CN112739340A - 抗cd5抗体药物缀合物(adc)在同种异体细胞疗法中的用途 - Google Patents

抗cd5抗体药物缀合物(adc)在同种异体细胞疗法中的用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了在经历嵌合抗原受体(CAR)免疫疗法的人类患者中消耗CD5+细胞以便促进对表达CAR的免疫细胞的接受的方法。将抗CD5抗体药物缀合物(ADC)作为调节方案施用至接受自体或同种异体的表达CAR的免疫细胞的人类患者，使得表达CAR的免疫细胞被人类患者接受。本发明的组合物和方法可以与CAR疗法组合使用，以治疗多种疾病，包括自身免疫性疾病和癌症。

Description

抗CD5抗体药物缀合物(ADC)在同种异体细胞疗法中的用途
相关申请
本申请要求于2018年7月23日提交的美国临时专利申请第62/702296号和于2018年11月29日提交的美国临时专利申请第62/773047号的优先权的权益。前述申请的内容通过引用并入本文。
序列表
本申请包含以ASCII格式电子提交的序列表，并且所述序列表在此通过引用以其整体并入。创建于2019年7月19日的所述ASCII副本被命名为M103034_2060WO_SL.txt并且大小为85,119字节。
发明领域
本发明总体上涉及通过使用抗CD5抗体药物缀合物(ADC)来促进人类受试者对表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞的接受的方法。
发明背景
嵌合抗原受体(CAR)疗法是使用身体自身的免疫系统来破坏表达与某种疾病(诸如癌症)相关的特定抗原的细胞的免疫治疗。例如，在癌症中，CAR疗法募集并增强患者免疫系统攻击肿瘤的能力。在过去的几年里，这种免疫疗法已经成为有前景的且革命性的疗法。CAR疗法基于表达CAR的免疫细胞诸如T细胞，CAR通常是组合了胞外抗原结合结构域(诸如scFv)与胞质活性信号传导和“共刺激”结构域(从表面受体向细胞传导信号)的跨膜融合蛋白。因此，当免疫细胞(诸如T细胞)表达CAR时，该免疫细胞能够识别并杀伤表达被CAR的抗原结合结构域靶向的抗原(例如，肿瘤相关抗原)的细胞(Geyer和Brentjens(2016)Cytotherapy 18(11):1393-1409)。
虽然CAR疗法是极其强大的技术，但它确实会带来严重风险和不良副作用(Kay和Turtle(2017)Drugs 77(3):237-245；Hill等人(2018)Blood 131:121-130)。为了使接受治疗的患者对表达CAR的细胞的排斥最小化，通常将淋巴消耗性(lymphodepleting)化学疗法用作与CAR疗法组合的调节治疗(Wei等人(2017)Exp Hematol Oncol.6:10)。例如，淋巴消耗剂(lymphodepleting agent)氟达拉滨和环磷酰胺的组合改善了接受者患者中的CAR-T细胞的持续时间(Turtle等人(2016)J Clinic Invest 126(6):2123；另参见US20170368101)。虽然调节疗法提高了CAR-T细胞的功效，但淋巴消耗性化学疗法通常具有严重的负面副作用。
发明概述
本发明提供了一种调节方案，该调节方案可以与CAR疗法一起使用，以促进对表达CAR的免疫细胞的接受。本文描述的方法可以用于促进对表达CAR的自体免疫细胞或表达CAR的同种异体免疫细胞的接受。传统上，对这样的细胞的接受是使用淋巴消耗性化学治疗剂的治疗来实现的。本文描述了改进的促进接受者患者对表达CAR的细胞的接受的方法。
本发明包括一种促进患有癌症或自身免疫性疾病的人类受试者对表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞的接受的方法，该方法包括将抗CD5抗体药物缀合物(ADC)施用至患有癌症或自身免疫性疾病的人类受试者，其中抗CD5 ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5抗体或其抗原结合片段；以及将治疗有效量的表达CAR的免疫细胞施用至人类受试者，其中CAR包含与肿瘤抗原或与自身免疫性疾病相关的抗原结合的胞外结构域、跨膜结构域和胞质结构域。
在一种实施方案中，人类受试者在表达CAR的免疫细胞的施用之前、与表达CAR的免疫细胞的施用同时地或在表达CAR的免疫细胞的施用之后未被施用阿仑单抗(alemtuzumab)。在另一种实施方案中，人类受试者在表达CAR的免疫细胞的施用之前、与表达CAR的免疫细胞的施用同时地或在表达CAR的免疫细胞的施用之后未被施用淋巴消耗性化学治疗剂。在一种实施方案中，淋巴消耗性化学治疗剂是氟达拉滨、环磷酰胺、苯达莫司汀和/或喷司他丁。
在一种实施方案中，方法还包括将抗CD5 ADC在施用表达CAR的免疫细胞之前施用至人类受试者。
在一种实施方案中，方法还包括将抗CD5 ADC在施用表达CAR的免疫细胞之前约12小时至约21天施用至人类受试者。
在一种实施方案中，免疫细胞是同种异体细胞或自体细胞。在一种实施方案中，同种异体细胞是同种异体T细胞或同种异体NK细胞。
在某些实施方案中，表达CAR的同种异体细胞的治疗有效量是约1×104个细胞/kg至约1.0×108个细胞/kg。
本发明的特征还在于一种治疗患有肿瘤的患者的方法，该方法包括将抗CD5 ADC施用至有相应需要的患者，其中抗CD5 ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5抗体或其抗原结合片段，以及将治疗有效量的约1×106个工程化CAR T细胞/kg至约1×108个工程化CAR T细胞/kg施用至患者。在一种实施方案中，工程化CAR T细胞的治疗有效量是约1×106个细胞/kg或约2×106个细胞/kg。
在本发明的某些实施方案中，抗CD5 ADC作为单剂量或作为多剂量被施用至患者。
在一种实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含分别具有SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3，并且抗CD5抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含分别具有SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8中列出的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3。
在一种实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段是嵌合的或人源化的。
在另一种实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段是IgG1同种型或IgG4同种型。
在又另一种实施方案中，细胞毒素是抗有丝分裂剂或RNA聚合酶抑制剂。
在其他实施方案中，细胞毒素是美登素(maytansine)、加利车霉素(calicheamicin)、吡咯并苯二氮卓类、吲哚并苯二氮卓类或澳瑞他汀(auristatin)。在一种实施方案中，澳瑞他汀是一甲基澳瑞他汀F(monomethyl auristatin F；MMAF)或一甲基澳瑞他汀E(monomethyl auristatin E；MMAE)。在一种实施方案中，细胞毒素是美登素。在一种实施方案中，细胞毒素是吡咯并苯二氮卓类(PBD)。例如，在一些实施方案中，PBD可以选自tesirine或talirine。在一些实施方案中，细胞毒素可以是加利车霉素。例如，在一些实施方案中，加利车霉素可以是奥佐米星(ozogamicin)。
在一种实施方案中，RNA聚合酶抑制剂是鹅膏蕈毒素。在另一种实施方案中，RNA聚合酶抑制剂是鹅膏蕈碱(amanitin)(例如，α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素(amanin)、鹅膏素酰胺(amaninamide)、鹅膏无毒环肽(amanullin)、一羟鹅膏毒肽羧酸(amanullinic acid)或前鹅膏无毒环肽(proamanullin))。
在一种实施方案中，抗体药物缀合物(ADC)由式Ab-Z-L-Am表示，其中Ab是结合CD5的抗体或其抗原结合片段，L是接头，Z是化学部分，并且Am是鹅膏蕈毒素。在某些实施方案中，接头-鹅膏蕈毒素缀合物Am-L-Z由式(III)表示
Figure BDA0002986829440000041
其中R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成任选地被取代的5元杂环烷基基团；
R3是H、RC或RD；
R4、R5、R6和R7各自独立地是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是-L-Z；
RD是任选地被取代的C1-C6烷基、任选地被取代的C1-C6杂烷基、任选地被取代的C2-C6烯基、任选地被取代的C2-C6杂烯基、任选地被取代的C2-C6炔基、任选地被取代的C2-C6杂炔基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的杂环烷基、任选地被取代的芳基或任选地被取代的杂芳基；
L是任选地被取代的C1-C6烷基、任选地被取代的C1-C6杂烷基、任选地被取代的C2-C6烯基、任选地被取代的C2-C6杂烯基、任选地被取代的C2-C6炔基、任选地被取代的C2-C6杂炔基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的杂环烷基、任选地被取代的芳基或任选地被取代的杂芳基；或者包括二肽；或–((CH2)mO)n(CH2)m–，其中m和n各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10；并且
Z是由L上存在的反应性取代基与抗CD5抗体或其抗原结合片段内存在的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分。
在这种实施方案中，接头-鹅膏蕈毒素缀合物Am-L-Z由式(III)表示
Figure BDA0002986829440000061
其中R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成任选地被取代的5元杂环烷基基团；
R3是H、RC或RD；
R4、R5、R6和R7各自独立地是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是-L-Z；
RD是任选地被取代的C1-C6烷基、任选地被取代的C1-C6杂烷基、任选地被取代的C2-C6烯基、任选地被取代的C2-C6杂烯基、任选地被取代的C2-C6炔基、任选地被取代的C2-C6杂炔基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的杂环烷基、任选地被取代的芳基或任选地被取代的杂芳基；
L是接头；并且
Z是由L上存在的反应性取代基与抗CD5抗体或其抗原结合片段内存在的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分。
在式(III)的一种实施方案中，L是包含接头的肽。
在一些实施方案中，接头包括以下的一个或更多个：二肽、对氨基苄基(PAB)基团、任选地被取代的C1-C6烷基、任选地被取代的C1-C6杂烷基、任选地被取代的C2-C6烯基、任选地被取代的C2-C6杂烯基、任选地被取代的C2-C6炔基、任选地被取代的C2-C6杂链炔基、任选地被取代的C3-C6环烷基、任选地被取代的杂环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、增强溶解性的基团、-(C＝O)-、-(CH2CH2O)p-基团，其中p是1-6的整数，((CH2)mO)n(CH2)m–，其中n和每个m各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10；或其组合。
在一些实施方案中，接头包括((CH2)mO)n(CH2)m–基团和杂芳基基团，其中杂芳基基团是三唑。在一些实施方案中，((CH2)mO)n(CH2)m–基团和三唑一起包括
Figure BDA0002986829440000071
其中n是1至10，并且波浪线指示与另外的接头组分、化学部分Z或鹅膏蕈毒素的附接点。
在一些实施方案中，Am精确地包含一个RC取代基。
在一种实施方案中，ADC的接头是N-β-马来酰亚胺丙酰基-Val-Ala-对氨基苄基(BMP-Val-Ala-PAB)。在一些实施方案中，接头L和化学部分Z(合在一起称为L-Z)是
Figure BDA0002986829440000072
其中S是硫原子，表示存在于结合CD5的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基(例如，来自半胱氨酸残基的-SH基团)。
在一些实施方案中，L-Z是
Figure BDA0002986829440000073
在一种实施方案中，ADC由以下结构中的任一种表示：
Figure BDA0002986829440000081
在一种实施方案中，ADC由以下结构中的一种表示：
Figure BDA0002986829440000082
在一种实施方案中，ADC具有3天或更短的血清半衰期。
在一种实施方案中，CAR的胞外结构域是scFv抗体。
在一种实施方案中，CAR的胞外结构域是单链T细胞受体(scTCR)。在一种实施方案中，CAR的胞外结构域包括非免疫球蛋白支架蛋白。
在一种实施方案中，CAR的胞外结构域与是以下的肿瘤抗原结合：CD19、CD22、CD30、CD7、BCMA、CD137、CD22、CD20、AFP、GPC3、MUC1、间皮素、CD38、PD1、EGFR(例如，EGFRvIII)、MG7、BCMA、TACI、CEA、PSCA、CEA、HER2、MUC1、CD33、ROR2、NKR-2、PSCA、CD28、TAA、NKG2D或CD123。
在某些实施方案中，CAR的胞质结构域包括CD28胞质信号传导结构域、CD3δ胞质信号传导结构域、OX40胞质信号传导结构域和/或CD137(4-1BB)胞质信号传导结构域。在一种实施方案中，CAR的胞质结构域包括CD3δ胞质信号传导结构域。
本文公开的方法和组合物可以用于治疗患有癌症的人类受试者，所述癌症包括但不限于白血病、成人晚期癌症、胰腺癌、不可切除性胰腺癌、结肠直肠癌(colorectalcancer)、转移性结肠直肠癌、卵巢癌、三阴性乳腺癌、造血/淋巴癌、结肠癌肝转移、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、B细胞淋巴瘤、复发性或难治性B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、复发性或难治性弥漫性大细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、复发性纵隔大B细胞淋巴瘤、难治性纵隔大B细胞淋巴瘤、大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、复发性或难治性非霍奇金淋巴瘤、难治性侵袭性非霍奇金淋巴瘤、B细胞非霍奇金淋巴瘤、难治性非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠上皮癌(colorectal carcinoma)、胃癌、胰腺癌、三阴性浸润性乳腺癌、肾细胞癌、肺鳞状细胞癌、肝细胞癌、尿路上皮癌、白血病、B细胞白血病、B细胞急性淋巴细胞白血病、B细胞急性成淋巴细胞白血病、成人急性成淋巴细胞白血病、B细胞幼淋巴细胞白血病、儿童急性成淋巴细胞白血病、难治性儿童急性成淋巴细胞白血病、急性白血病、急性成淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、幼淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、复发性浆细胞骨髓瘤、难治性浆细胞骨髓瘤、多发性骨髓瘤、复发性或难治性多发性骨髓瘤、骨多发性骨髓瘤、脑恶性神经胶质瘤、骨髓增生异常综合征、EGFR阳性结肠直肠癌、多形性胶质母细胞瘤、赘生物、母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤、肝转移、实体瘤、晚期实体瘤、间皮素阳性肿瘤、血液恶性肿瘤及其他晚期恶性肿瘤。
在以上任一方面的某些实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包含如下文表1A和表1B中列出的CDR(即，CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3区域)的组合。在某些实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包含如表1A和表1B中列出的重链可变区和轻链可变区的组合。
附图简述
图1图示描绘了体外细胞系结合测定的结果，其中将指示的抗CD5抗体中的每一种或阴性对照(即，mIgG1)与MOLT-4细胞(即，人类T淋巴母细胞细胞系)一起孵育，随后与荧光团缀合的抗IgG抗体一起孵育。信号通过流式细胞术检测，并且表示为几何平均荧光强度(y轴)随抗CD5抗体浓度(x轴)的变化。
图2图示描绘了体外原代细胞结合测定的结果，其中将指示的抗CD5抗体(即，“CD55D7”)或阴性对照(即，hIgG1)与原代人类T细胞一起孵育，随后与荧光团缀合的抗IgG抗体一起孵育。信号通过流式细胞术来检测，并且表示为几何平均荧光强度(y轴)随抗CD5抗体浓度(x轴)的变化。
图3A和图3B图示描绘了体外T细胞杀伤测定的结果，该测定包括抗CD5鹅膏蕈碱ADC(即，5D7-AM或“CD5 5D7 AM”)，其具有平均药物与抗体比(DAR)为6的链间缀合的鹅膏蕈碱(图3A)或DAR为2的位点特异性缀合的鹅膏蕈碱(图3B)。在图3A中，示出了与非缀合的抗CD5 5D7抗体(即，“裸CD5 5D7”)相比的抗CD5-ADC T细胞杀伤分析。在图3B中，示出了与具有减少抗体的半衰期(即，“CD5快速半衰期AM”)的H435A突变的抗CD5 5D7抗体(即，CD5 5D7D265C.H435A AM)相比的抗CD5-ADC T细胞杀伤分析。结果示出了存活的T细胞的数目(y轴)随ADC(CD5 5D7 AM、CD5 5D7 D265C.H435A AM)或非缀合的抗体(裸CD5 5D7)浓度(x轴)的变化，如使用流式细胞术评估的。
图4A-4B图示描绘了体内T细胞消耗测定的结果，示出了在单次施用0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg的具有链间DAR为6的抗CD5 5D7鹅膏蕈碱ADC(即，CD5 5D7-AM)之后7天，人源化NSG小鼠的外周血(图4A)和骨髓(图4B)中的T细胞的绝对水平(CD3+细胞；y轴)。为了比较，图4A-4B还示出了在用指示的对照(即，25mg/kg抗CD5抗体、3mg/kg hIgG1-鹅膏蕈碱ADC(即，hIgG1-AM)、25mg/kg hIgG1或PBS)处理人源化NSG小鼠之后T细胞消耗的水平。
图5A-5C图示描绘了体内T细胞消耗测定的结果，示出了在单次施用1mg/kg或3mg/kg的具有位点特异性DAR为2的抗CD5 5D7-鹅膏蕈碱ADC(即，CD5 5D7-AM)之后7天，人源化NSG小鼠的外周血(图5A)、骨髓(图5B)和胸腺(图5C)中的T细胞的绝对水平(CD3+细胞；y轴)。为了比较，图5A-5C还示出了在用3mg/kg的非缀合的抗CD5抗体(即，CD5 5D7)或用指示的对照(即，3mg/kg hIgG1-鹅膏蕈碱ADC(“hIgG1-AM”)或PBS)处理人源化NSG小鼠之后T细胞消耗的水平。
详述
本发明提供了促进接受嵌合抗原受体(CAR)疗法的人类受试者对表达CAR的免疫细胞(自体或同种异体的)的接受的方法，所述方法通过将抗CD5抗体药物缀合物(ADC)施用至接受CAR疗法的患者来进行。本文公开的方法可以用于改善对自体或同种异体免疫细胞(例如T细胞)的接受，而不依赖于(或可选地降低使用)通常用作调节疗法以降低表达CAR的免疫细胞排斥的淋巴消耗性化学疗法。
I.定义
如本文使用的，术语“约”是指高于或低于所描述的值的5％以内的值。
如本文使用的，术语“同种异体”，当用于移植的情况时，用于定义从供体移植至同一物种接受者的细胞(或组织或器官)，其中供体和接受者不是同一受试者。
如本文使用的，术语“自体”是指供体和接受者是同一受试者的情况下的细胞或移植物。
如本文使用的，术语“异种异体”是指供体和接受者物种不同的情况下的细胞。
如本文使用的，术语“免疫细胞”意图包括但不限于造血来源并在免疫应答中起作用的细胞。免疫细胞包括但不限于T细胞和自然杀伤(NK)细胞。自然杀伤细胞是本领域熟知的。在一种实施方案中，自然杀伤细胞包括细胞系，诸如NK-92细胞。NK细胞系的另外的实例包括NKG细胞、YT细胞、NK-YS细胞、HANK-1细胞、YTS细胞和NKL细胞。免疫细胞可以是同种异体的或自体的。
“工程化细胞”意指通过添加基因、DNA或RNA序列或蛋白或多肽或者修饰基因、DNA或RNA序列或蛋白或多肽而被修饰、转化或操作的任何生物体的任何细胞。本公开内容的分离的细胞、宿主细胞和遗传工程化细胞包括包含编码CAR的DNA或RNA序列并在细胞表面上表达CAR的分离的免疫细胞，诸如NK细胞和T细胞。分离的宿主细胞和工程化细胞可以用于例如增强NK细胞活性或T淋巴细胞活性、治疗癌症以及治疗自身免疫性疾病。在实施方案中，工程化细胞包括免疫细胞，例如T细胞或自然杀伤(NK)细胞。
如本文使用的，术语“抗体”是指与特定抗原特异性结合或进行免疫反应的免疫球蛋白分子。抗体包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，条件为它们表现出期望的抗原结合活性。
通常，抗体包含含有抗原结合区的重链和轻链。每条重链包含重链可变区(在本文中被缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含3个结构域，CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(在本文中被缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域，CL。VH和VL区可以被进一步细分为被称为互补决定区(CDR)的高变区，其散布着被称为框架区(FR)的更保守的区域。每个VH和VL包含3个CDR和4个FR，按以下顺序从氨基末端向羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的多种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。
如本文使用的，术语“抗原结合片段”是指抗体的一个或更多个部分，其保留与靶抗原特异性结合的能力。抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。抗体片段可以是例如Fab、F(ab')2、scFv、双体(diabody)、三体(triabody)、亲和体(affibody)、纳米抗体(nanobody)、适配体或结构域抗体。涵盖术语抗体的“抗原结合片段”的结合片段的实例包括但不限于：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含在铰链区通过二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)包含VH和VL结构域的dAb；(vi)由VH结构域组成的dAb片段(参见，例如，Ward等人,Nature 341:544-546,1989)；(vii)由VH或VL结构域组成的dAb；(viii)分离的互补决定区(CDR)；和(ix)两个或更多个(例如，两个、三个、四个、五个或六个)分离的CDR的组合，该CDR可以任选地通过合成的接头连接。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由单独的基因编码，但它们可以使用重组方法通过接头连接，该接头使得它们能够成为单个蛋白链，其中VL和VH区配对形成单价分子(被称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird等人,Science 242:423-426,1988和Huston等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883,1988)。这些抗体片段可以使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且可以以与完整抗体相同的方式筛选这些片段的效用。抗原结合片段可以通过重组DNA技术、完整免疫球蛋白的酶促或化学裂解，或在某些情况下，通过本领域已知的化学肽合成程序产生。
如本文使用的，“完整”或“全长”抗体是指具有通过二硫键相互连接的两个重(H)链多肽和两个轻(L)链多肽的抗体。
如本文使用的，术语“抗CD5抗体”或“与CD5结合的抗体”或“抗CD5 ADC”或“与CD5结合的ADC”是指当CD5存在于细胞诸如T细胞的细胞表面上时与人类CD5特异性地结合的抗体或ADC。抗CD5抗体(或抗CD5 ADC)将结合的人类CD5的氨基酸序列在下文描述于SEQ IDNO:20中。
如本文使用的，术语“特异性地结合”是指抗体(或ADC)识别并结合特定蛋白结构(表位)而不是一般蛋白的能力。如果抗体对表位“A”有特异性，则在含有标记的“A”和抗体的反应中，含有表位A的分子(或游离的、未标记的A)的存在将降低与抗体结合的标记的A的量。以举例的方式，如果抗体在标记时可以被对应的未标记的抗体竞争离开其靶，则抗体与靶“特异性地结合”。在一种实施方案中，如果抗体对靶具有至少约10-4M、10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M或更小(更小意指小于10-12的数，例如10-13)的KD，则抗体与靶例如CD5特异性地结合。在一种实施方案中，如本文使用的，术语“与CD5特异性的结合”或“与CD5特异性地结合”是指与CD5结合并且具有1.0×10-7M或更小的解离常数(KD)的抗体，如通过表面等离子体共振确定的。在一种实施方案中，KD根据标准生物层干涉法(BLI)确定。然而，应理解，抗体可能能够与两种或更多种序列相关的抗原特异性地结合。例如，在一种实施方案中，抗体可以与CD5的人类直系同源物和非人类(例如，小鼠或非人类灵长类动物)直系同源物两者特异性地结合。
如本文使用的术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术产生的抗体。单克隆抗体通过本领域中任何可用或已知的手段从单个克隆包括任何真核克隆、原核克隆或噬菌体克隆获得。可用于本公开内容的单克隆抗体可以使用本领域已知的各种各样的技术制备，包括使用杂交瘤技术、重组技术和噬菌体展示技术或其组合。
如本文使用的术语“嵌合”抗体是指具有来源于非人类免疫球蛋白(诸如大鼠或小鼠抗体)的可变序列和人类免疫球蛋白恒定区(通常选自人类免疫球蛋白模板)的抗体。用于产生嵌合抗体的方法是本领域已知的。参见，例如，Morrison,1985,Science 229(4719):1202-7；Oi等人,1986,BioTechniques 4:214-221；Gillies等人,1985,J.Immunol.Methods125:191-202；美国专利第5,807,715号、第4,816,567号和第4,816,397号。
非人类(例如，鼠)抗体的“人源化”形式是包含来源于非人类免疫球蛋白的最少序列的嵌合免疫球蛋白。通常，人源化抗体将大体上包含至少一个并且通常两个可变结构域的全部，其中全部或大体上全部CDR区对应于非人类免疫球蛋白的CDR区，并且全部或大体上全部FR区是人类免疫球蛋白序列的FR区。人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人类免疫球蛋白共有序列的一部分。抗体人源化的方法是本领域已知的。参见，例如，Riechmann等人,1988,Nature 332:323-7；Queen等人的美国专利第5,530,101号、第5,585,089号、第5,693,761号、第5,693,762号和第6,180,370号；EP239400；PCT公布WO 91/09967；美国专利第5,225,539号；EP592106；EP519596；Padlan,1991,Mol.Immunol.,28:489-498；Studnicka等人,1994,Prot.Eng.7:805-814；Roguska等人,1994,Proc.Natl.Acad.Sci.91:969-973；以及美国专利第5,565,332号。
如本文使用的，术语“嵌合抗原受体”或“CAR”是指包含至少一个能够特异性地结合抗原的胞外结构域、跨膜结构域和至少一个胞内信号传导结构域的重组多肽。通常，CAR是将免疫效应细胞的细胞毒性朝向呈现给定抗原的细胞重新定向的遗传工程化受体。CAR是将针对期望抗原(例如肿瘤抗原)的基于抗体的特异性与活化T细胞受体的胞内结构域组合以产生表现出特定细胞免疫活性的嵌合蛋白的分子。在特定实施方案中，CAR包含胞外结构域(也被称为结合结构域或抗原特异性结合结构域)、跨膜结构域和胞内(胞质)信号传导结构域。CAR的抗原结合结构域与靶细胞表面上的靶抗原的接合导致CAR的聚集，并且将活化刺激递送至包含CAR的细胞。CAR的主要特征是其利用单克隆抗体、可溶性配体或细胞特异性共受体的细胞特异性靶向能力来重新定向免疫效应细胞特异性，从而触发增殖、细胞因子产生、吞噬或分子产生(能够以不依赖主要组织相容性(MHC)的方式介导表达靶抗原的细胞的细胞死亡)的能力。在一些实施方案中，CAR包含与肿瘤抗原特异性结合的胞外结合结构域；跨膜结构域和一个或更多个胞内信号传导结构域。在各种实施方案中，CAR包含特异性结合人类CD5的胞外结合结构域、跨膜结构域和一个或更多个胞内信号传导结构域。
如本文使用的，术语“CAR疗法”是指将工程化以表达CAR的免疫细胞施用至人类受试者以治疗给定疾病，例如癌症或自身免疫性疾病。CAR疗法是指用工程化免疫细胞对患者进行的特异性治疗，并且不意图包括通常与CAR细胞治疗结合使用的疗法，例如淋巴消耗性化学疗法。值得注意的是，除非另外说明，否则在通篇使用术语“细胞”的情况下，该术语也包括细胞群体。例如，因为CAR疗法需要施用工程化细胞群体。
如本文使用的，术语“组合”或“组合疗法”是指在单个人类患者中使用两种(或更多种)疗法。这些术语不意图指组合组分。例如，本文描述了包括施用抗CD5 ADC和CAR疗法的组合疗法。
术语“调节”是指将需要CAR疗法的患者准备为合适的条件。如本文使用的调节包括但不限于，在T细胞疗法之前降低内源淋巴细胞的数目、去除细胞因子池(sink)、增加一种或更多种稳态细胞因子或促炎因子的血清水平、增强在调节之后施用的T细胞的效应物功能、增强抗原呈递细胞的活化和/或可用性或其任何组合。
在抗CD5抗体或ADC对表达CD5的细胞的作用的情况下，术语“消耗”是指表达CD5的细胞的数目减少或消除。
如本文使用的，术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以实现期望的结果或对自身免疫性疾病或癌症具有效果的量。
如本文使用的，术语“受试者”和“患者”是指如本文描述的接受特定疾病或状况的治疗的生物体，诸如人类。
如本文使用的“治疗(to treat)”或“治疗(treatment)”是指对疾病结果的任何改善，诸如延长的生存期、较少的发病率和/或减轻作为替代治疗方式的副产品的副作用；如本领域中容易理解的，完全消除疾病是优选的，但不是治疗行为的要求。有益或期望的临床结果包括，但不限于，促进对表达CAR的免疫细胞(同种异体的或自体的—两者均可以在接受CAR疗法的患者中引起免疫反应)的接受。就本发明的方法旨在预防紊乱而言，应理解术语“预防”并不要求疾病状态被完全阻止。而是，如本文使用的，术语预防是指技术人员鉴定易受紊乱影响的人群的能力，使得本发明化合物的施用可以在疾病发作之前进行。该术语并不意味着疾病状态被完全避免。
如本文使用的，术语“载体”包括核酸载体，诸如质粒、DNA载体、质粒、RNA载体、病毒或其他合适的复制子。本文描述的表达载体可以含有多核苷酸序列以及例如用于表达蛋白和/或将这些多核苷酸序列整合到哺乳动物细胞基因组中的另外的序列元件。可以用于表达CAR的某些载体包括包含指导基因转录的调控序列(诸如启动子和增强子区)的质粒。用于抗体或CAR表达的其他有用载体包含增强这些基因的翻译速率或改善由基因转录产生的mRNA的稳定性或核输出的多核苷酸序列。这些序列元件可以包括，例如，5'和3'非翻译区和多腺苷酸化信号位点，以便指导表达载体上携带的基因的有效转录。本文描述的表达载体还可以含有编码用于选择含有这样的载体的细胞的标志物的多核苷酸。合适的标志物的实例包括编码对抗生素(诸如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素和诺尔丝菌素(nourseothricin))的抗性的基因。
如本文使用的，术语“抗体药物缀合物”或“ADC”是指与细胞毒素连接的抗体。ADC通过一个分子(诸如抗体或其抗原结合片段)的反应性官能基团与另一个分子(诸如本文描述的细胞毒素)的适当反应性官能基团的化学键合形成。缀合物可以在彼此结合的两个分子之间(例如在抗体和细胞毒素之间)包含接头。值得注意的是，术语“缀合物”(当指化合物时)在本文中也可互换地被称为“药物缀合物”或“抗体药物缀合物”或“ADC”。可以用于形成缀合物的接头的实例包括含肽接头，诸如含有天然存在或非天然存在的氨基酸诸如D-氨基酸的接头。可以使用本文描述和本领域已知的多种策略制备接头。取决于其中的反应性组分，接头可以通过例如，酶促水解、光解、在酸性条件下水解、在碱性条件下水解、氧化、二硫化物还原、亲核裂解或有机金属裂解而被裂解(参见，例如，Leriche等人,Bioorg.Med.Chem.,20:571-582,2012)。
如本文使用的，术语“偶联反应”是指其中两个或更多个适于彼此反应的取代基进行反应以便形成化学部分的化学反应，所述化学部分将与每个取代基结合的分子片段连接在一起(例如，共价地)。偶联反应包括那些反应，其中结合至为细胞毒素(诸如本领域已知的或本文描述的细胞毒素)的片段的反应性取代基与结合至为抗体或其抗原结合片段(诸如本领域已知或本文描述的结合CD5的抗体、其抗原结合片段或特异性抗CD5抗体)的片段的适当反应性取代基发生反应。适当反应性取代基的实例包括亲核体/亲电子体对(例如尤其是，硫醇/卤代烷基对、胺/羰基对或硫醇/α,β-不饱和羰基对)、二烯/亲二烯体对(例如尤其是叠氮化物/炔烃对)等。偶联反应包括但不限于硫醇烷基化、羟基烷基化、胺烷基化、胺缩合、酰胺化、酯化、二硫化物形成、环加成(例如尤其是[4+2]狄尔斯-阿尔德环加成(Diels-Alder cycloaddition)、[3+2]Huisgen环加成)、亲核芳族取代、亲电芳族取代和本领域已知或本文描述的其他反应性方式。
如本文使用的，术语“微管结合剂”是指通过破坏微管网络起作用的化合物，微管网络对于细胞中的有丝分裂和间期细胞功能至关重要。微管结合剂的实例包括但不限于美登素、美登素生物碱及其衍生物，诸如本文描述或本领域已知的那些，长春花生物碱类，诸如长春花碱、硫酸长春花碱、长春新碱、硫酸长春新碱、长春地辛和长春瑞滨，紫杉烷类，诸如多西他赛和紫杉醇，大环内酯类，诸如圆皮海绵内酯(discodermolide)、秋水仙素和埃博霉素及其衍生物，诸如埃博霉素B或其衍生物。
如本文使用的，术语“鹅膏蕈毒素”是指由鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)蘑菇产生的肽的鹅膏蕈毒素家族成员或其衍生物，诸如其能够抑制RNA聚合酶II活性的变体或衍生物。可用于与本文描述的组合物和方法结合使用的鹅膏蕈毒素包括化合物，诸如但不限于式(II)的化合物，例如，α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素、鹅膏素酰胺、鹅膏无毒环肽、一羟鹅膏毒肽羧酸和前鹅膏无毒环肽。鹅膏蕈毒素可以从多种蘑菇物种(例如，鬼笔鹅膏、纹缘盔孢伞(Galerina marginata)、肉褐鳞小伞(Lepiotabrunneo-incarnata))分离，或者可以半合成制备或合成制备。这个家族的一个成员，α-鹅膏蕈碱，描述于Wieland,Int.J.Pept.Protein Res.1983,22(3):257-276中。鹅膏蕈毒素的衍生物可以通过对天然存在的化合物进行化学修饰(“半合成”)来获得，或者可以从完全合成来源获得。多种鹅膏蕈毒素衍生物的合成途径公开于例如美国专利第9,676,702号以及Perrin等人,J.Am.Chem.Soc.2018,140,第6513-6517页中，其中每一项关于制备和衍生鹅膏蕈毒素的合成方法都通过引用以其整体并入本文。
如本文描述的，可以通过例如接头部分(L)将鹅膏蕈毒素与抗体或其抗原结合片段缀合(由此形成ADC)。示例性鹅膏蕈毒素-接头缀合物的结构由式(III)、式(IIIA)和式(IIIB)表示。以下描述了鹅膏蕈毒素缀合的示例性方法和可用于这样的方法的接头。本文还描述了可用于与根据组合物和方法的抗体或抗原结合片段缀合的示例性包含接头的鹅膏蕈毒素。
如本文使用的术语“酰基”是指-C(＝O)R，其中，如本文定义的，R是氢(“醛”)、C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C3-C7碳环基、C6-C20芳基、5-10元杂芳基或5-10元杂环基。非限制性实例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、苯甲酰基和丙烯酰基。
如本文使用的术语“C1-C12烷基”是指具有从1个至12个碳原子的直链的或支链的饱和烃。代表性C1-C12烷基基团包括但不限于，-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基和-正己基；而支链C1-C12烷基包括但不限于，-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基、-异戊基和2-甲基丁基。C1-C12烷基基团可以是未被取代的或被取代的。
如本文使用的术语“烯基”是指包含具有至少一个不饱和位点(即碳-碳sp2双键)的正、仲或叔碳原子的C2-C12烃。实例包括但不限于:乙烯或乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-异丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基等。烯基基团可以是未被取代的或被取代的。
如本文使用的“炔基”是指包含具有至少一个不饱和位点(即碳-碳sp三键)的正、仲或叔碳原子的C2-C12烃。实例包括但不限于炔基(acetylenic)和炔丙基。炔基基团可以是未被取代的或被取代的。
如本文使用的“芳基”是指C6-C20碳环芳香族基团。芳基基团的实例包括但不限于苯基、萘基和蒽基。芳基基团可以是未被取代的或被取代的。
如本文使用的“芳基烷基”是指其中与碳原子(典型是末端碳原子或sp3碳原子)键合的一个氢原子被芳基基团取代的无环烷基基团。典型的芳基烷基基团包括但不限于苄基、2-苯基乙基-1-基、2-苯基乙烷-1-基、萘基甲基、2-萘基乙烷-1-基、2-萘基乙烯-1-基、萘基苄基(naphthobenzyl)、2-萘基苯基乙烷-1-基等。芳基烷基基团包含6个至20个碳原子，例如芳基烷基基团的烷基部分(包括烷基(alkanyl)、烯基或炔基基团)是1个至6个碳原子，并且芳基部分是5个至14个碳原子。烷芳基基团可以是未被取代的或被取代的。
如本文使用的“环烷基”是指饱和碳环基团，其可以是单环或双环的。环烷基基团包括具有作为单环的3个至7个碳原子或作为双环的7个至12个碳原子的环。单环的环烷基基团的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、以及环辛基。环烷基基团可以是未被取代的或被取代的。
如本文使用的“环烯基”是指不饱和碳环基团，其可以是单环或双环的。环烯基基团包括具有作为单环的3个至6个碳原子或作为双环的7个至12个碳原子的环。单环的环烯基基团的实例包括1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基和1-环己-3-烯基。环烯基基团可以是未被取代的或被取代的。
