전형적으로 QLQPFPQPELPYPQPYPQQPEQPYPQPQP, QPYPQQPEQPYPQPQPQYSQPEQPISQQ, QPYPFRPEQPYPQPQPQYSQPEQPISQQ, PSGEGSFQPSQENPQAQGSVQPQQLPQF, QQFPQPEQPFPQQPEQPFPQQPQ, PQPQQPEQPFPQSQQPEQPFPQPEQ, QPFPQPEQEFPQPQQPQQSFPEQQPSL, PQPQQPFPEQPQQPFPEQPQ, PQPEQPQQPFPQSEQPQQPFPQPEQ, QPFPQPEQEFPQPQQPQQSFPEQEPSL, PTPLQPEQPFPQQPQQPQQPFPQPEQPFPWQPQ, QQPPFSEQEQPVLPQ, QGQEGYYPTSPEQPG,, IAQQQPFPEQPQPYPEQPQPYPQQ, PQQPFPQPEQPFPSQ, PQQPFPQPEQPFPLQ, QFPPQPEQPFPQPQQ, QFPPQPEQPFPQPHQ, PQQPIPEQPQPYPQQ, SQQPIPEQPQPYPQQ, QPFPQPEQEFPQPQQ, QSIPQPEQPFPQPEQPFPQS 및 PQQPFPEQPEQIIPQ로부터 선택된 글리아딘으로부터 선택된 펩티드 항원을 포함한다.
다발성 경화증을 치료하기 위한 관용 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 관용 백신은 미엘린 핍지교세포 당단백질, 미엘린 염기성 단백질 및/또는 미엘린 단백질지질 단백질로부터 유래된 중첩 펩티드로 이루어진 펩티드 항원을 포함하며, 여기서 중첩 펩티드는 중첩 펩티드 풀 내의 적어도 1개의 다른 펩티드 항원과 13 내지 19개의 아미노산 중첩을 갖는 35개의 아미노산 펩티드 항원으로 이루어진다. 다발성 경화증을 치료하기 위한 관용 백신의 일부 실시양태에서, 관용 백신은 MHC-I 및/또는 MHC-II에 대해 예측된 높은 결합 친화도를 갖는 에피토프를 갖는 것에 기초하여 선택된, 미엘린 핍지교세포 당단백질, 미엘린 염기성 단백질 및/또는 미엘린 단백질지질 단백질로부터 유래된 펩티드 항원을 포함한다. MHC-II에 대해 예측된 높은 결합 친화도를 갖는 미엘린 핍지교세포 당단백질, 미엘린 염기성 단백질 및/또는 미엘린 단백질지질로부터 유래된 펩티드 항원을 포함하는, 다발성 경화증을 치료하기 위한 관용 백신의 비제한적 예는 SLPSCLCSFLLLLLLQVSSSYAGQFRVIGPRHPIR, VSSSYAGQFRVIGPRHPIRALVGDEVELPCRISPG, EEAAMELKVEDPFYWVSPGVLVLLAVLPVLLLQIT, SPGVLVLLAVLPVLLLQITVGLIFLCLQYRLRGKL, QITVGLIFLCLQYRLRGKLRAEIENLHRTFDPHFL, GKLRAEIENLHRTFDPHFLRVPCWKITLFVIVPVL, HFLRVPCWKITLFVIVPVLGPLVALIICYNWLHRR, PVLGPLVALIICYNWLHRRLAGQFLEELRNPF, DPGSRPHLIRLFSRDAPGREDNTFKDRPSESDELQ, GRTQDENPVVHFFKNIVTPRTPPPSQGKGRGLSLS, GGRASDYKSAHKGFKGVDAQGTLSKIFKLGGRDSR, FSKNYQDYEYLINVIHAFQYVIYGTASFFFLYGAL, AFQYVIYGTASFFFLYGALLLAEGFYTTGAVRQIF, GALLLAEGFYTTGAVRQIFGDYKTTICGKGLSATV, HPDKFVGITYALTVVWLLVFACSAVPVYIYFNTWT, LLVFACSAVPVYIYFNTWTTCQSIAFPSKTSASIG, TWTTCQSIAFPSKTSASIGSLCADARMYGVLPWNA, SICKTAEFQMTFHLFIAAFVGAAATLVSLLTFMIA, AAFVGAAATLVSLLTFMIAATYNFAVLKLMGRGTK, MIAATYNFAVLKLMGRGTKF 또는 적어도 6개의 아미노산 길이, 바람직하게는 적어도 9개의 아미노산을 갖는 그의 임의의 단편, 또는 그의 유도체로부터 선택된 펩티드 항원을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 항원은 심혈관 질환 또는 신경변성 질환에 수반되는 단백질로부터 유래된다. 심혈관 질환에 수반되는 단백질의 비제한적 예는 PCSK9, ANGPTL3 및 유사한 이러한 단백질에 기초한 전장 단백질 또는 단백질 단편 또는 조작된 비-천연 에피토프를 포함한다.
PCSK9로부터 유래된 펩티드 항원의 비제한적 예는 서열 RGYLTKILHVFHGLLPGFLVKMSGDLLE, PGFLVKMSGDLLE, PGFLVKnSGDLLE (여기서 n = 노르류신), PGFLVKMSSDLLG, PGFLVKnSSDLLG (여기서 n = 노르류신), SIPWNLERITPPR, SIPWNLERITPPR, SIPWNLE, SIPWNLEKVTPPR, SIPWNLDRVTPPR, NVPEEDGTRFHRQASKC, NVPEEDGTRFHRQASK, PEEDGTR, NVPEEDG, NVPEEDATRFHRQGSK, LFAPGEDIIGASSDCSTCFVSQSGTSQAAA, CSTCFVSQSGTSQAAA, STCFVSQSGTSQAAA, STBFVSQSGTSQAAA (여기서 B = 알파 아미노부티르산) 및 STBFVSQ (여기서 B = 알파 아미노부티르산)를 포함한다.
ANGPTL3으로부터 유래된 펩티드 항원의 비제한적 예는 서열 MFTIKLLLFIVPLVISSRIDQDNSSFDSLSPEPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGLKDFVHKTKGQIND, EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGLKDFVHKTKGQIND, EPKSRFAMLDDVKI, MLDDVKILANGLLQ, LANGLLQLGHGLKD, LGHGLKDFVHKTKG, LKDFVHKTKGQIND, RFAMLDDVKILANGLLQLGH, GLLQLGHGLKDFVHKTKGQI 및 IFQKLNIFDQSFYDLSLQTSEIKEEEKELRRTTYKLQVKNEEVKNMSLELNSKLESLLEEKILLQQKVKY를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원은 β 아밀로이드 펩티드, 알파 시뉴클레인 및 미세관-연관 단백질 타우를 포함한, 아밀로이드를 형성하는 것으로 공지된 단백질 또는 단백질의 부분 또는 그의 유도체를 포함한 신경변성 질환에 수반되는 단백질로부터 유래된다.
타우로부터 유래된 펩티드 항원의 비제한적 예는 MAEPRQEFEVMEDHAGTY, VQKEQAHSEEHLGRAAFPGAPG, EDRDVDESSPQDSPPS, GQDAPLEFTFHV, MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKD, EVMEDHAGTYG, MAEPRQEFEVMEDHAGTY 및 RKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKES 또는 적어도 6개의 아미노산 길이, 바람직하게는 적어도 9개의 아미노산을 갖는 그의 임의의 단편, 또는 그의 유도체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원은 독소 또는 남용 약물, 또는 독소 또는 남용 약물에 대해 지시된 항체를 생성하는 독소 또는 남용 약물의 유사체이다. 일부 실시양태에서, 항원은 유기포스페이트 신경 작용제에 대한 항체를 유도하는 유기포스페이트이다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 면역 반응을 유도하고 질환의 예방 또는 치료에 유용한 임의의 펩티드, 단백질 또는 번역후 변형된 단백질 (예를 들어, 당단백질)이 본 발명의 면역원성 조성물에 사용하기 위한 펩티드 항원 (A)으로서 사용하기 위해 선택될 수 있다는 것을 인식한다.
펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비
면역원성 조성물 포함 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 1개 이상의 펩티드 항원 접합체 (예를 들어, [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H) 및 친양쪽성체 (예를 들어, S-[B]-[U]-H)를 추가로 포함하는 입자를 포함한다. 친양쪽성체는 입자를 안정화시키는 기능을 하고 일부 펩티드 항원 (A)의 소수성 특성에 기여하는 가용화 블록 (S)을 포함한다. 그러나, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비는 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성체를 포함하는 입자의 안정성 및 유체역학적 거동에 영향을 미치는 것으로 발견되었다. 따라서, 약 4:1 내지 1:1,000의 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체 몰비가 일반적으로 잘-허용되는 것으로 발견되었고, 즉, 몰량으로 ≥ 20% 친양쪽성체를 포함하는 입자는 일반적으로 안정한 반면, 1개 이상의 펩티드 항원 접합체의 평균 알짜 전하가 거의 중성 전하, 예를 들어 +5 내지 -5 평균 알짜 전하일 때, 몰량으로 20% 미만의 친양쪽성체를 갖는 입자는 응집하는 경향이 있었고, 즉, 거의 중성인 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 입자를 안정화시키기 위해서는 보다 높은 비율의 친양쪽성체가 필요한 반면, +6 이상 또는 -6 이하의 높은 평균 알짜 양전하를 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 입자를 안정화시키기 위해서는 보다 적은 친양쪽성체를 필요로 하거나 친양쪽성체를 필요로 하지 않았다. 보다 높은 비율의 친양쪽성체는 개선된 입자 안정성을 발생시키는 경향이 있는 한편, 친양쪽성체 퍼센트 몰량과 면역원성 사이에는 역의 관계가 있었고, 보다 높은 친양쪽성체 비율은 일반적으로, 가능하게는 입자 내의 비교적 보다 낮은 펩티드 항원 (A) 로딩으로 인해, 보다 낮은 면역원성을 초래하였다. 따라서, 친양쪽성체 비율은 생물학적 활성을 희생시키지 않으면서 입자 안정성을 보장하도록 조정되어야 한다. 따라서, 친양쪽성체를 포함하는 백신의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비는 전형적으로, 약 4:1 내지 약 1:20, 예컨대 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:11, 1:12, 1:13, 1:14, 1:15, 1:16, 1:17, 1:18, 1:19, 1:20, 보다 바람직하게는 약 2:1 내지 약 1:4, 예컨대 약 1:1로부터 선택된다.
평균 GRAVY 점수가 중간 정도이거나 높은, 예를 들어 각각 GRAVY ≥ 0 또는 ≥ 1인 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신의 경우, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비는 일반적으로 2:1 내지 약 1:20, 또는 보다 바람직하게는 약 1:1 내지 약 1:20, 예컨대 1:1 내지 약 1:4과 같이 더 높아야 한다. 그러나, 펩티드 항원 접합체의 알짜 전하도 또한 입자 안정성에 기여하고, 필요할 수 있는 친양쪽성체의 양에 영향을 미친다. 예를 들어, +3 이상 또는 -3 이하의 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신의 경우에, 안정한 크기의 나노입자를 형성하기 위해 보다 적은 친양쪽성체가 요구될 수 있다. 이러한 조성물의 경우, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비는 바람직하게는 약 4:1 내지 약 1:4, 보다 바람직하게는 약 3:1 내지 1:3 또는 약 2:1 내지 1:2, 가장 바람직하게는 1:1이다.
본원에 개시된 예상외의 발견은 +3 이상의 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하고, 약 1:1 이하의 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비 (즉, 보다 높은 비율의 친양쪽성체)로 중성 또는 거의 중성 전하를 갖는 친양쪽성체를 추가로 포함하는 백신이, 친양쪽성체가 없거나 보다 낮은 비율의 친양쪽성체를 갖는 조성물보다 더 적은 용혈을 유도하였다는 것이다. 이들 결과는 친양쪽성체가 알짜 양전하를 갖는 펩티드 항원 접합체의 용혈 활성을 차폐할 수 있고, 백신 조성물에 포함된 친양쪽성체의 몰 비율 및 조성은 용혈을 완화시키도록 제어될 수 있다는 것을 시사한다.
유사하게, +3 이상의 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하고, 약 1:1 이하의 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비 (즉, 보다 높은 비율의 친양쪽성체)로 음전하를 갖는 친양쪽성체를 추가로 포함하는 백신은, 친양쪽성체가 없거나 보다 낮은 비율의 친양쪽성체를 갖는 조성물보다 더 적은 용혈을 유도하였지만, 2:1 내지 1:2의 몰비의 펩티드 항원 접합체를 갖는 조성물은 일반적으로 응집되는 것이 관찰되었다. 따라서, 펩티드 항원 접합체의 평균 알짜 전하가 양성이고 친양쪽성체의 알짜 전하가 음성인 백신의 바람직한 조성물의 경우, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비는 전반적인 알짜 음전하를 보장하도록 선택되어야 한다. 따라서, 평균 알짜 양전하를 갖는 펩티드 항원 접합체 및 평균 알짜 음전하를 갖는 친양쪽성체(들)를 포함하는 백신의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비는 1:2 이하, 전형적으로 약 1:2 내지 1:16, 보다 바람직하게는 약 1:2 내지 1:6, 예컨대 1:3 내지 1:5 또는 약 1:4이다.
백신 조성물에 사용하기 위한 면역조정 약물 분자 (D)
백신의 바람직한 조성물은 면역자극제 및/또는 면역억제제로부터 선택된 1종 이상의 면역조정 약물 분자를 포함한다.
백신에 사용하기 위한 면역조정 약물 분자의 선택은 용도에 좌우된다. 암을 치료 또는 예방하기 위한 백신 ("암 백신") 조성물의 경우, 1종 이상의 면역조정 약물 분자는 전형적으로 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-9, RLR 및 STING의 효능제를 포함한 면역자극제, 보다 바람직하게는 유형-I IFN을 유도하는 면역자극제로부터 선택된다. 감염성 질환을 치료 또는 예방하기 위한 백신 ("감염성 질환 백신") 조성물의 경우, 1종 이상의 면역조정 약물 분자는 전형적으로 TLR-1, TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-5, TLR-6, TLR-7, TLR-8, TLR-9, CLR, NLR의 효능제 또는 그의 조합을 포함한 염증유발 시토카인 및/또는 유형-I IFN을 유도하는 면역자극제로부터 선택된다. 알레르기 또는 자가면역 질환을 치료하기 위해 관용을 유도하기 위한 백신 조성물의 경우, 1종 이상의 면역조정 약물 분자는 전형적으로 면역억제제, 예컨대 Treg 촉진 면역조정제 (하기 정의됨), 또는 Treg 촉진 면역조정제와 TLR-1, TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-5, TLR-6, TLR-7, TLR-8, TLR-9, CLR, NLR의 효능제 또는 그의 조합으로부터 선택된 면역자극제의 조합으로부터 선택된다. 특정 면역조정 약물의 바람직한 조성물 및 조합물은 하기 섹션에서 보다 상세하게 기재된다.
백신에 사용하기에 적합한 면역자극제 조성물은 전형적으로 PRR 효능제로부터 선택된다. 패턴 인식 수용체 (PRR) 효능제의 비제한적 예는 TLR-1/2/6 효능제 (예를 들어, 리포펩티드 및 당지질, 예컨대 Pam2cys 또는 Pam3cys 리포펩티드); TLR-3 효능제 (예를 들어, dsRNA, 예컨대 폴리I:C, 및 뉴클레오티드 염기 유사체); TLR-4 효능제 (예를 들어, 리포폴리사카라이드 (LPS) 유도체, 예를 들어, 모노포스포릴 지질 A (MPL) 및 피리미도인돌의 소분자 유도체 또는 유사체); TLR-5 효능제 (예를 들어, 플라젤린); TLR-7 & -8 효능제 (예를 들어, ssRNA 및 뉴클레오티드 염기 유사체, 예컨대 이미다조퀴놀린, 히드록시-아데닌, 벤조나프티리딘 및 록소리빈의 유도체); 및 TLR-9 효능제 (예를 들어, 비메틸화 CpG); 인터페론 유전자의 자극인자 (STING) 효능제 (예를 들어, 시클릭 디뉴클레오티드, 예컨대 시클릭 디아데닐레이트 모노포스페이트 및 디ABZI 또는 그의 유도체); C-유형 렉틴 수용체 (CLR) 효능제 (예컨대 선형 또는 분지형일 수 있는 다양한 모노, 디, 트리 및 중합체 당, 예를 들어, 만노스, 루이스-X 트리-사카라이드 등); RIG-I-유사 수용체 (RLR) 효능제; NOD-유사 수용체 (NLR) 효능제 (예컨대 펩티도글리칸 및 박테리아로부터의 구조적 모티프, 예를 들어, 메소-디아미노피멜산 산 및 뮤라밀 디펩티드); 및 그의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 백신에 사용하기 위해 선택된 면역자극제는 무기 염, 예컨대 알루미늄 염 및/또는 오일, 예컨대 스쿠알렌 및 그의 유도체 (예를 들어, MF59 등)로부터 선택된다.
백신의 여러 실시양태에서, 백신은 TLR 효능제, 예컨대 이미다조퀴놀린-기반 TLR-7/8 효능제로부터 선택된 면역자극제를 포함한다. 예를 들어, 면역자극제는 특정 적응증 및 용도를 위해 인간 사용에 대해 FDA에 의해 승인된 이미퀴모드 (R2137) 또는 레시퀴모드 (R2148)일 수 있다.
백신의 여러 실시양태에서, 백신은 TLR-7 효능제, TLR-8 효능제 및/또는 TLR-7/8 효능제를 포함한다. 많은 상이한 이미다조퀴놀린 화합물을 비롯한 다수의 이러한 효능제가 공지되어 있다.
이미다조퀴놀린은 본원에 개시된 방법에서 사용된다. 이미다조퀴놀린은 항원 제시 세포 (예를 들어, 수지상 세포) 상의 톨-유사 수용체 -7 및/또는 -8 (TLR-7/TLR-8)에 결합하여 이들 수용체의 천연 리간드, 바이러스 단일-가닥 RNA를 구조적으로 모방함으로써 작용하는 합성 면역조정 약물이다. 이미다조퀴놀린은 융합된 퀴놀린-이미다졸 골격을 포함하는 헤테로시클릭 화합물이다. 그의 유도체, 염 (수화물, 용매화물 및 N-옥시드 포함) 및 전구약물이 또한 본 개시내용에 의해 고려된다. 특정한 이미다조퀴놀린 화합물은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 미국 특허 번호 6,518,265; 및 미국 특허 번호 4,689,338을 참조한다. 일부 비제한적 실시양태에서, 이미다조퀴놀린 화합물은 이미퀴모드 또는 레시퀴모드가 아니다.
일부 실시양태에서, 면역자극제는 이미다조퀴놀린 아민 및 치환된 이미다조퀴놀린 아민 예컨대, 예를 들어, 아미드 치환된 이미다조퀴놀린 아민, 술폰아미드 치환된 이미다조퀴놀린 아민, 우레아 치환된 이미다조퀴놀린 아민, 아릴 에테르 치환된 이미다조퀴놀린 아민, 헤테로시클릭 에테르 치환된 이미다조퀴놀린 아민, 아미도 에테르 치환된 이미다조퀴놀린 아민, 술폰아미도 에테르 치환된 이미다조퀴놀린 아민, 우레아 치환된 이미다조퀴놀린 에테르, 티오에테르 치환된 이미다조퀴놀린 아민, 히드록실아민 치환된 이미다조퀴놀린 아민, 옥심 치환된 이미다조퀴놀린 아민, 6-, 7-, 8-, 또는 9-아릴, 헤테로아릴, 아릴옥시 또는 아릴알킬렌옥시 치환된 이미다조퀴놀린 아민, 및 이미다조퀴놀린 디아민을 포함하나 이에 제한되지는 않는 5원 질소-함유 헤테로시클릭 고리에 융합된 2-아미노피리딘을 갖는 소분자; 아미드 치환된 테트라히드로이미다조퀴놀린 아민, 술폰아미드 치환된 테트라히드로이미다조퀴놀린 아민, 우레아 치환된 테트라히드로이미다조퀴놀린 아민, 아릴 에테르 치환된 테트라히드로이미다조퀴놀린 아민, 헤테로시클릭 에테르 치환된 테트라히드로이미다조퀴놀린 아민, 아미도 에테르 치환된 테트라히드로이미다조퀴놀린 아민, 술폰아미도 에테르 치환된 테트라히드로이미다조퀴놀린 아민, 우레아 치환된 테트라히드로이미다조퀴놀린 에테르, 티오에테르 치환된 테트라히드로이미다조퀴놀린 아민, 히드록실아민 치환된 테트라히드로이미다조퀴놀린 아민, 옥심 치환된 테트라히드로이미다조퀴놀린 아민, 및 테트라히드로이미다조퀴놀린 디아민을 포함하나 이에 제한되지는 않는 테트라히드로이미다조퀴놀린 아민; 아미드 치환된 이미다조피리딘 아민, 술폰아미드 치환된 이미다조피리딘 아민, 우레아 치환된 이미다조피리딘 아민, 아릴 에테르 치환된 이미다조피리딘 아민, 헤테로시클릭 에테르 치환된 이미다조피리딘 아민, 아미도 에테르 치환된 이미다조피리딘 아민, 술폰아미도 에테르 치환된 이미다조피리딘 아민, 우레아 치환된 이미다조피리딘 에테르, 및 티오에테르 치환된 이미다조피리딘 아민을 포함하나 이에 제한되지는 않는 이미다조피리딘 아민; 1,2-가교된 이미다조퀴놀린 아민; 6,7-융합된 시클로알킬이미다조피리딘 아민; 이미다조나프티리딘 아민; 테트라히드로이미다조나프티리딘 아민; 옥사졸로퀴놀린 아민; 티아졸로퀴놀린 아민; 옥사졸로피리딘 아민; 티아졸로피리딘 아민; 옥사졸로나프티리딘 아민; 티아졸로나프티리딘 아민; 피라졸로피리딘 아민; 피라졸로퀴놀린 아민; 테트라히드로피라졸로퀴놀린 아민; 피라졸로나프티리딘 아민; 테트라히드로피라졸로나프티리딘 아민; 및 피리딘 아민, 퀴놀린 아민, 테트라히드로퀴놀린 아민, 나프티리딘 아민, 또는 테트라히드로나프티리딘 아민에 융합된 1H-이미다조 이량체이다.
일부 실시양태에서, 면역자극제는 화학식:
을 갖는 이미다조퀴놀린이다.
화학식 IV에서, R20은 수소, 임의로 치환된 저급 알킬, 또는 임의로 치환된 저급 에테르 중 1개로부터 선택되고; R21은 임의로 치환된 아릴아민, 또는 임의로 치환된 저급 알킬아민 중 1개로부터 선택된다. R21은 중합체에 연결되는 링커로 임의로 치환될 수 있다. 예상외의 발견은 R21이 저급 알킬아민으로부터 선택된 일부 화합물에서, 화합물이 아릴아민으로부터 선택된 R21보다 덜 강력하지만, 반응 품질이 개선되었다는 것이었다. 따라서, 화학식 IV의 중간 정도의 효력 아주반트는 보다 우수한 품질 반응을 유도하였다. 주: 화학식 IV의 아주반트(들)는 리간드의 한 유형이고, 화학식 IV의 아주반트 또는 아주반트 특성을 갖는 리간드로서 지칭될 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 IV에 포함된 R20은 수소, 으로부터 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, R21은
로부터 선택될 수 있고, 여기서 e는 메틸렌 단위의 수를 나타내고, 1 내지 4의 정수이다.
일부 실시양태에서, R21은 일 수 있다.
일부 실시양태에서, R21은 일 수 있다.
일부 실시양태에서, R20은 일 수 있고 R21은 일 수 있다.
일부 실시양태에서, 적어도 1개의 D는 이며, 여기서 R20은 H, 알킬, 알콕시알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아미노알킬, 아미드 및 에스테르로부터 선택되고; X3은 알킬, 알콕시알킬, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 카르복시로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, R20은 H, 알킬 및 알콕시알킬로부터 선택되고; X3은 알킬 및 아르알킬로부터 선택된다. 다른 실시양태에서, R20은 부틸이다.
일부 실시양태에서, X3은 알킬이다.
백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 친양쪽성체, 1개 이상의 펩티드 항원 접합체 및 면역조정 약물 분자를 추가로 포함하는 나노입자를 포함한다. 이러한 실시양태에서, 면역조정 약물 분자는 임의의 적합한 수단을 통해 나노입자 내로 혼입될 수 있다.
일부 실시양태에서, 소수성 및/또는 친양쪽성인 면역조정 약물 분자는 비-공유 상호작용, 예컨대 나노입자의 코어를 구성하는 소수성 블록과의 소수성 상호작용을 통해 친양쪽성체 및 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 나노입자 내로 혼입된다. 비제한적 예는 스쿠알렌-기반 면역자극제; 지질-기반 PRR 효능제, 예컨대 민클 수용체 효능제 (예를 들어, 트레할로스 디미콜레이트 및 트레할로스 디베헤네이트) TLR-4의 리포폴리사카라이드-기반 효능제, 및 TLR-1/2 및 TLR-2/6의 리포펩티드-기반 효능제; TLR-4의 헤테로아릴-기반 효능제 (예를 들어, 피리미도인돌); TLR-7/8 (예를 들어, 이미다조퀴놀린 및 벤조나프티리딘) 및 STING (예를 들어, 디ABZI)의 효능제; 및 mTOR/PI3K/AKT (예를 들어, KU-0062794, 토린 1, 토린 2 등), CDK8/19 (예를 들어, 코르티스타틴), 레티노산-관련 고아 감마 t (RORγt) (예를 들어, SR1555) 및 히스톤 데아세틸라제 (HDAC) (예를 들어, TMP269)의 특정 억제제, 뿐만 아니라 아릴 탄화수소 수용체 (AHR) (예를 들어, 인돌, 인돌로[3,2-b]카르바졸 (ICZ) 및 3,3 디인돌로메탄), 레티노산 수용체 (RAR) (예를 들어, 모든-트랜스 레티노산, TTNPB (cas: 71441-28-6), AM580, BMS753, BMS961 등) 및 아데노신 수용체 (예를 들어, UK-432,097)의 특정 효능제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 소수성 면역억제제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 면역조정 약물 분자는 소수성 블록에 연결되어 약물 분자 접합체를 형성하고, 이는 비-공유 상호작용을 통해 친양쪽성체 및 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 나노입자 내로 혼입된다. 또 다른 실시양태에서, 면역조정 약물 분자는 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체에 대한 공유 부착을 통해 친양쪽성체 및 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 나노입자 내로 혼입된다. 암 및 감염성 질환에 대한 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 친양쪽성체, 1개 이상의 펩티드 항원 접합체, 및 이미다조퀴놀린으로부터 선택된 면역자극제를 포함하는 나노입자를 포함하고, 여기서 이미다조퀴놀린은 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록에 연결된다. 백신의 바람직한 조성물은 다른 곳에서 보다 상세하게 기재된다.
백신에 사용하기 위한 친양쪽성체 및 펩티드 항원 접합체의 조성물
백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 나노입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 백신은 친양쪽성체 및/또는 1개 이상의 면역조정 약물 분자를 추가로 포함한다.
백신 조성물에 포함된 1개 이상의 펩티드 항원 접합체는 각 대상체에서 충분한 면역 반응이 유도될 수 있도록 보장하기 위해 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 백신은 전형적으로 각각 고유한 항원 조성물을 포함하는 최대 약 40개의 펩티드 항원 접합체를 포함하지만, 전형적으로 약 100개 이하의 고유한 펩티드 항원 접합체를 포함한다. 각각의 펩티드 항원 접합체는 1개 이상의 공지되거나 예측된 T 세포 에피토프 (예를 들어, CD4 및/또는 CD8 T 세포 에피토프) 및/또는 B 세포 에피토프를 포함하는 고유한 펩티드 항원 (A)을 포함한다. 일반적으로, 암 치료를 위한 백신 ("암 백신")은 종양 또는 바이러스 항원으로부터 유래된 CD4 및/또는 CD8 T 세포 에피토프를 갖는 항원을 추가로 포함하는 펩티드 항원 접합체를 포함하고; 관용을 유도하기 위한 백신 ("관용 백신")은 자가항원 또는 알레르겐으로부터 유래된 CD4 및/또는 CD8 T 세포 에피토프를 갖는 항원을 추가로 포함하는 펩티드 항원 접합체를 포함하고; 항체를 유도하기 위한 백신 ("항체 백신")은 표적 단백질로부터 유래된 1개 이상의 B 세포 에피토프를 갖는 항원을 추가로 포함하는 펩티드 항원 접합체를 포함하거나, 또는 전형적으로 독소로부터 유래되거나 또는 독소의 화학적 유사체인 합텐을 포함하는 합텐 접합체 (다른 곳에 정의됨)를 포함한다. 추가적으로, 전형적으로 암 백신 및 항체를 유도하기 위한 백신의 바람직한 조성물에서, 백신은 전형적으로, 예를 들어 CD4 T 세포 반응을 유도하는 것을 통해 종양 항원에 대한 반응을 증진시키는 기능을 하는, 감염성 질환 항원 (예를 들어, 플루 항원) 및/또는 비-천연 CD4 헬퍼 펩티드, 예컨대 PADRE (예를 들어, AKFVAAWTLKAAA 및 관련 펩티드 서열, 예를 들어 여기서 F는 시클로헥실알라닌으로 대체됨)로부터 선택된 항원을 포함하는 적어도 1개 이상의 추가의 펩티드 항원 접합체를 포함한다. 적절한 길이 및 화학적 조성을 포함한, 펩티드 항원 접합체에 포함시킬 항원을 선택하는 보다 상세한 방법은 다른 곳에서 보다 상세하게 기재된다.
백신의 일부 실시양태에서, 1개 이상의 펩티드 항원 접합체는 가용화 블록을 포함하며 (예를 들어, 펩티드 항원 접합체는 화학식 S-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H[(D)]-U-[E1]-A-[E2]-S를 가짐), 이는 제조 동안 펩티드 항원 접합체의 용해도를 개선시키고/거나 수용액에 가용화되었을 때 나노입자 미셀화를 촉진시키는 기능을 할 수 있다. 친양쪽성 담체 분자를 포함하지 않는 백신의 바람직한 조성물에서 (예를 들어, S-[B]-[U]-H[(D)]), 1개 이상의 펩티드 항원 접합체는 전형적으로 가용화 블록을 포함하는 것으로부터 선택되고; 친양쪽성 담체 분자를 포함하는 백신의 경우에는, 1개 이상의 펩티드 항원은 전형적으로 가용화 블록이 결여된 것으로부터 선택된다.
백신의 일부 실시양태에서, 1개 이상의 펩티드 항원 접합체는 N-말단 및/또는 C-말단 연장부를 포함한다. 백신의 바람직한 조성물에서, 연장부는 소수성 블록과 항원 사이에 직접적으로 또는 링커를 통해, 예를 들어 A-E2-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-[U]-E1-A로 포함되고, 가용화 블록이 존재하는 경우에 연장부는 전형적으로 가용화 블록과 항원 사이에, 예를 들어 S-E1-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A-E2-S로 포함된다. 연장부의 바람직한 조성 및 사용은 다른 곳에서 보다 상세하게 기재된다.
펩티드 항원 접합체는 임의의 적합한 수단에 의해 제조될 수 있다. 전형적으로, 펩티드 항원 접합체는 고체-상 펩티드 합성 (SPPS)에 의해 전적으로 수지 상에서 제조되거나, 또는 SPPS에 의해 생산된 펩티드 항원 단편 및 소수성 블록 단편의 수렴적 어셈블리에 의해 제조되며, 여기서 펩티드 항원 단편과 소수성 블록 단편의 커플링은 용액 중에서 또는 수지 상에서 이루어질 수 있다. 제조 방법에 대한 선호도는 전형적으로 소수성 블록의 조성에 좌우된다. 예를 들어, 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록이 트립토판 (및 그의 임의의 유사체 또는 유도체), 파라-아미노페닐알라닌, 글루탐산 (그의 임의의 유도체), 리신 또는 오르니틴 (및 그의 임의의 유도체) 등으로부터 선택된 아미노산을 포함하는 경우에, 펩티드 항원 접합체는 전형적으로 SPPS에 의해 전적으로 생성된다. 소수성 블록이 약물 분자, 특히 (표준 아미노산 비용과 비교해서) 비교적 고비용인 약물 분자를 포함하는 경우에, 펩티드 항원 접합체는 전형적으로, 다른 곳에서 보다 상세하게 기재된 링커 화학을 사용하여 2개의 별개로 생성된 성분의 수렴적 어셈블리 (즉, [S]-[E1]-A-[E2]-U1 + U2-H-[D])에 의해 제조된다.
균일한 크기 및 조성의 나노입자 내로의 펩티드 항원 접합체의 혼입은 일관된 제조 및 대상체에서의 면역 반응의 신뢰가능한 유도를 보장하는 데 중요하다. 본 개시내용의 본 발명자들은 이전에, 소수성 블록에 연결된 펩티드 항원에 직접적으로의 또는 연장부를 통한 간접적으로의 1개 이상의 하전된 아미노산 잔기 (전하-변형 기로 지칭됨)의 혼입이, 펩티드 항원 접합체가 적절한 알짜 전하를 갖는 경우에, 균일한 나노입자 미셀로 자기-어셈블리되는 친양쪽성 펩티드 항원 접합체를 생성한다는 것을 보고하였다 (문헌 [Lynn et al., Nat. Biotech. 2020] 참조). 이러한 접근법 (즉, 각각의 펩티드 항원 접합체에 가용화 블록을 혼입시키는 것)의 잠재적 제한은 제조 복잡성 및 비용을 감소시키기 위해 SPPS 동안 각각의 항원 상에 전하-변형 기를 제조하는 것이 일반적으로 바람직하지만, SPPS를 도입하기 위한 SPPS에 대한 의존성은 실행가능한 화학적 조성의 범주를 제한할 수 있다는 것이다. 예를 들어, 리신을 기초로 하는 알짜 양전하-변형 기는 SPPS에 의한 제조 동안 임의의 펩티드 항원 내로 용이하게 혼입될 수 있지만, 글루탐산, 아스파르트산 또는 포스포세린을 기초로 하는 알짜 음전하-변형 기는 그렇지 않은 것으로 발견되었고, 따라서 실제로 이용될 수 있는 잠재적인 전하-변형 기의 범주가 제한된다.
가용화 블록을 펩티드 항원 접합체에 직접 혼입시키는 것과 연관된 도전과제를 극복하기 위해, 본 개시내용의 본 발명자들은 펩티드 항원 접합체와 조합하여 사용하기 위한 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 신규 친양쪽성 담체 분자를 개발하였다. 이는 면역원성 조성물, 예를 들어 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신에 포함될 수 있는 가능한 가용화 블록 조성 및 아키텍처의 보다 넓은 폭의 평가를 가능하게 하였다. 실제로, 본 개시내용의 저자는 다양한 아키텍처 (선형, 원뿔 및 브러시), 전하 (알짜 양성, 알짜 음성 또는 알짜 중성 전하), 화학적 조성 및 크기 (예를 들어, 선형 중합체 또는 올리고머의 길이, 또는 덴드론의 세대)를 갖는 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체를 합성하고 평가하고, 1개 이상의 펩티드 항원 접합체와 조합된 친양쪽성체의 다양한 특성이 (친양쪽성체 대 펩티드 항원 접합체의 몰비의 범위에서) 생체내 유체역학적 거동 및 면역원성에 어떻게 영향을 미치는지를 평가하였다.
예상외의 발견은 선형 및 원뿔 (또는 "덴드론") 아키텍처를 갖는 친양쪽성체와 혼합된 펩티드 항원 접합체가 브러시 아키텍처를 갖는 친양쪽성체와 비교하여 더 큰 일관성을 갖고 더 높은 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체 비에 이르기까지 안정한 나노입자 미셀을 형성하였으며, 단 선형 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 알짜 전하 ≥ +4 또는 알짜 전하 ≤ -4를 갖거나, 또는 적어도 2개 이상의 당 분자, 바람직하게는 2 내지 8개 또는 그 초과의 당 분자 (즉, 개별 모노사카라이드 또는 더 복잡한 구조, 예를 들어 1 내지 4개 또는 그 초과의 디사카라이드로서 2 내지 8개 또는 그 초과의 모노사카라이드)를 함유하였다는 것이었다. 알짜 양전하 또는 알짜 음전하를 필요로 하는 선형 아키텍처, 또는 높은 당 분자 함량을 갖는 친양쪽성체와 대조적으로, 원뿔 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 전하와 무관하게 안정한 나노입자 미셀을 형성하는 것으로 발견되었으며, 즉, 4:1 내지 1:1,000 범위의 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 비에서 알짜 양전하, 알짜 음전하 및 중성 전하를 갖는 원뿔 아키텍처를 갖는 친양쪽성체에 의하면 안정한 나노입자 형성이 관찰되었지만, 펩티드 항원 접합체가 가용화 블록을 포함하고 +6 이상 또는 -6 이하의 평균 알짜 전하를 갖는 경우 보다 높은 비 (즉, 펩티드 항원 접합체의 보다 큰 비율)가 달성될 수 있었다.
중요한 것으로, 알짜 전하와 무관하게 나노입자 미셀화를 가능하게 하는 덴드론의 능력은 상이한 가용화 기가 백신 제제 특성뿐만 아니라 생물학적 활성에 어떻게 영향을 미치는지에 대한 철저한 조사를 가능하게 하였다. 따라서, 원뿔 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 일반적으로, 펩티드 항원 접합체와 4:1 이하의 몰비의 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체로 조합되는 경우에 안정한 나노입자 형성을 보장하기 위해 최대 4개 또는 그 초과의 가용화 기 (예를 들어, 사카라이드, 아민, 카르복실산 또는 히드록실)를 필요로 하였다. 따라서, 원뿔 아키텍처를 갖는 친양쪽성체의 바람직한 실시양태에서, 친양쪽성체는 4개 이상의 가용화 기를 포함하지만, 전형적으로 친양쪽성체당 16 또는 32개 이하의 가용화 기를 포함한다. 원뿔 아키텍처 및 4개 이상의 가용화 기를 갖는 친양쪽성체는 일반적으로 높은 비의 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체에 의해 안정한 나노입자 미셀을 형성하였지만, 덴드론 증폭제, 스페이서 및 소수성 블록의 특이적 화학적 조성도 또한 유체역학적 거동에 영향을 미쳤다. 따라서, 4 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서 (B) 및 세대 2 내지 4 PEG-기반 덴드론 증폭제는 각각 유사한 세대 및 길이의 펩티드-기반 증폭 링커 및 펩티드-기반 스페이서를 포함하는 원뿔 아키텍처를 갖는 친양쪽성체와 비교하여 보다 균일한 나노입자 조성물을 생성하는 것으로 발견되었다. 또한, 48개 초과의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서 (B)를 갖는 친양쪽성체를 포함하는 백신은 짧은 PEG-스페이서를 갖는 친양쪽성체를 포함하는 백신보다 덜 안정한 나노입자 미셀 및 감소된 면역원성을 유도하는 경향이 있었다. 그러나, 친양쪽성체에 대해 선택된 스페이서 길이는 또한 백신 조성물이 평균 알짜 양전하를 갖는 펩티드 항원 접합체를 추가로 포함하는 경우에 용혈을 방지하는 친양쪽성체의 능력에 영향을 미쳤다. 따라서, 12개 이상의 단량체 단위를 갖는 PEG 스페이서를 갖는 친양쪽성체는 보다 짧은 스페이서를 갖는 친양쪽성체보다 더 효과적으로 용혈을 완화시키는 것으로 발견되었다.
따라서, 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H[(D)]-U-[E1]-A-[E2]-[S]의 1개 이상, 전형적으로 1 내지 40개의 펩티드 항원 접합체 및 원뿔 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-[U]-H-[D]의 친양쪽성체를 포함하며, 여기서 원뿔 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 4 내지 16개의 가용화 기를 갖는 PEG-기반 덴드론 및 4 내지 48개의 단량체 단위, 보다 바람직하게는 4 내지 36개의 단량체 단위, 가장 바람직하게는 24개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서를 포함하는 가용화 블록을 추가로 포함하고, 추가적으로 여기서 가용화 기는 당 분자, 카르복실산, 아민 및/또는 히드록실을 포함하고, 소수성 블록은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함한다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서 b는 스페이서를 포함하는 정수의 단량체 단위이고, 전형적으로 4 내지 48개, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 22, 43, 44, 45, 46, 47 또는 48개의 단량체 단위, 바람직하게는 약 4 내지 36개의 단량체 단위, 가장 바람직하게는 24개의 단량체 단위이고; SG는 직접적으로 또는 적합한 링커 X, 또는 보다 바람직하게는 X5를 통해 S에 연결된 당 분자, 카르복실산, 아민 및/또는 히드록실로부터 선택되고; 소수성 블록 (H)은 전형적으로 화학식 I의 폴리(아미노산)로부터 선택되고; S는 가용화 블록이고; E1은 N-말단 연장부이고; A는 항원이고; E2는 C-말단 연장부이고; U는 링커이고; D는 약물 분자이고; [ ]는 기가 임의적임을 나타낸다. 일부 대안적 실시양태에서 펩티드 항원 접합체는 화학식 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]를 갖는다. 명확성을 위해, 각 경우의 본원에 기재된 백신의 성분 중 임의의 것, 예를 들어 H, S, A, E1, E2, B, D 및 임의의 링커 (예를 들어, U)는 독립적으로 선택된다.
백신의 의도된 용도가 가용화 기의 조성을 선택하는 데 고려되어야 하지만, 본 개시내용의 본 발명자들은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S]의 1개 이상의 펩티드 항원 접합체 및 원뿔 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-[U]-H-[D]의 친양쪽성체를 포함하는 백신의 경우, 만노스로부터 선택된 친양쪽성체의 가용화 블록의 가용화 기가 일반적으로 카르복실산, 아민 또는 히드록실을 포함하는 가용화 기를 갖는 친양쪽성체의 사용과 비교하여 더 높은 규모의 T 세포 반응을 유도하였음을 확인하였다. 1개 이상, 전형적으로 1 내지 40개의 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D]의 펩티드 항원 접합체 및 원뿔 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-[U]-H-[D]의 친양쪽성체를 포함하며, 여기서 원뿔 아키텍처를 갖는 친양쪽성체가 4개의 가용화 기 (SG)를 갖는 PEG-기반 덴드론 및 4 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서를 포함하는 가용화 블록을 추가로 포함하고, 추가적으로 여기서 가용화 기가 만노스로부터 선택된 당 분자를 포함하고, 소수성 블록이 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하는 것인 백신의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공된다:
X5는 적합한 링커이고; b는 스페이서를 포함하는 정수의 단량체 단위이고, 바람직하게는 4 내지 36개, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 36개의 단량체 단위이고; 소수성 블록 (H)은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하고; S는 가용화 블록이고, E1은 N-말단 연장부이고, A는 항원이고, E2는 C-말단 연장부이고, U는 링커이고, D는 약물 분자이고, [ ]는 기가 임의적임을 나타낸다. 일부 대안적 실시양태에서 펩티드 항원 접합체는 화학식 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]를 갖는다.
백신의 의도된 용도는 또한 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성체 (존재하는 경우) 둘 다에 대한 적합한 펩티드 항원 접합체 조성물뿐만 아니라 소수성 블록 조성을 선택할 때 고려되어야 하지만, 본 출원의 저자들은 상이한 백신 적용에 걸쳐 일반적으로 바람직한 펩티드 항원 접합체 및 소수성 블록 조성의 특정 특색을 확인하였다.
따라서, 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성 담체 및 1개 이상의 펩티드 항원 접합체의 바람직한 조성물을 포함하는 백신의 경우, 펩티드 항원 (A)은 가용화 블록 (S)의 사용 없이 소수성 블록 (H)에 직접적으로 또는 연장부 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 연결될 수 있고 (예를 들어, H-[D]-U-[E1]-A 또는 A-[E2]-[U]-H[(D)]), 친양쪽성체 및 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체의 생성된 제제는 일반적으로 시간 경과에 따라 안정하고 생체내에서 면역원성인 일관된 크기의 입자를 갖는 나노입자 미셀을 생성하는 것으로 발견되었다.
그러나, 알짜 양전하를 갖는 펩티드 항원 접합체 및 양으로 하전된 기, 예를 들어 리신 및 오르니틴을 갖는 폴리(아미노산)으로부터 선택된 가용화 블록을 포함하는 백신은 일반적으로 가용화 기가 결여되거나 알짜 음전하를 갖는 가용화 기를 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신과 비교하여 개선된 제조성 및 제제 특성 (예를 들어, 입자 크기 균일성 및 안정성)을 갖는 것으로 또한 관찰되었다. 따라서, 본원에 기재된 백신의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 알짜 양전하를 갖고, 양으로 하전된 기를 갖는 폴리(아미노산)를 추가로 포함하는 가용화 블록을 포함한다.
추가의 주목할 만한 발견은 특정 펩티드 항원 접합체의 제조 방법이 소수성 블록 (H)의 조성에 기초하여 추가로 단순화될 수 있다는 것이었다. 따라서, 아릴, 헤테로아릴, 아미노아릴 및/또는 아미노헤테로아릴 기를 추가로 포함하는 방향족 기를 갖는 소수성 단량체 M, 및 아민을 포함하는 임의로 하전된 아미노산 (P)을 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)에 기초한 소수성 블록을 포함하는 펩티드 항원 접합체의 경우에, 전체 펩티드 항원 접합체는 SPPS에 의해 생성될 수 있는 것으로 관찰되었다. 따라서, 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 화학식 H-[D]-[E1]-A-[E2]-[S] 또는 [S]-[E1]-A-[E2]-H-[D]의 펩티드 항원 접합체로부터 선택되고, 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록은 아릴, 헤테로아릴, 아미노아릴 및/또는 아미노헤테로아릴 기를 갖는 소수성 단량체 M, 및 아민을 포함하는 임의로 하전된 아미노산 (P)을 포함하며, 여기서 소수성 블록을 구성하는 아미노산의 수는 전형적으로 3 내지 30개이다.
추가적으로, 아릴, 헤테로아릴, 아미노아릴 및/또는 아미노헤테로아릴 기를 갖는 소수성 단량체 M을 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)로부터 선택된 소수성 블록을 갖는 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성체는 제조가능성을 개선시켰고, 질소가 결여된 고급 알칸 또는 방향족 기를 포함하는 소수성 블록을 갖는 것보다 더 일관된 나노입자 제제를 생성한 것으로 관찰되었다. 따라서, 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 1개 이상, 전형적으로 1 내지 40개의 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 [D]-U-[E1]-A-[E2]-[S]의 펩티드 항원 접합체 및 원뿔 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-[U]-H-[D]의 친양쪽성체를 포함하며, 여기서 원뿔 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 4개의 가용화 기 (SG)를 갖는 PEG-기반 덴드론 및 4 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서를 포함하는 가용화 블록을 추가로 포함하고, 추가적으로 여기서 가용화 기는 만노스로부터 선택된 당 분자를 포함하고, 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성체 둘 다의 소수성 블록은 아릴, 헤테로아릴, 아미노아릴 및/또는 아미노헤테로아릴 기를 갖는 소수성 단량체 M을 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하며:
여기서 X5는 적합한 링커이고; b는 스페이서를 포함하는 정수의 단량체 단위이고, 전형적으로 4 내지 36개, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 36개의 단량체 단위이고; 소수성 블록 (H)은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하고, 여기서 R4는 아릴, 헤테로아릴, 아미노아릴 및/또는 아미노헤테로아릴 기로부터 선택되고, m은 전형적으로 3 내지 30이고; A는 항원이고, S는 가용화 블록이고, E1은 N-말단 연장부이고, E2는 C-말단 연장부이고, U는 링커이고, [ ]는 기가 임의적임을 나타낸다. 일부 대안적 실시양태에서 펩티드 항원 접합체는 화학식 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]를 갖는다.
소수성 단량체가 파라-아미노페닐알라닌 (때때로 "F'로 약칭됨)인 상기 예에서, 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성체의 구조는 하기이다:
.
백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 약물 분자는 펩티드 항원 접합체 및/또는 친양쪽성체의 소수성 블록에 포함된다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서 X1 및 X5는 적합한 링커이고; b는 스페이서를 포함하는 정수의 단량체 단위이고, 전형적으로 4 내지 36개, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 36개의 단량체 단위이고; 소수성 블록 (H)은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하고, 여기서 R4는 아릴, 헤테로아릴, 아미노아릴 및/또는 아미노헤테로아릴 기로부터 선택되고, 약물 (D)은 임의의 적합한 면역조정 약물이고; m 및 n은 단량체 M 및 N의 정수의 반복 단위이고, 여기서 m 및 n의 합계는 전형적으로 3 내지 30이고; A는 항원이고, S는 가용화 블록이고, E1은 N-말단 연장부이고, E2는 C-말단 연장부이고, U는 링커이고, [ ]는 기가 임의적임을 나타낸다. 일부 대안적 실시양태에서 펩티드 항원 접합체는 화학식 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]를 갖는다.
암 치료 및 항체를 유도하기 위한 백신의 바람직한 실시양태에서, 및 mTOR의 억제제로부터 선택된 약물 분자를 추가로 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신의 일부 조성물에서, 백신은 펩티드 항원 접합체 및/또는 친양쪽성체의 소수성 블록에 공유 연결된 이미다조퀴놀린으로부터 선택된 약물 분자를 포함한다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
.
펩티드 항원 접합체 및/또는 친양쪽성체의 소수성 블록이 약물 분자를 포함하는 백신의 바람직한 실시양태에서, 소수성 블록은 트리아졸을 포함하는 링커 U를 통해 항원 및 친양쪽성체에 연결된다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공된다:
.
백신, 특히 개인맞춤형 백신의 특정의 바람직한 실시양태에 대해, 본 개시내용의 본 발명자들은 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성체에 대해 상이한 소수성 블록 조성을 사용하는 것이 바람직하다는 것을 발견하였다. 예를 들어, 고유한 세트의 펩티드 항원 접합체가 각각의 환자에게 제공되는 백신의 경우에, 본 개시내용의 본 발명자들은 아릴, 헤테로아릴, 아미노아릴 및/또는 아미노헤테로아릴 기를 갖는 소수성 단량체 M, 및 아민을 포함하는 임의로 하전된 아미노산 (P)을 추가로 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하는 소수성 블록과의 접합체를 사용하는 것 (여기서 소수성 블록을 구성하는 아미노산의 수는 전형적으로 3 내지 30개임); 및 약물 분자를 포함하는 소수성 블록을 갖는 친양쪽성체를 사용하는 것이 바람직하다는 것을 발견하였다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서 X1 및 X5는 각각 독립적으로 임의의 적합한 링커이고; b는 스페이서를 포함하는 정수의 단량체 단위이고, 전형적으로 4 내지 36개, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 36개의 단량체 단위이고; 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하고, 여기서 R4는 아릴, 헤테로아릴, 아미노아릴 및/또는 아미노헤테로아릴 기로부터 선택되고, m은 전형적으로 3 내지 30이고; 친양쪽성체의 소수성 블록은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하고, 여기서 R4는 아릴, 헤테로아릴, 아미노아릴 및/또는 아미노헤테로아릴 기로부터 선택되고; 약물 (D)은 임의의 적합한 면역조정 약물이고; m 및 n은 단량체 M 및 N의 정수의 반복 단위이고, 여기서 m 및 n의 합계는 전형적으로 3 내지 30이고; A는 항원이고, S는 가용화 블록이고, E1은 N-말단 연장부이고, E2는 C-말단 연장부이고; U는 링커이고, [ ]는 기가 임의적임을 나타낸다. 일부 대안적 실시양태에서 펩티드 항원 접합체는 화학식 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]를 갖는다.
암 치료 및 항체를 유도하기 위한 백신의 또 다른 실시양태에서, 및 mTOR의 억제제로부터 선택된 약물 분자를 추가로 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신의 일부 조성물에서, 백신은 친양쪽성체가 아닌 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록에 공유 연결된 이미다조퀴놀린으로부터 선택된 약물 분자를 포함한다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
.
예를 들어, 여기서 친양쪽성체는 덴드론 아키텍처를 갖고, 4개의 가용화 기 (SG)를 갖는 PEG-기반 덴드론 및 4 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서를 포함하는 가용화 블록을 포함하며, 추가적으로 여기서 가용화 기는 만노스로부터 선택된 당 분자를 포함한다:
.
암을 예방 또는 치료하기 위한 백신 조성물
이전의 섹션은 백신에 사용하기에 일반적으로 바람직한 펩티드 항원 접합체, 친양쪽성체 및 약물 분자 (약물 분자 접합체 포함)의 조성물을 포함하는 백신의 일반적 설명을 제공하였다. 본 섹션은 암을 예방 또는 치료하기 위한 백신 ("암 백신")의 구체적이고 바람직한 실시양태를 기재한다.
암 백신은 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 나노입자를 포함한다. 암 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 친양쪽성체 및 면역자극 약물 분자를 추가로 포함한다.
1개 이상의 펩티드 항원 접합체, 전형적으로 1 내지 40개는 각각, 자기-항원을 포함한 종양 항원, 신생항원 및 바이러스 항원으로부터 전형적으로 선택된 항원 (A)을 포함한다. 암 백신의 바람직한 조성물에서, 펩티드 항원 접합체 중 적어도 1개는 종양 항원으로부터 선택된 항원 (A)을 포함하지만, 암 백신은 또한 감염성 질환 항원뿐만 아니라 비-천연 CD4 헬퍼 펩티드, 예컨대 PADRE로부터 선택된 항원 (A)을 포함하는 1개 이상의 추가의 펩티드 항원 접합체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 암 백신은 신생항원으로부터 선택된 항원을 포함하는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함한다. 다른 실시양태에서, 암 백신은 자기-항원으로부터 선택된 항원을 포함하는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함한다. 다른 실시양태에서, 암 백신은 바이러스 항원, 보다 바람직하게는 악성종양과 연관된 바이러스 항원 (예를 들어, HPV, HCV, 폴리오마 바이러스 등)으로부터 선택된 항원을 포함하는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함한다.
펩티드 항원 접합체의 수는 충분한 면역 반응이 각각의 대상체에서 유도될 수 있도록 보장하기 위해 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 암 치료를 위한 백신은 전형적으로, 각각 1개 이상의 CD4, CD8 T 세포 및/또는 B 세포 에피토프 또는 예측된 에피토프를 포함하는 고유한 펩티드 항원 (A)을 포함하는, 최대 약 40개, 전형적으로 100개 이하의 펩티드 항원 접합체를 포함한다. 항원을 선택하기 위한 보다 상세한 방법은 다른 곳에서 보다 상세하게 기재된다.
암 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 유형-I IFN을 유도하는 면역자극제로부터 선택된 약물 분자를 추가로 포함하고, 이는 전형적으로 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8a, TLR-9, RLR 및 STING의 효능제로부터 선택된다. 암 백신의 바람직한 실시양태에서, 면역자극제는 화학식 IV의 이미다조퀴놀린으로부터 선택되며, 이는 공유 결합을 통해 펩티드 항원 접합체 및/또는 친양쪽성체에 연결된다.
암 백신의 일부 실시양태에서, 1개 이상의 펩티드 항원 접합체는 가용화 블록을 포함하고 (예를 들어, 펩티드 항원 접합체는 화학식 S-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-S의 펩티드 항원 접합체로부터 선택됨), 친양쪽성 담체는 포함되지 않는다. 펩티드 항원 접합체가 가용화 블록을 포함하고 친양쪽성 담체 (예를 들어, 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체)가 부재하는 암 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 유리 약물 분자로서 (예를 들어, D + S-[E1]-A-[E2]-[U]-H 또는 H-U-[E1]-A-[E2]-S) 또는 약물 분자 접합체로서 (예를 들어, D-H + S-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-S) 펩티드 항원 접합체와 혼합되어 포함되는 면역자극제로부터 선택된 1개 이상의 약물 분자를 추가로 포함하거나, 또는 약물 분자는 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록에 직접적으로 연결된다 (예를 들어, S-[E1]-A-[E2]-[U]-H-D 또는 H-D-U-[E1]-A-[E2]-S). 특정의 바람직한 실시양태에서, 면역자극제는 공유 결합을 통해 소수성 블록에 연결된 화학식 IV의 이미다조퀴놀린으로부터 선택된다.
친양쪽성 담체 (예를 들어, 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체)를 추가로 포함하는 암 백신의 다른 실시양태에서, 1개 이상의 펩티드 항원 접합체는 임의로 가용화 기를 포함한다 (예를 들어, 펩티드 항원 접합체는 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S]의 펩티드 항원 접합체로부터 선택됨). 본 개시내용에서 앞서 기재된 바와 같이, 4 내지 16개의 가용화 기를 갖는 PEG-기반 덴드론 및 4 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서를 포함하는 가용화 블록을 포함하며, 여기서 가용화 기는 당 분자, 카르복실산, 아민 및/또는 히드록실을 포함하고, 소수성 블록은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하는 것인, 원뿔 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-[U]-H-D의 친양쪽성체는 대안적 친양쪽성체 아키텍처 및 조성과 비교하여 일관되고 증진된 면역원성을 갖는 개선된 제제를 생성하였다. 그러나, 3 내지 12개의 하전된 아미노산 (예를 들어, 리신)을 갖는 선형 펩티드 및 4 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서를 포함하는 가용화 블록 (여기서 소수성 블록은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함함)도 또한 암 백신에 적합한 담체인 것으로 발견되었다.
따라서, 암 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S]의 1개 이상, 전형적으로 1 내지 40개의 펩티드 항원 접합체 및 원뿔 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-[U]-H-[D]의 친양쪽성체를 포함하며, 여기서 원뿔 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 4 내지 16개의 가용화 기를 갖는 PEG-기반 덴드론 및 4 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서를 포함하는 가용화 블록을 추가로 포함하고, 추가적으로 여기서 가용화 기는 당 분자, 카르복실산, 아민 및/또는 히드록실을 포함하고, 소수성 블록은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함한다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서 b는 스페이서를 포함하는 정수의 단량체 단위이고, 전형적으로 4 내지 36개, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 36개의 단량체 단위이고; SG는 직접적으로 또는 적합한 링커 X, 또는 보다 바람직하게는 X5를 통해 S에 연결된 당 분자, 카르복실산, 아민 및/또는 히드록실로부터 선택되고; 소수성 블록 (H)은 전형적으로 화학식 I의 폴리(아미노산)로부터 선택되고; S는 가용화 블록이고, E1은 N-말단 연장부이고, A는 종양 항원으로부터 선택된 항원이고, E2는 C-말단 연장부이고, U는 링커이고, D는 약물 분자이고, [ ]는 기가 임의적임을 나타낸다. 일부 대안적 실시양태에서 펩티드 항원 접합체는 화학식 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 +2 이상, 바람직하게는 +3 내지 +5의 알짜 양전하를 갖고, 펩티드 항원 접합체의 가용화 블록이 존재하며 리신 및/또는 오르니틴 잔기를 추가로 포함하는 폴리(아미노산) (또는 "펩티드")를 포함하고; 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비는 4:1 내지 1:4, 보다 바람직하게는 2:1 내지 1:2 또는 약 1:1이며; b는 24 내지 36개의 단량체 단위를 포함한다.
암 백신의 특정의 다른 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S]의 1개 이상, 전형적으로 1 내지 40개의 펩티드 항원 접합체 및 선형 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-[U]-H-[D]의 친양쪽성체를 포함하며, 여기서 선형 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 3 내지 12개의 하전된 아미노산을 갖는 펩티드 및 4 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서를 포함하는 가용화 블록을 추가로 포함하고, 소수성 블록은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함한다.
암 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 면역자극 약물 분자, 및 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-D 또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S]의 1개 이상, 전형적으로 1 내지 40개의 펩티드 항원 접합체 및 원뿔 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-[U]-H-D의 친양쪽성체를 포함하며, 여기서 원뿔 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 4 내지 16개의 가용화 기를 갖는 PEG-기반 덴드론 및 4 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서를 포함하는 가용화 블록을 추가로 포함하고, 추가적으로 여기서 가용화 기는 만노스 또는 시알릴 루이스x (sLeX)로부터 선택된 당 분자를 포함하고, 소수성 블록은 화학식 IV의 이미다조퀴놀린을 추가로 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함한다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서 X1, X3 및 X5는 각각 독립적으로 임의의 적합한 링커 분자이고; b는 스페이서를 포함하는 정수의 단량체 단위이고, 전형적으로 4 내지 36개, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 36개의 단량체 단위이고; S는 가용화 블록이고, E1은 N-말단 연장부이고, E2는 C-말단 연장부이고, A는 종양 항원으로부터 선택된 항원이고, [ ]는 기가 임의적임을 나타낸다. 일부 대안적 실시양태에서 펩티드 항원 접합체는 화학식 H-D-U-[E1]-A-[E2]-[S]를 갖는다. 바람직한 실시양태에서, 1개 이상의 펩티드 항원 접합체의 평균 알짜 전하는 +2 이상, 바람직하게는 +2 내지 +6, 보다 바람직하게는 +3 내지 +5이고, 펩티드 항원 접합체의 가용화 블록이 존재하며 리신 및/또는 오르니틴 잔기를 추가로 포함하는 폴리(아미노산) (또는 "펩티드")를 포함하고; 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비는 4:1 내지 1:4, 보다 바람직하게는 2:1 내지 1:2 또는 약 1:1이며; b는 12 내지 36개의 단량체 단위, 바람직하게는 24개의 단량체 단위를 포함한다.
개인맞춤형 온-디맨드 요법으로서 사용되는 암 백신 ("개인맞춤형 암 백신" 또는 "PCV")의 특정의 바람직한 조성물의 경우, 약물 분자는 친양쪽성체의 소수성 블록 내로 혼입될 수 있지만, 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록 내로는 혼입되지 않을 수 있고, 예컨대 하기이다:
.
암 백신의 일부 실시양태에서, 대상체에게 제공된 제1 백신 ("프라이밍")의 바람직한 조성물은 대상체에게 제공된 제2 백신 ("부스팅")의 바람직한 조성물과 상이하다.
바람직한 암 치료 요법에서, 대상체에게 프라이밍 면역화 및 적어도 1회의 부스팅 면역화가 제공되며, 여기서 각각의 면역화는 1 내지 64일, 보다 바람직하게는 약 7 내지 21일의 간격으로 분리된다. 예를 들어, 특정 암 치료 요법의 경우, 프라이밍 면역화에 이어 프라이밍의 7 내지 21일 후에 부스팅 면역화가 제공된다.
특정의 바람직한 암 치료 요법에서, 1개 이상, 전형적으로 1 내지 40개의 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S]의 펩티드 항원 접합체, 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체, 및 적어도 1개의 면역자극 약물 분자를 추가로 포함하는 나노입자를 포함하는 프라이밍 면역화가 대상체에게 제공되고, 이어서 박테리아, 바이러스, 시토카인, 케모카인 등으로부터 선택된 생물학적 아주반트, 및 1개 이상, 전형적으로 1 내지 40개의 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S]의 펩티드 항원 접합체, 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체 및 임의로 면역자극 약물 분자를 포함하는 나노입자를 포함하는 부스팅 면역화가 제공된다. 본원에 개시된 예상외의 발견은 생물학적 아주반트, 예컨대 바이러스를 포함하는 부스팅 면역화가 하기 기준: 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 나노입자를 (i) 정맥내 경로에 의해 투여하고, (ii) 면역자극 약물은 포함하지 않음을 충족시켰을 때 보다 높은 규모의 면역 반응을 유도하였다는 것이다. 이들 기준을 충족시키는 프라이밍 및 부스팅 조성물의 비제한적 예가 하기에 제공된다.
프라이밍의 비제한적 예는 하기를 포함한다:
.
생물학적 아주반트와 조합하여 사용하기 위해 포함되는 부스팅 조성물의 비제한적 예는 하기를 포함한다:
.
여기서 X1, X3 및 X5는 각각 독립적으로 임의의 적합한 링커 분자이고; b는 스페이서를 포함하는 정수의 단량체 단위이고, 전형적으로 4 내지 36개, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 36개의 단량체 단위이고; SG는 직접적으로 또는 적합한 링커 X, 또는 보다 바람직하게는 X5를 통해 S에 연결된 당 분자, 카르복실산, 아민 및/또는 히드록실로부터 선택되고; m은 정수의 소수성 아미노산의 반복 단위이고, 이는 전형적으로 3 내지 30개로부터 선택되고; S는 가용화 블록이고, E1은 N-말단 연장부이고, A는 종양 항원으로부터 선택된 항원이고, E2는 C-말단 연장부이고, U는 링커이고, [ ]는 기가 임의적임을 나타낸다. 일부 대안적 실시양태에서 펩티드 항원 접합체는 화학식 H-[D]-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]를 갖는다.
트립토판을 추가로 포함하는 H를 포함하는 암 백신 조성물의 특정의 바람직한 실시양태에서, 트립토판은 R 기가
이도록 N-메틸화된다 (CAS 번호: 21339-55-9).
본원에 개시된 주목할 만한 발견은 당 분자 및/또는 카르복실산을 추가로 포함하는 가용화 블록을 갖는 친양쪽성체는, 평균 알짜 양전하를 갖는 1개 이상의 펩티드 항원 접합체, 특히 양으로 하전된 아미노산, 예컨대 리신을 포함하는 가용화 블록을 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신에 포함되는 경우에, 용혈 활성을 포함하여 감소된 독성을 유발한다는 것이었다. 이들 발견은 친양쪽성체가 결여된 암 백신보다 더 안전하고 더 내약성이 우수한, 양으로 하전된 펩티드 항원 접합체 및 중성 또는 음성 친양쪽성체 둘 다를 포함하는 정맥내 투여를 위한 암 백신의 설계로 이어졌다. 추가의 주목할 만한 발견은 정맥내 투여를 위한 암 백신 조성물의 안전성 및 내약성이 mTORC1 신호전달만을 차단하는 약물 분자를 포함시키는 것에 의해 추가로 개선될 수 있다는 것이었다. 예를 들어, mTORC1 및 mTORC2 둘 다의 하류 신호전달을 억제하는 ATP-경쟁적 mTOR 억제제는 Th1 표현형을 갖는 CD4 T 세포를 유도하는 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8, TLR-9, RIGI 및 STING로부터 선택된 면역자극제의 능력을 차단하는 것으로 발견되었지만, 주목할 만한 발견은 mTORC1은 억제하지만 mTORC2는 억제하지 않는 라파마이신 및 관련 분자가 면역원성 및 효능에 유해 영향을 미치지 않으면서 정맥내 투여 경로에 의해 투여된 암 백신의 독성을 감소시키기 위해 사용될 수 있다는 것이었다. 따라서, 암을 예방 또는 치료하기 위한 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 백신은 라파마이신 (시롤리무스), 타크롤리무스, 에베롤리무스, RAD001 (에베롤리무스), CCI-779 (템시롤리무스) 및 AP23573 (데페롤리무스)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 mTORC1의 억제제를 포함하고, 총 펩티드 항원 접합체 (즉, 펩티드 항원 접합체의 총 몰량) 대 mTOR의 억제제의 몰비는 약 100:1 내지 약 1:4로부터 선택되며, 약 10:1 내지 1:2의 몰비가 바람직하고, 약 5:1 내지 약 1:1 또는 약 4:1 내지 약 2:1의 몰비가 가장 바람직하게 적합하다.
당으로부터 선택된 가용화 기 (SG)를 갖는 친양쪽성체는 안정한 나노입자 제제를 보장할 뿐만 아니라 양성 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체의 용혈 활성을 감소시키기 위한 담체로서 유용성을 갖는 것으로 발견되었다. 이들 특징에 더하여, 친양쪽성체는 또한 종양-연관 글리칸에 대한 항체 반응을 유도하는 역할을 할 수 있는 것으로 발견되었다. 따라서, sTn, TF, sTF, 글로보 H, SSEA-3, GM2, GD2, GD3, 푸코실 GM1, NeuGcGM3 및 폴리(시알산) 종양 연관 글리칸으로부터 선택된 SG를 갖는 친양쪽성체는 둘 다 담체로서 뿐만 아니라 종양 글리칸-특이적 항체를 유도하기 위한 합텐으로서 역할을 할 수 있는 것으로 관찰되었다.
주목할 만한 것으로, 종양에 대한 항체 및 T 세포 반응 둘 다의 유도는 항체 또는 T 세포 반응 단독을 유도하는 것과 비교하여 개선된 효능으로 이어진다는 것이 또한 관찰되었다. 따라서, 암 백신의 바람직한 실시양태에서, 암 백신은 T 세포 에피토프 및 B 세포 에피토프를 포함하는 펩티드 항원 (A), 및 임의로 종양-특이적 글리칸을 포함하는 합텐을 포함한다. 특정의 바람직한 실시양태에서, B 세포 에피토프를 포함하는 펩티드 항원은 당펩티드로부터 선택된다. 다양한 종양 연관 당펩티드가 관련 기술분야에 공지되어 있다. 암 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 세린 및 트레오닌 잔기에서 O-연결된 글리코실화를 갖는 뮤신 1 유래 펩티드로부터 선택된 당펩티드로부터 선택된 항원을 추가로 포함한다. 비제한적 예는 펩티드 항원 서열 HGVT*S*APDT*RPAPGS*T*APPA, DT*RPAPGS*T*APPAHGVT*S*AP, GS*T*APPAHGVT*S*APDT*RPAPGS*T*APPA, GVT*S*APDT*RPAP, APDT*RPAPGS*T*A, GS*T*APPAHGVT*S*AP, VT*S*AP, DT*RPAP 및 GS*T*AP를 포함하며, 여기서 *는 O-연결된 글리칸이고, 각 경우는 독립적으로 시알릴 루이스 x, 시알릴 루이스 a, 루이스 y, 루이스 x, Tn, sTn, TF 및 sTF 글리칸으로부터 선택된다.
당펩티드-기반 항원을 포함하고 가용화 블록은 결여되어 있는 펩티드 항원 접합체 (즉, [E1]-A-[E2]-[U]-H-[D], 여기서 A는 당펩티드임)를 포함하는 암 백신의 특정 조성물의 경우, 펩티드 항원 접합체는 친양쪽성 담체의 부재 하에 일관된 크기의 나노입자 미셀을 형성하였다. 비제한적 설명은 당펩티드 항원 (A)을 포함하는 펩티드 항원 접합체 상에 존재하는 글리칸이 펩티드 항원 접합체 또는 친양쪽성체 상의 가용화 블록의 부가를 필요로 하지 않으면서 충분한 용해도를 제공한다는 것이다. 따라서, 당펩티드-기반 항원을 포함하는 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 암 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체 및/또는 친양쪽성체의 S 블록은 존재할 수 있거나 부재할 수 있다.
중요한 것으로, 본 개시내용의 본 발명자들은 B 세포 에피토프를 추가로 포함하는 펩티드 항원, 예를 들어 종양 세포 표면 단백질로부터 유래된 펩티드 또는 당펩티드를 포함하는 암 백신의 경우에, 강성 연장부 (E1 또는 E2)가 항원 (A)을 소수성 블록 (H)에 연결하는 데 바람직하였음을 발견하였다. 바람직한 실시양태에서, 종양 세포 표면 단백질로부터 유래된 펩티드 또는 당펩티드를 포함한 B 세포 에피토프를 연결하는 데 사용되는 연장부는 바람직하게는 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부를 포함하는 서열로부터 선택된다. T- 및/또는 B-세포 항원을 갖는 암 백신의 또 다른 실시양태에서, 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부로부터 선택된 연장부 (E1 또는 E2)의 사용은 나노입자 미셀의 입자 안정성을 개선시켜 보다 균일한 나노입자 크기를 생성하는 것으로 발견되었다. 따라서, 암 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 연장부 (E1 및/또는 E2)는 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부로부터 선택된다. 연장부 (E1 및/또는 E2)로서 사용하기 위한 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부의 바람직한 조성은 명세서의 다른 곳에서 기재된다.
항체 반응을 유도하기 위한 백신 조성물
이전의 섹션은 백신에 사용하기에 일반적으로 바람직한 펩티드 항원 접합체, 친양쪽성체 및 약물 분자 (약물 분자 접합체 포함)의 조성물을 포함하는 백신의 일반적 설명을 제공하였다. 본 섹션은 항체 반응을 유도하기 위한 백신 ("항체 백신"), 특히 건강 및 합텐에 유해할 수 있는 내인성으로 생산된 단백질인 감염성 유기체로부터 유래된 최소 면역원에 대해 지시된 항체의 구체적이고 바람직한 실시양태를 기재한다.
본원에 기재된 항체 백신은 1개 이상의 펩티드 항원 접합체 또는 1개 이상의 합텐 접합체를 포함하는 나노입자를 포함하며, 여기서 합텐 접합체는 스페이서를 통해 소수성 블록에 공유 부착된 독소 또는 독소의 유사체 또는 유도체를 포함한다. 항체 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 친양쪽성체 및 면역자극 약물 분자를 추가로 포함한다.
1개 이상의 펩티드 항원 접합체, 전형적으로 1 내지 40개는 각각, 전형적으로 감염성 질환 항원 (예를 들어, 바이러스, 박테리아, 원충 또는 진균 항원) 또는 내인성 단백질, 예컨대 건강에 유해할 수 있는 내인성 단백질, 예컨대 심혈관 질환에 연루된 단백질, 예컨대 PCSK9 및 ANGPTL3, 뿐만 아니라 β 아밀로이드 펩티드, 알파 시뉴클레인 및 미세관-연관 단백질 타우를 포함한 아밀로이드를 형성하는 다양한 단백질 또는 펩티드를 포함한 신경변성 질환에 수반되는 단백질로부터 선택된 항원 (A)을 포함한다.
1개 이상의 합텐 접합체는 각각 독소 또는 독소의 유사체, 예컨대 남용 약물의 유사체 또는 유도체, 신경 작용제 등을 포함한다. 바람직한 항체 백신에서, 항체 백신은 또한 감염성 질환 항원 및/또는 비-천연 CD4 헬퍼 펩티드, 예컨대 PADRE로부터 선택된 항원 (A)을 포함하는 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함한다. 특이적 항원 또는 합텐은 항체 백신의 의도된 용도에 기초하여 선택된다. 항원을 선택하기 위한 상세한 방법은 다른 곳에서 보다 상세하게 기재된다.
항체 백신의 일부 실시양태에서, 1개 이상의 합텐 접합체 또는 펩티드 항원 접합체 (예를 들어, 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S] 및/또는 A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A의 펩티드 항원 접합체)는 친양쪽성 담체 (예를 들어, 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체)와 조합된다. 본 개시내용에서 앞서 기재된 바와 같이, 4 내지 16개의 가용화 기를 갖는 PEG-기반 덴드론 및 4 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서를 포함하는 가용화 블록을 포함하며, 여기서 가용화 기는 당 분자, 카르복실산, 아민 및/또는 히드록실을 포함하고, 소수성 블록은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하는 것인, 원뿔 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-[U]-H-D의 친양쪽성체는 대안적 친양쪽성체 아키텍처 및 조성과 비교하여 개선된 제제 일관성 및 증진된 면역원성을 유도하였다. 그러나, 3 내지 12개의 하전된 아미노산 (예를 들어, 리신)을 갖는 선형 펩티드 및 4 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서를 포함하는 가용화 블록 (여기서 소수성 블록은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함함)도 또한 항체 백신에 적합한 담체인 것으로 발견되었다.
항체 백신의 일부 실시양태에서, 항체 백신은 알짜 양전하를 갖는 화학식 S-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D]의 1개 이상의 펩티드 항원 접합체 및 1개 이상의 합텐 접합체 및/또는 화학식 A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A의 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함한다.
항체 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S], 또는 보다 바람직하게는 A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A의 1개 이상, 전형적으로 1 내지 40개의 합텐 접합체 및/또는 펩티드 항원 접합체, 및 덴드론 (또는 "원뿔") 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-[U]-H-[D]의 친양쪽성체를 포함하며, 여기서 덴드론 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 4 내지 16개의 가용화 기를 갖는 PEG-기반 덴드론 및 4 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서를 포함하는 가용화 블록을 추가로 포함하고, 추가적으로 여기서 가용화 기는 당 분자, 카르복실산, 아민 및/또는 히드록실을 포함하고, 소수성 블록은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함한다.
비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서 b는 스페이서를 포함하는 정수의 단량체 단위이고, 전형적으로 4 내지 36개, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 36개의 단량체 단위이고; SG는 직접적으로 또는 적합한 링커 X, 또는 보다 바람직하게는 X5를 통해 S에 연결된 당 분자, 카르복실산, 아민 및/또는 히드록실로부터 선택되고; 소수성 블록 (H)은 전형적으로 화학식 I의 폴리(아미노산)로부터 선택되고; S는 가용화 블록이고; E1은 N-말단 연장부이고; A는 전형적으로 감염성 질환 항원, 암 세포 표면 항원 또는 내인성 단백질로부터 선택된 최소 면역원을 포함하는 항원이고; E2는 C-말단 연장부이고; B는 스페이서이고; U는 링커이고; D는 약물 분자이고, [ ]는 기가 임의적임을 나타낸다. 일부 대안적 실시양태에서 펩티드 항원 접합체는 화학식 H-[D]-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]를 갖는다.
항체 백신의 특정의 다른 바람직한 실시양태에서, 백신은 1개 이상, 전형적으로 1 내지 40개의 합텐 접합체 및/또는 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S], 보다 바람직하게는 A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-U-[E1]-A의 펩티드 항원 접합체 및 선형 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-[U]-H-[D]의 친양쪽성체를 포함하며, 여기서 선형 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 3 내지 12개의 하전된 아미노산을 갖는 펩티드 및 4 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 PEG-기반 스페이서를 포함하는 가용화 블록을 추가로 포함하고, 소수성 블록은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함한다.
항체 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 면역자극제로부터 선택된 약물 분자를 추가로 포함하고, 이는 전형적으로 TLR-1, TLR-2, TLR-6, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8a 또는 TLR-9의 효능제로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 면역자극제는 화학식 IV의 이미다조퀴놀린으로부터 선택되며, 이는 공유 결합을 통해 펩티드 항원 접합체 (또는 합텐 접합체) 및/또는 친양쪽성체에 연결된다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공된다:
.
본원에 개시된 예상외의 발견은 펩티드 항원 접합체에서 PEG- 및/또는 펩티드-기반 연장부 (E1 또는 E2)를 사용하는 것이 1개 이상의 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성 담체 ('친양쪽성체')를 포함하는 모자이크 나노입자 백신의 개선된 제조가능성뿐만 아니라 증진된 면역원성을 유도하였다는 것이다. 따라서, 본 개시내용의 본 발명자들은 PEG를 포함하는 E1 또는 E2 및/또는 1 내지 36개의 단량체 단위를 갖는 펩티드를 통해 소수성 블록에 연결된 펩티드 항원, 및 항원 및 E1 또는 E2 연장부의 단량체 단위의 합계 이하인 단량체 단위의 수를 갖는 PEG를 포함하는 스페이서 (B)를 갖는 친양쪽성체를 추가로 포함하는 나노입자를 포함하는 항체 백신이, 친양쪽성체의 PEG-기반 스페이서 (B)가 펩티드 항원 접합체의 항원 및 E1 (또는 E2) 단량체 단위의 수의 합계보다 더 큰 수의 단량체 단위를 갖는 경우보다 더 높은 규모의 항체 역가를 유도하는 안정한 나노입자 미셀을 생성하였다는 것을 발견하였다. 추가적으로, 본 발명자들은 N-말단 위치가 PEG-기반 연장부를 혼입시키는 데 바람직하였음을 발견하였다. 따라서, 항체-기반 백신의 바람직한 실시양태에서, 합텐 또는 펩티드 항원은 PEG- 및/또는 펩티드-기반 E1 또는 E2 연장부를 통해, 보다 바람직하게는 E1 연장부를 통해 소수성 블록에 연결된다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서 X, X1 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 적합한 링커 분자이고, b는 스페이서를 포함하는 정수의 단량체 단위이고, 전형적으로 4 내지 36개, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 36개의 단량체 단위이고; e는 연장부 (E1 또는 E2)를 포함하는 정수의 단량체 단위이고, 전형적으로 1 내지 36개, 보다 바람직하게는 4 내지 24개, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24개의 단량체 단위로부터 선택되고; SG는 직접적으로 또는 적합한 링커 X, 또는 보다 바람직하게는 X5를 통해 S에 연결된 당 분자, 카르복실산, 아민 및/또는 히드록실로부터 선택되고; A는 전형적으로 감염성 질환 항원 또는 내인성 단백질로부터 선택된 최소 면역원을 포함하는 항원이고, U는 링커이고, [ ]는 기가 임의적임을 나타낸다. 바람직한 실시양태에서, e는 4 내지 24개의 단량체 단위로부터 선택되고, b는 4 내지 24개의 단량체 단위로부터 선택된다.
특정의 바람직한 실시양태에서, 가용화 기는 만노스로부터 선택되고, 상기 구조는 하기와 같아지며:
여기서 X5는 임의의 적합한 링커 분자이다.
항원 (A) (또는 합텐)과 소수성 블록 (H) 사이에 PEG 및/또는 펩티드-기반 연장부를 도입하는 것이 일반적으로 용해도를 개선시키고, 항원 (또는 합텐)에 대해 지시된 항체 반응의 규모를 증가시키는 것으로 발견되었지만, 추가의 주목할 만한 발견은 연장부 (E1 또는 E2)의 강성을 증가시키는 것이 일반적으로 항체 반응을 추가로 증진시킨다는 것이었다. 본 개시내용의 본 발명자들은 펩티드 항원 (A)과 소수성 블록 (H) 사이에 연장부 (E1 또는 E2)를 포함하는 적합한 펩티드가 글리신, 세린, 트레오닌, 알라닌, 프롤린 및 에틸렌 옥시드로부터 선택된 아미노산을 포함하는 약 4 내지 24개의 아미노산 길이의 펩티드, 또는 보다 바람직하게는 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부를 포함하는 펩티드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다는 것을 발견하였다. 연장부 (E1 및/또는 E2)로서 사용하기 위한 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부의 바람직한 조성은 다른 곳에서 기재된다. 일부 실시양태에서, 연장부는 PEG-기반 링커, 펩티드 서열, 보다 바람직하게는 헵타드 반복부, 및/또는 지방족 링커의 조합을 포함한다. 항체 반응을 유도하기 위한 백신, 예를 들어 최소 면역원 백신의 바람직한 실시양태에서, 항원 (A)은 하기 비제한적 예에 제시된 바와 같은 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부로부터 선택된 연장부를 통해 소수성 블록 (H)에 연결된다:
.
이미다조퀴놀린 약물 분자가 친양쪽성체 상에 존재하지 않는 상기 예에서, 구조는 하기이다:
.
트립토판을 추가로 포함하는 H를 포함하는 항체를 유도하기 위한 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 트립토판은 R 기가
이도록 N-메틸화된다 (CAS 번호: 21339-55-9).
심혈관 및 신경변성 질환을 치료하기 위한 백신 조성물
심혈관 또는 신경변성 질환을 치료하기 위한 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 S-B-[U]-H-[D]의 친양쪽성체 및 화학식 A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-[U]-[E1]-A의 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함하고, 여기서 1개 이상의 펩티드 항원 접합체는 심혈관 또는 신경변성 질환에 연루된 내인성 단백질로부터 유래된 항원으로부터 선택된다.
심혈관 또는 신경변성 질환을 치료하기 위한 백신의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며, 여기서 백신은 화학식:
의 1개 이상의 펩티드 항원 접합체
및 화학식:
의 친양쪽성 담체를 포함하고,
여기서 X1 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 적합한 링커 분자이고, b는 스페이서를 포함하는 정수의 단량체 단위이고, 전형적으로 4 내지 36개, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 36개의 단량체 단위, 바람직하게는 약 4 내지 24개의 단량체 단위 길이이고; SG는 직접적으로 또는 적합한 링커 X, 또는 보다 바람직하게는 X5를 통해 S에 연결된 당 분자, 카르복실산, 아민 및/또는 히드록실로부터 선택되고; U는 전형적으로 트리아졸 (존재하는 경우)을 포함하는 링커이고; E1 (또는 E2)은 전형적으로 존재하고, PEG 또는 1 내지 36개의 단량체 단위 길이, 전형적으로 약 4 내지 24개의 단량체 단위 길이의 펩티드로부터 선택되고; A는 심혈관 질환에 수반되는 내인성 단백질, 예컨대 PCSK9 및/또는 ANGPTL3으로부터 유래된 펩티드 서열, 예컨대 비제한적으로 RGYLTKILHVFHGLLPGFLVKMSGDLLE, PGFLVKMSGDLLE, PGFLVKnSGDLLE (여기서 n = 노르류신), PGFLVKMSSDLLG, PGFLVKnSSDLLG (여기서 = 노르류신), SIPWNLERITPPR, SIPWNLERITPPR, SIPWNLE, SIPWNLEKVTPPR, SIPWNLDRVTPPR, NVPEEDGTRFHRQASKC, NVPEEDGTRFHRQASK, PEEDGTR, NVPEEDG, NVPEEDATRFHRQGSK, LFAPGEDIIGASSDCSTCFVSQSGTSQAAA, CSTCFVSQSGTSQAAA, STCFVSQSGTSQAAA, STBFVSQSGTSQAAA, STBFVSQ, MFTIKLLLFIVPLVISSRIDQDNSSFDSLSPEPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGLKDFVHKTKGQIND, EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGLKDFVHKTKGQIND, EPKSRFAMLDDVKI, MLDDVKILANGLLQ, LANGLLQLGHGLKD, LGHGLKDFVHKTKG, LKDFVHKTKGQIND, RFAMLDDVKILANGLLQLGH, GLLQLGHGLKDFVHKTKGQI, IFQKLNIFDQSFYDLSLQTSEIKEEEKELRRTTYKLQVKNEEVKNMSLELNSKLESLLEEKILLQQKVKY, 또는 신경변성 질환에 수반되는 내인성 단백질, 예컨대 베타 펩티드, 알파 시뉴클레인, 및 미세관-연관 단백질 타우 또는 그의 임의의 단편 또는 유도체로부터 유래된 펩티드 서열로부터 선택된 펩티드 항원이고; [ ]는 기가 임의적임을 나타낸다.
심혈관 백신의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서, 상기 예에서, 펩티드 항원 접합체는 트리아졸 링커를 통해 화학식 IV의 이미다조퀴놀린에 연결된 화학식 I의 폴리(아미노산)-기반 소수성 블록 (H)에 연결된 펩티드 항원 (서열: SIPWNLEKVTPPR)을 포함한다.
심혈관 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 1개 이상의 펩티드 항원 접합체는 전형적으로, PEG, 예를 들어 (CH2-CH2-O)e (여기서 e는 전형적으로 1 내지 36개, 보다 바람직하게는 4 내지 24개의 단량체 단위로부터 선택된, 정수의 에틸렌 옥시드 단위임); 펩티드, 예컨대 (Gly-Ser)2-12, (Gly-Gly-Gly-Ser)1-4, (Ala-Pro)2-12, (Ile-Ala-Ala-Ile-Glu-Ser-Lys)1-4, (Ile-Ala-Ala-Ile-Lys-Ser-Lys)1-4, 또는 (Ile-Ala-Ala-Ile-Glu-Ser-Glu)1-4; 또는 PEG- 및 펩티드-기반 링커의 조합으로부터 선택된 연장부 (E1 또는 E2)를 포함한다.
감염성 질환을 치료 또는 예방하기 위한 백신 조성물
감염성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 S-B-[U]-H-[D]의 친양쪽성체 및 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 및/또는 H-[D]-[U]-[E1]-A-[E2-[S]의 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함한다. 감염성 질환을 예방 또는 치료하기 위해 선택된 항원이 B 세포 에피토프인 경우에, 펩티드 항원 접합체는 가용화 블록을 갖지 않고, 펩티드 항원 접합체는 화학식 A-[E2]-[U]-H-[D] 또는 H-[D]-[U]-[E1]-A를 갖는다.
B 세포 에피토프를 포함하는 1개 이상의 항원 (A)을 추가로 포함하는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 감염성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 백신의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며, 여기서 백신은 화학식:
의 1개 이상의 펩티드 항원 접합체
및 화학식:
의 친양쪽성 담체를 포함하고, 여기서 X1 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 적합한 링커 분자이고, b는 스페이서를 포함하는 정수의 단량체 단위이고, 전형적으로 4 내지 36개, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 36개의 단량체 단위이고; SG는 직접적으로 또는 적합한 링커 X, 또는 보다 바람직하게는 X5를 통해 S에 연결된 당 분자, 바람직하게는 만노스 또는 시알릴 루이스 x 당, 카르복실산, 아민, 및/또는 히드록실로부터 선택되고; U는 바람직하게는 트리아졸 (존재하는 경우)로부터 선택된 링커이고; E1 (또는 E2)은 전형적으로 존재하고, PEG 또는 1 내지 36개의 단량체 단위 길이, 전형적으로 약 4 내지 24개의 단량체 단위 길이의 펩티드로부터 선택되고; A는 감염성 유기체로부터 유래된 펩티드 서열로부터 선택된 펩티드 항원이고; [ ]는 기가 임의적임을 나타낸다.
관용을 촉진하는 데 유용한 백신의 일반적 특색
본 개시내용의 본 발명자들은 알레르기 및 자가면역의 치료를 위한 백신을 포함하여, 관용을 유도하기 위한 백신의 제조성, 안전성 및/또는 효능에서 예상외의 개선을 제공한 조성물을 확인하였다.
관용을 유도하기 위한 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 [S]-[E]-A-[E2]-[U]-H의 1개 이상의 펩티드 항원 접합체, 화학식 S-[B]-[U]-H의 친양쪽성체 및 임의로 1개 이상의 별개의 면역조정 약물 분자를 포함하고, 이는 펩티드 항원 접합체 (예를 들어, [S]-[E]-A-[E2]-[U]-H-D), 친양쪽성체 (예를 들어, S-[B]-[U]-H) 또는 둘 다의 소수성 블록에 연결될 수 있거나, 또는 약물 분자 접합체 (예를 들어, D-[B]-[U]-H), 또는 유리 약물, D로서 제공될 수 있다.
1개 이상의 펩티드 항원 접합체는 각각, 바람직하게는 1개 이상의 T 세포 에피토프를 포함하는 자가항원 또는 알레르겐으로부터 선택된 항원 (A)을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 관용을 유도하기 위한 백신은 전형적으로, 각각 별개의 펩티드 항원 (A) 조성을 갖는, 펩티드 항원 접합체의 1개 초과의 조성물, 바람직하게는 1 내지 40개의 고유한 펩티드 항원 접합체를 포함한다. 항원 (A)을 선택하는 방법은 다른 곳에서 상세하게 기재된다.
가용화 블록 (S)에 대한 다양한 옵션이 존재하고, 본 명세서의 다른 곳에서 보다 상세하게 기재되어 있지만, 본 개시내용의 저자는 개선된 제조뿐만 아니라 관용을 유도하기 위한 백신의 증진된 안전성 및 효능으로 이어지는 가용화 블록 (S)의 특정 아키텍처 및 조성을 확인하였다. 따라서, 2 내지 32개의 가용화 기, 바람직하게는 약 4 내지 8개의 가용화 기를 갖는 덴드론 아키텍처를 갖는 가용화 블록 (S)이, 입자 안정화를 위해 보다 높은 알짜 표면 전하를 필요로 하는 경향이 있는 선형 또는 브러시 아키텍처를 갖는 가용화 블록과 비교하여, 백신으로의 제조 및 펩티드 항원 접합체 로딩을 일반적으로 개선시키는 데 최적인 것으로 발견되었다. 추가적으로, 특정 가용화 기 (SG) 조성물은 관용을 유도하기 위한 백신의 효능에 실질적인 영향을 미치는 것으로 발견되었다. 실제로, 본 개시내용의 본 발명자들에 의한 예상외의 발견은 음으로 하전된 가용화 기 및/또는 사카라이드를 포함하고 알짜 음전하 또는 거의 중성 전하를 갖는 덴드론을 포함하는 가용화 블록 (S)을 갖는, 약물 분자를 임의로 포함하는 (예를 들어, S-[B]-[U]-H-D) 화학식 S-[B]-[U]-H의 친양쪽성체를 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신이 자가면역 질환을 치료하는 데 증진된 효능을 유도하였다는 것이다.
따라서, 바람직한 실시양태에서, 관용을 유도하기 위한 백신에 사용되는 친양쪽성체의 가용화 블록은 전형적으로 카르복실산, 포스포세린 (또는 글리세로포스포세린), 글루코스, 만노스, 글루코사민, n-아세틸글루코사민, 갈락토스, 갈락토사민, n-아세틸-갈락토사민 및/또는 CD22a의 효능제로부터 선택된 가용화 기 (SG)를 갖는 덴드론 아키텍처를 포함하며, 이는 직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로 임의의 적합한 수단을 통해 덴드론 아키텍처를 갖는 가용화 블록 (S)의 말단 관능기 (FGt)에 연결될 수 있지만, 바람직한 실시양태에서 가용화 기는 아미드 결합을 통해 FGt에 연결된다. 특정의 바람직한 실시양태에서, 당 분자를 포함하는 가용화 기 (SG)는 아노머 탄소에서 알파- 또는/ 베타-연결을 통해 가용화 블록 (S)에 연결된다. 또 다른 실시양태에서, 가용화 기 (SG)는, 예를 들어 카르복실산을 포함하는 FGt의 경우에 그러할 수 있는 바와 같이, 덴드론의 말단 관능기이다.
카르복실산을 추가로 포함하는 가용화 기 (SG)를 포함하며, 여기서 가용화 블록 (S)은 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 소수성 블록 (H)에 연결된 것인 가용화 블록 (S)의 비제한적인 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
.
예상외의 발견은 상기 구조의 친양쪽성체가 생리학적 pH 7.4 근처의 pH에서 pH-반응성이어서, pH 7.4에서 또는 그 근처에서, 예를 들어 pH 7.0 내지 7.3에서 용액 중에 분산될 때 감소된 용해도 및 응집으로 이어진다는 것이었다. 그러나, 카르복실산을 갖는 덴드론 아키텍처를 갖는 가용화 블록의 화학적 조성에 대한 미묘한 변화는 생성된 친양쪽성체가 pH-반응성인 범위에 영향을 미치는 것으로 발견되었다. 비제한적 예에서, 말단 관능기 FGt의 베타-알라닌으로의 치환은 하기 구조의 친양쪽성체를 생성하였고, 이는 적어도 pH 6.0까지 pH 반응성 특성을 나타내는 것으로 발견되지 않았다:
.
유사하게, 리신의 1급 아민, 즉 FGt가 숙신산으로 치환된 리신-기반 덴드론을 포함하는 친양쪽성체는 생리학적 pH 7.4 근처에서 안정한 나노입자를 형성하는 친양쪽성체를 유도하였다. 리신의 1급 아민, 즉 FGt가 숙신산으로 치환된 리신-기반 덴드론을 포함하는 친양쪽성체의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
.
이들 발견에 기초하여, 음전하를 갖는 친양쪽성체를 포함하는, 관용을 유도하기 위한 백신을 비롯한 백신의 바람직한 실시양태는 베타-알라닌 및/또는 숙신산으로 치환된 말단 관능기를 갖는 덴드론을 포함한다.
사카라이드를 추가로 포함하는 가용화 기 (SG)를 포함하며, 여기서 가용화 블록 (S)은 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 소수성 블록 (H)에 연결된 것인 가용화 블록 (S)의 추가의 비제한적인 예가 명확성을 위해 본원에 제시되며:
여기서 X5는 저급 알킬 및/또는 에틸렌 옥시드로부터 전형적으로 선택된 임의의 적합한 링커이고, 사카라이드는
또는 그의 조합으로부터 전형적으로 선택된다.
펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성체 둘 다는 소수성 블록 (H)을 포함한다. 소수성 블록 (H)에 대한 다양한 옵션이 존재하고, 본 명세서의 다른 곳에서 보다 상세하게 기재되어 있지만; 본 개시내용의 저자는 관용 백신과 함께 사용하는 데 유용성을 갖는 소수성 블록 (H)을 확인하였다. 바람직한 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 아릴 또는 헤테로아릴 기를 추가로 포함하는 소수성 아미노산 (M) 및/또는 소수성 약물 분자 (D)에 연결된 반응성 아미노산 (N)으로부터 선택된 단량체 단위를 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함한다. 관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록 (H)은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하며, 여기서 폴리(아미노산)는 전적으로 소수성 아미노산 (M)으로 구성된다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공된다:
.
추가의 비제한적 예는 하기를 포함한, AHR 효능제인 소수성 아미노산 M을 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함한다:
.
면역조정 약물로 지칭되는 면역조정 특성을 갖는 약물 분자 (D)는 효능을 추가로 개선시키기 위해 관용을 유도하기 위한 백신에 첨가되거나 또는 그와 공-투여될 수 있다. 적합한 약물 분자는 조절 T 세포 프라이밍, 전환-분화, 확장 또는 안정화를 촉진할 수 있는 면역조정제 ("Treg 촉진 면역조정제")를 포함하며, 이는 포스포이노시티드-3-키나제 (PI3K), AKT 및 포유동물 라파마이신 표적 (mTOR) 억제제, 예컨대 라파마이신, 에베롤리무스, 토린 1, 토린 2, INK-128, 닥톨리십, AZD8055, KU-00639874 및 그의 임의의 유사체, 유도체 또는 염 형태; 시클린 의존성 키나제 (CDK8) 및/또는 CDK19 억제제, 예컨대 코르티스타틴, CCT251545, CCT251921, 세넥신 A 및 BRD6968; 레티노산-관련 고아 감마 t (RORγt) 억제제, 예컨대 SR1555 또는 SR1001; 특정 히스톤 데아세틸라제 (HDAC), 예컨대 트리코스타틴-A (TsA), 수베로일아닐리드 히드록삼산 (SAHA, 또는 "보리노스타트"), 또는 부티레이트, 또는 보다 바람직하게는 HDAC9의 억제제, 예컨대 TMP269; 아릴 탄화수소 수용체 (AHR)의 효능제, 예컨대 인돌, 인돌로[3,2-b]카르바졸 (ICZ), 키누레닌, 키누렌산, 5-히드록시 트립토판, 트립타민, 인돌-3-아세트산 및 ITE (cas: 448906-42-1) (문헌 [Gutierrez-Vazquez, C., et al., Immunity Review, 2018] 참조); 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO)에 대한 기질; 레티노산 수용체 (RAR)의 효능제, 예컨대 올-트랜스 레티노산, TTNPB (cas: 71441-28-6), AM580, BMS753, BMS961 등; 특정 아데노신 수용체 효능제, 예를 들어 A2A의 효능제, 예컨대 ATL-146e, YT-146, (N6-(2-(3,5-디메톡시페닐)-2-(2-메틸페닐)에틸)아데노신 (DPMA), 레가데노손, UK-432,097, 제아틴; 및 TGF-β, IL-17, IL-2 및 IL-10 수용체의 효능제, 예컨대 자연 발생 단백질 및/또는 항체를 포함한다. 주: "Treg 촉진 면역조정제"는 또한 보다 일반적으로 면역억제제로서 기재될 수 있다.
본 개시내용의 본 발명자들에 의한 예상외의 발견은 면역자극제 및 1개 이상의 Treg 촉진 면역조정제의 특정 조성물을 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신 조성물이 면역자극제가 없는 백신 조성물과 비교하여 유의하게 더 높은 규모의 T 세포 유도를 발생시켰다는 것이다. 이는 면역자극제가 조절 T 세포 유도 및 면역 억제에 대항하는 것으로 여겨지기 때문에 예상외의 것이었다.
Treg 촉진 면역조정제와 조합하여 사용하기에 효과적인 것으로 발견된 면역자극제의 비제한적 예는 C-유형 렉틴 수용체 (CLR)의 효능제, 예컨대 트레할로스-6,6-디벤헤네이트, 뉴클레오티드-결합 올리고머화 도메인 (NOD)-유사의 효능제, 예컨대 뮤라밀 디펩티드; TLR-7의 효능제, 예컨대 이미다조퀴놀린; TLR-4의 효능제, 예컨대 리포폴리사카라이드 또는 그의 유도체, 예컨대 모노포스포릴 지질 A (MPL-A); 및 STING의 효능제, 예컨대 CDN (예를 들어, c-디-AMP) 및 디ABZI를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
관용을 유도하기 위해 약물 분자를 백신 내로 혼입시키는 바람직한 수단은, 부분적으로, 약물 분자의 조성에 좌우된다.
난수용성, 즉 소수성 약물 분자인 면역자극제 및/또는 Treg 촉진 면역조정제는 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체와 혼합되고 (예를 들어, D + S-[B]-[U]-H 및/또는 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H), 이는 비-공유 상호작용을 통해 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 입자의 소수성 코어 내로 혼입될 수 있다. 비제한적 예는 지방산을 포함하는 면역자극제, 예컨대 TLR-1, -2 및/또는 -6의 리포펩티드-기반 효능제뿐만 아니라 TLR-4 및 CLR (예를 들어, 민클)의 지질-기반 효능제; 폴리시클릭 헤테로아릴을 포함하는 면역자극제, 예컨대 TLR-7 및 -8의 이미다조퀴놀린 기반 효능제, 뿐만 아니라 STING의 디ABZI-기반 효능제, 및 그의 임의의 유도체, 예컨대 각각 이미다조퀴놀린의 N1 또는 피페라진의 질소를 통해 지방산, 콜레스테롤 또는 다른 소수성 모이어티에 연결된 이미다조퀴놀린 또는 pip-디ABZI 분자; mTOR의 마크롤리드-기반 억제제, 예컨대 라파마이신, 및 mTOR/PI3K/AKT (예를 들어, KU-0062794, 토린 1, 토린 2 등), CDK8/19 (예를 들어, 코르티스타틴)의 임의의 다양한 헤테로시클릭 방향족 억제제, 레티노산-관련 고아 감마 t (RORγt) 억제제, 예컨대 SR1555; 특정 히스톤 데아세틸라제 (HDAC), 예컨대 TMP269; 아릴 탄화수소 수용체 (AHR)의 특정 효능제, 예컨대 인돌, 인돌로[3,2-b]카르바졸 (ICZ), 3,3 디인돌로메탄 및 ITE; 레티노산 수용체 (RAR)의 효능제, 예컨대 올-트랜스 레티노산, TTNPB (cas: 71441-28-6), AM580, BMS753, BMS961 등; 및 특정 소수성 아데노신 수용체 효능제, 예컨대 UK-432,097을 포함한다.
대안적으로, 난수용성, 즉 소수성 약물 분자인 면역자극제 및/또는 Treg 촉진 면역조정제는 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록 (H)에 연결될 수 있고 (예를 들어, S-[B]-[U]-H-D 및/또는 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-D), 따라서 약물과 입자 코어를 포함하는 소수성 블록 (H) 사이의 공유 결합을 통해 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 입자의 코어 내로 혼입될 수 있다. 비제한적 예는 (i) 난수용성이고/거나; (ii) 공유 접합에 적합하고/거나; (iii) 전신 사용되는 경우에 심각한 용량-제한 독성을 가지며, 따라서 생체분포를 제한하기 위한 전달 플랫폼을 필요로 하고/거나; (iv) 펩티드 항원 (A)과의 충분한 공동-전달을 보장하기 위해 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체에 대한 공유 부착을 필요로 하는 면역자극제 및 Treg 촉진 면역조정제를 포함한다. 비제한적 예는 면역자극제, 예컨대 TLR-7 및 -8의 이미다조퀴놀린 기반 효능제, 뿐만 아니라 STING의 디ABZI-기반 효능제; mTOR/PI3K/AKT의 특정의 접합가능한 헤테로시클릭 방향족 억제제, 예컨대 토린 2; 특정 히스톤 데아세틸라제 (HDAC), 예컨대 부티르산; 아릴 탄화수소 수용체 (AHR)의 특정 효능제, 예컨대 트립타민, 키누레닌, 키누렌산, 5-히드록시 트립토판, 인돌-3-아세트산 및 ITE; IDO에 대한 기질, 예컨대 트립토판; 레티노산 수용체 (RAR)의 효능제, 예컨대 올-트랜스 레티노산, TTNPB (cas: 71441-28-6), AM580, BMS753, BMS961 등; 및 특정 아데노신 수용체 효능제, 예컨대 UK-432,097을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록 (H)은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하며, 여기서 화학식 I의 폴리(아미노산)는 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 아미노산 (N) 및 임의로 소수성 아미노산 (M)을 포함한다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서 X1은 임의의 적합한 링커이고, R3은 전형적으로 수소, NH2, NH2-CH3, NH2-(CH2)iCH3, OH, 또는 직접적으로 또는 임의의 적합한 링커 분자 (X)를 통해 연결된 약물 분자 (D)로부터 선택되고; n 및 m은 임의의 정수이고, 여기서 n 및 m (존재하는 경우)의 합계는 3 초과, 전형적으로 약 3 내지 30이고; N-말단 아미노산은 (i) 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 가용화 블록 (S)에; (ii) 직접적으로 또는 연장부 (E1 또는 E2) 및/또는 링커 U를 통해 간접적으로 항원 (A)에; (iii) 직접적으로 또는 링커 U를 통해 약물 분자에; 또는 (iv) 캡핑 기에 부착된다.
일부 실시양태에서, 약물 분자 (D)는 자기 희생적 링커를 추가로 포함할 수 있는 효소 분해성 펩티드를 통해 소수성 블록 (H)에 연결된다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서 j는 임의의 정수이고, R은 임의의 적합한 아미노산 조성이며, 바람직한 실시양태에서 j는 카텝신에 의해 인식되는 2 내지 4개의 아미노산이다.
주: 중간 정도 내지 고도로 수용성인 친양쪽성 또는 친수성 약물 분자 (D)는 또한, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록 (H)에 연결될 수 있지만 (예를 들어, S-[B]-[U]-H-D 및/또는 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-HD), 약물 분자 (D)의 가용화 효과는 소수성 블록의 조성에 의해 보상되어야 한다. 관용을 유도하기 위한 백신의 일부 실시양태에서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록 (H)은 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함하며, 여기서 화학식 I의 폴리(아미노산)는 소수성 아미노산 (M) 및 소수성 약물 분자에 연결된 반응성 아미노산 (N)을 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 다른 실시양태에서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 소수성 블록 (H)은 말단 관능기가 소수성 약물 분자에 연결된 덴드론을 포함한다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서 약물 분자는 트립타민이다.
면역자극제 및/또는 Treg 촉진 면역조정제가 중간 정도 또는 고도로 수용성인, 즉 친양쪽성 또는 친수성 약물 분자인, 관용을 유도하기 위한 백신의 바람직한 실시양태에서, 면역자극제 및/또는 Treg 촉진 면역조정제는 소수성 블록 (H)에 연결되어 약물 분자 접합체를 생성하고 (예를 들어, D-H 또는 H-D), 이는 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체와 혼합될 수 있고 (예를 들어, D-H + S-[B]-[U]-H 및/또는 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H), 비-공유 상호작용을 통해 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 입자의 소수성 코어 내로 혼입될 수 있다. 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체와 혼합하기 위한, 수용성이고 소수성 분자에의 부착에 바람직한 면역자극제 및 Treg 촉진 면역조정제는 펩티드-기반 NLR, 예컨대 뮤라밀 디펩티드 및 그의 임의의 유도체; TLR-7의 아데닌-기반 효능제, 뿐만 아니라 TLR-3, TLR-7, TLR-9, STING 및 MDA5의 고도의-수용성 핵산-기반 효능제; 아릴 탄화수소 수용체 (AHR)의 특정 효능제, 예컨대 키누레닌 및 키누렌산; 중간 정도의 수용성 아데노신 수용체 효능제, 예를 들어 A2A의 효능제, 예컨대 ATL-146e, YT-146, (N6-(2-(3,5-디메톡시페닐)-2-(2-메틸페닐)에틸)아데노신 (DPMA), 레가데노손 또는 제아틴; 및 TGF-β, IL-17, IL-2 및 IL-10 수용체의 단백질 및 펩티드-기반 효능제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
약물 분자 접합체 (예를 들어, D-H 또는 H-D)를 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체와 혼합하는 것은 (예를 들어, D-H + S-[B]-[U]-H 및/또는 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H) 관용을 유도하기 위한 백신을 위한 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 입자의 소수성 코어 내로 친양쪽성 또는 친수성 약물 분자를 혼입시키는 바람직한 수단이며, 이러한 접근법은 또한, 특히 2개 이상의 상이한 약물 분자가 관용을 유도하기 위한 백신에 포함되는 경우에, 소수성 약물 분자를 혼입시키는 데 효과적이다.
핵산-기반 약물 분자, 예컨대 TLR-3, TLR-7, TLR-9, STING 및 MDA5의 핵산-기반 효능제를 혼입시키는 대안적 수단은 양으로 하전된 소수성 블록과의 정전기적 복합체화를 포함한다. 핵산을 복합체화하기 위한 친양쪽성체 및/또는 소수성 블록의 바람직한 조성은 다른 곳에서 기재된다.
본 개시내용의 본 발명자들은 조절 T 세포 (Treg)의 유도 및/또는 Th1/Th2/Th17 세포의 Treg로의 전환-분화에서 예상외의 개선을 생성한, 면역자극제 및 Treg 촉진 면역조정제로부터 선택된 약물 분자의 특이적이고 바람직한 조합을 포함하는, 관용을 유도하기 위한 백신 조성물을 확인하였다. 구체적으로, 화학식 [S]-[E]-A-[E2]-[U]-H의 1개 이상의 펩티드 항원 접합체, 화학식 S-[B]-[U]-H의 친양쪽성체, 및 mTOR의 억제제 (예를 들어, 라파마이신, KU-0063794), RORγt의 억제제 (예를 들어, SR1555), CDK8/19의 억제제 (예를 들어, CCT251921) 및 HDAC의 억제제 (예를 들어, SAHA, TMP269 등), 뿐만 아니라 AHR의 효능제 (예를 들어, 키누레닌, 트립타민 등), RAR의 효능제 (예를 들어, 올-트랜스 레티노산, BMS961 등) 및 A2a의 효능제 (예를 들어, 제아틴 또는 UK 432,097)로부터 선택된 Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 약물 분자 (D), 및 NLR의 효능제 (예를 들어, 뮤라밀 디펩티드), CLR의 효능제 (예를 들어, TDB), TLR-1,-2 및 -6의 효능제 (리포펩티드), TLR-4의 효능제 (LPS 및 그의 임의의 유도체), TLR-7/8a의 효능제 (예를 들어, 이미다조퀴놀린) 및 STING의 효능제 (예를 들어, CDN, 디ABZI 등)로부터 선택된 면역자극제를 포함하는 제2 약물 분자 (D2)를 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신의 경우, Treg의 규모는 면역자극제가 포함되지 않은 경우보다 더 낮았던 것으로 관찰되었다. 비제한적 설명은 면역자극제가 천연 T 세포 활성화 및/또는 T 세포 확장을 촉진하는 데 필요하지만, Treg 촉진 면역조정제가 T 헬퍼 (Th) 표현형으로의 T 세포 분화를 차단한다는 것이다.
면역자극제를 관용 백신에 포함시키는 것은 일반적으로 보다 높은 규모의 항원-특이적 T 세포 반응을 발생시켰지만; Treg 표현형 (즉, FOXP3 발현)을 갖는 항원-특이적 CD4 T 세포의 부분은 T 세포 프라이밍 동안 존재하는 Treg 촉진 면역조정제 및 면역자극제의 특이적 조합에 의존적이었다. 예를 들어, 항원 및 면역자극제를 포함하는 백신 조성물은 일반적으로 Th1, Th2 및/또는 Th17 표현형을 갖는 CD4 T 세포를 유도하였다. Treg의 유도는 전형적으로 Treg 촉진 면역조정제의 첨가를 필요로 하였지만; 백신 조성물 중 면역자극제 및 Treg 촉진 면역조정제 둘 다의 존재는 사용된 면역자극제 및 Treg 촉진 면역조정제의 특정 조성 및 조합에 의존한 표현형의 분포를 갖는 CD4 T 세포를 생성하였다.
따라서, 본 개시내용의 본 발명자들은 관용을 유도하기 위한 백신에 사용되는 경우에, IL-12 및/또는 유형 I IFN을 유도하는 면역자극제, 예컨대 TLR-3, TLR-4, TLR-7, TLR-8, TLR-9, STING 및 MDA5의 효능제가 고도로 Th1 분극화였고, 전형적으로 CD4 T 세포의 Th1, Th2 및 Th17 표현형으로의 분화를 차단하여 CD4 T 세포의 Treg로의 분화를 촉진하기 위해, 토린 1 (Cas: 1222998-36-8), KU-0063794 (Cas: 938440-64-3) 및 오미팔리십 (Cas: 1086062-66-9)을 포함한 이중 mTOR 복합체 1 (mTORC1) 및 mTOR 복합체 2 (mTORC2) 억제제로부터 선택된 Treg 촉진 면역조정제의 첨가를 필요로 한다는 것을 발견하였다. 대조적으로, 보다 낮은 IL-12 및/또는 유형 I IFN을 유도하거나 또는 전혀 유도하지 않는 면역자극제, 예컨대 CLR, NLR, TLR-1, TLR-2, TLR-5 및/또는 TLR-6의 효능제는 전형적으로 CD4 T 세포의 Treg로의 분화를 촉진하기 위해 mTORC1의 억제제 (예를 들어 라팜시인, 닥톨리십, 에베롤리무스 및 템시롤리무스 등), RORγt의 억제제 또는 AHR 및/또는 RAR의 효능제로부터 선택된 Treg 촉진 면역조정제의 첨가를 필요로 하였다. 따라서, 면역자극제를 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 mTORC1 및 mTORC2의 이중 억제제, 예컨대 토린 1, KU-0063794, 및 오미팔리십으로부터 선택된 적어도 1종의 Treg 촉진 면역조정제를 추가로 포함한다. CLR, NLR, TLR-1, TLR-2, TLR-5 및/또는 TLR-6의 효능제로부터 선택된 면역자극제를 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신의 또 다른 실시양태에서, 백신은 mTORC1 및 mTORC2의 이중 억제제, 예컨대 토린 1, KU-0063794, 및 오미팔리십, 또는 mTORC1의 억제제 (예를 들어, 라팜시인, 닥톨리십, 에베롤리무스 및 템시롤리무스 등), RORγt의 억제제 또는 AHR 및/또는 RAR의 효능제로부터 선택된 적어도 1종의 Treg 촉진 면역조정제를 추가로 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신 조성물
관용을 유도하기 위한 백신의 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] (또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S])의 1개 이상, 전형적으로 1 내지 40개의 펩티드 항원 접합체 및 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체를 포함하며, 여기서 각각의 펩티드 항원 접합체는 전형적으로 약물 분자 (D)에 연결된 소수성 아미노산 (M) 및/또는 반응성 아미노산 (N)을 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)로부터 전형적으로 선택된 소수성 블록 (H)에 직접적으로 또는 연장부 (E1 또는 E2) 및/또는 링커 U를 통해 연결된 자가항원 (또는 알레르겐)으로부터 선택된 항원 (A)을 포함하고; 추가적으로 여기서 친양쪽성체는 약물 분자 (D)에 연결된 소수성 아미노산 (M) 및/또는 반응성 아미노산 (N)을 포함하는 화학식 I의 폴리(아미노산)로부터 전형적으로 선택된 소수성 블록 (H)에 직접적으로 또는 스페이서 (B) 및/또는 링커 U를 통해 연결된 가용화 블록 (S)을 포함하는 덴드론 또는 선형 아키텍처를 갖는 친양쪽성체로부터 선택되고; 여기서 친양쪽성체는 덴드론 아키텍처를 갖고, 가용화 블록은 카르복실산, 포스포세린 (또는 글리세로포스포세린), 글루코스, 만노스, 글루코사민, n-아세틸글루코사민, 갈락토스, 갈락토사민, n-아세틸-갈락토사민 및/또는 CD22a의 효능제로부터 선택된 2 내지 32개, 보다 바람직하게는 4 내지 8개의 가용화 기 (SG)를 갖는 덴드론 증폭제로부터 선택되며, 이는 직접적으로 또는 링커 (X)를 통해 간접적으로 임의의 적합한 수단을 통해 덴드론 아키텍처를 갖는 가용화 블록 (S)의 말단 관능기 (FGt)에 연결될 수 있지만, 바람직한 실시양태에서 가용화 기는 아미드 결합을 통해 FGt에 연결된다. 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제공되며:
여기서 X1은 임의의 적합한 링커 분자이고, D는 면역자극제 및/또는 Treg 촉진 면역조정제로부터 전형적으로 선택된 임의의 적합한 약물 분자이고, R3은 수소, NH2, NH2-CH3, NH2-(CH2)y5CH3, OH로부터 전형적으로 선택되거나, 또는 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 임의의 적합한 링커 분자 (X)를 통해 연결되고; m 및 n은 임의의 정수이며, 여기서 m 및 n (존재하는 경우)의 합계는 3 초과, 전형적으로 약 3 내지 30이다.
바람직한 실시양태에서, 소수성 블록 (H)은 AHR 효능제 (예를 들어, 키누레닌 또는 5HT) 또는 IDO 기질 (예를 들어, 트립토판)로부터 선택된 소수성 아미노산 (M) 및/또는 소수성 면역조정제에 연결된 반응성 아미노산 (예를 들어, 트립타민)으로부터 전형적으로 선택된 화학식 I의 폴리(아미노산)를 포함한다. 소수성 블록이 트립토판으로부터 선택된 소수성 아미노산을 포함하고, R3이 아민인 상기 예에서, 구조는 하기이다:
.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 바람직한 실시양태에서, 가용화 기는 카르복실산, 만노스, 포스포세린 (또는 글리세로포스포세린), 글루코스, 글루코사민, n-아세틸글루코사민, 갈락토스, 갈락토사민, n-아세틸-갈락토사민 및/또는 CD22a의 효능제를 포함하는 군으로부터 선택되며, 이는 직접적으로 또는 적합한 링커 X, 또는 보다 바람직하게는 전형적으로 저급 알킬 또는 에틸렌 옥시드 링커로부터 선택된 X5를 통해 S에 연결된다. 가용화 기가 카르복실산을 포함하고 베타-알라닌으로부터 선택되며, 스페이서 B가 PEG로부터 선택된 상기 예에서, 구조는 하기이다:
.
가용화 기가 X5를 통해 덴드론-기반 가용화 블록의 말단 관능기 (FGt)에 연결된 β-GalNAc를 포함하는 상기 예에서, 구조는 하기이다:
.
가용화 기가 X5를 통해 덴드론-기반 가용화 블록의 말단 관능기 (FGt)에 연결된 만노스를 포함하는 상기 예에서, 구조는 하기이다:
.
관용 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 리신으로부터 선택된 폴리(아미노산)를 추가로 포함하는 가용화 블록을 포함하고, 상기 구조는 하기와 같아진다:
.
여기서 c는 생리학적 pH에서 펩티드 항원 접합체 알짜 전하가 2 초과, 바람직하게는 2 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6, 가장 바람직하게는 3 내지 5, 예컨대 3이도록 선택된 정수의 반복 단위를 나타내고; A는 펩티드 항원이고, E1은 N-말단 연장부이고, E2는 C-말단 연장부이고; m은 전형적으로 3 내지 30이고; X5는 전형적으로 PEG 또는 짧은 지방족 기로부터 선택된 링커이고, b는 전형적으로 약 4 내지 약 36개의 단량체 단위, 보다 바람직하게는 약 12 내지 24개의 단위로부터 선택된 정수의 반복 단위이다.
관용을 유도하기 위한 백신의 일부 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체 및/또는 친양쪽성체는 바람직하게는 아지드와 알킨의 반응으로부터 생성된 트리아졸린 고리를 포함하는 링커로부터 선택된 링커 U를 포함한다. 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성체가 트리아졸을 추가로 포함하는 링커 U를 포함하는 상기 예에서, 가능한 결과적인 구조의 비제한적 예는 하기이다:
추가의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체는 전형적으로 Val-Arg로부터 선택된 E1 N-말단 연장부 및 전형적으로 Ser-Pro-Val-Cit로부터 선택된 E2 C-말단 연장부 및 PEG3으로부터 선택된 X5 링커를 포함하며, 구조는 하기와 같아지고:
여기서 c는 생리학적 pH에서 펩티드 항원 접합체 알짜 전하가 2 초과, 바람직하게는 2 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6, 가장 바람직하게는 3 내지 5, 예컨대 3이도록 선택된 정수의 반복 단위를 나타내고; A는 전형적으로 7 내지 35로부터 선택된 정수, a의 반복 단위를 갖는 펩티드 항원이며, 여기서 R8은 임의의 아미노산 측쇄이고; b는 전형적으로 약 4 내지 약 36개의 단량체 단위, 보다 바람직하게는 약 12 내지 24개의 단위로부터 선택된 정수의 반복 단위이다. 특정의 바람직한 실시양태에서, 가용화 기는 GalNAc이고, 상기 구조는 하기와 같아진다:
.
또 다른 실시양태에서, 가용화 블록은 베타-알라닌을 포함하고, 구조는 하기이다:
.
또는, 가용화 블록은 덴드론-기반 증폭제에 연결된 숙신산을 포함하고, 구조는 하기이다:
관용 백신의 일부 실시양태에서, 연장부 (E1 또는 E2)는 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부로부터 선택된다. 연장부 (E1 및/또는 E2)로서 사용하기 위한 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부의 바람직한 조성은 본 명세서의 다른 곳에서 기재된다.
관용을 유도하기 위한 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] (또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S])의 1개 이상, 전형적으로 40개 이하의 펩티드 항원 접합체, 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체, 및 mTOR의 억제제 (예를 들어, 라파마이신) 또는 AHR의 효능제 (예를 들어, 키누레닌 또는 ITE)로부터 선택된 약물 분자 (D)를 포함한다. 관용을 유도하기 위한 백신의 특정의 바람직한 실시양태에서, 친양쪽성체는 부재하고, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] (또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S])의 1개 이상, 전형적으로 40개 이하의 펩티드 항원 접합체, 및 mTOR의 억제제 (예를 들어, 라파마이신) 또는 AHR의 효능제 (예를 들어, 키누레닌 또는 ITE)로부터 선택된 약물 분자 (D)를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] (또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S])의 1개 이상, 전형적으로 40개 이하의 펩티드 항원 접합체, 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체, Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 약물 분자 (D), 및 면역자극제를 포함하는 제2 약물 분자 (D2)를 포함한다. 관용을 유도하기 위한 백신의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 친양쪽성체는 부재하고, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] (또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S])의 1개 이상, 전형적으로 40개 이하의 펩티드 항원 접합체, Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 약물 분자 (D), 및 면역자극제를 포함하는 제2 약물 분자 (D2)를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 약물 분자 (D)는 mTOR의 억제제 (예를 들어, 라파마이신) 또는 AHR의 효능제 (예를 들어, 키누레닌)로부터 선택되고, 면역자극제를 포함하는 제2 약물 분자 (D2)는 뮤라밀 디펩티드 (MDP), TDB, TLR4 효능제 (예를 들어, MPL 또는 LPS), 리포펩티드 TLR-1 -2 및 -6 효능제 (예를 들어, Pam2Cys 또는 Pam3Cys), 또는 TLR-7 효능제로부터 선택되며, 단 D2가 효능제 TLR로부터 선택되는 경우에, Treg 촉진 면역조정제는 mTORC1 및 mTORC2 둘 다를 억제하는 mTOR의 억제제, 예컨대 토린 1, KU-0063794, 및 오미팔리십으로부터 선택된다. 이들 기준에 맞는 D 및 D2의 비제한적 예시적인 조합은 (a) 라파마이신 및 MDP, (b) 라파마이신 및 TDB, (c) ITE 및 MDP, (d) ITE 및 TDB, (e) 토린1 및 MPL, (f) 토린 1 및 Pam2Cys 및 (g) 토린 1 및 이미다조퀴놀린을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
관용을 유도하기 위한 백신의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] (또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S])의 1개 이상, 전형적으로 40개 이하의 펩티드 항원 접합체, 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체, Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 약물 분자 (D), 및 Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 제2 약물 분자 (D2)를 포함한다. 관용을 유도하기 위한 백신의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 친양쪽성체는 부재하고, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] (또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S])의 1개 이상, 전형적으로 40개 이하의 펩티드 항원 접합체, Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 약물 분자 (D), 및 Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 제2 약물 분자 (D2)를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 약물 분자 (D)는 mTOR의 억제제 (예를 들어, 라파마이신) 또는 억제제 RORγt (예를 들어, SR1555)로부터 선택되고, Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 제2 약물 분자 (D2)는 AHR의 효능제 (예를 들어, 키누레닌), RAR의 효능제 (예를 들어, 레티노산) 또는 A2a의 효능제 (예를 들어, 제아틴 또는 UK 432,097), 또는 HDAC의 억제제 (예를 들어, SAHA, TMP269 등)로부터 선택된다. 이들 기준에 맞는 D 및 D2의 비제한적 예시적인 조합은 (a) 라파마이신 및 키누레닌, (b) 라파마이신 및 ITE, (c) 라파마이신 및 레티노산, (d) 라파마이신 및 SAHA를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 추가의 실시양태에서, 약물 분자 (D) 및 제2 약물 분자 (D2) 둘 다는 AHR의 효능제 (예를 들어, 키누레닌), RAR (예를 들어, 레티노산)의 효능제 또는 A2a의 효능제 (예를 들어, 제아틴 또는 UK 432,097), 또는 HDAC의 억제제 (예를 들어, SAHA, TMP269 등)로부터 선택된 Treg 촉진 면역조정제를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] (또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S])의 1개 이상, 전형적으로 40개 이하의 펩티드 항원 접합체, 임의로 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체, 제1 약물 분자 (D), 제2 약물 분자 (D2) 및 제3 약물 분자 (D3)를 포함하며, 여기서, D, D2 및 D3은 AHR (예를 들어, 키누레닌), RAR (예를 들어, 레티노산) 또는 A2a (예를 들어, 제아틴 또는 UK 432,097) 또는 HDAC의 억제제 (예를 들어, SAHA, TMP269 등)로부터 독립적으로 선택된 Treg 촉진 면역조정제를 포함한다. 일부 추가의 실시양태에서, D는 mTOR의 억제제 (예를 들어, 라파마이신) 또는 RORγt의 억제제 (예를 들어, SR1555)로부터 선택되고, D2 및 D3은 각각 독립적으로 AHR의 효능제 (예를 들어, 키누레닌), RAR의 효능제 (예를 들어, 레티노산) 또는 A2a의 효능제 (예를 들어, 제아틴 또는 UK 432,097), 또는 HDAC의 억제제 (예를 들어, SAHA, TMP269 등)로부터 선택된다. 이들 기준에 맞는 D, D2 및 D3의 비제한적 예시적인 조합은 (a) 키누레닌, 레티노산 및 SAHA 및 (b) 라파마이신, 키누레닌 및 SAHA를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
관용을 유도하기 위한 백신의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] (또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S])의 1개 이상, 전형적으로 40개 이하의 펩티드 항원 접합체, 임의로 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체, 면역자극제를 포함하는 약물 분자 (D), Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 제2 약물 분자 (D2) 및 Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 제3 약물 분자 (D3)를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, D1은 NLR의 효능제 (예를 들어, 뮤라밀 디펩티드), CLR의 효능제 (예를 들어, TDB), TLR-1, -2 및 -6의 효능제 (리포펩티드), TLR-4의 효능제 (LPS 및 그의 임의의 유도체), TLR-7/8a의 효능제 (예를 들어, 이미다조퀴놀린) 및 STING의 효능제 (예를 들어, CDN, 디ABZI 등)로부터 선택되고, D2 및 D3은 mTOR의 억제제 (예를 들어, 라파마이신) 및 RORγt의 억제제 (예를 들어, SR1555)로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, D1은 NLR의 효능제 (예를 들어, 뮤라밀 디펩티드), CLR의 효능제 (예를 들어, TDB), TLR-1, -2 및 -6의 효능제 (리포펩티드), TLR-4의 효능제 (LPS 및 그의 임의의 유도체), TLR-7/8a의 효능제 (예를 들어, 이미다조퀴놀린) 및 STING의 효능제 (예를 들어, CDN, 디ABZI 등)로부터 선택되고, D2는 mTOR의 억제제 (예를 들어, 라파마이신) 및 RORγt의 억제제 (예를 들어, SR1555)로부터 선택되고, D3은 AHR의 효능제 (예를 들어, 키누레닌), RAR의 효능제 (예를 들어, 레티노산) 또는 A2a의 효능제 (예를 들어, 제아틴 또는 UK 432,097), 또는 HDAC의 억제제 (예를 들어, SAHA, TMP269 등)로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, D1은 NLR의 효능제 (예를 들어, 뮤라밀 디펩티드), CLR의 효능제 (예를 들어, TDB), TLR-1, -2 및 -6의 효능제 (리포펩티드), TLR-4의 효능제 (LPS 및 그의 임의의 유도체), TLR-7/8a의 효능제 (예를 들어, 이미다조퀴놀린) 및 STING의 효능제 (예를 들어, CDN, 디ABZI 등)로부터 선택되고, D2 및 D3 둘 다는 각각 독립적으로 AHR의 효능제 (예를 들어, 키누레닌), RAR의 효능제 (예를 들어, 레티노산) 또는 A2a의 효능제 (예를 들어, 제아틴 또는 UK 432,097), 또는 HDAC의 억제제 (예를 들어, SAHA, TMP269 등)로부터 선택된다. 이들 기준에 맞는 D, D2 및 D3의 비제한적 예시적인 조합은 (a) TDB, 라파마이신 및 SR1555, (b) TDB, 라파마이신 및 키누레닌, (c) 이미다조퀴놀린, 토린 1 및 키누레닌, (d) TDB, 키누레닌 및 레티노산 및 (e) TDB, 키누레닌 및 SAHA를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
관용을 유도하기 위한 백신의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 백신은 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] (또는 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S])의 1개 이상, 전형적으로 40개 이하의 펩티드 항원 접합체, 임의로 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체, 면역자극제를 포함하는 약물 분자 (D), 면역자극제를 포함하는 제2 약물 분자 (D2) 및 Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 제3 약물 분자 (D3)를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, D1 및 D2는 각각 독립적으로 NLR의 효능제 (예를 들어, 뮤라밀 디펩티드), CLR의 효능제 (예를 들어, TDB), TLR-1, -2 및 -6의 효능제 (리포펩티드), TLR-4의 효능제 (LPS 및 그의 임의의 유도체), TLR-7/8a의 효능제 (예를 들어, 이미다조퀴놀린) 및 STING의 효능제 (예를 들어, CDN, 디ABZI 등)로부터 선택되고, D3은 mTOR의 억제제 (예를 들어, 라파마이신) 및 RORγt의 억제제 (예를 들어, SR1555)로부터 선택된다. 이들 기준에 맞는 D, D2 및 D3의 비제한적 예시적인 조합은 (a) TDB, LPS 및 토린1 및 (b) MDP, TDB 및 토린1을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 보고된 예상외의 발견은 관용을 유도하기 위해 백신에 포함된 mTORC1 및 mTORC2 둘 다를 억제하는 억제제로부터 선택된 Treg 촉진 면역조정제가 mTORC1의 신호전달 하류만을 억제하는 억제제의 사용과 비교하여 Treg 표현형을 갖는 CD4 T 세포의 보다 높은 비율을 유도하였다는 것이다. 더욱이, mTORC1 및 mTORC2 둘 다를 억제하는 억제제 및 IL-12 및/또는 IFN을 유도하는 면역자극제, 예컨대 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-9, RIGI 및 STING의 효능제로부터 선택된 Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신은 면역자극제가 결여된 관용을 유도하기 위한 백신과 비교하여 Treg 표현형을 갖는 CD4 T 세포의 수뿐만 아니라 비율을 증가시키는 것으로 발견되었다. 이는 IL-12 및 IFN을 유도하는 면역자극제가 세포독성 T 세포를 유도하기 위한 백신 아주반트로서 사용하기 위한 가장 강력한 면역자극제 중 일부로 간주되기 때문에 매우 예상외의 것이다. 따라서, 이러한 면역자극제가 조절 T 세포를 유도하기 위한 관용을 유도하기 위한 백신에 포함될 수 있다는 것은 매우 예상외의 것이며, 외견상 역설적인 것이었다.
이들 발견에 기초하여, 관용을 유도하기 위한 백신의 특정의 바람직한 조성물은 mTORC1 및 mTORC2 둘 다의 억제제 및 임의로 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8, TLR-9, RIGI 및 STING로부터 선택된 면역자극제로부터 선택된 Treg 촉진 면역조정제를 포함한다.
관용을 유도하기 위한 백신의 바람직한 실시양태에서, Treg 촉진 면역조정제는 mTORC1 및 mTORC2 둘 다의 신호전달 하류를 억제하는 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택된다. ATP-경쟁적 mTOR 억제제의 비제한적 예는 US2008/0081809A1에 기재된 것을 포함한다. 비제한적 예는 AZD-8055, AZD2016, KU-0063794를 포함한다. ATP-경쟁적 억제제의 추가의 예는 피라지노(2,3-b)피라진 부류의 것, 예컨대 CC223을 포함하여, US 8,492,381 B2에 기재된 분자를 포함한다. 특정의 바람직한 실시양태에서, ATP-경쟁적 억제제는 US 8,394,818 B2 및 문헌 [Liu and colleagues (Liu, et al., J. Med. Chem. 2010)]에 기재된 바와 같은 벤조나프트리디논이다. 벤조나프트리디논 부류 분자의 비제한적 예는 토린-1 및 토린-2를 포함한다. 다른 예는 피라졸로피리미딘 유사체, 예컨대 US 2008/0234262 A1에 기재된 것, 예컨대 WYE354 및 WYE132; US 8,796455 B2에 기재된 바와 같은 융합된 비시클릭 mTOR 억제제, 예컨대 OSI-027 및 OXA-01; 및 다른 ATP-경쟁적 억제제, 예컨대 PP242, PI-103, NVP-BEZ235, GNE-493 및 GSK2126458을 포함한다.
Treg 촉진 면역조정제 및 면역자극제를 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신의 바람직한 실시양태에서, Treg 촉진 면역조정제는 AZD-8055, AZD2016, KU-0063794, CC223, 토린-1, 토린-2, INK-128, WYE354, WYE132, OSI-027, OXA-01, PI-103, NVP-BEZ235, GNE-493 및 GSK2126458로부터 선택된 ATP-경쟁적 억제제이고, 면역자극제는 TLR-3, TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8, TLR-9, RIGI 및 STING의 효능제이다. Treg 촉진 면역조정제 및 면역자극제를 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신의 비제한적 예에서, Treg 촉진 면역조정제는 토린-1이고, 면역자극제는 이미다조퀴놀린 TLR-7, TLR-8 및/또는 TLR-7/8 효능제이다.
펩티드 항원 접합체, 및 mTOR의 억제제로부터 선택된 Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 백신의 경우, 총 펩티드 항원 접합체 (즉, 펩티드 항원 접합체의 총 몰량) 대 Treg 촉진 면역조정제의 몰비는 입자 유체역학적 거동뿐만 아니라 독성 및 효능에 유의한 영향을 미치는 것으로 발견되었다. 따라서, 약 100:1 내지 약 1:4의 총 펩티드 항원 접합체 (즉, 펩티드 항원 접합체의 총 몰량) 대 mTOR의 억제제의 몰비가 적합한 것으로 관찰되었고, 약 10:1 내지 1:4의 몰비가 바람직하고, 약 5:1 내지 약 1:3, 예컨대 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2 및 1:3의 몰비가 보다 바람직하고, 약 5:1 내지 약 1:2 또는 약 5:1 내지 약 1:1 또는 약 4:1 내지 약 2:1의 몰비가 가장 바람직하다. Treg 촉진 면역조정제가 펩티드 항원 접합체에 연결된 일부 실시양태에서, 펩티드 항원 접합체 대 mTOR의 억제제로부터 선택된 Treg 촉진 면역조정제의 바람직한 몰비는 약 1:1 내지 약 1:3, 예컨대 1:1, 1:2 또는 1:3이다.
mTORC1 및 mTORC2 둘 다의 억제제 및 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-9, RIGI 및 STING의 효능제로부터 선택된 Treg 촉진 면역조정제를 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신이 Treg 표현형을 갖는 CD4 T 세포의 수뿐만 아니라 비율을 증가시킨다는 예상외의 발견은 관용 유도를 위한 플랫폼으로서 DNA, RNA 및 바이러스를 포함한 항원을 코딩하기 위한 발현 시스템을 사용하는 것의 가능성을 제공한다. 예를 들어, RNA 발현 시스템은 백신으로서 사용하기 위한 항원을 코딩하는 데 사용될 수 있지만, RNA의 특정 조성물은 TLR-7에의 결합을 통해 세포독성 T 세포 반응을 유도할 수 있다 (Diebold et al., Science. 2004; 및 Kranz et al., Nature. 2016). 그러나, 본원에 개시된 결과는 mTORC1 및 mTORC2의 조합 억제제의 공동-전달을 통해 RNA 및 DNA-기반 발현 시스템의 면역자극 능력을 조정하는 가능성을 제공한다. 따라서, RNA, DNA 또는 바이러스 벡터-기반 발현 시스템을 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신의 바람직한 실시양태에서, 관용 백신은 mTORC1 및 mTORC2 신호전달을 억제하는 ATP-경쟁적 억제제를 포함한다. 비제한적 예는 AZD-8055, AZD2016, KU-0063794, CC223, 토린-1, 토린-2, WYE354, WYE132, OSI-027, OXA-01, PI-103, NVP-BEZ235, GNE-493 및 GSK2126458을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
시험관내 또는 생체외에서 T 세포 및 CAR-T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키기 위한 펩티드 항원 접합체 및/또는 펩티드 항원 단편
T 세포 및 CAR-T 세포는 시험관내 또는 생체외에서 대상체의 외부에서 활성화, 프라이밍 및/또는 확장될 수 있다. T 세포는 대상체로부터 단리된 혼합 백혈구 배양물로서 발생할 수 있고, 예를 들어 T 세포는 대상체, 예를 들어 환자로부터 유래된 혈액 세포 (예를 들어, PBMC), 골수 세포 및/또는 종양-침윤 백혈구의 집단 내에 존재할 수 있다. 대안적으로, T 세포는 혼합 집단으로부터 단리될 수 있고/거나 특이적 T 세포 하위세트, 예를 들어 CD4 또는 CD8 T 세포에 대해 풍부화될 수 있다. T 세포는 클론 또는 폴리(클론)일 수 있고/거나, 예를 들어 CAR-T 세포와 같이 유전자 변경될 수 있다.
시험관내 또는 생체외에서 T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키는 것은 종종, 세포 배양물에 펩티드 항원을 첨가하거나 또는 세포 배양물 내에서 발현시키는 것을 수반한다. 펩티드 항원은 종종 특이적 펩티드-MHC 복합체를 인식하는 T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키기 위해 선택된다. 세포 배양물에서 T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키기 위해, 펩티드 항원은 제조가능하고 수용성이어야 하고, 바람직하게는 산화되는 경향이 없어야 한다. 그러나, MHC에 결합하는 에피토프를 포함하는 많은 펩티드 항원은 소수성 잔기로 풍부화되어 있으며, 이는 용해도를 감소시키고 제조에 대해 도전과제를 제시한다.
이러한 도전과제를 다루기 위해, 제조 동안 펩티드를 포함하는 서열의 용해도를 개선시키고 시험관내 또는 생체외에서 T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키는 데 사용하기 위해 가용화 블록을 화학식 S-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 및 [D]-H-[E1]-A-[E2]-[U]-S의 펩티드 항원 접합체 및 화학식 S-[E1]-A-[E2]-[U1] 및 [U1]-[E1]-A-[E2]-S의 펩티드 항원 단편에 도입하였다.
본 발명자들의 결과는, 바람직하게는 리신, 오르니틴 및 아르기닌으로부터 선택된 양으로 하전된 아미노산을 포함하는 가용화 블록이 화학식 S-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 및 [D]-H-[E1]-A-[E2]-[U]-S의 펩티드 항원 접합체 및 화학식 S-[E1]-A-[E2]-[U1] 및 [U1]-[E1]-A-[E2]-S의 펩티드 항원 단편의 용해도 및 제조를 개선시켰음을 보여주었다. 따라서, T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키기 위한 펩티드 서열의 바람직한 실시양태에서, 펩티드 서열은 화학식 S-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 및 [D]-H-[E1]-A-[E2]-[U]-S의 펩티드 항원 접합체 및 화학식 S-[E1]-A-[E2]-[U1] 및 [U1]-[E1]-A-[E2]-S의 펩티드 항원 단편으로부터 선택되고, 펩티드 서열은 바람직하게는 리신, 오르니틴 또는 아르기닌으로부터 선택된 양으로 하전된 아미노산을 추가로 포함하는 가용화 블록을 포함한다.
주목할 만한 발견은 펩티드 항원에 대한 임의의 변형의 부착 부위가 시험관내 T 세포 인식에 영향을 미쳤다는 것이다. 따라서, 펩티드 항원의 C-말단에 대한 변형은 일반적으로 잘 허용되는 반면, N-말단에 대한 변형은 덜 잘 허용되는 데, 즉 T 세포에 의한 인식에 덜 강력하였다. 이들 발견에 기초하여, 시험관내 또는 생체외에서 T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키기 위해 사용되는 펩티드 서열의 바람직한 실시양태는 전형적으로 가용화 블록 (S)이 직접적으로 또는 연장부 (E2)를 통해 간접적으로 펩티드 항원의 C-말단에 연결된 펩티드 서열, 예컨대 화학식 [D]-H-[U]-[E1]-A-[E2]-S의 펩티드 항원 접합체 및 화학식 [U1]-[E1]-A-[E2]-S의 펩티드 항원 단편으로부터 선택되고, 여기서 S는 바람직하게는 리신, 오르니틴 또는 아르기닌으로부터 선택된 양으로 하전된 아미노산을 포함한다.
연장부는 또한 펩티드 항원 (A)의 T 세포 인식에 영향을 미치는 것으로 발견되었다. 따라서, 화학식 P4-P3-P2-P1의 카텝신 절단가능한 테트라펩티드로부터 선택된 연장부 (E1 및/또는 E2)에 연결된 펩티드 항원 (A)을 포함하는 펩티드 서열은 보다 짧은 연장부, 예를 들어 디펩티드, P2-P1을 갖는 것보다 일반적으로 더 강력하였다. 시험관내 또는 생체외에서 T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키는 데 사용되는 펩티드 항원과 함께 사용하기에 적합한 테트라펩티드 연장부의 비제한적 예는 Ser-Pro-Val-Arg, Ser-Pro-Val-Cit, Ser-Pro-Val-aBut (aBut = 알파-아미노부티르산)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 카텝신 절단가능한 테트라펩티드의 다른 바람직한 조성의 상세한 설명은 다른 곳에서 기재된다.
마지막으로 주목할 만한 발견은 펩티드 항원 (A)의 메티오닌 및 시스테인 잔기를 각각 노르류신 및 알파-아미노 부티르산으로 대체하는 것이 펩티드 항원의 T 세포 인식을 변경시키지 않으면서 개선된 제조를 발생시킨다는 것이었다. 따라서, 시험관내 또는 생체외에서 T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키기 위해 사용되는 펩티드 항원의 바람직한 실시양태에서, 임의의 메티오닌 및 시스테인 아미노산 (또는 "잔기")은 각각 노르류신 및 알파-아미노 부티르산으로 대체된다.
시험관내 또는 생체외에서 T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키는 데 사용되는 펩티드 서열의 바람직한 실시양태는 전형적으로 화학식 S-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 및 [D]-H-[E1]-A-[E2]-[U]-S의 펩티드 항원 접합체 및 화학식 S-[E1]-A-[E2]-[U1] 및 [U1]-[E1]-A-[E2]-S의 펩티드 항원 단편으로부터 선택되며, 여기서 S는 전형적으로 리신, 아르기닌 및 오르니틴으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산, 전형적으로 2 내지 12개, 예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개, 바람직하게는 2 내지 8개, 보다 바람직하게는 4 내지 6개의 아미노산을 포함하고; E1 및 E2는 존재하는 경우에 바람직하게는 Ser-Pro-Val-Arg, Ser-Pro-Val-Cit 및 Ser-Pro-Val-aBut (aBut = 알파-아미노부티르산)으로부터 선택된, 화학식 P4-P3-P2-P1의 카텝신 절단가능한 테트라펩티드로부터 선택되고; 자연 발생 펩티드 항원의 메티오닌 및 시스테인 잔기는 각각 노르류신 및 알파-아미노부티르산으로 임의로 대체된다.
시험관내 또는 생체외에서 T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키는 데 사용되는 펩티드 서열의 비제한적 예가 명확성을 위해 본원에 제시되며: [U1]-[E1]-A-Ser-Pro-Val-Arg-(Lys)2-12, 여기서 바람직한 실시양태에서 U1 및 E1은 부재하고, 서열은 A-Ser-Pro-Val-Arg-(Lys)2-12이며, 여기서 A는 전형적으로 7 내지 35개의 아미노산 길이의 임의의 펩티드 항원이고, 리신 잔기의 수는 전형적으로 2-12개, 보다 바람직하게는 4, 5 또는 6개로부터 선택되며, 예컨대 A-Ser-Pro-Val-Arg-(Lys)4, A-Ser-Pro-Val-Arg-(Lys)5, 또는 A-Ser-Pro-Val-Arg-(Lys)6이다.
이종 프라이밍-부스팅 백신 요법에 사용된 펩티드 항원 접합체
이종 프라이밍-부스팅 백신은 조성이 상이한 2종 이상의 백신, 즉 제1 백신 (V1) 및 제2 백신 (V2)을 포함하며, 여기서 V1 및 V2는 상이하다. 제1 백신은 제1 시간 (V1T1)에 투여될 수 있고, 임의로 제2 시간 (V1T2) 또는 제3 시간 (V1T3) 등에 투여될 수 있다. 제2 백신은 제1 백신의 마지막 투여 후 제1 시간 (V2T1)에 투여되고, 임의로 제2 시간 (V2T2) 또는 제3 시간 (V2T3) 등에 투여될 수 있다. 투여 사이의 시간의 양은 간격으로 지칭되고, 전형적으로 이종 프라이밍-부스팅 백신 요법을 위해 1주 내지 12주가 되도록 선택되지만, 보다 바람직하게는 간격은 1 내지 6주, 예컨대 1주, 2주, 3주, 4주, 5주 또는 6주이다.
V1 및 V2의 조성물은 면역 반응을 최대화하도록 선택되고, 전형적으로 바이러스 백신 (예를 들어, 아데노바이러스, 백시니아 바이러스 등), 단백질 또는 펩티드 백신 (예를 들어, 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신), 및 핵산 백신으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, V1은 단백질 또는 펩티드 백신을 포함하고, V2는 바이러스 백신을 포함한다. 일부 실시양태에서, V1 및 V2는 바이러스 백신을 포함한다.
일부 이종 프라이밍-부스팅 백신에서, V1은 펩티드 항원 접합체, 예를 들어 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[(D)] 또는 [(D)]-H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]의 펩티드 항원 접합체를 포함하고, V2는 바이러스 백신을 포함한다. 이종 프라이밍-부스팅 백신의 다른 실시양태에서, V1은 바이러스 백신을 포함하고, V2는 펩티드 항원 접합체, 예를 들어 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[(D)] 또는 [(D)]-H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]의 펩티드 항원 접합체를 포함한다.
본 개시내용의 본 발명자들은 특정 이종 프라이밍-부스팅 백신 조성물, 예를 들어, 펩티드 항원 접합체 및 아데노바이러스를 포함하는 백신으로부터 선택된 V1 및 V2를 포함하는 이종 프라이밍-부스팅 백신이 유의하게 증진된 T 세포 반응을 유도하였음을 발견하였다. 일부 실시양태에서, V1은 펩티드 항원 접합체, 예를 들어 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[(D)] 또는 [(D)]-H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]의 펩티드 항원 접합체로부터 선택되고, V2는 아데노바이러스, 예를 들어 ChAdOx로부터 선택되며, 여기서 아데노바이러스는 V1의 항원 (A)을 코딩한다. 다른 실시양태에서, V1은 아데노바이러스, 예를 들어 ChAdOx로부터 선택되며, 여기서 아데노바이러스는 펩티드 항원 접합체, 예를 들어 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[(D)] 또는 [(D)]-H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 V2에 포함되는 항원 (A)을 코딩한다.
본원에 개시된 주목할 만한 발견은 펩티드 항원 접합체 및 바이러스 벡터를 포함하는 이종 프라이밍-부스팅 백신에 대한 투여 경로가 항원 (A)에 대해 유도되는 T 세포 반응의 규모에 주요 영향을 미쳤다는 것이다. 예상외의 발견은 IM 또는 IV 경로에 의해 투여된 펩티드 항원 접합체를 포함하는 V1의 투여 후에, 아데노바이러스를 포함하는 V2가 IV 경로에 의해 투여된 경우에, IM 경로에 의해 투여된 V2와 비교하여 유의하게 보다 높은 규모의 T 세포 반응을 발생시켰다는 것이었다.
임의로 친양쪽성체, 예를 들어 화학식 S-[B]-[U]-H-[(D)]의 친양쪽성체를 추가로 포함하는, 단백질 또는 펩티드 백신 (예를 들어, 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[(D)] 또는 [(D)]-H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]의 펩티드 항원 접합체)으로부터 선택된 V1, 및 바이러스 백신, 보다 바람직하게는 아데노바이러스, 예를 들어 ChAdOx로부터 선택된 V2를 포함하는 이종-프라이밍 부스팅 백신의 바람직한 실시양태에서, V1은 IM 또는 IV 경로에 의해 투여되고, V2는 V1의 투여의 적어도 1주 후, 보다 바람직하게는 V1의 투여의 1 내지 12주 후, 가장 바람직하게는 V1의 투여의 1 내지 6주 후에 IV 경로에 의해 투여된다.
일부 실시양태에서, 암, 자가면역 질환, 알레르기, 감염성 질환, 심혈관 질환, 또는 신경변성 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 백신 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암, 자가면역 질환, 알레르기, 감염성 질환, 심혈관 질환, 또는 신경변성 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
실시예
실시예 1: 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체, 약물 분자 접합체 및 그의 임의의 전구체의 합성
고체 상 펩티드 합성 (SPPS)에 의해 생성된 폴리(아미노산)를 기초로 하는 소수성 블록 (H)은 라디칼 중합에 의해 생성된 소수성 중합체에 비해 수득된 생성된 물질이 화학적으로 규정된다는, 즉 정확한 조성을 갖는 단일 생성물이 수득될 수 있다는 이점을 제공한다.
그러나, SPPS에 의해 소수성 폴리(아미노산)를 생성하는 것의 잠재적인 제한은 고도로 소수성인 펩티드가 펩티드 커플링에 통상적으로 사용되는 용매 (예를 들어, DMF)에서 가용성이 아닐 수 있고/거나 소수성 펩티드가 통상적인 HPLC 이동상 (예를 들어, 아세토니트릴 및 물) 및 정지상 (예를 들어, C18)을 사용하는 정제에 적합하지 않을 수 있다는 것이다.
따라서, 본 발명자들은 SPPS에 의한 합성 및 HPLC에 의한 정제를 위한 지방족 (Aliph), 아릴 (Ar), 헤테로아릴 (H-Ar) 또는 아미노아릴/아미노헤테로아릴 (Ar-a) 측쇄를 갖는 아미노산을 기초로 하는 상이한 소수성 폴리(아미노산)의 적합성을 조사하였다 (표 1).
표 1: 소수성 폴리(아미노산)
L = 류신; F = 페닐알라닌; H = 히스티딘; W = 트립토판; F' = 파라-아미노페닐알라닌; Aliph = 지방족-기반 폴리(아미노산); Ar = 아릴 폴리(아미노산); H-Ar = 헤테로아릴 폴리(아미노산); Ar-a = 아미노아릴/아미노헤테로아릴 폴리(아미노산); Y는 제1 시도 시 성공적인 합성을 나타내고; N은 특정 아미노산 서열의 합성 또는 정제가 제1 시도 시 성공적이지 않았음을 나타낸다. 순도는 HPLC에 의해 결정된 생성물의 % AUC이다. 조 순도는 HPLC 정제가 성공적이지 않았으나 지정된 폴리(아미노산)-기반 소수성 블록 (H)을 포함하는 조 물질이 수득되었음을 나타낸다.
본 발명자들의 결과는 Ar-a 측쇄를 갖는 아미노산을 포함하는 소수성 폴리(아미노산)가 SPPS에 의해 가장 용이하게 접근가능하였고, 이어서 폴리(아미노산) H-Ar, Ar 및 Aliph였음을 보여준다. 특히, 지방족 측쇄를 포함하는 폴리(아미노산)는 SPPS에 의한 생산에 가장 큰 도전과제를 제기한 한편, 방향족 측쇄를 포함하는 아미노산의 사용은 일반적으로 보다 접근가능하였고, 헤테로아릴 및 아미노아릴/아미노헤테로아릴 기를 포함하는 폴리(아미노산)가 가장 용이하게 접근가능하였다.
이들 결과는 아미노아릴/아미노헤테로아릴이 HPLC에 의한 정제 동안 폴리(아미노산)-기반 소수성 블록 (H)의 합성 및 용해도를 개선시킬 뿐만 아니라 수혼화성 용매 중에서의 용해도를 개선시킨다는 것을 나타낸다.
화합물 15, DBCO-FFFFF (서열식별번호: 66)
DBCO-F5, F5 또는 DBCO-(Phe)5로 지칭되는 화합물 15는, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 전구체 NH2-(Phe)5-NH2 50.0 mg (0.066 mmol, 1 당량)을 DMSO 1.0 mL 중 DBCO-NHS 29.4 mg (0.073 mmol, 1.1 당량) 및 트리에틸아민 7.4 mg (0.073 mmol, 1.1 당량)과 반응시켜 합성하였다. 화합물 15를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 30-95% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 10분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C64H61N7O7 m/z 1039.46, 실측치 1040.6 (M+H)+.
화합물 16, DBCO-WWWWW (서열식별번호: 67)
DBCO-W5, W5 또는 DBCO-(Trp)5로 지칭되는 화합물 16은, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 전구체 NH2-(Trp)5-NH2 137.6 mg (0.15 mmol, 1 당량)을 DMSO 3.0 mL 중 DBCO-NHS 146.1 mg (0.057 mmol, 2.5 당량) 및 트리에틸아민 14.7 mg (0.15 mmol, 1.1 당량)과 반응시켜 합성하였다. 화합물 16을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 52-72% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 10분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 75.1 mg (42% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C74H66N12O7 m/z 1234.52, 실측치 1235.6 (M+H)+.
화합물 17, DBCO-F'F'F'F'F' (서열식별번호: 68)
DBCO-F'5 또는 F' 5로 지칭되는 화합물 17은, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 전구체 NH2-(F')5-NH2 49.8 mg (0.06 mmol, 1 당량)을 DMF 1.0 mL 중 DBCO-TT 24.5 mg (0.057 mmol, 1.0 당량) 및 NaHCO3 30.3 mg (0.36 mmol, 6.0 당량)과 반응시켜 합성하였다. 반응을 실온에서 밤새 실행시켰고, HPLC는 반응이 24시간까지 완결되었음을 나타내었다. 화합물 17을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 10분에 걸쳐 10-30% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 3.4분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 25.8 mg (38.4% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C64H66N12O7 m/z 1114.52, 실측치 1116.1 (M+H)+.
화합물 18, DBCO-F'F'F'F'F'F'F'F'F'F' (서열식별번호: 69)
DBCO-F'10 또는 F' 10으로 지칭되는 화합물 18은, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 전구체 NH2-(F')10-NH2 30 mg (0.0183 mmol, 1 당량)을 DMF 1.0 mL 중 DBCO-TT 7.4 mg (0.018 mmol, 1.0 당량) 및 NaHCO3 16.9 mg (0.20 mmol, 11 당량)과 반응시켜 합성하였다. 반응을 실온에서 밤새 실행시켰고, HPLC는 반응이 24시간까지 완결되었음을 나타내었다. 화합물 18을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 10분에 걸쳐 10-30% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 6.3분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 14 mg (39.5% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C109H116N22O12 m/z 1924.91, 실측치 963.9 (M+2H)+.
화합물 19, DBCO- F'F'F'F'F'F'F'F'F'F'F'F'F'F'F'F'F'F'F'F' (서열식별번호: 70)
DBCO-F'20 또는 F' 20으로 지칭되는 화합물 19는, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 전구체 NH2-(F')20-NH2 30 mg (0.009 mmol, 1 당량)을 DMF 1.0 mL 중 DBCO-TT 3.7 mg (0.009 mmol, 1.0 당량) 및 NaHCO3 16.2 mg (0.20 mmol, 21 당량)과 반응시켜 합성하였다. 반응을 실온에서 밤새 실행시켰고, HPLC는 반응이 24시간까지 완결되었음을 나타내었다. 화합물 19를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 10분에 걸쳐 10-30% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 6.3분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 10.6 mg (32.4% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C199H216N42O22 m/z 3545.71 실측치 1183.6 (M+3H)+ 및 887 (M + 4H)+.
화학식 S-[B]-H의 친양쪽성체를 제조하기 위한 용이한 방법으로서, 아지드 관능화된 S-[B]를 DBCO 관능화된 소수성 블록 (H)과 반응시켰다. 예로서, 20 mg/mL의 DMSO 중 0.5 mg의 화합물 15를 1.0 몰 당량의 펩티드, KKSLVRX (서열식별번호: 71) (여기서, X = 아지도리신임)와 반응시켜 출발 물질을 화합물 20으로 완전히 전환시켰다:
유사한 반응 조건을 사용하여 표 2에 요약된 화합물 20-32를 제조하였다. 주목할 만한 발견은 (i) 아미노아릴 및/또는 아미노헤테로아릴을 포함하는 친양쪽성 블록 공중합체가 전형적으로 가시적인 응집체 (즉, 490 nm에서 탁도 > 0.05) 또는 초분자 회합물 (즉, 입자 크기 > 30 nm)을 생성하지 않으면서 안정한 미셀 (~ 20 nm 크기)을 생성하였고, (ii) 가용화 블록 (S)이 하전된 아미노산을 포함하는 가용화 기 (S)를 보유하는 친양쪽성체에 대해서는 관찰되지 않았던 응집체를 생성하였기 때문에, 짧은 중성 선형 PEG를 포함하는 친양쪽성체로서 + 4 초과 또는 -4 미만의 친양쪽성체의 알짜 전하가 중요하다는 것이었다.
표 2 - 선형 아키텍처를 갖는 화학식 S-[B]-U-H의 친양쪽성체의 유체역학적 거동
* 표 2에 열거된 아민 산 서열에 대해 단일 문자 코드가 사용된다; K = 리신, S = 세린, L = 류신, V = 발린, R = 아르기닌, x = 아지도리신, F = 페닐알라닌, W = 트립토판 및 F' 파라-아미노페닐알라닌. (N3-DBCO)는 아지드와 DBCO의 반응으로부터 생성된 트리아졸 링커이다. PEG24는 24개의 반복부를 갖는 에틸렌 옥시드 링커를 지칭한다.
추가의 주목할 만한 발견은 5개만큼 적은 방향족 기를 갖는 소수성 블록 (H)을 포함하는 친양쪽성체에 의해 안정한 미셀이 형성될 수 있다는 것이었다. 추가의 연구 (데이터는 제시되지 않음)는, 예상외로, 3개만큼 적은 방향족 측쇄를 갖는 아미노산을 갖는 소수성 블록 (H)을 갖는 친양쪽성체가 안정한 나노입자 어셈블리를 유도하기에 충분하였지만; 5 내지 30개의 아미노산을 갖는 소수성 블록 (H)이 보다 바람직한 것으로 확인되었음을 밝혀내었다.
화합물 33
때때로 "2B"로 지칭되는 화합물 33, 2B로 지칭되는 1-(4-아미노부틸)-2-부틸-1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민을 이전에 기재된 바와 같이 제조된 3-니트로-2,4-디클로로퀴놀린, 33-b로부터 출발하여 합성하였다 (Lynn GM, et al., Nat Biotechnol 33(11):1201-1210, 2015). 트리에틸아민 (TEA) (10% w/w) 210 mL 중 33-b 21 g (87.8 mmol, 1 당량)에 N-boc-1,4-부탄디아민 16.34 g (87.8 mmol, 1 당량)을 격렬하게 교반시키면서 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃로 가열하고, HPLC에 의해 모니터링하였으며, 이는 반응이 2시간 후에 완결되었음을 확인시켜 주었다. 트리에틸아민을 진공 하에 제거하고, 생성된 오일을 200 mL의 디클로로메탄 중에 용해시킨 다음, 3x100 mL DI H2O로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시킨 다음, 진공 하에 제거하고, 생성된 오일을 1:1 (v:v) 헥산 및 디에틸 에테르로 연화처리하여 중간체 33-c의 황색 결정 30.7 g를 수득하였다. MS (APCI) 계산치 C18H23ClN4O4, m/z 394.1 실측치, 394.9.
33-d. 중간체 33-c 30.7 g (76.4 mmol)을 아르곤으로 버블링한 파르 반응기 용기에서 에틸 아세테이트 300 mL 중에 용해시키고, 이어서 10% 탄소 상 백금 3 g을 첨가하였다. 반응 용기를 아르곤 하에 유지시킨 다음, 수회 배기하고 H2(g)로 가압한 후, 격렬하게 진탕시키면서 55 PSI H2(g)로 가압하였다. 압력이 55 PSI에서 안정화될 때까지 H2(g)를 계속 첨가하였고, 이 지점에 반응이 완결된 것으로 결정하였다. 이어서, 파르 반응기로부터의 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 증발 건조시켜 황색 오일을 수득하였으며, 이를 1:1 헥산 / 에테르로 연화처리하여 백색 결정을 수득하였고, 이를 여과에 의해 수집하여 33-d의 분광학적으로 순수한 백색 결정 27.4 g을 수득하였다. MS (APCI) 계산치 C18H25ClN4O2, m/z 364.2, 실측치 365.2.
33-e. THF 50 mL 중 33-d 10 g (27.4 mmol, 1 당량)에 트리에틸아민 7.7 mL (54.8 mmol, 2 당량)를 첨가하고, 이어서 반응 혼합물을 얼음 상에 두고 격렬하게 교반시키면서 THF 30 mL 중 발레로일 클로라이드 3.6 g (30.1 mmol, 1.1 당량)을 적가하였다. 90분 후, 빙조를 제거하고, THF를 진공 하에 제거하여 황색 오일을 수득하였으며, 이를 디클로로메탄 (DCM) 100 mL 중에 용해시키고, pH 5.5 100 mM 아세테이트 완충제 3x50 mL로 세척하였다. DCM을 오일 중에서 진공 하에 제거하고, 이를 에틸 아세테이트로 연화처리하여 백색 고체 10.4 g을 수득하였으며, 이를 CaO (s) 1 g과 함께 메탄올 중에 용해시키고, 격렬하게 교반시키면서 100℃에서 5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 건조시켜 회백색 고체, 중간체, 33-e 10.2 g을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C23H31ClN4O2, m/z 430.21, 실측치 431.2.
33-f. 1-e 10.2 g (23.7 mmol, 1 당량)에 벤질아민 액체 30.4 g (284 mmol, 12 당량)을 첨가하고, 격렬하게 교반시키면서 110℃로 가열하였다. 10시간 후에 반응이 완결되었고, 반응 혼합물을 200 mL 에틸 아세테이트에 첨가하고, 1 M HCl로 4x100 mL 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시킨 다음, 진공 하에 제거하고, 생성된 오일을 에틸 아세테이트로부터 재결정화하여 중간체, 33-f의 분광학적으로 순수한 백색 결정 10.8 g을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C30H39N5O2, m/z 501.31, 실측치 502.3
화합물 33. 33-f 10.8g (21.5 mmol)을 진한 (>98%) H2SO4 54 mL 중에 용해시키고, 반응 혼합물을 3시간 동안 격렬하게 교반시켰다. 3시간 후, 점성 적색 반응 혼합물을 500 mL의 DI H2O에 격렬하게 교반시키면서 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반시킨 다음, 셀라이트를 통해 여과하고, 이어서 용액의 pH가 ~ pH 10이 될 때까지 10 M NaOH를 첨가하였다. 이어서, 수성 층을 DCM 6x200 mL로 추출하고, 생성된 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 감소시켜 분광학적으로 순수한 백색 고체를 수득하였다.
1H NMR (400 MHZ, DMSO-d6) δ 8.03 (d, J = 8.1 HZ, 1H), 7.59 (d, J = 8.1Hz, 1H), 7.41 (t, J = 7.41Hz, 1H), 7.25 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.47 (s, 2H), 4.49 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.91 (t, J = 7.78 Hz, 2H), 2.57 (t, J = 6.64 Hz, 1H), 1.80 (m, 4H), 1.46 (sep, J= 7.75 Hz, 4H), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS (ESI) 계산치 C18H25N5, m/z 311.21, 실측치 312.3.
화합물 34
화합물 34를 이전에 기재된 바와 같이 제조하였다 (Lynn GM, et al., Nat Biotechnol 33(11):1201-1210, 2015).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.02 (dd, J = 16.6, 8.2 Hz, 1H), 7.63 - 7.56 (m, 1H), 7.47 - 7.38 (m, 1H), 7.30 - 7.21 (m, 1H), 6.55 (s, 2H), 4.76 (s, 2H), 4.54 (q, J = 6.3, 4.4 Hz, 2H), 3.54 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.58 (t, J = 6.9Hz, 2H), 1.93-1.81 (m, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.15 (t, J = 7.0Hz, 3H). MS (APCI) 계산치 C17H23N5O m/z 313.2, 실측치 314.2 (M+H)+.
화합물 35 - 2E-아지드
화합물 35를 이전에 기재된 바와 같이 제조하였다 (Lynn GM, et al., Nat Biotechnol 33(11):1201-1210, 2015). MS (APCI) 계산치 C20H26N8O2 m/z 410.2, 실측치 411.2 (M+H)+.
화합물 36
2BXy로 지칭되는 화합물 36, 1-(4-(아미노메틸)벤질)-2-부틸-1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민은 이전에 기재되었다 (문헌 [Lynn GM, et al., In vivo characterization of the physicochemical properties of polymer-linked TLR agonists that enhance vaccine immunogenicity. Nat Biotechnol 33(11):1201-1210, 2015, 및 Shukla NM, et al., Syntheses of fluorescent imidazoquinoline conjugates as probes of Toll-like receptor 7. Bioorg Med Chem Lett 20(22):6384-6386, 2010] 참조).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.77 (dd, J = 8.4, 1.4 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H), 7.35 - 7.28 (m, 1H), 7.25 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.06 - 6.98 (m, 1H), 6.94 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.50 (s, 2H), 5.81 (s, 2H), 3.64 (s, 2H), 2.92-2.84 (m, 2H), 2.15 (s, 2H), 1.71 (q, J = 7.5Hz, 2H), 1.36 (q, J = 7.4Hz, 2H), 0.85 (t, J = 7.4 Hz, 3H). MS (APCI) 계산치 C22H25N5 m/z 359.2, 실측치 360.3
화합물 37
화합물 37은 20 mg/mL의 DMSO 중 0.5 mg의 화합물 15를 1.0 몰 당량의 화합물 35와 반응시켜 생성하였으며, 이는 출발 물질의 화합물 37로의 완전한 전환을 유발하였다.
화합물 38
화합물 38은 20 mg/mL의 DMSO 중 0.5 mg의 화합물 15를 1.0 몰 당량의 아지드 관능화된 독소루비신과 반응시켜 생성하였으며, 이는 출발 물질의 화합물 38로의 완전한 전환을 유발하였다.
화합물 39
DBCO-2BXy3, 2BXy3 또는 DBCO-(Glu(2BXy)3)로 지칭되는 화합물 39를, 고체-상 펩티드 합성에 의해 제조된 Fmoc-(Glu)3-NH2 전구체로부터 출발하여 합성하였다. Fmoc-(Glu)3-NH2 50 mg (0.08 mmol, 1 당량), 화합물 36 143 mg (0.40 mmol, 5 당량), 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진 (CDMT) 84 mg (0.48 mmol, 6 당량) 및 4-메틸모르폴린 (NMM) 48.5 mg (0.48 mmol, 6 당량)을 주위 공기 하에 실온에서 격렬하게 교반시키면서 DMSO 3.25 mL에 첨가하였다. 반응 진행을 HPLC (AUC 254 nm)에 의해 모니터링하였다. 1 추가 당량의 화합물 36 및 2 추가 당량의 CDMT 및 NMM 둘 다를 30분 후에 첨가하였다. 2시간 후, 반응이 완결되었고, 반응 혼합물을 1M HCl 용액 50 mL에 첨가하여 Fmoc 보호된 중간체를 침전시켰으며, 이를 10분 동안 4℃에서 3000g로 용액을 원심분리함으로써 수집하였다. HCl 용액을 폐기하고, Fmoc 보호된 중간체를 고체 백색 펠릿으로서 수집하였다. 백색 고체를 1M HCl 용액 50 mL 중에 재현탁시키고, 5분 동안 4℃에서 3000g로 회전시키고; 1 M HCl 용액을 폐기하고, 생성물을 고체 펠릿으로서 수집하였다. 이 과정을 반복한 다음, 고체를 수집하고, 진공 하에 건조시켜 Fmoc 보호된 중간체 156.1 mg을 정량적 수율로 수득하였다. 이어서, Fmoc 보호된 생성물을 실온에서 30분 동안 DMF 용액 중 20% 피페리딘 1.5 mL에 첨가하여 탈보호된 생성물을 수득하고, 이어서 이를 50 mL의 에테르로부터 침전시키고, 30분 동안 4℃에서 3000g로 원심분리하였다. 생성물을 고체 펠릿으로서 수집한 다음, 에테르로 2회 더 세척하고, 이어서 진공 하에 건조시켜 중간체 126.4 mg을 수득하였다. 이어서, 생성된 중간체, NH2-(Glu-2BXy)3-NH2 60 mg (0.042 mmol, 1 당량)을 DMSO 1 mL 중 DBCO-NHS 에스테르 (미국 애리조나주 스코츠데일) 18.6 mg (0.046 mmol, 1.1 당량) 및 트리에틸아민 8.5 uL (0.084 mmol, 2 당량)와 실온에서 6시간 동안 반응시켰다. 생성된 생성물인 화합물 39를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 30-70% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 7.0분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 40.12 mg (55.7% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C100H106N20O8 m/z 1714.85, 실측치 858.9 (M/2)+
화합물 40
DBCO-2BXy5, 2BXy5 또는 DBCO-(Glu(2BXy)5)로 지칭되는 화합물 40은, 화합물 36의 접합을 위한 출발 물질로서 Fmoc-(Glu)5-NH2를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 39에 대해 기재된 바와 동일한 절차를 사용하여 합성하였다. 화합물 40을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 38-48% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 8.0분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 45.9 mg (63.4% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C154H166N32O12 m/z 2655.34, 실측치 886.6 (M/3)+.
화합물 41
DBCO-2B5, 2B5 또는 DBCO-(Glu(2B)5)로 지칭되는 화합물 41은, 화합물 33의 접합을 위한 출발 물질로서 Fmoc-(Glu)5-NH2 (서열식별번호: 85)를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 39에 대해 기재된 바와 동일한 절차를 사용하여 합성하였다. 화합물 41을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 33-45% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 10.0분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 25.2 mg (62.6% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C134H166N32O12 m/z 2415.34, 실측치 1209.3 (M/2)+.
화합물 42
DBCO-2B3W2, 2B3W2 또는 DBCO-(Glu(2B)3(Trp)2)로 지칭되는 화합물 42는, 화합물 33의 접합을 위한 출발 물질로서 Fmoc-Glu-Trp-Glu-Trp-Glu-NH2 (서열식별번호: 86)를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 39에 대해 기재된 바와 동일한 절차를 사용하여 합성하였다. 화합물 42를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 33-47% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 8분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 197 mg (50.6% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C110H126N24O10 m/z 1943.01, 실측치 973.0 (M/2)+.
화합물 43
DBCO-2B2W3, 2B2W3 또는 DBCO-(Glu(2B)2(Trp)3)로 지칭되는 화합물 43은, 화합물 33의 접합을 위한 출발 물질로서 Fmoc-Trp-Glu-Trp-Glu-Trp-NH2 (서열식별번호: 87)를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 39에 대해 기재된 바와 동일한 절차를 사용하여 합성하였다. 화합물 43을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 35-65% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 9분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 11.6 mg (62.5% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C98H106N20O9 m/z 1706.85, 실측치 854.9 (M/2)+.
화합물 44
DBCO-2B2W8, 2B2W8 또는 DBCO-(Glu(2B)2(Trp)8)로 지칭되는 화합물 44는, 화합물 33의 접합을 위한 출발 물질로서 Fmoc-Trp-Trp-Glu-Trp-Trp-Trp-Trp-Glu-Trp-Trp-NH2 (서열식별번호: 88)를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 39에 대해 기재된 바와 동일한 절차를 사용하여 합성하였다. 화합물 44를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 35-85% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 8.0분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 3.3 mg (16.3% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C153H156N30O14 m/z 2637.24, 실측치 1320.2 (M/2)+.
화합물 45
DBCO-2B1W4, 2B1W4 또는 DBCO-(Glu(2B)1(Trp)4)로 지칭되는 화합물 45는, 화합물 33의 접합을 위한 출발 물질로서 Fmoc-Trp-Trp-Glu-Trp-Trp-NH2 (서열식별번호: 89)를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 39에 대해 기재된 바와 동일한 절차를 사용하여 합성하였다. 화합물 45를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 50-55% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 8.9분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 9.7 mg (55.4% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C86H86N16O8 m/z 1470.68, 실측치 736.6 (M/2)+.
화합물 46
DBCO-2BXy3W2, 2BXy3W2 또는 DBCO-(Glu(2BXy)3(Trp)2)로 지칭되는 화합물 46은, 출발 물질로서 Fmoc-Glu-Trp-Glu-Trp-Glu-NH2 (서열식별번호: 90) 및 화합물 33을 사용하여 제조하였다. 500 mg의 Fmoc-Glu-Trp-Glu-Trp-Glu-NH2 (서열식별번호: 90) (0.5 mmol, 1 당량), 595.6 mg의 티아졸린-2-티올 (TT) (5 mmol, 10 당량), 및 575.7 mg의 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 (EDC) (3 mmol, 6 당량)를 26 mL의 DCM 중에 현탁시켰다. 18.3 mg의 4-(디메틸아미노)피리딘 (DMAP) (0.2 mmol, 0.3 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 교반시켰다. 반응 진행을 분석용 HPLC에 의해 모니터링하였다. 4시간 후, 추가의 4 당량의 TT 및 2 당량의 EDC를 첨가하였다. 밤새 교반시킨 후, 2 당량의 TT 및 절반 당량의 EDC를 첨가하였다. 6시간 후, 반응이 완결되었다. DCM을 진공 하에 제거하고, 고체를 건조 DMSO 6 mL에 녹였다. 화합물 33 539.3 mg (1.5 mmol, 3 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 이어서, 접합된 중간체를 300 mL의 1 M HCl로부터 침전시키고, 10분 동안 4℃에서 3000g로 원심분리하였다. 펠릿을 수집하고, 1 M HCl로 1회 더 및 DI 수로 1회 세척하였다. 최종 수집된 펠릿을 동결시키고, 진공 하에 건조시켰다. 809.06 mg의 Fmoc-2BXy3W2-NH2 (0.4 mmol, 1 당량))를 DMF 중 20% 피페리딘 4 mL에 용해시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 이어서, 탈보호된 중간체를 에테르 100 mL로부터 침전시키고, 10분 동안 4℃에서 3000g로 원심분리하였다. 생성물을 고체 펠릿으로서 수집한 다음, 에테르로 2회 더 세척하고, 이어서 진공 하에 건조시켜 중간체를 수득하였다. 729 mg NH2-2BXy3W2-NH2 (0.4 mmol, 1 당량)를 6 mL의 건조 DMSO 중에 용해시켰다. 488.8 mg의 DBCO-NHS (1.2 mmol, 3 당량)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 생성된 생성물을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙 C-18 칼럼, 50x100mm, 5 um 상에서 12분에 걸쳐 36-46% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성된 분획을 합하고, 동결시키고, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 백색 분말 239 mg (38.1% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C122H126N24O10 m/z 2087.65 실측치 697 (m/3)+.
화합물 47
DBCO-2B6W4, 2B6W4 또는 DBCO-(Glu(2B)6(Trp)4)로 지칭되는 화합물 47은, 화합물 33의 접합을 위한 출발 물질로서 Fmoc-(Glu-Trp-Glu-Trp-Glu)2-NH2 (서열식별번호: 91)를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 39에 대해 기재된 바와 동일한 절차를 사용하여 합성하였다. 화합물 47을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 10분에 걸쳐 24-45% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C201H236N46O18 m/z 3582.4, 실측치 717.7 (M/5)+
화합물 48
DBCO-2B4W6, 2B4W6 또는 DBCO-(Glu(2B)4(Trp)6)로 지칭되는 화합물 48은, 화합물 33의 접합을 위한 출발 물질로서 Fmoc-(Trp-Glu-Trp-Glu-Trp)2-NH2 (서열식별번호: 92)를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 39에 대해 기재된 바와 동일한 절차를 사용하여 합성하였다. 화합물 48을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 10분에 걸쳐 24-45% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C177H196N38O16 m/z 3111.7, 실측치 777.5 (M/4)+.
화합물 49
DBCO-2BXy1W4, 2BXy1W4 또는 DBCO-(Glu(2BXy)1(Trp)4)로 지칭되는 화합물 49는, 출발 물질로서 Fmoc-Trp-Trp-Glu-Trp-Trp-NH2를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 39에 대해 기재된 바와 동일한 절차를 이용하여 제조하였다. 화합물 49를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30 x 100 mm, 5 μm 상에서 16분에 걸쳐 40-70% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 3.4 mg (73.3% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C90H85N15O9 m/z 1519.67, 실측치 760.5 (M/2)+.
화합물 50
DBCO-(GG2B)5, 2B5G10 또는 DBCO-(Glu(2B)5(Gly)10)로 지칭되는 화합물 50은, Fmoc-(Gly-Gly-Glu)5-NH2 및 화합물 33을 출발 물질로서 사용한 것을 제외하고는, 화합물 39에 대해 기재된 바와 동일한 절차를 사용하여 합성하였다. 화합물 50을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 22-42% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 7분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 22.8 mg (36.2% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C154H196N42O22 m/z 2985.51, 실측치 598.5 (M/5)+.
화합물 51
DBCO-(GG2BGGW)2GG2B, 2B3W2G10 또는 DBCO-(Glu(2B)3(Trp)2(Gly)10)로 지칭되는 화합물 51은, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 전구체인 Fmoc-(Gly-Gly-Glu-Gly-Gly-Trp)2-Gly2-Glu-NH2 (서열식별번호: 93) 및 화합물 33으로부터 합성하였다. 235.4 mg의 Fmoc-(Gly-Gly-Glu-Gly-Gly-Trp)2-Gly2-Glu-NH2 (서열식별번호: 93), (0.15 mmol, 1 당량)를 DMF 중의 20% 피페리딘 2 mL 중에 용해시켰다. 30분 후 반응이 완결되었고, 생성물을 에테르 100 mL로부터 침전시키고, 10분 동안 4℃에서 3000g로 원심분리하였다. 생성물을 고체 펠릿으로서 수집한 다음, 에테르로 2회 더 세척하고, 이어서 진공 하에 건조시켜 탈보호된 중간체 ~ 200 mg을 수득하였다. NH2-(Gly-Gly-Glu-Gly-Gly-Trp)2-Gly2-Glu-NH2 (서열식별번호: 94) 200 mg (0.15 mmol, 1 당량)을 건조 DMSO 2 mL 중에 용해시키고, DBCO-NHS 89.73 mg (0.22 mmol, 1.5 당량)에 이어서 TEA (0.22 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 생성된 DBCO 중간체를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙 C-18 칼럼, 50x100mm, 5 um 상에서 12분에 걸쳐 30-50% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성된 분획을 합하고, 동결시키고, 동결건조시켜 중간체를 수득하였다. DBCO-(Gly-Gly-Glu-Gly-Gly-Trp)2-Gly2-Glu-NH2 (서열식별번호: 95) 25 mg (0.015 mmol, 1 당량) 및 화합물 33 17.11 mg (0.055 mmol, 3.6 당량)을 건조 DMSO 1.2 mL 중에 용해시켰다. TEA (0.183 mmol, 12 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반시켰다. HATU 19.17 mg (0.05 mmol, 3.3 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 교반시켰다. 반응의 진행을 LC-MS에 의해 모니터링하였다. 1.2 추가 당량의 화합물 33 및 1.1 당량의 HATU를 1시간 후에 첨가하였다. 2시간 후, 반응이 완결되었다. 생성된 생성물을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙 C-18 칼럼, 30x100mm, 5 um 상에서 12분에 걸쳐 30-60% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성된 분획을 합하고, 동결시키고, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 백색 분말을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C130H156N34O20 m/z 2515.96 실측치 839 (m/3)+.
화합물 52
비스(TT)로 지칭되는 화합물 52는, 출발 물질로서 수베르산 및 2-티아졸린-2-티올 (TT)을 사용하여 합성하였다. 간략하게, 500 mg의 수베르산 (2.87 mmol, 1 당량), 752.7 mg의 TT (6.31 mmol, 2.2 당량) 및 1.431 g의 EDC (7.46 mmol, 2.6 당량)를 17.5 mL의 건조 DMSO 중에 용해시켰다. 70.15 mg의 DMAP (0.57 mmol, 0.2 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 1 M HCl로 2회 및 DI 수로 1회 세척하였다. 유기 분획을 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 증발시켜 황색 고체를 정량적 수율로 수득하였다.
화합물 53
2B-TT로 지칭되는 화합물 53은, 출발 물질로서 화합물 52 및 화합물 33을 사용하여 합성하였다. 간략하게, 화합물 33 50 mg (0.16 mmol, 1 당량)을 메탄올 0.6 mL 중에 용해시키고, DCM 1.93 mL 중 화합물 53 301.1 mg (0.8 mmol, 5 당량)의 격렬하게 교반시킨 용액에 적가하였다. 30분 후, 반응 혼합물을 칼럼 상에 직접 주입하고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 2-단계 구배: 5 칼럼 부피 (CV)에 걸쳐 DCM 중 5% 메탄올에 이어서 20 CV에 걸쳐 DCM 중 5-50% 메탄올을 사용하여 정제하였다. 분획을 합하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. MS (ESI) 계산치 C29H40N6O2S2 m/z 568.27 실측치 569.3 (m+H)+.
화합물 54
DBCO-(2BGWGWG)5, 2B5W10G15 또는 DBCO-(Glu(2B)5(Trp)10(Gly)15)로 지칭되는 화합물 54는, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 펩티드 전구체인 Fmoc-(Lys-Gly-Trp-Gly-Trp-Gly)5-NH2 (서열식별번호: 96) 및 화합물 53으로부터 합성하였다. 49.8 mg (0.01 mmol, 1 당량)의 Fmoc-(Lys-Gly-Trp-Gly-Trp-Gly)5-NH2 (서열식별번호: 96)를 0.5 mL의 건조 DMSO 중에 용해시켰다. 이 용액에 건조 DMSO 중 40 mg/mL 원액으로서 화합물 53 0.492 mL (0.03 mmol, 2.5 당량)를 첨가하였다. TEA (0.01 mmol, 1 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 10분에 걸쳐 45-65% 아세토니트릴/H2O (0.05%TFA)의 구배를 사용한 분석용 HPLC는 5-치환된 중간체로의 완전한 전환을 나타내었다. 반응물을 아미노-2-프로판올 (0.03 mmol, 2.5 당량)의 첨가에 의해 켄칭한 다음, DMF 중 20% 피페리딘 0.5 mL를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 에테르 50 mL에 첨가하고, 10분 동안 4℃에서 3000g로 원심분리하였다. 생성물을 고체 펠릿으로서 수집한 다음, 에테르로 2회 더 세척하고, 이어서 진공 하에 건조시켜 탈보호된 중간체를 수득하였다. 탈보호된 중간체 73.4 mg (0.0131 mmol, 1 당량)을 건조 DMSO 0.5 mL 중에 용해시키고, 이어서 0.066 mL (0.0196 mmol, 1.5 당량)의 DBCO-NHS (40 mg/mL) 및 TEA (0.0131 mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시킨 다음, 아미노-2-프로판올 (0.0196 mmol, 1.5 당량)을 첨가하여 켄칭하였다. 이어서, 생성물을 50 mL의 1 M HCl로부터 침전시키고, 10분 동안 4℃에서 3000g로 원심분리하였다. 생성물을 고체 펠릿으로서 수집한 다음, 1 M HCl로 1회 더 및 DI 수로 1회 더 세척하였다. 최종 수집된 펠릿을 진공 하에 건조시켜 최종 생성물 15.1 mg (26% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C319H396N72O42 m/z 5909.1 실측치 1183(m/5)+.
화합물 55
E10-2B3W2로 지칭되는 화합물 55는, 아지도-(Glu)10-NH2 (서열식별번호: 97) 및 화합물 42를 출발 물질로서 사용하여 합성하였다. 아지도-(Glu)10-NH2 (서열식별번호: 97) 5 mg (0.0035 mmol, 1 당량)을 건조 DMSO 중에 용해시키고, 건조 DMSO 중의 40 mg/mL 용액으로서 화합물 42 6.77 mg (0.0035 mmol, 1 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 화합물 55를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 10분에 걸쳐 25-45% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 11.8 mg을 정량적 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 m/z 3377.31, 실측치 1127 (M/3)+.
화합물 56
K10-2B3W2로 지칭되는 화합물 56은, 출발 물질로서 아지도-(Lys)10-NH2 (서열식별번호: 98)를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 55와 동일한 절차를 사용하여 합성하였다. 화합물 46을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 10분에 걸쳐 20-40% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말을 정량적 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 m/z 3367.58, 실측치 482 (M/7)+.
화합물 57, DBCO-Ahx-(F')5
DBCO-Ahx-F'5 또는 Ahx-F' 5로 지칭되는 화합물 57은, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 전구체 Ahx-(F')5-NH2 400 mg (0.4 mmol, 1 당량)을 3.7 mL의 DMSO 중에서 171.05 mg의 DBCO-NHS (0.4 mmol, 1.0 당량) 및 258.1 mg의 트리에틸아민 (2.55 mmol, 6.0 당량)과 반응시켜 합성하였다. DBCO-NHS를 0.25 당량의 4 증분으로 첨가하였다. 반응을 실온에서 밤새 실행시켰고, HPLC는 반응이 24시간까지 완결되었음을 나타내었다. 화합물 57을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 13-43% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 5.7분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 백색/황색 분말 217.0 mg (41.5% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C70H76N12O9 m/z 1228.59, 실측치 1228.7 (M+H)+.
화합물 58, DBCO-Ahx-(F')10
DBCO-Ahx-F'10 또는 Ahx-F' 10로 지칭되는 화합물 58은, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 전구체 Ahx-(F')10-NH2 (서열식별번호: 99) 450 mg (0.26 mmol, 1 당량)을 3.3mL의 DMSO 중에서 103.4 mg의 DBCO-NHS (0.26 mmol, 1.0 당량) 및 286.1 mg의 트리에틸아민 (2.83 mmol, 11.0 당량)과 반응시켜 합성하였다. DBCO-NHS를 0.25 당량의 4 증분으로 첨가하였다. 반응을 실온에서 밤새 실행시켰고, HPLC는 반응이 24시간까지 완결되었음을 나타내었다. 화합물 58을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 15-45% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 5.1분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 > 95% AUC) 적색/구리 분말 265.4 mg (50.6% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C205H226N42O24 m/z 3659.78, 실측치 1221.3 (M+3H)+.
화합물 59, DBCO-Ahx-(F')20
DBCO-Ahx-F'20 또는 Ahx-F' 20 DBCO-Ahx-(F')20 (서열식별번호: 100)으로 지칭되는 화합물 59는, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 전구체 Ahx-(F')20-NH2 (서열식별번호: 101) 480 mg (0.14 mmol, 1 당량)을 3.0mL의 DMSO 중에서 57.3 mg의 DBCO-NHS (0.14 mmol, 1.0 당량) 및 302.4 mg의 트리에틸아민 (2.99 mmol, 21.0 당량)과 반응시켜 합성하였다. DBCO-NHS를 0.25 당량의 4 증분으로 첨가하였다. 반응을 실온에서 밤새 실행시켰고, HPLC는 반응이 24시간까지 완결되었음을 나타내었다. 화합물 59를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 13-43% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 5.5분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 94.4% AUC) 갈색/구리 분말 106.6 mg (20.5% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C115H126N22O14 m/z 2039.99, 실측치 1020.5 (M+2H)+.
화합물 60, DBCO-비스(TT)
DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(TT)2 또는 DBCO-비스(TT)로 지칭되는 화합물 60은, 전구체 DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판 385.6mg (0.74 mmol, 1 당량)을 DCM 4.0mL 중에서 2-티아졸린-2-티올 193.4 mg (1.62 mmol, 2.2 당량) 및 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 367.5 mg (1.92 mmol, 2.6 당량) 및 4-디메틸아미노피리딘과 반응시켜 합성하였다. 반응을 실온에서 밤새 실행시켰고, HPLC는 반응이 24시간까지 완결되었음을 나타내었다. 생성물을 애질런트 분석용 C18 칼럼, 4.6x100mm, 2.7 μm 상에서 6.8분에 용리시켰다. 화합물 60을 에틸 아세테이트 및 1M HCl로 추출하고, 회전증발기 상에서 건조시켜 불순한 (254 nm에서 27.0% AUC) 황색 분말 317.1 mg (59.3% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C34H36N4O6S4 m/z 724.15, 실측치 725.3 (M+H)+
화합물 61, DBCO-비스(Ahx-F'10)
DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(Ahx-F'10)2 또는 DBCO-비스(Ahx-F'10)로 지칭되는 화합물 61은, 13.0 mg (0.018 mmol, 1 당량)의 전구체 DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(TT)2, 화합물 61을 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 314.2 mg의 Ahx-(F')10-NH2 (서열식별번호: 102) (0.18 mmol, 10 당량) 및 199.5 mg의 트리에틸아민 (1.97 mmol, 11.0 당량)과 1.8mL의 DMSO 중에서 반응시켜 합성하였다. 반응을 실온에서 밤새 실행시켰고, HPLC는 반응이 24시간까지 완결되었음을 나타내었다. 화합물 61을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 14분에 걸쳐 5-25-35% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 9.8분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 83.4% AUC) 오렌지색 분말 19.16mg (26.8% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C220H252N44O30 m/z 3989.95, 실측치 1330.8 (M+3H)+.
화합물 62, DBCO-Ahx-W5
DBCO-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 62는, 전구체 DBCO-NHS 14.2mg (0.035 mmol, 1 당량)을 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 Ahx-(W)5-NH2 (서열식별번호: 103) 37.5 mg (0.035 mmol, 1 당량) 및 트리에틸아민 3.93mg (0.039 mmol, 1.1 당량)과 DMSO 0.5 mL 중에서 반응시켜 합성하였다. 반응을 실온에서 밤새 실행시켰고, HPLC는 반응이 24시간까지 완결되었음을 나타내었다. 화합물 62를 1M HCL로 2회 및 H2O로 1회 분쇄하여 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 92.6% AUC) 분홍색 분말 34.3 (71.9% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C80H76N12O9 m/z 1348.59, 실측치 1348.4 (M+H)+.
화합물 63, DBCO-비스(Ahx-W5)
DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(Ahx-W5)2 또는 DBCO-비스-(Ahx-W5)로 지칭되는 화합물 63은, 전구체 DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(TT)2 13.0mg (0.018 mmol, 1 당량)을 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 Ahx-(W)5-NH2 (0.039 mmol, 2.2당량) 41.3 mg 및 트리에틸아민 9.1 mg (0.09mmol, 2.3 당량)과 DMSO 0.3mL 중에서 반응시켜 합성하였다. 반응을 실온에서 밤새 실행시켰고, HPLC는 반응이 24시간까지 완결되었음을 나타내었다. 화합물 63을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 16분에 걸쳐 15-60-90% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 12.7분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 >95% AUC) 분홍색 분말 12.5mg (30.8% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C150H152N24O20 m/z 2609.16, 실측치 1305.0 (M+2H)+.
화합물 64, DBCO-테트라(COOH)
DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(COOH)4 또는 DBCO-테트라(COOH)로 지칭되는 화합물 64는, 250 mg (0.34 mmol, 1.1 당량)의 전구체 화합물 60을 170 mg의 DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판 (0.6 mmol, 2 당량) 및 190 mg의 TEA (1.9 mmol, 6 당량)와 2.5 mL의 DMF 중에서 반응시켜 합성하였다. 반응을 실온에서 1시간 동안 실행시켰고, HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었다. MS (ESI) 계산치 C46H60N4O18 m/z 956.4, 실측치 957.2 (M+H)+.
화합물 65, DBCO-테트라(TT)
DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(TT)4 또는 DBCO-테트라(TT)로 지칭되는 화합물 65는, 178 mg (0.19 mmol, 1 당량)의 전구체 화합물 64를 115 mg의 2-티아졸린-2-티올 (0.96 mmol, 5.2 당량)과 반응시켜 합성하였다. TEA (2.98 mmol, 16 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 빙조에서 5분 동안 냉각시켰다. HATU 310 mg (0.8 mmol, 4.4 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 빙조에서 교반시켰다. 반응의 진행을 LC-MS에 의해 모니터링하였다. 2시간 후, 반응이 완결되었다. 화합물 65를 1M HCl 중에서 1회 및 H2O 중에서 1회 분쇄하였다. 생성된 고체를 ACN 중에 용해시키고, 회전증발기 상에서 건조시켜 불순한 (254 nm에서 53.0% AUC) 황색/갈색 오일 215 mg (85.0% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C58H72N8O14S8 m/z 1360.3, 실측치 1361.0 (M+H)+.
화합물 66, DBCO-테트라(2BXy)
DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(2BXy)4 또는 DBCO-테트라(2BXy)로 지칭되는 화합물 66은, 전구체 화합물 65 16 mg (0.012 mmol, 1 당량)을 화합물 36 17 mg (0.047 mmol, 4 당량) 및 TEA (0.047 mmol, 4 당량)와 DMSO 0.5 mL 중에서 반응시켜 합성하였다. 반응의 진행을 HPLC에 의해 모니터링하였다. 1시간 후, 반응이 완결되었다. 화합물 66을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 38-48% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 4.0분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 98.3% AUC) 백색 분말 13.6 mg (49.8% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C134H152N24O14 m/z 2321.2, 실측치 775.0 (M/3+H)+.
화합물 67, 2323-테트라(2BXy)
{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(2BXy)4 또는 2323-테트라(2BXy)로 지칭되는 화합물 67은, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 {프로파르길}4K2K{Lys(N3)} 16 mg (0.17 mmol, 1 당량) 및 화합물 66 39 mg (0.017 mmol, 1 당량)을 1.0 mL 건조 DMSO 중에서 반응시켜 합성하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 화합물 67을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 20-50% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 6.5분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 98.6% AUC) 백색 분말 26 mg (47.5% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C178H221N39O22 m/z 3256.7, 실측치 1087.0 (M/3+H)+.
화합물 68, OH-PEG24-2323-테트라(2BXy)
{OH-PEG24}4-{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(2BXy)4 또는 OH-PEG24-2323-테트라(2BXy)로 지칭되는 화합물 68은, 3.5 mg 화합물 67 (0.0011 mmol, 1 당량)을 0.058 mL H2O 및 0.117 mL DMSO 중에서 4.7 mg의 알파-아지도-오메가-히드록시 24(에틸렌 글리콜) (0.0043 mmol, 4 당량)과 반응시켜 합성하였다. 반응 혼합물에, 0.8 mg 아스코르브산나트륨 (0.0043 mmol 및 4 당량)을 첨가하였다. 1.1 mg 황산구리 5수화물 (0.0043 mmol, 4 당량) 및 1.9 mg 트리스-히드록시프로필트리아졸릴메틸아민 (0.0043 mmol, 4 당량)을 개별 바이알에서 합한 다음, 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다.
LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 화합물 68을 재생 셀룰로스 막, MWCO: 2kDa를 사용하여, 0.01% EDTA 함유 1:1 H2O/MeOH (2x), 1:1 H2O/MeOH (1x), 및 MeOH (2x)의 용매 변화를 사용한 투석에 의해 정제하였다. 샘플을 수집하고, 회전증발기 상에서 건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 99.3% AUC) 청색 고체 5.8 mg (70.5% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C370H609N51O118 m/z 7655.3, 실측치 1277.8 (M/6)+.
화합물 69, NH2-PEG24-2323-테트라(2BXy)
{NH2-PEG24}4-{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(2BXy)4 또는 NH2-PEG24-2323-테트라(2BXy)로 지칭되는 화합물 69는, 알파-아지도-오메가-아미노 23(에틸렌 글리콜)을 출발 물질로서 사용한 것을 제외하고는, 화합물 68과 동일한 절차를 사용하여 합성하고 정제하였다. 정제된 샘플을 수집하고 회전증발기 상에서 건조시켜, 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 95.5% AUC) 녹색 고체 4.8mg (58.4% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C370H613N55O114 m/z 7651.4, 실측치 1276.8 (M/6+H)+.
화합물 70, COOH-PEG24-2323-테트라(2BXy)
{COOH-PEG24}4-{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(2BXy)4 또는 COOH-PEG24-2323-테트라(2BXy)로 지칭되는 화합물 70은, 알파-아지도-오메가-(프로피온산) 24(에틸렌 글리콜)를 출발 물질로서 사용한 것을 제외하고는, 화합물 68과 동일한 절차를 사용하여 합성하고 정제하였다. 정제된 샘플을 수집하고 회전증발기 상에서 건조시켜, 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 98.0% AUC) 청색 고체 6.0 mg (70.3% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C382H625N51O126 m/z 7943.1, 실측치 1325.4 (M/6+H)+.
화합물 71, DBCO-테트라(Dox)
DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(독소루비신)4 또는 DBCO-테트라(Dox)로 지칭되는 화합물 71은, 전구체 화합물 65 23 mg (0.017mmol, 1 당량)을 DMSO 1.5 mL 중에서 독소루비신 히드로클로라이드 40 mg (0.069 mmol, 4 당량) 및 TEA (0.138 mmol, 8 당량)와 반응시켜 합성하였다. 반응의 진행을 HPLC에 의해 모니터링하였다. 1시간 후, 반응이 완결되었다. 화합물 71을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 38-48% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 7.5분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 95.9% AUC) 적색 분말 5.3 mg (20.1% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C154H168N8O58 m/z 3059.0.
화합물 72, 2323-테트라(Dox)
{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(독소루비신)4 또는 2323-테트라(Dox)로 지칭되는 화합물 72는, 16 mg의 {프로파르길}4K2K{Lys(N3)} (0.17 mmol, 1 당량) 및 53 mg의 화합물 71 (0.017 mmol, 1 당량)을 2.0 mL 건조 DMSO 중에서 반응시켜 합성하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 화합물 72를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 25-45% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 4.6분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 91.3% AUC) 적색/오렌지색 분말 28 mg (40.9% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C198H237N23O66 m/z 3995.2, 실측치 1332.8 (M/3+H)+.
화합물 73, OH-PEG24-2323-테트라(Dox)
{OH-PEG24}4-{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(독소루비신)4 또는 OH-PEG24-2323-테트라(Dox)로 지칭되는 화합물 73은, 화합물 72 3.5 mg (0.0011 mmol, 1 당량)을 H2O 0.054 mL 및 DMSO 0.109 mL 중에서 알파-아지도-오메가-히드록시 24(에틸렌 글리콜) 4.7 mg (0.0043 mmol, 4 당량)과 반응시켜 합성하였다. 반응 혼합물에, 0.7 mg 아스코르브산나트륨 (0.0035 mmol 및 4 당량)을 첨가하였다. 0.9 mg 황산구리 5수화물 (0.0035 mmol, 4 당량) 및 1.5 mg 트리스-히드록시프로필트리아졸릴메틸아민 (0.0035 mmol, 4 당량)을 개별 바이알에서 합한 다음, 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다.
LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 화합물 73을 재생 셀룰로스 막, MWCO: 2kDa를 사용하여, 0.01% EDTA 함유 1:1 H2O/MeOH (2x), 1:1 H2O/MeOH (1x), 및 MeOH (2x)의 용매 변화를 사용한 투석에 의해 정제하였다. 샘플을 수집하고, 회전증발기 상에서 건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 95.8% AUC) 자주색 고체 5.1 mg (69.3% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C390H625N35O162 m/z 8396.4, 실측치 1399.8 (M/6+H)+.
화합물 74, NH2-PEG24-2323-테트라(2BXy)
{NH2-PEG24}4-{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(2BXy)4 또는 NH2-PEG24-2323-테트라(2BXy)로 지칭되는 화합물 74는, 알파-아지도-오메가-아미노 23(에틸렌 글리콜)을 출발 물질로서 사용한 것을 제외하고는, 화합물 73과 동일한 절차를 사용하여 합성하고 정제하였다. 정제된 샘플을 수집하고 회전증발기 상에서 건조시켜, 분광학적으로 불순한 (254 nm에서 67.7% AUC) 자주색 고체 5.0 mg (68.0% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C390H629N39O158 m/z 8387.2, 실측치 1399.2 (M/6+H)+.
화합물 75, COOH-PEG24-2323-테트라(2BXy)
{COOH-PEG24}4-{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판(2BXy)4 또는 COOH-PEG24-2323-테트라(2BXy)로 지칭되는 화합물 75은, 알파-아지도-오메가-(프로피온산) 24(에틸렌 글리콜)를 출발 물질로서 사용한 것을 제외하고는, 화합물 73과 동일한 절차를 사용하여 합성하고 정제하였다. 정제된 샘플을 수집하고 회전증발기 상에서 건조시켜, 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 90.4% AUC) 자주색 고체 5.4 mg (71.0% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C402H641N35O170 m/z 8679.3, 실측치 1241.2 (M/7+H)+.
화합물 76, 2323-Ahx-W5
{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-W5 또는 2323-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 76은, 건조 DMSO 중에 용해시킨 28.4 mg의 화합물 62 (0.02 mmol, 1.2 당량)와 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조되어 (0.024 mmol, 1 당량) DMSO 중의 100 mg/mL 용액으로서 첨가된 23 mg의 {프로파르길}4K2K{Lys(N3)}를 반응시킴으로써 합성하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 화합물 76을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 25-55% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 4.5분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 99.4% AUC) 백색 분말 32 mg (80.0% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C124H146N28O16 m/z 2283.2, 실측치 1142.8 (M/2+H)+.
화합물 77, OH-PEG24-2323-Ahx-W5
{OH-PEG24}4-{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-W5 또는 OH-PEG24-2323-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 77은, 3.2 mg 화합물 76 (0.0014 mmol, 1 당량)을 0.063 mL H2O 및 0.126 mL DMSO 중에서 6.1 mg의 알파-아지도-오메가-히드록시 24(에틸렌 글리콜) (0.0056 mmol, 4 당량)과 반응시켜 합성하였다. 반응 혼합물에, 1.1 mg 아스코르브산나트륨 (0.0056mmol 및 4 당량)을 첨가하였다. 1.4 mg 황산구리 5수화물 (0.0056 mmol, 4 당량) 및 2.4 mg 트리스-히드록시프로필트리아졸릴메틸아민 (0.0056 mmol, 4 당량)을 개별 바이알에서 합한 다음, 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다.
LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 화합물 77을 재생 셀룰로스 막, MWCO: 2kDa를 사용하여, 0.01% EDTA 함유 1:1 H2O/MeOH (2x), 1:1 H2O/MeOH (1x), 및 MeOH (2x)의 용매 변화를 사용한 투석에 의해 정제하였다. 샘플을 수집하고, 회전증발기 상에서 건조시켜 분광학적으로 불순한 (254 nm에서 63.0% AUC) 청색 고체 7.1 mg (75.8% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C316H534N40O112 m/z 6681.7, 실측치 1337.8 (M/5+H)+.
화합물 78, 2323-Ahx-(F')10
{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-(F')10 또는 2323-Ahx-(F')10으로 지칭되는 화합물 78은, 88.6 mg의 화합물 58 (0.04 mmol, 1.1 당량), 및 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 41 mg의 {프로파르길}4K2K{Lys(N3)} (0.043 mmol, 1 당량)를 2.0 mL 건조 DMSO 중에서 반응시켜 합성하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었고, 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 96.1% AUC) 무색 용액을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C159H196N38O21 m/z 2973.5, 실측치 992.3 (M/3+H)+.
화합물 79, OH-PEG24-2323-Ahx-(F')10
{OH-PEG24}4-{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-(F')10, 또는 OH-PEG24-2323-Ahx-(F')10로 지칭되는 화합물 79는, 4.0 mg 화합물 79 (0.0013 mmol, 1 당량)를 5.9 mg의 알파-아지도-오메가-히드록시 24(에틸렌 글리콜) (0.0054 mmol, 4 당량)와 0.050 mL H2O 및 0.099 mL DMSO 중에서 반응시켜 합성하였다. 반응 혼합물에, 1.1 mg 아스코르브산나트륨 (0.0054 mmol, 4 당량)을 첨가하였다. 1.3 mg 황산구리 5수화물 (0.0054 mmol, 4 당량) 및 2.3 mg 트리스-히드록시프로필트리아졸릴메틸아민 (0.0054 mmol, 4 당량)을 개별 바이알에서 합한 다음, 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다.
LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 화합물 79를 재생 셀룰로스 막, MWCO: 2kDa를 사용하여, 0.01% EDTA 함유 1:1 H2O/MeOH (2x), 1:1 H2O/MeOH (1x), 및 MeOH (2x)의 용매 변화를 사용한 투석에 의해 정제하였다. 샘플을 수집하고, 회전증발기 상에서 건조시켜 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 94.1% AUC) 녹색 고체 6.4 mg (64.6% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C351H584N50O117 m/z 7372.1, 실측치 1230.2 (M/6+H)+.
화합물 80, K8-PEG24-Ahx-W5
K8-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-W5 또는 K8-PEG24-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 80은, 먼저 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 K8-PEG24-N3을 DMSO 중에 20 mg/mL로, 및 화합물 62를 DMSO 중에 100 mg/mL로 현탁시킨 다음, 반응 용기에서 매 1.0 몰의 S-B에 대해 약 1.1 몰의 H의 몰비로 합함으로써 합성하였다. 반응을 실온에서 수행하였고, S-B 단편이 S-B-H로 완전히 전환된 후에 완결된 것으로 결정하였다. 이는 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 90.2% AUC) 백색 용액을 생성하였다. MS (ESI) 계산치 C179H275N33O41 m/z 3543.0, 실측치 1182.4 (M/3+H)+.
화합물 81, K8-PEG24-Ahx-(F')5
K8-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-(F')5 또는 K8-PEG24-Ahx-(F')5로 지칭되는 화합물 81은, 화합물 57을 출발 물질로서 사용한 것을 제외하고는, 화합물 80과 동일한 절차를 사용하여 합성하고 정제하였다. 이는 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 86.8% AUC) 백색 용액을 생성하였다. MS (ESI) 계산치 C169H275N33O41 m/z 3423.0, 실측치 1142.4 (M/3+H)+.
화합물 82, K8-PEG24-Ahx-(F')20
K8-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-(F')20 또는 K8-PEG24-Ahx-(F')20로 지칭되는 화합물 82는, 화합물 59를 출발 물질로서 사용한 것을 제외하고는, 화합물 80과 동일한 절차를 사용하여 합성하고 정제하였다. 이는 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 89.2% AUC) 담갈색 용액을 생성하였다. MS (ESI) 계산치 C304H425N63O56 m/z 5854.2, 실측치 1171.2 (M/5+H)+.
화합물 83, K7(SG)12X -Ahx-(F')20
K7(SG)12X-(N3-DBCO)-Ahx-(F')20 또는 K7(SG)12X -Ahx-(F')20으로 지칭되는 화합물 83은, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 K7(SG)12X-N3 및 화합물 59를 출발 물질로서 사용한 것을 제외하고는, 화합물 80과 동일한 절차를 사용하여 합성하고 정제하였다. 이는 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 76.5% AUC) 담갈색 용액을 생성하였다. MS (ESI) 계산치 C313H420N86O67 m/z 6455.2, 실측치 1292.8 (M/5+H)+. 주: X = 아지도-리신.
화합물 84, (F')8-2BXy (D-H의 예 즉, H에 연결된 약물 분자)
(F')8-(N3-DBCO)-2BXy 또는 (F')8-2BXy로 지칭되는 화합물 84는, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 (F')8-N3 및 DBCO-2BXy를 출발 물질로서 사용한 것을 제외하고는, 화합물 80과 동일한 절차를 사용하여 합성하고 정제하였다. 이는 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 84.8% AUC) 회백색 용액을 생성하였다. MS (ESI) 계산치 C118H128N26O11 m/z 2085.0, 실측치 1043.6 (M/2+H)+. F
(F')8-(N3-DBCO)-2BXy 또는 (F')8-2BXy로 지칭되는 화합물 84는, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 (F')8-N3 및 DBCO-2BXy를 출발 물질로서 사용한 것을 제외하고는, 화합물 80과 동일한 절차를 사용하여 합성하고 정제하였다. 이는 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 84.8% AUC) 회백색 용액을 생성하였다. MS (ESI) 계산치 C118H128N26O11 m/z 2085.0, 실측치 1043.6 (M/2+H)+. F
CpG-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 85. TLR-9의 CpG-기반 효능제는 생리학적 pH에서 알짜 전하를 운반하고, 따라서 표면 안정화 기 (S)로서 기능할 수 있다. 소수성 중합체 또는 올리고머 (S)에 대한 CpG의 부위-선택적 부착을 가능하게 하기 위해 아지드를 포함하는 CpG 서열을 제조하였다. 간략하게, 화학식 /5아지드N//iSp9/G*G*T*C*C*A*T*G*A*C*G*T*T*C*C*T*G*A*C*G*T*T의 아지드-변형된 CpG ODN 1826을 인테그레이티드 DNA 테크놀로지스(Integrated DNA Technologies) (IDT, 미국 아이오와주 코랄빌)에 의해 맞춤 합성하였으며, 여기서 /5아지드N//iSp9/는 포스포로티오에이트 백본을 갖는 DNA 서열 G*G*T*C*C*A*T*G*A*C*G*T*T*C*C*T*G*A*C*G*T*T의 5'-OH에 연결된 아지드-말단 PEG3 스페이서이다. 비제한적 예로서, DBCO-Ahx-W5 (화합물 62)를 실온에서 DMSO/PBS 용액 중 아지드 보유 CpG 서열과 반응시켜 친양쪽성 블록 공중합체를 생성하였으며, 여기서 S-B 및 H는 트리아졸 기를 통해 함께 연결되었다. 반응을 겔 투과 크로마토그래피에 의해 모니터링하였으며, 이는 CpG가 실온에서 16시간 후에 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 생성된 친양쪽성체 (화합물 85)는 혼탁하지 않았고 (490 nm에서 OD < 0.04), PBS 중에 0.5 mg/mL로 재현탁한 경우에 ~ 20 nm 직경의 안정한 나노입자 미셀을 형성하였다.
HPMA-Ahx-F'10으로 지칭되는 화합물 86. 아지드 기로 종결된 ~ 7,000 g/mol의 분자량을 갖는 pHPMA (HPMA 중합체)를 이전에 기재된 바와 같이 제조하였다. 간략하게, 아지드-pHPMA를 70℃에서 6.5시간 동안 tert-부탄올/N,N-디메틸아세트아미드 중에서 쇄 전달제로서 CTA-아지드 및 개시제로서 ACVA-아지드를 사용하여 HPMA의 RAFT 중합을 통해 합성하였다. 생성된 중합체 (아지드-pHPMA-DTB)를 아세톤/디에틸 에테르 중에서 침전시킴으로써 정제하였고, 건조시켜 담분홍색 고체를 수득하였다. 생성된 고체를 tert-부탄올 중에서 80℃에서 2시간 동안 20-배 몰 과량의 ACVA와 반응시켜 CTA (DTB)를 제거하였다. 생성된 캡핑된 중합체 아지드-pHPMA를 GPC-MALS에 의해 분석하여 분자량이 대략 7,000 g/mol (또는 "달톤" 또는 "Da")임을 확인하였고, 이는 대략 50개의 단량체 단위를 갖는 중합체에 상응한다. 비제한적 예로서, DBCO-Ahx-F'10 (화합물 58)을 실온에서 아지드-pHPMA와 반응시켜 친양쪽성 블록 공중합체를 생성하였고, 여기서 S 및 H는 트리아졸 기를 통해 함께 연결되었다. 반응을 겔 투과 크로마토그래피에 의해 모니터링하였으며, 이는 CpG가 실온에서 16시간 후에 생성물로 완전히 전환되었음을 나타내었다. 생성된 친양쪽성체 (화합물 86) 공중합체는 혼탁하지 않았고 (490 nm에서 OD < 0.04), PBS 중에 0.5 mg/mL로 재현탁한 경우에 ~ 20 nm 직경의 안정한 나노입자 미셀을 형성하였다.
실시예 2. 화학식 S-[B]-[U]-H-[D]의 친양쪽성체의 합성 및 특징화
알킨 링커 전구체 U2를 보유하는 소수성 블록 (H)의 상이한 조성물을 아지드를 보유하는 S-B-U1의 상이한 조성물과 반응시킴으로써 상이한 S-B-U-H 조성물의 조합 라이브러리를 제조하였다. 각각의 전구체를 먼저 DMSO 중에 20 mg/mL 초과의 DMSO로 현탁시킨 다음, 반응 용기에서 매 1.0 몰의 S-B-U1에 대해 약 1.05 몰의 U2-H의 몰비로 합하였다. 반응을 실온에서 수행하였고, S-B-U1 단편이 S-B-U-H로 완전히 전환된 후에 완결된 것으로 결정하였다. 이 반응식을 사용하여 친양쪽성체의 상이한 조성물을 제조하였으며, 이를 수성 완충제, PBS pH 7.4 중에서 0.5 mg/mL의 농도에서 나노입자 미셀을 형성하는 능력에 대해 특징화하였다. 이들 연구의 결과는 친양쪽성 블록 공중합체의 화학적 조성 및 아키텍처에 따라 하기에 요약된다.
펩티드를 포함하는 선형 친양쪽성체
가용화 블록 및 스페이서 (B)가 둘 다 펩티드, 즉 각각 폴리(리신) 및 폴리(세린-코-글리신)를 포함하고 다양한 소수성 중합체 조성을 갖는, 화학식 S-B-U-H의 일련의 선형 친양쪽성 블록 공중합체를 동적 광 산란에 의해 입자 크기 및 안정성에 대해 평가하였다. 결과는 나노입자 미셀화가 알짜 전하에 고도로 의존적임을 보여주며, +8의 알짜 전하를 갖고 Phe(NH2), 즉 때때로 F'로 약칭되는 페닐알라닌-아민에 기초한 최대 20개의 소수성 아미노산을 갖는 소수성 중합체를 포함하는 S-B-H는 안정한 나노입자 미셀을 형성한 반면, +4의 알짜 전하를 갖는 것은 응집하는 것으로 발견되었다 (표 3).
표 3: 펩티드-기반 선형 친양쪽성체.
Figure pct00220
주: 아미노산에 대한 단일 문자 약어가 상기 표에 사용된다.
펩티드 및 PEG를 포함하는 선형 친양쪽성체
하전된 분자 가용화 블록 (S)이 펩티드를 포함하고, 스페이서 (B)가 친수성 중합체, 즉 PEG를 포함하며, 다양한 소수성 중합체 조성을 갖는, 화학식 S-B-U-H의 일련의 선형 친양쪽성체를 동적 광 산란에 의해 입자 크기 및 안정성에 대해 평가하였다.
펩티드-기반 스페이서를 포함하는 친양쪽성체에서 관찰된 결과와 유사하게, 나노입자 미셀화는 알짜 전하에 고도로 의존적이었다 (표 4 참조).
표 4: 펩티드-기반 가용화 블록 및 친수성 PEG 중합체-기반 스페이서를 포함하는 선형 아키텍처를 갖는 친양쪽성체.
Figure pct00221
Figure pct00222
주: 아미노산에 대한 단일 문자 약어가 상기 표에 사용되고; 상기 표에서 올리고(리신) 서열은 N-말단을 통해 PEG 스페이서에 연결되고, 아미드로 종결된다.
원뿔 아키텍처를 갖는 덴드론-기반 S 블록을 갖는 친양쪽성체
가용화 블록 (S)이 수지상 구조의 펩티드를 포함하고, 스페이서 (B)가 친수성 중합체, 즉 PEG를 포함하며, 다양한 소수성 중합체 조성을 갖는, 화학식 S-B-U-H의 일련의 원뿔-형 친양쪽성체를 동적 광 산란에 의해 입자 크기 및 안정성에 대해 평가하였다. 펩티드-기반 S 블록을 포함하는 원뿔 아키텍처를 갖는 친양쪽성체는 일반적으로 나노입자 미셀화를 유도하기 위해 높은 알짜 전하를 필요로 하였다 (표 5 참조).
표 5: 펩티드-기반 가용화 블록을 포함하는 원뿔 아키텍처를 갖는 친양쪽성체
Figure pct00223
주: 아미노산에 대한 단일 문자 약어가 상기 표에 사용되며;
K2K 및 K4K2K는 각각 3 및 7개의 리신을 포함하는 리신 덴드론이다. 명확성을 위해, K2K의 구조 (스페이서, B에 연결됨)가 명확성을 위해 본원에 제시된다:
화합물 135, DBCO-Ahx-E3W2
DBCO-Ahx-E3W2 또는 DBCO-Ahx-(Glu)3(Trp)2로 지칭되는 화합물 135는, 고체-상 펩티드 합성에 의해 제조된 6-아미노헥산산-Glu-Trp-Glu-Trp-Glu- NH2 또는 Ahx-E3W2 전구체로부터 합성하였다. Ahx-E3W2 105 mg (0.12 mmol, 1 당량) 및 트리에틸아민 (TEA) 65.8 uL (0.47 mmol, 4 당량)를 무수 DMF 525 uL에 첨가하고, 주위 공기 하에 실온에서 5분 동안 교반시켰다. 이어서, DBCO-NHS 에스테르 (미국 애리조나주 스코츠데일) 52.2 mg (0.13 mmol, 1.1 당량)을 격렬하게 교반시키면서 첨가하고, 1시간 동안 반응시켰다. 반응 진행을 HPLC (AUC 254 nm)에 의해 모니터링하였다. 1시간 후, 반응이 완결되었고, 아미노-PEG24-OH (미국 캘리포니아주 샌디에고) (1 당량)를 첨가하고 1시간 동안 교반함으로써 반응을 켄칭하였다. 반응 혼합물을 5 mL의 0.2 M HCl에 적가하여 회백색 분말을 침전시켰고, 이를 5분 동안 4℃에서 4000g로 용액을 원심분리함으로써 수집하였다. HCl 용액을 폐기하고, 화합물 135를 고체 회백색 펠릿으로서 수집하였다. 회백색 고체를 525 uL DMF 중에 재현탁시키고, 5 mL의 DI 수에 적가하고, 5분 동안 4℃에서 3000g로 회전시키고; DI 수 용액을 폐기하고, 화합물 135를 고체 펠릿으로서 수집하였다. 이 과정을 반복한 다음, 고체를 수집하고, 진공 하에 건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 > 95% AUC) 백색 분말 117 mg을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C62H68N10O14 m/z 1176.5, 실측치 588.8 (M/2+H)+.
화합물 136, DBCO-Ahx-2B3W2
DBCO-Ahx-2B3W2, DBCO-Ahx-E(2B)3W2 또는 DBCO-Ahx-Glu(2B)3(Trp)2로 지칭되는 화합물 136은, HATU의 존재 하에 화합물 135 및 화합물 33을 반응시켜 합성하였다. 142.2 uL 트리에틸아민 (TEA) (1.02 mmol, 12 당량)을 1 mL 무수 DMF 중에 희석하고, 100 mg의 화합물 135 (0.09 mmol, 1당량) 및 103 mg의 화합물 33 (0.33 mmol, 3.9 당량)을 완전히 용해될 때까지 격렬하게 교반시키면서 첨가하였다. 반응 혼합물을 빙조에서 5분 동안 침지시킴으로써 4℃로 냉각시킨 다음, HATU 106.6 mg (0.28 mmol, 3.3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 4℃에서 1시간 동안 격렬하게 교반시키고, 반응 진행을 HPLC (AUC 254 nm)에 의해 모니터링하였다. 생성된 생성물을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙 C-18 칼럼, 30x100mm, 5 um 상에서 12분에 걸쳐 30-45% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 40% 아세토니트릴에서 용리시키고, 생성된 분획을 합하고, 동결시키고, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 백색 분말 (220 nm에서 >95% AUC) 99.1 mg (60% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C116H137N25O11 m/z 2056.1, 실측치 685.4 (M/3+H)+.
화합물 137, (COOH)2-PEG24-N3
(COOH)2-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 137은, 무수 DCM 30 mL 중에 용해시킨 N3-P24-NHS 에스테르 2.8 g (2.2 mmol, 1 당량) 및 2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판 HCl 염 0.57 g (2.1 mmol, 0.95 당량)을 반응시켜 합성하였다. 트리에틸아민 (3 mL, 22.1 mmol, 10 당량)을 반응 혼합물에 첨가하였다. HPLC가 반응이 완결되었음을 나타낼 때까지 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응 용매를 진공 하에 제거하고, 반응 혼합물을 0.05% TFA를 함유하는 1:1 DMSO/H2O 중에 재용해시켰다. 생성물을 플래쉬 C18 크로마토그래피에 의해 12g 바이오타지 스냅 C18 칼럼 상에서 2-단계 구배: 3 칼럼 부피 (CV)에 걸쳐 H2O (0.05% TFA) 중 0% 아세토니트릴에 이어서 20 CV에 걸쳐 H2O (0.05% TFA) 중 0-60% 아세토니트릴을 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 25% 아세토니트릴에서 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 용매를 진공 하에 제거하여 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 >97% AUC) 백색 오일 2.0 g (65.2% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C60H116N4O31 m/z 1388.8, 실측치 1412.6 (M+Na+H)+.
화합물 138, (TT)2-PEG24-N3
(TT)2-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 138은, 화합물 137 2.0 g (1.5 mmol, 1 당량) 및 HATU 1.2 g (3.2 mmol, 2.2 당량)을 DCM 24 mL 중에서 반응시켜 합성하였다. 혼합물을 얼음 상에서 5분 동안 냉각시키고, 트리에틸아민 1.6 mL (11.7 mmol, 8 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 얼음 상에서 5분 동안 교반하고, 티아졸린-2-티오 (TT) 0.45 g (3.8 mmol, 2.6 당량)을 첨가하였다. HPLC가 반응이 완결되었음을 나타낼 때까지 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 생성물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 100g 바이오타지 사파르 실리카D 칼럼 상에서 2-단계 구배: 3 칼럼 부피 (CV)에 걸쳐 DCM 중 0% 메탄올에 이어서 20 CV에 걸쳐 DCM 중 0-8% 메탄올에 걸쳐 정제하였다. 생성물을 ~ 5% 메탄올에서 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 용매를 제거하여 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 96.1% AUC) 황색 오일 2.0 g (85.3% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C66H122N9O29S4 m/z 1590.7, 실측치 782.3 ((M-N3)/2)+.
화합물 139, (Boc-에틸)2-PEG24-N3
(Boc-에틸)2-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 139는, 화합물 138 347 mg (0.2 mmol, 1 당량) 및 N-boc-에틸렌디아민 83 mg (0.5 mmol, 2.4 당량)을 DCM 3.5mL 중에서 반응시켜 합성하였다. 트리에틸아민 (73 uL, 0.5 mmol, 2.4 당량)을 첨가하고, HPLC가 반응이 완결되었음을 나타낼 때까지 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공 하에 제거하고, 생성물을 DMSO 중에 용해시키고, 정제용 HPLC 시스템 상에서 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 27-57% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 7.2분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 94.7% AUC) 백색 고체 189 mg (51.8% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C74H144N8O33 m/z 1672.98, 실측치 1574.6 (M-Boc+H)+
화합물 140, (OH-에틸)2-PEG24-N3
(OH-에틸)2-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 140은, N-boc-에틸렌디아민 대신 에탄올아민을 사용한 것을 제외하고는, 화합물 139와 동일한 절차에 따라 합성하였다. 화합물 140을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 15-45% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 7.1분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 98.3% AUC) 백색 고체를 81.2% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C64H126N6O31 m/z 1474.9, 실측치 11476.6 (M+H)+.
화합물 141, (COOH-에틸)2-PEG24-N3
(COOH-에틸)2-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 141은, N-boc-에틸렌디아민 대신 베타-알라닌을 사용하고 용매로서 MeOH를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 139와 동일한 절차에 따라 합성하였다. 화합물 141을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 2분에 걸쳐 13-43% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 9.2분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 90.0% AUC) 백색 고체를 37.2% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C66H126N8O33 m/z 1530.8, 실측치 1533.6 (M+H)+
화합물 142, (만노스-에틸)2-PEG24-N3
(만노스-에틸)2-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 142는, N-boc-에틸렌디아민 대신 2-아미노에틸-a-만노피라노시드 (브로드팜(Broadpharm) (캘리포니아주 샌디에고))를 사용하고 용매로서 DMSO를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 139와 동일한 절차에 따라 합성하였다. 화합물 142를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 15-45% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 7.0분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 98.2% AUC) 백색 고체를 70.0% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C76H146N6O41 m/z 1799.0.
화합물 143, (SO3-에틸)2-PEG24-N3
(SO3-에틸)2-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 143은, N-boc-에틸렌디아민 대신 타우린을 사용하고 용매로서 2:1 DMSO/PBS를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 139와 동일한 절차에 따라 합성하였다. 화합물 143을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 15-40% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 6.7분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 >99% AUC) 백색 고체를 47.1% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C64H126N6O35S2 m/z 1602.8, 실측치 802.4 (M/2+H)+
화합물 144, (CD22a)2-PEG24-N3
(CD22a)2-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 144는, N-boc-에틸렌디아민 대신 CD22a 아민을 사용하고 용매로서 DMSO를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 139와 동일한 절차에 따라 합성하였다. 화합물 144를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 15-35% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 8.1분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 98.3% AUC) 백색 고체를 68.8% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C112H204N8O67 m/z 2733.3, 실측치 1367.8 (M/2+H)+
화합물 145, (COOH)4-PEG24-N3
(COOH)4-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 145는, 무수 DCM 35 mL 중에 용해시킨 화합물 138 1.5 g (0.9 mmol, 1 당량) 및 2-아미노-1,3-비스(카르복실에톡시)프로판 HCl 염 0.4 g (1.4 mmol, 1.6 당량)을 반응시켜 합성하였다. 트리에틸아민 (2.5 mL, 18.3 mmol, 19 당량)을 반응 혼합물에 첨가하였다. HPLC가 반응이 완결되었음을 나타낼 때까지 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 화합물 145는 정제하지 않았다. MS (ESI) 계산치 C78H146N6O41 m/z 1823.0, 실측치 912.4 (M/2+H)+.
화합물 146, (TT)4-PEG24-N3
(TT)4-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 146은, 화합물 145 1.5 g (0.8 mmol, 1 당량) 및 HATU 1.4 g (3.7 mmol, 4.4 당량)을 DCM 3 mL 중에서 반응시켜 합성하였다. 트리에틸아민 (1.9 mL, 13.5 mmol, 16 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 5분 동안 교반시켰다. 티아졸린-2-티오 (TT) (0.5 g, 4.4 mmol, 5 당량)를 첨가하고, HPLC가 반응이 완결되었음을 나타낼 때까지 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 생성물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 100g 바이오타지 사파르 실리카D 칼럼 상에서 2-단계 구배: 3 칼럼 부피 (CV)에 걸쳐 DCM 중 0% 메탄올에 이어서 20 CV에 걸쳐 DCM 중 0-8% 메탄올에 걸쳐 정제하였다. 생성물을 ~ 5% 메탄올에서 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 용매를 제거하여 황색 오일 (220 nm에서 70% AUC) 0.8 g (42% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C90H158N10O37S8 m/z 2228.8, 실측치 962.8 (M/2)+
화합물 147, (Boc-에틸)4-PEG24-N3
(Boc-에틸)4-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 147은, 246 mg의 화합물 146 (0.1 mmol, 1 당량) 및 84 mg의 N-boc-에틸렌디아민 (0.5 mmol, 4.8 당량)을 2.6 mL의 DCM 중에서 반응시켜 합성하였다. 트리에틸아민 (74 uL, 0.5 mmol, 4.8 당량)을 첨가하고, HPLC가 반응이 완결되었음을 나타낼 때까지 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공 하에 제거하고, 생성물을 DMSO 중에 용해시키고, 정제용 HPLC 시스템 상에서 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 32-60% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 7.1분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 94.9% AUC) 백색 고체 100.4 mg (40.0% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C106H202N14O45 m/z 2392.8, 실측치 1197.0 (M/2+H)+.
화합물 148, (OH-에틸)4-PEG24-N3
(OH-에틸)4-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 148은, N-boc-에틸렌디아민 대신 에탄올아민을 사용한 것을 제외하고는, 화합물 147과 동일한 절차에 따라 합성하였다. 화합물 148을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 17-37% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 7.0분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 97.2% AUC) 백색 고체를 43.6% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C86H166N10O41 m/z 1995.1, 실측치 998.6 (M/2+H)+
화합물 149, (COOH-에틸)4-PEG24-N3
(COOH-에틸)4-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 149는, N-boc-에틸렌디아민 대신 베타-알라닌을 사용하고 용매로서 MeOH를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 147과 동일한 절차에 따라 합성하였다. 화합물 149를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 2분에 걸쳐 19-39% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 6.8분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 86.0% AUC) 백색 고체를 34.3% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C90H166N10O45 m/z 2107.1, 실측치 1054.7 (M/2+H)+
화합물 150, (만노스-에틸)4-PEG24-N3
(만노스-에틸)4-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 150은, N-boc-에틸렌디아민 대신 2-아미노에틸-a-만노피라노시드 (브로드팜(Broadpharm) (캘리포니아주 샌디에고))를 사용하고 용매로서 DMSO를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 147과 동일한 절차에 따라 합성하였다. 화합물 150을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 15-35% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 7.3분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 98.5% AUC) 백색 고체를 35.6% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C133H252N10O61 m/z 2965.7, 실측치 1322.9 (M/2)+.
화합물 151, (SO3-에틸)4-PEG24-N3
(SO3-에틸)4-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 151은, N-boc-에틸렌디아민 대신 타우린을 사용하고 용매로서 2:1 DMSO/PBS를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 147과 동일한 절차에 따라 합성하였다. 화합물 151을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 5-45% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 7.4분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 96.9% AUC) 백색 고체를 30.2% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C86H166N10O49S4 m/z 2251.0, 실측치 1126.7 (M/2)+
화합물 152, (NH2-에틸)2-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2
(NH2-에틸)2-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 152는, 무수 DMSO 중에 용해시킨 화합물 139 (0.001 mmol, 1.0 당량) 및 무수 DMSO 중의 50 mM 용액으로서의 화합물 136 (0.001 mmol, 1.05 당량)을 반응시켜 합성하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 이어서, DMSO 용매를 제거하였다. boc 보호된 중간체를 100% 트리플루오로아세트산 (TFA) (200 uL) 중에 1분 동안 재현탁시킴으로써 탈보호한 다음, TFA를 제거하였다. 나머지 용액을 디에틸 에테르 (200 uL)로 2회 세척하였다. HPLC는 탈보호가 완결되었음을 나타내었고, 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 89.6% AUC) 회백색 고체 2.1 mg (38.4% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C180H265N33O40 m/z 3531.3, 실측치 1177.8 (M/3)+.
화합물 153, (NH2-에틸)4-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2
(NH2-에틸)4-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 153은, 화합물 139 대신 화합물 147을 사용한 것을 제외하고는, 화합물 152와 동일한 절차를 사용하여 합성하였고, 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 92.7% AUC) 회백색 고체를 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C202H307N39O48 m/z 4047.3, 실측치 1013.3 (M/4+H)+.
화합물 154, (OH-에틸)2-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2
(OH-에틸)2-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 154는, 화합물 140 (0.001 mmol, 1.0 당량)을 화합물 136 (0.001 mmol, 1.05 당량)과 무수 DMSO 중에서 16시간 동안 실온에서 반응시켜 합성하였다. HPLC를 모니터링하여 반응 진행을 평가하였고, 이는 화합물 140의 화합물 154로의 완전한 전환을 나타내었으며, 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 89.2% AUC) 무색 용액을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C180H263N31O42 m/z 3530.9, 실측치 1178.3 (M/3+H)+.
화합물 155-164를 화합물 154에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 제조하였다. 표 6은 화합물 155-164의 합성 및 특징화의 요약을 제공한다.
표 6: 원뿔 아키텍처, 즉 덴드론-기반 가용화 블록 (S) 및 선형 스페이서 및 소수성 블록 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-U-H-[D]의 친양쪽성 블록 공중합체.
알짜 전하는 pH 7.4의 수성 완충제에서의 친양쪽성체의 예측된 알짜 전하이다.
화합물 165, CD22a-PEG24-N3
CD22a-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 165는 74.8 mg의 CD22a 아민 (0.11 mmol, 1 당량)을 3.75 mL 무수 DMSO 중에 용해시킴으로써 합성하였다. 49.9 uL TEA (0.36 mmol, 3.3 당량)를 첨가하고, 용액을 실온에서 5분 동안 교반시켰다. 165.1 mg의 NHS-PEG24-N3 (0.13 mmol, 1.2 당량)을 반응 혼합물에 첨가하고, LC-MS가 반응이 완결되었음을 나타낼 때 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 생성물을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 15-45% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 6분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 94.9% AUC) 백색 고체 167 mg (73.7% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C77H145N5O44 m/z 1843.9, 실측치 923.1 (M/2+H)+.
화합물 166, KKKK-PEG24-(N3-DBCO)-2B3W2
KKKK-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 166은, 손쉬운 클릭 화학 반응을 사용하여 1 당량의 화합물 136을 1 당량의 아지드-PEG24-KKKK와 DMSO 중에서 실온에서 반응시켜 합성하였다. 반응 진행을 HPLC에 의해 모니터링하였으며, 이는 16시간 후에 출발 물질의 화합물 166으로의 완전한 전환을 확인시켜 주었다. MS (ESI) 계산치 C190H283N37O41 m/z 3739.1, 실측치 923.1 (M/2+H)+.
유사한 반응 조건을 사용하여 표 7에 요약된 화합물 167-177을 제조하였다.
표 7: 선형 아키텍처를 갖는 화학식 S-B-U-H-[D]의 친양쪽성체.
상기 표에서 아미노산 서열에 대해 단일 문자 약어가 사용된다; X = 아지도리신; O = 오르니틴; 및 k = d-리신. 펩티드-기반 출발 물질은 젠스크립트(Genscript) (뉴저지주 피스카타웨이)에 의해 고체-상 펩티드 합성에 의해 제조되었고, NH2-PEG(5000)-N3은 폴리사이언시스(Polysciences) (펜실베니아주 워링턴)로부터 입수하였다. 펩티드-기반 출발 물질 서열은 N-에서 C-말단으로 기록되고, C-말단 -NH2 및 -COOH는 펩티드가 각각 아미드 또는 카르복실산 기로 종결됨을 나타낸다. 달리 명시되지 않는 한, 임의의 C-말단 X인 아지도리신은 아미드로 종결되며, 이는 서열에 내포된다 (즉, 제시되지 않음). 알짜 전하는 pH 7.4의 수성 완충제에서의 친양쪽성체의 예측된 알짜 전하이다.
화합물 178, {프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-2B3W2
{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-2B3W2 또는 2323-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 178은, 무수 DMSO 중에 용해시킨 32.5 mg의 화합물 136 (0.02 mmol, 1.05 당량)과 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조되어 (0.02 mmol, 1 당량) 무수 DMSO 중의 100 mg/mL 용액으로서 첨가된 16.8 mg의 {프로파르길}4K2K{Lys(N3)}를 반응시킴으로써 합성하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 화합물 178을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 25-45% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 3.7분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 >99% AUC) 백색 분말 28.1 mg (62.4% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C160H206N40O19 m/z 2991.6, 실측치 998.6 (M/3+H)+.
화합물 179, OH-PEG24-2323-Ahx-2B3W2
{OH-PEG24}4-{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-2B3W2 또는 OH-PEG24-2323-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 179는, 7.0 mg의 화합물 178 (0.0023 mmol, 1 당량)을 150.6 uL H2O 및 320.1 uL DMSO 중에서 18.0 mg의 알파-아지도-오메가-히드록시 24(에틸렌 글리콜) 또는 OH-PEG24-N3 (0.0164 mmol, 7 당량)와 반응시켜 합성하였다. 반응 혼합물에, 3.24 mg 아스코르브산나트륨 (0.00164 mmol, 7 당량)을 첨가하였다. 4.1 mg 황산구리 5수화물 (0.0163 mmol, 7 당량) 및 7.1 mg 트리스-히드록시프로필트리아졸릴메틸아민 (THPTA) (0.0164 mmol, 7 당량)을 개별 바이알에서 합한 다음, 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다.
LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 3 mL H2O 중에 희석하고, 동결시키고, 동결건조시키고, DMF 중 0.5% 소듐 디에틸디티오카르바메이트/0.5% DIPEA 600 uL 중에 용해시키고, 정제용 HPLC 시스템 상에서 애질런트 프렙-C18 칼럼, 9.4x100mm, 5 μm 상에서 14분에 걸쳐 27-47-57% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 5분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 >99% AUC) 회백색 고체 6.6 mg (38.2% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C352H594N52O115 m/z 7394.9, 실측치 1233.0 (M/6+H)+.
화합물 180, Fmoc-PEG24-2656
{Fmoc-PEG24}4-{NH2}4K2K{Lys(N3)} 또는 Fmoc-PEG24-2656으로 지칭되는 화합물 180은, 73.8 mg Fmoc-PEG24-NHS 에스테르 (0.05 mmol, 3.5 당량)를 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 8 mg의 {NH2}4K2K{Lys(N3)} (0.01 mmol, 1 당량)와 반응시켜 합성하였다. 24.1 uL 트리에틸아민 (TEA) (0.17 mmol, 12 당량)을 6 mL THF 중에 희석하고, 반응 혼합물에 첨가하고, 실온에서 24시간 동안 교반시켰다. HPLC는 반응이 84% 완결되었음을 나타내었다. MS (ESI) 계산치 C288H493N15O112 m/z 5954.3, 실측치 993.8 (M/6+H)+.
화합물 181, NH2-PEG24-2656-Ahx-2B3W2
{NH2-PEG24}4-{NH2}4K2K{Lys(N2B3W2)}-DBCO-Ahx-2B3W2 또는 NH2-PEG24-2656-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 181은, 무수 DMSO 중에 용해시킨 7.4 mg의 Fmoc 전구체, 화합물 180 (0.001 mmol, 1.0 당량) 및 무수 DMSO 중의 100 mg/mL 용액으로서 첨가된 2.4 mg의 화합물 136 (0.001 mmol, 1.05 당량)을 반응시켜 합성하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 이어서, Fmoc 보호된 생성물에 피페리딘 (20% v/v)을 첨가하고, 이어서 이를 실온에서 3시간 동안 교반하여 탈보호된 생성물을 수득하고, 이어서 이를 에테르로 세척하였다. 화합물 181을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 30-40% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 5.5분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 >93.7% AUC) 백색 고체를 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C344H590N40O115m/z 7122.2, 실측치 1188.6 (M/6+H)+.
화합물 182, Fmoc-PEG36-NHS
화합물 182, Fmoc-Peg36-NHS 에스테르는, 바이알에서 30 mg의 NH2-Peg12-COOH (0.049 mmol, 1 당량) 및 74.7 mg Fmoc-Peg24-NHS 에스테르 (0.051 mmol, 1.05 당량)를 합하여 합성하였다. 13.5 uL의 TEA를 1 mL의 DMF에 첨가한 다음, 이 용액을 Peg를 함유하는 바이알로 옮겼다. 1시간 후, LCMS는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 추가의 TEA 27.1 uL를 바이알에 첨가하고, 이어서 NHS 7.27 mg (0.063 mmol, 1.3 당량)을 첨가하였다. 용액을 빙조를 사용하여 4℃로 냉각시키고, HATU 20.3 mg (0.053 mmol, 1.1 당량)을 첨가하였다. 1시간 후, LCMS는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 화합물 182를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 35-60% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 5.5분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 >93.7% AUC) 백색 고체를 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C97H169N3O43 m/z 2065.4, 실측치 1033.2(M/2+H)+.
화합물 183, NH2-PEG36-2656-Ahx-2B3W2
{NH2-PEG36}4-{NH2}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-2B3W2 또는 NH2-PEG36-2656-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 183은, 33.4 mg의 화합물 182 (0.024 mmol, 4.5당량)를 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 3 mg의 {NH2}4K2K{Lys(N3)}, (0.005 mmol, 1 당량)와 반응시켜 합성하였다. 트리에틸아민 (TEA) (9.0 uL, 0.06 mmol, 12 당량)을 6 mL THF 중에 희석하고, 반응 혼합물에 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. HPLC는 반응이 90% 완결되었음을 나타내었다. 용매를 제거하고, fmoc 전구체를 무수 DMSO 중에 재현탁시켰다. 이어서, fmoc 전구체 (10.8mg, 0.001 mmol, 1 당량)를 무수 DMSO 중의 100 mg/mL 용액으로서의 화합물 136 2.2 mg (0.001 mmol, 1.05 당량)과 반응시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 이어서, Fmoc 보호된 생성물에 피페리딘 (20% v/v)을 첨가하고, 이어서 이를 실온에서 3시간 동안 교반하여 탈보호된 생성물을 수득하고, 이어서 이를 에테르로 세척하였다. 화합물 183을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 30-40% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 6분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 >89.7% AUC) 백색 고체를 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C452H802N44O167 m/z 9519.6, 실측치 865.4 (M/11+H)+.
화합물 184, NH2-PEG12-2656-Ahx-2B3W2
{NH2-PEG12}4-{NH2}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-2B3W2 또는 NH2-PEG12-2656-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 184는, 15.2 mg Fmoc-PEG12-NHS 에스테르 (0.016 mmol, 3.5 당량)를 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 2.6 mg의 {NH2}4K2K{Lys(N3)}, (0.005 mmol, 1 당량)와 반응시켜 합성하였다. 트리에틸아민 (TEA) (20 uL, 0.12 mmol, 30 당량)을 2 mL THF 중에 희석하고, 반응 혼합물에 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. HPLC는 반응이 90% 완결되었음을 나타내었다. 용매를 제거하고, fmoc 전구체를 무수 DMSO 중에 재현탁시켰다. 이어서, fmoc 전구체 (18.6mg, 0.005 mmol, 1 당량)를 무수 DMSO 중의 100 mg/mL 용액으로서의 화합물 136 8 mg (0.001 mmol, 1.05 당량)과 반응시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 이어서, Fmoc 보호된 생성물에 피페리딘 (20% v/v)을 첨가하고, 이어서 이를 실온에서 3시간 동안 교반하여 탈보호된 생성물을 수득하고, 이어서 이를 에테르로 세척하였다. 화합물 184를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 28-38% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 5분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 95.2% AUC) 백색 고체를 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C248H298N40O67 m/z 5008.9, 실측치 1253.9 (M/4+H)+.
화합물 185, NH2-PEG6-2656-Ahx-2B3W2
{NH2-PEG6}4-{NH2}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-2B3W2 또는 NH2-PEG6-2656-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 185는, Fmoc-PEG12-NHS 대신 Fmoc-PEG6-NHS를 사용한 것을 제외하고는, 화합물 184와 동일한 절차에 따라 합성하였다. 화합물 185를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 18-48% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 6분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 93.2% AUC) 백색 고체를 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C200H302N40O43 m/z 3952.3, 실측치 189.7 (M/4+H)+.
화합물 186, OH-PEG12-2323-Ahx-2B3W2
{OH-PEG12}4-{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-2B3W2 또는 OH-PEG12-2323-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 186은, OH-PEG24-N3 대신 OH-PEG12-N3을 사용한 것을 제외하고는, 화합물 179와 동일한 절차를 사용하여 합성하였다. 화합물 186을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 9.4x100 mm, 5 μm 상에서 14분에 걸쳐 30-50% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 4.0분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 91.9% AUC) 회백색 고체를 30.2% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C256H402N52O67 m/z 5277.0, 실측치 1320.7 (M/4+H)+.
화합물 187, {NH2}4K2K{PEG24}{Lys(N3-DBCO)}-Ahx-2B3W2
{NH2}4K2K{PEG24}{Lys(N3-DBCO)}-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 187은, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 {NH2}4K2K{PEG24}{Lys(N3)}를 화합물 180 대신 사용한 것을 제외하고는, 화합물 181과 동일한 절차에 따라 합성하였고, 무색 용액을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C190H283N37O41 m/z 3739.1, 실측치 1306.4 (M/2+H)+.
화합물 188, 2656-Ahx-2B3W2
{NH2}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-2B3W2 또는 2656-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 188은, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 {NH2}4K2K{Lys(N3)}를 화합물 180 대신 사용한 것을 제외하고는, 화합물 181과 동일한 절차에 따라 합성하였고, 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 >98 % AUC) 무색 용액을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C140H186N36O15 m/z 2611.5, 실측치 1306.4 (M/2+H)+.