如本文使用的“杂芳烷基”是指其中与碳原子(典型是末端碳原子或sp3碳原子)键合的一个氢原子被杂芳基基团取代的无环烷基基团。典型的杂芳基烷基基团包括但不限于2-苯并咪唑基甲基、2-呋喃基乙基等。杂芳基烷基基团包含6个至20个碳原子，例如杂芳基烷基基团的烷基部分(包括烷基、烯基或炔基基团)是1个至6个碳原子，并且杂芳基部分是5个至14个碳原子和1个至3个选自N、O、P和S的杂原子。杂芳基烷基基团的杂芳基部分可以是具有3个至7个环成员(2个至6个碳原子)的单环或具有7个至10个环成员(4个至9个碳原子和1个至3个选自N、O、P和S的杂原子)的双环，例如：双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。
如本文使用的“杂芳基”和“杂环烷基”分别指芳香族环系统或非芳香族环系统，其中一个或更多个环原子是杂原子，例如氮、氧和硫。杂芳基或杂环烷基基团包含2个至20个碳原子和1个至3个选自N、O、P和S的杂原子。杂芳基或杂环烷基可以是具有3个至7个环成员(2个至6个碳原子和1个至3个选自N、O、P和S的杂原子)的单环或具有7个至10个环成员(4个至9个碳原子和1个至3个选自N、O、P和S的杂原子)的双环，例如：双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。杂芳基和杂环烷基可以是未被取代的或被取代的。
杂芳基基团和杂环烷基基团描述于以下中：Paquette,Leo A.；"Principles ofModern Heterocyclic Chemistry"(W.A.Benjamin,New York,1968)，特别是第1章、第3章、第4章、第6章、第7章和第9章；"The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series ofMonographs"(John Wiley&Sons,New York,1950至今)，特别是第13卷、第14卷、第16卷、第19卷和第28卷；以及J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566。
例如，杂芳基基团的实例包括但不限于吡啶基、噻唑基、四氢噻吩基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、硫代萘基(thianaphthalenyl)、吲哚基、二氢吲哚基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、异噁唑基、吡嗪基、哒嗪基、吲嗪基、异吲哚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪(4H-quinolizinyl)、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、菲啶基、吖啶基、嘧啶基、菲咯啉基(phenanthrolinyl)、吩嗪基、吩噻嗪基、呋咱基、吩噁嗪基、异色原烷基、色原烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、苯并三唑基、苯并异噁唑基和靛红基(isatinoyl)。
例如，杂环烷基的实例包括但不限于二氢吡啶基、四氢吡啶基(哌啶基(piperidyl))、四氢噻吩基、哌啶基(piperidinyl)、4-哌啶酮基、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、双四氢吡喃基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢异喹啉基、哌嗪基、奎宁环基和吗啉基。
例如但不限于，碳键合的杂芳基和杂环烷基键合在吡啶的位置2、3、4、5或6处，哒嗪的位置3、4、5或6处，嘧啶的位置2、4、5或6处，吡嗪的位置2、3、5或6处，呋喃、四氢呋喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氢吡咯的位置2、3、4或5处，噁唑、咪唑或噻唑的位置2、4或5处，异噁唑、吡唑、异噻唑的位置3、4或5处，氮丙啶的位置2或3处，氮杂环丁烷的位置2、3或4处，喹啉的位置2、3、4、5、6、7或8处或异喹啉的位置1、3、4、5、6、7或8位处。仍更典型地，碳键合的杂环包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-哒嗪基、4-哒嗪基、5-哒嗪基、6-哒嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。
例如但不限于，氮键合的杂芳基和杂环烷基键合在氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氢吲哚啉、1H-吲唑的位置1处，异吲哚或异吲哚啉的位置2处，吗啉的位置4处和咔唑或β-咔啉的位置9处。仍更典型地，氮键合的杂环包括1-氮丙啶基、1-氮杂环丁二烯基(azetedyl)、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基和1-哌啶基。
如本文使用以及应用于任何以上烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、环烷基、杂芳基、杂环基等的“被取代的”意指一个或更多个氢原子各自独立地被取代基替代。除非另外受到个体取代基的定义的限制，否则前述化学部分，诸如“烷基”、“亚烷基”、“杂烷基”、“亚杂烷基”、“烯基”、“亚烯基”、“杂烯基”、“亚杂烯基”、“炔基”、“亚炔基”、“杂炔基”、“亚杂炔基”、“环烷基”、“亚环烷基”、“杂环烷基”、“亚杂环烷基”、“芳基”、“亚芳基”、“杂芳基”和“亚杂芳基”基团可以任选地被取代。
典型的取代基包括但不限于，-X、-R、-OH、-OR、-SH、-SR、NH2、-NHR、-N(R)2、-N+(R)3、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-NCO、-NCS、-NO、-NO2、-N3、-NC(＝O)H、-NC(＝O)R、-C(＝O)H、-C(＝O)R、-C(＝O)NH2、-C(＝O)N(R)2、-SO3-、-SO3H、-S(＝O)2R、-OS(＝O)2OR、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2N(R)2、-S(＝O)R、-OP(＝O)(OH)2、-OP(＝O)(OR)2、-P(＝O)(OR)2、-PO3、-PO3H2、-C(＝O)X、-C(＝S)R、-CO2H、-CO2R、-CO2-、-C(＝S)OR、-C(＝O)SR、-C(＝S)SR、-C(＝O)NH2、-C(＝O)N(R)2、-C(＝S)NH2、-C(＝S)N(R)2、-C(＝NH)NH2和-C(＝NR)N(R)2；其中对于每种情况每个X独立地选自F、Cl、Br和I；并且对于每种情况每个R独立地选自C1-C12烷基、C6-C20芳基、C3-C14杂环烷基或杂芳基、保护基团和前药部分。在基团被描述为“任选地被取代”的所有情况下，对于每种情况该基团可以独立地被一个或更多个以上取代基取代。
应理解，取决于上下文，某些基团命名惯例可以包括单价基或二价基。例如，在取代基需要与分子的其余部分有两个附接点的情况下，应理解该取代基是二价基。例如，被鉴定为需要两个附接点的烷基的取代基包括二价基，诸如-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-等。其他基团命名惯例明确地表明该基团是二价基，诸如“亚烷基”、“亚烯基”、“亚芳基”、“亚杂环烷基”等。
在取代基被描述为二价基(即，与分子的其余部分有两个附接点)的所有情况下，应理解取代基可以以任何方向构型附接，除非另有说明。
“异构”意指具有相同分子式但其原子键合顺序或其原子空间排列不同的化合物。其原子空间排列不同的异构体被称为“立体异构体”。不是彼此镜像的立体异构体被称为“非对映异构体(diastereoisomers)”，而彼此呈不可重叠镜像的立体异构体被称为“对映异构体”或者有时也被称为“光学异构体”。
与四个不相同的取代基键合的碳原子被称为“手性中心”。“手性异构体”意指具有至少一个手性中心的化合物。具有多于一个手性中心的化合物可以作为单独的非对映体或作为非对映体的混合物(被称为“非对映体混合物”)存在。当存在一个手性中心时，立体异构体可以由该手性中心的绝对构型(R或S)来表征。绝对构型是指与手性中心附接的取代基的空间排列。与所考虑的手性中心附接的取代基按照Cahn、Ingold和Prelog的序列规则排序。(Cahn等人,Angew.Chem.Inter.编著1966,5,385；勘误511；Cahn等人,Angew.Chem.1966,78,413；Cahn和Ingold,J.Chem.Soc.1951(London),612；Cahn等人,Experientia 1956,12,81；Cahn,J.Chem.Educ.1964,41,116)。包含等量相反手性的单独对映异构体形式的混合物被称为“外消旋混合物”。
本说明书和权利要求书中公开的化合物可以包含一个或更多个不对称中心，并且每种化合物可以存在不同的非对映异构体和/或对映异构体。除非另外说明，否则本说明书和权利要求书中对任何化合物的描述意图包括所有对映异构体、非对映异构体及其混合物。此外，除非另外说明，否则本说明书和权利要求书中对任何化合物的描述意图包括单独的对映异构体以及对映异构体的任何外消旋或其他混合物两者。当化合物的结构被描述为特定对映异构体时，应当理解，本申请的发明不限于该特定对映异构体。相应地，本文考虑了本公开内容的每个结构式的对映异构体、光学异构体和非对映异构体。在本说明书中，为了方便起见，化合物的结构式在一些情况下表示某种异构体，但是本公开内容包括所有异构体，诸如几何异构体、基于不对称碳的光学异构体、立体异构体、互变异构体等，应当理解，不是所有异构体都可以具有相同的活性水平。化合物可能以不同的互变异构体形式存在。除非另外说明，否则根据本公开内容的化合物意图包括所有互变异构体形式。当化合物的结构被描述为特定互变异构体时，应当理解，本申请的发明不限于该特定互变异构体。
本文描述的任何式的化合物包括化合物本身，以及如果适用则包括它们的盐和它们的溶剂化物。例如，盐可以在阴离子和本公开内容的化合物上的带正电荷的基团(例如，氨基)之间形成。合适的阴离子包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硫酸氢根、氨基磺酸根、硝酸根、磷酸根、柠檬酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根、谷氨酸根、葡糖醛酸根、戊二酸根、苹果酸根、马来酸根、琥珀酸根、富马酸根、酒石酸根、甲苯磺酸根、水杨酸根、乳酸根、萘磺酸根以及乙酸根(例如三氟乙酸根)。术语“药学上可接受的阴离子”是指适于形成药学上可接受的盐的阴离子。同样，盐也可以在阳离子和本公开内容的化合物上的带负电荷的基团(例如，羧酸根)之间形成。合适的阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子和铵阳离子，诸如四甲基铵离子。一些合适的被取代的铵离子的实例是来源于以下的那些：乙胺、二乙胺、二环己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苄胺、苯基苄胺、胆碱、葡甲胺和氨丁三醇，以及氨基酸，诸如赖氨酸和精氨酸。本公开内容的化合物还包括包含季氮原子的那些盐。
合适的无机阴离子的实例包括但不限于来源于以下无机酸的那些：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、磷酸和亚磷酸。合适的有机阴离子的实例包括但不限于来源于以下有机酸的那些：2-乙酰氧基苯甲酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、乙二胺四乙酸、乙二磺酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基马来酸、羟基萘羧酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、粘酸、油酸、草酸、棕榈酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、苯磺酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、酒石酸、甲苯磺酸和戊酸。合适的聚合有机阴离子的实例包括但不限于来源于以下聚合酸的那些：单宁酸、羧甲基纤维素。
另外地，本公开内容的化合物，例如，化合物的盐，可以以水合或非水合(无水)形式存在，或者作为与其他溶剂分子的溶剂化物存在。水合物的非限制性实例包括一水合物、二水合物等。溶剂化物的非限制性实例包括乙醇溶剂化物、丙酮溶剂化物等。“溶剂化物”意指包含化学计量或非化学计量的量的溶剂的溶剂加成形式。一些化合物在结晶固体状态下具有捕获固定摩尔比的溶剂分子，从而形成溶剂化物的趋势。如果溶剂是水，则形成的溶剂化物是水合物；并且如果溶剂是醇，则形成的溶剂化物是醇化物。水合物是由一个或更多个水分子与一个物质分子组合形成的，其中水保持其分子状态为H2O。水合物是指例如一水合物、二水合物、三水合物等。
此外，由本文公开的式表示的化合物或其盐可以存在晶体多晶型性。应当注意，任何晶型、晶型混合物或其酸酐或水合物都包括在本公开内容的范围内。
以下章节提供了基于将抗CD5 ADC施用至人类患者以促进对CAR疗法中表达CAR的免疫细胞的接受的方法的描述。
II.抗CD5 ADC和CAR的治疗方法
嵌合抗原受体(CAR)疗法的一个挑战是确定表达CAR的工程化细胞例如CAR-T细胞藉以可以被人类接受者接受的手段。这样的对工程化免疫细胞的接受可影响治疗的功效以及对患者的不良副作用的结果。
淋巴消耗性化学疗法是抑制接受者免疫系统以改善接受的传统方法，但通常具有不良副作用。本文描述了促进正在接受CAR疗法的人类患者对表达(CAR)的免疫细胞的接受的方法。本文描述的方法特别地靶向正在经历CAR疗法的人类患者中的CD5+细胞例如CD5+T细胞并消除CD5+细胞。本文公开的方法比淋巴消耗性化学疗法更具靶向性，并且提供了自体细胞或同种异体细胞藉以可以被使用的手段。
本文描述了施用抗CD5抗体药物缀合物(ADC)以消耗接受CAR疗法的患者内CD5特异性免疫细胞群体以便促进表达CAR的免疫细胞的接受和功效的方法。免疫系统的特异性表达CD5的细胞的这种选择性消耗提高了患者的总体存活率和无复发存活率，同时减少用于治疗自身免疫性紊乱或癌症的表达CAR的免疫细胞排斥的风险。
施用CAR细胞疗法之后，表达CAR的免疫细胞排斥的风险仍然是高的。本文公开的方法和组合物可以用于抑制或预防人类患者中CAR细胞的排斥。抗CD5 ADC可以用于选择性地靶向将接受CAR细胞疗法的患者中的活化的T细胞。如本文描述的抗CD5 ADC也可以用于通过靶向和消耗已接受CAR疗法的人类患者中的CD5阳性细胞来降低CAR细胞排斥的风险。
本文描述的组合物和方法可以用于消耗与CAR细胞疗法排斥相关的CD5+细胞，例如T细胞。本发明的方法促进人类受试者(例如患有癌症或自身免疫性疾病的人类受试者)对表达CAR的免疫细胞的接受。在一种实施方案中，该方法包括将抗CD5抗体药物缀合物(ADC)施用至将经历或已经经历CAR疗法的人类受试者，以及将治疗有效量的表达CAR的免疫细胞施用至人类受试者。
抗CD5 ADC可以在一种或更多种CAR细胞疗法的施用之前、与一种或更多种CAR细胞疗法的施用同时地或在一种或更多种CAR细胞疗法的施用之后施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之前(例如，在CAR细胞疗法的施用之前约3天、在CAR细胞疗法的施用之前约2天、在CAR细胞疗法的施用之前约12小时)施用至有相应需要的人类患者。可以将单剂量的抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之前、在CAR细胞疗法的施用之后或与CAR细胞疗法的施用同时地施用至人类患者，其中这样的单剂量足以预防表达CAR的免疫细胞的消耗或降低表达CAR的免疫细胞消耗的风险。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之前约3天施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之前约2天施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之前约1天施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之前约20小时施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之前约18小时施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之前15小时施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之前约12小时施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之前约6小时施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之前约4小时施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之前约2小时施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC与CAR细胞疗法的施用同时地施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之后约2小时施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之后约4小时施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之后约6小时施用至有相应需要的人类患者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC在CAR细胞疗法的施用之后约12小时施用至有相应需要的人类患者。
在一些实施方案中，抗CD5 ADC可以在一种或更多种CAR细胞疗法的施用之前至多约21天施用，例如在一种或更多种CAR细胞疗法的施用之前约21天、约20天、约19天、约18天、约17天、约16天、约15天、约14天、约13天、约12天、约11天、约10天、约9天、约8天、约7天、约6天、约5天、约4天、约3天、约2天、约1天、约24小时、约12小时、约6小时、约3小时、约2小时或约1小时施用。
在一些实施方案中，抗CD5 ADC可以在CAR细胞疗法的施用之后约12小时施用，例如，在一种或更多种CAR细胞疗法的施用之后约12小时、约11小时、约10小时、约9小时、约8小时、约7小时、约6小时、约5小时、约4小时、约3小时、约2小时、约1小时施用。在一些实施方案中，抗CD5 ADC可以在CAR细胞疗法的施用之后约10天施用，例如，在一种或更多种CAR细胞疗法的施用之后约10天、约9天、约8天、约7天、约6天、约5天、约4天、约3天、约2天、约1天施用。
在一种实施方案中，抗CD5 ADC在表达CAR的免疫细胞被施用至有相应需要的人类患者之前施用。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC与CAR疗法组合施用至人类患者，其中将抗CD5 ADC在表达CAR的免疫细胞的施用之前约12小时至约21天施用至人类受试者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC与CAR疗法组合施用至人类患者，其中将抗CD5 ADC在表达CAR的免疫细胞的施用之前约18小时至约20天施用至人类受试者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC与CAR疗法组合施用至人类患者，其中将抗CD5 ADC在表达CAR的免疫细胞的施用之前约20小时至约18天施用至人类受试者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC与CAR疗法组合施用至人类患者，其中将抗CD5 ADC在表达CAR的免疫细胞的施用之前约1天至约15天施用至人类受试者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC与CAR疗法组合施用至人类患者，其中将抗CD5ADC在表达CAR的免疫细胞的施用之前约1天至约10天施用至人类受试者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC与CAR疗法组合施用至人类患者，其中将抗CD5 ADC在表达CAR的免疫细胞的施用之前约2天至约8天施用至人类受试者。在一种实施方案中，将抗CD5 ADC与CAR疗法组合施用至人类患者，其中将抗CD5 ADC在表达CAR的免疫细胞的施用之前约3天至约6天施用至人类受试者。
来自人类患者的生物样品中T细胞的总水平可以在施用抗CD5 ADC之后进行测试，其中人类患者中施用抗CD5 ADC之后的T细胞总数相对于施用之前水平的减少指示抗CD5ADC用于预防CAR细胞疗法排斥的功效。在一种实施方案中，来自人类患者的生物样品中内源T细胞的水平相对于来自即将施用抗CD5 ADC之前的人类患者的生物样品(相同类型，例如血液)中T细胞的水平降低了至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％。在一种实施方案中，来自人类患者的生物样品中内源T细胞的水平相对于来自即将施用抗CD5 ADC之前的人类患者的生物样品(相同类型，例如血液)中T细胞的水平降低了约5％至25％、约5％至20％、约5％至15％或约5％至10％。在一种实施方案中，内源T细胞的水平在施用抗CD5ADC之前一天或更短时间被确定。
T细胞的水平可以根据本领域已知的标准方法来确定，所述方法包括但不限于荧光激活细胞分选(FAC)分析或血液分析仪。
如以上描述的，本文描述方法的一个优点是，淋巴消耗性化学治疗剂的量可以被降低或者淋巴消耗性化学治疗剂不被包括在施用至接受或计划接受CAR疗法的人类患者的调节方案中。淋巴消耗性化学治疗剂，诸如但不限于氟达拉滨、环磷酰胺、苯达莫司汀和/或喷司他丁，通常用作抗排斥剂，以促进接受CAR疗法的人类对表达CAR的细胞的接受。在某些实施方案中，将抗CD5 ADC以与表达CAR的免疫细胞(例如，T细胞)的施用组合的方式(例如，在表达CAR的免疫细胞(例如，T细胞)的施用之前)施用至人类患者，使得人类患者在表达CAR的免疫细胞的施用之前、与表达CAR的免疫细胞的施用同时地或在表达CAR的免疫细胞的施用之后不接受淋巴消耗性化学治疗剂，例如，氟达拉滨和/或环磷酰胺。
通过使用抗CD5 ADC作为消耗人类受试者内源免疫细胞并降低表达CAR的免疫细胞排斥的风险的剂，也可以避免或降低其他免疫消耗剂的使用。例如，阿仑单抗通常被用作与CAR疗法组合的抗排斥剂，以促进接受CAR疗法的人类对表达CAR的细胞的接受。在某些实施方案中，将抗CD5 ADC以与表达CAR的免疫细胞(例如，T细胞)的施用组合的方式(例如，在表达CAR的免疫细胞(例如，T细胞)的施用之前)施用至人类患者，使得人类患者在表达CAR的免疫细胞的施用之前、与表达CAR的免疫细胞的施用同时地或在表达CAR的免疫细胞的施用之后不接受阿仑单抗。
在某些实施方案中，将抗CD5 ADC与另一种疗法组合使用，以便促进表达CAR的免疫细胞的耐受性。例如，还可以将抗CD2 ADC在人类患者接受CAR疗法之前施用至人类患者。抗CD2 ADC可以在抗CD5 ADC之前、与抗CD5 ADC同时地或在抗CD5 ADC之后施用，其中抗CD2ADC和抗CD5 ADC两者均在CAR疗法之前施用至人类患者。
本文公开的方法可以用于表达CAR的自体细胞和同种异体细胞两者。重要的是，本文描述的抗CD5 ADC调节方法通过提供可以藉以提供同种异体细胞耐受性的方法，可用于扩大可以在CAR疗法中使用的免疫细胞类型。在一种实施方案中，表达CAR的免疫细胞是同种异体细胞或自体细胞。可以被工程化以表达CAR的免疫细胞类型的实例包括但不限于同种异体T细胞、自体T细胞、自体NK细胞或同种异体NK细胞。
在一种实施方案中，通过在CAR细胞疗法的施用之后施用抗CD5抗体药物缀合物，将抗CD5抗体药物缀合物用于消耗表达CD5的供体细胞，例如，活化的表达CD5的T细胞。在一种实施方案中，CAR细胞疗法包括同种异体细胞。
本文公开的方法对于治疗具有癌症或自身免疫性疾病之一的人类受试者中的这些紊乱特别有用。
在一种实施方案中，本文公开的方法用于治疗癌症。更特别地，将抗CD5 ADC与CAR疗法组合施用至患有癌症的人类受试者。可以使用本文公开的方法治疗的癌症类型的实例包括但不限于成人晚期癌症、胰腺癌、不可切除性胰腺癌、结肠直肠癌、转移性结肠直肠癌、卵巢癌、三阴性乳腺癌、造血/淋巴癌、结肠癌肝转移、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、B细胞淋巴瘤、复发性或难治性B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、复发性或难治性弥漫性大细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、复发性纵隔大B细胞淋巴瘤、难治性纵隔大B细胞淋巴瘤、大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、复发性或难治性非霍奇金淋巴瘤、难治性侵袭性非霍奇金淋巴瘤、B细胞非霍奇金淋巴瘤、难治性非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠上皮癌、胃癌、胰腺癌、三阴性浸润性乳腺癌、肾细胞癌、肺鳞状细胞癌、肝细胞癌、尿路上皮癌、白血病、B细胞白血病、B细胞急性淋巴细胞白血病、B细胞急性成淋巴细胞白血病、成人急性成淋巴细胞白血病、B细胞幼淋巴细胞白血病、儿童急性成淋巴细胞白血病、难治性儿童急性成淋巴细胞白血病、急性白血病、急性成淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、幼淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、复发性浆细胞骨髓瘤、难治性浆细胞骨髓瘤、多发性骨髓瘤、复发性或难治性多发性骨髓瘤、骨多发性骨髓瘤、脑恶性神经胶质瘤、骨髓增生异常综合征、EGFR阳性结肠直肠癌、多形性胶质母细胞瘤、赘生物、母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤、肝转移、实体瘤、晚期实体瘤、间皮素阳性肿瘤、血液恶性肿瘤以及其他晚期恶性肿瘤。
在一种实施方案中，本文公开的方法用于治疗自身免疫性疾病。更特别地，将抗CD5 ADC与CAR疗法组合施用至患有自身免疫性疾病的人类受试者。可以使用本文公开的组合方法治疗的自身免疫性疾病的实例包括但不限于多发性硬化、克罗恩病、溃疡性结肠炎、类风湿性关节炎、1型糖尿病、狼疮和银屑病。
在某些实施方案中，将抗CD5 ADC与CAR-T细胞疗法组合施用至人类患者。在一种实施方案中，抗CD5 ADC在CAR-T疗法的施用之前施用至人类患者。可以与本文描述的抗CD5ADC疗法组合使用的CAR-T细胞的实例包括但不限于CD19 CAR-T(例如，CART-19-01,02,03(Fujian Medical University)；daopeicart(Hebei Senlang Biotechnology Inc.)；IM19CART/001,YMCART201702(Beijing Immunochina Medical Science&TechnologyCo.)；CART-CD19-02,03(Wuhan Sian Medical Technology Co.)；通用CD19-CART/SHBYCL001,002(Shanghai Bioray Laboratory Inc.)；UnicarTherapy201701(ShanghaiUnicar-Therapy Biomedicine Technology Co.)；Genechem/NCT02672501(ShanghaiGeneChem Co.)；SenL_19(Hebei Senlang Biotechnology Inc.)；PCAR-019(PersonGenBioTherapeutics(Suzhou)；ICAR19(Immune Cell,Inc.)；WM-CART-02(Sinobioway CellTherapy Co.)；HenanCH080,109,152(Henan Cancer Hospital/The Pregene(ShenZhen)Biotechnology Co.)；IM19-CD28 and IM19-41BB CAR-T cells(Beijing ImmunochinaMedical Science&Technology Company)；CTL019/IT1601-CART19(Beijing SanwaterBiological Technology Co.)；CTL019/CCTL019C2201(Novartis Pharmaceuticals)；CD19:4-1BB:CD28:CD3/FirstShenzhen01(Shenzhen Second People’s Hospital/TheBeijing Pregene Science and Technology Company)；MB-CART19.1(ShanghaiChildren’s Medical Center/Miltenyi Biotec GmbH)；PZ01 CAR-T cells(PinzeLifetechnology Co.)；YMCART201701(Beijing Immunochina Medical Science&Technology Co.)；2016YJZ12(Peking University/Marino Biotechnology Co.)；EGFRt/19-28z/4-1BBL CAR T细胞(Memorial Sloan Kettering Cancer Center/JunoTherapeutics,Inc.)；Doing-002(Beijing Doing Biomedical Co.)；PCAR-019(PersonGenBioTherapeutics(Suzhou)Co.)；C-CAR011(Peking Union Medical College Hospital/Cellular Biomedicine Group Ltd.)；iPD1 CD19 eCAR T细胞(Peking University/Marino Biotechnology Co.)；2013-1018/NCT02529813(M.D.Anderson Cancer Center/Ziopharm/Intrexon Corp.)；HenanCH CAR 2-1(Henan Cancer Hospital/The Pregene(ShenZhen)Biotechnology Co.)；JCAR015(Juno Therapeutics,Inc.)；JCAR017/017001,004,006(Juno Therapeutics,Inc.)；JCAR017(Celgene)；TBI-1501(Takara Bio Inc.)；JMU-CD19CAR(Jichi Medical University)；KTE-C19(Kite,A Gilead Company)；TriCAR-T-CD19(Timmune Biotech Inc.)；PF-05175157(Fred Hutchinson Cancer ResearchCenter))；CD22/CD30/CD7/BCMA/CD123(例如，2016040/NCT03121625(Hebei SenlangBiotechnology Inc.))；CD22(例如，Ruijin-CAR-01(Ruijin Hospital/Shanghai Unicar-Therapy Bio-medicine Technology Co.)；AUTO-PA1,DB1(Autolus Limited)),CD20(例如，Doing-006(Beijing Doing Biomedical Co.))或CD20/CD22/CD30(例如，SZ5601(TheFirst Affiliated Hospital of Soochow University Shanghai/Unicar-Therapy Bio-medicine Technology Co.))。
嵌合抗原受体(CAR)
本发明包括与抗CD5免疫抑制性ADC组合的CAR疗法的使用。本发明通常不限于特定CAR构建体，例如特定的抗原结合区或胞内信号传导结构域，因为本发明至少部分基于这样的发现，即抗CD5 ADC可以通过消除内源CD5+免疫细胞，诸如内源T细胞，促进对表达CAR的细胞的接受，从而用作CAR疗法的调节剂。本文设想了特定的CAR，例如CD19特异性CAR，并且包括在本文公开的方法中，但是不意图限制。
CAR构建体是本领域已知的，并且通常包含(a)包含抗原结合结构域的胞外区、(b)跨膜结构域和(c)胞质信号传导结构域。示例性CAR配置是本领域已知的，并且任何合适的配置都可以用于本文描述的方法中。例如，CAR可以是第一代CAR、第二代CAR或第三代CAR，例如，如以下中描述的：Guedan等人Molecular Therapy-Methods&ClinicalDevelopment.12:145-156(2019)或Sadelain等人Cancer discovery 3.4:388-398(2013)，其全部内容在此通过引用并入。简言之，“第一代”CAR可以包含(a)胞外抗原结合结构域、(b)跨膜结构域、(c)一个或更多个胞内信号传导结构域以及任选地(d)连接抗原结合结构域与跨膜结构域的铰链区。“第二代”CAR可以包含要素(a)、(b)、(c)以及任选地(d)，并且还包含共刺激结构域，例如CD28或4-1BB的共刺激结构域。“第三代”CAR可以包含要素(a)、(b)、(c)以及任选的(d)，并且还包含多于一个共刺激结构域，例如CD28和4-1BB的共刺激结构域，或者CD28和OX40的共刺激结构域。上述要素中的每一个在下文详细描述。应当理解，在一些实施方案中，由以下示例性非限制性排列描述的CAR分子是从CAR的左至右、N末端至C末端。如本公开内容描述的CAR可以包括或还包括如本文描述的要素的任何其他组合。
本文公开的方法中使用的CAR可以包含胞外抗原结合结构域。胞外抗原结合结构域可以是与抗原结合的任何分子，包括但不限于人类抗体、人源化抗体或它们的任何功能片段。在某些实施方案中，抗原结合结构域是scFv。在其他实施方案中，胞外抗原结合结构域是非免疫球蛋白支架蛋白。在其他实施方案中，CAR的胞外结合结构域包括单链T细胞受体(scTCR)。如美国专利第5,359,046号、第5,686,281号和第6,103,521号中描述的，胞外结构域也可以从与配体结合和/或信号转导相关的各种各样的胞外结构域或分泌蛋白中的任何一种获得。
胞外结合结构域的分子靶(抗原)的选择取决于定义靶细胞表面的配体的类型和数目。例如，可以选择抗原结合结构域来识别与特定疾病状态相关的靶细胞上充当细胞表面标志物的配体。因此，在一方面，CAR介导的免疫细胞(例如T细胞)应答可以通过将特异性结合期望抗原的胞外抗原结合结构域工程化到CAR中的方式而针对感兴趣的抗原。例如，可以选择抗原结合结构域来识别与特定疾病状态(诸如癌症或自身免疫性疾病)相关的靶细胞上充当细胞表面标志物的配体。因此，可以充当CAR中的抗原结合结构域的配体的细胞表面标志物的实例包括与癌细胞和其他形式的患病细胞(例如自身免疫性疾病细胞和病原体感染的细胞)相关的那些标志物。在一些实施方案中，通过将与肿瘤细胞上的抗原特异性结合的期望的抗原结合结构域工程化，将CAR工程化以靶向感兴趣的肿瘤抗原。在本发明的上下文中，“肿瘤抗原”是指对特定过度增殖性紊乱诸如癌症常见的抗原。在一种实施方案中，抗原是肿瘤抗原，肿瘤抗原的实例包括但不限于CD19、CD22、CD30、CD7、BCMA、CD137、CD22、CD20、AFP、GPC3、MUC1、间皮素、CD38、PD1、EGFR(例如，EGFRvIII)、MG7、BCMA、TACI、CEA、PSCA、CEA、HER2、MUC1、CD33、ROR2、NKR-2、PSCA、CD28、TAA、NKG2D或CD123。在一种实施方案中，CAR包括与以下结合的scFv：CD19、CD22、CD30、CD7、BCMA、CD137、CD22、CD20、AFP、GPC3、MUC1、间皮素、CD38、PD1、EGFR(例如，EGFRvIII)、MG7、BCMA、TACI、CEA、PSCA、CEA、HER2、MUC1、CD33、ROR2、NKR-2、PSCA、CD28、TAA、NKG2D或CD123。
在另一方面，CAR的胞外结合结构域与为以下的抗原结合：AFP(例如，ETCH17AFPCAR01(Aeon Therapeutics(Shanghai)Co./Eureka Therapeutics Inc.))、GPC3(例如，GeneChem GPC-3 CART(Shanghai GeneChem Co.)；302 GPC3-CART(ShanghaiGeneChem Co.)；用于肝癌的CAR-T(Shanghai GeneChem Co.)；CAR-GPC3 T细胞(CarsgenTherapeutics))、MUC1(例如，PG-021-001,002(PersonGen BioTherapeutics(Suzhou)Co.))、间皮素(例如，H2017-01-P01(Ningbo Cancer Hospital)；TAI-meso-CART(ShanghaiGeneChem Co.)；K16-4/NCT02930993(China Meitan General Hospital/MarinoBiotechnology Co.))、CD38(例如，Anti-CD38 A2 CAR-T/SOR-CART-MM-001(SorrentoTherapeutics,Inc.))、herinCAR-PD1(例如，herinCAR-PD1/NBWYKY2016-06-001,002,003(Ningbo Cancer Hospital)；SIMC-20160101,02,03(Shanghai International MedicalCenter))、BCMA(例如，P-BCMA-101自体记忆性T干细胞(Tscm)CAR-T细胞/P-BCMA-101-001(Poseida Therapeutics,Inc.)；HenanCH284(Henan Cancer Hospital/The Pregene(ShenZhen)Biotechnology Company)；LCAR-B38M CAR-T细胞(Nanjing Legend BiotechCo.)；9762/NCT03338972(Fred Hutchinson Cancer Research Center/JunoTherapeutics,Inc.)；Descartes-08(Cartesian Therapeutics)；KITE-585(Kite,AGilead Company)；bb21217(bluebird bio)；bb21217(Celgene)；JCARH125(JunoTherapeutics,Inc.))、CD30(例如，ICAR30 T细胞(Immune Cell,Inc.))、EGFR(例如，EGFR:4-1BB:CD28:CD3修饰的T细胞/First Shenzhen02(Shenzhen Sceond People’s Hospital/The Beijing Pregene Science and Technology Company)；EGFR-IL12-CART(ShenzhenSecond People’s Hospital/The Pregene(ShenZhen)Biotechnology Co.)；SBNK-2016-015-01(Beijing Sanbo Brain Hospital/Marino Biotechnology Co.))、MG7(例如，MG7-CART(Xijing Hospital/Shanghai GeneChem Co.))、BCMA/TACI(例如，AUTO2-MM1(AutolusLimited))、CEA(例如，383-74/NCT02416466(Roger Williams Medical Center/SirtexMedical))、间皮素/PSCA/CEA/HER2/MUC1/EGFRvIII(例如，NCT03267173(FirstAffiliated Hospital of Harbin Medical University/Shanghai Unicar-Therapy Bio-medicine Technology Co.))、CD20(例如，EY201605-19(Beijing BiohealthcareBiotechnology Co.))、CD33(例如，2016-0341/NCT03126864(M.D.Anderson CancerCenter/Intrexon Corp./Ziopharm))、EGFR/BCMA(例如，EGFRt/BCMA-41BBz CAR T细胞(Memorial Sloan Kettering Cancer Center/Juno Therapeutics,Inc.))、ROR2(例如，自体CCT301-38或CCT301-59 T细胞(Shanghai Sinobioway Sunterra Biotech))、NKR-2(例如，CYAD-N2T-002,003,004(Celyad))、PSCA(例如，BP-012(Bellicum Pharmaceuticals))、CD28(例如，自体CSR T细胞(Beijing Sanbo Brain Hospital/Marino BiotechnologyCo.))、TAA(例如，AMG 119(Amgen))、NKG2D(例如，CM-CS1(Celyad))或CD123(例如，UCART123(Cellectis S.A.))。前述句子还提供了结合所述抗原的CAR的实例(例如，AMG119(Amgen))。这些CAR构建体可以与抗CD5 ADC一起用于本文公开的调节方法中。
CAR构建体还可以包含跨膜结构域，该跨膜结构域将胞外抗原结合结构域与质信号传导结构域相连(无论是字面上还是一般的接近，例如用间隔物)。在一些实施方案中，CAR的胞外抗原结合结构域(例如，scFv、Fab或其他抗原结合部分)可以使用铰链或其他接头连接至跨膜结构域。可以在胞外抗原结合结构域和跨膜结构域之间引入间隔区、接头或铰链，以提供允许抗原结合结构域以不同方向定向的柔性，从而促进抗原识别和结合。如下文讨论的，跨膜结构域的胞质侧可以附接至胞内信号传导结构域，诸如CD28或CD3δ(CD3-δ)的胞内信号传导结构域，并且可以另外地包含一个或更多个共刺激结构域。
因此，在某些实施方案中，CAR还可以包含位于胞外抗原结合结构域和跨膜结构域之间的铰链区。例如，铰链区可以来源于IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE、IgM、CD28或CD8α的铰链区。在一种特定实施方案中，铰链区来源于IgG4的铰链区。在另一种实施方案中，铰链区是CD8铰链结构域(参见SwissProt/GenBank登录号P01732)。
在一种实施方案中，CAR包含经由CD8铰链连接的胞外抗原结合结构域和跨膜结构域：AKPTTTPAPR PPTPAPTIAS QPLSLRPEAC RPAAGGAVHT RGLDFA(SEQ ID NO:9)。
在一种实施方案中，CAR包含经由杂交体CD8-CD28铰链连接的胞外抗原结合结构域和跨膜结构域：AKPTTTPAPR PPTPAPTIAS QPLSLRPEAC RPAAGGAVHT RGLDFAPRKIEVMYPPPYLD NEKSNGTIIH VKGKHLCPSP LFPGPSKP(SEQ ID NO:10)。
跨膜结构域可以来源于贡献胞外抗原结合结构域的蛋白的序列、贡献效应物功能信号传导结构域的蛋白的序列、贡献增殖信号传导部分的蛋白的序列，或者来源于完全不同的蛋白的序列。在一些实施方案中，跨膜结构域与CAR的其他结构域之一天然地相关。例如，跨膜结构域和胞质结构域可以来源于同一蛋白的跨膜区和胞质区。在一种实施方案中，CAR的跨膜结构域和胞质结构域包含CD28序列的连续部分。任何跨膜结构域都可以用于本文描述的CAR构建体，条件是该结构域能够将包含抗原结合结构域的CAR锚定至细胞膜。
跨膜结构域来源于天然来源或来源于合成来源。在来源是天然的情况下，结构域可以来源于任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。可以用于本文提供的方法中的示例性跨膜结构域可以来源于(例如，至少包含以下的跨膜结构域)：T细胞受体的α、β或δ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、LFA-1T细胞共受体、CD2 T细胞共受体/黏附分子、CD8α及其片段。可以使用本领域已知的任何方法(例如疏水性分析、结构分析等)或通过使用公共数据库例如UniProt数据库来鉴定蛋白的跨膜结构域。
在一些实施方案中，跨膜结构域可以是合成的。在示例性实施方案中，跨膜结构域主要可以包含疏水性残基，诸如亮氨酸和缬氨酸。在一种实施方案中，苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体可以位于合成的跨膜结构域的每个末端处。任选地，短的寡肽或多肽接头(优选地，长度在2个至10个氨基酸之间)可以形成CAR的跨膜结构域和胞质信号传导结构域之间的连接。甘氨酸-丝氨酸双联体提供了特别合适的接头。
在一些实施方案中，本文使用的CAR中的跨膜结构域是CD8跨膜结构域或其一部分。为此目的CD8的序列在PCT公布第W02014/055771A1号中进行了教导。
在一些实施方案中，CAR中的跨膜结构域是CD8跨膜结构域或其功能部分。例如，CAR可以包含具有氨基酸序列LDPKLCYLLD GILFIYGVIL TALFLRVK(SEQ ID NO:11)的CD3跨膜结构域或其功能部分，诸如LCYLLDGILF IYGVILTALF L(SEQ ID NO:12)。
在一些实施方案中，本发明的CAR的跨膜结构域是CD28跨膜结构域。下文提供了CD28的示例性序列以及示例性跨膜结构域序列。在一些实施方案中，CD28跨膜结构域包含以下示例性跨膜结构域序列或其片段或变体，能够将包含该序列的CAR锚定至细胞膜。因此，在一些实施方案中，CAR的跨膜结构域是包含以下氨基酸序列的CD28跨膜结构域：FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV(SEQ ID NO:13)。在一种实施方案中，CAR的跨膜结构域是包含以下氨基酸序列的CD28跨膜结构域：IEVMYPPPYL DNEKSNGTII HVKGKHLCPSPLFPGPSKPF WVLVVVGGVL ACYSLLVTVA FIIFWV(SEQ ID NO:16)或其功能性片段，例如SEQID NO:14。
除了胞外抗原结合结构域和跨膜结构域之外，CAR还包含胞内(或胞质)信号传导结构域。
已知，通过单独的内源TCR产生的信号不足以完全活化T细胞，并且还可能需要次级信号或共刺激信号。因此，T细胞活化可以通过两类不同的胞质信号传导序列介导：通过TCR启动抗原依赖性初级活化的那些(初级胞质信号传导序列)，和以不依赖抗原的方式作用以提供次级信号或共刺激信号的那些(次级胞质信号传导序列)。
如本文使用的术语“胞内信号传导结构域”或“胞质信号传导结构域”是指分子的胞内部分。胞内信号传导结构域可以产生促进包含CAR的免疫细胞(例如，CAR-T细胞或表达CAR的NK细胞)的免疫效应物功能的信号。免疫效应物功能的实例，例如在CART细胞或表达CAR的NK细胞中，包括细胞溶解活性和辅助活性，包括细胞因子的分泌。在实施方案中，胞内信号结构域转导效应物功能信号并指导细胞执行特定功能。虽然可以采用整个胞内信号传导结构域，但在许多情况下，使用整个链不是必要的。就使用胞内信号传导结构域的截短部分的程度，这样的截短部分可以用来替代完整的链，条件是截短部分转导效应物功能信号。因此，术语胞内信号传导结构域意图包括胞内信号传导结构域的任何足以转导效应物功能信号的截短部分。
在一种实施方案中，CAR的胞内信号传导结构域包含如SEQ ID NO:15中描述的CD3δ信号传导区或其信号传导部分。
Figure BDA0002986829440000381
胞质信号传导结构域还可以包括但不限于来源于CD3δ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CDS、CD22、CD79a、CD79b、CD278(“ICOS”)、FcεRI、CD66d、DAP10和DAP12的那些。
CAR还可以包含“胞内共刺激结构域”，所述胞内共刺激结构域是来源于一种共刺激蛋白或更多种共刺激蛋白(诸如CD28和4-1BB)的胞内信号传导结构域的多肽链，其增强细胞因子产生。
示例性共刺激信号传导区包括4-1BB、CD21、CD28、CD27、CD127、ICOS、IL-15Rα和OX40。
在某些实施方案中，CAR的胞质共刺激结构域包含4-1BB信号传导结构域本身或与可用于CAR的背景的任何其他期望的胞质结构域组合。4-1BB是TNFR超家族的成员，具有以GenBank登录号AAA62478.2提供的氨基酸序列或来自非人类物种(例如小鼠、啮齿动物、猴、猿等)的等同残基；并且“4-1BB共刺激结构域”被定义为GenBank登录号AAA62478.2的氨基酸残基214-255或来自非人类物种(例如小鼠、啮齿动物、猴、猿等)的等同残基。
在一种实施方案中，CAR的胞内共刺激信号传导结构域是4-1BB(CD137)共刺激信号传导区，或其信号传导部分：
Figure BDA0002986829440000391
在一种实施方案中，CAR的共刺激信号传导结构域是CD28共刺激信号传导区序列。例如，共刺激信号传导结构域可以包含以下CD28共刺激信号传导区或其信号传导部分：
Figure BDA0002986829440000392
在示例性实施方案中，CAR的胞质结构域可以包含与可用于本发明的CAR的背景的任何其他期望的胞质结构域组合的CD3δ信号传导结构域。在某些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包含CD3δ结构域和共刺激信号传导区，包括但不限于4-1BB、CD28和CD27的共刺激信号传导区。
本发明的CAR的胞质信号传导部分中的胞质信号传导序列可以以随机或特定顺序相互连接。任选地，可以在胞质结构域之间插入长度优选地在5个和20个氨基酸之间的短的寡肽或多肽接头或间隔区。A GGGGS(SEQ ID NO:18)或(GGGGS)×3(SEQ ID NO:19)提供了特别合适的接头。
在一种实施方案中，本文使用的CAR包含含有抗CD19单克隆抗体的单链可变结构域的胞外结构域、含有CD8α的铰链和跨膜结构域的跨膜结构域、以及含有CD3δ的信号传导结构域和4-1BB的信号传导结构域的胞质结构域。示例性CAR包含胞外结构域，所述胞外结构域包含在Nicholson I C等人,Mol Immunol 34:1157-1165(1997)中描述的抗CD19单克隆抗体加上CD8α的21个氨基酸信号肽(从GenBank登录号NM_001768的位置26-88处的63个核苷酸翻译的)。CD8α铰链和跨膜结构域由从GenBank登录号NM_001768的位置815-1021处的207个核苷酸翻译的69个氨基酸组成。优选的实施方案的CD3δ信号传导结构域包含从GenBank登录号NM_000734的位置1022-1360处的339个核苷酸翻译的112个氨基酸。
在CAR的胞外结构域(包括抗原结合结构域)和跨膜结构域(如以上描述的)之间，或者在CAR的胞质结构域和跨膜结构域之间，可以掺入间隔区或铰链结构域。如本文使用的，术语“间隔区结构域”通常意指功能是将多肽链中的跨膜结构域与胞外结构域和/或胞质结构域连接的任何寡肽或多肽。如本文使用的，铰链结构域通常意指功能是为CAR或其结构域提供柔性和/或防止CAR或其结构域的空间位阻的任何寡肽或多肽。在一些实施方案中，间隔区或铰链结构域可以包含最多300个氨基酸，优选地10个至100个氨基酸，并且最优选地5个至20个氨基酸。还应当理解，一个或更多个间隔区结构域可以包含在CAR的其他区域中，因为本公开内容的方面不限于此方面。
应当理解，CAR可以包含具有本文提供的序列的区域(例如，抗原结合结构域、跨膜结构域、胞质结构域、信号传导结构域、安全结构域和/或接头或它们的任何组合)，或者其变体或它们任一种的片段(例如，保持CAR活性所需功能的变体和/或片段)可以包含在本文描述的CAR蛋白中。在一些实施方案中，变体相对于所示序列具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸改变。在一些实施方案中，变体具有与所示序列至少80％、至少85％、至少90％、90％-95％、至少95％或至少99％相同的序列。在一些实施方案中，片段比本文提供的序列短1-5个、5-10个、10-20个、20-30个、30-40个或40-50个氨基酸。在一些实施方案中，片段在所提供序列的N末端、C末端或两个末端区域处较短。在一些实施方案中，片段包含本文提供的序列中80％-85％、85％-90％、90％-95％或95％-99％数目的氨基酸。
在一些实施方案中，以上示例性、非限制性排列是从CAR的左至右、N末端至C末端。CAR可以包括或还包括如本文描述的要素的任何其他组合。
对CAR构建体的各部分进行鉴定后，表达CAR的免疫细胞被产生，由此免疫细胞表达CAR。该方法包括用本文描述的核酸分子(例如，RNA分子，例如，mRNA)或包含编码CAR(例如，本文描述的CAR)的核酸分子的载体引入免疫细胞，例如，转导免疫细胞。值得注意的是，本发明包括编码本文公开的氨基酸序列的核酸。本发明还提供了一种产生细胞群体的方法(例如，瞬时表达外源RNA的RNA工程化细胞)。该方法包括将如本文描述的RNA(例如，体外转录的RNA或合成的RNA；编码如本文描述的CAR多肽的mRNA序列)引入细胞中。在实施方案中，RNA瞬时表达CAR多肽。在一种实施方案中，细胞是如本文描述的细胞，例如免疫效应细胞(例如，T细胞或NK细胞，或细胞群体)。
其他示例性嵌合抗原受体构建体公开于以下中：美国专利第9,328,156号；美国专利第9,783,591号；美国专利第9,714,278号；美国专利第9,765,156号；美国专利第10,117,896号；美国专利第9,573,988号；美国专利第10,308,717号；美国专利第10,221,245号；美国专利第10,040,865号；美国专利公布第2018/0256712A1号；美国专利公布第2018/0271907A1号；美国专利公布第2016/0046724A1号；美国专利公布第2018/0044424A1号；美国专利公布第2018/0258149A1号；美国专利公布第2019/0151363A1号和美国专利公布第2018/0273601A1号；前述专利和专利出版物中的每一项的内容通过引用以其整体并入本文。
III.抗CD5抗体药物缀合物(ADC)
如本文描述的，抗CD5 ADC可以与CAR疗法组合使用，以治疗人类患者的癌症或自身免疫性疾病。更具体地，抗CD5 ADC可以用于消耗还接受CAR疗法的人类受试者中的CD5+细胞(例如CD5+T细胞)。抗CD5ADC靶向内源T细胞并杀伤这些细胞，使得患者的免疫系统将不攻击施用至受试者的表达CAR的细胞(例如，自体的或同种异体的)。因此，抗CD5ADC用作与CAR疗法组合的调节步骤，以促进接受者患者对表达CAR的工程化免疫细胞的接受。相比于其中将一般的淋巴消耗性化学治疗剂施用至受试者的用于CAR疗法的更传统的调节方法，使用抗CD5 ADC作为调节方案的一个优点是表达CD5的内源T细胞可以被特异性地靶向以进行消耗。
抗CD5抗体
能够结合CD5的ADC可以用作治疗剂，通过预防表达CAR的免疫细胞排斥或降低表达CAR的免疫细胞排斥的风险，促进人类患者对表达CAR的免疫细胞的接受。
本文描述的抗CD5 ADC包括与细胞毒素连接的抗CD5抗体或其抗原结合部分。
人类CD5也被称为淋巴细胞抗原T1、T1、Leu-1和LEU1。CD5表达于人类T细胞上。已经鉴定出人类CD5的两种同种型。同种型1包含495个氨基酸，并且描述于Gladkikh等人(2017)Cancer Med.6(12):2984和Jones等人(1986)Nature 323(6086):346)中。CD5(同种型1)的氨基酸序列在下文提供(NCBI参考序列：NP_055022.2)：
Figure BDA0002986829440000421
人类CD5的第二种同种型为438个氨基酸并且在下文标识为NCBI参考序列：NP_001333385.1。与同种型1不同，CD5同种型2是胞内蛋白。与同种型1相比，同种型2包含不同的5'UTR，并且缺少5'编码区的框内部分。与同种型1相比，所得的同种型2具有较短的N末端。与同种型1相比，CD5同种型2缺少前导肽，并且代表存在于B淋巴细胞的亚群中的胞内同种型。本文描述的ADC对代表胞外形式的人类CD5的人类CD5同种型1是特异性的。
在一种实施方案中，可以用于本文描述的方法和组合物中的抗CD5抗体是抗体5D7v(Ab5D7v)。Ab5D7v的重链可变区(VH)氨基酸序列在以下提供为SEQ ID NO:1。
Figure BDA0002986829440000431
以上Ab5D7v的VH CDR氨基酸序列被加划线并且如下：FSLSTSGMG(VH CDR1；SEQ IDNO:3)；WWDDD(VH CDR2；SEQ ID NO:4)；和RRATGTGFDY(VH CDR3；SEQ ID NO:5)。
Ab5D7v的轻链可变区(VL)氨基酸序列在以下提供为SEQ ID NO:2。
Figure BDA0002986829440000432
以上Ab5D7v的VL CDR氨基酸序列被加划线并且如下：QDVGTA(VL CDR1；SEQ IDNO:6)；WTSTRHT(VL CDR2；SEQ ID NO:7)；和YNSYNT(VL CDR3；SEQ ID NO:8)。
在一种实施方案中，抗CD5 ADC包含抗CD5抗体，所述抗CD5抗体包含重链，所述重链包含含有SEQ ID NO:3中列出的氨基酸序列的CDR1结构域、含有SEQ ID NO:4中列出的氨基酸序列的CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的CDR3结构域，并且所述抗CD5抗体包含轻链，所述轻链包含含有SEQ ID NO:6中列出的氨基酸序列的CDR1结构域、含有SEQ ID NO:7中列出的氨基酸序列的CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:8中列出的氨基酸序列的CDR3结构域，其中抗体经由接头与细胞毒素缀合。
在一种实施方案中，抗CD5 ADC包含抗CD5抗体，所述抗CD5抗体包含重链和轻链，所述重链包含含有SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的可变区，所述轻链包含含有SEQ IDNO:2中列出的氨基酸序列的可变区，其中抗体经由接头与细胞毒素缀合。
在另一种实施方案中，用于本文描述的ADC的抗CD5抗体是5D7抗体(参见例如，US20080254027，其公开内容通过引用并入本文)。在另一种实施方案中，可以用于本文描述的方法和组合物(包括ADC)的抗CD5抗体是5D7抗体的变体(参见例如，US 20080254027，其公开内容通过引用并入本文)。
此外，在某些实施方案中，抗CD5 ADC在人类受试者中具有3天或更短的血清半衰期。
可以用于本文描述的ADC的另外的抗CD5抗体可以使用本领域已知的技术(诸如杂交瘤产生)来鉴定。杂交瘤可以使用鼠系统来制备。免疫和随后分离脾细胞用于融合的方案是本领域已知的。用于杂交瘤产生的融合配偶体和程序也是已知的。可选地，抗CD5抗体可以使用
Figure BDA0002986829440000441
或XenoMouseTM产生。在制备另外的抗CD5抗体时，将CD5抗原分离和/或纯化。CD5抗原可以是来自CD5的胞外结构域的CD5片段。动物的免疫接种可以通过本领域已知的任何方法进行。参见，例如，Harlow和Lane，Antibodies:A LaboratoryManual,New York:Cold Spring Harbor Press,1990。免疫动物诸如小鼠、大鼠、绵羊、山羊、猪、牛和马的方法是本领域熟知的。参见，例如，Harlow和Lane，同上，和美国专利第5,994,619号。CD5抗原可以与佐剂一起施用以刺激免疫应答。本领域已知的佐剂包括完全或不完全弗氏佐剂(Freund's adjuvant)、RIBI(胞壁酰二肽)或ISCOM(免疫刺激复合物)。在用CD5抗原免疫动物之后，产生抗体的永生化细胞系由从免疫的动物中分离的细胞制备。在免疫之后，处死动物，并且通过本领域已知的方法(例如，癌基因转移、致癌病毒转导、暴露于致癌化合物或突变化合物、与永生化细胞例如骨髓瘤细胞融合以及灭活肿瘤抑制基因)使淋巴结和/或脾B细胞永生化。参见，例如，Harlow和Lane，同上。可以针对期望的特性(包括稳健的生长、高抗体产生和期望的抗体特性)对杂交瘤进行选择、克隆和进一步筛选。
用于在本文描述的抗CD5 ADC中使用的抗CD5抗体也可以使用高通量筛选抗体文库或抗体片段文库中能够结合CD5的分子来鉴定。这样的方法包括本领域已知的体外展示技术，诸如，尤其是噬菌体展示、细菌展示、酵母展示、哺乳动物细胞展示、核糖体展示、mRNA展示和cDNA展示。使用噬菌体展示来分离结合生物相关分子的抗体、抗原结合片段或配体已经在例如Felici等人,Biotechnol.Annual Rev.1:149-183,1995；Katz,AnnualRev.Biophys.Biomol.Struct.26:27-45,1997；和Hoogenboom等人，Immunotechnology 4:1-20,1998中进行了综述，其中每一项的公开内容在其涉及体外展示技术时通过引用并入本文。已经构建了随机化组合肽文库以选择结合细胞表面抗原的多肽，如Kay,Perspect.Drug Discovery Des.2:251-268,1995和Kay等人，Mol.Divers.1:139-140,1996中描述的，其中每一项的公开内容在其涉及发现抗原结合分子时通过引用并入本文。蛋白，诸如多聚体蛋白，已经成功地作为功能分子进行噬菌体展示(参见，例如，EP 0349578、EP4527839和EP 0589877以及Chiswell和McCafferty,Trends Biotechnol.10:80-84 1992，其中每一项的公开内容在其涉及发现抗原结合分子的体外展示技术的用途时通过引用并入本文)。此外，功能性抗体片段诸如Fab和scFv片段已经以体外展示形式被表达(参见，例如，McCafferty等人,Nature 348:552-554,1990；Barbas等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:7978-7982,1991；和Clackson等人,Nature 352:624-628,1991，其中每一项的公开内容在其涉及用于发现抗原结合分子的体外展示平台时通过引用并入本文)。
除了体外展示技术之外，计算机建模技术可以用于在计算机中(in silico)设计和鉴定抗CD5抗体或抗体片段，例如，使用US 2013/0288373中描述的程序，其公开内容在其涉及用于鉴定抗CD5抗体的分子建模方法时并入本文。例如，使用计算机建模技术，本领域技术人员可以在计算机中筛选抗体文库或抗体片段文库中能够结合CD5上的特定表位诸如CD5的胞外表位的分子。
在一种实施方案中，本文描述的ADC中使用的抗CD5抗体能够内化到细胞中。在鉴定抗CD5抗体(或其片段)时，可以使用另外的技术来鉴定结合细胞(例如，T细胞)的表面上的CD5并且还能够例如通过受体介导的胞吞被细胞内化的抗体或原结合片段。例如，以上描述的体外展示技术可以被修改以筛选结合造血干细胞表面上的CD5并且随后被内化的抗体或其抗原结合片段。噬菌体展示表示这样的可以与这种筛选范式结合使用的一种技术。为了鉴定结合CD5并随后被CD5+细胞内化的抗CD5抗体或其片段，本领域技术人员可以使用Williams等人,Leukemia 19:1432-1438,2005中描述的噬菌体展示技术，其公开内容通过引用以其整体并入本文。
抗CD5抗体或其片段的内化能力可以例如使用本领域已知的放射性核素内化测定评估。例如，使用本文描述或本领域已知的体外展示技术鉴定的抗CD5抗体或其片段可以通过掺入以下放射性同位素而被官能化：诸如18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、211At、67Ga、111In、99Tc、169Yb、186Re、64Cu、67Cu、177Lu、77As、72As、86Y、90Y、89Zr、212Bi、213Bi或225Ac。例如，可以使用包含亲电卤素试剂的珠，诸如聚苯乙烯珠(例如，Iodination Beads,Thermo Fisher Scientific,Inc.,Cambridge,MA)，将放射性卤素，诸如18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、211At掺入抗体、其片段或配体中。可以将放射性标记的抗体或其片段与造血干细胞一起孵育足以允许内化的时间。通过检测所得到的造血干细胞的发射辐射(例如，γ-辐射)与回收的洗涤缓冲液的发射辐射(例如，γ-辐射)相比，可以鉴定内化的抗体或其片段。前述内化测定也可以用于表征ADC。
在一些实施方案中，抗CD5抗体(或其片段)具有确定的血清半衰期。例如，在人类患者中，抗CD5抗体(或其片段)可以具有约1-24小时的血清半衰期。例如，在人类患者中，包含这种抗CD5抗体的ADC也可以具有约1-24小时的血清半衰期。通过测量血清水平的药代动力学分析可以通过本领域已知的测定来进行。
为了重组产生抗CD5抗体，分离编码例如如以上描述的抗体的核酸，并且插入一个或更多个载体中，以进一步在宿主细胞中克隆和/或表达。这样的核酸可以使用常规程序容易地分离和测序(例如，通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。
用于克隆或表达编码抗体的载体的合适的宿主细胞包括本文描述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中产生抗体，特别是在不需要糖基化和Fc效应功能时。关于在细菌中表达抗体片段和多肽，参见，例如，美国专利第5,648,237号、第5,789,199号和第5,840,523号。(另参见：Charlton,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,编著,Humana Press,Totowa,N.J.,2003)，第245-254页，描述了在大肠杆菌(E.coli.)中表达抗体片段)。表达后，可以从细菌细胞团(paste)的可溶级分中分离抗体，并且可以进一步纯化。
脊椎动物细胞也可以被用作宿主。例如，适于悬浮生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它实例是通过SV40转化的猴肾CV1细胞系(COS-7)、人类胚胎肾细胞系(293或293细胞，如在Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977)中描述的)、幼仓鼠肾细胞(BHK)、小鼠支持细胞(TM4细胞，如在例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中描述的)、猴肾细胞(CV1)、非洲绿猴肾细胞(VERO-76)、人类宫颈癌细胞(HELA)、犬肾细胞(MDCK、Buffalo大鼠肝细胞(BRL 3A)；人类肺细胞(W138)、人类肝细胞(Hep G2)、小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)、TRI细胞(如在例如Mather等人,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中描述的)、MRC 5细胞和FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))和骨髓瘤细胞系诸如Y0、NS0和Sp2/0。关于某些适用于抗体产生的哺乳动物宿主细胞系的综述，参见，例如，Yazaki和Wu,Methods inMolecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,编著,Humana Press,Totowa,N.J.),第255-268页(2003)。在一种实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞(例如Y0、NS0、Sp20细胞)。
在一些实施方案中，可以与本文描述的组合物和方法结合使用的抗CD5抗体包括包含下文表1A和表1B中列出的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3区域的组合的那些抗体。
表1A.
Figure BDA0002986829440000481
Figure BDA0002986829440000491
表1B.
Figure BDA0002986829440000492
Figure BDA0002986829440000501
细胞毒素
各种细胞毒素可以经由接头与抗CD5抗体缀合，以用于在本文描述的组合疗法中使用。特别地，抗CD5 ADC包含与细胞毒性部分(或细胞毒素)缀合(即，通过接头共价附接)的抗体(或其抗原结合片段)。如本文使用的，术语“细胞毒素”、“细胞毒性部分”和“药物”可互换使用。在多种实施方案中，细胞毒性部分在结合于缀合物中时表现出减少的细胞毒性或没有细胞毒性，但是在从接头裂解之后恢复细胞毒性。在多种实施方案中，细胞毒性部分维持细胞毒性而不从接头裂解。在一些实施方案中，将细胞毒性分子与如本文公开的细胞内化抗体或其抗原结合片段缀合，使得在细胞摄取抗体或其片段后，细胞毒素可以接近其细胞内靶并且例如介导T细胞死亡。
因此，本发明的ADC可以具有通式I，其中抗体或其抗原结合片段(Ab)通过化学部分(Z)与接头(L)缀合(共价连接)至细胞毒性部分(“药物”，D)。
Ab-(Z-L-D)n (I)
相应地，抗体或其抗原结合片段可以与如整数n指示的多个药物部分缀合，整数n表示每个抗体的细胞毒素的平均数，整数n范围可以是例如约1至约20。可以将任何数目的细胞毒素与抗体缀合，例如约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7或约8。在一些实施方案中，n是1至4。在一些实施方案中，n是1至3。在一些实施方案中，n是约2。在一些实施方案中，n是约1。由缀合反应制备的ADC中每个抗体的药物部分的平均数可以通过常规手段诸如质谱、ELISA测定和HPLC来表征。也可以确定ADC在n方面的定量分布。在一些情况下，将n为某个值的同质ADC从具有其他药物载量的ADC中分离、纯化、和表征可以通过诸如反相HPLC或电泳的手段来实现。
对于一些抗CD5 ADC，n可以受抗体上附接位点数的限制。例如，在附接是半胱氨酸硫醇的情况下，抗体可以仅具有一个或若干个半胱氨酸硫醇基团，或者可以仅具有一个或若干个有足够反应性的硫醇基团，通过这些基团可以附接接头。通常，抗体不含有许多可以与药物部分连接的游离和反应性的半胱氨酸硫醇基团；抗体中的半胱氨酸硫醇残基主要以二硫桥的形式存在。在某些实施方案中，可以将抗体在部分或全部还原条件下用还原剂诸如二硫苏糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)还原，以产生反应性半胱氨酸硫醇基团。在某些实施方案中，较高的药物载量，例如n>5，可引起某些抗体药物缀合物的聚集、不溶性、毒性或丧失细胞渗透性。
在某些实施方案中，在缀合反应期间，小于理论最大值的药物部分与抗体缀合。抗体可以包含例如不与药物-接头中间体或接头试剂反应的赖氨酸残基，如下文描述的。仅最具反应性的赖氨酸基团可以与胺反应性接头试剂反应。在某些实施方案中，抗体经历变性条件以暴露反应性亲核基团，诸如赖氨酸或半胱氨酸。
ADC的载量(药物/抗体比)可以用不同的方式控制，例如通过：(i)限制药物-接头中间体或接头试剂相对于抗体的摩尔过量，(ii)限制缀合反应时间或温度，(iii)用于半胱氨酸硫醇基修饰的部分的或受限的还原条件，(iv)通过重组技术将抗体的氨基酸序列工程化，使得半胱氨酸残基的数目和位置被修饰，以控制接头-药物附接的数目和/或位置。
适于与本文描述的组合物和方法一起使用的细胞毒素，除本领域已知的其他的以外，包括DNA嵌入剂(例如，蒽环霉素)、能够破坏有丝分裂纺锤体的剂(例如，长春花生物碱、美登素、美登素生物碱、及其衍生物)、RNA聚合酶抑制剂(例如，鹅膏蕈毒素，诸如α-鹅膏蕈碱及其衍生物)、以及能够破坏蛋白生物合成的剂(例如，表现出rRNA N-糖苷酶活性的剂，诸如皂草素和蓖麻毒蛋白A链)。
在一些实施方案中，细胞毒素是微管结合剂(例如，美登素或美登素生物碱)、鹅膏蕈毒素、假单胞菌外毒素A、deBouganin、白喉毒素、皂草素、澳瑞他汀、蒽环霉素、加利车霉素、伊立替康、SN-38、倍癌霉素、吡咯并苯二氮卓类、吡咯并苯二氮卓类二聚体、吲哚并苯二氮卓类，和吲哚并苯二氮卓类二聚体，或其变体，或本文描述或本领域已知的另一种细胞毒性化合物。
在一些实施方案中，抗体药物缀合物的细胞毒素是RNA聚合酶抑制剂。在一些实施方案中，RNA聚合酶抑制剂是鹅膏蕈毒素或其衍生物。在一些实施方案中，如本文公开的抗体药物缀合物的细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，诸如α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素、鹅膏素酰胺、鹅膏无毒环肽、一羟鹅膏毒肽羧酸、前鹅膏无毒环肽或其衍生物。
下文描述了关于可以用于在本发明方法中有用的抗CD5 ADC的细胞毒素的另外的细节。
鹅膏蕈毒素
在一些实施方案中，RNA聚合酶抑制剂是鹅膏蕈毒素或其衍生物。在一些实施方案中，如本文公开的抗体药物缀合物的细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，诸如α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素、鹅膏素酰胺、鹅膏无毒环肽、一羟鹅膏毒肽羧酸、前鹅膏无毒环肽或其衍生物。多种天然存在的鹅膏蕈毒素的结构由式II和随附的表2表示，并且公开于例如Zanotti等人,Int.J.Peptide Protein Res.30,1987,450-459中。
Figure BDA0002986829440000531
表2.鹅膏蕈毒素结构表。
Figure BDA0002986829440000532
Figure BDA0002986829440000541
在一种实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈碱或其衍生物。在一种实施方案中，细胞毒素是α-鹅膏蕈碱或其衍生物。
鹅膏蕈毒素或其衍生物上的许多位置可以用作与连接部分L共价键合并因此与抗体或其抗原结合片段共价键合的位置。在一些实施方案中，式I的ADC中的细胞毒素是根据式(II)的鹅膏蕈毒素或其衍生物。
在一种实施方案中，ADC由式Ab-Z-L-Am表示，其中Ab是结合CD5的抗体或其抗原结合片段，L是接头，Z是化学部分，并且Am是鹅膏蕈毒素。在这种实施方案中，接头-鹅膏蕈毒素缀合物Am-L-Z由式(III)表示：
Figure BDA0002986829440000542
其中：
R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成5元杂环烷基基团；
R3是H、RC或RD；
R4、R5、R6和R7中的每一个独立地是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是–L-Z′或-L-Z-Ab，其中L是接头，并且是任选地被取代的C1-C6烷基、任选地被取代的C1-C6杂烷基、任选地被取代的C2-C6烯基、任选地被取代的C2-C6杂烯基、任选地被取代的C2-C6炔基、任选地被取代的C2-C6杂炔基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的杂环烷基、任选地被取代的芳基；或者包括二肽；或–((CH2)mO)n(CH2)m–，其中m和n各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10；Z′是反应性部分，并且Z是由Z′与Ab上的官能团的偶联反应产生的化学部分；并且
RD是C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基或其组合，其中每个C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选地被1个至5个取代基取代，对于每种情况取代基独立地选自由以下组成的组：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵、酰基、酰基氧基、酰基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基(sulfanyl)、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、巯基和硝基。
式(III)包括鹅膏蕈毒素和接头，并且在一些实施方案中，包括接头、化学部分和抗体。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈毒素，并且接头-鹅膏蕈毒素缀合物或抗体-接头-鹅膏蕈毒素缀合物由式(IIIA)表示：
Figure BDA0002986829440000561
其中：
R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成5元杂环烷基基团；
R3是H、RC或RD；
R4、R5、R6和R7中的每一个独立地是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是–L-Z′或-L-Z-Ab，其中L是接头，并且是任选地被取代的C1-C6烷基、任选地被取代的C1-C6杂烷基、任选地被取代的C2-C6烯基、任选地被取代的C2-C6杂烯基、任选地被取代的C2-C6炔基、任选地被取代的C2-C6杂炔基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的杂环烷基、任选地被取代的芳基；或者包括二肽；或–((CH2)mO)n(CH2)m–，其中m和n各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10；Z′是反应性部分，并且Z是由Z′与Ab上的官能团的偶联反应产生的化学部分；并且
RD是C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基或其组合，其中每个C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选地被1个至5个取代基取代，对于每种情况取代基独立地选自由以下组成的组：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵、酰基、酰基氧基、酰基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、巯基和硝基。
在一些实施方案中，鹅膏蕈毒素包含一个RC取代基。
在一些实施方案中，RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成下式的5元杂环烷基基团：
Figure BDA0002986829440000571
其中Y是-(C＝O)-、-(C＝S)-、-(C＝NRE)-或-(CRERE’)-；并且