화합물 189, COOH-PEG25-2656
{COOH-PEG25}4-{NH2}4K2K{Lys(N3)} 또는 COOH-PEG25-2656으로 지칭되는 화합물 189는, 59.2 mg COOH-PEG25-NHS 에스테르 (0.05 mmol, 2.5 당량)를, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 10 mg의 {NH2}4K2K{Lys(N3)} (0.02 mmol, 1 당량)와 반응시켜 합성하였다. 30.0 uL 트리에틸아민 (TEA) (0.21 mmol, 12 당량)을 400 mL THF 중에 희석하고, 반응 혼합물에 첨가하고, 실온에서 24시간 동안 교반시켰다. HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 화합물 189를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 27-47% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 57.2 mg (94.9% 수율) 회백색 고체를 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C240H465N11O116 m/z 5358.1, 실측치 1341.0 (M/3+H)+.
화합물 190, COOH-PEG25-2656-Ahx-2B3W2
{COOH-PEG25}4-{NH2}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-2B3W2 또는 COOH-PEG25-2656-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 190은, 무수 DMSO 중에 용해시킨 화합물 189 5.9 mg (0.001 mmol, 1.0 당량) 및 무수 DMSO 중의 100 mg/mL 용액으로서 첨가된 화합물 136 2.4 mg (0.001 mmol, 1.05 당량)을 반응시켜 합성하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었고, 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 91.6% AUC) 무색 용액을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C356H602N36O127 m/z 7414.2, 실측치 1484.3 (M/5+H)+.
화합물 191, 2323-Ahx-W5
{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-W5 또는 2323-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 191은, 무수 DMSO 중에 용해시킨 21.7 mg의 화합물 62 (0.02 mmol, 1.05 당량)와 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조되어 (0.02 mmol, 1 당량) 무수 DMSO 중의 100 mg/mL 용액으로서 첨가된 28.2 mg의 {프로파르길}4K2K{Lys(N3)}를 반응시킴으로써 합성하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 화합물 191을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 25-55% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 5.7분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 27.2 mg (77.7% 수율) 백색 분말을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C124H145N27O17 m/z 2284.1, 실측치 1143.3 (M/2+H)+.
화합물 192, OH-PEG24-2323-Ahx-W5
{OH-PEG24}4-{프로파르길}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-W5 또는 OH-PEG24-2323-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 192는, 화합물 191을 화합물 178 대신 사용한 것을 제외하고는, 화합물 179와 동일한 절차를 사용하여 합성하였다. 화합물 192를 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 9.4x100 mm, 5 μm 상에서 14분에 걸쳐 31-51-61% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 5.5분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 98.6% AUC) 회백색 고체 6.2 mg (35.3% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C316H533N39O113 m/z 6682.7, 실측치 1337.8 (M/5+H)+.
화합물 193, NH2-PEG24-2656-Ahx-W5
무수 DMSO 중에 용해시킨 12.2 mg의 Fmoc 전구체, 화합물 180 (0.002 mmol, 1.0 당량) 및 무수 DMSO 중의 100 mg/mL 용액으로서 첨가된 2.6 mg의 화합물 191 (0.002 mmol, 1.05 당량)을 반응시킨 것에 의한 화합물 193. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었고, 분광학적으로 순수한 (254 nm에서 >99% AUC) 무색 용액을 수득하였다. 이어서, Fmoc 보호된 생성물을 실온에서 3시간 동안 DMF 용액 중 20% 피페리딘 250 uL에 첨가하여 탈보호된 생성물을 수득하고, 이어서 이를 10 mL의 에테르로부터 침전시키고, 5분 동안 4000g로 원심분리하였다. 생성물을 고체 펠릿으로서 수집하고, DMF 200 uL 중에 용해시킨 다음, 에테르 중에서 1회 더 분쇄하고, 이어서 진공 하에 건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 87.8% AUC) 밝은 자주색 오일 20.9 mg (>100% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C308H529N27O113 m/z 6414.65, 실측치 1284.2 (M/5+H)+.
화합물 194, COOH-PEG25-2656-Ahx-W5
{COOH-PEG25}4-{NH2}4K2K{Lys(N3)}-DBCO-Ahx-W5 또는 COOH-PEG25-2656-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 194는, 무수 DMSO 중에 용해시킨 4.3 mg의 화합물 189 (0.001 mmol, 1.0 당량)와 무수 DMSO 중의 100 mg/mL 용액으로서 첨가된 1.6 mg의 화합물 62 (0.001 mmol, 1.05 당량)를 반응시켜 합성하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었고, 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 94.3% AUC) 무색 용액을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C320H541N23O125 m/z 6706.7, 실측치 1342.6 (M/5+H)+.
브러시 아키텍처를 갖는 펩티드 항원 접합체의 합성
화합물 195, (CPNE1 min)4-2323-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2
여기서 A는 펩티드 항원 서열 SSPYSLHYLX이고, 여기서 X는 아지도리신이다.
(CPNE1 min)4-2323-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2 또는 (SSPYSLHYL)4-2323-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 195는, 화합물 178 0.63 mg (0.21 umol, 1 당량)을, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 펩티드 SSPYSLHYLX (서열식별번호: 104) 또는 CPNE1 min 1.29 mg (1.06 umol, 5 당량)과 함께 15.6 uL H2O 및 320.1 uL DMSO 중에 용해시킴으로써 합성하였다. 반응 혼합물에, 0.21 mg 아스코르브산나트륨 (1.06 umol, 5 당량)을 첨가하였다. 0.26 mg 황산구리 5수화물 (0.0163 mmol, 7 당량) 및 0.46 mg 트리스-히드록시프로필트리아졸릴메틸아민 (THPTA) (1.06 umol, 5 당량)을 개별 바이알에서 합한 다음, 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다.
LC-MS는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 9.4x100 mm, 5 μm 상에서 16분에 걸쳐 15-50-95% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 8 내지 11분 사이에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 >90% AUC) 회백색 고체를 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C384H534N104O79 m/z 7871.15, 실측치 1575 (M/5+H)+.
화합물 196, (CPNE1 LP)4-2323-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2
여기서 A는 펩티드 항원 서열 DFTGSNGDPSSPYSLHYLSPTGVNEYX이고, 여기서 X는 아지도리신이다.
(CPNE1 LP)4-2323-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 196은, 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조된 펩티드 DFTGSNGDPSSPYSLHYLSPTGVNEYX (서열식별번호: 105) 또는 CPNE1 LP를 출발 물질로서 사용한 것을 제외하고는, 화합물 195와 동일한 방법을 사용하여 제조하였다. 화합물 196을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 9.4x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 22-52% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물은 6.5 내지 8분 사이에 용리되었다. 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 >90% AUC) 회백색 고체를 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C680H946N180O199 m/z 14826.11, 실측치 1479 (M/10+H)+.
화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-U-H-[D] 및 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S]의 펩티드 항원 접합체
화합물 197-225는 문헌 [Lynn et al., Nature Biotechnology (2020)]에 이전에 기재된 바와 같이 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-U1 또는 U1-[E1]-A-[E2]-[S]의 펩티드 항원 단편과 화학식 U2-H-[D]의 소수성 블록 단편의 수렴적 어셈블리에 의해 생산하였다. 간략하게, 펩티드 항원 단편을 실온에서 DMSO 중 1 몰 당량의 소수성 블록 단편과 반응시켰다. 반응 진행을 HPLC에 의해 모니터링하고, 펩티드 항원 단편이 펩티드 항원 접합체로 완전히 전환된 후 16시간째에 반응을 정지시켰다.
표 8: 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-U-H-[D] 및 H-[D]-U-[E1]-A-[E2]-[S]의 펩티드 항원 접합체.
상기 표에서 아미노산 서열에 대해 단일 문자 약어가 사용된다; X = 아지도리신 및 Z = 시트룰린. 펩티드-기반 출발 물질은 젠스크립트 (뉴저지주 피스카타웨이)에 의해 고체-상 펩티드 합성에 의해 제조되었다. 펩티드-기반 출발 물질에 대한 서열은 N-에서 C-말단으로 기록되고, C-말단 NH2는 펩티드가 아미드로 종결됨을 나타낸다. 달리 명시되지 않는 한, 임의의 C-말단 X인 아지도리신은 아미드로 종결되며, 이는 서열에 내포된다 (즉, 제시되지 않음). N-말단 Azp = 아지도펜탄산.
화학식 A-[E2]-H 및 H-[E1]-A의 펩티드 항원 접합체
표 9의 화합물 226-241을 고체 상 펩티드 합성에 의해 합성하였다.
표 9: SPPS에 의해 생산된 화학식 A-[E2]-H 및 H-[E1]-A의 펩티드 항원 접합체.
상기 표에서 아미노산 서열에 대해 단일 문자 약어가 사용된다; F' = 파라-아미노페닐알라닌 및 Z = 시트룰린. 펩티드는 젠스크립트 (뉴저지주 피스카타웨이)에 의해 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조되었고, 순도 및 동일성은 HPLC 및 질량 분광측정법에 의해 확인되었고; "일치"는 질량 스펙트럼이 예상된 m/z에 일치하였음을 나타낸다. 달리 명시되지 않는 한, 모든 서열은 C-말단에서 아미드로 종결된다.
화학식 S-B-U-H-[D]의 추가의 친양쪽성체
화합물 242-248 (표 10)을 표 7에 기재된 것과 유사한 방식으로 제조하였다.
표 10: 화학식 S-B-U-H-[D]의 친양쪽성체
상기 표에서 아미노산 서열에 대해 단일 문자 약어가 사용된다; X = 아지도리신; O = 오르니틴; 및 k = d-리신. 펩티드-기반 출발 물질은 젠스크립트 (뉴저지주 피스카타웨이)에 의해 고체-상 펩티드 합성에 의해 제조되었다. 펩티드-기반 출발 물질 서열은 N-에서 C-말단으로 기록되고, C-말단 -NH2 및 -COOH는 펩티드가 각각 아미드 또는 카르복실산 기로 종결됨을 나타낸다. 달리 명시되지 않는 한, 임의의 C-말단 X인 아지도리신은 아미드로 종결되며, 이는 서열에 내포된다 (즉, 제시되지 않음). 알짜 전하는 pH 7.4의 수성 완충제에서의 친양쪽성체의 예측된 알짜 전하이다.
화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-U-H-[D]의 추가의 펩티드 항원 접합체
화합물 249-256 (표 11)을 표 8에 기재된 것과 유사한 방식으로 합성하였다.
표 11: 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-U-H-[D]의 추가의 펩티드 항원 접합체.
상기 표에서 아미노산 서열에 대해 단일 문자 약어가 사용된다; X = 아지도리신 및 Z = 시트룰린. 펩티드-기반 출발 물질은 젠스크립트 (뉴저지주 피스카타웨이)에 의해 고체-상 펩티드 합성에 의해 제조되었다. 달리 명시되지 않는 한, 임의의 C-말단 X인 아지도리신은 아미드로 종결되며, 이는 서열에 내포된다 (즉, 제시되지 않음).
친양쪽성 담체를 포함하는 나노입자의 유체역학적 거동
본 발명자들의 초기 연구는 스페이서 (B)의 조성 및 친양쪽성체의 알짜 전하가, 화학식 S-B-U-H의 선형 친양쪽성체가 나노입자 미셀로 어셈블리되는 능력에 어떻게 영향을 미치는지 평가하는 데 집중하였다 (도 1). 예상된 바와 같이, +2에서 +8로 알짜 전하를 증가시키는 것은 소수성 블록 길이 또는 스페이서 조성과 무관하게 친양쪽성체가 나노입자 미셀로 어셈블리되는 증가된 성향으로 이어졌다 (도 1). PEG4, PEG24 또는 24개의 아미노산을 포함하는 스페이서를 갖는 친양쪽성체는 모두 +8의 알짜 전하로 나노입자 미셀을 형성한 한편, PEG4- 또는 펩티드-기반 스페이서를 갖는 것은 +2 이하의 알짜 전하로 응집하는 경향이 있었으나 PEG24는 그렇지 않았고 (도 1), 이는 중간 길이의 PEG 스페이서가 일반적으로 아미노산 또는 짧은 PEG-기반 스페이서 (B)보다 바람직할 수 있다는 것을 시사한다.
본 발명자들의 다음 연구는 가용화 블록의 조성 및 아키텍처가, 화학식 S-B-U-H의 선형 친양쪽성체가 나노입자 미셀로 어셈블리되는 능력에 어떻게 영향을 미치는지를 조사하였다. 아민, 카르복실산, 히드록실 또는 만노스 기반 가용화 기를 갖는 선형, 덴드론 또는 브러시 아키텍처를 갖는 친양쪽성체를 평가하였다 (도 2 및 3). 특히, 선형 친양쪽성체는 전형적으로 안정한 나노입자 미셀화를 보장하기 위해 +4 초과 또는 -4 미만의 알짜 전하를 필요로 하지만, 덴드론 친양쪽성체는 중성 전하에 의해 안정한 나노입자 미셀을 형성하였다. 선형 및 덴드론 구조와 대조적으로, 브러시-기반 친양쪽성체는 알짜 전하와 무관한, 보다 큰 입자 크기 가변성을 나타내었다. 종합하면, 이들 데이터는 친양쪽성체 아키텍처가 유체역학적 거동뿐만 아니라 미셀화를 위한 요건 (예를 들어, 요구되는 알짜 전하)에 주요 영향을 미친다는 것을 나타낸다.
친양쪽성 담체 및 펩티드 항원 접합체를 포함하는 나노입자의 유체역학적 거동
펩티드 항원은 가변적인 생물학적 활성으로 이어질 수 있는 다양한 물리적 및 화학적 특성을 갖는다. 보다 예측가능한 생물학적 활성을 가능하게 하기 위한 수단으로서 균일한 크기 및 조성의 나노입자로의 펩티드 항원 전달을 표준화하기 위해, 본 개시내용의 본 발명자들은 1개 이상의 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성 담체를 포함하는 소위 "모자이크" 나노입자를 포함하는 백신을 개발하였다 (도 4). 친양쪽성 담체 (예를 들어, S-[B]-[U]-H-[D])의 코어는 펩티드 항원 접합체 상에 존재하는 소수성 블록을 가용화시키는 반면 (이에 의해 입자 내로 접합된 펩티드 항원이 혼입됨), 친양쪽성체의 가용화 블록은 생성된 나노입자 미셀을 안정화시키고, 달리 펩티드 항원 접합체 단독에서 발생할 수 있는 응집을 방지한다. 이러한 접근법의 이점은 다중의 상이한 항원을 (펩티드 항원 접합체로서) 균일한 조성의 나노입자 내로 혼입시키는 간단한 방법을 가능하게 한다는 것이다.
상기 연구는 가용화 블록 조성 및 아키텍처가 친양쪽성체 단독에 의한 나노입자 미셀화에 어떻게 영향을 미치는지 확립하였지만, 이러한 파라미터가 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성체 둘 다를 포함하는 조성물의 유체역학적 거동에 어떻게 영향을 미치는지는 이전에 공지되지 않았다. 따라서, 본 발명자들은 1:1 몰비의 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체에서 다양한 조성의 친양쪽성체를 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 나노입자의 유체역학적 거동을 평가하였다 (도 5). 친양쪽성체 단독에 의해 관찰된 결과와 유사하게, 덴드론 아키텍처를 갖는 친양쪽성체를 포함하는 나노입자는 중성 알짜 전하 하에 안정한 나노입자를 형성한 반면, 선형 또는 브러시 아키텍처를 갖는 것은 -4 초과 또는 +4 미만의 전하에서 보다 큰 입자, 가능하게는 응집체를 형성하는 경향이 있었다. 이들 결과는 펩티드 항원 접합체와 혼합된 덴드론 아키텍처를 갖는 친양쪽성체가 전하와 무관하게 모자이크 나노입자 미셀을 촉진한다는 것을 확립하였다.
실시예 3: 친양쪽성체 및 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 모자이크 나노입자에 기초한 백신 조성물
암을 치료 또는 예방하기 위한 백신의 유체역학적 거동 및 면역원성에 대한 친양쪽성 담체 조성물의 영향
암 치료를 위한 백신의 비제한적 예는 친양쪽성체 및 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하며, 여기서 펩티드 항원 접합체는 종양 항원, 예컨대 신생항원으로부터 선택된 항원 (A)을 포함한다. 암 치료를 위한 백신의 특정 실시양태에서, 백신은 친양쪽성체를 1개 이상의 펩티드 항원 접합체와 총 친양쪽성체 대 총 펩티드 항원 접합체의 명시된 몰비로 극성 비양성자성 용매, 예컨대 DMSO, DMF 또는 DMAC 중에서 조합한 다음; 수성 완충제를 혼합물에 첨가하고, 이어서 부드럽게 혼합하여 친양쪽성체 및 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 모자이크 나노입자의 수성 제제를 수득하는 것에 의해 제조된다.
표 12는 양전하 및 선형 아키텍처 (화합물 169 및 172), 음전하 및 선형 아키텍처 (화합물 174 및 175) 또는 중성 전하 및 덴드론 (또는 "원뿔") 아키텍처 (화합물 162 및 163)를 갖는 화학식 S-B-U-H-D의 친양쪽성체를 포함하는 암 백신의 예를 제공하며, 여기서 각 경우에 친양쪽성체는 4개의 펩티드 항원 접합체와 함께 1:1 몰비의 친양쪽성체 대 펩티드 항원 접합체로 제제화되었다. 예를 들어, 군 2의 경우, 친양쪽성체 화합물 174의 5 mM DMSO 용액 48 uL (240 nmol, 4 당량)를 2 mL 폴리프로펜 바이알에 첨가한 다음, 펩티드 항원 접합체 화합물 198 (60 nmol, 1 당량), 화합물 199 (60 nmol, 1 당량), 화합물 202 (60 nmol, 1 당량), 및 화합물 224 (60 nmol, 1 당량)의 5 mM DMSO 용액 12 uL, 및 트리스 염기의 500 mM DMSO 용액 5.76 uL (2880 nmol, 48 당량)를 첨가하였다. 용액을 볼텍싱한 다음, 1098.2 uL의 PBS를 첨가하고, 이어서 부드럽게 혼합하여, 친양쪽성체 및 펩티드 항원 접합체를 추가로 포함하는 모자이크 나노입자를 포함하는 수성 백신 제제를 수득하였다. 나노입자의 유체역학적 거동을 탁도 및 DLS 측정에 의해 특징화하였고, 표 12에 요약한다.
표 12: 양성, 음성 또는 중성 (만노스) 나노입자를 포함하는 암 백신
덴드론 아키텍처를 갖는 친양쪽성 담체의 주요 이점은 이러한 친양쪽성체가 전하와 무관하게 나노입자 미셀화를 가능하게 하여, 본원에 기재된 가능한 선형 친양쪽성체보다 더 넓은 범위의 화학적 조성의 가용화 블록의 사용을 가능하게 한다는 것이다. 예를 들어, 높은 알짜 양전하를 갖는 입자는 고도로 면역원성이지만, 이러한 조성물은 특히 정맥내 경로에 의하면 독성을 야기할 수 있다. 따라서, 중성 또는 음전하를 갖는 조성물이 특정 적용에 바람직할 수 있다.
가용화 블록 조성 및 알짜 전하가 면역 반응에 어떻게 영향을 미치는지를 평가하기 위해, 마우스를 선형 아키텍처 및 양전하 (화합물 245), 선형 아키텍처 및 음전하 (화합물 246) 또는 덴드론 아키텍처 및 순 중성 전하를 갖는 만노스 기반 가용화 기 (화합물 162; 도 6)를 갖는 펩티드 항원 접합체 및 화학식 (S-B-H)의 친양쪽성체를 포함하는 백신으로 면역화시켰다. 특히, 덴드론 아키텍처를 갖는 백신 조성물 (화합물 162)은 양전하 또는 음전하를 갖는 선형 친양쪽성체를 갖는 백신 조성물과 비교하여 보다 높은 규모의 CD8 T 세포 반응 및 보다 낮은 독성을 유도하였다 (제시되지 않음) (도 6). 중요한 것으로, 이들 경향은 독립적 연구에서 재현되었고, 덴드론 아키텍처를 갖는 친양쪽성체 및 알짜 중성 전하를 갖는 만노스-기반 가용화 기를 포함하는 백신 조성물 (화합물 162)은 선형 아키텍처를 갖는 친양쪽성체 및 알짜 양전하 또는 알짜 중성 전하를 갖는 백신 조성물과 비교하여 보다 높은 규모의 CD8 T 세포 반응을 유도하였다 (도 7A-B). 상이한 나노입자 백신 조성물과 공-투여된 생물학적 아주반트의 형태로서 백시니아 바이러스를 포함하는 부스팅 면역화 후에, 군 사이의 차이는 크게 감소하였다 (도 7C).
관용을 유도하기 위한 백신의 유체역학적 거동에 대한 친양쪽성 담체 조성물의 영향
암 치료를 위한 백신을 제조하는 데 사용되었던 것과 유사한 방법을 사용하여 관용을 유도하기 위한 백신 조성물을 제조하였다. 표 13은 양전하 및 선형 아키텍처 (화합물 172), 음전하 및 선형 아키텍처 (화합물 175), 중성 전하 (사카라이드 가용화 기) 및 덴드론 (또는 "원뿔") 아키텍처 (화합물 163) 또는 음전하 (사카라이드-기반 가용화 블록으로부터의 것) 및 선형 아키텍처 (화합물 177)를 갖는 화학식 S-B-U-H의 친양쪽성체를 포함하는, 관용을 유도하기 위한 백신의 예를 제공하며, 여기서 각 경우에 친양쪽성체는 자가항원 ("MOG")을 포함하는 펩티드 항원 접합체 및 약물 (D), 라파마이신과 함께 1:1:1 몰비의 친양쪽성체 대 펩티드 항원 접합체 대 약물로 제제화되었다. 추가적으로, 카르복실산을 추가로 포함하는 친양쪽성체를 포함하는 제제에 1.5 몰 당량의 트리스를 첨가하였다.
예를 들어, 표 13의 군 2의 경우, 화합물 175의 13.28 mM DMSO 용액 5.65 uL (75 nmol, 1 당량) 및 화합물 218의 8.42 mM DMSO 용액 8.91 uL (75 nmol, 1 당량)를 2.0 mL 폴리프로필렌 튜브에 첨가한 다음, DMSO를 진공 하에 제거하였다. 이 튜브에 9 uL DMSO, 3.75 uL의 라파마이신의 20 mM DMSO 용액 (75 nmol, 1 당량) 및 2.25 uL의 트리스의 400 mM DMSO 용액 (900 nmol, 12 당량)을 첨가하였다. 용액을 볼텍싱하여 화합물 218이 DMSO 중 5 mM인 혼합물을 수득하였다. 바이알을 볼텍싱한 다음, 2,385 uL의 PBS 완충제를 첨가하여 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체 및 약물 분자를 추가로 포함하는 모자이크 나노입자를 포함하는 수성 백신 제제를 수득하였다. 나노입자의 유체역학적 거동을 탁도 및 DLS 측정에 의해 특징화하였고, 표 13에 요약한다.
표 13: 양성, 음성 또는 중성 친양쪽성체, 펩티드 항원 접합체 및 약물 (즉, 라파마이신)을 포함하는, 관용을 유도하기 위한 백신.
항체를 유도하기 위한 백신의 유체역학적 거동 및 면역원성에 대한 친양쪽성 담체 조성물의 영향
암 치료를 위한 백신을 제조하는 데 사용되었던 것과 유사한 방법을 사용하여 항체를 유도하기 위한 백신 조성물을 제조하였다. 표 14는 양전하 및 PEG24 스페이서를 갖는 선형 아키텍처 (화합물 169), 양전하 및 PEG4 스페이서를 갖는 선형 아키텍처 (화합물 167), 또는 양전하 및 브러시 아키텍처 (화합물 185)를 갖는 화학식 S-B-U-H의 친양쪽성체를 포함하는 항체를 유도하기 위한 백신의 예를 제공하며, 여기서 각 경우에 친양쪽성체는 B 세포 에피토프를 포함하는 1개 이상의 펩티드 항원 접합체 및 범용 CD4 T 세포 에피토프를 포함하는 펩티드 항원 접합체와 함께 1:1 몰비의 친양쪽성체 대 총 펩티드 항원 접합체로 제제화되었다. B 세포 에피토프를 포함하는 펩티드 항원 접합체 대 범용 CD4 T 세포 에피토프를 포함하는 펩티드 접합체의 몰비는 4:1이었음을 주목한다.
예를 들어, 군 1의 경우, 화합물 211의 5 mM DMSO 스톡 7.2 uL (36 nmol, 1 당량)를 2 mL 폴리프로필렌 튜브에 첨가하였다. 화합물 169의 5.4 mM DMSO 원액 8 uL (43.2 nmol, 1.2 당량)를 첨가하고, 이어서 화합물 225의 4.1 mM DMSO 원액 1.76 uL (7.2 nmol, 0.2 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 DMSO 150 uL로 희석하고, 멸균 여과한 다음, DMSO를 진공 하에 제거하였다. 건조된 물질을 멸균 DMSO 7.2 uL 중에 재현탁시켜 DMSO 중 5 mM의 화합물 211을 갖는 용액을 수득하였다. 바이알을 볼텍싱한 다음, 712.8 uL의 PBS를 첨가하여 친양쪽성체 및 펩티드 항원 접합체를 추가로 포함하는 모자이크 나노입자를 포함하는 수성 백신 제제를 수득하였다. 나노입자의 유체역학적 거동을 탁도 및 DLS 측정에 의해 특징화하였고, 하기 표 14에 요약한다.
표 14: 친양쪽성체, 및 각각 B 세포 에피토프 및/또는 T 세포 에피토프를 포함하는 1개 이상의 상이한 펩티드 항원 접합체를 포함하는, 항체 반응을 유도하기 위한 백신.
상기 제제화 방법을 이용하여, 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 다양한 조성 및 아키텍처의 친양쪽성 담체와 혼합함으로써 형성된 입자의 유체역학적 거동을 평가하였다. 항원-제시 세포에 의해 프로세싱되고 제시된 선형 펩티드에 대한 항원-특이적 T 세포 반응을 생성하는 것에 초점을 맞춘 암 백신 또는 관용을 유도하기 위한 백신과 대조적으로, 항체 백신은 또한 B 세포 에피토프가 용매 노출되고 입자 (예를 들어, 1개 이상의 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성 담체에 의해 형성된 나노입자 미셀)의 표면 상의 B 세포 수용체에 접근가능하도록 보장해야 한다. 따라서, 친양쪽성 담체 조성물의 영향을 평가하는 것에 더하여, 본 발명자들은 또한, 펩티드 항원 (A)과 소수성 블록 (H) 사이의 연장부 (E1 또는 E2)의 길이, 뿐만 아니라 가용화 기와 친양쪽성 담체 사이의 스페이서 길이 (B)를 변화시키는 것이 입자 안정성뿐만 아니라 펩티드 항원에 대해 생성된 항체 반응에 어떻게 영향을 미치는지를 평가하였다. 본 발명자들의 근거는 B의 길이 이상인 연장부 E1 (또는 E2)에 연결된 항원 (A)을 제공하는 것이 항원이 충분하게 용매 노출되고 B 세포에 접근가능하도록 보장할 것인 반면, B 미만의 E1 (또는 E2)은 불충분한 용매 노출로 인해 보다 낮은 규모의 반응을 유도할 수 있다는 것이었다. 그러나, 가용화 블록 (S)의 부재 하의 펩티드 항원 (A)의 용매 노출 (예를 들어, A-[E2]-[U]-H[D] 또는 H-[D]-[U]-[E1]-A)은 입자 불안정성으로 이어지는 잠재력을 갖는다.
본 발명자들의 다음 연구는 다양한 친양쪽성 담체 조성 및 아키텍처, 뿐만 아니라 다양한 길이의 펩티드 항원 접합체 연장부 (도 8 참조) 및 다양한 길이의 친양쪽성 담체의 스페이서 (B)를 갖는 상이한 B 세포 백신 조성물의 유체역학적 안정성을 평가하였다. 이전의 발견과 일치하게 (도 5 참조), 덴드론 아키텍처 또는 선형 아키텍처 및 높은 알짜 전하 (또는 선형 아키텍처 및 PEG 스페이서 (B) 길이 적어도 36 단위 초과)를 갖는 친양쪽성 담체를 포함하는 백신 조성물은 일반적으로 안정한 나노입자 미셀을 형성한 반면, 브러시 아키텍처를 갖는 친양쪽성 담체는 일반적으로 서브마이크로미터 입자로 어셈블리되었다 (도 9 및 10). 추가의 주목할 만한 발견은 펩티드 항원 접합체 연장부 E1이 친양쪽성 담체 상에 존재하는 스페이서 B의 길이보다 길거나, 동일하거나, 또는 그보다 짧은 경우에도 나노입자 미셀이 안정하였다는 것이며, 이는 항원의 돌출이 유체역학적 거동에 최소의 영향을 미치고, 펩티드 항원 접합체 상에 짧은 펩티드-기반 가용화 블록 (즉, Lys-Pro-Lys)을 도입하는 것은 펩티드 항원 접합체가 친양쪽성 담체의 존재 없이 안정한 나노입자 미셀로 어셈블리될 수 있게 하였음을 시사한다 (도 9).
가용화 블록을 포함하는 펩티드 항원 접합체가 담체 없이 안정한 나노입자를 형성하였지만, 펩티드 항원 접합체의 펩티드 항원에 인접한 말단 가용화 블록의 존재는 항체 반응에 유해하였다 (도 11). 따라서, 가용화 블록이 없는 4개의 펩티드 항원 접합체 (화합물 207, 212, 216 및 225) 및 친양쪽성 담체 (화합물 167 또는 169)를 포함하는 백신 조성물은 가용화 기를 추가로 포함하는 펩티드 항원 접합체 (화합물 208, 213 및 217; 도 11)를 포함하는 백신 조성물보다 펩티드 항원 (A)에 대해 보다 높은 규모의 항체 반응을 유도하였다. 이들 결과는 가용화 블록이 펩티드 항원 접합체를 포함하는 나노입자의 안정성에 중요하지만, 펩티드 항원에 대해 생성된 항체 반응의 간섭을 감소시키는 수단으로서 친양쪽성 담체의 사용을 통해 가용화 블록을 펩티드 항원으로부터 탈커플링시키는 것이 우선적이라는 것을 시사한다.
마지막으로 주목할 만한 발견은 친양쪽성 담체의 스페이서 (B)보다 길거나 또는 동일한 길이의 연장부 (E1 또는 E2)를 갖는 펩티드 항원 접합체가 일반적으로 보다 높은 규모의 항체 반응을 유도하였지만 (예를 들어, 친양쪽성 담체 화합물 167 (PEG4) 대 화합물 169 PEG를 갖는 군을 비교함) (도 12); 강성의 펩티드-기반 연장부를 갖는 펩티드 항원 접합체가 일반적으로 PEG-기반 연장부를 갖는 것보다 더 큰 규모의 항체 반응을 유도하였기 때문에, 연장부의 강성이 항체 반응에 실질적인 영향을 미친다는 것이 또한 발견되었다는 것이다 (데이터는 제시되지 않음).
실시예 4: 비-천연 아미노산을 갖는 펩티드 항원 접합체
아미노산 시스테인 및 메티오닌은 산화되는 경향이 있으며, 이는 1개 이상의 시스테인 및/또는 메티오닌 잔기를 갖는 펩티드를 포함하는, 백신을 비롯한 펩티드-기반 치료제를 제조하는 데 도전과제를 제시할 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 본 발명자들은 1개 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 펩티드 항원 접합체가 주위 공기 하에 특정 유기 용매 (예를 들어, DMSO) 또는 수용액 중에 저장 시 (분자간 디술피드 결합 형성으로 인해) 이량체 또는 다량체를 형성하는 경향이 있다는 것을 관찰하였다. 분자간 디술피드 결합 형성을 일으키는 산화는 순도 감소를 발생시키고, 잠재적으로 생물학적 활성에 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 시스테인 및 메티오닌 산화의 도전과제를 극복하기 위한 전략이 필요하다.
시스테인 및 메티오닌 산화의 도전과제를 극복하기 위한 수단으로서, 본 개시내용의 본 발명자들은 펩티드 항원의 자연 발생 시스테인 (Cys) 및 메티오닌 (Met) 잔기를 각각 산화 경향이 있는 것으로 주목되는 유사한 구조의 아미노산, 예를 들어 알파 아미노부티르산 (aBut) 및 노르류신 (nLeu)으로 치환하는 것의 허용성을 평가하였다 (도 13). Cys 및 Met 잔기를 각각 aBut 및 nLeu로 치환하는 것이 자연 (또는 "천연") 항원에 대해 교차-반응성인 생체내 T 세포를 유도하는 생성된 비-자연 항원의 능력에 어떻게 영향을 미칠 것인지는 선험적으로 공지되지 않았다. 따라서, 1개 이상의 시스테인 및/또는 메티오닌 잔기를 갖는 일련의 항원 (표 15)을 합성하고, 비-자연 백신 펩티드 항원, 뿐만 아니라 자연 발생 ("천연") 펩티드 항원 둘 다를 인식하는 T 세포를 도출하는 능력에 대해 생체내에서 스크리닝하였다.
놀라운 발견은 Met 및 Cys가 각각 nLeu 및 aBut로 대체된 비-자연 펩티드 항원을 포함하는 펩티드 항원 접합체가 자연 (천연) 펩티드 항원 및 비-자연 서열 둘 다에 대해 교차-반응성이고, 자연 펩티드 항원으로 유도된 T 세포와 비교하여 유사한 규모, 표현형 및 효력의 T 세포를 유도하였다는 것이다 (도 14-20). 이는 T 세포 에피토프 내의 아미노산 잔기의 치환이 MHC 결합, T 세포 프라이밍 및/또는 T 세포 반응성에 어떻게 영향을 미칠 수 있는지 공지되지 않았기 때문에 매우 예상외의 것이었다. nLeu 및 aBut가 각각 Met 및 Cys에 대한 적합한 대체물로서 확인되었지만, 추가의 주목할 만한 발견은 펩티드 항원의 메티오닌 잔기를 노르발린 또는 류신으로 대체하는 것이 T 세포 반응에 해롭다는 것이었다 (도 16). 유사하게, 자연 발생 펩티드 항원의 Cys를 세린 (Ser)으로 대체하는 것은 천연 펩티드 항원에 대해 유의하게 더 낮은 규모의 T 세포를 유도하는 비-자연 항원을 발생시켰다 (도 19).
표 15: 자연 또는 비-자연 발생 펩티드 항원 서열을 포함하는 펩티드 항원 접합체
상기 표에서 아미노산 서열에 대해 단일 문자 약어가 사용된다; X = 아지도리신, Z = 시트룰린; n = 노르류신; v = 노르발린; 및 B = 알파-아미노부티르산. C-말단 아지도리신 (X)을 보유하는 펩티드-기반 출발 물질은 젠스크립트 (뉴저지주 피스카타웨이)에 의해 고체-상 펩티드 합성을 통해 제조되었고, 이어서 이를 DBCO를 보유하는 소수성 블록 단편, 화합물 136 (DBCO-Ahx-2B3W2)과 반응시켜 화학식 S-E1-A-E2-U-H(D)의 펩티드 항원 접합체를 생성하였다. 반응을 HPLC에 의해 모니터링하고, 생성물을 LC-MS에 의해 특징화하여, 분자량 실측치가 이론치와 일치하는지 ("Conf.") 확인하고, DLS에 의해 유체역학적 직경 (DH)을 평가하였다. 주: 밑줄친 문자는 비-자연 발생 ('비-천연') 아미노산을 나타내고; 예를 들어, 화합물 258의 아미노산 노르류신 ("n")은 화합물 257의 메티오닌을 대체하였다. Trp1은 자기-항원이고, norTrp1은 공지된 T 세포 에피토프에 함유된 단일 메티오닌이 노르류신으로 대체된 것을 제외하고는 Trp1이다. Adpgk는 종양 신생항원이고, nor Adpk, 노르발린 Adpgk 및 류신 Adpgk는 공지된 T 세포 에피토프 내에 함유된 3개의 메티오닌 잔기가 각각 노르류신, 노르발린 또는 류신으로 대체된 것을 제외하고는 Adpgk이다. GP33은 바이러스 항원이고, aBut GP33 및 Ser GP33은 공지된 T 세포 에피토프 내에 함유된 시스테인 잔기가 각각 aBut 또는 Ser로 대체된 것을 제외하고는 GP33이다. M27은 종양 신생항원이고, aBut M27은 공지된 T 세포 에피토프 내에 함유된 시스테인 잔기가 aBut로 대체된 것을 제외하고는 M27이다. E7은 바이러스 항원이고, aBut E7은 3개의 시스테인 잔기가 aBut로 대체된 것을 제외하고는 E7이다.
실시예 5: pH-반응성에 대한 친양쪽성체 조성물의 영향
친양쪽성체의 가용화 기로서 사용하기 위해, 카르복실산은 친양쪽성체가 알짜 음전하를 갖는 것을 보장하기 위해 생리학적 pH 근처의 pH, 예를 들어 pH 7.4에서 탈양성자화되어야 한다. 그러나, 카르복실산의 pKa는 그의 화학적 환경뿐만 아니라 치환기에 의해 영향을 받을 수 있다. 따라서, 카르복실산을 추가로 포함하는 가용화 기를 포함하는 여러 친양쪽성체를 합성하고, pH 7.4 내지 pH 6.5의 pH 범위에 걸쳐 그의 용해도를 평가하였다.
화합물 270, 271 및 160은 가용화 기 (SG)인, 또는 링커 X5를 통해 SG에 연결된, 카르복실산으로 이루어진 말단 관능기 (FGt)를 갖는 PEG-기반 덴드론 증폭제를 포함하며, 여기서 X5-SG는 각각 -NH-(CH2)-COOH 및 -NH-(CH2)2-COOH이다. 화합물 270, 271 및 160의 구조 및 합성은 하기에 제공된다.
(COOH)4-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2 또는 테트라(COOH)-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 270은, 화합물 154에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 화합물 145를 화합물 136과 반응시켜 합성하였다. MS (ESI) 계산치 C194H283N31O52 m/z 3879.1, 실측치 971.2 (M/4+H)+.
(COOH-메틸)4-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2, 테트라(COOH-메틸)-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2 또는 테트라(Gly)-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 271을 2 단계로 합성하였다. 먼저, (COOH-메틸)4-PEG24-N3을 화합물 149에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 화합물 146을 글리신과 반응시켜 합성하였다. 이어서, (COOH-메틸)4-PEG24-N3을 화합물 154에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 화합물 136과 반응시켜 화합물 271을 수득하였다. C202H295N35O56 m/z 4107.1, 실측치 1370.4 (M/3+H)+.
화합물 272, 273 및 274는 링커 X5를 통해 SG에 연결된 아민으로 이루어진 말단 관능기 (FGt)를 갖는 펩티드-기반, 즉 리신-기반, 덴드론 증폭제를 포함하며, 여기서 X5-SG는 화합물 272의 경우에 -C(O)-(CH2)3-COOH이고, X5-SG는 화합물 273 및 274의 경우에 -NH-(CH2)2-COOH이다. 화합물 272, 273 및 274의 구조 및 합성은 하기에 제공된다.
{글루타르산}4K2K{PEG24}{Lys(N3-DBCO)}-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 272는, C-말단 Lys(N3)을 포함하는 펩티드-기반 덴드론, {글루타르산}4K2K{PEG24}{Lys(N3)}을 화합물 154에 대해 기재된 바와 유사한 방식으로 화합물 136과 반응시켜 합성하였다. MS (ESI) 계산치 C211H311N37O52 m/z 4195.3, 실측치 1050.2 (M/4+H)+.
{숙신산}4K2KK{PEG24-N3-DBCO)}-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 273을 2 단계로 합성하였다. 먼저, 펩티드-기반 덴드론 {숙신산}4K2KK의 C-말단 리신의 엡실론 아민을 NHS-PEG24-N3과 반응시켜 {숙신산}4K2KK{PEG24-N3}을 수득하고, 이어서 이를 화합물 154에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 화합물 136과 반응시켜 화합물 273을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C207H303N37O52 m/z 4139.2, 실측치 1036.3 (M/4+H)+.
{숙신산}4K2K{Lys(N3-DBCO)}-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 274는, C-말단 Lys(N3)을 포함하는 펩티드-기반 덴드론, {숙신산}4K2K {Lys(N3)}을 화합물 154에 대해 기재된 바와 유사한 방식으로 화합물 136과 반응시켜 합성하였다. MS (ESI) 계산치 C156H202N36O27 m/z 3011.6, 실측치 1005.3 (M/3+H)+.
카르복실산 기를 추가로 포함하는 친양쪽성체의 6종의 상이한 조성물 (화합물 160, 270, 271, 272, 273 및 274)의 pH-반응성 특성을 탁도 측정을 사용하여 평가하였다. 간략하게, 각각의 친양쪽성체를 pH 7.4, 7.0 또는 pH 6.5의 1X PBS 완충제 중에 0.1 mM의 최종 농도로 현탁시키고, 혼탁도 (490 nm에서의 OD)를 UV-Vis 분광광도계를 사용하여 평가하였다 (도 21).
pH 7.4에서 일부 응집을 나타낸 화합물 271을 제외하고, 카르복실산을 포함하는 모든 다른 친양쪽성체는 pH 7.4에서 안정한 입자 크기를 갖는 나노입자 미셀을 형성하였다 (도 21B). 특히, 화합물 270은 pH 7.0 및 pH 6.5에서 응집체를 형성하였고, 이는 약 pH 7.4 내지 7.0의 생리학적 pH 근처에서의 pH-반응성을 나타내는 반면, 화합물 160, 272, 273 및 274는 적어도 pH 7.0까지 안정한 입자 크기를 나타내었다.
실시예 6: 펩티드 항원 접합체 (PAC) 알짜 전하 및 친양쪽성체의 영향
+8 이상의 펩티드 항원 접합체의 평균 알짜 전하를 갖는 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 추가로 포함하는 나노입자를 포함하는 백신은 용량-의존성 방식으로 적혈구 (RBC) 용해를 유발하는 것으로 발견되었다. 양으로 하전된 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신의 용량-의존성 용혈은 펩티드 항원 접합체의 평균 알짜 전하를 감소시키고/거나 중성 또는 음으로 하전된 친양쪽성 담체를 차폐기로서 사용하는 것 둘 다에 의해 완화될 수 있는 것으로 가설화되었다. 또한, 특정 친양쪽성체가 나노입자 안정성을 촉진시킬 수 있기 때문에, 특정 친양쪽성체의 사용이 친양쪽성체 및 1개 이상의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 입자를 안정화시키는 데 필요한 평균 펩티드 항원 접합체 알짜 전하를 감소시킬 수 있다는 것이 추가로 가설화되었다.
따라서, 펩티드 항원 접합체 알짜 전하와 친양쪽성체 조성물 사이의 상호 작용이 1개 이상의 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성체를 포함하는 백신의 크기, 안정성 및 RBC 용해 잠재력에 어떻게 영향을 미치는지 평가하기 위해, 다양한 친양쪽성체 조성 및 펩티드 항원 접합체 알짜 전하를 갖는 백신에 대해 RBC 용해 잠재력, 제타 전위 및 입자 크기 안정성을 평가하였고, 이를 표 16 및 도 22에 요약한다.
표 16: 도 22 연구에 포함된 백신 조성물.
표 16에 기재된 제제를 제조하는 데 사용된 펩티드 항원 접합체를 표 17 또는 다른 곳에 요약한다.
표 17: 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-U-H의 추가의 펩티드 항원 접합체.
상기 표에서 아미노산 서열에 대해 단일 문자 약어가 사용된다; X = 아지도리신, Z = 시트룰린; n = 노르류신; 및 B = 알파-아미노부티르산. C-말단 아지도리신 (X)을 보유하는 펩티드-기반 출발 물질은 젠스크립트 (뉴저지주 피스카타웨이)에 의해 고체-상 펩티드 합성을 통해 제조되었고, 이어서 이를 DBCO를 보유하는 소수성 블록 단편, 화합물 62 (DBCO-Ahx-W5)와 반응시켜 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-U-H의 펩티드 항원 접합체를 생성하였다. 반응을 HPLC에 의해 모니터링하고, 생성물을 LC-MS에 의해 특징화하여 분자량 실측치가 이론치와 일치하는지 확인하였다.
표 16에 기재된 제제를 제조하는 데 사용된 친양쪽성체를 하기 또는 다른 곳에 요약한다.
화합물 291, (만노스-PEG3)4-PEG24-N3
(만노스-PEG3)4-PEG24-N3 또는 테트라(만노스-PEG3)-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 291은, N-boc-에틸렌디아민 대신 a-만노스-PEG3-아민 (CarboSynthUSA (캘리포니아주 샌디에고))을 사용하고 용매로서 DMSO를 사용한 것을 제외하고는 화합물 147과 동일한 절차에 따라 합성하였다. 화합물 291을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 15-35% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 7.3분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 97.2% AUC) 백색 고체를 49.5% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C126H238N10O69 m/z 2995.5, 실측치 999.9 (M/3)+.
화합물 292, TT-PEG12-N3
TT-PEG12-N3으로 지칭되는 화합물 292는, N3-PEG12-COOH 50 mg (0.08 mmol, 1 당량)을 DCM 330 uL 중에서 HATU 33.0 mg (0.09 mmol, 1.4 당량)과 반응시켜 합성하였다. 혼합물에, 트리에틸아민 43.3 uL (0.31 mmol, 4 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반하고, 티아졸린-2-티오 (TT) 12.6 mg (0.11 mmol, 1.4 당량)을 첨가하였다. HPLC가 반응이 완결되었음을 나타낼 때까지 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 생성물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 10 g 바이오타지 사파르 실리카 HC 칼럼 상에서 2-단계 구배: 3 칼럼 부피 (CV)에 걸쳐 DCM 중 0% 메탄올에 이어서 20 CV에 걸쳐 DCM 중 0-7% 메탄올에 걸쳐 정제하였다. 생성물을 ~ 5% 메탄올에서 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 용매를 제거하여 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 92.0% AUC) 황색 오일 24 mg (41.0% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C30H56N4O13S2 m/z 744.3, 실측치 745.3 (M+H)+.
화합물 293, TT-PEG12-(N3-DBCO)-Ahx-W5
TT-PEG12-(N3-DBCO)-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 293은, 14.2 mg의 화합물 292 (0.02 mmol, 1 당량)를 28.4 mg의 화합물 62 (0.02 mmol, 1.1 당량)와 400 uL의 무수 DMSO 중에서 반응시켜 합성하였다. HPLC가 반응이 완결되었음을 나타낼 때까지 반응물을 실온에서 16시간 동안 혼합하였다. 반응물을 정제하지 않았고, 83% 순수한 (220 nm에서의 AUC) 생성물을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C110H13317O21S2 m/z 2091.9, 실측치 1048.4 (M/2+H)+.
화합물 294, TT-PEG24-N3
TT-PEG24-N3으로 지칭되는 화합물 294는, 2.55 g의 N3-PEG24-COOH (2.2 mmol, 1 당량)를 24 mL의 DCM 중에서 0.92 g의 HATU (2.4 mmol, 1.1 당량)와 반응시켜 합성하였다. 혼합물에, 트리에틸아민 1.2 mL (8.7 mmol, 4 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반하고, 티아졸린-2-티오 (TT) (2.5 mmol, 1.1 당량) 0.29 g을 첨가하였다. HPLC가 반응이 완결되었음을 나타낼 때까지 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 200 mL의 디클로로메탄 (DCM)으로 희석한 다음, 2x200 mL 0.1 M HCl 및 1x200 mL DI H2O로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시킨 다음, 진공 하에 제거하여 황색 오일을 수득하였다. 이어서 생성물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 100 g 바이오타지 사파르 실리카 HC 칼럼 상에서 2-단계 구배: 3 칼럼 부피 (CV)에 걸쳐 DCM 중 0% 메탄올에 이어서 20 CV에 걸쳐 DCM 중 0-8% 메탄올에 걸쳐 정제하였다. 생성물을 ~ 5% 메탄올에서 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 용매를 제거하여 84% 순수한 (220 nm에서의 AUC) 황색 오일 1.8 g (62.5% 수율)을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C54H104N4O28S2 m/z 1272.6, 실측치 1273.6 (M+H)+.
화합물 295, TT-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-W5
TT-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 295는, 12.7 mg의 화합물 294 (0.01 mmol, 1 당량)를 14.8 mg의 화합물 62 (0.01 mmol, 1.1 당량)와 500 uL의 DMSO 중에서 반응시켜 합성하였다. HPLC가 반응이 완결되었음을 나타낼 때까지 반응물을 실온에서 16시간 동안 혼합하였다. 반응물을 정제하지 않았고, 84% 순수한 (220 nm에서의 AUC) 생성물을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C134H181N17O33S2 m/z 2622.1, 실측치 1311.8 (M/2+H)+.
화합물 285, (만노스-PEG3)4-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-W5
(만노스-PEG3)4-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-W5 또는 테트라(만노스-PEG3)-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 285는, 1 당량의 화합물 291을 1 당량의 화합물 62와 무수 DMSO 중에서 16시간 동안 실온에서 반응시켜 합성하였다. HPLC를 모니터링하여 반응 진행을 평가하였고, 이는 화합물 291의 화합물 285로의 완전한 전환을 나타내었으며, 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 94.0% AUC) 무색 용액을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C206H315N23O77 m/z 4343.21 실측치 1449.0 (M/3+H)+.
화합물 286, (만노스-PEG3)4-PEG36-(N3-DBCO)-Ahx-W5
(만노스-PEG3)4-PEG24-PEG12-(N3-DBCO)-Ahx-W5, (만노스-PEG3)4-PEG36-Ahx-W5 또는 테트라(만노스-PEG3)-PEG36-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 286은, 45 mg 화합물 291 (15 umol, 1 당량)을 1 mL 무수 DMSO 중에서 43 mg 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 히드로클로라이드 (TCEP) (150 umol, 10 당량)와 반응시켜 먼저 (만노스-PEG3)4-PEG24-NH2를 합성함으로써 합성하였다. HPLC가 모든 화합물 291이 (만노스-PEG3)-PEG24-NH2로 전환되었음을 나타내었을 때, 반응물을 실온에서 16시간 동안 혼합하였다. 반응 혼합물에 28.9 mg의 화합물 293 (13.8 umol, 1 당량) 및 40 uL 트리에틸아민 (TEA) (287 umol, 20 당량)을 첨가하였다. HPLC가 반응이 완결되었음을 나타내었을 때, 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 화합물 286을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 50x100 mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 32-52% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 6분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 96.2% AUC) 무색 오일을 47.9% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C233H368N24O90 m/z 4942.5, 실측치 1237.2 (M/4+H)+.
화합물 287, (만노스-PEG3)-PEG48-(N3-DBCO)-Ahx-W5
(만노스-PEG3)4-PEG24-PEG24-Ahx-W5, (만노스-PEG3)4-PEG48-Ahx-W5, 테트라(만노스-PEG3)-PEG48-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 287은, 화합물 291이 (만노스-PEG3)-PEG24-NH2로 완전히 전환되면, 화합물 293 대신 화합물 295를 첨가한 것을 제외하고는, 화합물 286에서와 동일한 절차에 따라 합성하였다. 화합물 287을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 32-52% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 7분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 98.2% AUC) 무색 오일을 40.9% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C257H416N24O102 m/z 5470.8, 실측치 1095.9 (M/5+H)+.
화합물 288, (COOH-에틸)4-PEG36-(N3-DBCO)-Ahx-W5
(COOH-에틸)4-PEG24-PEG12-(N3-DBCO)-Ahx-W5, (COOH-에틸)4-PEG36-(N3-DBCO)-Ahx-W5 또는 테트라(COOH-에틸)-PEG36-Ahx-W5로 지칭되는 바와 같은 화합물 288은, 화합물 149를 화합물 291 대신 사용한 것을 제외하고는, 화합물 286과 동일한 절차에 따라 합성하였다. 화합물 288을 정제용 HPLC 시스템 상에서, 애질런트 프렙-C18 칼럼, 30x100mm, 5 μm 상에서 12분에 걸쳐 34-54% 아세토니트릴/H2O (0.05% TFA)의 구배를 사용하여 정제하였다. 생성물을 ~ 7분에 용리시키고, 생성된 분획을 수집하고, 동결시킨 다음, 동결건조시켜 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 94.6% AUC) 무색 오일을 62.3% 수율로 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C197H296N24O66 m/z 4054.1, 실측치 1352.6 (M/3+H)+.
화합물 297, (만노스- PEG3)4-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2
(만노스-PEG3)4-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2 또는 테트라(만노스-PEG3)-PEG24-(N3-DBCO)-Ahx-2B3W2로 지칭되는 화합물 297은, 1 당량의 화합물 291을 1 당량의 화합물 136과 무수 DMSO 중에서 16시간 동안 실온에서 반응시켜 합성하였다. HPLC를 모니터링하여 반응 진행을 평가하였고, 이는 화합물 291의 화합물 297로의 완전한 전환을 나타내었으며, 분광학적으로 순수한 (220 nm에서 95.0% AUC) 무색 용액을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C242H375N25O80 m/z 5051.6 실측치 1264.6 (M/4+H)+.
백신 조성물이 적혈구 (RBC) 용해 잠재력에 어떻게 영향을 미치는지 평가하기 위해, 표 16에 요약된 다양한 백신 조성물을 0.1 mM 최종 농도에서 뮤린 적혈구와 함께 8% v/v PBS에서 3시간 동안 37℃에서 인큐베이션하고, % 종양 용해를 각각 100% 용혈 및 0% 용혈 대조군으로서 1% 트리톤 X 및 PBS 완충제에 기초하여 계산하였다.
놀라운 발견은 중성 친양쪽성체를 포함하는 백신이 중성 친양쪽성체가 없는 백신과 비교하여 유의하게 더 낮은 RBC 용해를 발생시키고, 용혈의 정도는 백신 내에 포함된 펩티드 항원 접합체의 평균 알짜 전하에 비례하였다는 것이다 (도 22A). 따라서, +8의 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신은 제타 전위 > 15 mV를 가졌고, > 10%의 RBC가 용해되게 유발한 반면, +8의 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체 및 중성 친양쪽성체를 포함하는 백신은 여전히 양성 제타 전위 (즉, ~ 20 mV)를 갖지만, 유의하게 더 적은 RBC 용해 (< 5%)를 유도하였다. 또한, +3 또는 +1 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하고 중성 친양쪽성체를 추가로 포함하는 백신은 +8 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체 및 중성 친양쪽성체를 포함하는 백신보다 훨씬 더 낮은 제타 전위 및 용혈을 나타내었다.
펩티드 항원 접합체 전하를 감소시키는 것이 감소된 RBC 용해를 유도하는 것으로 발견되었지만, 백신 입자 크기 안정성은 전하가 감소함에 따라 감소하였다 (도 22B). 특히, 친양쪽성체의 존재 또는 부재 하에 +8의 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신, 및 친양쪽성체의 존재 하에 +3의 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신은 실온에서 적어도 20시간 동안 안정한 나노입자를 형성한 반면, 거의 중성 전하, 즉, +1 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신은 실온에서 20시간 후에 응집되는 경향을 나타내었다. 이들 발견은 추가의 백신 조성물의 평가에 의해 입증되었다. 따라서, 상이한 친양쪽성체를 갖는 나노입자 (화합물 152, 153, 156 또는 162) 및 -2 내지 +5의 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체 (화합물 201, 202, 203, 204, 205 또는 206)를 1:1 몰비로 포함하는 백신 조성물을 입자 크기 안정성에 대해 평가하였다. 결과는 친양쪽성체 및 +3 내지 +5의 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신은 나노입자 미셀을 생성하는 반면, +3 미만의 알짜 전하를 갖는 조성물은 일반적으로 응집체를 형성한다는 것을 보여준다 (도 23).
펩티드 항원 접합체 알짜 전하와 친양쪽성체 특성 사이의 상호 작용이 1개 이상의 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성체를 포함하는 백신 조성물의 입자 크기 안정성에 어떻게 영향을 미치는지 추가로 조사하기 위해, 다양한 친양쪽성체 조성 및 펩티드 항원 접합체 알짜 전하를 갖는 백신 조성물 (표 18)에 대해 다중 동결-해동 주기에 걸쳐 입자 크기 안정성을 평가하였고, 이를 도 24에 요약한다. 결과는 +3 이상의 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체 및 중성 친양쪽성체를 1:1 비로 포함하는 백신이 적어도 3회의 동결-해동 주기에 걸쳐 안정하지만, 중성 근처의, 예를 들어 -1의 평균 알짜 전하를 갖는 펩티드 항원 접합체 및 중성 친양쪽성체를 1:1 비로 포함하는 백신은 3회의 동결-해동 주기 후에 응집을 나타내기 시작한다는 것을 보여준다 (도 24).
표 18: 도 24 연구에 포함된 백신 조성물.
표 18에 기재된 제제를 제조하는 데 사용된 펩티드 항원 접합체를 표 19 또는 다른 곳에 요약한다.
표 19: 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-U-H의 추가의 펩티드 항원 접합체.
상기 표에서 아미노산 서열에 대해 단일 문자 약어가 사용된다; X = 아지도리신, Z = 시트룰린; n = 노르류신; 및 B = 알파-아미노부티르산. C-말단 아지도리신 (X)을 보유하는 펩티드-기반 출발 물질은 젠스크립트 (뉴저지주 피스카타웨이)에 의해 고체-상 펩티드 합성을 통해 제조되었고, 이어서 이를 DBCO를 보유하는 소수성 블록 단편, 화합물 62 (DBCO-Ahx-W5)와 반응시켜 화학식 [S]-[E1]-A-[E2]-U-H의 펩티드 항원 접합체를 생성하였다. 반응을 HPLC에 의해 모니터링하고, 생성물을 LC-MS에 의해 특징화하여 분자량 실측치가 이론치와 일치하는지 확인하였다.
실시예 7: 관용 백신을 위한 면역조정 약물 분자의 선택
지금까지 평가된 대부분의 관용 백신은 자가항원, 알레르겐 또는 알레르겐 단독으로부터 선택된 항원을 포함하거나, 또는 라파마이신 또는 아릴 탄화수소 수용체 효능제로부터 선택된 mTOR 억제제를 추가로 포함한다. 면역자극제는 면역자극제의 효과, 예를 들어 APC 활성화의 유도, 염증유발 시토카인 생산 및 헬퍼 T 세포 및/또는 세포독성 T 세포의 프라이밍이 관용 백신의 목적과 반대되기 때문에 관용 백신에 사용되지 않았다. 그러나, 항원을 단독으로 또는 면역억제제와 함께 사용하는 것은 비교적 낮은 규모의 조절 T 세포를 발생시키는데, 이는 이러한 백신 제제에 강건한 T 세포 프라이밍 및 확장을 구동하는 면역학적 신호가 결여되어 있기 때문이다.
면역자극제로 T 세포의 프라이밍 및 확장을 구동하되 억제제로 그의 분화 및 확장을 차단하여, 프라이밍되고 확장된 T 세포를 조절 (Treg) 표현형으로 구동하기 위한 수단으로서 특정 면역자극제를 T 세포 분화의 억제제와 조합하는 것에 의해, 관용 백신으로 유도된 조절 T 세포의 규모를 증가시킬 수 있다는 것이 본 개시내용의 본 발명자들에 의해 가설화되었다.
면역자극제 및 억제제의 조합이 조절 T 세포의 선택적 프라이밍 및 확장을 가능하게 할 것이라는 것은 선험적으로 공지되지 않았다. 따라서, 상이한 면역자극제 및 억제제 조합을 갖는 관용 백신 조성물을 시험관내에서 조절 T 세포를 유도하는 그의 능력에 대해 스크리닝하였다. 간략하게, 친양쪽성체 화합물 285 및 펩티드 항원 접합체 화합물 282를 1:1 몰비로 추가로 포함하는 나노입자를 포함하는 관용 백신을, 면역자극제 없이 또는 뮤라밀 디펩티드 (MDP, 1:1 몰비), 트레할로스 디베헤네이트 (TDB, 1:0.1 몰비), 모노포스포릴 지질 A (MPL A, 1:0.25 몰비), 리포폴리사카라이드 (LPS, 1:0.25 몰비), 화합물 36 (2BXy, 1:0.5 몰비), 또는 2종의 면역자극제, 즉 TDB (1:0.1) 및 LPS (1:0.25), 또는 2종의 면역자극제 및 아릴 탄화수소 수용체 효능제, ITE (1:0.2 몰비)로부터 선택된 면역자극제 (및 펩티드 항원 대 면역자극제의 몰비)와 함께 제제화하였다. 이들 8종의 조성물을 직접적으로 사용하거나 (억제제 없이), 또는 토린-1, 라파마이신 및 SR1555로부터 선택된 억제제와 1:0.1, 1:0.25 또는 1:1의 총 펩티드 항원 접합체 대 약물의 몰비로 조합하여 96종의 고유한 백신 제제를 수득하였다. 주: 억제제가 부재할 때 면역자극제가 D로 지칭될 수 있는 경우를 제외하고, 억제제는 D로 지칭될 수 있고, 면역자극제는 D2로 지칭될 수 있다. 각각의 백신 제제를 화합물 282에 존재하는 CD4 T 세포 에피토프에 특이적인 20,000개의 CD11c+ APC 및 50,000개의 OT-II 세포의 공동-배양물에 500 nM의 펩티드 항원 접합체의 최종 농도로 첨가하였다. 37℃, 5% CO2에서 3일 인큐베이션한 후, T 세포를 각각의 배양 조건에 존재하는 항원-특이적 Tbet+ (Th1) 및 FOXP3+ (Treg)의 수에 대해 유동 세포측정법에 의해 평가하였다.
놀라운 발견은 유도된 Treg의 수 및 비율이 억제제가 없는 것과 비교하여 라파마이신 및 토린-1을 포함하는 백신의 경우에 유의하게 더 높았다는 것이다 (도 25 및 26). 특히, 토린-1을 갖는 백신 제제로 유도된 Treg의 비율은 라파마이신을 갖는 백신 제제보다 유의하게 더 높았으며, 토린-1을 갖는 백신 제제는 라파마이신을 갖는 제제와 비교하여 약 >2-4-배 더 높은 비율의 Treg (즉, Treg/Tbet)를 유도하였다.
매우 예상외의 발견은, 억제제 토린 1을 갖는 백신 제제 중에서, TLR-7/8 효능제, 2BXy만이 유의하게 더 많은 수의 조절 T 세포를 유도하였다는 것이다 (도 26). 이는 TLR-7/8a가 염증유발 시토카인 (예를 들어, IL-6 및 IL-12) 및 유형-I IFN 둘 다를 유도하고, 세포 면역을 유도하기 위한 가장 강력한 아주반트 중에서 고려되기 때문에 예상외의 발견이다. 따라서, 이러한 강력한 아주반트가 ATP-경쟁적 mTOR 억제제, 즉 토린-1과 조합하여 사용되는 경우에 Treg를 유도할 수 있다는 것은 예상외의 것이었다. 중요한 것으로, TLR-7/8a 2BXy를 라파마이신과 조합하여 사용한 경우, 유도된 Treg의 비율은 라파마이신을 포함한 다른 모든 군보다 유의하게 더 낮았으며, 이는 라파마이신에 의한 mTORC1 단독의 억제가 강력한 아주반트, 예컨대 TLR-7/8a의 존재 하에 T 세포를 Treg 표현형으로 전환시키기에 충분하지 않다는 것을 시사한다. 대조적으로, 토린-1로 mTORC1 및 mTORC2 둘 다를 억제하는 것은 심지어 강력한 아주반트의 존재 하에서도 Treg 편향을 현저하게 개선시켰다.
추가의 주목할 만한 발견은 펩티드 항원 접합체 대 억제제 약물 분자의 비가 또한 유도된 Treg의 규모 및 비율에 영향을 미친다는 것이다. 따라서, 펩티드 항원 접합체 대 약물 분자의 1:0.1 몰비는 Treg 편향 능력의 관점에서 준최적이었지만, 1:1 이상의 비는 세포독성 및/또는 입자 크기 불안정성을 유발하는 것으로 발견되었다. 따라서, 1:0.1 내지 1:1, 예를 들어 1:0.25 내지 1:0.5의 비가 일반적으로 바람직하였다.
이러한 발견을 기초로, 관용 백신의 바람직한 조성물은 약 1:0.1 내지 약 1:1의 펩티드 항원 접합체 대 약물 (즉, 억제제) 비로 ATP-경쟁적 mTOR 억제제를 포함하고, 이는 유도된 Treg의 비율을 현저하게 개선시키는 것으로 발견되었다. 이러한 제제는 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8, TLR-9 및 STING의 효능제를 포함하는, 바람직하게는 유형-I IFN을 유도하는 면역자극제로부터 선택된 제2 약물 분자를 임의로 포함할 수 있다.
실시예 8: 화학식 S-B-[U]-H의 추가의 친양쪽성체
화합물 298
(만노스-PEG3)4K2K-PEG24-X 또는 테트라(만노스-PEG3)4K2K-PEG24-X로 지칭되며 여기서 X는 아지도리신인 화합물 298은, a-만노스-PEG3-산 (CarboSynUSA (캘리포니아주 샌디에고))을 사용하여 고체 상 펩티드 합성에 의해 제조하였다. 순도 및 아이덴티티를 HPLC 및 질량 분광분석법에 의해 확인하였다. MS (ESI) 계산치 C127H238N12O65 m/z 2971.6.
화합물 299
(만노스-PEG3)4K2K-PEG24-(X-DBCO)-Ahx-W5 또는 테트라(만노스-PEG3)4K2K-PEG24-(X-DBCO)-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 299는, 1 당량의 화합물 298을 1 당량의 화합물 62와 무수 DMSO 중에서 16시간 동안 실온에서 반응시켜 합성하였다. HPLC를 모니터링하여 반응 진행을 평가하였고, 이는 화합물 298의 화합물 299로의 완전한 전환을 나타내었으며, 분광학적으로 순수한 무색 용액을 수득하였다. MS (ESI) 계산치 C207H315N25O73 m/z 4319.2.
화합물 300
(만노스-PEG3)4K2K-PEG24-Ahx-W5 또는 테트라(만노스-PEG3)4K2K-PEG24-Ahx-W5로 지칭되는 화합물 300은, a-만노스-PEG3-산 (CarboSynUSA (캘리포니아주 샌디에고))을 사용하여 고체 상 펩티드 합성에 의해 생산하였다. 순도 및 아이덴티티를 HPLC 및 질량 분광분석법에 의해 확인하였다. MS (ESI) 계산치 C182H289N19O70 m/z 3861.0.
실시예 9: 항체 반응에 대한 연장부 (E1 또는 E2)의 영향
항체 반응에 대한 연장부 (E1 또는 E2)의 영향을 평가하기 위해, 표 19 및 도 27A에 요약된 바와 같은 PEG12, (GGGS)3, (AP)7 또는 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)e의 헵타드 반복부, 즉 (IAALESK)2 또는 (IAALKSK)2로부터 선택된 연장부 (E1)를 통해 소수성 블록 (H)에 연결된, SARS-CoV2 스파이크 단백질로부터 유래된 모델 펩티드 항원 (TESNKKFLPFQQFGRDIA)을 추가로 포함하는 나노입자 미셀을 포함하는 백신으로 마우스를 면역화하였다. 제28일에 면역화된 마우스로부터 항체 반응을 평가하였고, SARS-CoV2 스파이크 단백질에 대한 종점 역가를 도 27B에 제시한다.
주목할 만한 발견은 코일드 코일을 형성하는 것으로 예측된 헵타드 반복부, 즉 (IAALESK)2 또는 (IAALKSK)2를 포함하는 연장부가 보다 낮은 강성을 갖는 것으로 예측된 것, 예를 들어 PEG12 및 (GGGS)n과 비교하여 스파이크 단백질에 대해 유의하게 보다 높은 규모의 항체 반응을 유도하였다는 것이다 (도 27B).
표 19: 추가의 펩티드 항원 접합체 및 친양쪽성체
펩티드 항원 (A)을 헵타드 반복부에 연결하는 기의 조성이 항체 반응에 어떻게 영향을 미치는지 평가하기 위해, SARS-CoV2 스파이크 단백질로부터 유래된 모델 항원인 TESNKKFLPFQQFGRDIA를 모델 헵타드 반복부인 IAALESK-IAALESK에 직접적으로, 또는 GG, PEG4, PEG12, AP, 또는 APAPAP 서열을 통해 연결하였다. 대안적 실시양태로서, 펩티드 항원을 대안적으로 GG 서열을 통해 표 20에 요약된 바와 같이 d-아미노산을 포함하는 헵타드 반복부 (IAALESK-IAALESK), 4개의 반복부를 갖는 헵타드 (IAALESK-IAALESK-IAALESK-IAALESK) 및 대안적 배향을 갖는 헵타드 반복부 (KSELAAI-KSELAAI)에 연결하였다.
표 20: 헵타드 반복부를 포함하는 E1을 갖는 펩티드 항원 접합체
주: 펩티드 서열은 고체-상 펩티드 합성을 통해 진스크립트에 의해 합성되었다. 아미노산에 대한 단일 문자 약어가 상기 표에 사용되고; "아지드"는 N-말단이 아지드 기 (아지도-펜탄산)로 캡핑되어 있음을 나타내고; PEG4 및 PEG12는 각각 4 및 12개의 에틸렌 옥시드 반복부를 갖는 PEG-기반 기이고; 이탤릭체 문자는 d-아미노산을 나타내고; 모든 서열은 C-말단에서 아미드화된다.
헵타드 반복부를 포함하는 연장부에 연결된 펩티드 항원의 추가의 예로서, PCSK9 (화합물 317-321) 및 ANGPTL3 (화합물 322-327)으로부터 유래된 펩티드 항원을 다양한 배향의 연장부 (E1 또는 E2)에 연결하였다 (표 21).
표 21: 헵타드 반복부를 포함하는 연장부 (E1 또는 E2)에 연결된 PCSK9 및 ANGPTL3으로부터 유래된 최소 면역원을 포함하는 펩티드 항원 접합체
주: 펩티드 서열은 고체-상 펩티드 합성을 통해 진스크립트에 의해 합성되었다. 아미노산에 대한 단일 문자 약어가 상기 표에 사용되고; "아지드"는 N-말단이 아지드 기 (아지도-펜탄산)로 캡핑되어 있음을 나타내고; X = 아지도리신이고; Ac는 아세틸 기이고; PEG12는 12개의 에틸렌 옥시드 반복부를 갖는 PEG-기반 기이고; 모든 서열은 C-말단에서 아미드화된다.
헵타드 반복부를 포함하는 연장부에 연결된 펩티드 항원의 추가의 예로서, 모델 마우스 종양 신생항원으로부터 유래된 펩티드 항원을 표 22에 요약된 바와 같이 연장부 E2에 연결하였다.
표 22: 헵타드 반복부를 포함하는 E2에 연결된 종양 신생항원을 포함하는 펩티드 항원 접합체
주: 펩티드 서열은 고체-상 펩티드 합성을 통해 진스크립트에 의해 합성되었다. 아미노산에 대한 단일 문자 약어가 상기 표에 사용되고; B = 알파-아미노부티르산; Z = 시트룰린; X = 아지도리신이고; 모든 서열은 C-말단에서 아미드화된다.
헵타드 반복부를 포함하는 연장부에 연결된 펩티드 항원의 추가의 예로서, SARS-CoV-2로부터 유래된 펩티드 항원을 표 23에 요약된 바와 같이 연장부 E1에 연결하였다.
표 23: 헵타드 반복부를 포함하는 E1 또는 E2에 연결된 SARS-CoV-2로부터 유래된 최소 면역원을 포함하는 펩티드 항원 접합체
주: 펩티드 서열은 고체-상 펩티드 합성을 통해 진스크립트에 의해 합성되었다. 아미노산에 대한 단일 문자 약어가 상기 표에 사용되고; "아지드"는 N-말단이 아지드 기 (아지도-펜탄산)로 캡핑되어 있음을 나타내고; 모든 서열은 C-말단에서 아미드화된다.
헵타드 반복부를 포함하는 연장부에 연결된 펩티드 항원의 추가의 예로서, 말라리아 CSP로부터 유래된 펩티드 항원을 표 24에 요약된 바와 같이 연장부 E1에 연결하였다.
표 24: 헵타드 반복부를 포함하는 E1에 연결된 말라리아로부터 유래된 최소 면역원을 포함하는 펩티드 항원 접합체
주: 펩티드 서열은 고체-상 펩티드 합성을 통해 진스크립트에 의해 합성되었다. 아미노산에 대한 단일 문자 약어가 상기 표에 사용되고; "아지드"는 N-말단이 아지드 기 (아지도-펜탄산)로 캡핑되어 있음을 나타내고; 모든 서열은 C-말단에서 아미드화된다.
실시예 10: T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키기 위한 펩티드 서열
본원에 기재된 펩티드 항원 접합체 및 펩티드 항원 단편을 비롯한, 펩티드 항원을 포함하는 펩티드 서열은 시험관내 또는 생체외에서 T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키기 위해 사용될 수 있다.
펩티드 항원 접합체의 가용화 블록, S를 도입하여 제조 동안 용해도를 개선시키고 펩티드 항원 아미노산 조성과 무관하게 나노입자 미셀의 형성을 보장하였다. 펩티드 항원 단편의 가용화 블록, 즉 가용화 블록 (S), 연장부 (E1 및/또는 E2) 및 링커 전구체 (U1)에 임의로 연결되었지만 소수성 블록 (H)에는 연결되지 않은 펩티드 항원은 또한, T 세포의 시험관내 또는 생체외 활성화, 프라이밍 및/또는 확장을 위해 사용하기에 달리 도전과제가 되는 소수성 펩티드 항원의 용해도를 개선시킬 수 있었다.
시험관 내에서 T 세포에 의한 펩티드 항원 인식에 대한 가용화 블록 및 연장부의 영향을 연구하기 위해, N-말단 및/또는 C-말단 위치에서 변형된 2개의 모델 항원, E7 (RAHYNIVTF) 및 Reps1 (AQLANDVVL)을 고체-상 펩티드 합성에 의해 생산한 후 (표 25 및 26), T 세포 인식에 대해 시험관내 스크리닝하였다 (도 28).
표 25
주: 펩티드 서열은 고체-상 펩티드 합성을 통해 진스크립트에 의해 합성되었다. 아미노산에 대한 단일 문자 약어가 상기 표에 사용되고; "아지드"는 N-말단이 아지드 기 (아지도-펜탄산)로 캡핑되어 있음을 나타내고; 모든 서열은 C-말단에서 아미드화된다.
표 26
주: 펩티드 서열은 고체-상 펩티드 합성을 통해 진스크립트에 의해 합성되었다. 아미노산에 대한 단일 문자 약어가 상기 표에 사용되고; "아지드"는 N-말단이 아지드 기 (아지도-펜탄산)로 캡핑되어 있음을 나타내고; 모든 서열은 C-말단에서 아미드화된다.
결과는 펩티드 항원 단편 (예를 들어, 화합물 343 및 364)의 N-말단의 변형이 효력에 부정적인 영향을 미치는 반면, 펩티드 항원 단편 (예를 들어, 화합물 341 및 362)의 C-말단의 변형은 보다 잘 허용된다는 것을 보여준다 (도 28A 및 B). 추가적으로, 알파 아미노산을 기초로 하는 테트라펩티드를 포함하는 연장부는 보다 짧은 펩티드 (예를 들어, 디펩티드)를 포함하는 연장부 또는 베타 아미노산 또는 엡실론 아미노산을 포함하는 연장부를 갖는 펩티드 항원 단편보다 T 세포 인식에 대해 더 높은 효력을 갖는 펩티드 항원 단편을 생성하였다 (도 28A 및 B).
실시예 11: T 세포 반응을 증진시키기 위한 바이러스 벡터의 사용
아데노바이러스 백신, 예컨대 ChAdOx는 이종 프라이밍-부스팅 백신으로서 백시니아 바이러스와 조합되어 사용되어 왔고, 이는 단독으로 사용된 것보다 우수한 면역 반응을 나타내었다. 따라서, 본 개시내용의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신을 이종 프라이밍-부스팅 백신으로서 바이러스를 포함하는 백신과 조합하는 것은 단독으로 사용된 것과 비교하여 개선된 T 세포 반응을 발생시킬 수 있는 것으로 가설화되었다.
화합물 250을 추가로 포함하는 제1 백신 (V1), 화학식 S-E1-A-E2-U-H-D의 펩티드 항원 접합체, 및 서열 GRVLELFRAAQLANDVVLQIMELCGATR을 갖는 펩티드 항원 (A)을 발현하는 아데노바이러스 ChAdOx를 포함하는 제2 백신 (V2)을 포함하는 이종 프라이밍-부스팅 백신을 평가하는 제1 연구에서, 제2 백신의 경로의 영향을 평가하였다 (도 29A). 주목할 만한 발견은 부스팅으로서 IV 경로에 의해 V2를 투여하는 것이 IM 경로에 의해 투여된 V2와 비교하여 펩티드 항원 (A)에 대해 유의하게 더 높은 규모의 T 세포 반응을 발생시켰다는 것이었다 (도 29B). 특히, 펩티드 항원 접합체를 포함하는 V1 및 아데노바이러스, ChAdOx를 포함하는 V2 둘 다의 경로는 T 세포 반응의 규모에 주요 영향을 미치는 것으로 발견되었다 (도 29 및 30). 따라서, V1을 IM 경로에 의해 투여하고 이어서 V2를 IV 경로에 의해 투여하는 것은 V1 및 V2 둘 다를 IV 경로에 의해 투여하는 것 또는 V1 및 V2 둘 다를 IM 경로에 의해 투여하는 것과 비교하여 보다 높은 규모의 T 세포 반응을 발생시켰다 (도 29 및 30).
다음 연구는 펩티드 항원 접합체의 알짜 전하 및 친양쪽성체의 존재가 상동 프라이밍-부스팅으로서 단독으로 또는 이종-프라이밍 부스팅에서 바이러스 백신, 예를 들어, 아데노바이러스와 조합되어 사용되는 경우에 T 세포 반응에 어떻게 영향을 미치는지를 평가하였다 (도 31A & B). 결과는 펩티드 항원 접합체의 알짜 전하를 감소시키는 것 (+8에서 +3으로) 및/또는 친양쪽성체를 도입하는 것이 상동 프라이밍-부스팅으로서 또는 ChAdOx와 이종 프라이밍-부스팅으로서 사용되는 경우에 유도되는 T 세포의 규모에 부정적인 영향을 미치지 않음을 보여준다 (도 31A & B).
최종의 일련의 연구는 펩티드 항원 접합체와 조합하여 사용하기 위한 생물학적 아주반트로서 아데노바이러스의 사용을 평가하였다 (도 32A &B). 결과는 아주반트 (즉, TLR-7/8a)를 포함하는 화학식 S-E1-A-E2-U-H-D의 펩티드 항원 접합체로 유도된 T 세포 반응이, 아데노바이러스, 즉 항원 A를 코딩하지 않는 ChAdOx와 혼합된 아주반트 부재 하의 화학식 S-E1-A-E2-U-H-D 또는 화학식 S-E1-A-E2-U-H의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 부스팅 백신에 의해 부스팅될 수 있다는 것을 보여준다 (도 32A &B). 이들 결과는 아데노바이러스가 펩티드 항원 접합체와 조합되는 경우에 생물학적 아주반트의 공급원을 제공할 수 있음을 보여준다.
SEQUENCE LISTING <110> Vaccitech North America, Inc. The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services <120> Self-Assembling Nanoparticles Based on Amphiphilic Peptides <130> AVI-10 <140> PCT/US2022/016600 <141> 2022-02-16 <150> 63/149,996 <151> 2021-02-16 <150> 63/197,092 <151> 2021-06-04 <160> 540 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <400> 1 Gly Phe Leu Gly 1 <210> 2 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <400> 2 Lys Pro Leu Arg 1 <210> 3 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <400> 3 Tyr Leu Leu Leu 1 <210> 4 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <400> 4 Ser Pro Leu Arg 1 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> synthetic <400> 5 Lys Pro Leu Arg Tyr Leu Leu Leu 1 5 <210> 6 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Citrulline <400> 6 Ser Leu Val Xaa 1 <210> 7 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <400> 7 Ser Leu Val Leu 1 <210> 8 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Citrulline <400> 8 Ser Pro Val Xaa 1 <210> 9 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <400> 9 Glu Leu Val Arg 1 <210> 10 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <400> 10 Ser Pro Val Arg 1 <210> 11 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <400> 11 Ser Leu Val Arg 1 <210> 12 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <400> 12 Lys Pro Val Arg 1 <210> 13 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Citrulline <400> 13 Glu Leu Val Xaa 1 <210> 14 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <400> 14 Glu Leu Val Leu 1 <210> 15 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Citrulline <400> 15 Glu Pro Val Xaa 1 <210> 16 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Citrulline <400> 16 Lys Pro Val Xaa 1 <210> 17 <211> 6 <212> PRT <213> synthetic <400> 17 Gly Gly Lys Leu Val Arg 1 5 <210> 18 <211> 6 <212> PRT <213> synthetic <400> 18 Gly Gly Lys Pro Leu Arg 1 5 <210> 19 <211> 6 <212> PRT <213> synthetic <400> 19 Gly Gly Ser Leu Val Arg 1 5 <210> 20 <211> 6 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Citrulline <400> 20 Gly Gly Ser Leu Val Xaa 1 5 <210> 21 <211> 6 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Citrulline <400> 21 Gly Gly Ser Pro Val Xaa 1 5 <210> 22 <211> 6 <212> PRT <213> synthetic <400> 22 Gly Gly Ser Leu Val Leu 1 5 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> synthetic <400> 23 Gly Gly Glu Leu Val Arg 1 5 <210> 24 <211> 6 <212> PRT <213> synthetic <400> 24 Gly Gly Glu Leu Val Leu 1 5 <210> 25 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 25 Gly Ser Leu Val Arg 1 5 <210> 26 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Citrulline <400> 26 Gly Ser Leu Val Xaa 1 5 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Citrulline <400> 27 Gly Lys Pro Val Xaa 1 5 <210> 28 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 28 Gly Lys Pro Val Arg 1 5 <210> 29 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 29 Gly Ser Leu Val Leu 1 5 <210> 30 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 30 Gly Glu Leu Val Leu 1 5 <210> 31 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Citrulline <400> 31 Glu Gly Val Xaa 1 <210> 32 <211> 12 <212> PRT <213> synthetic <400> 32 Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 1 5 10 <210> 33 <211> 11 <212> PRT <213> synthetic <400> 33 Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 1 5 10 <210> 34 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 34 Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 1 5 10 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> synthetic <400> 35 Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 1 5 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> synthetic <400> 36 Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 1 5 <210> 37 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 37 Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 1 5 <210> 38 <211> 6 <212> PRT <213> synthetic <400> 38 Asp Asp Asp Asp Asp Asp 1 5 <210> 39 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 39 Asp Asp Asp Asp Asp 1 5 <210> 40 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <400> 40 Asp Asp Asp Asp 1 <210> 41 <211> 12 <212> PRT <213> synthetic <400> 41 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 10 <210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> synthetic <400> 42 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 10 <210> 43 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 43 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 10 <210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> synthetic <400> 44 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 <210> 45 <211> 8 <212> PRT <213> synthetic <400> 45 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 46 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 <210> 47 <211> 6 <212> PRT <213> synthetic <400> 47 Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 <210> 48 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 48 Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 <210> 49 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <400> 49 Lys Lys Lys Lys 1 <210> 50 <211> 4 <212> PRT <213> synthetic <400> 50 Lys Asp Lys Asp 1 <210> 51 <211> 6 <212> PRT <213> synthetic <400> 51 Lys Asp Lys Asp Lys Asp 1 5 <210> 52 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 52 Leu Leu Leu Leu Leu 1 5 <210> 53 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 53 Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu 1 5 10 <210> 54 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 54 Phe Phe Phe Phe Phe 1 5 <210> 55 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 55 Phe Phe Phe Phe Phe Phe Phe Phe Phe Phe 1 5 10 <210> 56 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 56 His His His His His 1 5 <210> 57 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 57 His His His His His His His His His His 1 5 10 <210> 58 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 58 Trp Trp Trp Trp Trp 1 5 <210> 59 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 59 Trp Trp Trp Trp Trp Trp Trp Trp Trp Trp 1 5 10 <210> 60 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(5) <223> p Amino phenylalanine <400> 60 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 61 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> p Amino phenylalanine <400> 61 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 62 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(20) <223> p Amino phenylalanine <400> 62 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa 20 <210> 63 <211> 30 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(30) <223> p Amino phenylalanine <400> 63 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 <210> 64 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 64 Phe Trp Phe Trp Phe Trp Phe Trp Phe Trp 1 5 10 <210> 65 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> p Amino phenylalanine <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> p Amino phenylalanine <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> p Amino phenylalanine <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> p Amino phenylalanine <220> <221> misc_feature <222> (10)..(18) <223> p Amino phenylalanine <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> p Amino phenylalanine <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> p Amino phenylalanine <220> <221> misc_feature <222> (16)..(16) <223> p Amino phenylalanine <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> p Amino phenylalanine <400> 65 Trp Xaa Trp Xaa Trp Xaa Trp Xaa Trp Xaa Trp Xaa Trp Xaa Trp Xaa 1 5 10 15 Trp Xaa Trp Phe 20 <210> 66 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 66 Phe Phe Phe Phe Phe 1 5 <210> 67 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 67 Trp Trp Trp Trp Trp 1 5 <210> 68 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(5) <223> p Amino phenylalanine <400> 68 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 69 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> p Amino phenylalanine <400> 69 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 70 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(20) <223> p Amino phenylalanine <400> 70 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa 20 <210> 71 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Citrulline <400> 71 Lys Lys Ser Leu Val Arg Xaa 1 5 <210> 72 <211> 8 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Citrulline <400> 72 Lys Lys Lys Ser Leu Val Arg Xaa 1 5 <210> 73 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 73 Glu Glu Glu Glu Glu 1 5 <210> 74 <211> 8 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> p Amino phenylalanine <400> 74 Lys Lys Lys Ser Leu Val Arg Xaa 1 5 <210> 75 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 75 Glu Glu Glu Glu Glu 1 5 <210> 76 <211> 8 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> p Amino phenylalanine <400> 76 Lys Lys Lys Ser Leu Val Arg Xaa 1 5 <210> 77 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 77 Glu Glu Glu Glu Glu 1 5 <210> 78 <211> 8 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> p Amino phenylalanine <400> 78 Lys Lys Lys Ser Leu Val Arg Xaa 1 5 <210> 79 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 79 Glu Glu Glu Glu Glu 1 5 <210> 80 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> p Amino phenylalanine <400> 80 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 81 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 81 Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 1 5 <210> 82 <211> 11 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Citrulline <400> 82 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Xaa 1 5 10 <210> 83 <211> 8 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Citrulline <400> 83 Lys Lys Lys Ser Leu Val Arg Xaa 1 5 <210> 84 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 84 Glu Glu Glu Glu Glu 1 5 <210> 85 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 85 Glu Glu Glu Glu Glu 1 5 <210> 86 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 86 Glu Trp Glu Trp Glu 1 5 <210> 87 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 87 Trp Glu Trp Glu Trp 1 5 <210> 88 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 88 Trp Trp Glu Trp Trp Trp Trp Glu Trp Trp 1 5 10 <210> 89 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 89 Trp Trp Glu Trp Trp 1 5 <210> 90 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 90 Glu Trp Glu Trp Glu 1 5 <210> 91 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 91 Glu Trp Glu Trp Glu Glu Trp Glu Trp Glu 1 5 10 <210> 92 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 92 Trp Glu Trp Glu Trp Trp Glu Trp Glu Trp 1 5 10 <210> 93 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 93 Gly Gly Glu Gly Gly Trp Gly Gly Glu Gly Gly Trp Gly Gly Glu 1 5 10 15 <210> 94 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 94 Gly Gly Glu Gly Gly Trp Gly Gly Glu Gly Gly Trp Gly Gly Glu 1 5 10 15 <210> 95 <211> 9 <212> PRT <213> synthetic <400> 95 Gly Gly Glu Gly Gly Trp Gly Gly Glu 1 5 <210> 96 <211> 30 <212> PRT <213> synthetic <400> 96 Lys Gly Trp Gly Trp Gly Lys Gly Trp Gly Trp Gly Lys Gly Trp Gly 1 5 10 15 Trp Gly Lys Gly Trp Gly Trp Gly Lys Gly Trp Gly Trp Gly 20 25 30 <210> 97 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 97 Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu 1 5 10 <210> 98 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 98 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 10 <210> 99 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> p Amino phenylalanine <400> 99 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 100 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(20) <223> p Amino phenylalanine <400> 100 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa 20 <210> 101 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(20) <223> p Amino phenylalanine <400> 101 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa 20 <210> 102 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 102 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 103 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 103 Trp Trp Trp Trp Trp 1 5 <210> 104 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Citrulline <400> 104 Ser Ser Pro Tyr Ser Leu His Tyr Leu Xaa 1 5 10 <210> 105 <211> 27 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Citrulline <400> 105 Asp Phe Thr Gly Ser Asn Gly Asp Pro Ser Ser Pro Tyr Ser Leu His 1 5 10 15 Tyr Leu Ser Pro Thr Gly Val Asn Glu Tyr Xaa 20 25 <210> 106 <211> 28 <212> PRT <213> synthetic <400> 106 Arg Gly Tyr Leu Thr Lys Ile Leu His Val Phe His Gly Leu Leu Pro 1 5 10 15 Gly Phe Leu Val Lys Met Ser Gly Asp Leu Leu Glu 20 25 <210> 107 <211> 13 <212> PRT <213> synthetic <400> 107 Pro Gly Phe Leu Val Lys Met Ser Gly Asp Leu Leu Glu 1 5 10 <210> 108 <211> 13 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Norleucine <400> 108 Pro Gly Phe Leu Val Lys Xaa Ser Gly Asp Leu Leu Glu 1 5 10 <210> 109 <211> 13 <212> PRT <213> synthetic <400> 109 Pro Gly Phe Leu Val Lys Met Ser Ser Asp Leu Leu Gly 1 5 10 <210> 110 <211> 13 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Norleucine <400> 110 Pro Gly Phe Leu Val Lys Xaa Ser Ser Asp Leu Leu Gly 1 5 10 <210> 111 <211> 13 <212> PRT <213> synthetic <400> 111 Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg Ile Thr Pro Pro Arg 1 5 10 <210> 112 <211> 13 <212> PRT <213> synthetic <400> 112 Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg Ile Thr Pro Pro Arg 1 5 10 <210> 113 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 113 Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu 1 5 <210> 114 <211> 13 <212> PRT <213> synthetic <400> 114 Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Lys Val Thr Pro Pro Arg 1 5 10 <210> 115 <211> 13 <212> PRT <213> synthetic <400> 115 Ser Ile Pro Trp Asn Leu Asp Arg Val Thr Pro Pro Arg 1 5 10 <210> 116 <211> 17 <212> PRT <213> synthetic <400> 116 Asn Val Pro Glu Glu Asp Gly Thr Arg Phe His Arg Gln Ala Ser Lys 1 5 10 15 Cys <210> 117 <211> 16 <212> PRT <213> synthetic <400> 117 Asn Val Pro Glu Glu Asp Gly Thr Arg Phe His Arg Gln Ala Ser Lys 1 5 10 15 <210> 118 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 118 Pro Glu Glu Asp Gly Thr Arg 1 5 <210> 119 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 119 Asn Val Pro Glu Glu Asp Gly 1 5 <210> 120 <211> 16 <212> PRT <213> synthetic <400> 120 Asn Val Pro Glu Glu Asp Ala Thr Arg Phe His Arg Gln Gly Ser Lys 1 5 10 15 <210> 121 <211> 30 <212> PRT <213> synthetic <400> 121 Leu Phe Ala Pro Gly Glu Asp Ile Ile Gly Ala Ser Ser Asp Cys Ser 1 5 10 15 Thr Cys Phe Val Ser Gln Ser Gly Thr Ser Gln Ala Ala Ala 20 25 30 <210> 122 <211> 16 <212> PRT <213> synthetic <400> 122 Cys Ser Thr Cys Phe Val Ser Gln Ser Gly Thr Ser Gln Ala Ala Ala 1 5 10 15 <210> 123 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 123 Ser Thr Cys Phe Val Ser Gln Ser Gly Thr Ser Gln Ala Ala Ala 1 5 10 15 <210> 124 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 124 Ser Thr Asx Phe Val Ser Gln Ser Gly Thr Ser Gln Ala Ala Ala 1 5 10 15 <210> 125 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 125 Ser Thr Asx Phe Val Ser Gln 1 5 <210> 126 <211> 70 <212> PRT <213> synthetic <400> 126 Met Phe Thr Ile Lys Leu Leu Leu Phe Ile Val Pro Leu Val Ile Ser 1 5 10 15 Ser Arg Ile Asp Gln Asp Asn Ser Ser Phe Asp Ser Leu Ser Pro Glu 20 25 30 Pro Lys Ser Arg Phe Ala Met Leu Asp Asp Val Lys Ile Leu Ala Asn 35 40 45 Gly Leu Leu Gln Leu Gly His Gly Leu Lys Asp Phe Val His Lys Thr 50 55 60 Lys Gly Gln Ile Asn Asp 65 70 <210> 127 <211> 39 <212> PRT <213> synthetic <400> 127 Glu Pro Lys Ser Arg Phe Ala Met Leu Asp Asp Val Lys Ile Leu Ala 1 5 10 15 Asn Gly Leu Leu Gln Leu Gly His Gly Leu Lys Asp Phe Val His Lys 20 25 30 Thr Lys Gly Gln Ile Asn Asp 35 <210> 128 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 128 Glu Pro Lys Ser Arg Phe Ala Met Leu Asp Asp Val Lys Ile 1 5 10 <210> 129 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 129 Met Leu Asp Asp Val Lys Ile Leu Ala Asn Gly Leu Leu Gln 1 5 10 <210> 130 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 130 Leu Ala Asn Gly Leu Leu Gln Leu Gly His Gly Leu Lys Asp 1 5 10 <210> 131 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 131 Leu Gly His Gly Leu Lys Asp Phe Val His Lys Thr Lys Gly 1 5 10 <210> 132 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 132 Leu Lys Asp Phe Val His Lys Thr Lys Gly Gln Ile Asn Asp 1 5 10 <210> 133 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <400> 133 Arg Phe Ala Met Leu Asp Asp Val Lys Ile Leu Ala Asn Gly Leu Leu 1 5 10 15 Gln Leu Gly His 20 <210> 134 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <400> 134 Gly Leu Leu Gln Leu Gly His Gly Leu Lys Asp Phe Val His Lys Thr 1 5 10 15 Lys Gly Gln Ile 20 <210> 135 <211> 69 <212> PRT <213> synthetic <400> 135 Ile Phe Gln Lys Leu Asn Ile Phe Asp Gln Ser Phe Tyr Asp Leu Ser 1 5 10 15 Leu Gln Thr Ser Glu Ile Lys Glu Glu Glu Lys Glu Leu Arg Arg Thr 20 25 30 Thr Tyr Lys Leu Gln Val Lys Asn Glu Glu Val Lys Asn Met Ser Leu 35 40 45 Glu Leu Asn Ser Lys Leu Glu Ser Leu Leu Glu Glu Lys Ile Leu Leu 50 55 60 Gln Gln Lys Val Lys 65 <210> 136 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 136 Met His Gln Lys Arg Thr Ala Met Phe Gln Asp Pro Gln Glu Arg Pro 1 5 10 15 Arg Lys Leu Pro Gln Leu Cys Thr Glu Leu Gln Thr Thr 20 25 <210> 137 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 137 Pro Arg Lys Leu Pro Gln Leu Cys Thr Glu Leu Gln Thr Thr Ile His 1 5 10 15 Asp Ile Ile Leu Glu Cys Val Tyr Cys Lys Gln Gln Leu 20 25 <210> 138 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 138 His Asp Ile Ile Leu Glu Cys Val Tyr Cys Lys Gln Gln Leu Leu Arg 1 5 10 15 Arg Glu Val Tyr Asp Phe Ala Phe Arg Asp Leu Cys Ile 20 25 <210> 139 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 139 Arg Arg Glu Val Tyr Asp Phe Ala Phe Arg Asp Leu Cys Ile Val Tyr 1 5 10 15 Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Cys Asp Lys Cys Leu 20 25 <210> 140 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 140 Tyr Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Cys Asp Lys Cys Leu Lys Phe 1 5 10 15 Tyr Ser Lys Ile Ser Glu Tyr Arg His Tyr Cys Tyr Ser 20 25 <210> 141 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 141 Phe Tyr Ser Lys Ile Ser Glu Tyr Arg His Tyr Cys Tyr Ser Leu Tyr 1 5 10 15 Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn Lys Pro Leu Cys 20 25 <210> 142 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 142 Tyr Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn Lys Pro Leu Cys Asp Leu 1 5 10 15 Leu Ile Arg Cys Ile Asn Cys Gln Lys Pro Leu Cys Pro 20 25 <210> 143 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 143 Leu Leu Ile Arg Cys Ile Asn Cys Gln Lys Pro Leu Cys Pro Glu Glu 1 5 10 15 Lys Gln Arg His Leu Asp Lys Lys Gln Arg Phe His Asn 20 25 <210> 144 <211> 28 <212> PRT <213> synthetic <400> 144 Glu Lys Gln Arg His Leu Asp Lys Lys Gln Arg Phe His Asn Ile Arg 1 5 10 15 Gly Arg Trp Thr Gly Arg Cys Met Ser Cys Cys Arg 20 25 <210> 145 <211> 24 <212> PRT <213> synthetic <400> 145 Ile Arg Gly Arg Trp Thr Gly Arg Cys Met Ser Cys Cys Arg Ser Ser 1 5 10 15 Arg Thr Arg Arg Glu Thr Gln Leu 20 <210> 146 <211> 27 <212> PRT <213> synthetic <400> 146 Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln 1 5 10 15 Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln 20 25 <210> 147 <211> 25 <212> PRT <213> synthetic <400> 147 Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn 1 5 10 15 Asp Ser Ser Glu Glu Glu Asp Glu Ile 20 25 <210> 148 <211> 25 <212> PRT <213> synthetic <400> 148 Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Glu Asp Glu Ile Asp Gly 1 5 10 15 Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg 20 25 <210> 149 <211> 27 <212> PRT <213> synthetic <400> 149 Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His 1 5 10 15 Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp 20 25 <210> 150 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic <400> 150 Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr 1 5 10 15 Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu 20 25 30 <210> 151 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic <400> 151 Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu 1 5 10 15 Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro 20 25 30 <210> 152 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <400> 152 Gln Leu Tyr Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val 1 5 10 15 Ile Pro Lys Ile 20 <210> 153 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 153 Xaa His Gln Lys Arg Thr Ala Xaa Phe Gln Asp Pro Gln Glu Arg Pro 1 5 10 15 Arg Lys Leu Pro Gln Leu Asx Thr Glu Leu Gln Thr Thr 20 25 <210> 154 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Norleucine <400> 154 Xaa His Gln Lys Arg Thr Ala Xaa Phe Gln Asp Pro Gln Glu Arg Pro 1 5 10 15 Arg Lys Leu Pro Gln Leu Cys Thr Glu Leu Gln Thr Thr 20 25 <210> 155 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 155 Met His Gln Lys Arg Thr Ala Met Phe Gln Asp Pro Gln Glu Arg Pro 1 5 10 15 Arg Lys Leu Pro Gln Leu Asx Thr Glu Leu Gln Thr Thr 20 25 <210> 156 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (22)..(22) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 156 Pro Arg Lys Leu Pro Gln Leu Asx Thr Glu Leu Gln Thr Thr Ile His 1 5 10 15 Asp Ile Ile Leu Glu Asx Val Tyr Asx Lys Gln Gln Leu 20 25 <210> 157 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 157 His Asp Ile Ile Leu Glu Asx Val Tyr Asx Lys Gln Gln Leu Leu Arg 1 5 10 15 Arg Glu Val Tyr Asp Phe Ala Phe Arg Asp Leu Asx Ile 20 25 <210> 158 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 158 Arg Arg Glu Val Tyr Asp Phe Ala Phe Arg Asp Leu Asx Ile Val Tyr 1 5 10 15 Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Asx Asp Lys Asx Leu 20 25 <210> 159 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 159 Tyr Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Asx Asp Lys Asx Leu Lys Phe 1 5 10 15 Tyr Ser Lys Ile Ser Glu Tyr Arg His Tyr Asx Tyr Ser 20 25 <210> 160 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (29)..(29) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 160 Phe Tyr Ser Lys Ile Ser Glu Tyr Arg His Tyr Asx Tyr Ser Leu Tyr 1 5 10 15 Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn Lys Pro Leu Asx 20 25 <210> 161 <211> 28 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (22)..(22) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 161 Tyr Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn Lys Pro Leu Asp Leu Leu 1 5 10 15 Ile Arg Asx Ile Asn Asx Gln Lys Pro Leu Asx Pro 20 25 <210> 162 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 162 Leu Leu Ile Arg Asx Ile Asn Asx Gln Lys Pro Leu Asx Pro Glu Glu 1 5 10 15 Lys Gln Arg His Leu Asp Lys Lys Gln Arg Phe His Asn 20 25 <210> 163 <211> 28 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (24)..(24) <223> Norleucine <400> 163 Glu Lys Gln Arg His Leu Asp Lys Lys Gln Arg Phe His Asn Ile Arg 1 5 10 15 Gly Arg Trp Thr Gly Arg Cys Xaa Ser Cys Cys Arg 20 25 <210> 164 <211> 28 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (24)..(24) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (26)..(26) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 164 Glu Lys Gln Arg His Leu Asp Lys Lys Gln Arg Phe His Asn Ile Arg 1 5 10 15 Gly Arg Trp Thr Gly Arg Asx Xaa Ser Asx Asx Arg 20 25 <210> 165 <211> 28 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (26)..(26) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 165 Glu Lys Gln Arg His Leu Asp Lys Lys Gln Arg Phe His Asn Ile Arg 1 5 10 15 Gly Arg Trp Thr Gly Arg Asx Met Ser Asx Asx Arg 20 25 <210> 166 <211> 24 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Norleucine <400> 166 Ile Arg Gly Arg Trp Thr Gly Arg Cys Xaa Ser Cys Cys Arg Ser Ser 1 5 10 15 Arg Thr Arg Arg Glu Thr Gln Leu 20 <210> 167 <211> 24 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 167 Ile Arg Gly Arg Trp Thr Gly Arg Asx Xaa Ser Asx Asx Arg Ser Ser 1 5 10 15 Arg Thr Arg Arg Glu Thr Gln Leu 20 <210> 168 <211> 24 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 168 Ile Arg Gly Arg Trp Thr Gly Arg Asx Met Ser Asx Asx Arg Ser Ser 1 5 10 15 Arg Thr Arg Arg Glu Thr Gln Leu 20 <210> 169 <211> 27 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Norleucine <400> 169 Xaa His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Xaa Leu Asp Leu Gln 1 5 10 15 Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln 20 25 <210> 170 <211> 26 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 170 His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Xaa Leu Asp Leu Gln Pro 1 5 10 15 Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Asx Tyr Glu Gln 20 25 <210> 171 <211> 27 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Norleucine <400> 171 Xaa His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Xaa Leu Asp Leu Gln 1 5 10 15 Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Met Tyr Glu Gln 20 25 <210> 172 <211> 25 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 172 Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Asx Tyr Glu Gln Leu Asn 1 5 10 15 Asp Ser Ser Glu Glu Glu Asp Glu Ile 20 25 <210> 173 <211> 25 <212> PRT <213> synthetic <400> 173 Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Glu Asp Glu Ile Asp Gly 1 5 10 15 Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg 20 25 <210> 174 <211> 27 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (24)..(24) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (26)..(26) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 174 Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His 1 5 10 15 Tyr Asn Ile Val Thr Phe Asx Asx Lys Asx Asp 20 25 <210> 175 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 175 Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Asx Asx Lys Asx Asp Ser Thr 1 5 10 15 Leu Arg Leu Asx Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu 20 25 30 <210> 176 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Norleucine <400> 176 Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu 1 5 10 15 Leu Xaa Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro 20 25 30 <210> 177 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 177 Leu Asx Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu 1 5 10 15 Leu Asn Gly Thr Leu Gly Ile Val Asx Pro Ile Asx Ser Gln Lys Pro 20 25 30 <210> 178 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 178 Leu Asx Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu 1 5 10 15 Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Asx Pro Ile Asx Ser Gln Lys Pro 20 25 30 <210> 179 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 179 Gln Leu Tyr Gln Thr Asx Lys Ala Ala Gly Thr Asx Pro Ser Asp Val 1 5 10 15 Ile Pro Lys Ile 20 <210> 180 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 180 Ala Leu Gln Ala Ile Glu Leu Gln Leu Thr Leu Glu Thr Ile Tyr Asn 1 5 10 15 Ser Gln Tyr Ser Asn Glu Lys Trp Thr Leu Gln Asp Val 20 25 <210> 181 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 181 Asn Ser Gln Tyr Ser Asn Glu Lys Trp Thr Leu Gln Asp Val Ser Leu 1 5 10 15 Glu Val Tyr Leu Thr Ala Pro Thr Gly Cys Ile Lys Lys 20 25 <210> 182 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 182 Ser Val Thr Val Val Glu Gly Gln Val Asp Tyr Tyr Gly Leu Tyr Tyr 1 5 10 15 Val His Glu Gly Ile Arg Thr Tyr Phe Val Gln Phe Lys 20 25 <210> 183 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic <400> 183 Leu Lys Gly Asp Ala Asn Thr Leu Lys Cys Leu Arg Tyr Arg Phe Lys 1 5 10 15 Lys His Cys Thr Leu Tyr Thr Ala Val Ser Ser Thr Trp His Trp Thr 20 25 30 <210> 184 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 184 Lys His Lys Ser Ala Ile Val Thr Leu Thr Tyr Asp Ser Glu Trp Gln 1 5 10 15 Arg Asp Gln Phe Leu Ser Gln Val Lys Ile Pro Lys Thr 20 25 <210> 185 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 185 Met His Gln Lys Arg Thr Ala Met Phe Gln Asp Pro Gln Glu Arg Pro 1 5 10 15 Arg Lys Leu Pro Gln Leu Cys Thr Glu Leu Gln Thr Thr 20 25 <210> 186 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 186 Pro Arg Lys Leu Pro Gln Leu Cys Thr Glu Leu Gln Thr Thr Ile His 1 5 10 15 Asp Ile Ile Leu Glu Cys Val Tyr Cys Lys Gln Gln Leu 20 25 <210> 187 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 187 His Asp Ile Ile Leu Glu Cys Val Tyr Cys Lys Gln Gln Leu Leu Arg 1 5 10 15 Arg Glu Val Tyr Asp Phe Ala Phe Arg Asp Leu Cys Ile 20 25 <210> 188 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 188 Arg Arg Glu Val Tyr Asp Phe Ala Phe Arg Asp Leu Cys Ile Val Tyr 1 5 10 15 Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Cys Asp Lys Cys Leu 20 25 <210> 189 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 189 Tyr Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Cys Asp Lys Cys Leu Lys Phe 1 5 10 15 Tyr Ser Lys Ile Ser Glu Tyr Arg His Tyr Cys Tyr Ser 20 25 <210> 190 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 190 Phe Tyr Ser Lys Ile Ser Glu Tyr Arg His Tyr Cys Tyr Ser Leu Tyr 1 5 10 15 Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn Lys Pro Leu Cys 20 25 <210> 191 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 191 Tyr Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn Lys Pro Leu Cys Asp Leu 1 5 10 15 Leu Ile Arg Cys Ile Asn Cys Gln Lys Pro Leu Cys Pro 20 25 <210> 192 <211> 31 <212> PRT <213> synthetic <400> 192 Cys Pro Glu Glu Lys Gln Arg His Leu Asp Lys Lys Gln Arg Phe His 1 5 10 15 Asn Ile Arg Gly Arg Trp Thr Gly Arg Cys Met Ser Cys Cys Arg 20 25 30 <210> 193 <211> 27 <212> PRT <213> synthetic <400> 193 Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln 1 5 10 15 Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln 20 25 <210> 194 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 194 Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 15 Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln 20 25 <210> 195 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic <400> 195 Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu 1 5 10 15 Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro 20 25 30 <210> 196 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (26)..(26) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 196 Asn Ser Gln Tyr Ser Asn Glu Lys Trp Thr Leu Gln Asp Val Ser Leu 1 5 10 15 Glu Val Tyr Leu Thr Ala Pro Thr Gly Asx Ile Lys Lys 20 25 <210> 197 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 197 Leu Lys Gly Asp Ala Asn Thr Leu Lys Asx Leu Arg Tyr Arg Phe Lys 1 5 10 15 Lys His Asx Thr Leu Tyr Thr Ala Val Ser Ser Thr Trp His Trp Thr 20 25 30 <210> 198 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 198 Xaa His Gln Lys Arg Thr Ala Xaa Phe Gln Asp Pro Gln Glu Arg Pro 1 5 10 15 Arg Lys Leu Pro Gln Leu Asx Thr Glu Leu Gln Thr Thr 20 25 <210> 199 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (22)..(22) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 199 Pro Arg Lys Leu Pro Gln Leu Asx Thr Glu Leu Gln Thr Thr Ile His 1 5 10 15 Asp Ile Ile Leu Glu Asx Val Tyr Asx Lys Gln Gln Leu 20 25 <210> 200 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 200 His Asp Ile Ile Leu Glu Asx Val Tyr Asx Lys Gln Gln Leu Leu Arg 1 5 10 15 Arg Glu Val Tyr Asp Phe Ala Phe Arg Asp Leu Asx Ile 20 25 <210> 201 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 201 Arg Arg Glu Val Tyr Asp Phe Ala Phe Arg Asp Leu Asx Ile Val Tyr 1 5 10 15 Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Asx Asp Lys Asx Leu 20 25 <210> 202 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 202 Tyr Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Asx Asp Lys Asx Leu Lys Phe 1 5 10 15 Tyr Ser Lys Ile Ser Glu Tyr Arg His Tyr Asx Tyr Ser 20 25 <210> 203 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (29)..(29) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 203 Phe Tyr Ser Lys Ile Ser Glu Tyr Arg His Tyr Asx Tyr Ser Leu Tyr 1 5 10 15 Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn Lys Pro Leu Asx 20 25 <210> 204 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 204 Tyr Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn Lys Pro Leu Asx Asp Leu 1 5 10 15 Leu Ile Arg Asx Ile Asn Asx Gln Lys Pro Leu Asx Pro 20 25 <210> 205 <211> 31 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (26)..(26) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (29)..(29) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (30)..(30) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 205 Asx Pro Glu Glu Lys Gln Arg His Leu Asp Lys Lys Gln Arg Phe His 1 5 10 15 Asn Ile Arg Gly Arg Trp Thr Gly Arg Asx Xaa Ser Asx Asx Arg 20 25 30 <210> 206 <211> 27 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (24)..