其中RE和RE’各自独立地是H、C1-C6亚烷基-RC、C1-C6亚杂烷基-RC、C2-C6亚烯基-RC、C2-C6亚杂烯基-RC、C2-C6亚炔基-RC、C2-C6亚杂炔基-RC、亚环烷基-RC、亚杂环烷基-RC、亚芳基-RC或亚杂芳基-RC，或其组合；其中每个C1-C6亚烷基-RC、C1-C6亚杂烷基-RC、C2-C6亚烯基-RC、C2-C6亚杂烯基-RC、C2-C6亚炔基-RC、C2-C6亚杂炔基-RC、亚环烷基-RC、亚杂环烷基-RC、亚芳基-RC或亚杂芳基-RC任选地被1个至5个取代基取代，对于每种情况取代基独立地选自由以下组成的组：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵、酰基、酰基氧基、酰基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、巯基和硝基。式(IIIA)包括鹅膏蕈毒素和接头，并且在一些实施方案中，包括接头、化学部分和抗体。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，并且鹅膏蕈毒素-接头缀合物由式IIIA表示，其中
R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成：
Figure BDA0002986829440000581
其中R3是H或RC。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，并且鹅膏蕈毒素-接头缀合物由式IIIA表示，其中
R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成：
Figure BDA0002986829440000582
其中
R3是H或RC；
R4和R5各自独立地是H、OH、ORC、RC或ORD；
R6和R7各自是H；
R8是OH、NH2、ORC或NHRC；
R9是H或OH；并且
其中RC和RD如以上所定义。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，并且鹅膏蕈毒素-接头缀合物由式IIIA表示，其中：
R1是H、OH或ORA；
R2是H、OH或ORB；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成：
Figure BDA0002986829440000591
其中
R3、R4、R6和R7各自是H；
R5是ORC；
R8是OH或NH2；
R9是H或OH；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC和RD如以上所定义。这样的鹅膏蕈毒素-接头缀合物例如描述于美国专利申请公布第2016/0002298号中，其公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，并且鹅膏蕈毒素-接头缀合物由式IIIA表示，其中：
R1和R2各自独立地是H或OH；
R3是RC；
R4、R6和R7各自是H；
R5是H、OH或OC1-C6烷基；
R8是OH或NH2；
R9是H或OH；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC和RD如以上所定义。这样的鹅膏蕈毒素-接头缀合物例如描述于美国专利申请公布第2014/0294865号中，其公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，并且鹅膏蕈毒素-接头缀合物由式IIIA表示，其中：
R1和R2各自独立地是H或OH；
R3、R6和R7各自是H；
R4和R5各自独立地是H、OH、ORC或RC；
R8是OH或NH2；
R9是H或OH；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC和RD如以上所定义。这样的鹅膏蕈毒素-接头缀合物例如描述于美国专利申请公布第2015/0218220号中，其公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，并且鹅膏蕈毒素-接头缀合物由式IIIA表示，其中：
R1和R2各自独立地是H或OH；
R3、R6和R7各自是H；
R4和R5各自独立地是H或OH；
R8是OH、NH2、ORC或NHRC；
R9是H或OH；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC和RD如以上所定义。这样的鹅膏蕈毒素-接头缀合物描述于例如美国专利第9,233,173号和第9,399,681号中，其中每一项的公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，并且鹅膏蕈毒素-接头缀合物由式IIIB表示，其中：
Figure BDA0002986829440000611
其中：
R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成5元杂环烷基基团；
R3是H、RC或RD；
R4、R5、R6和R7中的每一个独立地是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是–L-Z′或-L-Z-Ab，其中L是接头，并且是任选地被取代的C1-C6烷基、任选地被取代的C1-C6杂烷基、任选地被取代的C2-C6烯基、任选地被取代的C2-C6杂烯基、任选地被取代的C2-C6炔基、任选地被取代的C2-C6杂炔基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的杂环烷基、任选地被取代的芳基；或者包括二肽；或–((CH2)mO)n(CH2)m–，其中m和n各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10；Z′是反应性部分，并且Z是由Z′与Ab上的官能团的偶联反应产生的化学部分；并且
RD是C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基或其组合，其中每个C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选地被1个至5个取代基取代，对于每种情况取代基独立地选自由以下组成的组：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵、酰基、酰基氧基、酰基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、巯基和硝基。
式(IIIA)包括鹅膏蕈毒素和接头，并且在一些实施方案中，包括接头、化学部分和抗体。
在一些实施方案中，RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成下式的5元杂环烷基：
Figure BDA0002986829440000621
其中Y是-(C＝O)-、-(C＝S)-、-(C＝NRE)-或-(CRERE’)-；并且
其中RE和RE’各自独立地是H、C1-C6亚烷基-RC、C1-C6亚杂烷基-RC、C2-C6亚烯基-RC、C2-C6亚杂烯基-RC、C2-C6亚炔基-RC、C2-C6亚杂炔基-RC、亚环烷基-RC、亚杂环烷基-RC、亚芳基-RC或亚杂芳基-RC，或其组合；其中每个C1-C6亚烷基-RC、C1-C6亚杂烷基-RC、C2-C6亚烯基-RC、C2-C6亚杂烯基-RC、C2-C6亚炔基-RC、C2-C6亚杂炔基-RC、亚环烷基-RC、亚杂环烷基-RC、亚芳基-RC或亚杂芳基-RC任选地被1个至5个取代基取代，对于每种情况取代基独立地选自由以下组成的组：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵、酰基、酰基氧基、酰基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、巯基和硝基。
在一些实施方案中，如本文描述的抗体或其抗原结合片段与由式IIIB表示的鹅膏蕈毒素-接头缀合物或其衍生物缀合，其中
R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成下式的5元杂环烷基：
Figure BDA0002986829440000631
其中R3是H或RC。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，并且鹅膏蕈毒素-接头缀合物由式IIIB表示，其中
R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成下式的5元杂环烷基基团：
Figure BDA0002986829440000632
其中
R3是H或RC；
R4和R5各自独立地是H、OH、ORC、RC或ORD；
R6和R7各自是H；
R8是OH、NH2、ORC或NHRC；
R9是H或OH；并且
其中RC和RD如以上所定义。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，并且鹅膏蕈毒素-接头缀合物由式IIIB表示，其中：
R1是H、OH或ORA；
R2是H、OH或ORB；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成下式的5元杂环烷基基团：
Figure BDA0002986829440000641
其中
R3、R4、R6和R7各自是H；
R5是ORC；
R8是OH或NH2；
R9是H或OH；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC和RD如以上所定义。这样的鹅膏蕈毒素-接头缀合物例如描述于美国专利申请公布第2016/0002298号中，其公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，并且鹅膏蕈毒素-接头缀合物由式IIIB表示，其中：
R1和R2各自独立地是H或OH；
R3是RC；
R4、R6和R7各自是H；
R5是H、OH或OC1-C6烷基；
R8是OH或NH2；
R9是H或OH；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC和RD如以上所定义。这样的鹅膏蕈毒素-接头缀合物例如描述于美国专利申请公布第2014/0294865号中，其公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，并且鹅膏蕈毒素-接头缀合物由式IIIB表示，其中：
R1和R2各自独立地是H或OH；
R3、R6和R7各自是H；
R4和R5各自独立地是H、OH、ORC或RC；
R8是OH或NH2；
R9是H或OH；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC和RD如以上所定义。这样的鹅膏蕈毒素-接头缀合物例如描述于美国专利申请公布第2015/0218220号中，其公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈毒素或其衍生物，并且鹅膏蕈毒素-接头缀合物由式IIIB表示，其中：
R1和R2各自独立地是H或OH；
R3、R6和R7各自是H；
R4和R5各自独立地是H或OH；
R8是OH、NH2、ORC或NHRC；
R9是H或OH；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC和RD如以上所定义。这样的鹅膏蕈毒素-接头缀合物描述于例如美国专利第9,233,173号和第9,399,681号中，其中每一项的公开内容通过引用以其整体并入本文。
澳瑞他汀
本文描述的抗CD5抗体及其抗原结合片段可以与为澳瑞他汀(美国专利第5,635,483号、第5,780,588号)的细胞毒素缀合。澳瑞他汀是抗有丝分裂剂，干扰微管动力学、GTP水解以及核和细胞分裂(Woyke等人(2001)Antimicrob.Agents and Chemother.45(12):3580-3584)，并且具有抗癌活性(美国专利第5,663,149号)和抗真菌活性(Pettit等人(1998)Antimicrob.Agents Chemother.42:2961-2965)。(美国专利第5,635,483号、第5,780,588号)。澳瑞他汀药物部分可以通过肽药物部分的N(氨基)末端或C(羧基)末端被附接至抗体(WO 02/088172)。
示例性澳瑞他汀实施方案包括N-末端连接的一甲基澳瑞他汀药物部分DE和DF(分别为MMAE和MMAF)，其公开于2004年3月28日提交的Senter等人,Proceedings of theAmerican Association for Cancer Research,第45卷,摘要号623中，其公开内容通过引用以其整体明确并入。
一种示例性澳瑞他汀实施方案是MMAE：
Figure BDA0002986829440000661
其中波浪线指示抗体-药物或药物-接头缀合物(-L-Z-Ab或-L-Z′，如本文描述的)的接头的共价附接点。
另一种示例性澳瑞他汀实施方案是MMAF，
Figure BDA0002986829440000662
其中波浪线指示抗体-接头缀合物(-L-Z-Ab或-L-Z′，如本文描述的)的接头的共价附接点，如US 2005/0238649中公开的。
澳瑞他汀可以根据以下方法制备：美国专利第5,635,483号；美国专利第5,780,588号；Pettit等人(1989)J.Am.Chem.Soc.111:5463-5465；Pettit等人(1998)Anti-CancerDrug Design 13:243-277；Pettit,G.R.,等人Synthesis,1996,719-725；Pettit等人(1996)J.Chem.Soc.Perkin Trans.15:859-863；和Doronina(2003)Nat.Biotechnol.21(7):778-784。美国专利
美登素生物碱
本文描述的抗体及其抗原结合片段可以与为微管结合剂的细胞毒素缀合。在一些实施方案中，微管结合剂是美登素、美登素生物碱或美登素生物碱的类似物。美登素生物碱是有丝分裂抑制剂，其结合微管并且通过抑制微管蛋白聚合来发挥作用。首次从东非灌木齿叶美登木(Maytenus serrata)分离出了美登素(美国专利第3,896,111号)。随后，发现某些微生物也产生美登素生物碱，诸如美登醇和C-3美登素醇酯(美国专利第4,151,042号)。合成的美登醇及其衍生物和类似物公开于以下中：例如美国专利第4,137,230号、第4,248,870号、第4,256,746号、第4,260,608号、第4,265,814号、第4,294,757号、第4,307,016号、第4,308,268号、第4,308,269号、第4,309,428号、第4,313,946号、第4,315,929号、第4,317,821号、第4,322,348号、第4,331,598号、第4,361,650号、第4,364,866号、第4,424,219号、第4,450,254号、第4,362,663号和第4,371,533号。美登素生物碱药物部分在抗体药物缀合物中是有吸引力的药物部分，因为它们：(i)相对易于通过发酵或化学修饰制备、对发酵产物进行衍生化，(ii)易于用适于通过非二硫化物接头与抗体缀合的官能团衍生化，(iii)在血浆中稳定，和(iv)对多种肿瘤细胞系有效。
合适的美登素生物碱的实例包括美登醇的酯、合成的美登醇以及美登醇类似物及衍生物。本文包括抑制微管形成并且对哺乳动物细胞具有高度毒性的任何细胞毒素，如美登素生物碱、美登醇和美登醇类似物及衍生物。
合适的美登醇酯的实例包括那些具有修饰的芳香族环的美登醇酯和那些在其他位置处具有修饰的美登醇酯。这样的合适的美登素生物碱公开于以下中：美国专利第4,137,230号、第4,151,042号、第4,248,870号、第4,256,746号、第4,260,608号、第4,265,814号、第4,294,757号、第4,307,016号、第4,308,268号、第4,308,269号、第4,309,428号、第4,313,946号、第4,315,929号、第4,317,821号、第4,322,348号、第4,331,598号、第4,361,650号、第4,362,663号、第4,364,866号、第4,424,219号、4,450,254号、第4,322,348号、第4,362,663号、第4,371,533号、第5,208,020号、第5,416,064号、第5,475,092号、第5,585,499号、第5,846,545号、第6,333,410号、第7,276,497和第7,473,796号，其中每一项的公开内容在它们涉及美登素生物碱及其衍生物时通过引用并入本文。
在一些实施方案中，本公开内容的抗体药物缀合物(ADC)利用含硫醇的美登素生物碱(DM1)作为细胞毒性剂，该美登素生物碱被正式称为N2′-脱乙酰基-N2′-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素。DM1由以下结构式IV表示：
Figure BDA0002986829440000681
在另一种实施方案中，本发明的缀合物利用含硫醇的美登素生物碱N2′-脱乙酰基-N2′(4-甲基-4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(例如，DM4)作为细胞毒性剂。DM4由以下结构式V表示：
Figure BDA0002986829440000682
另一种包含含有空间位阻硫醇键的侧链的美登素生物碱是N2′-脱乙酰基-N-2′(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(被称为DM3)，由以下结构式VI表示：
Figure BDA0002986829440000691
美国专利第5,208,020号和第7,276,497号中教导的每一种美登素生物碱也可以用于本公开内容的缀合物。在这方面，将5,208,020和7,276,697的全部公开内容通过引用并入本文。
美登素生物碱上的许多位置可以用作与连接部分共价键合的位置，并且因此与抗体或其抗原结合片段共价键合(-L-Z-Ab或-L-Z′，如本文描述的)。例如，具有羟基基团的C-3位置、修饰有羟甲基的C-14位置、修饰有羟基的C-15位置和具有羟基基团的C-20位置都被预期是有用的。在一些实施方案中，C-3位置用作与接头部分共价键合的位置，并且在一些特定实施方案中，美登醇的C-3位置用作与连接部分共价键合的位置。本领域中有许多已知的接头基团用于制备抗体-美登素生物碱缀合物，包括例如以下中公开的那些：美国专利第5,208,020号、第6,441,163号和EP专利第0425235 B1号；Chari等人,Cancer Research 52:127-131(1992)；和U.S.2005/0169933A，其公开内容在此通过引用明确并入。本文描述并例示了另外的接头团。
本发明还包括美登素生物碱和缀合物的多种异构体和混合物。本发明的某些化合物和缀合物可以以多种立体异构体、对映异构体和非对映异构体的形式存在。若干用于产生这样的抗体-美登素生物碱缀合物的描述在以下中提供：美国专利第5,208,020号、第5,416,064号、第6,333,410号、第6,441,163号、第6,716,821号和第7,368,565号，其中每一项以其整体并入本文。
蒽环类
在其他实施方案中，本文描述的抗体及其抗原结合片段可以与为蒽环类分子的细胞毒素缀合。蒽环类是表现出细胞毒性的抗生素化合物。研究已经表明蒽环类可以通过许多不同的机制操作以杀伤细胞，所述机制包括：1)将药物分子嵌入细胞的DNA中，从而抑制依赖于DNA的核酸合成；2)由药物产生自由基，然后自由基与细胞大分子反应以对细胞引起损伤，或3)药物分子与细胞膜的相互作用[参见，例如，Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy中的C.Peterson等人,"Transport And Storage Of Anthracycline InExperimental Systems And Human Leukemia"；N.R.Bachur,"Free Radical Damage"同上，见第97-102页]。由于蒽环类的细胞毒性潜力，它们已被用于治疗许多癌症，诸如白血病、乳腺癌、肺癌、卵巢腺癌和肉瘤。[参见例如，Anthracycline:Current Status And New Developments中的P.H-Wiernik,第11页]。常用的蒽环类包括多柔比星、表柔比星、伊达比星和道诺霉素。
蒽环类的代表性实例包括但不限于柔红霉素(Cerubidine；BedfordLaboratories)、多柔比星(阿霉素；Bedford Laboratories；也被称为盐酸多柔比星、羟基柔红霉素和Rubex)、表柔比星(Ellence；Pfizer)和伊达比星(Idamycin；Pfizer Inc.)。蒽环类类似物多柔比星(ADRIAMYCINO)被认为通过嵌入而与DNA相互作用并且抑制拓扑异构酶II的进程，拓扑异构酶II使DNA解链以进行转录。在拓扑异构酶II复合物破坏DNA链以进行复制后，多柔比星稳定了拓扑异构酶II复合物，阻止了DNA双螺旋被重新密封，从而停止了复制进程。多柔比星和柔红霉素(daunorubicin)(道诺霉素(DAUNOMYCIN))是原型细胞毒性天然产物蒽环类化学治疗剂(Sessa等人,(2007)Cardiovasc.Toxicol.7:75-79)。
用于本文使用的合适的蒽环类的一种非限制性实例是PNU-159682("PNU")，一种奈莫柔比星(nemorubicin)的高效主要代谢产物。PNU表现出相对于母体奈莫柔比星大于3000倍的细胞毒性(Quintieri等人，Clinical Cancer Research 2005,11,1608-1617)。PNU由以下结构式表示：
Figure BDA0002986829440000711
蒽环类诸如PNU上的多于一个位置可以用作与连接部分L共价键合并因此与如本文描述的抗CD137抗体或其抗原结合片段共价键合的位置。例如，接头可以通过对羟甲基酮侧链的修饰来引入。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的PNU衍生物：
Figure BDA0002986829440000712
其中波浪线指示如本文描述的ADC的接头的共价附接点。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的PNU衍生物：
Figure BDA0002986829440000713
其中波浪线指示如本文描述的ADC的接头的共价附接点。
吡咯并苯二氮卓类(PBD)
在其他实施方案中，本文描述的抗CD5抗体或其抗原结合片段可以与为吡咯并苯二氮卓类(PBD)的细胞毒素缀合或与包含PBD的细胞毒素缀合。PBD可以由某些放线菌产生，并且已经被证明是序列选择性的DNA烷基化化合物。PBD细胞毒素包括但不限于，氨茴霉素(anthramycin)、二聚体PBD，以及在例如以下中公开的那些：Hartley,J.A.(2011)Thedevelopment of pyrrolobenzodiazepines as antitumor agents.Expert Opin InvDrug,20(6),733-744和Antonow D,Thurston DE(2011)Synthesis of DNA-interactivepyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines(PBDs).Chem Rev 111:2815-2864。
在一些实施方案中，细胞毒素可以是由以下结构式表示的吡咯并苯二氮卓类二聚体：
Figure BDA0002986829440000721
其中波浪线指示如本文描述的ADC的接头的共价附接点。基于该PBD的ADC公开在例如Sutherland等人，Blood 2013 122:1455-1463中，其通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，细胞毒素可以是由以下结构式表示的PBD二聚体：
Figure BDA0002986829440000722
其中n是3或5，并且其中波浪线指示如本文描述的ADC的接头的共价附接点。
在一些实施方案中，细胞毒素可以是由以下结构式表示的PBD二聚体：
Figure BDA0002986829440000723
其中波浪线指示如本文描述的ADC的接头的共价附接点。
在特定实施方案中，细胞毒素可以是PBD二聚体，当PBD二聚体与接头和反应性部分Z′合在一起时，如本文描述的，每一个可以由以下结构表示：
Figure BDA0002986829440000731
这种特定的细胞毒素-接头缀合物被称为tesirine(SG3249)，并且已经在例如Howard等人，ACS Med.Chem.Lett.2016,7(11),983-987中描述，其公开内容通过引用以其整体并入本文。
在特定实施方案中，细胞毒素可以是PBD二聚体，当PBD二聚体与接头和反应性部分Z′合在一起时，如本文描述的，每一个可以由以下结构表示：
Figure BDA0002986829440000732
这种特定细胞毒素接头缀合物被称为talirine，并且已经在例如Mantaj等人，Angewandte Chemie International Edition English 2017,56,462-488中描述，其公开内容通过引用以其整体并入本文。
加利车霉素
在其他实施方案中，本文描述的抗体及其抗原结合片段可以与为烯二炔抗肿瘤抗生素(例如，加利车霉素，奥佐米星)的细胞毒素缀合。加利车霉素家族的抗生素能够以亚皮摩尔浓度产生双链DNA断裂。关于加利车霉素家族缀合物的制备，参见美国专利第5,712,374号、第5,714,586号、第5,739,116号、第5,767,285号、第5,770,701号、第5,770,710号、第5,773,001号和第5,877,296号(全部属于American Cyanamid Company)。可以使用的加利车霉素的结构类似物包括但不限于，在例如以下中公开的那些：Hinman等人,CancerResearch 53:3336-3342(1993)；Lode等人,Cancer Research 58:2925-2928(1998)；以及前述American Cyanamid的美国专利。
适于在本发明中使用的加利车霉素的实例公开在例如美国专利第4,671,958号、美国专利第4,970,198号、美国专利第5,053,394号、美国专利第5,037,651号和美国专利第5,079,233号中，将它们以其整体并入本文。
示例性加利车霉素被命名为γ1，其在本文中简称为γ，并且具有结构式：
Figure BDA0002986829440000741
在一些实施方案中，加利车霉素是γ加利车霉素衍生物或N-乙酰基γ加利车霉素衍生物。可以使用的加利车霉素的结构类似物包括但不限于，在例如以下中公开的那些：Hinman等人,Cancer Research 53:3336-3342(1993)；Lode等人,Cancer Research 58:2925-2928(1998)；以及前述美国专利。加利车霉素包含甲基三硫化物部分，所述甲基三硫化物部分可以与适当的硫醇反应形成二硫化物，同时引入官能团，该官能团可用于经由接头将加利车霉素衍生物附接至如本文描述的抗CD5抗体或其抗原结合片段。
在一种实施方案中，如本文公开的ADC的细胞毒素是由下式表示的加利车霉素二硫化物衍生物：
Figure BDA0002986829440000751
其中波浪线指示接头的附接点。
另外的细胞毒素
在其他实施方案中，本文描述的抗体及其抗原结合片段可以与不同于或除了本文以上公开的那些细胞毒素以外的细胞毒素缀合。适于与本文描述的组合物和方法一起使用的另外的细胞毒素，尤其包括但不限于，5-乙炔基尿嘧啶、阿比特龙、酰基富烯(acylfulvene)、腺环戊醇(adecypenol)、阿多来新(adozelesin)、阿地白介素、六甲蜜胺、氨莫司汀、艾美多(amidox)、氨磷汀、氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶、阿那格雷(anagrelide)、阿那曲唑(anastrozole)、穿心莲内酯、血管生成抑制剂、安雷利克斯(antarelix)、抗背侧形态发生蛋白-1(anti-dorsalizingmorphogenetic protein-1)、抗雄激素、前列腺癌、抗雌激素、抗瘤酮(antineoplaston)、反义寡核苷酸、甘氨酸阿非迪霉素(aphidicolin glycinate)、凋亡基因调节剂、凋亡调节剂、脱嘌呤核酸、奥沙那宁(asulacrine)、阿他美坦(atamestane)、阿莫司汀(atrimustine)、阿新司坦汀1(axinastatin 1)、阿新司坦汀2(axinastatin 2)、阿新司坦汀3(axinastatin3)、阿扎司琼(azasetron)、阿扎托新(azatoxin)、重氮酪氨酸、巴卡亭III衍生物(baccatinIII derivatives)、班兰诺(balanol)、巴马司他(batimastat)、BCR/ABL拮抗剂、苯并二氢卟酚(benzochlorins)、苯甲酰基星形孢菌素(benzoylstaurosporine)、β内酰胺衍生物、β-阿立辛(beta-alethine)、β可来霉素B(betaclamycin B)、桦木酸、bFGF抑制剂、比卡鲁胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、双氮丙啶基精胺(bisaziridinylspermine)、双奈法德(bisnafide)、bistratene A、比折来新(bizelesin)、比锐来特(breflate)、博来霉素A2、博来霉素B2、溴匹立明(bropirimine)、布多替钛(budotitane)、丁硫氨酸亚砜胺、卡泊三醇、钙磷酸蛋白C(calphostin C)、喜树碱衍生物(例如10-羟基-喜树碱)、卡培他滨(capecitabine)、甲酰胺-氨基三唑(carboxamide-amino-triazole)、羧酰胺基三唑(carboxyamidotriazole)、卡折来新(carzelesin)、酪蛋白激酶抑制剂、栗树精胺、杀菌肽B(cecropin B)、西曲瑞克(cetrorelix)、二氢卟酚、氯喹喔啉磺胺、西卡前列素(cicaprost)、顺式卟啉、克拉屈滨(cladribine)、氯米芬及其类似物、克霉唑、克立霉素A(collismycin A)、克立霉素B(collismycin B)、考布他丁A4(combretastatin A4)、考布他丁类似物、康纳京尼(conagenin)、卡那贝西汀816(crambescidin 816)、克里斯奈托(crisnatol)、念珠藻环肽8、念珠藻环肽A衍生物、卡拉新A(curacin A)、环戊蒽醌、环普兰姆(cycloplatam)、西匹霉素(cypemycin)、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠(cytarabineocfosfate)、溶细胞因子、磷酸己烷雌酚(cytostatin)、达昔单抗、地西他滨、脱氢膜海鞘素B、2'脱氧柯福霉素(2'deoxycoformycin)(DCF)、地洛瑞林(deslorelin)、右异环磷酰胺(dexifosfamide)、右雷佐生(dexrazoxane)、右维拉帕米(dexverapamil)、地吖醌(diaziquone)、膜海鞘素B、地多西(didox)、二乙基去甲精胺(diethylnorspermine)、二氢-5-氮杂胞苷(dihydro-5-azacytidine)、二氢紫杉醇(dihydrotaxol)、二恶霉素(dioxamycin)、二苯基螺莫司汀、圆皮海绵内酯、二十二烷醇(docosanol)、多拉司琼、去氧氟尿苷、屈洛昔芬、屈大麻酚、倍癌霉素SA(duocannycin SA)、依布硒啉、依考莫司汀、依地福新、依决洛单抗、依氟鸟氨酸(eflornithine)、榄香烯、乙嘧替氟、埃博霉素、epithilones、爱普列特(epristeride)、雌莫司汀及其类似物、依托泊苷、依托泊苷4'-磷酸酯(也称为etopofos)、依西美坦、法倔唑、法扎拉滨、维甲酰酚胺(fenretinide)、非格司亭、非那雄胺、夫拉平度(flavopiridol)、夫来折司汀(flezelastine)、夫斯特隆(fluasterone)、氟达拉滨、盐酸氟道诺霉素(fluorodaunorunicin hydrochloride)、福酚美克(forfenimex)、福美司坦(formestane)、福司曲星(fostriecin)、福莫司汀(fotemustine)、钆德卟啉(gadolinium texaphyrin)、硝酸镓、加洛他滨(galocitabine)、加尼瑞克(ganirelix)、明胶酶抑制剂、吉西他滨、谷胱甘肽抑制剂、普苏姆(hepsulfam)、高三尖杉酯碱(homoharringtonine)(HHT)、金丝桃素、伊班膦酸、艾多昔芬(idoxifene)、伊决孟酮(idramantone)、伊莫福新(ilmofosine)、伊洛马司他(ilomastat)、咪唑吖啶酮(imidazoacridones)、咪喹莫特(imiquimod)、免疫刺激肽、碘苄胍、碘多柔比星、甘薯苦醇、伊立替康、伊罗普拉(iroplact)、伊索拉定(irsogladine)、异苯胍唑(isobengazole)、杰斯普拉克立德(jasplakinolide)、卡哈拉立得F(kahalalide F)、三醋酸片螺素-N(lamellarin-N triacetate)、兰乐肽(lanreotide)、leinamycin、来格司亭(lenograstim)、硫酸香菇多糖(lentinan sulfate)、雷托他汀(leptolstatin)、来曲唑(letrozole)、亲脂性铂类化合物、立索克林酰胺7(lissoclinamide 7)、洛铂、洛美曲索(lometrexol)、氯尼达明(lonidamine)、洛索蒽醌(losoxantrone)、洛索立宾(loxoribine)、勒托替康(lurtotecan)、镥德卟啉(lutetium texaphyrin)、立索茶碱(lysofylline)、马索罗酚、马司非(maspin)、基质金属蛋白酶抑制剂、美诺立尔(menogaril)、rnerbarone、美替瑞林(meterelin)、甲硫氨酸酶、甲氧氯普胺、MIF抑制剂、米非司酮(ifepristone)、米替福新(miltefosine)、米立司亭(mirimostim)、光辉霉素(mithracin)、米托胍腙(mitoguazone)、二溴卫矛醇、丝裂霉素及其类似物、米托萘胺(mitonafide)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫法罗汀(mofarotene)、莫拉司亭(molgramostim)、美卡普罗B(myloroxide B)、美瑞泡仁((myriaporone)、N-乙酰基地那林(N-acetyldinaline)、N-被取代的苯甲酰胺、那法瑞林(nafarelin)、纳格瑞替(nagrestip)、纳普维(napavin)、萘特非(naphterpin)、那托司亭(nartograstim)、奈达铂(nedaplatin)、奈莫柔比星、奈立膦酸、尼鲁米特(nilutamide)、丽沙霉素(nisamycin)、里挫林(nitrullyn)、奥曲肽(octreotide)、奥克恩(okicenone)、奥那司酮(onapristone)、昂丹司琼(ondansetron)、奥拉新(oracin)、奥马铂(ormaplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、厄诺霉素(oxaunomycin)、紫杉醇及其类似物、帕诺明(palauamine)、十六酰基根霉素(palmitoylrhizoxin)、帕米膦酸、人参炔三醇、帕诺米芬(panomifene)、帕拉贝新(parabactin)、帕折普汀(pazelliptine)、培门冬酶(pegaspargase)、皮地新(peldesine)、戌聚糖聚硫酸钠、喷司他丁(pentostatin)、喷唑(pentrozole)、全氟溴烷(perflubron)、培磷酰胺、苯连氮霉素(phenazinomycin)、沙培林(picibanil)、吡柔比星(pirarubicin)、吡曲克辛(piritrexim)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、泊非霉素(porfiromycin)、嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂、雷替曲塞(raltitrexed)、根霉素、罗谷亚胺(rogletimide)、罗希吐碱、鲁滨吉隆B1(rubiginone B1)、鲁泊塞(ruboxyl)、沙芬戈(safingol)、圣特平(saintopin)、肌肉叶绿醇A(sarcophytol A)、沙格司亭(sargramostim)、索布佐生(sobuzoxane)、索纳明(sonermin)、斯帕磷酸(sparfosic acid)、斯皮卡霉素D(spicamycin D)、螺莫司汀(spiromustine)、斯替皮米德(stipiamide)、sulfinosine、他莫司汀(tallimustine)、替加氟(tegafur)、替莫唑胺、替尼泊苷、噻立拉斯汀(thaliblastine)、噻可拉林(thiocoraline)、替拉扎明(tirapazamine)、拓扑替康(topotecan)、托普升替(topsentin)、曲西立滨(triciribine)、三甲曲沙(trimetrexate)、藜芦胺(veramine)、长春瑞滨(vinorelbine)、维萨汀(vinxaltine)、伏罗唑(vorozole)、折尼铂(zeniplatin)和亚苄维C(zilascorb)。
接头
如本文使用的，术语“接头”意指包含共价键或原子的链的二价化学部分，其将抗CD5抗体或其片段(Ab)共价附接至药物部分(D)以形成式I的抗体药物缀合物(ADC)。合适的接头具有两个反应性末端，一个用于与抗体缀合，并且另一个用于与细胞毒素缀合。接头的抗体缀合反应性末端(反应性部分，Z′)通常是能够通过抗体上的半胱氨酸硫醇或赖氨酸胺基团与抗体缀合的位点，并且因此通常是硫醇反应性基团诸如双键(如在马来酰亚胺中)或离去基团诸如氯、溴、碘或R-磺酰基基团，或胺反应性基团诸如羧基基团；而接头的细胞毒素缀合反应性末端通常是能够与细胞毒素缀合的位点。接头-细胞毒素缀合的非限制性实例包括，例如，分别经由接头上的羧基或碱性胺基团与细胞毒素上的碱性胺或羧基基团形成酰胺键，或者经由细胞毒素上OH基团的烷基化(例如经由接头上的离去基团)形成醚等。在一些实施方案中，细胞毒素接头缀合是通过与细胞毒素上的碱性胺或羧基基团形成酰胺键，并且因此接头上的反应性取代基分别是羧基或碱性胺基团。当术语“接头”被用于描述呈缀合形式的接头时，由于在接头和/或细胞毒素之间以及接头和/或抗体或其抗原结合片段之间形成键，一个或两个反应性末端将是不存在的(诸如反应性部分Z′，已经被转化为化学部分Z)或不完整的(诸如仅为羧酸的羰基)。这样的缀合反应在下文中进一步描述。
多种接头可以用于将所描述的抗体、抗原结合片段和配体与细胞毒性分子缀合。在一些实施方案中，接头在细胞内条件下是可裂解的，使得在细胞内环境中接头的裂解使药物单元从抗体释放。在又其他的实施方案中，接头单元是不可裂解的，并且药物通过例如抗体降解而释放。可用于本发明的ADC的接头优选在细胞外稳定，防止ADC分子聚集，并保持ADC在水性介质中易溶解且呈单体状态。在转运或递送到细胞中之前，优选地ADC是稳定的并保持完整，即抗体保持与药物部分连接。接头在靶细胞外是稳定的，并且可以在细胞内以一定的有效速率被裂解。有效的接头将会：(i)维持抗体的特异性结合特性；(ii)允许缀合物或药物部分的细胞内递送；(iii)直到缀合物已经被递送或转运至其靶向的位点之前保持稳定和完整，即，不裂解；并且(iv)维持细胞毒性部分的细胞毒性、细胞杀伤作用或细胞抑制作用。ADC的稳定性可以通过标准分析技术诸如质谱术、HPLC和分离/分析技术LC/MS来测量。抗体和药物部分的共价附接要求接头具有两个反应性官能基团，即在反应性意义上的二价性。可用于附接两个或更多个功能性或生物活性部分(诸如肽、核酸、药物、毒素、抗体、半抗原和报告物基团)的二价接头试剂是已知的，并且已经描述了它们产生缀合物的方法(Hermanson,G.T.(1996)Bioconjugate Techniques；Academic Press:New York,第234-242页)。