(24) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 206 Xaa His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Xaa Leu Asp Leu Gln 1 5 10 15 Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Asx Tyr Glu Gln 20 25 <210> 207 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (17)..(17) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 207 Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 15 Asx Asx Lys Asx Asp Ser Thr Leu Arg Leu Asx Val Gln 20 25 <210> 208 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 208 Leu Asx Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu 1 5 10 15 Leu Xaa Gly Thr Leu Gly Ile Val Asx Pro Ile Asx Ser Gln Lys Pro 20 25 30 <210> 209 <211> 244 <212> PRT <213> synthetic <400> 209 Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu Lys 1 5 10 15 His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala Val 20 25 30 Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His 35 40 45 Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu Phe 50 55 60 His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe Pro 65 70 75 80 His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg Pro 85 90 95 Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu Pro 100 105 110 Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met Asp Leu Pro Thr Gln Glu 115 120 125 Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile Glu 130 135 140 Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu His 145 150 155 160 Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Pro Gln Lys Val Thr 165 170 175 Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr Cys 180 185 190 Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asn Gly Val Leu Gln Gly 195 200 205 Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro Ser 210 215 220 Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr Ile 225 230 235 240 Val Ala Asn Pro <210> 210 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 210 Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His 1 5 10 15 Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu Phe 20 25 30 His Pro Glu 35 <210> 211 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 211 Ser Leu Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His 1 5 10 15 Ser Phe Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe 20 25 30 Leu Arg Pro 35 <210> 212 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 212 Pro Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His 1 5 10 15 Tyr Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr Ile Val Ala Asn Pro 20 25 <210> 213 <211> 364 <212> PRT <213> synthetic <400> 213 Phe Phe Trp Leu Asp Arg Ser Val Leu Ala Lys Glu Leu Lys Phe Val 1 5 10 15 Thr Leu Val Phe Arg His Gly Asp Arg Ser Pro Ile Asp Thr Phe Pro 20 25 30 Thr Asp Pro Ile Lys Glu Ser Ser Trp Pro Gln Gly Phe Gly Gln Leu 35 40 45 Thr Gln Leu Gly Met Glu Gln His Tyr Glu Leu Gly Glu Tyr Ile Arg 50 55 60 Lys Arg Tyr Arg Lys Phe Leu Asn Glu Ser Tyr Lys His Glu Gln Val 65 70 75 80 Tyr Ile Arg Ser Thr Asp Val Asp Arg Thr Leu Met Ser Ala Met Thr 85 90 95 Asn Leu Ala Ala Leu Phe Pro Pro Glu Gly Val Ser Ile Trp Asn Pro 100 105 110 Ile Leu Leu Trp Gln Pro Ile Pro Val His Thr Val Pro Leu Ser Glu 115 120 125 Asp Gln Leu Leu Tyr Leu Pro Phe Arg Asn Cys Pro Arg Phe Gln Glu 130 135 140 Leu Glu Ser Glu Thr Leu Lys Ser Glu Glu Phe Gln Lys Arg Leu His 145 150 155 160 Pro Tyr Lys Asp Phe Ile Ala Thr Leu Gly Lys Leu Ser Gly Leu His 165 170 175 Gly Gln Asp Leu Phe Gly Ile Trp Ser Lys Val Tyr Asp Pro Leu Tyr 180 185 190 Cys Glu Ser Val His Asn Phe Thr Leu Pro Ser Trp Ala Thr Glu Asp 195 200 205 Thr Met Thr Lys Leu Arg Glu Leu Ser Glu Leu Ser Leu Leu Ser Leu 210 215 220 Tyr Gly Ile His Lys Gln Lys Glu Lys Ser Arg Leu Gln Gly Gly Val 225 230 235 240 Leu Val Asn Glu Ile Leu Asn His Met Lys Arg Ala Thr Gln Ile Pro 245 250 255 Ser Tyr Lys Lys Leu Ile Met Tyr Ser Ala His Asp Thr Thr Val Ser 260 265 270 Gly Leu Gln Met Ala Leu Asp Val Tyr Asn Gly Leu Leu Pro Pro Tyr 275 280 285 Ala Ser Cys His Leu Thr Glu Leu Tyr Phe Glu Lys Gly Glu Tyr Phe 290 295 300 Val Glu Met Tyr Tyr Arg Asn Glu Thr Gln His Glu Pro Tyr Pro Leu 305 310 315 320 Met Leu Pro Gly Cys Ser Pro Ser Cys Pro Leu Glu Arg Phe Ala Glu 325 330 335 Leu Val Gly Pro Val Ile Pro Gln Asp Trp Ser Thr Glu Cys Met Thr 340 345 350 Thr Asn Ser His Gln Gly Thr Glu Asp Ser Thr Asp 355 360 <210> 214 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 214 Arg Thr Leu Met Ser Ala Met Thr Asn Leu Ala Ala Leu Phe Pro Pro 1 5 10 15 Glu Gly Val Ser Ile Trp Asn Pro Ile Leu Leu Trp Gln Pro Ile Pro 20 25 30 Val His Thr 35 <210> 215 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 215 Pro Ile Leu Leu Trp Gln Pro Ile Pro Val His Thr Val Pro Leu Ser 1 5 10 15 Glu Asp Gln Leu Leu Tyr Leu Pro Phe Arg Asn Cys Pro Arg Phe Gln 20 25 30 Glu Leu Glu 35 <210> 216 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 216 Ala Thr Glu Asp Thr Met Thr Lys Leu Arg Glu Leu Ser Glu Leu Ser 1 5 10 15 Leu Leu Ser Leu Tyr Gly Ile His Lys Gln Lys Glu Lys Ser Arg Leu 20 25 30 Gln Gly Gly 35 <210> 217 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 217 Leu Gln Gly Gly Val Leu Val Asn Glu Ile Leu Asn His Met Lys Arg 1 5 10 15 Ala Thr Gln Ile Pro Ser Tyr Lys Lys Leu Ile Met Tyr Ser Ala His 20 25 30 Asp Thr Thr 35 <210> 218 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 218 Met Ala Leu Asp Val Tyr Asn Gly Leu Leu Pro Pro Tyr Ala Ser Cys 1 5 10 15 His Leu Thr Glu Leu Tyr Phe Glu Lys Gly Glu Tyr Phe Val Glu Met 20 25 30 Tyr Tyr Arg 35 <210> 219 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 219 Tyr Phe Glu Lys Gly Glu Tyr Phe Val Glu Met Tyr Tyr Arg Asn Glu 1 5 10 15 Thr Gln His Glu Pro Tyr Pro Leu Met Leu Pro Gly Cys Ser Pro Ser 20 25 30 Cys Pro Leu 35 <210> 220 <211> 338 <212> PRT <213> synthetic <400> 220 Met Glu Ser Arg Lys Asp Ile Thr Asn Gln Glu Glu Leu Trp Lys Met 1 5 10 15 Lys Pro Arg Arg Asn Leu Glu Glu Asp Asp Tyr Leu His Lys Asp Thr 20 25 30 Gly Glu Thr Ser Met Leu Lys Arg Pro Val Leu Leu His Leu His Gln 35 40 45 Thr Ala His Ala Asp Glu Phe Asp Cys Pro Ser Glu Leu Gln His Thr 50 55 60 Gln Glu Leu Phe Pro Gln Trp His Leu Pro Ile Lys Ile Ala Ala Ile 65 70 75 80 Ile Ala Ser Leu Thr Phe Leu Tyr Thr Leu Leu Arg Glu Val Ile His 85 90 95 Pro Leu Ala Thr Ser His Gln Gln Tyr Phe Tyr Lys Ile Pro Ile Leu 100 105 110 Val Ile Asn Lys Val Leu Pro Met Val Ser Ile Thr Leu Leu Ala Leu 115 120 125 Val Tyr Leu Pro Gly Val Ile Ala Ala Ile Val Gln Leu His Asn Gly 130 135 140 Thr Lys Tyr Lys Lys Phe Pro His Trp Leu Asp Lys Trp Met Leu Thr 145 150 155 160 Arg Lys Gln Phe Gly Leu Leu Ser Phe Phe Phe Ala Val Leu His Ala 165 170 175 Ile Tyr Ser Leu Ser Tyr Pro Met Arg Arg Ser Tyr Arg Tyr Lys Leu 180 185 190 Leu Asn Trp Ala Tyr Gln Gln Val Gln Gln Asn Lys Glu Asp Ala Trp 195 200 205 Ile Glu His Asp Val Trp Arg Met Glu Ile Tyr Val Ser Leu Gly Ile 210 215 220 Val Gly Leu Ala Ile Leu Ala Leu Leu Ala Val Thr Ser Ile Pro Ser 225 230 235 240 Val Ser Asp Ser Leu Thr Trp Arg Glu Phe His Tyr Ile Gln Ser Lys 245 250 255 Leu Gly Ile Val Ser Leu Leu Leu Gly Thr Ile His Ala Leu Ile Phe 260 265 270 Ala Trp Asn Lys Trp Ile Asp Ile Lys Gln Phe Val Trp Tyr Thr Pro 275 280 285 Pro Thr Phe Met Ile Ala Val Phe Leu Pro Ile Val Leu Ile Phe Lys 290 295 300 Ser Ile Leu Phe Leu Pro Cys Leu Arg Lys Lys Ile Leu Lys Ile Arg 305 310 315 320 His Gly Trp Glu Asp Val Thr Lys Ile Asn Lys Thr Glu Ile Cys Ser 325 330 335 Gln Leu <210> 221 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 221 Leu Phe Pro Gln Trp His Leu Pro Ile Lys Ile Ala Ala Ile Ile Ala 1 5 10 15 Ser Leu Thr Phe Leu Tyr Thr Leu Leu Arg Glu Val Ile His Pro Leu 20 25 30 Ala Thr Ser 35 <210> 222 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 222 Tyr Thr Leu Leu Arg Glu Val Ile His Pro Leu Ala Thr Ser His Gln 1 5 10 15 Gln Tyr Phe Tyr Lys Ile Pro Ile Leu Val Ile Asn Lys Val Leu Pro 20 25 30 Met Val Ser 35 <210> 223 <211> 38 <212> PRT <213> synthetic <400> 223 Arg Lys Gln Phe Gly Leu Leu Ser Phe Phe Phe Ala Val Leu His Ala 1 5 10 15 Ile Tyr Ser Leu Ser Tyr Pro Met Arg Arg Ser Tyr Arg Tyr Lys Leu 20 25 30 Leu Asn Trp Ala Tyr Gln 35 <210> 224 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 224 Glu Asp Ala Trp Ile Glu His Asp Val Trp Arg Met Glu Ile Tyr Val 1 5 10 15 Ser Leu Gly Ile Val Gly Leu Ala Ile Leu Ala Leu Leu Ala Val Thr 20 25 30 Ser Ile Pro 35 <210> 225 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 225 Leu Ala Val Thr Ser Ile Pro Ser Val Ser Asp Ser Leu Thr Trp Arg 1 5 10 15 Glu Phe His Tyr Ile Gln Ser Lys Leu Gly Ile Val Ser Leu Leu Leu 20 25 30 Gly Thr Ile 35 <210> 226 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 226 Asp Ile Lys Gln Phe Val Trp Tyr Thr Pro Pro Thr Phe Met Ile Ala 1 5 10 15 Val Phe Leu Pro Ile Val Leu Ile Phe Lys Ser Ile Leu Phe Leu Pro 20 25 30 Cys Leu Arg 35 <210> 227 <211> 389 <212> PRT <213> synthetic <400> 227 Ser Ser Pro Thr Ser Ser Ala Ser Ser Phe Ser Ser Ser Ala Pro Phe 1 5 10 15 Leu Ala Ser Ala Val Ser Ala Gln Pro Pro Leu Pro Asp Gln Cys Pro 20 25 30 Ala Leu Cys Glu Cys Ser Glu Ala Ala Arg Thr Val Lys Cys Val Asn 35 40 45 Arg Asn Leu Thr Glu Val Pro Thr Asp Leu Pro Ala Tyr Val Arg Asn 50 55 60 Leu Phe Leu Thr Gly Asn Gln Leu Ala Val Leu Pro Ala Gly Ala Phe 65 70 75 80 Ala Arg Arg Pro Pro Leu Ala Glu Leu Ala Ala Leu Asn Leu Ser Gly 85 90 95 Ser Arg Leu Asp Glu Val Arg Ala Gly Ala Phe Glu His Leu Pro Ser 100 105 110 Leu Arg Gln Leu Asp Leu Ser His Asn Pro Leu Ala Asp Leu Ser Pro 115 120 125 Phe Ala Phe Ser Gly Ser Asn Ala Ser Val Ser Ala Pro Ser Pro Leu 130 135 140 Val Glu Leu Ile Leu Asn His Ile Val Pro Pro Glu Asp Glu Arg Gln 145 150 155 160 Asn Arg Ser Phe Glu Gly Met Val Val Ala Ala Leu Leu Ala Gly Arg 165 170 175 Ala Leu Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Leu Ala Ser Asn His Phe Leu 180 185 190 Tyr Leu Pro Arg Asp Val Leu Ala Gln Leu Pro Ser Leu Arg His Leu 195 200 205 Asp Leu Ser Asn Asn Ser Leu Val Ser Leu Thr Tyr Val Ser Phe Arg 210 215 220 Asn Leu Thr His Leu Glu Ser Leu His Leu Glu Asp Asn Ala Leu Lys 225 230 235 240 Val Leu His Asn Gly Thr Leu Ala Glu Leu Gln Gly Leu Pro His Ile 245 250 255 Arg Val Phe Leu Asp Asn Asn Pro Trp Val Cys Asp Cys His Met Ala 260 265 270 Asp Met Val Thr Trp Leu Lys Glu Thr Glu Val Val Gln Gly Lys Asp 275 280 285 Arg Leu Thr Cys Ala Tyr Pro Glu Lys Met Arg Asn Arg Val Leu Leu 290 295 300 Glu Leu Asn Ser Ala Asp Leu Asp Cys Asp Pro Ile Leu Pro Pro Ser 305 310 315 320 Leu Gln Thr Ser Tyr Val Phe Leu Gly Ile Val Leu Ala Leu Ile Gly 325 330 335 Ala Ile Phe Leu Leu Val Leu Tyr Leu Asn Arg Lys Gly Ile Lys Lys 340 345 350 Trp Met His Asn Ile Arg Asp Ala Cys Arg Asp His Met Glu Gly Tyr 355 360 365 His Tyr Arg Tyr Glu Ile Asn Ala Asp Pro Arg Leu Thr Asn Leu Ser 370 375 380 Ser Asn Ser Asp Val 385 <210> 228 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 228 Ser Pro Thr Ser Ser Ala Ser Ser Phe Ser Ser Ser Ala Pro Phe Leu 1 5 10 15 Ala Ser Ala Val Ser Ala Gln Pro Pro Leu Pro Asp Gln Cys Pro Ala 20 25 30 Leu Cys Glu 35 <210> 229 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 229 Arg Asn Leu Thr Glu Val Pro Thr Asp Leu Pro Ala Tyr Val Arg Asn 1 5 10 15 Leu Phe Leu Thr Gly Asn Gln Leu Ala Val Leu Pro Ala Gly Ala Phe 20 25 30 Ala Arg Arg 35 <210> 230 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 230 Ala Leu Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Leu Ala Ser Asn His Phe Leu 1 5 10 15 Tyr Leu Pro Arg Asp Val Leu Ala Gln Leu Pro Ser Leu Arg His Leu 20 25 30 Asp Leu Ser 35 <210> 231 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 231 Leu Ser Asn Asn Ser Leu Val Ser Leu Thr Tyr Val Ser Phe Arg Asn 1 5 10 15 Leu Thr His Leu Glu Ser Leu His Leu Glu Asp Asn Ala Leu Lys Val 20 25 30 Leu His Asn 35 <210> 232 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 232 Asp Cys Asp Pro Ile Leu Pro Pro Ser Leu Gln Thr Ser Tyr Val Phe 1 5 10 15 Leu Gly Ile Val Leu Ala Leu Ile Gly Ala Ile Phe Leu Leu Val Leu 20 25 30 Tyr Leu Asn 35 <210> 233 <211> 11 <212> PRT <213> synthetic <400> 233 Arg Asn Asn Ile Leu Arg Thr Gln Glu Ser Glu 1 5 10 <210> 234 <211> 17 <212> PRT <213> synthetic <400> 234 Leu Asn Asp Lys His Ser Asn Gly Thr Ile Lys Asp Arg Ser Pro Tyr 1 5 10 15 Arg <210> 235 <211> 12 <212> PRT <213> synthetic <400> 235 Ser Trp Arg Asn Asn Ile Leu Arg Thr Gln Glu Ser 1 5 10 <210> 236 <211> 9 <212> PRT <213> synthetic <400> 236 Asp Asn Trp His Gly Ser Asn Arg Pro 1 5 <210> 237 <211> 11 <212> PRT <213> synthetic <400> 237 Asp Asn Pro Arg Pro Asn Asp Lys Thr Gly Ser 1 5 10 <210> 238 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 238 Asp Pro Asn Gly Trp Thr Gly Thr Asp Asn Asn Phe Ser Ile 1 5 10 <210> 239 <211> 9 <212> PRT <213> synthetic <400> 239 Gln Leu Asp Pro Ala Phe Arg Ala Gly 1 5 <210> 240 <211> 9 <212> PRT <213> synthetic <400> 240 Arg Gly Leu Tyr Phe Pro Ala Gly Leu 1 5 <210> 241 <211> 11 <212> PRT <213> synthetic <400> 241 Ser Thr Gly Pro Cys Arg Thr Cys Met Thr Lys 1 5 10 <210> 242 <211> 9 <212> PRT <213> synthetic <400> 242 Ala Val Gly Ile Gly Ala Val Phe Leu 1 5 <210> 243 <211> 30 <212> PRT <213> synthetic <400> 243 Glu Ile Asn Cys Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Pro Gly Glu Ile 1 5 10 15 Ile Gly Asp Ile Arg Gln Ala His Cys Asn Ile Ser Arg Ala 20 25 30 <210> 244 <211> 23 <212> PRT <213> synthetic <400> 244 Tyr Asn Lys Arg Lys Arg Ile His Ile Gly Pro Gly Arg Ala Phe Tyr 1 5 10 15 Thr Thr Lys Asn Ile Ile Gly 20 <210> 245 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 245 Pro Ala Asp Gly Asn Pro Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Val Asp 1 5 10 15 <210> 246 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 246 Asn Pro Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Val Asp Pro Asn Ala Asn 1 5 10 15 <210> 247 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 247 Asn Ala Asn Pro Asn Val Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Val Asp 1 5 10 15 <210> 248 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 248 Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn 1 5 10 15 <210> 249 <211> 12 <212> PRT <213> synthetic <400> 249 Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Val Asp Pro Asn Ala 1 5 10 <210> 250 <211> 16 <212> PRT <213> synthetic <400> 250 Lys Gln Pro Ala Asp Gly Asn Pro Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Val 1 5 10 15 <210> 251 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 251 Glu Asp Asn Glu Lys Leu Arg Lys Pro Lys His Lys Lys Leu Lys Gln 1 5 10 15 Pro Ala Asp Gly Asn Pro Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Val Asp Pro 20 25 30 Asn Ala Asn 35 <210> 252 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <400> 252 Lys Leu Arg Lys Pro Lys His Lys Lys Leu Lys Gln Pro Ala Asp Gly 1 5 10 15 Asn Pro Asp Pro 20 <210> 253 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <400> 253 Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp 1 5 10 15 Ile Ala <210> 254 <211> 31 <212> PRT <213> synthetic <400> 254 Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile 1 5 10 15 Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe 20 25 30 <210> 255 <211> 25 <212> PRT <213> synthetic <400> 255 Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile 1 5 10 15 Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr 20 25 <210> 256 <211> 25 <212> PRT <213> synthetic <400> 256 Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn 1 5 10 15 Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe 20 25 <210> 257 <211> 31 <212> PRT <213> synthetic <400> 257 Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys 1 5 10 15 Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn 20 25 30 <210> 258 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <400> 258 Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser 1 5 10 15 Pro Thr Lys Leu 20 <210> 259 <211> 25 <212> PRT <213> synthetic <400> 259 Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys 20 25 <210> 260 <211> 25 <212> PRT <213> synthetic <400> 260 Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile 1 5 10 15 Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser 20 25 <210> 261 <211> 25 <212> PRT <213> synthetic <400> 261 Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val 1 5 10 15 Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu 20 25 <210> 262 <211> 24 <212> PRT <213> synthetic <400> 262 Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln 1 5 10 15 Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln 20 <210> 263 <211> 58 <212> PRT <213> synthetic <400> 263 Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 Arg Leu Phe Arg Gly Ser Gly Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys 20 25 30 Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly 35 40 45 Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln 50 55 <210> 264 <211> 247 <212> PRT <213> synthetic <400> 264 Met Ala Ser Leu Ser Arg Pro Ser Leu Pro Ser Cys Leu Cys Ser Phe 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gln Val Ser Ser Ser Tyr Ala Gly Gln Phe 20 25 30 Arg Val Ile Gly Pro Arg His Pro Ile Arg Ala Leu Val Gly Asp Glu 35 40 45 Val Glu Leu Pro Cys Arg Ile Ser Pro Gly Lys Asn Ala Thr Gly Met 50 55 60 Glu Val Gly Trp Tyr Arg Pro Pro Phe Ser Arg Val Val His Leu Tyr 65 70 75 80 Arg Asn Gly Lys Asp Gln Asp Gly Asp Gln Ala Pro Glu Tyr Arg Gly 85 90 95 Arg Thr Glu Leu Leu Lys Asp Ala Ile Gly Glu Gly Lys Val Thr Leu 100 105 110 Arg Ile Arg Asn Val Arg Phe Ser Asp Glu Gly Gly Phe Thr Cys Phe 115 120 125 Phe Arg Asp His Ser Tyr Gln Glu Glu Ala Ala Met Glu Leu Lys Val 130 135 140 Glu Asp Pro Phe Tyr Trp Val Ser Pro Gly Val Leu Val Leu Leu Ala 145 150 155 160 Val Leu Pro Val Leu Leu Leu Gln Ile Thr Val Gly Leu Ile Phe Leu 165 170 175 Cys Leu Gln Tyr Arg Leu Arg Gly Lys Leu Arg Ala Glu Ile Glu Asn 180 185 190 Leu His Arg Thr Phe Asp Pro His Phe Leu Arg Val Pro Cys Trp Lys 195 200 205 Ile Thr Leu Phe Val Ile Val Pro Val Leu Gly Pro Leu Val Ala Leu 210 215 220 Ile Ile Cys Tyr Asn Trp Leu His Arg Arg Leu Ala Gly Gln Phe Leu 225 230 235 240 Glu Glu Leu Arg Asn Pro Phe 245 <210> 265 <211> 192 <212> PRT <213> synthetic <400> 265 Met Gly Asn His Ala Gly Lys Arg Glu Leu Asn Ala Glu Lys Ala Ser 1 5 10 15 Thr Asn Ser Glu Thr Asn Arg Gly Glu Ser Glu Lys Lys Arg Asn Leu 20 25 30 Gly Glu Leu Ser Arg Thr Thr Ser Glu Asp Asn Glu Val Phe Gly Glu 35 40 45 Ala Asp Ala Asn Gln Asn Asn Gly Thr Ser Ser Gln Asp Thr Ala Val 50 55 60 Thr Asp Ser Lys Arg Thr Ala Asp Pro Lys Asn Ala Trp Gln Asp Ala 65 70 75 80 His Pro Ala Asp Pro Gly Ser Arg Pro His Leu Ile Arg Leu Phe Ser 85 90 95 Arg Asp Ala Pro Gly Arg Glu Asp Asn Thr Phe Lys Asp Arg Pro Ser 100 105 110 Glu Ser Asp Glu Leu Gln Thr Ile Gln Glu Asp Ser Ala Ala Thr Ser 115 120 125 Glu Ser Leu Asp Val Met Ala Ser Gln Lys Arg Pro Ser Gln Arg His 130 135 140 Gly Ser Lys Tyr Leu Ala Thr Ala Ser Thr Met Asp His Ala Arg His 145 150 155 160 Gly Phe Leu Pro Arg His Arg Asp Thr Gly Ile Leu Asp Ser Ile Gly 165 170 175 Arg Phe Phe Gly Gly Asp Arg Gly Ala Pro Lys Arg Gly Ser Gly Lys 180 185 190 <210> 266 <211> 277 <212> PRT <213> synthetic <400> 266 Met Gly Leu Leu Glu Cys Cys Ala Arg Cys Leu Val Gly Ala Pro Phe 1 5 10 15 Ala Ser Leu Val Ala Thr Gly Leu Cys Phe Phe Gly Val Ala Leu Phe 20 25 30 Cys Gly Cys Gly His Glu Ala Leu Thr Gly Thr Glu Lys Leu Ile Glu 35 40 45 Thr Tyr Phe Ser Lys Asn Tyr Gln Asp Tyr Glu Tyr Leu Ile Asn Val 50 55 60 Ile His Ala Phe Gln Tyr Val Ile Tyr Gly Thr Ala Ser Phe Phe Phe 65 70 75 80 Leu Tyr Gly Ala Leu Leu Leu Ala Glu Gly Phe Tyr Thr Thr Gly Ala 85 90 95 Val Arg Gln Ile Phe Gly Asp Tyr Lys Thr Thr Ile Cys Gly Lys Gly 100 105 110 Leu Ser Ala Thr Val Thr Gly Gly Gln Lys Gly Arg Gly Ser Arg Gly 115 120 125 Gln His Gln Ala His Ser Leu Glu Arg Val Cys His Cys Leu Gly Lys 130 135 140 Trp Leu Gly His Pro Asp Lys Phe Val Gly Ile Thr Tyr Ala Leu Thr 145 150 155 160 Val Val Trp Leu Leu Val Phe Ala Cys Ser Ala Val Pro Val Tyr Ile 165 170 175 Tyr Phe Asn Thr Trp Thr Thr Cys Gln Ser Ile Ala Phe Pro Ser Lys 180 185 190 Thr Ser Ala Ser Ile Gly Ser Leu Cys Ala Asp Ala Arg Met Tyr Gly 195 200 205 Val Leu Pro Trp Asn Ala Phe Pro Gly Lys Val Cys Gly Ser Asn Leu 210 215 220 Leu Ser Ile Cys Lys Thr Ala Glu Phe Gln Met Thr Phe His Leu Phe 225 230 235 240 Ile Ala Ala Phe Val Gly Ala Ala Ala Thr Leu Val Ser Leu Leu Thr 245 250 255 Phe Met Ile Ala Ala Thr Tyr Asn Phe Ala Val Leu Lys Leu Met Gly 260 265 270 Arg Gly Thr Lys Phe 275 <210> 267 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 267 Gln Leu Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Leu Pro Tyr Pro Gln Pro Tyr 1 5 10 15 Pro Gln Gln Pro Glu Gln Pro Tyr Pro Gln Pro Gln Pro 20 25 <210> 268 <211> 28 <212> PRT <213> synthetic <400> 268 Gln Pro Tyr Pro Gln Gln Pro Glu Gln Pro Tyr Pro Gln Pro Gln Pro 1 5 10 15 Gln Tyr Ser Gln Pro Glu Gln Pro Ile Ser Gln Gln 20 25 <210> 269 <211> 28 <212> PRT <213> synthetic <400> 269 Gln Pro Tyr Pro Phe Arg Pro Glu Gln Pro Tyr Pro Gln Pro Gln Pro 1 5 10 15 Gln Tyr Ser Gln Pro Glu Gln Pro Ile Ser Gln Gln 20 25 <210> 270 <211> 28 <212> PRT <213> synthetic <400> 270 Pro Ser Gly Glu Gly Ser Phe Gln Pro Ser Gln Glu Asn Pro Gln Ala 1 5 10 15 Gln Gly Ser Val Gln Pro Gln Gln Leu Pro Gln Phe 20 25 <210> 271 <211> 23 <212> PRT <213> synthetic <400> 271 Gln Gln Phe Pro Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Gln Gln Pro Glu Gln 1 5 10 15 Pro Phe Pro Gln Gln Pro Gln 20 <210> 272 <211> 25 <212> PRT <213> synthetic <400> 272 Pro Gln Pro Gln Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Gln Ser Gln Gln Pro 1 5 10 15 Glu Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln 20 25 <210> 273 <211> 27 <212> PRT <213> synthetic <400> 273 Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln Glu Phe Pro Gln Pro Gln Gln Pro 1 5 10 15 Gln Gln Ser Phe Pro Glu Gln Gln Pro Ser Leu 20 25 <210> 274 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <400> 274 Pro Gln Pro Gln Gln Pro Phe Pro Glu Gln Pro Gln Gln Pro Phe Pro 1 5 10 15 Glu Gln Pro Gln 20 <210> 275 <211> 25 <212> PRT <213> synthetic <400> 275 Pro Gln Pro Glu Gln Pro Gln Gln Pro Phe Pro Gln Ser Glu Gln Pro 1 5 10 15 Gln Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln 20 25 <210> 276 <211> 27 <212> PRT <213> synthetic <400> 276 Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln Glu Phe Pro Gln Pro Gln Gln Pro 1 5 10 15 Gln Gln Ser Phe Pro Glu Gln Glu Pro Ser Leu 20 25 <210> 277 <211> 33 <212> PRT <213> synthetic <400> 277 Pro Thr Pro Leu Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Gln Gln Pro Gln Gln 1 5 10 15 Pro Gln Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Trp Gln Pro 20 25 30 Gln <210> 278 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 278 Gln Gln Pro Pro Phe Ser Glu Gln Glu Gln Pro Val Leu Pro Gln 1 5 10 15 <210> 279 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 279 Gln Gly Gln Glu Gly Tyr Tyr Pro Thr Ser Pro Glu Gln Pro Gly 1 5 10 15 <210> 280 <211> 24 <212> PRT <213> synthetic <400> 280 Ile Ala Gln Gln Gln Pro Phe Pro Glu Gln Pro Gln Pro Tyr Pro Glu 1 5 10 15 Gln Pro Gln Pro Tyr Pro Gln Gln 20 <210> 281 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 281 Pro Gln Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Ser Gln 1 5 10 15 <210> 282 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 282 Pro Gln Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Leu Gln 1 5 10 15 <210> 283 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 283 Gln Phe Pro Pro Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Gln Pro Gln Gln 1 5 10 15 <210> 284 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 284 Gln Phe Pro Pro Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Gln Pro His Gln 1 5 10 15 <210> 285 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 285 Pro Gln Gln Pro Ile Pro Glu Gln Pro Gln Pro Tyr Pro Gln Gln 1 5 10 15 <210> 286 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 286 Ser Gln Gln Pro Ile Pro Glu Gln Pro Gln Pro Tyr Pro Gln Gln 1 5 10 15 <210> 287 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 287 Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln Glu Phe Pro Gln Pro Gln Gln 1 5 10 15 <210> 288 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <400> 288 Gln Ser Ile Pro Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln Pro 1 5 10 15 Phe Pro Gln Ser 20 <210> 289 <211> 15 <212> PRT <213> synthetic <400> 289 Pro Gln Gln Pro Phe Pro Glu Gln Pro Glu Gln Ile Ile Pro Gln 1 5 10 15 <210> 290 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 290 Ser Leu Pro Ser Cys Leu Cys Ser Phe Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gln 1 5 10 15 Val Ser Ser Ser Tyr Ala Gly Gln Phe Arg Val Ile Gly Pro Arg His 20 25 30 Pro Ile Arg 35 <210> 291 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 291 Val Ser Ser Ser Tyr Ala Gly Gln Phe Arg Val Ile Gly Pro Arg His 1 5 10 15 Pro Ile Arg Ala Leu Val Gly Asp Glu Val Glu Leu Pro Cys Arg Ile 20 25 30 Ser Pro Gly 35 <210> 292 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 292 Glu Glu Ala Ala Met Glu Leu Lys Val Glu Asp Pro Phe Tyr Trp Val 1 5 10 15 Ser Pro Gly Val Leu Val Leu Leu Ala Val Leu Pro Val Leu Leu Leu 20 25 30 Gln Ile Thr 35 <210> 293 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 293 Ser Pro Gly Val Leu Val Leu Leu Ala Val Leu Pro Val Leu Leu Leu 1 5 10 15 Gln Ile Thr Val Gly Leu Ile Phe Leu Cys Leu Gln Tyr Arg Leu Arg 20 25 30 Gly Lys Leu 35 <210> 294 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 294 Gln Ile Thr Val Gly Leu Ile Phe Leu Cys Leu Gln Tyr Arg Leu Arg 1 5 10 15 Gly Lys Leu Arg Ala Glu Ile Glu Asn Leu His Arg Thr Phe Asp Pro 20 25 30 His Phe Leu 35 <210> 295 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 295 Gly Lys Leu Arg Ala Glu Ile Glu Asn Leu His Arg Thr Phe Asp Pro 1 5 10 15 His Phe Leu Arg Val Pro Cys Trp Lys Ile Thr Leu Phe Val Ile Val 20 25 30 Pro Val Leu 35 <210> 296 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 296 His Phe Leu Arg Val Pro Cys Trp Lys Ile Thr Leu Phe Val Ile Val 1 5 10 15 Pro Val Leu Gly Pro Leu Val Ala Leu Ile Ile Cys Tyr Asn Trp Leu 20 25 30 His Arg Arg 35 <210> 297 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic <400> 297 Pro Val Leu Gly Pro Leu Val Ala Leu Ile Ile Cys Tyr Asn Trp Leu 1 5 10 15 His Arg Arg Leu Ala Gly Gln Phe Leu Glu Glu Leu Arg Asn Pro Phe 20 25 30 <210> 298 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 298 Asp Pro Gly Ser Arg Pro His Leu Ile Arg Leu Phe Ser Arg Asp Ala 1 5 10 15 Pro Gly Arg Glu Asp Asn Thr Phe Lys Asp Arg Pro Ser Glu Ser Asp 20 25 30 Glu Leu Gln 35 <210> 299 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 299 Gly Arg Thr Gln Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile 1 5 10 15 Val Thr Pro Arg Thr Pro Pro Pro Ser Gln Gly Lys Gly Arg Gly Leu 20 25 30 Ser Leu Ser 35 <210> 300 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 300 Gly Gly Arg Ala Ser Asp Tyr Lys Ser Ala His Lys Gly Phe Lys Gly 1 5 10 15 Val Asp Ala Gln Gly Thr Leu Ser Lys Ile Phe Lys Leu Gly Gly Arg 20 25 30 Asp Ser Arg 35 <210> 301 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 301 Phe Ser Lys Asn Tyr Gln Asp Tyr Glu Tyr Leu Ile Asn Val Ile His 1 5 10 15 Ala Phe Gln Tyr Val Ile Tyr Gly Thr Ala Ser Phe Phe Phe Leu Tyr 20 25 30 Gly Ala Leu 35 <210> 302 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 302 Ala Phe Gln Tyr Val Ile Tyr Gly Thr Ala Ser Phe Phe Phe Leu Tyr 1 5 10 15 Gly Ala Leu Leu Leu Ala Glu Gly Phe Tyr Thr Thr Gly Ala Val Arg 20 25 30 Gln Ile Phe 35 <210> 303 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 303 Gly Ala Leu Leu Leu Ala Glu Gly Phe Tyr Thr Thr Gly Ala Val Arg 1 5 10 15 Gln Ile Phe Gly Asp Tyr Lys Thr Thr Ile Cys Gly Lys Gly Leu Ser 20 25 30 Ala Thr Val 35 <210> 304 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 304 His Pro Asp Lys Phe Val Gly Ile Thr Tyr Ala Leu Thr Val Val Trp 1 5 10 15 Leu Leu Val Phe Ala Cys Ser Ala Val Pro Val Tyr Ile Tyr Phe Asn 20 25 30 Thr Trp Thr 35 <210> 305 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 305 Leu Leu Val Phe Ala Cys Ser Ala Val Pro Val Tyr Ile Tyr Phe Asn 1 5 10 15 Thr Trp Thr Thr Cys Gln Ser Ile Ala Phe Pro Ser Lys Thr Ser Ala 20 25 30 Ser Ile Gly 35 <210> 306 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 306 Thr Trp Thr Thr Cys Gln Ser Ile Ala Phe Pro Ser Lys Thr Ser Ala 1 5 10 15 Ser Ile Gly Ser Leu Cys Ala Asp Ala Arg Met Tyr Gly Val Leu Pro 20 25 30 Trp Asn Ala 35 <210> 307 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 307 Ser Ile Cys Lys Thr Ala Glu Phe Gln Met Thr Phe His Leu Phe Ile 1 5 10 15 Ala Ala Phe Val Gly Ala Ala Ala Thr Leu Val Ser Leu Leu Thr Phe 20 25 30 Met Ile Ala 35 <210> 308 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 308 Ala Ala Phe Val Gly Ala Ala Ala Thr Leu Val Ser Leu Leu Thr Phe 1 5 10 15 Met Ile Ala Ala Thr Tyr Asn Phe Ala Val Leu Lys Leu Met Gly Arg 20 25 30 Gly Thr Lys 35 <210> 309 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <400> 309 Met Ile Ala Ala Thr Tyr Asn Phe Ala Val Leu Lys Leu Met Gly Arg 1 5 10 15 Gly Thr Lys Phe 20 <210> 310 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <400> 310 Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly 1 5 10 15 Thr Tyr <210> 311 <211> 22 <212> PRT <213> synthetic <400> 311 Val Gln Lys Glu Gln Ala His Ser Glu Glu His Leu Gly Arg Ala Ala 1 5 10 15 Phe Pro Gly Ala Pro Gly 20 <210> 312 <211> 16 <212> PRT <213> synthetic <400> 312 Glu Asp Arg Asp Val Asp Glu Ser Ser Pro Gln Asp Ser Pro Pro Ser 1 5 10 15 <210> 313 <211> 12 <212> PRT <213> synthetic <400> 313 Gly Gln Asp Ala Pro Leu Glu Phe Thr Phe His Val 1 5 10 <210> 314 <211> 25 <212> PRT <213> synthetic <400> 314 Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly 1 5 10 15 Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp 20 25 <210> 315 <211> 11 <212> PRT <213> synthetic <400> 315 Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr Tyr Gly 1 5 10 <210> 316 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <400> 316 Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly 1 5 10 15 Thr Tyr <210> 317 <211> 24 <212> PRT <213> synthetic <400> 317 Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His Gln Asp Gln Glu Gly Asp 1 5 10 15 Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser 20 <210> 318 <211> 70 <212> PRT <213> synthetic <400> 318 Ile Phe Gln Lys Leu Asn Ile Phe Asp Gln Ser Phe Tyr Asp Leu Ser 1 5 10 15 Leu Gln Thr Ser Glu Ile Lys Glu Glu Glu Lys Glu Leu Arg Arg Thr 20 25 30 Thr Tyr Lys Leu Gln Val Lys Asn Glu Glu Val Lys Asn Met Ser Leu 35 40 45 Glu Leu Asn Ser Lys Leu Glu Ser Leu Leu Glu Glu Lys Ile Leu Leu 50 55 60 Gln Gln Lys Val Lys Tyr 65 70 <210> 319 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <400> 319 His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr 1 5 10 15 Ala Pro Pro Ala 20 <210> 320 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <400> 320 Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val 1 5 10 15 Thr Ser Ala Pro 20 <210> 321 <211> 27 <212> PRT <213> synthetic <400> 321 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 1 5 10 15 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala 20 25 <210> 322 <211> 12 <212> PRT <213> synthetic <400> 322 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 1 5 10 <210> 323 <211> 12 <212> PRT <213> synthetic <400> 323 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 1 5 10 <210> 324 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 324 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro 1 5 10 <210> 325 <211> 6 <212> PRT <213> synthetic <400> 325 Asp Thr Arg Pro Ala Pro 1 5 <210> 326 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 326 Gly Ser Thr Ala Pro 1 5 <210> 327 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 327 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys 1 5 <210> 328 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 328 Ile Ala Ala Leu Lys Ser Lys 1 5 <210> 329 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 329 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Glu 1 5 <210> 330 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 330 Ile Ala Ala Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 331 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 331 Val Ala Ala Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 332 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 332 Ile Ala Ala Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 333 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 333 Leu Ala Ala Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 334 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 334 Val Ser Ala Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 335 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 335 Ile Ser Ala Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 336 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 336 Leu Ser Ala Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 337 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 337 Val Ala Ser Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 338 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 338 Ile Ala Ser Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 339 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 339 Leu Ala Ser Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 340 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 340 Val Ser Ser Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 341 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 341 Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 342 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 342 Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 343 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 343 Val Ala Ala Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 344 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 344 Leu Ala Ala Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 345 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 345 Val Ser Ala Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 346 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 346 Ile Ser Ala Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 347 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 347 Leu Ser Ala Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 348 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 348 Val Ala Ser Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 349 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 349 Ile Ala Ser Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 350 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 350 Lys Ser Glu Leu Ala Ala Ile 1 5 <210> 351 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 351 Lys Ser Lys Leu Ala Ala Ile 1 5 <210> 352 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 352 Glu Ser Ser Leu Ala Ala Ile 1 5 <210> 353 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 353 Glu Ser Lys Leu Ala Ala Ile 1 5 <210> 354 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 354 Glu Ala Lys Leu Ala Ala Val 1 5 <210> 355 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 355 Glu Ala Lys Leu Ala Ala Ile 1 5 <210> 356 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 356 Glu Ala Lys Leu Ala Ala Leu 1 5 <210> 357 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 357 Glu Ala Lys Leu Ala Ser Val 1 5 <210> 358 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 358 Glu Ala Lys Leu Ala Ser Ile 1 5 <210> 359 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 359 Glu Ala Lys Leu Ala Ser Leu 1 5 <210> 360 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 360 Glu Ala Lys Leu Ser Ala Val 1 5 <210> 361 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 361 Glu Ala Lys Leu Ser Ala Ile 1 5 <210> 362 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 362 Glu Ala Lys Leu Ser Ala Leu 1 5 <210> 363 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 363 Glu Ala Lys Leu Ser Ser Val 1 5 <210> 364 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 364 Glu Ala Lys Leu Ser Ser Ile 1 5 <210> 365 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 365 Glu Ala Lys Leu Ser Ser Leu 1 5 <210> 366 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 366 Glu Ser Lys Leu Ala Ala Val 1 5 <210> 367 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 367 Glu Ser Lys Leu Ala Ala Ile 1 5 <210> 368 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 368 Glu Ser Lys Leu Ala Ala Leu 1 5 <210> 369 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 369 Glu Ser Lys Leu Ala Ser Val 1 5 <210> 370 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 370 Glu Ser Lys Leu Ala Ser Ile 1 5 <210> 371 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 371 Glu Ser Lys Leu Ala Ser Leu 1 5 <210> 372 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 372 Glu Ser Lys Leu Ser Ala Val 1 5 <210> 373 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 373 Glu Ser Lys Leu Ser Ala Ile 1 5 <210> 374 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 374 Ile Ala Ala Leu Lys Ser Lys Ile Ala Ala Lys Glu Ser Glu 1 5 10 <210> 375 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 375 Ile Ala Ala Leu Lys Ser Lys Ile Ala Ala Lys Glu Ser Lys 1 5 10 <210> 376 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 376 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Glu Ile Ala Ala Lys Glu Ser Lys 1 5 10 <210> 377 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 377 Ile Ala Ala Leu Lys Ser Lys 1 5 <210> 378 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 378 Ile Ala Ala Leu Arg Ser Arg 1 5 <210> 379 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 379 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys 1 5 <210> 380 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 380 Ile Ala Ala Leu Lys Ser Lys 1 5 <210> 381 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 381 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Glu 1 5 <210> 382 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 382 Ile Ala Ala Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 383 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 383 Val Ala Ala Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 384 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 384 Ile Ala Ala Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 385 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 385 Leu Ala Ala Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 386 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 386 Val Ser Ala Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 387 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 387 Ile Ser Ala Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 388 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 388 Leu Ser Ala Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 389 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 389 Val Ala Ser Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 390 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 390 Ile Ala Ser Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 391 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 391 Leu Ala Ser Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 392 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 392 Val Ser Ser Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 393 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 393 Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 394 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 394 Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu 1 5 <210> 395 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 395 Val Ala Ala Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 396 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 396 Leu Ala Ala Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 397 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 397 Val Ser Ala Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 398 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 398 Ile Ser Ala Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 399 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 399 Leu Ser Ala Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 400 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 400 Val Ala Ser Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 401 <211> 7 <212> PRT <213> synthetic <400> 401 Ile Ala Ser Leu Lys Ser Glu 1 5 <210> 402 <211> 27 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Azidolysine <400> 402 Lys Ala Arg Asp Glu Thr Ala Ala Leu Leu Asn Ser Ala Val Leu Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Phe Val Pro Pro Ala Asp Xaa 20 25 <210> 403 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Azidolysine <400> 403 Ala Ala Leu Leu Asn Ser Ala Val Leu Xaa 1 5 10 <210> 404 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Azidolysine <400> 404 Ala Ser Met Thr Asn Met Glu Leu Met Xaa 1 5 10 <210> 405 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (29)..(29) <223> Azidolysine <400> 405 Gly Ile Pro Val His Leu Glu Leu Ala Ser Met Thr Asn Met Glu Leu 1 5 10 15 Met Ser Ser Ile Val His Gln Gln Val Phe Pro Thr Xaa 20 25 <210> 406 <211> 34 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (34)..(34) <223> Azidolysine <400> 406 Lys Lys Lys Val Arg Gly Ile Pro Val His Leu Glu Leu Ala Ser Met 1 5 10 15 Thr Asn Met Glu Leu Met Ser Ser Ile Val His Gln Gln Val Phe Pro 20 25 30 Thr Xaa <210> 407 <211> 33 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (33)..(33) <223> Azidolysine <400> 407 Lys Lys Lys Lys Val Arg Asp Phe Thr Gly Ser Asn Gly Asp Pro Ser 1 5 10 15 Ser Pro Tyr Ser Leu His Tyr Leu Ser Pro Thr Gly Val Asn Glu Tyr 20 25 30 Xaa <210> 408 <211> 36 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (36)..(36) <223> Azidolysine <400> 408 Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Gly Ile Pro Val His Leu Glu Leu Ala 1 5 10 15 Ser Met Thr Asn Met Glu Leu Met Ser Ser Ile Val His Gln Gln Val 20 25 30 Phe Pro Thr Xaa 35 <210> 409 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (35)..(35) <223> Azidolysine <400> 409 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Asp Phe Thr Gly Ser Asn Gly Asp 1 5 10 15 Pro Ser Ser Pro Tyr Ser Leu His Tyr Leu Ser Pro Thr Gly Val Asn 20 25 30 Glu Tyr Xaa 35 <210> 410 <211> 26 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (26)..(26) <223> Azidolysine <400> 410 Met Glu Val Gly Trp Tyr Arg Ser Pro Phe Ser Arg Val Val His Leu 1 5 10 15 Tyr Arg Asn Gly Lys Ser Pro Val Xaa Xaa 20 25 <210> 411 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (29)..(29) <223> Azidolysine <400> 411 Gly Arg Val Leu Glu Leu Phe Arg Ala Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu Gln Ile Met Glu Leu Cys Gly Ala Thr Arg Xaa 20 25 <210> 412 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (17)..(17) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Azidolysine <400> 412 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Ser Pro Val 1 5 10 15 Xaa Xaa <210> 413 <211> 38 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (29)..(38) <223> p Amino phenylalanine <400> 413 Gly Ile Pro Val His Leu Glu Leu Ala Ser Met Thr Asn Met Glu Leu 1 5 10 15 Met Ser Ser Ile Val His Gln Gln Val Phe Pro Thr Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 <210> 414 <211> 36 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (27)..(36) <223> p Amino phenylalanine <400> 414 Lys Ala Arg Asp Glu Thr Ala Ala Leu Leu Asn Ser Ala Val Leu Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Phe Val Pro Pro Ala Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa 35 <210> 415 <211> 36 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (27)..(36) <223> p Amino phenylalanine <400> 415 Asp Phe Thr Gly Ser Asn Gly Asp Pro Ser Ser Pro Tyr Ser Leu His 1 5 10 15 Tyr Leu Ser Pro Thr Gly Val Asn Glu Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa 35 <210> 416 <211> 19 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (10)..(19) <223> p Amino phenylalanine <400> 416 Ala Ser Met Thr Asn Met Glu Leu Met Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa <210> 417 <211> 19 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (10)..(19) <223> p Amino phenylalanine <400> 417 Ala Ala Leu Leu Asn Ser Ala Val Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa <210> 418 <211> 19 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (10)..(19) <223> p Amino phenylalanine <400> 418 Ser Ser Pro Tyr Ser Leu His Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa <210> 419 <211> 23 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (14)..(23) <223> p Amino phenylalanine <400> 419 Ala Ser Met Thr Asn Met Glu Leu Met Ser Pro Val Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 <210> 420 <211> 23 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (14)..(23) <223> p Amino phenylalanine <400> 420 Ala Ala Leu Leu Asn Ser Ala Val Leu Ser Pro Val Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 <210> 421 <211> 23 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (14)..(23) <223> p Amino phenylalanine <400> 421 Ser Ser Pro Tyr Ser Leu His Tyr Leu Ser Pro Val Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 <210> 422 <211> 33 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (29)..(33) <223> p Amino phenylalanine <400> 422 Gly Ile Pro Val His Leu Glu Leu Ala Ser Met Thr Asn Met Glu Leu 1 5 10 15 Met Ser Ser Ile Val His Gln Gln Val Phe Pro Thr Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa <210> 423 <211> 33 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (29)..(33) <223> p Amino phenylalanine <400> 423 Gly Arg Val Leu Glu Leu Phe Arg Ala Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu Gln Ile Met Glu Leu Cys Gly Ala Thr Arg Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa <210> 424 <211> 31 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (27)..(31) <223> p Amino phenylalanine <400> 424 Lys Ala Arg Asp Glu Thr Ala Ala Leu Leu Asn Ser Ala Val Leu Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Phe Val Pro Pro Ala Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 <210> 425 <211> 31 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (27)..(31) <223> p Amino phenylalanine <400> 425 Asp Phe Thr Gly Ser Asn Gly Asp Pro Ser Ser Pro Tyr Ser Leu His 1 5 10 15 Tyr Leu Ser Pro Thr Gly Val Asn Glu Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 <210> 426 <211> 40 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> p Amino phenylalanine <400> 426 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Ile Pro Val His Leu 1 5 10 15 Glu Leu Ala Ser Met Thr Asn Met Glu Leu Met Ser Ser Ile Val His 20 25 30 Gln Gln Val Phe Pro Thr Ser Pro 35 40 <210> 427 <211> 31 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(5) <223> p Amino phenylalanine <400> 427 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Lys Leu Leu Ser Phe Met Ala Pro Ile Asp 1 5 10 15 His Thr Thr Met Ser Asp Asp Ala Arg Thr Glu Leu Phe Arg Ser 20 25 30 <210> 428 <211> 40 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (31)..(40) <223> p Amino phenylalanine <400> 428 Gly Arg Val Leu Glu Leu Phe Arg Ala Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu Gln Ile Met Glu Leu Cys Gly Ala Thr Arg Ser Pro Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 <210> 429 <211> 44 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (43)..(43) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (44)..(44) <223> Azidolysine <400> 429 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Gly Ile Pro Val His 1 5 10 15 Leu Glu Leu Ala Ser Met Thr Asn Met Glu Leu Met Ser Ser Ile Val 20 25 30 His Gln Gln Val Phe Pro Thr Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 430 <211> 42 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (41)..(41) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (42)..(42) <223> Azidolysine <400> 430 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Gly Arg Val Leu Glu Leu Phe 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val Leu Gln Ile Met Glu Leu 20 25 30 Cys Gly Ala Thr Arg Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 431 <211> 41 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (40)..(40) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (41)..(41) <223> Azidolysine <400> 431 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Lys Ala Arg Asp Glu Thr 1 5 10 15 Ala Ala Leu Leu Asn Ser Ala Val Leu Gly Ala Ala Pro Leu Phe Val 20 25 30 Pro Pro Ala Asp Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 432 <211> 42 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (41)..(41) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (42)..(42) <223> Azidolysine <400> 432 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Asp Phe Thr Gly Ser 1 5 10 15 Asn Gly Asp Pro Ser Ser Pro Tyr Ser Leu His Tyr Leu Ser Pro Thr 20 25 30 Gly Val Asn Glu Tyr Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 433 <211> 40 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (39)..(39) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (40)..(40) <223> Azidolysine <400> 433 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Lys Ala Arg Asp Glu Thr Ala 1 5 10 15 Ala Leu Leu Asn Ser Ala Val Leu Gly Ala Ala Pro Leu Phe Val Pro 20 25 30 Pro Ala Asp Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 434 <211> 43 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (42)..(42) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (43)..(43) <223> Azidolysine <400> 434 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Val Thr Asn Thr 1 5 10 15 Glu Met Phe Val Thr Ala Pro Asp Asn Leu Gly Tyr Met Tyr Glu Val 20 25 30 Gln Trp Pro Gly Gln Glu Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 435 <211> 43 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (29)..(29) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (42)..(42) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (43)..(43) <223> Azidolysine <400> 435 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Val Thr Asn Thr 1 5 10 15 Glu Met Phe Val Thr Ala Pro Asp Asn Leu Gly Tyr Xaa Tyr Glu Val 20 25 30 Gln Trp Pro Gly Gln Glu Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 436 <211> 44 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (43)..(43) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (44)..(44) <223> Azidolysine <400> 436 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Gly Ile Pro Val His 1 5 10 15 Leu Glu Leu Ala Ser Met Thr Asn Met Glu Leu Met Ser Ser Ile Val 20 25 30 His Gln Gln Val Phe Pro Thr Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 437 <211> 44 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (22)..(22) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (43)..(43) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (44)..(44) <223> Azidolysine <400> 437 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Gly Ile Pro Val His 1 5 10 15 Leu Glu Leu Ala Ser Xaa Thr Asn Xaa Glu Leu Xaa Ser Ser Ile Val 20 25 30 His Gln Gln Val Phe Pro Thr Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 438 <211> 44 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (22)..(22) <223> Norvaline <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> Norvaline <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> Norvaline <220> <221> misc_feature <222> (43)..(43) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (44)..(44) <223> Azidolysine <400> 438 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Gly Ile Pro Val His 1 5 10 15 Leu Glu Leu Ala Ser Xaa Thr Asn Xaa Glu Leu Xaa Ser Ser Ile Val 20 25 30 His Gln Gln Val Phe Pro Thr Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 439 <211> 44 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (43)..(43) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (44)..(44) <223> Azidolysine <400> 439 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Gly Ile Pro Val His 1 5 10 15 Leu Glu Leu Ala Ser Leu Thr Asn Leu Glu Leu Leu Ser Ser Ile Val 20 25 30 His Gln Gln Val Phe Pro Thr Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 440 <211> 33 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (32)..(32) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (33)..(33) <223> Azidolysine <400> 440 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Val Ile Thr Gly Ile Lys Ala 1 5 10 15 Val Tyr Asn Phe Ala Thr Cys Gly Ile Phe Ala Leu Ser Pro Val Xaa 20 25 30 Xaa <210> 441 <211> 33 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> alpha Aminobutyrric acid <220> <221> misc_feature <222> (32)..(32) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (33)..(33) <223> Azidolysine <400> 441 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Val Ile Thr Gly Ile Lys Ala 1 5 10 15 Val Tyr Asn Phe Ala Thr Xaa Gly Ile Phe Ala Leu Ser Pro Val Xaa 20 25 30 Xaa <210> 442 <211> 33 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (32)..(32) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (33)..(33) <223> Azidolysine <400> 442 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Val Ile Thr Gly Ile Lys Ala 1 5 10 15 Val Tyr Asn Phe Ala Thr Ser Gly Ile Phe Ala Leu Ser Pro Val Xaa 20 25 30 Xaa <210> 443 <211> 40 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (39)..(39) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (40)..(40) <223> Azidolysine <400> 443 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Arg Glu Gly Val Glu Leu Cys Pro 1 5 10 15 Gly Asn Lys Tyr Glu Met Arg Arg His Gly Thr Thr His Ser Leu Val 20 25 30 Ile His Asp Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 444 <211> 40 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (39)..(39) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (40)..(40) <223> Azidolysine <400> 444 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Arg Glu Gly Val Glu Leu Xaa Pro 1 5 10 15 Gly Asn Lys Tyr Glu Met Arg Arg His Gly Thr Thr His Ser Leu Val 20 25 30 Ile His Asp Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 445 <211> 34 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (33)..(33) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (34)..(34) <223> Azidolysine <400> 445 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg 1 5 10 15 Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Pro Val 20 25 30 Xaa Xaa <210> 446 <211> 34 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (33)..(33) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (34)..(34) <223> Azidolysine <400> 446 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg 1 5 10 15 Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Xaa Xaa Lys Xaa Asp Ser Pro Val 20 25 30 Xaa Xaa <210> 447 <211> 26 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (26)..(26) <223> Azidolysine <400> 447 Xaa Glu Val Gly Trp Tyr Arg Ser Pro Phe Ser Arg Val Val His Leu 1 5 10 15 Tyr Arg Asn Gly Lys Ser Pro Val Xaa Xaa 20 25 <210> 448 <211> 30 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (29)..(29) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (30)..(30) <223> Azidolysine <400> 448 Arg Leu Glu Arg Val Asx His Asx Leu Gly Lys Trp Leu Gly His Pro 1 5 10 15 Asp Lys Phe Val Gly Ile Thr Tyr Ala Ser Pro Val Xaa Xaa 20 25 30 <210> 449 <211> 31 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (31)..(31) <223> Azidolysine <400> 449 Lys Lys Val Arg Lys Ala Arg Asp Glu Thr Ala Ala Leu Leu Asn Ser 1 5 10 15 Ala Val Leu Gly Ala Ala Pro Leu Phe Val Pro Pro Ala Asp Xaa 20 25 30 <210> 450 <211> 31 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (30)..(30) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (31)..(31) <223> Azidolysine <400> 450 Lys Lys Lys Val Arg Xaa Glu Val Gly Trp Tyr Arg Ser Pro Phe Ser 1 5 10 15 Arg Val Val His Leu Tyr Arg Asn Gly Lys Ser Pro Val Xaa Xaa 20 25 30 <210> 451 <211> 36 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (35)..(35) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (36)..(36) <223> Azidolysine <400> 451 Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Leu Glu Arg Val Asx His Asx Leu Gly 1 5 10 15 Lys Trp Leu Gly His Pro Asp Lys Phe Val Gly Ile Thr Tyr Ala Ser 20 25 30 Pro Val Xaa Xaa 35 <210> 452 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (29)..(29) <223> Azidolysine <400> 452 Ser Leu Lys Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His Ala Glu Ile Asn 1 5 10 15 Glu Ala Gly Arg Glu Val Val Gly Ser Pro Val Xaa Xaa 20 25 <210> 453 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (34)..(34) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (35)..(35) <223> Azidolysine <400> 453 Lys Lys Lys Val Arg Glu Ser Leu Lys Ile Ser Gln Ala Val His Ala 1 5 10 15 Ala His Ala Glu Ile Asn Glu Ala Gly Arg Glu Val Val Gly Ser Pro 20 25 30 Val Xaa Xaa 35 <210> 454 <211> 40 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (39)..(39) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (40)..(40) <223> Azidolysine <400> 454 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Glu Ser Leu Lys Ile Ser 1 5 10 15 Gln Ala Val His Ala Ala His Ala Glu Ile Asn Glu Ala Gly Arg Glu 20 25 30 Val Val Gly Ser Pro Val Xaa Xaa 35 40 <210> 455 <211> 33 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (33)..(33) <223> Azidolysine <400> 455 Lys Lys Lys Lys Val Arg Lys Ala Arg Asp Glu Thr Ala Ala Leu Leu 1 5 10 15 Asn Ser Ala Val Leu Gly Ala Ala Pro Leu Phe Val Pro Pro Ala Asp 20 25 30 Xaa <210> 456 <211> 34 <212> PRT <213> synthetic <400> 456 Ile Ala Ala Leu Lys Ser Lys Ile Ala Ala Leu Lys Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp 20 25 30 Ile Ala <210> 457 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 457 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Glu Ile Ala Ala Leu Glu Ser Glu 1 5 10 <210> 458 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (17)..(17) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Azidolysine <400> 458 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Ser Pro Val 1 5 10 15 Xaa Xaa <210> 459 <211> 33 <212> PRT <213> synthetic <400> 459 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Thr 1 5 10 15 Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile 20 25 30 Ala <210> 460 <211> 34 <212> PRT <213> synthetic <400> 460 Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp 20 25 30 Ile Ala <210> 461 <211> 34 <212> PRT <213> synthetic <400> 461 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp 20 25 30 Ile Ala <210> 462 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic <400> 462 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Thr Glu 1 5 10 15 Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala 20 25 30 <210> 463 <211> 34 <212> PRT <213> synthetic <400> 463 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp 20 25 30 Ile Ala <210> 464 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 464 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys 1 5 10 <210> 465 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <400> 465 Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp 1 5 10 15 Ile Ala <210> 466 <211> 34 <212> PRT <213> synthetic <400> 466 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ala Pro 1 5 10 15 Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp 20 25 30 Ile Ala <210> 467 <211> 38 <212> PRT <213> synthetic <400> 467 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ala Pro 1 5 10 15 Ala Pro Ala Pro Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln 20 25 30 Phe Gly Arg Asp Ile Ala 35 <210> 468 <211> 34 <212> PRT <213> synthetic <400> 468 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp 20 25 30 Ile Ala <210> 469 <211> 48 <212> PRT <213> synthetic <400> 469 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala 1 5 10 15 Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly Thr Glu 20 25 30 Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala 35 40 45 <210> 470 <211> 34 <212> PRT <213> synthetic <400> 470 Lys Ser Glu Leu Ala Ala Ile Lys Ser Glu Leu Ala Ala Ile Gly Gly 1 5 10 15 Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp 20 25 30 Ile Ala <210> 471 <211> 30 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (30)..(30) <223> Azidolysine <400> 471 Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg Ile Thr Pro Pro Arg Gly Gly Glu 1 5 10 15 Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Xaa 20 25 30 <210> 472 <211> 30 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (30)..(30) <223> Azidolysine <400> 472 Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg Ile Thr Pro Pro Arg Gly Gly Ile 1 5 10 15 Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Xaa 20 25 30 <210> 473 <211> 28 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (28)..(28) <223> Azidolysine <400> 473 Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg Ile Thr Pro Pro Arg Glu Ser Lys 1 5 10 15 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Xaa 20 25 <210> 474 <211> 30 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (30)..(30) <223> Azidolysine <400> 474 Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg Ile Thr Pro Pro Arg Gly Gly Lys 1 5 10 15 Ser Glu Leu Ala Ala Ile Lys Ser Glu Leu Ala Ala Ile Xaa 20 25 30 <210> 475 <211> 29 <212> PRT <213> synthetic <400> 475 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Pro Gly Phe Leu Val Lys Met Ser Gly Asp Leu Leu Glu 20 25 <210> 476 <211> 37 <212> PRT <213> synthetic <400> 476 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Gln Asp Asn Ser Ser Phe Asp Ser Leu Ser Pro Glu Pro Lys Ser Arg 20 25 30 Phe Ala Met Leu Asp 35 <210> 477 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 477 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gln Asp 1 5 10 15 Asn Ser Ser Phe Asp Ser Leu Ser Pro Glu Pro Lys Ser Arg Phe Ala 20 25 30 Met Leu Asp 35 <210> 478 <211> 36 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (36)..(36) <223> Azidolysine <400> 478 Gln Asp Asn Ser Ser Phe Asp Ser Leu Ser Pro Glu Pro Lys Ser Arg 1 5 10 15 Phe Ala Met Leu Asp Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile 20 25 30 Ala Ala Leu Xaa 35 <210> 479 <211> 26 <212> PRT <213> synthetic <400> 479 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Glu Pro Lys Ser Arg Phe Ala Met Leu Asp 20 25 <210> 480 <211> 33 <212> PRT <213> synthetic <400> 480 Arg Phe Ala Met Leu Asp Asp Val Lys Ile Leu Ala Asn Gly Leu Leu 1 5 10 15 Gln Leu Gly His Gly Leu Lys Asp Phe Val His Lys Thr Lys Gly Gln 20 25 30 Ile <210> 481 <211> 49 <212> PRT <213> synthetic <400> 481 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Arg Phe Ala Met Leu Asp Asp Val Lys Ile Leu Ala Asn Gly Leu Leu 20 25 30 Gln Leu Gly His Gly Leu Lys Asp Phe Val His Lys Thr Lys Gly Gln 35 40 45 Ile <210> 482 <211> 49 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (32)..(32) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (49)..(49) <223> Azidolysine <400> 482 Gly Arg Val Leu Glu Leu Phe Arg Ala Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu Gln Ile Met Glu Leu Cys Gly Ala Thr Arg Ser Pro Val Xaa 20 25 30 Gly Gly Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu 35 40 45 Xaa <210> 483 <211> 49 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (32)..(32) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (49)..(49) <223> Azidolysine <400> 483 Gly Ile Pro Val His Leu Glu Leu Ala Ser Met Thr Asn Met Glu Leu 1 5 10 15 Met Ser Ser Ile Val His Gln Gln Val Phe Pro Thr Ser Pro Val Xaa 20 25 30 Gly Gly Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu 35 40 45 Xaa <210> 484 <211> 41 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (16)..(17) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> alpha Aminobutyric acid <220> <221> misc_feature <222> (24)..(24) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (41)..(41) <223> Azidolysine <400> 484 Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Asx 1 5 10 15 Asx Lys Asx Asp Ser Pro Val Xaa Gly Gly Glu Ser Lys Ile Ala Ala 20 25 30 Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Xaa 35 40 <210> 485 <211> 47 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (30)..(30) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (47)..(47) <223> Azidolysine <400> 485 Lys Ala Arg Asp Glu Thr Ala Ala Leu Leu Asn Ser Ala Val Leu Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Phe Val Pro Pro Ala Asp Ser Pro Val Xaa Gly Gly 20 25 30 Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Xaa 35 40 45 <210> 486 <211> 41 <212> PRT <213> synthetic <400> 486 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn 20 25 30 Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe 35 40 <210> 487 <211> 36 <212> PRT <213> synthetic <400> 487 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu 20 25 30 Pro Pro Leu Leu 35 <210> 488 <211> 35 <212> PRT <213> synthetic <400> 488 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser 20 25 30 Pro Thr Lys 35 <210> 489 <211> 28 <212> PRT <213> synthetic <400> 489 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys 20 25 <210> 490 <211> 38 <212> PRT <213> synthetic <400> 490 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Leu Val Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn Ser Ala 20 25 30 Ile Gly Lys Ile Gln Asp 35 <210> 491 <211> 39 <212> PRT <213> synthetic <400> 491 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Phe Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala 20 25 30 Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln 35 <210> 492 <211> 40 <212> PRT <213> synthetic <400> 492 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Pro Ala Asp Gly Asn Pro Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Val Asp Pro 20 25 30 Asn Ala Asn Pro Asn Val Asp Pro 35 40 <210> 493 <211> 36 <212> PRT <213> synthetic <400> 493 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro 20 25 30 Asn Ala Asn Pro 35 <210> 494 <211> 40 <212> PRT <213> synthetic <400> 494 Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Ile Ala Ala Leu Glu Ser Lys Gly Gly 1 5 10 15 Asn Ala Asn Pro Asn Val Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Val Asp Pro 20 25 30 Asn Ala Asn Pro Asn Val Asp Pro 35 40 <210> 495 <211> 13 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Azidolysine <400> 495 Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Ser Val Xaa Xaa 1 5 10 <210> 496 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 496 Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Ser 1 5 10 <210> 497 <211> 12 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Citrulline <400> 497 Val Xaa Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Ser 1 5 10 <210> 498 <211> 16 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> p Amino phenylalanine <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Citrulline <400> 498 Xaa Xaa Xaa Xaa Val Xaa Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Ser 1 5 10 15 <210> 499 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> p Amino phenylalanine <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Citrulline <400> 499 Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Pro Val Xaa Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr 1 5 10 15 Phe Ser <210> 500 <211> 12 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Citrulline <400> 500 Val Xaa Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Ser 1 5 10 <210> 501 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 501 Lys Lys Lys Lys Lys Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 <210> 502 <211> 9 <212> PRT <213> synthetic <400> 502 Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 <210> 503 <211> 12 <212> PRT <213> synthetic <400> 503 Lys Val Arg Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 <210> 504 <211> 16 <212> PRT <213> synthetic <400> 504 Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 15 <210> 505 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> Citrulline <400> 505 Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 15 Ser Pro Val Xaa 20 <210> 506 <211> 22 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (22)..(22) <223> Citrulline <400> 506 Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 15 Gly Gly Ser Pro Val Xaa 20 <210> 507 <211> 17 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> b Alanine <400> 507 Lys Lys Lys Lys Lys Xaa Val Arg Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr 1 5 10 15 Phe <210> 508 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <400> 508 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Pro Val Arg Arg Ala His Tyr Asn Ile Val 1 5 10 15 Thr Phe <210> 509 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 509 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Pro Val Xaa Arg Ala His Tyr Asn Ile Val 1 5 10 15 Thr Phe <210> 510 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Citrulline <400> 510 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Pro Val Xaa Arg Ala His Tyr Asn Ile Val 1 5 10 15 Thr Phe <210> 511 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 511 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Lys Val Xaa Arg Ala His Tyr Asn Ile Val 1 5 10 15 Thr Phe <210> 512 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 512 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Lys Ser Xaa Arg Ala His Tyr Asn Ile Val 1 5 10 15 Thr Phe <210> 513 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <400> 513 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Lys Val Arg Arg Ala His Tyr Asn Ile Val 1 5 10 15 Thr Phe <210> 514 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <400> 514 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Lys Ser Arg Arg Ala His Tyr Asn Ile Val 1 5 10 15 Thr Phe <210> 515 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <400> 515 Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys 1 5 10 15 Cys Lys Cys Asp 20 <210> 516 <211> 12 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> p Amino phenylalanine <400> 516 Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val Leu Val Xaa Xaa 1 5 10 <210> 517 <211> 9 <212> PRT <213> synthetic <400> 517 Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val Leu 1 5 <210> 518 <211> 11 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Citrulline <400> 518 Val Xaa Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val Leu 1 5 10 <210> 519 <211> 16 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Citrulline <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> p Amino phenylalanine <400> 519 Phe Phe Phe Phe Val Glx Xaa Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val Leu 1 5 10 15 <210> 520 <211> 17 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> p Amino phenylalanine <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Citrulline <400> 520 Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Pro Val Xaa Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val 1 5 10 15 Leu <210> 521 <211> 11 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Citrulline <400> 521 Val Xaa Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val Leu 1 5 10 <210> 522 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (21)..(21) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (24)..(24) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 522 Gly Arg Val Leu Glu Leu Phe Arg Ala Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu Gln Ile Xaa Glu Leu Asx Gly Ala Thr Arg Ser Pro Val Arg 20 25 30 <210> 523 <211> 36 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (21)..(21) <223> Norleucine <220> <221> misc_feature <222> (24)..(24) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 523 Gly Arg Val Leu Glu Leu Phe Arg Ala Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu Gln Ile Xaa Glu Leu Asx Gly Ala Thr Arg Lys Lys Lys Lys 20 25 30 Lys Lys Lys Lys 35 <210> 524 <211> 40 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (21)..(21) <223> b Alanine <220> <221> misc_feature <222> (24)..(24) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 524 Gly Arg Val Leu Glu Leu Phe Arg Ala Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu Gln Ile Xaa Glu Leu Asx Gly Ala Thr Arg Ser Pro Val Arg 20 25 30 Xaa Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 35 40 <210> 525 <211> 14 <212> PRT <213> synthetic <400> 525 Lys Lys Lys Lys Lys Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val Leu 1 5 10 <210> 526 <211> 10 <212> PRT <213> synthetic <400> 526 Arg Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val Leu 1 5 10 <210> 527 <211> 12 <212> PRT <213> synthetic <400> 527 Lys Val Arg Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val Leu 1 5 10 <210> 528 <211> 16 <212> PRT <213> synthetic <400> 528 Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val Leu 1 5 10 15 <210> 529 <211> 20 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> Citrulline <400> 529 Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val Leu 1 5 10 15 Ser Pro Val Xaa 20 <210> 530 <211> 22 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (22)..(22) <223> Citrulline <400> 530 Lys Lys Lys Lys Lys Val Arg Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val Leu 1 5 10 15 Gly Gly Ser Pro Val Xaa 20 <210> 531 <211> 17 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> b Alanine <400> 531 Lys Lys Lys Lys Lys Xaa Val Arg Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val 1 5 10 15 Leu <210> 532 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <400> 532 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Pro Val Arg Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu <210> 533 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 533 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Pro Val Xaa Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu <210> 534 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Citrulline <400> 534 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Pro Val Xaa Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu <210> 535 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 535 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Lys Val Xaa Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu <210> 536 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> alpha Aminobutyric acid <400> 536 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Lys Ser Xaa Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu <210> 537 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <400> 537 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Lys Val Arg Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu <210> 538 <211> 18 <212> PRT <213> synthetic <400> 538 Lys Lys Lys Lys Lys Ser Lys Ser Arg Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu <210> 539 <211> 28 <212> PRT <213> synthetic <400> 539 Gly Arg Val Leu Glu Leu Phe Arg Ala Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val 1 5 10 15 Val Leu Gln Ile Met Glu Leu Cys Gly Ala Thr Arg 20 25 <210> 540 <211> 5 <212> PRT <213> synthetic <400> 540 Val Thr Ser Ala Pro 1 5