合适的可裂解接头包括可以通过以下被裂解的接头：例如，酶促水解、光解、在酸性条件下水解、在碱性条件下水解、氧化、二硫化物还原、亲核裂解或有机金属裂解(参见，例如，Leriche等人,Bioorg.Med.Chem.,20:571-582,2012，其公开内容在其涉及适用于共价缀合的接头时通过引用并入本文)。合适的可裂解接头可以包括，例如，化学部分，诸如肼、二硫化物、硫醚或二肽。
在酸性条件下可水解的接头包括，例如，腙、缩氨基脲、缩氨基硫脲、顺乌头酰胺(cis-aconitic amides)、原酸酯、缩醛、缩酮等。(参见，例如，美国专利第5,122,368号、第5,824,805号、第5,622,929号；Dubowchik和Walker,1999,Pharm.Therapeutics 83:67-123；Neville等人,1989,Biol.Chem.264:14653-14661，其中每一项的公开内容在其涉及适用于共价缀合的接头时通过引用以其整体并入本文)。这样的接头在中性pH条件下(诸如在血液中的中性pH条件下)相对稳定，但在pH5.5或5.0(溶酶体的近似pH)以下时不稳定。
还原条件下可裂解的接头包括，例如，二硫化物。多种二硫化物接头是本领域已知的，包括，例如，可以使用以下形成的二硫化物接头：SATA(N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫代乙酸酯)、SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)、SPDB(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯)和SMPT(N-琥珀酰亚胺基-氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫代)甲苯)、SPDB和SMPT(参见，例如，Thorpe等人,1987,Cancer Res.47:5924-5931；Wawrzynczak等人,In Immunoconjugates:Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy ofCancer(C.W.Vogel编著,Oxford U.Press,1987)。另参见美国专利第4,880,935号，其中每一项的公开内容在其涉及适用于共价缀合的接头时通过引用以其整体并入本文)。
易受酶促水解的接头可以是，例如，被细胞内肽酶或蛋白酶(包括但不限于溶酶体或内体蛋白酶)裂解的含肽接头。使用细胞内蛋白水解释放治疗剂的一个优点是，当缀合时，剂通常被削弱，并且缀合物的血清稳定性通常较高。在一些实施方案中，肽基接头的长度为至少两个氨基酸或长度为至少三个氨基酸。示例性氨基酸接头包括二肽、三肽、四肽或五肽。合适的肽的实例包括含有以下氨基酸的肽：诸如缬氨酸、丙氨酸、瓜氨酸(Cit)、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸和甘氨酸。构成氨基酸接头成分的氨基酸残基包括天然存在的氨基酸残基，以及少量氨基酸和非天然存在的氨基酸类似物，诸如瓜氨酸。示例性二肽包括缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)和丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)。示例性三肽包括甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。在一些实施方案中，接头包括二肽，诸如Val-Cit、Ala-Val或Phe-Lys、Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Phe-Arg或Trp-Cit。含有二肽诸如Val-Cit或Phe-Lys的接头公开于例如美国专利第6,214,345号中，其公开内容在其涉及适用于共价缀合的接头时通过引用以其整体并入本文。在一些实施方案中，接头包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。
适于将本文描述的抗体、抗原结合片段和配体与细胞毒性分子缀合的接头包括那些能够通过1,6-消除过程释放细胞毒素的接头。能够进行这种消除过程的化学部分包括对氨基苄基(PAB)基团、6-马来酰亚胺基己酸、pH敏感性碳酸酯和如Jain等人Pharm.Res.32:3526-3540，2015中描述的其他试剂，其公开内容在其涉及适用于共价缀合的接头时通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，接头包括“自我分解性(self-immolative)”基团，诸如前述的PAB或PABC(对氨基苄基氧羰基)，其被公开于以下中：例如，Carl等人,J.Med.Chem.(1981)24:479-480；Chakravarty等人(1983)J.Med.Chem.26:638-644；US 6214345；US20030130189；US20030096743；US6759509；US20040052793；US6218519；US6835807；US6268488；US20040018194；W098/13059；US20040052793；US6677435；US5621002；US20040121940；W02004/032828)。其他的能够进行该过程的这样的化学部分(“自我分解性接头”)包括亚甲基氨基甲酸酯和杂芳基基团诸如氨基噻唑、氨基咪唑、氨基嘧啶等。含有这样的杂环自我分解性基团的接头公开于以下中：例如，美国专利公布第20160303254号和第20150079114号以及美国专利第7,754,681号；Hay等人(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9:2237；US 2005/0256030；de Groot等人(2001)J.Org.Chem.66:8815-8830；和US 7223837。在一些实施方案中，二肽与自我分解性接头组合使用。
适用于本文的接头还可以包括一个或更多个选自以下的基团：C1-C6亚烷基、C1-C6亚杂烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6亚杂烯基、C2-C6亚炔基、C2-C6亚杂炔基、C3-C6亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基、亚杂芳基及其组合，其中每一个可以任选地被取代。这样的基团的非限制性实例包括(CH2)p、(CH2CH2O)p和-(C＝O)(CH2)p-单元，其中对于每种情况p是独立地选择的1-6的整数。
在一些实施方案中，每个C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团可以任选地被1个至5个取代基取代，对于每种情况所述取代基独立地选自由以下组成的组：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵、酰基、酰基氧基、酰基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、巯基和硝基。
在一些实施方案中，每个C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团可以任选地被一个或更多个选自O、S和N的杂原子间隔。
在一些实施方案中，每个C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C2-C6烯基、C2-C6杂烯基、C2-C6炔基、C2-C6杂炔基、C3-C6环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团可以任选地被一个或更多个选自O、S和N的杂原子间隔并且可以任选地被1个至5个取代基取代，对于每种情况所述取代基独立地选自由以下组成的组：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷芳基、烷基杂芳基、氨基、铵、酰基、酰基氧基、酰基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、羟基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、巯基和硝基。合适的接头可以包含具有增强溶解性的特性的基团。例如，包含(CH2CH2O)p单元(聚乙二醇，PEG)的接头可以增强溶解性，被氨基、磺酸、膦酸或磷酸残基取代的烷基链也可以。包含这样的部分的接头公开于例如美国专利第8,236,319号和第9,504,756号中，其中每一项的公开内容在其涉及适用于共价缀合的接头时通过引用以其整体并入本文。其他增强溶解性的基团包括例如酰基和氨基甲酰基磺酰胺基团，其具有以下结构：
Figure BDA0002986829440000821
其中a是0或1；并且
R10选自由以下组成的组：氢、C1-C24烷基基团、C3-C24环烷基基团、C1-C24(杂)芳基基团、C1-C24烷基(杂)芳基基团和C1-C24(杂)芳基烷基基团、C1-C24烷基基团、C3-C24环烷基基团、C2-C24(杂)芳基基团、C3-C24烷基(杂)芳基基团和C3-C24(杂)芳基烷基基团，其中每一个可以任选地被一个或更多个杂原子取代和/或任选地被一个或更多个杂原子间隔，所述杂原子选自O、S和NR11R12，其中R11和R12独立地选自由以下组成的组：氢和C1-C4烷基基团；或者R10是细胞毒素，其中细胞毒素任选地经由间隔物部分与N连接。包含这样的基团的接头描述于例如美国专利第9,636,421号和美国专利申请公布第2017/0298145号中，其公开内容在其涉及适用于与细胞毒素和抗体或其抗原结合片段共价缀合的接头时通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，接头可以包括以下中的一个或更多个：肼、二硫化物、硫醚、二肽、对氨基苄基(PAB)基团、杂环自我分解性基团、任选地被取代的C1-C6烷基、任选地被取代的C1-C6杂烷基、任选地被取代的C2-C6烯基、任选地被取代的C2-C6杂烯基、任选地被取代的C2-C6炔基、任选地被取代的C2-C6杂炔基、任选地被取代的C3-C6环烷基、任选地被取代的杂环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、增强溶解性的基团、酰基、-(C＝O)-或-(CH2CH2O)p-基团，其中p是1-6的整数。本领域技术人员将认识到，所列出的一个或更多个基团可以以二价(二价基)物类的形式存在，例如C1-C6亚烷基等。
在一些实施方案中，接头包括对氨基苄基基团(PAB)。在一种实施方案中，对氨基苄基基团布置于细胞毒性药物和接头中的蛋白酶裂解位点之间。在一种实施方案中，对氨基苄基基团是对氨基苄基氧羰基单元的一部分。在一种实施方案中，对氨基苄基基团是对氨基苄基酰氨基单元的一部分。
在一些实施方案中，接头包括选自由以下组成的组的二肽：Phe-Lys、Val-Lys、Phe-Ala、Phe-Cit、Val-Ala、Val-Cit和Val-Arg。在一些实施方案中，接头包括以下中的一种或更多种：PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB。
在一些实施方案中，接头包括PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB。
在一些实施方案中，接头包括以下中的一种或更多种的组合：肽、寡糖、-(CH2)p-、-(CH2CH2O)p-、PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB。
在一些实施方案中，接头包括-(C＝O)(CH2)p-单元，其中p是1-6的整数。
在一些实施方案中，接头包括-(CH2)n-单元，其中n是2-6的整数。在一些实施方案中，接头包括-((CH2)n，其中n是6。在一些实施方案中，L-Z是
Figure BDA0002986829440000841
其中S是硫原子，表示存在于结合CD5的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基(例如，来自半胱氨酸残基的-SH基团)。
在一些实施方案中，接头包括((CH2)mO)n(CH2)m-基团和杂芳基基团，其中n和m各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10，其中杂芳基基团是三唑。在一些实施方案中，((CH2)mO)n(CH2)m–基团和三唑一起包括
Figure BDA0002986829440000842
其中n是1至10，并且波浪线指示与另外的接头组分、化学部分Z或鹅膏蕈毒素的附接点。可用于本文描述的方法和组合物中的其他接头描述于US2019/0144504中，其通过引用并入本文。
在一种特定体实施方案中，接头包括由以下结构表示的PAB-Ala-Val-丙酰基
Figure BDA0002986829440000843
其中波浪线指示细胞毒素和反应性部分Z′的附接点。
在另一种特定实施方案中，接头包括由以下结构表示的PAB-Cit-Val-丙酰基
Figure BDA0002986829440000851
其中波浪线指示细胞毒素和反应性部分Z′的附接点。这样的PAB-二肽-丙酰基接头公开于例如专利申请公布第WO2017/149077号中，将其通过引用以其整体并入本文。此外，将WO2017/149077中公开的细胞毒素通过引用并入本文。
本领域技术人员将认识到，本文公开的任何一种或更多种化学基团、部分和特征可以以多种方式组合，以形成可用于如本文公开的抗体和细胞毒素的缀合的接头。可与本文描述的组合物和方法结合使用的其他接头描述于例如美国专利申请公布第2015/0218220号中，其公开内容通过引用以其整体并入本文。
在某些实施方案中，作为接头前体的中间体在适当的条件下与药物部分反应。在某些实施方案中，在药物和/或中间体或接头上使用反应性基团。药物和中间体或衍生化药物之间的反应产物随后在适当的条件下与抗体或抗原结合片段反应。可选地，接头或中间体可以首先与抗体或衍生化抗体反应，并且然后与药物或衍生化药物反应。现在将更充分地描述这样的缀合反应。
许多不同的反应可用于将接头或药物-接头缀合物与抗体或其抗原结合片段共价附接。抗体分子上合适的附接点包括赖氨酸的胺基团、谷氨酸和天冬氨酸的游离羧酸基团、半胱氨酸的硫醇基团和芳香族氨基酸的多种部分。例如，可以使用碳二亚胺反应将化合物上的羧基(或氨基)基团与抗体部分上的氨基(或羧基)基团连接来进行非特异性共价附接。另外，双官能剂诸如二醛或亚氨酸酯也可以用于将化合物上的氨基基团与抗体部分上的氨基基团连接。席夫碱反应也可用于药物与结合剂的附接。这种方法包括对包含乙二醇或羟基基团的药物进行高碘酸氧化，从而形成醛，然后醛与结合剂反应。经由与结合剂的氨基基团形成席夫碱而发生附接。异硫氰酸酯也可以用作偶联剂，用于将药物与结合剂共价附接。其他技术是技术人员已知的，并且在本公开内容的范围内。
可用于与本文描述的抗体或抗原结合片段缀合的接头包括但不限于包含通过如下表3中描绘的偶联反应形成的化学部分Z的接头。曲线分别表示与抗体或抗原结合片段和细胞毒性分子的附接点。
表3.在抗体药物缀合物的形成中通过偶联反应形成的示例性化学部分Z
Figure BDA0002986829440000861
Figure BDA0002986829440000871
Figure BDA0002986829440000881
Figure BDA0002986829440000891
本领域技术人员将认识到，与接头附接的反应性取代基Z′和抗体或其抗原结合片段上的反应性取代基参与共价偶联反应以产生化学部分Z，并且将认识到反应性取代基Z′。因此，可与本文描述的方法结合使用的抗体药物缀合物可以通过抗体或其抗原结合片段与如本文描述的接头或细胞毒素-接头缀合物反应而形成，接头或细胞毒素-接头缀合物包括反应性取代基Z′，反应性取代基Z′适于与抗体或其抗原结合片段上的反应性取代基反应，以形成化学部分Z。
如表3中描绘的，接头和抗体或其抗原结合片段上的合适的反应性取代基的实例包括亲核体/亲电子体对(例如，硫醇/卤代烷基对、胺/羰基对，或硫醇/α,β-不饱和羰基对等)、二烯/亲二烯体对(例如尤其是，叠氮化物/炔烃对或二烯/α,β-不饱和羰基对)等。形成化学部分Z的反应性取代基之间的偶联反应包括但不限于硫醇烷基化、羟基烷基化、胺烷基化、胺或羟胺缩合、肼形成、酰胺化、酯化、二硫化物形成、环加成(例如尤其是，[4+2]狄尔斯-阿尔德环加成、[3+2]Huisgen环加成)、亲核芳香族取代、亲电芳香族取代和本领域已知或本文描述的其他反应形式。优选地，接头包含亲电官能团，以与抗体或其抗原结合片段上的亲核官能团反应。
可以存在于如本文公开的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基包括但不限于亲核基团，诸如(i)N-末端胺基团，(ii)侧链胺基团，例如赖氨酸，(iii)侧链硫醇基团，例如半胱氨酸，和(iv)糖羟基或氨基基团，其中抗体是糖基化的。可以存在于如本文公开的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基包括但不限于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基的羟基部分；赖氨酸残基的氨基部分；天冬氨酸和谷氨酸残基的羧基部分；和半胱氨酸残基的硫醇部分，以及非天然存在的氨基酸的炔丙基、叠氮基、卤代芳基(例如，氟芳基)、卤代杂芳基(例如，氟杂芳基)、卤代烷基和卤代杂烷基部分。在一些实施方案中，如本文公开的抗体或其抗原结合片段内存在的反应性取代基包括胺或硫醇部分，是胺或硫醇部分。某些抗体具有可还原的链间二硫化物，即半胱氨酸桥。可以通过用还原剂诸如DTT(二硫苏糖醇)处理使得抗体具有反应性以与接头试剂缀合。因此，理论上，每个半胱氨酸桥将形成两个反应性硫醇亲核体。可以通过赖氨酸与2-亚氨基硫杂环戊烷(2-iminothiolane)(Traut试剂)的反应将另外的亲核基团引入抗体中，导致胺转化为硫醇。可以通过引入一个、两个、三个、四个或更多个半胱氨酸残基(例如，制备包含一个或更多个非天然半胱氨酸氨基酸残基的突变抗体)将反应性硫醇基团引入抗体(或其片段)中。美国专利第7,521,541号教导了通过引入反应性半胱氨酸氨基酸将抗体工程化。
在一些实施方案中，与接头附接的反应性部分Z′是与抗体上存在的亲电基团反应的亲核基团。抗体上有用的亲电基团包括但不限于醛和酮羰基基团。亲核基团的杂原子可以与抗体上的亲电基团反应并与抗体形成共价键。有用的亲核基团包括但不限于酰肼、肟、氨基、羟基、肼、缩氨基硫脲、酰肼羧酸酯和芳基酰肼。
在一些实施方案中，Z是抗体或其抗原结合片段内存在的反应性亲核取代基(诸如胺和硫醇部分)与反应性亲电取代基Z′之间的反应产物。例如，Z′尤其可以是迈克尔受体(例如马来酰亚胺)、活化的酯、缺电子羰基化合物或醛。反应性取代基Z′和所得化学部分Z的若干代表性且非限制性实例在表4中提供。
表4.互补的反应性取代基和化学部分
Figure BDA0002986829440000911
例如，适于合成药物抗体缀合物和药物配体缀合物的接头包括但不限于反应性取代基Z′，诸如马来酰亚胺或卤代烷基基团。这些可以通过以下试剂与接头附接：诸如尤其是，琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-L-羧酸酯(SMCC)、N-琥珀酰亚胺基碘乙酸酯(SIA)、磺基-SMCC、间-马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)、磺基-MBS和琥珀酰亚胺基碘乙酸酯，它们在例如Liu等,18:690-697,1979中描述，其公开内容在其涉及用于化学缀合的接头时通过引用并入本文。
在一些实施方案中，与接头L附接的反应性取代基Z′是马来酰亚胺、叠氮化物或炔烃。包含马来酰亚胺的接头的实例是不可裂解的基于马来酰亚胺基己酰基的接头，它对微管破坏剂诸如奥瑞他汀的缀合特别有用。这样的接头由Doronina等人BioconjugateChem.17:14-24,2006描述，其公开内容在其涉及用于化学缀合的连接基时通过引用并入本文。
在一些实施方案中，反应性取代基Z′是-(C＝O)-或-NH(C＝O)-，使得接头可以分别通过酰胺或脲部分与抗体或其抗原结合片段连接，由-(C＝O)-或-NH(C＝O)-基团与抗体或其抗原结合片段的氨基基团反应产生。
在一些实施方案中，反应性取代基是N-马来酰亚胺基基团、卤代N-烷基酰氨基基团、磺酰氧基N-烷基酰氨基基团、碳酸酯基团、磺酰基卤基团、硫醇基团或其衍生物、包含内部碳-碳三键的炔基基团、(杂)环炔基基团、双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基基团、包含内部碳-碳双键的烯基基团、环烯基基团、四嗪基(tetrazinyl)基团、叠氮基基团、膦基团、氧化腈基团、硝酮基团、腈亚胺(nitrile imine)基团、重氮基团、酮基团、(O-烷基)羟基氨基基团、肼基团、卤代N-马来酰亚胺基基团、1,1-双(磺酰基甲基)甲基羰基基团或其消除衍生物、羰基卤基团或丙二烯酰胺基团，其中每一个都可以任选地被取代。在一些实施方案中，反应性取代基包括环烯基团、环炔基团或任选地被取代的(杂)环炔基基团。
包含适于与抗体或其抗原结合片段上的反应性残基反应的反应性取代基Z'的鹅膏蕈毒素-接头缀合物的非限制性实例包括但不限于，7'C-(4-(6-(马来酰亚胺基)己酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)己酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷羰基)哌嗪-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)己酰氨基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己酰氨基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(3-羧基丙酰氨基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(2-溴乙酰氨基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(3-(吡啶-2-基二硫烷基)丙酰氨基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(4-(马来酰亚胺基)丁酰氨基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(马来酰亚胺基)乙酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(3-(马来酰亚胺基)丙酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(4-(马来酰亚胺基)丁酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己酰氨基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(3-((6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(3-((6-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)己酰氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(3-((4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(3-((6-((4-(马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己酰氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(6-(2-(氨基氧基)乙酰氨基)己酰氨基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(4-(2-(氨基氧基)乙酰氨基)丁酰氨基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(4-(2-(氨基氧基)乙酰氨基)丁酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(6-(2-(氨基氧基)乙酰氨基)己酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(6-(马来酰亚胺基)己酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、(R)-7'C-((3-((6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、(S)-7'C-((3-((6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)己酰氨基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己酰氨基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)己酰氨基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己酰氨基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((3-((6-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)己酰氨基)-S-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((3-((6-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)己酰氨基)-R-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((3-((4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)-S-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((3-((4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)-R-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((3-((6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己酰氨基)甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(3-羧基丙酰氨基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)己酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(马来酰亚胺基)乙酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(3-(马来酰亚胺基)丙酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(4-(马来酰亚胺基)丁酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(2-(马来酰亚胺基)乙酰氨基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(4-(马来酰亚胺基)丁酰氨基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己酰氨基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((3-((6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((3-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)乙基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((3-((4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((3-(2-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)乙基)氮杂环丁烷-1基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((3-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己酰氨基)乙基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(((2-(6-(马来酰亚胺基)-N-甲基己酰氨基)乙基)(甲基)氨基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(((4-(6-(马来酰亚胺基)-N-甲基己酰氨基)丁基(甲基)氨基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((2-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)乙基)氮丙啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((2-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己酰氨基)乙基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(6-(6-(2-(氨基氧基)乙酰氨基)己酰氨基)己酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(1-(氨基氧基)-2-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十七烷-17-o基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(2-(氨基氧基)乙酰氨基)乙酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(3-(2-(氨基氧基)乙酰氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(4-(2-(氨基氧基)乙酰氨基)丁酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(6-(2-(氨基氧基)乙酰氨基)己酰氨基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(2-(2-(氨基氧基)乙酰氨基)乙酰氨基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(4-(2-(氨基氧基)乙酰氨基)丁酰氨基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(20-(氨基氧基)-4,19-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十二烷基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(((2-(6-(2-(氨基氧基)乙酰氨基)-N-甲基己酰氨基)乙基)(甲基)氨基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(((4-(6-(2-(氨基氧基)乙酰氨基)-N-甲基己酰氨基)丁基)(甲基)氨基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((3-((6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己酰氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-S-甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((3-((6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己酰氨基)-R-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(2-溴乙酰氨基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(2-溴乙酰氨基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、7'C-((4-(2-(3-(吡啶-2-基二磺酰基)丙酰氨基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏蕈毒素、6'O-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)己基)-鹅膏蕈毒素、6'O-(5-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)戊基)-鹅膏蕈毒素、6'O-(2-((6-(马来酰亚胺基)己基)氧基)-2-氧代乙基)-鹅膏蕈毒素、6'O-((6-(马来酰亚胺基)己基)氨基甲酰基)-鹅膏蕈毒素、6'O-((6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰氨基)己基)氨基甲酰基)-鹅膏蕈毒素、6'O-(6-(2-溴乙酰氨基)己基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(6-(叠氮基)己酰氨基)哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(己-5-炔酰氨基(hex-5-ynoylamino))哌啶-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)乙基)哌嗪-1-基)-鹅膏蕈毒素、7'C-(4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰氨基)己酰氨基)乙基)哌嗪-1-基)-鹅膏蕈毒素、6'O-(6-(6-(11,12-二脱氢-5,6-二氢-二苯并[b,f]氮杂环辛(azocin)-5-基)-6-氧代己酰氨基)己基)-鹅膏蕈毒素、6'O-(6-(己-5-炔酰基氨基)己基)-鹅膏蕈毒素、6'O-(6-(2-(氨基氧基)乙酰基酰氨基)己基)-鹅膏蕈毒素、6'O-((6-氨基氧基)己基)-鹅膏蕈毒素和6'O-(6-(2-碘乙酰氨基)己基)-鹅膏蕈毒素。
在一些实施方案中，化学部分Z选自表3或表4。在一些实施方案中，化学部分Z是：
Figure BDA0002986829440000951
其中S是硫原子，表示存在于抗体或其抗原结合片段(诸如抗CD-5抗体)内的反应性取代基。
在一些实施方案中，如本文公开的鹅膏蕈毒素与具有下式的接头-反应性部分-L-Z′缀合：
Figure BDA0002986829440000961
其中波浪线指示至细胞毒素(例如鹅膏蕈毒素)上的取代基的附接点。该接头-反应性取代基基团L-Z′可选地可以被称为N-β-马来酰亚胺丙酰基-Val-Ala-对氨基苄基(BMP-Val-Ala-PAB)。
在一些实施方案中，如本文公开的鹅膏蕈毒素与具有下式的接头-反应性部分-L-Z′缀合：
Figure BDA0002986829440000962
其中波浪线指示至细胞毒素(例如鹅膏蕈毒素)上的取代基的附接点。该接头反应性取代基基团L-Z′可选地可以被称为N-β-马来酰亚胺丙酰基-Val-Cit-对氨基苄基(BMP-Val-Cit-PAB)。
在一些实施方案中，接头L和化学部分Z(合在一起称为L-Z)是
Figure BDA0002986829440000963
其中S是硫原子，表示存在于抗体或其抗原结合片段(诸如抗CD-5抗体)内的反应性取代基。接头末端处的波浪线指示至鹅膏蕈毒素的附接点。
在一些实施方案中，接头L和化学部分Z在与抗体缀合之后(合在一起称为L-Z-Ab)具有结构：
Figure BDA0002986829440000971
可与本文描述的组合物和方法结合使用的前述接头部分和鹅膏蕈毒素-接头缀合物以及其他接头部分和鹅膏蕈毒素-接头缀合物描述于例如美国专利申请公布第2015/0218220号和专利申请公布第WO2017/149077号中，其中每一项的公开内容通过引用以其整体并入本文。
可与本文描述的组合物和方法结合使用的前述接头部分和鹅膏蕈毒素-接头缀合物以及其他接头部分和鹅膏蕈毒素-接头缀合物描述于例如美国专利申请公布第2015/0218220号和专利申请公布第WO2017/149077号中，其中每一项的公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一种实施方案中，本文描述的CD5抗体或抗原结合片段可以与鹅膏蕈毒素结合，以便形成由式Ab-Z-L-Am表示的缀合物，其中Ab是CD5抗体或其抗原结合片段，L是接头，Z是化学部分，并且Am是鹅膏蕈毒素，每个如本文描述的。
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab是：
Figure BDA0002986829440000972
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab是：
Figure BDA0002986829440000981
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab是：
Figure BDA0002986829440000982
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab是：
Figure BDA0002986829440000983
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab是：
Figure BDA0002986829440000991
抗体药物缀合物的制备
在如本文公开的式I的ADC中，抗CD5抗体或其抗原结合片段通过如本文公开的接头L和化学部分Z与一个或更多个细胞毒性药物部分(D)缀合，例如每个抗体与约1个至约20个药物部分缀合。本公开内容的ADC可以通过若干途径，采用本领域技术人员已知的有机化学反应、条件和试剂来制备，包括：(1)抗体或其抗原结合片段的反应性取代基与二价接头试剂反应以形成如上文描述的Ab-Z-L，随后与药物部分D反应；或(2)药物部分的反应性取代基与二价接头试剂反应以形成D-L-Z′，随后与如上文描述的抗体或其抗原结合片段的反应性取代基反应。本文描述了另外的用于制备ADC的方法。
在另一方面，抗CD5抗体或其抗原结合片段具有一个或更多个赖氨酸残基，该赖氨酸残基可以被化学修饰以引入一个或更多个硫氢基基团。然后如上文描述的通过硫氢基基团的硫原子缀合而形成ADC。可以用于修饰赖氨酸的试剂包括但不限于N-琥珀酰亚胺基S-乙酰硫代乙酸酯(SATA)和2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐(Traut试剂)。
在另一方面，抗CD5抗体或其抗原结合片段可以具有一个或更多个碳水化合物基团，该碳水化合物基团可以被化学修饰以具有一个或更多个硫氢基基团。然后如上文描述的通过硫氢基基团的硫原子缀合而形成ADC。
在又另一方面，抗CD5抗体可具有一个或更多个碳水化合物基团，该碳水化合物基团可以被氧化以提供醛(-CHO)基团(参见，例如，Laguzza等人,J.Med.Chem.1989,32(3),548-55)。然后如上文描述的通过对应的醛缀合来形成ADC。用于修饰蛋白以附接或缔合细胞毒素的其他方案描述于Coligan等人,Current Protocols in Protein Science,vol.2,John Wiley&Sons(2002)中，通过引用并入本文。
用于将接头-药物部分与靶向细胞的蛋白诸如抗体、免疫球蛋白或其片段缀合的方法见于例如美国专利第5,208,020号；美国专利第6,441,163号；WO2005037992；WO2005081711；和WO2006/034488，将所有这些在此通过引用以其整体明确并入。
施用途径和剂量
可选地，可以例如通过重组技术或肽合成来制备包含抗体和细胞毒性剂的融合蛋白。DNA的长度可以包含编码缀合物的两个部分的相应区域，所述相应区域彼此相邻或者由编码不会破坏缀合物的期望特性的接头肽的区域隔开。
本文描述的ADC可以以多种剂型施用至患者(例如，罹患免疫疾病或癌症的人类患者)。例如，本文描述的ADC可以以水性溶液(诸如含有一种或更多种药学上可接受的赋形剂的水性溶液)的形式施用至罹患免疫疾病或癌症的患者。用于与本文描述的组合物和方法一起使用的合适的药学上可接受的赋形剂包括粘度调节剂。水性溶液可以使用本领域已知的技术灭菌。
包含如本文描述的抗CD5 ADC的药物制剂通过将这样的ADC与一种或更多种任选的药学上可接受的载体(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编著(1980))混合，以冻干制剂或水性溶液的形式来制备。药学上可接受的载体通常在所采用的剂量和浓度对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲剂诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖，和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂诸如EDTA；糖类诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐反离子诸如钠；金属络合物(例如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂诸如聚乙二醇(PEG)。
施用的ADC的量应足以消耗细胞，例如活化的T细胞，该活化的T细胞排斥CAR细胞疗法。治疗有效剂量的确定在本领域从业者的能力内，然而，作为实例，在本文描述的利用ADC的全身性施用来治疗免疫疾病或癌症的方法的实施方案中，有效的人类剂量将在0.1mg/kg-150mg/kg的范围内(例如，5mg/kg、10mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、75mg/kg、100mg/kg、150mg/kg等)。施用途径可以影响推荐剂量。取决于所采用的施用模式，设想了重复的全身性剂量以便维持有效水平，例如，以便降低CAR-T细胞排斥的风险。
本文描述的抗CD5 ADC可以通过多种途径施用，诸如口服施用、经皮施用、皮下施用、鼻内施用、静脉内施用、肌肉内施用、眼内施用或肠胃外施用。在任何给定情况下，最合适的施用途径将取决于特定的ADC、患者、药物制剂方法、施用方法(例如，施用时间和施用途径)、患者的年龄、体重、性别、所治疗疾病的严重程度、患者的饮食和患者的排泄速率。
本文描述的抗CD5 ADC的有效剂量的范围可以为例如每单次(例如，推注(bolus))施用、多次施用或连续施用从约0.001mg/kg体重至约100mg/kg体重，或者可以在达到抗CD5ADC的最佳血清浓度(例如，0.0001μg/mL-5000μg/mL的血清浓度)的范围。抗CD5 ADC的剂量可以每天、每周或每月一次或更多次(例如，2-10次)施用至已经接受CAR疗法、正在同时接受CAR疗法或将在递送抗CD5 ADC之后的时间点接受CAR疗法的人类受试者。抗CD5 ADC可以一次或多于一次剂量施用至人类患者。在一种实施方案中，抗CD5 ADC可以在CAR疗法之前以足以将宿主反应性T细胞的量降低例如10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多的量施用。
实施例
提供以下实施例以便为本领域普通技术人员提供可以如何使用、制备和评价本文描述的组合物和方法的描述，并且以下实施例意图是本发明的单纯示例，并不意图限制本发明人视为他们的发明的范围。
实施例1：抗CD5抗体的体外结合分析。
为了确定抗CD5抗体5D7 hIgG1的结合特征，抗体结合研究使用生物层干涉法(BLI)用Pall ForteBio Octet Red96在25摄氏度在补充有0.1％w/v牛血清白蛋白的1×PBS中进行。将纯化的人类抗CD5抗体(5D7)固定在抗人类Fc生物传感器(AHC；PallForteBio 18-5063)上，并且与50nM纯化的人类CD5胞外域一起孵育。抗CD5抗体5D7的结合特征在表4中示出。实施例1至实施例5中使用的抗人类CD5抗体5D7是人源化形式的鼠抗体5D7(参见US 2008/0254027)。如本文使用的抗体5D7的序列在SEQ ID No:53和SEQ ID No:54(重链和轻链可变区氨基酸序列)以及SEQ ID No:47至SEQ ID No:52(重链和轻链CDR)中描述。
表4：5D7与人类CD5胞外域的结合动力学
Figure BDA0002986829440001021
实施例2：抗CD5抗体的体外细胞系结合分析
将MOLT-4细胞(即，永生化的人类T淋巴母细胞细胞系)以20,000个细胞/孔进行铺板，并且用一定滴度的指示的鼠抗CD5抗体(即，L17F12、UCHT2、205919和CRIS-1)在4℃染色2小时。添加恒定量的二级抗小鼠AF488染料，在4℃持续30分钟。洗涤之后，将板在流式细胞仪上运行，并且指示的抗体(和阴性对照，即，mIgG1)的结合基于AF488通道中几何平均荧光强度来确定。来自这些测定的结果在图1中提供。
如图1中示出的，鼠抗CD5抗体L17F12(Thermo Fisher)、UCHT2(BioLegend)、205919(Novus Biologicals)和CRIS-1(Novus Biologicals)与人类T淋巴母细胞(即，MOLT-4细胞)结合，其中EC50＝207pM(L17)、354pM(UCH)、1350pM(205)和43pM(CRIS)。
实施例3：抗CD5抗体的体外原代细胞结合分析
将原代人类T细胞以8×104个细胞/孔进行铺板，并且用一定滴度的人类抗CD5抗体5D7在37℃染色2小时。添加恒定量的二级抗小鼠AF488染料，在4℃持续30分钟。洗涤之后，将板在流式细胞仪上运行，并且抗CD5 5D7抗体(和阴性对照，即，hIgG1)的结合基于AF488通道中几何平均荧光强度来确定。来自这些测定的结果在图2中提供。
如图2中示出的，抗CD5抗体5D7与原代人类T细胞结合，其中EC50＝3.0pM。
实施例4.使用体外T细胞杀伤测定对抗CD5-鹅膏蕈毒素抗体药物缀合物(ADC)进行的体外分析
抗CD5抗体5D7用可裂解接头与鹅膏蕈毒素(鹅膏蕈碱)缀合以形成抗CD5 5D7ADC。测试了药物与抗体比(DAR)为约6(链间DAR6)的抗CD5 5D7-ADC以及DAR为约2(经由D265C突变使用位点特异性缀合制备)的抗CD5 5D7-ADC。此外，抗CD5 5D7-ADC的快速半衰期变体通过在Fc区内引入H435A突变来产生。
每种抗CD5 5D7-ADC均使用体外人类T细胞杀伤测定评估。
将低温保存的阴性选择的原代人类T细胞解冻并用抗CD3抗体和IL-2刺激。在测定开始时，在384孔板的每个孔中接种2×104个T细胞，并且将指示的ADC或非缀合的抗CD5抗体以0.003nM和30nM之间的不同浓度添加至孔中，然后放置在37℃和5％CO2的培养箱中。在培养五天后，通过流式细胞术分析细胞。将细胞用存活力标志物7-AAD染色，并在体积流式细胞仪上运行。
存活的T细胞的数目(图3A和图3B)通过FSC与SSC和7-AAD确定。非缀合的抗CD55D7抗体用作比较对象(图3A)。
如图3A中示出的，具有DAR为约6的抗CD5 5D7-ADC表现出对人类T细胞的有效且特异性的杀伤(IC50＝3.7pM)，而T细胞在非缀合的(“裸”)抗CD5 5D7抗体的存在下保持存活。如图3B中示出的，具有位点特异性(D265C)DAR为约2的ADC保持与DAR 6ADC的T细胞杀伤水平相似的有效的T细胞杀伤水平(IC50＝5.0pM)。抗CD5 5D7-ADC的快速半衰期变体(H435A)表现出相似的T细胞杀伤水平(IC50＝4.9pM；图3B)。
实施例5.使用hNSG小鼠模型对T细胞消耗进行的分析
体内T细胞消耗测定使用人源化NSG小鼠(Jackson Laboratories)来进行。抗CD5抗体5D7用可裂解接头与鹅膏蕈毒素(鹅膏蕈碱)缀合以形成抗CD5 5D7-ADC。如以上描述的，抗CD5 5D7-ADC被制备为DAR为约6或DAR为约2。将每种抗CD5 5D7ADC(DAR6或DAR2)以单次静脉内注射(DAR6 ADC为0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg，或者DAR2 ADC为1mg/kg或3mg/kg)施用至人源化小鼠。在第7天收集外周血细胞、骨髓或胸腺样品，并且通过流式细胞术确定CD3+T细胞的绝对数目(对于DAR2 ADC参见图4A-4B，并且对于DAR6 ADC参见图5A-5C)。
如图4A-4B中示出的，用0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg DAR6抗CD5 5D7-ADC处理的人源化NSG小鼠表现出在外周血或骨髓中有效的T细胞消耗，而在用1mg/kg或3mg/kg的DAR6抗CD5 5D7-ADC处理之后胸腺T细胞被消耗。该体内实验中使用的阴性对照包括对CD5非特异性的人类IgG1(作为裸抗体(huIgG1)，和与鹅膏蕈毒素缀合(huIgG1-AM))。如图4A至图4B中描述的，裸huIgG1对照和缀合的对照对外周血(图4A)和骨髓(图4B)中的T细胞消耗没有影响，因为这些对照与PBS对照相当。抗CD5抗体(抗体YTH34.5)也被用作对照，并且还能够以25mg/kg的剂量消耗外周和骨髓T细胞。
如图5A-5C中示出的，用1mg/kg或3mg/kg位点特异性DAR2抗CD5 5D7-ADC处理的人源化NSG小鼠表现出在外周血、骨髓和胸腺T细胞中有效的T细胞消耗。在图5A至图5C的每一个中，裸抗体5D7也被用作对照。如图5A中描述的，抗体5D7能够消耗外周T细胞(相对于非特异性人类IgG1对照或PBS)，但不能够消耗骨髓T细胞或胸腺T细胞，而5D7-AM ADC在消耗骨髓和胸腺两者方面有效，如图5B和图5C中描述的。
实施例6.在小鼠模型中施用同种异体CAR-T细胞
进行以下研究以评估在不同条件下同种异体接受者中存在的CAR-T细胞的水平。
本研究使用鼠同种异体CAR-T模型。
在第0天，将第一处理组的小鼠通过静脉内输注施用1×107个细胞/kg至1×109个细胞/kg同种异体T细胞，来用致敏(priming)剂量的同种异体T细胞进行处理。在第3天，以3mg/kg的剂量向小鼠施用抗CD5-α-鹅膏蕈碱ADC。在第10天，在ADC大体上从小鼠血液中清除之后，向小鼠施用同种异体CAR-T细胞。CAR-T细胞来自与第0天施用的同种异体T细胞相同的供体。
第二处理组的小鼠使用与第一处理组相同的方案进行处理，但是在第3天施用非缀合的抗CD5抗体来替代抗CD5ADC。
第三处理组的小鼠使用与第一处理组相同的方案进行处理，但是在第3天施用与α-鹅膏蕈碱缀合的同种型对照抗体来替代抗CD5 ADC。
第四处理组的小鼠使用与第一处理组相同的方案进行处理，但是在第0天施用致敏剂量的自体T细胞来替代同种异体T细胞。
第五处理组的小鼠在第10天施用同种异体CAR-T细胞，而未预先处理。
第六处理组的小鼠在第10天施用自体CAR-T细胞，而未预先处理。
在第14天、第17天和第30天确定来自每个处理组的小鼠脾和外周血中存在的CAR-T细胞的数目。在第9天确定来自每个处理组的小鼠脾和外周血中的CD5+活化T细胞的数目。在整个研究中，对小鼠的排斥症状进行监测。
实施例7.将抗CD5抗体药物缀合物施用至人类患者以预防同种异体细胞疗法的排斥
选择人类患者以接受同种异体细胞疗法，诸如同种异体CAR细胞疗法。为了抑制或预防同种异体细胞的排斥，根据本文公开的方法施用抗CD5抗体药物缀合物(ADC)。医生执行以下治疗步骤。
首先，以足以引发对同种异体细胞的致敏免疫应答的量将初始量的同种异体细胞静脉内施用至患者。在致敏步骤中，将同种异体细胞施用至患者，以便引发免疫应答，从而产生内源活化的CD5+T细胞。
随后，将抗CD5 ADC施用至患者，该抗CD5 ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5抗体。抗CD5 ADC以有效消耗内源CD5+活化T细胞的量施用。在施用抗CD5 ADC之后，评估患者中CD5+活化T细胞的水平，以确认消耗。
接下来，向患者施用治疗有效量的表达CAR的同种异体细胞。同种异体细胞与致敏步骤过程中施用至患者的细胞来源于相同的供体。相对于接受同种异体细胞疗法而没有致敏和施用抗CD5 ADC的患者，接受者患者对同种异体细胞的接受得到促进，并且排斥的风险降低。
表5.序列概述
Figure BDA0002986829440001061
Figure BDA0002986829440001071
Figure BDA0002986829440001081
其他实施方案
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度如同每个单独的出版物或专利申请被具体和单独地指示通过引用并入的相同程度。
虽然已经结合本发明的具体实施方案描述了本发明，但是应该理解，本发明能够进行进一步的修改，并且本申请意图覆盖本发明的任何变化、用途或修改，所述本发明的任何变化、用途或修改在总体上遵循本发明的原则，并且包括与本发明的这样的偏离，所述偏离在本发明所属的领域内是已知或惯用实践之内并且可以被应用于在上文中陈述的必要特征，且落入本申请权利要求书的范围。
序列表
<110> 美真达治疗公司
<120> 抗CD5抗体药物缀合物(ADC)在同种异体细胞疗法中的用途
<130> M103034 2060WO
<140>
<141>
<150> 62/773,047
<151> 2018-11-29
<150> 62/702,296
<151> 2018-07-23
<160> 282
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 1
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Val Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Ala Ser Lys Asp Gln Val
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Val Arg Arg Arg Ala Thr Gly Thr Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 2
Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr Asn Ser Tyr Asn Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
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Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly
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<223> 人工序列：合成肽的描述
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Trp Trp Asp Asp Asp
1 5
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<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 5
Arg Arg Ala Thr Gly Thr Gly Phe Asp Tyr
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<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 6
Gln Asp Val Gly Thr Ala
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<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 7
Trp Thr Ser Thr Arg His Thr
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Tyr Asn Ser Tyr Asn Thr
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<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 9
Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro
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Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro
20 25 30
Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala
35 40 45
<210> 10
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 10
Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro
1 5 10 15
Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro
20 25 30
Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Pro Arg
35 40 45
Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser
50 55 60
Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro
65 70 75 80
Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro
85
<210> 11
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 11
Leu Asp Pro Lys Leu Cys Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr
1 5 10 15
Gly Val Ile Leu Thr Ala Leu Phe Leu Arg Val Lys
20 25
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 人工序列：合成肽的描述
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Leu Cys Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu
1 5 10 15
Thr Ala Leu Phe Leu
20
<210> 13
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 13
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 14
<400> 14
000
<210> 15
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 15
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 16
<211> 66
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 16
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly
35 40 45
Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe
50 55 60
Trp Val
65
<210> 17
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 17
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 18
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
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Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 19
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 19
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 20
<211> 495
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 20
Met Pro Met Gly Ser Leu Gln Pro Leu Ala Thr Leu Tyr Leu Leu Gly
1 5 10 15
Met Leu Val Ala Ser Cys Leu Gly Arg Leu Ser Trp Tyr Asp Pro Asp
20 25 30
Phe Gln Ala Arg Leu Thr Arg Ser Asn Ser Lys Cys Gln Gly Gln Leu
35 40 45
Glu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Trp His Met Val Cys Ser Gln Ser Trp
50 55 60
Gly Arg Ser Ser Lys Gln Trp Glu Asp Pro Ser Gln Ala Ser Lys Val
65 70 75 80
Cys Gln Arg Leu Asn Cys Gly Val Pro Leu Ser Leu Gly Pro Phe Leu
85 90 95
Val Thr Tyr Thr Pro Gln Ser Ser Ile Ile Cys Tyr Gly Gln Leu Gly
100 105 110
Ser Phe Ser Asn Cys Ser His Ser Arg Asn Asp Met Cys His Ser Leu
115 120 125
Gly Leu Thr Cys Leu Glu Pro Gln Lys Thr Thr Pro Pro Thr Thr Arg
130 135 140
Pro Pro Pro Thr Thr Thr Pro Glu Pro Thr Ala Pro Pro Arg Leu Gln
145 150 155 160
Leu Val Ala Gln Ser Gly Gly Gln His Cys Ala Gly Val Val Glu Phe
165 170 175
Tyr Ser Gly Ser Leu Gly Gly Thr Ile Ser Tyr Glu Ala Gln Asp Lys
180 185 190
Thr Gln Asp Leu Glu Asn Phe Leu Cys Asn Asn Leu Gln Cys Gly Ser
195 200 205
Phe Leu Lys His Leu Pro Glu Thr Glu Ala Gly Arg Ala Gln Asp Pro
210 215 220
Gly Glu Pro Arg Glu His Gln Pro Leu Pro Ile Gln Trp Lys Ile Gln
225 230 235 240
Asn Ser Ser Cys Thr Ser Leu Glu His Cys Phe Arg Lys Ile Lys Pro
245 250 255
Gln Lys Ser Gly Arg Val Leu Ala Leu Leu Cys Ser Gly Phe Gln Pro
260 265 270
Lys Val Gln Ser Arg Leu Val Gly Gly Ser Ser Ile Cys Glu Gly Thr
275 280 285
Val Glu Val Arg Gln Gly Ala Gln Trp Ala Ala Leu Cys Asp Ser Ser
290 295 300
Ser Ala Arg Ser Ser Leu Arg Trp Glu Glu Val Cys Arg Glu Gln Gln
305 310 315 320
Cys Gly Ser Val Asn Ser Tyr Arg Val Leu Asp Ala Gly Asp Pro Thr
325 330 335
Ser Arg Gly Leu Phe Cys Pro His Gln Lys Leu Ser Gln Cys His Glu
340 345 350
Leu Trp Glu Arg Asn Ser Tyr Cys Lys Lys Val Phe Val Thr Cys Gln
355 360 365
Asp Pro Asn Pro Ala Gly Leu Ala Ala Gly Thr Val Ala Ser Ile Ile
370 375 380
Leu Ala Leu Val Leu Leu Val Val Leu Leu Val Val Cys Gly Pro Leu
385 390 395 400
Ala Tyr Lys Lys Leu Val Lys Lys Phe Arg Gln Lys Lys Gln Arg Gln
405 410 415
Trp Ile Gly Pro Thr Gly Met Asn Gln Asn Met Ser Phe His Arg Asn
420 425 430
His Thr Ala Thr Val Arg Ser His Ala Glu Asn Pro Thr Ala Ser His
435 440 445
Val Asp Asn Glu Tyr Ser Gln Pro Pro Arg Asn Ser His Leu Ser Ala
450 455 460
Tyr Pro Ala Leu Glu Gly Ala Leu His Arg Ser Ser Met Gln Pro Asp
465 470 475 480
Asn Ser Ser Asp Ser Asp Tyr Asp Leu His Gly Ala Gln Arg Leu
485 490 495
<210> 21
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 21
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
1 5
<210> 22
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
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Asn Thr His Thr Gly Glu
1 5
<210> 23
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 23
Arg Gly Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val
1 5
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 24
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 人工序列：合成肽的描述
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Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 26
<211> 9
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 人工序列：合成肽的描述
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Gln Gln Tyr Asp Glu Ser Pro Trp Thr
1 5
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<223> 人工序列：合成多肽的描述
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Glu Ser Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 28
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 人工序列：合成多肽的描述
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Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Val Arg Ile Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr His Tyr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Ser Phe
50 55 60
Lys Gly Thr Arg Thr Phe Ser Leu Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Gly Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 7
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 人工序列：合成肽的描述
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Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
1 5
<210> 30
<211> 6
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
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Asn Thr His Tyr Gly Glu
1 5
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 人工序列：合成肽的描述
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Arg Arg Gly Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 32
<211> 11
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 32
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 33
<211> 7
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 33
Arg Ala Asn Arg Leu Glu Ser
1 5
<210> 34
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 34
Gln Gln Tyr Asp Glu Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 35
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 35
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Tyr
1 5
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 36
Ile Ser Tyr Ser Gly Phe Thr
1 5
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 37
Ala Gly Asp Arg Thr Gly Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 38
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 38
Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 39
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 39
Ala Thr Ser
1
<210> 40
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 40
Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 41
Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr Gly
1 5
<210> 42
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 42
Ile Asn Thr Tyr Asn Gly Glu Pro
1 5
<210> 43
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 43
Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Tyr Glu Asp Tyr
1 5 10
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 44
Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 45
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 45
Tyr Thr Ser
1
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 46
Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 47
Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly
1 5
<210> 48
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 48
Trp Trp Asp Asp Asp
1 5
<210> 49
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 49
Arg Arg Ala Thr Gly Thr Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 50
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 50
Gln Asp Val Gly Thr Ala
1 5
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 51
Trp Thr Ser Thr Arg His Thr
1 5
<210> 52
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 52
Tyr Asn Ser Tyr Asn Thr
1 5
<210> 53
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 53
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Val Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Ala Ser Lys Asp Gln Val
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Val Arg Arg Arg Ala Thr Gly Thr Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 54
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 54
Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr Asn Ser Tyr Asn Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 55
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 55
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Glu Asn Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly Gly Ala Val Ser Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 56
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 56
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105
<210> 57
<211> 438
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 57
Met Val Cys Ser Gln Ser Trp Gly Arg Ser Ser Lys Gln Trp Glu Asp
1 5 10 15
Pro Ser Gln Ala Ser Lys Val Cys Gln Arg Leu Asn Cys Gly Val Pro
20 25 30
Leu Ser Leu Gly Pro Phe Leu Val Thr Tyr Thr Pro Gln Ser Ser Ile
35 40 45
Ile Cys Tyr Gly Gln Leu Gly Ser Phe Ser Asn Cys Ser His Ser Arg
50 55 60
Asn Asp Met Cys His Ser Leu Gly Leu Thr Cys Leu Glu Pro Gln Lys
65 70 75 80
Thr Thr Pro Pro Thr Thr Arg Pro Pro Pro Thr Thr Thr Pro Glu Pro