Claims (268)

  1. 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체; 및
    [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체
    를 포함하는 백신으로서,
    여기서 S는 각 경우에 독립적으로 가용화 블록이고;
    B는 스페이서이고;
    H는 각 경우에 독립적으로 소수성 블록이고,
    여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
    A는 각 경우에 독립적으로 펩티드 항원이고;
    E1은 각 경우에 독립적으로 N-말단 연장부이고;
    E2는 각 경우에 독립적으로 C-말단 연장부이고;
    U는 각 경우에 독립적으로 링커이고;
    [ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
    -는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
    여기서 친양쪽성체 및/또는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 덴드론 증폭제를 포함하는 것인 백신.
  2. 제1항에 있어서, 친양쪽성체의 S가 덴드론 증폭제를 포함하는 것인 백신.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 친양쪽성체의 S가 2개 이상의 가용화 기 (SG)를 포함하는 것인 백신.
  4. 제3항에 있어서, 2개 이상의 SG가 덴드론 증폭제에 의해 S의 나머지 부분에 연결된 것인 백신.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 4 내지 8개의 SG가 S에 연결된 것인 백신.
  6. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, SG가 아민, 히드록실, 카르복실산 및/또는 당 분자로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 당 분자는 만노스, 글루코스, 글루코사민, N-아세틸 글루코스, 갈락토스, 갈락토사민, 및 N-아세틸 갈락토사민, 포스포세린 및 그의 임의의 유도체, CD22a의 효능제, 시알릴 루이스 x, 및 그의 조합으로부터 독립적으로 선택된 것인 백신.
  7. 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 덴드론 증폭제가 세대당 2 내지 6개의 분지를 갖는 1 내지 10 세대의 반복 단량체 단위를 포함하는 것인 백신.
  8. 제7항에 있어서, 덴드론 증폭제가 세대당 2 내지 3개의 분지를 갖는 2 내지 3 세대의 반복 단량체 단위를 포함하는 것인 백신.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 반복 단량체 단위가 FG1-(CH2)y2CH(R1)2, FG1-(CH2)y2C(R1)3, FG1-(CH2CH2O)y2CH(R1)2, FG1-(CH2CH2O)y2C(R1)3, 및 FG1-CH(R1)2, FG1-C(R1)3으로부터 선택되고,
    여기서
    R1은 각 경우에 독립적으로 (CH2)y3-FG2, (OCH2CH2)y3-FG2, 및 CH2(OCH2CH2)y3-FG2)로부터 선택되고;
    y2 및 y3은 각 경우에 독립적으로 1 내지 6의 정수의 반복 단위이고;
    FG1은 제1 관능기이고;
    FG2는 제2 관능기인 백신.
  10. 제9항에 있어서, FG1이 -NH2이고; FG2가 -CO2H이거나, 또는 FG1이 -CO2H이고; FG2가 -NH2인 백신.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, 단량체가 히드록시산, 아미노산, 폴리올, 폴리아민, 및 아미노 알콜로부터 선택된 것인 백신.
  12. 제11항에 있어서, 단량체가 3-히드록시프로판산 및 세리놀을 포함하는 것인 백신.
  13. 제4항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 덴드론 증폭제가 폴리에틸렌 옥시드 (PEG) 기를 포함하는 것인 백신.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체의 H가 고급 알칸, 방향족 기, 지방산, 스테롤, 다중불포화 탄화수소, 스쿠알렌, 사포닌, 또는 중합체를 포함하는 것인 백신.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드 항원 접합체의 H가 고급 알칸, 방향족 기, 지방산, 스테롤, 다중불포화 탄화수소, 또는 중합체를 포함하는 것인 백신.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 각각의 H가 독립적으로 소수성 아미노산 (M), 반응성 아미노산 (N), 스페이서 아미노산 (O), 하전된 아미노산 (P) 및 그의 조합으로부터 선택된 단량체를 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하며, 단 M 또는 N 중 적어도 1개는 존재하는 것인 백신.
  17. 제16항에 있어서, 각각의 H가 독립적으로 화학식:

    을 갖는 폴리(아미노산)를 포함하며,
    여기서 M, N, O 및 P는 각각 독립적으로 존재하거나 부재하며, 단 M 또는 N 중 적어도 1개는 존재하고;
    m, n, o 및 p는 각각 독립적으로 1 내지 100의 정수를 나타내고, m, n, o 및 p의 합계는 100 이하이고;
    R3은 수소, NH2, NH-CH3, NH-(CH2)y5CH3, OH, 또는 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 연결된 약물 분자 (D)로부터 선택되고;
    y5는 1 내지 6으로부터 선택된 정수인 백신.
  18. 제17항에 있어서, P가 부재하는 것인 백신.
  19. 제17항에 있어서, N, O 및 P가 각각 부재하는 것인 백신.
  20. 제17항에 있어서, P가 존재하는 경우에 이며, 여기서 각각의 R5는 독립적으로 1 내지 2개의 하전된 관능기를 포함하는 기인 백신.
  21. 제17항, 제18항 및 제20항 중 어느 한 항에 있어서, O가 존재하는 경우에 이며, 여기서 각각의 Q는 독립적으로 (CH2)y6 및 (CH2CH2O)y7CH2CH2로부터 선택되고; 각각의 y6은 독립적으로 1 내지 6의 정수로부터 선택되고; 각각의 y7은 독립적으로 1 내지 4의 정수로부터 선택된 것인 백신.
  22. 제17항, 제18항, 제20항 및 제21항 중 어느 한 항에 있어서, N이 존재하는 경우에 이고, 여기서 각각의 X1은 독립적으로 적합한 링커이고; 각각의 D는 독립적으로 약물 분자인 백신.
  23. 제17항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, M이 존재하는 경우에 이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 소수성 기인 백신.
  24. 제23항에 있어서, R4가