85 90 95
Thr Ala Pro Pro Arg Leu Gln Leu Val Ala Gln Ser Gly Gly Gln His
100 105 110
Cys Ala Gly Val Val Glu Phe Tyr Ser Gly Ser Leu Gly Gly Thr Ile
115 120 125
Ser Tyr Glu Ala Gln Asp Lys Thr Gln Asp Leu Glu Asn Phe Leu Cys
130 135 140
Asn Asn Leu Gln Cys Gly Ser Phe Leu Lys His Leu Pro Glu Thr Glu
145 150 155 160
Ala Gly Arg Ala Gln Asp Pro Gly Glu Pro Arg Glu His Gln Pro Leu
165 170 175
Pro Ile Gln Trp Lys Ile Gln Asn Ser Ser Cys Thr Ser Leu Glu His
180 185 190
Cys Phe Arg Lys Ile Lys Pro Gln Lys Ser Gly Arg Val Leu Ala Leu
195 200 205
Leu Cys Ser Gly Phe Gln Pro Lys Val Gln Ser Arg Leu Val Gly Gly
210 215 220
Ser Ser Ile Cys Glu Gly Thr Val Glu Val Arg Gln Gly Ala Gln Trp
225 230 235 240
Ala Ala Leu Cys Asp Ser Ser Ser Ala Arg Ser Ser Leu Arg Trp Glu
245 250 255
Glu Val Cys Arg Glu Gln Gln Cys Gly Ser Val Asn Ser Tyr Arg Val
260 265 270
Leu Asp Ala Gly Asp Pro Thr Ser Arg Gly Leu Phe Cys Pro His Gln
275 280 285
Lys Leu Ser Gln Cys His Glu Leu Trp Glu Arg Asn Ser Tyr Cys Lys
290 295 300
Lys Val Phe Val Thr Cys Gln Asp Pro Asn Pro Ala Gly Leu Ala Ala
305 310 315 320
Gly Thr Val Ala Ser Ile Ile Leu Ala Leu Val Leu Leu Val Val Leu
325 330 335
Leu Val Val Cys Gly Pro Leu Ala Tyr Lys Lys Leu Val Lys Lys Phe
340 345 350
Arg Gln Lys Lys Gln Arg Gln Trp Ile Gly Pro Thr Gly Met Asn Gln
355 360 365
Asn Met Ser Phe His Arg Asn His Thr Ala Thr Val Arg Ser His Ala
370 375 380
Glu Asn Pro Thr Ala Ser His Val Asp Asn Glu Tyr Ser Gln Pro Pro
385 390 395 400
Arg Asn Ser His Leu Ser Ala Tyr Pro Ala Leu Glu Gly Ala Leu His
405 410 415
Arg Ser Ser Met Gln Pro Asp Asn Ser Ser Asp Ser Asp Tyr Asp Leu
420 425 430
His Gly Ala Gln Arg Leu
435
<210> 58
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 58
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Glu Ser Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 59
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 59
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Lys Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Val Arg Ile Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Arg Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr His Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Gly Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 60
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成多肽的描述
<400> 60
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 61
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 61
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met
1 5 10
<210> 62
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 62
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Thr Met
1 5 10
<210> 63
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 63
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met
1 5 10
<210> 64
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 64
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met
1 5 10
<210> 65
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 65
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met
1 5 10
<210> 66
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 66
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met
1 5 10
<210> 67
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 67
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met
1 5 10
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 68
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr Asn Ile
1 5 10
<210> 69
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 69
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr Ser Met
1 5 10
<210> 70
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 70
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe Ala Ile
1 5 10
<210> 71
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 71
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe Ala Ile
1 5 10
<210> 72
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 72
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe Ala Ile
1 5 10
<210> 73
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 73
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe Ala Ile
1 5 10
<210> 74
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 74
Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Met
1 5 10
<210> 75
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 75
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Met
1 5 10
<210> 76
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 76
Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr Asp Val
1 5 10
<210> 77
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 77
Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr Asp Val
1 5 10
<210> 78
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 78
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Met
1 5 10
<210> 79
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 79
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met
1 5 10
<210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 80
Ser Gly Tyr Ile Phe Ala Asn Tyr Gly Met
1 5 10
<210> 81
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 81
Ser Gly Tyr Asn Phe Thr Asn Tyr Gly Met
1 5 10
<210> 82
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 82
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met
1 5 10
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 83
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Ile
1 5 10
<210> 84
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 84
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Ile
1 5 10
<210> 85
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 85
Ser Gly Asn Thr Phe Thr Asn Phe Tyr Leu
1 5 10
<210> 86
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 86
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met
1 5 10
<210> 87
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 87
Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met
1 5 10
<210> 88
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 88
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Arg Met
1 5 10
<210> 89
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 89
Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Met
1 5 10
<210> 90
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 90
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Thr Met
1 5 10
<210> 91
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 91
Ser Gly Tyr Met Phe Thr Asn His Gly Met
1 5 10
<210> 92
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 92
Ser Gly Tyr Met Phe Thr Asn Tyr Gly Met
1 5 10
<210> 93
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 93
Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr Gly Met
1 5 10
<210> 94
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 94
Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Tyr Ile
1 5 10
<210> 95
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 95
Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asn Tyr Gly Met
1 5 10
<210> 96
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 96
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Phe Ile
1 5 10
<210> 97
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 97
Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Gly Tyr Asn Ile
1 5 10
<210> 98
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 98
Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr
1 5 10
<210> 99
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 99
Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Met
1 5 10
<210> 100
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 100
Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Met
1 5 10
<210> 101
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 101
Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Met
1 5 10
<210> 102
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 102
Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr
1 5 10
<210> 103
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 103
Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Phe
1 5
<210> 104
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 104
Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr
1 5
<210> 105
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 105
Ser Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Asp Thr Lys
1 5 10
<210> 106
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 106
Ser Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Asp Thr Lys
1 5 10
<210> 107
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 107
Leu Ile Ser Ser Asn Ser Gly Asp Val Ser
1 5 10
<210> 108
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 108
Leu Ile Ser Thr Ser Ser Gly Asp Val Ser
1 5 10
<210> 109
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 109
Leu Ile Ser Ser Asn Ser Gly Asp Val Ser
1 5 10
<210> 110
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 110
Leu Ile Ser Ser Asn Ser Gly Asp Val Ser
1 5 10
<210> 111
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 111
Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys
1 5 10
<210> 112
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 112
Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg
1 5 10
<210> 113
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 113
Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp
1 5
<210> 114
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 114
Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp
1 5
<210> 115
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 115
Ala Ile Asn Ser Asn Gly Asp Ile Thr Tyr
1 5 10
<210> 116
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 116
Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Arg
1 5 10
<210> 117
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 117
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr
1 5 10
<210> 118
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 118
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr
1 5 10
<210> 119
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 119
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr
1 5 10
<210> 120
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 120
Trp Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Asn Thr Arg
1 5 10
<210> 121
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 121
Trp Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Asn Thr Arg
1 5 10
<210> 122
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 122
Cys Ile Tyr Pro Gly Asn Val Lys Thr Lys
1 5 10
<210> 123
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 123
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr
1 5 10
<210> 124
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 124
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr
1 5 10
<210> 125
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 125
Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Gly Thr His
1 5 10
<210> 126
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 126
Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys
1 5 10
<210> 127
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 127
Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Arg
1 5 10
<210> 128
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 128
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr
1 5 10
<210> 129
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 129
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr
1 5 10
<210> 130
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 130
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr
1 5 10
<210> 131
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 131
Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Arg Thr Glu
1 5 10
<210> 132
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 132
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr
1 5 10
<210> 133
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 133
Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 134
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 134
Ala Val Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser
1 5 10
<210> 135
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 135
Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ser Ser Pro Asp Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 136
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 136
Cys Ala Arg Asp Asn Tyr Gly Ser Ser Pro Asp Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 137
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 137
Cys Ala Arg Asp Asn Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 138
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 138
Cys Ala Arg Asp Asn Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 139
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 139
Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ser Ser Pro Asp Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 140
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 140
Cys Val Arg Tyr Tyr Tyr Gly Val Thr Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp
1 5 10 15
<210> 141
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 141
Cys Val Arg Tyr Tyr Tyr Gly Ile Arg Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp
1 5 10 15
<210> 142
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 142
Cys Ala Arg Arg Met Ile Thr Met Gly Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp
1 5 10 15
<210> 143
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 143
Cys Ala Arg Arg Met Ile Thr Thr Gly Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp
1 5 10 15
<210> 144
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 144
Cys Ala Arg His Tyr Gly Ala His Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 145
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 145
Cys Ala Arg His Tyr Gly Ala Asn Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 146
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 146
Cys Ala Arg His Tyr Gly Ala His Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 147
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 147
Cys Ala Arg His Tyr Gly Ala His Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 148
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 148
Cys Ala Arg Glu Glu Asn Tyr Tyr Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 149
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 149
Cys Ala Arg Trp Gly Asp His Asp Asp Ala Met Asp Phe Trp
1 5 10
<210> 150
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 150
Cys Ala Arg Asn His Gly Asp Gly Tyr Phe Asn Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10 15
Trp
<210> 151
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 151
Cys Ala Arg Asn His Gly Asp Gly Tyr Tyr Asn Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10 15
Trp
<210> 152
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 152
Cys Ala Arg Gly Thr Ala Trp Phe Thr Tyr Trp
1 5 10
<210> 153
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 153
Cys Ala Arg Asp Gly Asp Asp Gly Trp Asp Ile Asp Val Trp
1 5 10
<210> 154
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 154
Cys Ala Arg Arg Gly Thr Tyr Trp His Phe Asp Val Trp
1 5 10
<210> 155
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 155
Cys Ala Arg Arg Gly Ser Tyr Trp His Phe Asp Val Trp
1 5 10
<210> 156
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 156
Cys Ala Arg Arg Ser Thr Leu Val Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 157
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 157
Cys Ala Arg Asn Gly Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp
1 5 10
<210> 158
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 158
Cys Ala Arg Asn Gly Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp
1 5 10
<210> 159
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 159
Cys Ala Lys Glu Gly Asp Tyr Asp Gly Thr Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 160
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 160
Cys Ala Arg Arg Arg Asp Gly Asn Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 161
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 161
Cys Val Arg His Gly Tyr Phe Asp Val Trp
1 5 10
<210> 162
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 162
Cys Ala Phe Tyr Asp Gly Ala Tyr Trp
1 5
<210> 163
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 163
Cys Ala Ser Tyr Asp Pro Asp Tyr Trp
1 5
<210> 164
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 164
Cys Ala Arg Asp Thr Thr Ala Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 165
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 165
Cys Ala Arg Arg Val Ala Thr Tyr Phe Asp Val Trp
1 5 10
<210> 166
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 166
Cys Thr Arg Arg Ser His Ile Thr Leu Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 167
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 167
Cys Ala Arg Arg Arg Thr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 168
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 168
Cys Asn Asn Gly Asn Tyr Val Arg His Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 169
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 169
Cys Thr Arg Arg Arg Glu Ile Thr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 170
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 170
Cys Ala Arg Ser Gly Ile Ser Pro Phe Thr Tyr Trp
1 5 10
<210> 171
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 171
Cys Ala Lys Tyr Asp Arg Phe Phe Ala Ser Trp
1 5 10
<210> 172
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 172
Ser Gln Gly Ile Ser Asn His Leu
1 5
<210> 173
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 173
Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu
1 5
<210> 174
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 174
Ser Gln Gly Ile Ser Asn His Leu
1 5
<210> 175