    이며, 여기서
    α는 아릴 또는 헤테로아릴이고;
    X2는 존재하거나 부재하고, 존재하는 경우에 적합한 링커이고;
    y8은 0 내지 6의 정수로부터 선택되고;
    Z1, Z2, 및 Z3은 각각 독립적으로 수소, 플루오린, 히드록시, 아미노, 알킬, 및 플루오로알킬로부터 선택된 것인 백신.
  25. 제24항에 있어서, α가 아릴인 백신.
  26. 제24항에 있어서, α가 헤테로아릴인 백신.
  27. 제25항 또는 제26항에 있어서, A가 이미다졸릴, 페닐, 피리디닐, 나프틸, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌릴 및 벤즈이미다졸릴로부터 선택된 것인 백신.
  28. 제24항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, X2가 부재하는 것인 백신.
  29. 제24항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, X2가 존재하고, C(O), CO2(CH2)y9, CO2, C(O)NH(CH2)y9, NHC(O) 및 NHC(O)(CH2)y9로부터 선택되며, 여기서 y9는 1 내지 6으로부터 선택된 정수인 백신.
  30. 제24항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, X2가 존재하고, 알킬 및 PEG 기로부터 선택된 것인 백신.
  31. 제24항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, X1이 존재하고, 효소 절단가능한 링커, pH 감수성 링커, 자기 희생적 링커, 저급 알킬 및 PEG 기로부터 선택된 것인 백신.
  32. 제23항에 있어서, 각각의 R4가 독립적으로

    로부터 선택되며, 여기서 각각의 X2는 독립적으로 적합한 링커로부터 선택되고, 각각의 y8은 독립적으로 0 및 6의 정수로부터 선택된 것인 백신.
  33. 제23항에 있어서, 각각의 R4가 독립적으로

    로부터 선택되며, 여기서 각각의 y8은 독립적으로 0 및 6의 정수로부터 선택된 것인 백신.
  34. 제23항에 있어서, 각각의 R4가 독립적으로

    로부터 선택된 것인 백신.
  35. 제23항에 있어서, 각각의 R4가 독립적으로



    로부터 선택된 것인 백신.
  36. 제23항에 있어서, 각각의 R4가 독립적으로

    로부터 선택된 것인 백신.
  37. 제23항에 있어서, 각각의 R4가

    로부터 선택된 것인 백신.
  38. 제22항에 있어서, 적어도 1개의 D가

    이며, 여기서
    R20은 수소, 알킬, 알콕시알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아미노알킬, 아미드 및 에스테르로부터 선택되고;
    X3은 알킬, 알콕시알킬, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 카르복시로부터 선택된 것인 백신.
  39. 제38항에 있어서, R20이 수소, 알킬 및 알콕시알킬로부터 선택되고; X3이 알킬 및 아르알킬로부터 선택된 것인 백신.
  40. 제38항에 있어서, R20이 부틸인 백신.
  41. 제38항에 있어서, X3이 알킬인 백신.
  42. 제17항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, m, n, o 및 p가 각각 독립적으로 1 내지 30의 정수를 나타내고, m, n, o 및 p의 합계가 30 이하인 백신.
  43. 제17항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, m, n, o 및 p가 각각 독립적으로 1 내지 10의 정수를 나타내고, m, n, o 및 p의 합계가 10 이하인 백신.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, B가 존재하는 경우에 친수성 중합체 또는 펩티드인 백신.
  45. 제44항에 있어서, B가 PEG 기인 백신.
  46. 제45항에 있어서, PEG 기가 4 내지 36개의 단량체 단위를 포함하는 것인 백신.
  47. 제45항에 있어서, PEG 기가 4 내지 12개의 단량체 단위를 포함하는 것인 백신.
  48. 제44항에 있어서, B가 친수성 펩티드인 백신.
  49. 제48항에 있어서, 친수성 펩티드가 4 내지 36개의 아미노산을 포함하는 것인 백신.
  50. 제48항에 있어서, 친수성 펩티드가 4 내지 12개의 아미노산을 포함하는 것인 백신.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체의 U가 존재하는 경우에 아미드, 티오에테르 또는 트리아졸을 포함하는 것인 백신.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드 항원 접합체의 U가 존재하는 경우에 아미드, 티오에테르 또는 트리아졸을 포함하는 것인 백신.
  53. 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체가 화학식 S-H를 갖는 것인 백신.
  54. 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체가 화학식 S-B-U-H를 갖는 것인 백신.
  55. 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체가 화학식 S-B-U-H-D를 갖는 것인 백신.
  56. 제1항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 펩티드 항원 (A)이 1개 이상의 시스테인 잔기가 알파 아미노-부티르산으로 대체되고/거나 1개 이상의 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체된 서열을 포함하는 것인 백신.
  57. 제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 약 4:1 내지 약 1:20의 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체 몰비를 포함하는 백신.
  58. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 암 백신, 감염성 질환 백신, 관용 유도 알레르기 백신, 관용 유도 자가면역 질환 백신, 관용 유도 이식 거부 백신, 심혈관 백신 또는 신경변성 질환 백신인 백신.
  59. 암, 자가면역 질환, 알레르기, 감염성 질환, 심혈관 질환 또는 신경변성 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항의 백신을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암, 자가면역 질환, 알레르기, 감염성 질환, 심혈관 질환 또는 신경변성 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  60. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체가 최소 면역원으로부터 선택된 A를 포함하는 것인 백신.
  61. 제60항에 있어서, A가 RGYLTKILHVFHGLLPGFLVKMSGDLLE, PGFLVKMSGDLLE, PGFLVKnSGDLLE (여기서, n = 노르류신); PGFLVKMSSDLLG, PGFLVKnSSDLLG (여기서, n은 노르류신); SIPWNLERITPPR; SIPWNLERITPPR; SIPWNLE; SIPWNLEKVTPPR; SIPWNLDRVTPPR; NVPEEDGTRFHRQASKC; NVPEEDGTRFHRQASK; PEEDGTR; NVPEEDG; NVPEEDATRFHRQGSK; LFAPGEDIIGASSDCSTCFVSQSGTSQAAA;CSTCFVSQSGTSQAAA; STCFVSQSGTSQAAA, STBFVSQSGTSQAAA; STBFVSQ; MFTIKLLLFIVPLVISSRIDQDNSSFDSLSPEPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGLKDFVHKTKGQIND; EPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGLKDFVHKTKGQIND; EPKSRFAMLDDVKI; MLDDVKILANGLLQ; LANGLLQLGHGLKD; LGHGLKDFVHKTKG; LKDFVHKTKGQIND; RFAMLDDVKILANGLLQLGH; GLLQLGHGLKDFVHKTKGQI; 및 IFQKLNIFDQSFYDLSLQTSEIKEEEKELRRTTYKLQVKNEEVKNMSLELNSKLESLLEEKILLQQKVK로부터 선택된 펩티드 항원인 백신.
  62. 제60항 또는 제61항에 있어서, A가 공유 결합에 의해 직접적으로 또는 U를 통해 간접적으로 H에 부착된 E1에 공유 결합에 의해 직접적으로 부착된 것인 백신.
  63. 제60항 또는 제61항에 있어서, A가 공유 결합에 의해 직접적으로 또는 U를 통해 간접적으로 H에 부착된 E2에 공유 결합에 의해 직접적으로 부착된 것인 백신.
  64. 제62항 또는 제63항에 있어서, E1 및 E2가 각각 4 내지 36개의 단량체 단위의 PEG 기를 포함하는 것인 백신.
  65. 제64항에 있어서, PEG 기가 4 내지 24개의 단량체 단위를 포함하는 것인 백신.
  66. 제62항 또는 제63항에 있어서, E1 및 E2가 각각 펩티드를 포함하는 것인 백신.
  67. 제66항에 있어서, 펩티드가 4 내지 24개의 아미노산을 포함하는 것인 백신.
  68. 제67항에 있어서, 펩티드가 글리신, 세린, 트레오닌, 알라닌 및 프롤린으로부터 선택된 아미노산을 포함하는 것인 백신.
  69. 제68항에 있어서, 펩티드가 (Gly-Ser)2-12, (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)1-4, 및 (Ala-Pro)2-12로부터 선택된 것인 백신.
  70. 제66항에 있어서, 펩티드가 7 내지 28개의 아미노산을 포함하는 것인 백신.
  71. 제70항에 있어서, 펩티드가 화학식 (AAH-AAP-AAP-AAH-AAP-AAP-AAP)1-4의 헵타드 반복부를 포함하며, 여기서 AAH는 이소류신, 류신, 발린 및 노르류신으로부터 선택된 코일 도메인에 적합한 소수성 아미노산이고; AAP는 알라닌, 세린, 리신, 아스파르트산 및 글루탐산으로부터 선택된 코일 도메인에 적합한 친수성 아미노산인 백신.
  72. 제71항에 있어서, 펩티드가 (Ile-Ala-Ala-Ile-Glu-Ser-Lys)1-4, (Ile-Ala-Ala-Ile-Lys-Ser-Lys)1-4, 및 (Ile-Ala-Ala-Ile-Glu-Ser-Glu)1-4로부터 선택된 것인 백신.
  73. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체가 자가항원, 동종항원, 및 알레르겐으로부터 선택된 A를 포함하는 것인 백신.
  74. 제73항에 있어서, 친양쪽성체의 S가 카르복실산, 포스포세린 및 당 분자로부터 독립적으로 선택된 2개 이상의 가용화 기 (SG)를 포함하며, 여기서 당 분자는 만노스, 글루코스, 글루코사민, N-아세틸 글루코스, 갈락토스, 갈락토사민, N-아세틸 갈락토사민, 및 CD22a의 효능제로부터 독립적으로 선택된 것인 백신.
  75. 제73항 또는 제74항에 있어서, mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제 및 AHR, RAR 및 A2a의 효능제로부터 선택된 적어도 1개의 D를 포함하는 백신.
  76. 제75항에 있어서, 적어도 1개의 D가 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택된 것인 백신.
  77. 제75항 또는 제76항에 있어서, mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제, AHR, RAR 및 A2a의 효능제, 및 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 면역자극제로부터 독립적으로 선택된 제2 약물 분자 (D2)를 추가로 포함하며, 단 D 및 D2는 상이한 수용체에 결합하는 것인 백신.
  78. 제77항에 있어서, 적어도 1개의 D가 mTOR의 억제제 및 AHR의 효능제로부터 선택되고, D2가 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 것인 백신.
  79. 제78항에 있어서, 적어도 1개의 D가 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택되고, D2가 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 것인 백신.
  80. 제77항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, D2가 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8, TLR-9 및 STING의 효능제로부터 선택된 것인 백신.
  81. 제80항에 있어서, D2가 TLR-7, TLR-8 및 TLR-7/8의 RNA 및 이미다조퀴놀린 효능제로부터 선택된 것인 백신.
  82. 제77항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제, AHR, RAR 및 A2a의 효능제, 및 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 면역자극제로부터 독립적으로 선택된 제3 약물 분자 (D3)를 추가로 포함하며, 단 D, D2 및 D3은 상이한 수용체에 결합하는 것인 백신.
  83. 제75항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 D가 AZD-8055, AZD-2016, KU-0063794, CC223, 토린-1, 토린-2, INK-128, WYE354, WYE132, OSI-027, OXA-01, PI-103, NVP-BEZ235, GNE-493, GSK2126458, 라파마이신, 타크롤리무스, 에베롤리무스, RAD001, CCI-779 및 AP23573으로부터 선택된 것인 백신.
  84. 제75항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 총 펩티드 항원 접합체 대 적어도 1개의 D의 몰비가 약 20:1 내지 1:2, 또는 약 10:1 내지 약 1:1 또는 약 4:1 내지 약 2:1인 백신.
  85. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체가 종양 항원으로부터 선택된 A를 포함하는 것인 백신.
  86. 제85항에 있어서, 친양쪽성체의 S가 아민, 카르복실산 또는 당 분자로부터 독립적으로 선택된 2개 이상의 가용화 기 (SG)를 포함하며, 여기서 당 분자는 만노스, 시알릴 루이스 x, 시알릴 루이스 a, 루이스 y, 루이스 x, Tn, sTn, TF, sTF, 글로보 H, SSEA-3, GM2, GD2, GD3 및 푸코실 GM1 및 그의 조합으로부터 독립적으로 선택된 것인 백신.
  87. 제85항 또는 제86항에 있어서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 각각의 H가 독립적으로, 트립토판, 1-메틸 트립토판 및/또는 파라-아미노 페닐알라닌으로부터 선택된 소수성 아미노산 (M)의 단량체를 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하는 것인 백신.
  88. 제85항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 D가 존재하고 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8, TLR-9 및 STING의 효능제로부터 선택된 것인 백신.
  89. 제85항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 각각의 H가 반응성 아미노산 (N)의 단량체를 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하며, 여기서 단량체는 TLR-7/8의 효능제로부터 선택된 D를 포함하는 것인 백신.
  90. 제88항 또는 제89항에 있어서, mTOR의 억제제로부터 선택된 제2 약물 분자 (D2)를 추가로 포함하는 백신.
  91. 제90항에 있어서, D2가 라파마이신, 타크롤리무스, 에베롤리무스, RAD001, CCI-779 및 AP23573으로부터 선택된 것인 백신.
  92. 제91항에 있어서, 펩티드 항원 접합체 대 D2의 몰비가 약 20:1 내지 1:2, 또는 약 10:1 내지 약 1:1 또는 약 4:1 내지 약 2:1인 백신.
  93. 제85항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, A가 당펩티드인 백신.
  94. 제93항에 있어서, A가 HGVT*S*APDT*RPAPGS*T*APPA, DT*RPAPGS*T*APPAHGVT*S*AP, GS*T*APPAHGVT*S*APDT*RPAPGS*T*APPA, GVT*S*APDT*RPAP, APDT*RPAPGS*T*A, GS*T*APPAHGVT*S*AP, VT*S*AP, DT*RPAP 및 GS*T*AP로부터 선택되며, 여기서 *는 O-연결된 글리칸이고, 각 경우에 독립적으로 시알릴 루이스 x, 시알릴 루이스 a, 루이스 y, 루이스 x, Tn, sTn, TF, sTF로부터 선택된 것인 백신.
  95. 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체; 및
    [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체
    를 포함하는 관용을 유도하기 위한 백신으로서,
    여기서 S는 각 경우에 독립적으로 가용화 블록이고;
    B는 스페이서이고;
    H는 각 경우에 독립적으로 소수성 블록이고,
    여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
    A는 각 경우에 독립적으로 펩티드 항원이고;
    E1은 각 경우에 독립적으로 N-말단 연장부이고;
    E2는 각 경우에 독립적으로 C-말단 연장부이고;
    U는 각 경우에 독립적으로 링커이고;
    [ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
    -는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
    여기서 친양쪽성체 및/또는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 덴드론 증폭제를 포함하고,
    적어도 1개의 펩티드 항원은 자가항원, 동종항원 및 알레르겐으로부터 선택된 것인 백신.
  96. 제95항에 있어서, A가 자가항원 또는 동종항원으로부터 선택된 것인 백신.
  97. 제95항에 있어서, A가 알레르겐으로부터 선택된 것인 백신.
  98. 제95항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체의 S가 덴드론 증폭제를 포함하는 것인 백신.
  99. 제95항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체의 S가 2개 이상의 가용화 기 (SG)를 포함하는 것인 백신.
  100. 제99항에 있어서, 2개 이상의 SG가 덴드론 증폭제에 의해 S의 나머지 부분에 연결된 것인 백신.
  101. 제99항 또는 제100항에 있어서, 4 내지 8개의 SG가 S에 연결된 것인 백신.
  102. 제99항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, SG가 아민, 히드록실, 카르복실산 및/또는 당 분자로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 당 분자는 만노스, 글루코스, 글루코사민, N-아세틸 글루코스, 갈락토스, 갈락토사민, 및 N-아세틸 갈락토사민, 포스포세린 및 그의 임의의 유도체, CD22a의 효능제, 시알릴 루이스 x, 및 그의 조합으로부터 독립적으로 선택된 것인 백신.
  103. 제102항에 있어서, 적어도 1개의 SG가 N-아세틸 갈락토사민인 백신.
  104. 제102항에 있어서, 적어도 1개의 SG가 포스포세린인 백신.
  105. 제102항에 있어서, 적어도 1개의 SG가 CD22a의 효능제인 백신.
  106. 제100항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 덴드론 증폭제가 세대당 2 내지 6개의 분지를 갖는 1 내지 10 세대의 반복 단량체 단위를 포함하는 것인 백신.
  107. 제106항에 있어서, 덴드론 증폭제가 세대당 2 내지 3개의 분지를 갖는 2 내지 3 세대의 반복 단량체 단위를 포함하는 것인 백신.
  108. 제106항 또는 제107항에 있어서, 반복 단량체 단위가 FG1-(CH2)y2CH(R1)2, FG1-(CH2)y2C(R1)3, FG1-(CH2CH2O)y2CH(R1)2, FG1-(CH2CH2O)y2C(R1)3, 및 FG1-CH(R1)2, FG1-C(R1)3으로부터 선택되고,
    여기서
    R1은 각 경우에 독립적으로 (CH2)y3-FG2, (OCH2CH2)y3-FG2, 및 CH2(OCH2CH2)y3-FG2)로부터 선택되고;
    y2 및 y3은 각 경우에 독립적으로 1 내지 6의 정수의 반복 단위이고;
    FG1은 제1 관능기이고;
    FG2는 제2 관능기인 백신.
  109. 제108항에 있어서, FG1이 -NH2이고; FG2가 -CO2H이거나, 또는 FG1이 -CO2H이고; FG2가 -NH2인 백신.
  110. 제108항 또는 제109항에 있어서, 단량체가 히드록시산, 아미노산, 폴리올, 폴리아민 및 아미노 알콜을 포함하는 것인 백신.
  111. 제110항에 있어서, 단량체가 3-히드록시프로판산 및 세리놀을 포함하는 것인 백신.
  112. 제90항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 덴드론 증폭제가 폴리에틸렌 옥시드 (PEG) 기를 포함하는 것인 백신.
  113. 제95항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체의 H가 고급 알칸, 방향족 기, 지방산, 스테롤, 다중불포화 탄화수소, 스쿠알렌, 사포닌, 및/또는 중합체를 포함하는 것인 백신.
  114. 제95항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드 항원 접합체의 H가 고급 알칸, 방향족 기, 지방산, 스테롤, 다중불포화 탄화수소, 및/또는 중합체를 포함하는 것인 백신.
  115. 제113항 또는 제114항에 있어서, 각각의 H가 독립적으로 소수성 아미노산 (M), 반응성 아미노산 (N), 스페이서 아미노산 (O), 하전된 아미노산 (P) 및 그의 조합으로부터 선택된 단량체를 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하며, 단 M 또는 N 중 적어도 1개는 존재하는 것인 백신.
  116. 제115항에 있어서, 각각의 H가 독립적으로 화학식:

    을 갖는 폴리(아미노산)를 포함하며, 여기서 M, N, O 및 P는 각각 독립적으로 존재하거나 부재하며, 단 M 또는 N 중 적어도 1개는 존재하고;
    m, n, o 및 p는 각각 독립적으로 1 내지 100의 정수를 나타내고, m, n, o 및 p의 합계는 100 이하이고;
    R3은 수소, NH2, NH-CH3, NH-(CH2)y5CH3, OH, 또는 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 연결된 약물 분자 (D)로부터 선택되고;
    y5는 1 내지 6으로부터 선택된 정수인 백신.
  117. 제116항에 있어서, P가 부재하는 것인 백신.
  118. 제116항에 있어서, N, O 및 P가 각각 부재하는 것인 백신.
  119. 제116항에 있어서, P가 존재하는 경우에 이며, 여기서 각각의 R5는 독립적으로 1 내지 2개의 하전된 관능기를 포함하는 기인 백신.
  120. 제116항, 제117항 및 제119항 중 어느 한 항에 있어서, O가 존재하는 경우에 이며, 여기서 각각의 Q는 독립적으로 (CH2)y6 및 (CH2CH2O)y7CH2CH2로부터 선택되고; 각각의 y6은 독립적으로 1 내지 6의 정수로부터 선택되고; 각각의 y7은 독립적으로 1 내지 4의 정수로부터 선택된 것인 백신.
  121. 제116항, 제117항, 제119항 및 제120항 중 어느 한 항에 있어서, N이 존재하는 경우에 이고, 여기서 각각의 X1은 독립적으로 적합한 링커이고; 각각의 D는 독립적으로 약물 분자인 백신.
  122. 제116항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, M이 존재하는 경우에 이며, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 소수성 기인 백신.
  123. 제122항에 있어서, R4가

    이며, 여기서
    α는 아릴 또는 헤테로아릴이고;
    X는 존재하거나 부재하고, 존재하는 경우에 적합한 링커이고;
    Y8은 0 내지 6의 정수로부터 선택되고;
    Z1, Z2, 및 Z3은 각각 독립적으로 수소, 플루오린, 히드록시, 아미노, 알킬, 및 플루오로알킬로부터 선택된 것인 백신.
  124. 제123항에 있어서, α가 아릴인 백신.
  125. 제123항에 있어서, α가 헤테로아릴인 백신.
  126. 제124항 또는 제125항에 있어서, α가 이미다졸릴, 페닐, 피리디닐, 나프틸, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌릴 및 벤즈이미다졸릴로부터 선택된 것인 백신.
  127. 제123항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, X2가 부재하는 것인 백신.
  128. 제123항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, X2가 존재하고, C(O), CO2(CH2)y9, CO2, C(O)NH(CH2)y9, NHC(O) 및 NHC(O)(CH2)y9로부터 선택되며, 여기서 y9는 1 내지 6으로부터 선택된 정수인 백신.
  129. 제123항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, X2가 존재하고, 알킬 및 PEG 기로부터 선택된 것인 백신.
  130. 제123항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, X2가 존재하고, 효소 절단가능한 링커, pH 감수성 링커, 자기 희생적 링커, 저급 알킬 및 PEG 기로부터 선택된 것인 백신.
  131. 제122항에 있어서, 각각의 R4가 독립적으로:

    로부터 선택되며, 여기서 각각의 X2는 독립적으로 적합한 링커로부터 선택되고, 각각의 y8은 독립적으로 0 및 6의 정수로부터 선택된 것인 백신.
  132. 제122항에 있어서, 각각의 R4가 독립적으로:

    로부터 선택되며, 여기서 각각의 y8은 독립적으로 0 및 6의 정수로부터 선택된 것인 백신.
  133. 제122항에 있어서, 각각의 R4가 독립적으로

    로부터 선택된 것인 백신.
  134. 제122항에 있어서, 각각의 R4가 독립적으로


    로부터 선택된 것인 백신.
  135. 제122항에 있어서, 각각의 R4가 독립적으로

    로부터 선택된 것인 백신.
  136. 제122항에 있어서, 각각의 R4가

    로부터 선택된 것인 백신.
  137. 제121항에 있어서, 적어도 1개의 D가

    이며, 여기서
    R20은 수소, 알킬, 알콕시알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아미노알킬, 아미드 및 에스테르로부터 선택되고; X3은 알킬, 알콕시알킬, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 카르복시로부터 선택된 것인 백신.
  138. 제137항에 있어서, R20이 수소, 알킬 및 알콕시알킬로부터 선택되고; X3이 알킬 및 아르알킬로부터 선택된 것인 백신.
  139. 제138항에 있어서, R20이 부틸인 백신.
  140. 제138항에 있어서, X3이 알킬인 백신.
  141. 제116항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, m, n, o 및 p가 각각 독립적으로 1 내지 30의 정수를 나타내고, m, n, o 및 p의 합계가 30 이하인 백신.
  142. 제116항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, m, n, o 및 p가 각각 독립적으로 1 내지 10의 정수를 나타내고, m, n, o 및 p의 합계가 10 이하인 백신.
  143. 제95항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서, B가 존재하는 경우에 친수성 중합체 또는 펩티드인 백신.
  144. 제143항에 있어서, B가 PEG 기인 백신.
  145. 제144항에 있어서, PEG 기가 4 내지 36개의 단량체 단위를 포함하는 것인 백신.
  146. 제145항에 있어서, PEG 기가 4 내지 12개의 단량체 단위를 포함하는 것인 백신.
  147. 제143항에 있어서, B가 친수성 펩티드인 백신.
  148. 제147항에 있어서, 친수성 펩티드가 4 내지 36개의 아미노산을 포함하는 것인 백신.
  149. 제147항에 있어서, 친수성 펩티드가 4 내지 12개의 아미노산을 포함하는 것인 백신.
  150. 제95항 내지 제149항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체의 U가 존재하는 경우에 아미드, 티오에테르 또는 트리아졸을 포함하는 것인 백신.
  151. 제95항 내지 제150항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드 항원 접합체의 U가 존재하는 경우에 아미드, 티오에테르 또는 트리아졸을 포함하는 것인 백신.
  152. 제95항 내지 제151항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체가 화학식 S-H를 갖는 것인 백신.
  153. 제95항 내지 제151항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체가 화학식 S-B-U-H를 갖는 것인 백신.
  154. 제95항 내지 제151항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체가 화학식 S-B-U-H-D를 갖는 것인 백신.
  155. 제95항 내지 제154항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드 항원 (A)이 1개 이상의 시스테인 잔기가 알파 아미노-부티르산으로 대체되고/거나 1개 이상의 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체된 서열을 포함하는 것인 백신.
  156. 제95항 내지 제155항 중 어느 한 항에 있어서, 약 4:1 내지 약 1:20의 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체 몰비를 포함하는 백신.
  157. 제95항 내지 제156항 중 어느 한 항에 있어서, mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제 및 AHR, RAR 및 A2a의 효능제로부터 선택된 적어도 1개의 D를 포함하는 백신.
  158. 제157항에 있어서, 적어도 1개의 D가 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택된 것인 백신.
  159. 제157항 또는 제158항에 있어서, mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제, AHR, RAR 및 A2a의 효능제, 및 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 면역자극제로부터 독립적으로 선택된 제2 약물 분자 (D2)를 추가로 포함하며, 단 D 및 D2는 상이한 수용체에 결합하는 것인 백신.
  160. 제159항에 있어서, 적어도 1개의 D가 mTOR의 억제제 및 AHR의 효능제로부터 선택되고, D2가 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 것인 백신.
  161. 제160항에 있어서, 적어도 1개의 D가 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택되고, D2가 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 것인 백신.
  162. 제159항 내지 제161항 중 어느 한 항에 있어서, D2가 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8, TLR-9 및 STING의 효능제로부터 선택된 것인 백신.
  163. 제162항에 있어서, D2가 TLR-7, TLR-8 및 TLR-7/8의 RNA 및 이미다조퀴놀린 효능제로부터 선택된 것인 백신.
  164. 제159항 내지 제163항 중 어느 한 항에 있어서, mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제, AHR, RAR 및 A2a의 효능제, 및 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 면역자극제로부터 독립적으로 선택된 제3 약물 분자 (D3)를 추가로 포함하며, 단 D, D2 및 D3은 상이한 수용체에 결합하는 것인 백신.
  165. 제157항 내지 제164항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 D가 AZD-8055, AZD2016, KU-0063794, CC223, 토린-1, 토린-2, INK-128, WYE354, WYE132, OSI-027, OXA-01, PI-103, NVP-BEZ235, GNE-493, GSK2126458, 라파마이신, 타크롤리무스, 에베롤리무스, RAD001, CCI-779 및 AP23573으로부터 선택된 것인 백신.
  166. 제157항 내지 제165항 중 어느 한 항에 있어서, 총 펩티드 항원 접합체 대 적어도 1개의 D의 몰비가 약 20:1 내지 1:2, 또는 약 10:1 내지 약 1:1 또는 약 4:1 내지 약 2:1인 백신.
  167. 알레르기의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 제85항 내지 제166항 중 어느 한 항의 백신을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 알레르기를 치료 또는 예방하는 방법.
  168. 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체; 및
    [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체
    를 포함하는 백신으로서,
    여기서 S는 각 경우에 독립적으로 가용화 블록이고;
    B는 스페이서이고;
    H는 각 경우에 독립적으로 소수성 블록이고,
    여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
    A는 각 경우에 독립적으로 펩티드 항원이고;
    E1은 각 경우에 독립적으로 N-말단 연장부이고;
    E2는 각 경우에 독립적으로 C-말단 연장부이고;
    U는 각 경우에 독립적으로 링커이고;
    [ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
    -는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
    여기서 친양쪽성체 및/또는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체는 덴드론 증폭제를 포함하고,
    적어도 1개의 A는 1개 이상의 시스테인 잔기가 알파 아미노-부티르산으로 대체되고/거나 1개 이상의 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체된 서열을 포함하는 것인 백신.
  169. 제1항 내지 제168항 중 어느 한 항에 있어서, S가 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체에 대해 존재하고, 아민 또는 카르복실산으로부터 선택된 SG를 포함하는 것인 백신.
  170. 제169항에 있어서, S가 1개 이상의 리신 또는 오르니틴 잔기를 포함하는 것인 백신.
  171. 제169항 또는 제170항에 있어서, 펩티드 항원 접합체가 생리학적 pH에서 약 +1 내지 약 +10의 알짜 양전하를 갖는 것인 백신.
  172. 제171항에 있어서, 펩티드 항원 접합체가 생리학적 pH에서 약 +2 내지 약 +6 또는 약 +3 내지 약 +5의 알짜 양전하를 갖는 것인 백신.
  173. 제169항에 있어서, S가 1개 이상의 글루탐산 또는 아스파르트산 잔기를 포함하는 것인 백신.
  174. 제169항 또는 제173항에 있어서, 펩티드 항원 접합체가 생리학적 pH에서 약 -1 내지 약 -10의 알짜 음전하를 갖는 것인 백신.
  175. 제174항에 있어서, 펩티드 항원 접합체가 생리학적 pH에서 약 -2 내지 약 -6 또는 약 -3 내지 약 -5의 알짜 음전하를 갖는 것인 백신.
  176. 제1항 내지 제175항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체의 S가 카르복실산을 포함하는 것인 백신.
  177. 제176항에 있어서, 친양쪽성체의 S가 숙신산 또는 베타 알라닌을 포함하는 것인 백신.
  178. 제176항 또는 제177항에 있어서, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비가 약 4:1 내지 1:20인 백신.
  179. 제176항 또는 제177항에 있어서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체의 평균 알짜 전하가 생리학적 pH에서 양성이고, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비가 약 4:1 내지 약 2:1 또는 약 1:2 내지 약 1:16, 또는 약 1:2 내지 약 1:4인 백신.
  180. 적어도 1개의 펩티드 항원 (A)을 포함하는 백신으로서, 여기서 적어도 1개의 펩티드 항원 (A)은 1개 이상의 시스테인 잔기가 알파 아미노-부티르산으로 대체되고/거나 1개 이상의 메티오닌 잔기가 노르류신으로 대체된 서열을 포함하는 것인 백신.
  181. 제180항에 있어서, 지질 에멀젼, 리포솜, PLGA 입자, 무기 염 입자 및 금속 나노입자로부터 선택된 입자 전달 시스템을 추가로 포함하는 백신.
  182. 제181항에 있어서, 면역자극제 및 Treg 촉진 면역조정제로부터 선택된 적어도 1개의 약물 분자 (D)를 추가로 포함하는 백신.
  183. [S]-[E1]-A-[E2]-[U]-H 및 H-[U]-[E1]-A-[E2]-[S]로부터 선택된 화학식을 갖는 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체를 포함하는 백신으로서,
    여기서 S는 각 경우에 독립적으로 가용화 블록이고;
    H는 각 경우에 독립적으로 소수성 블록이고,
    여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
    A는 각 경우에 독립적으로 펩티드 항원이고;
    E1은 각 경우에 독립적으로 N-말단 연장부이고;
    E2는 각 경우에 독립적으로 C-말단 연장부이고;
    U는 각 경우에 독립적으로 링커이고;
    여기서:
    (i) 적어도 1개의 A가 알파 아미노-부티르산 및/또는 노르류신을 포함하거나;
    (ii) 적어도 1개의 A가 종양 항원으로부터 선택되고, 적어도 1개의 D가 존재하며 TLR-7/8의 효능제로부터 선택되고, 백신이 mTOR의 억제제로부터 선택된 제2 약물 분자 (D2)를 추가로 포함하거나;
    (iii) 적어도 1개의 A가 당펩티드이거나; 또는
    (iv) 적어도 1개의 A가 자가항원, 알레르겐 및 동종항원으로부터 선택되고, 적어도 1개의 D가 존재하며 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택되고;
    [ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
    -는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내는 것인 백신.
  184. 제183항에 있어서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체가 종양 항원으로부터 선택된 적어도 1개의 A를 포함하는 것인 백신.
  185. 제184항에 있어서, 적어도 1개의 D가 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-9 및 STING의 효능제로부터 선택된 것인 백신.
  186. 제184항 또는 제185항에 있어서, 친양쪽성체 및/또는 펩티드 항원 접합체의 각각의 H가 반응성 아미노산 (N)의 단량체를 포함하는 폴리(아미노산)를 포함하며, 여기서 단량체는 TLR-7/8의 효능제로부터 선택된 D를 포함하는 것인 백신.
  187. 제184항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, D2가 라파마이신, 타크롤리무스, 에베롤리무스, RAD001, CCI-779 및 AP23573으로부터 선택된 것인 백신.
  188. 제187항에 있어서, 펩티드 항원 접합체 대 D2의 몰비가 약 20:1 내지 1:2, 또는 약 10:1 내지 약 1:1 또는 약 4:1 내지 약 2:1인 백신.
  189. 제183항 또는 제184항에 있어서, 적어도 1개의 A가 당펩티드인 백신.
  190. 제189항에 있어서, A가 HGVT*S*APDT*RPAPGS*T*APPA, DT*RPAPGS*T*APPAHGVT*S*AP, GS*T*APPAHGVT*S*APDT*RPAPGS*T*APPA, GVT*S*APDT*RPAP, APDT*RPAPGS*T*A, GS*T*APPAHGVT*S*AP, VT*S*AP, DT*RPAP 및 GS*T*AP로부터 선택된 당펩티드이며, 여기서 *는 O-연결된 글리칸이고, 각 경우에 독립적으로 시알릴 루이스 x, 시알릴 루이스 a, 루이스 y, 루이스 x, Tn, sTn, TF, sTF로부터 선택된 것인 백신.
  191. 제189항 또는 제190항에 있어서, S가 부재하는 것인 백신.
  192. 제189항 또는 제190항에 있어서, S가 존재하는 것인 백신.
  193. 제184항 내지 제192항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체를 추가로 포함하며,
    여기서 S는 가용화 블록이고;
    B는 스페이서이고;
    H는 소수성 블록이고;
    U는 링커이고;
    [ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
    -는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
    여기서 친양쪽성체의 S는 덴드론 증폭제를 포함하는 것인 백신.
  194. 제193항에 있어서, 친양쪽성체의 S가 아민, 카르복실산 또는 당 분자로부터 독립적으로 선택된 2개 이상의 가용화 기 (SG)를 포함하며, 여기서 당 분자는 만노스, 시알릴 루이스 x, 시알릴 루이스 a, 루이스 y, 루이스 x, Tn, sTn, TF, sTF, 글로보 H, SSEA-3, GM2, GD2, GD3 및 푸코실 GM1 및 그의 조합으로부터 독립적으로 선택된 것인 백신.
  195. 제183항에 있어서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체가 자가항원, 동종항원, 및 알레르겐으로부터 선택된 적어도 1개의 A를 포함하는 것인 백신.
  196. 제195항에 있어서, mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제 및 AHR, RAR 및 A2a의 효능제로부터 선택된 적어도 1개의 D를 추가로 포함하는 백신.
  197. 제195항 또는 제196항에 있어서, mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제, AHR, RAR 및 A2a의 효능제, 및 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 면역자극제로부터 독립적으로 선택된 제2 약물 분자 (D2)를 추가로 포함하며, 단 D 및 D2는 상이한 수용체에 결합하는 것인 백신.
  198. 제197항에 있어서, D2가 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 것인 백신.
  199. 제197항에 있어서, D2가 TLR-3, TLR-7, TLR-8, TLR-7/8, TLR-9 및 STING의 효능제로부터 선택된 것인 백신.
  200. 제197항에 있어서, D2가 TLR-7, TLR-8 및 TLR-7/8의 RNA 및 이미다조퀴놀린 효능제로부터 선택된 것인 백신.
  201. 제197항 내지 제200항 중 어느 한 항에 있어서, mTOR, RORγt, CDK8/19 및 HDAC의 억제제, AHR, RAR 및 A2a의 효능제, 및 NLR, CLR, TLR 및 STING의 효능제로부터 선택된 면역자극제로부터 독립적으로 선택된 제3 약물 분자 (D3)를 추가로 포함하며, 단 D, D2 및 D3은 상이한 수용체에 결합하는 것인 백신.
  202. 제196항 내지 제201항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 D가 AZD-8055, AZD2016, KU-0063794, CC223, 토린-1, 토린-2, INK-128, WYE354, WYE132, OSI-027, OXA-01, PI-103, NVP-BEZ235, GNE-493, GSK2126458, 라파마이신, 타크롤리무스, 에베롤리무스, RAD001, CCI-779 및 AP23573으로부터 선택된 것인 백신.
  203. 제196항 내지 제202항 중 어느 한 항에 있어서, 총 펩티드 항원 접합체 대 적어도 1개의 D의 몰비가 약 20:1 내지 1:2, 또는 약 10:1 내지 약 1:1 또는 약 4:1 내지 약 2:1인 백신.
  204. 제195항 내지 제203항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 S-[B]-[U]-H를 갖는 친양쪽성체를 추가로 포함하며,
    여기서 S는 가용화 블록이고;
    B는 스페이서이고;
    H는 소수성 블록이고;
    U는 링커이고;
    [ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
    -는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
    여기서 친양쪽성체의 S는 덴드론 증폭제를 포함하는 것인 백신.
  205. 제204항에 있어서, 친양쪽성체의 S가 카르복실산, 포스포세린 및 당 분자로부터 독립적으로 선택된 2개 이상의 가용화 기 (SG)를 포함하며, 여기서 당 분자는 만노스, 글루코스, 글루코사민, N-아세틸 글루코스, 갈락토스, 갈락토사민, N-아세틸 갈락토사민, 및 CD22a의 효능제로부터 독립적으로 선택된 것인 백신.
  206. 제185항 내지 제205항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체의 S가 아민으로부터 선택된 SG를 포함하는 것인 백신.
  207. 제206항에 있어서, 펩티드 항원 접합체의 S가 1개 이상의 리신 또는 오르니틴 잔기를 포함하는 것인 백신.
  208. 제206항 또는 제207항에 있어서, 펩티드 항원 접합체가 생리학적 pH에서 약 +1 내지 약 +10의 알짜 양전하를 갖는 것인 백신.
  209. 제208항에 있어서, 펩티드 항원 접합체가 생리학적 pH에서 약 +2 내지 약 +6 또는 약 +3 내지 약 +5의 알짜 양전하를 갖는 것인 백신.
  210. 제206항 내지 제209항 중 어느 한 항에 있어서, 친양쪽성체가 존재하고, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비가 약 4:1 내지 1:20인 백신.
  211. 제210항에 있어서, 친양쪽성체가 카르복실산을 포함하고 알짜 음전하를 갖는 것인 백신.
  212. 제211항에 있어서, 친양쪽성체가 베타 알라닌 및 숙신산으로부터 선택된 카르복실산을 포함하는 것인 백신.
  213. 제211항 또는 제212항에 있어서, 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체의 평균 알짜 전하가 생리학적 pH에서 양성이고, 펩티드 항원 접합체 대 친양쪽성체의 몰비가 약 4:1 내지 약 2:1 또는 약 1:2 내지 약 1:16, 또는 약 1:2 내지 약 1:4인 백신.
  214. 적어도 1개의 펩티드 항원 (A)을 코딩하는 DNA 또는 RNA를 포함하는 발현 시스템을 포함하며, Treg 촉진 면역조정제로부터 선택된 적어도 1개의 약물 분자 (D)를 추가로 포함하는 백신.
  215. 제214항에 있어서, 적어도 1개의 D가 ATP-경쟁적 mTOR 억제제로부터 선택된 것인 백신.
  216. 제214항 또는 제215항에 있어서, D가 AZD-8055, AZD2016, KU-0063794, CC223, 토린-1, 토린-2, INK-128, WYE354, WYE132, OSI-027, OXA-01, PI-103, NVP-BEZ235, GNE-493, GSK2126458, 라파마이신, 타크롤리무스, 에베롤리무스, RAD001, CCI-779 및 AP23573으로부터 선택된 것인 백신.
  217. 제214항 내지 제216항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드 항원 (A)이 자가항원, 동종항원 및 알레르겐으로부터 선택된 것인 백신.
  218. 제214항 내지 제217항 중 어느 한 항에 있어서, 양이온성 리포솜성 입자를 추가로 포함하는 백신.
  219. S-[E1]-A-[E2]-[U]-H-[D] 및 [D]-H-[U]-[E1]-A-[E2]-S로부터 선택된 화학식을 갖는 펩티드 항원 접합체 또는 S-[E1]-A-[E2]-[U1] 및 [U1]-[E1]-A-[E2]-S로부터 선택된 화학식을 갖는 펩티드 항원 단편으로서,
    여기서 S는 가용화 블록이고;
    H는 소수성 블록이고,
    여기서 1개 이상의 약물 분자 (D)는 직접적으로 또는 적합한 링커 X1을 통해 각각의 H에 임의로 부착되고;
    A는 펩티드 항원이고;
    E1은 N-말단 연장부이고;
    E2는 C-말단 연장부이고;
    U는 링커이고;
    U1은 링커 전구체이고;
    [ ]는 기가 임의적임을 나타내고;
    -는 2개의 인접한 기가 공유 결합에 의해 서로 직접적으로 또는 적합한 링커 X를 통해 서로 간접적으로 부착됨을 나타내고,
    여기서 S는 1개 이상의 아미노산을 포함하는 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  220. 제219항에 있어서, S가 2 내지 12개의 아미노산을 포함하는 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  221. 제220항에 있어서, S가 2 내지 8개의 아미노산을 포함하는 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  222. 제221항에 있어서, S가 4 내지 6개의 아미노산을 포함하는 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  223. 제220항에 있어서, S가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개의 아미노산을 포함하는 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  224. 제220항 내지 제223항 중 어느 한 항에 있어서, S 아미노산이 리신, 아르기닌 및 오르니틴으로부터 선택된 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  225. 제219항 내지 제224항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드 항원 단편이 화학식 A-[E2]-S를 갖는 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  226. 제219항 내지 제225항 중 어느 한 항에 있어서, E1 및/또는 E2가 존재하고, 화학식 P4-P3-P2-P1의 카텝신 절단가능한 테트라펩티드로부터 선택된 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  227. 제219항 내지 제226항 중 어느 한 항에 있어서, E1 및/또는 E2가 존재하고, Ser-Pro-Val-Arg, Ser-Pro-Val-Cit 및 Ser-Pro-Val-aBut로부터 선택된 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  228. 제219항 내지 제227항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드 항원 (A)이 노르류신 및 알파-아미노부티르산으로부터 선택된 적어도 1개의 아미노산을 포함하는 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  229. 제219항 내지 제228항 중 어느 한 항의 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편을 포함하는 백신.
  230. 제219항 내지 제229항 중 어느 한 항의 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편을 포함하는 수용액을 시험관내 또는 생체외에서 T 세포에 첨가하는 것을 포함하는, T 세포를 활성화, 프라이밍 및/또는 확장시키는 방법.
  231. 제219항에 있어서, E1 및 E2 중 적어도 1개가 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편에 존재하는 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  232. 제231항에 있어서, 각각의 E1 및/또는 E2가 독립적으로 화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 헵타드 반복부를 포함하며, 여기서
    각 경우의 AAa 및 AAd는 독립적으로 류신, 이소류신, 노르류신, 발린, 노르발린, T-류신, 알로-이소류신, N-프로필 글리신, 메티오닌, 및 O-메틸 세린으로부터 선택되고;
    각 경우의 AAb, AAc 및 AAf는 독립적으로 알라닌, 시스테인, 아스파르트산, 글리신, 아스파라긴, 프롤린, 세린, 트레오닌, 발린, 알파-아미노-부티르산, 및 노르발린으로부터 선택되고;
    각 경우의 AAe 및 AAg는 독립적으로 아스파르트산, 글루탐산, 리신, 아르기닌, 오르니틴, 술포-세린, 및 포스포세린을 포함하나 이에 제한되지는 않는 하전된 아미노산으로부터 선택되고;
    e는 1 내지 6으로부터 선택된 정수인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  233. 제232항에 있어서, 각 경우의 AAa 및 AAd가 독립적으로 류신, 이소류신 및 노르류신으로부터 선택된 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  234. 제232항 또는 제233항에 있어서, 각 경우의 AAb, AAc 및 AAf가 독립적으로 알라닌, 프롤린 및 세린으로부터 선택된 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  235. 제231항 내지 제234항 중 어느 한 항에 있어서, 각 경우의 AAe 및 AAg가 독립적으로 아스파르트산, 글루탐산, 리신, 아르기닌, 및 오르니틴으로부터 선택된 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  236. 제231항에 있어서, 각각의 E1 및/또는 E2가 독립적으로 (I-A-A-L-E-S-K)e, (I-A-A-L-K-S-K)e, (I-A-A-L-E-S-E)e, (I-A-A-L-K-S-E)e, (V-A-A-L-K-A-E)e, (I-A-A-L-K-A-E)e, (L-A-A-L-K-A-E)e, (V-S-A-L-K-A-E)e, (I-S-A-L-K-A-E)e, (L-S-A-L-K-A-E)e, (V-A-S-L-K-A-E)e, (I-A-S-L-K-A-E)e, (L-A-S-L-K-A-E)e, (V-S-S-L-K-A-E)e, (I-S-S-L-K-A-E)e, (L-S-S-L-K-A-E)e, (V-A-A-L-K-S-E)e, (L-A-A-L-K-S-E)e, (V-S-A-L-K-S-E)e, (I-S-A-L-K-S-E)e, (L-S-A-L-K-S-E)e, (V-A-S-L-K-S-E)e, 및 (I-A-S-L-K-S-E)e로부터 선택된 헵타드 반복부를 포함하는 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  237. 제231항에 있어서, 각각의 E1 및/또는 E2가 독립적으로 (K-S-E-L-A-A-I)e, (K-S-K-L-A-A-I)e, (E-S-S-L-A-A-I)e, (E-S-K-L-A-A-I)e, (E-A-K-L-A-A-V)e, (E-A-K-L-A-A-I)e, (E-A-K-L-A-A-L)e, (E-A-K-L-A-S-V)e, (E-A-K-L-A-S-I)e, (E-A-K-L-A-S-L)e, (E-A-K-L-S-A-V)e, (E-A-K-L-S-A-I)e, (E-A-K-L-S-A-L)e, (E-A-K-L-S-S-V)e, (E-A-K-L-S-S-I)e, (E-A-K-L-S-S-L)e, (E-S-K-L-A-A-V)e, (E-S-K-L-A-A-I)e, (E-S-K-L-A-A-L)e, (E-S-K-L-A-S-V)e, (E-S-K-L-A-S-I)e, (E-S-K-L-A-S-L)e, (E-S-K-L-S-A-V)e, (E-S-K-L-S-A-I)e로부터 선택된 헵타드 반복부를 포함하는 것인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  238. 제230항 내지 제237항 중 어느 한 항에 있어서, e가 1 내지 4로부터 선택된 정수인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  239. 제230항 내지 제238항 중 어느 한 항에 있어서, e가 2 또는 3으로부터 선택된 정수인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  240. 제230항 내지 제239항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 헵타드의 6개의 아미노산이 D-아미노산인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  241. 제230항 내지 제239항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 헵타드의 7개의 아미노산이 D-아미노산인 펩티드 항원 접합체 또는 펩티드 항원 단편.
  242. 제1항, 제95항, 제168항 및 제183항 중 어느 한 항에 있어서, E1 및 E2 중 적어도 1개가 적어도 1개의 펩티드 항원 접합체에 존재하는 것인 백신.
  243. 제242항에 있어서, 각각의 E1 및/또는 E2가 독립적으로 화학식 (AAa-AAb-AAc-AAd-AAe-AAf-AAg)e의 헵타드 반복부를 포함하며, 여기서
    각 경우의 AAa 및 AAd는 독립적으로 류신, 이소류신, 노르류신, 발린, 노르발린, T-류신, 알로-이소류신, N-프로필 글리신, 메티오닌, 및 O-메틸 세린으로부터 선택되고;
    각 경우의 AAb, AAc 및 AAf는 독립적으로 알라닌, 시스테인, 아스파르트산, 글리신, 아스파라긴, 프롤린, 세린, 트레오닌, 발린, 알파-아미노-부티르산, 및 노르발린으로부터 선택되고;
    각 경우의 AAe 및 AAg는 독립적으로 아스파르트산, 글루탐산, 리신, 아르기닌, 오르니틴, 술포-세린, 및 포스포세린을 포함하나 이에 제한되지는 않는 하전된 아미노산으로부터 선택되고;
    e는 1 내지 6으로부터 선택된 정수인 백신.
  244. 제243항에 있어서, 각 경우의 AAa 및 AAd가 독립적으로 류신, 이소류신 및 노르류신으로부터 선택된 것인 백신.
  245. 제243항 또는 제244항에 있어서, 각 경우의 AAb, AAc 및 AAf가 독립적으로 알라닌, 프롤린 및 세린인 백신.
  246. 제242항 내지 제245항 중 어느 한 항에 있어서, 각 경우의 AAe 및 AAg가 독립적으로 아스파르트산, 글루탐산, 리신, 아르기닌, 및 오르니틴으로부터 선택된 것인 백신.
  247. 제242항에 있어서, 각각의 E1 및/또는 E2가 독립적으로 (I-A-A-L-E-S-K)e, (I-A-A-L-K-S-K)e, (I-A-A-L-E-S-E)e, (I-A-A-L-K-S-E)e, (V-A-A-L-K-A-E)e, (I-A-A-L-K-A-E)e, (L-A-A-L-K-A-E)e, (V-S-A-L-K-A-E)e, (I-S-A-L-K-A-E)e, (L-S-A-L-K-A-E)e, (V-A-S-L-K-A-E)e, (I-A-S-L-K-A-E)e, (L-A-S-L-K-A-E)e, (V-S-S-L-K-A-E)e, (I-S-S-L-K-A-E)e, (L-S-S-L-K-A-E)e, (V-A-A-L-K-S-E)e, (L-A-A-L-K-S-E)e, (V-S-A-L-K-S-E)e, (I-S-A-L-K-S-E)e, (L-S-A-L-K-S-E)e, (V-A-S-L-K-S-E)e, 및 (I-A-S-L-K-S-E)e로부터 선택된 헵타드 반복부를 포함하는 것인 백신.
  248. 제242항에 있어서, 각각의 E1 및/또는 E2가 독립적으로 (K-S-E-L-A-A-I)e, (K-S-K-L-A-A-I)e, (E-S-S-L-A-A-I)e, (E-S-K-L-A-A-I)e, (E-A-K-L-A-A-V)e, (E-A-K-L-A-A-I)e, (E-A-K-L-A-A-L)e, (E-A-K-L-A-S-V)e, (E-A-K-L-A-S-I)e, (E-A-K-L-A-S-L)e, (E-A-K-L-S-A-V)e, (E-A-K-L-S-A-I)e, (E-A-K-L-S-A-L)e, (E-A-K-L-S-S-V)e, (E-A-K-L-S-S-I)e, (E-A-K-L-S-S-L)e, (E-S-K-L-A-A-V)e, (E-S-K-L-A-A-I)e, (E-S-K-L-A-A-L)e, (E-S-K-L-A-S-V)e, (E-S-K-L-A-S-I)e, (E-S-K-L-A-S-L)e, (E-S-K-L-S-A-V)e, (E-S-K-L-S-A-I)e로부터 선택된 헵타드 반복부를 포함하는 것인 백신.
  249. 제242항 내지 제248항 중 어느 한 항에 있어서, e가 1 내지 4로부터 선택된 정수인 백신.
  250. 제242항 내지 제248항 중 어느 한 항에 있어서, e가 2 또는 3으로부터 선택된 정수인 백신.
  251. 제242항 내지 제248항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 헵타드의 6개의 아미노산이 D-아미노산인 백신.
  252. 제242항 내지 제248항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 헵타드의 7개의 아미노산이 D-아미노산인 백신.
  253. 면역 반응의 유도를 필요로 하는 대상체에게 제1 백신 (V1)의 적어도 1회의 용량에 이어서 제2 백신 (V2)의 적어도 1회의 용량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법으로서,
    여기서
    V1은 제1항 내지 제58항, 제168항 내지 제213항 및 제229항 중 어느 한 항의 백신이고;
    V2는 바이러스 백신인 방법.
  254. 제253항에 있어서, 대상체에서의 T 세포 반응이 제1 백신 (V1)의 적어도 1회의 용량의 단독 투여에 비해 증가되는 것인 방법.
  255. 제253항에 있어서, 대상체에서의 T 세포 반응이 제2 백신 (V2)의 적어도 1회의 용량의 단독 투여에 비해 증가되는 것인 방법.
  256. 제253항 내지 제255항 중 어느 한 항에 있어서, V1의 1회 용량이 제1 시간 (V1T1)에 투여되는 것인 방법.
  257. 제253항 내지 제255항 중 어느 한 항에 있어서, V1의 2회 용량이 제1 시간 (V1T1) 및 제2 시간 (V1T2)에 투여되는 것인 방법.
  258. 제253항 내지 제255항 중 어느 한 항에 있어서, V1의 3회 용량이 제1 시간 (V1T1), 제2 시간 (V1T2), 및 제3 시간 (V1T3)에 투여되는 것인 방법.
  259. 제253항 내지 제258항 중 어느 한 항에 있어서, V2의 1회 용량이 제1 시간 (V2T1)에 투여되는 것인 방법.
  260. 제253항 내지 제258항 중 어느 한 항에 있어서, V2의 2회 용량이 제1 시간 (V2T1) 및 제2 시간 (V2T2)에 투여되는 것인 방법.
  261. 제253항 내지 제258항 중 어느 한 항에 있어서, V2의 3회 용량이 제1 시간 (V2T1), 제2 시간 (V2T2) 및 제3 시간 (V2T3)에 투여되는 것인 방법.
  262. 제253항 내지 제261항 중 어느 한 항에 있어서, V1이 근육내 또는 정맥내 경로에 의해 투여되는 것인 방법.
  263. 제253항 내지 제262항 중 어느 한 항에 있어서, V2가 정맥내 경로에 의해 투여되는 것인 방법.
  264. 제253항 내지 제263항 중 어느 한 항에 있어서, V2의 초기 용량이 V1의 최종 용량의 1 내지 6주 후에 투여되는 것인 방법.
  265. 제253항 내지 제263항 중 어느 한 항에 있어서, V2의 초기 용량이 V1의 최종 용량의 1 내지 12주 후에 투여되는 것인 방법.
  266. 제253항 내지 제265항 중 어느 한 항에 있어서, V2가 아데노바이러스 벡터 백신인 방법.
  267. 제266항에 있어서, 아데노바이러스가 V1의 펩티드 항원 (A)을 코딩하는 것인 방법.
  268. 제266항 또는 제267항에 있어서, V2가 ChAdOx 백신인 방법.
KR1020237031419A 2021-02-16 2022-02-16 친양쪽성 펩티드에 기초한 자기-어셈블리 나노입자 KR20230147135A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163149996P 2021-02-16 2021-02-16
US63/149,996 2021-02-16
US202163197092P 2021-06-04 2021-06-04
US63/197,092 2021-06-04
PCT/US2022/016600 WO2022177993A1 (en) 2021-02-16 2022-02-16 Self-assembling nanoparticles based on amphiphilic peptides

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230147135A true KR20230147135A (ko) 2023-10-20

Family

ID=82931139

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237031419A KR20230147135A (ko) 2021-02-16 2022-02-16 친양쪽성 펩티드에 기초한 자기-어셈블리 나노입자

Country Status (8)

Country Link
EP (1) EP4294431A1 (ko)
JP (1) JP2024506381A (ko)
KR (1) KR20230147135A (ko)
AU (1) AU2022224567A1 (ko)
BR (1) BR112023016402A2 (ko)
CA (1) CA3207998A1 (ko)
IL (1) IL305174A (ko)
WO (1) WO2022177993A1 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3222840A1 (en) * 2021-06-16 2022-12-22 Geoffrey M. Lynn Self-assembling nanoparticles based on amphiphilic peptides for drug delivery applications
WO2024092030A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Vaccitech North America, Inc. Self-assembling nanoparticles
WO2024092028A2 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Vaccitech North America, Inc. Combination treatment regimes for treating cancer

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL73534A (en) 1983-11-18 1990-12-23 Riker Laboratories Inc 1h-imidazo(4,5-c)quinoline-4-amines,their preparation and pharmaceutical compositions containing certain such compounds
US4880935A (en) 1986-07-11 1989-11-14 Icrf (Patents) Limited Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates
IL89220A (en) 1988-02-11 1994-02-27 Bristol Myers Squibb Co Immunoconjugates of anthracycline, their production and pharmaceutical preparations containing them
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
PT871490E (pt) 1995-12-22 2003-07-31 Bristol Myers Squibb Co Ligantes de hidrazona ramificada
JP2000119271A (ja) 1998-08-12 2000-04-25 Hokuriku Seiyaku Co Ltd １ｈ―イミダゾピリジン誘導体
ES2436877T3 (es) 2005-11-17 2014-01-07 OSI Pharmaceuticals, LLC Intermedios para la preparación de inhibidores de mTOR bicíclicos condensados
RU2445312C2 (ru) 2006-08-23 2012-03-20 Кудос Фармасьютиклз Лимитед ПРОИЗВОДНЫЕ 2-МЕТИЛМОРФОЛИН ПИРИДО-, ПИРАЗО- И ПИРИМИДО-ПИРИМИДИНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ mTOR
US20080234262A1 (en) 2007-03-21 2008-09-25 Wyeth Pyrazolopyrimidine analogs and their use as mtor kinase and pi3 kinase inhibitors
BRPI0817484B1 (pt) * 2007-10-03 2021-08-17 Immunovaccine Technologies Inc Composição de vacina sem água, processo de produção e o uso dos mesmos
EP2620157A3 (en) * 2007-10-12 2013-10-16 Massachusetts Institute of Technology Vaccine nanotechnology
CN102256966B (zh) 2008-10-17 2016-02-10 白头生物医学研究所 可溶性mTOR复合物和其调节剂
US8110578B2 (en) 2008-10-27 2012-02-07 Signal Pharmaceuticals, Llc Pyrazino[2,3-b]pyrazine mTOR kinase inhibitors for oncology indications and diseases associated with the mTOR/PI3K/Akt pathway
AU2016355926A1 (en) * 2015-11-18 2018-05-31 Immunovaccine Technologies Inc. Adjuvanting systems and water-free vaccine compositions comprising a polyi:C polynucleotide adjuvant and a lipid-based adjuvant
CA3057715A1 (en) 2017-04-04 2018-10-11 Avidea Technologies, Inc. Peptide-based vaccines, methods of manufacturing, and uses thereof for inducing an immune response
CN114555629A (zh) * 2019-05-10 2022-05-27 维多利亚联结有限公司 糖肽疫苗

Also Published As

Publication number Publication date
JP2024506381A (ja) 2024-02-13
WO2022177993A1 (en) 2022-08-25
AU2022224567A1 (en) 2023-08-24
IL305174A (en) 2023-10-01
EP4294431A1 (en) 2023-12-27
CA3207998A1 (en) 2022-08-25
BR112023016402A2 (pt) 2023-11-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230026627A1 (en) Compositions and Methods of Manufacturing Star Polymers for Ligand Display and/or Drug Delivery
KR20230147135A (ko) 친양쪽성 펩티드에 기초한 자기-어셈블리 나노입자
JP2020515629A (ja) 免疫応答を誘導するためのペプチドベースのワクチン、それらの製造方法および使用
US20210113705A1 (en) Improved methods of manufacturing peptide-based vaccines
US20230390406A1 (en) Star Polymer Drug Conjugates
US20210393523A1 (en) Aromatic ring substituted amphiphilic polymers as drug delivery systems
WO2022066635A1 (en) Compositions and methods of manufacturing amphiphilic block copolymers that form nanoparticles in situ
WO2024092030A1 (en) Self-assembling nanoparticles
CN118103059A (zh) 基于两亲性肽的自组装纳米粒子
EP4355367A1 (en) Self-assembling nanoparticles based on amphiphilic peptides for drug delivery applications
WO2024092028A2 (en) Combination treatment regimes for treating cancer
EA046161B1 (ru) Вакцины на основе пептидов, способы их изготовления и применения для индуцирования имунного ответа