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 175
Ser Gln Gly Ile Asn Asn Tyr Leu
1 5
<210> 176
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 176
Ser Gln Gly Ile Ser Asn His Leu
1 5
<210> 177
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 177
Ser Gln Ser Val Asp His Asp Gly Asp Ser Tyr Met
1 5 10
<210> 178
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 178
Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Met
1 5 10
<210> 179
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 179
Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu
1 5
<210> 180
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 180
Ser Gln Asp Ile Ser Thr Tyr Leu
1 5
<210> 181
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 181
Thr Ser Ser Ile Ser Ser Ser Tyr Leu
1 5
<210> 182
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 182
Asn Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu
1 5
<210> 183
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 183
Thr Ser Ser Ile Ser Ser Ser Tyr Leu
1 5
<210> 184
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 184
Thr Ser Ser Ile Ser Ser Ser Tyr Leu
1 5
<210> 185
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 185
Ser Glu Asn Ile Tyr Tyr Asn Leu
1 5
<210> 186
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 186
Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Tyr Phe
1 5
<210> 187
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 187
Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr Ile
1 5
<210> 188
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 188
Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile
1 5
<210> 189
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 189
Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu
1 5
<210> 190
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 190
Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu
1 5
<210> 191
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 191
Ser Gln Asp Val Arg Thr Asp Val
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 192
Ser Gln Asp Val Ile Thr Ala Val
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<210> 193
<211> 8
<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 193
Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser Ile
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 194
Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10
<210> 195
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 195
Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 196
Ser Glu Asn Ile Tyr Tyr Asn Leu
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 197
Ser Gln Thr Ile Gly Thr Ser Ile
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 198
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1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 199
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<210> 200
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 200
Ser Glu Asn Ile Tyr Tyr Asn Leu
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 201
Ser Ser Ser Leu Ser Tyr Met
1 5
<210> 202
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 202
Ser Gln Arg Ile Gly Thr Ser Met
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<210> 203
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 203
Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser Ile
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 204
Ser Gln Asn Ile Gly Thr Ser Ile
1 5
<210> 205
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 205
Ile Ser Ser Val Ser Tyr Met
1 5
<210> 206
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 206
Ser Gln Thr Ile Ala Thr Ser Ile
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 207
Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu
1 5 10
<210> 208
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 208
Asn Glu Ser Val Glu Tyr Ser Gly Thr Ser Leu Met
1 5 10
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 209
Tyr Phe Thr Ser Ser
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<210> 210
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 210
Tyr Phe Thr Ser Ser
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<210> 211
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 211
Tyr Phe Thr Ser Ser
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<210> 212
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 212
Tyr Tyr Thr Ser Ser
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<210> 213
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 213
Tyr Phe Thr Ser Ser
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 214
Tyr Ala Ala Ser Asn
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<210> 215
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 215
Tyr Ala Ala Ser Asn
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 216
Tyr Tyr Thr Ser Arg
1 5
<210> 217
<211> 5
<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 217
Phe Tyr Thr Ser Arg
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 218
Tyr Gly Thr Ser Asn
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 219
Tyr Gly Thr Ser Asn
1 5
<210> 220
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 220
Tyr Gly Thr Ser Asn
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 221
Tyr Gly Thr Ser Asn
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 222
Tyr Asn Ala Asn Ser
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 223
Tyr Asn Ala Lys Thr
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 224
His Tyr Thr Ser Thr
1 5
<210> 225
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 225
His Tyr Thr Ser Thr
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 226
Tyr Asn Ala Lys Thr
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 227
Tyr His Thr Ser Thr
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 228
Tyr Ser Ala Ser Phe
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 229
Tyr Ser Ala Ser Tyr
1 5
<210> 230
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 230
Lys Ser Ala Ser Glu
1 5
<210> 231
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 231
Tyr Trp Ala Ser Thr
1 5
<210> 232
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 232
Tyr Ser Thr Ser Asn
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 233
Tyr Asn Ala Asn Ser
1 5
<210> 234
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 234
Lys Asn Ala Ser Glu
1 5
<210> 235
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 235
Tyr Trp Ala Ser Thr
1 5
<210> 236
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 236
Tyr Asp Thr Ser Lys
1 5
<210> 237
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 237
Tyr Asn Ala Asn Ser
1 5
<210> 238
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 238
Tyr Asp Thr Ser Asn
1 5
<210> 239
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 239
Lys Ser Ala Ser Glu
1 5
<210> 240
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 240
Lys Ser Ala Ser Glu
1 5
<210> 241
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 241
Lys Asp Ala Ser Glu
1 5
<210> 242
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 242
Tyr Ala Thr Ser Asn
1 5
<210> 243
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 243
Lys Asn Ala Ser Glu
1 5
<210> 244
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 244
Tyr Lys Val Ser Asn
1 5
<210> 245
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 245
Ser Ala Ala Ser Asn
1 5
<210> 246
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 246
Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Leu Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 247
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 247
Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Leu Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 248
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 248
Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Leu Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 249
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 249
Cys Gln Gln Tyr Ser Lys Ile Pro Tyr Thr Cys
1 5 10
<210> 250
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 250
Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Leu Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 251
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 251
Cys Gln Gln Asn Tyr Glu Asp Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 252
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 252
Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 253
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 253
Cys Gln Gln Gly Asp Ala Leu Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 254
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 254
Cys Gln Gln Gly Asn Ser Leu Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 255
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 255
Cys Gln Gln Trp Ser Ser Arg Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 256
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 256
Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 257
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 257
Cys Gln Gln Tyr Ser Asp Tyr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 258
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 258
Cys Gln Gln Arg Ser Tyr Phe Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 259
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 259
Cys Lys Gln Val Tyr Asp Val Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 260
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 260
Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 261
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 261
Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 262
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 262
Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 263
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 263
Cys Gln His His Tyr Gly Tyr Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 264
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 264
Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Leu Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 265
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 265
Cys Gln Gln His Tyr Thr Ser Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 266
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 266
Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 267
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 267
Cys Gln Gln Ser Asn Arg Trp Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 268
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 268
Cys Gln Asn Asp Tyr Asp Tyr Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 269
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 269
Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 270
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 270
Cys Gln Gln Thr Phe Asp Val Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 271
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 271
Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr Tyr
1 5 10
<210> 272
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 272
Cys Gln Gln Tyr Tyr Asn Tyr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 273
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 273
Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 274
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 274
Cys Lys Gln Ala Tyr Asp Val Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 275
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 275
Cys Gln Gln Trp Ser Ser Phe Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 276
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 276
Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 277
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 277
Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 278
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 278
Cys Gln Gln Ser Asp Ser Trp Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 279
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 279
Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Arg Thr Phe
1 5 10
<210> 280
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 280
Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 281
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
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Cys Trp Gln Asn Thr His Phe Pro Gln Thr Phe
1 5 10
<210> 282
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列：合成肽的描述
<400> 282
Cys Gln Gln Ser Arg Gln Val Pro Leu Thr Phe
1 5 10

Claims (34)

1.一种促进患有癌症或自身免疫性疾病的人类受试者对表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞的接受的方法，所述方法包括：
(a)将抗CD5抗体药物缀合物(ADC)施用至患有癌症或自身免疫性疾病的人类受试者，其中所述抗CD5 ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5抗体或其抗原结合片段；以及
(b)将治疗有效量的表达CAR的免疫细胞施用至所述人类受试者，其中所述CAR包含与肿瘤抗原或与自身免疫性疾病相关的抗原结合的胞外结构域、跨膜结构域和胞质结构域。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述人类受试者在步骤(b)之前、与步骤(b)同时地或在步骤(b)之后未被施用阿仑单抗。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述人类受试者在步骤(b)之前、与步骤(b)同时地或在步骤(b)之后未被施用淋巴消耗性化学治疗剂。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述淋巴消耗性化学治疗剂是氟达拉滨、环磷酰胺、苯达莫司汀和/或喷司他丁。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，所述方法还包括将抗CD2ADC在步骤(b)之前施用至所述人类受试者。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，所述方法包括将抗CD5ADC在步骤(b)之前约12小时至约21天施用至所述人类受试者。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞是同种异体细胞或自体细胞。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述同种异体细胞是同种异体T细胞或同种异体NK细胞。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中表达所述CAR的同种异体细胞的治疗有效量是约1×104个细胞/kg至约1.0×108个细胞/kg。
10.一种治疗患有肿瘤的患者的方法，所述方法包括(i)将抗CD5 ADC施用至有相应需要的受试者，其中所述抗CD5 ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5抗体或其抗原结合片段，以及(ii)将治疗有效量的约1×106个工程化CAR T细胞/kg至约1×108个工程化CAR T细胞/kg施用至所述患者。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述工程化CAR T细胞的治疗有效量是约1×106个细胞/kg或约2×106个细胞/kg。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述抗CD5 ADC作为单剂量或作为多剂量被施用至所述患者。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述抗CD5抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含分别具有SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5中列出的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3，并且所述抗CD5抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含分别具有SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8中列出的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗CD5抗体或其抗原结合片段是嵌合的或人源化的。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述抗CD5抗体或其抗原结合片段是IgG1同种型或IgG4同种型。
16.根据权利要求1-15所述的方法，其中所述细胞毒素是抗有丝分裂剂或RNA聚合酶抑制剂。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述RNA聚合酶抑制剂是鹅膏蕈毒素。
18.根据权利要求16所述的方法，其中所述RNA聚合酶抑制剂是鹅膏蕈碱。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述鹅膏蕈碱选自由以下组成的组：α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素、鹅膏素酰胺、鹅膏无毒环肽、一羟鹅膏毒肽羧酸和前鹅膏无毒环肽。
20.根据权利要求17所述的方法，其中与鹅膏蕈毒素缀合的所述抗CD5抗体或其抗原结合片段由式Ab-Z-L-Am表示，其中Ab是所述抗体或其抗原结合片段，L是接头，Z是化学部分，并且Am是由式(III)表示的鹅膏蕈毒素
Figure FDA0002986829430000031
其中R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成任选地被取代的5元杂环烷基基团；
R3是H、RC或RD；
R4、R5、R6和R7各自独立地是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
Q是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是-L-Z；
RD是任选地被取代的C1-C6烷基、任选地被取代的C1-C6杂烷基、任选地被取代的C2-C6烯基、任选地被取代的C2-C6杂烯基、任选地被取代的C2-C6炔基、任选地被取代的C2-C6杂炔基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的杂环烷基、任选地被取代的芳基或任选地被取代的杂芳基；
L是接头；并且
Z是由L上存在的反应性取代基与所述抗CD5抗体或其抗原结合片段内存在的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分，其中Am精确地包含一个Rc取代基。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述接头(L)是任选地被取代的C1-C6烷基、任选地被取代的C1-C6杂烷基、任选地被取代的C2-C6烯基、任选地被取代的C2-C6杂烯基、任选地被取代的C2-C6炔基、任选地被取代的C2-C6杂炔基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的杂环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基；或者包括二肽或–((CH2)mO)n(CH2)m–，其中m和n各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。
22.根据权利要求16所述的方法，其中所述抗有丝分裂剂是美登素或澳瑞他汀。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述澳瑞他汀是一甲基澳瑞他汀F(MMAF)或一甲基澳瑞他汀E(MMAE)。
24.根据权利要求16所述的方法，其中所述抗有丝分裂剂是吡咯并苯二氮卓类(PBD)或加利车霉素。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述ADC的接头是N-β-马来酰亚胺丙酰基-Val-Ala-对氨基苄基(BMP-Val-Ala-PAB)。
26.根据权利要求1或10所述的方法，其中所述ADC由以下结构中的任一种表示：
Figure FDA0002986829430000041
27.根据权利要求1或10所述的方法，其中所述ADC由以下表示：
Figure FDA0002986829430000051
28.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述ADC具有3天或更短的血清半衰期。
29.根据权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述CAR的胞外结构域包括scFv抗体或单链T细胞受体(scTCR)。
30.根据权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述胞外结构域包括非免疫球蛋白支架蛋白。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述肿瘤抗原是选自由以下组成的组的抗原：CD19、CD22、CD30、CD7、BCMA、CD137、CD22、CD20、AFP、GPC3、MUC1、间皮素、CD38、PD1、EGFR(例如，EGFRvIII)、MG7、BCMA、TACI、CEA、PSCA、CEA、HER2、MUC1、CD33、ROR2、NKR-2、PSCA、CD28、TAA、NKG2D或CD123。
32.根据权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述CAR的胞质结构域包括CD28胞质信号传导结构域、CD3δ胞质信号传导结构域、OX40胞质信号传导结构域和/或CD137(4-1BB)胞质信号传导结构域。
33.根据权利要求1-32中任一项所述的方法，其中所述CAR的胞质结构域包括CD3δ胞质信号传导结构域。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中患有癌症的人类受试者患有选自由以下组成的组的癌症：白血病、成人晚期癌症、胰腺癌、不可切除性胰腺癌、结肠直肠癌、转移性结肠直肠癌、卵巢癌、三阴性乳腺癌、造血/淋巴癌、结肠癌肝转移、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、B细胞淋巴瘤、复发性或难治性B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、复发性或难治性弥漫性大细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、复发性纵隔大B细胞淋巴瘤、难治性纵隔大B细胞淋巴瘤、大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、复发性或难治性非霍奇金淋巴瘤、难治性侵袭性非霍奇金淋巴瘤、B细胞非霍奇金淋巴瘤、难治性非霍奇金淋巴瘤、结肠直肠上皮癌、胃癌、胰腺癌、三阴性浸润性乳腺癌、肾细胞癌、肺鳞状细胞癌、肝细胞癌、尿路上皮癌、白血病、B细胞白血病、B细胞急性淋巴细胞白血病、B细胞急性成淋巴细胞白血病、成人急性成淋巴细胞白血病、B细胞幼淋巴细胞白血病、儿童急性成淋巴细胞白血病、难治性儿童急性成淋巴细胞白血病、急性白血病、急性成淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、幼淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、复发性浆细胞骨髓瘤、难治性浆细胞骨髓瘤、多发性骨髓瘤、复发性或难治性多发性骨髓瘤、骨多发性骨髓瘤、脑恶性神经胶质瘤、骨髓增生异常综合征、EGFR阳性结肠直肠癌、多形性胶质母细胞瘤、赘生物、母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤、肝转移、实体瘤、晚期实体瘤、间皮素阳性肿瘤、血液恶性肿瘤及其他晚期恶性肿瘤。
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